DE2534982B2

DE2534982B2 - 1-n- eckige klammer auf (l)-2-hydroxy-5-aminovaleroyl eckige klammer zu- und 1-n- eckige klammer auf (l)-2-hydroxy-6-aminocaproyl eckige klammer zu -xk-62-2, deren pharmazeutisch vertraegliche saeureadditionssalze und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2534982B2
Application number: DE19752534982
Authority: DE
Inventors: Shinji Machida Tokio; Mori Yasuki Kawasaki Kanagawa; Tomioka (Japan)
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 1974-08-05
Filing date: 1975-08-05
Publication date: 1977-12-22
Also published as: CA1044229A; GB1508814A; BE832128A; FR2281129B1; ES440046A1; FR2281129A1; AU8369575A; SE7508793L; DE2534982C3; US4076931A; JPS575799B2; DE2534982A1; JPS5119744A; AR210333A1

Description

OH

NHCOCH —(CH₂J_n-NY₄Y₅

die Schutzgruppen abspaltet und die erhaltenen Verbindungen gegebenenfalls in ihre pharmazeutisch vertraulichen Säureadditionssalze überführt.

Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen angegebenen Gegenstand. Das Antibiotikum XK-62-2 und seine Herstellung durch Fermentation sind in der DT-OS 23 26 781 beschrieben. Danach ist das Antibiotikum XK-62-2 leicht erhältlich, indem man Actinomyceten. wie Micromonospora sagamiensis, Micromonospora echinospora und Micromonospora purpurea, nach gewöhnlich beim Züchten von Actinomyceten angewandten Methoden kultiviert. Speziell beimpft man ein flüssiges Medium, das eine Kohlenstoffquelle enthält, die der Mikroorganismus verwerten kann, wie Zucker, Kohlenwasserstoffe, Alkohole, organische Säuren, und anorganische oder organische Stickstoffquellen und anorganische Salze und wachstumsfördernde Faktoren mit Stämmen der obengenannten Mikroorganismen und kultiviert 2 bis 12 Tage bei 25 bis 40⁰C. Isolierung u id Reinigung des XK-62-2 werden durch entsprechende Kombination von Adsorption und Desorption von lonenaustauschharzen und Aktivkohle und säulenchromatographisch unter Verwendung von Cellulose, Aluminiumoxid und Silikagel durchgeführt. Das XK-62-2 kann in dieser Weise in Form des Sulfates oder als freie Base erhalten werden.

XK-62-2 ist eine basische Substanz, die als weißes Pulver erhalten wird. XK-62-2 hat die Summenformel C₂I)H^iN₅O? und das Molekulargewicht 463. Die Substanz ist in Wasser und Methanol gut löslich, in Äthanol und Aceton leicht löslich und in Chloroform, Benzol, Äthylacetat und η-Hexan unlöslich.

Die Derivate des XK-62-2 gemäß der Erfindung, nämlich !N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 and 1 N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyi-XK-62-2, sind gegenüber einer Vielfalt grampositiver und gramnegativer Bakterien stark antibakteriell aktiv und besitzer insbesondere eine bemerkenswert starke antibakterielk Aktivität gegenüber denjenigen Bakterien, die geget

lie bekannten Aminoglykosid-Antibiotika resistent lind. Die Antibiotika gemäß der Erfindung bieten sich ^ur Behandlung verschiedener Infektionen an, wie nfektionen des Harntraktes und Infektionen der \temwege, die von verschiedenen phlogogenen Bakte- > •ien hervorgerufen werden.

Die neuen halbsynthetischen Derivate des XK-62-2 Dder deren pharmazeutisch verträgliche, nichttoxische Säureadditionssalze können hergestellt werden, indem nan

(a) das Antibiotikum XK-62-2 mit einem Acylierungsmittel zu einer Zwischenverbindung umsetzt und danach die Amino-Schutzgruppe der Zwischenverbindung eliminiert oder

(b) das Antibiotikum XK-62-2, dessen Aminogruppen, r> die an die Kohlenstoffatome in der 2'- und/oder 6'-Stellung gebunden sind, durch Schutzgruppen blockiert worden sind, mit einem Acylierungsmittel zu einem Zwischenprodukt umsetzt, und danach die Amino-Schutzgruppen eliminiert. ><>

Vorzugsweise arbeitet man nach (b), da hierbei das gewünschte Endprodukt in besserer Ausbeute erhalten werden kann.

Die Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen sind die Säureadditionssalze mit pharmazeutisch verträgli- 2~> chen, nichttoxischen Säuren, einschließlich verschiedener anorganischer Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure. Phosphorsäure, Kohlensäure, und verschiedener organischer Säuren, wie Essigsäure, Fumarsäure, Äpfelsäure, Zitro- so nensäure, Mandelsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Ascorbinsäure.

Nach einer Ausführungsform der Erfindung wird eine Lösung angesetzt, die das Antibiotikum XK-62-2 in einem zweckentsprechenden Lösungsmittel gelöst enthält. Die Lösung wird mit 0,4 bis 2,5 Äquivalenten, vorzugsweise 0,7 bis 1,5 Äquivalenten, eines Acylierungsmittels je Äquivalent XK-62-2 versetzt. Die Reaktionstemperatur beträgt —50 bis -(-5O⁰C, vorzugsweise - 20 bis + 20°C. Gewöhnlich ist die Umsetzung in au 1 bis 15 Stunden vollständig.

Als Aminoschutzgruppe kann jede leicht eliminierbare Schutzgruppe Verwendung finden, wie sie gewöhnlich bei Peptidsynthesen herangezogen werden. Solche Schutzgruppen und die entsprechenden Schutzreagen- 4-, zien, welche die Schutzgruppe einzuführen vermögen, sind von M. Bodanszky »Peptide Synthesis«, Seite 21 bis 41 und 75 bis 135 (John Wiley & Sons, New York 1966), A. K a ρ ο ο r »Journal of Pharmaceutical Sciences«, Vol. 59, Seite 1 bis 27 (1970) und M. B ο d a η s ζ k y -,0 »Synthesis«, Seite 453 bis 463 (1972) beschrieben worden.

Bei der Acylierung arbeitet man vorzugsweise mit aktivierten Carbonsäure-Derivaten, besonders mit N-Hydroxysuccinimidestern. Die Hydroxysuccinimid- y-> ester werden erhalten, indem man 2-Hydroxy-5-aminovaleriansäure oder 2-Hydroxy-6-aminocapronsäure mit N-Hydroxysuccinimid in Gegenwart eines dehydratisierend und kondensierend wirkenden Mittels, wie Dicyclohexylcarbodiimid, umsetzt. ho

Die anfallende, das Acylierungsmittel enthaltende Reaktionsmischung kann in dieser Form für die Acylierungsreaktion verwendet werden, aber man kann auch dab Acylierungsrni'lc! aus der P.eaktionsmischung isolieren und dann zur Acylierungsreaktion einsetzen. t,^r>

Die Acylierungsreaktion läuft in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid ab. Anstelle Dicyclohexylcarbodiimid kann auch Cyanamid verwendet werden.

Lösungsmittel für die Acylierungsreaktion lassen sich aus der Gruppe Wasser, Alkohole, wie Methanol. Äthanol, 2-Propanol, Bntanol, Amide, wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Tetrahydrofuran, Äthylenglykoldimethyläther, Pyridin wählen. Ein Lösungsmittel-Gemisch aus Äthanol und Wasser (Volumenverhältnis 2 : 1) wird besonder? be.orzugt.

Die durch die Acylierungsreaktion eingeführten Aminoschutzgruppen des Derivats des XK-62-2 können nach an sich bekannten Methoden eliminiert werden.

Wenn die Aminoschutzgruppen Benzyloxycarbonylgruppen sind, ist die Eliminierung leicht durchführbar, indem man bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck eine Hydrogenolyse mit einer kleinen Menge an Säure, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Essigsäure, in Gegenwart eines Metallkataiysators, wie Palladium. Platin, in mindestens einem Lösungsmiüel aus der Gruppe Wasser, Alkohole. Tetrahydrofuran, Dixoan, Dimethyformamid, Dimethylacetamid, Äthylengylkoldimethyläther durchführt.

Das gewünschte Produkt wird aus dem auf diese Weise erhaltenen Reaktionsgemisch säulenchromatographisch unter Verwendung von Absorptionsmitteln, wie lonenaustauschharzen, Silikagel, Aluminiumoxid und Cellulose, oder dünnschichtchromatographisch unter Verwendung von Silikagel, Aluminiumoxid oder Cellulose isoliert und gereinigt.

Nach einer anderen Ausführungsform der Erfindung werden die Aminogruppen des XK-62-2 werden deshalb vor der Acylierungsreaktion in der 2'-Stellung und/oder der 6'-Stellung geschützt, weil die Reaktivität der an das Kohlenstoffatom in 1-Stellung des XK-62-2 gebundenen Aminogruppe geringer als die Reaktivität derjenigen in der 2'-Stellung oder 6'-Stellung des XK-62-2 ist.

Die Schutzgruppen werden an den Aminogruppen eingeführt, die an die Kohlenstoffatome der 2'-Stel!ung und/oder 6'-Stellung des XK-62-2 gebunden sind, indem man XK-62-2 mit einem Aminoschutzreagens in einem Lösungsmittel umsetzt. Vorzugsweise setzt man 1 Mol XK-62-2 mit 1,0 bis 4,5 Mol, in besonders bevorzugter Weise 1,5 bis 2,6 Mol, des Schutzgruppenreagenz bei einer Temperatur von -50 bis +50⁰C, vorzugsweise -20 bis +30° C, um.

1 Mol cies Ausgangsmaterials XK-62-2, dessen an die Kohlenstoffatome in T- und/oder 6'-Stellung gebundene Aminogruppen geschützt sind, wird mit 0,5 bis 1,5 Mol, vorzugsweise 0,7 bis 1,2 Mol eines Acylierungsmittels der in Anspruch 2 aufgeführten Struktur umgesetzt.

Als Acylierungsmittel und Lösungsmittel für diese Reaktion eignen sich die vorstehend beschriebenen. In ähnlicher Weise wird die Eliminierung der Aminoschutzgruppen und die Isolierung und Reinigung des gewünschten Produktes in der gleichen Weise durchgeführt.

Die chemischen und physikalischen Kennzahlen, wie Kernresonanzspektrum, Infrarotabsorptionsspektrum, Schmelzpunkt, spezifische Drehung, Elementaranalyse und die MHK-Werte gegenüber verschiedenen Arten von Bakterien stimmen bei den Produkten, die nach den oben beschriebenen beiden Ausführungsformen (a) und (b) erhalten werden, überein.

Die minimalen Hemmkonzentrationen (MHK-Werte) der beiden erfindungsgemäßeii Verbindungen gegenüber verschiedenen gramnegativen und grampositiven Bakterien, bestimmt nach der Agar-Verdünnungsmethode, sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:

7	XK-62-2	I	8
MHK-Werte, lAg/ml		l-N-\|(L)-2-Hydroxy-5-
Stämme		aminovalerovl]-	l-N-\|(L)-2-!ly-
		XK-62-2	droxy-6-amino-
	0,13		caproyl]-
		0,52	X K-62-2
Pseudomonas	< 0,004		4,17
aeruginosa BMHl		0,008
Staphylococcus aureus	< 0,004		0,033
ATCC 6538P		< 0,004
Bacillus subtiiis	0,016		0,008
No. 10707		0,065
Proteus vulgaris	0,033		0,26
ATCC 6897		0,065
Shigclla sonnci	0,008		0,26
ATCC 9290		0,016
Sa.monella typhosa	< 0,004		0,065
ATCC 9992		0,008
Klebsiella pneumoniae	0,016		0,033
ATCC 10031		0.033
Escherichia coli	1.04		0,13
ATCC 26		0,065
Escherichia coli	1.04		0,013
KY 8327		0,033
Escherichia coli			0,065
KY 8348

Escherichia coli KY 8327 und KY 8348 erzeugt intrazellular Adenyltransferase bzw. Acetyltransferase: das erstgenannte Enzym inaktiviert Kanamycine und Gentamicine durch Adcnylierung und das letztgenannte Gentamicine durch Acetylierung.

Wie die vorstehende Tabelle zeigt, besitzen 1-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 und l-N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaporyl]-XK-62-2 eine sehr starke antibakterielle Aktivität, insbesondere auch gegen Escherichia coli KY 8327 und Escherichia coli KY 8348 (beide sind gegen bekannte Aminoglykosid-Antibiotika. z. B. Kanamycine und Gentamicine, resistent).

Herstellung der als Acylierungsmittel eingesetzten Ausgangssubstanzen (siehe hierzu auch DT-OS 23 11 524. Beispiele 14 und 15):

A) Herstellung von L-( - )-2-hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleriansäure-N-hydroxysuccinimidester

a) Es werden 1,33 g (10,0 mMol) L-(-)-2-Hydroxy-5-aminovaleriansäure und 0,80 g (20.0 mMol) NaOH in 13,0 ml Wasser gelöst. Zu dieser Lösung wird tropfenweise bei einer Temperatur von 0 bis 5°C unt°r Rühren 2.04 g (12.0 mMol) Carbobenzoxychlorid zugegeben. Die Zugabe ist nach 1 Stunde vollständig. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur weitere 3 Stunden reagieren gelassen.

Zu dem Reaktionsgemisch werden zur Entfernung des nicht umgesetzten Carbobenzoxychlorids 20 ml Äther zugegeben. Die erhaltene wäßrige Lösung wird mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf einen pH 2,0 eingestellt. Die wäßrige Lösung wird dreimal mit jeweils 15 ml Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden vereint und mit wäßriger gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und dann mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Anschließend wird der Äther entfernt. Die erhaltenen Kristalle werden aus einem Lösungsmittelgemisch von Äthylacetat und n-Hexar umkristallisiert, wobei man 2,20 g der reinen L-( — )-2 Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleriansäure erhält. Ausbeute: 82,5%
Schmelzpunkt: 113,0 bis 113,5⁰C Spezifische Drehung:[«]% + 2,40°

(C = 2,0 Methanol)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBr. cm -') 3460,3350,2930,1726,1688,1531.1451, 1279,1140,1116,1031,728,690.

Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methani -d₄)

ό (in p. p. m. aus TMS)

1,73,(4H,m),3,20(2H,m),

4,20 (IH. breites s).

5,14 (2Hs), 7,43 (5H,s)

Elementaranalyse für Ci jHitNO,:

Berechnet: C 58,42, H 6,41, N 5,24%; gefunden: C 58,45, H 6,48, N 5,45%.

b) Es werden 0,53 g (2,0 mMol) L-(-)-2-Hydroxy carbobenzoxyaminovaleriansäure und 0,23 g (2,0 mM N-Hydroxysuccinimid in 20 ml Äthylacetat gelöst, der Lösung werden 0.41 g (2,0 mMol) N,N'-Dicyclol xylcarbodiimid bei einer Temperatur von 0 bis 5 zugegeben. Man läßt die Mischung über Nacht bei c gleichen Temperatur regagieren. Der entstände Niederschlag von Ν,Ν'-Dicyclohexylharnstoff w durch Filtrieren entfernt und das Filtrat wird un vermindertem Druck eingedampft. Man erhält 0,7 des gewünschten Produktes in Form einer farblo; transparenten, viskosen, öligen Substanz. Ausbeute: 96,5%

Infrarotabsorptionsspektrum (KBr cm ') vC = 0 1810.1785,1725

709 551

B) Herstellung von L-(-)-2-Hydroxy-6-carbobenzoxyaminocapronsäure-N-hydroxysuccinimidester

a) Es werden 1,47 g (10,0 mMol) L-( -)-2-Hydroxy-6-aminocapronsäure und 0,80 g (20,0 mMol) NaOH in 15 ml Wasser gelöst. Zu der Lösung werden tropfenweise unter Rühren bei einer Temperatur von 0 bis 5°C 2,04 g (12,0 mMol) Carbobenzoxychlorid gegeben. Nach I Stunde ist die Zugabe vollständig. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur weitere 3 Stunden reagieren gelassen. Zu der Lösung weiden 20 ml Äther gegeben, um das nicht umgesetzte Carbobenzoxychlorid zu entfernen. Die erhaltene wäßrige Lösung wird mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH 2,0 eingestellt. Die wässerige Lösung wird dreimal mit jeweils 15 ml Äthet extrahiert. Die Ätherextrakte werden vereint und mit wäßriger gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und dann werden die Ätherextrakte mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Der Äther wird entfernt. Die erhaltenen Kristalle werden aus einem Lösungsmittclgemisch von Äthylacetat und η-Hexan umkristallisiert, wobei man 2,20 g der L-( — )-2-Hydroxy-6-carbobenzoxyaminocapronsäure in reiner Form erhält.
Ausbeute: 78,2%

Schmelzpunkt: 84,0 bis 84,5°C
Spezifische Drehung: [α] ^!J + 0,64°

(C = 2,0 Methanol)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBr.cm ')

3460,3320, 2940.1739,1680, 1532, 1451,

1274, 1139, 1122, 1098,900, 746,693.
Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Dcuterochloroform)

6 (in ppm aus TMS)

1,55 (6H, m), 3,23 (2H, breites s),

4,30(1H,breitess)5,19(2H,s),

5,96 (3H, breites s), 7,45 (5H,s)

Elementaranaly.se für CmHh)NO-,:

Berechnet: C 59,78, H 6,81, N 4,98%;
gefunden: C 59,73, H 6,83, N 4,96%.

b) Es werden 0,56 g (2,0 mMol) L-(-)-2-Hydroxy-6-carbobenzoxyaminocapronsäure und 0,23 g (2,0 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 20 ml Äthylacetat gelöst. Zu der Lösung werden bei einer Temperatur von 0 bis 5¹³C 0,41 g (2,0 mMol) Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid zugegeben. Die Mischung wird bei der gleichen Temperatur (von 0 bis 5°C) über Nacht reagieren gelassen. Der entstehende Niederschlag von N.N'-Dieyclohexylharnstoff wird durch Filtrieren entfernt und das erhaltene Filtrat wird unter vermindertem Druck abgedampft. Ausbeute 0,72 g in Form eines farblosen, transparenten, viskosen Öls erhalten.

Ausbeute: 95,0%

Infrarotabsorptionsspektrum(KNr,cm ')
1'C = O 1812. 1 787. 1724

Beispiel 1

a) I lerstellung und Isolierung von
2'-N,b'-N-Dicarboben/oxy-XK-62-2

Fs werden 4,00g (8,b5 mMol) XK-62-2 in 92 ml iväürigem, 5()"/oigem Dimethylformamid gelöst, /ti der Lösung wird tropfenweise eine Lösung aus 3,23 g (12,9 mMol) N-Benzyloxycarbonyloxy-succinimid in 70 m Dimethylformamid unter Rühren bei einer Temperatui von 0 bis 5°C gegeben. Nach 3 Stunden ist die Zugabs vollständig. Die Mischung wird dann bei 0 bis 5°C übei Nacht stehengelassen. Durch Dünnschicht-Chromato graphic über Kieselgel (Entwicklungsmittel — Isopro panol in konzentriertem wäßrigem Ammoniak zl Chloroform im Verhältnis 4:1 : 1, Farbreagens Ninhy· drin) wird die Anwesenheit von nichtumgesetzter XK-62-2 zusätzlich zu 6'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 (Rf: 0,71), 2'-N-Carbobenzoxy-XK-62--2 (Rf: 0,62) und 2'-N,6'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2 (Rf: 0,88) bestätigt Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert. Zu dem erhaltenen Rückstand werden 71 ml Wasser und 50 ml Äthylacetat gegeben. Das Gemisch wird heftig gerührt und dann läßt man es in zwei Schichten absetzen, d. h. in eine Wasserschicht und in eine Äthylacetatschicht. Die Wasserschicht wird zweimal mit jeweils 30 ml Äthylacetat extrahiert. Beide Äthylacetatschichten und die Äthylacetatextrakte werden vereingt, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Als Ergebnis erhält man 2,24 g 2'-N,6'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2 als hellgelben amorphen Feststoff in einer Ausbeute von 35,1%.

Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmuicrial für die nachfolgende Reaktion geeignet. Gewünschteiilalls kann das Produkt aber weiter gereinigt werden durch Chromatographie über einer Kieselgelsäulc (Entwicklungsmittel — Isopropanol zu konzentriertem wäßrigem Ammoniak zu Chloroform im Verhältnis 4 : 1 : i). Schmelzpunkt: 93 bis 95°C
Spezifische Drehung:[λ] L⁸+ 81,6°

(C = 0,12 Methanol)
lnfrarotabsorptionsspektrum(KBr,cm ') 3800,3000, 2950.1700, 1540. 1456,1403, 1310, 1250.1160, 1050, 1010,960. 738 700,605.

Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol -d₄)

Λ (in ppm aus TMS)

1.13 (3H₁S), 2,62(3H,s), 3,01 (311, s),

5,30 - 4,90 (6H, breites s), 7,43 (5H s)

7,47 (5H,s)

Elcmentaranalyse für Cu₁H₅₅N₅Oi₂- 72 H..O: Berechnet: C 58,10, H 7,29, N 9,46%; gefunden: C 58,02, H 7,41, N 9,70%.

b) Isolierung von 6'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2

Die gemäß a) nach der Extraktion mit Äthylacetat erhaltenen Wasserschichten werden auf etwa 15 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene Konzentrat wird einer Säule zugeführt (Durchmesser = 2,5 cm), die mit einem schwach sauren Ionenaustauschharz (Ammoniumform, 200 ml) gefüllt ist. Die Säule wird zunächst mit 200 ml Wasser gewaschen. Das Eluicren wird mit 0,1 η wäßrigem Ammoniak vorgenommen. und dabei wird das FJuat in I(MnI-Anteilen gewonnen. b'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 wird eluiert in den Fraktionen Nr. 48 bis 65. Diese Fraktionen werden vereint und zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt. Fs werden 1,23 g eines farblosen, amorphen Feststoffes in einer Ausbeute von 23,1 % erhalten. Schmelzpunkt 108 bis 110"C
Spezifische Drehung:[nt] ,'," + 127 8" (C = 0.094 Methanol!

lnfrarotabsorpiionsspektrum(KBr,cm ')

3700,3000,2930,1690,1596,1480,1452,

1402,1250,1143, 1096,1050,1020,830,

768,750,697,595,550.

Kernniagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol -d₄)

ή (in ppm aus TMS)

1.16(3H₁S), 2,61 (3H,s), 3,01 (3H,s),

5,30 - 4,90 (4H, m), 7,47 (5H, s)

Elementaranalyse fürC28H47N5O4 · H>O:

Berechnet: C 54,77, H 7,84, N 11,13%.
gefunden: C 54,91, H 7,93, N 10,90%.

Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmaterial für die nachfolgende Umsetzung geeignet. Gewünschtcnfalls kann das Produkt weiter gereinigt werden durch wiederholte Säulenchromatographie in der obengenannten Weise.

c) Isolierung von 2'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2

Im Anschluß an die Eluierung von 6'-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 wird 2^;-N-Carbobenzoxy-XK-62-2 in den Fraktionen Nr. 78 bis 97 eluiert. Diese Fraktionen (Nr. 78 bis 97) werden vereint und zur Trockne unter vermindertem Druck konzentriert. Es werden 1,43 g eines farblosen, amorphen Feststoffs erhalten. Das so erhaltene Produkt ist als Ausgangsmaterial für die nachfolgende Umsetzung geeignet, Gewünschentcnfalls kann das Produkt weiter gereinigt werden durch wiederholte Säulenchromatographie in der vorher erwähnten Weise.
Ausbeute: 26,7%
Schmelzpunkt: 107 bis 1 !0⁰C
Spezifische Drehung:OH⁵ + 87,8°

(C = 0,10 Wasser)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBr,cm '·)

3700,3100,2930,1702,1530,1451,1310,

1255,1141,1053,1021,960,735,697,604
Kernmagnetisches Resonanzspektrum (in Methanol -d₄)

ή (in ppm aus TMS)

1,13 (3H, s), 2,42 (3H, s), 2,60 (3H, s),

5,13 (4H, breites s)

Elementaranalyse für CiB

V 2 H2O:

Berechnet: C 53,08, H 8,06, N 11,06%;
gefunden: C 53,31, H 8,16, N 10,93%.

Beispiel 2

Herstellung von 1-N-[L-(-)-2-Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleroyl]-2'-N,6'-dicarbobenzoxy-XK-62-2

0,76 g (1,0 mMol) 2'-N-6'-Dicarboben/.oxy-XK-62-2, erhalten nach Beispiel I, werden in 20 ml wäßrigem, 50%igem Dimethylformamid gelöst. Die Lösung wird auf 0 bis 50"C gehalten und dazu werden tropfenweise unter Rühren 0,44 g (1,2 mMol) des N-Hydroxysuceinimideslers von l.-( - )-2-llydroxy-5-earbobenzoxyammovaleriansäure, gelöst in 15 ml Dimethylformamid gegeben.

Nach 1 Stunde ist die Zugabe vollständig. Man liilJi das Gemisch über Nacht reagieren. Das Reaktionsgcmisch wird unter vermindertem Druck eingeengt, wobei πι«η einen gelblichen Rückstand erhält, welcher 'ie Tilelverbindung enthält. Der Rückstand ist geeignet für die nachfolgende I Imsct/ung ohne weitere Reinigung.

Beispiel 3

Herstellung von 1 -N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2

> Der in Beispiel 2 erhaltene Rückstand, der in der Hauptsache l-N-[L-( —)-2-Hydroxy-5-carbobenzoxyaminovaleryl]-2'-N,6'-N-dicarbobenzoxy-XK-62-2 enthält, wird in 20 ml wäßrigem, 20%igem Methanol gelöst. Zu der Lösung wird 1,0 ml Essigsäure gegeben und die Mischung wird in Gegenwart von 120 mg eines 5%igen Aktivkohle/Palladium-Katalysators bei Raumtemperatur unter Atmosphärendruck 6 Stunden hydriert. Durch Kitseigel-Dünnschichtchromatographie (Entwickeln mit lsopropanol/konz. wäßrigen NHj/Chloroform

r, 2:1:1) wird die Anwesenheit von l-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 als Hauptanteil und eine geringe Menge von XK-62-2 (auf Grund von nichtumgesetztem 2'-N,6'-N-Dicarbobenzoxy-XK-62-2 in Beispiel 2) und der substituierten Stellungsisomeren von

„><> l-N-[(L)-2-FIydroxy-5-aminovaleroyl]-XK-62-2 bestätigt. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wird dann in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung wird einer Säule zugeführt (Durchmesser

:"> 1,5 cm), die mit einem schwach sauren Ionenaustauschharz (in der Ammoniumform, 50 ml) gefüllt ist. Die Kolonne wird zuerst mit 20 ml Wasser gewaschen. Dann läßt man 0,2-n wäßrigen Ammoniak durch die Säule laufen und 78 mg XK-62-2 werden gewonnen.

so Eine weitere Eluierung wird mit 0,4-n wäßrigem Ammoniak vorgenommen, wobei die Komponenten des Eluats durch Dünnschicht-Chromatographie überprüft werden. Das Eluat wird in Anteilen gewonnen. Die Fraktionen, welche nur t-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminova-

j--) leroyl]-XK-62-2 enthalten, werden vereint und dann unter vermindertem Druck eingeengt zur Trockne, wobei man 0.36 g eines farblosen amorphen Feststoffes erhält.
Ausbeute: 54,6% (aus2'-N,6'-N-Dicarbo-

M) benzoxy-XK-62-2)

Schmelzpunkt: 144 bis 147°C
Spezifische Drehung:[α] Ί>⁸ +55,0°

(C = 0,100 Wasser)
Infrarotabsorptionsspektrum (KBrcm ')

-, 3400,2950,1650,1565,1481,1386,1340,

1112,1057,1026,818
Kernmagnetisches Resonanzspektrum

(in schwerem Wasser) (in ppm aus DSS)
1,19 (3H, s), 2,50 (3H, s), 2,67 (3H, s),

-,„ 5,1 - 5,5(2H,m).

Beispiel 4

Herstellung von 1-N-[L-(-)-2-Hydroxy-6-carbo-
-,-, benzoxyaminocaproyl]-XK-62-2

Es werden 0,46 g (1,0 mMol) XK-62-2 in 251
wäßrigen, 50%igen Dimethylformamids gelöst. '/
dieser Lösung werden tropfenweise 1,2 mMol d

_h(, N-Hydroxysiiccinimidesters von L-(-)-2-Hydroxycarbobenzoxyaminocapronsäure in 10 ml Dimeth'
formamid un'.er Rühren bei einer Temperatur von bis 0"C zugegeben. Nach 1 Stunde ist die Zugal
vollständig und man IuBl die Mischung über Nac

„-, reagieren. Das Reaktionsgemisch wird unter vcrmindc
lern Druck konzentriert, wobei man einen gelb
Rückstand erhält, welcher das gewünschte Prodi]
enthält. Der so erhaltene Rückstand ist als Ausgangsir

terial für die nachfolgende Umsetzung ohne Reinigung geeignet.

Beispiel 5

Herstellung von 1-N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl]-XK-62-2

Der in Beispiel 4 erhaltene Rückstand wird in 20 ml einer wäßrigen, 50%igen Methanollösung gelöst. Zu dieser Lösung werden 0,3 ml Essigsäure gegeben und die Mischung wird in Gegenwart von 40 mg eines 5%igen Aktivkohle/Palladium-Katalysators hydrogcnolysiert. Durch Kieselgel-Dünnschichtchromatographie "(Entwicklungsmittel — Isopropanol zu konzentriertem wäßrigem Ammoniak zu Chloroform im Verhältnis 2:1 : 1) findet man zusätzlich zu der gewünschten Verbindung deren Stellungsisomere und XK-62-2 in geringen Mengen. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat wird unter vermindertem Druck konzentriert. Der erhaltene Rückstand wird dann in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung wird einer Säule (Durchmesser 1,5 cm) eines schwach sauren lonenaustauschharzes (in der Ammoniumform, 30 ml) zugegeben. Die Säule wird zunächst mit 150 ml Wasser gewaschen und dann wird 0,2-n wäßriges Ammoniumhydroxid durch die Säule gegeben, um XK-62-2 (79 mg) zu erhalten. Eine weitere Eluierung wird vorgenommen mit 0,4-n wäßrigem Ammoniak, wobei die Komponenten des Eluats durch Dünnschicht-Chromatographie überprüft werden. Das Eluat wird i Anteilen aufgefangen. Die Fraktionen, welche nur da gewünschte Produkt erhalten, werden vereint und unte vermindertem Druck konzentriert, wobei man 58 nij eines farblosen amorphen Feststoffes erhält.
Ausbeute: 8,3%
Schmelzpunkt: 140 bis 145"C
Spezifische Drehung: [a] L" + 82.2^C

(C = 0,110 Wasser)
Infrarotabsorptionsspektrum:(KBr,cm ')

3400, 2940, 2640,1567,1480,1385,1340.

1112,1055,1020,813.
Kernmagnetisches Spektrum (in schwerem Wasser)

ö (in ppm aus DSS)

1,23 (3H, s), 2,63 (3H, s), 2,73 (3H, s)

5.1 -5,5(2H,m).

Beispiel 6

Herstellung des Monosulfates von 1 -N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl]-XK-62-2

1,0 mMol l-N-[iL)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl]-XK 62-2 werden in 5 rnl Wasser gelöst. Zu der Lösung wire eine Lösung von 0,098 g (1,0 mMol) Schwefelsäure ii 1 ml Wasser unter Kühlen gegeben. Nach 30 Minuter wird zu dieser Mischung kaltes Methanol gegeben, bi: der Niederschlag vollständig ist. Der ausgefallene weißt Feststoff wird durch Filtrieren gewonnen, wobei mar das gewünschte Monosulfat erhält.

Claims

Patentansprüche:

I. l-N-[(L)-2-Hydroxy-5-aminovaleroyl]- und 1 - N-[(L)-2-Hydroxy-6-aminocaproyl]-XK-62-2 der allgemeinen Formel

H,

NH,

HO

OH
NHCOCH-(CH₂I_n-NH₂

CH₃

in der η den Wert 3 oder 4 hat, und deren pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze.
2. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß Anspruch I, dadurch gekennzeichnet, daß man jeweils in an sich bekannter Weise ein an den Aminogruppen in T- und/oder 6-Stellung Schutzgruppen enthaltendes Derivat der Verbindung XK-62-2 der allgemeinen Formel

CH, OH

in der Y₁. Y₂ und Y, Wasserstoffalome (Hler Aniinoschutzgruppen bedeuten, mit einem Acylierungsmittel der

Uücnieinen Formel

OH

HOOC CH-(CH₂I_n-NY₄Y₅

umscizl. in der Y₄ eine Aminoschutzgruppc und Y₅ Wasserstoff ist oder Y₄ und Y₅ gemeinsam eine AminosL-hui/gruppc bedeuten und η die angegebene Bedeutung hat, aus dem eihaltenen Zwischenprodukt der allgemeinen Formel