DE2559411C2 - Verwendung von Clavulansäure - Google Patents

Verwendung von Clavulansäure

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Description

Gegenstand vorliegender Erfindung ist die Verwendung von Clavulansäure, deren pharmakologisch verträglichen Salze oder Ester als Synergisten bei der antibiotischen Behandlung mit einem Penicillin oder Cephalosporin.
Clavulansäure kann aus Streptomyces claviligerus isoliert werden und besitzt nachstehende Formel I:
CH2OH
(D
CO2H
Streptomyces clavuligerus ist ausführlich beschrieben worden von Higgens und Mitarbeitern in InL ]. Systematic Bacteriology 21 (1971), S. 326. Dieser Mikroorganismus war insofern interessant, als er bestimmte ß-Lactam-Antibiotika erzeugt, wie Penicillin N, 7-(5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und 7-(5-Amino-S-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyloxy-methyl^-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure. Dieser Mikroorganismus ist bei der Agricultural Research Service Collection unter der Nummer NRRL 3585 und bei der American Type Culture Collection unter der Nummer ATCC 27 064 hinterlegt worden. Streptomyces clavuligerus ist auch in der US-PS 37 70 590 und von Nagarajan und Mitarbeitern in ]. Amer. Chem. Soc. 93 (1971), S. 2308, Brannon und Mitarbeitern in Antimicrob. Agents Chömother. 1 (1972), S. 237 und 247, und Higgens und Mitarbeitern in J. Antibiotics 27 (1974), S. 298, erwähnt worden.
/?-Lactamasen sind Enzyme, die den 0-Lactamring von Penicillinen und Cephalosporinen öffnen und Produkte liefern, die keine antibakterielle Wirksamkeit mehr besitzen. Derartige Enzyme werden von verschiedenen Bakterien erzeugt, z. B. Spezies oder Stämmen von Escherichia. Klebsiella. Proteus, Pseudomonas, Enterobacter und Staphylococcus. Diese Enzyme sind in vielen Fällen die Erklärung für eine Widerstandsfähigkeit bestimmter Stämme solcher Organismen gegenüber manchen Penicillinen und Cephalosporinen. Die Bedeutsamkeit einer jS-Lactamase-Erzeugung wird verständlich, wenn offensichtlich wird, daß ein hoher Anteil von klinisch isolierten Organismen 0-Lactamasen erzeugen (vgL zum Beispiel M. Wilson und I. A. Freeman in Bacteriological Proceedings 80 [1969]), wo in dem
ίο Aufsatz »Penicillin Inactivation by Gram-negative Bacilli« die Autoren gezeigt haben, daß 84 Prozent der gramnegativen Organismen, die in einem amerikanischen Krankenhaus isoliert worden sind, ß-Lactamase erzeugen). In zahlreichen Fällen sind bestimmte
is Penicilline oder Cephalosporine unwirksam bei der Behandlung von Krankheiten, die keine ß-Lactamase erzeugenden Organismen wegen des allgemeinen Auftretens einer Nebeninfektion durch einen ß-Lactamase-Erzeuger zugeschrieben werden (vgL .aim Beispiel
R. May und Mitarbeiter in Brit J. Dis. ChesL 66 [1972], S. 185). Von Gemischen von 0-Lactamase-Hemmsubstanzen mit einem Penicillin oder einem Cephalosporin könnte man erwarten, daß das letztere vom Abbau durch bakterielle /?-Lactamase geschützt sei, so daß sie dadurch ihre antibakterielle Wirksamkeit gegen zahlreiche infektiöse Organismen steigern. Eine derartige Steigerung einer antibakteriellen Wirksamkeit nennt man Synergismus, wenn die antibakterielle Wirksamkeit des Gemisches über eine einfache Addition der Wirksamkeiten der beiden Einzelsubstanzen hinausgeht Die ß-Lactamase-Hemmsubstanz der Mischung wird als Synergist bezeichnet Derartige Substanzen sind vorteilhaft zur Erhöhung der antibakteriellen Wirksamkeit von Penicillinen und Cephalosporinen
is gegen resistente Organismen. Es ist eine Aufgabe vorliegender Erfindung, derartige Synergisten bereitzustellen.
Anwendungsbeispiele von bestimmten 0-Lactamaseresistenten halbsynthetischen Penicillinen und Cephalo- spönnen als /7-Lactamase-Hemmstoffe und Synergisten für Penicilline und Cephalosporine sind bereits in der Literatur beschrieben, z. B. von Sutherland und Mitarbeitern in Nature 201 (1964), 868; Sabath und Mitarbeitern in Nature 204 (1964), 1066; O'Callaghan und Mitarbeitern in Antmicrob. Agents and Chemotherapy 1968 (1969), 67. Jedoch besitzt keine dieser bekannten Substanzen einen besonders eindrucksvollen Effekt auf das Spektrum des anderen, im Gemisch vorliegenden Antibiotikums.
Es ist auch von einigen Actinomvcetes-Züchtungen beschrieben worden, daß sie ß-Lactamase-Hemmstoffe erzeugen, die mit Penicillinen oder Cephalosporinen synergistisch wirken, z.B. die in der GB-PS 13 63 075 und von Hata und Mitarbeitern in ]. Antibiotics 25 (1972), S. 473, und Umezawa und Mitarbeitern in J. Antibiotics 26 (1973), S. 51, beschriebenen Züchtungen. Von diesen /J-Lactamase-Hemmstoffen von Actinomycetes ist bisher noch keine klinische Verwendbarkeit festgestellt worden. Besonders bemerkenswerte Merk male, die Clavulansäure von anderen 0-Lactamase- Hemmstoffen von Actinomyceten unterscheiden, sind ihre Extrahierbarkcit in organische Lösungsmittel aus dem Nährmedium bei pH 2, ihre hohe Stabilität in Menschenblut und ihr breites Antibiotika-Spektrum und
b5 /J-Lactamase-Hemmwirkung, ihr niedriges Molekulargewicht und ihr hoher Rf-Wert bei der Papierchromatographie bei Anwendung zahlreicher Lösungsmittelsysteme.
Durch aerobes Züchten von Streptomyces clavuligerus in üblichen Nährmedien bei etwa 25 bis 30° C unter annähernd neutralen Bedingungen kann man eine /J-Lactamase-Hemmsubstanz erzeugen, die auch eine antibakterielle Wirksamkeit besitzt Diese neue Substanz wird als »Clavulansäure« bezeichnet
Clavulansäure hat folgende Eigenschaften:
(a) Sie ist eine Carbonsäure;
(b) sie bildet ein Natriumsalz, das ein charakteristisches Infrarot-Spektrum besitzt, wie es im wesentlichen aus der F i g. 1 hervorgeht;
(c) sie vermag das Wachstum von Staphylococcus aureus-Stämmen zu hemmen;
(d) sie kann die antibakterielle Wirksamkeit von Ampicillin gegenüber /2-Lactamase erzeugenden Stämmen von Escherichia coli, Klebsiella aerogenes und Staphylococcus aureus synergistisch beeinflussen;
(e) sie kann die antibakterielle Wirksamkeit von Cephaloridin gegenüber /J-Laciamase erzeugenden Stämmen von Proteus mirabilis und Staphylococcus aureus synergistisch beeinflussen;
(f) sie bildet einen Methylester, der aufgrund der Massenspektroskopie ein Molekulargewicht von 213,0635 entsprechend der Formel C9HnNO5 besitzt
Die Clavulansäure kann als einwertige Carbonsäure der Formel CgtfeNOs betrachtet werden, die in Form des Natriumsalzes ein charakteristisches Infrarot-Absorptionsspektrum besitzt, das im wesentlichen dem in F i g. 1 gezeigten entspricht
Die von Streptomyces clavuligerus erzeugte Verbindung mit den vorgenannten Eigenschaften besitzt die Formel II:
CH2OH
CO2H
Die Clavulansäure kann als 3-(/}-HvdroxyäthyIiden)-7-oxo-4-oxa-l-azabicyclc{3A0pieptan-2-carbonsäure bezeichnet werden.
In stereochemischer Hinsicht sind die Kohlenstoffatome in 2- und 5-Stellung der Clavulansäure gleich wie bei den natürlich vorkommenden Penicillinen und Cephalosporinen, so daß die Clavulansäure durch die nachstehende Strukturformel (I) dargestellt werden kann:
Penicilline jedoch gehemmt werden, wenn gleichzeitig 5 μg/ml Clavulansäure vorhanden sind. Ähnliche Ergehnisse sind bei Gemischen mit einem Gehalt verschiedener Ester der Clavulansäure beobachtet worden. Zum Beispiel werden Stämme von Klebsiella aerogenes A, deren Wachstum durch 125 μg/ml Ampicillin oder durch 10 μg/ml Clavulansäure-methylester nicht gehemmt wird, jedoch von unter 12^5 ug/ml Ampicillin in Gegenwart von 5 μg/ml Clavulansäure-methylester
ίο gehemmt Es ist ferner festgestellt worden, daß StCmme von Staphylococcus aureus Russell, deren Wachstum durch die Gegenwart von 100μg/mI Ampicillin oder durch 5 μg/ml Clavulansäure nicht gehemmt wird, durch das Vorliegen von unter 10 μΗ/πι! Ampicillin in Gegenwart von 1 μg/mi Clavulansäure gehemmt werden. Bei Untersuchungen an weiblichen Mäusen ist festgestellt worden, daß beträchtlich über 5 μg/ml liegende Mengen an Clavulansäure im Blut und Gewebe in einfacher Weise durch eine subcutane Verabreichung von 100 mg/kg des Natriumsalzes der Clavulansäure erreicht werden können und daß brauchbare Mengen an Clavulansäure nach einer oralen Verabreichung von 100 mg/kg des Natriumsalzes der Clavulansäure erhalten werden können.
Gegenstand vorliegender Erfindung ist daher die Verwendung von Clavulansäure, deren pharmakologisch verträgliche Salze oder Ester als Synergisten bei der antibiotischen Behsadlung mit einem Penicillin oder Cephalosporin.
Beispiele für pharmakologisch verträgliche Salze der Clavulansäure sind das Natrium-, Kalium-, Calcium-, Magnesium-, Alumimium- und das Ammoniumsalz, ferner substituierte Ammoniumsalze, wie das Trimethylammoniumsalz, sowie weiterhin Benzathin-, Procain- und ähnliche Salze, wie sie üblicherweise mit Penicillinen oder Cephalosporine!! gebildet werden.
Die Salze der Clavulansäure sind gewöhnlich stabiler als die freie Säure per se und werden daher bevorzugt (II) eingesetzt
Besonders zweckmäßige Salze der Clavulansäure sind das Natrium- und das Kaliumsalz der nachstehenden Formeln III und IV:
CH2OH
(HD
CO2Na
CH2OH
(D
CH2OH
(IV)
CO2K
CO2H
Deshalb ist der vollständigere chemische Name für Clavulansäure Z-(2R£R)-3-(/?-Hydroxyäthyliden)-7-oxo-4-oxa-l-azabicyclo[3^,0pieptan-2-carbonsäure.
Die hervorragende Brauchbarkeit der Clavulansäure wird erst richtig erkannt, wenn man sich vergegenwärtigt, daß bestimmte Stämme von Klebsiella aerogenes A, deren Wachstum durch die Anwesenheit von 125μg/ml Ampicillin, Amoxycillin, Carbenicillin oder Benzylpenicillin oder durch die Anwesenheit von 10 μg/ml Clavulansäure nicht gehemmt wird, durch das Vorhandensein von unter 12,5 μg/ml der vorerwähnten Kristalline Formen derartiger Salze können Hydratwasser enthalten. Zweckmäßige Ester der Clavulansäure sind diejeni gen, die sich von den betreffenden Alkoholen ableiten, wie Methanol, Äthanol, Propanol, Butanol, 2,2,2-Trichloräthanol, 2,2,2-TrifluoräthanoI, Benzylalkohol, p-Nitrobenzylalkohol, Phenol, Acetoxymethanol, Trimethylacetoxymethanol, 2-Dimethylaminoäthanol und ande- ren üblichen Alkoholen. Zahlreiche Ester der Clavulansäure sind wertvolle Zwischenprodukte bei bestimmten Verfahren zur Reindarstellung der Clavulansäure. Viele Clavulansäureester sind wertvolle synergistische Ver-
bindungen. Die Wirksamkeit derartiger Ester dürfte in einer Hydrolyse des Esters zur freien Säure liegen.
Wenn vorstehend der Ausdruck »Ester« verwendet wird, so schließt er die Ester mit ein, die sich begrifflich von einem Alkohol oder einem Thiol der allgemeinen Formeln ROH oder RSH ableiten, in denen R ein organischer Rest ist Geeignete Reste für R sind Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl- oder andere ähnliche Reste, die auch substituiert sein können. Um das Molekulargewicht nicht übermäßig zu erhöhen, sollten die Reste R normalerweise nicht über 16 Kohlenstoffatome, zweckmäßigerweise nicht über 12 Kohlenstoffatome und besonders bevorzugt nicht über 8 Kohlenstoffatome enthalten.
Vorzugsweise leitet sich der Rest R in erster Linie von einem Alkohol ROH oder in zweiter Linie von einem Thiol RSH ab, die pharmakologisch verträglich sind.
Beispiele von geeigneten Substituenten an den Resten R sind Halogenatome, Hydroxylgruppen, niedere Alkoxy-, niedere Acyloxy-, niedere Alkylamino- oder niedere Dialkylaminoreste. Der Ausdruck »nieder« gibt an. daß der Rest bis 6 Kohlenstoffatome und vorzugsweise bis zu 4 Kohlenstoffatome enthält Demzufolge kann R die Methyl-, Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, geradkettige oder verzweigte ßutyl-, Pentyl-, Heptyl-, Octyl-, Nonyl-, Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Vinyl-, Allyl-, Butenyl-, Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl-, Cycloheptyl-, Cyclohexenyl-, Cyclohexadienyl-, Methylcyclopentyl-, Methylcyclohexyl-, Benzyl-, Benzhydril-, Phenyläthyl-, Naphthylmethyl-, Phenyl-, Naphthyl-, Propinyl-, ToIyI-, 2-Chloräthyl-, 2,2,2-TrichloräthyI-, 2^^-Trifluoräthyl-, Acetylmethyl-, Benzoylmethyl-, 2-Methoxyäthyl-, 2-Dimethylaminoäthyl-, 2-Diäthylaminoäthyl-, 2-Piperidinoäthyl-, 2-MorphoIinoäthyl-, 3-Dimethylaminopropyl-, p-Chlorbenzyl-, p-Methoxybenzyl-, p-Nitrobenzyl-, p-Brombenzyl-, m-Chlorbenzyl-, 6-Methoxynaphthyl-2-methyI-, p-Chlorphenyl- und die p-Methoxyphenylgruppe und ferner solche Gruppen bedeuten, die aus der Penicillinoder Cephalosporin-Chemie zur Herstellung solcher Ester bekannt sind, die in vivo leicht zur antibiotischen Stammsubstanz hydrolysieren.
Leicht hydrolysierbare Ester umfassen auch die Ester der allgemeinen Formeln V und VI, doch sind sie nicht auf diese beschränkt:
CH2OH
(V)
CO A,
O J- X CO A O — v^ — X — CO — A3
CH2OH
(VI)
— τ
in denen A| ein Wisserstoffatom oder ein Alkyl-, Aryl- oder Aralkylrest ist, A2 ein Wasserstoffatom oder die Methylgruppe bedeutet, A3 für einen Alkyl-, Aryl- oder Aralkylrest steht, X und Y Sauerstoff- und/oder Schwefelatome sind und Z einen zweiwertigen organischen Rest darstellt Ester der allgemeinen Formeln V und VI1 die nach einer Verabreichung ziemlich leicht die Clavulansäure im Blutkreislauf freisetzen, schließen auch solche ein, in denen Ai ein Wasserstoffatom, A2 ein Wasserstoffatom oder die Methylgruppe und A3 die Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Butyl-, Benzyl- oder die Phenylgruppe sind, sowie solche, in denen X ein Sauerstoffatom, Y ein Sauerstoffatom ist und Z eine der Gruppierungen -CH2CH2-, -CH :CH-,
60
oder
OCH3
O CH3
darstellt
Wenn in Verbindung mit den vorstehenden Formeln
der Ausdruck »Alkyl« verwendet wird, schließt er Alkylreste bis zu 6 Kohlenstoffatomen ein. Der Ausdruck »Aryl« bedeutet die Phenyl- oder die Napiithylgruppe oder ferner einen Phenylrest, der durch einen inerten Substituenten, wie ein Fluor- oder Chloratom oder die Methyl- oder Methoxylgruppe oder dergleichen, substituiert ist Wenn hierin der Ausdruck »Aralkyl« verwendet wird, bedeutet er einen durch einen Arylrest substituierten Alkylrest
Besonders zweckmäßige Ester der allgemeinen
Formeln V und VI sind diejenigen der allgemeinen Formeln VII und VIII:
CH2OH
CO — Ο — CH —Ο — CO — A5
(VID
CH2OH
50
(VIII)
In diesen Foimeln bedeutet A4 ein W&sserstofiatom oder die Methylgruppe, A5 die Methyl-, tert-Butyl- oder die Phenylgruppe und Ae ein Wasserstoffatom und/oder die Methoxyyruppe.
Zahlreiche Ester der Clavulansäure unterscheiden sich von analogen Estern von Penicillinen oder Cephalosporinen darin, daß sie eine erhöhte Bereitschaft zur Hydrolyse zu Clavulansäure unter milden Bedingungen zeigen. So hydrolysieren ζ. Β. einfache Alkylester, wie der Methylester, langsam in auf pH 7 gepuffertem Wasser zu Clavulansäure. Ester, die schon unter milden Bedingungen in gewissem Grad eine
Hydrolyse erleiden, sind solche der allgemeinen Formel IX:
CHjOH
(IX)
CO2R'
in der R1 ein Kohlenwasserstoffrest mit 1 bis 9 Kohlenstoffatomen ist, der durch Halogenatome·, niedere Alkoxyreste, Hydroxylgruppen oder durch gegebenenfalls in Salzform vorliegende NR2R3-Reste substituiert sein kann, wobei R2 und R3 gleich oder ι; verschieden sind und Wasserstoffatome und/oder niedere Alkylreste bedeuten und auch zusammen mit dem Stickstoffatom einen 5- oder 6gliedrigen Ring bilden können.
Wenn unter Bezugnahme auf die allgemeine Formel m IX der Ausdruck »nieder« verwendet wird, bedeutet er, daß der Rest 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält.
Geeignete Reste für R1 sind Alkyl- und Aralkylreste, die gegebenenfalls durch Halogenatome, Hydroxyl- oder Methoxygruppen oder durch in Salzform vorlie- 2ί gende NR2R3-Reste substituiert sein können, wobei R2 der Methyl- oder Äthylrest und R3 der Methyl- oder Äthylrest ist oder mit dem Rest R2 unter Einschluß des Stickstoffatoms zu einem Pyrrolidin-, Piperidin- oder Morpholinrest verbunden ist. jo
Die zweckmäßigsten Alkylreste für R1 sind geradkettige Reste bis zu 6 Kohlenstoffatomen, die gegebenenfalls durch eine Methoxy- oder eine Hydroxylgruppe, einen in Salzform vorliegenden NR2R3-Rest oder ein Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch die CCIj- oder a CF3-Gruppe substituiert sind.
Die Ester der Clavulansäure sind besonders brauchbar als Synergisten, wenn sie in Geweben von Säugern, insbesondere im menschlichen Blut, unter Bildung von Clavulansäure oder dessen Salz hydrolysieren, da man annimmt, daß Clavulansäure oder deren Salze etwas stärker wirksame antibakterielle Mittel als die Ester per se sein dürften. Zahlreiche Ester der allgemeinen Formeln V bis IX sind für diese Zwecke brauchbar.
Eine weitere Gruppe besonders geeigneter Ester nach vorliegender Erfindung sind jene wertvollen Zwischenprodukte, die leicht in Clavulansäure oder deren Salz durch chemische oder biochemische Methoden, die aus der Penicillin- oder Cephalosporin-Chemie bekannt und ausreichend milde sind, die reaktionsfähigen säurelabilen 0-Lactamringe aufzuspalten, überführt werden.
Am zweckmäßigsten ist natürlich ein Ester, der durch Hydrierung spaltbar ist Übliche Ester für ein derartiges Verfahren sind die Benzyl-, substituierten Benzyl-, Benzhydril-, substituierten Benzhydril- oder die Tritylester. Der Benzyiester hat sich als besonders zweckmäßig für dieses Verfahren erwiesen.
Im großen und ganzen ist die Art eines Substituenten im Esterrest ohne Bedeutung, solange er nicht bei der Spaltung durch Hydrierung stört
Die Verwendung der Clavulansäure oder deren Salze oder Ester als Synergisten bei der antibiotischen Behandlung mit einem Penicillin oder Cephalosporin erfolgt am vorteilhaftesten in Form von Arzneimitteigemischen, die auch pharmakologisch unbedenkliche Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel enthalten können.
Die erfindungsgemäße Verwendung der Clavulansäure, deren Salze oder Ester wird im folgenden an Arzneimittelgemischen ausführlicher beschrieben.
Derartige Arzneimittelgemische umfassen solche in einer Form, die für eine orale, lokale oder parenterale Anwendung geeignet sind und die zur Behandlung von Infektionen bei Säugern, einschließlich Menschen, verwendet werden können.
Zweckmäßige Formen derartiger Arzneimittelgemische sind Tabletten, Kapseln, Cremes, Sirupe, Suspensionen, Lösungen, Trockensäfte und sterile, zu Injektions- oder Infusionszwecken geeignete Formen. Die Arzneimittelgemische können übliche pharmakologisch verträgliche Substanzen, wie Verdünnungsmittel, Bindemittel, Farbstoffe, Geschmacksstoffe, Konservierungsmittel, Zerfallhilfsmittel und dergleichen gemäß einer üblichen pharmakologischen Praxis zur Formulierung von Antibiotika enthalten, wie sie dem Fachmann bekannt ist. Injizierbare oder infundierbare Arzneimittel der Clavulansäure oder deren .Salze sind besonders zweckmäßig, da große Mengen der Verbindung Clavulansäure im Gewebe nach einer Verabreichung durch Injizieren oder Infundieren auftreten können. Demzufolge ist ein besonderes bevorzugtes Arzneimittel nach vorliegender Erfindung die Clavulansäure oder deren Salz in steriler Form.
Einzeldosierungen mit einem Gehalt an Clavulansäure oder deren Salz oder Ester, die für eine orale Verabreichung angepaßt sind, bilden ein weiteres bevorzugtes Arzneimittel im Hinblick auf vorliegende Erfindung.
Unter bestimmten Voraussetzungen kann die Wirksamkeit der oralen Arzneimittelgemische mit Clavulansäure und deren Salze oder Ester verbessert werden, wenn derartige Arzneimittel eine Puffersubstanz enthalten oder mit einem erst im Darm löslichen Überzug versehen sind, so daß die Verbindungen keine lange Eterührungszeit mit dem hochgradig sauren Magensaft haben. Derartige gepufferte oder mit einem erst im Darm löslichen Überzug versehene Arzneimittel können nach den üblichen pharmazeutischen Techniken hergestellt werden.
Die Verwendung von Clavulansäure oder deren Salze oder Ester als Synergisten bei der antibiotischen Behandlung erfolgt zusammen mit Penicillinen oder Cephalosporine^ die als 0-Lactam-Antibiotika bezeichnet werden und die nicht nur solche einschließen, die in hohem Maße gegen 0-Lactamase empfindlich sind, sondern auch solche, die einen guten Grad an innewohnender Widerstandsfähigkeit gegen /?-Lactamasen haben. Beispiele geeigneter /?-Lactam-Antibio':- ka sind Benzylpenicillin, Phenoxymethylpenicillin, Carbenicillin, Methicillin, Propicillin, Ampicillin, Amoxycillin, Epicillin, Ticarcillin, Cyclacillin, 6-Aminopenicillansäure, 7-Aminocephalosporansäure, 7-Aminodesacetoxycephalosporansäure, Cephaloridin, Cephalothin, Cefazolin, Cephalexin, Cefoxitin, Cephacetril, Cephamandol, Cephapirin, Cephradin, Cephaloglycin und andere gut bekannte Penicilline und Cephalosporine oder deren Vorstufen, wie Hetacillin, Metampicillin, ferner die Acetoxymethyl-, Trimethylacetoxymethyl- oder die Phthalidylester von Benzylpenicillin, Ampicillin, Amoxycillin oder Cephaloglycin oder der Phenyl-, Tolyl- oder Indalyl-a-ester von Carbenicillin oder Ticarcillin.
Wenn natürlich das im Arzneimittelgemisch vorliegende Penicillin oder Cephalosporin nicht für eine orale Verabreichung geeignet ist, dann wird das Arzneimittel für eine parenterale Verabreichung angepaßt
ίο
Bei einer bevorzugten Verwendung der Clavulansäure oder deren Salze oder Ester zusammen mit einem /J-Lactam-Antibiotikum beträgt das Verhältnis von Clavulansäure oder deren Salz oder Ester zum vorhandenen 0-Lactam-Antibiotikum 10:1 bis 1 : 10 und vorzugsweise 3 : 1 bis 1 : 3.
Die Gesamtmenge der in einer Einzeldosierungsform vorhandenen antibakteriellen Mittel liegt gewöhnlich zwischen 50 und 1500 mg und üblicherweise zwischen 100 und 1000 mg.
Die Arzneimittelgemische können zur Behandlung von Infektionen von u. a. der Atemwege, des Harnsystems und der Weichteile beim Menschen verwendet werden Sie können auch zur Behandlung von Infektionen bei Haustieren, wie der Mastitis beim Vieh, eingesetzt werden.
Üblicherweise werden zwischen 50 und 6000 mg des Arzneimittelgemisches je Behandlungstag verabreicht, jedoch vorzugsweise zwischen 500 bis 3000 mg je Tag. Jedoch für eine Behandlung schwerer Korperinfektionen oder Infektionen eines besonders schwer beeinflußbaren Organismus können in Übereinstimmung mit der klinischen Praxis höhere Dosen verwendet werden.
Die genaue Form der Arzneimittelgemische hängt in bestimmtem Maß von dem zu behandelnden Mikroorganismus ab. Für eine Behandlung von Infektionen werden die Arzneimittelgemische üblicherweise so eingestellt, daß sie ein Maximum beim Blutspiegel von mindestens 0,1 μg/ml, noch zweckmäßiger von mindestens 0,25 μg/ml und vorzugsweise von mindestens 1 'ig/ml Clavulansäure hervorrufen.
Die Penicilline oder Cephalosporine in den synergistisch wirkenden Arzneimittelgemischen sind üblicherweise bis zu oder bei annähernd einer üblicherweise verwendeten Menge vorhanden, wenn das betreffende Penicillin oder Cephalosporin als einziges, bei der Behandlung der Infektion verwendetes therapeutisches Mittel vorliegt
Bei einer besonders bevorzugten Verwendung der Clavulansäuren beträgt das Verhältnis von Clavulansäure oder deren Salze oder deren in vivo hydrolysierbaren Ester gegenüber Ampicillin oder Amoxycillin oder einer Vorstufe davon 50 bis 500 mg zu 150 bis 1000 mg. Noch zweckmäßiger beträgt das Verhältnis eines pharmakologisch verträglichen Salzes der Clavulansäure gegenüber Amoxycillin oder Ampicillin oder einer deren Vorstufen 50 bis 250 mg zu 200 bis 500 mg.
Die Substanzen in derartigen Arzneimittelgemischen können gegebenenfalls in hydratisierter Form vorliegen. Die Gewichte der Antibiotika in solchen Arzneimittelgemischen werden auf der Grundlage des in dem Arzneimittelgemisch theoretisch verfügbaren Antibiotikums und nicht auf der Basis des Gewichtes pro Arzneimittel ausgedrückt
Beschreibung 1
Zur Bestimmung der
Clavulansäure geeigneter Versuch
Grundlagen des Versuchs
Lösungen mit einem Gehalt an Clavulansäure (Filtrat der Nährbouillon, Proben aus einem Isolierungsverfahren oder dergleichen) werden 15 Minuten mit einem 0-Lactamase-Präparat bei 37° C in einer 0,05-m Phosphatpufferlösung vom pH 7 bebrütet Währenddessen tritt eine Enzymhemmung oder eine Inaktivierung auf. Dann wird ein Substrat (Benzylpenicillin)
60 zugegeben und das Bebrüten bei 37°C 30 Minuten fortgesetzt. Die Menge des enzymatischen Abbaus des Substrats zu Penicillansäure wird mittels des Hydroxylamin-Versuchs für Penicillin bestimmt. Die Menge der verwendeten /J-Lactamase errechnet sich aus einer 75prozentigen Hydrolyse des Benzylpenicillins in 30 Minuten bei 37°C.
Das Ausmaß der Hydrolyse ist der Einfluß der Menge des ungehemmt verbleibenden Enzyms. Die Ergebnisse werden ausgedrückt in Prozent Hemmung der Enzymaktivität durch eine gegebene Verdünnung der Clavulansäure enthaltenden Lösung (z. B. des Filtrats der Nährbouillon) oder durch die Konzentration der Clavulansäure in μg/ml bei gegebener 50prozentigen Hemmung des Enzyms unter den vorstehend genannten Bedingungen (I50).
/3-Lactamase-Enzym
Es wird die mittels Escherichia coli JT4 erzeugte p-Lactamase ais Enzym verwendet Diese Zuleitung isi ein Ampicillin-resistenter Stamm und verdankt seine Resistenz einer Erzeugung der den R-Faktor steuernden /3-Lactamase. Gegebenenfalls können ähnliche den R-Faktor steuernde /?-Lactamasen verwendet werden.
Die auf einem Schrägagar gehaltene Züchtung wird in einem 400 ml sterilen Trypton-Medium bebrütet, das in einer konischen Flasche von 2 Liter Inhalt enthalten ist. Dieses Medium hat die folgende Zusammensetzung: 32 g/Liter Trypton, 20 g/Liter Hefeextrakt, 5 g/Liter Natriumchlorid und 2,2 g/Liter Calciumchlorid mit 6 Mol Hydratwasser. Der pH-Endwert wird mit verdünnter Natronlauge auf 7,4 eingestellt. Die Flasche wird 20 Stunden auf einem Drehschüttler mit 240 UpM bei 250C geschüttelt.
Die bakteriellen Zellen werden durch Zentrifugieren gesammelt, mit 0,05-m Phosphatpufferlösung vom pH 7 gewaschen (nochmals suspendiert und zentrifugiert) und dann in Wasser nochmals suspendiert, wodurch man eine 25fache Zellkonzentration in dem Kulturmedium erhält Diese Zellsuspension wird dann bei 4°C in einem MSE-Ultraschal!-Disintegrator zertrümmert Die Z~llbruchstücke werden durch Zentrifugieren entfernt und aliquote Anteile der überstehenden Lösung werden im tiefgefrorenen Zustand gelagert Zur Verwendung bei dem Versuchsverfahren wird das Überstehende mit einer 0,005-m Phosphatpufferlösung verdünnt bis man eine etwa 75prozentige Hydrolyse einer 1 mg/ml enthaltenden Lösung von Benzylpenicillin in 30 Minuten bei 37° C erhält.
Versuchsverfahren
Geeignete Verdünnungen des Hemmpräparats und der /J-Lactamase-Lösung werden vermischt und 15 Minuten bei 37° C bebrütet (Test). Ein Kontrollversuch mit einer Pufferlösung anstelle des Inhibitorpräparats wird ebenfalls bebrütet Dann wird eine Benzylpenicillin-Lösung (Substrat) zu dem Test- und dem Kontrollgemisch gegeben. Dann wird die Bebrütung weitere 30 Minuten bei 370C fortgesetzt Es wird dann das restliche Benzylpenicillin in jedem Gemisch unter Verwendung des Hydroxylaminversuchs bestimmt wie er beschrieben ist von Batchelor und Mitarbeitern in Proc Roy. Soc B 154 (1961), S. 498. Zu allen Tests werden 6 ml Hydroxylamin-Reagens zugegeben. Die Kontrollversuche und die Versuche mit den reinen Substanzen läßt man !0 Minuten bei Raumtemperatur reagieren, bevor man 2 ml eines Eisen(III)-ammoniumsulfat-Reagens zusetzt Die Absorption der Endlösungen wird in einem
E.E.L-Colorimeter oder in einem Spektrophotometer bei 490 nm gegenüber dem reinen Reagens gemessen. Die Zusammensetzungen der Reaktionslösungen, der Testlösungen und der reinen Substanzen vor dem Hydroxylamin-Verriich sind wie folgt.
Bestandteile (alle gelösl in oder lest
verdünnt πν· 0,005-m
I'hosphatpulTer vom pH 7)
FschericSia coli-ß-Lactamasc-Lösung 1,9
Inhibitor 0,1
Benzylpenicillin 5 mg/ml 0,5
0,005-m PhosphatpufTcr vom pH 7 0,0
Berechnung der Ergebnisse
D\e prozentuale Hemmung der ß-Lactamase wird wie folgt berechnet:
Absorption des reinen B8nzyipeniciiiins minus Absorption der Kontrollösung (nicht gehemmte Reaktion) = χ
Absorption der Testlösung (gehemmte Reaktionslösung) minus Absorption der Kontrollösung (nicht gehemmte Reaktion)=/
Hemmung in % -- — · 100.
.v
Um den Ijo-Wert zu 8rhalten, wird das Hemmpräparat verdünnt bis eine 50prozentige Hemmung der 0-Lactamase-Inaktivierung des Benzyipeniciiiins bei dem vorgenannten Verfahren erhalten wird.
Beschreibung 2
Papierchromatographische Bestimmung
der Clavulansäure
Das Filtrat der Nährbouillon und eine Bezugslösung der Clavulansäure (250 μg/ml eines teilweise gemnigten Präparats) werden auf 1 cm breite Papierstreifen (Whatman No. 1) (20 μίΐΙεΓ der Ausgangslösung) getüpfelt Die Chromatogramme laufen bei absteigender Chromatographie 16 Stunden bei 5° C unter Verwendung eines Gemisches von n-Butanol/lsopropanol/Wasser im Volumenverhältnis 7 :7 :6 als Lösungsmittel. Die Streifen werden bei 400C getrocknet und auf Agarplatten ausgelegt die 6 μg/ml Benzylpenicillin enthalten und dann mit εϊηεηι ß-Lactamase 8rzeugenden Stamm von Klebsieila aerogenes (synergistisches System) beimpft Die Platten werden über Nacht bei 30° C bebrütet und die Clavulansäure zeigt sich als Zone eines gehemmten Wachstums. Der Rr-Wert der Zone ist 0,46. Die Menge von 6 μg/ml Benzylpenicillin allein liegt unterhalb der erforderlichen Konzentration, um Klebsiella aerogenes abzutöten, jedoch in Gegenwart eines /?-Lactamase-Hemmstoffes wird diese Konzentration toxisch, was hinsichtlich des Synergismus zu sagen ist
Die Verwendung des vorgenannten synergistischen Systems ermöglicht die Feststellung der Clavulansäure bei Konzentrationen unterhalb denjenigen, bei denen sie eine antibakterielle Wirksamkeit zeigt
Beschreibung 3
Dünnschicht-chromatographische Bestimmung
des Natriumsalzes der Clavulansäure
Lösungen von Präparaten des Natriumsal2.cs der Clavulansäure werden auf Glasplatten, die mit einer
Keines Benzyl Kontroll- Keines
penicillin. vcrsuch. Reagens,
ml ml ml
0.0 1,9 1,9
0,0 0,0 0,0
0,5 0,5 0.0
2,(1 0,1 0,6
-, 0,25 mm dicken Schicht von Silikagel (F254) beschichtet sind, in einer Menge von 5 μί^εΓ von 1 mg/ml getüpfelt Die Chromatogramme laufen bei 22°C unter Verwendung einer oberen Phase eines Gemisches von n-Butanol/Äthanol/Wasser im Volumenverhältnis von
:o 4 : i : 5. Die Chromaiogrammpiaiien werden bei 4ö"C getrocknet. Das Natriumsalz der Clavulansäure wird durch Bioautographie auf Agarplatten mit einem Gehalt von 6 μg/ml Benzylpenicillin angeordnet und mit Klebsieila aerogenes beimpft (synergistisches System
i-i wie bei der vorstehend besprochenen Papierchromatographie). Die Agaroberfläche wird mit einem feinen Filtertuch abgedeckt, bevor die Dünnschicht-Chromaiographieplatte darübergelegt wird. Nach 15- bis JOminütigem Ruhenlassen zum Befeuchten und Diffundieren
in wird die Dünnschicht-Chromatographieplatte mit Hilfe des Filtertuches abgehoben und die Agarplatte über Nacht bei 300C bebrütet, um die Zonen eines gehemmten Wachstums aufzuzeigen. Der Rf-Wert des Natriumsalzes der Clavulansäure in dem vorgenannten
r. Lösungsmittel beträgt annähernd 037. Zwei sprühbare Reagentien, nämlich Ehrlichsches Reagens und Triphenyltetrazolium-chlorid, werden ebenfalls verwendet, um die Zone des Natriumsalzes der Clavulansäure aufzuzeigen. Das erstgenannte Reagens besteht aus 300 mg
p-Dimethyiaminobenzaldehyd, das in 9 ml Äthanol, 54 ml n-Butanol und 9 ml konzentrierter Chlorwasserstoff säure gelöst ist Beim 1- bis 2minütigen Erh.tzen der besprühten Dünnschicht-Chromatographieplatte auf 120°C erscheint das Natriumsalz der Clavulansäure als rosaroter Flecken. Das Triphenyltetrazolium-chlorid-Reagens besteht aus einem Gemisch von 1 Volumenteil einer 4prozentigen Lösung dieser Verbindung in Methanol und 1 Volumenteil methanolischer Natronlauge. Nach dem Aufsprühen werden die Dünnschicht-
,0 Chromatographieplatten auf 8O0C erhitzt Das Natriumsalz der Clavulansäure erscheint als roter Punkt auf weißem Untergrund.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
Antibaktericller Synergismus zwischen Ampicillin
und dem Natriumsalz der Clavulansäure
Die Mindest-Hemmkonzentrationen von Ampicillin, von dem Natriumsalz der Clavulansäure und von Ampicillin in Gegenwart von 1 u£/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure werden bei einer Reihe von 0-Lactamase-erzeugenden Bakterien bestimmt Die Organismen werden in eine »Oxoidw-Empfindlichkeits-Testflüssigkeit überimpft, die sich in kleinen Löchern in einer Piastikcuvette befinden und die unterschiedliche Konzentrationsgradienten von einmal Ampicillin, zum anderen von dem Natriumsalz der Clavulansärre und
/.tu;·'; dritten von Ampicillin plus 1 μg/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure (Mikrotiter-Methode) enthalten. Die Endverdünnung des Impfstoffes beträgt 0,5 χ ΙΟ"2. Die Cuvette wird bei 37°C über Nacht bebrüte!. Eine Aufzeichnung der Endpunkte des bakteriellen Wachstums wird am nächsten Morgen vorgenommen. Die Mindest-Hemmkonzentrationswerte in μg/ml sind in der Tabelle I verzeichnet, die auch aufzeigt, daß der Synergismus bei der niedrigen Konzentration von 1 μg/ml in bemerkenswerter Weise die antibaktcrielle Wirksamkeit von Ampicillin gegenüber bestimmten
grampositiven und gramnegativen Bakterien steigert. Der Mechanismus dieses Snyergismus besteht wahrscheinlich darin, die Hemmung der Ampicillin-zerstörenden 0-Lactamase-Enzyme nach sich zu ziehen, doch kann die Existenz anderer Mechanismen nicht ausgeschlossen werden.
Ähnliche Ergebnisse wie die in Tabelle-1 angegebenen werden erhalten, wenn man Ampicillin durch Amoxycillin oder durch den Phthalidylester des Arnpicillins ersetzt.
Tiibclle I
Antibakterieller Synergismus /wischen Ampicillin und dem Nalriumsal/ der Clavulansäure
Dakterienstanim Mindesl-lle mmkonzenlration - , 1,8 us/ml
Nalriumsal/ ' der Ampicillin > 500 Ampicillin in
Clavulansäure 125 Gegenwart
125 von I /ig/ml
250 Natriumsalz
>500 der Clavulan
500 säure
Ischerichia aiii NCTC 10418 31 250 <0,4
lischerichia aiii B 11 62 125
Klebsiella aerogenes A 31 <0,4
Klcbsiclla sp 62 31 <0,4
finterobacter cloacae 62 <62
Serratia ninrccscens 125 62
Staphylococcus .ureus (Russell) 15 <0,4
Staphylococcus aureus 62 7,5
Beispiel 2
Antibakteriell Synergismus zwischen Cephaloridin und dem Natriumsalz der Clavulansäure
Die Mindest-Hemmkonzentration von Cephaloridin, von dem Natriumsalz der Clavulansäure und von Cephaloridin in Gegenwart von 5 ;ig/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure werden nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren bestimmt. Die Ergebnisse in Tabelle II zeigen, daß ein Synergismus zwischen dem Natriumsalz der Clavulansäure und Cephaloridin erhalten werden kann, insbesondere beim jS-Lactamase-erzeugenden Stamm von Staphylococcus aureus (Russell).
Tabelle II
Antibakterieller Synergismus zwischen Cephaloridin und dem Natriumsalz der Clavulansäure
Bakterienstamm Mindest-Hemmkonzentration , /ig/ml in Gegenwart
Natriumsalz der Cephaloridin Cephaloridin von 5 //g/ml
Clavulansäure Natnumsalz
der Clavulan
säure
7,5
<0,03+)
Proteus mirabilis 899 >500*) 62 3,7
Staphylococcus aureus (Russell) 15 3,1
Staphylococcus aureus 62 15
*) Endpunkt.
+) der gleiche Wert wird erhalten, wenn 1 /jg/ml anstatt 5 /jg/ml Synergist zugegeben wird.
Beispiel 3
Antibakterieller Synergismus zwischen dem Natriumsalz der Clavulansäure und verschiedenen Penicilliner.
Die in der Tabelle angegebenen Ergebnisse werden nach dem in Beispiel I beschriebenen Verfahren erhalten.
15 16
Tabelle ΠΙ
Antibakterieller Synergismus zwischen dem Natnumsalz der Clavulansäure und verschiedenen Penicillinen gegenüber Stämmen von KJebsielia aerogenes
Amoxycillin +5 pg/ml Carbenicillin*) +5 //g/ml Benzylpenicillin +5 /ig/ml
allein Synergist allein Synergist allein Synergist
0,97 7,8 7,8
500 3,9 500 15 250 15,6
500 15,6 500 7,8 500 15,6
250 125 250
*) Ähnliche Ergebnisse werden beobachtet, wenn Carbenicillin durch den Phenyl-d-ester des Carbenicillins oder durch Ticarciliin ersetzt wird.
Beispiel 4
Antibakterieller Synergismus zwischen Ampicillin und Estern der Clavulansäure
Die in der Tabelle IV angegebenen Ergebnisse werden nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren erhalten.
Tabelle IV
Antibakterieller Synergismus zwischen Ampiriifin und Estern der Clavulansäure gegenüber
Stämmen von KJebsielia aerogenes
Stamm
Ampicillin allein
Ampicillin + 5 pg/ml des Methylesters der Clavulansäure
Ampicillin + 5 /ig/ml des Benzylesters der Clavulansäure
A 500
E 70 500
62 500
1,9 3,9 3,9
Weder Clavulansäure-methylester noch Clavulansäurebenzylester hemmen das Wachstum der Testorganismen bei Konzentrationen von 100 ug/ml.
Tabelle V
Synergistische Wirkung von Gemischen aus Ampicillin und Estern der Clavulansäure gegen Staphylococcus aureus Russell
Mindcsthemmkonzentrationen (//g/ml) Ester allein Ampicillin allein Ampicillin
+ 1 //g/ml Ester
Ester +5/ig/ml
CHj 62 125 0,06 0,03
CHjC6H5 16 250 0.4 0.08
CHjCOC6H5 62,5 500 0,9 <0.l
Phthalidyl 62,5 500 4,0 1,6
CHjCOCH3 31 250 0,8 <0,l
CHjCH2OCOCH3 125 500 1,25 0,08
CH2CH2Br 125 500 1,25 0,3
Cyclohexyl 500 62,5 10 2,5
P-CH2C6H5CH3 62 500 1,25 0,3
CHjC - CH 62 500 0,6 0,16
CHjCH2OCH, 25 1000 2,5 0.6
C6H5 62,5 500 0,9 <0,l
6-Methoxynaphthylmethyl 62 250 2,5 0,3
Carboxymethyl 125 500 3.1 0,6
Benzylbenzyl 250 500 10 1.25
Benzoaxazolunylmethyl 500 500 - 0.1
Aminoäthoxyiithyl 500 250 31 4.0
Piperidylmethyl 62.5 125 0.3 0.08
p-Methoxybenzyl 62 5(X) 1.25 0.3
N-Benzyloxyciirbonyl-N-mcthylaniinoiithyl 500 500 50 2.5
230 238/228
17
18
Tabelle VI
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz des Clavulansäure-(carboxymethyO-esters und Cephalosporinen gegen Staphylococcus areus Russell
Cephalosporin-Derivat
Cephaloridin Cephalothin Cefazolin Cephalexin Cephradin Cefuroxim Cephamandol
Mindesthemmkonzentrationen (/ig/ml) Cephalosporin- Cephalosporin-Derivat+ 10/ig/ml Derivat allein des Natriumsalzes
des Clavulansäure-(carboxymethyl)-esters
2,5
0,156
0,31
0,6
2,5
2,5
2,5
2,5
Tabelle VII
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Nairiumsaiz des Ciavu!ansäure-(carböxymethyl)-esters und Penicillinen gegen Staphylococcus aureus Russell
Penicillin-Derivat Mindesthemmkonzentrationen (/ig/ml) Penicillin- Cephalosporin-Derivat+ 10/ig/ml Derivat allein des Natriumsalzes des Clavulan-
säure-{carboxymethyl)-esters
0,6 0,6
1,25
2,5
2,5
Synergistische Wirkung von Gemischen aus Ampicillin und Clavulansäure-benzylester gegenüber verschiedenen Bakterien
Mindesthemmkonzentrationen (//g/ml) Ampicillin Benzylester Ampicillin
allein allein + 5 μ$/τη\
Benzylester
Ampicillin >500
Amoxycillin 500
Carbenicillin 250
Ticarcillin 250
Sulbenicillin 62,5
Epicillin >500
Cyclocillin >500
Benzylpenicillin >500
Tabelle VIII
Staphylococcus aureus Russell 125 62 < Ο,Ρ.ι
Klcbsiella A 500 250 0,23
Eschcrichia CoIi JT4 >4000 250 4000*)
*) Die Mindestkonzentration liegt bei 250 /jg/ml beim Einsatz von 20 mg/ml.
Tabelle IX
Synergistische Wirkung von Gemischen aus Ampicillin und Clavulansäure-methylester gegenüber verschiedenen Bakterien
Mindesihemmknnzentratinnen (^gZmI) Ampicillin Methylester Ampicillin
allein allein + 5 ^g/ml
Methylester
Staphylococcus aureus Russell 250 31-62, <0,5
Proteus C889 >500 125 8
Escherichia coli JT 19 >500 125 16
19
20
Tabelle X
Synergistische Wirkung von Gemischen aus Ampicillin und Clavulansäure-phthalidylester gegenüber verschiedenen Bakterien
Mindesthemmkonzenirutionen (/ig/ml) Ampicillin Phthalidylester Ampicillin
allein (jedes Isomere) +■ 5 //g/ml
allein Phthalidylester
Staphylococcus aureus Russell 500 62 1,6
Klebsieila E 70 >500 125 3-6,2
Escherichia coli JT4 62 >4000 2000
Tabelle XI
Synergistische Wirkung von Gemischen aus Ampicillir. und Clavulansäurephenyiester gegenüber verschiedenen Bakterien
Mindesthemmkonzentrationen (//g/ml) Ampicillin Phenylesier Ampicillin
allein allein + 5 //g/ml
Phcnylcstcr
Staphylococcus aureus Russell Klebsiella E 70 Escherichia coli JT4
Tabelle XII
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure (=Synergist) und Cephalosporinen gegen Proteus
62,5 62 <0
500 62 6
>4000 62 250
Mindesthemmkonzentralioncn (//g/m!) irabilis C 889 Proteus morganii 1580 Proteus vulgaris WO91 A Q 3618
"roteus Q 2879 62.5 DU 10 >2000 WO 90 >2000 125 >2000
LO 8406 ^2000 3.9 1000 3,9 1000 7,8 0,9 7,8
Cephaloridin allein >2000 15,6 7,8 >25O 1,9 7,8 7,8 3,9 3,9
Cephaloridin + Synergist 1 //g/ml 250 7,8 7,8 >25O >2000 3,9 >2000 500 >2000
Cephaloridin + Synergist 5 //g/ml 31,25 125 1,9 500 3,9 1000 7,8*) K9 15,6
Cefazolin allein 125 3,9 3,9 >25O 1,9 3,9 7,8 1,9 0,9
Cefazolin + Synergist I //g/ml 125*) 3,9 3,9 >25O 2000 3,9 >2000 250 >2000
Cefazolin + Synergist 5 /ig/ml 125 500 0,9 l-i,6-7,8 0,4 1000 3,9*) <0,2 3,9*)
Cephamandol allein 500 7,8 0,2 7,8 0,4 3,9 0,4 <0,2 <0,2
Cephamandol + Synergist I //g/ml 1,9 0,4 <l,9 62,5-31 >2000 1,9 >2000 125 15,6
Cephamandol + Synergist 5 //g/ml 3,9 15,6*) 0.4 62.5 1,9 >2000 0,2 <0,2 0,9
Cefuroxim aliein <1,9 7,8*) 0,2 62.5 0,9 3,9 0,4 <0,2 0,4
Cefuroxim + Synergist 1 //g/ml 1,9 0,9 62,5 1,9
Cefuroxim + Synergist 5 //g/ml 3,9 125 62,5 >500 15,6 250-125
Natriumsalz der Clavulansäure, 125 31,25-62,5 15,6
allein 31.25
*) Endpunkte (teilweise Hemmung bei niedrigeren Mengen).
Tabelle XIII
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure (=Synergist) und Cephalosporinen gegen Klebsiella
Mindesthemmkonzentralionen (/zg/mi) A 62 E 70
Cephaloridin allein
Cephaloridin +■ Synergist 1 μg/mI Cephalorodin + Synergist 5 /ig/ml Cephalothin allein
Cephalothin + Synergist 1 //g/ml Cephalothin + Synergist 5 /ig/ml
1,5 6,25 12,5 500
3,1 6.25 6,25 15.6
3.1 1,5 1,5 12,5
12.5 125 12,5 500
6,25 12,5 12,5 31,0
6.25 6.25 6.25 25.0
21
Fortsetzung
Mindeslhemmkonzenlrationen (//g/ml) Λ bl E 70
Cephamandol allein Cephamandol + Synergist 1 //g/ml Cephamandol + Synergist 5 pg/ml Cefazolin allein Cefazolin + Synergist 1 /ig/ml Cefazolin + Synergist 5 /ig/ml Cephalexin allein Cephalexin + Synergist I /ig/ml Cephalexin + Synergist 5 //g/ml Natriumsalz der Clavulansäure, allein
*) Endpunkte (teilweise Hemmung bei niedrigeren Mengen).
Tabelle XIV
Synergistische Wirkung von Gemischen aus rtem Nstriumsalz der Clavulansäure (=Synergist) und Penicillinen gegen Proteus
3,1 3,1 6,25 1000
0,78 1,5 6,25 31,0
0,78 0,39 3,1*) 6,25
1,5 3,1 6,2 250
6,2 3,1 3,1- 15,6
1,5 0,8 3,1 3,!
6,2 12,5 6,2 62,5
12,5 6,2 12,5 15,6
6,2 1,5 6,2 12,5
125-62 31,0 31,0 62,5
Mindcsthemmkonzentrationen (//g/ml) Q 2879 108406" Proteus π ■organii 31-62 WO 91 Proteus vulgaris Q 3618 WO 90
Proteus mirabilis >1000 >1000 l) DU 10 1580 500 A >1000 1000
C 889 62 250 >1000 ^ 1000 0.9 62 15 31
Ampicillin allein >1000 15 15 500 7,8 <0,9 <0,9 1,9 7,8
Ampicillin + Synergist 1 /ig/ml 125-250 >I000 >1000 125 3,9 1000 <0,9 >1000 1000
Ampicillin + Synergist 5 //g/ml 15,6 125 500 >1000 >1000 1,9 125 15,31 31
Amoxycillin allein >IOOO 7,8 31 500-1000 7,8 0,9 <0,9 3,9 3,9
Amoxycillin + Synergist 1 /ig/ml 125 >I000 >1000 500 3,9 125 <0,9 250 62
Amoxycillin + Synergist 5 //g/ml 31 >1000 125-250 15
Carbenicillin allein >1000 31 62-125 <0,9 1,9-3,9 3,9-7,8
Carbenicillin + Synergist 500 7,8 <0,9
I /ig/ml 500 3,9-7,8 15 0,9 0,9-1,9 1,9-3,9
Carbenicillin + Synergist >1000 >1000 31 0,9-1,9 125 <0,9 125 31
5 //g/ml 15,6 31 62 >1000 125 <0,9 31 1,9-3,9 3,9
Ticarcillin allein >1000 3,9-7,8 15-31 2j0 0,9 <0,9 <0,9 0,9 0,9
Ticarcillin + Synergist 1 //g/ml 250 >IOOO >1000 3,9 <0,9 1000 <0,9 1000 500
Ticarcillin + Synergist 5 //g/ml 15,6 >1000 1000 125
Benzylpenicillin allein >!000 62 250 7,8 7,8 31
Benzylpenicillin + Synergist >1000 31 <0,9
1 //g/ml 250 3,9-7.8 3! 1,9 0,9-1,9 7,8-15
Benzylpenicillin + Synergist 1000 7,8 <0,9
5 //g/ml 15,6 125-250 62 125-250 62 15
Natriumsalz der Clavulansäure 31-62 62
allein 31
*) R+-Stamm.
Tabelle XV
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure und Penicillinen gegen Klebsiella
Mindesthemmkonzentrationen (//g/ml)
Ampicillin allein
Ampicillin + Synergist 0,5 /ig/ml Ampicillin + Synergist 5 //g/ml Amoxycillin allein Amoxycillin + Synergist 0,5 /ig/ml Amoxycillin + Syncrgis* 5 /ig/ml
Λ 62 E 70 Ba 95 LO 7 500*)
250 500 2000 >4000 >8000
0,39 1,56 0.39 >4000 -
<0,09 0,19 0,39-0,78 62 >8000
500 500 2000 >4000 >8000
0,39 6,0 1,56 >4000 -
0,19 0,39 0,39 250 >8000
23
Fortsetzung
MiiKlesthemmkon/enlialionen (//g/ml)
Λ fi2 [·: 7O
ll.i '»5
Carbenicillin allein
Carbenicillin + Synergist 0,5 //g/ml Carbenicillin + Synergist 5 /ig/ml Ticarcillin allein
Ticarcillin + Synergist 0,5 /ig/ml Ticarcillin + Synergist 5 /ig/ml Benzylpenicillin allein Benzylpenicillin + Synergist 0,5 //g/ml Benzylpenicillin + Synergist 5 /ig/ml Natriumsalz der Clavulansäure, allein
*) Rs werden auch 20 //g/rnl Natriumsal/ der Clavulansäure in ilen Gemischen verwendet, doch hemmt das Natriumsal.' d< Clavulansäure allein das Wachstum des Mikroorganismus.
31 250 500 >4000 > 8000
3,1 12 6.2 >4000 -
0,78 1,56-3,1 6.2 >1000 >8000
62-125 125 500 >4000 > 8000
1.56 6.2 3.1 >4000 -
0,78 0.78 1.56 500 >800()
125 1000 1000 >4000 < 800(1
3.1 25 6.2 >40()0 -
1,56 6.2 12.5 250 8(MMI
31 15 15 31 31
Tabelle XVI
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure und Penicillinen gegen Staphylc coccus aiircus
Ampicillin allein
Ampicillin + Synergist I /ig/ml Ampicillin + Synergist 5 /ig/ml Amoxycillin allein
Amoxycillin + Synergist ΐ /ig/ml Amoxycillin + Synergist 5 /vg/ml Carbenicillin allein
Carbenicillin + Synergist 1 /ig/ml Carbenicillin + Synergist 5 /ig/ml Ticarcillin allein
Ticarcillin + Synergist 1 /ig/ml Ticarcillin + Synergist 5 /ig/ml Benzylpenicillin allein Benzylpenicillin + Synergist 1 /ig/ml Benzylpenicillin + Synergist 5 /ig/ml Natriumsalz der Clavulansäure, allein Mindesthemmkonzentrationen (μμ/mll Russell II 5275
Nohel
1000 1000 500 500
0,6 1.25 2.5-1.25 0.6
0.019 0.3 0.15 0.03
1000 1000 500 500
1,25 1.25 2.5 0,6
0.15-0,07 0,3 0.15 0.15
62.5 62.5 62.5 31
5.0 5.0 5.0 2.5
0,6 2.5 0.6 1.25
31 62.5 62.5 31-15.6
5.0 2.5 5.0 2,5
0.6 1.25 1.25 2,5
1000 1000 1000 500
5.0 2,5 10 1,25
0,03 0,15 0.3 0.07
15,6 7.8 7.8 7.8
Tabelle XVII
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure und Anti-Pseudomonas-Penicilliner gegen Pseudomonas aeruginosa
Mindesthemmkonzentrationen (//g/ml)
PU 11 P 22 Dalgleish
1822
Carbenicillin allein
Carbenicillin + Synergist 5 /2g/ml Carbenicillin + Synergist 20 //g/ml Ticarcillin allein
Ticarcillin + Synergist 5 /zg/ml Ticarcillin + Synergist 20 μ%!π\\ Natriumsalz der Clavulansäure, allein
15,6 >4000 >4000 >4000
15,6 500-250 500 2000
15,6 250 250-125 125
15,6 >4000 >4000 >4000
15,6 250-125 250 2000
!5,6 62 125
62.5 250 250 250
26
Tabelle XVIII
Synergistische Wirkung von Gemischen aus dem Natriumsalz der Clavulansäure und Penicillinen gegen Escherichia coli
Mindesthemmkonzentrationen (//g/ml) JT 4 JT 9 JT 20 JT 39
JT
JT 77
JT 98
JT 159
Ampicillin allein
Ampi'.i iin + Synergist 1 //g/ml
Ampicillin + Synergist 5 //g/ml Amoxycillin allein Amoxycillin + Synergist 1 /ig/ml Amoxycillin + Synergist 5 //g/ml Carbenicillin allein Carbenicillin + Synergist 1 //g/ml Carbenicillin + Synergist 5 //g/ml
Ticarcillin allein
Ticarcillin + Synergist 1 //g/ml Ticarcillin + Synergist 5 ^g/ml Benzylpenicillin allein Benzylpenicillin + Synergist Benzylpenicillin + Synergist
Natriumsal/. der Clavulansäure, allein
>4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000
>4000 >4000 1000 4000 . 2000 125-250 125 62,0
1000 >!000 7,8 15,6 62,5 7,8 3,9 1.9
>4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000
>4000 >4000 2000 >4000 >4000 2000 250 250
>IOOO >1000 62,5 62,5 250 31 7,8 15.5
>40OO >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000
>4000 >4000 2000 >4000 4000 4000 1000-2000 1000
>1000 >IOOO 62,5 250 500 125-250 31 62,0
>4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000 >4000
>4000 >40O0 4000 >4000 >4000 4000 500-1000 500
>1000 >1000 62,5 125 500 125 31 31
>4000 >4000 >4000 >4000 4000 >4000 4000 4000
>4000 >4000 1000 4000 2000 500 250 125
1000 >1000 62,5 62,5 62,5 62,5 62,5 31
62,5 31 31 31 31-62 62,5 62-125 31

Claims (4)

Patentansprüche:
1. Verwendung von Clavulansäure, deren pharmakologisch verträgliche Salze oder deren Ester als Synergisten bei der antibiotischen Behandlung mit einem Penicillin oder Cephalosporin.
2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Verhältnis von Clavulansäure oder deren Salze oder Ester gegenüber Penicillin oder Cephalosporin 10:1 bis 1:10, vorzugsweise 3 :1 bis 1 :3, beträgt
3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Verhältnis von Clavulansäure oder deren Salze oder deren in vivo hydrolysierbarer Ester gegenüber Amoxycillin oder Ampicillin oder einer Vorstufe davon 50 bis 500 mg zu 150 bis 1000 mg beträgt
4. Verwendung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß das Verhältnis eines pharmakologisch verträglichen Salzes der Clavulansäure gegenüber Arnoxycilüp. oder Ampicillin oder einer deren Vorstufen 50 bis 250 mg zu 200 bis 500 mg beträgt
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