DD228259A5

DD228259A5 - Verfahren zur herstellung von 7-acylamino-9a-methoxymitosanen

Info

Publication number: DD228259A5
Application number: DD84271473A
Authority: DD
Inventors: Takushi Kaneko; Henry S L Wong; Terrence W Doyle
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1983-12-23
Filing date: 1984-12-21
Publication date: 1985-10-09
Also published as: DK621484D0; IE57835B1; HU193245B; KR850004762A; ES8603485A1; PT79741A; DE3447003A1; NO163570C; DE3447003C2; OA07911A; NZ210254A; GB2151627A; SE8406577L; SE8406577D0; IL73876A; BE901377A; HUT37434A; MY100976A; IL73876A0; FR2557112B1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 7-Acylamino-9a-methoxymitosanen. Diese Verbindungen stellt man her, indem man eine N7-Acylierung oder eine N1a, N7-Diacylierung von 7-Amino-9a-methoxymitosan durchfuehrt. Erfindungsgemaess erhaeltlich sind die Carboxamid-, Thiocarboxamid-, Harnstoff-, Thioharnstoff-, Urethan-, Thiophosphoramid-, Phosphoramid- und Sulfonamidderivate. Die erfindungsgemaess erhaeltlichen 7-Acylamino-9a-methoxymitosane inhibieren Tiertumore in vivo staerker als Mitomycin C.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Mitomycin-A-naloga/ die eine oder mehrere Acylaminogruppen aufweisen. Diese Verbindungen sind Mitomycin-C-Derivate, bei denen entweder die 7-Aminogruppe oder das N ^a-Stickstoffatom oder beide einem Acylaminosubstituenten einverleibt sind. Diese Verbindungen sind wirksame Antituraorsubstanzen, die experimentell erzeugte *° Tiertumore in vivo inhibieren.

Nach der Nomenklatur der Chemical Abstracts besitzt Mitomycin C den folgenden, systematischen Namen:

[1aR-(1aa,8ß,8aa,8ba) ] -β-Αιηΐηο-δ- [ ( (aminocarbonyl) oxy) methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methylazirino [2 ' ,3 ' ,3,4] -pyrrolot 1 ,2-a].indol-4 ,7-dion.

Danach wird das Azirinopyrroloindolringsystem wie folgt numeriert.

I .

1a

Chemical Abstracts Formel (I)

Nach einem trivialen Nomenklatursystem, das in der Mitomycin betreffenden Literatur sehr häufig benutzt wird, wird das zuvor genannten Ringsystem zusammen mit verschiedenen für die Mitomycine charakteristischen Substituenten als Mitosan bezeichnet.

Mitosan Formel II

Für viele einfache Derivate ist dieses Bezeichnungssystem geeignet und ausreichend. Dazu zählen beispielsweise solche Derivate, die an dem Azirinoringstickstoffatom oder in den 7- oder 9a-Stellungen Substituenten aufweisen. Dieses System ist jedoch für allgemeine Zwecke nicht einsetzbar, da es zu Unklarheiten und Mißverständnissen führt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind Mitomycin-C-Derivate, die sowohl an dem Azirinoringstickstoffatom als auch an dem an den aromatischen Ring gebundenen Aminostickstoffatomen Substituenten aufweisen. Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung wird daher das Azirinostickstoffatom als N bezeichnet. Das Stickstoffatom der an den aromatischen Ring gebundenen Amino gruppe wird mit N bezeichnet. Dabei wird das Nomenklatur-

5 system für Mitosan verwendet.

Hinsichtlich der stereochemischen Konfiguration der erfindungsgemäßen Verbindungen gilt folgendes. Durch die Basisbezeichnung "Mitosan" oder durch die Strukturformel wird zum Ausdruck gebracht, daß die damit bezeichnete Verbindung die gleiche stereochemische Konfiguration besitzt wie Mitomycin C.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen 15

Mitomycin C ist ein Antibiotikum, das durch Fermentation hergestellt wird. Es wird derzeit mit Zustimmung der Food and Drug Administration verkauft und dient zur Therapie disseminierter Adenokarcinoma. des Magens oder der Pancreas. Es wird dabei mit anderen chemotherapeutischen Wirkstoffen kombiniert. Es wird ferner zur palliativen Behandlung eingesetzt, wenn andere Behandlungen nicht

TJ

anschlugen (Mutamycin Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians' Desk Reference-35th Edition,

1981, Seiten 717 und 718). Mitomycin C und seine Herstellung durch Fermentation ist in der US-PS 3 660 578 (patentiert am 2. Mai 1972 unter Beanspruchung der Priorität früherer Anmeldungen inklusive einer in Japan am 6. April 1957 eingereichten Anmeldung) be-

30 schrieben.

Die Strukturen der MitomycineA, B, C und von-Porfiromycin wurden zuerst von J.S. Webb et al veröffentlicht (Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 84, 3185 - 3187 (1962)). Eine der eingesetzten chemischen Transformationen bei diesen Struktur-

i. ι. -J c L. 12 2 ι *· ; : i 1

Untersuchungen, die dazu dienten zu klären, in welchem Verhältnis Mitomycin A und Mitomycin C zueinander stehen, bestand in der Umwandlung der ersten Verbindung, d.h. 7,9a-Dimethoxymitosan, durch Umsetzung mit Ammoniak zu der letzteren Verbindung, d.h. 7-Amino-9a-methoxymitosan.

Es hat sich herausgestellt, daß die Verdrängung der 7-Methoxygruppe von Mitomycin A für die Herstellung von Mitomycin-C-Derivaten mit Antitumoreigenschaften von großem Interesse ist. Die nachfolgenden Literaturstellen und Patentschriften befassen sich jeweils mit der Umwandlung von Mitomycin A zu einem in 7-Stellung substituierten Aminomitomycin-C-Derivat mit Antitumoraktivität. Erfindungsgemäße 7-Acylaminomitomycin-A-Analoga sind jedoch im Stand der Technik nicht beschrieben.

Matsui et al "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968), Kinoshita et al "J. Med. Chem." 14, 103 - 109 (1971)

Iyengar et al "J. Med. Chem." 2.4, 975 - 981 (1981).

Iyengar, Sami, Remers and Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, März 1982, Abstract Nr. MEDI 72.

Sasaki et al, Internat. J. Pharm., 1983, 15, 49. 30

Die nachstehenden Patentschriften befassen sich mit der Herstellung von in 7-Stellung substituierten Amino-

mitosanderivaten durch Umsetzung von Mitomycin A, mycin B oder einem N -substituierte einem primären oder sekundären Amin:

Mitomycin B oder einem N -substituierten Derivat davon

Cosulich et al, US-PS 3 332 944 patentiert am.

25. JuIi 1967;

Matsui et al, US-PS 3 420 846 patentiert am 7.01.1969; Matsui et al, US-PS 3 450 705 patentiert am 17.06.1969; !0 Matsui et al, US-PS 3 514 452 patentiert am 26.05.1970;

Nakano et al, US-PS 4 231 936 patentiert am 4.11.1980;

und

Remers, US-PS 4 268 676 patentiert am 19.05.1981.

Mitomycin-C-Derivate, die in 7-Stellung einen substituierten Aminorest aufweisen, sind auch durch direkte Biosynthese hergestellt worden. Dazu wurden. Fermentationsbrühen mit verschiedenen primären Aminen versetzt. Die Fermentation entsprach der üblichen Mitomycin-Ferme.ntation (CA. Claridge et al, Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982, Abs. 028).

Ziel der Erfindung

Es werden neue Arzneimittel mit Antitumorwirkung bereitgestellt. Die erfindungsgemäß erhältlichen Antitumorwirkstoffe bereichern das Angebot der bekannten Wirkstoffe.

30 Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein neues Verfahren zur Herstellung von Mitomycin-C-Derivaten bereitzustellen, die wirksame Antitumorwirkstoffe sind.

21.GEZ. 193 η ^*2"^ki 11

ί O

Die vorliegende Erfindung schafft ein neues Verfahren zur Herstellung von neuen N -substituierten Mitomycin-C-Derivaten, bei denen die Aminogruppe in der 7-Stellung durch eine organische Acylgruppe substituiert ist. Bei den erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen handelt es sich dabei um Carboxamide, Thiocarboxamide, Harnstoffverbindungen, Thioharnstoffverbindungen,.Urethane, Thiophosphoramide, Phosphoramide und Sulfonamide.

Die vorliegende Erfindung betrifft somit ein Verfahren zur Herstellung der folgenden Verbindungen der allgemeinen Formel (III):

25 worin

R für ein Wasserstoffatom, eine Cj^-Alkylgruppe oder für den Rest R⁷ steht,

R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus:

O :s O S ο S

R^aC-,R^a£-, R³NHC-, R³NHC-, R¹³OC-Z(R¹³O)₀P-, 0 0 ο 0 ²

(R^bO)₂P-, R^as-, R^aS-, R^aS-, <R^a)₂P- und

35 5

(R^a)₂P-,

ι λ π - -! λ ", r~. ι '"> ») 1 1 "L I.UL/. ÜJ4 *..ί2 11 ί

5 wobei:.

R^a ein Wassers toff a torn, eine C₁, g-Alkylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C₆^₁₀-Arylgruppe_f die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C₇_₁₇-Aralkylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C_ _fi-Alkenylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert

ist, eine C- ,-Alkinylgruppe, die ge-

gebenenfalls durch den Rest A substituiert

ist, eine C^g-Cycloalkylgruppe oder eine C₄ .Q-Cycloalkylalkylgruppe bedeutet,

R eine C₁ _c -Alkylgruppe, die gegebenenfalls '~°

durch den Rest A substiuiert ist, eine

Cg,_Q-Arylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist oder eine C^ -.,-Aralkylgruppe, die gegebenenfalls

durch den Rest A substituiert ist, be-25

deutet,

und

der Rest A ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Chlor, Brom,. Fluor, Iod, Amino, geschütztes Amino, C* _ß-Alkoxy, Cj_g-Alkylamino, Di{C..g)alkylamino, C₃_g-Cycloalkylamino, C. ,.-Cycloalkylamino, Thiol, C^g-Alkylthio, Cj^g-Alkyldithio, Cg_-1Q-ATyItMo und C-^^-Aralkyl-

35 thio,

V* i.l 1 1 / J

\.'JlL \^2 V* i.l 1 1 / J

... daß dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine als Anion vorliegende Mitomycin-C-Verbindung mit 1 bis Moläquivalenten eines Acylierungsmittels der folgenden allgemeinen Formeln

OS 0 S

¹⁰R³C-X, R^aC-X, R³NCO, R³NCS, R^bOC-X, (R^bO)^P-X, 0 0 0 0

(R^bO)J?-X, R³-S-X, R^aS-X, R³S-X, (R^a) J-X, oder

(R^a)₂P-X,

15 - ' -

worin X eine übliche Abgangsgruppe bedeutet und

R^a und R die Oben angegebenen. Bedeutungen besitzen,

in einem aprotischem, polaren, organischen Lösungs- mittel bei einer Temperatur von -60 cos +25 C um-: setzt, oder

daß man "eine Mitomycin, C-Verbindung~ in einer. ' -

25 Dimethylformamidlösung oder einem anderen

kompatiblen Lösungsmittel mit 1,0 bis 1,5 Moläquivalenten Natriumhydrid zu einer Mitomycin C-Verbindung umsetzt, die als Anion vorliegt, und daß man danach 1.MoI dieser als Anion vorliegenden Mitomycin C-Verbindung mit 1 bis 2 Molen eines Acylierungsmittels der allgemeinen Formeln

OS 0 S

R^aC-X, R^aC-X, R³NCO, R³NCS, R^bOC-X, <R^bOUP-X, 0 O O O .

(R^bO)_P-X, R^a-S-X, R^aS-X, R^aS-X, (R^a)_oP-X, oder

s ο .

worin

X eine übliche Abgangsgruppe bedeutet, und

R und R die obeni angegebenen. Bedeutungen-

S _ _ ;

besitzen, 10

in einem aprotischen, polaren, organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur von -60° bis +25⁰C um setzt. _^

,ε Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen inhibieren experimentell erzeugte Tumore bei Tieren. Sie inhibieren die gleiche Art von Tumoren wie Mitomycin C. Sie besitzen jedoch in vielen Fällen eine höhere Aktivität, da sie zu einer stärkeren Inhibierung führen als Mitomycin C. Ihre Toxizität ist im allgemeinen geringer als die von Mitomycin C, was sich insbesondere in ihrer niedrigeren myelosuppressiven Wirkung wiederspiegelt. Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen werden zur Bekämpfung von Tumoren im wesentlichen in einer nichtig toxischen, antitumorwirksamen Dosis an ein Säugetier (Mensch und Tier) verabreicht.

Die erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen werden hauptsächlich wie Mitomycin C durch Injektion verabreicht. „_n Sie können im allgemeinen in höheren Dosen als Mitomycin C verabreicht werden, da sie eine geringere Toxizität besitzen. Außerdem führen sie bei höheren Dosen zu einer wirksameren Inhibierung der Tumore.

Sie können als trockene, pharmazeutische Formulierungen vorliegen, die Verdünnungsmittel,.Puffer, Stabilierungsmittel, Solubilisierungsmittel und andere Bestandteile

enthalten, welche zu einer leichteren pharmazeutischen Formulierung beitragen. Diese Mittel können unmittelbar vor der Verwendung mit einer injezierbaren Flüssigkeit bereitet werden. Geeignete Injektionsflüssigkeiten sind z. B. Wasser, isotonische· Kochsalzlösungen usw.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (III) stellt man ausgehend von Mitomycin C her, indem man zuerst ein Proton abspaltet, um Mitomycin C als Anion zu erhalten.

Anschließend setzt man das Anion mit einem organischen Isocyanat oder Isothiocyanat zu einem Mitosan um, das in der 7-Stellung eine substituierte Ureido- oder Thioureidogruppe aufweist. Man kann auch Mitomycin C, das als Anion vorliegt, mit einer acylierenden organischen

20 Säure, beispielsweise einem Acylhalogenid, einem

reaktiven Ester einer Carbonsäure oder.Thiocarbonsäure, beispielsweise einem Phenyl-, p-Nitrophenyl, p-Nitrobenzylester, oder mit einem Ester einer Carbonsäure mit einem N-Hydroxyamin, beispielsweise N-Hydroxysuccinimid,

25 N-Hydroxybenzotriazol, N-Hydroxyphthalimid oder

N-Hydroxypiperidin, einem organischen Carbonat oder einem organischen Haloformiat zu einem Mitosan umsetzen, das in 7-Stellung eine Amido- oder Carbamoylgruppe aufweist. Auch kann man Acylanhydride als Acylierungsmittel ein-

QO setzen.

Zur Umsetzung mit dem anionischen Mitomycin C setzt man Acylierungsmittel der folgenden Formeln ein: 0 S 0 S

₃₅ R^aC-X, R^aC-X, R^aNCO, R^bNCS, R^bOC-X, (R^bO)₂P-X,

0 0 0 0 S

(R^bO)₂P-X, R^aS-X, R^aS-X, R^aS-X, (R^a)₂P-x oder (R^a)₂P-X.

In diesen ,Formeln bedeutet X eine Gruppe, die dem Fachmann als Abgangsgruppe bzw. austretende Gruppe bekannt ist. In organischen Synthesen wird eine große Vielzahl derartiger Gruppen eingesetzt. Dazu zählen beispielsweise die Halogenide und verschiedene andere reaktive Ester, wie beispielsweise die oben aufgeführten. Es können außerdem andere Acylgruppen eingesetzt werden; in diesem Fall handelt es sich bei dem Acylierungsmittel um ein Anhydrid. Es können auch gemischte Anhydride eingesetzt werden, bei denen ein Teil die acylierende Funktion wahrnimmt und

15 der andere Teil die Abgangsgruppe darstellt.

Die Deprotonierung (Η-Abspaltung) von.Mitomycin C führt zu einem Anion mit nucleophilen.Eigenschaften.. In dieser Form reagiert Mitomycin C leicht mit elektrophilen Reagentien, in diesem Fall Acylierungsmitteln.

Zur Deprotonierung von Mitomycin C kann man eine Dimethylformamidlösung davon mit etwa 1,5 Moläquivalenten Natriumhydrid bei Raumtemperatur oder bei niedrigeren Temperaturen behandeln. Dabei setzt man das Mitomycin-C-Anion mit mindestens einem chemischen.Äquivalent eines Acylierungsmittels, vorzugsweise mit. 1,5 bis 2 chemischen Äquivalenten, bei wasserfreien Bedingungen bei einer Temperatur von etwa Raumtemperatur bis etwa -6 0 C um.

Temperaturen von -20 bis -30⁰C kann man sowohl im Labor als auch im großindustriellen Maßstab-leicht erzielen. Das erfindungsgemäße Verfahren verläuft.bei diesen Temperaturen sehr zufriedenstellend.

Man setzt aprotische, polare, organische Lösungsmittel ein, beispielsweise Pyridin, Dimethylformamid,

5 Hexamethylphosphoramid oder Dimethylsulfoxid.

Das Mitomycin-Anion kann jedoch nicht nur nach den oben beschriebenen Verfahren hergestellt werden, sondern auch auf andere dem Fachmann bekannte Art und Weise.

Die erJ-indungsgemäß bevorzugten Verbindungen sind solche, die, verglichen mit Mitomycin C, eine hohe Antitumoraktivität und eine verhältnismäßig niedrige Toxizität besitzen. Dazu zählen. 7-(Formyl)-amino-9a-methoxymitosan (Beispiel. 1) , 7- (Acetyl) amino-^a-methoxymitosan. (Beispiel 3) und 7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (Beispiel 13).

Diese Verbindungen sind stellvertretend für die Ausführungsform der Verbindungen der allgemeinen Formel (III), bei denen R eine Alkanoylgruppe mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen oder eine Cycloalkylcarbonylgruppe mit 4 bis 9 Kohlenstoffatomen darstellt. Diese Verbindungen sind erfindungsgemäß bevorzugt.

Aktivität gegenüber P-388 Murine Leukämie

Tabelle 1 gibt die Ergebnisse von Labortests wieder, die mit weiblichen CDF..-Mäusen erhalten wurden, welchen

intraperitoneal ein Tumorinoculum von 10 Ascites-Zellen von P-388 Murine Leukämie implantiert wurde und welche mit verschiedenen Dosen entweder einer erfindungsgemäßen Verbindung oder von Mitomycin C behandelt wurden. Die

Verbindungen wurden dabei intraperitoneal injiziert. Für jede Dosismenge wurden Gruppen von 6 Ratten eingesetzt. Diese wurden mit einer einzelnen Dosis der Verbindung an dem Tag der Inokulation behandelt. Bei allen Experimenten wurde auch eine Kontrollgruppe (Mäuse) mit Kochsalzlösung behandelt. Zur positiven Kontrolle wurden Gruppen mit Mitomycin C behandelt. In ein Protokoll, das über 30 Tage geführt wurde, wurden die für jede Mäusegruppe bestimmte mittlere Überlebenszeit in Tagen und die Anzahl der überlebenden am Ende der 30-tägigen Periode eingetragen. Die Mäuse wurden vor der Behandlung und am Tag 6 gewogen. Die Gewichtsveränderung wurde als Maß für die Toxizität der Droge bewertet. Es wurden jeweils Mäuse mit einem Gewicht von 20 g eingesetzt. Ein Gewichtsverlust von bis zu etwa 2 g wurde als nicht ungewöhnlich betrachtet. Die Ergebnisse wurden ausgedrückt als "% T/C". Es handelt sich dabei um das Verhältnis der mittleren Überlebenszeit der behandelten Gruppe zu der mittleren Überlebenszeit der mit Kochsalzlösung behandelten Gruppe, multipliziert mit 100. Die mit Kochsalzlösung behandelten Kontrolltiere starben gewöhnlich innerhalb von 9 Tagen . In der folgenden. Tabelle ist die "maximale Wirkung" ausgedrückt als "% T/C". Es ist auch die diese Wirkung hervorrufende Dosis angegeben. Die in Klammern angegebenen Werte sind solche, welche in demselben

QQ Experiment mit Mitomycin C als positive Kontrolle erhalten wurden. Somit kann die relative Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen, bezogen auf Mitomycin C, berechnet werden. Ein als % T/C ausgedrückter Wert von 125 wurde als minimale Wirkung betrachtet..Die in der nachstehenden Tabelle aufgeführte minimal wirksame Dosis ist diejenige Dosis, die zu einem Wert von etwa 125 für "% T/C" führt.

"1 ·( p. 1 Λ p.

Die in der Spalte "durchschnittliche Gewichtsänderung" aufgeführten beiden Werte beziehen sich auf die durchschnittliche Gewichtsänderung pro Maus bei der maximal wirksamen Dosis bzw. bei der minimal wirksamen Dosis.

	Maximale % T/C	Wirkung ... Dosis	Minimal wirksame Dosis	Durchschnittl Gewichts- 2 änderung
- Tabelle 1	183(144)	3 3 3.2(3.2)	1.6	-2.1,-1.3
Jfohibierung von P-388 Murins-Leukämie	244(228)	6.4(4.8	<0.4	-2.2,+0.3
Verbindung des Beispiels Nr.	183(228)	6.4(4.8)	0.8	-1.0,+0.5
1	183(228)	12.8(4.8)	0.8	-0.8,+0.4
	219(263)	25.6(4.8)	0.8	-2.8,-1.3
2	233(228)	6.4(3.2)	0.2	-1.4,+0.3
6	250(228)	12.8(3.2)	0.2	-1.8,+0.4
5	163(363)	3.2(4.8)	<0.2	-0.6,+0.6
3
13	200(244)	6.4(4.8)	<0.2	-2.2,-1.4
14	189(356)	6.4(4.8)	<0.2	-1.2,-0.3
(BL-6938)	213(313)	3.2(3.2)	<0.1	-0.3,+0.6
11,.	206(313)	3.2(3.2)	<0.025	-1.8,+2.3
10	inaktiv
7
9
15

229(241) 3.2(4.8) <0.2

-1.6,-0.9

mg pro.kg.Körpergewicht Gramm pro Maus, bei maximal· bzw.. minimal wirksamer Dosis

„.

Die in Klammern angegebenen. Werte gelten für Mitomycin C

In der Tabelle II sind Antitumortestergebnisse für B16-Melanome wiedergegeben, die bei Mäusen wuchsen. Dazu wurden BDF₁-MaUSe eingesetzt, denen das Tumorimplantat subkutan inokuliert wurde. Es wurde ein 60-tägiges Protokoll angefertigt. Gruppen aus 10 Mäusen wurden für jede getestete Dosierungsmenge eingesetzt. Die mittlere Überlebenszeit für jede Gruppe wurde bestimmt. Kontrolltiere wurden wie die Testtiere inokuliert und mit dem Injektionsträger behandelt. Die mittlere Überlebenszeit der nicht mit einem Wirkstoff behandelten Tiere betrug 24,5 Tage. Die Überlebenszeit, bezogen auf die Überlebenszeit der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Maß für die Wirksamkeit betrachtet. Es wurden die maximal wirksame Dosis und die minimal wirksame Dosis für jede Testverbindung bestimmt. Als minimal wirksame Dosis wurde diejenige Dosis definiert, die zu einem % T/C-Wert von 125 führte. Bei jeder Dosismenge wurden die Testverbindungen an den Tagen 1,5 und 9 den Testtieren intravenös verabreicht.

Verbindung des Beispiels Nr.

Tabelle II B16 Melänom

Maximale Wirkung Minimal wirk- Durchschnittl. % T/C

1 1

Dosis same Dosis

228(195)³ 2(4)³ 220(220) 2(4)

186(195) 1(4)

Gewichtsänderung

-0,6;+0,2

+0,6;+0,6

mg pro kg Körpergewicht

Gramm pro Tag und Maus

die in Klammern angegebenen Werte gelten für (getestet b dingungen)

Mitomycin C (getestet bei denselben Versuchsbein der Tabelle III sind weitere Antitumortestergebnisse unter Verwendung von B16 Melanom wiedergegeben, welche in BDF.-Mäusen wuchsen. Der Tumor (0,5.ml; 10 % Brei) wurde intraperitoreal inokuliert. Es wurde ein 60-tägiges Protokoll angefertigt. Für jede getestete Dosismenge wurden Gruppen von 10 Mäusen eingesetzt.

Die mittlere Überlebenszeit wurde für jede Gruppe 20

bestimmt. Der Tumor wurde den Kontrolltieren auf dieselbe Weise inokuliert wie den Testtieren. Die Kontrolltiere wurden mit dem Injektionsträger behandelt. Bei den Tieren, die mit keinem Wirkstoff behandelt wurden,

betrug die mittlere Überlebenszeit 20,5 Tage. Die 25

Überlebenszeit, bezogen auf diejenigen der Kontrolltiere (% T/C) wurde als Wirksamkeitsmaß genommen. Die maximal wirksame Dosis und die minimal wirksame Dosis wurden für jede Testverbindung bestimmt. Als minimal wirksame Dosis wurde eine solche definiert, die zu

einem % T/C-Wert von 125 führt. Für jede Dosismenge wurde den Testtieren die Testverbindung an den Tagen 1,5 und 9 intraperitoneal verabreicht.

Tabelle III B16 Melanom

Verbindung des Maximale Wirkung Minimal wirksame Durchschnittl. Beispiels Nr. % T/C Dosis Dosis Gewichtsver-

13 16

> 249 (173) 4(2)

173(173) 1,5(2)

>270(202) 7,0(3)

mg pro kg Körpergewicht

Graum pro Tag und Maus

20 ³

<0,5

<7,0

änderung

-0,4; keine

keine;keine

+1,2, 1,2

die in Klausnern angegebenen. Warte gelten für Mitomycin C (getestet bei denselben Versuchsbedingungen)

In der Tabelle IV sind die Werte für die myelosuppressive wirkung der Verbindungen der Beispiele 1,3 und 13 aufgeführt. Diese Verbindungen wurden Mäusen intravenös verabreicht und mit Mitomycin C verglichen. Den Mäusen wurde eine, einzelne Dosis der Testverbindung am Tag O verabreicht. Ferner wurde bei den Mäusen an den Tagen 0,4 und 7 die Gesamtzahl der weißen Blutkörperchen (total white blood cell counts; WBC) bestimmt. In der Tabelle IV sind die Werte für den Tag 4 und 7 als prozentuale Änderung. (Δ. %) angegeben. An den Tagen 0 und 4 wurden Unterschiedszählungen durchgeführt und als prozentuale Änderung (Δ %) am Tag 4 angegeben. Verschiedene Dosen der Testverbindungen

wurden, wie in der Tabelle gezeigt, an verschiedenen Gruppen aus 10 Tieren verabreicht. Die in Klammern angegebenen Werte für die Δ. % sind Vergleichswerte für Mitomycin C, das auf dieselbe Weise untersucht wurde. Die Verbindungen der Beispiele 1, 3 und 13 erwiesen sich als weniger myelosuppressiv als Mitomycin C. Bei Dosen mit äquivalenter Lethalität war bei den erfindungsgemäßen Verbindungen der Effekt hinsichtlich der neutrophilen Zählungen wesentlich weniger stark ausgeprägt als bei Mitomycin C.

Tabelle IV Myelosuppressive Wirkung und lethale Toxizität

	Dosis	Tag 4.	Tag 4	«	-5(-96)	Tag A	ι	-65(-80)	Tag 7	Todes
Verbindung das	mg/kg. i.ν.	WBC	Neutrophile.:	+1K-62)	Iiymghocyten .	-30(-53)	WBC	fälle
Beispiels Nr..	12.8	A%	Δ%		Δ%		Λ%	xim Tag 14
3	6.4	-69			5/5 tot	5/5
	3.2	-57 (-82)	-25(-77)	-69(-35)	-15(-58J¹	1/10
	12.8	-26(-54)	+6	-78	-18(-16)	0/10
1	6.4	-83	-2(-96)	-3K-75)	5/5 tot	5/5
	3.2	-77(-71)	10/10 tot	10/10
	12.8	-62 (-43)	-22(-8)	6/10
13	6.4	-64	-14	10/10
	-26(-78)	+18(-57)	0/10

die in Klammern angegebenen Werte gelten für Mitomycin C, gemessen bei vergleichbaren Bedingungen

In den nachfolgenden Beispielen sind detaillierte Verfahren zur Herstellung verschiedener erfindungsgemäßer Verbindungen beschrieben. Die Verbindungen sind im allgemeinen durch ihr NMR-Spektrum, ihr Infrarot-Absorptionsspektrum und ihr UV-Absorptionsspektrum charakterisiert. Die Daten dieser Spektren sind in den folgenden Beispielen auf übliche Weise wiedergegeben. Bei den meisten Verbindungen sind die Werte für die Elementaranalyse ebenfalls angegeben, welche die gezeigten Strukturformeln bestätigen und zur Identifizierung dieser Verbindungen herangezogen werden können. Es wurden folgende Abkürzungen verwendet:

BOC

DMF

Trockeneis -

EtOAc

IR

MeOH

NMR

RT

UV

tert.-Butoxycarbonyl Dimethylformamid festes Kohlenstoffdioxid Ethylacetat

Infrarot-Absorptionsspektrum Methanol

H-NMR^-Spektrum

Raumtemperatur, 20 - 25°C UV-Absorptionsspektrum

Beispiel 1

7-(Formyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6859)

'JLiL.

ι * -, : 1.1 ί ο

OCONH₂ JiE

6,ml Dimethylformamid gibt man zu einer Mischung aus Mitomycin C (549 mg; 1,78 mmol) und 214 mg einer 50%-igen Öldispersion von NaH (4,45 mmol), die unter Argon gehalten wurde. Nach 10-minütigem Rühren bei Raumtemperatur kühlt man die Mischung auf -20⁰C und gibt Phenylformiat (0,6 ml eines Materials mit 65%-iger Reinheit, 3,50 mmol, H.L. Yale, J. Org. Chem. 36, 3234 (1971)) zum Schluß zu. Die Reaktionsmischung rührt man 30 Minunten bei -20⁰C, läßt dann während eines Zeitraumes von 1 Stunde auf Raumtemperatur erwärmen, quencht die Umsetzung durch Zugabe von festem CO„ und verdünnt die Reaktionsmischung mit EtOAc. Das erhaltene Präzipitat filtriert man ab und entfernt das Lösungsmittel bei vermindertem Druck. Den Rückstand chromatographiert man an Silikagel (5 % MeOH-CH₂Cl₃), wobei man die Titelverbindung (306 mg; 47%) erhält. Einen Teil dieses Materials kristallisiert man aus Aceton und Ether: Fp. > 280°C

NMR (Pyridin-d₅,£ ) 2,02 (s, 3H), 2,72(m, 1H), 3,06 (m, 1H),

3,24 (s,3H), 3,50 (<3d, 1H, J=12, 1Hz),

3,93 (dd, 1H, J=10, 4 Hz) ,

4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 4,92 (t, 1H,

J=10 Hz), 5,24 (dd, 1H, J=10, 4 Hz),

8,76 (s, 1H); 35

, IR (KBr): 3450, 3300, 1705, 1660, 1580, 1336, 1220,

⁵ -1

1063 cm ;

UV (MeOH, λ.__): 223, 330, 520 nm.

IuclX

Analyse für ^c-|6^Hi8^N4°6^:

H N

berechnet: . 53,04 5,01 15,46 gefunden: 52,75 5,09 15,96.

Ersetzt man in diesem Beispiel das Phenylformiat durch Phenylthioacetat oder Ethylthioformiat , dann erhält man 7-(Thioacetyl oder Thioformyl)amino-9a-methoxymitosan.

Beispiel 2

7-(Trifluoracetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6878)

Ausgehend von 300 mg (0,899 mmol) Mitomycin C und 2,25 35

mmol NaH führt man die Umsetzung wie im Bespiel 1 be-

L ι.üc/L. ü: a *.{.: 11 f j

5 schrieben durch. Man verwendet p-Nitrophenyltrifluoracetat (432 mg; 1,80 mmol) als Acylierungsmittel. Ein Silikagel-Dünnschichtchromatograitm (10 % MeOH-CH₂Cl₂) ergibt die Titelverbindung als rötlich-purpurnen

amorphen Feststoff (91 mg; 24 %): Fp. 93 - 95°C.

NMR (Pyridin-d₅,S ): 2,02 (s, 3H), 2,74 (m, 1H),

3,11 (d, 1H, J=4 Hz), 3,20 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=12, 1 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=11, 5Hz), 5,00 (t, 1H, J=10 Hz), 5;35 (dd, 1H, J=10, 5 Hz);

IR (KBr):

20 UV (MeOH, λ _max) :

3460, 3300, 1720, 1665, 1580, 1335, 1220, 1150, 1065 cm"¹;

216, 355, 510 nm.

Eine beträchtliche Menge (1.20 mg) des Ausgangsmaterials gewinnt man zurück.

25 Analyse für C₁₇H₁₇F₃N₄O₆:

berechnet:	47,	45	3	,98	13	,01
" gefunden:	48,	10	4	,43	12	,91

Beispiel 3

7-(Acetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6 905)

OCONH₂

Unter Verwendung von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C und 4 mmol NaH führt man die Umsetzung wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man den ²^ N-Hydroxysuccinimidester von Essigsäure (314 mg, 2mmol) Nach Flash-Chromatographie an Silikagel (3 % MeOH-CH₂Cl₂) erhält man 200 mg (27 %) der Titelverbindung: Fp. 110 - 112°C.

NMR (Pyridin-d₅,Γ) 2,06 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,75

(m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,24

(s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=13, 1Hz),

3,95 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,19 (d,

1H, J=13 Hz), 5,03 (t, 1H, J=10 Hz),

5,34 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 10,16 (bs,

1H) ;

IR (KBr): , 3420, 3320, 1700, 1650, 1610, 1575,

1330, 1245, 1055 cm"¹;

UV (CH-OH, X ) 220, 330, 510 mn.

*L ΧΠ3.Χ

5 Analyse für

	51	C	5	H	N	21
berechnet:	51	/77	5	,62	14,	10
gefunden:	,58	,25	14,

Beispiel 4

7-(2-Chloracetyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6904) 15

Cl

Jl ο

OCONH₂

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, und 4 mmol 25

NaH führt man die Umsetzung ähnlich wie im Bespiel 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man 520 mg (3 mmol) Phenylchloracetat. Nach Chromatographie an Silikagel (5 % MeOH-CH₂Cl₂) erhält man 60 mg (7,3 %)

der Titelverbindung: Fp. 118 - 120⁰C. 30

NMR (Pyridin-d₅,«S" ) : 2,04 (s, 3H), 2,77 (m, 1H), 3,15

(d, 1H, J=4 Hz), 3,53 (dd, 1H, J=12, 1 Hz), 4,04 (dd, 1H, J=11,

4 Hz), 4,64 (s, 2H), 5,01 (t, 1H, 35

J=10 Hz), 5,31 (dd, 1H, J=10, 4 Hz);

i I.ÜLL. UjOH^- ..Hi

IR(KBr): ₃420, 3330, 1760, 1647, 1588, 1480,

1330, 1060 cm"¹;

UV (MeOH, _max): 218, 235 (sh), 298 (sh), 342, 480 nm. Man erhält etwa 100 mg des Ausgangsmaterials zurück. Analyse für

Ί7"1!

CHN

berechnet: 49,70 4,66 13,64

gefunden: 51,31 5,05 11,75

Beispiel 5

7-(Methansulfonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6885)

O O

OCONH

6 ml Dimethylformamid gibt man unter Argon zu einer Mischung von Mitomycin C (668 mg,. 2 mmol) und 4 mmol NaH. Nach 20-minütigem Rühren bei Raumtemperatur, kühlt ο

man die Reaktionsmischung auf -25 C ab und gibt 4 54 mg

(2 mmol) p-Nitrophenylmethansulfonat (Kametani et al,

Yakugaku Zasshi, 84, 237 (1963)) zu. Die Reaktionsmischung hält man 4 Stunden bei -25°C, quencht die Reaktion dann mit festem CO₂, verdünnt die Reaktionsmischung mit EtOAc, wäscht mit Kochsalzlösung, trocknet über Na₂SO. und entfernt das Lösungsmittel, wobei man einen

rötlich-purpurnen Rückstand erhält. Diesen chromatographiert man an neutralem Aluminiumoxid (3 % MeOH-CH₂-Cl₂) und erhält 100 mg (12 %) der Titelverbindung:

Fp. 126 - 128°C.

NMR (Pyridin-d₅,£): 2,28 (s, 3H), 2,74 (m, 1H),

3,15 (d, 1H, J=4 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,31 (s, 3H), 3,55 (dd, 1H, J=13, 1 Hz), 4,04 (dd, 1H, J=11, 4 Hz), 4,10 (d, 1H, J=13 Hz), 5,06 (t, 1H,

J=11 Hz), 5,48 (dd, 1H, J=11, 4 Hz);

IR(KBr): 3450, 1710, 1650, 1600, 1445, 1335,

1155, 1060 cm"¹;

UV (MeOH,Λ ): 218, 340, 360, 490 mn.

ΙΏ3.Χ

Analyse	für C₁₆H₁₉N₄OgS	-H₂O:	,14	4	H	N	,58
		C	,99	4	,75	12	,60
	berechnet:	43			,67	12
	gefunden:	42

L.\.'JiL Ib b ^L\ *-i 111 1 ö

5 Beispiel 6

7-[3-(tert.-Butoxycarbonylamino)propionyl]amino-9amethoxymitosan (BL-6879)

^cht ίί ?ι I ³ Il Il Ω

OCONH.

Ausgehend von 350 mg (1,05 mmol) Mitomycin C und 2,62 mmol NaH führt man die Umsetzung ähnlich wie im Beispiel ²^ 1 beschrieben durch. Als Acylierungsmittel verwendet man den N-Hydroxysuccinimidester von N-BOC-ß-Alanin. Nach Dünnschichtchromatographie an Silikagel (10 % CH-.OH-CH-Cl-) erhält man 181 mg (34 %) der Titelverbindung:

Fp. 121 - 125°C. 25

NMR (Pyridin-d₅,£ ): 1,53 (s, 9H), 2,03 (s, 3H), 2,75 (m,

1H), 3,06 (t, 2H, J=6 Hz), 3,11 (m, 1H), 3,52 (d, 1H, J=12 Hz), 3,81 (q, 1H, J=6 Hz), 3,97 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 5,00

(t, 1H, J=10 Hz), 5,30 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,32 (bs, 1H),;

IR(KBr): 3360, 3310, 1705, 1660, 1625, 1585,

³⁵ 1500, 1168, 1068 cm"¹;

wynvi

UV (MeOH, X _a ): 221, 237, 327, 515 nm.

Ui. cl X

Analyse für

	52	C	6	H	N	,38
berechnet:	52	,76	6	,35	13	,83
gefunden:	,85	,22	12

₁₅ Beispiel 7

7-(Methoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25069)

20 11 ο _0C0NH

•-NH 25

Zu einer Mischung von Mitomycin C (334 mg; 1 mmol) und einer 50%-igen Öldispersion von NaH (96 mg; 2 mmol) gibt man unter N₀ 5 ml trockenes DMF, rührt die Mischung bei Raumtemperatur 10 Minuten und kühlt dann auf -30⁰C ab. Danach gibt man 482 mg (2,3 mmol) Methyl-p-nitrobenzylcarbonat als Feststoff zu, rührt eine weitere Stunde bei -30⁰C, quencht die Reaktion durch Zugabe einer

geringen Menge Trockeneis und verteilt die Reaktions-35

mischung zwischen EtOAc und Wasser. Die organische

7 IGQ / *0 ^k) 1 1 7 i_. IjOi " - -^ J- .L ί

Schicht wäscht man mit Kochsalzlösung und trocknet über Na₇SO₄. Den nach Abziehen des Lösungsmittels erhaltenen Rückstand chromatographiert man an SiO₂ (2 % CH₃OH-CH₂Cl₂) und erhält 150 mg (38 %) der Titelverbindung: Fp. 106 - 107⁰C.

NMR (Pyridin-d₅,S ): 2,05 (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 3,15

(m, 1H), 3,54 (d, 1H, J=12 Hz), 3,74 (s, 3H), 4.04 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 4,19 (d, 1H, J=12 Hz), 5,12 (t, 1H, J=12 Hz), 5,36 (dd, 1H,

J=10, 5 Hz), 10,20 (bs, 1H);

IR(KBr): 3450, 3300, 1725, 1652, 1615, 1580,

1495, 1335, 1220, 1010 cm ¹;

UV (CH,OH,λ _mav) : 218, 329, 514 nm.

j Iu α.Λ

Analyse für C.₇H₂₀l·	^J4°7^:	C	5	H	14	N
		/04	5	,14	14	,28
berechnet:	52	,03		,15		,20
gefunden:	52

3Q Beispiel 8

7-(Ethoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25082)

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 96 mg einer 50%-igen Öldispersion von NaH (2 mmol) und 450 mg Ethylp-nitrobenzylcarbonat erhält man die Titelverbindung wie im Beispiel 7 beschrieben. Man erhält 150 mg (37 %) mit einem Fp. von 100 - 102⁰C.

NMR (Pyridin-d₅,£ ): 1,16 (t, 3H, J=7 Hz), 2,09 (s, 3H),

2,77 (m, 1H), 3,14 (d, 1H, J=4 Hz), 3,26 (s, 3H), 3,54 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=12, 5 Hz),

4,10 (d, 1H, J=13 Hz), 4,12 (q, 2H, J=7 Hz), 5,10 (t_r 1H, J=12 Hz), 5,40 (dd, 1H, J=10, 5 Hz);

IR(KBr): 3640, 3300, 1740, 1655, 1620, 1580,

1495, 1335, 1220, 1060 cm"¹;

UV (CH.OH,Λ _m3V): 218, 330, 515 nm.

30 Analyse für C₁QH₂₂N₄O^O,75 H₃O:

C HN

berechnet:	51	/55	5	/64	13	/34
gefunden:	51	/52	5	/64	13	,47

⁵ Beispiel 9

7-[(2-Methoxyethoxy)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan (BMY-25071)

OCONH

Ausgehend von 688 mg (2 mmol) Mitomycin C, 192 mg einer 50%-igen öldispersion von NaH (4 mmol) und 960 mg (4 mmol) 2-Methoxyethyl-p-nitrobenzylcarbonat erhält man die Titelverbindung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 7 beschrieben. Man erhält 300 mg (35 %) mit Fp: 82 - 84°C.

NMR (CDCl₃₇ £ ):

1,92 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,52 - 3,80 (m, 4H), 4,11 (d, 1H, J=12 Hz), 4,24 - 4,38 (m, 2H), 4,44 - 4,84 (m, 4H), 7,47 (s, 1H) ;

30 IR(KBr):

Analyse für

3450, 1715, 1655, 1585, 1505, 1450, 1340, 1225, 1065 cm~¹;

berechnet: gefunden:

51,76 52,09

H N 5,60 12,71 5,50 12,72

5 Beispiel 10

7-(Isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-25003)

Zu einer Mischung aus Mitomycin C (668 mg; 2 mmol) und einer 50%-igen öldispersion von NaH (192 mg; 4 mmol) gibt man

unter N- 8 ml trockenes DMF- , rührt die erhaltene Lösung 20 Minuten bei Raumtemperatur und kühlt dann auf -25°C ab. Anschließend gibt man 340 mg (4 mmol) Isopropylisocyanat zu, rührt eine weitere Stunde bei -25 C, quencht die Reaktion durch Zugabe einer geringen Trockeneismenge

und verteilt die Reaktionsmischung zwischen EtOAc

und Wasser. Die organische Schicht wäscht man mit Kochsalzlösung und trocknet über Na₃SO₄. Den nach Abziehen des Lösungsmittels erhaltenen Rückstand, chromatographiert man an SiO₂ (3 % CH₃OH-CH₂Cl₂) wobei man 140 mg (17 %) der Titelverbindung erhält: Fp. 163 - 165°C.

NMR (Pyridin-d₅,ξ ) : 1,19 (d, 6H, J=6 Hz) , 2,22 (s, 3H),

2,75 (m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,53 (dd, 1H, J=12,

2 Hz), 3,94 (dd, 1H, J=10, 5 Hz),

4,12 (Septett, 1H, J=6 Hz), 4,24 (d, 1H, J=12 Hz), 4,75 (t, 1H,

J=10 Hz), 5,26 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 7,80 (d, 1H, J=7 Hz), 8,46 (s, 1H);

IR(KBr): 3340, 3300, 1700, 1630, 1455, 1320,

1215, 1050 cm"¹;

UV (CH₃OH, Xmax) : 219, 238 (sh) , 348, 520 nm.

10 Analyse für C.₉ ^Η ₂5^Ν5°6*°'^{75 H}2^0:

CHN

berechnet:	52	,71	5	,99	16	,17
gefunden:	53	,01	6	,03	15	,86.

Eine frühere Fraktion ergibt 1a-(Isopropylaminocarbonyl)-7-(isopropylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan: mg (24 %).

NMR(Pyridin-d₅,^): 1,20 (m, 12H), 2,22 (s, 3H), 3,17

(s, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,53 (dd, 1H, J=12, 2 Hz), 3,78 - 4,30 (m, 3H), 3,87 (d, 1H, J=4 Hz), 4,16 (d, 1H, J=12 Hz), 4,78 (t, 1H, J=10 Hz), 5,30 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,86 (d,

1H, J=7 Hz), 8,40 (s, 1H), 8,53 (d, 1H, J=7 Hz).

Beispiel 11

7-(Cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BMY-6936)

2i.CEZ.15S^:i:Ul7

Ausgehend von 334 mg (1 mmol} Mitomycin C, 96 mg einer 50%-igen Öldispersion von NaH (2 mmol) und 250 mg (2 mmol) Cyclohexylisocyanat stellt man die Titelverbindung in 15 ähnlicher Weise her wie im Bespiel 10 beschrieben.- Man erhält 100 mg (22 %) mit Fp. 138 - 140°C.

NMR(Pyridin-d₅,6')

1,06 - 1,72 (m, 10H), 1,96 - 2,15 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,75 (bd, 1H, J=4 Hz), 3,12 (d, 1H, J=4 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,56 (d, 1H, J=13 Hz), 3,95 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 4,27 (d, 1H, J=13 Hz), 5,00 (t, 1H, J=13 Hz), 5,28 (dd, 1H, J=12, 5 Hz), 7,88 (d, 1H, J=8 Hz), 8,52 (s, 1H);

IR(KBr):

3380, 1710, 1695, 1675, 1585, 1535, 1340, 1220, 1070 cm'¹;

30 UV (CH-. OH, λ ): 218, 236 (sh), 348, 520 nm.

-J HlciX

Analyse für

₃₅

berechnet gefunden:

55,86 55,83

6,50 6,22

14,81

14,44

Eine frühere Fraktion ergibt 70 mg (14 %) 1a-(Cyclohexylaminocarbonyl) -7-(cyclohexylaminocarbonyl)amino-9amethoxymitosan.

NMR (Pyridin-d₅,<5) : 1,1 - 1,7 (m, 20H), 1,9 - 2,2 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 3,42 (m,

1H), 3,54 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,86 (d, 1H, J=5 Hz), 3,94 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 4,14 (d, 1H, J=13 Hz), 4,78 (t, 1H, J=11 Hz), 5,33 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 7,94 (d, 1H, J=7 Hz),

8,50 (s, 1H), 8,64 (d, 1H, 3=1 Hz).

Beispiel 12 20

7-(Benzylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6 955)

25 A : X Il • OCONH₂

-NH O

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 192 mg NaH (50%-ige Öldispersion; 4 mmol) und 536 mg (4 mmol) Benzylisocyanat stellt man die Titelverbindung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 10 beschrieben her. Man erhält 110 mg (12 %) mit Fp. 145 - 147°C·.

^ ^i 117

5 NMR (Pyridin-d,,S )

2,24 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,12 (d, 1H, J=5 Hz), 3,23 (s, 3H), 3,55 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,96 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 4,24 (d, 1H, J=13 Hz), 4,68 (d, 2H, J=6 Hz), 5,05 (t, 1H, J=10 Hz), 5,27 (dd, 1H, J=10, 5 Hz), 7,2 - 7,7 (m, 5H), 8,5 - 8,7 (m, 2H) ;

IR(KBr) : 3310, 1700, 1650, 1620, 1565, 1475, 1340, 1212, 1067 cm"¹;

UV (CH₃OH, A_max): 217, 240 (sh), 346, 515

nm.

Analyse für ^C23^H25^N5°6^:

	58	C	5	H	N	,84
berechnet:	58	,53	5	,45	14	,12
gefunden:	,93	,45	14

Beispiel

7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan (BL-6906)

CH

OCONH

/ j.üLz.. 1 j2 -, * ; --11 !

Ausgehend von 668 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 370 mg (2 mmol) N-Hydroxysuccinimidester von Cyclopropancarbonsäure führt man die Umsetzungen in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Silikagel (2 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 65 mg ( 8%) der Titelverbindung mit Fp.: 102 - 104⁰C.

NMR (Pyridin-d₅, £): 0,70 - 0,84 (m, 2H), 1,00 - 1,25

(m, 2H), 2,04 (s, 3H), 2,10 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 3,12 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 3,51 (bd, 1H, J=11 Hz),

3,99 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,19 (d, 1H, J=11 Hz), 5,03 (t, IH, J=10 Hz), 5,31 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,17 (bs, 1H);

IR(KBr): 3420, 3320, 1700, 1580, 1430, 1330,

1210, 1056 cm"¹;

	UV (CH₃C	>H, χ _max) :	220,	330	00	51	0	mn.	H	59	1	N	,50
25					16				5,	88	1	3	,86
	Analyse	für C₁₉H₂₂N₄O₆	3/4 H	₂O:				5,			2
				C
		berechnet:		55,
		gefunden:		55,

1 1

Beispiel 14

7-(Diethylthiophosphoryl)amino-9a-methoxyraitosan (BL-6938)

(C₀H₁-O) ,P

Ausgehend von 450 mg (1,35 mmol) Mitomycin C, 2,7 mmol NaH und 280 mg (1,49 mmol) Diethylthiophosphorylchlorid führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an einer Silikagelsäule (2 % CH₃OH-CH₂Cl₂) und einer anschließenden Dünnschichtchromatographie an Silikagel (3 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 39 mg (8 %) ia-Diethylthiophosphoryl-7-(diethylthiophosphoryl) amino-9a-methoxymitosan (BL-6934) mit Fp.: 47 - 49°C.

NMR (Pyridin-d₅, £): 1,24 (t, 6H, J=7 Hz), 2,31 (d, 3H,

J=1 Hz), 2,76 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,55 (bd, 1H, J=10

Hz), 4,02 (dd, 1H, J=11, 4 Hz),

IR(KBr): 3450, 335O₇ 3210, 1720, 1640, 1625,

1580, 1425, 1320, 1015, 960, 810, 785 cm"¹;

\uLL 13C^* ί.ίΐϊ ί J

₅ UV(CH₃OH,χ_max): 212, 345, 515 nm.

Analyse für

berechnet gefunden:

	C	5	H	8	N
43	,26	5	,68	8	,77
43	,29	,41	,83

Eine polarere Bande ergibt 91 mg (14 %) der Titel-15 Verbindung mit Fp. 76 - 79°C.

NMR(Pyridin-d₅,£): 1,06 - 1,32 (m, 12H), 2,28 (d, 3H₇

J=1 Hz), 3,28 (s, 3H), 3,30 - 3,76 (m, 3H), 4,00 - 4,40 (m, 10H),

20 4,72 (t, 1H₇ J=11 Hz), 5,74 (dd,

1H, J=11, 5 Hz);

IR(KBr):

UV(CH_,OH,> _a ): 3450, 3280, 3210, 1715, 1620, 1575, 1425, 1325, 1015, 960, 780 cm"¹;

216, 348, 526 nm.

Analyse für

berechnet: gefunden: ^{C H N} 46,91 5,60 11,52

47,02 5,53 11,88

4 *^li 2117 3

5 Beispiel 15:

N -(Benzyloxycarbonyl)-T-benzyloxycarbonylamino-Samethoxymitosan (BMY-25072)

C₆H₅CH₂O

0CH_oC,H,

Ausgehend von 6 68 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 9 97 mg (4 mmol) Benzyl-N-hydroxysuccinimidcarbonat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 7 beschrieben durch. Nach Chromatographie an

Silikagel (2 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 490 mg (41 %) 25

der Titelverbindung mit Fp. 68 - 70⁰C.

NMR(Pyridin-d₅,<5 ) : 2,09 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 3,42-

3,60 (m, 2H), 3,84 (d, 1H, J=4.Hz), 4,08 (dd, 1H, J=11, 5 Hz), 4,32 (d, 1H, J=13 Hz), 4,86 (t, 1H,

J=11, 5 Hz), 7,24 - 7,55 (m, 10H),

10,50 (bs, 1H)t

IR(KBr): 3460, 3360, 1725, 1652., 1585, 1495,

1260, 1212, 1177, 1015 cm"¹; 35

21.DEZ.183^^l2-21175

Analyse für

C	,79	5	H	N	,63
61	,68	5	,24	9	,30.
61		,02	9

berechnet: gefunden:

Setzt man statt Mitomycin C eine analoge, N ^a-substituierte Mitomycin-C-Verbindung als Ausgangsmaterial in irgendeinem der Beispiele 1 bis 15 ein, dann erhält man die zu diesen Beispielen analogen Verbindungen, welche denen

!5 der allgemeinen Formel(III) entsprechen, worin R eine Niedrigalkylgruppe bedeuten. Das als Ausgangsmaterial eingesetzte N -substituierte Mitomycin C kann man nach dem von Matsui et al, beschriebenen Verfahren erhalten (J. Antibiotics, 21, No. 3,189-198 (1968)). Solche Verbindungen der allgemeinen Formel (III), worin R eine Gruppe bedeutet, wie sie für den Rest R definiert ist, stellen bis-substiuierte Reaktionsprodukte dar, die gemäß den zuvor beschriebenen Beispielen isoliert werden. Bei geeigneten Reaktionsbedingungen kann der Anteil des erhaltenen Bis-Produktes erhöht werden. Mitomycin C Ausgangsverbindungen, bei denen der N ^a-Substituent eine Acylgruppe ist, kann man nach der US-PS 3 450 705 herstellen.

30 Beispiel 16

7-Acetylamino-9a-methoxy-1a-methylmitosan· (BL-6916)

CH

OCONH

-V-CH.

Ausgehend von 348 mg (1 mmol) Porfiromycin, 2 mmol NaH und 314 mg (2 mmol) N-Hydroxysuccinimidester von Essigsäure führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach praparatxver Dünnschichtchromatographie an Silikagel (10 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 40 mg (10 %) der Titelverbindung mit Fp. 101 - 103°C.

NMR (Pyridin-d₅,.& ) :

2,05 (s, 3H), 2,14 (dd, 1H, J=4, 2 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,52 (d, 1H, J=4 Hz), 3,16 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J=13, 2 Hz), 3,93 (dd, 1H, J=12, 4 Hz), 4,08 (d, -1H, J=13 Hz), 4,74 (t, 1H, J=10 Hz) , 5,24 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,04 (bs, 1H);

IR(KBr) :

3430, 3320, 1700, 1650, 1615, 1575, 1435, 1320, 1245, 1060 cm

-1

UV (CH₃OH, X_max) : 221, 245 (sh) , 329, 515 nm.

5 Analyse für ^c-j 8^H22^N4°6 " °'^5H2^O:

CHN

berechnet: 54, 13- 5,80 13,72 gefunden: 54, 37 5,71 13,88. 10

Beispiel 17

7-[3-(Ethoxycarbonyl)propionyl]amino-9a-methoxymitosan (BL-6920)

2 5 N^^V« Π _χ— OCONH₂

- NH

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 2 mmol NaH und 486 mg (2 mmol) N-Hydroxysuccinimidester von Monoethylsuccinat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Aluminiumoxid (2 % CH-.OH-CH-CIp) erhält man 130 mg (30 %) der Titelverbindung mit Fp. 52 - 55°C.

NMR (Pyridin-d₅,£ ): 1,12 (t, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,68 - 3,16 (m, 6H), 3,22 (s, 3H),

3,52 (bd, 1H, J=13 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,12 (q, 2H, J=7 Hz), 4,16 (d, 1H, J=13 Hz),

5,06 (t, 1H, J=10 Hz), 5,35 (dd, 1H, J=10, 4 Hz);

IR(KBr): 3455, 3310, 1720, 1660, 1625, 1580, 10

1450, 1340, 1300, 1220, 1070 cm"¹ ;

UV(CH^OH, y _ma J : 220, 240 (sh) , 334, 515 nm. j max

Analyse für ^C20^H26^N4°7 °'^75H2°

C H N

berechnet: 52,61 6,19 12,51

gefunden: 53,99 5,69 12,12

Beispiel 18

20 —

7-Benzoylamino-9a-methoxymitosan (BL-6 930)

25 /\Λ, Ii _y OCONH₂

-NH ^J O

30 ^: .- -

Ausgehend von 658 mg (2 mmol) Mitomycin C, 4 mmol NaH und 730 mg (3 mmol) p-Nitrophenylbenzoat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie im Bespiel 1 beschrieben durch. Nach Chromatographie an Aluminiumoxid (2 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 150.mg (17 %) der

Titelverbindung mit Fp. 129 - 130 C.

NMR(Pyridin-d₅,6 2,12 (s, 3H), 2,80 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,54 (bd, 1H, J=13 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,23 (d, 1H, J=13 Hz), 5,04 (t, 1H, J=10 Hz), 5,33 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 10,00 (bd, 1H);

IR(KBr): 3460, 3360, 3210, 1715, 1660, 1640, 1585, 1480, 1260, 1070 cm

-1

UV(CH₃OH, X_max): 215, 236 (sh), 337, 515 nm.

Analyse	für ^C22^H22^N4^P6'	19	H₂O:	C	H	N	2	,27
			,89	5,29	1	2	,27
	berechnet:	57	,71	5,29	1
	gefunden:	57
Beispiel

7-[((2-Chlorethyl)amino)carbonyl]amino-9a-methoxymitosan (BL-6931)

—OCONH

bä^·^ i ill ί ο

Ausgehend von 334 mg (1 mmol) Mitomycin C, 2 mmol NaH und 211 mg (2 mmol) 2-Chlorethylisocyanat führt man die Umsetzung in ähnlicher Weise wie in Beispiel 10 beschrieben durch. Nach Chromatographieren an einer Aluminiumoxidsäule (3 % CH₃OH-CH₂Cl₂) erhält man 50 mg (1.1 %) der Titelverbindung mit Fp. 118 - 120°C.

NMR (Pyridin-d₅, <£) : 2,30 (s, 3H), 2,73 (m, 1H), 3,13 (m, 1H), 3,20 (s, 3H)₇ 3,64 (bd, 1H, J=13 Hz), 3,80 (m, 4H), 3,96

(dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,23 (d, 1H, J=13 Hz), 5,02 (t, 1H, J=10 Hz), 5,28 (dd, 1H, J=IO, 4 Hz), 7,80 (bs, 1H), 8,46 (bt, 1H);

IR(KBr): 3410, 3300, 1720, 1620, 1560, 1440,

1330, 1220, 1055 cm"¹;

218, 238 (sh) , 296, 345, 520 nm. 25

UV(CH₃OH	' m	*v> '·	218	0	238
Analyse	für		V		,5H
				48	C
		berechnet	•	48	,16
		gefunden:		,21

H	1	6	1	N	,60
5,	1	6	1	5	,27
5,			5

In ähnlicher Weise kann man im Bespiel 10 das Isopropylisocyanat durch Isopropylisothiocyanat ersetzen und erhält wie oben beschrieben 7-.(Isopropylaminothiocarbonyl)

amino-9a-methoxymitosan. 35

U L L. I j

Claims

Erfindungsanspruch

1-[(2-Methoxyethoxy)-carbonyl]amino-9 a-methoxymitosan, 7-(Isopropylaminocarbonyl)-9a-methoxymitosan,

Ί-(Cyclohexylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan, 20 7-(Benzylaminocarbonyl)amino-9a-methoxymitosan, 7-(Dieethylthiophosphoryl)amino-9 a-methoxymitosan, N ^a-(Benzyloxycarbonyl)-7-benzyloxycarbonylamino-9 amethoxymitosan,

1. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der folgenden allgemeinen Formel (III):

worin

R für ein Wasser stoff atom, eine C, _g-Alkylgruppe oder für den Rest R steht,

7
R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus:

R ein Wasserstoff a torn, eine C_1-6-Alkyl gruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine Cg_₁₀-Arylgruppe, die

/ Ι.ϋΓ. L.I j '2 i "^<r --ill J

gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C^ .^-Aralkylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C„g-Alkenylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, eine C-g-Alkinylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert

ist, eine C, «-Cycloalkylgruppe oder eine

C₄__1tj-Cycloalkylalkylgruppe bedeutet,

R eine C., g-Alky!gruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substiuiert ist, eine Cg_₁₀-Arylgruppe, die gegebenenfalls durch • den Rest A substituiert ist oder eine C₇ ,.,-Aralkylgruppe, die gegebenenfalls durch den Rest A substituiert ist, bedeutet,

und 20

der Rest A ausgewählt ist aus der Gruppe

bestehend aus Chlor, Brom,. Fluor, Iod, Amino, geschütztes Amino, C«g-Alkoxy, C, g-Alkylamino, Di(C_1-6)alkylamino, C₃_g-Cycloalkylamino, C. ...-Cycloalkylamino, Thiol, C-g-Alkylthio, ^ci_6~^Al^yl~ dithio, Cg__1Q-Arylthio und C ₇ _ ..,-Ar alkylthio,
gekennzeichnet dadurch,

30 daß man eine als Anion vorliegende

Mitomycin-C-Verbindung mit 1 bis 2 Moüäquivalenten eines Acylierungsmittels der folgenden allgemeinen Formeln

OS O S

^aCX R^aCX R^CO R^aNCS R¹³OCX (R¹OJ

R^aC-X, R^aC-X, R^CO, R^aNCS, R¹³OC-X, (R¹O)J-X₁O O O O

(R^bO).,P-X, R^a-S-X, R^aS-X, R^aS-X, (R⁰J₀P-X, oder

10 *

(R^a)₂P-X,

worin X eine übliche Abgangsgruppe bedeutet und R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, in einem aprotischem, polaren, organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur von -60 bis +25 C umsetzt,

oder

daß man eine Mitomycin C-Verbindung in einer Dimethyl-

formamidlösung oder einem anderen kompatiblen Lösungsmittel mit 1,0 bis 1,5 Moläquivalenten Natriumhydrid zu einer Mitomycin C-Verbindung umsetzt, die als Anion vorliegt,

und daß man danach diese als Anion vorliegende Mitomycin C-Verbindung mit 1 bis 2 Moläquivalenten eines Acylierungsmittels der allgemeinen Formeln

<R^bO)J?-X, R^a-S-X, R^aS-X, R^aS-X, (R^a) J?-X, oder

S °

(R^a)₂P-X,

worin

X eine übliche Abgangsgruppe bedeutet, und

*^ci^fci 117

R^a und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,

in einem aprotischen, polaren, organischen Lösungsmittel
setzt.

mittel bei einer Temperatur von -60° bis +25⁰C um-

² 7-(Cyclopropancarbonyl)amino-9a-methoxymitosan, 7-Acetylamino-9a-methoxy-1a-methylmitosan,

7-[3-(Ethoxycarbonyl)propionyl]amino-9a-methoxymitosan,

7-Benzoylamino-9a-methoxymitosan_/ und

2. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man als aprotisches, polares, organisches Lösungsmittel Dimethylformamid oder Pyridin einsetzt.

3. Verfahren nach Punkt 1 oder 2 zur' Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (III), worin

R ein Wasserstoffatom bedeutet.

4. Verfahren nach Punkt 1 oder 2 zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (III) , worin R ein Wasserstoffatom und R eine Ά 1 bis 7 Kohlenstoffatomen bedeutet.

5. Verfahren nach Punkt 1 oder 2 zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (III) , worin R ein Wasserstoffatom und R^ eine Cycloalkylcarbonylgruppe mit 4 bis 9 Kohlenstoffatomen bedeuten,

6· Verfahren nach Punkt 1 oder 2 zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (III), nämlich

*:>:>! 17 3

7-(Formyl)amino-9a-methoxymitosan, 5

7-(Trifluoracetyl)amino-9a-methoxymitosan, T-Acetamido-Sa-methoxymitosan, 7-.( 2-Chloracetyl ) amino-9a-methoxymitosan, J^q 7- (Methansulf onyl) amino-9a-methoxymitosan,

7-[3—(tert.-Butoxycarbonylamino)-propionyl]amino-9amethoxymitosan,

Ί-(Methoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan, 7-.(Ethoxycarbonyl)amino-9a-methoxymitosan,

7- [ ((2-Chlorethyl) amino)carbonyl] amino-9a-methoxymitosan.