DE2352361A1

DE2352361A1 - Antibiotische derivate

Info

Publication number: DE2352361A1
Application number: DE19732352361
Authority: DE
Inventors: Yoshio Abe; Takayuki Naito; Susumu Nakagawa
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1972-10-18
Filing date: 1973-10-18
Publication date: 1974-05-16
Also published as: FR2203621B1; FR2203621A1; JPS4969632A; US3796698A; GB1434572A; JPS5714355B2

Description

PATENTANWÄLTE

PROF. DR. DR. J. REITSTÖ I T£R

DR.-1NG. WOLFRAM BUNTE

DR. KARL GEORG LÖSCH

D-SOOO MÜNCHEN «O, BAUERSTRASSE 22 · FERNRUF (O8S) 37 8S 83 · TELEX S2iS2O3 ISAR D POSTANSCHRIFT: D-βΟΟΟ MÜNCHEN 43. POSTFACH 73O

PAIENIANMELDUNQ

München, den 18„Oktober 1973 M/12 859

BRISTOL-MYERS COMPANY, 345 Park Avenue, New York,, New York 1OO22/v„St_eA_t

Äntibiotische Derivate

Die Erfindung betrifft Derivate von Gentamicin Cp, die eine wesentlich verbesserte antibakterielle Aktivität aufweisen» Insbesondere betrifft sie halbsynthetische_? in 1-Stellung substituierte Derivate von Gentamicin C₂, die durch Acylierung der 1-Aminofunktion von Gentamicin C_? mit einer γ-Aminoa-hydroxybutyryl-, ß-Amino-cr-hydroxypropionyl" oder einer cT-Amino-a-hydroxyvalerylgruppe hergestellt werden. Ein Beispiel für ein solches Mittel ist 1-[L-(-)-Y-Amino-a-hydro2cybutyrylj-gentamicin C₂ [IV, BB-K75].

— 2. —>

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Gentamicin (Gentamyein) und die Fermentation davon ist Gegenstand der US-PSen 3 091 572 (erteilt am 28« Mai 1962) und 3 136 704 (erteilt am 9. Juni 1964). Diese Patente beschreiben die Fermentation von Gentamicinkomplexen aus Micromonospora purpurea, NIIRL 2953 und Micromonospora eehinospora, NIiRL 2985. In der Stammkultur-Sammlung des United States Department of Agriculture, Northern Utilization Research and Development Division* Peoria, Illinois wurden auch Varianten davon als M. echinospora var« ferruginea, NITRL 2995 und M. echinospora var„ pallida, KNRL 2996 hinterlegt.

Gentamicin wird weiter beschrieben im Merck Index, 8th Ed. Seite 485. Die zwei Hauptbestandteile, Gentamicin C^ und Gentamicin Cp sind darin beschrieben.

Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren, zur Herstellung von Verbindungen der Formel

HO 1»

KH-R III

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in der R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(~)-cf-Amino-c£- hydroxyvaleryl besitzt, oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon, wobei das Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, daß man in aufeinanderfolgenden Schritten

(A) Gentamicin C₂ (I) mit einem Acylierungsmittel der Formel

OH 0

1 »

W-NH-(CH₂)_n-CH-C-M

VII

in der ¥ einen aus dem Stand der Technik als Schutzgruppe der primären Aminogruppe bekannten Rest, η eine ganze Zahl von 1 bis 3 und M einen Rest, ausgewählt unter

-0—N

-NO₉, -O-

und

bedeuten oder mit seinem funktionellen Äquivalent als Acylierungsmittel acyliert,und zwar in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol von Verbindung VII pro Mol Gentamicin C₂ in einem Lösungsmittel, wobei die Verbin--

- 3 _ ' . 409820/1136

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2352381

dung der Formel

II

in der ¥ und η dieselbe Bedeutung wie oben besitzen, entsteht, und

(B) die Schutzgruppe W durch an sich bekannte Methoden von der Verbindung II entfernt, wobei die Verbindung der Formel III entsteht. .

Die vorliegende Erfindung schafft auch eine Verbindung der Formel III oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Die Erfindung schafft weiterhin ein Zwischenprodukt für die Verbindung der Formel III, wobei das Zwischenprodukt eine Verbindung der Formel III ist, in der die primäre Aminogruppe der L-(-)-Y-Amino-a~hydroxybutyryl-, L-(-)-ß-Amino-

- 4 409820/1136

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α-hydroxypropionyl- oder L-(-)-cf-Ainino-cc-hydrox3rvalerylgruppe durch einen aus dem Stand der Technik als Schutzgruppe für diese primäre Aminogruppe bekannten Rest geschützt ist.

Wie hierin gebraucht, bedeutet der Begriff "nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz" ein Mono-, Di-, Tri-, Tetra- oder Pentasalz, das durch Einwirken von 1 Mol von Verbindung III auf 1 bis 5 Mol einer nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Säure entsteht. Eingeschlossen unter diesen Säuren sind Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoffsäure. Ascorbinsäure, Apfelsäure, Mandelsäure und Zitronensäure und die anderen Säuren, die allgemein zur Herstellung von Amingruppen enthaltenden Pharmazeutika verwendet werden.

Gentamicin C wird als ein Komplex von drei nahe verwandten

und

bezeichnet werden,

Komponenten, die als "C₁", C₂ ^_a

fermentiert. Gentamicin C₂, das Ausgangsmaterial für die erfindungsgemäßen Verbindungen_; besitzt die Formel

X.

- 5 409 820/1136

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23^2361

Die allgemeine Methode zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird im folgenden allgemeinen Schema aufgezeigt;. Es ist zu 'bemerken, daS - o^gleicis die Reaktion zur Herstellung einer Verbindung der Formel III, in der R die Bedeutung L-(-)-T-Amino-a-hydroxybutyryl besitzt* erläutert ist - sie allgemein zur Herstellung von alien Verbindungen der Formel III anwendbar"ist:

H-»Hy4spoxysuecinimidester von X^, ( - )-y-BenzyloxycarbonylaiQinoa-hydTGxybuttersäure (VIIa)

A) Gentamicin C₂ (I) -,, ,,, ν

C=O

II

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B) Verbindung IIa

Bevorzugt ist die Verbindung der Formel III, in der R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-o:-hydroxybutyryl besitzt,, oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Besonders bevorzugt sind die Mono- und Disulfatsalze der Verbindung der Formel IV.

Bevorzugte Salze der Verbindung der Formel III schließen ein das Hydrochlorid, Acetat, Maleat, Citrat, Ascorbat, Nitrat und Phosphat.

Die Ziele der vorliegenden Erfindung werden dadurch erreicht, daß erfindungsgemäß ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel .III oder eines nicht-toxischen, pharma-

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zeutisch verträglichen Säureadditionssalzes davon geschaffen wird, wobei das Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, daß
man in aufeinanderfolgenden Schritten

A) Gentamicin C₂ (l) mit einem Acylierungsmittel der Formel

OH 0 W-NH-(CH₂)_n-CH-C-M

VII

in der η eine ganze Zahl von 1 bis 3 bedeutet,w einen pus dem Stand der Technik als Schutzgruppe für die primäre '
Aminogruppe bekannten Rest bedeutet und vorzugsweise
ausgewählt ist unter ·

CH₂-O-C-

- CH, 0

-C-O-C- J J

-ΓΧ-,

NO,

0
X-CH₂-C-

It

C-CH₂-CH₂-C-

wobei die Gruppe

R-

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2 3 η 2 3 6 1

"besonders bevorzugt ist, *

worin R und R gleich oder verschieden und jeweils H, F, Cl, Br, NO₂, OH, (Niedrig)-alkyl oder (Niedrig)-alkoxy bedeuten können, X die Bedeutung Chlor, Brom oder Jod besitzt und M einen Rest, ausgewählt unter der Gruppe

-0-N

-0-

-NO₉ , -0-

-NO₂ ,

ο.

, vorzugsweise -0-N

bedeutet,

oder mit einem funktionellen Äquivalent als Acylierungsmittel für primäre Aminogruppen in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol von Verbindung VII pro Mol Verbindung I, vorzugsweise in einem Verhältnis von etwa 0,5 bis 1,4 und besonders bevorzugt in einem Verhältnis von etwa 0,8 bis etwa 1,1 in einem Lösungsmittel, das vorzugsweise ausgewählt ist unter Mischungen von Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Propylenglykoldimethyläther oder dergl. und besonders bevorzugt 1:1 Wasser/Äthylenglykoldimethyläther, acyliert, wobei eine Verbindung der Formel

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2 V) 2 36 1

CH

CH-NH.

II

entsteht, in der W dieselbe Bedeutung v/ie oben besitzt, und

B) die Schutzgruppe Vi durch an sich "bekannte Methoden von der Verbindung II entfernt, und wenn W einen Rest der Formel

bedeutet, vorzugsv/eise durch Hydrierung der Verbindung II mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators, vorzugsv/eise ausgewählt unter Palladium Platin, Raney-Niekel, Rhodium, Ruthenium und Nickel, jedoch vorzugsv/eise Palla—

- 10 409 820/1136

dium und besonders bevorzugt Palladium-auf-Äktivkohle in einem aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel bestehenden Lösungsystem, vorzugsweise ausgewählt unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimethyläther, Propylenglykoldimethyläther oder dergl., jedoch vorzugsweise 1:1 Wasser/Dioxan und vorzugsweise in Gegenwart einer katalyti sehen Menge Eisessig, entfernt, wobei die Verbindung der Formel III entsteht.

Es Ist für den Fachmann offensichtlich, daß man in dem obigen Verfahren zur Acylierung der Aminofunktion der erfindungsgemäßen Zwischenverbindungen andere Mittel verwenden kann. Diese Veröffentlichung schließt alle solche Acylierungsmittel ein, die zu labilen amino-blockierenden Gruppen führen, •wobei diese labilen Biockierungsgruppen allgemein bei der Synthese von Peptiden eingesetzt v/erden» Die labilen Blockierungsgruppen müssen durch an sich bekannte Methoden leicht entfernbar sein. Beispiele für solche labilen Blockierungsgruppen und ihre Entfernung sind in der Übersicht von A. Kapoor, J. Pharm. Sciences .j59> S. 1-27 (1970) zu finden. Funktionelle Äquivalente als Acylierungsmittel für primäre Aminogruppen schließen die entsprechenden Carbonsäurechloride ,-bromide, Säureanhydride, einschließlich gemischter Anhydride und insbesondere der aus stärkeren Säuren, wie der niedrlgaliphatischen Monoester der Kohlensäure, der Alkyl- und Arylsulfonsäuren und der der gehinderteren Säuren, v/ie DIphenylessigsäurej hergestellten gemischten Anhydride ein. Ausserdem kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester (beispielsweise mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenolj Thiophenol, Thioessigsäure) verwendet werden oder die freie Säure selbst kann mit dem Gentamicin-Cp-Derivat nach zuerst erfolgter Reaktion dieser freien Säure mit NpN'-Dimethylchloroforminium-chlorid [vergl. GB-PS 1 008 170 land Novak und Weichet, Experientia XXl/6, 360 (1965)] gekuppelt werden^ oder das Derivat eines Alkinylamin-Reagenzes

- 11 409820/ 1136

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[vergl, R. BuIjIIe und H.G.Viehe, Angew.Chem., International Edition 3, 582 (1964)] oder eines Ketenlmin-Reagenzes [vergl. CL. Stevens und M.E. Munk, J. Amer. Chem. Soc. 80, 4065 (1958)] oder eines Isoxazolluinsalz-Reagenzes [vergl. R.B. Woodward, R.A_# Olofson und PL Mayer, J. Amer. Chem. Soc, 83, 1010 (1961)]» Ein weiteres Äquivalent des Säurechlorids ist ein korrespondierendes Azolid, d„h. ein Amid der entsprechenden Saure j deren Amidstickstoff das Glied eines quasi-aromatischen 5-Rlngs ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, d,h. Imidazole Pyrazol, die Triazole, Benzimidazole, Benzotriazole und Ihre substituierten Derivate, Als Beispiel für die allgemeine Methode zur Herstellung eines Azolids wird IT,N¹-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Verhältnissen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt, wobei unter Freisetzung von Kohlendioxyd und einem Mol Imldazol das Carbonsäureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute anfällt. Dicarbonsäuren liefern Diimidazolide* Das Nebenprodukt Imidazo! fällt aus und kann abgetrennt werden und das Imldazolid kann isoliert werden, jedoch Ist dies nicht wesentlich Diese Reaktionen sind aus dem Stand der Technik wohlbekannt [vergl_o US-PSen 3 079 3*14, '5 117 126 und 3 129 224 sowie die GB-PSen S32 644, 957 570 und 959 054]_o

Die Verbindung IV₃ 1~[L=( = 5~Y-=Aaino=a^r-hydroxybutyryl]-gentazaiclü Cp besitzt eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität_o Die folgende Tabelle I zeigt die minimalen Hemmkonzentrationen (MlC) von Gentamicin C₂? Verbindung IV (BB-K75) und zwei weiteren verv/andten mono- und diacylierten Derivaten von Gentamicin Cp gegen eine Vielzahl gram-positiver und gram-negativer Bakterien,, die durch die zweifache Agarverdünnungsmethode bestimmt wurden«,

·= 12 -»
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TABELLE I

235^361

In vitro antimicrobische Aktivität von Gentamicin-C^-Derivaten

Stamm

Bristol BB-K74 BB-K75 BB-K76 Genta-Nr. micin

E.	coli NIHJ	*	JR/W677	D-11	D-113	409	AI5II9	3	,1	0	,8	6	,3	0	,8
Il	Juhl		pneumoniae	Typ 22			AI5I69	3	,1	0	,8		,3	0	,8
Il		*		. marcescens		A2O363	3	,1	0	,8	6,	.3	0	,8
			aeruginosa D-15		A9844	3	,1	0	,4	6,	»3	0	,8
Il		*	H9		A20365	3	₉8	0	,4	O₁	,3	0	,8
11		*			A9632	O	,6	0	,1	O₁	.8	0	/1
It	K-12				A20664	1	,8	0	,2	3,	,1	0.	,4
11	Il		D-114	A2O665	0	,6	0	,2	3,		0.	,4
Il	II			A20684	1	,8	0	,2	3₃		0,	,4
It	¥677			A2O683	0	,5	0	,2	6,	,3	0.	,8
I!					12	,8	0		3,	,1	12,	,5
K.		H6	A20680	O	,5	0	*¹	0,	,8	0,	,2
I!		vulgaris	A20019	12	»1		f8	6,	,3	25
Ser			3		1.	,6	6_S	,3		»8
Ps.			MOO		25		>100		6,	,3
π		A9923	>100		100		>1OO			,5
It	A993Q	>1OO	,1	100		>1OO		12,	,5
Il	•AI5I50	3.			»8		3	o,	Λ
11	A15194	>1OO		>too		>1OO		25
ti	A207I7	>1OO		50		>1OO		12,	5
Il	A20718	>1OO		>1OO		>1OO		>1OO
II		>1OO		>100		>1OO		>1OO
It	A9436	>1OO	,6	25		>1OO		6,	3
Pr.	A9526	1,	,1	o,	8	3,	1	0,	4
Il		■ 3,	■	0,	8	β!	3	0,	4
	820/1	13 -
	1 36

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TABELLE I-(Fortsetzung):

Stamm

Bristol BB-K74 BB-K75 BB-K76 Genta-Nr. micin C,

Pr.	mirabilis	A9554	12,5	1,6	25	0,8
Il Pr.	morganii	A9900 A9553	6,3 3,1	1,6 1,6	25 25	0,8 0,8
Il S.	aureus Smith	A20031 AI5I67	6_S3 0^8	3,1 0,2	25 3,1	0,8 0,2
(I	209P •K--X-		12,5	3,1	25	0,8

A20239 0,8

6,3 0,4

* bedeutet kanamyeln-resistent;

** bedeutet streptomycin-resistent;

*** bedeutet gentamicin-resistent;

**** bedeutet neomycin-resistent.

- 14 -

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Da Gentamicin C₂ mehrere Aminofunktionen besitzt, die bei der Behandlung mit dem N-Hydroxysuccinimidester der L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-c-hydroxybuttersäure gemäß dem folgenden Schema acyliert werden können^ werden in Abhängigkeit vom Ort der Acylierung wechselnde Mengen verschiedener Produkte erhalten:

Gentamicin C,

CbZ-NHCH₂CH₂CHCOO-N

OH

CG-50 (NH/"⁵") Säulenchromatographie

BB-K74 + BB-K75 (IV) + BB-K76

Es ist zu erkennen.

HABA-substituierten Gentamicin-Cg-Derivaten führt«,

daß das Verfahren zu drei verschiedenen

die hierin

als BB=K74_P BB-K75 und BB-K76 bezeichnet werden_o BB-K75 wird als 1 = [l~(-)-Y=Anino=a-hydroxybutyryl ]■= gentamicin C₂ (IV) identifizierte

- 15 -409820/1Ί36

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BB-K75, das wirksamste Produkt, ist gegen die bisher untersuchten Stämme E. coli und K. pneumoniae genauso wirksam oder wirksamer als Gentamicin C₂* Es ist 16- Ms 32mal wirksamer gegen E, coli A20683 und K. pneumoniae A20680, von denen bekannt ist, daß sie Gentamicin C durch 2"-Adenylierung inaktivieren, jedoch 2- bis 8mal weniger wirksam gegen Stämme von Pseudomonas, Proteus und Staphylococcus.

BB-K74 ist ein monoacyliertes Gentamicin-Cp-Derivat und BB-K76 ist ein diacyliertes Gent ami cin-^-Derivat. Die Orte der Acylierung dieser zwei Verbindungen sind nicht bestimmt worden.

Obgleich BB-K74 und BB-K76 weniger wirksam sind, besitzen sie ähnliehe antibakterielle Eigenschaften, wie die von BB-X74. Im Vergleich mit dem zugrundeliegenden Antibiotikum Gentamicin Cp besitzen alle im Vorliegenden isolierten Acylierungsprodukte eine verbesserte Wirksamkeit gegen die zwei gentaiaicin-resistenten Stäiaiae (E₀ coli A20683 und Ko pneumoniae A206S0), wogegen die Wirksamkeit gegen die gentamicin-resistenten Stämme von Pseudomonas beinahe gegen. Hull abgefallen sind«·

Durch DümiscMchtcriromatograpMe (TLC) wird bei BB-K74, BB»i€75 und BB=K76 'bestätigt, daß bei der Hydrolyse mit O₃5 normaler wäßriger KaOH-Lösung bei 100°C während 1 Std. Gentamicin Cp und L=HABA freigesetzt werden«, Dies beweist, daß diese drei Verbindungen mit L-HABA acylierte Gentamicin-Cp-Berivats sind^, Dies zeigt in Verbindung mit der Anwesenheit einer Amido-earbonylbande in den Infrarotspektren (IR) daß alle von ihnen Gentamicin-Cp-Derivate sind.

Verbindungen der Formel HI₅ insbesondere die Verbindung der Formel IV₃ ■ sind wertvoll als antibakterielle Mittel ₃ Be!.futtermittel im Tierfutter und als therapeutische Mittel bei Ge-

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flügel und Tieren sowie dem Menschen. Sie sind insbesondere wertvoll bei der Behandlung infektiöser Krankheiten, die durch gram-positive und gram-negative Bakterien verursacht sind.

Verbindung IV ist bei oraler Verabreichung insbesondere ■wertvoll als .Zusatzbehandlung zur präoperativen Sterilisation des Darms. Die aerobe und anaerobe Flora, die gegen diese Mittel empfindlich ist, wird im Dickdarm vermindert. In Verbindung mit geeigneter mechanischer Reinigung, ist Verbindung IV nützlich zur Vorbereitung von Dickdarmoperationen.

Die Verbindung der Formel IV ist wirksam bei.der Behandlung bakterieller Systeminfektionen, wenn sie parenteral im Dosierungsbereich von etwa 250 mg bis etwa 3000 mg/Tag in aufgeteilten Dosen drei- oder viermal täglich verarbereicht wird. Im allgemeinen ist die Verbindung wirksam, wenn sie in einer Dosierung von etwa 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht "alle 12 Std. verabreicht wird.

Gentamicin C ist ein Komplex von mindestens drei Hauptkomponenten, die sich nur durch den an der 5'-Position der Didesoxyzuckereinheit des Gentamicin-Kerns befindlichen Substituenten R unterscheiden, wie unten gezeigt wird:

- 17 A09820/ 1 138

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Gentamicin C₁

R-

»CH-NH-CH,

Gentamicin

Gentamicin C

-CH-IiH.

CB

-CH₂-

'"2

Gentamicin C₂ wird aus dem Komplex durch folgendes Verfahren erhalten.

Auftrennung des Gentamicin-C-Komplexes

4,10 g an Gentamicin-C-Komplex in Form der freien Base v/erden unter Verwendung eines präparativen Gegenstrom-Verteilungsapparates (CCD) (100 ml χ 50 Röhren) mit .einem Lösungsmittelsystem von CHCl₃-CH₃OH-I? % wäßriges NH₄OH (2:1:1) fraktioniert, wobei die unten aufgezeigten Fraktionen erhalten werden:

- 18 409820/1136

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Fraktion	Röhren Nr.	wiedergewonnene Menge
I	25-33	1,46 g
II	32-42	- 0,72
III	43-47	1,20
IV	48-50	0_s87

Identifizierung
(DünnschichtChromatographie*)

hauptsächlich

^C1^fC2

2 ^{+ C}1a

₁ hauptsächlich

Cellulose-Dünnschichtplatte,
Lösungsmittelsystem; untere Schicht

CHCl₃-CH₃OH-I7 % NH₄OH (2;1:1) Rfs Gentamicin C₁ (0^69)_?
« -C₂ (0,39),

Die Fraktionen I und II werden vereint und nochmals durch dasselbe CCD-System wie oben verteilt^ wobei 1,94 g der Gentamicin-C₁ -Komponente anfallen,? die durch Dowex 1-X2-Säulenchro.matographie weiter gereinigt wird, wobei 1₅70 g an im wesentlichen reinem Gentamicin C₁ gewonnen werden. Die anderen Fraktionen werden in gleichen Weise durch CCD und Dowex 1-X2-Chromatographie gereinigt^ wobei 1,13 g

an Gentamicin

werden«

und 0,62 g an Gentamicin

erhalten

Dowex 1-X2 (eingetragenes Warenzeichen der DOVi CHEMICAL CO.) ist ein Har2_s bestehend aus einem Polystyrol "backbone", an das \-iahrend der Polymerisation des Polystyrols Benzyl-

- 19 -

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trimethylammoniumchlorid und 2 % zusätzliches Divinylbenzol als Vernetzungsmittel angelagert werden» Es wird in Form vor Kügelchen gelieferte

Beispiel 1

Herstellung von L~(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure (VIa)

7,4 g (0,062 Mol) L-(-)-Y-Amino-cr-hydroxybuttersäure werden zu einer Lösung von 5,2 g (0,13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser gegeben. Zu der Lösung werden tropfenweise während eines Zeitraums von 0,5 Std. unter Rühren bei einer Temperatur von 0 bis 5°C 11,7 g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid gegeben. Das Rühren wird 1 Std. bei derselben Temperatur fortgesetzt. Die Reaktionsmischung v/ird mit 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf einen pH von 2 eingestellt und mit vier 80 ml-Portionen Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden vereinigt, mit einer kleinen Menge an gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das FiItrat wird in vacuo eingedampft und der erhaltene Rückstand v/ird aus Benzol kristallisiert, v/obei 11,6 g (74 %) farblose Platten vom Schmelzpunkt 78,5 bis 79,5°C erhalten werden.

[a]_D = 4,5 (c=2, CH₃OH).

Infrarot-Spektrum (KBr):N) ₌ 1740, 1690 cm"¹.

^ Kernmagnetische Resonanz (NI-iR) (Aceton-dg) J" (in ppm von TbIS) o2,0 (2H, m), 3,29 (2H, d-d, J=6,7 und 12 Hz), 4,16 (1H, Sd-d, J = 4,5 und 8 Hz), 4,99 (2H, s), 6,2 (2H, breit), £7,21 (5H, s).

'Analyse C^Lri^,. ld 15 5

(αϊ C5

	56	C	5,	H	5	N	0< /O
ber. ϊ	56	,91	5,	97	5	,53	*t^f* /0
ge f. :	,66	97	,47

- 20 -

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Beispiel

N-Hydroxysuccinimidester von ]>(~)~Y~Benzyloxycarbonylamino== re-hydroxybuttersäure (VIIa)

Eine Lösung von 1O₉6 g (0_p042 Mol) der Verbindung VIa und 4_a8 g (Oj,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid [G₀W₀ Anderson et al_oa J₀ "Am₀ Checic Soc₀ , 86 _? 1839 (1964)] in 200 ml Äthylacetat wird auf O⁰C gekühlt und anschließend werden 8_P6 g (O₅042 Mol) Dicyclohexylcarbodiimid zugegebene Die Mischung wird über Nacht in einem Kühlschrank gehaltene Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat wird unter vermindertem Druck auf etwa 50 ml eingeengt^ wobei farblose Kristalle von Verbindung (VII) entstehen_P die ab= filtriert werden,, Die Ausbeute beträgt 6_P4 g_o Schmelzpunkt = 121 bis 122,,5⁰C Das Filtrat wird in vacuo zur Trockene eingedampft und der kristalline Rückstand wird mit 20 ml einer Benzol/n-Hexan-Mischung gewaschen,, wobei zusätzliches (Vila) erhalten wird« Die Gesamtausbeute beträgt 13_P4 g (92 56)„

[a]_D 1p5° (c=2, ₃

IR (KBr) S( _c=0 181O_P 1755, 174O₁, 1680 cnf¹

NMR (Aceton-dg) (in ppm von TMS) 2,0 (2H, m), 2,83 (4H, a) 3,37 (2H₂, d-dp J = 6,5 -und 12,5 Hz), 4₅56 (1H, m), 4,99 (2H_S s), 6,3 (2H, breit), 7,23 (5H, s).

ber_o: ' 54,85

gef_e; 54,79 _, ,

54 7O con ο -ι ο /°

	H	8,	N
5,	18	8,	00
5,	21	8,	14
5,	20	12

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inlcin C^ \I7)

= ß-hydr ozc/hntyry 1 j-gent a-

ISol

-i3_L/ Η—HydrG3sysuccinimi&es"ter' der L—(—)—γ-

2U einer gsrünrten Lösung von 325 mg (0₉7 büMoI) Gentamicin C^ in 40 zu 75 ysigeai itfaflrigein Tetrahydrofuran (THF) gegeben,. Bis 3rh£i2*iai-.3 Mischung wird über Nacht bei Raumteaperatur gerüljrt izid 7 Std_e bei Uagebungstemperatur und Atniosphärendrtiolc ~-I"ä IQ % Palladium—aui-Aktivkohle hydrierte Die Rs£::'Jir::LsiiIs0lESig wird filtriert^ das FiItrat wird int Vakuum singsä.SEjz'-'s -^- ^^as organische Lösungsmittel zu entfernen usid USxS, srxsltene Konzentrat wird auf eine Säule mit Ämbsrliti «335G-Ionenaustauscher harz CiJiL^4--FGrSg 10 ml) aufg3gsüs:i₃ die ts.lt 60 ml wasser gewaschen und nacheinander si~- D₃In ίΕ%0Η (480 ml) ₀ 0_s2n ffl%0H (450 ml) und ö_t5n IIH£,0H (SDO zu.) eluiert wird_o Das Eluat wird in.10 ml-Frak™ tioneii aufg3fangen_o Die Fraktionen werden durch den TJinhydrixL-ijü^-^sl—Tsst₅ den Scheibentest und durch Dünnschichtchrsm£t;,grapMs überwacht und wie folgt eingeteilte Jede Gruppe wird unter vermindertem Druck eingeengt und lyophilisiert.

Grupps Fraktion eluiert mit

1 37-65

2 101-130

3 161-170

^i-w 0,1-0,2n IiH₄OH

0,5n

0,5n iffi.OH

isolierte Verbindung Menge

28 mg rohes BB-K73

eine Mischung von BB-K74 und BB-K75

18 mg BB-K76

- 22 409820/1136

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23523B1

Nochmalige Cliromatographle der Gruppe 1 mit Jüaberlite CG-5O (NH,⁺-Form) ergibt 12 mg reines BB-K73 (das als eine disrch L-HABA acylierte Yerunreinigungp bestellend aus einem Material, welches kein Gentamicin Cp ist,, klassifiziert irJird),

Nochmalige Chromatographie der Gruppe 2 mit CG-50 ergibt 21 mg BB-KTh und 21 mg BB-K75-

EIGENSCHAFTEN

Bezeichnung	S chmelzpunkt (Zersetzung)	Rf*~Wert	" 1 c=o	cm"
BB- K73	130 - 135°C	0,58	1640	-1 ca
BB-K74	150 - 155°C	0,33	1640	-1 cm
BB-K75	160 - 165°C	0,15	1640	cm""
BB-K76	230⁰C	O₉ 08	1640

* Dünnschichtcbromatographie: Silikagelplatte,

CHCl₃-CKL0H-28 %

(2:8:2:1).

Amberlite CG—50 (eingetragenes Viarenzeichen der Fa. RÖHM & HAAS) ist eine cJaromatographische Sorte eines schwach-sauren Kationaustauscherharzes eines Carbonsäure-Polymethaeryl-

Typs.

- 23 -

409820/113 6

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Beispiel

Herstellung von L-(-)-Y-Anino-o:-hydroxybuttersäure aus Ambutyrosin A oder B oder Mischungen davon

5,0 g Ambutyrosin A (US-PS 3 541 078, erteilt am 17. Novem ber 1970) werden 1 Std. mit 160 ml 0,5n Natriumhydroxyd unter Rückfluß gehalten. Das Hydrolysat wird mit 6n Chlorwasserstoffsäure neutralisiert und über eine Säule mit CG-50 (NH,⁺""Typ) chromatographiert. Die erwünschte L-(-)-.y-Amino-a-hydroxybuttersäure wird isoliert, indem man die Säule mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknung entfernt. Die L-(-)-Y-Aminc~ar-hydroxybuttersäure wird als kristallines Material mit einem Schmelzpunkt von 212,5 bis 214,5°C charakterisiert (Spalte 2, Zeilen 31-38 der US-PS 3 541 078).

Beispiel

Herstellung von L-(-)-y-Amino-(x-hydroxybuttersäure aus DL-a-Hydroxy-Y-phthalimidobuttersäure

(A) Dehydroabietylammonium-L-a-hydroxy-y-phthalimidobutyrat:

Eine Lösung von 29 g (0,1 Mol) Dehydroabietylamin in 130 ml Äthanol wird zu einer Lösung von 25 g (0,1 Mol) 2-Hydroxy-Y-phthalimidobuttersäure (Y. Saito et al., Tetrahedron Letters, 1970, 4863) in 200 ml Äthanol gegeben. Die erhaltene Lösung wird 1 Min. heftig geschüttelt und 5 Std. bei Raumtem:- era tür stehen gelassen, wobei feine Nadeln auskristallisieren. Die Kristalle werden abfiltriert, mit 50 ml Äthanol gewaschen und an der Luft getrocknet, wobei 30,1 g (56 %) eines Diastereoisomeren des Dehydroabietylaminsalzes erhalten werden. Schmelzpunkt 93 bis 94°C.

O]^⁴ +15° (C 2,5, CH₃OH).

409820/1136 - 24 -

!^kristallisation aus 300 ml Äthanol ergibt 23,2 g (43 %) des reinen Produkts. Schmelzpunkt = 94 bis 95°C

+10,8° (C. 2,5, CH₃OH)

Weitere Umkristallisation ändert weder den Schmelzpunkt nach die spezifische Drehung.

Analyse C₃₂H^₂N₂O-H₂O:

CHN

ber.:	69,	54	8,	02	5,	07	%
ge'f.:	69,	58	8,	08	5,	07	%

(B) L-(-)-Y-Amino-£r-hydroxybuttersäure: 5*3 g (0,01 Mol) Dehydroabietylammonium-L-a-hydroscy-Y-phthalimidobutyrat und 60 ml Äther werden zu einer Lösung von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser gegeben. Die erhaltene Mischung wird heftig geschüttelt, bis alle Feststoffe aufgelöst sind» Die Ätherschicht wird abgetrennt. Die wäßrige Lösung wird zweimal mit 20 ml-Portionen Äther gewaschen und anschließend unter vermindertem Druck auf 15 ml eingedampft«, 10 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure wird zum Konzentrat zugesetzt und die erhaltene Mischung wird 10 Std. unter Rückfluß gehalten. Nach dem Kühlen wird abgeschiedene Phthalsäure abfiltriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit 10 ml Wasser gelöst und die Lösung wird zur ■ Trockene eingedampft. Diese Operation wird zweimal wiederholt, um überschüssige Chlorwasserstoffsäure zu entfernen. Der zurückgebliebene Sirup wird in 10 ml Wasser gelöst und filtriert, um eine kleine Menge unlösliche Phthalsäure zu entfernen. Das Filtrat wird auf einer Säule mit IR-120 (H⁺, 1 cm χ 35 cm) adsorbiert, die Säule wird mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 1n Ammo-

- 25 4 0 9 8 2 0/1136

niumhydroxydlö sung eluiert. Das Eluat wird in 15 ml Fraktionen aufgefangen. Die Ninhydrin-positiven Fraktionen 1ö bis 16 werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei ein Sirup erhalten wird, der allmählich kristallisiert. Die Kristalle v/erden mit Äthanol yerrieben, filtriert und in einem Vakuuaexsiccator getrocknet, wobei 0,78 g (66 %) L-(-)-y-Amino-ahydroxybuttersäure vom Schmelzpunkt 206 bis 207⁰C erhalten werden.

-29° (C 2,5, H₂O).

Das Infrarotspektrum ist identisch mit einer aus Ambutyrosin erhaltenen authentischen Probe«

Asiberlite IR-120 (eingetragenes Warenzeichen der Firma RO'HM & HAAS) ist ein hochdichtes Kern-Sulfonsäure-Typ-Kationaus tauscherharζ, das entweder in Wasserstoffoder Natriumform als Kügelchen mit 16 bis 50 mesh geliefert wird. (Entsprechend einer Teilchengröße von

1,17 mm bis 0,30 mm.)
Beispiel 6

Herstellung des Monosulfatsalzes von 1-[L-C-)-v-Amino-ahydroxybutyrylj-gentamicin C^

Mol 1-[L-(-)-Y-Amino-K-hydrox3/butyryl]-gentamicin C^ wird in 1 bis 3 Ltr. Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. 1 Mol Schwefelsäure, gelöst in 500 ml Wasser wird zu der gekühlten und gerührten Lösung zugegeben. Die erhaltene Mischung wird 30 Min. gerührt. Anschließend wird kaltes Äthanol zugesetzt, bis ein Niederschlag auftritt. Die Feststoffe werden abfiltriert und es wird festgestellt, daß es sich um das erwünschte Monosulfat handelt.

- 26 409820/1136

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Beispiel 7

Herstellung des Disulfatsalzes von 1~[L-(~)~Y-Ämino-a-iiyäroxybutyryl]-gentamicin C₂

1 Mol 1-[L-(-)-y-Amino-ix-]iydroxy'but3rryl]-gentamicin C₂ ir/ird in 1 bis 3 Ltr. Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, mn ungelöste Feststoffe zu entfernen. .2 Mol Schwefelsäure, gelöst in 100 ml Wasser ir/erden zu der gekühlten und gerührten Lösung zugegeben. Die erhaltene Mischung wird 30 Min. gerührt, anschließend wird kaltes Äthanol zugesetzt bis ein Niederschlag auftritt. Die Feststoffe werden abfiltriert und man stellt fest, daß es sich um das gewünschte Disulfatsalz handelt.

Beispiel 8

Herstellung von L-ß-Benzyloxycarbonyl amino-er-hydroxypropionsäure (VIb)

8,2 g (0,073 Mol) L-ß-Amino-a-hydroxypropionsäure (K. Freudenberg, Ber: 47, 2027 [1914]) werden in einer Lösung von 6,56 g (0,0164 Mol) Natriumhydroxyd in 60 ml Wasser aufgelöst. 14,7 g (0,086 Mol) Carbobenzoxychlorid werden unter Rühren bei einer Temperatur unterhalb 5°C tropfenweise zugegeben. Die erhaltene Mischung wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt, mit 60 ml Äther gewaschen und mit verdünnter Chlorwasserstoff säure auf einen pH von 2 eingestellt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet, wobei 9,65 g (52 %) (VIb) erhalten werden. Das Filtrat wird mit fünf 100 ml-Portionen Äther extrahiert. Die Ätherlösung wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat- getrocknet und in vacuo zur Trockene eingedampft, wobei weitere 2,0 g (11 %) VIb erhalten werden. Insgesamt-11,65 g VIb werden aus 500 ml Benzol/

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Äthylacetat (4:1) kristallisiert, wobei 9,36 g (50 %) reines VIb vom Sc3nnelzpunkt 128,5 bis 129,5°C erhalten werden.

Infrarotspektrum (KBr) :NJ_C=O 1745, 169 0 cm"" . [cc]^⁵ +2,9° (c 5,0, CH₃OH).

KernmagnetisGhe Resonanzspektren [NMR (DMSO-dg)]: cT(in ppm) 3,05 - 3,45 (2H, m, CH₂N) 4,05 (1H, d-d, -0-CH-CO-), 5,03 (2H, s, CH₂Ar), 7,18 (1H, breit, NH), 7,36 (5H, s, Ring H).

Analyse C. .j Rj ,NO,-:

	55	C	5,	H	5	N
ber.:	55	,23	5,	48	5	,86
gef.;	,34	45	,87

Beis.piel 9

N-Hydroxysuccinimidester der L-ß-Benzyloxycarbonyl-amino-ahydroxypropionsäure (VIIb)

412 mg (2 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid v/erden zu einer gekühlten und gerührten Lösung von 478 mg (2 mMol) VIb und 230 mg (2 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 10 ml Tetrahydrofuran (THF) gegeben. Die erhaltene Mischung wird 1 Std. bei 0 bis 5°C gerührt, 2 Std. bei Raumtemperatur gerührt und anschließend filtriert, um den NyN'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das FiItrat, das VIIb enthält, wird ohne Isolierung für die nachfolgende Reaktion verwendet.

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Beispiel 10

Herstellung von 1-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-gentamicin Cp

Im Verfahren gemäß Beispiel 3 führt der Ersatz des dort verwendeten -N-Hydroxysuccinimidesters der L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure VIIa durch eine äquimolare Menge an N-Hydroxysuccinimidester der L-(-)~ ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure VIIb zu 1-[L-(-)-ß-Amino-cx-hydroxypropionyl!-gentamicin C₉.

Beispiel 11

Herstellung von L-cf-Benzyloxycarbonylamino-a-hydrbxyvaleriansäure (VIc)

580 mg (3s,3 mMol) Carbobenzoxychlorid werden innerhalb von 30 Min. bei einer Temperatur von 0 bis 5°C tropfenweise zu einer gerührten Lösung von 400 mg (3,0 mMol) L-cT-Aminoor-hydroxyvaleriänsäure [S* Ohsiro et al., Yakugaku Zasshi, 87_s 1184 (1967)] und 250 mg (6",5 mMol) Natriumhydroxyd in. 25 ml Wasser zugegeben. Die erhaltene Mischung wird 1 Std. bei 5 bis 15⁰C gerührt, mit 25 ml Äther gewaschen, mit Chlorwasserstoff säure ' auf einen pH von 2 eingestellt und mit drei 30 ml-Portionen Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherlösungen werden mit 10 ml gesättigter Natriumchloridlösung geschüttelt^ über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und in vacuo eingedampft, wobei Kristalle erhalten werden, die aus Benzol umkristallisiert, werden, wobei 631 mg (78 %) VIc vom Schmelzpunkt 110 bis 111°C erhalten werden.

- 29 40 9 82 071 t 38

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30 23B2361

m-Spektrum [IR(KBr)J: 3460_f 3350, 1725, 1685, 1535, 1280,

730, 690 cm"¹«.*

Kernmagnetisch.es Resonanzspektrum. [NMR (Aceton-d-)] cf(in ppm) 1,70 (4H, m), 4,14 (2H, q, J=5 Hz), 4,19 (1H, a), 4,82 (2E, s)_f 6,2 (3H, breit), 7,25 (5H, s).

| +1,6- (c 10, Methanol).
Analyse Oj ^H₁ „NO;-:

CH-N

ber. :_	58,	42	6,	41	5,	24	■%
ge f.:	58,	36	6,	50	5,	27

Beispiel 12

N-Eydraxysuccinimidester der L-.jf-Benzyloxycarbonylamino-cciiydroxyvaleriansäure (VIIc)

412 mg (2,0 mMoi) NjN'-Dicyclohejrylcarbodiiaiid (DCC) werden zu einer gerührten und -gekühlten Lösung von 535 mg (2,0 eKoI) YIc υχιά 230 mg (2,0 mMol) N-Hydroxysucciniiaid in 55 al Äthylacetat zugegeben. Die erhaltene Mischung wird 3 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um ausgefallenen N,N^f-Dicyclohexylhamstoff zu entfernen. Das FiI-trat wird in vacuo eingedampft, wobei 780 mg (100 %) viskoser Sirup (VIIc) erhalten werden.

IR-Spektrum (sauber):^ _c=0 1810, 1785, 1725 cm"¹.

- 30 -

4098 20/1 136

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Beispiel 13

Herstellung von 1-[l/-(-)-<f-Ämino-a-hydroxyvaleryl]-gentamicin C^

Im Verfahren gemäß Beispiel 3 führt der Ersatz des dort verwendeten N-Hydroxysuccinimidesters der L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure VIIa durch eine äquimolare Menge an N-Hydroxysuccinimidester der L-(-)-cP-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleriansäure VIIc zu 1-[L-(-)-cf-Ainino-a-hydroxyvaleryl]-gentainicin Cp.

Die in der vorliegenden Erfindung verwendete Abkürzung HABA bedeutet Hydroxyaminobuttersäure.

- 31 409820/1136

Claims

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PATENTANSPRÜCHE :

mel

Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der For-

HO

ΙχΉ-R (in)

in der R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-/-Amino-orhydroxyvaleryl besitzt oder eines nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalz^s davon, dadurch gekennzeichnet, daß man in aufeinanderfolgenden Schritten

(A) Gentamicin C2 mit einem Acylierungsmittel der Formel

OH 0 ι π

W-

-NH-(CH₂^-CH-C-M (VII)

- 32 409820/1136

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in der ¥ einen aus dem Stand der Technik als Schutzgruppe für die primäre Aminogruppe bekannten Rest,
η eine ganze Zahl von 1 bis 3 und M einen Rest ausgewählt unter

0.

-0-N

-0-. NO

-NO,

und

-N

.N

bedeuten oder seinem funktionellen Äquivalent als Acylierungsmittel in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Gentamicin C^ in einem Lösungsmittel acyliert, wobei die Verbindung der Formel

(ID

- 33 -

4 0 9 8 2 0/1136

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23S2361

entsteht, in der ¥ und η die obigei Bedeutungen besitzen,

und

(B) die Schutzgruppe ¥ durch an sich bekannte Methoden aus der Yerbindung II entfernt, wobei die Verbindung der Formel III entsteht.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, äaS die Schutzgruppe ¥ ausgewählt ist unter

O CH_x 0

CH₉-O-C- , CH^-C-O-C-, O₉N-

kJ* ο oo

X-CH₂-C- und

vorzugsweise

CH₉-O-C-

4 5

worin R und R gleich oder verschieden sein können und jeweils H, F, Cl, Br, N0₂pH, (Niedrig)-alkyl oder (Niedrig)-alkoxy tind X Chlor, Brom oder Jod bedeuten.

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3. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß das molare Verhältnisdes Acylierungsmittels der Formel VII zu Gentamicin Cp 0,5 "bis 1,4, und vorzugsweise 0,8 bis 1,1 beträgt.
4. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, daß das Lösungsmittel Mischungen von V/asser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran oder Propylenglykoldimethyläther, vorzugsweise 1:1 ¥asser/ Äthylenglykoldimethyläther ist.
5. Verfahren gemäß- Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ¥ die Gruppe

CH₂-O-C-

ist und in Schritt B) die Verbindung II in Gegenwart eines Metallkatalysators, ausgewählt unter Palladium, Platin, Raney-Nickel, Rhodium, Ruthenium und Nickel, in einem aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel be stehenden Lösungsmittelsystem, ausgewählt unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimethyläther und Propylenglykoldimethyläther, hydriert wird.
6.. Verfahren gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß der eingesetzte Metallkatalysator Palladium-auf-Aktivkohle ist, das Lösungsmittel 1:1 Wasser/Dioxan ist und eine katalytische Menge an Eisessig zugesetzt -wird.

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7. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß das als Acylierungsmittel v/irksame funktionelle Äquivalent das entsprechende Azolid, Carbonsäurechlorid, -bromide Säureanhydrid, Säureazid, der aktive Ester oder Thioester oder das Isoxazoliumsalzreagens ist.
8. Verbindung dar Fonnel

NH₂

NH-R

worin R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-cr-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-£r-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf— Amino—cc— hydrozyvaleryl besitzt oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.
9» Zwischenprodukt für die Verbindung gemäß Anspruch 8, ausgewählt unter L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl-gentamicin C₂, L-(-)»ß-Benzyloxycarbonylamino-s-hydroxypFopionyi-gentamicin C₂ und L- (-)-cT-Benzyloxycarbonylamino-a^liydroxyvaleryl-gentamicin C
10, Verbindung gemäß Anspruch 8, worin E die Bedeutung L-(-)-Y"Aaino-a-hydro3qr'butyryl besitzt,,

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^M/12859 OQEOQCI
11«, Verbindung gemäß Anspruch 8₉ worin R die Bedeutung I_J-(-,)-ß„ii_nino-a-hydro2iypropionyl besitzt»
12_O Verbindung gemäß Anspruch S₉ worin R die Bedeutung j>.(-.)-cT-Amino-a-hydro3cyvaleryl besitzt.
13. Verbindung, die gemäß dem in einem der Ansprüche 1 bis 7 beanspruchten Verfahren erhalten wird.

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