DE3236725A1 - N-(4-(3-aminopropyl)-aminobutyl)-2-(w-guanidino-fettsaeure-amido)-2-substituierte ethanamide, ihre salze und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents
N-(4-(3-aminopropyl)-aminobutyl)-2-(w-guanidino-fettsaeure-amido)-2-substituierte ethanamide, ihre salze und verfahren zu ihrer herstellungInfo
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Description
Die Erfindung betrifft neue N-[4-(3-aminopropyl)-aminobutyl]-2-(u>
-guanidino-fettsäure-amido)-2-substituierte Ethanamide, die als karzinostatische Mittel nützlich sind
und die durch die allgemeine Formel:
H9NCNH(CH-) -Y-CONHCHCONH(CH ) NH(CH ) NH (I)
NH OR
dargestellt werden, worin Y -CHp-CHp-, -CH=CH- oder
-CH-CHp- bedeutet, R ein Wasserstoffatom, eine Alkyl-OH
gruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe
bedeutet und η eine ganze Zahl von 1 bis 8 bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn Y -CH-CH0- und η 4
OH bedeuten, R eine andere Bedeutung als ein Wasserstoffatom
aufweist, ihre Salze und ein Verfahren zu ihrer Herstellung.
Während systematischer Untersuchungen von karzinostatisehen Mitteln hat die Anmelderin ein neues karzinostatisches
Antibiotikum BMGi62-aF2 gefunden, welches als Spergualin
bezeichnet wurde und welches ein Kulturfiltrat eines Stammes BMGi62-aF2 (FERI-I P-5230 ATCC 31932) von
Bacillus laterosporus, der zu dem Genus Bacillus gehört, (Journal of Antibiotics, Band 34, Seite 1619 und Seite
1622 (1981)) ist. Die chemische Struktur von Spergualin wird durch die Formel:
IS
19* 18 17 16 (S) li» 13 1211 10 98 76 5*3 2 1
H NCNHCH CH CH CH CHCH CONHCHCONHCH CH CH CH NHCH CH CH NH
NH OH OH
dargestellt. Die Konfiguration an der 15-Stellung ist S,
während sie an der 11-Stellung noch nicht bestimmt wurde (Journal of Antibiotics, Band 34, Seite 1622 (1981)). Die
Verbindung dieser Formel wird durch Kondensation eines Säureamids und Glyoxylylspermidin synthetisiert. Die entstehende
epimere Verbindung wird in natürliches (-)-Spergualin und nicht-natürliches (+)-öpergualin gespalten
(Journal of Antibiotics, Band 34, Seite 1625 (1931)).
Die Anmelderin hat weitere Verbindung, die dem Spergualin
verwandt sind, untersucht. Es wurde jedoch gefunden, daß die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel (I) dargestellt
werden, eine überraschende karzinostatische Aktivität
aufweisen und insbesondere, wenn R eine andere Gruppe als ein Wasserstoffatorn bedeutet, sind die Verbindungen
sehr stabil.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden wie folgt hergestellt.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R ein
Wasserstoffatom bedeutet, werden durch Kondensation eines
u-Guanidino-fettsäureamids der allgemeinen Formel:
H0NCNH(CH0) -Y-CONH- (II)
Z it Z. Xl
£.
-NH
worin Y und η die oben gegebenen Definitionen besitzen,
und N- [4- (3-Aminopropyl) -aminobutyl J-2, 2>-dihydroxyethanamid
der allgemeinen Formel:
HO .w
"^> CHCONH (CH2J4NH CCH2I3NH2 (III)
35 H0
hergestellt. Wenn R in der allgemeinen Formel (I) eine
andere Gruppe als ein Wasserstoffatom bedeutet, v/erden die
erfindungsgemäßen Verbindungen synthetisiert, indem man die Verbindung, die man bei der obigen Kondensation erhält,
oder Spergualin, welches man aus dem Mikrobenkulturfiltrat
erhält, wobei in den Verbindungen oder in Spergualin gegebenenfalls die Amino- und Iminogruppen geschützt
wurden, mit einem aliphatischen Mono- oder Dialkohol
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, einem Diazoparaffin mit 1 bis k Kohlenstoffatomen oder Benzylalkohol umsetzt
und gegebenenfalls die Schutzgruppen der Amino- und Iminogruppen,
sofern diese vorhanden sind, entfernt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden im allgemeinen in Form ihrer pharmakologisch annehmbaren Säureadditionssalze
verwendet. Als Beispiele für die Säureadditionssalze können die Salze mit anorganischen Säuren, wie
Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und
Borsäure, und die Salze mit organischen Säuren, wie Essigsäure, Zitronensäure, Weinsäure und Glutarsäure, er-
20 wähnt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden durch die allgemeine
Formel:
15 -V* 13 12 11 10 9 B-S "» 3-1
H2NCNH (CH2) ^Y-CONHCHCONH CCH2 )4NH CCH2 )3NH2 (I)
H OR
dargestellt, worin Y, R und η die oben gegebenen Bedeutungen besitzen. Jede der erfindungsgemäßen Verbindungen besitzt
ein asymmetrisches Kohlenstoffatom an der 11-Stellung und liegt somit in Form der Epimeren, bezogen auf
das 11-Kohlenstoffatom, vor, d.h. in Form des linksdrehenden
Epimeren (welches im folgenden als (-) bezeichnet wird) und in Form des rechts-drehenden Epimeren (welches
im folgenden als (+) bezeichnet wird). Sofern nichts anderes angegeben, liegt die erfindungsgemäße Verbindung
--ET-S-
als Gemisch (ungefähr 1:1) eines Paares der Epimeren
vor (gegebenenfalls als (-) bezeichnet).
15 14
Wenn Y -CPI-CH2 bedeutet, besitzt die Verbindung ebenfalls
Wenn Y -CPI-CH2 bedeutet, besitzt die Verbindung ebenfalls
OH
an der 15-Stellung ein asymmetrisches Kohlenstoffatom und
es gibt somit ein Epimeres mit S-Konfiguration an der 15-Stellung
und ein anderes Epimeres mit R-Konfiguration an der 15-Stellung. Sofern nicht spezifisch angegeben, ist
die erfindungsgemäße Verbindung ein Gemisch (ungefähr 1:1) des (S)-Epimeren und (R)-Epimeren.
Die physikalisch-chemischen und biologischen Eigenschaften
von typischen Beispielen von erfindungsgemäßen Verbindungen werden im folgenden aufgeführt.
(1) Physikalisch-chemische Eigenschaften:
Die Namen von typischen erfindungsgemäßen Verbindungen
sind in Tabelle I angegeben. Die Molekularformein und
Elementaranalysen der Hydrochloride dieser Verbindungen sind in der folgenden Tabelle II zusammengestellt und
die Infrarotspektren (KBr-Tablette) und die Proton-NMR-Spektren
(in Deuterο-Methanol, Tetramethylsilan = TMS
als innerer Standard) sind in Tabelle III angegeben. Die spezifischen Rotationen von den optischen Isomeren
von verschiedenen erfindungsgemäßen Verbindungen sind in Tabelle IV aufgeführt.
Die chemische Stabilität der erfindungsgemäßen Verbindungen
wird festgestellt, indem man die Retention (%) nach dem Erhitzen bei 600C während 4 h bestimmt. In der
Tabelle V sind die Versuchsergebnisse zusammen mit denen für Spergualin als Vergleich aufgeführt. Die Retention
wird mittels der Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie
(HPLC) bestimmt. Die Säule ist mit Nucleosi^5Ci8
15
20
25
30
35
bepackt. Das für Cpergualin verwendete Lösungsmittel ist
ein Gemisch (6 : 94) aus Acetonitril und 0,01M Natriurnpentansulfonat
+0,01M Na2HPO^ (pH 3), während für die erfindungsgemäßen
Verbindungen ein Gemisch aus Acetonitril und -0,005M Natriumpentansulfonat +0,01M Na2HPO^ (pH 3)
verwendet wird. Das Mischungsverhältnis im letzteren Fall wird für jede besondere Verbindung variiert. Beispielsweise
wird ein Mischverhältnis von 10 : 90 für die Verbindung
Nr. 9 verwendet, während eines von 7 : 93 für die Verbindung Nr. 22 verwendet wird.
ω ο
cn
cn
H.NCNH(CH-) -Y-CONHCHCONH(CH0).NH(CH.)_NH
Z I! 2 Π ι Zh Zo
Z I! 2 Π ι Zh Zo
NH OR
| Verbin dung Nr. |
η | Y | R | Name der Verbindung |
| 1 | 1 | CH2CH2 | H | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (4-guanidinobutan- amido)-2-hydroxyethanamid |
| 2 | 2 | η | It | N- [4- (3-Aminopropyl>-aminobutyl3 -2- (5-guanidinopentan- amido)-2-hydroxy©thanantid |
| 3 | 3 | Ii | Il | N-[4- (3-Aminopropyl)^minobutyl]='2-(6-guanidinohexan- amido)-2-hydroxyethananiid |
| 4; | 4 | If | Il | N- [4- (3-Aminopropyl>^aminobutyl]-2'= (7-guanidinoheptan- amido)-2-hydroxyethanamid |
| 5 | 5 | Il | ti | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (8-guanidinooctan- amido)-2-hydroxyethanamid |
| 6 | 6 | ii | Il | N- [4- (3-Aainopropyl)-axninobutyl]=2= (9-guanidinononan- amido)-2-hydroxyethanamid |
| 7 | 1 | Il | CH3 | N- [4- (3-Aminapropyl)-amin©butyl3-2- (4-guanidinobutanamido)- 2-methoxyethanamid . |
| 8 | 3 | Il | Il | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl3 -2- (6-guanidinohexan- amido)-2-methoxyethanamid |
CO K)
Ca)
ω
ο
ο
Cn
cn
| 9 | 4 | CH2CH2 | CH3 | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl] -2- (7-guanidinoheptan- amido)-2-methoxyethanamid |
| 10 | 5 | Il | M | N- 14- (3-A^inopropyl)-aminobutyl] -2-(8-guanidinooctan- amido)-2-methoxyethanamid |
| 11 | 6 | Il | H | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (9-guanidinononan- amido)-2-methoxyethanamid |
| 12 | 4 | η | CH2CH3 | N- [4- (3-Aminopropy 1 }-a:minobutyl] -2- (7-guanidinoheptan- amido)-2-ethoxyethanamid |
| 13 | 4 | Il | CH2CH2- CH2CH3 |
N- 14- (3-Aminopropy 1 )-aminobutyl] -2- (7-guanidinoheptan- amido)-2-butoxyethanamid. |
| 14 | 4 | η | CH2CH2OH | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (7-guanidinoheptan- amido) -2- (2-hydroxy)-€thoxyethanamid · |
| 15 | 4 | Il | CH2-C6H5 | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (7-guanidinoheptan- amido)-2-benzyloxyethanamid · |
| 16 | 4 | CH=CH | H | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2- (7-guanidino-2- heptenamido)-2-hydroxyethanamid |
| 17 | 5 | η | Il | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl] -2- (8-guanidino-2- octenamido)-2-hydroxyethanamid |
| 18 | 6 | Il | •ι | N- [4- (3-Aminopropyl)-eminobuty 1] -2- (9-guanidino-2- nonenamido)-2-hydroxyethanamid |
TsJ CO
Kj ίο —'
cn o cn
Fortsetzung Tabelle I
cn
| 19 | 4 | CH=CH | CH3 | N- [4- (3-Aminopropyl )-aminobutyl]-2- (7-guanidino-2- heptenamido)-2-methoxyethanamid |
| 20 | 5 | .CHCH2 OH |
H | N-[4-(3-Aminopropyl)-eminobutyl]-2- (8-guanidino-3-hydroxy- octanamido]-2-hydroxyethanamid |
| 21 | 6 | CHCH0 I 2 OH |
Il | N- [4- (3-Aminopropyl>anvinobutyl]-2- (9-guanidino-3- hydroxynonanamido)-2-hydroxyethanamid |
| 22* | 4 | (S) CHCH0 I 2 OH |
CH3 | N-i4-(3-Aminopropyl)-aininobutyl3-2-{7-guanidino-3- hydroxyheptanamido)^2-roethoxyethanamid |
| 23* | '4 | Il | CH3CH3 | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutyl] -2- (7-guanidino-3- hydroxyheptanamido)-2-ethoxyethanamid |
| 24* | 4 | :i | CH2CH2- CH2CH3 |
N- 14- (3-Aminopropyl>-aminobuty 1 ] -2- {7-guanidino-3- hydroxyheptanamido)-2-butoxyethanamid |
| 25* | 4 | ti | CH2CH2OH | N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobuty 1 ] -2- (7-guanidino-3r hydroxyheptanamido) -2τ (2-hydroxy)-ethoxyethanamid |
| 26* | 4 | Il | CH2C6H5 | N-l4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl3-2-|7-guanidino-3- hydroxyheptanamido)~2-ben2yloxyethanämid |
323672
1 Bemerkung:
* Die Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin Y
(S)
-CHCHp bedeutet, η 4 und R eine andere Gruppe als Wasser-
-CHCHp bedeutet, η 4 und R eine andere Gruppe als Wasser-
5 OH
stoffatom bedeuten, werden in folgenden kurz als "11-0-(Name
des R)-Spergualin bezeichnet.
10 15 20 25 30 35
co
Ui
co
| Verbin dung Nr. |
Molekularformel | Elementaranaly se (?'>)' | berechnet gefunden |
C | H | N | Cl |
| 1 | C14H31N7O3*3HCl·3/2 H2O . | berechnet gefunden |
34.90 34.92 |
7.74 7,87 |
20.35 • 20.21 |
22.07 21.96 |
|
| 2 | C15H33N7O3OHCl* 3/2 H2O | berechnet gefunden |
36.33 36.27 |
7.93 8.05 |
19.77 19.68 |
21.45 21.30 |
|
| - 3 | C16H35N7O3*3HC1>3/2 H2° | berechnet gefunden |
37.69 37.83 |
8.10 8.38 |
19.23 19.18 |
20.86 20.67 |
|
| 4 | C17H37N7O3 03HCl«3/2 H2O | berechnet gefunden |
38.97 39,10 |
8.27 8.42 |
18.71 18.57 |
20.30 20.18 |
|
| 5 | C18H39N7O3-SHCl.3/2 H3O | berechnet gefunden |
40.19 40.31 |
8.43 8.74 |
18.23 • 17.96 |
19.77 19.51 |
|
| 6 | C19H41N7O3OHCl* 3/2 H2O | berechnet gefunden |
41.34 41.32 |
8.58 8.79 . |
17.76 17.65 |
19.27 19.13 |
|
| 7 | C15H33N7O3 «3HC1 = 3/2' H2O | berechnet gefunden |
36.33 36.41 |
7.93 8.10 |
19.77 19.46 |
21.45 21.32 |
|
| 8 | C17H37N7O3OHCl'3/2 H2O | berechnet gefunden |
38.97 39.20 |
8.27 8.31 |
18.71 18.48 |
20.30 20.11 |
|
| 9 | C18H39N7O3«3HC1·3/2 H2O | 40.19 40.33 |
8.43 8.51 |
18.23 18.08 |
19.77 20.11 |
cn
cn
| 10 | C19H41N7°3'3HC1'3/2 H2° | berechnet gefunden |
41.34 41.39 |
8.58 8.82 |
17.76 17.62 |
19.27 19.15 |
| 11 | C20H43N7O3-3HCl-3/2 H2O | berechnet gefunden |
42.44 42.51 |
8.73 .8.92 |
17.32 17.33 |
18.79 18.50 |
| 12 | C19H41N7O3·3HCl·3/2 H2O | berechnet gefunden |
■ 41.34 41.44 |
8.58 8.75 |
17.76 17.59 |
19.27 19.11 |
| 13 | C21H45N7O3*3HCl«3/2 H2O | berechnet gefunden |
43.48 43.61 |
8.86 9.04 |
16.90 16.78 |
18.34 18.43 |
| 14 | C19H4 ^7O4. 3HCl. 3/2 H2O | berechnet gefunden |
40.18 40.07 |
8,34 8.39 |
17.26 17.31 |
18.73 18.58 |
| 15 | C21H43N7O3OHCl* 3/2 H2O | berechnet gefunden |
46.94 47.03 |
8.04 8.20 |
15.97 15.76 |
17.32 17.12 |
| 16 | C17H35N7O3-3HCl«3/2 H2O | berechnet gefunden |
39.12 39.10 |
7.92 8.02 |
18.79 19.05 |
20.38 20.07 |
| 17 | C19H37N7O3*3HCl.3/2 H2O | berechnet gefunden |
'40.34 40.53 |
8.09 8.22 |
18.29 18.26 |
19.85 19.69 |
| 18 | C19H39N7O3'3HCl.3/2 H2O | berechnet gefunden |
41.49 41.46 |
8.25 8.07 |
17.83 17.93 |
lii.34 19.20 |
| 19 | C19H37N7O3.3HCl-3/2 H2O | berechnet gefunden |
40.34 40.09 |
8.09 7.86 |
18.29 18.11 |
19.85 19.71 |
| ä | CO cn 20 |
co O C18H39N7O4 |
S3 cn •3HCl.3/2 |
H2O | KS O Fortsei |
cn ille II 39.03 38.77 |
O 8.19 8.05 |
cn 17.70 17.64 |
19 20 |
.2.0 .41 |
Γ | |
| 21 | C19H41N7°4 | .3HC1·3/2 | H2O | 40.18 40.41 |
8.34 8.60 |
17.26 17.35 |
18 18 |
.73 .58 |
5: | |||
| BAD C | 22 | C18H39N7°4 | .3HCl.3/2 | H2° | 39.03 39.03 |
8.19 .. 8.50 |
17.70 17.49 |
19 19 |
,20 .15 |
HkJ \ ' |
||
| 33 © 32 |
23 | C19H41N7°4 | .3HCl.3/2 | H2O | 40.18 40.23 |
8.34 8.75 |
17.26 17.17 |
18 18 |
.73 .35 |
|||
| 24 | C21H45N7O4 | •3HCl.3/2 | H2O | 42.32 42.37 |
8*62 8.90 |
16,45 16.31 |
17 17 |
.84 .74 |
• 3236 | |||
| 25 | C19H41N7°5 | •3HC1-3/2 | E2O | 39.08 39.15 |
8.11 8.26 |
16.79 16.42 |
18 18 |
.21 .10 - |
||||
| 26 | C24B43N7°4 | •3HCl-3/2 | >H2° | 45.75 45.77 |
7.84 7.93 |
15.56 15.39 |
16 16 |
.88 .64 |
||||
| bzung Tab« berechnet gefunden |
||||||||||||
| berechnet gefunden |
||||||||||||
| Derechnet gefunden |
||||||||||||
| berechnet gefunden |
||||||||||||
| berechnet gefunden |
||||||||||||
| berechnet gefunden |
||||||||||||
| berechnet gefunden |
||||||||||||
co
ω ο
to
cn
N3
cn
| Verbin dung Nr. |
IR-Absorptionsspek'trum (cm"1) |
2950, 1260, |
1655, 1160, |
1525, 1115, |
1460, 1070 |
Prοton-NMR-Spektrum (6-Viert) |
1.4-2.4 2.9-3.4 |
(CH2x4), (NCH2x5) |
2.40 , 5.55 |
(CH2), (CH) |
| 1 | 3320, 1365, |
2950, 1120, |
1660, 1080, |
1530, 1020 |
1465, | 1.9-2.0 2.9-3.4 |
CCH2x4), (NCH2x5) |
2.0-2 , 5.53 |
.5 (CH2x2), (CH) |
|
| 2 | 3400, 1170, |
2950, 1240, |
1560, 1165, |
1530, 1120, |
1460, 1080 |
1.4-2.0 2.9-3.4 |
(CH2x5), (NCH2x5) |
2.0-2 , 5.52 |
.5 (CH2x2), (CH) |
|
| 3 | 3270, 1370, |
29 50, 1160, |
1653, 1120, |
1525, 1030 |
1460, | 1.2-2.0 2.9-3.4 |
(CH2x6), (NCH2x5) |
2.24 , 5.56 |
(CH2), 2.30 (CH2), (CH) |
|
| 4 | 3400, 1360, |
2925, 1160, |
1655, 1120, |
1520, 1080 |
1460, | 1.20-2.0 2.9-3.4 |
(CH2x7) (NCH2x5) |
, 2.0- , 5.52 |
2.4 (CH2x2), (CH) |
|
| 5 | 3330, 1360, |
2925, 1115, |
1655, 1080 |
1520, | 1460, | 1.2-2.0 2.9-3.4 |
(CH2x8), (NCH2x5) |
2.0-2 , 5.50 |
.4 (CH2x2)·, (CH) |
|
| 6 | 3370, 1155, |
2930, 1190, |
1650, 1160, |
1520, 1090 |
1460, | 1.4-2.4 2.8-3.4 |
(CH2x4), (NCH2x5) |
2.40 , 3.38 |
(CH2), (OCH3), 5.30 (CH) |
|
| 7 | 3400, 1360, |
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| Verbin dung Nr. |
15-Stellung | 11-Stellung | spezifische Drehung |
| 9 | (±) (-) (+) |
0.0° (Cl, H2O) -30.4° (Cl, H2O) +29.5° (Cl, H2O) |
|
| 22 | (S) | (±) (-) (+) |
-1.0° (Cl, H2O) -27.3° (Cl, H2O) +25.5° (Cl, H2O) |
| 23 | (S) | (±> (-) (+) |
-0.2° (Cl, H2O) -25.0° (Cl, H2O) +24.2° (Cl, H2O) |
| 24 | (S) | (±) (-) ( + ) |
+0.5° (Cl, H2O) -22.9° (Cl, HO) +23.5° (Cl, HO) |
| 2 5 | (S) | (±) (-) '..(+) |
-2.1° (Cl, H2O) -18.7° (Cl, H2O) +15.8° (Cl, H2O) |
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| 13 | 72.4 | 90.1 | 100 | - | 100 | - | 100 | 98.0 | 96.0 |
| 14 | 71.8 | 90.6 | 100 | - | 100 | - | 100 | 97.5 | 97.3 |
| 15 | 76.5 | 91.4 | 100 | - | 100 | - | 100 | 99.0 | 96.2 |
| 22 (-} | 79.7 79.7 |
- | 100 100 |
100 100 |
100 100 |
100 100 |
100 100 |
97.6 100 |
95.7 95.6 |
| 24 | 76.3 | - | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 97.1 | 94.8 |
| 25 | 68.9 | - | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 97.7 | 95.5 |
| 26 | 77.2 | - | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 95.9 | 94.5 |
| (-)-Spergualin | 88.1 | 88.0 | 87.8 | 82.5 | 46.5 | 12.6 | 6.1 | 0 | - |
(2) Biologische Eigenschaften:
Alle erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen eine ausgeprägte
carzinostatische Aktivität und zeigen bei Krebszellen in vitro eine starke Wachstumshemmwirkung und eine
lebensverlängernde Wirkung bei Mäusen, die implantierte Krebszellen tragen.
I. Wachstumshemmaktivität gegenüber Krebszellen in vitro:
DBA/2-Mäuse v/erden mit ^e 10^ Mäuse Leukenia-L-1210-ZeIlen
inplantiert. Die Asziten werden aseptisch aus den Mäusen 4 Tage nach dem Püttern gesammelt, dreimal
mit physiologischerSalzlösung gewaschen, wobei man L-1210-Zellen
erhält, die in einem RPMI-i640-Kulturmedium (G.E. Moore, Journal of the American Medical Association, Band
199, Seite 519 (1967); H.J. Morton, In Vitro, Band 6, Seite öS (1970)) suspendiert werden. Dazu gibt man 10?S
fetales Kalbserum und 5 juM 2-Mercaptoethanol und dann
wird die entsprechende Suspension auf 5x10 L-I210-Zellen
pro 0,9 ml verdünnt. Eine Mikroplatte, die 0,9 ml der Zellsuspension und 0,1 ml Kulturmedium, welches die
zu prüfende Probe enthält, trägt, wird in einem Kohlendioxidinkubator
bei 370C aufbewahrt. Nach 43 h Züchtung
wird die Zahl der Zellen mittels eines Coulter Counters (Coulter Electronics, Inc., USA) gezählt, wobei man die
Wachstumshemmung {%) = (Ι-τ/C) x 100 = [1- (Zahl der gewachsenen
Zellen im Medium, das die Probe enthält)/(Zahl der Zellen, die im Kontrollmedium wachsen)] χ 100 erhält.
Die 50%ige Wachstumshemmkonzentration wird aus den Werten der Wachstumshemmung bei verschiedenen Probenkonzentrationen
berechnet. Die Versuchsergebnisse von typischen erfindungsgemäßen Verbindungen für die Wachstumshemmung
35 der L-1210-Zellen sind in Tabelle VI aufgeführt.
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| Verbin dung Nr. |
Wachstumshemmung (%), (1 -Τ/C) χ 100 | 1.25 | 2.5 | 5 | 10 | 20 | 40 | 80 | 160 | 5O?oige Hemm- konzentration (mcg/ml) |
| 1 | Konzentration der Testverbindung, mcg/nal | - | 52.2 | 89.3 | 101 | 100 ' | - | - | - | 2.4 |
| 2 | 9.6 | 30.5 | 46.9 | 69.5 | 77.6 | 79.6 | 79.6 | - | 5.0 | |
| 3 | 20.6 | 36.7 | 64.2 | 81.6 | 86.7 | - | - | - | 3.7 | |
| 4 | 20.0 | 27.5 | 29.9 | 58.4 | 75.5 | 78.7 | - | - | 8.1 | |
| 5 | - | 24.9 | 29.1 | 40.0 | 54.2 | 66.0 | 88.5 | 96.8 | 18 | |
| 6 | 38. 0 | 40.3' | 45.5 | 50.3 | 57.5 | - | - | - | 8.0 | |
| 7 | 38.7 | 80.7 | 98.5 | 99.8 | 99.9 | 99.3 | - | - | 1.5 | |
| 8 | - | - | 33.2 | 38.1 | 46.8 | 53.5 | 66.3 | 88.2 | 28 | |
| 9 | - | - | 35.5 | 45.9 | 62.3 | 78.1 | 90.9 | 96.0 | 12 | |
| 10 | - | - | 19.9 | 28.5 | 36.5 | 52.4 | 62.4 | 79.5 | 39 | |
| 11 | - | - | 35.0 | 52.2 | 59.4 | 71.8 | 77.9 | - | 10 | |
| 12 | - | 21.5 | 31.1 | 38.4 | 47.3 | 58.6 | 73.5 | - | 21 | |
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| O | CM | VO | CM | VO | CM | CM | CM | in | O | cn | |||||
| T | P- | CM | *3· | •H | cn | CO | P- | CM | P- . | ||||||
| CM | 1 | O | CM | I | CN | O | CM | co | CO | O | CM | ||||
| cn | cn | CN | CM | m | O | P- | cn | ||||||||
| ,_) | CO | I | CO | CM | r-k | ΛΟ | ■«3· | in | |||||||
| CM | I | iH | I | cn | 9 | CM | |||||||||
| O | P- | VO | I | I | I | I | |||||||||
| P- | VO | cn | r-i | • | |||||||||||
| P- | CS | iH | OO | CN | O | ||||||||||
| rH | in | cn | CM | r-i | CM | in | VO | ||||||||
| co | CM | CM | CN | CM | |||||||||||
| CM | |||||||||||||||
II.
323672S
Therapeutische Wirkung auf implantierten Krebs
bei Mäusen:
Männliche Mäuse des BDF. -Stammes (5 Wochen alt) v/erden je
intraperitoneal mit 1Cr Mäuse Leukämia L-210-Zellen inokuliert
und intraperitoneal wird· ihnen einmal am Tag die Testverbindung, gelöst in einer physiologischen Salzlösung,
während 6 aufeinanderfolgenden Tagen, beginnend vom Tag der Inokulation, verabreicht. Die Mäuse werden dann
weitergezüchtet und 30 Tage lang beobachtet, ura die Verlängerung
der Überlebenszeit = 100 χ Τ/C = 100 χ (durchschnittliche Überlebenstage pro behandelter Gruppe/
durchschnittliche Überlebenstage pro Kontrollgruppe) zu bestimmen. Die therapeutische Wirkung von typischen erfindungsgemäßen
Verbindungen bei Mäusen Leukämie L-1210
sind in Tabelle VII angegeben.
| Ver | Dosis | Verlängerung | Zahl der Mäuse, | 0/4 |
| bindung | (mgAg/Fag) | der Überlebens | - die während 30 | 0/4 |
| Nr. | zeit 00» | Tagen überleb | 2/4 | |
| T/C χ 100 | ten | 1/4 | ||
| 50 | 0 | 2/4 | ||
| 25 | 336 | 4/4 | ||
| 12.5 | >357 | 4/4 | ||
| 6.25 | >369 | 3/4 | ||
| 4 | 3.13 | >364 | 0/4 | |
| 1.56 | >429 | 0/4 | ||
| 0.78 | >429 | 0/4 | ||
| 0.39 | >390 | 0/4 | ||
| 0.20 | 197 | 0/4 | ||
| 50 | 0 | 0/4 | ||
| 25 | 306 | 0/4 | ||
| C | 12.5 | 181 | ||
| 6.25 | 125 | |||
| 3.13 | 118 | |||
| 1.56 | 104 | |||
■ - ar-. 29-
Fortsetzung Tabelle VII
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 0 | 0/4 | |
| 12.5 | >429 | 4/4 | |
| 6.25 | >429 | 4/4 | |
| 6 | 3.13 | >386 | 2/4 |
| 1.56 | >393 | 3/4 | |
| 0.78 | >429 | 4/4 | |
| 0.39 | >383 | 2/4 | |
| 0.20 | >354 | 2/4 | |
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 0 . | 0/4 | |
| 12.5 | >429 | 4/4 | |
| 6,25 | >429 | 4/4 | |
| 9 | 3.13 | >429 | 4/4 |
| (±) | 1.56 | >411 | 1/4 |
| 0.78 | >300 | 2/4 | |
| 0.39 | 171 | 0/4 | |
| 0.20 | 114 | 0/4 | |
| 25 | 0 | 0/4 | |
| 12.5 | >390 | 2/4 | |
| 6.25 | >336 | 1/4 | |
| 9 | 3.13 | >411 | 3/4 |
| (-) | 1.56 | >356 | 2/4 |
| 0.78 | >370 | 2/4 | |
| 0.39 | >342 | 2/4 | |
| 0.20 | 127 | 0/4 | |
| 0.10 | 110 | 0/4 | |
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 0 | 0/4 | |
| 1 Π | 12.5 | 129 | 0/4 |
| XU | 6.25 | 107 | 0/4 |
| 3.13 | 100 | 0/4 | |
| 1.56 | 100 | 0/4 | |
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 0 | 0/4 | |
| 12.5 | >357 | 2/4 | |
| 6.25 | >393 | 3/4 | |
| 11 | 3.13 | >357 | 2/4 |
| 1.56 | 200 | 0/4 | |
| 0.78 | 200 | 0/4 | |
| 0.39 | 143 | 0/4 | |
| 0.20 | 107 | 0/4 |
- «Τ- 30 -
Fortsetzung Tabelle VII
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 236 | 0/4 | |
| 12.5 | >354 | 2/4 | |
| 16 | 6.25 | >350 | 2/4 |
| 3.13 | >343 | 2/4 | |
| 1.56 | 233 | 0/4 | |
| 0.78 | 129 | 0/4 | |
| 12.5 | 0 | 0/4 | |
| 6.25 | >350 | 2/4 | |
| 3.13 | >429 | 4/4 | |
| 18 | 1.56 | >429 | 3/4 ■ |
| 0.78 | 200 | 0/4 | |
| 0.39 | 157 | 0/4 | |
| 0.20 | 136 | 0/4 | |
| 0~l0 | 129 | 0/4 | |
| 25 | 0 | 0/4 | |
| 12.5 | >364 | 2/4 | |
| 6.25 | >429 | 3/4 | |
| 3.13 | >321 | 2/4 | |
| 19 | 1.56 | >350 | 2/4 |
| 0.78 | 164 | 0/4 | |
| 0.39 | 107 | 0/4 | |
| 0.20 | 100 | 0/4 | |
| 50 | 0 | 0/4 | |
| 25 | 229 | 0/4 | |
| 12.5 | 200 | 0/4 | |
| 6.25 | 164 | 0/4 | |
| 21 | 3.13 | 129 | 0/4 |
| 1.56 | 114 | 0/4 | |
| 0.78 | 100 | 0/4 | |
| 0.39 | 100 | 0/4 | |
| 0.20 | 100 | 0/4 | |
| 50 | 7 | 0/8 | |
| 22 | 25 | >414 | 6/8 |
| (S) | 12.5 | >380 | 5/8 |
| (±) | 6.25 | >332 | 4/8 |
| 3.13 | 163 | 0/8 | |
| 1.56 | 117 | 0/8 | |
| OO | 25 | >423 | 5/5 |
| I C \ | 12.5 | >408 | 4/5 |
| (S; | 6.25 | >400 | 4/5 |
| (—J | 3.13 | >290 | 1/5 |
| 1.56 | 177 | 0/5 |
| 2 3 | 25 12.5 6.25 3.13 |
200 129 119 104 |
0/4 0/4 0/4 0/4 |
| 25 | 50 25 12.5 6.25 |
>429 229 193 107 |
4/4 0/4 0/4 0/4 |
III. Toxizität;
Alle erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen eine relativ
niedrige Toxizität und eine niedrige Kumulation der Toxi» zität bei fortgesetzter Verabreichung. In Tabelle VIII
sind die mittleren letalen Dosen (LD^0) der typischen erfindungsgemäßen
Verbindungen bei Mäusen bei einer einfachen intraperitonealen Verabreichung angeführt. Es sind
weiterhin die maximal tolerierbaren Dosen, ausgedrückt als Gesamtdosis, aufgeführt, wenn eine bestimmte Menge
pro Einheitskörpergewicht intraperitoneal der Maus einmal
am Tag während 6 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht
25 wird.
| Verbin dung Nr. |
LD50* (ingAg) |
maximal tolerierbare Dosis ** (mgAg) |
| 1 | 50< | 300< |
| 2 | 50< | 300< |
| 3 | 50< | 300< |
Fortsetzung Tabelle VIII
| 4 | 25 - 50 | 150< |
| 5 | 25 - 50 | 150< |
| 6 | 12.5 - 25 | 75< |
| 8 | 25 - 50 | 150< |
| 9 | 12.5 - 25 | 75< |
| 10 | 12.5 - 25 | 75< |
| 11 | 12.5 - 25 | 75< |
| 12 | 12.5 - 25 | 75< |
| 14 | 25-50 | 150< |
| 15 | 12.5 - 25 | 75< |
| 16 | 25 - 50 | 150< |
| 17 | 12.5 - 25 | 75 < |
| 18 | 6.25 - 12.5 | 37.5< . |
| 19 | 12.5 - 25 | 75< |
| 20 | 50< | 300< . |
| 21 | 25 - 50 | 150< |
| 22 | 25 - 50 | 150< |
| 23 | 25< | 150< |
| 24 | 50< | 300< |
| 25 | 50< | 300< |
| 26 | 12.5 - 25 | 75< |
1 Bemerkung:.."-'
"* Mittlere letale Dosis bei einfacher Verabreichung
*-- Maximale Werte der Gesamtdosis, die keinen Tod verursacht, wenn eine bestimmte Menge pro Einheitskörpergewicht
den Mäusen einmal am Tag während 6 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht -wird.
Wie aus der obigen Beschreibung folgt, sind die erfindungsgemäßen
Verbindungen, die durch die Formel I dargestellt werden, nützliche karzinostatische Mittel. Alle
der individuellen, zuvor angegebenen Verbindungen zeigen eine ausgezeichnete Wachstumshemmaktivität gegenüber Mäuse
Leukämia-L-1210-Zellen. Bei diesen Verbindungen weisen
insbesondere die Verbindungen eine sehr hohe Aktivität auf, worin R ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit 1
bis 4 Kohlenstoffatomen, die als Substituenten eine Hydroxylgruppe aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe und η
eine ganze Zahl von 1 bis 6 bedeuten, mit der Maßgabe,
daß, wenn Y -GH-CHp- bedeutet, R die Gruppen ausgenommen
20 OH
dem Wasserstoffatom bedeutet. Weiterhin zeigen bei Mäusen,
die implantierten Krebs tragen, solche Verbindungen eine ausgezeichnete therapeutische Wirkung, worin R ein Wasserstoff
atom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 2„ bevorzugt 1,
Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei die Alkylgruppe eine
Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann? und η 4Qder 6 bedeutet. Von diesen Verbindungen sind solche,
worin R eine Methylgruppe (eine Alkylgruppe mit einem Kohlenstoffatom) bedeutet, ebenfalls in ihrer chemischen Stabilität
hervorragend, wobei die Verbindungen Nr. 9, 19 und 22 die bevorzugtesten Verbindungen sind.
Das Syntheseverfahren für die erfindungsgemäßen Verbindungen
wird im folgenden näher erläutert. 35
Die Kondensation des U?-Guanidino-fettsäure-amids der
Formel (II) und des Dihydroxyethanamids der Formel (III)
.::. 323^725
gemäß der vorliegenden Erfindung kann in organischen Lösungsmitteln
durchgeführt v/erden. Sie wird Jedoch im allgemeinen in Anwesenheit von geringen Wassermengen durchgeführt
wegen der Löslichkeit beider Verbindungen, die im allgemeinen in Form ihrer Säureadditionssalze behandelt
bzw. eingesetzt werden.
Wenn organische Lösungsmittel verwendet v/erden, sind Aceton und Dimethylformamid bevorzugt, aber die Kondensation
wird im allgemeinen in Anwesenheit geringer Wassermengen durchgeführt, ohne daß organische Lösungsmittel verwendet
werden. Die Menge an Wasser, die verwendet wird, sollte möglichst so ausgewählt werden, daß mindestens beide Verbindungen
gelöst werden. In der Praxis wird das Wasser in einer Menge im Bereich von 2 bis 60, bevorzugt 4 bis 40
mol pro 1 mol Guanidino-fettsäure-amid der Formel (II)
verwendet. Da die Verbindungen der Formeln (II) und (III) im allgemeinen in Form der Säureadditionssalze verwendet
werden, ist es nicht erforderlich, zu der Lösung für die Reaktion eine Säure zuzugeben. Hinsichtlich der Ausbeute
an Kondensat ist es jedoch bevorzugt, einen sauren Katalysator bzw. Säurekatalysator zu verwenden. Geeignete
Säurekatalysatoren sind anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoff säure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Borsäure,
und organische Säuren, wie Essigsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und Adipinsäure.
Eine Dicarbonsäuren wie Glutarsäure, ist bevorzugt. Die Menge an Säure, die verwendet wird, beträgt 0 bis 10,
bevorzugt 0,5 bis 4 mol pro mol Guanidino-fettsäure-amid der Formel (II). Die Reaktionstemperatur beträgt 0 bis
1000C, im allgemeinen beträgt sie von Zimmertemperatur
bis 800C, bevorzugt 40 bis 700C. Die Reaktionszeit variiert
mit der Reaktionstemperatur. Eine Reaktionszeit von 1 bis 2 Tagen ist wegen der Erhöhung der Ausbeute bevorzugt.
Obgleich das Verhältnis von Guanidino—fottsäure-amid der
Formel (II) zu Dihydroxyethanamid der Formel (III) nicht besonders begrenzt ist, ist es allgemeine Praxis, 0,5
bis 4, bevorzugt Ο,ΰ bis 1,5 mol des letzteren pro 1 mol
des ersteren zu verwenden. Die entstehende Verbindung ist ein N- [4- (3-Aminopropyl) -aminobutyl J-2- (b>-guanidino-f e ttsäure-amido)-2-hydroxyethanamid,
welches durch die allge-
5 meine Formel: .
H2NCNH (CH2) Jx-Y-CONHCHCONHCH2CH2CH2CH2NHCH2CH2CH2NH2
NH . OH
■-■. ■ (Ia)■■;
dargestellt wird, worin Y und η die zuvor gegebenen Bedeutungen
besitzen, und es ist die Verbindung der Formel (I), worin R ein Wasserstoffatom bedeutet.
Die Verbindungen der Formel (I), worin R Gruppen, ausgenommen ein Wasserstoffatom, bedeutet, werden erhalten,
indem man die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung der Verbindung
der Formel (Ia) mit dem zuvor erwähnten aliphatischen Alkohol, Diazoparaffin oder Benzylalkohol alkyliert.
Die Verbindung, die man bei der obigen Kondensation erhält, oder Spergualin, welches man aus der Mikrobenkulturbrühe
erhält, kann als Verbindung der Formel (Ia) verwendet werden. Bei der Alkylierung erhält man
als Verbindung ein N-[4~(3-Aminopropyl)-aminobutyl]™2-(jLJ-guanidino-fettsäure-amido)-2-alkoxyethanamid,
welches durch die allgemeine Formel:
H0NCNH(CH0) -Y-CONHCHCONH-(Ch0) .NH(CH0) ,NH0 (Ib)
NH OR1
dargestellt wird, worin Y und η die zuvor gegebenen Bedeutungen
besitzen und R' eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten
aufweist, oder eine Benzylgruppe bedeutet. Die
323672
1 Alkylierung v;ird auf folgende Weise durchgeführt.
Die Umsetzung zwischen einem N-[4-(3~Aminopropyl)-aminobutyl
J-2- (j^-guanidino-f ett säure-amido ) -2-hydroxyethanamid
der Formel (Ia) und dem Alkohol wird im allgemeinen in
Anwesenheit eines sauren Katalysators bzw. Säurekatalysators durchgeführt. Vor der Reaktion müssen die Guanidino-
und Aminogruppen in dem Hydroxyethanamid der Formel (Ia) nicht notwendigerweise geschützt werden, sie können jedoch
geschützt v^erden. Der Alkohol wird durch die Formel
R'-OH (IV)
dargestellt, worin R1 eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen,
die eine Hydroxylgruppe als Substituenten aufweisen kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet. Solche
Alkohole sind beispielsweise niedrige Alkohole, wie Methanol, Ethanol, Propanol und Butanol, Glykole, wie
Ethylenglykol und Propylenglykol, und Benzylalkohol. Die Reaktion wird bevorzugt in einem Alkohol der obigen Formel
(IV) durchgeführt, obgleich auch ein inertes Lösungsmittel verweidet werden kann. Geeignete saure Katalysatoren
sind anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure
und Schwefelsäure, organische Säuren, wie Essigsäure und p-Toluolsulfonsäure, und kationische Austauschharze.
Die Reaktionstemperatur liegt im Bereich von 0 bis 1000C,
im allgemeinen von Zimmertemperatur bis 800C, Zimmertemperatur
ist am meisten bevorzugt. Die Reaktionszeit variiert entsprechend der Reaktionstemperatur und liegt im
Bereich von 1 h bis 10 Tage, bevorzugt 1 bis 2 Tage.
Wenn die Löslichkeit eines Hydroxyethanamids der Formel (Ia) in dem Alkohol der Formel (IV) niedrig ist, ist es
bevorzugt, die Amino- und Iminogruppen des Hydroxyethanamids
mit Schutzgruppen zur Erhöhung der Ausbeuten zu schützen. Geeignete Schutzgruppen können ausgewählt werden
(vgl. die Literaturstelle J.F.W. Mcomie Ed., "Pro-
tective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, N.Y.
1973). Solche Schutzgruppen für Aminogruppen, die im allgemeinen in der Peptidsynthese verwendet werden, sind geeignet.
Beispiele sind einwertige Schutzgruppen, wie Benzyloxycarbonyl,
p-Methoxybenzyloxycarbonyl, p-Nitrobenzyloxycarbonyl,
tert.-Butoxycarbonyl, Trichlorethoxycarbonyl
und Isobormyloxycarbonyl, und zweiwertige Schutzgruppen,
wie Phthaloyl und Succinyl. Von diesen Gruppen sind Aralkyloxycarbonylgruppen, wie Benzyloxycarbonyl-und
p-Methoxybenzyloxycarbonylgruppen^ wegen ihrer leichten
Einführbarkeit und Entfernung bevorzugt« Die Einführung dieser Schutzgruppen erfolgt nach an sich bekannten Verfahren
und bevorzugt nach dem aktiven Esterverfahren« Bei diesem Verfahren verbleibt die Guanidlnogruppe in der
15 Verbindung der Formel (Ia) unverändert.
Die Alkylierung der Hydroxylgruppe an der 11-Stellung des
Hydroxyethanamids der Formel (Ia) durch Umsetzung mit
einem Diazoparaffin erfolgt auf folgende Weise.
Im allgemeinen werden zuerst die Amino- und Iminogruppen
des Hydroxyethanamids der Formel (Ia) mit den oben angegebenen Schutzgruppen geschützt und die entstehende Verbindung
wird mit einem Diazoparaffin in einem inerten or»
ganischen Lösungsmittel, wie Methylenchlorid oder Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur von -20 bis 200C, üblicherweise
-10 bis 100C, bevorzugt -3 bis 30C, während 1
bis 15, im allgemeinen 2 bis 8 h zur Durchführung der Alkylierung
umgesetzt. Die Reaktion erfordert nicht notwendigerweise einen Katalysator, sie wird jedoch in Anwesenheit
eines Lewis-Säurekatalysators, wie Bortrifluorid,
Aluminiumchlorid, Borfluorwasserstoffsäure oder Seleniumdioxid, beschleunigt. Als Beispiele für Diazoparaffine
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen können Diazomethan, Diazoethan,
DIazopropan und Diazobutan erwähnt werden. Diese Diazoparaffine können aus den entsprechenden N-Nitrosoalkylharnstoffen,
N-Nitrosoalky!urethan, N-Nitroso-
- -32-
alkylsulfonamid und N-Nitrosoalkyl-N'-nitroguanidin nach
an sich bekannten Verfahren (beispielsweise "Organic Synthesis" (John Wiley and Sons, Inc.), II, 165 (1943); III,
119 (1955); Journal of Organic Chemistry, Y^, 763 (194^3);
"Organic Synthesis", IV, 250 (1963); Chemische Berichte, £4, 2547 (1961); Canadian Journal of Research, 28B, 633
(1950); "Organic Synthesis", III, 244 (1955); Journal of Chemical Society, 1935. 286) synthetisiert werden.
- 10 Die Alkylierung mit einem Diazoparaffin ermöglicht, daß
die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung ohne Änderung der Konfiguration in der 11-Stellung der Formel (Ia) alkyliert
wird. Beispielsweise wird ein (-)-Hydroxyethanamid der Formel (Ia) zu dem entsprechenden (-)-Alkoxyethanamid
der Formel (Ib) umgewandelt. Ein (+)-Alkoxyethanamid oder ein epimeres Gemisch (i)-, bezogen auf die 11-Stellung,
wird aus dem (+)-Hydroxyethanamid bzw. dem (i)-Hydroxyethanamid erhalten.
Die Hydroxyethanamidverbindung der Formel (Ia) wird Hydroxylgruppen
in beiden Stellungen 11 und 15 aufweisen, wenn Y -CH-CH^-bedeutet. In diesem Fall ist es, bedingt
OH
durch den Unterschied in der Reaktivität zwischen den beiden Hydroxylgruppen, möglich, selektiv die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung zu alkylieren.
durch den Unterschied in der Reaktivität zwischen den beiden Hydroxylgruppen, möglich, selektiv die Hydroxylgruppe in der 11-Stellung zu alkylieren.
Die Schutzgruppen der Amino- und Iminogruppen des alkylierten
Produkts können auf übliche Weise entfernt werden, wobei ein Alkoxyethanamid der Formel (Ib) zurückbleibt.
Wenn beispielsweise die·Schutzgruppe eine Aralkyloxycarbonylgruppe
ist, kann sie durch übliche katalytische Hydrierung bei Atmosphärendruck entfernt werden.
Die Reaktion wird in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Methanol, Ethanol, Dioxan oder einem Gemisch davon, in
Anwesenheit von Palladium oder Platin als Katalysator durchgeführt. Die Reaktion wird durch Zugabe einer Säure,
wie Chlorwasserstoffsäure oder Essigsäure, beschleunigt.
Wenn γ-CH-CH^-bedeutet, ist das 2-substituierte Ethan-
OH
amid der Formel (I) N-L'4-(3-aminopropyl)-aminobutyl]-2-(ω-guanidino-ß-hydroxyfettsäure-amido)-2-substituiertes
Ethanamid, welches durch die allgemeine Formel
10
H2NCNH(CH2)nCHCH2CONHCHCONH(CH2
>4NH ICH2)3NH2 (Ic)
NH OH OR
dargestellt wird, worin R und η die oben gegebenen Definitionen besitzen, vorausgesetzt, daß, wenn η 4 bedeutet,
R andere Gruppen, ausgenommen einem Wasserstoffatom, bedeutet. ¥enh die Konfiguration an der 15-Stellung dieser
Verbindung entweder (S) oder (R) ist und die Verbindung
ein epimeres Gemisch, bezogen auf die 11-Stellung ist,
kann die Verbindung in beide Epimere [(+)-Form und (-)-Form])
mittels Chromatographie getrennt werden. Zu diesem Zweck ist die Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie
(HPLC) geeignet. Das gewünschte Ergebnis wird erhalten,
wenn man beispielsweise Nucleosil C18 (M. Nagel Co.) als Säulenpackmaterial und ein Gemisch aus Acetonitril-Natriumpentansulfonat-Phosphatpuffer
als Eluiermittel verwendet.
30
Wie oben beschrieben, ergibt die Alkylierung der Hydroxylgruppe
in der 11-Stellung mit einem Diazoparaffin oder
die Trennung mittels HPLC optisch aktives N-C4-(3-Aminopropyl)
-aminobutyl ]-2- ((j-guanidino-ß-hydroxy-f e-ttsäureamido)-2-alkoxyethanamid,
welcheβ durch die allgemeine Formel
323672ο
H2NCNH(CH2) CHCH2CONHCHCONh CCH3)4NH(CH3)3NH3 (Id)
NH OH OR·
dargestellt werden kann, worin R1 und η die oben gegebenen
Definitionen aufweisen. Wenn die Hydroxylgruppe in der 15-Stellung dieser Verbindung durchDeoxygenierung entfernt
wird oder wenn die Verbindung dehydroxygeniert wird,
wird ein optisch aktives N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2~
öui-guanidino- (α, ß-ungesättigt)-fettsäure-amido ]-2-alkoxyethanamid,
welches durch die Formel:
NH OR1
dargestellt wird, worin R1 und η die oben gegebenen Definitionen
besitzen, oder ein optisch aktives N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-ßo-guanidino-(gesättigt)-fettsäureamido3-2-alkoxyethanamid
mit der allgemeinen Formel
H0NCCH(CH0) CHoCHoC0NHCHC0NH(CH0)-NH(CH0)-NH0 (If)
NH OR'
worin R1 und η die oben gegebenen Bedeutungen besitzen,
gebildet.
Die Verbindung der Formel (Ie) wird erhalten, indem man die Amino- und Iminogruppen der Verbindung der Formel (Id)
mit den zuvor erwähnten Schutzgruppen schützt, die entstehende Verbindung einer Dehydrationsbehandlung unterwirft
und die Schutzgruppen entfernt. Die Dehydration kann beispielsweise durch ein an sich bekanntes Verfahren erfolgen,
bei dem Dicyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von Kupfer(I oder Il)-chlorid (Journal of the American Chemical
Society, ^o, 3245 (1965)) reagieren kann. Dieses Ver-
fahren wird bevorzugt, da es bei milden neutralen Bedingungen
durchgeführt wird. Ein Überschuß von Dicyclohexylcarbodiimid verkürzt die Reaktionszeit. Im Hinblick auf
die Löslichkeit der Ausgangsmaterialien ist N,N-Dimethylformamid
ein Beispiel eines geeigneten Lösungsmittels. Die Reaktionstemperatur beträgt im allgemeinen von Zimmertemperatur
bis 1000C. Die Reaktionszeit variiert von mehreren h bis mehreren Tagenf abhängig von der Reaktionstemperatur.
10
Die Verbindung der Formel (If), die aus der Verbindung der Formel (Id) durch Deoxygenierung der Hydroxylgruppe
an der 15-Stellung gebildet wird, wird bevorzugt aus der
Verbindung der Formel (Ie) durch Reduktion der Doppelbindung
erhalten. Die Reduktion der Doppelbindung erfolgt nach an sich bekannten Verfahren, wie beispielsweise
durch katalytische Reduktion. \Iemi die Schutzgruppe für
die Amino- und Iminogruppen eine Aralkyloxycarbonylgruppe ist, kann die Reduktion der Doppelbindung und die Entfernung
der Schutzgruppen gleichzeitig durch katalytische Reduktion erfolgen.
Venn R' der Alkoxyethanamidverbindung der Formel (Ib) eine
Benzylgruppe ist, wird die Benzylgruppe durch katalytisehe
Reduktion entfernt und die Verbindung wird in die Hydroxyethanamidverbindung der Formel (Ia) umgewandelt,
wobei die Konfiguration an der 11-Stellung unverändert
erhalten bleibt. In diesem Fall verläuft die katalytische Reduktion für die Entfernung der Schutz-Aralkyloxycarbonylgruppe
mit langsamer Geschwindigkeit bei Atmosphärendruck, wohingegen ein zufriedenstellendes Ergebnis mit
verkürzter Reaktionszeit erhalten wird, wenn man die Reaktion in wäßriger Essigsäurelösung bei hohem Druck
von mehreren Atmosphären bis mehreren 10 Atmosphären
35 durchführt.
Das U-Guanidino-fettsäureamid, das durch die Formel
323672ο
H0NCNH L
2 || Hl"-2'n —«a (II)
NH
dargestellt wird, worin Y und η die oben gegebenen Definitionen
besitzen, und welches als Ausgangsmaterial für die Synthese der Verbindung der Formel (Ia) verwendet
wird, wird wie folgt synthetisiert.
]0 (a) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin
Y -CH2CH2- bedeutet:
Diese Verbindung ist ein O-guanidinogesättigtes Fettsäureamid,
das durch die allgemeine Formel
H0NCNH(CH0) CH0CH0CONH- (Ha)
2 j| 2 η 2 2 2 NH
dargestellt wird, worin η die oben gegebene Definition besitzt.
Diese Io-guanidinogesättigten Fettsäureamid sind
bekannte Verbindung und können aus im Handel erhältlichen Rohmaterialien durch bekannte Reaktionen synthetisiert
werden. Beispielsweise wird die Verbindung erhalten, indem man die Aminogruppe der lo-Aminofettsäure der Formel
H2N(CH2)nCH2CH2C00H (V)
worin η die oben gegebene Definition besitzt, schützt, dann die Carboxylgruppe verestert, den entstehenden Ester
mit Ammoniak behandelt, um ihn in ein Amid umzuwandeln,
die Aminoschutzgruppe entfernt und die Aminogruppe in eine Guanidinogruppe umwandelt.
Die Verbindung der Formel (Ha) kann ebenfalls hergestellt
werden, indem man ein Diamin zu der entsprechenden Nitrilverbindung, die durch die Formel
1 H2N(CH2JnCHgCH2CN (VI)
dargestellt wird, worin η die oben gegebene Bedeutung besitzt,
oxidiert, dann die Nitrilgruppe unter Bildung einer Amidverbindung hydrolysiert und die Aminogruppe in
die Guanidinogruppe umwandelt. Beispiele von besonderen
\j3 -guanidinogesattigten Fettsäureamiden der Formel (Ha)
sind 4-Guanidinobutandmid, 5-Guanidinopentanamid, 6-Guanidinohexanamid,
7-Guanidinoheptanamid, ö-Guanidinooctan-TO
amid, 9-GuanidinononanamId, 10-Guanidinodecanamid und 11-Guanidinoundecanamid.
(b) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin Y
-CH-CH2- bedeutet: 15 OH
Diese Verbindung ist ein U>-Guanidino-ß-hydroxy~fettsäureamid,
welches durch die allgemeine Formel
NH OH
dargestellt wird, worin η die oben gegebenen Bedeutung
besitzt, und es wird nach an sich bekannten Reaktionen auf verschiedenen Wegen synthetisiert. Beispielsweise kann
es synthetisiert werden, indem man die Aminogruppe einer lO-Aminofettsäure, die durch die Formel
H2N(CH2)nC00H (VII)
dargestellt wird, worin η die oben gegebene Bedeutung besitzt,
schützt, dann die Kohlenstoffkette um zwei Kohlenstoff
atome verlängert, die entstehende Verbindung in das ß-Hydroxyffettsäureamid durch eine Reihe von Reaktionen
umwandelt, die im allgemeinen für die Herstellung von ß-Hydroxycarbonsäurederivaten verwendet werden, dann die
323872
Gehutzgruppe zur Regenerierung der Arainogruppe entfernt
und die Aminogruppe in die Guanidinogruppe umwandelt. Das Verfahren ist in Einzelheiten in einem Beispiel beschrieben.
Ein La-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäureamid wird synthetisiert,
indem man die Aminogruppe einer to-Aminofettsäure der Formel (VII) mit einer Amino-Schutzgruppe, wie einer
Benzyloxycarbonylgruppe, schützt, die Carbonsäure in ein Q reaktives Derivat, wie das Säureimidazolid, umwandelt,
das reaktive Derivat mit Magnesiumenolat von Monoethylmalonat
der Formel
15 ^C-O.
CS ^Mg (viii)
C - 0
OEt
kondensiert (Buletin de la Societe Chimique de France,
945 (1964)), wobei man einen ß-Ketoester der Formel
X1-NH(CH2)nC0CH2C00Et (IX)
erhält, worin X1 eine Amino-Schutzgruppe bedeutet und η
die oben gegebene Bedeutung besitzt, die Ketoncarbonylgruppe
unter Bildung eines ß-Hydroxyesters reduziert, den
Ester mit Ammoniak unter Bildung eines Amids behandelt, die Amino-Schutzgruppe entfernt und die regenerierte Aminogruppe
in eine Guanidinogruppe umwandelt. Als Beispiele von VÄ)-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäureamiden, die so hergestellt
werden, kann man 4-Guanidino-3-hydroxybutanamid, 5-Guanidino-3-hydroxypentanamid, 6-Guanidino-3-hydroxyhexanamid,
7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid, 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid
und 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid erwähnen.
BAD ORIGINAL
(G)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid wird ebenfalls durch
Hydrolyse mit einer Säure oder einem Alkali der antibiotischen Substanz BMG i62-aF2 (Spergualin), die durch die
Formel ■
(S) H2NCNH(CH2)4CHCH2CONHCHCONH(CH2)4NH(CH2)
(S)
4CH
NH OH OH 10
dargestellt ""wird und welche aus dem KuIturfiltrat eines
Mikroorganismus des Genus Bacillus, wie beispielsweise
Bacillus BMG 162-aFg (FERM-P5230; ATCC 31932), isoliert
wird, erhalten. Es wird ebenfalls, wie in Journal of Antibiotics,
Band 34, 1625 (19^1) beschrieben, durch Bildung der (S)-3,7-Diaminoheptansäure von L-Lysin gemäß
Arndt-Eistert-Reaktion (Journal of Organic Chemistry, Band 17, 347 (1952)), Deaminierung der ß-Aminogruppe mit
salpetriger Säure, Umwandlung der Carboxylgruppe in eine Amidgruppe und weitere Umwandlung der Aminogruppe in
eine Guanidinogruppe synthetisiert.
(c) Synthese einer Verbindung der Formel (II), worin Y -CH=CH- bedeutet?
Diese Verbindung ist ein u-guanidino - cc, ß-ungesättigtes
Fettsäureamid, das durch die Formel:
H0NCNH(CH0) CH■- CHCONH... (ITC)
30 2 H 2 n 2 ·
NH .
dargestellt wird, worin η die oben gegebene Definition
besitzt. Diese Verbindungen werden bevorzugt durch Dehydratisierung
der bo-Guanidino-ß-hydroxy-fettsäure-amide
der Formel (lib), deren Herstellung oben beschrieben wurde, synthetisiert. Obgleich die Dehydratisierung nach
Verfahren erfolgen kann, wie sie üblicherweise bei der Dehydratisierung von ß-Hydroxy-fettsäure-amid verwendet
v/erden, ist es bevorzugt, die Reaktion bei milden neutralen Bedingungen durchzuführen. Einer der geeigneten
Wege besteht darin, die Dehydratisierung durch Einwirkung von Dicyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von Kupfer(II)-chlorid
(Journal of the American Chemical Society, 9_0, 3245 (1963)) durchzuführen. Da die Verbindung der Formel
(lib) im allgemeinen in Form des Säureadditionssalzes behandelt wird, ist ein bevorzugtes Lösungsmittel N,N-Dimethylformamid
wegen der Löslichkeit des Säureadditionssalzes. Die Reaktionstemperatur beträgt im allgemeinen
von Zimmertemperatur bis 1000C. Die Reaktionszeit liegt
im allgemeinen im Bereich von mehreren h bis mehreren Tagen, abhängig von der Reaktionstemperatur. Die Reaktionszeit
kann unter Verwendung eines Überschusses an Dicyclohexylcarbodiimid verkürzt v/erden. Beispiele von U3-guanidino-a,ß-ungesättigten
Fettsäureamiden, die so hergestellt werden, sind 4-Guanidino-2-butenamid, 5-Guanidino-2-pentenamid,
6-Guanidino-2-hexenamid, 7-Guanidino-2-heptenamid, 8-Guanidino-2-octenamid und 9-Guanidino-2-nonenamid.
Die Reduktion der Doppelbindung in dem lo-guanidino-a,ßungesättigten
Fettsäureamid der Formel (lic) kann entweder katalytisch in an sich bekannter Weise oder unter Verwendung
von Natriumborhydrid in Anwesenheit einer Übergangsmetallverbindung, wie Nickelchlorid oder Kobaltchlorid,
erfolgen (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, _19_, Ö17
(1971)), wobei man ein VP -guanidino-gesättigtes Fettsäureamid der Formel (Ha) erhält.
N- [4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2,2-dihydroxyethanamid
der Formel
35
35
HO..
^CHCONH(CH2 J4NH(CH2 J3NH2 (HI)
BAD ORIGINAL
welches das Ausgangsraaterial für die Synthese der Verbindung
der Formel (Ia) darstellt, wird auf folgende Weise synthetisiert, wie es in Einzelheiten in Journal of Antibiotics,
Band 34, 1625 (1931) beschrieben wird.
Die freie Aminogruppe der Verbindung, die durch die Formel
H2N (CH2 J4N(CH213NH-X1 (X)
10 i1
-ι
dargestellt wird, worin X eine Amino-Schutzgruppe bedeutet,
wird mit einem Dialkylacetal der Glyoxylsäure, welehe
durch die Formel
> CHCOOH ■ XO
ρ dargestellt wird, acyliert, worin X eine Alkylgruppe mit
1 bis 5 Kohlenstoffatomen bedeutet, oder sie wird mit
einem reaktiven Derivat der Carboxylsäure acyliert und
1 dann werden die Amino-Schutzgruppe X und die Alkylgruppen
X entfernt, wobei man die Verbindung der Formel (III)
erhält.
Die Verbindung der Formel (III) kann ebenfalls in hoher
Ausbeute durch Hydrolyse der zuvor erwähnten antibiotisehen Substanz BMG i62-aF2 (Spergualin) erhalten werden.
Die folgenden Bezugsbeispiel· und Beispiele erläutern die
Erfindung.
35 Bezugsbeispiel t
Synthese von (S)-7-Gtaanidino-3-hydroxyheptanamid:
1 (a) Synthese von (S)-3,7-Diaminoheptansäure:
Zu einer Lösung von 15 g (#2,15 mmol) L-Lysinhydrochlorid
in 150 ml Wasser gibt man 8,7 g (82,15 mmol) Natriumcarbonat
und 43,2 g (200 mmol) N-Ethoxycarbonylphthalimid. Das Gemisch wird 20 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das
Reaktionsgemisch wird mit 50 ml Ethylacetat gewaschen. Der pH-Wert der wäßrigen Schicht wird mit 6N-Chlorwasser~
stoffsäure auf 3,0 eingestellt und dann wird dreimal mit
100 ml Toluol extrahiert. Der Extrakt wird zweimal mit 100 ml Wasser (pH 2,0) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat
getrocknet und zur Trockene bei verringertem Druck eingedampft. Man erhält 27»95 g (34% Ausbeute) weißes
Pulver aus Di-N-phthaloyl-L-lysin, Zersetzungspunkt
15 71 bis 720C, [α]22 -32° (Cl, Methanol).
Zu 27,0 g (66,4 mmol) Di-N-phthaloyl-L-lysin gibt man 40 ml Oxalylchlorid. Das Gemisch wird in einem Ölbad bei
900C erhitzt, dann mit 40 ml 1,2-Dimethoxyethan vermischt
und am Rückfluß 2 h erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, erneut in 20 ml 1,2-Dimethoxyethan
gelöst und tropfenweise zu 500 ml einer Etherlösung, die 330 mmol Diazomethan enthält, unter Kühlen
mit Eiswasser gegeben. Das Gemisch wird dann 1 h gerührt.
Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft und in 250 ml wasserfreiem Methanol gelöst. Zu der Lösung gibt
man 50 ml einer Triethylaminlösung, die 3,4 g· (14,8 mmol)
Silberbenzoat enthält. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 15 h lang gerührt. Der Niederschlag wird abfiltriert,
in 100 ml Chloroform gelöst, dann wird von den unlöslichen Materialien abfiltriert und zur Trockene eingedampft.
Man erhält 15,3 g (53% Ausbeute) (S)-3,7-Diphthaloylaminoheptansäure-methylester,
Zersetzungspunkt
118 bis 1190C, [α]£2 -3° (C2, Chloroform).
35
Zu 15,0 g (34^5 mmol) (S)-3,7-Diphthaloylaminoheptansäure-methylester
gibt man 100 ml 1M ethanolisches Hydrazin-
hydrat und 100 ml 95%igeh Ethanol. Das Gemisch wird unter
Rückfluß 1 h lang (Ölbadtemperatur: 900C) erhitzt.
Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft, in 250 ml 5/jiger Chlorwasserstoff säure gelöst, auf oO°C 1 h
erhitzt, dann wird der pH-Wert mit 17?oigem wäßrigen Ammoniak
auf 7,1 eingestellt und dann wird das Gemisch durch eine Säule (innendurchmesser 27 mm), die mit j500 ml Amberlite
CG-50 (70% NH^-Typ) bepackt ist, gegeben. Die
Säule wird nacheinander mit 900 ml Wasser und 900 ml 0,2M
wäßrigem Amminlak gewas-chen und mit 0,5M wäßrigem Ammoniak
eluiert. Die Kinhydrin-positiven Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene' eingedampft«, Man erhält 3» 15 g
(57% Ausbeute) (S)-3,7-Diaminoheptansäure (C7H16N2O2.1/4
H2CO3) in farbloser Sirupform, [ocj|1 +2,9° (Cl, Wasser).
(b) Synthese von (s)-7"Guanidino-3-hydroxyheptanamids
Zu 30 ml eines Pyridin-Wasser-Triethylamin-(10;10:1)-Gemisches,
das 3,1 g (19,3 mmol) (S)-3,7~Diaminoheptansäure
von (a) oben enthält, gibt man langsam 4,81 g (19,3 mmol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid. Das Gemisch
wird 5 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch
wird zur Trockene eingedampft, dann in 30 ml Wasser gelöst, und der pH-Wert wird mit 6N-Chlorwasserstoffsäure
auf 6,4 eingestellt. Das Gemisch wird dann durch eine 100-ml-Säule (Innendurchmesser 16 mm), die mit
Amberlite CG-50 (80% NH^-Typ) bepackt ist, geleitet. Die
Säule wird mit 300 ml Wasser entwickelt. Das gesammelte abströmende Material wird weiter durch eine Säule (Innendurchmesser
16 mm), die mit 100 ml Dowex 50W-X4 (H-Typ) bepackt ist, geleitet. Die Säule wird nacheinander mit
300 ml Wasser und 0,2M wäßrigem Ammoniak gewaschen und mit 0,5M wäßrigem Ammoniak eluiert (10-ml-Fraktionsgröße).
Die Fraktionen Nr. 16 bis 33 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,73 g (48% Ausbeute)
eines weißen Pulvers von (S)-3-Amino-7-benzyloxycarbonylaminoheptansäure
(C1CH22N2O..H2O), Zersetzungspunkt
:-" -:":-:.:. 3236723
- SO -143 bis 1470C, [α]22 +14° (Cl, Methanol). Die Amberlite-CG-50-Säule
wird rait 0,5N wäßrigem Ammoniak eluiert, wobei
746 mg (2k% Gewinnung) von (S)-3,7-Diaminoheptansäure
erhalten werden.
Zu einer Lösung von 2,7 g (9,17 mmol) (S)-3-Amino-7-benzyloxycarbonylaininoheptansäure
in 33%iger wäßriger Essigsäure gibt man unter Eiskühlung tropfenweise im Verlauf
von 1 h eine Lösung von 1,9 g (27,51 mmol) Natriumnitrit in 10 ml Wasser. Das Gemisch wird weiter 1 h gerührt und
dann bei 50C während 24 h stehen gelassen. Nach Zugabe von 50 ml Wasser wird das Reaktionsgemisch zweimal mit
50 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trokkene
eingedampft. Man erhält 2,16 g rohes Pulver. Unter Verwendung der Säulenchromatographie (Innendurchmesser
28 mm) mit 200 g Silicagel (Wakogel C-200) wird das obige rohe Pulver mit einem Chloroform-Methanol-konzentrierter
wäßriger Ammoniak-(30:10:1 Volumen)-Gemisch entwikkelt
(20-ml-Fraktionsgröße). Die Fraktionen Nr. 51 bis 60 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält
460 mg (1790 Ausbeute) eines weißen Pulvers aus (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptansäure,
Zersetzungspunkt 115 bis 1170C, [α]23 +3° (C2, Methanol).
Zu einer Lösung aus 450 ml (1,52 mmol) (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptansäure
in 1,2-Dimethoxyethan gibt man unter Eiskühlen tropfenweise 7 ml (4,56 mmol)
einer Lösung von Diazomethan in Ether. Das Gemisch wird 30 min gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene
eingedampft. Man erhält 461 mg (9&% Ausbeute) (s)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptansäure-methylester,
Eine Lösung von 450 ml (1,45 mmol) (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptansäure-methylester
in 50 ml wässerfreiem Methanol wird unter Kühlen auf -100C mit gas-
xörmigem Ammoniak gesättigt und dann in einem verschlossenen
Rohr bei Zimmertemperatur 3 Tage stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft und der
Chromatographie unterworfen, wobei eine Säule (Innendurchmesser
20 ml), die 50 g Silicagel (Wakogel C-200) enthält, verwendet wird, und wobei mit Chloroform-Methanol
(100:1, ausgedrückt durch das Volumen) entwickelt wird. Die Fraktionen Nr. d>2 bis 106 (je 10 ml Volumen)
werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 371 mg (.8796 Ausbeute) eines weißen Pulvers aus (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanamid,
Zersetzungspunkt 126 bis 127°C, O]22 -3° (C5, Methanol).
In einem Gemisch aus 10 ml 9O?oigem wäßrigem Methanol und
0,01 ml Essigsäure löst man 350 mg (1,19 mmol) (S)-7-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanamid.
Nach Zugabe von 50 ml 5%iger Palladiumkohle wird das Gemisch bei einem
Wasserstoffdruck und bei Zimmertemperatur 3 h gerührt.
Nach Entfernung des Katalysators durch Filtration wird das Filtrat zur Trockene eingedampft, erneut in einem geringen
Wasservolumen gelöst und durch eine Säule (Innendurchmesser 12 mm), die 30 ml Dowex 50W-X4 (Η-Typ) enthält,
geleitet. Die Säule wird mit 90 ml Wasser gewaschen und mit 0,5 M wäßrigem Ammoniak eluiert (3 ml Fraktionsgröße).
Die Fraktionen Nr. 28 bis 34 werden vereinigt und
zur Trockene eingedampft. Man erhält 201 mg (96% Ausbeute) (S)-7-Amino-3-hydroxyheptanamid, Mq2 -2° (C2, Wasser).
Zu einer Lösung aus 190 mg (1,OS mmol) (S)-7-AmInO-3-hydroxyheptanamid
in 3 ml V/asser gibt man 0,54 ml 2N wäßrige Natriumhydroxidlösung. Zu der entstehenden Lösung
gibt man unter Eiskühlen tropfenweise im Verlauf von 30 min 1 ml einer Methanollösung, die 129 mg (1,03 mmol) 2-Methyl-1-nitrosoharnstoff
enthält. Das Gemisch wird weiter
5 h gerührt, dann wird der pH-Wert mit 6N-Chlorwasserstoffsäure
auf 6,0 eingestellt, es wird zur Trockene
BAD ORIGINAL
eingedampft und unter Verwendung einer Säule (Innendurchmesser 15 ml), die 30 g Silicagel (Wakogel C-200) enthält,
und durch Entwicklung mit einen Gemisch aus Chloroform, Methanol und konzentriertem wäßrigen Ammoniak
(60:10:1, ausgedrückt durch das Volumen) wird durch Chromatographie gereinigt. Die Fraktionen Nr. 67 bis 90 (6 ml
Fraktionsgröße) werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält I87 mg (70% Ausbeute) eines weißen Pulvers
von (S)-7-Nitroguanidino-3-hydroxyheptanamid, Zersetzungspunkt 143 bis 149°C, Ca]^2 -2° (C2, Methanol).
In einem Gemisch aus 15 ml Wasser, 15 ml Methanol und 7,5 ml Essigsäure löst man 170 mg (0,69 mmol) (S)-7-Nitroguanidino-3-iiydroxyheptanamid.
Nach Zugabe von 50 mg 5/oiger Palladiumkohle wird das Gemisch unter einem Wasserstoff
strom 1 h bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Entfernung des Katalysators durch Filtration wird das FiI-trat
zur Trockene eingedampft. Man erhält 165 mg eines rohen Pulvers. Das rohe Pulver wird in 10 ml V/asser gelöst,
durch eine Säule (Innendurchmesser 12 mm), die mit 20 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt ist, geleitet und
dann wird mit 0,5M wäßriger Natriumchloridlösung (2 ml Fraktionsgröße) eluiert. Die Fraktionen Nr. 18 bis 25
werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die Methanollösungen werden
vereinigt, durch eine Säule (20 mm Innendurchmesser), die mit 100 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und
mit Methanol (1 ml Fraktionsgrcße) wird eluiert. Die Fraktionen 28 bis 46 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft.
Man erhält 149 mg (91% Ausbeute) eines weißen Pulvers aus (S)-7-Guanidino-3-hydroxyheptanamid-hydrochlorid
(C0H10N4O2-HCl), [α]22 -2° (C2, Wasser).
Bezugsbeispiel 2 35
Synthese von 7-Guanidino-2-heptenamid:
BAD O
t-"- ..'-JO :.:3238725
- -53-
Zu einer Lösung aus 955 mg (4 mmol) (S)-7-Guanidino-3™
hydroxyheptanamid-hydr ο chlorid in 20 ml wasserfreiem
N,N-Dimethylformamid gibt man 2,48 g (12 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid
und 40 mg Kupfer(II)-chlorid. Das Gemisch wird 2 Tage bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch
wird zur Entfernung des Niederschlags filtriert, und das FiItrat wird bei verringertem Druck konzentriert.
Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst und zweimal mit 10 ml Ethylacetat gewaschen. Die wäßrige
Schicht wird zur Trockene eingedampft, in 5 ml Wasser gelöst, durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit
50 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt war, geleitet und
die Säule wird mit 200 ml 0,5M wäßriger NatriumchloridlÖ-sung
(10 ml Fraktionsgröße) eluiert. Die Fraktionen Wr.
17 bis 30 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit Methanol extrahiert. Die Methanollösung wird
durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und dann wird mit
Methanol (5 ml Fraktionsgröße) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 9 bis 16 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft.
Der Rückstand (Gewicht 95° ms) wird aus Ethanol-Aceton
kristallisiert. Man erhält 790 mg (89,5% Ausbeute)
7-Guanidino-2-heptenamid-hydrοchlorid, Fp. 162 bis 1680C.
Proton-NMR (Bestimmt in Deuteromethanol), 4 s
1,4 bis 1,8 (CH2x2>, 2,27 (CH2), 3,20 (CH2),
5,98 (CH), 6,80 (CH)
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm :
3370, 3150, 1660, 1625, 1610, 1590, 1415,
1395, 1370.
Bezugsbeispiel 3 35 Synthese von 7-Guanidinoheptanamid-hydroChlorids
Zu einer Lösung aus 441 mg (2 mmol) 7-Guanidino-2-hepten-
amid-hydrochlorid in 7 ml Methanol gibt man 47,5 mg (0,2
mmol) Nickelchlorid. Zu dem Gemisch gibt man unter Rühren bei Zimmertemperatur 139 mg (5 mmol) Natriumborhydrid
in geringen Teilen. Nach Zugabe wird das Gemisch veiter 1,5 h gerührt, dann von einem schwarzen Niederschlag abfiltriert
und das Filtrat wird zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 5 ml 0,5M wäßriger Natriumchloridlösung
gelöst, durch eine Säule (Innendurchmesser 30 mm),
die mit 100 ml Diaion HP-20 bepackt war, geleitet und mit 300 ml 0,5M wäßriger Natriumchloridlösung und dann
mit 300 ml Wasser (15 ml Fraktionsgröße) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 25 bis Nr. 33 werden vereinigt, zur Trokkene
eingedampft und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser
20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet und es wird mit Methanol (5 ml Fraktionsgröße)
entwiekelt. Die Fraktionen Nr. 8 bis 13 werden vereinigt,
zur Trockene eingedampft und aus Ethanol-Aceton kristallisiert. Man erhält 372 mg (83,5% Ausbeute) farblose Kristalle
aus 7-Guanidinoheptanamid-hydrochlorid, Schmelzpunkt
140 bis 1410C.
Proton-NMR (bestimmt in Deuteromethanol), ^:
1,2 bis 1,9 (CH2x4), 2,23 (CH2), 3,20 (CH2).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm~ :
3350, 315O, 2920, 1655, I630, 1590, 1455, 1430,
1400, 1220, 1165, 1130, IO65.
30 Bezugsbeispiel 4
Synthese von S-Guanidino-3-hydroxyoctanamid:
(a) Synthese von S-Benzyloxycarbonylamino-3-ketooctansäure-ethylester:
Zu einer Lösung aus 6,56 g (50 mmol) 6-Aminohexansäure in
?ÄD ORIGiNAI,
-SS-
25 ml 2N-wäßriger Natriumhydroxid-Lösung gibt man 5 ml
Ethylether. Zu dem Gemisch gibt man unter Kühlen mit Eis und Rühren tropfenweise im Verlauf von 30 min 10 ml Benzyloxycarbonylchlorid
und 37,5 ml 2N wäßriger Natriumhydroxidlösung.
Nach Zugabe wird die Temperatur auf Zimmertemperatur
gebracht und dann wird 2 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zweimal mit 20 ml Ethylether gewaschen.
Die wäßrige Schicht wird mit konzentrierter Chlor-Wasserstoff säure angesäuert und dreimal mit 50 ml Ethylacetat
extrahiert. Die Extraktlösungen werden vereinigt, mit gesättigter Salzlösung gewaschen, über wasserfreiem
Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel durch Destillation befreit. Man erhält 12,16 g (92% Ausbeute) 6-Benzyloxycarbonylaminohexansäure,
Fp 127 bis 1280C.
Eine Lösung aus 2,65 g (10 mmol) 6-Benzyloxycarbonylaminohexansäure
und 1,62 g (10 mmol) im Handel erhältlichem 1,1'-Carbonyldiimidazol in 25 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran
wird während 15 min bei Zimmertemperatur gerührt.
Zu dem Reaktionsgemisch gibt man eine Suspension aus
6,13 g (40 mmol) eines weißen Pulvers von Magnesiumenolat von Monoethylmalonat (hergestellt aus 5,2ö g Monoethylmalona.t
und 972 mg Magnesium) in 50 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran.
Das Gemisch wird 2 h bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Zugabe von 50 ml IN-Chlorwasserstoffsäure und
Rühren während 10 min wird das Reaktionsgemisch dreimal mit 50 ml Chloroform extrahiert«, Die Chloroformschicht
wird nacheinander mit 1N Chlorwasserstoffsäure, gesättigter
wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung und gesättigter
Salzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel durch Destillation befreit.
Der Rückstand wird durch eine Säule aus 100 g Silicagel 60 (Merck and Co.) geleitet und mit Chloroform
(20 g Fraktionsgröße) eluiert. Die Fraktionen Nr. 43 "bis
105 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,35 g (70% Ausbeute) Ethyl-8-benzyloxycarbonylamino-3-ketooctanoat.
Proton-NMR-opektrum (in Deuterochloroform), £;
1,27 (CH3), 1,1 bis 1,9 (CH2x3), 2,52 (CH2),
3,17 (NCH2), 3,AO (CH2), 4,13 (CH2), 5,05 (NH),
5,09 (CH2), 7,32 (C6H5).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm" :
336O, 2920, 173O, 1710, 1520, 1240.
(b) Synthese von 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid:
In 20 ml Ethanol löst man 2,01 g (6 mmol) Ethyl-ü-benzyloxycarbonylamino-3-ketooctanoat,
erhalten gemäß (a) oben. Zu der ^ösung gibt man portionsweise unter Rühren bei Zimmertemperatur
227 mg (6mmol) Natriumborhydrid. Das Gemisch wird 30 min gerührt, dann mit mehreren Tropfen Essigsäure
vermischt, in 100 ml Wasser gegossen und dreimal mit 50 ml Chloroform extrahiert. Die Chloroformschichten
werden vereinigt, nacheinander mit 1N Chlorwasserstoffsäure,
gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung
und gesättigter Salzlösung gewaschen, dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und von Lösungsmittel
durch Destillation befreit. Man erhält 2,00 g (99% Ausbeute
) Ethyl-S-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctanoat,
Fp. 47 bis 500C.
In 40 ml Methanol, welches mit gasförmigem Ammoniak gesättigt ist, löst man 1,69 g (5 mmol) Ethyl-8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctanoat.
Die Lösung wird 3 Tage bei Zimmertemperatur gerührt und das Reaktionsgemisch
wird zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird aus Ethanol kristallisiert. Man erhält 1,13 g (72,5?S Ausbeute)
8-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctanamid, Fp. 100
bis 1010C.
Zu einer ^ösung aus 1,04 g (3,2 mmol) 8-Benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctanamid
in 20 ml Methanol gibt man 3,2 ml 1N Chlorwasserstoffsäure und 200 ml 10%ige Palla-
BAD
diurnkohle. Das Gemisch wird unter Wasserstoffstrom bei
Zimmertemperatur 3 h gerührt. Der' Katalysator wird abfiltriert und das FiItrat wird zur Trockene eingedampft.
Man erhält 670 mg e-Amino^-hxdroxyoctanamid-hydrochlorid.
Zu einer Lösung aus 670 mg S-Amino^-hydroxyoctanamidhydrochlorid
in ei "ml 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung
gibt man 663 mg (2,4 mmol) S-Methylisotioharnstoffhemisulfat.
Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgeraisch wird mit 1N Chlorwasserstoff
säure auf einen pH-Wert von 6 eingestellt, zur Trokkene eingedampft und in 5 ml ΊΜ Salzlösung gelöst» Die
Lösung wird durch eine Säule aus 160 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi
Chemical Co.) geleitet und die Säule wird nacheinander mit 400 ml 1M Salzlösung, 400 ml 0,UM Salzlösung
und 800 ml 0,6M Salzlösung (15 g Fraktionsgröße) eluiert. Die Fraktionen Nr. 41 bis 07 werden vereinigt,
zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml Methanol
extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule aus 300 ml Sephadex LH-20 geleitet und dann wird mit Methanol
eluiert, wodurch entsalzt wird (7 ml FraktionsgrSße). Die Fraktionen Nr. 25 bis 35 werden vereinigt und zur Trockene
eingedampft. Man erhält 687 mg (85% Ausbeute) 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid-hydrochloridi
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), S ;
1,4 bis 1,8 (CH2x4), 2,36 (CH2), 3»20 (NCH2),
3,95 (CH).
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm" :
3350, 3170, 2930, 1655, 1400, 1175.
Bezugsbeispiel 5
35 Synthese von 8-Guanidino-2~octenamids
Auf ähnliche Weise wie bei der Synthese von 7-Guanidino-
2-heptenamid beim Bezugsbeispiel 2 v/erden 218 mg (86%
Ausbeute) e-Guanidino-^-octenamid-hydrochlorid, Fp.
bis 165°C, aus 270 mg B-Guanidino-^-hydroxyoctanamidhydrochlorid
erhalten.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), S :
1,4 bis 1,9 (CH2x3), 2,25 (CH2), 3,19 (NCH2),
5,94 (CH), 6,79 (CH).
St
IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm:
3400, 3120, 2920, 1660, I63O, 1400.
Bezugsbeispiel 6 15 Synthese von 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid:
Auf ähnliche Weise, wie bei der Synthese von 3-Guanidino-3-hydroxyoctanamid
beim Bezugsbeispiel 4 beschrieben, werden 892 mg 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid-hydrochlorid
aus 2,56 g 7-Aminoheptansäure erhalten.
Proton-NMR-Spektrum (in Deuteromethanol), O:
1,2 bis 1,9 (CH2x5), 2,35 (CH2), 3,19 (NCH2),
3,92 (CH).
25
25
IR-Absorptionspektrum (KBr-Tablette), cm" :
. 335O, 3180, 2940, 1660, 1400, 1175.
Bezugsbeispiel 7 30
Synthese von 9-Guanidino-2-nonenamid:
Auf ähnliche Weise, wie bei der Synthese von 7-Guanidino-2-heptenamid
beim Bezugsbeispiel 2 beschrieben, werden 253 mg (7590 Ausbeute) 9-Guaniditio-2-nonenamid-hydrochlorid
aus 36I mg 9-Guanidino-3-hydΓoxynonanaInid-hydrochlorid
erhalten. Fp 132 bis 135°C.
BAD
323672
1 Proton-NMR-Spektrum (Deuteromethanol), & :
1,2 bis 1,9 (CH2x4), 2,23 (CH2), 3,20 (NCH2),
5,97 (CH), 6, -Ό (CH).
5 IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette), cm:
3350, 3175, 2940, 1660, 1620, 1420.
Bezugs beispiel ü
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid:
(a) Synthese von Mono-N-benzyloxycarbonyl-1 j,4»butandiamin:
Zu einer Lösung aus 1,76 g (20 mmol) 1,4-Butandiamin in
30 ml 5Obigem wäßrigen Methanol gibt man 5,48 g (20 mmol)
Benzyl-S-4,6-dimethylpyrimid~2~ylthiocarbonat (Kokusankagaku
Co.)· Das Gemisch wird 3 h gerührt. Das Reaktionsgemisch
wird zur Entfernung des Niederschlags filtriert (2,03 g (29?o) Di-N-benzyloxycarbonylverbindung werden
aus dem Präzipitat erhalten). Das Filtrat wird zur Trokkene
eingedampft, in 250 ml Chloroform gelöst und fünfmal mit 100 ml Wasser gewaschen. Die Chloroformschicht
wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Man erhält 1,0 g (23% Ausbeute)
Mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butandiamin, einen farblosen
Sirup.
(b) Synthese von O-Toxyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-1-propanol:
Zu einer Lösung aus 1,5 g (20 mmol) 3-Amino-1-propanol in 30 ml Methanol gibt man 4,3 g (20 mmol) tert.-Butyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonate
Das Gemisch wird 6 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft,
in 200 ml Chloroform gelöst und mit 200 ml Was-
323672S
ser gewaschen. Die Chloroformschicht wird konzentriert und der Säulenchromatographie unter Verwendung von 300 g
Silicagel (Wakogel C-200) unterworfen. Es wird ein Toluol-Ethylacetat(1:1,
ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklungslösungsmittel (15 ml Fraktionsgröße) verwendet.
Die Fraktionen Nr. ^2 bis 151 v/erden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Man erhält 2,95 g (^ 4% Ausbeute)
3-tert.-Butyloxycarbonylamino-1-propanol, eine frablöse ölige Substanz.
10
Zu einer Lösung aus 2,95 g (16,9 mmol) 3-tert.-Butoxycarbonylamino-1-propanol
in 50 ml Pyridin gibt man unter Eiskühlung und unter Argonatmosphäre tropfenweise im Verlauf
von 40 min eine Pyridinlösung, die 3,36 g (17,7 mmol) p-Toluolsulfonylchlorid
enthält. Das Gemisch wird über Nacht bei 70C stehen gelassen, mit einem geringen Volumen an
Wasser vermischt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 200 ml Chloroform gelöst, nacheinander mit
5/£iger wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung, gesättigter
v/äßriger Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur
Trockene eingedampft. Der Rückstand wird der Säulenchromatographie unter Verwendung von 120 g Silicagel (Wakogel
C-200) und einem Toluol-Ethylacetat(8:1, ausgedrückt
durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklungsmittel unterworfen (15 ml Fraktionsgröße). Die Fraktionen Nr. 35 bis
68 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 3,06 g (55% Ausbeute) O-Tosyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-1-propanol,
eine farblose ölige Substanz.
30
(c) Synthese von N-tert.-Butoxycarbonyl-N-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butandiamin:
In 15 ml N,N-Dimethylformamid löst man 800 mg (2,43 mmol)
O-Tosyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-i-propanol, erhalten
gemäß (b) oben. Nach Zugabe von 510 mg (4,8 mmol) Lithiumbromid
(LiBr-H2O) wird das Gemisch bei Zimmertemperatur
24 h gerührt. Zu don Reaktionsgemisch, welches die Bromverbindung
enthält, gibt man 540 rag (2,43 mmol) Mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butandiamin,
erhalten gemäß (a) oben, und 0,34 ml Triethylamin. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur
4-; h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch gibt man 699 Qg (2,9 nmol) tert.-Butyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonat.
Das Gemisch wird 13 h bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft,
in 100 ml Chloroform gelöst, mit 50 ml Wasser ge-
]0 waschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und
zur Trockene eingedampft. Der Rückstand.wird der Säulenchromatographie unter Verwendung von 200 g Silicagel
(Uakogel C-200) und einem Toluol-Ethylacetat(4;1S ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch als Entwicklungsmittel
unterworfen (12 ml Fraktionsgröße)« Die Fraktionen Nr.
134 bis 165 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 606 mg (52$ Ausbeute) N-Benzyloxycarbonyl-N1-tert.-butoxycarbonyl-N1-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butandiamin,
eine farblose sirupartige Substanz.
Zu einer Lösung aus 144 mg (0„3 mmol) der obigen sirupartigen
Substanz in 5 ml Methanol gibt man 100 mg 5% Palladium-Bariuincarbonat.
Das Gemisch wird unter einem Wasserstoff strom bei Zimmertemperatur 5 h gerührt. Nach der Entfernung
des Katalysators durch Filtration wird das Filtrat zur Trockene eingedampft. Man erhält 103 mg (100% Ausbeute
) N-tert.-Butoxycarbonyl-N'-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl
)-1,4-butandiamin.
(d) Synthese von N-[4-(3-Aminopröpyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamidi
In 2 ml Ethylacetat löst man 100 mg (0,29 mmol) N-tert„-Butoxycarbonyl-N-(tert.-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butandiamin,·
erhallten gemäß (c) oben, und I4d mg (1
mmol) 2,2-Diethoxyessigsäure. Zu der entstehenden Lösung
gibt man 135 mg (1 mmol) 1-Hydroxybenzotriazol und 206 mg
] (1 mraol) Dicyclohexylcarbodiimid. Das Gemisch wird bei
Zimmertemperatur 15 h gerührt. Der Niederschlag wird abfiltriert
land mit kaltem Ethylacetat gewaschen. Das FiI-trat und die Waschlösungen v/erden vereinigt und mit 1M
wäßrigem Ammoniak und dann mit Wasser gewaschen. Die Ethylacetatschicht wird über wasserfreiem Natriumsulfat
getrocknet, zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird der Säulenchromatographie unter Verwendung einer
Säule aus 20 g Silicagel (Wakogel C-200) und einem To-
]0 luol-Ethylacetat(1:2, ausgedrückt durch das Volumen)-Gemisch
als Entwicklungslösungsmittel unterworfen (3 ml Fraktionsgröße). Die Fraktionen Nr. 14 bis 21 werden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Man erhält 109 mg (79% Ausbeute) N-(.'4-(3-tert.-Butoxycarbonylaminopropyl)-4-tert.-butoxycarbonylaminobutylJ-2,2-diethoxyethanamid,
eine farblose sirupartige Substanz.
Zu einer Lösung von 44 mg (0,13 mmol) der obigen sirupartigen
Substanz in 1 ml Dioxan gibt man 2,5 ml 0,1N Chlorwasserstoffsäure.
Das Gemisch wird in einem Ölbad bei 1000C während 4 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit
0,2N wäßriger Natriumhydroxidlösung auf einen pH-Wert von 6 neutralisiert und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand
wird mit 1,5 ml Methanol extrahiert und die Methanolschicht
wird durch eine Säule (Innendurchmesser 16,5 mm), die mit 100 ml Sephadex LH-20 bepackt wird, geleitet.
Es wird mit Methanol entwickelt (2 ml Fraktionsgröße). Die Fraktionen Nr. 22 bis 25, die bei der Ninhydrinreaktion
positiv sind, v/erden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 13 mg (46?S Ausbeute) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2,2-dihydroxyethanamiddihydrochlorid,
eine farblose sirupartige Substanz.
Beispiel 1 35
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(4-guanidinobutanamido)-2-hydroxyethanamid:
- 59-- 63
Ein Geraisch aus 360 mg (2 mmol) 4-Güanirlinobutanamidhydrochlorid,
701 mg (2,4 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
264 mg (2 mmol) Glutarsäure und 0,36 ml Wasser wird bei 600C
24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion v/erden 5 ml
Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und dann v/ird das Reaktionsgenisch durch eine Säule (Innendurchmesser
20 mm), die mit 150 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt
war, geleitet und gemäß Gradienteneluierung mit 1,5 1 Wasser und 1,5 1 0,ÖM wäßriger Natriumchloridlösung (15
ml Fraktionsgröße) fraktioniert. Die Fraktionen'Nr. 125
bis 137, die einer Natriumchloridkonzentration von 0s48
bis 0,56m entsprechen, werden vereinigt, dann konzentriert und dreimal mit 10 ml Methanol extrahiert. Die
Methanolschicht v/ird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet
und dann wird mit Methanol (7 ml Fraktionsgröße) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 9 bis 15 v/erden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Man erhält 318 mg (35% Äusbeute)
eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(4-guanidinobutanaraido)-2-hydroxyethanamidtrihydrochlorid.
Beispiel 2
25
Synthese von N-[%-(3-Aminopropyl)-amlnobutyl]»2-(5-guanidinopentanamido)-2-hydroxyethanamid
ϊ
Ein Gemisch aus 92,4 mg (0,48 mmol) 5-Guanidinopentanamid-hydrochlorid,
166,5 mg (0,57 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
62,8 mg (0,48 mmol) Glutarsäure und 0,1 ml Wasser wird bei 600C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion
werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, welches dann auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1
beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt wird. Man erhält 82,5 mg
(37>1/j Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(5-guanidinopentanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
5 Beispiel 3
Synthese von N-['4-(3-Arninopropyl)-aminobutyl ]-2-( 6-guanidinohexanarnido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 446 mg (2,14 mmol) 6-Guanidinohexanamidhydrochlorid,
750 mg (2,57 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
283 mg (2,14 mmol) Glutarsäure und 0,45 ml Wasser wird bei 600C
während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das Reaktionsgemisch
wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ)
und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 459 mg (44?o Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(6-guanidinohexanamido)-2-hydroxy-
ethanamid-trihydrochlorid.
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 360 mg (1,62 mmol) 7-Guanidinoheptanamidhydrochlorid,
568 mg (1,94 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
214 mg (1,62 mmol) Glutarsäure und 0,36 ml Wasser wird bei 600C
während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und das
entstehende Gemisch wird auf ähnliche Weise, v/ie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 317 mg (39% Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-
Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Synthese von N- [4- (3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2- (<J-guanidinooctanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 500 mg (2,11 mmol) 3-Guanidinooctanamidhydrochlorid,
740 mg (2,53 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl
J-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid, 335 mg (2,53 mmol) Glutarsäure und 0,34 ml Wasser wird bei 600C
während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion v/erden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das
entstehende Gemisch wird auf ähnliche V/eise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Vervrendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 526 mg (49?6 Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(ö-guanidinooctanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(9-guanidinononanamido)-2-hydroxyethanamid;
Ein Gemisch aus 316 mg (1,26 mmol) 9-Guanidinononanamid™
hydrochlorid, 442 mg (1,51 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
166 mg (1,26 mmol) Glutarsäure und 0,01 ml Wasser wird bei 600C
während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion werden 5 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben und das
Gemisch wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 be- . schrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ)
und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 324 mg (49% Ausbeute)
eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-' aminobutyl]-2-(9-guanidinononanamido)-2-hydroxyethanamidtrihydrochlorid
.
Beispiel 7
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(4-guanidinobutanamido
)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 45,5 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(4-guanidinobutanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
in 1 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,1 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch
wird bei Zimmertemperatur 17 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und in 3 ml
Wasser gelöst. Die entstehende Lösung wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml CM-Sephadex
C-25 bepackt war, geleitet und durch Gradienteneluierung mit je 1 1 Wasser und 1M wäßriger Natriumchloridlösung
(17 ml Fraktionsgröße) fraktioniert. Die Frak-.tionen Nr. 67 bis 71, die der Salzkonzentration von 0,63
bis 0,67M entsprechen, werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die
Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 20 mm), die mit 150 ml Sephadex LH-20 bepackt war, geleitet
und dann wird mit Methanol (7 ml Fraktionsgröße) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 10 bis 14 werden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Man erhält 31,4 mg (67% Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(4-guanidinobutanamido)-2-methoxyethanamidtrihydrochlorid.
Beispiel d 30
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(6-guanidinohexanamido
) -2-me thoxyethanamid :
Zu einer Lösung aus 177 mg (0,37 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(6-guanidinohexanamido)-2-hydroxy-
ethanamid-trihydrochlorid in 3,6 ml wasserfreiem Methanol
gibt man 0,36 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Ge-
-:- *"* 3235725
- 67.
misch wird bei Zimmertemperatur 17 h gerührt. Das Reaktionsgemisch
wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weiße Pulver wird in ähnlicher Weise, wie
im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 110 mg (6Ö?o Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(6-guanidinohexanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid".
10 B e i s ρ i e 1 9
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamidcV-2-methoxyethanamid:
J-
Zu einer Lösung aus 920 mg (1,85 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl
)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
in 20 ml wasserfreiem Methanol gibt man 2 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch
wird bei Zimmertemperatur 15 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und das
entstehende weiße Pulver wird in 15 ml Wasser gelöst. Der pH-Wert der wäßrigen Lösung wird mit 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung
auf 6 eingestellt, dann wird die Lösung durch eine Säule (Innendurchmesser 25 mm), die mit 300 ml
CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) bepackt war, geleitet und gemäß Gradienteneluierung mit js 2 1 Wasser und 1M wäßriger
Natriumchloridlösung (17 ml Fraktionsgröße) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 138 bis 152, die einer Natriumchloridkonzentration
von 0,59 bis 0,65M entsprechen, werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und zweimal mit 10 ml
Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule (Innendurchmesser 25 mm), die mit 300 ml Sephadex
LH-20 bepackt war, geleitet und dann mit Methanol (7 ml Fraktionsgröße) entwickelt. Die Fraktionen Nr. 16 bis 32
werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 607 mg (64?6 Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
1 . Beispiel 10
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(8-guanidinooctananido)
-2-methoxyethananiid:
Zu einer Lösung von 220 ng (0,43 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(ö-guanidinooctanamido)-2-hydroxyethananid-trihydrochlorid
in 4,4 ml wasserfreiem Methanol givt man 0,44 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch
wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert und
das entstehende weiße Pulver wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 195 mg (αβ% Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(3-guanidinoo
ctanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 11 20
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidinononanamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung von 160 mg (0,31 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]~2-(9-guanidinononanamido)-2-hydroxy-
ethanamid-trihydrochlorid in 3»2 ml wasserfreiem Methanol
gibt man 0,32 ml 2N Hydrogenchlorid-Methanol. Das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperaturgerührt. Das Reaktionsgenisch
wird bei verringertem Druck konzentriert und das entstehende weiße Pulver wird auf ähnliche V/eise,
wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man
erhält 107 mg (65/ά Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(9-guanidinononanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
1 . ■ Beispiel. 12
Synthese von N-[4-(3-A^inopropyl)-aminobutyli-2-(7-guanidinoheptananido)-2-ethoxyethanamid:
Zu 100 mg "(0,20 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
gibt man 10 ml wasserfreien Ethanol und 1 ml wasserfreien Ethanol, gesättigt mit gasförmigem Hydrogen»
chlorid. Das Geraisch wird bei Zimmertemperatur 24 h gerührt.
Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien filtriert und das Filtrat wird bei
verringertem Druck konzentriert» Das entstehende weiße Pulver wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben,
unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ)
und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 71 mg (6350 Ausbeute)
eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2~ethoxyethanamidtrihydrοchlorid.
Bei s.p i e 1 13
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido
)-2-butoxyethanamid:
Zu 100 mg (0,2 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
gibt man 10 ml n-Butanol und 1 ml n-Butanol, gesättigt
mit gasförmigem Hydrogenchlorid. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 2 Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien
filtriert und das Filtrat (n-Butanollösung) wird dreimal
mit 5 ml Wasser extrahiert. Die wäßrige Schicht wird mit
Amberlite IR-410 neutralisiert und bei verringertem Druck
konzentriert. Der Rückstand wird auf ähnliche Weise, wie
im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man
erhält 15 mg (13,5'j Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aninobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)·
2-butoxyethanamid- tr ihydr ο chlor id..
5 Beispiel 14
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-(2-hydroxy)-ethoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-arainobutylJ-2-(7-guanidinoheptananido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
in 5 ml Ethylenglykol gibt man 0,5 nil Ethylenglykol, gesättigt mit gasförmigem Chlorwasserstoff.
Das Gemisch v/irä über Nacht bei Zimmertemperatür gerührt. Nach Zugabe von 25 ml Wasser wird der pH-Wert
des Reaktionsgemisches mit 1N v/äßriger Natriumhydroxidlösung
auf 6 eingestellt und dann wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung
von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt.
Man erhält 63 mg (53°o Ausbeute) eines weißen Pulvers
von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-(2-hydroxy)-ethoxyethanamid-trihydrochlorid.
25 Beispiel15
Synthese von N~[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-benzyloxyethanamid:
Zu 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
gibt man 10 ml Benzylalkohol und 1 ml Benzylalkohol, gesättigt mit gasförmigem Chlorwasserstoff. Das Gemisch
wird bei Zimmertemperatur 13 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Entfernung der unlöslichen Materialien
filtriert und die Benzylalkoholschicht wird dreimal
mit 5 ml V/asser extrahiert. Die wäßrige Schicht wird
rait Amberlite 111-410 neutralisiert, zur Trockene eingedampft und auf ähnliche Weise, wie imBeispiel 7 beschrieben,
unter Verwendung von .CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 61 mg (52% Ausbeute)
eines weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-benzyloxyethanamid-trihydrochlorid.
S^Tithese von N- [4- (3-Aminopropyl) -aminobutyl J-2- (7-guanidino-2-heptenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 234,5 mg (1,06 mmol) 7-Guanidino-2-heptenamid-hydrochlorid,
372,3 mg (1,27 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl ) -aminobutyl J-2, 2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
14O,4 mg (1,06 mmol) Glutarsäure und o,2 ml Wasser wird bei 600C 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird
das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Öephadex C-25 (Na-Typ)
und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 244,6 mg (46,5/o Ausbeute) eines weißen Pulvers von N-£4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
25
25
B ei s pi e 1 17
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(8-guanidino-2-octenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 202,4 mg (0,o6 mmol) 8-Guanidino-2-octenamid-hydrοchlorid,
302,4 mg (1,04 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl )-aminobutylJ-2,2-dihydroxyethanamid-dIhydrochlorid,
113,9 mg (0,86 mmol) Glutarsäure und 0,2 ml Wasser
wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise,
wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-
Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man
erhält 12C,3 mg (29,2?; Ausbeute) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl
]-2- (cs-guanidino-2-octenaniido )-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Beispiel 18
Synthese von N-[4-(3-Arninopropyl)-aninobutyl]-2-(9-guanidino-2-nonenamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 206,2 mg (0,β4 mmol) 9-Guanidino-2-nonenamid-hydrochlorid,
291,0 mg (1,00 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-dihydrochlorid,
109,6 mg (0,64 mmol) Glutarsäure und 0,2 ml V/asser wird bei 600C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion
wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 135,0 mg (31 »1/S Ausbeute) eines weißen Pulvers von
N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl3-2-(9-guanidino-2-nonenamido)-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-methoxyethanamid:
Zu einer Lösung aus 50,3 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl
) -aminobutyl ]-2- (7-guanidino-2-heptenami do )-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid
in 1 ml wasserfreiem Methanol gibt man 0,1 ml 2N Chlorwasserstoff-Methanol. Das Gemisch
wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt und das Reaktionsgemisch wird unter verringertem Druck konzentriert.
Der Rückstand wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 7 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man er-
lÄÖ QRtGlMAl
hält 37,2 mg (72,4Ji Ausbeute) von N-[4-(3-Aminopropyl)-aninobutyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-methoxyethanaciid-trihydrochlorid.
5 B e i s ρ i e 1 20
Synthese von N-[4-(3-Amlnopropyl)-aminobutyl ]-2-(8-giianidino-3-hydroxyoctanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 150 mg (0,59 mmol) 8-Guanidino-3-hydroxyoctanamid-hydrochlorid,
208 mg (0,71 mmol) N-£4-(3-Aininopropyl)
-aminobutyl J-2:, 2-dihydroxyethanamid-dihydro-Ghlorid,
7° mg (0,59 mmol) Glutarsäure und 0,1 ml Wasser wird bei 600C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der
Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben," unter Verwendung von CM-Sephadex
C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 120,7 mg (38,6% Ausbeute) eines weißen Pulvers
von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(ö-guanidino-3™
hydroxi'Octanamido )-2-hydroxyethanamid-trihydrochlorid.
Synthese von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(9-guanidino-3-hydroxynonanamido)-2-hydroxyethanamid:
Ein Gemisch aus 325,8 mg (1,23 mmol) 9-Guanidino-3-hydroxynonanamid-hydrochlorid,
428,1 mg (1f47 mmol) N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2,2-dihydroxyethanamid-di-
hydrochlorid, 161,4 mg (1,23 mmol) Glutarsäure und 0,3
ml Wasser wird bei 60°C während 24 h erhitzt. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsgemisch auf ähnliche
Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20
gereinigt. Man erhält 220,8 mg (33,4$S Ausbeute) eines
weißen Pulvers von N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(9-guanidino-3-hydroxynonanamido)-2-hydroxyethanamidtrihydrochlorid.
1 Beispiel 22
Synthese von 11-0-Methylspergualin:
Zu einer Lösung aus 1,ci g (3»51 mmol) (-)-Gpergualintrihydrochlorid
in 31 ml wasserfreiem Methanol gibt man 3,5
ml 2N Chlorwasserstoff-Methanol. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur
15 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene eingedampft und dann in 30 ml Wasser gelöst,
durch eine Säule von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ; 600 ml) geleitet und gemäß Gradienteneluierung mit je 3 1 Wasser
und 1M wäßriger Natriumchloridlösung (Fraktionsgröße 17 g)
fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 208 bis 230 werden vereinigt, zur Trockene eingedampft und dreimal mit 10 ml
Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine
Säule von Sephadex LH-20 (300 ml) geleitet und mit Methanol eluiert, um eine Entsalzung zu bewirken (Fraktionsgröße 7g). Die Fraktionen Nr. 19 bis 33 werden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Man erhält 1,528 g (8250
Ausbeute) eines weißen Pulvers von 11-0-Methylspergualintrihydrochlorid.
Für die Trennung von 11-0-Methylspergualintrihydrochlorid
in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC mit einer Säule von 2 cm 0 χ 25 cm, bepackt mit Nucleosil
3OC^Q, ein Umkehrphasen-Packungsmaterial von K. Nagel Co.,
und die folgenden Bedingungen:
Strömungsgeschwindigkeit: 10 ml/min 30 Druck: 30 kg/cm2
Lösungsmittel: Acetonitril-[0,01M
Natriumpentansulfonat+ 0,01M Na2HPO4 (pH 3) =
9 : 91 Ladung: 6 mg
Nachweis: UV 205 nm
Bei HPLC tritt der UV-Absorptionspeak für (-)-H-O-Mcthylspergualin
(Retentionszeit 43,3 min) zuerst auf und dann folgt der für (+)-11-0-Methylspergualin (Retentionszeit
56,5 min). Die Fraktionierung wird 12-mal wiederholt. Die Fraktionen, die jedem Peak entsprechen, v/erden gesammelt
und auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, unter Verwendung von CM-Ccphadex C-25 (Na-Typ) und
Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 32,9 mg eines weißen Pulvers von (-)-11-0-i.iethylspergualintrihyd.rochlorid und
24,5 mg eines weißen Pulvers von (+)-11-O-Methylspergualintrihydrochlorid.
Beispiel 23 ■ 15 Synthese von 11-0-Ethylspergualin:
Zu 484 mg (0,94 mmol) Spergualindihydrochlorid [(-)-Spergualin
: (+)-Spergualin = 1 ; 1] gibt man 20 ml v/asserfreien Ethanol und 2 ml 2N Chlorwasserstoff-Ethanol. Das
Gemisch wird bei Zimmertemperatur 2 Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch -wird zur Trockene eingedampft, dann in
10 ml Wasser gelöst, der pH-Wert wird mit 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung
auf 4 eingestellt und dann wird auf ähnliche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, unter Verwendung
von CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 gereinigt. Man erhält 355,6 mg (70?υ Ausbeute) eines
weißen Pulvers von 11-0-Ethylsperguallntrihydrochlorid.
Für die Trennung von 11-0-Ethylspergualintrihydrochlorid
in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben,
ausgenommen, daß man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat +
0,01M Na2HPO4 (pH 3)] (10,5 : 89,5) verwendet. Bei der
wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 11 mg eines weißen Pulvers von (-)-H-O-Ethylspergualintrihydrοchlorid
und 14,5 mg eines weißen Pulvers von (+)-11-O-Ethylspergualintrihydrochlorid.
1 Beispiel 24
Synthese von 11-0-n-Butylspergualin:
Zu 493 mg (0,96 mmol) (O-Spergualintrihydrochlorid gibt
man 30 ml n-Butanol und 3 ml n-Butanol, gesättigt mit Chlorv/asserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur
2 Tage gerührt. Der in n-Butanol lösliche Teil des Reaktionsgemisches wird zur Trockene eingedampft, dann in 10
•jO ml Wasser gelöst. Der pH-Wert wird mit 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung
auf 4 eingestellt und dann wird mit CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) und Sephadex LH-20 im wesentlichen
auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben, gereinigt, wobei man 114,7 mg (2156 Ausbeute) eines weißen
]5 Pulvers von 11-0-n-Butylspergualintrihydrochlorid erhält.
Für die Trennung von 11-0-n-Butylspergualintrihydrochlorid
in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC im wesentlichen auf die gleiche Weise, wie im Beispiel 22
beschrieben, ausgenommen, daß man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Acetonitril-[0,01M Natriumpentansulfonat +
0,01M Na2HPO4 (pH 3)] (14,5 : 85,5) verwendet. Bei der
wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 15 mg eines weißen Pulvers von (-)-H-O-n-Butylsper-'
gualintrihydrochlorid und 16 mg eines weißen Pulvers von (+)-11-0-n-Butylspergualintrihydrochlorid.
Beispiel 25 30 Synthese von 11-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualin:
Zu einer Lösung aus 2,38 g (5,61 mmol) (-)-Spergualintrihydrochlorid
in 100 ml Ethylenglykol gibt man 10 ml Ethylenglykol, gesättigt mit Chlorwasserstoff. Das Gemisch
wird bei Zimmertemperatur während 24 h gerührt. Nach Zugabe von 200 ml Wasser wird der pH-Wert des Reaktionsgemisches
mit 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung auf
4 eingestellt und dann wird mit CM-Sephadex C-25 (Na-Typ)
und Sephadex LH-20 im wesentlichen auf gleiche Weise, wie
im Beispiel 22 beschrieben, gereinigt. Man erhält 2,7 g (73/3 Ausbeute) eines weißen Pulvers von 11-0-(2-Hydroxy)-
5 ethylspergualintrihydrochlorid.
Für die Abtrennung von 11-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualintrihydrochlorid
in seine epimeren Komponenten verwendet man HPLC, wie im Beispiel 22 beschrieben, ausgenommen,
daß das Lösungsmittel und die Beladung wie folgt sind*
Lösungsmittel: Acetonitril-[0,01M Natriumpentan-
sulfonat + 0,01 M Na2HPO^ (pH 3)]
(7 : 93)
]5 Beladung: 20 mg.
]5 Beladung: 20 mg.
Bei der wiederholten Fraktionierung, sechsmal insgesamt, erhält man 2,3 mg eines weißen Pulvers von (-)-ii-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualintrihydrochlorid
und 2,5 mg eines weißen Pulvers von (+)-11-0-(2-Hydroxy)-ethylspergualintrihydrochlorid.
Beispiel 26
25 Synthese von 11-0-Benzylspergualin:
Zu 2,36 g (4,60 mmol) (-)-Spergualintrihydrochlorid gibt
man 90 ml Benzylalkohol und 9 ml Benzylalkohol, gesättigt mit Chlorwasserstoff. Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur
über Nacht gerührt» Das Reaktionsgemisch wird mit 350 ml Wasser extrahiert und der pH-Wert der wäßrigen
Schicht wird mit 1N wäßriger Natriumhydroxidlösung auf
6,0 eingestellt und dann wird zur Trockene konzentriert. Der Rückstand wird in 20 ml 1M wäßriger Natriumchloridlösung
gelöst und dann wird durch eine Säule aus 500 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co.) geleitet und
nacheinander mit je 1,5 1 0,6M Salzlösung, O/j-M Salzlösung
und Wasser eluiert. Der Teil, der mit Wasser eluiert wird,
wird zur Trockene eingedampft und mit Sephadex LH-20, wie
im Beispiel 1 beschrieben, entsalzt. Man erhält 1,92 g (69/4 Ausbeute) eines weißen Pulvers von 11-O-Benzylsper-
5 gualintrihydrochlorid.
Für die Abtrennung von 11-0-Benzylspergualintrihydrochlorid
in seine epimeren Komponenten verwendet nan HPLC. Die HPLC wird auf gleiche Weise, wie im Beispiel 22 beschrieben,
ausgeführt, ausgenommen, daß man als Lösungsmittel ein Gemisch aus Aceton!tril-[O,O1M Natriumpentansulfonat
+ 0,01-M Na2HPO4 (pH 3)] (16 : 84) verwendet. Bei
der wiederholten Fraktionierung, neunmal insgesamt, erhält man 21,2 mg eines weißen Pulvers von (-)-11-0-Benzyl-
]5 spergualintrihydrochlorid und 13,8 mg eines weißen Pulvers
von (+)-11-0-Benzylspergualintrihydrochlorid.
Beispiel 27 20 Synthese von (-)-H-O-Methylspergualin:
(a) (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualin:
Zu einer Lösung aus 2,3 g (4,43 mmol) (-)-Spergualintrihydrochlorid
in einem Gemisch aus 11 ml N,N-Dimethylformamid
und 11 ml Wasser gibt man unter Eiskühlen 1,25 ml (3,96 mmol) Triethylamin und anschließend eine Lösung aus
2,24 g (8,97 mmol) N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid in
11 ml Ν,Ν-Dimethylformamid. Das Gemisch wird 15 h bei 5°C
gerührt. Das Reaktionsgemisch wird bei verringertem Druck konzentriert, in 10 ml 0,5M wäßriger Natriumchloridlösung
gelöst, dann durch eine Säule aus Diaion HP-20 (400 ml), die mit 0,5M wäßriger Natriumchloridlösung equilibriert
ist, geleitet. Es wird mit 1 1 0,5M Salzlösung und dann mit 1 1 Wasser gewaschen und mit Methanol eluiert (Fraktionsgröße
.15 g). Die Fraktionen Nr. 21 bis 30 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 287 mg
Ausbeute) eines weißen Pulvers von (-)-1--N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid,
L'ajH -11° (Cl, Wasser). Proton-NMR (in Dcuteromethanol), <$ : 1,3 bis
2,0 (CH2x6), 2,33 (CH2), 2,9 bis 3,4 (NCH2XS), 4,0 (CH),
5,04 (CH2), 5,07 (CH2), 5,56 (CH), 7,30 (C6H^).
(b) (-J-i-N^-Bis-CbenzyloxycarbonylJ-ii-O-methylspergualin:
Zu einer Lösung aus 78 mg (0,484 .mmol) des obigen (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorids
in 12 ml Methylenchlorid gibt man unter Eiskühlen 2,44 ml
(0,4ö4 mmol) einer Lösung aus 0,1 ml Bortrifluorid/Ether-Komplex
in 4 ml Methylenchlorid. Zu dem Gemisch gibt man portionsweise 9 ml (1 ml in Zeitlritervallen von 30 min
bis 1 h) einer Lösung aus Diazomethan in Methylenchlorid. Die Diazomethanlösung wird hergestellt, indem man allmählich
10 g N-Nitrosomethy!harnstoff zu einem Gemisch aus
30 ml einer 40^igen Kaliumhydroxidlösung und 100 ml Methylenchlorid
unter Kühlen bei 400C in Wasser zugibt, die organische Schicht abtrennt und die wäßrige Schicht mit
10 ml Methylenchlorid extrahiert, die organischen Schichten vereinigt und über granulärem Kaliumhydroxid bei 50C
während 3 h trocknet. Nach 3,5 h vom Beginn der Reaktion unterbricht man das Rühren» Nach Zugabe von mehreren
Tropfen verdünnter Essigsäure wird das Reaktionsgemisch
bei verringertem Druck konzentriert und dann in 3 ml
50?$igem wäßrigen Methanol gelöst und durch eine Säule
aus Diaion HP-20 (100 ml), die mit 300 ml 10bigem wäßrigen
Methanol gewaschen wird, geleitet und dann wird mit Methanol eluiert (Fraktionsgröße 15 ml). Die Fraktionen
Nr. 25 bis 28 werden vereinigt und^ zur Trockene eingedampft.
Man erhält 262,4 mg eines weißen Pulvers aus einem Gemisch von (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-11-O-methylspergualinhydrochlorid
und nicht-umgesetztem (-)-1-N, 4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydroChlorid
(Wiedergewinnung 69,2 Gew.-?o). Die Zusammensetzung die-
ses Gemisches wird durch HPLC an einer Säule aus Nucleosil
5C^0 (4,0 χ 150 mm) bestimmt, wobei mit einem Gemisch
aus Acetonitril und 0,01 M (NH^)2HP0^ (1 : 1.) bei
einer Strömungsrate von 0,ö ml/min· eluiert wird. Man
stellt fest, daß das Verhältnis zwischen (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-11-O-methylspergualinhydrochlorid
(Retentionszeit 10,47 min) und (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid
(Retentionszeit 7,74 min) 47 : 50 beträgt.
Das obige Gemisch (7^,5 Qg) wird durch eine Säule aus
30 ml Silicagel 60 (Merck Co.) geleitet und mit 10%igem
Methanol-Chloroform-Gemisch eluiert. Das Eluat wird durch HPLC gereinigt, wobei man die gleichen Bedingungen, wie
oben beschrieben, verwendet. Die Fraktionen, die eine UV-Absorption bei 220 nm bei einer Retentionszeit von 10,47
min zeigen, v/erden gesammelt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 28,6 mg eines weißen Pulvers von (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-11-O-methylspergualinhydro-
Chlorid. £α]|5 -14,4° (Cl, Methanol). Proton-NMR (in Deuteromethanol),
& : 1,3 bis 2,0 (CH2x6.)f 2,42 (CH2), 2,9
bis 3,4 (NCH2x5), 3,37 (OCH3), 4,0 (CH), 5,03 (CH2),
5,08 (CH2), 5,34 (CH), 7,29 (C6H5x2).
25 (c) (-)-H-O-Methylspergualin:
In einem Gemisch aus 5 ml Ethanol, 5 ml Wasser und 0,36
ml 1N-Chlorwasserstoffsäure löst man 13O mg des obigen
Gemisches (47 : 50) aus (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-11-O-methylspergualinhydrochlorid
und (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid. Nach Zugabe
von 50 mg 10% Palladium-Kohlenstoff zu der Lösung wird das Gemisch bei einem Wasserstoffstrom während 4 h bei
Zimmertemperatur gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das· Filtrat wird -zur Trockene eingedampft. Der
Rückstand wird in 3 ml Wasser gelöst, durch eine Säule aus 150 ml CM-Sephadex C-25 (Na-Typ) geleitet und durch
Gradienteneluierung nit je 900 ml Wasser und 1M wäßriger
Natriumchloridlösung (Fraktionsgröße 17 g) fraktioniert. Die Fraktionen Nr. 76 bis ü1 v/erden vereinigt und, wie im
Beispiel 22 beschrieben, unter Verwendung von Sephadex
LH-20 entsalzt. Man erhält 25,4 mg (51% Ausbeute) eines
weißen Pulvers von (-)-11 -O-Methylspergualintrihydrochlorid,
[a]^5 -27,1° (Cl, Wasser).
Die Fraktionen Nr. ^3 bis 36 des Eluats aus der CM-Sephadex-oäule
v/erden auf ähnliche Weise entsalzt, \vobei man
24,5 mg (52?o Wie der gewinnung) eines weißen Pulvers von
(-)-Spergualintrihydrochlorid erhält.
B e i s ρ i e 1 28 Synthese von (-)-H-O-'Ethylspergualini
Auf ähnliche V/eise, wie im Beispiel 27(b) beschrieben,
wird eine Methylenchloridlösung aus Diazoethan mit 352 mg (0,451 mmol) (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid,
erhalten gemäß Beispiel 27(a), umgesetzt, v;obei man 217,0 mg eines Gemisches aus (-)-1-N,4-Bis~
(benzyloxycarbonyl)-11-O-ethylspergualinhydrochlorid und
nicht-umgesetztem (-)-1-N,4-Bis-(benzyloxycarbonyl)-spergualinhydrochlorid
erhält. Das Gemisch wird im wesentlichen auf gleiche Weise, wie im Beispiel 27(c) beschrieben,
behandelt, wobei man 41,7 mg eines weißen Pulvers von (-)-11-0-Ethylspergualintrihydrochlorid
in einer Gesamtausbeute von 17,1% erhält, M^ -24,8° (Cl, Vfesser).
Synthese von (-)-N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid:
35
(a) (-)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-methoxyethanamid:
In 1,2 ml N,N-Dimethylformamid löst man 134,3 mg (0,187
inmol) (-)-1 -N,4-Bis- (benzyloxycarbonyl)-11 -O-methylspergualinhydrochlorid,
erhalten im Beispiel 27(b). Zu der Lösung gibt man 192,9 mg (0,935 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid
und 5,6 mg Kupferchlorid (CuCl). Das Gemisch wird bei 7O0C 3 h erhitzt. Nach dem Kühlen wird der Niederschlag
abfiltriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 5 ml 30^igem
wäßrigen Methanol gelöst und dann wird der pH-Wert auf 7 eingestellt. Er wird durch eine Säule (30 ml) aus Diaion
HP-20 geleitet, wobei mit 300 ml Wasser und dann mit 300 ml 10bigem wäßrigen Methanol gewaschen und mit Methanol
eluiert wird. Die Fraktionen, die gegenüber der Sakaguchi-Reaktion positiv sind, werden gesammelt und bei
verringertem Druck konzentriert. Man erhält 114 mg rohes (-)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutylJ-2-(7-guanidino-2-heptenamido)-2-methoxyethanamid-hydrochlorid,
welches ein Signal eines Olefinprotons bei & 6,02 in dem Proton-NMR-Spektrum (in Deutero-
20 methanol) zeigt.
(b) (-)-N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid:
In einem Gemisch aus je 5 ml Methanol und Wasser löst man 114 mg rohes (-)-N-[4-(3-Benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutyl
jj-2- (7-guanidino-2-heptenamido)-2-methoxyethanamid-hydrochlorid,
erhalten gemäß (a) oben. Zu der entstehenden Lösung gibt man 0,32 ml 1N Chlorwasser stoff säure und 50 mg 10?6 Palladium-Kohlenstoff.
Das Gemisch wird bei einem Wasserstoffstrom während 1,5 h
bei Zimmertemperatur gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat wird bei verringertem Druck
konzentriert. Der Rückstand wird durch eine Säule aus 100 ml CM^-Sephadex C-25 (Na-Typ) geleitet und gemäß Gradienteneluierung
mit je 500 ml Wasser und 1M wäßriger Natriumchloridlösung (Fraktionsgröße 10 g) fraktioniert.
- S3-
Die Fraktionen Nr. 69 bis 74 werden vereinigt, bei verringertem
Druck konzentriert und dreimal mit 5 ml Methanol extrahiert. Die Methanolschicht wird durch eine Säule
(150 ml) aus Sephadex LH-20 geleitet und mit Methanol zum Entsalzen (Fraktionsgröße 5 g) eluiert. Die Fraktionen
Wr. 16 bis 21 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 17,A mg eines weißen Pulvers von (-)-N-[4_(3-Amlnopropyl)-arainobutyl]-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid-trihydrochlorid.
Gesamtausbeute 16,7#, [a]|5 -30,4° (Cl, Wasser).
Claims (11)
1. N-[4-(3-amlnopropyl)-aminobutylJ-2-(Ui-cuanidino-
fettsäure-araido)-2-substituierte Ethanaraidc der allgemeinen
Formel
H2NCNH (CH2) ^Y-CONHCHCONHCCH2 )4NH(CH2 )3NH2 (I)
NH OR
Y7orin Y -CH9CH0-, -CH=CH- oder -CH-CH9- bedeutet, R ein
OH
Vasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen,
die eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthalten kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und η eine ganze
Zahl von 1. bis & bedeutet, vorausgesetzt, daß, \^enn Y
-CH-CH0 bedeutet und η 4 bedeutet, R für die Gruppen
OH ~- -
steht, die anders sind als ein Wasserstoffatom, oder ein
20 Salz davon.
2. Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet , daß R ein Viasserstoffatom
oder eine Alkylgruppe mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe als Substituenten
enthalten kann, bedeutet und η eine ganze Zahl von 4 bis 6 bedeutet.
5· Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet , daß R ein Wasserstoff
atom oder eine Methylgruppe und η eine ganze Zahl von 4 oder 6 bedeuten.
4. N- [4- (3-Aniinopropyl) -aminobutyl J-2- (7-guanidinoheptanamido)-2-methoxyethanamid
oder ein Salz davon.
5. N- [4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl}-2-(7-guanidino-
' " " 323672S
2-iieptenamido)-2-inetho3cycthanainid oder ein Calz davon.
6. N-[4—(3-Aninopropyl)-aminobutyl]-2-(7-guanidino-3-hydroxyheptanamido)-2-metho:ryethanamid
oder ein GaIz
5 davon.
7. N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(9-guanidinononanamido)-2-methoxyethanamid
oder ein Calz davon.
^. N-[4-(3-Aminopropyl)-aininobutylJ-2-(7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyethanamid
oder ein Salz davon.
9. N- L'4- (3-Aminopropyl) -aminobutyl ]-2- (9-guanidinononanamido)-2-hydroxyethanamid
oder ein Salz davon.
10. Verfahren zur Herstellung von N-[4-(3-aminopropyl)·
aminobutylJ-2-(u> -guanidino-fsttsäure-amido)-2-substituierten
Ethanamiden der allgemeinen Formel
H0NCNH(CH0) -Y-CONHCHCONHCCH-I-NHtCH0I-NH- (I)
2 if zn ι Zh ZoZ
NH OR
worin Y -CH2-CH2-, -CH=CH- oder -CH-CH2- bedeutet, R ein
25 OH
Viasser stoff atom, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen,
die eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthalten kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und η eine ganze
Zahl von 1 bis 8 bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn Y-CH-CH9- bedeutet und η 4 bedeutet, R eine Gruppe be-
OH
deutet, die anders ist als ein Wasserstoffatom, dadurch
gekennzeichnet , daß man
(a) ein t^-Giianidino-fettsäureamid, das durch die allgemeine
Formel
BAD ORlOiNAk
3235725
H,NCNH(CH,) -Y-CONH, (II)
NH
dargestellt v/ird, v/orin Y und η die zuvor angegebenen Bedeutungen besitzen, mit N-f4-C3-Aminopropyl)-aininobutyl]-2,2-dihydroxyethcaiamid,
das durch die allgemeine Formel
10 HO.
j>CHCONH (CH- ) -NH(CH-) -NH, (IU)
dargestellt v/ird, kondensiert oder 15
(b) ein lO-Guanidino-fettsäure-amid, do.E durch die
allgemeine Formel
H0NCNH(CH0) -Y-CONH0 (II)
20 Z ■ ii ' 2 η 2
NH
dargestellt v/ird, v/orin Y und η die oben gegebenen Bedeutungen besitzen, mit N~[4-(3-Aminopropyl)-aminobutyl3-2,2-dihydroxyethanainid,
welches durch die Formel
HO>.
^CHCONH(CH2) 4NH(CH2)3NH2 (III)
30 HO
dargestellt v/ird, unter Bildung von N-f4-(3-Aminopropyl)
-aminobutyl ]-2- ■·( \£ -guanidlno-f ettsäureamido)-2-hydroxyethanamid,
v/elches durch die allgemeine Formel
BAD GftfGiKÄL
13 12 Π 10 9 β 7 6 5 ι»3 2 1
H2NCNH (CH2) J1-Y-CONHCHCONHCH2CH2CH2CH2NHCH2CH2Ch2NH2
NH OH
(Ia)
dargestellt wird, worin η und Y die oben gegebenen Definitionen besitzen, kondensiert und dann gegebenenfalls
nach dem Schutz der Amino- und Iminogruppe die Verbindung der Formel (Ia) mit einem
ein- oder zweiwertigen aliphatischen Alkohol mit bis 4 Kohlenstoffatomen, einem Diazoparaffin mit
1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Benzylalkohol umsetzt und gegebenenfalls die Schutzgruppen, sofern
sie vorhanden sind, entfernt. 15
11. Verfahren zur Herstellung von U-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(tj
-guanidino-fettsäure-amido)-2-alkoxyethanamid der allgemeinen Formel
H2N[j (CH2} n-Y
NH OR1
worin Y -CH2-CH2-, -CH=CH- oder -CH-CH2 bedeutet, R' eine
25 OH
Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Hydroxylgruppe
als Substituenten enthalten kann, oder eine Benzylgruppe bedeutet und η eine ganze Zahl von 1 bis 8
bedeutet, oder einem Salz davon, dadurch g e k e η η -
™ zeichnet, daß man N-[4-(3-Aminopropyl)-aminobutylJ-2-(
U) -guanidino-fettsäure-amido)-2-hydroxyethanamid,
welches durch die allgemeine Formel
HnNCNH(CH0) -Y-CONHCHCONh(CH-).NHCCH0)-NH0 (Ia)
35 2 Il 2 n I 2 3 2
NH OH
BAD ORIGiNAL
"■■"" 3235725
-S-
dargestellt v.rird, worin Y und η die oben gegebenen Bedeutungen
besitzen, oder ein UaIz davon umsetzt und gegebenenfalls
nach den Schutz der Amino- und Iminogruppen mit einen ein -oder zv;ei\-/ertigen aliphatischen Alkohol mit 1
bis 4 Kohlenstoffatomen, einem Diazoparaffin mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder einem Benzylalkohol umsetzt und
gegebenenfalls die Gehutzgruppen, sofern sie vorhanden sind, entfernt.
BAD ORIGINAL
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| JP56159503A JPS5862152A (ja) | 1981-10-08 | 1981-10-08 | Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法 |
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