DE2632396C2

DE2632396C2 - Bestatin-Analoga, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate

Info

Publication number: DE2632396C2
Application number: DE2632396A
Authority: DE
Inventors: Takaaki Fujisawa Kanagawa Aoyagi; Rinzo Nishizawa; Tetsushi Tokyo Saino; Tomohisa Asaka Saitama Takita; Hamao Tokyo Umezawa
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1975-07-22
Filing date: 1976-07-19
Publication date: 1982-11-25
Also published as: GB1510477A; SE452318B; SE8306145D0; JPS6050780B2; JPS5823654A; DK149110C; NL7608064A; DE2632396A1; SE431642B; HU183048B; SE8306145L; CH630892A5; JPS5758338B2; JPS52136118A; SE8001959L; CS201034B2; FR2318863B1; SE7606736L; AU506003B2; FR2318863A1

Description

mit folgender Konfiguration an

C—2	C—3	C—2'
S	R	S
S	R	R
S	S	S
S	S	R
RS	RS	S

15

20

25

und den Bedeutungen:

R¹ Wasserstoff, 4-Nitro, 4-Amino. 2-Chlor, 4-Chlor, oder4-Methyl,

R- Ci- bis C-Alkyl-, 0-Methylthioäthyl oder jo Hydroxymethyl mit der Maßgabe, daß dann, wenn R¹ Wasserstoff und R² isobutyl bedeuten, die Konfiguration der Verbindung (2S, 3R, 2'R). (2S, 3S. 2'S) oder (2S. 3S, 2'R) ist.

2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R² Alkyl mit 3 oder 4 Kohlenstoffatomen bedeutet.

3.(2S,3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-p-nitrophenylbutanoyl-(S)-leucin.

4. (2RS, 3RS}-3-Amino-2-hydroxy-4-p-methylphenylbut?.noyl-(S)-leucin.

35

5. Verfahren zur Herstellung der Bestatin-Analoga gemäß Anspruch 1 —4 sowie von Bestatin, dadurch gekennzeichnet, daß man eine gegebenenfalls (eine) Schutzgruppe(n) aufweisende Aminosäure der allgemeinen Formel

-CH₂-CH-CH-COOH

NH₂ OK

in der R¹ die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen hat, mit einer Aminosäure der allgemeinen Formel

H₂N-CH-COOH

(HD

in der R² die in Anspruch 1 oder 2 angegebenen Bedeutungen hat, nach.einem üblichen Peptid-Herstellungsvc-fahren kondensiert und gegebenenfalls die Schutzgruppe(n) abspaltet.

6. Pharmazeutische Präparate, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Wirkstoff mindestens eine Verbindung nach den Ansprüchen I bis 4 sowie übliche pharmazeutische Hilfs- oder Zusatzstoffe enthalten.

Die Erfindung betrifft neue Bestatin-Analoga der allgemeinen Formel (I), die Aminopeptidase B, Leucinaminopeptidase und Bleomycinhydrolase inhibieren, die Antitumorwirkung von Bleomycin verstärken und Antifertilitätswirkungen besitzen, ein Verfahren zur Herstellung dieser neuen Verbindungen sowie von Bestatin selbst und die neuen Verbindungen eninaltende pharmazeutische Präparate.

Bei der Verbindung Bestatin handelt es sich um das (2S, 3R)-3-Ämino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-leu cin, das in »J. Antibiotics«, 29, 1976, S. 97-99, beschrieben ist. Diese Verbindung hat die Formel (I), worin R¹ Wasserstoff und R² eine Isobutylgruppe

55 bedeuten.

Aus »J. Antibiotics«, 29, 1976, S. 857-859, und aus

»Chcm. Abstracts«, 85, 1976, Referat Nr. 173 376, sind auch bereits Stereoisomere dieser Verbindung bekannt.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind neue

Bestatin-Analoga, die gekennzeichnet sind durch die allgemeine Formel

R¹

3 2 2'

-CH₂- CH-CH- C —NH- CH-COOH

I I Il

NH₂ OH O R

mit folgender Konfiguration an

H₂N-CH-COOH

(HD

C —2

C—3

C —2'

S
S
S

RS

und den Bedeutungen:

R
R
S
S
RS

S
R
S
R
S

R¹ Wasserstoff, 4-Nitro, 4-Amino, 2-Chlor, 4-Chlor oder4-Methyl.

R² C,- bis Q-Alkyl, /J-Meti.j!ü.i"ä!hy! oder Hydroxymethyl mit der Maßgabe, daß dann, wenn R¹ Wasserstoff und R^J Isobutyl bedeuten, die Konfiguration der Veröindung (2S, 3R, 2'R), (2S, 3S, 2'S) oder (2S,3S,2'R) ist.

Alle vorgenannten Verbindungen einschließlich des Bestatins selbst können durch Züchten eines Bestatin bildenden Mikroorganismus der Gattung Actinomyces in einem geeigneten Medium um.', gegebenenfalls Umwandlung des dabei erhaltenen Bestatins in die obengenannten Analoga hergestellt werden. Alle diese Verbindungen inhibieren Aminopeptidase B, Leucinaminopeptidase und Bleomycinhydrolase, sie verstärken die Antitumorwirkung on Bleomycin und haben eine Antifertilitätswirkung, wobei die er^findungsgemäßen Bestatin-Analoga der oben angegebenen Formel (I) in bezug auf ihre genannten physioiogisc'^n Eigenschaften sowohl dem Bestatin selbst als auch den bekannten Bestatinderivaten eindeutig überlegen sind.

Die erfindungsgemäßen Bestatin-Analoga haben eine ausgeprägte inhibierende Wirkung gegenüber Aminopeptidase B. Leucinaminopeptidase und Bleomycinhydrolase, sie verstärken die Antitumorwirkung von Bleomycin und stellen ein wirksames Antifcrtilitätsmittel dar. Darüber hinaus haben sie die Wirkung, daß nach ihrer Verabreichung die Anzahl der Antikörper bildenden Zellen beträchtlich zunimmt.

Bevorzugte Vertreter der erfindungsgemäßen Bestatin-Analoga sind Verbindungen der oben angegebenen Formel (I), worin R² Alkyl mit 3 oder 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, insbesondere
(2S,3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-p-nitrophenyl-

butanoyl-(S)-leucin und
(2RS,3RS)-3-Amino-2-hydroxy-4-p-methyl-

phenylbutanoyl-(S)-leucin.

Die erfindungsgemäßen Bestaiin-Analoga der oben angegebenen Formel (I) sowie Bestatin selbst können nach einem einen weiteren Gegenstand der Erfindung bildenden verfahren hergestellt werden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine gegebenenfalls (eine) Schutzgruppe(n) aufweisende Aminosäure der allgemeinen Formel

CH₂-CH-CH-COOH
NH₂ OH

(II)

in der R¹ die oben angegebenen Bedeutungen hat, mit einer Aminosäure der allgemeinen Formel in der R³ die oben angegebenen Bedeutungen hat, nach einem üblichen Peptid-Herstellungsverfahren kondensiert und gegebenenfalls die Schutzgruppe(n) abspaltet. Gegenstand der Erfindung sind ferner pharmazeutische Präparate, die dadurch gekennzeichnet sind, daß ίο sie als Wirkstoff mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) sowie übliche pharmazeutische Hilfs- oder Zusatzstoffe enthalten.

Die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendbaren Aminosäuren der Formel (II) können durch Hydrolyse ihrer entsprechenden Nitrile, insbesondere nach dem in der Patentanmeldung 26 60 626.8-42 beschriebenen Verfahren, hergestellt werden. Zu dafür geeigneten Nitrilen gehören beispielsweise

S-Amino^-hydroxy^-p-chlorphenylbutyronitril, 3-Amino-2-hydroxy-4-phenyIbutyronitril, j-Ärnino^-hydroxy^-o-chlorphenylbutyronitrilund

S-Amino^-hydroxy^-p-methylphenylbutyro-

nitril.

Zum Schutz der Aminogruppen können beliebige Aminoschutzgruppen verwendet werden, wie sie in der Peptidchemie üblicherweise eingesetzt werden. Bevorzugte Beispiele für verwendbare Aminoschutzgruppen vom Acyltyp sind die Formyl-, Acetyl-, Trifiuoracetyl- und die substituierte ou«:r unsubstituierte Benzoylgruppe. Bevorzugte Beispiele für Aminoschutzgruppen vom Urethantyp sind substituierte oder unsubstituierte Benzyloxycarbonylgruppen, Alkoxycarbonylgruppen mit I bis 6 Kohlenstoffatomen sowie Cycloalkanoxycarbonylgruppen. Bevorzugte Beispiele für andere Aminoschutzgruppen sind substituierte oder unsubstituierte Arylsulfonylgruppen, Phthalylgruppen, die o-Nitrophenylsulfonylgruppe oder die Tritylgruppe.

■to Zuum Hydrolysieren der obengenannten Nitrile zu den entsprechenden Aminosäuren können übliche anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure. Bromwasserstoffsäure und Schwefelsäure, sowie übliche organische Säuren, wie Alkylsulfonsäuren, wie Methan-

■»5 sulfonsäure, Äthansulfonsäure, Acrylsulfonsäuren wie Benzolsulfonsäure und Toluolsulfonsäure, verwendet werden. Diese Säuren können in beliebiger Konzentration eingesetzt werden, eine Konzentration über 1 η ist jedoch bevorzugt.

v> Wenn die erfindungsgemäß verwendeten, eine oder mehrere Schutzgruppen aufweisenden Aminosäuren der Formel (II) und (III) in wäßriger Lösung nicht leicht löslich sind, kann zur Verbesserung ihrer Löslichkeit ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, Dioxan, ein niederer Alkohol, Aceton. Dimethylformamid, Dimethylacetamid oder Dimethylsulfoxid, verwendet werden.

Wird eine Aminosäure der Formel (II) oder (III) mit einer Schutzgruppe verwendet, die bei der Hydrolyse unter Bildung eines elektrophilen Restes abgespalten wird, so kann ein Kationen-Einfangmittel wie Anisol zugegeben werden. Die Hydrolyse kann bei einer Temperatur innerhalb des Bereiches von Zimmertemperatur bis zu der Temperatur, die erforderlich ist. um das Reaktionsgemisch unter Rückfluß zu halten, liegen. Nähere Einzelheiten zur Herstellung der in dem erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzten Aminosäu ren der Formel (II) und (III) sind aus der Patcntanmcl-

dung 26 60 626.8-42 zu entnehmen.

Zur Herstellung von Bestatin und seinen Analoga der Formel (I) wird eine gegebenenfalls (eine) Schuugrup pe(n) aufweisende Aminosäure der Forme¹, (Ii) nach einem üblichen Pepüd-Herstellungsverfahren kondensiert mit einer Aminosäure der Forme! (!Π), düi grgebeneiifails ebenfalls (eine) Schutzgruppe(n) aufweisen kann, und die gegebenenfalls vorhandene(n) Schutzgruppe(n) wird (werden) auf übliche Weise abgespalten.

Typische Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Aminosäuren sind Alanin, 2-Aminobutansäure, Valin, Norvalin, Leucin, Norleucin, Isoleucin, tert-Leucin, Serin und Methionin.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Kondensation einer gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen aufweisenden Aminosäure der Formel (II) mit einer gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen aufweisenden Aminosäure der Formel (III) kann es sich um ein Carbodiimidverfahren, das unter Verwendung von Dicyclohexylcarbodiimid oder l-Äthyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid durchgeführt wird, um ein Azidverfahren, bei dem salpetrige Säure oder Alkylnitrit verwendet wird, um ein gemischtes Anhydridverfahren, bei dem Äthylchlorformiat oder Isobutylchlorfor-Tiiat eingesetzt wird, um ein aktives Esterverfahren, bei dem ein Cyanomethylester, Vinylester, substituierter oder unsubstituierter Phenylester, Thiophenylester oder N-Hydroxysuccinimidester verwendet wird, um ein O-Acylhydroxylaminderivat-Verfahren.beidemO-Acylacetoxim oder O-Acylcyclohexanonoxim verwendet wird, oder um ein N-Acylderivat-Verfahren, bei dem Carbonyldiimidazol verwendet wird, handeln.

Organische Lösungsmittel, die bei der obengenannten Kondensationsreaktion verwendet werden können, sind beispielsweise Äther, wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, Ester, wie Äthylacetat oder Methylacetat, Ketone, wie Aceton oder Methylethylketon, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Methylenchlorid oder Chloroform, Amide, wie Dimethylformamid oder Dimethylacetamid, und Nitrile wie Acetonitril.

Wenn eine Aminosäure der Formel (II), deren Aminogruppe geschützt ist, und eine Aminosäure der Formel (III), deren Carboxylgruppe nicht geschützt ist, unter Anwendung des aktiven Esterverfahrens kondensiert wurden, kann ein Lösu·: gsmittelgemisch aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer anorganischen Base, wie Natriumbicarbonat oder Magnesiumoxid, einer tertiären organische.; Base, wie Triäthylamin oder N-Mcthylmorpholin, verwendet werden.

Die S"hutzgruppen in den dabei erhaltenen Verbindungen können nach in der Peptidchemie üblichen Verfahren wieder abgespalten werden, beispielsweise durch katalytisdie Hydrierung mit Palladium, durch Verseifung mit einem Alkali, durch Säurespaltung mit Bromwasserstoff in Essigsäure, mit Trifluoressigsäure, mit Chlorwasserstoff in Dioxan, Tetrahydrofuran oder Äthylacetat, mit flüssigem Fluorwasserstoff, durch Hydrazinolyse mit Hydrazin oder durch Behandlung mit M Natrium und flüssigem Ammoniak. Auf diese Weise erhält man die gewünschte Verbindung der Formel (1).

Beispiele für Aminoschutzgruppen, die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendet werden können, sind solche, wie sie üblicherweise in der Peptidchemie verwendet werden, vorzugsweise solclm vom Urethan-Typ un-i insbesondere die Benzyloxycarbonylgruppe (nachstehend als Gruppe »Z« bezeichnet).

Zum Nachweis der therapeutischen ÜDerlegejnhea der erfindungsgemälif u ik-taim -Aiul-aga jegeniiber Bestatin in bezug auf ihre obengenannten tigi-i-scri-Jten wur'len die nachstehend beschriebenen Vergleichsversüche durchgeführt.

A) Inhibitoraktivität gegenüber
Aminopeptidase B

Es wurde das von V. K. Hopusu, K. K. Makinen und G. G. Glenner in »Archives of Biochemistry and Biophysics«, Ί14, 557 (1966), beschriebene Verfahren in modifizierter Form angewendet..

Zu einem Gemisch aus 0,3 ml (1 mMol) Argin-/?-naphthylamid und 1,0 ml (0,1 Mol) Tris-HCI-Puffer (pH 7,0) wurden 0,7 ml destilliertes Wasser mit oder ohne Testmaterial zugegeben und es wurde 3 Minuten lang auf 37°C erwärmt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 0,2- ml Aminopeptidase D-Lösung in Gang gebracht, die nach dem üblichen Chromat.^raphieverfahren, wie von Hopusu et al. beschrieben, hergestellt wurde. Nach 30 Minuten bei 37⁰C wurden 0,6 ml eines l,0M Acetatpuffers (pH 4,2), der das Diazoniumsalz von o-Aminoazotoluol (l,0mg/inI) enthielt, zugegeben. Nac;. 15 Minuten bei Zimmertemperatur wurde die Absorption (a) bei 530 nm mit einem Spektrophotometer bestimmt.

Zum Vergleich wurde die Absorption (b) nach der Umsetzung in Abwesenheit einer Probe gemessen. Der Prozentgehalt der Inhibierung wurde folgendermaßen berechnet:

(b-a)/bxl00.

Der Prozentgehalt der Inhibierung bei verschiedenen Konzentrationen wurde bestimmt und aus den gemessenen Prozentgehalten der Inhibierung wurde die 5O°/oige Inhibierung (IDs«) errechnet. Die dabei erzielten Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle I angegeben.

Tabelle I

Inhibitoraktivität von Bestatin und seiner veiwandten Verbindungen gegenüber Aminopeptidase B

Nr.	Verbindung	ID₅₀ (//g/ml)
1	(2S,3R)-AHPA-(S)-Leu	0,10
2	(2S,3R)-AHPA-(S)-Leu	1,25
3	(2S,3R)-AHPA-(R)-Leu	0,56
4	(2S,3S)-AHPA-(R)-Leu	0,04
C	(2S,3R)-AHPA-(S)-Val	0,55
6	(2S,3R)-AHPA-(5)-iie	0,05
7	(2S,3R)-AHPA-(S)-Met	0,22
8	(2S,3R)-AHPA-(S)-Nva	0,17
9	(2S,3R)-AHPA-(S)-NIe	0,13
10	(2S,3RV-AHPA-(S)-Ser	0,72
11	(2RS,3 RiJ)-AHPA(p-ClHS)-Leu	0,07
12	(2RS,3R5)=AHFA(oClMS)-Leu	0,48
13	C?RS,3RS)-AHPA(p-Me)-(5)-Leu	0,01
14	(2S,3R)-AHPA(p-NO₂)-(S)-Leu	0,01
15	(2S,3PVAKPA(p-NH₂)-{S)-Leu	0,10

In der Tabelle haben die gewählten Abkürzungen die folgende Bedeutung:

AHPA

AHPA(p-CI)
AHPA(O-CI)
AHPA(p-Me)
AHPA(P-NO₂)

Leucin,-

Serin;

Valin:

Norvalin;

Methionin:

Isoleucin:

Norleticin;

3- Am ino-2- hydroxy -4-phenyl-

butansäure;

phenylbutansäure:

J-Am ino-2-hydroxy-4-ο-chlor-

phcnylbutansäiire:

S-Amino-2-hydroxy-4 -p-met hy I-

phenylbutansiiure;

J-Amino-2-hydroxy-4-p-nitro-

phenylbutansiiiirc:

in AHPA(P-NH..) =

J-Amino^-hydroxy^-p-aminopnenylbutansäure.

(B) Verteilung in den Organen von Bleomycin
in Anwesenheit von Bestatin

100 mg/kg Bleomycin B2 werden subkutan je drei männlichen Mäusen des ICR Stamms (4 Wochen alt) verabreicht, und 100 mg/kg Bleomycin Bj und 100 mg/kg Bestatin werden subkutan gleichzeitig an drei ähnliche Mäuse verabreicht. Diese sechs Mäuse werden 1 Stunde nach der Verabreichung getötet und die Menge an Bleomycin Ii.?. die im Serum und in den Organen verbleibt, wird nach dem Dünnschichtscheibenverfahren bestimmt, wobei man Bacillus subtilis PCI2I"} als Testmikroorganismus verwendet Die Ergebnisse sind in Tabelle Il aufgeführt, wobei die Zahlen die durchschnittlichen Werte angeben.

labelle Il

Wirkung dersimultanen Verabreichung von Bestatin und Bleomycin B_: oderdie Organverteilung von Bleomycin bei Mausen

Serum Lunge Maut Leber Niere

Mil/

Magen Gehirn

BLM

100 mg/kg 110 11,2 4,5 0 68.0 4.0 1,6 0

BLM

100 mg/kg +

BST

100 mg/kg 140 21.2 42,0 0 84,0 5,8 2.5 2,4

Bemerkungen: BLM = Bleomycin B_;: BST = Bestatin

(C) Konzeptionsverhütende Eigenschaften Antifertilität von Bestatin

I Inmittelbar nach der subkutanen Verabreichung von Bestatin (10 mg/kg) an weibliche ICR JCL Mäuse im Pubertätsalter werden diese Mäuse mil männlichen Mäusen eines ähnlichen Stamms zusammengebracht.

Die weiblichen Mäuse, die begail-j: .vurden, werden zwei Tage nacti der Bildung von Vaginaltampons bzw. Vaginalfüllungen getötet und die Ova werden aus den Uteruseileitem gesammelt für die Prüfung, ob eine Befruchtung stattgefunden hat oder nicht. Die befruchteten Ova befinden sich im 8- bis I6zelligen Stadium.

Miiusegruppc.	Weiblich	Weiblich	'.isgesanv
der Besiatin verabreich! <vurde	Nr. 1	Nr. 2	N = 2
Anzahl von corpus luteum	10	19
Anzahl der isolierten Ova	10	19	29
befruchtete Ova	4 (40%)	6(31.6%)	10(34.5%)
nichtbefruchtete Ova	6 (60%)	13 (68.4%)	19 (65.5%)
Vergleich
Anzahl von corpus luteum	13	13	26
Anzahl der isolierten Ova	9	11	20
befruchtete Ova	6 (66,7%)	8 (72.7%)	14 (70%)
nichtbefruchtete Ova	3 (333%)	3 (27.3%)	6 (30%)

Die Versuche zeigen, daß die Fertilität der Ova, die von Mäusen stammen, die 4 bis 16 Stunden nach der Verabreichung von Bestatin kopuliert hatten, 34,5% beträgt, wohingegen die Fertilität von Ova, die aus der Vergleichsmäusegruppe stamme», 70% beträgt. Aus diesen Ergebnissen ist offensichtlich, daß Bestatin Antifertilitätseigenschaften besitzt Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.

Zusätzlich zu den zuvor beschriebenen Abkürzungen werden die folgenden Abkürzungen in den Beispielen verwendet:

HOBt DCCD 65 HOSu -OBzi.TosOH

-OSu

-OMe N - Hydroxybenzotriazol;

N.N'- Dicyclohexylcarbodiimid;

N-Hydroxysuccinimid;

Benzylester-p-Toiuoisuifonat;

N- Hydroxysuccinimidester;

Methvlester;

-ONb = p-Nitrobenzylester:

Boc = t-Butoxycarbcnyl:

DCHA = Dicyclohexylamin;

-OBu¹ = t-Butylester.

Der Rf-Wert wird an Silikagel-Platten unter Verwendung von η BiiOH : AcOH : Η,Ο (4 : t : 1) als Entwick liingslösungsmittel, bestimmt.

Fjnige 3-Amino-2-hydroxycarbonsäuren und Peptide, in denen sie enthalten sind, besitzen zwei Rf-Werte, da sie Gemische aus den Threo- und Erythro-Konfigurationcn sind.

Beispiel I
Stufe I

35.4 g öliges Z-(2RS.3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phe-M'.lbutynmitril werden in einem Gemisch aus 300 ml k"H/. Chlorwasserstoffsäure und 300 ml Dioxan gelöst. Nach /.ugabc von 21.2 g Anisol wird das Kcaktionsgemisch 12 Stunden am Rückfluß erwärmt. Das Dioxan wird bei verminderlein Druck abdestilliert, die entstehende Lösung au*. Chlorwasserstoffsaure wird mit Äther gewaschen und die Wasserschlag wird bei vermindertem Druck konzentriert und zur Trockene eingedampft. Anschließend werden 200 ml Wasser zu dem Rückstand gegeben und die unlösliche Verbindung wird abfüiricrt. Nach "Zugabe einer gleichen Menge Aceton wird der pH-Wert des Gemisches mit ammoniakalischem Wasser auf 5.5 eingestellt. Das Gemisch wird in einem Eisschrank stehengelassen. Die •(»geschiedenen Kri-.;alle werden abfiltriert. Man erhält 1 3.6b g der gewünschten (2RSJR)-AHPA.
■!-16.8 (ri.25.NHCI);Rf = 0

127
J 57!

Analyse für Ci

berechnet:
gefunden:

C 61,52. H 6,71.
C 61.06. H 6.55.

Stufe 2

N 7.18%.
N b.80%.

abkühlen, wobei sich das Brucinsalz von Z-(2S.3R)-AHPA abtrennt. Die Kristalle werden abfiltriert und zweimal aus Äthylacetat umkristallisiert. Man erhält 13.51 g reines Brucinsalz von Z-(2S,3R)-AHPA; Fp. l44ⁿC.[ft]$, +33.8'(el,12,AcOH).

13,5 g der erhaltenen Kristalle werden in 150 ml Äthylacetat suspendiert und Brucin wird mit 30ml In Chlorwasserstoffsäure entfernt. Dann wird die Äthylacetatschicht mit Wasser gewaschen und unter Verwendung von wasserfreiem Magnesiumsulfat entwässert. Anschließend wird das Magnesiumsulfat abfiltriert und das Äthylacetat wird bei vermindertem Druck abdcstillicrt. Der Rückstand wird aus Äthylacetat-Petroläther wiederausgefällt: man erhält 6.21 g Z-(2S.JR)-AHPA; Fp. Ι54.5Χ.|λ]$, +83.5¹" (c 1.34. AcOH).

Stufe 3

2.25 g Z (2SJR)AHPA und 945 mg HOBt werden in 70 ml Tetrahydrofuran gelöst. Nach Zugabe von 2.75 g (S)-Leu OBzI. losOH wird die Mischung mit 0.48 ml Triethylamin neutralisiert und auf -5°C gekühlt. Dann werden 1.40 g DCC D zugegeben und das Rcaktionsgemisch wird über Nacht für die Umsetzung stehengelassen. Tetrahydrofuran wird bei vermindertem Druck abdestillicrt und 200 ml Äthylacetat werden zugegeben. Nach Abfiltrieren der unlöslichen Verbindungen wird das FiItrat mit In Schwefelsäure. Wasser. rVbiger wäßriger Natriumbicarbonatlö.sung und Wasser in der angegebenen Reihenfolge gewaschen und mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Der beim Konzentrieren des l-'iltrats bei vermindertem Druck erhaltene Kiickstand verfestigt sich in Äthylacetat-Petroläther. IJmkristaliisalion aus dem g Liehen Lösungsmittel ergibt 3.26 g Z-(2SJR)-AHPA-(.S)-I.eu-OBzl; Fp. 122 bis 123 C.[\]&, +14.2 (ti, AcOH).

13.6bg der in Stufe 1 erhaltenen (2RSJR)AHPA •.vordcn in 70 ml einer 1 η Natriumhydroxidlosung gelöst. Unter heftigem Rühren und Kühlen der Lösung mit Eis werden 15 ml Z-Cl und 70 ml In Natriumhydro- *■> xidlösung in drei Teilen im Verlauf von 30 Minuten zugegeben. Das Reaktionsgemiseh wird dann I Stunde unter Kühlen mit Eis weiter heftig gerührt und dann 3 Stunden bei Zimmertemperatur.

Nach Beendigung der Reaktion wird 6n Chlorwasscr- so stoffsäure zur Einstellung des pH-Wertes des Reaktionsgemisches auf 1 zugegeben. Es trennt sich ein öliges Material ab. das zweimal mit 100 ml Äthylacetat extrahiert wird. Die Äthylacetatschicht wird mit Wasser gewaschen und unter Verwendung von wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Magnesiumsulfat wird abfiltriert, und das Fiitrat wird bei vermindertem Druck konzentriert Der Rückstand wird in Äthylacetat-Petroläther zur Herstellung vcn 8,48 g optisch unreiner Z-(2k„,U; A ^-pä kristallisiert. Wird die Mutterlauge bei vermindertem Druck konzen-.. '.^r. -val ^J?r Rückstand in Petroläther kristallisiert, so erhält man t"7 ί "'-^h unreine Z-(2SJR)-AHPA; Fp. 142 bis 143⁰C; M578 +70.2° (cl.44.AcOH).

8.00g optisch unreine Z-(2S,3R)-AHPA und 10,35 g Brucin-dihydrat werden unter Erwärmen in einem Lösungsmittelgemisch aus 300 ml Äthylacetat und 10 m! Methanol gelöst und filtriert. Das Fiitrat kann sich

Analyse für C	„H,	t.N	69.90.	H	6.81.	N	5	.26%.
berechnet:		C	69.b6.	H	7.01.	N	5	.13%.
gefunden:		C

Stufe 4

3,22 g Z-(2SJR)-AHPA-(S)-Leu-OBzl werden in 100 ml Methanol gelöst und 3 Stunden mit 100 mg Palladiumschwarz hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Lösungsmittel wird bei vermindertem Druck konzentriert. Erfolgt das Umkristallisationsverfahren mit Methanol-Äthylacetat, so erhält man 889 mg (2S.3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-leucin; Fp. 208 bis 213°C (Zers.). [x]\)_t -23,5° (c 0.48, AcOH). Rf = 0.48.

Analyse für Ci

berechnet:
gefunden:

C 62.31.
C 62.61.

H 7,85.
H 7,86.

N 9.09%,
N 8,83%.

Beispiel 2

Stufe 1

11,0 g (2RS,3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutyronitrilhydrochlorid werden 4 Stunden in 200 ml 6n Ciii^. ..a;;erstoffsäure am Rückfluß erwärmt. Die Chlorwasserstoffsäure wird bei vermindertem Druck abdestilliert. 200 ml Wasser werden zugegeben und das Reaktionsgemiseh wird erneut bei vermindertem Druck konzentriert. 100 ml Wasser werden zu dem festen Material zugegeben. Das unlösliche Material wird

abfiltriert. 100 ml Aceton werden zugegeben und das Reaktionsgemisch wird mit ammnniakalischem Wasser auf einen pH-Wert von 5,5 eingestellt und in einem Kühlschrank über Nacht stehengelassen. Die abgetrennten Kristalle werden abfiltriert und mit Wasser/ Aceton (I : I)-Lösung gespült. Man erhält 6,19g der gewünschten (2RSJR)-A H PA.

Stufe 2

Auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 2, beschrieben, wird (2RS,3R)-AHPA ccnzyloxycarbonyliert und mit Brucin unier Herstellung von Z-(2S.3R)-AHPA gespalten. Wenn die entstehende Z-(2S.3R)-AHPA mit einer äquimolaren Menge HOSu und DCDD umgesetzt wird, erhält man Z-(2S.3R)AHPA-OSu; Ip. 111 bisll2C,[«]$, +87,7° (cO,52, AcOH).

Analyse für C22H22N2O7

gefunden:

C 61.27. H 5,25. N 6,47%.
Stufe 3

Analyse für C 25!·	1i2N₂O₆	H	7,07,	N	6,14%,
berechnet:	C 65,77.	H	7.iö.	N	6.28%.
gefunden:	C 65,91.

Stufe 2
250 mg Z-(2S3R)-AHPA-(S)-Leu-OMe werden in einen pH-Wert von 2 eingestellt wird. Der abgetrennte Niederschlag wird r Λ Äthylacetat extrahiert, mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird entfernt. Das entstehende feste Material wird aus Äthylacetat-Petroläther kristallisiert. Werden die Kristalle aus den gleichen Lösungsmitteln umkristailisiert, so erhält man 150 mg Z-(2S,3R)-AHPA-(S)-Leu; Fp. 209T. [ft]jj, +27,2" (cO.71, AcOH).

Analyse für C24H J0N2O6

85 mg Z-(2S,3R)-AHPA-OSu und 86 mg (S)-Leu-OBzl.TosOH werden 12 Stunden in 5 ml Dioxan bei Zimmertemperatur in Anwesenheit von 0,03 ml Triethylamin umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wird dann bei vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird mil Äthylacetat cxtrahieri und mit In Schwefelsaure. Wasser, 5%iger Natriumbicarbonatlösung und Wasser in der angegebenen Reihenfolge gewaschen. Der Rückstand wird dann über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird /ur Herstellung eines festen Materials abdesiilliert. Wird das feste Material aus Äthylacetat-Petroläther umkristallisiert, so erhält man 90 mg des gewünschten Z-(2S,3R)-AH PA-(S)-Leu-OBzl; Fp. 122 C.

W57S +15.1" (c-0,77. AcOH).

75 mg Z(2S,3R)AHPA (S)-Leii-Obzl werden dann auf ähnliche Weise wie in Beispiel !,Stufe 4, beschrieben behandelt. Man erhält 33 mg (2S,3R>-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-leucin; Γα]*', -21,8° (<.- 0.45. AcOH), Rf = 0,48.

Beispiel 3
Stufe 1

330 mg Z-(2S.3R)-AHPA. hergestellt auf ähnliche Weise, wie in Beispiel 1. Stufe I. beschrieben. 162 mg HOBt, 217 mg Hydrochiorid von (S)-Leu-OME. O.i" ml Triäthylamin und 206 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 3, beschrieben umgesetzt. Man erhält 293 mg Z-(2S.3R)-AHPA-(S)-Leu-OMe; Fp. 12(TCHIi, -22,1* (c 1.09, AcOH).

berechnet:
gefunden:

C 65.14.
C 65.29.

H 6.75.
Hb.75.

N 6.46%
N 6.33%

Stufe 3

120mg Z(2S.3R)AHPA-(S)-Leu werden in 30ml Methanol gelöst und 3 Stunden mit 50 mg Palladiumschwarz hydriert. Der Katalysator wird dann abfilmen und Methanol wird abdestilliert. Nach Kristallisation aus Methanol-Äthylacetat erhält man 54 mg (2S.3RJ-3-

Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-leucin-[*]&, -22.7" (cO.95. AcOH). Rf = 0.48.

Beispiel 4

85 mg Z-(2S,3R)-AHPA-OSu. hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 2. Stufe 2. beschrieben, können mit 54 mg (S)-Leu 2 Tage bei Zimmertemperatur in 5 ml

)i» Dioxan und 5 ml Wcsser in Anwesenheit von 0.03 ml Triäthylamin reagieren. Das Reaktionsgemisch wird bei vermindertem Druck konzentriert. 30 ml Wasser werden zu dem Rückstand zugegeben und die Lösung wird mit In Schwefelsaure auf einen pH-Wen von 2

i~> eingestellt. Die Extraktion erfolgt mit 50 ml Aihylacctat. Die Äthylacetat'.chicht wird mit In Schwefelsäure. Wasser, 5%igei" wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser in ac angegebenen Reihenfolge gewaschen und mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet.

Äthylacetat wird entfernt und der entstehende Feststoff wird aus Äthylacetat-Petroläther kristallisiert. Werden die Kristalle aus den gleichen Lösungsmitteln wiederausgefällt, so erhält man 63 mg des gewünschten Z-(2S.3R)-AHPA(S)-Le.i. Fp. 209 C. [.χ]», +26.7° (c 0.55.AcOH).

Werden 45 mg Z-(2S.3R)-AHPA-(S)-Leu auf ähnliche Weise wie in Beispiel 3, Stufe 3. behandelt, so erhält man 15 mg Bestatin;[λ]^, - 22.3° (c0.52. AcOH). Rf = 0.48.

Beispiel 5

330 mg Z-(2S.3R)-AHPA. hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel I. Stufe 2, beschrieben, werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Beispiel Stufe 3. beschrieben mit 472 mg (R)-Leu-OBzLTosOH, 162 mg HOBi. 0,14 ml Triäthylamin und 206 mg DCCD unter Herstellung von 450 mg Z(2S,3R)-AHPA-(R)-Leu-OBzl behandelt; Fp. 118 bis 119⁰C, [a]g, +43,0° (c 1,23, AcOH).

Werden 430 mg Asi entstehenden Z-(2S3R)-AHPA-(R)-Leu-OBzi auf ähnliche Weise wie in Beisuie» 1. Stufe 4, behandelt, so erhält man 144 mg (2S3R)-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(R)-leucin;[«]g, +05° (cO,47, AcOHX Rf=0,49.

10 ml Methanol gelost und 0,6 ml In wäßrige Natriumhydroxidlösung werden zu der Lösung gegeben. Die entstehende Mischung wird 6 Stunden bei Zimmertem- es Analyse für C16H24NO.1 peratur gerührt. Dann wird Methanol bei vermindertem

Druck abdestilliert und Wasser wird zu der verbleiben- berechnet: C 6231,

den Flüssigkeit zugegeben, die mit 1 η Schwefelsäure auf gefunden: C 62,47,

H 7,85.
H 7,89.

N 9,09%,
N 9,09%.

Beispiel 6

Stufe I

Z-(2RSJS)-AHPA wird durch Bcnzyloxyoarbonyüerung von (2RSJS)-AHPA hergestellt, die auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 1, beschrieben erhalten wurde. 7,75 g Z-(2RSJS)-AHPA und 6.69 g Dehydroabiethylamin können reagieren: man erhält ein· DiastcreoisGiner, welches dann in Äther gelöst wird. Kaum lösliches Dehydroabietylaminsalz von Z-(2RJR)-AHPA wird abfiltriert. Die filtrierte Ätherlösung wird bei vermindertem Druck konzentriert. Das entstehende, ölige Material wird mit Äthylacetat In Chlorwasserstoifsäure behandelt; man erhält rohe /.(2SJS)AHPA; wenn die Kristalle zweimal aus ÄthylacetatPetroläthcr ausgefällt werden, erhält man 2.16 g reine Z-(2SJS)-AHPA; f-"p. 175 bis Ι76Χ\[λ]"ι +5.6 (c 1.39. AcOH).

Stufe 2

660. .lg Z-(2SJS)-AHPA. ' 944 mg (S)-Leu-OBzl.TosOH. 324 mg HOBt. 0.34 ml Triäthylamin und 412 mg DCDD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 3, behandelt, wobei man 710 mg Z-(2SJS)-AHPA(S)-Leu-OBzl erhält: Fp. !28'C. M"s - 38.0° (c-0.81, AcOH).

500 mg (Z-(2S.3S)-AHPA-(S)-I.eu-OBzI werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel I. Stiik- 4, behandelt. Man erhält 270 mg (2S.3S)-3-\mino-2-h\dm\>-4-phenylbutanoyl-(S)-leucin; MsIi -61.3 \c 0.56. AcOH). Rf = 0.37.

Analyse fürCi_hH₂₄N₂Oj

berechnet: C 62.31. H 7.85. N 9.09^lVi>.
gefunden: C61.99. H 7.71. N 9.13%.

Beispiel 7

165 mg Z-(2SJS)-AHPA, hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 6. Stufe I. 237 mg (R)-Leu-OBzl.TosOH, 81 mg HOBt. 0.03 ml Triäthylamin und 103 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 3, behandelt, man erhält 180 mg Z-(2S.3S)-AHPA-(R)-Leu-OBzl: Fp. 128 bis 129°C, MP₇₈ -11.0° (c 1,02, AcOH).

155mg Z(2SJS)-AHPA-(R)LeuOBzl werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 4. behandelt: man erhält 72.1 mg (2SJS)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(R)-leucin: Mrs -31.4' (c 0.47. AcOH), Rf = 0.52.

Analyse für CiaH;

berechne':
gefunden:

C 62Jl,
C 62,07.

H 7,85.
H 7.63.

N 9,09%,
N 8,80%.

Beispiel 8

330 mg Z-(2S,3R)-AHPA, hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 2, 440 mg Hydrochlorid von (S)-Ser-(Bzl)-ONb, 162 mg HOBt. 0.14 ml Triethylamin und 206 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Be«pic-i 1, Stufe 3. behandelt. Man erhält 540 r?g Z-(2SJR)-AHPA-(S)-Ser(Bzl)-ONb; Fp. 121,5⁰C, MS» +17,7° (el.07,AcOH).

Werden 500 mg Z-(2S JR)-AH PA-(S)-Ser(Bz!}-ONb auf ähnliche Weise wi^ \a Beispiel 1. Stufe 4, behandelt, so erhält man 147 mg (2S,3R)-3-AmiPc-2-hyd;"o?y-4-

phcnylbiitanoyl(S)-serin: M571 -9,0° (c 0.50, AcOH)₁ Rf = 0.20.

Analyse fur C ul	C C	5N₂ · !	I₂O	6,71. 6.74.	N N	9.33%.
berechnet: gefunden:		51,99, 51,39,	H H
	B e i s fi i t

330 mg Z (25.3R)-AHPA, hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 2. t>5 mg (S)-VaI-OBzi.TosOH. 162 mg HOBt. 0,14 ml Triäthylamin und 206 mg D(CD werden auf ähnliche Weise wie in Scispiel 1. Stufe 3. zur Herstellung von 397 n,g Z-(2S.JR)-AHPA-(S)-Val OBzI behandelt; Ip 96.5 bis 97'C. [λ]^, + 19.2 (c0.99. AcOH).

Werden 376mg Z-(2SJR)-AHPA-(S)-VaI-OBz! auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 4. behandelt, so

nylbutano>1-(S)-valin;
Rf = 0.42.

Ulf ytj,ji\;

0.55. .'-.cOII)

Analyse für CV,1

berechnet:
gefunden:

C 61.20,
C 60.98.

H 7.53. N 9,57%.
H 7,59, N^lU8"/,,.

Beispiel 10

330mg Z-(2SJR)-ArSPA. hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 2. 455 mg (S)-Nva-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt. 0.14 ml Triethylamin und 206 mg DCCD werden auf gleiche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 3. zur Herstellung von 310 mg Z-(2SJR)-AHPA-(S)-Nva-i)Bz! behandelt; Fp. 114 bis 115 C. [\$, +22.0" ((-0.49.AcOII).

Werden 250 mg Z-(2S.3R)-AHPA-(S)-Nva-OBzal auf ah, iich'c Weise wie in Beispiel !. Stufe 4, behandelt, so erhält man 110 mg '2S,3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-norvalin: Mi¹J, -14.5° (c 0.50. AcOH) Rf = 0,41.

Analyse für dsl·	-I₂₂O.	,N₂	H	7.64,	N	9.2.3°i-.
berechnet:	C	59.33.	H	7.58.	N	9.09'Vo.
gefunden:	C	59.42.

Beispiel 11

Wird (2SJR)-AHPA auf übliche WeK- unter Verwendung von t-P..;'.M S 4,t> jmethylpyrimidin-2-_, thiolcarbonat t-buloxycarbonyliert. so erhä't man das DCHA-SaIz von Boc-(2S,3R)-AHPA; Fp. 158 bis 159°C. Min +51,9⁰IcOmAcOH).

Wird DCHA aus 952 mg dieses Produktes durch Behandlung mit In Schwefelsäure und Äthy'.acetat entfernt, so erhäU man ölige Boc-(2SJR)-AHPA. Das cüge Matenas und 440 mg Hydrochlorid von (S)-Met-OMe werden in 20 m! Tetrahydrofuran suspendiert und mit 0,308 ml Triäthylamin neutralisiert. Die entstehende Lösung wird auf — 5^CC abgekühlt und nach Zugab* von 412 mg DCCD 4 Sw,Jen bei Zimmertemperatur gerührt.

Die abgeschiedene); Kristalle werden abfiltriert und die Mutterlauge wird bei vermindert?;^ Druck koiritritriert. Der Rückstand *ir£ « 2C=C rnl Äxhyfczd.zt gelöst, mit Ir. Schwefelsäure, W3-:ser. 5°/biger wäüngcr B:-;3rbi>na!!"~ung und Wasser in d;^r arsgcrrebeien

Reihenfolge gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet.

Der durch Konzentrierung der Mutterlauge bei vermindertem Druck erhaltene Rückstand wird in einem Gemisch aus Äthylacetat und Benzol (2:5) gelöst. Die Lösung wird in eine Chromatographiesäule gegeben, die mit Silicagel gefüllt ist.

Die das gewünschte Produkt enthaltende Fraktion wird gesammelt. Das Lösungsmittel wird bei vermindertem Druck abfiltriert; man erhält ein festes Material. Wird das feste Material aus Äther-Petroläther umkristallisiert, so erhält man 380 mg Boc-(2S3R)-AHPA-(S)-Met-GWe; Fp. 118°C,[a]^₈ +51,4° (cO.56, AcOH).

Werden 280 mg Boc-(2S,3R)-AHPA-(S)-Met-OMe auf ähnliche Weise wie in Beispiel 3, Stufe 2, behandelt, so erhält man 200 mg Boc-(2S,3R)-AHPA-(S)-Met. Fp. 116°C (Schäumen).[a]ü„ +44,1° (cO.54. AcOH).

0.2 ml Thioglykolsäure und 50%ige wäßrige Trifluoressigsäurelösung werden zu 150 mg Boc-(2S3R)-AHPA-(S)-MeI zugegeben, und das Gemisch wird 1 Stunde bei Zimmertemperatur gerührt.

Das durch Konzentration der Mischung bei vermindertem Druck erhaltene ölige Material wird in Wasser gelöst und an einer Säule (5 ml) adsorbiert, die mit einem lonenaustauscherharz (Dowex® 50x4; Η-Form) gefüllt ist. Das adsorbierte Material wird mit einer 2n wäßrigen Ammorrumhydroxidlösung eluiert und das Eluat wird zui Trockene eingedampft. Man erhält einen Feststoff. Wird der Feststoff aus einem Wasser-Acelon (1 :I)-Gemisch umkristallisiert, so erhält man 87 mg (2S.3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-methionin;[*]$g - 20,4° (cO.49. AcOH), Rf = 037.

Analyse KJrCi₅H₂₂O₄N₂S-I^H₂O

berechnet: gefunden:

C 53,67, C 53,64,

H 6,91, H 6.47.

N 8,35%. N 8,11%.

Beispiel 12

330 mg Z-(2S3R)-AHPA, hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 2, 472 mg (S)-IIe-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt. 0,14 ml Triethylamin und 206 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 3, zur Herstellung von 466 mg Z-(2S,3R)-AHPA-(S)-lle-OBzl behandelt; Fp. 100 bis IOI°C.[«]8, + 23.6° (c 1,0, AcOH).

Werden 440 mg Z-(2S3R)-AHPA-(S)-lle-OBzl auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 4, behandelt, so erhält man 191 mg (2S3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-isoleucin; [<x]$, +6,4° (c 0,52, AcOH), Rf = 0,48.

Analyse für Ci₆H₂₄O₄N₂

berechnet: C 62,31, H 7,85, gefunden: C 62,31, H 7,70,

Beispiel 13

N 9,09%, N 8,99%.

55

erhält 160 mg (2S,3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-(S)-norleucin; [«]|i, -8,9° (c 0,70, AcOH), Rf=0,47.

Analyse für C₁₆H₂₄O₄N₂ - H₂O

berechnet: gefunden:

C 58,88, C 5835,

H 8,03, H 7,84,

N 8.58%, N 8,6O<io.

Beispiel 14

Werden 103 g Z-(2RS3RS)-3-Amino-2-hydroxy-4-pchlorphenyl-butyronitril auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 1, behandelt, erhält man 3,10 g (2RS3RS)-AHPA(p-Cl); Rf=0.25.

Analyse OJrC₁₀H₁₂NO₃Cl

berechnet: C 52^9, gefunden: C 52,11,

H 5,27, H 5,17,

N 6,10%, N 5,99%.

1,81 g Z-(2RS3RS)-AHPA(p-CI) (Fp. 147⁰C). hergestellt durch Benzyloxycarbonylierung von (2RS3RS)-AHPA(p-CI), 237 g (S)-Leu-OBzl.TosOH, 810 mg HOBt, 0,84 ml Triethylamin und 1,03 g DCCD werden auf ähnliche Weise wie Li Beispiel 1, Stufe 3 behandelt Man erhält 2,50 g Z-(2RS3RS)-AHPA(p-CIMS)-Leu-OBzI; Fp. 122 bis 124^OC,[«]|?_S -123° (c3,18, AcOH).

Werden 1,50 g Z-(2RS3RS)-AHPA(p-CI)-(S)-Leu-OBzI auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 4, behandelt, erhält man 650 mg (2RS3RS)-3-Amino-2-hy-

droxy-4-p-chlorphenylbutanoyl-(S)-leucin; [λ]$, - 113° (c 133, AcOH). Rf=0,42 und 0.52.

35

Analyse für Ci₆H₂₃N₂O₄Cl

berechnet: gefunden:

C 56,05, C 55,88.

H 6,76, H 729,

N 8,17%. N 8.11%.

40 Beispiel 15

Werden 103 g Z-(2RS3RS)-3-Amino-2-hydroxy-4-ochlorphenyl-butyronitril auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 1, behandelt, erhält man 4,82 g (2RS3RS)-A H PA(o-CI); Rf = 0.25 und 0,29.

Analyse fürCioH,₂N0₃CI

berechnet: gefunden:

C 5229, H 5,27, C 52,01, H 5.17,

N 6,10%, N 531%.

330 mg Z-(2S,3R)-AHPA. hergestellt auf ähnliche Weise wie in Beispiel I, Stufe 2, 472 mg (S)-NIe-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt. 0.14 ml Triäthylamin und 206 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel I, Stufe 3, zur Herstellung von 437 mg

Z-(2S.3R)-AHPA (S)-NIe-OBzI behandelt; Fp. 114 bis 65 Analyse für C₁H₂₃N₂O₄CI 1Ι5°α[Λ]$, +23.Γ (cO,V4, AcOH).

350 mg Z-'(2S,/iR)-AhPA-(S)-Nlc-OBzl werden auf berechnet: C 56,05.

ähnliche Weise wie in Beispiel I.Stufe 4, behandelt; man gefunden: C 56.21,

726 mg Z-(2RS3RS)-AHPA(o-CI) (Fp. I36,5°C), hergestellt durch Benzyloxycarbonylierung von (2RS3RS)-AHPA(O-CI), 944 mg (S)-Leu-OBzl.TosOH, 324 mg HOBt, 034 ml Triethylamin und 412 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 3, behandelt: man erhält 747 mg Z-(2RS3RS)-AHPA(o-CI)-(S)-Leu-OBzl;Fp.129bis132°C,[«]Hi -29,1° (el,02, AcOH).

Werden 640 mg Z(2RSJRS)-AHPA(e-CI)-(S)-Leu-OBzI auf ähnliche Weise wie in Beispiel I. Stufe 4. behandelt, erhält man 107 mg(2RS,3RS)-3-Amino-2-hy-

droxy-4-o-chlorphenylbutanoyl-(S)-lcucin; [*]jj, - 20,8° (c0,48. AcOH), Rf-0.46.

H 6,/6,
H 6,56,

N 8,17%. N 7,90%.

230 247/272

Beispiel 16

Werden 11,2 g Z-(2RS3RS)-3-Amino-2-hydroxy-4-pmethylphenylbutyronitril auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1. Stufe 1, behandelt erhält man 3,41 g (2RS3RS)-AHPA(p-Me); Rf = 0,20.

Analyse WrCnH₁₅NO₃

berechnet: C 63,14,
gefunden: C 6234,

H 7,23,
H 7,01,

N 6,99%,
N 6,79%.

1,57 g Z-(2RS3RS)-AHPA(p-Me) (Fp.' 166,5 bis 168° C), hergestellt durch Benzyloxycarbonylierung von (2RSJRS)-AHPA(P-Me), 1,42 g (S)-Leu-OBzl.TosOH, 486 mg HOBt, 0,50 ml Triäthylamin und 618 mg DCCD werden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1, Stufe 3, behandelt; man erhält öliges Z-(2RS3RS)-AHPA-(S)-Leu-OBzl.

Wird das ölige Produkt auf ähnliche Weise wie in Beispiel i, Stufe 4, behandeil, erhält man 497 mg (2RS3RS)-3-Amino-2-hydroxy-4-p-methylphenylbutanoyl-(S)-leucin; Rf=0,58 und 0,53, [tx]?_n -72° (cO,96, AcOH).

Analyse für Ci₇H₂₆N₂O₄

berechnet: C 6333,
gefunden: C 63,08,

H 8,13,
H 8,23,

17

N 8,69%,
N 8,49%.

Beispiel

300 mg Bestatin werden in IO ml konz. Schwefelsäure und 03 ml rauchender Salpetersäure bei 0°C suspendiert. Die Umsetzung wird 1 Stunde bei der gleichen

Temperatur fortgeführt, nachdem die suspendierten Materialien verschwunden sind. Das Reaktionsgemisch wird in 100 ml Wasser gegossen und an einer mit einem lonenaustausrherharz (Dowex® 50x4; Η-Form) gepackten Säule adsorbiert Das adsorbierte Material wird mit 2n wäßriger Ammoniumhydroxidlösung eluieri und das tiuai .vi.d zur Trockene eingedampft Der Rückstand wird in !0 ml Waiscr gelöst, nitriert und dann wird das Filtrat Iyophilisiert; man erhält 213 mg (2S3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-p-nitrophenylbutanoyl-(S)-Ieucin;[a]$₈ +52{cO$, AcOH), Rf=058.

Analyse für C|₆H₂jNjO₆

berechnet: C 5438, H 6,56, N 11,89%,
gefunden: C 54,28, H 6,58, N 11,88%.

Beispiel 18

100 mg (2S3R)-AHPA(p-NO₂)-(S)-Leu, erhalten gemäß Beispiel 22, werden in 10 ml Methanol gelöst und katalytisch mit Palladiumschwarz 5 Stunden hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat wird bei vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 5 ml Wasser gelöst und filtriert. Das Filirat wird lyophilisiert; man erhält 81 mg (2S3R)-3-Amino-2-hy-

droxy-4-p-aminophenylbutanoyl-(S)-leucin;
[«]|?g - 23.2° (cO.5. AcOH), Rf=0.25.

Analyse für Ci_ör	^₅NjO₄	H	7,79,	N	13,00%
berechnet:	C 59,42,	H	7,91,	N	12.81%
gefunden:	C 59,01,

Claims

Patentansprüche: I. Bestatin-Analoga, gekennzeichnet durch die allgemeine Formel

R¹

3 7 T

-CH₂—CH CII -C-NH —CH- COOH

I I Il

NH₂ OH 0 R