DE2534982C3

DE2534982C3 - 1-N- [(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroylJ- und 1-N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl] -XK-62-2, deren pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE2534982C3
Application number: DE2534982A
Authority: DE
Inventors: Yasuki Kawasaki Kanagawa Mori; Shinji Machida Tokio Tomioka
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 1974-08-05
Filing date: 1975-08-05
Publication date: 1978-08-17
Also published as: CA1044229A; GB1508814A; BE832128A; FR2281129B1; ES440046A1; FR2281129A1; AU8369575A; SE7508793L; US4076931A; JPS575799B2; DE2534982A1; JPS5119744A; DE2534982B2; AR210333A1

Description

HO

NHCOCH-(CH₂I_n-NY₄Y₅

\ ^NO-- _Λ

CH, OH

die Schutzgruppen abspaltet und die erhaltenen Verbindungen gegebenenfalls in ihre pharmazeutisch verträglichen Säurcadditionssalze überführt.

Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen angegebenen Gegenstand. Das Antibiotikum XK-62-2 und seine Herstellung durch Fermentation sind in der DE-OS 23 26 781 beschrieben. Danach ist das Antibiotikum XK-62-2 leicht erhältlich, indem man Actinomycelen, wie Micromonospora sngamiensis, Micromonospora echinospora und Micromonospora purpurea, nach gewöhnlich beim Züchten von Actinomyceten angewandten Methoden kultiviert. Speziell beimpft man ein flüssiges Medium, das eine Kohlenstoffquellc enthält, die der Mikroorganismus verwerten kann, wie Zucker, Kohlenwasserstoffe, Alkohole, organische Säuren, und anorganische oder organische Stickstoffquellen und anorganische Salze und wachstumsfördernde Faktoren mit Stämmen der obengenannten Mikroorganismen und kultiviert 2 bis 12 Tage bei 25 bis 40 C. Isolierung und Reinigung des XK-62-2 werden durch entsprechende Kombination von Adsorption und Desorption von

frO Ionenaustauschharz^ und Aktivkohle und säulenchromatographisch unter Verwendung von Cellulose. Aluminiumoxid und Silikagel durchgeführt. Das XK-62-2 kann in dieser Weise in Form des Sulfates oder als freie Base erhalten werden.

XK-62-2 ist eine basische Substanz, die als weißes Pulver erhalten wird. XK-62-2 hat die Summenformel C2nH.11 NsO; und das Molekulargewicht 463. Die Substanz ist in Wasser und Methanol gut löslich, in Äthanol und Aceton leicht löslich und in Chloroform, Benzol, Äthylacetat und η-Hexan unlöslich.

Die Derivate des XK-62-2 gemäß der Erfindung, nämlich l-N-|(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 und l-N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl-XK-62-2, sind gegenüber einer Vielfalt grampositiver und gramnegativer Bakterien stark antibakteriell aktiv und besitzen insbesondere eine bemerkenswert starke antibakteriell Aktivität gegenüber denjenigen Bakterien, die gegen

die bekannten Aminoglykosid-Antibiotika resisteni sind. Pie Antibiotika gemäß der Erfindung bieten sich zur Behandlung verschiedener Infektionen an, wie Infektionen des Harntraktes und Infektionen der Atemwege, die von verschiedenen phlogogenen Baklerien hervorgerufen werden.

Die neuen halbsynthetischen Derivate des XK-62-2 oder deren pharmazeutisch verträgliche, nichttoxische Säureadditionssalze können hergestellt werden, indem man '"

(a) das Antibiotikum XK-62-2 mit einem Acylierungsmittel zu einer Zwischenverbindung umsetzt und danach die Amino-Schutzgruppe der Zwischenverbindung eliminiert oder

(b) das Antibiotikum XK-62-2, dessen Aminogruppen, die an die Kohlenstoffatome in der 2'- und/oder 6'-Stellung gebunden sind, durch Schutzgruppen blockiert worden sind, mit einem Acylierungsmittel zu einem Zwischenprodukt umsetzt, und danach die Amino-Schutzgruppen eliminiert.

Vorzugsweise arbeitet man nach (b), da hierbei das gewünschte Endprodukt in besserer Au. beute erhalten werden kann.

Die Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen sind die Säureadditionssalze mit pharmazeutisch verträglichen, nichttoxischen Säuren, einschließlich verschiedener anorganischer Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Kohlensäure, und verschiedener organischer Säuren, wie Essigsäure, Fumarsäure, Aprelsäure, Zitronensäure. Mandelsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Ascorbinsäure.

Nach einer Ausführungsform der Erfindung wird eine Lösung angesetzt, die das Antibiotikum XK-62-2 in einem zweckentsprechenden Lösungsmittel gelöst enthält. Die Lösung wird mit 0,4 bis 2,5 Äquivalenten, vorzugsweise 0,7 bis 1,5 Äquivalenten, eines Acylierungsmittels je Äquivalent XK-62-2 versetzt. Die Reaktionstemperatur beträgt -50 bis +50° C, vorzugsweise -20 bis +20°C. Gewöhnlich ist die Umsetzung in 1 bis 15 Stunden vollständig.

Als Aminoschutzgruppe kann jede leicht eliminierbare Schutzgruppe Verwendung finden, wie sie gewöhnlich bei Peptidsynthesen herangezogen werden. Solche Schutzgruppen und die entsprechenden Schutzreagenzien. welche die Schutzgruppe einzuführen vermögen, sind von M. Bodanszky »Peptide Synthesis«, Seite 21 bis 41 und 75 bis 135 (John Wiley & Sons. New York 1966), A. K a poor »Journal of Pharmaceutical Sciences« Vol. 59, Seite 1 bis 27 (1970) und M. B ο d a η s ζ k y »Synthesis«, Seite 453 bis 463 (1972) beschrieben worden.

Bei der Acylierung arbeitet man vorzugsweise mit aktivierten Carbonsäure-Derivaten, besonders mit N-Hydroxyiuccinimidestem. Die Hydroxysuccinimidester werden erhalten, indem man 2-Hydroxy-5-aminovaleriansäure oder 2-Hydroxy-6-aminocapronsäure mit N-Hydroxysuccinimid in Gegenwart eines dehydratisierend und kondensierend wirkenden Mittels, wie Dicyclohexylcarbodiimid, umsetzt. t>o

Die anfallende, das Acylierungsmittel enthaltende Reaktionsmischung kann in dieser Form für die Acylicrungsreaktion verwendet werden, aber man kann auch das Acylierungsmittel aus der Reaktionsmischling isolieren und dann zur Acylierungsrcaktion einsetzen. h>

Die AcyiiTungsreaktion läuft in Gegenwar: von Dicyclohocylcarbodiimid ab. Anstelle Dicyclohcxjlcarbodiimid kann auch Cyanamid verwendet werden.

Lösungsmittel für die Acylierungsreaktion lassen sich aus der Gruppe Wasser, Alkohole, wie Methanol, Äthanol, 2-Propanol, Butanol, Amide, wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimeihyläther, Pyridin wählen. Ein Lösungsmittel-Gemisch aus Äthanol und Wasser (Volumenverhältnis 2:1) wird besonders bevorzugt.

Die durch die Acylierungsreaktion eingeführten Aminoschutzgruppen des Derivats des XK-62-2 können nach an sich bekannten Methoden eliminiert werden.

Wenn die Aminoschutzgruppen Benzyloxycarbonylgruppen sind, ist die Eliminieirung leicht durchführbar, indem man bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck eine Hydrogenolyse mit einer kleinen Menge an Säure, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Essigsäure, in Gegenwart eines Metallkatalysators, wie Palladium, Platin, in mindestens einem Lösungsmittel aus der Gruppe Wasser, Alkohole. Tetrahydrofuran, Dixoan, Dimethyformamid, Dimethylacetamid, Äthylengylkoldimethyläther durchführt.

Das gewünschte Produkt v.-.:d aus dem auf diese Weise erhaltenen ReaktionsgemisJn säulenchromatographisch unter Verwendung von Absorptionsmitteln, wie lonenaustauschharzen. Silikagel. Aluminiumoxid und Cellulose, oder dünnschichtchromatographisch uüter Verwendung von Silikagel. Aluminiumoxid oder Cellulose isoliert und gereinigi.

Nach einer anderen Ausführungsform der Erfindung werden die Aminogruppen des XK-62-2 werden deshalb vor der Acylierungsreaktion in der 2'-Stellung und/oder der 6'-Stellung geschützt, weil die Reaktivität der an das Kohlenstoffatom in 1-Stellung des XK-62-2 gebundenen Aminogruppe geringer als die Reaktivität derjenigen in der 2'-Stellung oder 6'-Stellung des XK-62-2 ist.

Die Schutzgruppen werden an den Aminogruppen eingeführt, die an die Kohlenstoffatome der 2'-Stellung und/oder 6'-Stellung des XK-62-2 gebunden sind, indem man XK-62-2 mit einem Aminoschut^reagi-ns in einem Lösungsmittel umsetzt. Vorzugsweise setzt man 1 Mol XK-62-2 mit 1,0 bis 4,5 Mol, in besonders bevorzugter Weise 1,5 bis 2,6 Mol, des Schutzgruppenreagenz bei einer Temperatur von -50 bis +50⁰C, vorzugsweise -20 bis+30° C, um.

1 Mo! des Ausgangsmaterials XK-62-2, dessen an die Kohlenstoffatome in 2'- und/oder 6'-Stellung gebundene Aminogruppen geschützt sind, wird mit 0,5 bis Mol, vorzugsweise 0,7 bis 1,2 Mol eines Acylierungsmittels der in Anspruch 2 aufgeführten Struktur umgesetzt. Als Acylierungsmittel und Lösungsmittel für diese Reaktion eignen sich die vorstehend beschriebenen. In ähnlicher Weise wird die Eliminierung der Aminoschutzgruppen und die Isolierung und Reinigung des gewünschten Produktes in der gleichen Weise durchgeführt.

Die chemischen und physikalischen Kennzahlen, wie Kernresonanzspektrum, Infrarotabsorptionsspekirum, Schmelzpunkt, spezifische Drehung, Elementaranalyse und die MHK-Werte gegenüber verschiedenen Arten von Bakterien stimmen bei den Produkten, die nach den oben beschriebenen beiden Ausführungsformen (a) und (b) erhalten werden, überein.

Die minimalen Hemmkonzentraiionen (MHK-Werte) der beiden erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber verschiedenen gramnegativen und grampositiven Bakterien, bestimm! nach der Agar-Verdünnungsmethode. sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:

	25 34	982	8
7
MIIK-Werlc. y.g/ml			ly-S- l-N-\|(I.)-2-lly-
Stämme	XK-f.2-2	1-N-I(I.)-2-llyil ro*	(Iroxy-d-iimino-
		aniinuviilcrovll-	caprovl\|-
		X K-62-2	XK-62-2
			4,17
I'scudomonas	0.13	0,52
aeruginosa BMIII			0,033
Staphylococcus au re us	< O.(K)4	0,(K)8
ATCC- 6538P			0,(K)X
Bacillus suhtilis	< 0.004	< 0,(HM
No. 10707			0.26
Protons vulgaris	0.016	0.065
ATCC 6897			(1,26
Shigella sonnoi	0.033	0,065
ATCC 9290		il it I A
.Kit 11 ii/1 n_i κι iy \ η twin	I/,!'»'"
ATCC- 9992			0.033
Klcbsiella pncunioniac	< 0.004	O.(K)8
ATCC 10031			0.13
Eschcrichiu coli	0.016	0,033
ATCC 26			0.013
Eseherichia coli	1.04	0.065
KY 8327			0,065
Hschcrichia coli	1.04	0,033
KY 8348

Escherichia coli KY 8327 und KY 8348 cr/etigi intra/ellular Adenyltransferase bzw. Acetylirarisferase; ilas erstgenannte Enzym inaktiviert Kanamycine und Cientamicine durch Adenylicrung und das letztgenannte Gentamicine durch Acetylierung.

Wie die vorstehende Tabelle zeigt, besitzen I-N-[(1.)-21lydroxy-5-aminovaIeroyl]-XK-62-2 und 1-N[(L)-2-Hydro:< y-6-aminocaporyl]-XK-62-2 eine sehr starke antibaktericlle Aktivität, insbesondere auch gegen F.scherichia coli KY 8327 und Escherichia coli KY 8348 (beide sind gegen bekannte Aminoglykosid-Antibiotika. z. B. Kanamycine und Gentamicine. resistent).

Herstellung der als Acylierungsmittel eingesetzten Ausgangssubstanzen (siehe hierzu auch DT-OS 23 11 5524. Beispiele Hund 15):

A) Herstellung von !.-( -)-2-hydroxy-5-carbobenzoxyatiiinovaleriansäure-N-hydroxysuccinimidester

a) Ls werden 1,33 g (10.0 niMol) L-( -)-2-Hydroxy-5-amino\'alcriansäure u.d 0.80g (20.0 niMol) NaOH in 13.0 ml Wasser gelöst. Zu dieser Lösung wird tropfenweise bei einer Temperatur von 0 bis 5° C unter Rühren 2,04 g (12,0 rnMol) Carbobenzoxychlorid zugegeben. Die Zugabe ist nach 1 Stunde vollständig. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur weitere 3 Stunden reagieren gelassen.

Zu dem Reaktionsgemisch werden zur Entfernung des nicht umgesetzten Carbobenzoxychlorids 20 ml Äther zugegeben. Die erhaltene wäßrige Lösung wird mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf einen pH 2,0 eingestellt. Die wäßrige Lösung wird dreimal mit jeweils 15 ml Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden vereint und mit wäßriger gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und dann mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Anschließend.wird der Äther entfernt. Die erhaltenen Kristalle werden aus einem Lösungsmittelgemisch von Äthylacetdt und n-Hexan umkristallisiert, wobei man 2,20 g der reinen L-(-)-2-r > llydroxy-S-carbobcnzoxyaminovaleriansäiire erhält.
Ausbeute: 82.5%
Schmelzpunkt: 113.0 bis 113.5"C
Spezifische Drehung: [α] >i + 2,40"

(C = 2.0 Methanol)
in Infrarotabsorptionsspektrum(KBr,cm ')

3460.3350,2930.1726.1688,1531.1451.

1279.1140,1116.1031.728.690.

Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol -d₄)
!> Λ (in p. p. m. aus TMS)

1,73,(4H,m),3,20(2H.m),

4,20 (IH, breites s),

5.14 (2Hs), 7,43 (5H,s)

. Elementaranalyse für CuH;;NO-,:

Berechnet: C 58.42, H 6,41. N 5.24%;
gefunden: C 58.45. H 6.48. N 5.45%.

b) Es werden 0,53 g (2,0 mMol) L-( - )-2-Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleriansäure und 0,23 g (2,0 mMol)

N-Hydroxysuccinimid in 20 ml Äthylacetat gelöst. Zu der Lösung werden 0,41 g (2,0 mMol) N.N'-Dicyclohexylcarbodümid bei einer Temperatur von 0 bis 5° C zugegeben. Man läßt die Mischung über Nacht bei der

bo gleichen Temperatur regagieren. Der entstandene Niederschlag von Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff wird durch nitrieren entfernt und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft Man erhält 0,71 g des gewünschten Produktes in Form einer farblosen,

b5 transparenten, viskosen, öligen Substanz.

Ausbeute: 963%

InfrarotabsorptionsspektrumiKBrcm-¹)
ν C = 01810.1785.1725

U) Herstellung von I. -( )-2llydroxy-6 earbobenzoxyaminocapronsäure-N-hydroxysuccinimidesler

a) Ls werden 1,47g (10,0 mMol) l.(-)-2 Hydro xy-6-aminocapronsiiiire und 0,80 g (20,0 mMol) NaOII in 15 ml Wasser gelöst. Zu der Lösung werden tropfenweise unter Rühren bei einer Temperatur von 0 bis ^c C 2.04 g (12.0 mMol) Carbobenzoxychlorid gegeb'.Mi. Nach I Stunde ist die Zugabc vollständig. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur weitere 3 Stunden reagieren gelassen. Zu der I ösung werden 20 ml Äther gegeben, um das nicht umgesetzte Carbobenzoxychlorid zu entfernen. Die erhaltene wäßrige Lösung wird mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH 2.0 eingestellt. Die wässerige Lösung wird dreimal mit jeweils 15 ml Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden vereint und mit wäßriger gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und dann werden die Ätherextrakte mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Der Äther wird entfernt. Die erhaltenen Kristalle werden aus einem Lösungsmittel· gemisch von Äthylacetat und n-Hexan umkristallisiert. wobei man 2.20 g der l.-( - )-2-llydroxy-6-carbobcnzoxyaminocapronsäure in reiner Form erhält.
Ausbeute: 78,2%

Schmelzpunkt: 84.0 bis 84,5'C
Spezifische Drehung: [<x] 'J + 0.64"

(C = 2.0 Methanol)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBr.cm ')

3460, 3320.2940,1739. 1680, 1532, 1451.

1274. I 139. 1 122.1098.900. 746.093.
Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Dcuterochioroform)

ι) (in ppm aus TMS)

1.55(6H,m). 3.23(211, breites s),

4.3O(1H. breites s) 5,19(2H,s).

5.96 (3H, breites s), 7.45 (5H,s)

Elementaranalyse für CnHmNO₁:

Berechnet: C 59,78, H 6.81. N 4,98%:
gefunden: C 59.73, H 6,83, N 4,96%.

b) Es werden 0,56 g (2,0 mMol) L-( - )-2-Hydrox;. 6 carbobenzoxyaminocapronsäure und 0.23 g (2,0 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 20 ml Äthylacetat gelöst. Zu der Lösung werden bei einer Temperatur von 0 bis 5"C 0.41 g (2.0 mMol) N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid zugegeben. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur (von 0 bis 5⁰C) über Nacht reagieren gelassen. Der entstehende Niederschlag von N.N'-Dicyclohcxylhurnstoff wird durch Filtrieren entfernt und das erhaltene Filtrat wird unter vermindertem Druck abgedampft. Ausbeute 0,72 g in Form eines farblosen, transparenten, viskosen Öls erhalten.

Ausbeute: 95,0%

Infrarotabsorptionsspektrum (KBr, cm~')
vC --= 01812,1787,1724

Beispiel 1

a) Herstellung und Isolierung von
2'-N,6'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2

Es werden 4,00 g (8,65 mMol) XK-62 2 in 92 m! wäßrigem, 50%igem Dimethylformamid gelöst Zu der Lösung wird tropfenweise eine Lösung aus 3,23 g (123 mMol) N-Hen/yloxycarbonyloxy-succinimid in 70ml Dimethylformamid unter Rühren bei einer Temperatur von 0 bis 5 C gegeben. Nach 3 Stunden ist die Zugabe vollständig. Die Mischung wird dann bei 0 bis 5 C über . Nacht stehengelassen. Durch Dünnsehicht-Chromatogiuphie über Kiesclgcl (F.ntwicklungsmittel — Isopropanol in konzentriertem wäßrigem Ammoniak /w Chloroform im Verhältnis 4:1 : I. Farbreagens Ninhydrin) wird die Anwesenheit von nichtumgesetzten μ, XK-62-2 zusätzlich zu 6'-N-Carnobenzoxy-XK-62-2 (Rf: 0,71). 2'-N-CarbobcnzoxyXK-62-2 (Rf: 0,62) und 2'-N.6^:-N-Dicarbobenz()xy-Xk-62-2 (Ri: 0,88) bestätigt. Das Reakiionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert. Zu dem erhaltenen Rückstand werden ι· 71 ml Wasser und 10ml Äthylacetat gegeben. Das Ciemisch wird heftig gerührt und dann läßt man es in zwei Schichten absetzen, el. h. in eine Wasserschicht und in eine Äthylneetatschicht. Die Wasserschicht wird zweimal mil jeweils 30 ml Äthylacctal extrahiert. Beide .'Ii Äthylacetalsehicliten tinil die Äthylacetatextrakte werden vereingi, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Als Ergebnis erhält man 2.24 g 2'-N.b'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2 als hellgelben amorphen Feststoff in einer Ausbeute von j. 3^r\|%.

Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmaterial für die nachfolgende Reaktion geeignet, (iewünschtenfalls kann das Produkt aber weiter gereinigt werden durch Chromatographie über einer Kiesclgelsäule (Entwickln lungsmittel — lsopropanol zu konzentriertem wäßrigem Ammoniak zu Chloroform im Verhältnis 4 : 1 : I).
Schmelzpunkt:93 bis 95"C
Spezifische Drehung:^] '" + 8Kb

(C = 0,1 2 Methanol)

;ί Infrarotabsorptionsspektrum (KHr. cm ')
3800, 3000.2950. 1700. 1540. 1456. 1403,
1310, 12%, 1 160. 1050, 1010,960, 7 38,
700,605.

Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol ic -dj)

Λ (in ppm aus TMS)
1.13 (311, s). 2.62 (3H. s), 3.01 (311. s).
5,30 - 4,90 (6H, breites s), 7,43 (511, s),
7,47 (511. s)

'"' Elementaranalyse fürCiftH-.-.N-.Oi..·'/.' ILO:
Berechnet: C 58.10. H 7.29, N 9.46%:
gefunden: C 58.02. H 7.41. N 9.70"/,,.

'" b) Isolierung von b'N-Carbobenzoxy-XK-62-2

Die gemäß a) nach der Extraktion mit Äthylacetat erhaltenen Wasserschichten werden auf etwa 15 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene

Sj Konzentrat wird einer Säule zugeführt (Durchmesser = 2,5 cm), die mit einem schwach sauren Ionenaustauschharz (Ammoniumform, 200 ml) gefüllt ist. Die Säule wird zunächst mit 200 ml Wasser gewaschen. Das Eluieren wird mit 0,1 η wäßrigem Ammoniak vorge-

Wi nommen, und dabei wird das Eluat in 10-ml-Anteilen gewonnen. 6'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 wird eluiert in den Fraktionen Nr. 48 bis 65. Diese Fraktionen werden vereint und zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt. Es werden 1,23 g eines farblosen, amorphen

b5 Feststoffes in einer Ausbeute von 23,1 % erhalten.
Schmelzpunkt 108 bis 1 '0°C
Spezifische Drehung: [λ] ?+ 127,8°
(C = 0,094 Methanol)

Methanol

Il

Infrarolabsorpiionsspektriim (KBr. cm ')
J7OO.3OOO.293O. 1690. 1596, 1480, 1452.
1402, 1250, 1143. 1096, 1050. 1020,830.
768,750,697.595.550.

Kernmagnetisches Rcsonan/spektriim (in

Λ (in ppm aus TMS)
U6(3H,s),2,fc;(3H.s),3,OI(3H.s),
5,30 - 4,90 (4H, m), 7,47 (5H,s)

Filementaranalyse für C.)kMi;N-,()i ■ HjO:

Berechnet: C 54,77. 117.84, N 11.13%.
gefunden: C" 54.91. 117,93. N 10,90%.

Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmaterial für die nachfolgende Umsetzung geeignet. Gewünschtenfalls kann das Produkt weiter gereinigt weiden durch wiederholte Säulenchromatographic in der obengenünnlpn \λ/ριί:ρ

c) isolierung von 2-N-Carbobenzoxy-XK-62-2

Im Anschluß an die Eiuicrung von b'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 wird 2'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 in den Fraktionen Nr. 78 bis 97 eluiert. Diese Fraktionen (Nr. 78 bis 97) werden vereint und zur Trockne unter vermindertem Druck konzentriert. Es werden 1.4Jg eines farblosen, amorphen Feststoffs erhallen. Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmaterial für die nachfolgende Umsetzung geeignet. Gewünschentcnialls kann das Produkt weiter gereinigt werden durch wiederholte Säulenchromatographie in der vorher erwähnten Weise.
Ausbeute: 26,7%
Schmelzpunkt: 107 bis 110'C
Spezifische Drehung:[c\J:" + 87.8"

(C = 0,10 Wasser)
lnfrarotabsorplionsspektrum(KBr,cm ')

3700,3100.2930,1702,1530,1451,1310.

1255,1141,1053,1021,960,735,697.604
Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol -d₄)

ό (in ppm aus TMS)

1,13 (3H.S), 2,42 (3H.s),2.60(3H,s),

5,13(411,breitess)

Elementaranaly.se für Ci,<H4rN-,O.)-2 H₂O:

Berechnet: C 53.08, H 8,06. N 11.06%;
gefunden: C 53.31, H 8,16, N 10.93%.

Beispiel 2

Herstellung von l-N-[L-( — )-2-Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaIeroyl]-2'-N,6'-dicarbobenzoxy-XK-62-2

0,76 g (1,0 mMol) 2'-N-6'-Dicarbobenzoxy-XK-62-2. erhalten nach Beispiel 1. werden in 20 ml wäßrigem, 50%igem Dimethylformamid gelöst. Die Lösung wird auf 0 bis 50°C gehalten und dazu werden tropfenweise unter Rühren 0,44 g (1,2 mMol) des N-Hydroxysuccinimidesters von L-(-)-2-Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleriansäure, gelöst in 15 ml Dimethylformamid gegeben.

Nach 1 Stunde ist die Zugabe vollständig. Man läßt das Gemisch über Nacht reagieren. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck eingeengt, wobe^; man einen gelblichen Rückstand erhäit, weicher die Titelverbindung enthält. Der Rückstand ist geeignet für die nachfolgende Umsetzung ohne weitere Reinigung.

Beispiel 3

Herstellung von I -N-[(l.)-2-Hydroxy-5-iiminovaleiOylj-XK-b2-2

Der in Beispiel 2 erhaltene Rückstand, der in der Hauptsache l-N-[L-( - )-2-Hydroxy-5-earbobcnzoxyaminovaleryl]-2'-N,6'-N-dicarbobenzoxy-XK-62-2 enthält, wird in 20 ml wäßrigem, 20%igcm Methanol gelöst. Zu der Lösung wird 1,0 ml Essigsäure gegeben und die Mischung wird in Gegenwart von 120 mg eines 5%igcn Aktivkohle/Palladium-Katalysators bei Raumtemperatur unter Atmosphärendruck b Stunden hydriert. Durch K icsclgcl-Dün nsch ich (Chromatographie (Entwickeln mit Isopropanol/konz. wäßrigen NH i/Chloroform 2:1: 1) wird die Anwesenheit von I ■N-[(l.)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 als Hauptanteil und eine geringe Menge von XK-62-2 (auf Grund von nichtumgcsetztem 2'-N,6'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2 in Bei-

l-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 bestätigt. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wird dann in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung wird einer Säule zugeführt (Durchmesser 1.5 cm), ti i e mit einem seh wach sauren Ionenaustauschharz (in der Ammoniumform. 50 ml) gefüllt ist. Die Kolonne wird zuerst mit 20ml Wasser gewaschen. Dann läßt man 0.2-n wäßrigen Ammoniak durch die Säule laufen und 78 mg XK-62-2 werden gewonnen. Eine weitere Eiuicrung wird mit 0.4-n wäßrigem Ammoniak vorgenommen, wobei die Komponenten des Eluats durch Dünnschieht-Chromatographic überprüft werden. Das Eluat wird in Anteilen gewonnen. Die Fraktionen, welche nur l-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 enthalten, werden vereint und dann unter vermindertem Druck eingeengt zur Trockne, wobei man 0,36 g eines farblosen amorphen Feststoffes erhält.
Ausbeute: 54,6% (aus 2'N.6'-N-Dicarbo-

bcnzoxy-XK-62-2)
Schmelzpunkt: 144 bis 147°C
Spezifische Drehung: [λ] '* +55,0°

(C = 0.100 Wasser)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBr cm ')

3400. 2950, 1650.1565, 1481,1386. 1340.

1112, 1057, 1026,818
Kernmagnetisches Resonanzspektrum

(in schwerem Wasser) (in ppm aus DSS)

1.19 (3H, s), 2,50 (3H, s), 2.67 (3H, s).

5,1 - 5.5(2H.m).

Beispiel 4

Herstellung von 1 -N-[L-( - )-2-Hydroxy-6-carbobenzoxyaminocaproyl]-XK-62-2

Es werden 0.46 g (1,0 mMol) XK-62-2 in 25 ml wäßrigen, 50%igen Dimethylformamids gelöst. Zu dieser Lösung werden tropfenweise 1,2 mMol des N-Hydroxysuccinimidesters von L-( —)-2-Hydroxy-6-carbobenzoxyaminocapronsäure in 10 ml Dimethylformamid unter Rühren bei einer Temperatur von —5 bis 0⁰C zugegeben. Nach 1 Stunde ist die Zugabe vollständig und man läßt die Mischung über Nacht reagieren. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert, wobei man einen gelben Rückstand erhält, welcher das gewünschte Produkt enthält. Der so erhaltene Rückstand ist als Ausgan^sma-

tonal für die nachfolgende Umsetzung ohne Reinigung geeignet.

H e i s ρ i c. I 5

I lcrstcllung von I -N-f(L,)-2-Hydroxy-6-i>.ininociinroyl]-XK-62-2

[3er in Beispiel 4 erhaltene Rückstand wird in 20 ml einer wäßrigen, 5O°/oigen Methanollösung gelöst. Zu dieser Lösung werden 0.3 ml Essigsäure gegeben und die Mischung wird in Gegenwart von 40 mg eines 5%igen Aktivkohle/Palladium-Katalysators hydrogcnolysicrl. Durch Kieselgel-Du nnschichtch romulogniphie "(Ilntwicklungsmittcl — Isopropanol zu konzentriertem wäßrigem Ammoniak zu Chloroform im Verhältnis 2:1 : 1) findet man zusätzlich zu der gewünschten Verbindung deren Stcllungsisomere und XK-62-2 in geringen Mengen. Der Katalysator wird durch nitrieren entfernt und das Filtrat wird unter

Ππ

rhültr

Rückstand wird dann in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung '.,ird einer Säule (Durchmesser 1.5 cm) eines schwach sauren lonenaustauschharz.es (in der Ammoniumform, 30 ml) zugegeben. Die Säule wird zunächst mit 150 ml Wasser gewaschen und dann wird 0.2-n wäßriges Ainmoniumhydroxid durch die Säule gegeben, um XK-62-2 (79 mg) zu erhalten. Eine weitere Eluicrung wird vorgenommen mit 0.4-n wäßrigem Ammoniak, wobei die Komponenten des Eluats durch Dünnschicht-Chromatographie überprüft werden. Das Eluat wir' in Anteilen aufgefangen. Die Traktionen, welche nur das gewünschte Produkt erhalten, werden vereint und unter vermindertem Druck konzentriert, wobei man 58 mg ι eines farblosen amorphen Feststoffes erhält.
Ausbeute: 8.3%
Schmelzpunkt: 140 bis 145" C
Spezifische Drehung: [\] '" + 82.2

(C = 0.110 Wasser)
in lnfrarotabsorptionsspektrum:(Kßr.cm ')

3400. 2940. 2640. 1567, 1480. I 385. 1340.

1112,1055.1020,813.
Kernmagnetisches Spektrum (in schwerem Wasser)

Λ (in ppm aus DSS)

1,23(3Ii. s). 2,63 (3H. s). 2.73 (311. s)

5.1 - 5.5(2ll.m).

Beispiel b

Herstellung des Monosulfates von l-N-[(l.)-2-llydrox>· 6-aminocaproyi]-X'K-b2-2

1.0 niMol l-N-[(l.)-2-IUdroxy-6-aminocaproyl]-XK-62-2 werden in 5 ml Wasser gelöst. Zu dei Lösung wird eine Lösung von 0.098 g (1.0 mMol) Schwefelsäure in :"> I ml Wasser unter Kühlen gegeben. Nach 30 Minuten wird zu dieser Mischung kaltes Mcihanol gegeben, bis der Niederschlag vollständig ist. Der ausgefallene weiße Feststoff wird durch Filtrieren gewonnen, wobei man das gewünschte Monosulfat erhall.

Claims

Patentansprüche:

I. l-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]- und I-N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl]-XK.-62-2 der allgemeinen Formel

HO

OH

^- NHCOCH-(CH₂J_n-NH₂

[a der η den Wert 3 oder 4 hat, und deren pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze.

2 Verfahren zur Herstellune der Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man jeweils in an sich bekannter Weise ein an den Aminogruppen in T- und/oder 6-Stellung Schutzgruppen enthaltendes Derivat der Verbindung XK-62-2 der allgemeinen Formel

HO

) \ O HN 2 V CH I
O C ι«· \ Oil '■- Vl,
V \ H₁

ι <lcr '· >'■ tinil N'. \\asM.-i^l(>tf;iionic culcr Animoseliiil/üruppcn bedeuten, mit einem Acvlieriingsmittel de

allgemeinen Formel

OH
HOOC-CH-(CH₂J_n-NY₄Y₅

umsetzt, in der Y₊ eine Aminoschutzgruppe und Y₅ Wasserstoff ist oder Y₄ und Y₅ gemeinsam eine Aminoschutzgruppe bedeuten und η die angegebene Bedeutung hat, aus dem erhaltenen Zwischenprodukt der allgemeinen Formel