NO150838B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper - Google Patents

Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper Download PDF

Info

Publication number
NO150838B
NO150838B NO791956A NO791956A NO150838B NO 150838 B NO150838 B NO 150838B NO 791956 A NO791956 A NO 791956A NO 791956 A NO791956 A NO 791956A NO 150838 B NO150838 B NO 150838B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
clavulanic acid
preparation
esters
lactamase
ester
Prior art date
Application number
NO791956A
Other languages
English (en)
Other versions
NO150838C (no
NO791956L (no
Inventor
Martin Cole
Thomas Trevor Howarth
Christopher Reading
Original Assignee
Beecham Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27448389&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO150838(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GB17410/74A external-priority patent/GB1508977A/en
Publication of NO791956L publication Critical patent/NO791956L/no
Application filed by Beecham Group Ltd filed Critical Beecham Group Ltd
Publication of NO150838B publication Critical patent/NO150838B/no
Publication of NO150838C publication Critical patent/NO150838C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser.
Norsk patent nr. 145.247 beskriver fremstilling av klavulansyre, som har følgende formel:
og salter og estere derav.
Klavulansyre og dens salter er middels sterke bred-
spektrede antibiotika som også er &-laktamase-inhibitorer med evne til å forsterke effektiviteten til penicilliner og cephalosporiner mot forskjellige gram-negative og gram-positive bakterier. Vi har oppdaget at estere av klavulansyre også er i besittelse av antibakterielle og (3-laktamase-inhiberende egenskaper.
Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen en analogifremgangsmåte for fremstilling av estere av klavulansyre som er dannet ved karboksylgruppen, idet disse estere har følgende formel:
hvor R er en in vivo-hydrolyserbar estergruppe utvalgt blant C^_g-alkyl, eventuelt substituert med halogen; fenyl, benzyl eventuelt substituert med nitro, C1_4~alkanoyloksy(C^_4)alkyl eller ftalidyl. Fremgangsmåten er karakterisert ved at klavulansyre med den innledningsvis angitte formel, eller et salt derav, forestres på i og for seg kjent måte for innføring av gruppen R,
hvor R er som definert ovenfor.
Eksempler på estere av klavulansyre som fremstilles i henhold til oppfinnelsen, er spesielt slike som stammer fra alkoholer som metanol, etanol, propanol, butanol, 2,2,2-trikloretanol, 2,2,2-trifluoretanol, benzylalkohol, p-nitrobenzylalkohol og acetoksymetanol.
Den antibakterielle og (3-laktamase-inhiberende aktivitet
av disse estere kan skyldes in vivo-hydrolyse av esteren til mor-syren eller dens salt.
Nærmere bestemt kan R i formel (I) f.eks. være metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, rettkjedet eller forgrenet butyl, pentyl, heksyl, heptyl, oktyl, nonyl, benzyl, fenyl, 2-kloretyl, 2,2,2r trikloretyl, 2,2,2-trifluoretyl, p-metoksybenzyl, p-nitrobenzyl, 6-metoksynaftyl-2-metyl eller p-metoksyfenyl så vel som andre grupper som er kjent fra penicillin- eller cephalosporinområdet for å produsere estere som er kjent å kunne hydrolyseres lett in vivo til mor-antibiotikumet.
Eksempler på lett in vivo-hydrolyserbare estere er slike forbindelser som har de generelle formler (II) og (III);
hvor A1 er et hydrogenatom eller en alkylgruppe; A-, er et hydrogenatom eller en metylgruppe; A3 er en alkyl- eller aralkylgruppe; og Z er en toverdig organisk gruppe. Fordelaktige estere av formel (II) inkluderer slike hvor A^ er et hydrogenatom, A2 er et hydrogenatom eller en metylgruppe og A^ er en metyl-, etyl-, propyl-, butyl-, benzyl- eller fenylgruppe. Fordelaktige estere av formel (III) inkluderer slike hvor Z er
Ved anvendelse i tilknytning til formel (II) inkluderer betegnelsen "alkyl" alkyl med opp til 6 karbonatomer; og betegnelsen "aralkyl" betyr en alkylgruppe som er substituert med en arylgruppe.
Spesielt egnede estere av formlene (II) og (III) inkluderer dem av formlene (IV) og (V):
hvor A^ er et hydrogenatom eller en metylgruppe, A,, er en metyl-, t-butyl- eller fenylgruppe, og Ag er et hydrogenatom eller en metoksylgruppe.
Mange estere av klavulansyre avviker fra analoge estere av penicilliner eller cephalosporiner ved det at de viser forhøy-et tendens til å hydrolysere til klavulansyre under milde betingelser. Således hydrolyserer for eksempel alkylestere, f.eks. metylesteren, og på enkel måte substituerte alkylestere til klavulansyre-salter i vandig løsning som holdes ved tilsetning av base under tilnærmet nøytrale eller svakt alkaliske betingelser. Estere som gjennomgår hydrolyse under milde betingelser, er inkludert innen formel (VI):
hvor R"<*>" er en alkylgruppe med 1-9 karbonatomer som eventuelt er substituert med halogen. ;Best egnede alkylgrupper R<1> er rettkjedede grupper med opp til 6 karbonatomer som eventuelt er substituert med et klor-, brom- eller jodatom. ;Andre egnede hydrolyserbare estere er slike som har formlene (II) til (V) som beskrevet ovenfor. Slike estere hydrolyserer under milde betingelser, f.eks. under mild alkalisk hydrolyse ved pH 7,5. ;Esterne av klavulansyre med spesiell nytte som syner-gister er slike som hydrolyserer i pattedyrvev, spesielt i mennes-keblod, slik at det dannes klavulansyre eller et salt derav, da det antas at klavulansyre og dens salter har tendens til å være noe mer nyttige antibakterielle midler enn esterne i og for seg. ;Estere som fremstilles i henhold til oppfinnelsen, skal være spaltbare ved hydrogenolyse. Konvensjonelle estere med denne egenskap inkluderer benzyl- og substituerte benzylestere. Benzylesteren har vist seg spesielt nyttig i denne forbindelse. ;I det store og hele er naturen av en eventuell substituent ;i esterdelen betydningsløs så lenge den ikke innvirker på hydro-genolysereaksjonen. ;Som tidligere angitt, har klavulansyre-estere verdifulle terapeutiske egenskaper. Følgelig kan forbindelser som fremstilles i henhold til oppfinnelsen anvendes i et farmasøytisk preparat som omfatter en ester av klavulansyre sammen med en farma-søytisk akseptabel bærer. Slike preparater er gjerne i en form tilpasset for oral, topisk eller parenteral bruk og kan anvendes for behandling av infeksjon hos pattedyr, inklusive mennesker. ;Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer, som nevnt, en fremgangsmåte for fremstilling av estere av klavulansyre som omfatter forestring av klavulansyre eller et salt derav. ;Egnede metoder for dannelse av estere av klavulansyre inkluderer: (a) omsetning av et salt av syren av klavulansyre med en forbindelse av formelen Q-R hvor Q er en lett forskyvbar gruppe, og R er som definert for formel (I); (b) omsetning av klavulansyre med en diazoforbindelse, og ;(c) omsetning av klavulansyre med en alkohol eller diol ;i nærvær av et kondensasjonsfremkallende middel, f.eks. et karbodiimid. ;Hovedpatentet beskriver egnede betingelser for fremstilling av en ren ester av klavulansyre med utgangspunkt i urene preparater av et salt av klavulansyre. ;Den foretrukne fremgangsmåte for fremstilling av mange estere er den som er beskrevet under (a) ovenfor. ;Egnede salter av klavulansyre som kan omsettes med forbindelser R-Q omfatter litium-, natrium-, kalium- og sølvsaltene. ;Egnede grupper Q inkluderer de atomer eller grupper som er kjent for å være utskiftbare ved hjelp av karboksylat-anioner og inkluderer klor-, brom- og jodatomer, sulfonsyreester-rester, f.eks. O.S02CH3- eller 0.S02CgH4CH3-gruppene, aktive estergrupper, f.eks. 0.C0.H- eller O.CO.CF^-gruppen og andre konvensjonelle grupper som er fortrengbare ved hjelp av nukleofiler. ;Den ovennevnte reaksjon utføres normalt i et organisk løsningsmiddel med relativt høy dielektrisitetskonstant, f.eks. dimetylformamid, aceton, dioksan, tetrahydrofuran eller lignende, og ved en ikke-ekstrem temperatur, f.eks. -5 til 100°C, mer vanlig +5 til 30°C, f.eks. ved romtemperatur. ;Omsetningen av klavulansyre med en diazoforbindelse er en mild metode for fremstilling av alkyl-, aralkyl- eller lignende estere. Diazoteringsreaksjonen kan utføres under konvensjonelle re-aksjonsbetingelser, f.eks. ved en ikke-ekstrem temperatur og i et konvensjonelt løsningsmiddel. Slike reaksjoner utføres normalt ved mellom ca. -5 og 100°C, mer vanlig fra 5 til 30°C, f.eks. ved romtemperatur. Egnede løsningsmidler for denne reaksjon inkluderer lavere alkanoler, f.eks. metanol og etanol, og slike løsningsmidler som tetrahydrofuran, dioksan og lignende. Etanol har vist seg å væ-re et spesielt nyttig løsningsmiddel for denne reaksjon. ;Omsetningen av klavulansyre med en alkohol i ;nærvær av et kondensasjonspåskyndende middel vil normalt finne sted i et inert organisk løsningsmiddel med relativt høy dielektrisitetskonstant, f.eks. acetonitril. Denne reaksjon utføres vanligvis ved omgivende eller nedsatt temperatur, f.eks. ved -10 til +22°C, mer vanlig -5 til +18°C, f.eks. innledningsvis ved 0°C og deretter gradvis oppvarmning til ca. 15°C. Det kondensasjonspåskyndende middel som anvendes, er normalt et som fjerner vann fra reaksjonsblandingen. Egnede midler inkluderer karbodiimider, karbodiimidazoler eller ekvivalente reagenser. Dicykloheksylkarbo-diimid har vist seg å være et spesielt egnet kondensasjonspåskyndende middel for anvendelse i denne fremgangsmåte. I den hensikt å redusere selvkondensasjon av klavulansyren til et minimum utføres ;denne reaksjon vanligvis i nærvær av et betydelig overskudd av al-koholen . ;Andre egnede metoder for ester-dannelse inkluderer (d) fjerning av karbondioksydgruppene fra en forbindelse av formel (VIII): ;4 ;hvor R er en inert organisk gruppe. ;Karbondioksydgruppene kan fjernes fra forbindelsen av formel (VIII) spontant under fremstillingen eller alternativt ved oppvarmning av forbindelsen med formel (VIII) i et inert løs-ningsmiddel. Egnede inerte løsningsmidler inkluderer eterløsnings-midler, f.eks. dietyleter, tetrahydrofuran, dioksan og lignende. I mange tilfeller spaltes forbindelsen av formel (VIII) spontant selv ved nedsatt temperatur, f.eks. ved -5°C, slik at man får en ester av formel (IX): ;hvor R 4 er en inert gruppe innen definisjonen av R. ;Forbindelsen av formel (VIII) kan fremstilles ved omsetning av et salt av klavulansyre med Cl.CO.0.R 4 eller den kjemiske ekvivalent derav. Normalt utføres denne omsetning ved nedsatt temperatur, f.eks. ved en temperatur som ikke er høyere enn 5°C, og i et inert løsningsmiddel, f.eks. dietyleter, tetrahydrofuran eller dioksan. Helst er saltet av klavulansyre som anvendes ved denne reaksjon, et lipofilt salt, slik at det vil o<p>pløse seg i løsnings-midlet, selv om man om ønsket kan anvende det mindre gunstige natriumsalt ved å suspendere det i reaksjonsmiljøet. ;Esterne av klavulansyre kan renses kromatografisk. Ved slike prosesser oppløses esteren normalt i et organisk løsnings-middel, f.eks. etylacetat, metylenklorid, kloroform, cykloheksan eller lignende løsningsmidler. Den faste fase som anvendes i den kromatografiske prosess, er normalt et inert materiale, f.eks. silikagel eller kromatografisk lignende materialer. De fraksjoner som strømmer ut fra kolonnen, kan kombineres og det organiske løsningsmiddel dampes av under redusert trykk. ;Beskrivelse 1 ;Analyse som er egnet for påvisning av klavulansyre ;Prinsippet ved analysen ;Løsninger som inneholder klavulansyre (dyrkningsfiltrat, prøver fra isolasjonsprosessen og lignende) inkuberes i 15 minutter med et 3-laktamase-preparat i 0,05m fosfatpuffer ved pH 7 og 37°C. 1 løpet av dette tidsrom inntrer enzym-inhibering eller -inaktive-ring. Substrat (benzylpenicillin) tilføyes så og inkuberingen fort-setter i 30 minutter ved 3 7°C. Mengden av enzymnedbrytning av sub-stratet til penicillinsyre bestemmes ved hydroksylaminanalysen for penicillin. Mengden av p-laktamase som anvendes, er slik at man får 75 % hydrolyse av benzylpenicillinet i løpet av 30 minutter ved 37°C. ;Graden av hydrolyse er en gjenspeiling av den enzymmmeng-de som forblir u-inhibert. Resultatene uttrykkes som prosent-inhibering av enzym-aktiviteten ved en gitt fortynning av den klavulan-syreholdige løsning (f.eks. dyrkningsfiltrat) eller konsentrasjonen av klavulansyre (^ug/ml) som gir 50 % inhibering av enzymet under de ovenfor angitte betingelser (I^q)• ;g- laktamase- enzym ;Den p-laktamase som produseres av Escherichia coli JT4, anvendes som enzym. Denne kultur er en ampicillin-resistent stamme og skylder sin resistens produksjonen av en R-faktorstyrt p-laktamase. Andre lignende R-faktor-styrte p-laktamaser kan anvendes om så ønskes. ;Kulturen som holdes på skråkulturer av næringsagar, in-okkuleres i 400 ml sterilt trypton-medium som inneholdes i en 2 liter konisk kolbe. Dette medium har følgende sammensetning: Trypton ("Oxoid") 32 g/l, gjærekstrakt ("Oxoid") 20 g/l, KaCl 5 g/l og CaCl26H20 2,2 g/l. Den endelige pH-verdi ble justert til 7,4 med fortynnet NaOH. Kolben rystes ved 25°C i 20 timer på en roterende rystemaskin ved 240 opm. ;Bakteriecellene oppsamles ved sentrifugering, vaskes med ;0,05m fosfatpuffer pH 7 (resuspendert og sentrifugert) og resuspen-deres i vann slik at man får en cellekonsentrasjon som er 25 ganger' den som er i dyrkningsmediet. Denne cellesuspensjon ble så oppbrutt ;i en MSE ultrasonisk desintegrator ved 4°C. Celleavfallet ble fjernet ved sentrifugering, og alikvoter av den overstående væske lagret i dypfrossen tilstand. For anvendelse i analyseprosessen fortynnes den overstående væske i 0,005m fosfatpuffer til den gir ca. 75 % hydrolyse av en 1 mg/ml løsning av benzylpenicillin i løpet av 30 minutter ved 37°C. ;Analysemetode ;Egnede fortynninger av inhibitorpreparatet og |3-laktamase-løsningen blandes og inkuberes ved 37°C i 15 minutter (test). En kontrollprøve med puffer istedenfor inhibitorpreparat inkuberes og-så. Benzylpenicillinløsning (substrat) tilsettes så til testen og kontrollblandingene, og inkuberingen fortsettes i ytterligere 30 minutter ved 37°C. Det resterende benzylpenicillin i hver blanding anslås så under anvendelse av den hydroksylaminanalyse som er beskrevet av Batchelor m.fl., Proe.Roy.Soc., B 154, 498 (1961). 6 ml hydroksylamin-reagens tilsettes til alle tester, kontrollprø-ver og blindprøver og tillates å reagere i 10 minutter ved romtemperatur før tilsetning av 2 ml ferri-ammoniumsulfatreagens. Ab-sorpsjonen av de endelige løsninger måles i et "E.E.L." kolorime-ter eller et spektrofotometer ved 490 mm mot reagens-blindprøven. Sammensetningen av reaksjonene, testene og blindprøvene før hydroksylamin-analysen er som følger: ;Beregning av resultatene ;Den prosentvise inhibering av (3-laktamasen beregnes på følgende måte: Absorpsjon av benzylpenicillin-blindprøve minus absorpsjon av kontrollprøven (u-inhibert reaksjon) = x ;Absorpsjon av test (inhibert reaksjon) minus absorpsjon av kontrollprøven (u-inhibert reaksjon ) = y ;For oppnåelse av 1,-Q-verdien fortynnes inhibitor-prepa-ratet til 50 % inhibering av p-laktamase-inaktiveringen av benzyl-pencillin oppnåes i ovennevnte prosess. ;Beskrivelse 2 ;Papirkromatografisk påvisning av klavulansyre ;Dyrkningsfiltrat og en referanseløsning av klavulansyre (250^ug/ml delvis renset preparat) avsettes som flekker (20^ul/opp-rinnelse) på 1 cm brede papirstrimler av "Whatman" nr. 1. Kromato-grammene kjøres ved hjelp av nedadgående kromatografi i 16 timer ved 5°C under anvendelse av n-butanol/isopropanol/vann, 7/7/6 vol./vol. som løsningsmiddel. Strimlene tørkes ved 40°C og legges på agarplater som inneholder 6^ug/ml benzylpenicillin, og kimdannes med en p-laktamasepproduserende stamme av Klebsiella aerogenes (synergisme-system). Platene inkuberes natten over ved 30°C, ;og klavulansyre avsløres som en sone med inhibert vekst. Rf-verdien til sonen var 0,46. 6^ug/ml benzylpenicillin alene er under den konsentrasjon som er nødvendig for å drepe Klebsiella aerogenes, men i nærvær av en 3-laktamase-inhibitor blir denne konsentrasjon toksisk, dvs. at det er synergisme til stede. ;Anvendelse av det ovenfor nevnte synergisme-system mulig-gjør påvirkning av klavulansyre ved konsentrasjoner som er under dem ved hvilke den viser antibakteriell aktivitet. ;Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen. ;Eksempel 1 ;Fremstilling av metylklavulanat ;19,8 mg av natriumsaltet av klavulansyre ble oppløst ;i 0,5 ml tørt dimetylformamid og behandlet med 0,25 ml metyl-jodid. Etter henstand ved romtemperatur i 1,5 timer under vannfrie betingelser ble løsningsmidlene fjernet i vakuum. ;Resten ble renset med P.L.C. på silikagel (Kiselgel "60F254" ;fra E. Merck, Darmstadt, Vest-Tyskland) ved eluering med etylacetat slik at man fikk klavulansyre-metylester som en farveløs ;olje (R^ = 0,38; rød farve med trifenyltetrazoliumklorid-spray) ;som hadde følgende egenskaper: ;Analyse: Funnet C 50,49; H 5,43; N 6,29 ;C9H1;LN05 krever C 50,70; H 5,20; N 6,57 ;A. maks. (Metanol), ingen absorpsjon > 215 nm ;i/maks. (Film): 3300 - 3600 (Bred), 1800 , 1750, 1695 cm"<1 >Tilnærmet Iste orden N.M.R. (CDC13): 2,49 (bred S, ;1, utbyttet med D20), 3,05 ;(d, 1, J = 17,5 Hz), 3,54 (dd, 1, J = 17,5 Hz, ;J2 = 2,5 Hz), 3,85 (S, 3) ;4,24 (d, 2, J = 7 Hz), 4,93 (dt, 1, J = 7 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,07 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,72 (d, 1, J = 2,5 Hz) Molekylvekt (massespektrum) : 213,0635. ;Beregnet for CgH^NOg : 213,0637 ;Tynnsjiktkromatografi av metylesteren viste en enkelt sone i hvert av følgende løsningsmiddelsystemer: butanol/etanol/ vann 4:1:5 vol./vol. toppfase R^ = 0,75; isopropanol/vann, 7:3 vol./vol. Rf = 0,95; etylacetat/etylalkohol 8:2 vol./vol. Rf = 0,87. Sonene ble påvist ved hjelp av bioautografi under anvendelse av Klebsiella aerogenes med tilsetning av benzylpenicillin (syner-gismesystem). ;Eksempel 2 ;Fremstilling av metyl- klavulanat ;130 mg klavulansyre i 10 ml etanol ble behandlet med overskudd av diazometan i eter. Etter 2 minutter ved romtemperatur viste reaksjonen seg ved hjelp av TLC å være fullstendig. Løsningen ble inndampet i vakuum og resten renset ved kromatografi på silikagel, under eluering med etylacetat. Fraksjonene som inneholdt metylklavulanat, ble kombinert og inndampet slik at man fikk 104 mg av en klar olje. ;Eksempel 3 ;Fremstilling av metyl- klavulanat . ;200 mg klavulansyre i 5 ml acetonitril ble avkjølt og omrørt ved 0°C. 0,5 ml metanol og deretter 206 mg dicykloheksyldikarbodiimid ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt véd romtemperatur natten over. Suspensjonen ble filtrert og fil- ;tratet inndampet i vakuum slik at man fikk rått metyl-klavulanat. Råproduktet ble renset ved hjelp av kromatografi på silikagel, eluert med etylacetat og ga 140 mg av en klar olje. ;Eksempel 4 ;Fremstilling av fenyl- klavulanat ;100 mg klavulansyre i 5 ml acetonitril ble avkjølt og omrørt ved 0°C. Til løsningen ble tilsatt 0,94 g fenol og 100 mg dicykloheksyldikarbodiimid, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Suspensjonen ble filtrert og filtratet inndampet. Resten ble fraksjonert på silikagel, ;eluert med etylacetat/heksan (1:1) slik at man fikk 70 mg fenyl-klavulanat. IR (film) 1800, 1770, 1690 cm"<1.> NMR (CDC13) 2,18 (bred s,l), 3,06 (dd, 1, J=17 Hz, J2=0,9 Hz), 3,54 (dd,l,J1=17 Hz), J2=2,6 Hz), 4,29 (d,2,J=7,5 Hz), 5,1 (dt,l,Jx=7,5 H2, J2=l/5 Hz) 5,29 (d,l,J=l,5 Hz), 5,76 (dd, 1, J_L=2,6 Hz, J2=0,9 Hz), 7,35 5(m,5). Mol.vekt (massespektrometri) = 275,0777 hvilket tilsvarer C14H13N05 (bere9net 275,0794). ;Eksempel 5 ;Fremstilling av 2, 2, 2- trikloretyl- klavulanat ;221 mg natrium-klavulanat ble suspendert i 5 ml tørt tetrohydrofuran og omrørt ved 0°C. 211 mg trikloretylklorformiat i 1 ml tørt tetrohydrofuran ble tilsatt til ovennevnte suspensjon i løpet av 20 minutter. Blandingen fikk innstille seg til romtemperatur og ble omrørt natten over. Suspensjonen ble filtrert og filtratet inndampet i vakuum. Inndampningsresten ble kromatografert på silikagel under eluering med etylacetat/heksan (2:1) slik at man fikk det ønskede produkt som en olje. IR (film) ;1800, 1760, 1690 cm"<1>. NMR (CDC13) 1,56 (bred S,l), 3,07 (dd,l, J1=17,5 Hz, J2 = 0,7 Hz), 3,56 (dd, 1, ^=17,5 Hz, J2=2,5 Hz), 4,24 (d,2,J=7,5 Hz), 4,69 (d,l,J=12 Hz), 4,92 (d,l,J=12 Hz), 5,02 (dt,l,J1=7,5 Hz), J2=l/3 Hz), 5,19 (d,l,J=l,3 Hz), 5,73 (dd,l, J1=2,5 Hz, J2=0,7 Hz). Mol.vekt (massespektrometri) = 328,9621 hvilket tilsvarer CinH10NO5Cl3 (beregnet 328,9625). ;Eksempel 6 ;Fremstilling av p- nitrobenz ylklavulanat ;Behandling av natriumsaltet av klavulansyre med p-nitro-benzylbromid i tørt DMF ga, etter P.L.C., en farveløs olje som krystalliserte ut fra kloroform/eter slik at man fikk p-nitro-benzylester av klavulansyre som hvite, fjæraktige nåler, smp. 111-112°C, som ved rekrystallisering hadde smp. 117,5-118°C. ;Eksempel 7 ;Fremstilling av benzylklavulanat ;Urent 3-(3-nydroksyetylidin)-7-4-oksa-l-azabicyklo-[3,2,0]-heptan-2-karboksylsyre-natriumsalt (antatt å være grovt 55 mg rent materiale) i 0,64 ml tørt dimetylformamid ble behandlet med 0,18 ml benzylbromid. Løsningen ble holdt ved romtemperatur (tilnærmet 17-18°C) i 3 timer under vannfrie betingelser. Reaksjonsblandingen ble fraksjonert på silikagel, eluert med etylacetat, slik at man i ialt vesentlig ren form fikk benzylesteren av 3-(3-hydroksyetylidin)-7-okso-4-oksa-l-azabicyklo-[3,2,0]heptan-2-karboksylsyre, 63 mg) som en farveløs olje. ;IR (film) 1800, 1745, 1695 cm"<1>; NMR (CDC13), 2,25 (s,l, utbytt- ;bar med D20), 3,05 (d,l,J= 17 Hz), 3,51 (dd,l, J = 17 Hz, J2 = ;2,5 Hz), 4,24 (d,2, J = 7,5 Hz), 4,92 (dt, 1, J = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,15 (d,l, J = 1,5 Hz), 5,24 (s,2), 2,71 (d,l, J = 2,5 Hz), 7 , 45 S (s,5). ;Eksempel 8 ;Fremstilling av pivaloyloksymetyl- klavulanat ;Til en omrørt løsning av 0,37 g brom-metylpivalat i ;5 ml tørt dimetylformamid ble tilsatt 0,49 g natriumklavulanat. ;Etter 2 timer ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen be- ;handlet med 20 ml etylacetat, 10 ml cykloheksan og 20 ml vann. Blandingen separerte i to sjikt, og det vannfrie sjikt ble ;separert fra, vasket med 20 ml vann og tørket over natriumsulfat. ;Den tørkede løsning ble inndampet slik at det etterlot det ønskede- produkt som en blekgul olje (500 mg). NMR (CDC13), 1,26 (s.9), 3,13 (d,l,J=17 Hz), 3,62 (dd, 1,J=17 Hz, 0^=2,5 Hz, 4,3 ;(d,2,J = 7,5 Hz), 5,0 (dt,l,J = 7,5 Hz, J2=l,5 Hz), 5,16 (d,l,J= ;1,5 Hz), 5,79 (d,l,J=2,5 Hz), 5,92 (s,2); IR (flytende film), '—)* (3-laktam CO 1800 cm -1 , ester C=0 1760 cm -1.
Eksempel 9
Fremstilling av klavulansyre- ftalidylestere
Til en omrørt løsning av 0,4 3 g 3-bromftalid i 5 ml
tørt dimetylformamid ble tilsatt 0,5 g natriumklavulanat, og
løsningen fikk stå ved romtemperatur i 2 timer. Løsningen ble behandlet med 20 ml etylacetat, 10 ml cykloheksan og 30 ml vann og rystet grundig. Det vannfrie sjikt ble vasket med 20 ml vann, tørket (Na2S04) og inndampet slik at man fikk en blekgul gummi.
De to diastereomere estere ble separert under anvendelse av høy-trykks-væskekromatografi på en 40 cm x 10 mm kolonne av silikagel ("Merckosorb" SI 60, 5^u) og eluering med etylacetat ved en strømningshastighet på 3 ml/min.
Den første ftalidester (retensjonstid 7,15 min) krystalliserte ut fra etylacetat som nåler, smp. 102°C, og hadde følgende IR (nujol mull) p-laktam C=0 1790 cm<-1> ester C=0
1755 cm<_1>NMR (CD3COCD3): 3,14 (d,l,J=17,5 Hz) 3,76 (dd,l,J=17,5 Hz, J2=2,5 Hz), 4,25 (d,2,J=7,5 Hz), 5,0 (dt,l,J1=7,5 Hz), J2=l,5 Hz) ' 5,4 (s,k,J=l,5 Hz), 5,82 (d,1,J=2,5 Hz), 7,7 (s,l), 8,06 £ (m,4)j Mol.vekt (massespektrometri: 331,0696 tilsvarer ci6<H>^3<N0>7 (be~ regnet 331,0692). Den annen diastereoisomer (retensjonstid 8,85 min) hadde følger.de IR (CH2Cl2-løsnin<g>) -y 3-laktam C=0 1800 cm"<1>, ester C=0 1780 cm"<1>; NMR (CDC13)2,42 (bred S,l, utskiftbar med D20), 3,12 (d,l,J=18 Hz), 3,60 (dd,l,J1=18 Hz, J2=2,5 Hz)' 4'30 (d,2,J=7,5 Hz), 5,0 (dt,l,J1=7,5 Hz, J2=l,5 Hz), 5,12 (d,l,J=l,5 Hz), 5,76 (d,l,J=2,5 Hz), 7,52 (S,l), 7,85/ (m,4).
Eksempel 10
Fremstilling av n- nonyl- kiavulanat
44 mg natrium-klavulanat i 2 ml tørt dimetylformamid ble behandlet med 76 mg nonyljodid og fikk stå ved romtemperatur i 2 timer. Løsningen ble inndampet og resten fraksjonert på silikagel, eluert med etylacetat/heksan (2:1) slik at man fikk et oljeaktig produkt; IR (film) 1800, 1745, 1690 cm"<1>. Mol.vekt (massespektrometri) = 325,1890 hvilket tilsvarer C17H27N05 (beregnet 325,1889).
Antibakteriell synergisme mellom ampicillin og klavulansyre-
estere
Den minste inhiberende konsentrasjon (M.I.C.-verdier)
for ampicillin, klavulansyre-natriumsalt og ampicillin i nærvær
av l^ug/ml klavulansyre-natriumsalt ble bestemt for et område av 3-laktamase-produserende bakterier. Organismene ble inokkulert
i "Oxoid"-sensitivitetstestbuljong som befant seg i små groper
i en plastskål og inneholdt separate konsentrasjonsgradienter av ampicillin, klavulansyre-natriumsalt eller ampicillin pluss 1 /Ug/ml klavulansyre-natriumsalt (mikrotitermetoden). Den endelige fortynning av overnattingsbuljong-podestoffet var 0,5 x 10 . Skålen ble inkubert ved 37°C natten over, og neste morgen ble det gjort notater angående sluttpunktene for bakterievekst. M.I.C.-verdiene i ^ug/ml er gjengitt i følgende tabell som avslører at synergisten ved deh lave konsentrasjon av l^ug/ml markert forbedrer den antibakterielle aktivitet for ampicillin mot visse Gram-positive og -negative bakterier. Mekanismen for denne synergisme innebærer sannsynligvis inhibering av ampicillin-ødeleggende p-laktamase-enzymer, men eksistensen av andre mekanis-mer kan ikke utelukkes.
Lignende resultater som dem som er vist i tabellen ble oppnådd ved utbytting av ampicillin med amoksycillin eller med ftalidylesteren av ampicillin.
TABELL
Antibakteriell synergisme mellom ampicillin og estere av klavulansyre mot stammer av Klebsiella aerogenes
Hverken klavulansyremetylester eller klavulansyrebenzyl-ester inhiberte veksten av testorganismene ved en konsentrasjon på 100^ug/ml.
Eksempler på aktivitet av klavulansyre- metylester
Tester på antibakteriell aktivitet i buljong viste at klavulansyre-metylesteren har bred-spektret aktivitet, men av lavere størrelsesorden enn vist ved klavulansyre. Det var ikke klart hva enten denne aktivitet var aktiviteten av forbindelsen selv eller av klavulansyre som var frigjort ved langsom vann-hydrolyse av esteren. Klavulansyre-metylester viste markert antibakteriell synergisme i kombinasjon med ampicillin eller cephaloridin mot bakterier som var resistente mot disse antibiotika. Således ble den minste inhibitive konsentrasjon (M.I.C.) for ampicillin mot Staphylococcus aureus (Russell) redusert fra 500 yug/ml til < 0,4 i nærvær av l,0^ug/ml klavulansyre-metylester. M.I.C. for cephaloridin ble redusert fra l,5^ug/ml til
<0,0 3^,ug/ml i nærvær av lyug/ml av klavulansyre-metylester. M.I.C. for ampicillin mot Proteus mirabilis C889 ble redusert fra 500^,ug/ml til 31^ug/ml i nærvær av 5^ug/ml klavulansyre-metylester.
Antibakterielt spektrum av klavulansyreestere
Den antibakterielle aktivitet av klavulansyre-natriumsalt mot et område av bakterier ble bestemt under anvendelse av mikrotiter-metoden. Seriefortynninger av klavulansyre-natriumsalt i "Oxoid"-sensitivitetstest-buljong inneholdt i et mikrotiter-plastkar, ble inokulert med en overnattings-buljongkultur av hver organisme, slik at den endelige fortynning av podestoffet var 0,5 x 10 -4. Kulturene ble inkubert natten over og punktene for bakterievekst notert neste morgen ved observasjon av kulturens grumsethet. Resultatene, uttrykt som tilnærmede MIC-verdier (minste inhiberende konsentrasjon ^ug/ml) er angitt
i følgende tabell som viser at forbindelsen har et bredt spektrum av antibakteriell aktivitet.
EKSEMPEL 11
Fremstilling av benzylesteren av clavulansyre fra rå ekstrakter
av dyrkningsfiltratet av S. clavuligerus
20 liter dyrkningsf iltrat, oppnådd som beskrevet i hovedsøknadens eksempel 10, ble vakuuminndampet under anvendelse av en "klyvende film"-inndamper til 5 liter. Konsentratet ble så frysetørket under anvendelse av en "Edwards" E.F.6 hylle-frysetørker frem-stilt av Edwards High Vacuum Ltd. De 300 g av det således opp-nådde faste stoff inneholdt 3 g natrium-clavulansyre, hvilket ble fastslått ved enzym-inhiberingsanalysen. Det faste stoff ble suspendert i 900 ml tørt dimetylformamid, og 150 ml benzylbromid ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur og deretter fortynnet med 1 liter etylacetat. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet konsentrert til så lite volum som mulig. Den oljeaktige rest ble ekstrahert med ytterligere 1 liter etylacetat, og ekstrakten ble filtrert. Filtratet ble igjen konsentrert og den resulterende, oljeaktige rest belagt på en 76,2 mm x 35,6 cm silikagel-kolonne ("Biogel Biosil" A 100 mesh) i cykloheksan. Kolonnen ble eluert med cykloheksan for fjerning av benzylbromid, og løsningsmidlet ble så byttet ut med etylacetat og 20 ml fraksjoner oppsamlet. Fraksjonene ble testet på nærvaar av benzylesteren av clavulansyre ved avsetting av flekker på glassbelagte TLC-plater av silikagel (Merck's forhåndsbelagt silikagel 60 F 254) og ved sprøyting med 2 ,3 ,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) spray-reagens.
Fraksjoner som ga intense røde flekker med dette reagens, ble undersøkt ytterligere ved hjelp av TLC på silikagel-plater under anvendelse av kloroform/etylacetat 8:2 som løsningsmiddel og ved sprøyting av de utviklede plater med TTC-spray. Benzy1-esteren av clavulansyre løper ved R f = 0,31 ved 22°C. Fraksjoner som inneholdt denne ester, ble kombinert og konsentrert til 15 ml, og denne løsning ble ytterligere kromatografert på en 38,1 mm x 40,7 cm silikagel-kolonne (Merck's silikagel H, type 60) med kloroform/etylacetat 8:2 som løsningsmiddel. 15 ml fraksjoner ble oppsamlet og testet med hensyn på benzylesteren som beskrevet ovenfor. De fraksjoner som inneholdt esteren, ble konsentrert til 8 ml og til slutt renset ved hjelp av kolonne-kromatografi på en 25,4 mm x 40,7 cm silikagel-kolonne (Merck's silikagel Fl, type 60) med etylacetat/cykloheksan 8:2 som løsningsmiddel. Utvalgte fraksjoner ble kombinert og vakuuminndampet slik at man
fikk ren benzylester som olje, 160 mg.
EKSEMPEL 12
Fremstilling av clavulansyre- benzylester
3,3 kg forstøvningstørket fast stoff som inneholdt
69,4 g clavulansyre, bestemt ved enzym-inhiberingsanalyse, ble oppnådd som beskrevet i hovedsøknadens eksempel 16. Det faste stoff ble opp-slemmet i 5,5 1 dimetylformamid og 500 ml benzylbromid tilsatt. Etter omrøring ved romtemperatur i 2 timer ble 12 liter etylacetat tilsatt og fast-stoffet fjernet ved filtrering. Filtratet ble vakuuminndampet til en oljeaktig rest (212 g). Resten ble belagt på en kolonne som inneholdt et 10,2 mm x 33 cm sjikt av silikagel (MFC fra Hopkins & Williams) i cykloheksan. Kolonnen ble eluert med 12 liter cykloheksan for fjerning av overskudd av benzylbromid. Eluenten ble så byttet ut mot etylacetat og 500 ml fraksjoner oppsamlet. Disse ble testet med hensyn på benzylclavulanat-innhold ved avsetning av flekker på silikagel TLC-plater (Merck's forhåndsbelagt silikagel 60 F 254) og sprøyting med 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) spray-reagens. Fraksjoner som ga intense røde flekker, ble ytterligere undersøkt ved hjelp av TLC på silikagel med kloroform/ etylacetat 8:2 som løsningsmiddel og sprøyting av de utviklede plater med TTC-spray. Fraksjoner 5-13 inneholdt hovedmengden av esteren, og disse ble kombinert og vakuum-konsentrert til en olje (79,3 g). Dette preparat ble så kromatografert på en 10,2 mm x 45,7 cm kolonne av silikagel (Merck's silikagel H,
type 60) med kloroform/etylacetat 8:2 som løsningsmiddel. Fraksjoner ble utvalgt som beskrevet ovenfor og ga ved konsentrering 45,9 g olje som var av 62 % renhet, fastslått ved NMR-spektroskopi.
Dette produkt ble til slutt kromatografert på en 70 mm x 45,7 cm kolonne av "Sephadex LH 20" i cykloheksan/kloroform 1:1. Etter utvelgelse av fraksjoner og konsentrering ble det oppnådd 27,6 g av en farveløs olje som viste seg å være 95 % ren benzylester av clavulansyre, hvilket ble fastslått ved NMR-spektro-skopisk undersøkelse. ("Sephadex" LH 20 er et hydroksypropyl-derivat.ay "Sephadex" Q 25 fra Pharmacia Great Britain, 75 Uxbridge Road, London W5, Storbritannia).
EKSEMPEL 13
Fremstilling av clavulansyre- benzylester
150 liter dyrkningsfiltrat med pH 7,0 inneholdt 16,2 g clavulansyre (natriumsalt), fastslått ved enzym-inhiberingsanalysen. Dette filtrat ble omrørt med 5 kg "Amberlyst" A.26 anionebytte-harpiks i kloridform (Rohm & Haas Company, Phila-delphia, USA) i 1 time ved romtemperatur. Harpiksen ble så filtrert og filtratet analysert på ny, hvilket viste at 6,4 g clavulansyre var fjernet. Harpiksen ble vasket med 20 liter avionisert vann, fulgt av 20 liter aceton og 10 liter dimetylformamid (DMF). Etter refiltrering ble harpiksen suspendert i 2,3 liter DMF/0,2m Nal. Til dette ble tilsatt 200 ml benzy1-bromid, og suspensjonen ble grundig omrørt. Etter henstand ved romtemperatur i 16 timer ble 2 liter etylacetat tilsatt, harpiksen ble filtrert, ytterligere vasket med etylacetat, og vaskevannet ble kombinert med filtratet. Ekstrakten ble så konsentrert til et lite volum og kromatografert på 76,2 mm x 45,7 cm silikagel-kolonne (Merck's silikagel H, type 60) med etylacetat/cykloheksan 8:2 som løsningsmiddel. Fraksjoner som inneholdt benzy1-clavulanat ble utvalgt ved avsetning av flekker på silikagel-TLC-plater og sprøyting med TTC-reagens som beskrevet tidligere (eksempel 14). De som ble utvalgt, ble konsentrert til 20 ml
og deretter kromatografert på en 38,1 mm x 45,7 cm silikagel-kolonne (Merck's silikagel H, type 60) med kloroform/etylacetat 8:2 som løsningsmiddel. Utvalgte fraksjoner ble kombinert og inndampet til en farveløs olje (440 mg) som var 90 % benzylclavulanat, fastslått ved NMR-spektroskopi.
EKSEMPEL 14
Fremstilling av benzylesteren av clavulansyre fra rå ekstrakter av dyrkningsfiltratet av S. clavuligerus
En alikvot av vandig tilbakeekstrakt av butanolekstrakten av dyrkningsf iltrat oppnådd som beskrevet i hovedsøknadens eksempel 14, ble frysetørket under anvendelse av en Edwards' kammertørker. En 24 g porsjon av det faste stoff som ble oppnådd, inneholdt 0,96 g natriumclavulansyre, fastslått ved enzym-inhiberingsanalysen. Dette faste stoff ble suspendert i 75 ml tørt dimetylformamid,
og 75 ml benzylbromid ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Suspensjonen ble så fortynnet med 500 ml etylacetat, og blandingen ble filtrert. Filtratet ble konsentrert til en oljeaktig rest på en roterende vakuuminndamper.
Denne rest ble belagt på en 50,8 mm x 35,6 cm silikagelkolonne ("Biogel Biosil" A.100 mesh) i cykloheksan. Benzylbromid ble eluert fra kolonnen, og deretter ble løsningsmidlet utbyttet mot etylacetat, og 10 ml fraksjoner ble oppsamlet. Fraksjoner som inneholdt benzylesteren av clavulansyre, ble utvalgt som i eksempel 14. Ytterligere rensning ble også oppnådd som beskrevet i eksempel 14, ved kolonne-kromatografi. Denne fremgangsmåte ga 220 mg ren benzylester.

Claims (1)

  1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av nye klavulansyre-estere med antibakterielle og B-laktamase-inhiberende egenskaper, av formel (I):
    hvor R er en in vivo-hydrolyserbar estergruppe utvalgt blant C1_g-alkyl, eventuelt substituert med halogen; fenyl, benzyl eventuelt substituert med nitro, C1_4~alkanoyloksy (C-^_4 ) alkyl eller ftalidyl, karakterisert ved at klavulansyre med formel eller et salt derav forestres på i og for seg kjent måte for innføring av gruppen R, hvor R er som definert ovenfor.
NO791956A 1974-04-20 1979-06-12 Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper NO150838C (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB17410/74A GB1508977A (en) 1974-04-20 1974-04-20 Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
GB2771574 1974-06-21
GB4365174 1974-10-09
GB5352574 1974-12-11

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO791956L NO791956L (no) 1975-10-21
NO150838B true NO150838B (no) 1984-09-17
NO150838C NO150838C (no) 1985-01-09

Family

ID=27448389

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO751407A NO145247C (no) 1974-04-20 1975-04-18 Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre
NO791956A NO150838C (no) 1974-04-20 1979-06-12 Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper
NO801852A NO801852L (no) 1974-04-20 1980-06-20 Farmasoeytisk clavulansyrepreparat.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO751407A NO145247C (no) 1974-04-20 1975-04-18 Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO801852A NO801852L (no) 1974-04-20 1980-06-20 Farmasoeytisk clavulansyrepreparat.

Country Status (26)

Country Link
US (5) US4427690A (no)
JP (7) JPS5246957B2 (no)
AR (3) AR206627A1 (no)
CA (1) CA1059050A (no)
CH (2) CH629252A5 (no)
CY (1) CY1078A (no)
DD (2) DD121799A5 (no)
DE (4) DE2559410A1 (no)
DK (1) DK141254B (no)
FI (1) FI54144C (no)
FR (1) FR2267778B1 (no)
HK (1) HK54780A (no)
IE (1) IE41109B1 (no)
IL (1) IL47087A (no)
IN (1) IN140042B (no)
KE (1) KE3076A (no)
LU (1) LU72322A1 (no)
MY (1) MY8100195A (no)
NL (1) NL163824C (no)
NO (3) NO145247C (no)
NZ (1) NZ177159A (no)
OA (1) OA05203A (no)
PH (1) PH16474A (no)
RO (2) RO77320A (no)
SE (8) SE422063B (no)
YU (3) YU39941B (no)

Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE41109B1 (en) * 1974-04-20 1979-10-24 Beecham Group Ltd Novel -lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
AT353409B (de) * 1975-02-07 1979-11-12 Glaxo Lab Ltd Verfahren zum entfernen von verunreinigungen aus clavulansaeure oder deren salzen
JPS596796Y2 (ja) * 1975-04-04 1984-03-01 株式会社東芝 脱水兼用洗濯機
US6218380B1 (en) * 1975-04-17 2001-04-17 Smithkline Beecham P.L.C. Pharmaceutical compositions
US6048977C1 (en) * 1975-04-17 2001-10-16 Smithkline Beecham Plc Clavulanic acid and salts thereof
GB1563103A (en) * 1975-10-13 1980-03-19 Beecham Group Ltd Process for the preparation of clavulanic acid
US4230622A (en) * 1975-12-17 1980-10-28 Glaxo Laboratories Limited Halogen derivatives of clavulaic acid
GB1515241A (en) * 1976-01-27 1978-06-21 Beecham Group Ltd Beta-lactam antibiotics
NL7706242A (nl) * 1976-06-08 1977-12-12 Glaxo Lab Ltd Werkwijze voor de bereiding van clavamderivaten.
GB1562802A (en) * 1976-06-26 1980-03-19 Beecham Group Ltd Pharmaceutical compositions containing containing clavulanic acid
GB1562902A (en) * 1976-06-30 1980-03-19 Beecham Group Ltd Pharmaceutical compositions containing clavulanic acid
GB1578739A (en) * 1976-07-23 1980-11-05 Beecham Group Ltd Amine salts of clavulanic acid methods for their preparation and compositions containing them
GB1594001A (en) * 1977-03-16 1981-07-30 Beecham Group Ltd Pellets suitable for use in the testing of microorganisms
GB1582884A (en) * 1977-05-19 1981-01-14 Beecham Group Ltd Clavulanic acid derivatives their preparation and use
DE2912511C2 (de) * 1977-06-07 1982-06-24 Pfizer Inc., 10017 New York, N.Y. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Penicillansäure
JO984B1 (en) * 1977-10-11 1979-12-01 بيتشام غروب ليمتد A dry pharmaceutical compound with a suitable dosage unit for oral administration
JPS54126735A (en) * 1978-03-24 1979-10-02 Toyama Chem Co Ltd Bactericidal composition for medical use
EP0008905B1 (en) * 1978-09-06 1983-02-16 Beecham Group Plc Pharmaceutical compositions containing two beta-lactam derivatives
JPS5545906U (no) * 1978-09-21 1980-03-26
US4202819A (en) * 1979-05-04 1980-05-13 Hoffman-La Roche Inc. 2-(3-Alanyl)clavam antibiotic
ZA804670B (en) * 1979-08-03 1981-07-29 Beecham Group Ltd Derivatives of clavulanic acid, a process for their preparation and their use
EP0026044B1 (en) * 1979-08-24 1983-06-08 Beecham Group Plc Amine salt of clavulanic acid, its preparation and use
NZ199061A (en) * 1980-12-09 1984-10-19 Beecham Group Ltd 9-(n-tetrazolyl)-deoxyclavulanic acids,salts,esters,and pharmaceutical compositions
US4562182A (en) * 1980-12-23 1985-12-31 Beecham Group P.L.C. Compounds containing beta-lactams
JPS58361A (ja) * 1981-06-22 1983-01-05 Kurosaki Refract Co Ltd 溶融金属鋳造用ノズル
US4533542A (en) * 1983-08-22 1985-08-06 Eli Lilly And Company Pharmaceutical compositions for storage in plastic containers and process therefor
US4684643A (en) * 1983-08-22 1987-08-04 Eli Lilly And Company Pharmaceutical compositions for storage in plastic containers and process therefor
IT1207982B (it) * 1983-10-07 1989-06-01 Lisapharma Spa Composizioni farmaceutiche adattivita' antibiotica.
JPS60151610U (ja) * 1984-03-22 1985-10-08 住友重機械工業株式会社 回転ホイ−ル式連続金属押出装置におけるアバツトメント
JPS6155889A (ja) * 1984-08-28 1986-03-20 松下電器産業株式会社 高周波加熱装置
US4757066A (en) * 1984-10-15 1988-07-12 Sankyo Company Limited Composition containing a penem or carbapenem antibiotic and the use of the same
DE3725375A1 (de) * 1987-07-31 1989-02-09 Bayer Ag Stabile oxapenem-3-carbonsaeuren
GB9009446D0 (en) * 1990-04-26 1990-06-20 Beecham Group Plc Veterinary composition
DE4027928A1 (de) * 1990-09-04 1992-03-05 Bayer Ag Neue 2-tert.substituierte methyl-oxapenem-3-carbonsaeuren und -ester, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE4030706A1 (de) * 1990-09-28 1992-04-02 Bayer Ag Neue 3-substituierte cephalosporine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel
GB9201639D0 (en) * 1992-01-25 1992-03-11 Smithkline Beecham Plc Pharmaceutical formulations
AT400033B (de) * 1992-03-10 1995-09-25 Biochemie Gmbh Neues verfahren zur isolierung und reinigung von clavulansäure und zur herstellung von pharmakologisch verträglichen salzen derselben
AT399155B (de) * 1992-03-26 1995-03-27 Lek Tovarna Farmacevtskih Neue alkylendiammonium-diclavulanat-derivate, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung
EP0680322B1 (en) * 1993-01-22 2000-07-05 Smithkline Beecham Plc Use of clavulanate and an antibacterial compound for the treatment of infections
US5821364A (en) * 1993-03-26 1998-10-13 Gist-Brocades N.V. Diamine salts of clavulanic acid
US5741903A (en) * 1993-03-26 1998-04-21 Gist-Brocades N.V. Diamine salts for purification of clavulanic acid
PL306371A1 (en) * 1993-03-26 1995-03-20 Gist Brocades Nv Diamine salts of clavulanic acid
US5760218A (en) * 1993-03-26 1998-06-02 Gist-Brocades N.V. Diamine salts of clavulanic acid
US20030219867A1 (en) * 1993-07-24 2003-11-27 Smithkline Beecham Plc Clavulanic acid dehydrogenase, preparation and use for the production of clavulanic acid
GB9315393D0 (en) 1993-07-24 1993-09-08 Smithkline Beecham Plc Novel product
SI9400107A (en) * 1994-03-02 1995-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
US20030109503A1 (en) * 1995-06-06 2003-06-12 Smithkline Beecham P.L.C. Pharmaceutical formulations comprising clavulanic acid alone or in combination with other beta-lactam antibiotics
GB9515809D0 (en) * 1995-08-02 1995-10-04 Smithkline Beecham Plc Process
SI9500265A1 (en) 1995-08-28 1997-02-28 Lek Tovarna Farmacevtskih Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration
WO1997009042A1 (en) * 1995-09-07 1997-03-13 Smithkline Beecham Corporation Pharmaceutical formulation
AT403375B (de) * 1995-11-15 1998-01-26 Biochemie Gmbh Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure
US20030124187A1 (en) * 1997-02-14 2003-07-03 Smithkline Beecham Laboratoires Pharmaceutiques, Pharmaceutical formulations comprising amoxycillin and clavulanate
PL335227A1 (en) * 1997-02-20 2000-04-10 Dsm Nv Industrial-scale production of valuable compounds by fermentation in a chemically defined medium
AR015825A1 (es) * 1997-05-28 2001-05-30 Gist Brocades Bv Produccion fermentativa de acido clavulanico bajo condiciones controladas de fosfato
WO2000001840A1 (en) * 1998-07-03 2000-01-13 Dsm N.V. Fermentation process to produce clavulanic acid at a low concentration of free amino acids
US7250176B1 (en) 1999-04-13 2007-07-31 Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited Method of treating a bacterial infection
US6294199B1 (en) 1999-04-13 2001-09-25 Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited Method of treating a bacterial infection comprising administering amoxycillin
US6878386B1 (en) 1999-04-13 2005-04-12 Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited Method of treating a bacterial infection comprising amoxycillin and potassium clavulanate
US6544555B2 (en) 2000-02-24 2003-04-08 Advancis Pharmaceutical Corp. Antibiotic product, use and formulation thereof
US6565882B2 (en) 2000-02-24 2003-05-20 Advancis Pharmaceutical Corp Antibiotic composition with inhibitor
US6756057B2 (en) 2000-10-12 2004-06-29 Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited Amoxicillin and potassium clavulanate dosage form
EP1330236A2 (en) 2000-10-12 2003-07-30 Beecham Pharmaceuticals (Pte) Limited Formulation containing amoxicillin
US6541014B2 (en) 2000-10-13 2003-04-01 Advancis Pharmaceutical Corp. Antiviral product, use and formulation thereof
US20020068078A1 (en) 2000-10-13 2002-06-06 Rudnic Edward M. Antifungal product, use and formulation thereof
IL150907A (en) * 2002-07-25 2007-07-04 Stephan Cherkez Process for the preparation of stable amorphous calcium pseudomonate
CA2533292C (en) 2003-07-21 2013-12-31 Advancis Pharmaceutical Corporation Antibiotic product, use and formulation thereof
AU2004258944B2 (en) 2003-07-21 2011-02-10 Shionogi, Inc. Antibiotic product, use and formulation thereof
AU2004258949B2 (en) 2003-07-21 2011-02-10 Shionogi, Inc. Antibiotic product, use and formulation thereof
JP2007502296A (ja) 2003-08-11 2007-02-08 アドバンシス ファーマスーティカル コーポレイション ロバストペレット
US8062672B2 (en) 2003-08-12 2011-11-22 Shionogi Inc. Antibiotic product, use and formulation thereof
WO2005023184A2 (en) 2003-08-29 2005-03-17 Advancis Pharmaceuticals Corporation Antibiotic product, use and formulation thereof
WO2005027877A1 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Advancis Pharmaceutical Corporation Antibiotic product, use and formulation thereof
WO2006014427A1 (en) 2004-07-02 2006-02-09 Advancis Pharmaceutical Corporation Tablet for pulsed delivery
US20060194285A1 (en) * 2005-02-08 2006-08-31 Wei Lian Biological production of clavulanic acid and related compounds
DE102005009277B4 (de) * 2005-02-25 2008-07-31 Johnson Controls Interiors Gmbh & Co. Kg Halterung für eine Komponente
CA2783572C (en) * 2005-12-07 2016-08-09 Basilea Pharmaceutica Ag Useful combinations of monobactam antibiotics with beta-lactamase inhibitors
US8357394B2 (en) 2005-12-08 2013-01-22 Shionogi Inc. Compositions and methods for improved efficacy of penicillin-type antibiotics
US8778924B2 (en) 2006-12-04 2014-07-15 Shionogi Inc. Modified release amoxicillin products
US20070218038A1 (en) 2006-03-17 2007-09-20 Pegasus Biologics, Inc. Stabilized, sterilized collagen scaffolds with active adjuncts attached
US8299052B2 (en) * 2006-05-05 2012-10-30 Shionogi Inc. Pharmaceutical compositions and methods for improved bacterial eradication
EP2575781A1 (en) 2010-06-03 2013-04-10 Mahmut Bilgic Production method for the effervescent formulation comprising cephalosporin and potassium clavulanate
KR102147420B1 (ko) 2012-12-07 2020-08-25 베나토알엑스 파마슈티컬스, 인크. 베타-락타마제 억제제
US9403850B2 (en) 2013-01-10 2016-08-02 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
WO2014151958A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
KR20220065084A (ko) 2014-06-11 2022-05-19 베나토알엑스 파마슈티컬스, 인크. 베타-락타마제 억제제
US20150361108A1 (en) * 2014-06-11 2015-12-17 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Orally bioavailable beta-lactamase inhibitors
US9511142B2 (en) 2014-06-11 2016-12-06 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
US10399996B2 (en) 2015-09-11 2019-09-03 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
WO2017100537A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
CN109715156A (zh) 2016-07-14 2019-05-03 尔察祯有限公司 用于治疗细菌感染的头孢布烯和克拉维酸的组合
EP3494121B1 (en) 2016-08-04 2021-10-06 Venatorx Pharmaceuticals, Inc. Boron-containing compounds
EP3630783A4 (en) 2017-05-26 2021-03-03 Venatorx Pharmaceuticals, Inc. PENICILLIN BINDING PROTEIN INHIBITORS
CN110959008A (zh) 2017-05-26 2020-04-03 维纳拓尔斯制药公司 青霉素结合蛋白抑制剂
EP4049036A1 (en) 2019-10-25 2022-08-31 Instrumentation Laboratory Company Biocide compositions compatible with enzyme biosensors and methods of use thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3801464A (en) 1972-02-09 1974-04-02 Lilly Co Eli Antibiotic a16886 and process for production thereof
IE41109B1 (en) * 1974-04-20 1979-10-24 Beecham Group Ltd Novel -lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
US4140764A (en) * 1974-12-18 1979-02-20 Beecham Group Limited β-Lactamase inhibitors and process for their preparation
US4123540A (en) * 1974-12-18 1978-10-31 Beecham Group Limited Isoclavulanic acid as an antibacterial and a β-lactamase inhibitor
US4144242A (en) * 1975-02-07 1979-03-13 Glaxo Laboratories Limited Process for the purification of clavulanic acid
AT353409B (de) * 1975-02-07 1979-11-12 Glaxo Lab Ltd Verfahren zum entfernen von verunreinigungen aus clavulansaeure oder deren salzen
JO984B1 (en) * 1977-10-11 1979-12-01 بيتشام غروب ليمتد A dry pharmaceutical compound with a suitable dosage unit for oral administration

Also Published As

Publication number Publication date
AR216430A1 (es) 1979-12-28
SE8306328D0 (sv) 1983-11-16
RO69984A (ro) 1980-12-30
FI54144B (fi) 1978-06-30
NO145247B (no) 1981-11-02
US4525352A (en) 1985-06-25
SE8105829L (sv) 1981-10-02
US4560552C1 (en) 2001-10-16
SE435286B (sv) 1984-09-17
IL47087A0 (en) 1975-06-25
NL163824C (nl) 1980-10-15
IE41109L (en) 1975-10-20
JPS532495A (en) 1978-01-11
JPS50142591A (no) 1975-11-17
US4556559A (en) 1985-12-03
JPS5549832B2 (no) 1980-12-15
SE443562B (sv) 1986-03-03
JPS532494A (en) 1978-01-11
DE2560074C2 (de) 1985-03-28
NL7504621A (nl) 1975-10-22
IE41109B1 (en) 1979-10-24
FI54144C (fi) 1978-10-10
JPS5246957B2 (no) 1977-11-29
AR206627A1 (es) 1976-08-06
JPS521996B2 (no) 1977-01-19
US4526783A (en) 1985-07-02
DK141254B (da) 1980-02-11
CA1059050A (en) 1979-07-24
JPS533590A (en) 1978-01-13
JPS5549831B2 (no) 1980-12-15
IN140042B (no) 1976-09-04
JPS5549833B2 (no) 1980-12-15
FI751133A (no) 1975-10-21
US4560552A (en) 1985-12-24
NO145247C (no) 1982-02-10
DK167275A (no) 1975-10-21
DK141254C (no) 1980-08-11
MY8100195A (en) 1981-12-31
NZ177159A (en) 1978-03-06
JPS5549830B2 (no) 1980-12-15
AR219050A1 (es) 1980-07-31
YU274481A (en) 1983-06-30
YU42744B (en) 1988-12-31
DD132297A5 (de) 1978-09-20
RO77320A (ro) 1981-08-17
JPS533589A (en) 1978-01-13
IL47087A (en) 1979-07-25
DE2517316C2 (de) 1985-03-07
SE7811200L (sv) 1978-10-27
YU39941B (en) 1985-06-30
PH16474A (en) 1983-10-25
NO150838C (no) 1985-01-09
FR2267778A1 (no) 1975-11-14
SE7811202L (sv) 1978-10-27
SE8605405L (sv) 1986-12-16
DD121799A5 (no) 1976-08-20
YU42745B (en) 1988-12-31
OA05203A (fr) 1981-02-28
FR2267778B1 (no) 1978-11-17
CH630631A5 (de) 1982-06-30
YU90875A (en) 1982-05-31
CY1078A (en) 1980-12-27
SE435287B (sv) 1984-09-17
SE446687B (sv) 1986-10-06
KE3076A (en) 1980-10-03
NL163824B (nl) 1980-05-16
DE2517316A1 (de) 1975-10-23
NO801852L (no) 1975-10-21
NO791956L (no) 1975-10-21
SE7811201L (sv) 1978-10-27
CH629252A5 (de) 1982-04-15
LU72322A1 (no) 1975-08-20
US4427690A (en) 1984-01-24
SE422063B (sv) 1982-02-15
DE2559410A1 (de) 1976-09-23
SE8306328L (sv) 1983-11-16
HK54780A (en) 1980-10-03
DE2559411A1 (de) 1976-10-21
YU274381A (en) 1983-06-30
NO751407L (no) 1975-10-21
SE7504541L (no) 1975-12-19
SE453600B (sv) 1988-02-15
JPS50142789A (no) 1975-11-17
JPS533588A (en) 1978-01-13
SE7811203L (sv) 1978-10-27
DE2559411C2 (de) 1982-07-01
SE8605405D0 (sv) 1986-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO150838B (no) Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye klavulansyreforbindelser med antibakterielle og beta-laktamase-inhiberende egenskaper
US4110165A (en) Process for the production of clavulanic acid
US6218380B1 (en) Pharmaceutical compositions
US6031093A (en) Solid salts of clavulanic acid
US4529720A (en) Antibiotic from Streptomyces clavulicerus
US4235882A (en) Antibiotic MM 4550A
US4421760A (en) β-Lactam antibiotic, its preparation and use
US4189473A (en) Antibiotic MM 13902
CA1058540A (en) Antibiotic mm 17880 from streptomyces olivaceus
US4525353A (en) Antibiotics
US4318916A (en) Antibiotic PS-5 and derivatives having β-lactamase inhibitory activity and production thereof
US4146610A (en) Antibiotics mm13902
US4060530A (en) Clavulanic acid amides
US4140764A (en) β-Lactamase inhibitors and process for their preparation
US4113856A (en) Antibiotic mm 13902
US4172129A (en) Antibiotics
US4847200A (en) Biosynthesis of unnatural cephalosporins
US4061649A (en) Clavulanic acid sulphates
US4123540A (en) Isoclavulanic acid as an antibacterial and a β-lactamase inhibitor
US4206202A (en) Antibiotics
US4205067A (en) Antibiotics
US4205068A (en) β-Lactamase inhibitor EM4615
US4181716A (en) Antibiotics
US4203973A (en) Antibiotics
CA1220746A (en) Luzopeptin e.sub.2