DE2818822A1 - Verfahren zur herstellung von 1-n- eckige klammer auf omega-amino-alpha-hydroxyalkanoyl eckige klammer zu -aminoglycosid-antibiotika und neue zwischenprodukte zu deren herstellung - Google Patents

Description

PATENTANWÄLTE

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE DR. WERNER KlNZEBACH

BAUERSTRASSE 22. D-8OOO MÜNCHEN AO · FERNRUF (O89) 37 6S 83 · TELEX S2IS2OS ISAR D POSTANSCHRIFT: POSTFACH 70O. D-8OOO MÜNCHEN

München, 28. April 1978 M/19

BRISTOL-MYERS COMPANY 345, Park Avenue, Nev/ York, N.Y. U.S.A.

Verfahren zur Herstellung von 1-N-[£j~Amino-a-hydroxyalkanoyl]-, aminoglycosid-Antibiotika und neue Zwischenprodukte zu deren

Herstellung ;

809845/089S

M/19 111 - 29 - -

Die Erfindung betrifft den durch die Ansprüche näher gekennzeichneten Gegenstand.

Aminoglycoside sind eine wohlbekannte Klasse von Antibiotika und wurden in der Literatur ausführlich beschrieben. Eine ausgezeichnete Zusammenfassung ist der Artikel "Structures

i and Syntheses of Aminoglycoside Antibiotics" von Sumio ümezawa, in Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry» 30, 111-182, Academic Press, N.Y. (1974). In diesem Artikel !

(und auch in den darin zitierten Literaturstellen) sind j

i viele bekannte 1-N-(Acyl)aminoglycosid-Antibiotika beschrieben,!

wie die 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-Derivate von Kanamycin A, Kanamycin B, 3',4'-Dideoxykanamycin B, Tobramycin, Paromomycin I, Ribostamycin, 3',4'-Dideoxyribostamycin und ^! Lividomycin A. !

Die US-PS 4 029 882 beschreibt 1-N-Acyl-Derivate von Genta- '

mycinen A, B, B, C₁, C₁ , C , C₀ und X₀, Sisomicin, Verda- ,

ι ι ι a α ώ a δ ?

micin, Mutamicinen 1, 2, 4, 5 und 6 und den Antibiotika >

G-418, 66-40B, 66-40D, Ji-20A, JI-20B und G-52, worin die \

Acylgruppen von einer geradkettigen, verzweigten oder .

cyclischen Alkylgruppe mit 1 bis 8 C-Atomen abgeleitet sind, ι

welche einen Amino- oder einen Hydroxysubstituenten, oder j

einen Amino- und einen Hydroxysubstituenten aufweisen können. j

Die Verbindungen werden hergestellt durch Acylierung teil- ί weise neutralisierter Säureadditionssalze des Antibiotikums

mit einem acylierenden Derivat der gewünschten Nebenketten- ι

säure. '

Die US-PS 4 055 715 beschreibt die 1-N-[L-(-)-γ-Amino-ahydroxybutyryl]-Derivate des Aminoglycosids XK-62-2, und das Verfahren zu deren Herstellung durch Acylieren der Verbindung XK-62-2, deren 2'-Amino-oder 2'- und 6'-Aminogruppen durch eine bekannte Aminoschutzgruppe (wie die

809845/0895

Carbobenzyloxygruppe) geschützt sind, mit einem acylierenden ! Derivat von L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybuttersäure (wie deren N-Hydroxysuccinimidester).

j Die GB-PS 1 500 218 beschreibt die D-,- L-, und D,L-Formen von 1-N-[ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-XK-62-2 und deren Herstellung

durch ein Verfahren das im wesentlichen dem gemäß der ' US-PS 4 055 715 entspricht.

j Die GB-PS 1 499 041 beschreibt 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-alkylkanamycin A, worin die 6'-N-Aikylgruppe 1 bis 4 C-Atome enthält, Die Verbindungen werden unter anderem hergestellt, indem man 6'-N-Alky!kanamycin A (entweder ungeschützt oder in der Form, daß die 3- oder 3"-Aminogruppe durch eine herkömmliche Aminoblockierungsgruppe geschützt sind) mit einem acylierenden Derivat von L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybuttersäure umsetzt»

Die GB-PS 1 475 481 beschreibt 1-N-Acylderivate von 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B, worin die Acylgruppen in der L- oder ι D,L-Form vorliegen können und der Formel

K₀N-(CH₀) -CH-C-2 2 η ,

OH

entsprechen, worin η für 1, 2 oder 3 steht. Die Verbindungen werden hergestellt, indem man das Aminoglycosid (dessen 6'-Amino- und gegebenenfalls 2'-Aminogruppen durch herkömmliche Aminoblockierungsgruppen geschützt sind) mit einem acylierenden Mittel, das die obige Acylgruppe enthält, gegegebenenfalls mit dessen N-Hydroxysuccinimidester, umsetzt.

Die südafrikanische PS 77/1944 beschreibt unter anderem ein | Verfahren zur Herstellung von 1-N-(niedrig)Alkanoyl-Derivaten j

i ι

809845/0895

M/19 111 - 31

j von Kanamycin A und B, wobei die Alkanoylgruppen durch Hydroxy-
und/oder Amino substituiert sein können. Bei dem Verfahren
acyliert man Kanamycin A oder B, wobei die 3-Aminogruppe
von Kanamycin A oder B und die 2 *-Aminogruppe von Kanamycin B
j (und gegebenenfalls die 6^!-Aminogruppe jedes Antibiotikums)
ι durch eine herkömmliche Aminoblockierungsgruppe geschützt

sind. Die Acylierung erfolgt auf herkömmliche Weise, beispielsweise durch Verwendung des N-Hydroxysuccinimidesters der
j acylierenden Säure=

Die US-PS 3 974 137 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung

von 1-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycin A, gemäß

dem man 6'-Carbobenzyloxykanamycin A mit mindestens 3 Mol i

Benzaldehyd, einem substituierten Benzaldehyd oder Pivaldehyd
umsetzt, wobei man das 6'-N-Carbobenzyloxykanamycin A er- I hält, welches Schiffsche Baseneinheiten an den 1,3- und ; 3"-Positionen aufweist, und dann dieses tetra-geschützte
Kanamycin-A-Derivat mit dem N-Hydroxysuccinimidester von
L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure acyliert ;

und anschließend die Schutzgruppen entfernt. j

In The Journal of Antibiotics, 2§_, 790-3 (1973), T.P. Culbertson; et al. ist die Herstellung von 5"-Amino-5"-deoxybutirosinen ! A und B aus Butirosin A und B beschrieben. Die ersten Synthese- ' stufen sind wie folgt: _:

1) teilweise N-Trifluoracetylierung der Butirosinbase J

durch zum Rückfluß Erhitzen in einer Mischung von ι Methanol und Äthyl-trifluoracetat,

2) Eindampfen zur Trockne, Lösen des Rückstands in Pyridin, I

Behandeln des Rückstands mit Hexamethyldisilazan und 1 Trimethylchlorsilan, dann Abkühlen auf ^10 °C und J Behandeln mit Trifluoressigsäureanhydrid, I

3) Eindampfen zur Trockne und Hydrolysieren des Rückstands

809845/0895

M/19 111 - 32 -

in einer 2:1 Mischung von Äthanol und 2n Essigsäure am Rückfluß, wobei man dann tetra-[N-(Trifluoracetyl)]-

butirosin erhält.

Die Endprodukte des Reaktionsschemas, 5"-Amino-5"-deoxy-

butirosin A und B, wurden ebenfalls nach den obigen drei Stufen umgesetzt, wobei man penta-[N-(Trifluoracetyl)]-5"-amino-5"~deoxy-butirosine A und B erhält» Auch diese Veröffentlichung beschreibt die Acylierung eines trimethylsilylierten (und teilweise acylierten) Aminoglycosidantibiotikums, wobei man immer eine völlige Acylierung aller primären Aminogruppen im Molekül erhält (4 im Butirosinausgangsprodukt und 5 im Produkt). Das erfindungsgemäße Verfahren vermeidet im wesentlichen Polyacylierung und bringt einen hohen Grad an selektiver Acylierung in der gewünschten 1-N-Stellung.

J. J. Wright et al, in The Journal of Antibiotics, 2S_, 714-719 (1976) beschreiben ein allgemeines Verfahren zur selektiven 1-N-Acylierung von Gentamicin-Sisomicin-Aminoglycosiden. Sie berichten, daß die Selektivität der Acylierung vom pH-Wert abhängig ist und daß die C-1-Aminogruppe für die Acylierung am reaktivsten ist, wenn die Aminogruppen des Moleküls nahezu vollständig protoniert sind. Diese Bedingungen erreicht man durch Zugabe eines Äquivalents einer tert.-Aminbase zu einer Lösung des völlig neutralisierten Säureadditionssalzes. Wenngleich die Autoren eine 1-N-Selektivität bei der Acylierung von Gentamicin C₁ , Sisomicin und Verdamicin

erreichten, so berichten sie, daß bei der Acylierung hoch hydroxylierter Aminoglycoside, wie Gentamycin B und Kanamycin A eine geringe Selektivität zu beobachten war.

809845/0895

M/19 111 - 33 -

GB-PS 1 460 039 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung ■ verschiedener Deoxyaminoglycosid-Antibiotika durch Halo-ι genieren eines phosphorylierten Aminoglycosids (bei dem die j zu entfernende Hydroxygruppe in eine Phosphonoxygruppe über- [ führt worden war), wobei man das entsprechende Aminoglycosid ι erhält, dessen Hydroxygruppe in Halogen überführt wurde, und i Reduzieren der Halogenverbindung, wobei man dann das ent-¹ sprechende Deoxyaminoglycosid erhält. Bevor man das phosphorylierte Aminoglycosid halogeniert, werden alle seine funktioneilen Gruppen vorzugsweise durch Silyl- oder Acyl-I gruppen geschützt.

Die vorliegende Erfindung schafft ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von 1-N-{tu -Amino-a-hydroxyalkanoyl]-aminoglycosid-Antibiotika. Die Verwendung polysilylierter Aminoglycoside als Ausgangsmaterial ergibt eine hohe Löslichkeit

' in dem organischen Lösungsmittelsystem, so daß man bei hohen Konzentrationen umsetzen kann. Wenngleich die Reaktion

; im allgemeinen in Lösungen durchgeführt wird, welche etwa 10 bis 20 % polysilylierte Aminoglycosid-Ausgangsprodukte

ι enthalten, erhält man ausgezeichnete Ergebnisse mit Konzen-', trationen von etwa 50 % Gew./Vol. (beispielsweise 50 g/100 ml

¹ Lösung) .

' Wie bei den Arbeitsweisen des Standes der Technik ergibt i das erfindungsgemäße Verfahren eine Mischung acylierter

Produkte und das gewünschte Produkt wird von den anderen [ Produkten durch Chromatographie abgetrennt. Die Stelle der

Substitution wird jedoch viel selektiver, wenn man das er- ; findungsgemäße Verfahren anwendet, wodurch man geringere

Mengen unerwünschter Nebenprodukte erhält, was sowohl die _; Ausbeute an gewünschtem Produkt erhöht als auch die chromato-

graphische Reinigung vereinfacht.

809845/089§

M/19 111 - 34 -

So ist es typisch, daß wenn man 1 - [L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycin A Amikacin mittels verschiedener Verfahren nach dem Stand der Technik herstellt, man auch das 3"-N-acylierte Produkt (BB-K11), das 3-N-acylierte Produkt (BB-K29), das 6'-N-acylierte Produkt (BB-K6) und polyacyliertes Material sowie nicht umgesetztes Kanamycin A erhält„

Bei der gewerblichen Herstellung von Amikacin durch Acylieren von 6'-N-Carbobenzyloxykanamycin A in wässrigem Medium und anschließendem Entfernen der Schutzgruppe wurde gefunden, daß gewöhnlich etwa 10 % des gewünschten Amikacins (2,5 kg in einem 25 kg Ansatz) verlorengingen, da BB-K11 als Nebenprodukt vorhanden war. Jedes hergestellte 3"-N-acylierte Material verursachte einen Verlust von etwa einer gleichen Menge an gewünschtem 1-N-acyliertem Produkt, da sich dieses sehr schwer aus dem erstgenannten abtrennen läßt» Die Selektivität der Substitution des erfindungsgemäßen Verfahrens wird aufgezeigt durch die extrem geringe Menge an unerwünschtem 3"-N-acyliertem Produkt das sich bei der erfindungsgemäßen Herstellung von BB-K8 ergibt. Es ist typisch, daß sich BB-K11 in der Mischung nicht e"ihma.l nachweisen läßt.

Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren zur Her- i stellung von 1-N-[i„ -Amino-a-hydroxyalkanoyl]-aminoglycosid-Antibiotika der allgemeinen Formel I:

809845/0895

M/19 111

oder pharmazeutisch verträglicher Säureadditionssalze davon,

2 worin η für eine ganze Zahl von 0 bis 4 steht; R einen Hexopyranosylring der allgemeinen Formeln II, III oder IV

10

SL

¹ 7

CHNHR

II

,10

R⁶

CHOH

O,

oder

H₂N

III

¹ 7

CHNIfR

IV

darstellt, worin R für Wasserstoff oder CH- steht, R Wasser-

8 9

stoff oder CH bedeutet, R für OH oder NH steht, R Wasser-

^ό 10

t stoff oder OH bedeutet und R für Wasserstoff oder OH

steht;

R für Wasserstoff oder einen Hexopyranosylring der Formeln V, VI, VII oder VIII steht»

ΗθΛ>

H₂H-A-

CH₂OH

HO

OH

VI

HN I CH

■0

HO

VII

oder

VIII

60984 5/0895

M/19 111 - 36 - _Λα

worin R für Wasserstoff oder CH steht;

R für Wasserstoff oder OH steht; und

4
R Wasserstoff, OH oder einen Pentofuranosylring der Formeln IX oder X bedeutet;

HOCH.

4^ \ ι

oder

OH

Of* R¹²O OH

IX X ^:

1 2
worin R Wasserstoff oder einen Hexopyranosylring der Formeln XI oder XII bedeutet:

CH₀NH

~~0 oder -.13./Vv I

HO-Λ—

H_ XI

worin R Wasserstoff oder a-D-Mannopyranosyl bedeutet;

wobei Voraussetzung ist, daß wenn R nicht Wasserstoff be-

4 5
deutet, einer der Reste R und R für Wasserstoff steht und der andere OH bedeutet; und wobei weiter Voraussetzung ist, daß wenn R Wasserstoff bedeutet, R Wasserstoff be-

4
deutet und R für einen Pentofuranosylring der Formeln IX oder X steht;

809845/0895

das dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein polysilyliertes Aminoglycosid, hergestellt aus einem Aminoglycosid der Formel XIV

XIV

2 3 4 5

worin R , R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und das gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-I-Aminogruppe aufweist, in einem im wesentlichen wasserfreien organischen Lösungsmittel mit einem acylierenden Derivat einer Säure der Formel XIII

B-HN-CH₀-(CH₀) -CH-COOH XIII 2 2. η ,

OH

worin B für eine Aminoblockierungsgruppe steht und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzt, umsetzt und anschließend sämtliche Blockierungsgruppen entfernt.

Die Aminogruppe der acylierenden Säure der Formel XII muß während der Acylierungsreaktion durch eine aminoblockierende Gruppe geschützt sein. Dies erfolgt normalerweise durch Verwendung einer herkömmlichen Aminoblockierungsgruppe. Die gleichen herkömmlichen Aminoblockierungsgruppen können zum Schützen der anderen als der C-1-Aminogruppe des Aminoglycosids verwendet werden. Solche herkömmlichen Aminoblockierungsgruppen zum Schutz von primären Aminogruppen sind dem Fachmann bekannt. Zu geeigneten Blockierungsgruppen gehören

809845/0895

Alkoxycarbonylgruppen, beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl und tert.-Amyloxycarbony!gruppen; Aralkoxycarbony!gruppen, wie Benzyloxycarbonyl; Cycloalkyloxycarbonvlgruppen, wie Cyclohexyloxycarbonyl; Halogenalkoxycarbonylgruppen, wie Trichloräthoxycarbonyl; Acylgruppen, wie Phthaloyi und o-Nitrophenoxyacetyl; Halogenacetylgruppen, wie Trifluoracetyl; und andere bekannte Blockierungsgruppen, beispielsweise die o-Nitrophenylthiogruppe, die Tritylgruppe, und dergleichen.

Die acylierende Säure der Formel XIII enthält ein asymmetrisches Kohlenstoffatom und kann in ihrer (+) oder (-) isomeren Form, oder als Mischung der beiden Isomeren (d,l-Form) vorliegen. Auf diese Weise wird die entsprechende Verbindung der allgemeinen Formel I gebildet, in der die 1-N-[iJ-Amino-a-hydroxyalkanoyl] -gruppe in ihrer (+) [oder (R)]-Form oder ihrer (-) [oder (S)]-Form, oder in einer Mischung davon vorliegt« Jede isomere Form und deren Mischungen fallen in den Rahmen der Erfindung, jedoch ist die (-)-Form bevorzugt.

Die Acylierung der polysilylierten Aminoglycoside (mit oder ohne 1 bis 3 von Silyl verschiedenen Blockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe) kann im allgemeinen in einem organischen Lösungsmittel durchgeführt werden, in dem das Ausgangsmaterial genügend löslich ist. Diese Ausgangsmaterialien sind in den üblichsten organischen Lösungsmitteln sehr gut löslich. Geeignete Lösungsmittel sind beispielsweise Aceton, Diäthylketon, Methyl-n-propyl- ·, keton, Methyl-isobutyl-keton, Methyl-äthyl-keton, Heptan, Glyme, Diglyme, Dioxan, Toluol, Tetrahydrofuran, Cyclohexanon, : Pyridin, Methylenchlorid, Chloroform und Tetrachlorkohlen- j stoff. Die Wahl des Lösungsmittels ist abhängig vom speziell verwendeten Ausgangmaterial. Ketone sind im allgemeinen bevorzugte Lösungsmittel. Das jeweils günstigste Lösungsmittel für eine bestimmte Kombination von Reaktionspartnern kann durch Rountineuntersuchungen leicht herausgefunden werden.

80984S/089S

M/19 111

Zu geeigneten Silylierungsmitteln zur Verwendung bei der Herstellung der hier verwendeten polysilylierten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien gehören die der nachfolgenden allgemeinen Formeln XV und XVI:

,14

.14

NH

Si

-NH

14

•Si

R¹⁵

16 ·
und R-Si-Z

XV

XVI

R und R jeweils für Wasserstoff, Halogen,

worin R

(niedrig)Alkyl, (niedrig)Alkoxy, Halogen(niedrig)alkyl und und Phenyl stehen können, wobei mindestens eine der Gruppen R , R und R von Halogen oder Wasserstoff verschieden

1 4
sind; R " für (niedrig)Alkyl steht, m eine ganze Zahl von 1 bis 2 darstellt und Z die Bedeutungen Halogen und

.R

•R

1 R
hat, worin R für Wasserstoff oder (niedrig)Alkyl steht

1 9

und R die Bedeutungen Wasserstoff, Niedrigalkyl oder

80984 6/0895

E¹⁶_ Si

R¹⁷

hat, worin R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen.

Als Beispiele für spezifische Si IyI verbindungen der Formeln xv und XVI kann man nennen: Trimethylchiorsi1 an , Hexamethyldisilazan, Triäthyl chlorsi 1 an , Methyltrichlorsilan, Dimethyldichlorsilan, Triäthylbromsi1 an, Tri-n-propylchiorsi1 an, Methyldiäthylchlorsilan, Dimethyläthylchlorsilan, Dimethyl-tert.-butylchlorsi1 an , Phenyldimethylbromsi1 an, Benzylmethyläthylchlorsilan , Phenyläthylmethylchlorsilan, Triphenyl chiorsi1 an , Triphenylf1uorsilan, Tri-o-tolylchlorsilan, Tri-p-dimethyl-

j

ΐ aminophenylchlorsi1 an, N-Äthyltriäthylsi IyIamin , Hexaäthyldi- ;

j silazan, Triphenyl silylamin, Tri-n-propylsi IyIamin , Tetra-

äthyldimethyldisi1azan , Hexaphenyldisi1azan , Hexa-p-tolyldisilaf zan, und dergleichen. Ebenfalls brauchbar sind Hexaalkylcyclo-

j trisilazane und octa-Alkylcyclotetrasi1azane . Andere geeignete

Silylierungsmittel sind Silylamide (beispielsweise Trialkylsi IyIacetamide und bis-Trialkylsilylacetamide), Si IyI harnstoffe

[ (beispielsweise Trimethylsilylharnstoff) und Silylureide. Man kann auch TrimethylsiIyI imidazo! einsetzen.

Eine bevorzugte Silylgruppe ist die Trimethylsilylgruppe. Bevorzugte Silylierungsmittel zur Einführung der TrimethylsiIyI-gruppe sind Hexamethyldisi1azan, Bis(trimethylsilyl)acetamid , Trimethylsilylacetamid und Trimethylchlorsilan. Am bevorzugtesten ist das Hexamethyldisilazan.

60984S/0896

M/19 111

Die Polysilylierung von Aminoglycosiden verändert die normale Größenordnung der Aktivität der darin enthaltenen Aminogruppen. So ist die 6'-Aminogruppe des Kanamycins die aktivste. Wenn ungeschütztes Kanamycin A oder B acyliert wird, sind die

hauptsächlichen Produkte die 6'-N-Acylkanamycine. Aus diesem Grund war es bei Verfahren nach dem Stand der Technik zur Herstellung von 1-N-Acylkanamycinen erforderlich, den 6'-N-Aminorest (beispielsweise mit Carbobenzyloxy) zu schützen, um gute Ausbeuten an 1-N-Acyl-Produkt zu erhalten. Wenn man jedoch die polysilylierten Kanamycine acyliert, sind die Hauptprodukte die 1-N-Acyl-Kanamycine. Man nimmt an, daß dies der sterischen Wirkung angrenzender (oder nahebei liegender) silylierter Hydroxygruppen (sowie angrenzenden Glycosidbindungen) zuzuschreiben ist, welche die Acylierung an den normalerweise aktiveren Aminogruppen verhindern. Dies ist jedoch eine theoretische Erklärung und ist nicht Teil der Erfindung.

Kanamycin B entspricht der allgemeinen Formel

NH.

if¹ CH₂ ^0H
5"

809845/0895

M/19 111 - 42 -

Betrachtet man Kanamycin B, bei dem alle Hydroxygruppen silyliert sind, im Lichte der obigen Theorie, so ist ersichtlich, daß die 3"-Aminogruppe durch die angrenzenden 2"~ und 4"-silylierten Hydroxygruppen sterisch gehindert ist. Man nimmt an, daß man aus diesem Grunde normalerweise kein 3"-acyliertes Produkt entdeckt, wenn man polysilyliertes Kanamycin B (oder die strukturell ähnlichen polysilylierten Kanamycine A oder C) acyliert, wenngleich schwierige 3"-N-acylierte Produkte erhalten werden können, wenn man Verfahren nach dem Stand der Technik anwendet. Ähnlich ist die 6'-Aminogruppe durch die nahebei liegenden 4'- und 3'-silylierten Hydroxygruppen ge- , hindert. Die 2'-Aminogruppe ist durch die angrenzende 3'-silyl-; ierte Hydroxygruppe und die angrenzende Glycosidbindung gehindert.

Weitere Aminoglycoside, welche strukturell mit den Kanamycinen verwandt sind, und wenn sie polys.ilyliert werden, in erster Line das 1-N-Acyl-Produkt ergeben, sind beispielsweise 3¹-Deoxykanamycin A, 3'-Deoxykanamycin B (Tobramycin), die 6'-N-Alky!kanamycine A, die 6'-N-Alky!kanamycine B, die 3'-Deoxy-6'-N-alky!kanamycine A, die 3'-Deoxy-6'-N-alkylkanamycine B, Gentamicine A, B, B₁ und X₂, Seldomycin Faktoren 1 und 3 und Aminoglycoside NK-1001 und NK-1012-1. Jede dieser Verbindungen und andere strukturell ähnliche Aminoglycoside ergeben hauptsächlich das 1-N-substituierte Produkt, wenn man sie in Form ihrer polysilylierten Derivate acyliert. Es werden jedoch geringe Mengen 6'-N- und 3-N-substituierter Produkte gebildet, und einer oder beide dieser Aminogruppen kann gewünschtenfalls, beispielsweise durch eine Carbobenzyloxygruppe, ge s chüt ζ t we rden.

Eine weitere Gruppe von Aminoglycosiden enthalten, wenngleich sie den oben beschriebenen Kanamycin-Typen strukturell ähnlich sind, weder 3'- noch 4'-Hydroxygruppen (d.h. sind 3',4'-dideoxy-verbindungen). Werden diese polysilyliert, so hindern sie die 6'-Aminogruppe (oder die 2'-Aminogruppe,

809846/0995

M/19 111

falls vorhanden) nicht, sterisch, und die 6'-N-substituierten (oder 2',6'-di-N-substituierten) Verbindungen sind die Hauptacylierungsprodukte. Bei diesen Aminoglycosiden muß man die 6'-Aminogruppe (und, falls vorhanden, die 2'-Aminogruppe) mit einer von Silyl verschiedenen Aminoschutzgruppe (beispielsweise mit Carbobenzyloxy) schützen und das polysilylierte 6'-N-blockierte (oder 2',6'-di-N-blockierte) Aminoglycosid acylieren. Aminoglycoside, welche in diese Gruppe fallen, sind beispielsweise 3',4'-Dideoxykanamycin A, 3',4'-Dideoxykanamycin B, die 6'-N-Alkyl-3',4'-dideoxykanamycine A, die 6'-N-Alky1-3',4'- di deoxykanamycine B, Gentamicine C₁, C₁ , C„ und C₀ , Aminoglycoside XK-62-2, Aminoglycosid 66-40D, Verdamicin und Sisomicin«

Eine weitere Klasse von Aminoglycosiden bilden diejenigen, ■

bei denen die Glycosidbindung an den 4- und 5-Stellungen des Deoxystreptaminrings sind anstelle an den 4- und 6-Stellun-' gen, wie bei den oben beschriebenen Aminoglycoside vom ! Kanamycintyp. Diese können dargestellt werden durch das j Ribostamycin der Formel

OH

809845/0895

Bei Aminoglycosiden vom Ribostamycin-Typ hindert die PoIysilylierung die gewünschte 1-N-Gruppe mehr als die unerwünschte 3-N-Gruppe (wobei die anderen Aminogruppen wie oben für die Kanamycin-Typen beschrieben gehindert werden). Somit bilden polysilylierte Antibiotika vom Ribostamycin-Typ nach der Acylierung hauptsächlich das 3-N-substituierte Produkt, und deshalb muß die 3-Aminogruppe durch eine Aminoblockierungsgruppe, wie Carbobenzyloxy geschützt werden, um nach der Acylierung des polylsilylierten Ausgangsmaterials das 1-N-substituierte Produkt zu erhalten. Weitere Aminoglycoside, welche in diese Klasse fallen, sind beispielsweise die Neomycine B und C, die Paromomycine I und II, die Lividomycine A und B, Aminoglycosid 2230-C und Xylostasin, sowie deren 3'-Deoxy-Derivate. Die 6'-N-Alkyl- und 3'-Deoxy-6'-N-alkyl-Varianten jeder dieser oben erwähnten Antibiotika vom Ribostamycin-Typ, welche eine 6'-Aminogruppe enthalten, fallen ebenfalls unter diese Klasse. Einige der Aminoglycoside dieser Klasse enthalten eine 6'-Hydroxygruppe anstelle einer 6'-Aminogruppe.

Eine weitere Gruppe von Aminoglycosiden sind die des oben beschriebenen Ribostamycin-Typs, welche jedoch 3 ' ,4'-Dideoxy-susbtituiert sind. Wie bei den 3',4'-Dideoxykanamycin-Aminoglycosiden, die oben beschrieben wurden, werden die 2'- und 6'-Aminogruppen (derjenigen Aminoglycoside dieser Klasse, welche eine 6'-Aminogruppe enthalten) durch PoIysilylierung nicht gehindert. Somit muß man bei Verbindungen wie 3',4'-Dideoxyribostamycin, 3',4'-Dideoxy-neomycinen B und C, und 3',4'-Dideoxyxylostasin, sowie bei deren β'-N-Alkyl-Analogen, die 2', 3 - und 6'-Aminogruppen durch eine Aminoblockierungsgruppe, wie Carbobenzyloxy, schützen, damit man bei der Acylierung des polysilylierten Ausgangsmateria-ls hauptsächlich das 1-N-Acyl-Produkt erhält. Bei denjenigen Aminoglycosiden dieser Klasse, welche eine 6'-Hydroxygruppe anstelle einer 6'-Aminogruppe aufweisen (beispielsweise

809846/0695

M/19 111 - 45 -

3',4'-Dideoxyparomomycin I und II und 4'-Deoxylividomycin , A oder B) muß man nur die 2¹- und 3-Aminogruppen schützen.

Verwendet man als Ausgangsmaterial ein polysilyliertes Aminoglycosid, das 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe aufweist, so kann das Ausgangsmaterial entweder durch Polysilylierung des gewünschten N-blockierten Aminoglycosids oder durch Ein- ! führen der gewünschten N-Blockierungsgruppe in das polysilylierte Aminoglycosid hergestellt werden (gegebenenfalls nach ; ι teilweiser Desilylierunc durch Hydrolyse oder Solvolyse). |

' I

Verfahren zur Einführung von Silylgruppen in organische Ver- ^:

j :

bindungen, einschließlich gewisser Aminoglycoside, sind nach ! dem Stand der Technik bekannt. Die polysilylierten Kanamycine ί (mit oder ohne von Silyl verschiedene Blockierungsgruppen an ι Aminoresten, die von der C-1-Aminogruppe verschieden sind) können auf an sich bekannte Weise oder wie in der vorliegenden j

Beschreibung dargestellt hergestellt werden. !

Die bei der Beschreibung der Erfindung verwendete Bezeichnung ' polysilyliertes Aminoglycosid umfaßt kein persilyliertes Amino-i glycosid. So umfaßt beispielsweise der Begriff polysilyliertes Kanamycin A, Kanamycin A mit 2 bis 10 Silylgruppen im Molekül [wobei insgesamt 11 Positionen (4-Aminogruppen und 7 Hydroxygruppen) silyliert werden könnten].

Die genaue Anzahl der Silylgruppen (oder deren Stellung) in den polysilylierten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien (mit oder ohne 1 bis 3 von Silyl verschiedenen Blockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe) ist nicht bekannt Erfindungsgemäß wurde festgestellt, daß Untersilylierung und Übersilylierung die Ausbeute an gewünschtem Produkt absenken und zu einem Ansteigen anderer Produkte führen. Im Falle einer starken Unter- oder übersilylierung kann es dazu kommen, daß nur wenig oder überhaupt kein gewünschtes Produkt

809845/0898

M/19 111 - 46 -

gebildet wird. Der Silylierungsgrad, der zur größten Ausbeute an gewünschtem Produkt führt, hängt von den jeweiligen Reaktionspartnern ab, die bei der Acylierungsstufe eingesetzt werden. Der jeweils vorteilhafteste Silylierungsgrad bei irgendeiner Kombination von Reaktionspartnern kann durch routinemäßiges Ausprobieren leicht festgestellt werden.

Die bevorzugte durchschnittliche Anzahl von Silylgruppen im · polysilylierten Aminoglycosid-Ausgangsmaterial liegt im allgemeinen zwischen einer unteren Grenze von 4 und einer

oberen Grenze welche gleich der Gesamtzahl der Hydroxygruppen ist oder eine darüberhinaus, die im Aminoglycosid-Molekül enthalten sind, und daß diese oberen und unteren Grenzen für jede im Aminoglycosid enthaltenen Aminoblockierungsgruppen ; um jeweils 1 Gruppe verringert werden. Diese Erklärung ist jedoch nur theoretisch und wird nicht als wesentlicher Teil der Erfindung betrachtet. :

Polysilylierte Aminoglycoside, welche die gewünschte Anzahl von Silylgruppen enthalten, können hergestellt werden, indem > man entweder eine Menge an Silylierungsmittel verwendet, welche ausreichend ist, um die gewünschte Anzahl von Silylgruppen einzuführen, oder indem man einen Überschuß j an Silylierungsmittel verwendet und das Aminoglycosid persilyliert, und dann durch Hydrolyse oder Solvolyse teilweise desilyliert. '

Wenn man beispielsweise 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]- \ kanamycin A herstellt, indem man polysilyliertes Kanamycin A : mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-γ-Benzyloxy- ;

i carbonylamino-a-hydroxybuttersäure in Acetonlösung acyliert, so erhält man gute Ausbeuten des gewünschten Produkts, wenn man polysilyliertes Kanamycin A verwendet, welches hergestellt wurde durch Umsetzung von etwa 4 bis etwa 5,5 Mol Hexamethyldisilazan pro Mol Kanamycin A.

809845/0895

M/19 111 - 47 -

Es können größere oder geringere Mengen an Hexamethyldisilazan verwendet werden, jedoch wird dadurch die Ausbeute an gewünschtem Produkt in der nachfolgenden Acylierungsstufe bedeutend verringert» Bei dem speziellen oben beschriebenen Verfahren verwendet man vorzugsweise 4,5 bis etwa 5 Mol Hexamethyldisilazan pro Mol Kanamycin, um bei der Acylierungsstufe eine maximale Produktausbeute zu erhalten.

Pro Mol Hexamethyldisilazan können zwei Äquivalente der Trimethylsilylgruppe in Kanamycin A oder B eingeführt werden. Sowohl Kanamycin A wie auch Kanamycin B weisen insgesamt 11 Stellen (NH„- und OH-Gruppen) auf, die silylierbar sind, während Kanamycin A und Kanamycin B, die eine von Silyl verschiedene Aminogruppe an einer anderen Aminogruppe als der C-1-Aminogruppe aufweisen, insgesamt 10 derartige Stellen aufweisen. So müßten 5,5 Mol Hexamethyldisilazan pro Mol Kanamycin A oder B theoretisch zu einer vollständigen Silylierung sämtlicher OH- und NH₂-Einheiten des Kanamycins führen, .während 5,0 Mol Hexamethyldisilazan zu einer vollständigen Silylierung von einem Mol Kanamycin A oder B, das eine von Silyl verschiedene Blockierungsgruppe an einer anderen Aminogruppe als der C-1-Aminogruppe aufweist, führen sollteο Jedoch wird erfindungsgemäß angenommen daß eine derartig extensive Silylierung bei diesen molaren Verhältnissen während vernünftiger Reaktions-

809845/0895

M/19 111 - 48 -

zeiten nicht erfolgt, obgleich man bei vorgegebener Reaktions- j zeit höhere Si IyIierungsgrade erzielt₉ wenn man einen Silylie-

rungskatalysator zugibt, '

i

. Si IyIierungskatalysatoren führen zu einer beträchtlichen Er-

! höhung der Silylierungsgeschwindigkeit. Geeignete Silylierungs- ί

; katalysatoren sind bekannt. Hierzu gehören unter anderem Amin- _t

ι sulfate (beispielsweise Aminoglycosidsulfat), Sulfaminsäure, Imida-

zol und Trimethylchiorsi1 an. Si IyIierungskatalysatoren fördern

im allgemeinen einen höheren Si IyIierungsgrad als beim erfin- ; dungsgemäßen Verfahren erforderlich. Man kann jedoch auch über- . silylierte Aminoglycoside als Ausgangsmaterial beim erfin- ; dungsgemäßen Verfahren einsetzen, wenn mansie zuerst mit einem
Desilylierungsmittel behandelt, um den Si IyIierungsgrad zu ver- j mindern, bevor die Acylierungsreaktion durchgeführt wird. j

Man erhält gute Ausbeuten an gewünschtem Produkt, wenn man , polysiIyIiertes Kanamycin A acyliert, das unter Verwendung ι eines 5,5:1 molaren Verhältnisses von Hexamethyldisilazan zu ! Kanamycin A hergestellt wurde. Wenn man jedoch Kanamycin A mit
einem 7:1 molaren Verhältnis an Hexamethyldisi1azan (oder mit j einem 5,5:1 molaren Verhältnis in Gegenwart eines Si IyIierungs- j katalysators) in Aceton mit dem N-Hydroxysuccinimidester der
L- (-)-',/*-Benzyl oxycarbonylami ηo-:y-hydroxybutters"äure acyl iert,
so erhält man weniger als eine 1 %-ige Ausbeute des gewünschten Produkts. Wenn man jedoch dasselbe "übersiIyIierte" Kanamycin A mit demselben Acylierungsmittel in einer Acetonlösung
acyliert, zu der man 1 Stunde vor der Acylierungsreaktion Wasser /"21 Mol Wasser pro Mol Kanamyci n/2,5 % Wasser (Gew. /Vol. )J
als DesiIyIierungsmittel zugesetzt hatte, so erhält man eine
Ausbeute von angenähert 40 % des gewünschten Produkts. Dieselben Ergebnisse werden erhalten, wenn das Wasser durch Methanol
oder durch eine andere Verbindung mit aktivem Wasserstoff ersetzt wird, die zu einer DesiIyIierung führen kann, beispiels-

8098^5/0895

weise durch Äthanol, Propanol, Butandiol, Methylmercaptan, Äthylmercaptan, Phenylmercaptan, oder dergleichen.

Obgleich man beim Arbeiten mit silylierten Materialien iiblicher-ί weise trockene Lösungsmittel einsetzt, wurde überraschend ge- ; funden, daß selbst in Abwesenheit einer "übersiIyIierung" die j Zugabe von Wasser zum Reaktionslösungsmittel vor der Acylierung ι häufig gleich gute Ausbeute ergibt, ja bisweilen sogar zu besse-j ren Ausbeuten an gewünschtem Produkt als in einem trockenen Lösungsmittel, führt. Bei Acylierungsreaktionen, die in Aceton bei den üblichen Konzentrationen von 10 bis 20 % (Gew./Vol.) polysiIyIiertem Kanamycin A durchgeführt werden, wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß man ausgezeichnete Ausbeuten an l-N-/L-(-)-7^v-Amino-o^-hydroxybutyryl7kanamycin A erhält, wenn man bis zu 28 Mol Wasser pro Mol polysilyliertes Kanamycin A zusetzt. Arbeitet man bei 20 %-iger Konzentration, so bedeuten 28 Mol pro Mol angenähert 8 % Wasser. Mit anderen Kombinationen von Reaktionspartnern kann man sogar die Anwesenheit von noch mehr Wasser dulden; sie kann sogar vorteilhaft sein. Die Acy-1ierungsreaktion kann in Lösungsmitteln durchgeführt werden, [ die bis zu ungefähr 40 % Wasser enthalten, obgleich man bei derart hohen Wasserkonzentrationen kurze Acylierungszeiten wählen muß, um eine übermäßige DesiIyIierung des polysiIyIierten -Aininoglycosid-Ausgangsmaterials zu'vermeiden. Wenn demgemäß im vorliegenden Falle der Begriff "im wesentlichen wasserfreies organisches Lösungsmittel" gebraucht wird, so umfaßt dieser Begriff auch Lösungsmittel, die bis zu ungefähr 40 % Wasser enthalten. Ein bevorzugter Bereich geht bis zu ungefähr 20 % Wasser, ein bevorzugterer Bereich geht bis ungefähr 8 % Wasser und ein am meisten bevorzugter Bereich geht bis zu ungefähr 4 % Wasser.

809846/0896

M/19 111 - 50 -

Mit Ausnahme der oben beschriebenen Fälle für Lösungsmittel, ' welche große Mengen Wasser enthalten, ist die Acylierungsdauer nicht kritisch.

Temperaturen im Bereich von etwa -30 C bis etwa 100 C können während Reaktionszeiten von etwa 1 Stunde bis zu 1 Tag oder mehr verwendet werden. Erfindungsgemäß wurde festgestellt, daß die Reaktion bei Raumtemperatur üblicherweise gut verläuft, und aus Gründen der Einfachheit und Wirtschaftlichkeit ist bevorzugt, dieReaktion bei Umgebungstemperatur durchzuführen. Wenn es jedoch um maximale Aus- '' beuten und um selektive Acylierung geht, wird bevorzugt, die Acylierung bei einer Temperatur von ungefähr 0 ⁰C bis 5 C durchzuführen.

Die Acylierung der 1-Aminogruppe des polysilylierten Aminoglycosids (mit oder ohne von Silyl verschiedenen Blockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe) kann mit irgendeinem acylierenden Derivat der Säure der ι allgemeinen Formel XIII durchgeführt werden, von dem bekannt I ist, daß es sich zur Acylierung einer primären Aminogruppe eignet. Zu Beispielen für geeignete acylierende ! Derivate der freien Säure gehören die entsprechenden Säureanhydride, gemischten Anhydride, beispielsweise '<

Alkoxyameisensäureanhydride, Säurehalogenide, Säureazide, I aktive Ester und aktive Thioester. Man kann die freie Säure mit dem polysilylierten Aminoglycosid-Ausgangsmaterial kuppeln, nachdem man zuerst die freie Säure mit N,N'-Dimethylchlorformiminiumchlorid [vgl. GB-PS 1 008 170 und Novak und Weichet, Experientia XXI, 6, 360 (1965)] umgesetzt hat oder mit Hilfe eines N,N'-Carbonyldiimidazols oder eines N,N'-Carbonylditriazols

809845/0895

M/11 111 - 51 -

/vgl. südafrikanische Patentschrift 63/26847 oder mit Hilfe eines Carbodiimidreagenzes /insbesondere N ,N'-Dicyclohexylcarbodiimids N,N'-Diisopropylcarbodiimid oder N-Cyclohexyl-N'-(2-morpholinoäthyl)carbodiimid; vgl. Sheehan und Hess, J.A.C.S._; 77, 1967 (1955)7 oder mit Hilfe eines Alkynylaminreagenzes /vgl. R. Buijle und H.G.Viehe, Angew. Chem. International Edition, 3, 582 (1964)7 oder mit Hilfe eines Isoxazoliumsalzrea-· genzes /vgl. R.B.Woodward, R.A.Olofson und H.Mayer, J.Amer. Chem.Soc._s 83, 1010 (1961)7 oder mit Hilfe eines Keteniminreagenzes /vgl. C.L.Stevens und M.E.Munk, J. Arr.er .Chem.Soc _s 80, 4065 (1958)7 oder mit Hilfe eines Hexachlorcyclotriphosphatria- I zins oder Hexabromcyclotriphosphatriazins (US-PS Nr. 3 651 050) j oder mit Hilfe von Diphenylphosphorylazid ZDDPA; J.Amer.Chem. j Soc. , 94, 6203-6205 (1972)7 oder mit Hilfe von Diäthyl phosphoryl!- cyanid /DEPC; Tetrahedron Letters Nr. 18, Seiten 1595-1598 j (1973)7 oder mit Hilfe von Diphenyl phosphit /tetrahedron Letters] Nr. 49, Seiten 5047-5050 (1972)7 umgesetzt hat. Ein anderes Äquivalent der Säure ist ein entsprechendes Azolid, d.h. ein Amid der entsprechenden Säure, deren Amidstickstoff Glied eines quasi-aromati- ! sehen 5-gliedrigen Rings ist, der mindestens zwei Stickstoff- j atome enthält, d.h. Imidazo! , Pyrazol , die Triazole, Benzimi- | dazol , Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Für den Fachmann liegt es auf der Hand, daß es bisweilen wünschenswert oder erforderlich sein kann^ die Hydroxylgruppe des acylierenden Derivats der Säure der allgemeinen Formel XIII zu schützen, beispielsweise wenn man acylierende Derivate, wie beispielsweise Säurehalogenide, einsetzt. Der Schutz der Hydroxy-gruppe kann auf an sich bekannte Weise erfolgen, z.B. unter Verwendung einer Carbobenzyloxygruppe, durch Acetylieren, durch Silylieren, und dergleichen.

809845/0896

M/19 111 - 52 -

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das acylierende Derivat der Säure der Formel XIII ein aktiver Ester, und bevorzugt deren aktiver Ester mit N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid oder N-Hydroxyphthalimid. Gemäß einer anderen bevorzugten Ausführungsform ist das acylierende Derivat der Säure der Formel XIII ein Gemisch des Säureanhydrids, und vorzugsweise ein Gemisch des Säureanhydrids mit Pivalinsäure, Benzoesäure, Isobutylkohlensäure oder Benzylkohlensäure.

ι Nach Beendigung der Acylierungsreaktion des polysilylierten j Aminoglycosids werden sämtliche Blockierungsgruppen in an sich bekannter Weise entfernt, um das gewünschte Produkt der allgemeinen Formel I zu liefern. !

Die Silylgruppen kann man beispielsweise leicht dadurch ent- ^; fernen, daß man mit Wasser hydrolysiert. Dies erfolgt Vorzugs- ι weise bei niedrigem pH. Amxnoblockxerungsgruppen am Amino-

glycosidmolekül (falls vorhanden) oder an der Acyl-Seiten-

kette können ebenfalls nach bekannten Methoden-!entfernt werden. So kann man beispielsweise eine tert.-Butoxycarbonylgruppe durch Verwendung von Ameisensäure entfernen, eine Carbobenzyloxygruppe durch katalytisches Hydrieren, eine 2-Hydroxy-1-naphthcarbonylgruppe durch saure Hydrolyse, eine Trichloräthoxycarbonylgruppe durch Behandlung mit j Zinkstaub in Eisessig, die Phthaloylgruppe durch Behandlung !

mit Hydrazinhydrat in Äthanol unter Erhitzen, die Trifluoracetylgruppe durch Behandeln mit NH.OH, etc. entfernen.

809845/0895

M/19 111

Bevorzugte Aminoblockierungsgruppen, welche zum Schutz der Aminogruppen im Aminoglycosidmolekül, sowie zum Schutz der Aminogruppe der acylierenden Säure der Formel XIII brauchbar sind, entsprechen den Gruppen der nachstehenden Formeln;

CH-, 0

^{1 3} Il

, CH--C-O-C-³ I
CH.,

X₃C-CH₂

und

20 21
worin R und R , die gleich oder verschieden sein können, jeweils Wasserstoff, F, Cl, Br, NO„, OH (niedrig)Alkyl oder (niedrig)Alkoxy bedeuten, X für Cl, Br, F oder J steht und

809845/0895

M/19 111 - 54 -

Y Wasserstoff, Cl, Br, F oder J bedeutet. Eine zur Verwendung
im Aminoglycosidmolekül besonders bevorzugte Aminoblockierungs-; gruppe ist die Carbobenzyloxygruppe» Besonders bevorzugte
Aminoblockierungsgruppen zur Verwendung bei der acylierenden
Säure der Formel XIII sind die Carbobenzyloxy, Trifluoracetyl-
und tert.-Butyloxycarbonyl-gruppen.

Einige der Verbindungen der Formel I enthalten eine Doppelbindung (d.h. wenn der Substituent R der Formel IV entspricht). Dies sind Verbindungen, welche von Aminoglycosiden, wie
Sisomicin, Verdamicin, G-52, 66-40B und 66-40D, abgeleitet sind» Verwendet man solche Verbindungen, so ist jedem Fachmann be- ; kannt, daß man sämtliche Reduktionstechniken, welche die
Doppelbindung reduzieren könnten, vermeiden muß. So sollten ' beispielsweise Aminoblockierungsgruppen verwendet werden,
welche durch Hydrolyse oder durch ein Alkalimetall in
flüssigem Ammoniak entfernt werden können, um die Reduktion ' der Doppelbindung zu vermeiden, welche bei Methoden wie : katalytischer Hydrogenolyse eintreten würde. '

Die Ausbeuten an Produkt wurden nach verschiedenen Methoden
bestimmt. Nach Entfernung sämtlicher Blockierungsgruppen und
Chromatographie an einer CG-50 (^NH ₄ ) Säule, ließ sich die
Ausbeute durch Isolierung des kristallinen Feststoffs aus den
entsprechenden Fraktionen oder durch mikrobiologische Untersuchtung ( turbidimetrisch^ Methode oder Plattentest) der
entsprechenden Fraktionen bestimmen. Eine andere erfindungsgemäß eingesetzte Technik war Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie der nicht reduzierten Acylierungsmischung,
d.h. mit Hilfe der wässrigen Lösung, die nach der Hydrolyse
j der Silylgruppen und Entfernung des organischen Lösungsmittels
erhalten wurde, jedoch vor der Hydrogenolyse zur Entfernung j der verbleibenden Blockierungsgruppe(n)„ Diese Untersuchung j ist keine direkte Untersuchung auf das Endprodukt, sondern ι auf die entsprechenden N-blockierten Verbindungen. !

809845/0895

Als Instrument verwendete man einen Waters Associates ALC/GPC244 Hochdruck-Flüssigkeitschromatograph mit einem Waters Associates ' Model 440 Absorptionsdetektor und einer 30 cm χ 3,9 mm (Innen- i -^A

durchmesser) μ-Bondapak C-18-Säule, und zwar unter den folgenden Bedingungen:

Mobile Phase: 25 % 2-Propanol

75 % 0,01 m Natriumacetat pH 4,0

Flußrate: 1 ml/Minute

Detektor: UV bei 254 nm

Empfindlichkeit: 0,04 AUFS

Verdünnungsmittel: DMSO

Injizierte Menge: 5 μ!

Konzentration: 10 mg/ml

Die Schreibergeschwindigkeit variierte, jedoch waren 2 Minuten/2,54 cm typisch. Die obigen Bedingungen ergaben UV-Spuren mit Peaks, die quantitativ leicht zu bestimmen waren. Die Ergebnisse der obigen Analysen sind im vorliegenden Text als HLPC-Tests bezeichnet.

Um die Wiederholung komplizierter chemischer Bezeichnungen zu vermeiden, werden im vorliegenden Text bisweilen die nachfolgenden Abkürzungen gebraucht:

AHBA L-(-)-f- Ami no -oi- hydroxy buttersäure BHBA N-Carbobenzyloxyderivat von AHBA HONB N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid NAE N-Hydroxy-5-norbornen-2 ,3-dicarboximid-aktivierter (oder BHBA-¹ONB¹) _{Ester von BH}BA

HONS N-Hydroxysuccinimid

SAE N-Hydroxysuccinimid-aktivierter Ester

(oder BHBA-¹ONS¹) _von BHBA

DCC Dicyclohexylcarbodiimid

DCU Dicyclohexylharnstoff

HMDS Hexamethyldisilazan

BSA Bis(trimethylsilyl)acetamid

MSA Trimethylsi IyI acetamid

809845/0895

M/19 111 - 56 -

TFA Trifluoracetyl

t-BOC tert.-Butyloxycarbonyl ;

"Dicalite" ist eine Handelsbezeichnung der Great Lakes Carbon .

Corporation für ein Produkt aus Diatomeenerde. !

"Amberlite CG-50" ist eine Handelsbezeichnung der Rohm & Haas ! Co. für ein schwach-saures Kationenaustauscherharz des Carbon- J säure-polymethacrylsäuretyps von chromatographischer Qualität. :

"u-Bondapak" ist eine Handelsbezeichnung der Waters Associates i für eine Reihe von Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographiesäul en'.

Alle Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben.

Die Begriffe "(niedrig)Alkyl" und "(niedrig)Alkoxy" beziehen sich auf Alkyl- oder Alkoxygruppen, die 1 bis 6 Kohlenstoff- ; atome aufweisen. :

Die in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendete Bezeichnung "pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz" einer Verbindung der Formel I bezeichnet ein Mono-, Di-, Tri-, Tetra- (oder ein höheres Salz), das durch Einwirkung eines Moleküls einer Verbindung der Formel I auf eines oder mehrere Äquivalente einer nicht-toxischen, . pharmazeutisch verträglichen Säure, abhängig von der speziellen Verbindung der Formel I, gebildet wurde. Es versteht sich, daß ein Säureadditionssalz an jeder Aminogruppe im Molekül gebildet werden kann, sowohl im Aminoglycosidkern als auch in der Acylseitenkette. Zu diesen Säuren gehören Essigsäure, Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure Salpetersäure, Bromwassersjboffsäure, Ascorbinsäure_y

809845/0896

M/19 111 - 57 -

] Äpfelsäure und Citronensäure und die anderen Säuren, welche

herkömmlicherweise zur Herstellung von Salzen aminhaltiger Pharmazeutika verwendet werden.

Die meisten der erfindungsgemäß als Ausgangsmaterialien verwendeten Aminoglycoside sind nach dem Stand der Technik bekannt. Jedes spezielle Aminoglycosid, das nicht per se bekannt ist, (z.B. ein zuvor noch . nicht beschriebenes β'-N-Methyl-Derivat eines bekannten Aminoglycosids) kann nach bekannten Verfahren wie sie zur Herstellung analoger Verbindungen verwendet werden, leicht hergestellt werden.

Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen der Formel I sind sowohl gegen gram-positive als auch gram-negative Bakterien j aktiv und werden analog zu anderen bekannten Aminoglycosiden verwendet. Viele der Verbindungen der Formel I sind per se I bekannt. ■

i j Gemäß einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Er- '

. findung werden polysilylierte Aminoglycoside der Formel XIV

oder polysilylierte Aminoglycoside der Formel XIV, welche j 1 bis 3 von Silyl verschiedene Blockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe aufweisen, hergestellt.

809845/0895

M/19 111 - 58 -

Beispiel 1

Herstellung von l-N-/"L-( -J-7"-Ami no-y-hydroxybutyryljkanamycin A« Amikacin, durch selektive Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)- ' 6'-N-carbobenzyioxykanamyciη A in wasserfreiem Diäthylketon

Man schlämmt 15 g (24,24 niMol ) 6 ' -N-Carbobenzyi oxykanamycin A ' in 90 ml trockenem Acetonitril auf und erhitzt unter einer Stickstoffatmosphäre zum Rückfluß. Dann gibt man im Verlauf von j 30 Minuten langsam 17,5 g (108,48 mMol)Hexamethyldisi1azan zu | und hält die erhaltene Lösung 24 Stunden lang am Rückfluß. Nach Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum (4O⁰C) und vollständigem Trocknen unter Vakuum (10 mm) erhält man 27,9 g eines weißen, amorphen Feststoffs. Ausbeute 90,71 %, berechnet als

6'-N-Carbobenzyloxykanamycin A (Silyl)_q. !

Diesen Feststoff löst man in 150 ml trockenem Diäthylketon bei j einer Temperatur von 23⁰C auf. Man gibt 11,05 g (26,67 mMol) ' L-(-J-)"-Benzyl oxycarbonyl ami no- x-hydr oxy butt ers au re-N -Hydroxy- , 5-norbornen-2,3-dicarboximidester (ΝΑΕ), gelöst in 100 ml trockenem Diäthylketon bei 23⁰C unter gutem Rühren im Verlauf von einer ,

halben Stunde langsam zu. Man rührt die Lösung 78 Stunden lang bei 23⁰Co Man verdünnt die gelbe_s klare Lösung (pH 7,0) mit 100 ml Wasser. Der pH der Mischung wird mit 3 η HCl auf 2,8 eingestellt und man rührt 15 Minuten lang heftig bei einer Temperatur von 23⁰C. Die wässerige Phase wird abgetrennt, und die organische Phase wird mit 50 ml Wasser von pH 2,8 extrahiert. Die vereinigten wässerigen Fraktionen wäscht man mit 50 ml Äthylacetat. Man gibt die Lösung in eine 500 ml-Parr-Vorrichtung zusammen mit 5 g 5 %-igem Pal 1adium-auf-Aktivkohle-Katalysator (Engelhard) und reduziert 2 Stunden lang bei 23⁰C bei einem Druck von 3,52 kg/cm² (50 psi) H₂- Man filtriert

809845/0895

die Mischung durch ein Filterbett aus Dicalite, das dann mit zusätzlichen 30 ml Wasser gewaschen wird. Man konzentriert ι das farblose Filtrat im Vakuum (40 bis 45⁰C) auf 50 ml. Die ; Lösung wird auf eine 5 χ 100 cm CG-50 (NH₄+)-Ionenaustauscher- ' säule aufgegeben. Nach dem Waschen mit 1000 ml Wasser eluiert man unumgesetztes Kanamycin A, 3-/L-(-) -T-Amino-oMiydroxybutyryl7kanamycin A (BB-K29) und Amikacin mit 0,5 η Ammoniumhydroxyd. Mit 3 η Ammoniumhydroxyd wird Polyacylmaterial wiedergewonnen. Zur überwachung der fortlaufenden Eluierung wählt man Biotest, Dünnschichtchromatographie und optische Drehung. Volumen,, beobachtete optische Drehung jeder Fraktion des Eluats und Gewicht und prozentuale Ausbeute des aus jeder Fraktion durch Eindampfen zur Trockne isolierten Feststoffs sind nachstehend zusammengestellt:

Material	Volumen	578	Gewicht	1 Ausbeute
	(ml)	+ 0,115	(g)
Kanamycin A	1000	+ 0,24	0,989	9,15
BB-K29	1750	+ 0,31	4,37	32,0
Ami kacin	2000	+ 0,032	6,20	47,4
Polyacyle	900	0,288	2,0

Durch Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie wird gezeigt, daß die verbrauchte Diäthylketonschicht weitere 3 bis 5 % Amikacin enthält.

Man löst das rohe Amikacin (6,20 g) in 20 ml Wasser auf und verdünnt mit 20 ml Methanol und setzt dann 20 ml Isopropanol zu, um die Kristallisation einzuleiten. Man erhält 6,0 g (45,8 %) kristallines Amikacin.

Beispiel 2

Herstellung von l-N-/"L-(-)-^-Amino-o^-hydroxybutyryl7kanamycin Amikacin, durch selektive Acylierung von Poly(trimethylsilyl)■ kanamycin A, wobei man in situ blockiert

809846/0886

H/HU, -.0-

A) Poly(trimethylsilyl)kanamycin A

Man schlämmt Kanamycin A in Form der freien Base mit 18 g Aktivität (37,15 mMol) in 200 ml trockenem Acetonitril auf und erhitzt zum Rückfluß. Im Verlauf von 30 Minuten gibt man 29,8 g (184,6 mMol) Hexamethyldisri1azan zu und rührt die Mischung 78 Stunden am Rückfluß, wobei man eine hellgelbe klare Lösung erhält. Nach dem Entfernen des Lösungsmittels unter Vakuum bleibt ein amorpher, fester Rückstand übrig. Die Ausbeute beträgt 43 g (94 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)₁₀),

B) l-N-/L-(-)-'7"-Amino-o^-hydroxybutyryl7kanamycin A

Man schlämmt 5,56 g (20,43 mMol) p-(Benzyloxycarbonyloxy)-benzoesäure in 50 ml trockenem Acetonitril bei einer Temperatur von 23⁰C auf. Dann gibt man unter gutem Rühren 8,4 g (41,37 mMol) N ,0-bis-Trimethylsi IyIacetamid zu. Die Lösung wird 30 Minuten bei 23⁰C gehalten und dann im Verlauf von 3 Stunden unter heftigem Rühren zu einer Lösung von 21,5 g (17,83 mMol s berechnet als (Si IyI ) ,,,-Verbindung ) Poly(trimethylsilyl)kanamycin A in 75 ml trockenem Acetonitril von 23⁰C zugegeben. Man rührt die Mischung 4 Stunden lang, entfernt das Lösungsmittel im Vakuum (4O⁰C) und löst dann den öligen Rückstand in 50 ml trockenem Aceton mit einer Temperatur von 23⁰C.

Im Verlauf von 5 Minuten gibt man 8,55 g (20,63 mMol) L-(-)-f-Benzyl oxycarbonylamino-iX-hydroxybuttersäure-N-Hydroxy-S- ' norbornen-2,3-dicarboximidester (NAE) in 30 ml Aceton zur obigen Lösung. Man hält die Mischung 78 Stunden bei 23⁰C. j Dann verdünnt man die Lösung mit 100 ml Wasser und senkt den; pH (7,0) mit 6 η HCl auf 2,5 ab. Die Mischung wird in eine 500 ml Parr-Flasche zusammen mit 3 g 5 % Palladium-auf-Aktiv kohle-Katalysator (Engelhard) gegeben und 2 Stunden bei

809845/0695

M/19 111 - 61.--

einer Temperatur von 23⁰C bei einem Druck von 2,81 kg/cm (40 psi) Ho reduziert. Man filtriert die Mischung durch ein Filterbett aus Diatomeenerde, das anschließend mit 20 ml Wasser gewaschen wird. Bei den vereinigten Filtraten und WaschflUssigkeiten (168 ml) wird durch mikrobiologischen Test gegen E. coli festgestellt, daß sie angenähert 11 400 meg/ml Amikacin enthalten (Ausbeute 19 %).

Beispiel Herstellung von l-N-/*L-(-)-'7''-Amino-o{-hydroxybutyryl7kanamycin A.

Amikacin, durch selektive Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin A

A) Poly(trimethyl si IyI)kanamycin A

Eine Suspension von 10 g (20,6 mMol) Kanamycin A in 100 ml trockenem Acetonitril und 25 ml (119 mMol) 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisi1azan wird 72 Stunden lang am Rückfluß gehalten. Man erhält eine klare, hellgelbe Lösung. Die Lösung wird im Vakuum bei 30 bis 40⁰C zur Trockne eingedampft. Man erhält 21,3 g Poly(trimethylsilyl)kanamycin A in Form eines hellockerfarbenen, amorphen Pulvers. Die Ausbeute beträgt 85 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)₁₀-

B) 1-N-/L-(-)-7^v-Amino-p(-hydroxybuty ry 17kanamycin A

Zu einer Lösung von 2,4 g (2,0 mMol) Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin A in 30 ml trockenem Aceton gibt man langsam 2,0 mMol L- (-)-T- Benzyl oxy carbonyl amino-<x-hydroxybuttersäure-N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester (NAE) in 10 ml trockenem Aceton bei einer Temperatur von 0 bis 5⁰C zu. Die Reaktionsmischung wird 1 Woche lang bei 23⁰C gerührt und dann im Vakuum bei einer Badtemperatur von 30 bis 40⁰C zur

809845/0895

Trockne eingedampft. Dann gibt man 60 ml Wasser zum Rückstand, gefolgt von 70 ml Methanol, um eine Lösung zu erhal- : ten. Die Lösung wird mit 3 η HCl auf pH 2,0 angesäuert und j dann 2 Stunden lang bei einem Druck von 3,52 kg/cm (50 psi) J H₂ reduziert, wobei man 500 mg 5 % Pal 1adium-auf-Aktivkohle- ! Katalysator verwendet. Das Material wird filtriert, und ver- \ einigte Filtrate und Waschflüssigkeiten werden mit dem mikrobiologischen Test gegen E.coli untersucht. Man stellt fest, daß eine Ausbeute von 29,4 % Amikacin erhalten wurde.

Beispiel 4

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsiIyI)-6'-N-Cbz-Kanamyciη A in Tetrahydrofuran mit dem gemischten Säureanhydrid aus Pivalinsäure und BHBA

j #■ ι

A) Herstellung des gemischten Anhydrids ;

Man löst 5,066 g (20_s0 mMol) BHBA₅ 4,068 g (20,0 mMol) BSA j und 2,116 g (22,0 mMol) Triethylamin in 200 ml Tetrahydrofuran, das zuvor über einem Molekularsieb getrocknet wurde. Man hält die Lösung 2 1/4 Stunden am Rückfluß und kühlt dann auf -1O⁰C ab. Im Verlauf von 2 bis 3 Minuten gibt man 2,412 g (20,0 mMol) Pivaloylchlorid unter Rühren zu und rührt dann noch 2 Stunden lang bei -1O⁰C. Dann läßt man die Temperatur auf 23⁰C ansteigen.

B) Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-6'-N-Cbz-Kanamycin A

5,454 g (4,97 mMol, berechnet als 6'-Cbz-Kanamycin A (SiIyI)₉) Poly(trimethylsilyl)-6'-N-Cbz-Kanamycin A, wie in Beispiel 1 hergestellt, wird in 50 ml trockenem (Molekularsieb) Tetrahydrofuran von 23⁰C aufgelöst. Man gibt die Hälfte der Lösung dei

809845/0895

M/19 111 - 63

wie in Stufe A beschrieben hergestellten gemischten Anhydrids (10,0 mMol) im Verlauf von 20 Minuten unter Rühren zu und ^; rührt dann noch weitere 7 Tage.

Dann gibt man 100 ml Wasser zur Reaktionsmischung und stellt den pH (5,4) mit 3 m H₂SO₄ auf 2,0 ein. Man rührt noch 1 Stunde und extrahiert dann die Lösung mit Äthylacetat. Die Kristallisation von polyacyliertem Material setzt ein, so daß die Reaktionsmischung gefiltert wird. Nach dem Trocknen über PpOr wiegen die gewonnenen Feststoffe 0,702 g. Die Extraktion der Reaktionsmischung wird insgesamt mit 4 χ 75 ml Äthylacetat durchgeführt. Anschließend wird das überschüssige Äthylacetat aus der wässerigen Schicht entfernt. Man führt einen Test mit Hilfe von HPLC bei einem aliquoten Anteil der wässerigen Lösung durch. Die erhaltene Kurve zeigt eine Ausbeute an di-Cbz-Amikacin von 26,4 % an. ;

Dann hydriert man die wässerige Schicht in einer Parr-Vor- : richtung 2 Stunden lang bei einem H₂-Druck von 3,52 kg/cm ; (50 psi), wobei man 0,5 g 10 % Pd-auf-Aktivkohle-Katalysator verwendet» Man filtriert das Material und stellt bei dem vereinigten Filtrat und den Waschflüssigkeiten durch Test gegen E.coli fest, daß eine Ausbeute an Amikacin von 31,2 % vorliegt. Das Verhältnis Amikacin/BB-K29 beträgt angenähert 9-10/1. Es liegen Spuren von Polyacylverbindungen und unumgesetzten Kanamycin A vor.

B e i s ρ i e 1 5

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-6'-N-Cbz-kanamycin A in Aceton mit dem gemischten Anhydrid aus BHBA und Isobutylkohlensäure

A) Herstellung des gemischten Anhydrids

1,267 g (5,0 mMol) BHBA und 1,313 g (10,0 mMol) N-Trimethylsilylacetamid (MSA) in 20 ml über Molekularsieb-getrocknetem

809845/0895

M/19 111 - 64 -

Aceton wird bei 23⁰C gerührt und man gibt 0,70 ml (5,0 mMol) Triethylamin (TEA) zu. Die Mischung wird 2 1/2 Stunden unter einer ^-Atmosphäre am Rückfluß gehalten. Man kühlt die Mischung auf -2O⁰C ab und gibt 0,751 g (0,713 ml; 5,50 mMol) Isobutylchlorformiat zu. Es setzt eine sofortige Abscheidung von Triäthylaminhydrochlorid ein. Man rührt die Mischung 1 Stunde bei -2O⁰C.

B) Acylierung ,

Man löst 6,215 g (4,9 mMol, berechnet als (Si IyI )_g-Verbin- '<■'' dung) Poly(trimethyl silyl )-6' -N-Cbz-Kanamycin A, das wie in ^!; Beispiel 1 beschrieben hergestellt wurde, in 20 ml Molekular-; sieb-getrocknetem Aceton unter Rühren bei 23⁰C auf. Man ■ kühlt die Lösung auf -2O⁰C ab und gibt langsam im Verlauf ; von 30 Minuten die kalte Lösung des gemischten Anhydrids aus Stufe A zu. Man rührt die Reaktionsmischung weitere 1 1/2 Stunden bei -2O⁰C und anschließend 17 Stunden bei 23⁰C. Die Reaktionsmischung wird dann unter Rühren in 150 ml Wasser von 23⁰C gegossen, der pH (7₅75) wird mit 3 η HCl auf I 2,5 eingestellt, und das Rühren wird noch 15 Minuten fortgesetzt. Dann wird das Aceton im Vakuum bei 4O⁰C entfernt. Man führt einen Test mit HPLC bei einem Aliquot der erhaltenen wässerigen Lösung durch. Die erhaltene Kurve zeigt eine Ausbeute an di-Cbz-Amikaciη von 34,33 % an.

Der Hauptteil der wässerigen Lösung wird 3 1/4 Stunden bei 23⁰C unter einem H₂~Druck von 3,52 kg/cm (50 psi) reduziert, wobei man 2,0 g Pd/C-Katalysator einsetzt. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt, und bei den vereinigten Filtraten und Waschflüssigkeiten wird durch mikrobiologische Untersuchung gegen E. coli festgestellt, daß eine Ausbeute von 35,0 % an Amikacin vorliegt.

809845/0895

M/19 111 - 65 -

Beispiel 6

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsilyi)-6'-N-Cbz-Kanamycin A in wasserfreiem Cyclohexanon bei unterschied!ichen Reaktionszeiten

A) 2,537 g (2,0 mMol , berechnet als 6' -N-Cbz-Kanamycin A (Silyl);_g) Poly(trimethylsi IyI)-6'-N-Cbz-Kanamycin A, das wie in Bei- j spiel 1 beschrieben hergestellt wurde, in 300 ml trockenem Cyclohexanon wird 20 Stunden bei 23⁰C mit einer NAE-Lösung in trockenem Cyclohexanon (10,8 ml einer 0,1944 mMol/ml-Lö- , sung, 2,10 mMol) acyliert. Dann gibt man die Reaktionsmischunig zu 150 ml Wasser unter Rühren zu und stellt den pH (5,6) mit 3 η HCl auf 2,5 ein. Das Cyclohexanon wird im Vakuum bei 4O⁰C entfernt, und ein aliquoter Anteil der verbliebenen wässerigen Phase wird zur Untersuchung mit HPLC herangezogen.

Man reduziert die Hauptmenge der wässerigen Phase 3 Stunden lang bei 23⁰C unter einem H₂-Druck von 3,52 kg/cm (50 psi), wobei man 1,0 g eines 10 %-igen Pd/C-Katalysators verwendet. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und vereinigte Filtrate und WaschfTüssigkeiten werden mikrobiologisch auf Amikacin untersucht.

B) Die obige Reaktion A wird wiederholt mit der Ausnahme, daß die Acylierung diesmal nicht 20 Stunden lang, sondern 115 Stunden lang durchgeführt wurde.

Ausbeuten

Mikrobiologische Unter-HPLC-Test suchung auf Amikacin

(di-Cbz-Amikacin) turbidimetrisch Platte

Reaktion A 49,18 % 42,87 % 39,16 %

Reaktion B 56,17 % 55,39 % 38,45 %

809848/0895

M/19 111 -66 -

Beispiel 7_

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsiTyI)-6'-N-Cbz-Kanamyciη A in wasserfreiem Tetrahydrofuran bei unterschied!ich en Reaktionszeiten

A) Man wiederholt Beispiel H₅ A mit der Ausnahme, daß man anstelle von trockenem Cyclohexanon trockenes Tetrahydrofuran als Lösungsmittel verwendet. j

B) Man wiederholt Beispiel 11, B mit der Ausnahme, daß man an- ι stelle von trockenem Cyclohexanon trockenes Tetrahydrofuran j als Lösungsmittel verwendet. \

Ausbeuten

Mikrobiologische Unter-HPLC-Test suchung auf Amikacin

(di-Cbz-Ami kacin) turbidimetrisch . Platte

Reaktion A 29,27 % 28,34 % 28,18 %

Reaktion B 33 _S39 % 21,52 % 28,63 %

Beispiel 8

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethyl- j si IyI)-6'-N-Cbz-Kanamycin A in wasserfreiem Dioxan während unterschied!icher Reaktionszeiten

A) Man wiederholt Beispiel 11, A mit der Ausnahme, daß man unter Verwendung von trockenem Dioxan als Lösungsmittel 44 Stunden lang acyliert.

809845/0895

M/19 111 - 67 -

B) Man wiederholt das Beispiel 11, B mit der Ausnahme, daß man unter Verwendung von trockenem Dioxan als Lösungsmittel 18 1/2 Stunden acyliert.

Ausbeuten

Mikrobiologische Unter-HPLC-Test · suchung auf Amikacin

(di-Cbz-Amikacin) turbidimetrisch PIatte

Reaktion A 39,18 % 43,27 % 33,36 %

Reaktion B 42,82 % 22,55 % 33,37 %

Beispiel 9

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsilyl)-6'-N-Cbz-Kanamycin A in wasserfreiem Diäthylketon bei 75⁰C

Zu einer gerührten Lösung von 2,537 g (2,0 mMol , berechnet als 6'-N-Cbz-Kanamycin A (SiIyI)₉) Poly(trimethylsilyl)-6'-N-Cbz-Kanamycin A, das wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt wurde, in 32 ml Mol ekul arsieb-getrocknetem Diäthylketon bei 75⁰C] gibt man im Verlauf von 15 Minuten eine Lösung von NAE (10,8 ml mit 0,1944 mMol/ml Diäthylketon, 2,10 mMol) zu. Man rührt noch weitere 3 Stunden bei 75⁰C und gießt dann die Mischung in 150 ml Wasser.Der pH wird mit 3 η HCl auf 2,8 eingestellt und das Diäthylketon wird bei 4O⁰C im Vakuum entfernt. HPLC-Test eines aliquoten Anteils der wässerigen Phase zeigt eine Ausbeuti an di-Cbz-Amikacin von 39,18 % an.

Man reduziert die Hauptmenge der wässerigen Phase 3 1/4 Stunden bei 23⁰C unter einem H₂~Druck von 3,49 kg/cm (49,8 psi),

809845/0895

wobei man 1,0 g Pd/C-Katalysator einsetzt. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt, und vereinigte Filtrate und Waschflüssigkeiten werden mikrobiologisch auf Amikacin untersucht. Die turbidimetrische Untersuchung zeigt eine Ausbeute von 27,84 % an, der Plattentest ergibt eine Ausbeute von 28,6 %.

Beispiel 10

Herstellung von	IyI)-kanamyci	Ami	kac-	in durch	Acyl i	erun(	3 von Poly(	trimethyl-
si	t Wasser	η Α	mit	NAE bei	0 bis	50C	nach "Rück	"-Hydrolyse
mi	Silylierung
A)	von	Kanamycin A	unter	Verwendung von	HMDS mit

TMCS als Katalysator

Man bringt 10 g Kanamycin A (97,6 % rein, 20,14 mMol ) in 100 ml Molekülarsieb-getrocknetem Acetonitril unter einer Stickstoffatmosphäre zum Rückfluß. Zur rückflußkochenden Reaktionsmischung gibt man im Verlauf von 10 Minuten eine Mischung aus 22,76 g (141 mMol, 7 Mol pro Mol Kanamycin A) HMDS und 1 ml (0,856 g, 7,88 mMol) TMCS. Man hält noch 4 3/4 Stunden am Rückfluß und kühlt dann die Mischung, konzentriert im Vakuum zu einem gelben, viskosen Sirup und trocknet 2 Stunden unter Hochvakuum. Die Ausbeute an Produkt beträgt 23,8 g (97,9 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)₁₀)J

B) Acylierung

Man löst 23,8 g (20,14 mMol) Poly(trimethylsilyl)-kanamyciη A, das in Stufe A hergestellt wurde, in 250 ml Molekularsieb-getrocknetem Aceton bei 23⁰C auf und kühlt dann auf 0 bis 5 C ab. Dann gibt man unter Rühren 3,63 ml (201,4 mMol 10 Mol pro Mol polysilyliertem Kanamycin A) Wasser zu und läßt die Mischung 30 Minuten lang unter mäßigem Vakuum ste-

809845/089$

hen. Im Verlauf von weniger als 1 Minute werden 19,133 mMol

(0,95 Mol pro Mol polysiIyIiertes Kanamycin A) MAE in j

108,3 ml Aceton zugegeben. Man rührt die Mischung 1 Stunde j

bei 0 bis 5⁰C, verdünnt mit Wasser, stellt den pH auf 2,5 j

ein und entfernt dann das Aceton im Vakuum. Dann wird die !

wässerige Lösung 2 1/2 Stunden bei 23⁰C bei einem H₉-Druck

von 3,52 kg/cm (50 psi) reduziert, wobei man 2,0 g 10 % Pd-auf-Aktivkohle als Katalysator verwendet. Die reduzierte Reaktionsmischung wird durch Dicalite filtriert, im Vakuum bei 40⁰C auf ungefähr 100 ml konzentriert und dann auf eine CG-50 (NH₄+)-Säule (6 Liter Harz, 5 χ 100 cm) aufgegeben. Man wäscht mit Wasser und eluiert dann mit 0,6 n-1,0 n- j 3 η NH₄OH. Man erhält 60,25 % Amikacin, 4,37 % BB-K6₉ j 4,35 % BB-K29, 26,47 % Kanamycin A und 2,18 % Polyacylverbi ndungen.

Beispiel 1J_

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsi1y1)-6'-N-Cbz-Kanamycin A mit SAE bei 0 bis 5⁰C nach "RUck"-Methanolyse

A) Silylierung von 6'-N-Cbz-Kanamycin A

Man bringt 20,0 g (32,4 raMol) 6'-N-Cbz-Kanamycin A in 200 ml Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril unter einer Stick-Stoffatmosphäre zum Rückfluß. Im Verlauf von 10 Minuten gibt man 47,3 ml (226,8 mMol , 7 Mol pro Mol 6'-N-Cbz-Kanamycin A) HMDS zu und setzt das Rückflußkochen noch 20 Stunden fort. Dann kühlt man die Mischung, konzentriert im Vakuum und trocknet 2 Stunden unter Hochvakuum, wodurch man 39,1 g weißen amorphen Feststoff erhält. Ausbeute 95,4 %, berechnet als 6'-N-Cbz-Kanamycin A (Silyl)_g.

809845/0895

M/19 111 - 70 -

B) Acylierung

Man löst 39,1 g (32,4 mMol) Poly (trimethylsiIy1)-6'-N-Cbz-Kanamycin A, das in der obigen Stufe A hergestellt wurde, in 400 ml trockenem Aceton unter Rühren bei 23⁰C auf. Man gibt 6_S6 ml (162 mMol , 5 Mol pro Mol polysiIyIiertes 6^!-N-Cbz-Kanamycin A) Methanol zu und rührt die Mischung 1 Stunde unter einer starken Stickstoffspülung bei 23⁰C. Die Mischung wird auf 0 bis 5⁰C abgekühlt, und eine Lösung von 11,35 g (32,4 mMol) SAE in 120 ml zuvor abgekühltem, trockenem Aceton wird zugesetzt. Man rührt die Mischung weitere 3 Stunden bei 0 bis 5⁰C und gibt sie dann 1 Woche lang in einen bei 4⁰C gehaltenen Kälteraum. Dann gibt man 300 ml ; Wasser zu, stellt den pH auf 2,0 ein, rührt die Mischung 1 Stunde und entfernt das Aceton im Vakuum. Die erhaltene ■ wässerige Lösung wird 17 Stunden bei 23⁰C unter einem H^-Druck von 3,80 kg/cm (54,0 psi) reduziert, wobei man 3,0 g ! 10 %-iges Pd-auf-Aktivkohle als Katalysator verwendet. j Dann filtriert man durch Dicalite, konzentriert im Vakuum ■ auf 75 bis 100 ml, gibt auf eine CG-50 (NH₄+)-Säule auf und ; eluiert mit Wasser und 0,6 η NH₄OH. Man erhält 52,52 % Amika-* ein, 14,5 % BB-K29, 19,6 % Kanamycin A und 1,71 % Polyacyl- !

verbindungen.

Beispiel 12

——-—^^——————— !

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsilyl)-Kanamycin A mit SAE bei 0 bis 5⁰C nach "Rück"-Hydro1yse mit Wasser

A) Silylierung von Kanamycin A mit TMCS in Acetonitril unter Verwendung von Tetramethylguanidin als Säureakzeptor

Man suspendiert 4,88 g (10,07 mMol) Kanamycin A in 100 ml

80984S/Ö895

M/19 111 - 71 -

Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril unter Rühren bei ]

23⁰C. Zur gerührten Suspension gibt man 16,234 g (140,98 !

mMol , 14 Mol pro Mol Kanamycin A) Tetramethylguanidiη (TMG). j Man erhitzt die Mischung zum Rückfluß und gibt im Verlauf von 15 Minuten 15,32 g (140,98 mMol, 14 Mol pro Mol Kanamycin A) TMCS zu. Ungefähr 1/2 Stunde nach der Zugabe des TMCS bildet sich ein weißer Niederschlag von TMG-HCl. Man kühlt die Mischung auf Raumtemperatur, konzentriert zu einem klebrigen Rückstand und trocknet 2 Stunden unter Hochvakuum. Der Feststoff wird mit 100 ml trockenem THF verrieben, und das unlösliche TMG-HCl wird abfiltriert und mit 5 χ 20 ml-Portionen THF gewaschen. Vereinigtes Filtrat und Waschflüssig keiten werden im Vakuum bei 4O⁰C zu einem klebrigen Rückstand konzentriert und 2 Stunden unter Hochvakuum getrocknet, Man erhält 10,64 g eines hei 1-cremefarbigen, klebrigen Rückstands. Die Ausbeute beträgt 87,6 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)₁₀.

B) Acylierung

Man löst 10,64 g (10,07 mMol) Poly (trimethyl si IyI ^kanamycin A, das in der obigen Stufe A hergestellt wurde, in 110 ml Molekularsieb-getrocknetem Aceton unter Rühren bei 23⁰C auf und kühlt die Lösung auf 0 bis 5⁰C. Dann gibt man 1,81 ml Wasser (100,7 mMol, 10 Mol pro Mol polysiIyIiertem Kanamycin A) zu und rührt die Lösung 30 Minuten unter mäßigem Vakuum. 3,70 g (10,57 mMol, 5 %-iger Überschuß) SAE in 40 ml vorgekühltem, trockenem Aceton werden im Verlauf von weniger als 1 Minute zugegeben, und die Mischung wird 1 Stunde gerührt. Man arbeitet die Mischung nach der allgemeinen Arbeitsweise des Beispiels 16 B auf, wobei man ungefähr 50 % Amikacin, ungefähr 10 % BB-K29, 5 bis 8 % BB-K6, ungefähr 20 % Kanamycin A und 5 bis 8 % Polyacylverbindungen erhält.

809846/0895

M/19 111 - 72 -

Beispiel 13

Herstellung von Poly(triäthylsi IyI)-kanamycin A unter Verwendung von Triäthylchi orsil an mit Triäthyl amin als S'äureakzeptor

5,0 g zu 97,6 % reines Kanamycin A (10,07 mMol) werden in 100 ml Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril bei 23⁰C suspendiert. Man gibt 33,8 ml (24,5 g, 241,7 mMol) Triäthylamin zu und bringt die Suspension zum Rückfluß. Eine Lösung von 23,7 ml (21,3 g, 140,98 mMol) Trichioräthylsi 1 an in 25 ml trockenem Acetonitril wird im Verlauf von 20 Minuten zugesetzt. Man hält noch weitere 7 Stunden am Rückfluß und kühlt die Mischung auf Raumtemperatur ab, worauf lange, feine Nadeln von TEA-HCl abgeschieden werden. Man läßt die Mischung ungefähr 16 Stunden bei Raumtemperatur stehen, konzentriert im Vakuum bei 4O⁰C zu einem klebrigen Feststoff und trocknet 2 Stunden unter Hochvakuum zu einem dunkel-orangefarbenen, klebrigen Feststoff. Man verreibt den Feststoff mit 100 ml trockenem THF von 23⁰C

809845/089B

und filtriert das unlösliche TEA-HCl ab, wäscht mit 5 χ 20 ml THF und trocknet. Hierbei erhält man 16,0 g TEA-HCl. Vereinigte Filtrate und Waschflüssigkeiten werden im Vakuum zu einem Feststoff konzentriert. Dann trocknet man 2 Stunden unter Hoch- | vakuum. Man erhält 19_S3 g Poly(triäthylsilyl)-kanamycin A als dunkelorangen, viskosen Sirup.

Beispiel 14

Herstellung von Poly(trimethylsilyl)-kanamycin A unter Verwendung von bis-Trimethylsilylharnstoff

Man suspendiert 10,0 g zu 99,7 % reines Kanamycin A (20,58 mMol] in 200 ml Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril unter Rühren bei 23⁰C. Zur Suspension gibt man 29,45 g bis-Trimethylsilylharnstoff (BSU) (144,01 mMol, 7 Mol pro Mol Kanamycin) und bringt die Mischung unter einer Stickstoffatmosphäre zum Rückfluß. Man hält noch 17 Stunden am Rückfluß und kühlt dann die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur ab. Eine kleine Menge unlösliches Material wird durch Filtrieren entfernt, mit 3 χ 10 ml-Portionen Acetonitril gewaschen und getrocknet (1,1381 g) Infrarot-Spektroskopie zeigt, daß es sich hierbei um BSU und eine kleine Menge unumgesetztes Kanamycin A handelt. Vereinigte Filtrate und Waschflüssigkeiten werden 16 Stunden auf 4⁰C abgekühlt. Es scheidet sich weiterer Feststoff ab, der wie oben beschrieben gewonnen wird. Man erhält 7,8 g. Durch Infrarotanalyse wird gezeigt, daß es sich um BSU und Harnstoff handelt. Das hellgelbe Filtrat und die Waschflüssigkeiten werden im Vakuum bei 4O⁰C konzentriert. Anschließend trocknet man unter Hochvakuum, wobei man 27,0 g eines weißen Feststoffs erhält, der teilweise klebrig ist und teilweise aus feinen, nadelartigen Kristallen besteht. Man behandelt den Feststoff mit 150 ml Heptan von 23⁰C, entfernt den unlöslichen Anteil durch Filtrieren, wäscht mit 2 χ 50 ml-Portionen Heptan und trocknet. Hier-

809845/0895

bei erhält man 6,0 g weiße Nadeln, bei denen es sich nach Infrarotanalyse um BSU und Harnstoff handelt. Vereinigtes Filtrat j und Waschflüssigkeiten werden im Vakuum bei 4O⁰C konzentriert, j Dann trocknet man 2 Stunden lang unter Hochvakuum, wobei man ,

20,4 g weiße Nadeln erhält. Deren Infrarotspektrum ist typisch ! für polysilyliertes Kanamycin A. Berechnungen zeigen, daß das i Produkt durchschnittlich 7,22 Trimethylsilylgruppen enthält. i

BeisDiel 15

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Per(trimethylsi IyI)-kanamycin A nach teilweiser Desilylierung mit 1,3-Butandi öl

A) Herstellung von Per(trimethylsi IyI)-kanamycin A

Man suspendiert 10,0 g (20,639 mMol) Kanamycin A in 100 ml Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril unter Rühren bei 23⁰C. Man bringt die Suspension unter Stickstoffspülung zum Rückflußkochen und gibt dann im Verlauf von 10 Minuten 23,322 g (144,5 mMol, 7 Mol pro Mol Kanamycin A) HMDS zu. Man hält noch 16 Stunden lang am Rückfluß und kühlt dann die Mischung auf Raumtemperatur ab und konzentriert dann im Vakuum. Anschließend trocknet man 2 Stunden unter Hoch- j

vakuum. Man erhält 24,3 g eines weißen, klebrigen Rückstands[ Die Ausbeute beträgt 92,1 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)_n.

B) Acylierung

24,3 g in Stufe A hergestelltes Per(trimethylsi IyI)-kanamycin A werden in 240 ml Molekularsieb-getrocknetem Aceton bei 23⁰C unter Rühren gelöst. Zu dieser Lösung gibt man 9,25 ml 1,3-Butandiol (103,2 mMol, 5 Mol pro Mol Per(tri-

8098^8/0895

M/19 11.1 - 75 -

methyl si IyI)-kanamycin A). Man rührt die Mischung 2 Stunden bei 23⁰C unter StickstoffspUlung und kühlt dann auf 0 bis 5⁰C ab. Im Verlauf von ungefähr 1 Minute gibt man 7,23 g SAE (20,64 mMol) in 70 ml vorgekühltem Aceton zu. Die Mischung wird 3 Stunden bei 0 bis 5⁰C gerührt und dann ungefähr 16 Stunden lang in einem bei 4⁰C gehaltenen Kälteraum stehengelassen. Man gibt 200 ml Wasser zu, stellt den pH auf 2,5 ein und rührt die klare, gelbe Lösung 30 Minuten bei 23⁰C. Das Aceton wird im Vakuum entfernt und die wässerige Lösung wird 2 Stunden lang bei 23⁰C bei einem H~-Druck von 3,87 kg/cm (55,0 psi) reduziert, wobei man 3,0 g 10 %-iges Pd-auf-Aktivkohle als Katalysator verwendet. Dann filtriert man die reduzierte Lösung durch Dicalite und chromatographiert wie in Beispiel 16 B beschrieben. Man erhält 47,50 % Amikacin, 5,87 % BB-K29, 7,32 % BB-K6, 24,26 % Kanamycin A und 7,41 % Polyacylverbindungen.

B ei s pi e 1 1j>

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin A, das in THF unter Verwendung von SAE mit Sulfaminsäurekatalysator hergestellt wurde

Zu einer unter Rückfluß gehaltenen Mischung von 5,0 g (10,32 mMol) Kanamycin A in 50 ml Molekularsieb-getrocknetem Tetrahydrofuran (THF) gibt man 100 mg SuIfaminsäure und 12,32 g (76,33 mMol) HMDS. Man hält die Mischung 18 Stunden lang am Rückfluß, wobei nach 6 Stunden vollständige Auflösung erfolgt. ; Man kühlt die Lösung auf 23⁰C, behandelt mit O₅I ml Wasser und j hält 30 Minuten bei 23⁰C. Eine Lösung von 3,61 g (10,3 mMol)

SAE in 36 ml THF wird im Verlauf von 30 Minuten zugesetzt. Nach j 3-stündigem Rühren wird die Mischung mit 100 ml Wasser verdünnt und der pH mit 10 ϊ-iger H₂SO₄ auf 2,2 eingestellt. Man

8098A5/0895

M/19 111 -76

rührt 30 Minuten lang bei 23⁰C und konzentriert dann im Vakuum, um das THF zu entfernen. Die erhaltene wässerige Lösung wird 2 Stunden lang bei 23⁰C bei einem Hg-Druck von 3,52 kg/cm (50 psi) reduziert, wobei man 10 %-iges Pd-auf-Aktivkohle als ' Katalysator verwendet. Die reduzierte Lösung wird durch Dicalitei filtriert, und die Feststoffe werden mit Wasser gewaschen. Ver- ! einigte Filtrate und Waschflüssigkeiten (150 ml) werden mikrobiologisch gegen E. coli untersucht. Man stellt fest, daß sie 1225 mcg/ml (31,5 % Ausbeute an aktivem Material) Amikacin enthält.

Beispiel YT_

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin A mit dem N-Hydroxysuccinimidester von Pica rbobenzyl oxy-AHBA

A) Herstellung des Dicarbobenzyi oxy-L-(-)-gr-amino-</-hydroxybuttersäure-N-hydroxysucciηimidesters

Man löst 8 g (20,65 mMol) Dicarbobenzyloxy-L-(-)-<*-amino-<tfhydroxybuttersäure und 2,37 g (20,65 mMol) N-Hydroxysuccinimid in 50 ml trockenem Aceton von 23 C auf. 4,25 g (20,65 mMol) Dicyclohexyl carbodiimid, gelöst in 20 ml trockenem Aceton, werden zugegeben und das Ganz.e wird 2 Stunden bei 23⁰C gerührt. Man filtriert den Dicyclohexylharnstoff ab, wäscht den Filterkuchen mit 10 ml trockenem Aceton und vereinigt Filtrate und Waschflüssigkeiten. ι

I B) Acylierung

Aus 10,0 g (20,639 mMol) Kanamycin A nach der allgemeinen Arbeitsweise des Beispiels 21 hergestelltes Poly(trimethylsilyl)-kanamycin A wird in 100 ml trockenem Aceton gelöst.

809845/0895

Man kühlt die Lösung auf O bis 5⁰C ab, gibt 3,7 ml entionisiertes Wasser zu und rührt die Lösung 30 Minuten unter mäßigem Vakuum bei 0 bis 5⁰C.

Zu dieser Lösung gibt man die Lösung des in Stufe A hergestellten di-Cbz-blockierten Acylierungsmittels und rührt { die Mischung dann 30 Minuten lang bei 0 bis 5⁰C. Die Mischung wird mit Wasser verdünnt, der pH wird auf 2,2 eingestellt ι und das Aceton wird im Vakuum entfernt. Man reduziert die ^! wässerige Lösung nach der allgemeinen Arbeitsweise des j Beispiels 22 und filtriert dann durch Dicalite. Durch Chromaj· tographie wird festgestellt, daß 40 bis 45 % Amikacin, \ etwa 10 % BB-K29, eine Spur BB-K6, ungefähr 30 % Kanamycin A und eine kleine Menge Polyacylverbindungen vorliegen.

Beispiel 1_8

Herstellung von Poly(trimethylsilyi)-kanamycin A unter Verwendung von HMDS mit Imidazo! als Katalysator

Man erhitzt 11 g (22,7 mMol) Kanamycin A und 100 mg Imidazol in 100 ml Molekularsieb-getrocknetem Acetonitril unter Stickstoffspülung zum Rückfluß. Im Verlauf von 30 Minuten gibt man 18,48 g HMDS (114,5 mMol, 5 Mol pro Mol Kanamycin A) zu und hält die Mischung 20 Stunden am Rückfluß. Nach ungefähr 2 1/2 Stunden erfolgt vollständige Auflösung. Man kühlt die Lösung auf 23⁰C und entfernt das Lösungsmittel im Vakuum, wobei 21,6 g Poly(trimethylsilyl)-kanamycin A als schaumiger Rückstand zurückbleiben. Die Ausbeute beträgt 93,1 %, berechnet als Kanamycin (S

809845/0895

M/19 111 -78 -

Beispiel 1_9

Herstellung von l-N-/'L-(-)-]*'-Amino-^-hydroxybutyryl7kanamycin B ^; (BB-K26) durch Acylierung von Poly(trimethy1silyl)-kanamycin B

mit SAE j

A) Herstellung von Poly(trimethylsilyl)-kanamycin B unter Verwendung von HMDS mit TMCS-Katalysator I

25 g (51,7 mMol ) Kanamycin B in 250 ml Mol ekul arsieb-ge- '■

trocknetem Acetonitril werden unter einem Stickstoffstrom \ zum Rückfluß erhitzt. Man gibt im Verlauf von 30 Minuten

62,3 g HMDS (385,81 mMol, 7,5 Mol pro Mol Kanamycin B), ge- |

folgt von 1 ml TMCS als Katalysator, zu. Die Mischung wird J

21 Stunden unter Rückfluß gehalten, wobei nach 1 Stunde I vollständige Auflösung erfolgt. Dann wird das Lösungsmittel

bei 6O⁰C im Vakuum entfernt. Den öligen Rückstand hält man j

3 Stunden bei 6O⁰C unter Hochvakuum. Man erhält 53,0 g i

Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin B. Die Ausbeute beträgt ; 85,2 %, berechnet als Kanamycin B (Silyl),q.

B) Acyl ierung j

53,0 g des in der obigen Stufe A hergestellten Poly(tri- ! methyl si IyI)-kanamycins B werden in 500 ml trockenem Aceton bei 0 bis 5⁰C aufgelöst. Man gibt 20,9 ml Methanol zu und rührt die Mischung 30 Minuten bei 0 bis 5⁰C im Vakuum. Eine Lösung von 18,1 g (51,67 mMol) SAE in 200 ml vorgekühltem, ' trockenem Aceton wird im Verlauf von weniger als 1 Minute zugesetzt, und die Mischung wird 30 Minuten bei 0 bis 5⁰C ■ gerührt. Die Mischung wird nach der allgemeinen Arbeitsweise des Beispiels 22 aufgearbeitet und dann auf eine Säule mit ι CG-50 (NH₄+) (8 χ 120 cm) aufgegeben. Man eluiert mit einem NH₄0H-Gradienten von 0,6 η auf 3 n. Erhalten werden 38 % BB-K26, 5 % des entsprechenden 6'-N-acylierten Kanamycins B

809845/0895

H/19 11, -V₉-

(BB-K22), 10 % des entsprechenden 3-N-acylierten Kanamycins E (BB-K46), 14,63 % Kanamycin B und eine kleine Menge polyacyliertes Kanamycin B.

Beispiel 20

Herstellung von Poly(trimethylsiIyI)-kanamycin A unter Verwendung von HMDS mit Kanamycin Α-Sulfat als Katalysator

19,5 g (40,246 tnMol ) Kanamycin A und 0,5 g (0,858 mMol ) Kanamycin Α-Sulfat /"insgesamt = 20,0 g, 41,0 mMol7 in 200 ml Molekül arsieb-getrocknetem Acetonitril werden zum Rückfluß gebracht. Man gibt langsam 60,3 ml HMDS (287,7 mMol, 7 Mol pro Mol Kanamycin A) zu und hält die Mischung 28 Stunden am Rückfluß. Dann wird am Rotationsverdampfer zur Trockne eingedampft und anschließend unter Dampfstrahl vakuum getrocknet. Man erhält 47,5 c Poly(trimethylsi IyI)-kanamycin A als blaßgelbes öl. Die Ausbeute beträgt 95,82 %, berechnet als Kanamycin A (SiIyI)₁₀-

Beispiel 21

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsi IyI)-kanamyciη A mit N-Trifluoracetyl-blockiertem AHBA-N-hydroxysuccinimidester

A) Herstellung von N-Trifluoracetyl-AHBA und Umwandlung in den N-Hydroxysuccinimidester

Zu einer Suspension von 5,0 g (42 mMol) AHBA in 100 ml THF gibt man 40 g (191 mMol) Trif1uoressigsäureanhydrid unter Rühren im Verlauf von 10 Minuten zu. Man rührt die Lösung 18 Stunden bei 23⁰C und konzentriert dann im Vakuum bei 50⁰C zur Trockne. Den Rückstand löst man in 100 ml wässern-

809845/0895

M/19 111 -80 -

ι ι gem Methanol (1:1) und rührt 1 Stunde. Dann konzentriert

man im Vakuum zur Trockne und löst in 50 ml H₀O wieder auf. I

C. i

Die wässerige Lösung wird mit 3 χ 50 ml-Portionen MIBK extraf hiert, und nach dem Trocknen über Na^SO* wird der Extrakt \ zu einem öl konzentriert. Spuren an Lösungsmittel werden ί durch Zusatz und Abdesti11ieren von 4 ml Wasser entfernt. ! Beim Stehenlassen geht das öl in einen wachsartigen, kristal linen Feststoff über. Man erhält 2,5 g Produkt, Ausbeute 28 %.

Man löst 2,4 g (11,3 mMol) des N-Trifluoracetyl-AHBA in 50 ml trockenem Aceton und gibt 1,30 g (11,31 mMol) N-Hydroxy succinimid zur Lösung. Eine Lösung von 2,33 g Dicyclohexylcarbodiimid in 20 ml trockenem Aceton wird langsam zugesetzt Man rührt die Reaktionsmischung 2 Stunden lang bei 23⁰C und entfernt dann den ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff durch Filtrieren und wäscht mit einer kleinen Menge Aceton. Vereinigte Filtrate und Waschflüssigkeiten (Lösung des N-Hydroxy succinimidestersder N-Trif1uoracetyl-AHBA) wird bei der nachfolgenden Stufe ohne Isolierung verwendet.

B) Acylierung

Zu einer Lösung von 11,31 mMol Poly(trimethylsilyl)-kanamycin A, das wie in Beispiel 26 beschrieben hergestellt wurde, in 54 ml Aceton gibt man 2,0 ml (113,4 mMol) Wasser und rührt die Mischung 30 Minuten im Vakuum bei 0 bis 5⁰C. Zu der Mischung gibt man den in der obigen Stufe A hergestellten N-Hydroxysuccinimidester der N-Trif1uoracetyl-AHBA (11,31 mMol) und hält die Mischung dann 1 Stunde bei 5⁰C. Der pH wird mit 20 %-iger H₂SO₄ auf ungefähr 2,0 eingestellt!, die Mischung wird 30 Minuten gerührt und dann wird der pH mit NH₄OH auf ungefähr 6,0 erhöht. Anschließend dampft man die Mischung am Rotationsverdampfer zur Trockne ein. Man

809845/0895

M/19 1U - 24 -

erhält 14,4 g eines klebrigen, weißlichen Feststoffs. Der Feststoff wird in 100 ml Wasser gelöst, der pH wird mit 10 η ΝΗ,ΟΗ von 5,5 auf 11,0 angehoben und die Lösung wird J in einem ölbad 1 Stunde bei 7O⁰C erhitzt. Dann senkt man den ^: pH (9,5) mit HCl auf 7,0 ab, führt mit der Lösung eine Klarfiltration durch, um eine kleine Menge unlösliche Materialien zu entfernen und wäscht das Filter mit Wasser» Vereinigte Filtrate und WaschfTüssigkeiten (188 ml) werden auf eine Säule mit CG-50 (NH₄+) (8 χ 90 cm) aufgegeben, mit 2 Liter Wasser gewaschen und mit einem NH^OH-Gradienten (0,6 η 1,0 η konzentriert) eluiert. Man erhält 28,9 % Amikacin, 5,0 % BB-K6, 5,7 % BB-K29, 43,8 % Kanamycin A, 3,25 % PoIyacylverbindungen und 14,3 % eines unbekannten Materials, das in der ersten Fraktion aus der Säule austritt.

Beispiel 22

Herstellung von Amikacin durch Acylierung von Poly(trimethylsilyl)-kanamycin A mit tert.-Butoxycarbonyl-blockiertem AHBA-N-hydroxysuccinimidester

A) Herstellung von tert.-BOC-AHBA und Umwandlung in den N-Hydroxysuccinimidester

Eine Lösung von 5,0 g (42 mMol) AHBA in 100 ml Wasser und 20 ml Aceton wird mit 10 η NaOH auf pH 10 eingestellt. Im Verlauf von 3 bis 4 Minuten gibt man 11,6 g (53 mMol) Oitert.-butyldicarbonat zu und rührt die Lösung 35 Minuten, während man den pH durch periodische Zugabe von 10 η NaOH bei pH 10 hält. Das Aceton wird im Vakuum entfernt, und die wässerige Phase wird mit 40 ml Äthylacetat gewaschen. Man senkt den pH der wässerigen Lösung mit 3 η HCl auf 2,0 ab und extrahiert dann mit 3 χ 30 ml MIBK. Die vereinigten

809845/0895

M/19 111 - 82 -

MIBK-Extrakte werden über Na₂SO₄ getrocknet und zu einem klaren, öligen Rückstand konzentriert. Man erhält 8,2 g Produkt, Ausbeute 89 % .

4,25 g (19,4 mMol) des tert.-BOC-AHBA werden in 50 ml Aceton gelöst, und man gibt 2,23 g (19,4 mMol) N-Hydroxysuccinimid zu. Eine Lösung von 4,00 g (19,4 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in 20 ml Aceton wird langsam zugesetzt, und die Mischung wird 2 Stunden bei 23⁰C gerührt. Man entfernt den ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff durch Filtrie-· ren und wäscht mit einer kleinen Menge Aceton. Vereinigte ι Filtrate und Waschflüssigkeiten (Lösung des N-Hydroxysuccin- i imidesters von tert.-BOC-AHBA) werden in der nachfolgenden j Stufe ohne Isolierung eingesetzt. j

B) Acylierung !

Zu einer Lösung von 41,28 mMol Poly(trimethylsiIyI)-kanamy- : ein A, wie in Beispiel 26 beschrieben hergestellt., in 94 ml j Aceton gibt man 3,5 ml (194 mMol) Wasser und rührt die Lösung 30 Minuten im Vakuum bei 0 bis 5⁰C. 19,4 mMol des in der obigen Stufe A hergestellten N-Hydroxysuccinimidesters von tert .-BOC-AHBA werden zugesetzt und die Mischung wird 1 Stunde bei 5⁰C stehengelassen. Dann gibt man 200 ml Wasser zu und senkt den pH (7,0) mit 20 %-iger H₂SO₄ auf 2,0 ab. Nach 30-minütigem Rühren wird der pH mit NH₄OH auf ungefähr 6,0 angehoben, und die Mischung wird im Vakuum zur Trockne eingedampft, wobei man 36,3 g eines goldfarbenen Öls erhält. Das öl wird in 200 ml Trif1uoressigsäure gelöst, 15 Minuten lang stehengelassen und dann am Rotationsverdampfer zur Trockne eingedampft. Man wäscht das öl mit Wasser und destilliert das Wasser ab. Man gibt konzentriertes NH₄OH auf pH 6,0 zu und destilliert dann ab. Der erhaltene Feststoff wird in Wasser gelöst, filtriert, und das Filter wird mit Wasser gewaschen. Man gibt vereinigte Filtrate und

8098Λ5/0895

M/19 111 - 83 -

Waschflüssigkeiten (259 ml) auf eine CG-50 (NH. )Säule , (8 χ 92 cm), wäscht mit 4 Liter Wasser und eluiert mit j einem NH.OH-Gradienten (0,6 η - 1,0 η konzentriert). Man j erhält 40,32 % Amikacin, 4,58 % BB-K6, 8,32 % BB-K29,
30,50 % Kanamycin A und 7,43 % Polyacy!verbindungen.

Beispiel 23

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise des Beispiels 10
mit der Ausnahme, daß man das dort verwendete Kanamycin A
durch eine äquimolare Menge an:

3'-Deoxykanamycin A,

6'-N-Methylkanamycin A, !

3'-Deoxy-6'-N-methylkanamycin A !

Kanamycin B '

6'-N-Methylkanamycin B, ■

Tobramycin (3'-Deoxykanamycin B), , !

6'-N-Methyltobramycin, j

Aminoglycosid NK-1001, |

3'-Deoxy-aminoglycosid NK-1001, j

6'-N -Methyl-aminoglycosid NK-1001,

3'-Deoxy-6'-N-methyl-aminoglycosid NK-1001,

Gentamicin A, 3'-Deoxygentamicin A, Gentamicin B, 3'-Deoxygentamicin B, 6'-N-Methylgentamicin B, 3'-Deoxy-6'-N-methylgentamicin B, Gentamicin B₁, 3'"Deoxygentamicin B , 6'-N-Methylgentamicin B₁, 3'-Deoxy-6'-N-methylgentamicin B , Gentamicin X„, Seldomycin Faktor 1 , bzw.

809845/0895

M/19 111 - 84 -

Seldomycin Faktor 2, ersetzt,
wodurch man

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxykanamycin A, 1-N- [L- (-) -γ-Amino-a-hydroxybutyryl] -6 '-N-methylkanamycin A, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-6'-N-methylkanamycin A,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-kanamycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl·]-tobramycin, ^!

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyltobramycin, ; 1-N- [L- (-) -γ-'-Amino-a-hydroxybutyryl·] -aminoglycosid NK-1 001 , 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-aminoglycosid-NK-1001,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-aminoglycosid-NK-1001, !

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-6'-N-methyl- ' aminoglycosid NK-1001,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin A, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentamicin A, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentamicin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgentamicin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-6'-N-methylgentamicin B , ·

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin B₁, ί

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentamicin B , \

j 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl·]-6'-N-methyl·gentamicin B₁, ι ι

! 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl·]-3'-deoxy-6'-N-methyl·- gentamicin B ,

' 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl·]-gentamicin X_, j 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl·]-sel·domycin Faktor 1, bzw.

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-selodmycin Faktor 2 erhält.

809845/0895

Die Umsetzung jedes der oben aufgeführten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien auf die gleiche Weise mit L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure-N-hydroxy-S-norbornen- · 2,3-dicarboximidester anstatt .mit dem L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid-ester ergibt die entsprechenden 1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl] -aminoglycoside= '.

Die Umsetzung jedes der oben aufgeführten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien auf die gleiche Weise mit L-(-)- 0-Benzyloxycarbony lamino-a-hydroxyvaleriansäure-N-hydroxy-5-norbornen- j 2,3-dicarboximidester anstatt mit dem L-(-)-γ-Benzyloxycarbony1-amino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-di-■ carboximidester ergibt die entsprechenden 1-N-[L-(-)-cf-Amino- ; α-hydroxyvaleryl]-aminoglycoside. ,

Beispiel 24 |

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise des Beispiels 10
mit der Ausnahme, daß man den dort verwendeten L-(-)-γ-Benzyl- ^! oxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3 dicarboximidester durch

L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyprapionsäure-N-hydroxy-! 5-norbornen-2,3-dicarboximidester und j

, i

L-(-)-o-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleriansäure-N- ;

hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester ersetzt, !

wodurch man

1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-kanamycin A und

1 -N- [L- (-) - ö-Amino-a-hydroxyvaleryl] -kanamycin A erhält.

809845/0895

M/19 111 - 86 -

Beispiel 25

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise des Beispiels mit der Ausnahme, daß man das dort verwendete 6'-N-Carbobenzyloxykanamycin A durch eine äquimolare Menge

6'-N-Carbobenzyloxy-3',4'-dideoxykanamycin A, 6'-N-Carbobenzyloxy-3^!,4'-dideoxy-6"-N-methylkanamycin A, ι 2',6'-Di-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxykanamycin B, 2',6'-Di- (N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxy-6'-N-methylkanamycin B, 2'/6'"Di-(N-carbobenzyloxy)-gentamicin C₁ , 2',6'-Di-(N-carbobenzyloxy)-gentamicin C, ,

ι a

2 \ 6'-Di- (N-carbobenzyloxy)-6^f-N-methylgentamicin C₁ , 2 ' , 6 '-Di-(N-carbobenzyloxy)-gentamicin C„, 2',6'-Di-(N-carbobenzyloxy)-6'-N-methylgentamicin C₂

bzw«

2',6'-Di-(N-carbobenzyloxy)-aminoglycosid XK-62-2,

ersetzt und erhält dabei

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxykanamycin A, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxy-6'-N-

methylkanamycin A,

1-N- [L-(-)-Y-Amino-a-hydroxybutyryl-3',4'-dideoxykanamycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxy-6'-N-

methylkanamycin B,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyry1]-gentamicin C₁, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin C₁ ,

ι a

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgentamicin C₁ , 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin C₂, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgentamicin C_

bzw.

1-N- [L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-aminoglycosid XK-62-2.

809845/0895

M/19 111 - 87 -

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten ! Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit L-(-)-ß-Benzyloxy-

carbonylamino-a-hydroxypropionsäure-N-hydroxy-S-norbornen- ; 2,3-dicarboximidester anstatt mit dem L-(-)-γ-Benzyloxycarbonyl-amino-a-hydroxybuttersaure-N-hydroxy-S-norbornen^/S-

dicarboximidester um, so erhält man die entsprechenden '

1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-aminoglycoside. '

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten · Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit L-(-)- F-Benzyloxy-

carbonylamino-α-hydroxyvaleriansäure-N-hydroxy-5-norbornen- i

2,3-dicarboximidester anstatt mit dem L-(-)-γ-Benzyloxy- i

carbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-S-norbornen- ;

2,3-dicarboximidester um, so erhält man die entsprechenden ;

1-N- [L- (-) - <T -Amino-a-hydroxyvaleryl]-aminoglycoside. ,

Beispiel 26

2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-sisomicin wird in trockenem Acetonitril aufgeschlämmt und unter Stickstoffatmosphäre 4 Stunden am Rückfluß erhitzt. Man gibt während 30 Minuten Hexamethyldxsxlazan zu [4 Mol pro Mol 2',6'-Di-(N-trifluoracetyl) sisomicin] und erhitzt die sich ergebene Lösung 24 Stunden zum Rückfluß. Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum ergibt festes polysilyliertes 2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-sisomicin.

polysilylierte
Das/2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-sisomicin wird gemäß der allgemeinen Arbeitsweise von Beispiel 21B mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-γ-Trifluoracetylamino-a-hydroxybuttersäure acyliert und wie in Beispiel 21B beschrieben aufbereitet, wobei man dann 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-sisomicin erhält.

809845/0.8 95

M/19 111 - 88 -

Beispiel 27

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise des Beispiels 26

mit der Ausnahme, daß das darin verwendete 2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-sisomicin durch eine äquimolare Menge an

2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-5-episisomicin,
2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-6'-N-methylsisomicin,
2',6'-Di-(N-trifluroacetyl)-6'-N-methyl-5-episisomicin,
2 ',6 ' -Di- (N-trif luoracetyl) -verdamicin,
2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-5-epiverdamicin,

2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-6'-N-methylverdamicin, !

2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-6'-N-methyl-5-ep!verdamicin ' bzw.

2¹,6'-Di-(N-trifluoracetyl)-aminoglycosid 66-40D ,

ersetzt wird und erhält dabei ^;

1-N- [L- (-) -γ-Αΐηϊηο-^α -hydroxybutyryl] -5-episisomicin,
1 -N- [N- (-) -γ-Amino-a-hydroxybutyryl] -6 ' -N-methylsisomicin,
1-N- [L- (-) -γ-Amino-a-hydroxybutyryl] - 6 '-N-methyl-5-episisomicin, 1-N- [L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-verdamicin, |

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-5-epiverdamicin,
1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylverdamicin,

1-N- [L- (-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl] -6'-N-methyl-5-epiverdamiciii

ι bzw. i

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-aminoglycosid 66-40D. ',

Setzt man auf gleiche Weise jedes der oben aufgeführten
2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-aminoglycosid-Ausgangsmaterialien
mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-ß-Trifluoracetylamino-a-hydroxypropionsäure anstatt mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-γ-Trifluoracetylamino-a-hydroxybutter- i säure um, so erhält man die entsprechenden 1-N-[L-(-)-ß-Aminoa-hydroxypropiony1]-aminoglycoside.

809845/0895

M/19 111

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten 2',6'-Di-(N-trifluoracetyl)-aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-O Trifluoracetylamino-a-hydroxyvaleriansäure anstatt mit dem N-Hydroxysuccinimidester von L-(-)-γ-Trifluoracetylamino-a-hydroxybuttersäure um, so erhält man die entsprechenden 1-N-[L-(-)~ <f -Amino-a-hydroxyvaleryl]-aminoglycoside.

Beispiel

28

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise gemäß Beispiel 26 mit der Ausnahme, daß man den N-Hydroxysuccinimidester von L- (-)-γ-Trifluoracetylamino-a-hydroxybuttersäure durch eine äquimolare Menge an N-Hydroxysuccinimdester von

L- (-)-ß-Trifluoracetylamino-a-hydroxyprQpionsäure bzw. L- (-)- ö-Trifluoracetylamino-a-hydroxyvaleriansäure

ersetzt, so erhält man dabei

1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-sisomicin bzw. 1-N-[L-(-)- 0 -Amino-a-hydroxyvaleryl]-sisomicin.

Beispiel

29

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise gemäß Beispiel 1 mit der Ausnahme, daß man das darin verwendete 6'-N-Carbobenzyloxykanamycin A durch eine äquimolare Menge

3-N-Carbobenzyloxyribostamycin,
S-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyribostamycin, 3-N-Carbobenzyloxy-e'-N-methylribostamycin, S-N-Carbobenzyioxy-ö'-N-methyl-3'-deoxyribostamycin, 3-N-Carbobenzyloxyneomycin B, ...

809845/0895

M/19 111 - 90 -

3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyneomycin B, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methylneomycin B, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyneomycin B, 3-N-Carbobenzyloxyneomycin C, 3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyneomycin C, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methylneomycin C, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyneomycin C, 3-N-Carbobenzyloxyxylostasin, 3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyxylostasin, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methylxylostasin, 3-N-Carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyxylostasin, 3-N-Carbobenzyloxyparomomycin I, 3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyparomomycin I, 2',3 -Di-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyparomomycin I, 3-N-Carbobenzyloxyparomomycin II, 3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxyparomomycin II, 2',3 -Di-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyparomomycin II, S-N-Carbobenzyloxy-aminoglycosid 2230-C, 3-N-Carbobenzyloxy-3'-deoxy-aminoglycosid 223 0-C, 3-N-Carbobenzyloxylividomycin Α, bzw. 3-N-Carbobenzyloxylividomycin B

ersetzt, und erhält so

1-N-[L- (-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-ribostamycin, 1-N- [L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyribostamycin, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methy!ribostamycin, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-3'-deoxyribostamycin ,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-neomycin B, 1-N- [L- (-) -γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyneomycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylneomycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-3'-deoxyneomycin B,

809845/0895

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-neomycin C, !

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyneomycin C, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylneomycin C, ; 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl3~6'-N-methyl-3'-deoxyneomycin C,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-xylostasin, :

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyxylostasin, ί 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylxylostasin, j 1 -N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-3'-deoxyxylostasin, ; 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin I, j 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyparonomycin I, ; 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyparomomycin I, ί 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-paromomycin II, > j 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxyparomomycin II,

I

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyparomomycin II, ' 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-aminoglycosid 2230-C, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-aminoglycosid \ 2230-C,

1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-lividomycin A j bzw.
1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-lividomycin B.

j Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten carbobenzyloxy-geschützten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit N-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxypropionsäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester anstatt mit dem L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester um, so erhält man die entsprechenden 1-N-[L-(-)-ß-Amino-a-hydroxypropionyl]-aminoglycoside.

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten carbobenzyloxy-geschützen Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit L-(-)-ii-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyvaleriansäure-

809845/089S

N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester anstatt mit dem L-(-)-y-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester um, so erhält man die entsprechenden 1-N-[L-(-)- 6 -Amino-a-hydroxyvaleryl]-aminoglycoside.

Beispiel 30

Man wiederholt die allgemeine Arbeitsweise gemäß Beispiel 1 J mit der Ausnahme, daß man das darin verwendete 6'-N-Carbo- ; benzyloxykanamycin A durch eine äquimolare Menge i
\ 2',3 ,6'-Tri-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyribostamycin, 2',3,6'-Tri-(N-carbobenzyloxy)-3^r,4'-dideoxyneomycin B, 2',3,6'-Tri-(N-carbobenzyloxy)-3 ^r,4'-dideoxyneomycin C bzw.

2',3,6'-Tri-(N-carbobenzyloxyI-3' _r4'-dideoxyxylostasin,

j ersetzt und erhält dabei

. 1-N- [L- (-) -γ-Amino-a-hydroxybutyryl] -3 ' ,4-dideoxyribostam.ycin, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyneomycin B, 1-N-[L-(-)-γ-Amino-a-hydroxybutyryll-3',4'-dideoxyneomycin C, bzw.

1-N-[L-(->-γ-Amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyxylostasin.

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten 2',3,6'-Tri-(N-carbobenzyloxy)-geschützten Aminoglycosid-ί Ausgangsmaterialien mit L-(-)-ß-Benzyloxycarbonylamino-α-S hydroxy-propionsäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid- ' ester anstelle von L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-a-hydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester um, so erhält man die entsprechenden 1-N-[L-(-)-ß-Amino-ahydroxypropionyl]-aminoglycoside.

809845/0895

Setzt man auf die gleiche Weise jedes der oben aufgeführten 2',3,6'-Tri-(N-carbobenzyloxy)-geschützten Aminoglycosid-Ausgangsmaterialien mit L-(-)- if-Benzyloxycarbonylamino-cxhydroxyvaleriansäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester um anstatt mit dem L-(-)-γ-Benzyloxycarbonylamino-ahydroxybuttersäure-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester, so erhält man die entsprechenden 1 -N- [L- (-) - cf-Amino-cxhydroxyvaleryl]-aminoglycoside.

809845/0895

Claims (1)

1. M/19 111

   Patentansprüche

   Verfahren zur Herstellung von 1-N-[u-Amino-a-hydroxyalkanoyl]-aminoglycosid-Antibiotika der allgemeinen Formel I:

   oder pharmazeutisch verträglicher Säureadditionssalze davon, worin η eine ganze Zahl von 0 bis 4 bedeutet;

   2
   R für einen Hexopyranosylring der allgemeinen Formeln

   II, III oder IV steht,

   II

   809845/089

   oder

   I 7

   CHNHR

   IV

   M/19 111

   • a-

   worxn R⁶ für H oder CH steht,

   R Wasserstoff oder CH bedeutet,

   R für OH oder NH steht, R⁹ für H oder OH steht, und

   R Wasserstoff oder OH bedeutet;

   R Wasserstoff, oder einen Hexopyranosylring der allgemeinen Formeln V, VI, VII oder VIII bedeutet.

   HO ^H2

   CH₂OH

   HO

   OH

   VI

   Ä>

   I CH-

   •0

   HO

   VII

   oder

   VIII

   worin R für H oder CH steht;

   R Wasserstoff oder OH bedeutet; und

   R Wasserstoff, OH oder einen Pentofuranosylring der Formeln IX oder X bedeutet,

   809845/0895

   M/19 111

   HOCH„ η HOCH.

   oder

   OH R¹²Q QH

   I^ ' X

   1 2
   worin R für H oder einen Hexopyranosylring der Formeln XI oder XII steht:

   CH NH,
   13 ^Vs / ' CH-NH-

   XII

   worin R ~ Wasserstoff oder a-D-Mannopyranosyl bedeutet;

   wobei Voraussetzung ist, daß wenn R nicht Wasserstoff

   4 5 bedeutet, einer der Reste R oder R für Wasserstoff steht und der andere OH bedeutet, und wobei weiter

   3
   Voraussetzung ist, daß wenn R für Wasserstoff steht,

   5 4

   R H bedeutet und R einen Pentofuranosylring der Formeln IX oder X bedeutet;

   dadurch gekennzeichnet, daß man ein polysilyliertes Aminoglycosid, das aus einem Aminoglycosid der Formel XIV

   Β098ΛΚ/089Β

   XIV

   2 3 4 5

   hergestellt ist, worin R , R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und das gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoschutzgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe aufweist, in einem im wesentlichen wasserfreien organischen Lösungsmittel mit einem acylierenden Derivat einer Säure der allgemeinen Formel XIII:

   B-HN-CH-(CH₀) - CH-COOH

   OH XIII

   worin B eine Aminoblockierungsgruppe darstellt und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzt, umsetzt; und anschließend alle Blockierungsgruppen entfernt.

   Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das acylierende Derivat der Säure der Formel XIII einen aktiven Ester oder ein gemischtes Säureanhydrid darstellt. !

   3. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch

   gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppe am ι acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII ausgewählt ist unter denen der Formeln:

   809845/0895

   M/19 111

   S·

   20

   21

   κ --■

   Il CE₂OC-

   CH-, 0

   I ³ Il

   CH-.-C-0-C · CH-,

   , Y₂XCC- ,

   X₃C-CH₂-O-C

   uncl

   20 21
   worin R und R , die gleich oder verschieden sein

   können, jeweils für H, F, Cl, Br, NO₃, OH, (niedrig)Alkyl oder (niedrig)Alkoxy stehen, X für Cl, Br, F oder J steht und Y die Bedeutungen H, Cl, Br, F oder J besitzt.

   809845/0895

   4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII den aktiven Ester mit N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid oder N-Hydroxyphthalimid einsetzt.

   Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII das Gemisch des Säureanhydrids mit Pivalinsäure, Benzoesäure, Isobuty!kohlensäure oder Benzylkohlensäure einsetzt.

   6. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß man als Aminoblockierungsgruppe am acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII Carbobenzyloxy, Trifluoracetyl oder t-Butoxycarbonyl einsetzt.

   7ο Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß . das polysilylierte Aminoglycosid 1 bis 3 Aminoblockierungs-i gruppen, ausgewählt unter Carbobenzyloxy und Trifluor- ^: acetyl an Aminogruppen enthält, die von der C-1-Aminogruppe. verschieden sind. ;

   8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen Trimethylsily!gruppen sind.

   9. Verfahren zur Herstellung von 1-N- [L- (-) - (J-Amino-ahydroxyalkanoyl]-aminoglycosiden der allgemeinen Formel:

   809845/0895

   M/19 111

   R²²IiN

   oder pharmazeutisch verträglichen Salzen davon, worin η für eine ganze Zahl von 0 bis 4 steht, R für H oder

   CH₃ steht,

   R⁸ für OH oder NH₃ steht, R⁹ Wasserstoff oder OH bedeutet, R¹° Wasserstoff oder OH bedeutet, R²² Wasserstoff oder CH bedeutet, R für OH oder CH steht,

   24 25

   R Wasserstoff oder OH bedeutet, R Wasserstoff oder

   CH₃OH bedeutet und R

   für OH, NH₀ oder NHCH, steht,

   wobei Voraussetzung ist, daß wenn R Wasserstoff be-

   25 2?

   deutet, R für CH₀OH steht, und wenn R für CH, steht,

   25
   R Wasserstoff bedeutet; und wobei weiterhin Voraussetzung

   23 24

   ist, daß wenn R für OH steht, R Wasserstoff bedeutet

   23 24

   und wenn R für CH, steht, R die Bedeutung OH besitzt;

   dadurch gekennzeichnet, daß man ein polysilyliertes Aminoglycosid, das aus einem Aminoglycosid der allgemeinen Formel hergestellt ist:

   809845/0895

   M/19 111

   R⁸, R⁹,

   R¹⁰,

   ,22

   ,23

   ,24

   R²⁵ und R²⁶ die

   worin R , R , R , R , R , R , R' oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und das gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoschutzgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe aufweist, in einem im wesentlichen wasserfreien, organischen Lösungsmittel mit einem acylierenden Derivat einer Säure der allgemeinen Formel XIII:

   L-(-) B-HN-CH₀-(CH₀) -CH-COOH 2. zn,

   XIII

   worin B eine Aminoblockierungsgruppe darstellt und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzt, umsetzt, und anschließend alle Blockierungsgruppen entfernt.

   609845/0895

   M/19 111

   10. Verfahren gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet,

   daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel

   XIII einen aktiven Ester oder ein Gemisch des Säureanhydrids einsetzt.

   11. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 9 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppe des acylierenden Derivats der Säure der Formel XIII ausgewählt ist unter den Verbindungen der Formeln

   •20

   CH₂OC- ,

   CH-, O

   I ³ Il

   CH-.-C-O-C-3 I

   21

   0 W Y₂XCC-

   X₃C-CH₂-O-C-

   und

   809845/0895

   ^M/19

   20 21
   worin R und R , die gleich oder verschieden sein können, jeweils für H, F, Cl, Br, NO„, OH, (niedrig)-Alkyl oder (niedrig)Alkoxy steht, X für Cl, Br, F oder J und Y für H, Cl, Br, F oder J stehen.

   12. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII den aktiven Ester mit N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid oder N-Hydroxyphthalimid einsetzt.

   13. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII das Gemisch des Säureanhydrids mit Pivalinsäure, Benzoesäure, Isobuty!kohlensäure oder Benzylkohlensäure einsetzt.

   14. Verfahren gemäß Anspruch 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, daß als Aminoblockxerungsgruppe am acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII Carbobenzyloxy, Trifluoracety1 oder tert.-Butoxycarbonyl eingesetzt wird.

   ^: 15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet,

   ; daß das polysilylierte Aminoglycosid 1 bis 3 Amino-

   j blockierungsgruppen, ausgewählt unter Carbobenzyloxy-

   ! gruppen und Trifluoracetylgruppen an Aminogruppen

   j aufweist, welche von der C-1-Aminogruppe verschieden

   ; sind.

   809845/0895

   M/19 111

   16ο Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß als Silylgruppen Trimethylsilylgrupperi verwendet werden.

   17. Verfahren zur Herstellung von 1-N-[L-(-)-6J~Amino-ahydroxyalkanoyl]-aminoglycosiden der allgemeinen Formel

   H₃CHN

   oder von pharmazeutisch verträglichen Salzen davon,

   worin η für eine ganze Zahl von O bis 4 steht, R

   28

   Wasserstoff oder

   Wasserstoff oder CH, bedeutet und R CH₃ bedeutet,

   dadurch gekennzeichnet, daß man ein polysilyliertes Aminiglycosid, hergestellt aus einem Aminoglycosid der allgemeinen Formel:

   80984S/089S

   M/19 111

   R²⁷-CHNH-R²⁸

   H₃CHN

   NH.

   27 28
   .worin R und R die oben angegebenen Bedeutungen

   besitzen, und welches 2 oder 3 von Silyl verschiedene i

   Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als ;

   der C-1-Aminogruppe aufweist; I in einem im wesentlichen wasserfreien organischen Lösungs-;

   mittel mit einem acylierenden Derivat einer Säure der ,

   allgemeinen Formel XIII I

   L-(-) B-HN-CH₀-(CH₀) -CH-COOH

   2 2 η ,

   OH

   18.

   worin B für eine aminoblockierende Gruppe steht und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzt, umsetzt und anschließend alle Blockierungsgruppen entfernt.

   Verfahren gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII ein aktiver Ester oder ein Gemisch des Säureanhydrids eingesetzt wird.

   809845/0895

   M/19 111

   - yi-

   19. Verfahren gemäß Anspruch 17 oder 18, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppe des acylierenden Derivats der Säure der Formel XIII folgenden Formeln

   entspricht:
   20

   21

   O Il CH₂OG-

   CH-. 0

   ^{1 3} Il

   CH₃-C-O-C- , Y₂XCC- , CH-,

   X₃C-CH₂-O-C-

   und

   20 21

   worin R und R , die gleich oder verschieden sein können, jeweils für H, F_r Cl, Br, NO», OH, (niedrig)Alkyl oder (niedrig)Alkoxy stehen, X für Cl, Br, F oder J und Y für H, Cl, Br, F oder J stehen.

   809845/0895

   20. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 17 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß als acylierendesDerivat der Säure der Formel XIII deren aktiver Ester mit N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid oder N-Hydroxyphthalimid eingesetzt wird.

   ! 21. Verfahren nach einem der Ansprüche 17 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII das Gemisch des Säureanhydrids mit

   ι Pivalinsäure, Benzoesäure, Isobutylkohlensäure oder

   ! Benzylkohlensäure einsetzt.

   22. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 oder 21, dadurch gekennzeichnet, daß man als Äminoblockierungsgruppe am acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII Carbobenzyloxy, Trifluoracetyl oder tert.-Butoxycarbonyl einsetzt=

   23. Verfahren nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, daß das polysilylierte Aminoglycosid 2 oder 3 Arninoblockierungsgruppen, ausgewählt unter Carbobenzyloxy- und Trifluoracetylgruppen, am Aminogruppen, welche von der C-1-Aminogruppe verschieden sind, enthält.

   24. Verfahren nach einem der Ansprüche 17 bis 23, dadurch gekennzeichnet, daß als Silylgruppen Trimethylsilylgruppen verwendet werden.

   809845/0895

   M/19 111

   AS

   25. Verfahren zur Herstellung von 1-N-[L-(-)- (J-Amino-ahydroxyalkanoyl]-aminoglycosiden der allgemeinen Formel

   NH.

   oder pharmazeutisch verträglicher Salze davon, worin η eine ganze Zahl von 0 bis 4 bedeutet, R für H oder OH steht, R ° Wasserstoff oder OH bedeutet,

   für H oder OH

   für OH, NH„ oder NHCH steht, R

   30 31

   steht und R Wasserstoff, OH oder OR bedeutet,

   worin R

   31

   für einen Hexopyranosylrxng der Formel

   „33

   34

   CH-NH-

   oder

   32

   steht, worin R Wasserstoff oder a-D-Mannopyranosyl

   33 34 bedeutet und einer der Reste R und R Wasserstoff und der andere CH₇NH₃ bedeutet; wobei Voraussetzung

   80984B/089 5

   M/19 111

   ist, daß wenn R

   29

   - yf- Ab-

   R³⁰ OH oder OR

   31

   für H steht, IT" OH oder OR"¹ bedeutet,

   29 30

   und wenn R für OH steht, R Wasserstoff bedeutet; dadurch gekennzeichnet, daß man ein polysilyliertes Aminoglycosid, hergestellt aus einem Aminoglycosid der allgemeinen Formel

   NH_

   30 · OH

   Q -in OiT ₀ η on

   worin R , R ,R ,R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und das gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1-Aminogruppe aufweist;

   in einem im wesentlichen wasserfreien organischen Lösungsmittel mit einem acylierenden Derivat einer Säure der Formel

   L-(-) B-HN-CH₀-(CH,) -CH-COOH

   OH

   worin B für eine Aminoblockierungsgruppe steht und η die oben angegebenen Bedeutungen besitzt, umsetzt und anschließend alle Blockierungsgruppen entfernt.

   809845/0895

   M/19 111

   26» Verfahren nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, i daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII: einen aktiven Ester oder ein Gemisch des Säureanhydrids | einsetzt.

   Verfahren nach einem der Ansprüche 25 und 26, dadurch
   gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppe am
   acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII ausgewählt ist unter den nachfolgenden Formeln:

   .21"

   S-

   X₃C-CH₂-O-C-

   CH, 0

   I ³ Il

   CH,-C-O-C-CH,

   0 ir

   809846/0895

   20 21
   worin R und R , die gleich oder verschieden sein können, jeweils für H, F, Cl, Br, N0_, OH, (niedrig)Alkyl oder (niedrig)Alkoxy stehen, X für Cl, Br, F oder J steht und Y Wasserstoff, Cl, Br, F oder J bedeutet.

   28. Verfahren nach Anspruch 27, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII den aktiven Ester mit N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid oder N-Hydroxyphthalimid einsetzt.

   29ο Verfahren gemäß Anspruch 27, dadurch gekennzeichnet, daß man als acylierendes Derivat der Säure der Formel XIII das Gemisch des Säureanhydrids mit Pivalinsäure, Benzoesäure, Isobutylkohlensäure oder Benzy!kohlensäure einsetzt.

   30. Verfahren nach einem der Ansprüche 25 bis 29, dadurch ^!

   ': gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppe am

   ! acylierenden Derivat der Säure der Formel XIII Carbobenzyl-

   ! oxy, Trifluoracetyl oder terto-Butoxycarbonyl ist.

   31. Verfahren nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, daß das eingesetztepolysilylierte Aminoglycosid 1 bis 3 Aminoblockierungsgruppen, ausgewählt unter Carbobenzyloxy- und Trifluoracetylgruppen, an von der C-1-Aminogruppe\ verschiedenen Aminogruppen aufweist.

   809845/0395

   M/19 111

   -γ-

   32. Verfahren gemäß den Ansprüchen 25 bis 31, dadurch gekennzeichnet, daß man als Silylgruppen Trimethylsilylgruppen einsetzt.

   33. Polysilylierte Aminoglycoside, hergestellt aus einem Aminoglycosid der Formel

   R²O

   NH.

   R³O

   NH.

   XIV

   worin R für einen Hexopyranosylring der Formel

   I -. CHNHR

   oder

   III

   IV

   6 7 '

   steht, worin R Wasserstoff oder CH-, R Wasserstoff oder j

   CH₃, R⁸ OH oder NH₃, R⁹ Wasserstoff oder OH und R¹⁰ Wasserstoff oder OH bedeuten;

   R für einen Hexopyranosylring der Formeln

   80984B/0895

   M/19 111

   HO

   CH₂OH

   HO

   . SO

   OH

   HN ι CH

   VI

   HO

   HN
   J
   CH

   HO

   VII

   .11

   oder

   VIII

   steht, worin R Wasserstoff oder CH.. bedeutet;

   R für Wasserstoff oder OH steht; und

   4
   R für Wasserstoff, OH oder einen Pentofuranosy!ring

   der Formeln IX oder X steht:

   HOCH

   2.0

   oder

   R¹²O

   OH

   ,12

   worin R für Wasserstoff oder einen Hexopyranosylring der Formeln XI oder XII steht

   HO

   oder

   R¹³O

   XI

   XII

   809845/0895

   M/19 in

   worin R Wasserstoff oder a-D-Mannopyranosyl bedeutet;

   wobei Voraussetzung ist, daß wenn R nicht Wasserstoff

   4 5 bedeutet, einer der Reste R und R für Wasserstoff steht und der andere OH bedeutet; und wobei weiterhin Voraussetzung ist, daß wenn R für Wasserstoff steht,

   5 4

   R Wasserstoff bedeutet und R für einen Pentofuranosylring der Formel IX oder X steht;

   wobei das polysilylierte Aminoglycosid gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-T-Aminogruppe aufweist.

   34. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 33, dadurch

   gekennzeichnet, daß sie eine durchschnittliche Anzahl ι von 3 bis 8 Silylgruppen pro Molekül aufweisen. j

   35c Polysilylierte Aminoglycoside gemäß den Ansprüchen 33 oder 34, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen Trimethylsily!gruppen sind.

   36. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß einem der Ansprüche 33i bis 35, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungs-j gruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracetylgruppe j sind.

   37. Polysilylierte Aminoglycoside, hergestellt aus einem Aminoglycosid der Formel

   809845/0895

   M/19 111

   R²²IIN

   s· Q Q

   worin R für H oder CH-, R für OH oder NH , R für H oder OH, R¹⁰ für H oder OH, R²² für H oder CH₃,

   R für OH oder CH.,, R für H oder OH, R²⁵ für H oder

   2fi
   CH OH und R für OH, NH oder NHCH stehen;

   22

   wobei Voraussetzung ist, daß wenn R Wasserstoff bedeutet, R ⁵ für CH₉OH steht, und wenn R für CH-. steht,

   25

   R Wasserstoff bedeutet; und wobei weiter Voraussetzung

   23 24

   ist, daß wenn R für OH steht, R Wasserstoff bedeutet

   23 24

   und wenn R für CH₃ steht, R OH bedeutet; wobei diese polysilylierten Aminoglycoside gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an anderen Aminogruppen als der C-1 -Aminog^ppe aufweisen.

   38. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 37, dadurch gekennzeichnet, daß sie durchschnittlich 3 bis 8 Silylgruppen pro Molekül enthalten.

   80984S/089S

   M/19 111

   • 33-

   39. Polysilylierte Aminogylcoside gemäß Anspruch 37 oder 38, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen Trimethylsily!gruppen sind.

   40. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß einem der Ansprüche ! 37 bis 39, dadurch gekennzeichnet, daß die Amino- ' blockierungsgruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracetyigruppe sind. ;

   41. Polysilylierte Aminoglycoside, hergestellt aus einem Aminoglycosid der Formel

   R²⁷-CHNH -

   NH.

   NH

   H₃CHN

   0"7 ? R

   worin R für Wasserstoff oder CH_ steht und R Wasserstoff oder CH₃ bedeutet, wobei die polysilylierten Aminoglycoside gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an von der C-1-Aminogruppe verschiedenen Aminogruppen aufweisen.

   Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 41, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine durchschnittliche Anzahl von 3 bis 8 Silylgruppen pro Molekül aufweisen.

   809845/0 895

   M/19 111

   43. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 41 oder 42, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen Trimethylsilylgruppen sind.

   44. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß einem der Ansprüche 41 bis 43, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracetylgruppe sind.

   45. Polysilylierte Aminoglycoside, hergestellt aus einem Aminoglycosid der Formel

   30 OH

   UH,

   worin
   .9

   10

   R für Wasserstoff oder OH steht, R für Wasserstoff

   oder OH steht, R ,29

   26

   für OH, NH,

   R"" für H oder OH steht und R

   Ϊ0

   oder NHCH steht,

   oder OR steht, worin R~ ring der Formeln

   für Wasserstoff, OH für einen Hexopyranosyl-

   809845/0895

   M/19 111

   •95-

   oder

   R³²O

   HO-

   33 ,34

   32
   steht, worin R für Wasserstoff oder a-D-Mannopyranosyl

   33 34 steht und einer der Reste R und R für Wasserstoff steht und der andere CH„NH„ bedeutet;

   wobei Voraussetzung ist, daß wenn R Wasserstoff be-

   If)

   deutet, R

   OH bedeutet, R

   für OH oder OR ³⁰

   steht, und daß wenn R für Wasserstoff steht;

   OQ

   wobei diese polysilylierten Aminoglycoside gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an von C-I-Aminogruppen verschiedenen Aminogruppen aufweisen.

   Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 45, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine durchschnittliche Anzahl von 3 bis 8 Silylgruppen pro Molekül aufweisen.

   47. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß Anspruch 45 oder 46, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen Trimethylsily!gruppen.sind.

   48. Polysilylierte Aminoglycoside gemäß einem der Ansprüche 45 bis 47, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockieruncjsgruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracetylgruppe sind.

   809845/0895

   . 96-

   49. Polysilyliertes Gentamicin B , das gegebenenfalls 1 bis 3 von Silyl verschiedene Aminoblockierungsgruppen an von der C-1-Aminogruppe verschiedenen Aminogruppen aufweist.

   50. Polysilyliertes Gentamicin B. gemäß Anspruch 49, das eine durchschnittliche Anzahl von 3 bis 7 Silylgruppen pro Molekül aufweist.

   51. Polysilyliertes Gentamicin B gemäß Anspruch 49 oder 50, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen die Trimethylsilylgruppen sind.

   52. Polysilyliertes Gentamicin B. gemäß einem der Ansprüche 49 bis 51, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracety!gruppe sind.

   53. Polysilyliertes 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B, dadurch gekennzeichnet, daß es gegebenenfalls 1 bis 3 Aminoblockierungsgruppen an von der C-1-Aminogruppe verschiedenen Aminogruppen aufweist.

   54. Polysilyliertes 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B gemäß Anspruch 53, dadurch gekennzeichnet, daß die durchschnittliche Anzahl der Silylgruppen pro Molekül 3 bis 5 beträgt.

   809845/0895

   . SV

   55. Polysilyliertes 6'-N-Methyi-3',4'-dideoxykanamycin B gemäß Anspruch 53 oder 54, dadurch gekennzeichnet, daß die Silylgruppen TrimethyIsily!gruppen sind.

   56. Polysilyliertes 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B gemäß einem der Ansprüche 53 bis 55, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminoblockierungsgruppen die Carbobenzyloxy- oder Trifluoracetylgruppen sind.

   809845/0895