NO145247B - Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre Download PDFInfo
- Publication number
- NO145247B NO145247B NO751407A NO751407A NO145247B NO 145247 B NO145247 B NO 145247B NO 751407 A NO751407 A NO 751407A NO 751407 A NO751407 A NO 751407A NO 145247 B NO145247 B NO 145247B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- clavulanic acid
- lactamase
- medium
- acid
- culture
- Prior art date
Links
- HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N clavulanic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N 0.000 title claims description 94
- HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N Clavulanic acid Natural products OC(=O)C1C(=CCO)OC2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 93
- 229960003324 clavulanic acid Drugs 0.000 title claims description 93
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 28
- 241000187433 Streptomyces clavuligerus Species 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 241000424942 Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 Species 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 42
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 42
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 41
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 40
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 31
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 31
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 27
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 27
- WOGMLDNCNBLDCA-JSYANWSFSA-M sodium;(2r,3z,5r)-3-(2-hydroxyethylidene)-7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21 WOGMLDNCNBLDCA-JSYANWSFSA-M 0.000 description 27
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 20
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 20
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 18
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 14
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 13
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 12
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 12
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 10
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 10
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 10
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 10
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 6
- 239000003781 beta lactamase inhibitor Substances 0.000 description 6
- 229940126813 beta-lactamase inhibitor Drugs 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- 229940126085 β‑Lactamase Inhibitor Drugs 0.000 description 6
- CZTQZXZIADLWOZ-CRAIPNDOSA-N cefaloridine Chemical compound O=C([C@@H](NC(=O)CC=1SC=CC=1)[C@H]1SC2)N1C(C(=O)[O-])=C2C[N+]1=CC=CC=C1 CZTQZXZIADLWOZ-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 5
- 229960003866 cefaloridine Drugs 0.000 description 5
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 4
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LNOBZXNCABUBKK-UHFFFAOYSA-N 2,3,5-triphenyltetrazolium Chemical compound C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 LNOBZXNCABUBKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NKBWMBRPILTCRD-UHFFFAOYSA-N 2-Methylheptanoic acid Chemical compound CCCCCC(C)C(O)=O NKBWMBRPILTCRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000212749 Zesius chrysomallus Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009603 aerobic growth Effects 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N butyl acetate Chemical compound CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- OPEGYZAATHKDEM-HCWXCVPCSA-N (2r,4s)-2-[(r)-carboxy(formamido)methyl]-5,5-dimethyl-1,3-thiazolidine-4-carboxylic acid Chemical compound CC1(C)S[C@H]([C@H](NC=O)C(O)=O)N[C@H]1C(O)=O OPEGYZAATHKDEM-HCWXCVPCSA-N 0.000 description 1
- LSRDVUINCBDNAZ-YHBRXECLSA-N (6R)-7-[(5-amino-5-carboxypentanoyl)amino]-3-(carbamoyloxymethyl)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound NC(CCCC(=O)NC1[C@H]2SCC(COC(N)=O)=C(N2C1=O)C(O)=O)C(O)=O LSRDVUINCBDNAZ-YHBRXECLSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004256 Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 101900147372 Escherichia coli Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N Isopenicillin N Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229950008644 adicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000012459 agar diffusion assay Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004411 aluminium Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000007613 bennett's agar Substances 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N benzathine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 238000012474 bioautography Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- UZUODNWWWUQRIR-UHFFFAOYSA-L disodium;3-aminonaphthalene-1,5-disulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC(N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 UZUODNWWWUQRIR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N penicillin N Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/42—Oxazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
- A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D498/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre og salter derav, og denne fremgangsmåte omfatter dyrkning av en stamme av Streptomyces clavuligerus og utvinning av clavulansyre eller et salt derav fra dyrkningsmedi-
et ved i og for seg kjente metoder.
Fortrinnsvis anvendes Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen.
Streptomyces clavuligerus er beskrevet i detalj av Higgens m.fl. i Int. J. Systematic Bacteriology, 2/ L, 326 (1971). Denne streptomycet var av interesse fordi den produserte visse (3-laktam-antibiotika, f.eks. penicillin N, 7-(5-amino-5-karboksy-valer-amido)-3-karbamoyloksymetyl-3-cefem-4-karboksylsyre og 7-(5-amino-5-karboksyvaler-amido)-3-karbamoyloksymetyl-7-met-oksy-3-cefem-4-karboksylsyre. Streptomyceten er deponert i Agricultural Research Service Collection som NRRL 3585 og i American Type Culture Collection som ATCC 27064. Streptomyces clavuligerus er også blitt referert til i US-patent 3 770 590
og også av Nagarajan m.fl. i J. Amer. Chem. Soc . , 9_3, 2308 (1971), Brannon m.fl. i Antimicrob. Agents Chemother., 1, 237 (1972) og Antimicrob. Agents Chemother., 1, 247 (1972) og Higgens m.fl.
i J.Antibiotics, 27, 298 (1974).
(3-laktamaser er enzymer som åpner |3-laktamringen i penicilliner og cefalosporiner slik at man får produkter som er blottet for antibakteriell aktivitet. Disse enzymer produseres av mange bakterier, spesielt arter eller stammer av Escherichia, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Enterobacter og Staphylococcus, og er i mange tilfeller forklaringen på resistensen hos visse stammer av slike organismer overfor noen penicilliner og cefalosporiner. Betydningen av |3-laktamase-produksjonen kan forståes når man erkjenner at en stor andel av klinisk isolerte organismer produserer |3-laktamaser (se f.eks.- M.Wilson og I.A. Freeman i Bacteriological Proceedings, 80 (1969) hvor i en ar-tikkel med tittelen "penicillin-inaktivering ved hjelp av Gram-negative basiller" forfatterne viser at 84 % av de Gram-negati-
ve organismer som er isolert i et amerikansk hospital, produser-
te 3-laktamase). I mange tilfeller er noen penicilliner eller cefalosporiner ineffektive med hensyn til behandling av sykdommer som tilskrives ikke-3-laktamase-produserende organismer, på
grunn av den vanlige forekomst av ko-infeksjon av en 3-laktamase-produsent [se f.eks. R.May m.fl. i Brit.J.Dis.Chest., 661 185
(1972)]. Kombinasjonen av en 3-laktamase-inhiberende substans med et penicillin eller cefalosporin kan forventes å beskytte sistnevnte mot nedbrytning av bakteriell 3-laktamase og derved forbedre deres antibakterielle aktivitet overfor mange ineffektive organismer. Denne prosess med hensyn til å forbedre den antibakterielle aktivitet kalles synergisme når den antibakterielle aktivitet av kombinasjonen er godt i overskudd av den enk-le addisjon av aktivitetene til de to separate substanser. Den
3-laktamase-inhiberende komponent i blandingen kalles synergist, og slike substanser er verdifulle med hensyn til å øke den antibakterielle aktivitet hos penicilliner og cefalosporiner mot re-sistente organismer. Det er et av formålene ved foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe slike synergister.
Eksempler på anvendelse av visse 3-laktamase-resisten-te halvsyntetiske penicilliner og cefalosporiner som 3-laktamase-inhibitorer og synergister for penicilliner og cefalosporiner er. allerede beskrevet i litteraturen, se f.eks. Sutherland m.fl. i Nature, 201, 868 (1964); Sabath m.fl. i Nature, 204, 1066 (1964); 0'Callaghan m.fl. i Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 1968, 67 (1969). Imidlertid har ingen av disse kjente midler noen dra-matisk effekt på spektret til det annet antibiotikum som er til stede i blandingen.
Visse aktinomycetkulturer er beskrevet som produsenter av 3-laktamase-inhiberende substanser som opptrer synergistisk med penicilliner eller cefalosporiner, f.eks. de kulturer som er åpenbart i britisk patentskrift 1 363 075, og de som er beskrevet av Hata m.fl. i J.Antibiotics, 25_, 473 (1972) og Umezawa m.fl. i J.Antibiotics, 2_6, 51 (1973). Ingen av disse 3-laktamase-inhibitorer av aktinomycetisk opprinnelse er hittil funnet nyttige i det kliniske arbeid. Spesielt bemerkelsesver-dige trekk som adskiller clavulansyre fra andre 3-laktamase-inhibitorer av aktinomycetisk opprinnelse, er dens ekstraherbar-het i organiske løsningsmidler fra dyrkningsfiltrat ved pH 2, dens -høye stabilitet i menneskeblod og dens brede spektrum av antibakteriell og 3-laktamase-inhiberende aktivitet, dens lave molekylvekt og dens høye R^-verdier i papirkromatografering
under anvendelse av et utvalg av løsningsmiddelsystemer.
Vi har oppdaget at den aerobe dyrkning av Streptomyces clavuligerus i konvensjonelle næringssubstrater ved ca. 25-30°C under grovt sett nøytrale betingelser produserer en 3-laktamase-inhiberende substans som også er i besittelse av antibakteriell aktivitet. Dette nye materiale er betegnet "clavulansyre".
Clavulansyre har følgende egenskaper:
(a) Den er en karboksylsyre.
(b) Den danner et natriumsalt som har et karakteristisk infra-rødt spektrum i alt vesentlig som vist i figur 1. (c) Den har evne til å inhibere vekst av stammer av
Staphylococcus aureus.
(d) Den har evne til å synergisere den antibakterielle effekt av ampicillin mot 3-laktamase-produserende stammer av Escherichia coli, Klebsiella aerogenes og Staphylococcus
aureus.
(e) Den har evne til å synergisere den antibakterielle effekt av cefaloridin mot de 3-laktamase-produserende stammer av
Proteus mirabilis og Staphylococcus aureus.
(f) Den danner en metylester med molekylvekt (bestemt ved massespektroskopi) 213,0635, hvilket tilsvarer formelen C9HllfV
Således kan clavulansyre betraktes som en énbasisk karboksylsyre av formel CgHgNO^ som i form av sitt natriumsalt har et karakteristisk infrarødt absorpsjonsspektrum i alt vesentlig som vist i figur 1.
Den forbindelse som produseres av Streptomyces clavuligerus med de ovennevnte egenskaper, har formel (II):
Således kan clavulansyre betegnes 3-(3-hydroksyetyli-den)-7-okso-4-oksa-l-azabicyklo[3,2,0]heptan-2-karboksylsyre.
Stereokjemien ved C^ og C2 i clavulansyren er den samme som den man finner hos naturlig forekommende penicilliner og cefalosporiner, slik at clavulansyre kan representeres ved strukturformel (I):
Således er et mer fullstendig kjemisk navn på clavulansyre Z-(2R,5R)-3-(3-hydroksyetyliden)-7-okso-4-oksa-l-azabicyklo-[3,2,0]heptan-2-karboksylsyre.
Den store nytte ved clavulansyre vil lett forståes når det innsees at visse stammer av Klebsiella aerogenes A, hvis vekst ikke inhiberes ved nærvær av 125 yg/ml ampicillin, amoxy-cillin, carbenicillin eller benzylpenicillin eller ved nærvær av 10 yg/ml clavulansyre, inhiberes ved nærvær av mindre enn 12,5 yg/ml av de tidligere omtalte penicilliner når 5 yg/ml clavulansyre også er til stede. Det er også funnet at stammer av Staphylococcus aureus Russell, hvis vekst ikke inhiberes ved nærvær av 100 yg/ml ampicillin eller av 5 yg/ml clavulansyre, inhiberes ved nærvær av mindre enn 10 yg/ml ampicillin i nærvær av 1 yg/ml clavulansyre. Ved tester på hunn-mus er det funnet at blod- og vevspeil av clavulansyre betydelig i overskudd av 5 yg/ml lett kan oppnås ved subkutan administrering av 100 mg/kg av natriumsaltet av clavulansyre og at brukbare konsentrasjoner av clavulansyre kan oppnås etter oral administrering av 100 mg/ kg av natriumsaltet av clavulansyre.
Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen clavulansyre som tidligere beskrevet, samt dens salter.
Saltene av clavulansyre er som regel farmasøytisk akseptable salter som f.eks. natrium-, kalium-, kalsium-, magne-sium-, aluminium-, ammonium- og substituerte ammoniumsalter såsom trimetylammonium-, benzatin-, prokain- og lignende salter som konvensjonelt dannes med penicilliner eller cefalosporiner. Ikke-farmasøytisk akseptable salter av clavulansyre er nyttige mellomprodukter ved fremstilling av estere av clavulansyre, f. eks. litium- eller sølvsaltene av clavulansyre som kan omsettes med benzylbromid for dannelse av den nyttige benzylester av clavulansyre.
Salter av clavulansyre har tendens til å være mer sta-bile enn mor-syren og danner således foretrukne produkter av fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen. Spesielt egnede salter av clavulansyre omfatter natrium- og kaliumsaltene som har henholdsvis formel (III) og (IV) :
Krystallinske former av slike salter kan inneholde hydratvann.
Slik det her brukes betyr uttrykket "dyrkning" den tilsiktede aerobe vekst av en clavulansyre-produserende organisme i nærvær av assimilerbare kilder av karbon, nitrogen og mineralsalter. En slik aerob vekst kan finne sted i et fast eller halvfast næringsmedium, eller i et flytende medium hvor nærings-saltene er oppløst eller suspendert. Dyrkningen kan finne sted på en aerob overflate eller ved neddyppet kultur. Næringsmedi-et kan bestå av komplekse næringssalter eller kan være kjemisk definert. Søkeren har på sin side funnet medier som inneholder komplekse næringssalter, f.eks. gjærekstrakt, soyabønnemel og lignende, å være spesielt egnet.
De næringsmedier - også kalt substrater - som kan anvendes for dyrkning av Streptomyces clavuligerus, kan inneholde 0,1-10 % av en kompleks organisk nitrogenkilde, f.eks. gjærekstrakt, maisstøpvæske, vegetabilsk protein, frøprotein, hydrolysater av slike proteiner, melkeproteinhydrolysater, fis-ke- og kjøtt-ekstrakter og hydrolysater, f.eks. peptoner. Al-ternativt kan det anvendes slike kjemisk definerte nitrogenkil-der som urinstoff, amider, enkelte eller blandinger av vanlige aminosyrer, f.eks. valin, asparagin, glutaminsyre, prolin og fenylalanin. 0,1-5 % karbohydrat kan inkluderes i substratene, men glukose er uønsket i visse substrater, da det har en nedset-tende effekt på utbyttet av den ønskede clavulansyre. Stivelse eller stivelsehydrolysater, f.eks. dekstrin, sukrose, lakto-se eller andre sukkerarter eller glycerol eller glycerolestere kan også anvendes. Karbonkilden kan også stamme fra vegetabil-ske oljer eller animalske fett. Karboksylsyrer og deres salter kan inkluderes som karbonkilde for vekst og produksjon av
3-laktamase-inhibitorer. Et spesielt egnet, billig substrat er et som inneholder soyabønnemel ("Arkasoy") pluss tørket malt-destillator-løselig materiale ("Scotasol") pluss dekstrin.
Tilsetning av antiskummemidler,-f . eks. "Piuronic"
L81, kan være nødvendig for å regulere skumming av visse substrater i fermentatorer.
Slike mineralsalter somNaCl, KC1, MgCl„, ZnCl0, FeCl., , Na2S0^, FeS04, MgS04 og Na <+> - eller K +-salter av fosforsyre kan tilsettes til de ovenfor beskrevne substrater spesielt hvis de er kjemisk definert; CaCO^ kan tilsettes som kilde for Ca ioner eller for å gi pufringsvirkning. Salter av sporelementer, for eksempel nikkel, kobolt eller mangan, kan også inkluderes. Vitaminer kan tilsettes om så ønskes.
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus finner normalt sted i temperaturområdet 15-40°C, vanligvis 20-35°C og fortrinnsvis 25-30°C og ved en pH-verdi på mellom 5 og 8,5, fortrinnsvis mellom 6 og 7,5.
Streptomyces clavuligerus kan dyrkes i de ovenfornevnte substrater i koniske kolber av glass, som luftes ved rysting på roterende rystemaskin eller i fermentatorer av rustfritt stål utstyrt med ledeplater og omrørt med skiveformede skovlhjul utstyrt med vinger og luftet med en spreder. Fermenteringen kan også utføres på kontinuerlig måte.
Utgangs-pH-verdien ved fermenteringen er typisk 7,0, og maksimalt utbytte av clavulansyre oppnås i løpet av 2-10 dager ved 20-35°C. I en fermentator av rustfritt stål med omrøring, hvor det anvendes det "Arkasoy"/"Scotasol"/dekstrin-medium som det er henvist til ovenfor, er den foretrukne temperatur 26°C,
og topp-ytelser med hensyn til clavulansyre oppnås i løpet av 5 dager.
Clavulansyre kan ekstraheres fra dyrkningsfiltrat ved hjelp av en rekke metoder. Løsningsmiddel-ekstraksjon fra koldt dyrkningsfiltrat justert til sure pH-verdier, og fremgangsmåter basert på den anioniske natur av metabolitten, såsom anionebytte-harpikser har vist seg å være spesielt nyttige. Cellene til Streptomyces clavuligerus fjernes normalt først fra fermenteringen ved filtrering eller s.entrifugering før slike ekstraksjons-prosesser påbegynnes.
Ved løsningsmiddel-ekstraksjonsprosessen kjøles dyrkningsfiltratet^ og pH-verdien senkes til området pH 2-3 ved tilsetning av syre mens man blander grundig wed et organisk løsningsmiddel som ikke er blandbart med vann, for eksempel n-butylacetat, metylisobutylketon, n-butanol eller etylacetat. Syren som anvendes for å senke pH-verdien i substratet, er normalt en mineralsyre, for eksempel saltsyre, svovelsyre og salpetersyre, fosforsyre eller en lignende syre. n-butanol er et spesielt egnet løsningsmiddel for anvendelse ved ekstraksjon av det surgjorte dyrkningsfiltrat. Etter separering av fasene ved hjelp av sentr i fuger ing tilbake-ekstraheres den /3-laktamase-inhiberende metabolitt fra løsningsmiddelfasen inn i vandig natriumbikarbonat eller kaliumhydrogenfosfatpuffer, CaCO^-suspensjon eller vann mens man opprettholder pH-verdien ved tilnærmet nøytralitet, for eksempel ved pH 7,0. Denne vandige ekstrakt kan etter separering av fasene konsentreres under redusert trykk og frysetørkes slik at man får et rått preparat av et salt av clavulansyre. Dette preparat er stabilt når det lagres som et tørt, fast stoff ved -20°C.
I anionebytteharpiks-prosessen perkoleres det klarnede dyrkningsfiltrat ved en tilnærmet nøytral eller svakt sur pH-verdi, for eksempel pH 6-7, ned en kolonne med svak eller sterk base-anionbytteharpiks, for eksempel henholdsvis "Amberlite"
IR4B eller "Zerolit" FFIF inntil harpiksen er mettet og det /3-laktamase-inhiberende materiale strømmer ut fra bunnen. Kolonnen vaskes så med vann og elueres med vandig natriumklorid. De /3-laktamase-inhiberende fraksjoner oppsamles, gjøres voluminøse, avsaltes og frysetørkes slik at man får et rått, fast salt av clavulansyre.
"Amberlite"IR4B er et eksempel på en svakt basisk anionebytteharpiks med polyamin-aktive grupper og tverrbundet"polystyren/ divinylbenzen-grunnmasse. "Zerolite" FFIP" er en sterkt basisk anionebytteharpiks med kvaternære ammonium-aktive grupper og en tverrbundet polyvinyl/divinylbenzen-grunnmasse. Harpikser i lik-het med "Zerolite" FFIP inkluderer "Isopor" FFIP og "DeAcidite" FFIP SRA.64. Disse harpikser markedsføres av BDH Chemicals Ltd., Poole, Dorset, Storbritannia.
En alternativ form av ekstraksjonsprosessen er å bringe dyrkningsfiltratet (vanligvis ved tilnærmet nøytral pH-verdi) som inneholder et salt av clavulansyre, i kontakt med en organisk
fase i hvilken et vann-uløselig amin er oppløst. Egnede organiske løsningsmidler inkluderer slike konvensjonelle polare løsnings-midler som ikke er blandbare med vann, som metylisobutylketon,
trikloretylen og lignende. Egnede aminer inkluderer sekundære eller tertiære aminer hvor én av substituentgruppene er en lang-kjedet alifatisk gruppe, for eksempel med 12-16 karbonatomer, og den annen er en tertiær-alkylgruppe slik at molekylet er lipofilt. Søkeren har funnet at "Amberlite" LA2 er et vellykket amin. Normalt anvendes aminet i form av sitt syreaddisjonssalt.
Etter denne ekstraksjonsprosess er clavulansyren til stede i den organiske fase som aminsalt. Den organiske fase separeres så fra dyrkningsfiltratet. Clavulansyren kan tilbake-ekstraheres inn i en vannfase ved hjelp av en saltløsning, fortrinnsvis en konsentrert løsning av natriumklorid, natriumnitrat eller lignende. Det rå salt av clavulansyre kan så oppnås ved frysetørking eller lignende.
Andre primære isolasjonsmetoder som kan anvendes, inkluderer konvensjonelle metoder, for eksempel adsorpsjon på karbon, utfelling, utsalting og molekylfiltrering, men disse metoder er vanligvis ikke så vellykket som de ovenfor beksrevne metoder, som foretrekkes.
Ytterligere rensning av det rå fast-stoff som oppnås ved fremgangsmåtene som er beskrevet ovenfor, kan oppnås ved hjelp av en rekke metoder, men ionebyttekolonnekromatografi er spesielt godt egnet, spesielt ved anvendelse av "Isopor", "DeAcidite" FFIP, SRA64 eller DEAE cellulose. "DeAcidite"-kolonnen kan gradient-elueres med vandig løsning av et salt, for eksempel natriumklorid (0-0,5m). Søylen av "DEAE"-cellulose i O.Olm fosfatpuffer ved pH 7 kan elueres med en saltløsning, normalt en NaCl-løsning (0-0,2m NaCl i 0,0lm fosfatpuffer pH 7). Aktive fraksjoner kan påvises ved hjelp av sin Ø-laktamase-inhiberende aktivitet og sin antibakterielle aktivitet overfor Klebsiella aerogenes i en agar-diffusjonsanalyse. Fraksjonene som inneholder hovedmengden av denne aktivitet, kombineres så og konsentreres til et lite volum under vakuum. Dette råpreparat av clavulansyresaltet avsaltes ved perkolering ned en kolonne av "Bio Gel P2". ("Bio Gel P2"
er et eksempel på en høyt lipofil harpiks på hvilken organiske materialer kan adsorberes , men som ikke holder tilbake uorganiske salter. "Bio Gel P2" er en polyakrylamid-gel som leveres av Bio Rad, 32nd and Griffen Avenue, Richmond, Ca 94804, U.S.A.). Det aktive avsaltede materiale konsentreres så, blandes med etanol og kromatograferes ytterligere på en cellulose-kolonne under anvendelse av butanol/etanol/vann 4/1/5 vol./vol. toppfase som løsningsmiddel.
Fraksjoner som inneholder materiale som inhiberer Escherichia coli /3-laktamase gjøres voluminøse, inndampes til tørrhet under vakuum, gjenoppløses i vann og frysetørkes slik at man får et salt av clavulansyre som et hvitt, fast stoff.
De fremgangsmåter som er funnet mest nyttige ved påvisning av clavulansyre i dyrkningsfiltrater, er papirkromatografi og et bioautografisk påvisningssystem. Clavulansyre kan påvises ved å gjøre bruk av dens /3-laktamase-inhiberende aktivitet. Tynnsjiktkromatografi kan anvendes for påvisning av clavulansyre i faste preparater. Disse påvisnings- og analyse-prosesser er beskrevet 'senere i denne beskrivelse.
Beskrivelse 1
Analyse som er egnet for påvisning av clavulansyre
Prinsippet ved analysen
Løsninger som inneholder clavulansyre (dyrkningsfiltrat, prøver fra isolasjonsprosessen og lignende) inkuberes i 15 minutter med et /3-laktamase-preparat i 0,05m fosfatpuffer ved pH 7 og 37°C. 1 løpet av dette tidsrom inntrer enzym-inhibering eller -inaktivering. Substrat (benzylpenicillin) tilføyes så og inkuberingen fortsetter i 30 minutter ved 37°C. Mengden av enzymned-brytning av substratet til penicilloinsyre bestemmes ved hydroksylaminanalysen for penicillin. Mengden av /3-laktamase som anvendes, er slik at man får 75 % hydrolyse av benzyl-penicillinet i løpet av 30 minutter ved 37°C.
Graden av hydrolyse er en gjenspeiling av den enzym-mengde som forblir u-inhibert. Resultatene uttrykkes som prosent inhibering av enzym-aktiviteten ved en gitt fortynning av den clavulansyre-holdige løsning (for eksempel dyrkningsfiltrat)
eller konsentrasjonen av clavulansyre (^ug/ml) som gir 50 % inhibering av enzymet under de ovenfor angitte betingelser (I^q)•
ff- laktamase- enzym
Den /3-laktamase som produseres av Escherichia coli JT4, anvendes som enzym. Denne kultur er en ampicillin-resistent stamme og skylder sin resistens produksjonen av en R-faktor-
styrt /3-laktamase. Andre lignende R-faktor-styrte /3-laktamaser kan anvendes om så ønskes.
Kulturen som holdes på skråkulturer av næringsagar, in-okuleres i 400 ml sterilt trypton-medium som inneholdes i en 2 liter konisk kolbe. Dette medium har følgende sammensetning: Trypton ("Oxoid") 32 g/l, gjærekstrakt ("Oxoid") 20 g/l, NaCl 5 g/l og CaCl26H20 2,2 g/l. Den endelige pH-verdi ble justert til 7,4 med fortynnet NaOH. Kolben rystes ved 25 C i 20 timer på en roterende rystemaskin ved 240 o.p.m.
Bakteriecellene oppsamles ved sentrifugering, vaskes
med 0,05m fosfatpuffer pH 7 (resuspendert og sentrifugert) og resuspenderes i vann slik at man får en cellekonsentrasjon som er 25 ganger den som er i dyrkningsmediet. Denne cellesuspensjon ble så oppbrutt i en MSE ultrasonisk desintegrator ved 4°C. Celle-avfallet ble fjernet ved sentrifugering, og alikvoter av den over-
stående væske lagret i dypfrossen tilstand. For anvendelse i analyseprosessen fortynnes den overstående væske i 0,005m fosfatpuffer til den gir ca. 75 % hydrolyse av en 1 mg/ml løsning av benzylpenicillin i løpet av 30 minutter ved 37°C.
Analysemetode
Egnede fortynninger av inhibitorpreparatet og Ø-laktamase-løsningen blandes og inkuberes ved 37°C i 15 minutter ' (test).
En kontrollprøve med puffer istedenfor inhibitorpreparat inkuberes også. Benzylpenicillinløsning (substrat) tilsettes så til testen og kontrollblandingene, og inkuberingen fortsettes i ytterligere 30 minutter ved 37°C. Det resterende benzylpenicillin i hver blanding anslås så under anvendelse av den hydroksylaminanalyse som er beskrevet av Batchelor m.fl. Proe. Roy. Soc, B 154, 498
(1961). 6 ml hydroksylamin-reagens tilsettes til alle tester, kontrollprøver og blindprøver og tillates å reagere i 10 minutter ved romtemperatur før tilsetning av 2 ml ferri-ammoniumsulfat-reagens. Absorpsjonen av de endelige løsninger måles i et "E.E.L." kolorimeter eller et spektrofotometer ved 490 nm mot reagens-blindprøven. Sammensetningen av reaksjonene, testene og blind-prøvene før hydroksylamin-analysen er som følger:
Beregning av resultatene
Den prosentvise inhibering av /3-laktamasen beregnes på følgende måte:
Absorpsjon av benzylpenicillin-blindprøve minus absorpsjon av kontrollprøven (u-inhibert reaksjon) = x Absorpsjon av test (inhibert reaksjon) minus absorpsjon av kontrollprøven (u-inhibert reaksjon) = y
For oppnåelse av I5Q-verdien fortynnes inhibitor-preparatet til
50 % inhibering av /3-laktamase-inaktiveringen av benzylpenicillin oppnåes i ovennevnte prosess.
Beskrivelse 2
Papirkromatografisk påvisning av clavulansyre
Dyrkningsfiltrat og en referanseløsning av clavulansyre (250 ^ug/ml delvis renset preparat) avsettes som flekker (20 ^ul/ opprinnelse) på 1 cm brede papirstrimler av "Whatman" nr. 1. Kromatogrammene kjøres ved hjelp av nedadgående kromatografi i
16 timer ved 5°C under anvendelse av n-butanol/isopropanol/vann, 7/7/6 vol./vol. som løsningsmiddel. Strimlene tørkes ved 40°C
og legges på agarplater som inneholder 6 yug/ml benzylpenicillin, og kimdannes med en /3-laktamase-produserende stamme av Klebsiella aerogenes (synérgisme-system). Platene inkuberes natten over ved 30°C, og clavulansyre avsløres som en sone med inhibert vekst. Rf-verdien til sonen var 0,46. 6 ^ug/ml benzylpenicillin alene
er under den konsentrasjon som er nødvendig for å drepe Klebsiella aerogenes, men i nærvær av en /3-laktamase-inhibitor blir denne konsentrasjon toksisk, dvs. at det er synergisme til stede.
Anvendelse av det ovenfor nevnte synergisme-system muliggjør påvisning av clavulansyre ved konsentrasjoner som er under dem ved hvilke den viser antibakteriell aktivitet.
Beskrivelse 3
Tynnsjiktkromatografisk påvisning av clavulansyre - natriumsalt
Løsninger av clavulansyre-natriumsaltpreparater avsettes som flekker (5 ^ul av lmg/ml) på glassplater som er bestrøket med et 0,25 mm sjikt av silikagel ("F254") fra E. Merck, Darmstadt, Vest-Tyskland. Kromatogrammene kjøres ved 22°C under anvendelse av toppfasen av blandingen n-butanol/etanol/vann 4/1/5 vol./vol. Kromatogramplatene tørkes ved 40°C, og clavulansyre-natriumsaltet lokaliseres ved hjelp av bioautografi på agarplater som inneholder 6 yug/ml benzylpenicillin, og kimdannes med Klebsiella aerogenes (synergisme-system - se avsnittet om papirkromatografi ovenfor). Agaroverflaten dekkes av et fint filterklede før man legger TLC-platen på den. Etter at man har latt det gå 15-30 minutter for fukting og diffusjon, løftes TLC-platen av ved hjelp av filter-duken, og agarplaten inkuberes natten over ved 30°C for avsløring av sonene med inhibert vekst. R^-verdien til clavulansyre-natriumsalt i det ovenfor nevnte løsningsmiddel er tilnærmet 0,37. To spray-reagenser, Ehrlich- og trifenyltetrazoliumklorid anvendes også for avsløring av clavulansyre-natriumsaltsonen. Det først-nevnte reagens består av 300 mg p-dimetylaminobenzaldehyd opp-løst i 9 ml etylalkohol, 54 ml n-butanol og 9 ml konsentrert HCl. Ved oppvarmning av den sprøytede TLC-plate ved 120°C i 1-2 minutter viser clavulansyre-natriumsaltet seg som en rosa flekk. Trifenyltetrazoliumklorid-reagenset består av en blanding av
1 volumdel av en 4 % løsning av denne forbindelse i metanol med
1 volumdel metanolisk natriumhydroksyd. Etter sprøyting oppvar-mes TLC-platene ved 80°C. Clavulansyre-natriumsalt viser seg som en rød flekk på hvit bakgrunn.
Beskrivelse 4
(a) Antibakterielt spektrum av clavulansyre
Den antibakterielle aktivitet av clavulansyre-natriumsalt mot et område av bakterier ble bestemt under anvendelse av mikrotiter-metoden. Seriefortynninger av clavulansyre-natriumsalt i "Oxoid"-sensitivitetstest-buljong inneholdt i et mikrotiter-plastkar, ble inokulert med en overnattings-buljongkultur av hver organisme, slik at den endelige fortynning av pode-
-4
stoffet var 0,5 x 10 .. Kulturene ble inkubert natten over og punktene for bakterievekst notert neste morgen ved observasjon av kulturens grumsethet. Resultatene, uttrykt som tilnærmede MIC-verdier (minste inhiberende konsentrasjon yg/ml) er angitt i tabell 1 som viser at forbindelsen har et bredt spektrum av antibakteriell aktivitet. (b) Eksempler på [ 3- laktamase- inhibering av clavulansyre-natriumsalt.
Clavulansyre inhiberer progressivt og irreversibelt 3-laktamasen av Escherichia coli. Metoden fra beskrivelse 1 viser at de andre 3-laktamaser som er vist i tabell 2, også inhiberes av clavulansyre.
Med penicillin G som subtrat er I5Q-verdien til clavulansyre-natriumsalt mot /3-laktamasen av Staph. aureus (Russell) tilnærmet 0,06 yug/ml. (c) Antibakteriell synergisme mellom ampicillin og clavulansyre- natriumsalt.
Den minste inhiberende konsentrasjon (M.I.C.-verdier) for ampicillin, clavulansyre-natriumsalt og ampicillin i nærvær av 1 yug/ml clavulansyre-natriumsalt ble bestemt for et område, av /3-laktamase-produserende bakterier. Organismene ble inokulert i "Oxoid"-sensitivitetstestbuljong som befant seg i små groper i en plastskål og inneholdt separate konsentrasjonsgradienter av ampicillin, clavulansyre-natriumsalt eller ampicillin pluss 1 yug/ml clavulansyre-natriumsalt (mikrotitermetoden). Den endelige fortynning av overnattingsbuljong-podestoffet var 0,5 x 10 ^. Skålen ble inkubert ved 37°C natten over, og neste morgen ble det gjort notater angående sluttpunktene for bakterievekst. M.I.C.-verdiene i ^ug/ml er gjengitt i tabell 3 som av-slører at synergisten ved den lave konsentrasjon av 1 /ug/ml markert forbedrer den antibakterielle aktivitet for ampicillin mot visse Gram-positive og -negative bakterier. Mekanismen for denne synergisme innebærer sannsynligvis inhibering av ampicillin-ødeleggende /3-laktamase-enzymer, men eksistensen av andre mekanismer kan ikke utelukkes.
Lignende resultater som dem som er vist i tabell 3 ble oppnådd ved utbytting av ampicillin med amoksycillin eller med ftalidylesteren av ampicillin.
(d) Antibakteriell synergisme mellom cefaloridin og clavulansyre- natriumsalt
De minste inhiberende konsentrasjoner av cefaloridin, clavulansyre-natriumsalt og cefaloridin i nærvær av 5 ug/ml clavulansyre-natriumsalt ble bestemt ved den metode som er beskrevet i (c) ovenfor. Resultatene i tabell 4 viser at synergisme kan oppnås mellom clavulansyre-natriumsalt og cefaloridin spesielt for den 3-laktamase-produserende stamme av Staphylococcus aureus (Russell).
(e) Antibakteriell synergisme mellom nlaviilansyrp-nal-rliinisalt og forskjellige penicilliner
De resultater som presenteres i tabell 5, ble oppnådd ved den metode som er beskrevet i (c) ovenfor.
Eksempel 1
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 ble dyrket ved 26°c på agar-skråkulturer inneholdende 1 % "Yeatex" (gjærekstrakt), 1 %
glukose og 2 % "Oxoid"-agar nr. 3, pH 6,8. En steril løkke ble anvendt for overføring av mycel og sporer fra skråkulturen til lOO ml av et flytende medium i en 500 ml erlenmeyer-kolbe. Det flytende medium hadde følgende sammensetning:
Mediet ble justert til pH 7,0 med natriumhydroksyd-løsning, og 100 ml ble dispensert inn i kolber som ble lukket med skumplugger før autoklavering ved 1,05 kg/cm 2 i 20 minutter. En inokulert kimkolbe ble rystet i 3 dager ved 26°C på en roterende rystemaskin med 50,8 mm kast og en hastighet på 240 o.p.m. Produksjonstrinnkolber som inneholder det flytende medium som er beskrevet ovenfor, ble inokulert med 5 % vegetativt podestoff og dyrket under de samme betingelser som kimkolben. Prøver av dyrkningsfiltrat ble analysert med hensyn på inhibitor-virkning mot /3-laktamasen av Escherichia coli JT4. Optimal aktivitet ble oppnådd etter 3 dager. Resultatene er vist i tabell 6. En sone av clavulansyre ved R f = 0,46 ble sett da dyrkningsfiltratet ble undersøkt ved hjelp av papirkromatografisk metode som tidligere beskrevet. Økningen i størrelse av sonen var parallell med økningen i /3-laktamase-inhibitor-analyse.
Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 ble også dyrket i 2 liters rystede kolber som inneholdt 400 ml medium (produksjonstrinn) under anvendelse av det samme medium og de samme dyrkningsbetingelser som er beskrevet tidligere i dette eksempel. I disse større kar var veksten av organismen langsommere, og optimal /3-laktamase-inhiberende aktivitet ble oppnådd 7-9
dager etter inokuleringen med det vegetative kim. Resultatene er også vist i tabell 6»
EKSEMPEL 2
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
En kimkolbe fremstilt som i eksempel 1 ble anvendt for inokulering av 500 ml koniske kolber som inneholdt 100 ml alikvoter av følgende medium i avionisert vann: Løselig stivelse 2 ' vekt/vol.% Glycerol 0,3 vekt/vol.% "Scotasol" 0,1 vekt/vol.% "Arkasoy" 1 vekt/vol.% FeS04.7H20 0,01 vekt/vol.%
Mediet ble sterilisert ved autoklavering ved 1,05 kg/cm<2 >i 20 minutter og inokulert ved tilsetning av det 5 % vegetative kimtrinn. Kolbene ble rystet ved 26°C på en roterende rystemaskin som angitt i eksempel 1. Optimal titer av clavulansyren ble oppnådd mellom 3 og 5 dager. En fortynning på 1/2500 av dyrkningsfiltratet ga 60 % inhibering i /3-laktamase-inhiberingsanalysen. En sone av clavulansyre ble sett ved Rf = 0,46 ved anvendelse av den papirkromatografiske (bioautografiske) metode som tidligere er beskrevet. Denne sone øket i størrelse parallelt med økningen av aktivitet i /3-laktamase-inhibitor-analysen.
[Løselig stivelse levert av British Drug Houses Ltd.,
Poole, Storbritannia;
"Scotasol" er tørket destillators løselig materiale, levert av Thomas Borthwich Ltd., 60 Wellington Street, Glasgow, Storbritannia;
"Arkasoy" er soyabønnemel levert av British Arkady Co., Old Trafford, Manchester, Storbritannia].
EKSEMPEL 3
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
En kimflaske som produsert i eksempel 1 ble anvendt for inokulering av 500 ml koniske kolber som inneholdt 100 ml alikvoter av følgende medium fremstilt i avionisert vann og sterilisert som beskrevet tidligere. Podestoffnivået var 5 %.
De inokulerte kolber ble rystet ved 26°C. Optimal /3-laktamase-inhiberende aktivitet ble oppnådd mellom 3 og 5
dager. Aktiviteten var lik den som ble oppnådd i eksempel 2.
[Dekstrin markedsføres av C.P.C. (Storbritannia) Ltd., Trafford Park, Manchester, Storbritannia].
EKSEMPEL 4
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Kimtrinnet som beskrevet i eksempel 1 ble anvendt for inokulering av 500 ml koniske kolber som inneholdt følgende medium, fremstilt i avionisert vann:
Disse kolber ble behandlet nøyaktig som i de foregående eksempler og dyrket under identiske betingelser. /3-laktamase-inhiberingsaktiviteten ble produsert mellom 3 og 5 dager. Dyrkningsfiltrat ved endelig fortynning på 1/2500 ga 35-45 % inhibering i /3-laktamase-inhiberingsanalysen.
EKSEMPEL 5
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
/3-laktamase-inhiberende aktivitet som skyldes clavulansyre, ble produsert under anvendelse av følgende medium med identisk kimtrinn og identiske dyrkningsbetingelser som i eksempel 1.
Mediet ble fremstilt i avionisert vann.
/3-laktamase-inhiberingsaktivitet nådde et maksimumsnivå mellom 3 og 5 dager og var av lignende størrelse som det som ble produsert i henhold til eksempel 4.
EKSEMPEL 6
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Følgende medium produserte clavulansyre under anvendelse av de betingelser og det vegetative kim-podestoff som er beskrevet i eksempel 1.
Mediet ble fremstilt i avionisert vann.
Optimale titre ble oppnådd i løpet av 3 til 5 dager, og en 1/2500-fortynning av dyrkningsfiltratet ga 35-45 % inhibering i /3-laktamase-enzym-inhiberingsanalysen.
EKSEMPEL 7
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Som i eksemplene 4, 5 og 6 produserte det følgende medium 35-45 % inhibering (1/2500-fortynning) i /3-laktamase-analysen ved den optimale titer som nåes 3-5 dager etter inokuleringen. Alle betingelser var som tidligere beskrevet.
EKSEMPEL 8
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Følgende produksjonstrinn-medium produserte, ved anvendelse under standard dyrkningsbétingeIser som beskrevet i de foregående eksempler, 20-30 % inhibering ved 1/2500 fortynning i /3-laktamase-analysen mellom 3-5 dager etter inokulering. Under anvendelse av den papirkromatografiske metode som er beskrevet tidligere, ble en sone av clavulansyre sett ved = 0,46 da dyrkningsfiltratet ble undersøkt.
EKSEMPEL 9
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Under standard dyrkningsbetingeIser produserte det følgende medium clavulansyre 3-5 dager etter inokulering med det vegetative kim fra eksempel 1. En 1/2500 fortynning a<y> kulturen ga 20-30 % inhibering i P-laktamase-inhiberingsanalysen.
EKSEMPEL 10
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
En "Yeatex"/glukose-agar-skråkultur av S. clavuligerus ATCC 27064 ble anvendt for inokulering av en "Yeatex"/glukose-agar-skråkultur i en Roux-flaske ved å lage en mycel/sporesuspensjon i sterilt vann. Roux-flaskekulturen ble inkubert ved 26°C i 10 dager. Til denne skråkultur ble 100 ml sterilt vann tilsatt og en mycelsuspensjon fremstilt. Denne ble anvendt for inokulering av 50 liter av damp-sterilisert kim-medium med følgende sammensetning, i springvann."
["Pluronic" fra Jacobs and Van den Berg UK Ltd., 231
The Vale, London, W3, inneholdende en polypropylen/ polyetylen-blokkpolymer, og soyaolje fra British Oil and Cake Mills Ltd., Stoneferry Road, Hull, Storbritannia]
Mediet befant seg i en 90 liter fermentator av rustfritt stål med ledeplater , agitert ved hjelp av en 12,7 cm skovlhjul med skiver og vinger ved 240 o.p.m. Steril luft ble tilført v?d 50 l/min. og tanken inkubert ved 26°C.
Etter 72 timer ble kimfermentatoren anvendt for inokulering av 150 liter av det samme medium under anvendelse av en 5 vol.% tilsetning av steril overføring. Dette produksjonstrinn-medium befant seg i en 300 1 fermentator av rustfritt stål, fullstendig utstyrt med ledeplater og agitert ved hjelp av et 21,6 cm skovlhjul med skiver og vinger ved 210 o.p.m. Steril luft ble tilført ved 150 l/min. Fermenteringen ble opprettholdt ved 26°C. "Antifoam" ble tilsatt etter behov i 10 ml porsjoner (10 % "Pluronic" L81 i soyaolje). Det ble tatt prøver for /?-laktamase-inhiberings-analyse med jevne mellomrom. Fermentatoren ble høstet mellom 4 og 5 dager ved det optimale nivå av /3-laktamase-inhiberings-aktivitet (tabell 7).
EKSEMPEL 11
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Kimfermentatoren ble kjørt nøyaktig som beskrevet i eksempel 10 under anvendelse av det samme medium.
Etter 72 timer ble kimfermentatoren anvendt slik at
man fikk et 5 vol.% vegetativt podestoff inn i en 300 liter fermentator av rustfritt stål fullstendig utstyrt med ledeplater, inneholdende 150 liter dampsterilisert medium agitert ved hjelp av et 21,6 cm skovlhjul med skiver og vinger ved 210 o.p.m. Steril luft ble tilført ved 150 l/min. Fermenteringen ble opprettholdt ved 26°C. "Ahtifoam" ble tilsatt etter behov i 10 ml porsjoner (10 % "Pluronic" L81 i soyaolje).
Mediet som ble anvendt i produksjonstrinnet, var som beskrevet i eksempel 3 med tilsetning av 0,05 vol.% 10 % "Pluronic" L81/soyaolje-"Antifoam" før sterilisering.
Den /3-laktamase-inhiberende aktivitet for fermenterings-prøvene var lik verdiene fra eksempel 10 (se tabell 7). Papir-kromatograf isk undersøkelse avslørte en sone av clavulansyre ved Rf = 0,46 under anvendelse av den bioautografiske (synergisme-) metode som er tidligere beskrevet. Størrelsen av clavulansyre-sonen øket parallelt med økningen i /3-laktamase-inhibitoranalysen.
EKSEMPEL 12
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
100 ml sterilt vann ble tilsatt til en sporekultur av S. clavuligerus ATCC 27064 som var dyrket på Bennett's agar i en Roux-flaske i 10 dager ved 26°C. En mycel/sporesuspensjon ble produsert og anvendt for inokulering av 75 liter dampsterilisert medium av følgende sammensetning i springvann:
Mediets pH-verdi ble justert til 7,0.
Mediet befant seg i en lOO liter fermentator av rustfritt stål, utstyrt med ledeplater, agitert med et 19 cm skovlhjul med skiver og vinger ved 140 o.p.m. Steril luft ble til-ført ved 75 l/min. og tanken inkubert i 72 timer ved 26°C.
Innholdet av kimfermentatoren ble anvendt for inokulering av 1500 liter dampsterilisert medium av følgende sammensetning i springvann:
Mediets pH-verdi ble justert til 7,0.
Mediet befant seg i en 2000 liters fermentator av rustfritt stål, fullstendig utstyrt med ledeplater og agitert ved hjelp av to 48,2 cm skovlhjul med skiver og vinger ved 106 o.p.m.
Steril luft ble tilført ved 1200 l/min. "Antifoam" ble tilsatt i 25 ml porsjoner etter behov. (10 % "Pluronic" L81 i soyaolje). Fermenteringen ble regulert ved 26°C til det ble oppnådd et maksimalt utbytte av clavulansyre mellom 3 og 5 dager da 200-300 ^ug/ml clavulansyre ble produsert.
EKSEMPEL 13
Dyrkning av Streptomyces clavuligerus
Podestoff ble produsert i en kimkolbe som beskrevet tid-ligére, men under anvendelse av det medium som er beskrevet i eksempel 3 (med mediets pH-verdi justert til 7,0). Dette ble anvendt for inokulering av 500 ml koniske kolber som inneholdt 100 ml alikvoter av følgende medium fremstilt i avionisert vann og sterilisert. Podestoffnivået var 5 %.
Mediets pH-verdi ble justert til 7,0.
De inokulerte kolber ble rystet ved 26°C, og optimal /3-laktamase-inhiberende aktivitet ble oppnådd mellom 3 og 5 dager. Nivåer av 300-500 ^ug/ml av clavulansyre ble oppnådd.
"Prichem" P224 er et triglycerid levert av Prices Limited, Bromborough, Bebington, Wirral, Cheshire, Storbritannia. "Prichem" P 224 er basert på oljesyre (65 %) , palmitinsyre (11 %) og andre lignende syrer.
EKSEMPEL 14
Isolering av rått clavulansyre- natriumsalt
Høstet dyrkningsvæske, produsert som beskrevet i eksempel 10, ble klarnet ved kontinuerlig strømningssentrifugering og mycelet vraket. Fra 150 liter fermenteringsvæske ble det oppnådd 120 liter klarnet dyrkningsvæske. Dette filtrat ga 58 % inhibering i /3-laktamase-inhiberingsanalysen ved 1/2500. Filtratet ble avkjølt til 5°C, og 40 liter n-butanol ble tilsatt. Blandingen ble omrørt og 25 % ^SO^ tilsatt inntil pH-verdien var 2,0. Den surgjorte blanding ble omrørt i ytterligere 10 minutter før separering av fasene ved sentrifugering. Vannfasen ble vraket. Til n-butanol-ekstrakten ble 0,5 % "Norit" GSX karbon tilsatt og blandingen omrørt i 15 minutter. Karbonet ble vraket etter fjerning ved filtrering under anvendelse av kiselguhr som filter-medium. Til n-butanolen ble det tilsatt 1/4 volumdel avionisert vann, og blandingen ble omrørt under tilsetning av 20 % NaOH-løsning inntil pH-verdien hadde innstilt seg på likevekt ved 7,0. Fasene ble separert ved sentrifugering og n-butanolfasen vraket. Vannfasen ble konsentrert under redusert vakuum til 800 ml og så frysetørket. Dette ga 35 g av et rått, fast preparat av clavulansyre med en I^-verdi på 1,3 ^ug/ml i /3-laktamase-inhiberingsanalysen. Dette faste preparat ble lagret tørt ved -20°C mens man avventet ytterligere rensning.
EKSEMPEL 15
Isolering av rått clavulansyre- natriumsalt
En liter dyrkningsfiltrat som ga 53 % inhibering ved 1/2500 i /3-laktamase-inhiberingsanalysen, og som ble oppnådd som beskrevet i eksempel 12, ble perkolert ned en søyle med diameter 25,4 mm og lengde 152 mm av "Permutit Isopore"-harpiks FF 1P (SRA 62) i Cl-formen Ifra Permutit Co. Ltd., 632-652
London Road, Isleworth, Middlesex, Storbritannia]. Dyrkningsfiltratet ble fulgt av 300 ml destillert vann for vasking av kolonnen. Eluering av den aktive /3-laktamase-inhibitor ble ut-ført med 0,2m NaCl-løsning. 20 ml fraksjoner ble oppsamlet og analysert ved 1/2500 endelig fortynning i /3-laktamase-inhiberingsanalysen. Aktive fraksjoner ble kombinert og konsentrert under vakuum til 20 ml. Denne løsning ble avsaltet ved hjelp av gel-utelukkelses-kromatografi på en "Biorad Biogel" P2 kolonne med diameter 38,1 mm, med et gelsjikt på 40,6 cm, og eluert med 1 % n-butanol i vann.' ["Biogel" P2 leveres av Bio Rad Laboratories, 32nd and Griffin ave., Richmond , California, U.S.A.] De aktive fraksjoner, bestemt ved hjelp av /3-laktamase-inhiberingsanalysen , ble kombinert. Natriumklorid ble eluert etter clavulansyre og påvist ved hjelp av sølvnitrat-løsning. De kombinerte aktive fraksjoner ble konsentrert og frysetørket.
En liter dyrkningsfiltrat etter ovennevnte behandling
ga 0,45 g av et rått, fast preparat av clavulansyre med en I5q-verdi på 0,92 ^ug/ml.
Dette faste stoff ble lagret ved -20°C under avventing
av ytterligere rensning.
EKSEMPEL 16
Isolering av rått clavulansyre- natriumsalt
Dyrkningsfiltrat som inneholdt 300 ^ug/ml clavulansyre surgjøres under anvendelse av et "in-line"-blandesystem, ekstraheres med n-butanol, og clavulansyre tilbakeekstraheres inn i vann ved nøytral pH.
Avkjølt dyrkningsfiltrat (5-10°C) ble pumpet til en "in-line"-blander ved innløpet av hvilken nok 6 vol.% salpetersyre ble tilsatt til å opprettholde en utløps-pH-verdi på 2,0 jf 0,1. Det surgjorte filtrat ble ført med 4 l/min. gjennom en glykol-avkjølt plateformet varmeveksler (fra A.P.V. Ltd.) for opprett-holdelse av en temperatur mellom 2-5°. pH-verdien ble overvåket i en strømningscelle før passering inn i en tre-trinns-, motstrøms-
separator (fra Westfalia Separator Ltd., Model EG 1006).
Avkjølt vann-mettet n-butanol (av ca 5°C) ble pumpet
med 3 l/min. inn i motstrøms-separatoren.
Vannutløpet fra motstrøms-separatoren ble kjørt til kloakk. Oppfanget vann ble fjernet fra butanolutløpet i motstrøms-separatoren under anvendelse av en væske/væske-sentrifugalseparator. (Fra Alfa Laval Ltd., modell 3024X - G). Butanolen ble oppsamlet i et kar av rustfritt stål, utstyrt med kjølekappe i hvilket den ble lagret ved ca. 5°C.
Fra karet ble 40 1 alikvoter fjernet og blandet grundig med 2 liter avkjølt vann (5°C), mettet med n-butanol. pH-verdien til denne blanding ble justert til 6,8 + 0,1 under anvendelse av 20 % natriumhydroksydløsning.
Denne vandige ekstrakt/butanolblanding ble matet til en væske/væske-sentrifugalseparator (fra Sharples Centrifuge Ltd., modell M35PY - 5 PH) ved en pumpehastighet på 2 l/min.
Fra 1800 liter dyrkningsfiltrat ble 90 liter vannfase gjenvunnet som inneholdt 39 % av clavulansyren som var til stede i dyrkningsfiltratet. 15 liter av vannekstrakten ble justert fra 2 % til 8 % totalt tørrstoff ved tilsetning av 60 g natriumklorid pr. liter, og forstøvningstørket (Anhydro, København, type Lab S 1). Be-tingelsene som ble anvendt var: Matehastighet 2 l/h. Atomiserings-strøm 170 V. VarmeovninnstiIling: 6-7. Innløpstemperatur: 150°C. Utløpstemperatur: 80°C.
Det tørkede produkt, total vekt 1 kg, inneholdt 62 % av clavulansyren som var til stede i mateforrådet.
De gjenværende 75 liter vannekstrakt ble konsentrert
ved hjelp av ultrafiltrering (De Danske Sukkerfabrikker. Labora-tory Module, Membrane Type 900). Fremgangsmåten var å resirkulere det tilbakeholdte fra en tank av rustfritt stål, utstyrt med et kjølesystem, med utløpsventilen satt slik at det skulle bli et differensial-trykk tvers over de 40 membraner på 25 atmosfærer. Temperaturen ble holdt på 2-5°C og pH-verdien på 6,8 ± 0,1 ved tilsetning av 2n saltsyre, etter behov. Volumet ble redusert til 34 liter, som inneholdt 72 % av clavulansyren som var til stede i forrådet.
Det vandige konsentrat ble lagret ved ca. 5°C, justert til 8 % tørrstoff, og forstøvningstørket som angitt ovenfor. Det tørkede materiale inneholdt 75 % av clavulansyren som var til stede i forrådet, til forstøvningstørkeren.
Det totale forstøvningstørkede produkt, fra de 90 liter vannekstrakt som inneholdt 69,4 g clavulansyre som var 72 % av clavulansyren i materialet som skulle forstøvningstørkes , og 21 % av clavulansyren som var til stede i de 1800 liter dyrkningsfiltrat.
EKSEMPEL 17
Delvis rensning av rå clavulansyre
Rå clavulansyrepreparater oppnådd som beskrevet i eksempel 15 ble renset ved hjelp av ionebyttekromatografi. 18 g materiale, fremstilt som beskrevet i eksempel 15, med en 1,-Q-verdi på 1,3 yug/ml (endelig konsentrasjon) ble oppløst i 25 ml destillert vann og ført til et 38,1 mm x 40,6 cm sjikt av "Permutit" FF 1P (SRA 62) harpiks i kloridform. Kolonnen ble eluert med en natriumklorid-gradient dannet ved tyngdekraftmating av 0,5m natriumklorid inn i et blandereservoar som inneholdt 1 liter destillert vann, som igjen ble matet inn i krornatografikolonnen. 10 ml fraksjoner ble oppsamlet og /3-laktamase-inhiberingsaktiviteten analysert under anvendelse av en 1/2500 fortynning av fraksjonene. Aktiviteten ble eluert etter et hovedbånd av farve mellom fraksjonene 24 og 30. De aktive fraksjoner ble kombinert og konsentrert til
30 ml.
Denne løsning ble avsaltet under anvendelse av et 50,8 mm x 45,7 cm sjikt av "Biorad Biogel" P2 og eluering med 1 % n-butanol i vann. De 20 ml-fraksjoner ble analysert med hensyn på clavulan-syreinnhold under anvendelse av /3-laktamase-inhiberingsanalysen. Fraksjonene ble også avsatt som flekker på papirstrimler og for-støvet med enten Ehrlich-reagens eller trifenyltetrazolium-spray-reagensene som er beskrevet i beskrivelse 3. /3-laktamase-inhiberingsaktiviteten sammenholdt med de rosa, respektive røde flekker frembragt ved hjelp av disse reagenser. Aktive fraksjoner ble kombinert, bortsett fra dem som inneholdt natriumklorid, og konsentrert under vakuum til tørrhet. Dette ga 520 mg delvis renset clavulansyre-natriumsalt med en 1,-Q-verdi på 0,2 ^,ug/ml i standard /3-laktamase-inhibitoranalysen.
Tynnsjiktkromatografi (silikagel) av dette clavulansyre-preparat ga følgende R^-verdier: n-butanol/etanol/vann 4:1:5 vol./vol. toppfase R^ = 0,37; n-butanol/eddiksyre/vann 12:3:5 vol./vol. R^ = 0,44; isopropanol/vann 7:3 vol./vol. R^ = 0,78. Sonene ble påvist ved sprøyting med Ehrlich 's reagens. 6-aminopenicillansyre kjørt
som markør og påvist med samme spray, hadde R^-verdier på henholdsvis 0,38, 0,39 og 0,77.
EKSEMPEL 18
Delvis rensning av clavulansyre- natriumsalt
Dyrkningsfiltrat produsert som beskrevet i eksempel 12 ble løsningsmidlet ekstrahert som i eksempel 14, slik at man fikk et fast preparat som ble renset ytterligere ved hjelp av ionebyttekromatografi under anvendelse av Whatman dietylamino-etylcellulose "DE 52". Dette faste stoff (10 g) ble oppløst i 20 ml destillert vann og tilført til en 38,1 mm x 50,8 cm kolonne av "DE 52" cellulose som på forhånd var bragt i likevekt med 0,01m natriumfosfatpuffer pH 7,5. Kolonnen ble eluert med en NaCl-gradient. 0,lm NaCl i 0,01m natriumfosfatpuffer pH 7,5 ble matet inn i et blandekammer som inneholdt 1 liter 0,0lm fosfatpuffer pH 7,5 som på sin side var forbundet til kolonnen. 10 ml fraksjoner ble oppsamlet, og disse ble analysert med hensyn på /3-laktamase-inhiberingsaktivitet ved en fortynning på 1/2500. Fraksjonene ble også undersøkt med hensyn på antibakteriell aktivitet ved hjelp av hull-i-plate-analysemetoden under anvendelse av næringsagarplater som var kimsatt med Klebsiella aerogenes. De fraksjoner som hadde høyeste j3-laktamase-inhiberingsaktivitet og ga inhiberingssoner i hull-i-plate-analysen, ble kombinert, konsentrert og deretter avsaltet på en "Biorad Biogel" P2 kolonne. Disse fraksjoner viste seg å inneholde clavulansyre, ved hjelp av papir- og tynnsjiktkromatografi.
EKSEMPEL 19
Isolering av fast clavulansyre- natriumsalt
Et delvis renset, fast preparat av clavulansyre (500 mg), fremstilt som angitt i eksempel 17, ble belagt på en Whatman mikrokrystallinsk "CC 31" cellulose-kolonne med 25,4 mm x 50,8 cm sjiktstørrelse. Det kromatografiske løsningsmiddel var n-butanol/ etanol/vann 4:1:5 vol./vol., toppfase. Kolonnen ble kjørt ved 4°C, og 4 ml fraksjoner ble oppsamlet. Fraksjonene ble testet med hensyn på nærvær av clavulansyre ved å anbringe flekker på filterpapir og sprøyte med Ehrlich 's-reagens (rosa flekk) eller trifenyltetrazolium-reagens (rød flekk). Disse flekktester ble bekreftet ved hjelp av /3-laktamase-inhiberingsanalyser ved 1/1250 fortynning. Aktive fraksjoner ble kombinert og tørket under vakuum på en roterende inndamper. Det faste stoff ble opp-løst i et lite volum av destillert vann og frysetørket. Et hvitt, fast preparat av natriumsaltet av clavulansyre ble oppnådd (40 mg) med en I^^-verdi på 0,08 ^ug/ml i /3-laktamase-inhiberingsanalysen.
EKSEMPEL 20
Isolering av fast clavulansyre- natriumsalt
Konsentrert tilbakeekstrakt (6 liter) (fra ultrafiltrering i eksempel 16) som inneholdt 10 g clavulansyre, bestemt ved /3-laktamase-inhiberingsanalysen fra beskrivelse 1. Denne ble perkolert ved 1 l/h på en 50,8 mm x 61 cm kolonne av "Permutit Zerolit" FF 1 P SRA 62 anionbytte-harpiks i kloridform. Kolonnen ble så vasket med 2 liter avionisert vann før eluering med en natriumkloridgradient. Gradienten ble dannet av et reservoar som inneholdt 4 liter av 1,4 m NaCl som matet et om-rørt reservoar som inneholdt 4 liter av 0,7 NaCl som på sin side var forbundet med et omrørt reservoar som inneholdt 4 liter avionisert vann som ble tilknyttet via en pumpe til kolonnen. Kolonnen ble eluert ved 2,5 ml/min. og 25 ml fraksjoner oppsamlet. Fraksjonene ble analysert ved hjelp av /3-laktamase-inhiberingsanalysen.
Aktive fraksjoner (nr. 140-230) ble kombinert og vakuum-inndampet til nær tørrhet. 500 ml etanol ble så tilsatt og det faste stoff filtrert fra etter kraftig rysting. Etanolekstrakten ble så vakuum-inndampet til tørrhet på en roterende inndamper og gjenoppløst i 40 ml avionisert vann. Dette ble belagt på en 101,6 mm x 61 cm kolonne av "Biorad Biogel" og eluert med en 1 % n-butanol-løsning. 25 ml fraksjoner ble oppsamlet og analysert med hensyn på /3-laktamase-inhiberingsaktivitet ved en slutt-fortynning på 1/2500. Tester med hensyn på natriumkloridinnhold på 1/25 fortynninger av fraksjonene ble gjort under anvendelse av sølvnitratløsning. De fraksjoner som inneholdt clavulansyre som var fri for natriumklorid, ble kombinert, konsentrert ved inn-dampning av løsningsmidlet under redusert trykk til 20 ml og deretter frysetørket. Dette ga 4,8 g av natriumsaltet av clavulansyre. (I^Q-verdi på ca. 0,06 ^ug/ml).
EKSEMPEL 21
Ekstraks- on av clavulansyre under anvendelse av flytende ione-bytte- harpiks
Dyrkningsfiltrat (200 ml, oppnådd på lignende måte som
i eksempel 3, men under anvendelse av et medium som inneholder 0,1 vol.% KH2P04 istedenfor 0,01 % FeS04.7H20) ble ekstrahert med "Amberlite" LA2<+>(Cl~-form, 15 vol.% i metylisobutylketon,
66 ml) i 30 minutter ved 5°C.
Fasene ble separert ved sentrifugering (1660 g, 20 min.). Løsningsmiddeltasen (60 ml) ble gjenvunnet med pipette og delt
i fire like deler. Hver del ble ekstrahert ved omrøring ved 5°C i 20 minutter med 1/4 volumdel (3,75 ml) vandig ekstraksjons-middel som angitt i nedenstående tabell. Den resulterende blanding ble sentrifugert (1660 g, 15 min.). 3,6 ml vannfase ble gjenvunnet fra hver ekstraksjon.
EKSEMPEL 22-
Ekstraksjon av clavulansyre under anvendelse av flytende ione-bytte- harpiks
Klarnet væske (47 liter, oppnådd som i eksempel 12) ble ekstrahert med "Amberlite" LA2 (acetat-form, 15 vol.% i metylisobutylketon, 12,5 liter) ved omrøring i 1 time ved 17°C. Etter tilsetning av 500 ml oktan-l-ol ble fasene separert i en kontinuerlig strøm-sentrifuge som ga 9,2 liter løsningsmiddelfase, som deretter ble omrørt ved 5°C i 1,5 timer med molart natriumnitrat (2,3 liter). Blandingen ble separert ved kontinuerlig strøm-sentrifugering, og dette ga 2,4 liter vannfase (inklusive vann som ble brukt for utbyttingsformål). Vannfasens pH-verdi (innledningsvis 8,0) ble justert til 7,0 med konsentrert saltsyre .
Claims (2)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre, som er forbindelsen av formel (I):
eller et salt derav, karakterisert ved å dyrke en stamme av Streptomyces clavuligerus og utvinne clavulansyre eller et salt derav.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karak-terisert ved å dyrke Streptomyces clavuligerus ATCC 27064.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB17410/74A GB1508977A (en) | 1974-04-20 | 1974-04-20 | Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus |
GB2771574 | 1974-06-21 | ||
GB4365174 | 1974-10-09 | ||
GB5352574 | 1974-12-11 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO751407L NO751407L (no) | 1975-10-21 |
NO145247B true NO145247B (no) | 1981-11-02 |
NO145247C NO145247C (no) | 1982-02-10 |
Family
ID=27448389
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO751407A NO145247C (no) | 1974-04-20 | 1975-04-18 | Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre |
NO791956A NO150838C (no) | 1974-04-20 | 1979-06-12 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper |
NO801852A NO801852L (no) | 1974-04-20 | 1980-06-20 | Farmasoeytisk clavulansyrepreparat. |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO791956A NO150838C (no) | 1974-04-20 | 1979-06-12 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper |
NO801852A NO801852L (no) | 1974-04-20 | 1980-06-20 | Farmasoeytisk clavulansyrepreparat. |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US4427690A (no) |
JP (7) | JPS5246957B2 (no) |
AR (3) | AR206627A1 (no) |
CA (1) | CA1059050A (no) |
CH (2) | CH629252A5 (no) |
CY (1) | CY1078A (no) |
DD (2) | DD121799A5 (no) |
DE (4) | DE2559410A1 (no) |
DK (1) | DK141254B (no) |
FI (1) | FI54144C (no) |
FR (1) | FR2267778B1 (no) |
HK (1) | HK54780A (no) |
IE (1) | IE41109B1 (no) |
IL (1) | IL47087A (no) |
IN (1) | IN140042B (no) |
KE (1) | KE3076A (no) |
LU (1) | LU72322A1 (no) |
MY (1) | MY8100195A (no) |
NL (1) | NL163824C (no) |
NO (3) | NO145247C (no) |
NZ (1) | NZ177159A (no) |
OA (1) | OA05203A (no) |
PH (1) | PH16474A (no) |
RO (2) | RO77320A (no) |
SE (8) | SE422063B (no) |
YU (3) | YU39941B (no) |
Families Citing this family (94)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IE41109B1 (en) * | 1974-04-20 | 1979-10-24 | Beecham Group Ltd | Novel -lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus |
AT353409B (de) * | 1975-02-07 | 1979-11-12 | Glaxo Lab Ltd | Verfahren zum entfernen von verunreinigungen aus clavulansaeure oder deren salzen |
JPS596796Y2 (ja) * | 1975-04-04 | 1984-03-01 | 株式会社東芝 | 脱水兼用洗濯機 |
US6218380B1 (en) * | 1975-04-17 | 2001-04-17 | Smithkline Beecham P.L.C. | Pharmaceutical compositions |
US6048977C1 (en) * | 1975-04-17 | 2001-10-16 | Smithkline Beecham Plc | Clavulanic acid and salts thereof |
GB1563103A (en) * | 1975-10-13 | 1980-03-19 | Beecham Group Ltd | Process for the preparation of clavulanic acid |
US4230622A (en) * | 1975-12-17 | 1980-10-28 | Glaxo Laboratories Limited | Halogen derivatives of clavulaic acid |
GB1515241A (en) * | 1976-01-27 | 1978-06-21 | Beecham Group Ltd | Beta-lactam antibiotics |
NL7706242A (nl) * | 1976-06-08 | 1977-12-12 | Glaxo Lab Ltd | Werkwijze voor de bereiding van clavamderivaten. |
GB1562802A (en) * | 1976-06-26 | 1980-03-19 | Beecham Group Ltd | Pharmaceutical compositions containing containing clavulanic acid |
GB1562902A (en) * | 1976-06-30 | 1980-03-19 | Beecham Group Ltd | Pharmaceutical compositions containing clavulanic acid |
GB1578739A (en) * | 1976-07-23 | 1980-11-05 | Beecham Group Ltd | Amine salts of clavulanic acid methods for their preparation and compositions containing them |
GB1594001A (en) * | 1977-03-16 | 1981-07-30 | Beecham Group Ltd | Pellets suitable for use in the testing of microorganisms |
GB1582884A (en) * | 1977-05-19 | 1981-01-14 | Beecham Group Ltd | Clavulanic acid derivatives their preparation and use |
DE2912511C2 (de) * | 1977-06-07 | 1982-06-24 | Pfizer Inc., 10017 New York, N.Y. | Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Penicillansäure |
JO984B1 (en) * | 1977-10-11 | 1979-12-01 | بيتشام غروب ليمتد | A dry pharmaceutical compound with a suitable dosage unit for oral administration |
JPS54126735A (en) * | 1978-03-24 | 1979-10-02 | Toyama Chem Co Ltd | Bactericidal composition for medical use |
EP0008905B1 (en) * | 1978-09-06 | 1983-02-16 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical compositions containing two beta-lactam derivatives |
JPS5545906U (no) * | 1978-09-21 | 1980-03-26 | ||
US4202819A (en) * | 1979-05-04 | 1980-05-13 | Hoffman-La Roche Inc. | 2-(3-Alanyl)clavam antibiotic |
ZA804670B (en) * | 1979-08-03 | 1981-07-29 | Beecham Group Ltd | Derivatives of clavulanic acid, a process for their preparation and their use |
EP0026044B1 (en) * | 1979-08-24 | 1983-06-08 | Beecham Group Plc | Amine salt of clavulanic acid, its preparation and use |
NZ199061A (en) * | 1980-12-09 | 1984-10-19 | Beecham Group Ltd | 9-(n-tetrazolyl)-deoxyclavulanic acids,salts,esters,and pharmaceutical compositions |
US4562182A (en) * | 1980-12-23 | 1985-12-31 | Beecham Group P.L.C. | Compounds containing beta-lactams |
JPS58361A (ja) * | 1981-06-22 | 1983-01-05 | Kurosaki Refract Co Ltd | 溶融金属鋳造用ノズル |
US4533542A (en) * | 1983-08-22 | 1985-08-06 | Eli Lilly And Company | Pharmaceutical compositions for storage in plastic containers and process therefor |
US4684643A (en) * | 1983-08-22 | 1987-08-04 | Eli Lilly And Company | Pharmaceutical compositions for storage in plastic containers and process therefor |
IT1207982B (it) * | 1983-10-07 | 1989-06-01 | Lisapharma Spa | Composizioni farmaceutiche adattivita' antibiotica. |
JPS60151610U (ja) * | 1984-03-22 | 1985-10-08 | 住友重機械工業株式会社 | 回転ホイ−ル式連続金属押出装置におけるアバツトメント |
JPS6155889A (ja) * | 1984-08-28 | 1986-03-20 | 松下電器産業株式会社 | 高周波加熱装置 |
US4757066A (en) * | 1984-10-15 | 1988-07-12 | Sankyo Company Limited | Composition containing a penem or carbapenem antibiotic and the use of the same |
DE3725375A1 (de) * | 1987-07-31 | 1989-02-09 | Bayer Ag | Stabile oxapenem-3-carbonsaeuren |
GB9009446D0 (en) * | 1990-04-26 | 1990-06-20 | Beecham Group Plc | Veterinary composition |
DE4027928A1 (de) * | 1990-09-04 | 1992-03-05 | Bayer Ag | Neue 2-tert.substituierte methyl-oxapenem-3-carbonsaeuren und -ester, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
DE4030706A1 (de) * | 1990-09-28 | 1992-04-02 | Bayer Ag | Neue 3-substituierte cephalosporine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel |
GB9201639D0 (en) * | 1992-01-25 | 1992-03-11 | Smithkline Beecham Plc | Pharmaceutical formulations |
AT400033B (de) * | 1992-03-10 | 1995-09-25 | Biochemie Gmbh | Neues verfahren zur isolierung und reinigung von clavulansäure und zur herstellung von pharmakologisch verträglichen salzen derselben |
AT399155B (de) * | 1992-03-26 | 1995-03-27 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Neue alkylendiammonium-diclavulanat-derivate, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung |
EP0680322B1 (en) * | 1993-01-22 | 2000-07-05 | Smithkline Beecham Plc | Use of clavulanate and an antibacterial compound for the treatment of infections |
US5821364A (en) * | 1993-03-26 | 1998-10-13 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts of clavulanic acid |
US5741903A (en) * | 1993-03-26 | 1998-04-21 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts for purification of clavulanic acid |
PL306371A1 (en) * | 1993-03-26 | 1995-03-20 | Gist Brocades Nv | Diamine salts of clavulanic acid |
US5760218A (en) * | 1993-03-26 | 1998-06-02 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts of clavulanic acid |
US20030219867A1 (en) * | 1993-07-24 | 2003-11-27 | Smithkline Beecham Plc | Clavulanic acid dehydrogenase, preparation and use for the production of clavulanic acid |
GB9315393D0 (en) | 1993-07-24 | 1993-09-08 | Smithkline Beecham Plc | Novel product |
SI9400107A (en) * | 1994-03-02 | 1995-10-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804. |
US20030109503A1 (en) * | 1995-06-06 | 2003-06-12 | Smithkline Beecham P.L.C. | Pharmaceutical formulations comprising clavulanic acid alone or in combination with other beta-lactam antibiotics |
GB9515809D0 (en) * | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Smithkline Beecham Plc | Process |
SI9500265A1 (en) | 1995-08-28 | 1997-02-28 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration |
WO1997009042A1 (en) * | 1995-09-07 | 1997-03-13 | Smithkline Beecham Corporation | Pharmaceutical formulation |
AT403375B (de) * | 1995-11-15 | 1998-01-26 | Biochemie Gmbh | Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure |
US20030124187A1 (en) * | 1997-02-14 | 2003-07-03 | Smithkline Beecham Laboratoires Pharmaceutiques, | Pharmaceutical formulations comprising amoxycillin and clavulanate |
PL335227A1 (en) * | 1997-02-20 | 2000-04-10 | Dsm Nv | Industrial-scale production of valuable compounds by fermentation in a chemically defined medium |
AR015825A1 (es) * | 1997-05-28 | 2001-05-30 | Gist Brocades Bv | Produccion fermentativa de acido clavulanico bajo condiciones controladas de fosfato |
WO2000001840A1 (en) * | 1998-07-03 | 2000-01-13 | Dsm N.V. | Fermentation process to produce clavulanic acid at a low concentration of free amino acids |
US7250176B1 (en) | 1999-04-13 | 2007-07-31 | Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited | Method of treating a bacterial infection |
US6294199B1 (en) | 1999-04-13 | 2001-09-25 | Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited | Method of treating a bacterial infection comprising administering amoxycillin |
US6878386B1 (en) | 1999-04-13 | 2005-04-12 | Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited | Method of treating a bacterial infection comprising amoxycillin and potassium clavulanate |
US6544555B2 (en) | 2000-02-24 | 2003-04-08 | Advancis Pharmaceutical Corp. | Antibiotic product, use and formulation thereof |
US6565882B2 (en) | 2000-02-24 | 2003-05-20 | Advancis Pharmaceutical Corp | Antibiotic composition with inhibitor |
US6756057B2 (en) | 2000-10-12 | 2004-06-29 | Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited | Amoxicillin and potassium clavulanate dosage form |
EP1330236A2 (en) | 2000-10-12 | 2003-07-30 | Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited | Formulation containing amoxicillin |
US6541014B2 (en) | 2000-10-13 | 2003-04-01 | Advancis Pharmaceutical Corp. | Antiviral product, use and formulation thereof |
US20020068078A1 (en) | 2000-10-13 | 2002-06-06 | Rudnic Edward M. | Antifungal product, use and formulation thereof |
IL150907A (en) * | 2002-07-25 | 2007-07-04 | Stephan Cherkez | Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate |
CA2533292C (en) | 2003-07-21 | 2013-12-31 | Advancis Pharmaceutical Corporation | Antibiotic product, use and formulation thereof |
AU2004258944B2 (en) | 2003-07-21 | 2011-02-10 | Shionogi, Inc. | Antibiotic product, use and formulation thereof |
AU2004258949B2 (en) | 2003-07-21 | 2011-02-10 | Shionogi, Inc. | Antibiotic product, use and formulation thereof |
JP2007502296A (ja) | 2003-08-11 | 2007-02-08 | アドバンシス ファーマスーティカル コーポレイション | ロバストペレット |
US8062672B2 (en) | 2003-08-12 | 2011-11-22 | Shionogi Inc. | Antibiotic product, use and formulation thereof |
WO2005023184A2 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-17 | Advancis Pharmaceuticals Corporation | Antibiotic product, use and formulation thereof |
WO2005027877A1 (en) | 2003-09-15 | 2005-03-31 | Advancis Pharmaceutical Corporation | Antibiotic product, use and formulation thereof |
WO2006014427A1 (en) | 2004-07-02 | 2006-02-09 | Advancis Pharmaceutical Corporation | Tablet for pulsed delivery |
US20060194285A1 (en) * | 2005-02-08 | 2006-08-31 | Wei Lian | Biological production of clavulanic acid and related compounds |
DE102005009277B4 (de) * | 2005-02-25 | 2008-07-31 | Johnson Controls Interiors Gmbh & Co. Kg | Halterung für eine Komponente |
CA2783572C (en) * | 2005-12-07 | 2016-08-09 | Basilea Pharmaceutica Ag | Useful combinations of monobactam antibiotics with beta-lactamase inhibitors |
US8357394B2 (en) | 2005-12-08 | 2013-01-22 | Shionogi Inc. | Compositions and methods for improved efficacy of penicillin-type antibiotics |
US8778924B2 (en) | 2006-12-04 | 2014-07-15 | Shionogi Inc. | Modified release amoxicillin products |
US20070218038A1 (en) | 2006-03-17 | 2007-09-20 | Pegasus Biologics, Inc. | Stabilized, sterilized collagen scaffolds with active adjuncts attached |
US8299052B2 (en) * | 2006-05-05 | 2012-10-30 | Shionogi Inc. | Pharmaceutical compositions and methods for improved bacterial eradication |
EP2575781A1 (en) | 2010-06-03 | 2013-04-10 | Mahmut Bilgic | Production method for the effervescent formulation comprising cephalosporin and potassium clavulanate |
KR102147420B1 (ko) | 2012-12-07 | 2020-08-25 | 베나토알엑스 파마슈티컬스, 인크. | 베타-락타마제 억제제 |
US9403850B2 (en) | 2013-01-10 | 2016-08-02 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Beta-lactamase inhibitors |
WO2014151958A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Beta-lactamase inhibitors |
KR20220065084A (ko) | 2014-06-11 | 2022-05-19 | 베나토알엑스 파마슈티컬스, 인크. | 베타-락타마제 억제제 |
US20150361108A1 (en) * | 2014-06-11 | 2015-12-17 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Orally bioavailable beta-lactamase inhibitors |
US9511142B2 (en) | 2014-06-11 | 2016-12-06 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Beta-lactamase inhibitors |
US10399996B2 (en) | 2015-09-11 | 2019-09-03 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Beta-lactamase inhibitors |
WO2017100537A1 (en) | 2015-12-10 | 2017-06-15 | VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. | Beta-lactamase inhibitors |
CN109715156A (zh) | 2016-07-14 | 2019-05-03 | 尔察祯有限公司 | 用于治疗细菌感染的头孢布烯和克拉维酸的组合 |
EP3494121B1 (en) | 2016-08-04 | 2021-10-06 | Venatorx Pharmaceuticals, Inc. | Boron-containing compounds |
EP3630783A4 (en) | 2017-05-26 | 2021-03-03 | Venatorx Pharmaceuticals, Inc. | PENICILLIN BINDING PROTEIN INHIBITORS |
CN110959008A (zh) | 2017-05-26 | 2020-04-03 | 维纳拓尔斯制药公司 | 青霉素结合蛋白抑制剂 |
EP4049036A1 (en) | 2019-10-25 | 2022-08-31 | Instrumentation Laboratory Company | Biocide compositions compatible with enzyme biosensors and methods of use thereof |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3801464A (en) | 1972-02-09 | 1974-04-02 | Lilly Co Eli | Antibiotic a16886 and process for production thereof |
IE41109B1 (en) * | 1974-04-20 | 1979-10-24 | Beecham Group Ltd | Novel -lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus |
US4140764A (en) * | 1974-12-18 | 1979-02-20 | Beecham Group Limited | β-Lactamase inhibitors and process for their preparation |
US4123540A (en) * | 1974-12-18 | 1978-10-31 | Beecham Group Limited | Isoclavulanic acid as an antibacterial and a β-lactamase inhibitor |
US4144242A (en) * | 1975-02-07 | 1979-03-13 | Glaxo Laboratories Limited | Process for the purification of clavulanic acid |
AT353409B (de) * | 1975-02-07 | 1979-11-12 | Glaxo Lab Ltd | Verfahren zum entfernen von verunreinigungen aus clavulansaeure oder deren salzen |
JO984B1 (en) * | 1977-10-11 | 1979-12-01 | بيتشام غروب ليمتد | A dry pharmaceutical compound with a suitable dosage unit for oral administration |
-
1975
- 1975-04-08 IE IE792/75A patent/IE41109B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-04-08 NZ NZ177159A patent/NZ177159A/xx unknown
- 1975-04-09 YU YU908/75A patent/YU39941B/xx unknown
- 1975-04-11 FR FR7511344A patent/FR2267778B1/fr not_active Expired
- 1975-04-11 CY CY1078A patent/CY1078A/xx unknown
- 1975-04-14 IL IL47087A patent/IL47087A/xx unknown
- 1975-04-14 IN IN743/CAL/75A patent/IN140042B/en unknown
- 1975-04-16 FI FI751133A patent/FI54144C/fi not_active IP Right Cessation
- 1975-04-18 DE DE19752559410 patent/DE2559410A1/de not_active Ceased
- 1975-04-18 LU LU72322A patent/LU72322A1/xx unknown
- 1975-04-18 AR AR258435A patent/AR206627A1/es active
- 1975-04-18 SE SE7504541A patent/SE422063B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-04-18 NO NO751407A patent/NO145247C/no unknown
- 1975-04-18 DD DD185542A patent/DD121799A5/xx unknown
- 1975-04-18 DD DD7500193531A patent/DD132297A5/xx unknown
- 1975-04-18 DE DE2560074A patent/DE2560074C2/de not_active Expired
- 1975-04-18 DK DK167275AA patent/DK141254B/da not_active IP Right Cessation
- 1975-04-18 DE DE2517316A patent/DE2517316C2/de not_active Expired
- 1975-04-18 NL NL7504621.A patent/NL163824C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-04-18 CA CA224,970A patent/CA1059050A/en not_active Expired
- 1975-04-18 DE DE2559411A patent/DE2559411C2/de not_active Expired
- 1975-04-19 RO RO7595311A patent/RO77320A/ro unknown
- 1975-04-19 JP JP50048087A patent/JPS5246957B2/ja not_active Expired
- 1975-04-19 OA OA55480A patent/OA05203A/xx unknown
- 1975-04-19 RO RO7582037A patent/RO69984A/ro unknown
- 1975-04-19 JP JP50048086A patent/JPS521996B2/ja not_active Expired
- 1975-04-21 PH PH17082A patent/PH16474A/en unknown
- 1975-04-21 CH CH506075A patent/CH629252A5/de active Protection Beyond IP Right Term
- 1975-11-28 AR AR261403A patent/AR216430A1/es active
- 1975-11-28 AR AR261404A patent/AR219050A1/es active
-
1976
- 1976-09-24 US US06/726,224 patent/US4427690A/en not_active Expired - Lifetime
-
1977
- 1977-04-05 JP JP4026077A patent/JPS533589A/ja active Granted
- 1977-04-05 JP JP4025777A patent/JPS532494A/ja active Granted
- 1977-04-05 JP JP4025877A patent/JPS532495A/ja active Granted
- 1977-04-05 JP JP4026177A patent/JPS533590A/ja active Pending
- 1977-04-05 JP JP4025977A patent/JPS533588A/ja active Granted
-
1978
- 1978-07-13 US US05/924,174 patent/US4556559A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-10-27 SE SE7811202A patent/SE435287B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-10-27 SE SE7811200A patent/SE435286B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-10-27 SE SE7811201A patent/SE446687B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-10-27 SE SE7811203A patent/SE443562B/sv not_active IP Right Cessation
-
1979
- 1979-06-12 NO NO791956A patent/NO150838C/no unknown
-
1980
- 1980-06-20 NO NO801852A patent/NO801852L/no unknown
- 1980-08-29 KE KE3076A patent/KE3076A/xx unknown
- 1980-09-25 HK HK547/80A patent/HK54780A/xx unknown
- 1980-12-22 CH CH947280A patent/CH630631A5/de not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-06-09 US US06/272,030 patent/US4526783A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-10-02 SE SE8105829A patent/SE453600B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-11-23 YU YU2744/81A patent/YU42745B/xx unknown
- 1981-11-23 YU YU2743/81A patent/YU42744B/xx unknown
- 1981-12-03 US US06/327,253 patent/US4525352A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-12-14 US US06330456 patent/US4560552C1/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-12-30 MY MY195/81A patent/MY8100195A/xx unknown
-
1983
- 1983-11-16 SE SE8306328A patent/SE8306328L/sv unknown
-
1986
- 1986-12-16 SE SE8605405A patent/SE8605405D0/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO145247B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre | |
US4110165A (en) | Process for the production of clavulanic acid | |
US6218380B1 (en) | Pharmaceutical compositions | |
US6031093A (en) | Solid salts of clavulanic acid | |
US4072569A (en) | Preparation of clavulanic using Streptomyces jumonjinensis | |
US4168202A (en) | Process for producing antibiotics | |
IE46719B1 (en) | Thienamycin derivatives | |
US4235882A (en) | Antibiotic MM 4550A | |
US4162324A (en) | Antibiotics 890A1 and 890A3 | |
US4189473A (en) | Antibiotic MM 13902 | |
US4282322A (en) | Process for enzymatic deacylation of antibiotics | |
SU1194285A3 (ru) | Способ получени антибиотиков А51568-фактора А и А51568-фактора В | |
US4172129A (en) | Antibiotics | |
US4235967A (en) | Process for producing antibiotics by cultivation of Streptomyces flavogriseus | |
US4113856A (en) | Antibiotic mm 13902 | |
NO136204B (no) | ||
US4292309A (en) | Antibiotics C-14482 B1, B2 and B3 | |
US4335108A (en) | Paulomycin A and B and preparation thereof | |
JPS6253157B2 (no) | ||
US3061516A (en) | Telomycin and its production | |
US4206202A (en) | Antibiotics | |
CA1055395A (en) | Antibiotics | |
US4205067A (en) | Antibiotics | |
US4181716A (en) | Antibiotics | |
CA1074325A (en) | Clavulanic acid and its salts |