DK172543B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af 1-N-(omega-amino-alfa-hydroxyalkanoyl)aminoglucosider samt polysilyleret aminoglycosid so - Google Patents

Description

i DK PR 172543 B1

Den foreliggende opfindelse angår en sårlig fremgangsmåde til fremstilling af l-N-[w-am1no-e-hydroxyalkanoyl]am1noglycosider med formlen

'TtW

R RJ0 I

HO-CH

io «h>„ CH, i * NH2 2 15 hvori n er et helt tal på fra 0 til 4; R betegner en substitueret hexo-pyranosylrlng so« defineret i det efterfølgende; R3 betegner hydrogen eller en substitueret hexopyranosylring so« defineret i det efterfølgen-

A

de; R betegner hydrogen, hydroxy eller en pentofuranosylrlng som defineret i det efterfølgende; og R3 betegner hydrogen eller hydroxy; under 20 den forudsetning.at når R3 er forskellig fra hydrogen, betegner den ene 4 5 af grupperne R og R hydrogen og den anden hydroxy; og under den forud-setnlng, at når R3 betegner hydrogen, betegner R3 hydrogen og R* en substitueret pentofuranosylrlng.

Fremgangsmåden Indeberer, at man omsstter et polysilyleret amlno-25 glycosid fremstillet ud fra et aminoglycosid med formlen (XIV): nh, » R RO 35 eventuelt Indeholdende fra 1 til 3 ami no-bl okerende grupper, som er forskellige fra silyl, på andre anlnogrupper end C-l amlnogruppen, 1 et organisk opløsningsmiddel, der eventuelt indeholder op til ca. 40% vand, med et acylerende derivat af en syre med formlen: BNSDOCID; <DK 172543B » 2 DK PR 172543 B1 B-HN-CH2-(CH2)n-CH-COOH (XIII)

OH

5 hvori B betegner en amino-blokerende gruppe, og n har den ovenfor beskrevne betydning. Alle blokerende grupper fjernes dernæst pi konventionel nåde til frembringelse af den ønskede forbindelse med formel (I)· 10 Aminoglycosiderne er en velkendt kategori af antibiotika og er blevet beskrevet i litteraturen i stor udstrækning. En fortræffelig oversigtsartikel er artiklen "Structures and Syntheses of Aminoglycoside Antibiotics" af Suflrio Umezawa 1 "Advances 1n Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, JO, 111-182, Academic Press, N.Y. (1974). Denne over-15 sigtsartikel (og de deri citerede referencer) diskuterer ogsi mange kendte l-N-(acy1)am1noglycosid-antibiot1ka såso* l-N-[L-(-)-7-am1no-0!-3',4'-dideoxykanamyc1n B, tobramycin, paromomycin I, Hbostamydn, 3',4'-d1deoxyr1bostamycin og lividomycln A.

USA-patent nr. 4.029.882 omhandler 1-N-acyl-derivater af genta-20 miclner A, B, Bj, Cj, Cja> C2, C2a og X2, slsomldn, verdamlcln, mutamlcln 1, 2, 4, 5 og 6 og antibiotika G-418, 66-40B, 66-400, JI-20A, JI-20B og G-52, hvori acylgrupperne er afledt af en ligekedet, forgrenet eller cyklisk alkylgruppe Indeholdende fra 1 til 8 carbonatomer, som kan Indeholde en amino- eller hydroxysubstituent eller såvel en amlno- som 25 en hydroxysubstituent. forbindelserne fremstilles ved acylerlng af et partielt neutraliseret syreadditionssalt af antiblotiket med et acyle-rende derivat af den «nskede sidekadesyre.

USA-patent nr. 4.055.715 omhandler l-N-[L-(-)-7-am1no-e-hydroxy-butyryl]-derivatet af amlnoglycosldet XK-62-2 og en fremgangsmåde til 30 dets fremstilling ved acylerlng af XK-62-2, hvis 2'-am1no- eller 2'- og 6'-a*1nogrupper er beskyttet med en kendt amlnobeskyttende gruppe (såsom carbobenzyloxygruppen), med et acylerende derivat af L-(-)-t-am1no-a-hydroxysmørsyre (såsom dens N-hydroxysucc1n1m1dester).

Britisk patent nr. 1.500.218 omhandler D-, L- og D,L-formerne af 1-35 N-[d-amino-o-hydroxyprop1ony1]XK-62-2 og deres fremstilling ved 1 det vcsentllge samme fremgangsmåde som beskrevet i USA-patent skrift nr.

4.055.715.

Britisk patent nr. 1.499.041 omhandler l-N-[L-(-)-7-amino-e-hydroxybutyryl)-6'-N-alky1kanamyc1n A, hvori 6 '-N-al kyl gruppen 1nde- BNSDOCPD: <DK «7’Μ3β > 3 DK PR 172543 B1 holder fra 1 til 4 carbonatomer. Forbindelserne fremstilles blandt andet ved at omsatte et 6' -N-al kyl kanamydn A (enten ubeskyttet eller med 3- eller 3"-aminogruppen beskyttet med en konventionel amino-blokerende gruppe) med et acylerende derivat af L-(-)-t-am1no-e-5 hydroxysmørsyre.

Britisk patent nr. 1.475.481 omhandler 1-N-acylderivater af 6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamyc1n B, hvori acylgrupperne kan være i L- eller D,L-formen og have formlen: 10 0

II

H2N-(CH2) -CH-C- i

OH

15 hvori n er 1, 2 eller 3. Forbindelserne fremstilles ved acylerlng af aminoglycosidet (hvis 6'-am1no- og eventuelt 2'-am1nogruppe er beskyttet med en konventionel am1no*b1okerende gruppe) med et acylerlngsmiddel indeholdende ovennævnte acylgruppe, f.eks. N*hydroxysucc1n1m1desteren der-20 af.

Sydafrikansk patent nr. 77/1944 omhandler blandt andet en fremgangsmide til fremstilling af l-N-(1avere)alkanoy1derivater af kanamydn A og B, hvori alkanoylgrupperne kan være substitueret med hydroxy og/el-ler amlno. Fremgangsmåden omfatter acylerlng af kanamydn A eller B, 25 hvori 3-aminogruppen på kanamydn A eller B og 2'-aminogruppen på kanamydn B (og eventuelt 6'-aminogruppen på de enkelte antibiotika) er beskyttet med en konventionel amlno-blokerende gruppe. Acylerlng opnås på konventionel måde, såsom ved anvendelse af N-hydroxysucc1n1m1desteren af den acylerende syre.

30 USA-patent nr. 3.974.137 omhandler og Indeholder krav på en fremgangsmåde til fremstilling af l-{L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl)-kanamydn A, hvilken fremgangsmåde omfatter, at 6'-carbobenzyloxy-kanamycin A omsattes med mindst tre mol benzaldehyd, et substitueret benzaldehyd eller plvaldehyd til frembringelse af 6'-N-carbobenzyl-35 oxykanamydn A indeholdende Schlff-basegrupper på 1-, 3- og 3"- stillingerne, acylerlng af dette tetra-beskyttede kanamydn A derivat med N-hydroxysucc1nim1desteren af L-(-)-7*benzy1oxycarbonylamino-or-hydroxysmørsyre, og efterfølgende fjernelse af de beskyttende grupper.

I The Journal of Antibiotics, 790-3 (1973) refererer BNSDOCID: <DK 172543B > 4 DK PR 172543 B1 T.P. Culbertson et al. fremstillingen af 5"-am1no-5"-deoxybutirosiner A og B ud fra but i rosiner A og B. Oe farste trin ved syntesen omfattede: 1) partiel N-trifluoracetylering af butlrosinbase ved reflux 5 1 en blanding af methanol og ethyl trifluoracetat, 2) inddampnlng til torhed, oplosning af remanensen 1 pyridin, behandling med hexamethyldlsilazan og trlmethylchlorsilan efterfulgt af afkøling til mindre end 10*C og behandling med 10 tri fluoreddi kesyreanhydrid, 3) inddampnlng til torhed og hydrolysering af remanensen 1 en 2:1 blanding af ethanol og 2 n eddikesyre under reflux til frembringelse af tetra[N-trifluoracetyl)]butirosin.

15

Synteseskema-slutprodukterne, 5"-am1no-5"-deoxybutirosiner A og B omsattes også 1 overensstemmelse med ovenstående tre trin til frembringelse af penta[N-(trifluoracety1)]-5"-am1no-5"-deoxybut1ros1ner A og B. Skont denne publikation omtaler acylerlngen af et trlmethyl s Hyleret 20 (og partielt acyleret) aminoglycosid-antibiotikum, er resultatet i hvert tllfclde en fuldstmndlg acylerlng af allø prlmsre aminogrupper 1 molekylet (fire 1 but1ros1n-udgang$mater1a1et og fem 1 produktet). Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse eliminerer 1 alt væsentligt po-lyacylering og tilvejebringer en høj selektivitetsgrad ned hensyn til 25 acylerlng 1 den ønskede 1-N-stilUng.

J.J. Wright et al. beskriver 1 "The Journal of Antibiotics", 22· 714-719 (1976) en generel fremgangsmåde til selektiv 1-N-acylerlng af gentamicin-slsomlcln kategorien af amlnoglycoslder. De rapporterer, at selektivitet med hensyn til acyleringsstillingen er pH-afhænglg, og at 30 C-l amlnogruppen er den mest reaktive over for acylerlng, når aminogrup-peme 1 molekylet er næsten fuldstændig proton!seret. Disse betingelser opnås ved tilsætning af et ækvivalent af en tertiær aminbase til en opløsning af det fuldt neutraliserede syreadditionssalt. Skønt disse forskere opnåede 1-N-selektivitet ved acylerlngen af gentamicin C^a, 35 slsomlcln og verdamidn, rapporterede de, at der ved acylerlngen af stærkt hydroxylerede amlnoglycosider såsom gentamicin B og kanamycln A blev iagttaget ringe selektivitet.

Britisk patent nr. 1.460.039 omhandler en fremgangsmåde til fremstilling af forskellige deoxyaminoglycosid-antibiotika ved halogenering NSDOCID *DK (7?543B > 5 DK PR 172543 B1 af et phosphoryleret amlnoglycosld (et glycosid, hvori hydroxygruppen, som skal fjernes, er blevet omdannet til en phosphonoxygruppe), til frembringelse af det tilsvarende amlnoglycosld, hvori hydroxygruppen er blevet omdannet til halogen, og reduktion af halogenforbindel sen til 5 frembringelse af det tilsvarende deoxyamlnoglycosid. Før halogenering af det phosphorylerede amlnoglycosid beskyttes alle dets funktionelle grupper fortrinsvis ved hjælp af silyl- eller acylgrupper.

Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en særlig fremgangsmåde til fremstilling af l'N*[w-am1no-a-hydroxya1kanoyl]am1nog1ycosider. An-10 vendeisen af et polysilyleret amlnoglycosld som udgangsmateriale giver høj opløselighed i det organiske opløsningsmiddel og muliggør således omsætning under høje koncentrationer. Skønt omsætningen sædvanligvis gennemføres 1 opløsninger Indeholdende ca. 10-20% polysilyleret amino-glycosid-udgangsmaterlale, er fortræffelige resultater blevet opnået ved 15 koncentrationer på ca. 50% vægt/vol. (f.eks. 50 g pr. 100 ml opløsning).

Som ved de kendte fremgangsmåder giver nærværende fremgangsmåde en blanding af acylerede produkter, og det ønskede produkt adskilles fra de andre produkter ved kromatografi. Substitutionsstil lingen er imidlertid meget mere selektiv ved udnyttelse af den foreliggende opfindelse, hvor-20 ved der fås mindre mængder af uønskede produkter, hvilket både forøger udbyttet af ønsket produkt og simplificerer den kromatografiske rensning. Ved fremstilling af l-(l-(-)-7-amino-ft-hydroxybutyryl]kanamyc1n A, amikacin, ved forskellige kendte fremgangsmåder produceres der således også typisk det 3 "-N-acylerede produkt (ΒΒ-Κ1Ί), det 3-N-acylerede pro-25 dukt (BB-K29), det 6'-N-acylerede produkt (BB-K6) og polyacyleret materiale samt uomsat kanamycln. Ved fremstilling af amikacin i kommerciel målestok ved acylering af 6'-N-carbobenzyloxykanamycin A 1 et vandigt medium efterfulgt af fjernelse af den beskyttende gruppe blev det fundet, at ca. 10% af det ønskede amikadn (2,5 kg i en 25 kg 30 charge) sædvanligvis mistedes på grund af tilstedeværelsen af BB-K11 som coprodukt. 3"-N-acyleret materiale, som fremstilledes, forårsagede et tab på ca. en lige så stor mængde af det ønskede 1-N-acylerede produkt på grund af den store vanskelighed ved at adskille sidstnævnte fra førstnævnte. Substitutionsselektiviteten ved den foreliggende 35 fremgangsmåde illustreres ved den ekstremt lave mængde uønsket 3"-N-acyleret produkt, som fremstilles ved fremstilling af B8-K8 ved den foreliggende fremgangsmåde. Typisk vil der ikke påvises noget BB-K11 i reakt i onsblandingen.

Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en fremgangsmåde til BNSDOCiD: <DK 1725438» 6 OK PR 172543 B1 fremstilling af l-N-[«-am1no-a-hydroxyalkanoyl]am1noglycos1der med formlen (I): •‘ΤΓΊγ\λ· R R O C=0

10 I

HO-CH

CH, \ 2 NH2 15 2 hvori n er et helt tal pi fra 0 til 4; R betegner en hexopyranosylrlng 20 med formlen: f6 R6 r6 R10^ CHNHR7 I CHNHR7 (II) (III) (IV) 30 hvori R® betegner H eller CH,, R7 betegner H eller CH,, R8 betegner OH eller NH2, betegner H eller OH, og R1U betegner H eller OH; RJ 35 betegner H eller en hexopyranosylrlng med formlen: M'innniri' <rw 7 DK PR 172543 B1

5 Ho^yCH2°H PH

h2n^-7\\ r11

I ch3 ko I

10 (v> (vi)

HO\\-n H.CO^K

HN”^-Λ Λ' —O

15 i«3 ^ eller -fsA

(VII) (VIII) 1 20 25 hvori R*1 betegner H eller CH3; R^ betegner H eller OH, og R4 betegner H, OH eller en pentofuranosylrlng med formlen: 30 uocfy°\i VH / \_/

“ N OH B120 OH

(H) <X’ BNSDOCID <-DK 1725438 > 8 DK PR 172543 B1 hvori R1Z betegner H eller en hexopyranosylrlng aed formlen: ch2nh2 "“»γνΙ-O 13 Λν f 5 «Λ-eller R ° ΥΝΙ—O.

(XI) (XII) ' 10 hvori R13 betegner H eller a-D-mannopyranosyl; j under den forudsatnlng, at når R er forskellig fra H, betegner den 4 5 ene af grupperne R og R H og den anden OH; og under den forudsatnlng, 3 5 4 15 at når R betegner H, betegner R H og R en pentofuranosylrlng med forael (IX) eller (X) eller farmaceutisk acceptable syreaddltlonssalte deraf; som er ejendommelig ved, at man oasatter et polysllyleret aminogly-cosid, der er fremstillet ud fra et amlnoglycosid med formlen (XIV): 20 R ° —\ (XIV) R5 R30X\/NH2 25

2 3 4 S

hvori R , R , R og R har den ovenfor definerede betydning, og soa 30 eventuelt Indeholder fra 1 til 3 amlno-blokerende grupper, soa er forskellige fra silyl på andre amlnogrupper end C-l amlnogruppen, 1 et organisk opløsningsmiddel, der eventuelt Indeholder op til 40% vand, med et acylerende derivat af en syre med formlen (XIII): 35 B-HN-CH2-(CH2)n-CH-COOH (XIII)

OH

hvori B betegner en amlno-blokerende gruppe, og n har den ovenfor definerede betydning; og at man derefter fjerner alle blokerende grupper.

BM^nnrp'v ,-ηκ 9 DK PR 172543 B1

Aminogrupperne på den acylerende syre med formel (XII) ovenfor må beskyttes med en amlno-blokerende gruppe under acyleringsreaktionen.

Dette foretages sædvanligvis ved anvendelse af en konventionel amino-blokerende gruppe. Disse samme konventionelle amino-blokerende grupper 5 kan anvendes til beskyttelse af andre aminogrupper end C-l aminogruppen i aminoglycosidet. Sådanne konventionelle blokerende grupper til beskyttelse af primære aminogrupper er velkendte for fagmanden. Egnede blokerende grupper omfatter alkoxycarbonylgrupper, såsom t-butoxycarbonyl og t-amyloxycarbonyl; aralkoxycarbonylgrupper såsom benzyloxycarbonyl; 10 cycloalkyloxycarbonylgrupper såsom cyclohexyloxycarbonyl; halogenalkoxy-carbonylgrupper såsom trlchlorethoxycarbonyl; acylgrupper såsom phthaloyl og o-nitrophenoxyacetyl; halogenacetylgrupper såsom trifluor-acetyl; og andre velkendte blokerende grupper såsom o-nitrophenylthio-gruppen, tritylgruppen, etc.

15 Den acylerende syre med formel (XIII) indeholder et asymmetrisk carbonatom og kan eksistere i (+) formen eller (·) formen eller som en blanding deraf (d,1 formen), og således frembringe den tilsvarende forbindelse med formel (I), hvori l-N-[u-amino-a-hydroxyalkanoyl]gruppen er i sin (+) [eller (R)] form eller sin (-) (eller (S)] form eller en blan-20 ding deraf.

Acylering af det polysilylerede aminoglycosld (med eller uden fra 1 til 3 amino-blokerende grupper, som er forskellige fra silyl på andre aminogrupper end C-l aminogruppen) kan, i al almindelighed, gennemføres i et organisk opløsningsmiddel, hvori udgangsmaterialet har tilstrække-25 Hg opløselighed. Disse udgangsmaterialer er stærkt opløselige 1 de fleste almindelige organiske opløsningsmidler. Egnede opløsningsmidler omfatter f.eks. acetone, diethyl keton, methyl-n-propyl keton, methyl i so-butylketon, methylethyl keton, heptan, glyme, diglyme, dioxan, toluen, tetrahydrofuran, cyclohexanon, pyridin, methylenchlorid, chloroform og 30 carbontetrachlorid. Valget af opløsningsmiddel afhænger af de særlige udgangsmaterialer, der anvendes.

Ketoner er almindeligvis de foretrukne opløsningsmidler. Det mest fordelagtige opløsningsmiddel for den særlige kombination af reaktanter, der anvendes, kan let fastslås ved rutineforsøg.

35 Egnede sllyleringsmidler til anvendelse ved fremstilling af de po lysilylerede amlnoglycosid-udgangsmaterialer, der anvendes heri, omfatter sllyleringsmidler med formlen: BNSDOCID: <DK 172543B > 10 DK PR 172543 B1 r1\ ^^r14 f ^ --nh / _15

c 14 ' R

5 Ri m ΛΑ I

^Si /* og R16-Si-Z

R14 ^n---Si [n « \ \L4 10 R ra k / (XV) (XVI) hvori R*8, R*8 og R*7 er udvalgt blandt hydrogen, halogen, (lavere) al-15 Kyl, (lavere)alkoxy, halogen(lavere)al kyl og phenyl, Idet mindst én af grupperne R15, R16 og R17 er forskellig fra halogen eller hydrogen; R14 betegner (lavere)al kyl, m er et helt tal på 1 til 2, og Z er udvalgt blandt halogen og R18 20 /

-H

\„ R19

lfi 1Q

25 hvori R betegner hydrogen eller (lavere)alkyl, og R betegner hydrogen, (lavere)al kyl eller R15

30 16 I

R --si- i17 35 hvori R15, R18 og R17 har den ovenfor definerede betydning.

a.NSOOCIO <OK 177M3FI > DK PR 172543 B1 n

Specifikke s11ylforbindel ser ned formlerne (XV) og (XVI) er: trimethylchlorsilan, hexamethyldisilazan, triethylchlorsilan, methyl-trichlorsllan, dimethyldichlorsilan, tr1ethyl broms11 an, tri-n-propyl-chlorsilan, methyldiethylchlorsilan, dimethyl ethylchlors11 an, dimethyl -5 t-butylchlorsilan, phenyldimethylbroms11an, benzylmethylethylchlorsilan, phenylethylmethylchlorsilan, triphenylchlorsilan, tri-phenylfluorsilan, tri-o-tolylchlorsilan, tri-p-dimethylaminophenylchlorsilan, N-ethyl-triethylsllylamln, hexaethyldisilazan, triphenylsilylamin, tri-n-propyl-silylamin, tetraethyldimethyldisllazan, hexaphenyldisllazan, hexa-p-10 tolyldisilazan, etc. Egnede er også hexaalkylcyclotrisilazaner og octa-alkylcyclotetrasilazaner. Andre passende silylerlngsmldler er silyl-amider (såsom trlalkylsilylacetamider og bis-trialkylsilylacetamlder), silylurinstoffer (såsom trimethylsilylurinstof) og silylureider. Også trinethyl silylimidazol kan anvendes.

15 En foretrukket silylgruppe er trlmethylsilylgruppen, og foretrukne silyleringsmldler til indførelse af trimethylsilylgruppen er hexamethyl-disilazan, bis(trimethy1si1y1)acetamid, trimethylsilylacetanld og trimethyl chlors 11 an. Hexamethylendisilazan er det mest foretrukne.

Polysilylering af aminoglycosider ændrer den normale aktivltets-20 orden af de deri Indeholdte amlnogrupper. Således er 6'-amlnogruppen den mest aktive på kanamycinerne. Hvis ubeskyttet kanamycin A eller B acyle-res, er hovedprodukterne 6'-N-acylkanamyc1nerne. Det er af denne årsag, at kendte fremgangsmåder til fremstilling af l-N-acylkanamyc1ner krævede beskyttelse af 6'-N-am1nogruppen (f.eks. med carbobenzyloxy) for at opnå 25 1-N-acylproduktet med godt udbytte. Når derimod de polysilylerede kanamyci ner acyleres, er hovedprodukterne 1-N-acyl kanamycinerne. Det menes, at dette skyldes sterlske virkninger af tilstedende (eller nærliggende) sllylerede hydroxygrupper (såvel som tilstødende glycosid-bindinger), hvilket hindrer acylerlng ved de sædvanligvis mere aktive amlnogrupper; 30 men dette er kun en teoretisk forklaring og udgør ikke nogen del af opfindelsen.

Kanamycin B har formlen: 35 BNSDOCID: <DK 172543S > »-i 12 DK PR 172543 B1 -¾ ApfY· h2N TV / 10 / HO —’ °\ / H oN'V' / HO 1 / 15 ° Når kanamycln B med alle hydroxygrupper sllyleret betragtes 1 lyset af ovenstående arbejdsteorl, ses det, at 3"-aminogruppen hindres ste-risk af de tilstedende 2"- og 4"-silylerede hydroxygrupper. Det menes, at det er af denne grund, at der scdvanligvis Ikke påvises noget 3"-20 acyleret produkt, når polysilyleret kanamycln B (eller de strukturelt lignende polysllylerede kanamycln A eller C) acyleres, selvom besvtrllge 3"-N-acylerede produkter fås ved kendte fremgangsmåder. På lignende måde hindres 6'-aminogruppen af den nerliggende 4'- og den nerliggende 3'-silylerede hydroxygruppe. 2'-aminogruppen hindres af den tilstødende 3'-25 silylerede hydroxygruppe og den tilstødende glycosidbinding.

Andre aminoglycoslder, som er strukturelt beslzgtede med kanamy-cinerne, og som, når de polysHyleres, primert giver 1-N-acylproduktet, omfatter f.eks. 3'-deoxykanamyc1n A, 3'-deoxykanamyc1n B (tobramycin), 6'-N-al kylkanamycln A forbindelserne, 6'-N-al kylkanamycln B forbindel-30 serne, 3'-deoxy-6'-N-al kylkanamycln A forbindelserne, 3'-deoxy-6'-N-al kyl kanamycln B forbindelserne, gentamtdnerne A, B, Bj og X2, seldomycln-faktor 1 og 3 og aminoglycoslderne NK-1001 og NK-1012-1.

Hvert af disse, og andre strukturelt lignende amlnoglycosider, giver primert det 1-N-substituerede produkt, når de acyleres i form af deres 35 polysllylerede derivat. Der dannes imidlertid 6'-N- og 3-N-substituerede produkter 1 små mengder, og den ene eller begge disse amlnogrupper kan om ønsket beskyttes, f.eks. med en carbobenzyloxygruppe.

En anden gruppe af aminoglycoslder, som, skønt de i øvrigt strukturelt ligner de ovenfor beskrevne kanamycintyper, indeholder hverken . .nSDOCIO <rDK 17?$43B > 13 DK PR 172543 B1 3'- eller 4'-hydroxygrupper (dvs. er 3',4'-dideoxyforbinde1ser). Når de polysllyleres, hindrer disse ikke sterlsk 6'-aminogruppen (eller 2'-amlnogruppen, hvis en sådan er til stede), og 6'-N-substituerede (eller 2'-6'-di-N-substituerede) forbindelser er hovedprodukterne ved acyle-5 ring. 1 disse amlnoglycosider er det nødvendigt at beskytte 6'-amino-gruppen (og 2'-aminogruppen, hvis en sådan er til stede) med en amino-blokerende gruppe, som er forskellig fra silyl (f.eks. med carbobenzyloxy) og acylere det polysllylerede 6'-N-blokerede (eller 2',6'-di-N-blokerede) aminoglycosld. Amlnoglycosider, som falder inden 10 for denne gruppe, omfatter f.eks. 3',4'dideoxykanamycln A, 3',4'-dideoxykanamycin B, 6'-N-a1kyl-3',4'-dideoxykanamycin A forbindelserne, 6'-N-alkyl-3',4'-dideoxykanamydn B forbindelserne, gentamldnerne Cj,

Cja> og Cga, aminoglycosidet XK-62-2, aminoglycosidet 66-400, verdamicin og s1som1cin.

IS En anden kategori af aminoglycosider er amlnoglycosiderne, hvori glycosidbindingen befinder sig 1 deoxystreptamlnringens 4- og 5-stilling frem for i 4- og 6-stillingen. Disse kan illustreres ved ribostamycin, som har formlen: 20 j. CIUNH-.

HO-X_- °\ ^ *7\\ H2N i * 1 NH, * r * ho , s·· / " kH'

HO OH

I aminoglycosider af ribostamycin-typen hindrer polysilylerfng den 35 ønskede l-N-am1nogruppe mere end den uønskede 3-N-am1nogmppe (idet de andre amlnogrupper er hindret som beskrevet ovenfor for kanamycin-typer-ne). Polysllylerede antibiotika af ribostamycin-typen vil således pr1-mert danne det 3-N-substituerede produkt ved acylering, og det er derfor nødvendigt at beskytte 3-aminogruppen med en amlnoblokerende gruppe så- BNSDOCID: <DK 172S43B» 14 DK PR 172543 B1 som carbobenzyloxy for at opnå det 1-N-substituerede produkt ved acyle-ring af det polysllylerede udgangsmateriale. Andre aminoglycosider, som falder Inden for denne kategori, omfatter f.eks. neomycinerne B og C, paromomycinerne I og II, lividomydnerne A og B, aminoglycosid 2230-C og 5 xylostasin samt deres 3'-deoxyderfvater. Også 6'-N-alkyl- og 3'-deoxy-6'-N-alkyl-varianterne af et hvilket som helst af ovennzvnte ribostamycin-type antibiotika, som indeholder en 6'-aminogruppe, herer til denne kategori. Nogle af amlnoglycoslderne af denne kategori indeholder en 6'-hydroxygruppe fremfor en 6'-aminogruppe.

10 En anden gruppe af aminoglycosider er aminoglycosiderne af den ovenfor beskrevne ribostamycin-type, men som er 3',4'-dideoxy-forbindelser. Som ved de ovenfor beskrevne aminoglycosider af 3',4'-dideoxykanamycin-type vil 2'- og 6'-am1nogrupperne (i de aminoglycosider af denne kategori, som Indeholder en 6'-am1nogruppe) ikke vare hindrede 15 ved polysilylerlng. Ved forbindelser såsom 3',4'-dideoxyr1bostaipycin, 3',4'-dideoxyneomyc1nerne B og C og 3',4'-dideoxyxylostas1n samt deres 6'-N-alkyl-analoge er det følgelig nødvendigt at beskytte 2'-, 3- og 6'-aminogrupperne med en aminoblokerende gruppe såsom carbobenzyloxy,for at acylerlng af det polysllylerede udgangsmateriale primert skal frembringe 20 I-N-acylproduktet. Ved de aminoglycosider af denne kategori, som indeholder en 6'-hydroxygruppe frem for en 6'-aminogruppe (f.eks. 3',4'-dideoxyparomotnyclneme I og II og 4'-deoxy1iv1domycinerne A eller B) er det kun nødvendigt at beskytte 2'- og 3-aminogrupperne.

Når der som udgangsmateriale anvendes et polysllyleret amlno-25 glycosid indeholdende fra 1 til 3 amlno-blokerende grupper, som er forskellige fra sllyl på andre amlnogrupper end C-l aminogruppen, kan dette udgangsmateriale fremstilles enten ved polysilylering af det ønskede N-blokerede aminoglycosid eller ved at indføre den ønskede N-blokerende gruppe 1 det polysllylerede aminoglycosid (om nødvendigt efter partiel 30 desilylering ved hydrolyse eller solvolyse).

Fremgangsmåder til Indførelse af silylgrupper i organiske forbindelser, inklusive visse aminoglycosider, er kendte inden for området.

De polysllylerede kanamydner (med eller uden blokerende grupper, som er forskellige fra silyl på andre amlnogrupper end C-l aminogruppen) kan 35 fremstilles ved 1 og for sig kendte fremgangsmåder eller som beskrevet i denne beskrivelse.

Betegnelsen "polysllyleret aminoglycosid" omfatter, som den anvendes heri, ikke et persilyleret aminoglycosid. Således omfatter f.eks. betegnelsen "polysllyleret kanamycln A" kanamycin A indeholdende fra 2 OCID: <DK 17?543B > 15 DK PR 172543 B1 til 10 silylgrupper i molekylet [der er ialt 11 positioner (4 amlnogrup-per og 7 hydroxygrupper), som kan silyleres].

Det precise antal af silylgrupper, som er til stede i de polysily-lerede aminoglycosid-udgangsmaterialer (med eller uden fra 1 til 3 5 amino-blokerende grupper, som er forskellige fra silyl på andre amlno- grupper end C-l aminogruppen) (eller deres position) kendes ikke. Det har vist sig, at såvel unders i lyler ing som overs1 ly lering formindsker udbyttet af det ønskede produkt og foreger udbyttet af andre produkter.

Hvis det drejer sig om stærk under· eller overs i lyl er 1ng, kan en ringe 10 mængde eller Intet af det ønskede produkt blive dannet. Oen silylerings-grad, som vil give det største udbytte af det ønskede produkt, vil afhænge af de serllge reaktanter, der anvendes ved acyleringstrinnet. Den mest fordelagtige silyleringsgrad under anvendelse af en given kombination af reaktanter kan let bestemmes ved rutineforsøg.

15 Det menes, at det foretrukne gennemsnitlige antal silylgrupper 1 det polys1lylerede aminoglycosid-udgangsmateriale sædvanligvis vil ligge mellem en nedre grense på 4 og en øvre grænse, som er lig med én mere end det totale antal hydroxygrupper 1 amlnoglycosidmolekylet, og at disse øvre og nedre grænser senkes med én for hver ami no-blokerende gruppe, 20 som er til stede 1 aminoglycosidmolekylet. Hen denne forklaring er kun teori og betragtes ikke som en del af opfindelsen.

Polysilylerede aminoglycosIder indeholdende det ønskede antal silylgrupper kan fremstilles enten ved at anvende en silyleringsmiddel-mengde, som blot er tilstrækkelig til at tilføje det ønskede antal sl-25 lylgrupper, eller ved at anvende overskydende silyleringsmlddel til per-silylering af amlnoglycosidet og derefter desilylere partielt ved hydrolyse eller solvolyse.

Således har det f.eks. vist sig, at der ved fremstilling af 1-N-[L-(-)-y-am1no-o-hydroxybutyryl)kanamycin A ved acylering af polysilyleret 30 kanamycin A med N-hydroxysucc1n1m1desteren af L-(-)-y-benzyloxycarbonyl-amino-a-hydroxysmørsyre 1 acetone-opløsning fås gode udbytter af det ønskede produkt, når der anvendes polysilyleret kanamycin A, som er blevet fremstillet ved at omsætte fra ca. 4 til ca. 5,5 mol hexamethyldisilazan pr. mol kanamycin A. Større eller mindre mængder 35 hexamethyldisilazan kan anvendes, men udbyttet af det ønskede produkt ved det efterfølgende acylerlngstrln sænkes betydeligt. Ved den ovenfor anførte specifikke fremgangsmåde foretrækkes det at anvende fra ca. 4,5 til ca. 5,0 mol hexamethyldisilazan pr. mol kanamycin med henblik på opnåelse af maksimalt udbytte af produkt ved acyleringstrinnet.

BNSDOCID: <DK 172543B > 16 DK PR 172543 B1

Det vil kunne forstis, at hvert mol hexamethyldisilazan er 1 stand til at indføre to ækvivalenter af trimethylsilylgruppen 1 kanamydn A eller B. Kanamydn A eller B har hver ialt elleve positioner (NH^- og OH-grupper), som kan silyleres, mens kanamydn A og B indeholdende en 5 blokerende gruppe, som er forskellig fra silyl på en anden aminogruppe end C-l aminogruppen, hver har Ialt t1 sådanne positioner. Således kunne 5,5 nol hexamethyldisilazan pr. mol kanamydn A eller B teoretisk fuldstændigt silylere alle OH- og NH^-grupper på kanamycinet, mens 5,0 mol hexamethyldisilazan fuldstændigt kunne silylere et mol kanamydn A eller 10 B indeholdende en blokerende gruppe, som er forskellig fra silyl, på en anden aminogruppe end C-l aminogruppen. Oet menes imidlertid, at en så vidtgående silylering ikke finder sted med disse molære forhold inden for rimelige reaktionstidsrum, skønt højere silyleringsgrader opnås Inden for en given reaktionstid, når der tilsættes en sllyleringskatalysa-15 tor.

Silyleringskatalysatorer accelererer i høj grad silylerlngshastig-heden. Egnede silyleringskatalysatorer er velkendte Inden for området, og de omfatter blandt andet amlnsulfater (som kan være amlnoglycosldsul-fatet), sulfamlnsyre, Imidazol og tetramethylchlorsllan. Silyleringska-20 talysatorer fremmer sædvanligvis en højere silylerlngsgrad, end hvad der kræves til fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Oversilylerede aainoglyco-sider kan Imidlertid anvendes som udgangsmateriale, hvis de først behandles med et desllyleringsmiddel til reduktion af silylerIngsgraden, før acylerlngsreaktIonen gennemføres.

25 Således opnås der f.eks. gode udbytter af ønsket produkt, når man acylerer polysilyleret kanamydn A fremstillet under anvendelse af et 5,5:1 molært forhold af hexamethyldisilazan til kanamydn A. Når imidlertid kanamycln A silyleret med et 7:1 molært forhold af hexamethyldisilazan (eller med et 5,5:1 molært forhold under tilstedeværelse af en 30 silyleringskatalysator acyleredes 1 acetone med N-hydroxysucc1n1mid-esteren af L-(-)-y-benzyloxycarbonylamino-e-hydroxyl smørsyre, opnåedes mindre end et 1% udbytte af det ønskede produkt. Når imidlertid samme "oversi lylerede" kanamydn A acyleredes med samme acylerlngsmiddel i acetoneopløsning, hvortil vand [21 mol vand pr. mol kanamydn; 2,5% vand 35 (vægt/vol.)] var blevet sat som desilylerlngsmlddel 1 time før acylerin-gen, opnåedes et udbytte på omkring 40% af det ønskede produkt. Samme resultater opnås, hvis vandet erstattes med methanol eller en anden aktiv hydrogenforbindelse, som er 1 stand til at udvirke desilylerlng, f.eks. ethanol, propanol, butandiol, methyl, mercaptan, ethylmercaptan, BNSDOCIO <OK 17?543B » 17 OK PR 172543 B1 phenylmercaptan eller lignende.

Skent det er sædvanligt at anvende terre oplesningsmidler ved arbejde med sllylerende materialer, har det overraskende vist sig, at tilsætning af vand til reaktionsoplesningsmidlet forud for acylering, 5 selv 1 fravær af "oversllylerlng", ofte giver lige så gode udbytter og af og til giver bedre udbytter af ensket produkt end et tert opløsningsmiddel. Således har det f.eks. ved acyleringsreaktioner gennemført i acetone ved de sædvanlige koncentrationer pi 10-20% (vægt/vol.) af poly-silyleret kanamycin A vist sig, at fortræffelige udbytter af l-N-[L-(-)-10 Tf-am1no-o-hydroxybutyryl]kanamycin A opniedes ved tilsætning af op til 28 mol vand pr. mol polys Hyleret kanamycin A; ved en koncentration på 20% er 28 mol pr. mol omkring 8% vand. Ved andre kombinationer af reaktanter og opløsningsmidler kan endog mere vand blive tolereret eller være gunstigt. Acyleringsreaktlonen kan gennemføres i opløsningsmidler in-15 deholdende op til ca. 40% vand, skønt man ved si høje vandkoncentratio-ner må anvende korte acyleringstider for at undgå for stor desilylering af det polysilylerede aminoglycosid-udgangsmaterlale. Et foretrukket Interval er op til ca. 20% vand, et mere foretrukket interval er op til ca. 8% vand, og det mest foretrukne interval er op til ca. 4% vand.

20 Medmindre,som beskrevet ovenfor, der anvendes opløsningsmidler indeholdende meget store vandmængder, er varigheden af acyleringsreaktionen ikke kritisk. Oer kan anvendes temperaturer i intervallet fra ca.

-30gC til ca. 100DC i reaktionstidsrum varierende fra omkring 1 time og op til 1 dag eller mere. Omsætningen forløber sædvanligvis godt ved 25 stuetemperatur og kan af bekvemmelighedsgrunde gennemføres ved omgivelsestemperatur. Med henblik på maksimale udbytter og selektiv acylering foretrækkes det imidlertid at gennemføre acylerlngen ved fra ca. 0 til 5°.

Acylering af 1-aminogruppen 1 det polysilylerede amlnoglycosid (med 30 eller uden en blokerende gruppe, som er forskellig fra sllyl på en anden aminogruppe end C-l aminogruppen) kan gennemføres med et hvilket som helst acylerende derivat af syren med formel (XIII), som Inden for området er kendt for at være egnet til acylering af en primær aminogruppe.

Eksempler på egnede acylerende derivater af den frie syre omfatter de 35 tilsvarende syreanhydrlder, blandede anhydrider, f.eks. alkoxymyresyre-anhydrider, syrehalogenider, syreacider, aktive estere og aktive thio-estere. Oen frie syre kan kobles med det polysilylerede aminoglycosid-udgangsmaterlale, efter at den frie syre først er omsat med N,N'-di-methylch1orform1min1umchlorid [jfr. britisk patentskrift nr. 1.008.170 BNSDOCID: <DK 172543Β» 18 DK PR 172543 B1 og Novak og Weichet, "Experientia" XXI, 6, 360 (1965)] eller ved anvendelse af et Ν,Ν'-carbonyldiimidazol eller et N,N'-carbonyld1tr1azol [jfr. sydafrikansk patentbeskrivelse nr. 63/2684] eller et carbodllmid-reagens [iser N,N'-d1cyclohexy1carbod11mid, Ν,Ν'-diisopropylcarbodiim1d 5 eller N-cyc1ohexyl-N'-(2-morphol1noethyl)-carbodiimid: jfr. Sheehan og Hess, J.A.C.S., 77, 1967 (1955)], eller af et alkynylaaiinreagens [jfr.

R. Buijle og H.G. Viehe, Angew. Chem. international udgave, 3, 582 (1964)] eller af et isoxazoliumsaltreagens [jfr. R.B. Woodward, R.A.

Olofson og H. Mayer, J. Aner. Chem. Soc., 83, 1010 (1961)], eller af et 10 ketenimlnreagens [jfr. C.L. Stevens og M.E. Mund, J. Amer. Chem. Soc., 80, 4065 (1958)] eller af hexachlorcyclotriphosphatriazln eller hexa-bromcyclotriphosphatriazin (USA-patent nr. 3.651.050) eller af diphenyl -phosphorylazid [ODPA; J. Amer. Chem. Soc., 94, 6203-6205 (1972)] eller af diethylphosphorylcyanid [0EPC; Tetrahedron Letters No. 18, pp. 1595-15 1598 (1973)] eller af diphenylphosphit [Tetrahedron Letters No. 49, pp.

5047-5050 (1972)]. En anden med syren skvivalent forbindelse er et tilsvarende azolid, dvs. et amid af den tilsvarende syre, hvis amidnitrogen indgår i en quasiaromatisk femleddet ring indeholdende mindst to nitrogenatomer, dvs. imidazol, pyrazol, triazolerne, benzimidazol, benzo-20 triazol og de substituerede derivater deraf. Som det vil kunne forstås af fagmanden, kan det af og til vzre Onskeligt eller nødvendigt at beskytte hydroxylgruppen på det acylerende derivat af syren med formel (XIII), f.eks.ved anvendelse af acylerende derivater såsom et syre-halogenid. Beskyttelse af hydroxygruppen kan gennemføres på måder, der 25 er kendt inden for området, f.eks. ved anvendelse af en carbobenzyloxy-gruppe, ved acetylering, ved silylerlng eller lignende.

I en foretrukket udførelsesform for opfindelsen er det acylerende derivat af syren med formel (XIII) en aktiv ester, og fortrinsvis dens aktive ester med N-hydroxysuccinlmid, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-30 dicarboxlmid eller N-hydroxyphthalimld. I en anden foretrukket udførel-sesform er det acylerende derivat af syren med formel (XIII) et blandet syreanhydrid, og fortrinsvis dens blandede syreanhydrid med pivallnsyre, benzoesyre, isobutylcarbonsyre eller benzyl carbonsyre.

Efter at acyleringen af det polysilylerede aminoglycosid er afslut-35 tet, fjernes alle blokerende grupper på 1 og for sig kendt måde til frembringelse af det ønskede produkt med formel (I). F.eks. fjernes silylgrupperne let ved hydrolyse med vand, fortrinsvis ved lav pH-vxrdi.

Også eventuelle ami no-bl okerende grupper på aminoglycosidmolekylet eller på acylsyrekcden kan fjernes på kendt måde. Således kan en t-butoxy- ^Nsnnrm· n* 179^7«-, 19 DK PR 172543 B1 carbonylgruppe fjernes ved anvendelse af myresyre, en carbobenzyloxy-gruppe ved katalytisk hydrogenering, en 2-hydroxy-1-naphthcarbonylgruppe ved sur hydrolyse, en trichlorethoxycarbonylgruppe ved behandling med zinkstev 1 Iseddikesyre, phthaloylgruppen ved behandling med hydrazin- 5 hydrat 1 ethanol under opvarmning, tri fluoracetylgruppen ved behandling med NH^OH, etc.

Foretrukne amino-blokerende grupper, som er egnede til beskyttelse af amlnogrupper 1 såvel aminoglycosldmolekylet som amlnogruppen 1 den acylerende syre med formel (XIII), er grupperne med formlerne: 10 R20 ,__ O CH3 o o 15 - CHjOC-, CHj-C-O-C- · Y2XCC- ' r21>^=/ CH3

Q

25 M°* U

o in 11 X3C-C82-0-C- »8

II

o 35 BNSDOCID: <DK 172S43B > 20 DK PR 172543 B1 hvori R20 og R21 er ens eller forskellige, og hver især betegner H, F,

Cl, Br, NOg, OH, (lavere)alkyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, F eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller !. En særlig foretrukket am1no-blokerende gruppe til anvendelse 1 amtnoglycosidmolekylet er car-5 bobenzyloxygruppen. Særligt foretrukne amino-blokerende grupper til anvendelse 1 den acylerende syre med formel (XIII) er carbobenzyloxy-, tri fluoracetyl- og t-butyloxycarbonylgrupperne.

Nogle af forbindelserne med formel (I) indeholder en dobbeltbinding 2 (dvs. hvor substituenten R har strukturen IV). Disse er forbindelser 10 afledt af s4danne amtnoglycosider som sisomicln, verdamicin, G-52, 66-40B og 66-40D. Nir sidanne forbindelser anvendes, vi1 fagmanden forsti, at enhver reduktionsteknik, som ville reducere dobbeltbindingen, bør undgis. Siledes bør der f.eks. anvendes amlnoblokerende grupper, som kan fjernes ved hydrolyse eller ved hjælp af et alkalimetal i flydende ammo-15 niak, siledes at den reduktion af dobbeltbindingen, som ville indtræffe ved sidanne teknikker som katalytisk hydrogenolyse, undgås.

Produktudbytter bestemtes ved hjælp af forskellige metoder. Efter fjernelse af alle blokerende grupper og kromatografi pi en "CG-50" (NHj+) søjle kunne udbyttet bestemmes ved Isolering af det krystallinske 20 faste stof fra passende fraktioner eller ved mi krobiologi sk analyse (turbidimetrlsk eller plade) af passende fraktioner. En anden teknik, som anvendtes, var stærkt effektiv væskekromatografi af den ureducerede acyleringsblanding, dvs. den vandige opløsning, der opniedes efter hydrolyse af silylgrupperne og fjernelse af organisk opløsningsmiddel, men 25 før hydrogenolyse t11 fjernelse af den eller de resterende blokerende gruppe(r). Denne analyse var Ikke en direkte analyse for slutproduktet, men for de tilsvarende N-blokerede forbindelser.

Det anvendte Instrument var en Waters Associates "ALC/GPC 244" høj-tryks-væskekromatograf med en Waters Associates absorptionsdetektor af 30 model 440 og en 30 cm x 3,9 mm l.d. "μ-Bondapak C-18" søjle, under følgende betingelser:

Hobil fase: 25% 2-propanol 75% 0,01 m natriumacetat pH 4,0 35 Strømningshastighed: 1 ml/min.

Detektor: UV ved 254 nm

Følsomhed: 0,04 AUFS

Fortyndingsmiddel: DMSO

Injiceret mængde: 5 μΐ . NSDOCin· iDK 1 > DK PR 172543 B1 21

Koncentration: 10mg/ml.

Kurvehastigheden varierede, men 2 m1n./2,54 cm var typisk. Ovennævnte betingelser gav UV-kurver med toppe, som var lette at måle kvantitativt.

5 Resultaterne af ovenstående analyser er 1 beskrivelsen betegnet som HPLC-analyser.

For at undgå gentagelse af komplekse kemiske betegnelser anvendes felgende forkortelser af og til i beskrivelsen: 10 AHBA L-(-)-Tr-am1no-tt-hydroxysmersyre

BHBA N-carbobenzyloxy-derivat af AHBA

HONB N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid NAE N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboxlmid (eller BHBA-'ONB') aktiveret ester af BHBA 15 HONS N-hydroxysuccinlmid SAE N-hydroxysuccinimid-aktiveret ester af (eller BHBA*ONS') BHBA DCC dicyclohexylcarbodiimid DCU dicyclohexylurinstof 20 HHDS hexamethyld i s i 1azan BSA (bis(trimethylsilyl)acetamid HSA trimethyl sllylacetamid TFA tri fluoracetyl t-BOC tert.-butvloxvcarbonvl 25 "Dicalite" er et varemærke fra Great Lakes Carbon Corporation for diatoméjord.

"Amberi i te CG-50" er et varemærke fra Rohm and Haas Co. for kroma-tograf 1 -udformningen af en svagt sur kationlsk ionbytterharpiks af car-30 boxyl-polymethacryltypen.

"μ-Bondapak" er et varemærke fra Waters Associates for en serie stærkt effektive væskekromatografisøjler.

Alle temperaturer heri er anført i °C.

Med betegnelserne "(lavere)al kyl" og "(lavere)alkoxy" menes, som de 35 anvendes heri, alkyl- eller alkoxygrupper Indeholdende fra 1 til 6 car-bonatomer.

Med betegnelsen "farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt" af en forbindelse med formel (I) menes, som den anvendes i beskrivelsen og i kravene, et mono-, di-, tri-, tetra- (eller højere) salt dannet ved BNSDOCID: <DK 172543Β» 22 DK PR 172543 B1 vekselvirkning nellem et molekyle af en forbindelse med formel (I) og et eller flere ækvivalenter af en 1kke-tox1sk, farmaceutisk acceptabel syre 1 afhængighed af den særlige forbindelse med formel (1). Som det vil kunne forstis, kan et syreaddltlonssalt dannes ved hver af aminogrupper- 5 ne 1 molekylet, sivel 1 amlnoglycosIdkernen som 1 acyls idekæden. Medregnet blandt disse syrer er eddikesyre, saltsyre, svovlsyre, nalelnsyre, phosphorsyre, salpetersyre, brombrintesyre, ascorblnsyre, «blesyre og citronsyre, og de andre syrer, som er almindeligt anvendt til dannelse af salte af amlnholdlge legemidler.

10 Oe fleste af amlnoglycosiderne, som anvendes som udgangsmaterialer

Ifølge den foreliggende opfindelse, er kendte. Et hvilket som helst individuelt amlnoglycosId, som Ikke er 1 og for sig kendt (f.eks. et ikke tidligere beskrevet 6'-N-methylder1vat af et kendt amlnoglycosld) kan let fremstilles ved fremgangsmider, som er velkendte Inden for omridet, 15 til fremstilling af dermed analoge forbindelser.

Oe ved den foreliggende opfindelse fremstillede forbindelser med formel (I) er aktive over for gram-positive og gram-negative bakterier og anvendes analogt med andre kendte aminoglycoslder. Mange af forbindelserne med formel (I) er 1 og for sig kendte.

20 Ifølge et andet aspekt af den foreliggende opfindelse tilvejebrin ges polysilylerede aminoglycoslder med formel (XIV) eller polysllylerede aminoglycoslder med formel (XIV) Indeholdende fra 1 til 3 amino-blokerende grupper, som er forskellige fra sllyl pi andre amlnogrupper end ΟΙ aalnogruppen.

25 Den foreliggende opfindelse beskrives 1 det efterfølgende rarmere ved eksempler, som illustrerer foretrukne udførelsesformer.

,ΓϊΟΟΙΠ DK PR 172543 B1 23

Etegffl?el-A

Fremstilling af l.-_N-fl-[.:)-'r-*m1no-at-hydroxybutyryllkanaigvc1n A. amikacin, ved selektiv acvlerlnq af oolyftrlmethvlsilvll 6'-N-carbobenzvloxvkanamycln A i vandfri d1ethviketon 5 6'-H-carbobenzyloxykanamycin A (15 g, 24,2* m.mol) opslammedes i 90 ml tmr acetonitril og opvarmedes til reflux under nitrogenatmosfcre. Hexamethyldisilazan (17,5 g, 108,48 m.mol} tilsattes langsomt i løbet af 30 minutter, og den opnåede opløsning refluxedes 1 24 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlet 1 vakuum (40°) og fuldstsndig tørring under 10 vakuum (10 mm), opnåedes 27,9 g af et hvidt, amorft faststof [90,71% beregnet som 6'-N-carbobenzyloxykanamyc1n A (stlyl)g].

Dette faste stof opløstes i 150 ml tør diethylketon ved 23®. L-{-)-γ-benzyloxycarbonylamino-e-hydroxysmørsyre N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboxlmidester (NAE) (11,05 g, 26,67 m.mol) opløst i 100 ml tør 15 diethylketon ved 23° tilsattes langsomt under god omrøring 1 løbet af en halv time. Opløsningen omrørtes ved 23° 1 78 timer. Den gule, klare opløsning (pH 7,0) fortyndedes med 100 ml vand. pH-v*rdien af blandingen Indstilledes til 2,8 (3 n HC1) og omrørtes kraftigt ved 23° i 15 minutter. Den vandige fase fraskiltes, og den organiske fase ekstraheredes 20 med 50 ml vand med pH 2,8. De kombinerede vandige fraktioner vaskedes med 50 ml ethylacetat. Opløsningen anbragtes 1 en 500 ml Parr-flaske sammen med 5 g 5% palladium-pi-carbon katalysator (Engelhard) og reduceredes ved 3,4 atm. Hg i 2 timer ved 23°. Blandingen filtreredes gennem et lag "Dicalite", som derefter vaskedes med yderligere 30 ml vand. Det 25 farveløse filtrat koncentreredes 1 vakuum (40-45o) til 50 ml. Opløsningen blev fyldt på en 5 x 100 cm "CG-50" (NH^+) ionbytningssøjle. Efter vask med 1000 ml vand elueredes uomsat kanamycln A, 3-[L-(-)-t-a»1no-e-hydroxybutyry1]-kanamyc1n A (BB-K29) og amlkadn med 0,5 n ammonium-hydroxid. Polyacyl-materiale blev udvundet med 3 n ammoniumhydroxid.

30 Bio-analyse, tyndtlagskromatografl og optisk drejning anvendtes til registrering af elueringens fremadskriden. Volumenet og den iagttagne optiske drejning for hver eluatfraktion samt vxgten og det procentuelle udbytte af faststof Isoleret fra hver fraktion ved inddampning til tørhed er sammenfattet nedenfor: 35 BNSDOCID: <DK 172543Β» 24 DK PR 172543 B1

Volumen

Materiale (ml) ®578 1 Vxgt (g) % udbytte

Kanamycin A 1000 -«>0,115 0,989 9,15 5 BB-K29 1750 +0,24 4,37 32,0

Amikacin 2000 +0,31 6,20 47,4

Polyacyler 900 +0,032 0,288 2,0 10

Det forbrugte diethyl ketonlag vistes ved stsrkt effektiv vxske-kromatografi at Indeholde yderligere 3-5% amikacin.

Oet ri amikacin (6,20 g) opløstes 1 20 ml vand og fortyndedes med 20 ml methanol, og 20 ml isopropanol tilsattes til fremkaldelse af 15 krystallisation. Der opnåedes 6,0 g (45,8%) krystallinsk amikacin.

EteCTWKl l

Fremstilling af Ι-Ν-ΓΙ-M-Tr-amino-a-hydroxybutyrvllkanamycin A. amikacin, ved selektiv acvlerlno af oolyftrlmethylsilyll kanamycin A.

20 under anvendelse af blokering In situ

A. Polyftrimethvlsil vi 1kanamycin A

Kanamycin A fri base (18 g aktivitet, 37,15 m.mol) opslxmmedes 1 200 ml tør acetonltril og opvarmedes til reflux. Hexamethyldlsllazan 25 (29,8 g, 184,6 m.mol) blev tilsat 1 løbet af 30 minutter, og blandingen omrørtes under reflux 1 78 timer til frembringelse af en lysegul, klar opløsning. Fjernelse af opløsningsmidlet under vakuum efterlod en amorf fast remanens (43 g, 94%) [beregnet som kanamycin A (silyl)10].

30 B. L-(-)-y?amino-a-hvdroxvbutyrvl 1 kanamycin A

p*(Benzyloxycarbonyloxyjbenzoesyre (5,56 g, 20,43 m.mol) op-slammedes i 50 ml tør acetonitril ved 23®. N,0-b1s-trimethyls1lyl-acetamid (8,4 g, 41,37 m.mol) tilsattes under god omrøring. Opløsningen blev holdt ved 23° 1 30 minutter og sattes så 1 løbet af 3 timer under 35 kraftig omrøring til en opløsning af poly(tr1methyls1lyl)kanamycin A (21,5 g, 17,83 m.mol, beregnet som (silyl)jQ-forbindelsen) i 75 ml tør acetonltril ved 23®. Blandingen omrørtes 1 4 timer, opløsningsmidlet fjernedes i vakuum (40°), og den olleagtlge remanens opløstes i 50 ml tør acetone ved 23®C.

iiNSDOCID: <DK 172S43B > 25 DK PR 172543 B1 t-(-)-7-benzyloxycarbonylam1no-e-hydroxysmørsyre N-hydroxy-5-norbornen-2,3~dicarbox1m1dester (NAE) (8,55 g, 20,63 ni.mol) 1 30 ml acetone sattes til ovenstående opløsning i løbet af et tidsrum på 5 minutter. Blandingen blev holdt ved 23°C 1 78 timer. Opløsningen fortyndedes 5 med 100 ml vand, og pH-vcrdien (7,0) ssnkedes til 2,5 (6 n HC1). Blandingen anbragtes 1 en 500 ml Parr-flaske sammen med 3 g 5¾.palladium-på-carbon katalysator (Engelhard) og reduceredes ved 2,72 atm. Hg i 2 timer ved 23°. Blandingen flltreredes gennem et lag diatoméjord, som derncst vaskedes med 20 ml vand. Det kombinerede filtrat og vaskevand (168 ml) 10 bestemtes ved mikrobiologisk analyse over for E. coli til at indeholde omkring 11.400 mcg/ml (19% udbytte) amlkadn.

Eksempel 3

Fremstilling af l-N-fL-(-)-v-am1no-tt-hvdroxvbutyrvnkanamyc1n A.

15 amikacin, ved selektiv acvlerino af polyftrlmethylsIlyDkanamvcin A

A. Polyftrlmethvlsilvll kanamvcin A

En suspension af 10 g (20,6 m.mol) kanamycin A i 100 ml tør acetonltril og 25 ml (119 m.mol) 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazan re-20 fluxedes 1 72 timer. Dette gav en klar lysegul opløsning. Opløsningen inddampedes til tørhed i vakuum ved 30-40*C. Der opnåedes 21,3 g poly(trimethylsllyl) kanamycin A som et lyst gulbrunt amorft pulver [85% udbytte beregnet som kanamycin A (silyl)1Q].

25 B. l-N-fL-(->-y-am1no-tt-hvdroxybutvrvnkanamvcin A

T11 en opløsning af 2,4 g (2,0 m.mol) poly(trimethylsilyl) kanamycin A i 30 ml tør acetone sattes langsomt 2,0 m.mol l-(-)-y-benzyloxy-carbonylamino-e-hydroxysmørsyre N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1mid-ester (NAE) 1 10 ml tør acetone ved 0-5°C. Reaktionsblandingen omrørtes 30 ved 23®C i en uge og inddampedes dernsst til tørhed i vakuum ved en bad-temperatur på 30-40BC. Vand (60 ml) sattes dernest til remanensen efterfulgt af 70 ml methanol til frembringelse af en opløsning. Opløsningen blev gjort sur med 3 n HC1 til pH 2,0 og reduceredes dernsst ved 3,40 atm. Hg i 2 timer under anvendelse af 500 mg 5% palladium-på-carbon ka-35 talysator. Materialet filtreredes, og kombineret filtrat og vaskevcske bestemtes ved mikrobiologi sk analyse over for E. coli til at indeholde amikacin 1 et udbytte på 29,4%.

BNSDOCID: <DK 172543B > 26 DK PR 172543 B1

Eksempel 4

Fremstilling »f amikacin ved acvlerinq af PolWtHmethvIsilyl) S'-N-Cla kane A 1 tetrahvdrofuran med det blandede svreanhvdrld aflplval 1nsyre_og

fiUBA

5 A. Fremstilling af blandet.anhYdriit BHBA (5,066 g, 20,0 m.mol), BSA (4,068 g, 20,0 m.mol) og tri-ethylamin (2,116 g, 22,0 m.mol) opløstes 1 200 ml slgtetørret tetra-hydrofuran. Opløsningen refluxedes 1 2 1/4 time og køledes si til 10 -10BC. Plvaloylchlorld (2,412 g, 20,0 m.mol) tilsattes 1 løbet af 2-3 minutter under omrøring, og omrøringen fortsattes i 2 timer ved -10®C.

Temperaturen fik derefter lov til at stige til 23°C.

B. Acvlerlng af polyftrimethvlstlyll 6*-H-Cbz kana A

15 Poly(trimethylsilyl) 6'-N-Cbz kana A fremstillet som 1 eksempel 1 (5,454 g, 4,97 m.mol, beregnet som 6'-Cbz kana A (s1lyl)g) opløstes 1 50 ml tør (molekylsigte) tetrahydrofuran ved 23°C. Halvdelen af den under trin A ovenfor fremstillede opløsning af blandet anhydrid (10,0 m.mol) tilsattes 1 løbet af 20 minutter under omrøring, og omrøringen fortsat-20 tes 1 7 dage.

Vand (100 ml) tilsattes derefter til reaktionsblandingen, og pH (5,4) indstilledes til 2,0 med 3 m H^SO^. Omrøring fortsattes 1 1 time, og opløsningen ekstraheredes med ethylacetat. Polyacyleret materiale begyndte at udkrystalliseres, så reaktionsblandingen filtreredes. Efter 25 tørring over Ρ?05 vejede det udvundne faststof 0,702 g. Ekstraktionen af reaktionsblandingen fortsattes 1 Ialt 4 x 75 ml ethylacetat, hvorefter overskydende ethylacetat blev afdrevet fra det vandige lag. En aliquot af den vandige opløsning underkastedes analyse med HPLC. Oen resulterende kurve Indikerede et 26,4% udbytte af di-Cbz amikacin.

30 Det vandige lag hydrogeneredes dernmst i et Parr-apparat ved 3,40 atm Hj-tryk 1 2 timer under anvendelse af 0,5 g 10% Pd-på-carbon katalysator. Materialet filtreredes, og kombineret filtrat og vaskevssker bestemtes over for E. coll til at Indeholde et 31,2% udbytte af amikacin. Am1kac1n/BB-K29 forhold omkring 9-10/1; spor af polyacyl og uomsat kana 35 A til stede.

ftNSnrvrirY 'ΠΚ 17944^«., 27 DK PR 172543 B1

Ek&sroe] 5

FremstilΊ 1nq af amikacin ved acvlerlng af oolyftrimethylsilyl) 6'-N-Cbz kana A 1 acetone med det blandede anhvdrld af BHBA og Isobittvlcarbonsvre 5 A. Fremstilling af blandet anhvdrld BHBA (1,267 g, 5,0 «.mol) og N-tr1methylsilylacetamld (MSA) (1,313 g, 10,0 m.mol) 1 20 ml slgtetørret acetone omrørtes ved 23°C, og tri-ethylamln (TEA) (0,70 ml, 5,0 m.mol) til sattes. Blandingen refluxedes under N^-atmosfcre 1 2½ time. Blandingen afkøledes ved *20®C, og 1so-10 butylchlorformiat (0,751 g, 0,713 ml, 5,50 m.mol) tilsattes. Triethyl-amin.hydrochlorid begyndte øjeblikkeligt at udskilles. Blandingen omrørtes i 1 time ved -20°C.

b. Asyl grim 15 Poly(tr1methyls1lyl) 6'-N-Cbz kana A fremstillet som 1 eksempel 1 (6,215 g, 4,9 m.mol, beregnet som (silyl)g-forbindelsen) opløstes 1 20 ml slgtetørret acetone under omrøring ved 23°C. Opløsningen afkøledes til -20gC, og den kolde opløsning af blandet anhydrld fra trin A tilsattes langsomt 1 løbet af 30 minutter. Reaktionsblandingen omrørtes i 20 yderligere 1½ time ved -20°C og derefter 1 17 timer ved 23eC. Reaktionsblandingen blev så heldt 1 150 ml vand ved 23°C under omrøring, pH (7,75) Indstilledes til 2,5 med 3 n HC1, og omrøring fortsattes 1 15 minutter. Acetone blev derefter afdrevet i vakuum ved 40°C. En aliquot af den resulterende vandige opløsning underkastedes analyse ved HPLC. Den 25 resulterende kurve viste et 34,33% udbytte af di-Cbz amikacin.

Hovedparten af den vandige opløsning reduceredes ved 3,40 atm. Hg-tryk ved 23(C i 3 1/4 time under anvendelse af 2,0 g Pd/C katalysator. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, og kombineret filtrat og vaske-vesker bestemtes ved mikrobiologi sk analyse over for E. coil til at 1n-30 deholde et 35,0 % udbytte af amikacin.

Eksempel. $

Fremstilling af amlkadn ved acvlerlng af oolyttrlmethvlsllvl) 6*-N-Cbz kana A i vandfri cyclohexanon 1 varierende tidsrum 35 A. Poly(trlmethylsilyl) 6'-N-Cbz kana A fremstillet som i eksempel 1 (2,537 g, 2,0 m.mol, beregnet som 6'-N-Cbz kana A (silyl)g) i 300 ml tør cyclohexanon acyleredes i 20 timer ved 23°C med en NAE-opløsning i tør cyclohexanon (10,8 ml af en 0,1944 m.mol/ml opløsning, 2,10 m.mol). Re BNSDOCIO: <DK 172543B > 28 DK PR 172543 B1 aktionsblandingen blev så sat til 150 ml vand under omrøring, og pH (5,6) indstilledes til 2,5 med 3 n HC1. Cyclohexanonen blev afdrevet 1 vakuum ved 40°C, og en aliquot af den resterende vandige fase blev udtaget til analyse ved HPLC.

5 Hovedparten af den vandige fase reduceredes under 3,40 atm. Hg-tryk i 3 timer ved 23°C under anvendelse af 1,0 g 10% Pd/C katalysator. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, og kombineret filtrat og vaskevesker analyseredes mi krobiologi sk for amikacin.

10 B. Omsctning A ovenfor blev gentaget, bortset fra at acyleringen blev fortsat 1 115 timer i stedet for 20 timer.

Udfeyttør 15 HPLC:analYsq Mikrobiologi sk analyse amikacin

UkCbz.amikiClnl Turbid imetr is k Plade

Omsctning A 49,18% 42,87% 39,16%

Omsctning 8 56,17% 55,39% 38,45% 20

Eksaiipel 1

Fremstilling af amikacin ved acvlerino af polvitrimethvlsllvll 6'-N-Cbz kana A 1 vandfri tetrahvdrofuran 1 varierende tidsrum 25 A. Eksempel 6A blev gentaget, bortset fra at der som opløsningsmiddel i stedet for tør cyclohexanon anvendtes tør tetrahydrofuran.

B. Eksempel 6B blev gentaget, bortset fra at der som opløsningsmiddel 30 1 stedet for tør cyclohexanon blev anvendt tør tetrahydrofuran.

Udbytter HPLC-analyse Mikrobifflpalsk „aml.y$.&· amikacin 35 (di-Cbz amikacin) Turbidimetrisk Plade

Omsctning A 29,27% 28,34% 28,18%

Omsctning B 33,39% 21,52% 28,63% jMcnnrin· oocøgp«.

29 DK PR 172543 B1

Eksempel O

Fremstilling af amikacin ved acvlerinq af polyftrlmethylsllvl) 6'-N-Cbz kana A i vandfri dioxan i varierende tidsrum 5 A. Eksempel 6A blev gentaget, bortset fra at acyleringen fortsattes i 44 Urner under anvendelse af ter dioxan som opløsningsmiddel.

B. Eksmpel 6 B blev gentaget, bortset fra at acyleringen fortsattes 1 18½ time under anvendelse af ter dioxan som opløsningsmiddel.

10

Udbytter HPLC-analyse mkrofeialMlilLanalyse amikacin (di-Cbz amikacin 1 Inrbjd.ijieLr1$K PI ad? 15

Omsxtning A 39,18% 43,27% 33,36%

Omsztning B 42,82% 22,55% 33,37% 20 EK&eaPfil. g

Fremstilling af amikacin ved deviering af pplyftrimethvlsilvll 6'N-Cbz kana A i vandfri diethvlketon ved 7S*C

Til en omrørt opløsning af poly(trimethylsilyl) 6'-N-Cbz kana A fremstillet som 1 eksempel 1 (2,537 g, 2,0 m.mol, beregnet som 6'-N-Cbz 25 kana A (silyl)g) i 32 ml slgtetørret diethyl keton ved 75®C sattes en opløsning af NAE (10,8 ml med 0,1944 m.mol/ml diethyl keton, 2,10 m.mol) i løbet af 15 minutter. Omrøring fortsattes ved 75°C 1 yderligere 3 timer, hvorefter blandingen blev hcldt i 150 ml vand. pH-vzrdien indstilledes til 2,8 med 3 n HC1, og diethyl ketonen blev afdrevet 1 vakuum ved 40*C.

30 HPLC-analyse af en aliquot af den vandige fase viste et 39,18% udbytte af di-Cbz amikacin.

Hovedparten af den vandige fase reduceredes under 3,39 atm. Hz-tryk i 3 1/4 time ved 23°C under anvendelse af 1,0 g Pd/C katalysator. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, og kombineret filtrat og vaskevxsker 35 analyseredes mikrobiologi sk for amikacin. Turbidlmetrlsk analyse viste 27,84% udbytte, og pladeanalyse viste 28,6% udbytte.

BNSDOCtD: <DK 172543Β» 30 DK PR 172543 B1 iteampi!. lfl

Fremstilling af amikacin ved acvlerlng af P0ly£lr1methyl.Sllyl) AttU A ed NAE ved 0-5° efter tUbagehydrolvserlng TOd Yaod

5 A. Silvlerlng af kanamycln A under anvendelse af HUDS med THCS SOM

katalysator

Kanamydn A (10 g med renhed 97,6%, 20,14 m.mol) 1 100 ml sigte-tørret acetonltrll blev bragt til reflux under nitrogenatmosfmre. En blanding af HHOS (22,76 g, 141 m.mol, 7 mol pr. mol kanamydn A) og TMCS 10 (1 ml, 0,856 g, 7,88 m.mol) blev sat til den under reflux varende reaktionsblanding i løbet af 10 minutter. Reflux fortsattes 1 4 3/4 time, og blandingen afkøledes dernast, koncentreredes 1 vakuum til en gul viskos sirup og tørredes under højvakuum 1 2 timer. Udbyttet af produkt var 23,8 g (97,9%, beregnet som kanamycln A (silyl)1Q).

15 B. Acvlerlno

Pol y(tr1 methyl silyl) kanamydn A (23,8 g, 20,14 m.mol) fremstillet under trin A ovenfor opløstes 1 250 ml sigtetørret acetone ved 23° og køledes derefter til 0-5°. Vand (3,63 ml, 201,4 m.mol, 10 mol pr. mol 20 polysllyleret kanamydn A) tilsattes under omrøring, og blandingen blev henstillet under moderat vakuum 1 30 minutter. NAE (19,133 m.mol, 0,95 mol pr. mol polysllyleret kanamydn A) i 108,3 ml acetone tilsattes dernast 1 løbet af mindre, end 1 minut. Blandingen omrørtes ved 0-5° 1 1 time, fortyndedes med vand, pH Indstilledes til 2,5, og acetonen fjerne-25 des derncst 1 vakuum. Den vandige opløsning reduceredes si ved 3,40 atm.

H2~tryk ved 23° i 2½ time under anvendelse af 2,0 g 10% Pd/C som katalysator. Oen reducerede reaktionsblanding filtreredes gennem "Dicalite", koncentreredes til ca. 100 ml 1 vakuum ved 40° og blev demast haldt pi en "CG-SO* (NHj+) søjle (6 Ilter harpiks, 5 x 100 cm). Den vaskedes med 30 vand og elueredes si med 0,6n-l,0n-3n NH^OH. Der opniedes 60,25% amikacin, 4,37% BB-K6, 4,35% BB-K29, 26,47% kanamycln A og 2,18% polyacyl-forbindelser.

Eksempel 11 35 Ecffln&tiUIng af amikacin ved acvlerlng af oolyftrlmethvlsllvll 6'N-Cbz kana A med SAE ved 0-5» efter tllbaaemethanolvse

A. Sil viering af 6*-N-Cbz kanamycln A

6'-N-Cbz kanamydn A (20,0 g, 32,4 m.mol) 1 200 ml sigtetørret ace- '^ΡΓΧΊΠΓΥ ^ΓΪΚ 17?ς4Τ3 ^ 31 DK PR 172543 B1 tonltril blev bragt til reflux under nitrogenatmosfære. HMDS (47,3 ni. 226,8 n.nol, 7 nol pr. mol 6'-N-Cbz kana A) blev tilsat i løbet af 10 minutter, og reflux fortsattes i 20 timer. Blandingen køledes dernæst, koncentreredes 1 vakuum og tørredes under højvakuum 1 2 5 tiner til frembringelse af 39,1 g hvidt amorft faststof (95,4% udbytte, beregnet som 6'-N-Cbz kana A (silyl)g).

B. Acylsrlog

Poly(trimethylsllyl) 6'-N-Cbz kana A (39,1 g, 32,4 m.mol) frem-10 stillet under trin A ovenfor opløstes i 400 ml tør acetone under omrøring ved 23°. Methanol (6,6 ml, 162 m.mol, 5 mol pr. mol polys Hyleret 6'-N-Cbz kana A) tilsattes, og blandingen omrørtes ved 23° 1 1 time under en stærk nitrogenstrøm. Blandingen afkøledes til 0-5°, og en opløsning af SAE (11,35 g, 32,4 m.mol) i 120 ml for-kølet tør acetone til sat-15 tes. Blandingen omrørtes i yderligere 3 timer ved 0-5° og anbragtes dernæst i et 4° koldt rum 1 1 uge. Vand (300 ml) tilsattes, pH indstilledes til 2,0; blandingen omrørtes 1 1 time, og acetonen blev derefter afdrevet 1 vakuum. Oen resulterende vandige opløsning reduceredes ved 3,67 atm. Hg-tryk 1 17 timer ved 23° under anvendelse af 3,0 g 10% Pd/C som 20 katalysator. Oen filtreredes dernæst gennem "Dlcalite", koncentreredes i vakuum til 75-100 ml, blev fyldt på en "CG-50" (NH^+) søjle og elueret med vand og 0,6 n NH^OH. Der opnåedes 52,52% amikacin, 14,5% BB-K29, 19,6% kanamycin A og 1,71% polyacyl-forbindel ser.

25 Eksempel 12

Fremstilling af amikacin ved acvlering af polvitrlmethvlsilvl) kana A med SAE ved 0-5° efter tilbagehvdrolvserlng med vand A. Silvlerlnq af kanamycin A med TMCS i acetonitril under anvendelse af 30 tetramethvlguanldin som svreacceotor

Kanamycin A (4,88 g, 10,07 m.mol) suspenderedes 1 100 ml sigte-tørret acetonitril under omrøring ved 23°. Til den omrørte suspension sattes tetramethylguanidin (TMG) (16,234 g, 140,98 m.mol, 14 mol pr. mol kanamycin A). Blandingen opvarmedes til reflux, og TMCS (15,32 g, 140,98 35 m.mol, 14 mol pr. mol kanamycin A) blev tilsat i løbet af 15 minutter.

Et hvidt bundfald af TMG*HC1 dannedes, efter at ca. halvdelen af TMCS var blevet tilsat. Blandingen afkøledes til stuetemperatur, koncentreredes til en klæbrig remanens og tørredes under højvakuum i 2 timer. Det faste stof trltureredes med tør THF (100 ml), og det uopløselige TMG*HC1 BNSDOCID <DK 172543B > 32 DK PR 172543 B1 fraflltreredes og vaskedes ned 5 x 20 ni portioner THF. Kombineret fil' trat og vaskevmsker koncentreredes 1 vakuum ved 40° til en kisbrig remanens og tørredes under højvakuum 1 2 timer. Der opnåedes 10,64 g af en lys flødefarvet, kisbrig renanens (87,6% udbytte, beregnet som kanamycln 5 A (s1lyl)l0).

B. teyigrlng

Poly(trlnethylsllyl) kanamydn A (10,64 g, 10,07 rn.mol) fremstillet under trin A ovenfor opløstes 1 110 ml sigtetørret acetone under omrø-10 ring ved 23°, og opløsningen afkøledes til 0-5°. Vand (1,81 ml, 100,7 m.nol, 10 mol pr. mol polysllyleret kana A) tilsattes, og opløsningen omrørtes 1 30 minutter under moderat vakuum. SAE (3,70 g, 10,57 n.mol, 5% overskud) 1 40 ml for-kølet tør acetone tilsattes 1 løbet af mindre end 1 minut, og blandingen omrørtes 1 1 time. 81 andingen oparbejdedes 15 ved den generelle fremgangsmåde 1 eksempel 11 B til frembringelse af ca.

50% amikacin, ca. 10% BB-K29, 5-8% BB-K6, ca. 20% kanamydn A og 5-8% polyacylforb1ndel ser.

Eksempel 13 20 Fremstilling af polyftrlethvlsllvl) kanamvdn A under anvendelse af trlethvlchlorsllan med trlethvlamin som svreacceotor

Kanamydn A (5,0 g af 97,6% renhed, 10,07 rn.mol) suspenderedes 1 100 ml sigtetørret acetonitrll ved 23*. THethylamin (TEA) (33,8 ml, 24,5 g, 241,7 rn.mol) tllsattes, og suspensionen blev bragt til reflux.

25 En opløsning af trlchlorethyl sil an (23,7 ml, 21,3 g, 140,98 rn.mol) 1 25 ml tør acetonitrll tilsattes 1 løbet af 20 minutter. Reflux fortsattes 1 yderligere 7 timer, og blandingen køledes til stuetemperatur, hvorefter lange fine nåle af TEA*HC1 udskiltes. Blandingen blev henstillet ved stuetemperatur 1 16 timer, koncentreret 1 vakuum ved 40° til et klmbrigt 30 fast stof og tørret i 2 timer under højvakuum til et dyb-orange klmbrigt fast stof. Det faste stof tritureredes med 100 ml tør THF ved 23°, og det uopløselige TEA*HC1 frafiltreredes, vaskedes med 5 x 20 ml THF og tørredes til frembringelse af 16,0 g TEA.HC1. Kombineret filtrat og va-skevmsker koncentreredes 1 vakuum til et fast stof og tørredes under 35 højvakuum 1 2 timer. Der opnåedes 19,3 g poly(trlethylsllyl) kanamydn A som en dyb-orange viskos sirup.

kiWQnnnn· ,nii 33 DK PR 172543 B1

Eksempel 14

Fremstilling af polyftrlBethylsIlvl) kanamydn A under .anvendelse af bis-trimethvlsllvlurlnstef

Kanamydn A (10,0 g af 99,7% renhed, 20,58 m.mol) suspenderedes i 5 200 ml slgtetørret acetonitril under omrøring ved 23°. Til suspensionen sattes bis-trimethyls1lylurinstof (BSD) (29,45 g, 144,01 m.mol, 7 mol pr. mol kanamydn), og blandingen blev bragt til reflux under nitrogen-atmosfsre. Reflux fortsattes 1 17 timer, og reaktionsblandingen afkøle-des derefter til stuetemperatur. En lille mengde tilstedeverende uoplø-10 seligt materiale fjernedes ved filtrering, vaskedes med 3 x 10 ml portioner acetonitril og tørredes (1,1381 g). Infrarød analyse viste, at dette var BSD plus en lille mengde uomsat kanamydn A. Kombineret filtrat og vaskevssker afkøledes til 4° 1 16 timer. Yderligere fast stof skiltes ud, fjernedes som ovenfor (7,8 g) og vistes ved infrarød analyse 15 at vmre BSU plus urinstof. Det lysegule filtrat og vaskeveskerne koncentreredes 1 vakuum ved 40° og tørredes under højvakuum til frembringelse af 27,0 g af et hvidt fast stof, som dels var klebrlgt og dels var fine nålelignende krystaller. Det faste stof behandledes med 150 ml heptan ved 23°, den uopløselige del fjernedes ved filtrering, vaskedes med 2 x 20 50 ml portioner heptan og tørredes til frembringelse af 6,0 g hvide nåle (vistes ved infrarød analyse at vaere BSU plus urinstof). Kombineret filtrat og vaskevesker koncentreredes i vakuum ved 40° og tørredes under højvakuum 1 2 timer til frembringelse af 20,4 g hvide nåle, hvis infrarøde spektrum var typisk for polysllyleret kanamydn A. Beregninger vi-25 ste, at produktet i gennemsnit indeholdt 7,22 tr1methyls1lylgrupper.

EKsempd -15

Fremstilling af amikacin ved acvlerlno af Derftrimethvlsilvl) kanamvein A efter partiel desllvlerlno med 1.3-butandlol 30

a. FrewstUling af porttrinftthYlsilyl) kan«?Yc1n A

Kanamydn A (10,0 g, 20,639 m.mol) suspenderedes 1 100 ml sigte-tørret acetonitril under omrøring ved 23°. Suspensionen blev bragt til reflux under en nitrogenstrøm, og HH0S (23,322 g, 144,5 m.mol, 7 mol pr.

35 mol kanamydn A) tilsattes 1 løbet af 10 minutter. Reflux fortsattes 1 16 timer, og blandingen køledes dernest til stuetemperatur, koncentreredes 1 vakuum og tørredes 1 2 timer under højvakuum. Oer opnåedes 24,3 g af en hvid, klæbrig remanens (92,1% udbytte beregnet som kanamydn A (silyl)n).

BNSDOCID: <DK 172543B > 34 DK PR 172543 B1 B. fcyUrlnq

Per(trimethylsilyl) kanamycln A (24,3 g) fremstillet under trin A ovenfor opløstes i 240 ml slgtetørret acetone under omrøring ved 23°.

5 Til denne opløsning tllsattes 1,3-butandlol (9,25 ml, 103,2 m.mol, 5 mol pr. mol per(trlmethylsilyl) kanamycln A. Blandingen omrørtes ved 23° i 2 timer under en nitrogenstrøm og køledes så til 0-5°. SAE (7,23 g, 20,64 m.mol) 1 70 ml for-kølet acetone tilsattes 1 løbet af ca. 1 minut. Blandingen omrørtes ved 0-5° 1 3 timer og blev så henstillet i et 4° koldt 10 rum 1 ca. 16 timer. Vand (200 ml) tilsattes, pH Indstilledes til 2,5, og den klare gule opløsning omrørtes ved 23° 1 30 minutter. Acetonen blev afdrevet 1 vakuum, og den vandige opløsning reduceredes ved 3,74 atm.

Hg'tryk ved 23° 1 2 timer under anvendelse af 3,0 g 10% Pd-på-carbon som katalysator, (ten reducerede opløsning filtreredes gennem "Dlcalite" og 15 kromatograferedes som 1 eksempel 11 B til frembringelse af 47,50% amikacin, 5,87% BB-K29, 7,32% BB-K6, 24,26% kanamycln A og 7,41% poly-acylforbindelser.

Etoorool Jfi 20 Fremstilling af awikadn ved acvlerino af polvftrimethvlsilvil kanamycln A^fremstlUet 1 IHF under anvendelse af SAE med sul famlnsvrekatalvsator Til en under reflux varende blanding af kanamycln A (5,0 g, 10,32 m.mol) 1 50 ml slgtetørret tetrahydrofuran (THF) sattes sulfamlnsyre (100 mg) og HMDS (12,32 g, 76,33 m.mol). Blandingen refluxedes 1 18 t1-25 mer, Idet fuldstandlg opløsning Indtraffer efter 6 timer. Opløsningen afkøledes til 23°, behandledes med 0,1 ml vand og blev holdt på 23° 1 30 minutter. En opløsning af SAE (3,61 g, 10,3 m.mol) 1 36 ml THF tilsattes i løbet af 30 minutter. Efter omrøring 1 3 timer fortyndedes blandingen med 100 ml vand, og pH Indstilledes til 2,2 med 10% HjSO^. Den omrørtes 30 1 30 minutter ved 23° og koncentreredes så 1 vakuum til fjernelse af THF. Den resulterende vandige opløsning reduceredes ved 3,40 atm. Hg-tryk i 2 timer ved 23° under anvendelse af 10% Pd-på-carbon som katalysator. Oen reducerede opløsning filtreredes gennem "Olcalite”, og det faste stof vaskedes med vand. Kombineret filtrat og vaskevasker (150 ml) 35 bestemtes ved mikrobiologlsk analyse over for E. coli til at Indeholde 1225 mcg/ml (31,5% aktivitetudbytte) af amikacin.

riNsnncin· <ηκ 35 DK PR 172543 B1

CksfiMgl. 11

Fremstil Ung af amikacin ved acvlerlnq af polyftrlmethvlsilvl) kanamycin A med N-hvdroxvsuccinlmldesteren af di-carbobenzvloxv AHBA

5 A. Fremstilling af di-carbobenzvloxv l-M-a-amlno-o-hvdroxysmorsyre N-hydroxysucclnlmidester

Di-carbobenzyloxy L-(-)-tt-amino-a-hydrøxysmørsyre (8 g, 20,65 .mol) og N-hydroxysuccinimid (2,37 g, 20,65 m.mol) opløstes 1 50 ml 10 tør acetone ved 23°. Dicyclohexylcarbodiimid (4,25 g, 20,65 m.mol) opløst i 20 ml tør acetone tilsattes, og det hele omrørtes ved 23° i 2 timer. Di-cyclohexylurinstof frafiltreredes, filterkagen vaskedes med 10 ml tør acetone, og filtratet og vaskevæskerne kombineredes.

15 B. Acvlerinq

Poly(trimethylsilyl) kanamycin A fremstillet i overensstemmelse med den generelle fremgangsmåde i eksempel 15 ud fra 10,0 g (20,639 m.mol) kanamycin A opløstes 1 100 ml tør acetone. Opløsningen køledes til 0-5°, 3,7 ml deionlseret vand tilsattes, og opløsningen omrørtes ved 0-5° 1 30 20 minutter under moderat vakuum.

Til denne opløsning sattes den under trin A fremstillede opløsning af det di-Cbz-blokerede acyleringsmiddel, og blandingen omrørtes ved 0-5° 1 30 minutter. Blandingen fortyndedes med vand, pH indstilledes til 2,2, og acetonen blev fjernet 1 vakuum. Den vandige opløsning reducere-25 des ved den generelle fremgangsmåde i eksempel 22 og flltreredes dernest gennem "Dicalite". Kromatografi viste 40-45% amikacin, ca. 10% BB-K29, spormængder af BB-K6, ca. 30% kanamycin A og en ringe mængde polyacyl-forbindel ser.

30 Eksempel 18

Fremstilling af Dolv(tr1methvlsil»l) kanamycin A uadec. anvendelse_af mOS med Imldazol som katalysator

Kanamycin A (11 g, 22,7 m.mol) og 100 mg imidazol opvarmedes til reflux i 100 ml sigtetørret acetonitril under en nitrogenstrøm. HMDS 35 (1B,48 g, 114,5 m.mol, 5 mol pr. mol kanamycin A tilsattes 1 løbet af 30 minutter, og blandingen refluxedes i 20 timer. Fuldstændig opløsning Indtraf på ca. 2¼ time. Opløsningen afkøledes til 23°, og opløsningsmidlet fjernedes 1 vakuum og efterlod 21,6 g poly(trimethylsilyl) kanamycin A som en skumagtig remanens (93,1% udbytte beregnet som kanamycin BNSDOCIDkOK 172543B > 36 DK PR 172543 B1 (s1lyl)n).

Eksempel 1.9

Fremstilling af l-N-rL-M-T-amlno-o-hydroxybutyryll kanamycln B 5 1BB-K26) ved acrlerlng af polyftrlmethvlsilyll kanamve1n 8 med SAE

A. Fremstilling af polv(trinethvlsilyl) kanawvdn B under anvendelse af HMDS med TMCS-katalvsator

Kanamydn B (25 g, 51,7 m.mol) 1 250 ml slgtetørret acetonitril op-10 varmedes til reflux under en nitrogenstrem. HHOS (62,3 g, 385,81 m.mol, 7,5 mol pr. mol kanalycin B) tilsattes 1 lebet af 30 minutter efterfulgt af 1 ml TMCS som katalysator. Blandingen refluxedes 1 21 timer med fuld-stend1g opløsning efter 1 time. Opløsningsmidlet fjernedes 1 vakuum ved 60°, og den olieagtlge remanens blev holdt ved 60® under højvakuum 1 3 15 timer. Oer opnåedes 53,0 g poly(trimethylsllyl) kanamycln B (85,2% udbytte beregnet som kanamydn B (sllyl)jg).

B. Åcvlerlng

Det under trin A ovenfor fremstillede poly(trlmethylsilyl) 20 kanamydn B (53,0 g) opløstes 1 500 ml tør acetone ved 0-5°, methanol (20,9 ml) tilsattas, og blandingen omrørtes i vakuum 1 30 minutter ved 0-5°. En opløsning af SAE (18,1 g, 51,67 m.mol) 1 200 ml forkølet acetone tilsattes 1 løbet af mindre end 1 minut, og blandingen omrørtes 1 30 minutter ved 0-5°. Blandingen oparbejdedes i overensstemmelse med den 25 generelle fremgangsmåde 1 eksempel 11 og blev så fyldt på en søjle af "CG-50" (NH^+) (8 x 120 cm). Den elueredes med en NH^OH gradient fra 0,6 n t11 3 n. Der opnåedes 38% BB-K26, 5% af det tilsvarende 6'-N-acylerede kanamycln B (BB-K22), 10% af det tilsvarende 3-N-acylerede kanamycln B (BB-K46) 14,63% kanamycln 8 og en Ulle mengde polyacyleret kanamydn B.

30

Eksempel 20

Fremstilling af polv(trlmethvlsilyl) kanamvdn A under anvendelse af HHOS med kanamvdn A sulfat som katalysator

Kanamycln A (19,5 g, 40,246 m.mol) og kanamydn A sulfat (0,5 g, 35 0,858 m.mol) [ialt - 20,0 g, 41,0 m.mol] 1 200 ml slgtetørret acetonitril blev bragt til reflux. HMDS (60,3 ml, 287,7 m.mol, 7 mol pr. mol kanamycln A) blev langsomt tilsat, og blandingen refluxedes 1 28 timer.

Den blev dernsst inddampet til tørhed 1 en rotations Inddamper og tørredes under damplnjektorvakuum. Der opnåedes 47,5 g poly(trlmethylsllyl)

-Nsnomn «ίίκ 17?S4:?R

37 DK PR 172543 B1

kanamycln A som en bleggul olie (95,82% udbytte beregnet som kanamycin A

(silyl)10)·

Eksempel 21 5 Fremstilling af amikacin ved acvlerlng af ooly(tr1roethylsilvl1 kanamycln A med N-trlfluoracetvl-bl okeret AHBA N-hvdroxysucc1n1m1dester A. Fremstilling af N-trifluoracetyl AHBA og omdannelse til dens N-

Mn>xysutt1n.1iWestgr 10 Til en suspension af AHBA (5,0 g, 42 m.mol) i 100 ml THF sattes trifluoreddikesyreanhydrid (40g, 191 m.mol) under omrøring i løbet af 10 minutter. Opløsningen omrørtes 1 18 timer ved 23* og koncentre-redes derncst til tørhed 1 vakuum ved 50°. Remanensen opløstes 1 100 ml vandig methanol (1:1) og omrørtes 1 1 time. Den koncentreredes derncst 15 til tørhed 1 vakuum og genopløstes 1 50 ml H^O. Den vandige opløsning ekstraheredes med 3 x 50 ml portioner af MIBK, og ekstrakten koncentreredes efter tørring over Na2S04 til en olie. Opløsningsmiddelspor fjernedes ved tilsctnlng og afdestillation af 4 ml vand. Ved henstand cndre-des olien til et voksagtlgt krystallinsk faststof (2,5 g, 28% udbytte).

20 N-trifluoracetyl AHBA (2,4 g, 11,3 m.mol) opløstes i 50 ml tør acetone, og N-hydroxysucc1n1m1d (1,30 g, 11,31 m.mol) sattes til opløsningen. En opløsning af d1cyc1ohexylcarbod11mid (2,33 g) i 20 ml tør acetone til sattes langsomt. Reaktionsblandingen omrørtes i 2 timer ved 23®, og det udfcldede dicyclohexyluri nstof fjernedes ved filtrering og 25 vaskedes med en lille portion acetone. Kombineret filtrat og vaskevcsker (en opløsning af N-hydroxysucc1n1m1desteren af N-trifluoracetyl AHBA) anvendtes under det neste trin uden isolering.

B. Acvlerlng 30 Til en opløsning af poly(trlmethylsilyl) kanamycln A fremstillet som i eksempel 20.(11,31 m.mol) i 54 ml acetone sattes 2,0 ml (113,4 m.mol) vand, og blandingen omrørtes i vakuum ved 0-5* i 30 minutter. N-hydroxysucctnlmidesteren af N-trifluoracetyl AHBA fremstillet under trin A ovenfor (11,31 m.mol) sattes til blandingen, og den blev derefter 35 holdt pi 5° i 1 time. pH-vcrd1en Indstilledes si til ca. 2,0 med 20%

HgSO^, blandingen omrørtes i 30 minutter, og pH-vcrdien hcvedes si til ca. 6,0 med NH^OH. Blandingen blev derefter Inddampet til tørhed 1 en rotationsInddamper til frembringelse af 14,4 g af et klcbrigt off-white fast stof. Det faste stof opløstes 1 100 ml vand, pH-vcrdien hcvedes fra BNSDOC1D: <DK 172543B > 38 DK PR 172543 B1 5,5 til 11,0 med 10 n NH^OH, og opløsningen opvarmedes 1 et oliebad ved 70· 1 1 time. pH (9,5) smnkedes til 7,0 med HC1, opløsningen finfiltre· redes til fjernelse af en lille mngde uopløsellge bestanddele, og filteret vaskedes med vand. Kombineret filtrat og vaskevssker (188 ml) til-5 førtes en "CG-50" (NH^+J søjle (8 x 90 cm), vaskedes med 2 liter vand og elueredes med en NH^OH gradient (0,6n-l,0n-koncentreret). Oer opniedes 28,9% amikacin, 5,OX BB-K6, 5,7% BB-K29, 43,8% kanamydn A, 3,25% polyacyl forbi ndel ser plus 14,3% af et ukendt materiale, som var 1 den første fraktion fra søjlen.

10

Eksempel 22

Fremstilling af amikacin ved acvlerlno af polvftrlmethvlsllvl) kanamvdn A med t-butyloxycarbonvl-bl okeret AHBA N-hvdroxvsuccInimidester 15 A. Fremstilling af t-BOC AHBA og omdannelse til dens N-hydroxvsucclnlmldester

En opløsning af AHBA (5,0 g, 42 m.mol) i 100 ml vand og 20 ml acetone Indstilledes til pH 10 med 10 n NaOH. I løbet af 3-4 minutter tilsattes 11,6 g (53 m.mol) dl-t-butyldicarbonat, og opløsningen omrørtes 1 20 35 minutter, Idet pH-vcrd1en blev holdt pi 10 ved periodisk tllsmtnlng af 10 n NaOH. Acetonen fjernedes 1 vakuum, og den vandige fase vaskedes med 40 ml ethylacetat. pH-værdien af den vandige opløsning scnkedes til 2,0 med 3 n HCl, og opløsningen ekstraheredes dernæst med 3 x 30 ml MIBK. Oe kombinerede MIBK ekstrakter tørredes over NagSO^ og koncentre-25 redes t11 en klar olieagtig remanens (8,2 g, 89X).

-t-BOC-AHBA (4,25 g, 19,4 m.mol) opløstes 1 50 ml acetone, og N-hydroxysucdnlmid (2,23 g, 19,4 m.mol) tilsattes. En opløsning af di-cyclohexylcarbodlimld (4,00 g, 19,4 m.mol) 1 20 ml acetone tilsattes langsomt, og blandingen omrørtes 1 2 timer ved 23°. Det udfoldede di-30 cyclohexylurinstof fjernedes ved filtrering og vaskedes med en lille mængde acetone. Kombineret filtrat og vaskevæsker (en opløsning af N-hydroxysuccinlmldesteren af -t-BOC-AHBA) anvendtes ved det næste trin uden Isolering.

35 B. Acylerlng

Til en opløsning af poly(trimethylsilyl) kanamydn A fremstillet som i eksempel 20 (41,28 m.mol) i 94 ml acetone sattes 3,5 ml (194 m.mol) vand, og blandingen omrørtes 1 vakuum ved 0-5° i 30 minutter. N-hydroxysuccinlmidesteren af -t-BOC-AHBA fremstillet under trin A ovenfor BNSDOCID: <DK 172S43B > 39 DK PR 172543 B1 (19,4 m.mol) tilsattes, og blandingen henstod ved 5° 1 1 time. Vand (200 ml) tllsattes, og pH (7,0) scnkedes t11 2,0 med 20% HgSO^. Efter 30 minutters omrøring hcvedes pH til ca. 6,0 med NH^OH, og blandingen inddampedes til tørhed i vakuum til frembringelse af 36,3 g af en gylden olie.

6 Olien opløstes i 200 ml trifluoreddikesyre, henstod i 15 minutter og Inddampedes til tørhed 1 en rotationsinddamper. Olien vaskedes med vand, og vandet flash-afdampedes. Koncentreret NH^OH tilsattes til pH 6,0 og flash-afdampedes. Oet resulterende faste stof opløstes 1 vand, filtreredes, og filteret vaskedes med vand. Kombineret filtrat og vaskevzsker 10 (259 ml) blev fyldt på en aCG-50" (NH4+) søjle (8 x 92 cm), vasket med 4 liter vand og elueret med en NH^OH gradient (0,6n-l,0n-koncentreret).

Oer opnåedes 40,32% amlkadn, 4,58% BB-K6, 8,32% BB-K29, 30,50% kanamycin A og 7,43% polyacylforbindel ser.

15 Eksempel 23

Oen generelle fremgangsmåde i eksempel 10 gentages, bortset fra at det deri anvendte kanamycin A erstattes med en zkvimolcr msngde af henholdsvis: 3'-deoxykanamycin A, 20 6'-N-methylkanamycin A, 3'-deoxy-6'-N-methylkanamycin A kanamycin B, 6'-N-methylkanamycin B, tobramycin (3'-deoxykanamyc1n B), 25 6'-N-methyltobramycIn, amlnoglycosld NK-1001, 3'-deoxy-am1noglycos1d NK-1001, 6'-N-methyl-amlnoglycosld NK-1001, 3'-deoxy-6'-N-methyl-amlnoglycosld NK-1001, 30 gentamicin A, 3'-deoxygentam1c1n A, gentamicin 8, 3'-deoxygentamlcin B, 6'-N-methylgentam1c1n B, 35 3'-deoxy-6'-N-methylgentamlcIn B, gentamicin 8j, 3'-deoxygentamidn Bj, 6'-N-methylgentamicin Bj, 3' -deoxy-6'-N-methylgentamicin Bj, BNSDOCID: <DK 172S43B> 40 DK PR 172543 B1 gentamicin X2, seldomycln faktor 1 og seldomydn faktor 2, 5 og der fremstilles derved henholdsvis: 1-N-IL-(-)-y-amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxykanamyc1n A, 1-Ν-[L-(-)-y-amlno-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamycin A, 1-N-[1-(-)-7-amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-6'-H-methyl-kanamycin A, 10 l-N-[L-(-)-y-am1no-a-hydroxybutyryl]kanamyc1n B, 1-N-[L-(-)-y-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylkanamyciη B, 1-N-[L-(-)-y-amlno-a-hydroxybutyryl]tobramycin, l-N-lL-i-J-y-amlno-a-hydroxybutyryll-e'-N-methyltobramycIn, l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl] am1nog1yco$1d NK-1001, 15 l-N-[L-(-)-7-am1no-a-am1no-a-hydroxybutyry1]-3'-deoxy-am1noglycosid NK- 1001, 1 -N-[L- (-) -γ-amlno-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl -aminoglycosld NK-1001, 1-N- [L- (-) -y-amlno-a-hydroxybutyryl 1 -3' -deoxy-6' -N-methyl -ami noglycosld NK 1001, 20 l-N-[L-(-)-7-am1no-e-hydroxybutyryl]gentam1c1n A, l-N-[L-(-)-7-am1no-e-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentam1c1n A, 1-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]gentam1c1η B, 1-N—[L-(-)-7-amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentamlcln B, l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgenta«1c1n B, 25 1 -N- [L- (-) -7-ami no-a-hydroxybutyryl ] -3' -deoxy-6' -N-methyl gentamicin Bj, l-N-[l-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]gentam1c1n 8j, 1-N-[L- (-)-7-amino-a-hydroxybutyryl]-3'-deoxygentamlc1n B j, l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgentam1c1n Bj, 1 -N- [ L- (-) -7- ami no -a- hydroxybutyryl) -3' -deoxy-6' -N-methyl gentamlcl n Bj, 30 l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]gentamic1n X^, l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl] seldomycln faktor 1 og l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl] seldomycln faktor 2.

Omsmtnlng af hvert af de ovenfor anførte am1nog1ycos1d-udgangsmate-35 ri aler på samme måde med L-(-)-0-benzyloxycarbonylaml no-a- hydroxypropionsyre N-hydroxy-5-norbornen-2,3-d1carbox1m1dester 1 stedet for L-(-)-7-benzyloxycarbonylamino-a-hydroxysmørsyre N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1m1desteren frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-β-amino-a-hydroxyprop1onyl]aminoglycos i der.

BNSDOCID: <DK <79S43B > 41 DK PR 172543 B1

Omsætning af hvert af de ovenfor anførte aminoglycosid-udgangsmate-rialer pi samme måde med L-(-)-6-benzyloxycarbonylamino-or-hydroxy-valerianesyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3*dicarboximidester 1 stedet for L-(-)-7-benzyloxycarbonylamino-a-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-5-norbornen-5 2,3-dicarboximidesteren frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-i-amino-ar-hydroxyvaleryl]ami noglycos i der.

Eksempel 24

Den generelle fremgangsmåde 1 eksempel 10 gentages, bortset fra at 10 den deri anvendte L-(-)-7-benzyloxycarbonylanino-tt-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximide$ter erstattes med henholdsvis L-(-)-0-benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyprop1onsyre-N-hydroxy-5-norbornen- 2,3-dicarboximidester og L-(-)-S-benzyloxycarbonylam1no-a-hydroxy-valer1anesyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3*dicarboximidester, og der frem-15 stilles derved henholdsvis l-N-[L-(-)-0-amino-e-hydroxypropionylJkanamycin A og 1-N-[L-(-)-6-amino-a-hydroxyvalerylJkanamycin A.

Eksempel 25 20 Den generelle fremgangsmåde i eksempel 1 gentages, bortset fra at det deri anvendte 6'-N-carbobenzyloxykanamyc1n A erstattes med en ækvi-molær mængde af henholdsvis 6'-N-carbobenzyloxy-3',4'-dideoxykanamycin A, 25 6'-N-carbobenzyloxy-3',4'-dideoxy-6'-N-methylkanamycin A, 2',6'-di-(N-carbobenzy1oxy)-3',4'-dideoxykanamycin B, 2', 6'-d i -(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxy-6'-M-methy1kanamyciη B, 2',6'-di-(N-carbobenzyloxy)gentamicin Cj, 2',6'-di-(N-carbobenzyloxy)gentam1cin Cja, 30 2',6'-di-(N-carbobenzy1oxy)-6'-N-methylgentamic1n Cja, 2' ,6'-di-(N-carbobenzyloxy)gentamicin C^, 2',6'-di-(N-carboberzyloxy)-6,-N-methylgentamicin og 2',6'-di -(N-carbobenzyloxy)ami noglycosid XK-62-2, og der fremstilles derved henholdsvis 35 l*N*[l-(-)-7*ai»1no-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxykanafnycin A, ]-N-ll-(-)-7-amino-«-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxy-6'-N-methylkanamycin A, l-N-[l-(-)-7-amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxykanamycin B, 1 -N- (L- (-)-7-araino-o-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxy-6'-N-methylkanamycin BNSDOCID: <DK 172543B > 42 DK PR 172543 B1 B, 1-N-[L-(-)-7-amino-o-hydroxybutyryl]gentamic1n Cj, 1-N-IL-(-)-γ-amino-o-hydroxybutyrylJgentamici n Cj , 1 -N-(L-(-)-γ-am1 no-o-hydroxybutyryl]-6' -N-methylgentamicin Cja, 5 l-N-[l-(-)-Y-am1no-e-hydroxybutyryl]gentamicin C2, l-N-[l-(-)-T-am1no-o-hydroxybutyryl]-6'-N-methylgentam1cin C2 og 1-N-[L-(-)-γ-amino-o-hydroxybutyryl]amlnoglycosld XK-62-2.

Omsætning af hvert af de ovenfor anførte amlnoglycosid-udgangs-10 materialer på samme måde med L-(-)-0-benzy1oxycarbonylam1no-a-hydroxy-propionsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidester i stedet for L-(-)-7-benzyloxycarbony1am1no-o-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-S-norbornen- 2.3- dicarboxlmidesteren frembringer de tilsvarende l-N-[t-(-)-/J-am1no-a-hydroxypropionyl]amlnoglycosider.

15 Omsxtnlng af hvert af de ovenfor anførte amlnoglycosld-udgangs materialer på samme måde med L-(-)-i-benzyloxycarbonylam1no-o-hydroxy-valer1anesyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1midester 1 stedet for L-(-)-7-benzyloxycarbony1am1no-a-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-5-norbomen- 2.3- dicarboximidesteren frembringer de tilsvarende l-N-[l-(-)-6-amino-a-20 hydroxyvaleryl]amlnoglycosider.

Eksempel 26 2',6'-di-{N-trifluoracetyl)s1som1c1n opslcmmes i tør acetonltrll og opvarmes til reflux under nltrogenatmosfsre. Hexamethyldisilazan [4 mol 25 pr. mol 2',6'-di-(N-trifluoracetyl)s1som1cin] tilsettes i løbet af 30 minutter, og den opnåede opløsning refluxes 1 24 timer. Fjernelse af opløsningsmidlet 1 vakuum giver fast polysilyleret 2' ,6'-di-(N-trifluor-acetyl)sisomic1n.

Det polysllylerede 2',6'-d1-(N-trifluoracetyl)s1som1c1n acyleres 30 med N-hydroxysuccinimldesteren af L-(-)-7-trifluoracetylam1no-o-hydroxy-smørsyre 1 overensstemmelse med den generelle fremgangsmåde 1 eksempel 21B og oparbejdes som 1 eksempel 218 til frembringelse af 1-Ν-[ί-(-)-γ-amino-β-hydroxybutyryl]si somic In.

35 EKseinpgl 27

Den generelle fremgangsmåde i eksempel 26 gentages, bortset fra at det deri anvendte 2',6'-d1-(N-tr1fluoracetyl)sisom1c1n erstattes med en ekvimolær mængde af henholdsvis -r.SDOCID: <DK 172543B> DK PR 172543 B1 43 2',6'-di -(N-trifluoracetyl)-5-episisomicin, 2',6'-di-(N-trifluoracetyl)-6'-N-methylsisomicin, 2',6'-di -(N-trifluoracetyl)-6'-N-methyl-5-ep1s1somicin, 2' ,6'-di -(M-tri fluoracetyl)verdamicin, 5 2', 6' - d i - (N- tri f 1 uoracetyl) -5-epi verdami c i n, 2',6'-di -(N-tri fl uoracetyl)-6'-N-methylverdaini ci n, 2',6'-di-(N-trifluoracetyl)-6'-N-methyl-5-ep1verdamicin og 2',6'-di -(N-trifluoracetyl)am1noglycosid 66-40D, 10 og der derved fremstilles henholdsvis l-N-(L-(-)-Y-amino-o-hydroxybutyryl]-5-episisomicin, 1-N-[L-(-)-γ-amino-e-hydroxybutyryl]-6'-N-methylsi somicin, 1-N-(L-(-)-γ-amino-or-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-5-epi si somicln, 15 l-N-[l-(-)-y-amino-a-hydroxybutyryl]verdamic1n, I-N-(L-(-)-γ-amino-a-hydroxybutyryl]-5-epiverdamlc1n, 1-N-[L-(-)-γ-amino-e-hydroxybutyryl]-6'-N-methylverdamicin, l-N-[L-(-)-t-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl-5-epiverdamicin og 1-N-[L-(-)-γ-ami no-a-hydroxybutyryl]am i noglycos i d 66-40D.

20

Omsstning af hver af de ovenfor anførte 2',6'-di-(N-trif1uor-acetyl)amlnoglycosid-udgangsmater1aler på samme måde med N-hydroxy-succlnlmidesteren af L-(-)-^-tr1fluoracetylaniino-a-hydroxypropionsyre i stedet for N-hydroxysucc1n1m1desteren af L-(-)-t-trifluoracetylam1no-a-25 hydroxysmørsyre frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-/J-amino-a-hydroxy-propionyl)aminoglycosider.

Omsxtning af hvert af de ovenfor anførte 2',6'-di-(N-trifluor-acetyl)am1noglycos1d-udgangsmaterialer på samme måde med N-hydroxy-sucdnlmidesteren af l-(-)-6-tr1fluoracetylamino-e-hydroxyvalerianesyre 30 i stedet for N-hydroxysucc1n1midesteren af l-(-)-7-trifluoracetylamino-o-hydroxysmørsyre frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-6-am1no-o-hydroxyvaleryl]ami noglycos ider.

gtefflQBgl-Zfl 35 Den generelle fremgangsmåde fra eksempel 26 gentages, bortset fra at N-hydroxysuccinimidesteren af L-(-)-y-trifluoracetylamino-e-hydroxy-smørsyre erstattes med en ækvimolsr mzngde af N-hydroxysuccinimidestrene af henholdsvis 8NSDOCID: <DK 172543B> 44 DK PR 172543 B1 L-(-)-Ø-trlfluoracetylam1no-a-hydroxyprop1onsyre og L-(-)-4-trif1uoracetylam1no-a-hydroxyvaler1anesyre, og der fremstilles derved henholdsvis 5 l-N-[L-(-)-0-am1no-a-hydroxypropionyl]s1som1c1n og 1-N-[L-(-)-4-amlno-tt-hydroxyvaleryl]s1som1c1n.

Eksempel 29 10 Den generelle fremgangsmide fra eksempel 1 gentages, bortset fra at den deri anvendte 6'-N-carbobenzyloxykanamyc1n A erstattes med en mkvimolsr mcngde af henholdsvis 3-N-carbobenzyloxyribostamycln, 15 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxyri bostamydn, 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methyl rlbostamydn, 3*N-carbobenzyloxy-6'-H-methyl-3'-deoxyr1bostamyc1n, 3-N-carbobenzyloxyneomyc1n B, 3-N-c arbobenzyloxy-3'-deoxyneomyc1η B, 20 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methylneomyc1n B, 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyneomyc1 π B, 3-N-carbobenzyloxyneomycIn C, 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxyneomyc1n C, 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methylneomycin C, 25 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyneomydn C, 3-N-c arbobenzyloxyxylos tas1n, 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxyxylostasln, 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methylxylostasln, 3-N-carbobenzyloxy-6'-N-methyl-3'-deoxyxylostasln, 30 3-N-carbobenzyloxyparomomydn I, 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxyparomomyc1η I, 2',3-di-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dldeoxyparomomycin I, 3-N-carbobenzyloxyparomomyc1n II, 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxyparomomydn II, 35 2\3-di-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyparomomydn II, 3-N-carbobenzyloxy-amlnoglycosld 2230-C, 3-N-carbobenzyloxy-3'-deoxy-am1noglycos1d 2230-C, 3-N-carbobenzyloxyl ivldomydn A og 3-N-carbobenzyloxylivldomycin B, . NSDOCID: <DK 1725438 > 45 DK PR 172543 B1 og der fremstilles derved henholdsvis 1 -N-[l-(-)-7-amino-a-hydroxybutyryl]ribostamyc1n, 5 l-N-[L-(-)-7-amino-e-hydroxybutyry1]-3'-deoxyr1bostamycin, 1-N-[L-{-)-7-amt no-o-hydroxybutyryl]*6'-N-methyl ribostamycin, l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-*ethyl-3'-deoxyribostamycin, 1 -N-[L-(-)-7-ami no-o-hydroxybutyry1]neomyc i η B, l-N-[l-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl] -3'-deoxyneomyciη B, 10 l-N-[L-(-)-7-am1no-a-hydroxybutyryl]-6'-N-methylneomyc1n B, 1-N-[l-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyry1]-6'-N-methyl-3'-deoxyneomycln B, l-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]neomycin c, 1-N-[L-(-)-7-ami no-o-hydroxybutyrylJ-3'-deoxyneomycin C, 1-N-[L-(-)-7-amlno-o-hydroxybutyryl] -6'-N-methyl neomyc i n C, 15 l-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]-6'-N-methyl -3'-deoxyneomycin C, 1-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]xylostas1n, 1-N-[L-(-)-7-amiηο-α-hydroxybutyrylJ-3'-deoxyxylostasln, 1-N-[L-(-)-7-amfno-o-hydroxybutyrylJ-6'-N-methylxylostasln, l-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl1-6'-N-methyl-3'-deoxyxylostasin, 20 l-N-[L-(-)-y-am1no-a-hydroxybutyryl]paroinomyc1n I, 1 -N-[L-(-)-7-amlno-o-hydroxybutyryl]-3'-deoxyparomomycin I, l-N-[L-(-)-7-amim>-e-hydroxybutyryl]-3\4'-dideoxyparomomyc1n I, 1-N-[L-(-)-7-amlno-o-hydroxybutyryl]paromomycin II, 1-N-[L-(-)-7-amino-o-hydroxybutyryl]-3'-deoxyparomomyci η 11, 25 l-N-[L-(-)-y-amtno-a-hydroxybutyry1]-3',4'-dideoxyparomomycin II, 1-N-[L-(-)-7-amtno-o-hydroxybutyryl]am1noglycos1d 2230-C, 1-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]-3'-deoxy-aminoglycosid 2230-C, l-N-[L-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]11vidomycin A og I-N-[l-(-)-7-am1no-o-hydroxybutyryl]11v1domyc1n B.

30

Omsztning af hvert af de ovenfor anførte carbobenzyloxy-beskyttede amlnoglycosid-udgangsmaterlaler på samme måde med L-(-)-0-benzyloxy-carbonylam1no-a-hydroxypropionsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox-Imidester i stedet for L-(-)-y-benzy1oxycarbony1am1no-o-hydroxysmørsyre-35 N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1m1desteren frembringer de tilsvarende l-N-[l-(-)-0-amtno-e-hydroxyprop1onyl]amt noglycos1der.

Omsztning af hvert af de ovenfor anførte carbobenzyloxybeskyttede amlnoglycosid-udgangsmaterialer på samme måde med L-(-)-i-benzyloxycar-bonylamino-o-hydroxyvaler1anesyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3- BNSDOCID: <DK 1725438» 46 DK PR 172543 B1 dlcarboxlmldester 1 stedet for L-(-)-T-benzyloxycarbonylamino-o-hydroxysm#rsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1nudesteren frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-6-araino-ot-hydroxyvaleryl]amino-glycosider.

5

Eksempel 30

Den generelle fremgangsmåde fra eksempel 1 gentages, bortset fra at 6'-N-carbobenzy1oxykanamyc1n A, som anvendes deri, erstattes med en ækvlmolær mængde af henholdsvis 10 2',3,6'-tr1-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyri bostamyc1n, 2',3,6'-tri-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-dideoxyneoniycin B, 2',3,6'-tri-(M-carbobenzyloxy)-3',4#-dideoxyneomyc1n C og 2',3,6'-tri-(N-carbobenzyloxy)-3',4'-d1deoxylostas1n, 15 og der fremstilles derved henholdsvis 1-N-[L-(-J-y-amlno-a-hydroxybutyryl]-3',4-dideoxyribostamycin, 1 -N- [L - (-) -γ-aalno-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyneomyclη B, 20 l-N-[L-(-)-γ-amino-a-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyneomycln C og l-N-[L-(-)-7-am1no-e-hydroxybutyryl]-3',4'-dideoxyxy1ostasin.

Omsætning af hvert af de ovenfor anførte 2',3,6'-tri-(N-carbobenzyl oxy) -beskyttede am1noglycos1d-udgangsmater1a1er på samme måde med 25 L-(-)-^-benzyloxycarbonylamino-a-hydroxyproplonsyre-N-hydroxy-5- norbornen-2,3-dicarbox1midester 1 stedet for 1-(-)-γ-benzyloxy-carbonyl-am1no-a-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-d1carbox1in1desteren frembringer de tilsvarende l-N-[L-(-)-0-am1no-ft-hydroxyprop1onyl]am1no-glycosider.

30 Omsætning af hvert af de ovenfor anførte 2',3,6'-tri-(N-carbo-benzyloxy)-beskyttede amlnoglycosid-udgangsmaterialer på samme måde med L-(-)-i-benzyloxycarbonylami no-a-hydroxyvaler1anesyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-d1carbox1midester 1 stedet for L-(-)-y-benzyloxy-carbonylam1no-e-hydroxysmørsyre-N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1mid-35 esteren frembringer de tilsvarende l-N-(L-(-)-£-amino-e-hydroxy-valeryl]am1noglycos1der.

nwcnnnri 47 DK PR 172543 B1

Eksempel 31

Fremstilling af l-N-fL-M-v-amlno-tt-hydroxybutyryll^'-deQxv-e'-N-methvlkanamycin A (BB-K3111 ved acylering af polvsilyleret 6'-N-benzv1- 3-M-carbobenzv1oxy-4'-deoxy-6'N-niethy1kanamycin A 5 A. 6'-N-carbobenzvloxy-4'-deoxvkanamvcln A oq 3,6'-di-N-carbobenzvloxy-4f-deoxvkanamvcin A Til en omrfrt opløsning af 10,4 g (22,2 mmol) 4'-deoxykanamycln A og 27,5 g (111 mol) Ni(0Ac)2-4H20 1 450 ml ONSO sattes 7,0 g (22,4 10 mmol) af N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximidesteren af benzyloxy-myresyre (Cbz-ONB) ved ca. 10®C, og der omrørtes natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen koncentreredes 1 vakuum, hvorved man fik en bl4, olieagtig remanens, som kromatograferedes over "CG-50" harpiks (ΝΗ4*, 500 ml), idet der elueredes med fortyndet ammoniak-vand. De 15 ninhydrin-positive fraktioner opsamlet fra spildet (skyldtes en udsivning af 3,6'di-N-Cbz-derlvatet) og eluatet med 0,1 n ammoniak kombineredes og Inddampedes 1 vakuum. Remanensen rekromatograferedes over "Diaion HR-10" harpiks (400 ml) under anvendelse af vandig methanol som elue-rlngsmlddel til adskillelse af mono- og di-Cbz-derivaterne. 6'-N-Cbz-20 derivatet elueret med 30% vandig methanol krystalliseredes fra HgO-ethanol, hvorved man fik 4,73 g (35%) farveløse krystaller. Smp. 232-233®C. IR(KBr): 1700, 1540, 1275, 1135, 1075, 1040, 770, 750, 695 cm'1.

Analyse beregnet for CggH^N^O^.EtOH.^O: C, 51,13; H, 7,51; N, 8,52.

25 Fundet: C, 51,03; H, 7,31; N, 8,42.

3,6'-di-N-Cbz-der1vatet, elueret med 90% vandig methanol, krystalliseredes fra HgO-methanol, hvorved man fik 3,08 g (18,4%) nile, smp.

220-221«C, IR(KBr): 1690, 1545, 1260, 1135, 1075, 1045, 780, 750, 700 30 cm"1.

Analyse beregnet for C34H48N4°i4*H20: C, 54,10; H, 6,68; N, 7,42.

Fundet: C, 54,10; H, 6,69; N, 7,07.

35 B. l.S.a’-tri-N-acetyl-B'-N-carbobenzvlPXV-l'-deoxy-kananycin A

Til en omrørt suspension af 4,70 g (7,8 mmol) 3,6'-di-NCbz-4'-deoxykanamycin A i 240 ml methanol sattes 29 ml (307 mmol) eddikesyre-anhydrid. Blandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur og Inddampedes i vakuum, hvorved man fik 5,68 g (100%) af det i overskriften an- BNSDOCID: <OK 172S43B > 48 DK PR 172543 B1 førte tr1-N-acetyl-derivat, smp. 290-291°C (dekomp.), IR(KBr): 1700, 1650, 1550, 1380, 1260, 1140, 1080, 1035, 745, 695 cm'1.

Analyse beregnet for γ·Η,0: C, 51,47; H, 6,75; N. 7,50.

5 Fundet: C, 51,66; H, 7,13; N, 7,06.

C. 1.3.3"-tri-N-acetrl-4'-deoxykanamvcin A

En opløsning af 5,5 g (7,6 mmol) 1,3,3"-tri-N-acetyl-6'-N-carbobenzy1oxy-4'-deoxykanamyc1n A i 80 ml 50% vandig ethanol hydrogene-10 redes i 18 timer med 1 g 10% Pd-C ved atmosfcrlsk tryk og stuetemperatur. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, og filtratet Inddampedes under reduceret tryk, hvorved man fik 4,49 g (100%) af den 1 overskriften anførte forbindelse. En analytisk prøve fremstilledes ved søjlekromatografi på "Amberlite IRA-410" harpiks (OH') og krystallisation fra 15 H20-methanol, smp. 280-283°C, IR(KBr): 1650, 1550, 1380, 1135, 1080, 1035 cm'1.

Analyse beregnet for Cj^H^NfO^-NeOH.fcHgO: C, 47,24; H, 7,45; N, 8,81.

Fundet: C, 47,61; H, 7,45; N, 8,58.

20

0. 1.3.3"-tri-N-acetyl-6'-N-benzyl-4*-deoxykanamvcin A

En opløsning af 4,39 g (7,39 mol) 1,3,3"-tri-N-acetyl-4'-deoxykanamycln A og 5 ml benzaldehyd i 60 ml vandig methanol opvarmedes til 60°C 1 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes, behandledes med 25 4,0 g (106 mol) NaBH^, omrørtes 1 2 dage ved stuetemperatur og Inddampedes 1 vakuum. Den olleagtlge remanens kromatograferedes over "HP-10" harpiks (150 ml) under anvendelse af vandig methanol som eluerlngsmld-del, hvorved man fik 3,86 g (74%) af den 1 overskriften anførte forbindelse og 1,70 g fugtigt udgangsmateriale, som recirkuleredes 1 den samme 30 proces, hvorved man fik yderligere 1,32 g (26%) af den 1 overskriften anførte forbindelse. En analytisk prøve fremstilledes ved rekromatografi pi "HP-10” harpiks og krystallisation fra HgO-ethanol, smp. >300*C, IR(KBr): 3280, 1640, 1555, 1380, 1135, 1080, 1040, 750, 700 cm'1.

Analyse beregnet for ; 35 C, 54,38; H, 7,07; N, 8,18.

Fundet: C, 54,01; H. 7,16; N. 7,87.

E. l.3,3"-tr1-N-acetvl-6,-N-benzyl-4>-deoxy-6,-N-niethylkanamyc1n A Til en omrørt opløsning af 3,86 g (5,6 mmol) l,3,3"-tri-N-acetyl- aNsnoon·<·ηκ i7?wsr» 49 DK PR 172543 B1 6'-N-benzyl-4'-deoxykanamycin A og 5,6 ml 37¾ vandig HCHO i 85 ml 95X methanol sattes 850 mg (13,5 mmol) NaBH^CN. Blandingen omrørtes i 4 ti* mer ved stuetemperatur og inddampedes til tørhed. Remanensen kromatogra-feredes over "HP-10" harpiks under anvendelse af vandig methanol som 5 eluerlngsmiddel, hvorved man fik 3,88 g (100¾) af den i overskriften anførte forbindelse. En analytisk prøve opnåedes ved krystallisation fra H20-ethanol, smp. 295-297«C (dekomp.). IR(KBr): 3280, 1645, 1500, 1375, 1145, 1075, 1040, 740, 700 cm'1. NMRfDgO): S i ppm fra DSS, 2,27(3H,s,N-CH3), 7,34(5H,s,Ar-H).

10 Analyse beregnet for ε^Η^Ν^Ο^.^Ο: C, 54,30; H, 7,26; N, 7,92.

Fundet: C, 54,30; H, 7,33; N, 7,64.

F. S'-N-benzvl-A'-deoxy-S'-N-methvlkanamvcIn A (BB-K312) 15 En blanding af 5,18 g (7,42 mmol) l,3,3"-tri-N-acetyl-6'-N-benzyl-4'-deoxy-6'-N-methylkanamycin A og 15 g NaOH i 80 ml Η?0 til bagesval edes natten over. Blandingen afkøledes, neutraliseredes med kone. HCl og filtreredes for at fjerne uopløseligt materiale. Filtratet indførtes på toppen af en søjle af "CG-50" harpiks (NH^+, 370 ml). Efter vask med 1,5 20 liter vand elueredes søjlen successivt med 2 liter 0,05 n NH^OH og 2 liter 0,1 n NH40H.

Eluatet, som viste positiv ninhydrin-reaktion, inddampedes, hvorved man fik 3,23 g (76¾) af den i overskriften anførte forbindelse.

25 6. 6'-N-benzvl-3-N-benzvloxvcarbonvl-4*-deoxv-6'-N-methvl-kanamvein A

Til en omrørt opløsning af 2,94 g (5,14 mmol) 6'-N-benzyl-4'deoxy-6'-N-methylkanamycin A (BB-K312) og 6,37 g (25,7 mmol) Ni(OAc)2*4H20 i 100 ml ONSO sattes 1,62 g (5,20 mmol) Cbz-ONB, og omrøringen fortsattes ved stuetemperatur. Efter 2 dage sattes 72 ml 0,2 m vandig EDTA-opløs-30 ning og 30 ml kone. NH.OH til reaktionsblandingen. Den opnåede blå opløsning Indførtes på toppen af en søjle af "HP-10" harpiks (150 ml). Efter vask med 200 ml 7 n NH^OH efterfulgt af 300 ml H^O elueredes søjlen med 400 ml 80X vandig methanol, hvorved man fik 2,65 g (73¾) af den i overskriften anførte forbindelse. En analytisk prøve fremstilledes ved 35 krystallisation fra methanol, smp. 216-217°C. IR(KBr): 3340, 1690, 1540, 1290, 1135, 1045, 745, 700 cm'1.

Analyse beregnet for C, 57,06; H, 7,18; N, 7,83.

Fundet: C, 57,29; H, 7,22; N, 7,58.

BNSDOCID: <DK 172543B > 50 DK PR 172543 B1 H. l-H-fL-(Q-'Y-ain1no-tt-hvdroxvbutyry1l-4>-deoxv-6,-N-methv1kanainvc1n A_(BB-K3111

En suspension af 2,49 g (3,53 mmol) 6'-N-benzyl-3-N-benzyl-oxycarbonyl-4'-deoxy-6'-N-methy1kanamycin A og S ni HMDS i 40 ni tor 5 CHjCH til bagesval edes natten over. Oen opnåede klare oplosning kone en* treredes til torhed. Til en omrort oplosning af den olieagtige remanens i 50 ml diethylketon sattes 1,23 g (3,51 nmol) SAE. Blandingen omrortes natten over ved stuetemperatur og Inddampedes i vakuum, hvorved man fik en olieagtig remanens, der behandledes ned HgO-ethanol, indstilledes til 10 pH ca. 3 med 1 n HCl og henstod 1 30 minutter ved stuetemperatur. Denne oplosning indeholdende det acylerede produkt (en lille prove isoleret fra oplosningen viste en carbonyl-absorption ved 1655 cm’1, hvilket skyldtes et amid, hydrogeneredes natten over med 1 g 10% Pd-C ved atmos-feri sk tryk og stuetemperatur. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, 15 og filtratet inddampedes i vakuum. Remanensen opløstes 1 en lille mengde vand, og opløsningen indførtes i toppen af en søjle af "CG-50" harpiks (NH^4, 160 ml). Efter vask med 250 ml vand elueredes søjlen successivt ned 250 ml 0,1 η NH^OH, 1 liter 0,2 n NH^OH og endelig 1 liter 0,5 n NH^OH. Eluatet opsamledes i 20-ml fraktioner. Fraktionerne 89-100, som 20 viste positiv ninhydrin-reaktlon, inddampedes 1 vakuum, hvorved man fik en olieagtig remanens. Remanensen blev fast i H^O-ethanol, hvorved man fik 1,255 g krystallinsk produkt og 144 mg af en anden portion, ialt I, 399 g (68%) af det i overskriften anførte produkt, smp. 182-184»C, [a)lZl 93» (c 1, H20).

25 Analyse beregnet for C23H45N5°12*^H*H20: C, 46,36; H, 8,25; N, 10,81.

Fundet: C, 46,37; H, 8,40; N, 10,38.

Dette produkt rekromatograferedes over "CG-50" harpiks (NH4+, 100 30 ml) under anvendelse af carbonatfri vandig ammoniak som elueringsmiddel og krystalliseredes fra H20-methanol-isopropano1, hvorved man fik 927 mg af den i overskriften anførte forbindelse som farveløse nåle, smp. 193-194»C, [e]J2+ 101« (c 1, H20). NMR(020): S i ppm fra DSS, l,37(2H,q,J-12,2-Hax & 4-Hax), 1,86 (4H,m,2-Heq, 4'-Heq & fi-CH2), 35 2,29(3H,s,N-CH·), 4,14(lH,dd,J-8 & 4,5,a-CH), 5,00(lH,d,J-3,5,l'-H), 5,24(lH,d,J«3,5,r-H). IR(KBr): 1640, 1540, 1135, 1080, 1040, 955 cm'1.

Analyse beregnet for Ν,-0 2H,0: C, Μ.μΓη; M7, ».*11.30

Fundet: C, 44,85; H, 7,90; N, 11,85.

^Mcnnrin 51 DK PR 172543 B1

Eksempel 32

Fremstilling af l-N-fL-M-T-am1no-tt-hvdroxvbutvrvn-4'-deoxykanamyc1n A (BB-K160) ved acvlering af polysilvleret 3.6*-d1-M‘cerbobenzylflxy.-AL·

S deoxykanamvdn A

En suspension af 2,27 g (3,08 mmol) 3,6'-di-N-carbobenzyloxy-4'-deoxykanamydn A og 5 ml HHDS i 35 ml tør CH^CN til bagesval edes i 2 dage. Den opnåede klare opløsning koncentreredes i vakuum. Den olieagtige remanens opløstes 1 40 ml tør diethylketon. Til opløsningen sattes 1,08 10 g (3,08 mmol) SAE under omrøring. Blandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur og Inddampedes til tørhed. Remanensen behandledes med ethanol-H^O og Indstilledes til pH 3 med 1 n HC1. Efter henstand 1 30 minutter hydrogeneredes den sure opløsning i 3 dage med 1,2 g 10% Pd-C ved atmosfærisk tryk og stuetemperatur. Katalysatoren fjernedes ved 15 filtrering, og filtratet Inddampedes i vakuum. Remanensen opløstes 1 en lille iwngde vand, og opløsningen indførtes 1 toppen af en søjle af ”CG-50” harpiks (NH^+, 130 ml). Efter vask med 500 ml H^O elueredes søjlen successivt med 1 liter 0,2 n NH^OH og 1 liter 0,5 n NH^OH. Eluatet opsaml edes i 20-ml fraktioner. Fraktionerne 79 - 95, som viste positiv 20 ninhydrlnprøve, kombineredes og Inddampedes 1 vakuum, hvorved man fik 1 g (56,IX) af den 1 overskriften anførte forbindelse som et amorft pulver. Produktet krystalliseredes ved hjælp af samme fremgangsmåde som den, der i trin H i Eksempel 31 anvendtes for BB-K311, smp. 179-180°C, [o]2°+ 99® (c 1, H20). IR(KBr): 1640, 1535, 1120, 1065, 1030, 945 25 cm . NMR(D20): é i ppm, l,37(2H,q,J-12,2- 4 4'-Hax), l,86(4H,m,2- & 4'-Heq & 0-CH2), 4,13(lH,dd,J-8 & 4,5,0-CH), 5,02(lH,d,J-3,Γ-Η), 5,28(lH,d,J»3,5,l'-H).

Analyse beregnet for C22H43N5°12*^Me0H*2H20: C, 43,47; H, 7,95; N, 11,27.

30 Fundet: C, 43,69; H, 7,92; N, 10,91.

BNSDOCID: <DK 172543B>

Claims (56)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af l-N-[«i>-am1no-e-hydroxy-alkanoy1]am1noglycosider med formlen (I) ^ NH, R5 i (i) K RO C=0

2. Fremgangsmåde Ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det acylerede derivat af syren med formel (XIII) er en aktiv ester eller et blandet 25 syreanhydrid.

3. Fremgangsmåde Ifølge krav 1 eller 2, KENDETEGNET ved, at den aminoblokerende gruppe pi det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er udvalgt blandt grupper med formlerne 30 R20 ^ 0 CH3 0 0 /ΓΛ ii i ii ii (f y---ai2oc-, CH-j-c-o-c- , *2xcc- , 35 "3 RNSOOCin- <DK 172543B 9 55 DK PR 172543 B1 , Q~- O-f- · iQ) o

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, KENDE TEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens aktive ester med N-hydroxysucc1n1m1d, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid eller N-hydroxyphthalimid.

5 J R betegner H eller OH, og 4 20. betegner H, OH eller en pentofuranosylrlng med formlen: Μ0<:|*2 Ov ,<0<iV0\ I ^7 ··' yj OH K O 0,i (IX) (X) 12 30 hvori R betegner H eller en hexopyranosylrlng med formlen ch2nh2 ΛΜ__ο ,,ΛΤΛ ·“· (χΐ) (XU) ' Ai'-irwiirv ^ηκ· ·> 67 DK PR 172543 B1 hvori R13 betegner H eller a-O-mannopyranosyl; under den forudsctning, at når R er forskellig fra H, betegner den ene af grupperne R4 og R5 H og den anden OH; og under den forudsztning, at 3. a 5 når R betegner H, betegner R H og R en pentofuranosylring med formel (IX) eller (X); med silyleringsmidler med formlerne 10 «v r ϊ -----NH K14 NH R15 V\l /R14 16 I ^Sl. / og Ri6-Si-Z 15 r14 \n--Si' \ H \ R \n14 R m L / (XV) (XVI) 20 hvori R15, R16 og R17 er udvalgt blandt hydrogen, halogen, (lavere)al kyl, (lavere)alkoxy, halogen(lavere)alkyl og phenyl, idet 25 «indst én af grupperne R*®, R^ og R^7 er forskellig fra halogen eller hydrogen; R14 betegner (lavere)alkyl, « er et helt tal på 1 til 2, og Z er udvalgt blandt halogen og

5 H0 ] CH3 HO I (V) (VI)

5 R 9 Q~ · O-f— · 15 o s X,C-CII,-0-C- og . #

5 R ”2 / NH2 Γ HO vr

5. Fremgangsmåde Ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, KENDE TEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens blandede anhydrid med pivalinsyre, benzoesyre, Isobutylcarbonsyre eller benzylcarbonsyre.

5 R5 R3^\/H2 hvori R2, R3, R4 og R5 har den ovenfor definerede betydning, og son 10 eventuelt indeholder fra 1 til 3 amino-blokerende grupper, som er forskellige fra sllyl på andre amlnogrupper end C-l amlnogruppen, i et organisk opløsningsmiddel, der eventuelt Indeholder op til ca. 40% vand, med et acylerende derivat af en syre med formlen (XIII)

5 52 DK PR 172543 B1 ΡΑΙζΝΤΚΜγ

6. Fremgangsmåde ifølge krav 4 eller 5, KENDETEGNET ved, at den amlnoblokerende gruppe på det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er carbobenzyloxy, tr1 fluoracetyl eller 1-butoxycarbonyl.

7. Fremgangsmåde Ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at det polysilyle-35 rede amlnoglycosid indeholder fra 1 til 3 amlnoblokerende grupper i form af carbobenzyloxy eller trifluoracetyl på andre amlnogrupper end C-l aminogruppen.

8. Fremgangsmåde Ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7, KEN0E- BNSDOCIDkDK 172543B > 56 DK PR 172543 B1 TE6NET ved, at sHylgrupperne er trimethylsilylgrupper.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af l-N-[L-(-)-u-amino-o-hydroxyalkanoyl)aminoglycosider ned formlen 5 R6 /K nch-r26 Rl° W-- ___ r9 ~^8s\\ / io rI3 M / / c=o */ / HO-CH t-(-) / (C„2,n «24 / 1 R 25 / CH- .s „iA-I'-ox / r22H»A—-----7n\ / 110 / o 20 hvori n er et helt tal på fra 0 til 4, R6 betegner H eller CH3, R® betegner OH eller NH2, R9 betegner H eller OH, R10 betegner H eller OH, R22 betegner H eller CH3, R23 betegner OH eller CH3, R2* betegner H eller OH, R25 betegner H eller CH^OH, og R26 betegner OH, NH2 eller 25 NHCH,; under forudsetning af at når R22 betegner H, betegner R2® CH.OH, *22 9C c og når R betegner CH-, betegner R H, og under forudsstnlng af at når 23 * 2å 23 2A R betegner OH, betegner R H, og når R betegner CHj, betegner R OH, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, KENDETEGNET ved, at der som polysllyleret amlnoglycosld benyttes et 30 polysllyleret aminoglycosid, der er frenstillet ud fra et aminoglycosid med formlen 35 ^Msnorin 57 DK PR 172543 B1 R6 „lo'Kj"-1’26 s //,l0^y^Vwl2 ° / / Γ»” / 10 "Y -°\ / -~7χ\ / 1. i / O 15 hvori R6, R8, R9, r10, r22, r23, r24, R25 og R26 har den ovenfor definerede betydning, og som eventuelt indeholder fra 1 til 3 amino- blokerende grupper, som er forskellige fra silyl pi andre amlnogrupper end C-l amlnogruppen, og at der som acylerende derivat benyttes et acylerende 20 derivat af en syre med formlen (XIII) L-(-) B-HN-CH2-(CH2)n-CH-COOH (XIII) OH 25 hvori B og n har den ovenfor definerede betydning.

10 UOCIU Λ / \ 7 r2A^ K OH 15 hvori R9 betegner H eller OH, R*® betegner H eller OH, R2® betegner OH, NH2 eller MHCHj, R29 betegner H eller OH, og R30 betegner H, OH eller OR31, hvori R31 betegner en hexopyranosylring med formlen Z0 33 CH2N1I2 I! » η —Μ HjN ] 32 hvori R betegner H eller α-D-mannopyranosyl, og den ene af grupperne

10 HO j 2 °H j ψ h3chn / /

10 H0V\____ H3C°/\XX_ |W eller H2N νΛ ch3 “ Ί (VII) (VIII) Λ 1 15 hvori R^ betegner H eller CH,;

10 HOCIf, n / \ ts °\/ 2jPj----{ J,30 R OH 15 hvori R9, R10, R26, R29 og R30 har den ovenfor definerede betydning, og som eventuelt Indeholder fra 1 til 3 amlnoblokerende grupper, som er 20 forskellige fra sllyl på andre amlnogrupper end C-l amlnogruppen, og at der som acylerende derivat benyttes et acylerende derivat af en syre med formlen (XIII) l-(-) B-HN-CH2-(CH2)n-CH-C00H (XIII)

10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, KENDETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er en aktiv ester eller et blandet 30 syreanhydrid.

10 O Λ « 11 X3C-CH2-0-C- og . |l ti o 15 hvori RZ0 og R21 er ens eller forskellige, og hver is*r betegner H, F, Cl, Br, N02, OH, (lavere)alkyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, F eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller I.

10 I HO-CH (iH2Jn CH, I i nh2 15 hvori n er et helt tal på fra 0 til 4; R2 betegner en hexopyranosyl ring med formlen f r6 R6

11. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 9 og 10, KENDETEGNET ved, at den aminoblokerende gruppe p& det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er udvalgt blandt grupper med formlerne

12. Fremgangsmåde ifelge et hvilket som helst af kravene 9-11, KEN· DETE6NET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens aktive ester med N-hydroxysucc1n1mfd, N-hydroxy-5-norbornen-2,3- 25 dicarboxlmid eller N-hydroxyphthalimid.

13. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 9-11, KENDETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens blandede anhydrld med plvalinsyre, benzoesyre, Isobutylcarbonsyre 30 eller benzylcarbonsyre.

14. Fremgangsmåde Ifølge krav 12 eller 13, KENDETEGNET ved, at den aminoblokerende gruppe på det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er carbobenzyloxy, tri fluoracetyl eller -t-butoxycarbonyl. 35

15 NET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper.

15 HO I / O hvori R22 betegner H eller CHj, og R28 betegner H eller CHj. 20

15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, KENDETEGNET ved, at det polysily-lerede aminoglycosid indeholder fra 1 til 3 aminoblokerende grupper 1 form af carbobenzyloxy eller trifluoracetyl pi andre amlnogrupper end ΟΙ amlnogruppen. .»Nsoorm· 59 DK PR 172543 B1

15 B-HN-CH2-(CH2)n-CH-COOH (XIII) OH hvori B betegner en amino-bl okerende gruppe, og n har den ovenfor 20 definerede betydning; og at man derefter fjerner alle blokerende grupper.

16. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 9-15, KENDETEGNET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper.

17. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af l-N-[L-(-)-u- amino-hydroxyalkanoyl)aminoglycosider med formlen r27-chnh-r28 NH, 10 /viU h2n »0/ \ HO / . / C=0 / / HO-CI1 L-(-) 15 -—’Q / <CH2)n HjCHN-^--/ T2 HO 1/ NH, O 2 20 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvori n betegner et helt tal på fra 0 til ♦ , R2^ betegner H eller CHV og R28 betegner H eller ch3, KENDETEGNET ved, at der som polysllyleret amlnoglycosid benyttes et polysilyleret amlnoglycosid, der er fremstillet ud fra et amlnoglycosid 25 med formlen r27-chnh-R28 nh2 30 -Λ H2N \ -----1W Oil / X==\ / 35 h3chn'^7n\ / «ο y BNSDOCID; <DK 172543B > 60 DK PR 172543 B1 P7 pe hvori R og R har den ovenfor definerede betydning, og som indeholder 2 eller 3 amlnoblokerende grupper, so· er forskellige fra silyl på andre anlnogrupper end C-l aminogruppen, og at der som acylerende derivat benyttes et acylerende derivat af en syre med formlen (XIII) 5 L-(-) B-HN-CH2-(CH2)n-CH-C00H (XIII) OH 10 hvori B og n har den ovenfor definerede betydning.

18. Fremgangsmåde i felge krav 17, KENOETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er en aktiv ester eller et blandet syreanhydrid. 15

19. Fremgangsmåde Ifølge krav 17 eller 18, KENDETEGNET ved, at den amlnoblokerende gruppe på det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er udvalgt blandt grupper med formlerne _20 20 * ,-v O CK, O O ii i 3 ii ii (f y----ch2oc-, ch3-c-o-c- , y2xcc- , r21^K=z/ ch3 o Q--' O-T-..... ” o o 35 » X,C-CH,-0-C- og V-N. ^ II o OCID: <DK 177643B. 61 DK PR 172543 B1 20 21 hvori R og R er ens eller forskellige, og hver især betegner H, F, Cl, Br, NO^, OH, (lavere)alkyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, F eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller I.

20 H O »o 21 hvori R og R er ens eller forskellige, og hver isår betegner H, F, Cl, Br, N02, OH, (lavere)al kyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, F eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller I. 25

20. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 17-19, KENDETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens aktive ester med N-hydroxysuccin1mid, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid eller N-hydroxyphthalimid.

20 R10^V\ CHNHR7 J.H0M CHNHR7 1ΖΓ°ν r1°x\n^—-o - TV 25 (II) (III) (IV) hvori R® betegner H eller CH^, R7 betegner H eller CH^, R® betegner OH eller HH^, R® betegner H eller OH, og R*® betegner H eller OH; R3 30 betegner H eller en hexopyranosylrlng med formlen Γ „,n^—'-Λ 35 2 7 Λ ' --- ' H0 1 CH3 »o I (V) cVI) ^NSDOCID <OK 172543B > 53 DK PR 172543 B1 . S, uo^ ·“« (vri) (vin) 2 I 10 hvori R11 betegner H eller CH3; R5 betegner H eller OH, og R* betegner H, OH eller en pentofuranosylring ned formlen » hccl>°"-4 v_7 — >-/ OH Ri20 OH (IX) ,xl 20 hvori R1Z betegner H eller en hexopyranosylring med formlen CH2nh2 ..... .“-V-K Αη * ,jA (XI) (XII) 30 hvori R*3 betegner H eller o-D-mannopyranosyl; 3 under den forudsctnlng, at nir R er forskellig fra H, betegner i c den ene af grupperne R og R H og den anden OH; og under den forud-3 5 4 setning, at nir R betegner H, betegner R H og R en pentofuranosylring med formel (IX) eller (X), eller farmaceutisk acceptable 35 syreadditionssalte deraf; KENDETEGNET ved, at man omsetter et polysllyleret aminoglycosid, der er fremstillet ud fra et aminoglycosid med formlen (XIV) BNSDOCID: <DK 172543B » 54 DK PR 172543 B1 yw nh2 -> (XIV)

21. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 17-19, KENDETE6NET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens blandede anhydrid med plvalinsyre, benzoesyre, isobutylcarbonsyre eller benzylcarbonsyre.

22. Fremgangsmåde ifølge krav 20 eller 21, KENDETEGNET ved, at den amlnoblokerende gruppe på det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er carbobenzyloxy, trifluoracetyl eller -i-butoxycarbonyl.

23. Fremgangsmåde ifølge krav 22, KENDETEGNET ved, at det polysily-20 lerede aminoglycosid indeholder 2 eller 3 aminoblokerende grupper 1 form af carbobenzyloxy eller trifluoracetyl på andre aminogrupper end C-l aminogruppen.

24. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 17-23,

25 Cl, Br, NO^, OH, (lavere)alkyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, F eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller I, pi andre amlnogrupper end C-l amlnogruppen.

25 I OH hvori B og n har den ovenfor definerede betydning.

25. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af l-N-[L-(-)-w-amino-a-hydroxyalkanoylJamlnoglycosider med formlen 30 35 BNSDOCID: <DK 172S43B» 62 DK PR 172543 B1 •Vir" Γ / H0 C=0 / I / HO-CH L-(-) 10 iii,j’n x γ ί"2 R I I nh, R30 Oli 15 hvert n betegner et helt tal pi fra 0 til 4, R9 betegner H eller OH, R*° betegner H eller OH, R26 betegner OH, NH2 eller NHCH^, R29 betegner H 20 eller OH, og R30 betegner H, OH eller OR31, hvori R31 betegner en hexopyranosylring ned formlen „33 η2ν I 30 32 hvori R betegner H eller α-D-mannopyranosyl, og den ene af grupperne 33 34 R og R betegner H og den anden CHgNHg; under forudsmtnlng af at nir R29 betegner H, betegner R30 OH eller OR31, og at nir R29 betegner OH, 35 betegner R30 H, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf; KENDETEGNET ved, at der som polysllyleret aminoglycosid benyttes polysilyleret aminoglycosid, der er fremstillet ud fra et aminoglycosid med formlen . ^SDOCIO <Γ»Κ 172S43B> 63 DK PR 172543 B1 /K CH2-R26 ^±-r\

25 KENDETEGNET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper.

26. Fremgangsmåde Ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at det acyleren de derivat af syren med formel (XIII) er en aktiv ester eller et blandet syreanhydrid.

27. Fremgangsmåde ifølge krav 25 eller 26, KENDETEGNET ved, at den 35 amlnoblokerende gruppe på det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er udvalgt blandt grupper med formlerne BNSDOCID: <OK 172S43B > 64 DK PR 172543 B1 R20 _ O CH, O 0 y^S--CIljOC-, CHj-C-O-C- . *2xcc- . 21^\=/ CH3

28. Fremgangsmåde ifølge krav 27, KENDETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med formel (XIII) er dens aktive ester med N-hydroxysucclnimid, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbox1m1d eller N-hydroxyphthalimid. 30

29. Fremgangsmåde ifølge krav 27, KENDETEGNET ved, at det acylerende derivat af syren med forrmel (XIII) er dens blandede anhydrid med pi-vallnsyre, benzoesyre, isobutylcarbonsyre eller benzylcarbonsyre.

30 NET ved, at s1lylgrupperne er trlmethylsilylgrupper.

30 R33 og R3* betegner H og den anden CHgNHgi under forudsetning af at når R29 betegner H, betegner R3® OH eller OR3*, og at når R29 betegner OH, betegner R3® H.

30 -N ^R19 u 10 hvori R betegner hydrogen eller (lavere)alkyl, og R betegner hydrogen, (lavere)al kyl eller 35 r15 -ii- BNSDOOID <DK 172543B > 68 DK PR 172543 B1 hvori R^, R16 og R^7 har den ovenfor definerede betydning, og oai ønsket ved Indføring af 1-3 amlnoblokerende grupper Med formlerne R20 __ O CH3 O O 5 --c" 2°^"' CH3-C-0-C- , »2XCC- . u21 3 o Q-- o-j·- · o o 20 ίί X3C-CU2-0-C- 09 IH ^ ίί o 20 21 hvori R og R er ens eller forskellige, og hver 1s*r betegner H, F,

30. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 25-29, KENOETEGNET ved, at den amlnoblokerende gruppe på det acyl erende derivat af syren med formel (XIII) er carbobenzyloxy, trifluoracetyl eller t-butoxycarbonyl. R^SDOCID: <DK 17P543B > 65 DK PR 172543 B1

31. Fremgangsmåde ifølge krav 30, KENDETEGNET ved, at det polysily-lerede amlnoglycosid indeholder fra 1 til 3 aminoblokerende grupper i form af carbobenzyloxy eller tri fluoracetyl på andre amlnogrupper end ΟΙ aminogruppen. 5

32. Fremgangsmåde ifølge krav 25-31, KENDETEGNET ved, at silylgrup-perne er trlmethylsilylgrupper.

33. Polysilyleret aminoglycosid med 2*10 silylgrupper til anvendel* 10 se som udgangsstof ved udøvelse af den i krav 1 omhandlede fremgangsmåde til fremstilling af l-N-[w-affl1no-a-hydroxyalkanoyl]aminoglycosider med den angivne formel (I), KENDETEGNET ved, at det er fremstillet ved omsætning af et aminoglycosid med formlen (XIV) 15 r4'U7"^,,B2 r RO 20 2 hvori R betegner en hexopyranosylrlng med formlen: r10W"K',R7 ^ Ihoh f-»7 .....* (II) (III) (IV) 35 hvori R6 betegner H eller CH3, R7 betegner H eller CH3, R8 betegner OH eller NHZ, R9 betegner H eller OH, og R10 betegner H eller OH; R3 betegner H eller en hexopyranosylring med formlen: BNSDOC1D: <OK 172543B > 66 DK PR 172543 B1 H2 ^ 7n\ , UN*

34. Polysllyleret amlnoglycosld Ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at 30 det indeholder et gennemsnitligt antal sllylgrupper pr. molekyle pi fra 3 til B.

35. Polysllyleret amlnoglycosld ifølge krav 33 eller 34, KENDETEGNET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper. 35

35 R20 —λ ,? CH3 0 0 C \-ch2oc-, ch -c-o-c- . Y xcc- , r21^A=/ CH3 BNSDOCID: <DK 172543B> 58 DK PR 172543 B1 G . Q~ O-f- ' >»2 o 10 o li f' X3C-CH2-0-C- og -I jl VGN..^ II 15 0 20 21 hvori R og R er ens eller forskellige, og hver ismr betegner H, F, Cl, Br, NOg, OH, (lavere)alkyl eller (lavere)alkoxy, X betegner Cl, Br, 20. eller I, og Y betegner H, Cl, Br, F eller I.

36. Polysllyleret amlnoglycosld ifølge et hvilket som helst af kravene 33-35, KEM)ETE6NET ved, at de amlnoblokerende grupper er carbo-benzyloxy- eller tri fluoracetylgrupper. HNsnorin ,ηκ ι7·>μιβ » 69 DK PR 172543 B1

37. Polysllyleret aminoglycosid Ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at det er fremstillet ved omsætning af et aminoglycosid med formlen 5 »* 10 1 / / lv' o/ / r2-1 ^ / IS --"°\ / „"...Λ—-τΛ / no / o 20 hvori R6 betegner H eller CH3, R® betegner OH eller NHg, R9 betegner H eller OH, R10 betegner H eller OH, R22 betegner H eller CHj, R23 betegner OH eller CH3, R2* betegner H eller OH, R2® betegner H eller CH20H, og R26 betegner OH, NH^ eller NHCHj*. under forudsætning af, at 25 når R22 betegner H, betegner R25 CH20H, og når R22 betegner CH3, betegner R2® H; og under forudsætning af, at når R23 betegner OH, betegner R2< H, og når R23 betegner CH3, betegner R2* OH.

38. Polysllyleret aminoglycosid Ifølge krav 37, KENDETEGNET ved, at 30 det indeholder et gennemsnitligt antal sllylgrupper pr. molekyle på fra 3 til 8.

39. Polysllyleret aminoglycosid Ifølge krav 37 eller 38, KENDETEGNET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper. 35

40. Polysilyleret aminoglycosid Ifølge et hvilket som helst af kravene 37-39, KENDETEGNET ved, at de amlnoblokerende grupper er carbo-benzyloxy- eller trifluoracetylgrupper. BNSOOCID: <DK 172543B > 70 DK PR 172543 B1

41. PolysHyleret aminoglycosid Ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at det er fremstillet ved omsætning af et aminoglycosid med formlen 5 57 28 R^-CHNH-R H,N L/ \ 2 _ \ ^^7N\ / Nii

42. Polysilyleret aminoglycosid Ifølge krav 41, KENDETEGNET ved, at det Indeholder et gennemsnitligt antal sllylgrupper pr. molekyle pi fra 3 til 8.

43. Polysilyleret aminoglycosid Ifølge krav 41 eller 42, KENDETEG NET ved, at silylgrupperne er trlmethylsllylgrupper.

44. Polysilyleret aminoglycosid Ifølge et hvilket som helst af kravene 41 - 43, KENDETEGNET ved, at de amlnoblokerende grupper er carbo- 30 benzyloxy- eller trlfluoracetylgrupper.

45. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at det er fremstillet ved omsætning af et aminoglycosid med formlen 35 >.gSDOrin· -rOK 172543B > 71 DK PR 172543 B1 / vr

46. Polysllyleret aminoglycosid ifølge krav 45, KENDETEGNET ved, at 35 det indeholder et gennemsnitligt antal silylgrupper pr. molekyle på fra 3 til 8.

47. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 45 eller 46, KENDETEG- BNSDOCID: <DK 172543Β» 72 DK PR 172543 B1 NET ved, at silylgrupperne er trimethylsilylgrupper.

48. Polysilyleret aminoglycosid ifølge et hvilket som helst af kra-vene 45-47, KENDETEGNET ved, at de aminoblokerende grupper er carboben- 5 zyloxy- eller tri fluoracetylgrupper.

49. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 33, KENOETEGNET ved, at det er polysilyleret ved omsxtning af gentamicin Bj.

50. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 49, KENDETEGNET ved, at det Indeholder et gennemsnitligt antal silylgrupper pr. molekyle på fra 3 til 7.

51. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 49 eller 50, KENDETE6-

52. Polysilyleret aminoglycosid ifølge et hvilket som helst af kravene 49-51, KENOETEGNET ved, at de aminoblokerende grupper er carbo-benzyloxy- eller trifluoracetylgrupper. 20

53. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 33, KENDETEGNET ved, at det er polysilyleret ved omsxtning af 6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamyc1n B.

54. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 53, KENDETEGNET ved, at det Indeholder et gennemsnitligt antal silylgrupper pr. molekyle på fra 3 til 5.

55. Polysilyleret aminoglycosid ifølge krav 53 eller 54, KENOETEG-

56. Polysilyleret aminoglycosid ifølge et hvilket som helst af kravene 53-55, KENDETEGNET ved, at de aminoblokerende grupper er carbo-benzyloxy- eller trifluoracetylgrupper. 35 ‘T.SDOCID <DK 17?S43B>