DE2311524B2

DE2311524B2 - 1- eckige Klammer auf L-(-)-gamma-Amno-alpha-hydroxybutyryl eckige Klammer zu -tobramycin, dessen nicht-toxische Säureadditionssalze und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE2311524B2
Application number: DE19732311524
Authority: DE
Inventors: Takayuki Naito; Susumu Nakagawa
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1972-03-08
Filing date: 1973-03-08
Publication date: 1975-07-10
Also published as: DE2311524A1; AR205516A1; JPS5133551B2; FR2181797A1; FR2181797B1; BE796491A; JPS4918850A; GB1418399A

Description

Die Erfindung betrifft das halbsynthetische I - [l -(-)-;·- Amino - «- hydroxybutyryltobramycin, dessen nichttoxischc Säureadditionssalze und Verfahren zu deren Herstellung.

In Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1967, S. 314 bis 348 ist der Nebramycinkomplex, der durch Fermentation von Strcptomyces tenebrarius (American Type Culture Collection A.T.C.C. 17 920 und 17 921) hergestellt wird, beschrieben. In Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970. S. 309 bis 313, ist angegeben, daß eine Fraktion des genannten Nebramycinkomplexes (dort als Faktor 6 beschrieben und nachstehend Tobramycin genannt) die folgende Struktur aufweist:

1-IO-i

NH₁

Fs wird angegeben, daß diese Verbindung ein breites Spektrum antimikrobieller Wirksamkeil, ein- »-hließlieh einer Wirksamkeil gegen Pscudomonas-WkI Proteus-Mikroorganismen, besitzt.

Der Nebramycinkomplex (auch Tenebramycinkomplex genannt) ist in der britischen Patentschrift Il 78 489." belgischen Patentschrill 697 319. kanadischen Patentschrift 8 81 488 beschrieben und erhielt den Index Farmdoc Nr. 29 5791'. Die für die Fermentation des Nebramycinkomplexes erforderliche Kultur isl in der American Type Culture Collection als A.T.C.C. Nr! 17920 (Rockulle. Maryland. USA) hinterlegt. _c

Ferner ist !Nebramycin in der USA.-Patentschrift 36 91 279 beschrieben.

Das erlindungsgcmäße 1 - 11. -(-)-;■- Amino-

«<-hydroxybutyryI]-tobramycin besitzt folgende Formel:

HO-

CH^OH

NH — R

worin R L-(-)-}'-Amino-</-hydroxybutyryI bedeutet. nen Formel

Seine nichltoxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalze bedeuten ein Mono-, Di-, Tri-,

Tetra- oder Pentasalz, das durch. Reaktion eines . <f

Moleküls der Verbindung IV mit 1 bis 5 MoI einer 20 \=^/

richttoxischen pharmazeutisch verträglichen Säure in der X Chlor, Brom oder Jod bedeutet, oder mit

CH, — O C-X

CII₁ -O—C — O —N

gebildet wird. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoffsäurc, /,—

Ascorbinsäure, Apfelsäure und Citronensäure und 25 ■'/

jene Säuren, die allgemein zur Herstellung von Salzen "-^

aminhaltigcr pharmazeutischer Präparate verwendet werden.

Das Verfahren zur Herstellung der erfindungs- in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger gemäßen Verbindungen ist dadurch gekennzeichnet. 30 Acylicrungsmittel pro Mol Tobramycin in einem daß man in an sich bekannter Weise entweder Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als

a) Tobramycin mit einer Verbindung der allgemci- ungefähr 50" C behandelt.

b) die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel

CH,OH

HO

NH,

worin Y den Rest der Formel

CH,

O—C —

bedeutet, in an sich bekannter Weise mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

Il ο on ο c —

—CH₂-O—C-NH-(CH₂)₂ —CH-C--O —N

C

Il ο

in einem Verhältnis von mindestens 0.5 Mol der Verbindung VII pro Mol der Verbindung Il in einem l.ösunus-

iittel acyliert. aus der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel

CH, OH

NH,

NH- CO- O — CH,

c) die Schutzgruppen in an sich bekannter Weise durch Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium auf Aktivkohle als Katalysator in Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel entfernt und

d) gegebenenfalls das erhaltene Produkt in üblicher Weise anschließend in ein nichttoxisches pharma/eutiscli verträgliches Salz umwandelt.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung IV wird durch folgendes Schema veranschaulicht:

1. Tobramycin

N-(Benzyloxycarbonyloxy)-Succinimid

HO

H CH₂ — N — C — O — CH₂ — C₆H₅

HO-T-

NH,

-O

NH,

2. Verbindung II

N-Hydroxysuccinimidester von l-( —)-;.- _>

Benzyloxycarbonylamino-H-hydroxybuttersäure

HO

H₂N O

CH₂OH

OH

CH₂ — N — C — O — CH₂QH₅

HO

NH,

NH

NH,

C = O
HO CH

CH, O

CH, NH C O (H,

509 528 2

3. Verbindung III

H₂ Pd C

CH₇OH

— N11 — C = O

NH₁

Bevorzugte Verbindungen sind das Monosulfal und Disulfat der Verbindung IV.

Die Verbindung IV, 1-[l-( —)-;'-Amino-i<-hydroxybutyryl]-tobramycin, besitzt eine ausgezeiehnete antibakterielle Wirkung. Nachstehend werden an Hand einer TabelledieMindesthemmkonzentrationen (MIC)

Tabelle I (MIC mg ml)

20

CH₁ -NH,

von Tobramycin und der Verbindung IV (BB-K gegenüber einer Anzahl grampositiver und gram negativer Bakterien, wie sie durch das Steers-Agar Verdünnungsverfahren erhalten werden, veranschau licht (Tabelle I). Ein Agarnährmedium wurde bei de Untersuchung der Tabelle I verwendet.

Organismus

E. eoli NIHJ

E. coli J u h 1

E. coli

E. coli K-12

E. coli

K. pneumoniae D-11

Klebsieila sp.

Klebsiella sp.

P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
P. aeruginosa D
aeruginosa D
aeruginosa D
aeruginosa D
aeruginosa D
aeruginosa D
aeruginosa D

KM - KjnaiTHi:

13
13
13
13
13
13
13
13
13

1 \

Interne Bezeichnung

A 15119 A 15169 A 20363 A 9844 A 20365

A 20664 A 206&5 A 20684 A 20683 A 9535 A 15148 A 15164 A 15170 A 20102

A 2O6S0 A 9661 A 9662

A 9923 A 993(1 A15150 A 15194 A20479 A 20616 A 20653 A 9843 KVI-B = Kanaimcin B

Resistent gegen *|

KM KM

MK KM

KM. GM

KM

KM KM KM

<i\l : Gentamicin KM-B

0,8
1.6
1.6
100

0,8
100
0.4
0.8
50
0.4
>100
0.8
0,8
0.8
0.8
0,8
0,1

> 100

0.8

0.8
12.5
>100
25

6.3
50

1.5

> 100
100

>100
50
lohra-M

Tobra-M

0.4
0,8
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
1.6
0.4
0.2
12,5
0.8
0.8
0,8
0.4
0.8
0.2
12.5
0.8
0.8
0.4
1.6
1.6
0.2
1.6
1.6
3.1
3.1
1.6
1.6

lob'amxcm

BB-K

0.8 0.8

0.8

o.s

1.6 0.4 1.6 1.6 1.6 0.4 1.6 1.6 1.6 1.6 0.8 1.6 0.2 1.6 1.6 1.6 1.6 6.3 6.3 0.4 6.3 3.1 f.3 12.5 12.5 6.3

Fortsetzung

Ormtnismiis

Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
Pseudomonas sp.
S. marcescens
P. vulgaris
P. vulgaris
P. vulgaris
ATCC 9920
ATCC 9920
ATCC 9920
P.
P.
P.
P.
P.

morganii

morganii
P. morganii
P. morganii
P. reitgeri
P. rettgeri
P. inconotans
P. mirabilis
P. mirabilis
P. mirabilis
P. mirabilis
S. aureus 209 P
S. aur:us Smith
S. aureus 209 P
S. aureus 209 P
B. sublilis PCI-219

*) KM -- Kanamycin Λ. KM-B = Kanamycin B

Interne	Resistent	KM-B	To bra-M	BB-K
Bezeichnung	gegen *)
A 20355		6,3	0,8	1.6
A 20358		12,5	1,6	6,3
A 20368	GM	6,3	12,5	100
A 20598	GM	50	1,6	12,5
A 20600	GM	12,5	0,8	6,3
A 20603	KM, GM	> 100	6,3	100
A 20618	KM, GM	>100	>50	100
A 20594	KM, GM	100	3,1	12,5
A 20019		0,8	1,6	3,1
A 9436		0,2	0.2	0.4
A 9526		0,4	0,2	0,4
A 9699		0,8	0,4	1,6
		0,2	0,1	0,8
A 9539		0,2	0,1	0,8
A 9716		1,6	0,4	3,1
A 9553		0,4	0,2	0,4
A 20031		0,8	0,4	1,6
A 9636		0,4	0,4	0,8
A15153		0,2	0,8	3,1
A15166		0.4	0.4	0.8
A 20455		0.8	0,8	0,8
A 20457		0,8	0.4	0.8
A15167		0,4	0,2	0,4
A 9637		0,4	0,2	0,8
A 20615		6,3	6.3	3,1
A 9554		0,8	0,4	1,6
A 9900		0.4	0,2	0,8
A 20119		0,8	0,8	3.1
A 20454		0,8	0,8	3,1
		0,4	0,2	0,8
		0,2	0.1	0,4
R-41	SM	0,4	0,2	0,8
A 20239	KM	50	0,4	0,8
		0,1	0,05	0.1
π B GM	= Gentamicin	Tohra-M	= Tobramycin.

Die Verbindung IV ist als antibaktcrielles Mittel, Zusatz zu Tierfutter, therapeutisches Mittel bei Gciügel und Tieren, einschließlich dem Menschen, ivertvoll und ist von besonderem Wert bei der Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch grampositive und gramnegative Bakterien hervorgerufen werden.

Die Verbindung IV ist bei oraler Verabreichung als eine zusätzliche Behandlung für voroperative Stenlisierung des Darms wertvoll. Sowohl aerobe als auch anearobe Flora, die auf diese Medikamente anspricht, wird im Dickdarm reduziert. Zusammen mit entsprechender mechanischer Reinigung ist sie bei der Vorbereitung von Dickdarmoperationen wertvoll.

Die Verbindung IV ist bei der Behandlung sysiemischer bakterieller Infektionen wirksam, wenn sie parenteral in eines Dosis im Bereich von ungefähr 250 mg bis ungefähr 30(K) mg täglich in unterteilten Dosen drei- bis viermal täglich verabreicht werden Allgemein sind die Verbindungen wirksam, wenn sit in einer Dosis von ungefähr 5.0 bis 7.5 mg kt Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.
Die Verbindung der Formel IV und deren Salze bilden bei Isolierung aus wäßrigen Lösungsmiltelr Mono- und Polyhydrate. Folglich fallen auch die st hergestellten Hydrate in den Bereich der Erfindung.

Beispiel

al Herstellung von ι-( - )-;-Ben/yIoxycarhonylamino-.i-hydrox>buttersäure (Vl)

ι -(-)-;- Amino - u - hydroxybuttersäure (7.4 j (1.062 Mol) wird einer Lösung von 5.2 g (0,13Mo!

Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser zugesetzt. De

gerührten Lösung werden tropfenweise bei 0 bis 5 (

innerhalb von 0,5 Stunden 11,7 g (0.068 Mol) Carbc

benzoxychlorid zugesetzt, und das Gemisch wird 1 Stunde lang bei der gleichen Temperatur gerührt. Das Reaklionsgemisch wird mit 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsaurc auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und mil viermal 80-ml-Teilen Äther extrahiert. Die ätherischen Extrakte werden kombiniert, mit einer geringen Menge gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft und der erhaltene Rückstand aus Benzol kristallisiert, wobei man 11.6 g (74%) farblose Plättchen erhält, Schmelzpunkt 78,5 bis 79,5⁰C, [«]₀ -4,5^D (c = 2, CH₃OH). Infra-

rotspeklrum (IR) [KBr]: ;_V=o ¹⁷⁴⁰' ^{1690 cm}~'· ^Kern" resonanzspektrum (NMR) (Aceton-d₍,)^a (in ppm aus TMS) 2,0 (2 H, m), 3,29 (2 H, d-d, J = 6,7 und 12 Hz). 4,16 (IH, d-d, J =4,5 und 8Hz), 4,99 (2H,s). 6.2 (2 H, breit), 7,21 (5H,s). Das Produkt ist die Verbindung Vl.

Analyse für C₁₂H₁₅NO₅:

Berechnet ... C 56,91, H 5,97, N 5.53%:
gefunden .... C 56,66. H 5,97, N 5.47%.

b) N-Hydroxysuccinimidester von

l-( — (-y-benzyloxycarbonyl-arnino-

r/-hydroxybuttersäure (VIl)

Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) der Verbindung V! und 4,8 g (0,042 Mol) N-FIydroxysuccinimid¹) in 200 ml Äthylacetat wird auf 0⁰C gekühlt, und sodann werden 8,6 g (0.042 Mol) N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht in einen Kühlschrank gestellt. Der abgetrennte Dicyclohexylharnstoff wird abgefiltert und das Filtrat auf ungefähr 50 ml bei verringertem Druck eingeengt, wobei man farblose Kristalle der Verbindung VII erhält, die durch Filtrieren gesammelt werden, 6.4 g. Schmelzpunkt 121 bis 122,5°C. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne eingedampft und der kristalline Rückstand mit 20 ml eines BcnzoI-n-Hexangemisches gewaschen und ergibt eine weitere Menge der Verbinduna VII. Die Gesamtausbeute beträct 1,34 g (92%). [«]„ 1.5" (C- = 2. CHCl,) IR(KBr) _;v=0 1810, 1755. 1740, 1680 cm"¹. NMR (Aceton-d_b f (in ppm aus TMS) 2,0 (2H, m), 2,83 (4H, s). 3.37 (2 H. d-d, J = 6,5 und 12,5 Hz), 4,56 (1 H. m). 4.99 (2H. s). 6.3 (2H. breit). 7.23 (5 H, s).

Analyse für C_lhH,_gN₂O₇:

Berechnet ... C 54.85. H 5,18, N 8.00%:
gefunden .... C 54,79, 54.70. H 5.21. 5.20.
N 8,14, 8,12%.

c) Herstellung von
6-N-Benzyloxycarbonyltobramycin (H)

Zu einer gerührten Lösung von 250 mg (0.53 mMol) Tobramycin in 13 ml Wasser und 13 ml Tetrahydrofuran (THF) werden 135 mg (0,53 mMol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid bei 10 C zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt und bei verringertem Druck eingedampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Um die unlöslichen Bestandteile zu entfernen, wird die entstehende wäßrige Lösung filtriert, und das Filtrat wird anschließend in eine Kolonne »CG-50« (NH₄-I yp, 10 ml Fassungsvermögen) eingebracht. Die Kolonne wird mit 50 ml Wasser gewaschen und

¹I O. W. Anderson u a. .1 Am Chcm S.h Kh. ISWiIQMl mit 0.1 η-Ammoniak eluicrt. Das Eluat wird ii lO-ml-Fraklionen gesammelt. Die Fraktionen Nr. bis 40 werden kombiniert, bei verringertem Drucl verdampft und gefriergetrocknet, wobei man 228 m; (72%) rohes ö'-N-Bcnzyloxycarbonyltobramyein er hält, das kein Tobramycin selbst enthält. Schmelz, punkt 155 bis 156" C (unter Zersetzung). IR... ₌₍ 1700cm"'. Das Produkt wird für die nächste Reak tionsstufc ohne weitere Reinigung verwendet.

Analyse für C₂₍,H₄₃N₅O_n · H₂CO₃ -4H₂O:

Berechnet . . . C 44,08, H 7,26, N 9.52%:
gefunden .... C 44,19, H 6,54. N 9.79%.

d) Herstellung von

1-f l-( - )-;'-Benzyloxycarbonylamino_li-hydiOxybutyryl]-6'-carbobcnzoxytobramycin (III)

6' - N - Benzyloxycarbonyltobramycin (200 mg 0,33 mMol) wird in 10 ml Wasser und 10 ml Tetra hydrofuran gelöst. Die Lösung wird auf 10 C abge kühlt.und 117 mg(0,33 mMol)N-Hydroxysuccinimid ester von i. -(-)-;■- Bcnzyloxycarbonylamino ii-hydroxybuttersäure werden zugesetzt. Das Gemisd wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerühr und ergibt nach Verdampfung des Lösungsmittels da: oben angegebene Produkt als einen rohen Feststoff.

e) Herstellung von

1-[l-( — )-;-Amino-(/-hydroxybutyryl ]-tobramycin (IV, BB-K 36)"

Das rohe Produkt der Verbindung III wird in 20 m 1 :1-Wasser-Tctrahydrofuran gelöst und anschließenc bei Atmosphärendruck in Gegenwart von 60 rm 10%igem Palladium auf Aktivkohle über Nacht be Raumtcmpcralurhydriert. Das Reaktionsgemisch wire filtriert und bei verringertem Druck verdampft, urr das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die ent stehende wäßrige Lösung wird in einer Kolonm »CG-50« (NH₄, 9 ml) absorbiert. Die Kolonne win.

mit 30 ml Wasser gewaschen und anschließend mi 520 ml 0,1 n-Ammoniak. 500 ml 0,2 η-Ammoniak um 710 ml 0.5 η-Ammoniak eluiert. Das Eluat wird ir 10-ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen X9 bi: 102. die einen bioaktiven Fleck bei Rf 0,4 durch Dünn schichtchromatocraphic auf System S-110 (Silikauelplatte. CH₃Cl — CH₃OH - 28% NH₄OH H₂O 1:4:2:1) zeigen, werden vereinigt, bei verringerten Druck eingedampft, gefriergetrocknet und enzeber 19 mg BB-K 35*). Schmelzpunkt 219 bis 223 C Uintei Zersetzung), ;>,._„ 1750 cm '.

Analyse für C₂₂H₄₄N₆O₁₁ · 2H₂CO., ■ 2H₂O:
Berechnet ... C 37,69. H 7,38. N 10.99%:
gefunden .... C 37,68. H 6,75, N 10.59%.

Die Fraktionen 105 bis 111 werden vereinigt, be verringertem Druck verdampft, gefriergetrocknet unc ergeben 35 mg eines Gemisches, das zwei bioaktivt Flecken bei Rf = 0,23 (BB-K 36) und 0.38 (BB-K 35 durch Dünnschichtchromatographie zeigt Das Ge

6a misch wird in 2 ml Wasser gelöst und in einci Kolonne »CG-50« (NH₄ ⁺. 5 ml) absorbiert. Die Ko lonne wird mit 175 ml 0.2η-Ammoniak und 400 m 0.5 η-Ammoniak eluiert. Das Hluat wird in 5-ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen Nr.47 bis 55 werder vereinigt, bei verringertem Druck verdampft unc gefriergetrocknet und ergeben 6 mg (3% I BB-K 36

*l BB-K κ wird für Ü-|M I:-Amino-.i-hvdro\>hul>r\l]-h> hriimwin !'(.hallen

Schmelzpunkt 205 bis 206 C (unter Zersetzung), :v=o 1650cm"¹. Ein Gemisch von 20mg BB-K35 und BB-K 36 wird aus den Fraktionen 40 bis 46 gewonnen.

Die Fraktionen 126 bis 131 der ursprünglichen Kolonne werden vereinigt, bei verringertem Druck verdampft, gefriergetrocknet und ergeben 7 mg (4%) BB-K 37**), das einen Fleck bei 0,13 durch Dünnschichtchromatographie (S-IlO, Ninhydrin und Bioautograph) zeigt. Schmelzpunkt 209 bis 210'¹C (unter Zersetzung), y_c=0 1650 cm~".

f,) Herstellung des Monosulfats von
1-[l-( - H-Amino-n-hydroxybutyryl]-tobramycin

1 Mol l-[L-(-)-y-Amino-(/-hydroxybutyryl]-tobramycin wird in 1 bis 3 1 Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung wird 1 Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefelsäure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und werden als das gewünschte Monosulfalsalz bestimmt.

f,) Herstellung des Disulfats von
1-[l-( — )-;-Amino-r;-hydroxybutyryl]-tobramycin

1 Mol l-[i.-( - )-;-Amino-fi-hydroxybutyryl]-lobramycin wird in 1 bis 3 1 Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung werden 2 Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefelsäure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und als das gewünschte Disulfatsalz. bestimmt.

Herstellung der Ausgangsverbindungen

1. Herstellung von
N-fBenzyloxycarbonyloxyl-succinimid

40

N-Hydroxysuccinimid (23 g. 0,2 Mol) wird in einer Lösung von 9 g (0.22 Mol) Natriumhydroxyd in 200 ml Wasser gelöst. Der gerührten Lösung werden tropfenweise 34 g (0,2 Mol) Carbobcnzoxychlorid untcr Wasserkühlung zugesetzt, und anschließend wird das Gemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, um das Carbobcnzoxydcrivat abzutrennen, das durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und IuFlgetrocknet wird. Ausbeute 41,1 g (82%).

Umkrislallisicrung aus Bcnzol-n-Hcxan (10:1) ergibt farblose Prismen, die bei 78 bis 79 C schmelzen.

2. Herstellung von

l-( — )-;-Amino-n-hydroxybuttcrsäurc

aus Ambutyrosin A oder B oder Gemischen davon

Ambutyrosin A(5,0 g)(USA.-Patentschrift 3541 078) wird mit i60ml 0.5 n-Natriumhydroxyd 1 Stunde lang unter Rückfluß gehallen. Das Hydrolysat wird mit 6n-HCl neutralisiert und in einer Kolonne »CG-50« (NH₄ ⁺-Typ) Chromatographien. Die gewünschte i.-( — j-j'-Amino-x-hydroxybuUcrsaure wird abgetrennt, indem man die Kolonne mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknen entfernt. Man erhält die l-( — )-;'-Amino-u-hydroxybuttersäure als einen kristallinen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 212,5 bis 214,5 C (Spalte 2, Zeilen 31, 28 der USA.-Patentschrift 35 41 078).

3. Herstellung von

L-( — )-;'-Amino-n-hydroxybuttersäure aus
OL-d-Hydroxy-y-phtalimidobuttersäure

A. Dehydroabietylammonium-i -<i-hydroxy-
;-phtalimidobutyrat

Zu einer Lösung von 25 g (0.1 Mol) «-Hydroxy-7-phtalimidobuUersäure¹) in 200 ml Äthanol wird eine Lösung von 29 g (0,1 Mol) Dehydrobictylamin in 130 ml Äthanol zugesetzt. Die Lösung wird 1 Minute lang kraftig geschüttelt und 5 Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen, währenddessen feine Nadeln auskristallisicren. Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit 50 ml Äthanol gewaschen, luflgetrocknct und ergchen 30.1 g (56%) eines Diastereomeren des Dehydroabictylaininsalzcs. Schmelzpunkt 93bis94 Cf"]? + 1? (Γ.2.5. MeOH). Umkristallisierung aus 300 ml Äthanol ergibt 23.2 g (43%) des reinen Produktes. Schmelzpunkt 94 bis 95 C. M" + 10.8 (C 2.5. McOHl. Weitere Umkristallisierung ändert den Schmelzpunkt und die spezifische Drehung nicht.

Berechnet ... C 69.54. H 8.02. N 5.07%:
gefunden .... C 69.58. H 8.08. N 5.07%.

B. 1.-( - )-;-Amino-K-hydro\yhuttersäurc

Zu einer Lösung von 1,5 g (0.014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser werden 5.3 g (0.01 Moll Dchydroabietylammonium -1 - <ι - hydroxy - ;■ - phlhalimidobutyrat und 60 ml Äther zugesetzt. Das Gemisch wird kräftig geschüttelt, bis sich der gesamte Feststoff aufgelöst hat. Die Ätherschicht wird abgetrennt und die wäßrige Lösung zweimal mit 30-ml-Tcilcn Äther gewaschen und auf 15 ml bei verringertem Druck verdampft. Dem Konzentrat werden 10 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure zugesetzt, und das Gemisch wird 10 Stunden unter Rückfluß gehalten. Nach dem Abkühlen wird die abgetrennte Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrai wird bei verringertem Druck eingedampft und der Rückstand in IO ml Wasser gelöst und die Lösung zur Trockne verdampft. Dieser Vorgang wird zweimal wiederholt, um den Überschuß an Chlorwasscrstoffsäure zu entfernen. Der zurückbleibende Sirup wird in 10 ml Wasser gelöst und filtriert, um eine geringe Menge unlöslicher Phthalsäure zu entfernen. Das Filtrai wird in einer Kolonne »lR-120« (H⁺ , 1 χ 35 cm) adsorbiert, und die Kolonne wird mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 1 n-Ammoniumhydroxydlösung cluierl. Das Fluat wird in 15-ml-Fraktionen gesammelt. Die Ninhydrin-positivcn Fraktionen K) bis 16 werden vereinigt und bei verringertem I)₁ uek eingedampft, wobei man einen allmählich kristallisierenden Sirup erhält. Die Kristalle werden mit Äthanol verrieben, gefiltert, in einem Vakuum-Hxsikkalor getrocknet und ergeben 0.78 g (66%) 1.-1 .-)-;-Amino-ii-hydroxybuttersäure. Schmelzpunkt 206 bis 207 C. [.«]? - 29^r (C. 2.5. H₂O). Das IR-Spekltum

**) BU-K .17 wird lur 1,2'- oder I ..V oder 1,6-Dif ι -I ■ )-_:-Aminon-hyilrnxyhutyryll-tohriimycin gehalten.

¹I Y. Sailo el al.. Tetrahedron Letters. 1470. 4X(O.

mn

ist mit einer aus Ambutyrosin erhaltenen authentischen Probe identisch.

»Amberlite CG-50« ist der Handelsname CUr ein schwach saures Kationenaustauscherharz eines Carbonsäure Polymethacrylsäurelyps zur chromatographischen Verwendung.

»Amberlite IR-120« ist der Handelsname für ein hochdichtes Kationenaustauscherharz mit Kernsulfonsaurecruppen, das entweder in Wasserstoff- oder Natriumiorm als Kügclchen mit einem Durchmesser, der einem Sieb mit 16 bis 50 Maschen entspricht, erhältlich ist.

Claims

Patentansprüche:

1. 1 - [l -(-)-;■- Amino - ,< - hydroxybutyryl]- tobramycin der allgemeinen Formel

CH₂OH

HO

(IV)

NH-R

NH

worin R i_-( — )-y-Amino-u-hydroxybutyryl bedeutet, und dessen nichttoxische pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze.

2. 1 - [l -( — )-;·- Amino - u - hydroxybutyryl]-tobramycinmono- und -disulfat.

3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise entweder

a) Tobramycin mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

Il

CH, — O — C-X -1°

in der X Chlor, Brom oder Jod bedeutet. NH₁

oder mit

CH₂

Il o —c —ο

in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger Acylicrungsmittel pro Mol Tobramycin in einem Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als ungefähr 50°C behandelt,

b) die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel

HO

CH₇OH

HO

worin Y den Rest der Formel

Il

O O Oll O C

/ V-CII₂-O --C -Nil (CH₂I₂- CH C-Q-N (VII)

C --

Il ο

in einem Verhältnis von mindestens 0.5 Mol der Verbindung VII pro Mol der Verbindung Il in einem Losungs-

mittel acyliert, aus der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel

CH,OH

NH

NH-CO-O-CH₁-Z^-S

d) gegebenenfalls das erhaltene Produkt in üblicher Weise anschließend in ein nichltoxisches pharmazeutisch verträgliches Salz, umwandelt.

4. Verfahren gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man in Stufe a) Tetrahydrofuran und Wasser im Gewichtsverhältnis 1:1 als Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als 25° C verwendet und in Stufe btWasser-Tetrahydrofuran im Gewichtsverhältnis 1:1 als Lösungsmittel in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis 1,1 Mol Acylicrungsmittel pro Mol der Verbindung II einsetzt.