DE2555405A1 - Antibakterielle mittel - Google Patents
Antibakterielle mittelInfo
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Description
patentanwKlte
PROF. DR. DR. J. REI TSTÖTTHR
DR.-ING. WOLFRAM BUNTE DR. WERNER KINZEBACH 2555405
O βΟΟΟ MÜNCHEN 4O. BAUERSTRASSE 22 ■ FERNRUF ιΟββι 37 OS 83 - TELEX B21B2O8 ISAR D
!»OSTANSCHRIFT. D - βΟΟΟ MÜNCHEN 43. POSTFACH 7βΟ
München, den 9. Dezember I975
BRISTOL-MYERS COMPANY
345 Park Avenue New York, N.Y.10022
Antibakterielle Mittel
Die Erfindung betrifft halbsynthetische Derivate des Kanamycin A und B, wobei diese Verbindungen als 1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionylj-ö'-N-methylkanamycin
A oder B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin A
oder B und 1-N-[L-(-)-<f-Amino-a-hydroxyvaleryl]-6'-N-methylkanamycin
A oder B bezeichnet werden und der allgemeinen Formel IV
609824/0971
M/16 305
4 F2
H-R
NH.
(IV)
entsprechen, worin R für -OH oder -NH2 steht und R die Bedeutungen
L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-α-hydroxypropionyl
oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt;
oder ein pharmazeutisch verträgliches, nicht-toxisches
Salz davon.
Es ist bekannt, daß einige, durch den R-Faktor vermittelten Kanamycin-resistenten Organismen, beispielsweise
E. coli K-12 R-5 und Ps. aeruginosa GN 315, die Kanamycine
durch 6'-N-Acetylierung inaktivieren. Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Derivate des Kanamycin
A und B herzustellen, die gegenüber diesem Typ von enzymatischer Inaktivierung durch diese Kanamycin A oder B
resistenten Organismen resistent sind, jedoch dennoch die Mehrzahl ihrer biologischen Aktivität und Spektren behalten.
Die der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Aufgabe wird durch die Synthese der hier als Verbindung IV bezeichneten
Verbindung gelöst.
— 2 —
609824/0971
Eine bevorzugte AusfUhrungsform der vorliegenden Erfindung
ist die Verbindung der Formel IV
:h2-nhch3
worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-α-hydroxypropionyl
oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen OH oder NHU besitzt; oder ein nichttoxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz
davon.
Die bevorzugtesten Ausführungsformen sind die Verbindungen
der Formel IV, worin:
1. R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl und R^ für OH (TVa)
stehen;
2. R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl und R^ für NH2
(rvb) stehen;
3. R für L-(-)-ß-Amino-(i-hydroxypropionyl und R für OH
(IVc) stehen;
4. R für L-(-)-ß-Amino-oc-hydroxypropionyl und R3 für NH2
(rvd) stehen;
- 3 609824/0971
„/16 505 ? SSB 40 5
5. R für L-C-)-/-Ämlnio-ar-hydroxy^aleryl und Er für OH (IYe)
stehen;;
6. R für Lr-{—)-ff—itemo—or—iijdroxyraleryl und R für·
(I¥f) stehen; oder ein miclrt—"fcoxisclies pharmazeutisch
■verträgliches Sätireadditionssalz davon.
Tm Rahmen der vorliegenden Offenbarung bedeutet der Begriff
"nicht—toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz11
ein Mono-, Bi-„ Tri- oder Tetrasalz, das durch
Reaktion von 1 Mol Verbindung IY mit 1 bis 4 Mol einer nicht-toxischen^pharmazeutisch verträglichen Säure gebildet
ist. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure,
Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoff säure, Ascorbinsäure, Apfelsäure und
Zitronensäure, und alle anderen Säuren, die üblicherweise zur Bildung von Amin-enthaltenden Pharmazeutika verwendet
werden.
Andere, am meisten bevorzugte Ausführungsformen sind die
Sulfat-, Hydrochlorid-, Acetat-, Maleat-, Citrat-, Ascorbat-, Nitrat- oder Phosphatsalze der Verbindung IV.
Eine weitere bevorzugteste Ausführungsform ist das Monosulfatsalz
der Verbindung IV.
Eine andere bevorzugte Ausführungsform ist das Disulfatsalz
der Verbindung IV.
Die der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Aufgabe wird durch die erfindungsgemäße Schaffung des Verfahrens zur Herstellung
der Verbindungen der Formel IV
6 09824/0971
ORIGINAL INSPECTEi
M/16 305
NH,
NH-R
(IV)
worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Aminoa-hydroxypropionyl
oder L-(-)-cf-Amino-α-hydroxyvaleryl steht
und worin R die Bedeutungen -OH oder NHp besitzt, gelöst,
das dadurch gekennzeichnet ist, daß man in aufeinanderfolgenden
Stufen:
A) die Verbindung der Formel II
worin R für -OH oder -NH2 steht, mit einem Acylierungsmittel
der Formel VII
QRIQINAL INSPECTID
Μ/1β 305
G.
W-NH-
OH 0
It
-CH - C-M
(VII)
worin W für einen Rest steht, der ausgewählt ist unter:
I 3
H2-O-C-, CH3-C-O-C-,
CH.,
Il
V Vy-C , X-CH9-C, oder
jedoch bevorzugt
Il H2-O-C-
M einen Rest darstellt, der ausgewählt ist unter
B U J U 2 A / 0 9 7
M/16 305
-Ο—
■V
255B405
-ο-
-NO-
-0-N
und
-0-
jedoch bevorzugt
oder
-0-
4 5
worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Verbindung II, jedoch bevorzugt in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 und am bevorzugtesten in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis ungefähr 1,1 in einem Lösungsmittel, das vorzugsweise ausgewählt ist unter einer Mischung aus Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dirnethylformamid, Tetrahydrofuran und Propylenglykoldimethyläther, jedoch vorzugsweise wäßrigem Tetrahydrofuran, acyliert, wobei die Verbindung der Formel III
worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Verbindung II, jedoch bevorzugt in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 und am bevorzugtesten in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis ungefähr 1,1 in einem Lösungsmittel, das vorzugsweise ausgewählt ist unter einer Mischung aus Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dirnethylformamid, Tetrahydrofuran und Propylenglykoldimethyläther, jedoch vorzugsweise wäßrigem Tetrahydrofuran, acyliert, wobei die Verbindung der Formel III
6 (i [\ B 'M / 0 9 7 1
M/16 305
NH
NH.
Ill
NH-C=O HC-OH
(au)
.Zn
NH
entsteht, worin η, R und W die vorstehenden Bedeutungen
besitzen; und
B) die Blockierungsgruppe W aus der Verbindung III durch
nach dem Stand der Technik bekannte Methoden, und vorzugsweise in dem Fall, in dem W einen Rest der Formel
/^ \_CH2-O-C-
darstellt, durch Hydrieren der Verbindung III mit V/asserstoff
in Gegenwart eines Metallkatalysators, der vorzugsweise ausgewählt ist unter Palladium, Platin, Raney-Nickel,
Rhodium, Ruthenium und Nickel, jedoch bevorzugt Palladium und am bevorzugtesten Palladium-auf-Aktivkohle, in
einem aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel bestehenden Lösungsmittelsystem, das vorzugsweise
ausgewählt ist unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran,
6 0 9 8 2 A / 0 9 7 1
m/16 305 255 5 40
Äthylenglykoldimethylather, Propylenglykoldimethyläther
oder dergleichen, jedoch vorzugsweise 1:1 Wasser-Dioxan
und bevorzugt in Gegenwart einer katalytischen Menge Eisessig, entfernt, wobei die Verbindung der Formel IV gebildet
wird.
Für den Fachmann liegt es auf der Hand, daß beim obigen Verfahren zur Acylierung der Aminfunktionen der erfindungsgemässen
Zwischenverbindungen auch andere Mittel verwendet werden können. Die vorliegende Offenbarung umfaßt alle derartigen
Acylierungsiaittel, die zu labilen aminblockierenden
Gruppen führen, wobei die labilen Blockierungsgruppen üblicherweise
bei der Synthese von Peptiden eingesetzt werden. Die labilen Blockierungsgruppen müssen nach aus dem Stand
der Technik allgemein bekannten Methoden entfernbar sein. Beispiele für derartige labile Blockierungsgruppen und deren
Entfernung kann in der Übersicht von A. Kapoor,J. Pharm. Sciences, 59, Seiten 1-27 (1970), gefunden werden. Funktionelle
Äquivalente als Acylierungsmittel für primäre Amingruppen
umfassen entsprechende Garbonsäurechloride, -bromide, -säureanhydride,
einschließlich gemischter Anhydride und insbesondere der gemischten Anhydriden, die aus stärkeren Säuren,
wie den niedrigen aliphatischen Monoestern der Kohlensäure, der Alkyl- und Arylsulfonsäuren und der sterisch gehinderteren
Säuren, wie Diphenylessigsäure, hergestellt sind. Zusätzlich kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester
(beispielsweise mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, Thiophenol,
Thioessigsäure) verwendet werden, oder die freie Säure selbst kann mit dem Kanamycinderivat (II) gekuppelt
werden, nachdem man zuerst die freie Säure mit N,N'-Dimethylchlorforrniminiumchlorid
[vgl. GB-PS 1 008 170 und Novak und Weight, Experientia XXI/6, 360 (1965)] oder unter Verwendung
von Enzymen oder eines Ν,Ν'-Carbonyldiimidazols oder eines
Ν,Ν'-Carbonylditriazols [vgl. Sheehan und Hess, J. Amer.Chem.
Soc, 77, 1067 (1955)] oder eines Alkinylaminreagenses [vgl.
609B24/0971
R. Buijile und H.G. Viehe, Angew.Chem., International
Edition 3, 582 (1964)] oder eines Keteniminreagenses [vgl.
CL. Stevenes und M.E.Monk, J.Amer.Chein.Soc. , 80, 4065
(1958)] oder eines Isoxazoliumsalzreagenses [vgl„ R.B.
Woodward, R.A. Olofson und H. Mayer, J.Amer.Chem.Soc., 83,
1010 (1961)], gekuppelt hat. Ein weiteres Äquivalent des Säurechlorids ist ein entsprechendes Azolid, d.h. ein Amid
der entsprechenden Säure, deren Amidstickstoff Glied eines
quasiaromatischen 5-gliedrigen Rings ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, d.h. Imidazol, Pyrazol, die
Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Als Beispiel für die allgemeine Methode zur
Herstellung eines Azolids wird N,N'-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Anteilen bei Raumtemperatur
in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt,
wobei das Carbonsäureimidazolid in praktisch quanitativer
Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxid und einem Mol Imidazol gebildet wird. Dicarbonsäuren liefern die Diimidazolide.
Das Nebenprodukt Imidazol fällt aus und kann abgetrennt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, jedoch
ist dies nicht wesentlich. Diese Reaktionen sind aus dem Stand der Technik wohlbekannt (vgl. US-PSen 3 079 314,
3 117 126 und 3 129 224 und GB-PSen 932 644, 957 570 und
959 054).
Das bevorzugteste Verfahren zur Herstellung der Verbindungen
der Formel IV ist durch die nachfolgenden Stufen gekennzeichnet:
A) Acylieren der Verbindung der Formel II mit einem Acylierungsmittel
der Formel
- 10 -
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M/16 305
OH O
ι I
oder
OH
H2-O-C-NH-(CH2)n-C - C-
worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem
Lösungsmittelsystem aus wäßrigem Tetrahydrofuran oder
wäßrigem Dimethylformamid-Aceton, bei ungefähr Raumtemperatur,
wobei die Verbindung der Formel III
- 11 -
6098 2 4/0971
M/16 305
gebildet wird, worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt;
und
B) Hydrieren der Verbindung III in wäßrigem Tetrahydrofuran
in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle bei ungefähr
atmosphärischem Druck, wobei Verbindung IV gebildet wird.
Alternativ kann i η Stufe A) das Acylierungsmittel VII in situ
durch Vermischen der Verbindung der Formel
Il T Ii
H -0-C-NH-(CH2) n-C — C-OH
mit äquimolaren Mengen an N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid
und Dicyclohexylcarbodiimid in einer kleinen Menge wasserfreiem Tetrahydrofuran gebildet werden. Die erhaltene
- 12 -
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m/16 305 255 540
"3
Mischimg "Wird filtriert -und das Filtrat wird zu einer wäßrigen
Tetrahydrofuranmischung des 6'-N-Kanamycin A oder B zugegeben,
wobei die entsprechende Verbindung III gebildet wird.
Die Verbindungen IV sind wertvoll als antibakterielle Mittel, als Beifuttermittel bei Tierfutter, als therapeutische
Mittel bei Geflügel und Tieren, einschließlich des Menschen, und sie sind besonders wertvoll bei der Behandlung
von infektiösen Erkrankungen, die durch gram-positive und gram-negative Bakterien verursacht sind.
Bei oraler Verabreichung sind die Verbindungen IV brauchbar als Zusätzbehandlung zur präoperativen Sterilisation
des Darms. Sowohl die aerobe als auch die anaerobe Flora, die gegenüber diesen Pharmazeutika empfindlich ist, werden
im Dickdarm vermindert. In Verbindung mit geeignetem mechanischen Reinigen sind sie brauchbar bei der Vorbereitung
von Dlckdarmoperationen.
Die Verbindungen IV sind bei der Behandlung systemischer
bakterieller Infektionen brauchbar, wenn sie parenteral im Dosisbereich von ungefähr 250 mg bis ungefähr 3000 mg
pro Tag in aufgeteilten Dosen drei- oder viermal täglich verabreicht werden. Im allgemeinen sind die Verbindungen
Wirksam; wenn sie in einer Dosis von ungefähr 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.
Die Verbindungen der Art der Verbindung IV, insbesondere BB-K28, 142, 148, 162 und 163 besitzen alle wesentlich
verbesserte Aktivitäten gegen ein größeres Spektrum von Mikroorganismen im Vergleich zu den Stammverbindungen,
von denen sie abgeleitet sind, d.h. von Kanamycin A und B.
- 13 609824/0971
Nachfolgend ist die Tabelle I dargestellt, die die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC) von Kanamycin A und B und
BB-K28, 142, 148, 162 und 163 gegen eine Vielzahl grampositiver
und gram-negativer Bakterien zeigen, so wie sie durch die Steers-Agar-Verdünnungsmethode auf Mueller-Hinton-Agarmedium
erhalten wurden.
- 14 -
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I | Organismus | , COli NIHJ | K-12 | (GM-R) . | Px-IO Ps. | A15119 | BB-K | TABELLE I | BB-K | 0,8 | BB-K | BB-K | |
_i vji |
Ec-L E, | Juhl | NR79/W677 | (GM-R) | A20363 | 28 | (MIC γ/ml) | 148 | 25 | 162 | 163 | ||
I | Ec-3 " | K-12 ML-1630 | JR35/0600 | A20365 | 0,4 | BB-K | 3,1 | 1,6 | 6,3 | 6,3 | |||
Ec-5 " | (KM-R) | W677 | A9632 | 0,8 | 142 | 3,1 | 3,1 | 6,3 | 12,5 | ||||
Ec-7 " | JR66/W677 | A20664 | 0,8 | 0,4 | 3,1 | 0,4 | 12,5 | 12,5 | |||||
Ec-8 " | A20665 | 0,2 | 0,8 | 0,2 | >50 | 3,1 | 6,3 | ||||||
Ec-9 | A20684 | 0,4 | 1,6 | 0,4 | 6,3 | 6,3 | 12,5 | ||||||
Ec-IO" | K-12 CS2 R-5 | A20683 | 0,4 | 0,2 | 0,4 | 12,5 | 6,3 | 6,3 | |||||
Ec-52" | , pneumoniae D | A20766 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 6,3 | 3,1 | 6,3 | |||||
cn | Ec-53" | Type 22 | A20898 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 12,5 . | 3,1 | 6,3 | ||||
X) | Ec-59" | Sm-I Ser. marcescens | 0,8 | 0,4 | 12,5 | 12,5 | 50 | 100 | |||||
co | Ec-60" | Pa-I Ps. aeruginosa | -11 | 0,8 | 0,8 | 12,5 | 50 | 50 | 100 | ||||
Ec-55 | Pa-3 " | A20680 | 6,3 | 6,3 | >50 | >50 | 100 | >100 | |||||
Kp-I K. | Pa-4 | A20019 | 6,3 | * | 3,1 | 3,1 | |||||||
O | Kp-8 " | Pa-5 " | D-15 | 0,4 | 50 | 0,8 | 1,6 | ||||||
to | Pa-I5" | A9930 | 1,6 | * | 12,5 | 50 | |||||||
-J | Pa-16" | H-9 | 0,8 | 0,2 | 6,3 | 6,3 | |||||||
Pa-20" | A15150 | 3,1 | 12,5 | 6,3 | 12,5 | ||||||||
Pa-21" | A20717 | 0,2 | 1,6 | 3,1 | 3,1 | ||||||||
Pa-23" | A20718 | 25 | 3,1 | 100 | >100 | ||||||||
A20325 | 6,3 | 0,4 | • 12,5 | 12,5 | |||||||||
A20601 | 6,3 | 100 | 25 | 25 | |||||||||
Λ2 0741 | 3,1 | 12,5 | 25 | 50 | |||||||||
A20621 | 3,1 | 25 | 6,3 | 12,5 | |||||||||
12,5 | 12,5 | 25 | 50 | ||||||||||
25 | 12,5 | 50 | 100 | ||||||||||
100 | 12,5 | ||||||||||||
50 | |||||||||||||
100> | |||||||||||||
Kanamycin A
0,4 0,8
>100 6,3 0,4 3,1 50
0,8 100
>100
>100
0,2 >100 1,6
12,5 6,3
>100 12,5
100
25
25
50
>100 >100
mycin B
1,6 >100 >100 >100 *
Fortsetzung TAEELL
VT.T." i"
Pv-L PR. vulgaris
Pm-I Pr. mirabilis
Pg-I Pr. morganii
Sa-2 S,
Sa-4 "
Sa-IO"
Sa-49
aureus
Smith
FDA 209P
(Ki-I-R)
A9436
A9554
A9553
B3-K
28
28
A15167 0,2
A20239
A20240
.3,1 <0,05
M6-1 Mycob. 607 . 0,8
M6-2 " " (KM-R) >100
M6-3 " · (KM,SM-R) >100
Mp-I " phlei 0,2
Mr-I
ranae
BB-K 142
0,4
1,6·
0,8
0,4
1,6 1,6 6,3
<0,05
0,8
100
100
0,4 0,8
BB-K 148
0,8 1,6 1,6
0,1
0,8
1,6
12,5
<0,025
0,8 >50 >50
0,4
0,8
BB-K
162
162
3,1
6,3
1,6
12,5
12,5
50
0,4
>100
>100
1,6
BB-K
163
163
6,3
1,6
25
12,5
50
0,8
3,1
>100
>100
1,6
3,1
Kana- Kanamycin Λ mycir. 3
0,4
0,8
0,8
0,2
0,8
50
>100
< 0,05
< 0,05
>100
>100
0,4
0,8
0,8
3,1 3,1 3,1
0,4
1,6 50
100
0,2
3,1
>100
>100
3,1 1,6
M/16 305
Nach den umfassenden Erfahrungen der fachkundigen Anmelderin
mit Kanamycin A und B und seiner chemischen Reaktivität wurde erwartet, daß von den vier oder fünf primären
Aminfunktionen, die in Kanamycin A bzw. B vorliegen, aus sterischen Gründen die 6f-Aminofunktion die reaktivste
ist. Es wurde daher postuliert, daß, wenn man die 6'-Aminofunktion
in ein 6 ·-N-Methyl-.sek.-Amin überführt,
seine Reaktivität mit einem Acylierungsmittel wesentlich vermindert wäre, und daß die 1-N-primäre Aminfunktion aus
sterischen Gründen bei den verbleibenden primären Aminen die reaktivste wäre. Daher wurde das 6'-N-Methylkanamycin
A oder B direkt mit einem geeigneten, Seitenketten acylierenden Mittel acyliert, ohne zuerst die anderen
Aminfunktionen des Moleküls zu blockieren. Die Kontrolle der molaren Mengen an verwendetem Acylierungsmittel bestimmt
den Grad der Acylierung, die an anderen Positionen auftritt.
AUS GANGSMATERIALIEN
Herstellung von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure
(VI)
L-(-)-Y-Amino-oc-hydroxybuttersäure (7,4 g, 0,062 Mol)
wird zu einer Lösung von 5,2 g (0,13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser zugegeben. Zur gerührten Lösung gibt man
tropfenweise bei 0 bis 5°C im Verlauf von 0,5 Std. 11,7 g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid und setzt das
Rühren der Mischung während einer Stunde bei derselben Temperatur fort. Die Reaktionsmischung wird mit 50 ml
Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure
auf pH 2 eingestellt und mit vier 80 ml-Portionen Äther extrahiert. Man vereinigt die Ätherextrakte, wäscht mit
- 17 -
6 U 1J :; I <* / U f3 7 1
25554D5
einer kleinen Menge gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet mit wasserfreiem Natriumsulfat und filtriert.
Das FiItrat wird im Vakuum eingedampft und der erhaltene Rückstand wird aus Benzol kristallisiert, wobei man
11 »6· g (74 ?6) farblose Platten mit Schmelzpunkt 78,5
bis 79,5°C, [a]D -4,5° (c = 2, CH3OH) erhält.
Infrarotspektrum (IR) [KBr]: IR (KHr) ^ c=0 17'K), U-1K) cm"1
Kernmagnetische Resonanz (NMR) (Aceton-dg)cf (in ppm von
TMS) 2,0 (2H, m), 3,29 (2H5 d-d, J = 6,7 und 12 Uz)3 4,l6
(IH, d-d, J=I,5 und 8 Hz), '1,99 (2H, s), 6,2 (2H, breit),
7,21 C5H, s).
Analyse ci2H15NO5:
C H N
ber.: 56,91 5,97 5,53 % Ref.: 56,66 5,97 5,'17 %
2« N-Hydroxysucciniraidester von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-nt-hydroxyb
utter säure (VII).
Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) Verbindung VI und
4,8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid* in 200 ml
Äthylacetat wird auf O0C gekühlt und dann werden 8,6 g (0,042 Mol) Dicyclohexylcarbodiimia zugesetzt. Die Mischung
wird über Nacht in einem Kühlschrank gehalten. Der Dicyclohexylharnstoff, der sich abgeschieden hat,
wird abfiltriert und das Filtrat wird unter vermindertem Druck auf ungefähr 50 ml konzentriert, wobei man
farblose Kristalle von Verbindung VII erhält, die durch Filtrieren gesammelt werden; 6,4 g, Schmelzpunkt 121
bis 122,5°C. Man dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockene
- 18 -
6 0 9 B ■} k I 0 9 7 1
M/16 305
ein und wäscht den kristallinen Rückstand mit 20 ml einer Mischung aus Benzol/n-Hexan, wobei man eine zusätzliche
Menge an Verbindung VII erhält. Die Gesamtausbeute beträgt 13,4 g (92 %).
M0 1,5° (c = 2, CHCl3).
IR (KBr)^J c=0 1810, 1755, 17Jl0, 1680 crn
-1
NMR (Aceton-dg) d~(in ppm von TMS) 2,0 (211, m), 2,ü5
(Uli, s), 3,37 (211, d-d, J = 6,5 und 12,5 Hz), ϋ,56 (lit, m),
9 (2H, s), 6,3 (2H, breit), 7,23 (1IH, s).
Analyse
Cl6Hl8N2°7:
ber, Ge f.
C | 5 | II | 8 | N |
,05 | Γ> | ,18 | 8 | ,00 % |
,79 | ,21 | ρ | ,1'I % | |
,70 | ,20 | ,12 % | ||
3. Herstellung von H-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid
N-Hydroxysuccinimid** (23 g, 0,2 Mol) wird in einer Lösung von 9 g (0,22 Mol) Natriumhydroxyd in 200 ml Wasser
gelöst. Zur gerührten Lösung gibt man tropfenweise unter Wasserkühlung 34 g (0,2 Mol) Carbobenzoxychlorid
und rührt dann die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur, um das Carbobenzoxyderivat abzuscheiden, das durch
Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet wird. Die Ausbeute beträgt 41,1 g (82 %),
Umkristallisation aus Benzol/n-Hexan (10:1) ergibt farblose
Prismen, die bei 78 bis 790C schmelzen.
** G.W. Anderson et al., J. Am. Chem. Soc, 86, 1839
(1964).
- 19 -
6 0 9 B 2 U I Q 9 7
4. Herstellung von 6r-Carbobenzoxykanamycin A.
Eine Lösung von 42,5 g (90 rnMol) Kanamycin A in Form
der freien Base in 450 ml Wasser und 500 ml Dimethylformamid (DMF) wird unterhalb 0°C abgekühlt und heftig
gerührt. Zur Lösung gibt man tropfenweise im Verlauf von ungefähr 2 Std. eine Lösung von 22,4 g (90 mMol) N-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid
in 500 ml DMF. Die Mischung wird bei -10° bis 0°C über Nacht und dann einen Tag bei Raumtemperatur gerührt.
Die Reaktionsmischung wird unter vermindertem Druck unterhalb ungefähr 50 C eingedampft. Den öligen Rückstand
löst man in einer Mischung aus 500 ml Wasser und 500 ml Butanol, wobei die Mischung filtriert wird, um unlösliches
Material zu entfernen und in zwei Schichten aufgetrennt wird. Das Butanol und die wäßrigen Schichten
werden mit Butanol-gesättigtem Wasser (500 ml χ 2) bzw.
Wasser-gesättigtem Butanol (500 ml χ 2) behandelt, wobei man eine Technik anwendet, die der Gegenstromverteilung
entspricht. Die drei wäßrigen Schichten werden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft,
wobei man einen öligen Rückstand erhält, von dem ein Teil beim Stehen bei Raumtemperatur kristallisiert.
Zu dem Rückstand einschließlich der Kristalle . gibt man ungefähr 100 ml Methanol, das das Öl löst und
trennt es von den Kristallen ab. Nachdem man ungefähr 300 ml Äthanol zugegeben hat, wird die Mischung über
Nachtbei Raumtemperatur gehalten, wobei man eine kristalline Masse erhält, die durch Filtrieren gesammelt wird.
Sie wiegt 44 g. Das Produkt enthält eine kleine Menge Kanamycin A, wie dies durch Dünnschichtchromatographie
unter Verwendung von n-Propanol/Pyridin/Essigsäure/Wasser
(15:10:3:12) als Lösungsmittelsystem und Ninhydrin als Spray-Reagens, angezeigt wird.
- 20 -
609824/09 7 1
Das Rohprodukt wird in 300 ml Wasser gelöst und auf einer Säule (30 mm Durchmesser) mit CG-50 Ionenaustauscherharz
(NH^+ Typ, 500 ml) chromatographiert. Die Säule wird mit
0,1η Ammoniumhydroxydlösung bespült und das Eluat wird
in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Das gewünschte Produkt ist in den Röhren Nr. 10-100 enthalten, während das
Kanamycin A aus den sich langsamer bewegenden Fraktionen gewonnen und das (die) Positionsisomere(n) des Produkts
offensichtlich in den sich schneller bewegenden Fraktionen enthalten sind. Die Fraktionen 10-110 werden vereinigt
und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei 24,6 g (45 %)eines farblosen Produkts, 6-Carbobenzoxykanamycin
A (II) [6'-Cbz-Kanamycin A] erhält, das bei
204°C unter Verfärbung zu schmelzen beginnt und sich bei 212°C unter Gasentwicklung zersetzt.
[a]D +106° (c = 2, H2O).
- 21
6 (J 3 ö 2 4 / 0 Η 7 Ί
Rf-Wert
σ co οα ro
ro
TLC (DünnschichtChromatographie)
(Silikagel
Lösungsmittelsystem
n-PrOH-Pyridin-AcOH-HpO
(15:10:3:12)
Aceton-AcOH-KgO (20:6:74)
CKCl3-MeOH-CNK11OH-H2O
(1:4:2:1)
AcOMe-n-PrOH-c .NH2-OK
(45:105:60) 6'-Cbz-Kanamycin A
0,42* 0,33** 0,15**
0,76
0,22
Kanamycin A
0,04
0,14
0,50
0,50
0,04* *
hauptsächlich weniger
entdeckt durch Anthron-Schwefelsäure
(JH CD
%1
Durch Dünnschichtchroraatographie (TLC) mit einem der untersuchten
Lösungsmittelsysteme stellt man fest, daß das Endprodukt von zwei geringeren Komponenten begleitet ist.
Jedoch wird das Endprodukt zur Herstellung von Verbindung II ohne weitere Reinigung verwendet.
5. Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure aus
Ambutyrosin A oder B oder Mischungen davon.
Ambutyrosin A (5,0 g) [US-PS 3 541 078, erteilt am
17. November 1970] wird mit I60 ml 0,5n Natriumhydroxyd
1 Std. am Rückfluß gehalten. Man neutralisiert das Hydrolysat mit 6n HCl und chromatographiert auf einer
Säule mit CG-50 (NH»+ Typ)· Man isoliert die gewünschte
L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure, indem man die Säule
mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknen entfernt. Die L-(-)-Y-Ainino-a-hydr oxy buttersäure
ist als kristallines Material mit einem Schmelzpunkt von 212,5 bis 214,5°C [Spalte 2, Zeilen 31-38,
US-PS 3 541 078] charakterisiert.
6. Herstellung von 6'-Carbobenzoxykanamycin B.
Zu einer gekühlten Lösung von 8,1 g (0,0168 Mol) Kanamycin B in 120 ml Wasser und 80 ml 1,2-Dimethoxyäthan
gibt man tropfenweise unter Rühren eine Lösung von 4,2 g (0,0168 Mol) N-iBenzyloxycarbonyloxyJ-succinimid in 40 ml
1,2-Dimethoxyäthan zu. Man rührt die Reaktionsmischung über Nacht und dampft unter vermindertem Druck ein. Der
Rückstand wird in 100 ml Wasser gelöst und zweimal mit 50 ml Wasser-gesättigtem n-Butanol geschüttelt. Die
wäßrige Schicht wird abgetrennt und auf einer Säule mit 100 ml CG-50 (NH^+ Typ) adsorbiert. Man wäscht die Säule
mit 200 ml Wasser, eluiert mit 0,05n NH^OH. Das Eluat
wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 121 bis 180 werden gesammelt, eingedampft und gefriergetrock-
- 23 609824/0971
net, wobei man 1,58 g (15 %) des gewünschten Produkts erhält.
Die Fraktionen 1 bis 120 werden eingedampft und nochmals auf CG-50 (NEL+) chroraatographiert, wobei man
1,21 g (12 %)aes Produkts erhält. Schmelzpunkt = 151
bis 152°C (Zersetzung).
[a]D24 +104° (c = 2,5, H3O).^ c=0 I7IO cm"1.
Analyse c 26Hi)3N5°12:
C | 7 | H | |
50 | ,56 | 7 | ,0? |
50 | ,71 | ,3« | |
bor. :
11, Ί8 %
TLC (Dünnschichtchromatographie) (Silikagel F254)f
Rf 0,03 in n-PrOH-Pyridin-AcOH-HgO (15:10:3:12);
Rf 0,16 in Aceton-AcOH-HgO (20:6:7*0.
7. Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure aus
DL-re-Hydroxy-y-phthalimidobuttersäure
A) Dehydroabietylammonium-L-a-hydroxy-Y-phthalimidobutyrat:
Zu einer Lösung von 25 g (0,1 Mol)a-Hydroxy-γ-phthalimidobuttersäure***
in 200 ml Äthanol gibt man eine Lösung von 29 g (0,1 Mol) Dehydroabietylamin in
130 ml Äthanol. Man schüttelt die Lösung 1 Min. heftig
und läßt 5 Std. bei Raumtemperatur stehen; während dieser Zeit kristallisieren feine Nadeln aus. Man sammelt
die Kristalle durch Filtrieren, wäscht mit 50 ml Äthanol und trocknet an der Luft, wobei man 30,1 g (56 %) eines
Diastereomeren des Dehydroabiethylaminsalzes erhält.
Schmelzpunkt = 93 bis 940C.
Ca]^4 + 15° (c = 2,5; MeOH).
Umkristallisation aus 300 ml Äthanol ergibt 23,2 g (43 %)
- 24 -609824/0971 '
Λ* '
reines Produkt mit Schmelzpunkt 94 bis 95°C.
|>]p4 +10,8° (c = 2,5; MeOH).
Weitere Itokristallisation ändert weder den Schmelzpunkt
noch die spezifische Drehung.
Analyse C32H^2N2O-H2O:
C | 8 | H | 5 | N | |
ber. : | 69,5^ | 8 | ,02 | 5 | ,07 % |
Kef. : | 69,58 | ,08 | ,07 % | ||
B) L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure: Zu einer Lösung
von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser gibt man 5,3 g (0,01 Mol) Dehydroabiethylammonium-L-o:-
hydroxy-Y-phthalimidobutyrat und 60 ml Äther. Man
schüttelt die Mischung heftig, bis sich der gesamte Peststoff gelöst hat. Die Ätherschicht wird abgetrennt.
Die wäßrige Lösung wird zweimal mit 20 ml-Portionen Äther gewaschen und unter vermindertem Druck
auf 15 ml eingedampft. Zum Konzentrat gibt man 10 ml konz. Chlorwasserstoffsäure und hält die Mischung
10 Std. am Rückfluß. Nach dem Kühlen wird abgeschiedene Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wird
unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung wird zur
Trockene eingedampft. Diese Operation wird zweimal wiederholt, um überschüssige Chlorwasserstoffsäure zu entfernen.
Den verbliebenen Sirup löst man in 10 ml Wasser und filtriert, um eine kleine Menge unlösliche Phthalsäure
zu entfernen. Das Filtrat wird auf einer Säule mit IR-120 (H+, 1 cm χ 35 cm) adsorbiert, die Säule wird mit
300 ml V/asser gewaschen und mit 1n Ammoniumhydroxydlösung eluiert. Man vereinigt die Ninhydrin-positiven
Fraktionen 10 bis 16 und dampft unter vermindertem Druck
ein, wobei man einen Sirup erhält, der allmählich kri-
- 25 609824/0971
stallisiert. Die Kristalle werden mit Äthanol verrieben, filtriert \and in einem Vakuumexsiccator getrocknet, wobei
man 0,78 g (66 %) L-(-)-Y-Amino-oc-hydroxybuttersäure
mit Schmelzpunkt 206 bis 207°C erhält.
[αξ4 -29° (c = 2,55 H2O).
Das IR-Spektrum ist identisch mit dem der authentischen
Probe, die aus Ambutyrosin erhalten wurde.
8. Herstellung von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure
XX
L-ß-Amino-oc-hydroxypropionsäure* (8,2 g; 0,078 Mol) wird
in einer Lösung von 6,56 g (0,0164 Mol) Natriumhydroxyd und in 60 ml Wasser gelöst. Zur gerührten Lösung gibt
man tropfenweise 14,7 g (0,086 Mol) Carbobenzoxychlorid unterhalb 5°C zu. Die Mischung wird 1 Std. bei Raumtemperatur
gerührt, mit 60 ml Äther gewaschen und mit verdünnter HCl auf pH 2 eingestellt. Man sammelt den
Niederschlag durch Filtrieren, wäscht mit Wasser und trocknet an der Luft, wobei man 9,65 g (52 %) Verbindung
XX erhält. Das Filtrat wird mit fünf 100 ml-Portio- nen Äther extrahiert. Die Ätherlösung wird mit Wasser gewaschen,
über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wobei man 'zusatz 1 i ehe 2,0 g (11 %) Verbindung XX
erhält. Insgesamt 11,65 g Verbindung VI werden aus 500 ml Benzol/Äthylacetat (4:1) kristallisiert, wobei man 9,36 g
(50 %) reine Verbindung XX mit Schmelzpunkt 128,5 bis 129,5°C erhält.
Infrarot (IR) (KBr) :>J 17^5, 1690 cm"1. "
r ι25
L<*JD +2,9° (c 5,0; MeOH).
*K. Freudenberg, Ber., 47, 2027 (1914)
- 26 -
609824/097 1
Kernmagnetische Resonanz3pektren [NMR (DMSO-d,-)]:<f (in ppm)
3,05 - 3,^5 (2H, m, CIi2N), if,05 (IH, d-d, -0-CH-CO-),
5,03 (2H, s, CH2Ar), 7,18 (IH, breit, NII), 7,36 (5H, s,
Ring H).
Analyse C11H15NO5:
C H N
ber.: 55,23 5,13 5,86 %
: 55,34 5,2f9 5,87 %
9. N-Hydroxysuccinimidester von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure XXI
Zu einer gekühlten und gerührten Lösung von 478 mg (2 mMol) Verbindung XX und 230 mg (2 mMol) N-Hydroxysuccinimid
in 10 ml Tetrahydrofuran (TIIF) gibt man 412 mg (2 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid. Die Mischung
wird 1 Std. bei 0 bis 5°C und 2 Std. bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert, um den N,N'-Dicyclohexylharnstoff
zu entfernen. Das Filtrat, welches das Titelprodukt enthält, wird ohne Isolierung für die
nachfolgende Reaktion verwendet.
10. Herstellung von L-cf-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvalerionsäuro
XXII
Zu einer gerührten Lösung von 400 mg (3,0 mMol) L-cT-Amino-a-hydroxyvaleriansäure*
und 250 mg (6,5 mMol) Natriumhydroxyd in 25 ml Wasser gibt man tropfenweise 580 mg (3,3 mMol) Carbobenzoxychlorid im Verlauf von
30 Min. bei 0 bis 50C. zu. Die Mischung wird 1 Std. bei
5 bis 15°C gerührt, mit 25 ml Äther gewaschen, mit Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und mit drei
* S. Ohshiro et al., Yakugaku Zasshi, 87, 1184 (1967)
- 27 -
609824/0 971
M/16 305
30 ml-Portionen Äther extrahiert. Man schüttelt die vereinigte Ätherlösung mit 10 ml einer gesättigten Natriumchloridlösung,
trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat und dampft im Vakuum ein, wobei man Kristalle erhält,
die aus Benzol umkristallisiert werden, wobei man 631 mg (78 %) Verbindung XXII mit Schmelzpunkt 110 bis
111°C erhält;
Infrarotspektrum [IR (KBr)]: 3^60, 3350, 1725, 1685,
1535, 1280, 730, 690 cm"1.
Kernmagnetisches Resonanzspektrum [NMR (Aceton-dg) ]:
cf (in ppm) 1,70 ('IiI, m), H3Vl (2Ii, q, J = 4,5 Hz), '1,19
(Hi, m), 4,82 (211, s), 6,2 (3H, breit), 725 (5H, s).
[α]25 +1,6 (£ 10; MeOH).
Analyse C13H17NO5: C H iJ
bor. : 5Π,^!? G Hl c; ?'l %
ί',οΓ.: 5o,36 . 6^0 r/,27 %
11. N-Hydroxysuccinimidester von L-cT-Benzyloxycarbonylaminoq-hydroxyvaleriansäure XXIII
Zu einer gerührten und gekühlten Lösung von 535 mg (2,0
mMol) Verbindung XXII und 230 mg (2,0 mMol) N-Hydroxysuccinimid
in 55 ml Äthylacetat gibt man 412 mg (2,0 mMol) NjN'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC). Die Mischung
wird 3 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um ausgefallenen Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen.
Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft, wobei man 780 mg (100 %) viskosen Sirup XXIII erhält.
IR (gut): ^ 1810, 1785, 1725 cm"1.
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Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen.
o'-N-Methylkanamycin A (BB-K 25) nach Methode A
1. Zu einer Suspension von 610 mg LiAlKL in 10 ml trockenem Dioxan gibt man tropfenweise bei 70 C eine Suspension
von 618 mg 6'-N-Carbobenzoxykanamycin A (6'-N-Cbz-Kanamycin
A) in 30 ml trockenem Dioxan. Die Mischung wird 20 Std. bei 700C gerührt und dann auf -5 bis O0C
gekühlt. Zur Reaktionsmischung gibt man vorsichtig ungefähr 20 ml kaltes Wasser. Nach beendeter Zugabe
neutralisiert man die Mischung mit 2n HCl und dampft unter vermindertem Druck zur Trockene ein. Der Rückstand
wird mit einer großen Menge EtOH gewaschen, wobei man 536 mg des Rohprodukts erhält, das in einer
kleinen Menge Wasser gelöst und auf einer Säule mit CG-50 Ionenaustauscherharz (NH^+ Typ; 20 ml) chromatographiert
wird. Die Säule wird mit Wasser, 1 Ltr. 0,1 η NH^OH, 600 ml 0,2n NH^OH und schließlich 500 ml 0,5n
NH.OH bespült. Man sammelt 10 ml-Fraktionen und unterwirft
sie dem Ninhydrinr.pottcst, dem Gcheibenter.t
(B. ßubtilis PCI 219) und TLC (Dünnschichtchromatoßraphie) auf einer Silikagelplatte; Lösungsmittelsystem,
S-110 (CHCl3-MeOH-28 % NH4OH-H2O = 1:4:2:1). Die Fraktionen,
welche nach TLC einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven Spot bei Rf 0,50 ergeben, werden vereinigt
und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, wobei man 137 mg (27 %) BB-K 25, mit Schmelzpunkt 183
bis 187°C (Zersetzung) erhält.
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NIiR(D2O): cT (ppm), 2,51 (3 H,.s, 6'-N-CH3), 4,95 (HI, d,
H Hz, 1"-H), 5,01 (HI, d, 3 Hz, l'-H).
Analyse C19 1I38N)1O11 -H2CO3:
C II M
ber.: 12,85 7,19 9,99 .%
gef.: '12,97 7,27 9,63 %
2. Zu einer Suspension von 8,8 g LiAlH^ in 100 ml trockenem
Dioxan gibt man eine Suspension von 9,0 g ö'-N-Cbz-Kanamycin
A in 200 ml trockenem Dioxan und rührt die Reaktionsmischung 4 Tage bei 8O0C. Man kühlt die Reaktionsmischung
auf 1O°C, behandelt vorsichtig mit 200 ml Wasser und filtriert, um unlösliches Material zu entfernen.
Das Filtrat wird mit η HCl neutralisiert und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mehrmals mit
EtOH gewaschen und in einer kleinen Menge Wasser gelöst. Die wäßrige Lösung wird auf einer Säule mit CG-50
(NH^+; 200 ml) chromatographiert, die mit 100 ml Wasser
gewaschen und nacheinander mit 2,0 Ltr. 0,1 η ΝΗλΟΗ
und 1,5 Ltr. 0,2n NH^OH eluiert wird. Das Eluat wird
in 20 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 119 bis
144 zeigen beim Dünnschichtchromatogramm (Silikagelplatte;
CHCl5-MeOH-28 % NH^OH-H2O =» 1:4:2:1) einen bioaktiven
und Ninhydrin-positiven Spot bei Rf 0,45. Sie werden vereinigt,unter vermindertem Druck konzentriert
und schließlich lyophilisiert, wobei man 1,139 g (16 %) BB-K 25 erhält, das mit dem gemäß Methode A-(1) hergestellten
Produkt identisch ist.
- 30 -
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6'-N-Methylkanamycin A (BB-K 25) nach Methode B
Zu einer gerührten Suspension von 618 mg (1 mMol) 6f-N-Cbz-Kanamycin
in 30 ml trockenem Pyridin gibt man 7 ml Trimethylchlorsilan und 14 ml Hexamethyldisilazan bei
70 C zu. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei derselben Temperatur gerührt und im Vakuum eingedampft. Den
Rückstand behandelt man mit trockenem Tetrahydrofuran (THF). Das unlösliche Material wird filtriert und mit
trockenem THF gewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeiten werden vereinigt und im Vakuum eingedampft,
wobei man 1,567 g des trimethylsilylierten Produkts erhält, das in 30 ml trockenem THF gelöst wird.
Man gibt die Lösung zu einer Guspension von 758 mg Lithiumaluminiumhydrid in 70 ml trockenem THF. Die Mischung
wird 22 Std. unter Rühren am Rückfluß gehalten. Nach dem Abkühlen auf ungefähr 0°C behandelt man die
Reaktionsmischung vorsichtig mit 20 ml Eiswasser und filtriert, um unlösliches Material zu entfernen. Das
Filtrat wird mit 6n HCl neutralisiert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Den Rückstand wäscht man mehrmals
mit Äthanol, löst in einer kleinen Menge Wasser und chromatographiert auf einer Säule mit CG-50 (NH.+; 50 ml).
Die Säule wird mit 50 ml Wasser gewaschen und hintereinander mit 1 Ltr. 0,1η NH OH und 600 ml 0,2n NH^OH eluiert.
Das Eluat wird in 20 ml-Fraktionen gesammelt und wie in
Methode A-(1) beschrieben überwacht. Die Fraktionen 47 bis 72, die einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven Spot
bei Rf 0,50 gemäß TLC ergeben, werden vereinigt, unter vermindertem Druck eingedampft und lyophilisiert, wobei
man 258 mg (52 % aus 6·-Cbz-Kanamycin A) BB-K 25 mit
Schmelzpunkt 183 bis 187°C erhält.
- 31 -
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.■3*.
1-N-(L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl)-6l-N-methyl-kanamycin A
(BB-K 28)
Zu einer Lösung von 750 mg 6'-N-Methyl-kanamycin A (B3-K 25)
in 30 ml 60 ^igem wäßrigem TIiF gibt man 525 mg N-Hydroxysuccinimidester
von N-Cbz-L-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure. Man hydriert die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur über Nacht filter atmosphärischem Druck in Gegenwart von 500 mg 10 tigern
Palladium-auf-Aktivkohle. Die Reaktionsmischung wird
filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Den Rückstand löst man in einer kleinen Menge Wasser und
adsorbiert an einer Säule mit CG-50 (NH4 +; 70 ml). Die
Säule wird mit Wasser gewaschen und nacheinander mit 850 ml 0,1 η Ammoniak (Röhren Nr. 1 bis 43 wurden in 20 ml-Fraktionen
gesammelt), 1450 ml 0,2n Ammoniak (Röhren Nr. 44 bis 115 in 20 ml-Fraktion) und schließlich 100 ml 0,5n Ammoniak
(Röhren Nr. 116 bis 215 in 10 ml-Fraktion) bespült. Die
Fraktionen 152 bis 161, die einen bioaktiven und Ninhydrinpositiven Spot bei Rf 0,17 gemäß TLC (Silikagel;
CHCl3-CH30H-28 % NH4OH-H2O = 1:4:2:1) zeigen, werden vereinigt,
unter vermindertem Druck eingedampft und lyophilisiert, wobei man 149 mg (16 %) BB-K 28 mit Schmelzpunkt
187 bis 189°C (Zersetzung) erhält.
Infrarot [IR(KBr)]: ^ if.',0 cm"1.
NMR (D2O): 2,70 ppm (3II, s, W-CII,).
Analyse CO,H.. -N-O1, · 2H_C0_.. 2H„0:
ber.: | 39 | ,52 | 7 | ,03 |
gef.: | 39 | ,26 | 6 | ,6? |
39 | ,00 | 6 | , 5^ |
9,23 %
9,C9 % 9,20 %
Um eine Spur Isomeres des Typs BB-K 11 (3"-N-acyliertes
Isomeres) zu entfernen, unterwirft man das BB-K 28 einer
- 32 -
6 098 2 A/0971
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Säulenchromatographie mit einem Tetraminkupfer (TACu)-Typ
von Amberlite CG-50 Ionenaustauscherharz. Man löst BB-K 28 (73 mg) in einer kleinen Menge Wasser und chromatographiert
auf einer Säule mit CG-50 (TACu-Typ; 3 ml). Die Säule wird mit 20 ml Wasser gewaschen und dann mit
100 ml 0,2n NH^OH und schließlich mit 100 ml 1,0n NH^OH
eluiert. Man sammelt das Eluat in 7 ml-Fraktionen und
überwacht mit dem Ninhydrin-Spottest, dem Scheibentest
(B. subtillis PCI 219 und Pseudomonas aeruginosa) und TLC auf Silikagel (S-110; Ninhydrin). Die Fraktionen 21
bis 24 zeigen einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven (gegen den P. aeruginosa-Stamm) Spot bei Rf 0,2. Sie werden
vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 30 mg blaues Pulver erhält. Der blaugefärbte Rückstand (30 mg)
wird in einer kleinen Menge Wasser gelöst und auf einer Säule mit CG-50 (NH^+; 3 ml) adsorbiert, die mit 20 ml
0,2n NH^OH und 200 ml 0,5n NH^OH bespült wird. Man sammelt
das Eluat in 7 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 19 bis 23, die einen positiven Ninhydrintest zeigen, werden vereinigt,
im Vakuum eingedampft und gefriergetrocknet, wobei man 20 mg reines BB-K 28 mit Schmelzpunkt 187 bis 1890C (Zersetzung)
erhält.
1-N-[L-(-)-ß-Amino-rc-hydroxypropionyl]-6'-N-methyl-kanamycin
A (BB-K 162).
Eine Mischung von 218 mg (0,912 mMol) N-Cbz-L-Isoserin,
163 mg (0,912 mMol) N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid
(HONB) und 188 mg (0,912 mMol) DCC (Dicyclonexylcarbodiimid)
in 10 ml THF wird bei 5°C über Nacht stehen gelassen und dann filtriert. Nachdem das Filtrat zu einer Lösung
von 441 mg (0,892 mMol) 6'-N-Methyl-kanamycin A in 20 ml
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50 %igem wäßrigem THF zugegeben ist, rührt man die Mischung
5 Std. bei Raumtemperatur und konzentriert unter vermindertem
Druck auf ungefähr 2 ml. Das Konzentrat wird auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH4 +; 26 ml) adsorbiert, die mit
40 ml Wasser gewaschen und mit 500 ml 0,1 η NH4OH eluiert
wird. Man sammelt das Eluat in 10 ml-Fraktionen. Die Fraktionen
11 bis 16 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 231 mg des N-acylierten Produkts erhält. Aus dem
0,3n NH4OH-ElUat sammelt man 175 mg (40 %) des Ausgangsmaterials,
BB-K 25.
Zu einer Lösung des Acylderivats in 20 ml 50 %igem wäßrigem
EtOH gibt man 130 mg 10 % Pd-auf-Aktivkohle und hydriert
die Mischung unter Normaldruck bei Raumtemperatur. Man filtriert den Katalysator ab und dampft das FiItrat ein,
um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die erhaltene
wäßrige Lösung wird einer Säulenchromatographie auf CG-50 (NH4 +; 25 ml) unterworfen. Man eluiert die Säule
nacheinander mit 40 ml Wasser, 240 ml 0,1 η NH4OH, 500 ml
0,2n NH4OH, 300 ml 0,4η NH4OH und sammelt das Eluat in
10 ml-Fraktionen. Die bioaktiven Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 127 mg des
Rohprodukts erhält, das auf einer Säule mit CG-50 (Tetraminkupfer-Typ; 4 ml) nochmals chromato graphie rt und
mit 200 ml 0,3n NH4OH, 300 ml 0,5n NH4OH und schließlich
mit 300 ml 1n NH4OH eluiert wird. Man sammelt das Eluat
in 10 ml-Fraktionen.
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Menge Rf Bemerkungen
Röhre Nr. | Eluiermittel | 3n | NH4OH |
4 | o, | 5n | NH4OH |
19-24 | o, | On | NH4OH |
50-54 |
27 mg 0,33 inaktiv
38 mg 0,33 wänrscheinlich ein
Positionsisomeres
35 mg 0,37 das gewünschte Pro
dukt,BB-Ki 52
Die Röhren Nr. 50 bis 54 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei man 35 mg (6,8 %) des gewünschten bioaktiven
Produkts, BB-K 162 mit Schmelzpunkt 178 bis 1850C
(Zersetzung) erhält.
1630 cm-1.
Beispiel 5
1 -N-[L- (-) -<f- Amino- α-hydroxyvaleryl ]-6' -N-me thyl-kanamyein A (BB-K 163)
Eine Mischung von 94 mg (0,353 mMol) N-Cbz-L-y-Amino-ahydroxyvaleriansäure,
64,5 mg (0,353 mMol) HONB und 74,5 mg (0,353 mMol) DCC in 5 ml trockenem THF wird über Nacht bei
4°C stehengelassen und filtriert. Das Filtrat gibt man zu einer Lösung von 175 mg (0,351 mMol) ö'-N-Methyl-kanamycin A
in 10 ml 50 tigern wäßrigem THF und rührt die Mischung bei Raumtemperatur 5 Std. lang. Die Reaktionsmischung wird bei
Raumtemperatur in Gegenwart von 70 mg 10 %igem Palladiumauf-Aktivkohle
hydriert. Man filtriert den Katalysator ab, und dampft das Filtrat ein, um das THF zu entfernen. Das erhaltene
wäßrige Konzentrat wird auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH4 +-TyP; 20 ml) chromatographiert und
nacheinander mit Wasser (50 ml), 0,1n NH4OH (250 ml), 0,2n
NH4OH (450 ml) und 0,5n NH4OH (400 ml) eluiert. Das Eluat
wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Die bioaktiven Frak-
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tionen v/erden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei
man 40 mg Rohprodukt erhält, das auf einer Säule mit CG-50 (Tetraminkupfer-Typ; 1,5 ml) nochmals chromatographiert und
mit 10 ml Wasser und 100 ml 0,5η ΝΗλΟΗ eluiert wird. Man
sammelt das Eluat in 5 .ml-Fraktionen.
Röhre Nr. Eluiermittel Menge
7-8
9
0,5η ΝΗ^ΟΗ 0,5η ΝΗ,ΟΗ
Rf
5 mg 0,21
Bemerkungen
inaktiv
9 mg 0,21, 0,29 eine Mischung aus
zwei Komponenten
10-14 0,5n NH4OH 24 mg 0,29
das gewünschte Produkt BB-K 163
Die Röhren Nr. 10 bis 14 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei man 24 mg (11 %) des gewünschten bioaktiven
Produkts, BB-K 163 mit Schmelzpunkt 167 bis 174°C (Zersetzung) erhält.
KBr· 1620 cm"1. C=O
Beispiel 6 6'-N-Methyl-kanamycin B, BB-K 140
Zu einer Suspension von 2,0 g (3,25 mMol) 6'-N-Cbz-Kanamycin
B in 100 ml trockenem Pyridin gibt man 20 ml Trimethylsilylchlorid und 50 ml Hexamethyldisilazan bei 700C
unter Rühren zu und rührt die Mischung bei derselben Temperatur über Nacht. Der Niederschlag wird durch Filtrieren
entfernt und mit trockenem THF gewaschen. Das Filtrat wird mit den Waschflüssigkeiten vereinigt und zur Trockene einge-
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dampft. Den öligen Rückstand löst man in 80 ml trockenem TIIF, Die Lösung wird tropfenweise zu einer gerührten Suspension
von 4,4 g Lithiumaluminiumhydrid in 200 ml trockenem THF zugegeben und die Mischung wird über Nacht unter Rückfluß
erhitzt. Nach dem Kühlen behandelt man die Reaktionsmischung vorsichtig mit Eiswasser, stellt mit 2n HCl auf pH 7
ein und dampft unter vermindertem Druck zur Trockene ein. Nach dem gründlichen Waschen mit Äthanol löst man den Rückstand
(2,7 g) in 5 ml Wasser und chromatographiert auf einer
Säule mit Amberlite CG-50 (NIL+; 40 ml). Die Säule wird mit
300 ml Wasser gewaschen und mit 0,1n Ammoniak eluiert. Das Eluat sammelt man mit 10 ml-Fraktionen und überwacht mit
Ninhydrinspottest, Scheibentest (B. subtilis PCI 219) und TLC (Silikagelplatte, CHCl^-CH^OH-28 % NH^OH-H2O =
1:4:2:1). Die Fraktionen 70 bis 134, die einen Ninhydrinpositiven und bioaktiven Spot bei Rf 0,47 nach TLC zeigen,
werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man 889 mg (55 %) BB-K 140 mit Schmelzpunkt 177 Ms
1810C (Zersetzung) erhält.
NMR (D2O): 2,74 ppm (3H, s, N-CH ).
Analyse ciqH,qN 0 -H CO :
C H · N
ber.: 42,93 7,39 12,52 % gef.: 42,93 7,13 11,86 %
1-N-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-kanamycin B
(BB-K 142)
Eine Mischung von 253 mg (1 mMol) N-CBz-L-y-Amino-a-hydroxybuttersäure,
115 mg (1 mMol) N-Hydroxysuceinimid (HOSu) und 206 mg (1 mMol) DCC wird 3 Std. bei 5°C gerührt und
filtriert, um den Niederschlag zu entfernen, der sich während
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der Reaktion abgeschieden hat. Die erhaltene aktive Esterlösung
wird zu einer Lösung von 497 mg (1 mMol) 6'-N-Methyl-kanamycin
B (BB-K 140) in 10 ml Wasser zugegeben und die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.
Man filtriert die Reaktionsmischung und dampft im Vakuum ein. Den Rückstand löst man in 5 ml Wasser und adsorbiert
an einer Säule mit CG-50 Ionenaustauscherharz
(NH^+-TVp; 45 ml), die nacheinander mit 200 ml Wasser,
1500 ml 0,05n Ammoniak und 500 ml 0,3n Ammoniak eluiert wird. Das Eluat sammelt man in 10 ml-Fraktionen. Das gewünschte
Zwischenprodukt-Derivat ist in den Fraktionen bis 72 enthalten, die mit 0,05n Ammoniak eluiert wenden,
während 163 mg (33 %) BB-K 140 aus den mit 0,3n Ammoniak
eluierten Fraktionen gewonnen werden.
Eine Lösung des Zwischenprodukt-Derivats in 20 ml 50 %igem
THF wird über Nacht unter Normaldruck in Gegenwart von 30 mg 10 % Palladium-auf-Aktivkohle hydriert. Die Reaktionsmischung
wird filtriert und auf ungefähr 4 ml konzentriert. Man adsorbiert das Konzentrat auf einer Säule
mit Amberlite CG-50 (NH4 +-TyP; 10 ml), die mit I50 ml
Wasser gewaschen und hintereinander mit 350 ml 0,05n NH4OH,
300 ml 0,1 η NH4OH, 150 ml 0,3n NH4OH und 300 ml 0,5n NH4OH
eluiert wird. Man sammelt das Eluat in 15 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 67 und 68, die einen bioaktiven Spot bei ■
Rf 0,22 gemäß TLC (Silikagelplatte; CHCl5-CH3OH^S % NH4OH-HpO
= 1:4:2:1) aufweisen, werden vereinigt und auf einer Säule mit CG-50 (unterer Teil NH4 +-TyP 1 ml; oberer Teil
Tetraminkupfer-Typ 2 ml) nochmals chromatographiert. Man
eluiert die Säule mit 100 ml 0,5n NH4OH und dann mit 50 ml
1,On NH4OH und sammelt das Eluat in 5 ml-Fraktionen. Die
Fraktionen 15 bis 33 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft,
wobei man 29,4 mg (5 %) des gewünschten bioaktiven Produkts, BB-K 142 mit Schmelzpunkt 188 bis 192°C (Zersetzung)
erhält.
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IR(KBr):
Analyse
Analyse
C | 6, | H | 11 | N | |
ber.: | 41,55 | 6, | 97 | 10 | ,63 % |
gef.: | 41,52 | 72 | ,95 % | ||
Man erhitzt eine kleine Probe BB-K 142 auf 100°C 1 Std. lang in 0,5n NaOH, wobei man o'-N-lfethyl-kanamycin B und L-HABA
erhält; dies wird durch TLC (Dlinns chichtchr oma to gr aphie) bestätigt.
Beispiel 8
1 -N- [L-(-) -ß-Amino-oc-hydroxypropionyl ]-6f -N-methylkanamycin
B (BB-K 148)
Eine gerührte Mischung von 12.0 mg (0,5 mMol) N-Cbz-L-Isoserin,
58 mg (0,5 mMol) HOSu und 103 mg (0,5 mMol) DCC in 5 ml THF wird bei 5°C über Nacht stehengelassen.
Nachdem die Mischung filtriert wurde, gibt man das Filtrat zu einer Lösung von 248 mg (0,5 mMol) BB-K 140 in 5 ml
"Wasser und rührt über Nacht. Nach dem Entfernen des THF wird die wäßrige Lösung auf einer Säule mit Amberlite
CG-50 (NH^+-TVp; 10 ml) adsorbiert. Das Eluieren wird mit
300 ml 0,5n NH^OH, gefolgt von 300 ml 0,1 η NH^OH durchgeführt,
und man sammelt 10 ml-Fraktionen. Das gewünschte Zwischenprodukt-Derivat (68 mg) wird durch Eindampfen der
Fraktionen 18 bis 31 erhalten, die mit 0,05n NH^OH erhalten
werden, während man 69 mg (28 %)BB-K 140 aus den mit 0,1η Ammoniak eluierten Fraktionen gewinnt.
Eine Lösung des Zwischenprodukt-Derivats in 10 ml Wasser wird über Nacht in Gegenwart von 20 mg 10 % Pd-C hydriert
und die Reaktionsmischung wird filtriert und auf ungefähr
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5 ml konzentriert. Man chromatographiert das Konzentrat auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH^+; 8 ml) und
eluiert nacheinander mit 280 ml 0,05η ΝΗλΟΗ, 340 ml 0,1 η
NH^OH und 200 ml 0,2n NH^OH. Die gewünschte bioaktive
Komponente (35 mg) erhält man aus den mit 0,2n NHiOH eluierten Fraktionen. Das Produkt zeigt noch immer 2 bis 3 Ninhydrin-positive
Spots und wird durch nochmaliges Chromatographieren auf einer Säule mit CG-50 (unterer Teil NH^+-Typ
1 ml; oberer Teil Tetraminkupfer-Typ 2 ml)gereinigt,die nacheinander
mit 60 ml 0,3n NHA0H, 110 ml 0,5n NH, OH und
100 ml 1,On NH^OH eluiert wird. Das gewünschte Produkt,
BB-K 148, wird aus den Fraktionen 40 bis 50 erhalten, die mit 0,1η ΝΗ^ΟΗ eluiert wurden.
Ausbeute 8,1 mg (3 %); Schmelzpunkt 190 bis 1.98°C (Zersetzung)
.
IR(KBr): Vc-O 163° 1
1-N-[L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl]-6'-N-methyl-kanamycin B
Ersetzt man in der Arbeitsweise des Beispiels 5· das dort verwendete 6'-N-Methyl-kanamycin A durch eine äquimolare
Menge an 6'-N-Methyl-kanamycin B, so erhalt man das Titelprodukt.
Amberlite CG-50 ist die Handelsbezeichnung für die chromatographische
Qualität eines schwach-sauren Kationenaustauscherharzes eines Carbonsäure-polymethacryltyps.
Die Cupra-ammoniumform von Amberlite CG-50 wird auf die folgende Weise hergestellt: Zu einer gerührten Suspension von
CG-50 (NH^+) in Wasser gibt man 10 %ige Kupfer-II-sulfatlö-
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sung, um das Kupfersalz von CG-50 zu erhalten, das filtriert wird. Man wäscht das Harz mehrmals mit Wasser und behandelt
dann unter Rühren mit 1n ΝΗλΟΗ, filtriert und wäscht mehrmals
mit Wasser, wobei man die tief-blaue, Cupra-ammoniumform von CG-50 erhält.
Beispiel 10
Herstellung des Mononulfatii.nl ze r. von 1-[ΐ,-(-)-γ-Απιάηο-ίϊ-hydroxybutyrylJ-6'-N-methyl-kanamycin
Λ oder B
Ein.Mol 1-[L-(-)-Y-Amino-ot-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin
A oder B werden in 1 bis 3 Ltr. Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um irgendwelche ungelöste Feststoffe
zu entfernen. Zur gekühlten und gerührten Lösung gibt man 1 Mol Schwefelsäure, gelöst in 500 ml Viasser.
Die Mischung wird 30 Min. rührengelassen, worauf man kaltes Äthanol zur Mischung zugibt, bis ein Niederschlag auftritt.
Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und man stellt fest, daß es sich um das gewünschte Monosulfatsalz
handelt.
Beispiel 11
Herstellung des Disulfatsalzes von 1-[L-(-)-ß-Amino-ahydroxypropionylj-e'-N-methyl-kanamycin A oder B
35 g 1-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-6'-N-methylkanamycin
A oder B werden in 125 ml entionisiertem Wasser gelöst. Man senkt den pH mit 50 % V/V Schwefelsäure auf
7 bis 7,5 ab.
8 1/2 g Darco G-60 (Aktivkohle) werden zugesetzt und die
Mischung wird bei Umgebungstemperatur 0,5 Std. aufge-
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schlämmt. Man entfernt die Kohle durch geeignetes Filtrieren und wäscht mit 40 ml Wasser. Die Wasserwäsche wird zum
Filtrat zugesetzt.
Das obige vereinigte Filtrat/Waschflüssigkeit wird mit 50 %
V/V Schwefelsäure auf pH 2 bis 2,6 eingestellt. Es entwickelt sich eine große Menge Kohlendioxid. Man läßt die
Lösung unter Rühren 20 Min. am Laborvakuum, um zusätzliches Kohlendioxid auszutreiben.
Zur entgasten Lösung gibt man 8 1/2 g Darco G-60. Die Mischung wird 0,5 Std. bei Umgebungstemperatur aufgeschlämmt.
Man entfernt die Kohle durch geeignetes Filtrieren und wäscht mit 35 ml entionisiertem Wasser. Die Waschflüssigkeit
wird zum Filtrat zugesetzt.
Das vereinigte FiItrat/V/aschflüssigkeit wird mit 50 % V/V
Schwefelsäure auf pH 1 bis 1,3 eingestellt. Diese Lösung gibt man unter schnellem Rühren im Verlauf von 10 Min. zu
600 bis 800 ml Methanol (3 bis 4 Volumina Methanol). Die
Mischung wird 5 Min. bei pH 1 bis 1,3 gerührt, durch ein Sieb mit einer Maschenweite von 0,148 mm (100 mesh) gegeben,
2 Min. gerührt und 5 Min. absitzen gelassen. Die
Hauptmenge der überstehenden Flüssigkeit wird dekantiert. Die verbleibende Aufschlämmung wird auf geeignete V/eise · filtriert, mit 200 ml Methanol gewaschen und 24 Std. bei 50°C im Vakuum getrocknet, wobei man das Titel-Disulfatsalz erhält.
Hauptmenge der überstehenden Flüssigkeit wird dekantiert. Die verbleibende Aufschlämmung wird auf geeignete V/eise · filtriert, mit 200 ml Methanol gewaschen und 24 Std. bei 50°C im Vakuum getrocknet, wobei man das Titel-Disulfatsalz erhält.
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6098 24/0971
Claims (1)
- PATENTANSPRÜCHEVerbindung der FormelNHIVworin R für -OH oder -NH2 steht und R die Bedeutungen L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-J-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon. ■Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R für -OH steht und R die Bedeutungen L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-/-Amino-ahydroxyvaleryl besitzt.Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R für -NHp steht und R die Bedeutungen ]>(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.- 43 -609824/0971M/16 3054. Verbindung gemäß Anr.pruch 2, worin R für -OH nteht und R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-u-hydroxybutyryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.5. Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R für -NH2 steht und R die Bedeutung L-(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.6. Verbindung gemäß Anspruch 2, worin R für -OH steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.7. Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R für -NHp steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.8. Verbindung gemäß Anspruch 2, worin R für -OH steht und R die Bedeutung L-(-)-cf-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.9. .Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R5 für -NH2 stehtund R die Bedeutung L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.10. Pharmazeutisches Mittel, bestehend aus einer antibakteriell wirksamen Menge einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 und einem Träger.11. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der FormelIV .60 9 824/0971M/16 305NH.NH-R(IV)worin R für L-(-)-Y-Amino-!«-hydroxybutyryi, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl. oder L-(-)-cf-AmAnq-re-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen -OH oder -NEU besitzt, dadurch, gekennzeichnet, daß man in aufeinanderfolgenden Stufen:A) die Verbindung der Formel IIH^NH-CH,•worin R für -OH oder -NH2 steht, mit einem Acylierungsmittel der Formel VIIOH 0 W-NH-(CH2)n-CH-S-M- 45 -(VII)609824/0971M/16 305• Η.■worin W einen Rest darstellt, der ausgewählt ist unter:O CH, OH '3IH2-O-C-, CH3-C-O-C-,CH.C— , X-CH0-C, oderO OI! Il-CHCHCM einen Rest bedeutet, der ausgewählt ist unter, -0-f V-NO, ,-0-f W-NOo iÖ.-0-NJ,und- 46 -609824/0971M/16 305-o-4 5worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 in einem Lösungsmittel, das ausgewählt ist unter einer Mischung aus Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran und Propylenglykoldimethyläther, acyllert, wobei man die Verbindung der Formel IIINHMH.IIINH-C=O HC-OHNHworin n, R und W die vorstehenden Bedeutungen besitzen, erhält; undB) die Blockierungsgruppe W aus Verbindung III nach an sich bekannten Methoden entfernt, wobei eine Verbindung der Formel IV gebildet wird.- 47 -609824/0971M/16 305 ^ ^12. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe A) mit einem Acylierungsmittel der FormelOH 0 W-NH-(CH2)n-CH - C-Mworin W einen Rest der Formeldarstellt und M füroder4 5steht, worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 Mol Acylierungsmittel zu ungefähr 1,1 Mol Verbindung VII in wäßrigem Tetrahydrofuran, durchführt.13. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 und 12, dadurch gekennzeichnet, daß man als Blockierungsgruppe ¥ einen Rest der Formel- 48 -82A/097tM/16 305wählt und diesen in Stufe B) durch Hydrieren entfernt.14. Verfahren gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators in einem aus Wasser bestehenden und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel bestehenden Lösungsmittelsystem durchführt.15. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 13 und 14, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium, Platin, Raney-Nickel, Rhodium, Ruthenium oder Nickel in einer Mischung aus Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimethyläther oder Propylenglykoldimethyläther, durchführt.16. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle in einem 1:1 Wasner/Dioxan-Lönungsmittelsystem und in Gegenwart einer katalytischen Menge Eisessig durchführt.17. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV- 49 -609824/097M/16 305NH.NH-R(IV)worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-cT-Amino-α-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen -OH oder -NH2 besitzt, dadurch gekennzeichnet, daß man in aufeinanderfolgenden Stufen:A) die Verbindung der Formel II mit einem Acylierungsmittel der FormelΗ,-Ö-C-NH-OH OoderΗ,-O-C-NH-ieH,) -C-C- Ο —H ..worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem wäßrigen Tetrahydrofuran- oder wäßrigen Dimethylformamid- Aceton- Lösungsmittelsystem bei unge-- 50 -60 9 824/0971M/16 305fähr Raumtemperatur acyliert, wobei die Verbindung der Formel IIINH.NH-C-OHC-OH IXIZNHI Ogebildet wird, worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt; undB) die Verbindung III in wäßrigem Tetrahydrofuran in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle bei ungefähr atmosphärischem Druck hydriert, wobei die Verbindung IV gebildet wird.18. Verfahren gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß man das Acylierungsmittel der Stufe A) in situ durch Vermischen einer Verbindung der Formel609824/0971M/16 305 - .< Γ2 -S OH OT lHn-O-C-NH- (CH, ) -C—C —OH 2 α ηmit äquimolaren Mengen N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid und Dicyclohexylcarbodiimid, erzeugt.19. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß R für OH steht und R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypr op ionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.20. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-Y-Amino-orhydroxybutyryl steht und R"* die Bedeutung OH besitzt.21. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-ß-Amino-αχhydroxypropionyl steht und R^ die Bedeutung OH besitzt.22. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, da- ;durch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-J-Amino-rr-•5
hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutung OH besitzt.23. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß R für NHp steht und R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(r)-ß-Amino-oc-hydroxypropionyl oder L-(-)-</-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.609824/0971M/16 30524. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß Ir für NH2 steht und R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-<r-hydroxybutyryl besitzt.25. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß R^ für NEU steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt.26. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß R für NH2 steht und R die Bedeutung L-(-)-cT-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt.- 53 -609824/0971
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