CH653015A5 - N-(4-(3-aminopropyl)-aminobutyl)-2-(omega-guanidino-fettsaeure-amido)-2-substituierte ethanamide, ihre salze und verfahren zu ihrer herstellung. - Google Patents

N-(4-(3-aminopropyl)-aminobutyl)-2-(omega-guanidino-fettsaeure-amido)-2-substituierte ethanamide, ihre salze und verfahren zu ihrer herstellung. Download PDF

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CH653015A5
CH653015A5 CH5895/82A CH589582A CH653015A5 CH 653015 A5 CH653015 A5 CH 653015A5 CH 5895/82 A CH5895/82 A CH 5895/82A CH 589582 A CH589582 A CH 589582A CH 653015 A5 CH653015 A5 CH 653015A5
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aminopropyl
aminobutyl
guanidino
mmol
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CH5895/82A
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Hamao Umezawa
Tomio Takeuchi
Shinichi Kondo
Hironobu Iinuma
Daishiro Ikeda
Teruya Nakamura
Akio Fujii
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Microbial Chem Res Found
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Description

Die Erfindung betrifft neue N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(co-guanidino-fettsäure-amido)-2-substituierte Ethanamide, die als karzinostatische Mittel nützlich sind und die durch die allgemeine Formel:
H2NCNH (CH2) n-Y-CONHCHCONH (CHj) ^NH (CH2) 3NH2 (I)
NH
OR
worin Y -CH2-CH2-, -CH = CH- oder -CH-CH2- bedeutet,
I
OH
und n eine ganze Zahl von 1 bis 8 bedeutet, dadurch gekennzeichnet, dass man ein oo-Guanidino-fettsäureamid, das durch die allgemeine Formel 60
dargestellt werden, worin Y -CH2CH2-, -CH = CH- oder -CH-CH2- bedeutet, R ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe
I
OH
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und n eine ganze Zahl von 1 bis 8 bedeutet, mit der Massgabe, dass, wenn Y-CH-CH2 und n 4 bedeuten, R eine andere Be-
I
OH
deutung als ein Wasserstoffatom aufweist, ihre Salze und ein Verfahren zu ihrer Herstellung.
Während systematischer Untersuchungen von karzinostati-schen Mitteln hat die Anmelderin ein neues karzinostatisches Antibiotikum BMG162-aF2 gefunden, welches als Spergualin bezeichnet wurde und welches ein Kulturfiitrat eines Stammes BMG162-aF2 (FERM P-5230 ATCC 31932) von Bacillus latero-sporus, der zu dem Genus Bacillus gehört, [Journal of Antibio-tics, Band 34, Seite 1619 und Seite 1622 (1981)] ist. Die chemische Struktur von Spergualin wird durch die Formel:
3
653 015
ls atom, vor, d.h. in Form des linksdrehenden Epimeren [welches h ncnhch ch ch ch chch conhchconhch ch^ch ch nhch ch ch nh *m folgenden als ( ) bezeichnet wird] und in Form des rechts-2 | | 2 j 2222 drehenden Epimeren [welches im folgenden als ( + ) bezeichnet uh oh oh wird]. Sofern nichts anderes angegeben, liegt die erfindungsge-
5 mässe Verbindung als Gemisch (ungefähr 1 : 1) eines Paares der dargestellt. Die Konfiguration an der 15-Stellung ist S, während Epimeren vor [gegebenenfalls als (±) bezeichnet].
sie an der 11-Stellung noch nicht bestimmt wurde [Journal of 15 u
Antibiotics, Band 34, Seite 1622 (1981)]. Die Verbindung dieser Wenn Y -CH-CH2 bedeutet, besitzt die Verbindung eben-Formel wird durch Kondensation eines Säureamids und Gly- |
oxylylspermidin synthetisiert. Die entstehende epimere Verbin- 10 OH
dung wird in natürliches (—)-Spergualin und nicht-natürliches falls an der 15-Stellung ein asymmetrisches Kohlenstoffatom (+)-Spergualin gespalten [Journal of Antibiotics, Band 34, Sei- und es gibt somit ein Epimeres mit S-Konfiguration an der te 1625 (1981)]. 15-Stellung und ein anderes Epimeres mit R-Konfiguration an
Die Anmelderin hat weitere Verbindungen, die dem Sper- der 15-Stellung. Sofern nicht spezifisch angegeben, ist die erfin-gualin verwandt sind, untersucht. Es wurde jedoch gefunden, 15 dungsgemässe Verbindung ein Gemisch (ungefähr 1 : 1) des (S)-dass die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel (I) dar- Epimeren und (R)-Epimeren.
gestellt werden, eine überraschende karzinostatische Aktivität Die physikalisch-chemischen und biologischen Eigenschaf aufweisen und insbesondere, wenn R eine andere Gruppe als ten von typischen Beispielen von erfindungsgemässen Verbin-ein Wassersioffatom bedeutet, sind die Verbindungen sehr düngen werden im folgenden aufgeführt.
stabil. 20
Die erfindungsgemässen Verbindungen werden wie folgt (1) Physikalisch-chemische Eigenschaften:
hergestellt.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R ein Die Namen von typischen erfindungsgemässen Verbindun-
Wasserstoffatom bedeutet, werden durch Kondensation eines gen sind in Tabelle I angegeben. Die Molekularformeln und co-Guanidino-fettsäureamids der allgemeinen Formel: 25 Elementaranalysen der Hydrochloride dieser Verbindungen sind in der folgenden Tabelle II zusammengestellt und die Infrarot-I^NCNH (CH2 ) n~Y—CONH2 (II) spektren (KBr-Tablette) und die Proton-NMR-Spektren (in
II Deutero-Methanol, Tetramethylsilan = TMS als innerer Stan-
dard) sind in Tabelle III angegeben. Die spezifischen Rotatio-30 nen von den optischen Isomeren von verschiedenen erfindungs^ worin Y und n die oben gegebenen Definitionen besitzen, und gemässen Verbindungen sind in Tabelle IV aufgeführt. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid Die chemische Stabilität der erfindungsgemässen Verbindun-
der allgemeinen Formel: gen wird festgestellt, indem man die Retention (%) nach dem
Erhitzen bei 60°C während 4 h bestimmt. In der Tabelle V sind HO\ 35 die Versuchsergebnisse zusammen mit denen für Spergualin als
> CHCONH (CH- ) 4NH (CH2 ) NH2 (III) Vergleich aufgeführt. Die Retention wird mittels der Hoch-HO leistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) bestimmt. Die
Säule ist mit Nucleosil® 5C18 bepackt. Das für Spergualin verhergestellt. Wenn R in der allgemeinen Formel (I) eine andere wendete Lösungsmittel ist ein Gemisch (6 : 94) aus Acetonitril Gruppe als ein Wasserstoffatom bedeutet, werden die erfin- 40 und 0,01M Natriumpentansulfonat +0,01M Na2HPÜ4 (pH 3), dungsgemässen Verbindungen synthetisiert, indem man die Ver- während für die erfindungsgemässen Verbindungen ein Ge-bindung, die man bei der obigen Kondensation erhält, oder misch aus Acetonitril und —0,005M Natriumpentansulfonat
Spergualin, welches man aus dem Mikrobenkulturfiltrat erhält, + 0,01M Na2HPÛ4 (pH 3) verwendet wird. Das Mischungsver-wobei in den Verbindungen oder in Spergualin gegebenenfalls hältnis im letzteren Fall wird für jede besondere Verbindung die Amino- und Iminogruppen geschützt wurden, mit einem ali- 45 variiert. Beispielsweise wird ein Mischverhältnis von 10 : 90 für phatischen Mono- oder Dialkohol mit 1 bis 4 Kohlenstoffato- die Verbindung Nr. 9 verwendet, während eines von 7 : 93 für men, einem Diazoparaffin mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder die Verbindung Nr. 22 verwendet wird.
Benzylalkohol umsetzt und gegebenenfalls die Schutzgruppen der Amino- und Iminogruppen, sofern diese vorhanden sind,
entfernt. 50
Die erfindungsgemässen Verbindungen werden im allgemeinen in Form ihrer pharmakologisch annehmbaren Säureadditionssalze verwendet. Als Beispiele für die Säureadditionssalze können die Salze mit anorganischen Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Borsäure, und 55 die Salze mit organischen Säuren, wie Essigsäure, Zitronensäure, Weinsäure und Glutarsäure, erwähnt werden.
Die erfindungsgemässen Verbindungen werden durch die allgemeinen Formel:
is-» 13 12 11 10 9 e-s * j-i 60
HjNCNH ( CH2 ) n-Y—CONHÇHCONH (.CI^ ) ^NH (CI^ ) 3NH2 (i)
IH OR
dargestellt, worin Y, R und n die oben gegebenen Bedeutungen 65 besitzen. Jede der erfindungsgemässen Verbindungen besitzt ein asymmetrisches Kohlenstoffatom an der 11-Stellung und liegt somit in Form der Epimeren, bezogen auf das 11-Kohlenstoff-
n
1
2
3
4
5
6
1
3
4
5
6
4
4
4
4
4
5
6
4
5
6
4
4
Tabelle I
H 0NCNH(CH 0) -Y-CONHCHCONH(CH„) .NH(CH 0)-NH-z n | z j ^
NH OR
R
Name der Verbindung
CH2CH2
H
CH
= CH
CHCH2
I
OH
CHCHz
I
OH (s)
CHCH2
I
OH
CH3
CH2CH2
CH2CH2CH2CH3
CH2CH2OH
CH2-C6H5
H
ch3
H
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanmid
N- [4-(3 -Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyI]-2--ethoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--butoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--(2-hydroxy)-ethoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--benzyloxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-amido)-2-hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--2-hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--2-hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--2-methoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-octanamido)-2-hydroxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-nonanamido)-2-hydroxyethanamid
4-guanidinobutanamido)-2-
5-guanidinopentanamido)-2-
6-guanidinohexanamido)-2-
7-guanidinoheptanamido)-2-
8-guanidinooctanamido)-2-
9-guanidinononanamido)-2-4-guanidinobutanamido)-2-
guanidinohexanamido)-2-
7-guanidinoheptanamido)-2-
8-guanidinooctanamido)-2-
9-guanidinononanamido)-2-7-guanidinoheptanamido)-2-7-guanidinoheptanamido)-2-7-guanidinoheptanamido)-2-7-guanidinoheptanamido)-2-
7-guanidino-2-hepten-
8-guanidino-2-octenamido)-
9-guanidino-2-nonenamido)-
7-guanidino-2-heptenamido)-
8-guanidino-3-hydroxy-
9-guanidino-3-hydroxy-
CH3
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-3-hydroxy-heptanamido)-2-methoxyethanamid
5
653 015
Tabelle I (Fortsetzung)
Verbindung Nr. n r
Name der Verbindung
23*
24* 25* 26*
4 4
(s)
chch2
I
oh
»
ch2ch3
CH2CH2CH2CH3 CH2CH2OH
ch2c6h5
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-3-hydroxy-heptanamido)-2-ethoxyethanamid
N- [4-(3 - Aminopropyl)-aminobutyl] -2-(7 -guanidino-3 -hydroxy-heptanamido)-2-butoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-3-hydroxy-heptanamido)-2-(2-hydroxy)-ethoxyethanamid
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-3-hydropxy-heptanamido)-2-benzyloxyethanamid
Bemerkung: (S)
* Die Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin Y -CHCH2 bedeutet, n 4 und R eine andere Gruppe als Wasserstoffatom
I
oh bedeuten, werden im folgenden kurz als "ll-0-(Name des R)-Spergualin bezeichnet.
Tabelle II
Verbindung Nr.
Molekularformel
Elementaranalyse (%) C H N
Cl
1
C14H31N7O3
. 3HC1
. 3/2 H20
berechnet gefunden
34,90 34,92
7,74 7,87
20,35 20,21
22.07 21,96
2
C15H33N7O3
. 3HC1 ■
. 3/2 H20
berechnet gefunden
36,33 36,27
7,93 8,05
19,77 19,68
21,45 21,30
3
Cl6H35N703
• 3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
37,69 37,83
8,10 8,38
19,23 19,18
20,86 20,67
4
C17H37N7O3 .
• 3HC1 •
. 3/2 H20
berechnet gefunden
38,97 39,10
8,27 8,42
18,71 18,57
20,30 20,18
5
Cl8H39N703 •
• 3HC1 ■
■ 3/2 H20
berechnet gefunden
40,19 40,31
8,43 8,74
18,23 17,96
19,77 19,51
6
Cl9H4iN703 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
41,34 41,32
8,58 8,79
17,76 17,65
19,27 19,13
7
C15H33N7O3 •
■ 3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
36,33 36,41
7,93 8,10
19,77 19,46
21,45 21,32
8
Q7H37N7O3 ■
3HC1 ■
3/2 H20
berechnet gefunden
38,97 39,20
8,27 8,31
18,71 18,48
20,30 20,11
9
C18H39N7O3 ■
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
40,19 40,43
8,43 8,51
18,23 18,08
19,77 20,11
10
C19H41N7O3 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
41,34 41,39
8,58 8,82
17,76 17,62
19,27 19,15
11
C2oH43N703 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
42,44 42,51
8,73 8,92
17.32
17.33
18,79 18,50
12
C19H41N7O3 •
3 HCl ■
3/2 H20
berechnet gefunden
41,34 41,44
8,58 8,75
17,76 17,59
19,27 19,11
13
C2iH4sN703 ■
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
43,48 43,61
8,86 9,04
16,90 16,78
18,34 18,43
14
C19H41N704 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
40,18 40,07
8,34 8,39
17,26 17,31
18,73 18,58
653 015
6
Tabelle II (Fortsetzung)
Verbindung Nr.
Molekularförmel
Elementaranalyse (%) C H N
Cl
15
C21H43N7O3 •
■ 3HC1 ■
3/2 H20
berechnet gefunden
46,94 47,03
8,04 8,20
15,97 15,76
17,32 17,12
16
C17H35N7O3 ■
■ 3HC1 ■
. 3/2 H20
berechnet gefunden
39,12 39,10
7,92 8,02
18,79 19,05
20,38 20,07
17
C18H37N7O3
■ 3HC1 •
• 3/2 H20
berechnet gefunden
40,34 40,53
8,09 8,22
18,29 18,26
19,85 19,69
18
C19H39N7O3 ■
■ 3HC1 ■
• 3/2 H20
berechnet gefunden
41,49 41,46
8,25 8,07
17,83 17,93
19,34 19,20
19
C18H37N7O3 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
40,34 40,09
8,09 7,86
18,29 18,11
19,85 19,71
20
C18H39N7O4 ■
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
39,03 38,77
8,19 8,05
17,70 17,64
19,20 20,41
21
C19H41N7O4 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
40,18 40,41
8,34 8,60
17,26 17,35
18,73 18,58
22
Cl8H39N704 •
3 HCl ■
3/2 H20
berechnet gefunden
39,03 39,03
8,19 8,50
17,70 17,49
19,20 19,15
23
C19H41N7O4 ■
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
40,18 40,23
8,34 8,75
17,26 17,17
18,73 18,35
24
C21H45N7O4 •
3 HCl ■
3/2 H20
berechnet gefunden
42,32 42,37
8,62 8,90
16,45 16,31
17,84 17,74
25
Cl9H4lN705 •
3HC1 •
3/2 H2O
berechnet gefunden
39,08 39,15
8,11 8,26
16,79 " 16,42
18,21 18,10
26
C24H43N704 •
3HC1 •
3/2 H20
berechnet gefunden
45,75 45,77
7,84 7,93
15,56 15,39
16,88 16,64
Tabelle III
Verbindung Nr.
IR-Absorptionsspektrum (cm-1)
Proton-NMR-Spektrum (S-Wert)
1
3320, 2950, 1655, 1525, 1460, 1365, 1260, 1160, 1115, 1070
1,4-2,4 (CH2X4), 2,40 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,55 (CH)
2
3400, 2950, 1660, 1530, 1465, 1170, 1120, 1080, 1020
1,9-2,0 (CH2X4), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,53 (CH)
3
3270, 2950, 1560, 1530, 1460, 1370, 1240, 1165, 1120, 1080
1,4-2,0 (CH2 x 5), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x 5), 5,52 (CH)
4
3400, 2950, 1653, 1525, 1460, 1360, 1160, 1120, 1030
1,2-2,0 (CH2x6), 2,24 (CH2), 2,30 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2X 5), 5,56 (CH)
5
3330, 2925, 1655, 1520, 1460, 1360, 1160, 1120, 1080
1,20-2,0 (CH2x7), 2,0-2,4 (CH2X2), 2,9-3,4 (NCH2X5), 5,52 (CH)
6
3370, 2925, 1655, 1520, 1460, 1155, 1115, 1080
1,2-2,0 (CH2x8), 2,0-2,4 (CH2 X 2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,50 (CH)
7
3400, 2930, 1650, 1520, 1460, 1360, 1190, 1160, 1090
1,4-2,4 (CH2 X 4), 2,40 (CH2),
2,8-3,4 (NCH2x5), 3,38 (OCH3), 5,30 (CH)
8
3420, 2940, 1650, 1520, 1460, 1355, 1190, 1160, 1090
1,4-2,0 (CH2 X 5), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2 x 5), 3,38 (OCH3), 5,29 (CH)
9
3420, 2950, 1650, 1520, 1460, 1360, 1190, 1160, 1090
1,2-2,0 (CH2x6), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x 5), 3,37 (OCH3), 5,26 (CH)
10
3400, 2925, 1650, 1520, 1455, 1355, 1250, 1190, 1160, 1090
1,2-2,0 (CH2X7), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2X5), 3,37 (OCH3), 5,28 (CH)
7
653 015
Tabelle III (Fortsetzung)
Verbindung Nr.
IR-Absorptionsspektrum (cm-1)
Proton-NMR-Spektrum (8-Wert)
11
3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 1360, 1190, 1160, 1090
1,2-2,0 (CH2X8), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2X5), 3,37 (OCH3), 5,29 (CH)
12
3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 1360, 1160, 1085
1,23 (CH3), 1,3-2,0 (CH2 x 6), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x 5), 3,64 (CH2), 5,42 (CH)
13
3380, 2925, 1655, 1520, 1455, 1360, 1155, 1080
0,92 (CH3), 1,2-2,0 (CH2x8), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,61 (CH2), 5,41 (CH)
14
3370, 2930, 1655, 1520, 1455, 1355, 1165, 1110, 1060
1,2-2,0 (CH2 x 6), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2 X 5), 3,70 (CH2X2), 5,45 (CH)
15
3340, 2930, 1655, 1520, 1450, 1160, 1065, 1020, 740, 695
1,2-2,0 (CH2x 6), 2,0-2,5 (CH2x 2),
2,9-3,4 (NCH2 x 5), 4,64 (CH2), 5,51 (CH), 7,32 (C6H5)
16
3350, 2930, 1660, 1520, 1460, 1355
1,4-2,5 (CH2x6), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,56 (CH), 6,01 (CH), 6,81 (CH)
17
3400, 2925, 1660, 1530, 1460, 1360, 1165, 1115, 1080
1,4-2,5 (CH2 x 7), 2,9-3,4 (NCH2x 5), 5,60 (CH), 6,02 (CH), 6,85 (CH)
18
3400, 2940, 2850, 1660, 1530, 1460, 1360, 1225, 1115, 1080
1,2-2,5 (CH2 X 8), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,65 (CH), 6,04 (CH), 6,88 (CH)
19
3400, 2930, 1665, 1520, 1455, 1350, 1195, 1095, 985
1,4-2,5 (CH2x6), 2,9-3,4 (NCH2x5),
3,4 (OCH3), 5,39 (CH), 6,09 (CH), 6,90 (CH)
20
3450, 2925, 1650, 1525, 1460, 1160, 1110, 1075
1,4-2,3 (Ch2 x 7), 2,38 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2 X 5), 4,0 (CH), 5,52 (CH)
21
3400, 2950, 1655, 1520, 1460, 1165, 1110, 1075
1,2-2,4 (CH2 X 8), 2,41 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x 5), 4,0 (CH), 5,58 (CH)
22
3330, 2930, 1655, 1520, 1460, 1360, 1190, 1160, 1090, 1020
1,4-1,9 (CH2x5), 2,19 (CH2), 2,49 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,41 (CH3), 4,04 (CH), 5,35 (CH)
23
3350, 2925, 1655, 1520, 1460, 1360, 1160, 1085, 1020
1,23 (CH3), 1,4-1,9 (CH2 X 5), 2,16 CH2), 2,46 (CH3), 2,9-3,4 (NCH2X 5), 3,64 (CH2), 4,02 (CH2), 5,43 (CH)
24
3380, 2925, 1655, 1520, 1455, 1370, 1155, 1080, 1020
0,92 (CH3), 1,2-1,9 (CH2x7), 2,09 (CH2), 2,43 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2X 5), 3,61 (CH2), 4,01 (CH), 5,41 (CH)
25
3375, 2930, 1655, 1520, 1450, 1165, 1115, 1060
1,4-1,9 (CH2 X 5), 2,13 (CH2), 2,45 (CH2),
2,9-3,4 (NCH2x5), 3,70 (CH2x2), 4,02 (CH), 5,44 (CH)
26
3330, 2930, 1655, 1520, 1445, 1360, 1160, 1065, 1020, 740, 695
1,4-1,9 (CH2 x 5), 2,12 (CH3), 2,46 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 4,00 (CH), 4,64 (CH2), 5,50 (CH), 7,32 (C6H5)
Tabelle IV
Verbindung Nr.
15-Stellung
11-Stellung spezifische Drehung [a]o
(±)
0,0°
(Cl, H20)
9
(-)
—30,4°
(Cl, H20)
( + )
+ 29,5°
(Cl, H20)
(±)
—1,0°
(Cl, H20)
22
(S)
(-)
—27,3°
(Cl, H20)
( + )
+ 25,5°
(Cl, H20)
(±)
—0,2°
(Cl, H20)
23
(S)
(-)
—25,0°
(Cl, H2o)
( + )
+ 24,2°
(Cl, H2o)
(±)
+ 0,5°
(Cl, H2o)
24
(S)
(-)
—22,9°
(Cl, H20)
( + )
+ 23,5°
(Cl, H2o)
(±)
—2,1°
(Cl, H2o)
25
(S)
(-)
—18,7°
(Cl, H2o)
('+)
+ 15,8°
(Cl, H20)
(±)
—3,1°
(C1,H20)
26
(S)
(-)
—24,3°
(Cl, H20)
( + )
+ 21,0°
(Cl, H2o)
653 015
8
Tabelle V Retention (%)
pH
Verbin^^ 23456789 10
düng Nr.
9
69,3
89,3
100
100
100
100
100
97,5
97,9
13
72,4
90,1
100
—
100
—
100
98,0
96,0
14
71,8
90,6
100
—
100
—
100
97,5
97,3
15
76,5
91,4
100
100
100
99,0
96,2
22 ^ ^ (+)
79,7 79,7
—
100 100
100
100
100 100
100
100
100 100
97,6 100
95,7 95,6
24
76,3
—
100
100
100
100
100
97,1
94,8
25
68,9
—
100
100
100
100
100
97,7
95,5
26
77,2
100
100
100
100
100
95,9
94,5
;—)-Spergualin
88,1
88,0
87,8
82,5
46,5
12,6
6,1
0
—
(2) Biologische Eigenschaften:
Alle erfindungsgemässen Verbindungen besitzen eine ausgeprägte carzinostatische Aktivität und zeigen bei Krebszellen in vitro eine starke Wachstumshemmwirkung und eine lebensverlängernde Wirkung bei Mäusen, die implantierte Krebszellen tragen.
I. Wachstumshemmaktivität gegenüber Krebszellen in vitro:
DBA/2-Mäuse werden mit je 105 Mäuse Leukämia-L-1210-Zellen inplantiert. Die Asziten werden aseptisch aus den Mäusen 4 Tage nach dem Füttern gesammelt, dreimal mit physiologischer Salzlösung gewaschen, wobei man L-1210-Zellen erhält, die in einem RPMI-1640-Kulturmedium [G.E. Moore, Journal of the American Medicai Association, Band 199, Seite 519 (1967); H.J. Morton, In Vitro, Band 6, Seite 89 (1970)] suspen-
25 diert werden. Dazu gibt man 10% fetales Kalbserum und 5 jxM 2-Mercaptoethanol und dann wird die entsprechende Suspension auf 5 x 104 L-1210-Zellen pro 0,9 ml verdünnt. Eine Mikroplatte, die 0,9 ml der Zellsuspension und 0,1 ml Kulturmedium, welches die zu prüfende Probe enthält, trägt, wird in 30 einem Kohlendioxidinkubator bei 37°C aufbewahrt. Nach 48 h Züchtung wird die Zahl der Zellen mittels eines Coulter Coun-ters (Coulter Electronics, Inc., USA) gezählt, wobei man die Wachstumshemmung (%) = (1-T/C) X 100 = [1- (Zahl der gewachsenen Zellen im Medium, das die Probe enthält)/(Zahl 35 der Zellen, die im Kontrollmedium wachsen)] X 100 erhält. Die 50%ige Wachstumshemmkonzentration wird aus den Werten der Wachstumshemmung bei verschiedenen Probenkonzentrationen berechnet. Die Versuchsergebnisse von typischen erfindungsgemässen Verbindungen für die Wachstumshemmung der 40 L-1210-Zellen sind in Tabelle VI aufgeführt.
Tabelle VI
Verbindung Nr.
1,25
2,5
Wachstumshemmung (%), (1-T/C) x 100 Konzentration der Testverbindung, mcg/ml 5 10 20 40
80
160
50%ige Hemmkonzentration (mcg/ml)
1
—
52,2
89,3
101
100
—
—
—
2,4
2
9,6
30,5
46,9
69,5
77,6
79,6
79,6
—
5,0
3
20,6
36,7
64,2
81,6
86,7
—
—
—
3,7
4
20,0
27,5
29,9
58,4
75,5
78,7
—
—
8,1
5
—
24,9
29,1
40,0
54,2
66,0
88,5
96,8
18
6
38,0
40,3
45,5
50,3
57,5
—
—
—
8,0
7
38,7
80,7
98,5
99,8
99,9
99,3
—
—
1,5
8
—
—
33,2
38,1
46,8
53,5
66,3
88,2
28
9
—
—
35,5
45,9
62,3
78,1
90,9
96,0
12
10
—
—
19,9
28,5
36,5
52,4
62,4
79,5
39
11
—
—
35,0
52,2
59,4
71,8
77,9
—
10
12
—
21,5
31,1
38,4
47,3
58,6
73,5
—
21
9
653 015
Tabelle VI (Fortsetzung)
Verbindung Nr.
1,25
2,5
Wachstumshemmung (%), (1-T/C) X 100 Konzentration der Testverbindung, mcg/ml 5 10 20 40
80
160
50%ige Hemmkonzentration (mcg/ml)
13
17,0
21,3
24,0
33,2
65,7
72,5
—
—
14
14
—
—
22,3
24,6
29,9
42,7
58,6
—
52
15
27,1
39,0
71,0
94,5
97,7
100
—
—
3,1
16
—
22,6
31,1
32,5
56,3
—
—
—
17
17
2,1
4,5
13,3
16,5
33,7
52,53
—
—
70
18
—
—
15,7
20,9
29,5
32,3
47,8
—
90
19
29,9
32,2
46,4
56,4
75,6
85,4
93,1
—
6,3
20
17,2
20,1
28,9
30,7
45,7
—
—
—
27
21
14,6
21,5
29,7
37,5
51,6
84,0
94,5
—
18
22
—
60,8
82.6
94,5
96,9
98,3
—
—
1,8
23
—
58,5
85,5
93,0
96,1
96,4
—
—-
2,2
24
—
47,3
75,6
89,5
95,0
97,2
—
—
2,6
25
—
9,0
20,0
42,0
63,5
74,7
—
—
7,2
26
—
54,2
79,0
90,2
96,6
97,3
—
—
2,2
II. Therapeutische Wirkung auf implantierten Krebs bei Mäusen:
Männliche Mäuse des BDFi-Stammes (5 Wochen alt) werden je intraperitoneal mit 105 Mäuse Leukämia L-2I0-Zellen inokuliert und intraperitoneal wird ihnen einmal am Tag die Testverbindung, gelöst in einer physiologischen Salzlösung, während 6 aufeinanderfolgenden Tagen, beginnend vom Tag der Inokulation, verabreicht. Die Mäuse werden dann weitergezüchtet und 30 Tage lang beobachtet, um die Verlängerung der Überlebenszeit = 100 X T/C = 100 x (durchschnittliche Überlebenstage pro behandelter Gruppe/durchschnittliche Überlebenstage pro Kontrollgruppe) zu bestimmen. Die therapeutische Wirkung von typischen erfindungsgemässen Verbindungen bei Mäusen Leukämia L-1210 sind in Tabelle VII angegeben.
Tabelle VII
Tabelle VII (Fortsetzung)
Ver- Dosis bindung (mg/kg/Tag) Nr.
Ver
Dosis
Verlängerung
Zahl der Mäuse bindung
(mg/kg/Tag)
der Überlebens die während 30
Nr.
zeit (%),
Tagen überlebten
T/C x 100
50
0
0/4
25
336
0/4
12,5
>357
2/4
6,25
>369
1/4
4
3,13
>364
2/4
1,56
>429
4/4
0,78
>429
4/4
0,39
>390
3/4
0,20
197
0/4
50
0
0/4
25
306
0/4
5
12,5
181
0/4
6,25
125
0/4
3,13
118
0/4
1,56
104
0/4
Verlängerung der Überlebenszeit (%), T/C x 100
Zahl der Mäuse die während 30 Tagen überlebten
50
0
0/4
25
0
0/4
12,5
>429
4/4
6,25
>429
4/4
6
3,13
>386
2/4
1,56
>393
3/4
0,78
>429
4/4
0,39
>383
2/4
0,20
>354
2/4
50
0
0/4
25
0
0/4
12,5
>429
4/4
6,25
>429
4/4
9
3,13
>429
4/4
(±)
1,56
>411
1/4
0,78
>300
2/4
0,39
171
0/4
0,20
114
0/4
25
0
0/4
12,5
>390
2/4
6,25
>336
1/4
9
3,13
>411
3/4
(-)
1,56
>356
2/4
0,78
>370
2/4
-
0,39
>342
2/4
0,20
127
0/4
0,10
110
0/4
50
0
0/4
10
25
0
0/4
12,5
129
0/4
653 015
10
Tabelle VII (Fortsetzung)
Ver
Dosis
Verlängerung
Zahl der Mäuse bindung
(mg/kg/Tag)
der Überlebens die während 30
Nr.
zeit (%),
Tagen überlebten
T/C X 100
6,25
107
0/4
10
3,13
100 '
0/4
1,56
100
0/4
50
0
0/4
25
0
0/4
12,5
>357
2/4
6,25
>393
3/4
11
3,13
>357
2/4
1,56
200
0/4
0,78
200
0/4
0,39
143
0/4
0,20
107
0/4
50
0
0/4
25
236
0/4
12,5
>354
2/4
16
6,25
>350
2/4
3,13
>343
2/4
1,56
233
0/4
0,78
129
0/4
12,5
0
0/4
6,25
>350
2/4
3,13
>429
4/4
18
1,56
>429
3/4
0,78
200
0/4
0,39
157
0/4
0,20
136
0/4
0,10
129
0/4
25
0
0/4
12,5
>364
2/4
6,25
>429
3/4
3,13
>321
2/4
19
1,56
>350
2/4
0,78
164
0/4
0,39
107
0/4
0,20
100
0/4
50
0
0/4
25
229
0/4
12,5
200
0/4
6,25
164
0/4
21
3,13
129
0/4
1,56
114
0/4
0,78
100
0/4
0,39
100
0/4
0,20
100
0/4
50
7
0/8
22
25
>414
6/8
(s)
12,5
>380
5/8
(±>
6,25
>332
4/8
3,13
163
0/8
1.56
117
0/8
25
>423
5/5
22
12,5
>408
4/5
(s)
6,25
>400
4/5
(-)
3,13
>290
1/5
1,56
177
0/5
25
200
0/4
23
12,5
129
0/4
Tabelle VII (Fortsetzung)
Ver
Dosis
Verlängerung
Zahl der Mäuse bindung
(mg/kg/Tag)
der Überlebens die während 30
Nr.
zeit (%),
Tagen überlebten
T/C x 100
23
6,25
119
0/4
3,13
104
0/4
50
>429
4/4
25
229
0/4
25
12,5
193
0/4
6,25
107
0/4
III. Toxizität:
Alle erfindungsgemässen Verbindungen zeigen eine relativ niedrige Toxizität und eine niedrige Kumulation der Toxizität bei fortgesetzter Verabreichung. In Tabelle VIII sind die mittleren letalen Dosen (LD50) der typischen erfindungsgemässen Verbindungen bei Mäusen bei einer einfachen intraperitonealen Verabreichung angeführt. Es sind weiterhin die maximal tolerierbaren Dosen, ausgedrückt als Gesamtdosis, aufgeführt, wenn eine bestimmte Menge pro Einheitskörpergewicht intraperitoneal der Maus einmal am Tag während 6 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht wird.
Tabelle VIII
Verbindung LD50* maximal tolerierbare
Nr. (mg/kg) Dosis** (mg/kg)
1 50< 300<
2 50< 300<
3 50 < 300 <
4 25 -50 150<
5 25-50 150<
6 12,5 -25 75 <
8 25-50 150 <
9 12,5-25 75 <
10 12,5 - 25 -75 <
11 12,5 -25 75 <
12 12,5-25 75 <
14 25 - 50 150 <
15 12,5 -25 75 <
16 25-50 150 <
17 12,5 -25 75 <
18 6,25- 12,5 37,5 <
19 12,5 -25 75 <
20 50 < 300 <
21 25 - 50 150<
22 25 -50 150 <
23 25 < 150 <
24 50 < 300 <
25 50 < 300 <
26 12,5-25 75 <
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
11
653 015
Bemerkung:
* Mittlere letale Dosis bei einfacher Verabreichung ** Maximale Werte der Gesamtdosis, die keinen Tod verursacht, wenn eine bestimmte Menge pro Einheitskörpergewicht den Mäusen einmal am Tag während 6 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht wird.
Wie aus der obigen Beschreibung folgt, sind die erfindungsgemässen Verbindungen, die durch die Formel I dargestellt werden, nützliche karzinostatische Mittel. Alle der individuellen, zuvor angegebenen Verbindungen zeigen eine ausgezeichnete Wachstumshemmaktivität gegenüber Mäuse Leukämia-L-1210-Zellen. Bei diesen Verbindungen weisen insbesondere die Verbindungen eine sehr hohe Aktivität auf, worin R ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppë mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die als Substituenten eine Hydroxylgruppe aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe und n eine ganze Zahl von 1 bis 6 bedeuten, mit der Massgabe, dass, wenn Y -CH-CH2- bedeutet, R die
I
OH
Gruppen ausgenommen dem Wasserstoffatom bedeutet. Weiterhin zeigen bei Mäusen, die implantierten Krebs tragen, solche Verbindungen eine ausgezeichnete therapeutische Wirkung, worin R ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 2, bevorzugt 1, Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei die Alkylgruppe eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann, und n 4 oder 6 bedeutet. Von diesen Verbindungen sind solche, worin R eine Methylgruppe (eine Alkylgruppe mit einem Kohlenstoffatom) bedeutet, ebenfalls in ihrer chemischen Stabilität hervorragend, wobei die Verbindungen Nr. 9, 19 und 22 die bevorzugtesten Verbindungen sind.
Das Syntheseverfahren für die erfindungsgemässen Verbindungen wird im folgenden näher erläutert.
Die Kondensation des co-Guanidino-fettsäure-amids der Formel (II) und des Dihydroxyethanamids der Formel (III) gemäss der vorliegenden Erfindung kann in organischen Lösungsmitteln durchgeführt werden. Sie wird jedoch im allgemeinen in Anwesenheit von geringen Wassermengen durchgeführt wegen der Löslichkeit beider Verbindungen, die im allgemeinen in Form ihrer Säureadditionssalze behandelt bzw. eingesetzt werden.
Wenn organische Lösungsmittel verwendet werden, sind Aceton und Dimethylformamid bevorzugt, aber die Kondensation wird im allgemeinen in Anwesenheit geringer Wassermengen durchgeführt, ohne dass organische Lösungsmittel verwendet werden. Die Menge an Wasser, die verwendet wird, sollte möglichst so ausgewählt werden, dass mindestens beide Verbindungen gelöst werden. In der Praxis wird das Wasser in einer Menge im Bereich von 2 bis 60, bevorzugt 4 bis 40 mol pro 1 mol Guanidino-fettsäure-amid der Formel (II) verwendet. Da die Verbindungen der Formeln (II) und (III) im allgemeinen in Form der Säureadditionssalze verwendet werden, ist es nicht erforderlich, zu der Lösung für die Reaktion eine Säure zuzugeben. Hinsichtlich der Ausbeute an Kondensat ist es jedoch bevorzugt, einen sauren Katalysator bzw. Säurekatalysator zu verwenden. Geeignete Säurekatalysatoren sind anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Borsäure, und organische Säuren, wie Essigsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und Adipinsäure. Eine Dicarbonsäure, wie Glutarsäure, ist bevorzugt. Die Menge an Säure, die verwendet wird, beträgt 0 bis 10, bevorzugt 0,5 bis 4 mol pro mol Guanidino-fettsäure-amid der Formel (II). Die Reaktionstemperatur sollte 0 bis 100°C, im allgemeinen von Zimmertemperatur bis 80°C und bevorzugt 40 bis 70°C betragen. Die Reaktionszeit variiert mit der Reaktionstemperatur. Eine Reaktionszeit von 1 bis 2 Tagen ist wegen der Erhöhung der Ausbeute bevorzugt. Obgleich das Verhältnis von Guanidino-fettsäure-amid der Formel (II) zu Dihydroxy-
ethanamid der Formel (III) nicht besonders begrenzt ist, ist es allgemeine Praxis, 0,5 bis 4, bevorzugt 0,8 bis 1,5 mol des letzteren pro 1 mol des ersten zu verwenden. Die entstehende Verbindung ist ein N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(co-gua-5 nidino-fettsäure-amido)-2-hydroxyethanamid, welches durch die allgemeine Formel:
10 NH
H2NCNH(CH2)n-Y-CONHCHCONHCH2CH2CH2CH2NHCH2CH2CH2NH2 OH
(Ia)
dargestellt wird, worin Y und n die zuvor gegebenen Bedeutun-15 gen besitzen, und es ist die Verbindung der Formel (I), worin R ein Wasserstoffatom bedeutet.
Die Verbindungen der Formel (I), worin R Gruppen, ausgenommen ein Wasserstoffatom, bedeutet, werden erhalten, indem man die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung der Verbin-20 dung der Formel (Ia) mit dem zuvor erwähnten aliphatischen Alkohol, Diazoparaffin oder Benzylalkohol alkyliert. Die Verbindung, die man bei der obigen Kondensation erhält, oder Spergualin, welches man aus der Mikrobenkulturbrühe erhält, kann als Verbindung der Formel (Ia) verwendet werden. Bei der 25 Alkylierung erhält man als Verbindung ein N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(to-guanidino-fettsäure-amido)-2--alkoxyethanamid, welches durch die allgemeine Formel:
30 H2N£NH (CH2 ) n~Y—CONHÇHCONH (CH2 ) ^NH (C^ ) 3NH2
" JL. (Ib)
NH OR' '
35 dargestellt wird, worin Y und n die zuvor gegebenen Bedeutungen besitzen und R' eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweist, oder eine Benzylgruppe bedeutet. Die Alkylierung wird auf folgende Weise durchgeführt.
40 Die Umsetzung zwischen einem N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(co-guanidino-fettsäure-amido)-2-hydroxy-ethanamid der Formel (Ia) und dem Alkohol wird im allgemeinen in Anwesenheit eines sauren Katalysators bzw. Säurekatalysators durchgeführt. Vor der Reaktion müssen die Guani-45 dino- und Aminogruppen in dem Hydroxyethanamid der Formel (Ia) nicht notwendigerweise geschützt werden, sie können jedoch geschützt werden. Der Alkohol wird durch die Formel
R'-OH
(IV)
dargestellt, worin R' eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet. Solche Alkohole sind 55 beispielsweise niedrige Alkohole, wie Methanol, Ethanol, Pro-panol und Butanol, Glykole, wie Ethylenglykol und Propylen-glykol, und Benzylalkohol. Die Reaktion wird bevorzugt in einem Alkohol der obigen Formel (IV) durchgeführt, obgleich auch ein inertes Lösungsmittel verwendet werden kann. Geeig-60 nete saure Katalysatoren sind anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure und Schwefelsäure, organische Säuren, wie Essigsäure und p-Toluolsulfonsäure, und kationische Austauschharze. Die Reaktionstemperatur liegt beispielsweise im Bereich von 0 bis 100°C, im allgemeinen von Zimmertempera-65 tur bis 80°C, wobei Zimmertemperatur am meisten bevorzugt wird. Die Reaktionszeit variiert entsprechend der Reaktionstemperatur und liegt beispielsweise im Bereich von 1 h bis 10 Tage, bevorzugt 1 bis 2 Tage.
653 015
12
Wenn die Löslichkeit eines Hydroxyethanamids der Formel (Ia) in dem Alkohol der Formel (IV) niedrig ist, ist es bevorzugt, die Amino- und Iminogruppen des Hydroxyethanamids mit Schutzgruppen zur Erhöhung der Ausbeuten zu schützen. Geeignete Schutzgruppen können ausgewählt werden (vgl. die Literaturstelle J.F.W. Mcomie Ed., «Protective Groups in Or-ganic Chemistry», Plenum Press, N.Y. 1973). Solche Schutzgruppen für Aminogruppen, die im allgemeinen in der Peptid-synthese verwendet werden, sind geeignet. Beispiele sind einwertige Schutzgruppen, wie Benzyloxycarbonyl, p-Methoxy-benzyloxycarbonyl, p-Nitrobenzyloxycarbonyl, tert.-Butoxy-carbonyl, Trichlorethoxycarbonyl und Isobormyloxycarbonyl, und zweiwertige Schutzgruppen, wie Phthaloyl und Succinyl. Von diesen Gruppen sind Aralkyloxycarbonylgruppen, wie Benzyloxycarbonyl- und p-Methoxybenzyloxycarbonylgruppen, wegen ihrer leichten Einführbarkeit und Entfernung bevorzugt. Die Einführung dieser Schutzgruppen erfolgt nach an sich bekannten Verfahren und bevorzugt nach dem aktiven Esterverfahren. Bei diesem Verfahren verbleibt die Guanidinogruppe in der Verbindung der Formel (Ia) unverändert.
Die Alkylierung der Hydroxylgruppe an der 11-Stellung des Hydroxyethanamids der Formel (Ia) durch Umsetzung mit einem Diazoparaffin erfolgt auf folgende Weise.
Im allgemeinen werden zuerst die Amino- und Iminogruppen des Hydroxyethanamids der Formel (Ia) mit den oben angegebenen Schutzgruppen geschützt und die entstehende Verbindung wird beispielsweise mit einem Diazoparaffin in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Methylenchlorid oder Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur von zum Beispiel —20 bis 20°C, üblicherweise —10 bis 10°C, bevorzugt —3 bis 3°C, während beispielsweise 1 bis 15, im allgemeinen 2 bis 8 h zur Durchführung der Alkylierung umgesetzt. Die Reaktion erfordert nicht notwendigerweise einen Katalysator, sie wird jedoch in Anwesenheit eines Lewis-Säurekatalysators, wie Bortrifluo-rid, Aluminiumchlorid, Borfluorwasserstoffsäure oder Sele-niumdioxid, beschleunigt. Als Beispiele für Diazoparaffine mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen können Diazomethan, Diazoethan, Diazopropan und Diazobutan erwähnt werden. Diese Diazoparaffine können aus den entsprechenden N-Nitrosoalkylharn-stoffen, N-Nitrosoalkylurethan, N-Nitrosoalkylsulfonamid und N-Nitrosoalkyl-N'-nitroguanidin nach an sich bekannten Verfahren [beispielsweise «Organic Synthesis» (John Wiley and Sons, Inc.), II, 165 (1943); III, 119 (1955); Journal of Organic Chemistry, 13, 763 (1948); «Organic Synthesis», IV, 250 (1963); Chemische Berichte, 94, 2547 (1961); Canadian Journal of Research, 28B, 683 (1950); «Organic Synthesis», III, 244 (1955); Journal of Chemical Society, 1935, 286] synthetisiert werden.
Die Alkylierung mit einem Diazoparaffin ermöglicht, dass die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung ohne Änderung der Konfiguration in der 11-Stellung der Formel (Ia) alkyliert wird. Beispielsweise wird ein (—)-Hydroxyethanamid der Formel (Ia) zu dem entsprechenden (—)-Alkoxyethanamid der Formel (Ib) umgewandelt. Ein ( + )-Alkoxyethanamid oder ein epimeres Gemisch (±), bezogen auf die 11-Stellung, wird aus dem (+)-Hydroxyethanamid bzw. dem ( ± )-Hydroxyethanamid erhalten.
Die Hydroxyethanamidverbindung der Formel (Ia) wird Hydroxylgruppen in beiden Stellungen 11 und 15 aufweisen, wenn Y -CH-CHî- bedeutet. In diesem Fall ist es, bedingt durch den i
OH
Unterschied in der Reaktivität zwischen den beiden Hydroxylgruppen, möglich, selektiv die Hydroxylgruppe in der 11-Stel-lung zu alkylieren.
Die Schutzgruppen der Amino- und Iminogruppen des alky-lierten Produkts können auf übliche Weise entfernt werden, wobei ein Alkoxyethanamid der Formel (Ib) zurückbleibt.
Wenn beispielsweise die Schutzgruppe eine Aralkyloxycarbo-nylgruppe ist, kann sie durch übliche katalytische Hydrierung bei Atmosphärendruck entfernt werden. Die Reaktion wird in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Methanol, Ethanol, Dio-xan oder einem Gemisch davon, in Anwesenheit von Palladium oder Platin als Katalysator durchgeführt. Die Reaktion wird durch Zugabe einer Säure wie Chlorwasserstoffsäure oder Essigsäure, beschleunigt.
Wenn Y -CH-CH2- bedeutet, ist das 2-substituierte Ethan-
I
OH
amid der Formel (I) N-[4-(3-aminopropyl)-aminobutyl]-2-(©--guanidino-ß-hydroxyfettsäure-amido)-2-substituiertes Ethan-amid, welches durch die allgemeine Formel
IS l>t J3 a 11 » ï <-s <> 3—1 H2NÇNH(CH2)nCHCH2CONHÇHCONH(CH2)^NH tCH2)3NH2 (Ic)
NH .OH OR
dargestellt wird, worin R und n die oben gegebenen Definitionen besitzen, vorausgesetzt, dass, wenn n 4 bedeutet, R andere Gruppen, ausgenommen einem Wasserstoffatom, bedeutet. Wenn die Konfiguration an der 15-Stellung dieser Verbindung entweder (S) oder (R) ist und die Verbindung ein epimeres Gemisch, bezogen auf die 11-Stellung ist, kann die Verbindung in beide Epimere [(+)-Form und (—)-Form] mittels Chromatographie getrennt werden. Zu diesem Zweck ist die Hochlei-stungs-FIüssigkeitschromatographie (HPLC) geeignet. Das gewünschte Ergebnis wird erhalten, wenn man beispielsweise Nuc-leosil C18 (M. Nagel Co.) als Säulenpackmaterial und ein Gemisch aus Acetonitril-Natriumpentansulfonat-Phosphatpuffer als Eluiermittel verwendet.
Wie oben beschrieben, ergibt die Alkylierung der Hydroxylgruppe in der 11-Stellung mit einem Diazoparaffin oder die Trennung mittels HPLC optisch aktives N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(cö-guanidino-ß-hydroxy-fettsäureamido)-2--alkoxyethanamid, welches durch die allgemeine Formel
15 l<t 13 12 11
H2NCNH(CH2)nCHCH2CONHCHCONHtCH2)4NH{CH2)3NH2 (Id)
NH OH OR'
dargestellt werden kann, worin R' und n die oben gegebenen Definitionen aufweisen. Wenn die Hydroxylgruppe in der 15-Stellung dieser Verbindung durch Deoxygenierung entfernt wird oder wenn die Verbindung dehydroxygeniert wird, wird ein optisch aktives N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-[co-guanidi-no-(a,ß-ungesättigt)-fettsäure-amido]-2-alkoxyethanamid, welches durch die Formel:
H2NCNH (CH2 ) nCH=CHCONHCHCONH CCH2 ) (CH2 ) 3NH2 (Ie) NH OR'
dargestellt wird, worin R' und n die oben gegebenen Definitionen besitzen, oder ein optisch aktives N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-[co-guanidino-(gesättigt)-fettsäure-amido]-2--alkoxyethanamid mit der allgemeinen Formel
H2NCCH(CH2)nCH2CH2CONHÇHCONH(CH2)^NH(CH2)3NH2(If) NH OR'
worin R' und n die oben gegebenen Bedeutungen besitzen, gebildet.
Die Verbindung der Formel (Ie) wird erhalten, indem man die Amino- und Iminogruppen der Verbindung der Formel (Id)
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
13
653 015
mit den zuvor erwähnten Schutzgruppen schützt, die entstehende Verbindung einer Dehydrationsbehandlung unterwirft und die Schutzgruppen entfernt. Die Dehydration kann beispielsweise durch ein an sich bekanntes Verfahren erfolgen, bei dem Di-cyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von Kupfer(I oder II)-chlorid [Journal of the American Chemical Society, 90, 3245 (1965)] reagieren kann. Dieses Verfahren wird bevorzugt, da es bei milden neutralen Bedingungen durchgeführt wird. Ein Überschuss von Dicyclohexylcarbodiimid verkürzt die Reaktionszeit. Im Hinblick auf die Löslichkeit der Ausgangsmaterialien ist N,N-Dimethylformamid ein Beispiel eines geeigneten Lösungsmittels. Die Reaktionstemperatur beträgt im allgemeinen von Zimmertemperatur bis 100°C. Die Reaktionszeit variiert von mehreren h bis mehreren Tagen, abhängig von der Reaktionstemperatur.
Die Verbindung der Formel (If), die aus der Verbindung der Formel (Id) durch Deoxygenierung der Hydroxylgruppe an der 15-Stellung gebildet wird, wird bevorzugt aus der Verbindung der Formel (Ie) durch Reduktion der Doppelbindung erhalten. Die Reduktion der Doppelbindung erfolgt nach an sich bekannten Verfahren, wie beispielsweise durch katalytische Reduktion. Wenn die Schutzgruppe für die Amino- und Iminogruppen eine Aralkyloxycarbonylgruppe ist, kann die Reduktion der Doppelbindung und die Entfernung der Schutzgruppen gleichzeitig durch katalytische Reduktion erfolgen.
Wenn R' der Alkoxyethanamidverbindung der Formel (Ib) eine Benzylgruppe ist, wird die Benzylgruppe durch katalytische Reduktion entfernt und die Verbindung wird in die Hydroxy-ethanamidverbindung der Formel (Ia) umgewandelt, wobei die Konfiguration an der 11-Stellung unverändert erhalten bleibt. In diesem Fall verläuft die katalytische Reduktion für die Entfernung der Schutz-Aralkyloxycarbonylgruppe mit langsamer Geschwindigkeit bei Atmosphärendruck, wohingegen ein zufriedenstellendes Ergebnis mit verkürzter Reaktionszeit erhalten wird, wenn man die Reaktion in wässriger Essigsäurelösung bei hohem Druck von mehreren Atmosphären bis mehreren 10 Atmosphären durchführt.
Das co-Guanidino-fettsäureamid, das durch die Formel
Carboxylgruppe verestert, den entstehenden Ester mit Ammoniak behandelt, um ihn in ein Amid umzuwandeln, die Amino-schutzgruppe entfernt und die Aminogruppe in eine Guanidino-gruppe umwandelt.
5 Die Verbindung der Formel (IIa) kann ebenfalls hergestellt werden, indem man ein Diamin zu der entsprechenden Nitril-verbindung, die durch die Formel
H2N(CH2)nCH2CH2CN
(VI)
dargestellt wird, worin n die oben gegebene Bedeutung besitzt, oxidiert, dann die Nitrilgruppe unter Bildung einer Amidverbin-dung hydrolysiert und die Aminogruppe in die Guanidinogrup-pe umwandelt. Beispiele von besonderen co-guanidinogesättig-15 ten Fettsäureamiden der Formel (IIa) sind 4-Guanidinobutan-amid, 5-Guanidinopentanamid, 6-Guanidinohexanamid, 7-Gua-nidinoheptanamid, 8-Guanidinooctanamid, 9-Guanidinononan-amid, 10-Guanidinodecanamid und 11-Guanidinoundecanamid.
20 (b) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin Y -CH-CH2 bedeutet:
I
OH
Diese Verbindung ist ein co-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäure-25 amid, welches durch die allgemeine Formel
H2NCNH(CH^)nÇHCH2 CONH2
(IIb)
NH
OH
dargestellt wird, worin n die oben gegebene Bedeutung besitzt, und es wird nach an sich bekannten Reaktionen auf verschiedenen Wegen synthetisiert. Beispielsweise kann es synthetisiert werden, indem man die Aminogruppe einer co-Aminofettsäure, 35 die durch die Formel
H2N(CH2)nCOOH
(VII)
H2NCNH(CH2)n-Y-CONH2 NH
(II)
dargestellt wird, worin Y und n die oben gegebenen Definitionen besitzen, und welches als Ausgangsmaterial für Synthese der Verbindung der Formel (Ia) verwendet wird, wird wie folgt synthetisiert.
(a) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin Y -CH2CH2- bedeutet:
Diese Verbindung ist ein co-guanidinogesättigtes Fettsäure-amid, das durch die allgemeine Formel dargestellt wird, worin n die oben gegebene Bedeutung besitzt, 40 schützt, dann die Kohlenstoffkette um zwei Kohlenstoffatome verlängert, die entstehende Verbindung in das ß-Hydroxyfett-säureamid durch eine Reihe von Reaktionen umwandelt, die im allgemeinen für die Herstellung von ß-Hydroxycarbonsäure-derivaten verwendet werden, dann die Schutzgruppe zur Rege-45 nerierung der Aminogruppe entfernt und die Aminogruppe in die Guanidinogruppe umwandelt. Das Verfahren ist in Einzelheiten in einem Beispiel beschrieben.
Ein (ü-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäureamid wird synthetisiert, indem man die Aminogruppe einer co-Aminofettsäure 50 der Formel (VII) mit einer Amino-Schutzgruppe, wie einer Ben-zyloxycarbonylgruppe, schützt, die Carbonsäure in ein reaktives Derivat, wie das Säureimidazolid, umwandelt, das reaktive Derivat mit Magnesiumenolat von Monoethylmalonat der Formel
(IIa)
H2NCNH(CH2)nCH2CH2CONH2 NH
dargestellt wird, worin n die oben gegebene Definition besitzt. Diese co-guanidinogesättigten Fettsäureamid sind bekannte Verbindung und können aus im Handel erhältlichen Rohmaterialien durch bekannte Reaktionen synthetisiert werden. Beispielsweise wird die Verbindung erhalten, indem man die Aminogruppe der co-Aminofettsäure der Formel f
/ CH
C - O
\lq
C - O
OEt
/
(VIII)
H2N(CH2)nCH2CH2COOH
65 kondensiert [Buletin de la Société Chimique de France, 945 (V) (1964)], wobei man einen ß-Ketoester der Formel worin n die oben gegebene Definition besitzt, schützt, dann die
X'-NH(CH2)nCOCH2COOEt
(IX)
653 015
14
erhält, worin X' eine Amino-Schutzgruppe bedeutet und n die oben gegebene Bedeutung besitzt, die Ketoncarbonylgruppe unter Bildung eines ß-Hydroxyesters reduziert, den Ester mit Ammoniak unter Bildung eines Amids behandelt, die Amino-Schutzgruppe entfernt und die regenerierte Aminogruppe in eine Guanidinogruppe umwandelt. Als Beispiele von co-Guani-dino-ß-hydroxy-fettsäureamiden, die so hergestellt werden, kann man 4-Guanidino-3-hydroxybutanamid, 5-Guanidino-3--hydroxypentanamid, 6-Guanidino-3-hydroxyhexanamid, 7--Guanidino-3-hydroxyheptanamid, 8-Guanidino-3-hydroxy-octanamid und 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid erwähnen.
(S)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid wird ebenfalls durch Hydrolyse mit einer Säure oder einem Alkali der antibiotischen Substanz BMG 162-aF2 (Spergualin), die durch die Formel
(S)
H2N|jWH(CH2) 4ÇHCH2CONHCHCONH (CHj) 4NH (CH2) 3NH2 NH OH OH
dargestellt wird und welche aus dem Kulturfiitrat eines Mikroorganismus des Genus Bacillus, wie beispielsweise Bacillus BMG 162-aF2 (FERM-P5230; ATCC 31932), isoliert wird, erhalten. Es wird ebenfalls, wie in Journal of Antibiotics, Band 34, 1625 (1981) beschrieben, durch Bildung der (S)-3,7-Di-aminoheptansäure von L-Lysin gemäss Arndt-Eistert-Reaktion [Journal of Organic Chemistry, Band 17, 347 (1952)], Deami-nierung der ß-Aminogruppe mit salpetriger Säure, Umwandlung der Carboxylgruppe in eine Amidgruppe und weitere Umwandlung der Aminogruppe in eine Guanidinogruppe synthetisiert.
(c) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin Y -CH = CH- bedeutet:
Diese Verbindung ist ein <a-guanidino-a,ß-ungesättigtes Fetttsäureamid, das durch die Formel:
H^NCNH(CH0) CH = CHCONH-2 fi 2 n 2
NH
(He)
dargestellt wird, worin n die oben gegebene Definition besitzt. Diese Verbindungen werden bevorzugt durch Dehydratisierung der co-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäure-amide der Formel (IIb), deren Herstellung oben beschrieben wurde, synthetisiert. Obgleich die Dehydratisierung nach Verfahren erfolgen kann, wie sie üblicherweise bei der Dehydratisierung von ß-Hydroxy--fettsäure-amid verwendet werden, ist es bevorzugt, die Reaktion bei milden neutralen Bedingungen durchzuführen. Einer der geeigneten Wege besteht darin, die Dehydratisierung durch Einwirkung von Dicyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von Kupfer(II)chlorid [Journal of the American Chemical Society, 90, 3245 (1968)] durchzuführen. Da die Verbindung der Formel (IIb) im allgemeinen in Form des Säureadditionssalzes behandelt wird, ist ein bevorzugtes Lösungsmittel N,N-Dimethyl-formamid wegen der Löslichkeit des Säureadditionssalzes. Die Reaktionstemperatur beträgt im allgemeinen von Zimmertemperatur bis 100°C. Die Reaktionszeit liegt im allgemeinen im Bereich von mehreren h bis mehreren Tagen, abhängig von der Reaktionstemperatur. Die Reaktionszeit kann unter Verwendung eines Überschusses an Dicyclohexylcarbodiimid verkürzt werden. Beispiele von co-guanidino-a,ß-ungesättigten Fettsäure-amiden, die so hergestellt werden, sind 4-Guanidino-2-buten-amid, 5-Guanidino-2-pentenamid, 6-Guanidino-2-hexenamid, 7-Guanidino-2-heptenamid, 8-Guanidino-2-octenamid und 9-Guanidino-2-nonenamid.
Die Reduktion der Doppelbindung in dem co-guanidino--a,ß-ungesättigten Fettsäureamid der Formel (Ile) kann entweder katalytisch in an sich bekannter Weise oder unter Verwendung von Natriumborhydrid in Anwesenheit einer Übergangs-5 metallverbindung, wie Nickelchlorid oder Kobaltchlorid, erfolgen [Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 19, 817 (1971)], wobei man ein co-guanidino-gesättigtes Fettsäureamid der Formel (IIa) erhält.
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethan-lo amid der Formel
HO
HO
^>CHCONH (CH2 ) 4NH (CH2 ) 3NH2 (in)
welches das Ausgangsmaterial für die Synthese der Verbindung der Formel (Ia) darstellt, wird auf folgende Weise synthetisiert, wie es in Einzelheiten in Journal of Antibiotics, Band 34, 1625 (1981) beschrieben wird.
20 Die freie Aminogruppe der Verbindung, die durch die Formel
H2N(CH2)4N(CH213NH-X
i1
(X)
dargestellt wird, worin X1 eine Amino-Schutzgruppe bedeutet, wird mit einem Dialkylacetal der Glyoxylsäure, welche durch die Formel
2 XzO
>CHCOOH
(XI)
X'O
dargestellt wird, acyliert, worin X2 eine Alkylgruppe mit 1 bis 5 35 Kohlenstoffatomen bedeutet, oder sie wird mit einem reaktiven Derivat der Carboxylsäure acyliert und dann werden die Amino-Schutzgruppe X1 und die Alkylgruppen X2 entfernt, wobei man die Verbindung der Formel (III) erhält.
Die Verbindung der Formel (III) kann ebenfalls in hoher 40 Ausbeute durch Hydrolyse der zuvor erwähnten antibiotischen Substanz BMG 162-aF2 (Spergualin) erhalten werden.
Bezugsbeispiel 1 Synthese von (S)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid:
45
(a) Synthese von (S)-3,7-Diaminoheptansäure:
Zu einer Lösung von 15 g (82,15 mmol)L-Lysinhydrochlorid in 150 ml Wasser gibt man 8,7 g (82,15 mmol) Natriumcarbo-50 nat und 43,2 g (200 mmol) N-Ethoxycarbonylphthalimid. Das Gemisch wird 20 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit 50 ml Ethylacetat gewaschen. Der pH-Wert der wässrigen Schicht wird mit 6N-Chlorwasserstoffsäure auf 3,0 eingestellt und dann wird dreimal mit 100 ml Toluol ex-55 trahiert. Der Extrakt wird zweimal mit 100 ml Wasser (pH 2,0) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene bei verringertem Druck eingedampft. Man erhält 27,95 g (84% Ausbeute) weisses Pulver aus Di-N-phthaloyl-L--lysin, Zersetzungspunkt 71 bis 72°C, [a]^2—32° (Cl, Metha-60 noi).
Zu 27,0 g (66,4 mmol) Di-N-phthaloyl-L-lysin gibt man 40 ml Oxalylchlorid. Das Gemisch wird in einem Ölbad bei 90°C erhitzt, dann mit 40 ml 1,2-Dimethoxyethan vermischt und am Rückfluss 2 h erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene 65 eingedampft, erneut in 20 ml 1,2-Dimethoxyethan gelöst und tropfenweise zu 500 ml einer Etherlösung, die 330 mmol Diazo-methan enthält, unter Kühlen mit Eiswasser gegeben. Das Gemisch wird dann 1 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird
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zur Trockene eingedampft und in 250 ml wasserfreiem Methanol gelöst. Zu der Lösung gibt man 50 ml einer Triethylaminlö-sung, die 3,4 g (14,8 mmol) Silberbenzoat enthält. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 15 h lang gerührt. Der Niederschlag wird abfiltriert, in 100 ml Chloroform gelöst, dann wird von den unlöslichen Materialien abfiltriert und zur Trockene eingedampft. Man erhält 15,3 g (53% Ausbeute) (S)-3,5-Di-phthaloylaminoheptansäure-methylester, Zersetzungpunkt 118 bis 119°C, [aß2— 3° (C2, Chloroform).
Zu 15,0 g (34,5 mmol) (S)-3,7-Diphthaloylaminoheptan-säure-methylester gibt man 100 ml IM ethanolisches Hydrazin-hydrat und 100 ml 95%igen Ethanol. Das Gemisch wird unter Rückfluss 1 h lang (Ölbadtemperatur: 90°C) erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, in 250 ml 5%iger Chlorwasserstoffsäure gelöst, auf 80°C 1 h erhitzt, dann wird der pH-Wert mit 17%igem wässrigen Ammoniak auf 7,1 eingestellt und dann wird das Gemisch durch eine Säule (Innendurchmesser 27 mm), die mit 300 ml Amberlite CG-50 (70% NH4-Typ) bepackt ist, gegeben. Die Säule wird nacheinander mit 900 ml Wasser und 900 ml 0,2M wässrigem Ammoniak gewaschen und mit 0,5M wässrigem Ammoniak eluiert. Die Ninhydrin-positiven Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 3,15 g (57% Ausbeute) (S)--3,7-Diaminoheptansäure (C7H16N2O2.1/4 H2CO3) in farbloser Sirupform, [a]^1 +2,9° (Cl, Wasser).
(b) Synthese von (S)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid:
Zu 30 ml eines Pyridin-Wasser-Triethylamin-(10:10:1)-Ge-misches, das 3,1 g (19,3 mmol) (S)-3,7-Diaminoheptansäure von (a) oben enthält, gibt man langsam 4,81 g (19,3 mmol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid. Das Gemisch wird 5 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, dann in 30 ml Wasser gelöst, und der pH-Wert wird mit 6N-Chlorwasserstoffsäure auf 6,4 eingestellt. Das Gemisch wird dann durch eine 100-ml-Säule (Innendurchmesser 16 mm), die mit Amberlite CG-50 (80% NHj-Typ) bepackt ist, geleitet. Die Säule wird mit 300 ml Wasser entwickelt. Das gesammelte abströmende Material wird weiter durch eine Säule (Innendurchmesser 16 mm), die mit 100 ml Dowex 50W-X4 (H-Typ) bepackt ist, geleitet. Die Säule wird nacheinander mit 300 ml Wasser und 0,2M wässrigem Ammoniak gewaschen und mit 0,5M wässrigem Ammoniak eluiert (10-ml-Fraktions-grösse). Die Fraktionen Nr. 16 bis 33 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,73 g (48% Ausbeute) eines weissen Pulvers von (S)-3-Amino-7-benzyIoxycarbonylamino-heptansäure (C15H22N2O4.H2O), Zersetzungspunkt 143 bis 147°C, [<x]d2 + 14° (Cl, Methanol). Die Amberlite-CG-50 Säule wird mit 0,5N wässrigem Ammoniak eluiert, wobei 746 mg (24% Gewinnung) von (S)-3,7-Diaminoheptansäure erhalten werden.
Zu einer Lösung von 2,7 g (9,17 mmol) (S)-3-Amino-7-ben-zyloxycarbonylaminoheptansäure in 33%iger wässriger Essigsäure gibt man unter Eiskühlung tropfenweise im Verlauf von 1 h eine Lösung von 1,9 g (27,51 mmol) Natriumnitrit in 10 ml Wasser. Das Gemisch wird weiter 1 h gerührt und dann bei 5°C während 24 h stehen gelassen. Nach Zugabe von 50 ml Wasser wird das Reaktionsgemisch zweimal mit 50 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,16 g rohes Pulver. Unter Verwendung der Säulenchromatographie (Innendurchmesser 28 mm) mit 200 g Silicagel (Wa-kogel C-200) wird das obige rohe Pulver mit einem Chloroform-Methanol-konzentrierter wässriger Ammoniak-(30:10:1 Volumen-Gemisch entwickelt (20-ml-Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 51 bis 60 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 460 mg (17% Ausbeute) eines weissen Pulvers aus (S)-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptansäure, Zersetzungspunkt 115 bis 117°C, [<*]□ +3° (C2, Methanol).
Zu einer Lösung aus 450 ml (1,52 mmol) (S)-7-Benzyloxy-carbonylamino-3-hydroxyheptansäure in 1,2-Dimethoxyethan gibt man unter Eiskühlen tropfenweise 7 ml (4,56 mmol) einer Lösung von Diazomethan in Ether. Das Gemisch wird 30 min gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft. Man erhält 461 mg (98% Ausbeute) (S)-7-Benzyloxy-carbonylamino-3-hydroxyheptansäure-methylester, [a]p +1°.
Eine Lösung von 450 ml (1,45 mmol) (S)-7-Benzyloxycar-bonylamino-3-hydroxyheptansäure-methylester in 50 ml wasserfreiem Methanol wird unter Kühlen auf —10°C mit gasförmigem Ammoniak gesättigt und dann in einem verschlossenen Rohr bei Zimmertemperatur 3 Tage stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft und der Chromatographie unterworfen, wobei eine Säule (Innendurchmesser 20 ml), die 50 g Silicagel (Wakogel C-200) enthält, verwendet wird, und wobei mit Chloroform-Methanol (100:1, ausgedrückt durch das Volumen) entwickelt wird. Die Fraktionen Nr. 82 bis 106 (je 10 ml Volumen) werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 371 mg (87% Ausbeute) eines weissen Pulvers aus (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptan-amid, Zersetzungspunkt 126 bis 127°C, [a]^2—3° (C5, Methanol).
In einem Gemisch aus 10 ml 90%igem wässrigem Methanol und 0,01 ml Essigsäure löst man 350 mg (1,19 mmol) (S)-7--Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanamid. Nach Zugabe von 50 ml 5%iger Palladiumkohle wird das Gemisch bei einem Wasserstoffdruck und bei Zimmertemperatur 3 h gerührt. Nach Entfernung des Katalysators durch Filtration wird das Filtrat zur Trockene eingedampft, erneut in einem geringen Wasservolumen gelöst und durch eine Säule (Innendurchmesser 12 mm), die 30 ml Dowex 50W-X4 (H-Typ) enthält, geleitet. Die Säule wird mit 90 ml Wasser gewaschen und mit 0,5 M wässrigem Ammoniak eluiert (3 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 28 bis 34 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 201 mg (96% Ausbeute) (S)-7-Amino-3-hydroxyheptan-amid, [a];,2—2° (C2, Wasser).
Zu einer Lösung aus 190 mg (1,08 mmol) (S)-7-Amino-3--hydroxyheptanamid in 3 ml Wasser gibt man 0,54 ml 2N wäss-rige Natriumhydroxidlösung. Zu der entstehenden Lösung gibt man unter Eiskühlen tropfenweise im Verlauf von 30 min 1 ml einer Methanollösung, die 129 mg (1,08 mmol) 2-Methyl-l--nitrosoharnstoff enthält. Das Gemisch wird weiter 5 h gerührt, dann wird der pH-Wert mit 6N-Chlorwasserstoffsäure auf 6,0 eingestellt, es wird zur Trockene eingedampft und unter Verwendung einer Säule (Innendurchmesser 15 ml), die 30 g Silicagel (Wakogel C-200) enthält, und durch Entwicklung mit einem Gemisch aus Chloroform, Methanol und konzentriertem wässrigen Ammoniak (60:10:1, ausgedrückt durch das Volumen) wird durch Chromatographie gereinigt. Die Fraktionen Nr. 67 bis 90 (6 ml Fraktionsgrösse) werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 187 mg (70% Ausbeute) eines weissen Pulvers von (S)-7-Nitroguanidino-3-hydroxyheptanamid, Zersetzungspunkt 148 bis 149°C, [a]jr>2—2° (C2, Methanol).
In einem Gemisch aus 15 ml Wasser, 15 ml Methanol und 7,5 ml Essigsäure löst man 170 mg (0,69 mmol) (S)-7-nitro-guanidino-3-hydroxyheptanamid. Nach Zugabe von 50 mg 5%iger Palladiumkohle wird das Gemisch unter einem Wasserstoffstrom 1 h bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Entfernung des Katalysators durch Filtration wird das Filtrat zur Trockene eingedampft. Man erhält 165 mg eines rohen Pulvers. Das rohe Pulver wird in 10 ml Wasser gelöst, durch eine Säule (Innendurchmesser 12 mm), die mit 20 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt ist, geleitet und dann wird mit 0,5M wässriger Natriumchloridlösung (2 ml Fraktionsgrösse) eluiert. Die Fraktionen Nr. 18 bis 25 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanollösungen werden vereinigt, durch eine Säule (20 mm Innendurchmesser), die mit 100 ml Sephadex LH-20 bepackt war,
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geleitet und mit Methanol (1 ml Fraktionsgrösse) wird eluiert. Die Fraktionen 28 bis 46 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 149 mg (91% Ausbeute) eines weissen Pulvers aus (S)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid-hydrochlo-rid (QH18N4O2 . HCl), [aß2—2°C (C2, Wasser).
Bezugsbeispiel 2
Synthese von 7-Guanidino-2-heptenamid:
Zu einer Lösung aus 955 mg (4 mmol) (S)-7-Guanidino-3--hydroxyheptanamid-hydrochlorid in 20 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid gibt man 2,48 g (12 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid und 40 mg Kupfer(II)-chlorid. Das Gemisch wird 2 Tage bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgenisch wird zur Entfernung des Niederschlags filtriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst und zweimal mit 10 ml Ethylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wird zur Trockene eingedampft, in 5 ml Wasser gelöst, durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 50 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt war, geleitet und die Säule wird mit 200 ml 0,5M wässriger Na-triunchloridlösung (10 ml Fraktionsgrösse) eluiert. Die Fraktionen Nr. 17 bis 30 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit Methanol extrahiert. Die Methanollösung wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Se-phadex LH-20 bepackt war, geleitet und dann wird mit Methanol (5 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 9 bis 16 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand (Gewicht 950 mg) wird aus Ethanol-Aceton kristallisiert. Man erhält 790 mg (89,5% Ausbeute) 7-Guanidino-2-hepten-amid-hydrochlorid , Fp. 162 bis 168°C.
Proton-NMR (Bestimmt in Deuteromethanol), 5:
1,4 bis 1,8 (CH2x2), 2,27 (CH2), 3,20 (CH2), 5,98 (CH), 6,80 (CH)
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"1:
' 3370, 3150, 1660, 1625, 1610, 1590, 1415, 1395, 1370.
Bezugsbeispiel 3
Synthese von 7-Guanidinoheptanamid-hydrochlorid:
Zu einer Lösung aus 441 mg (2 mmol) 7-Guanidino-2--heptenamid-hydrochlorid in 7 ml Methanol gibt man 47,5 mg (0,2 mmol) Nickelchlorid. Zu dem Gemisch gibt man unter Rühren bei Zimmertemperatur 189 mg (5 mmol) Natriumborhydrid in geringen Teilen. Nach Zugabe wird das Gemisch weiter 1,5 h gerührt, dann von einem schwarzen Niederschlag abfiltriert und das Filtrat wird zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 5 ml 0,5M wässriger Natriumchloridlösung gelöst, durch eine Säule (Innendurchmesser 30 mm), die mit 100 ml Diaion HP-20 bepackt war, geleitet und mit 300 ml 0,5M wässriger Natriumchloridlösung und dann mit 300 ml Wasser (15 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 25 bis Nr. 33 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und es wird mit Methanol (5 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 8 bis 13 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und aus Ethanol-Aceton kristallisiert. Man erhält 372 mg (83,5% Ausbeute) farblose Kristalle aus 7-Guanidinoheptanamid-hydro-chlorid, Schmelzpunkt 140 bis 141 °C.
Proton-NMR (bestimmt in Deuteromethanol), 5:
1,2 bis 1,9 (CH2x4), 2,23 (CH2), 3,20 (CH2).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"!:
3350, 3150, 2920, 1655, 1630, 1590, 1455, 1430, 1400, 1220, 1165, 1130, 1065.
Bezugsbeispiel 4 Synthese von 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid:
(a) Synthese von 8-Benzyloxycarbonylamino-3-keto-octansäure-ethylester:
Zu einer Lösung aus 6,56 g (50 mmol) 6-Aminohexansäure in 25 ml 2N-wässriger Natriumhydroxidlösung gibt man 5 ml Ethylether. Zu dem Gemisch gibt man unter Kühlen mit Eis und Rühren tropfenweise im Verlauf von 30 min 10 ml Benzyl-oxycarbonylchlorid und 37,5 ml 2N wässriger Natriumhxdro-xidlösung. Nach Zugabe wird die Temperatur auf Zimmertemperatur gebracht und dann wird 2 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zweimal mit 20 ml Ethylether gewaschen. Die wässrige Schicht wird mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure angesäuert und dreimal mit 50 ml Ethylacetat extrahiert. Die Extraktionslösungen werden vereinigt, mit gesättigter Salzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel durch Destillation befreit. Man erhält 12,16 g (92% Ausbeute) 6-Benzyloxycarbonylaminohexansäure, Fp 127 bis 128°C.
Eine Lösung aus 2,65 g (10 mmol) 6-Benzyloxycarbonyl-aminohexansäure und 1,62 g (10 mmol) im Handel erhältlichem l,l'-Carbonyldiimidazol in 25 ml wasserfreiem Tatrahydro-furan wird während 15 min bei Zimmertemperatur gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch gibt man eine Suspension aus 6,18 g (40 mmol) eines weissen Pulvers von Magnesiumenolat von Mo-noethylmalonat (hergestellt aus 5,28 g Monoethylmalonat und 972 mg Magnesium) in 50 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran. Das Gemisch wird 2 h bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Zugabe von 50 ml lN-Chlorwasserstoffsäure und Rühren während 10 min wird das Reaktionsgenisch dreimal mit 50 ml Chloroform extrahiert. Die Chloroformschicht wird nacheinander mit IN Chlorwasserstoffsäure, gesättigter wässriger Natriumhy-drogencarbonatlösung und gesättigter Salzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel durch Destillation befreit. Der Rückstand wird durch eine Säule aus 100 g Silicagel 60 (Merck and Co.) geleitet und mit Chloroform (20 g Fraktionsgrösse) eluiert. Die Fraktionen Nr. 43 bis 105 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,35 g (70% Ausbeute) Ethyl-8-benzyloxycarbonyl-amino-3-ketooctanoat.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuterochloroform), 6:
1,27 (CH3), 1,1 bis 1,9 (CH2x3), 2,52 (CH2), 3,17 (NCH2),
3,40 (CH2), 4,18 (CH2), 5,05 (NH), 5,09 (CH2), 7,32 (C6H5).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"':
3360, 2920, 1730, 1710, 1520, 1240.
(b) Synthese von 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid:
In 20 ml Ethanol löst man 2,01 g (6 mmol) Ethyl-8-benzyl-oxycarbonylamino-3-ketooctanoat, erhalten gemäss (a) oben. Zu der Lösung gibt man portionsweise unter Rühren bei Zimmertemperatur 227 mg (6 mmol) Natriumborhydrid. Das Gemisch wird 30 min gerührt, dann mit mehreren Tropfen Essigsäure vermischt, in 100 ml Wasser gegossen und dreimal mit 50 ml Chloroform extrahiert. Die Chloroformschichten werden vereinigt, nacheinander mit IN Chlorwasserstoffsäure, gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung und gesättigter Salzlösung gewaschen, dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel durch Destillation befreit. Man erhält 2,00 g (99% Ausbeute) Ethyl-8-benzyloxycarbonyl-amino-3-hydroxyoctanoat, Fp. 47 bis 50°C.
In 40 ml Methanol, welches mit gasförmigem Ammoniak gesättigt ist, löst man 1,69 g (5 mmol) Ethyl-8-benzyloxycarbo-nylamino-3-hydroxyoctanoat. Die Lösung wird 3 Tage bei Zimmertemperatur gerührt und das Reaktionsgemisch wird zur
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Trockene eingedampft. Der Rückstand wird aus Ethanol kristallisiert. Man erhält 1,18 g (72,5% Ausbeute) 8-Benzyloxycar-bonylamino-3-hydroxyoctanaraid, Fp. 100 bis 101 °C.
Zu einer Lösung aus 1,04 g (3,2 mmol) 8-Benzyloxycarbo-nyIamino-3-hydroxyoctanamid in 20 ml Methanol gibt man 3,2 ml IN Chlorwasserstoffsäure und 200 ml 10%ige Palladiumkohle. Das Gemisch wird unter Wasserstoffstrom bei Zimmertemperatur 3 h gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat wird zur Trockene eingedampft. Man erhält 670 mg 8-Amino-3-hydroxyoctanamid-hydrochlorid.
Zu einer Lösung aus 670 mg 8-Amino-3-hydroxyoctanamid-hydrochlorid in 8 ml IN wässriger Natriumhydroxydlösung gibt man 668 mg (2,4 mmol) S-Methylisothioharnstoffhemisulfat. Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit IN Chlorwasserstoffsäure auf einen pH-Wert von 6 eingestellt, zur Trockene eingedampft und in 5 ml IM Salzlösung gelöst. Die Lösung wird durch eine Säule aus 160 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co.) geleitet und die Säule wird nacheinander mit 400 ml IM Salzlösung, 400 ml 0,8M Salzlösung und 800 ml 0,6M Salzlösung (15 g Fraktionsgrösse) eluiert. Die Fraktionen Nr. 41 bis 87 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule aus 300 ml Sephadex LH-20 geleitet und dann wird mit Methanol eluiert, wodurch entsalzt wird (7 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 25 bis 35 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 687 mg (85% Ausbeute) 8-Guani-dino-3-hydroxyoctanamid-hydrochlorid.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), 5:
1,4 bis 1,8 (CH2x4), 2,36 (CH2), 3,20 (NCH2), 3,95 (CH).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"1:
3350, 3170, 2930, 1655, 1400, 1175.
Bezugsbeispiel 5
Synthese von 8-Guanidino-2-octenamid:
Auf ähnliche Weise wie bei der Synthese von 7-Guanidino--2-heptenamid beim Bezugsbeispiel 2 werden 218 mg (86% Ausbeute) 8-Guanidino-2-octenamid-hydrochlorid, Fp. 163 bis 165°C, aus 270 mg 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid-hydro-chlorid erhalten.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), 5:
1,4 bis 1,9 (CH2x3), 2,25 (CH2), 3,19 (NCH2), 5,94 (CH), 6,79 (CH).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"1:
3400, 3120, 2920, 1660, 1630, 1400.
Bezugsbeispiel 6
Synthese von 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid:
Auf ähnliche Weise, wie bei der Synthese von 8-Guanidino--3-hydroxyoctanamid beim Bezugsbeispiel 4 beschrieben, werden 892 mg 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid-hydrochlorid aus 2,56 g 7-Aminoheptansäure erhalten.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), 8:
1,2 bis 1,9 (CH2x5), 2,35 (CH2), 3,19 (NCH2), 3,92 (CH).
IR-Absorptionspektrum (KBr-Tablette), cm"1:
3350, 3180, 2940, 1660, 1400, 1175.
Bezugsbeispiel 7
Synthese von 9-Guanidino-2-nonenamid;
Auf ähnliche Weise, wie bei der Synthese von 7-Guanidino--2-heptenamid beim Bezugsbeispiel 2 beschrieben, werden 253 mg (75% Ausbeute) 9^Guanidinò-2-nonenamid-hydrochlorid.
aus 361 mg 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid-hydrochlorid erhalten. Fp 132 bis 135°C.
Proton-NMR-Spektrum (Deuteromethanol), 8:
1,2 bis 1,9 (CH2x4), 2,23 (CH2), 3,20 (NCH2), 5,97 (CH),
6,80 (CH).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm"1:
3350, 3175, 2940, 1660, 1620, 1420.
Bezugsbeispiel 8
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2--dihydrfixyethdnamid:
(a) Synthese von Mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butan-diamin:
Zu einer Lösung aus 1,76 g (20 mmol) 1,4-Butandiamin in 30 ml 50%igem wässrigem Methanol gibt man 5,48 g (20 mmol) Benzyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonat (Koku-san-kagaku Co.). Das Gemisch wird 3 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung des Niederschlags filtriert [2,08 g (29%) Di-N-benzyloxycarbonylverbindung werden aus dem Präzipitat erhalten]. Das Filtrat wird zur Trockene eingedampft, in 250 ml Chloroform gelöst und fünfmal mit 100 ml Wasser gewaschen. Die Chloroformschicht wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Man erhält 1,0 g (23% Ausbeute) Mono-N-benzyloxy-carbonyl-l,4-butandiamin, einen farblosen Sirup.
(b) Synthese von O-Toxyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-l--propanol:
Zu einer Lösung aus 1,5 g (20 mmol) 3-Amino-l-propanol in 30 ml Methanol gibt man 4,8 g (20 mmol) tert.-Butyl-S-4,6--dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonat. Das Gemisch wird 6 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, in 200 ml Chloroform gelöst und mit 200 ml Wasser gewaschen. Die Chloroformschicht wird konzentriert und der Säulenchromatographie unter Verwendung von 300 g Silicagel (Wakogel C-200) unterworfen. Es wird ein Toluol-Ethylacetat (1:1, ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als EntwicklüngslÖ-sungsmittel (15 ml Fraktionsgrösse) verwendet. Die Fraktionen Nr. 82 bis 151 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,95 g (84% Ausbeute) 3-tert.-Butyloxycarbonyl-amino-l-propanol, eine farblose ölige Substanz.
Zu einer Lösung aus 2,95 g (16,9 mmol) 3-tert.-Butoxycar-bonylamino-l-propanol in 50 ml Pyridin gibt man unter Eiskühlung und unter Argonatmosphäre tropfenweise im Verlauf von 40 min eine Pyridmlösung, die 3,36 g (17,7 mmol) p-Toluolsulfonylchlorid enthält. Das Gemisch wird über Nacht bei 7°C stehen gelassen, mit einem geringen Volumen an Wasser vermischt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 200 ml Chloroform gelöst, nacheinander mit 5%iger wässriger Kaliumhydrogensulfatlösung, gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird der Säulenchromatographie unter Verwendung von 120 g Silicagel (Wakogel C-200) und einem Toluol-Ethylacetat (8:1, ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklüngsmittel Unterworfen (15 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 35 bis 68 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 3,06 g (55% Ausbeute) O-Tosyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-l-propanoI, eine farblose ölige Substanz.
(c) Synthese von N-tert.-Butoxycarbonyl-N-(tert.-butOxy-carbonylaminopropyl)-l,4-butandiamin:
. In 15 ml N,N-Dimethylformamid löst-man 800 mg (2,43 . ;
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(2,43 mmol) O-Tosyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-l-propanol, erhalten gemäss (b) oben. Nach Zugabe von 510 mg (4,8 mmol) Lithiumbromid (LiBr . H2O) wird das Gemisch bei Zimmertemperatur 24 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch, welches die Bromverbindung enthält, gibt man 540 mg (2,43 mmol) Mono-N-benzyloxycarbonyl-l,4-butandiamin, erhalten gemäss (a) oben, und 0,34 ml Triethylamin. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 43 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch gibt man 699 mg (2,9 mmol) tert.-Butyl-S-4,6-dimethylpyrimid--2-ylthiocarbonat. Das Gemisch wird 13 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, in 100 ml Chloroform gelöst, mit 50 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird der Säulenchromatographie unter Verwendung von 200 g Silicagel (Wakogel C-200) und einem Toluol-Ethylacetat (4:1, ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklungsmittel unterworfen (12 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 134 bis 165 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 608 mg (52% Ausbeute) N-Benzyloxycarbonyl-N'-tert.-butoxycarbonyl--N'-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl)-l ,4-butandiamin, eine farblose sirupartige Substanz.
Zu einer Lösung aus 144 mg (0,3 mmol) der obigen sirupartigen Substanz in 5 ml Methanol gibt man 100 mg 5% Palla-dium-Bariumcarbonat. Das Gemisch wird unter einem Wasserstoffstrom bei Zimmertemperatur 5 h gerührt. Nach der Entfernung des Katalysators durch Filtration wird das Filtrat zur Trockene eingedampft. Man erhält 103 mg (100% Ausbeute) N-tert.-Butoxycarbonyl-N'-(tert.-butoxycarbonylaminopropyI)--1,4-butandiamin.
(d) Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2--dihydroxyethanamid:
In 2 ml Ethylacetat löst man 100 mg (0,29 mmol) N-tert.--Butoxycarbonyl-N-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl)-l,4--butandiamin, erhalten gemäss (c) oben, und 148 mg (1 mmol) 2,2-Diethoxyessigsäure. Zu der entsprechenden Lösung gibt man 135 mg (1 mmol) 1-Hydroxybenzotriazol und 206 mg (1 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 15 h gerührt. Der Niederschlag wird abfiltriert und mit kaltem Ethylacetat gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen werden vereinigt und mit IM wässrigem Ammoniak und dann mit Wasser gewaschen. Die Ethylacetat-schicht wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird der Säulenchromatographie unter Verwendung einer Säule aus 20 g Silicagel (Wakogel C-200) und einem Toluol-Ethylacetat (1:2, ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklungslösungsmittel unterworfen (3 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 14 bis 21 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 109 mg (79% Ausbeute) N-
[4-(3-tert.-Butoxycarbonyl-aminopropyl)-4-tert.-butoxycarbonyl aminobutyl]-2,2-diethoxyethanamid, eine farblose sirupartige Substanz.
Zu einer Lösung von 44 mg (0,13 mmol) der obigen sirupartigen Substanz in 1 ml Dioxan gibt man 2,5 ml 0,1 N Chlorwasserstoffsäure. Das Gemisch wird in einem Ölbad bei 100°C während 4 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit 0,2N wässriger Natriumhydroxidlösung auf einen pH-Wert von 6 neutralisiert und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird mit 1,5 ml Methanol extrahiert und die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 16,5 mm), die mit 100 ml Sephadex LH-20 bepackt wird, geleitet. Es wird mit Methanol entwickelt (2 ml Fraktionsgrösse). Die Fraktionen Nr. 22 bis 25, die bei der Ninhydrinreaktion positiv sind, werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 13 mg (46% Ausbeute) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxy-ethanamiddihydrochlorid, eine farblose sirupartige Substanz.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(4-guani-dinobutanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 360 mg (2 mmol) 4-Guanidinobutanamid-hydrochlorid, 701 mg (2,4 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 264 mg (2 mmol) Glutarsäure und 0,36 ml Wasser wird bei 60°C 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und dann wird das Reaktionsgemisch durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt war, geleitet und gemäss Gradienteneluierung mit 1,5 1 Wasser und 1,5 1 0,8M wässriger Natriumchloridlösung (15 ml Fraktionsgrösse) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 125 bis 137, di einer Natriumchloridkonzentration von 0,48 bis 0,56M entsprechen, werden vereinigt, dann konzentriert und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und dann wird mit Methanol (7 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 9 bis 15 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 318 mg (35% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(4-guanidinobutanamido)-2-hydroxyethanamid-trihy-drochlorid.
Beispiel 2
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(5--guanidinopentanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 92,4 mg (0,48 mmol) 5-Guanidinopentan-amid-hydrochlorid, 166,5 mg (0,57 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethyanamid-dihydrochlorid, 62,8 mg (0,48 mmol) Glutarsäure und 0,1 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, welches dann auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt wird. Man erhält 82,5 mg (37,1% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(5-guanidinopentanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 3
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(6-guani-dinohexanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 446 mg (2,14 mmol) 6-Guanidinohexan-amid-hydrochlorid, 750 mg (2,57 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 283 mg (2,14 mmol) Glutarsäure und 0,45 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das Reaktionsgemisch wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man "erhält 459 mg (44% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(6-guanidinohexanamido)-2-hydroxyethanamid-trihy-drochlorid.
Beispiel 4
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guani-dinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 360 mg (1,62 mmol) 7-Guanidinoheptan-amid-hydrochlorid, 568 mg (1,94 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 214 mg (1,62 mmol) Glutarsäure und 0,36 ml Wasser wird bei 60°C
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während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und das entstehende Gemisch wird auf ähnliche Wesie, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 317 mg (39% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethan-amid-trihydrochlorid.
Beispiel 5
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]^2-(8--guanidinooctanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 500 mg (2,11 mmol) 8-Guanidinooctan-amid-hydrochlorid, 740 mg (2,53 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 335 mg (2,53 mmol) Glutarsäure und 0,34 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das entstehende Gemisch wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 526 mg (49% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(8-guanidinooctanamido)-2-hydroxyethanamid-trihy-drochlorid.
Beispiel 6
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9--guanidinononanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 316 mg (1,26 mmol) 9-Guanidinononan-amid-hydrochlorid, 442 mg (1,51 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 166 mg (1,26 mmol) Glutarsäure und 0,01 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das Gemisch wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 324 mg (49% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-AminopropyI)-aminobutyl]-2-(9--guanidinononanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 7
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(4--guanidinobutanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 45,5 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(4-guanidinobutanamido)-2-hydroxy-ethanamid-trihydrochlorid in 1 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,1 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 17 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und in 3 ml Wasser gelöst. Die entstehende Lösung wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml CM-Sephadex C-25 bepackt war, geleitet und durch Gradienteneluierung mit je 1 1 Wasser und IM wässriger Natriumchloridlösung (17 ml Fraktionsgrösse) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 67 bis 71, die der Salzkonzentration von 0,63 bis 0,67M entsprechen, werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und dann wird mit Methanol (7 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 10 bis 14 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 31,4 mg (67% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopro-pyl)-aminobutyl]-2-(4-guanidinobutanamido)-2-methoxyethan-amid-trihydrochlorid.
Beispiel 8
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(6--guanidinohexanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 177 mg (0,37 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(6-guanidinohexanamido)-2-hydroxy-ethanamid-trihydrochlorid in 3,6 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,36 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 17 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weisse Pulver wird in ähnlicher Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 110 mg (60% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(6-guanidinohexanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 9
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7--guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 920 mg (1,85 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxy-ethanamid-trihydrochlorid in 20 ml wasserfreiem Methanol gibt man 2 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 15 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weisse Pulver wird in 15 ml Wasser gelöst. Der pH-Wert der wässrigen Lösung wird mit IN wässriger Natriumhydroxydlösung auf 6 eingestellt, dann wird die Lösung durch eine Säule (Innendurchmesser 25 mm), die mit 300 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt war, geleitet und gemäss Gradienteneluierung mit je 21 Wasser und IM wässriger Natriumchloridlösung (17 ml Fraktionsgrösse) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 138 bis 152, die einer Natriumchloridkonzentration von 0,59 bis 0,65M entsprechen, werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und zweimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 25 mm), die mit 300 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und dann mit Methanol (7 ml Fraktionsgrösse) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 18 bis 32 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 607 mg (64% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2--methoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 10
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(8--guanidinooctanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung von 220 mg (0,43 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(8-guanidinooctanamido)-2-hydroxy-ethanamid-trihydrochlorid in 4,4 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,44 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur grührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weisse Pulver wird auf ähnliche Weise, wie im Beipiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 195 mg (86% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-AminopropyI)--aminobutyl]-2-(8-guanidinooctanamido)-2-methoxyethanamid--trihydrochlorid.
Beispiel 11
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9--guanidinononanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung von 160 mg (0,31 mmol) N-[4-(3-Amino-propyI)-aminobutyl]-2-(9-guanidinononanamido)-2-hydroxy-
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ethanamid-trihydrochlorid in 3,2 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,32 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatugerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weisse Pulver wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 107 mg (65% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(9-guanidinononanamido)-2-methoxyethan-amid-trihydrochlorid.
Beispiel 12
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7--guanidinoheptanamido)-2-ethoxyethanamid:
Zu 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]--2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydro-chlorid gibt man 10 ml wasserfreien Ethanol und 1 ml wasserfreien Ethanol, gesättigt mit gasförmigem Hydrogenchlorid. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 24 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien filtriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck konzentriert. Das entstehende weisse Pulver wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 71 mg (68% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4--(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2--ethoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 13
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7--guanidinoheptanamido)-2-butoxyethanamid:
Zu 100 mg (0,2 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2--(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlo-rid gibt man 10 ml n-ButanoI und 1 ml n-Butanol, gesättigt mit gasförmigem Hydrogenchlorid. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 2 Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien filtriert und das Filtrat (n-Butanollösung) wird dreimal mit 5 ml Wasser extrahiert. Die wässrige Schicht wird mit Amberlite IR-410 neutralisiert und bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 15 mg (13,5% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-heptanamido)-2-butoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 14
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-
-guanidinoheptanamido)-2-(2-hydroxy)-ethoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxy-ethanamid-trihydrochlorid in 5 ml Ethylenglykol gibt man 0,5 ml Ethylenglykol, gesättigt mit gasförmigem Chlorwasserstoff . Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Zugabe von 25 ml Wasser wird der pH-Wert des Reaktionsgemisches mit IN. wässriger Natriumhydroxidlösung auf 6 eingestellt und dann wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 63 mg (58% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobütyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-(2-hydroxy)-eth-oxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 15
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7--guanidinoheptanamido)-2-benzyloxyethanamid:
Zu 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]--2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydro-chlorid gibt man 10 ml Benzylalkohol und 1 ml Benzylalkohol, gesättigt mit gasförmigem Chlorwasserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 18 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien filtriert und die Benzylalkoholschicht wird dreimal mit 5 ml Wasser extrahiert. Die wässrige Schicht wird mit Amberlite IR-410 neutralisiert, zur Trockene eingedampft und auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 61 mg (52% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4--(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2--benzyloxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 16
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7--guanidino-2-heptenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 234,5 mg (1,06 mmol) 7-Guanidino-2-hep-tenamid-hydrochlorid, 372,3 mg (1,27 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl] -2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 140,4 mg (1,06 mmol) Glutarsäure und 0,2 ml Wasser wird bei 60°C 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 244,6 mg (46,5% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-amino-butyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-hydroxyethanamid-tri-hydrochlorid.
Beispiel 17
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(8--guanidino-2-octenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 202,4 mg (0,86 mmol) 8-Guanidino-2--octenamid-hydrochlorid, 302,4 mg (1,04 mmol) N-[4-(3-Ami-nopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlo-rid, 113,9 mg (0,86 mmol) Glutarsäure und 0,2 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 128,3 mg (29,2% Ausbeute) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(8--guanidino-2-octenamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochIo-rid.
Beispiel 18
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9--guanidino-2-nonenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 206,2 mg (0,84 mmol) 9-Guanidino-2--nonenamid-hydrochlorid, 291,0 mg (1,00 mmol) N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydro-chlorid, 109,6 mg (0,84 mmol) Glutarsäure und 0,2 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel .1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 135,0 mg (31,1% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidino-2-nonenamido)-2--hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
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Beispiel 19
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7--guanidino~2-heptenamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 50,3 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-Amino-propyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-hy-droxyethanamid-trihydrochlorid in 1 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,1 ml 2N Chlorwasserstoff-Methanol. Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt und das Reaktionsgemisch wird unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 37,2 mg (72,4% Ausbeute) von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-2--heptenamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 20
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(8-
-guanidino-3-hydroxyoctanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 150 mg (0,59 mmol) 8-Guanidino-3-hy-droxyoctanamid-hydrochlorid, 208 mg (0,71 mmol) N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 78 mg (0,59 mmol) Glutarsäure und 0,1 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 120,7 mg (38,6% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyI]-2-(8-guanidino-3-hydroxy-octanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 21
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-
-guanidino-3-hydroxynonanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 325,8 mg (1,23 mmol) 9-Guanidino-3-hy-droxynonanamid-hydrochlorid, 428,1 mg (1,47 mmol) N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydro-chlorid, 161,4 mg (1,23 mmol) Glutarsäure und 0,3 ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 220,8 mg (33,4% Ausbeute) eines weissen Pulvers von N-[4-(3--Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidino-3-hydroxynonan-amido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 22 Synthese von 11-O-Methylspergualin:
Zu einer Lösung aus 1,8 g (3,51 mmol) (—)-Spergualintri-hydrochlorid in 31 ml wasserfreiem Methanol gibt man 3,5 ml 2N Chlorwasserstoff-Methanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 15 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft und dann in 30 ml Wasser gelöst, durch eine Säule von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ; 600 ml) geleitet und gemäss Gradienteneluierung mit je 3 l Wasser und IM wässriger Natriumchloridlösung (Fraktionsgrösse 17 g) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 208 bis 230 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule von Sephadex LH-20 (300 ml) geleitet und mit Methanol eluiert, um eine Entsalzung zu bewirken (Fraktionsgrösse 7 g). Die Fraktionen Nr. 19 bis 33 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 1,528 g (82% Ausbeute) eines weissen Pulvers von 11--O-Methylspergualintrihydrochlorid.
Für die Trennung von 11-O-Methylspergualintrihydro-
chlorid in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC mit einer Säule von 2 cm 0 x 25 cm, bepackt mit Nucleosil 30Ci8, ein Umkehrphasen-Packungsmaterial von M. Nagel Co., und die folgenden Bedingungen:
Strömungsgeschwindigkeit: 10 ml/min Druck: 30 kg/cm2
Lösungsmittel: Acetonitril-[0,01M Natriumpentan sulfonat + 0,01M Na2HP04 (pH 3) = 9 : 91
Ladung: 6 mg
Nachweis: UV 205 nm
Bei HPLC tritt der UV-Absorptionspeak für (—)-ll-0--Methylspergualin (Retentionszeit 48,3 min) zuerst auf und dann folgt der für ( + )-l 1-O-Methylspergualin (Retentionszeit 56,5 min). Die Fraktionierung wird 12mal wiederholt. Die Fraktionen, die jedem Peak entsprechen, werden gesammelt und auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 32,9 mg eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-Methylspergualintrihydrochlorid und 24,5 mg eines weissen Pulvers von ( + )-ll-0-Methylspergualintrihydro-chlorid.
Beispiel 23 Synthese von 11-O-Ethylspergualin:
Zu 484 mg (0,94 mmol) Spergualindihydrochlorid [(-)-Spergualin : ( + )-Spergualin =1:1] gibt man 20 ml wasserfreien Ethanol und 2 ml 2N Chlorwasserstoff-Ethanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 2 Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, dann in 10 ml Wasser gelöst, der pH-Wert wird mit IN wässriger Natriumhydroxidlösung auf 4 eingestellt und dann wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 355,6 mg (70% Ausbeute) eines weissen Pulvers von 11 -O-Ethylspergualintrihydrochlorid.
Für die Trennung von 11-O-Ethylspergualintrihydrochlorid in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, ausgenommen, dass man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat + 0,01M Na2HP04 (pH 3)] (10,5 : 89,5) verwendet. Bei der wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 11 mg eines weissen Pulvers von (—)-l 1-O-Ethylspergualintrihydrochlorid und 14,5 mg eines weissen Pulvers von (+)-ll-0-Ethylspergualintri-hydrochlorid.
Beispiel 24 Synthese von 11-O-n-Butylspergualin:
Zu 493 mg (0,96 mmol) (—)-Spergualintrihydrochlorid gibt man 30 ml n-Butanol und 3 ml n-Butanol, gesättigt mit Chlorwasserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 2 Tage gerührt. Der in n-Butanol lösliche Teil des Reaktionsgemisches wird zur Trockene eingedampft, dann in 10 ml Wasser gelöst. Der pH-Wert wird mit IN wässriger Natriumhydroxid-lösung auf 4 eingestellt und dann wird mit CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, gereinigt, wobei man 114,7 mg (21% Ausbeute) eines weissen Pulvers von 11-O-n--Butyispergualintrihydrochlorid erhält.
Für die Trennung 11-O-n-Butylspergualintrihydrochlorid in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC im wesentlichen auf die gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, ausgenommen, dass man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat + Q,01M Na2HP04
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653 015
22
(pH 3)] (14,5 : 85,5) verwendet. Bei der wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 15 mg eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-n-Butylspergualintrihydrochlorid und 16 mg eines weissen Pulvers von ( + )-ll-0-n-Butylspergualin-trihydrochlorid.
Beispiel 25
Synthese von ll-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualin:
Zu einer Lösung aus 2,88 g (5,61 mmol) (—)-Spergualin-trihydrochlorid in 100 ml Ethylenglykol gibt man 10 ml Ethylenglykol, gesättigt mit Chlorwasserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur während 24 h gerührt. Nach Zugabe von 200 ml Wasser wird der pH-Wert des Reaktionsgemisches mit IN wässriger Natriumhydroxidlösung auf 4 eingestellt und dann wird mit CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, gereinigt. Man erhält 2,7 g (73% Ausbeute) eines weissen Pulvers von ll-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualintrihydrochlorid.
Für die Abtrennung von 1 l-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualin-trihydrochlorid in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC, wie im Beispiel 22 beschrieben, ausgenommen, dass das Lösungsmittel und die Beladung wie folgt sind:
Lösungsmittel: Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat +
0,OlM Na2HP04 (pH 3)] (7 : 93)
Beladung: 20 mg.
Bei der wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 2,3 mg eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-(2--Hydroxy)-ethylspergualintrihydrochlorid und 2,5 mg eines weissen Pulvers von (+)-ll-0-(2-Hydroxy)-ethyIspergualin-trihydrochlorid.
Beispiel 26 Synthese von 11-O-Benzylspergualin:
Zu 2,36 g (4,60 mmol) (—)-Spergualintrihydrochlorid gibt man 90 ml Benzylalkohol und 9 ml Benzylakohol, gesättigt mit Chlorwasserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit 350 ml Wasser extrahiert und der pH-Wert der wässrigen Schicht wird mit IN wässriger Natriumhydroxidlösung auf 6,0 eingestellt und dann wird zur Trockene konzentriert. Der Rückstand wird in 20 ml IM, wässriger Natriumchloridlösung gelöst und dann wird durch eine Säule aus 500 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co.) geleitet und nacheinander mit je 1,5 / 0,6M Salzlösung, 0,4M Salzlösung und Wasser eluiert. Der Teil, der mit Wasser eluiert wird, wird zur Trockene eingedampft und mit Sephadex LH-20, wie im Beispiel 1 beschrieben, entsalzt. Man erhält 1,92 g (69% Ausbeute) eines weissen Pulvers von ll-O--Benzylspergualintrihydrochlorid.
Für die Abtrennung von 11-O-Benzylspergualintrihydro-chlorid in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC. Die HPLC wird auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, ausgeführt, ausgenommen, dass man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat + 0,01M Na2HPC>4 (pH 3)] (16 : 84) verwendet. Bei der wiederholten Fraktionierung, neunmal insgesamt, erhält man 21,2 mg eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-Benzylspergualintrihydro-chlorid und 18,8 mg eines weissen Pulvers von ( + )-ll-0-Ben-zylspergualintrihydrochlorid.
Beispiel 27 Synthese von (-)-l 1-O-Methylspergualin:
(a) (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualin:
Zu einer Lösung aus 2,3 g (4,48 mmol) (—)-Spergualintri-
hydrochlorid in einem Gemisch aus 11 ml N,N-Dimethylform-amid und 11 ml Wasser gibt man unter Eiskühlen 1,25 ml (8,96 mmol) Triethylamin und anschliessend eine Lösung aus 2,24 g (8,97 mmol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid in 11 ml N,N-Dimethylformamid. Das Gemisch wird 15 h bei 5°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert, in 10 ml 0,5M wässriger Natriumchloridlösung gelöst, dann durch eine Säule aus Diaion HP-20 (400 ml), die mit 0,5M wässriger Natriumchloridlösung equilibriert ist, geleitet. Es wird mit 1 / 0,5M Salzlösung und dann mit 1 l Wasser gewaschen und mit Methanol eluiert (Fraktionsgrösse 15 g). Die Fraktionen Nr. 21 bis 30 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 287 mg (82% Ausbeute) eines weissen Pulvers von (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-sperguaIin-hydrochlorid, [aß1—11° (Cl, Wasser).
Proton-NMR (in Deuteromethanol), ô: 1,3 bis 2,0 (CH2X6),
2,38 (CH2), 2;9 bis 3,4 (NCH2x5), 4,0 (CH), 5,04 (CH2),
5,07 (CH2), 5,56 (CH), 7,30 (C6H5 X 2).
(b) (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-l 1-O-methylsper-gualin:
Zu einer Lösung aus 78 mg (0,484 mmol) des obigen (—)--l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorids in 12 ml Methylenchlorid gibt man unter Eiskühlen 2,44 ml (0,484 mmol) einer Lösung aus 0,1 ml Bortrifluorid/Ether-Komplex in 4 ml Methylenchlorid. Zu dem Gemisch gibt man portionsweise 9 ml (1 ml in Zeitintervallen von 30 min bis 1 h) einer Lösung aus Diazomethan in Methylenchlorid. Die Diazomethanlösung wird hergestellt, indem man allmählich 10 g N-Nitrosomethylharnstoff zu einem Gemisch aus 30 ml einer 40%igen Kaliumhydroxidlösung und 100 ml Methylenchlorid unter Kühlen bei 40°C in Wasser zugibt, die organische Schicht abtrennt und die wässrige Schicht mit 10 ml Methylenchlorid extrahiert, die organischen Schichten vereinigt und über granulärem Kaliumhydroxid bei 5°C während 3 h trocknet. Nach 3,5 h vom Beginn der Reaktion unterbricht man das Rühren. Nach Zugabe von mehreren Tropfen verdünnter Essigsäure wird das Reaktionsgemisch bei verringertem Druck konzentriert und dann in 3 ml 50%igem wässrigen Methanol gelöst und durch eine Säule aus Diaion HP-20 (100 ml), die mit 300 ml 10%igem wässrigen Methanol gewaschen wird, geleitet und dann wird mit Methanol eluiert (Fraktionsgrösse 15 ml). Die Fraktionen Nr. 25 bis 28 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 262,4 mg eines weissen Pulvers aus einem Gemisch von (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-ll-0-methylspergualin-hydrochlorid und nicht-umgesetztem (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxy-carbonyl)-spergualinhydrochlorid (Wiedergewinnung 69,2 Gew.-%). Die Zusammensetzung dieses Gemisches wird durch HPLC an einer Säule aus Nucleosil 5Cis (4,0 x 150 mm) bestimmt, wobei mit einem Gemisch aus Acetonitril und 0,1M . (NH4)2HPC>4 (1 : 1) bei einer Strömungsrate von 0,8 ml/min eluiert wird. Man stellt fest, dass das Verhältnis zwischen (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-ll-0-methylspergualin-hydrochlorid (Retentionszeit 10,47 min) und (—)-l-N,4-Bis--(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid (Retentionszeit 7,74 min) 47 : 50 beträgt.
Das obige Gemisch (78,5 mg) wird durch eine Säule aus 30 ml Silicagel 60 (Merck Co.) geleitet und mit 10%igem Me-thanol-Chloroform-Gemisch eluiert. Das Eluat wird durch HPLC gereinigt, wobei man die gleichen Bedingungen, wie oben beschrieben, verwendet. Die Fraktionen, die eine UV-Absorption bei 220 nm bei einer Retentionszeit von 10,47 min zeigen, werden gesammelt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 28,6 mg eines weissen Pulvers von (—)-l-N,4-Bis-(ben-zyloxycarbonyl)-l 1-O-methylspergualinhydrochlorid. [aß5 —14,4° (Cl, Methanol).
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Proton-NMR (in Deuteromethanol), ô: 1,3 bis 2,0 (CH2X6),
2,42 (CHz), 2,9 bis 3,4 (NCH2x5), 3,37 (OCH3), 4,0 (CH),
5,03 (CH2), 5,08 (CH2), 5,34 (CH), 7,29 (C6H5x2).
(c) (—)-l 1-O-Methylspergualin:
In einem Gemisch aus 5 ml Ethanol, 5 ml Wasser und 0,36 ml lN-Chlorwasserstoffsäure löst man 130 mg des obigen Gemisches (47 : 50) aus (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-ll--O-methylspergualinhydrochlorid und (—)-l-N,4-Bis-(benzyl-oxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid. Nach Zugabe von 50 mg 10% Palladkium-Kohlenstoff zu der Lösung wird das Gemisch bei einem Wasserstoffstrom während 4 h bei Zimmertemperatur gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat wird zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 3 ml Wasser gelöst, durch eine Säule aus 150 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) geleitet und durch Gradienteneluierung mit je 900 ml Wasser und IM wässriger Natriumchloridlösung (Fraktionsgrösse 17 g) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 76 bis 81 werden vereinigt und, wie im Beispiel 22 beschrieben, unter Verwendung von Sephadex LH-20 entsalzt. Man erhält 25,4 mg (51% Ausbeute) eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-Methylspergua-lintrihydrochlorid, [aß5—27,1° (Cl, Wasser).
Die Fraktionen Nr. 83 bis 86 des Eluats aus der CM-Sepha-dex-Säule werden auf ähnliche Weise entsalzt, wobei man 24,5 mg (52% Wiedergewinnung) eines weissen Pulvers von (—)-Spergualintrihydrochlorid erhält.
Beispiel 28 Synthese von (-)-Il-O-Ethylspergualin:
Auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 27(b) beschrieben, wird eine Methylenchloridlösung aus Diazoethan mit 352 mg (0,451 mmol) (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydro-chlorid, erhalten gemäss Beispiel 27(a), umgesetzt, wobei man 217,0 mg eines Gemisches aus (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbo-nyl)-l 1-O-ethylspergualinhydrochlorid und nicht-umgesetztem (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid erhält. Das Gemisch wird im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 27(c) beschrieben, behandelt, wobei man 41,7 mg eines weissen Pulvers von (—)-ll-0-Ethylspergualintrihydro-chlorid in einer Gesamtausbeute von 17% erhält, [aß5—24,8° (Cl, Wasser).
Beispiel 29
Synthese von (—)-N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid:
(a) (—)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyl-
653 015
oxycarbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepten-amido)-2-methoxyethanamid:
In 1,2 ml N,N-Dimethylformamid löst man 134,8 mg (0,187 mmol) (—)-l-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-l 1-O-methylsper-gualinhydrochlorid, erhalten im Beispiel 27(b). Zu der Lösung gibt man 192,9 mg (0,935 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid und 5,6 mg Kupferchlorid (CuCl). Das Gemisch wird bei 70°C 3 h erhitzt. Nach dem Kühlen wird der Niederschlag abfiltriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 5 ml 30%igem wässrigen Methanol gelöst und dann wird der pH-Wert auf 7 eingestellt. Er wird durch eine Säule (80 ml) aus Diaion HP-20 geleitet, wobei mit 300 ml Wasser und dann mit 300 ml 10%igem wässrigen Methanol gewaschen und mit Methanol eluiert wird. Die Fraktionen, die gegenüber der Sakaguchi-Reaktion positiv sind, werden gesammelt und bei verringertem Druck konzentriert. Man erhält 114 mg rohes (—)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopropyl)-ben-zyloxy-carbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)--2-methoxyethanamid-hydrochlorid, welches ein Signal eines Olefinprotons bei 8 5,02 in dem Proton-NMR-Spektrum (in Deutero-methanol) zeigt.
(b) (—)-N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylj-2-(7-guani-dinoheptanamido)-2-methoxyethanamid:
In einem Gemisch aus je 5 ml Methanol und Wasser löst man 114 mg rohes (—)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopro-pyl)-benzyloxycarbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepten-amido)-2-methoxyethanamid-hydrochlorid, erhalten gemäss (a) oben. Zu der entstehenden Lösung gibt man 0,32 ml IN Chlorwasserstoffsäure und 50 mg 10% Palladium-Kohlenstoff. Das Gemisch wird bei einem Wasserstoffstrom während 1,5 h bei Zimmertemperatur gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch eine Säule aus 100 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) geleitet und gemäss Gradienteneluierung mit je 500 ml Wasser und IM wässriger Natriumchloridlösung (Fraktionsgrösse 10 g) fraktioniert.
Die Fraktionen Nr. 69 bis 74 werden vereinigt, bei verringertem Druck konzentriert und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (150 ml) aus Sephadex LH-20 geleitet und mit Methanol zum Entsalzen (Fraktionsgrösse 5 g) eluiert. Die Fraktionen Nr. 16 bis 21 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 17,4 mg eines weissen Pulvers von (—)-N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethan-amid-trihydrochlorid. Gesamtausbeute 16,7%, [aß5—30,4° (Cl, Wasser).
23
5
10
15
20
25
30
35
40
45
V

Claims (11)

  1. 653 015
    2
    PATENTANSPRÜCHE 1. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(co-guanidino-fett-säure-amido)-2-substituierte Ethanamide der allgemeinen Formel
    H2NCNH(CH2)n-Y-CONHCHCONHCCH2)^HtCHj)3NH2
    NH
    T
    OR
    (I)
    HO
    HO
    ^>CHCONH CCH2) 4NHCCH2 ) 3NH2
    (Iii)
    dargestellt wird kondensiert.
  2. 11. Verfahren zur Herstellung von N-[4-(3-Aminopropyl)--aminobutyl]-2-(co-guanidino-fettsäure-amido)-2-alkoxy-ethan-amid der allgemeinen Formel worin Y -CH2CH2-, -CH = CH- oder -CH-CH2- bedeutet,
    OH
    H2NC (CH2) n-ï-CONHCHCONH (CH2 ) ^NH (CH2) 3NH2 (Ib)
    NH
    OR'
    R ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthal- worin Y -CH2CH2-, -CH = CH- oder -CH-CH2 bedeutet, R' ten kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und n eine ganze 15 |
    Zahl von 1 bis 8 bedeutet, vorausgesetzt, dass, wenn Y -CH-CH2
    OH
    bedeutet und n 4 bedeutet, R für die Gruppen steht, die anders sind als ein Wasserstoffatom, oder ein Salz davon.
  3. 2. Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthalten kann, bedeutet und n eine ganze Zahl von 4 bis 6 bedeutet.
  4. 3. Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und n eine ganze Zahl von 4 oder 6 bedeuten.
  5. 4. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-hep-tanamido)-2-methoxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  6. 5. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-2--heptanamido)-2-methoxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  7. 6. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidmo-3--hydroxyheptanamido)-2-methoxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  8. 7. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidino--nonanamido)-2-methoxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  9. 8. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-hep-tanamido)-2-hydroxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  10. 9. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidino--nonanamido)-2-hydroxyethanamid oder ein Salz davon, nach Anspruch 3.
  11. 10. Verfahren zur Herstellung von N-[4-(3-aminopropyl)--aminobutyl]-2-(co-guanidino-fettsäure-amido)-2-hydroxy-ethanamid der allgemeinen Formel
    OH
    eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthalten kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und n eine ganze Zahl von 1 bis 8 bedeutet, oder einem Salz davon, dadurch gekennzeichnet, dass man N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(ü)-guanidino-fettsäure--amido)-2-hydroxyethanamid, welches durch die allgemeine Formel
    H2NCNH (CH21 n-Y-CONHÇHCONH(CHj) ^NH tCH2) gNI^(Ia)
    H-NÇNH (CH„.) ■
    M * "
    NH
    -Ï—CONHCHCONH CCH2 } ^NRtC^} 3NH2 (Ia) OH
    H,NCNH(CH0i -Y-CONH 0 ii j. n i
    (Ii)
    NH
    dargestellt wird, worin Y und n die zuvor angegebenen Bedeutungen besitzen, mit N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2--dihydroxyethanamid, das durch die allgemeine Formel
    NH
    OH
    30
    dargestellt wird, worin Y und n die oben gegebenen Bedeutungen besitzen, oder ein Salz davon entweder direkt oder nach dem Schutz der Amino- und Iminogruppen, mit einem ein-oder zweiwertigen aliphatischen Alkohol mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, einem Diazoparaffin mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder einem Benzylalkohol umsetzt und die gegebenenfalls vorhandenen Schutzgruppen entfernt.
CH5895/82A 1981-10-08 1982-10-07 N-(4-(3-aminopropyl)-aminobutyl)-2-(omega-guanidino-fettsaeure-amido)-2-substituierte ethanamide, ihre salze und verfahren zu ihrer herstellung. CH653015A5 (de)

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