DE3447003C2

DE3447003C2 - 7-Acylamino-9a-methoxymitosane, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Mittel

Info

Publication number: DE3447003C2
Application number: DE3447003A
Authority: DE
Inventors: Takushi Kaneko; Henry She Lai Wong; Terrence William Doyle
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1983-12-23
Filing date: 1984-12-21
Publication date: 1994-11-17
Anticipated expiration: 2004-12-22
Also published as: IT1178792B; DK169477B1; PT79741B; AU3571084A; CA1239645A; SE8406577L; NO163570C; FR2557112A1; ES538804A0; DD228259A5; GB8432513D0; IL73876A0; IE57835B1; FI81099B; NO845100L; BE901377A; FI845037L; AR244231A1; DK621484D0; AU561376B2

Description

Die Erfindung betrifft Mitomycin-Analoga, und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Mittel. Diese Verbindungen sind Mitomycin-C-Derivate, bei denen die 7-Aminogruppe acyliert ist und sie sind wirksame Antitumorsubstanzen, die experimentell erzeugte Tiertumore in vivo inhibieren.

Nach der Nomenklatur der Chemical Abstracts besitzt Mitomycin C den folgenden systematischen Namen:
[1aR-(1aα,8β,8aα,8bα)]-6-Amino-8-[((aminocarbonyl)oxy) methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl- azirino[2′,3′,3,4]-pyrrolo[1,2-ª]indol-4,7-dion.

Danach wird das Azirinopyrroloindolringsystem wie folgt numeriert:

Nach einem Trivial-Nomenklatursystem, das in der Mitomycin betreffenden Literatur sehr häufig benutzt wird, wird das zuvor genannte Ringsystem zusammen mit verschiedenen für die Mitomycine charakteristischen Substituenten als Mitosan bezeichnet:

Für viele einfache Derivate ist dieses Bezeichnungssystem geeignet und ausreichend. Dazu zählen beispielsweise solche Derivate, die an dem Azirinoringstickstoffatom oder in den 7- oder 9a-Stellungen Substituenten aufweisen. Dieses System ist jedoch für allgemeine Zwecke nicht einsetzbar, da es zu Unklarheiten und Mißverständnissen führt.

Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung wird das Azirinostickstoffatom als N^1a bezeichnet. Das Stickstoffatom der an den aromatischen Ring gebundenen Aminogruppe wird mit N⁷ bezeichnet. Dabei wird das Nomenklatursystem für Mitosan verwendet.

Hinsichtlich der stereochemischen Konfiguration der erfindungsgemäßen Verbindungen gilt folgendes. Durch die Basisbezeichnung "Mitosan" oder durch die Strukturformel wird zum Ausdruck gebracht, daß die damit bezeichnete Verbindung die gleiche stereochemische Konfiguration besitzt wie Mitomycin C.

Mitomycin C ist ein Antibiotikum, das durch Fermentation hergestellt wird. Es ist derzeit von der Food and Drug Administration zum Verkauf zugelassen und dient zur Therapie disseminierter Adenokarcinoma des Magens oder der Pancreas. Es wird dabei mit anderen chemotherapeutischen Wirkstoffen kombiniert. Es wird ferner zur palliativen Behandlung eingesetzt, wenn andere Behandlungen nicht anschlugen (Mutamycin® Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13 201, Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981, Seiten 717 und 718). Mitomycin C und seine Herstellung durch Fermentation ist in der US-PS 36 60 578 (patentiert am 2. Mai 1972 unter Beanspruchung der Priorität früherer Anmeldungen inklusive einer in Japan am 6. April 1957 eingereichten Anmeldung) beschrieben.

Die Strukturen der Mitomycine A, B, C und von Porfiromycin wurden zuerst von J. S. Webb et al veröffentlicht (Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 84, 3185-3187 (1962)). Eine der eingesetzten chemischen Transformationen bei diesen Strukturuntersuchungen, die dazu dienten zu klären, in welchem Verhältnis Mitomycin A und Mitomycin C zueinander stehen, bestand in der Umwandlung der ersten Verbindung, d. h. 7,9α-Dimethoxymitosan, durch Umsetzung mit Ammoniak zu der letzteren Verbindung, d. h. 7-Amino-9α-methoxymitosan.

Es hat sich herausgestellt, daß die Verdrängung der 7-Methoxygruppe von Mitomycin A für die Herstellung von Mitomycin-C-Derivaten mit Antitumoreigenschaften von großem Interesse ist. Die nachfolgenden Literaturstellen und Patentschriften befassen sich jeweils mit der Umwandlung von Mitomycin A zu einem in 7-Stellung substituierten Aminomitomycin-C-Derivat mit Antitumoraktivität. Erfindungsgemäße 7-Acylaminomitomycin-C-Analoga sind jedoch im Stand der Technik nicht beschrieben.
Matsui et al "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968), Kinoshita et al "J. Med. Chem." 14, 103-109 (1971).
Iyengar et al "J. Med. Chem." 24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers and Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, März 1982, Abstract Nr. MEDI 72.
Sasaki et al, Internat. J. Pharm., 1983, 15, 49.

Die nachstehenden Patentschriften befassen sich mit der Herstellung von in 7-Stellung substituierten Aminomitosanderivaten durch Umsetzung von Mitomycin A, Mitomycin B oder einem N^1a-substituierten Derivat davon mit einem primären oder sekundären Amin:
Cosulich et al, US-PS 33 32 944,
Matsui et al, US-PS 34 20 846,
Matsui et al, US-PS 34 50 705,
Matsui et al, US-PS 35 14 452,
Nakano et al, US-PS 42 31 936 und
Remers, US-PS 42 68 676.

Mitomycin-C-Derivate, die in 7-Stellung einen substituierten Aminorest aufweisen, sind auch durch direkte Biosynthese hergestellt worden. Dazu wurden Fermentationsbrühen mit verschiedenen primären Aminen versetzt. Die Fermentation entsprach der üblichen Mitomycin-Fermentation (C. A. Claridge et al, Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982, Abs. 028).

Die JP-A-58/201 791 beschreibt Acylderivate des Mitomycin C, bei denen ein Hematoporphyrin-Acylrest am N⁷-Atom gebunden ist.

Die US-A-34 10 867 beschreibt ein Phosphor enthaltendes Mitomycin C-Derivat, das durch Umsetzung von Mitomycin C mit einem Phosphamidester-Chlorid in Gegenwart einer Base erhältlich ist. Die Struktur des Reaktionsproduktes ist nicht angegeben.

Die FR-A-15 40 921 beschreibt das 1α-Thioharnstoffderivat von Mitomycin C, das im Vergleich zu Mitomycin C geringere Toxizität besitzt.

Die FR-A-6 005 M beschreibt Mitomycinderivate der Formel:

worin X für Amino, Niedrigalkylamino, Phenylamino oder Pyridyl steht und COR für Halogenalkanoyl, Halogenbenzoyl, Nitrobenzoyl, Alkenoyl, Acetylglycyl, Sorbyl und Acetylmethionyl oder, wenn X eine andere Bedeutung als Amino besitzt für eine Alkanoyl- oder Benzoylgruppe steht.

Die BE-A-6 55 399 beschreibt Mitomycin-C-Derivate, die in 1α- Stellung einen gegebenenfalls substituierten Alkanoylrest aufweisen.

Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel (III):

worin R⁷ eine Alkanoylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylcarbonylgruppe mit 4 bis 9 Kohlenstoffatomen bedeutet, sowie die folgenden Verbindungen:
7-(Formyl)-amino-9α-methoxymitosan,
7-(Trifluoracetyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-Acetamido-9a-methoxymitosan,
7-(2-Chloracetyl)-amino-9a-methoxymitosan,
7-(Methansulfonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-[3-(tert.-Butoxycarbonylamino)-propionyl]amino-9a-methoxymitosan,
7-(Methoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Ethoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-[(2-Methoxyethoxy)-carbonyl]-amino-9a-methoxymitosan,
7-(Isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Benzylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Diethylthiophosphoryl)amino-9a-methoxymitosan,
N^1a-(Benzyloxycarbonyl)-7-benzyloxycarbonylamino-9a-methoxymitosan,
7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-Acetylamino-9a-methoxy-1a-methylmitosan,
7-[3-(Ethoxycarbonyl)propionyl]amino-9a-methoxymitosan,
7-Benzoylamino-9a-methoxymitosan, und
7-[((2-Chlorethyl)amino)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan.

Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen inhibieren experimentell erzeugte Tumore bei Tieren. Sie inhibieren die gleiche Art von Tumoren wie Mitomycin C. Sie besitzen jedoch in vielen Fällen eine höhere Aktivität, da sie zu einer stärkeren Inhibierung führen als Mitomycin C. Ihre Toxizität ist im allgemeinen geringer als die von Mitomycin C, was sich insbesondere in ihrer niedrigeren myelosuppressiven Wirkung wiederspiegelt. Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen werden zur Bekämpfung von Tumoren im wesentlichen in einer nicht-toxischen, antitumorwirksamen Dosis an ein Säugetier (Mensch und Tier) verabreicht.

Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen werden hauptsächlich wie Mitomycin C durch Injektion verabreicht. Sie können im allgemeinen in höheren Dosen als Mitomycin C verabreicht werden, da sie eine geringere Toxizität besitzen. Außerdem führen sie bei höheren Dosen zu einer wirksameren Inhibierung der Tumore.

Sie können als trockene, pharmazeutische Formulierungen vorliegen, die Verdünnungsmittel, Puffer, Stabilisierungsmittel, Solubilisierungsmittel und andere Bestandteile enthalten, welche zu einer leichteren pharmazeutischen Formulierung beitragen. Diese Mittel können unmittelbar vor der Verwendung mit einer injezierbaren Flüssigkeit bereitet werden. Geeignete Injektionsflüssigkeiten sind z. B. Wasser, isotonische Kochsalzlösungen.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (III) stellt man ausgehend von Mitomycin C her, indem man zuerst Mitomycin C mit Natriumhydrid umsetzt. Anschließend setzt man das erhaltene Produkt mit einem Acylierungsmittel der folgenden Formeln um:

In diesen Formeln bedeutet X eine Gruppe, die dem Fachmann als Abgangsgruppe bzw. austretende Gruppe bekannt ist. In organischen Synthesen wird eine große Vielzahl derartiger Gruppen eingesetzt. Dazu zählen beispielsweise die Halogenide und verschiedene andere reaktive Ester, wie beispielsweise die oben aufgeführten. Es können außerdem andere Acylgruppen eingesetzt werden; in diesem Fall handelt es sich bei dem Acylierungsmittel um ein Anhydrid. Es können auch gemischte Anhydride eingesetzt werden, bei denen ein Teil die acylierende Funktion wahrnimmt und der andere Teil die Abgangsgruppe darstellt.

Ra und R^b besitzen die den gewünschten Substituenten in 7-Stellung entsprechenden Bedeutungen.

Die Umsetzung von Mitomycin C mit Natriumhydrid erfolgt vorzugsweise in Dimethylformamidlösung bei niedrigen Temperaturen. Anschließend setzt man das Reaktionsprodukt mit mindestens einem chemischen Äquivalent eines der erwähnten Acylierungsmittel, vorzugsweise mit 1,5 bis 2 chemischen Äquivalenten, bei wasserfreien Bedingungen bei einer Temperatur von vorzugsweise -20 bis -30°C um.

Die erfindungsgemäß bevorzugten Verbindungen sind solche, die, verglichen mit Mitomycin C, eine hohe Antitumoraktivität und eine verhältnismäßig niedrige Toxizität besitzen. Dazu zählen 7-(Formyl)-amino-9a-methoxymitosan (Beispiel 1), 7-(Acetyl)amino-9a-methoxymitosan (Beispiel 3) und 7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (Beispiel 13).

Diese Verbindungen sind stellvertretend für die Ausführungsform der Verbindungen der allgemeinen Formel (III), bei denen R⁷ eine Alkanoylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylcarbonylgruppe mit 4 bis 9 Kohlenstoffatomen darstellt. Diese Verbindungen sind erfindungsgemäß bevorzugt.

Aktivität gegenüber P-388 Murine Leukämie

Tabelle 1 gibt die Ergebnisse von Labortests wieder, die mit weiblichen CDF₁-Mäusen erhalten wurden, welchen intraperitoneal ein Tumorinoculum von 10⁶ Ascites-Zellen von P-388 Murine Leukämie implantiert wurde und welche mit verschiedenen Dosen entweder einer erfindungsgemäßen Verbindung oder von Mitomycin C behandelt wurden. Die Verbindungen wurden dabei intraperitoneal injiziert. Für jede Dosismenge wurden Gruppen von 6 Ratten eingesetzt. Diese wurden mit einer einzelnen Dosis der Verbindung an dem Tag der Inokulation behandelt. Bei allen Experimenten wurde auch eine Kontrollgruppe (Mäuse) mit Kochsalzlösung behandelt. Zur positiven Kontrolle wurden Gruppen mit Mitomycin C behandelt. In ein Protokoll, das über 30 Tage geführt wurde, wurden die für jede Mäusegruppe bestimmte mittlere Überlebenszeit in Tagen und die Anzahl der Überlebenden am Ende der 30-tägigen Periode eingetragen. Die Mäuse wurden vor der Behandlung und am Tag 6 gewogen. Die Gewichtsveränderung wurde als Maß für die Toxizität der Droge bewertet. Es wurden jeweils Mäuse mit einem Gewicht von 20 g eingesetzt. Ein Gewichtsverlust von bis zu etwa 2 g wurde als nicht ungewöhnlich betrachtet. Die Ergebnisse wurden ausgedrückt als "% T/C". Es handelt sich dabei um das Verhältnis der mittleren Überlebenszeit der behandelten Gruppe zu der mittleren Überlebenszeit der mit Kochsalzlösung behandelten Gruppe, multipliziert mit 100. Die mit Kochsalzlösung behandelten Kontrolltiere starben gewöhnlich innerhalb von 9 Tagen. In der folgenden Tabelle ist die "maximale Wirkung" ausgedrückt als "% T/C". Es ist auch die diese Wirkung hervorrufende Dosis angegebenen. Die in Klammern angegebenen Werte sind solche, welche in demselben Experiment mit Mitomycin C als positive Kontrolle erhalten wurden. Somit kann die relative Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen, bezogen auf Mitomycin C, berechnet werden. Ein als % T/C ausgedrückter Wert von 125 wurde als minimale Wirkung betrachtet. Die in der nachstehenden Tabelle aufgeführte minimal wirksame Dosis ist diejenige Dosis, die zu einem Wert von etwa 125 für "% T/C" führt.

Die in der Spalte "durchschnittliche Gewichtsänderung" aufgeführten beiden Werte beziehen sich auf die durchschnittliche Gewichtsänderung pro Maus bei der maximal wirksamen Dosis bzw. bei der minimal wirksamen Dosis.

Tabelle 1

Inhibierung von P-388 Murine-Leukämie

In der Tabelle II sind Antitumortestergebnisse für B16-Melanome wiedergegeben, die bei Mäusen wuchsen. Dazu wurden BDF₁-Mäuse eingesetzt, denen das Tumorimplantat subkutan inokuliert wurde. Es wurde ein 60-tägiges Protokoll angefertigt. Gruppen aus 10 Mäusen wurden für jede getestete Dosierungsmenge eingesetzt. Die mittlere Überlebenszeit für jede Gruppe wurde bestimmt. Kontrolltiere wurden wie die Testtiere inokuliert und mit dem Injektionsträger behandelt. Die mittlere Überlebenszeit der nicht mit einm Wirkstoff behandelten Tiere betrug 24,5 Tage. Die Überlebenszeit, bezogen auf die Überlebenszeit der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Maß für die Wirksamkeit betrachtet. Es wurden die maximal wirksame Dosis und die minimal wirksame Dosis für jede Testverbindung bestimmt. Als minimal wirksame Dosis wurde diejenige Dosis definiert, die zu einem % T/C-wert von 125 führte. Bei jeder Dosismenge wurden die Testverbindungen an den Tagen 1, 5 und 9 den Testtieren intravenös verabreicht.

Tabelle II

B16 Melanom

In der Tabelle III sind weitere Antitumortestergebnisse unter Verwendung von B16 Malanom wiedergegeben, welche in BDF₁-Mäusen wuchsen. Der Tumor (0,5 ml; 10% Brei) wurde intraperitoneal inokuliert. Es wurde ein 60-tägiges Protokoll angefertigt. Für jede getestete Dosismenge wurden Gruppen von 10 Mäusen eingesetzt. Die mittlere Überlebenszeit wurde für jede Gruppe bestimmt. Der Tumor wurde den Kontrolltieren auf dieselbe Weise inokuliert wie den Testtieren. Die Kontrolltiere wurden mit dem Injektionsträger behandelt. Bei den Tieren, die mit keinem Wirkstoff behandelt wurden, betrug die mittlere Überlebenszeit 20,5 Tage. Die Überlebenszeit, bezogen auf diejenigen der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Wirksamkeitsmaß genommen. Die maximal wirksame Dosis und die minimal wirksame Dosis wurden für jede Testverbindung bestimmt. Als minimal wirksame Dosis wurde eine solche definiert, die zu einem % T/C-Wert von 125 führt. Für jede Dosismenge wurde den Testtieren die Testverbindung an den Tagen 1, 5 und 9 intraperitoneal verabreicht.

Tabelle III

B16 Melanom

In der Tabelle IV sind die Werte für die myelosuppressive Wirkung der Verbindungen der Beispiele 1, 3 und 13 aufgeführt. Diese Verbindungen wurden Mäusen intravenös verabreicht und mit Mitomycin C verglichen. Den Mäusen wurde eine einzelne Dosis der Testverbindung am Tag 0 verabreicht. Ferner wurde bei den Mäusen an den Tagen 0, 4 und 7 die Gesamtzahl der weißen Blutkörperchen (total white blood cell counts; WBC) bestimmt. In der Tabelle IV sind die Werte für den Tag 4 und 7 als prozentuale Änderung (Δ%) angegeben. An den Tagen 0 und 4 wurden Unterschiedszählungen durchgeführt und als prozentuale Änderung (Δ%) am Tag 4 angegeben. Verschiedene Dosen der Testverbindungen wurden, wie in der Tabelle gezeigt, an verschiedenen Gruppen aus 10 Tieren verabreicht. Die in Klammern angegebenen Werte für die Δ% sind Vergleichswerte für Mitomycin C, das auf dieselbe Weise untersucht wurde. Die Verbindungen der Beispiele 1, 3 und 13 erwiesen sich als weniger myelosuppressiv als Mitomycin C. Bei Dosen mit äquivalenter Lethalität war bei den erfindungsgemäßen Verbindungen der Effekt hinsichtlich der neutrophilen Zählungen wesentlich weniger stark ausgeprägt als bei Mitomycin C.

In den nachfolgenden Beispielen sind detaillierte Verfahren zur Herstellung verschiedener erfindungsgemäßer Verbindungen beschrieben. Die Verbindungen sind im allgemeinen durch ihr NMR-Spektrum, ihr Infrarot-Absorptionsspektrum und ihr UV-Absorptionsspektrum charakterisiert.

Die Daten dieser Spektren sind in den folgenden Beispielen auf übliche Weise wiedergegeben. Bei den meisten Verbindungen sind die Werte für die Elementaranalyse ebenfalls angegeben, welche die gezeigten Strukturformeln bestätigen und zur Identifizierung dieser Verbindungen herangezogen werden können. Es wurden folgende Abkürzungen verwendet:

BOC
tert.-Butoxycarbonyl
DMF	Dimethylformamid
Trockeneis	festes Kohlenstoffdioxid
EtOAc	Ethylacetat
IR	Infrarot-Absorptionsspektrum
MeOH	Methanol
NMR	H-NMR-Spektrum
RT	Raumtemperatur, 20-25°C
UV	UV-Absorptionsspektrum

Beispiel 1 7-(Formyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6859)

6 ml Dimethylformamid gibt man zu einer Mischung aus Mitomycin C (549 mg; 1,78 mmol) und 214 mg einer 50%igen Öldispersion von NaH (4,45 mmol), die unter Argon gehalten wurde. Nach 10minütigem Rühren bei Raumtemperatur kühlt man die Mischung auf -20°C und gibt Phenylformiat (0,6 ml eines Materials mit 65%iger Reinheit, 3,50 mmol, H. L. Yale, J. Org. Chem. 36, 3234 (1971)) zum Schluß zu. Die Reaktionsmischung rührt man 30 Minuten bei -20°C, läßt dann während eines Zeitraumes von 1 Stunde auf Raumtemperatur erwärmen, quencht die Umsetzung durch Zugabe von festem CO₂ und verdünnt die Reaktionsmischung mit EtOAc. Das erhaltene Präzipitat filtriert man ab und entfernt das Lösungsmittel bei vermindertem Druck. Den Rückstand chromatographiert man an Silikagel (5% MeOH-CH₂Cl₂), wobei man die Titelverbindung (306 mg; 47%) erhält. Einen Teil dieses Materials kristallisiert man aus Aceton und Ether:
Fp. < 280°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ) 2,02 (s, 3H), 2,72 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J=12, 1 Hz), 3,93 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 4,92 (t, 1H, J=10 Hz), 5,24 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 8,76 (s, 1H);
IR (KBr): 3450, 3300, 1705, 1660, 1580, 1336, 1220, 1063 cm^-1;
UV (MeOH, λ_max): 223, 330, 520 nm.

Analyse für C₁₆H₁₈N₄O₆:

berechnet:
C 53,04, H 5,01, N 15,46;
gefunden:
C 52,75, H 5,09, N 15,96.

Ersetzt man in diesem Beispiel das Phenylformiat durch Phenylthioacetat oder Ethylthioformiat, dann erhält man 7-(Thioacetyl oder Thioformyl)amino-9a-methoxymitosan.

Beispiel 2 7-(Trifluoracetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6878)

Ausgehend von 300 mg (0,899 mmol) Mitomycin C und 2,25 mmol NaH führt man die Umsetzung wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Man verwendet p-Nitrophenyltrifluoracetat (432 mg; 1,80 mmol) als Acylierungsmittel. Ein Silikagel-Dünnschichtchromatogramm (10%) MeOH-CH₂Cl₂) ergibt die Titelverbindung als rötlich-purpurnen amorphen Feststoff (91 mg; 24%):
Fp. 93-95°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,02 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,11 (d, 1H, J=4 Hz), 3,20 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=12, 1 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 5,00 (t, 1H, J=10 Hz), 5,35 (dd, 1H, J=10, 5 Hz);
IR (KBr): 3460, 3300, 1720, 1665, 1580, 1335, 1220, 1150, 1065 cm^-1;
UV (MeOH, λ_max): 216, 355, 510 nm.

Eine beträchtliche Menge (120 mg) des Ausgangsmaterials gewinnt man zurück.

Analyse für C₁₇H₁₇F₃N₄O₆:

berechnet:
C 47,45, H 3,98, N 13,01;
gefunden:
C 48,10, H 4,43, N 12,91.

Beispiel 3 7-(Acetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6905)

Unter Verwendung von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C und 4 mmol NaH führt man die Umsetzung wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man den N-Hydroxysuccinimidester von Essigsäure (314 mg, 2 mmol) Nach Flash-Chromatographie an Silikagel (3% MeOH-CH₂Cl₂) erhält man 200 mg (27%) der Titelverbindung:
Fp. 110-112°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,06 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,75 (m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=13, 1 Hz), 3,95 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,19 (d, 1H, J=13 Hz), 5,03 (t, 1H, J=10 Hz), 5,34 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,16 (bs, 1H);
IR (KBr): 3420, 3320, 1700, 1650, 1610, 1575, 1330, 1245, 1055 cm^-1;
UV (CH₂OH, λ_max) 220, 330, 510 nm.

Analyse für C₁₇H₂₀N₄O₆ · H₂O:

Berechnet:
C 51,77, H 5,62, N 14,21;
gefunden:
C 51,58, H 5,25, N 14,10.

Beispiel 4 7-(2-Chloracetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6904)

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C und 4 mmol NaH führt man die Umsetzung ähnlich wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man 520 mg (3 mmol) Phenylchloracetat. Nach Chromatographie an Silikagel (5% MeOH-CH₂Cl₂) erhält man 60 mg (7,3%) der Titelverbindung:
Fp. 118-120°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,04 (s, 3H), 2,77 (m, 1H), 3,15 (d, 1H, J=4 Hz), 3,53 (dd, 1H, J=12, 1 Hz), 4,04 (dd, 1H, J=11, 4 Hz), 4,64 (s, 2H), 5,01 (t, 1H, J=10 Hz), 5,31 (dd, 1H, J=10, 4 Hz);
IR (KBr): 3420, 3330, 1760, 1647, 1588, 1480, 1330, 1060 cm^-1;
UV (MeOH, λ_max): 218, 235 (sh), 298 (sh), 342, 480 nm.

Man erhält etwa 100 mg des Ausgangsmaterials zurück.

Analyse für C₁₇H₁₉ClN₄O₆:
Berechnet:
C 49,70, H 4,66, N 13,64;
gefunden:
C 51,31, H 5,05, N 11,75.

Beispiel 5 7-(Methansulfonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6885)

6 ml Dimethylformamid gibt man unter Argon zu einer Mischung von Mitomycin C (668 mg, 2 mmol), und 4 mmol NaH. Nach 20minütigem Rühren bei Raumtemperatur kühlt man die Reaktionsmischung auf -25°C ab und gibt 454 mg (2 mmol) p-Nitrophenylmethansulfonat (Kametani et al., Yakugaku Zasshi, 84, 237 (1963)) zu. Die Reaktionsmischung hält man 4 Stunden bei -25°C, quencht die Reaktion dann mit festem CO₂, verdünnt die Reaktionsmischung mit EtOAc, wäscht mit Kochsalzlösung, trocknet über Na₂SO₄ und entfernt das Lösungmittel, wobei man einen rötlich-purpurnen Rückstand erhält. Diesen chromatographiert man an neutralem Aluminiumoxid (3% MeOH-CH₂-Cl₂) und erhält 100 mg (12%) der Titelverbindung:
Fp. 126-128°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,28 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,15 (d, 1H, J=4 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,31 (s, 3H), 3,55 (dd, 1H, J=13, 1 Hz), 4,04, (dd, 1H, J=11, 4 Hz), 4,10 (d, 1H, J=13 Hz), 5,06 (t, 1H, J=11 Hz), 5,48 (dd, 1H, J=11, 4 Hz);
IR (KBr): 3450, 1710, 1650, 1600, 1445, 1335, 1155, 1060 cm^-1;
UV (MeOH, λ_max): 218, 340, 360, 490 nm.

Analyse für C₁₆H₁₉N₄O₈S · H₂O:

Berechnet:
C 43,14, H 4,75, N 12,58;
gefunden:
C 42,99, H 4,67, N 12,60.

Beispiel 6 7-[3-(tert.-Butoxycarbonylamino)propionyl]amino-9a- methoxymitosan (BL-6879)

Ausgehend von 350 mg (1,05 mmol) Mitomycin C und 2,62 mmol NaH führt man die Umsetzung ähnlich wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man den N-Hydroxysuccinimidester von N-BOC-β-Alanin. Nach Dünnschichtchromatographie an Silikagel (10% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 181 mg (34%) der Titelverbindung:
Fp. 121-125°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,53 (s, 9H), 2,03 (s, 3H), 2,75 (m, 1H), 3,06 (t, 2H, J=6 Hz), 3,11 (m, 1H), 3,52 (d, 1H, J=12 Hz), 3,81 (q, 1H, J=6 Hz), 3,97 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 5,00 (t, 1H, J=10 Hz), 5,30 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,32 (bs, 1H);
IR (KBr): 3360, 3310, 1705, 1660, 1625, 1585, 1500, 1168, 1068 cm^-1;
UV (MeOH, λ_max): 221, 237, 327, 515 nm.

Analyse für C₂₃H₃₁N₅O₈ · H₂O:

Berechnet:
C 52,76, H 6,35, N 13,38;
gefunden:
C 52,85, H 6,22, N 12,83.

Beispiel 7 7-(Methoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25069)

Zu einer Mischung von Mitomycin C (334 mg; 1 mmol) und einer 50%igen Öldispersion von NaH (96 mg; 2 mmol) gibt man unter N₂ 5 ml trockenes DMF, rührt die Mischung bei Raumtemperatur 10 Minuten und kühlt dann auf -30°C ab. Danach gibt man 482 mg (2,3 mmol) Methyl-p-nitrobenzylcarbonat als Feststoff zu, rührt eine weitere Stunde bei -30°C, quencht die Reaktion durch Zugabe einer geringen Menge Trockeneis und verteilt die Reaktionsmischung zwischen EtOAc und Wasser. Die organische Schicht wäscht man mit Kochsalzlösung und trocknet über Na₂SO₄. Den nach Abziehen des Lösungsmittels erhaltenen Rückstand chromatographiert man an SiO₂ (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) und erhält 150 mg (38%) der Titelverbindung:
Fp. 106-107°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,05 (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,54 (d, 1H, J=12 Hz), 3,74 (s, 3H), 4,04 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 4,19 (d, 1H, J=12 Hz), 5,12 (t, 1H, J=12 Hz), 5,36 (dd, 1H, J=10,5 Hz), 10,20 (bs, 1H);
IR (KBr): 3450, 3300, 1725, 1652, 1615, 1580, 1495, 1335, 1220, 1010 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 218, 329, 514 nm.
Analyse für C₁₇H₂₀N₄O₇:

Berechnet:
C 52,04, H 5,14, N 14,28;
gefunden:
C 52,03, H 5,15, N 14,20.

Beispiel 8 7-(Ethoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25082)

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 96 mg einer 50%igen Öldispersion von NaH (2 mmol) und 450 mg Ethyl- p-nitrobenzylcarbonat erhält man die Titelverbindung wie im Beispiel 7 beschrieben. Man erhält 150 mg (37%) mit einem Fp. von 100-102°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,16 (t, 3H, J=7 Hz), 2,09 (s, 3H), 2,77 (m, 1H), 3,14 (d, 1H, J=4 Hz), 3,26 (s, 3H), 3,54 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 4,10 (d, 1H, J=13 Hz), 4,12 (q, 2H, J=7 Hz), 5,10 (t, 1H, J=12 Hz), 5,40 (dd, 1H, J=10, 5 Hz);
IR (KBr): 3640, 3300, 1740, 1655, 1620, 1580, 1495, 1335, 1220, 1060 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 218, 330, 515 nm.

Analyse für C₁₈H₂₂N₄O₇ · 0,75 H₂O:

Berechnet:
C 51,55, H 5,64, N 13,34;
gefunden:
C 51,52, H 5,64, N 13,47.

Beispiel 9 7-[(2-Methoxyethoxy)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan (BMY-25071)

Ausgehend von 688 mg (2 mmol) Mitomycin C, 192 mg einer 50%igen Öldispersion von NaH (4 mmol) und 960 mg (4 mmol) 2-Methoxyethyl-p-nitrobenzylcarbonat erhält man die Titelverbindung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 7 beschrieben. Man erhält 300 mg (35%) mit Fp.: 82-84°C.
NMR (CDCl₃, δ): 1,92 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,52-3,80 (m, 4H), 4,11 (d, 1H, J=12 Hz), 4,24-4,38 (m, 2H), 4,44-4,84 (m, 4H), 7,47 (s, 1H);
IR (KBr): 3450, 1715, 1655, 1585, 1505, 1450, 1340, 1225, 1065 cm^-1.

Analyse für C₁₉H₂₄N₄O₈ · 0,25 H₂O:

Berechnet:
C 51,76, H 5,60, N 12,71;
gefunden:
C 52,09, H 5,50, N 12,72.

Beispiel 10 7-(Isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25003)

Zu einer Mischung aus Mitomycin C (668 mg; 2 mmol) und einer 50%igen Öldispersion von NaH (192 mg; 4 mmol) gibt man unter N₂ 8 ml trockenes DMF, rührt die erhaltene Lösung 20 Minuten bei Raumtemperatur und kühlt dann auf -25°C ab. Anschließend gibt man 340 mg (4 mmol) Isopropylisocyanat zu, rührt eine weitere Stunde bei -25°C, quencht die Reaktion durch Zugabe einer geringen Trockeneismenge und verteilt die Reaktionsmischung zwischen EtOAc und Wasser. Die organische Schicht wäscht man mit Kochsalzlösung und trocknet über Na₂SO₄. Den nach Abziehen des Lösungsmittels erhaltenen Rückstand, chromatographiert man an SiO₂ (3% CH₃OH-CH₂Cl₂), wobei man 140 mg (17%) der Titelverbindung erhält:
Fp. 163-165°C;
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,19 (d, 6H, J=6 Hz), 2,22 (s, 3H), 2,75 (m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,53 (dd, 1H, J=12, 2 Hz), 3,94 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 4,12 (Septett, 1H, J=6 Hz), 4,24 (d, 1H, J=12 Hz), 4,75 (t, 1H, J=10 Hz), 5,26 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 7,80 (d, 1H, J=7 Hz), 8,46 (s, 1H);
IR (KBr): 3340, 3300, 1700, 1630, 1455, 1320, 1215, 1050 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 219, 238 (sh), 348, 520 nm.

Analyse für C₁₉H₂₅N₅O₆ · 0,75 H₂O:

Berechnet:
C 52,71, H 5,99, N 16,17;
gefunden:
C 53,01, H 6,03, N 15,86.

Eine frühere Fraktion ergibt 1a-(Isopropylaminocarbonyl)- 7-(isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan:
120 mg (24%);
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,20 (m, 12H), 2,22 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,53 (dd, 1H, J=12, 2 Hz), 3,78-4,30 (m, 3H), 3,87 (d, 1H, J=4 Hz), 4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 4,78 (t, 1H, J=10 Hz), 5,30 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,86 (d, 1H, J=7 Hz), 8,40 (s, 1H), 8,53 (d, 1H, J=7 Hz).

Beispiel 11 7-(Cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-6936)

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 96 mg einer 50%igen Öldispersion von NaH (2 mmol) und 250 mg (2 mmol) Cyclohexylisocyanat stellt man die Titelverbindung in ähnlicher Weise her wie im Beispiel 10 beschrieben. Man erhält 100 mg (22%) mit Fp. 138-140°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,06-1,72 (m, 10H), 1,96-2,15 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,75 (bd, 1H, J=4 Hz), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,56 (d, 1H, J=13 Hz), 3,95 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 4,27 (d, 1H, J=13 Hz), 5,00 (t, 1H, J=13 Hz), 5,28 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 7,88 (d, 1H, J=8 Hz), 8,52 (s, 1H);
IR (KBr): 3380, 1710, 1695, 1675, 1585, 1535, 1340, 1220, 1070 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 218, 236 (sh), 348, 520 nm.

Analyse für C₂₂H₂₉N₅O₆ · 0,75 H₂O:

Berechnet:
C 55,86, H 6,50, N 14,81;
gefunden:
C 55,83, H 6,22, N 14,44.

Eine frühere Fraktion ergibt 70 mg (14%) 1a-(Cyclohexylaminocarbonyl)- 7-(cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a- methoxymitosan.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,1-1,7 (m, 20H), 1,9-2,2 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 3,42 (m, 1H), 3,54 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,86 (d, 1H, J=5 Hz), 3,94 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 4,14 (d, 1H, J=13 Hz), 4,78 (t, 1H, J=11 Hz), 5,33 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 7,94 (d, 1H, J=7 Hz), 8,50 (s, 1H), 8,64 (d, 1H, J=7 Hz).

Beispiel 12 7-(Benzylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6955)

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 192 mg NaH (50%ige Öldispersion; 4 mmol) und 536 mg (4 mmol) Benzylisocyanat stellt man die Titelverbindung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 10 beschrieben her. Man erhält 110 mg (12%) mit Fp. 145-147°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,24 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=5 Hz), 3,23 (s, 3H), 3,55 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,96 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 4,24 (d, 1H, J=13 Hz), 4,68 (d, 2H, J=6 Hz), 5,05 (t, 1H, J=10 Hz), 5,27 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 7,2-7,7 (m, 5H), 8,5-8,7 (m, 2H);
IR (KBr): 3310, 1700, 1650, 1620, 1565, 1475, 1340, 1212, 1067 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 217, 240 (sh), 346, 515 nm.

Analyse für C₂₃H₂₅N₅O₆:

Berechnet:
C 58,53, H 5,45, N 14,84;
gefunden:
C 58,93, H 5,45, N 14,12.

Beispiel 13 7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6906)

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 370 mg (2 mmol) N-Hydroxysuccinimidester von Cyclopropancarbonsäure führt man die Umsetzungen in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Silikagel (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 65 mg (8%) der Titelverbindung mit Fp.: 102-104°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 0,70-0,84 (m, 2H), 1,00-1,25 (m, 2H), 2,04 (s, 3H)), 2,10 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 3,12 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 3,51 (bd, 1H, J=11 Hz), 3,99 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,19 (d, 1H, J=11 Hz), 5,03 (t, 1H, J=10 Hz), 5,31 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,17 (bs, 1H);
IR (KBr): 3420, 3320, 1700, 1580, 1430, 1330, 1210, 1056 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 220, 330, 510 nm.

Analyse für C₁₉H₂₂N₄O₆ · 3/4 H₂O:

Berechnet:
C 55,00, H 5,59, N 13,50;
gefunden:
C 55,16, H 5,88, N 12,86.

Beispiel 14 7-(Diethylthiophosphoryl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6938)

Ausgehend von 450 mg (1,35 mmol) Mitomycin C, 2,7 mmol NaH und 280 mg (1,49 mmol) Diethylthiophosphorylchlorid führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an einer Silikagelsäule (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) und einer anschließenden Dünnschichtchromatographie an Silikagel (3% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 39 mg (8%) 1a-Diethylthiophosphoryl-7- (diethylthiophosphoryl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6934) mit Fp.: 47-49°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,24 (t, 6H, J=7 Hz), 2,31 (d, 3H, J=1 Hz), 2,76 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,55 (bd, 1H, J=10 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=11, 4 Hz);
IR (KBr): 3450, 3350, 3210, 1720, 1640, 1625, 1580, 1425, 1320, 1015, 960, 810, 785 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 212, 345, 515 nm.

Analyse für C₂₃H₃₆N₄O₉P₂S₂:

Berechnet:
C 43,26, H 5,68, N 8,77;
gefunden:
C 43,29, H 5,41, N 8,83.

Eine polarere Bande ergibt 91 mg (14%) der Titelverbindung mit Fp. 76-79°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,06-1,32 (m, 12H), 2,28 (d, 3H, J=1 Hz), 3,28 (s, 3H) 3,30-3,76 (m, 3H), 4,00-4,40 (m, 10H), 4,72 (t, 1H, J=11 Hz), 5,74 (dd, 1H, J=11, 5 Hz);
IR (KBr): 3450, 3280, 3210, 1715, 1620, 1575, 1425, 1325, 1015, 960, 780 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 216, 348, 526 nm.

Analyse für C₁₉H₂₇N₄O₇PS:

Berechnet:
C 46,91, H 5,60, N 11,52;
gefunden:
C 47,02, H 5,53, N 11,88.

Beispiel 15 N^1a-(Benzyloxycarbonyl)-7-benzyloxycarbonylamino-9a- methoxymitosan (BMY-25072)

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 997 mg (4 mmol) Benzyl-N-hydroxysuccinimidcarbonat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 7 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Silikagel (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 490 mg (41%) der Titelverbindung mit Fp. 68-70°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,09 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 3,42- 3,60 (m, 2H), 3,84 (d, 1H, J=4 Hz), 4,08 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 4,32 (d, 1H, J=13 Hz), 4,86 (t, 1H, J=11, 5 Hz), 7,24-7,55 (m, 10 H), 10,50 (bs, 1H);
IR (KBr): 3460, 3360, 1725, 1652, 1585, 1495, 1260, 1212, 1177, 1015 cm^-1.

Analyse für C₃₁H₃₀N₄O₉:

Berechnet:
C 61,79, H 5,24, N 9,63;
gefunden:
C 61,68; H 5,02, N 9,30.

Setzt man statt Mitomycin C eine analoge N^1a-substituierte Mitomycin-C-Verbindung als Ausgangsmaterial in irgendeinem der Beispiele 1 bis 15 ein, dann erhält man die zu diesen Beispielen analogen Verbindungen, welche denen der allgemeinen Formel (III) entsprechen, worin R¹ eine Niedrigalkylgruppe bedeuten. Das als Ausgangsmaterial eingesetzte N^1a-substituierte Mitomycin C kann man nach dem von Matsui et al. beschriebenen Verfahren erhalten (J. Antibiotics, 21, No. 3, 189-198 (1968)). Solche Verbindungen der allgemeinen Formel (III), worin R¹ eine Gruppe bedeutet, wie sie für den Rest R⁷ definiert ist, stellen bis-substituierte Reaktionsprodukte dar, die gemäß den zuvor beschriebenen Beispielen isoliert werden. Bei geeigneten Reaktionsbedingungen kann der Anteil des erhaltenen Bis-Produktes erhöht werden. Mitomycin-C- Ausgangsverbindungen, bei denen der N^1a-Substituent eine Acylgruppe ist, kann man nach der US-PS 34 50 705 herstellen.

Beispiel 16 7-Acetylamino-9a-methoxy-1a-methylmitosan (BL-6916)

Ausgehend von 348 mg (1 mmol) Porfiromycin, 2 mmol NaH und 314 mg (2 mmol) N-Hydroxysuccinimidester von Essigsäure führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach präparativer Dünnschichtchromatographie an Silikagel (10% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 40 mg (10%) der Titelverbindung mit Fp. 101-103°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,05 (s, 3H), 2,14 (dd, 1H, J=4, 2 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,52 (d, 1H, J=4 Hz), 3,16 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,93 (dd, 1H, J=12, 4 Hz), 4,08 (d, 1H, J=13 Hz), 4,74 (t, 1H, J=10 Hz), 5,24 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,04 (bs, 1H);
IR (KBr); 3430, 3320, 1700, 1650, 1615, 1575, 1435, 1320, 1245, 1060 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 221, 245 (sh), 329, 515 nm.

Analyse für C₁₈H₂₂N₄O₆ · 0,5 H₂O:

Berechnet:
C 54,13, H 5,80, N 13,72;
gefunden:
C 54,37, H 5,71, N 13,88.

Beispiel 17 7-[3-(Ethoxycarbonyl)propionyl]amino-9a-methoxymitosan (BL-6920)

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 2 mmol NaH und 486 mg (2 mmol) N-hydroxysuccinimidester von Monoethylsuccinat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Aluminiumoxid (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 130 mg (30%) der Titelverbindung mit Fp. 52-55°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 1,12 (t, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,68-3,16 (m, 6H), 3,22 (s, 3H), 3,52 (bd, 1H, J=13 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,12 (q, 2H, J=7 Hz), 4,16 (d, 1H, J=13 Hz), 5,06 (t, 1H, J=10 Hz), 5,35 (dd, 1H, J=10, 4 Hz);
IR (KBr): 3455, 3310, 1720, 1660, 1625, 1580, 1450, 1340, 1300, 1220, 1070 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 220, 240 (sh), 334, 515 nm.

Analyse für C₂₀H₂₆N₄O₇ · 0,75 H₂O:

Berechnet:
C 52,61, H 6,19, N 12,51;
gefunden:
C 53,99, H 5,69, N 12,12.

Beispiel 18 7-Benzoylamino-9a-methoxymitosan (BL-6930)

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 730 mg (3 mmol) p-Nitrophenylbenzoat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Aluminiumoxid (2% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 150 mg (17%) der Titelverbindung mit Fp. 129-130°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,12 (s, 3H), 2,80 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,54 (bd, 1H, J=13 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,23 (d, 1H, J=13 Hz), 5,04 (t, 1H, J=10 Hz), 5,33 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,00 (bd, 1H);
IR (KBr): 3460, 3360, 3210, 1715, 1660, 1640, 1585, 1480, 1260, 1070 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 215, 236 (sh), 337, 515 nm.

Analyse für C₂₂H₂₂N₄P₆ · H₂O:

Berechnet:
C 57,89, H 5,29, N 12,27;
gefunden:
C 57,71, H 5,29, N 12,27.

Beispiel 19 7-[((2-Chlorethyl)amino)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan (BL-6931)

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 2 mmol NaH und 211 mg (2 mmol) 2-Chlorethylisocyanat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie in Beispiel 10 beschrieben durch. Nach Chromatographieren an einer Aluminiumoxidsäule (3% CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 50 mg (11%) der Titelverbindung mit Fp. 118-120°C.
NMR (Pyridin-d₅, δ): 2,30 (s, 3H), 2,73 (m, 1H), 3,13 (m, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,64 (bd, 1H, J=13 Hz), 3,80 (m, 4H), 3,96 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,23 (d, 1H, J=13 Hz), 5,02 (t, 1H, J=10 Hz), 5,28 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,80 (bs, 1H), 8,46 (bt, 1H);
IR (KBr): 3410, 3300, 1720, 1620, 1560, 1440, 1330, 1220, 1055 cm^-1;
UV (CH₃OH, λ_max): 218, 238 (sh), 296, 345, 520 nm.

Analyse für C₁₈H₂₂ClN₅O₆ · 0,5 H₂O:

Berechnet:
C 48,16, H 5,16, N 15,60;
gefunden:
C 48,21, H 5,16, N 15,27.

In ähnlicher Weise kann man in Beispiel 10 das Isopropylisocyanat durch Isopropylisothiocyanat ersetzen und erhält wie oben beschrieben 7-(Isopropylaminothiocarbonyl) amino-9a-methoxymitosan.

Claims

1. Verbindungen der allgemeinen Formel (III): worin R⁷ eine Alkanoylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylcarbonylgruppe mit 4 bis 9 Kohlenstoffatomen bedeutet.

2. 7-(Formyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Trifluoracetyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-Acetamido-9a-methoxymitosan,
7-(2-Chloracetyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Methansulfonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-[3-(tert.-Butoxycarbonylamino)-propionyl]amino-9a- methoxymitosan,
7-(Methoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Ethoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-[(2-Methoxyethoxy)-carbonyl]amino-9a-methoxymitosan,
7-(Isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Benzylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-(Diethylthiophosphoryl)amino-9a-methoxymitosan,
N^1a-(Benzyloxycarbonyl)-7-benzyloxycarbonylamino-9a- methoxymitosan,
7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,
7-Acetylamino-9a-methoxy-1a-methylmitosan,
7-[3-(Ethoxycarbonyl)propionyl]amino-9a-methoxymitosan,
7-Benzoylamino-9a-methoxymitosan und
7-[((2-Chlorethyl)amino)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan.

3. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, gegebenenfalls zusammen mit einem pharmazeutischen Träger und/oder Verdünnungsmitteln.