DE2311524C3 - 1- eckige Klammer auf L-(-)-gamma-Amino-alpha-hydroxybutyryl eckige Klammer zu -tobramycin, dessen nicht-toxische Säureadditionssalze und Verfahren zu deren Herstellung - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft das halbsynthetische 1 - [l -( — )-;·- Amino - a - hydroxybutyryliebramycin, dessen nichttoxische Säureaddilionssalze und Verfahren zu deren Herstellung.

In Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1967, S. 314 bis 348 ist der Ncbramycinkomplex. der durch Fermentation von Streptomyces tencbrarius (American Type Culture Collection A.T.C.C. 17 920 und 17 921) hergestellt wird, beschrieben. In Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970, S. 309 bis 313. ist angegeben, daß eine Fraktion des genannten Nebramyeinkomplexes (dort als Faktor 6 beschrieben und nachstehend Tobramycin genannt) die folgende Struktur aufweist:

CH₂OH

HO

NH₁

NH,

Es wird angegeben, daß diese Verbindung ein breites Spektrum anlimikrobieller Wirksamkeit, einschließlich einer Wirksamkeit gegen Pseudomonas- und Proteus-Mikroorganismen, besitzt.

Der Ncbramycinkomplex (auch Tenebramycinkomplex uenannt) ist in der britischen Patentschrift 11 78 489," belgischen Patentschrift 6 97 319. kana-Hiurhon Patentschrift 8 81 488 beschrieben und erhielt den Index Fanndoe Nr. 29 5791'. Die für die Fermentation des Nebramycinkomplexes erforderliche Kultur ist in der American 1 vpe Culture Collection als A.T.C.C. Nr'. 17 920 (Rockvillc Maryland. IjSA) hinterlegt. -

Ferner ist !Nebramycin in der USA.-Patentschrift 36 91 279 beschrieben.

Das ernndumisuemiiße 1 - 11. -(-)-;·- Amino-

i-hydroxybutyryl]-tobrarnyc;n besitzt folgende Formel:

CH₁OH

HO

NH,

NH-R

worin R l-(-)-;-Amino-.i-hydroxybutyryl bedeutet. nen Formel Seine nichttoxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalze bedeuten ein Mono-, Di-, Tri-, Tetra- oder Pentasalz, das durch Reaktion eines Moleküls der Verbindung IV mit 1 bis 5 Mol einer richttoxischen pharmazeutisch verträglichen Säure gebildet wird. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure. Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure. Bromwasserstoffsäurc, Ascorbinsäure, Apfelsäure und Citronensäure und jene Säulen, die a!k»emein zur Herstellung von Salzen aminhaltiger pharmazeutischer Präparate verwendet werden.

Das Verfahren zur Herstellung der erfindungs- in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger gemäßen Verbindungen ist dadurch »ekenrzeichnet, 3° Acylierungsmittcl pro Mol Tobramycin in einem daß man in an sich bekannter Weise entweder Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als

a) Tobramycin mit einer Verbindung der allgcmei- ungefähr 50 C behandelt,

ζ \-CH₂-O — C — X in der X Chlor, Brom oder Jod bedeutet, oder mit

O

CH₁ O —C-O — N

b) die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel

CH₇OH

HO

NH,

NH₁

NH₁

worin Y den Rest der Formel

CH₁-O-C-

bedeutet, in an sich bekannter Weise mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

Il

O OH O C

/ V-CH₁-O-C Nil-ICH₁), CH--C--Ο —Ν

!I ο

in einem Wrhüllnis von mindestens 0.5 Mol der Verbindung VlI pro Mol der Verbindung II in einem I.ösungs-

mittel acyliert, aus der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel

HO-v^ ^^OH

c) die Schutzgruppen in an sich bekannter Weise durch Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart vor Palladium auf Aktivkohle als Katalysator in Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmitte entfernt und

d) gegebenenfalls das erhaltene Produkt in üblicher Weise anschließend in ein nichttoxisches pharmazeutiscl verträgliches Salz umwandelt.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung IV wird durch folgendes Schema veranschaulicht:

1. Tobramycin

N-(Benzyloxycarbonyloxy)-Succinimid

HO

H CH,-Ν —

CH₁OH

NH,

1-CH₂-Cf₁H₅
HO

-O

NH,

NH,

2. Verbindung II

N-Hydroxysuccinimidester von i.-( —)-;-

Benzyloxycarbonylamino-n-hydroxybuttersäure

HO

HO

CH,OH

H
CH₂ — N — C — O — CH₂C₆H₅

HO

609'293

ίο

3. Verbindung HI
H₂, Pd C

CIl₂OH

HO-

NH₂

Bevorzugte Verbindungen sind das Monosuliui und Disulfat der Verbindung IV.

Die Verbindung IV. 1-[l-( - )-;-Amino-t<-hydroxybutyryl]-tobramycin, besitzt eine ausgezeichnete anlibakterielle Wirkung. Nachstehend werden an Hand einer Tabelle die Mindesthemmkonzcntrationen (M IC)

von Tobramycin und der Verbindung IV IBB-K 36 gegenüber einer Anzahl grampositiver und gramnegativer Bakterien, wie ste durch das Stcers-Agar Verdünnungsverfahren erhalten weiden, veranschaulicht (Tabelle I). Ein Agarnährmedium wurde bei dei Untersuchung der Tabelle I verwendet.

Tabelle I (MIC mg ml)

Organismus	5	Interne	Resistor,!	KM-n	Tobra-M	BH-K
	13	Be/ciclinimg	L'crai *}
E. coli Nl HJ	13			0.8	0.4	0.8
E. coli J u h 1	13	A 15119		1,6	0.8	0.8
E. coli	13	A 15169		1.6	0.4	0.8
E. coli	13	A 20363	KM	100	0.4	0.8
E. coli	13	A 9844		0.8	0.4	1.6
E. coli	113	A 20365	KM	100	0.4	0,4
E. coli K-12	113			0.4	0.4	1.6
E. coli K-12	13	A 20664	MK	0.8	1.6	1.6
E. coli K-12	*i KM = kanamwin Λ	A 20665	KM	50	0.4	1.6
E. coli		A 20684		0.4	0.2	0.4
E. coli		A 20683	KM. GM	>K)0	12.5	1.6
E. coli	A 9535		0.8	0.8	1.6
E. coli	A 15148		0.8	0 S	1.6
E. coli	A 15164		0.8	V/. O 0 8	1.6
E. coli	A 15170		0.8	W, O 0.4	0.8
E. coli	A 20102		0.8	0.8	1.6
			0.1	0.2	0.2
	A 20680	KM GM	>100	12.5	1.6
	A 9661		0.8	0 8	1.6
	A 9662		0.8	0.8	1.6
			12.5	0.4	1.6
		KM	>100	1 6	6.3
	A 9923		25	1 f>	C1 I
	A 9930		6,3	ι .ο 0 ">	Π 4
	A 15150		50	1 A	»I.H C1 }
	A 15194		1.5	I .O 1 Λ	1 ι
	A 20479	KM	>100	! .π } ι	Λ. I (λ "ΐ
	A 20616	KM	100	J · ι ■) ι	\·.-' ι ι ^
	A 20653	KM	> KX)	-*. I 1 {λ	I _.-~ 1 "> S
	A 9843		50	1 .Π 1.6	6.3
	KM-B -= Kanaiman B CiM =	( iOniiiiilli'tη	Tl \ 4
		■ \-iJitl IMiLWl	I unfa-M	1 "hninncin
K. pneumoniae D-Il
K. pneumoniae D-11
Klebsiella sp.
Klebsiella sp.
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D

Fortsetzung

Pseudomonas sp.
Pscudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
S. marcescens
P. vulgaris
P. vulgaris
P. vulgaris
ATCC 9920
ATCC 9920
ATCC 9920
P. morganii
P. morganii
P. morganii
P. morganii
P. morganii
P. morganii
P. morganii
P. reitgeri
P. rettgeri
P. inconotans
P. mirabilis
P. mirabilis
P. mirabilis
P. mirabilis
S. aureus 209 P
S. aureus S m i l h
S. aureus 209 P
S. aureus 209 P
B. subtilis PCi-219

*l KM K₁In₁IIiUCIn

KM-B = Kanamycin B

Interne	Insistent	KM-B
Biv.cichnuni!	j!c μεη *)
A 20355		6,3
A 20358		12,5
A 20368	GM	6,3
A 20598	GM	50
A 20600	GM	12,5
A 20603	KM, GM	>100
A 20618	KM, GM	>100
A 20594	KM, GM	100
A 20019		0,8
A 9436		0,2
A 9526		0,4
A 9699		0,8
		0,2
A 9539		0,2
A 9716		1,6
A 9553		0,4
A 20031		0,8
A 9636		0,4
A 15153		0,2
A 15166		0,4
A 20455		0,8
A 20457		0,8
A 15167		0.4
A 9637		0,4
A 20615		6,3
A 9554		0.8
A 99(X)		0.4
A 20Ii9		0,8
A 20454		0.8
		0,4
		0.2
R-41	SM	0,4
A 20239	KM	50
		0.1
η Β CiM	(icnuimicm.	Γι) bra -N

Tobra-M

BB-K 36

0,8	1.6
1,6	6.3
12,5	100
1,6	12.5
0,8	6,3
6.3	100
50	100
3,1	12,5
1,6	3,1
0,2	0,4
0,2	0.4
0,4	1.6
0.1	0.8
0.1	0.8
0.4	3.1
0,2	0.4
0.4	1.6
0,4	0.8
0,8	3.1
0,4	0,8
0.8	0,8
0.4	0.8
0.2	0,4
0.2	0.8
6.3	3.1
0.4	1.6
0.2	0.8
0.8	3,1
0,8	3.1
0.2	0.8
0.1	0.4
0.2	0.8
0.4	0.8
0.05	0.1

Tobra-M = Tobramycin.

Die Verbindung IV ist als antihakteriellcs Mittel. Zusatz /u Tierfutter, therapeutisches Mittel bei Geflügel und Tieren, einschließlich dem Menschen, wertvoll und ist von besonderem Wert bei der Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch grampositive und gramnegative Bakterien hervorgerufen werden.

Die Verbindung IV ist bei oraler Verabreichung als eine zusätzliche Behandlung für voroperative Steriiisicrung des Darms wertvoll. Sowohl aerobe als auch anearobe Flora, die auf diese Medikamente anspricht, wird im Dickdarm reduziert. Zusammen mit entsprechender mechanischer Reinigung ist sie bei der Vorbereitung von Dickdarmoperationen wertvoll

Die Verbindung IV ist bei der Behandlung systemischer bakterieller Infektionen wirksam, wenn sie parenteral in einer Dosis im Bereich von ungefähr 250 mc bis unsefähr 3000 mn tätlich in unterteilten Dosen drei- bis viermal täglich verabreicht werden Allger.icin sind die Verbindungen wirksam, wenn sie in einer Dosis von ungefähr 5.0 bis 7.5 mg kt Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.
Die Verbindung der Formel IV und deren Salze bilden bei Isolierung aus wäßrigen Lösungsmitteln Mono- und Polyhydratc. Folglich fallen auch die se hergestellten Hydrate in den Bereich der Erfindung.

B : i s ρ i c I

al Herstellung von ι-( — )-;-Bcnzyloxycarbo-iylamino-u-hydroxybuttersäure (Vl)

!-(-)-;■- Amino - « - hydroxybuttersäure (7.4 g 0.062 Mol) wird einer Lösung von 5.2 g (0.13MoI

Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser ;'ugcsetz.t. Dei

iieriihrten Lösung werden tropfenweise bei 0 bis 5 C

innerhalb von 0.5 Stunden 11.7 g (0.068 Mol) Carbo

benzoxychlorid zugesetzt, und das Gemisch wird 1 Stunde lang bei der gleichen Temperatur gerührt. Das Reaklionsgcmisch wird mit 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter ChlorwasscrstofTsäurc auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und mit viermal 80-ml-Teilcn Äther extrahiert. Die ätherischen Fxtrakte werden kombiniert, mit einer geringen Menge gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Filtral wird im Vakuum eingedampft und der erhaltene Rückstand aus Benzol kristallisiert, wobei man 11.6 11 (74%) farblose Plättchen erhält, Schmelzpunkt 78.5 bis 79,5°C, [«]„ -4.5" (<■ = 2, C-Η,ΟΗ). Infrarotspektrum (IR) [KBr]: _:ν=0 1740, 1690 cm"¹. Kernresonanzspektrum (NMR) (Accton-d,,)* (in ppm aus TMS) 2,0 (2H, m), 3,29 (2 H, d-d, J = 6.7 und 12 Hz), 4.16 (IH. d-d, J =4.5 und 8Hz), 4,99 (2H,s), 6,2 (2 H. breit), 7,21 (5H,s). Das Produkt ist die Verbindung Vl.

Analyse für C₁₂H₁₅NO₅:

Berechnet ... C 56,91, H 5,97, N 5.53%: gefunden .... C 56,66, H 5,97, N 5,47%.

b) N-Hydroxysuccinimidcstcr von l-( - H'-bcnzyloxycarbonyl-amino-

ii-hydroxybuttersuurc (VH)

Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) der Verbindung Vl und 4,8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid¹) in 200 ml Äthylacetat wird auf 0"C gekühlt. und sodann werden 8,6 g (0,042 Mol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht in men Kühlschrank gestellt. Der abgetrennte Dicyclohexylharnstoff wird abgefiltert und das Filtral auf ungefähr 50 ml bei verringertem Druck eingeengt, wobei man farblose Kristalle der Verbindung VlI erhält, die durch Filtrieren gesammelt werden, 6,4 g, Schmelzpunkt 121 bis 122,5° C. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne eingedampft und der kristalline Rückstand mit 20 ml eines Benzol-n-Hexangemischcs gewaschen und ei gibt eine weitere Menge der Verbindung VII. Die Gesamlausbeutc betraut 1,34 g (92%). [„], 1.5 (c = 2. CHCl₃) IR(KBr) _;Γ₌₀ 1810. 1755. 1740. 1680cm"¹. NMR (Accton-d,,)* (in ppm aus TMS) 2.0 (2 H, m). 2.83 (4H, s), 3,37 (2 H. d-d, .1 = 6.5 und 12.5 Hz). 4,56 (1 H, m), 4,99 (2 H, s). 6,3 (2 H. breit). 7.23 (5 H, s).

Analyse für C_u,H_lf)N₂O₇:

Berechnet ... C 54.85, H 5.18. N 8,00%: gefunden .... C 54.79. 54.70. H 5,21. 5,20. N 8,14, 8,12%.

c) Herstellung von 6'-N-Bcnzyloxycarbonyltobramycin (II)

Zu einer gerührten Lösung von 250 mg (0,53 mMol) Tobramycin in 13 ml Wasser und 13 ml Tetrahydrofuran (THF) werden 135 mg (0,53 mMol) N-Bcnzyloxycarbonyloxysuccinimid bei 10⁰C zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt und bei verringertem Druck eingedampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Um die unlöslichen Bestandteile zu entfernen. v\ ird die entstehende wäßrige Lösung filtriert, und das Filtrat wird anschließend in eine Kolonne »CG-50« (N H₄'-Typ, K) ml Fassungsvermögen) eingebracht. Die Kolonne wird mit 50 ml Wasser gewaschen und

¹I ('< W Λ η ilc rs im 11 ;ι . I Am (hem Sm-.. Xd. 1X1') mit 0.1 η-Ammoniak cluicrt. Das Fluat wird in 10-inl-Fraktioncn gesammelt. Die Fraktionen Nr. 7 his 40 werden kombiniert, bei verringertem Druck verdampft und gefriergetrocknet, wobei man 228 mg (72" οI rohes 6'-N-Benzyloxycarbonyltobramycin erhält, das kein Tobramycin selbst enthält. Schmelzpunkt 155 bis 156 C (unter Zersetzung). IR.,_=n 1700 cm '. Das Produkt wird für die nächste Reaktionsstufe ohne weitete Reinigung vcrwendei.

Analyse Tür C₂JU₃N₅O₁₁ ■ H₂CO.,-4H₂O:

Berechnet ... C 44.08. 117.26. N 9.52%: gefunden .... C 44.19. H 6.54. N 9.79%.

dl Herstellung von !-[ i.-( - (--Benzyloxycarbonylamino-M-hvdroxybutyiyl]-6'-carbobenzoxytobramycin(llll

6' - N - Bcnzyloxycarbonyllobramyein (200 mg. 0.33 mMol) wird in IO mf Wasser und 10 ml Tetrazo hydrofuran gelöst. Die Lösung wird auf 10 C abgekühlt.und I \1 mg(0.33 mMol) N-Hydroxysuccinimidester von 1 -(-)-;· - Benzyloxycarbonylamino- -i-hydroxybuttcrsäure werden zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt und ergibt nach Verdampfung des Lösungsmittels das oben angegebene Produkt als einen rohen Feststoff.

e) Herstellung von l-[ i.-( - )-;-Amino--/-hydroxyhutyryl ]-

tobramycin (IV. BB-K 361 30

Das rohe Produkt der Verbindung 111 wird in 20ml 1 : 1-Wasser-Tetrahydrofuran gelöst und anschließend bei Atmosphärcndruck in Gegenwart von 60 mg ]()%igem Palladium auf Aktivkohle über Nacht bei Raumtemperatur hydriert. Das Reaktionsgemisch wird filtriert und bei verringertem Druck verdampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die entstehende wäßrige Lösung wird in einer Kolonne »CG-50« (NH₄"" 9 ml) absorbiert. Die Kolonne wird mit 30 ml Wasser gewaschen und anschließend mil 520 ml 0.1 n-Ammoniak. 500 ml 0.2 η-Ammoniak unc 720 ml 0.5 η-Ammoniak eluierl. Das Fluat wird ir 10-ml-Fraklionen «csammelt. Die Fraktionen 89 bi; 102. die einen bioaktiven Fleck bei Rf 0.4 durch Dünn schichtchromatosiraphie auf System S-IlO (Silikagcl platte. CH₃Cl-CH₃OH - 28% NH₄OH-H₂O 1:4:2:1) /eigen, werden vereinigt, bei verringerten Druck eingedampft, sicfricructrocknet und crgcbei 19 mg BB-K 35*). Schmelzpunkt 219 bis 223 C (untc

Zersetzung). ;·,_=η 1750 cm"¹.

Analyse Tür C₂₂H₄₄N^O₁₁ -2H₂CO., -2H₂O: Berechnet ... C 37.69. H 7.38. N 10.99"«: gefunden .... C" 37.68. H 6.75. N 10.59%.

Die Fraktionen 105 bis 111 werden vereinigt, bt verringertem Druck verdampft, gefriergetrocknet un ergeben 35 mg eines Gemisches, das zwei bioaktiv Flecken bei Rf = 0.23 (BB-K 36) und 0.38 (BB-K 3: durch Dünnschichtchromatographie zeigt. Das di

misch wird in 2 ml Wasser gelöst und in eine Kolonne »CG-50« (NH₄. 5 mlf absorbiert. Die Kt lonnc wird mit 175 ml 0.2 η-Ammoniak und 400 η 0.5 η-Ammoniak eluierl. Das Lluat wird in 5-nil-Fral tioncn gesammelt. Die Fraktionen Nr. 47 bis 55 werde vereinigt, bei verringertem Druck verdampft i"¹ gefriergetrocknet und ergeben 6 mg (3" π I BB-K 3

*l BB-K 35 «ml dir 2-[ hnimyciii Lvli.ilti-n

I---NniiiiK-., Ιι\ιΙγο\\ΗιιΙ>γ\Π-'

Schmelzpunkt 205 bis 206 C (unter Zersetzung). :v=o 1650 cm"¹. Ein Gemisch von 20 mg BB-K 35 und BB-K 36 wird aus den Fraktionen 41) bis 46 gewonnen.

Die Fraktionen 126 bis 131 der ursprünglichen Kolonne werden vereinigt, bei verringertem Druck verdampft, gefriergetrocknet und ergeben 7 me (4%) BB-K 37**), das einen Fleck bei 0,13 durch Dünnschichtchromatographie (S-110, Ninhydrin und Bioautograph) zeigt. Schmelzpunkt 209 bis 210 C (unter Zersetzung), y_c=0 1650 cm"¹.

f,) Herstellung des Monosulfats von
1-[l-( - )-;'-Amino-<j-hydroxybutyryl]-tobramycin

1 Mol 1-[l-( —)-/-Amino-(/-hydroxybutyryl]-tobramyein wird in 1 bis 3 1 Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung wird 1 Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefelsäure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und werden als das gewünschte Monosulfatsalz bestimmt.

f₂) Herstellung des Disulfats von
1-[l-( — )-*/-Amino-«-hydroxybutyryl]-tobramycin

1 Mol !-[!.-(-!-•/-Amino-.i-hydroxybutyryn-tobramyein wird in 1 bis 3 1 Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung werden 2 Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefelsäure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und als das gewünschte Disulfatsalz bestimmt.

Herstellung der Ausgangsverbindungen

fernt. Man erhält die L-( - )-;-Amino-«-hydroxybuttersäure als einen kristallinen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 212,5 bis 214,5" C (Spalte 2. Zeilen 31. 28 der USA -Patentschrift 35 4i 078).

1. Herstellung von
N-lBenzyloxycarbonyloxyl-succinimid

40

N-Hydroxysuccinimid (23 g, 0,2 Mol) wird in einer Lösung von 9 g (0,22 Mol) Nalriumhydroxyd in 200 ml Wasser gelöst. Der gerührten Lösung werden tropfenweise 34 g (0,2 Mol) Carbobenzoxychlorid untcr Wasserkühlung zugesetzt, und anschließend wird das Gemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, um das Carbobenzoxyderivat abzutrennen, das durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und luftgetrocknet wird. Ausbeute 41,1 g (82%).

Umkristallisierung aus Benzol-n-Hcxan (10:1) ergibt farblose Prismen, die bei 78 bis 79' C schmelzen.

2. Herstellung von

L-( — )-;'-Amino-«-hydroxybuUersüure

aus Ambutyrosin A oder B oder Gemischen davon

Ambutyrosin A(5,0g)(USA.-Palenischrift 3541 078) wird mit 160 ml 0.5 n-Natriumhydroxyd !Stunde lang unter Rückfluß gehalten. Das Hydrolysat wird mit fin-HCI neutralisiert und in einer Kolonne »CG-50« (NHj-Typ) Chromatographien. Die gewünschte l-( - )-;-Amino-«-hydroxybuUcrsäure wird abgetrennt, indem man die Kolonne mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknen en'-

3. Herstellung von

l-( — )-;--Amino-f(-hydroxybuttersäure aus
i)L-<j-Hydroxy-;'-phtalimidobuttersäure

A. Dehydroabietylammonium-L-n-hydroxy-
;-phtalimidobulyrat

Zu einer Lösung von 25 g (0.1 Mol) «-Hydroxy- ^-phialimidobuttersaure¹) in 200 ml Äthanol wird eine Lösung von 29 g (0.1 Mol) Dehydrobieiylamin in 130 ml Äthanol zugesetzt. Die Lösung wird ! Minute lang kräftig geschüttelt und 5 Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen, währenddessen feine Nadeln auskristallisieren. Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit 50 ml Äthanol gewaschen, luftgetrocknet nnd ergeben 30.1 g (56%) eines Diastercomeren des Dehydroabietylaminsalzes. Schmelzpunkt 93 bis94 C. [>]i^; + 15 (C. 2.5. MeOH). Umkristallisierung aus 300 ml Äthanol ergibt 23.2 g (43%) des reinen Produktes. Schmelzpunkt 94 bis 95 C. [,_ty + 10,8 (C. 2,5. McOH). Weitere Umkristallisierung ändert den Schmelzpunkt und die spezifische Drehung nicht.

Analyse für C_3nH₄₂N₂O₅ · H₂O:

Berechnet ... C 69,54. H 8,02. N 5.07%:
gefunden .... C 69.58. H 8,08. N 5.07%.

B. L-( — )-;'-Amino-«-hydroxybuttersäure

Zu einer Lösung von 1.5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser werden 5.3 g (0.01 Mol) Dehydroabietylammonium - L - π - hydroxy - ;■ - phthalimidobutyrat und 60 ml Äther zugesetzt. Das Gemisch wird kräftig geschüttelt, bis sich der gesamte Feststoff aufgelöst hat. Die Ätherschicht wird abgetrennt und die wäßrige Lösung zweimal mit 30-ml-Teilen Äther gewaschen und auf 15 ml bei verringertem Druck verdampft. Dem Konzentrat werden 10 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäurc zugesetzt, und das Gemisch wird 10 Stunden unter Rückfluß gehallen. Nach dem Abkühlen wird die abgetrennte Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wird bei verringertem Druck eingedampft und der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung zur Trockne verdampft. Dieser Vorgang wird zweimal wiederholt, um den Überschuß an Chlorwasserstoffsaure zu entfernen. Der zurückbleibende Sirup wird in 10 ml Wasser gelöst und filtriert, um eine geringe Menge unlöslicher Phthalsäure zu entfernen. Das Filtrat wird in einer Kolonne »IR-l 20« (H⁺, 1 χ 35 cm) adsorbiert, und die Kolonne wird mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 1 n-Ammoniumhydroxydlösung eluicrt. Das Elual wird in 15-ml-Fraktioncn gesammelt. Die Ninhydrin-posiliven Fraktionen 10 bis 16 werden vereinigt und bei verringertem Druck eingedampft, wobei man einen allmählich kristallisierenden Sirup erhält. Die Krislalle werden mit Äthanol verrieben, gefiltert, in einem Vakuum-Exsikkator getrocknet und ergeben 0.78 g (66%) i.-(-)-;■-Amino-.i-hydroxybultcrsäure. Schmelzpunkt 206 bis 207 C. f..]r - 29 (C. 2.5. H₂O). Das 1R-Speklrum

**l BH-K 37 wird fur 1,.T- oder 1.3- oder I.6-Di| 1
K-Iiulrox) hutyryll-lohramvein gehalten.

!-•-Ληιιηο-¹I Y Sail ο el al.. Tclralicdron letters. Ι'ΠΟ. 4Xh.V

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ist mit einer aus Ambutyrosin erhaltenen authentischen Probe identisch.

»Amberlitc CG-50« ist der Handelsname für ein schwach saures Kationenaustaascherharz eines Carbonsaure/ Poiymethacryisü"!reiyps zjr chrüffiatographischen Verwendung.

»Amberlitc IR-120« ist der Handelsname für ein hochdichtes Kationenaustauscherhar/ mit Kernsulfonsauregruppen, das entweder in Wasserstoff- oder Natriumform als Kügelchen mit einem Durchmesser, der einem Sieb mit 16 bis 50 Maschen entspricht, erhältlich ist.

Claims (4)

1. Patentansprüche:

   ί. i - [l -( — )-;·- Amino - .·ί - hydroxybut yry!]- tobramycin der allgemeinen Formel

   CH₁OH

   HO

   (IVi

   NH-R

   NH,

   worin R l-( — )-;<-Amino-(4-hydroxybutyryl bedeutet, und dessen nichttoxische pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze.
2. 2. 1 - [l - (—) - γ - Amino -«- hydroxybutyryl]-tobramycinmono- und -disulfat.
3. 3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise entweder

   a) Tobramycin ml einer Verbindung der allgemeinen Formel

   CH, — O— C-X

   in der X Chlor, Brom oder Jod bedeutet. oder mit

   CH, — O — C — Ο — Ν

   in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger Acylierungsmittel pro Mol Tobramycin in einem Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als ungefähr 50° C behandelt,

   b) die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel

   HO

   CH₂OH

   HO

   NH,

   NH NH,

   worin Y den Rest der Formel

   CH₂-O-C-bedeutet, in an sich bekannter Weise mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

   O OH O C -₍

   /^V-CIl₂-O-C-NH-(CH₂I₂-CH-C-O- N (VlI)

   in einem Verhältnis von mindesiensO.5 Mol der Verbindung VII pro Mol der Verbindung Ii in einem Lösungs-

   mittel acyliert, aus der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel

   CH₁OH

   NH /^
   l O HO -CH
   I (CH₂

   NH-CO — O- CH

   c) die Schutzgruppen in an sich bekannter Weise durch Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium auf Aktivkohle als Katalysator in Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel entfernt und

   d) gegebenenfalls das erhaltene Produkt in üblicher Weise anschließend in ein nichttoxisches pharmazeutisch verträgliches Salz umwandelt.
4. 4. Verfahren gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man in Stufe a) Tetrahydrofuran und Wasser im Gewichtsverhältnis 1 :1 als Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als 25 C verwendet und in Stufe b)Wasser-Tetrahydrofuran im Gewichtsverhäitnis 1:1 als Lösungsmittel in einem Verhältnis von ungefähr 0.8 bis 1.1 Mol Acylierungsmittel pro Mol der Verbindung 11 einsetzt.