DE2555405A1

DE2555405A1 - Antibakterielle mittel

Info

Publication number: DE2555405A1
Application number: DE19752555405
Authority: DE
Inventors: Takayuki Naito; Susumu Nakagawa; Yukio Narita; Soichiro Toda
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1974-12-09
Filing date: 1975-12-09
Publication date: 1976-06-10
Also published as: GB1535215A; DK551075A; SE7513804L; HU175575B; YU306475A; NL7514322A; LU73957A1; CS191168B2; CA1052780A; CH621558A5; SE435513B; DK149775B; FR2293941B1; ZA757652B; BE836292A; FR2293941A1; SU581873A3; JPS51105036A; IE42179B1; AU8688275A

Description

patentanwKlte

PROF. DR. DR. J. REI TSTÖTTHR DR.-ING. WOLFRAM BUNTE DR. WERNER KINZEBACH 2555405

O βΟΟΟ MÜNCHEN 4O. BAUERSTRASSE 22 ■ FERNRUF ιΟββι 37 OS 83 - TELEX B21B2O8 ISAR D !»OSTANSCHRIFT. D - βΟΟΟ MÜNCHEN 43. POSTFACH 7βΟ

München, den 9. Dezember I975

BRISTOL-MYERS COMPANY

345 Park Avenue New York, N.Y.10022

Antibakterielle Mittel

Die Erfindung betrifft halbsynthetische Derivate des Kanamycin A und B, wobei diese Verbindungen als 1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionylj-ö'-N-methylkanamycin A oder B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin A oder B und 1-N-[L-(-)-<f-Amino-a-hydroxyvaleryl]-6'-N-methylkanamycin A oder B bezeichnet werden und der allgemeinen Formel IV

609824/0971

M/16 305

4 F₂

H-R

NH.

(IV)

entsprechen, worin R für -OH oder -NH₂ steht und R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-α-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt; oder ein pharmazeutisch verträgliches, nicht-toxisches Salz davon.

Es ist bekannt, daß einige, durch den R-Faktor vermittelten Kanamycin-resistenten Organismen, beispielsweise E. coli K-12 R-5 und Ps. aeruginosa GN 315, die Kanamycine durch 6'-N-Acetylierung inaktivieren. Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Derivate des Kanamycin A und B herzustellen, die gegenüber diesem Typ von enzymatischer Inaktivierung durch diese Kanamycin A oder B resistenten Organismen resistent sind, jedoch dennoch die Mehrzahl ihrer biologischen Aktivität und Spektren behalten.

Die der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Aufgabe wird durch die Synthese der hier als Verbindung IV bezeichneten Verbindung gelöst.

— 2 —

609824/0971

Eine bevorzugte AusfUhrungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verbindung der Formel IV

:h₂-nhch₃

worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-α-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen OH oder NHU besitzt; oder ein nichttoxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon.

Die bevorzugtesten Ausführungsformen sind die Verbindungen der Formel IV, worin:

1. R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl und R^ für OH (TVa) stehen;

2. R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl und R^ für NH₂ (rvb) stehen;

3. R für L-(-)-ß-Amino-(i-hydroxypropionyl und R für OH (IVc) stehen;

4. R für L-(-)-ß-Amino-oc-hydroxypropionyl und R³ für NH₂ (rvd) stehen;

- 3 609824/0971

„/16 505 ? SSB 40 5

5. R für L-C-)-/-Ämlnio-ar-hydroxy^aleryl und Er für OH (IYe) stehen;;

6. R für Lr-{—)-ff—itemo—or—iijdroxyraleryl und R für·

(I¥f) stehen; oder ein miclrt—"fcoxisclies pharmazeutisch ■verträgliches Sätireadditionssalz davon.

Tm Rahmen der vorliegenden Offenbarung bedeutet der Begriff "nicht—toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz¹¹ ein Mono-, Bi-„ Tri- oder Tetrasalz, das durch Reaktion von 1 Mol Verbindung IY mit 1 bis 4 Mol einer nicht-toxischen^pharmazeutisch verträglichen Säure gebildet ist. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Bromwasserstoff säure, Ascorbinsäure, Apfelsäure und Zitronensäure, und alle anderen Säuren, die üblicherweise zur Bildung von Amin-enthaltenden Pharmazeutika verwendet werden.

Andere, am meisten bevorzugte Ausführungsformen sind die Sulfat-, Hydrochlorid-, Acetat-, Maleat-, Citrat-, Ascorbat-, Nitrat- oder Phosphatsalze der Verbindung IV.

Eine weitere bevorzugteste Ausführungsform ist das Monosulfatsalz der Verbindung IV.

Eine andere bevorzugte Ausführungsform ist das Disulfatsalz der Verbindung IV.

Die der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Aufgabe wird durch die erfindungsgemäße Schaffung des Verfahrens zur Herstellung der Verbindungen der Formel IV

6 09824/0971

ORIGINAL INSPECTEi

M/16 305

NH,

NH-R

(IV)

worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Aminoa-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf-Amino-α-hydroxyvaleryl steht und worin R die Bedeutungen -OH oder NHp besitzt, gelöst, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man in aufeinanderfolgenden Stufen:

A) die Verbindung der Formel II

worin R für -OH oder -NH₂ steht, mit einem Acylierungsmittel der Formel VII

QRIQINAL INSPECTID

Μ/1β 305

G.

W-NH-

OH 0

It

-CH - C-M

(VII)

worin W für einen Rest steht, der ausgewählt ist unter:

I 3

H₂-O-C-, CH₃-C-O-C-, CH.,

Il

V Vy-C , X-CH₉-C, oder

jedoch bevorzugt

Il H₂-O-C-

M einen Rest darstellt, der ausgewählt ist unter

B U J U 2 A / 0 9 7

M/16 305

-Ο—

■V

255B405

-ο-

-NO-

-0-N

und

-0-

jedoch bevorzugt

oder

-0-

4 5
worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von mindestens 0,5 Mol Verbindung VII pro Mol Verbindung II, jedoch bevorzugt in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 und am bevorzugtesten in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 bis ungefähr 1,1 in einem Lösungsmittel, das vorzugsweise ausgewählt ist unter einer Mischung aus Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dirnethylformamid, Tetrahydrofuran und Propylenglykoldimethyläther, jedoch vorzugsweise wäßrigem Tetrahydrofuran, acyliert, wobei die Verbindung der Formel III

6 (i [\ B 'M / 0 9 7 1

M/16 305

NH

NH.

Ill

NH-C=O HC-OH

(au) .Zn

NH

entsteht, worin η, R und W die vorstehenden Bedeutungen besitzen; und

B) die Blockierungsgruppe W aus der Verbindung III durch nach dem Stand der Technik bekannte Methoden, und vorzugsweise in dem Fall, in dem W einen Rest der Formel

/^ \_CH₂-O-C-

darstellt, durch Hydrieren der Verbindung III mit V/asserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators, der vorzugsweise ausgewählt ist unter Palladium, Platin, Raney-Nickel, Rhodium, Ruthenium und Nickel, jedoch bevorzugt Palladium und am bevorzugtesten Palladium-auf-Aktivkohle, in einem aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel bestehenden Lösungsmittelsystem, das vorzugsweise ausgewählt ist unter Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran,

6 0 9 8 2 A / 0 9 7 1

m/16 305 255 5 40

Äthylenglykoldimethylather, Propylenglykoldimethyläther oder dergleichen, jedoch vorzugsweise 1:1 Wasser-Dioxan und bevorzugt in Gegenwart einer katalytischen Menge Eisessig, entfernt, wobei die Verbindung der Formel IV gebildet wird.

Für den Fachmann liegt es auf der Hand, daß beim obigen Verfahren zur Acylierung der Aminfunktionen der erfindungsgemässen Zwischenverbindungen auch andere Mittel verwendet werden können. Die vorliegende Offenbarung umfaßt alle derartigen Acylierungsiaittel, die zu labilen aminblockierenden Gruppen führen, wobei die labilen Blockierungsgruppen üblicherweise bei der Synthese von Peptiden eingesetzt werden. Die labilen Blockierungsgruppen müssen nach aus dem Stand der Technik allgemein bekannten Methoden entfernbar sein. Beispiele für derartige labile Blockierungsgruppen und deren Entfernung kann in der Übersicht von A. Kapoor,J. Pharm. Sciences, 59, Seiten 1-27 (1970), gefunden werden. Funktionelle Äquivalente als Acylierungsmittel für primäre Amingruppen umfassen entsprechende Garbonsäurechloride, -bromide, -säureanhydride, einschließlich gemischter Anhydride und insbesondere der gemischten Anhydriden, die aus stärkeren Säuren, wie den niedrigen aliphatischen Monoestern der Kohlensäure, der Alkyl- und Arylsulfonsäuren und der sterisch gehinderteren Säuren, wie Diphenylessigsäure, hergestellt sind. Zusätzlich kann ein Säureazid oder ein aktiver Ester oder Thioester (beispielsweise mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, Thiophenol, Thioessigsäure) verwendet werden, oder die freie Säure selbst kann mit dem Kanamycinderivat (II) gekuppelt werden, nachdem man zuerst die freie Säure mit N,N'-Dimethylchlorforrniminiumchlorid [vgl. GB-PS 1 008 170 und Novak und Weight, Experientia XXI/6, 360 (1965)] oder unter Verwendung von Enzymen oder eines Ν,Ν'-Carbonyldiimidazols oder eines Ν,Ν'-Carbonylditriazols [vgl. Sheehan und Hess, J. Amer.Chem. Soc, 77, 1067 (1955)] oder eines Alkinylaminreagenses [vgl.

609B24/0971

R. Buijile und H.G. Viehe, Angew.Chem., International Edition 3, 582 (1964)] oder eines Keteniminreagenses [vgl. CL. Stevenes und M.E.Monk, J.Amer.Chein.Soc. , 80, 4065 (1958)] oder eines Isoxazoliumsalzreagenses [vgl„ R.B. Woodward, R.A. Olofson und H. Mayer, J.Amer.Chem.Soc., 83, 1010 (1961)], gekuppelt hat. Ein weiteres Äquivalent des Säurechlorids ist ein entsprechendes Azolid, d.h. ein Amid der entsprechenden Säure, deren Amidstickstoff Glied eines quasiaromatischen 5-gliedrigen Rings ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, d.h. Imidazol, Pyrazol, die Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Als Beispiel für die allgemeine Methode zur Herstellung eines Azolids wird N,N'-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Anteilen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt, wobei das Carbonsäureimidazolid in praktisch quanitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxid und einem Mol Imidazol gebildet wird. Dicarbonsäuren liefern die Diimidazolide. Das Nebenprodukt Imidazol fällt aus und kann abgetrennt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, jedoch ist dies nicht wesentlich. Diese Reaktionen sind aus dem Stand der Technik wohlbekannt (vgl. US-PSen 3 079 314, 3 117 126 und 3 129 224 und GB-PSen 932 644, 957 570 und 959 054).

Das bevorzugteste Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel IV ist durch die nachfolgenden Stufen gekennzeichnet:

A) Acylieren der Verbindung der Formel II mit einem Acylierungsmittel der Formel

- 10 -

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M/16 305

OH O

ι I

oder

OH

H₂-O-C-NH-(CH₂)_n-C - C-

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Lösungsmittelsystem aus wäßrigem Tetrahydrofuran oder wäßrigem Dimethylformamid-Aceton, bei ungefähr Raumtemperatur, wobei die Verbindung der Formel III

- 11 -

6098 2 4/0971

M/16 305

gebildet wird, worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt; und

B) Hydrieren der Verbindung III in wäßrigem Tetrahydrofuran in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle bei ungefähr atmosphärischem Druck, wobei Verbindung IV gebildet wird.

Alternativ kann i η Stufe A) das Acylierungsmittel VII in situ durch Vermischen der Verbindung der Formel

Il T Ii

H -0-C-NH-(CH₂) _n-C — C-OH

mit äquimolaren Mengen an N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid und Dicyclohexylcarbodiimid in einer kleinen Menge wasserfreiem Tetrahydrofuran gebildet werden. Die erhaltene

- 12 -

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m/16 305 255 540

"3

Mischimg "Wird filtriert -und das Filtrat wird zu einer wäßrigen Tetrahydrofuranmischung des 6'-N-Kanamycin A oder B zugegeben, wobei die entsprechende Verbindung III gebildet wird.

Die Verbindungen IV sind wertvoll als antibakterielle Mittel, als Beifuttermittel bei Tierfutter, als therapeutische Mittel bei Geflügel und Tieren, einschließlich des Menschen, und sie sind besonders wertvoll bei der Behandlung von infektiösen Erkrankungen, die durch gram-positive und gram-negative Bakterien verursacht sind.

Bei oraler Verabreichung sind die Verbindungen IV brauchbar als Zusätzbehandlung zur präoperativen Sterilisation des Darms. Sowohl die aerobe als auch die anaerobe Flora, die gegenüber diesen Pharmazeutika empfindlich ist, werden im Dickdarm vermindert. In Verbindung mit geeignetem mechanischen Reinigen sind sie brauchbar bei der Vorbereitung von Dlckdarmoperationen.

Die Verbindungen IV sind bei der Behandlung systemischer bakterieller Infektionen brauchbar, wenn sie parenteral im Dosisbereich von ungefähr 250 mg bis ungefähr 3000 mg pro Tag in aufgeteilten Dosen drei- oder viermal täglich verabreicht werden. Im allgemeinen sind die Verbindungen Wirksam; wenn sie in einer Dosis von ungefähr 5,0 bis 7,5 mg/kg Körpergewicht alle 12 Stunden verabreicht werden.

Die Verbindungen der Art der Verbindung IV, insbesondere BB-K28, 142, 148, 162 und 163 besitzen alle wesentlich verbesserte Aktivitäten gegen ein größeres Spektrum von Mikroorganismen im Vergleich zu den Stammverbindungen, von denen sie abgeleitet sind, d.h. von Kanamycin A und B.

- 13 609824/0971

Nachfolgend ist die Tabelle I dargestellt, die die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC) von Kanamycin A und B und BB-K28, 142, 148, 162 und 163 gegen eine Vielzahl grampositiver und gram-negativer Bakterien zeigen, so wie sie durch die Steers-Agar-Verdünnungsmethode auf Mueller-Hinton-Agarmedium erhalten wurden.

- 14 -

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	I	Organismus	, COli NIHJ	K-12	(GM-R) .	Px-IO Ps.	A15119	BB-K	TABELLE I	BB-K	0,8	BB-K	BB-K
	_i vji	Ec-L E,	Juhl	NR79/W677	(GM-R)		A20363	28	(MIC γ/ml)	148	25	162	163
	I	Ec-3 "	K-12 ML-1630	JR35/0600			A20365	0,4	BB-K	3,1	1,6	6,3	6,3
		Ec-5 "	(KM-R)	W677			A9632	0,8	142	3,1	3,1	6,3	12,5
		Ec-7 "	JR66/W677			A20664	0,8	0,4	3,1	0,4	12,5	12,5
		Ec-8 "			A20665	0,2	0,8	0,2	>50	3,1	6,3
		Ec-9		A20684	0,4	1,6	0,4	6,3	6,3	12,5
		Ec-IO"	K-12 CS₂ R-5	A20683	0,4	0,2	0,4	12,5	6,3	6,3
		Ec-52"	, pneumoniae D	A20766	0,4	0,4	0,4	6,3	3,1	6,3
cn		Ec-53"	Type 22	A20898	0,4	0,4	0,4	12,5 .	3,1	6,3
X)		Ec-59"	Sm-I Ser. marcescens		0,8	0,4	12,5	12,5	50	100
co		Ec-60"	Pa-I Ps. aeruginosa	-11	0,8	0,8	12,5	50	50	100
		Ec-55	Pa-3 "	A20680	6,3	6,3	>50	>50	100	>100
		Kp-I K.	Pa-4	A20019		6,3	*		3,1	3,1
O		Kp-8 "	Pa-5 "	D-15	0,4	50		0,8	1,6
to		Pa-I5"	A9930	1,6	*	12,5	50
-J		Pa-16"	H-9	0,8	0,2	6,3	6,3
		Pa-20"	A15150	3,1	12,5	6,3	12,5
		Pa-21"	A20717	0,2	1,6	3,1	3,1
		Pa-23"	A20718	25	3,1	100	>100
			A20325	6,3	0,4	• 12,5	12,5
		A20601	6,3	100	25	25
		Λ2 0741	3,1	12,5	25	50
	A20621	3,1	25	6,3	12,5
		12,5	12,5	25	50
		25	12,5	50	100
	100	12,5
	50
	100>

Kanamycin A

0,4 0,8

>100 6,3 0,4 3,1 50

0,8 100

>100

0,2 >100 1,6

12,5 6,3

>100 12,5

100

25

50

>100 >100

mycin B

1,6 >100 >100 >100 *

Fortsetzung TAEELL

VT.T." i"

Organismus

Pv-L PR. vulgaris Pm-I Pr. mirabilis Pg-I Pr. morganii

Sa-2 S,

Sa-4 " Sa-IO"

Sa-49

aureus Smith FDA 209P (Ki-I-R)

A9436 A9554 A9553

B3-K
28

A15167 0,2

A20239 A20240

Bs-I B Subtilis PC1-219

.3,1 <0,05

M6-1 Mycob. 607 . 0,8

M6-2 " " (KM-R) >100

M6-3 " · (KM,SM-R) >100 Mp-I " phlei 0,2

Mr-I

ranae

BB-K 142

0,4

1,6·

0,8

0,4

1,6 1,6 6,3

<0,05

0,8

100

100 0,4 0,8

BB-K 148

0,8 1,6 1,6

0,1

0,8

1,6

12,5

<0,025

0,8 >50 >50

0,4

0,8

BB-K
162

3,1 6,3

1,6

12,5 12,5 50 0,4

>100 >100 1,6

BB-K
163

6,3

1,6

25

12,5 50 0,8

3,1

>100

>100 1,6 3,1

Kana- Kanamycin Λ mycir. 3

0,4 0,8 0,8

0,2

0,8 50

>100
< 0,05

>100 >100

0,4

0,8 0,8

3,1 3,1 3,1

0,4

1,6 50 100 0,2

3,1

>100

>100 3,1 1,6

M/16 305

Nach den umfassenden Erfahrungen der fachkundigen Anmelderin mit Kanamycin A und B und seiner chemischen Reaktivität wurde erwartet, daß von den vier oder fünf primären Aminfunktionen, die in Kanamycin A bzw. B vorliegen, aus sterischen Gründen die 6^f-Aminofunktion die reaktivste ist. Es wurde daher postuliert, daß, wenn man die 6'-Aminofunktion in ein 6 ·-N-Methyl-.sek.-Amin überführt, seine Reaktivität mit einem Acylierungsmittel wesentlich vermindert wäre, und daß die 1-N-primäre Aminfunktion aus sterischen Gründen bei den verbleibenden primären Aminen die reaktivste wäre. Daher wurde das 6'-N-Methylkanamycin A oder B direkt mit einem geeigneten, Seitenketten acylierenden Mittel acyliert, ohne zuerst die anderen Aminfunktionen des Moleküls zu blockieren. Die Kontrolle der molaren Mengen an verwendetem Acylierungsmittel bestimmt den Grad der Acylierung, die an anderen Positionen auftritt.

AUS GANGSMATERIALIEN

Herstellung von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure (VI)

L-(-)-Y-Amino-oc-hydroxybuttersäure (7,4 g, 0,062 Mol) wird zu einer Lösung von 5,2 g (0,13 Mol) Natriumhydroxyd in 50 ml Wasser zugegeben. Zur gerührten Lösung gibt man tropfenweise bei 0 bis 5°C im Verlauf von 0,5 Std. 11,7 g (0,068 Mol) Carbobenzoxychlorid und setzt das Rühren der Mischung während einer Stunde bei derselben Temperatur fort. Die Reaktionsmischung wird mit 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und mit vier 80 ml-Portionen Äther extrahiert. Man vereinigt die Ätherextrakte, wäscht mit

- 17 -

6 U ¹J ^:; I <* / U ^f3 7 1

25554D5

einer kleinen Menge gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet mit wasserfreiem Natriumsulfat und filtriert. Das FiItrat wird im Vakuum eingedampft und der erhaltene Rückstand wird aus Benzol kristallisiert, wobei man 11 »6· g (74 ?6) farblose Platten mit Schmelzpunkt 78,5 bis 79,5°C, [a]_D -4,5° (c = 2, CH₃OH) erhält.

Infrarotspektrum (IR) [KBr]: IR (KHr) ^ _c=0 17'K), U-¹K) cm"¹ Kernmagnetische Resonanz (NMR) (Aceton-dg)cf (in ppm von TMS) 2,0 (2H, m), 3,29 (2H₅ d-d, J = 6,7 und 12 Uz)₃ 4,l6 (IH, d-d, J=I,5 und 8 Hz), '1,99 (2H, s), 6,2 (2H, breit), 7,21 C5H, s).

Analyse ^ci2^H15^NO5^:

C H N

ber.: 56,91 5,97 5,53 % Ref.: 56,66 5,97 5,'17 %

2« N-Hydroxysucciniraidester von L-(-)-Y-Benzyloxycarbonylamino-nt-hydroxyb utter säure (VII).

Eine Lösung von 10,6 g (0,042 Mol) Verbindung VI und 4,8 g (0,042 Mol) N-Hydroxysuccinimid* in 200 ml Äthylacetat wird auf O⁰C gekühlt und dann werden 8,6 g (0,042 Mol) Dicyclohexylcarbodiimia zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht in einem Kühlschrank gehalten. Der Dicyclohexylharnstoff, der sich abgeschieden hat, wird abfiltriert und das Filtrat wird unter vermindertem Druck auf ungefähr 50 ml konzentriert, wobei man farblose Kristalle von Verbindung VII erhält, die durch Filtrieren gesammelt werden; 6,4 g, Schmelzpunkt 121 bis 122,5°C. Man dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockene

- 18 -

6 0 9 B ■} k I 0 9 7 1

M/16 305

ein und wäscht den kristallinen Rückstand mit 20 ml einer Mischung aus Benzol/n-Hexan, wobei man eine zusätzliche Menge an Verbindung VII erhält. Die Gesamtausbeute beträgt 13,4 g (92 %).

M₀ 1,5° (c = 2, CHCl₃).

IR (KBr)^J _c=0 1810, 1755, 17^Jl0, 1680 crn

-1

NMR (Aceton-dg) d~(in ppm von TMS) 2,0 (211, m), 2,ü5 (Uli, s), 3,37 (211, d-d, J = 6,5 und 12,5 Hz), ϋ,56 (lit, m), 9 (2H, s), 6,3 (2H, breit), 7,23 (¹IH, s).

Analyse

^Cl6^Hl8^N2°7^:

ber, Ge f.

C	5	II	8	N
,05	^Γ>	,18	8	,00 %
,79		,21	ρ	,1'I %
,70	,20	,12 %

3. Herstellung von H-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid

N-Hydroxysuccinimid** (23 g, 0,2 Mol) wird in einer Lösung von 9 g (0,22 Mol) Natriumhydroxyd in 200 ml Wasser gelöst. Zur gerührten Lösung gibt man tropfenweise unter Wasserkühlung 34 g (0,2 Mol) Carbobenzoxychlorid und rührt dann die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur, um das Carbobenzoxyderivat abzuscheiden, das durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet wird. Die Ausbeute beträgt 41,1 g (82 %), Umkristallisation aus Benzol/n-Hexan (10:1) ergibt farblose Prismen, die bei 78 bis 79⁰C schmelzen.

** G.W. Anderson et al., J. Am. Chem. Soc, 86, 1839 (1964).

- 19 -

6 0 9 B 2 U I Q 9 7

4. Herstellung von 6^r-Carbobenzoxykanamycin A.

Eine Lösung von 42,5 g (90 rnMol) Kanamycin A in Form der freien Base in 450 ml Wasser und 500 ml Dimethylformamid (DMF) wird unterhalb 0°C abgekühlt und heftig gerührt. Zur Lösung gibt man tropfenweise im Verlauf von ungefähr 2 Std. eine Lösung von 22,4 g (90 mMol) N-(Benzyloxycarbonyloxy)-succinimid in 500 ml DMF. Die Mischung wird bei -10° bis 0°C über Nacht und dann einen Tag bei Raumtemperatur gerührt.

Die Reaktionsmischung wird unter vermindertem Druck unterhalb ungefähr 50 C eingedampft. Den öligen Rückstand löst man in einer Mischung aus 500 ml Wasser und 500 ml Butanol, wobei die Mischung filtriert wird, um unlösliches Material zu entfernen und in zwei Schichten aufgetrennt wird. Das Butanol und die wäßrigen Schichten werden mit Butanol-gesättigtem Wasser (500 ml χ 2) bzw. Wasser-gesättigtem Butanol (500 ml χ 2) behandelt, wobei man eine Technik anwendet, die der Gegenstromverteilung entspricht. Die drei wäßrigen Schichten werden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, wobei man einen öligen Rückstand erhält, von dem ein Teil beim Stehen bei Raumtemperatur kristallisiert. Zu dem Rückstand einschließlich der Kristalle . gibt man ungefähr 100 ml Methanol, das das Öl löst und trennt es von den Kristallen ab. Nachdem man ungefähr 300 ml Äthanol zugegeben hat, wird die Mischung über Nachtbei Raumtemperatur gehalten, wobei man eine kristalline Masse erhält, die durch Filtrieren gesammelt wird. Sie wiegt 44 g. Das Produkt enthält eine kleine Menge Kanamycin A, wie dies durch Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von n-Propanol/Pyridin/Essigsäure/Wasser (15:10:3:12) als Lösungsmittelsystem und Ninhydrin als Spray-Reagens, angezeigt wird.

- 20 -

609824/09 7 1

Das Rohprodukt wird in 300 ml Wasser gelöst und auf einer Säule (30 mm Durchmesser) mit CG-50 Ionenaustauscherharz (NH^+ Typ, 500 ml) chromatographiert. Die Säule wird mit 0,1η Ammoniumhydroxydlösung bespült und das Eluat wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Das gewünschte Produkt ist in den Röhren Nr. 10-100 enthalten, während das Kanamycin A aus den sich langsamer bewegenden Fraktionen gewonnen und das (die) Positionsisomere(n) des Produkts offensichtlich in den sich schneller bewegenden Fraktionen enthalten sind. Die Fraktionen 10-110 werden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei 24,6 g (45 %)eines farblosen Produkts, 6-Carbobenzoxykanamycin A (II) [6'-Cbz-Kanamycin A] erhält, das bei 204°C unter Verfärbung zu schmelzen beginnt und sich bei 212°C unter Gasentwicklung zersetzt.

[a]_D +106° (c = 2, H₂O).

- 21

6 (J 3 ö 2 4 / 0 Η 7 Ί

Rf-Wert

σ co οα ro

ro

TLC (DünnschichtChromatographie) (Silikagel

Lösungsmittelsystem

n-PrOH-Pyridin-AcOH-HpO (15:10:3:12)

Aceton-AcOH-KgO (20:6:74)

CKCl₃-MeOH-CNK₁₁OH-H₂O (1:4:2:1)

AcOMe-n-PrOH-c .NH₂-OK (45:105:60) 6'-Cbz-Kanamycin A

0,42* 0,33** 0,15**

0,76

0,22

Kanamycin A

0,04

0,14
0,50

0,04* *

hauptsächlich weniger

entdeckt durch Anthron-Schwefelsäure

(JH CD

%1

Durch Dünnschichtchroraatographie (TLC) mit einem der untersuchten Lösungsmittelsysteme stellt man fest, daß das Endprodukt von zwei geringeren Komponenten begleitet ist. Jedoch wird das Endprodukt zur Herstellung von Verbindung II ohne weitere Reinigung verwendet.

5. Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure aus Ambutyrosin A oder B oder Mischungen davon.

Ambutyrosin A (5,0 g) [US-PS 3 541 078, erteilt am 17. November 1970] wird mit I60 ml 0,5n Natriumhydroxyd 1 Std. am Rückfluß gehalten. Man neutralisiert das Hydrolysat mit 6n HCl und chromatographiert auf einer Säule mit CG-50 (NH»⁺ Typ)· Man isoliert die gewünschte L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure, indem man die Säule mit Wasser entwickelt und das Wasser durch Gefriertrocknen entfernt. Die L-(-)-Y-Ainino-a-hydr oxy buttersäure ist als kristallines Material mit einem Schmelzpunkt von 212,5 bis 214,5°C [Spalte 2, Zeilen 31-38, US-PS 3 541 078] charakterisiert.

6. Herstellung von 6'-Carbobenzoxykanamycin B.

Zu einer gekühlten Lösung von 8,1 g (0,0168 Mol) Kanamycin B in 120 ml Wasser und 80 ml 1,2-Dimethoxyäthan gibt man tropfenweise unter Rühren eine Lösung von 4,2 g (0,0168 Mol) N-iBenzyloxycarbonyloxyJ-succinimid in 40 ml 1,2-Dimethoxyäthan zu. Man rührt die Reaktionsmischung über Nacht und dampft unter vermindertem Druck ein. Der Rückstand wird in 100 ml Wasser gelöst und zweimal mit 50 ml Wasser-gesättigtem n-Butanol geschüttelt. Die wäßrige Schicht wird abgetrennt und auf einer Säule mit 100 ml CG-50 (NH^⁺ Typ) adsorbiert. Man wäscht die Säule mit 200 ml Wasser, eluiert mit 0,05n NH^OH. Das Eluat wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 121 bis 180 werden gesammelt, eingedampft und gefriergetrock-

- 23 609824/0971

net, wobei man 1,58 g (15 %) des gewünschten Produkts erhält. Die Fraktionen 1 bis 120 werden eingedampft und nochmals auf CG-50 (NEL⁺) chroraatographiert, wobei man 1,21 g (12 %)aes Produkts erhält. Schmelzpunkt = 151 bis 152°C (Zersetzung).

[a]_D24 +104° (c = 2,5, H₃O).^ _c=0 I7IO cm"¹.

Analyse ^c ₂6^Hi)3^N5°12^:

	C	7	H
50	,56	7	,0?
50	,71	,3«

bor. :

11, Ί8 %

TLC (Dünnschichtchromatographie) (Silikagel F254)_f Rf 0,03 in n-PrOH-Pyridin-AcOH-HgO (15:10:3:12); Rf 0,16 in Aceton-AcOH-HgO (20:6:7*0.

7. Herstellung von L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure aus DL-re-Hydroxy-y-phthalimidobuttersäure

A) Dehydroabietylammonium-L-a-hydroxy-Y-phthalimidobutyrat: Zu einer Lösung von 25 g (0,1 Mol)a-Hydroxy-γ-phthalimidobuttersäure*** in 200 ml Äthanol gibt man eine Lösung von 29 g (0,1 Mol) Dehydroabietylamin in 130 ml Äthanol. Man schüttelt die Lösung 1 Min. heftig und läßt 5 Std. bei Raumtemperatur stehen; während dieser Zeit kristallisieren feine Nadeln aus. Man sammelt die Kristalle durch Filtrieren, wäscht mit 50 ml Äthanol und trocknet an der Luft, wobei man 30,1 g (56 %) eines Diastereomeren des Dehydroabiethylaminsalzes erhält. Schmelzpunkt = 93 bis 94⁰C.

Ca]^⁴ + 15° (c = 2,5; MeOH).

Umkristallisation aus 300 ml Äthanol ergibt 23,2 g (43 %)

- 24 -609824/0971 '

Λ* '

reines Produkt mit Schmelzpunkt 94 bis 95°C. |>]p⁴ +10,8° (c = 2,5; MeOH).

Weitere Itokristallisation ändert weder den Schmelzpunkt noch die spezifische Drehung.

Analyse C₃₂H^₂N₂O-H₂O:

	C	8	H	5	N
ber. :	69,5^	8	,02	5	,07 %
Kef. :	69,58	,08	,07 %

B) L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure: Zu einer Lösung von 1,5 g (0,014 Mol) Natriumcarbonat in 40 ml Wasser gibt man 5,3 g (0,01 Mol) Dehydroabiethylammonium-L-o:- hydroxy-Y-phthalimidobutyrat und 60 ml Äther. Man schüttelt die Mischung heftig, bis sich der gesamte Peststoff gelöst hat. Die Ätherschicht wird abgetrennt. Die wäßrige Lösung wird zweimal mit 20 ml-Portionen Äther gewaschen und unter vermindertem Druck auf 15 ml eingedampft. Zum Konzentrat gibt man 10 ml konz. Chlorwasserstoffsäure und hält die Mischung 10 Std. am Rückfluß. Nach dem Kühlen wird abgeschiedene Phthalsäure durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung wird zur Trockene eingedampft. Diese Operation wird zweimal wiederholt, um überschüssige Chlorwasserstoffsäure zu entfernen. Den verbliebenen Sirup löst man in 10 ml Wasser und filtriert, um eine kleine Menge unlösliche Phthalsäure zu entfernen. Das Filtrat wird auf einer Säule mit IR-120 (H+, 1 cm χ 35 cm) adsorbiert, die Säule wird mit 300 ml V/asser gewaschen und mit 1n Ammoniumhydroxydlösung eluiert. Man vereinigt die Ninhydrin-positiven Fraktionen 10 bis 16 und dampft unter vermindertem Druck ein, wobei man einen Sirup erhält, der allmählich kri-

- 25 609824/0971

stallisiert. Die Kristalle werden mit Äthanol verrieben, filtriert \and in einem Vakuumexsiccator getrocknet, wobei man 0,78 g (66 %) L-(-)-Y-Amino-oc-hydroxybuttersäure mit Schmelzpunkt 206 bis 207°C erhält.

[αξ⁴ -29° (c = 2,55 H₂O).

Das IR-Spektrum ist identisch mit dem der authentischen Probe, die aus Ambutyrosin erhalten wurde.

8. Herstellung von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure XX

L-ß-Amino-oc-hydroxypropionsäure* (8,2 g; 0,078 Mol) wird in einer Lösung von 6,56 g (0,0164 Mol) Natriumhydroxyd und in 60 ml Wasser gelöst. Zur gerührten Lösung gibt man tropfenweise 14,7 g (0,086 Mol) Carbobenzoxychlorid unterhalb 5°C zu. Die Mischung wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt, mit 60 ml Äther gewaschen und mit verdünnter HCl auf pH 2 eingestellt. Man sammelt den Niederschlag durch Filtrieren, wäscht mit Wasser und trocknet an der Luft, wobei man 9,65 g (52 %) Verbindung XX erhält. Das Filtrat wird mit fünf 100 ml-Portio- nen Äther extrahiert. Die Ätherlösung wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockene eingedampft, wobei man 'zusatz 1 i ehe 2,0 g (11 %) Verbindung XX erhält. Insgesamt 11,65 g Verbindung VI werden aus 500 ml Benzol/Äthylacetat (4:1) kristallisiert, wobei man 9,36 g (50 %) reine Verbindung XX mit Schmelzpunkt 128,5 bis 129,5°C erhält.

Infrarot (IR) (KBr) :>J 17^5, 1690 cm"¹. "

r ι25

L<*J_D +2,9° (c 5,0; MeOH).

*K. Freudenberg, Ber., 47, 2027 (1914)

- 26 -

609824/097 1

Kernmagnetische Resonanz3pektren [NMR (DMSO-d,-)]:<f (in ppm) 3,05 - 3,^5 (2H, m, CIi₂N), if,05 (IH, d-d, -0-CH-CO-), 5,03 (2H, s, CH₂Ar), 7,18 (IH, breit, NII), 7,36 (5H, s, Ring H).

Analyse C₁₁H₁₅NO₅:

C H N

ber.: 55,23 5,13 5,86 %

: 55,34 5,²f9 5,87 %

9. N-Hydroxysuccinimidester von L-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure XXI

Zu einer gekühlten und gerührten Lösung von 478 mg (2 mMol) Verbindung XX und 230 mg (2 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 10 ml Tetrahydrofuran (TIIF) gibt man 412 mg (2 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid. Die Mischung wird 1 Std. bei 0 bis 5°C und 2 Std. bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert, um den N,N'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das Filtrat, welches das Titelprodukt enthält, wird ohne Isolierung für die nachfolgende Reaktion verwendet.

10. Herstellung von L-cf-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvalerionsäuro XXII

Zu einer gerührten Lösung von 400 mg (3,0 mMol) L-cT-Amino-a-hydroxyvaleriansäure* und 250 mg (6,5 mMol) Natriumhydroxyd in 25 ml Wasser gibt man tropfenweise 580 mg (3,3 mMol) Carbobenzoxychlorid im Verlauf von 30 Min. bei 0 bis 5⁰C. zu. Die Mischung wird 1 Std. bei 5 bis 15°C gerührt, mit 25 ml Äther gewaschen, mit Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und mit drei

* S. Ohshiro et al., Yakugaku Zasshi, 87, 1184 (1967)

- 27 -

609824/0 971

M/16 305

30 ml-Portionen Äther extrahiert. Man schüttelt die vereinigte Ätherlösung mit 10 ml einer gesättigten Natriumchloridlösung, trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat und dampft im Vakuum ein, wobei man Kristalle erhält, die aus Benzol umkristallisiert werden, wobei man 631 mg (78 %) Verbindung XXII mit Schmelzpunkt 110 bis 111°C erhält;

Infrarotspektrum [IR (KBr)]: 3^60, 3350, 1725, 1685, 1535, 1280, 730, 690 cm"¹.

Kernmagnetisches Resonanzspektrum [NMR (Aceton-dg) ]: cf (in ppm) 1,70 ('IiI, m), H₃Vl (2Ii, q, J = 4,5 Hz), '1,19 (Hi, m), 4,82 (211, s), 6,2 (3H, breit), 725 (5H, s).

[α]²⁵ +1,6 (£ 10; MeOH).

Analyse C₁₃H₁₇NO₅: C H iJ

bor. : 5Π,^!? G Hl ^c; ?'l %

ί',οΓ.: 5o,36 . 6^0 ^r/,27 %

11. N-Hydroxysuccinimidester von L-cT-Benzyloxycarbonylaminoq-hydroxyvaleriansäure XXIII

Zu einer gerührten und gekühlten Lösung von 535 mg (2,0 mMol) Verbindung XXII und 230 mg (2,0 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 55 ml Äthylacetat gibt man 412 mg (2,0 mMol) NjN'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC). Die Mischung wird 3 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um ausgefallenen Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft, wobei man 780 mg (100 %) viskosen Sirup XXIII erhält.

IR (gut): ^ 1810, 1785, 1725 cm"¹.

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Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen.

Beispiel

o'-N-Methylkanamycin A (BB-K 25) nach Methode A

1. Zu einer Suspension von 610 mg LiAlKL in 10 ml trockenem Dioxan gibt man tropfenweise bei 70 C eine Suspension von 618 mg 6'-N-Carbobenzoxykanamycin A (6'-N-Cbz-Kanamycin A) in 30 ml trockenem Dioxan. Die Mischung wird 20 Std. bei 70⁰C gerührt und dann auf -5 bis O⁰C gekühlt. Zur Reaktionsmischung gibt man vorsichtig ungefähr 20 ml kaltes Wasser. Nach beendeter Zugabe neutralisiert man die Mischung mit 2n HCl und dampft unter vermindertem Druck zur Trockene ein. Der Rückstand wird mit einer großen Menge EtOH gewaschen, wobei man 536 mg des Rohprodukts erhält, das in einer kleinen Menge Wasser gelöst und auf einer Säule mit CG-50 Ionenaustauscherharz (NH^⁺ Typ; 20 ml) chromatographiert wird. Die Säule wird mit Wasser, 1 Ltr. 0,1 η NH^OH, 600 ml 0,2n NH^OH und schließlich 500 ml 0,5n NH.OH bespült. Man sammelt 10 ml-Fraktionen und unterwirft sie dem Ninhydrinr.pottcst, dem Gcheibenter.t (B. ßubtilis PCI 219) und TLC (Dünnschichtchromatoßraphie) auf einer Silikagelplatte; Lösungsmittelsystem, S-110 (CHCl₃-MeOH-28 % NH₄OH-H₂O = 1:4:2:1). Die Fraktionen, welche nach TLC einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven Spot bei Rf 0,50 ergeben, werden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, wobei man 137 mg (27 %) BB-K 25, mit Schmelzpunkt 183 bis 187°C (Zersetzung) erhält.

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NIiR(D₂O): cT (ppm), 2,51 (3 H,.s, 6'-N-CH₃), 4,95 (HI, d, H Hz, 1"-H), 5,01 (HI, d, 3 Hz, l'-H).

Analyse C₁₉ ¹I₃₈N)₁O₁₁ -H₂CO₃:

C II M

ber.: 12,85 7,19 9,99 .%

gef.: '12,97 7,27 9,63 %

2. Zu einer Suspension von 8,8 g LiAlH^ in 100 ml trockenem Dioxan gibt man eine Suspension von 9,0 g ö'-N-Cbz-Kanamycin A in 200 ml trockenem Dioxan und rührt die Reaktionsmischung 4 Tage bei 8O⁰C. Man kühlt die Reaktionsmischung auf 1O°C, behandelt vorsichtig mit 200 ml Wasser und filtriert, um unlösliches Material zu entfernen. Das Filtrat wird mit η HCl neutralisiert und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mehrmals mit EtOH gewaschen und in einer kleinen Menge Wasser gelöst. Die wäßrige Lösung wird auf einer Säule mit CG-50 (NH^⁺; 200 ml) chromatographiert, die mit 100 ml Wasser gewaschen und nacheinander mit 2,0 Ltr. 0,1 η ΝΗλΟΗ und 1,5 Ltr. 0,2n NH^OH eluiert wird. Das Eluat wird in 20 ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen 119 bis 144 zeigen beim Dünnschichtchromatogramm (Silikagelplatte; CHCl₅-MeOH-28 % NH^OH-H₂O =» 1:4:2:1) einen bioaktiven und Ninhydrin-positiven Spot bei Rf 0,45. Sie werden vereinigt,unter vermindertem Druck konzentriert und schließlich lyophilisiert, wobei man 1,139 g (16 %) BB-K 25 erhält, das mit dem gemäß Methode A-(1) hergestellten Produkt identisch ist.

- 30 -

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Beispiel 2

6'-N-Methylkanamycin A (BB-K 25) nach Methode B

Zu einer gerührten Suspension von 618 mg (1 mMol) 6^f-N-Cbz-Kanamycin in 30 ml trockenem Pyridin gibt man 7 ml Trimethylchlorsilan und 14 ml Hexamethyldisilazan bei 70 C zu. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei derselben Temperatur gerührt und im Vakuum eingedampft. Den Rückstand behandelt man mit trockenem Tetrahydrofuran (THF). Das unlösliche Material wird filtriert und mit trockenem THF gewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeiten werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 1,567 g des trimethylsilylierten Produkts erhält, das in 30 ml trockenem THF gelöst wird. Man gibt die Lösung zu einer Guspension von 758 mg Lithiumaluminiumhydrid in 70 ml trockenem THF. Die Mischung wird 22 Std. unter Rühren am Rückfluß gehalten. Nach dem Abkühlen auf ungefähr 0°C behandelt man die Reaktionsmischung vorsichtig mit 20 ml Eiswasser und filtriert, um unlösliches Material zu entfernen. Das Filtrat wird mit 6n HCl neutralisiert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Den Rückstand wäscht man mehrmals mit Äthanol, löst in einer kleinen Menge Wasser und chromatographiert auf einer Säule mit CG-50 (NH.⁺; 50 ml). Die Säule wird mit 50 ml Wasser gewaschen und hintereinander mit 1 Ltr. 0,1η NH OH und 600 ml 0,2n NH^OH eluiert. Das Eluat wird in 20 ml-Fraktionen gesammelt und wie in Methode A-(1) beschrieben überwacht. Die Fraktionen 47 bis 72, die einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven Spot bei Rf 0,50 gemäß TLC ergeben, werden vereinigt, unter vermindertem Druck eingedampft und lyophilisiert, wobei man 258 mg (52 % aus 6·-Cbz-Kanamycin A) BB-K 25 mit Schmelzpunkt 183 bis 187°C erhält.

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609824/097 1

.■3*.

Beispiel 5

1-N-(L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl)-6^l-N-methyl-kanamycin A (BB-K 28)

Zu einer Lösung von 750 mg 6'-N-Methyl-kanamycin A (B3-K 25) in 30 ml 60 ^igem wäßrigem TIiF gibt man 525 mg N-Hydroxysuccinimidester von N-Cbz-L-Y-Amino-a-hydroxybuttersäure. Man hydriert die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur über Nacht filter atmosphärischem Druck in Gegenwart von 500 mg 10 tigern Palladium-auf-Aktivkohle. Die Reaktionsmischung wird filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Den Rückstand löst man in einer kleinen Menge Wasser und adsorbiert an einer Säule mit CG-50 (NH₄ ⁺; 70 ml). Die Säule wird mit Wasser gewaschen und nacheinander mit 850 ml 0,1 η Ammoniak (Röhren Nr. 1 bis 43 wurden in 20 ml-Fraktionen gesammelt), 1450 ml 0,2n Ammoniak (Röhren Nr. 44 bis 115 in 20 ml-Fraktion) und schließlich 100 ml 0,5n Ammoniak (Röhren Nr. 116 bis 215 in 10 ml-Fraktion) bespült. Die Fraktionen 152 bis 161, die einen bioaktiven und Ninhydrinpositiven Spot bei Rf 0,17 gemäß TLC (Silikagel; CHCl₃-CH₃0H-28 % NH₄OH-H₂O = 1:4:2:1) zeigen, werden vereinigt, unter vermindertem Druck eingedampft und lyophilisiert, wobei man 149 mg (16 %) BB-K 28 mit Schmelzpunkt 187 bis 189°C (Zersetzung) erhält.

Infrarot [IR(KBr)]: ^ if.',0 cm"¹. NMR (D₂O): 2,70 ppm (3II, s, W-CII,).

Analyse C_O,H.. -N-O₁, · 2H_C0_.. 2H„0:

ber.:	39	,52	7	,03
gef.:	39	,26	6	,6?
	39	,00	6	, 5^

9,23 %

9,C9 % 9,20 %

Um eine Spur Isomeres des Typs BB-K 11 (3"-N-acyliertes Isomeres) zu entfernen, unterwirft man das BB-K 28 einer

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6 098 2 A/0971

M/16 305

Säulenchromatographie mit einem Tetraminkupfer (TACu)-Typ von Amberlite CG-50 Ionenaustauscherharz. Man löst BB-K 28 (73 mg) in einer kleinen Menge Wasser und chromatographiert auf einer Säule mit CG-50 (TACu-Typ; 3 ml). Die Säule wird mit 20 ml Wasser gewaschen und dann mit 100 ml 0,2n NH^OH und schließlich mit 100 ml 1,0n NH^OH eluiert. Man sammelt das Eluat in 7 ml-Fraktionen und überwacht mit dem Ninhydrin-Spottest, dem Scheibentest (B. subtillis PCI 219 und Pseudomonas aeruginosa) und TLC auf Silikagel (S-110; Ninhydrin). Die Fraktionen 21 bis 24 zeigen einen Ninhydrin-positiven und bioaktiven (gegen den P. aeruginosa-Stamm) Spot bei Rf 0,2. Sie werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 30 mg blaues Pulver erhält. Der blaugefärbte Rückstand (30 mg) wird in einer kleinen Menge Wasser gelöst und auf einer Säule mit CG-50 (NH^⁺; 3 ml) adsorbiert, die mit 20 ml 0,2n NH^OH und 200 ml 0,5n NH^OH bespült wird. Man sammelt das Eluat in 7 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 19 bis 23, die einen positiven Ninhydrintest zeigen, werden vereinigt, im Vakuum eingedampft und gefriergetrocknet, wobei man 20 mg reines BB-K 28 mit Schmelzpunkt 187 bis 189⁰C (Zersetzung) erhält.

Beispiel

1-N-[L-(-)-ß-Amino-rc-hydroxypropionyl]-6'-N-methyl-kanamycin A (BB-K 162).

Eine Mischung von 218 mg (0,912 mMol) N-Cbz-L-Isoserin, 163 mg (0,912 mMol) N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid (HONB) und 188 mg (0,912 mMol) DCC (Dicyclonexylcarbodiimid) in 10 ml THF wird bei 5°C über Nacht stehen gelassen und dann filtriert. Nachdem das Filtrat zu einer Lösung von 441 mg (0,892 mMol) 6'-N-Methyl-kanamycin A in 20 ml

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809824/0971

50 %igem wäßrigem THF zugegeben ist, rührt man die Mischung 5 Std. bei Raumtemperatur und konzentriert unter vermindertem Druck auf ungefähr 2 ml. Das Konzentrat wird auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH₄ ⁺; 26 ml) adsorbiert, die mit 40 ml Wasser gewaschen und mit 500 ml 0,1 η NH₄OH eluiert wird. Man sammelt das Eluat in 10 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 11 bis 16 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 231 mg des N-acylierten Produkts erhält. Aus dem 0,3n NH₄OH-ElUat sammelt man 175 mg (40 %) des Ausgangsmaterials, BB-K 25.

Zu einer Lösung des Acylderivats in 20 ml 50 %igem wäßrigem EtOH gibt man 130 mg 10 % Pd-auf-Aktivkohle und hydriert die Mischung unter Normaldruck bei Raumtemperatur. Man filtriert den Katalysator ab und dampft das FiItrat ein, um das organische Lösungsmittel zu entfernen. Die erhaltene wäßrige Lösung wird einer Säulenchromatographie auf CG-50 (NH₄ ⁺; 25 ml) unterworfen. Man eluiert die Säule nacheinander mit 40 ml Wasser, 240 ml 0,1 η NH₄OH, 500 ml 0,2n NH₄OH, 300 ml 0,4η NH₄OH und sammelt das Eluat in 10 ml-Fraktionen. Die bioaktiven Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 127 mg des Rohprodukts erhält, das auf einer Säule mit CG-50 (Tetraminkupfer-Typ; 4 ml) nochmals chromato graphie rt und mit 200 ml 0,3n NH₄OH, 300 ml 0,5n NH₄OH und schließlich mit 300 ml 1n NH₄OH eluiert wird. Man sammelt das Eluat in 10 ml-Fraktionen.

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Menge Rf Bemerkungen

Röhre Nr.	Eluiermittel	3n	NH₄OH
4	o,	5n	NH₄OH
19-24	o,	On	NH₄OH
50-54

27 mg 0,33 inaktiv

38 mg 0,33 wänrscheinlich ein Positionsisomeres

35 mg 0,37 das gewünschte Pro dukt,BB-Ki 52

Die Röhren Nr. 50 bis 54 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei man 35 mg (6,8 %) des gewünschten bioaktiven Produkts, BB-K 162 mit Schmelzpunkt 178 bis 185⁰C (Zersetzung) erhält.

1630 cm-¹.

Beispiel 5

1 -N-[L- (-) -<f- Amino- α-hydroxyvaleryl ]-6' -N-me thyl-kanamyein A (BB-K 163)

Eine Mischung von 94 mg (0,353 mMol) N-Cbz-L-y-Amino-ahydroxyvaleriansäure, 64,5 mg (0,353 mMol) HONB und 74,5 mg (0,353 mMol) DCC in 5 ml trockenem THF wird über Nacht bei 4°C stehengelassen und filtriert. Das Filtrat gibt man zu einer Lösung von 175 mg (0,351 mMol) ö'-N-Methyl-kanamycin A in 10 ml 50 tigern wäßrigem THF und rührt die Mischung bei Raumtemperatur 5 Std. lang. Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur in Gegenwart von 70 mg 10 %igem Palladiumauf-Aktivkohle hydriert. Man filtriert den Katalysator ab, und dampft das Filtrat ein, um das THF zu entfernen. Das erhaltene wäßrige Konzentrat wird auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH₄ ⁺-TyP; 20 ml) chromatographiert und nacheinander mit Wasser (50 ml), 0,1n NH₄OH (250 ml), 0,2n NH₄OH (450 ml) und 0,5n NH₄OH (400 ml) eluiert. Das Eluat wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Die bioaktiven Frak-

- 35 -

809824/09 7 1

M/16 305

tionen v/erden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei man 40 mg Rohprodukt erhält, das auf einer Säule mit CG-50 (Tetraminkupfer-Typ; 1,5 ml) nochmals chromatographiert und mit 10 ml Wasser und 100 ml 0,5η ΝΗλΟΗ eluiert wird. Man sammelt das Eluat in 5 .ml-Fraktionen.

Röhre Nr. Eluiermittel Menge

7-8 9

0,5η ΝΗ^ΟΗ 0,5η ΝΗ,ΟΗ

Rf

5 mg 0,21

Bemerkungen

inaktiv

9 mg 0,21, 0,29 eine Mischung aus

zwei Komponenten

10-14 0,5n NH₄OH 24 mg 0,29

das gewünschte Produkt BB-K 163

Die Röhren Nr. 10 bis 14 werden vereinigt und zur Trockene eingedampft, wobei man 24 mg (11 %) des gewünschten bioaktiven Produkts, BB-K 163 mit Schmelzpunkt 167 bis 174°C (Zersetzung) erhält.

^KBr· 1620 cm"¹. C=O

Beispiel 6 6'-N-Methyl-kanamycin B, BB-K 140

Zu einer Suspension von 2,0 g (3,25 mMol) 6'-N-Cbz-Kanamycin B in 100 ml trockenem Pyridin gibt man 20 ml Trimethylsilylchlorid und 50 ml Hexamethyldisilazan bei 70⁰C unter Rühren zu und rührt die Mischung bei derselben Temperatur über Nacht. Der Niederschlag wird durch Filtrieren entfernt und mit trockenem THF gewaschen. Das Filtrat wird mit den Waschflüssigkeiten vereinigt und zur Trockene einge-

- 36 -

S0982A/0

dampft. Den öligen Rückstand löst man in 80 ml trockenem TIIF, Die Lösung wird tropfenweise zu einer gerührten Suspension von 4,4 g Lithiumaluminiumhydrid in 200 ml trockenem THF zugegeben und die Mischung wird über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Kühlen behandelt man die Reaktionsmischung vorsichtig mit Eiswasser, stellt mit 2n HCl auf pH 7 ein und dampft unter vermindertem Druck zur Trockene ein. Nach dem gründlichen Waschen mit Äthanol löst man den Rückstand (2,7 g) in 5 ml Wasser und chromatographiert auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NIL⁺; 40 ml). Die Säule wird mit 300 ml Wasser gewaschen und mit 0,1n Ammoniak eluiert. Das Eluat sammelt man mit 10 ml-Fraktionen und überwacht mit Ninhydrinspottest, Scheibentest (B. subtilis PCI 219) und TLC (Silikagelplatte, CHCl^-CH^OH-28 % NH^OH-H₂O = 1:4:2:1). Die Fraktionen 70 bis 134, die einen Ninhydrinpositiven und bioaktiven Spot bei Rf 0,47 nach TLC zeigen, werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man 889 mg (55 %) BB-K 140 mit Schmelzpunkt 177 Ms 181⁰C (Zersetzung) erhält.

NMR (D₂O): 2,74 ppm (3H, s, N-CH ).

Analyse c_iqH,_qN 0 -H CO :

C H · N

ber.: 42,93 7,39 12,52 % gef.: 42,93 7,13 11,86 %

Beispiel

1-N-[L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-kanamycin B (BB-K 142)

Eine Mischung von 253 mg (1 mMol) N-CBz-L-y-Amino-a-hydroxybuttersäure, 115 mg (1 mMol) N-Hydroxysuceinimid (HOSu) und 206 mg (1 mMol) DCC wird 3 Std. bei 5°C gerührt und filtriert, um den Niederschlag zu entfernen, der sich während

- 37 609824/0971

der Reaktion abgeschieden hat. Die erhaltene aktive Esterlösung wird zu einer Lösung von 497 mg (1 mMol) 6'-N-Methyl-kanamycin B (BB-K 140) in 10 ml Wasser zugegeben und die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Man filtriert die Reaktionsmischung und dampft im Vakuum ein. Den Rückstand löst man in 5 ml Wasser und adsorbiert an einer Säule mit CG-50 Ionenaustauscherharz (NH^⁺-TVp; 45 ml), die nacheinander mit 200 ml Wasser, 1500 ml 0,05n Ammoniak und 500 ml 0,3n Ammoniak eluiert wird. Das Eluat sammelt man in 10 ml-Fraktionen. Das gewünschte Zwischenprodukt-Derivat ist in den Fraktionen bis 72 enthalten, die mit 0,05n Ammoniak eluiert wenden, während 163 mg (33 %) BB-K 140 aus den mit 0,3n Ammoniak eluierten Fraktionen gewonnen werden.

Eine Lösung des Zwischenprodukt-Derivats in 20 ml 50 %igem THF wird über Nacht unter Normaldruck in Gegenwart von 30 mg 10 % Palladium-auf-Aktivkohle hydriert. Die Reaktionsmischung wird filtriert und auf ungefähr 4 ml konzentriert. Man adsorbiert das Konzentrat auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH₄ ⁺-TyP; 10 ml), die mit I50 ml Wasser gewaschen und hintereinander mit 350 ml 0,05n NH₄OH, 300 ml 0,1 η NH₄OH, 150 ml 0,3n NH₄OH und 300 ml 0,5n NH₄OH eluiert wird. Man sammelt das Eluat in 15 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 67 und 68, die einen bioaktiven Spot bei ■ Rf 0,22 gemäß TLC (Silikagelplatte; CHCl₅-CH₃OH^S % NH₄OH-HpO = 1:4:2:1) aufweisen, werden vereinigt und auf einer Säule mit CG-50 (unterer Teil NH₄ ⁺-TyP 1 ml; oberer Teil Tetraminkupfer-Typ 2 ml) nochmals chromatographiert. Man eluiert die Säule mit 100 ml 0,5n NH₄OH und dann mit 50 ml 1,On NH₄OH und sammelt das Eluat in 5 ml-Fraktionen. Die Fraktionen 15 bis 33 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei man 29,4 mg (5 %) des gewünschten bioaktiven Produkts, BB-K 142 mit Schmelzpunkt 188 bis 192°C (Zersetzung) erhält.

- 38 -

609824/0971

IR(KBr):
Analyse

	C	6,	H	11	N
ber.:	41,55	6,	97	10	,63 %
gef.:	41,52	72	,95 %

Man erhitzt eine kleine Probe BB-K 142 auf 100°C 1 Std. lang in 0,5n NaOH, wobei man o'-N-lfethyl-kanamycin B und L-HABA erhält; dies wird durch TLC (Dlinns chichtchr oma to gr aphie) bestätigt.

Beispiel 8

1 -N- [L-(-) -ß-Amino-oc-hydroxypropionyl ]-6^f -N-methylkanamycin B (BB-K 148)

Eine gerührte Mischung von 12.0 mg (0,5 mMol) N-Cbz-L-Isoserin, 58 mg (0,5 mMol) HOSu und 103 mg (0,5 mMol) DCC in 5 ml THF wird bei 5°C über Nacht stehengelassen. Nachdem die Mischung filtriert wurde, gibt man das Filtrat zu einer Lösung von 248 mg (0,5 mMol) BB-K 140 in 5 ml "Wasser und rührt über Nacht. Nach dem Entfernen des THF wird die wäßrige Lösung auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH^⁺-TVp; 10 ml) adsorbiert. Das Eluieren wird mit 300 ml 0,5n NH^OH, gefolgt von 300 ml 0,1 η NH^OH durchgeführt, und man sammelt 10 ml-Fraktionen. Das gewünschte Zwischenprodukt-Derivat (68 mg) wird durch Eindampfen der Fraktionen 18 bis 31 erhalten, die mit 0,05n NH^OH erhalten werden, während man 69 mg (28 %)BB-K 140 aus den mit 0,1η Ammoniak eluierten Fraktionen gewinnt.

Eine Lösung des Zwischenprodukt-Derivats in 10 ml Wasser wird über Nacht in Gegenwart von 20 mg 10 % Pd-C hydriert und die Reaktionsmischung wird filtriert und auf ungefähr

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609824/0971

M/16 305 _<

5 ml konzentriert. Man chromatographiert das Konzentrat auf einer Säule mit Amberlite CG-50 (NH^⁺; 8 ml) und eluiert nacheinander mit 280 ml 0,05η ΝΗλΟΗ, 340 ml 0,1 η NH^OH und 200 ml 0,2n NH^OH. Die gewünschte bioaktive Komponente (35 mg) erhält man aus den mit 0,2n NHiOH eluierten Fraktionen. Das Produkt zeigt noch immer 2 bis 3 Ninhydrin-positive Spots und wird durch nochmaliges Chromatographieren auf einer Säule mit CG-50 (unterer Teil NH^⁺-Typ 1 ml; oberer Teil Tetraminkupfer-Typ 2 ml)gereinigt,die nacheinander mit 60 ml 0,3n NH_A0H, 110 ml 0,5n NH, OH und 100 ml 1,On NH^OH eluiert wird. Das gewünschte Produkt, BB-K 148, wird aus den Fraktionen 40 bis 50 erhalten, die mit 0,1η ΝΗ^ΟΗ eluiert wurden.

Ausbeute 8,1 mg (3 %); Schmelzpunkt 190 bis 1.98°C (Zersetzung) .

IR(KBr): Vc-O ¹⁶³° ¹

Beispiel 9

1-N-[L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl]-6'-N-methyl-kanamycin B

Ersetzt man in der Arbeitsweise des Beispiels 5· das dort verwendete 6'-N-Methyl-kanamycin A durch eine äquimolare Menge an 6'-N-Methyl-kanamycin B, so erhalt man das Titelprodukt.

Amberlite CG-50 ist die Handelsbezeichnung für die chromatographische Qualität eines schwach-sauren Kationenaustauscherharzes eines Carbonsäure-polymethacryltyps.

Die Cupra-ammoniumform von Amberlite CG-50 wird auf die folgende Weise hergestellt: Zu einer gerührten Suspension von CG-50 (NH^⁺) in Wasser gibt man 10 %ige Kupfer-II-sulfatlö-

- 40 -

609824/097 Γ

sung, um das Kupfersalz von CG-50 zu erhalten, das filtriert wird. Man wäscht das Harz mehrmals mit Wasser und behandelt dann unter Rühren mit 1n ΝΗλΟΗ, filtriert und wäscht mehrmals mit Wasser, wobei man die tief-blaue, Cupra-ammoniumform von CG-50 erhält.

Beispiel 10

Herstellung des Mononulfatii.nl ze r. von 1-[ΐ,-(-)-γ-Απιάηο-ίϊ-hydroxybutyrylJ-6'-N-methyl-kanamycin Λ oder B

Ein.Mol 1-[L-(-)-Y-Amino-ot-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin A oder B werden in 1 bis 3 Ltr. Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, um irgendwelche ungelöste Feststoffe zu entfernen. Zur gekühlten und gerührten Lösung gibt man 1 Mol Schwefelsäure, gelöst in 500 ml Viasser. Die Mischung wird 30 Min. rührengelassen, worauf man kaltes Äthanol zur Mischung zugibt, bis ein Niederschlag auftritt. Die Feststoffe werden durch Filtrieren gesammelt und man stellt fest, daß es sich um das gewünschte Monosulfatsalz handelt.

Beispiel 11

Herstellung des Disulfatsalzes von 1-[L-(-)-ß-Amino-ahydroxypropionylj-e'-N-methyl-kanamycin A oder B

35 g 1-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-6'-N-methylkanamycin A oder B werden in 125 ml entionisiertem Wasser gelöst. Man senkt den pH mit 50 % V/V Schwefelsäure auf

7 bis 7,5 ab.

8 1/2 g Darco G-60 (Aktivkohle) werden zugesetzt und die Mischung wird bei Umgebungstemperatur 0,5 Std. aufge-

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609824/Q971

schlämmt. Man entfernt die Kohle durch geeignetes Filtrieren und wäscht mit 40 ml Wasser. Die Wasserwäsche wird zum Filtrat zugesetzt.

Das obige vereinigte Filtrat/Waschflüssigkeit wird mit 50 % V/V Schwefelsäure auf pH 2 bis 2,6 eingestellt. Es entwickelt sich eine große Menge Kohlendioxid. Man läßt die Lösung unter Rühren 20 Min. am Laborvakuum, um zusätzliches Kohlendioxid auszutreiben.

Zur entgasten Lösung gibt man 8 1/2 g Darco G-60. Die Mischung wird 0,5 Std. bei Umgebungstemperatur aufgeschlämmt. Man entfernt die Kohle durch geeignetes Filtrieren und wäscht mit 35 ml entionisiertem Wasser. Die Waschflüssigkeit wird zum Filtrat zugesetzt.

Das vereinigte FiItrat/V/aschflüssigkeit wird mit 50 % V/V Schwefelsäure auf pH 1 bis 1,3 eingestellt. Diese Lösung gibt man unter schnellem Rühren im Verlauf von 10 Min. zu 600 bis 800 ml Methanol (3 bis 4 Volumina Methanol). Die Mischung wird 5 Min. bei pH 1 bis 1,3 gerührt, durch ein Sieb mit einer Maschenweite von 0,148 mm (100 mesh) gegeben, 2 Min. gerührt und 5 Min. absitzen gelassen. Die
Hauptmenge der überstehenden Flüssigkeit wird dekantiert. Die verbleibende Aufschlämmung wird auf geeignete V/eise · filtriert, mit 200 ml Methanol gewaschen und 24 Std. bei 50°C im Vakuum getrocknet, wobei man das Titel-Disulfatsalz erhält.

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6098 24/0971

Claims

PATENTANSPRÜCHE

Verbindung der Formel

NH

IV

worin R für -OH oder -NH₂ steht und R die Bedeutungen L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-J-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz davon. ■

Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R für -OH steht und R die Bedeutungen L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-/-Amino-ahydroxyvaleryl besitzt.

Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R für -NHp steht und R die Bedeutungen ]>(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.

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M/16 305

4. Verbindung gemäß Anr.pruch 2, worin R für -OH nteht und R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-u-hydroxybutyryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

5. Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R für -NH₂ steht und R die Bedeutung L-(-)-y-Amino-a-hydroxybutyryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

6. Verbindung gemäß Anspruch 2, worin R für -OH steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

7. Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R für -NHp steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

8. Verbindung gemäß Anspruch 2, worin R für -OH steht und R die Bedeutung L-(-)-cf-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

9. .Verbindung gemäß Anspruch 3, worin R⁵ für -NH₂ steht

und R die Bedeutung L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt, oder ein Mono- oder Disulfatsalz davon.

10. Pharmazeutisches Mittel, bestehend aus einer antibakteriell wirksamen Menge einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 und einem Träger.

11. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel

IV .

60 9 824/0971

M/16 305

NH.

NH-R

(IV)

worin R für L-(-)-Y-Amino-!«-hydroxybutyryi, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl. oder L-(-)-cf-AmAnq-re-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen -OH oder -NEU besitzt, dadurch, gekennzeichnet, daß man in aufeinanderfolgenden Stufen:

A) die Verbindung der Formel II

H^NH-CH,

•worin R für -OH oder -NH₂ steht, mit einem Acylierungsmittel der Formel VII

OH 0 W-NH-(CH₂)_n-CH-S-M

- 45 -

(VII)

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M/16 305

• Η.

■worin W einen Rest darstellt, der ausgewählt ist unter:

O CH, O

H '³I

H₂-O-C-, CH₃-C-O-C-,

CH.

C— , X-CH₀-C, oder

O O

I! Il

-CHCHC

M einen Rest bedeutet, der ausgewählt ist unter

, -0-f V-NO, ,

-0-f W-NOo iÖ.

-0-N

J,

und

- 46 -

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M/16 305

-o-

4 5

worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,4 in einem Lösungsmittel, das ausgewählt ist unter einer Mischung aus Wasser und Äthylenglykoldimethyläther, Dioxan, Dimethylacetamid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran und Propylenglykoldimethyläther, acyllert, wobei man die Verbindung der Formel III

NH

MH.

III

NH-C=O HC-OH

NH

worin n, R und W die vorstehenden Bedeutungen besitzen, erhält; und

B) die Blockierungsgruppe W aus Verbindung III nach an sich bekannten Methoden entfernt, wobei eine Verbindung der Formel IV gebildet wird.

- 47 -

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M/16 305 ^ ^

12. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe A) mit einem Acylierungsmittel der Formel

OH 0 W-NH-(CH₂)_n-CH - C-M

worin W einen Rest der Formel

darstellt und M für

oder

4 5

steht, worin R und R die vorstehenden Bedeutungen besitzen und η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem Verhältnis von ungefähr 0,8 Mol Acylierungsmittel zu ungefähr 1,1 Mol Verbindung VII in wäßrigem Tetrahydrofuran, durchführt.

13. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 und 12, dadurch gekennzeichnet, daß man als Blockierungsgruppe ¥ einen Rest der Formel

- 48 -

82A/097t

M/16 305

wählt und diesen in Stufe B) durch Hydrieren entfernt.

14. Verfahren gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart eines Metallkatalysators in einem aus Wasser bestehenden und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel bestehenden Lösungsmittelsystem durchführt.

15. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 13 und 14, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium, Platin, Raney-Nickel, Rhodium, Ruthenium oder Nickel in einer Mischung aus Wasser und Dioxan, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimethyläther oder Propylenglykoldimethyläther, durchführt.

16. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß man das Hydrieren mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle in einem 1:1 Wasner/Dioxan-Lönungsmittelsystem und in Gegenwart einer katalytischen Menge Eisessig durchführt.

17. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel IV

- 49 -

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M/16 305

NH.

NH-R

(IV)

worin R für L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl oder L-(-)-cT-Amino-α-hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutungen -OH oder -NH₂ besitzt, dadurch gekennzeichnet, daß man in aufeinanderfolgenden Stufen:

A) die Verbindung der Formel II mit einem Acylierungsmittel der Formel

Η,-Ö-C-NH-

OH O

oder

Η,-O-C-NH-ieH,) -C-C- Ο —

H ..

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt, in einem wäßrigen Tetrahydrofuran- oder wäßrigen Dimethylformamid- Aceton- Lösungsmittelsystem bei unge-

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M/16 305

fähr Raumtemperatur acyliert, wobei die Verbindung der Formel III

NH.

NH-C-O

HC-OH I

XIZ

NH

I O

gebildet wird, worin η eine ganze Zahl von 1 bis 3 darstellt; und

B) die Verbindung III in wäßrigem Tetrahydrofuran in Gegenwart von Palladium-auf-Aktivkohle bei ungefähr atmosphärischem Druck hydriert, wobei die Verbindung IV gebildet wird.

18. Verfahren gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß man das Acylierungsmittel der Stufe A) in situ durch Vermischen einer Verbindung der Formel

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M/16 305 - .

< Γ2 -

S OH O

T l

H_n-O-C-NH- (CH, ) -C—C —OH 2 α η

mit äquimolaren Mengen N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid und Dicyclohexylcarbodiimid, erzeugt.

19. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß R für OH steht und R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypr op ionyl oder L-(-)-cf-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.

20. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-Y-Amino-orhydroxybutyryl steht und R"* die Bedeutung OH besitzt.

21. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-ß-Amino-αχ

hydroxypropionyl steht und R^ die Bedeutung OH besitzt.

22. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 19, da- ;

durch gekennzeichnet, daß R für L-(-)-J-Amino-rr-

•5
hydroxyvaleryl steht und R die Bedeutung OH besitzt.

23. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß R für NHp steht und R die Bedeutungen L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl, L-(r)-ß-Amino-oc-hydroxypropionyl oder L-(-)-</-Amino-a-hydroxyvaleryl besitzt.

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M/16 305

24. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß Ir für NH₂ steht und R die Bedeutung L-(-)-Y-Amino-<r-hydroxybutyryl besitzt.

25. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß R^ für NEU steht und R die Bedeutung L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl besitzt.

26. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 18 und 23, dadurch gekennzeichnet, daß R für NH₂ steht und R die Bedeutung L-(-)-cT-Amino-α-hydroxyvaleryl besitzt.

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