CZ292709B6 - Diaromatické sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutické prostředky, které je obsahují - Google Patents

Diaromatické sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutické prostředky, které je obsahují Download PDF

Info

Publication number
CZ292709B6
CZ292709B6 CZ20014662A CZ20014662A CZ292709B6 CZ 292709 B6 CZ292709 B6 CZ 292709B6 CZ 20014662 A CZ20014662 A CZ 20014662A CZ 20014662 A CZ20014662 A CZ 20014662A CZ 292709 B6 CZ292709 B6 CZ 292709B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cells
calcium
complex
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
CZ20014662A
Other languages
English (en)
Inventor
Wagenen Bradford C. Van
Scott T. Moe
Manuel F. Balandrin
Eric G. Delmar
Edward F. Nemeth
Original Assignee
Nps Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23390556&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ292709(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US1994/012117 external-priority patent/WO1995011221A1/en
Priority claimed from US08/353,784 external-priority patent/US6011068A/en
Application filed by Nps Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Nps Pharmaceuticals, Inc.
Publication of CZ292709B6 publication Critical patent/CZ292709B6/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A61P3/14—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis for calcium homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A61P5/20—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of PTH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/27—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by saturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/28—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by unsaturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/30—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring the six-membered aromatic ring being part of a condensed ring system formed by two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/58—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms with amino groups and the six-membered aromatic ring, or the condensed ring system containing that ring, bound to the same carbon atom of the carbon chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/62—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms linked by carbon chains having at least three carbon atoms between the amino groups and the six-membered aromatic ring or the condensed ring system containing that ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C225/00—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones
    • C07C225/02—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C225/14—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated
    • C07C225/16—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated and containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/32—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/32—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to an acyclic carbon atom of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)

Abstract

Diaromatické sloučeniny, např. sloučeniny obecného vzorce I, kde R je atom vodíku nebo methylová skupina; m a n znamenají nezávisle na sobě celé číslo od 0 do 5; každá skupina X je nezávisle halogenmethylová skupina nebo halogenalkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy a každá skupina Z je nezávisle alkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, které jsou schopny modulovat jednu nebo více aktivit receptorů pro anorganické ionty a dále pak použití těchto sloučenin pro výrobu léčiv pro léčení onemocnění a poruch modulace aktivity receptorů pro anorganické ionty. Výhodně mohou tyto sloučeniny mimikovat či blokovat účinek extracelulárního Ca.sup.2+.n. na kalciové receptory.ŕ

Description

Vynález popisuje návrh, vývoj, složení a použití sloučenin schopných modulovat jednu nebo více aktivit receptorů anorganických iontů.
Dosavadní stav techniky
Určité druhy buněk v organizmu reagují nejenom na chemické signály, ale rovněž na přítomnost iontů jako například na přítomnost extracelulámích vápenatých iontů (Ca2+). Změny v koncentraci extracelulámích Ca2+ (dále ,,[Ca2+J“) vedou u těchto buněk k různým funkčním odpovědím. Jedním druhem takto specializovaných buněk jsou buňky' příštitných tělísek sekretující parathormon (PTH). PTH je nej důležitějším endokrinním faktorem účastnícím se regulace homeostázy Ca2+ v krvi a v extracelulámích tekutinách.
PTH svým působením na buňky v kostech a na ledvinové buňky zvyšuje hladinu Ca2+ v krvi. Toto zvýšení [Ca2+] poté působí jako negativní zpětnovazebný signál a snižuje sekreci PTH. Reciproční vztah mezi [Ca2+] a sekrecí PTH vytváří základní mechanizmus udržující homeostázu Ca2+ v organizmu.
Extracelulámí Ca2+ působí přímo na buňky příštitných tělísek a tím regulují sekreci PTH. Na buňkách příštitných tělísek byla potvrzena existence povrchového proteinu, který detekuje změny v [Ca2+J. Brown a další, 366 Nátuře 574, 1993. Tento protein přítomný na povrchu buněk příštitných tělísek funguje jako receptor pro extracelulámí Ca2* (.jeceptor pro vápník“), detekuje změny v [Ca2+] a iniciuje funkční buněčnou odpověď, kterou je v tomto případě sekrece PTH.
Extracelulámí Ca2+ mohou působit na nejrůznější buněčné funkce; viz Nemeth a další, 11 Cell Calcium 319, 1990.
Úloha extracelulámích Ca2+ u parafolikulámích buněk (C-buněk) a buněk příštitných tělísek je zmíněna v Nemeth, 11 Cell Calcium 323, 1990. Bylo prokázáno, že tyto buňky exprimují podobné receptory pro Ca2+. Brown a další, 366 Nátuře 574, 1993; Mithal a další, 9 Suppl. 1 J. Bone and Minerál Res. s282, 1993; Rogers a další, 9 Suppl. 1 J. Bone and Minerál Res. s409, 1994; Garret a další, 9 Suppl. 1 J. Bone and Minerál Res. s409, 1994. Vliv extracelulámích Ca2+ na osteoklasty je popsán v článku Zaidy, 10 Bioscience Reports 493, 1990, Rovněž keratinocyty, juxtaglomerulámí buňky, trofoblasty, beta buňky pankreatu a tukové buňky/adipocyty reagují na zvýšení koncentrace vápenatých iontů v extracelulámím médiu. Tato buněčná odpověď je pravděpodobně odrazem aktivace receptorů pro vápník přítomných na povrchu zmíněných buněk.
Schopnost nejrůznějších sloučenin mimikovat in vitro přítomnost extracelulámích Ca2+je popsána v Nemeth a další, (spermin a spermidin) v „Calcium-Binding Proteins in Health and Disease,“ 1987, Academie Press, lne., strany 33 až 35; Brown a další, (například neomycin) 128 Endocrinology 3047, 1991; Chen a další, (dilthiazem a jeho analog TA-3090) 5 J. Bone and Minerál Res. 581, 1990; a Zaidi a další, (verapanil) 167 Biochem. Biophys. Res. Commun. 807, 1990. Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959 a Nemeth a další, PCT/US92/07175, Mezinárodní publikace WO 93/04373 popisují nejrůznější sloučeniny, které mohou modulovat účinky anorganického iontu na buňku, která má na svém povrchu receptor pro tento anorganický ion.
Výše uvedené citace nezahrnují nejnovější objevy uskutečněné v průběhu posledních let.
Podstata vynálezu
Vynález se týká sloučenin, které jsou schopné modulovat jednu nebo více aktivit receptorů anorganických iontů. Vynález dále popisuje postupy, které k léčbě nemocí a poruch využívají modulaci aktivity receptorů anorganických iontů.
Ve výhodném provedení vynálezu mohou používané sloučeniny mimikovat nebo blokovat působení extracelulámího vápníku na receptor pro vápník přítomný na povrchu buněk. Mezi onemocnění nebo poruchy, které mohou být léčeny pomocí modulace aktivity receptorů anorganických iontů, patří některá/některé z následujících: (1) onemocnění neb poruchy charakterizované abnormální homeostázou anorganických iontů, výhodněji pak abnormální homeostázou vápníku; (2) onemocnění nebo poruchy charakterizované výskytem abnormálního množství extracelulámích nebo intracelulámích poslů (messengers), jejichž tvorba může být ovlivněna aktivitou receptorů anorganických iontů, výhodněji pak aktivitou receptorů pro vápník; (3) onemocnění nebo poruchy charakterizované abnormálním působením (například abnormální nebo silnější/slabší odezvou buněk) extracelulámích nebo intracelulámích poslů. Působení těchto poslů může být samo o sobě ovlivněno aktivitou receptorů anorganických iontů, výhodněji pak aktivitou receptorů pro vápník; a (4) další onemocnění nebo poruchy, u kterých bude modulace aktivity receptorů anorganických iontů, výhodněji pak modulace aktivity receptorů pro vápník, prospěšná. To platí například u onemocnění nebo poruch, u nichž může tvorba extracelulámího nebo intracelulámího posla stimulovaná aktivitou receptorů nahradit abnormální množství některého posla. Příkladem extracelulámích poslů, jejichž sekrece a/nebo působení může být ovlivněno prostřednictvím modulace aktivity receptorů anorganických iontů jsou anorganické ionty, hormony, neurotransmitery, růstové faktory a chemokiny. Příkladem intracelulámích poslů jsou cAMP, cGMP, IP3 a diacylglycerol.
Sloučenina podle vynálezu tedy výhodně moduluje aktivitu receptorů pro vápník a je využívána k léčbě onemocnění nebo poruch, které mohou být ovlivněny modulací jedné nebo několika aktivit receptorů pro vápník. Proteiny fungující jako receptor pro vápník umožňují specializovaným buňkám reagovat na změny v extracelulámí koncentraci Ca2+. Extracelulámí Ca2+ například inhibují sekreci parathormonu z buněk příštitných tělísek, inhibují resorpci kostní tkáně způsobenou činností osteoklastů a stimulují sekreci kalcitoninu z C-buněk.
Ve výhodném provedení vynálezu je daná sloučenina použita k léčbě onemocnění nebo poruchy charakterizované abnormální homeostázou kostní tkáně a minerálních látek, výhodněji však abnormální homeostázou vápníku. Extracelulámí Ca2+ podléhají dokonalé kontrole udržující jejich homeostázu a samy v organizmu ovlivňují nejrůznější procesy, jako například srážení krve, vzrušivost nervové a svalové tkáně a řádnou tvorbu kostí. Abnormální homeostáza vápníku je určena jednou nebo více z následujících charakteristik: (1) abnormálním zvýšením nebo snížením koncentrace vápníku v séru; (2) abnormálním zvýšením nebo snížením exkrece vápníku močí; (3) abnormálním zvýšením nebo snížením hladiny vápníku v kostech, které je možné například stanovit pomocí měření hustoty kostní dřeně; (4) abnormální absorpcí vápníku přijímaného v potravě; (5) abnormálním zvýšením nebo snížením produkce a/nebo uvolňování poslů, kteří ovlivňují hladinu sérového vápníku. Mezi takové posly patří například parathormon nebo kalcitonin; a (6) abnormální změnou v odpovědi vyvolané některými posly, kteří ovlivňují hladinu sérového vápníku. Abnormální zvýšení nebo snížení hladiny vápníku v těchto případech, které vlastně znamená porušení homeostázy vápníku, odpovídá změnám vyskytujícím se běžně v populaci. Tato změny jsou pak většinou spojeny s výskytem některého onemocnění nebo poruchy.
Příčinou onemocnění a poruch charakterizovaných abnormální homeostázou vápníku mohou být nej různější buněčné defekty, jako například narušená aktivita receptorů pro vápník, chybný počet receptorů pro vápník nebo defektní intracelulámí protein, který je funkčně spjat s receptorem pro
-2CZ 292709 B6 vápník. Například v buňkách příštitných tělísek je receptor pro vápník funkčně spojen s Gi proteinem, který po aktivaci inhibuje tvorbu cyklického AMP. Defekty v Gi mohou ovlivnit schopnost tohoto proteinu inhibovat tvorbu cyklického AMP.
Sloučeniny podle vynálezu spadají do skupiny sloučenin, které lze znázornit obecným vzorcem:
R CH3
Struktura 1 kde Ar] je buď naftyl nebo fenyl, který může být substituován 0 až 5 substituenty. Každý z těchto substituentů může být nezávisle na všech ostatních vybrán ze skupiny tvořené nižšími alkyly, halogeny, skupinami odvozenými od nižších alkyloxy sloučenin, nižšími thioalkyly, methylendioxy skupinou, nižšími halogenalkyly, skupinami odvozenými od nižších halogenalkyloxy sloučenin, OH, CH2OH, CONH?, CN, acetyloxy skupinou, N(CH3)2, fenylovou skupinou, fenyloxy skupinou, benzylovou skupinou, benzyloxy skupinou, α,α-dimethylbenzylovou skupinou, NO2, CHO, CH3CH(OH), acetylovou skupinou, ethylendioxy skupinou;
Ar2 je buď naftyl nebo fenyl, který může být substituován 0 až 5 substituenty. Každý z těchto substituentů může být nezávisle na všech ostatních vybrán ze skupiny tvořené nižšími alkyly, halogeny, skupinami odvozenými od nižších alkyloxy sloučenin, nižšími thioalkyly, methylendioxyskupinou, nižšími halogenalkyly, skupinami odvozenými od nižších halogenalkyloxy sloučenin, OH, CH2OH, CONH2, CN a acetyloxy skupinou;
q odpovídá číslicím 0,1,2 nebo 3; a R je buď H nebo nižší alkyl.
Předmětem vynálezu jsou také farmaceuticky použitelné soli a komplexy sloučenin podle vynálezu.
Sloučeniny podle vynálezu jsou výhodně stereochemické sloučeniny. Skupina CH3 přítomná ve Struktuře I na straně 5 je umístěna na chirálním centru a vytváří na tomto centru a-(R)-methyl konfiguraci. Jestliže R označuje CH3 skupinu, pak R vyskytující se ve Struktuře I je rovněž umístěno na chirálním centru a vytváří na tomto centru (R)-methyl konfiguraci. Jestliže tedy R označuje CH3 skupinu, pak sloučenina znázorněná Strukturou I je (R,R) stereoizomerem.
Termínem aktivita receptorů anorganických iontů označujeme procesy, které jsou důsledkem aktivace receptorů anorganických iontů. Mezi takové procesy patří tvorba molekul, které fungují jako intracelulámí nebo extracelulámí poslové.
Mezi sloučeniny modulující aktivitu receptorů pro anorganické ionty patří iontomimetika, iontolytika, kalcimimetika a kalcilytika.
Jako iontomimetika označujeme sloučeniny, které mimikují (to znamená evokují nebo zesilují) účinky anorganického iontu na příslušný receptor anorganického iontu.Ve výhodném provedení vynálezu ovlivňují tyto sloučeniny jednu nebo více aktivit receptorů pro vápník. Jako kalcimimetika označujeme iontomimetika, která ovlivňují jednu nebo více aktivit receptorů pro vápník a vážou se na receptor pro vápník.
Jako iontolytika označujeme sloučeniny, které se vážou na některý receptor anorganických iontů a blokují (to znamená inhibují nebo potlačují) jednu nebo více aktivit receptorů anorganických iontů vyvolaných přítomností anorganického iontu. Ve výhodném provedení vynálezu ovlivňují
-3CZ 292709 B6 tyto sloučeniny jednu nebo více aktivit receptoru pro vápník. Jako kalcilytika označujeme iontolytika, která blokují jednu nebo více aktivit receptoru pro vápník vyvolaných přítomností extracelulámího vápníku a vážou se na receptory pro vápník.
Iontomimetika a iontolytika se mohou vázat buď do stejného místa na receptoru. do kterého se vážou přirozené ligandy (to znamená anorganické ionty), nebo se mohu vázat na jiné místo (například alosterické místo). Například vazba sloučeniny NPS R-467 na receptor pro vápník má za následek aktivaci tohoto receptoru pro vápník a sloučenina NPS R-467 je tudíž klasifikována jako kalcimimetikum. NPS R-467 se nicméně na receptoru pro vápník váže do místa odlišného 10 od místa, do kterého se váže extracelulámí vápník.
Efektivita jednotlivých sloučenin je stanovována pomocí výpočtu konstant EC50 nebo IC30 pro každou takovou sloučeninu. Konstanta EC50 odpovídá koncentraci sloučeniny, která vyvolá poloviční odezvu ve srovnání s maximální aktivací. Konstanta IC50 odpovídá koncentraci slouče15 niny, která způsobí snížení maximální aktivity na polovinu. Konstanty EC5o a IC50 pro sloučeniny účinné k aktivaci/blokování receptoru pro vápník mohou být stanovovány pomocí měření vlivu extracelulámího vápníku na jednu nebo více aktivit receptoru pro vápník. Příklady stanovení sloužících k měření EC50 a IC50 jsou popsány vNemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní patentové přihlášce WO 94/18959, Nemeth a další, PCT/US92/07175, Mezinárodní patentové 20 přihlášce WO93/04373 a v následující části. Mezi taková stanovení patří měření zvýšení intracelulámí koncentrace vápenatých iontů ([Ca2+]i), které je reakcí na aktivaci receptorů pro vápník, které jsou exprimovány na povrchu oocytů. Ve výhodném provedení vynálezu je v takovýchto stanoveních měřeno uvolňování nebo inhibice produkce hormonu, které jsou spojeny se změnou aktivity příslušného receptoru pro vápník.
Ve výhodném provedení vynálezu je sloučenina modulující receptory anorganických iontů selektivně namířena na receptory anorganických iontů na určité buňce, jejichž aktivitu má ovlivnit. Například selektivního ovlivnění aktivity receptorů pro vápník je dosaženo použitím sloučeniny, která má při dané koncentraci větší účinek na aktivitu receptorů pro vápník na jednom druhu 30 buněk než na jiném druhu buněk. Ve výhodném provedení vynálezu je rozdíl v účinku na receptory na jednotlivých druzích buněk měřený in vitro nebo in vivo desetinásobný nebo větší. Ve výhodnějším provedení vynálezu je rozdíl v účinku na receptory na jednotlivých druzích buněk měřen in vivo, koncentrace příslušné sloučeniny je udávána jako plazmatická koncentrace nebo koncentrace v extracelulámí tekutině a měřeným účinkem je produkce extracelulámích 35 poslů, jako například kalcitoninu, parathomonu nebo plazmatické koncentrace vápníku. Ve výhodném provedení vynálezu daná sloučenina například selektivně aktivuje sekreci PTH a neovlivňuje sekreci kalcitoninu.
Ve výhodném provedení vynálezu je daná sloučenina buď kalcimimetikem nebo kalcilytikem 40 a má konstanty EC50 nebo IC5o účinné k aktivaci/blokování receptoru pro vápník menší než nebo rovny 5 μΜ a dokonce ještě výhodněji menší než nebo rovny 1 μΜ, 100 nanomolámí, 10 nanomolámí nebo 1 nanomolámí. Ve výhodnějším provedení vynálezu stanovení jsou intracelulámí Ca2' měřeny v buňkách HEK 293 transformovaných nukleovou kyselinou, které jsou nasyceny indikátorem fura-2, a které exprimují receptor pro vápník buněk příštitných tělísek člověka. 45 Nižší hodnoty konstant ECS0 nebo IC50 jsou výhodnější, protože umožňují in vivo nebo in vitro použití nižších koncentrací daných sloučenin.Objev sloučenin s nízkými hodnotami konstant EC50 a IC50 umožňuje navrhnout a syntetizovat další sloučeniny s obdobnou nebo ještě vyšší účinností, efektivitou a/nebo selektivitou.
-4CZ 292709 B6
V souvislosti s předkládaným vynálezem je třeba zmínit sloučeniny popsané vzorcem (viz. Struktura 3), které modulují receptory anorganických iontů:
Rll R12
Struktura 3 kde Ars je buď naftyl nebo fenyl, který může být substituován 0 až 5 substituenty. Každý z těchto substituentů může být nezávisle na všech ostatních vybrán ze skupiny tvořené nižšími alkyly, halogeny, skupinami odvozenými od nižších alkyloxy sloučenin, nižšími thioalkyly, methylendioxy skupinou, nižšími halogenalkyly, skupinami odvozenými od nižších halogenalkyloxy sloučenin, OH, CH2OH, CONH2, CN, acetyloxy skupinou, benzylovou skupinou, benzyloxy skupinou, α,α-dimethylbenzylovou skupinou, acetylovou skupinou, ethvlendioxy skupinou a skupinou -CH=CH-fenyl;
Ar6 je buď naftyl nebo fenyl, který může být substituován 0 až 5 substituenty. Každý z těchto substituentů může být nezávisle na všech ostatních vybrán ze skupiny tvořené acetylovou skupinou, nižšími alkyly, halogeny, skupinami odvozenými od nižších alkyloxy sloučenin, nižšími thioalkyly, methylendioxy skupinou, nižšími halogenalkyly, skupinami odvozenými od nižších halogenalkyloxy sloučenin, OH, CH2OH, CONH2, CN, karbomethoxy skupinou, OCH2C(O) C2H5 a acetyloxy skupinou;
R11 je buď vodík nebo methyl; a
R12 je buď vodík nebo methyl.
Dále vynález popisuje farmaceutické kompozice tvořené sloučeninou modulující receptory anorganických iontů podle vynálezu a fyziologicky přijatelným nosičem. Termínem „farmakologická (farmaceutická) kompozice“ rozumíme kompozici ve formě vhodné k administraci do organizmu savců, výhodněji pak do lidského organizmu. Ve výhodném provedení vynálezu obsahuje farmaceutická kompozice (ve formě vhodné pro farmaceutické použití) dostatečné množství sloučeniny modulující aktivitu receptorů pro vápník, která je terapeuticky účinná v lidském organizmu.
Ze stavu techniky jsou dobře známy vlastnosti, na které je třeba brát ohled při tvorbě kompozic vhodných pro administraci do organizmu. Mezi tyto vlastnosti řadíme toxické účinky, rozpustnost, způsob podávání (administrace) a zachování aktivity. Farmakologická kompozice aplikovaná nitrožilně by například měla být rozpustná.
Termínem „farmaceutická kompozice“ označujeme rovněž farmaceuticky přijatelné soli (například soli získané přídavkem kyseliny) a jejich komplexy. Příprava takovýchto solí může u daných sloučenin usnadnit jejich farmakologické použití tím, že u těchto sloučenin dojde (bez jakéhokoliv ovlivnění fyziologických účinků) ke změně jejich fyzikálních vlastností.
Dále vynález popisuje postupy sloužící k léčbě pacientů, při kterých jsou k modulaci aktivity receptorů anorganických iontů používány sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů podle vynálezu. Postupy se týkají administrace farmaceutické kompozice obsahující terapeuticky účinné množství sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů do organizmu pacienta. Ve výhodném provedení vynálezu je onemocnění nebo porucha léčena pomocí modulace aktivity receptorů pro vápník za použití terapeuticky účinného množství sloučeniny modulující aktivitu receptorů pro vápník v organizmu pacienta.
-5CZ 292709 B6
K léčbě pacientů mohou být použity sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů a rovněž mohou být použity kompozice obsahující tyto sloučeniny. Termínem „pacient“ označujeme savce, pro jehož organizmus bude modulace receptorů anorganických iontů prospěšná. Pacienti, kteří potřebují léčbu při níž se využívá modulace aktivity receptorů anorganických iontů, mohou být identifikováni pomocí standardních, odborníkům známých, postupů.
Ve výhodném provedení vynálezu je pacientem člověk, který má nemoc nebo poruchu popsanou jednou nebo více z následujících charakteristik: (1) abnormální homeostázu anorganických iontů, výhodněji pak abnormální homeostázu vápníku; (2) abnormální množství poslů, jejichž tvorba nebo sekrece jsou ovlivněny aktivitou receptorů anorganických iontů, výhodněji pak aktivitou receptorů pro vápník; a (3) abnormální hladinou nebo aktivitou poslů, jejichž činnost je ovlivněna aktivitou receptorů anorganických iontů, výhodněji pak aktivitou receptorů pro vápník.
Mezi nemoci charakterizované abnormální homeostázou vápníku patří hyperparathyreóza, osteoporéza a další poruchy kostí nebo poruchy spojené s metabolismem anorganických látek a rovněž další podobná onemocnění (tak jak jsou popsána například ve standardních lékařských příručkách jako například v „Harrisonů Principles of Intemal Medicine“). Taková onemocnění jsou léčena za použití sloučenin modulujících aktivitu receptorů pro vápník. Tyto sloučeniny na receptorech pro vápník buď mimikují nebo blokují jeden nebo více z účinků extracelulámích Ca2+ a přímo nebo nepřímo tudíž v organizmu pacienta ovlivňují hladinu proteinů nebo jiných sloučenin.
Termínem „terapeuticky účinné množství“ rozumíme takové množství sloučeniny, které v organizmu pacienta do určité míry zmírní jeden nebo více symptomů provázejících danou nemoc nebo poruchu. Termínem „terapeuticky účinné množství“ rovněž rozumíme takové množství sloučeniny, které v organizmu pacienta částečně nebo úplně znormalizuje jeden nebo více fyziologických nebo biochemických parametrů, které jsou spojené s nemocí nebo poruchou nebo které jsou příčinou tohoto onemocnění či poruchy.
Ve výhodném provedení vynálezu trpí pacient nemocí nebo poruchou charakterizovanou abnormální hladinou jedné nebo více komponent regulovaných aktivitou receptorů pro vápník a sloučenina účinně ovlivňuje receptory pro vápník přítomné na buňkách ze skupiny: buňky příštitných tělísek, osteoklasty kostní tkáně, juxtaglomerulámí ledvinné buňky, buňky proximálního tubulu ledvin, buňky distálního tubulu ledvin, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, keratinocyty přítomné vepidermis, parafolikulámí buňky štítné žlázy (Cbuňky), buňky střeva, krevní destičky, buňky hladké svaloviny cév, buňky srdečních síní, buňky sekretující gastrin, buňky sekretující glukagon, buňky mezangia ledvin, buňky mléčné žlázy, beta buňky, tukové buňky/buňky tukové tkáně, buňky imunitního systému, buňky gastrointestinálního traktu, buňky pokožky, buňky nadledvinek, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu.
Ve výhodném provedení vynálezu se jedná o buňky ze skupiny: buňky příštitných tělísek, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, buňky gastrointestinálního traktu, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu.
Ve výhodném provedení vynálezu je sloučenina kalcimimetikem, účinně ovlivňuje receptoiy pro vápník přítomné na buňkách příštitných tělísek a tím snižuje v organizmu pacienta hladinu sérového parathormonu. Ve výhodnějším provedení vynálezu je hladina sérového parathormonu v organizmu pacienta snížena tak výrazně, že toto snížení zapříčiní snížení koncentrace Ca2+ v plazmě. V nej výhodnějším provedení vynálezu je hladina parathormonu v séru snížena na úroveň typickou pro zdravého jedince.
-6CZ 292709 B6
V jiném výhodném provedení vynálezu je sloučenina kalcilytikem, účinně ovlivňuje receptory pro vápník přítomné na buňkách příštitných tělísek a tím zvyšuje v organizmu pacienta hladinu sérového parathormonu. Ve výhodnějším provedení vynálezu je hladina sérového parathormonu v organizmu pacienta zvýšena tak výrazně, že toto zvýšení zapříčiní zvýšení hustoty kostní tkáně pacienta.
Pacienti vyžadující takovou léčbu mohou být identifikováni pomocí standardních technik používaných v lékařství, jakými jsou například analýza krve nebo moči. Identifikace může být například provedena prostřednictvím detekce nepřítomnosti proteinu, jehož produkce nebo sekrece je ovlivněna změnami v koncentracích anorganických iontů nebo prostřednictvím detekce abnormálních hladin anorganických iontů nebo hormonů, které ovlivňují homeostázu anorganických iontů.
V aplikaci jsou uvedeny nejrůznější příklady. Záměrem zde uvedených příkladů není nikterak omezit využití vynálezu.
Další aspekty a výhody vynálezu budou zřejmé z následujících obrázků, podrobného popisu vynálezu, příkladů a nároků.
Stručný popis obrázků
Obrázky la až lr znázorňují struktury jednotlivých sloučenin výše popsaných struktur.
Obrázky 2 a 3 poskytují souhrnné údaje o fyzikálních vlastnostech hydrochloridů NPS R-467, respektive NPS R-568. Na obrázku je znázorněna struktura molekuly, body tání, optická otáčivost a další spektroskopické údaje.
Na obrázcích 4 až 95 jsou některé sloučeniny blíže charakterizovány na základě svých hmotnostních spekter.
Obrázky 96 až 131 zobrazují údaje získané pomocí NMR spektroskopie.
Popis výhodných provedení vynálezu
Vynález popisuje sloučeniny, které jsou schopny modulovat jednu nebo více aktivit receptorů anorganických iontů, a ve výhodném provedení vynálezu sloučeniny, které mohou na buňce nesoucí receptory anorganických iontů mimikovat nebo blokovat účinky příslušného extracelulámího iontu. Ve výhodnějším provedení vynálezu je pak zmíněným extracelulámím iontem iont Ca2+ a daná sloučenina je účinná při mimikování/blokování účinků Ca2+ u buněk nesoucích receptory pro vápník. Mezi publikace, které se zaobírají problematikou aktivity vápníku, receptorů pro vápník a/nebo sloučenin modulujících aktivitu receptorů pro vápník patří: Brown a další, Nátuře 366: 574,1993; Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959; Nemeth a další, PCT/US92/07175, Mezinárodní publikace WO 93/04373; Shoback a Chen,
J. Bone Minerál Res. 9:293, 1994; a Racke a další, FEBS Lett. 333: 132, 1993. Tyto citace nemusí zahrnovat nejnovější poznatky uskutečněné v průběhu posledních let.
I. Receptory pro vápník
Receptory pro vápník jsou přítomné na různých druzích buněk a na odlišných druzích buněk mohou mít také rozdílné aktivity. Farmakologické účinky níže vyjmenovaných buněk (při reakci na přítomnost vápníku) jsou v souladu s aktivitou receptorů pro vápník exprimovaných na jejich povrchu. Mezi tyto buňky patří: buňky příštitných tělísek, osteoklasty kostní tkáně, juxtaglomerulámí ledvinné buňky, buňky proximálního tubulu ledvin, buňky distálního tubulu ledvin, buňky
-7CZ 292709 B6 centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, keratinocyty přítomné v epidermis, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, krevní destičky, buňky hladké svaloviny cév, buňky srdečních síní, buňky sekretující gastrin, buňky sekretující glukagon, buňky mezangia ledvin, buňky mléčné žlázy, beta buňky, tukové buňky/buňky tukové tkáně, buňky imunitního systému, buňky gastrointestinálního traktu, buňky pokožky, buňky nadledvinek, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfonikálního orgánu.
Přítomnost receptorů pro vápník byla navíc potvrzena fyzikálního daty u následujících buněk: buňky příštitných tělísek, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, buňky gastrointestinálního traktu, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu.
Na těchto buňkách různých druhů mohou být přítomny receptory pro vápník rozdílného typu. Je rovněž možné, že na buňkách jednoho druhu je přítomno více typů receptorů pro vápník. Srovnání aktivit receptorů pro vápník získaných z jednotlivých druhů buněk a jejich aminokyselinových sekvencí naznačuje, že existují rozdílné typy receptorů pro vápník. Receptory pro vápník mohou například reagovat na přítomnost různých dvojmocných a trojmocných kationtů. Receptory pro vápník přítomné na buňkách příštitných tělísek reagují na přítomnost vápníku a Gd , zatímco osteoklasty reagují na přítomnost dvojmocných kationtů jako například Ca2+, ale nereagují na přítomnost Gd3+. Receptory pro vápník přítomné na buňkách příštitných tělísek jsou tudíž z farmakologického hlediska odlišné od receptorů pro vápník přítomných na osteoklastech.
Nukleotidové sekvence nukleových kyselin kódujících receptory pro vápník přítomné na buňkách příštitných tělísek a nikoliv na C-buňkách na druhé straně naznačují, že tyto receptory mají velmi podobné aminokyselinové složení. Kalcimimetické sloučeniny nicméně vykazují u buněk příštitných tělísek jiné farmakologické účinky a regulují jiné aktivity než u C-buněk. Farmakologické vlastnosti receptorů pro vápník se tedy v závislosti na druhu buněk nebo orgánu, na kterém jsou exprimovány, mohou podstatně lišit, ačkoliv tyto receptory mohou mít podobnou nebo identickou strukturu.
Receptory pro vápník mají obecně nízkou afinitu k extracelulámím Ca2+ (zdánlivé konstanty Kd jsou obvykle větší než 0,5 mM). Receptory pro vápník mohou vázat jak volný tak navázaný efektor mechanizmem definovaným v práci Cooper, Bloom a Roth, „The Biochemical Basis of Neuropharmacology“, kapitola 4, a liší se tudíž od intracelulámích receptorů pro vápník, jakými jsou například kalmodulin nebo troponiny.
Receptory pro vápník reagují na změny v hladině extracelulámího vápníku. Tyto reakce jsou závislé na typu receptorů a na buněčné linii, na jejímž povrchu je receptor exprimován. Například v experimentech prováděných in vitro na buňkách příštitných tělísek reagovaly receptory pro vápník na změny v koncentraci vápníku následovně:
1. Zvýšením hladiny vápníku uvnitř buněk. Toto zvýšení je způsobeno vnikáním vápníku z vnějšího prostředí a/nebo mobilizací zdrojů vápníku uvnitř buňky. Pro zvýšení hladiny vápníku uvnitř buněk je charakteristické:
(a) Zvýšení [Ca2+]i je rychlé (s maximální odezvou v čase < 5 sekund) a přechodné a není možné jej inhibovat přídavkem 1 μΜ La3+ nebo přídavkem 1 μΜ Gd3+, ale je naopak inhibováno předběžným působením ionomycinem (v nepřítomnosti extracelulámích Ca2 );
(b) Zvýšení není inhibováno přítomností dihydropyridinů;
(c) Přechodné zvýšení je inhibováno předběžným působením 10 mM fluoridu sodného po dobu 10 minut;
-8CZ 292709 B6 (d) Přechodné zvýšení je negativně ovlivněno předchozím působením aktivátoru protein kinázy C (PKC), jakými jsou například octan esteru forbolu s kyselinou myristilovou (PMA), mezerin nebo (-) -indolaktam V. Výsledným efektem působení aktivátoru protein kinázy C je posun křivky znázorňující změnu v koncentraci vápníku při reakci na změnu extracelulámí koncentrace Ca2+ doprava, bez ovlivnění maximální dosažené hodnoty; a (e) Zvýšení není ovlivněno předběžným působením toxinem produkovaným mikroorganizmem Bordetella pertussis (100 mg/ml po dobu delší než 4 hodiny).
2. Rychlé (< 30 sekund) zvýšení tvorby inositol-1, 4, 5 - trifosfátu a diacylglycerolu. Zvýšení není ovlivněno předběžným působením toxinem produkovaným mikroorganizmem Bordetella pertussis (100 mg/ml po dobu delší než 4 hodiny);
3. Inhibice tvorby cyklického AMP vyvolané působením dopaminu a izoproterenolu. Tato inhibice je blokována předběžným působením toxinem produkovaným mikroorganizmem Bordetella pertussis (100 mg/ml po dobu delší než 4 hodiny); a
4. Inhibice sekrece PTH. Tato inhibice je blokována předběžným působením toxinem produkovaným mikroorganizmem Bordetella pertussis (100 mg/ml po dobu delší než 4 hodiny).
Účinky vápníku na receptory pro vápník přítomné na jiných druzích buněk mohou být snadno stanoveny za použití postupů známých ze stavu techniky. Tyto účinky mohou být, co se týká zvýšení koncentrace vápníku uvnitř buněk, podobné účinkům pozorovaným u buněk příštitných tělísek. Předpokládá se nicméně, že tyto účinky se budou v dalších aspektech u jiných druhů buněk lišit. Odlišné bude například ovlivnění (spuštění nebo inhibice) uvolňování jiných hormonů než je parathormon.
II. Sloučeniny modulující receptory anorganických iontů
Sloučeniny modulující receptory anorganických iontů modulují jednu nebo více aktivit receptorů anorganických iontů. Ve výhodném provedení vynálezu patří sloučeniny modulující receptory pro vápník mezi kalcimimetika nebo kalcilytika.
Sloučeniny modulující receptory anorganických iontů mohou být identifikovány prostřednictvím screeningu sloučenin, které jsou vytvořeny modifikací struktury, která vykazuje příslušnou modulační aktivitu (to jest sloučenina základní struktury).
Výhodnou metodou pro měření aktivity receptorů pro vápník je měření změn v [Ca2+]j. Změny v [Ca2+1j mohou být měřeny prostřednictvím nej různějších technik jakými jsou například použití buněčné linie HEK 293 nasycené indikátorem fura-2, která je transdukovaná nukleovou kyselinou, a která na svém povrchu exprimuje receptor pro vápník lidských příštitných tělísek. Jinou použitelnou technikou je detekce zvýšení proudu iontů Cl v oocytech rodu Xenopus, které jsou transformované nukleovou kyselinou kódující receptor pro vápník. (Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959). mRNA spoly(A) sekvencí může být například získána z buněk exprimujících receptor pro vápník. Mezi takové buňky patří například buňky příštitných tělísek, osteoklasty kostní tkáně, juxtaglomerulámí ledvinné buňky, buňky proximálního tubulu ledvin, buňky distálního tubulu ledvin, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, keratinocyty přítomné v epidermis, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, krevní destičky, buňky hladké svaloviny cév, buňky srdečních síní, buňky sekretující gastrin, buňky sekretující glukagon, buňky mezangia ledvin, buňky mléčné žlázy, beta buňky, tukové buňky/buňky tukové tkáně, buňky imunitního systému, buňky gastrointestinálního traktu, buňky pokožky, buňky nadledvinek, buňky hypofýzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu. Ve výhodném provedení vynálezu je nukleová kyselina
-9CZ 292709 B6 získána z buněk příštitných tělísek, C-buněk nebo osteoklastů. Ještě výhodněji kóduje tato nukleová kyselina receptor pro vápník a je přítomná v plazmidu nebo ve vektoru.
Ve výhodném provedení vynálezu je sloučenina modulující receptory pro vápník kalcimimetikem a tato sloučenina in vivo inhibuje resorpci kostní tkáně uskutečňovanou činností osteoklastů; in vitro inhibuje resorpci kostní tkáně uskutečňovanou činností osteoklastů; in vivo nebo in vitro stimuluje u C-buněk sekreci kalcitoninu; in vitro inhibuje u buněk příštitných tělísek sekreci parathormonu a in vivo snižuje sekreci PTH; in vivo zvyšuje hladinu kalcitoninu; in vitro blokuje resorpci kostní tkáně uskutečňovanou činností osteoklastů a in vivo inhibuje resorpci kostní tkáně.
V jiném výhodném provedení vynálezu je sloučenina modulující receptor pro vápník kalcilytikem a tato sloučenina vyvolává in vitro u buněk příštitných tělísek sekreci parathormonu a zvyšuje hladinu parathormonu in vivo.
Ve výhodném provedení vynálezu daná sloučenina selektivně ovlivňuje aktivitu receptorů anorganických iontů, výhodněji aktivitu receptorů pro vápník, exprimovaných na určitém druhu buněk. Termínem „selektivně“ rozumíme skutečnost, že daná sloučenina je při dané koncentraci účinnější při ovlivnění aktivity receptorů anorganických iontů na jednom druhu buněk než na jiném druhu buněk. Ve výhodném provedení vynálezu je rozdíl v účinku desetinásobný nebo větší. Ve výhodném provedení vynálezu se jako koncentrace uvažuje koncentrace dané sloučeniny v krevní plazmě a měřeným účinkem je produkce extracelulámích poslů, jako například plazmatického kalcitoninu, parathormonu nebo plazmatického vápníku. Ve výhodném provedení vynálezu daná sloučenina například selektivně ovlivňuje sekreci PTH (pozitivní ovlivnění) a nemá naopak vliv na sekreci kalcitoninu.
V jiném výhodném provedení vynálezu má daná sloučenina pro jeden nebo více (ale ne pro všechny) druhů buněk hodnoty konstant EC50 nebo IC50 nižší než nebo rovny 5 μΜ. Buňky jsou vybrány ze skupiny: buňky příštitných tělísek, osteoklasty kostní tkáně, juxtaglomerulámí ledvinné buňky, buňky proximálního tubulu ledvin, buňky distálního tubulu ledvin, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, keratinocyty přítomné v epidermis, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, krevní destičky, buňky hladké svaloviny cév, buňky srdečních síní, buňky sekretující gastrin, buňky sekretující glukagon, buňky mezangia ledvin, buňky mléčné žlázy, beta buňky, tukové buňky/buňky tukové tkáně, buňky imunitního systému, buňky gastrointestinálního traktu, buňky pokožky, buňky nadledvinek, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu. Ve výhodném provedení vynálezu se jedná o buňky ze skupiny: buňky příštitných tělísek, buňky centrálního nervového systému, buňky periferního nervového systému, buňky tlustého úseku vzestupného ramínka Henleovy kličky a/nebo buňky sběrného kanálku, parafolikulámí buňky štítné žlázy (C-buňky), buňky střeva, buňky gastrointestinálního traktu, buňky hypofyzy, buňky hypothalamu a buňky subfomikálního orgánu. U skupiny zmíněných buněk byla přítomnost receptorů pro vápník potvrzena měřeními jakými jsou například hybridizace in šitu nebo značení pomocí protilátek.
Ve výhodném provedení vynálezu mimikují nebo blokují sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů u buněk, které exprimují příslušný receptor anorganických iontů, účinky extracelulámích iontů. To znamená, že tyto sloučeniny mohou být terapeuticky účinné. Sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů mohou mít na buňky s odlišnou morfologií receptorů anorganických iontů (to znamená, že buňky exprimují „normální“ receptory anorganických iontů, „normální“ počet receptorů anorganických iontů, abnormální receptory anorganických iontů a abnormální počet receptorů anorganických iontů) stejné nebo rozdílné účinky.
Ve výhodném provedení vynálezu blokují nebo mimikují sloučeniny modulující aktivitu receptorů pro vápník u buněk, které exprimují receptory pro vápník, veškeré účinky extracelulámích vápenatých iontů. Nicméně není nezbytné, aby kalcimimetika nesla všechny aktivity příslušející
-10CZ 292709 B6 extracelulámím Ca2+. Obdobně není potřeba, aby kalcilytika blokovala všechny aktivity vyvolané přítomností extracelulámí vápníku. Dále rovněž platí, že proto, aby mohla být účinná, nemusí se různá kalcimimetika a různá kalcilytika na receptorech pro vápník vázat do stejného místa, do něhož se vážou extracelulámí Ca2+.
Sloučeniny modulující aktivitu receptorů anorganických iontů nemusí ovlivňovat aktivitu receptorů anorganických iontů vtom samém rozsahu nebo tím samým způsobem, jakým je ovlivňují jejich přirozené ligandy. Například kalcimimetika mohou ovlivňovat aktivitu receptorů pro vápník v jiném rozsahu a jinak dlouhou dobu tím, že se vážou do jiného vazebného místa recep10 toru pro vápník, než je tomu u vápenatých iontů, nebo že mají ve srovnání s vápenatými ionty k receptorům pro vápník jinou afinitu.
A. Kalcimimetika
Sloučeniny znázorněné Strukturou 1
Předkládaný vynález poskytuje diaromatickou sloučeninu obecného vzorce
kde R je atom vodíku nebo methylová skupina;
man znamenají nezávisle na sobě celé číslo od 0 do 5;
každá skupina X je nezávisle halogenmethylová skupina nebo halogenalkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy a každá skupina Z je nezávisle alkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
-11CZ 292709 B6
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu obecného vzorce
kde X je trihalogenmethylová skupina nebo trihalogenmethoxyskupina; a
R je -H nebo skupina -CH3;
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
-12CZ 292709 B6
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu obecného vzorce
kde R znamená buď atom vodíku nebo methylovou skupinu;
n je celé číslo od 0 do 5; a
X je nezávisle trihalogenmethylová skupina, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
Předkládaný vynález dále poskytuje diaromatickou sloučeninu vzorce
nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
-13CZ 292709 B6
Termínem „halogenalkyl“ označujeme alkyl substituovaný alespoň jedním halogenem. Ve výhodném provedení vynálezu je halogenem substituován pouze koncový uhlíkový atom halogenalkylu a počet atomů halogenů přítomných na tomto uhlíku se pohybuje v rozmezí 1 až 3.
Ve výhodném provedení vynálezu jsou jako substituenty použity Cl nebo F.
Termínem „halogenalkoxy“ označujeme „O-halogenalkyl“, kde „O“ je atom kyslíku připojený k nižšímu halogenalkylu.
Ve výhodném provedení je skupina X vázána k fenylové skupině v poloze 3.
Do této skupiny patří i sloučeniny znázorněné Strukturou 3.
Kalcimimetická aktivita
Schopnost sloučenin mimikovat na receptorech pro vápník účinky Ca2+ může být stanovena za použití postupů známých ze stavu techniky. Tyto postupy jsou popsány v Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959. Kalcimimetika mají například při testování in vitro na buňkách příštitných tělísek jednu nebo více a ve výhodném provedení vyná20 lezu všechny z následujících aktivit:
1. Sloučenina způsobuje tychlé (s maximální odezvou v čase menším než 5 sekund) a přechodné zvýšení koncentrace extracelulámího vápníku a toto zvýšení koncentrace extracelulámího vápníku není možné inhibovat přídavkem 1 μΜ La3+ nebo přídavkem 1 μΜ
Gd3+. Zvýšená [Ca2+]j přetrvává i v nepřítomnosti extracelulámích Ca2+, ale je inhibována předběžným působením ionomycinem (v nepřítomnosti extracelulámích Ca2+);
2. Sloučenina umocňuje zvýšení [Ca2+]i, které je vyvoláno působením extracelulámích Ca2* v koncentracích, které nevedou k maximální odezvě;
3. Zvýšení [Ca2+]i vyvolané přítomností extracelulámích Ca2+ není inhibováno prostřednictvím dihydropyridinů;
4. Přechodné zvýšení [Ca2+]j způsobené účinkem dané sloučeniny je inhibováno předběžným působením 10 mM fluoridu sodného po dobu 10 minut;
5. Přechodné zvýšení [Ca2+]i zapříčiněné působením dané sloučeniny je negativně ovlivněno předchozím působením aktivátoru protein kinázy C (PKC), jakými jsou například octan esteru forbolu s kyselinou myristilovou (PMA), mezerin nebo (-) -indolaktam. V. Výsled- ným efektem působení aktivátoru protein kinázy C je posun křivky znázorňující změnu v koncentraci vápníku při reakci na změnu extracelulámí koncentrace Ca2+ doprava, bez ovlivnění maximální dosažené hodnoty;
6. Daná sloučenina způsobuje rychlé (< 30 sekund) zvýšení tvorby inositol-l,4,5-trifosfátu a diacylglycerolu;
7. Daná sloučenina inhibuje tvorbu cyklického AMP vyvolanou působením dopaminu a izoproterenolu;
8. Daná sloučenina inhibuje sekreci PTH;
9. Předběžné působení toxinem produkovaným mikroorganizmem Bordetella pertussis (100 mg/ml po dobu další než 4 hodiny) blokuje inhibiční účinky sloučeniny na tvorbu cyklického AMP, ale neovlivňuje zvýšení [Ca2+]j, zvýšení tvorby inositol-l,4,5-trifosfátu 55 nebo diacylglycerolu a nesnižuje sekreci PTH;
-14CZ 292709 B6
10. Daná sloučenina vyvolává voocytech rodu Xenopus, které jsou injikovány obohacenou frakcí polyadenylované mRNA z buněk lidských příštitných tělísek nebo z buněk příštitných tělísek skotu, zvýšení toku Cf. Daná sloučenina však nemá žádný vliv na oocyty rodu Xenopus injikované vodou nebo mRNA izolovanou z jater; a
11. Podobně při použití klonovaného receptoru pro vápník získaného z buněk příštitných tělísek vyvolává daná sloučenina u oocytů rodu Xenopus injikovaných specifickou cDNA nebo mRNA kódující receptor pro vápník příslušnou reakci.
Za použití dostupných technik mohou být měřeny rozdílné účinky vápníku (viz. Nemeth a další, PC17US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959). Podobné definice pro sloučeniny, které mimikují účinky Ca2+ na jiných druzích buněk reagujících na přítomnost vápenatých iontů, výhodněji pak které mimikují účinky Ca2+ na receptorech přítomných na těchto buňkách., jsou zřejmé z příkladů a z článku Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959.
Ve výhodném provedení vynálezu má daná sloučenina jeden nebo více a ve výhodnějším provedení vynálezu všechny z následujících aktivit (tyto aktivity jsou měřeny pomocí popisovaných biostanovení nebo v článku Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959): vyvolává přechodné zvýšení hladiny intracelulámího vápníku, které má dobu trvání kratší než 30 sekund (ve výhodném provedení vynálezu je toto zvýšení způsobeno mobilizací rezerv intracelulámího vápníku); vyvolává rychlé zvýšení [Ca2+]i ke kterému dojde během 30 sekund; vyvolává dlouhodobé zvýšení (doba trvání delší než 30 sekund) [Ca2+]j (ve výhodném provedení vynálezu je toto zvýšení způsobeno vnikáním vápníku z okolního prostředí); vyvolává zvýšení hladiny inositol-l,4,5-trifosfátu a diacylglycerolu, ke kterému dojde ve výhodném provedení vynálezu v časovém úseku kratším než 60 sekund; a inhibuje tvorbu cyklického AMP vyvolanou působením dopaminu a izoproterenolu.
Ve výhodném provedení vynálezu je přechodné zvýšení [Ca2+]i zrušeno předběžným působením 10 mM fluoridu sodného po dobu 10 minut nebo je přechodné zvýšení [Ca2+]j sníženo krátkým předběžným působením (ne delším než 10 minut) aktivátoru protein kinázy C (PKC), jakými jsou například octan esteru forbolu s kyselinou myristilovou (PMA), mezerein nebo (-)-indolaktam V.
B. Kalcilytika
Schopnost sloučenin blokovat na receptorech pro vápník účinky Ca2+ může být stanovena za použití standardních postupů založených na objevech známých ze stavu techniky. (Viz například Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959). Sloučeniny, které blokují účinky extracelulámího vápníku mají například při testování in vitro na buňkách příštitných tělísek jednu nebo více a ve výhodném provedení vynálezu všechny z následujících aktivit:
1. Daná sloučenina buď částečně nebo úplně blokuje účinky zvýšené koncentrace extracelulámích Ca2+. Zvýšená koncentrace Ca2+ by jinak zapříčinila:
(a) zvýšení [Ca2+]i, (b) mobilizaci intracelulámích Ca2+, (c) zvýšení tvorby inositol-1,4,5-trifosfátu, (d) snížení tvorby cyklického AMP vyvolané působením dopaminu a izoproterenolu a (e) inhibici sekrece PTH;
-15CZ 292709 B6
2. Daná sloučenina blokuje v oocytech rodu Xenopus, které jsou injikovány obohacenou frakcí polyadenylované mRNA z buněk lidských příštitných tělísek nebo z buněk příštitných tělísek skotu, zvýšení toku Cl“, které je vyvolané působením extracelulámích Ca2+ nebo kalcimimetických sloučenin. Daná sloučenina však nemá žádný vliv na oocyty rodu Xenopus injikované vodou nebo mRNA izolovanou z jater;
3. Podobně daná sloučenina blokuje u oocytů rodu Xenopus injikovaných specifickou cDNA, mRNA nebo cRNA kódující receptor pro vápník odpověď vyvolanou působením extracelulámích Ca2+ nebo kalcimimetických sloučenin (při použití klonovaného receptoru pro vápník získaného z buněk příštitných tělísek).
Podobné definice pro sloučeniny, které blokují účinky Ca2' na jiných druzích buněk reagujících na přítomnost vápenatých iontů, výhodněji pak které blokují účinky Ca2+ na receptorech přítomných na těchto buňkách, jsou zřejmé z uvedených příkladů a z článku Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959.
III. Léčba nemocí a poruch
V současnosti jsou známa onemocnění a poruchy, které mohou být léčeny pomocí modulace aktivity receptorů pro vápník. Onemocnění a poruchy, které mohou být léčeny pomocí modulace aktivity receptorů pro vápník, mohou být například identifikovány na základě funkčních odpovědí buněk, které jsou regulovány aktivitou receptorů pro vápník. Mezi funkční odpovědi buněk, které jsou regulovány aktivitou receptorů pro vápník, v současnosti dobře známé, patří sekrece PTH prostřednictvím buněk příštitných tělísek, sekrece kalcitoninu prostřednictvím C-buněk a resorpce kostní tkáně osteoklasty.
Takové funkční odpovědi jsou svázány s výskytem různých nemocí a poruch. Například hyperparathyreóza má za následek zvýšení hladiny PTH v krevní plazmě. Snížení hladiny plazmatického PTH je tedy účinným prostředkem, k léčbě hyperparathyreózy. Podobně zvýšená hladina kalcitoninu v plazmě je spojena s inhibicí resorpce kostní tkáně. Inhibice resorpce kostní tkáně je účinnou léčbou osteoporézy. Z toho vyplývá, že modulace aktivity receptorů pro vápník může být využito k léčbě nemocí jako například hyperparathyreózy a osteoporézy.
Sloučeniny, které modulují aktivitu receptorů anorganických iontů a ve výhodném provedení vynálezu pak aktivitu receptorů pro vápník, mohou být prospěšné při použití u pacientů, kteří jsou postiženi onemocněním nebo poruchou. Například osteoporéza je porucha staršího věku, která je charakterizována úbytkem kostní hmoty a zvýšeným rizikem výskytu zlomenin kostí. K inhibici resorpce kostní tkáně prostřednictvím osteoklastů mohou tedy být využity sloučeniny, které tuto resorpci blokují přímo (například iontomimetické sloučeniny působící na osteoklasty) nebo nepřímo prostřednictvím zvýšení hladiny endogenního kalcitoninu (například kalcimimetika působící na C-buňky). Jinou možností je zvýšení hladiny parathormonu v krevním oběhu prostřednictvím působení kalcilytik na buňky příštitných tělísek. Toto zvýšení hladiny PTH stimuluje tvorbu kostí. Všechny tři zmíněné přístupy jsou pro pacienta trpícího osteoporózou prospěšné.
Dále je známo, že občasné podávání malých dávek PTH má za následek tvorbu kostní hmoty a podporuje řádné remodelování kostní tkáně. Sloučeniny a režim jejich podávání, který vyvolává přechodné zvýšení hladiny parathormonu (například občasné podávání iontolytika působícího na buňky příštitných tělísek), může tedy u pacientů trpících osteoporézou zvýšit hmotu kostní tkáně.
Prostřednictvím identifikace dalších funkčních odpovědí buněk, které jsou regulovány aktivitou receptorů pro vápník, a které jsou spojeny s některou nemocí nebo poruchou, mohou být identifikovány další onemocnění a poruchy. Onemocnění a poruchy, které mohou být léčeny prostřed
-16CZ 292709 B6 nictvím modulace receptorů jiných anorganických iontů než iontů vápníku, mohou být identifikovány obdobným způsobem.
Sloučeniny podle vynálezu, které modulují aktivitu receptorů anorganických iontů, mohou působit na receptor anorganických iontů, tím navodit jednu nebo více funkčních odpovědí buněk na jejichž povrchu je tento receptor exprimován a tím projevit svůj terapeutický účinek. Sloučeniny podle vynálezu, které modulují aktivitu receptorů pro vápník, mohou u buněk exprimujících tento receptor navodit jednu nebo více funkčních odpovědí a tím projevit svůj terapeutický účinek. Postupy podle vynálezu mohou být použity k léčbě nejrůznějších nemocí prostřednictvím ovlivnění buněk exprimujících receptory pro vápník.
Primární hyperthyreóza (HPT) je například charakterizována hyperkalcémií a abnormálně zvýšenou hladinou PTH v krevním oběhu. Poruchou spojenou s tímto převládajícím typem HPT je snížená citlivost buněk příštitných tělísek k negativní zpětnovazebně regulaci způsobené přítomností extracelulámího vápníku. To znamená, že ve tkáni pacientů trpících primární HPT je „nastavená hodnota,, („set point“) pro extracelulámí Ca2+ posunuta doprava, což znamená, že k potlačení sekrece PTH je zapotřebí vyšších koncentrací extracelulámích Ca2+, než je tomu u zdravého jedince. U primární HPT navíc dokonce vysoké koncentrace extracelulámích Ca2+ snižují sekreci PTH jenom částečně. U sekundární (uremické) HPT je pozorováno obdobné zvýšení „nastavené hodnoty“ pro extracelulámí Ca2+, ačkoliv stupeň potlačení sekrece PTH způsobené přítomností Ca2+ je „normální“. Změny v sekreci PTH odpovídají změnám v hladině [Ca2+],; „nastavená hodnota“ pro extracelulámí Ca2+ schopné indukovat zvýšení [Ca2+], je posunuta doprava a toto zvýšení [Ca2*], není (co do velikosti) tak výrazné.
Pacienti postižení sekundární HPT mohou rovněž trpět renální osteodystrofií. U těchto pacientů se kalcimimetika jeví jako užitečná při léčbě jak abnormální sekrece PTH tak osteodystrofíe.
Sloučeniny mimikující účinky extracelulámích Ca2+ jsou prospěšné při dlouhodobé léčbě jak primární tak sekundární HPT. Tyto sloučeniny dodávají další impulz, který je potřebný k potlačení sekrece PTH, které nemůže být dosaženo pouhým navozením hyperkalcemických podmínek. Tyto sloučeniny tedy pomáhají zmírnit hyperkalcémií. Sloučeniny s vyšší účinností než jakou mají extracelulámí Ca2+ mohou překonat zdánlivě nepotlačitelnou část sekrece PTH, která způsobuje zvlášť velké problémy u nej rozšířenější formy primární HPT, která je způsobena adenomem příštitných tělísek. Jinou možností je využití skutečnosti, že tyto sloučeniny mohou snížit syntézu PTH, jelikož bylo prokázáno, že dlouhotrvající hyperkalcémie snižuje u člověka a skotu hladinu mRNA kódující preproPTH v adenomu příštitných tělísek. Dlouhotrvající hyperkalcémie rovněž in vitro potlačuje proliferaci buněk příštitných tělísek, z čehož vyplývá, že kalcimimetika mohou být rovněž účinná při omezení tvorby hyperplazií buněk příštitných tělísek charakteristických pro sekundární HPT.
I buňky jiného druhu než buňky příštitných tělísek mohou přímo reagovat na fyziologické změny v koncentraci extracelulámích Ca2+. Například změny v koncentraci extracelulámích Ca2+ regulují u parafolikulámích buněk štítné žlázy (C-buněk) sekreci kalcitoninu.
Izolované osteoklasty reagují na zvýšení koncentrace extracelulámích Ca2+ odpovídajícím zvýšením [Ca2+],, které má z části příčinu v mobilizaci intracelulámích Ca2+. Zvýšení [Ca2+]; v osteoklastech je spojeno s inhibicí resorpce kostní tkáně. Vápenaté ionty přímo stimulují uvolňování alkalické fosfatázy u osteoblastů, které se účastní tvorby kostní tkáně.
Zvýšená koncentrace extracelulámích Ca2+ snižuje, stejně jako je tomu u PTH, sekreci reninu u juxtaglomerulámích buněk ledvin. V těchto buňkách způsobují extracelulámí Ca2+ mobilizaci zásob intracelulámích Ca2+. Ostatní buňky ledvin reagují na přítomnost vápníku následujícím způsobem: u buněk proximálního tubulu inhibuje zvýšená hladina Ca2+ tvorbu 1, 25(OH) 2vitaminu D, u buněk distálního tubulu stimuluje zvýšená hladina Ca2+ produkci vazebného proteinu pro vápník a inhibuje zpětnou absorpci Ca2+ a Mg2* a inhibuje účinky vasopresinu na
-17CZ 292709 B6 tlusté vzestupné ramínko Henleovy kličky (MTAL), zvýšená hladina Ca2+ snižuje účinky vasopresinu na buňky kortexu sběrného kanálku a ovlivňuje buňky hladké svaloviny v cévách glomerulu ledvin.
Vápník rovněž podporuje diferenciaci pohárkových buněk střeva, buněk mléčné žlázy a kožních buněk; inhibuje sekreci natriuretického peptidu srdečních síní; v krevních destičkách snižuje akumulaci cAMP; pozměňuje sekreci gastrinu a glukagonu; u buněk hladkého svalstva cév modifikuje sekreci vazoaktivních faktorů; ovlivňuje buňky centrálního nervového systému a buňky periferního nervového systému.
Existuje tedy dostatek údajů, které naznačují, že Ca2+ funguje nejenom jako všudypřítomný intracelulámí signál, ale že rovněž působí jako extracelulámí signál a může tudíž regulovat funkční odpovědi určitých specializovaných buněk. Sloučeniny podle vynálezu mohou být tedy použity k léčbě nemocí a poruch spojených s narušenými funkčními odpověďmi těchto buněk na přítomnost Ca2+.
Mezi specifická onemocnění nebo poruchy způsobené narušením funkčních odpovědí buněk, které mohou být léčeny nebo kterým můžeme předcházet, řadíme onemocnění nebo poruchy centrálního nervového systému, jako například záchvaty, mrtvice, úraz hlavy, poranění míchy, poškození nervových buněk navozené nedostatkem kyslíku, ke kterým dochází například při zástavě srdce nebo u neonatální respirační tísně, epilepsie, neurodegenerativní poruchy jako například Alzheimerovu nemoc, Huntingtonovu nemoc a Parkinsonovu nemoc, demenci, svalové námahy, deprese, panických stavů, úzkosti, obsedantně-kompulzivní poruchy, poruchy způsobené posttraumatickým stresem, schizofrénie, neuroleptický maligní syndrom a Tourettův syndrom; poruchy vyznačující se přebytečnou zpětnou absorpcí v ledvinách jako je například syndrom nepřiměřené sekrece ADH (SIADH), cirhóza, selhání srdce způsobené překrvením anefróza; hypertenze; prevence a/nebo snížení renální toxicity (například antibiotik na bázi aminoglykosidů); dráždivý tračník jako například průjem a spastický kolon; vředovitá onemocnění gastrointestinálního traktu; onemocnění gastrointestinálního traktu charakterizovaná nadměrnou absorpcí vápníku jako například sarkoidóza; a autoimunitní onemocnění a odmítnutí orgánových transplantátů.
Ačkoliv sloučeniny podle vynálezu, modulující aktivitu receptorů pro vápník, budou obvykle používány k léčbě lidí, mohou být tyto sloučeniny rovněž použity k léčbě podobných nebo identických nemocí postihujících jiné teplokrevné živočišné druhy, jako například primáty, hospodářská zvířata, jako například vepře, dobytek a drůbež; zvířata chovaná ke sportovním účelům a domácí zvířata jako například koně, psi a kočky.
IV. Administrace
Různé sloučeniny popsané ve vynálezu mohou být použity k léčbě nejrůznějších nemocí nebo poruch. Léčebný účinek těchto sloučenin spočívá v jejich schopnosti modulovat aktivitu receptorů anorganických iontů, výhodněji pak aktivitu receptorů pro vápník. Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny v nejrůznějších kompozicích použitelných pro administraci, jako například systemickou administraci a topickou nebo lokální administraci. Techniky přípravy a druhy kompozicí mohou být obecně nalezeny v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA. Administrace iontomimetik a iontolytik je popsána v Nemeth a další, PCT/US93/01642, Mezinárodní publikace WO 94/18959.
Druh kompozice vhodné pro dávkování je, alespoň z části, závislý na způsobu použití nebo cestě, kterou je kompozice aplikována. Administraci je možné provádět orální cestou, přes pokožku nebo ve formě injekcí. Kompozice vhodné pro dávkování by měly aktivní sloučenině umožnit dosáhnout cílové buňky, ať už je cílová buňka součástí mnohobuněčného organizmu nebo se nachází v buněčné kultuře. Například farmaceutická sloučenina nebo kompozice aplikovaná do krevního řečiště ve formě injekcí by měla být rozpustná. Jiné faktory ovlivňující druh použité
-18CZ 292709 B6 kompozice jsou známé ze stavu techniky a patří mezi ně problém toxicity nebo možnost použití kompozice, která „pozdrží“ účinky sloučeniny nebo kompozice.
Sloučeniny mohou být rovněž připraveny ve formě farmaceuticky přijatelných solí (například soli připravené přídavkem kyselin) a jejich komplexů. Jako farmaceuticky přijatelné soli označujeme netoxické soli v koncentracích, ve kterých jsou administrovány. Příprava takových solí může usnadnit farmakologické využití tím, že dojde ke změně fyzikálních charakteristik dané sloučeniny a přitom není u dané sloučeniny ovlivněn její fyziologický účinek. Mezi užitečné změny fyzikálních vlastností patří například snížení bodu tuhnutí, které usnadňuje administraci sloučeniny přes sliznici nebo zvýšení rozpustnosti, které usnadní administraci vyšších koncentrací dané sloučeniny.
Mezi farmaceuticky přijatelné soli patří soli získané přídavkem kyseliny. Získané soli existují například ve formě síranů, chloridů, maleátů, fosfátů, amidosíranů, octanů, citrátů, laktátů, vínanů, methansulfonátů, ethansulfonátů, benzensulfonátů, p-toluensulfonátů, cyklohexylamidosíranů a chinátů. (Viz například PCT/US92/03736). Farmaceuticky přijatelné soli mohou být získány z kyselin, jakými jsou například kyselina chlorovodíková, kyselina maleinová, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina amidosírová, kyselina octová, kyselina citrónová, kyselina mléčná, kyselina vinná, kyselina malonová, kyselina methylsulfonová, kyselina ethylsulfonová, kyselina benzensulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina cyklohexylamidosírová a kyselina chinová.
Farmaceuticky přijatelné soli mohou být připraveny pomocí standardních postupů. Daná sloučenina ve formě volné báze je kupříkladu rozpuštěna ve vhodném rozpouštědle, jakým je například vodný roztok nebo roztok směsi alkohol-voda, obsahující požadovanou kyselinu, a následně izolována odpařením roztoku. V jiném příkladu je sůl připravena reakcí volné báze a kyseliny v prostředí organického rozpouštědla.
K usnadnění administrace dané sloučeniny mohou být použity rovněž nosiče a excipienty (masťové základy). Jako příklad nosičů a excipientů je možné uvést například uhličitan vápenatý, hydrogenfosforečnan vápenatý, nejrůznější cukry jako například laktóza, glukóza nebo sacharóza nebo různé druhy škrobů, deriváty celulózy, želatina, rostlinné oleje, polyethylenglykoly a fyziologicky přijatelná rozpouštědla. Kompozice nebo farmaceutické kompozice mohou být administrovány nejrůznějšími způsoby, například intravenózně, intraperitoneálně, do podkožní vrstvy (subkutánně) a intramuskulámě, orálně, lokálně nebo přes sliznice.
Pro systemickou administraci je upřednostňována orální administrace. Jinou možností je administrace ve formě injekcí, například intramuskulámí, intravenózní, intraperitoneální nebo subkutánní administrace. K administraci ve formě injekcí jsou sloučeniny podle vynálezu připravovány ve formě vodných roztoků, výhodněji ve formě fyziologicky přijatelných pufrů, jakými jsou například Hankův roztok nebo Ringerův roztok. Jinou možností je připravit danou sloučeninu v pevném stavu a těsně před použitím ji rozpustit nebo suspendovat ve vhodném rozpouštědle. Daná sloučenina může být rovněž lyofilizována.
Systemická administrace může být rovněž dosaženo prostřednictvím administrace přes sliznici nebo přes pokožku nebo může být daná sloučenina administrována orálně. Při administraci přes sliznici nebo přes pokožku jsou v kompozicích použity smáčecí přípravky vhodné k usnadnění překonání bariéry bránící průniku dané sloučeniny. Mezi takové smáčecí přípravky známé ze stavu techniky patří například při administraci přes sliznici soli žlučových kyselin nebo deriváty kyseliny fusidové. K usnadnění pronikání dané sloučeniny mohou být dále použity různé detergenty. Administrace přes sliznice může být dosaženo použitím nosních sprejů nebo například čípků. Pro aplikaci sloučeniny orální cestou může být daná sloučenina připravena v kompozici běžně používané k orální administraci, jako například ve formě kapsulí, tablet nebo kapalných přípravků.
-19CZ 292709 B6
Pro lokální aplikaci sloučeniny může být příslušná sloučenina připravena v kompozicích známých ze stavu techniky. Takovými kompozicemi jsou masti, gely nebo krémy.
Množství sloučeniny podle vynálezu určené k administraci může být stanoveno pomocí standar5 dních postupů. Obvykle se terapeuticky účinné množství pohybuje v rozmezí 1 mmol až 3 mmol příslušné sloučeniny, výhodněji však v rozmezí 0,1 nmol až 1 mmol v závislosti na hodnotě příslušných konstant EC50 nebo IC50, na věku a hmotnosti pacienta a rovněž na druhu onemocnění nebo poruchy. Obvykle jsou sloučeniny používány v množstvích v rozmezí 0,1 až 50 mg/kg, výhodněji pak v rozmezí 0,01 až 20 mg/kg živé váhy živočicha, který podstupuje léčbu.
Příklady provedení vynálezu
Dále uvádíme příklady ilustrující různá provedení podle vynálezu, která neomezují v žádném 15 ohledu rozsah vynálezu. Pro ilustraci jsou v příkladech zahrnuty také sloučeniny, které přímo nejsou předmětem vynálezu.
Příklad 1:
Klonování receptorů pro vápník z adenomu lidských příštitných tělísek.
Tento příklad popisuje postup klonování receptorů pro vápník z adenomu lidských příštitných tělísek, při kterém je jako hybridizační sonda použit konstrukt pBoPCaRl (viz. Nemeth a další, 25 PCT/US93/01642, mezinárodní publikace WO 94/18959). Hybridizační sonda byla použita za účelem identifikace nukleové kyseliny, která kóduje receptor pro vápník exprimovaný na lidských příštitných tělíscích. Tato identifikace byla prováděna v podmínkách, při kterých je snížena specifita vazby sondy na odpovídající nukleotidovou sekvenci.
Messengerová RNA byla izolována z adenomu příštitných tělísek odebraného 39-ti letému muži z Kavkazu, trpícímu primárním hyperparathyroidismem. Analýzou takto získané mRNA metodou Northem blot za použití pBoPCaRl jako hybridizační sondy byly identifikovány dva transkripty kódující receptor pro vápník o velikostech 5 kb a 4 kb. Ze získané mRNA byla vytvořena cDNA knihovna. Na agarózové elektroforéze byly v závislosti na délce izolovány fragmenty dvojvláknové cDNA o velikosti věští než 3 kbp. Tyto fragmenty byly následně zaklonovány do vektoru lambda Zapil. Byl proveden screening pěti set tisíc rekombinantních fágů, při kterém byla jako hybridizační sonda použita cDNA inzertu pBoPCaRl o velikosti 5,2 kbp. Inzert pBoPCaRl byl radioaktivně označen syntézou s využitím primerů o náhodných sekvencích, při níž byl jako zdroj radionuklidu použit [32P]-dCTP. Výsledná specifická aktivita inzertu pBoPCaRl byla 1 x 109 cpm/pg.
Screening knihovny byl prováděn po dobu 20 hodin za následujících podmínek: 400 mM Na+, 50% formamid, teplota 38 °C. Filtry s otiskem plaků byly hybridizovány po dobu 20 hodin pomocí sondy o koncentraci 500 000 cpm/ml. Po skončení hybridizace byly filtry promývány při 45 40 °C v 1 x SSC po dobu 1 hodiny.
Pomocí hybridizační sondy pBoPCaRl bylo při primárním screeningu identifikováno 250 pozitivních klonů. U sedmi z těchto pozitivních klonů byl proveden ještě sekundární a terciární screening za účelem izolace jednotlivých klonů, které hybridizují se sondou pBoPCaRl. Těchto 50 sedm klonů bylo analyzováno metodou restrikčního mapování a metodou Southem blot. Tři z těchto klonů nesly inzert cDNA o velikosti přibližně 5 kbp a byly zřejmě klony s inzertem odpovídajícím mRNA o velikosti 5 kb. Dva z těchto klonů nesly inzert cDNA o velikosti přibližně 4 kbp a byly zřejmě klony s inzertem odpovídajícím mRNA o velikosti 4 kb.
-20CZ 292709 B6
Restrikční mapování zmíněných dvou různě velkých inzertů naznačuje, že tyto inzerty mají na svém 5a konci sekvenčně příbuzné oblasti, ale liší se v nukleotidové sekvenci na 3' konci. Sekvenční analýza DNA naznačuje, že menší inzert může být výsledkem procesu, při kterém dochází k alternativní polyadenylaci v místě položeném proti směru transkripce od místa, ve kterém dochází k polyadenylaci u většího inzertu.
Jak cDNA inzert o velikosti přibližně 5 kbp tak menší cDNA inzert byly zaklonovány do plazmidu pBluescript SK. Za použití T7 RNA polymerázy byly in vitro linearizované plazmidy transkribovány. Výsledkem této transkripce byl vznik odpovídajících cRNA, které byly injikovány do oocytů rodu Xenopus (150 ng/μΐ RNA; 50nl/oocyt) za účelem provedení funkční analýzy. Po uplynutí inkubačních období o délce 2 až 4 dny byla u oocytů zjišťována přítomnost funkčních receptorů pro vápník. U obou klonů došlo k expresi funkčních receptorů pro vápník. Tato skutečnost byla stanovena tak, že přidáním vhodných agonistů receptorů pro vápník došlo ke zvýšení toku chloridových iontů dovnitř oocytů. Agonisté receptorů pro vápník, mezi něž patří NPS R-467 a NPS R-568 (viz. Nemeth a další, PCT/US93/01642, mezinárodní publikace WO 94/18959) aktivovali receptory pro vápním exprimované na oocytech v koncentracích přibližně rovných koncentracím, při kterých dochází k aktivaci nativních receptorů pro vápník na buňkách příštitných tělísek. Oba klony tedy kódují funkční receptor pro vápník buněk příštitných tělísek člověka.
Jak cDNA inzert o velikosti přibližně 5 kbp tak menší cDNA inzert byly zaklonovány do plazmidu pBluescript a vzniklé plazmidy byly označeny jako pHuPCaR 5,2 a pHuPCaR 4,0. Nukleotidová sekvence a aminokyselinová sekvence obou těchto inzertů jsou znázorněny v SEQ. ID. číslo 1 a 2.
Mezi nukleotidovými sekvencemi zmíněných inzertů bylo pozorováno několik rozdílů. Sekvenční analýza zmíněných cDNA inzertů naznačuje, že existují přinejmenším dvě varianty, které se liší v sekvenci 3' nepřekládané oblasti a které mohou být produktem alternativní polyadenylace. Existují rovněž odchylky v nukleotidové sekvenci na 5' konci inzertů. Tyto rozdílné sekvence odpovídají nepřekládaným oblastem a mohly vzniknout alternativní iniciací transkripce a/nebo alternativním sestřihem mRNA.
V klonech pHuPCaR 5,2 a pHuPCaR 4,0 jsou pozorovány mezi kódujícími oblastmi příslušných cDNA ještě další úseky, ve kteiých existuje odlišnost v nukleotidové sekvenci (viz. SEQ. ID. číslo 1 a 2). To znamená, že tyto dva cDNA klony kódují odlišné proteiny. Sekvenční analýza lidského genu CaR naznačuje, že 30 párů bází vyskytujících se navíc v cDNA klonu pHuPCaR 5,2 (ve srovnání s cDNA klonu pHuPCaR 4,0) je výsledkem alternativního sestřihu mRNA. Předpokládá se, že alternativní sestřih mRNA má za následek vložení 10 dalších aminokyselin do polypeptidu CaR kódovaného cDNA klonu pHuPCaR 5,2. K tomuto vložení dochází v polypeptidu kódovaném cDNA klonu pHuPCaR 4,0 mezi aminokyselinovými zbytky číslo 536 a 537. Dále pak pHuPCaR 4,0 kóduje na pozici 925 glutamin (Gin) a na pozici 990 glycin (Gly), kdežto pHuPCaR 5,2 kóduje na obou těchto pozicích arginin (Arg). Gen pro lidský CaR kóduj na pozici 925 Gin a na pozici 990 Arg. Ve srovnání s lidskou DNA je rozdíl mezi touto DNA a cDNA klonu pHuPCaR 4,0 chápán jako sekvenční polymorfizmus v lidské populaci, zatímco záměna jedné báze v pHuPCaR 5,2 byla patrně způsobena mutací během klonování. Obě cDNA kódují funkční receptory pro vápník, což bylo potvrzeno v experimentech, při kterých byly oocyty rodu Xenopus injikovány cRNA připravenou z těchto klonů cDNA. Tyto oocyty pak reagovaly (jak ukazují měření vodivosti zprostředkované ionty Cl) na přítomnost extracelulámího vápníku o koncentraci 10 mM. Je nicméně možné, že tyto dvě izoformy receptorů pro vápník jsou funkčně a/nebo farmakologicky odlišné.
-21 CZ 292709 B6
Příklad 2:
Selekce rekombinantních buněk, které stabilně exprimují receptory pro vápník
Byly izolovány klonované buněčné linie, které stabilně exprimují dva lidské receptory pro vápník a jeden receptor pro vápník skotu. cDNA kódující receptory pro vápník byly zaklonovány do dvou rozdílných, komerčně dostupných vektorů; vektoru pMSG (získaný od firmy Pharmacia) a vektoru Cep4B (získaný od firmy Invitrogen). První vektor nesl jako selekční markér gen pro xanthin-guanin fosforibosyltransferázu (gpt). Produkt tohoto genu umožňuje stabilně transío fekovaným buňkám překonat zablokování dráhy biosyntézy purinů, kterého je dosaženo přídavkem 2 pg/ml aminopterinu a 25 gg/ml mykofenolové kyseliny. Druhý vektor kóduje gen, který nese rezistenci vůči antibiotiku hygromycin (použito v koncentraci 200 pg/ml). cDNA klonu pHuPCaR 5,2 a klonu pHuPCaR 4,0 (SEQ. ID. číslo 1 a 2) byly z plazmidu Bluescript vyštěpeny za použití restríkčních enzymů Not I a Hind III. Takto získané fragmenty byly buď přímo 15 zaligovány do vektoru Cep4B, který byl předem rozštěpen restrikčními enzymy Not I a Hind III, nebo byly vystaveny působení Klenowova fragmentu DNA polymerázy a následně zaligovány (ligace tupých konců) do vektoru pMSG rozštěpeného restrikčním enzymem Srna I.
Klonem vektoru pMSG nesoucím inzert z pHuPCaR 5,2 byly postupem zmíněným výše trans20 fekovány buňky CHO. Selekčním postupem bylo získáno 20 rezistentních klonů, které jsou v současné době charakterizovány. Klonem vektoru Cep4B nesoucím inzert z pHuPCaR 5,2 byly postupem zmíněným výše transfekovány buňky HEK 293. Selekcí hygromycinem bylo získáno velké množství stabilně transformovaných klonů. Podobně byly připraveny klony exprimující izoformu receptorů pro vápník kódovanou inzertem z klonu pHuPCaR 4,0.
Buňky získané po selekci hygromycinem z klonů buněk HEK 293 transfekovaných vektorem Cep4B obsahujícím inzert pHuPCaR 5,2, byly vysety na Aklarovy čtverce potažené kolagenem. Tyto čtverce byly po jednom umístěny do jamek na 12-ti jamkových plotnách pro tkáňové kultury. Po dvou až šesti dnech bylo odstraněno růstové médium a buňky byly promyty vyrovná30 vacím roztokem a 1 ml pufru obsahujícím 1 μΜ indikátor fura2-AM, 1 mM CaCl2 a 0,1% BSA a 1 mM CaCl2. Měření fluorescence jako odpovědi na přítomnost agonistů receptorů pro vápním bylo prováděno při 37 °C ve spektrofluorimetru při vlnové délce excitace 340 nm a vlnové délce emise 510 nm. Při kalibraci signálu byla hodnota Fmax stanovena po přidání ionomycinu (40 μΜ) a zdánlivá hodnota Frain byla stanovena po přidání 0,3 M EGTA, 2,5 M Tris-HCl, pH = 10. Velké 35 zvýšení [Ca2+]j bylo pozorováno jako reakce na přidání následujících agonistů receptorů pro vápník: Ca2+ (10 mM), Mg2+ (20 mM) a NPS R-467. Kontrolní linie buněk exprimující funkční receptory substance K na přítomnost těchto kalcimimetických sloučenin nereagovaly.
Dále byly získány buňky HEK 293 transfekované vektorem s inzertem pHuPCaR 4,0. U těchto 40 buněk byla rovněž testována reakce na přítomnost kalcimimetik (jak bylo popsáno výše), ale s tím rozdílem, že tyto buňky byly během experimentu přítomny v suspenzi.
Příklad 3:
Použití buněk příštitných tělísek nasycených indikátorem fura-2 za účelem měření aktivity receptorů pro vápník
Tento oddíl popisuje postupy použité k získání buněk příštitných tělísek z organizmu telat a lidského organizmu a využití buněk příštitných tělísek k měření aktivity receptorů pro vápník.
Příštitná tělíska byla získána z čerstvě zabitých telat (starých 12 až 14 týdnů). Telata byla zabita na místních jatkách a příštitná tělíska byla do laboratoře transportována v pufru pro buňky příštitných tělísek (PCB - parathyroíd cell buffer) o teplotě 0 °C, jehož složení je následující 55 (mM): NaCl, 126; KC1, 4; MgCl2, 1; Na-HEPES, 20; pH = 7,4; glukóza, 5,6 a proměnné
-22CZ 292709 B6 množství CaCl2, například 1,25 mM. Lidská příštitná tělíska byla získána od pacientů trpících primární nebo uremickou hyperparathyreózou (uremická HPT), kterým byla tato příštitná tělíska chirurgicky odstraněna. Postup při transportu byl stejný jako u příštitných tělísek telat.
Žlázy byly zbaveny přebytečného tuku a pojivové tkáně a poté byly rozstříhány pomocí malých nůžek na kostičky o hraně přibližně 2 až 3 mm. Jednotlivé buňky příštitných tělísek byly připraveny působením kolagenázy a poté purifíkovány centrifúgací v pufru Percoll. Výsledný preparát buněk příštitných tělísek neobsahoval téměř žádné červené krvinky, adipocyty nebo tkáň kapilár, což bylo potvrzeno pozorováním mikroskopem s fázovým kontrastem a barvením Sudánovou černí. Disociované a purifikované buňky příštitných tělísek byly přítomny ve shlucích obsahujících 5 až 20 buněk. Životaschopnost buněk stanovovaná pomocí měření exkluze trypanové modře nebo ethidium bromidu byla běžně 95 %.
Ačkoliv by mohly být buňky v tomto stavu použity k experimentům, měly by být u buněk kultivovaných přes noc stanoveny fyziologické reakce (například možnost potlačení sekrece PTH a klidová hladina [Ca‘+]j). Primární kultura má rovněž tu výhodu, že buňky mohou být izotopově značeny až na rovnovážnou úroveň izotopu, což je nezbytné pro studie, při kterých se měří metabolizmus inositol fosfátu.
Následně po purifikaci na gradientu Percoll byly buňky několikrát promyty ve směsi (1:1) ITS' aHamova F12-Eaglova média modifikovaného podle Dulbecca (GIBCO) s přídavkem 50 pg/ml streptomycinu, 100 U/ml penicilinu a 5 pg/ml gentamicinu. ITS” je předpřipravené médium obsahující inzulín, transferin, selen a bovinní sérový albumin (BSA) s kyselinou linoleovou (Collaborative Research, Bedford, MA). Následně byly buňky přeneseny do plastikových lahví (75 a 150 cm3; Falcon) a inkubovány přes noc při 37 °C ve vlhké atmosféře s5% CO2. K těmto buněčným kulturám kultivovaným přes noc nebylo přidáváno sérum, protože přítomnost séra umožňuje buňkám, aby se přichytily k plastikovým stěnám a začaly proliferovat a diferencovat. Buněčné kultury připravené za podmínek zmíněných výše mohly být z lahví odstraněny jednoduše dekantací a vykazovaly stejnou životaschopnost jako čerstvě připravené buňky μ.
Purifikované buňky příštitných tělísek byly suspendovány v roztoku 1,25 mM CaCl2 - 2% BSA-PCB obsahujícím 1 μΜ acetyloxymethyl ester fura-2 a byly inkubovány při 37 °C po dobu 20 minut. Poté byly buňky krátce zcentrifugovány a suspendovány v pufru o stejném složení jaké měl předchozí pufr, ovšem již bez přítomnosti esteru fúra-2, a dále inkubovány při 37 °C po dobu 15 minut. Následně byly buňky dvakrát promyty PCB obsahujícím 0,5 mM CaCl2 a 0,5% BSA a ponechány při pokojové teplotě (přibližně 20 °C). Těsně před použitím byla buněčná suspenze pětkrát zředěna předehřátým roztokem 0,5 mM CaCl2-PCB, aby bylo dosaženo finální koncentrace 0,1% BSA. Koncentrace buněk vkyvetě použité k měření fluorescence byla 1 až 2 x 106 /ml.
Fluorescence buněk nasycených indikátorem byla měřena při 37 °C na spektrofluorimetru (Biomedical Instrumentation Group, Pennsylvania, Philadelphia, PA) vybaveném termostatovaným držákem kyvet a magnetickým míchadlem. Pro měření byla použita vlnová délka excitace 340 nm a vlnová délka emise byla měřena při 510 nm. Naměřené hodnoty fluorescence korespondují s hladinou cystolických Ca2+. Fluorescenční signály byly kalibrovány za použití digitoninu (finální koncentrace 50 pg/ml), kde byla stanovena hodnota maximální fluorescence (Fmax) a EGTA (finální koncentrace 10 mM, pH = 8,3), při použití kterého byla získána hodnota minimální fluorescence (Fnrá) a disociační konstanta 224 nm. Unikání barvy je závislé na teplotě a nej intenzivnější je během prvních dvou minut po zahřátí buněk v kyvetě. Poté se množství uniklé barvy zvyšuje jen nepatrně. Za účelem korekce kalibrace vzhledem k úniku barvy byly buňky umístěny do kyvety a míchány při 37 °C po dobu 2 až 3 minut. Poté byla buněčná suspenze z kyvety odstraněna, buňky byly krátce zcentrifugovány a supematant byl vrácen do prázdné kyvety. Supematant byl poté vystaven působení digitoninu a EGTA za účelem stanovení množství uniklé barvy. Toto množství obvykle představuje 10 až 15 % z celkového fluorescenčního signálu závislého na přítomnosti Ca2+. Odhad úniku barvy byl odečten od zdánlivé
-23CZ 292709 B6 konstanty Fmin. Příklad číslo 4: Použití buněk HEK 293/pHuPCaR 4,0 nasycených indikátorem fura-2 za účelem měření aktivity receptorů pro vápník.
Tento oddíl popisuje postupy použité ke stanovení aktivity receptorů pro vápník za využití buněk HEK 293/pHuPCaR 4,0 nasycených indikátorem fura-2. Buňky HEK 293 transfekované pHuPCaR 4,0 byly nasyceny indikátorem fura-2 pomocí inkubace buněk v Eaglově médiu modifikovaném podle Dulbecca pufrovaném roztokem 20 mM HEPES obsahujícím 5 μΜ fluor-3/AM po dobu jedné hodiny při pokojové teplotě. Poté byly buňky promyty Hankovým rovnovážným roztokem pufrovaným roztokem 20 mM HEPES obsahujícím 1 mM CaCh a 1 mM MgCh- Testované sloučeniny byly následně přidány k buňkám a byla stanovována fluorescence. Pro měření byla použita vlnová délka excitace 340 nm a vlnová délka emise byla měřena při 510 nm.
Příklad 5:
Měření schopnosti jednotlivých sloučenin modulovat aktivitu receptorů pro vápník
Schopnost různých sloučenin modulovat aktivitu receptorů pro vápník byla stanovována pomocí měření zvýšení [Ca2+]j v buňkách HEK 293 transfekovaných nukleovou kyselinou kódující pHuPCaR 4,0, které byly nasyceny indikátorem fura-2. Druhým systémem pro toto stanovení byly buňky příštitných tělísek nasycené indikátorem fura-2. Výsledky jednotlivých experimentů jsou shrnuty vtabulkách 1. a; 1. b. 1; 1. b. 2; 1. c a 2. V tabulkách 1. a, 1. b. 1, 1. b. 2, 1. c jsou shrnuty výsledky stanovení účinků jednotlivých sloučenin na aktivitu receptorů pro vápník při různých koncentracích těchto sloučenin. Účinky jednotlivých sloučenin na aktivitu receptorů pro vápník byly stanovovány jak je popsáno v příkladu číslo 4 (to znamená, že byly použity buňky HEK 293 transfekované nukleovou kyselinou kódující pHuPCaR 4,0, které byly nasyceny indikátorem fura-2).
V tabulce 2 jsou shrnuty výsledky jednotlivých experimentů, při kterých byla pro buňky HEK 293/pHuPCaR 4,0, nebo pro buňky příštitných tělísek, které byly nasyceny indikátorem fura-2, vypočítána hodnota konstanty EC50. Buňky byly nasyceny indikátorem fura-2 a stanovení bylo provedeno způsobem popsaným v příkladu číslo 2 (pro buňky příštitných tělísek) nebo v způsobem popsaným v příkladu číslo 3 (pro buňky HEK 293/pHuPCaR 4,0).
Tabulka 1. a. Kalcimimetické sloučeniny, které v koncentracích 3,3 ng/ml vyvolávají u buněk HEK-293 exprimujících lidský receptor pro vápník silnější než 40% odpověď.
Kód sloučeniny % aktivity při čtyřech koncentracích (ng/ml)
3300 330 33 3,3
Referenční sloučeniny R-568 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
24X 126 109 124 109
24Y 119 120 127 102
17J 116 118 122 102
25A 122 120 114 92
17E 116 110 110 92
24Z 138 138 135 90
14S 116 106 105 88
25E 132 129 122 85
17G 125 128 119 77
14T 126 125 17 77
17H 126 124 111 74
-24CZ 292709 B6
140 119 119 102 74
251 119 113 114 74
12J 131 130 113 68
121 115 111 93 68
25G 130 115 99 66
9R 108 101 64
12F 118 110 101 63
120 110 117 94 62
23Z 129 126 100 61
17M 115 99 59
16V 114 102 58
250 126 115 96 57
25J 119 123 105 56
16L 146 138 98 56
12N 115 106 102 55
16T 97 88 55
25U 107 107 95 55
17P 101 86 54
16Q 110 88 53
23E 137 113 102 53
17C 113 120 99 52
25L 97 97 85 52
8Z 101 97 52
17X 105 93 51
13R 132 98 51
170 112 96 51
23Q 122 114 98 51
16X 111 96 51
24V 127 98 71 50
130 115 94 50
17N 108 86 49
21V 122 116 99 48
24M 132 134 99 48
13U 108 79 47
24P 140 138 110 46
17Y 109 94 79 46
11X 100 76 45
25H 115 107 89 45
22J 99 71 45
9C 104 82 45
13S 102 87 45
10Q 103 100 84 44
13P 110 83 44
8K 98 81 44
13N 114 88 43
ION 106 97 77 43
12H 114 115 94 43
25P 90 81 75 41
18A 111 88 40
14L 109 78 40
-25CZ 292709 B6
Tabulka 1. b. 1. Kalcimimetické sloučeniny, které v koncentracích 33 ng/ml vyvolávají u buněk HEK-293 exprimujících lidský receptor pro vápník silnější než 40% odpověď.
Kód sloučeniny % aktivity při čtyřech koncentracích (ng/ml)
3300 330 33 3,3
Referenční sloučeniny R-568 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
12C 134 125 98 39
161 121 117 96 36
17D 108 91 38
17F 111 90 28
24C 116 113 87 32
25K 124 107 86 35
13F 125 122 85 38
21F 109 85 36
21S 132 131 85 34
10F 96 84 27
14R 106 107 84 37
13G 111 128 82 29
14Z 118 103 82 20
16N 122 159 82 8
8U 123 129 82 11
23W 117 97 81 25
12G 139 139 81 35
15G 113 80 32
25M 118 110 79 25
13V 110 79 33
14P 112 103 78 30
6T 123 129 78 15
14Q 101 78 35
17L 111 104 78 31
24K 106 78 30
24U 106 106 78 25
25Q 116 95 77 20
8J 104 77 39
23H 121 114 77 28
21C=4U 134 114 76 17
25F 97 85 76 28
16R 100 76 25
171 118 97 76 18
24J 103 75 31
210 109 75 37
24G 109 94 75 22
151 111 93 75 24
21D 104 75 17
20Y 117 95 74 24
10P 102 74 8
23M 113 97 74 26
14Y 109 73 17
17K 98 97 73 37
12E 117 121 73 23
17Z 99 73 37
16W 102 73 4
-26CZ 292709 B6
23K 106 107 72 24
25X 96 94 72 22
13 W 109 71 12
23P 125 99 70 22
18B 111 96 69 26
21Y 100 68 36
17W 92 67 13
23A 103 67 24
23G 127 93 67 13
13M 92 66 15
21U 104 104 66 18
21R 100 66 15
10S/10T 86 65 13
17R 98 65 13
13X 102 65 13
4N 100 65 13
21E 94 64 4
15J 80 75 64 13
22Y 114 64 28
21G 88 63 18
24L 105 62 10
10V 99 62 8
10W/10X 98 61 9
17B 92 61 19
23Y 106 87 61 16
11Y 103 61 20
Tabulka 1. b. 2. Kalcimimetické sloučeniny, které v koncentracích 33 ng/ml vyvolávají u buněk HEK-293 exprimujících lidský receptor pro vápník silnější než 40% odpověď.
Kód sloučeniny % aktivity při čtyřech koncentracích (ng/ml)
3300 330 33 3,3
Referenční sloučeniny
R-568 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
18C 99 87 60 18
23T 102 74 60 31
4V 93 59
8G 84 59 6
231 102 58 3
21M 102 58 17
240 137 114 58 8
3U 89 57
9A 82 56 6
12M 98 86 56 11
12B 130 110 56 4
21P 92 56 13
8T 85 55 13
10L/10M 99 55 4
241 109 84 55 11
14N 89 55 15
23R 104 86 54 13
23S 97 53 3
-27CZ 292709 B6
21T 133 112 53 3
10W/10X 81 53 4
13T 90 53 6
6R 94 52 7
201 87 52 12
24A 122 85 52 9
12D 128 109 52 5
6X 84 52 10
18T 99 74 52 14
21X 119 101 51 2
23J 102 61 51 29
10Z 96 51 5
16Z 88 51 9
23N 96 50 2
16U 85 50 4
11D 96 50 4
23X 94 49 1
17A 88 49 7
20J 80 48 8
22X 86 48 10
23U 87 48 3
9Z 74 48 4
16J 92 76 47 31
25N 94 73 46 8
4P 81 46 8
230 111 79 46 13
13Q 95 46 5
4G 83 46
12Y 80 46 10
12L 88 45 10
23F 82 45 5
11W 81 44 2
8H 88 44 7
25V 89 59 43 26
25W 95 69 42 8
10R 82 42 7
21N 124 98 42 4
8S 73 42 7
8X 75 40 19
13E 123 94 40 2
Tabulka l.c. Kalcimimetické sloučeniny, které v koncentracích 330 ng/ml vyvolávají u buněk
HEK-293 exprimujících lidský receptor pro vápník silnější než 40% odpověď.
Kód sloučeniny 3300 % aktivity při čtyřech koncentracích (ng/ml) 3,3
330 33
Referenční sloučeniny R568 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
7X 85
3H 84
3L 81 28
160 129 81 21 2
-28CZ 292709 B6
8O/8Q 124 80 14 0
14A 98 78 10 7
23L 107 77 37 9
1T 76
7W 76
4H 77 37
8D 75
5M 73 21
4U 72
24E 94 71 35 6
16M 130 68 11 4
4M 68 34
2S 67 29
17V 91 66 27 -1
2X 66 15
23D 91 66 35 13
4P 65 32
5B/5C 65 20
3M 64 19
16K 78 62 36 8
5D 62 18
4D 61 13
24B 76 61 34 11
24H 81 60 32 13
5L 60 16
2X 59 10
5G 58 16
3V 56 14
2Q 56 4
14B 75 55 11 4
13Z 93 54 22 5
8A 54
24D 87 53 34 39
ID 53
131 85 52 3 1
3B . 52 15
8C 51
14H 49 5 5
7U 112 49
5E 48 7
13H 88 48 36 12
13Y 106 47 2 4
4J 47 8
141 80 45 11 7
4B 45 8
3D 45 4
3R 45 2
3A 41 7
14J 55 41 6 5
41 40 9
-29CZ 292709 B6
Tabulka 2: Arylalkylaminová kalcimimetika podle obrázku 1 aktivní na receptorech parathyroidních buněk in vitro (EC5o<5jiM)
Kód sloučeniny, viz obr. 1 EC50 (μΜ) Kód sloučeniny, viz obr. 1 EC50 (μΜ)
NPS R-467 2,00 11X 0,83
NPS R-568 0,60 11Y 2,80
3U 0,64 12L 1,70
3V 1,80 12U 1,20
4A 1,40 12V 0,42
AB 2,00 12W 3,20
4C 2,00 12Y 2,00
4D 4,40 12Z 0,11
4G 1,80 13Q ca. 0,80
4H 13R 0,25
4J 2,20 13S <0,13
4M 2,10 13U 0,19
4N 0,80 13X <0,75
4P 1,60 14L 0,26
4R/6V 4,20 14Q 0,47
4S 3,30 14U 0,13
4T/4U 1,60 14V 1,70
4V 2,50 14Y 0,38
4W 2,30 15G ca. 0,50
4Y 1,30 16Q 0,04
4Z/5A 4,40 16R 0,36
5B/5C 2,80 16T 0,04
5W/5Y 3,60 16V <0,13
6E 2,70 16W 0,59
6F (R,R-) 0,83 16X 0,10
6R 3,40 17M 0,15
6T 2,90 170 0,04
6X 2,50 17P 0,04
7W 3,20 17R 0,39
7X 1,10 17W 0,43
8D 2,50 17X 0,02
8J 0,78 20F <1,00
8K 1,30 201 >1,00
8R 2,60 20J >3,00
8S 1,70 20R 2,40
8T 1,80 20S 4,20
8U 0,44 21D 3,00
8X 0,76 21F 0,38
8Z 0,40 21G 1,10
9C 0,60 210 0,26
9D 1,40 21P 0,43
9R 0,25 21Q 1,40
9S 4,80 21R 0,37
10F 0,89 25C >2,00
11D 1,80 25D 0,02
-30CZ 292709 B6
Příklady 6 až 17:
Syntéza sloučenin podle vynálezu
Sloučeniny podle vynálezu mohou být syntetizovány pomocí standardních technik, například takových, které jsou popsány v Nemeth a další, PCT7US93/01642, Mezinárodní patentová přihláška WO 94/18959. Níže jsou uvedeny reprezentativní příklady syntéz sloučenin podle vynálezu.
Syntéza sloučenin 9R, 14U, a 17P probíhala reduktivní aminací komerčně dostupných aldehydů nebo ketonů s primárním aminem v přítomnosti kyanoborohydridu sodného nebo triacetyloxyborohydridu sodného.
Sloučeniny 11Y, 12H, 12K, 12M, 14S, 14T, 16L - O, 17E, 17G, 17J, 24X, 24Y, 25A, 25R - 25K, and 250 byly připraveny podobným způsobem.
Při syntéze těchto tří sloučeniny (9R, 14U, a 16P) byly při použití triacetyloxyborohydridu sodného vyšší výtěžky požadovaných diastereoizomerů s vyšší diastereoselektivitou, než při použití kyanoborohydridu sodného. Obohacené směsi byla dále purifikovány až na jednotlivé diastereomery pomocí HPLC s normální fází nebo rekrystalizací z organických rozpouštědel.
Sloučeniny 8J, 8U, 1IX, 17M a 25Y byly připraveny kondenzací primárního aminu s aldehydem nebo ketonem v přítomnosti izopropoxidu titaničitého. Vzniklé intermediátní iminy redukovány in šitu pomocí kyanoborohydridu sodného, borohydridu sodného nebo triacetyloxyborohydridu sodného. Intermediátní enamin pro syntézu sloučeniny 8U byl katalyticky redukován pomocí hydroxidu palladnatého nebo uhlíku.
Sloučeniny 12U, 12V and 12Z byly připraveny kondenzací aminu s nitrilem v přítomnosti diizobutylaluminiumhydridu (DIBAL - H). Vzniklý intermediátní imin byl redukován in šitu pomocí kyanoborohydridu sodného nebo borohydridu sodného. Intermediátní alkeny (sloučeniny 12U a 12V) byly redukovány katalytickou hydrogenací v ethanolu pomocí palladia na uhlíku.
Sloučeniny byly převedeny na odpovídající bílé krystalické hydrochloridy vytřepáním pomocí HC1 z etherického roztoku volné báze.
Aminy použité pro tyto syntézy byly získány od firmy Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, nebo od firmy Calgene Corp., Warren, NJ, nebo byly připraveny syntézou pomocí známých technik. Všechny ostatní chemikálie byly získány od firmy Aldrich Chemical Co.
Příklad 6:
Syntéza sloučeniny 25Y
N-(3-(2-fenyl)propyl)-2-(l-naftyl)ethylamin
Směs 3-fenyl-l-propylaminu (1,35 mg, 1 mmol), l'-acetonaftonu (170 mg, 1 mmol) a izopropoxidu titaničitého (355 mg, 1,3 mmol) se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. K reakční směsi se přidá 1M ethanolický roztok kyanoborohydridu sodného (1 ml) a směs se dále míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se poté naředí etherem a vytřepává vodou (0,1 ml). Reakční směs se odstředí a je odebrána eterická fáze, která se zakoncentruje do mléčné olejovité kapaliny.Malá část tohoto materiálu (10 mg) se čistí pomocí HPLC (Phenomenex, 1,0 x 25 cm, 5 pm silikagel) v gradientu dichlormethanu až k 10% methanolu vdichlormethanu s obsahem 0,1 % izopropylmethanu. Po přečištění vznikl produkt, obsahující čistou
-31 CZ 292709 B6 volnou bázi s těmito vlastnostmi: GC/EI - MS (Rt = 10,48 min) m/z (rel. int.) 289, (M+, 11), 274 (63), 184 (5), 162 (5), 155 (100), 141 (18), 115 (8), 91 (45), 77 (5).
Příklad 7:
Syntéza sloučeniny 8J hydrochlorid N-(3-fenylpropyl)-l-(3-thiomethylfenyl)ethylaminu
3'-Aminoacetofenon (2,7 g, 20 mmol) se rozpustí ve 4 ml koncentrované HC1, 4 g ledu a 8 ml vody. Roztok se ochladí na 0 °C a po dobu 5 minut se přidává dusitan sodný (1,45 g, 21 mmol) rozpuštěný ve 3 až 5 ml vody, přičemž se teplota reakční směsi udržuje pod 6 °C. Thiomethoxid sodný (1,75 g, 25 mmol) se rozpustí v 5 ml vody a ochladí na 0 °C. K tomuto roztoku se přidává po 10 minut diazoniová sůl a teplota se přitom udržuje pod 10 °C. Reakční směs se míchá po dobu další hodiny, přičemž se teplota postupně zvyšuje až dosáhne hodnoty vnější teploty. Reakční směs se poté vytřepává ve směsi etheru a vody. Etherová fáze se oddělí a poté se promyje hydrogenuhličitanem sodným a chloridem sodným. Pak se fáze suší pomocí síranu sodného. Ether se nechá odpařit za 74% výtěžku 3'-thiomethyl-acetofenonu. Surový materiál se čistí destilací za sníženého tlaku.
3-Fenylpropylamin (0,13 g, 1 mmol), 3-thiomethylacetofenon (0,17 g, 1 mmol) a izopropoxid titaničitý (0,38 g, 1,25 mmol) se smísí a nechají se 4 hodiny v klidu. Poté se přidá ethanol (1 ml) a kyanoborohydrid sodný (0,063 g, 1 mmol) a reakční směs se míchá přes noc. Poté se k reakční směsi přidají 4 ml etheru a 200 μΐ vody. Směs se míchá a poté se v centrifuze oddělí nerozpustné látky. Etherová vrstva se oddělí od sraženiny a rozpouštědlo se odstranění ve vakuu. Vzniklý olej se znovu rozpustí v dichlormethanu a sloučenina se čistí preparativní TLC na silikagelu. Jako elučního činidla se přitom použije 3% směs methanol/dichlormethan. Titulní sloučenina se získá jako čistý olej: GC/EI - MS (R, = 7,64 min) m/z (ret int.) 285 (M', 18), 270 (90), 180 (17), 151 (100,136 (32), 104 (17), 91 (54), 77 (13).
Příklad 8:
Syntéza sloučeniny 8U hydrochlorid N-3-(2-methoxyfenyl)-l-propyl-(R)-3-methoxy-a-methylbenzylaminu
Směs (R}-(+)-3-methoxy-a-methylbenzylaminu (3,02 g, 20 mmol), 2-methoxycinnamaldehydu (3,24 g, 20 mmol) a izopropoxidu titaničitého (9,53 g, 30 mmol, 1,5 ekv.) se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, poté se k ní přidá 1M ethanolický roztok kyanoborohydridu sodného (20 ml). Reakční směs se míchá přes noc (16 hodin), pak se přidá diethylether, a vytřepává se vodou (1,44 ml, 80 mmol, 4 ekv.). Po důkladném promíchání (1 hodinu) se reakční směs odstředí a etherová fáze se odejme a zakoncentruje na olej. Tento materiál se rozpustí v ledové (koncentrované) kyselině octové, vytřepává se s hydroxidem palladia a hydrogenuje se 2 hodiny vodíkem o tlaku 413 kPa, při teplotě místnosti.
Katalyzátor se odstraní filtrací, vzniklý roztok se zakoncentruje do podoby hustého oleje. Tento materiál se rozpustí v dichlormethanu a neutralizuje se přídavkem IN NaOH. Dichlormethanový roztok se oddělí od vodné fáze a suší se pomocí bezvodého uhličitanu draselného do formy oleje. Tento se poté rozpustí etherem a vytřepává se 1M HC1 v diethyletheru. Shromáždí se vzniklý precipitát (bílá pevná látka), který se promyje díethyletherem a vysuší na vzduchu.
Vzniklá volná báze má následující vlastnosti CC/EI - MS (Rt - 9,69 min) m/z (rel. int.) 299 (M+, 21), 284 (100), 164 (17), 150 (8), 135 (81), 121 (40), 102 (17), 91 (43), 77 (18).
-32CZ 292709 B6
Příklad 9:
Syntéza sloučeniny 9R hydrochlorid (R)-N-( 1 -(2-naftyl)ethyl)-(R)-l -(1 -naftyl)ethyl-aminu
Směs (R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (10,0 g, 58 mmol), 2'-acetonaftonu (9,4 g; 56 mmol), izopropoxidu titaničitého (20,7 g, 73,0 mmol) a absolutního ethanolu (100 ml) se po 3 hodiny zahřívá na 60 °C. Poté se přidá kyanoborohydrid sodný (NaCNBH, 0,67 g, 58,4 mmol). Reakční směs se míchá 18 hodin za teploty místnosti. Poté se k reakční směsi přidá 1 ml etheru a 10 ml vody, a vzniklý precipitát se odstraní centrifugací. Supematant se nechá odpařit ve vakuu a surový produkt se čtyřikrát rekrystalizuje z horkého hexanu za vzniku 1,5 g čistého (98 %) diastereomeru. Volná báze se rozpustí v hexanu, přefiltruje, a poté se přidá HC1 s etherem, čímž se vysráží produkt jako bílá sraženina s výtěžkem 1,1 g (6 %), teplota tání: měkne mezi 200 až 240 °C.
Příklad 10:
Syntéza sloučeniny llx hydrochlorid N-(4-izopropylbenzyl)-(R)-l-( l-naftyl)ethylaminu
Směs (R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (1,06 g, 6,2 mmol), 4-izopropylbenzaldehydu (0,92 g, 6,2 mmol) a izopropoxidu titaničitého (2,2 g, 7,7 mmol) se 5 minut zahřívá na teplotu 100 °C a poté se 4 hodiny míchá za teploty místnosti. Poté se přidá kyanoborohydrid sodný (NaCNBHj) (0,39 g, 6,2 mmol) s 1 ml ethanolu. Reakční směs se míchá 18 hodin za teploty místnosti. Poté se k reakční směsi přidá 100 ml etheru a 1 ml vody a vzniklý precipitát se odstraní centrifugací. Supematant se nechá odpařit ve vakuu a surový produkt se chromatograficky rozdělí na silikagelu na koloně 50 mm x 30 cm. Jako elučního činidla se použije 1 % methanolu v chloroformu. Chromatograficky rozdělený materiál se poté rozpustí v hexanu a produkt se vysráží přídavkem HC1 s etherem jako bílá sraženina. Výtěžek 0,67 g, 35 %, teplota tání: 257 až 259 °C.
Příklad 11:
Syntéza sloučeniny 12U hydrochlorid N-3-(2-methylfenyl)-l-propyl-(R)-3-methoxy-a-methylbenzylaminu
Roztok 2-methylcinnamonitrilu (1,43 g, 10 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se ochladí na 0 °C a pak se po dobu 15 minut po kapkách přidává 1M roztok diizobutylaluminiumhydridu (10 ml v dichlormethanu). Reakční směs se poté 15 minut míchá při teplotě 0 °C a po dalších 15 minut se kní po kapkách přidává 1M roztok (R)-(+)-3-methoxy-a-methylbenzylaminu (1,51 g, 10 mmol) v dichlormethanu (10 ml). Reakční směs se poté další 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C a pak se nalije do 100 ml ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (1 g, 16 mmol). Reakční směs se v dalším kroku míchá 48 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se poté naředí etherem a neutralizuje se 1N NaOH.
Etherická fáze se odstraní a vysuší se bezvodým uhličitanem draselným za vzniku olejovité kapaliny. Tento materiál se chromatograficky přečistí na silikagelu. Jako elučního činidla se přitom použije gradientu od čistého dichlormethanu po 5% methanol v dichlormethanu. Výtěžkem je čistý nenasycený meziprodukt s vlastnostmi GC/EI - MS (Rt = 10,06 min) m/z (rel. int.) 281 (M+, 17), 266 (59), 176 (19), 146 (65), 135 (73), 131 (100), 91 (21), 77 (13).
-33CZ 292709 B6
Tento nenasycený meziprodukt v ethanolu se hydrogenuje v přítomnosti palladia na uhlíku ve vodíkové atmosféře za tlaku 1,013.105 Pa. Hydrogenace probíhá 16 hodin při teplotě místnosti. Produkt této reakce se převede na hydrochloridovou sůl vytřepáním 1M HC1 v diethyletheru. Tento materiál (čistá volná báze) vykazoval následující vlastnosti GC/EI - MS (R< = 9,31 min), m/z (rel. int.) 283 (M+, 21), 268 (100), 164 (12), 148 (8), 135 (85), 121 (12), 105 (49), 91 (23), 77 (21).
Příklad 12:
Syntéza sloučeniny 12V hydrochlorid N-3-(3-methylfenyl)-l-propyl-(R)-3-methoxy-a-methylbenzylaminu
Sloučenina se připraví způsobem popsaným v příkladu 11, pouze stím rozdílem, že se použije 2-methylcinnamonitril. Nenasyceným meziproduktem je čistá složka s vlastnostmi GC/EI - MS (R<= 10,21 min) m/z (rel. int.) 281 (M+, 57), 266 (86), 146 (98), 135 (88), 131 (100), 115 (43), 102 (26), 91 (43), 77 (18). Redukce této látky a tvorba hydrochloridu probíhala způsobem popsaným v příkladu 11. Vlastnosti produktu (čisté volné báze) byly následující GC/EI - MS (R< = 9,18 min), m/z (rel. int.) 283 (M+, 19), 268(100), 164(11), 148 (8), 135 (76), 121 (16), 105 (45),91 (23), 77(21).
Příklad 13:
Syntéza sloučeniny 12Z hydrochlorid N-3-(2-chlorfenyl)-l-propyl-(R)-l-( l-naftyl)-ethylaminu
Sloučenina se připraví způsobem popsaným v příkladu 11, pouze stím rozdílem, že se použije 2-chlorhydrocinnamonitril a (R)-l-(+)-l-(l-naftyl)ethylamin v lOmilimolámím měřítku. Meziprodukt se chromatografícky přečistí na silikagelu. Jako elučního činidla se přitom použije gradientu od čistého dichlormethanu po 5% methanol v dichlormethanu. Vzniká tak chromatografícky čistá složka (testováno TLC s 5% methanolem v dichlormethanu jakožto elučním činidlem). Hydrochlorid tohoto meziproduktu se připraví pomocí 1M HC1 v diethyletheru.
Příklad 14:
Syntéza sloučeniny 14U hydrochlorid (R)-N-(l-(4-methoxyfenyl)ethyl)-(R)-l-(l-naftyl)ethylaminu
Směs R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (1,1 g, 6,2 mmol), 4'-methoxyacetofenonu (0,93 g, 6,2 mmol), izopropoxidu titaničitého (2,2 g, 7,7 mmol) a absolutního ethanolu (1 ml) se 3 hodiny zahřívá na 60 °C. Poté se přidá kyanoborohydrid sodný (NaCNBH3) (0,39 g, 6,2 mmol) a reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Poté se přidá 200 ml etheru a 2 ml vody. Vzniklá sraženina se poté odstraní centrifugací. Supematant se nechá odpařit ve vakuu a surový produkt se chromatografícky rozdělí na silikagelu (kolona 25 mm x 25 cm). Jakožto elučního činidla se použije 1% methanol v chloroformu. Část tohoto produktu se použije na HPLC chromatografíi na koloně Salectosil, 5 μΜ silikagel; 25 cm x 10,0 mm (Fenomenex, Torrance, CA) při průtokové rychlosti 4 ml/minutu. UV detekce byla prováděna při vlnové délce 275 nm. Jakožto elučního činidla bylo použito směsi 12 % ethylacetátu s 88 % hexanu. Eluční čas byl
-34CZ 292709 B6
12,0 minut. Pomocí HPLC purifíkovaný diastereomer se poté rozpustí v hexanu a produkt se poté vysráží přídavkem HC1 s etherem jako bílá sraženina (20 mg), teplota tání 209 až 210 °C.
Příklad 15:
Syntéza sloučeniny 17M hydrochlorid N-(3-chlor-4-methoxybenzyl)-(R)-l-( l-naftyl)ethylaminu
Směs (R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (6,6 g, 30 mmol), 3'-chlor-4'-methoxybenzaldehydu (6,6 g, 39 mmol) a izopropoxidu titaničitého (13,8 g, 48,8 mmol) se 30 ml absolutního ethanolu se 30 minut zahřívá na 80 °C a poté se míchá 3 hodiny za teploty místnosti. Poté se přidá kyanoborohydrid sodný (NaCNBH3) (2,45 g, 39 mmol). Reakční směs se 18 hodin míchá za teploty místnosti. Po této době se k reakční směsi přidá 100 ml etheru a 2 ml vody a vzniklá sraženina se poté odstraní centrifugách Supematant se odpaří ve vakuu a surový produkt se chromatografícky přečistí na silikagelu (50 mm x 30 cm). Jako elučního činidla se použije dichlormethanu. Chromatografícky rozdělený materiál se poté rozpustí v 500 ml hexanu a odbarví se pomocí filtru Nořit® (0,2 pm). Produkt se poté vysráží přídavkem HC1 s etherem jako bílá sraženina (10,2 mg, výtěžek 56 %), teplota tání 241 až 242 °C.
Příklad 16:
Syntéza sloučeniny 17P
4-Methoxy-3-methylacetofenon (prekurzor sloučeniny 17P). Směs 4'-hydroxy-3'-methylacetofenonu (5,0 g, 33,3 mmol), methyljodidu (5,7 g, 40,0 mmol), granulovaného bezvodého uhličitanu draselného (23,0 g, 167 mmol), a acetonu (250 ml) se míchá 3 hodiny. Poté se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu, filtrací se odstraní anorganické soli a nechá se odpařit ve vakuu. Surový produkt se rozpustí ve 100 ml etheru a promyje se 2 x 20 ml vody. Organická fáze se vysuší síranem sodným a nechá se odpařit. Výtěžek produktu je 4,5 g (82,4 %). Získaný keton se použije v následující reakci bez dalšího přečišťování.
hydrochlorid (R)-N-( l-(4-methoxy-3-methylfenyl)ethyl)-(R)-l-( 1-nafty l)ethy laminu (Sloučenina 17P)
Směs (R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (4,24 g, 24,8 mmol), 4'-methoxy-3'-methylacetofenonu (4,06 g, 24,8 mmol), a izopropoxidu titaničitého (8,8 g, 30,9 mmol) s 1 ml absolutního ethanolu se zahřívá 2 hodiny na 100 °C. Poté se přidá 45 ml izopropanolu a reakční směs se ochladí na 10 °C v ledové lázni. Poté se po částech 15 minut přidává triacetyloxyborohydrid sodný (NaHB(O2CCH3)3, 10,5 g, 49,5 mmol). Reakční směs se 18 hodin zahřívá na teplotu 70 °C. Poté se ochladí na pokojovou teplotu a nalije se do 400 ml etheru. Suspenze se zcentrifuguje, supernatant se odebere a peleta se promyje 400 ml etheru. Organická rozpouštědla se nechají odpařit ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve 400 ml etheru a promyje se 1N NaOH (4 x 50 ml) a 2 x 50 ml vody. Organická fáze se vysuší pomocí síranu sodného, přefiltruje se a nechá se odpařit ve vakuu.
K. vlhkému zbytku se přidá absolutní ethanol, který se poté důkladně odpaří na rotační odparce do formy olejovité kapaliny. Směs se poté chromatografícky rozdělí na silikagelu (50 mm x 30 cm). Jako elučního činidla se použije 1% methanol, 1% IPA:CHC13. Výtěžek činí 4,8 g oleje.
Požadovaný diastereomer se dále čistí pomocí HPLC chromatografie [SUPELCOSIL™ PLC - Si, 18 pm silikagel; 25 cm x 21,2 mm, výrobce Supelco; lne., Bellefonte, PA). Průtoková rychlost 7 ml rozpouštědla za minutu, UV detekce při vlnové délce 275 nm. Jako eluční činidlo se použije směs 20 % ethylacetátu a 80 % hexanu, eluční čas je 9,5 - 11,0 min). Nástřiky směsi (800 μΐ
-35CZ 292709 B6 alikvoty obsahující 100 mg/ml eluentu) poskytly 65 mg požadovaného izomeru. Několikanásobným nástřikem do HPLC aparatury bylo dosaženo výtěžku 1 g purifikovaného produktu. Takto rozdělený materiál se rozpustí v 50 ml hexanu a převede se na hydrochlorid přídavkem HC1 s etherem. Sůl se oddělí od rozpouštědla na fritě a promyje se hexanem. Výtěžek činí 1,0 g 5 bílé sraženiny s teplotou tání 204 až 205 °C.
Příklad 17:
Syntéza sloučeniny 17X
3-Chlor-4-methoxybenzaldehyd
Směs 3-chlor-4-hydroxybenzaldehydu (25 g, 160 mmol), methyljodidu (27,25 g, 192 mmol), 15 bezvodého granulovaného uhličitanu draselného (110,6 g, 800 mmol) a acetonu (300 ml) se hodiny zahřívá pod zpětným chladičem. Reakční směs se poté ochladí na pokojovou teplotu. Poté se přidá 500 ml diethyletheru a směs se přefiltruje přes papírový filtr, aby se odstranily anorganické nerozpustné složky. Filtrát se nechá odpařit za sníženého tlaku, rozpustí se v 800 ml diethyletheru a promyje se 3 x 100 ml 0,lN NaOH. Organická fáze se suší pomocí síranu 20 sodného a nechá se odpařit ve vakuu. Výtěžek surového produktu činí 24 g (92 %). Tento materiál se dále chromatograficky čistí na silikagelové koloně (50 mm x 30 cm). Jako elučního činidla se přitom použije směs hexan/ethylacetát 5:1. Výtěžek činí 15,02 g (56 %) produktu ve formě bílé sraženiny s těmito vlastnostmi: TLC (hexan - EtOAc, 5:1) Rt = 0,24; GC Rt = 4,75 min; MS (El) m/z 170 (M+), 172 (M+2).
-Methyl-(3 '-chlor-4'-methoxybenzyl)alkohol
Směs 3-chlor~4-methoxybenzaldehydu (13 g, 76,5 mmol), methylmagneziumchloridu (52 g, 153 mmol) a THF (300 ml) se 3 hodiny zahřívá pod zpětným chladičem. Reakční směs se poté 30 ochladí na teplotu místnosti. Poté se přidá po kapkách 6 ml nasyceného roztoku NH4CI a nato
500 ml diethyletheru a směs se přefiltruje přes filtrační papír, aby se odstranily nerozpustné anorganické složky. Filtrát se nechá odpařit za sníženého tlaku a vzniklá pevná látka se rozpustí ve 300 ml diethyletheru. Poté se promyje 4 x 25 ml vody. Organická fáze se vysuší pomocí síranu sodného a nechá se odpařit ve vakuu. Výtěžek surového produktu činí 11,3 g, (80 %). 35 Tento materiál se dále chromatograficky čistí na silikagelové koloně (50 mm x 30 cm). Jako elučního činidla se přitom použije dimethylchlorid. Výtěžek činí 11,3 g (63 %) produktu ve formě olejovité kapaliny s těmito vlastnostmi: TLC (CH2CI2) R, = 0, 25; GC Rt = 5, 30 min; MS (El) m/z 186 (M+), 188 (M+2).
3'-chlor-4'-methoxyacetofenon
Směs l-methyl-(3'-Chlor-4'-methoxybenzyl)alkoholu (7,6 g, 41 mmol), pyridiniumchlorochromátu (PCC, 13,16 g, 61,5 mmol) ve 300 ml dichlormethanu se 2 hodiny míchá za teploty místnosti. Poté se přidá 1000 ml diethyletheru a vzniklá směs se umístí na chromatografickou 45 kolonu obsahující silikagel (50 mm x 30 cm). Jako eluční činidlo se použije diethylether.
Výtěžek surového tuhého produktu činí 7,3 g, (97 %). Analýzou tohoto materiálu pomocí GC byla prokázána jeho 99% čistota. Proto byl použit pro další reakce bez dalšího přečištění. TLC (diethylether) Rt = 1,0; GC Rt = 5,3 min; MS (El) m/z 184 (M+l) 184 (M+2).
(R,R)-N-(l-Ethyl-4'-methoxy-3'-chlorfenyl)-l-(l-naftylethyl)amin
Směs 3'-chlor-4'-methoxyacetofenonu (5,3 g, 29 mmol), (R)-(+)-l-(l-naftyl)ethylaminu (4,98 g, 29 mmol), izopropoxidu titaničitého (10,2 g, 36 mmol) a izopropanolu (20 ml) se 55 3 hodiny zahřívá na 100 °C. Poté se po částech 10 minut přidává triacetyloxyborohydrid sodný
-36CZ 292709 B6 (NaBH(O2CCH3); 12,29 g, 58 mmol). Reakční směs se 30 minut zahřívá pod zpětným chladičem, poté se 1 hodinu míchá za teploty místnosti. Směs se poté nalije do 500 ml diethyletheru. Po přídavku 2 ml vody se ze suspenze odstraní centrifugací jemné sražené částečky solí titanu. Supematant se odebere a peleta se promyje 500 ml etheru. Spojené organické fáze se vysuší pomocí síranu sodného a poté se nechají odpařit ve vakuu. Výtěžek surového tuhého produktu činí 6,81 g, (70 %).
Tento materiál se dále chromatograficky čistí na silikagelu (50 mm x 30 cm). Jako elučního činidla se použije směs 3 % methanolu s 97 % dichlormethanu. Výsledný meziprodukt má formu olejovité kapaliny (2,01 g). Diastereomer se dále čistí rekrystalizací. Volná báze (1,98 g) se převede na svůj hydrochlorid přídavkem HC1 s etherem. Tato sůl se rozpustí v 65 ml horkého izopropanolu (65 ml) a roztok se přefiltruje přes papírový filtr.
Filtrát se nechá odpařit ve vakuu a odparek se rozpustí v 30 ml izopropanolu. Po 18hodinovém stání za teploty místnosti se odebere krystalická pevná látka, promyje se 20 ml studeného izopropanolu a vysuší se. Výtěžek činí 0,87 g, (40 % volné báze) diastereomemě čistého hydrochloridu: teplota tání 236 až 237 °C; TLC (methanol/dichlormethan (99:1)) Rt = 0,25; GC R< = 11,06 min; FTIR (v peletě KBr, cm - 1), 3433, 2950, 2931,2853,2803,2659,2608,2497,1604,1595,1504, 1461, 1444, 1268, 1260, 1067, 1021,802, 781, 733; MS (EI)m/z339 (M+),341 (M+2).
Příklad 18:
Protokol dodatečných syntéz. Příprava sloučenin 22Z a 23A
K. míchanému roztoku hydridu sodného (2,173 g, 60% roztoku v oleji, 54,325 mmol) ve 100 ml dimethylformamidu se po kapkách přidá triethylfosfonoacetát (12,47 g, 55,65 mmol). Reakční směs se poté 30 minut míchá za teploty místnosti. Po této době se po kapkách přidá roztok m-trifluoromethoxybenzaldehydu (10,0 g, 52, 6 mmol) v 50 ml dimethylformamidu, roztok se 30 minut míchá za teploty místnosti a dalších 30 minut při teplotě 100 °C. Reakce se zastaví přídavkem vody, přenese se do dělicí nálevky s diethyletherem. Etherická fáze (50 ml) se čtyřikrát promyje 500 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, přefiltruje se a koncentruje se. Produktem je ethyltrifluormethoxycinnamát ve formě olejovité kapaliny s následujícími vlastnostmi m/z (rel. int.) 260 (M+, 19), 232 (16), 215 (100), 187 (21), 101 (28).
Ethylester ve 100 ml ethanolu se redukuje ve vodíkové atmosféře 414 kPa (60 p.s.i.). Jako katalyzátoru se přitom použije 10 % hmotnostních hydroxidu palladnatého. Po redukci (2 hodiny, teplota místnosti) se reakční směs přefiltruje a koncentruje. Produktem je ethyl-m-trifluormethoxyhydrocinnamát ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 262 (M+, 16), 217 (7), 188 (100), 175 (28), 103 (31), 91 (18), 77 (23).
Nasycený ethylester se 16 hodin hydrolyzuje v roztoku ethanol - 10 M hydroxid sodný (1:1). Po dokončení hydrolýzy se roztok okyselí a produkt se vytřepe do diethyletheru. Etherická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zakoncentruje se. Produktem je m-trifluormethoxyhydrocinnová kyselina ve formě pevné látky s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 234 (M+, 46), 188 (100), 174 (65), 103 (27), 91 (12), 77 (17).
Vzniklá kyselina se 4 hodiny míchá v přebytku thionylchloridu za teploty místnosti. Přebytek thionylchloridu se odpaří za sníženého tlaku a teploty 100 °C. Produktem je m-trifluormethoxyhydrocinnamylchlorid ve formě olejovité kapaliny. Produkt se dále použije bez dalšího přečištění.
Roztok m-trifluormethoxyhydrocinnamylchloridu (9,8 g, 39 mmol) v tetrahydrofuranu se ochladí na -78 °C a po kapkách se k němu přidává 13 ml 3M roztoku methylmagneziumbromidu v tetra
-37CZ 292709 B6 hydrofuranu (39 mmol). Reakční směs se 4 hodiny míchá za teploty -78 °C a pak 8 hodin za teploty místnosti. Reakce se ukončí zředěnou HC1. Reakční směs se vytřepe do diethyletheru, ether se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, přefiltruje se a zakoncentruje se do olejovité kapaliny. Chromatografícky lze tento materiál na silikagelu v hexan-acetonovém gradientu 5 rozdělit a vyčistit tak 4-(3-trifluormethoxyfenyl)-2-butanon jako olejovitou kapalinu s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 232 (M+, 68), 217 (7), 189 (59), 175 (31), 103 (28), 43 (100).
Roztok 4-(3-trifluormethoxyfenyl)-2-butanonu (2,32 g, 10 mmol), (R)-l-(3-methanoloxyfenyl)ethylaminu (1,51 g, 7,0 mmol) a izopropoxidu titaničitého (3,55 g, 12,5 mmol) se 4 hodiny 10 míchá za teploty místnosti. K reakční směsi se poté přidá 10 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (10 mmol) a reakční směs se míchá 16 hodin za teploty místnosti. Reakční směs se poté naředí 50 ml diethyletheru vytřepává se s 0,72 ml vod (40 mmol).
Po důkladném protřepání se roztok odstředí a etherická fáze se dekantuje a zakoncentruje do 15 formy tuhé olejovité látky. Odparek se suspenduje v diethyletheru, přefiltruje se přes filtr
0,45 μιη CR PTFE Acrodisc a zakoncentruje se. Produktem je čirý olej. Po opakované preparativní tenkovrstevné chromatografii za použití 5 % methanolu v chloroformu jako elučního činidla vznikají dva diastereoizomery: (S,R)-N-[4-(3-trifluormethoxyfenyl)-2-butyl]-l-(3methoxyfenyl)ethylamin - sloučenina 22z - s vlastnostmi (m/z (rel. int.) 367 (M+, 3), 352 (20), 20 232 (4), 178 (47), 135 (100), 105 (14), 91 (10), 77 (11)) a (R,R)-N-[4-(3-trifluormethoxyfenyl)2-butyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin - sloučenina 23A; m/z (rel. int.) 367 (M+, 3), 352 (19), 232 (7), 178 (43), 135 (100), 105 (19), 91 (10), 77 (11).
Příprava sloučenin 22X a 22Y
Podobným způsobem se smísí stejná molámí množství 4-(3-trifluormethoxyfenyl)-2-butanonu;
(R)-l-(l-naftyl)ethylaminu a 1,25 ekvivalentu izopropoxidu titaničitého a intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografii za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (S,R)-N-(4-(330 trifluormethoxyfenyl)-2-butyl)-l-(l-naftyl)ethylamin, sloučenina 22X s následujícími vlastnostmi: múz (rel. int.) 387 (NT, 3), 372 (15), 198 (15), 176 (12), 155 (100), 128 (8), 115 (6), 109 (4), 103 (5), 77 (8) a (R,R)-N-[4-(3-trifluormethoxyfenyl)-2-butyl]-l-(l-naftyl)ethylamin, sloučenina 22Y, s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 387 (M+, 2), 372 (12), 198 (16), 176 (11), 155 (100), 128 (8), 115 (6), 109 (4), 103 (5), 77 (8).
Příprava sloučeniny 4T
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 4-(2chlorfenyl)-2-butanonu, připraveného z o-chlorbenzaldehydu, a dále pak (R)-l-(3-methoxy40 fenyl)ethylaminu a 1,25 násobek ekvivalentního množství izopropoxidu titaničitého. Intermediátní imin se redukuje ethanolickém roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografii za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (R,R)-N-(4-(2-chlorfenyl)-2-butyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 4T, s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 317 (M+, 3), 302 (16), 178 (62), 178 (62), 135 (100), 125 (15), 105 (10), 91 (6), 45 77 (8).
Příprava sloučeniny 21Y
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 4—(3—tri50 fluormethylfenyl)-2-butanonu, připraveného z m-trifluoromethylbenzaldehydu, a dále pak (R)l-(3-methoxyfenyl)ethyIamin a 1,25 násobek ekvivalentního množství izopropoxidu titaničitého. Intermediátní imin se redukuje ethanolickém roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografii za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (R,R)-N-[4-(3-trifluormethylfenyl)-2-butyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 21Y, 55 s vlastnostmi: [m/z (rel. int.) 351 (M+, 2), 336 (18), 216 (4), 202 (3), 178 (45), 135 (100), 105
-38CZ 292709 B6 (13), 91 (9), 77 (81) a (S,R)-N-[4-(3-trifluormethylfenyl)-2-butyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 2IX.
Příprava sloučeniny 25C a 25D
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 4—(3—trifluormethylfenyl)-2-butanonu, (R)-l-(l-naftyl)ethylaminu a 1,25 násobek ekvivalentního množství izopropoxidu titaničitého. Intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografií za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (S,R)-N-[4-(3-trifluormethylfenyl)-2-butyl]-l-(lnaftyl)ethylamin, sloučenina 25C, s vlastnostmi: [m/z (rel. int.) 371 (M+, 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 109 (3), 77 (2) a (R,R)-N-[4-(3-trifluormethylfenyl)-2-butyl]-l(l-naftyl)ethylamin, sloučenina 25D, s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 371 (M+, 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 109 (3), 77 (2).
Příprava sloučeniny 25C a 25D
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 4-fenyl-2butanonu (Aldrich Chemical Co.), (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylaminu a 1,25 násobek ekvivalentního množství izopropoxidu titaničitého. Intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografií za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (R,R)-N-(4-fenyl-2-butyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 21D s vlastnostmi: m (rel. int.) 283 (Μζ 4), 268 (13), 178 (45), 135 (100), 105 (15), 91 (43), 71 (11) a (S,R)-N-(4-fenyl-2-butyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 21E.
Příprava sloučeniny 21F
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 4-fenyl-2butanonu (Aldrich Chemical Co.), (R)-l-(l-naftyl)ethylaminu a 1,25 násobek ekvivalentního množství izopropoxidu titaničitého. Intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Opakovanou preparativní tenkovrstevnou chromatografií za použití 5 % methanolu v chloroformu se připraví (R,R)-N-(4-fenyl-2-butyl)-l-(l-naftyl)ethylamin, sloučenina 21F, s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 303 (M+, 6), 288 (14), 198 (22), 155 (100), 129 (8), 115(5),91(19),77(4).
Příprava sloučeniny 12Z
Roztok 2-chlorhydrocinnamonitrilu (Aldrich Chemical Co., 1,66 g, 10 mmol) ve 100 ml dichlormethanu se za stálého míchání ochladí na -78 °C. K tomuto roztoku sé po kapkách přidává 1,42 g diizobutylaluminiumhydridu (10 mmol). Reakční směs se míchá 1 hodinu za teploty místnosti, pak se ochladí na -78 °C a pak se k ní přidá roztok l-(l-naftyl)ethylaminu (1,71 g, 10 mmol) ve 25 ml dichlormethanu. Poté se reakční směs převede do ledové lázně a míchá se 2 hodiny. Po této době se reakční směs nalije přímo do dobře míchaného ethanolického roztoku borohydridu sodného (50 ml, 0,2M, 10 mmol). Reakční směs se za teploty místnosti míchá 30 minut v přebytku borohydridu sodného. Reakce se ukončí přídavkem 10% HC1. Přídavkem 10N NaOH se reakce roztoku zalkalizuje a směs se převede do dělicí nálevky. Zde se promyje 300 ml diethyletheru. Vodní fáze se odstraní a organická fáze se poté promyje 1N NaOH (3 x 100 ml) a poté vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Směs se zakoncentruje do formy olejovité kapaliny.
Chromatografií tohoto materiálu na silikagelové koloně v gradientu chloroform až 10% roztok methanolu v chloroformu se připraví 2,34 g (výtěžek 72 %) (R)-N-(3-(2-chlorfenyl)propyl]-l(1-nafty l)ethylamin, sloučenina 12Z, ve formě čiré olejovité kapaliny s těmito vlastnostmi: m/z
-39CZ 292709 B6 (rel. int.) 323 (M+, 2), 308 (63), 288 (7), 196 (5), 184 (5), 155 (100), 125 (24), 115 (8), 103 (4), 91 (3), 77(7).
Příprava sloučeniny 12B
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí 4-methylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(4-methylfenyl)prop-2-enyl)-l-(3-meth10 oxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12B ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 281 (M+, 6), 266 (5), 176 (27), 146 (75), 135 (63), 131 (100), 115 (25), 105 (21), 91 (21),77(21).
Příprava sloučeniny 12C
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí 2-methylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(2-methylfenyl)prop-2-enyl)-l-(3-meth20 oxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12C, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi:
m/z (rel. int.) 281 (M*, 4), 266 (15), 176 (18), 146 (62), 135 (58), 131 (100), 115 (23), 105 (19), 91 (38), 77(17).
Příprava sloučeniny 12D
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí 2,4,6-trimethylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(2,4,6-trimethylfenyl)prop-230 enyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12D ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 309 (M*, 8), 294 (25), 174 (82), 159 (100), 135 (52), 129 (29), 105 (21),91(17), 77(14).
Příprava sloučeniny 12E
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí 4-izopropylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(4~izopropylfenyl)prop-2-enyl]-l-(940 methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12E, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 309 (M*, 9), 294 (7), 174 (98), 159 (22), 135 (80), 117 (100), 105 (35), 91 (37), 77 (19).
Příprava sloučeniny 12F
Obdobným způsobem jako v předcházejícím příkladu se smísí 2,4-dimethylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(2,4-dimethylfenyl)prop-2-enyl)-l-(350 methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12F, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 295 (M*, 8), 294 (15), 174 (29), 160 (75), 145 (100), 135 (68), 117 (21), 105 (30), 91 (26), 77 (19).
-40CZ 292709 B6
Příprava sloučeniny 12G
Obdobným způsobem jako v předcházejícím příkladu se smísí 3-methylcinnamonitril sdiizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-[3-(3-methylfenyl)prop-2-enyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 12G, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 281 (Nf, 5), 266 (9), 176 (24), 146 (71), 135 (62), 131 (100), 115 (23), 105 (19), 91 (41),77(18).
Příprava sloučeniny 25E
Obdobným způsobem jako v předcházejícím příkladu se smísí cinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-(3-fenylprop-2-enyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 25E, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 267 (M+, 3), 252 (14), 176 (17), 135 (62), 117 (100), 105 (28), 91 (56), 77 (33).
Příprava sloučeniny 25G
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí a-methylcinnamonitril s diizobutylaluminiumhydridem. K intermediátnímu komplexu hliník-imin se přidá (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin. Ke vzniklému intermediátnímu iminu se přidá ethanolický roztok borohydridu sodného. Poté se chromatograficky přečistí (R)-N-(2-methyl-3-fenylprop-2-enyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 25G, ve formě čiré bezbarvé olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 281 (M+, 5), 266 (18), 190 (12), 146 (78), 135 (82), 131 (100), 115 (21), 105 (21), 91 (62), 77 (19).
Příprava sloučeniny 6X
K míchanému roztoku hydridu sodného (1,8 g, 75 mmol) ve 150 ml dimethylformamidu se přidá roztok diethylkyanomethylfosfonátu (13,5 g, 75 mmol) v 50 ml dimethylformamidu. Reakční směs se 30 minut míchá za teploty místnosti. Po této době se k reakční směsi přidá 10,54 g 3-chlorbenzaldehydu (75 mmol) a směs se míchá 1 hodinu za teploty místnosti a dalších 30 minut při teplotě 60 °C. Reakce se ukončí přídavkem 200 ml vody. Poté se směs převede do dělicí nálevky s 300 ml diethyletheru. Po důkladném protřepání se organická fáze promyje vodou (5 x 300 ml). Organická fáze se poté vysuší bezvodým uhličitanem draselným a zakoncentruje. Výtěžek činí 11,6 g 3-chlorcinnamonitrilu ve formě pevné látky. Sraženina se rozpustí v 50 ml tetrahydrofuranu a přidá se k ní přebytek diboranu. Reakční směs se míchá 30 minut za teploty místnosti, a poté se nalije na led s 10% HC1. Kyselá vodná fáze se promyje 2x200 ml diethyletheru. Poté se vodní fáze zneutralizuje přídavkem 10N NaOH a extrahuje se diethyletherem (200 ml). Etherický extrakt se vysuší bezvodým uhličitanem draselným a zakoncentruje se do formy olejovité kapaliny. K tomuto roztoku (0,6 g, 3,54 mmol) 3-(3-chlorfenyl)propylaminu) se přidá 3-(3-trichlorfenyl)propylamin (0,6 g, 3,54 mmol), 3'-methoxyacetofenon (0,53 g, 3,54 mmol) a 1,25 molámí nadbytek izopropoxidu titaničitého (1,26 g, 4,43 mmol). Reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti. K intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol) a směs se míchá 16 hodin za teploty místnosti. Reakce se ukončí přídavkem 50 ml diethyletheru a 0,32 ml vody (17,7 mmol). Po důkladném protřepání se z roztoku odstraní centrifugaci etherická fáze, která se zakoncentruje do formy mléčné zabarvené sraženiny. Tento materiál se resuspenduje v diethyletheru a přefiltruje se pomocí 0,45 μΜ CR PTFE Acrodisc filtru. Promytá etherická fáze se poté zakoncentruje do formy olejovité kapaliny. Z této kapaliny se pomocí chromatografie na silikagelu a preparativní tenkovrstvé chromatografie s použitím 3 % methanolu v dichlormethanu (s obsahem 1 %
-41 CZ 292709 B6 izopropylaminu) jakožto elučního činidla připraví N-[3-(3-chlorfenyl)propyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 6X s těmito vlastnostmi: m/z (rel. int.) 303 (M+, 3), 288 (40), 196 (3), 164 (8), 135 (100), 125 (46), 103 (26), 91 (29), 77 (29).
Příprava sloučeniny 6V
Stejná molámí množství 3-(4-chlorfenyl)propylaminu, připraveného podobným způsobem z chlorbenzaldehydu, 3'-methoxyacetofenonu a 1,25 molámí přebytek izopropoxidu titaničitého se míchají 4 hodiny za teploty místnosti. K intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolic10 kého roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografickém přečištění se získá N-[3-(4-chlorfenyl)propyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 6V, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 303 (M+, 8), 288 (91), 196 (4), 164 (10), 135 (100), 125 (61), 103 (21), 91 (21), 77 (18).
Příprava sloučeniny 20A
Podobným způsobem jako v předchozím příkladu se smísí stejná molámí množství l-(l-methoxyfenyl)ethylaminu, 4-t-butylacetofenonu a 1,25 molámí přebytek izopropoxidu titaničitého. Reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M 20 ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografickém přečištění se získá (R)-N-[l-(4-t-butylfenyl)ethyl]-l-(l-naftyl)ethylamin, sloučenina 20A, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 331 (M+, 12), 316 (29), 161 (70), 155 (100), 131 (14), 127 (13), 115 (10), 105 (6), 91 (10), 77 (7).
Příprava sloučenin 25H a 251
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí ekvivalentní molámí množství (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylaminu, trans-4-fenyl-3-buten-2-onu a 1,25 molámí přebytek izopropoxidu titaničitého. Reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu 30 iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografickém přečištění se získá (R,R)-N-(2-methyl-4-fenylbut-3-enyl)-l-(3methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 25H, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 283 (Μζ 4), 268 (13), 178 (40), 135 (100), 105 (15), 91 (47), 77 (13) a (S,R}-N-(2methyl-4-fenylbut-3-enyl)-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 251, ve formě olejovité 35 kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 283 (M+, 4), 268 (13), 178 (40), 135 (100), 105 (15), 91 (47),77(13).
Příprava sloučenin 16M a 16L
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí ekvivalentní molámí množství (R)-l-(3-methoxyfenyl)ethylaminu, 3-methoxyacetofenonu a 1,25 molámí přebytek izopropoxidu titaničitého. Reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografickém přečištění je výtěžkem (R,R)-N-(l-(4-methoxyfenyl)ethyl)-l-(345 methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 16L ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.)
284 (M-l, 1), 270 (85), 150 (83), 135 (100), 120 (12), 105 (28), 91 (25), 77 (23), (S,R)-N-[1(4-methoxyfenyl)ethyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 16M, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 284 (M-l, 1), 270 (53), 150 (98), 135 (100), 120 (11), 105 (33), 91 (25), 77 (23).
Příprava sloučeniny 5B/5C
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se 4-chloracetofenon použije pro přípravu 3-methyl-3-(4-chlorfenyl)cinnamonitrilu. Nitril se poté 2 hodiny katalyticky redukuje vodíkem 55 o tlaku 413 kPa na hydroxidu palladia v prostředí kyseliny octové za vzniku 3-methyl-3-(4
-42CZ 292709 B6 chlorfenyl)propylaminu. Stejná molámí množství tohoto aminu, 3'-methoxyacetofenonu a 1,25 násobek molámího ekvivalentu izopropoxidu titaničitého se míchají 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografickém přečištění je výtěžkem N-(3-methyl-3(4-chlorfenyl)propyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 5B/5C, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 317 (M+, 12), 302 (74), 210 (2), 182 (4), 164 (12), 135 (100), 121 (25), 103 (40), 91 (19), 77 (28).
Příprava sloučeniny 4Z/5A
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se použije 3-chloracetofenon pro přípravu 3-methyl-3-(3-chlorfenyl)cinnamonitrilu. Nitril se poté 2 hodiny katalyticky redukuje vodíkem o tlaku 413 kPa na hydroxidu palladnatém v prostředí ky seliny octové za vzniku 3-methyl-3-(3chlorfenyl)propylaminu. Stejná molámí množství tohoto aminu, 3'-methoxyacetofenonu a 1,25 násobek molámího ekvivalentu izopropoxidu titaničitého se míchají 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografíckém přečištění se získá N-[3-methyl-3-(3chlorfenyl)propyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 4Z/5A, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 283 (M+, 17), 268 (71). 164 (13), 135 (100), 121 (21), 105 (27), 91 (26), 77 (14).
Příprava sloučeniny 4Y
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se použije 2-chloracetofenon pro přípravu 3-methyl-3-(2-chlorfenyl)cinnamonitrilu. Nitril se poté 2 hodiny katalyticky redukuje vodíkem o tlaku 413 kPa na hydroxidu palladnatém v prostředí kyseliny octové za vzniku 3-methyl-3-(2chlorfenyl)propylaminu. Stejná molámí množství tohoto aminu, 3'-methoxyacetofenonu a 1,25 násobek molámího ekvivalentu izopropoxidu titaničitého se míchají 4 hodiny za teploty místnosti a k intermediátnímu iminu se přidá 5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (5 mmol). Po zpracování a chromatografíckém přečištění je výtěžkem N-[3-methyl-3(2-chlorfenyl)propyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 4Y, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 283 (M+, 17), 268 (71), 154 (13), 185 (100), 121 (21), 105 (27), 91 (26), 77 (14).
Příprava sloučeniny 6T
K roztoku NPS R-568 (30,3 g, 100 mmol) v dichlormethanu se po kapkách přidá za teploty -78 °C bromid boritý (50 g, 200 mmol) a reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny za teploty místnosti. Poté se reakční směs nalije na led. Bromovodík se extrahuje z vodní fáze chloroformem. Chloroformová fáze se poté promyje 4 x 100 ml 50% HC1 a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. 3,25 g (20 mmol) vzniklého hydrochloridu (R)-N-[3-(3-chlorfenyl)propyl]-l-(3hydroxyfenyl)ethylaminu ve formě sraženiny se přidá k roztoku hydridu sodného (0,48 g, 20 mmol) v dimethylformamidu a reakční směs míchá 1 hodinu za teploty místnosti. Poté se k reakční směsi přidá 1,71 g ethyljodidu (11 mmol) a směs se míchá 16 hodin za teploty místnosti. Po zpracování a chromatografíckém přečištění na silikagelu v 3 % methanolu v chloroformu se získá (R)-N-[3-(2-chlorfenyl)propyl)-l-(3-ethoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 6T, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 316 (ΝΓ, 1), 302 (100), 282 (11), 196 (5), 178 (7), 149 (74), 121 (34), 103 (25), 91 (28), 77 (29).
Příprava sloučeniny 6R
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se použije roztok NPS R-467 k přípravě (R)-N-(3-fenylpropyl)-l-(3-ethoxyfenyl)ethylaminu, sloučeniny 6R, ve formě olejovité kapaliny s vlastnostmi: m/z (rel. int.) 283 (M+, 10), 268 (74), 178, (11), 162 (8), 149 (100), 121 (30), 103(16),91 (86), 77(29).
-43CZ 292709 B6
Příprava sloučeniny 3U
Stejná molámí množství 3,3-difenylpropylaminu (2,11 g, 10 mmol), l'-acetonaftonu (1,70 g, lOmmol) a 1,25 násobné molámí množství izopropoxidu titaničitého (3,55 g, 12,5 mmol) se míchají 4 hodiny za teploty místnosti. K reakční směsi se poté přidá 12,5 ml 1M ethanolického roztoku kyanoborohydridu sodného (12,5 mmol) a směs se míchá 16 hodin pří teplotě místnosti. Poté se reakční směs naředí 50 ml diethyletheru a protřepe se s 0,72 ml vody (40 mmol). Po důkladném protřepání se jednotlivé fáze oddělí centrifugací a etherická složka se dekantuje. Poté se tato fáze zahustí do podoby mléčné olejovité kapaliny, která se suspenduje v diethyletheru a přefiltruje pomocí 0,45 μΜ CR PTFE Acrodisc filtru. Filtrát v diethyletheru se zákoncentruje a výsledná sloučenina 3U (N-(3,3-difenylpropyl)-l-(l-naftyl)ethylamin) ve formě čiré a bezbarvé olejovité kapaliny vykazuje následující vlastnosti: m/z (rel. int.) 365 (M+, 17), 350 (19), 181 (23), 155 (100), 141 (25), 115 (11), 91 (13), 77 (6).
Příprava sloučeniny 6F
Podobným způsobem jako v předchozím příkladu se smísí stejná molámí množství l-(3-methoxyfenyl)ethylaminu (1,51 g, 10 mmol) a 2'-acetonaftonu (1,70 g, 10 mmol) s 1,25 násobným molámím množstvím izopropoxidu titaničitého (3,55 g, 12,5 mmol) a reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti. Dalším zpracováním vzniká N-[l-(2-naftyl)ethyl]-l-(3-methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 6F ve formě čiré, bezbarvé olejovité kapaliny vykazují následující vlastnosti: m/z (rel. int.) 305 (NT, 1), 290 (35), 170 (49), 155 (100), 135 (55), 115 (8), 105 (10), 91 (9),77(10).
Příprava sloučeniny 4G
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství (R)-l,5fenylethylaminu a Γ-acetonaftonu s 1,25 molámím násobkem izopropoxidu titaničitého a reakční směs se míchá 4 hodiny za teploty místnosti. Vzniklý intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Dalším zpracováním a chromatografickým přečištěním vzniká N-(l-(l-naftyl)ethyl}-l-fenylethylamin, sloučenina 4G, ve formě čiré, bezbarvé olejovité kapaliny vykazující následující vlastnosti: m/z (rel. int.) 275 (M+, 16), 260 (79); 155 (100), 127 (27), 105 (70), 77 (32).
Příprava sloučeniny 4H
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství (R)—1— fenylethylaminu a 2'-acetonaftonu s 1,25 molámím násobkem izopropoxidu titaničitého. Vzniklý intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Dalším zpracováním a chromatografickým přečištěním vzniká N-[l-(2-naftyl)ethyl]-l-fenylethylamin, sloučenina 4H, ve formě čiré, bezbarvé olejovité kapaliny vykazující následující vlastnosti: m/z (rel. int.) 275 (NT, 1), 260 (61), 155 (100), 120 (36), 105 (55), 77 (15).
Příprava sloučeniny 6E
Podobným způsobem jako v předchozích příkladech se smísí stejná molámí množství 1—(3— methoxyfenyl)ethylaminu a l'-acetonaftonu s 1,25 molámím přebytkem izopropoxidu titaničitého. Vzniklý intermediátní imin se redukuje ethanolickým roztokem kyanoborohydridu sodného. Dalším zpracováním a chromatografickým přečištěním vzniká N-l-(l-naftyl)ethyl-l-(3methoxyfenyl)ethylamin, sloučenina 6E ve formě čiré, bezbarvé olejovité kapaliny vykazující následující vlastnosti: m/z (rel. int.) 305 (M+, 10), 290 (30), 170 (43), 155 (100), 135 (69), 115 (9),105(15),91 (14), 77(18).
-44CZ 292709 B6
Příklad 19: Farmaceutické kompozice
Příprava farmaceutických kompozic podle vynálezu vhodných k administraci kalcimimetik lidským pacientům je znázorněna v tabulce 3
Tabulka 3
Složka mg na kapsuli g na reprezentativní dávku 5000 kapsuli
NPS R-568 56,0 280,0
Předběžně zgelovatělý škrob 134,0 670,0
Mikrokrystalická celulóza 34,0 170,0
Koloidní oxid křemičitý 1,0 5,0
Celkem 225,0 mg U25g
Jiné příklady kompozic a dávkových forem s hydrochloridem NPS (R)-568 jsou takové, které jsou vhodné pro dlouhotrvající uvolňování, a které lze připravit standardními technikami.
Správné dávkování může být rovněž provedeno standardními technikami. V jedné sadě pokusů vykazovaly například orální dávky 10 až 100 mg hydrochloridu NPS R- (568) farmakologický účinek u lidských pacientů. Po orálním podání hydrochloridu NPS (R) -568 byly v lidské plazmě detekovány vysoké koncentrace konjugátu o-glukuronidu se sloučeninou 17Q, což je hlavní metabolit látky NPS (R) -568. Tento konjugát glukuronidu a sloučeniny 17Q může mít prospěšný účinek.
Standardními technikami lze rovněž určit jiné vhodné dávkovači koncentrace pro látku NPS (R) -568.
Vhodná dávková množství, farmaceutické kompozice a aplikační formu dalších sloučenin podle vynálezu může určit odborník na základě způsobů podle vynálezu.
Další formy provedení vynálezu jsou popsány v nárocích. Popsaná provedení vynálezu však nejsou v žádném případě omezující a odborník může na jejich základě připravit mnohé další modifikace.
-45CZ 292709 B6 (1) INFORMACE O SEKVENCI ID.Č.: 1 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA:
(B) TYP:
(C) POČET VLÁKEN:
(D) TOPOLOGIE:
5006 párů bází nukleová kyselina jedno lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA komplementární k mRNA (ix) VLASTNOSTI:
(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) POZICE: 436..3699 (D) DALŠÍ INFORMACE:
(xi) POPIS SEKVENCE: Sekvence id. č.: 1:
GCTGCTGTGG CCGGACCCGA AGGCGGGCGC CGGGAGCGCA 40
GCGAGCCAGA CGCGCCTCTC CAAGACCGTG ACCTTGGCAT 80
AGGGAGCGGG GCTGCGCGCA GTCCTGAGAT CAGACCAGAG 120
CTCATCCTCG TGGAGACCCA CGGCCGAGGG GCCGGAGCTG 160
CCTCTGTGCG AGGGAGCCCT GGCCGCGGCG CAGAAGGCAT 200
CACAGGAGGC CTCTCCATGA TGTGGCTTCC AAAGACTCAA 240
GGACCACCCA CATTACAAGT CTGGATTGAG GAAGGCAGAA 280
ATGGAGATTC AAACACCACG TCTTCTATTA TTTTATTAAT 320
CAATCTGTAG ACATGTGTCC CCACTGCAGG GAGTGAACTG 360
CTCCAAGGGA GAAACTTCTG GGAGCCTCCA AACTCCTAGC 400
TGTCTCATCC CTTGCCCTGG AGAGACGGCA GAACC 435
ATG GCA TTT TAT AGC TGC TGC TGG GTC CTC TTG GCA 471 Met Ala Phe Tyr Ser Cys Cys Trp Val Leu Leu Ala
5 10
-46CZ 292709 B6
CTC ACC TGG CAC ACC TCT GCC TAC GGG CCA GAC CAG 507
Leu Thr Trp His Thr Ser Ala 15 Tyr Gly Pro 20 Asp Gin
CGA GCC CAA AAG AAG GGG GAC ATT ATC CTT GGG GGG 543
Arg 25 Ala Gin Lys Lys Gly Asd 30 Ile Ile Leu Gly Gly 35
CTC TTT CCT ATT CAT TTT GGA GTA GCA GCT AAA GAT 579
Leu Phe Pro Ile 40 His Phe Gly Val Ala 45 Ala Lys Asp
CAA GAT CTC AAA TCA AGG CCG GAG TCT GTG GAA TGT 615
Gin Asp 50 Leu Lys Ser Arg Pro 55 Glu Ser Val Glu Cys 60
ATC AGG TAT AAT TTC CGT GGG TTT CGC TGG TTA CAG 651
Ile Arg Tyr Asn Phe 65 Arg Gly Phe Arg Trp 70 Leu Gin
GCT ATG ATA TTT GCC ATA GAG GAG ATA AAC AGC AGC 687
Ala Met Ile 75 Phe Ala Ile Glu Glu 80 Ile Asn Ser Ser
CCA GCC CTT CTT CCC AAC TTG ACG CTG GGA TAC AGG 723
Pro B5 Ala Leu Leu Pro Asn 90 Leu Thr Leu Gly Tyr 95 Arg
ATA TTT GAC ACT TGC AAC ACC GTT TCT AAG GCC TTG 759
Ile Phe Asp Thr 100 Cys Asn Thr Val Ser 105 Lys Ala Leu
GAA GCC ACC CTG AGT TTT GTT GCT CAA AAC AAA ATT 795
Glu Ala 110 Thr Leu Ser Phe Val 115 Ala Gin Asn Lys Ile 120
GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC TGC AAC TGC TCA 831
Asp Ser Leu Asn Leu 125 Asp Glu Phe Cys Asn 130 Cys Ser
GAG CAC ATT CCC TCT ACG ATT GCT GTG GTG GGA GCA 867
Glu His Ile 135 Pro Ser Thr Ile Ala 140 Val Val Gly Ala
ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA GTG GCA AAT CTG 903
Thr 145 Gly Ser Gly Val Ser 150 Thr Ala Val Ala Asn 155 Leu
CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG GTC AGT TAT GCC 939
Leu Gly Leu Phe 160 Tyr Ile Pro Gin Val 165 Ser Tyr Ala
TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC AAG AAT CAA TTC 975
Ser Ser 170 Ser Arg Leu Leu Ser 175 Asn Lys Asn Gin Phe 180
-47CZ 292709 B6
AAG TCT Lys Ser TTC CTC Phe Leu CGA ACC Arg Thr 185 ATC CCC AAT GAT GAG CAC 1011
Ile Pro Asn Asp Glu His 190
CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC ATC GAG TAT TTC 1047
Gin Ala Thr Ala 195 Met Ala Asp Ile 200 Ile Glu Tyr Phe
CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT GCA GCT GAT GAC 1083
Arg 205 Trp Asn Trp Val Gly 210 Thr Ile Ala Ala Asp Asp 215
GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG AAA TTC CGA GAG 1119
Asp Tyr Gly Arg 220 Pro Gly Ile Glu Lys 225 Phe Arg Glu
GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC ATC GAC TTC AGT 1155
Glu Ala 230 Glu Glu Arg Asp Ile 235 Cys Ile Asp Phe Ser 240
GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT GAG GAA GAG ATC 1191
Glu Leu Ile Ser Gin 245 Tyr Ser Asp Glu Glu 250 Glu Ile
CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA AAT TCC ACG GCC 1227
Gin His Val 255 Val Glu Val Ile Gin 260 Asn Ser Thr Ala
AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT GGC CCA GAT CTT 1263
Lys 265 Val Ile Val Val Phe 270 Ser Ser Gly Pro Asp 275 Leu
GAG ccc CTC ATC AAG GAG ATT GTC CGG CGC AAT ATC 1299
Glu Pro Leu Ile 280 Lys Glu Ile Val Arg 285 Arg Asn Ile
ACG GGC AAG ATC TGG CTG GCC AGC GAG GCC TGG GCC 1335
Thr Gly 290 Lys Ile Trp Leu Ala 295 Ser Glu Ala Trp Ala 300
AGC TCC TCC CTG ATC GCC ATG CCT CAG TAC TTC CAC 1371
Ser Ser Ser Leu Ile 305 Ala Met Pro Gin Tyr 310 Phe His
GTG GTT GGC GGC ACC ATT GGA TTC GCT CTG AAG GCT 1407
Val Val Gly 315 Gly Thr Ile Gly Phe 320 Ala Leu Lys Ala
GGG CAG ATC CCA GGC TTC CGG GAA TTC CTG AAG AAG 1443
Gly 325 Gin Ile Pro Gly Phe 330 Arg Glu Phe Leu Lys 335 Lys
GTC CAT CCC AGG AAG TCT GTC CAC AAT GGT TTT GCC 1479
Val His Pro Arg 340 Lys Ser Val His Asn 345 Gly Phe Ala
-48CZ 292709 B6
AAG Lys GAG TTT TGG GAA GAA ACA TTT AAC TGC CAC CTC
Glu 350 Phe Trp Glu Glu Thr Phe 355 Asn Cys His Leu 360
CAA GAA GGT GCA AAA GGA CCT TTA CCT GTG GAC ACC
Gin G1U Gly Ala Lys 365 Gly Pro Leu Pro Val 370 Asp Thr
TTT CTG AGA GGT CAC GAA GAA AGT GGC GAC AGG TTT
Phe Leu Arg 375 Gly His Glu Glu Ser 380 Gly Asp Arg Phe
AGC AAC AGC TCG ACA GCC TTC CGA CCC CTC TGT ACA
Ser 385 Asn Ser Ser Thr Ala 390 Phe Arg Pro Leu Cys 395 Thr
GGG GAT GAG AAC ATC AGC AGT GTC GAG ACC CCT TAC
Gly Asp Glu Asn 400 Ile Ser Ser Val Glu 405 Thr Pro Tyr
ATA GAT TAC ACG CAT TTA CGG ATA TCC TAC AAT GTG
Ile Asp 410 Tyr Thr His Leu Arg 415 Ile Ser Tyr Asn Val 420
TAC TTA GCA GTC TAC TCC ATT GCC CAC GCC TTG CAA
Tyr Leu Ala Val Tyr 425 Ser Ile Ala His Ala 430 Leu Gin
GAT ATA TAT ACC TGC TTA CCT GGG AGA GGG CTC TTC
Asp Ile Tyr 435 Thr Cys Leu Pro Gly 440 Arg Gly Leu Phe
ACC AAT GGC TCC TGT GCA GAC ATC AAG AAA GTT GAG
Thr 445 Asn Gly Ser Cys Ala 450 Asp ile Lys Lys Val 455 Glu
GCG TGG CAG GTC CTG AAG CAC CTA CGG CAT CTA AAC
Ala Trp Gin Val 460 Leu Lys His Leu Arg 465 His Leu Asn
TTT ACA AAC AAT ATG GGG GAG CAG GTG ACC TTT GAT
Phe Thr 470 Asn Asn Met Gly Glu 475 Gin Val Thr Phe Asp 480
GAG TGT GGT GAC CTG GTG GGG AAC TAT TCC ATC ATC
Glu Cys Gly Asp Leu 485 Val Gly Asn Tyr Ser 490 Ile Ile
AAC TGG CAC CTC TCC CCA GAG GAT GGC TCC ATC GTG
Asn Trp His 495 Leu Ser Pro Glu Asp 500 Gly Ser Ile Val
TTT AAG GAA GTC GGG TAT TAC AAC GTC TAT GCC AAG
Phe 505 Lys Glu Val Gly Tyr 510 Tyr Asn Val Tyr Ala 515 Lys
1515
1551
1587
1623
1659
1695
1731
1767
1B03
1839
1875
1911
1947
1983
-49CZ 292709 B6
AAG GGA GAA AGA CTC TTC ATC AAC GAG GAG AAA ATC 2019
Lys Gly Glu Arg Leu Phe Ile Asn Glu 525 Glu Lys Ile
520
CTG TGG AGT GGG TTC TCC AGG GAG CCA CTC ACC TTT 2055
Leu Trp 530 Ser Gly Phe Ser Arg 535 Glu Pro Leu Thr Phe 540
GTG CTG TCT GTC CTC CAG GTG CCC TTC TCC AAC TGC 2091
Val Leu Ser Val Leu 545 Gin Val Pro Phe Ser 550 Asn Cys
AGC CGA GAC TGC CTG GCA GGG ACC AGG AAA GGG ATC 2127
Ser Arg Asp 555 Cys Leu Ala Gly Thr 560 Arg Lys Gly Ile
ATT GAG GGG GAG CCC ACC TGC TGC TTT GAG TGT GTG 2163
Ile 565 Glu Gly Glu Pro Thr 570 Cys Cys Phe Glu Cys 575 Val
GAG TGT CCT GAT GGG GAG TAT AGT GAT GAG ACA GAT 2199
Glu Cys Pro Asp 580 Gly Glu Tyr Ser Asp 585 Glu Thr Asp
GCC AGT GCC TGT AAC AAG TGC CCA GAT GAC TTC TGG 2235
Ala Ser 590 Ala Cys Asn Lys Cys 595 Pro Asp Asp Phe Trp 600
TCC AAT GAG AAC CAC ACC TCC TGC ATT GCC AAG GAG 2271
Ser Asn Glu Asn His 605 Thr Ser Cys Ile Ala 610 Lys Glu
ATC GAG TTT CTG TCG TGG ACG GAG CCC TTT GGG ATC 2307
Ile Glu Phe 615 Leu Ser Trp Thr Glu 620 Pro Phe Gly Ile
GCA CTC ACC CTC TTT GCC GTG CTG GGC ATT TTC CTG 2343
Ala 625 Leu Thr Leu Phe Ala 630 Val Leu Gly Ile Phe 635 Leu
ACA GCC TTT GTG CTG GGT GTG TTT ATC AAG TTC CGC 2379
Thr Ala Phe Val 640 Leu Gly Val Phe Ile 645 Lys Phe Arg
AAC ACA CCC ATT GTC AAG GCC ACC AAC CGA GAG CTC 2415
Asn Thr 650 Pro Ile Val Lys Ala 655 Thr Asn Arg Glu Leu 660
TCC TAC CTC CTC CTC TTC TCC CTG CTC TGC TGC TTC 2451
Ser Tyr Leu Leu Leu 665 Phe Ser Leu Leu Cys 670 Cys Phe
TCC AGC TCC CTG TTC TTC ATC GGG GAG CCC CAG GAC 2487
Ser Ser Ser 675 Leu Phe Phe Ile Gly 680 Glu Pro Gin Asp
-50CZ 292709 B6
TGG ACG Trp Thr 685 TGC CGC CTG CGC CAG CCG GCC TTT GGC ATC Ile 2523
Cys Arg Leu Arg 690 Gin Pro Ala Phe Gly 695
AGC TTC GTG CTC TGC ATC TCA TGC ATC CTG GTG AAA 2559
Ser Phe Val Leu 700 Cys Ile Ser Cys Ile 705 Leu Val Lys
ACC AAC CGT GTC CTC CTG GTG TTT GAG GCC AAG ATC 2595
Thr Asn 710 Arg Val Leu Leu Val 715 Phe Glu Ala Lys Ile 720
ccc ACC AGC TTC CAC CGC AAG TGG TGG GGG CTC AAC 2631
Pro Thr Ser Phe His 725 Arg Lys Trp Trp Gly 730 Leu Asn
CTG CAG TTC CTG CTG GTT TTC CTC TGC ACC TTC ATG 2667
Leu Gin Phe 735 Leu Leu Val Phe Leu 740 Cys Thr Phe Met
CAG ATT GTC ATC TGT GTG ATC TGG CTC TAC ACC GCG 2703
Gin 745 Ile Val Ile Cys Val 750 Ile Trp Leu Tyr Thr 755 Ala
CCC CCC TCA AGC TAC CGC AAC CAG GAG CTG GAG GAT 2739
Pro Pro Ser Ser 760 Tyr Arg Asn Gin Glu 765 Leu Glu Asp
GAG ATC ATC TTC ATC ACG TGC CAC GAG GGC TCC CTC 2775
Glu Ile 770 Ile Phe Ile Thr Cys 775 His Glu Gly Ser Leu 780
ATG GCC CTG GGC TTC CTG ATC GGC TAC ACC TGC CTG 2811
Met Ala Leu Gly Phe 785 Leu Ile Gly Tyr Thr 790 Cys Leu
CTG GCT GCC ATC TGC TTC TTC TTT GCC TTC AAG TCC 2847
Leu Ala Ala 795 Ile Cys Phe Phe Phe 800 Ala Phe Lys Ser
CGG AAG CTG CCG GAG AAC TTC AAT GAA GCC AAG TTC 2883
Arg 805 Lys Leu Pro Glu Asn 810 Phe Asn Glu Ala Lys 815 Phe
ATC ACC TTC AGC ATG CTC ATC TTC TTC ATC GTC TGG 2919
Ile Thr Phe Ser 820 Met Leu Ile Phe Phe 825 Ile Val Trp
ATC TCC TTC ATT CCA GCC TAT GCC AGC ACC TAT GGC 2955
Ile Ser 830 Phe Ile Pro Ala Tyr 835 Ala Ser Thr Tyr Gly 840
AAG TTT GTC TCT GCC GTA GAG GTG ATT GCC ATC CTG 2991
Lys Phe Val Ser Ala Val Glu Val Ile Ala Ile Leu
845 850
-51CZ 292709 B6
GCA GCC AGC TTT GGC TTG CTG GCG TGC ATC TTC TTC 3027
Ala Ala Ser Phe Gly Leu Leu Ala Cys Ile Phe Phe
855 860
AAC AAG ATC TAC ATC ATT CTC TTC AAG CCA TCC CGC 3063
Asn 865 Lys Ile Tyr Ile Ile 870 Leu Phe Lys Pro Ser 875 Arg
AAC ACC ATC GAG GAG GTG CGT TGC AGC ACC GCA GCT 3099
Asn Thr Ile Glu 880 Glu Val Arg Cys Ser 885 Thr Ala Ala
CAC GCT TTC AAG GTG GCT GCC CGG GCC ACG CTG CGC 3135
His Ala 890 Phe Lys Val Ala Ala 895 Arg Ala Thr Leu Arg 900
CGC AGC AAC GTC TCC CGC AAG CGG TCC AGC AGC CTT 3171
Arg Ser Asn Val Ser 905 Arg Lys Arg Ser Ser 910 Ser Leu
GGA GGC TCC ACG GGA TCC ACC CCC TCC TCC TCC ATC 3207
Gly Gly Ser 915 Thr Gly Ser Thr Pro 920 Ser Ser Ser Ile
AGC AGC AAG AGC AAC AGC GAA GAC CCA TTC CCA CGG 3243
Ser 925 Ser Lys Ser Asn Ser 930 Glu Asp Pro Phe Pro 935 Arg
CCC GAG AGG CAG AAG CAG CAG CAG CCG CTG GCC CTA 3279
Pro Glu Arg Gin 94 0 Lys Gin Gin Gin Pro 945 Leu Ala Leu
ACC CAG CAA GAG CAG CAG CAG CAG CCC CTG ACC CTC· 3315
Thr Gin 950 Gin Glu Gin Gin Gin 955 Gin Pro Leu Thr Leu 960
CCA CAG CAG CAA CGA TCT CAG CAG CAG CCC AGA TGC 3351
Pro Gin Gin Gin Arg 965 Ser Gin Gin Gin Pro 970 Arg Cys
AAG CAG AAG GTC ATC TTT GGC AGC GGC ACG GTC ACC 3387
Lys Gin Lys 975 Val Ile Phe Gly Ser 980 Gly Thr Val Thr
TTC TCA CTG AGC TTT GAT GAG CCT CAG AAG AAC GCC 3423
Phe 985 Ser Leu Ser Phe Asp 990 Glu Pro Gin Lys Asn 995 Ala
ATG GCC CAC AGG AAT TCT ACG CAC CAG AAC TCC CTG 3459
Met Ala His Arg Asn 1000 Ser Thr His Gin Asn 1005 Ser Leu
GAG GCC CAG AAA AGC AGC GAT ACG CTG ACC CGA CAC 3495
Glu Ala Gin 1010 Lys Ser Ser Asp Thr 1015 Leu Thr Arg His 1020
-52CZ 292709 B6
CAG CCA TTA Leu CTC CCG CTG CAG TGC GGG GAA ACG GAC 3531
Gin Pro Leu Pro Leu 1025 Gin Cys Gly Glu Thr Asp 1030
TTA GAT CTG ACC GTC CAG GAA ACA GGT CTG CAA GGA 3567
Leu Asp Leu Thr Val Gin Glu Thr Gly Leu Gin Gly
1035 1040
CCT GTG GGT GGA GAC CAG CGG CCA GAG GTG GAG GAC 3603
Pro Val Gly Gly Ásp Gin Arg Pro Glu Val Glu Asp
1045 1050 1055
CCT GAA GAG TTG TCC CCA GCA CTT GTA GTG TCC AGT 3639
Pro Glu Glu Leu Ser Pro Ala Leu Val Val Ser Ser
1060 1065
TCA CAG AGC TTT GTC ATC AGT GGT GGA GGC AGC ACT 3675
Ser Gin Ser Phe Val Ile Ser Gly Gly Gly Ser Thr
1070 1075 1080
GTT ACA GAA AAC GTA GTG AAT TCA TAAAATGGAA 3709
Val Thr Glu Asn Val Val Asn Ser
1085
GGAGAAGACT GGGCTAGGGA GAATGCAGAG AGGTTTCTTG 3749
GGGTCCCAGG GATGAGGAAT CGCCCCAGAC TCCTTTCCTC 3789
TGAGGAAGAA GGGATAATAG ACACATCAAA TGCCCCGAAT 3829
TTAGTCACAC CATCTTAAAT GACAGTGAAT TGACCCATGT 3869
TCCCTTTAAA ATTAAAAAAA AGAAGAGCCT TGTGTTTCTG 3909
TGGTTGCATT TGTCAAAGCA TTGAGATCTC CACGGTCAGA 3949
TTTGCTGTTC ACCCACATCT AATGTCTCTT CCTCTGTTCT 3989
ATCCCACCCA ACAGCTCAGA GATGAAACTA TGGCTTTAAA 4029
CTACCCTCCA GAGTGTGCAG ACTGATGGGA CATCAAATTT 4069
GCCACCACTA GAGCTGAGAG TCTGAAAGAC AGAATGTCAC 4109
CAGTCCTGCC CAATGCCTTG ACAACAGACT GAATTTTAAA 4149
TGTTCACAAC ATAAGGAGAA TGTATCTCCT CCTATTTATG 4189
AAAACCATAT GATATTTTGT CTCCTACCTG CTGCTGCTAT 4229
TATGTAACAT CCAGAAGGTT TGCACCCCTC CTATACCATA 4269
TGTCTGGTTC TGTCCAGGAC ATGATACTGA TGCCATGTTT 4309
AGATTCCAGG ATCACAAGAA TCACCTCAAA TTGTTAGGAA 4349
-53CZ 292709 B6
GGGACTGCAT AAACCAATGA GCTGTATCTG TAATTAATAT 438S 4429
TCCTATATGT AGCTTTATCC TTAGGAAAAT GCTTCTGTTG
TAATAGTCCA TGGACAATAT AAACTGAAAA ATGTCAGTCT 4469
GGTTTATATA AGGCAGTATT ATTGAGCTCT ATTTCCCCAC 4509
CCCACTATCC TCACTCCCAT AAGCTAAGCC TTATGTGAGC 4549
CCCTTCAGGG ACTCAAGGGT CCAGAAGTCC CTCCCATCTC 4589
TACCCCAAAG AATTCCTGAA GCCAGATCCA CCCTATCCCT 4629
GTACAGAGTA AGTTCTCAAT TATTGGCCTG CTAATAGCTG 4669
CTAGGGTAGG AAAGCGTGGT TCCAAGAAAG ATCCACCCTC 4709
AAATGTCGGA GCŤATGTTCC CTCCAGCAGT GGTATTAATA 4749
CTGCCGGTCA CCCAGGCTCT GGAGCCAGAG AGACAGACCG 4789
GGGTTCAAGC CATGGCTTCG TCATTTGCAA GCTGAGTGAC 4829
TGTAGGCAGG GAACCTTAAC CTCTCTAAGC CACAGCTTCT 4869
TCATCTTTAA AATAAGGATA ATAATCATTC CTTCCCCTCA 4909
GAGCTCTTAT GTGGATTAAA CGAGATAATG TATATAAAGT 4949
ACTTTAGCCT GGTACCTAGC ACACAATAAG CATTCAATAA 4989
ATATTAGTTA ATATTAT 5006
(2) INFORMACE O SEKVENCI ID.Č.: 2 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 3809 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA komplementární k mRNA (ix) VLASTNOSTI:
(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) POZICE: 373..3606 (D) DALŠÍ INFORMACE:
(xi) POPIS SEKVENCE: Sekvence id. č.: 2:
CAACAGGCAC CTGGCTGCAG CCAGGAAGGA CCGCACGCCC 40
-54CZ 292709 B6
TTTCGCGCAG GAGAGTGGAA GGAGGGAGCT GTTTGCCAGC80
ACCGAGGTCT TGCGGCACAG GCAACGCTTG ACCTGAGTCT120
TGCAGAATGA AAGGCATCAC AGGAGGCCTC TGCATGATGT180
GGCTTCCAAA GACTCAAGGA CCACCCACAT TACAAGTCTG200
GATTGAGGAA GGCAGAAATG GAGATTCAAA CACCACGTCT240
TCTATTATTT TATTAATCAA TCTGTAGACA TGTGTCCCCA280
CTGCAGGGAG TGAACTGCTC CAAGGGAGAA ACTTCTGGGA320
GCCTCCAAAC TCCTAGCTGT CTCATCCCTT GCCCTGGAGA360
GACGGCAGAA CC ATG GCA TTT TAT AGC TGC TGC TGG3 96
Met Ala Phe Tyr Ser Cys Cys Trp
GTC CTC TTG GCA CTC ACC TGG CAC ACC TCT GCC TAC 432
Val Leu Leu Ala Leu Thr Trp 15 His Thr Ser Ala Tyr 20
10
GGG CCA GAC CAG CGA GCC CAA AAG AAG GGG GAC ATT 468
Gly Pro Asp Gin Arg 25 Ala Gin Lys Lys Gly 30 Asp Ile
ATC CTT GGG GGG CTC TTT CCT ATT CAT TTT GGA GTA 504
Ile Leu Gly Gly 35 Leu Phe Pro Ile 40 His Phe Gly Val
GCA GCT AAA GAT CAA GAT CTC AAA TCA AGG CCG GAG 540
Ala 45 Ala Lys Asp Gin Asp 50 Leu Lys Ser Arg Pro 55 Glu
TCT GTG GAA TGT ATC AGG TAT AAT TTC CGT GGG TTT 576
Ser Val Glu Cys 60 Ile Arg Tyr Asn Phe 65 Arg Gly Phe
CGC TGG TTA CAG GCT ATG ATA TTT GCC ATA GAG GAG 612
Arg Trp 70 Leu Gin Ala Met Ile 75 Phe Ala Ile Glu Glu 80
ATA AAC AGC AGC CCA GCC CTT CTT CCC AAC TTG ACG 648
Ile Asn Ser Ser Pro 85 Ala Leu Leu Pro Asn 90 Leu Thr
CTG GGA TAC AGG ATA TTT GAC ACT TGC AAC ACC GTT 684
Leu Gly Tyr 95 Arg Ile Phe Asp Thr 100 Cys Asn Thr Val
TCT AAG GCC TTG GAA GCC ACC CTG AGT TTT GTT GCT 720
Ser 105 Lys Ala Leu Glu Ala 110 Thr Leu Ser Phe Val 115 Ala
-55CZ 292709 B6
CAA Gin AAC Asn AAA ATT GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC Phe 756
Lys Ile 120 Asp Ser Leu Asn Leu Asp 125 Glu
TGC AAC TGC TCA GAG CAC ATT CCC TCT ACG ATT GCT 792
Cys Asn 130 Cys Ser Glu His Ile 135 Pro Ser Thr Ile Ala 14 0
GTG GTG GGA GCA ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA 828
Val Val Gly Ala Thr 145 Gly Ser Gly Val Ser 150 Thr Ala
GTG GCA AAT CTG CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG 864
Val Ala Asn 155 Leu Leu Gly Leu Phe 160 Tyr Ile Pro Gin
GTC AGT TAT GCC TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC 900
Val 165 Ser Tyr Ala Ser Ser 170 Ser Arg Leu Leu Ser 175 Asn
AAG AAT CAA TTC AAG TCT TTC CTC CGA ACC ATC CCC 936
Lys Asn Gin Phe 180 Lys Ser Phe Leu Arg 185 Thr Ile Pro
AAT GAT GAG CAC CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC 972
Asn Asp 190 Glu His Gin Ala Thr 195 Ala Met Ala Asp Ile 200
ATC GAG TAT TTC CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT 1008
Ile G1U Tyr Phe Arg 205 Trp Asn Trp Val Gly 210 Thr Ile
GCA GCT GAT GAC GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG 1044
Ala Ala Asp 215 Asp Asp Tyr Gly Arg 220 Pro Gly Ile Glu
AAA TTC CGA GAG GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC 1080
Lys 225 Phe Arg Glu Glu Ala 230 Glu Glu Arg Asp Ile 235 Cys
ATC GAC TTC AGT GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT 1116
Ile Asp Phe Ser 240 G1U Leu Ile Ser Gin 245 Tyr Ser Asp
GAG GAA GAG ATC CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA 1152
Glu Glu 250 Glu Ile Gin His Val 255 Val Glu Val Ile Gin 260
AAT TCC ACG GCC AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT 1188
Asn Ser Thr Ala Lys 265 Val Ile Val Val Phe 270 Ser Ser
GGC CCA GAT CTT GAG CCC CTC ATC AAG GAG ATT GTC 1224
Gly Pro Asp 275 Leu Glu Pro Leu Ile 280 Lys Glu Ile Val
-56CZ 292709 B6
CGG CGC Arg Arg 285 AAT ATC ACG GGC AAG ATC TGG CTG GCC AGC 1260
Asn Ile Thr Gly Lys 290 Ile Trp Leu Ala 295 Ser
GAG GCC TGG GCC AGC TCC TCC CTG ATC GCC ATG CCT 1296
Glu Ala Trp Ala 300 Ser Ser Ser Leu Ile 305 Ala Met Pro
CAG TAC TTC CAC GTG GTT GGC GGC ACC ATT GGA TTC 1332
Gin Tyr 310 Phe His Val Val Gly 315 Gly Thr Ile Gly Phe 320
GCT CTG AAG GCT GGG CAG ATC CCA GGC TTC CGG GAA 1368
Ala Leu Lys Ala Gly 325 Gin Ile .Pro Gly Phe 330 Arg G1U
TTC CTG AAG AAG GTC CAT CCC AGG AAG TCT GTC CAC 1404
Phe Leu Lys 335 Lys Val His Pro Arg 340 Lys Ser Val His
AAT GGT TTT GCC AAG GAG TTT TGG GAA GAA ACA TTT 1440
Asn 345 Gly Phe Ala Lys Glu 350 Phe Trp Glu Glu Thr 355 Phe
AAC TGC CAC CTC CAA GAA GGT GCA AAA GGA CCT TTA 1476
Asn Cys His Leu 360 Gin Glu Gly Ala Lys 365 Gly Pro Leu
CCT GTG GAC ACC TTT CTG AGA GGT CAC GAA GAA AGT 1512
Pro Val 370 Asp Thr Phe Leu Arg 375 Gly His Glu Glu Ser 380
GGC GAC AGG TTT AGC AAC AGC TCG ACA GCC TTC CGA 1548
Gly Asp Arg Phe Ser 385 Asn Ser Ser Thr Ala 390 Phe Arg
CCC CTC TGT ACA GGG GAT GAG AAC ATC AGC AGT GTC 1584
Pro Leu Cys 395 Thr Gly Asp Glu Asn 400 Ile Ser Ser Val
GAG ACC CCT TAC ATA GAT TAC ACG CAT TTA CGG ATA 1620
Glu 405 Thr Pro Tyr Ile Asp 410 Tyr Thr His Leu Arg 415 Ile
TCC TAC AAT GTG TAC TTA GCA GTC TAC TCC ATT GCC 1656
Ser Tyr Asn Val 420 Tyr Leu Ala val Tyr 425 Ser Ile Ala
CAC GCC TTG CAA GAT ATA TAT ACC TGC TTA CCT GGG 1692
His Ala 430 Leu Gin Asp Ile Tyr 435 Thr Cys Leu Pro Gly 440
AGA GGG CTC TTC ACC AAT GGC TCC TGT GCA GAC ATC 1728
Arg Gly Leu Phe Thr 445 Asn Gly Ser Cys Ala 450 Asp Ile
-57CZ 292709 B6
AAG AAA GTT GAG Glu GCG TGG Ala Trp CAG GTC CTG AAG CAC CTA 1764
Lys Lys Val 455 Gin Val 460 Leu Lys His Leu
CGG CAT CTA AAC TTT ACA AAC AAT ATG GGG GAG CAG 1800
Arg 465 His Leu Asn Phe Thr 470 Asn Asn Met Gly Glu 475 Gin
GTG ACC TTT GAT GAG TGT GGT GAC CTG GTG GGG AAC 1836
Val Thr Phe Asp 480 Glu Cys Gly Asp Leu 485 Val Gly Asn
TAT TCC ATC ATC AAC TGG CAC CTC TCC CCA GAG GAT 1872
Tyr Ser 490 Ile Ile Asn Trp His 495 Leu Ser Pro Glu Asp 500
GGC TCC ATC GTG TTT AAG GAA GTC GGG TAT TAC AAC 1908
Gly Ser Ile Val Phe 505 Lys Glu Val Gly Tyr 510 Tyr Asn
GTC TAT GCC AAG AAG GGA GAA AGA CTC TTC ATC AAC 1944
Val Tyr Ala 515 Lys Lys Gly Glu Arg 520 Leu Phe Ile Asn
GAG GAG AAA ATC CTG TGG AGT GGG TTC TCC AGG GAG 1980
Glu 525 Glu Lys Ile Leu Trp 530 Ser Gly Phe Ser Arg 535 Glu
GTG CCC TTC TCC AAC TGC AGC CGA GAC TGC CTG GCA 2016
Val Pro Phe Ser 540 Asn Cys Ser Arg Asp 545 Cys Leu Ala
GGG ACC AGG AAA GGG ATC ATT GAG GGG GAG CCC ACC 2052
Gly Thr 550 Arg Lys Gly Ile Ile 555 Glu Gly Glu Pro Thr 560
TGC TGC TTT GAG TGT GTG GAG TGT CCT GAT GGG GAG 2088
Cys Cys Phe Glu Cys 565 Val Glu Cys Pro Asp 570 Gly Glu
TAT AGT GAT GAG ACA GAT GCC AGT GCC TGT AAC AAG 2124
Tyr Ser Asp 575 Glu Thr Asp Ala Ser 580 Ala Cys Asn Lys
TGC CCA GAT GAC TTC TGG TCC AAT GAG AAC CAC ACC 2160
Cys 5B5 Pro Asp Asp Phe Trp 590 Ser Asn Glu Asn His 595 Thr
TCC TGC ATT GCC AAG GAG ATC GAG TTT CTG TCG TGG 2196
Ser Cys Ile Ala 600 Lys Glu Ile Glu Phe 605 Leu Ser Trp
ACG GAG CCC TTT GGG ATC GCA CTC ACC CTC TTT GCC 2232
Thr Glu 610 Pro Phe Gly Ile Ala 615 Leu Thr Leu Phe Ala 620
-58CZ 292709 B6
GTG CTG GGC ATT TTC CTG ACA GCC TTT GTG CTG GGT 2268
Val Leu Gly Ile Phe 625 Leu Thr Ala Phe Val 630 Leu Gly
GTG TTT ATC AAG TTC CGC AAC ACA CCC ATT GTC AAG 2304
Val Phe Ile 635 Lys Phe Arg Asn Thr ’640 Pro Ile Val Lys
GCC ACC AAC CGA GAG CTC TCC TAC CTC CTC CTC TTC 2340
Ala 645 Thr Asn Arg G1U Leu 650 Ser Tyr Leu Leu Leu 655 Phe
TCC CTG CTC TGC TGC TTC TCC AGC TCC CTG TTC TTC 2376
Ser Leu Leu Cys 660 Cys Phe Ser Ser Ser 665 Leu Phe Phe
ATC GGG GAG CCC CAG GAC TGG ACG TGC CGC CTG CGC 2412
Ile Gly 670 Glu Pro Gin Asp TrD 675 Thr Cys Arg Leu Arg 680
CAG CCG GCC TTT GGC ATC AGC TTC GTG CTC TGC ATC 244B
Gin Pro Ala Phe Gly 685 Ile Ser Phe Val Leu 690 Cys Ile
TCA TGC ATC CTG GTG AAA ACC AAC CGT GTC CTC CTG 2484
Ser Cys Ile 695 Leu Val Lys Thr Asn 700 Arg Val Leu Leu
GTG TTT GAG GCC AAG ATC CCC ACC AGC TTC CAC CGC 2520
Val 705 Phe Glu Ala Lys Ile 710 Pro Thr Ser Phe His 715 Arg
AAG TGG TGG GGG CTC AAC CTG CAG TTC CTG CTG GTT 2556
Lys Trp Trp Gly 720 Leu Asn Leu Gin Phe 725 Leu Leu Val
TTC CTC TGC ACC TTC ATG CAG ATT GTC ATC TGT GTG 2592
Phe Leu 730 Cys Thr Phe Met Gin 735 Ile Val Ile Cys Val 740
ATC TGG CTC TAC ACC GCG CCC CCC TCA AGC TAC CGC 2628
Ile Trp Leu Tyr Thr 745 Ala Pro Pro Ser Ser 750 Tyr Arg
AAC CAG GAG CTG GAG GAT GAG ATC ATC TTC ATC ACG 2664
Asn Gin Glu 755 Leu G1U Asp Glu Ile 760 Ile Phe Ile Thr
TGC CAC GAG GGC TCC CTC ATG GCC CTG GGC TTC CTG 2700
Cys 765 His Glu Gly Ser Leu 770 Met Ala Leu Gly Phe 775 Leu
ATC GGC TAC ACC TGC CTG CTG GCT GCC ATC TGC TTC 2736
Ile Gly Tyr Thr 780 Cys Leu Leu Ala Ala 785 Ile Cys Phe
-59CZ 292709 B6
TTC TTT Phe Phe 790 GCC Ala TTC Phe AAG Lys TCC CGG AAG CTG CCG GAG AAC
Ser Arg 795 Lys Leu Pro Glu Asn 800
TTC AAT GAA GCC AAG TTC ATC ACC TTC AGC ATG CTC
Phe Asn Glu Ala Lys 805 Phe Ile Thr Phe Ser 810 Met Leu
ATC TTC TTC ATC GTC TGG ATC TCC TTC ATT CCA GCC
Ile Phe Phe 815 Ile Val Trp Ile Ser 820 Phe Ile Pro Ala
TAT GCC AGC ACC TAT GGC AAG TTT GTC TCT GCC GTA
Tyr 825 Ala Ser Thr Tyr Gly 830 Lys Phe Val Ser Ala 835 Val
GAG GTG ATT GCC ATC CTG GCA GCC AGC TTT GGC TTG
Glu Val Ile Ala 840 Ile Leu Ala Ala Ser 845 Phe Gly Leu
CTG GCG TGC ATC TTC TTC AAC AAG ATC TAC ATC ATT
Leu Ala 850 Cys Ile Phe Phe Asn 855 Lys Ile Tyr Ile Ile 860
CTC TTC AAG CCA TCC CGC AAC ACC ATC GAG GAG GTG
Leu Phe Lys Pro Ser 865 Arg Asn Thr Ile Glu 870 Glu Val
CGT TGC AGC ACC GCA GCT CAC GCT TTC. AAG GTG GCT
Arg Cys Ser 875 Thr Ala Ala His Ala 880 Phe Lys Val Ala
GCC CGG GCC ACG CTG CGC CGC AGC AAC GTC TCC CGC
Ala 885 Arg Ala Thr Leu Arg 890 Arg Ser Asn Val Ser 895 Arg
AAG CGG TCC AGC AGC CTT GGA GGC TCC ACG GGA TCC
Lys Arg Ser Ser 900 Ser Leu Gly Gly Ser 905 Thr Gly Ser
ACC CCC TCC TCC TCC ATC AGC AGC AAG AGC AAC AGC
Thr Pro 910 Ser Ser Ser Ile Ser 915 Ser Lys Ser Asn Ser 920
GAA GAC CCA TTC CCA CAG CCC GAG AGG CAG AAG CAG
Glu Asp Pro Phe Pro 925 Gin Pro Glu Arg Gin 930 Lys Gin
CAG CAG CCG CTG GCC CTA ACC CAG CAA GAG CAG CAG
Gin Gin Pro 935 Leu Ala Leu Thr Gin 940 Gin Glu Gin Gin
CAG CAG CCC CTG ACC CTC CCA CAG CAG CAA CGA TCT
Gin 945 Gin Pro Leu Thr Leu 950 Pro Gin Gin Gin Arg 955 Ser
2772
2808
2844
2880
2916
2952
2988
3024
3060
3096
3132
3168
3204
3240
-60CZ 292709 B6
CAG Gin CAG CAG CCC AGA TGC Cys AAG CAG AAG GTC ATC Ile TTT Phe 3276
Gin Gin Pro Arg 960 Lys Gin Lys 965 Val
GGC AGC GGC ACG GTC ACC TTC TCA CTG AGC TTT GAT 3312
Gly Ser Gly Thr Val Thr Phe Ser Leu Ser Phe Asp
970 975 980
GAG CCT CAG AAG AAC GCC ATG GCC CAC GGG AAT TCT 3348
Glu Pro Gin Lys Asn Ala Met Ala His Gly Asn Ser
985 990
ACG CAC CAG AAC TCC CTG GAG GCC CAG AAA AGC AGC 3384
Thr His Gin Asn Ser Leu Glu Ala Gin Lys Ser Ser
995 1000
GAT ACG CTG ACC CGA CAC CAG CCA TTA CTC CCG CTG 3420
Asp Thr Leu Thr Arg His Gin Pro Leu Leu Pro Leu
1005 1010 1015
CAG TGC GGG GAA ACG GAC TTA GAT CTG ACC GTC CAG 3456
Gin Cys Gly Glu Thr Asp Leu Asp Leu Thr Val Gin
1020 1025
GAA ACA GGT CTG CAA GGA CCT GTG GGT GGA GAC CAG 3492
Glu Thr Gly Leu Gin Gly Pro Val Gly Gly Asp Gin
1030 1035 -1040
CGG CCA GAG GTG GAG GAC CCT GAA GAG TTG TCC CCA 3528
Arg Pro Glu Val Glu Asp Pro Glu Glu Leu Ser Pro
1045 1050
GCA CTT GTA GTG TCC AGT TCA CAG AGC TTT GTC ATC 3564
Ala Leu Val Val Ser Ser Ser Gin Ser Phe Val Ile
1055 1060
AGT GGT GGA GGC AGC ACT GTT ACA GAA AAC GTA GTG 3600
Ser Gly Gly Gly Ser Thr Val Thr Glu Asn Val Val
1065 1070 1075
AAT TCA TAAAATGGAA GGAGAAGACT GGGCTAGGGA3636
Asn Ser
GAATGCAGAG AGGTTTCTTG GGGTCCCAGG GATGAGGAAT3676
CGCCCCAGAC TCCTTTCCTC TGAGGAAGAA GGGATAATAG3716
ACACATCAAA TGCCCCGAAT TTAGTCACAC CATCTTAAAT3756
GACAGTGAAT TGACCCATGT TCCCTTTAAA AAAAAAAAAA3796
AAAAAGCGGC CGC3809
-61 CZ 292709 B6
Popis obrázků:
Obr. la- lr popisují strukturní vzorce sloučenin
Obr. 2 a 3 popisují fyzikálně-chemické vlastnosti a spektrální charakteristiky příslušných sloučenin, včetně jejich teplot tání (mp), optické otáčivosti, mol. hmotnosti apod.
Obr. 4 až 95 popisují hmotnostní spektra NPS sloučenin (ionizace nárazem elektronů, 70 eV).
Obr. 96, 98, 100, 102, 104, 109, 115, 117, 119 a 121 popisují ’Η-NMR spektra hydrochloridů sloučenin 9C (Obr. 96), 9R (Obr. 98), 11X (Obr. 100), 13U (Obr. 102), 13X (Obr. 104), 16Q (Obr. 109), 16W (Obr. 115), 16X (Obr. 117), 17M (Obr. 119) a 170 (Obr. 121), měřená na přístroji Varian při 300 MHz; chemické posuny v rozsahu 0 až 5 ppm byly měřeny v 1% roztoku deuterovaného methanolu v deuterochloroformu (5 mg/ml), chemické posuny v rozsahu 5 až 12 ppm pak v deuterochloroformu (60 mg/ml).
Obr. 106, 107, 111, 113, 123, 125, 126, 128, 129 a 131 popisují ’Η-NMR spektra hydrochloridů sloučenin 14L(Obr. 106), 14U (Obr. 107), 16R(Obr. 111). 16T (Obr. 113), 17P (Obr. 123), 17W (Obr. 125), 17X (Obr. 126), 25U (Obr. 128), 25V (Obr. 129) a 25W (Obr. 131), měřená na přístroji Varian při 300 MHz; chemické posuny v rozsahu 0 až 10 ppm byly měřeny v 1% roztoku deuterovaného methanolu v deuterochloroformu (5 mg/ml), chemické posuny v rozsahu 10 až 12 ppm pak v deuterochloroformu (60 mg/ml).
Obr. 97 (hydrochlorid sloučeniny 9C), 99 (hydrochlorid sloučeniny 9R), 101 (hydrochlorid sloučeniny 11X), 103 (hydrochlorid sloučeniny 13U), 105 (hydrochlorid sloučeniny 13X), 108 (hydrochlorid sloučeniny 14U), 110 (hydrochlorid sloučeniny 16Q), 112 (hydrochlorid sloučeniny 16R), 114 (hydrochlorid sloučeniny 16T), 116 (hydrochlorid sloučeniny 16W), 118 (hydrochlorid sloučeniny 16X), 120 (hydrochlorid sloučeniny 17M), 122 (hydrochlorid sloučeniny 170) a 124 (hydrochlorid sloučeniny 17P) popisují nC-NMR spektra shora uvedených hydrochloridů, měřená na přístroji Varian při 75 MHz, a to v deuterochloroformu (60 mg/ml).
Obr. 127 (hydrochlorid sloučeniny 17X) a 130 (hydrochlorid sloučeniny 25V) popisují ’3C-NMR spektra shora uvedených hydrochloridů, měřená na přístroji Varian při 75 MHz v deuterochloroformu obsahujícím 1 % deuterovaného methanolu (20 mg/ml).
Ve shora zmíněných a používaná označení: NMR spektrech jsou ponechána následující mezinárodně uznávaná
(PPM) - chemické posuny v ppm
MULTIPLICITY - multiplicita (tvar signálu):
s = singlet
bs = široký singlet
d = dublet
dd = dvojitý dublet
t = triplet
q = kvartet
m = multiplet
COUPLING (HZ) - interakční konstanta (Hz)
ASSIGNMENZ - přirazený (aliph = alifatický řetězec, RIGHT SIDE = pravá strana,
LEFT SIDE = levá strana, OR = nebo, arom = aromatický systém, naphthyl = naftyl, phenyl = fenyl).

Claims (21)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Diaromatická sloučenina obecného vzorce kde R je atom vodíku nebo methylová skupina;
    man znamenají nezávisle na sobě celé číslo od 0 do 5;
    každá skupina X je nezávisle halogenmethylová skupina nebo halogenalkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy a každá skupina Z je nezávisle alkoxyskupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  2. 2. Diaromatická sloučenina podle nároku 1 vzorce nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  3. 4. Diaromatická sloučenina vzorce nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
    -63CZ 292709 B6
  4. 5. Diaromatická sloučenina obecného vzorce kde X je trihalogenmethylová skupina nebo trihalogenmethoxyskupina; a R je -H nebo skupina -CH3;
    nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  5. 6. Diaromatická sloučenina podle nároku 5 vzorce
  6. 7. Diaromatická sloučenina obecného vzorce:
    kde R znamená buď atom vodíku nebo methylovou skupinu; n je celé číslo od 0 do 5; a
    X je nezávisle trihalogenmethylová skupina, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
    -64CZ 292709 B6
  7. 8. Diaromatická sloučenina vzorce nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  8. 9. Diaromatická sloučenina, její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex podle nároku 5, kde X znamená trifluormethylovou skupinu nebo trifluormethoxyskupinu a R je -H nebo skupina -CH3.
  9. 10. Diaromatická sloučenina, její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex podle nároku 5 nebo 9, kde X je vázána k feny love skupině v poloze 3.
  10. 11. Diaromatická sloučenina podle nároku 10 vzorce nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  11. 12. Diaromatická sloučenina podle nároku 10 vzorce nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex.
  12. 13. Kompozice pro modulování aktivity receptorů vápníku, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  13. 14. Kompozice pro léčení pacienta, který má onemocnění charakterizované abnormální hladinou iontů vápníku nebo látek, jejichž hladinu ovlivňuje hladina iontů vápníku, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
    -65CZ 292709 B6
  14. 15. Kompozice pro léčení primárního nebo sekundárního hyperparathyroidismu, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  15. 16. Kompozice pro léčení Pagetovy choroby, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  16. 17. Kompozice pro léčení hyperkalcemických onemocnění, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  17. 18. Kompozice pro léčení osteoporózy, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  18. 19. Kompozice pro léčení vysokého krevního tlaku, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  19. 20. Kompozice pro léčení renální osteodystrofie, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  20. 21. Kompozice pro snížení hladiny PTH v krvi, vyznačující se tím, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
  21. 22. Farmaceutická kompozice pro snížení hladiny vápenatých iontů v krvi, vyznačující se t í m, že obsahuje diaromatickou sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její komplex.
CZ20014662A 1994-10-21 2001-10-21 Diaromatické sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutické prostředky, které je obsahují CZ292709B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1994/012117 WO1995011221A1 (en) 1991-08-23 1994-10-21 Calcium receptor-active arylalkyl amines
US08/353,784 US6011068A (en) 1991-08-23 1994-12-08 Calcium receptor-active molecules

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ292709B6 true CZ292709B6 (cs) 2003-11-12

Family

ID=23390556

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19971182A CZ290670B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-23 Sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutický prostředek, který je obsahuje
CZ20014662A CZ292709B6 (cs) 1994-10-21 2001-10-21 Diaromatické sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19971182A CZ290670B6 (cs) 1994-10-21 1995-10-23 Sloučeniny modulující receptory anorganických iontů a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Country Status (25)

Country Link
US (1) US6211244B1 (cs)
EP (4) EP1553078A1 (cs)
JP (3) JP2882882B2 (cs)
KR (2) KR100403094B1 (cs)
CN (2) CN1312116C (cs)
AT (2) ATE287390T1 (cs)
AU (1) AU709303B2 (cs)
BR (1) BRPI9509411B8 (cs)
CA (1) CA2202879C (cs)
CZ (2) CZ290670B6 (cs)
DE (4) DE69533948T2 (cs)
DK (1) DK1203761T3 (cs)
ES (2) ES2285707T3 (cs)
FR (1) FR05C0029I2 (cs)
HK (2) HK1046900B (cs)
HU (2) HU228150B1 (cs)
LU (1) LU91182I2 (cs)
NL (1) NL300199I2 (cs)
NZ (1) NZ297157A (cs)
PL (1) PL183499B1 (cs)
PT (1) PT1203761E (cs)
RU (1) RU2195446C2 (cs)
TW (2) TW568896B (cs)
UA (1) UA55374C2 (cs)
WO (1) WO1996012697A2 (cs)

Families Citing this family (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4426245A1 (de) 1994-07-23 1996-02-22 Gruenenthal Gmbh 1-Phenyl-3-dimethylamino-propanverbindungen mit pharmakologischer Wirkung
CA2202879C (en) * 1994-10-21 2005-08-30 Bradford C. Van Wagenen Calcium receptor-active compounds
JPH10507934A (ja) * 1995-07-26 1998-08-04 エヌピーエス・ファーマシウティカルズ・インコーポレイテッド 代謝指向型グルタミン酸受容体に活性を示す化合物を同定するためのキメラ受容体および方法、ならびに神経学的障害および疾患の治療におけるそのような化合物の使用
EP1258471B1 (en) * 1996-05-01 2007-01-24 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
JP4117506B2 (ja) * 1996-05-01 2008-07-16 エヌピーエス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 無機イオン活性化合物
EP1770083B1 (en) * 1996-05-01 2009-04-29 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
ATE503739T1 (de) 1996-07-08 2011-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verbindungen die die aktivität von calcium- rezeptoren beeinflussen
US6210964B1 (en) * 1997-08-18 2001-04-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Avian extracellular calcium-sensing receptor
JP2002527414A (ja) 1998-10-14 2002-08-27 オーソ−マクニール・フアーマシユーチカル・インコーポレーテツド １，２−ジ置換シクロプロパン
US20040214889A1 (en) * 1999-07-31 2004-10-28 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
JP4595178B2 (ja) * 1999-08-04 2010-12-08 住友化学株式会社 アミン化合物、中間体、製造法および光学分割剤
DE60036758T2 (de) * 1999-08-04 2008-07-24 Sumitomo Chemical Co., Ltd. Verfahren zur Herstellung von optisch aktiver 3,3,3-Trifluor-2-hydroxy-2-methylpropionsäure und deren Salze
US6797842B2 (en) * 2000-05-11 2004-09-28 Central Glass Company, Limited Process for producing optically active 1-(fluoro- or trifluoromethyl-substituted phenyl) ethylamine and process for purifying same
FR2809396B1 (fr) 2000-05-24 2005-10-14 Centre Nat Rech Scient Nouvelles molecules possedant une activite calcimimetique et leur mode de preparation
AR038658A1 (es) * 2001-06-15 2005-01-26 Novartis Ag Derivados de 4-aril-2(1h) quinazolinona y 4-aril-quinazolina 2-sustituidas, un proceso para su preparacion, composiciones farmaceuticas y el uso de dichos derivados para la preparacion de un medicamento
US7176322B2 (en) 2002-05-23 2007-02-13 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6908935B2 (en) 2002-05-23 2005-06-21 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6849761B2 (en) 2002-09-05 2005-02-01 Wyeth Substituted naphthoic acid derivatives useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
GB0230015D0 (en) * 2002-12-23 2003-01-29 Novartis Ag Organic compounds
WO2004069793A2 (en) * 2003-01-28 2004-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Novel 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators
US7205322B2 (en) * 2003-02-12 2007-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
US7265145B2 (en) * 2003-05-28 2007-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method
FR2855754B1 (fr) * 2003-06-05 2005-07-08 Oreal Compsition, notamment cosmetique, comprenant une amine carbonylee
TWI344363B (en) 2003-09-12 2011-07-01 Amgen Inc Rapid dissolution formulation of a calcium receptor-active compound
US20050186658A1 (en) * 2003-10-17 2005-08-25 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chimeric metabotropic glutamate receptors and uses thereof
EP1757582B1 (en) 2004-05-28 2015-12-30 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Arylalkylamines and process for production thereof
US20050288377A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-29 Cantor Thomas L Use of calcimimetic as an adynamic bone disease related treatment
CN1989097A (zh) * 2004-07-22 2007-06-27 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于制备非对映异构体富集的化合物的方法
US7361789B1 (en) 2004-07-28 2008-04-22 Amgen Inc. Dihydronaphthalene compounds, compositions, uses thereof, and methods for synthesis
CA2601669A1 (en) * 2005-03-17 2006-09-28 Amgen Inc. Methods of decreasing calcification
FR2885129B1 (fr) 2005-04-29 2007-06-15 Proskelia Sas Nouveaux derives de l'ureee substituee parun thiazole ou benzothiazole, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et utilisation.
EP1881954B1 (en) * 2005-05-16 2009-09-16 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Process for preparing cinacalcet hydrochloride
US7368606B2 (en) * 2005-05-23 2008-05-06 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Amorphous cinacalcet hydrochloride and preparation thereof
EP1883618B1 (en) * 2005-05-23 2009-10-14 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing cinacalcet hydrochloride crystal form i
ES2400693T3 (es) * 2005-09-02 2013-04-11 Amgen Inc. Regulación del equilibrio de fluido intestinal usando calcimiméticos
US7595161B2 (en) 2005-11-10 2009-09-29 Hansjoerg Martin Rothe Efficacy of calcimimetic agents
JP2009516655A (ja) * 2005-11-22 2009-04-23 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド シナカルセット塩酸塩の結晶形フォーム（Ｆｏｒｍ）、およびそれらの調製方法
WO2007060026A1 (en) * 2005-11-25 2007-05-31 Galapagos Sas Urea derivatives useful as calcium receptor modulators
US20070129444A1 (en) * 2005-12-06 2007-06-07 Mallinckrodt Inc. Novel weight reduction composition and uses thereof
SI3095447T1 (sl) 2006-02-03 2022-02-28 Opko Renal, Llc Zdravljenje pomanjkanja vitamina D s 25-hidroksivitaminom D2 in 25-hidroksivitaminom D3
MX2008012061A (es) 2006-03-23 2008-12-17 Amgen Inc Metodos y composiciones para elaborar y utilizar polimorfos de cinacalcet.
MX2008013339A (es) * 2006-04-20 2009-01-26 Amgen Inc Formulaciones de emulsion estable.
ATE447546T1 (de) * 2006-04-27 2009-11-15 Teva Pharma Verfahren zur herstellung einer cinacalcetbase
US7393967B2 (en) * 2006-04-27 2008-07-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Process for the preparation of cinacalcet base
WO2008008608A2 (en) 2006-06-21 2008-01-17 Proventiv Therapeutics, Llc Method of treating and preventing secondary hyperparathyroidism
EP1914224A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sandoz AG Amorphous organic compound
WO2008000422A1 (en) * 2006-06-27 2008-01-03 Sandoz Ag Amorphous form of cinacalcet
US20090197970A1 (en) * 2006-06-27 2009-08-06 Sandoz Ag Crystalline form of cinacalcet
GB0613674D0 (en) * 2006-07-10 2006-08-16 Proskelia Sas Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
CA2662315A1 (en) * 2006-09-01 2008-03-06 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Solid composites of a calcium receptor-active compound
WO2008041118A2 (en) * 2006-10-04 2008-04-10 Pfizer Products Inc. Pyrido[4,3-d]pyrimidin-4(3h)-one derivatives as calcium receptor antagonists
EP2079525A1 (en) * 2006-10-26 2009-07-22 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
WO2008058236A2 (en) * 2006-11-08 2008-05-15 Dr. Reddy's Labortories, Ltd. Methods for preparing cinacalcet hydrochloride
EP1968932A1 (en) * 2006-11-20 2008-09-17 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Process for preparing cinacalcet
WO2008075173A2 (en) * 2006-12-15 2008-06-26 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Methods for treating podocyte-related disorders
WO2008121386A2 (en) 2007-03-30 2008-10-09 Amgen Inc. Calcimimetic compounds for use in the treatment of bowel disorders
CA2701638A1 (en) * 2007-04-02 2008-10-09 Concert Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical calcimimetics
EP3342405B1 (en) 2007-04-25 2019-08-21 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Controlled release 25-hydroxyvitamin d
ES2403107T3 (es) 2007-04-25 2013-05-14 Cytochroma Inc. Método de tratamiento de insuficiencia y deficiencia de vitamina D
EP2156846B1 (en) * 2007-05-08 2014-08-13 Ajinomoto Co., Inc. Prophylactic or therapeutic agent for diarrhea
JP5358566B2 (ja) 2007-06-21 2013-12-04 アムジエン・インコーポレーテツド シナカルセトおよびその塩を合成する方法
ITMI20071261A1 (it) 2007-06-22 2008-12-23 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet
AU2008275595B2 (en) 2007-07-10 2013-11-14 Amgen Inc. Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
WO2009025792A2 (en) * 2007-08-16 2009-02-26 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Crystalline forms cinacalcet fumarate and cinacalcet succinate and processes for preparation thereof
NZ585543A (en) * 2007-11-23 2012-08-31 Leo Pharma As Naphthalene-containing cyclic hydrocarbon compounds for the treatment of disturbances of calcium sensor receptor activity
CN101959530A (zh) 2008-02-25 2011-01-26 味之素株式会社 糖尿病或肥胖症的预防或治疗剂
JPWO2009107579A1 (ja) * 2008-02-25 2011-06-30 味の素株式会社 コク味付与剤
EP2275138A4 (en) * 2008-03-24 2013-08-21 Ajinomoto Kk PROMOTER FOR SECRETION OF BICARBONATE IN THE GASTROINTESTINAL TRACT
CA2719256A1 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Amgen Inc. Methods of treating epithelial injury
WO2009128523A1 (ja) 2008-04-17 2009-10-22 味の素株式会社 免疫賦活剤
WO2009153814A1 (en) * 2008-06-18 2009-12-23 Erregierre S.P.A. A process for the synthesis of cinacalcet hydrochloride
WO2010015935A2 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Actavis Group Ptc Ehf Unsaturated cinacalcet salts and processes for preparing cinacalcet hydrochloride
TWI428318B (zh) * 2008-08-22 2014-03-01 Daiichi Sankyo Co Ltd 環烷基胺衍生物
WO2010043721A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Oryzon Genomics, S.A. Oxidase inhibitors and their use
US20110318417A1 (en) * 2008-12-08 2011-12-29 Actavis Group Ptc Ehf Highly pure cinacalcet or a pharmaceutically acceptable salt thereof
WO2010084160A1 (en) 2009-01-21 2010-07-29 Oryzon Genomics S.A. Phenylcyclopropylamine derivatives and their medical use
WO2010086129A1 (en) 2009-01-27 2010-08-05 Rathiopharm Gmbh Inclusion complex comprising cinacalcet and cyclodextrin
AU2010215520B2 (en) 2009-02-19 2016-07-21 F.I.S. - Fabbrica Italiana Sintetici S.P.A. Process for preparing Cinacalcet hydrochloride
WO2010100429A1 (en) 2009-03-05 2010-09-10 Cipla Limited Process for the preparation of cinacalcet and salts thereof, and intermediates for use in the process
EP2406211B1 (en) 2009-03-09 2018-06-27 Megafine Pharma (P) Ltd. A new method for the preparation of cinacalcet and new intermediates thereof
WO2010104882A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Amgen Inc. Methods of modulating sperm motility
WO2010103429A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Pfizer Inc. 1,1-(Dimethyl-Ethylamino)-2-Hydroxy-Propoxy]-Ethyl}-3-Methyl-Biphenyl-4- Carboxylic Acid Derivatives As Calcium Receptor Antagonists
RU2595720C2 (ru) * 2009-04-09 2016-08-27 Когнишн Терапьютикс, Инк. Ингибиторы снижения когнитивных способностей
WO2010128388A2 (en) 2009-05-08 2010-11-11 Aurobindo Pharma Limited An improved process for the preparation of intermediate compounds useful for the preparation of cinacalcet
JP2012528086A (ja) 2009-05-27 2012-11-12 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ 新規のカルシウム感知受容体調節化合物およびその医薬用途
EP2435400A2 (en) * 2009-05-27 2012-04-04 Leo Pharma A/S Novel calcium sensing receptor modulating compounds and pharmaceutical use thereof
WO2010150837A1 (ja) * 2009-06-25 2010-12-29 第一三共株式会社 インドリン誘導体
SG10201506978UA (en) 2009-07-31 2015-10-29 Cognition Therapeutics Inc Inhibitors Of Cognitive Decline
WO2011029833A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Zach System S.P.A. Process for preparing cinacalcet
EP2477959A1 (en) 2009-09-16 2012-07-25 Ranbaxy Laboratories Limited Processes for the preparation of cinacalcet
MX338041B (es) 2009-09-25 2016-03-30 Oryzon Genomics Sa Inhibidores de demetilasa-1 especificos de lisina y su uso.
US8722732B2 (en) 2009-09-29 2014-05-13 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
EP2482855B1 (en) 2009-09-29 2017-12-27 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
WO2011042217A1 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Oryzon Genomics S.A. Substituted heteroaryl- and aryl- cyclopropylamine acetamides and their use
EP2314286A1 (de) 2009-10-21 2011-04-27 Ratiopharm GmbH Schmelzgranuliertes Cinacalcet
CN102119137A (zh) * 2009-11-02 2011-07-06 上海威智医药科技有限公司 盐酸西那卡塞的合成方法
IT1396623B1 (it) * 2009-11-26 2012-12-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet e suoi intermedi
WO2011106105A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Oryzon Genomics, S.A. Inhibitors for antiviral use
WO2011106573A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with hepadnaviridae
CA2797537C (en) 2010-03-29 2021-11-23 Cytochroma Inc. Use of 25-hydroxyvitamin d compound for reducing parathyroid levels
AU2011244325B2 (en) 2010-04-19 2015-12-17 Oryzon Genomics S.A. Lysine specific demethylase-1 inhibitors and their use
US9012511B2 (en) 2010-05-19 2015-04-21 Alkermes Pharma Ireland Limited Nanoparticulate cinacalcet compositions
RU2599789C2 (ru) * 2010-06-30 2016-10-20 Лео Фарма А/С Новая полиморфная форма кальцимиметического соединения
WO2012000499A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Leo Pharma A/S New polymorphic form of a calcimimetic compound
US8921606B2 (en) * 2010-07-16 2014-12-30 Hetero Research Foundation Process for cinacalcet hydrochloride
ES2674747T3 (es) 2010-07-29 2018-07-03 Oryzon Genomics, S.A. Inhibidores de demetilasa LSD1 basados en arilciclopropilamina y sus usos médicos
WO2012013727A1 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine derivatives useful as lsd1 inhibitors
US9061966B2 (en) 2010-10-08 2015-06-23 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine inhibitors of oxidases
CN101993379B (zh) * 2010-10-22 2013-06-19 能特科技股份有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
JP2014507375A (ja) 2010-11-26 2014-03-27 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ カルシウム感知受容体活性化合物
EP2643291A2 (en) 2010-11-26 2013-10-02 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
US20130267516A1 (en) 2010-11-26 2013-10-10 Leo Pharma A/S Substituted cyclopentyl-azines as casr-active compounds
WO2012069419A1 (en) 2010-11-26 2012-05-31 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
WO2012072713A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with flaviviridae
US8846941B2 (en) 2010-12-13 2014-09-30 Quiapeg Ab Functionalized polymers
WO2012107498A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative disorders
EP4074695A1 (en) 2011-10-20 2022-10-19 Oryzon Genomics, S.A. (hetero)aryl cyclopropylamine compounds as lsd1 inhibitors
BR112014009306B1 (pt) 2011-10-20 2021-07-20 Oryzon Genomics S.A. Compostos de (hetero)aril ciclopropilamina como inibidores de lsd1
CZ303627B6 (cs) 2011-11-25 2013-01-16 Zentiva, K.S. Zpusob výroby Cinacalcetu
CN103450027B (zh) 2012-05-29 2015-07-29 上海京新生物医药有限公司 盐酸西那卡塞的制备方法
US9220789B2 (en) 2012-06-12 2015-12-29 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Conjugates of tumor necrosis factor inhibitors to functionalized polymers
US20150344407A1 (en) * 2012-08-21 2015-12-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Fendiline derivatives and methods of use thereof
CN104583177B (zh) * 2012-08-27 2016-09-07 卢平亚特兰蒂斯控股有限公司 作为钙敏感受体调节剂的芳基烷基胺化合物
FR2995307A1 (fr) 2012-09-07 2014-03-14 Prod Chim Auxiliaires Et De Synthese Procede de preparation du cinacalcet et de ses sels pharmaceutiquement acceptables
DK2730279T3 (en) 2012-11-09 2015-10-26 K H S Pharma Holding Gmbh CINACALCETFORMULERINGER immediate release
RU2662562C2 (ru) 2012-12-21 2018-07-26 Синтон Б.В. Композиция в форме таблеток, содержащая гидрохлорид цинакалцета
KR101847947B1 (ko) 2013-03-15 2018-05-28 옵코 아이피 홀딩스 Ⅱ 인코포레이티드 안정화되고 변형된 비타민 ｄ 방출 제형
CA2915432C (en) 2013-06-26 2019-03-05 Jubilant Life Sciences Limited Disintegrant free composition of cinacalcet
JP6517827B2 (ja) 2014-01-31 2019-05-22 コグニション セラピューティクス，インコーポレイテッド イソインドリン組成物および神経変性疾患の治療方法
WO2015183839A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Cardioxyl Pharmaceuticals, Inc. Pyrazolone derivatives as nitroxyl donors
CN104045568A (zh) * 2014-06-18 2014-09-17 中山奕安泰医药科技有限公司 一种合成(r)-1–(萘-1-基)乙胺的新工艺
US10220047B2 (en) 2014-08-07 2019-03-05 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Adjunctive therapy with 25-hydroxyvitamin D and articles therefor
CN104478736B (zh) * 2014-12-16 2016-07-13 成都启泰医药技术有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
WO2016193882A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Lupin Limited Process for preparation of cinacalcet intermediate and cinacalcet hydrochloride
KR20230054752A (ko) 2016-03-28 2023-04-25 옵코 아일랜드 글로벌 홀딩스 리미티드 비타민 d 치료 방법
WO2018163131A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Releasable conjugates
MX388366B (es) 2017-05-15 2025-03-19 Cognition Therapeutics Inc Composiciones para tratar enfermedades neurodegenerativas.
CN112955216A (zh) 2018-09-12 2021-06-11 奎亚培格制药公司 可释放glp-1缀合物
CN111196759B (zh) * 2018-11-16 2023-03-24 上海博志研新药物技术有限公司 盐酸西那卡塞及其中间体的制备方法
US20220313581A1 (en) * 2019-08-28 2022-10-06 Conopco, Inc. , d/b/a UNILEVER Novel compounds for skin lightening
JP2023519882A (ja) 2020-03-27 2023-05-15 ソム、イノベーション、バイオテック、ソシエダッド、アノニマ シヌクレイノパチーの治療に有用な化合物
RU2739376C1 (ru) * 2020-07-24 2020-12-23 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) Способ получения фендилина

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2276618A (en) 1942-03-17 N-phenylaliphatic bihxdroxithenyl-
US2930731A (en) 1952-04-08 1960-03-29 Upjohn Co Bis[beta-(ortho-hydrocarbonoxyphenyl)iso-propyl]amines
BE570596A (cs) 1957-08-26
BE621300A (cs) 1961-08-14
US3262977A (en) 1962-03-10 1966-07-26 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet N-aralkyl-1, 1-diphenyl-propylamine derivatives
NL293886A (cs) 1962-06-19 1965-04-12 Merck Ag E
US3318952A (en) * 1964-01-22 1967-05-09 Sandoz Ag Dibenzylsulfamides
US3459767A (en) 1965-08-10 1969-08-05 Pfizer & Co C Aminomethylindoles
GB1109924A (en) 1965-11-29 1968-04-18 Roche Products Ltd Novel substituted diphenylalkyl amines and a process for the manufacture thereof
DE1618005A1 (de) 1966-09-22 1971-09-09 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur Herstellung von neuen Amino-dihalogen-phenyl-aethylaminen
CH480791A (de) 1967-01-17 1969-11-15 Ciba Geigy Schädlingsbekämpfungsmittel
GB1263987A (en) 1969-05-30 1972-02-16 Allen & Hanburys Ltd Phenethylamine derivatives
US4129598A (en) * 1972-05-31 1978-12-12 Synthelabo Phenylethylamine derivatives
GB1448437A (en) 1973-02-24 1976-09-08 Beecham Group Ltd Diphenylpropylamines
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US4000197A (en) * 1973-07-23 1976-12-28 The University Of Iowa Research Foundation Asymmetric synthesis of phenylisopropylamines
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (cs) 1974-03-08 1982-06-04
US4014937A (en) 1974-08-26 1977-03-29 Pfizer Inc. 3,4-And 3,5-dialkoxyphenethylamines
HU169507B (cs) * 1974-09-25 1976-12-28
US3987201A (en) 1974-12-24 1976-10-19 Eli Lilly And Company Method for treating arrhythmia
US4105602A (en) 1975-02-10 1978-08-08 Armour Pharmaceutical Company Synthesis of peptides with parathyroid hormone activity
JPS5390272A (en) 1977-01-13 1978-08-08 Sendai Fukusokan Kagaku Kenkiy Method of producing optically active salsolizine
US4608391A (en) 1977-07-05 1986-08-26 Cornell Research Foundation Inc. Catecholamine derivatives, a process for their preparation and pharmaceutical compositions thereof
US4289787A (en) 1977-12-19 1981-09-15 Eli Lilly And Company Quaternary ammonium antiarrhythmic drugs
FI791727A7 (fi) 1978-06-05 1981-01-01 Ciba Geigy Ag Menetelmä N-alkyloitujen aminoalkoholien valmistamiseksi.
DE2825961A1 (de) 1978-06-14 1980-01-03 Basf Ag Fungizide amine
IL57671A (en) 1978-07-03 1982-11-30 Lilly Co Eli Phenethanolamines,process for their preparation and pharmaceutical and animal feed compositions containing the same
US4391826A (en) 1978-07-03 1983-07-05 Eli Lilly And Company Phenethanolamines, compositions containing the same, and method for effecting weight control
ZA794872B (en) 1978-09-20 1980-11-26 Schering Corp A phenylalkylaminoethylsalicylamide,its preparation and pharmaceutical compositions containing it
FR2436773A1 (fr) 1978-09-22 1980-04-18 Roussel Uclaf Nouveaux derives du 3-(aminoethyl) phenol et leurs sels, procede de preparation et application a titre de medicaments
DE2841184C2 (de) * 1978-09-22 1986-09-25 Hochtemperatur-Reaktorbau GmbH, 4600 Dortmund Vorrichtung zur Durchmischung der Heißgassträhnen bei einem gasgekühlten Hochtemperaturreaktor
US4360511A (en) 1978-11-29 1982-11-23 Medi-Physics, Inc. Amines useful as brain imaging agents
DD150456A5 (de) 1979-03-01 1981-09-02 Ciba Geigy Ag Verfahren zur herstellung von derivaten des 3-amino-1,2-propandiols
DE3061334D1 (en) 1979-06-16 1983-01-20 Beecham Group Plc Ethanamine derivatives, their preparation and use in pharmaceutical compositions
JPS603387B2 (ja) 1980-07-10 1985-01-28 住友化学工業株式会社 新規光学活性イミダゾリジン−２−オン誘導体およびその製法
HU183430B (en) 1981-05-12 1984-05-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing cyclodextrine inclusion complexes of n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine or n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine-hydrochloride
US4591605A (en) 1981-11-10 1986-05-27 Research Foundation Of State University Of New York Method and ingestible formulation for inhibiting the secretion of stomach acid
US4658060A (en) 1982-04-26 1987-04-14 Schering Corporation Preparation of (-)-5-(beta)-1-hydroxy-2-((beta)-1-methyl-3-phenylpropyl)aminoethyl) salicylamide
DE3225879A1 (de) 1982-07-10 1984-01-12 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Trans-3-(4'-tert.-butylcyclohexyl-1')-2-methyl-1-dialkyl-aminopropane, ihre herstellung und verwendung als arzneimittel
CA1258454A (en) 1982-08-10 1989-08-15 Leo Alig Phenethanolamines
US4647446A (en) 1982-08-18 1987-03-03 The Regents Of The University Of California Rapid brain scanning radiopharmaceutical
JPS5950358A (ja) 1982-09-14 1984-03-23 Sumitomo Chem Co Ltd 光学活性なカルボン酸をグラフトしたクロマトグラフ充填剤およびそれを用いる鏡像体混合物の分離法
US4677101A (en) 1983-09-26 1987-06-30 Merck & Co., Inc. Substituted dihydroazepines useful as calcium channel blockers
US4661635A (en) 1983-11-21 1987-04-28 Mcneilab, Inc. Aralykyl (arylethynyl)aralkyl amines and their use as vasodilators and antihypertensives
US5334628A (en) 1984-06-09 1994-08-02 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Amine derivatives, processes for preparing the same and fungicides containing the same
US4587253A (en) 1984-07-30 1986-05-06 Merck & Co., Inc. Bridged pyridine compounds useful as calcium channel blockers and analgesics
US4609494A (en) 1985-02-21 1986-09-02 Merck & Co., Inc. 5-acetyl-3,4,5,6-tetrahydro-4-oxo-2,6-methano-2H-1,3,5-benzothiazocine(benzodiazocine)-11-carboxylates useful as calcium channel blockers
US4839369A (en) 1985-04-16 1989-06-13 Rorer Pharmaceutical Corporation Aryl and heteroaryl ethers as agents for the treatment of hypersensitive ailments
GB8522186D0 (en) 1985-09-06 1985-10-09 Erba Farmitalia Cycloalkyl-substituted 4-aminophenyl derivatives
DE3541181A1 (de) 1985-11-21 1987-05-27 Basf Ag Propylamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als fungizide
US4675321A (en) 1986-02-07 1987-06-23 Merck & Co., Inc. Substituted pyrimidines useful as calcium channel blockers
US5034514A (en) 1986-03-17 1991-07-23 Cetus Corporation Novel cross-linking agents
US5030576A (en) 1986-04-30 1991-07-09 Genentech, Inc. Receptors for efficient determination of ligands and their antagonists or agonists
US4808718A (en) 1986-05-06 1989-02-28 Merck & Co., Inc. Fused polycyclic and bridged compounds useful as calcium channel blockers
HU200591B (en) 1986-07-11 1990-07-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new diphenyl propylamine derivatives and pharmaceutical compositions comprising such compounds
IL83163A (en) 1986-07-18 1991-06-10 Erba Carlo Spa Cycloalkyl-substituted 4-pyridyl derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
HU207280B (en) 1986-09-25 1993-03-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new phenyl-alkyl-amines and pharmaceutical compositions containing them
US4925664A (en) 1986-10-20 1990-05-15 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of calcium channels and amino acid receptor function
US5064657A (en) 1986-10-20 1991-11-12 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of amino acid receptor function
US5049654A (en) 1986-12-04 1991-09-17 Toyo Jozo Kabushiki Kaisha Calcitonin gene related peptide derivatives
GB8720115D0 (en) 1987-08-26 1987-09-30 Cooper G J S Treatment of diabetes mellitus
GB8709871D0 (en) 1987-04-27 1987-06-03 Turner R C Peptides
US4916145A (en) 1987-07-10 1990-04-10 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted n-[(pyridyl)alkyl]aryl-carboxamide
WO1989006135A1 (en) 1988-01-11 1989-07-13 Amylin Corporation Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5001251A (en) 1988-01-15 1991-03-19 E. R. Squibb & Sons, Inc. Optical resolution of DL-3-acylthio-2-methylpropanoic acid
AU3548089A (en) 1988-04-04 1989-11-03 Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc., The Calcium channel compositions and methods
US5082837A (en) 1988-06-28 1992-01-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Lactamimides as calcium antagonists
US4925873A (en) 1988-09-01 1990-05-15 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method of treating skin injuries using thromboxane A2 receptor antagonists
JPH02200658A (ja) 1989-01-28 1990-08-08 Kumiai Chem Ind Co Ltd Ｎ―（置換）ベンジルカルボン酸アミド誘導体及び除草剤
RU2005717C1 (ru) * 1989-02-17 1994-01-15 Такеда кемикал-индастриз Лтд Способ получения производных аралкиламинов или их кислотно-аддитивных солей
US5011834A (en) 1989-04-14 1991-04-30 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon PCP receptor ligands and the use thereof
DD298412A5 (de) 1989-04-28 1992-02-20 ������@���Kk�� Verfahren zur herstellung von polypeptiden, die geeignet sind als antagonisten exzitatorischer aminosaeure-neurotransmitter und/oder blocker der calciumkanaele
EP0597830A1 (en) 1989-07-03 1994-05-25 New York University Nyu Medical Center Use of polyamines as ionic-channel regulating agents
GB8915712D0 (en) 1989-07-08 1989-08-31 Macintyre Iain Medical treatment
US5021599A (en) 1989-08-31 1991-06-04 Serpentix Conveyor Corporation Redox-responsive anion receptors
US5053337A (en) 1989-10-30 1991-10-01 Neurogenetic Corporation DNA encoding an α2B -adrenergic receptor
EP0507863A4 (en) 1989-12-28 1993-07-07 Virginia Commonwealth University Sigma receptor ligands and the use thereof
JP2818958B2 (ja) 1990-02-23 1998-10-30 塩野義製薬株式会社 ４―（４―アルコキシフェニル）―２―ブチルアミン誘導体およびその製造法
US5096908A (en) 1990-05-04 1992-03-17 Eli Lilly And Company Method of inhibiting gastric acid secretion
AU8876591A (en) 1990-11-02 1992-05-26 Upjohn Company, The Indole-3-methanamines useful as anti-diabetic, anti-obesity and anti-atherosclerotic agents
ATE288262T1 (de) 1991-02-08 2005-02-15 Scion Pharmaceuticals Inc Substituierte guanidine und derivate hiervon als modulatoren der freisetzung von neurotransmittern und neue methode zur identifizierung von inhibitoren der neurotransmitter-freisetzung
US5312928A (en) 1991-02-11 1994-05-17 Cambridge Neuroscience Calcium channel antagonists and methodology for their identification
DK0508307T3 (da) * 1991-04-08 1995-12-27 Sumitomo Chemical Co Optisk aktive sekundære aminforbindelser, fremgangsmåde til fremstilling af en optisk aktiv sekundær aminforbindelse og fremgangsmåde til fremstilling af en optisk aktiv carboxylsyre ved anvendelse af denne forbindelse
US5688938A (en) 1991-08-23 1997-11-18 The Brigham & Women's Hospital, Inc. Calcium receptor-active molecules
DE69233586T2 (de) 1991-08-23 2006-09-28 NPS Pharmaceuticals, Inc., Salt Lake City Kalzium-Rezeptor aktive Verbindungen
US5763569A (en) 1991-08-23 1998-06-09 The Brigham And Women's Hospital, Inc Calcium receptor-active molecules
ES2218531T3 (es) 1991-08-23 2004-11-16 Nps Pharmaceuticals, Inc. Arilalquilaminas activas sobre los receptores del calcio.
DK0613458T3 (da) 1991-11-12 1998-02-09 Pfizer Acykliske ethylendiaminderivater som substans P receptorantagonister
CA2125676A1 (en) 1991-12-30 1993-07-08 Marcel August Constant Janssen .alpha.-substituted benzenemethanamine derivatives
AU3588693A (en) 1992-01-29 1993-09-01 Smithkline Beecham Corporation N-benzyloxamic acid, oxamate, and oxamide derivatives and their use as TNF and PDE IV inhibitors
JP3175339B2 (ja) * 1992-10-07 2001-06-11 住友化学工業株式会社 光学活性アミン化合物、その製法、その中間体及びその用途
JP4143118B2 (ja) 1993-02-23 2008-09-03 ブリガム・アンド・ウイミンズ・ホスピタル・インコーポレイテッド カルシウム受容体活性化分子およびその関連物
GB9326403D0 (en) * 1993-12-24 1994-02-23 Oxford Asymmetry Ltd Improvements in or relating to chiral syntheses
US5631401A (en) * 1994-02-09 1997-05-20 Abbott Laboratories Inhibitors of protein farnesyltransferase and squalene synthase
CA2202879C (en) * 1994-10-21 2005-08-30 Bradford C. Van Wagenen Calcium receptor-active compounds
US7043457B1 (en) 2000-06-28 2006-05-09 Probuild, Inc. System and method for managing and evaluating network commodities purchasing
US20060283332A1 (en) 2001-12-11 2006-12-21 Garman Michael H Hot beverage maker
US8526300B2 (en) 2008-03-31 2013-09-03 Ericsson Ab Method and apparatus for providing resiliency in multicast networks
KR101411428B1 (ko) 2012-07-12 2014-06-24 한국과학기술원 집광식 휴대용 형광 검출 시스템

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI9509411B1 (pt) 2016-12-06
US6211244B1 (en) 2001-04-03
RU2195446C2 (ru) 2002-12-27
EP0787122B9 (en) 2007-10-17
PT1203761E (pt) 2005-04-29
HK1046900B (en) 2005-07-29
JPH10513436A (ja) 1998-12-22
AU4195796A (en) 1996-05-15
JPH11130737A (ja) 1999-05-18
NL300199I2 (nl) 2005-10-03
WO1996012697A9 (en) 2000-08-24
LU91182I9 (cs) 2019-01-07
CA2202879A1 (en) 1996-05-02
CA2202879C (en) 2005-08-30
EP0787122A2 (en) 1997-08-06
DE69535461T2 (de) 2008-09-25
LU91182I2 (fr) 2006-07-11
HK1020041A1 (en) 2000-03-10
DE122005000033I1 (de) 2005-09-29
JP2007204482A (ja) 2007-08-16
HK1052685A1 (en) 2003-09-26
TW568896B (en) 2004-01-01
HU228150B1 (en) 2012-12-28
AU709303B2 (en) 1999-08-26
PL319812A1 (en) 1997-09-01
DK1203761T3 (da) 2005-04-11
HUT77980A (hu) 1999-02-01
DE69535461D1 (de) 2007-05-24
CZ290670B6 (cs) 2002-09-11
UA55374C2 (uk) 2003-04-15
CN1220658A (zh) 1999-06-23
KR100293621B1 (ko) 2001-11-26
HK1002454A1 (en) 1998-08-28
BRPI9509411A (pt) 1997-12-30
HU0700718D0 (en) 2008-12-29
EP1275635A1 (en) 2003-01-15
JP4002338B2 (ja) 2007-10-31
FR05C0029I1 (cs) 2005-08-12
CN1147459C (zh) 2004-04-28
EP1203761A3 (en) 2002-05-15
ATE359259T1 (de) 2007-05-15
EP0787122B1 (en) 2007-04-11
ES2234768T3 (es) 2005-07-01
EP1203761A2 (en) 2002-05-08
DE122005000033I2 (de) 2006-11-23
JP2882882B2 (ja) 1999-04-12
CN1312116C (zh) 2007-04-25
BRPI9509411B8 (pt) 2021-07-06
DE69533948T2 (de) 2005-12-15
EP1203761B1 (en) 2005-01-19
CZ118297A3 (en) 1997-09-17
HU229474B1 (en) 2014-01-28
CN1534016A (zh) 2004-10-06
ES2285707T3 (es) 2007-11-16
FR05C0029I2 (fr) 2006-12-29
ATE287390T1 (de) 2005-02-15
KR100403094B1 (ko) 2003-11-13
JP4353985B2 (ja) 2009-10-28
NL300199I1 (nl) 2005-08-01
PL183499B1 (pl) 2002-06-28
WO1996012697A2 (en) 1996-05-02
NZ297157A (en) 1999-08-30
HK1046900A1 (en) 2003-01-30
WO1996012697A3 (en) 1996-06-13
EP1553078A1 (en) 2005-07-13
DE69533948D1 (de) 2005-02-24
TW200402407A (en) 2004-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6211244B1 (en) Calcium receptor-active compounds
US6001884A (en) Calcium receptor-active molecules
US6313146B1 (en) Calcium receptor-active molecules
CA2173747C (en) Calcium receptor-active arylalkyl amines
US6011068A (en) Calcium receptor-active molecules
US5962314A (en) Calcium receptor-active molecules
AU747853B2 (en) Calcium receptor-active compounds
KR100300450B1 (ko) 칼슘 수용체-활성 화합물
HK1077807A (en) Calcium receptor-active compounds
MXPA97002938A (en) Active compounds for cal receiver
HK1002454B (en) Calcium receptor-active compounds
HK1070351A (en) Calcium receptor-active arylalkyl amines
AU3122699A (en) Calcium receptor active arylakyl amines

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20151023

MK4A Patent expired

Effective date: 20200426