DE2559411A1

DE2559411A1 - Arzneimittelgemische

Info

Publication number: DE2559411A1
Application number: DE19752559411
Authority: DE
Inventors: Martin Cole; Thomas Trefor Howarth; Christopher Reading
Original assignee: Beecham Group PLC
Current assignee: Beecham Group PLC
Priority date: 1974-04-20
Filing date: 1975-04-18
Publication date: 1976-10-21
Also published as: DK141254C; NO150838B; US4526783A; JPS533588A; NO145247C; DD121799A5; RO77320A; US4560552A; JPS533589A; SE7811200L; OA05203A; AR206627A1; NO751407L; HK54780A; LU72322A1; PH16474A; AR216430A1; DE2560074C2; NL7504621A; SE8105829L

Description

DIPL-CHEM. DR. ELISABETH JUNG
DIPL-PHYS. DR. JÜRGEN SCHIRDEWAHN DR-fNG. GERHARD SC H M ITT-N I LS O N PATENTANWÄLTE

a k-üNCHEt·· 40,

CLfMENSSTP'3SE TELEFON 34 50

TELEGRAMM-ADRESSE: INVENTVMONCHEN TELEX 5-28

u.Z.: J 561 C/Div.II (J/vdB/or) Case A.826

30. April 1976

BEECHAM GROUP LIMITED

Brentford, Middlesex» Großbritannien

■"Arzneimittelgemische"

Beanspruchte Prioritäten:

20. April I974 - Großbritannien

21. Juni 1974 - Großbritannien 9. Okt. 1974 - Großbritannien

11. Dez. 1974 - Großbritannien Nr. 17 410/74 Nr. 27 715/74 Nr. 43 651/74 Nr. 53 525/74

Die Erfindung betrifft ein neues Arznexmittelgemisch gegen Bakterien mit einem Gehalt an einer Verbindung, die aus Streptomyces clavuligerus isoliert werden kann. Diese neue Verbindung wird als Clavulansäure bezeichnet, die die nachstehende Formel I besitzt:

(D

B f 1 9 8 L 3 / 1 1 3

Streptomyces clavuligerus ist ausführlich beschrieben worden von Higgens und Mitarbeitern in Int.J.Systematic Bacteriology 21_ (1971), S. 326. Dieser Mikroorganismus war insofern interessant, als er bestimmte ß-Lactam-Antibiotika erzeugt, wie Penicillin N, 7-(5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure und 7-(5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure. Dieser Mikroorganismus ist bei der Agricultural Research Service Collection unter der Nummer NHRL 3585 und bei der American Type Culture Collection unter der Nummer ATCC 27064 hinterlegt worden. Streptomyces clavuligerus ist auch in der US-PS 3 770 590 und von Nagarajan und Mitarbeitern in J.Amer.Chem.Soc. 93 (1971)* S. 2308, Brannon und Mitarbeitern in Antimicrob.Agents Chemother. JL (1972), S. 237 und 247 und Higgens und Mitarbeitern in J.Antibiotics 27 (1974), S. 298* erwähnt worden.

ß-Lactamasen sind Enzyme, die den ß-Lactamring von Penicillinen und Cephalosporinen öffnen und Produkte liefern, die keine antibakterielle Wirksamkeit mehr besitzen. Derartige Enzyme werden von verschiedenen Bakterien erzeugt, z.B. Spezies oder Stämmen von Escherichia, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Enterobacter und Staphylococcus: Diese Enzyme sind in vielen Fällen die Erklärung für eine Widerstandsfähigkeit bestimmter Stämme solcher Organismen gegenüber manchen Penicillinen und Cephalosporinen. Die Bedeutsamkeit einer ß-Lactamase-Erzeugung wird verständlich, wenn offensichtlich wird, daß ein hoher Anteil von klinisch isolierten Organismen ß-Lactamasen erzeugen (vgl. z.B. M. Wilson und I.A. Freeman in Bacteriological Proceedings 80 (I969), wo in dem Aufsatz "Penicillin Inactivation by Gram-negative Bacilli"

60 9843/.1 13 9:

die Autoren gezeigt haben, daß 84 Prozent der gramnegativen Organismen, die in einem amerikanischen Krankenhaus isoliert worden sind, ß-Lactamase erzeugen). In zahlreichen Fällen sind bestimmte Penicilline oder Cephalosporine unwirksam bei der Behandlung von Krankheiten, die keine ß-Lactamase erzeugenden Organismen wegen des allgemeinen Auftretens einer Nebeninfektion durch einen ß-Lactamase-Erzeuger zugeschrieben werden (vgl. z.B. R. May und Mitarbeiter in Brit.J.Dis.Chest. 66 (1972), S. 185). Von Gemischen von ß-Lactamase-Hemmsubstanzen mit einem Penicillin oder einem Cephalosporin könnte man erwarten, daß das letztere vom Abbau durch bakterielle ß-Lactamase geschützt sei, so daß sie dadurch ihre antibakterielle Wirksamkeit gegen zahlreiche infektiöse Organismen steigern. Eine derartige Steigerung einer antibakteriellen Wirksamkeit nennt man Synergismus, wenn die antibakterielle Wirksamkeit des Gemisches über eine einfache Addition der Wirksamkeiten der beiden Einzelsubstanzen hinausgeht. Die ß-Lactamase-Hemmsubstanz der Mischung wird als Synergist bezeichnet. Derartige Substanzen sind vorteilhaft zur Erhöhung der antibakteriellen Wirksamkeit von Penicillinen und Cephalosporinen gegen resistente Organismen. Es ist eine Aufgabe vorliegender Erfindung, derartige Synergisten bereitzustellen.

Anwendungsbeispiele von bestimmten ß-Lactamase-resistenten halbsynthetischen Penicillinen und Cephalosporinen als ß-Lactamase-Hemmstoffe und Synergisten für Penicilline und Cephalosporine sind bereits in der Literatur beschrieben, z.B. von Sutherland und Mitarbeiter in Nature 2(H (1964), 868; Sabath und Mitarbeiterin.Nature 204 (1964), 1066j O'Callaghan und Mitarbeiter in Antimicrob. Agents and Chemotherapy 1968 (1969), 67. Jedoch

•6 0984 3/1139

■ ■"■■ ' 2553411

besitzt keine dieser bekannten Substanzen einen besonders eindrucksvollen Effekt auf das Spektrum des anderen, im Gemisch vorliegenden Antibiotikums. " .

Es ist auch von einigen Actinomycetes-Züchtungen beschrieben worden, daß sie ß-Lactamase-Hemms*toffe erzeugen, die mit Penicillinen oder Cephalosporinen synergistisch wirken, z.B. die in der GB-PS 1 363 075 und von Hata und Mitarbeitern in J.Antibiotics 25 (1972), S. 473 und Umezawa und Mitarbeitern in J.Antibiotics 26> (1973), S. 51, beschriebenen Züchtungen. Von diesen ß-Lactamase-Hemmstoffen von Actinomycetes ist bisher noch keine klinische Verwendbarkeit festgestellt worden. Besonders bemerkenswerte Merkmale, die Clavulansäure von anderen ß-Lactamase-Hemmstoffen von Actinomyceten unterscheiden, sind ihre Extrahierbarkeit in organische Lösungsmittel aus dem Nährmedium bei pH 2, ihre hohe Stabilität in Menschenblut und ihr breites Antibiotika-Spektrum und ß-Lactamase-Hemmwirkung, ihr niedriges Molekulargewicht und ihr hoher R^-Wert bei der Papierchromatographie bei Anwendung zahlreicher Lösungsmittelsysterne.

Durch aerobes Züchten von Streptomyces clavuligerus in üblichen Nährmedien bei etwa 25 bis 30⁰C unter annähernd neutralen Bedingungen kann man eine ß-Lactamase-Hemmsubstanz erzeugen, .: ' ■ . die auch eine antibakterielle Wirksamkeit besitzt. Diese neue Substanz wird als "Clavulansäure" bezeichnet.

Clavulansäure hat folgende Eigenschaften:

(a) Sie ist eine Carbonsäure; -. . "

(b) sie bildet ein Natriumsalz., das ein charakteristisches

6 0 9 8 4 3/1139."

~⁵~ · 25

Infrarot-Spektrum besitzt, wie es im wesentlichen aus der Fig. 1 hervorgeht;

(c) sie vermag das Wachstum von Staphylococcus aureus-Stämmen zu hemmen;

(d) sie kann die antibakterielle Wirksamkeit von Ampicillin gegenüber ß-Lactamase erzeugenden Stämmen von Escherichia coli, Klebsieila aerogenes und Staphylococcus aureus synergistisch beeinflussen;

(e) sie kann die antibakterielle Wirksamkeit von Cephaloridin gegenüber ß-Lactamase erzeugenden Stämmen von Proteus mirabilis und Staphylococcus aureus synergistisch beeinflussen; "und

(f) sie bildet einen Methylester, der aufgrund der Massenspektroskopie ein Molekulargewicht von 213*0635 entsprechend der Formel CqH₁₁NOc- besitzt.

Die Clavulansäure kann als einwertige Carbonsäure der Formel CoHqNO₁- betrachtet werden, die in Form des Natriumsalzes ein charakteristisches Infrarot-Absorptionsspektrum besitzt, das im wesentlichen dem in Fig. 1 gezeigten entspricht.

Die von Streptomyces clavuligerus erzeugte Verbindung mit den vorgenannten Eigenschaften besitzt die Formel II

CH₂OH

(H)

~⁶~ 2 b 5 9 4 1 1

Die Clavulansäure kann als 3-(ß-Hydroxyäthyliden)-7-oxo-4-oxal-azabicyclo^3,2,07heptan-2-carbonsäure bezeichnet werden.

In stereochemischer Hinsicht sind die Kohlenstoffatome in 2- und 5-Steilung der Clavulansäure gleich wie bei den natürlich vorkommenden Penicillinen und Cephalosporinen, so daß die Clavulansäure durch die nachstehende Strukturformel (I) dargestellt werden kann:

CH OH

2 -

(D

Deshalb ist der vollständigere chemische Name für Clavulansäure Z-(2R,5R)-3-(ß-Hydroxyäthyliden)-7-oxo-4-oxa-l-azabicyclo^, 2,07-heptan-2-carbonsäure. . ■

Die hervorragende Brauchbarkeit der Clavulansäure wird erst richtig erkannt, wenn man sich vergegenwärtigt, daß bestimmte Stämme von Klebsiella aerogenes A, deren Wachstum durch die Anwesenheit von 125 iig/ml Ampicillin, Amoxycillin, Carbenicillin oder Benzylpenicillin oder durch die Anwesenheit von 10 ^ig/ml Clavulansäure nicht gehemmt wird, durch das Vorhandensein von unter 12,5 ^g/ml der vorerwähnten Penicilline jedoch gehemmt werden, wenn gleichzeitig 5 pg/ml Clavulansäure vorhanden sind. Ähnliche Ergebnisse sind bei Gemischen mit einem Gehalt verschiedener Ester der Clavulansäure beobachtet worden. Zum Beispiel

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2 b b 9 4 1 1

■werden Stämme von Klebsiella aerogenes A, deren Wachstum durch 125 yg/ml Ampicillin oder durch 10 ug/ml Clavulansäure-methyl-

nicht
ester/gehemmt wird, jedoch von unter 12,5 Mg/ml Ampicillin in Gegenwart von 5 pg/ml Clavulansäure-methylester gehemmt. Es ist ferner festgestellt worden, daß Stämme von Staphylococcus aureus Russell, deren Wachstum durch die Gegenwart von 100 Jig/ml Ampicillin oder durch 5 ug/ml Clavulansäure nicht gehemmt wird, durch das Vorliegen von unter 10 ug/ml Ampicillin in Gegenwart von 1 up/ml Clavulansäure gehemmt werden. Bei Untersuchungen an weiblichen Mäusen ist festgestellt worden, daß beträchtlich über 5 pg/ml liegende Mengen an Clavulansäure im Blut und Gewebe in einfacher Weise durch eine subcutane Verabreichung von 100 mg/kg des Natriumsalzes der Clavulansäure erreicht v/erden können und daß brauchbare Mengen an Clavulansäure nach einer oralen Verabreichung von 100 mg/kg des Natriumsalzes der Clavulansäure erhalten werden können. " .

Gegenstand vorliegender Erfindung sind daher Arzneimitteigemische, die durch einen Gehalt an Clavulansäure, deren pharmakologisch verträglichen Salzen oder Estern und einem Penicillin oder Cephalosporin gekennzeichnet sind.

Beispiele für pharmakologisch verträgliche Salze der Clavulansäure sind das Natrium-, Kalium-, Calcium-, Magnesium-, Aluminium· und das-Ammoniumsalz, ferner substituierte Ammoniumsalze, wie das Trimethylammoniumsalz, sowie weiterhin Benzathin-, Procain- und ähnliche Salze, wie sie üblicherweise mit Penicillinen oder Cephalosporinen gebildet werden.

•609843/1139

Die Salze der Clavulansäure sind gewöhnlich stabiler als die freie Säure per se und werden daher bevorzugt eingesetzt. "

• · Besonders zweckmäßige Salze der Clavulansäure sind das Natrium- und das Kaliumsalz der nachstehenden Formeln III und IV:

H₂OH.

CO₂Na

(III)

(IV)

Kristalline Formen derartiger Salze können Hydratwasser enthalten,

Zweckmäßige Ester der Clavulansäure sind diejenigen, die sich von den betreffenden Alkoholen ableiten, wie Methanol, Äthanol, Propanol, Butanol, 2,2,2-Trichloräthanol, 2,2,2-Trifluoräthanol, Benzylalkohol, p-Nitrobenzylalkohol, Phenol, Acetoxymethanol, Trimethylacetoxymethanol, 2-Dimethylaminoäthanol und anderen üblichen Alkoholen. Zahlreiche Ester der Clavulansäure sind wertvolle Zwischenprodukte bei bestimmten Verfahren zur Reindarstellung der Clavulansäure. Viele Clavulansäureester sind wertvolle synergistische Verbindungen. Die Wirksamkeit derartiger Ester dürfte in einer Hydrolyse des Esters zur freien Säure liegen.

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2b5941l

Wenn vorstehend der Ausdruck "Ester" verwendet wird, so schließt er die Ester mit ein., die sich begrifflich von einem Alkohol oder einem Thiol der allgemeinen Formeln ROH oder RSH ableiten, in denen R ein organischer Rest ist. Geeignete Reste für R sind Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl- oder andere ähnliche Reste, die auch substituiert sein können. Um das Molekulargewicht nicht übermäßig zu erhöhen, sollten die Reste R normalerweise nicht über 16 Kohlenstoffatome, zweckmäßigerweise nicht über 12 Kohlenstoffatomen und besonders bevorzugt nicht über 8 Kohlenstoffatome enthalten.

Vorzugsweise leitet sich der Rest R von einem Alkohol ROH oder nicht ganz so bevorzugt von einem Thioi RSH ab, die pharmakologisch verträglich sind.

Beispiele von geeigneten Substituenten an den Resten R sind Halogenatome, Hydroxylgruppen, niedere Alkoxy-, niedere Acyloxy-, niedere Alkyiamino- oder niedere Dialkylaminoreste. Der Ausdrudk "nieder" gibt an , daß der Rest bis 6 Kohlenstoffatome und vorzugsweise bis zu 4 Kohlenstoffatome enthält. Demzufolge kann R die Methyl-, Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, geradkettige oder verzweigte Butyl-, Pentyl-, Heptyl-, Octyl-, Nonyl-, Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Vinyl-, Allyl-, Butenyl-, Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl-, Cycloheptyl-, Cyclohexenyl-, Cyclohexadienyl-, Methylcyclopentyl-, Methylcyclohexyl- _φ Benzyl-, Benzhydril-, Phenyläthyl-, Näphthylmethyl-, Phenyl-, fiaphthyl-, Propinyl-, Tolyl-, 2-Chloräthyl-, 2,2,2-Trichloräthyl-, 2>2,2-Trifluoräthyl-, Acetylmethyl-, Benzoylmethyl-, 2-Methoxyäthyl-,

ßfr.-,^:a.'{/ 113 9

" ¹⁰ " ■ 25-594Ί

2-Dimethylaminoäthyl-, 2-Diäthylaminoäthyl-, 2-Piperidinoäthyl-, 2-Morpholinoäthyl-, 3-Dimethylaminopropyl-, p-Chlorbenzyl-, p-Methoxybenzyl-, p-Nitrobenzyl-, p-Brombenzyl-, m-Chlorbenzyl-, ö-Methoxynaphthyl-S-methyl-, p-Chlorphenyl- und die p-Methoxy-

bedeuten

phenylgruppe und ferner solche Gruppen^, die aus der Penicillinoder Cephalosporin-Chemie zur Herstellung solcher Ester bekannt sind, die in vivo leicht zur antibiotischen Stammsubstanz hydrolysieren.

Leicht hydrolysierbare Ester umfassen auch die Ester der allgemeinen Formeln V und VI, doch sind sie nicht auf diese beschränkt;

CHpOH

(V)

— CO

(VI)

= Y

in denen A, ein V/asserstoffatöm oder ein Alkyl-, Aryl- oder Aräikylrest ist, A₂ ein Wasserstoffatom oder die Methylgrüppe bedeutet* A-* für einen Alkyl-, Aryl- oder Äraikylrest steht^ X und Ϋ Sauerstoff- und/oder Schwefelatome sind und Z einen

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zweiwertigen organischen Rest darstellt. Ester der allgemeinen Formeln V und VI, die nach einer Verabreichung zeitlich leicht die Clavulansäure im Blutkreislauf freisetzen, schließen auch solche ein, in denen A-, ein V/asserstoffatom, A₂ ein Wasserstoffatom oder die Methylgruppe und A, die Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Butyl-, Benzyl- oder die Phenylgruppe sind, sowie solche, in denen X ein Sauerstoffatom, Y ein Sauerstoffatom ist und Z eine der Gruppierungen -CHpCH₂-, -CH:CH-,

OCH,

oder

OCH₃

darstellt.

in Verbindung mit den vorstehenden Formeln der Ausdruck "Alkyl" verwendet wird, schließt er Alkylreste bis zu 6 Kohlenstoffatomen ein. Der Ausdruck "Aryl" bedeutet die Phenyl- oder die Naphthylgruppe oder ferner einen Phenylrest, der durch einen inerten Substituenten, wie ein Fluor- oder Chloratom oder die Methyl- oder Methoxy!gruppe oder dergleichen, substituiert ist. Wenn hierin der Ausdruck "Aralkyl" verwendet wird, bedeutet er einen durch einen Arylrest substituierten Alkylrest.

Besonders zweckmäßige Ester der allgemeinen Formeln V und VI sind diejenigen,der allgemeinen Formeln VII und VIII:

CO - 0 - CH - 0 - CO - A

(VII)

■6 0 9 8 A3 /1 139

2bb9A I 1

(VIII)

In diesen Formeln bedeutet A^ ein V/asserstoffatom oder die Methylgruppe, A₁- die Methyl-, tert.-Butyl- oder die Phenylgruppe und Ag ein Wasserstoffatom und/oder die Methoxygruppe.

Zahlreiche Ester der Clavulansäure unterscheiden sich von analo gen Estern von Penicillinen oder Cephalosporinen darin, daß sie eine erhöhte Bereitschaft zur Hydrolyse zu Clavulansäure unter milden Bedingungen zeigen. So hydrolysieren z.B. einfache Alkyl ester, wie der Methylester, langsam in auf pH 7 gepuffertem Was ser zu Clavulansäure. Ester, die schon unter milden Bedingungen in gewissem Grad eine Hydrolyse erleiden, sind solche,der allge meinen Formel IX:

(IX)

in der R ein Kohlenwasserstoffrest mit 1 bis 9 Kohlenstoffatomen ist, der durch Halogenatome, niedere Alkoxyreste, Hydroxyl-

? "5 gruppen oder durch gegebenenfalls in Salzform vorliegende NR R-Reste substituiert sein kann, wobei R und Br gleich oder ver-

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schieden sind und Wasserstoffatome und/oder niedere Alkylreste bedeuten und auch zusammen mit dem Stickstoffatom einen 5- oder 6gliedrigen Ring bilden können.

Wenn unter Bezugnahme auf die allgemeine Formel IX der Ausdruck ^nieder" verwendet wird, bedeutet er, daß der Rest 1 bis 4 Kohlenstoff atome enthält. .

Geeignete Reste für R sind Alkyl- und Aralkylreste, die gegebenenfalls durch Halogenatome, Hydroxyl- oder Methoxy^gruppen oder

2 3
durch in Salzform vorliegende NR R -Reste substituiert sein

können, wobei R der Methyl- oder Äthylrest und Br der Methylol

öder Äthylrest ist oder mit dem Rest R unter Einschluß des Stickstoff atoms zu einem Pyrrolidin-, Piperidin- oder Morpholinrest verbunden ist.

Die zweckmäßigsten Alkylreste für R sind geradkettige Reste bis zu 6 Kohlenstoffatomen, die gegebenenfalls durch eine Methoxy- oder eine Hydroxylgruppe, einen in Salzform vorliegenden NR R-Rest oder ein Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch die CCl-,-öder CF,-Gruppes substituiert sind.

Die Ester der Clavulansäure sind besonders brauchbar als Synergisten, wenn sie in Geweben von Säugern, insbesondere im menschlichen Blut unter Bildung von Clavulansäure oder dessen Salz hydrolysieren, da man annimmt, daß Clavulansäure oder deren Salze etwas stärker wirksame antibakterielle Mittel als die Ester per se sein dürften. Zahlreiche Ester der allgemeinen Formeln V bis IX sind für diese Zwecke brauchbar.

B ι: H H A 3 / 1 1 3 9

Eine weitere Gruppe besonders geeigneter Ester nach vorliegender Erfindung sind jene wertvollen Zwischenprodukte, die leicht in Clavulansäure oder deren Salz durch chemische oder biochemische Methoden, die aus der Penicillin- oder Cephalosporin-Chemie bekannt und ausreichend milde sind, die reaktionsfähigen säurelabilen ß-Lactamringe aufzuspalten, überführt werden.

Am zweckmäßigsten ist natürlich ein Ester, der durch Hydrierung spaltbar ist. Übliche Ester für ein derartiges Verfahren sind die Benzyl-, substituierten Benzyl-, Benzhydril-, substituierten Benzhydril- oder die Tritylester. Der Benzylester hat sich als besonders zweckmäßig für dieses Verfahren erwiesen.

Im großen und ganzen ist die. Art eines Substituenten im Esterrest ohne Bedeutung, so lange er nicht bei der Spaltung durch Hydrierung stört.

Die erfindungsgemässen Arzneimittelgemische mit einem Gehalt an Clavulansäure oder deren Salzen oder Estern und Penicillinen oder Cephalosporinen können auch pharmakologisch unbedenkliche Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel enthalten_k

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Die Arzneimittelgemische ' umfassen solche in einer Form, die für eine orale, lokale oder parenterale Anwendung geeignet sind und die zur Behandlung von Infektionen bei Säugern, einschließlich Menschen, verwendet werden können.

Zweckmäßige Formen der Arzneimittelgemische sind Tabletten, Kapseln, Cremes, Sirupe, Suspensionen, Lösungen, Trokkensäfte und sterile, zu Injektions- oder Infusionszwecken geeignete Formen .Die Arzneimittelgemische können übliche" pharmakologisch verträgliche Substanzen, wie Verdünnungsmittel, Bindemittel, Farbstoffe, Geschmacksstoffe, Konservierungsmittel, Zerfallhilfsmittel und dergleichen gemäß einer üblichen pharmakologisehen Praxis zur Formulierung von Antibiotika enthalten, wie sie dem Fachmann bekannt ist. Injizierbare oder infundierbare Arzneimittel der Clavulansäure oder deren Salze sind besonders zweckmäßig, da große Mengen der Verbindung Clavulansäure im Gewebe nach einer Verabreichung durch Injizieren oder Infundieren auftreten können. Demzufolge ist ein besonderes bevorzugtes Arzneimittel nach vorliegender Erfindung die Clavulansäure oder deren Salz in steriler Form.

Einzeldosierungen mit einem Gehalt an Clavulansäure oder deren Salz oder Ester, die für eine orale Verabreichung angepaßt sind, bilden ein weiteres bevorzugtes Arzneimittel im Hinblick auf vorliegende Erfindung.

Unter bestimmten Voraussetzungen kann die Wirksamkeit der oralen

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Arzneimittel mit Clavulansäure und deren Salze oder Ester verbessert werden, wenn derartige Arzneimittel eine Puffersubstanz enthalten oder mit einem erst im Darm löslichen Überzug versehen sind, so daß die Verbindungen vorliegender Erfindung keine lange Berührungszeit mit dem hochgradig sauren Magensaft haben. Derartige gepufferte oder mit einem erst im Darm löslichen Überzug versehene Arzneimittel können nach den üblichen pharmazeutischen Techniken hergestellt werden.

Die Clavulansäure oder deren Salze oder Ester sind ^{in den} Arzneimittelgemischen "L - - "— ■-'" ~ - - '

-■.-:- zusammen mit anderen therapeutischen Mitteln, wie einem ß-Lactam-Antibiotikum, vergesellschaftet. - - Geeignete

ß-Lactam-Antibiotika zum Einarbeiten in derartige synergistische Arzneimittelgemis ehe/
/ schließen nicht nur solche ein, die in hohem Maße gegen ß-Lactamase empfindlich sind, sondern auch solche, die einen guten Grad an innewohnender Widerstandsfähigkeit gegen ß-Lactamasen haben. Demzufolge sind geeignete ß-Lactam-Antibio-

/ArzneimittelKemische tika zum Einarbeiten in die /. vorliegender Erfindung Benzylpenicillin, Phenoxymethylpenicillin, Carbenicillin, Methicillin, Propicillin, Ampicillin, Amoxycillin, Epicillin, Ticarcillin, Cyclacillin, 6-Aminopenicillansäure, 7-Aminocephalosporansäure, 7-Aminodesacetoxycephalosporansäure, Cephaloridin, Cephalothin, Cefazolin, Cephalexin, Cefoxitin, Cephacetril, Cephamandol, Cephapirin, Cephradin, Cephaloglycin und andere gut bekannte Penicilline und Cephalosporine oder deren Vorstufen, wie Hetacillin, Metampicillin, ferner die Acetoxymethyl-, Trimethylacetoxymethyl- oder die Phthalidylester von Benzylpenicillin, Ampicillin, Amoxycillin oder Cephaloglycin oder der Phenyl-, Tolyl-

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~¹⁷~ 25ΊΓ94 1Ι

oder Indalyl-oi-ester von Carbenicillin oder Ticarcillin oder dergleichen.

vorliegende Wenn natürlich das im Arzneimittelgerrisch / Penicillin oder Cephalosporin nicht für eine orale Verabreichung geeignet ist, dann wird das Arzneimittel für eine parenterale Verabreichung angepaßt.

Wenn die Clavulansäure oder deren Salze oder Ester in den Arzneimitteln zusammen mit einem ß-Lactam-Antibiotlkum vorliegen, kann das Verhältnis der Vorhandenen Clavulansäure oder deren Salz oder Ester zum vorhandenen ß-Lactam-Antibiotikum von beispielsweise 10 : 1 bis 1 : 10 und vorteilhafterweise von 3 : 1 bis 1 ; 3 sein.

Die Gesamtmenge der in einer Einzeldosierungsform vorhandenen antibakteriellen Mittel liegt gewöhnlich zwischen 50 und 1500 mg und üblicherweise zwischen 100 und 1000 mg.

/Arzneimittelgemische
Die . / vorliegender Erfindung können zur Behandlung

von Infektionen von u.a. der Atemwege, des Harnsystems und der

Weichteile beim Menschen verwendet werden. Sie können auch zur

Behandlung von Infektionen bei Haustieren, wie der Mastitis beim Vieh, eingesetzt werden.

üblicherweise werden zwischen 50 und 6000 mg des erfindungsgemä-

/Arzneimittelgemi s ehe s

Ben /je Behändlungstag verabreicht, jedoch vorzugsweise zwischen 500 bis 3000 mg je Tag. Jedoch für eine Behandlung schwerer Körperinfektionen oder Infektionen eines besonders

R fi H H 4 3/1139

schwer beeinflußbaren Organismus können in Obereinstimmung mit der klinischen Praxis höhere Dosen verwendet werden.

nach Die genaue Form der Arzneimittelgeiaische / der Erfindung hängt

in bestimmtem Maß von dem zu behandelnden Mikroorganismus ab.

Für eine Behandlung von Infektionen werden die erfindungsgemäßen Arzneimittelgemisehe *

~^L·'- -___: - J üblicherwei se so eingestellt, daß sie ein Maximum beim Blutspiegel von mindestens 0,1 ,ug/ml, noch zweckmäßiger von mindestens 0,25 jug/ml und vorzugsweise von mindestens 1 jag/ml Clavulansäure hervorrufen.

Die Penicilline oder Cephalosporine in den synergistisch wirken-

/Arzneimittelgemischen
den - /-. vorliegender Erfindung sind üblicherweise bis zu oder bei annähernd einer üblicherweise verwendeten Menge vorhanden, wenn das betreffende Penicillin oder Cephalosporin als einziges_/bei der Behandlung der Infektion verwendetes therapeutisches Mittel vorliegt. -

/Arzneimittelgemische Besonders begünstigte - . / vorliegender Erfindung enthalt ten 150 bis 1000 mg Amoxycillin, Ampicillin oder eine deren Vorstufen und 50 bis 500 mg Clavulansäure oder deren Salz oder deren in vivo hydrolysierbaren Ester, noch zweckmäßiger 200 bis 500 mg Amoxycillin, Ampicillin oder deren Vorstufen und 5Q bis 250 mg Clavulansäure oder deren Salz oder deren in vivo hydrolysierbaren Ester,

/Arzneimittelgemis chen Die Substanzen in derartigen ί können gegebenenfalls

in hydratisierter Form vorliegen. Die Gewichte der Antibiotika in

/Arzneimittelgemischen
solchen / wird auf der Grundlage des in· dem Arznei-

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"¹⁹V 5?bS94 1 1

mittelgemisch theoretisch verfügbaren Antibiotikums und nicht auf der Basis des Gewichts pro Arzneimittel ausgedrückt.

Beschreibung 1 ■ ■ ' ;.-'·."

Zur Bestimmung der Clavulansäure geeigneter Versuch Grundlagen des Versuchs '. '

Lösungen mit einem Gehalt an Clavulansäure (FiItrat der Nährbouillon, Proben aus einem Isolierungsverfahren oder dergleichen) ■werden 15 Minuten mit einem ß-Lactamase-Präparat bei 37°C in einer 0,05-m Phosphatpufferlösung vom -pH 7 bebrütet. Währenddessen tritt eine Enzymhemmung oder eine Inaktivierung auf. Dann wird ein Substrat (Benzylpenicillin) zugegeben und das Bebrüten bei 37°C 30 Minuten fortgesetzt. Die Menge des enzymatischen Abbaus des Substrats zu Penicillansäure wird mittels des Hydroxyl-

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Ϊ b b 9 4 1 1 ■

amin-Versuchs für Penicillin bestimmt. Die Menge der verwendeten ß-Lactamase errechnet sich aus einer 75prozentigen Hydrolyse des Benzy!penicillins in 30 Minuten bei 37°C.

Das Ausmaß der Hydrolyse ist der Einfluß der Menge des ungehemmt verbleibenden Enzyms. Die Ergebnisse werden ausgedrückt in Prozent Hemmung der Enzymaktivität durch eine gegebene Verdünnung der Clavulansäure enthaltenden Lösung (z.B. des Plltrats der Nährbouillon) oder durch die Konzentration der Clavulansäure in ug/ml bei gegebener 50prozentigen Hemmung des Enzyms unter den vorstehend genannten Bedingungen (Ij-q).

ß-Lactamase-Snzym " - ■

Es wird die mittels Eseherichia coli JT4 erzeugte ß-Lactamase als Enzym verwendet. Diese Züchtung ist ein Ampicillin-resistenter Stamm und verdankt seine Resistenz einer Erzeugung der den RrPaktor steuernden ß-Lactamase. Gegebenenfalls können ähnliche den R-Faktor steuernde ß-Lactamasen verwendet werden.

Die auf einem Schrägagar gehaltene Züchtung wird in einem 4θΟ ml sterilen Trypton-Medium bebrütet, das in einer konischen Flasche von 2 Liter Inhalt enthalten ist. Dieses Medium hat die folgende Zusammensetzung: 32 g/Liter Trypton, 20 g/Liter Hefeextrakt,

5 g/Liter Natriumchlorid und 2,2 g/Liter Calciumchlorid mit

6 Mol Hydratwasser. Der pH-Endwert wird mit verdünnter Natronlauge auf 7,4 eingestellt. Die Flasche wird 20 Stunden auf einem Drehschüttler mit 24o UpM bei 25°C geschüttelt.

Die bakteriellen Zellen werden durch Zentrifugieren gesammelt,

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mit 0,05-m Phosphatpufferlösung vom pH 7 gewaschen (nochmals suspendiert und zentrifugiert) und dann in Wasser nochmals suspendiert, wodurch man eine 25fache Zellkonzentration in dem Kulturmedium erhält. Diese Zellsuspension wird dann bei 4 C in einem MSE-Ultraschall-Disintegrator zertrümmert. Die Zellbruchstücke werden durch Zentrifugieren entfernt, und aliquote Anteile der überstehenden Lösung werden im tiefgefrorenen Zustand gelagert. Zur Verwendung bei dem Versuchsverfahren wird das Überstehende mit einer 0,005-m Phosphatpufferlösung verdünnt, bis man eine etwa 75prozentige Hydrolyse einer 1 mg/ml enthaltenden Lösung von Benzylpenicillin in 30 Minuten bei 37°C erhält.

yersuchsverfahren

Geeignete Verdünnungen des Hemmpräparats und der ß-Lactamase-Lösung werden vermischt und 15 Minuten bei 37°^c bebrütet (Test). Ein Kontrollversuch mit einer Pufferlösung anstelle des Inhibitorpräparats wird ebenfalls bebrütet. Dann wird eine Benzylpenicillin-Lösung (Substrat) zu dem Test- und dem Kontrollgemisch gegeben. Dann wird die Bebrütung weitere 30 Minuten bei 37°C fortgesetzt. Es wird dann das restliche Benzylpenicillin in jedem Gemisch unter Verwendung des Hydroxylaminversuchs bestimmt, wie er beschrieben ist von Batchelor und Mitarbeitern in Proc.Roy. Soe. B 154 (196I), S. 498. Zu allen Tests werden 6 ml Hydroxylamin-Reagens zugegeben. Die Kontrollversuche und die Versuche mit den reinen Substanzen läßt man 10 Minuten bei Raumtemperatur reagieren, bevor man 2 ml eines Eisen(III)-anunoniumsulfat-Reagens zusetzt. Die Absorption der Endlösungen wird in einem E.E.L.-Colorimeter oder in einem Spektrophotometer bei 490 nm gegenüber dem reinen Reagens gemessen. Die Zusammensetzungen der Reaktions-

Bo >iii k 'λ J 1 13 9

^- ²² 25S9A1

lösungen, der Testlösungen und der reinen Substanzen vor dem Hydroxylamin-Versuch sind wie folgt.

Bestandteile (alle gelöst in oder verdünnt mit 0,005-m Phosphatpuffer vom pH 7)	reines Benzyl- Test peni cillin, ml	Kontroll versuch, ml	reines Reagens, ml
Escherichia coli- ß-Lactamase-Lösung	1,9 o,ö	1,9	1,9
Inhibitor	0,1 0,0	0,0	0,0
Benzylpenicillin 5 mg/ml	0,5 0,5	0,5	0,0
D,OO5-m Phosphatpuffer vom pH 7	0,0 2,0	0,1	0,6

Berechnung der Ergebnisse .'

Die prozentuale Hemmung der ß-Lactamäse wird wie folgt berechnet;

Absorption des reinen Benzylpenicillins minus Absorption der Kontroilösung (nicht gehemmte Reaktion) = χ

Absorption der Testlösung (gehemmte Reaktionslösung) minus Absorption der Kontrolllösung (nicht gehemmte Reaktion) = y

Hemmung in

±t ·— χ 100 χ

Um den !(-„-Wert zu erhalten, wird das Hemmpräparat verdünnt, bis 50

eine goprozentige Hemmung der ß-Lactamase-Inaktivierung des Benzylpenicillins bei dem vorgenannten Verfahren erhalten wird.

6098 4 3/1139

. 2bb941 1

Beschreibung 2 Papierchromatographische Bestimmung der Clavulansäure

Das Piltrat der Nährbouillon und eine Bezugslösung der Clavulansäure (250 ug/ml eines teilweise gereinigten Präparats) werden auf 1 cm breite Papierstreifen (Whatman No. l)(20 uLiter der Ausgangslösung) getüpfelt. Die Chromatogramme laufen bei absteigender Chromatographie 16 Stunden bei 5^QC unter Verwendung eines Gemisches von n-Butanol/Isopropanol/Wasser im Volumenverhältnis 7:7:6 als Lösungsmittel. Die Streifen werden bei 4o°C getrocknet und auf Agarplatten ausgelegt, die 6 ug/ml Benzylpenicillin enthalten und dann mit einem ß-Lactamase erzeugenden Stamm von Klebsieila aerogenes (synergistisches System) beimpft. Die Platten werden über Nacht bei 30⁰C bebrütet, und die Clavulansäure zeigt sich als Zone eines gehemmten Wachstums. Der Rp-Wert der Zone ist Ö, 46. Die Menge von 6 yg/ml Benzylpenicillin allein liegt unterhalb der erforderlichen Konzentration, um Klebsiella aerogenes abzutöten, Jedoch in Gegenwart eines ß-Laetamase-Hemmstoffes wird diese Konzentration toxisch, was hinsichtlich des Synergismus zu: sagen ist.

Die Verwendung des vorgenannten synergistischen Systems ermöglicht die Feststellung der Clavulansäure bei Konzentrationen unterhalb denjenigen, bei denen sie eine antibakterielle Wirksamkeit zeigt. ■

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Beschreibung 3 Dünnschicht-chromatographische Bestimmung des Natriumsalzes

der Clavulansäure ■ .

Lösungen von Präparaten des Natriumsalzes der Clavulansäure werden auf Glasplatten, die mit einer 0,25 mm dicken Schicht von Silikagel (F254) beschichtet sind, in einer Menge von 5 uLiter von 1 mg/ml getüpfelt. Die Chromatogramme laufen bei 22°C unter Verwen- " dung einer oberen Phase eines Gemisches von n-Butanol/A'thanol/· Wasser im Volumenverhältnis von 4:1:5· Di^e Chromatogrammplatten werden bei 40°C getrocknet. Das Natriumsalz der Clavulansäure wird durch Bioautographie auf Agarplatten mit einem Gehalt von 6 iig/ml Benzylpenicillin angeordnet und mit Klebsieila aerogenes beimpft (synergistisches System wie bei der vorstehend besprochenen Papierchromatographie). Die Agaroberfläche wird mit einem feinen Filtertuch abgedeckt, bevor die Dünnschicht-Chromatographieplatte darübergelegt wird. Nach 15-bis 30minütigem Ruhenlassen zum Befeuchten und Diffundieren wird die Dünnschicht-Chromatographieplatte mit Hilfe des Filtertuches abgehoben und die Agarplatte über Nacht bei 30⁰C bebrütet, um die Zonen eines gehemmten Wachstums aufzuzeigen. Der PU-Wertdes Natriumsalzes der Clavulansäure in dem vorgenannten Lösungsmittel beträgt annähernd 0,37. Zwei sprühbare Reagentien, nämlich Ehrlich'sches Reagens und Triphenyltetrazolium-chlorid, werden ebenfalls verwendet, um die Zone des Natriumsalzes der Clavulansäure aufzuzeigen. Das erstgenannte Reagens besteht aus 300 mg p-Dimethylaminobenzaldehyd, das in 9 ml Äthanol, 54 ml n-Butanol und 9 ml konzentrierter Chlorwasserstoffsäure gelöst ist. Beim 1- bis 2minütigen Erhitzen der besprühten Dünnschicht-Chromatographieplatte auf 120°C er-

. 60 984 3 7-1 13 9

■- .· -'-~*⁵ -· 2 b b 9 4 11 -

scheint das Natriumsalz der Clavulansäure als rosaroter Flecken. Das Triphenyltetrazolium-chlorid-Reagens besteht aus einem Gemisch von 1 Volumenteil einer 4prozentigen Lösung dieser Verbindung in Methanol und 1 Volumenteil methanolischer Natronlauge. Nach dem Aufsprühen werden die DUnnschicht-Chromatographieplatten auf 8o°C erhitzt. Das Natriumsalz der Clavulansäure erscheint als roter Punkt auf weißem Untergrund. . · ·

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

B ti HH 4 :-i/ 1 1 3 9

2S5941

Beispiel¹

Antibakterieller Synergismus zwischen- Ampicillin und dem Natriumsalz der Clavulansäure

Die Mindest-Hemmkonzentrationen von Ampicillin, von dem Natriumsalz der Clavulansäure und von Ampicillin in Gegenwart von 1 ug/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure werden bei einer Reihe von ß-Lactamase-erzeugenden Bakterien bestimmt. Die Organismen werden in eine "Oxoid^fl-Empfindlichkeits-Testflüssigkeit überimpft, die sich in kleinen Löchern in einer Plastikcuvette befinden und die unterschiedliche Konzentrationsgradienten von ,einmal Ampicillin, zum anderen von dem Natriumsalz der Clavulansäure und zum dritten von Ampicillin plus 1 wg/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure (Mikrotlter-Methode) enthalten. Die Endverdünnung des Impfstoffes beträgt 0,5 x IC"².. Die Cuvette wird bei 37⁰C über Nacht bebrütet. Eine Aufzeichnung der Endpunkte des bakteriellen Wachstums wird am nächsten Morgen vorgenommen. Die Mindest-Hemmkonzentrationswerte in jig/ml sind in der Tabelle I verzeichnet, die auch aufzeigt, daß der Synergismus bei der niedrigen Konzentration von 1 ug/ml in bemerkenswerter Weise die antibakterielle Wirksamkeit von Ampicillin gegenüber bestimmten grampositiven und gramnegativen Bakterien steigert. Der Mechanismus dieses Synergismus besteht wahrscheinlich darin, die Hemmung der Ampicillin-zerstörenden S-Lactamase-Enzyme nach sich zu ziehen, doch kann die

6 0 9 8 4 3/1 1 3 9

_·₂₇-- 2 b b 9 4 1

Existenz anderer Mechanismen nicht ausgeschlossen werden.

Ähnliche Ergebnisse wie die in Tabelle I angegebenen werden er halten, wenn man Ampicillin durch Amoxycillin oder durch den Phthalidylester des Ampicillins ersetzt.

Tabelle I

Antibakterieller Synergismus zwischen Ampicillin und dem Natriumsalz der Clavulansäure

■ --■■■■	Mindest-Hemmkonzentrationen - ^ig/ml	Ampi cillin	Ampicillin in Gegenwart von 1 ^Jg/ml Natriumsalz der Clavulansäure
Bakterien- stamm	Natriumsaiz der Clavulan säure	1,8	£o,4
Escherichia coil NCTC 104l8 ^:	31:	> 500	125
Escherichia coIi B 11	62	125	< 0,4
Klebsiella aerogenes A	31	125	< 0,4
Klebsiella sp 62	31	250	62
Enterobacter cloacae	62	>500	62
Serratia marcescens	125	500	<0,4
Staphylococcus aureus (Russell)	15	250	7,5
Staphylococcus aureus	62

Beispiel "2

Antibakterieller Synergismus zwischen Cephaloridin und dem Natriumsalz der Clavulansäure ■

Die Mindest-Hemmkonzentrationen von Cephaloridin, von dem Natriumsalz der Clavulansäure und von Cephaloridin in Gegenwart von

.'-609843/1139

- 28 - _ X hf5 ^CJ 4 Π

5 ug/ml des Natriumsalzes der Clavulansäure werden nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren bestimmt. Die Ergebnisse in Tabelle II zeigen, daß ein Synergismus zwischen dem Natriumsalz der Clavulansäure und Cephaloridin erhalten werden kann, insbesondere beim ß-Lactamase-erzeugenden Stamm vnn Staphylococcus aureus (Russell).

Tabellen

Antibakterieller Synergismus zwischen Cephaloridin und dem Natriumsalz der Clavulansäure

Bakterien stamm	Mindest-Hemmkonzentrationen pg/ml	Cephalo ridin	Cephaloridin in Gegenwart von 5 Ug/ml Natrium salz der Clavu lansäure
Proteus mirabilis 899 Staphylococcus aureus (Russell) Staphylococcus aureus	Natriumsalz der Clavulan säure	62 3,1 15	7,5 3,7
> 500* 15 " 62

3t. Endpunkt

+ der gleiche Wert wird erhalten, wenn 1 ug/ml anstatt 5 Wg/ml Synergist zugegeben wird.

Beispiel 3

Antibakterieller Synergismus zwischen dem Natriumsalz der.Clavulansäure und verschiedenen Penicillinen Die in der Tabelle angegebenen Ergebnisse werden nach dem in Beispiel I. beschriebenen Verfahren erhalten.

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Tabelle III

2 b b 9 4

Antibakterieller Synergismus zwischen dem Natriumsalz der Clavulansäure und verschiedenen Penicillinen gegenüber Stämmen von Klebsiella aerogenes

Stamm	Amoxycillin	+5 ug/ml Synergist	Carbenicillin³¹	+5 >g/ml Synergist	Benzylpenicillin	+5 yg/ml Synergist
A	allein	0,97	alleii	7,8	allein	7,8
E 70	500	3,9	500	15	250	15,6
62	500	15,6	500	7,8	500	15,6
250	125	250

3E Ähnliche Ergebnisse werden beobachtet, wenn Carbenicillin durch den Phenyl-iiC-ester des Carbenicillin oder durch Ticarcillin ersetzt wird.

Beispiel 4'

Antibakterieller Synergismus zwischen Ampicillin und Estern der Clavulansäure

Die in der Tabelle IV '": angegebenen Ergehnisse werden nach dem

in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren erhalten.

Tabelle IV

AntibakterJSLler Synergismus zwischen Ampicillin und Estern der Clavulansäure gegenüber Stämmen von

Stamm	Ampicillin allein	Ampicillin + 5 ^ig/ml des Methy1- esters der Clavulan säure	Ampicillin + 5 ug/ml des Benzyl- esters der Clavulan säure
A E 70 62	500 500 500	1,9 3,9 3,9	1,9 3,9 3,9

984 3/1139

-30- 25594 1

Weder Clavulansäure-methylester noch Clavulansäurebenzylester hemmen das Wachstum der Testorganismen bei Konzentrationen von 1OQ ug/ml.

6 D 9 ä 4 3 / 1 139

Claims

Patentansprüche

Arzneimittelgemische/

1. / ~ ~~g ekennzeichne t durch einen

Gehalt an Clavulansäure, deren pharmakologisch verträgliche Salze oder Ester und einem Penicillin oder Cephalosporin.

Arzneimittelgemische/ ' ·

2. / - - nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß

es pharmakologisch verträgliche Verdünnungsmittel und/oder Träger-Stoffe und/oder Puffersubstanzen und/oder enterische Überzugsmittel und/oder übliche Zusatzstoffe enthält.

Arzneimittelgemische/ - '

3. / nach den Ansprüchen 1 oder 2 in oral verabreichbarer, injizierbarer oder infundierbarer Form.

Arzneimittelgemische/ " " _# :

*·■ / nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 3»

dadurch gekennzeichnet, daß das Arzneimittel als Penicillin oder Cephalosporin Benzylpenicillin, Phenoxyme thy !penicillin, Carbenicillin, Methicillin, Propicillin, Ampicillin, Amoxycillin, Epicillin, Ticarcillin, Cyclacillin, 6-Aminopenicillansäure-, 7-Aminocephalosporansäure, Y-Aminodesacetoxycephalosporansäure, Cephaloridin, Cephalothin, Cefazoiin, Cephalexin, Cefoxitin, Cephacetril, Cephamandol, Cephapirin, Cephradin, Cephaloglycin und andere Penicilline und Cephalosporine oder deren Vorstufen, wie Hetacillin, Metampicillin, die Acetoxymethyl-, Trirnethylacetoxymethyl- oder die Phthalylester von Benzylpenicillin, Ampicillin, Amoxycillin oder Cephaloglycin oder die Phenyl-, Tolyl- oder Indanyl-U-ester

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von Carbenicillin oder Ticarcillin enthält. .

Arzneimittelgemische/

5. / - _ · ■ nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4,

dadurch gekennzeichnet, daß das Verhältnis von Clavulansäure oder deren Salze oder Ester gegenüber Penicillin oder Cephalosporin : 10 : 1 bis 1 : 10, vorzugsweise 3 : 1 bis 1 : J5> beträgt.

• · Arzneimittelgemische/ ' . ■-·--·. . ■

6. / \ nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 5.

in Form von Einzeldosen mit jeweils einem Gehalt von 50 bis I5OO mg, vorzugsweise 100 bis 1000 mg, antibakteriell wirkender Verbindungen. '""/'"'■'. ■ "'; · -" · - ' '

.--' Arzneimittelgemische/ ' ' ' . .

1* I , nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 6 ,

gekennzeichnet durch einen Gehalt von I50 bis 1000 mg Amoxycillin oder Ampicillin oder einer Vorstufe davon und von 50 bis 500 mg Clavulansäure oder deren Salz oder deren in vivo hydrolysierbarer Ester.· . . . ;'."■·'.■■·. ·■'.":··.-

Arzneimittelgemische/ " ■ ■

8. / ...;. nach Anspruch 7, gekennzeichnet durch einen Gehalt von 200 bis 500 mg Amoxycillin oder Ampicillin oder einer deren Vorstufen und von 50 bis 250 mg eines pharmakologisch verträglichen Salzes der Clavulansäure. .

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