DE2311524A1 - Antibiotische derivate - Google Patents

Description

j PATENTANWÄLTE

PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTER 2311524

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE *" ^ DR. KARL GEORG LÖSCH D-8OOO MÜNCHEN 13. BAUERSTRASSE 22. POSTFACH 78O · FERNRUF <OSI1) 37 65 83 · TELEX S2152O8 ISAR d

München, den 6. März 1975 M/12441

BRISTOL-MYERS COMPANY
345, Park Avenue, New York, N.Y., U.S.A.

Antibiotische Derivate '

Die Erfindung betrifft Derivate von Tobramycin (auch Nebramycin Faktor 6 genannt), die eine wesentlich bessere antibakterielle Wirkung aufweisen. Die Erfindung betrifft insbesondere halbsynthetische, in 1-Stellung substituierte Derivate von Tobramycin, die durch Acylierung der 1-Aminofunktion von Tobramycin mit einer γ-Amino-a-hydroxybutyryl-, ß-Amino-a-hydroxypropionyl- oder /"-Amino-a-hydroxyvalerylgruppe hergestellt werden.

309838/1251

In Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1967» Seiten 314 bis 348 ist der Nebramycinkomplex, der durch Fermentation von Streptomyces tenebrarius (American Type Culture Collection A.T.C.C. 17920 und 17921) hergestellt wird, beschrieben. In Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970, Seiten 309 bis 313 ist angegeben, daß eine Fraktion des genannten Nebramycinkomplexes (dort als Faktor β beschrieben und nachstehend Tobramycin genannt) die folgende Struktur aufweist

	•	β' CH2NH2	H2N ^	6"
		\.—"~*Τ?~ϊ 31 /^ NH2		CH2OH
			OH^V-
. HO		Η07—4^ -/^Τ^2 4 NH2

Es wird angegeben, daß diese Verbindung ein breites Spektrum antimikrobieller Wirksamkeit, einschließlich einer Wirksamkeit gegen Pseudomonäs-und .Proteus-Mikroorganismen, besitzt.

Der Nebramycinkomplex (auch Tenebramycinkomplex genannt) ist in der britischen Patentschrift 1 178 489, belgischen Patentschrift 697 319, kanadischen Patentschrift 881 488 beschrieben und erhielt den Index Farmdoc Nr. 29 579F. Die für die Fermentation des Nebramycinkomplexes erforderliche Kultur ist in der American Type Culture Collection als A.T.C.C. Nr. 17920 (Rockville, Maryland, U.S.A.) hinterlegt.

Ferner ist Nebramycin in der US-Patentschrift 3 ,691 279 beschrieben.

3 0 9 8-3«> 1 2 5 1 original inspected

Μ/12 441 ο

Die Erfindung betrifft halbsynthetische Tobramycinderivate, die als !-[L-CO-Y-Amino-a-hydroxybutyrylJ-tobramycin, 1-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-tobramycin oder l-[L-(-)· </-Amino-a-hydroxyvaleryl]-tobramycin bezeichnet werden undfol gende Formel aufweisen

CHoOH
CH₂NH₂

HO χ ^-^r -/-\ ι "^^"NH-R

IV

worin R L-(-j-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-ahydroxypropionyl oder L- (-)-<£-Amino-a-hydroxyvaleryl bedeutet, oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Die bei der Besehreibung der vorliegenden Erfindung verwendete Bezeichnung "nicht-toxische pharmazeutisch verträgliche "Säureadditionssalze" bedeutet ein Mono-, Di-, Tri-, Tetra- oder Pentasalz, das durch Reaktion eines Moleküls der Verbindung IV mit 1-5 Mol einer nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säure gebildet wird. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoffsäure, Ascorbinsäure, Apfelsäure und Citronensäure und jene weiteren Säuren, die allgemein zur Herstellung von Salzen aminhaltiger pharmazeutischer Präparate verwendet werden.

309838/1 251

M/12 441

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird durch folgendes Schema veranschaulicht :

1. Tobramycin

N-(Benzyloxycarbonyloxy)-Succinimid

CH^OH,

II

2. Verbindung II N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-y-

Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure

CH₂OH

IHa

j 2 O

CH₂-NH-C-O-CH2-C₆H5

309838/12 5 1

M/12 441

? ^; 1 : S 2 4

3. Verbindung IHa

H₂/Pd/C

CH^OH

IVa

H₂-NH₂

Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung ist die Verbindung der Formel

CH^OH ²

NH-R²

0 worin R¹ Wasserstoff oder CgH₅-CH₂-O-C und R² Wasserstoff, L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-C-J-cCAmino-a-hydroxyvaleryl bedeuten, wobei entweder R oder R eine von Wasserstoff abweichende Bedeutung haben muß, oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

■309l! 3 8/

M/12 441 k 2- ; i-¹·:'^

Eine weitere bevorzugte Ausführungsform ist die Verbindung

Il

der Formel V, worin R¹ CgH₅CH₂-O-C- und R² Wasserstoff bedeuten .

Am meisten bevorzugte Ausführungsformen gemäß der Erfindung sind die Verbindung der Formel V, worin R Wasserstoff und R L-(-)-Y-Amino-oc-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl bzw. L-(-)-(/^Amino-a-hydroxyvaleryl bedeuten, oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Weitere am meisten bevorzugte Ausführungsformen sind die Sulfate, Hydrochloride, Acetate, Maleate, Citrate, Ascorbate, Nitrate oder Phosphate der Verbindung V und'Monosulfate und Disulfate der Verbindung IV.

Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen' der Formel

NH-R²

!I

worin R^x Wasserstoff oder C^H₅-CH₂-O-C- und R Wasserstoff, L-(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-α-hydroxypropionyl, L-(-)-f£Amino-a-hydroxyvaleryl, L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl, L- (-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypro.pionyl oder L- (-O-cCBenzyloxycarbonylaminoa-hydroxyvaleryl bedeuten, wobei entweder R oder R eine von

- 6 -3 0 9 B 3 B / "1

M/12 441

"3 1 ' ^l\ '> 4

Wasserstoff abweichende Bedeutung haben muß, oder eines nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man aufeinanderfolgend A. Tobramycin mit einem Acylierungsmittel, ausgewählt unter den Verbindungen der Formeln

CH₂-O-C-O-

CH₂-O-C-X

CH, 0

CH_x-C-O-C-N,

CH

ff \

© 0

-C-O-C-CH-.

X-CH₂-C-X,

309838/ Τ2ΊΓΓ

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441

Il

2 31 "524

X-CHp -C-OH (oder einer Carbodiimidadditionsverbindung davon)

oder · H Y\ (oder einer Carbodiimidaddi-

3-CH₂-CH₂-CO₂H ■ tionsverbindung davon)

worin R¹⁺ und R^ gleich oder verschieden sind und jeweils H, F, Cl, Br, NO₂, OH, Niedrigalkyl oder Niedrigalkoxy bedeuten und X Chlor, Brom oder Jod bedeutet, oder mit seinem funktioneilen Äquivalent als Acylierungsmittel in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger Acylierungsmittel pro Mol Tobramycin in einem Lösungsmittel, vorzugsweise ausgewählt unter Dimethylformamid, Dirnethylacetamid, Tetrahydrofuran, Dioxan, 1,2-Dimethoxyäthan, Methanol, Äthanol, Wasser, Aceton, Pyridin, N-Niedrigalkylpiperidin oder Gemischen davon, vorzugsweise jedoch in 1:1 Wasser-Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur unter ungefähr 50⁰C, vorzugsweise unter 25°C, behandelt, um die Verbindung der Formel

CH OH

II

worin Y ein Rest der Formel

INSPECTED

3~Ö 98 3 8/ΊΤ5"Τ

M/12 441

2 ^:- 1 Ι J 1

CH₂-O-C-

Il

C-

bder

0 . 0

1! il

C₇CH₂-CH₂-C-

ist, worin R und R"^ die oben angegebene Bedeutung haben,

herzustellen,

B. die Verbindung II mit einem Acylierungsmittel der Formel

OH W-Mi-(CHg)_n-CH-C-M

VII

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 einschließlich ist, j W einen Rest bedeutet, ausgewählt unter j

OBlGlNAL INSPECTED

M/12 441

AO

CH,

,oJ-

O₂N

NC

Ii -

X-CH-C-2

	9 ■" ι ."■·>■/. (- ·■ ■ - . ί	ι
CH3 0
. CH,-C-O-C- > ι
ι CH5

0. , 0 ■

-CH₂-CH₂-C- ;

vorzugsweise^

worin R und R^ die obige Bedeutung haben, und M einen Rest bedeutet, ausgewählt unter

-0-l·

-0

-Ο-Ν-

-NO.

₉ vorzugsweise -Ο-Ν

- ίο und

ORiGiMAL INSPECTED.

M/12 441

oder mit seinem funktionellen Äquivalent als Acylierungsmittel in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol der Verbindung VII pro Mol der Verbindung II, vorzugsweise in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 und am meisten bevorzugt in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis ungefähr 1,1, in einem Lösungsmittel, vorzugsweise ausgewählt unter einem Gemisch von Wasser und Athylenglycoldimethyläther, Dioxan, Dirnethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Propylenglycoldimethyläther oder dergleichen, vorzugsweise jedoch 1:1 Wasser-Tetrahydrofuran acyliert, um die Verbindung der Formel

■ CH„OH

NH-C=O

III

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist und Y und ¥ die oben angegebene Bedeutung haben, herzustellen und C. die· Schutzgruppen ¥ und Y gegebenenfalls aus "der Verbindung III durch allgemein bekannte Verfahren entfernt und zwar vorzugsweise, wenn ¥ und Y-Reste der Formel

CHo-O-C

sind, indem man die Verbindung III mit ¥asserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators, vorzugsweise ausgewählt unter

- 11 -

ORIGINAL JNSPECTED

Palladium, Platin, Raneynickel, Rhodium, Ruthenium und Nickel vorzugsweise jedoch Palladium und am meisten "bevorzugt Palladium auf Holzkohle, in einem Wasser-wassermischbarem

_ ι

Lösungsmittelsystem, vorzugsweise ausgewählt unter Wasser und ' Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglycoldimethylather, Propylen- i glycoldimethyläther oder dergleichen, vorzugsweise jedoch in '

1:1 Wasser-Dioxan, hydriert. - , |

Es wird dem Fachmann auf diesem Gebiete klar sein, daß für '· die Durchführung des obigen Verfahrens zur Acylierung der ! Aminfunktionen der Zwischenverbindungen gemäß der Erfindung i andere Mittel verwendet werden können. Die Erfindung umfaßt jene Acylierungsmittel, die labile Aminschutzgruppen schaffen, die bei der Synthese von Peptiden allgemein verwendet werden. Die labilen Schutzgruppen müssen durch bekannte Verfahren leicht zu entfernen sein. Beispiele_;besagter labiler Schutzgruppen und Verfahren zu ihrer Entfernung sind im Bericht von A. Kapoor, J. Pharm. Sciences 59., Seiten 1-27 (1970) zu finden. Funktionelle Äquivalente als Acylierungsmittel für primäre Amingruppen umfassen entsprechende Karbonsäurechloride, -bromide, . Säureanhydride, einschließlich gemischter Säureanhydride und insbesondere die gemischten Säureanhydride, die aus stärkeren Säuren, wie die niedrigaliphatisehen Monoester von Kohlensäure, Alkyl- und Arylsulfonsäuren und sterisch gehinderterer Säuren, wie Diphenylessigsäure, hergestellt sind. Weiterhin kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester (zum Beispiel mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, Thiophenol, Thioessigsäure) verwendet werden oder die freie Säure selbst kann mit der Verbindung II verbunden werden, nachdem zuerst die freie Säure mit N,N'-Dimethylchlorforminumchlorid [siehe britische Patentschrift 1 008 170 und Novak und Weichet, Experientia XXI/6, 360 (1965)] umgesetzt worden ist oder es können Enzyme oder ein Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol oder ein NjN'-Carbonylditriazol [siehe Sheehan und Hess, J. Amer. Chem. Soc, 77, Seite IO67, (1955)] oder ein Alki-nylaminreaktionsmittel [siehe R. Buijile

- 12 oUo00στ Tt9 I

U/12 441 *■

und H.G. Viehe, Angew., Chem., International Edition 3, (1964)] oder ein Keteniminreaktionsmittel [siehe CL. Stevens und M.E. Monk, J. Amer. Chem. Soc. 80, 4065 (1958] oder ein Isoxazoliumssizreaktionsmittel [siehe R.B. Woodward, R.A. Olofson und H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc, 83, 1010 (I96I)] verwendet werden. Ein weiteres Äquivalent des Säurechlorids ist ein entsprechendes Azolid, das heißt ein Amid der entsprechenden Säure, dessen Amids tickst off ein Glied eines quasiaromatischen fünfgliedrigen Ringes mit mindestens zwei Stickstoffatomen, das heißt Imidazol, Pyrazol, die Trizole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate, ist.Als Beispiel für ein allgemeines Verfahren zur Herstellung eines Azolids wird N,N^f-Carbonyldiimidazol mit einer Karbonsäure in äquimolaren Verhältnissen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten: Lösungsmittel zum Karbonsäureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxyd und einem Mol Imidazol umgesetzt. Dikarbonsäuren ergeben Diimidazolide. Das Nebenprodukt, Imidazol, fällt aus und kann abgetrennt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, aber das ist nicht wesentlich. Diese Umsetzungen sind gut bekannt (siehe US-Patentschriften. 3 079 314, 3 117 126 und 3 129 224 und britische Patentschriften 932 644, 957 570 und 959 054).

Die Verbindung IVa, l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-tobramycin, besitzt eine ausgezeichnete antibakterielle Wirkung. Nachstehend werden anhand einer Tabelle die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC) von Tobramycin und der Verbindung IVa (BB-K36) gegenüber einer Anzahl gram-ipositiver und gramnnegativer Bakterien, wie sie durch das Steersagar-Verdünnungsverfahren erhalten werden, veranschaulicht (Tabelle I). Ein Agarnährmedium wurde bei der Untersuchung der Tabelle I verwendet.

- 13 3 09R38/12S1

ORIGINAL INSPECTED

I M/12 441· ■	TARTCLLR T	-	I fMIC rag./ml	0 ·	.8	23ME	(;24	.8
	' Interne' Bezeichng.		Resistent gegen *	KM-B	.6			.8
Organismus			O	.6	Tobra- M		.8
E. coli NIHJ	AI5II9		1		0.4		V8
" Juhl	A15169		1	.8	0.8	B3-K36' .	.6
η	A20363	KM	100		0.4	0	.4
Il	A9844		0	.4	0.4	0	.6
II !-■	A20365	KM	100	,8	. 0.4	0	.6 ■
I1 Il			0		0.4	0	6
■" K-12	A20664	MK	• 0	.4	0.4	1	Λ: -
" K-12	A2O665	KM	50		1.6	0	6
" K-12	A20684. .	■ :	.0.	8	. 0.4	1,	β
JI	A20683	KM, GM	>10p	8	0.2	1	β
Il	A9535		0,	8	12.5	!■	6
ti 1	A15148		' 0«	8	0.8	0.	8 ■
„	A15164		0.	8	- 0.8	1.	6
Ii	AI517O		0.	1·	• O>8	1.	2
Il	A20102		0.		·*♦ 0.4	1.	β
Il			0.	8	0.8	- 1.	β
K. pneumoniae D-Il	A2O68O	KM, GM	>100	8	0.2	0.	β
II	A9661			5	12.5	1.	β
Klebsiella sp.	A9662		0,		0.8	0.
II			12.	0.8	1.
P. aeruginosa ! D15 ■	14 -		0.4	1.
				1.
		1.

30 9 83 8/1251

M/12 441

/r ■ ■

; TABELLE I (MIC mg./ml.) (Fortsetzung)

Tovtk·* »

Interne Resistent Organismus Bezeichng. ..,gegen * KM-B

P. aeruginosa
D15

D113

A9923
A9930
AI5150

' A20479 . A20616 " A2O653 " ; A9843

Pseudomonas sp A2O355

_t. A20358

A2O368

A20598

A20600

" A20603 A206l8 " ■' A20594 S. marcescens A20019 P._: vulgaris A943β

A9526
" . A9699

KM

KM KM KM

GM GM GM KM, GM

KM, GM KM, GM >100

25

6.3
50

1.5
>100 100 >100

50

■6.3
12.5

' 6.3
" 50
12.5

>100

>100
100
0.8·
0.2
0.4
0.8

1.6
1.6
0.2
1.6
1.6
3.1
3.1
1.6
1.6
0.8
1.6
12.5

. 1.6

9.8
_v 6.3
>50

3.1
1.6

0.2 0.2 0.4

BB-K36

6.3 6.3 0.4

6.3

3.1

6.3

12.5

12.5

6.3

1.6

6.3 100

12.5

6.3 100 '

100

12.5 3.1 0.4 0.4 1.6

ATCC 992Ο
π

TI

A9539
A9716

0'.2

'.0.2

1.6

0.1
0.1
0.4

0.8 0.8 3.1

ORIGfNAt INSPECTED

M/12 441

	ί j	• P	j	- ■	(MIC mg./ml.)	.·· ■	ϊ·	A	- 16 -	231	Tobra- M	1524	Tobra-M—Tobramycin
I I		TABELLE I	Resistent . _ gegen *		B	09838/1251	(Fortsetzung)	0.2		*
J I	! ρ	Interne Organismus Bezeichng				KM-B	• 0.4	BB-K36	■ - -
1 P		. morganii A9553	■		0.4	0.4 :	0.4
		11 . A20031			0.8	0.8	1.6
		11 ' A9636.			0.4	0.4	- 0.8
	S	A15153			0.2	0.8	3.1
		11 u, A15166		SM	0.4	0.4	0.8
" r		11 "' A2O455 .		KM	0.8	0.2	0.8
	" A2O457 "			0.8	0.2	0.8
B I i	. rettgeri ' AI5.I67	0.4	6.3	0.4
	11 A9637	0.4	• 0.4	o.8'J
	. inconotäns A2O615	6.3	0.2	3.1
	. mirabilis,. A9554	0.8	0.8	1.6
	11 ' A99QO	0.4	0.8	0.8
11 ' . A2O119	' 0.8 .	0.2	3.1
" A2O454	0.8	0.1	3.1
. aureus 209P	0.4	0.2	* 0.8
11 . Smith	0.2	0.4	0.4
11 '" 2O9P R-4l	0.4	0.05	0.8
11 e ■ " A2O239	50	GM—Gentamicin	. 0.8
. subtilis PCI-219	0.1	0.1
*KM — Kanamycin
KM-B- Kanamycin
3

Μ/12 441 rT

Die Verbindlangen Ι¥ sind als antibakterielle Mittel, Nährzusätze zu Tierfutter, therapeutische Mittel bei Geflügel und Tieren, einschließlich dem Menschen, wertvoll und sind von besonderem ¥ert bei der Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch gram-ipositive und gram-megative Bakterien hervorgerufen werden.

Die Verbindungen IV sind bei oraler Verabreichung als eine zusätzliche Behandlung für yoroperative Sterilisierung des Darms wertvoll. Sowohl aerobe als auch anearobe Flora, die auf diese Medikamente anspricht, wird im Dickdarm reduziert. Zusammen mit entsprechender mechanischer Reinigung sind sie bei der Vorbereitung von Dickdarmoperationen wertvoll. . -

Die Verbindungen IV sind bei^:der Behandlung systemischer bakterieller Infektionen wirksam, wenn sie parenteral in einer Dosis im Bereich von ungefähr 250 mg bis ungefähr 3000 mg täglich in unterteilten Dosen drei- bis viermal täglich verabreicht werden. Allgemein'sind die Verbindungen wirksam, wenn sie in einer Dosis von ungefähr 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.

Die Verbindungen der Formel IV und deren Salze bilden bei Isolierung aus wässrigen Lösungsmitteln Mono- und Polyhydrate bilden. Folglich fallen auch die so hergestellten Hydrate in den Bereich der Erfindung.

- 17 303R3R/ Λ.2-5-1

ORiGiNAIlNSPECTEP

M/12 441 /?

Beispiel 1

Herstellung von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonyl-amino-ahydroxybuttersäure (VIa )

!,_.(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure (7,4 g, 0,062 Mol) wird einer Lösung von 5,2 g (0,13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser zugesetzt. Der gerührten Lösung werden tropfenweiBe bei 0-5⁰C während einer Zeitspanne von 0,5 Stunden ll,7a-g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid zugesetzt und das Gemisch wird eine Stunde lang bei der gleichen Temperatur gerührt.. Das'Reaktionsgemisch wird mit 50 ml· Äther gewaschen, mit' verdünnter Chlorwasser stoff säure auf einen pH-Wert von 2 .·" eingestellt und' mit vier mal 80 ml-Teilen Äther, extrahiert. Die ätherischen Extrakte werden kombiniert, mit einer gerin.-gen Menge gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen-, -mit wasserfreiem-Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Filtrat wird im Vakuum verdampft und der erhaltene Rückstand aus Benzol kristallisiert, wobei man 11,6 g (74 %), farblose Plättchen erhält, Schmelzpunkt 78,5-79,5°C, [a]_D-4,5° (c=2, CH^OH). Infrarotspektrum (IR) [KBr]: ^γο=ο 1740, l690cm~ Nuklearmagnetische Resonanz (NMR) (Aceton-dg) (in ppm aus .TMS) 2,0 (2H, m), 3,29 (2H, d-d, J=6,7 und 12 Hz), 4,16. (IH, d-d, J=4,5 und 8 Hz), 4,99 (2H,s), 6,2 (2H, breit), 7,21 (5H,s). Das Produkt ist die Verbindung. VIa.

Analyse für C₁₂H₁₅NO₅ : ·.

C H . N. \ ■ ' berechnet : 56,91 5,97 5,53 % '

gefunden : 56,66 5,97 5,47 %. . ..

- 18 -

309838/1251

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441
Beispiel 2

N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-Y-benzyloxycarbonylamino-ct-hydroxybuttersäure (VIIa)

Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) der Verbindung VIa und 4,8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuceinimid¹ in 200 ml Äthylacetat wird auf O⁰C gekühlt und sodann werden 8,6 g (0,042 Mol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht in einen Kühlschrank gestellt. Der abgetrennte Dicyclohexylharnstoff wird abgefiltert und das Filtrat auf ungefähr 50 ml bei- verringertem Druck konzentriert, wobei man farblose Kristalle der Verbindung VIIa erhält, die durch Filtrieren gesammelt werden.,. 6,4 g, Schmelzpunkt 121-122,5°C. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne verdampft und der kristalline Rückstand mit 20 ml eines Benzoln-rHexangemisches gewaschen und ergibt eine weitere Menge der Verbindung VIIa. Die Gesamtausbeute beträgt 1,34 g (92 %). Ca]₁J 1,5° (c=2, CHCl₃) IR(KBr)^ c=o 1810, 1755, j 1740, 1680 cm"¹. NMR (Aceton-dg)<T (in'ppm aus TMS) 2,0 j (2H,m), 2,83 (4H,s), 3,37 (2H,d-d, J=6,5 und 12,5 Hz),

4,56 (lH,m), 4,99 (2H,s), 6,3 (2H, breit), 7,23 (5H,s). ·

Analyse	für	C16H	C	18N2°	7 :	8	N
		,85		H	8	,00 ?
berechnet:	54	,79,	VJl	,18	8	,14,
gefunden :	54	,70	VJl	,21,		,12 ?
	54	5	,20

1. G.W. Anderson et al., J. Am. Chem. Soc, 86, 1839 (1964)

- 19 -
098 3 8/1251

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441 * ■ "■-■.■ . f

B e is ρ i e 1 3 · ..^v* ' , j

Herstellung von 6'-N-BenzyloxyGarbonvltobramycin (II) ^ \ V

Zu einer, gerührten Lösung von "250 mg (0,53^mMoI) Tobramycin . ] in 13 ml Wasser und 13 ml Tetrahydrofuran-(THF) werden■ 135 ag J (0,35 mMpl) N-Benzyloxycarbonyloxysucciniffiid bei-10°G züger setzt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt und bei verringertem Druck "verdampft^ um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Um-die unlöslichen Bestandteile zu entfernen, wird die entstehende wässrige" Lösung filtriert und das Eiltrat wird anschließend in eine Kolonne CG-50 (NH^-Typ, .10 ml Fassungsvermögen) eingebracht. Die Kolonne wird mit 50 ml Wasser gewaschen'und mit 0,1 η Ammoniak eluiert. ■ Das Eluat wird in 10.ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen Nr. 7 bis 40 werden.kombiniert, bei verringertem Druck verdampft und gefriergetrocknet, wobei man 228 mg (72 %) rohes 6'-N-Benzyloxycarbony!tobramycin erhält, das kein Tobramycin selbst enthält. Schmelzpunkt 155-56⁰C (unter Zersetzung). IR_YC~_Ö 1700 6m*"¹. Das Produkt wird für die nächste Reaktionsstufe ohne weitere Reinigung verwendet.

Analyse für

	44	C	7	H	9	N
berechnet:	44	,08	6	,26	9	.52
gefunden :	,19	,54	,79

30 9.8 38/ 12S.1

ORIGINAL 5NSPECTED

"■I ' ο '

Μ/12 441
Beispiel 4

Herstellung von l~[L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-ahYdroxybtttyryl] -6' -earbobenzoxytobramycin (IHa) -

β'-N-Benzyloxycarbonyltobramycin (200 mg, 0,33 HMol) wird in 10 ml Wasser Und 10 ml Tetrahydrofuran gelöst. Die Lösung wird auf 10°C abgekühlt und 117 ing (0,33 mMol) N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-ahydroxybuttersäure werden zugesetzt. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt und ergibt nach Verdampfung des Lösungsmittels das in der Überschrift des Beispiels angegebene Produkt als einen rohen Feststoff.

Bei spiel

Herstellung von l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-tobramycin (IYa, BB-K36)

Das rohe Produkt IHa des Beispiels 4 wird in 20 ml 1:1 Wasser-Tetrahydrofuran gelöst und anschließend bei atmosphärischem Druck in Gegenwart von 60 mg 10 %-igem Palladium auf Aktivkohle über Nacht bei Raumtemperatur hydriert. Das Reaktipnsgemisch wird filtriert und bei verringertem Druck verdampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen.

Die entstehende wässrige Lösung wird in einer Kolonne CG-50 (NH^⁺, 9 ml) absorbiert. Die Kolonne wird mit 30 ml Wasser gewaschen und anschließend mit 520 ml 0,1 η Ammoniak, 500 ml 0,2 n- Ammoniak und 720 ml 0,5 η Ammoniak eluiert.' Das Eluat wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 89 bis 102, die einenbioaktiven Fleck bei Rf 0,4 durch Dünnschichtchromatographie auf System S-IlO (Silicagelpl'atte, CH₃Cl-CH₃OH- 28 % NH₄OH-H₂O, 1:4:2:1) zeigen, werden kombiniert, bei verringertem Druck konzentriert, gefrierge-

- 21 -
: 3 a-/4- 2-5-3

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441 &

trocknet und ergeben 19 mg BB-K35 , Schmelzpunkt 219-223⁰C (unter Zersetzung), Y_c=o 1750 cm.

Analyse	für	37	C22H4^	+N6°	11·2Ηί	,CO,.2H2O :
	-	37	C		H	N
berechnet:	,69	7	,38	10,99
gefunden :	,68	6	,75·	10,59 %l

Die Fraktionen 105 bis 111 werden kombiniert, bei verringertem! Druck verdampft, gefriergetrocknet und ergeben 35 mg eines j Gemisches, das zwei bioaktive Flecken, bei Rf 0,23 (BB-K36) und 0,38 (BB-K35) durch Dünnschichtchromatographie zeigt. Das Gemisch wird in 2 ml Wasser gelöst und in einer Kolonne CG-50 (NH^⁺, 5 ml) absorbiert. Die Kolonne wird mit 175 ml 0,2 η Ammoniak und 400 ml 0,5 η Ammoniak . eluiert. Das Eluat wird in 5 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen Nr. 47 bis 55 werden kombiniert, bei verringertem Druck verdämpft und gefriergetrocknet und ergeben 6 mg (3%) BB-K36, Schmelzpunkt 205-6⁰C (unter Zersetzung), Y_c__o 1650 cm~ . Ein Gemisch von 20 mg BB-K35 und BB-K56. wird aus den Fraktionen 40 bis 46 gewonnen.

Die Fraktionen 126 bis 131 der ursprünglichen Kolonne werden kombiniert, bei verringertem Druck verdampft, gefriergetrocknet und ergeben 7 mg (4%) BB-K37 , das einen Fleck bei 0,13 durch Dünnschichtchromatographie (S-IlO, Ninhydrin und Bioautograph) zeigt. Schmelzpunkt 209-10⁰C (unter Zersetzung) Y_c=0 1650 cm"¹. . . '

BB-K35 wird für 2^f-[L-(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl]-tobramycin gehalten.

ν BB-K37 wird ·. für 1,2J-1,3- oder 1,6*-"Dl[L-C-)-γ-Amino-ahydroxybutyryl]-tobramycin gehalten.

ORIGSMAL INSPECTED

O'' ι ι ' ν /. i

M/12 441 iS j

Beispiel 6

Herstellung von N-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid

N-Hydroxysuccinimid (23 g, 0,2 Mol) wird in einer Lösung von 9 g (0,22 Mol) Natriumhydrpxyd in 200 ml Wasser gelöst. Der gerührten Lösung werden tropfenweise 34 g (0,2 Mol) Carbobenzöxychlorid unter Wasserkühlung zugesetzt und anschliessend wird das Gemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, um das Carbobenzoxyderivat abzutrennen, das durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und luftgetrocknet wird. Ausbeute 41,1 g (82 %).

Umkristallisierung aus Benzol-n-Hexan (10:1) ergibt farblose Prismen, die bei 78-79°C schmelzen.

Beispiel 7

Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersaure aus Ambutyrosin A oder B oder Gemischen davon

Ambutyrosin A (5,0 g) (US-Patentschrift 3 541 078, ausgegeben am 17. November 1970) wird mit 160 ml 0,5 n-Natriumhydroxyd eine Stunde lang unter Rückfluß gehalten. Das Hydrolysat wird mit 6n HCl neutralisiert und in einer Kolonne . CG-50 (NH^^{+ T}yp) Chromatograph!ert. Die gewünschte L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybuttersäure wird abgetrennt, indem man die Kolonne mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknen entfernt. Man erhält die L-(-)-y-Amino-ahydroxybuttersäure als einen kristallinen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 212,5-214,5⁰C. (Spalte 2, Zeilen 31,28 der US-Patentschrift 3 541 078).

- 23 -

. 3098?··:/1 251 :

OFHGlNAL INSPECTED

Z311524

M/12 441 Qf '■ ■ - .

Beispiel 8

Herstellung von L-(-)-Y~Amino-a-hydroxybuttersäure aus DL-q-Hydroxy-γ-phtalimidobüttersäure

A. Dehydroabietylaiiimonium-L-a-hydroxy-γ- . phtalimidobutyrat:

Zu einer Lösung von 25 g (0,1 Mol) a-Hydroxy-Y-phtalimidobutter· säure¹ in 200 ml Äthanol wird eine Lösung von 29 g (0,1 Mol) Dehydrobietylamin in 130 ml Äthanol zugesetzt. Die Lösung wird eine Minute lang kräftig geschüttelt und fünf Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen, währenddessen sich feine Nadeln auskristallisieren. Die Kristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit 50 ml Äthanol gewaschen, luftgetrocknet und ergeben 30,1 g (56 %) eines Diastereomeis des Dehydroabietylaminsalzes. Schmelzpunkt 93-94°C [a]_D + 15° (C. 2,5, MeOH). Umkristall!sierung aus 300 ml Äthanol ergibt 23,2 g (43 %) des reinen Produktes. Schmelzpunkt 94-95⁰C. [α]²⁴ +10,8° (C.2,4 MeOH). Weitere Umkristallisierung ändert den Schmelzpunkt und die spezifische Drehung nicht.

Analyse	für C	32H4i	,N2O5	.H2O :	5	N.
		C		H	5	,07
berechnet:	69	,54	'8	,02		,07
gefunden :	69	,58	8	,08

1. Y. Saito et al., Tetrahedron Letters, 1970, 4863.

B. L-(-)-Y-Amino-q-hydroxybuttersäure:

Zu einer Lösung von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in

40 ml Wasser werden 5,3 g (0,01 Mol) Dehydroabietylammonium- j

— ζ*+ *·

. ' ORIGINAL SMSPEGTED

Μ/12 441 -

! L-a-hydroxy-Y-phthalimidobutyrat und 6θ ml Äther zugesetzt. j Das Gemisch wird kräftig geschüttelt, bis sich der gesamte Feststoff aufgelöst hat. Die Ätherschicht' wird abgetrennt und die wässrige Lösung zweimal mit 30 ml-Teilen Äther gewaschen und auf 15 ml bei verringertem Druck verdampft. Dem Konzentrat werden 10 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure zugesetzt und das Gemisch wird zwei Stunden unter Rückfluß gehalten. Nach dem Abkühlen wird die abgetrennte Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wird bei verringertem Druck verdampft und der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung zur Trockne verdampft. Dieser Vorgang wird zweimal wiederholt, um den Überschuß an Chlorwasserstoffsäure zu entfernen. Der zurückbleibende Sirup wird in 10 ml Wasser gelöst und filtriert, um eine geringe Menge unlöslicher Phthal.· säure zu entfernen. Das Filtrat wird in einer Kolonne IR-120 (H⁺, 1 cm χ 35 cm) adsorbiert und die Kolonne wird mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 1 η Ammoniumhydröxydlösung eluiert.. Das Eluat wird in 15 ml-Fraktionen gesammelt. Die Ninhydrin-ßositiven Fraktionen 10 bis 16 werden kombiniert und bei verringertem Druck verdampft, wobei man einen allmählich kristallisierenden Sirup erhält. Die Kristalle werden mit Äthanol verrieben, gefiltert, in einem Vakuum-' Exsikkator getrocknet und ergeben 0,78 g (66 %)^ L-(-)-y-Amino-a-hydroxybuttersäure. Schmelzpunkt 206-207°C, [α]{^-29^ο (C, 2,5, H₂O). Das IR-Spektrum ist mit einer aus Ambutyrosin erhaltenen authentischen Probe identisch.

Beispiel 9

Herstellung des Monosulfats von l-[L-(-)-y-amino-a-

hydroxvbutyryl]-tobramycin

— ^d ' **—·*—■* ■* ~ ———

Ein Mol l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-tobramycin wird in 1 bis 3 Liter Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert,

- 25 -

-4-2-5-1

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441

um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung wird ein Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefel-j säure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und werden als das gewünschte Mono sulfatsalz bestimmt.

Beispiel 10 ,

Herstellung des Disulfats von l-[L-(-)-Y-Amino-ahydroxybutyryl]-tobramycin

Ein Mol l-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-tobramycin wird in 1 bis 3 Liter Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert-, um ungelöste Feststoffe zu entfernen. Der gekühlten und gerührten Lösung werden 2 Mol in 500 ml Wasser gelöste Schwefelsäure zugesetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, worauf ihm kaltes Äthanol zugesetzt wird, bis Ausfällung eintritt. Die Feststoffe werden durch'Filtrieren gesammelt und als das gewünschte Disulfatsalz bestimmt..

Beispiel 11

Herstellung von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure (VIb) _^ -

L-ß-Amino-a-hydroxypropionsäure (8,2 g, 0,078 Mol) wird.in ■ einer Lösung von 6,56 g .(0,0ί64 Mol) Natriumhydroxyd und 60 ml Wasser gelöst. Der gerührten Lösung werden tropfen-,: weise 14,7 g (0,086 Mol) Carbobenzoxychlorid unter .5⁰C zugesetzt. Das Gemisch wird eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit 60 ml Äther gewaschen und mit verdünnter HCl.auf einen pH-Wert von 2 eingestellt. Der Niederschlag wird durch

- 26 . , ^-4-2-5-4 1 ORSGlNAi -

! M/12 441

Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen, luftgetrocknet und ergibt 9,65 g (52 %) der Verbindung VIb. Das Filtrat ■wird mit fünf 100 ml-Teilen Äther extrahiert. Die ätherische Lösung wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum zur Trockne verdampft und ergibt weitere 2,0 g (11 %) der Verbindung VIb. Eine Gesamtmenge von 11,65 g der Verbindung VIb wird aus 500 ml Benzol-Äthylacetat (4:1) kristallisiert und ergibt 9,36 g (50 %) reine Verbindung VIb, Schmelzpunkt 128,5-129,5°C. Infrarotspektrum (IR) (KBr) :

"¹ [a]^⁵° +29°

Y_G=0 1745, 1690 cm"¹. [a]^⁵° +2,9° (c 5,0, MeOH). Nuklearmagnetische Resonanzspektren [NMR (DMSO-dg)]:σ(in ppm) 3,05-3,45 (2H, m, CH₂N), 4,05 (IH, d-d, -0-CH-CO-), 5,03 (2H, s, CH₂Ar) 7,18 (IH, breit, NH), 7,36 (5H, s, Ring H).

Analyse für

! C H₁N,

! berechnet: 55,23 5,48 5,86

gefunden : 55,34 5,49 5,87 %. ; *K. Freudenberg, Ber.,.47, 2027 (1914).

t ,

! Beispiel 12

I N-Hydroxysuccinimidester von L-ß-Benzyloxycarbonyl- ; amino-a-hydroxypropionsäure (VIIb)

j Einer gekühlten und gerührten Lösung von 478 mg (2 mMol) [ der Verbindung VIb und 230 mg (2 mMol) N-Hydroxysuccinimid = in 10 ml Tetrahydrofuran werden 412 mg (2 mMol) Dicyclo-I hexylcarbodiimid zugesetzt. Das Gemisch wird eine Stunde j lang bei 0-5⁰C und dann zwei Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und anschließend filtriert, um den N,N¹-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das die Verbindung VIIb

j - 27 -

L -3-2-5-3 ■

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441 $&

enthaltende Filtrat wird ohne Isolierung für die nächste Reaktion verwendet.

Beispiel 13 ' '

Herstellung von l-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyll·- tobramycin (IVb) . "

A. Man ersetzt im Verfahren des Beispiels 4 den N-Hydroxysuccinimidester von L- (-)-γ-BenzylOxycarbonylamino-ahydroxybuttersäure VIIa durch eine äquimolare Menge N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure VIIb und erhält l-[L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionyl]-6' -carbobenzoxytobramycin (IHb).

B. Man ersetzt im Verfahren des Beispiels 5 das darin verwendete rohe Produkt IHa durch eine äquimolare Menge der Verbindung IHb und erhält 1-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl] -tobramycin (IVb).

Beispiel 14

Herstellung von L-if-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleriansäure (VIc) ; ; -

Einer gerührten Lösung von 400 mg (3,0 mMol) L-J-Amino-ochydroxyvaleriansäure und 250 mg (6,5 mMol) Natriumhydroxyd in 25 ml Wasser werden tropfenweise 580 mg (3,3 mMol) Carbobenzoxychlorid während einer Zeitspanne von 30 Minuten bei 0-5⁰C zugesetzt. Das Gemisch wird eine Stunde lang bei 5-15°C gerührt,, mit 25 ml Äther gewaschen, mit Chlorwasserstoffsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und mit drei 30 ml-Teilen Äther extrahiert. Die kombinierte ätherische

309838/1251

, . ORIGiMALiNSPEGTED

Μ/12 441 3ϋ

Lösung wird mit 10 ml einer gesättigten Natriumchloridlösung geschüttelt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum verdampft und ergibt Kristalle, die aus Benzol umkristallisiert eine Ausbeute von 631 mg (78 %) der Verbindung VIc ergeben, Schmelzpunkt 110-111⁰C, infrärotspektrum [IR (KBr)]: 3460, 3350, 1725, 1685, 1535, 1280, 730, 690 cm"¹ J, Nuklearmagnetisches Resonanzspektrum [NMR' (Aceton-dg)] /(in ppm) l,70(4H, m) 4,14(2H, q, J=4,5Hz), 4,19(1H, m), 4,82(2H, s), 6,2(3H, breit), 7,25(5H, s). [ct]|⁵+ 1,6 (c 10, Methanol).

Analyse für' ^13%7^ΝΟ5 ·

C H N berechnet: 58,42 6,41- · 5,24 *

gefunden : 58,36 6,50 5,27 %.

S. Ohshiro et al., Yakugaku Zasshi, 87, 1184 (1967).

B e i s ρ i e 1 15

ί f '

N-Hydroxysuccinimidester von L-e-Benzyloxycarbonylamino-a-

hydroxyvaleriansäure (VIIc) *"

! Einer gerührten und gekühlten Lösung von 535 mg (2,0 mMol) ! der Verbindung VIc und 230 mg (2,0 mMol) N-Hydroxysuecinimid in 55 ml Äthylacetat werden 412 mg (2,0 mMol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugesetzt. Das Gemisch wird drei Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den ausgefällten Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das Piltrat wird im Vakuum verdampft und ergibt 780 mg (100 % eines viskosen Sirups (Verbindung VIIc). IR (klar) : Y_C=O 1810, 1785, 1725 cm"¹.

.

j - 29 -

309B2S/1251

ORIGINAL INSPECTED

M/12 441 -30

Beispiel 16

Herstellung von l-[L-(-)-ti--Amino-a-hydroxyvaleryl]-tobramycin (IVc)

A. Man ersetzt im Verfahren des Beispiels 4 den darin verwendeten N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-oc-hydroxybuttersäure VIIa durch eine äquimolare Menge N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-J-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleriansäure VIIc und erhält 1-[L-(-J-if-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvalerylj-ö'-carbobenzoxytobramycin (IIIc).

B. Man ersetzt im Verfahren des Beispiels 5 das darin verwendete rohe Produkt IHa durch eine äquimolare Menge der I Verbindung IIIc und erhält l~[L-(-)-<^Amino-oc-hydroxyvaleryl]-j· tobramycin (IVc).

Amberlite CG-50 ist der Handelsname für ein schwach saures kationisches Austauschharz eines Karbonsäure/Polymethacrylsäuretyps zur chromatographischen Verwendung.

Amberlite IR-120 ist der Handelsname für ein hochdichtes kationisches Kernsulfonsäure-Austauschharz, das entweder in Wasserstoff- oder Natriumform als Kügelchen mit 16-50 mesh erhältlich ist.

- 30 -

125 1

ORiGiMAL INSPECTED

Claims (1)

1. Patentansprüche

   1 2

   worin R Wasserstoff oder CgHc-CH₂"°""^c" ¹^ ^R Wasserstoff,
   L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-cc-hydroxypropionyl, L-(-)-if^Amino-a-hydroxyvaleryl, L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino^a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Benzyloxycarbonyl- j

   amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-^-Benzyloxycarbonylamino- |

   1 2. i a-hydroxyvaleryl bedeuten, wobei entweder R oder R eine von i Wasserstof^abweichende Bedeutung haben muß, oder eines
   nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Säureadditions- ; salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man aufeinanderfolgend A. Tobramycin mit einem Acylierungsmittel, ausgewählt unter j den Verbindungen der Formeln j

   Il

   CH₂-O-C-X *

   CH, 0

   ι ³ Il

   CK,-C-O-C-K,

   CH

   - 31 -

   3098 3 1251

   ORiQfNAL INSPECTED

   M/12 441

   CH,

   N-C-O-C-CK

   X-CH₂-C-X,

   It

   X-CH2 -C-OH (oder ein£* Carbodiimidadditionsverbindung davon)

   oder I Il ü „„ .. (oder einer Carbodiimidadditionsverbindung davon)

   worin R und Fr gleich oder verschieden sind und jeweils H, F, Cl, Br, NO₂, OH, Niedrigalkyl oder Niedrigalkoxy bedeuten und X Chlor, Brom oder Jod bedeutet, oder mit seinem funktioneilen Äquivalent als Acylierungsmittel in einem Verhältnis von einem Mol oder weniger Acylierungsmittel pro Mol Tobramycin in einem Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als ungefähr 50⁰C behandelt, um die Verbindung der Formel

   CH OH

   251

   M/12 441

   worin Y ein Rest der Formel

   O
   I

   oder

   ist, worin R- und R^ die oben angegebene Bedeutung haben, herzustellen,

   B. die Verbindung II mit einem Acylierungsmittel der Formel

   GH O W-HH-(CHg)_n-CH-C-M

   VII

   worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 einschließlich ist, V ein Rest bedeutet, ausgewählt unter

   - 33 -

   309838/1251

   ORIGINAL INSPECTS)

   M/12 441

   r5

   CH,

   CH-, O

   P I!

   CH_x-C-O-C-

   ³ ι

   NO,

   II

   X-CH -C 2

   und

   CH₂-

   -CH₂-C-

   worin R und R^ die obige Bedeutung haben, und M ein Rest

   bedeutet, ausgewählt unter

   -0

   NO,

   und

   oder mit seinem funktioneilen Äquivalent als Acylierungs- mittel in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol der Ver bindung VII pro Mol der Verbindung II in einem Lösungsmittel

   - 34 -

   309838/1251

   ?'■':--■ Ί L

   M/12 441

   acyliert, um die Verbindung der Formel

   CH OH

   NH-C=O

   III

   MH-W

   worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist und Y und W die oben angegebene Bedeutung haben, herzustellen und C. die Schutzgruppen ¥ und/oder Y gegebenenfalls aus. der Verbindung III durch allgemein bekannte Verfahren entfernt, um die Verbindung der Formel V herzustellen und gegebenenfalls das Produkt durch per se bekannte Verfahren anschließend in ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Salz umwandelt.

   2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß in Stufe A das Tobramycin mit einem Acylierungsmittel

   der Formel

   CH₂-O-C-O-

   wqrin R und R^ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, in einem Lösungsmittel, ausgewählt unter Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Tetrahydrofuran, Dioxan, 1,2-Dimethoxyäthan, Methanol, Äthanol, Wasser, Aceton, Pyridin, N-Niedrig-

   - 35 -

   TfTW

   25T

   ORIGINAL INSPECTED

   worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 einschließlich ist und R und R-⁵ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, mit der Verbindung II in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 Mol Acylierungsmittel pro Mol der Verbindung II in einem Lösungsmittel, ausgewählt unter einem Gemisch von Wasser und Äthylenglycoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran oder Propylenglycoldimethylather, umgesetzt wird.

   M/12 441 ^

   alkylpiperidin oder Gemischen davon, behandelt wird und in Stufe B ein Acylierungsmittel der Formel

   0 OH 0 JL

   Il L " /

   CH₂-O-C-NH-(CH₂)_nCH-C-O-N

   3· Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Stufe A in Wasser-Tetrahydrofuran 1:1 als Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als 25°C und die . Acylierungsreaktion der Stufe B in Wasser-Tetrahydrofuran 1:1 als Lösungsmittel in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis 1,1 Mol Acylierungsmittel pro Mol der Verbindung II durchgeführt werden.

   4. Verfahren gemäß den Ansprüchen 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Schutzgruppen W und Y in Stufe C entfernt werden, indem die Verbindung III mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators in einem System aus Wasser und wassermischbarem Lösungsmittel hydriert wird.

   - 36 -3 0 9 S 3 9 ! 1 2 5 1

   441 Vl·

   5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Schutzgruppen ¥ und Y durch Hydrieren der Verbindung III mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators, ausgewählt unter Palladium, Platin, Raneynickel, Rhodium,
   Ruthenium oder Nickel, in einem System aus Wasser/wassermischba rem Lösungsmittel, ausgewählt unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglycoldimethyläther oder Propylenglycoldimethyläther, entfernt werden.

   6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Schutzgruppen W und Y durch Hydrieren der Verbindung III mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium auf Aktivkohle
   als Katalysator in 1:1 Wasser-Dioxan als Lösungsmittel entfernt werden.

   7. Verbindung der Formel

   NH-R²

   O T " 2

   worin R^x Wasserstoff oder C^Hc-CH₂-O-C- ^{xmd R} Wasserstoff, L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl, L-(-)-^Amino-a-hydroxyvaleryl, L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybutyryl, L- (- )-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-i^Benzyloxycarbonyl-

   - 37 -

   309838M251

   ORIGINAL INSPECTED

   M/12 441

   1 2 amino-a-hydroxyvaleryl bedeuten, wobei entweder R oder R eine von Wasserstoff abweichende Bedeutung haben muß, oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

   8. Verbindung gemäß Anspruch 7, worin R

   -O-C- und R Wasserstoff bedeuten.

   9· Verbindung gemäß Anspruch 7, worin R

   Il

   CgHr-CHp-O-C- und R L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-ahydroxybutyryl, L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a- hydroxypropionyl oder L-(-)-</^Benzyloxycarbonylaminoa-hydroxyvaleryl bedeuten.

   10. Verbindung gemäß Anspruch 7, worin R Wasserstoff und R L~(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a- hydroxypropionyl oder L-(-)-<pAmino-a-hydroxyvaleryl bedeuten, oder ein nicht-toxisches pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

   11. Verbindung gemäß Anspruch 10, worin R Wasserstoff und R l>(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

   309838/1251

   ORiGiNAL INSPECTED

   Μ/12 441

   12. Verbindung gemäß Anspruch 10, worin R Wasserstoff und R L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

   13. Verbindung gemäß Anspruch 10, worin R Wasserstoff und R L-(-)-</-Amino-a-hydroxyvaleryl bedeuten, oder das Mono- oder Disulfatsalz davon.

   14. Mono- oder Polyhydrate der Verbindungen gemäß den Ansprüchen 10 bis 13-

   th.- - 39 -

   5TTSTTTT1T5T