<Desc/Clms Page number 1>
EMI1.1
Erfindung betrifftein A oder B durch Acylierung der 1-Aminogruppe des Kanamycins A oder B mit einem y-Amino-a-hydroxy- butyrylrest.
Die Kanamycine sind bekannte Antibiotica, die im Merck Index, 8. Auflage, S. 597 bis 598 beschrieben sind. Kanamycin A ist eine Verbindung der Formel
EMI1.2
Kanamycin B ist eine Verbindung der Formel
EMI1.3
Die Erfindung betriffthalbsynthetische, als - [L- (-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycin A und B bekannte Derivate des Kanamycins A und B der Formel
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
EMI2.2
EMI2.3
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
<Desc/Clms Page number 4>
EMI4.1
EMI4.2
droxybutyl und R3 für OH steht, sowie ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz dieser Verbindung.
Eine weitere besonders bevorzugte Verbindung ist eine Verbindung der Formel (V), in der R 1 für H, R z für L- (-)-y-Amino-ct-hydroxybutyryl und R3 für OH steht, sowie ein pharmazeutisch annehmbares Saureadditions- salz dieser Verbindung.
Besonders bevorzugt sind auch Salze der Verbindungen (V), nämlich Sulfate, Hydrochloride, Acetate, Maleate, Mandelate, Citrate, Ascorbate, Nitrate und Phosphate.
Zu einer besonders bevorzugten Verbindung zählt auch das Monosulfatsalz einer Verbindung (V).
Eine weitere bevorzugte Verbindung ist das Disulfat einer Verbindung (V).
EMI4.3
EMI4.4
EMI4.5
stehende aufeinander folgende Verfahrensstufen :
A) Acylierung von Kanamycin A oder Kanamycin B mit einem Acylierungsmittel, nämlich Verbindungen der Formeln
EMI4.6
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
EMI5.2
<Desc/Clms Page number 6>
EMI6.1
in der Y ein Rest der Formel ist :
EMI6.2
<Desc/Clms Page number 7>
EMI7.1
EMI7.2
EMI7.3
EMI7.4
EMI7.5
EMI7.6
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
EMI8.2
funktionellen Äquiyalenten in einem Verhältnis von zumindest 0,5 Mol der Verbindung (VII) pro Mol derVer- bindung (II), vorzugsweise in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 zu ungefähr 1,4 und gemäss einer besonders bevorzugten Ausführungsweise in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis ungefähr 1, 1, in einem Lösungsmittel, z.
B. einer Mischung von Wasser und Äthylenglykol, Dimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethyl- formamid, Tetrahydrofuran, Propylenglykoldimethyläther, od. dgl., vorzugsweise einer 1 : 1- Mischung von
Wasser und Äthylenglykoldimethyläther unter Bildung einer Verbindung der Formel
EMI8.3
EMI8.4
EMI8.5
EMI8.6
<Desc/Clms Page number 9>
ester von Carbonsäuren, von Alkyl- und Arylsulfonsäuren und von mehr behinderten Säuren, wie Diphenylessigsäuren. Es kann auch ein Säureazid oder ein aktiver Ester eines Thioesters, z. B. mit p-Nitrophenol, 2, 4-Di- nitrophenol, Thiophenol, Thioessigsäure verwendet werden, oder es kann die freie Säure mit dem Kanamycinderivat (H) gekuppelt werden, indem diese freie Säure mit N, Ni-Dimethylchlorforminiumclilorid (vgl.
Great
EMI9.1
170nyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Anteilen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloro- form, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt wird, wobei das Carbonsäure- imidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxyd und eines Mols Imidazol ge- bildet wird. Dicarbonsäuren führen zu Diimidazoliden. Das Nebenprodukt, Imidazol, fällt aus ; es kann abgetrennt werden, wonach das Imidazolid isoliert wird, wobei dies jedoch nicht wesentlich ist. Diese Reaktionen sind bekannt, (vgl. z. B. USA-Patentschriften Nr. 3, 079, 314, Nr. 3, 117, 126 und Nr. 3, 129, 224 undbrit. Pa- tentschriften Nr. 932, 644, Nr. 957,570 und Nr. 959, 054).
Bei der Herstellung von Kanamycin mitiii6'-StellungabgeschirmterAminogruppewahrendderVerfah- rensstufe A wird es vorgezogen, die molaren Anteile der Komponenten so zu regeln, dass ein Verhältnis von 1 Mol oder weniger als 1 Mol Acylierungsmittel pro Mol 61-abgeschirmten Amino-Kanamycin verwendet wird.
Ein grösserer Anteil an Acylierungsmittel wird auf Grund der erhöhten Anzahl von Nebenreaktionen, bei denen als Verunreinigungen Polyacylderivate entstehen, zu geringeren Ausbeuten an dem gewünschten Zwischenprodukt führen.
Wie bei den meisten chemischen Reaktionen können Temperaturen, die höher oder niedriger sind als die angegebenen, verwendet werden. Jedoch wird man bei Temperaturen, die wesentlich höher liegen als die angeführten (50 C), im allgemeinen auf Grund einer erhöhten Anzahl von Nebenreaktionen geringere Ausbeuten erhalten.
Die Verbindung (IVa), l- [Lr (-)-y-Amino-cx-hydroxybutyryl)-kanamycinA, besitzt eineausgezeictmete antibakterielle Wirksamkeit, welche derjenigen von Kanamycin A selbst überlegen ist. In nachstehenden zwei Tabellen sind die geringsten Minimalhemmkonzentrationen (MHK) von Kanamycin A und der Verbindung (IVa) (BB-K8) mit Bezug auf verschiedene grampositive und gramnegative Bakterien gezeigt, die nach dem Steers Agar-Verdünnungsverfahren (Tabelle 1) bzw. nach dem zweifachen Verdünnungsverfahren (Tabelle 2) erhalten worden waren. Bei den Versuchen gemäss Tabelle 1 wurde ein Mueller-Hinton-Agar-Medium und bei denVersuchen gemäss Tabelle 2 eine Herzmuskelbrühe verwendet.
Tabelle 1
EMI9.2
<tb>
<tb> (MHK <SEP> mg/ml)
<tb> Verbindung <SEP> (IVa)
<tb> Kanamycin <SEP> A <SEP> (BB-K8)
<tb> Oragnismus <SEP> (6-8198) <SEP> Beispiel <SEP> 2
<tb> 1. <SEP> Alk. <SEP> faecalisA-9423 <SEP> 16 <SEP> 8
<tb> 2. <SEP> Alk. <SEP> faecalis <SEP> A-20648 <SEP> > 125 <SEP> > <SEP> 125
<tb> 3. <SEP> Ent. <SEP> cloacae <SEP> A-9656 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 4. <SEP> Ent. <SEP> species <SEP> A-20364 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 5. <SEP> Ent. <SEP> hafniae <SEP> 1 <SEP> A-20674 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 6. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-0636 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 7. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20664 <SEP> 16 <SEP> 4
<tb> 8. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20665 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 1
<tb> 9. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20507 <SEP> 32 <SEP> 2
<tb> 10. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20520 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 11. <SEP> E.
<SEP> coli <SEP> A-20365 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 1 <SEP>
<tb> 12. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20684 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 13. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20682 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb>
<Desc/Clms Page number 10>
Tabelle 1 (Fortsetzung)
EMI10.1
<tb>
<tb> Verbindung <SEP> (IVa)
<tb> Kanamycin <SEP> A <SEP> (BB-K8)
<tb> Organismus <SEP> (6-8198) <SEP> Beispiel <SEP> 2 <SEP>
<tb> 14. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20683 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 8
<tb> 15. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20681 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 16. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-15119 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 17. <SEP> K- <SEP> pneumoniae <SEP> A-9867 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 18. <SEP> K. <SEP> species <SEP> A-20328 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 19. <SEP> K. <SEP> species <SEP> A-20330 <SEP> 32 <SEP> 32
<tb> 20. <SEP> K. <SEP> species <SEP> A-20634 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 21.
<SEP> K. <SEP> pneumoniae <SEP> A-20680 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 22. <SEP> K. <SEP> pneumoniae <SEP> A-9977 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 23. <SEP> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A-9900 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 24. <SEP> Pr. <SEP> morganii <SEP> A-15153 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 25. <SEP> Pr. <SEP> vulgaris <SEP> A-9555 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 26. <SEP> Pr. <SEP> rettgeri <SEP> A- <SEP> 9636 <SEP> 0,25 <SEP> 0,25
<tb> 27. <SEP> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A-20645 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 28. <SEP> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A-20454 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 29. <SEP> Providencia <SEP> stuartii <SEP> A <SEP> -20615 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 30. <SEP> Providencia <SEP> alkalifaciens <SEP> A-20676 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 31. <SEP> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20229 <SEP> 32 <SEP> 2
<tb> 32. <SEP> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-9843A <SEP> 125 <SEP> 16
<tb> 33. <SEP> Ps.
<SEP> aeruginosa <SEP> A-20653 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 32
<tb> 34. <SEP> Ps. <SEP> species <SEP> A-20601 <SEP> 125,63 <SEP> 16
<tb> 35. <SEP> Ps. <SEP> species <SEP> A-20621 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> > <SEP> 125
<tb> 36. <SEP> Ps. <SEP> maltophilia <SEP> A-20620 <SEP> 32 <SEP> > <SEP> 125
<tb> 37. <SEP> Sal. <SEP> enteritidis <SEP> A <SEP> - <SEP> 9531 <SEP> 1 <SEP> 0,5
<tb> 38. <SEP> Sal. <SEP> derby <SEP> A-20087 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 1
<tb> 39. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-20019 <SEP> 2 <SEP> 4
<tb> 40. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-9933 <SEP> 4 <SEP> 8
<tb> 41. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-20460 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4 <SEP> 2
<tb> 42. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-20459 <SEP> 4 <SEP> 16
<tb> 43. <SEP> Shig. <SEP> flexneri <SEP> A9684 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 44. <SEP> Aeromonas <SEP> sp. <SEP> A-20670 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 45. <SEP> Arizona <SEP> Sp.
<SEP> A-20671 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 46. <SEP> Citrobacter <SEP> Sp. <SEP> A-20673 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 47. <SEP> Edwardsiella <SEP> sp. <SEP> A-20678 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> 48. <SEP> Staph, <SEP> aureus <SEP> A-9606 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 49. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-4749 <SEP> 0,5 <SEP> 1
<tb> 50. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-9537 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 51. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-20610 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 52. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-20240 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 8
<tb> 53. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-15197 <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> Mueller-Hinton <SEP> Medium <SEP> + <SEP> 4% <SEP> Schafsblut
<tb> 54. <SEP> Str. <SEP> faecalis <SEP> A-9854 <SEP> 63 <SEP> 63
<tb> 55. <SEP> Str. <SEP> faecalis <SEP> A-9575 <SEP> 125 <SEP> > <SEP> 125 <SEP>
<tb> 56. <SEP> Str. <SEP> pyogenes <SEP> A-20200 <SEP> 32,16 <SEP> 32
<tb> 57. <SEP> Str.
<SEP> pyogenes <SEP> A-9604 <SEP> 125 <SEP> 125
<tb> 58. <SEP> Str. <SEP> pyogenes <SEP> A-15040 <SEP> 125 <SEP> 125
<tb> 59. <SEP> Str. <SEP> pyogenes <SEP> A-20065 <SEP> 125 <SEP> 125
<tb> 60. <SEP> D. <SEP> pneumoniae <SEP> A-9585 <SEP> 63, <SEP> 32 <SEP> 63
<tb> 61. <SEP> D. <SEP> pneumoniae <SEP> A-20159 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> > <SEP> 125
<tb>
<Desc/Clms Page number 11>
Tabelle 2
EMI11.1
<tb>
<tb> (MHK <SEP> mg/ml)
<tb> Verbindung <SEP> (IVa)
<tb> Kanamycin <SEP> A <SEP> (BB-K8)
<tb> Organismus <SEP> (6-8196) <SEP> Beispiel <SEP> 2
<tb> 1. <SEP> D. <SEP> pneumoniae+5% <SEP> SerumA-9585 <SEP> 63 <SEP> 63
<tb> 2. <SEP> Str. <SEP> pyrogenes <SEP> :
<SEP> 5% <SEP> Sérum <SEP> A-9604 <SEP> 125 <SEP> 125
<tb> 3. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> Smith <SEP> A-9537 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5
<tb> 4. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-9497 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5
<tb> 5. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-20239 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 6. <SEP> Staph. <SEP> aureus <SEP> A-20240 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 7. <SEP> Enter. <SEP> cloacaeA-0656 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 8. <SEP> Enter. <SEP> species <SEP> A-20364 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 9. <SEP> K. <SEP> pneumoniaeA-9867 <SEP> 2 <SEP> 4
<tb> 10. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> ML1410 <SEP> A-20361 <SEP> 2 <SEP> 4
<tb> 11. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> ML1630 <SEP> A-20363 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 2
<tb> 12. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> A-9632 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 13. <SEP> E. <SEP> coli <SEP> A-20664 <SEP> 32 <SEP> 8
<tb> 14. <SEP> E.
<SEP> coli <SEP> A-20665 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 8
<tb> 15. <SEP> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A- <SEP> 9900 <SEP> 2 <SEP> 16
<tb> 16. <SEP> Pr. <SEP> morganii <SEP> A-15153 <SEP> 4 <SEP> 16
<tb> 17. <SEP> Pr. <SEP> vulgaris <SEP> A-9436 <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> 18. <SEP> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20227 <SEP> 4 <SEP> 1
<tb> 19. <SEP> Ps. <SEP> species <SEP> A-20499 <SEP> 63 <SEP> 4
<tb> 20. <SEP> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20653 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> 4
<tb> 21. <SEP> Ps. <SEP> species <SEP> A-20621 <SEP> > <SEP> 125 <SEP> > <SEP> 125
<tb> 22. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-20019 <SEP> 2 <SEP> 4
<tb> 23. <SEP> Ser. <SEP> marcescens <SEP> A-20141 <SEP> 16 <SEP> 16
<tb>
Die obigen MHK-Resultate zeigen, dass die Verbindung (IVa) (BB-K8) Kanamycin A, insbesondere mit Bezug auf Kanamycin A gegenüber resistenten Organismen überlegen ist.
Diese Ergebnisse stimmen auch gut mit in vivo Resultaten für die drei Organismen überein, mit Bezug auf welche Kanamycin A und die Verbindung (IVa) geprüft wurden.
Die Verbindung (IVa) und Kanamycin A waren gleichfalls wirksam gegenüber Mäuseinfektionen, die durch mit Bezug auf Kanamycin A sensible Stämme von E. coli A-15119 and Staph. aureus A-9537 bewirkt waren.
Obgleich die CD-Werte (kurativeDosisbei50% vontodlictiinfiziertenMausen) furStaph. auieus A-9537 nahelegen. dass dieVerbindung (IVa) etwas weniger wirksam ist als Kanamycin A, ist dieser geringe Unterschied wahrscheinlich nicht von Bedeutung, da die Dosishöhen weit auseinander lagen (5fache Verdünnungen).
Mit Bezug auf den Kanamycin resistenten Stamm E. coli A-20520 war Kanamycin A, wie erwartet, in vivo nicht wirksam, wogegen die Verbindung (IVa) eine deutliche Schutzwirkung zeigt. DieVerbindung (IV a) war ungefähr zehnmal aktiver gegenüber diesem E. coli-Stamm, wenn sie je viermal und nicht je zweimal verabreicht wurde.
<Desc/Clms Page number 12>
Tabelle 3
EMI12.1
<tb>
<tb> Vergleich <SEP> von <SEP> in <SEP> vitro <SEP> und <SEP> in <SEP> vivo <SEP> Wirksamkeiten <SEP> der <SEP> Verbindung <SEP> (IVa) <SEP> und <SEP> Kanamycin <SEP> A
<tb> Verbindungen <SEP> Versuchs-Staphylococcus <SEP> Escherichia <SEP> coli <SEP> Escherichia <SEP> coli
<tb> nummer <SEP> aureus <SEP> A-9537 <SEP> A-15119 <SEP> A-20520 <SEP>
<tb> MHK <SEP> CD50b <SEP> MHK <SEP> CD50 <SEP> MHK <SEP> CD50
<tb> Verbindung <SEP> (IVa) <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2, <SEP> 0 <SEP> X <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> X <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 66 <SEP> X <SEP> 2
<tb> 2 <SEP> c <SEP> - <SEP> 5X4 <SEP>
<tb> Kanamycin <SEP> A <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 0,5 <SEP> X <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 4X2 <SEP> 125 <SEP> 200 <SEP> X <SEP> 2
<tb> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 200 <SEP> X <SEP> 4
<tb>
a MHK = Minimalhemmkonzentration (mg/ml).
Versuche ausgeführt nach Chrisholm et al., (Antimicrob. agents and Chemotherapy - 1969 [1970] S. 244) unter Verwendung von Mueller-Hinton-Agar als Testmedium.
CD = kurative Dosis, 50% (mg/kg behandelt X Zahl der Behandlungen). Mäuse wurden subkutan 1 und
4 h nach der Infektion bei zwei Verabreichungen bzw. 0,2, 4 und 6 h nach der Infektion bei vier Verabreichungen behandelt. Im übrigen wurde bei diesen Versuchen so verfahren, wie von
Price et al. (J. of Antibiotics 22 : 1 [1969]) beschrieben. c = nicht geprüft.
<Desc/Clms Page number 13>
Die Verbindungen (IV) sind wertvoll als antibakterielle Mittel, Zusätze zu Futtermittel, therapeutische Mittel bei Geflügel und Säugetieren, einschliesslich Menschen, und sind insbesondere wertvoll zur Behandlung von durch grampositive und gramnegative Bakterien verursachte Infektionskrankheiten.
Bei oraler Verabreichung sind die Verbindungen (IV) als zusätzliche Behandlung bei der preoperativen Darmdesinfektion verwendbar. Auf diese Arzneimittel ansprechende aerobe und anaerobe Flora wird im Dickdarm vermindert. Bei entsprechender mechanischer Reinigung sind diese Verbindungen auch in der Dickdarmchirurgie verwendbar.
Die Verbindungen (IV) sind auch wirksam zur Behandlung von bakteriellen Infektionen, wenn sie im Bereich von ungefähr 250 mg bis ungefähr 3000 mg/Tag, verteilt in drei oder vier Dosen, verabreicht werden. Im allgemeinen sind die Verbindungen wirksam, wenn sie in einer Dosierung von ungefähr 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht alle 12 h verabreicht werden.
DieVerbindung (IVb), l- [L- (-)-y-Amino-c < -hydroxybutyryl]-kanamycinB, besitzt eine hervorragende antibakterielle Wirksamkeit, welche derjenigen von Kanamycin A überlegen ist. In nachstehender Tabelle 4 sind die Minimalhemmkonzentrationen (MHK) von Kanamycin A und der Verbindung (IVb) (BB-K26) mit Bezug auf verschiedene grampositive und gramnegative Bakterien gezeigt. Die MHK-Werte wurden nach dem Steer- Agar-Verdünnungsverfahren (Tabelle 4) auf Agar-Medium erhalten.
Tabelle 4
EMI13.1
<tb>
<tb> Bezeich- <SEP> resistent <SEP> MHK <SEP> (mg/ml)
<tb> Organismus <SEP> nung <SEP> gegenüber <SEP> BBK-26 <SEP> KanamycinA <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> Nllff <SEP> 0,4 <SEP> 0,8
<tb> E. <SEP> coli <SEP> Juhl <SEP> A-15119 <SEP> 1,6 <SEP> 0,8
<tb> E. <SEP> coli <SEP> A-1516a <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> E. <SEP> coli <SEP> A-20363 <SEP> KM <SEP> 0,8 <SEP> 50
<tb> E. <SEP> coli <SEP> A-9844 <SEP> 0,8 <SEP> 0,8
<tb> E. <SEP> coli <SEP> A-20365 <SEP> KM <SEP> 0, <SEP> 4 <SEP> > 50 <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> 0,8 <SEP> 0,4
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> A-20664 <SEP> KM <SEP> 0,8 <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> A-20665 <SEP> KM <SEP> 0,8 <SEP> 50
<tb> K. <SEP> pneumoniae <SEP> DU <SEP> 0,2 <SEP> 0,2
<tb> K. <SEP> pneumoniae <SEP> A-9678 <SEP> 0,8 <SEP> 0, <SEP> 8
<tb> S.
<SEP> marcescens <SEP> A-20019 <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> D15 <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> 12,5
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> D113 <SEP> KM <SEP> 50 <SEP> > <SEP> 50 <SEP>
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-9923 <SEP> 1,6 <SEP> 25
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-9930 <SEP> 0,8 <SEP> 6,3
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-15150 <SEP> 6,3 <SEP> 25
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-15194 <SEP> 1,6 <SEP> 12,5
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20479 <SEP> KM <SEP> 1,6 <SEP> 50
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20616 <SEP> KM <SEP> 3,1 <SEP> 25
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-20653 <SEP> KM <SEP> 25 <SEP> 50
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> A-9843 <SEP> 1,6 <SEP> 12,5
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20355 <SEP> 1,6 <SEP> 6,3
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20358 <SEP> KM <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> 12,5
<tb> Pseudomonas <SEP> sp.
<SEP> A-20368 <SEP> GM <SEP> 50 <SEP> 25
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20598 <SEP> GM <SEP> 6,3 <SEP> 25
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20600 <SEP> GM <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> 12,5
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20603 <SEP> GM <SEP> 6,3 <SEP> > <SEP> 50 <SEP>
<tb> Pseudomonas <SEP> sp. <SEP> A-20618 <SEP> GM <SEP> 50 <SEP> 50
<tb> Pr. <SEP> vulgaris <SEP> A-9436 <SEP> 1,6 <SEP> 0,8
<tb> Pr. <SEP> vulgaris <SEP> A-9526 <SEP> 0,8 <SEP> 0,8
<tb> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A-9554 <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> Pr. <SEP> mirabilis <SEP> A-9900 <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> Pr. <SEP> morganii <SEP> A-9553 <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> Pr. <SEP> morganii <SEP> A-20031 <SEP> 6, <SEP> 3 <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP>
<tb> Pr. <SEP> rettgeri <SEP> A-15167 <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> 0,8
<tb> S.
<SEP> aureus <SEP> 209P <SEP> 1,6 <SEP> 0,8
<tb>
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
EMI14.2
<tb>
<tb> MHK <SEP> (mg/ml)
<tb> Bezeich-resistent <SEP> MHK <SEP> (mg/ml) <SEP>
<tb> Organismus <SEP> nung <SEP> gegenü <SEP> her <SEP> BBK-26 <SEP> Kanamycin <SEP> A
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> Smith <SEP> 0,8 <SEP> 0, <SEP> 4
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> 209 <SEP> P <SEP> 1,6 <SEP> 0, <SEP> 8
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> A-20239 <SEP> KM <SEP> 1,6 <SEP> 25
<tb> S. <SEP> lutea <SEP> PCl-1001 <SEP> 1,6 <SEP> 3,1
<tb> M. <SEP> flavus <SEP> 0,4 <SEP> 0,8
<tb> B. <SEP> subtilis <SEP> PCI-219 <SEP> 0,1 <SEP> 0,1
<tb> St. <SEP> pyogenes <SEP> S-23 <SEP> 25 <SEP> 25
<tb> St. <SEP> pyogenes <SEP> Dick <SEP> 1,6 <SEP> 1,6
<tb> St. <SEP> pyogenes <SEP> Digonnet <SEP> A- <SEP> 9604 <SEP> 12,5 <SEP> 25
<tb> St. <SEP> pyogenes <SEP> A-20065 <SEP> 25 <SEP> 25
<tb> D.
<SEP> pneumoniae <SEP> 50 <SEP> 25
<tb> Mycobacterium <SEP> 607 <SEP> 6,3 <SEP> 0,8
<tb> Mycobacterium <SEP> 607 <SEP> D105 <SEP> KM <SEP> > <SEP> 100 <SEP> > <SEP> 100
<tb> Mycobacterium <SEP> 607 <SEP> D107 <SEP> KM <SEP> > <SEP> 100 <SEP> > <SEP> 100
<tb> Mycobacterium <SEP> phlei <SEP> 1, <SEP> 6 <SEP> 1,6
<tb> Mycobacterium <SEP> ranae <SEP> 6,3 <SEP> 1,6
<tb> Mycobacterium <SEP> H37Rv <SEP> 0,8 <SEP> 0,4
<tb>
EMI14.3
bestimmt nach dem Rohrverdünnungsverfahren (tube dilution method)
KM = Kanamycin A
GM = Gentamycin
Die obigen MHK-Werte zeigen, dass die Verbindung (IVb) (BB-K26) wirksamer ist als Kanamycin, insbesondere mit Bezug auf Kanamycin A gegenüber resistenten Organismen.
Es wurde eine in vivo Bewertung der Verbindung (IVb) mit Bezug auf sowohl Kanamycin B gegenüber sensiblen als auch mit Bezug auf Kanamycin B gegenüber resistenten Stämmen von E. coli und Ps. aeruginosa vorgenommen.
Die Organismen können wie folgt klassifiziert werden :
EMI14.4
<tb>
<tb> Bezeichnung <SEP> Kanamycin <SEP> Sensibilität <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> Juhl <SEP> A-15119 <SEP> sensibel
<tb> E. <SEP> coli <SEP> ML-1630 <SEP> A-20363 <SEP> resistent <SEP> (Phosphorylierung)
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> D15 <SEP> mässig <SEP> resistent <SEP>
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> D113 <SEP> sehr <SEP> resistent <SEP>
<tb> (Phosphorylierung)
<tb>
Die Verbindung (IVb) (BB-K26) und Kanamycin B waren in gleicher Weise wirksam gegenüber E. coli Juhl A-15119 bei einer Dosis von 6, 3 mg/kg in Mäusen. Die Verbindung (IVb) war besonders wirksam gegenüber Kanamycin B resistenten E. coli ML-1630 bei einer Dosis von 6,3 mg/kg vs. 100 bis 400 mg/kg für Kanamycin B.
Die Verbindung (IVb) zeigte eine verglichen mit Kanamycin B etwas bessere Wirksamkeit gegenübermässig resistenten Ps. aeruginosa D15 und eine wesentlich bessere Wirksamkeit gegeniiber sehrresistenten Ps. aeruginosa D-113 (vgl. nachstehende Tabelle 5).
<Desc/Clms Page number 15>
Tabelle 5
EMI15.1
<tb>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> Juhl <SEP> A-15119 <SEP> E. <SEP> coli <SEP> ML-1630
<tb> Dosis <SEP> (sc) <SEP> BB-K26 <SEP> KM-B* <SEP> BB-K26 <SEP> KM-B
<tb> 400 <SEP> mg/kg--2/5 <SEP>
<tb> 100 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 2/5
<tb> 25 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 0/5
<tb> 6,3 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 0/5
<tb> 1,6 <SEP> 0/5 <SEP> 0/5 <SEP> 2/5
<tb> CDso <SEP> (mg/kg) <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> 3,1 <SEP> 1, <SEP> 8 <SEP> zirka <SEP> 300
<tb> Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> D-15 <SEP> Ps.
<SEP> aeruginosa <SEP> D-113
<tb> Dosis <SEP> (sc) <SEP> BB-K26 <SEP> KM-B <SEP> Dosen <SEP> (sc) <SEP> BB-K26 <SEP> KM-B
<tb> 100 <SEP> mg/kg <SEP> 5/5 <SEP> 5/5 <SEP> 400 <SEP> mg/kg <SEP> - <SEP> 0/5 <SEP>
<tb> 25 <SEP> 1/5 <SEP> 0/5 <SEP> 200 <SEP> 3/5
<tb> 6, <SEP> 3 <SEP> 1/5 <SEP> 0/5 <SEP> 50 <SEP> 1/5
<tb> 1, <SEP> 6 <SEP> 0/5 <SEP> 0/5 <SEP> 12, <SEP> 5 <SEP> 0/5 <SEP>
<tb> 3, <SEP> 1 <SEP> 0/5 <SEP>
<tb> CDso <SEP> (mg/kg) <SEP> 38 <SEP> 50 <SEP> CD <SEP> (mg/kg) <SEP> 145 <SEP> > 400
<tb>
KM-B ist Kanamycin B. Die Angaben 0/5,1/5, 5/5 usf. zeigen die Anzahl der überlebenden Tiere pro 5 geprüfte Tiere ; z. B. zeigt 5/5 an, dass 5 von 5 behan- delten Tieren die an sich tödliche Dosis überstanden, wenn sie mit Kanamycin B oder BB-K26 behandelt wurden.
Die Erfindung soll an Hand von Beispielen näher erläutert werden.
Vorschrift 1 : Herstellung von L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-α-hydroxybuttersäure (VI).
L-(-)-γ-Amino-α-hydroxybuttersäure (7,4 g, 0,062 Mol) wurde einer Lösung von 5, 2 g (0, 13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser zugesetzt. Zu der Lösung wurden unter Rühren tropfenweise während 1/2 h bei 0 bis 50C 11,7 g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid hinzugefügt, wonach die Mischung eine weitere Stunde bei der gleichen Temperatur gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde mit 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und viermal mit je 80 ml Anteilen Äther extrahiert. Die
EMI15.2
EMI15.3
<tb>
<tb>
Analyse <SEP> auf <SEP> Cl. <SEP> H <SEP> NOs: <SEP> C <SEP> 56, <SEP> 91 <SEP> H <SEP> 5,97 <SEP> N <SEP> 5, <SEP> 53 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 56,66 <SEP> H <SEP> 5, <SEP> 97 <SEP> N <SEP> 5, <SEP> 47.
<tb>
Vorschrift 2 : N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-α-hydroxybuttersäure (VII).
Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) der Verbindung (VI) und 4,8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid 1 in 200 ml Äthylacetat wurde auf 00C abgekühlt. Sodann wurden 8,6 g (0,042 Mol) Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wurde überNacht in einem Eiskasten stehen gelassen, der abgeschiedene Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert und das Filtrat unter vermindertem Druck auf ungefähr 50 ml eingeengt. Nach Filtrieren erhielt man farblose Kristalle (VII), 6, 4 g Fp. =121 bis 122, 50C.
Das Filtrat wurde im Vakuum zur Trockne eingedampft, wonach der kristalline Rückstand mit 20 ml einer Mischung von Benzol mit n-Hexan ge-
EMI15.4
breit), 7,23 (5H, s).
EMI15.5
<tb>
<tb>
Analyse <SEP> auf <SEP> C16H18N2O7 <SEP> : <SEP> C <SEP> 54, <SEP> 85 <SEP> H <SEP> 5, <SEP> 18 <SEP> N <SEP> 8, <SEP> 00 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 54, <SEP> 79,54, <SEP> 70 <SEP> H <SEP> 5,21, <SEP> 5,20 <SEP> N <SEP> 8, <SEP> 14, <SEP> 8, <SEP> 12. <SEP>
<tb>
EMI15.6
<Desc/Clms Page number 16>
Eine Lösung von 1, 6 g (4,6 mMol) der Verbindung (VII) in 40 ml Äthylenglykoldimethyläther (DMÄ) wurde tropfenweise einer Lösung von 2, 6 g (4, 2 mMol) 61-Monobenzyloxycarbonylkanamycin A (II) in 40 ml 50% wässerigem Äthylenglykoldimethyläther zugesetzt, wonach die Mischung über Nacht gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhielt einen braunen Rückstand von (IIIa), der für die nächste Verfahrensstufe ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
Beispiel 2 : Herstellung von l-[L- (-) -y-Amino-a-hydroxybutyryI]-kanamycin A (IVa).
Das Rohprodukt (IIIa) aus Beispiel 1 wurde in 40 ml 50% wässerigem Dioxan gelöst, wonach eine kleine
EMI16.1
le wurde mit 200 ml Wasser gewaschen und dann mit 800 ml 0, In-NH OH, 500 ml 0, 2n-NH OH und schliesslich mit 500ml 0, 5n-NH4OH eluiert. Es wurden 10 ml Fraktionen gesammelt, wobei die Fraktionen 146 bis 154 552 mg (221o, bezogen auf das C arbobenzoxykanamycin A, II) des Produktes (IV) enthielten, dasmit""BB-K8-An-
EMI16.2
30 X 0,9 cm) einer Chromatographie unterworfen. Die Säule wurde mit 50 ml Wasser gewaschen und dann mit 0, 2n-NH 4OH eluiert. Es wurden 10 ml Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 50 bis 63 wurden vereint und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Man erhielt 98 mg des reinen Produktes K8 Ansatz 2-1.
EMI16.3
EMI16.4
<tb>
<tb>
85 <SEP> (c=2, <SEP> HAnalyse <SEP> aufC <SEP> HNg0. <SEP> 2H2COg <SEP> : <SEP> C <SEP> 40, <SEP> 62 <SEP> H <SEP> 6, <SEP> 68 <SEP> N <SEP> 9, <SEP> 87 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 40, <SEP> 21,39, <SEP> 79 <SEP> H <SEP> 6,96, <SEP> 6,87 <SEP> N <SEP> 9, <SEP> 37, <SEP> 9, <SEP> 49. <SEP>
<tb>
Vorschrift 3 : Herstellung von N- (Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid.
N-Hydroxysuccinimid 1 (23 g, 0, 2 Mol) wurde in einer Lösung von 0, 9 g (0, 22 Mol) Natriumhydroxyd in
EMI16.5
bei sich das Cerbobenzoxyderivat abschied, welches abfiltriert, mit Wasser gewaschen und luftgetrocknet wurde. Ausbeute 41, 1 g (820/0). Die Umkristallisation aus einem Gemisch von Benzol mit n-Hexan (10 : 1) ergab farblose Prismen, Fp. = 78 bis 790C.
1 G. W. Anderson et al, J. Am. Chem. Soc., 86,1839 [1964],
Beispiel3 :Herstellungvon6'-CarbobenzoxykanamycinA.
Eine Lösung von 42, 5 g (90 mMol) Kanamycin A freie Base in 450 ml Wasser und 500 ml Dimethylformamid (DMF) wurde auf unter 00C abgekühlt und stark gerührt. Der Lösung wurden tropfenweise in einem Zeitraum von ungefähr 2 h eine Lösung von 22, 4 g (90 mMol) N-Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid in 50 ml DMF
EMI16.6
Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck bei einer ungefähr unter 500c gelegenen Temperatur eingedampft. Der ölige Rückstand wurde in einer Mischung von 500 ml Wasser und 500 ml Butanol gelöst, wonach das Gemisch zwecks Abscheidung von unlöslichem Material abfiltriert wurde.
Es schieden sich zwei Schichten ab, die Butanolschichten und die wässerigen Schichten wurden mit mit Butanol gesättigtem Wasser (500mlx2) bzw. mit mit Wasser gesättigtem Butanol (500 ml x 2) behandelt, wobei eine mit einer Gegenstromverteilung vergleichbare Technik angewendet wurde. Die drei wässerigen Schichten wurden vereint und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wonach man einen öligen Ruckstand erhielt ; ein Teil desselben kristallisierte beim Stehenlassen bei Raumtemperatur aus. Zu dem die Kristalle enthaltenden Rückstand wurden ungefähr 100 ml Methanol hinzugefügt, der das Öl auflöste und es von denKristallen trennte.
Nach Zusatz von ungefähr 300 ml Äthanol wurde die Mischung bei Raumtemperatur über Nacht stehen gelassen, wobei sich eine kristalline Masse abschied, welche abfiltriert wurde. Sie wog 44 g. Das Produkt enthielt, wie eine Dünnschichtchromatographie (DSC) unter Verwendung von n - Propanol- Pyridin - Essigsäure-Wasser
EMI16.7
cin A.
Das Rohprodukt wurde in 300 ml Wasser aufgelöst und auf einer Saule (30 mm Durchmesser) CG-50 Ionen-
EMI16.8
500 ml)behandelt, wonach das Eluat in 10 ml Fraktionen gesammelt wurde. Das erwünschte Produkt wurde in Röhren Nr. 10 bis 100 gesammelt, wobei Kanamycin A aus sich langsamer bewegenden Fraktionen isoliert wurde und das bzw. die Stellungsisomeren des Produktes in den sich schneller bewegenden Fraktionen vorzuliegen schienen. Die Fraktionen 10 bis 110 wurden vereint und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Man er-
<Desc/Clms Page number 17>
hielt auf diese Weise 24, 6g (450/o) eines farblosenProduktes 6-CarbobenzoxykanamycinA (II) (6'-Cbz-Kanamycin A), das bei 204 C zu schmelzen und sich zu verfärben begann und sich unter Gasentwicklung bei 2120C zersetzte. [a]D + 1060 (c = 2, HzO).
EMI17.1
<tb>
<tb>
Rf-Wert
<tb> DSC <SEP> (Kieselgel <SEP> F <SEP> ; <SEP> Ninhydrin) <SEP> Rf-Wert <SEP>
<tb> Lösungsmittelsystem <SEP> 61-Cbz-Kanamycin <SEP> A <SEP> Kanamycin <SEP> A <SEP>
<tb> n-PrOH-Pyridin-Essigsäure-H2O <SEP> 0,42 <SEP> 0,33 <SEP> 0,15 <SEP> 0, <SEP> 04
<tb> (15 <SEP> : <SEP> 10. <SEP> : <SEP> 3 <SEP> : <SEP> 12)
<tb> (Haupt- <SEP> (geringerer
<tb> anteil) <SEP> Anteil)
<tb> Aceton-Essigsäure-H2O <SEP> 0,24 <SEP> 0, <SEP> 14 <SEP>
<tb> (20 <SEP> : <SEP> 6 <SEP> : <SEP> 74)
<tb> CHClg-MeOH-c. <SEP> NH <SEP> OH-HO <SEP> 0,76 <SEP> 0,50
<tb> (1 <SEP> : <SEP> 4 <SEP> : <SEP> 2 <SEP> : <SEP> 1) <SEP>
<tb> AcOMe-n-PrOH-c.NH4OH <SEP> 0,22* <SEP> 0, <SEP> 04*
<tb> (45 <SEP> : <SEP> 105 <SEP> : <SEP> 60)
<tb>
*
Festgestellt mittels Anthron-Schwefelsäure.
Es wurde festgestellt, dass das Endprodukt von zwei kleineren Komponenten begleitet war (gemäss DSC mit einem der Lösungsmittelsysteme). Es wurde jedoch das Endprodukt ohne weitere Reinigung zur Herstellung von
BB-K8 (I) verwendet.
Vorschrift 4 : Herstellung von L-(-)-γ-Amino-α-hydroxybuttersäure aus Ambutyrosin A oder B oder Mi- schungen dieser Verbindungen.
Ambutyrosin A (5,0 g) (vgl. USA-Patentschrift Nr. 3,541, 078) wurde mit 160 ml 0, 5n-Natriumhydroxyd
EMI17.2
Rückfluss erhitzt. Das Hydrolysatchromatographiert. Die gewünschte L- (-)-y-Amino-a-hydroxybuttersäure wurde unter Verwendung von Wasser auf einer Säule isoliert, wonach das Wasser durch Gefriertrocknung entfernt wurde. Die L-(-)-ss-Amino-α-hy- droxybuttersäure ist kristallin, Fp. 212,5 bis 214, 50C. (Sp. 2, Z. 31 bis 38,USA-Patentschrift Nr. 3,541,078).
Beispiel 4 : Herstellung von 61-Carbobenzoxykanamycin B.
Einer gekühlten Lösung von 8, 1 g (0,0168 Mol) Kanamycin B in 120 ml Wasser und 80 ml 1,2-Dimethoxy- äthan wurde tropfenweise eine Lösung von 4,2 g (0,0168 Mol) N- (Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid in 40 ml
1, 2-Dimethoxyäthan unter Rühren zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht gerührt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde in 100 ml Wasser gelöst und zweimal mit 50 ml von mit Wasser gesättigtem n-Butanol geschüttelt. Die wässerige Schicht wurde abgetrennt und auf einer Säule von
EMI17.3
eluiert. Das Eluat wurde in 10 ml Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 121 bis 180 wurden eingedampft und gefriergetrocknet. Man erhielt 1,58 g (150/0) des erwünschten Produktes.
Die Fraktionen 1 bis 120 wurden ein-
EMI17.4
EMI17.5
<tb>
<tb> Analyse <SEP> auf <SEP> C <SEP> 26 <SEP> H <SEP> 43 <SEP> N <SEP> 4012 <SEP> : <SEP> C <SEP> 50, <SEP> 56 <SEP> H <SEP> 7,02 <SEP> N <SEP> 11, <SEP> 34 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 50, <SEP> 71 <SEP> H <SEP> 7, <SEP> 38 <SEP> N <SEP> 11, <SEP> 48. <SEP>
<tb>
DSC (Kieselgel F254 E. Merck, Darmstadt), Rf 0,03 in n-PrOH-Essigsäure- H2O (15 : 10 : 3 : 12); Rf 0, 16 in Aceton-Essigsäure-H2O (20 : 6 : 74).
Beispiel 5 : Herstellung von l- [L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-α-hydroxybutyryl]-6'-carbobenzoxy- kanamycin B (IIIb).
EMI17.6
0,21, 0,34, 0,46 (Aceton-Essigsäure-H, 0 = 20 : 6 : 74).
Beispiel 6: Herstellung von 1-[L-(-)-γ-Amino-α-hydroxybutyryl]-kanamycin B (IVb).
Zu der gemäss beispiel 9 erhaltenen Lösung wurden 0,2 g 10% Palladium auf Kohle hinzugefügt. Sodann
<Desc/Clms Page number 18>
wurde das Gemisch 5h unter atmosphärischem Druck hydriert, wobei eine zusätzliche Menge von 107Palladium auf Kohle (0,1 g) und 10 ml Wasser zugesetzt wurden. Das Hydrieren wurde über Nacht fortgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde abfiltriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft, der Rückstand in 50 ml Was-
EMI18.1
Wasser gewaschen und hierauf mit 500ml 0,1 n-NH4OH, 500 ml 0,2n-NH4OH, 900 ml 0, 5n-NHpHund 500 ml in NH4 OH eluiert. Die Eluate wurden in 10 ml Fraktionen gesammelt. Kanamycin B wurde in den Fraktionen 60 bis 66 in 32% Ausbeute (459 mg) isoliert.
Die Fraktionen 128 bis 138 wurden gesammelt, unter vermindertem
EMI18.2
EMI18.3
<tb>
<tb> Fp. <SEP> =Analyse <SEP> auf <SEP> C22H44N6O12. <SEP> H2CO3 <SEP> : <SEP> C <SEP> 42,72 <SEP> H <SEP> 7,17 <SEP> N <SEP> 13,00;
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 42, <SEP> 23 <SEP> H <SEP> 7, <SEP> 19 <SEP> N <SEP> 12, <SEP> 37.
<tb>
EMI18.4
Konzentrat NHOH-H 20 (1 : 4 : 2 : 1).
Die Fraktionen 201 bis 222 wurden vereint, unter vermindertem Druck eingedampft und gefriergetrocknet.
Man erhielt auf diese Weise 209 mg (12%) einer weiteren wirksamen Komponente, die als BB-K27 bezeichnet wurde. Fp. = 183 bis 1840C (Zers.) y C=o 1750 cm -1.
EMI18.5
<tb>
<tb>
ANalyse <SEP> auf <SEP> C22H44N6O12. <SEP> H2CO3: <SEP> C <SEP> 42, <SEP> 72 <SEP> H <SEP> 7, <SEP> 17 <SEP> N <SEP> 13, <SEP> 00 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> C <SEP> 42,25 <SEP> H <SEP> 6,93 <SEP> N <SEP> 12, <SEP> 18. <SEP>
<tb>
EMI18.6
Ftersäure A) Dehydroabietylammonium-L-α-hydroxy-γphthalimidobutyrat: Einer Lösung von 25 g (0,1 Mol) 2-Hydroxy-y -phthalimidobuttersäure1 in 200 ml Äthanol wurde eine Lö-
EMI18.7
die spezifische Rotation.
EMI18.8
<tb>
<tb> ANalyse <SEP> auf <SEP> C32H42N4.H2O: <SEP> C <SEP> 69,54, <SEP> H <SEP> 8,02 <SEP> N <SEP> 5, <SEP> 07 <SEP> ; <SEP>
<tb> gefunden <SEP> :
<SEP> C <SEP> 69,58 <SEP> H <SEP> 8, <SEP> 08 <SEP> N <SEP> 5, <SEP> 07.
<tb>
EMI18.9
Einer Lösung von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser wurden 5,3 g (0,01 Mol) Dehydro- abietylammonium-L-α-hydroxy-γphthalimidobutyrat und 60 ml Äther zugesetzt. Die Mischung wurde heftig geschüttelt, bis die ganzenFeststoffe aufgelöst waren. Die Ätherschicht wurde abgetrennt. Die wässerige Lösung wurde zweimal mit 20ml Anteilen Äther gewaschen und unter vermindertem Druck auf 15 ml eingeengt. Dem Konzentrat wurden 10 ml konz. Salzsäure zugesetzt, wonach die Mischung 10 hunter Rückfluss erhitzt wurde.
Nach dem Abkühlen wurde die abgeschiedene Phthalsäure abfiltriert. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde in 10 ml Wasser aufgelöst und die Lösung zur Trockne eingedampft. Dieser Vorgang wurde zur Entfernung von überschüssiger Salzsäure zweimal wiederholt. Der zurückbleibende Sirup wurde in 10 ml Wasser aufgelöst und zur Entfernung einer kleinen Menge von unlöslicher Phthalsäure abfiltriert. Das Filtrat wurde auf einer Polystyrol-Ionenaustauschersäule IR-120 Rohm & Haas Comp. U. S. A.
(H+, 1 x 35 cm) adsorbiert, die Säule mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 1n-Ammoniumhydroxydlösung eluiert. Das Eluat wurde in 15 ml Fraktionen gesammelt. Die ninhydrinpositiven Fraktionen 10 bis 16 wurden vereint und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei ein allmählich kristallisierender Sirup erhalten wur-
EMI18.10
Das IR-Spektrum war identisch mit einer authentischen Probe, die aus Ambutyrosin erhalten worden war.
Beispiel 7 : Herstellung des Monsulfatsalzes von 1-[L-(-)-γ-Amino-α-hydroxybutyryl]-kanamycin A oder B.
EMI18.11
<Desc/Clms Page number 19>
1 Mol mit 500 ml Wasser verdünnter Schwefelsäure zugesetzt. Die Mischung wurde 30 min gerührt, wonach kalter Äthanol zu der Mischung bis zum Auftreten eines Niederschlages hinzugefügt wurde. Die Feststoffe wur- den abfiltriert ; sie waren, wie festgestellt werden konnte, das gewünschte Monosulfatsalz.
Beispiel 8 : Herstellung des Disulfatsaizesvon l- [L- (-)-y-Amino-'x-hydroxybutyryl]-kanamycinA (BB-K8. 2H SO4).
35 g l- [L- (-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycin A (als Monobicarbonattrihydrat) wurden in 125 ml entionisiertem Wasser aufgelöst. Es wurde ein PH-Wert von ungefähr 9,0 festgestellt, der mit 50 Vol. /Vol. -%
Schwefelsäure auf 7 bis 7,5 herabgesetzt wurde.
8, 5 g Darco G-60 der Firma Atlas Powder Company, U. S. A. (Aktivkohle) wurden zugesetzt, wonach die Mischung bei Raumtemperatur 0, 5 h aufgeschlämmt wurde. Die Kohle wurde durch Filtrieren abgetrennt und mit 40 ml Wasser gewaschen. Das Waschwasser wurde dem Filtrat zugesetzt.
Das mit dem Waschwasser kombinierte Filtrat wurde mit 50 Vol. /Vol. -% Schwefelsäure auf einen PH-Wert von 2 bis 2, 6 gebracht, wobei eine grosse Menge von Kohlendioxyd abgegeben wurde. Die Lösung wurde zur
Entfernung von weiterem Kohlendioxyd unter Rühren 20 min mit dem Hausvakuum in Verbindung gelassen.
Zu der so erhaltenen Lösung wurden 8,5 g Darco G-60 hinzugefügt. Die Mischung wurde bei Raumtempe- ratur 0, 5 h aufgeschlämmt. Die Kohle wurde abfiltriert und mit 35 ml entionisiertem Wasser gewaschen. Das
Wasser wurde dem Filtrat zugesetzt, wonach es mit 50 Vol. /Vol. -% Schwefelsäure auf einen PH-Wert von 1 bis
1, 3 gebracht wurde. Dieser Lösung wurde unter starkem Rühren innerhalb von 10 min 600 bis 800 ml Methanol (3 bis 4Volumina Methanol) zugesetzt. Die Mischung wurde bei einem PH-Wert von 1 bis 1, 3 5 min gerührt, durch ein Sieb mit lichter Maschenweite von 149 u durchgeführt, 2 min gerührt und 5 min sich absetzen ge- lassen. Der grösste Teil der überstehenden Flüssigkeit wurde abdekantiert.
Die zurückbleibende Aufschlämmung wurde abfiltriert, mit 200 ml Methanol gewaschen und bei 500C 24 h im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute an
EMI19.1
EMI19.2
<tb>
<tb> Elementaranalyse <SEP> (auf <SEP> trockener <SEP> Basis*)
<tb> gefunden <SEP> Theorie
<tb> %C <SEP> 32, <SEP> 7, <SEP> 33, <SEP> 5, <SEP> 32, <SEP> 3 <SEP> 33, <SEP> 5 <SEP>
<tb> 0/0 <SEP> N <SEP> 8,78, <SEP> 8,7, <SEP> 8,2, <SEP> 8,8 <SEP> 8,97
<tb> % <SEP> S <SEP> 8, <SEP> 75, <SEP> 8, <SEP> 9, <SEP> 7, <SEP> 8, <SEP> 8, <SEP> 85 <SEP> 8, <SEP> 2 <SEP>
<tb> 0/0 <SEP> Asche <SEP> Null <SEP> - <SEP>
<tb>
* Karl Fisher-Wassergehalt : 2,33, 1, 79, 2, 87% (Theorie für Monohydrat : 2, 25% Wasser).
Das Salz ist hygros- kopisch aber nicht zerfliessend, Nach Aufbewahrung an der Luft bei Raumtemperatur erhöhte sich der
Wassergehalt nach 18 h auf 9,55, 9, 895o (Theorie für ein Pentahydrat : 10, 33% Wasser).
**WARNUNG** Ende DESC Feld kannt Anfang CLMS uberlappen**.