NL8301949A - Amidines en werkwijze voor het bereiden daarvan. - Google Patents

Description

a I £ VO U857

Amidines en werkwijze voor het bereiden daarvan.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op mitomycine-analoga die een of meerdere amidinogroepen bevatten (klasse 260, subklasse 326.2k), Deze verbindingen zijn mitomycine C-derivaten waarin de 7-ami-nogroep en/of het carbamidostikstof atoom binnen een amidinosubstituent 5 zijn opgenomen. Deze verbindingen zijn actieve anti-tumormaterialen in experimentele diertumoren.

Nomenclatuur. - De systematische Chemical Abstracts naam voor mitomycine C is: £ 1aR-( Ί&οζ ,8/3 ,8a cC ,8b β<·) _7-$-amino-8-T ((aminocarbonyl)oxy)-10 methyl_7-1,1 a, 2,8,8a, 8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-azirino- 7*2',3’,3, ^__7-pyrrolo/71,2-a_7indool-l, 7-dion volgens welke naam het azirinopyrroloïndoolringsysteem is genummerd volgens formule 17 van het formuleblad.

Een triviaal nomenelatuursysteem dat op grote schaal gebruikt 15 wordt in de mitomycine-literatuur identificeert het bovenstaand vermelde ringsysteem met inbegrip van verscheidene van de karakteristieke substituenten van de mitomycinen als mitosaan met formule 18 van het formuleblad.

Hoewel dit systeem geschikt en gepast is voor een aantal eenvou-20 dige derivaten zoals die welke N-sübstituenten op het azirinoringstik-stof atoom of in de 7- of 9a-posities dragen, schiet het voor algemeen gebruik tekort door bepaalde dubbelzinnigheden en tekortkomingen. Met betrekking tot de verbindingen volgens de onderhavige uitvinding waarvan sommige substituenten op zowel het azirinoringstikstofatoom als op 25 het carbamoylstikstofatoom van de zijketen hebben, bestaat geen conventionele nummering om deze posities te onderscheiden. Daarom is in deze beschrijving gekozen voor een aanduiding van het azirinostikstofatoom als N^a en het carbamoylstikstofatoom als N10 in een gebruik van het mitosaan-nomenclatuursysteem. Wat de stereochemische configuratie van 30 de produkten volgens de uitvinding betreft, wordt beoogd om wanneer ze 8301949 τ « - 2 - worden geïdentificeerd door de basisnaam "mitosaan" of door een struc-tuurformule, de stereo chemische configuratie daarvan als gelijk aan die van mitomycine C te identificeren.

Mitomycine C is een antibioticum dat door fermentatie wordt ge-5 produceerd en momenteel onder goedkeuring van Food and Drug Administration verkrijgbaar is in de therapie van uitgezaaide adenocarcinoma van de maag of pancreas in bewezen combinaties met andere goedgekeurde che-motherapeutische middelen en als verzachtende behandeling wanneer andere modaliteiten hebben gefaald (Mutamycin® Bristol Laboratories, 10 Syracuse, New York 13201, Physicians' Desk Reference 35e Edition, 1981, p. 717 en 718). Mitomycine C en zijn produktie door fermentatie vormen het onderwerp van het Amerikaanse octrooischrift 3.660.578 van 2 mei 1972, dat voorrang inroept van eerdere aanvragen waaronder een in Japan op 6 april 1957 ingediende aanvrage, 15 De structuren van de mitomycines A, B, C, en vanporfiromycine werden voor het eerst gepubliceerd door J.S.Webb et al. van Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc.

8U, 3185 - 31.87 (1962). Een van de in deze structuurstudie gebruikte chemische transformaties waardoor mitomycine A en mitomycine C met el-20 kaar in verband werden gebracht, was de omzetting van eerstgenoemde, 7,9*C-dimethoxymitosaan, door reactie met ammoniak tot laatstgenoemde verbinding, 7- amino-9 -methoxymit osaan. Vervanging van de 7-methoxy-groep van mifomycine A is een reactie van aanzienlijk belang gebleken in de bereiding van mitomycine C-derivaten met anti-tumorwerkzaamheid. 25 De volgende artikelen en octrooien houden zich allemaal bezig met de omzetting van mitomycine A in een 7-gesubstitueerd aminomitomycine C-derivaat met anti-tumorwerkzaamheid. Het doel van dit onderzoek was om derivaten te bereiden die nog actiever waren, en in het bijzonder die minder toxisch waren dan mitomycine C: 30 Matsui et al. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189—196 (1968).

Kinoshita et al. "J. Med. Chem." JU, 103-109 (1971).

Iyengar et al. "J. Med. Chem." 2^, 975-981 (1981).

Iyengar, Sami, Remers, and Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, 35 Nevada, maart 1982, Abstract No. MEDI 72.

8301949

De volgende octrooien houden zich hezig met de bereiding van 7- gesubstitueerde aminomitosaanderivaten door de reactie van mitomycine 1a - 3 - ft ft A, mitomycine B, of een ΪΓ -gesubstitueerd derivaat daarvan met een primair of secundair amine: 5 Cosulich et al. Amerikaans octrooischrift 3.332.9^+ van 25 «juli 1967,

Matsui et al. Amerikaans octrooischrift 3.^20.8U6 van 7 januari 1969,

Matsui et al. Amerikaans octrooischrift 3.^50.705 van 17 juni 10 1969,

Matsui et al. Amerikaans octrooischrift 3-51^.^52 van 26 mei 1970,

Nakano et al. Amerikaans octrooischrift k.231.936 van k november 1980, 15 Remers. Amerikaans octrooischrift U.268.676 van 19 mei 1981.

Mitomycine C-derivaten met een gesubstitueerde aminosubstituent op de 7-positie zijn eveneens bereid door gerichte biosynthese, d.w.z. door fermentatiebouillons aan te vullen met een reeks primaire aminen, en de conventionele mitomycinefermentatie uit te voeren (C.A.Claridge 20 et al. Abst. of the Annual Metting of Amer. Soc. for Microbiology 1982.

Acs. 028).

Mitomycine C is het belangrijkste door fermentatie geproduceerde mitomycine en is de in de handel verkrijgbare vorm. De huidige technologie voor de omzetting van mitomycine C in mitomycine A voor toepas-25 sing in de bereiding van de semisynthetisch gesubstitueerde aminoanalo-ga van mitomycine C waarnaar in de bovenstaand vermelde publikaties is verwezen, omvat een hydrolyse van mitomycine C tot het overeenkomstige 7-hyaroxymitosaan, een zeer onstabiele verbinding, en daarna methy-lering van die stof met diazomethaan dat een zeer lastig te hanteren ma-30 teriaal is. 2en poging om het gebruik van diazomethaan voor de methyle-ring van het 7-0-demethylmitomycine A dat door hydrolyse van mitomycine C wordt geproduceerd, te vermijden, omvat het gebruik van 7-acyloxymito-sanen (ïyowa Hakko Kogyo ££, Japans octrooischrift J5 6073-O85,

Farmdoc No. 56227 D/31).

25 De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een nieuwe groep 8301949 1 ♦ - u - monoguanidino, of mono- en bis-amidino-analoga van mitomycine C waarin het 7-aminostikstof atoom en/of het N -carbamoylstikstofatoom van mitomycine C deel uitmaken van een amidinosubstituent of de 7-aminostikstof deel van een guanidinogroep uitmaakt. Overeenkomstige analoga van mito-5 mycine A met de methoxygroep op de 7-positie en de amidinogroep op de ΓΓ -positie zijn eveneens inbegrepen. De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding beantwoorden aan de algemene structuurformule Π van het formuleblad, waarin A amino, methoxy, hydroxy, (1-lager alkyl-2(1ïï)-pyridinylideen)amino, 10 of een van de groep met de formules 2-8 voorstelt; B amino of de amidinogroep met formule 2 voorstelt en tenminste ien van A en B een van de gespecificeerde groepen anders dan amino, methoxy of hydroxy is, n een geheel getal 0, 1, 2 of 3 is; 15 r"* waterstof, lager alkyl, lager alkanoyl, benzoyl of gesubstitueerde benzoyl voorstelt, waarin de substituent lager alkyl, lager alkoxy, halogeen, amino of nitro is; 2 R waterstof, lager alkyl, fenyl, lager alkylfenyl, lager alkoxyfenyl, halogeenfenyl, aminofenyl, nitrofenyl, thiënyl, furyl, cyano, di- 20 lager alkylamino, lager alkoxy, of lager alkylthio voorstelt; 3 b R lager alkyl, lager alkoxy - voorst elt, of tezamen met R en het stikstofatoom waarmee ze verbonden zijn, pyrrolidiney 2- of 3-lager alkylpyrrolidine, piperidine, 2-, 3-, af h-lager alkylpiperidine, 2,6-di-lager alkylpiperidine, piperazine, gesubstitueerde pipera-25 zine (waarin de ^-substituent alkyl of carbalkoxy elk met 1 - 8 kool stof atomen, fenyl, methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, nitrofenyl, of benzyl is), azepine, 2-, 3-, k-, of 5-lager alkylazepine, morfoline, thiomorfoline, thiomorfoline-1-oxyde, of thiomorfoline-1,1-dioxyde, vormt; k 3 30 R lager alkyl voorstelt of samen met R en het stikstofatoom waarmee ze verbonden zijn, pyrrolidine, 2- of 3-lager alkylpyrrolidine, piperidine, 2-, 3-, of U-lager alkylpiperidine, 2,6-di-lager alkylpiperidine, piperazine, U-gesubstitueerde piperazine (waarin de h-substituent alkyl of carbalkoxy elk met 1 - 8 koolstofatomen, fenyl, 35 methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, nitrofenyl, of benzyl is), 8301949 « * - 5 - aepine, 2-, 3-, U- of 5-lager alkylazepine, morfoline, thiomorfoli-ne, thiomorfoline-1-oxyde, of thiomorfoline-1,1-dioxyde, vormt; R^ gekozen is uit C^g-alkyl met uitzondering van tert.alkyl, alkenyl, ^g-alkynyl, G1 _ 1 g-halogeenalkyl, c ·] _ -j g-hydroxyalkyl, 5 C4 g-cycloalkyl, of aryl of lager aralkyl elk met tot 12 koolstof- atomen of een heteroalicyclische of heteroaromatische groep met 3 - 8 ringatomen waarvan er tenminste twee koolstofatomen zijn; 7 9 R' en R onafhankelijk van elkaar waterstof of lager alkyl voorstellen, waarin elk van de eerder genoemde lager alkyl-, lager alkanoyl- en . 10 lager alkoxygroepen 1 - 6 koolstofatomen bevat.

De deskundigen zullen beseffen dat tautomere vormen van enkele van de bovenstaand vermelde amidinogroepen bestaan. Beoogd wordt dat ook die door de bovenstaande formules en de onderhavige uitvinding worden omvat.

15 De bovenstaande stoffen met formule 1 vertonen anti-tumorwerk- zaamheid in dierproeven. Ze zijn ook bruikbaar als tussenprodukten voor het bereiden van andere verbindingen met anti-tumorwerkzaamheid in dieren . De onderhavige uitvinding omvat werkwijzen voor het bereiden van de bovenstaand vermelde stoffen en voor hun omzetting in andere bruik-20 bare verbindingen met anti-tumorwerkzaamheid in dierproeven zoals onderstaand wordt beschreven.

De werkwijze volgens de onderhavige uitvinding waarbij de bovenstaand vermelde stoffen als tussenprodukten worden gebruikt voor het bereiden van andere verbindingen met antitumorwerkzaamheid in dieren, 25 omvat een reactie van een verbinding met formule 1 waarin A of zowel A als B de vermelde amidinogroep zijn, met een primair amine, leidend tot een afsplitsing van de N^-aminomethyleensubstituent, indien die aanwezig is, met omzetting daarvan in de NHg-groep zoals aanwezig in mitomycine A en mitomyeine C. De primaire aminen met bepaalde uitzonde-30 ringen reageren ook op positie 7 door verwijdering van de amidinogroep en vervanging daarvan door de met de reactant overeenstemmende amino-substituent. Deze werkwijzen worden in schema A van het formuleblad geïllustreerd. Hierin stelt R*5 de stikstofsubstituent voor van verscheidene bekende en nieuwe 7-gesubstitueerde aminomitomycine C-verbin-35 dingen, die hierin worden beschreven en van de primaire aminen die.tot 8301949 3 ί - β - verwijdering van de 7-amidinegroep van verbindingen met formule 9 in staat zijn; R^ wordt gekozen uit ^g-alkyl, met uitzondering van tert.-alkyl, ^g-alkoxy, C^g-alkenyl, ^-alkynyl, ^g-halo-geenalkyl, C1 _ ^ g-hydroxyalkyl, C^g-cycloalkyl, aryl of lager aralkyl 5 of lager aralkoxy met elk tot 12 koolstofatomen, of een heteroalicycli-sche of heteroaromatische groep met 3-8 ringatomen waarvan er tenmi η- g ste twee koolstofatomen zijn. R , die de stikstofsubstituent van de primaire amines voorstelt die alleen tot afsplitsing van de N^-amidino- substituent in staat zijn, is de rest van een zeer zwak basisch alifa- 10 tisch amine of van een sterk gehinderd alkylamine of aralkylamine.

Voorbeelden daarvan zijn trifluoroëthylamine, benzhydrylamine (d.w.z.

aminodifenylmethaan), of tert.-butylamine.

De verbindingen met formule 1 worden bereid door reactie van mito- 1a mycme C, 7-hydroxy-9a-methoxymitosaan, of mitomycxne A of een ïï -15 gesubstitueerd analogon van een daarvan met een amideacetaal. De verbinding met formule 1, waarin A maar niet B de amidinogroep is, kunnen ook worden bereid door reactie van mitomycine C of een ΪΓ -gesubstitueerd analogon daarvan met een sterke base onder vorming van een anion ..7 . . .

bij II , gevolgd door reactie van het anïon met een reagens dat de ammo- 20 methyleengroep kan genereren zoals een halogeenmethyleeniminiumzout.

De geprefereerde verbindingen volgens de onderhavige uitvinding zijn mitomycine C-analoga waarin de 7-aminogroep is opgenomen in een gesubstitueerde of ongesubstitueerde amidinogroep. Ze hebben een sterke antitumorwerking tegen experimentele tumoren in dieren. Deze verbindin-25 gen worden bereid door reactie van mitomycine C met een reagens dat de 7-aminogroep kan omzetten in een 7-amidinogroep. Geprefereerde reagentia voor dit doel zijn de amideacetalen die in goede opbrengst en onder milde omstandigheden met mitomycine C reageren (voorbeelden I - V, en XVIII). Een andere groep van amidine vormende reagentia zijn de imidoyl-30 halogeniden (voorbeeld XVII), halogeenmethyleeniminiumzouten (voorbeeld XV), 2-rhalogeen-1-alkylpyridiniumhalogeniden (voorbeeld XVT), en iminoëthers of iminothioëthers (voorbeelden ΧΓΙΙ en XIV) die reageren met de anionogene vorm van mitomycine C, gevormd door deprotonering van de 7-aminogroep daarvan door behandeling met sterke basen. Omstan-35 digheden voor de deprotonering van mitomycine C omvat een behandeling 8301949 * « - 7 - van mitomycine C in dimethylf ormamideoploss ing met ongeveer 1,5 molaire hoeveelheden natriumhydride bij kamertemperatuur. De reactie van de aldus gevormde anionogene vorm met een van de bovenstaand vermelde reagentia gebruikt bij voorkeur 1-1,5 molaire hoeveelheden daarvan ten 5 opzichte van het mitomycine C bij een temperatuur van kamertemperatuur tot ongeveer -60°C. Aprotische polaire organische oplosmiddelen zoals dimethylformamide, hexamethylfosforamide, dimethylsulfoxyde, of pyridine worden als reactiemedium gebruikt. De methode is echter niet beperkt tot de vorming van anionogeen mitomycine C op deze specifieke 10 wijze, omdat modificaties aan de deskundigen duidelijk zullen zijn.

De voorkeursmethode voor het bereiden van de verbindingen met formule 1 waarin 3 of zowel A als B de amidinogroep met formule 2 voor-

♦ 1SL

stelt, is door reactie van mitomycine C of mitomycine A of een IT - gesubstitueerd derivaat van een van beide met een amideacetaal met

2 3 U

15 formule 12 van het formuleblad, waarin R , R en R zoals bovenstaand o .gedefinieerd zijn en R° lager alkyl of cycloalkyl met tot 6 koolstof- 8 atomen voorstelt of de twee R -groepen samengevoegd zijn als een alky-leenketen die met de twee zuurstofatomen en het tussengelegen koolstof-atoom een cyclische structuur met 5 of 6 ringatomen vormt. De reactie 20 van dergelijke amideacetalen met primaire aminen is zeer goed bekend, en de deskundigen zullen weten hoe de reactie moet worden uitgevoerd 1 s · · met mitomycine C, mitomycine A, of de N -alkylderivaten daarvan. Bij wijze van voorbeeld verwezen naar H.E.Winberg, Amerikaans octrooi 3.121.08U (11 februari 19ÖU), en R.F.Abdulla et al. "The Chemistry 25 of Formamide Acetals", Tetrahedron, Vol. 35, p. 1720 - 1J2k (1979).

De reactie wordt bij voorkeur uitgevoerd in een vloeibaar anhy-drisch reactiemedium waarin een verdunningsmiddel een vloeistof is die met de reactieomstandigheden verenigbaar is. Bij voorkeur is laatstgenoemde een lagere gehalogeneerde alifatische koolwaterstof of een 30 lagere alkanoi of bij voorkeur een mengsel van deze twee. Chloroform en methanol en mengsels daarvan zijn zeer geschikt. De reactie wordt uitgevoerd bij een temperatuur van Uo - Ö5°C gedurende een voldoende tijdsduur om de reactie te voltooien.

Wanneer een grote overmaat (ongeveer 60-voudige overmaat) van 35 net acetaal wordt gebruikt, is het in overwegende mate gevormde produkt 8301949 * i - 8 - het bis-amidinoprodukt, d.w.z. de stoffen met formule 1 waarin zowel 1a A als B de amidinogroep omvatten. Het N -formylderivaat wordt soms als bijprodukt gevormd. Met een Beperkte hoeveelheid (ongeveer 10-vou-dig) van het acetaal wordt echter behalve het bis-amidinoprodukt 3 ook 5 een monoamidinoprodukt, d.w.z. een produkt met formule 1 waarin A de aminogroep is en B de amidinogroep is, geproduceerd. Mengsels van de bovenstaand vermelde reactieprodukten kunnen gemakkelijk door chromato-grafie worden gescheiden zoals in de onderstaande voorbeelden wordt beschreven.

10 Enkele in de handel verkrijgbare amideacetalen, die in deze werkwijze kunnen worden gebruikt, zijn in onderstaande tabel A, afkomstig uit het geciteerde artikel van Abdulla et al., p. 1685'» vermeld.

Tabel A

Enkele in de handel verkrijgbare amideacetalen: 15 Acetaal Structuur_ A (CH3)2HCH(0CH3)2 b (ch3)2nch(och2ch3)2 ?H3 C (CH3)2HCH(0CH -C-CH3)2 20 CH3 D (CH3)2!IC(CH3)(OCH3)2 ^o-ch2

E (CH ) HCH

^O-CHg 25 ^CH3 F (CH3)2HCH(0-CH )2 CH3 G (CH )2NCH(0CH2CH2CH )2 30 H (CH )2HCH(0- O >2

De stoffen met formule 1, waarin R2 cyano, di-lager alkylamino, lager alkoxy, of lager alkylthio voorstelt, werden bereid door de amideacetalen in de bovenstaand vermelde werkwijze te vervangen door de orthocarbonaatderivaten met de formules 13 - 16 van het formuleblad.

35 Deze reagentia zijn beschikbaar uit de volgende bronnen: 8301949 * · - 9 - formule 13: Kantlehner, et al., Liebigs Ann. Chem., J98l_, 70-8¼. formules 1U, 15 en 16: H.Meerwein, et al., Liebigs Arm. Chem. 6U1, 1 (1961).

De amidinoderivaten met formule 1, vaarin A de groep met formule 5 3 of de groep met formule 4 voorstelt, worden bereid uit de anionogene • 7 vorm van mitomycme C of een N -gesubstitueerd derivaat daarvan volgens bovenstaande beschrijving. Geschikte halogeermiethyleeniminiumzouten voor toepassing in deze werkwijze zijn in de literatuur beschreven. Representatieve voorbeelden zijn die, vermeld door W.Kantlehner in 10 "Advances in Organic Chemistry", Vol.9» deel 2, Wiley Interscience, 1979» p* 81 en 82. Tabel B is hieraan ontleend.

Tabel B

Halogeenmethyleeniminiumzouten 15 r2-cv R2 R3 R^ X r Smp..

H CH3 CH3 Cl Cl 1U0-1U5 H CH3 CH3 Br Br 156-158 20 H CH3 CH3 I I 110 H -(CH2)5- Cl Cl 58-66 H CH3 CgH5 Cl Cl olie CH3 CH3 Cïï3 Cl Cl 150-200 c2h5 ch3 ch3 Cl Cl 68-70 25 c2h5 -(CH2)5- Cl Cl 82-85 n-C3H7 CH3 CH3 Cl Cl 82-814- n-C3HT C2H5 C2H5 Cl Cl ' 20 i-C3H? C2H5 C2H5 Cl Cl v20 n-C^ CIi3 CH3 Cl Cl 50-55 30 -(CH2)3- CH3 Cl Cl 75-79

CgH5 CH3 H Cl Cl 93-95 C/-H- CH- H Cl Br 115-117 op o

CgH- CH3 D Cl Br 115-118 C^H_ CH- CH- Cl Cl 95-96 35 Orr* -(CHj_- Cl Cl 136-1U0 op d p 8301949 - ίο -

Tabel B (vervolg)

CgH -(CHg)^- Br Br3 6h C6H5 -(CH2)5- Br Br3 97 C/-H- -CH-(CEL)) -CH- Br Br, 125 6 5 | 2 4 | 3 5 CH3 CH3

C^H- -CH- (CH,) _-CH- Br Br, 12U

D 5 f ^ J i -J

ch3 ch3

CgH5 CH3 CH3 Br Br 120 (ontl.)

CgH5 -(CBg)^- Br Br 176 (ontl.) 10 CgHj. -(CH2)6- Br Br 195 (ontl.) C6H5 -CH-(CH2)u- Br Br 160 ch3 C.H- -CH- (CH,) ,-CH- Br Br 6 5 | 2 3 j ch3 ch3 15 C6H5 -CH-(CH2)u- Br Br 85-95 n“C3H7 p-0CH3-CgH^ -(CH2)5- Cl Cl 85 p-HOg-CgH^ CH3 CH3 Cl ' Cl 90 (ontl.) p-NOg-CgH^- -(CH^- ‘ C1 01 117-119 20

aCH3 H Cl Cl 103-10U

CH3 H Cl Br 132-13^(ontl.) ch3 D Cl Cl 103-105 CH3 D Cl' Br 133-13¾(ontl.) 25 C2H5 H Cl Cl 93-9b C2H5 H Cl Br 151-152 ch3 ch3 ci ci 181-182 C0ïïc C H Cl Cl 99-103 2 5 2 5

Wanneer een halogeenmethyleeniminiumzout als reactant wordt ge-30 bruikt zoals in tabel B is geïllustreerd, is het soms nuttig om het overeenkomstige amide als oplosmiddel te gebruiken, d.w.z. het amide waaruit het iminiumzout is bereid. In gevallen dat de overeenkomstige amiden vaate stoffen zijn, kunnen hexamethylfosforamide of pyridine worden gebruikt. Dit wordt geïllustreerd in de onderstaande voorbeelden 35 XVII en XIX.

De van W-gesubstitueerde formamiden afgeleide imidoylchloriden 8301949 « # - 11 - zijn voor dit doel eveneens geschikte reactanten. Hun "bereiding is welbekend zoals geïllustreerd wordt door tabel C die ontleend is aan H.Ulrich in "The Chemistry of Imidoyl Halides”, Plenum Press, New York, 1968, p. 7¾ - 76, Him reactie met amines onder vorming van amidines 5 is eveneens welbekend zoals geïllustreerd door S.R.Sandler en W.Karo in "Organic Chemistry", Vol. 12-III, A.T.Blomquist en H.Wasserman, uitgevers, Academie Press, New York, 19T2, p.227.

Tabel C

Imidoylchloriden .

10 R2-C=NR3 »

Cl F2 β3 Kookpunt, °C/mm (Smp., °C) 15 CH3 CgH^ ^5-58/0,01; C6H5 (118-120) 2-CH CgH^ 60/0,1 2-FCgH^ 70/0,25

2-ClC^H, 11-11U/1U

20 2-BrCgH^ 1^2-1^3/12 C2H5 CgH11 ^3-^/0,02 CH3CH20C12 C272-75/1^ (CH3)2CH CgH^ U0-M/0,001 2-CH3Cgïï^ 67/0,3 25 h-CH CgH^ 80-85/0,8 it-CH^CgH^ 93-9V0.25 n-CuH9(C2H5)CH n-C^ 72-76/0,7 (CH3)3C CgH^ 10U-106/20 CSH10C1 c2h5 toa/3 30 C,H_ CH, tó-liT/2 6 5 3 90-92/13 c2h5 Vf-Wl i-C3HT 52-5U/1 n-C^ 85-86/1 35 CgH^ 110-112/1 (66-67) 8301949 4 * * - 12 -

Tabel C (vervolg) CHgCgÏÏ^ 128-130/1 c6h5 175-176/12 (Uo-In) 5 2,6-(CH3)2C6H3 153-156/1 2-0^0(¾¾ 188-190/6 U-CH^CgH^ 198-200/20 (61-63) 2,U(02li)2C6ïï3 (122-12U) 10 2-CH CgH^ CgH5 17^-177/10 ^-CH CgH^ CgH5 1IH-1W/1 (40-iH)

Ij—ClCgH^ CgH5 (66-67) 1+-BrCgH^ U-BrCgH^ (93-9*0 15 fc-C^OCgH^ CgH5 183-185/3 (73-76) ^2^6¾ C6ÏÏ11 (UCU2) c6ïï5 (137-138) il-OgUCgH^ (132-13*0 20 3,5-(02IT)2C6H3 QeEu (86-87) 2#1;,6-(0Η3)306Η2 C6ïï5 16U-165/1 (60-62)

De stoffen met formule 1 waarin A de amidinogroep met niet-ge- substitueerde stikstof is, d.w.z. de groep met formule 5 of de groep 25 met formule 6, worden bereid door reactie van een iminoëther met be- 7 schermde aminogroep met mitomycme C, een Ir -gesubstitueerd derivaat 1a ...

daarvan, of een H -lager alkyl-derivaat van een van beide m de aniono- gene vorm op de bovenstaand beschreven wijze. De beschermende groep wordt daarna op een gebruikelijke wijze verwijderd. Isopropylformimi-30 daat waarin de aminogroep beschermd is door de -trimethylsilylethoxy-carbonylgroep, is een geschikte reactant (voorbeeld XIII).

ClC02CH2CH2Si(CH3)3 (CH3)2CH0CH=NH.HC1 - (CH3)2CH0CH=NC02CH2CH2Si(CH3)3

Wanneer A (1-lager alkyl-2(1H)-pyridinylideen)amino of de groep 35 met formule 7 of de groep met formule 8 voor stelt, omvatten de prepara- 8301949 - 13 -

tieve procedures een reactie van de anionogene vorm van mitomycine C

met cyclische halogeenmethyleenimiüiumzouten of imidoylhalogeniden waar- in R en RJ van de formule Rn 1T-C(R )*N- onder vorming van een ring zijn samengevoegd. Geschikte reagentia voor reactie met het mitcmycine 5 C-anion zijn 2-chloor-1-methylpyridiniumjodide (voorbeeld XVI), 2-chloor-k,5-dihydro-1-methyl-1(3H)-pyrrolidiniumchloride (tabel B), lï,Π1 -dimethyl-IJ, Jï'-trimethyleenchloorformamidimiumchloride (voorbeeld XXVIII) en andere cyclische imidoylhalogeniden verkregen van 2-azetidi- nonen, 2-pyrrolidinonen, 2-piperidinonen, en 2-azepinonen. Opnieuw 7 9 10 wordt, wanneer R of R van het eindprodukt waterstof is, een beschermende groep zoals bovenstaand in het als tussenprodukt fungerende cyclische halogeenmethyleeniminiumzout toegepast*

De stoffen met formule 1 waarin A of zowel A als B een amidino-groep met de formule 2 voorstellen, reageren met primaire aminen met 15 de formule R^NH, waarin R^ gekozen is uit C1—18 -alkyl met uitzondering van tert.-alkyl, ^g-alkenyl, ^Q-alkynyl, ^q-halogeenalkyl, C, ^g-hydroxyalkyl, C^_g-cycloalkyl, of aryl of lager aralkyl, met elk tot 12 koolstofatomen, of een heteroalicyclische of heteroaromati-sche groep met 3-8 ringatomen waarvan er tenminste twee koolstofato-20 men zijn. De enige beperking aan de keuze van het primaire amine, behalve de afwezigheid van functionele groepen die niet verenigbaar zijn met de reactieomstandigheden, is dat het aminostikstofatoom gebonden is aan een koolstof at oom dat tenminste lln waterstofatoom en minder dan twee arylgroepen draagt. Een anhydrische vloeibare organische verbinding 25 wordt als reaetiemedium gebruikt en elk materiaal dat aan deze eis voldoet kan worden gebruikt zolang het met de reactieomstandigheden verenigbaar is, en niet op schadelijke wijze aan de reactie deelneemt. Een overmaat van het primaire aminereactant op moleculaire basis wordt in het algemeen toegepast. De reactietemperatuur in het gebied van ongeveer 30 -15°C tot +50°C heeft de voorkeur. Het uit deze reactie resulterende produkt is een 7-gesubstitueer! amino-9a-methoxymitosaan, nl. een mito-mycine C-derivaat dat een substituent zoals gedefinieerd voor R^ op de 7-aminogroep draagt. Van dergelijke verbindingen is bekend dat ze een aanzienlijke mate van antitumorwerkzaamheid in de proefdieren bezitten.

6 35 Enkele primaire aminen, aangeduid door de formule R ÏÏH^, zijn 8301949 - 1U - niet in staat gebleken om de 7-amidinogroep volgens de in de voorgaande alinea beschreven werkwijze te verwijderen. R^ is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, aralkyl, of een heteroalicyclische groep met U - 18 koolstofatomen waarin het koolstöfatoom dat de aminogroep draagt, een 5 tertiair koolstofatoom of een secundair koolstofatoom met twee aryl-groepen is. Bepaalde andere zwakbasische alifatische aminen zoals tri-fluoroëthylamine, slagen er eveneens niet in om de 7-amidinogroep te verwijderen. Deze aminen zijn bruikbaar voor het omzetten van een verbinding met formule 1, waarin zowel A als B de genoemde amidinogroep 10 met formule 2 voorstelt, in een verbinding met formule 1 waarin Aldeze amidinogroep voorstelt. Deze aminen hebben, hoewel ze het vermogen om de 7-amidinogroep te verwijderen missen, niettemin het vermogen om de met B aangeduide amidinogroep te splitsen tot HHg waardoor de carbamido-functie wordt verkregen die karakteristiek is voor de niet gesubstitu-15 eerde mitosanen. Het amine zelf kan als reactiemedium dienst doen of kan een oplosmiddelsysteem zoals gedefinieerd in de voorgaande alinea worden toegepast. Deze werkwijze wordt bij voorkeur uitgevoerd in het temperatuurgebied van 20 - 6o°C.

Beschrijving van specifieke uitvoeringsvormen: 20 Smeltpunten werden gemeten met een Thomas-Hoover capillair smelt- puntapparaat en zijn niet gecorrigeerd. Temperaturen zijn uitgedrukt in °C. Protonen kernmagnetische resonantiespectra (HMR) werden opgenomen op een Varian XL1QQ spectrometer in pyridine-d^ tenzij anders is aangegeven. Infraroodspectra (IR) werden verkregen met een Beekman k2b0 spec-25 trofotometer en het monster werd met kaliumbromide gecomprimeerd tot een pil. De IR-cijfers zijn \T ^ in cm” . De UV-zichtbaarspectra werden opgenomen op een Varian-Cary 219 spectrofotometer.

Dunnelaagchromatografie (tic) werd uitgevoerd op 0,25 mm voorbeklede silicagelplaten onder toepassing van UV-licht als middel om de re-30 sultaten zichtbaar te maken. Flitschromatografie werd uitgevoerd met silica Woelm (32 - 63 ym). Oplosmiddelen werden onder verminderde druk en beneden 50°C verdampt.

Voorbeeld I Verbinding A

3 5 7-Γ (dimethylamino )met hyleen_7 amino-ff °- (dimethylamino) -met hy- leen-9a-methoxymitosaan.

8301949 - 15 -

Verbinding B

Ί-£ ( dimethylamino )methyleen_7amino-N - (dimethylamino) -methy-1a leen-N -formy1-9 a-methoxymit o s aan.

(Zie schema C van het formuleblad.) 5 Aan een suspensie van 500 mg (1,50 mM) mitomycine C in 25 cm^

o O

chloroform werd. in totaal 9,6 cm-3 (2,4 cnr porties na 0, 18, 21 en 23 uren) Ν,Ν-dimethylformamidedimethylacetaal toegevoegd en de suspensie werd gedurende 41 uren bij ongeveer 50°C geroerd. Na verdamping van het oplosmiddel en overmaat reagens onder verminderde druk, werd een 10 domkergroen residu verkregen; tic (methyleenchloride/methanol 20 : 1) toonde de afwezigheid van mitomycine C en de aanwezigheid van twee nieuwe groene componenten (Hf = 0,16 en 0,22) aan. De hoofdcomponent (Rf = 0,16) werd door flits-chromatografie geïsoleerd, gebruikmakend van methyleenchloride/methanol 20 : 1 als eluens, als een groene vaste 15· stof (340 mg, 51,5%), die na oplossen in diëthylether gevolgd door een toevoeging van hexaan, verbinding A, als een donkergroen amorf poeder gaf.

NMR (pyridine d,_, é)i 2,18 (s, 3H), 2,70 (bs, 1H), 2,76 (s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,86 (s, 6h), 3,22 (s, 3H), 3,30 (bs, 1ïï), 3,60 (d, J = 12 Hz), 20 4,12 (dd, 1H, J = 10, 4 Hz), 4,13 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,90 (bs, 1H), 5,10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,52 (dd, 1H, J = 10, 4 Hz), 7,85 (s, 1H), 8,64 (s, 1H).

IR (K3r) V cm"1: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060. max UV (Ho0) λ nm: 390 en 244.

2 ' max 25 Analyse: berekend voor C C 56,71» H 6,08, N 18,90$; 21 2o o 5 gevonden : C 56,20, H 6,28, N 17,88%.

De ondergeschikte component (Hf = 0,22), geïsoleerd (180 mg, 25,35$) 3 een amorfe vaste stof na precipitatie uit diethylether en 30 hexaan, werd geïdentificeerd als verbinding B.

3MR (pyridine S): 2,20 (s, 3ïï), 2,60 - 3,00 (3 singlets, 12 H), 3,2 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 4,04 (d, 1H, J = 4 Hz), 4,16 (dd, 1H, J = 12, 4 Hz), 4,6o (d, 1H, J = 13 Hz), 4,86 (t, 1H, J = 12 Hz), 4,90 (s, 1H), 5,48 (dd, 1H, J = 12, 4 Hz), 7,90 (s, 1H), 8,64 (s, 1Ξ), 9,06 (s, 35 1H).

830 1 9 4 9 - 16 - IE (KBr) Omax cm-1: 2^90, 2860, 1698, 1β30, 1600, 15^0, 1250, 1060.

UV (H20), frmgx nm: 390 en 2bb.

Analyse : berekend voor C22H28N6°6: C 55>89> H 5,93, N 17,78$; 5 gevonden : C 55,*H, H 5,96, N 16,99$.

Oplossingen van de verbindingen A en B in ethylacetaat of in N, CT-dimethylformamidedimethylacetaal toonden na staan gedurende meer dan 10 uren bij kamertemperatuur door tic aan, dat verbinding B (Rf = O, 22) werd omgezet in verbinding A (Rf = 0,16) waardoor een oplossing 10 werd verkregen die sterk verrijkt aan laatstgenoemde verbinding was.

De voorbeelden II - VII werden uitgevoerd volgens de in voorbeeld I beschreven methode, waarbij de onderstaand aangegeven modificaties werden aangebracht om verscheidene andere verbindingen volgens de onderhavige uitvinding te verkrijgen.

15 Voorbeeld II Verbinding C: 7-Γ (diïsopropylamino)methyleen_7-amino-N10-(diIsopropylamino)-methyleen-9a-methoxymitosaan.

Een suspensie van mitomycine C (200 mg, 0,6 mM) in N,R-di£so-

O

20 propylfofmamidediëthylacetaal (3 cm0) werd onder roeren gedurende 15 uren bij 53°C verwarmd. Het reactiemengsel werd in 50 cm8 water gego-ten en met 3 x 30 cm ethylacetaat geëxtraheerd. De verenigde organische extracten werden boven Na^SO^ gedroogd en verdampt, waarbij een donkergroene siroop werd verkregen, waarin tic (methyleenchloride/me-25 thanol 10 : 1) een groene hoofdcomponent bij Rf = 0,U3 aantoonde met sneller bewegende (Rf =0,^5 — 0,50) verontreinigingen. De hoofdcomponent C werd geïsoleerd als een donkergroene vaste stof (156 mg, U6,8$) door twee flits-chromatografieprccedures waarbij als elutieoplosmiddel methyleenchloride/methanol 20 : 1 werd gebruikt.

30 HMR (CDC13, £): 1,10 - 1,50 (5 singlets, 2Uh), 1,9^ (s, 3H), 2,78 (dd, 1H, J = b ,2 Hz), 3,05 (d, 1H, J = b Hz), 3,22 (s, 3H), 3,60 (m, 5H), 3,75 (dd, 1H, J = 10, k Hz), b,2b (d, 1H, J = 12 Hz), U,56 (t, 1H, J = 10 Hz), M8 (dd, 1H, J = 10,. 1+ Hz), 7,83 (s, 1H), 8,67 (s, 1H).

IR (KBr) <3 cm-1: 3320, 2990, 29b0, 1680, 1630, 1600, 1550, 1235, 35 1060.

8301949 - IT - UV (MeOH) ) am: 2k6 en 393.

Analyse: berekend voor C^H^ITgO^: C 62,55, H 7,91, N 15,10#; gevonden : C 62,03, H 7,00, N 14,60#.

5 Voorbeeld III Verbinding D: T-£ (dimet hylamino )methyleen_7 amino-H ^-( dimethylamino )methy-1 si leen-9a-methoxy-IT -methylmitosaan.

In dit voorbeeld werd porfiromycine (N1 a-methylmit any cine C), 10 gebruikt in een hoeveelheid van 130 mg, 0,37 mM, als uitgangsmateriaal in de reactie met 0,8 cm? (1,5 mM) N,ΙΤ-dimethylfomamidedimethylacetaal, 3 3 gebruikmakend van 10 cm chloroform en 2 cm methanol als reactieoplos-middel en een reactieperiode van 50 minuten bij 50°C, Verbinding D werd verkregen als een siroop na verdamping van het~reactieoplosmiddel; 15 zuivering geschiedde door flits-chromatografie met 20 g silicagel en methyleenchloride/methanol (20 : 1) als elutieoplosmiddel, HMR (pyridine d?, ): 2,22 (bs, UH), 2,28 (s, 3H), 2,70 (d, 1H, J * k

Ez), 2,80 (s ,3H), 2,84 (s, 3H), 2,90 (s, 6h), 3,20 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J = 2, 12 Hz), 4,10 (dd, 1H, J = 4, 11 Hz), 4,38 (d, 1H, J = 12 Hz), 20 4,92 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,96 (bs, 1H), 5,46 (dd, 1H, J = 4, 11 Hz), 7,36 (s, 1H), 8,70 (s, 1H).

Hf = 0,53- dunnelaagchromatografie met methyleenchloride/methanol (9:1).

IR (K3r) 0 cm"1: 2930, 1680, 1620, 15^5, T230, 1115.

UV (MeOH) > nm: 386 en 243. n max 25 Analyse: berekend voor C^H^HgO^ C 5T>6o> H é»55i N 18»33*» gevonden : C 57,11, H 6,11, N 17,99%· 10

Deze procedure gaf verbinding S, 7-amino-N -dimethylammomethy- 1SL · · leen-9a-methoxy-H -methylmitosaan als bijprodukt m een opbrengst van 30 30#, tic Rf = 0,40 (methyleenchloride/methanol 9 : 1).

NMR (pyridine, d?, &): 2,02 (s, 3H), 2,16 (dd, 1H, J = 2, 5 Hz), 2,25 (s, 3H), 2,66 (d, 1H, J = 5 Hz), 2,76 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J = 2, 12 Hz), 4,08 (dd, 1Ξ, J = 4, 10 Hz), 4,50 (d, 1H, J * 10 Hz), 14-,90 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,05 (bs), 5,43 (dd, 1H, J =4, 35 10 Hz), 3,70 (s, 1H).

8301949 - 18 - IR (KBr) ·? max cm 3l*30, 3330, 3270, 29^0, 2960, 1690, 1625, 1553, 1230, 1125.

UV (MeOH) \ nm: 358, 2bk en 216.

Analyse: 5 berekend voor C^Hg^O^ï C 56,53, H 6,20, N 17,38$; gevonden : C 5^,68, H 6,13, N 16,59$.

Voorbeeld IV Verbinding E: 9 a-methoxy-7 -£ (1 τ piperidinylamino )methyleen_7amino-ir"'0-(1 -pipe-10 ridiny]methyleen)mitosaan.

O

Men liet 3 cm N- (diëthoxymethyl)piperidine en 200 mg mitomycine C bij 60°C gedurende 2,5 uren reageren in een oplossing van 3 cm^ chloroform. Het produkt werd verkregen in een opbrengst van 27,6$, tic Rf = 0,20 (methyleenchloride/methanol 20 : 1).

15 ÏÏMR (pyridine d,-,<f): 1,38 (bs, 12H), 2,20 (s, 3H), 2,80 (bs, 1H), 3,2k (s, 3H), 3,00 - 3,1*0 (m, 5H), 3,1*0 - 3,80 (m, 5H), U.13 (dd, 1H, J = 10, 1* Hz), 1*,1*5 (d, 1H, J = 12 Hz), 1*,90 (bs, 2H), 5,12 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,56 (dd, 1H, J = 10 Hz), 7,87 (s, 1H), 8,70 (s, 1H).

IR (KBr) 0 cm”1: 3300, 2950, 2870, 168Ο, 1630, 1610, 1550, 1200, 20 1070.

.UV (H90) ^ nm: 39^* en 21*6.

c. max

Analyse: berekend voor C^H^ÏÏgO^ C 61,79, H 6,87, N 16,02$; gevonden : C 61901, H 6,85, H 15,3l*$.

1a 25 Het H -formylderivaat van de bovenvermelde stof, de verbinding G H"*a-formyl-9a-met hoxy-7-/* (1 -piperidinylamino)methyleen_7amino-N^- (1-piperidinylmethyleen)mitosaan werd verkregen als hoofdcomponent in een opbrengst van 1*3$, tic Rf = 0,25 (methyleenchloride/methanol 20 : 1).

MMR (pyridine d^,£): 1,38 (bs, 12H), 2,23 (s, 3H), 3,00 - 3,1*0 (m, 1*H), 30 3,23 (s, 3H), 3,1*0 - 3,90 (m, 6h), U,07 (d, 1H, J = 1* Hz), I*,18 (dd, 1H, J = 11, 1* Hz), 1*,63 (d, 1H), 1+ ,90 (t, 1H, J = 11 Hz), l*,9l* (bs, 1H), 5,51* (dd, 1H, J = 11,. 1* Hz), 7,91* (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,08 (s, 1H).

IR (KBr) d ^ cm-1: 2l*90, 2860, 1698, 1630, 1600, 15^0, 1250, 1060. msjc UV (H90) V nm: 39l* en 2U7.

d. · max _ 35 Analyse: 8301949 - 19 - berekend voor c28^36^6^61 C 2 6,52, ff 15,21#; gevonden : C 59,99, H 6,17, ff 15,07#.

Voorbeeld V Verbinding 5: 5 9a-methoxy-7-/" (1-morfolino)methyleen_7amino-ff -(1-morfolino- methyleenmitosaan.

Een geroerde suspensie van 200 mg, 0,6 mM, mitomycine G in 10

O O

cnr chloroform en k cnr N-diëthoxymethylmorfoline verd gedurende k2 uren op ongeveer 53°G verwarmd. Eet reactiemengsel werd onder hoog va-10 cuum tot een siroop geconcentreerd. Er verd een ruwe flits-chromatogra-fiescheiding (methyleenchloride/methanol 25 : 1) uitgevoerd om de groen gekleurde componenten van de overmaat reagentia te isoleren. De , . 3 gecombineerde groene componenten werden opgelost m 20 cm ethylace- 3 taat, en met 3 x 20 cm water gewassen. De gecombineerde wasvloeistof-15 fen werden opnieuw met 3 x 15 cm^ ethylacetaat geëxtraheerd. Alle ethyl-acetaatfracties werden gecombineerd, boven Ha^SO^ gedroogd en tot een donkergroene siroop verdampt, waarvan tic (methyleenchloride/methanol 10 : 1) een aparte groene component bij Rf = 0,33 liet zien met verscheidene groene verontreinigingen (Rf = 0,35 - 0,^0). ffa flits-chroma-20 tografie werd de component bij Ef 0,33 geïsoleerd (130 mg, 56,8#) als een donkergroene amorfe vaste stof, die gekarakteriseerd werd als verbinding H.

mm (CDC13, £): 1,91 (s, 3H), 2,80 (bs, 1H), 3,13 (d, 1H, J - 2 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,30 - 3,9^ (m, 18 H), ^,20 (d, 1H, J - 12 Hz), U.UO (bs, 25 1H), k,5k (t, 1H, J * 10 Hz), k,88 (dd, 1H, J - 10 Hz, k Hz), 7,7^ (s, 1H), 8,51 (s, 1H).

IE(X3r) cm"1: 3300 , 2970 , 2920, 1680, 1625, 1550, 1235, 1070.

nax ÜV (MeQE) % nm: 386 en 2kk.

/l max

Analyse: 30 berekend voor C^H^NgO^: C 56,78, Η 6,θ6, II 15,90#; gevonden : C 53,07, H 6,03, II 15,37#.

Voorbeeld VI Verbinding i: 7-amino-H1 ^-dimethylaminomethyleen-9 a-me t hoxymit o s aan.

35 200 mg, 0,6 mM, mitomycine C werd opgelost in 10 cm^ chlorofoim 8301949 - 20 -

o · O

en 2 cur methanol, er werd 0,64 cm , 4,8 mM, N ,N-dimethylf ormamidedime-tbylacetaal toegevoegd, en de oplossing werd gedurende 50 minuten bij ongeveer 50°C geroerd. Dunnelaagchromatografie (methyleenchloride/me-thanol 90 : 10) liet een sporenhoeveelheid van niet gereageerd hebbend 5 mitomycine C (Rf = 0,22) alsmede twee nieuwe componenten (Rf = 0,42 resp. 0,33) zien. De oplossing werd onder verminderde druk tot een siroop geconcentreerd, die aan flits-ehromatografie werd onderworpen (25 g silicagel) met methyleenchloride/methanol (20 : 1) als elutie-oplosmiddel.

10 De snellere component (Rf = 0,42) werd geïsoleerd als een groe ne amorfe vaste stof (60 mg, 22,5$) en geïdentificeerd door zijn KMR-spectrum (pyridine d^) als verbinding A.

De blauwe hoofdcomponent (Rf = 0,33) werd geïsoleerd als een amorfe vaste stof (l48 mg, 63,3$) en gekarakteriseerd als verbinding I. 15 Men verkreeg een analytisch monster door precipitatie uit methyleenchlo-ride en n-pentaan, RMR (pyridine d^,f): 2,02 (s, 3Ξ), 2,76 (bs, 4h), 2,86 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 3,28 (d, 1H, J = 4 Hz), 3,62 (dd, 1H, J = 2, 13 Hz), 3,94 (bs), 4,14 (dd, 1H, J = 4, 12 Hz), 4,56 (d, 1H, J = 13 Hz), 5,12 (t, 1H, J = 20 10 Hz), 5,52 (dd, 1H, J - 4, 10 Hz).

IR (KBr) 9 cm"1: 3430, 3320, 3280, 2930, 1675, 1615, 1650, 1230, max 1115.

UV (H_0) λ nm: 364, 244 en 219.

c* m3*x Analyse: 25 berekend voor C 55,48, H5,91, N 17,98$; gevonden : C 54,70, H 6,14, N 17,95$.

Voorbeeld VII Verbinding J: . 10 .

7,9a-dimethoxy-H -dimethylaminomethyleenmitosaan.

30 In plaats van het in voorbeeld I gebruikte mitomycine C werd 170 mg mitomycine A gebruikt, dat men met 0,6 cm^ H,H-dimethylformamide-dimethylacetaal liet reageren in een chloroform/methanol (10 : 1) oplossing, en wel gedurende 1 uur bij 50°C. Het gewenste produkt werd in een opbrengst van 48$ verkregen, tic Rf = 0,50 (methyleenchloride/me-35 thanol 9 : 1).

8301949 - 21 - HMR (pyridine d^,£): 1,83 (s, 3H), 2,76 (bs, if-iï), 2,86 (s, 3Ξ), 3,22 (s, 3H), 3,28 (d, 1H), 3,56 (dd, 1H, J =* 2, 13 Hz), k302 (s, 3H), 4,10 (dd, 1H, J - 4, 10 Hz), 4,24 (d, J = 13 Hz), 5,10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,50 (dd, 1Ξ, J * 4, 10 Hz), 8,67 (s, 1H).

5 IR (KBr) P ^ cm“1: 3300, 2930, 1675. 1655, 1625, 1500, 1235, 1120. max UV (H20) ^max nm: 530 , 316 en 244.

Analyse: berekend voor C 56,39, H 5,9^, H 13,85?; gevonden : C 56,51, H 5,92, N 13,71?.

1a 10 Het N -formylderivaat van verbinding J werd verkregen als ver binding K, 7,9a-dimethoxy-Ii1^-dimethylananomethyleen-li^a-fonnylaiito-saan in een opbrengst van 16,5?, tic Rf s 0,61 (methyleenchloride/metha-nol 9 : 1).

HMR (pyridine d5, <f ): 1,88 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 2,85 (a, 3H), 3,5¾ 15 (d, 1H), 3,62 (bs, 1H), 4,05 (β, 3H), 4,05 (ba, 1H), 4,14 (dd, 1H, J = 4, 12 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 13 Hz), 4,86 (t, 1H, J * 12 Hz), 5,42 (dd, 1H, J = it, 12 Hz), 8,66 (s, 1H), 9,08 (s, TH).'

Voorbeeld VIII

/ --ΙΓ J··^—^

Verbindingslij 20 7- (dimethylaminomethyleen) amino-9a-methoxymitosaan.

3

Aan 600 mg, 1,35 mM, van verbinding A, opgelost in 10 cm- metha-o nol, werd 2,2 cm , 10,8 mM, aminodifenylmethaan toegevoegd en de resulterende oplossing werd gedurende 4 uren bij 54°C geroerd. Het voortschrijden van de reactie werd door tic (methyleenchloride/methanol 25 90 : 10) gevolgd. Aan het eind van de 4 uren was het uitgangsmateriaal (Rf = 0,35) verdwenen en was in de plaats daarvan een overheersende nieuwe groene zone (Rf = 0,29) verschenen. De oplossing werd onder verminderde druk geconcentreerd en de resulterende siroop werd aan flits-chromatografie onderworpen (25 g silicagel) gebruikmakend van methy-30 leenchloride/methanol 20 : 1 als eluens, De fracties die de groene component (Rf = 0,29) bevatten, werden verzameld, gedroogd boven HagSO^ en geconcentreerd. De verbinding L werd verkregen als een amorfe vaste stof (215 mg, 41?).

HMR (pyridine d,,^): 2,18 (s, 3H), 2,70 (bs, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,88 35 (s, 3H), 3,08 (bs, 1E), 3,2¾ (s, 3H), 3,56 (bd, 1H, J = 12 Hz), 4,00 8301949 (dd, ih}9 k,kk (a, ih, j = 12 Hz), 5,06 (t, ih, j = 10 Hz), 5,56 (dd, 1H, J = 10, 1* Hz), T,5Ö (bs, 2H), 7,88 (s, 1ïï).

- 22 - IR (KBr) i> ^ cm”1: 3300 - 3^50, 2960 - 2910, 1715, 1620, 1535, 1050, ÏÏicUC " ÜV (Ho0) ) mav nm: 390 en 226. d max 5 Analyse: berekend voor C^H^N^: C 55,^8, H 5,91, H 17,98#; gevonden : C 5^,83, H 5,67, B 16,90#.

1a

Wanneer bet ïf -formylderivaat van verbinding A, d.w.z. verbin-aing B als uitgangsmateriaal werd gebruikt in plaats van verbinding A 10 in dit voorbeeld VIII, werd, indien als reactieomstandigheden kamertemperatuur en 20 uren werden gekozen, verbinding L op vrijwel dezelfde wijze en in vrijwel dezelfde opbrengst verkregen.

Voorbeeld IX Verbinding M: 15 7- (dimethylaminomethyleen) amino-9a-methoxy-IT1 a-methylmitosaan.

» O

Men loste 1 g (2,18 mM) van verbinding D op in 20 cm*5 methanol,

O

voegde 3,5 cm, 17,18 mM, aminodifenylmethaan toe, en roerde de verkregen oplossing gedurende 5 uren bij kamertemperatuur en gedurende 5 uren bij U0°C. Dunnelaagchromatografie (CHgClg/MeOH 90 : 10) van bet 20 reactiemengsel toonde aan dat vrijwel al het uitgangsmateriaal (Rf = 0,55) was verbruikt en dat een overheersende nieuwe groene zone (Rf = 0 ,U8) was verschenen. Soortgelijk opwerken als beschreven in voorbeeld VIII gaf de verbinding M als een amorfe vaste stof (350 mg). Verdere zuivering werd gerealiseerd door flits-chromatografie (7 g silicagel) 25 gebruikmakend van CHgClg/MeOH (250 cm^, 96A v/v) en precipitatie van de verkregen vaste stof (Rf = 0,^8) uit 5 cm^ methyleenchloride en 50 cm^ hexaan, waarbij analytisch zuivere verbinding M (3A mg, 35,7#) als een vaste stof werd verkregen.

ÏÏMR (CDCl3,i): 1,93 (a, 3H), 2,26 (bs, 1H), 2,26 (s, 3H), 3,06 (s, 30 3H), 3,08 (bs, 1Ξ), 3,10 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 3A6 (bd, 1.H, J ** 12, 1 Hz), 3,58 (dd, 1H, J = h, 10 Hz), U,17 (d, 1H, J = 12 Hz), M8 (t, 1H, J = 10 Hz), h-,68 (m, 2H), kj6 (dd, 1H, J = U, 10 Hz), 7,72 (s, 1H).

IR (KBr) d cm"1: 3A0, 3350, 3190, 3020, 29^0, 2910, 1725, 1630, max 35 1550, 1055.

8301949 - 23 - UV (MeOïï) λ nm: 386 en 231.

Tna.y

Analyse: berekend voor C 56,53, H 6,20, N 17,36#; gevonden : C 53,90, H 5,13, N 15,8155.

5 Voorbeeld X Verbinding N: 7- (n-propyl) amino-9a-methoxymitos aan.

Men lost 330 mg, 0,7** mM, van verbinding A op in 10 cm^ anhydri-

O

sche methanol, en voegt daaraan 1,0 cm n-propylamine toe. Het reactle-10 mengsel verd gedurende 6 uren bij kamertemperatuur en gedurende 16 uren bij ongeveer 0 - k°C geroerd. Het oplosmiddel en overmaat reagens werden onder verminderde druk verdampt en het residu verd aan flits-ehroma-tografie onderworpen met silicagel als adsorbens. De blauwe component (Hf = 0,1*0), door elutie met methyleenchloride/methanol 30 : 1 verkre-15 gen, werd opnieuw uit methyleenchloride neergeslagen met hexaan om de verbinding N te verkrijgen als een amorf grijs poeder (125 mg, 1*1*, 5#) · HMR (pyridine d,., ƒ): 0,80: (t, 3H), 1,1*2 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,7l* (bs, 1H), 3,12 (bs, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,36 (ς, 2H), 3,60 (d, 1H, J = 12 Hz), 3,96 (dd, 1H, J = 11 Hz, 1* Hz), l*,5l* (d, 1H, J = 12 Hz), 5,00 20 (m, 3K), 5,36 (dd, 1H, J = 11, 1* Hz).

IH (KBr) t) cm"1: 31*1*0, 3300, 2960, 29^*0, 1715, 1630, 1600, 1550, max 1510, 1220, 1060.

UV (HpO) ^ d 2H2JC SU dfcfa 1

Analyse: 25 berekend voor C 57,1*0, Ξ 6,38, ΓΓ11*,38#; gevonden : C 57,28, Ξ 6,1*1, H 11*,08^.

Voorbeeld XI Verbinding 0: 7-(2-hydroxyethyl)-amino-9a-methoxymitos aan.

3 30 Men loste 330 mg, 0,7l* mM, van verbinding A op m 5 cm anhydri- O .

sche methanol en voegde 2 cm*1 ethanolamine toe. Men roerde het reactle-mengsel gedurende 2 uren bij kamertemperatuur, en verdunde vervolgens met 50 cm^ water en extraheerde met 5 x 60 cm^ ethylacetaat. De gecombineerde ethylacetaat extract en werden boven Ha^O^ gedroogd en geconcen-35 treerd tot een blauwig-paars residu, dat na kolomchrcmatografie met 10# ------ ----- » 8301949 - 2k - methanol in methyleenchloride en concentratie van de verzamelde fracties die de "blauwe verbinding bevatten, 105 mg (31%) van de verbinding 0 als een amorfe vaste stof gaf.

HMR (pyridine d^, ): 2,1¾ (s, 3H), 2,81 (bs, 1H), 3,18 (d, 1H, J = U

5 Hz), 3,2¾ (s, 3H), 3,65 (dd, 1H, J = 2* 12 Hz), 3,70 - b,20 (m, 5H), ¾,52 (d, 1H, J = 13 Hz), ^96 (t, 1H, J = 12 Hz), 7,38 (t, 1H).

IR (KBr) Ό cm"1: 3300 - 3500, 2930, 1710, 1630, 1600, 15to, 1510, max 1200, 1055.

UV (H-0) λ _ nm: 371 en 221.

2 max 10 Analyse: berekend voor C 53,92, H 5,82, H 1^80#; gevonden : C 51,30, H 5,88, N 1^80#.

Voorbeeld, XII Verbinding P: 15 1-C 2 -benzylthioëthyl_7 amino-9 a-methoxymitos aan.

3

Men loste 200 mg,/Q^5 mM, van verbinding A op in 2 cm methanol, voegde 0,5 cm^ S-benzyl-2-aminoëthaanthiol toe en roerde de oplossing gedurende 16 uren bij kamertemperatuur. Het na verdamping van het oplosmiddel bij verminderde druk verkregen residu werd aan flits-chromatogra-20 fie onderworpen ^0 g silicagel) gebruikmakend van 6# methanol/methy-leenchloride ^00 cm^) als eluens. De blauwe component (Rf ongeveer 0,5 in 10# MeOH/CHgClg) werd als een amorfe vaste stof (65 mg, 29,8#) geïsoleerd. Zijn spectraalgegevens (HMR, IR, UV en massaspectra) stemden overeen met de toegekende structuur.

25 Analyse/ berekend voor C^ÏÏ^H^S: C 59^9, H 5,82, N 11,56#; gevonden : C 59,72, H 5,9¾. N 11,08#.

Voorbeeld XIII

Bereiding van de verbinding met formule 19.

30 (A) Aan een oplossing van 1 mmol i s opropylformimi daathy dr o chloride in 3 2 cm dimethylformamide werd langzaam 2,1 mmol dilsopropylethyl-amine toegevoegd bij 0°G onder een stikstofatmosfeer. Aan de resulterende oplossing werd druppelsgewijze /3-trimethylsilylethylchloro-formiaat toegevoegd bij 0°C, De resulterende heldere oplossing werd 35 aangeduid als oplossing A.

8301949 - 25 -

O

(B) Een oplossing van 1 mmol mitomycine C in 5 cnr DMF werd toegevoegd . . . . 3 aan een suspensie van 1,5 mmol natrïumhy dr 1de m 3 car DMF. De oplossing verd gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur geroerd en tot -40 tot -50°C gekoeld, voordat oplossing A (zie boven) werd 5 toegevoegd. De oplossing werd gedurende 1 uur op -U0°C gehouden en daarna de gelegenheid gegeven cm op te warmen tot kamertemperatuur. Ha ongeveer 6 - 18 uren staan bij kamertemperatuur werd het reactiemengsel met CHgCl^ verdund en gefiltreerd. Het na verdamping van het filtraat verkregen vaste residu werd chromatografisch be-10 handeld over silicagel om de door amidino beschermde titelverbin ding met formule 19 te isoleren.

(C) De amidino beschermende groep van het voorgaande tussenprodukt werd verwijderd volgens de gepubliceerde procedure van Carpino en Tsao (J. Chem. Soc. Chem. Comm. 358 (19T8)) teneinde de niet gesub- 15 stitueerde amidinotitelverbinding te verkrijgen.

Voorbeeld XIV

Be bereiding van de verbinding met formule 20: (A) Aan een oplossing van 1 mmol isopr opylf omimi daathy dr ochloride in 2 cm^ DMF werd langzaam 21 mmol diïsopropylethylamine toegevoegd 20 bij 0°C onder een stikstofatmosfeer. Aan de resulterende oplossing werd bij 0°C methyljodide toegevoegd. De resulterende oplossing werd aangeduid als oplossing B.

(3) De procedure die in voorbeeld XÏIl(B) is beschreven, werd herhaald voor oplossing B in plaats van oplossing A, waarbij de titelverbin-25 ding met formule 20 werd verkregen.

Voorbeeld XV

(Zie sehema D op het formuleblad.}

Een 0,5 M oplossing van H,H-dimethylchloromethyleeniminiumchloride werd bereid door druppelsgewijze toevoeging van 1,57 g, 12,5 mmol, ox- 30 allylcnloride bij 0°C aan een oplossing van 915 mg, 12,5 mmol, DMF in 3 25 cm CHCl^, gevolgd door roeren bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten. Afzonderlijk werd een oplossing van 33^ mg, 1 mmol, mitomycine C in 5 cm-3 DMF toegevoegd aan een suspensie van 36 mg, 1,5 mmol, NaH in 3 cm^ DMF. De oplossing werd gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur 35 geroerd en tot -40 tot -50°£ gekoeld, waarna de bovenstaand vermelde 8301949 - 26 - o o p lossing van H,H-dimethylchloromethyleeniminiumchloride (3 cm , 1,5 mmol) werd toegevoegd. Een extra hoeveelheid HaH van 18 mg, 0,75 mmol, werd toegevoegd na 10 minuten roeren hij -1*0°C, De oplossing werd gedurende 1 uur op -1*0°C gehouden en daarna met CHgClg verdund en gefil-5 treerd. Het na verdamping van het filtraat verkregen residu werd chroma-tografisch behandeld door dunnelaagchromatografie op silicagel (10% CH^OH-CHgCl als eluens). Extractie van de belangrijkste groene band gaf 78 mg (1*3%)gebaseerd op het teruggewonnen mitomycine C) van een amorfe vaste stof waarvan het NMR-spectrum en tlc-gedrag identiek wa-10 ren met die van verbinding L zoals bereid in voorbeeld VIII. Extractie van de paarse band gaf 150 mg mitomycine C.

Voorbeeld XVI

De verbinding 7-( 1-methyl-2-(H)-pyridinylideen)amino-9a-methoxymtosaan met formule 21 (zie het op het formuleblad weergegeven schema E).

15 Aan een mengsel van 2l*2 mg, 0,725 mmol, mitomycine C en 1*3,5 mg, I, 81 mmol, NaH werden 1* cm^ DMF toegevoegd. Ha 15minuten roeren werd 370 mg, 1,1*5 mmol, 2-chloro-1-methylpyridiniumjodide bij kamertemperatuur toegevoegd, De oplossing werd gedurende 1,5 uur geroerd en daarna met ethylac'etaat (EtOAc) verdund en gefiltreerd. Het na verdamping van 20 het filtraat verkregen residu werd aan dunnelaagchromatografie onderworpen óp silicagel (5% CH^OH-CHgClg als eluens). Het ondergeschikte produkt (12 mg) was verbinding L (voorbeeld VIII), Het hoofdprodukt (75 mg) werd verder gezuiverd door silicageldunnelaagchromatografie ('10% CH^OH-CHgClg) waardoor 6 mg (2%) van de titelverbinding werd ver- . 25 kregen.

NMR (pyridine d^, <T): 2,11 (s, 3H), 2,76 (bs, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,1*9 (s, 3H), 3,63 (dd, 1H, J = 13, 1 Hz), 1*,01 (dd, 1H, J = II, 1* Hz), 1*,51 (d, 1H, J = 13 Hz), 5,10 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,1*3 (dd, 1H, J = 10, 1* Hz), 5,99 (dt, 1H, J = 9, 2 Hz), 6,09 (dd, 1H, J = 9, 30 1 Hz), 6,95 (dd, 1H, J = 9, 7, 2 Hz), 7,32 (dd, 1H, J = 7, 1 Hz).

Voorbeeld XVII

1-£ (methylami nomethyle en) ami no_j/-9 a-methoxymi tos aan met formule 22 (zie het op het formuleblad weergegeven schema F).

Men voegde 12 mg, 0,5 mmol, natriumhydride onder een stikstofat-35 mosfeer toe aan een oplossing van 167 mg, 0,5 mmol, mitomycine C in 2 8301949 -27- cm^. hexamethylfosforamide. Aan deze oplossing werd 19 mg, 0,25 mmol, N-methylformimidoylchloride toegevoegd, N.H.Bosshard en Ξ.Zollinger,

Helv. Chim. Acta, h2, 1659 (1959))· De oplossing werd gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur geroerd en daarna werden 6 mg, 0,25 mmol, 5 NaH en 9,5 mg, 0,13 mmol, N-methylformimidoylchloride toegevoegd. Na 6-12 uren roeren werd de oplossing met ethylacetaat verdund en gefiltreerd. Verdamping van bet oplosmiddel, gevolgd door chromatografische zuivering van het residu, gaf de titelverbinding.

Voorbeeld XVIII 10 Verbinding Q: 9a-methoxy-7- (1-morf olinomethyleen) aminomitosaan.

O

Aan 600 mg, /1,8 mM, mitomycine C gesuspendeerd in 30 cm chloroform

O

werd 12,5 cnr U-diëthoxymethylmorfoline toegevoegd en de resulterende suspensie werd gedurende hQ uren bij 58° C verwarmd. Na U8 uren toonde 15 tic aan (20$ MeOH in CHgClg) dat de reactie niet volledig was. De oplossing werd onder verminderde druk geconcentreerd, en aan de resulterende siroop werd 100 cm·^ water toegevoegd. Na 20 minuten roeren werd de donkergroene oplossing geëxtraheerd met 5 x 50 cm methyleenchlonde, en de gecombineerde extracten werden gedroogd en geconcentreerd tot 20 een siroop. Aan deze siroop, in 20 cm^ methanol, werd 6,5 cm^ aminodife-nylmethaan toegevoegd, en de verkregen oplossing werd gedurende 18 uren bij 30 - 35°C geroerd. Dunnelaagchromatografie (20$ MeOH in CHgClg) toonde een groene hoofdzone met een ondergeschikte langzamere paarse zone. De oplossing werd onder verminderde druk geconcentreerd, en de 25 resulterende siroop werd door de gebruikelijke flits-chromatografie-techniek gezuiverd waarbij de titelverbinding werd verkregen als een donkergroene amorfe vaste stof (75 mg, 10$). Er werd een analytisch monster verkregen door de stof neer te slaan uit een methyleenchloride-oplossing met behulp van n-hexaan.

30 mm (pyridine, d^,S): 2 ,l6 (s, 3ïï), 2,7 6 (dd, 1H, J = 5 en 1 Hz), 3,16 (d, 1H, J = 5 Hz), 3,2k (s, 3Ξ), 3,28 - 3,80 (m, 10H), k,02 (dd, 1H, J = 10 en ^ Hz), U,it0 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,06 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,½ (dd, 1H, J = 10 en If. Hz), 7,90 (s, 1H).

IH (SBr) i) cm-1: 3360 , 3280 , 2960 , 2920, 1720, 1600, 1520, 1230, 35 1050.

8301949 - 28 - UV (MeOH) ^ : 381* en 23¾. .

m8X

Analyse: berekend voor C^H^H^Og: C 55,61*, H 5,80, H 16,23$; gevonden : C 55,07, H 5»55, H 15,88$.

5 Voorbeeld XIX Verbinding R: 7-( 1-pyrrolidinylmethyleen)amino-9a-methoxymitosaan (zie het op het formuleblad weergegeven schema G)*

Men bereidde een 0,5 molaire oplossing van pyrrolidinylchloromethy- 10 leeniminiumchloride door druppelsgewijze toevoeging van 3,17 g, 25 mmol, oxalylchloride bij 0°C aan een oplossing van 2,1*8 g, 25 mmol, 1-formyl-• . 3 pyrrolidine in 50 cm CHCl^, gevolgd door 30 minuten roeren bij kamertemperatuur» Afzonderlijk werd 2h mg, 1 mmol, natriumhydride onder stikstofatmosfeer toegevoegd aan een oplossing van 33¾ mg, 1 mmol, . . . 3 . .

15 mitomycme Cm3 cm 1 -formylpyrrolidme. Ha 20 minuten roeren bij kamertemperatuur werd de oplossing gekoeld tot -1*0 a -50°C, en de bovenstaand bereide iminiumzoutoplossing (1 cm^, 0,5 mmol) werd toegevoegd. Aan dit mengsel werd afwisselend met tussenpozen van 10 minuten 12 mg q (0,5 mmol) HaH, 0,5 cmJ (0,25 mmol) van de iminiumzoutoplossing, 6 mg 20 (0,25 mmol) HaH, 0,25 cm^ (0,125 mmol) van de iminiumzoutoplossing, en tenslotte 3 mg (0,125 mmol) HaH, en 0,125 cm^ (0,063 mmol) van de iminiumzoutoplossing toegevoegd. Ha 30 minuten roeren bij -30°C werd het mengsel tot kamertemperatuur opgewarmd. Het werd verdund met ethylace-taat en het anorganische zout werd afgefiltreerd. Het na verdamping 25 van het oplosmiddel verkregen residu werd aan dunnelaagchromatografie onderworpen op silicagel (10$ CH OH-CHgClg). Extractie van de groene band gaf 120 mg (15# opbrengst) van de tit elverbinding: HMR (pyridine d^,S) 1,58 (m, 1*H), 2,29 (s, 3H), 2,73 (m, 1ïï), 3,06 -3,50 (m, 8h) , 3,59 (dd, 1H, J = 13 Hz, 1 Hz), i* ,03 (dd, 1H, J = 10, I* 30 Hz), 1*s 1+1* (d, 1H, J = 12 Hz), 5,05 (t, 1H, J = 10 Hz), 5,1*5 (dd, 1H, J = 10, i* Hz), 8,0i* (s, 1H), IR (KBr) i) max cm"1: 31*20, 3280, 2960 - 2870, 1715, 1625, 1560, 1300, 1055.

Voorbeeld XX

35 7-/”H-methyl-H-(methylamino)methyl_7amino-9a-methoxymitosaan met formule 23.

8301949 - 29 - (Zie het op het formuleblad weergegeven schema ,M.)

De procedure van voorbeeld XVII werd herhaald met vervanging van mitomycine C door een gelijke moleculaire hoeveelheid van 9a-metho-xy-7-(N-methylamino)mitos aan (Matsui et al., The Journal of Anti-5 biotics, ΧΧΓ, 189 - 198 (1968)).

Voorbeeld XXI Verbinding S: 7-Γ 1-(dimethylamino)ethylideen_7amino-N -£ 1-(dimethylamino)ethyli-deen_7-9a-methoxymitosaan (zie formule op het formuleblad) 10 Sen suspensie van 600 mg (1,79 mM) mitomycine C in 2 cm-3 metha- nol werd bereid en behandeld met 3 cm H,H-dimethylaceetamidedimethyl-acetaal. De suspensie werd onder roeren gedurende 2 uren op 75 - 80°C verwarmd. In dit stadium toonde tic (CH^Clg/methanol 10 : 1) dat vrijwel alle mitomycine C door de reactie was verbruikt. Het produkt ver-15 scheen als een groene zone. Het oplosmiddel en de vluchtige materialen werden verwijderd door het reactiemengsel droog te dampen onder verminderde druk waarbij een siroop werd verkregen die in methyleenchloride werd opgelost en op een silicagelkolom werd gebracht (U0 g silicagel),

O

waarna de kolom werd ontwikkeld met 1* methanol in 200 cnr methyleen-

O

20 chloride, 2% methanol in 200 cm methyleenchloride, en 5# methanol in

O

UOO cm methyleenchloride. De fracties die de groene zone bevatten, welke het produkt voorstelde, werden gecombineerd en geconcentreerd tot een amorfe vaste stof die 110 mg woog (13# opbrengst). Dit materi-• 3 aal werd opgelost m 2 cm aceton en uit de oplossing neergeslagen 25 door de toevoeging van hexaan. Het produkt werd door filtratie verzameld.

Analyse: berekend voor ^3^32^6^51 c 58,U6, H 6,83, N 17,79#; gevonden : C 58,89, H 6,89, N 17,6U#.

30 UV (MeOH) λ v nm: 235, 261;.

IR (KBr) 9 cm" : 3^0, 3295, 2925, 1770, 1660, 1620, 1580, 1550,

ZE2JC

1300, 1055.

Het HMR-spectrum in pyridine d^ komt overeen met de structuur van de titelverbinding.

8301949 - 30 -

Voorbeeld XXII Verbinding T: 7-/" 1-(dimethylamino)ethylideenamino_7-9a-methoxymitosaan met formule 5 Een oplossing van 100 mg (0,21 mM) van verbinding S in 2 cm^ chloroform werd toegevoegd aan 2 cmJ amxnodifenylmethaan en de oplossing werd gedurende uren op ongeveer 55 - 6ö°C verwarmd. In dit stadium bleven sporenhoeveelheden van verbinding S in het reactiemengsel achter, maar dit werd niettemin geconcentreerd en het residu chromato-10 grafisch behandeld over een neutraal alumina gebruikmakend van gradient elutie, beginnende met methyleenchloride en eindigende met methanol/ methyleenchloride. 2,5 : 1. De groene hoofdzone werd geïsoleerd als een amorfe groene vaste stof met een gewicht van 25 mg (29,opbrengst). Dit materiaal werd gezuiverd door oplossen in aceton en toevoegen van 15 hexaan aan de acetonoplossing totdat precipitatie optrad. Het produkt werd door filtratie verzameld en gedroogd.

Analyse: berekend voor C^H^ffgCy 0 56,58, H 6,20, ff 17,37#; gevonden : C 55,71, H 6,3^·, ff 15,23#.

20 UV (Ho0) 3 nm: 37U, 230 (sh.) d. max 1 IE (KBr) } cm : 3^20, 3350, 3280, 2920, 1710, 1610, 15U0, 1300, max 1050.

Het % NMR-speet rum in pyridine d^ is identiek met de structuur. Voorbeeld XXIII 25 Verbinding U: 7-/7 (1-methyl-2-pyrrolidinylideen)amino_7-ff ^^-Γ (1-methyl-2-pyrrolidi-nylideen) amino_7-9a-methoxymitosaan met formule 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine (H.Silingsfeld et al. Angew. Chem., 72, 836 (i960)), 1,5 g (10,3 mM) en 280 mg mitomycine C (0,3^ 30 mM) in 20 cm^ methanol werd gedurende 5 uren op 55°C verhit. Het reac-tiemengsel werd door dunnelaagchrcmatografie onderzocht op een alumina-plaat met methyleenchloride /methanol 97 : 3 als oplosmiddel. Tic liet een groene hoofdvlek zien die het produkt voorstelde en een blauwe ondergeschikte vlek zien die mitomycine C-uitgangsmateriaa! voorstelde. Het 35 oplosmiddel werd door destillatie onder verminderde druk bij ^0°C ver- 8301949 3 - 31 - wijderd en het residu werd opgelost in methyleenchloride en op een h,5 cm kolom getracht die 150 g alumina bevatte. ELutie geschiedde met 50 cm^ methyleenchloride, gevolgd door 600 αηβ 1%'s methanol in methyleenchloride. Grote verontreinigingen werden verwijderd, maar er wer-5 den geen zuivere fracties geïsoleerd. Het gecombineerde eluaat werd door destillatie bij 20°C geconcentreerd tot een olieachtig residu dat kennelijk wat 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine bevatte. Dit materiaal werd opnieuw chromatografisch behandeld op een aluminakolom (25 g alu-

O O

mina) met 200 cm-3 methyleenchloride, gevolgd door 100 cm3 1%'s methanol 10 in methyleenchloride. Dit leidde tot verwijdering van het 2,2-dimethoxy- 1-dimethylpyrrolidine en leidde tot een aantal fracties die ondergeschikte verontreinigingen bevatten en verschelde zuivere fracties, bevestigd door tic,(één groene vlek) die het gewenste produkt voorstel-den, opbrengst 53 mg.

15 Analyse: berekend voor ,85^0: C 58,66, H 6,6h, _IT l6,k2#; gevonden : C 58,63, H 6,16, N 16,50£.

UV (MeOH) ) ^ nm: 35l, 239.

IR (KBr)D cm"1: 3300, 3220, 29l0, 166Ο, 1620, 1550, 1290, 1055. max 20 Het % HMR-spectrum in pyridine dj komt overeen met de struc tuur van de titelverbinding.

Voorbeeld XXIV

J-Γ(1-methyl-2-pyrrolidinyiideen)amino_7-9a-methoxymitosaan met formule 2l.

25 Zen oplossing van 80 mg (0,16 mM) van verbinding U en 0,18 cm^ n-butylamine in 15 cm^ chloroform werd onder terugyloeikoeling gekookt gedurende 18 uren. Tic (methanol/methyleenchloride, 2% op alumina) toonde een groene hoofdvlek en een kleine leidende blauwe vlek en een kleine volgende rode vlek die alle het uitgangsmateriaal volgden. De 30 reactieoplossing werd op een kolom gebracht die 50 g alumina bevatte, en er werd geëlueerd met 200 cm3 1% methanol in methyleenchloride gevolgd door lOO cm^ 2% methanol in methyleenchloride. De fracties die een enkele groene hoofdcomponent bevatten, zoals aangetoond door tic, werden gecombineerd en geconcentreerd tot een residu van het gewenste . ' 35 produkt dat 2l mg woog.

8301949 - 32 - MMR (pyridine, 1,72 (q, 2H), 2,0½ (s, 3H), 2,16 (q, 2Ξ), 2,72 fas, 1H), 2,8½ (s, 3H), 3,12 (m, 3H), 3,2½ (s, 3H), 3,βθ (dd, 1H, J = 2 Hz), ½,00 (dd, 1H, J = 12, 6 Hz), ½,½0 (d, 1Ξ, J = 1½ Hz), 5,0½ (t, 1H, J = 1½ Hz), 5,38 (dd, 1H, J = 12, 6 Hz), 7fa8 fas, 2H).

5 Voorbeeld XXV Verbinding V: 7-/" (metho:xyamino)methyleen_7amino-9a-meth.oxymitosaan met formule

Men bereidde een oplossing van 660 mg (1,7 mM) van verbinding L in 10 cm^ mèthanol, en voegde daaraan 170 mg (2,0 mM) methoxyaminehydro-10 chloride toe. De oplossing werd gedurende 3 uren bij 10°C en gedurende 2 uren bij kamertemperatuur geroerd. Tic liet nog slechts een spoor van niet gereageerd hebbende verbinding L zien. Een zwart neerslag vormde zich bij staan, welk neerslag werd verzameld en met aceton werd gewassen, waarbij het gewenste produkt werd verkregen in een opbrengst 15 van 380 mg (51%)·

Analyse: berekend voor Ο^Η^Η,-Ο^: C 52,19, H 5fa0, R 17,90$; gevonden : C 51,6^ Ξ 5fa0, R 17,83$.

UV (MeOH) 3 nm: 376, 2½2 max ^ 20 IE (KBr) P . cm" : 3^0, 3250, 3^0, 2920, 1730, 16½5, 1615, 1560, max * fa50, 1320, 1050.

Het ^H RMR-spectrum in pyridine d^ komt overeen met de structuur van of de titelverbinding of zijn tautomeer bij C-7, d.i,

Η H

t

. 25 CHgOBT

Voorbeeld XiCVI '

Verbinding W: l-£ (benzyloxyamino)methyleen_7amino-9a-methoxymitosaan met formule

Men bereidde een oplossing van 100 mg (0,26 mM) van verbinding • 3 3 30 L, m 2 cnr methanol welke 0,5 cm tnethylamme bevatte, en voegde daaraan ½Q0 mg (2,5 mM) O-benzylhydroxylaminehydrochloride toe. Men liet de reactie gedurende 2,5 uren bij kamertemperatuur verlopen. Tic (CHgC^/methanol 10 : 1) toonde een oranj e-bruine hoofdzone voorafgaande aan de groene zone, welke laatstgenoemde correspondeerde met de ver-35 binding L, Het reactiemengsel werd geconcentreerd tot een residu dat 8301949 - 33 - aan flits-chromatografie over silicagel (20 g) werd onderworpen met CHgClg/methanol 20 : 1 als elutieoplosmiddel. De "bruine hoofdzone die het gewenste produkt vormde, werd verzameld als een amorfe vaste stof met een gewicht van 80 mg (65,6% opbrengst).

5 Analyse: berekend voor : C 59,10, H 5,35, H 14,97$; gevonden : C 58,43, Η 5,48, N 14,62$, m (MeOH) nm: 376 , 245 , 209.

IS (K3r) ΰ cm"1: 3460, 3300, 2945, 2920, 1745, 1720, 1570, 1275,

fll&X

10 1220, 1060.

Het 1H HMR-spectrum in pyridine d^ komt overeen met de structuur van of de titelverbinding of zijn tautomeer op C-7, d.i.

s^-s-{

CgH5Cls°N

15 Niet gereageerd hebbend uitgangsmateriaal, d.w.z. de verbinding L, met een gewicht van -10 mg werd teruggewonnen.

Voorbeeld XXVII Verbinding X: 7-( 1,3-dimethyl-2-imidazolinylideen)-9a-methoxymitosaan met formule

O

20 Men loste 0,34 g (1 mmol) mitomycine C op in 5 cm 1,3-dimethyl- 2-imidazolidon en voegde daaraan bij kamertemperatuur 0,1 g natriumhy-dride (50$ in olie, 2,08 mmol) toe. Het mengsel hield men gedurende 20 minuten op kamertemperatuur, en werd daarna afgekoeld in een ijszout-bad (-15°C). Het mengsel werd gedurende 10 minuten op deze temperatuur 25 gehouden en daarna werd daaraan 0,65 g (2 mmol) 2-chloro-1,3-dimethyl-4,5-dihydro-(3H)imidazoliminiumchloride toegevoégd. Het werd gedurende 1 uur op -15°C gehóuden en daarna verdund met ethylacetaat en chromato-grafisch behandeld op een aluminakolom. De kolom werd met methyleenchlo-ride gevolgd door methyleenchloride dat 2% v/v methanol bevatte, geëlu-30 eerd. 2en groengekleurde fractie werd verkregen die uit het gewenste produkt bestond, dat verder gezuiverd werd door chromatografie op alumina met methyleenchloride dat 10$ v/v methanol bevatte, opbrengst 20 mg (5%).

Analyse: 35 berekend voor c2oH26N6°5-1*H2°: 0 53,03, H 6,34, N 18,55$; gevonden : C 52,68, H6,21, N 18,15%.

8301949 - 3U - NMR (pyridine d^X): 2,32 (s, 3H), 2,1+7 ίβ, 3H), 2,59 (s, 3H), 2jk (m, 1H), 3,03 - 3,32 (m, 5H), 3,26 (s, 3Ξ), 3,66 (Μ, 1H, J - 12 Hz), 1+,02 (dd, 1H, J = 11, k Hz), 1+,75 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,09 (bt, 1H, J = 11 Hz), 5,lj.lt. (dd, 1H, J = 11, 1+ Hz).

5 IR (KBr) 3^00, 3280, 2930, 1700, 1610, 11+80, 1330, 1055 cm-1.

UV (MeOH) ^ 600, 375, 252 (sh), 222 urn.

max

Voorbeeld XXVIII Verbinding Y: 7-/* (1,3-dimethyltetrahydropyrimidinylideen)amino-9a-methoxymitosaan 10 met formule

Men voegde 200 mg, k,2 mmol, van bet natriumhydride (50#'s olie- dispersie) onder stikstof toe aan een oplossing van 680 mg, 2 mmol, mitomycine C in 8 cm^ 1,3-dimethyl-3,^,5,6-tetrahydro( 1H,3H)-2-pyrimidi- non. Het mengsel werd gedurende 20 minuten op kamertemperatuur gehou- 15 den en daarna tot -25°C gekoeld. Men voegde daaraan 0,73 g (1+ mmol) 2-chloro-1,3-dimethy 1-2,3, ^5-tetrahydro-pyrimidiniumehlori de toe en hield het mengsel vervolgens gedurende 3 uren op -25°C. Het werd dear's na verdund met ethylacetaat en 2 cm methanol. Het mengsel werd zonder ’verdere behandeling op een droge aluminachromat o grafi ekolom gebracht 20 en eerst met methyleenchloride en vervolgens met 2% v/v methanol/methy-leenchloride geëlueerd waarbij het gewenste produkt werd verkregen in een opbrengst van 0,35 g (39,5# opbrengst), Smp. 138 - 11+0°C.

Analyse: berekend voor C^H^NgO^.HgO: C 5^,65, H 6,33, H 18,21#; 25 gevonden : C 5^,78, H 6,18, N 18,21#j MMR (ipyridine d^,i ): 1,80 (m, 2H), 2,1+2 (s, 3H) , 2,52 (s, 3H), 2,61+ (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 2,90 - 3,30 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,7^ (d, 1H, J = 12 Hz), U,05 (dd, 1H, J = 11, b Hz), 1+,97 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,09 (t, 1H, J - 11 Hz), 5,1+1 (dd, 1H, J = 11, 1+ Hz).

30 IR (KBr) 31+30, 3280, 2930, 1710, 1570, 1*+80, 11+50, 1350, 1050 cm"1.

UV (MeOH) > 635, 377, 261+ (sh), 223 nm.

max

Voorbeeld XXIX Verbinding Zj: 7- (tetramethyldiaminomethyleen) amino-9a-methoxymitosaan met formule 35 Men vermengde 1+25 mg (1,1+2 mmol) mitomycine C met een 50#’ s dis- 8301949 - 35 - persie in olie van natriumhydride, 85»3 mg* en voegde daaraan b cnr di-methylformamide toe. Het mengsel werd gedurende 10 minuten onder een argonatmosf eer tij kamert emperatuur geroerd, en daarna tot -35°C gekoeld. Men voegde 289 mg (2,13 mmol) tetramethylchloroformamidimium-5 chloride toe en liet het mengsel gedurende een periode van 2 uren op-wamnentot 5°C. Gestampt kooldioxyde werd daarna aan het mengsel toegevoegd om het reactiemengsel af te schrikken, en het oplosmiddel werd door destillatie onder verminderde druk verwijderd. Het residu werd chromatografisch behandeld op een aluminakolom (100 g), waarbij 3% v/v 10 methanol in methyleenchloride gebruikt werd voor het elueren. Dit materiaal werd verder gezuiverd door alumina-tlc (5$ v/v methanol in methyleenchloride) waarbij twee fracties van 17 mg en 76 mg werden verkregen. Laatstgenoemde fractie werd gekristalliseerd uit aceton-ether waarbij het gewenste produkt werd verkregen met een smeltpunt van 193 -15 195°C (1255 opbrengst).

Analyse: berekend voor C^HggNgO : C 55,5^, H 6,53, 5 19,^3*; gevonden : C 5^,92, H 6,53, N 19,29$.

3SMR (pyridine d?, X): 2,26 (s, 3H), 2,59 (s, 6h), 2,68 (s, 6h), 2,75 20 (m, 1H), 3,15 (d, 1H. ,J = k Hz), 3,26 (s, 3H), 3,65 (d, 1H, J * 12 Hz), h,00 (dd, 1H, J = 11, 5 Hz), b,62 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,0U (t, 1H, J = 11 Hz), h,38 (dd, 1H, J = 11, 5 Hz).

IH (KBr) 3^30, 3280, 2920, 1710, 1610, 1U95, 1335, 1055 cm"1.

UV (MeOH) λ 610, 380, 260, 220 nm.

max 25 Voorbeeld XXX Verbinding : 7-(1-piperidinylmethyleen)amino-9a-methoxymitosaan met formule

Men bereidde een 0,5 M oplossing van piperidinylchloromethyleen-iminiumchloride door druppelsgewijze toevoeging van 380 mg, 3 mmol,

O

30 oxalylchloride aan 6 cnr chloroform dat 0,3^ g (3 mmol) 1-formylpiperi- dine bevatte. Apart werd 96 mg, 2 mmol, natriumhydride (50$ dispersie in olie) onder stikstof toegevoegd aan een oplossing van 33^ mg, 1 mmol, 3 ...

mitomycme Cm3 cm 1-formylpiperidme. Na 15 minuten roeren bij kamertemperatuur werd de oplossing gekoeld tot -25°C en werd de bovenbe-

O

35 reide iminiumzoutoplossing (k cm-3, 2 mmol) toegevoegd. Het reactiemeng- 8301949 -3 6 - sel werd gedurende 1 uur op -25°C gehouden en door toevoeging van vast • · · 3 kooldioxyde af geschrikt. Na toevoeging van 1 cm methanol werd het pro- duktmengsel op neutraal alumina geabsorbeerd. Dit materiaal werd op een aluminakolom geplaatst (30 g). De kolom werd eerst met methyleen-5 chloride en vervolgens met 3% v/v methanol in methyleenchloride geëlu-eerd, waarbij 3Ö0 mg (8¾¾) van de titelverbinding werd verkregen met een smeltpunt van 68 - 70°C.

Analyse: berekend voor C^Hg^Og. 1 ijHgO: C 55,80, H 6,58, ΕΓ 15,U9*i 10 gevonden : C 55,57, H 6,21, N 15,91¾.

NMR (pyridine 1,U2 (bs, 6h), 2,19 (s, 3H), 2,72 (m, 1ïï), 3,06 - 3,30 (m, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,W - 3,70 (m, 2H), 3,57 (d, 1ÏÏ, J = 13 Hz), ij-,01 (dd, 1H, J - 11, b Hz), k,k3 (d, 1H, J = 13 Hz), 5,02 (bt, 1H, J = 1Ί Hz), 5,55 (dd, 1H, J = 11, b Hz), 7,86 (s, 1H).

15 IE (KBr) 3^0, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520, IUU5, 1305, 1250, 1200, 1055 cm-1.

UV (MeOH) } 590, 389, 262 (sh), 23b, 212 (sh) nm.

msjc

Voorbeeld XXXI

7-hydroxy-H ^-dimethylaminomethyleen-9a-methoxymitosaan met formule 20 Aan een oplossing van 20 mg 7-hydroxy-9a-methoxymitosaan in 3 . 3 · .

3 cm methyleenchloride werd 1 cm dimethylformamidedimethylacetaal toegevoegd en de oplossing werd gedurende 30 minuten bij ongeveer 65°C geroerd. De voortgang van de reactie werd gevolgd met tic (10 : 1 CHgClg/MeOH). Het produkt werd gewonnen door het mengsel onder vermin-25 derde druk te concentreren en het residu werd chromatografisch behandeld over silicagel waarbij de t it 'elverbinding werd verkregen. Activiteit tegen P-388 murineleukemie.

Tabel D bevat de resultaten van laboratoriumproeven met CDF^ vrouwtjesmuizen waarin intraperitoneaal een tumorentmateriaal was ge-30 implanteerd van 10° ascites-cellen van P-388 murineleukemie en die met verscheidene doses van een testverbinding met formule 1 of van mitomy-cine C waren behandeld. De verbindingen werden door intraperitoneale injectie toegediend. Groepen van zes muizen werden voor elk doserings-niveau gebruikt en ze werden behandeld met een enkele dosis van de ver-35 binding op alleen de 1e dag. Een groep van 10 met zoutoplossing behan- 8301949 - 37 - delde controlemuizen werd in elke reeks experimenten opgenomen. De met mitomycine C behandelde groepen werden als positieve controle opgenomen. Men maakte gebruik van een 30 dagen bestrijkend protocol waarbij de gemiddelde overlevingsduur in dagen voor elke groep muizen werd vastge-5 steld en het aantal overlevenden op het eind van de 30 dagen durende periode werd genoteerd. De muizen werden v$6r de behandeling en opnieuw op de 6e dag gewogen. De gewiehtsverandering werd als een maat voor de toxiciteit van het geneesmiddel gezien. Men gebruikte miizen met een gewicht van 20 g per stuk en een gewichtsverlies tot ongeveer 2 g werd 10 niet excessief geacht. De resultaten werden vastgesteld in termen van % TyC hetwelk de verhouding van de gemiddelde overlevingsluur van de behandelde groep tot de gemiddelde overlevingsduur van de met zoutoplossing behandelde controlegroep x 100 voorstelt. De met zoutoplossing behandelde controledieren stierven gewoonlijk binnen 9 dagen. Het 15 "maximumeffect" in de volgende tabel is uitgedrukt als % T/C en de dosis die dat effect geeft, wordt vermeld. De waarden tussen haakjes zijn de waarden die verkregen werden met mitomycine C als positieve controle in hetzelfde experiment. Derhalve kan een maat voor de relatieve werkzaamheid van de onderhavige stoffen ten opzichte van mitomy-20 cine C worden geschat. Een minimumeffect in termen van % T/C werd gelijk aan 125 geacht te zijn. De minimumeffectieve dosis, die in de volgende tabel wordt vermeld, is die dosis welke een % T/C van ongeveer 125 gaf. De twee waarden die in elk geval in de kolom van "gemiddelde gewiehtsverandering” zijn gegeven, zijn resp. de gemiddelde ge-25 wichtsverandering per muis bij de maximumeffectieve dosis en bij de minimumeffectieve dosis.

Tabel D

Inhibitie van P-388 murineleukemie.

Verbinding Maximum effect Minimum Gemiddelde ge- 30 (voorbeeld % T/C dosis1 *f victtsveran- j ve dosis dering* 8301949 311 (2kb) 6,b (3,2) 0,2 -1,9, -0,2 183 (272) 6,h (3,2) 0,1 -1,0, +0,3 (I) 233 (2bb) 6tb (3,2) 0,2 -0,1, +0,1 35 (II) 1hl (22b) 25,6 (3,2) 0,8 -1,2, +0,2 - 38 -

Tabel D (vervolg) (IV) 165 (22h) 12,8 (3,2) 0,2 -0,7, +0,8 (V) 300 (22¾) . 12,8 (3,2) 0,2 -2,1, geen (XII) 161(211) 12,8,(3,2) 3,2 -0,3,+0,2 5 (III) 233 (272) 12,8 (3,2) 0,2 -3,8, +0,7 (III) 1¼ (272) 25,6 (3,2) 6,¾ -1,¾. +0,2 (VI) 1¾¾ (272) 6,¾ (3,2) 3,2 -0,¾. -0,3 (VII) 1¾¾ (272) 0,8 (3,2) 0,02 -0,2, -0,3 (VII) 167 (272) 6,h (3,2) 0,05 -1,0, +0,3 10 (vin) 333 (29k) 1,6 ((3,2) · -1,9, +1,6 200 (239) 0,8 (3,2) 0,2 -2,7, -1,8 (IX) 333 (29*0 3,2 (3,2) 0,2 -2,7, +3,2 (XVIII) 189 (183) 1,6 (3,2) 0,025 -0,5, -0,1 (XXX) 150 (1¾¾) 6,¾ (U,8) 1,6 -1,6, -2,3 15 267 (267) 3,2 (h,8) 1,6 -2,.3, -1,7 (XXIX) 206 (263) 3,2 (U,8) 3,2 -1,7, -1,7 (XXV) 183 (239) 0,¾ (3,2) 0,025 -3,1, -2,3 (XXVI) 1¾¾ (239) 0,2.(3,2) 0,025 -1,3,-0,9 (XXI) 19¾ (319) 12,8 (3,2) 0,2 -1,2, +0,2 20 (XXII) 313 (319) 6,U (3,2) 0,1 -2,8, +0,3 (XXIII) 188 (331) 25,6 (U,8) 0,¾. -2,2, +0,1 (XXVII) 119 (313) 3,2 (3,2) 3,2 +2,2, +2,2 (XXVIII) 331 (319) 25,6 (3,2) 0,¾ -2,8, +0,6 mg/kg lichaamsgewicht

O

25 ώ gram per muis op de dagen 1 - 6 bij een maximum- en minimumeffectieve dosis.

De verbindingen L en M zijn van exceptioneel belang omdat hun werkzaamheid duidelijk die van mitomycine C overtreft zowel in termen van maximumeffect als in mg-sterkte (vergelijkende doseringsgrootten 30 voor equivalente effecten). Zij zijn beide verbindingen met formule 1 waarin A de amidinogroep voorstelt en B -NHg voorstelt, of m.a.w. mito- 7 4 , mycine C-den vaten die op H zijn gesubstitueerd door een ammomethy- 3 Ij. . 2\ 2 3 ¾ leengroep met de formule R R H-C(R )=, waarin R , R en R zoals bovenstaand gedefinieerd zijn.

35 De bis-amidinoverbindingen volgens de onderhavige uitvinding met 8301949 - 39 - formule 1 -waarin elk van A en B de amidinogroep voorstelt, zijn eveneens van groot "belang als actieve antitumorverbindingen. Verwezen wordt naar de gegevens in de tabel voor de verbindingen A, B, C, F, H, en D die aan deze structuureis voldoen.

5 Tabel E bevat de resultaten van antitumortests waarbij B16 mela noma werden gebruikt die in muizen waren gegroeid. Er werden BDF^ muizen gebruikt en deze werden intraperitoneaalmet bet tumorimplantmateri-aal geënt. Men maakte gebruik van een 60 dagen bestrijkend protocol. Groepen van 10 muizen werden voor elk geteste doseringshoeveelheid ge-10 bruikt en de gemiddelde overlevingsiuur voor elke groep werd vastgesteld. Op dezelfde wijze als de testdieren geënte controledieren, die behandeld waren met de injectiedrager zonder geneesmiddel, vertoonden een gemiddelde overlevingsduur van 21 dagen. De overlevingsduur ten opzichte van die van de controles {% T/C) werd gebruikt als maat voor 15 de doeltreffendheid, en de maximale effectieve dosis en minimale effectieve dosis voor elke testverbinding werden bepaald. De minimale effectieve dosis werd gedefinieerd als de dosis die een % T/C-vaarde van 125 vertoonde. Voor elk doseringsniveau werden de testdieren behandeld met de testverbinding op de 1e, 5e en 9e dag, waarbij de intraperitone-20 ale route werd gevolgd. De gemiddelde gewichtsverandering op de aangegeven dag bij de maximale effectieve dosis en bij de minimale effectieve dosis werd gebruikt als een maat voor de toxiciteit. Een gewichtsverlies van 2 g voor een 20 g wegende muis was niet excessief.

Tabel E

25 Inhibitie van Bl6 melanoma

Verbinding Maximum effect Minimum Gemiddelde ge- , . ^ effectieve wiehtsverande- (voorbeeld 5 T/C Dosis 4osis ring (aa«en)

Nb. J

(I) 298 (256) 0,8 (3,2)x 0,2 +0,5, -0,2 (5) 30 (V) 295 (198) 2,0 (3,0) 2,0 -0,4, -0,4 (6) OCVIII) 295 (198) 0,4 (3,0) 0,2 -0,2, -1,8 (6) (ix) 262 (198) 0,8 (3,0) 0,2 -2,8, -1,6 (6) (vTIl) 235 (185) 1,2 (3,0) 0,5 +0,6, +0,8 (5) x waarden tussen haakjes zijn de controlewaarden van mitomycine C.

35 Verbinding Z (voorbeeld XXIX), en verbinding Y (voorbeeld XXVIII) 8301949 -toverden getest tegen het B16 murinemelanoma, vat hij de subcutane route van tumorimplantat'ie en een intraveneuze geneesmiddelbehandeling verden gebruikt. Het behandelingsschema en de evaluaties van overlevingsduur (men gebruikte een to dagen bestrijkend protocol) verden als eerder 5 vastgesteld. De gevichtsverandering op de 12e dag verd gemeten. De maximale effectieve dosis van verbinding Z vas 1 mg per kg, hetvelk een % T/C 156 en een gevichtstoename van 1,5 g gaf. Men gebruikte groepen van 6 dieren en er varen 3 dieren die het gehele ko dagen durende protocol overleefden bij deze dosis. De minimale effectieve dosis vas 10 0,25 mg/kg bij velke dosis de gevichts verandering op de 12e dag 1,0 g bedroeg.. Voor verbinding Y vas de maximale effectieve dosis 8 mg/kg voor een % T/C van 177 en een gevichtsverandering van -0,6. De minimale effectieve dosis vas k mg/kg met een gevichtsverandering van +0,8. In hetzelfde experiment vas de maximale effectieve dosis van mitomycine C 15 3 mg/kg voor een % T/C 195 s gevichtsverandering -0,5. De minimale effec tieve dosis van mitomycine C verd niet bepaald.

In een kort toxicologisch protocol vaarbij groepen van 5 mannelijke BDF.J-muizen per toegediende dosis verden gebruikt, vaarbij een enkele intraperitoneale dosis van de verbinding L verd toegediend, trad 20 geen significante verlaging van het lymfocytenaantal op bij de optimaal verkzame dosis van deze verbinding (1,6 mg/kg i.p.). Bij deze dosis trad geen significante verhoging van het bloedureumstikstof (BOT) of het serumglutaminezuurfosfortransferase (SGPT) op hetvelk aantoont dat geen nadelige invloed op nier- of leverfunctie of onderdrukking van 25 lymfocytische verkzaamheid verd uitgeoefend.

Met het oog op de uitstekende antitumorverkzaepheid die in experimentele diertumoren is vaargenomen, en de verlaagde toxiciteit in vergelijking tot mitomycine C, omvat de uitvinding het gebruik van de stoffen met formule 1 voor het inhiberen van zoogdiertumoren. Voor dit 30 doel vorden ze systemisch toegediend aan een zoogdier dat een tumor heeft, in een vrijvel niet toxische antitumorverkzame dosis.

8301949

Claims (3)

1. Verbinding met formule 1 van het formuleblad, waarin A amino, methoxy, hydroxy, (1-lager alkyl-2(1H)-pyridinylideen)amino, of een van de groepen met de formules 2 t/m 8 voorstelt, B amino of de amidinogroep met formule 2 voorstelt, en tenminste één 5 van A en B een van de gespecificeerde groepen anders dan amino, methoxy of hydroxy is, n het gehele getal 0, 1, 2 of 3 is, R^ waterstof, lager alkyl, lager alkanoyl, benzoyl of gesubstitueerd benzoyl voorstelt, waarin de substituent lager alkyl, lager alkoxy, 10 halogeen, amino, of nitro is, 2 R waterstof, lager alkyl, fenyl, lager alkylfenyl, lager alkoxyfenyl, halogeenfenyl, aminofenyl, nitrofenyl, thiënyl, furyl, cyano, di- lager alkylamino, lager alkoxy, of lager alkylthio voorstelt,

3. U · R lager alkyl, of lager alkoxy voorstelt, of samen met R en_het stik- 15 stofatoom waarmee ze verbonden zijn, pyrrolidine, 2- of 3-lager alkylpyrrolidine, piperidine, 2-, 3- of k-lager alkylpiperidine, 2,6-di-lager alkylpiperidine, piperazine, U-gesubstitueerd piperazine (waarin de substituent alkyl of carbalkoxy met elk 1 - 8 koolstofatomen, fenyl, methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, 20 nitrofenyl, of benzyl voorstelt), azepine, 2-, 3-, ^-, of 5-lager alkylazepine, morfoline, thiomorfoline, thicmorfoline-1-oxyde, of thiomorfoline-1,1-dioxyde vormt, k . 3 . R lager aljcyl xs, of samen met R en het stikstofatoom waarmee ze verbonden zijn pyrrolidine, 2- of 3-lager alkylpyrrolidine, piperidine, 25' 2-,3-, of k-lager alkylpiperidine, 2,6-di-lager alkylpiperidine, piperazine, U-gesubstitueerd piperazine (waarin de U-substituent alkyl of carbalkoxy elk met 1 - 8 koolstof atomen, fenyl, methylfenyl, methoxyfenyl, halogeenfenyl, nitrofenyl, of benzyl voorstelt), azepine, 2-, 3-, I*-, of 5-lager alkylazepine, morfoline, thiomorfoline, 30 thicmorf oline-1-oxyde, of thiomorfoline-1,1-dioxyde vormt, 5 R gekozen xs uit ^g-alkyl met uitzondering van tert.-alkyl, Ci_-,g-alkenyl, C^g-alkynyl, C g-halogeenalkyl, ^-hydroxyalkyl, 8301949 - h2 - Μ <\ of of lager aralkyl elk met tot 12 koolstof- atomen of een heteroalicyclische of heteroaromatische groep met 3 - 8 ringatomen waarvan er tenminste twee koolstof atomen zijn, 7 9 R' en R onafhankelijk van elkaar waterstof of lager alkyl zijn, waar-5 in elk van de bovengenoemde lage alkyl-j lage alkanoyl· en lage alkoxy- groepen 1 - 6 kools-tofatomen bevatten.

2. Verbinding volgens conclusie 1, waarin A en B elk onafhankelijk van elkaar de amidinogroep met de formule 2 voorstellen. 1 2

3. Verbinding volgens conclusie 2, waarin R en R elk waterstof 3 4 10 voorstellen en R en R elk methyl zijn*.

4. Verbinding volgens conclusie 1: J-Γ (dimethylamino)methyleen_7-amino-H1 °- (dimethylamino) methyl e en- 9 a-me t hoxymi t os aan.

5. Verbinding volgens conclusie 1: (dimethylamino)methyleen_7- amino-Ef -(dimethylamino) met hyleen-N -formyl-9a-methoxymitosaan.

6. Verbinding volgens conclusie 1: 7-£ (diΐsopropylamino)methyleen_7 amino-N (diïeópropylamino )methyleen-9a-methoxymitosaan.

7. Verbinding volgens conclusie 1: Ί-Γ (dimethylamino)methyleen_7- amino-ïï' -(dimethylamino)methyleen-9a-methoxy-N1 a-methylmitosaan. 1 2

8. Verbinding volgens conclusie 2, waarin R en R elk waterstof 3 4 20 voorstellen en R en R tezamen met het stikstofatoom waarmee ze verbonden zijn de piperidinegroep vormen.

9. Verbinding volgens conclusie 1: N -formyl-9a-methoxy-7-(1-pipe-ridinylmethyleen)amino-N' -(1-piperidinylmethyleen)mitosaan«

10. Verbinding volgens conclusie 1: 9a-methoxy-7-(1-piperidinylmë- 25 thyleen)amino-N -(1-piperidinylmethyleen)mitosaan. • . . 1 2

11. Verbinding volgens conclusie 2 waarin R en R elk waterstof 3 4 voorstellen en R en R tezamen, met het stikstofatoom waarmee ze verbonden zijn de morfolinegroep vormen.

12. Verbinding volgens conclusie 1: 9a-methoxy-7-(1-morfolinomethy-30 leen)amino-ïïf -(1-morfolino-methyleen)mitosaan.

13. Verbinding volgens conclusie 1 waarin A amino is en B de amidinogroep met formule 2 voorstelt. ... 3 1;

14. Verbinding volgens conclusie 13, waarin R en R elk methyl zijn. 10

15. Verbinding volgens conclusie 1: 7-amino-N -dimethylaminomethy- 8301949 -^3- 1a leen-9a-methoxy-ÏT -methyimitosaan.

16. Verbinding volgens conclusie 1: T-amino-N aimethylaminomethy-leen-9a-methoxymitosaan. *' ' 1T. Verbinding volgens conclusie 1, waarin A methoxy is en B de 5 amidinogroep met formule 2 voorstelt.

3 U

18. Verbinding volgens conclusie 17, waarin R en R elk methyl voorstellen.

19. Verbinding volgens conclusie 1: 7»9a-dimethoxy-N^-dimethylami-nomethyleenmitosaan.

20. Verbinding volgens conclusie 1: 7»9a-dimethoxy-2T -dimethylami- 1a nomethyleen-W -formylmitosaan.

21. Verbinding volgens conclusie 1; waarin A een van de amidino-groepen is en B amino voorstelt.

22. Verbinding volgens conclusie 21, waarin A de amidinogroep met 15 formule 2 voorstelt en R en R methyl zijn.

23. Verbinding volgens conclusie 1: 7-(dimethylaminomethyleen)amino-9a-methoxymitosaan. 2k, Verbinding volgens conclusie 1: 7-*(dimethylaminomethyleen)amino-1a 9a-msth3xy-Ii -methylmitosaan.

25. Werkwijze voor het bereiden van de verbinding volgens conclusie 1, waarbij een verbinding, gekozen uit de groep mitomycine C, mitomycine A, of een W -lager alkylderivaat van een van beide, m reactie wordt . . 2 3 h gebracht met een amideacetaal met de formule 12, waarin R , R en R 8 zoals in conclusie 1 gedefinieerd zijn en elke Ba onafhankelijk gekozen 25 is uit lager alkyl, of cycloalkyl met tot 6 koolstof atomen of samen al-kyleen zijn dat met de daarmee verbonden zuurstofatomen en het tussen-gelegen koolstofatoam een cyclische structuur vormt met 5 of 6 ringato-men, in oplossing in een anhydrisch met de reactie verenigbaar vloeibaar organisch reactiemedium bij ko - 65°C totdat een reactieprodukt 30 is gevormd waarin B of zowel A als 3 in de formule volgens conclusie 1 de amidinogroep met formule 2 zijn,

26. Werkwijze volgens conclusie 25, waarin het vloeibare organische reactiemedium een lage gehalogeneerde alifatische koolwaterstof omvat, en meer dan twee moleculaire hoeveelheden van het amideacetaal ten op-35 zichte van mitomycine C worden gebruikt waardoor een verbinding wordt 8301949 - hk - verkregen waarin elk van A en B de amidinogroep is.

27. Werkwijze volgens conclusie 26, waarin het reactiemedium chloroform is.

28. Werkwijze volgens conclusie 26, waarin het reactiemedium een 5 mengsel is van een gehalogeneerde lage alifatische koolwaterstof en een lage alkanol.

29. Werkwijze volgens conclusie 26, waarin het react iemedium een mengsel is van chloroform en methanol.

30. Werkwij ze voor het "bereiden van een 7-gesubstitueerd amino-9a-10 methoxymitosaan, waarbij een verbinding volgens conclusie 1, waarin B of zowel A als B de amidinogroep met formule 2 voorstellen, in reactie wordt gebracht met een alifatisch, alicyclisch, aromatisch, hetero-aromatisch, of heteroalicyclisch primair amine waarin het koolstofatoom dat de aminogroep draagt, tenminste een waterstofatoom draagt en min-15 der dan twee arylgroepen draagt, in een anhydrisch, met de reactie verenigbaar, -vloeibaar organisch reactiemedium bij een temperatuur van ongeveer -15°C tot +50°C.

31. Werkwijze, waarbij een eerste verbinding volgens conclusie 1, waarin elk van A en B de amidinogroep met formule 2 voorstelt, wordt 20 behandeld met meer dan éên moleculaire hoeveelheid van een amine, gekozen uit de groep aminodifenylmethaan, trifluorethylamine, en tert.-butyl-amine, bij 20 - 6o°C totdat de eerste verbinding volgens conclusie 1 is omgezet in een tweede verbinding volgens conclusie 1, waarin A de amidinogroep is en B amino voorstelt.

32. Werkwijze volgens conclusie 30 of 31, waarin een anhydrisch, met de reactie verenigbaar, vloeibaar organisch reactiemedium wordt gebruikt, dat methanol, chloroform, methyleenchloride, of een ander laag halogeenalkaan omvat,

33. Werkwijze voor het bereiden van een verbinding volgens conclusie 30 1, waarin B -NHg is, A (1-lager alkyl-2(1H)-pyridinylideen)amino of een van de groepen met de formules 2 t/m 8 voorstelt en R1, R^, R"^, R^, R^, 7 ... R en n zijn zoals gedefinieerd m conclusie 1, waarbij een dimethyl-formamide (of ander verenigbaar oplosmiddel) oplossing van mitomycine C in reactie wordt gebracht met 1,0 tot 1,5 moleculaire hoeveelheid 35 natriumhydride, waardoor een anionogene vorm van mitomycine C wordt ge- 8301949 -^5- produeeerd, en deze anionogene vorm in reactie wordt gebracht met een elektrofiel reagens dat de amidinogroep kan vormen, gekozen uit een iminoëther, een iminothioether, een halogeenmethyleeniminiumhalogenide, en een iminohalogenidezout. 5 3¾. Verbinding volgens conclusie 1: 7-(l-methyl-l(H)-pyridinylideen)- amino-9 a-methoxymit o s aan. 35« Verbinding volgens conclusie. 1: 9a-methoxy-7-(1-morfolinomethy-leen)aminomitosaan.

36, Verbinding volgens conclusie 1: 7-(1-pyrrolidinylmethyleen)amino-10 9a-methoxymitosaan. 37« Werkwijze voor het inhiberen van de groei van een zoogdiertumor waarbij aan een zoogdier met een tumor systemisch een vrijwel niet-toxische antitumorwerkzame dosis van een verbinding volgens conclusie 1 wordt toegediend. 15 38. Ί-Γ2-benzylthioëthyl_7amino-9a-methoxymitosaan.

39. Verbinding volgens conclusie 1: 7-/* 1-(dimethylamino)ethylideen_/ amino-ïr -£ 1-(dimethylamino)ethylideen_7-9a-methoxymitos aan♦ iiO. Verbinding volgens conclusie 1: Ί-Γ 1-(dimethylamino)ethylideen-aminq_7-9a-methoxymitosaan. 20 if-1. Verbinding volgens conclusie 1: 7-/” (1-methyl-2-pyrrolidinyli- deen)amino__7-N -Γ (1-methyl-2-pyrrolidinylideen)amino_7-9a-methoxymito-saan. k2.' Verbinding volgens conclusie 1: 1-Γ (1-methyl-2-pyrrolidinyli-deen)amino_7-9a—methoxymitosaan. 25 ^3. Verbinding volgens conclusie 1: l-£ (methoxyamino)methyleen_7- amino-9 a-methoxymit os aan. kt. Verbinding volgens conclusie 1: 7-/" (benzyloxyamino)methyleen_7-amino-9 a-methoxymit osaan. k-5. Verbinding volgens conclusie 1: 7-( 1,3-dimethyl-2-imidazolidyli-30 de en) -9 a-metho xymit o s aan. U6. Verbinding volgens conclusie 1: J-f (1,3-dimethyltetrahydropyri-midinylideen) amino-9a-methoxyrnitosaan.

47. Verbinding volgens conclusie 1: 7-(tetramethyldiaminomethyleen)-amino-9a-methoxymitosaan. 35 -8. Verbinding volgens conclusie 1: 7-( 1 -piperldinylmethyleen)airiino- 9a-methoxymitosaan. 8301949 1 o o II 3 A I =2==-2 2 J VS-f CCH B? SS2 ll^il khSs-c**· R3-rj-c=s- LJV 7 4 5 6 _ r2rS K2 5¾3 [ 'f25 n R.3-S=c4- h2n-o«- h;=c4- f H- S/' 8 12 ^ oj /^X 9 ' K3 E2 (^)^4-(0¾¾ ' K—S. ^,N-C-0R° \ y4 r4 OR8 N 'n'Ti- N(CH,) b7 (¾%°^ nn(ch3)2 15 16 ww, 18 7 17 J? Μ 1 .OpL- χΧχ 4 3 _U *® CH^ U 4 1 XN-H 2 la 1 ‘32 19 20 o ccara cccnh, >=«κΑ ,*J Hs_n X J X jT ΗΝθζ Y^j fX^3 o i_U* s t_l> 8 3 0 1 9 4 9 Bristol-Myers Company [ o 24 o cs3 I JDC H, CH3 7 π >H O -* 25 o W. 1 /~\n / ^1|Γ^Ν<00Η3 ^ ch3A^(^-m O 26 O^H-C^Ke VS-,-J L°CH3 /N-r^N//%SY' CH3 Π >ÏH o -L-'' A 2

3. O R. -5 Rv R q ii 1 r3 N. I |j αηΟΟί=ά-^Λ. H o N^N^Av__/ 2 \4 5 \ O H I 0(^3 «*λΑ ch/a-a^i 5 Xjrx«v

3. I_U* ™2 ^ cp^V^m^nT3 9 * '3 o i_JV^ R :H2 R5iH2y ^ V /

3 T^2 r\ O r3 i π 11* N-«*vA ^0-5¾ κ4/ XïrA3 8 3 0 1 9 4 9 11 Bristol-Myers Company ( 0 c fi II \ I 1/-0¾ 3. ii NH 0 '- (O^CHNiCELA Mitanycine. V 0 0 ° (Οί3) 0ΝΟί=Νχ>Λ^ O^CCN^SN (CH3) 2 (¾) 2NOï=NnJ{s^ p^CCN=CHN (CH3) 2 XaXc3 + a /\V\3 ^ 0 lJ'*18 3 ° I i-*30 A 8 D may \_L3 0 /-00¾ O ,'-°0BBï (1) NaH A“ VVA,C«, ΥϊΛΛ _> H αΧλ,Λ.. aJLkA.. (2) © Θ *8 \A·” Π \ L* NH (CH.) .N=OiClCl , , 0 3 2 verb. L Mitcmycine C E sXl 0 //-oc0*2 η, a /-°°°^ a) «2 yyv«3 yVSo ” > ‘vY^Ot* °M} \J"m IA ^ 21 + I Cl CH3 CH NH F \=N 0 ,--0=2¾ -7^¾. ^Al^Vj'w (2)CH3N=Ca:1 0 ^ 8301949 Bristol-Myers Company o V* 8 -rmm2 %r, 9½ o H 0 ft 3 ,-003¾ h CH- ° ,-OCNE, (1) NaH 3 i"*t? / j 'vijf i jl z'

3 U (2) CH3N<H:1 qj / γ^Ν^ΝΙ^ 3 o 23 H Cl \ o f0^ O S 2 /CH3 CH3 o 0^1=( ^ N H J XN(CH3)2 (CH ) M/ \ /\ - T ch3 'll ]['>« o -L·' CH3 T I O o C=H Π ,CH OCHH- (CHjljlT \r/Xr__--- 2 2 I L^ch3 ce2 n >h o I-L·'' Bristol-Myers Company 8301949 L ? u 0-- CH3 /°CH3 Ch3 -,ΛΛι Γ-» O --Je' y V o OCONH- >=\ JL J ch3onh yi i——rx l^cs3 ch3 O -Ie' „ W Hv O ÏV OCCNH- HxA J CcHeCH,ONH ΥΓ >)-< 6 5 2 J>*=3 ch3 Ó - CH3 X c«)=YV>o r~J, 1 ,.¾°4¾ ï OCH. Tv z (CH-)-N O / OCCNH2 3 * \ / / ""r^v0053 (CH3)2N s. / <Ύ \}-' 3301949 Bristol-Myers Company