CS201033B2 - Method of producing derivatives of n-/3-amino-2-hydroxy-propionyl/-2-amino acetic acid - Google Patents

Method of producing derivatives of n-/3-amino-2-hydroxy-propionyl/-2-amino acetic acid Download PDF

Info

Publication number
CS201033B2
CS201033B2 CS764736A CS473676A CS201033B2 CS 201033 B2 CS201033 B2 CS 201033B2 CS 764736 A CS764736 A CS 764736A CS 473676 A CS473676 A CS 473676A CS 201033 B2 CS201033 B2 CS 201033B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
amino
acid
hydroxy
formula
alpha
Prior art date
Application number
CS764736A
Other languages
English (en)
Inventor
Umezawa
Aoyagi
Rinzo Nishizawa
Tetsushi Saino
Original Assignee
Microbial Chem Res Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbial Chem Res Found filed Critical Microbial Chem Res Found
Publication of CS201033B2 publication Critical patent/CS201033B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C255/00—Carboxylic acid nitriles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Vdiález se týká způsobu výroby bestatinu a příbuzných sloučenin, inhibujících aminopeptidasu B, leucin-íminopeptidasu a bleomycCn-lhylrolasu, zvyšujících protinádorovou účinnost bleomysinu, jakož i účinnost proti oplodnění.
Přectaětem vynálezu je způsob výroby sloučenin obecného vzorce I
2 1 2'T
R.—CH—CH—CO—NH—CH—COOH 1 III
NH2 OHR2 (I) kde R, je alkyl s 1 až 4 atomy uihLíku, cyklopentylmeetyC, cyklohexylmethy, cyklo-heptylmethcl, fenyl a subbtituent vzorce
R3
(II) kde R je atom vodíku, chloru, meehyl, nitroskupina, hydroxyl nebo a Rg je alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyelkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, alkoxymethyl s 2 · až 3 atomy uhlíku, alkylthiomethyl s 2 až 3 atomy uhlíku, karboxyamidoalkyl s 2 až 3 atomy uhlíku, karboxyelkyl s 2 až 3 atomy uhlíku.
Bessatin je (2S, 3R))3-fflninoo2-hhydoor“4-fennlbbuanoyl-(S))leucin, jehož strukturu lze vyjádřit výše uvedeným obecným vzorcem I, kde R, znamená benzylovou skupinu a Rg zněmená isobutylovou skupinu.
Skupina sloučenin včetně bestatinu, které lze připravit z kultivačního prostředí houby, produkující beetatin a patřící k aktinomycetům, jsou novými látkami a vyznačují se výše uvedenými fyziologickými účinnostmi.
Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I se vyznačuje tím, že se kondenzuje aminokyselina obecného vzorce II
NH2 OH (II) kde Rj má výše uvedený význam, popřípadě s chráněnými funkčními skupinami, které se neťtóastňují při další reakci, a aminokk8elina obecného vzorce III
NHz~CH—OOOH 2 I (III) kde Rj má výše uvedený význam, za poožití obecných postupů peptidové chemie. Po odstranění případných chránících skupin se získáj sloučeniny obecného vzorce I.
Aiinokksseiny obecného vzorce II se získaj kyselou tydrolýzou z nitrilů obecného vzorce IV
NH2 OH (IV) kde Rj má význam uvedený výše nebo z těchto nitrilů s chráněnou aminoskupinou.
Vynález je blíže objasněn v následujícím popisu, přičemž nejprve je uvedena příprava aminookesein vzorce II, které slouží jako výchozí sloučeniny při postupu podle vynálezu.
Typickými příklady nitrilů v obecném vzorci IV jsou nitrii kyseliny 3-tmino-2-hydrk:χypropi-onové, ni trii kyseliny 3-amino-2-hydrkxy-5-mlthylhlxanové, ni trii kyseliny 3-amino-2-hydrkχr-3-flnylprkpiknkvé, nitrii kyseliny 3-tmink-2-tydroэχ-4-p-chlkrfenylmáselné, nitril kyseliny 3-amink-2-hydro;iqlr-4-fenylmáselné, nitril kyseliny 3-amnnk--hyddooχ-44-k-hlooflnnkmásslné, nitril kyseliny 3-amino-2-tydrozxr-4-p-methylfenylmáselné, nitril kyseliny p-metholykeny-máselné, nitril kyseliny p-hydroxyfenylmáselné a nitril kyseliny 3-amino-2-hydrkχy-4-p-benzyloxyfenylmáselné.
Pro chránění amine skupiny se může peužit k^rákoM skupina pro chránění aminoekupiny, jak jsou známé z p^Udové chemie.
Jako výhodné příklady acylových skupin ke chránění amineskupiny je možno uvést skupiny fojmylovou, ace tylovou, triflkrtacetykkvku, benzeylovou skupinu, případně substituovanou, jako příklady chránících skupin uгethenιovéhk typu pro Βΐηΐηοβ^ρ!^ je možno uvést popřípadě substituovanou b^zy^i^a!* bonzovou skupinu, alUkχkUarbonklkVku skupinu s 2 až 7 atomy uhlíku, a cyklkalkyloJkU:aгbknylovku skupinu.
Jako výhodné příklady dalších chránících skupin, použitelných pro chránění aminksUupiny, je možno uvést skupiny, popřípadě substituované, f taftovou skupinu, k-nitrofenyl8žleenykovkž skupinu nebo U^ytovou skupinu.
Při provádění hy&rolýzy se může pouužt kterákoli z kyseHn, které se obvykle používají při hydrolýze nitrilů. Jako příklady anorganických kyselin přicházzeí v úvahu kysekina chlorovodíková, bromovoodková, nebo sírová, jako příklady organických kyselin lze uvést alkyl suk^nové kyszliny, jako je kyselina mm than sifonová, ethans^-konová, dále aryls ufonové kyseliny jako je·kyselina benzensUfonová a tklžlnsžlkonooá.
Koncentrace těchto kyselin se může pohybovat v jakémsi rozneel, pokud je vhodné pro hydrolýzu obvyklých nitrilů. Koncentrace nad 1 N je možno oznaait za výhodné.
V případě sloučenin s chráněnou aminoskupinou, které se neochotně rozpouštějí ve vodných roztocích kyselin, je možno přidat organické rozpouštědlo, mísitelné s vodou, jako je tetrahydrofuran, dioxan, nižší alkoholy, aceton, dimethylfomamid, dimethylacetjmid a dimethylsulfoxid. Zvýší se tím rozpustnost sloučenin ve vodných suspenzích.
V případě použití chránicí skupiny a odstroíujj-li se tato chráiicí skupina hydrolýzou za vzniku elektrofilních látek, přidává se látka, vázající kationty jako je aii-sol.. Teplota při hydrolýze se může pohybovat v jakémkooi rozmezí od teploty místnosti ai do teploty varu reakční směsi pod zpětným chladičem. Při izolaci očekávané amin^yseliny z reakční směsi se může pouuit kterýkoli z obvyklých postupů pro takovou izolaci.
Naaříklad provvádíli se hydrolýza působením těkavé kyseliny, pak se nadbytek použité kyseliny může o^í^t^jrai^it zahuštěním reakční směsi za sníženého tlaku, a potom se zbytek rozpustí ve vodě a roztok se nenuralizuje vodným roztokem báze ai do dosažení isu-leУtriykéhu bodu. Dále se do reakční směsi přidá - je-li to žádoucí - aceton, methanol nebo ethanol, tím vykkyytaluje sloučenina obecného vzorce XI, která se potom oddiltruje.
Nebo v jiném případě při použity netěkavé kyseliny se reakční směs zředí vodou na koncentraci niití nei 1 N, roztok se prolije iontoměničovou pryskyyicí silně kyselé povahy, a na iontoměničové lrsskySici se adsorbuje požadovaná aminoUkSeeina. Adsorbovaná kyselina se potom eluuje z iontoměničové pryskyřice těkavou bází, jako je amoniak, zředěný popřípadě dále vodou, a roztok te za sníženého tlaku. Je-li to třeba, přidává se aceton, methanol nebo ethanol, čímž se napomáhá krystalizaci produktu, tj. sloučeniny obecného vzorce XI, a ta se potom ^dil^uje.
Při uvedené reakci se získá použitím derivátu (R-nnirilu jako výchozí sloučeniny (2RS,ЗR)-ш^iniUyseeina; pouužie-li se (S)-nnttil, získá se (2RS,33)-ιjnin¢)Uysseiia; při použití derivátu (RS-nnirilu se takto získá (2RS-3RS . -aminoккsseina.
Získané kyseliny obecného vzorce II se mohou pouužt v surovém stavu jako výchozí látky při dále uvedeném postupu. Tak například kyselina 3-amino-2-hкdro}χs4_feiylbur anová, která je výchozí látkou pro přípravu bestatinu, je ve formě (2S,3R). Takže se zřetelem na získání této sloučeniny je třeba štěpit kyselinu (2RS, 3R)-3-taninion2hhУsoxys4-f-nylburEnlovou na složku (2S, 3R)- a (2R, 3R)-.
Kyseina (2RS, 3R)-3-amini-2-hydro}χs4..fenslburaiová se štěpí na optické isomery v ethylkyseliny octové ve formě Siaetereoeuomeru, který se získá nejprve benzyloxykarbonylan cí (2RS, ЗR)-3-amini-2-hydroxys4-fenslbutEilOvé kyseliny za vzniku kyseliny benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-3-aminio2-hydroxχsn-f-nylbutanové, a která se potom nechá reagovat s brucinem. Přesněji řečeno, rozpuutí se za zalhřívání v -^1^^™.kyseliny octové kyselina benzsloxskarbunyln(2RS, 3R)-3-amini-2-^ydroxχs4-fenylbutanová, a udploVísjící ekvivalent brucinu, popřípadě malý nadbytek této látky, a roztok se popřípadě filtruje.
Při chladnutí nebo chlazení filtrátu se vyloučí krystaly, které se o^íltrují a pokud je to třeba, opakuje se přek^t^lování z kyseliny octové, až se získá opticky čistá sůl brucinu s kyselinou be^y^^/karbonny-^), 3R)-3-aminio2-hydroxys--fenylbutaiOn vou. Obvyklým zpracováním této soli brucinu se dále získá opticky čistá kxselina benzyloxykarbonxl-(2S, 3R)-3-amino- 2-hydroxy-4-feiylbut anová.
Jinak se může opticky čistá kxselina benzχluxχkarbonχln(2R, 3^)-3-a^i^i^<^-2-h^d:rox;^-4n -í-ísI butanová připravit takto:
Roztok soli brucinu a kyseliny benzxloxxkarbonxln(2R, 3R)-3-amini-2-hydro}χs4_feiylbutanové v -^χΙ^-™ kyseliny octové, obsaHnuící malé množtví kxseliny benzχluxχkaгbonχl-(2S, 3R)-3-amino-2-lhsdroэQr-4-fenslbur anové se zbaví brucinu protřepántím se zředěrým roztokem ‘ chlorovodíkové kyseliny, potom se vrstva ^hx^steru kyseliny octové vysuší dehydratač ním činidlem, jako je bezvodý síran sodný, a filtrát se zahustí za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v malém množství ethylesteru kyseliny octové. Přidáním petroletheru se vyloučí krystalky, a filtrací tohoto podílu se získá čistá kyselina benzyloxykarbonyl-(2R, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanová.
Bylo zjištěno, že (2R, 3R)-forma kyseliny benzyloxykarbonyl-3-amino-2- hydroxy-4-fenylbutanové je méně rozpustná v organických rozpouštědlech než odpovídající (2S, 3R)-forma· Kyselina benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4“fenylbutanová se rozpustí nejprve v rozpouštědle za teploty místnosti nebo za zahřívání a přidáním rozpouštědla, které rozpuštěnou látku nerozpouští, se vysrážejí krystaly, které je možno oddělit filtrací. Případně se tento postup opakuje, až se tím získá opticky čistá kyselina benzyloxykarbonyl-(2R, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanová.
Jako prvé rozpouštědlo, ve kterém se zmíněná látka rozpouští, se může použít některý z nižších alkoholů, jako je methanol, ethanol a propanol, dále některý z etherů, jako je diethylether, diisoprpylether, tetrahydrofuran a dioxan, posléze látky ze skupiny esterů, jako je methylester nebo ethylester kyseliny octové, ketony, jako je aceton a methylethylketon, halogenované deriváty uhlovodíků, jako je methylenchlorid a chloroform, amidy, jako je dimethylformamid a dimethylacetamid a konečně některý z nitrilů, jako je například acetonitril atd.
Jako druhé rozpouštědlo, které se ředí za vysrážení produktu, lze uvést uhlovodíkové frakce z ropy, jako je petrolether, benzin a ligroin, dále aromatické uhlovodíky, jako je benzen a toluen, alkany jako je pentan a hexan, dále cykloalkany, jako je cyklopentan a cyklohexan. Za použití postupu s diastereoisomery a brucinem je možno z filtrátu 8 nečistou kyselinou benzyloxykarbonyl-(2S,3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanovou, získat vyčištěním opticky čistou kyselinu (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanovou.
Kyselina benzyloxykarbonyl-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanová, která se používá při výše uvedeném Štěpení na optické antipody, se může syntetizovat za použití postupu podle Schottena a Baumanna reakcí kyseliny (2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanové s benzyloxykarbonylchloridem za přítomnosti báze, nebo za přítomnosti terciárního aminu, jako je triethylamin nebo N-methylmorfolin a v tom případě se použije jako benzyloxykarbonylační činidlo benzyloxykarbonyl-p-nitrofenylester, benzyloxykarbonylazid, benzyloxykarbonyl-N-hydroxysukcinimidoester a benzyloxykarbonyl-4,6-dimethyl-2-merkaptopyrimidin v rozpouštědle, jímž je směs dioxanu, tetrahydrofuranu, aceton!trilu nebo dimethylformamidu s vodou.
Ačkoliv výše uvedené štěpení na optické antipody je popsáno 8 přihlédnutím ke kyselině 3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanové, může se podobný postup použít - je-li to žádoucí - pro další aminokyseliny.
Při přípravě bestatinu a podobných sloučenin ve smyslu obecného vzorce I se aminokyselina obecného vzorce II kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce III za použití postupu, který se obvykle používá к řazení aminokyselin v chemii peptidů, a potom se odstraní chránící skupiny, kterých bylo popřípadě použito к chránění funkčních skupin, které neměly účast na vlastní reakci.
Jako typické příklady aminokyselin obecného vzorce III je možno uvést glycin, alanin, kyselinu 2-aminobutanovou, valin, norvalin, leucin, norleucin, isoleucin, terc.leucin, kyselinu 2-aminoheptánovou, kyselinu 2-amino-5-methylhexanovou, kyselinu 2-aminooktanovou, kyselinu 2-amino-6-methylheptanovou, serin, threonin, allothreonin, cystein, homocystein, asparagin, glutamin, 0-methylserin, O-ethylserin, O-propylserin, methionin, ethionin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylglycin, p-methoxyfenylglycin, fenylalanin, tyrosin, p-methoxyfenylalanin a p-nitrofenylalanin.
Mezi způsoby kondenzace aminokyseliny obecného vzorce II s aminokyselinou obecného vzorce III patří karbodiimidový postup za použití buá dicyklohexylkarbodiimidu nebo 1-ethyl-3-(3-dimethylíiinopropyl)karbodiimidu.
Dále se může použit azidového postupu za použití kyseliny dusité nebo jejího alkylesteru, postup smíšených anhydridů za použití ethylesteru kyseliny chloimravenčí nebo isobutylesteru kyseliny chlormravenčí, způsob za použití aktivních esterů, jako je kyam^meth^y·“ ester, fenySester, případné substituovaný, thiofenylester nebo N-hy dro :^811^^imidoester, dále postup s O-acylhydroxyaminoderivátem, jako je O-acylacetoxim nebo O-acylcyklohexanonoxim a postup s N-acySderiváty za použití karbo^^^y^i^^Li^mLdazf^^lů.
Z organických rozpouštědel použitelných při výše uvedené kondenzační reakci je moino jmenovat ethery, jako je diethylether, tstr(hlsdrefuran nebo dioxan, estery, jako je ethylester nebo meShhSlSter kyseliny octové, dále ketony, jako je aceton nebo metihy-ethylketon, halogenované deriváty uhlovodíků, jako je nebo chloroform, amidy, jako je dimethylfomiamid nebo dimethylacetemid, a nitrHy, jako je aceSoeU1til.
V případě kondenzace aminoeyseSiny obecného vzorce II s chráněnou aminoskupinou a aminokyseliny obecného vzorce III s nechráněnou karboxylovou skupinou, při pouSíLLÍ postupů aktivních esterů se jako rozpouštědlo může poulit směs vody a rozpouštědla metelného s vodou za přítomnooti anorganické báze, jako je hydrogenuuhiěitan sodný nebo kysličník hořečnatý, nebo za přítomnoti organického terciárního aminu, jako je nebo · N-mmehylmoeffeiu.
Ze vzniklého produktu se mohou o^s^t^ra^i.t případné chránící skupiny použitím postupů, obvyklých v chemii peptidů, jako je katalytická hydrogeuacn na palladiu, zmýdenění v alkalickém prostředí, acidolýza působením bromovodíku · v kyselině octové, reakce s kyselinou trfileoooceoveu, s chlorovodíkem v dioxanu, tetrahydrofuranu nebo ethy^ste^ kyseliny octové, reakce s kapal rým f^C^l^c^:ec^^^e^č^:Cl^<^m, hydrazinolýza působením hydrazinu nebo reakcí se sodíkem v kapalném amoonaku. Získá se tím očekávaná sloučenina obecného vzorce I.
Derivát obecného vzorce IV se připravuje redukcí alf a-aminokyseliny, její i aminoskupina je chráněna a karboxylová skupina převedena do funkce amidové skupiny, reakcí se sekundárním aminem za teploty pod 0 °C a hydridem kovu v etheru, jako je 01п1Ьу1п11пг nebo tstrahsdгefuгau a získá se aminoaldehyd s chráněnou aminoskupinou. Vzniklý aminoaldehyd se převede na adikt s hydrogenueřičitusem sodným, a potom se provede další reakce s kyanidem alkalického kovu nebo přímo s kyanovodíkem za vzniku kyanohydrinu nebo 3-amino-2-hydroxynitrHu.
Jako příklady výhodných sekundárních aminů je možno uvést Ν,Ν-dimethyiamiu, aziridin, karbazol, 3,5-dimethylpyrazol a imidazol. Jako příklady výhodných hydridů kovů lze jmenovat hydrid hl1u1teiit^uy, lth1imndilC0oxyalminiгmlhsdrid, iilhimtriaCkoxyaiumiuLUιmlydrid a uatrimbis-(2-methoxyethexy)alm1nižmthslrid.
Jako příklad chránící skupiny pro aminoskupinu je možno uvést kte^akoo! z chránících skupin, které se obvykle použivají v chemii peptidů. S výhodou je možno používat chránících skupin n^thanového typu, především pak je výhodnou skupinou bnnzylexyкarbenylová skupina.
Podle druhého možného způsobu se chrání aminoskupina v niiším · alky^ste^ alfa-1mluekyselins vhodnou chránící skupinou, jako je některá z výše jmenovaných, uačni se redukuje produkt s chráněnou aminoskupinou za teploty·pod -40 °C v prostředí řommtického uhlovodíku, jako je toluen nebo benzen nebo některý z etherů, jako je disthylsthsr nebo tstrahsdгefuran působením hydridu kovu, jako je hydrid hlinieoeo(^uy, diisobutylalmninžumhydrid nebo natržιmb1e-(--mehho>yrnthexy)allm1niLmlhsdrid za vznikl aminoaldehydu s chráněnou aminoskupinou. Zppacooááá-li se takový aminoaldnhyd, jak je to uvedeno výše, získá se tím 3-amlno-2-hydrooχsUtгil. .
б
Fyziologické účinnosti bestatinu a odpovídajících sloučenin ve smyslu obecného vzorce I, o^i-oravených podle tohoto vynálezu, se stanowijí takto: * (A) Inhibiční účinnost proti aminopoeOidase B
Testovací postup':
Byl УoVdfiksván způsob, který poposai V· K. Hopusu, K. K. Makinen, G.G. Glenner a Arch. Biochey. Biophys. 114. 557 (1966). Ke směsi 0,3 ml 1 mM roztoku beta-naftylmidu argininu a 1,0 ml 0,01 M hydrochloridu tris-pufau (pH 7,0) se za ptestovaného produktu nebo bez této látky přidá 0,7 ml deštilyvarné vody, a vSe se zahřívá 3 minuty na 37 °C.
Reakce se zahájí přidáním 0,2 ml roztoku aminopolOidasy B, pobitím chromatosp’afil na sefadexu G 100, jak to popsal Hopusu a spyl. (viz výše). Po 30 minutách uchovávání za teploty 37 °C se přidá 0,6 ml 1,0 M acetátového pufru (pH 4,2) oЪ8εlшjícíhs diazoniovou sůl o-aminoazotoluenu v konccetraci 1,0 mg/ml a Tween 20 o koncentraci 1,0 %.
Za 15 minut ponechání za teploty místyyssi se změří absorpce (a) při 530 nm spektrofotometrem. Pro kontrolu se podobným způsobem změří absorpce (b) po provedení reakce bez vlastního vzorku. Procento 1у11Ь1о1 se propočte z rovnice;
(b-a)/b.100.
Byly změřeny procentové údaje hUbice za různých koncentrací a ze zjiStných % bUblce byla odvozena hodny ta 50 % 1у11Ь1о1 (ΙΏ^θ). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.
Tabulka 1
Inhibiční účinnost bestatinu . a podobných sloučenin proti aminopolpidasl B.
látka č. sloučenina ID50 (pg/ml)
1 (2S, 3R·3-мmnoo-2hlУdosy-4-felyУlbjaaoyl-(S J-loucin 0,10
2 (2S, 3S)-3-aminoo2-^hrУdooyy44fenyУbbjtaюsl-(S)-llucin 1,25
3 (2S, 3R)-3“aminoo22^hrУdos;yy44fernУbbjtaosl-(S)-llucin 0,56
4 (2S, 3S)-3-aminoo2-hy(ldosyy-4fenyУbbjtaюsУ-(R)-lljcin 0,04
5 (2S, 3S )-3-emino-2-hydгoзχy4-flnylbutanoslglycin 21,5
б (2S, 3R)-3“amnoo-2^lrУaosУ“4-felyУbbjaaoySy (S )-vvlin 0,55
7 (2S, 3R)-3-aminos22hlУdo:sy-У(·fθlyУbbjaloySy (S J-Iso^-iucíi 0,05
8 (2S, 3R)-3-aminos2-hydaooyy-4flnylbbtШ’n)sУ-((S)-metllsnln 0,22
9 (2S, 3R )-3-lminoo2-hy<d·osyy-4f enyybu jιllosУl(S )-gl btemin 1,2
10 (2S, 3R)-3-lminys22hlУdooyy44fenyУbbjtnysl- 0,17
11 (2S, 3R)-3-lminos2-(lrУaosyy44fenyУbbjtalУsУ-(S)-ysrlljcly 0,13
12 (2S, 3R)-3-aminys-2hlУaosy-4-felyУbbjaloySy (S ^^πιΟ^ι^ι 4,2
13 (2S, 3R)-3-aminys-2hlУdooy-44feeyУbbjalУsУ-(S)-slaiy 0,72
14 (2S, 3R)-3-aminys2-lyУaУ5χy4-flУyУbutanyyУ- (S(-gjulmιюvá kyselina 25
15 (2S, 3R)-3-aminys2-hyУdУoyy44fenyУbbjtalУsУ-(RS )“2-lmiУOOktanová kyselina 3,1
16 (2RS, 3R)-3-lminys2-llyidO'oyypysiosyУ-(S Í-Iiucíi 16
17 (2RS, ' 3R)y3-lmino-lly:dooyy--melhlУhleШloySy(S)-lluciУ 12
18 (2RS, 3R))(3-lmiyys-2hlУdУsy-ЗзfelyУpoooOysyl-(S)-Уlbciy 56
19 (2RS, 3R )-3▼ílmny-22hlУdУo'-У-pochlysfenyУbb unnoS- (S)-Ioucíi 0,07
látka sloučenina ΙΟ^θ (pg/ml)
20 (2RS, 3R)-3-sclinOž2-hyзrožy-4-oociloorenolbuž8C10žll(S)- -ležcio 0,48
21 (2RS, 3RS )-3-íaIlinož22hhУrržyyp-πlíteylfeenУlužecn)žll(S )-leucin 0,01
22 (2S, 3R)-3-£Cϊ]inOž---yУrooy-4-p-nittrOenolbužtαlOžll(S)-leucin 0,01
23 (2S, 3R )-3-amino-2-hySrožyy-4-píaIlinožeenУlužtnožУ· (S)-leucin 0,10
24 (2S, 3R )-3-aminOž2-^hгSгooy----yУkožeeyllužsclOžУ- (S)-leucin 1,05
25 (2RS, 3R)-Зy|aIlinoo22hhУrržy-4-pphydrroyУeeolbužtcožll(S )- -leucin 0,10
26 (2S, 3R)-3-aminOž2-hyУdržy---pphyУdržyУeeollužtcιožУl(S). -J^eucin 0,007
(B) Distribuce bleomycinu v orgánech za přítomioosi bestatinu.
100 mg/kg bleomycinu Bg se subkutánně injikuje každému ze 3 samečků ICR щтё! (stáří 4 týdny), a podobně se podá subkutánně každé ze 3 stejně starých myšek současně 100 mg/kg bleomycinu Bg a 100 mg/kg bestatinu.
Za hodinu po podání uvedených látek se všech 6 myší usmrtí a možství bleomycinu, které zůstane v séru a orgánech, se stanoví za použžtí tenké vrstvy na Petriho misce, přičemž jako testovací mikroorganismus se použije Bacillus subttlis PCI219. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2; číselné údaje jsou průměrné hodnoty v pg/ml.
T ab u lka 2
Vliv současného podání testctiou a bleomycinu Bg nebo distrbbuce bleomycinu v . orgánech bleomycin 100 mg/kg sérum plíce pokožka játra ledviny
110 11,2 4,5 0 68,0 slezina žaludek mozek
4,0 1,6 0 bleomrcin 100 mg/kg + besiat^ 100 mg/kg 140
21,2 42,0
84,0
5,8 2,5 2,4 (C) Antikoncepční vlastnosti.
Účinek testctiou proti plodiooti ·
Bezprostředně po subkutárrním podání testctiož v dávce 10 mg/kg samičká! mršek ICR JCL v pubertálním věku se tyto i^áky umístí dohromady se samečky podobného stáří. Samičky my: ší se po spáření usimtí 2 dny po tvorbě v^inální zátky, a odeberou se vajíčka ke zjištění, zda byla oplodněna nebo nikoli. Oplodněná vajíčka byla z údobí 0 až 16 buněk.
201033 8
Skupila m^í po podání beetatinu samička č. 1 č. 2 celkově N=2
corpus luteim, počet 10 19 29
odebraná vajíčka, počet 10 19 29
oplodněná vajíčka 4 (40 %) 6 (31,6 %) 10 (34,5 «)
neoplodněná vajíčka 6 (60 %) 13 (68,4 «) 19 (65,5 »)
Konzola
corpus luteim, počet 13 13 26
odebraná vajíčka, počet 9 11 20
oplodněná vajíčka 6 (66,7 «) 8 (72,7 «) 14 (70 «)
neoplodněná vajíčka 3 (33,3 %) 3 (27,3 «) 6 (30 «)
Z pokusu . je patrné, že oplodnění vajíček, odebraných od myšek a kopULací 4 až 16 hodin po podání bestatinu, odpovídá 34,5 %, zatímco u kont-rolní skupiny se jedná o hodnotu 70 . Ž. Z těchto výsledků vyplývá, že se bestatln vyznačuje působením proti oplodněnn.
(D) Účinek . (2RS, 3IR:>)-3-aminck2-hy¢lrooχ--4p-hykr0oχУknnlbbžtalnkl-(S^leucinu na humorální . tvorbu protilátek na ovčí červené krevní buňky u m^š.
(2RS, 3IR>)-3-aminno2-tydrooχ--4pphykrokχУknyllbžannkl-<S)-ležcin byl také testován na humoáání tvorbu protilátek, aby se stanoovia jeho účinnost jako imunitního inhibitoru rakoviny. Bylo nalezeno, že sloučenina způsobuje značné zvýšení počtu hu^oodálních prootlátkových buněk. Výsledky ukazuj, že sloučenina může slo^žt jako v^nikaící imrnnttní inhibitor rakoviny. Pro humorání tvorbu protilátek u bsetatinu viz J. A^nj.bLoti^es 29 857 až 859 (1976).
Účinek (2RS, 3R)-3-β]iinno-2hykdokχ--4^hdroo;χfknylbbžannyo-(S)-lβžcinž na hunooáání tvorbu protilá1teU na ovčí červené krevní buňky u m^Ší byl studován následujícím způsobem.
* 8
Myši (dd/y samice) byly imunizovány intraoβnksní ' injekcí 10° ovčích červených krevních buněk. Intraperitoneální injekce (2RS, 3M>))·3-α^innk--(hšrooχ-fkenšlbžalnyl-(S)-llžcinž· byla aplikována ihned poté.
Jako kontrola .byl pouužt beetatin, (2S, 3R)τЗ-(aninnk2-hyšrokX·š-fklnlbbžaanyk ^(S)-loucin a (2RS, 3IR)-3-tninnk2--yšdOkIk(-p-chiokfkeyšlbžannyl-(S S-leucin.
Po 4 dnech se vypočte počet de8tičUkvitých buněk ve slezině JERNEho metodou, (Jerne N. K, A. A. Nordin a —. Henry: The Aga Plaque Technique kor Reccoginzing Antibkdkpdodžcing Cells in cellbboimd antibodilt (Wi^1;ar Institute Press, Philadelphie, 1963), str. 109 až 122.
Výsledky jsou shrnuté v tabulce.3.
Tabulka 3 Účinek (2RS, 3R>)-3·(aminck--(iyd·Okχ--4pphiddOkχfkenlbbžannyk-(S)-llžcinž na humorní tvorbu pro o Hátek na ovčí červené krevní buňky u mší.
buňky tvořící protilátky
sloučenina dávka počet ^oše^ená-skuioLnaneo Setřená skupina
- - 12 500 ± 9 050 -
(2RS, 3^0-3^1^-2-hydro:xr-4-p- -hydro :χyeenУ1·UutnιlooУ-(S^eeucin 1 mg 207 400 í 8 025 1,66
100 pg 261 000 i 11 700 2,09
10 pg 208 000 í 7 180 1,66
1 . pg 175 800 t 8 200 1,41
0.1 Ug 141 000 í 5 700 1,13
Bestatin 1 mg 190 000 t 7 100 ’·52
10 pg 136 250 ± 6 500 1,09
(2RS, 3R>S-3-amino-2hydrooxy-^p-chloohfeTnrybutcmnoy-(Sl-leucin 1 mg 208 750 í - 8 000 1,67
10 pg 133 750 i 5 600 1,07
Počet buněk vytvářejících protilátky u skupiny m^š, kterým bylo - podáno 10 pg bestatinu nebo (2RS, 3R)-3-aninoo221h’yroor-4“ppChhoofennyiuuanoyl-(S)-leucinu je téměř stejný jako u.neošetřené skupiny.
Na druhou stranu počet - buněk tvořících protilátky u m^š, kterým bylo aplikováno 10 ' pg (2RS, 3RЗ)-3“nninoo22hhУrooyy4-pp(hУгooyУeeolbuUanoyl-(S)“leuhinu je -1,66krát větší než . u neošetřených mrší a to i v těch případech, kdy se aplikuje pouze 1 pg je 1,41krát vyššť.
Jak bylo uvedeno .výše (2RS, 3R>)-3-nminoo2-(lrУrooχУutanoyOy(S)-leucin - má vyri-ksaící účinek na zvyšování počtu buněk tvořících protilátky -p nezvyšuje'hmotnost sleziny ani - počtu nespeeceických buněk tvořících protilátky.
Vyiález je blíže objasněn v následnících příkladech.- ' Rozumí se však, že kromě v příkladech uvedených metod se dá pouužt jakánoi metoda pro zavedení chránec -iumkční skupiny, - jakáíooi metoda pro odstranění chránící funkční skupiny a jakýkooi způsob pro tvoření peetidického řetězce. '
Uvedené Rf hodnoty se vztahuj na destičky silikagelu GF254 p£ipreven4 Merek Corp. za pouužtí směsi o-UutnloO-kytelion octová-voda (4:1:1) jako elučního činidla.
Některé z 3-nmino-2-lydЮ>XyknгUoxyУovýhh kyselin a - také peptidy, které je obscahiuí mají 2 hodnoty Rf, protože se jedná o směsi - s threo- a erythro- kortfigiumcí.
Příklad 1
Stupeň 1
V 70 ml -1 N roztoku hydroxidu sodného se rozpustí 13,66 g kyseliny (2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4(eeenylmáselné. Získaný roztok se energicky míchá za chlazení ledem, a během 30 minut se přidává ve 3 dávkách 15 ml Uenoylo:χУkia^tu)nyУchloгidu a 70 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného. Potom se reakční - směs míchá energicky hodinu za chlazení ledem a další 3 hodiny za teploty místnost.
Po skončení reakce se přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové upraví pH reakční směsi na hodnotu 1. Vyloučí se tím olejovitý prodx&t, který se extrahuje dvakrát do 100 ml ethylesteru kyseliny octové.
Roztok v uvedeném ' rozpouštědle · se pro^je vodou, potom se roztok v ethylesteru kysseiny octové vysuší bezvodýta síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí za sníženého tisku. Krystalováním zbytku ze směsi ethylesteru kyseliny, octové a petroletheou se připraví 8,48 g opticky nečisté kyseliny bennylo:xykartb)oyy-(2R, 3R)-3-amino-2-hyyroox-4-fenyymásslné.
Na druhé straně zahuštěním matečného louhu za sníženého tlaku a krystalizací zbytku z petroletheru se dá získat 8,07 g opticky nečisté kyseliny b<Minylo2ykaal:b>oyl-(2S, 3Ю-3-amino-2-hyroo:χr-4-fenylmáselné.
Látta má t. t. 142 až U3 °C. [alfa]|;g + 70,2° (c = 1»44, kyseHna octová).
Směs 8,00 g opticky nečisté kyseliny benzylosykarboony-^S, 3R )-3-яшХуо-^-ЬуГ r-xy-4-fenylmáselné· a 10,35 g ^hydrátu brucinu se rozpustí za .zahřívání ve - směsi 300 ml ethylesteru kyseliny octové a 10 ml methanolu. Po filtraci se filtrát ochladí, čímž se vyloučí sůl brucinu a kyseliny 0enzylo:χУcartb^0yl-(2S, 3R)-3-amiho-2-hldIo>oyl--fenylmá8elné.
Vyloučené krystaly se oddiltrují a d^c^-zí koystalizací z ethylesteru kyseliny octové se získá 13,51 g čisté so-i brucinu a kyseliny Oennyl·oзχlcarlo>nyll(2S, 3R)-3-^110-2-11^0X1-4-f exylmáselné.
Látka má t.· t. 144 °C · [alfa] + 33,8° (c = 1,12, kyseliya octová).
* 13,5 g zíekených krystalů se suspenduje v·· 150 ml ethylesteru kyseliny octové, a brucin se odstraní vytřepáním suspenze do 30 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny. Vrstva ethylesteru kyseliny octové se poomj vodou a po vysušení bezv-idým - síranem hořečyatýfa· se anorganický _ poddl ο^-ΙΙο^ι, a ethylester kyseliny octové se oddrltilujl ve vakuu. Přesrážením zbytku z ethylesteru kyseliny octové a petroletheou se získá 6,21 g b^i^a^z^l.ox^l^ia:^1^c^oyl-(2S, 3R)-3-cmLУO-2-hyrroχy-4-ferytaáselyé kyseliny.
Látka má t. t. ^4,5 °C [al^J^yg + 83,5° (c = 1,34 kyseliya octová).
Stupeň 2
V 70 ml tetrahyrrofurayu se rozpustí 2,25 g kyseliny benzylo:xkarbcmyl-(2S, 3R)-3-amiУo-2-hlrooχy---fexylmáselné a 945 mg N-hydroэylonnz0г0azolu. Po přidání 2,75 · g so-i bennylesteru leucinu s kyselinou p-toluensul-onovou se reakční směs neuuralizuje přidáním 0,98 ml trtottylmlnu, ochlafó se ya -5 °C, přidá se 1,40 g NyN^-cHcyklolux^karto^imtou, načež se oeakční směs ponechá stát po dobu jedné noci.
se potom odd^^luje za sníženého tlaku,·ke zbytku se přidá 200 ml ethylesteru kyseliny· octové, nerozpustné poddly se ο-^ΙΊο^ί, filtrát · se promyje 1 N roztokem kyseliny sírové, vodou, 5% vodným roztokem hydrogeenuhičitayu sodného a vodou (přesně v uvedeném·pořadd), načež se organický roztok vysuší bezv-dým síranem hořečnatým.
Filtrát · se zahustí za sníženého tlaku, a získaný zbytek tuhne po přidání směsi ethylesteru kyseliny octové a petooletheru. Kyytalizací ze stejné směsi rozpouštědel se získá b^x^a^z^l<^<^lte2o 00^00x1^0*00-11-^, 3R)-3-aIninoo2-^ylrooχl44feIyУbbUtmnol-(S)-leuciУU.
Látka má t. t T 122 až 123 °С [alfa] 2?g + 14,2° , (c · = 1 kyselina octová).
Pro c3iH36N2O6 vypočteno: 69,90 % C, 6,81 % H, 5,26 % . N;
nalezeno: 69,66 % C, 7,01 % H, 5,13 % N.
Stupeň 3
V 100 ml methrniolu se rozpustí 3,22 g benzylesteru benzylomkarbonnl-(2S, 3R)-3-amino-2-hydrom-4-fenylbutanoylleucinu, a po přidání 100 mg palladiové černi se hydrogenuje 3 hodiny. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahnutí za sníženého tlaku. KrriSalizací zbytku ze směsi methiwiolu a ethylesteru kyseliny octové .se získá 889 mg (2S, 3R)-3-amino-2-hyfro:!χr-4-fenylbutιмnool-(S)-lescins.
Látka má t. t. 208 až 213 °C (rozklad), ([lfafa - 23,5° . (c = 0,48, kyselina octová). Ho (din ta Rf - 0,48.
pro C16H24N204 vypočteno: 62,31 % C, 7,85 % H , 9t99 % N;
nalezeno: 62,11 % C, 7,86 % Η, β,Β3 % N.
(2RS, 3R)-3-amino-2-hydro:xy4-fenylmáselná kyselina použitá ve stupni 1 se připraví následujícím způsobem:
Ve srnmsi 300 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 300 ml dioxanu se rozpustí 35~,4 g olejovitého nitrilu benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)“3-aminoo2-hydroxy-4-fenylmáselné kyseliny, a ·po přidání 21,2 g anisolu se reakční směs zahřívá 12 hodin do varu pod zpětným chladičem. Za sníženého tlaku se odddstiluje dioxan, získaný vodný roztok se promyje etherem, vodný podíl se zahnutí za sníženého tlaku až do sucha.
Ke zbylé látce se přidá 200 ml vody, nerozpustný poddl se ocdfLltruje, přidá se stejné množtví acetonu a pH reakční smmsi se upraví přidáním vodného roztoku amoniaku na hodnotu 5,4. směs se ponechá v ledničce, vyloučené kryutaly se oddiltrují a získá se tím .
13,66 g očekávané kyseliny (2RS, 3^)-3-a^ii^(^-^l^-h^<^x^<^JX^-^i^-^:fen^:lm^s^<^lné.
[elfa] , + 16,8° (c = 1,25, N HO.), Rf = 0,23 a 0,26.
Pro C10H13NO3 vypočteno: ť^1/^2í0C , <5,1 1 50 H , 71,8 50N;
nalezeno: бцОбЯС , 6,55 % H, 6,80 %N.
Příklad 2’
Stupeň 1.
, Podobným postupem, jak to bylo popsáno ve stupni 1 příkladu 1, se připraví z kyseliny (2RS, jR-J-amino^-hydroxf^-fenylmáselné benzylo:χУ:aaboonldfeivát, který se Štěpí brucinem za vzniku kyseliny benzyloxykarbonny-^S;· 3R)-3-amino-2-hydrojxr“4-fenylmáselné.
Působením ekvimooáimího množtví ^-цагоэхтв^сИ^^ a N,N-dicyklohe:χllkarbodiimifu na zíuksnou . sloučeninu se získá N-hydroJχrltUcCnnmidfeter kyseliny benzyloxykarboiny--(2S, 3 R) -3-amino-2-hydroχr“4-fenllmmselné.
Látka má t. t. 111 až 112 °C, [alfa] ΙΥθ
2 + 87,7° (c = 0,5^ tysellm octový
Pro C22H22N2°7 vypočteno:
61,96 % C,
5,20 % H naleziio:
61,27 % C,
5,25 % H
6,57 % N;
6,47 % N.
Stupen 2
Smts 85 mg N-hydrs!χy8ujccinimide steru kyseliny blnzyls:χykar1мolyУL((2S, 3R)-3-amino-2-lyírsχy-4-feyylmáellyé a 86 mg sooi bey^Se steru (Sy-lancinu s kyselinou o”tslulyeulfsysvou se ponechá reagovat 12 hodin v prostředí 5 ml dioxanu za teploty místnosti a za příoomnosti 0,03 ml tгlelhylmiyu.
smts se zahustí - za sníženého tlaku, zbytek se extrahuje do ιΙ^Ι^^^ kyseHny octové, roztok se v tomto rozpouštědle.promyje 1 N roztokem sírové kyseliny, potom vodou, 5% vodným roztokem lydrogenyUliδitlУu sodného a vodou, vždy v uvedeném pořadí.
Po vysnění bezvodým síranem hořlčyatýy se odde^Hováním rozpouštědla připraví pevný zbytek, který se ořlkrystlljjl z ethyl^te^ kyseliny octové přidáním oθtrslltllru a získá se tím 90 mg Ь^^уУ^^™ benyyls:^χУkarbosyУ-(2S, 3R)-3-lminos2-lydrosχy-4flyylbutanosУllUcinu.
Látka má t. t. 122 °C, . [alfa] . + 15,1® (c = 0,77, kyselina octová).'
Podobně, jak je to popsáno ve stupni 3 příkladu 1, se získá z 75 mg blnyyllstlru ЬюzylsxykarbosyУ-(2S, 3R)-3-lmino-2-lydroзχy--flyylbutaУoyllluciУu 33 mg (2S, 3RR-3-amino-2-lyarsэχry4-flУylbutanyoУ“(S)-leuciУj.
Látka má [alfa] θθ θ - 21,8°' (c = 0,45, kyseliny, octová), Rf = 0,48.
(2RS, 3R)-3-lmiУs-2-lyarsxy-4-feyylmáeelná kyselina oosιjltá ve stupy! . 1 se připraví následujícím způsobem:
Smts 11,0 g . nitrilu kyseliny (2RS, 3R)-3-lmiУOs2-lydrs:χy-4-feyylmáellné a 200 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové se zahřívá 4 hodiny k varu pod zpětrým cMLi^íčem; kyselina chlorovodíková se sdííleilujl za sníženého tlaku, ke zbytku se přidá 200 ml vody, a reakční smts se jeitt jednou zOnustí za sníženého tlaku.
K pevnému zbytku se přidá, 100 ml vody, nerozpustné podíly se sSíiltrjjí, a po přidání 100 ml acetonu se pH reakCní směsi upraví na 5,5 přidáním vodného roztoku amoonaku, načež se rukč^ri smts ponechá stát v ledničce přes noc. Vyloučené krystaly se promyyí se směsí vody a acetonu (1:1), a získá se tím 6,19 g kyseliny (2RS, 3Н)-3-1У1уо-2-hydro xxy-Hfmylmáselné.
Příklad 3
Stupen 1
V 10 ml methanolu se · rozpustí 250 mg иеНпуУе·steru benzχls:)QУ£arbbSyУ-(2S, 3R)-3-amiys-2-lyíroэχry4-flУχlbutιay)sУl(S)-leuciyu, k roztoku se přidá 0,6 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného, a reakč^ri smts se míchá 6 hodin za teploty mísstnoosi. Methanol se dále sddlstiluje za sníženého tlaku, ke zbylému kapalnému poddlu se přidá voda, a okyselením 1 N roztokem kyseliny sírové se upraví pH na hodnotu 2.
Vysrážený podíl se extrahuje do éthylesteru kyseliny octové, roztok se promne vodou, potom se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědlo se po filtraci oddesSiluje. Zbylý pevný poddl se překrystaluje ze směsi ethylesieru kyseliny octové a petroletheru.
Opakovanou krystalizací se získá 150 mg benzyloxykarbonny-(2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy^-fenyltutanool-CSI-leucinu.
Látka má t. t. 209 °C, [alfa] j + 27,2° (c = 0,71 ýseHna octová).
Pro C24H30N2O6 vypočteno: 65,14 % C, 6,75 % H, 6,46 % N;
nalezeno: 65,29 % C, 6,75 % H, 6,33 %'N.
Stupeň 2
V 30 ml methanolu se rozpustí 120 mg benzyloxycarbonny-(2S, ' 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-<* -fenyУbutanoyl-(S)-lsucinu, a po přidání 50 mg palladiové černi se reakční směs hydrogenuje 3 hodiny. Kaaaiyzátor se od^í^yti^uje a z filtrátu se oddenSilujn methaol. Získá se tím · 54 mg (2S, 3R)-3-aninoo--hydro:nr-l-ffnylbutanoyl-(S)-leucinu (po krystalizací z methmolu a ethylesteru kyseliny octové).
[alfaJ^Q - 22,7° (c = 0,95, kyselina octová^ Rf = 0,48.
Μθ^ι-Ιι^^ benzyloχlkarboϊnl-(2S, 3R)-3-aminoo--hyleonχl-4ffnylbetanonll(S)-lnucinu použitý ve stupni 1 se připraví následujícím způsobem:
Provede se reakce směsi 330 mg benzyloxykarbonyl (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylmáselné kyseliny, připravené podobně, jak je to popisováno ve stupni 1 příkladu 1, dále 162 mg N-hyydooenzooriazolu, 217 mg hydrochloridu (S)-leucinu, 0,17 ml triethyaminu a 206 mg N,N'-dicyklohexylkarbodiimidu.
Reakce se provede poyie stupně 2 z příkladu 1, a připraví se tím·293 mg menhylesteru b^zylo^^^©!^- (2S, 3R)-3-ϋnoo-2-hldooy-l-fenylbbtanoyl-(S )-leucinu.
Látka má t. t. 120 °C, [aafa]278 - 22,1° (c = ^0% kyselina octová).
Pro ^5^2°6 vypočteno: 65,77 % C, 7,07 % N, 6,14 % N;
nalezeno: 65,91 % C, 7,16 % H, 6,28 % N.
Příklad 4 mg N-hyldoэχlsUcCnimiddonSeru kyseliny benzylox/karbonny-^S, 3R)-3-amino-2-Уydroxy-4-fenylmáselné se připraví podobně, jak je to popisováno ve stupni 1 příkladu 2, a s touto látkou se provede reakce s 54 mg (S)-leucinu v 5 ml dioxanu a 5 ml vody za přítomno ti 0,03 ml iriethyaminu stáním 2 dny za teploty míítnoosi.
Reakční směs se zahustí za sníženého tlaku, ke zbytku se přidá 30' ml vody, a pH roztoku se přidáním 1 N roztoku kyseliny sírové upraví na hodnotu 2. Okkselený roztok se extrahuje do ntУylnsinou kyseliny octové (50 ml), roztok v uvedeném· rozpouštědle se promyje · 1 N roztokem k^^i^li^^y sírové, vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuUУiČitanu sodného a opět vodou v uvedením načež se roztok vysuší enovoelým sírrniem hořečnatým, po filtraci se
201033 14 ethylester kyseliny octové oddestiluje, a zbylý pevný podíl se překrystaluje z ethylesteru kyseliny octové přidáním petroletheru.
Přearážejj-li se krystaly ze stejné kombinace rozpouutědel, získá se tím 63 mg očekávaného benzyloxykkabbnnl-(2S, 3R)-3-amino-2-hyderxy-4-feenlbbtanoyli(S)-leucinu.
Látka má t. t. 209 °C, ,θ + 26,7° (c = 0,55, kyselina octová). ,
Zpprccuíe-i se 45 mg benzyioyykarbonny-(2S, 3R)-3-aminoo4-4h-eroyy4-4feo-butanoo--(S)-leucinu podobným způsobem, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 3, získá se tím 15 mg best^tou.
Látka má [alfa] θθ - 22,3° (c = 0,52, kyselina octová), Rf = 0,-8.
ь
Příklad 5
Podobně jako je to popsáno ve stupni 1 příkladu 1 se připraví 330 mg benzyloyykarbonyl— (2S, 3R)-3-aInino-2-4hydroxy-4-:feoylmáselné kyseliny, a podobnou reakcí, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1 působením 472 g soli bena^^ste™ (R-leucinu s kyselinou p-t-lueotulfonovou, 162 mg N-hy(ldony-eeoz-riazolu, 0,1- ml triethyCmiou a 206 mg N,N-decykl-hexylkar4 bodiimidu se připraví 450 mg benzz-esteru benzyloχlkarbonol-(2S, 3R)-3-amino-2’4h-eroyy--4 Látka má t. 118 ae 119 °C alfa |γ8 + 43,0° (c = 1,23, kyselina octová)
Jestliže se zpracuje 430 mg takto připraveného benoz-esteгu benzyl-χ-karbony--(2S, 3R)-3-amino-2-hy-eroy-4--fen-bbtanon-l(R)-leuciou podobně jako je to popsáno ve stupni 3 příkladu 1, získá se tím 144 mg (2S, 3R)··3-amino---4h-eooy-4-ffeo-lbtinon-l(S )-leucinu.
[alfa]®g + 0,9° (c = O^7, kyselina -ctová, HP = 0,49).
pro 0^24^°4 vypočteno: 62,31 % C, 7,55 % H, 9,09 % N; ’ nalezeno: 62,47 % C, 7,99 % Η, 9)}9 %9 N.
Příklad 6
Stupeň 1
Ze 7,75 g benzyl-yykarb-nyl4(2RS, 3S)-3-amino-2-hydroyy---fen-lmáselné kyseliny a 6,69 g dehydroabiei-laminu se v etheru připraví těžce rozpustná eehydroabiei-l aminová sůl kyseliny benzyloyykarboln-l-(2R, 3R)-3-amino-2-h-eroxy-4-fen-lmá8elot a -deilirtje se.
Čirý roztok v etheru se po filtraci za4uutí za sníženého tlaku, a k olej^c^vitému zbytku se přidá směs ethylene™ octové a 1 N roztoku ^seliny chlorovodíkové, čímž se získá krystalická surová kyselina benzylóyykarboin^-r^S, 3S)-3-amino-2-h-dr-χl--4fen-lmáselná a ze získaných krystalů se dvojím přesrážením z ethylene™ kyseliny octové přidáním petmletheru získá 2,16 g čisté kyseliny benzyl-yykarbonn--(2S, 3S)-34amino-2-h-dr-χl---fen-lшáselot.
T. í. 175 až 176 °C, [alfa] + 5,6° (c = 1.39, kysel0na octová).
Stupeň 2
Směs 660 mg kyseliny benzyloxykarboryl-(2S, ЗЗЭ-З-ашхпо-^-^уйго/ху-^-ГепуЫтзе!^, 994 mg benzylesteru (S)-leucinu ve formě soli s kyselinou p-toluensulOonovou, 324 mg N-hydroxybenzotriazolu, 0,34 ml triethylaminu a 412 mg Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiinidu se zpracuje podobně, jak to bylo popsáno ve stupni 2 příkladu 1, a získá se tím 710 mg benzylesteru benzyl- . oxykarbooyl-(2S, 3S)-3-aminzo2-htlrroyl4-fennlbutaazyl-(S)-leucinu.
Látka má t. t. 128 °C, [alla] |γθ - 38,0° (c = 0,81, kyselina octová).
Z 500 mg benzylestiru benzylox/kkaboonli^S, 3S )-3-amino-2~hyldoxyi4~leriylbutanoyl.-(S)-leucinu se podobně, jak to bylo popsáno ve stupni 3 příkladu 1 připraví 270 mg (2S, 3S)434amino-2-htldroyl4-4lnollbttno-ll(S)-leucinu.
[alla] 24 613° 578- 61,3 (c = 0,56, kyselina octová). Rl = 0,37
Pro C16H24N2O4
vypočteno: 62,11 % C, 7,65 % H, 9,09 % N;
nalezeno: 61.99 % C, 7,71 % H 9/3 % N.
Příklad 7
Směs 165 mg kyseliny 0enzyloχyУalbo-nll(2S, 3S)-34lmino-2-'hl¢droxyl4-lenylmááelné» 237 mg soli benzi^ste™ (R-leucinu s kyselinou 81 mg N~hyldooyloiozιOrrazolu»
0,08 ml triethyaaminu a 103 mg Ν,Ν/4dicyklohiyylkar0odiimidu se zpracuje podobným způsobem, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1. Získá se tak Oenzylester 0enzylo:yУckrbo-nll(2St 3S )434amino-2-hyddoэyrl4-flnnllotallo-ll(R)-leucinu.
Látka má t. t. 128 až 129 °C, [kila] |^γ8 - 1»°° (c = 1,02, kyselina octová).
Podobně jak je to popsáno v příkladu 1, stupeň 3, se získá z 155 mg Oenzylestiru benzyloyykar0onyl- ( 2S, 3S)·434aminoo224hldooy-4-lennllbtalool-4R)-liucinu 72,1 mg (2S, 3S)434lшioo4 424hydroxyl4-linylbutano-l-(R)-liucinu.
[alla]® - 31,4° (c = 0,47, kyselina octová), R = 0,52.
pro С1бН2ЛО4 vypočteno: 62,31 % C,
7,85 % H, 9,09 % N;
nalezeno:
62,07 % C, 7,63 % H, 8,80 % N.
Příklad 8
Směs 330 mg kyseliny benzyloyУcarbonol-(2S» 3S)-34lmino-2-hydro:yl-4-leollmáseloé» jež se připraví podle postupu ze stupně 1, příklad 1, 405 mg soli benzyyesteru glycinu s kyselinou p4toluinsul-onovou» 162 mg N-hyУdr:χlonoyOrrazolu» 0,14 ml triethyaminu a 206 mg -di^c^ykl^oheyylkarOodii^midu se zpracuje postupem podle stupně 2 příkladu 1. Připraví se tím olejov^Ltá benz^^ste benzyloχlkadbonnl-(2S» 3R)-3-lminoo22hhldr-yl441ennlbutanoylglycinu.
Při testování chгsшatogгafováyíy na tenké · vrst^vt bylo zjištěno, že produkt je jednotný a čistý.
Zpracováním olejo^tého produktu podle postupu ze stupně 3 příkladu 1 se získá 117 mg (2S, 3R)-3-lmino-2-hydгooχy4-flУylbutlУosУglyciУu.
[ayfa] |γβ - 7,4° (c = 0,49, ^selina octová). Rf = 0,26
Pro C)2H]6O4N2.CH3OH vypočteno: 54,92 % C, 7,09 % H, 9,87 % N;
nalezeno: 54,33 % C, 6,87 % H, 9,69 % N.
Příklad 9
Směs 330 mg kyseliny bennylsзχSkarbbsyУ-(2S, 3R)-3-amiУo-2-lydrsxy~4-f шу^ёзе^ё, připravené pbdle stupně 1 příkladu 1, 440 mg lydrbchlbridu s-yitrbblyzylletlru (5)-Ьш^г^з^У|^€^1^1^nu, 162 mg N-hydra^Sbenzoeazolu, 0,14 ml trlelhylвmiyu a 206 mg N,N*-íicykloll:χylkarbsdiimidu se zpracuje postupem podle stupně 2 příkladu 1, získá se tím 540 mg OУitгsblnzyУesteru beУZyls:ιqrkkabbsyУl(2S, 3R))(3-lminns2--lrУdosχy44fenyУbujta)noУ-(S)-blУzyleeriУu.
Látka má t. ^t. 121,5 °C, [alfa] + 17,7° (c = 1,^ tyseUn octová).
Zpracováním 500 mg o-УitroblУzylletlru bθУzyls:χSkarbbsyУ-(2S, 3R)“3-amiУO-2-lydrs5χy-4-feyylbutayoyУ-(S)-blУzyУelriУj postupem podle stupně 3 příkladu 1 se získá 147 mg (2S, 3R)-3-lmiУO4 2-lydíooχy44feyyУbbjtansl-(S ^serinu.
[alfa 2γθ - 9,0° (c = 0,50, kyselic мЮТ)). Rf = 0,20.
Pro ¢,^,8°5¾.¾0 vypočteno: 51.99*0, <5,7 1 % H, 9,33 % Ni nalezeno: *^1.39« C,, 6^4 5K H, 8,97 « N.
Přkladio
Směs 330 mg kyseliny beynzls:ιχlrkarbbsyУ4(2S, 3R)-3-amiУβ-2-lydrsχy-4-feyylmáeelné, připravené obdobně postupem ze stupně 1, příklad 1, 400 mg boy^S^^^ (S)-glutaminu, 162 mg N-h^dre^y benzoe azblu, 0,14 ml trlelhylmiyu a 206 mg N,N*-dicyklsllJQrlkarbodiimidu se zpracovává obdobně pcdle stupně 2 z příkladu 1. Získá se tím 200 mg benzylesteru bennylsJqrkarbbsyУ-(2S, 3R)-lminns2-llrУdboχy-4feyyУbutшn)sУ-(S)-glulιmiУu.
Látka má t. t. 155 °C [bITi] + 62,3° (c = 0^ kyMlina octová).
Zpracu^je-i se 180 mg be^yl^t^u benzyls:)qУkarbbsyУ-(2S, 3R)-3-lminos2-hyУгooχy-4fθУZlbutanosУ-(S)-glujamiУu . podobně, jak je to popsáno ve stupni 3 příkladu θ1, získá se tím 61 mg (2S, 3R)-3-lmino-2-lydrbJχy44fenyУbujtllnsУl(S)-glutιmiУU.
Látka uá [alfa] |Y8 - 9,9° (c = 0^ kyβeli.Уl octová), Rf 0,17.
Pro C15H21O5N3.2H2° vypočteno: 50,13 % С, 7,01 % H, 11,69 % N;
nalezeno: 50,64 % c 6,32 % H, 11,61 % N.
P ř í k 1 ad 1 1
Podobně, jak je to popsáno , ve stupni 1 příkladu 1, se připraví kyselina benzyloxykarbooyl-(2S, 3R)-3-aeino-2-hydro:χrc4-eenyleáselná a směs 330 mg této látky, 600 mg soli benzylesteru (S )ho-^benzyl^g;lutm^ové kyseliny s kyselinou p-tolunotulfonovou, 162 mg N-hydroxybeozotriazolu, 0,14 ml triehhytmnou a 206 mg Ν,Ν'-dieyklohexylkarbodiieidu se zpracovává podobně, jak je to popsáno ve stupni 2 přikladu 1 za vzniku 605 mg bans^oste™ benzyloxykarbooyl- ( 2S, 3R)-3-aImnoo(?-hhCdooyc--fennCbutanoyC-(S)-o-benzylglutmlové kyseliny.
Látka má t. t. · 119 až 120 °C, [alfa] + 28,6° (c = 1,04, kyselina octová).
Zpracováním 250 mg benzyCestnru be^y^^ka^ou^^^, 3^)-3-a^ii^c^-^(^-^]^;^(^i^(^3y^-^(^-^:een^^Lbutaooyl-(S)-ObbenzylgUutmnové kyseliny postupem podle příkladu 1, stupně 3 se získá 166 mg kyseliny (2S, 5R)-3-(a]mnoo2-htCrooχc--fennCbuttnoyl-(S)(-glutmюvé.
Látka má [alf^a] |γθ - 18,4° (c = 0,51, tyselioa octová), Rf = 0,27
Pro C15H20OgN2
vypočteno: 55,55 % C, 6,22 % H, 8,64 % N;
nalezeno: 55,20 % C, 5,90 % H, 8,20 % N.
Příklad 12
Podobně, jako ve stupni 1 příkladu 1 se připraví kyselina benzylo:χУ£kabbnnCl-(-S, 3R)-3“aeino---hydro:χc(4-fenyleeáelná, a směs 330 g této látky, 455 mg soli benzyyesteru · (S)-valiou s kyselinou p-toluentulOonovou, 162 mg N-(цr(lrooyCbnozOriazolu,· 0,14 ml triehhylaminu a 206 mg, Ν,Ν*-dicyklohexylktrbodnieidu se zpracovává podobně, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1. Získá se tím 397 mg O-bbnoyCesteru benzylo:χУ£arbbnnC-((-S, 3R)-3-aeino---hydro x^A-feny! butanoyl-C S) - val inu.
Látka má t. t. 96,5 až 97 °C, [alfa] í? + ,9>2° (c = 0,99, kyselina octová).
Jestli že se 376 mg benoyCestsru bβnzyloχckarbonnC-(-S, BR^-aminno 2--hydro ox^-fenylbuttooyC-(S)-vtlinu zpracovává podobně, jak je to popsáno ve stupni 3 příkladu 1, získá se tím 104 mg (2S, 5R)-3-aniino---yCdooy-44-ennCbbUatoyC-(S S-valinu.
[alfa]|Cq - 1,4° (c = 0,55, kyselina octová), Rf = 0,42.
Pr° vypočteno: 61,00 % C , 7,53 * H , 9,52 % N;
nalezeno: 60,98 % C, 7,59 % H, ^6 % N.
Příklad 13
Podobně, jak to je popsáno ve stupni 1 příkladu 1, se připraví kyselina benzylozykarbooyl-(2S, 5R)-5-aeino-2-hydro:qrc4-fnnyleáselná, a směs 330 mg této látky, 455 mg soli beozylesteru (S)-oorvaliou s kyselinou p-toluensuioonovou, 162 mg N··hyddoxyУbnozOгí.azolu, 0,14 ml trie-thyamiou a 206 mg N,N''-dicyklohexylkarbodiiendu se zpracovává podobně, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1. Získá se tím 310 mg benzylesteru benzylox/karbonyl-(2S, 3R)-3-amino-2-hydro2qr-4-f ernlbutiMioyl- (S) -norvalinu.
Látka má t. t. И4 až 115 °C, [alfa! |4g + 22,0° (c = 0,49, kyselina octová).
Zpracováním 250 mg benzylesteru benzyloxikarbonyl-(2S, 3R)-3-amino-2-hydroxyi4-fenylbutanool-(S)-norvalinu'podle postupu ze stupně 3 příkladu 1, se získá 110 mg (2S, 3R)-3-amino-2-hldro)y-4-fe!n/l.butaΊoyl-(S)-norvalint.
- 14,5° (c = 0,50, kyselina octová), Rf = 0,41.
Pro C,5H22O4N2 vypočteno: 59,33 % C,
7,64 % H, 9,23 % N;
nalezeno:
59,42 % C, 7,58 % H, 9,09 % N.
Příklad 14
Jestliže se kyselina (2S, 3R)-3-amino-2-hydroyi-4-fenilmáselná ter^c.b^utc^jy^kax^bon^lLuje obvyklým způsobem za poožžtí teai.-butll-S-4,-sdimttllLplaimiSiy-2-yl-lhtoaaгbtУátu a pak se přidá dicykloheyilamin, získá se sůl kyseliny terc.-butoyikarbonyl-^S, 3R)-3-amino-2-hidroyy-4-fenylmáselné· s di^klohejqrliminem, t. t. 158 až 159 °C [aafa] 29g + 51,9° (c = 0,89, kyselina octová).
O^sstanní-LL se · dicykloheyylEmin z 952 mg výše uvedené sooi reakcí s 1 N roztokem kyseliny sírové a ethylesterem kyseliny octové, získá se olejovitá kyselina ttri.-butoэykaabtnya“(2S, 3R)-3-amino-2-hydroχl-4-fenylmáselné.
Tento olejovitý· poddl a 440 mg tydaochloaidu methhyesteru (S^methioninu se susj^<^i^<^i^;je v · 20 ml· . tttaehydatfuranu, a reakční směs se neutaal-izuje přidáním·. .0,308 · ml · trielhyamiyt. Takto připravený roztok se ochladí na -5 °C, přidá se 412 mg N>N*-diclkloltyyL.kaгbtdiimiSt, reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnoosi, načež se vyloučené krystalky o (šutrují a matečný louh se zahustí za snížení tlaku. Zbytek se rozpussí v 200 ml п^у^Ь^х’^ kyseliny octové, tento roztok se promne 1 N roztokem kyseliny sírové, vodou, 5% vodným roztokem lydгogeenιhličitayu sodného a potom opět vodou, jak je to uvedeno v pořadd, načež·se organický roztok vysuší bezvodým síaineem hořečnatým.
Zbytek, který se získá zahuštěním matečného louhu za sníženého tisku, se rozpustí ve éměsi ethy^ste^ kyseliny octové a benzenu (2:5), a roztok se nanese na kolonu chromaaografického silikegeLu G (Merck). Jímaaí se frekce, obsalující očekávanou látku, rozpouštědlo se tdSseSilujt za sníženého tisku, a překrystaiováním pevného zbytku ze směsi etheru a petroletheru se získá 380 mg methlat8ttau teai.-buttxy-(2S, 3R)-3-amino-2-lydгo>yrl4-ftУylbutayoyl- (S )-me íI^zíz u.
Látka má t. t. 118 °C, [alfa] |4θ + 51,4° (c = 0,5б, kyseiina octová).
Jestiiže se zpracovává postupem popsaným ve stupni 1 příkladu 3 280 mg metihrlesteru ttai.-Ъuttyy-(2S, 3R)-3-aminy-2-lyddaoyl44ftnylbutalУol-(S)-mttlitУiУu, získá se 200 mg terč. -butony! (2S, 3R)-3-aminot2-lhrdsooyl-4ftnylbutayotl-(S)·-mttlitУiУU.
Látka má t. t. 116 °C (za pěnёny)., [alfa] |γ8 + 44J° (c = 0,54 ýselina octová).
Ke · 150 mg· ter^-hu^y^^S, 3R)-3-aminot2-ýdrooyl4-ftnllbutayotУ.-(S)-mttlitУiУu se přidá 0,2 ml kyseliny tHoglykOlové a 50% vodný roztok kyseliny triflootocttvé, a reakční směs , se míchá hodinu za ' teploty místnosti. Olejovitý podíl, který se získá zahuštěním reakční směsi za sníženého tlaku se rozpustí ve vodě, á provede se aísorpce na koloně objemu 5 ml s náplní pryskyřice Dowex 50X4 (ve vodíkovém cyklu).
Adsorbovaný mattriál se eluuje 2 N vodným roztokem amonóaku, načež se zahuštěním do sucha získá z eluátu pevný matteiál. Krystalováním tohoto poddlu ze směsi vody a acetonu (1:1) se získá 87 mg (2S, 3R)-3-aminoo22hyУíonyy44fennУbbt1MΊonУ-(S)-methioninu.
[alfa] |7θ - 20,4° (c = 0,49, kyselina octová). R = 0,37.
Pro 0^2204^.1/2^0 vypočteno: 53,67 % C,
6,01 % H, 8,35 % N;
nalezeno:
53,64 % C, 6,47 % H, 8,11 % N.
Příklad 15 .
Směs 330 mg benzýloxykarbonny-(2S, 3R)-3-amino-2-hydro}Qy4-fenylbutanové kyseliny, připravené obdobně, jak je to popsáno ve stupni 1 příkladu 1, 472 mg soli benzzyesteru (S)“it-leuciou s kyslinou p-t-luentuf:Oonov-u, 162 mg N--hdíΌnyУenoo'-гiazolu, 0,14 ml triethyl aminu a 206 mg Ν,Ν'-íicykl-hexylkαrbndiimiíu se zpracuje podobně jako je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1, získá se tím 466 mg benzzlesteru benzyl-xykkrbbnoll(2S, 3R í-l-amino-2-hyíroχy-4-fenzlbutítΊonl-(S)-it-leuc inu. ·
Látka má t. t. 100 až 101 °C, [alfa]|γ8 + 23,6° (c = 1,0,kzselioa octová).
Zpracováním 440 mg právě uvedené látky postupem podle stupně 3 příkladu 1 se získá 191 mg 2S, 3R)“3-amino-2-^-ydríxn-l-4-nz0butanoz-l (S)--soleucinu. [aLfaJÍ^e - 6,4° (c = 0,52, kyselina octová), Rf = 0,48.
pro c 16H24°4N2 vypočteno: 62,1 1 % C, 7,85 % H, 9,,09 % N;
nalezeno: 62^ 1 % C, 7,70 % H, 8,99 % N1.
Příklad 16
Směs 330 mg kyseliny benzyl-χУckrbonoll(2S, 3R)-3-aminoo2-hylroэχl-4fe]0l1mástlné, která se připraví obdobně podle stupně 1 z příkladu 1 , 472 mg soli benzzyesteru (S^nodleucinu s kyselinou p-t-luentulnonovou, 162 mg N-hyУranyУbeoz-diаzolu, 0,14 ml triethztamiou a 206 mg N,N'-íicykl-hexylkαrb-diimiíu se zpracuje podobně, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1, získá se tím 437 mg benzzyesteru benzyl-χlkkrbonoУ“(2S, 3R)-3-amino-2-hydrnχy-4-fenllbutαooyl-(S)-o-rleuciou.
Látka má t. t. 114 až 115 °C, [alfa] 24g + 23,3° (o = 0,04, kyselina octová):
Z 350 mg právě uvedené sloučeniny se získá postupem poyie příkladu 1, stupeň 3, 160 mg (2S, 3R)-3-(aninoo-2hhУdony-l-ffeorlbutanoyl-(S)-nonleucinu.
Látka má spec Mickou rota^ [alfaj^g - 8,0° (c = 0,70, tyseltoa —ct—vá), Rf = 0,47. Pra ^^эд0^2^20 vzpočteno: 58,88 % C, 8,03 % H, 8,58 % N nalezeno: 5β,95 % C, 7,84 % H , 8,,00 % N.
Příklad
Směs 330 mg kyseliny benzyloxykarbonyl-{2S, 3R)-3-amino-2-Jhrdroxy-4“fenylmáselné, připravené podle příkladu 1, stupeň 1, 505 mg soli bennylesteru kyseliny (RS)-2-aminooktaMOvé s kyselinou p-toluensuioonovou, 162 mg N-hyllгooχlenooOriazolu, 0,14 ml triethyaminu a 206 mg N,N*-dicyklohexylkarbodiimidu se zpracuje podobným způsobem, jak to bylo popsáno ve stupni 2 příkladu 1; získá se tím 430 mg benzyy.esteru kyseliny benzyloxykarbonny-^S, 3R)-3-emino^^^^xy^-leny!. butanoyl-OS^minooktanové. 1
Látka m t. t. 90 až 92 °C (alf»)^ + 32,9° (c = 0,94, kyselina octová).
Zppaccjj-li se 250 mg právě uvedené sloučeniny postupem podle stupně 3 příkladu 1, získá se 74 mg· kyseliny (2S, 3R)-3-amino-2-lh<droэχl4-finylbutcnoyl-(RS)-2-ιminooktanové.
Látka má [alfa] θ θ - 34,9° (c = 0,53, kyselina octová), Rl = 0,58.
Pro C18Hg8°4N2 ' vypočteno: 64,26 % C, 8,39 % H, 8,33 % N;
nalezeno: 64,43 % C, 8,18 % H, 8,02 % N,
Příklad 18
Směs 330 mg kyseliny benzyloKyckrboony-^S, 3R)-3’-cmino-2-]hllroэχr-4-fioylmivelné, připravené podle příkladu 1, stupeň 1, 513 mg soli be^z^e steru (S)-leoylalcoinu s kyselinou p-toluensuioonovou, 162 mg N-hylrooχrlenooOriazolu, 0,14 ml triethyaminu a 206 mg N,N'-dicyklohexylkarbodiimidu se zpracuje podobně, jak je to popsáno ve stupni 2 příkladu 1;
získá se tím 378 mg benzyloKykarbonny-^S, 3R)-3-aminoo--hhldooχ-4-flnnlbbjanool-(S )-lenylcIcoíou.
Látto má t. t. 111 až 112 °G [alfa] |γθ + 39,6° (c = 0,97, kyselina octová).
Zpracovává--i se 355 mg výěe uvedené sloučeniny postupem podle stupně 3 z příkladu 1, získá se 108 mg (2S, 3R)-3-шninoo--hhldoor‘l”^-lnolbujanoyl-(S)-fenylalcninu.
Látka má specifickou rotaci [q01^] + 0,4° (c = 0,4^ kyselina octová^ R = 0,44.
Pro C19H2204N2.CH3OH vypočteno: 64,15 %C, 7,00 % H, 7,48 % M;
nalezeno: 63,58 % С, 6»55 % H, % N.
Příklad 19
Zpdacováváv-i se směs 1,10 g olejovitého benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-miihhlisošeřinu, připraveného benzyloxykarbonylací (2RS, 3R)-mithhlisošeřinu, 1,97 g soli be^zy-esteru (S)~ -leucinu s kyselinou p-toluensuioonovou, 675 mg N-^цгlгooχlenoyOriazolu, 0,70 ml tr^tty!aminu a 948 mg N,N*-diclklohexylkcrbodimidu podobně jak je to popsáno v příkladu 1, stupeň 3, získá se tím olejovitý Ъenoyles'te:r benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-ιlithhlissosirrl-(S)IíucIou. Podle vyhodnocení chromiCooгafií na tenké vrstvě je tento olejovitý θ prodat čistý.
Zpracováváv-i se právě uvedený olejovitý prodat postupem podle příkladu 1, stupeň 3, získá se tím 765 mg (2RS, 3R)-3-aminoo--hhldooylropiooyl-(S)-leuciou.
Látka má specifickou rotaci [alfa] - 28,7° (c = 1,09, kyselina octová).
Pro cioH2ON2°4 vypočteno: 51,70 % C, 8,68 % H, 12,06 % N;
nalezeno: 51,49 % C, 8,42 % H, 11,96% N.
Benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-methylisoserin použitý v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
9,00 g benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxypropionitrilu se zpracuje postupem podle příkladu 1, získá se tak 3,16 g (2RS, 3R)-methylisoserinu.
[alfa] - -0,6 Pro СдН9ИО3 (c = 1,10, N roztok kyseliny chlorovodíkové), Rf = 0,
vypočteno: 40,33 % C, 6,72 % H, 11,76 % N;
nalezeno: 40,53 % C, 7,51 % H, 11,95 % N.
Příklad 20
1,32 g olejovitého benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-isobutylisoserinu, připraveného benzyloxykarbonyl ováním (2RS, 3R)-isobutylisoserinu, získaného při výše uvedeném postupu, 1,76 g soli benzylesteru (S)-leucinu s kyselinou p-toluensulfonovou, 0,60 g N-hydroxybenzotriazolu, 0,63 ml triethylaminu a 0,92 g N,N'-dicyklohexylkarbodiimidu se zpracuje postupem podle stupně 2 z příkladu 1 za vzniku olejovitého benzylesteru benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-isobutylisoseryl-(S)-leucinu.
Zpracuje-li se tento produkt podobně, jak je to popsáno ve stupni 3 příkladu 1, získá se tím 0,37 g (2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanoyl-(S)-leucinu.
Látka má specifickou rotaci [alfa] - 26,6° (c = 1,0, kyselina octová), Rf = 0,43 a 0,49.
Pro c13h26n2o4 vypočteno: 56,91 % C, 9,55 % H, 10,21 % N;
nalezeno: 57,01 % C, 9,80 % H, 10,14 * N.
(2RS, 3R)-isobutylisoserin použitý v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem.
2,76 g olejovitého nitrilu kyseliny benzyloxykarbonyl -(2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanové kyseliny se rozpustí v 30 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 30 ml dioxanu. Po přidání 2,16 g anisolu se roztok zahřívá 4 hodiny к varu pod zpětným chladičem, dioxan se oddestiluje za sníženého tlaku a zbylý roztok v kyselině chlorovodíkové se promyje etherem. Vodný podíl se zahustí za sníženého tlaku к suchu.
Ke zbytku se přidá voda a z roztoku se adsorbuje účinná látka na koloně s náplní pryskyřice Dowex 50X4(ve vodíkovém cyklu). Po promytí vodou se adsorbovaný materiál eluuje 4 N vodným roztokem hydroxidu amonného, načež se eluovaný roztok zahustí za sníženého tlaku к suchu.
Ke zbytku se přidá směs vody a acetonu (1:1), vyloučené krystaly se t<diltaují a získá se tak 0,82 g požadovaného · (2RS, 3R)-istbuUylistseriУU. Látka vykazuje specc-flckou rotaci [alfa] |γθ - 8,3° , (c = 00 kyselka octová), R = 0,18·
PPíklad 21
Směs 250 mg benzyloχlkarbonyl-(2RS, 3R)-ftyyliststгiУUJ t. t. 170 až 171 °C, alfa 2· + 105°·(c = 0,47, kyselina octová), připraveyého beyzyloyykarboynlací (2RS, 3R)-ftylli8tseřiyu, 394 mg sooi benzylesteru (S^leuclnu s kyselinou p-toluensuioonovou, 130 mg N-lydro:yrletУztгaazolu, 1,14 ml tгeel^lLamiyu a 165 mg N,N'-Sliykloltxylkaabtdlimldu se zpracuje podobyě, jak je to popsáno ve stupyi 2 příkladu 1. Získá se tím 285 mg bcynylesteru beУУylo:ιyrkaabotyl-(2RS, 3R)-feyylisteeayl4(S)-leuilyu.
Látka má t. t. 93 až 95 °C, [alfa] - 34,7° (c · = 0,49, ýselina octová).
Zpracováním 200 mg behny^a^™ beyzylo:χykarboynl-(2RS, 3R))feyylistsetyl-(S)-eeuiiУU postupem podle stupně 3 z příkladu 1 se získá 45 mg (2RS, 3R)-3-amlУo-2-lldгoэyrlЗ-ftУylprtp iony!-(S)-1euc inu.
e [alfa] |γ8 - 2,4° (c = 0,33, kyselina octová).
Pro ^15^2204^2 vypočteno: 61,20 %C, 7,33 % H, 9,52 % N;
nalezeno: 60,92 % C , 7,,67 % H, 9,6 % N.
(2RS, 3R))feyylistseriy použitý v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
Jessiiže se 3,00 g nitr^u kyseliny beyzyltyykaabtnyl (2RS, 3R)-3-amino-2-lySro:yy-3-feyylproptoyová zpracuje postupem podle příkladu 1, získá se 0,80 g (2RS, 3R))·ftyylist sednu.
Látka vykazuje epecificktu rotaci [alfa] 2γ8 + 9,5° (c = 00 N HC1), R = 0,13 a 0,17 .
vypočteno: 59,66 % C, 6,12 % H, 7,73 % N;
nalezeno: 59,18 % C, 6,15 % H, 7,67 % N.
PPíklad 22
Směs 1,81 g beuzylo:ylkaгbonyl-(2RS, 3RS-3-amiyo-2-ly(Sroэyrl4-p-cllorfeyylmáetlné kyseLízi, t. t. 147 °C připravené beyyyltχlkarboynla¢í kyseliny (2RS, 3RS)-3-amlУO-2-lldroχl-4-p-clltfteyylmáselyé, 2,37 g sooi · beyyzlesteru (S^leucinu s kyselinou p-tolueneultonovtu, 810 · mg N-lldroxyletУZtraayolu, 0,84 m treelhyaвдiyu a 1,03 g N,N'-Sliykloltyllkaabodlimidu se zpracuje postupem podle příkladu 1 a stupně 2.
Získá se tím 2,50 g bcynylesteru beyyylo:ιyУ:arbotylL(2RS, 3RS)-3-amlyyo2-lydroэyrl4-p-illtafeyzlbutanyt*(s)-leuiiyu.
Látka má t. t. 122 až 124 °0 [alfa] 2?8 - 12,30 (c = 3,18 ýsellna.octová).
Zpracuje-li se 1,50 g právě uvedené látky postupem, který je popsán ve stupni 3 příkladu 1, získá se tak 650 mg (2RS, 2RS)-3-acmno-2-hydrdxχχl-4-chlorfennllbtacnχl-(S)-lnucinu.
Látka má specifickou rotaci [alfa] |?g - 11,3° (c = 1,33, kyselina octová), Rf = 0,42= =0,52.
Pro C6H23N2°4C1 vypočteno: 56,05 % C, 6,76 % Η, Θ17 % NT;
nalezeno: 55,88 % C, 7,29 % H, 7J1 % N. ' (2RS, 3RS)-3-шmnno22hyddrxy-44ppchlorf-nylmáselná kyselina použitá v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
10,3 g nitrilu kyseliny benzyloxykarbonyl-(2SS, 3IR)-3-<cmnn-22hhУdrxχl4-p--Uhorfnnχlmmselná se zpracuje postupem podle příkladu 1 a získá se 3,10 g kyseliny (2RS, 3SSS^-amino-2-hydroxy-4~ppfenylmmsslné.
Rf = 0,25.
Pro c16h12n°3C1 vypočteno: 52,29 % C, 5,27 % H, 6,10 % N; nalezeno: 52,11 % C, 5,17 % H, 5,99 % N.
P ř í k 1 ad 23
Směs 726 mg kyseliny benzyloχykkrbbnnl-(2RR,3RR)-3-cmino-2-hyddΌDχ--4--chlorfenylmáselné (t. t. 136,5 °C), připravené benzyloxykarbonnlací kyseliny (2RS, 3RSS^-íaninn-^-hydroxy-4---uhlorfenyliSsnlné kyseliny, 944 mg soli benzyyesteru (Slleucinu s kyselinou p-toluensulfonovou, 324 mg N-hyyrrxxyennztrrazolu, 0,34 ml triehhyaminu a 412 mg diuyklohexylkarbodiimidu se zpracuje podobné, jak to bylo popsáno ve stupni 2 příkladu 1.
Získá se tím 747 mg ba^y^ste^ bnnzylxxyУacbexnll(2SR, 3R>)-3-aminn-2—hydíroxy-4-o-uhlxrfnnyleutanooll(S)-leucinu.
Látka má t. t. 129 ai 132 °C, [alfa] Ιγθ - 29,1° (u = 1,02, kyselina -ut-vá).
Zpracujenli se 640 mg ennzylesteru bnnzyl-xlkarb-nyl-(2SS, 3RS-3-cmino-2-hldroxy-4-o- chl-rfnnyleutanoyl-(S)-leucinu podobně, jak je to popsáno ve stupni 3 příkladu 1, získá se 107 mg <2RS, 3RS)-3-εcmnn-2-hhlro:χ<χl-o--hloofennlbettcnχl-(S)-lnucinu.
Látka má specifickou rot-aci ^1^273 - 20,8° (u = 0,48, tyselina -ct-vá), Rf = 0,46.
Pro C16H23n2°4 C1 vypočteno: ' 56>55 % C, 6^6 % Η, 81Π % N;· nalezeno: 56s1 , % C, 6,66 % H, 7,90 N. ' (2RS, 3]R)-3-aminno-2hhldrxχl440o-Ch.orfnnllmáselná kyselina použitá v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
10,3 g nitrilu kyseliny bnnzyl-xlkarb-nyl-(2SS, 3R)-3-tcmnno-2hhУdrxχl4-0o-Uhlxfenylrnmselné se zpracuje postupem popsaným v příkladu 1. Získá se tak 4,82 g (2RS, 3^)-3-^1^-2-hydr-xy-4---uhlorfenlliSselné kyseliny.
201033 24
Rf = 0,25 а 0,29.
Pro C10H12N03C1 vypočteno: 52,29 % C, 5,27 % H, 6,10 % N; nalezeno: 52,01 % C, 5,17 % H, 5,91 % N.
Příklad 24
Směs 1,57 g kyseliny benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-methylfenylmáselné <t. t. 166,5 až 168 °C), připravené benzyloxykarbonylací kyseliny (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-methylfenylmáselné, 1,42 g soli benzylesteru (S)-leucinu s kyselinou p-toluensulfonovou, 486 mg N-hydroxybenzotriazolu, 0,50 ml triethyl aminu a 618 mg dicyklohexylkarbodiimidu se zpracuje obdobné podle stupně 2 příkladu Г. Získá se tím v olejovitá formě benzylester benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-fenylbutanoyl-(S)-leucinu.
Zpracovává-li se tento olejovitý produkt podobně, jak je to popsáno v příkladu 1, stupeň 3, získá se 497 mg (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydřoxy-4-p-methylfenylbutanoyl-(S)-leucinu.
Látka má Rf = 0,58 a 0,53, [alfa] |γθ - 7,2° (c = 0,96, kyselina octová).
Pro C17H26N2O4
vypočteno: 63,33 % c, 8,13 % H, 8,69 % N;
nalezeno: 63,08 % C, 8,23 % H, 8,49 % N.
(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-methylfenylmá8elná kyselina použitá v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
11,2 g nitrilu kyseliny benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3~amino-2-hydroxy-4-p-methylfenylmáselné se nechá reagovat postupem podle příkladu 1 a získá se 3,41 g kyseliny (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-me thylfenylmáselné.
Rf = 0,20.
Pro CHH15NO3
vypočteno: 63,14 % C, 7,23 % H, 6,99 % Ni
nalezeno: 62,94 % C, 7,01 % H, 6,79 % N.
Příklad 25
103 mg bestatinu se rozpustí v 5 ml kyseliny octové a 5 ml ethanolu. Reakční směs se katalyticky hydrogenuje 14 hodin na kysličníku platičitém. Po filtraci se filtrát zahustí za sníženého tlaku do sucha a rozmělněním zbytku v ethylacetátu se po filtraci získá 61 mg (2S, 3R)-3-amíno-2-hydroxy-4-cyklohexylbutanoyl-(S)-leucinu.
Látka má Rf = 0,47, [alfa] - 30,5° (c = 0,67, kyselina octová)
Pro C,6H3ON2O4
vypočteno: 61,12 % C, 9,62 % H, 6,91 % N;
nalezeno: 62,12 % C, 9,52 % H, 8,81 % N.
Příklad 26
300 mg bestatinu se suspenduje v 10 ml koncentrované kyseliny sírové a za chlazení na O °C se přidá 0,3 ml dýmavé kyseliny dusičné. Reakce se nechá probíhat hodinu za uvedené teploty; během této doby se suspendovaný produkt rozpustí, reakční směs se zředí vlitím do 100 ml vody, a provede se adsorpce na koloně s náplní pryskyřice Dowex 50X4 (vodíkový cyklus).
Adsorbovaný materiál se eluuje do 2 N vodného roztoku amoniaku, roztok se zahustí do sucha, zbytek se rozpustí v 10 ml vody, roztok se filtruje a lyofilisováním filtrátu se získá 213 mg (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-p-nitrofenylbutanoyl-(S)-leucinu.
Látka má [alf a] + 5,2° (c = 0,5, kyselina octová). Rf = 0,58.
Pro C16H23N306 vypočteno: 54,38 % C, 6,56 % H, 11,89 % N;
nalezeno: 54,28 % C, 6,58 % H, 11,88 % N.
Příklad 27
100 mg (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-p-nitrofenylbutanoyl-(S)-leucinu, jak se získá v příkladu 26, se rozpustí v 10 ml methanolu, a roztok se hydrogenuje 5 hodin na palladiové černi. Katalyzátor se filtruje, filtrát se zahustí za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v 5 ml vody, a po filtraci se lyofilisováním filtrátu získá 81 mg (2S,3R) -3-amino-2-hydroxy-4-p-aminofenylbutanoyl-(S)-leucinu.
Látka má [alfa] 2θβ - 23,2° (c = 0,5, kyselina octová), Rf = 0,25
Pro C16H25N3O4
vypočteno: 59,42 % C, 7,79 % H, 13,00 % N;
nalezeno: 59,01 % C, 7,91 % H, 12,81 % N.
Příklad 28
Stupeň 1
2,11 g (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy*4-p-hydroxyfenylmáselné kyseliny se rozpustí v 10 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného. Za intenzivního míchání roztoku a chlazení ledem se během 30 minut ve třech částech přidá 4,5 ml benzyloxykarbonylchloridu.
Reakční směs se pak intenzívně míchá jednu hodinu za chlazení ledem a pak 3 hodiny při teplotě místnosti. Během reakce se pH upravuje na 8 až 9 přidáváním 1 N roztoku hydroxidu sodného.
Po skončení přidávání se 6 N kyselinou chlorovodíkovou upraví pH reakční směsi na hodnotu 2. Vyloučený olejovitý produkt se pak dvakrát extrahuje 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátová fáze se promyje vodou a vysuší bezvodým síranem hořečnatým.
Po oddělení síranu hořečnatého se filtrát zahustí za sníženého tlaku a odparek se krystaluje ze směsi ethylacetátu a petroletheru. Získá se tak 3,64 g benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-benzyloxykarbonylfenylmáselné kyseliny, t. t. 138 až 140 °C.
Stupeň 2
479 mg benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-benzyloxykarbonylfenylmáselné kyseliny a 162 mg N-hydroxybenzotriazolu se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu. Po přidání 472 mg soli benzylesteru-(S)-leucinu s kyselinou toluensulfonovou se směs neutralizuje 0,168 ml triethylaminu a ochladí se na -5 °C.
Pak se přidá 206 mg N,Nz-dicyklohexylkarbodiimidu a reakční směs se nechá stát přes noc. Tetrahydrofuran se oddestiluje za sníženého tlaku a přidá se 30 ml ethylacetátu. Po odfiltrování nerozpustného podílu se filtrát promyje 1 N kyselinou sírovou, vodou, 5% kyselým uhličitanem sodným a vodou, načež se vysuší bezvodým síranem hořeČnatým.
Odparek získaný zahuštěním filtrátu za sníženého tlaku ztuhne ve směsi ethylacetátu a petroletheru. Krystalizací ze stejného rozpouštědla se získá 450 mg benzylesteru benzoylkarbonyl-(2HS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-benzyloxykarbonylfenylbutanoyl-(S)-leucinu.
T. t. 98 ač 99 °C, [alfaj - 14,0° (c = 0,58, kyselina octová).
Stupeň 3
400 g benzylesteru benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-benzyloxykarbonylfenylbutanoyl-(S)-leucinu se rozpustí v 10 ml methanolu a hydrogenuje 3 hodiny na 10 mg palladiové černi.
Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se zahustí za sníženého tlaku. Krystalizací ze směsi methanolu a ethylacetátu se získá 219 mg (2RS, 3RS )-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylbutanoyl-(S)-leucinu.
[alfa] 5θθ - 8,8° (c = 0,90, kyselina octová), Rf = 0,48 a 0,51.
Pro C,6H24N2O5 vypočteno: 59,24 % C, 7,46 % H, 8,64 % N;
nalezeno: 59,38 % C, 7,23 % H, 8,95 % N.
(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselná kyselina použitá ve stupni 1 se připraví následujícím způsobem:
22,0 g olejovítého nitrilu benzyloxykarbonyl-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-methoxyfenylmáselné kyseliny se rozpustí ve 200 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 200 ml dioxanu. Po přidání 13,2 g anisolu se reakční směs zahřívá 12 hodin к varu. Dioxan se pak oddestiluje za sníženého tlaku a zbylý vodný roztok se promyje etherem a vodná fáze se zahustí za sníženého tlaku a odpaří к suchu.
Pak se к odparku přidá 100 ml vody a nerozpustné podíly se odfiltrují. Po přidání stejného množství acetonu se směs upraví na pH 5,5 přidáním roztoku amoniaku ve vodě. Vyloučené krystaly se odfiltrují a získá se 6,93 g požadované (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselné kyseliny.
Příklad 29
Jestliže se (2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselná kyselina benzyloxykarbonyluje použitím benzyl S-4,6-dimeth.ylpyrimidin-2-lythiokarbonátu a dicyklohexylaminu, získá se benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-3- amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselná kyselina ve formě dicyklohexylamoniové soli.
85,22 g surové dicyklohexylamoniové soli se krystaluje ' z metbsnolu, ethylacetátu a petroletheru a získá se 3,2 g opticky nečisté dicyklohexylamoniové soli benzyloxykarbonyl-(2RS, 3R)-3~amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselné kyseliny v prvním krystalickém podílu.
Jestliže se matečné louhy odpaří k suchu a odparek se třikrát krystaluje z ethylacetátu a etheru, získá se 5,02 g opticky čisté dicyklohexylamoniové soli benzyloxykarbonyl-(2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfenylmáselné kyseliny.
T. t. 121 až 122 °C, [alfa] + 55,3 (c = 4,22, CHjCOOH).
Pro c3°H42N2O6 vypočteno: 69,46 % C, 8,16 % H, 6,17 % N;
nalezeno: 69,81 % C, 8,55 % H, 6,42 % N.
Diilklohexllamoniovk sůl benzyloxylcabooyl-(2S, 3R)“3-amino-2-hydro}y-4-p-hydro:yfenylmáselné kyseliny (1,05 g) v ethylacetátu se nechá reagovat se zředěnou kyselinou sírovou a získaná benzyloxyykabbony-(2S, 3R)-3-amino-2-hydroxy-4-p-hydroxyfeollmáselná kyselina se nechá reagovat s 866 mg soli benzyyesteru (Sj-leucinu s p-toluensufoonovou kyselinou, 405 mg N-hylíΌoχУeeZriazolu, 0,308 ml treeUiyaminu a 412 mg ' Ν,Ν/-dicyklohexllkarboíiimiíu postupem podle příkladu 28, stupně 3. V kvant,itatiwiím výtěžku se získá bennzyester benzyloxykarbonyl- (2S, 3R)-3“aminoo2-hhldooχl4-p-hhldooχ:leeolbbtaaool-(S )-leucinu.
Jestliže se získaný benzjy.ester benzyloxykarboryy-^S, 3S)-3-εmino-2-hldroxl~4-p-hlíroxz“ feoylbutanool-'(S)-leuiiou nechá reagovat postupem podle příkladu 28, stupně 3, získá se 630 mg, (2S, 3R)-3-aminoo--hhlrooy-l-p-hhdroxyflnyObutanoy0l(S)-leucinu.
[alfa] 5 - 89,9° (c = 1,19, CH3COOH), Rf = 0,48.
pro vypočteno: 60,55 % C, 7.00 % И, 10,08 % N;
nalezeno: 59,98 % C , 7^2 %5 H , 10^2 Í5 N.
(2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxy-3-p-hldroxyfeoylmáselná kyselina použžtá v tomto příkladu se připraví následujícím způsobem:
Jestliže se 30 g nitrilu benzyloxykarbonyl-( 2RS, 3R)-3-amino-·2-hydroxy-4-p-hydroχrfenylmáselné kyseliny nechá reagovat postupem podle příkladu 28 a získá se 12,61 g (2RS, 3R)-3-amioo-2-hydroxy-4-p-hldroxlfenllmáselnk kyseliny.
Rf - 0,20.
Pro C 10Hi2N°4
vypočteno: 58,81 % C, 5,92 % H, 7,82 % N;
nalezeno: 58,63 % C, 5,99 % H, 7,43 % N.
Referenční příklad 8
Syntéza nitrilu z aldehydu
Roztok 20,8 g hydrogeeniřičitanu sodného v 50 ml vody se přidá k 52,7 g olejovitého benzyloxχУcarooyl-(R)-feeyyaaaninalu, ediční produkt se oddiltruje a pro^je se vodou a etherem a připraví se tak 77 g surové sodné soli 2~benzyloxlkarbooylamino“1-hydro:ylЗ-eenyl pгooaneulfonové kyseliny, 68 g vzniklého aduktu se suspenduje v 250 ml vody . a ochladí se na 10 až 12 °C. Po přidání 500 ml etheru se během 30 minut přiУlol roztok 13 g kyanidu draselného v 100 ml vody.
Směs se pak nechá reagovat 3 hodiny při teplotě a vodná fáze se vylej! Etherický poddl se promyje vodným roztokem chloridu sodného a vysuií bezvodým síranem horečnatým.
Po oddil trvání síranu horečnatého a odpařením etheru za sníženého tlaku se získá 49 g slljsíiéélo nitrilu benzyloKykarbonyS-^RS, 3R)-3-amiyo-2-lyírsxy-4-fenylπláellyé kyseliny.
Ostatní nitrilý pouuité při postupu podle vynálezu se připraví analogickým způsobem.

Claims (4)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    1. Způsob výroby deH^tů N-(3-lmino-2-lydro}χypooOosyУ)-2(lamiУSoctsvé ky8eliyy obec- ného vzorce I . 3 2 1 2' T R.—CH—CH—CO—NH—CH — COOH li 1 (d NH' OH R2 '
    kde
    R! je alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, cyklspentylmelhlУ, cyklsle:ιQУLmelhlУ, cyklshelOylm^e^th^S., feny! nebo eubbeitjlyt vzorce ХУсн’~ r3 kde R3 R2 je ^dík^ cllsrj, melthry, yitroeyupiУl, tydro^l aminosyupina, je alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, tydrojxyakyl s 1 až 2 atomy uhlíku, al^xy^U^! s 2 až 3 atomy unlíku, alkylthSomltlyl s 2 až . 3 atomy Vilíku, klrboχy^lnidíslyyl s 2 až 3 atomy uhlíku, У1гО^:^з^8^)^1^;^:1 s 2 až 3 atomy uhlíku,
    vyznačený tím, že se kondenzuje aminooyssIina obecného vzorce II
    R-I—CH—CH—ČOOH (II)
    NH
  2. 2 OH kde
    R1 má výie uvedený význam, případně s chráněnými funkčními skupinami, které se při dalií reakci, a aminoSyyeliУl obecného vzorce III
    H'N—CH—COOH 12 (III) kde R2 má výie uvedený význam, načež se chriáiicí skupiny o^í^s^tra^í.
    O
    2. Způsob p^ode bodu ooujijl sloučenina, kde R, 11 vyznačerný tím, že se jako vv^^^ioz ©obcného wooce II je skupina obecného vzorce
    •5 kde R . je atom vodíku, chloru, шсГ^У, nitroeУuoiУl, hydro jqrl . nebo aminoskupina.
  3. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se jako výchozí sloučenina použije sloučenina obecného vzorce .II, kde R( . je bennzS, a sloučenina obecného vzorce III, kde Rg je alkyl se 4 atomy uhlíku.
  4. 4. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se jako výchozí sloučeniny použije sloučenina obecného vzorce II, kde R, je p-hydroxybenzyl., a sloučenina obecného vzorce III, kde Rg je alkyl se 4 atomy uhlíku.
CS764736A 1975-07-22 1976-07-16 Method of producing derivatives of n-/3-amino-2-hydroxy-propionyl/-2-amino acetic acid CS201033B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB30632/75A GB1510477A (en) 1975-07-22 1975-07-22 Peptides and to amino acid intermediates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS201033B2 true CS201033B2 (en) 1980-10-31

Family

ID=10310676

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS764736A CS201033B2 (en) 1975-07-22 1976-07-16 Method of producing derivatives of n-/3-amino-2-hydroxy-propionyl/-2-amino acetic acid
CS793519A CS201034B2 (en) 1975-07-22 1976-07-16 Method of producing amino acid

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS793519A CS201034B2 (en) 1975-07-22 1976-07-16 Method of producing amino acid

Country Status (12)

Country Link
JP (2) JPS52136118A (cs)
AU (1) AU506003B2 (cs)
CA (1) CA1104156A (cs)
CH (1) CH630892A5 (cs)
CS (2) CS201033B2 (cs)
DE (2) DE2660626C2 (cs)
DK (1) DK149110C (cs)
FR (1) FR2318863A1 (cs)
GB (1) GB1510477A (cs)
HU (1) HU183048B (cs)
NL (1) NL7608064A (cs)
SE (3) SE431642B (cs)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2725732C2 (de) 1977-06-07 1983-01-05 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai, Tokyo Bestatin-Analoga, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate
DE2760007C2 (cs) * 1977-06-07 1988-10-06 Microbial Chem Res Found
JPS6026099B2 (ja) * 1977-09-21 1985-06-21 財団法人微生物化学研究会 ペプチド、その酸附加塩およびその製造法
FR2442227A1 (fr) * 1978-11-25 1980-06-20 Nippon Kayaku Kk Procede de production d'acides threo-3-amino-2-hydroxybutanoylaminoacetiques
US4370318A (en) * 1980-07-07 1983-01-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Bestatin-related compounds as immunopotentiator
JPS5767516A (en) * 1980-09-24 1982-04-24 Microbial Chem Res Found Novel analgesic agent
JPH0810855Y2 (ja) * 1989-07-20 1996-03-29 タナシン電機株式会社 オートリバース式テープレコーダ
JP3655629B2 (ja) * 1993-06-29 2005-06-02 株式会社カネカ 光学活性アミノアルコール誘導体及びその製法
HUP9901872A3 (en) * 1996-02-08 2001-06-28 Nippon Kayaku Kk Process for producing optically active cyanohydrins
WO1999057098A2 (en) * 1998-05-01 1999-11-11 Abbott Laboratories Substituted beta-amino acid inhibitors of methionine aminopeptidase-2
US6242494B1 (en) 1998-05-01 2001-06-05 Abbott Laboratories Substituted β-amino acid inhibitors of methionine aminopeptidase-2

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5439477B2 (cs) * 1974-07-01 1979-11-28

Also Published As

Publication number Publication date
AU506003B2 (en) 1979-12-13
JPS5823654A (ja) 1983-02-12
FR2318863B1 (cs) 1980-10-31
DE2632396A1 (de) 1977-02-03
CA1104156A (en) 1981-06-30
SE8306145D0 (sv) 1983-11-09
DK149110C (da) 1986-09-08
DK149110B (da) 1986-01-27
SE7606736L (sv) 1977-01-23
DK331276A (da) 1977-01-23
DE2632396C2 (de) 1982-11-25
HU183048B (en) 1984-04-28
SE452318B (sv) 1987-11-23
DE2660626C2 (de) 1985-07-11
CS201034B2 (en) 1980-10-31
JPS52136118A (en) 1977-11-14
JPS6050780B2 (ja) 1985-11-11
CH630892A5 (en) 1982-07-15
SE431642B (sv) 1984-02-20
FR2318863A1 (fr) 1977-02-18
SE8306145L (sv) 1983-11-09
JPS5758338B2 (cs) 1982-12-09
SE8001959L (sv) 1980-03-13
GB1510477A (en) 1978-05-10
AU1591276A (en) 1978-01-19
NL7608064A (nl) 1977-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4189604A (en) Bestatin
Nishizawa et al. Synthesis and structure-activity relations of bestatin analogs, inhibitors of aminopeptidase B
JP2579323B2 (ja) ジアミン類の選択的アミジン化
EP0082088B1 (fr) Nouveaux dérivés d&#39;aminoacides, et leur application thérapeutique
SK64993A3 (en) Hydroxamic acid derivatives, method of their preparation and medicaments with their content
IE48072B1 (en) Derivatives of dehydrocyclicimino acids
CN1056141C (zh) 哌嗪衍生物
EP0037231A2 (en) Substituted acyl derivatives of octahydro-1H-indole-2-carboxylic acids
CA2155448A1 (en) Inhibitors of farnesyl protein transferase
EP0331921A1 (en) Renin inhibitors containing alpha-heteroatom amino acids
JPH01110696A (ja) ペルインドプリルの工業的製造法
JPS6059226B2 (ja) プロリン誘導体および関連化合物
CA2137455A1 (en) Inhibitors of farnesyl protein transferase
US7531673B2 (en) Preparation of amino acid amides
FI81783B (fi) Foerfarande foer avskiljning av racemiska blandningar av bicykliska imino- -karboxylsyraestrar i komponenterna.
RU2152953C1 (ru) Производные дипептидных п-амидино-бензиламидов с n-концевыми сульфонильными остатками и их соли с физиологически приемлемыми кислотами
CS201033B2 (en) Method of producing derivatives of n-/3-amino-2-hydroxy-propionyl/-2-amino acetic acid
US4240975A (en) Bestatin
FR2460291A1 (fr) Nouveaux tripeptides agissant sur le systeme nerveux central et leur procede de preparation
EP0236874A2 (de) Renininhibitoren, deren Herstellung und Verwendung sowie Aminosäure- und Aminoaldehyd-Derivate
HK1000209B (en) Reductive amination of an aminoacid or an aminoacid derivative with an alpha-keto acid or an alpha-keto acid derivative
US4474764A (en) 3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid derivatives and pharmaceutical composition containing the same
BG65832B1 (bg) Метод за синтез на естери на n-[(s)-1-карбоксибутил]-(s)- аланин и приложението му при синтеза на периндоприл
Pajpanova et al. Canavanine derivatives useful in peptide synthesis
BE1005720A3 (fr) Procede de synthese peptidique et nouveaux intermediaires de synthese.