PL117307B1 - Process for preparing 1-n-/omega-amino-alpha-hydroxyalkanocarbonylo/kanamycinsnil/kanamicinov - Google Patents

Process for preparing 1-n-/omega-amino-alpha-hydroxyalkanocarbonylo/kanamycinsnil/kanamicinov Download PDF

Info

Publication number
PL117307B1
PL117307B1 PL1978206457A PL20645778A PL117307B1 PL 117307 B1 PL117307 B1 PL 117307B1 PL 1978206457 A PL1978206457 A PL 1978206457A PL 20645778 A PL20645778 A PL 20645778A PL 117307 B1 PL117307 B1 PL 117307B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
kanamycin
formula
acid
mixture
solution
Prior art date
Application number
PL1978206457A
Other languages
English (en)
Other versions
PL206457A1 (pl
Inventor
Martin John Cron
John Gerard Keil
Jeng Shyong Lin
Mariano Vecchio Ruggeri
Derek Walker
Original Assignee
Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Co filed Critical Bristol Myers Co
Publication of PL206457A1 publication Critical patent/PL206457A1/xx
Publication of PL117307B1 publication Critical patent/PL117307B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms
    • C07H15/222—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms
    • C07H15/226—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with at least two saccharide radicals directly attached to the cyclohexane rings
    • C07H15/234—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with at least two saccharide radicals directly attached to the cyclohexane rings attached to non-adjacent ring carbon atoms of the cyclohexane rings, e.g. kanamycins, tobramycin, nebramycin, gentamicin A2
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia l-N- namycyny A i B o wzorze ogólnym 1, w którym R oznacza grupe hydroksylowa lub aminowa, a n oznacza liczbe calkowita o wartosci 0—2 i ich nietoksycznych, dopuszczalnych w farmacji addy¬ cyjnych soli kwasowych.Sposób wedlug wynalazku polega na tyrn, ze polisililowana kanamycyne A lub B lub ich po¬ chodne zawierajace przy grupie aminowej w po¬ zycji 6' £rupe ochronna inna niz sililowa, poddaje sie acylowaniu w praktycznie bezwodnym roz¬ puszczalniku organicznym, za pomoca acylujacej pochodnej kwasu o wzorze ogólnym 2, w którym n oznacza liczbe calkowita o wartosci 0—2 a B oznacza grupe chroniaca grupe aminowa, a na¬ stepnie usuwa sie wszystkie grupy ochronne.Kanamycyny sa dobrze znanymi antybiotykami, opisanymi np. w „Merck Index", wydanie 8, str. 597—598. Znanych jest równiez wiele pochodnych kanamycyn. Budowe kanamycyn A i B, lacznie z przyjetym w praktyce systemem numeracji, przedstawia wzór 3, w którym R oznacza grupe hydroksylowa (kanamycyna A) lub aminowa (ka- namycyna B). W dalszej czesci opisu, dla latwiej¬ szego zrozumienia rozmaite pochodne kanamycyny okresla sie jako pochodne kanamycyny A lub ka¬ namycyny B, nie stosujac wzorów strukturalnych, co pozwala na unikanie koniecznosci porównywa¬ nia struktur'i wyszukiwania miedzy nimi róznic. 10 15 20 W opisie patentowym St. Zjed. Am. nr 3781268 opisano l-[L-(-)-y-amino-a-hydroksybutyrylo]-ka¬ namycyne A (amikacyne) i B, oraz ich jedno- i dwukarbobenzyloksy-pochodne. Nizsze i wyzsze homologi powyzszych zwiazków przedstawione sa w opisach patentowych St. Zjedn. Am. nr 3886139 i 3904597. Zwiazki te wytwarza sie droga acylo- wania 6'-N-oehronionej kanamycyny A lub B za pomoca acylujacej pochodnej N-ochronionego kwasu L-(-)-y-amino-a-hydroksymaslowego, pro¬ wadzac reakcje w srodowisku wodnym i nastep¬ nie usuwajac jedna lub obie grupy N-ochronne.W opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3974137 opisano sposób wytwarzania l-[L-(-)-y-amino-a- -hydroksybutyrylo]kanamycyny A, polegajacy na tym, ze 6/-karbobenzyiooksykanamycyne A podda¬ je sie reakcji z co najmniej trzema molami ben¬ zaldehydu, podstawionego benzaldehydu lub alde¬ hydu trójmetylooctowego, i otrzymuje 6'-N-karbo- benzylooksykanamycyne A zawierajaca reszty za¬ sady Schiffa w pozycjach 1, 3 i 3". Otrzymana czteroochroniona pochodna kanamycyny A pod¬ daje sie reakcji z estrem N-hydroksysukcynimido- wym kwasu L-(-)-y-benzylooksykarbonyloamino-a- -hydroksymaslowego, a nastepnie^ usuwa sie gru¬ py ochronne.W belgijskim opisie patentowym nr 828192 przedstawiono sposób wytwarzania l-[L-(-)-y-ami- no-a-hydroksybutyrylo]kanamycyny A, polegajacy na otrzymywaniu takiej samej czteroochronionej 117 307117 307 pochodnej kanamycyny A jak w cytowanym po¬ wyzej opisie patentowym, acylowaniu jej estrem N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dwukarboksyimido- wym kwasem L-(-)-y-benzylooksykarbonyloamino- g -a-hydroksymaslowego, i nastepnym odszczepieniu grup ochronnych.Wynalazek dotyczy ulepszonego i przemyslowo v korzystnego sposobu wytwarzania zwiazków o wzorze ogólnym 1 polegajacego na zastosowaniu ^ polisilowanej kanamycyny A lub B. Zastosowanie polisililowanej kanamycyny A lub B jako zwiazku wyjsciowego, dzieki jej dobrej rozpuszczalnosci w rozpuszczalnikach organicznych pozwala na pro¬ wadzenie reakcji w wysokich stezeniach. Chociaz ig reakcje na ogól prowadzi sie w roztworach za¬ wierajacych okolo 10—20% polisililowanej kana¬ mycyny, doskonale wyniki uzyskuje sie takze sto¬ sujac stezenia wynoszace okolo 50 g na 100 ml rozpuszczalnika. 20 Podobnie jak w znanych sposobach, otrzymuje sie mieszanine zacytowanych produktów. Pozada¬ ny zwiazek 1-N-acylowy wyodrebnia sie z mie¬ szaniny metoda chromatografii, a produkty ubocz¬ ne w razie potrzeby mozna hydrolizowac do wyjs- 2g ciowej kanamycyny i zawracac do reakcji. Przy stosowaniu znanych sposobów stwierdzono, ze powstaniu zwiazku 3"-N-acylowego towarzyszy strata w przyblizeniu takiej samej ilosci pozada¬ nego zwiazku 1-N-acylowego ze wzgledu na duze 3Q trudnosci w rozdzielaniu tych pochodnych. Szcze¬ gólnie korzystna zaleta sposobu wedlug wynalazku jest fakt powstawania wyjatkowo malej ilosci nie¬ pozadanego zwiazku 3"-N-acylowego. Z reguly nie wykrywa sie go w produkcie reakcji. 35 Podczas wytwarzania l-[L-(-)-y-amino-a-hydro- ksybutyrylo/kanamycyny A (amikacyny) dotych¬ czas stosowanymi sposobaW powstaje równoczes¬ nie produkt 3"-N-acylowy (BB-K11), produkt 3-N- -acylowany (BB-K29), produkt 6'-N-acylowany 40 (BB-K6), produkt poliacylowany, oraz pozostaje takze nieprzereagowana kanamycyna A. Stwier¬ dzono, ze podczas produkcji w skali przemyslowej amikacyny droga acylowania 6'-N-karbobenzylo- oksykanamycyny A w srodowisku wodnym i na- 45 stepnego usuwania grupy ochronnej, traci sie za¬ zwyczaj okolo 10% pozadanej amikacyny (2,5 kg z porcji 25 kg) ze wzgledu na zanieczyszczenie zwiazkiem BB-K11. Podczas wytwarzania amika¬ cyny sposobem wedlug wynalazku nie wykrywa 50 sie na ogól zwiazku BB-K11 w mieszaninie reak¬ cyjnej.Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia l-N-(-co-amino-a-hydroksyalkanokarbonylo)ka- namycyn A lub" B o wzorze ogólnym 1, w któ- 55 rym R oznacza grupe hydroksylowa lub amino¬ wa, a n oznacza liczbe calkowita o wartosci 0—2, lub nietoksycznych, dopuszczalnych w farmacji addycyjnych soli kwasowych powyzszych zwiaz¬ ków, który to sposób polega na tym, ze polisililo- so wana kanamycyne A lub B lub ich pochodne za¬ wierajace przy grupie aminowej w pozycji 6' grupe ochronna inna niz .sililowa, poddaje sie akcylowaniu w praktycznie bezwodnym rozpusz¬ czalniku organicznym, za pomoca acylujacej po- 65 chodnej kwasu o wzorze ogólnym 2, w którym n jest liczba calkowita o wartosci 0-^2, a B ozna¬ cza grupe chroniaca grupe aminowa, a nastepnie usuwa sie wszystkie grupy ochronhe.Grupy ochraniajace, które mozna stosowac do ochrony grupy 6'-aminowej kanamycyny oraiz gru¬ py aminowej kwas-u (grupa B we wzorze 2), sa grupami zwykle stosowanymi dla ochrony pier- wszorzedowych grup aminowych i znane sa one dobrze fachowcom. Do odpowiednich naleza grupy alkoksykarbonylowe, takie jak Illrz.-butoksykar- bonylowa i Illrz.-amyloksykarbonylowa, aryloal- koksykarbonylowa, takie jak benzylooksykarbony- lowa, cykloalkoksyfcarbonylowe, takie jak cyklo- heksylooksykarbonylowa, chloroweoalkoksykarbo- nylowe, takie jak trójchloroetpksykarbonylowa, grupy acylowe, takie jak ftaioilowa i <5-nitrofe- rioksyacetylowa, a takze inne znane grupy ochron¬ ne, takie jak o-nitrofenylotiolowa, trytylowa i po¬ dobne.Kwasem acylujacym o wzorze 2 moze -byc za¬ równo izomer (+) jak i (—) oraz mieszanina izo¬ merów d,l. W efekcie wiec mozna otrzymywac zwiazek o wzorze 1; w którym grupa l-N- -amino-a-hydroksyalkanokarbonylowa) jest w po^ staci izomeru (+) lub R albo w postaci izomeru (—) lub S ewentualnie ich mieszaniny. Korzystnie kwas acylujacy o wzorze 2 jest izomerem (—) lub izomerem (+).Zwiazkiem wyjsciowym moze byc polisililowana kanamycyna A lub B, korzystnie polisililowana kanamycyna A, zawierajaca przy grupie amino¬ wej w pozycji 6' grupe ochronna inna niz grupa sililowa. Do korzystnych takich grup ochronnych naleza grupy o wzorze 4, wzorze 5, wzorze 6, wzorze 7, wzorze 8, wzorze 9, wzorze 10, w któ-' rych to wzorach R1 i R2 sa takie same lub rozne i oznaczaja atom wodoru, fluoru, chloru, bromu, grupe nitrowa, hydroksylowa, nizsza grupe alkilo¬ wa lub nizsza grupe alkoksylowa, X oznacza atom chloru, bromu, fluoru lub jodu oraz Y oznacza atom- wodoru, chloru, bromu, fluoru lub jodu.Najbardziej korzystna grupa ochronna jest gru¬ pa karbobenzyloksyIowa.W korzystnym wykonaniu sposobu wedlug wy¬ nalazku acylujaca pochodna kwasu o wzorze 2 jest jego aktywny ester, korzystnie ester z N-hy- droksysukcynimidem, N-hydroksy-5-norborneno- -2,3-dwukarboksyimidem lub N-hydroksyftalimi- dem.W innym korzystnym wykonaniu sposobu we¬ dlug wynalazku acylujaca pochodna kwasu o wzo¬ rze 2 jest mieszany bezwodnik z kwasem trójme- tylooctowym, benzoesowym, izobutyloweglowym lub benzyloweglowym.W bardziej korzystnym wykonaniu sposobu we¬ dlug wynalazku wytwarza sie l-N-(L-(-)-y-amino- -a-hydroksybutyrylo]ikanamycyne A lub jej nie¬ toksyczna, dopuszczalna w farmacji addycyjna sól kwasowa, która otrzymuje sie przez poddanie po¬ lisililowanej kanamycyny A acylowaniu w prak¬ tycznie bezwodnym rozpuszczalniku organicznym, mieszanym bezwodnikierh kwasu L-(-)-y-benzylo- oksykarbonyloamino-a-hydroksymaslowego, korzy-5 117 307 6 stnie mieszanego bezwodnika z kwasem trójmety- looctowym, benzoesowym, izobutyloweglowym lub benzyloweglowym, a nastepnie usuniecie wszy¬ stkich grup ochronnych.W innym bardziej korzystnym wykonaniu spo¬ sobu wedlug wynalazku l-N-[L-(-)-y-amino-a-hy- droksybutyrylo] kanamycyne A lub jej nietoksycz¬ na, dopuszczalna w farmacji addycyjna sól kwa¬ sowa, otrzymuje sie przez poddanie polisililowanej kanamycyny A, zawierajacej grupe 6/-aminowa ochroniona grupa karbobenzylooksylowa, acylowa- niu w praktycznie bezwodnym rozpuszczalniku or¬ ganicznym, mieszanym bezwodnikiem kwasu L-(-)- -y-benzylooksykarbonyloamino-a-hydroksymaslo- wego, korzystnie mieszanym bezwodnikiem z kwasem trójmetylooctowym, benzoesowym, izobu¬ tyloweglowym lub benzyloweglowym,. a nastepnie usuniecie wszystkich grup ochronnych.Inne- bardziej korzystne wykonanie sposobu we¬ dlug wynalazku dotyczace wytwarzania 1-N-[L- -(-)-yramino-«-hydroksybutyrylojka^namycyny A lub jej nietoksycznej, dopuszczalnej w farmacji addycyjnej soli kwasowej polega na tym, ze poli- sililowana kanamycyne A poddaje sie acylowaniu w praktycznie bezwodnym rozpuszczalniku orga¬ nicznym, za pomoca estru aktywnego kwasu L-{-)- -y-benzylooksykarbonyloamino-«-hydroksymaslo- wego, korzystnie aktywnego estru z N-hydroksy- sukcynimidem, N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dwu- karboksyimidem lub N-hydroksyftalimidem, a na¬ stepnie usuwa sie wszystkie grupy ochronne.Inne bardziej korzystne wykonanie sposobu we¬ dlug wynalazku dotyczace wytwarzania 1-N-[L- -(-)-y-amino-«-hydroksybutyrylo]kanamycyny A lub jej nietoksycznej, dopuszczalnej w farmacji addycyjnej soli kwasowej polega.na tym, ze po¬ lisililowana kanamycyne A, zawierajaca grupe aminowa w pozycji 6' ochroniona grupa karbo¬ benzylooksylowa, poddaje sie acylowaniu w prak¬ tycznie bezwodnym rozpuszczalniku organicznym, za pomoca astru aktywnego kwasu L-{-)-y-ben- zylooksykarbonyloamino-a-hydróksymaslowego, korzystnie aktywnego estru z N-hydroksysukcyni- midem, N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dwukarbo- ksyimidem lub to-hydroksyftalimidem; a. nastepnie usuwa sie wszystkie grupy ochronne.Korzystnie stosuje sie polisililowana kanamy¬ cyne A lub B zawierajaca grupe 6'-aminowa ochroniona grupa inna niz sililowa. W korzystnym wykonaniu sposobu wedlug wynalazku zwiazkiem wyjsciowym jest kanamycyna A lub B, korzy¬ stnie polisililowana kanamycyna A, zawierajaca srednio 4—8 grup sililowych, korzystnie trójme- tylosililowych, w czasteczce* W innym korzystnym wykonaniu sposobu we¬ dlug wynalazku zwiazkiem wyjsciowym jest po¬ lisililowana kanamycyna A lub B, korzystnie po¬ lisililowana kanamycyna A, zawierajaca przy gru¬ pie 6'-aminowej grupe ochronna inna niz sililo¬ wa i srednio w czasteczce 3—7 grup sililowych, korzystnie trójmetylosililowych.Stosowane w opisie i zastrzezeniach okreslenie „nietoksyczna, dopuszczalna w farmacji addycyj¬ na sól kwasowa" zwiazku o wzorze 1, oznacza jedno-, dwu-, trój- lub czterosól, wytworzona w reakcji jednej czasteczki zwiazku o wzorze 1 z 1—4 równowaznikami nietoksycznego, dopuszczal¬ nego w farmacji kwasu, takiego jak octowy, chlo¬ rowodór, kwas siarkowy, maleinowy, fosforowy, azotowy, bromowodór, kwas askorbinowy, jabl¬ kowy lub cytrynowy, albo inny z kwasów sto¬ sowanych zwykle do wytwarzania soli z zawiera¬ jacymi grupe aminowa zwiazkami farmaceutycz¬ nymi.Acylowanie wyjsciowej polisilowanej kanamy-* cyny A lub B, zawierajacej lub niezawierajacej przy grupie 6'-aminowej grupe ochronna inna niz sililowa, prowadzi sie na ogól w rozpuszczal¬ niku organicznym, w którym zwiazek wyjsciowy jest wystarczajaco rozpuszczalny. Zwiazki wyjs¬ ciowe sa bardzo dobrze rozpuszczalne w wiek¬ szosci zwykle stosowanych rozpuszczalników or¬ ganicznych.Odpowiednimi rozpuszczalnikami sa takie np. jak aceton, keton, dwuetylowy, keton metylowo- n-propylowy, keton metylowo izobutylowy, keton metylowoetylowy, acetonitryl, 1,2-dwumetoksye- tan, eter dwumetylowy glikolu dwuetylenowego, dioksan, toluen, czterowodorofuran, cykloheksa- non, chlorek metylenu, chloroform, czterochlorek wegla i mieszaniny acetonu z butanolem lub ke¬ tonu dwuetylowego z butanolem. Wybór rozpusz¬ czalnika zalezy od stosowanego zwiazku wyjscio¬ wego. Korzystnymi rozpuszczalnikami sa na ogól ketony. Najlepszy rozpuszczalnik dla poszczegól¬ nych kombinacji reagentów moze byc z latwoscia wybrany na podstawie doswiadczen.Odpowiednimi srodkami sililujacymi, stosowa¬ nymi do wytwarzania wyjsciowych polisililowa- nych kanamycyn sa zwiazki o wzorach 11 i 12, w których R5, Rfl i R7 oznaczaja atom wodoru lub chlorowca, nizsza grupe alkilowa, nizsza grupe chlorowcoalkilowa lufo fenylowa, przy czym co najmniej jedna z grup R5, R6 i R7 nie jest ato¬ mem chlorowca lub wodoru, R4 oznacza nizsza grupe alkilowa, m oznacza liczbe calkowita o war¬ tosci 1 lub 2, a X oznacza atom chlorowca lub grupe o wzorze 13, w którym R8 oznacza atom wodoru lub nizsza grupe al/kilowa a R9 oznacza atom wodoru, nizsza grupe alkilowa lub grupe o wzorze 14, w którym R5, R6 i R7 maja wyzej podane znaczenie.Przykladem zwiazków sililowych o wzorach 11 i 12 sa nastepujace: trójmetylochlorosilan, szes- ciometylodwusilazan, trójetylochlorosilan, metylo- trójchlorosilan, dwumetylodwuchlorosilan, trój- etylobromosilan, trój-nHpropylochlorosilan, me- tylodwuetyfochlorosilan, dwumetyloetylochlorosi- lan, dwumetylo-IIIrz.-butylochlorosilan, fenylo- dwumetylobromosilan, benzylometyloetylochlorosi- lan, fenyloetylometylochlorosilan, trójfenylochloro- silan, trójfenylofluorosilan, trój-o-tolilochlorosilan, trój-p-dwumetyloaminofenylochlorosilan, N-etylO- trójetylosililoamina, szescioetylodwusilazan, trójfe^ nylosililoamina, trój-n-propylosililoamina, cztero- etylodwumetylodwusilazan, szesciofenylodwusila- zan, szescio-p-tolilodwusilazan i podobne. 20 25 30 35 40 41 50 55 607 117 307 8 Stosowac mozna takze szescioalkilocyklotrójsila- zany, osmioalkilocykloczterosilazany, sililoamidy, takie jak trójalkilosililoacetamidy i bis-trójalkilo- aililoacetamidy, sililomoczniki, takie jak trójme- tyloaililomocznik, i sililoureidy. Mozna równiez 5 stosowac trójmetylosililoimidazol.Korzystna grupa sililowa jest grupa trójmety- losililowa, a korzystnym srodkiem sililujacym do wprowadzenia grupy trójmetylosililowej sa szes- ciometylodwusilazan, dwu-{trójmetylosililo)aceta- 10 mid i trójmetylosililoacetamid. Najbardziej korzy¬ stny jest szesciometylodwusilazan.Jesli wykorzystuje sie polisililowana kanamy¬ cyne A lub B, zawierajace przy grupie 6'-amino- wej grupe ochronna inna niz sililowa, to taki ' zwiazek wyjsciowy mozna wytwarzac albo droga polisililowania ochronionej w pozycji 6' kanamy¬ cyny A lub B, albo tez wprowadzenie w pozy¬ cje 6' pozadanej grupy N-ochronnej do polisililo- wanej kanamycyny A lubB. M Znane sa w praktyce- sposoby wprowadzania grup sililowych do zwiazków organicznych, w tym takze do róznych aminoglikozydów. Polisili- lowane kanamycyny, zawierajace lub niezawie- rajace przy * grupie 6'-aminowej grupe ochronna inna niz sililowa, mozna wytwarzac ogólnie zna¬ nymi sposobami lub sposobami podanymi w ni¬ niejszym opisie.Okreslenie „polisililowana kanamycyna A lub B" oznacza kanamycyne 'A lub B zawierajaca w czasteczce 2—10 grup sililowych. Dlatego tez, w za*- kres pojecia polisililowana kanamycyna A lub B nie wchodzi nadmiernie sililowana kanamycyna A lub B, które moga zawierac jedenascie grup sililowych w czasteczce.Nie sa znane dokladna ilosc i polozenie grup sililowych obecnych w czasteczce wyjsciowej poli- sililowanej kanamycyny, zawierajacej lub lie za¬ wierajacej w pozycji 6' przy grupie aminowej grupy ochronnej innej niz sililowa. Stwierdzono, ze zarówno niedostateczne jak i nadmierne sili- lowanie obniza wydajnosc pozadanego produktu i zwieksza wydajnosc ubocznych produktów.W przypadku bardzo niedostatecznego lub bardzo nadmiernego sililowania powstaje bardzo malo lub wogóle nie powstaje pozadany produkt. Sto¬ pien sililowania, przy którym mozna uzyskac naj¬ wieksza wydajnosc pozadanego produktu, zalezy od uzytych reagentów w etapie acylowania. Naj¬ korzystniejszy stopien sililowania przy danej kom¬ binacji reagentów, mozna latwo^okreslic za pomo¬ ca rutynowych doswiadczen.Stwierdzono podczas otrzymywania l-N-(-)-y- -amino-a-hydroksybutyrylo]kanamycyny A droga acylowania polisililowanej kanamycyny A za po¬ moca estru N-hydroksysukcynimidowego lcwasu L-<-)-y-benzylooksykarbpnyloamino-a-hydroksy- maslowego w roztworze acetonowym, ze uzyskuje sie dobra wydajnosc pozadanego produktu stosu¬ jac polisililowana kanamycyne A, otrzymana w reakcji okolo 4 do 5,5 moli szesciometylodwusi¬ lazanu na jeden mol kanamycyny A, Mozna sto¬ sowac mniejsze lub wieksze ilosci szesciometylo- dwusilazanu, ale wydajnosc pozadanego produktu w nastepnym etapie acylowania zmniejsza sie wtedy znacznie.W podanych ponizej przykladach stosuje sie okolo 4,5—5,0 moli szesciometylodwusilazanu na mol kanamycyny, w celu uzyskania maksymalnej wydajnosci w etapie acylowania.Nalezy zwrócic uwage, ze kazdy mol szescio¬ metylodwusilazanu moze wprowadzic do czaste¬ czki kanamycyny A lub E dwa równowazniki grupy trójmetylosililowej. Zarówno kanamycyna A jak i B maja po jedenascie centrów, które mo¬ zna sililowac (grupy aminowe i hydroksylowe).Natomiast kanamycyna A i B, zawierajace przy grupie 6/-aminowej grupe ochronna inna niz sili¬ lowa, maja tych miejsc dziesiec. Stad tez, 5,5 mo¬ la szesciometylodwusilazanu na jeden mol kana¬ mycyny A lub B wystarczy teoretycznie do cal¬ kowitego sililowania wszystkich grup aminowych i hydroksylowych.Natomiast w przypadku kanamycyny A i B, które zawieraja przy grupie 6'-aminowej grupe ochronna inna niz sililowa, wystarczy do calko¬ witej sililacji 5,0 moli szesciometylodwusilazanu.Uwaza sie. jednak, ze przy takich stosunkach mo- larnych nie zachodzi tak wyczerpujace sllilowa- nie, jesli reakcje prowadzi sie w ciagu rozsadnie dlugiego okresu czasu. Natomiast wyzszy stopien sililowania uzyskano przy takim samym' czasie reakcji, jesli stosowany byl katalizator sililowa¬ nia.Katalizatory sililowania znacznie przyspieszaja proces. Odpowiednimi i dobrze znanym w prak¬ tyce katalizatorami sa miedzy innymi siarczany amin, np. siarczan kanamycyny, kwas sulfamino- wy, imidazol i trójmetylochlorosilan. Stosowanie katalizatora sililowania prowadzi na ogól do uzy¬ skania wyzszego stopnia sililacji niz jest wyma¬ gany w sposobie wedlug wynalazku. Nadmiernie sililowana kanamycyna A lub B moze byc stoso¬ wana jako zwiazek wyjsciowy, jesli podda sie ja reakcji z czynnikiem desililujacym w celu zmniej¬ szenia stopnia sililacji, przed etapem acylowania.Dobra wydajnosc pozadanego produktu uzyski¬ wano acylujac polisililowana kanamycyne A, otrzymana w reakcji, w której stosowano stosu¬ nek szesciometylodwusilazanu do kanamycyny A wynoszacy 5,5:1. Natomiast w przypadku, gdy stosunek ten wynosil 7:1, lub 5,5:1 w obecnosci katalizatora sililowania, i reakcje acylowania ka¬ namycyny A za pomoca estru N-hydroksysukcyni* midowego kwasu L-<-)-y^benzylooksykarbony^ amino-a-hydroksymaslowego prowadzono w ace¬ tonie, otrzymano pozadany produkt z wydajnoscia 1% lub nizsza. Natomiast, gdy ten sam nadmier¬ nie sililowany zwiazek wyjsciowy acylówano tym samym czynnikiem acylujacym w acetonie za¬ wierajacym 21 moli wody na mol kanamycyny (2,5%, waga na objetosc), dodanej jako srodek desililujacy na godzine przed sililowaniem, uzy¬ skano pozadany produkt z wydajnoscia wynoszaca okolo 40%.Takie same wyniki uzyskano przy zastapieniu wody metanolem lub innym zwiazkiem posiadaja¬ cym aktywny atom wodoru i zdolnym do wywo- 10 i 15 20 25 30 35 50 $5 00117 307 10 lywania desililacji, takim np. jak etanol, propa- nol, butanodiol, merkaptan metylowy, merkaptan etylowy, merkaptan fenylowy i podobne.Chociaz zazwyczaj przy pracy ze zwiazkami si- lilowymi stosuje sie bezwodne rozpuszczalniki, stwierdzono nieoczekiwanie, ze nawet gdy nie wystepuje nadmierne sililowanie, dodatek wody do rozpuszczalnika przed acylowaniem czesto pro¬ wadzi do równiez dobrej, a niekiedy lepszej wy* dajnosci pozadanego produktu niz w przypadku stosowania rozpuszczalnika bezwodnego.Stwierdzono, ze w procesie acylowania prowa¬ dzonym w acetonie w zwyklych stezeniach, wy¬ noszacych 10—20%, polisililowanej kanamycyny A, uzyskuje sie doskonala wydajnosc l-N-[L-(-)-y- -amino-a-hydroksybutyrylo]kanamycyny A, jesli do mieszaniny dodaje sie do 28 moli wody na mol polisililowanej kanamycyny A przy jej stezeniu wynoszacym 20%, przy czym 28 moli wody od¬ powiada jej stezeniu wynoszacym 8%. Przy in¬ nych kombinacjach reagentów, nawet wieksza ilosc wody nie przeszkadza lyb poprawia wydaj¬ nosc.Proces acylowania mozna prowadzic w rozpusz¬ czalnikach zawierajacych do okolo 40% wody, chociaz przy tak wysokim stezeniu wody acylo- wanie nalezy prowadzic krócej, dla unikniecia nadmiernej desililacji wyjsciowej polisililowanej kanamycyny A lub B. W zwiazku z tym, stoso¬ wane w opisie i w zastrzezeniach okreslenie' „bez¬ wodny- praktycznie rozpuszczalnik organiczny" dotyczy rozpuszczalników zawierajacych do okolo 25% wody, korzystnie do 20%, bardziej korzy¬ stnie do okolo 8%, najbardziej korzystnie do oko¬ lo 4%.Jak wspomniano uprzednio, najbardziej korzy¬ stny stopien sililacji dla dowolnej kombinacji rea¬ gentów mozna latwo okreslic droga doswiadczen.Przyjmuje sie, ze korzystna srednia ilosc grup sililowych w zwiazku wyjsciowym wynosi zwykle 4—8 dla kanamycyny A lub B albo 3—7 dla ka¬ namycyny A lub B, zawierajacej przy grupie 6'-aminowej grupe ochronna inna niz sililowa.Jest to jednak tylko zalozenie teoretyczne, nie majace zasadniczego znaczenia w sposobie wdlug wynalazku.. Czas trwania i temperatura reakcji acylowania nie sa parametrami krytycznymi. Reakcje mozna prowadzic w temperaturze od okolo —30° do okolo 100°C, w ciagu od 1 godziny do jednego dnia lub dluzej. Stwierdzono, ze na ogól reakcja zachodzi dobrze w temperaturze pokojowej i taka temperatura jest korzystna ze wzgledu na wygo¬ de i koszty. Natomiast dla uzyskania maksymal¬ nej wydajnosci i selektywnego acylowania korzy¬ stne jest prowadzenie acylowania w temperatu¬ rze 0—5°C.Do acylowania grupy 1-aminówej w polisililo¬ wanej kanamycynie A lub B, zawierajacej lub nie zawierajacej przy grupie 6'-aminowej grupy ochronnej innej niz sililowa, mozna stosowac do¬ wolna znana pochodna kwasu o wzorze ogólnym 2, odpowiednia do acylowania' pierwszorzednych grup aminowych. Jako przyklady odpowiednich 10 15 20 30 35 40 50 55 60 pochodnych acylujacych wolnego kwasu moga byc bezwodniki, mieszane bezwodniki, np. bezwodniki z kwasem alkoksymrówkowym, halogenki kwa¬ sowe, azydki kwasowe, aktywne estry i aktywne tioestry.Wolne kwasy mozna sprzegac z wyjsciowa po- lisililowana kanamycyna, poddajac je najpierw reakcji z chlorkiem N,N'-dwumetylochlorotormi- miniowym, patrz brytyjski opis patentowy nr 1008170 i Novak i Weichet, Experientia, XXI, 6, 360/1965); lub stosujac N.N^karlwnylodwuimida- zol albo N,N'^karbonylodwutriazol, (patrz opis pa¬ tentowy Republiki Poludniowej Afryki 63/2684); albo.stosujac karbodwuimid, zwlaszcza, N,N'-dwu- cykloheksylokarbodwuimid, N,N'-dwuizopropylo- karbodwuimid lub N-cykloheksylo-N'-(2-irtorfoli- noetylo)karbodwuimid (Sheehan i Hess, J. Am.Chem. Soc., 77, 1967, (1965); albo stosujac odczyn¬ nik alkinyloaminowy, (R. Buijle i H. G'. Viehe, Angew. Chem. Int. Ed., 3, 582/1964); albo sól izo- ksazoliowa, (R. B. Woodward, R. A. Olofson i H.Mayer, J. Am. Chem. Soc, 83, 1010/1961); albo odczynnik keteniminowy, (C. L. Stevens i M. E.Munk, J. Am. Chem. Soc., 80, 4065/1958); albo szesciochlorocyklotrójfosfatriazyne lub szesciobro- mocyklotrójfosfatriazyne, (opis patentowy St.Zjedn. Am. nr 3651050); albo azydek dwufenylo- fosforylowy (DDPA), (J. Am. Chem. Soc., 94, 6203—6205/1972); albo cyjanek dwuetylofosforylu (DEPC), (Tetrahedron Letters, 18, 1595—1598/1973); albo fosforyn dwufenylo, (Tetrahedron Letters, 49, 5047—5050/1972).Innymi odpowiednikami kwasu sa odpowiednie azolidy, to znaczy amidy odpowiedniego kwasu, w których amidowy atom azotu jest czescia pseu- doaromatycznego pierscienia piecioczlonowego, za¬ wierajacego co najmniej dwa atomy azotu, takie¬ go jak imidazol, pirazol, triazole, benzimidazol, benzotriazol i ich podstawione pochodne. Dla fa¬ chowców jest zrozumale, ze niekiedy jest poza¬ dane lub konieczne chronienie grupy hydroksy¬ lowej w zwiazku acylujacym, pochodna kwasu o wzorze 2, np. jesli stosuje sie takie pochodne jak halogenki kwasowe. Grupe hydroksylowa ochrania sie w sposób znany w praktyce, np. przez acetylowania, sililowanie, wprowadzanie grupy karbobenzylooksylowej itp.Po zakonczeniu reakcji acylowania, wszystkie grupy ochronne usuwa sie, stosujac znane sposo¬ by, i otrzymuje sie pozadany zwiazek o wzorze ogólnym 1. Grupy sililowe mozna np. latwo usu¬ wac droga hydrolizy woda, korzystnie przy nis¬ kich wartosciach pH. Grupe ochronna B w po¬ chodnej kwasu o wzorze 2, oraz grupe chroniaca grupe 6'-aminowa w wyjsciowej polisililowanej kanamycynie, usuwa sie takze przy zastosowaniu znanych sposobów. Grupe IHrz.-butoksykarbony- lowa usuwa sie w reakcji z kwasem mrówkowym, grupe karbobenzylooksylowa droga katalitycznego uwodornienia, grupe 2-hydroksynaftylokarbonylo- wa-1 na drodze kwasnej hydrolizy, grupe trój- chloroetylowa w reakcji z pylem cynkowym w kwasie octowym lodowatym, grupe ftaloilowa dzialaniem wodzianu hydrazyny w etanolu, itd.117 307 11 12 Wydajnosc produktu oznaczana jest w rózny sposób. Po usunieciu wszystkich grup ochronnych i chromatografii na Amberlicie CG-50(NH4-l-,~ wy¬ dajnosc amikacyny mozna oznaczac izolujac kry¬ staliczny produkt z odpowiednich frakcji lub na drodze oznaczania mikrobiologicznego metoda tur- bidymetryczna lub plytkowa odpowiednich frak¬ cji. Inna metoda, która stosowano byla wysoko¬ rozdzielcza chromatografia cieczowa niereduko- wanej mieszaniny po acylowaniu, to znaczy roz¬ tworu wodnego otrzymanego po hydrolizie grup sililowych i usunieciu rozpuszczalnika organicz¬ nego, ale przed wodoroliza prowadzaca do usu¬ niecia pozostalych grup ochronnych. Oznacza sie w tym przypadku nie bezposrednio arnikacyne lub BB-K29 ale odpowiednie jedno- lub dwu-N-ochro- nione zwiazki.Do powyzszego celu stosowano wysokorozdziel¬ czy chromatograf cieczowy Waters Associates ALC/GPC 244, zaopatrzony w detektor absorpcji Water Associates Model 440 oraz kolumne //-Bon- dapak C-18 o wymiarach 30 cm X 3,9 mm (sred¬ nica wewnetrzna).Stosowano nastepujace warunki pracy.Faza ruchoma — 25% propanol-2 — 75% OiGl m octan sodowy, PH 4,0 Szybkosc przeplywu — 1 ml/minute Detektor Czulosc Rozcienczalnik Ilosc podawana Stezenie — UV, 254 nm — 0,04 AUFS — Dwumetylosulfotlenek — 5 fil — 10 mg/ml Szybkosc zapisu byla rózna, na ogól wynosila 0.8 minuty na 1 cm. Stosujac powyzsze warunki, otrzymano maksima absorpcji w nadfiolecie, któ¬ re bez trudu interpretowano ilosciowo. Wyniki po¬ wyzszych oznaczen podawane sa w opisie jako oznaczenia HPLC.W celu unikniecia powtarzania skomplikowa¬ nych nazw chemicznych, czasami w opisie stoso¬ wane sa nastepujace skróty: AHBA BHBA HONB NAE (lub BHBA—'ONB') — Kwas L-{-)-y-amino-«-hy- droksymaslowy — Pochodna N-karbobenzylo- oksylówa AHBA — N-hydroksy-5-norborne- no-2,3-dwukarboksyimid, — N-hydroksy-5-norborne- no-2,3-dwukarboksyimi- dowy ester BHBA HONS — N-hydroksysukcynimid SAE — Ester N-hydroksysukcyni- (lub BHBA—'ONS') midowy BHBA DCC — Dwucyklolieksylokarbo-^ dwuimid DCU — Dwucykloheksylomocznik HMDS — Szesciometylodwusilazan BSA —Bis(trójmetylosililo)aceta- mid MSA — Trójmetylosililoacetamid TFA —Grupa trójfluoroacetylowa t^BOC — Grupa illrz.-ibutyloksykar- bonylowa. 10 15 20 C5 30 35 10 45 50 ,55 f5 „Dicalite" jest nazwa firmowa ziemi okrzemko¬ wej produkowanej przez Great Lakes Carbon Corporation. v - Amberlit CG-50 jest nazwa handlowa slabo kwasnego kationowego wymieniacza jonowego ty¬ pu karboksylo-polimetakrylowego, produkowanego przez Rohm and Haas Co.,,^-Bondapak" jest nazwa firmowa dla serii wysokorozdzielczych kolumn do chromatografii cieczowej, wytwarzanych przez Waters Associa¬ tes.Okreslenia „nizsza grupa alkilowa" i „nizsza grupa alkoksylowa" oznaczaja grupy alkilowe lub alkoksylowe zawierajace 1—6 atomów wegla.Skrót „KFW oznacza zawartosc wody oznaczona metoda Karla Fischera.Przyklad I. Wytwarzanie l-N-{L-(-)-y-amino- -«-hydroksybutyrylo]kanamycyny A (amikacyny) droga selektywnego acylowania poli(trójmetylosi- lilo)-6'-N-karibobenzylooksykanamycyny A w bez¬ wodnym ketonie dwuetylowym. 15 g (24,24 milimola) 6'-N-karbobenzylooksyna- mycyny A zawiesza sie w 90 ml bezwodnego ace- tonitrylu i ogrzewa do temperatury wrzenia w atmosferze azotu, po czym dodaje sie powoli w ciagu 30 minut 17,5 g (108,48 milimola) szescio- metylodwusilazanu i calosc ogrzewa w tempera¬ turze wrzenia w ciagu 24 godzin. Rozpuszczalnik odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C i suszy pod cisnieniem 10 mm Hg, otrzymujac 27,9 g bialego bezpostaciowego osadu. Wydajnosc w przeliczeniu na dziewiecio- sililo-6VNnkarbobenzylooksykanamycyne A wyno¬ si 90,71%.Otrzymany osad rozpuszcza sie w 150 ml bez¬ wodnego ketonu dwuetylowego w temperaturze 23°C i dodaje powoli, podczas mieszania w ciagu 30 minut, roztwór 11,05 g (26,67 milimola) estru N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dwukarboksyimido- wego kwasu L-(-)-y-bemzylooksykarbonyloamino- -a-hydroksymaslowego w 100 ml bezwodnego ke¬ tonu dwuetylowego. Calosc miesza sie w ciagu 78 godzin w temperaturze 23°C, po czym zólty, klarowny roztwór o wartosci pH 7,0 rozciencza sie 100 ml wody. Wartosc pH mieszany doprowa¬ dza sie do 2,8 za pomoca 3 n kwasu solnego i mie¬ sza silnie w ciagu 15 minut. Warstwe wodna od¬ dziela sie a warstwe organiczna ekstrahuje 50 ml wody o wartosci pH 2,8.Polaczone frakcje wodne przemywa sie 50 ml octanu etylu. Roztwór umieszcza sie w aparacie Parra o objetosci 500 ml, dodaje 5 g 5% palladu na weglu aktywnym (katalizator Engelharda) i re¬ dukuje wodorem pod cisnieniem 466,5-Pa, w ciagu 2 godzin, w temperaturze 23°C. Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi „Dicalite", przemywa sa¬ czek dodatkowo 30 ml wody i przesacz zateza pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 45°C do objetosci 50 ml. Roztwór ten nanosi sie na ko¬ lumne o rozmiarach 5X100 cm, zaladowana wy¬ mieniaczem jonowym Amberlit CG—50(NH4+), przemywa na kolumnie 1000 ml wody, po czym nieprzereagowana kanamycyne A, 3-[L-(-)-y-ami- no-a-hydroksybutyrylo]kanamycyne A (BB—K29)117 307 13 14 i amikacyne eluuje sie 0,5 n roztworem wodoro¬ tlenku amonowego. v Zwiazki wieloacylowe eluuje sie :3 n roztworem wodowotlenku sodowego. Proces elucji kontroluje sie za pomoca oznaczen biologicznych, chromato¬ grafii cienkowarstwowej oraz pomiarów skrecal- nosci.W ponizszej tablicy podano objetosc i skrecal- nosc optyczna kazdej frakcji eluatu, a takze ilosc w gramach i procentach stalych substancji wyizo¬ lowanych z kazdej frakcji droga odparowania roz¬ tworu do sucha. ' 1 Sub¬ stancja Kana- mycy- na A BB-K29 Amika- cyna Zwiazki wielo¬ acylo¬ we Objetosc ml 1000 1750 2000 900 578 +0,115 +0,24 + 0,31 +0,032 Ilosc g 0,9.89 4,37 6,20 0,288 • Wydaj- nosc 9,15 32,0 ' 47,4 2,0 | Odrzucony roztwór dwuetyloketonowy zawiera, zgodnie z chromatografia cieczowa, dodatkowe 3—5% amikacyny.Surowa amikacyne (6,20 g) rozpuszcza sie w 20 ml wody, rozciencza roztwór 20 ml metanolu i dodaje 20 ml izopropanolu dla zapoczatkowania krystalizacji. Otrzymuje sie 6,0 g (45,8%) krysta¬ licznej amikacyny.Przyklad II. Wytwarzanie l-N-[L-(-)-y-ami- no-«-hydroksybutyrylo]kanamycyny A (amikacyny droga acylowania (poli(trójmetylosililo)-6'-N-karbo- benzylooksynamycyny A w bezwodnym acetonie.Poli(trójmetylosililo)-6' -N-karbobenzylooksyka- namycyne A otrzymana w sposób podany w przy¬ kladzie I (103 g, 0,081 mola) w przeliczeniu na pochodna dziesieciosililowa, rozpuszcza sie w 100 ml bezwodnego acetonu w temperaturze 23°C. Do roztworu dodaje sie powoli w ciagu 15 minut, podczas mieszania w temperaturze 23°C, roztwór 35,24 g (0,085 mola) estru N-hydroksy-5-norbome- no-2,3-dwukarboksyimidowego kwasu L-(-)-y-ben- zylooksykarbonyloamino-a-hydroksymaslowego w 180 ml bezwodnego acetonu. Calosc miesza sie w ciagu 20 godzin pod azotem, w temperaturze 23°C.Otrzymany zólty, klarowny roztwór o wartosci pH 7,2 rozciencza sie 100 ml wody. Wartosc pH mieszaniny doprowadza sie do 2,5 za pomoca 3 n kwasu solnego i mieszanie kontynuuje w ciagu 15 minut w temperaturze 23°C. Aceton usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze oko¬ lo 35°C. Pozostaly roztwór umieszcza sie w apa¬ racie Parra o pojemnosci 500 ml, dodaje 10 g 5% palladu na weglu aktywnym (katalizator En- gelharda) i redukuje wodorem pod cisnieniem oko¬ lo 373,2 Pa, w ciagu 2 godzin, w temperaturze 10 15 20 25 30 35 40 45 50 65 65 23°C. Mieszanine saczy sie. przez warstwe ziemi okrzemkowej i przemywa saczek 50 ml wody.Polaczone przesacze zateza sie do okolo 1/3 ob¬ jetosci i otrzymany roztwór o wartosci pH 6,9— 7,2 nanosi na kolumna o rozmiarach 6X110 cm, zaladowana Amberlitem CG-50 (NH4+) i eluuje w gradiencie stezenia wodorotlenku amonowego, rozpoczynajac od wody a konczac na 0,6 n roz¬ tworze. Przebieg elucji kontroluje sie za pomoca automatycznego polarymetru i chromatografii cienkowarstwowej.Polaczone frakcje zawierajace amikacyne zateza sie do stezenia 25—30%, rozciencza równa objetos¬ cia metanolu i dodaje dwie objetosci izopropano¬ lu dla zapoczatkowania krystalizacji. Otrzymuje sie 18,2 g (40%) krystalicznej amikacyny. Odzy¬ skuje sie równiez 12% kanamycyny A, 40% BB-K29 i 5% poliacylowanej kanamycyny. Lacz¬ nie uzyskuje sie wiec 97% produktów.Przyklad III. Wytwarzanie l-N-[L-(-)-y- -amino-a-hydroksybutyrylo]kanamycyny A (ami¬ kacyny) droga selektywnego acylowania poli(trój- metylosililo)kanamycyny A, stosujac wprowadze¬ nie grup ochronnych in situ.A. Poli(trójmetylosililo)kanamycyna A. 18 g (37,15 milimoli) kanamycyny A, wolnej zasady zawiesza sie w 200 ml bezwodnego aceto- nitrylu i ogrzewa do wrzenia, a nastepnie dodaje sie w ciagu 30 minut 29,8 g (184,6 milimola) szes- ciometylodwusilazanu. Calosc miesza sie i ogrze¬ wa w temperaturze wrzenia w ciagu 78 godzin, otrzymujac jasnózólty, klarowny roztwór. Po od¬ parowaniu rozpuszcza pod zmniejszonym cisnie¬ niem otrzymuje sie 43 g bezpostaciowej stalej po¬ zostalosci. Wydajnosc w przeliczeniu na dziesie- ciosililokanamycyne A wynosi 94%.B. l-N-[L-(-)-y-amino-a-hydroksybutyrylo]kana- mycyna A. 5,56 g (20,43 milimola) kwasu p-(benzylooksy- karbonylooksy)benzoesowego zawiesza sie w 50 ml bezwodnego ocetonitrylu, w temperaturze 23°C, po czym dodaje sie podczas dobrego mieszania 8,4 g (41,37 milimola) N,0-bis-trójmetylosililoaceta- midu. Roztwór pozostawia sie w ciagu 30 minut w temperaturze 23°C a nastepnie dodaje w ciagu 3 godzin, podczas silnego mieszania, do roztworu 21,5 g (17,83 milimola) poli(trójmetylosililo)frana- mycyny A (przeliczono na zwiazek dziesieciosililo- wy) w 75 ml bezwodnego acetonitrylu, w tempe¬ raturze 23°C.Calosc miesza sie w ciagu 4 godzin, po czym odparowuje rozpuszczalnik pod zmniejszonym cis¬ nieniem, w temperaturze 40°C i oleista pozosta¬ losc rozpuszcza w 50 ml bezwodnego acetonu, w temperaturze 23°C.Do tego roztworu dodaje sie w ciagu- 5 minut roztwór 8,55 g (20,63 milimola) estru N-hydroksy- -5-norborneno-2,3-dwukarboksyimidowego kwasu L-(-)-y-benzylooksykarbonyloamino-a-hydroksy- maslowego w 30 ml acetonu. Mieszanine pozosta-15 117 307 16 wla sie w ciagu 78 godzin w temperaturze 23°C, po czym rozciencza 100 ml wody i wartosc pH wynosza 7,0 obniza sie do 2,5 za pomoca 6 n kwasu solnego. Mieszanine umieszcza sie w apa¬ racie Parra o pojemnosci 500 ml, dodaje 3 g 5% palladu na weglu aktywnym i redukuje wodo¬ rem pod cisnieniem okolo 373,2 Pa, w ciagu 3 go¬ dzin, w temperaturze 23°C. Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi okrzemkowej i przemywa ziemie na saczku 20 ml wody. W polaczonych przesaczach stwierdzono na podstawie oznaczenia mikrobiologicznego wobec E, coli obecnosc okolo 11.400 mcg/ml (19%) amikacyny.Przyklad IV. Wytwarzanie l-N-[L-(-)-y- -amino-a-hydroksybutyrylo]kanamycyny A (ami¬ kacyny) droga selektywnego acylowania poli(trój- metylosililó)kanamycyny A.A. Poli(trójmetylosililo)kanamycyna A Mieszanine zawierajaca 10 g (20,6 milimola) ka- namycyny A w 100 ml bezwodnego acetonitrylu i 25 ml (119 milimoli) 1,1,1,3,3,3-szesciometylodwu- silazanu, ogrzewa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 72 godzin, otrzymujac klarowny, jasnozólty roztwór, który odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 30— 40°C. Otrzymuje sie 21,3 g ^oIi(trójmetylosililo)ka- namycyny A w postaci jasnobrazowego bezposta¬ ciowego proszku. Wydajnosc w przeliczeniu na dziesieciosilikanamycyne A wynosi 85%.B. l-N-[L-(-)-y-amino-a-hydroksybutyrylo]kana- mycyna A Do roztworu 2,4 g (2,0 milimole) poli(trójmety- losililo)kanamycyny A w 30 ml bezwodnego ace¬ tonu, dodaje sie powoli w temperaturze 0—5CG, 2,0 milimole estru N-hydroksy-5-norborneno-2,3- -dwukarboksyimidowego kwasu L-(-)-y-benzylo- oksykarbonyloamino-a-hydroksymaslowego w 10 ml bezwodnego acetonu. Calosc miesza sie w cia- 10 15 20 35 gu tygodnia w temperaturze 23°C i odparowuje do sucha pod zmniejszonym" cisnieniem w lazni o temperaturze 30—40*C. Do pozostalosci dodaje sie 60 ml wody i 70 ml metanolu. Otrzymany roz¬ twór zakwasza sie 3 n kwasem solnym do war¬ tosci pH 2,0, po czym redukuje wodorem pod cis¬ nieniem okolo 466,5 Pa w ciagu 2 godzin, stosu¬ jac 500 mg 5% palladu na weglu aktywnym, w charakterze katalizatora. Mieszanine saczy sie, .przemywa saczek i polaczone przesacze oznacza mikrobiologicznie wobec E. coli. Zawartosc ami¬ kacyny wynosi 29,4%.Przyklad V. Wytwarzanie amikacyny droga N-acylowania poli(trójmetylosiliIo)-6'-N-karboben- zoksykanamycyny A w bezwodnym acetonie.A. Produktem sililowania 6A-N-karbobenzoksyka- namycyny A o wzorze 15 6'-N-Cbz kana A o wzorze sumarycznym C^^O^^ (618,65) w acetonitrylu za pomoca szesciometylodwusilazanu, HMOS (161,4) jest przejsciowa pochodna dziewieciosililowa 6'-N- -karbobenzoksykanamycyny A 6'-N-Cbz - kana A (silyl)9, o wzorze 16 i wzorze sumarycznym C|3H114013N4Si9 i ciezarze czasteczkowym 1268,3 (schemat 1, R oznacza grupe trójmetylosililowa).Sililowana kanamycyna A jest dobrze rozpusz¬ czalna w wiekszosci rozpuszczalników organicz¬ nych. Acylowanie 5% molarnym nadmiarem estru aktywnego NAE, otrzymanym wedlug schematu 2, daje mieszanine zawierajaca tylko pochodne kar- bobenzylooksylówe amikacyny i zwiazku BB-K29, nieco nieprzereagowanej kanamycyny A i nieco substancji poliacylowanych. W zadnym z doswiad¬ czen nie wykrywano obecnosci zwiazku BB-K11.Po redukcji i chromatografii na Amberlicie CG-50 (NH4+), z zastosowaniem do elucjr wodo¬ rotlenku amonowego w gradiencie stezenia, izolu¬ je sie czysta amikacyne z wydajnoscia rzedu 40%.Ostatni etap wytwarzania amikacyny ilustruje ponizszy schemat. ^_ Dziewieciosililo-6'-N-karbobenzyloksykanamycyna A (1268,3) + NAE (414,6) Aceton, 23°C Dwukarbobenzyloksyamikacyna (854) + Dwukarbobenzyloksy — BB-K29 + 6Mcarbobenzyloksy-l,3-dwu-BHBA-kanamycyna A + 6'-karbobenzyloksykanamycyna A H2, 5% Pd/C Amikacyna (585,62) + BB-K29 + 1,3-dwu-AHBA-kanamycyna A (722,76) + Kanamycyna A (484,5) Amberlit CG-50 (NIJ4+) Amikacyna117 307 17 18 B. Materialy 6'-N-karboksy- benzyloksyka- naimycyna A HMDS Acetonitryl BHBA HONB DOC Aceton Amberlit CG-50 (NH4+) Metanol | fzopropanol Ilosc g 50 58,9 21,5 15,2 17,48 Ilosc ml 76,5 300 260 3000 Ile trzeba Ile trzeba Ilosc moli 0,081 0,365 0,085 0,085 0,085 C. Bezpieczenstwo pracy 6'-N-karbobenzyloksy- Brak danych, unikac kanamycyna A Acetonitryl Szesciomety^odwusila- zan (HMDS) Dziewieciosilili-6'-N- -karbobenzyloksykana- mycyna A BHBA HONB DCC Aceton NAE Metanol Izopropanol Wodorotlenek amonowy zetkniecia z pylami.Traktowac jak cyjanek, unikac wydychania o- parów, moze wywoly¬ wac podraznienie skóry.Drazniacy, zachowac ostroznosc..Brak danych, zachowac ostroznosc.Brak danych o toksy¬ cznosci, chronic od ze¬ tkniecia z substancja¬ mi stalymi.Brak danych o toksy¬ cznosci, zachowac ostro¬ znosc.Silny srodek drazniacy skóre i oczy. Unikac wdychania pylów i par.Toksyczny.Palny. Wdychanie mo¬ ze wywolywac ból glo¬ wy, zmeczenie, podnie¬ cenie, podraznienie dróg oddechowych, a w wiek¬ szych ilosciach dziala narkotycznie.Brak danych. Uzywac zawsze w postaci roz¬ tworu w acetonie.Palny. Dzialanie truja¬ ce przy polknieciu, wdy¬ chaniu lub poprzez ab¬ sorpcje przez skóre.Palny. Przy polknieciu lub wdychaniu duzych ilosci moze wystepowac ból lub zawroty glowy, depresja, wymioty, nar¬ koza.Opary toksyczne. Sto¬ sowac maske, unikac zetkniecia ze skóra. 10 15 20 35 40 45 50 55 65 Amberlit CG-50 (NH4+) Brak danych o toksy¬ cznosci. Zachowywac ostroznosc.D. Sposób postepowania a. Wytwarzanie dziewieciosililo-6'-N-karboben- zyloksykanamycyny A 1. 50 g 6/-N-karbobenzyloksykanamycyny A (KF<4%) zawiesza sie w 300 ml acetonitrylu (KF<0,01%) i ogrzewa calosc do temperatury wrzenia (74°), przepuszczajac przez zawiesine stru¬ mien azotu. N 2. Dodaje sie powoli w ciagu 30 minut 75,8 ml szesciometylodwusilazanu (HMDS). Nastepuje cal¬ kowite rozpuszczenie i wydzielanie gazowego amo¬ niaku. 3. Mieszanine ogrzewa sie w ciagu 18—20 go¬ dzin wv temperaturze wrzenia, przepuszczajac przez nia azot. 4. Otrzymany klarowny, jasnozólty roztwór za- teza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w lazni o temperaturze 40—50°C.Otrzymuje sie 89—92 g (90—94%) zwiazku dzie- wieciosililowego w postaci piankowatego osadu.Uwaga: W nastepnych doswiadczeniach przy za¬ stosowaniu innych rozpuszczalników osadu nie wyodrebniano, ale stosowano bezposrednio do acy- lowania. b. Wytwarzanie estru N-hydroksy-5-norborne- no-2,3-dwukarboksyimidowego kwasu L-(-)-y-kar- bobenzyloksyamino-a-hydroksymaslowego (NAE) 1. 21,5 g kwasu L-(-)-y-karbobenzyloksyamino- -a-hydroksyimaslowego (BHBA) rozpuszcza sie w 100 ml bezwodnego acetonu w temperaturze 23°C a nastepnie dodaje sie 15,2 g N-hydroksy-5-nor- , borneno-2,3-dwukarboksyimidu. 2. Do otrzymanego roztworu dodaje sie w cia¬ gu 30 minut, podczas mieszania, roztwór 17,48 g dwucykloheksylokarbodwuimidu (DCC) w 50 ml acetonu. Temperatura wzrasta do okolo 40°C i wydziela sie osad dwucykloheksylomocznika (DCU). 3. Zawiesine miesza sie w ciagu 3—4 godzin, utrzymujac temperature 23—25°C. 4. Odsacza sie mocznik, przemywa na saczku 30 ml acetonu a polaczone przesacze przeznacza do etapu acylowania. c. Acylowanie dziewieciosililo-6'-N-karbobenzy- loksykanamycyny A. 1. Dziesieciosililo-6'-N-karbobenzyloksykanamy- cyne A, wyodrebniona w punkcie A-4, rozpuszcza sie w 100 ml bezwodnego acetonu w temperatu¬ rze 23—24°C. 2. Do powyzszego roztworu dodaje sie powoli w ciagu 15 minut, podczas silnego mieszania, roz¬ twór NAE, przygotowany wedlug punktu B. Tem¬ peratura wzrasta stopniowo do okolo 40°C. Ca¬ losc miesza sie w ciagu 18—20 godzin, w tempe¬ raturze 23°C i w atmosferze azotu. 3. Do mieszaniny dodaje sie 100 ml wody i ob¬ niza sie wartosc pH z 6,9—7,2 do 2,2—2,5 za po¬ moca 6 n kwasu solnego. Calosc miesza sie w ciagu 15 minut w temperaturze 23°C. Uwaga:117 307 19 20 •Moze sie tworzyc druga faza, ale nie stanowi to problemu w dalszej przeróbce. 4. Aceton odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem w lazni o temperaturze 30—35°C. Za- tezony roztwór przenosi sie do odpowiedniego na¬ czynia do prowadzenia wodorolizy, przed tym przeplukanego azotem. Dodaje sie 10 g 5% palla¬ du na weglu aktywnym, i uwodarnia pod cisnie¬ niem okolo 373,2 Pa w ciagu 2—3 godzin. 5. Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi okrzemkowej „Dcalite", przemywajac naczynie reakcyjne i ziemie na saczku 50 ml wody. 6. Polaczone przesacze zateza sie do okolo 1/3 objetosci (50 ml) pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 40—45°C. 7. Sprawdza, sie wartosc pH, która powinna wynosic 6,9—7,2. W razie potrzeby koryguje sie dodatkiem 1 n wodorotlenku amonowego. Mie¬ szanine nanosi sie na kolumne o rozmiarach 6X110 cm, wypelniona Amberlitem CG-50 (NH4+). 8. Kolumne przemywa sie 1000 ml odminerali- zowanej wody a nastepnie eluuje 0,5—0,6 n wo¬ dorotlenku amonu, kontrolujac przebieg elucji za pomoca automatycznego polarymetru. Skladniki mieszaniny eluowane sa w nastepujacej kolejnos¬ ci: nieprzereagówana kanamycyna A, zwiazek BB-K29, amikacyna. W zadnej z reakcji acylo- wania nie stwierdza sie powstawania zwiazku BB-K11. Zwiazek poliacylowy, to znaczy pochod¬ na 1,3-dwuAHBA kanamycyny A odzyskuje sie przemywajac kolumne 3 n wodorotlenkiem amo¬ nowym. 9. Polaczone frakcje zawierajace amikacyne zateza sie do stezenia 25—30%, rozciencza roztwór jedna objetoscia metanolu i zaszczepia krysztal¬ kami amikacyny. 10. Dodaje sie powoli w ciagu 2 godzin dwie objetosci izopropanolu, dobrze miesza i pozosta¬ wia do krystalizacji w temperaturze 23°C, na okres 6^8 godzin. 11. Osad odsacza sie, przemywa najpierw mie¬ szanina 1:1:2 wody, metanolu i izopropariolu (50 ml) a pózniej 25 ml izopropanolu. 12. Osad suszy sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem, w temperaturze 40°C, w ciagu 12—16 go¬ dzin. Otrzymuje sie 17,3—19,0 g (38—42%) ami¬ kacyny o podanych ponizej wlasciwosciach. Chro¬ matografia cienkowarstwowa na plytkach z ze- 10 15 ?0 30 85 40 45 NI lem krzemionkowym o wymiarach 5X20 cm, pro¬ dukcji firmy Quantun Industries, wykazuje w ukladzie chloroform, metanol, wodorotlenek amo¬ nowy i woda (1:4:2:1) obecnosc jednej plamy wywolywanej ninhydryna, o Rf = okolo 0,4.Skrecalnosc wlasciwa ' _ 123° (c=l%) woda O.lmNUOH 0,lmH2SO4 J589 +101,6° +101,9° +103,5° 13. Z mieszaniny reakcyjnej wyodrebnia sie takze 39—42% zwiazku BB-K29, 10—14% nieprze- reagowanej kanamycyny A oraz okolo 5% po¬ chodnej 1,3-dwu-AHBA kanamycyny A. Bilans produktów wynosi wiec powyzej 95%.Przyklad VI. Wytwarzanie amikacyny dro¬ ga selektywnego N-acylowania poli(trójmetylosili- lo)-kanamycyny A w bezwodnym acetonie.A. Ogólny sposób Sililowanie kanamycyny A zasady o wzorze su¬ marycznym C18H36OUN4 i ciezarze czastkowym 484,51 w acetonitrylu za pomoca szesciometylo- dwusilazanu (HMDS) o ciezarze czasteczkowym 161,4 daje (poli(trójmetylosililo)-kanamycyne A.Stopien sililacji nie jest pewny, ale przyjmuje^ sie, ze produktem jest dziesieciosililo-kanamycyna A o wzorze sumarycznym C48H116O1iN4Si10 i cieza¬ rze czasteczkowym 1206,35. Polisililowana kana¬ mycyna A jest dobrze rozpuszczalna w wiekszosci rozpuszczalników organicznych. Sililowanie pro¬ wadzi sie wedlug schematu 3 (we wzorze 20 R oznacza grupe trójmetylosililowa). Acylowanie równomolarna iloscia SAE ciezar czasteczkowy 350,33 w bezwodnym acetonie, w temperaturze 23°C, daje mieszanine zawierajaca pochodne kar- bobenzyloksylowe amaikacyny i BB-K29, zazwy¬ czaj w stosunku 2—3/1, zwiazek BB-K6 (tokolo 5—8%), nieprzereagówana kanamycyne A (15— 20%) oraz nieco (5—10%) zwiazków poliacylowa- nych. Podobnie jak w poprzednich doswiadcze¬ niach, w których acylowano 6'-N-karbobenzoksy- kanamycyne A, nie wykrywa sie obecnosci zwiaz¬ ku BB-K11. Acylowanie prowadzi sie wedlug sche¬ matu 4. Po redukcji, obróbce acetonem i chro¬ matografii na Amberlicie CG-50(NH4+), z zastoso¬ waniem do elucji 0,5 n wodorotlenku amonowego, izoluje sie krystaliczna amikacyne z wydajnoscia rzedu 34—39%. Ostatni etap wytwarzania amika¬ cyny ilustruje ponizszy schemat.H2, 5% Pd/C Dziesieciosililokanamycyna A (1206,35) + SAE(350,33) Aceton, 23°C KarbobenzyloKsyamikaCyna (720) + Karbobenzyloksy-BB-K29 + Karbobenzyloksy-BB-K6 + ¦- - Kanamycyna A + Zwiazki poliacylowe, glównie 1,3-dwu-BHBA-kanamycyn^ A Amikacyna (585,62) + BB-K6 + 1,3-dwu-AHBA-kanamycyna A (722,76) + kanamycyna A ] Amberlit CG-50 (NH4+) Amikacyna21 117 307 22 B. Materialy Kanamycyna A, zasada HMDS (ciezar wlasciwy 0,774) Acetonitryl SAE Amberlit CG-50 (NH4+) Aceton Metanol Izopropanol Ilosc g 50 86,68 35,03 ' Ilosc ml 112 600 3000 850 Ile trzeba Ile trzeba Ilosc moli o,ro3 0,537 0,10 C. Bezpieczenstwo pracy Kanamycyna A, zasada Znany lek, zachowy¬ wac zwykle srodki ostroznosci.Dziesieciosililokanamycyna A Brak danych, zacho¬ wywac ostroznosc.Inne materialy Jak w przykladzie V.D. Sposób postepowania a. Wytwarzanie dziesieciosililokanamycyny A 1. 50 g kanamycyny A zasady (KF 2,5—3,5%) zawiesza sie w 500 ml acetonitrylu (KF 0,01%) i ogrzewa calosc do temperatury wrzenia, prze¬ puszczajac przez zawiesine strumien azotu. 2. Dodaje sie powoli, w ciagu 30 minut, 112 ml szesciometylodwusilazanu (HMDS). Po uplywie 4—5 godzin nastepuje calkowite rozpuszczenie, po¬ laczone z wydzielaniem sie amoniaku. 3. Mieszanine ogrzewa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 22—26 godzin, przepuszczajac przez nia azot. 4. Otrzymany klarowny, bladozólty roztwór za- teza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w tempe¬ raturze 40°C. Pozostalosc w postaci syropu roz¬ puszcza sie w 100 ml acetonitrylu i zateza pod bardzo niskim cisnieniem w ciagu 3—6 godzin.Otrzymuje se 109—115 g bialawego bezpostacio¬ wego osadu. Wydajnosc w przeliczeniu na dzie- sieciosililokanamycyne A wynosi 90—95%. b. Wytwarzanie estru N-hydroksysukcynimido- wego kwasu L-(-)-y-karbobenzyloksyamino-a-hy- droksymaslowego (SAE). 1. 100 g kwasu L-(-)-y-benzylooksykarbpnylo- amino-a-hydroksyniaslowego (BHBA) i 45,38 g N-hydroksysukcynimidu (N-HOS) rozpuszcza sie w 1300 ml octanu etylu (KF<0,05%) i miesza w temperaturze 23°C. 2. Rozpuszcza sie 81,29 g dwucykloheksylokar- bodwuimidu (DCC) w 400 ml octanu etylu (KF<0,05%), w temperaturze 23°C. Roztwór ten dodaje sie podczas silnego mieszania w ciagu 30 minut do roztworu z punktu 1. Temperatura wzra¬ sta do 40—42°C i wydziela sie osad dwucyklohe- ksylomocznika (DCU). Zawiesine miesza sie w temperaturze 23°C, w ciagu 3—4 godzin. 3. Odsacza sie dwucykloheksylomocznik, prze¬ mywa go na saczku 250 ml octanu etylu 5 (KF<0,05%) i odrzuca osad. 4. Polaczone przesacze zateza sie do objetosci okolo 500 ml pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 30—35°C. Produkt zaczyna krystali¬ zowac. 5. Zatezony roztwór przenosi sie do odpowied¬ niego naczynia i dodaje podczas silnego mieszania 100 ml heptanu. W razie potrzeby zaszczepia sie roztwór krysztalami SAE. Krystalizacja rozpoczy¬ na sie prawie natychmiast. Zawiesine miesza sie w ciagu 30 minut, w temperaturze 23°C. 6. Osad odsacza sie i przemywa mieszanina 3 :1 heptanu i octanu etylu i nastepnie 100 ml hep¬ tanu. 20 7. Osad suszy sie w suszarce prózniowej w temperaturze 30—35°C, w ciagu 18—20 godzin. Wy¬ dajnosc 110,1^131,4 g (80—95%). Temperatura top¬ nienia 119—120°C, miekniecia 114°C (korygowana).Chromatografie cienkowarstwowa wykonywano 25 na wstepnie wycechowanych plytkach z zelem krzemionkowym, o wymiarach 2X10 (produkcji formy Analtech Inc), stosujac do rozwijania mie¬ szanine 4 :12 :1 acetonu, benzenu i kwasu octo¬ wego. Wartosc Rj? wynosi 0,7 dla SAE i 0,2 dla 30 BHBA. Do wywolywania stosowano 1% roztwór wodny nadmanganianu potasowego. c. Acylowanie dziesieciosililokanamycyny A 1. Dziesieciosililokanamycyne A wyodrebniona 35 w punkcie A-4 rozpuszcza sie w 500 ml bezwod¬ nego acetonu, w temperaturze 23°C. 2. Do tego roztworu dodaje sie szybko w ciagu 5—10 minut 10% roztwór w acetonie 35,03 g estru M SAE z etapu B. Temperatura wzrasta o okolo 5°C.Calosc miesza sie w temperaturze 23°C w ciagu 18—20 godzin. 3. Otrzymany jasnopomaranczowy, klarowny roztwór rozciencza sie 400 ml wody i obniza war.- 45 tosc pH z 7,0—7,5 do 2,2—2,5 za pomoca 3 n kwa-, su solnego. Klarowny roztwór miesza sie w ciagu 15—30 minut, w temperaturze 23°C. 4. Aceton odparowuje sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem w lazni o temperaturze 30—35°C, moze 50 przy tym wypasc mala ilosc osadu ale nie stano¬ wi to problemu. Zatezony roztwór przenosi sie do odpowiedniego naczynia do wodorolizy, dodaje 10 g 5% palladu na weglu aktywnym i uwodarnia pod cisnieniem okolo 466,5 Pa, w ciagu 2—3 godzin. 55 5. Mieszanine saczy% sie przez warstwe ziemi okrzemkowej „Dicalite", , przemywajac naczynie reakcyjne i ziemie na saczku 2X50 ml wody. 6. Polaczone przesacze zateza sie do okolo 1/3 objetosci (150—165 ml), pod zmniejszonym cisnie- 60 niem, w temperaturze 40—45°C. 7. Wartosc pH roztworu wynosi 6,0—7,0. Miesza¬ nine nanosi sie na kolumne o rozmiarach 6 X HO cm, wypelniona Amberlitem CG-50 (NH4+). 8. Kolumne przemywa sie 1000 ml odmineralizo- 45 wanej wody a nastepnie eluuje 0,5 n wodorotlen-117 307 23 24 kiem amonowym, kontrolujac przebieg elucji za pomoca automatycznego polarymetru.Skladniki mieszaniny eluowane sa w nastepuja¬ cej kolejnosci: nieprzereagowana kanamycyna A, zwiazek BB-K6, zwiazek BB-K29, amikacyna. W 5 zadnym z doswiadczen nie stwierdza sie obecnosci zwiazku BB-K11. 9. Polaczone frakcje zawierajace amikacyne za- teza sie do stezenia 25—30%, rozciencza roztwór jedna objetoscia metanolu i zaszczepia krysztalka¬ mi amikacyny. -10. Dodaje sie podczas mieszania powoli w ciagu 2 godzin dwie objetosci izopropanolu i pozostawia do krystalizacji w temperaturze 23°C, w ciagu 6—8 godzin. 11. Osad odsacza sie, przemywa najpierw mie¬ szanina 35 "ml wody, metanolu i izopropanolu (1:1:2) a pózniej 35 ml izopropanolu. 12. Osad suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem, 20 w temperaturze 40°C, w ciagu 16—24 godzin.Otrzymuje sie 19,91—22,84 g (34—39%) amikacyny.Widma IR, PMR i CMR oraz skrecalnosc wlasci¬ wa odpowiadaja pozadanej strukturze.Chromatografia cienkowarstwowa na plytkach z zelem krzemionkowym o wymiarach 5 X 20 cm, (produkcji firmy Quantum Industries), wykazuje w ukladzie chloroform, metanol, wodorotlenek amonu i woda (1:4:2:1), obecnosc jednej plamy amikacyny, wywolanej ninhydryna, o Rf okolo 0,4. 10 15 25 *0 Przyklad VII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli(trójmetylosililo)-6'-N-karbo- benzyloksykanamycyny A w czterowodorofuranie mieszanym bezwodnikiem kwasu trójmetyloocto- 35 wego i BHBA.A. Otrzymywanie mieszanego bezwodnika 5,066 g (20,0 milimoli) BHBA, 4,068 (20,0 milimo- li) BSA i 2,116 g (22,0 milimole) trójetyloaminy, 40 rozpuszcza sie w 200 ml czterowodorofuranu su¬ szonego nad sitem molekularnym. Roztwór ogrze¬ wa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 2 godzin i 15 minut, po czym ochladza sie do temperatury —10°C. Do roztworu dodaje sie w ciagu 2—3 mi- 45 nut 2,412 g (20,0 milimoli) chlorku trójmetyloace- tylu. Roztwór miesza sie w ciagu 2 godzin w tem¬ peraturze —10°C, a nastepnie temperature podnosi sie do 23°'c.B. Acylowanie poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karbo- benzyloksykanamycyny A. 5,454 g poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karbobenzylo- oksykanamycyny A (4,97 milimola w przeliczeniu na pochodna dziesieciosilowa) otrzymanej w spo- 55 sób podany w przykladzie I, rozpuszcza sie w 50 ml bezwodnego* suszonego nad sitem molekular¬ nym, czterowodorofuranu, w temperaturze 23°C Do roztworu tego dodaje sie podczas mieszania, w ciagu 20 minut, polowe roztworu mieszanego bez- 60 wodnika z etapu A (okolo 10,0 milimoli). Calosc miesza sie w ciagu 7 dni.Do mieszaniny dodaje sie 100 ml wody i war¬ tosc pH obniza sie z 5,4 do 2,0 za pomoca 3 n kwasu siarkowego. Calosc miesza sie w ciagu jed- 65 nej godziny a nastepnie ekstrahuje octanem etylu.Rozpoczyna sie krystalizacja zwiazku poliacylowe- go. Mieszanine saczy sie. Osad suszy sie nadP205 i otrzymuje 0,702 g produktu. Mieszanine reakcyj¬ na ekstrahuje sie 4 X 75 ml octanu etylu z warstwy vwodnej odparowuje sie pozostaly tam octan etylu.Próbke roztworu wodnego poddaje sie analizie za pomoca wysokorozdzielczej chromatografii cieczo¬ wej (HPLC). Z krzywej odczytuje sie, ze zawartosc dwukarbobenzyloksyamikacyny wynosi 26,4%.Roztwór Wodny poddaje sie uwodornianiu w aparacie Parra, pod cisnieniem okolo 466,5 Pa, w ciagu dwóch godzin, stosujac 0,5 g 10% palladu na weglu aktywnym. Mieszanine saczy sie, prze¬ mywa saczek. Oznaczenia biologiczne polaczonych przesaczów wobec E. coli wykazuja 31,2% wydaj¬ nosci amikacyny. Stosunek amikacyny do BB-K29 wynosi okolo 9—10/1, sa obecne slady pochodnej poliacylowej i nieprzereagowanej kanamycyny A.Przyklad VIII. Wplyw dodawania wody podczas wytwarzania amikacyny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)-kanamycyny A w roztworze acetonowym, w temperaturze 23°C v A. Reakcja w bezwodnym rozpuszczalniku 2,40 g poli-(trójmetylosililo)-kanamycyny A otrzymanej wedlug przykladu III (2,0 milimoli w przeliczeniu na pochodna dziesiecioaililowa) roz¬ puszcza sie w 20 ml acetonu suszonego nad sitem molekularnym. Roztwór miesza sie w temperaturze 23°C i dodaje sie w ciagu 10 sekund roztwór 0,701 g (2,0 milimole) SAE w 10 ml acetonu su¬ szonego nad sitem molekularnym. Calosc miesza sie w ciagu 22 godzin w temperaturze 23°C, tfo czym dodaje sie 50 ml wody, i obniza wartosc pH z 7,5 do 2,5. Aceton odparowuje sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem, w temperaturze 40°C. Wodny roztwór poddaje sie redukcji wodorem pod cisnie¬ niem okolo 488,9 Pa, w ciagu dwóch godzin, w temperaturze 23°C, stosujac jako katalizator 1,0 g 10% palladu na weglu aktywnym. Wydajnosc ami¬ kacyny wedlug oznaczenia mikrobiologicznego wy¬ nosi 31,24%.B. Reakcja w rozpuszczalniku z dodatkiem wody Powtarza sie postepowanie opisane powyzej, do¬ dajac do roztworu poli-(trójmetylosililo)-kanamy- cyny A 1,0 ml (56 milimoli) wody i mieszajac w ciagu 15 minut przed acylowaniem za pomoca SAE. Wydajnosc amikacyny wedlug oznaczenia mikrobiologicznego wynosi 33,1*0%.Przyklad IX. Wytwarzanie amikacyny dro¬ ga acylowania poli-(trójmetylo'sililo)-6'-N-karbo- benzyloksykanamycyny A mieszanym bezwodni¬ kiem BHBA i kwasu izobutyloweglowego.A. Otrzymywanie mieszanego bezwodnika 1,267 g (5,0 milimoli) BHBA i 1,313 g (10,0 mili¬ moli) N-trójmetylosililoacetaminu (MSA) w 20 ml acetonu suszonego nad sitem molekularnym, mie¬ sza sie w temperaturze 23°C i dodaje 0,70 ml (5,0 milimoli) trójetyloaminy. Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrzenia, pod azotanem, w ciagu 30 minut. Mieszanine ochladza sie do temperatury —20°C i dodaje 0,751 g (0,713 ml, 5,50 milimola)117 307 25 26 10 15 20 chloromrówczanu izobutylu. Natychmiast zaczyna wydzielac sie chlorowodorek trójetyloaminy. Ca¬ losc miesza sie w ciagu jednej godziny w tempe¬ raturze —20°C.B. Acylowanie. 6,215 g poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karbobenzylo- ksykanamycyny A otrzymanej wedlug przykladu I (4,9 milimola w przeliczeniu na pochodna dzie- wieciosililowa) rozpuszcza sie w 20 ml acetonu su¬ szonego nad sitem molekularnym, mieszajac przy tym roztwór w temperaturze 23°C. Roztwór ochla¬ dza sie do temperatury —20*0 i dodaje powoli w ciagu 30 minut zimny roztwór mieszanego bezwod¬ nika z etapu A. Calosc miesza sie dodatkowo w ciagu 90 minut w temperaturze —20°C i nastepnie w ciagu 17 godzin w temperaturze 23°C. Mieszani¬ ne reakcyjna, wlewa sie do 150 ml wody o tem¬ peraturze 23°C, miesza i wartosc pH obniza sie 7,75 do 2,5 za pomoca 3 n kwasu solnego.Mieszanie kontynuuje sie w ciagu 15 minut, po czym usuwa aceton pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C. Próbke roztworu wodnego poddano analizie H!PLC. Z krzywej odczytuje sie, 25 ze wydajnosc dwukarbobenzyloksyamikacyny wy¬ nosi 34,33%.Glówna porcje wodnego roztworu redukuje sie wodorem pod cisnieniem okolo 466,5 Pa, w tem¬ peraturze 23°C, w ciagu 3 godzin i 15 minut, sto- 30 sujac 2,0 g palladu na weglu aktywnym. Katalizator odsacza sie, przemywa na saczku i polaczone prze¬ sacze oznacza mikrobiologicznie wobec E. coli. Wy¬ dajnosc amikacyny wynosi 35,0%. 85 Przyklad X. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójme:tylosililo)-6'-N-karbobenzy- loksykanamycyny A w pentanonie-3. 30 g poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karbobenzyloksy- kanamycyny A, otrzymanej wedlug przykladu I .40 (23,65 milimoli w przeliczeniu na pochodna dzie- wieciosililowa), rozpuszcza se w 100 ml pentano- nu-3 suszonego nad sitem molekularnym.Roztwór miesza sie w temperaturze 23°C i do¬ daje w ciagu 40 minut 26,02 milimola (10% nad- 45 miar) NAE. Calosc miesza sie dalej w ciagu 113 godzin, w temperaturze 23°C a nastepnie wlewa do 250 ml podczas silnego mieszania. Wartosc pH obniza sie z 7,3 do 2,5 za pomoca 3n kwasu solne¬ go, calosc miesza sie dodatkowo w ciagu 30 minut 50 i odparowuje pentanon-3 pod zmniejszonym cis¬ nieniem, w temperaturze 40°C. Roztwór wodny ekstrahuje sie 4X100 ml octanu etylu. Próbke roztworu wodnego poddaje sie analizie za pomoca HPLC. Z krzywej odczytuje sie, ze wydajnosc 55 dwukarbobenzyloksyamikacyny wynosi 46,12%. ' Glówna porcje wodnego roztworu redukuje sie wodorem pod cisnieniem okolo 488,9 Pa, w tem¬ peraturze 23°C, w ciagu 2,5 godzin, stosujac 3,0 g 10% palladu na weglu aktywnym.Próbke przesaczu oznacza sie mikrobiologicznie, stwierdzajac, ze wydajnosc amikacyny wynosi 40,24%. Przesacz zateza sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem, w temperaturze 40°C, do objetosci okolo 65 100 ml i chromatografie na kolumnie o wymiarach okolo 10 X122 cm wypelnionej okolo 10 litrami Amberlitu CG-50 (NH4-l-), Kolumne przemywa sie 5 litrami wody i eluuje najpierw 0,5 n wodoro- * tlenkiem amonowym a nastepnie 3 n wodorotlen¬ kiem ampnowym w celu wymycia zwiazków po- liacylowych. Analiza polarymetryczna poszczegól¬ nych frakcji wskazuje na obecnosc 42,7% amika¬ cyny, 12,0% nieprzereagowanej kanamycyny A, 12,4% zwiazków poliacylowych oraz 23,2% BB-K29.Przyklad XI. Wytwarzanie amikacyny dro¬ ga acylowania poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karbo- benzyloksykanamycyny A w bezwodniku cyklo- heksanonie przy zastosowaniu róznego czasu pro¬ wadzenia reakcji.A. 2,537 g poli-(trójmetylosililo)-6'-N-karboben- zyloksykanamycyny A otrzymanej wedlug przy¬ kladu I (2,0 milimole w przeliczeniu na pochodna dziewieciosililowa) rozpuszcza sie w 300 ml bez¬ wodnego cykloheksanonu i acyluje w ciagu 20 go¬ dzin, w temperaturze 23cC,-za pomoca 10,8 ml roz¬ tworu NAE w cykloheksanonie o stezeniu 0,1944 milimola/ml (lacznie 2,10 milimola). Mieszanine re¬ akcyjna dodaje sie podczas mieszania do 150 ml wody wartosc pH obniza z 5,6 do 2,5 za pomoca 3 n kwasu solnego. Cykloheksanon odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 40?C, i próbke pozostalego roztworu wodnego pod¬ daje sie badaniom za pomoca HPLC Roztwór wodny poddaje sie redukcji wodorem pod cisnie¬ niem okolo 466,5 Pa, w ciagu 3 godzin, w tempe¬ raturze 23°C, stosujac 1,0 g 10% palladu na weglu aktywnym. Katalizator odsacza sie przemywa i polaczone przesacze oznacza mikrobiologicznie na zawartosc amikacyny.B. Powtarza sie postepowanie z punktu A, ale czas acylowania przedluza sie z 20 do 115 godzin.Wydajnosc - Reakcja A | Reakcja B Analiza HPLC (dwukarbo- benzyloksy- amikacyna) 49,18% 56,17% Oznaczenie mikro¬ biologiczne (amikacyna) Turbidyme- trycznie 42,87% 55,39% Na plytkach 39,16% 38,45% | Przyklad XII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania polHtr6jmetylosililo)-6'-N-kar- bobenzyloksykanamycyny w bezwodnym czterowo- dorofuranie przy stosowaniu róznego czasu pro¬ wadzenia reakcji.A. Powtarza sie postepowanie z przykladu XIA, stosujac jako rozpuszczalnik czterowodorufuran za¬ miast cykloheksanonu.B. Powtarza sie postepowanie z przykladu XIB, stosujac jako rozpuszczalnik czterowodorofuran za¬ miast cykloheksanonu.27 117 307 28 Wydajnosc Reakcja A [ Reakcja B Analiza HPLC (dwukarbo- benzyloksy- amikacyna) 29,27% 33,39% Oznaczenie mikro¬ biologiczne (amikacyna) | Turbidyme- trycziiie 28,34% 21,52% Na plytkach 28,18% 28,63% 1 Przyklad XIII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójmetyksililo)-6'-N-kar- bobenzyloksykanamycyny A w bezwodnym diok¬ sanie przy zastosowaniu róznego czasu prowadze¬ nia reakcji.A. Powtarza sie postepowanie z przykladu XIA, stosujac jako rozpuszczalnik bezwodny dioksan i prowadzac reakcje w ciagu 44 godzin, B. Powtarza sie postepowanie z przykladu XIB, stosujac jako rozpuszczalnik bezwodny dioksan i prowadzac reakcje w ciagu 18,5 godzin.Wydajnosc - Reakcja A | Reakcja B Analiza HPLC (dwukarbo- benzyloksy- amikacyny) 39,18% 42,82% Oznaczenie mikro¬ biologiczne (amikacyny) Turbidyme- trycznie 43,27% 22,55% tfa plytkach 33,36%- I 33,37% Przyklad XIV. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)-6'-N-kar- bobenzyloksykanamycyny A w bezwodnym keto¬ nie dwuetylowym w temperaturze 75°C.Do roztworu 2,537 g poli~(trójmetylosililo)-6'-N- -karbobenzyloksykanamycyny A otrzymanej we¬ dlug przykladu I (2,0 milimole w przeliczeniu na pochodna dziewieciosililowa), w 32 ml ketonu dwu- etylowego suszonego nad sitem molekularnym, do¬ daje sie podczas mieszania w ciagu 15 minut w temperaturze 75°C, 10,8 ml roztworu NAE w ke¬ tonie dwuetylowym o stezeniu 0,1944 milimola/ml lacznie 2,10 milimola). Calosc miesza sie w ciagu 3 godzin w temperaturze 75°C, po czym mieszani- .. ne wlewa sie do 150 ml wody. Wartosc pH do¬ prowadza sie do 2,8 za pomoca 3n kwasu solnego i odparowuje keton pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C. Wydajnosc dwukarbobenzy- loksyamikacyny, obliczona na podstawie HPLC wynosi 39,18%.Wodny roztwór poddaje sie redukcji wodorem pod cisnieniem okolo 466,5 Pa, w ciagu 3 godzin i 15 minut, w temperaturze 23°C, stosujac 1,0 g palladu na weglu aktywnym.Katalizator odsacza sie, przemywa na soczku i przesacze oznacza sie mikrobiologicznie na za¬ wartosc amikacyny. Wydajnosc na podstawie oznaczen turbidymetrycznych wynosi 27,84%, na podstawie oznaczen plytkowych 28,6%.Przyklad XV. Wytwarzanie amikacyny dro¬ ga acylowania poli-(trójmetylosililo)-kanamycyny A za pomoca NAE, w temperaturze 0^5*C, po hy¬ drolizie woda.A. Sililowanie kanamycyny A za pomoca HMDS z zastosowaniem TMCS jako katalizatora.Do ogrzewanego do wrzenia w atmosferze azo¬ tu roztworu 10 g (97,6% czystosci, 201,4 milimola) kanamycyny A w 100 ml suszonego nad sitem mo¬ lekularnym acetonitrylu, dodaje sie 22,76 g (141 ¦ milimoli, 7 moli na mol kanamycyny A) HMDS oraz 1 ml (0,856 g, 7,88 milimola) TMS. Mieszani¬ ne te dodaje sie w ciagu 10 minut. Calosc ogrze¬ wa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 4 godzin i 45 minut, po czym ochladza, zateza pod zmniej- szonym cisnieniem i otrzymana zólta, gesta pozo¬ stalosc o konsystencji syropu suszy pod bardzo niskim cisnieniem w ciagu 2 godzin. Wydajnosc 23,8 g (97,9% w przeliczeniu na dziesieciosililoka- namycyne A). 20 B. Acylowanie. 23,8 g (20,14 milimola) poli-(trójmetylosililo)-ka- namycyny A, otrzymanej w sposób podany w pun¬ kcie A, rozpuszcza sie' w temperaturze 23°C w 250 ml suszonego nad sitem molekularnym aceto- .* nu. Roztwór ochladza sie do temperatury 0—5°C i dodaje podczas mieszania 3,63 ml (201,4 milimo¬ la, 10 moli na mol pochodnej kanamycyny) wody.Mieszanine pozostawia sie w ciagu 30 minut pod umiarkowanie obnizonym cisnenem, po czym dó- 30 daje sie roztwór 19,133 milimola (0,95 moli na mol kanamycyny A) NAE w 108,3 ml acetonu, w ciagu ponizej jednej minuty. Calosc miesza sie w ciagu jednej godziny w temiperaturze 0—5°C, rozciencza woda, wartosc pH obniza sie do 2,5 i odparowuje 85 aceton pod zmniejszonym cisnieniem. Wodny roz¬ twór poddaje sie redukcji wodorem pod cisnieniem okolo 466,5 Pa, w temperaturze 23°C, w ciagu 2,5 godzin, w obecnosci 2,0 g 10% palladu na weglu aktywnym.* Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi okrzemkowej „Dicalite", przesacz zateza pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 40°C, do objetosci okolo 100 ml i nanosi na kolumne o wymiarach 5 X100 cm, wypelniona 6 litrami Amberlitu CG-50 (NH4+). Kolumne przemywa sie woda i kolejno 0,6 n i 3 n wodorotlenkiem amono¬ wym. Otrzymuje sie 60,25% amikacyny, 4,37% BB-K6, 4,35% BB-K29, 26,47% kanamycyny A i 2,18% materialu poliacylowanego.Przyklad XVI. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)-6'-N-kar- bobenzyloksykanamycyny A za pomoca SAE po metarolizie. ii A. Sililowanie 6'-N-karbobenzyloksykanamycy- ny A.Do ogrzewanego do wrzenia w atmosferze azo¬ tu roztworu 20,0 g (32,4 milimola) 6'-N-karboben- ao zyloksykanamycyny A w 200 ml suszonego nad sitem molekularnym acetonitrylu, dodaje sie w ciagu 10 minut 47,3 ml (226,8 milimola, 7 moli na mol kanamycyny) HMDS.~ Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 20 godzin, po czym a ochladza, zateza pod zmniejszonym cisnieniem i29 117 307 30 suszy pozostalosc w ciagu 2 godzin pod bardzo niskim cisnieniem. Otrzymuje sie 39,1 g bialego bez¬ postaciowego osadu. Wydajnosc w przeliczeniu na dziewieciosililo-6'-N-karbobenzyloksykanamycyne wynosi 95,4%.B. Acylowanie.Do roztworu 39,1 g (32, 4 milimola) poli-(trój- metylc^ililo)-6'-N-karbobenzyloksykanamycyny A, otrzymanej wedlug punktu A, w 400 ml bezwod¬ nego acetonu, dodaje sie podczas mieszania w temperaturze 23°C 6,6 ml (162 milimole, 5 moli na mol kanamycyny) metanolu i calosc miesza w ciagu jednej godziny, przepuszczajac silny stru¬ mien azotu. Mieszanine ochladza sie do tempera¬ tury 0—5°C i dodaje roztwór 11,35 g (32,4 milimo¬ la SAE w 120 ml ochlodzonego bezwodnego ace¬ tonu, a nastepnie pozostawia w ciagu 1 tygodnia w temperaturze 4*0. Nastepnie dodaje sie 30G ml wody, pH doprowadza do wartosci 2,0 calosc mie¬ sza w ciagu 1 godziny i odparowuje aceton pod zmniejszonym cisnieniem.Pozostaly roztwór wodny poddaje sie redukcji wodorem pod cisnieniem okolo 506,5 Pa, w ciagu 17 godzin, w temperaturze 23°C, w obecnosci 3,0 g 10% palladu na weglu aktywnym. Mieszanine sa¬ czy sie przez warstwe ziemi okrzemkowej „Dica- lite", przesacz zateza pod zmniejszonym cisnieniem do objetosci 75—100 ml i nanosi na kolumne z Amberlitem CG-50 (NH4+). Kolumne przemywa sie woda i eluuje 0,6 n wodorotlenkiem amono¬ wym. Otrzymuje sie ' 52,52% amikacyny, 14,5% BB-K29, 19,6% kanamycyny A i 1,71% zwiazków poliacylowych.Przyklad XVII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)kanamy- cyny A za pomoca SAE, w temperaturze 0—5°C, po hydrolizie woda.A. Sililowanie kanamycyny A za pomoca TMCS w acetonitrylu w obecnosci czterometyloguanidy- ny jako akceptora kwasu.Do mieszaniny w temperaturze 23°C zawiesiny 4,88 g (10,07 milimola) kanamycyny w 100 ml su¬ szonego nad sitem molekularnym acetonitrylu, dodaje sie 16,234 g (140,98 milimola) czterometylo- guanidyny (TMG). Odpowiada to 14 molom TMG na mol kanamycyny A. Calosc ogrzewa sie do tem¬ peratury wrzenia i dodaje w ciagu 15 minut 15,32 g (140,98 milimola, 14 moli na mol kanamycyny A) TMCS. Po uplywie okolo 30 minut od oddania TMCS wypada bialy osad chlorowodorku cztero- metyloguanidyny. Mieszanine ochladza sie do tem¬ peratury pokojowej i zateza pod bardzo niskim cisnieniem w ciagu 2 godzin.Otrzymany lepki osad uciera sie z 100 ml bez¬ wodnego czterowodorofuranu, odsacza nierozpusz- czony chlorowodorek czterometyloguanidyny i przemywa go na saczku 5X20 ml czterowodoro¬ furanu. Polaczone przesacze zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem i lepka pozostalosc suszy pod bardzo niskim cisnieniem. Otrzymuje sie 10,64 g jasnokremowego lepkiego osadu. Wydajnosc w, przeliczeniu na dziesieciosililokanamycyne A wy¬ nosi 87,6%.B. Acylowanie. 10,64 g (10,07 milimola) poli-(trójmetylosililo) ka¬ namycyny A, otrzymanej w punkcie A, rozpuszcza sie w 110 ml acetonu suszonego nad sitem mole- 5 kulamym, podczas mieszania w temperaturze 23°C, Po ochlodzeniu do temperatury 0—5°C dodaje sie 1,81 ml (100,7 milimola, 10 moli na mol polisililo- wanej kanamycyny A) i calosc miesza sie w cia¬ gu 30 minut pod umiarkowaniem obnizonym cis- 10 nieniem a nastepnie dodaje w ciagu ponizej 1 mi¬ nuty roztwór 3,70 g (10,57 milimola, 5% nadmiar) SAE w ochlodzonym bezwodnym acetonie. Calosc miesza sie w ciagu jednej godziny i przerabia w sposób opisany w przykladzie XVIB. Otrzymuje 15 sie okolo 50% amikacyny, okolo 10% BB-K29, 5—8% BB-K6, okolo 20% kanamycyny A oraz 5—8% zwiazków poliacylowych.Przyklad XVIII. Wytwarzanie poli-(trój- 20 metylosililo)-kanamycyny A w pirydynie, z zasto- - sowaniem do sililowania HMDS. 10,0 g (20,64 milimola) kanamycyny A zawiesza sie w temperaturze 23°C w 100 ml swiezo destylo¬ wanej i suszonym nad sitem molekularnym piry¬ dyny. Zawiesine ogrzewa sie do temperatury wrzenia, przepuszcza przez nia azot i dodaje sie w ciagu 10 minut 17,33 g (107,32 milimola, 5,2 mo¬ la na mol kanamycyny A) HMDS. Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 19 godzin, ochladza do temperatury pokojowej, po czym za¬ teza pod obnizonym cisnieniem i suszy jasnozólto- zlota pozostalosc o konsystencji syropu pod bar¬ dzo niskim cisnieniem. Otrzymuje sie 22,1 g bia¬ lego bezpostaciowego osadu. Wydajnosc w przeli¬ czeniu na dziesieciosililokanamycyne A wynosi 92,6%.Przyklad XIX. Wytwarzanie poli-(trójme- tylosililo)kanamycyny A z zastosowaniem trójety- 40 lochlorosilanu i trójetyloaminy jako akceptora kwasu. 5,0 g (10,07 milimola, czystosc 97,6%) kanamycy¬ ny A zawiesza sie w temperaturze 23°C w 100 ml acetonitrylu suszonego nad sitem molekularnym.Nastepnie dodaje sie 33,8 ml (24,5 g 241,7 milimo¬ la) trójetyloaminy i ogrzewa do temperatury wrze¬ nia, po czym w ciagu 20 minut dodaje sie roztwór 23,7 ml (21,3- g, 140,98 milimola) trójetylochlorosila- M nu w 25 ml bezwodnego acetonitrylu. Calosc ogrze¬ wa sie dodatkowo w ciagu 7 godzin, po czym ochladza do temperatury pokojowej. Zaczyna wy¬ padac chlorowodorek trójetyloaminy w postaci dlugich drobnych igiel. Mieszanine pozostawia sie w w temperaturze pokojowej w ciagu okolo 16 go¬ dzin, po czym zateza pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C. Otrzymany lepki ciemnopo- maranczowy osad uciera sie w temperaturze 23°C z 100 ml czterowodorofuranu, odsacza nierozpusz- w czony- chlorowodorek trójetyloaminy, przemywa go 5X20 ml czterowodorofuranu i suszy.Otrzymuje sie 16,0 g chlorowodorku trójetyloa¬ miny. Polaczone przesacze zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem i stala pozostalosc suszy pod 69 bardzo niskim cisnieniem w ciagu 2 godzn. Otrzy-31 117 307 32 muje se 19,3 g poli-(trójetylosililo)kanamycyny A w postaci ciemnopomaranczowego gestego syropu.Przyklad XX. Wytwarzanie poli-(trójmety- losililo)-kanamycyny A z zastosowaniem bis-trój¬ metylosililomocznika. 10,0 g (20,58 milimola, czystosc 99,7%) kanamy¬ cyny zawiesza sie i miesza w 200 ml acetonitrylu suszonego nad sitem molekularnym. Do zawiesiny dodaje sie 29,45 g (144,01 milimola, 7 moli na mol kanamycyny) bis-trójmetylosililomocznika.Calosc ogrzewa sie w ciagu 17 godzin, ochladza do temperatury pokojowej, dosacza mala ilosc sub¬ stancji nierozpuszczalnych i przemywa je 3 X 10 ml acetonitrylu. Zgodnie z analiza widma IR otrzymuje sie 1,1381 g mieszaniny bis-trójmetylo¬ sililomocznika i nieprzereagowanej kanamycyny A.Polaczone przesacze ochlodza sie w ciagu 16 go¬ dzin w temperaturze 4°C. Oddziela sie wydzielony- osad (7,8 g) bedacy zgodnie z widmem IR miesza¬ nina bis-trójmetylosililomocznika i mocznika. Jas- nozólty przesacz zateza sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem w temperaturze 40°C i suszy pod bardzo niskim cisnieniem. Otrzymuje sie 27,0 g bialego osadu, bedacego mieszanina lepkiej substancji i drobnych podobnych do igiel krysztalów. Osad do¬ daje sie do 150 ml heptanu w temperaturze 23°C, czesc nierozpuszczona odsacza sie, przemywa 2 X 50 ml heptanu i suszy. Otrzymuje sie 6,0 g bialego kry¬ stalicznego osadu, bedacego zgodnie z widmem IR mieszanina bis-trójmetylosililomocznika i moczni¬ ka. Polaczone przesacze zateza sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem w temperaturze 40°C i pozostalosc suszy pod niskim cisnieniem w ciagu 2 godzin.^ Otrzymuje sie 80,4 bialego krystalicznego osadu w postaci igiel. Widmo IR odpowiada polisililowanej kanamycynie A. Z obliczen wynka, ze produkt za¬ wiera srednio 7,22 grup trójmetylosililowych.Przyklad XXI. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania jedenasto-(trójmetylosililo)-kana mycyny A po czesciowym desilowaniu za pomoca butanódiolu-1,3.A. Wytwarzanie jedenasto-(trójmetylosililo)-ka- namycyny A. 10,0 g (20,639 milimola) kanamycyny A zawiesza sie w 100 ml acetonitrylu suszonego nad sitem molekularnym, w temperaturze 23°C. Zawiesine ogrzewa sie do temperatury wrzenia, przepuszcza azot i dodaje w ciagu 10 minut 23,322 g (144,5 milimola, 7 moli na mol kanamycyny A) HMDS.Calosc ogrzewa sie w ciagu 16 godzin w tempera¬ turze wrzenia, po czym mieszanine ochladza do temperatury pokojowej, zateza pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc suszy w ciagu 2 godzin pod bardzo niskim cisnieniem. Otrzymuje sie 24,3 g bialej lepkiej substancji. Wydajnosc w przelicze¬ niu na jedenastosililowa pochodna wynosi 92,1%.B. Acylowanie. 24,3 g jedenasto-(trójmetylosililo)kanamycyny A, otrzymanej wedlug poprzedniego etapu, rozpuszcza sie podczas mieszania w temperaturze 23°C w 240 ml acetonu suszonego nad sitem molekularnym.Do roztworu dodaje sie 9,25 ml (103,2 milimola, 5 moli na mol sililowanej kanamycyny) butanodio- lu-1,3.Calosc miesza sie w ciagu 2 godzin w tempera¬ turze ^23°C, przepuszczajac strumien azotu. Po ochlodzeniu do temperatury 0—5°C dodaje sie w ciagu okolo 1 minuty 7,23 g (20,64 milimoli) SAE 5* w 70 ml ochlodzonego acetonu. Calosc miesza sie w temperaturze 0—5°C w ciagu 3 godzin, po czym pozostawia w ciagu okolo 16 godzin w tempera¬ turze 4°C i nastepnie dodaje 200 ml wody, wartosc pH obniza do 2,5 i klarowny zólty roztwór miesza 10 w ciagu 30 minut w temperaturze 23°C Aceton odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem a roz¬ twór wodny poddaje sie redukcji wodorem pod cisnieniem okolo 507 Pa, w temperaturze 23°C, w obecnosci 3,0 g 10% palladu na weglu aktywnym. 15 Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi okrzem¬ kowej „Dicalite" i poddaje chromatografii w spo¬ sób opisany w przykladzie XVTB. Otrzymuje sie 47,50% amikacyny, 5,8% BB-K29, 7,32% BB-K6, 24,26% kanamycyny A i 7,41% zwiazków poliacy- 20 Iowyeh.Przyklad XXII. Wytwarzanie amikacyny . droga acylowania poli-(trójmetylosililo)kanamycyny A otrzymywanej w czterowodorofuranie, z zasto¬ sowaniem SAE i jako katalizatora kwasu sulfa- 25 minowego.Do wrzacej mieszaniny 5,0 g (10,32 milimola) ka¬ namycyny A w 50 ml czterowodorofuranu suszone¬ go nad sitem molekularnym, dodaje sie 100 mg kwasu sulfaminowego i 12,32 g (76,33 milimola) 30 HMDS. Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrze¬ nia w ciagu 18 godzin, przy czym calkowite roz¬ puszczenie zachodzi po uplywie 6 godzin. Roz¬ twór ochladza sie do temperatury 23°C, dodaje 0,1 ml wody i pozostawia w tej temperaturze w 85 ciagu 30 minut. Nastepnie dodaje sie w ciagu 30 minut roztwór 3,61 g (10,3 milimola) SAE w 36 ml czterowodorofuranu.Calosc miesza sie w ciagu 3 godzin, rozciencza mieszanine 100 ml wody i wartosc pH doprowadza i10 do 2,2 za pomoca 10% kwasu siarkowego, po czym miesza w ciagu 2 godzin w temperaturze 23°C i zateza pod zmniejszonym cisnieniem, w celu usuniecia czterowodorufuranu. Pozostaly roztwór wodny poddaje sie redukcji wodorem pod cisnie- 45 niem okolo 466,5 Pa, w ciagu 2 godzin w tempe¬ raturze 23°C, w obecnosci 10% palladu na weglu aktywnym. Mieszanine saczy sie przez warstwe ziemi okrzemkowej „Dicalite" i przemywa ja wo¬ da. Polaczone przesacze (150 ml) oznacza sie mi- 5 krobiologicznie wobec E. coli. Stezenie amikacyny wynosi 1225 mcg/ml, wydajnosc 31,5%.Przyklad XXIII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania polMtrójmetylosildloJkanamycyny 55 A estrem N-hydroksysukcynimidowym dwukarbo- benzyloksy-AHBA.A.Wytwarzanie estru N-hydroksysukcynimidowe- go kwasu dwukarbobenzyloksy-L-(-)-y-amino-a-hy- droksymaslowego. eo Do roztworu 8 g (20,65 milimola) kwasu dwu- karbobenzyloksy-L-(-)-y-amino-«-hydroksymaslo- wego i 2,37 g (20,65 milimola) N-hydroksysukcyni- midu w 50 ml bezwodnego acetonu, dodaje sie w temperaturze 23°C 4,25 g (20,65 milimola) dwu- 65 cykloheksylokarbodwuimidu, rozpuszczonego w 20 6033 117 30T 34 ml bezwodnego acetonu. Calosc miesza sie w eia- gu 2 godzin w temperaturze 23°C, po czym od¬ sacza sie dwucykloheksylomocznik, przemywa sie na saczku 10 ml bezwodnego acetonu i zbiera przesacze.B. Acylowanie.Poli-(trójmetylosililo)-kanamycyne A, otrzymana w sposób opisany w przykladzie XXI z 10,0 g (20,639 milimola) kanamycy A rozpuszcza sie w 100 ml bezwodnego acetonu. Roztwór ochladza sie do temperatury 0—5°C, dodaje 3,7 ml odminerali- zowanej wody i miesza w ciagu 30 minut, w tem¬ peraturze 0—5°C, pod umiarkowanie obnizonym cisnieniem.Do roztworu dodaje sie roztwór srodka acylu- jacego przygotowany w poprzednim etapie. Ca- losó miesza sie w temperaturze 0—5°C w ciagu 30 minut, rozciencza woda, wartosc pH obniza do 2,2 i odparowuje aceton pod zmniejszonym cisnie¬ niem.Roztwór wodny poddaje sie redukcji w sposób opisany w przykladzie XXII i saczy przez war¬ stwe ziemi „Dicalite". Zgodnie z danymi chroma¬ tograficznymi otrzymuje sie 40—45% amikacyny, okolo 10% BB-K29, slady BB-K6, okolo 30% ka- namycyny A i mala ilosc zwiazków poliacylowych.Przyklad XXIV. Wytwarzanie poli-(trój- metylosililó)-kanamycyny A z zastosowaniem HMDS i imidazolu jako katalizatora.Mieszanine U g (22,7 milimola) kanamycyny A i 100 mg imidazolu w 100 ml^acetonitrylu suszo¬ nego nad sitem molekularnym, ogrzewa sie do temperatury wrzenia, przepuszczajac strumien azotu. Do mieszaniny tej dodaje sie w ciagu 30 minut 18,48 g (114,5 milimola, 5 moli na mol ka¬ namycyny A) HMDS. Calosc ogrzewa sie w tem¬ peraturze .wrzenia w ciagu 20 godzin, przy czym calkowite rozpuszczenie zachodzi po 2,5 godzinach.Roztwór ochladza sie do temperatury 23°C i odparowuje rozpuszczalnik pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Otrzymuje sie 21,6 g poli-(trójmetylosili- lo)-kanamycyny A w postaci piankowatego osadu.Wydajnosc w przeliczeniu na jedenastosililokana- mycyne wynosi 93,1%.Przyklad XXV. Wytwarzanie l-N-[L-(-)-y- -amino-«-hydroksybutyrylo]kanamycyny B (BB- -K26) droga acylowania poli-{trójmetylosiUlo)-ka- namycyne B za pomoca SAE.A. Wytwarzanie poli-(trójmetylosililo)-kanamy¬ cyny B -z zastosowaniem HMDS i TMCS iako ka¬ talizatora.Do ogrzewanego do temperatury wrzenia roz¬ tworu 25 g (51,7 milimola) kanamycyny B w 250 ml acetondtrylu suszonego nad sitem molekuralnym, dodaje sie podczas przepuszczania azotu, w ciagu 30 minut 62,3 g (385,81 milimola, 7,5 mola na mol kanamycyny B) HMDS, a nastepnie 1 ml TMCS w charakterze katalizatora. Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrzenia w ciagu 21 godzin, przy czym po uplywie 1 godziny zachodzi calkowite rozpuszczenie. Rozpuszczalnik odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 60*C a oleista pozostalosc pozostawia sie w ciagu 3 go¬ dzin pod bardzo niskim cisnieniem, w temperatu¬ rze 60°C. Otrzymuje sie 53,0 g produktu. Wydaj¬ nosc w przeliczeniu na dziesieciosililokanamycyne 5 B wynosi 85,2%.B. Acylowanie. 53,0 g poli- otrzymanej w poprzednim etapie rozpuszcza sie w 500 ml bezwodnego acetonu w temperaturze 10 0—5^C, nastepnie, dodaje sie 20,9 ml metanolu i ca¬ losc miesza pod zmniejszonym cisnieniem w tem¬ peraturze 0—5°C, w ciagu 30 minut; Do roztworu powyzszego dodaje sie w ciagu ponizej 1 minuty roztwór 18,1 g (51,67 milimola) SAE w 200 ml 15 oziebionego bezwodnego acetonu. Calosc miesza sie w ciagu 30 minut w temperaturze 0—5°C, prze¬ rabia w sposób opisany w przykladzie XXII i na¬ nosi na kolumne o wymiarach 8X120 cm, wy¬ pelniona Amberlitem CG-50 (NH4+). Eluuje sie w 20 gradiencie stezenia od 0,6 do 3 n wodorotlenkiem amonowym.Otrzymuje sie 38% BB-K-26, 5% 6'-N-acylowa- nej kanamycyny B (BB-K22), 10% 3-N-acylowa- nej kanamycyny B (BB-K46), 14,63% kanamycyny 25 B i mala ilosc poliacylowanej kanamycyny B.Przyklad XXVI. Wytwarzanie poli-(trój- metylosililo)-kanamycyny A z zastosowaniem HMDS i suarczanu kanamycyny A jako kataliza- 30 tora.Mieszanine 19,5 g (40,246 milimola) kanamycyny A i 0,5 g (0,858 milimola) siarczanu kanamycyny A (razem 20,0 g 41,0 milimoli) w 200 ml acetoni- trylu suszonego nad sitem molekularnym, ogrzewa 35 sie do temperatury wrzenia i dodaje powoli 60,3 g (287,7 milimola, 7 moli na mol kanamycyny A) HMDS. Calosc ogrzewa sie w temperaturze wrze¬ nia w ciagu 28 godzin, po czym odparowuje do sucha w wyparce obrotowej i suszy pod zmniej- 40 szónym cisnieniem. Otrzymuje sie 47,5 g poli- -(trójmetylosililo)-kanamycyny- A w postaci blado- zóltego oleju. Wydajnosc w przeliczeniu na dzie¬ sieciosililokanamycyne a wynosi 95,82%. 45 Przyklad XXVII. Wytwarzanie amikacyny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)-kanamycy- ny A estrem N-hydroksysukcynimidowym N-trój- fluoroacetylo-ochronionego AHBA.A. Wytwarzanie N-trójfluoroacetylo-ochronione- 50 go AHBA i przeksztalcanie go w ester N-hydro- ksysukcynimidowy.Do zawiesiny 5,0 (42 milimole) AHBA w 100 ml czerowodorofuranu dodaje sie podczas mieszania w ciagu 10 minut 40 g (191 milimoli) bezwodnika 55 trójfluorooctowego. Roztwór miesza sie w ciagu 18 godzin w temperaturze 23°C, po czym zateza do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, w tempe¬ raturze 50°C.Pozostalosc rozpuszcza sie w 100 ml mieszaniny eo 1:1 metanolu i wody i miesza w ciagu 1 godzin, po czym zateza do sucha pod zmniejszonym cis¬ nieniem i rozpuszcza ponownie w 50 ml wody, Wodny roztwór ekstrahuje sie 3 X 50 ml ketonu metylowoizoibutylowego, suszy nad siarczanem so- 05 dowym i zateza do konsystencji oleju. Siady roz«35 117 307 36 puszczalnika usuwa sie za pomoca azeotropowego oddestylowania z 4 ml wody. Oleisty produkt po jakims czasie zestala sie przechodzac w woskowa¬ ty krystaliczny osad. Wydajnosc 2,5 g (28%). 2,4 g (11,3 milimola) N- tróJfluoroacetylo-AHBA rozpuszcza sie w 50 ml bezwodnego acetonu i do¬ daje sie 1,30 g (11,31 milimola) N-hydroksysukcy- nimidu, a nastepnie powoli dodaje sie 2,33 g dwu- cykloheksylokarbodwuimidu w 20 ml bezwodnego acetonu. Calosc miesza sie w ciagu 2 godzin w temperaturze 23°C, wydzielony dwucykloheksylo- mocznik odsacza sie i przemywa mala iloscia ace¬ tonu. Polaczone przesacze zawierajace ester N-- -hydroksysukcynimddowy N-trójfluoroacetylo- -AHBA uzywa sie bez izolowania w nastepnym etapie syntezy.B. Acylowanie.Do roztworu 11,31 milimola poli-(trójmetylosili- lo)-kanamycyny A, otrzymanej w sposób podany w przykladzie XXVI, w 54 ml acetoriu, dodaje sie 2,0 ml (113,4 milimola) wody i calosc miesza sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 0—5^C, w ciagu 30 minut. Nastepnie dodaje sie w temperaturze 5°C 11,31 milimola estru N-trój- fluoroacetylo-AHBA, przygotowanego w poprzed¬ nim etapie i pozostawia mieszanine w tej tempe¬ raturze w ciagu 1 godziny. Wartosc pH doprowa¬ dza sie do okolo 2,0 za pomoca 20% kwasu siar¬ kowego i calosc miesza w ciagu 30 minut, po czym doprowadza sie Wartosc pH do okolo 6,0 za pomo¬ ca wodorotlenku amonowego, Mieszanine odparo¬ wuje sie do sucha w wyparce obrotowej, otrzy¬ mujac 14,4 g lepkiego bialawego osadu. Osad ten rozpuszcza sie w 100 ml wody, wartosc pH pod¬ nosi z 5,5 do 11,0 za pomoca wodorotlenku amo¬ nowego i roztwór ogrzewa w lazni olejowej w temperaturze 70°C, w ciagu 1 godziny. Wartosc pH obniza sie z 9,5 do 7,0 za pomoca kwasu sol¬ nego i mieszanine saczy w celu usuniecia malej ilosci substancji nierozpuszczonych, które przemy¬ wa sie woda. Polaczone przesacze (188 ml) nanosi sie na kolumne o wymiarach 8 X 90 cm, wypelnio¬ na Amberlitem CG-50 (NH4+). Kolumne przemy¬ wa sie 2 litrami wody a nastepnie eluuje wodoro¬ tlenkiem amonu w gradiencie stezenia od 0,6 n do 1,0 n i stezonego roztworu; Otrzymuje sie 28,9% amikacyny, 5,0% BB-K6, 5,7% BB-K29, 43,8% ka- namycyny A, 3,25% zwiazków poliacylowych i 14,3% nieznanego zwiazku, obecnego w pierwszej frakcji z kolumny.Przyklad XXVIII. Wytwarzanie amikacy¬ ny droga acylowania poli-(trójmetylosililo)-kana- mycyny A za pomoca estru N-hydróksysukcynimi- dowego III rz.-butoksyfcarbonylo-ochromionego AHBA.A. Wytwarzanie III rz.-butoksykarbonylo-AHBA i przeksztalcanie go w ester N-hydroksysukcyni- midowy. 5,0 g (42 milimole) AHBA rozpuszcza sie w 100 ml wody i 20 ml acetonu i wartosc pH roztworu doprowadza sie do 10,0 za pomoca 10 n roztworu wodorotlenku sodowego, po czym dodaje sie w ciagu 3—4 minut 11,6 (53 milimole) dwuweglanu dwu-III rz.-butylu. Calosc miesza sie w ciagu 35 minut, utrzymujac wartosc pH wynoszaca 10 za pomoca okresowego dodawania 10 n roztworu wo- 5 dorotlenku sodowego. Aceton odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem a faze wodna ekstrahuje sie 40 ml octanu etylu. Wartosc pH roztworu wod¬ nego obniza sie do 2,0 za pomoca 3n kwasu solnego, ' po czym ekstrahuje 3 X 30 ml ketonu metylowoizo- io butylowego. Polaczone ekstrakty ketonowe suszy sie nad siarczanem sodowym i zateza, otrzymujac jas¬ na oleista pozostalosc (8,2 g, 89%). 4*25 g (19,4 milimola) III rz.-butyksykarbonylo- AHBA rozpuszcza sie w 50 ml acetonu i dodaje 15 2,23 g (19,4 milimola) N-hydroksysukcynimidu a nastepnie powoli roztwór 4,00 g (19,4 milimola) dwucykloheksylokanbodwuimidu w 20 ml acetonu.Calosc miesza sie w ciagu 2 godzin w temperatu¬ rze 23°C. Wytracony osad dwucykloheksylomocz- 20 nika odsacza sie i przemywa mala iloscia acetonu.Polaczone przesacze zawierajace ester N-hydro- ksyimidowy III rz.-butyloóksykarbonylo-AHBA wy¬ korzystuje sie bez wyodrebniania w nastepnym etapie syntezy.B. Acylowanie.Do roztworu 41,28 milimola ppli-(trójmetylosili- lo)-kanamycyny A, przygotowanej w sposób poda¬ ny w przykladzie XXVI, w 94 ml acetonu, dodaje 30 sie 3,5 ml (194 milimole) wody i catasc miesza sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 0—5°C w cagu 30 minut. Nastepnie dodaje sie 19,4 milimola estru N-hydroksysukcynimidowego Illrz.-butylooksykarbonylo-AHBA, przygotowanego 35 w poprzednim etapie, i pozostawia mieszanine w ciagu 1 godziny w temperaturze 5°C, po czym do¬ daje sie 200 ml wody i wartosc pH obniza z 7,0 do 2,0 za pomoca 20% kwasu siarkowego. Po 30 minutach mieszania wartosc pH podnosi sie do 40 okolo 6,0 za pomoca wodorotlenku amonowego i odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Otrzymany zloty olej (36,3 g) rozpuszcza sie w 200 ml kwasu trójfluorooctowego, pozostawia roztwór w ciagu 15 minut i odparowuje do sucha 45 w wyparce obrotowej.Otrzymana oleista pozostalosc przemywa sie wo¬ da i dodaje stezonego wodorotlenku amonowego do pH 6,0, Otrzymany osad rozpuszcza sie w wodzie, saczy 50 i przemywa woda.Polaczone przesacze (259 ml) nanosi sie na kolumne o wymiarach 8 X 92 cm wypelniona Arriberlitem CG-50 (NH4+). Kolumne przemywa sie 4 litrami wody i eluuje wodoro¬ tlenkiem amonowym w gradiencie stezenia od 0,6 55 n do 1,0 n i stezonego roztworu. Otrzymuje sie 40,32% amikacyny, 4,58% BB-K6, 8,32% BB-K29, 30,50% kanamycyny A i 7,43% zwiazku poliacylo- wego. 60 Przyklad XXIX. Powtarza sie postepowa¬ nie z przykladu I, z tym, ze zamiast 6'-N-karbo- benzyloksykanamycyny A stosuje sie równomolar- na ilosc e^N-karbobenzyloksykanamycyny B i otrzymuje sie l-N^[L-(-)-yammo-«*-hydroksybuty- 65 rylojkanamycyne B,lit 307 37 3» Przyklad XXX. Powtarza sie postepowanie opisane w przykladzie I, stosujac zamiast estru N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dwukarboksyimido- wego kwasu L-(-)-y-benzyloksykarbonyloamino-a- -hydroksymaslowego ester N-hydroksy-5-norborne- 5 no-2,3Hkaribdksyimidowy kwasu L-(-)-jff-benzylo- ksykarbonyloamano-«-hydroksypropionowego lub ester N-hydroksy-5-norborneno-2,3-diWukarboksy- imidowy kwasu L-(-)-d-benzyloksykarbonyloamino -a-hydroksywalerianowego, i otrzymujac odpo- 10 wiednio l-N-[L-(-)-fi-amino-a-hydroksypropiony- lo]-fcanamycyne A lub l-N-[L-(-)-d-amino-a-hydro- ksywalerylo]-kanamycyne A. ) Przyklad XXXI. Powtarza sie postepowa- 05 nie opisane w przykladzie XXV, stosujac zamiast estru N*hydiroksysukcynamidowego kwasu L-(-)-y- -benzyloksykarbonyloamino-a-hydroksymaslowe- go, ester N-hydroksysukcynimidowy kwasu L-(-)-/?- -benzyloksykarbonyloamano-«-hydroksypropiono- ?° wego lub ester N-hydroksysukcynimidowy kwasu L-(-)-£-benzyloksykarbonyloamino-a-ihydroksywa- lerianowego i otrzymujac odpowiednio l-N-[L-(-)- -^-amino-a-hydroksyprppionylo] kanamycyne B lub l-N-[-(-)-#-amino-a-hydroksywalerylo] kanamycy- ^ ne B.Przyklad XXXII. Wytwarzanie BB-K8 na drodze acylowanda poli(trójmetylosililo)-3,6'-ojwu- -N-fcarbobenzyloksykanamycyny A w bezwodnym 30 ketonie dwuetylowym, A. 3,6'-dwu-N-karibdbenzyloksykanamycyna A. 7,26 g zawiesiny (15 mmoli) kanamycyny A (wolna zasada) i 18,6 g (75 mmoli) czterowodzianu 35 octanu niklu w 300 ml sulfotlenku dwumetylu (DMSO) ogrzewa sie w ciagu okolo 30 minut w temperaturze 100°C, mieszajac az do uzyskania klarownego, zielonego roztworu. Po oziebieniu do¬ daje sie roztworu 11,8 g (37,6 mmola) N-karbo- ^ benzyloksy-5-norbornen-2,3-dwukarboksyimidu w 50 ml DMSO. Roztwór miesza sie w ciagu nocy w temperaturze pokojowej, dodaje sie 100 ml ste¬ zonego roztworu amoniaku i 1 litr wody, miesza sie w ciagu 1 godziny w temperaturze pokojowej ^ oraz wprowadza sie na szczyt kolumny Diaion HP-10 (300 ml).Kolumne eluuje sie stopniowo najpierw 7 n roz¬ tworem NH4OH, nastepnie mieszanina metanolu i wody w stosunku 1:1, a na koncu mieszanina 50 metanolu i wody w stosunku 10:1. Zbiera sie frakcje o objetosci 20 ml badajac je metoda chro¬ matografii cienkowarstwowej na plytkach z sili- kazelu Merck Silica Gel 60 F-254 z zastosowaniem mieszaniny chloroformu etanolem i 28%-owym wo- 55 dorotlenkiem amonowym w stosunku 1 :2 :1. Czesc pozadanego produktu, która krystalizuje w postaci drobnych igiel z frakcji zawierajacych produkt w wiekszych stezeniach, odsacza sie uzyskujac próbke analityczna. Przesacz i inne frakcje zawie- 60 rajace pozadany produkt (Rf = 0,42) laczy sie i roztwór odparowuje sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Pozostalosc rozciera sie z eterem i otrzy¬ muje sie lacznie 9,7 g (86%), wymienionego, w ty¬ tule produktu o temperaturze topnienia .300°C. es Widmo IR (KBr) :Vc = 0 1690 cmK Widmo NMR (DMSO-d6 + DCI, pD ca 3): d 4,76—5,26 (6H, m, IV, Ht" i CO—OCHj—C6AX2), 7,26 (10H, s, CO—OCH2—C6HBX2).Wyniki analizy elementarnej: Wartosci obliczone dla C^U^N^O^ • H20 : C — 52,98, H — 6,54, N — 7,27.Wartosci oznaczone: C — 53,20, H — 6,42, N — 7,04.B. Poli(trójmetylosililo)-3,6'-dwu-N-karbobenzy- loksykanamycyna A Mieszanine 1,5 g (2 mmola) 3,6'-dwu-N-karbo- benzyloksykanamycyny A z etapu A i 1,29 g (8 mmoli) heksametylodwusilazanu w 15 ml -suchego acetonitrylu ogrzewa sie w ciagu 16 godzin w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna. Kla¬ rowny roztwór zateza sie do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem i pozostalosc rozpuszcza sie w 20 ml suchego ketonu dwuetylowego. Roztwór sto¬ suje sie bezposrednio w nastepnym etapie.C. Acylowanie poli-(trójmetylosililo)-3,6'-dwu-N- -karbobenzyloksykanamycyny A z zastosowaniem równowaznych ilosci czynnika acylujacego.Do roztworu otrzymanego z etapu B mieszajac dodaje sie 700 mg (2 mmole) estru N-hydroksysuk- cynimidowego kwasu L-(-)-«-karbobenzyloksy-ami- no-a-hydroksymaslowego (SAE). Nastepnie miesza sie w ciagu 19 godzin w temperaturze pokojowej, dodaje sie 8 ml wody i 35 ml tetrahydrofuranu (THF), dodaje sie kwasu solnego do pH 3, miesza sie w ciagu 30 minut i zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc rozpuszcza sie w mieszaninie 30 ml wody, 40 ml metanolu, 10 ml n-butanolu i 40 ml tetrahydrofuranu (THF) oraz w ciagu nocy przeprowadza sie uwodornienie w obecnosci 500 mg 10%-owego palladu osadzonego na weglu.Katalizator odsacza sie i przesacz odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem oraz liofilizuje sie uzyskujac 1,7 g surowcowego BB-K8. Bezposta¬ ciowy proszek rozpuszcza sie w wodzie, do roztwo¬ ru dodaje sie kwasu solnego do pH 4 i oczyszcza sie go chromatograficznie porcjami w kolumnie wypelnionej Amberlitem CG-50 w formie jonów NH4+. Kolumne eluuje sie stopniowo woda, 0,1 n NH4OH, 0,3 n NH4OH, 0,5 n NH4OH i 2 n NH4OH zbierajac frakcje o objetosci 10 ml i analizujac je metoda chromatografii cienkowarstwowej na plytkach z silikazelu Merck Silica Gel 60 F-254 z zastosowaniem mieszaniny chloroformu z meta¬ nolem, 28%-owym wodorotlenkiem amonowym i woda w stosunku 1:4:2:1.Homogeniczne frakcje laczy sie, odparowuje i w koncu liofilizuje sie. Frakcje zawierajace BB-K8 oraz frakcje zawierajace wydzielona kanamycyne A bada sie z zastosowaniem odpowiednio K. pneu- moniae A20680 i B. subtilis PCI 129.Po wodorolizie czesciowo odbezpieczonego pro¬ duktu z zastosowaniem palladu osadzonego na we¬ glu, przeprowadza sie rozdzielanie w kolumnie CG-50 i otrzymuje sie dodatkowo 30 mg (2%) BB-K8. Sumaryczna wydajnosc BB-K8 wynosi 846 mg (69%).117 307 1 Nr frakcji 32—39 40—46 47—59 60—78 89—95 39 Stezenie NHiOH (n) 0,1, 0,3 0,3 0,3, 0,5 0,5 2 Ciezar 102 mg 174 mg* 106 mg 816 mgb 70 mg Wydajnosc 7c 67c 5 40 Produkt czesciowo odbezpieczony produkt kanamycyna A produkt niezidentyfikowany BB-K8 dwuacylakanamycyna A Wartosc ! Rf 0,42 0,33 0,18 (a) 408 g/mg (b) 956 g/mg (c) na podstawie próby biologicznej.D. Acylowanie poli-(trójmetylosililo)-3,6'-dwu-N- -karbobenzyloksykanamycyny A z zastosowaniem 1,2 równowazników czynnika acylujacego.Powtarza sie procedure wedlug etapu C z za¬ stosowaniem 20%-owego nadmiaru czynnika acy- lujacego. Otrzymuje sie nastepujace wyniki: o wartosci 0—2, i ich nietoksycznych, dopuszczal¬ nych w farmacji addycyjnych soli kwasowych, 15 znamienny tym, ze polisililowana kanamycyne A lub B lub ich pochodne zawierajace przy grupie aminowej w pozycji 6' grupe ochronna, za wy¬ jatkiem sililowej, poddaje sie acylowaniu w bez- Nr frakcji 28—29 30—41 42—52 | 53—81 94—116 Stezenie NH4OH (n) 0,2 0,2 0,3 0,3, 0,5 1, 2 Ciezar 107 mg 157 mg 120 mg 750 mg* 147 mg Wydajnosc 60* 11 Produkt czesciowo odbezpieczony produkt niezidentyfikowany produkt niezidentyfikowany produkt BB-K8 dwuacylokanamycyna Wartosc 1 Rf 0,35 0,30 0,14 0,05 (a) 933 g/mg (b) na podstawie próby biologicznej.W wyniku wodorolizy czesciowo odbezpieczonego produktu z zastosowaniem palladu osadzonego na weglu oraz rozdzielania w kolumnie CG-50 otrzy¬ mujecie dodatkowo 21 mg (2%) BB-K8. Suma¬ ryczna wydajnosc BB-K8 wynosi 771/mg (62%).E. Acylowanie poli-(trójmetylosililo)-3,6'-dwu-N- -karbobenzyloksykanamycyny A z zastosowaniem 1,5 równowaznika czynnika acylujacego.Powtarza sie procedure wedlug etapu C z za- stooswaniem 50%-owego nadmiaru czynnika acy¬ lujacego.Otrzymuje sie nastepujace wyniki: 35 40 wodnym rozpuszczalniku organicznym, za pomoca acylujacej pochodnej kwasu o wzorze ogólnym 2, w którym n oznacza liczbe calkowita o wartosci 0—2 a B oznacza grupe chroniaca grupe amino¬ wa, a nastepnie usuwa sie wszystkie grupy ochron¬ ne. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako acylujaca pochodna kwasu stosuje sie aktyw¬ ny ester lub mieszany bezwodnik. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako grupe chroniaca grupe aminowa w acylujacej pochodnej kwasu stosuje sie grupy o wzorach 4, 5, 6, 7, 8, 9 lub 10, w których to wzorach R1 i R2 sa takie same lub rózne i oznaczaja atom wodo- Nr frakcji 29—39 40—47 65—80 100—130 Stezenie NHAOH (n) 0,2 0,3 0,5 1,2 Ciezar 293 mg 95 mg* 582 mgb 543 mg Wydajnosc 6° 299 26 Produkt czesciowo odbezpieczony produkt kanamycyna A BB-K8 dwuacylokanamycyna A Wartosc Rf 0,67 0,33 0,09 (a) 860 g/mg (b) 880 g/mg (c) na podstawie próby biologicznej.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania l-N-(co-amino-a-hydro- ksyalkanokarbonylo)kanamycyny A i B o wzorze „ ogólnym 1, w którym R oznacza grupe hydroksy¬ lowa lub aminowa, a n oznacza liczbe calkowita ru, fluoru, chloru, bromu, grupe nitrowa, hydro¬ ksylowa, nizsza grupe alkilowa lub nizsza grupe alkoksylowa, X oznacza atom chloru, bromu, flu¬ oru lub jodu, a Y oznacza atom wodoru, chloru, bromu, fluoru lub jodu. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze41 117 307 U jako acylujaca pochodna kwasu stosuje sie jego aktywny ester z N-hydroksysukcynimidem, N-hy- droksy-5-norborneno-2,3-dwukarboksyimidem lub N-hydroksyftalimidem. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako grupy chroniace grupy aminowe w acyluja- cej pochodnej kwasu stosuje sie grupy karboben- zylooksylowe. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako acylujaca pochodna kwasu stosuje sie jego mieszany bezwodnik z kwasem trójmetylooctowym, benzoesowym izobutyloweglowym lub benzylowe- glowym. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 10 stosuje sie polisililowana kanamycyne A lub B zawierajaca przy grupie aminowej w pozycji 6' grupe karbobenzylooksylowa. 8. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako zwiazek wyjsciowy stosuje sie polisililowana kanamycyne A lub B, zawierajaca srednio w cza¬ steczce 4—8 grup sililowych. 9. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wyjsciowa polisililowana kanamycyna A lub B zawiera w czasteczce srednia ilosc grup sililowych zawarta w zakresie 3—7. 10. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako grupe sililowa stosuje sie grupe trójmetylo- sililowa.CH2NH2 HOt* CH2NH2 Wzór t B-HN-CH3r(CH2)n-CH- COOH OH Wzór 2 4 NH2 R R a0-CH2CC- Wtór 4- 9 Y2XCC- Wzór $ no2 Wzór 7 CH3 0 CHs-C-0-C- CH3 WzófS117 307 0 C X3C-CH2-0-C- ^yL Wzór9 ^s^rs R? R4 Si ^NH NH R;i 6^5 R6-Si-X i R7 Wzór 12 Si O Wzór 10 R4 Wzór 11 R4 ,/ R m 8 Wzór 13 R5 R6-Si- i R7 Wzór 1+ H2N OH oh m A/^—^-m2 ' c=o U Wzór15 Q +¦ (CH3)3Si-NH-Si(CH3)3 £H R0^ /^0R A I CH3CN OH. RO^- 0R-0R O RHN ORI^hnAi±TT^0^0-^NH -NHR "• C=0 i 0 + NH3 CH Schemat 1117 307 OH O CbzNH (CH2)2-CH-C00H+ HOt{ l( I] + DCC Wzór 17 aceton OH 0 i 0 Wzór 18 0 DCU + CbzHN(CH2)2-CH-C-0-Nv K U O Wzór 19 Schemat 2 HO-K /OH OH HO Wzór 15 OH OH 6^NH2 + (CH3)3 Si-NH-Si (CH3)3 A RO 0 nJH 4 CH3CN R0^\ OR/OR OR RHN ^/^N^I^HR »' 6' XNHR h/zor20 + NH3 Schemat 3 CbzNH (CH2)2-CH-C00H + HO-hQ + DCC Wzor 17 EtOAC 0 Wzór 21 OH 0 DCU + CbzNH (CH2CH-C-0-lQ o' Wzor 22 Schemat 4- PL PL PL PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania l-N-(co-amino-a-hydro- ksyalkanokarbonylo)kanamycyny A i B o wzorze „ ogólnym 1, w którym R oznacza grupe hydroksy¬ lowa lub aminowa, a n oznacza liczbe calkowita ru, fluoru, chloru, bromu, grupe nitrowa, hydro¬ ksylowa, nizsza grupe alkilowa lub nizsza grupe alkoksylowa, X oznacza atom chloru, bromu, flu¬ oru lub jodu, a Y oznacza atom wodoru, chloru, bromu, fluoru lub jodu. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze41 117 307 U jako acylujaca pochodna kwasu stosuje sie jego aktywny ester z N-hydroksysukcynimidem, N-hy- droksy-5-norborneno-2,3-dwukarboksyimidem lub N-hydroksyftalimidem. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako grupy chroniace grupy aminowe w acyluja- cej pochodnej kwasu stosuje sie grupy karboben- zylooksylowe. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako acylujaca pochodna kwasu stosuje sie jego mieszany bezwodnik z kwasem trójmetylooctowym, benzoesowym izobutyloweglowym lub benzylowe- glowym. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 10 stosuje sie polisililowana kanamycyne A lub B zawierajaca przy grupie aminowej w pozycji 6' grupe karbobenzylooksylowa. 8. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako zwiazek wyjsciowy stosuje sie polisililowana kanamycyne A lub B, zawierajaca srednio w cza¬ steczce 4—8 grup sililowych. 9. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wyjsciowa polisililowana kanamycyna A lub B zawiera w czasteczce srednia ilosc grup sililowych zawarta w zakresie 3—7. 10. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako grupe sililowa stosuje sie grupe trójmetylo- sililowa. CH2NH2 HOt* CH2NH2 Wzór t B-HN-CH3r(CH2)n-CH- COOH OH Wzór 2 4 NH2 R R a0-CH2CC- Wtór 4- 9 Y2XCC- Wzór $ no2 Wzór 7 CH3 0 CHs-C-0-C- CH3 WzófS117 307 0 C X3C-CH2-0-C- ^yL Wzór9 ^s^rs R? R4 Si ^NH NH R;i 6^5 R6-Si-X i R7 Wzór 12 Si O Wzór 10 R4 Wzór 11 R4 ,/ R m 8 Wzór 13 R5 R6-Si- i R7 Wzór 1+ H2N OH oh m A/^—^-m2 ' c=o U Wzór15 Q +¦ (CH3)3Si-NH-Si(CH3)3 £H R0^ /^0R A I CH3CN OH. RO^- 0R-0R O RHN ORI^hnAi±TT^0^0-^NH -NHR "• C=0 i 0 + NH3 CH Schemat 1117 307 OH O CbzNH (CH2)2-CH-C00H+ HOt{ l( I] + DCC Wzór 17 aceton OH 0 i 0 Wzór 18 0 DCU + CbzHN(CH2)2-CH-C-0-Nv K U O Wzór 19 Schemat 2 HO-K /OH OH HO Wzór 15 OH OH 6^NH2 + (CH3)3 Si-NH-Si (CH3)3 A RO 0 nJH 4 CH3CN R0^\ OR/OR OR RHN ^/^N^I^HR »' 6' XNHR h/zor20 + NH3 Schemat 3 CbzNH (CH2)2-CH-C00H + HO-hQ + DCC Wzor 17 EtOAC 0 Wzór 21 OH 0 DCU + CbzNH (CH2CH-C-0-lQ o' Wzor 22 Schemat 4- PL PL PL PL PL
PL1978206457A 1977-04-28 1978-04-28 Process for preparing 1-n-/omega-amino-alpha-hydroxyalkanocarbonylo/kanamycinsnil/kanamicinov PL117307B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US79180677A 1977-04-28 1977-04-28
US88858578A 1978-03-20 1978-03-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL206457A1 PL206457A1 (pl) 1980-03-24
PL117307B1 true PL117307B1 (en) 1981-07-31

Family

ID=27121201

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL1978206457A PL117307B1 (en) 1977-04-28 1978-04-28 Process for preparing 1-n-/omega-amino-alpha-hydroxyalkanocarbonylo/kanamycinsnil/kanamicinov

Country Status (27)

Country Link
JP (1) JPS53149951A (pl)
AR (1) AR218910A1 (pl)
AT (1) AT357675B (pl)
CA (2) CA1100953A (pl)
CH (1) CH639104A5 (pl)
CS (1) CS207607B2 (pl)
CY (1) CY1241A (pl)
DE (2) DE2818992A1 (pl)
DK (2) DK172543B1 (pl)
EG (1) EG13710A (pl)
ES (1) ES469303A1 (pl)
FI (1) FI781288A (pl)
FR (2) FR2388826A1 (pl)
GB (1) GB1598294A (pl)
HK (1) HK51484A (pl)
IE (2) IE46945B1 (pl)
IT (2) IT1156718B (pl)
KE (1) KE3398A (pl)
LU (1) LU79541A1 (pl)
MY (1) MY8500528A (pl)
NL (1) NL178790C (pl)
NO (2) NO149635C (pl)
PL (1) PL117307B1 (pl)
PT (1) PT67959B (pl)
SE (2) SE447259B (pl)
SG (1) SG22884G (pl)
YU (2) YU102578A (pl)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55306A (en) * 1978-04-28 1980-01-05 Bristol Myers Co Manufacture of 11nn*omegaaaminooalphaahydroxy alkanoyl**aminoglycoside antibiotic
CA2480002A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Amato Pharmaceutical Products, Ltd. Lactic acid derivative
AU2008326297B2 (en) 2007-11-21 2012-11-08 Cipla USA, Inc. Antibacterial aminoglycoside analogs
WO2010132760A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Achaogen, Inc. Antibacterial derivatives of tobramycin
WO2010132759A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Achaogen, Inc. Antibacterial derivatives of dibekacin
WO2010132768A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Achaogen, Inc. Antibacterial derivatives of sisomicin
WO2010132757A2 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Achaogen, Inc. Antibacterial aminoglycoside analogs
WO2010132765A2 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Achaogen, Inc. Antibacterial aminoglycoside analogs

Also Published As

Publication number Publication date
NO154697C (no) 1986-12-03
DE2818822A1 (de) 1978-11-09
NL7804503A (nl) 1978-10-31
NO149635B (no) 1984-02-13
YU102578A (en) 1983-01-21
JPS5721277B2 (pl) 1982-05-06
IE47271B1 (en) 1984-02-08
FR2388827A1 (fr) 1978-11-24
AR218910A1 (es) 1980-07-15
NO831197L (no) 1978-10-31
CS207607B2 (en) 1981-08-31
SE8305538L (sv) 1983-10-07
DE2818992C2 (pl) 1988-03-17
FR2388826A1 (fr) 1978-11-24
DK183078A (da) 1978-10-29
SE461148B (sv) 1990-01-15
SE7804973L (sv) 1978-10-29
ES469303A1 (es) 1979-09-16
NO781437L (no) 1978-10-31
FR2388827B1 (pl) 1982-07-09
DE2818992A1 (de) 1978-11-23
MY8500528A (en) 1985-12-31
HK51484A (en) 1984-06-22
CH639104A5 (en) 1983-10-31
IT1105500B (it) 1985-11-04
JPS53149951A (en) 1978-12-27
YU41590B (en) 1987-12-31
IE780841L (en) 1978-10-28
DK165450C (da) 1993-04-13
FR2388826B1 (pl) 1982-12-10
IT1156718B (it) 1987-02-04
NL178790C (nl) 1986-05-16
DK172543B1 (da) 1998-12-07
DK165450B (da) 1992-11-30
NO149635C (no) 1984-05-23
SE447259B (sv) 1986-11-03
SG22884G (en) 1985-01-04
ATA312778A (de) 1979-12-15
CA1105454A (en) 1981-07-21
SE8305538D0 (sv) 1983-10-07
AT357675B (de) 1980-07-25
EG13710A (en) 1982-09-30
CY1241A (en) 1984-06-29
PT67959B (en) 1980-03-05
IT7849137A0 (it) 1978-04-28
FI781288A (fi) 1978-10-29
YU102478A (en) 1982-10-31
PL206457A1 (pl) 1980-03-24
KE3398A (en) 1984-06-08
NO154697B (no) 1986-08-25
LU79541A1 (fr) 1978-11-28
DK182978A (da) 1978-10-29
DE2818822C2 (pl) 1989-01-26
IE780842L (en) 1978-10-28
NL178790B (nl) 1985-12-16
IE46945B1 (en) 1983-11-16
CA1100953A (en) 1981-05-12
PT67959A (en) 1978-05-01
GB1598294A (en) 1981-09-16
IT7849136A0 (it) 1978-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4347354A (en) Preparation of 1-N-[ω-amino-α-hydroxyalkanoyl]aminoglycoside polysilylated antibiotics and products obtained therefrom
US4424343A (en) Preparation of 1-N- ω-amino-α-hydroxyalkanoyl!kanamycin polysilylates and products
PL117307B1 (en) Process for preparing 1-n-/omega-amino-alpha-hydroxyalkanocarbonylo/kanamycinsnil/kanamicinov
SU873888A3 (ru) Способ получени дезоксиаминогликозидных антибиотиков
DE2555405A1 (de) Antibakterielle mittel
GB1600457A (en) Process for the preparation of 1-n-acylaminoglycosides
EP0096392B1 (en) Novel aminoglycosides, process for production thereof and use thereof
CA1105452A (en) PREPARATION OF 1-N-[.omega.-AMINO-.alpha.- HYDROXYALKANOYL]AMINOGLYCOSIDE ANTIBIOTICS
KR920003838B1 (ko) I-N-(ω-아미노-α-히드록시알카노일)-2&#39;, 3&#39;-디데옥시가나마이신 A의 제조방법
EP0040764B1 (en) Novel aminoglycosides, and antibiotic use thereof
Long et al. Carbopeptoids: peptides and diketopiperazines incorporating the anomeric centre of mannopyranose
Lichtenthaler et al. Nucleosides, XXXVI. Synthesis of 3′‐Homocitrullylamino‐and 3′‐Lysylamino‐3′‐deoxyadenosine and Their Relation to Cordyceps militaris Derived Products
KR820000276B1 (ko) 1-N-[W-아미노-α-하이드록시알카노일)가나마이신류의 제조방법
DK167687B1 (da) Derivat af kanamycin a eller b til anvendelse ved fremstilling af 1-n-oeomega-amino-alfa-hydroxyalkanoylaakanamycin a eller b
JPH0130837B2 (pl)
Grouiller et al. Synthesis of amino-dideoxy-dl-pentopyranoses and their ureido derivatives
IT8209478A1 (it) Kanamicine 2&#39;-modificate e produzione di queste
JPH03875B2 (pl)
JPS6312079B2 (pl)
Desseaux et al. Synthesis and properties of phosphodiester and triester derivatives of AZT with tethered potential ribonucleases
JPS631949B2 (pl)
JPS6011718B2 (ja) 新規なホ−テイマイシンｂの誘導体およびその製法
CH652133A5 (de) 23-0-substituiertes carbamoyl-23-demycinosyldesmycosin.
JPS646200B2 (pl)
ZA200307317B (en) Topolsomerase I selective cytotoxic sugar derivatives of Indolopyrrolocarbazoles.