HU228150B1 - Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments - Google Patents

Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments Download PDF

Info

Publication number
HU228150B1
HU228150B1 HU9802491A HU9802491A HU228150B1 HU 228150 B1 HU228150 B1 HU 228150B1 HU 9802491 A HU9802491 A HU 9802491A HU 9802491 A HU9802491 A HU 9802491A HU 228150 B1 HU228150 B1 HU 228150B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
medicament
compound
calcium
complex
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
HU9802491A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT77980A (hu
Inventor
Wagenen Bradford C Van
Scott T Moe
Manuel F Balandrin
Eric G Delmar
Edward F Nemeth
Original Assignee
Nps Pharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23390556&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU228150(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US1994/012117 external-priority patent/WO1995011221A1/en
Priority claimed from US08/353,784 external-priority patent/US6011068A/en
Application filed by Nps Pharma Inc filed Critical Nps Pharma Inc
Publication of HUT77980A publication Critical patent/HUT77980A/hu
Publication of HU228150B1 publication Critical patent/HU228150B1/hu

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A61P3/14—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis for calcium homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A61P5/20—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of PTH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/27—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by saturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/28—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by unsaturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/30—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring the six-membered aromatic ring being part of a condensed ring system formed by two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/58—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms with amino groups and the six-membered aromatic ring, or the condensed ring system containing that ring, bound to the same carbon atom of the carbon chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/62—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms linked by carbon chains having at least three carbon atoms between the amino groups and the six-membered aromatic ring or the condensed ring system containing that ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C225/00—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones
    • C07C225/02—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C225/14—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated
    • C07C225/16—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated and containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/32—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/32—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to an acyclic carbon atom of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)

Description

NVÖMDAPÉI.DÁNY j f' A M í £
Kai ciujare-cepfcor'-aktív vegyüietak, áort
Ikí 1 C. 1' nJs ír «< iX,rM t >>í^ it a {fc x.) ** ‘f ?ps~>^íotOTSWT
RK
iFeltalálók:
: \ |VAN WAGENEN^xadford Cl. '^OE Scott T,z χ. jsALANDRIN Merjek;.. jUELMAR Eric G., \_y
IN.&M&T.H hjówar-Q F. t v
X ;>·' X |A nemzetközi bejelentés napjá\ 1995. 10. 23.
SalZ Laké City, ÜT, js:ált Laké City, UT,
Sandy, UTf
Salt Laké City, c?,
Salt Laké City, ÜT, Amerikai Egyesült Államok
Elsőbbségei: / 1991. 10. 2l\ (PCT/ÜS94/12117, US)
1994. 12. OS. /08/353 781, US)
A nemzetközi bejelentés száma; PCT/ÜS95/137Ö1
X |A nemzett z
bzí közrebocsátás száma; WO §6/1269-7
//ϊ .XXX
X »«y« «· ♦
A találmány szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozni képes vegyüietekre, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményekre, valasúnt ezeknek a gyógyszerkészítményeknek az alkalmazására vonatkozik.
A. test bizonyos sejtjei nemcsak a tisztán kémiai jelekre, hanem az ionokra, például az extraeeliuiáris kaiciusdonokra iCa2'; is reagálnak. Az extraeeliuiáris kalciumionok. koncentrációjának a változásai - az extraeeliuiáris kalciumionkoncentrációt a továbbiakban (Ca^l-val jelöljük - megváltoztatják ezeknek a sejteknek a működésben válaszreakcióit. Egy ilyen differenciálódott sejt a mellékpajzsmirigy hormonját IPTH) kiválasztó mellékpajzsmirigysej:t. A PTH a legfontosabb belső elvéi osztású faktor, amely a Ca2'~homoösztázist a bélben és a sejten kívüli testnedvekben szabályozza.
A, PTH a csont-sejtekre és a vese-sejtekre kifejtett hatásával megnöveli a vérkaicium-koneentráciőt. A ?Ca2j~nak ez a növekedése azután negatív visszacsatoló jelként működve csökkenti a PTH-kiválasztást. A kalciumion-koncentráció és a PTHkiválasztás közötti fordított fuggvénykapcsolat az alapja annak a fontos mechanizmusnak, amely fenntartja a testben a kalciumionok homöosztázisát.
Az extraeeliuiáris kalciumionok a mellékpajzsmirigy-sejtekre közvetlenül hatva szabályozzák a PTH-kiválasztást. Bébi zonyosodott , hogy létezik a mellékpajzsmirigy-sejtek felületén egy fehérje, amely észleli a [Ca2j-ban bekövetkezett változásokat [Brown és munkatársai: Kataré, 3S6, 574. (i993}]l Ez a fehérje a mellékpaj zsmirigysej lekben. az extraeeliuiáris kalciumionok receptoraként működve fez a fehérje a kalcium«««« ·♦** receptor”} észleli*' a [Ca 1 változásait és '* kéz demé nyesi ” a sejt műkodésboii válaszreakcióját, a PTH~kíválasztást.
Amint ex a Nemeth és munkatársai által elkészített szakirodalmi szemléből [Csll Calcium, 11., 319 (1990)} 'kitűnik, az extraceliuláris kalciumionok hatást gyakorolnak a különböző sejtfunkcíökra„ Németh, egy másik cikkben [Ceii Calcium, 11, 023 (1990(} a parafollikuiáris. sejtekben (a C-se j tekben) és a meiiékpaj-zsmirigysejtekben levő extraceliuláris kalciumionok szerepét vizsgálja. Ezekről a sejtekről korábban már kimutatták, hogy hasonló· kaicíumíon-receptorokkal rendelkeznek (Broun és munkatársai: Natúré, 3SS, 574 (1093); Mithai és munkatársai., 9. Suppi. 1 J. Boné and Minorai áss,, s282 (1994; és Carrott és munkatársai: 9. Suppi. 1 J. Boné and Míneral Rés. s«09 (19943}, 2aidí cikkéből (Bioscience Roports, 10, 493 (1990;} kitűnik, hogy milyen hatást gyakorolnak az extracelluláris kalciumionok a csont lebontó se j tekre . Ezenkívül a ksratinociták, a juxtaglomeruiáris sejtek, a trofoblasztok, a hasnyálmirigy béta-sejtjei, valamint a. zsir/háj sejtek valamennyien reagálnak az extraceliuláris kaiciumkoncentráciő növekedésére, ami valószínűleg azzal van összefüggésben, hogy az említett sejtek kaiciumreceptorai aktiválódnak.
Számos szakirodalmi hely foglalkozik különböző vegyülőtekne.k azzal a képességével, hogy in vitro körülmények között képesek szimulálni az extraceliuláris kalciumionokat [Nemeth és munkatársai: Calcium-Binding Proteins ín Health and Diseass” (A kalcium megkötésére alkalmas fehérjék szerepe az egészség megőrzésében és a betegségek kialakulásában), Academic Press, Inc., 1987,
33.-35. oldalak (spermán és
X « φ X Φ φ X Φ * >
spermidin); Srown és munkatársai: Endocrinology, 128,· 3047 (1991? (például neomicin)./ Chen és munkatársai: J. Boné and Minerál Rés., 5, 581 (1930) tdiltiazem és analogonja, TA3030); Zalái és munkatársai: Biochem. Biophys- Rés. Common., 167, 807 (1990) (vera-pamil); Nemeth és munkatársai: BCT/O333/01642, S2. nemzetközi bejelentés ja nemzetközi közrebocsátás! írat száma/ HO 94/18:359) és Neme eh és munkatársai: PCT/US92/07175. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátást irat száma; WO 33/04373)μ A felsorolt szakirodalmi helyeken olyan vegyületeket ismertetnek, amelyek képesek szabályozni egy szervetlen ionnak a szervetienionreceptorral rendelkező sejtekre gyakorolt hatását.
A felsorolt szakirodalmi helyeket nem tekintjük a találmány leírását kiegészítő referenciaanyagnak.
A találmány szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozni képes vegyületekre, valamint olyan, betegségek vagy rendellenességek kezelésére alkalmas eljárásokra vonatkozik., amelyek a szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásán alapulnak . Előnyösen azok a vegye letek alkalmazhatok, amelyek szimulálni vagy blokkolni képesek az eztrace11uiáris kalciumnak a sejtek területen levő kalcium-receptorokra gyakorolt hatását.
A szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásával kezelhető betegségekre, illetve rendellenességekre a következő típusú jellegzetességek legalább egyike jellemző; (1) rendellenes szervetleuion-homöosztázis, előnyős esetben kaicium-homöosztázis; (2? rendellenes mennyiségű extrsceiluiáris vagy inrracelluiárls: hírvivő, amelynek a termelődése szervet♦ »♦** φ •φ lenien-receptorok - előnyös esetben kalciamreceptorok - aktivitásával befolyásolható; (3) agy íntracelluláris vagy extracelruláris hírvivő rendellenes - például jellegében vagy nagyságában eltérő - hatása, astely szervetlenion-receptorok előnyős esetben, kalciwsreeeptorok - aktivitásának köszönnetőén javulhat; és HÍ a szervetlenion-recepf orok ~ előnyös esetben a kalciumreceptorok - aktivitásának a szabályozása pozitív hatást gyakorol, mint például olyan betegségek, illetve rendellenességek esetében, amelyeknél· egy intraoelluláris vagy extracelluláris hírvivőnek a receptor aktivitásának köszönhetően fokozott mértékű terxaelő-dése kompenzálja egy másik hírvivő rendellenes mennyiségét. Azokra az extraoelluláris hírvivőkre, amelyeknek a kiválasztása és/vagy a hatása befolyásolható a szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásával, példaként megemlítjük a szervetlen ionokat, a hormonokat, a neurotranszmlttereket, a növekedési faktorokat és a kemokinőkát. Az íntracelluiáris hírvivők köze tartozik a cAMP, a cGMP, az IP5 és a diacii-glieerin.
A találmány szerinti vegyületek tehát előnyösen szabályozzák a kalciumreceptör aktivitását, és olyan betegségek vagy rendellenességek kezelésére alkalmazhatók, amelyek a kalciumreceptor egy vagy több aktivitásának a szabályozásával befolyásolhatók. A kaloíumreoeptor fehérjéi képessé tesznek bizonyos speciális sejteket arra, hogy reagáljanak az extraoelluláris kaiciumion-koncentráoiő változásaira. így például, az extraoel luláris kálói emlőt, gátolja a mellékpajzsmirigyhormon kiválasztódását a mellékpajzsmirigysejtekből, akadályozza, hogy a csont a csont lebontó sejtek hatására *
felszívódjék és serkenti a C-sejtekbői a kalcitonin kiválasztódását.
A találmány egyik előnyös Megvalósítási módja szerint a találmány szerinti vegyűleteket olyan betegség vagy rendelie~ nesség kezelésére alkalmazzak, amely betegségre vagy rendellenességre a csontnak és az ásványi anyagoknak a megszokottól eltérő homoosztázisa, előnyösebb esetben kalcíumhomőosztázisa jellemző. A szigorú homöosztatikus ellenőrzés alatt lévő extracelluiáris kalcrumionok különböző folyamatokat szabályoznak, Így a véralvadást, az idegek és az Izmok ingerlés! folyamatát, valamint a megfelelő csontképződést. A kaiciom-homöosztázís rendellenességét a következő jelenségek közül legalább egy jelzi: {1} a várszérum kalciumkoncentráel őjanak rendellenes növekedése vagy csökkenése; (2) a kalciumkoncentráció rendellenes növekedése vagy csökkenése a kiválasztott vizeletben; (3) a kaieiumkoncenlráció rendellenes növekedése vagy csökkenése a csontokban {ezt például a csontban. lévő ásványianyagok sűrűségének a mérése alapján, lemet megállapítani;; (4} az elfogyasztott ételben levő kalcium, rendellenes felszívódása; (5) a vérszérum kaioiumszintjét befolyásoló hírvivők - például a mellákpajzárnirogy-hormon és a kalcitonin - termelődésének és/vagy felszabadulásának rendellenes növekedése vagy csökkenése; és (6? a vérszérum kalciumszintjét befolyásoló hírvivők által kiváltott válaszreakciókban bekövetkező rendellenes változás. A kalciuo-homöoszzúzzanak ezekben az eltérő megjelenési formáiban tapasztalható, a normálistól eltérő növekedés vagy csökkenés általában előfordul a lakosságnál, és rendszerint betegséggel vagy rendelle♦ >
nességekkel függ Össze.
A normálistól eltérő kalcinm-homöosztázisban megnyilvánuló betegségek és rendellenességek a sejtek különböző hiányosságainak, például a keiciumreceptorok hibás működésének, a kalcium-receptorok csökkent számának vagy hatását egy kalciumreceptor mellett kifejtő hibás intraeeiiuláris fehérjének tulajdoníthatók. így például a meliékpajzsmirzgyssdlekben a kalcium-receptor a G<-fehérjéhez kapcsolódik, amely viszont gátolja a ciklusos AMP termelődését, A Gj.-fehérjében előforduló hibák befolyásolhatják a Gj-fehérjének & crktusos AM.P termelődését gátló képességét.
A találmány először is olyan, szervetienion-receptorokst szabályzó vegyüietekre vonatkozik, amelyek (I) általános képlétében oki
- Ara jelentése éeeesanett szubsztituenssei - mégped.ig.^^=^eé—eeé»léí%eá· alkiicsoporttal, halogén/k-orSSal, rövid szénláncú alkoxicsoportjtaAy'krövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, ^^..i..évu~-b--íe^ r-Pvi-d-—-s-réTdrirrcz^ ^ikékr-csoporttal / halogén-aéAeieé-cso·-ρ o r 1t a 1J—©&—sAAAsnAuéeA,—grygu—fHeepe^ééeér?—ggpH-— porttal, Cd csoporttal, acctoxícsoportírrV hdCHd csoporttal, fenilcsoporttal, fenu^rfcsoportial, benziicsoporttai, benzli-pjsérVzsoporttal, ex, a-dimet.il-benziI-osopordtnlA NO; csoporttal, CHö csoporttal, CH2CH{Q&k^csoporttál, acetalcsoporttal és/vagy éti~—«?áoi?t--arjrertkre« he 1 y e 11 e s 1 te 11 ns-éÁi-l-^-^ag-y· fen 11 csoport;
y
Pl .üVá
Ar j elöntése —^gysaás-feéi—feéggeéR-eftiH—kóvdvAas^feeM szubsztltuenssei - mégpedig —s-aén/bárrcö·· adrkéűyy&epö-£--P-feaé.-r......hai<>gé'íns-feemíeai'7—«é^á^™-^»éft±á«eö^a±^ w·, e.'/oXi metilén-díoxí-csoporttal, rövid széniáarCŰ halogén-alki l~csoporttal, rövid sztáeltancü halogén-alkoxxcs-oporttal,- OH c sgipoht t a 1, CHjOK csoporttal, CQHlh csoportt§l«<^dN csoporttal és/vagy aoetoxiosoporttai toí<» (·>=» > k «./lAy tóSí-t—eees^e^ helyettesített eaééée- vagy -£e«ár*cstiport?
~ q jelentése j&r-W 2 ás iU
Vy< £/b
- R jelentése hidrogénatom vagy ^<?*4--a®é«ráársteá:—aé-Aeicsoport.
A találmány tárgyát képezik az (I) általános képlett vegyületek farmakológia! szempontból elfogadható sói, valamint komplexei is.
A találmány szerinti veyyüietek kedvező sztereokémiajó vegyüietek. Az (1· képletben a metilcsoport egy kiráiis centrumhoz kapcsolódik, így a~(R)-metil-szerkezet jön létre. Az ti) általános képletben az R szuhsztituens szintén kiráiis centrumhoz kapcsolódik, Így - amennyiben R jelentése ma ti lesöpört - (Ri-metil-szerkezet alakul ki. Abban az esetben tehát, he. R. jelentése metilesöpört, az (I) általános képlett vágyóiét sztereokémiái szempontból (R,R)-vegyület.
A szervetlenion-receptor aktivitásai olyan folyamatokban nyilvánulnak meg, amelyek szervetisnior-receptor aktiválásának az eredményeként mennek végbe. Ilyen folyamatok közé sorolható azoknak a molekuláknak a termelődése, amelyek intra,£7X ,h j. 1,5 <· ceiiuláris vagy extracelluláris· hírvivőként működhetnek.
A szervetieníon-receptorokat szabályozó vegyül etek. kővé tartoznak az iononírezikonok, az ionolitikumok, a kalcimimeti.körnek és a kaiciiitikumok< Az ionomimetikumok olyan vegyültek, amelyek hozzákötödnek egy szervetlenion-receptorhoz és szimulálják (vagyis kiváltják vagy fokozzák; egy szervetlen ion hatásait a szervetlenion-receptoron. A vegyület előnyös esetben a kaiciumionreceptor egy vagy több aktivitását befolyásolja. A kalcimimetikumok olyan ionomimetikotok, amelyek befolyásolják a kalciwreceptorok egy vagy több aktivitását és hozzákötodnek a kalciumreceptorokhoz.
Az ionoiitikumok olyan vegyületek, amelyek hozzákötődnek egy szervetlenion-receptor'hoz és blokkolják ;vagyis gátolják, illetve csökkentik; a szervetlenion-receptoron egy szervetlen ion által kiváltott egy vagy több aktivitást. A vegyület előnyös esetben egy vagy több kalciumreceptor-aktivitást befolyásol. A kalcil.iiikumok olyan ionolitikumok, amelyek blokkolják a kalcíumreoepfcor extracelluláris kalcium által kiváltott egy vagy több aktivitását és nozzákötődnek a kalciumreceptorhoz,
Az íonomametikumok és az ionolitikumok megkötődhetnek a receptornak ugyanazon a helyen, ahol a természetes szervetlenion-ligandum megkötődik, de megkötődhetnek attól eltérő például ailoszterikus - helyen is. Így például a kalciumreceptorhoz kötődő HPS R-46'7 kaiciumreceptor-aktívitást eredményez, és így az NFS R-4S7-et a kaicimimetíkumok csoportjába sorolják. Az NFS R-467 azonban az extracelluláris kalcium kötőhelyétől eltérő helyen - vagyis ailoszterikus helyen - kő4»*# * tődik a kalciumreceptorhoz.
Egy vegyül©t hatásosságának a mértékét úgy lehet meghatározni, hogy az adott vég yú let re kiszámítják az ECit) vagy az IC«o érteket, Az ECS0 az a koncentráció, amelyben egy vegyüietnek jelen keli lennie ahhoz, hogy a maximális szimuláló hatás felét kifejtse. Az ICA, az a koncentráció, amelyben egy vegyületnek jelen keli lennie ahhoz, hogy a maximális blokkoló hatás felét kifejtse. Kalciumreceptoron levő vsgyületekre az EC5o és az IC50 értékeket úgy határozzák meg, hogy mérik a kalciumreceptoron levő extraceliuláris kalcium egy vagy több aktivitását. Az Evht; és az IC5Ö értékek mérésére szolgáló mennyiségi elemzésre vonatkozó példák találhatok Németh és munkatársai szabadalmi bej elöntéseiben [PCT/ÜS93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (nemzetközi közrebocsátási száma: NO 94/18953.) és PCT/U'S92/0~Í75. sz, nemzetközi bejelentés (nemzetközi közrebocsátási száma NO 93/04373 .'}}, valamint a leírás további részében, (Az előbb említett két nemzetközi bejelentést a találmány ismertetését kiegészítő referenciaanyagnak tekintjük,) Ezekhez a mennyiségi elemzésekhez hozzátartozik az oocita-expresszíö vizsgálata és egy intraceliuláris kalciumion-koncentrációnál <{Cah}i) a kaiciumreceptor aktivitásának köszönhetően tapasztalható növekedés mérése is. Ezeknek a vizsgálatoknak a keretében előnyös esetben egy kalciumreceptor aktivitásával kapcsolatos jellemző hormon felszabadulását vagy gátlását mérik.
Egy szervetlenion-receptort szabályzó vegyúlet előnyös esetben szelektíven célozza meg egy adott setjben a szervetienion-receptor aktivitását. Egy kalciumreceptor-akziviras *** *♦«·.* * * * ♦ « #* például szelektíven ^megcélozható” egy olyan vsgyülettei, amely adott koncentrációban alkalmazva egy bizonyos típusú sejtben nagyobb hatást gyakorol a kalczamreceptor-akti vitásra, mint egy másik típusú sejtben, Jn vivő vagy in vitro körülmények között mérve a díífereneiálls hatás legalább tízszeres. Még előnyösebb, ha a differenciális hatást, in vivő körülmények között, a vegyület koncentrációját pedig a vérplazmában vagy az extraceiiuiáris fluidomban mérik, és a mért hatás eztracelluláris hírvivőktől - például vérplazmában lévő kalcitonintól, mellékpajzsmirigy-hormontól vagy vérplazmában levő kalciumtól - származik. így például az egyik előnyös megoldás .szerint olyan vegyületet alkalmaznak, amely a kalcitoninelválasztás helyett a PTK-szekréciöt befolyásolja szelektíven.
A vegyüiet előnyös esetben olyan kai c.Imimet ikum vagy ka lei 11 ti kun, amelynek a kalciumre-ceptoron az EC«n vagy XCso-értóke a későbbiekben ismertetésre kerülő mennyiségi elemzések egyikévei meghatározva legfeljebb 5 μΜ, még előnyösebb esetben pedig legfeljebb I μΜ, például 100 nM, 10 nM vagy 1 nM. Még előnyösebb, ha. az intracelluláris kalciumionokat a humán mellékpajzsmirigy kaleiumreceptorát manifesztáló: és fura-2-vel feltöltött nukleinsawai átalakított HSK 253-as sejtekben határozzuk meg mennyiségileg, A. kisebb EC;ü~ és XC;,ti-értékek előnyösek, mert lehetővé teszik a vegyületek kisebb koncentrációban való alkalmazását in vivő vagy in vit.ro körülmények között. Kis Efüe-értékekkel vagy IC^-értékekkel rendelkező vegyuietek felfedezése lehetővé teszi további, hasonló vagy még jobb hatékonysággal és/vagy szelektivitással
- 12 rendelkező vegyületek tervezését és szintetizálását.
A találmány tárgyát képezik továbbá - farmakológiai szempontból elfogadható sóikkal és komplexeikkel együtt ~ azok a szervetieníon-receptorok szabályozására alkalmas vagyai ezek, amelyek (χχ) általános képletében.
- Ar;; jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott sznbsztitnenssei - mégpedig rövid szántanod slkílosoporttai, halogénafcomma.i, rövid szénláncú, alkoxícscporttal, rövid szénláncű tio-aikil-csoporttal, metiién-díoxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkíi-csoporttai, rövid szénláncű. haiogén-aikoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, COdH, csoporttal. Cd csoporttal, acetoxicsoporttai, benzalcsoporttal, benzíl-oxi-csoporttal, a,a-dimetii-benzii-csoporttal, H02 csoporttal, CHO csoporttal, CihCHbOH;· csoporttal, csoporttal, acstilcsoporttal és/vagy etiién-dioxi-csoporttal - adott esetben helyettesített naftiivagy fenilesepert;
- Ar4 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubszt1tuenssei - mégpedig rövid szénláncű aikilcsoporttai, hsiogénatoímal, rövid szénláncű alkoxícscporttal, rövid szénláncű tio-alkil-csoporttal, metilén-díoxi-csöporttal, rövid szénláncű hatogén-alkii-csoporttal, rövid szénláncű balogén-aikoxi-csoporttai, OH csoporttal, CH:;OH csoporttal, COHHj csoporttal, Cd csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesi tett naftil- vagy zenilesöpört;
- r8 jelen t é se b1dr o géna tóm vagy fen i1c s ορort;
- Fm jelentése hidrogénatom vagy metilosoport;
- 13 - R?o jelentése hidrogénatom, metílcsoport vagy feniícsoport, feltéve, hogy ha Ar4 jelentése S-metoxifenil-csoport, akkor Ars jelentése olyan helyettesé Heti fenilcsoport, amelyben a helyettesítő jelentése nem 2-mefoxi·-, 3-metil-, 2-metlí-,
4-metii~, 2,4~dimetil·-, 2,4,6-trimetil· vagy 4-izopropilcsoport; és ha Au jelentése helyettesíteíien fenilcsoport, akkor ArB jelentése olyan helyettesített fenilcsoport, amelyben a helyettesítő jelentése nem 2~nitroíenik 4-nitröfenil· vagy 4-dimétll· aminofenil-csoport.
Λ ét
A találmány tárgyát képezik továbbá azok a gyógyszerkészítmények, amelyek találmány szerinti szervetlenion-receptor szabályzó vegyulet mellett fiziológiailag elfogadható hordozóanyagot tartalmaznak. !!Gyégyszerkészi tmények”~nek emlősök mindenekelőtt emberek - szervezetébe való bejuttatásra alkalmas kiszerelési tormáid kompozleiókat nevezünk. A. farmakológiái kompozíciók előnyös esetben megfelelő kiszerelési formában elegendő mennyiségű fcalciumreceptor-szabályozó vegydletet tartalmaznak ahhoz, hogy az emberi szervezetben gyógyító hatást fejtsenek ki.
A szakemberek tisztában vannak aszal, hogy milyen szempontok figyelembevételével letet előállítani a szervezetbe való bejuttatásra alkalmas kiszerelési formákat. Figyelembe kell venni például a mérgező hatásokat, az oldhatóságot, az adagolás módját és az aktivitás megőrizhetöségét. így például a véráramba injektált farmakoiógiai kompozícióknak oldhatóknak keli lenniük,
A. gyógyhatású vegyüietek farmakológia! szempontból elfogadhatói sók {például savaddieios sok! és komplexek alakjában is formálhatók. Ilyen sók előállításával meg lehet könnyíteni egy hatóanyag gyógyszerként való alkalmazását:: a fizikai tulajdonságok megváltoztathatók a fiziológiai hatás befolyásolása nélkül.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy olyan eljárás is, amely szerint a sxervetienion-receptor aktivitásának a szabályozásával lehet kezelni betegeket a találmány szerinti ionreceptor-szabályozó vegyüietek alkalmazása által. Az eljá-
rás keretében olyan gyógyszerkészítményt juttatunk be a beteg szervezetébe/ amely a gyógyító hatáshoz elegendő mennyiségben tartalmaz .szerve ti anion-receptort szabályozó vegyüietet. Az eljárás egyik előnyös megvalósítási módja szerint a betegséget vagy a rendellenességet a kalcíumreceptor aktivitásénak a szabályozásával kezeljük olyan módon/ hogy a beteg szervezetébe a gyógyító hatáshoz megfelelő mennyiségben kalciumreoeptor-szabályoző vegyüietet juttatunk.
A betegek kezelésére szervetlenion-receptort szabályozó vegyületek/ valamint ilyen vegyüieteket tartalmazó készítmények használhatók fel. Ά beteg” kifejezést olyan emlősök megjelölésére használjuk/ amelyeknek az állapotát előnyösen lehet befolyásolni egy szervetlenion-receptor szabályozásával. Azokat a betegeket/ akiknek szükségük van a szervetlenion-receptorok szabályozásán alapuló gyógykezelésre/ a gyógyító munkában jártas szakemberek számára ismert, szokásosan alkalmazott módszerekkel azonosítani lehet.
Előnyös esetben, a beteg olyan ember, akinél olyan rendellenességet állapítottak meg, amelyre a kővetkező szabálytalanságok legalább egyike jellemző: :lj szabálytalan szervetienion-homöosztázis, előnyösebb esetben szabálytalan kalcium~hombosztézis; (2; a normálistól eltérő koncentrációban van jelen az a. hírvivő/ amelynek a termelődését vagy elválasztását befolyásolja a szervetlenion-receptor aktivitása, előnyösebb esetben a kalciumreceptor aktivitása; és <'3J a normálistői eltérő koncentrációjú vagy aktivitású azon hírvivő, amelynek a működését befolyásolja a szervetlenion-receptor aktivitása, előnyösebb esetben a. kalciumreceptor aktivitása.
A normálistól eltérő· kalcium-homöosztázásban megnyilvánuló betegségek közé tartozik például a mellékpajzsmirigytúlműködés, a csontritkulás és más, csonttal és ásványianyagokkal összefüggő rendellenességek, amelyeket például a szokásos gyógyászati szövegkönyvekben - így például a “ Hamison ts Principles of Internál Medicina” (Har.rison: A belgyógyászat alapelvei} - ismertetnek. Ezeket a betegségeket olyan, kalciumreceptor-szabályozó vegyüietekkel kezelik, amelyek a kalciumreceptoron az extraeeliuiáris kalciumáén legalább egy hatását szimulálják vagy blokkolják, és ezáltal közvetlenül vagy közvetve befolyásolják a beteg szervezetében a fehérjék vagy más vegyülitek koncentrációját♦
Gyógyászati szempontból hatásos mennyiség’’-nek nevezzük egy vegyületnek azt a mennyiségét, amely bizonyos mértékben enyhíti a páciensnél diagnosztizált betegségnek vagy rendellenességnek egy vagy több kórtünetét; részben vagy teljes mértékben visszaállít a normális szintre egy vagy több olyan fiziológiai vagy biokémiai paramétert,· amely összefüggésben van a betegséggel vagy a rendellenességgel, illetve amelynek a megváltozása kiváltotta a betegséget vagy a rendellenességen .
Előnyösen alkalmazható- a. találmány szerinti eljárás például olyan betegek esetében, akiknek a betegségére vagy a rendellenességére egy vagy több kalciumreceptor-szabályoző komponens normálistól eltérő koncentrációja utal, és a vegyület hatást fejt ki a kővetkező sejtek valamelyikének kálóiumrecaptorán: mellékpajzsmirigysejt, csontiebontó sejt, juxtaglomeruláris vesesegt, a test középpontjához közel eső ** ♦’*** «Φ«Φ χ * 4 # * Φ Φ * ΧΦΦ * » 4Φ#* X Φ * * Φ #Φ vasecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornáboi származó sajt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében léve, úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt,· a pajzsmirigybői származó· parafoiiikuiáris sejt (C-sejt;, bélsejt, vériemezke, vaszkuláris simaizomsejt, szivpitvarból származó sejt, gasztrlnt kiválasztó sejt, glukagont kiválasztó sejt, mszangiális vesesejt, emlőseit, béta-sejt, zsir/báj sejt, ímmnnsejt, a gyomor- és béltraktusbői származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfűggeIekmírigy~sejt, hipotalamuszsejt, és a szubforníkális szervből származó sejt.
Előnyösebb esetben a sejtek a következők lehetnek: meilékpazsmirigysejtek, a központi idegrendszerből származó sejtek, s perifériás idegrendszerből származó sejtek, a vese Henie-kaosának a vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejtek, a pajzsmirigybői származó parafoliikuláris sejtek (C-sejtek), bélből származó sejtek, a gyomor· és bél traktusból származó sejtek, az agyfüggelekmirigyböl származó sejtek, hípotalamnszsejtek és a szubforn.pkáiis szervből származó sejtek.
A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósitásí módja szerint olyan vegytletet alkalmazunk, amely kalcrmimetikus hatást gyakorol a meilékpajzsmirigysejt kaioiumreceptorára és csökkenti a meliékpajzsmi.rigy-hormon szintjét a beteg vérszérumában. Még előnyösebb esetben a meliékpajzsmiri.gy-hormon szintje olyan mértékben csökken, amely elegendő * * * « « * * * * * * * * * β ► **» w V * ** ♦ *»
- 18 ahhoz, hogy kiváltsa a vérplazma kaiciumion-koncentrációjának a csökkenését. A legelőnyösebb esetben a mellékpajzsmirigyhormon szintje az egészséges embereket jellemző koncentrácíöértékre csökken.
Egy másik előnyös esetben a vegyelek valamilyen ka lei lilikem, amely hat a meliékpajzsmirígysejt kalciumreceptorára és megnöveli a beteg várszérumában a merlékpajzsmirigy-hormon szintjét. Még előnyösebb esetben a melIékoa j zsmirigy-hormon szintje olyan mértékben növekszik, amely elegendő ahhoz, hegy előidézze a beteg csontjában az ásványi anyagok sűrűségének a növekedését.
Az ilyen kezelésre szoruló betegeket szokásos orvosi módszerekkel - így véreiemzéssel vagy vizei&tel.emzéssei - azonosíthatjuk, például olyan módon, hegy méréssel megállapítjnk annak a fehérjének a hiányát, amelynek a termelődését vagy szekrécióját befolyásolják a szervetIenion-koncentráciökban bekövetkező változások, illetve az elemzési eredmények alapján megállapítjuk, hogy a szervetienion-homöoszfázist befolyásoló szervetlenionok vagy hormonok koncentrációi eltérnek a szokásos értekektől.
Különböző példákat közlünk, valamennyi alkalmazási lehetőség ismertetésére. .A közölt példák azonban semmilyen vonatkozásban nem korlátozzák a találmányt.
A találmány többi jellegzetessége és előnye nyilvánvalóan kitűnik a kővetkező ábrákból, a találmány részletes ismertetéséből, a példákból, valamint az igénypontokból.
A rajnmeilékietek rövid ismertetése
Az I.ai-i.r} ábrákon különböző vegyüietek kémiai szerbe···· * Φ ♦ X ·»»·♦:
* * ***» » ♦ * * ο *» rétét szemléltetjük.
Α 2,-131. ábrákon a leírásban szereplő jellegzetes vegyületek fizikai adatait közöljük,
A találmány előnyös megvalósítási formáinak ismertetése
A találmány szerinti vegyületek képesek szabályozni egy szervetieníon-reoeptor egy vagy több aktivitását. Ezek a vegyületek előnyös esetben szimulálni vagy blokkolni tudják egy eztraoeiiuiárzs ionnak egy szervetienion-receptorrai rendelkező sejtre gyakorolt hatását. Még előnyösebb esetben az extracelluláris ion kalciumon és a hatás egy kalciumreceptorral rendelkező sejtre gyakorolt hatás. A kaiciumaktivl.zással, a kaicíumreceptorral és/vagy a kaiciumreoeptor-szabályozó vegyületekkei foglalkozó szakirodalmi helyek közül megemlítjük a következőket: Bro-wn és munkatársai: Natúré, 366, 574 (1393); Nemeth és munkatársai; PCT/ÜS943/0ÍŐ42. sz. nemzetközi szabadalmi leírás (nemzetközi közzétételi száma: WO 943/183S9); Nemeth és munkatársai; PCT/US92/G7175. sz. nemzetközi szabadalmi leírás (nemzetközi közzétételi száma: WO 93/04373); Shoback és Chen: J, Boné Nineral vés., 9, 293 (1994), valamint Rácke és munkatársai: FESS Lert., 333, 132 (1993) . A felsorolt szakirodalmi helyek szövegét nem tekintjük a találmány leírását kiegészítő referenciaanyagnak.
I. Kaiciumreceptorok
A kalciumreceptorok eltérő típusú sejteken lehetnek jelen, és a különböző típusú sejteken eltérő lehet az aktivitásai.. A következő sejteknek a kaiciumionokra reagálva kifejtett farmakológiái hatásai összefüggésben vannak a kalcium* * * 9 9 * / * 9 * * ♦·** .:».» í * ·♦·* *„· receptor jelenlétével:: mellékpajzsmirigyse j t, csontlebontó sejt, juxtaglomeruláris vesesejt, a test középpontjához közel eső vesecsatornáhöi származó sejt, a test középpontjától távol esc vesecsatornáből származó sejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henle-kaes vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmírigyből származó parafői 11 kaláris sejt ÍC-sejt;, bélsejt, vérlemezke, vaszkuiáris s imái zo.rn.se jt, szívói ivarból származó sejt, gasztrznt kiválasztó sejt, glhkagont kiválasztó sejt, mezangíáiis vesesejt, emlőseit, béta-sejt, zsir/háj sejt, immunsejt, a gyomor- és bál-traktusból származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfüggelékmirigy-sejt, hipotalamuszsejt, és a szubfcrnikáiIs szervből származó sejt.
Ezenkívül megemlítjük, hogy fizikai adatokkal már igazolták a kalciumreceptorok jelenlétét a következő sejteken: mellékpazsmírigysejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vese üenle-kacsának. a vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuiárís sejt (G-sejtí , bélből származó sejt, a gyötörés béitraktüsből származó sejt, az agyfüggelékmirigyböí származó sejt, hipotalamuszsejt és a szubfornikáiis szervből származó sejt.
Ezeken az eltérő típusú sejteken különböző kalciumreceptorok lehetnek jelen. Az Is lehetséges, hogy egy sejten egynél több típusba sorolható kalciumreceptor van. A kalcium» «6 , ί» receptor-aktivitások és az eltérő sejtekből származó aminosav-szekvenciák összehasonlítása alapján megállapítható, hogy különféle kalciwareceptor-tlpnsok léteznek. A kalciumreceptorok például különböző kétértékű és háromértékű kationokra reagálhatnak. A meliékpajzsmirigysejt kalciumreceptora Ca'-ra és Gd’^-ra egyaránt reagál, mig a csontlebontó sejtek kalciumreceptora a kétértékű ionokra - például a kalcíuxaionra - reagál, de a Gd'^-ra ne®. A meliékpaj zsmirigysej t kalciumreceptora tehát farmakológia! szempontból különbözik a csontlebontó sejt kalciumreceptorától<
Más részről azonban a mellékpajzsmírigysejtekben és a Cssjtekoen jelenlevő, kalcium-receptorokat kódoló nükleinsavszekvenciák azt mutatják, hogy ezek a receptorok nagyon hasonló amínosav-szerkezettel rendelkeznek. A kalolmimetlkus vegyu.letek azonban farmakológia! szempontból különböznek, és a meliékpajzsmirigysejteken, valamint a C-sejteken eltérő aktivitásokat szabályoznak. A kelet umreceptorok farmekoiőgiai tulajdonságai tehát jelentős mérté kbexx függhetnek annak a sejtnek vagy szervnek a típusától, amelyben ezek a receptorok manifesztálódnak, így a kalciumreceptorok szerkezetei hasonlók, sőt azonosak is lehetnek,
A kaleíumrecsptoroknak általában kicsi ez affinitásuk az extraceiluláris kaiciamionokhoz {a látszólagos K,; rendszerint nagyobb mint körülbelül 0,5 mbfi , Cooper, Bioom és Roth meghatározása szerint [f!The Bioohemioal Sasis of Neuropharmacology'{A neurofarmakoiögia biokémiai alapjai?, Ch,, éj a kalciumraceptorok szabadéifektoros vagy kötöttéifaktoron mechanizmussal működhetnek, így tehát különböznek az intraceliulárls *♦«.» »»·♦♦. * ♦ ·*. « kaiciumrecsptoroktöl, például a kaimodulíntöi és a troponinektől.
& .kalciumreceptorok reagálnak az extraceliuláris kalciumszintek változásaira. Hogy pontosan milyen változások következnek be, az az adott receptortól és a receptort tartalmazó sejtvonaltől függ. így például a kalciumnak a mellékpajzsmirigysejtben lévő kalcíumreceptorra in vitro körülmények között gyakorolt hatása következtében:
1. növekszik a belső kaicinmzon-koncentráeiö. A növekedés a külső kalciumionok beáramlásának és/vagy a belső kalciumtartalom mohi Uralásának tulajdonítható. A belső kalciumionkoncentráció növekedése a következőkben nyilvánul meg:
(aj gyorsan, a csúcsértéket 5 másodpercen beiül elérve· átmenetileg no a [Ca^p, a növekedés 1 μΜ La^-nai vagy 1 μΜ Gd“*-nal nem gátolható- meg, de ioncmicines előkezeléssel - extraceliuláris kalciumionok távoliétében - megakadályozható?
(b) a növekedést dlhidrapiriöinazármazékok nem gátol ják;
(ο) az átmeneti növekedés megszüntethető lö mM nátrium-flüori-döai való lü perces előkezeléssel;' (d) az átmeneti növekedés mérsékelhető a C-proteinkináz (PbC; valamelyik aktivá.torával - például forbol-mirisztát-aeetáttal (ΡΜΆ)·, mezere lnnél. vagy --V-indolaktámmal - végzett előkezeléssel. A. C-protein- kinéz aktivátora végül is a kalciumkoncentráció/válaszreakció görbéjét jobbra tolja anélkül, hogy ez a változás a válaszreakció maximális értékét befolyásolná; és ♦ *
XX (ej a 100 ng/mi pertussziss-tozínnal legalább 4 órán át végzett előkezelés nem befolyásolja a növekedést?
2. gyorsan - 3-8 másodpercen belül - fokozódik az inorit~i, 4, ö-trifoszfat vagy a diacii-giioerin képződése. A 100 ng/ml koneent rációban alkalmazott pertusszísz-toxinnai több mint 4 órán át végzett előkezelés ezt a növekedést nem befolyásolja;
3. a ciklusos AMP dopaminnai és izoproterenoiial stimulált képződése gátolt; ezt a tatást blokkolni lehet 100 ng/ml koncentrációban alkalmazott pertusszisz-tcxinnal több mint 4 órán át végzett előkezeléssel; és
4. a PTH-kiválasztás gátolt; a PTH-kiválasztás gátlását a 100 ng/mi koncentrációban alkalmazott pertusszisz-toxlnnai több mint 4 órán át végzett előkezelés nem befolyásolja.
A kalciumnak a különböző sejtekben levő más kalciumreceptorokra gyakorolt hatását a szakterületen ismert módszerekkel könnyen meg lehet határozni. Ezek a ha tások hasonlóak lehetnek a belső kalciumion-koncentráoíőnak a mellékpaizsmirigysejfceknél megfigyelt növekedéséhez. Más vonatkozásokban viszont a hatások várhatóan eltérnek, például abban a tekintetben, hogy kiváltják-e vagy akadályozzák egy, a mellékpajzsmirigytől eltérő hormon felszabadulását,
II. Szervofclsnion-receptorokat szabályozó vegyüietek
A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyüietek egy a szervetlenion-rsceptorok egy vagy több aktivitását szabályozzák, Kaiciamreceptor-szshályozó vegyületként előnyösen alkalmazhatók a kaIcImimétíkumok és a kaiciiitikumok. A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületeket olyan vegyüietek szűrővizsgálata alapján lehat azonosítani, amelyeket egy jellegzetes aktivitást mutató vegyidet - az úgynevezett vezérvegyű let - szerkezetének az ismeretében terveztek meg” és állítottak elé,
Az egyik előnyösen alkalmazható módszer szerint a (Ca'3s változásának .mérése alapján lehet meghatározni a kalciumreceptor aktivitását. A iCa2'!]i változását különböző módszerekkel lehet mérni. így például a humán mellékpajzsmirigy kalciumreceptorát manifesztáló és fura-2-vel feltöltött nukleinsavval átalakított HEK 2S3-as' sejtek alkalmazásával, valamint egy kalciumreceptor genetikai kódját tartalmazó nukleinsavvai injektált Xenopus oocyte-ben a kloridion-áramlás fokozódásának a mérésével [Németh és munkatársai: PCT/US93/3IS42. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: HO 94/13959)]. így például poiidA)* mSNS-t lehat kinyerni olyan, kalcium-receptort manifesztáló sejtekből, mint a me.l~ iékpaj zsmirigysej t, a csontlebontó sej t, a juxfagiomeruiáris vesesejt, a test középpontjához közei eső vesecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesec-satornábői származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henie-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafoliikuiáris sejt «'C-sejt) , a bélsejt, a. központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vérlemezke, a vaszkuiáris simaizomsejt,. a szívóit varból származó sejt, a gaszfcrint kiválasztó sejt, a glükagont kiválasztó sejt, a nszangiális vesesejt, az emlősejt, a béta-sejt, a zsír/háj sejt, az immunsejt, a gyomor* φ
- 25 és bé.ltraktusből származó sejt. A nukleinsav előnyös esetben mellékpajzsmirigysejtbői, C~sejtböl vagy csontlebontó sejtből származik. Még előnyösebb, ha a nukleinsav kódol egy kalciumreceptort és jelen van egy plazmádban vagy egy vektorban.
A találmány előnyösen valósítható meg, ha a kaleiumreeeptor-szabályozó vegyület olyan kalcimimetikum, amely in vívó körülmények között megakadályozza, hogy a csontlebontó sejtek hatására a osont £elszívódéék, in vitro· körülmények között megakadályozza, hegy csontlebontó sejtek hatására a csont felszívódjék, in vitro vagy in vivő körülmények között serkenti a kalc.iton.in kiválasztódását a ü-sejtokból, in vitro körülmények között gátolja a mellékpajzsmirigy-hormon kiválasztódását a mellékpajzsmlrigysejbekből és in vivő körülmények között mérsékli a FTH-kiválasztódást, in vivő körülmények között növeli a kslcitoninszinteket, illetve in vit.ro körülmények között blokkolja a csontlebontó sejtek hatására végbemenő csontielszivödást és in vivő körülmények között gátolja a osontfalszivédést.
égy másik előnyös megvalósítási mód szerint a kalciumreceptor-szabályozó vegyület olyan, kalóz li tikom., amely in vit.ro körülmények között kiváltja a mellékpajzsmirigy-hormon, kiválasztódását a mellékpajzsmirigysejtekből és in vivő körülmények kozott fokozza a mellékpajzsmirigy-hormon koncentráció j át.
Előnyös esetben a vegyület egy jellegzetes sejtben szelektíven befolyásolja a szervetlsnüon-rsceptor aktivitását, még előnyösebb esetben a kalciumreceptor aktivitását. A szelektíven” szó azt jelenti, hogy a vegyület egy adott kon* « « * ♦ * « « *
- 26 centráciőban nagyobb hatást gyakorol, egy bizonyos típusú sejtben levő szervetlenion-recepéor aktivitására, mint egy másik, típusú sejtben levő szervetienion-receptoréra, Előnyös esetben az egyik hatás legalább 10-szer akkora, mint a másik. A koncentráció előnyös esetben vérplazmákéi! koncentrációt jelent, a mért hatás pedig extraceliuláris hírvivők ~ például a vérplazmában levő kaicitonin, a mellékpajzsmirigy-hormon vagy a vérplazmában levő kalcium - képződése. Az egyik előnyös megvalósítási módot például az jellemzi, hogy a vegyúlet a kalcitonínkiváiasztássai szemben szelektíven befolyásolja a P TK-ki v álá s z tás t,
Egy másik előnyös kiviteli mód szerint a vegyúlet EC®~ értéke vagy ICAj-értéke a következő sejtek közül legalább egynél - de nem valamennyinél - legfeljebb 5 ,uM: meliékpajzsmirigysejt, csont lebontó- sejt, jaxtaglomernláris vesesejt, a test középpontjához közel eső vesecsatornáböi származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornáböi származó sejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafoliikuláris sejt ÍC-sejt), célsejt, vériemezke, vaszkuláris simaizomsejt, szivpitvarbci származó sejt, gasztrint kiválasztó sejt, giükagont kiválasztó sejt, mezangiál is vesesejt, emlőseit, béta-sejt, zsír/haj sejt, Immunsejt, a gyomor- és béitraktusból származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfüggeiékmirigy-sejt, hipotalamuszsejt, és a sznbfornikális szervből származó sejt. Még • * * «X ♦ 9* * « Λ ♦ * ♦ » ♦ * ♦ ♦ Λ * 9 9 9*
V * + ♦ >«99 9 »♦»» < 9> X 99 előnyösebb esetben & sejtek a következők közül kerülnek ki: meliékpaasmirigysejt, központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből, származó sejt, a vese Henlekacsának vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékbői származó sejt, a pajzsmírügyből származó parafoilikutárás sejt {C-sejfc}, bélből származó sejt, a gyomor- és béltraktusból származó sejt, az agyfüggelékmirigyből származó sejt, hipotalamuszsejt és a szubfornikálls szervből származó sejt. Az ebbe a csoportba tartozó sejteknél a kalcíumreceptor jelenlétét fizikai módszerekkel - például in sitt? hibridizálással és antitestes színezéssel - már igazolták.
A szervetienion-reoeptort szabályozó vegyületek előnyös esetben olyan módon szimulálják vagy blokkolják a szervetlenIon-receptorral rendelkező sejten az extraceiluláris Ion hatásait, hogy gyógyhatást fejtenek ki.. A szervetienron-receptorokat szabályozó vegyületek a morfológiai szempontból különböző típusú szervetlenion-receptorokkal rendelkező sejtekre - Így például a szabályos szervetlenion-receptorokkal rendelkező sejtekre, a szokásos számú szervetienion-reoeptort tartalmazó sejtekre, a szabálytalan szervetienion-receptorokkal rendelkező sejtekre és a szokásostól eltérő számú, szervetlenion-receptort tartaimazö sejtekre - azonos vagy eltérő módon hathatnak.
A kalciumreceptor-szabáiyozó vegyületek a kalciumrecsptorral rendelkező sejtben előnyős esetben az extraceiluláris ion valamennyi hatását szimulálják vagy blokkolják. Ezzel kapcsolatban azonban megjegyezzilk, hogy a kalcimimetikumoknak nem kell rendelkezniük az extraceiluláris kalciumlonok ve la♦ ·* # mennyi biológiai aktivitásával. Ehhez hasonlóan a kaicilitikumokrói is elmondhatjak, hogy nem keli blokkolniuk az extracelluiárís ksiciumíonok által létrehozott aktivitások mindegyikét. Ehhez még azt is hozzátehetjük, hogy a különböző karcImimétikümok és különböző kalcilitikumok nemcsak akkor tudják kifejteni a hatásukat, ha a kaiciumreceptornak ugyanahhoz a helyéhez kötődnek, mint az extraoelluláris kaicínmionők<
A szerretienion-receptorokat szabályozó vegyületeknek nem szükséges ugyanolyan mértékben vagy ugyanolyan módon befolyásolniuk a szervetienion-receptor aktivitását, mint a természetes Ugandámnak. Egy kas. címemet ikum például - azáltal, hogy más kötőhelyhez kapcsolódik vagy más affinitással rendelkezik, mint a kaloíumreoeptorra hatást gyakorló kaioiumion ~ a kaicíumionhoz képest eltérő mértékben és eltérő ideig befolyásolhatja a kaiciumreeeptor aktivitását.
A> Kalcimimetifcmok
1. általános képletű vegyüietek
A kalcbumreceptorok aktivitását szabályozni képes vegyüietek íI) általános képletében í'ZÓ
- Ar-; jelentése —egymás-é-éé——k-évé™·
aeáeAHc s opo r 11 a 1 ha 1 o g é n - aaéea^é - o.s o ρ o r 11 a .1-ΘΗ—es^-pOTt-t-a-iy—EőA&H—e-aapuer ééynA;—í-eéééA—eee-~ pe-nbtaép ΕΉ s-s-opo-rtt-a-1- ae^sabx-iese'iepe^ebbe'e·^—pyrupá^..
(p dt. tb 7,o ♦ ♦ X * ζ 1 1 c s opo r 11 a 1, ben z i 1 - o x i-csoport t a, a- d 1 m« t i 1' benz.il-csoport tál, NGg^.mePborttai,, CHO csoporttal; CHglKíOH) _jas«pbrttal, acefcíIcsoporttal és/vagy éti——edete—h e 1 y e 11 e s x t e t' vagy feni lesöpört; é-
se egymástól tac rget lenül előnyösen CH: t f CH 3O jf CH-^pH^O Λ
métáién- h 1 ex i - c s sport, Br, Cl, F, 1, Z' rp Γ’ίΧ ΤΓ G.· b $ jf kx i, i / \x£xÓ jU f Z*
',.· í‘ d..rGG f Gr i <G f C;—. f <.·:“;·0, G -HH; , y CN, xb >, CIbClb, /
p rop i 1 os opo r t, izopropílesöpört. / butilesöpört,
1 zobut 1.1 csoport, / f· O: r-Κι Ί *·. ·:..] ~~ c** Í?rsr>,~t r>X λλ· ü *g Xz <.x .’w -x *G. kj *»» >x 'í*'** *G vagy acefcoxi-
......, / .
csoport lehet; még előnyösebb /ésetben Ari jelentése X
1-S, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel, megpegőg izopropílcsoporttal, se-
toxl; csoporttal, met,il-t io-csoporttal, t r 1 tluor-me-
toxi- “csoporttal, z Abdatómmal, klótatommal, f luo.ratom-
JV} Ui 1 •νΙΪΛΑ X. / / trifluorZret / il-csoporttal és/vagy xaetl lesöpört-
fc&£ f 1 e geXinyö séf >b esetben trif iuor-metoxi ~csoport-
C S ΐ f g-Őda tómmal, kiöratommal, fluoratommal os /vagy
tri/luor-metli-csooorttai helyettesített naftái- vaov /' ' i:- g~<h j PúT , ; · ' h^;i y, ~ __
mé gp e d i g i-ö-v-i-d—srénárancű rv> et® ti-'· &e$«/e s opo r 11 a 11—tevlb—s-sé-nl-á-neú—éde—osOprnpiuteaö·, met 11 én-d1οχ 1 - csopo r 11 a 1 , röyid--—tfen 1 áncű halogéna 1 k 11 - os opo r thai-?—rö v i d s z é ni ártó ű h a I o gé n ~ a 1 k o x i - o s o ;péaGeé’&i··?·—Gk—eeepeeefeaAy—ivSyex—esOOer'tteeey'··εο§ΑΆ~—s-eo—
Vx m '?
» * peréés-l·?—-CN——~4sdvagy—»««4«χχ4^&ορ^?-14·«ίΑ—» «£&λ η<! -»|>«Λ ζη-ρϋ í adott esetben helyettesített fta-étá4~~ vagy éeftéécsopo r t; —függe’H^r nül- előnyösen CHS, CH30, CB3CH2Q, metilén-díoxi/soportf Br, Cl, r, 1,- CCn, CHr,, Cí-i?s', öl A-u/''CkjCBvv,
CH:5Sí OH, CigOH, CONHo, CN, 'N02, 'CH3CH2, ppdpxlesöpört, izopropi lesöpört, butllcsoport, / o b a t i 1 c s ο p o r t, /
terc-butil-csoport vagy acetoxl/óport lehet; még ,z előnyösebb esetben Arj jelentévé 1-5 egymástól független szubsztituenssel // csoporttal, meroxíesopórttal, mégpedig izopropilmatil-tio—csoporttal.
triflaor-metoxi-esgfSorttai, jódatommai, kióratommai, fluoratommal, / ferifluor-matil-csoporttai és/vagy ..·· metilcsopor/al, legelőnyösebb esetben trifluorχ’’ metoxi-gőoporttal, jódatómmal, klóratommal, fluoratomMal, metoxicsoporttal és/vagy trifiuor-metil-cso/ pmr-t-t-ai------:--..beá-yef-tresarbett--5ia-e-t--r-l—vagy-^naáé?esoport7
- q jelentése —-M 2 Wgy~4; és
- A jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
A kalciumreceptor aktivitását szabályozni képes vegyüietek közé tartoznak az (I> általános képlett vegyületek farmakolögíaiiag el fogadható sói, valamint komplexei is.
A—^A-evAe-—s-zén-i-á-H-eá—a-i-ká-ée-ee>p<^e-á“—k~eáa4-<
szénatomos - előnyös esetben 1-3 szénatomos_,_^--Á-eTitett szénhlörogéncsoportra vonatkozik, ,...eme-iV'egyenes széniáncű és elágazó szénláncú^ejpyatant lehet.
yi. =/c:
rörrdd—voü:i.káiicn...~.a.iXzdvzon.pou.dlXxn—mo.ns.tko.ZüX,—^oetotuon—tor— rövid szénláncú aiki 1csoporthoz kapcsolódó οκίgénatomot/jelent, /”
A rövid. szénláncú tio-alkil-csoport kifejepés S-rövid szénláncú aikí icsoporíX-ra vonatkozik, amelybeX az S a rövid szénláncú alkilcsoporthoz kapcsolódó kgbatomot jelent.
A rövid szénláncú halogéxi-alkil-cpdport kifejezés legalább egy halogénatommal heiyetteslXett, rövid szénláncú ai/ kxlcsooortra vonatkozik. A röviíh szénláncú haiogen-alkiicsoportban előnyös esetben csa^/a láncvégi szénatom van helyettesítve haiogénato-mma.1, jé& a. csoport 1-3 halogénatomot tarX talmaz. Meg előnyösebb, ha a rövid szánláncú halogén-aikiiX' csoport 1 szén&jsúmot tartalmaz. Előnyös, ha a halogénxz szobsztztuenseX kiöratomok vagy fluoratomok.
A rövxd széniánoú haiogén-aikcxi-csoport” kifejezés örövid pdénláncú ha.iogán-alk.ii'“csoport’t-ra vonatkozik, ameiybeip/”O'” rövid szenláncú haiogén-alkil-csopcrthoz .kapcsolódó
a) Ar3. helyén és Ar2 helyén egyaránt adott esetben szubsztitűéit fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képlett vegyüietek
Az előnyösen alkalmazható vegyüietek egyik csoportját képezik az Ar· helyén és Ar; helyén egyaránt adott esetben helyettesített fenilcsoportot tartalmazó vegyüietek. Ezeknek, a vegyületeknek a köre az (Isi általános képlettel adható meg, amelyben
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
bíshTA
- m és n jelentése - egymástól függetlenül - 0:Kl; RR—R>λ ~ az X srobsztituensek jelentése - egymástól függetlenül - reaatd-~«^-éa%4án.cú—&liciöUrscuroxt.y—h^ogénaiasxs^...».rbzrid—széaiásx (söpört;
aikoxlesöpört, rövid szénláneó tio~aikii~csoport, diox.i-csop-ort, rövid széni áncá halogén-alki;
szén láncú halögén-slkoxi-csoport, OH,^.GHlOH, CONH2, Cd, acetoxicsoport, NnCHO..-, feniIccppOrt, f enoxiesoport, benziiescport, bsüzil~oxi~esppört, a,a~áimetii~benzil~csQport, HO?, CHO, CHjCH (OH; {.....-'áce ti lesöpört és/vagy etilén-dioxi-csoport; 32 X szntelírticsecsek jelentése egymástól függetlenül előnyös
H CF2:F ^Fjr-SííjFl €F2oKteS2W~~6S?ST——SW—SGNH?
NO., CHiCH.;, propilcsoporXi^^l-zo-prnpl'Tcsóport, buti lesöpört, csoportok jelentés-e egymástól füg&a&áenTxX még előnyösebb esetben 1 zopr-opiJL&swüTC -CKSO,- CH-.S, OFkl, I, Cl, F, OF
Rw~00^-r-™le'geieeyáeeiúa-e-seébefv~GéP©7—é?—Gl?—F-ée/vagy-^Fr* szubsztltuensé-H jelentése ú-eg-ymáe-tól—f/fg^e-éien-Uá-yvsC-hnn aaaeaxé c s-opo r 11—revéé—eeésúéeeú——mexiXég^ dioxi-csoport, rövid szénláncú halogén-aikil-csopp.r-tO rövid szénláncú halcgén-alkoxi-csoport, OH, CH2COt,----djöNH.;, OK és/vagy acetoxicsoport; a 2 szübsz.tituen§eá<j-elein.tése egymástól függetlenül előnyös -es etbejt'^Hs, ClpO, CH3CH2O, metilén-dioxicsoport, Fr, CC;>....-Ft I, CF,, CHF..,· CK;v, Cpé, CFXCKrO, CHpS, OH,
CHyöH, ......ΟθθΗ;, Cd, CH,CH.., prepalesöpörz, rzopropi lesöpör c,
-^kdyHseepe-r-t;-i^e^^-áéesefre-ré·?---t—b^téé-e;-s^po-ré----------é-s7-vagy í>
/71,0015 getienül itóg eloxwí5s3:bb._j^itóerr'^l^Ópropilesöpörtz CR^.0., CH3.S, b'ív.
Még előnyösebbek azok a vegyületek, amelyeknek ees-sabsbb ess a i. m ama zna t ο κ azon a vegyuietan, ameiyer. t icg 3í taianes képletében
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
es
- az X szubszti.tuerx.sek jelentése - egymástól függetlenül.
alk<
rom szem
X n· ! v-1 : — ,·-·< <r--h ·τ»λ f- Va-n.* w‘ \A· vi. !%. ·*. A. Vv- >^· \v £*> •v.' w. kv y Xv.S^J/v, >. Λ. \Cr 1 i.
dioxi-esoport, rövid szénláncú halogén-aiki.l.'-csopdrt, rövid
CH.öC acetoxtcsoport, fHCHbi, fenilcsopg«x, χ
fenozícsokortz benzélcsoport, benzli~oxx~csoportX a, a-dimetil~benz±l~eso·-X s>x port, NO;., CHO, CHs&KOH), aceprlcsoport és/vagy etilén-dioxicsoport; az egymástól ft|g$etlen jelentésű X szubsztitu.ensek jelentése előnyös -^s^tben CBs, £%0, CHjCloO, metílén-dioxi.x p
ÍRÓ, Ctg Ctoö,
-.^ i'lökyi'ly / Cb) g \.»Η· k t-M :< / pXOpö . jf. ty tZ-4- xú .Ά .;. .1. (.· Ά O 3 \G .i. t j bmilybáeport, ízobutilcsoport, t~bi.it il-csoport és/vagy ,Z'·
v.· λ öO/ k,, f —,^á.v7w*'*íí''—v
<* ΫΛ »*** »«»·* 't ^ηζηηχ.....1»Αηζη™.ηΑη~..ηΑ^—Ars—asaiezzréas;—i.~.ó,—agy^·.
mástói függetlenül kiválasztott szubsztituenssel, mégpeg-lg
X’ izopropilcsoporttál, metoxicsoporttal, met il~t io-csopog/its.i, tr ifInor-metil-csoporttai, trif iaor-metoxi-csoporttarí, jódx’ atommal, kiőratommai, fluoratommal· és/vagy m.et,Zl csoporttal helyettesített naftil- vagy fenilcsoport. ,·'' ksg előnyösebben alkalmazhatók azok az/Ar; helyén adott esetben helyettesített fenilosoportot tpftaimazö ÍI) általános képletü vsgyüiefcek, amelyeknek (,Ze) általános képletében
X a fenilcsoport adott esetben iétézö X szubszt!tuensernek a X jelentését - az előnyös sgdbsztftuensekkel, valamint a szízbszti tuensek n számával Xyütt ~ korábban már megadtak.
Mén előnyösebben alkalmazhatók azok az (1) általános kénletű vegyületek szűke/kb kórét képező vegyületek, amelyek <lr) általános képletébe X
E gefentéyé metílesöpört vagy hidrogénétox«;
j e pánté
- Jb jelentése rövid szénláncű aikiiesoport, halogénatom vagy alkokécsoport, előnyösen izopropilcsoport, klóratom. vagy x metoxiXsopor1; és
ZRs jelentése hidrogénatom, rövid szénláncű aikiiesoport
c) Ar5 helyén naftil csoportot, q helyén pedig 2-t tártálmaró (X) általános képiétű vegyületek
Az előnyösen alkalmazható vegyületek egy másik csoportját az Ar, helyén helyettesített feniIcsoportot, Ar, helyén naftiiesoportot, g helyén pedig 2~t tartalmazó íl) általános képletó vegyületek alkotják. Ezeknek a vegyül eteknek ílg) áh··
*»»*
BŐ
X talános képletében ·· R jelentése hidrogénatom, vagy betűcsoport;
- n jelentése 1 3-?—1,—4—y^gxggűb,—elűzazöcz^nnaethon_I
- az X szubsztituensek jelentése - egymástól függetlenül H*^*deeéertéere%i—a-hk-ű-e-separ-b?—e-eá-egóaa-basb—mavá-ds-eén-l alkoxicsooort, rövidszénláncú tio-alkil-csoport, mariiénάιοχι.-csoport, rövidszénláncű hatogen-alkii-csopprt, rövrdszénláncű halogén-alkoxí-csoport, OH, CHpötí, CONH2, CN, acetox lesöpört, N(CH:Öí,· feniiesopg-ri, fenoxiesoport, ben s 1.1 csoport, benoii~oxi~csopgű$ a, a-dimetű-benzilX'' csoport, NOs, CüO, ClijCHlOH} ,/acetilcsoport és/vagy etliéndiaxí-csoport lehet; a ^sicbsttitüensek jelentése egymástól függetlenül előnyösöd' CR3, Cü?O, Cü3Cü,O, metűén-dioxi-csoport, Bt, Cl, pFf I, CF;í, CHF2, CH2F, CF:5Q, CF2CH2O, CüjS, OH,
Cxjöu, COö.ípö Cb, NCs, CH3CH2z pr api lesöpört, xzapropiicsoport, χ·χ buci-psboport, izobuűlcsoport, t--butíi-csoport vagy acetoxi:?30<'cF3rlehet.
íih; általános képletében
R<: jelentése hidrogénatom, rövidstpmTáncű haiogénalkil-csoport vagy rovidszénláncá ^űilogén-alkoxi-csoport, előnyös esetben hidrogénatom^-ir if luor-metoxi-csopórt vagy t r i £ 1 uo r ~me t i 1 - c s opo r t
- Rv jeientó-s'e halogénatom vagy hidrogénatom, előnyös esetben igLóiatom vagy hidrogénatom.
—a®eiyekse-k-~a.z
Pb, M,2J ***>
* ♦ 4t * * s * * x ««*» « «. r ** b-é
- χ SJ--Sr3~—A,-AS---W-A>---S-Z4 _ tuensek megjelölésével, együtt - korábban, már^gjs^a'dk'tk, azzal a megkötéssel, hogy ha R és Bs jX-errtese egyaránt hidrogénatom, Rv klóratomtól eljrértr'jelentésű; és R jelentése CHS csoport, mlgj^vöamint R: jelentése a már megadott (az előnyös Ab^sAiciAoans^lokaJ—ezryüiübA(
2. (II) általános képiétű vegyűletek
A (11} általános képletben.
- Ara jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssei - mégpedig rövid szénláncú alkiiosoporttai, haló géné tómmal, rövid, széniáncű alkoxiosoporttal, rövid szénláncú tio-aikil-csoporttai, metiién-dioxl-osoporttal, rövid szénláncú halogén-alkíi-csoporttal, rövid szénláncú haiogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH:ÍOH csoporttal, COHH.. csoporttal, Ck csoporttal, acetoxícsoporttal, benzílesöpörital, benzii-oxi-csoporttai, α,α-dimetilbenzíl-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH;5CHíOH; csoporttal, N iCKbcsoporttal, acetlicsoporttai és/vagy etilén-dioxi-csoporttal, előnyös esetben dimetil-aminocsoporttal, rövidszénláncű alkoxiosoporttal vagy rövidszénláncű alkiicsoporttal - adott esetben helyettesített raítilvagy fsniiesoport;
- Ar» jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott sznbsztítuenssel - mégpedig rövid szénláncú alki.1csoporttal, haiogénatommal, rövid szénláncű aikoxicsoporttai, rövid széniáncű tio-alkil-csoporttal, metiién-dioxi-csoporttal, rövid széniáncű halcgén-aikii-cscporttal, rövid szénláncű. halogén~-alkoxi~csoporttai, OH csoporttal, ü'H2OH
csoporttal· CÖNH? csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttai, előnyös esetben röviöszénláncu atkoxicsoporttai, még előnyösebb esetben metoxicsoporttal - értért esetben helyettesített naftih vagy fenilcsoport;
- R§ Jelentése hidrogénatom vagy fenilcsoport, előnyös esetben hidrogénatom;
- Rg. jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és
- Rw jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy fenilcsoport; feltéve, hogy ha Au jelentése S-metoxIfenihcsöporl, akkor Ars jelentése olyan helyettesített fenilcsoport, amelyben a helyettesítő jelentése nem 2-metoxh„ 3-metlh, 2~metit~,
4-metih, 2,4-dirneflk 2,4,;6~thmetíl- vagy 4~i2opropilesoport; és ha Au jelentése helyeifesítetlen fenilcsoport, akkor Ar2, jelentése olyan helyettesített fenilcsoport, amelyben a helyettesitő jelentése nem 2-nitrofenil·, 4~nitrofanil· vagy 4~ -dimetilaminofenil-cseport, még előnyösebb, ha metilcsoport és a hozzá kapcsolódó királis szénatom az (R)-sztereolzomer.
A (II) általános képlete vegy öletekben az o-metil-csoport előnyös esetben (Rée-merti-csoport.
* * » ♦♦φ X acetoxicsoporttel, előnyös esetb
—bsgpteavyeéée-éb—egytóoéé^ iasztott szubsztituenssal, mégpedig acetiicsoporttal., pdvid széniáncá alkilcsopor Ital., halogénatómmal, rövid s/aaniáncú a lkoxí csoport tál, rövid szémiáncú. tio-slkil-csoportfsl, sietilén-díoxi-csoporttal, rövid szénláncú haigdén-aikil-csoX* porttal, rövid szénláncú halcgén-alkoxí-csp^orttai, OH cső/ porttal, -CH:.>OH csoporttal, CONH? csoporttal, CM csoporttal, / mefeoxi-karfoon.ii-csoporf fal,· öCHjCÍCípílh csoporttal és/vagy metoxicsoporttai, rövidszénláncú alkilcsoporttal, fgdiicsoporttai, halogénatomnai, t.rifluor-msf.il-csoporttal, /'biaaocsoporttal, laetoxi-karboní 1csoporttal és/vagy QCK4gXÖj C^H·, csoport tal - adott esetben heivettesitett naftil-Z/agv feniIcsooort;
X ' ' /
Ru jslentése/hidrogénato® vagy betűcsoport? ha Rn je/ lettese metiioéooort, az. a szénatom, amelyhez Rr kancsólódik, z-z előnyös evetben (R) -sztereóizomer; és
Rn/aelöntése hidrogénatom vagy metllesöpört; ha Ri2 jelentése metilcsopcrt, az a szénatom, amelyhez ?t.; kapcsolódik,
4. Ralcimimetikus aktivitás
A vogynieteknek azt a képességét, hogy szimulálni tudják a kalciumionoknak a kaiciumreceptorokon mutatott aktivitását, a szakmában ismert és Nemeth, valamint munkatársai által le is irt módszerrel [Nemeth és munkatársai; PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: db 94/13959)] lehat meghatározni. így például in ’/itro körülmények között meliékpajzsnirigysejteken vizsgálva a * * « ♦ ♦ ♦ *» * < « * * «.
»<** « < ♦ φ«
- 4Α kalcimimetikumok a következő aktivitások közül eggyel vagy többel - előnyös esetben, valamennyivel ~ rendelkeznek::
1. Gyorsan, a csúcsértéket 5 másodpercen belül elérve .átmenetileg növelik az intracelluláris kalciumkoncentréciót, és a növekedés I μΜ La^-nal vagy 1 μΜ Gdf'-nai nem. gátolható meg. A [Ca/’j; növekedése intracellulárís kalciumionok távollétében folytatódik, de ionomicines előkezeléssel - extracelluláris kalciumionok távollétében - kiküszöbölhető.
2. Fokozzák a (Ca‘''+]i-ne.k a maximális koncentrációknak megfelelő mennyiségeknél kisebb mennyiségben jelenlévő extracelluláris .kalciumionok által kiváltott növekedését.
3. A dihidropiria.in.származákok nem gátolják a [Cair].~nek az extraceliuláris kalciumionok által kiváltott növekedését.
4. A. [Ca2*'}.; általuk kiváltott átmeneti növekedése lö nM nátrium-f'luoriddal 10 percig végzett előkezeléssel kiküszöbölhető .
5. A (Ca*! általuk kiváltott átmeneti növekedése mérsékelhető a C-protein-kináz (PKC5 valamelyik aktivátoraval - például forbol-mírisztát-acetáttal (PMA), mezereinnel vagy {-.} -V-indolaktámmal - végzett előkezeléssel; a C-protein-kínáz aktivátora végül is a koncentráeió/váiaszreakcló görbéjét jobbra tolja anélkül, hogy ez a változás a válaszreakció maximális értékét befolyásolná.
S. Gyorsan - 3.0 másodpercen beiül - fokozzák az inozit-i, 4, 5-trifoszfát vagy a diacil-glicerin képződését.
7. Gátolják a ciklusos AMP lop a®.inna.1 és izoproterenolial stimulált képződését.
8. Gátolják a PlH-szekréciót.
Jt ♦
á. O
- ~
9. A -ciklusos AMP-képzödésre gyakorolt gáfclóhatásukat a 100 mg/ml pertusszísz-toxinnai legalább 4 órán át végzett előkezelés blokkolja, de a (Ca^K, az inozit-i,4,5-trifoszfát vagy a díacil-glicerin. koncentrációnovekedése, Illetve a ΡΊΉszekréciő csökkenése nem befolyásolja.
10. Szarvasmarha vagy ember mellékpajzsmirigysejtjélből származó, poiiíaí +-szal dúsított aRNS-sei injektált Xenopus oocytes-ben kiváltják a kloridion-áramlás fokozódását, de a vízzel vagy májból származó mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ben hatástalanok.
11. Mellékpajzsmirigyből származó, klónozott kalciumraceptor alkalmazása esetén hasonló módon váltanak ki válaszreakciót a receptor génállományát tartalmazó, speciális cDNS-sel vagy mábS-sei injektált Xenopus oocytes-ööl.
A különböző kalciumaktivitások mérhetők a rendelkezésre álló módszerekkel (v,ö. Nemeth és munkatársai; PCT/V393/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: NO 94/13959}]. A leírás példái, valamint Nemeth és munkatársai {Nemeth és munkatársai; PCT/ÜS93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátásé irat száma: WO 94/18959)1 kutatásai alapján nyilvánvaló, hogy hasonló módón dériníáihatök a kalciumíonok aktivitását más, kalciumra reagáló sejteken szimuláló vegyüietek.
A vegyüiet a leírásban ismertetett biológiai vizsgálatok vagy a Nemeth és munkatársai által leírt mérések (Nemeth és munkatársai: PCT/U393/01642 sz. nemzetközi bejelentés, (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: NO 94/18959}] szerint meghatározva a következő aktivitások közül előnyös esetben legalább aggyal, még előnyösebb esetben valamennyi felsorolt aktivitássá..! rendelkezik: kiváltja - előnyös esetben a belső kalcíumtartalom mobilizálásával - a belső kaiciumkoncentráciő átmeneti ~ 30 másodpercnél rövidebb ideig tartó - növekedését; kiváltja a [Cazi'Ji gyors - 30 másodpercnél rövidebb ideig tartó ~ növekedését; kiváltja ~ célszerűen a belső kalciumtartalom beáramlásának előidézésével ~ a (Caí+]i tartós (30 másodpercet meghaladd ideig tartó) növekedését; kiváltja - célszerűen 60 másodpercen beiül - az inozít-I,4,5~ -trifoszfát vagy a tíiacil-glieerin. koncentrációjának a növekedését; és gátolja a dopaminnal vagy az Izoproterenollal serkentett ciklusos AMP-képződést.
A (Ca'í+h. átmeneti növekedését előnyös esetben a sejt 10 percen át tartó, 10 mái nátrium-fluoriddal végzett előkezelésével megszüntetjük vagy csökkentjük olyan módon, hogy a sejtet rövid - 10 percet meg nem haladó - ideig a C-protein-kináz enzim valamelyik aktivátorával - előnyösen fórból-mirisztát-acetáttal (PdAi, mezereinnei vagy (-)~V~indolaktámmal - előkezeljük.
C) Ka 1 cl 1 i ti kom ok
Egy vegyületnek azt a képességét, amellyel blokkolni tudja egy kalciumreceptoron az extracellulárís kalcium aktivitását, ennek a leírásnak az alapján szokásos módszerekkel meg lehet határozni. (Ezzel kapcsolatban felhívjuk még a figyelmet Eemeth és munkatársai PCT/US93/01642 s.s. nemzetköz;, bejelentésére {a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: bő 94/18959)11 így például azok a vegyUletek, amelyek melléfcpajzsmírúgysej~ tek esetében blokkolják az extracellulárís kalcium hatását.
φφ »
mellékpajzsmirigysejteken in vitro körülmények között vizsgálva a következő jellemzők közül legalább eggyel, előnyös esetben valamennyi felsorolt jellemzővel rendelkeznek:
1. Részlegesen vagy teljesen blokkolják a megnövekeöest koncentrációban jelen levő extracelluláris kalciumionoknak azt a képességét, hogy:
(a; növelik a {Ca:j.·-1;
íb) mobilizálják az intracelluláris kaicinmionokat; tej fokozzák az inozit-1,4,o-trifoszfát-képződést;
:d) csökkentik a ciklusos AXP-uek a dopaminnai vagy izoproterenolial serkentett képződését; és te) gátolják a PTH kiválasztódását.
2. Szarvasmarha vagy ember mellékpajzsmirigysejtjélből extracelluláris ka Ici.umi ónokkal vagy kaieimimetikus vegyületekkei kiváltott poii <Ap-mRNS-sei injektált Xenopn.s oocytes-ben akadályozzák, vízzel vagy máj-mRNS-sei injektált Xenopus occytes-ben azonban nem gátolják a kloridionáram növekedését.
3. Mellékpajzsmirigyből származó kaiciumreoeptor alkalmazása esetén hasonló módon blokkolják az extracelluláris kaicinmiónokkal vagy kaleimimetikos vegyülsttel kiváltott válaszreakciót olyan Xenopus occytes-ben, amelybe a kalciumrsceptor génállományát tartalmazó speciális cDN3-t, mRNS-t vagy cRNS-t fecskendeztünk be.
A leírás példái, valamint Nemeth és munkatársai f?CT/U592/ö 1642. sz, nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: WO 94/18959)} alapján nyilvánvaló, hogy a kalciumionokra válaszreakciót adó sejteken a kalciumionok aktivitását blokkoló vegyületeket hasonló módon lehet φφ definiálni .
TU . BETEGSÉGEK VAGY RENDELLENESSÉGEK KEZELÉSE
A szakemberek ismerik azokat a betegségeket és rendellenességeket, amelyeket a kaiéiumsceptor aktivisásának a szabályozásával· kezelni lehet. A kalciumreceotor aktivitásának a szabályozásával kezelhető betegségeket például a kalciumreceptorok aktivitásával szabályozott sejtek funkcionális válaszreakcióinak az alapján lehet azonosítani. A kalciumraceptor által szabályozott sejtek funkcionális válaszreakciói - beleértve a mellékpajzsmlrigysejtek általi ITH-kiválasztást, a C-sejtek általi kalcitoninkiválaszfást és a csontiébontó sejtek által előidézett csontfelszivódást - a szakmabeliek ismerik.
Az ilyen funkcionális válaszreakciók különböző betegségekkel vagy rendellenességekkel kapcsolatosak. így például a mellékpajzsmirigy-túlműködés eredményeként megnő a vérplazmában a PTH koncentrációja, A vérplazmabeli PTH-szintek csökkentése lehetőséget nyújt a mellékesjzsmirigy-tüimüködés hatásos kezeléséhez. Hasonló módon, a kaicitonin-konoentráoió vérplazmabeli növekedése a csontfeíszivödás gátlásával van összefüggésben. A csontfelszivődás gátlásával hatásosan kezelhető a csontritkulás:.. A kalciumreceptor aktivitásának a szabályozásával tehát kezelni lehet olyan betegségeket, mint amilyen a mellékpajzsmirigy túlzott működése és a csontritkulás .
A szervetlenion-receptorok - előnyös esetben a kalciumreceptor - aktivitásának a szabályozásával kedvező módon lehat befolyásolni igen különböző betegségekben vagy rendelteé h
- M nességektöl szenvedő betegek ál.lapotát. A csontritkulás például az öregedéssel összefüggő rendellenesség, amelyre az jellemző, hogy csökken a csonttömeg és nő a csonttörések kockázata. A. osontromboiő csontfelszivödás megakadályozásé céljából a vegyül eteket ~ például csont lebont <5 ionomimetikus vegyület esetén - közvetlenül vagy - példán! C-ssjtes kaicImimeti bum esetén - közvetetten, az endogén kalcitonínszintek növelésével lehet alkalmazni. A meliékpajzsmirigysejtek kaiciumreceptorával szemben aktív kalcilítikumok is növelik a keringő mellékpajzsmirigy-hormon koncentrációját és serkentik a osontképződést. Mind a három módszer alkalmazása jótékonyan hat a csontritkulásban szenvedő betegekre.
Ezenkívül az is ismert, hogy a PTH időszakonkénti adagolása anaboiikus hatással van a csonttömegre és a csont megfelelő újjászerveződésére, így a mellékpajzsmirigy-hormon termelődését átmenetileg fokozó vegyűletekkel és étrenddel - például valamilyen mellékpajzsmirzgysejt-ionoiitikom időszakos adagolásával - növelhető a csontritkulásban szenvedő betegek csonttömege.
További betegségekéi és rendellenességeket, lehet azonosítani a sejtek kalciumreceptor-aktivitássai szabályozott és a betegséggel vagy a rendellenességgel összefüggő további funkcionális válaszreakcióinak a felismerése alapján. A más szervetlenion-receptorok szabályozásával kezelhető betegségeket vagy rendellenességeket hasonló módon lehet meghatározni,
A találmány szerinti, szervecíenion-receptorokat szabályozó vegyületek képesek egy vagy több ceiiuiáris hatást és ezzel végül is gyógyhatást kiváltó módon befolyásolni egy szervetlenion-receptort. A találmány szerinti kaloiumreoeptor-szabályozó vegyületek olyan módon képesek hatást gyakorolni a kalciumrecectorokra, hogy a sejtek szintjén egy vagy több, végül is gyógyhatást eredményező aktivitást váltanak ki. A különböző betegségeket a találmány szerint a kalciumreceptorral rendelkező sejtek oélhavételével lehet kezelni.
így például az elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködést íKPT) az emelkedett vérkaioiumtükör és a keringő FTH-nak a normálistól eltérő mértékben megnövekedett koncentrációja jellemzi. A KFT egyik fő típusára jellemző hiányosság abban nyilvánul meg, hogy csökken a mellékpajzsmirlgysegteknek az extraceiluláris kalciumlonok által végzett negatív visszássátolásos szabályozásra velő érzékenysége. Az elsődleges meliékpajzsmirigy-tűimüködesben szenvedő betegekből származó szövetben tehát az extraceiluláris üa2i ” névleges értéke'’ jobbra tolódik, és Így a szokásosnál magasabb extraceiluláris kaicizmkoncsntráciők szükségesek a PTH-kiválasztás csökkentéséhez. Sőt, elsődleges mellékpajzsmirigy-tulműködés esetén az extraceiluláris kalciumlonok még nagy koncentrációkban alkalmazva is gyakran csak részben csökkentik a PTH kiválasztását. Másodlagos íurérniás? mellékpajzsmirigy-tűimüködés esetén az extraceiluláris kalciumionokra vonatkozóan a névleges érték hasonló növekedése figyelhető meg annak ellenére, hogy a kaiciumionoknak a mellékpajzsmirigy-hormon kiválasztásának a megszüntetéséhez csak szokásos koncentrációban keli jelen lenniük. A PTH-kiválasztás változásai hasonlóak a [üa’j.; változásaihoz: a [Ca~'].~nek az extraceiluláris kalciumionok által
- indukált növekedéseihez tartozó névleges értékek jobbra tolódnák, és ezeknek a növekedéseknek a nagysága csökken.
A betegek a másodlagos meliékpajzsmirigy-tűlmüködés mellett veseműködésre visszavezethető cscntképződési zavaroktól is szenvedhetnek. Úgy tűnik, hegy ilyen betegeknél a kaicimlmetzkumok. eredményesen használhatók fel mind « szabályostól eltérd P7K~kiválasztás, mind a osontképzodesi zavarok kezelésére.
Az extraceiluláris kalciumiomok hatását szimuláló vegyi!letek eredményesen használhatók fel mind az elsődleges, mind a másodlagos meliékpajzsmirigy-tüimükodés hosszűtávü kezelésére, Ezek. a vegyüietek. szolgáltatják azt a piuszhatást, amely szükséges a meliékpajzsmirigy-hormon-kiválasztás elfojtásához {ez önmagában a vérkaioinmtükör emelésével nem érhető el;, és ezáltal ezek a vegyüietek segítik a hiperkaicémlá.s állapot enyhítését. Az extraceiluláris kaiciumionoknáí nagyobb hatékonyságú vegyüietek elfojthatják a PTH-kíválasztődás látszólag kikűszOböihetetien komponensét is, amely különösen a mellékpajzsmirigy daganata által okozott elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködésnél - HPT megjelenési formájánál - kellemetlen. Ezeket vagylagosan vagy kiegészitéskáppen alkalmazva csökkenteni lehet a szintézis utján létrejött ΡΊΉ mennyiségét. Kimutatták, hogy tartósan magas vérkaioiumtukör esetén csökken a marha és az ember daganatos mellékpajzsmirigy-szövetében a preproPTH mPNS szintje. A hosszú ideig fenntartott magas vérkalciamtükör in vütro körülmények között csökkenti a meliékpajzsmirigysejfék burjánzását is, igy a kalcimímetikumok hatásosan korlátozhatják a meliékpajzsmirigysejteknek a másodlagos HF7~re jellemző túlzott mértékű szövetszaporodását is.
A meliékpajzsmirigysejlektől eltérő sejtek közvetlenül reagálhatnak az extraceiiuiáris kalcíunionok koncentrációjában. végbemenő fiziológiai változásokra. Példán! a kalcitonin kiválasztását a meliékpajzsmirigy parafollikulárrs sejtjeiből (a C-sejtekbői) az extraceiiuiáris kaiciuxu.onok koncentrációjának a változásai szabályozzék.
Az izolált csontlebontó sejtek az extraceiiuiáris kalciumionok koncentrációjának a növekedésére úgy reagálnak, hogy - részben az intraoelluiáris kaiciumionok mobilizálásával ~ megfelelő mértékben növelik a .[Ca^K-t · A csont lebontó sejtekben a (Ca'^h növekedése összefüggésben van a csontfelszívódás gátlásával, A kalcium közvetlenül serkenti a lúgos foszfatáz enzim felszabadulását a csontképzö sejtekből.
Az extraceiiuiáris kaiciumionok koncentrációjának a növelésével csökken - a kiválasztott PTH mennyiségéhez hasonlóan - a vesében lévő iuxtaglomeruiáris sejtekből kiválasztott renín enzim mennyisége is. Az extraceiiuiáris kalciumionok ezekben a sejtekben előidézik az intraoelluiáris kalciumionok mobilizálódását. A kalciumra más vesesejtek a következőképpen reagálnak: a kaiciumionok megnövekedett koncentrációja gátolja a test középpontjához közelebb eső vesecsatorna sejtjeit az 1 x25íOH; y-D-vitamin képzésében, serkenti a kalciummegkötő fehérje termelődését a test középpontjától távolabb eső vesecsatorna sejtjeiben, gátolja a kaiciumionok és a magnéziumok ismételt felszívódását a vesevezetékekben, valamint a vazopresszin hatását a Renie-kacs vastag felszálló ágára (MTALji , t i
- νΰ csökkenti a vazopresszin hatását a kéreg gyűjtőcsatornájának a sejtjeiben ás befolyásolja a vaszkuiaris simaizomsejtek működését a vese gloaeruiuszáfoan levő véredényekben.
A. kalcium ezenkívül elősegíti a bei nyélkasejtjeinek, az emlő-sejteknek., valamint a börsejleknek a differenciálódását, megakadályozza a pitvari nátriurefikus pepiid kiválasztódását a szivpicvsrbői, csökkenti a vérismezkékben a cAMF felhalmozódását, megváltoztatja a gaszfcrin- és a glükagoneiválasztást, arra készteti a vaszkuláris simaizomsejteket, hogy tiödositsák az erekre hatást gyakorló faktorok sejtbeli kiválasztódását és befolyásolják a központi idegrendszer, valamint a perifériális idegrendszer sejtjeit.
Elég sok minden utal tehát arra, hogy a kalciumionok - azon kívül, hogy a sejteken belül mindenhol jelzőszerepet játszanak - extracelluláris jelként is .működve szabályozzák bizonyos speciális sejtek válaszreakcióit. A találmány szerinti vegynieteket fel lehet használni olyan betegségek és rendellenességek kezelésére, amelyek azzal függnek össze, hogy ezekben a sejtekben megszűntek a válaszreakciók.
Az érintett sejtekre alapozva kezelhető vagy megelőzhető jellegzetes betegségek és rendellenességek közé tartoznak a következők: a központi idegrendszer betegségei ás rendellenességei - például a rohamok, az agyvérzés, a fejsérülések, a gerincvelő sérülései és az oxigénhiány - például a szívműködés megszűnése vagy a szülési bonyodalmak miatt fellepő oxigénhiány - következtében fellépő idegsejtkárosodásök, epilepszia, az idegrendszer eifajniásos betegségei - például az Alzbeimer-kór, a üuttingfon-kőr és a Parkinson-kör elme·♦
baj, isomfeszüiés-, depresszió, szorongás, pánikbetegség, rögeszmés es kényesérképzefes rendellenességek, baleset által okozott stressz miatt kialakuld rendellenességek, tudathasadás, rosszindulatú neuroieptikus tunetegyüttes, Tourettetünetegyüttes, a vess által újra abszorbeált, fokozott menynyiségű viz miatt kialakuló betegségek - így például a nem-megfelelő AnH-kiválasztást ÍS1ADH) kísérő tünet-együttes, a cirrhözis, a pangásos szivkárosodás és a nefrőzis -, magas vérnyomás, fcationos antibiotikumok - például aminoglükosíd antibiotikumok - alkalmazása után fellépő mérgezattségí állapot, a belek mozgékonyságával kapcsolatos rendellenességek - például a hasmenés és a vastagbéigoros -, a gyomor- és béltraktus fekéiyes betegségei, a gyomor- és béitraktusnak a túlzott mértékű kalciumielszívödás miatt kialakuló betegségei
- például a szarkoidőzls -, autoimmun betegségek és a beültetett szerv kilökődésével fenyegető állapotok.
Bár a találmány szerinti k&leiumreceptor-szabáiyozó vegyültetek tipikus felhasználási területe az embergyógyászat, az említett vegyüietek más melegvérű állatfajták - például egyéb főemlősök, háziállatok, így például disznók, szarvasmarhák és háziszárnyasok, továbbá sportoláshoz igénybe vett állatok és állatkedvencek, például lovak, kutyák és macskák - hasonló vagy azonos betegségeinek a kezelésére is felhasználhatók.
ív. Alkal®ázás
A találmány szerinte, különböző vegyüieteket ~ annak a tulajdonságuknak köszönhetően, hogy szabályozzák a szervetlenion-- receptorok, előnyös esetben a kalciumreceptorok aktivüá*♦*«*
Γ-ο
Vz sát ~ fel lehet használni különféle betegségek és rendellenességek kezelésére. A találmány szerinti vegyületeket a különböző adagolási módoknak - példán! a szisztémás, a nem általános vagy a helyi adagolási módnak - megfelelően lehet formálni. A formálási eljárások és a kiszerelési formák általános ismertetése megtalálható a szakirodalomban f.Remíngton's Pharmaoeutícal Sciences, .Maok Fnbiishing Co., Easton, FA, USA]. Az ionomímetíkumok és az ionolitikumok alkalmazását Nemeth és munkatársai [PCT/US93/Q1642 sz, nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrefooosátási irat száma: WO $4/18959?] tárgyaljak.
Hogy milyen adagolási formák megfelelőek, az részben az alkalmazás vagy a szervezetbe juttatás módjától függ, tehát például attól, hogy a készítményt szájon keresztül, bőrön keresztül vagy injektálással juttatjuk be a szervezetbe. Ezeknek az adagolási formáknak lehetővé keli tenniük, hogy a vegyület elérje a célsejtet, függetlenül attól, hogy a célsejt moitieelluláris bacilusgazda vagy tenyészet formájában van-e jelen. így példán! a véráramba, fecskendezett, farmakoiogíai szempontból aktív vegyületeknek vagy kompozícióknak oldhatóknak keli lenniük. Hás, a szakterületen ismert szempontokat is figyelembe keli venni, így például a toxicitást és olyan adagolási formák alkalmazhatóságát, amelyek késleltetik a vegyülő t vagy a kompozíció hatásának a kifejtését,
A vegyületeket farmakolőgíai szempontból elfogadható sóik - például savaddíciős sóik - és komplexeik alakjában is lehet formálni. FarmakoIógiai szempontból elfogadható sóknak azokat a sókat nevezzük, amelyek az alkalmazott koncentráció4 *
Λ
-Sóiban. n-am mérgszőek. ilyen sók előállítása megkönnyítheti a hatóanyag gyógyászati célú alkalmazását, mert a sőképzés anélkül változtatja meg a hatóanyag fizikai jellemzőit, hogy gátolná a fiziológiai hatások kifejtését. A fizikai tulajdonságok előnyös változásai közé tartozik az olvadáspont csökkentése (könnyebbé válik a. gyógyszer alkalmazása a nyálkahártyán keresztül) és az oldhatóság növekedése (könnyebb nagy koncentrációkban alkalmazni a gyógyszert;.
A. farmakológiát szempontból elfogadható sok közé tartoznak a savaddierős sók, például a szulfátok., a. bidrokiorzdok, a maisatok, a foszfátok, a szuifamátok, az acetátok, a cifrátok, a laktátok, a tartanátok, a metánszulfonátok, az etánszaifonátok, a benzolsznlfonátok, a p-toiuolszulfonátok, a ciklohexil-szuifamátok és a kininsav sói [lásd például a ÜCT/ÜS92/0373S, sz. nemzetközi bejelentést, amelynek a szövegén a találmány ismertetését kiegészítő referens faanyagnak tekintjük}, A farmakologiai szempontból sókat savakból, például sósavból, maleinsavbői, kénsavból, foszforsavből, szulfamidsavből, eoetsavbői, citrom-savból, tej savból, borkősavbói, malonsavből, metánszulfonsavből, etánszulfonsavból, benzolszulfonsavből, p-toluolszulfonsavből, ciklohexiI-szülfaminsavooi és kinrnsavbol lehet előállítani.
A farmakológia! szempontból elfogadható sók előállíthatok a szokásos eljárásokkal. A vegyüietet szabad bázis formájában például feloldjuk valamilyen oldószerben - például a megfelelő savat tartalmazó vagy vizes-alkoholos oldatban -, majd a sót az oldat bepáriásávai elkülönítjük. Sgy másik, megoldás szerint ügy állítjuk elő a sőt, hogy a szabad bázist szerves si A- X oldószerben savval reagáltáljak.
Fel lehet használni hordozóanyagokat vagy kötőanyagokat is a hatóanyag alkaímazásáxxak a megkönny.i lése céljából. A hordozóanyagokra és a kötőanyagokra példaként megemlítjük a kalcium-karbonátot, a kalcium-foszfátot, a különböző cukrokat - így a iaktózt, a glukózt és a szacharózt -, a különböző típusú keményítőket, a céllulőuszármazékokat, a zselatint, a növényolajokat, a poiietiléngiíkolokat és a fiziológiai szempontból kompatibilis oldószereket. A hatóanyagokat és a gyógyszerkészitményeket különböző módokon, például vénába fecskendezve, a hasüregbe fecskendezve, bőrön át fecskendezve, izomba fecskendezve, szájon keresztül, helyileg és nyálkahártyán keresztül - lehet alkalmazni.
A szisztémás alkalmazások közül az orális alkalmazás előnyös. Alternatív megoldásként injekciót is lehet adni, például izomba, vénába, a hasüregbe és bőr alá. Az injektáláshoz a találmány szerinti vegyüieteket cseppfolyós oldatokkal, előnyösen fiziológiai szempontból kompatibilis pufferoidatokkal - például Hank-féle oldattal vagy Rinuer-féle oldattal - lehet formálni. A hatóanyagokból ezenkívül szilárd, kiszerelési formákat ás elő lehet állítani, amelyekből közvetlenül a felhasználás előtt lehet újra oldatokat vagy szuszpenziókat készíteni. Elő lehet állítani iiofildzált kiszerelési formákat is.
Szisztémás hatás elérése céljából a hatóanyagokat a nyálkahártyán vagy a bőrön keresztül is be lehet juttatni a -szervezetbe es - amint ezt már említettük - szájon keresztül is lehet alkalmazna. A nyálkahártyán vagy a bőrön keresztüli al«#*V «*« » ** η
Sé kalmazás esetén a gáton való áthatolás elősegítésére alkalmas adalékot alkalmazunk a formáláshoz. Az ezen a szakterületen dolgozók általában ismerik az erre a célra alkalmas adalékanyagokat, amelyek közé tartoznak például a transzmukozális alkalmazáshoz megfelelő epesavas sók és fuzidénsavszármazékok. Az áthatolás megkönnyítése céljából ezenkívül detergenseket is fel lehet használni. A nyálkahártyán keresztüli alkalmazáshoz, megfelelőek például az orrpermetek és a kúpok. Szájon keresztüli alkalmazáshoz a hatóanyagokból a szokásos orális adagolási formákat, például kapszulákat, tablettákat és cseppfolyós készítményeket állíthatunk elő.
Helyi alkalmazási célra a találmány szerinti vegyületekből - amint ez a szakterületen általánosan ismert - kenőcsöket, keneteket, géleket és krémeket lehet formálni.
Szokásos eljárásokkal meg lehet határozni, hogy a találmány szerinti különböző vegyületekből milyen mennyiségeket kell a szervezetbe juttatni. A hatóanyagnak a győgyhatás kifejtéséhez szükséges mennyisége rendszerint körülbelül 1 nM és 3 μΜ, előnyös esetben 0,1 nM és 1 uM között van, a hatóanyag EC5í: vagy IC5o értékétől, a kezeit beteg korától és testtömegétől, valamint a paciens betegségétől vagy rendellenességétől függően. A kezelt ember vagy állat 1 kg testtömegére vonatkoztatva a szükséges hatóanyag-mennyiség általában körülbelül 0,1 és 50 mg között, előnyös esetben G, 01 mg és 20 mg- között van.
V. Példák
A kővetkező példák a találmány különböző lehetőségeinek és megvalósítási formáinak a szemléltetésére szolgálnak. A κ««χ 9 ** * « » ♦ » ♦ * A « « » Μ·« * * V « * « « « * < « * ♦ > ♦ ♦'>
közölt példák tehát semmilyen vonatkozásban sem korlátozzák a találmányt„
1. példa
Emberi mellókpaj zsmirigydaganatból származó humán. ,sei~ léfcpajsssíirigy-kalciumreceptor klónozása
Ezzel a példával ismertetjük az ember;, mellákpaj zsmírigydaganatböl származó humán meiiékpajzsnirigy-kalciumreeeptor klónozását, amelyhez hibridizációs mintaként p.BcPCaRl-et használunk fel ív.ö. Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01312 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959}]. A mintát úgy használtuk fel az emberi mellékpajzsmirigy kaiciumreceptórának a génállományát tartalmazó nuklsinsav azonosítására, hogy kevésbé szigorú fcereszthibridizálást hajtottunk, végre.
Hírvivő RNS-t készítettünk emberi mellékpajzsmirigy-daganatból, amelyet egy olyan, 39 éves kaukázusi férfiből távolítottunk el, akinél elsődleges melléfcpajzsmírigy-túlműködést diagnosztizáltunk. Hibridizációs mintaként pSoPCaRl-t használva, ennek az mRHS-nek a “Northern” foltelemzésévei körülbelül 5 kliobázisos és körülbelül 4 kiiobázlsos kaiciumreoeptor-transzkriptumokst azonos!róttunk, Az mRHS-ből· cDNS-könyvtárat állítottunk össze. 3 kiiobázispárnál többet tartalmazó, kettős szálú cDNS-fc különítettünk ei méret szerint agarözgélen, és kapcsoltunk hozzá a iambda - Zapll klőnozövaktorhoz. Elvégeztük ötszázezer primer rekombinans tag szűrővizsgálatát olyan módon, hogy hibridizációs menzaként a pBoPCaRl 5,2 kilobázispáros cDNS inszerciós szekvenciát alkalmaztunk. A pBoPCahl inszerciós szekvenciát az IxlCd «♦ * ♦ <·
S· beütés/(min x μα) fajlagos aktivitás eléréséhez megfelelő mennyiségű rsP]-dC7? felhasználásával a statisztikus rendezet lenség állapotából kiindulva végrehajtott szintézis útján radioaktív izotóppal jelöltük.
Geromkönyvtár-szűrést hajtottunk végre 38 ’C-on végzett hibridizálássai (400 mik Na', 50 tömeg! formamid; . Vériemezke foltból árié szűröket hibridizártunk 20 órán át 500 000 beütés/(min x ml) koncentrációjó mintával, A hibrid!zárást követően a szűrőket 40 °C-on I órán át egyszer mostuk SSC-oen,
Az első szűrővizsgálat során körülbelül .250, pSoPCaRl-gyei végzett keresztezéssel azonosított pozitív klórt határoztunk meg. Ezek közül a krómok közül hetet egy második és egy harmadik szűrővizsgálatnak vetettünk alá, hogy elkülönítsük a pBoPCaRl-mintávar kereszteződött egyes kionokat. Ezt a hét krőnt restrikciós enzimes feltérképezéssel és Southern foit-aneri z.tssei elemeztük. A kiónok közűi három körülbelül 5 kizöbázispáros cDNS inszeroiös szekvenciákat tartalmazott, és úgy tűnik, hogy ezek a teljes hosszúságú kiónok az 5 kiiobázzsos mRNS-nek felelnek meg. A kíönok közűi kettő körülbelül 4 kilobázispáros cDNS inszerciós szekvenciákat tartalmazott, és úgy tűnik, hogy ezek terjes hosszúságú klőnok, amelyek a 4 kirobázisos mRNS-nek feleinek m.eg,
A két különböző méretű inszerciós szekvencia restrikciós enzimmel való feltérképezése azt mutatja, hogy ezek az inszerciós szekvenciák 5*-végeiken hasonló szekvencrájú régiókkal, 3 ’-végeiken, azonban eltérő szekvenciákkal rendelkeznek. A DNS-szekvenciaanaiizisek eredményeiből azt a következtetést lehet levonni, hogy a kisebb inszerciós szekvencia a « φ nagyobb inszerciős szekvenciában lévő poliadenilezésí helytől felfelé” átmeneti, módon végbemenő poliadenilezésböi származhat .
A két mérstosztály tipikus cDNS inszerciős szekvenciáit SK-pSIuescrlpt plazmidvektorfca szubklönoztuk. A lineárissá tételt követően T7-es PNS-poiimeráz-enzim felhasználásával in vitro körülmények között végzett átírással cRNS-t rans ::.kriptumokat kaptunk. Funkcionális elemzés elvégzése céljából a cRNS-érsnszkriptumokat Xenopus cocytákba injektáltuk (ISO ng/ui RNS; SO ni/oocyta;. 2-4 nap inknbálási idő eltelte után vizsgáltuk, hogy vannak-e az oocytákban jelen fun ke ion ál. is kaiciumreceptorok. Mindkét kiőntípusnál létrejöttek funkcionális kalciumreceptorok. Erre abból lehet következtetni, hogy megfelelő kadciumreceptor-agonisták hozzáadása serkenti a kalcium, által aktivált kloridáramokat. Az ismert kalciumreceptor-ágon isták - beleértve az NFS R-467-et és az NPő A-.56S-.at (v.ö. Nemeth és munkatársai: PCT/ÜS33/ŰI642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] - az oocyta. által manifesztált, receptort körülbelül ugyanolyan koncentrációkban, alkalmazva aktiválták, mint amilyen koncentrációkban, ismereteink szerint hatásosak a már a születéskor meglévő mellékpajzsmirigysejt~receptorckkal szemben. így tehát mindkét klón tartalmazza egy funkcionális humán meiiékpajzsmirigysejt kalciumreceptorának a génállományát .
Piazmldokat készítettünk olyan mődon, hogy az egyes, méret szerint osztályozott inszerciős szekvenciákat pBluascript-be szubklönoztuk, és ennek eredményeként pHuPCaPö.2-t és pHüPCaR ** *
4.0-t kaptunk. Az ínszercíós szekvenciák nukleinsav-székvencíája ás aminosav-szekvenciád a az 1. ás a 2. szekvenciaazonositásr listán látható.
A két cDNS inszerciös szekvencia nukieinsav-szekvenciái között megfigyeltünk néhány eltérést. A két cDNS inszerciös szekvenciaeiemzéseibői arra lehet következtetni hogy legalább két, egymástól a transzláció által nem érintett ö!-régiöban eltérő szekvenciaváltozat létezik, és ennek az oka alternatív poiiadenklezés lehet, Ezenkívül szekvenciaváitozat létezik az inszerciös szekvencia 5'-végén is. Ezek a különböző szekvenciák a transzláció által nem érintett régióknak feleinek meg, és keletkezésük valószínűleg annak tulajdonítható, hogy a transzkripcióhoz két kiindulási és/vagy kapcsolódási hely áll rendelkezésre.
A pKuPCaRS.2 és a pHuECsR/.O cDRS-kiőnok kódoló tartományain belül további szekvencíavariáciős helyeket figyeltünk meg (lásd az I, és a 2. szskvenciaazcnosltási listát;, ami arra utal, hogy ezek a cDhS-kiönok különféle fehérjék génállományát foglalják magukban. A humán CaR-gén szskvenciaeiemzése azt mutatja, hogy a pHuECaP.4.0 cDNS-kiónhoz képest a pHuPCaRS.2 oDNS klánban lévő további 30 DNS-bázispár az alternatív mRKS kapcsolódási lehetőségek eredménye. A vagylagos híRNS-illeszkedési lehetőségeknek tulajdonítható; 10 további aminosav beékelődése a pHuPCaRS.2 cDNS által kódolt génállománya CaR-polipeptidbe a pHuPüaRS.2 cDNS által kódolt poiipeptidben levő aa#536 és aa#537 közötti helyen. Ezenkívül a pHuPCaRí.0 az aaf925, helyen glufamint (Gin), a 990. helyen pedig giicint (Giy; foglal magában, mig só a pHuPCaR.5.2-ben mindkét megfelelő helyen arginin (Arg) van. A humán CaR ezeken a helyeken - az említés sorrendjében - Gin-t ás Arg-t kódol. Úgy tűnik, hogy a pHuFCaR4.0 cDNS és a humán DNS közötti eltérés valóságos szekvenciapolimorfizmust képvisel az emberi populáción belül, míg a pHuPCaho.2-belüli egyetlen bázisváltozás valószínűleg a klónozás során, bekövetkező mutáció eredménye. Mindkét cDNS tartalmazza funkcionális kaiciumreceptorok génállományát, amit az bizonyít, hogy az ezekből a cDNS-kiönökből készített cRNS-sel injektáló Xenonon oocytes képes arra - amint ez a kloridion-vezetőképesség mérése alapján negállapítható hogy 10 MM extraceiiuiáris kalciumíonra reagáljon. Lehetséges azonban, hogy ez a két receptorizoforma funkcionálisan és/vagy farmakológia! szempontból elférő.
2. példa
Kalciumreceptort expres&zálő, stabil rekomhinans sejtek kiválasztása
Olyan kionáiis seútvonalakat különítettünk el, amelyek stabilan expresszélják a két humán kalciumreceptort és a szarvasmarha-kaieiomreceptort. A. kalciumreceptorok cDNS-eít két különböző, kereskedelmi forgalomban lévő expresszibe vektorba - a Pharmacia cégtől beszerzett pMSG-be és az invitrogén cégtől beszerzett Cep4B-be - szubklőnoztuk. Az első vektor tartalmazza a szelektálható jeizőgent a xantin/guanin-foszforibozii-cranszferázhoz Cgpt.), amely lehetővé teszi, hogy a stabilan transzfékbált sejtek legyőzzék a puríncs bioszintetikus mechanizmus 2 μο/ηΐ aminopterin és 25 ug/ml mikofenolsav beadagolásával kialakított blokádját. A második 'e vektor tartalmaz egy olyan gént, amely eiienállőképességet biztosit a 200 ug/ml koncentrációban alkalmazott antibrotifcus higromicinnel szemben. A HuPCaAS.2 és a Hu?CaR4.0 cNDS-eit (a megemlítés sorrendjében az 1. és a 2. szekvenciaazonosítási listán láthatók) bot T-es és Hino 111-as restrikciós enzimekkel távoütottuk el a parentáiis bluescript” plazmádból, majd közvetlenül hozzákapcsoltuk őket a Nőt I és a Hínd 111 enzimmel egyaránt dineréit Cep4B~hez, vagy a DNS-polimeráz klenow fragmentumával kezeltük, majd tompa végű ligáció útján pMSG-vel dígerált Sma I-hez kapcsoltok őket.
A HuFCaP.5.2 inszerciós szekvenciát tartalmazó pMSG-szubkiónt a már ismertetett módon CHö-sejtekbe transzfektáitűk. 2.0 rezlsztens kiönt különítettünk el, amelyeknek a jellemzése jelenleg folyik, A KnPCaR5„2 inszerciós szekvenciát tartalmazó Cep43 szubkiónt a már ismertetett módon ΗΈΚ 233-as sejtekbe transzfektáituk. Higromícines szelektálással stabil klönokból álló folyadékot gyűjtöttünk össze. A HuPCaBA.O receptor izeformát manifesztáló kiónokat hasonló módon készítettük el.
HnPCaü.S.2 inszerciós szekvenciát tartalmazó CepáB-vei transzfektáit és h.igromicinnel szelektált HEK 223-as .sejteket tartalmazó összegyűjtött folyadékból kinyert sejtekkel kollagénnel bevont Akiar-kockákat fedtünk be, amelyeket előzőleg 12 mérőhelye® szövettenyésztő lemezek kűiön-külön mérőhelyein helyeztünk el. A közeget 2-6 nappal később eltávolíróttuk, és a sejteket stabilizált sőoldaftal. és 1 mi mennyiségű, 1 μΜ fura-2-AM-et, 1 mM kalcium-kloridot és 0,1 tömeg! BSA-t tartalmazó puffsroidattai mostuk. A kaiciumreceptor-agonistákra
C~on való reagálásra jellemző fluoreszcenciáért éke két 37 spekzrofluoríméterrel mértük. A gerjesztéshez 340 rna-es haliámbosszűságú fénysugarakat használtunk, a kibocsátott fénysugarak hullámhosszúsága 510 nm volt. A jelkalibráláshoz a Emax értékét 40 μΜ ionom!cin hozzáadása után, a látszólagos Emin értékét pedig 0,3 M EGTA és 2,5 A Trlsz-HCi hozzáadásával (pH ~ 10) határoztuk mag. A. (Ca'^ls nagymértékű növekedését figyeltük meg a következő kalciumreceptor-antagonisták hozzáadását követően: cX (10 md) , Mg2* (20 és NPS R-sö7. A funkcionális K-receptorokst manifesztáló kontrolleejtek nem reagáltak ezekre a kaicímimetikus vegyületekre.
További klónozó anyagokat különítettünk el pHuPCaRá.0 szekvenciával transzfaktáiz HEK 293~as sejtekből. Vizsgáltuk, hogy ezek az anyagok hogyan reagálnak a kalcimímetikumokra. A vizsgálatokat a már leírt módon végeztük azzal az eltéréssel, hogy a sejteket sznszpendált állapotban teszteltük.
3. példa
Fura-2-vel feltöltött mailékpajzsmíirigységtek felhasználása a kalciumrecsptor-aktivitás méréséhez
Ebben a példában azt ismertetjük, hogy miként lehet kinyerni meiiékpajzsmirzgysejteket borjakból és emberekből, továbbá hogyan lehet felhasználni a mellékpajzsmirígysejteket a kalciumrecaptor-aktivitás méréséhez.
Frissen levágott 12-15 hetes borjakból a helyi vágóhídon el távolitól tűk a mellékpajzsmirigyeket, majd a iabora tón urnba szállítottuk Őket 126 mii nátrium-kiorldot, 4 mM kálium-kloridot, 1 mM magnézium-kloridot, 20 md Fa-KEPSS-t, 5,6 md glukózt és változó mennyiségű - például 1,25 mM ~ kalcium- jjá -kloridot tartalmazó, jéghideg mellékpajzsmírígysejt-pufferoldatban (PCB) (pü~:?,4;. A humán mellékpajzsmirigyek olyan betegekből szármattak, akiknek elsődleges mellékpajzsmirigytúlműködés vagy urémiás meilékpajzsmirígy-tűiműködés fúr érni ás .HPT) miatt eltávolították a mellékpajzsmirigy-szövetét. Ezeket a mirigyeket a borjakból származó szövetekhez hasonlóan kezeltük.
A mirigyekről ienyestük a zsírfelesleget, valamint a kötőszövetet, majd a mirigyeket éles ollóval körülbelül 2-3 mm. éihosszűságü kockákra vágtuk. Kollagenázenzim.ee digeráiássai elkülönítettük, majd Perce11-pufserben való centrifugatással tisztítottuk .az elkülönült mellékpaj zsmrrigysej tokét. Fáziskontrasztom mikroszkóppal és B-szudáníeketévai való megfestéssel kimutattuk, hogy a kapott mellékpajzsmirlgyssjt-készitmény vörösvérsej tettől és zsírsejtektől gyakorlatilag mentes volt. A disszociált és tisztított mellékpajzsmirigysejtek 5-20 sejtet tartalmazó kis halmazokban voltak jelen. Rutinszerűen. végzett munka esetén a trípánkékes vagy etidiun-bromidos kizárással, -megállapított jelzőszám alapján, a sejtek SS %~a volt életképes.
Bar a sejteket ebben az állapotban fel lehet használni kísérleti célokra, a fiziológiai válaszreakciókat - például a ?TH.....szekréció elfőjthatöságát és a szövetek (Ca'-'p maradékkoncenfrációit a sejtek egy éjszakán át való tenyésztése után keli meghatározni. A primer tenyészetnek megvan az az előnye is, hogy a sejtek radioízotőpos megjelölésekor majdnem el lehet érni az izotöpegyensúiyt, ami az inozit-foszfátos metefeoiizmusra vonatkozó mérésekre kiterjedő vizsgálatokhoz szükséX X < « ges .
A sejteket tisztítás után 5Perooil-gradiensek; a. Ham-féle 'FI2 és 50 pg/ml mennyiségű sztreptomicinnel, 100 E/ml mennyiségű penicillinnel, S pg/ml mennyiségű gentamicinnel és ITS+-szal kiegészített, Dulbecco által módosított Eagle-féie közeg (GIBCO) 1:1 arányú elegyével többször mostuk. Az ITS* egy keveréssel előkészített oldat, amely inzulint, transzferint, szelént, valamint marhaszsrum-aibuminbői (B3.A) és linóiénsavbői álló ©legyet (Coliaborative Research., Sedtcrd, MA, USA; tartalmaz. A sejteket ezután áttöítöttük Falcon-gyártmányú., 7 5 vagy ISO: cm3~es edényekbe, majd egy éjszakán át 37 C-on, 5 % szén-monoxídot tartalmazó nedves légkörben inkubáltuk eket. Ezekhez a tenyészetekhez az éjszaka folyamán nem adtunk szérumot, minthogy a szérum jelenléte lehetővé teszi, hogy a sejtek a műanyaghoz tapadjanak, elszaporodjanak és dedifferenciálődjanak. Az Ismertetett körülmények között tenyésztett sejteket dekantáiással könnyen el lehetett távolítani az edényekből. Az eltávolított sejtek ugyanolyan életképességet mutattak, mint a frissen kiprepará.lt sejtek.
Tisztított mellékpajzsmirigysejteket újra ssuszpendáitnnk μΜ zura-2-acetoxi-metil-észtsrt tartalmazó 1,25 mii CaCIí2 % BSA-CPB-ben, majd a szuszpenziót 37 ‘C hőmérsékleten 20 percig inkubáltuk. A sejteket ezután peiletertúk, ugyanabban a pnfieroiőatban - de az észterkomponens nélkül. - újra szuszpandáitok, majd további 15 percig 37 'c-on inkubáltuk. A sejteket ezt követően 0,5 mM kaicium-kioríöot és 0,5 tömegk BSA-t tartalmazó PCB-vel kétszer mostuk és szobahőmérsékleten - körülbelül 20 °C~on - tartottuk. Közvetlenül a felhasz*Χ Φ * £> ?
- /18' nálás előtt a sejteket ötszörös mennyiségű, előmelegített 0,5 zlí CaCl2-PCS-vel hígítottuk, hogy a SSA végkoncentrációja 0,1 tömegi legyen. A fluoreszcenciás méréshez felhasznált küvettában jelenlévő sejtek koncentráció ja {1-2) x IQVml volt.
Az Indikátorral töltött sejtek fluoreszcenciáját 37 dC-on mértük egy termosztólt küvetfatartóval és mágneses keverővei felszerelt spektrofluoriméterrel (Biomedical Instrumentation Group, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA, USA·. A gerjesztéshez 340 na hullámhosszóságú fénysugarakat használtunk, a kibocsátott sugárzás hullámhosszúsága pedig 510 nm volt. A fluoreszkálás mutatja a sejtplazmáoan levő kalcíumionők koncentrációját. A fluoreszcencia-jeleket digítoninnal kalibrálva {50 pg/ml, végső érték) megkaptuk a fluoreszcencia-maximumot ílűk EGTA-val kalibrálva pedig (10 mM, pH = 0,3, végső érték) a fluoreszcencia-minimumot {Γ8ΑίΓ)), továbbá a 224 nM-es dlsszociáciős állandót. A színezékveszteség függ a hőmérséklettől. A legnagyobb veszteség a küvettában lévő sejtek melegítését követő első két percen belül következik be. Ezt követően a színezékveszteség csak nagyon lassan növekszik. A kalibrálásnak a szinezékveszteséggel való korrigálása céljából egy küvettában sejteket helyeztünk el, amelyeket 37 ’C-on 2-3 percig kevertünk. A sejtszuszpenziöt ezután eltávoIrtottuk, a sejteket peileteztűk, ás a felülüszót visszavezessük a kuvetta tisztítása céljából. A felülüszót ezután a szlnezékveszteség meghatározása céljából digitonines EGTA-val kezeltük. A ssínezékveszteség tipikus esetben a teljes Ca2+~ -függő fluoreszcens jel 10-15 %-a volt, Ezt a becsült érteket kivontuk a látszólagos F^-érfcékból.
4. példa
Fura-2-vel féltöltőét HEK 293/pHuPCaR4.0 sejtek felhasználása a kaioiumreceptor-aktivitás mérése céljából Ebben a példában azokat az eljárásokat ismertetjük, amelyek keretében fura-2-vel feltöltött HEK 293/pHuPCa?Ú.0 sejtek felhasználásával vizsgálni lehet a kalciumreceptor aktivitását. Fura-2-veI töltöttünk fel pHuRCaRd.0-val transzfekfáit HEK 293-os sejteket olyan módon, hogy a környezet hőmérsékletén 1 órán keresztül inkubáituk őket körülbelül 5 ,μΜ flno-S/AM-t tartalmazó, 20 mM mennyiségű HEPES-szei puffarolt, Dulbecco által módosított Eagle-féle közegben. A sejteket ezután Hank-féle stabilizált sóoldattal öblítettük, majd 1 kalolum-kiorídol és 1 bM magnézium-kloridot tartalmazó, 20 mM mennyiségű HEPES-szei pufferoltuk. Ezután a vizsgálandó vegyületeket hozzáadtuk a sejtekhez, és fiuoreszcenoíaméréseket végeztünk (a gerjesztést 240 nm hullámhosszúságú fénysugarakkal hajtottuk végre, az emittált fénysugarak hullámhosszúsága pedig 510 nm volt;.
5. példa
A vegyüietek kalciumreceptor-aktivitás-szabályOző képességének mérése
Különböző vegyületeknek a kaiciumreceptor-aktivitás szabályozására való képességét vizsgáltuk olyan, módon, hogy fura-2-vei feltöltött sejteket vagy fura-2-vel feltöltött sejtek alkalmazásával feltöltött mellékpajzsmirigysejleket felhasználva a pHuPCaR4öÖ génállományát tartalmazó nukieinsawal « » ét ~ A ~ transzfektált KEK 293-as· sejtekben mértük a (CaK'i növekedését. A különböző kísérletek eredményeit az Ka), az Kb)l., az Lb;2., az l.c) és a 2. táblázatokban foglaljuk össze. Az Ka), az Kb) , az l.bjL, az Kó;2, és az l.c) táblázatokban található adatok a különböző koncentrációkban alkalmazott vegyüieteknck a kaiciumreceptor-aktivításra gyakorolt hatásait mutatták. a 4. példában ismertetett vizsgálat alapján, azaz a pHuPCaHé.ö génállományát tartalmazó nukleinsawai transzfektéit, füra~2~vei fai töltött Kék 293-as sejtek alkalmazása esetén.
A 2. táblázatban különböző kísérletek eredményeit foglaljuk össze. Az ECsö~értékeket füra-2-vei feltöltött mellékpajzsmirigy vagy Hek 233/pHuPCaRK 0~sej tekre számítottuk ki. A sejteket fura-2-veI töltöttük tel, és olyan módon vizsgáltuk, ahogy a 2. példában (meliékpajzsmirígysejtekre vonatkozóan) , vagy a 3. példában (HEK. 293/pHuPCaRK 0-sej tekre vonatkozóan) leírtuk.
etek, amelyek 3,3 ng/ml ál nagyobb válaszreakciót t expresszáló HEX 293-as la> táblázat: Xalcxmimetikvs vegyül koncentrációban alkalmazva 40 %-osn váltanak ki a humán k&lciumrecepfcor sej tökben
iá vegyüietek .kódszáma j í [ Aktivitás négy koncentzá C^Xóó X?
téknél (%)
3300 i ng/ml J χ »ί~! <25 0 \y ng/ml 33 ng/ml i 3,3 ) ng/ml
R-56S 35 §9 24
«*Λ / Λ, 13 X SS 54
105 33 51
24 X 225 203 124 103
24Y 113 120 127 102
ÍVJ 116 í 3 V» jiíW SS ·* if *W Λ* 202
2SA 122 Λ 4* V 114 32
17S *í ! £ •Ae> 4» w Ί *5 Λ -U j» V 110 22
13 S 13 S 135 30
14 S 116 105 105 SS
xT 132 123 122 85
17G 123 123 123 / /
14 T Íz® 7 *> £ ou J*> «í 217 *Af ? /
X7H 125 * «ΐ Λ XXX / 4
140 123 113 202 /4
252 113 X 74
22J ·* 130 123 5 S
vegyületek kótíszárna i Aktivitás négy ko Léknél ncentrác í%í ióér-
3300 | 330 i 33 } 7
— i ng/ml | .ng/ml ; ng/sil | ng/ml
121 ' 115 7 7^7 33 98
250 7 ’S í* 1a aA O‘ 21S 33 89
3R 108 101 84
.12 F 118 110 101 93
120 210 X *· t 34 82
232 129 128 100 81
27M 115 33 53
Λ, >«<· mLO V 114 102 58
230 128 113 9S 57
25J *t $ 2 Λ» Λ Ά 10 s S δ
15L 145 13 S 33 55
12N 115: 7 (\£. le. 'W V 102
1ŐT <s~? •A> » 88 •Λ» V* «·< Ά W
250 107 ·* 7» -*7 4eV t 35 55
17P 101 88 54
ISO 110 88 53
23'S 137 113 102 53
170 113 120 93 52
SSL §7 97 35 52
82 101 37 52
27X 10 s 33 51
13R 1 *3 ÉS *Xa 93 Sl
170 7 7 38 51
23Q ·* -7 <· 7 Λ 1> 4a Éfc 33 51
1SX ΐ 1 1 MŰI SA» Iw 38 51
247 127 39 71 50
130 115 94 50
17N 108 SS 43
2.17 7 J Ια Λ» 1* 118 33 49
24H 132 13 4 95 48
13 V 10 3 79 47
** *
* * X
Se
- Y ..
A vegyületek kódszárna Aktivitás nagy koncentrációérfcéknál {%}
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
24? • 140 13 8 112 45
I?Y 103 34 73 45
XIX 120 75 43
25« 113 107 52 43
22 J 23 71 45
«C 104 32 43
13S 102 37 45
XOQ 103 102 84 44
139 110 83 44
s:< 33 SÍ 44
13N 114 85 43
ION XGS 27 77 43
12« 114 115 34 43
232 SQ 31 75 41
ISA 111 33 42
141 - 103 78 42
l.fe.l. táblázat; Kaicimimetzkua vegyületek, amelyek 33 ng/ml koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakciót váltanak ki a 'humán kalciumreceptort expresszáló KEK 293-as sej bekben
A vegyülitek kódszárna Aktivitás négy koncéntrácíóértéknél (%>
3300 WCí / iü x 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
Retereneisvegyületek
R-S55 SS SS 24
17? 121 SS 54
17X 133 33 31
Λ, ** «* 134 123 SS «· «.*
ISI 121 117 SS 't J <3
&
->/ y ν.
i Aktivitás négy koncentrá ^Ί-Λλι**
A vegyületek kódszárna i fcéknéX {%) :
| 3300 ! 330 | 33 | t 3
ΐ ng/ml { ng/sni J ng/ml i ng/sti i
-xn ^Av y i*'* 203 31 38
«·*»>«< 2. / 9? 5 ·* * 30 28
24C 226 113 87 32
ο v< 107 8 S Ά ,-· xxs
13 F «*· W Λβ/ t 0 3 85 3 3
21F 10 3 85 3 S
2 IS 13 2 132 ö « \2 ΑΛ> 34
20 F SS 84 *5 'J
14R 10 s •A Λ <A« V / 84 37
η fX wn *«a 122 128 82 3 S
24 2 US 103 32 20
1SN 122 1S3 82 8
su 123 223 32 21
23W 117 37 82 o s Λ© <ui
12 G 13 S 13 S S X *3 £S -k A*>
ISO 123 30 3 2
25M 2X8 100 7 S 23
* ’s V 110 78 33
14F 103 78 30
ST 123 1X23 78 12
24Q 7 Λ 7 Jw \X yk 78 35
17L 112 104 8 31
24 K XQ S 78 -2 A ki V
24 U 106 10 s 78 25
ΛΑ y* a\ X3M 126 § 5 ΛΛ< «** / / 20
3 “T 7 <\.k v-y
»:U Λ. V** 4 f •A» «9
23 H 221 114 \ 7 i l * 23
^«4H 134 1X4 ''A .<* 7» 17
XX (** <*X Í3t 37 SS. > 0 28
1 <Wt V9 a\ •X Λ. ,«\ k V V <*x .** / o 25
• y«í γ 218 27 78 13
Α Λ ♦ ** *
( Aktivitás négy kon cen 1 rácíóér- ΐ
A. vegyül etek kóásaásia 1 1 léknél { %)
í j 3300 τ 330 1 33 ! •••x ·~. : : J j
I i ng/nl I ng/ml i ng/m 1 ( ng/al 1
24Ü 103 75 32
'*$ ?. í*\ 10 3 *f <*· 3 37
24 G 10 5 54 75 -7 7> Xx-
15 Σ 111 33 75 24
*x > r* ZáV LG 4 *«f «·* ' 2 27
20 Y 7 7 *7 85 74 24
10? 102 74 8
23M 113 57 74 Λ·» Ζ» z«
•v Λ V i'S A 20 3 i*« «X > vf 5 y
7 *rv· X í X\ 38 37 73 *x *y «3 t
12Ξ 7 7 *7 Uk A í 122 73 23
55 73 37
1SW 102 73 4
23 K g .f*£ X-M & 207 í A 24
25X SS 94 72 zx <> A X
13 W 7 Λ $ » fj *7 *? •Λ. Λ». Íz
23? 125 55 70 7 7
183 ·» ·» ·* <«s» «Se· <* SS S 5 Λ» x· X*>
*5 x· \r AÜ 4r 1Λ ICO 53 35
17W 92 57 13
23A 7 -Á 7 4» V12 57 24
23G 227 53 57 13
13M 52 SS 15
22U 104 104 $ 5 18
2 ÍR 7 >7 Π A v U ,·*· z* fe « 15
χ n <£ / -χ π 'T sj* »X .} 4» 'd A 85 55 13
17R 58 SS 13
13 X 102 SS 13
45? 200 SS 23
2 IS 34 54 4
15a 80 y *[ 54 13
··?
* · * .·, * ♦ » * < 6 * * ♦ A»*.
»»««> Φ X <
7/? v -l
f ;A vegyül ebek kődszáma ( > Aktivitás négy ko kéknél ncentrá (%) CÍÓát£'~ Í t t I
ΐ 3300 í i ng/nl í 330 ; ng/nl ! 33 ng/ml 1 -3 ~ i ' < 5 ng/nl i
22 Y Xx 4 54 25
210 83 53 18
7 Λ T Ct Íaí 105 52 xo
107 35 52 8
10W/10X a a »A? \Á' 8 2 <<\ Ϊ
« *»r»\ 2. 32 51 15
2 32' 105 87 51 18
11Y 103 51 20
Hg:
I.b.2. táblázat: Kalcistimetlkus vsgyületek, amelyek 33 koncentrációban alkalmazva 40 %-esnál nagyobb válaszreakciót, váltanak ki a humán kalcimreceptort expresszáló HEK 293-as ss1bekben ks ... s
A vegyületek kódszána renciavegvüxetex
88
18C
231
21M
240
3U
2A
12M
123
Aktivitás négy koncenfcrációértéknél i (%)
102
30 ng/mi 33 ng/ml ( 3,3 ^ng/al
O *5 59 24
101 88 54
xos 93 51
87 ν' Λ s? u 18
74 50 31
33 59
S4 53 s
102 58 3
102 58 -t *? X ?
114 5 8 8
83 57
82 35 8
86 U a η
110 58 4
130
.«» «« * «
A vegyületek kődssáraa pák ti vitás négy koncén tr C%) áciőér téknéli
( 33öv ng/ Ksl ;3 ! í 30 ng/ml 33 ng/al |3,3| ; ng/rsl j
-5. ú '0 ·Α« ,f 32 SS 23
8T 85 SS 13
10L/1QM 33 SS 4
*\ Λ ·*· ,4*t «ΐ. 10 3 84 SS * ?
14H 33 55 25:
23 R 134 se 54 3 «Α»
TM Λ» ·λ^ só 37 53 3
2 XT 25 ’S ff. w 1 112 53 3
ion/iox 82 53 4
^»r*· 30 53 e
SR 34 52 *? f
2 01 87 §? •X* «X 12
24 A 122 SS 52 9
128 203 S2 5
ex 84 52 i n λ»
187 39 74 52 14
2IX 213 101 S1 2
vO ü? 202 SÍ sx 2 3
XQS se 51 5
25Z SS 51 3
23N 83 50 2
XSü SS 50 4
213 38 Sö 4
23 X 34 43
I7A 58 43 <-Ύ
^5 Λ- “T 4Ú> ví 30 48 8
kC 85 4 3 v Λ X'vf·
23U 87 48 3
/Λ v* w & 74 43 4
1SJ 32 75 47 *3 «X Λ
2SX 94 73 4 e 8
43 S -X 4 e 8
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncént (%) ....... 1 racióértéknéX!
1 3300 ng/ml |3 30 ng/ra I 33 | ng/ml 3,3 <ng/mz!
Φ» -»ri vy1 111 75 45 13
13 Q 45 5
X f* S 3 45
121 80 4 S * X4 λ. ;v
•a» ^á* 4»# SS 45 10
*} 4m ~*X Jv Ö Sri «Α 4 5 so
11W SÍ 44 Xv
SH á»: <5 $s sá 44 7
25V SS 53 43 25
25W C< ^3 55 42 s
ISA 32 '4 2 7
124 SS 42 4
SS 3 42 7
sx 75 4 0 15
Λ VS φΦ • íí. 123 54 40 ·*> 4ri
l.c) táblázat:: Kaieimimetikus vegyületek, amelyek 330 .ng/m koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakci váltanak ki a humán kaleiumreceptort. expressz ál ő HEK 293-a sejtekben
| Aktivitás A vegyületek j négy koncéntrációértékáéi (%}
kódszáma J 3300 ng/m 1 Í330 ng/m 5: Íj 33 | 3,3 : ng/ml jng/mi
Referenciavegyületek. R55S SS SS 24
17» > Λ t rf, y 1 35 54
-i, t .>;£ 105 53 51
7X SS
3H 84
·** 81 23
ISO ' ' 125 81 2 7
80/SQ 124 80 Ύ Λ A wL 'S Xí
» * *♦
A vegyűletek 1 Aktivitás négy koncéntráciőérték-j ) nei (%)
kódsráma I 3300 na/nl (330 ng/mii 33 j 3,3· i , ... , - j ί · ; ; 1 ϊ ng/ml pg/mlj
aí ,4 ·λ SS 7S IQ 7
**1 -J * jic «0 iul * >< *T 77 37
X 7** X -x /55
7W 75
4Ji Ύ-7 37
80 75
SM 73 AJ Ja Áa
,< 'C *»ϋ *7 Ó? ί Ja
24 B 34 MV A /1 ΑΛ AA íS δ
1SM 130 SS -1 «ί .4. sí. .j Ti
4M SS 34
2S »7 29
17V 91 SS ·\ .XJ· Ja f A.
2X 2 4 *$ ~
1-ΪΠ JA -ώ XJ 91 €3 3 S 5
4? j<· X» ti 3 *$ w Ja
SS/SC SS 20
S4 IS
<i «X A*» : i* «s 4Χ·.*$τ ,Ό S2 3« s
SO S2 18
40 5.1 13
24B 70 t? 1· 34 11
24H SÍ <9 ÍJ 32 13
5 Ix· so IS
2Y 53 10
SS IS
η, γ j. J V SS 24
**W x> X* Ϊ3 4
14S 73 5 S í *t 4
13Z 33 54 22 5
SA 54
24D 87 53 34 3 3
rí't Ί λ $*
Aktivitás négy koncéntrációértéknél (%) kódszáma
3300 ησ/ml 1330 mg/aslS 33 3,3 * ’ ' . I ng/aljng/ml
131 •5 a ώ·* se *τ?τ
SŐT λα’Χμ» ·* 'ír?
-< jy %tj ·» .>í T «» *fc 4%
4B *5 T**
I·*' ’W
SS
3.
s;
>« 2
4?
A ·«>
*ft ?
2. táblázat: A mellékpe jzsairigysej t kai ai uarscep torán in vitro körülmények, között aktív aril-alkil-amin-származék kalciaieetikuaok az 1, ábráról (EC5!J 4 5 μΗ)
|á vegyüietek (kődsráca (az ^ábráról} j FOK 1 ♦ ; <μΜ) La vegyüietek jkódszá»a <az (ábráról) j SCse ) ő, | <μΜ) 1
|| HPS E-4S7 | 2.0 ., X.1.X 1 0.83 1
1 NPS 35-5 SS I 0.50 i» ϊ ί
1 3U | Ö . 54 Ji 4» -»f Á3 ! lő j
| 3V | 1.8 1 123 ] 1.2 ||
| 4A ) 1.4 j 12 V | Q.4.2 J
1 43 j 2.0 j 12 W 1 $ ) 3.2 ||
♦.* X
-,Ζ yb
«X ΐ # · «Λ·» ♦* ♦ «·
I sc | Ö.S0 I 210 0.23 |
! 3b 1.4 I 2 IP 1 0,43 |
I 9R 1 0.25 1 21Q j X. 4 1
I 9S | 4.8 2XK | 0.3? |
I IGF | 0.89 j 25C 1 > 2 I
1 XXD | 1.8 I | 250 f 0,0X9 I
SA Példa
A kővetkező példában bemutatjuk, hogy a találmány szerinti, 21M jelű {in ábra), a 21Y és 21J jelű (1o ábra) és a 25C jelű (1q ábra) vegyúletek a korábban ismert vegyietekhez képest nagyobb aktivitást mutatnak. A hivatkozott vegyietek biológiai adatait az NFS 568 jelű (WO A 9418959 nemzetközi közzétételi számú szabadalmi bejelentés 36j ábráján ismertetett) vegyületiel összehasonlításban az alábbi táblázatban mutatjuk be.
A számok a szérum mellékpajzsmirigy hormonra (PTH) és a szérum kalcium ionra (Ca*') a görbe alatti terűiéiben 0-8 éra alatt bekövetkező, azon %-os változást mutatják be, amelyet az egyes vegyűlelek az adagolás után a patkányokban a vivöanyaggai kezeléshez képest okoztak, Minél nagyobb a görbe alatti terület, annál nagyobb a PTH és a szérum Ca** csökkentő hatás.
Amint az a fenti táblázatban látható, a találmány szerinti vegyűlelek az NP5 R-588 jelű technika állásához tartozó vegyületbez képest a 21M jelű ve78 gyület esetében körülbelül hétszeres, a 21Y jelű vegyüiet esetében körülbelül 16-szorös, a 22 J jelű vegyüiet. esetében körülbelül 10,5-szeres és a 25C jelű vegyüiet esetében körülbelül 24-szeres mértékben csökkentették a szérum PTH értékét.
Hasonlóan a találmány szerinti vegyületek a NPS R-56S jelű, technika állásához tartozó vegyüleíhez képest a 21M jelű vegyüiet esetében körülbelül készeres, a 21V jelű vegyüiet esetében körülbelül 2..3-szeres, a 22J jelű vegyület esetében körülbelül 2,3-szeres és a 25C jelű vegyüiet esetében körülbelül 2,5-szeres mértékben csökkentették a szérum. Ca+’’ szintjét.
Példa
A. következő táblázat a (II) általános képíetü vegyületek %~os aktivitását mutatja.
.28 táblázat
A vegyüiet BEK 4.0-7 %-os akti- %-os akti- %-os akti- %-os al ;ti-
jele (NPS ál ECsö(oM) vitás (10 pMl vitás (0,33 ug/rnl) vitás (0,033 pg/mh vitás (0,0033 ug/ml)
NPS1143 - - 110 56 4
NPS 1144 - 125 98 39
NPS1145 - - 109 52 5
NPSH46 121 73 23
NPS1147 - 110 101 63 ........
NPS 1418 - - 115 99 66
NFS1419 - ... 107 89 45
Az adatokból a következők láthatók:
Jó %-os aktivitással rendelkeznek a telítetlen sorozatok (szén-szén ketíöskötés), ahol Rs-Rg-Tóo-H és ahol Ar3 OMe~. alkil-csoporttal vagy Cl-atoransí helyettesített (ez NFS 1143, NFS 1144, NFS 1145, NFS 1146 és NFS 114? jelű vegyületek).
A megfelelő telített rendszerekben az aíkil helyettesítéssel kisebb agonísta hetessel rendelkező vegyületeket kapunk.
Más telített rendszerekben ez GMe-heíyettesítés nagyobb agonísta hatással rendelkező analógokat eredményez.
2. Jó %-os aktivitással rendelkeznek azok a telítetlen sorozatok (szénszén kettőskötés), ahol R®~Rto~H és R&-Me (NFS 1418).
A megtelelő telített rendszerekben a vegyUletek kisebb agonísta hatással rendelkeznek.
3. dó %-os aktivitással rendelkeznek azok a telítetlen sorozatok (szénszén kettöskötések), ahol Rs=R§=H és Rio~Me (NFS 1419).
A megfelelő telített rendszerekben a vegyületek kisebb agonísta hatással rendelkeznek.
».·· *
δ-3.7, példák A vegyületek szintézise
A leírásban szereplő vegyületek ismert eljárásokkal - például a Hemeth és munkatársai által leírt módén [9CT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi kezreboesátási irat száma;: UO 94/18959}] - szintetizáihatők. A továbbiakban példákat köziünk a szövegben szemelő vegyületek. tipikus előállítási módszereire.
A 9R, a 14U és a 179 kódszámú vegyületeket kereskedelmi forgalomban levő aldehidből vagy ketonból állítottuk siö reduktív amináiással, az aminálást primer aminnal végeztük nátrium- íciano-trihzdro-borátj (X-) vagy nátrium-Ctriacetoxi-nioro~oorá~} (i-ι jelenlétében. Hasonló módon állítottuk elő a lllj a 12H, a 12K, a 12M, a 14S, a iái, a 16L-0, a 17£, a iiG, a i7u. a 24X, a 24Y, a 25Ά, a 25E-25K és a 250 kódszámú vegyüi.eteket, nzt tapasztaltuk, hogy az említett három, vegyület (9R.; 14ü es le?} szintézisekor nátrium-(t.riacetoxi-hídro-borátj(i-í alkalmazása esetén nagyobb d-iasztereoszeiektzvitással Keletkeznek a kívánt diasztereoízomerek, ainí nátrium-rciano-trrhioro-borátni-’ alkalmazásé esetén. A dúsított el egyből.
i.A tb.
Sd χ· további tisztítással állítjuk alő a kívánt diasztereomert. A készített normálfázisú nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel vagy szerves oldószerrel való átkristáiyositássaí végezzük,
A δ-J, a 8U, a 11X, a 17H és a 25Y kódszámú, vegyületeket úgy állítottuk alő, hogy primer ami.nokát aldehiddel vagy ketonnal titán tiV;-isopropoxid jelenlétében kondenzáltunk. Az így kapott intermedier imineket ezután nátrium-{ciano“trihidro-borátl ·{.!-)-szál, nátrium-stetrahidro-borátj il~)~ szál vagy nátrium-[triacetoxi-hidro-borát]. (I-)-szál in situ redukáltuk. A. éU kódszámú vegyület szintetizálásához az intermedier amint szénhordo-zőra felvitt palládínm-díhidroxid alkalmazásával katalitikusán redukáltuk.
A 12U, a 12V és a 122 kódszámú, vegyül®teket úgy állítottuk elő, hogy amint diizobutii-aluminium-hidrid (DXBAL-H) közvetítésével nitrillei kondenzáltunk. A keletkezett intermedier imént nátríum-[eiano-trihidro~borát](1~)-szál vagy nátr ium-(tetrahidro-borát] {l-}~sxai in satu redukáltuk. Az intermedier al kéneket (a 1.2U és a 12V kódszámú vegyületeket) szénhordozóra felvitt palládium alkalmazásával etanéiban végrehajtott katalitikus hrdrogénezéssel redukáltuk. A vegyületeket ügy alakítottuk át a megfelelő hidrokioridokká, hogy a szabad bázisokat éteres sósavval kezeltük, és ennek eredményeként fehér színű szilárd anyagot kaptunk.
Az ezekhez a szintézisekhez felhasznált «minőket az Aldríoh Chemical Co.-tói {íáilwaukee, WI, USA) vagy a Ceigene Corp.-től (Uarren, AJ, USA) szereztük be, illetve hagyományos eljárások alkalmazásával szintetizáltuk. Az összes többi, re** Λ *:* X ♦ ~ ...
ágensként használt vegyszert az Aldricb Chemical Co.-től vásároltuk .
ű.™xuélda
V
Α\χ 257 kódszámú vsgyúlet {N~[3~(2-feniI) -prop±i]~l~<1-na^til)-stíl-amin} előállítása
135 μ (1 κακοί) 3-fenil-l-propí'i-aKdnt, 170 mg (1 mmoi) I ’ -aeetonarmont és 355 mg (1,3 mmoi.) titán(ÍV)-izopropoxídot tartalmazó elegyet 1 órán keresztül a környezet hőmérsékletén kevertünk, A. reMoiöelegyhez ezután 1 mi 1 M etanolos nátri®~ [ciano-tr ihidro\borát] (1-) -oldatot adtunk, és az Így keletkezett elegyes a \prnyezet hőmérsékletén 16 órán át kevertük. A reafcciőelegyet\dístil-éterrel hígítottuk, és 0,1 mi vízzel kezeltük. Az Így keletkezett reakcióslegyet centrifugáltuk., majd a díetil-éfcer^ réteget eltávolítottuk és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott tejszerű olaj egy kis részét (10 mg-ot) nagyteljesítményű foiyadékkromat.ográf iás: módszerrel (Phenomenex, 1,0 x 25\cm, 5 uM szílícium-dioxid) tisztítottuk. A tisztítást gradiéhselűoiövai valósi tettük meg; eluálőszerként olyan, ü,l 1 izo^ropll-amint tartalmazó diklör-metánböl és metanolhói álló slpgyet alkalmaztunk, amelyben a 10 %-os koncentráció eléréséig tpivamatosan növeltük a metanol koncentrációját. így szabad házié tormájában egyetlen komponensként kaptuk meg a terméket: \c/EX»-M.S {Rv 10,-4-8 min); m./z (relatív intenzitás) 283 (Ml, ll\ 274 (-63),
184 (5), 162 (5), 155 {100-}, 141 (18), 115 (8), ÓM (45), 77 (5), S lh yg .óv 10* * * ♦
/
Hasonló módon összekevertünk 1 elyáívalens mennyiségű, o- k 1 o r - b e n z a 1 de h i oh ö i eiőál Háttá 4 / (2 ~ k 1 ó r - f e n i I } - 2 - bot a no n s, ./ /
ekvivalens mennyiségű {R}-!·- (3-metoxif-en.il)-etli-amint, valamint 1,25 ekvivalens mennyiségű titán[IV)-i2opropoxidot# és az intermedier isiint náhzínm~jcíano~erzhidro---bor.át1 U~; alkoholos oldatában redu(gáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt és 95 % kloroyórmot tartalmazó elegy felhasználásával végrehajtott ismétléses preparativ vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után zyágkaptuk az (R,R) ~N-(4-(2-klőr-feníi) ~2~butíl1/ —X-(3-metoxi/feniü )-etil-amint# vagyis a 4? kódszámú vegyülttét: m/z^/íreiarív intenzitás·} 317 (Mt, 3), 302 (16) , 178 (62), /?8 (62), 135 (lOöj, 125 (15), 105 (10), 91 (6), 77 /
(-6-1--/ i ; á . pe > m m
A 219 kódszámú vegyület élőárlátása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű, m-(trifluor-metii!-benzaldehidbci előállított 4-{3-(trífiuor~met.il) -fenilpi-butanont, (R)-1- {3-metoxi-feni 1; -etr i-amint és 1,25 ekvivalens mennyiségű, titán(ÍV)-izopropoxidot, és az intermedier ímint nétrium-foiano-trihídro-borát] {.!-). alkoholos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 1 metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eléggyel végzett ismétléses preparativ vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (R, R) -11-(4-(3- (trifiuor-met181) -feniII-2-butiIj- I- { 3-metoxi-fenil)-etil-amint# vagyis a 21Y kódszámú vegyületet ím/z (relatív intenzitás) 351 (Ma, 2), 336 (18), 216 (a), 202 (3), 173 (45; , 135 (190) , 105 (11), 91 (9), 77 (3)1 és az (2,E;-b~ -(4-(3- (trífi oo r - metii} -feni I2 -b n t i 1) -1 - (3 - me t o x i - f e n i I) ¥ áj * ♦♦
-etil-amint, vagyis a 21X kódszámú vegyületet.
A 25C és a 25D kódszámú vegyöletek előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű 4~|3- (trifluor-metii) -feniij-ó-butanont, (R> -1- (1-naftil) -et11-amint és 1,25 ekvivalens titán ( XV)-izopropoxidot, és az intermedier imint nátrinm-|oíano~trihidro-borát] (1~> alkoholos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 35 % kloroformot tartalmazó elaggva! végzett ismétléses preparativ vékonyréteg-krom.atügráflás eljárás után megkapzuk az (S, RÍ ~N-(4-:{3- ( triflüor-meiíl) -feniil-2-bütiij-l- (1-naftíl) -etil-amint, vagyis a 25C kódszámú vegyületek jm/z (relatív intenzitás) 371 (Mg 3), 356 (16), 138 (.15), 1S5 (100), 123
03), 115 (5), 139 (3)0, 77 (2), 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (S) , 115 (5), 103 (3), 77 (2)] és az (R, R) -N-[4-[3- (trif luo.r-met.ii) -feniJj-2-butlij:-- 1~ (I-naftiii -etil-amint, vagyis a 25D kódszámú vegyületet ím/z (relatív intenzitás; 371 (Mg 3), 356 (16), 133 (15), 155 (100), 123 (8), 115 (5), 109 03, 7 7 főj].
Hasonló módon összekevertünk j/ékvivaíens mennyiségű 4-fenil-2-butanont (Aldrich prémicai Co.), (R)-I-í3-metoxi-fenil)-etai-amint és ipot ekvivalens: mennyiségű titán (XV)-izopropoxidot, ég./'az intermedier amint nátrium-(eíano~ -trihzdro-borápf'íl-) etanolos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és g/ 5 1 metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó jaíeggyel végzett ismétléses preparativ vékonyréteg--(-4---ée«Á4~~2~~<rt. tó / 'to
-(tetrahidro-borátp 1~)-oldatba, amely 10 mmol mennyiségű/hátrium-(tetrahídro-borát|(1-)-t tartalmazott. Az elegyej/a környezet hőmérsékletén 30 percig kevertük, és ,,-á nátrium/ ~(tetrsbidro~borát] íl~; felesleget 10 %-os sösXvoldat hozzáadásával semlegesítettük. Az oldatot ezután 10 N nátrium-hzdroxzd-oldat .beadagolásával meglűgosítdttuk ás 300 mi di~ etil-éterrel átmosva választötöicsérbg/töltöttük. A vizes fázist éltávolitottuk, és a megmaradj/szerves fázist 3 x 100 ml 1 R nátrium-hidroxid-oldattai Kiástuk. A szerves réteget vízmentes magnézium-szulfáttal Szárítottuk és bénáról tűk. A bepár lásd maradékként kadott olaj szerű anyagot gradiens eluáiast alkalma sva/’’ sziizkagélen kromatogratáituk. Az eiuáiáshoz kloroformot használtunk, amelyben a metanol koncentrációját folyamatosán 10 %-ra növeltük. Ilyen, módon 72 i~ /
/
-os hozammal/z, 34 g mennyiségben kaptuk meg tiszta olaj fór//Z r ·>
majában z/z ;R) ~H-{3- (2-kibr-fenil) -propiij-l- (1-naftil) -etil/
-amint/’ vagyis a 122 kódszámú vegyül etet: m/z {relatív intenzitás) 323 (M-x, 2} , 303 í 63} , 230 (7) , 196 {5), 184 (5), 155 d-a-úXé·,——AeH-T——éü——039—,—eu—
A 12B kódszámú vegyület előállítása
Hasonló- módon 4-metil-f ahé jsavnitriit dí i zobu.tr l-aiumíníum-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-im.ir.o~ -komplexet (R)-1-Í3~metoxí-fenii}-étii-aminnai reagáitattuk.
Az intermedier imint etanolos nátrium-ftetrahidro-borátí (i-) szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olaj szerű, anyag formájában kaptuk meg az ÍR)~h~[3~ (4-metii~£exili) -prop-2-enilj-l- t3~metoxi~ remi; -etri-
ói .'5. IJ ** *99
-amint, vagyis a. 12B kódszámú vegyületet: m./z (relatív intenzitás) 281 (59-, 6} , 266 (5), 176 (27) , 146 (75) , 135 )63),
131 )100:, 115 (25), 105 (21), 31 (21), 77 (21).
A 12C kódszámú vegyúlet előállítása
Hasonló módon 2-metil-fahéjsavnitriit diizobutil-aluminíum-hidriddel kezeltünk, és a keletkezett intermedier aluminíum-lm in-'komplexet (E) -1- (3-metoxí~fenil) -etii-aminnal reágálhattuk. Az intermedier imént nátrium-(tetrabrdro-borátj(l-}-szai kezeltük, A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, ola j szerű anyag formájában kaptuk meg az ÍR; -R-Í3- (2-metii-feniI) -prop-d-snii]-!- (3-mafoxi-rendi) -etil-amint, vagyis a 12C kódszámú vegyületet:. m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 41, 266 (15) ? 176 (1'8), 146 (62;, 135 (58), 131 (100), 115 (23), 105 (19), 31 :33), 7? ) 17) .
A Í2D kódszámú vogyulet előállítása
Hasonló módon 2,4,6-trimetil-fahéjsavnitriIt dzizofeutíd-aiuainium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium--imín-komplexet ÍR)-1~ (3-m.etoxi-fen.il} -éti 1-aminnal reagáltattuk. Az intermedier Imink etanolos nátrinm~[tetrahídro~ -borát! (1-}-szar kezeltük. A feldolgozás és a kromatograiáiás után tiszta, .színtelen, olajszerű anyag formájában megkaptuk az (R) -)4-(3- (2,4, 6~trimetí 1-feníi) ~prop~2~enil1~l~ (3-mehoxi-fenri)-erii-amdnt, vagyis a I.2D kódszámú vegyületet: zúz (relatív intenzitás) 309 )M+, 8), 294 (25) , 174 (32), 159 (100), 135 (52), 129 (29), 105 (21), 91 (17), 77 (14) ,
A 12E kódszámú vegyülat előállítása
Hasonló módon 4-izopropiI-fahéjsavnitrilt diizobutii*'#··· · * >1
»*« ♦ ' <fa
- _)..»« -al um'ínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imln komplexet ÍR;-1- (3-metO'XÍ-fenil) -etil-amidnai reagáltattuk. Az intermedier imínt etanolos nátríum-ítetrahidro-borét]í 1 -; -szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után. tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az ÍR) -15-(3- {4-l2oprop.il-fenti) -prop-2-enilJ-l- (3-metoxi-fenil;-etil-amint, vagyis a 12£ kódszámú vegyüietet' m./z (relatív intenzitás) 309 (Mb 9), 294 (7), 174 (98) , 159 ;22) , 155 {501, 117 {1001, 105 (35) , 91 (37) , 77 {19;.
A I.2F kódszámú vegyülefc előállítása
Hasonló módon 2,4-dlmetíl-fahéjsavnitríit diizobutil-aiumínium-hidriddai reagáltattunk, és az Intermedier alumínium- Imin- komplexet ÍR;— 1 — ('3-metoxi-fenil) -etil-aminnai reagáltattuk. Az intermedier amint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1~)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk rag az ÍR) -N-(3- (2,4-dimetii-fsn.il) -prop~2-enii}~l~ {3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 12.F kódszámú vegyüietet: m/z (relatív intenzitás; 295 (if, 3), 294 (15), 174 (29) , 150 (75), 145 (100), 135 (68), 11 (21), 105 (30), 91 (26), 77 (19) .
A 12G kódszámú vegyüiet előállítása
Hasonló módon 3-metil-fahéjsavnitrilt dlízobutii-alumlniuxa-hidriddei kezeltünk, és az intermedier aiumínium-imin-komplexet (R)-í~(3-metozi-fenll;-etil-aminnai reagáitattuk. Az intermedier imént etanolos nátrium-ftetrahídro-borátj í I-) -sza.1 kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tisz** . «••‘«.'Χ* <*<·· s:
·<
•χ.· ta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R)-N-[3.....03-metél-fen 1.1} ~prop-2~enilf~l- (3-Betozi-fení 1) -etil-amint, vagyis a 12G kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 281 AT, 55, 266 í.9j , 176 (24), I4S {715, 155 (62),
131 (ÍOú), 115 (235 , 105 (195, 91 (415, 77 ( 13 5 .
A 2SS kódszámú vegyüiet előállítása
Hasonló módon fahéj savnitri.lt dlizobutil~alamd.ninm·--hídriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imin-komplexet (Rj-l- (3-metoxi-fenil} -etil-amínnal. reagáitattuk. Az intermedier imént etanolos nátríum-|'tetrahidro-borát)(1-5- -szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olaj szerű anyag formájában kaptuk meg ez (R5-N- (3-fenii-prop-2-en:ll)-1-<3-Metoxi-fen.il) -efcii-amlnt., vagyis a 25B kódszámú vegyúletet: m/z (relatív intenzitás) 267 (H, 3), 232 (14), 176 (I7í, 135 (625 , 117 (100), 105 (23), (36), 77 (33).
A 25G kódszámú vegyüiet előállítása
Hasonló laódon α-metil-fahéj savnltrí it dlizobutil-alumínium-hídriddel kezeltünk, és a keletkezett intermedier slumínium-imin-komplaxet (R) -1- (3-meto-xí-fenll) -etil-aminnal reagálhattuk. Az intermedier imént etanolos nátrium-(tetrahidro-borátl (1-)-szai kezeltük, A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olaj szerű anyag fórBájában kaptuk meg az ÍR)-R-(2~metíl~3~fenii~prop~2~enli)-1-(3-metoxi-feni 1)-éti1-amint, vagyis a 25G kódszámú vegyűletet: m/.z (relatív intenzitás) 231 CM*, 5), 266 (13), 190 (125 , 146 (73 5, 135 (82), 131 (1005, 115 (21), 105 (21), 91 »*»* .
ζ Uh (62), 77 (19).
/
2.50 al dimetii-formamidban feloldottunk 1,8 g (75 mmol) nátrium-hidrádét . A kapott oldathoz keverés közben 50 ml ./ dimetil-formaiaidban feloldott 2.3,3 g (75 mmoi) díetil-ciano-mstil-foszfouétot adtunk. A relációelegyet 30 percig a kör/ övezet hőmérsékletén kevertük. Ézt kővetően a reakcióelecyhez /
10,54 g (75 moll S-klór-benz^Xdehidet adtunk, és az így ke/ letkezett eleqyet 1 őrén M a környezet hőmérsékletén, 30 / percig pedig 60 0C~on kevertük. A reakciót ezután 200 ml víz / beadagolásával befagyasztottuk. A reakcióelegyet 300 ml dietil-éter felhasználásával választőfölcsérbe töltöttük, és a kapott szerves fázisáé 5 x 300 mi vízzel, valamint nátrium-klorid-oldaftál mossuk. A szerves fázist vízmentes kálíum-karfconáttal szárítottuk és bepároltűk. Bepárlási maradékként szilárd anyag formájában 11,06 g 3-klőr-f.ahéjsavnitriit kaptunk. A szilárd Anyagot 50 mi tefcrahidrofuránban feloldottuk, diborán-felesl. férgei kezeltük,· és a környezet hőmérsékletén 30 percig kevertek. A reakcióéi egyet jég és 10 %-os sósavaidat elegyére öntettük. A savas vizes fázist 2 x 200 ml diet.il-éterrel mostuk. A vizes fázist 10 N nátríum-hidroxíd-oldat beadagolásával, msgiúgosltottuk, majd 200 mi díetil-éterrei. extrahátuok. A dietil-éteres extraktumot vízmentes kálium-karbonáttal szárítottuk, maid bepároltuk. Ilyen módon. 0,6 g Í3, sY mmci) olaj szerű anyag formájában 3- (3-k.lór-fenil) -prppii-amint kaptunk. 0,6 g 3-!3-klór-feniI)-propí1-amint,
C,/5.
2,54 mmol) 3f -metoxí-acetofenont és 1,25 mól—4...Α3.....ζζζαΧί— át., küőwévü—acx-gpéü-vü-afu--·
rX^táv—á«é^n-s4t-á-s4—-3H-3—i-MX—X
288· (91) , 196 (4), 184 (10j -, 135 (100; , 125 í 61 ,í f 103 (21 X 77 (la).
A 2GA kódszámú vegyület- előállítása /
X;,
Hasonló módon, a környezet hőmérsékleté^4 órán át kevertünk 1 mól ekvivalens mennyiségid 1-X-metoxi-feni'i)-etilam inból, mól-ekvivalens jXnnyíségű
4- (t-botil) -a-cetofenonból és 1,25- mólekvjXálens mennyiségű titán {IV} ~izopr-opoxídhó-1 álló elegye^/majd az intermedier imint 5 ml
M etanolos nátrium-^dlano-fcrihidro-borát} {1-}-oldattal <5 X mi; kezeltük. A fe.Ldöigozás és a. kromatograf ál ás után oiagszerű anyag foraXiában kaptuk meg az <R)-N~[l-(4~ (tere-butii)~fenilJ-etiljX- (i~naftil) -etíl-amint, vagyis a 2ΌΑ kódszámú vogyületX: m./s: (relatív intenzitás) 331 (Ma-, 12), 316 (2$),
161/<0), 155 (100), 131. (14), 127 (13),115 (10), 105 (6), 91 Χχ.7.....71ΧύΤχ...
A 25H és a 2SG- kódszámú vegyúletek előállí tása
Hasonló módon, a környezet hőmérsékletén 4 órán ét keverte etünk egy olyan elegyek, amely 1 obiekvivalens mennyiségű (R)--l-(3-metox.i-fenil)-etii-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű transz~4'-fenil~3“fe«tén-2~öní és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot tartalmazott, majd az intermedier ímínt 5 ml 1 M etanolos nátrium-feiano-tr iizo-bo.rátj (!-') -oldattal (5 mmol) kezeltük. A feldolgozás -és a kromatografá-lás után olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az (X R; -N- (.2-metzi-4-fenil~but-3-enil; -1- (,3-metoxi-fenil) -etil“amint, vagyis a 2 5H kódszámú vegyitletet fm/z (relatív intőnX
R..O.1.3 ·?'
- jhí (1.5) , oltás; 283 (Μ-κ, 4;, 268 <13;, 178 <40} , 135 <100; , 105
R7;, 77 <13;p valamint az (S'fR}-M-(2~metiI~4-fenil-but-3~ -enil)-1-(3-m.etoxi-fenil}-etil-amlnt, vagyis a 251 kódszámú vegyűletet [m/z (relatív intenzitás) 283 (M+f 4} , 258 <13)f
1~8 <4 0; , 135 <100; , 105 (15) , 01 (47), 77 <13)1.
ii.ason.io módon kevertünk 4 órán át szobshojaerséxleten 1 / mölskvivalsns mennyiségű (R) -1- (3-metoxi-feni gj -etil-amint, 1 / mól ekvivalens mennyiségű 3-m.etoxi“aoetofsnon.t és 1., 25 mölekvivalen/s mennyiségű titán(V) -izop^poxidot tartalmazó / eleovet, maid az intermedier xmínt S my 1 M etanolos nátrium“[c.iano-trxízo-norátld-)·-oldattal (5/ mmol; kezeltük. A. feldolgozás és a kromatografáiás utár/ olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az (R, Hj (4-mg€oxi-fenil) -etíl]-l-(3-metoxi/
-tanai}-ettl-amint, vagyis <k löL kódszámú vegyületet (m/z (relatív intenzitás; 284 /1-1, 1) , 270 <85} , ISO (83), 135 '100; 120 <1.2} , 105 (2^ , 9 <25}, 77 (23)} és - ugyancsak olajszerű anyag formájában - az (S, R} -N-íl-<4-.metox.i-feniX; -et.iij-1-(3~metoxi“f^hil)-etii-aminfc, vagyis a X6M kódszámú ’egyuletet (m/z (^élafiv intenzitás) 284 <M~i, 1), 270 <53; ,
150 (93), 135 (/00), 120 <1.1} , 105 (33), 91 (25}, 77 (23;}.
Az 5B/5€/kóászámú vegynlet előállítása
Hasonló módon használtunk fel é-kiór-aceto-fenont 3-metiX~ -3-<4-k/ór-fenii)- fahéjsavnitrli előállítására. A. nitrilt pailáXium-hidrox.id és ecetsav jelenlétében 4,14 x 10Λ Pa Aidrog4nnyomá.son 2 órán át katali tikusán redukálva 3~metil~3- < 4—áiXlXolAunk·— i 4®ái-e-kaAsvaAene~ ftí
Ót
19. példa
Gyögys zerkés zí tmények
A 3, táblázatban egy olyan gyógyszerkészítmény adatait közöljük, amellyel ka .leírnám.® ti kom juttatható be beteg ember szervezetébe.
3, táblázat
A komponensek m egne ve z és e A komponensek mennyisége, mg/kapszula 5000 kapszula elkészítéséhez tipikus esetben szükséges komponensmennyrség, g
N3S 3.-553 55, 0 230,0
Előzseiátinéit ke- méxxyito IbPj r 5 a, o 570,0
Mikrokristályos cellulóz INF) 34, 0 17 0,0
Kolloid .szilícium-dioxid 1,0 5, 0
összesen c s c- »,· 5 7 '7
Az. MPS (R) -553-hidrokloríd-keszltményak és adagolási formák további példái közé tartoznak a szokásos eljárásokkal előállított hosszantartó vagy elnyújtott hatású 'készítmények.
A készítmények adagolása Is szokásos módszerek alkalmazásával történhet. Az. egyik kísérletsorozat végrehajtása során például 10 - 400 mg orális dózisban alkalmazva az MPS (R)-553-hidcokiozid a kezeit embereknél farmakológia! .aktivitást mutatott. Az UPS {Rj-558-hidrokroríd orális alkalmazását követően az emberi vérplazmában megfigyeléseink szerint nagy volt a 17 kódszámú vegyulet O-giükuronid-konjugátumának - az HPS (R;-553 fő anyagcseretermekének - a koncentrációja. A I7Q kódszámú vegyüiet glúkuronid-konjugátuma tehát bizonyos kedvező hatást gyakorolhat.
Az MPS (R)-558-ra szokásos módszerekkel más megfelelő adagolási határértékeket is meg lehet határozni.
lg
M. · -4 lg ..
::
- í/ö A bejelentésben közölt ismeretek alapján az adott területen jártas szakember a leírásban szereplő többi vegyületre vonatkozóan is meg tudja határozni a megfelelő adagolási határértékeket, készítményeket és adagolási formákat.
A leírás végen közölt igénypontok más megvalósítási formákat is meghatároznak. Arról van sző tehát, hogy bár a leírásban számos megvalósítási módot bemutattunk és ismertettünk, azok különbözőképpen módosíthatók anélkül, hogy az új változatok eltérnének a találmány szellemétől és meghaladnák a találmány terjedelmét.
**«r ο
l/? Szekvencia lista (I) ÁLTALÁNOS INFORMÁCIÓK:
(i) BEJELENTŐ; NFS Pharmacentioals, Inc.
(.11) A TALÁLMÁNY ClMS: KALCIUM RECEPTOR-AKTÍV VEGYÜLETEK <iiii A szekvenciák száma: 2 (ív) LEVELEZÉSI CÍM:
(A) CÍMZETT: Lyon S Lyon
(Bí UTCA: First Interstate World Center, Suite 4700 633 West Fifth Street
(C) VÁROS: Los Angeles
(D) ÁLLAM: Kalifornia
(E) ORSZÁG: USA.
(F) IRÁNYITŐSZÁM: 9Q017
SZÁMITÓGÉPES LEOLVASÁS:
eszköztípus: 3,5” diazkétt, 1,44 Mb~ -os tárolási kapacitás
SZÁMÍTÓGÉP: IBM-komra tibi.l is személyi számitógép
OPERÁCIÓS RENDSZER; PC-DOS/MS-DOS
SZOFTVER: FastSeq
(vi) A JELENLEGI BEJELENTÉSBE VONATKOZÓ ADATOK: (A) A BEJELENTÉS SZÁMA;
(8) A BEJELENTÉS NAPJA:
(C) OSZTÁLYOZÁS:
évii; KORÁBBI BEJELENTÉSEK ADATAI;
A korábbi bejelentések száma - az alábbiakban ismertetett bejelentést, is beleértve -- összesen:
(A) A BEJELENTÉS SZÁMA: US 03/ 35.3 784
•3} A BEJELENTÉS NAPJA: 1994. december B.
(A) A BEJELENTÉS SZÁMA.: PCT/US/94/121I7
(3) A BEJELENTÉS NAPJA: 1994, október 21.
(vili) ÜGYVIVŐKRE VONATKOZÓ INFORMÁCIÓK:
(A) NÉV: sebet, Sheidon 0.
(B) REGISZTRÁCIÓS SZÁM: 38 17 9 (0) REFERENCIA/ÉRTÉK SZÁM: 215/304
5zx) TELEKOMMGNTKÁCIÖS INFORMÁCIÓK;
(A) TELEFON; (213} 403-1600
13.) TELEFAX; 5213} 355 0440
(C) TELEX; 67-3510
Az i. azonosítási számú s ZEKVENC1ÁRA VONATKOZÓ
INFORMÁCIÓK:
í i í SΖΕΕ7ΈΝ01A JELLEMZŐK;
(A; HOSSZÚSÁG: 5006 fcázispár
(S) TÍPUS: cuki elás av-
(C) SZÁLÚSÁG: agy szálú
(D) TOPOLÓGIAI ADAT ; lineáris
ÍÜ} MOLEKULA TÍPUS; cLKO - mRNS
(la) ISMEETETŐJEL:
(Aí MÉV/KULGS; CDS
(Sí HELYLET; 4 3 6..3699
(L; EGYES INFOÍMÁCL MM
Uií AZ 1, AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIA ISMERTETÉSE
GGTGGTGTGG GGGG.ACGCGA AGGGGGGCGG CGGGAGCGCA iö
GGGAGCGAGA CGGGCCTGTG GAAGACGGTG ACCTTGGCAT 80
AGGGAGGGGG GCTCCGCGCA GTGGTGAGAT GAGACGAGAG 120
GTGATCCTCG TGGAGAGGCA CGGCGGAGGG GCCGGAGCTG ISO
CCTCTGTGGG AGGGAGGGGT GGCGGCGGCG CAGAAGGCAT 200
CAGAGGAGGG CTGTGCATGA TGTGGGTTGG AAAGACTCAA 24 0
GGAGCACCCA CATTACAÁGT CTGGATTGAG GAAGGCAGAA 28 0
A.TGGAGATTC AAAgaggacg TCTTCTATTA TTTTATTAAT 3a0
GAATCTGTAG ACATGTGTCG CCACTGGAGG GAG'TGAAGTG 360
GTCGAAGGGA GAAAGTTGTG GGAGGCTCCA AACTCCTAGC 408
TGTGTGATGC GTTGGGCTGG AGAGACGGCA GAACC 435
AEG GGA TTT TAT AGG TGG TGG TGG GTG CTG TTG GGA Mer Alá -ha Tvr Ser Cvs Cys Trp Vai Leu Leu Alá
5 * 10
471 ♦ φ ♦ φ
Α Λ
Ϊ9
X» X AC*c Φ^\χ- tw TGG CAC 'Λ ΖΦ/Λ H,tvH Z* ΖΦΖΧ Uvd TAG ,νχ /νχ M GGA GAG GA.G 507
X ΦΛ-Φν T·^ 15 Hl»· •«*κν, Λ, Χνφ. Sa*·' XW Π-riiv Alá Tyr 20 x? a. y Pro ÁSp Gin
VsáfA zw /*»/*» í*í't·. * 1 AAv AAG GGG GAC * ’T**'?' A Λ Τ'»,·-* aHA m »·*φφγ«φφ* H A A /*.»** zv 54 3
Arg ΑΊ» Z-: ö \rtfwU<S4 Lys Lys Gly Asp He He ?.<an -msm. \A Gly Gzy
xi O 30 33
ζΧΧ*Κ/*< rfwT'W V «X X ΦΜ^βφφΜί du-i ATT χφ.·Λ m CAx TTT GGA GT&. GGA ΛΦ<χφ ’Sm? \x> A AAA rx *. tj \?A.i 575
Len P.h.$ Pro Ize Kis Phe Gly Vei AXh Axs Lys Asp
40 45
CAA ftl?· VvXA V <**W*> jZ*» \x> λ> 'ά* AAA ΜΖ>-Χ X * ΖΦΖΧ „«Μφ/νχ,Μ» />14 f* X«C,X«*Xp ΖΝί<**Λ«< Ga<u? GAA Φ^Χ*?*Φϊ^Φί A tv A Sí 5
Gin Á5>P Leu Lys Ser Arg Pro Glu Ser Vei Glu Cys
50 55 SO
ATC AGG Φ~>-* Χ*Φ ΙΛ Φ. AAT Z^.'X.’pX HtS Φ. GGO Φ» A φ> φ~> .»*(/** Vv Ά?<ν Φ*Χ <·**/*< A Άβ\2 TTA S51
He Arg Asn Phe Arg Z> 7 χ e «1? Pfee Arg Trp Leu v? j,n
SS 70
X Aiu ΑΤΑ {γχΦΦΦΡΦΦ «V Xa *» GCC ATA C?* .*Φ ks>í^\* rt ->4 /*> CaHat X «*14 Í-V A Λ» AAC AGG· •A φΜφφ«« SS 7
Ma J^£t. He ΡΗ-β Alc τ 1^ Glu Glu X 2^ Asn Ser Ser
75 SS
GGA '-«'‘«Χ ζχ*χ**ί* Μ i X «**φγ**χ*> A Í Ze>*> vv AAC í*'*^·,'** A -x AJ X ΛΠ/xS S*· A tv v*· ,***·* AJXSxTÍ. TAG AGG 723
.Alá iiSU P27O ÁSjI Li&H r* Lee Gly Tyr Arg
8 5 90 S5
ATA ✓γφνγφφΛ*» GAC ACT TGG ΛΛν 14 ,*V* AAk^r GGG .ΜΑΜφ»/*' X Asy 759
He The Asp T’S v •X- <ΧΦΦν Cys ThX Val S:ÖX Lys ÁXS3. 5v<«
•χ Λ X V V: 105
GAA mos e»><A*< tjftv tx> AGG }«η></Φ \«* X X? AGT Λ Λ X GTT GCT CAA AAG AAA ATT 795
/•' Λ < 9 W4.U Ad a Z^H ««* φ. Φ ΦΦ* Len Ser Phe Vei Ale Gzn Asn LíVS Ize
110 115 120
/*·$ f*V :$v».,v»w^s» Φ '*» «X TTG AAC ζχ«φ>ζφ< GAT űzi Φ GAG Λρ>·»γ</~ν A A *Sa «><*«/*< X Ο,Α· AAC <-v\<r-C /*« AdJU. TCA 831
Asp Ser Χφ& \A Asn cég Aso Glu Phe CVS Aán Cys Ser
? 0 ~ ·» JÍX s»í 130
.*ί ·Λ ,νφ ^Λίτ,'φί /*<^Φ »-Φ ΜνΛχ* X Ü> ζχ,ζ\φχ \χ> «V *W *Τ>ΖΧ*Φ> X \m, a AGG ATT Λ ,»*\ΦΦ^ \yn A GTG t? A\? GGA ,·*Χ<*Χ·*ν SS7
IwT 2 *»X His He Pro Ser φ» Φ Φ-Φ,· He Alá Vei Vei Gly &JL&
135 14 0
Λ Φ^φΧΦ ΛνΦ λ ζχ r*r \(5'Χί a* ,ΠΧ/**·χ •A Wk GGG x? X iz W ,νχ,ζ· A ** t. AGG GGA ,ΛΛίφΦΛ.^Αί Gxe /**γ*·^· \ν\*ΧιΛ AAT .-’x-yx»·'·» tv jx\a 903
Tfer ζχ 1 · «.· \?X y Ser Gly V lux Ser 4. ΦΑΑ. Alá Val Ax& Aae Len
145 7 ír n «X. νΦ tri 155
>♦«*«·>» tv. Φ. Ίϊ \jÁ5H? ^«ΦΦ,'η-φ X· A ’*Mf TTC Φφ·-Χ z- A Ad ATT CAG C? a X AGT /1^74 í?v HU GGG 939
Len Gly Τ.·£Π Phe ΦΛρ·. * y ·* Hé Pro r* ”í *7 Val Tyr Alá
ISO IS 5
TCC X Χ· Λχ. •Λ AV 7*t >Χ\3Μ> AGA Π X Aw ΖΧΦφ* Ζφ t» A. X AGG 27φΑ\ν AAG AAT CAA c$ 7
Ser §gr Ser Et τ^ζφ QA*V ^V Xí&'ía Len Ser Asn Lys Asn Gin Phe
170 Τ Ίζ υΦν 1 ν’ ISO
- gűC -
AAG lú X yx X X X· ζ>»ίΎ«»/«Χ /·<** *. χ·Χ?Α X yeyx hűd ATC y»yxyx U$A» AAT y» x z»x ΧΤΖλ X GAG γ*ϊχ\ y* XíXbXx* *« Λη \ X X X X
Lys Cí *».-** 5νλ' -χλ,λΧ, Phe Len Arg Tkv *. Ile Pro Asn Asp Glu £lX£st
135 130
yxN y* Χί \μ X* ACT GGC ATG yXyX'X yx £ í*' MíXXX»· X. «xy» xM<x\«. ^yve*' λ-í GAG jxxxs y*í iJii yx i ~ ?w Ύ -Λ A *7' X s/ *i /
rn V·^ X?- i<· Ο *» Λ 4.« TW*. X ül Alá Mát A Ί ~ ΛΧα Asp XI® Ile ΓΜ ?! \dx,U. Tyx Phe
135 200
y^í^** X \S*mS AAG <yty*<y-« Xsx-Xf viU AGA ATT GGA /*» /‘•MXX X?Ux GAT GAC 1033
Arg Trp Aen * *ΛΛ Ú v <xx Gly ’T’*» >·> X i itA. He Ale Alá Asp Asp
205 21 δ 2 *6v o
GAG x^'X <->x lAi yNyxy* y-iy^y-í \χ· «χχ\<3 GGG ATT GAG AAA irw,·! X X. yx ·φ i*x •jsen ű ·; ς
Asp * Λ Gly Arg Pro vxy Ile G z u Lys PHe Glu
220 225
GAA ,*«*( Ί>\ν xá GAG GAA AGG y* *. yx xzzi, ·Χ x rp<:yx ZX.X ű ϊ*(Λ y»e X n?Xx ATC GAC TTG Ax? x X1SS
V** ϊ νΛ Alá Glu Glu A v*·'·? Asp J L> S Cys lie ASO Phe Ser
230 *\ S 240
GAA ZX/«* ű X 'A·***·** a^X U ^To^yx X Xm· X> GAG TAG C^X^^yX ^z*«.x ’ν3ΛΛΧΓ GAA GAG Ά *ríy*í Α1·\» -í n q í X· X. X·
Glu x^SU 2 le Ser y* Ί vu» ύ/Χνί Tyr Ser Aso Gin *5 ts x?ÁU Glu Ile
245 n> X? V
yx-* yx XMMZk'xy Z*> ·χ '•’T* vMŰ y*»y»,«*% «i \y GTA r*t *x <-y \3x*i\d GTG X, y*<w: ZXX. X /'K'* *X AAT X \-Xy a y*,·^ >*Vx*\y ΛΧ <?'mX y> X» X Í
Gin vs Val Vei Glu Vei Ile Gin Asn Ser •JQ ^h«X X, AxS.
255 2 S 0
AAA Λ'Χΐχ·» y« Wi V ATC y^^kyay Ό> <xS X X j^x^xy*· 4¾ X <^*yNyx X \«aŰ AGT /«/x yx Xx yxy*· \x ’βι,Ζ^ y^A «* xatf*.x yx'N^j’x-í 12S3
Lys f *. *5 v&X Ile Vei Vei pj$.$ <5»v~ Xy »·*.*<. Ser Gly Ώ v.«\ A X X/ Asp áu&U·
2 SS 270 275
Z~* * z*< \&rt,ks y>S»«*>y*« V'w'w. yx*?*-f*» •λ x*· yx Zh, X Vw AAG GAG ATT <? X W yxyw yx X.'XSX? ywyAjí*» \μ χγ'χ· AAT •χ zwky» Λΐη- vas »k. Ae ve %/
Gx.u Pro .reu Xle Lys Glu Xle Vei Arg Arg Asn Xle
230 255
AGG SSU'U· AAG X <-í yx ίγφ/Αβ./'φ ΧΧζνχί yx ««»yx U· ΧΛ? \jS\x X> Assv. GAG PWX>/°« i VxS ksL'xx 1335
Thr Gly Lys He « X x«* <»X Ax& Ser Glu Ale ^vwx X X? ΑΧ 3.
? Ο .Λ. £» Λ/f \X *}35C X 2? X3 3 00
AGC Í\A#. .wxyvji·'» 4iAa>\n CTG ATC GGG ATG CGT GAG ?*< * yx ZvXv CAC 1371
Ser Ser Ser Len Ile Ara Mát Pro Gin ΛΑ Q ΑΛ Phe Hxs
SOS 310
»·*Ψί*Χ/Φ S-í'iU Λ<<Τ·ί*Η· i x«y. XyUU yX /X y* Wk* AGG A Z*- x .<* GGA X A Xn GGT CTG AAG Ζφ/*»χχ XoSVafr X 1407
*?ΛΛ VCtiv Vli Gly Gly Xle yXÓ y , -WA.> Phe Ale L&u Lys ÁxS.
315 320
y«yí,X k(3\<?K»5' CAG ATC CCA yxy* yx MW* O^X^X^X- yxyxy* UüW GAA W*(/* X x X» yNfT'y'x V, X AAG * ÍV'VxS 14 4 3
Glv Gin Ile Pro Gly Pn$£ Arg r* 1 X ' PAe Leu Lys x^ys
325 330 335
UXX. GAT ^.'Nyx * yxyx AAG ywyxxx X \v x yx<V* VS- AZ X ű /Ν·Λ Λ'·’·· Cx*xű AAT ''Xí’** x3\y x X x X Λ*? 14 73
Vei HiS Pro Arg Lys Ser Vei Hős .λ3 n \íx.y Pne Ax &
* φ
AAG Lys /“«•A ..*7 Glu 350 /fX «*:{««< X X X /7/7 /7 X U\? Γ^'-ν^νυ-Ι rrp GAA Glu GAA Glu AGA Thr 355 <T7W??«S: X X X Phe AAC Asn Zf*/7 Z7 1VX Cys Λ’** C“* \xsí^\*. His \rt^ X T ,{5f< J ΤοΦΧμ· <sX 3 S 0 ISIS
GAA GA^ ;Μ(/Ι»<φ> SürtA? X GCA AAA Ζ7/Τ{**7 XX x TTA ΛΧΐΤ·» .«X w iü /7 Λ /7 xjbttG. AGG 1551
C'i A '\í? Glu wiy Ara Lys /* * «, xsx-y Pxo Leu ®2TO Vai Asp •’pTT· V·*' X í*u»
355 7 7>Λ ΛΛ i X>
U x '-jf AuA. GGT GAC GAA- GAA AGT GGC vAC AGG *7*·Ζ7ΜηΧ X x X 1SS7
Phe Leu Arg Glv X- Ki s Glu Glu Ser Gly Asp X ^xTSJ Phe
375 3SQ
AGG AAG AGG •’Pf'fX j. X-v? AGA /. ,·—' ,-7 'V‘X:x «*zj7z^ X 4* X. CGA /^/*7*7 \m> X* Sm ΜΛχιΛί,^Λ W + \m» fT*/* zjx X Χϊ X AGA 1323
Ser Asn Ser Ser T’U »» Au.;» Phe Arg Pro Leu Cys ---- X x-áx·
335 330 335
,*7 a*í/x< XJ\£Xy ./7-κ .·/* A- UAG AAC ATC AGG Z7x*7 XftXS X ,·^> Λ .·** Χ5ΛΧϊ 1\ Λ·»/*? £7/-.177 TAC 25 5 3
G Í V & SS ·*·’* í 1 VV •ΧΪ- Xt Asn τ l a MW *M Ser Ser Vei X7űx IX ½ -^7 Pro
4 0 ü 405
γ». ·***Λ λΗ; A ·/» -χ ·χ*χ· \μΛ ,ΐ» TAG AGG X X XrX GGG ATA X u \«. .«•Λ· ΧΛΛ~ AAT <7τί7Μ -*7 Uíxxs 1535
He Asm Tyr Kis Lee Arr Xla Ser Asn Val
410 415 420
TAG *Τ***>»·κ /**'/*» XrxxrX /*«77/7 Ur iv wa /* X rv G ζ**<τ* 4ΧΛ- X /Μ>γΜ»ΛΜΙ( XXXwÁ*. GAC ¢07/7 {ZX νίΧ* *wr //*/!/* X x xy GAA 1731
Tyr leu Ά1& Val 7x«v» * / á· Ser -τ ‘Ύ } 5 <S5> Μ» Μ*. »«*· A2& Kis AX& Leu Gin
435 430
/* * .-r< «ΛΑ' * ír· ·» Λ.,. Λ ^' » z*7 A Xxá. ^/X/7 Z**/7 /7 X X>J\aí /7*«*' Ml X x<& Λ/7*(· Χ,Χ X GGG X í'*’ 1* GGG CTG ¢^777/7 « >7 /» *7 X» í <3 i
Asp He w -7¾ Cys Leu Pro Gly Arg Glv Leu Phe
4.3 3 440
7» /7/7 ΛχΑ* AAT /7 .'τλ/'Φ $Mk ¢^/7^ Z<7Z7<77 X -w Φ> GCA GAG •Φ *-XX x. 7 *</*< MzXxs AAA j*7Z*7f*7 GAG Ί ÍJA'l X >>r \j U
’TVx’*ώ. ς,ΛΧ Asn Glv Ser Cys Alá Asp x Xs XjVsS L’/S Vei GlU
445 450 455
\x *mJ W/«(í*i x GAG Wiv kx. X Χ3 <>*771 /* WiV CTA /‘'ÍZ·'*.'*'» GAT U * Λ AAC 1833
Alá W-WVA Φ. Ar. M Gin Val Len Lys Kis Leu Arg Kis Leu Asn
450 455
TTT AGA AAC AAT V> /7 <7» Ai‘a GGG /».%. Z** XXi-tfXS GAG £7.-77 Z·* •X /*· /7 .Ax-x*· ΤΦΖΤΜΦ* X x X GAT 1375
Pke Asn Asn Gly Glu Gin Va 7 * 77 JW Thr Ph<& Asp
/ *·> .”v *c f V 475 480
GAG /7/^ «77 iui GAC \^X\? /*>7*/* X? X X? /7/1 jw> AAC WVS Λ7 Χ.ΛΧ <71 Λ7 /7 X v<-\. «X J**í*í i-ix j* Xx· 1311
Glu Cys Gly Asp XX· Vei Gly Asn .*ru vm-m x yjx Ser 1 re Ile
4 SS Λ Ώ fi
AAC wz-jz··» i XyXS' CAC CTG ΖΚ7Ζ*</7 XUU ./*>-·»·* /7 * /*·: \a?^Xss? GAT ,Λ-*Ζ7,-*ν 43S3V «77/*/** 7 77,X «kV ^xv? 1347
Asn ψν*/*; * -^£- Kis Leu iS. Pro Glu Asp Gly Ser Ile Val
435 500
z*\<7*fX7 X 1 * AAG Z**' ?> <*7 \3 X <m ·>*>,Α7Ζ7 /*^*7* . TAG •AAC TAT /7 Z7 /7 ’kSX^'w AAUr 1353
Phe Lys /* Ύ - , vsUU Val siy Tyr Asn Val Tyr Alá lys
505 5ζ.ί Λ□ X> 515
AACa Lys Z*:y> X f*'· v GAA Glu AGA Arg 520 Z'**'*'»/** Ük A ü* L&u OWXWSX·» A A üx Phe ATu Ile AAG Asn z*· ?> z* üfAüs 7 V V •-cy A -A. 52S GAG .·.>. ÜSAk LA AAA lys •fc *í» jí** ΛΑ.ν Ile 20X3
Z*MX*ZX «/*>»» iürü? * ./*<*» -T'i 'x? 4 Z·» ,ΧΧ Z*· \z?\3Ü? ~ A U í^x^· zX A ü< -κ» Aeú GAC Z*z* \zx’'xkÁÜ y*«yz^ ü* i ü<· AGG WK««eZ<XAZ, 4 i i 2055
leu ψ\*ν\ A. 44Í Ser Gly xz k-x Λ Ser Arg Gru Oy y> Leu >T*$* V* X 4lXz.
ϊζ -3 n □ -z v 535 540
Uf'i ü? ζ»χ«ζ· Vw* .A ·ζΖ 4 üx· A GTC #·♦»<*?/«<( Xm* 4 Ük Zx gx zs ü,Aü? ZVA*X/>N Ü? Aü3 CCG Άτ A 'V TGC 203X
V a .1 Leu Ser Vei Leu ZX U 4X ü? JX Val Src She Ser AOaa cys
545 550
AGC ζ·*«*χ ?> ..«v* Λ ÜXrt,ü· í^f>rz* A \S \a> ΧΧ^ΛΧΖ* ü. iw Z-'Z^-X, SATÜk^ü xíüaüa ACC AGG AAA Ü2ü?ü? ·>, ZJXZ' Λ.Α. ü- 2X27
Ser Arg Asp CVS Leu Ά1&. ?-X ·>. Λ K GXy Thr Arg lys ^AxvA Ile
5 53 580
* <«y*«y; z*·» Γ* ÜX«rtü3 ζ.ζχζχ· C'^'.^í .»*» -x z* \ÍA>»Í VÜG> ACC W* «7** A<íüx TGC TTT GAG T>,rt*T z^zfloyQ- üyXü? 2X83
Zle 0 y Ύ C5 v u-úx Y Glu Pro X 444, Cys Cys Phe Glu Cys Vei
5 55 ^70 575
GAG «X 'A? A Z”* Z·**’» üvü* «X GAT Ζ^,^χζχ \Aüyüg .,<Κ%Λ ü?Áü? WA zp> A**ÍA AGT GAT Z^r * Z** \2x^üS X yí'A jA\kAX GAT ri§8 A* 4» *S
Glu Cys Pro Asrc /*» ·*? 4·. ü?«a y γ''* * « , ÜT «λζ \A >T<S'*v* A ν’ Ak Cy^Ö-y Χκ· ΚΛ· 4w. Asp Z*IÓ „v üs.Aküa T'U f. XA«k- Asp
530- sas
ÜTVÜ> * ,**« ΛΟ i GCC «X Άκ A rüAx™. AAG X*\Z»,Z» A AS üx CCA GAT z* sAníxÜ·’ *>»x«x*» A » »» ^Z*<* <4 xíü? X« ζχ o, « 4e >ώ k3 »z?
Alá Ser Alá •v, V » 4 A^n Lys cys O'r'zs x 4k- Sz Asp Asp Phe Trp
5.30 5 55 5uv
*«/·»«**: i v-U AAT uAG z-W-Jkü, Z^X ZX S«m^*4.Ük- AGC W,'*<ZA A A, Ük íTXjZ*^ AW Ά í'^Z'V .í*«i A GGC AAG Ζ*·χ zx \ízí-\üy 2 271
C/-^ ** >C3í23l Asn Glu Asm His ?Xr ·» ÓÓX> Ser Cys Ile Alá Lys v·. ÜÍjAxA
805 8X0
•Λ ’f'» «*? GAG y*<xx*y Ζ-ίζγχί*» üz A Ά· TCG «*ζχ z* Aüíüy AGG GAG ^z-tzr <*^**j**^XZ^ <**/**««*·» Ü5?üy^ «r»y: ζ&Α '’-z 2307
Ile ,«* X χ , •'ς5:Α'ύ Phe T ,i»{ t X\>W «χχ Ser xrp A* ΑΑΧή Glu Pro Phe Gly Ile
SIS 820
GGA ^9Z*SZX ACC Zm/t ü·· A \x> TTT Λ/*Ζ» Ü?Ü<U <«wz* ki z*<*wz*< üv A ÜS ywy XMi> ZX(. Ü5ü2\zx ATT TTC .rtíWZ»· üiv 2343
Alá leu Ía'w·^ XA«Mx leu Phe AakS Val leu Gly Ile Phe AU^vv XX
525 S30 835
AGA Ζ*·/·*>~» uLv «-»?-£* zjx «Z*Zf* ZX v$,X ü? CTG zx.zvry» UfO.i Z'tz-iX’í ÜSAüS TTT ATG AAG «'•i'WZ-S Λ X Lwz Z^z^zx Ü/ÜÍÜ, 2373
Thr Alá Phe Vei leu Gly Val 3he Ile lys Phe Arg
8 4 0 545
AAC AGA CGG x <y*y A A f««x»>z*< ü? ά ü* AAG Z-* /*>,<*« üyÜKÜKz ACC AAG ·Ζ*Ζ*«Ά ÜkÜS^A z=x*y ζχ üc A *w 24X5
Asm Thr Pro Ile V el Lys Alá Asn Arg Glu leu
850 SS 5 850
ζχ,^ζκ 1 ü««U A Λ\α» z-oyzx Vl\# ü 4 ü CTG A A üz Χ(«> AA(/A>t xvG X«*«X^ZX ÜK· A Ü3 ^“wyy' Aü?U TGC •»^x*í*y» 4 lVz 245X
Ser Tvr AU^ZX uX Leu Leu Phe Φλ·**' ÚJ AA« leu Leu CVS Cys Püe
855 £ Λ O / <z
TCC % ZX .ZX «Í^Ü^Ük fxX/«x,*X 4· Ük Ü« z-o-Z’z** -»*- A ü? Λ*Χ*Τ'> *** A A Ν«λ iy>y ZX A A üv A A kxz ZX Z* ,'** <yü?ü? GAG ccc zx * Z^ ürJOiÜy ze -K zx CAÜ 2457
Ser Ser SíSa? U tcU. Phe Phe 5 le Gly Glu Pro Z* *í: w ü? A.44 Asp
z· 2C < 3 880
** &
Q-í S ** / &
k Grp 6 8 5 %Ζ>Ζ· A^k? T >. 9* WZ λ-» XWk.· Cys Z*Z*-Z* kk?k> Ár 0 .**<***.*« Xy X kx XXv£ \k Z*.«X ZX kkxk Arc £ 3 Λ Q %y \a CAG GXn
X ,«*>í ΛΆ Zkkyk, 9 9 kv .^xyjxx*· k? ,9 k Z<Z*Z< k k V X>A X •Χί,.'Χ Aik r«5 r*-> A χχ.
Ser Pha Vak L&u Cys lka S&r
7GÖ
AGG ÁAC Ck? .9 ‘XS.Wk.WA Vkv Ζ*>γ*Ζ< k» k kv >AíV»Z Kv X.'kí wy*z Vk\3
Ghr Asc. Arg v-i ’S v .&> L^u ky<5'«X Vak
T7 A i X v 7X5
CCG 9 Z<Z> jHk\x.V X Z Ζ» ÍÖAXL.. yWkyvvyM·, X- 9 ki •'X'*. X k-j-tc CGC AAG
i-ro Τ'* V\ ·**9 999 S-sr Phe Hrs Arg Lys
τ «χ / X3
<**yy>« aa iV Zc Ti A’ '•α’ΑΛ,'Α»? «Τ'*** .Α» A, 9 kfl ky X kí Z^'Z’ZX k X kr GGG we»T* .**> 9 X V»*
Leu Gin PHs XjtSíi kj&U Vak Pfee
735
GAG s& y*«A»t XtX X Z**?'* Z· ki A-C ATC ykAÍ^A^ 9 ’xy x ,A»yy< ^y> \*A k vX *» «Λ 9 ke
Gin lka V<&X X XiS Cys Vak X X
745 7S0
ktkr kx Z*· yZZ* k \* ky TCA Atae» *»» X z* XXkk ZX.'X ,AX '•A’kJ'w A4C
Pro Pro S^r S^r Gyr Arg Asn
**?£ A > v V
GAG yA 4 'w. AGG fy»»s/*r AGG X /V* Ak\? z^z^z* Xk3\*
Gin Ire Jle Phs lka v> 9 kXX· Cys
*?7 A r í v 77^
X wyZ* Λ X\í z* ''Xy'X Uu-k Se*. Jg> ki· ζ»z*«x k?k3k» z**r>z< kik -$ ι?Ά* jtX.9 \y
.Mac Aka Leu Giy Lan lka
735
ZWWZ Vyy £Á# 'jrU i Λ·Ζ*Ζ» k5k» V ATC fAA AX AX X Sa· ky 9 k w
Leu Alá Aka T Ί 95t •A·. 9Ok \a> CVS Pha Pha
755
ΖίΛ^Ζ* ky'yS'k? AAG CTG ZVV* kvky.ky ,.-χχ \αΑ*^**αΓ AAG k 9 <m
Arg Lys Lau Pro Glu Asn Pha
SOS 8X0
ATC * /k Z. Λ.Β ηχί^ζχ AGG: AGG Z»rz zr ΆΑ 9 hy> AGG
He 9 v9 Ía> <j^'Z9 7*· Pha Sár .Mar Leu lka
320
Λ *9»:,**9 ZÍX k X kk Z'’ZCT‘Z9 A A k x^'cíí'T'í /9Z* kykX^ z* z>zx \?k.kv W9 «X ΑΛΑ
lka νΛ*' £5 7£.9 Phe lka Pro 7 « Λ-αΧΧΑ Gyr
83 0 835
.AAG GGG .->»xw*> /“V k$ 9 k* :«««..% «* Z*> Λ— ,*X GT& GAG
X>ys 5 he Vak O *a *>*· X«r \φ -Jy £5 a XA-aívxv Vak GXu
845
Z^ZíZ· k-Cks Pro GCC Aka fX'Z'iZv rtz Z* i. J. i AGG lka *S X 523
Pha Gky 3 P 5
yws .yx λχ 9 k?\A» X 7X9 z* Hk k. ΑΑ«φνΑ** ky X k? Z*«T>Z* \?9 kS AAA X 539
Z<A .ΛΛ k-Vb lka Leu V&I Lys
OS
WfWA> 9 k k Z z* ζ*ζ>7*χ <ΧΤ·αα\α· AAG WZ* 2 535
Pha Glu A*TkX.a 9 N w A, Aí^kí lka
xr *$ Z
^w^Z» 9 \a?‘X? Z9Z· .«X k kx w Ζ» ‘*9Z* kaxskx Z**9* Z^ k* 9 ky AAG ·*ϊ X 631
7*V«v^ 9 -9 U>- «Γ'χΑΤΑΑΛ 9 9y jjk Gky Lan Asn
730
Z’T'Z* mfXíx X 'k? ky AGG «9^?* Z®* 9 9 9> 7«1 Ζ9Ζ·< Al kJ 2687
3a a Cys Tar Pha .Mát
340
)W,yAA/y> 9k2\? ^Xí^XZ* GAC AGG z^z-z* k?kxk? *5 703
9.XW L&U Gvr ^cr Au a
7SS
CAS GAG Z*«f*Z* k*Xk3 GAG GAG 2733
Gin Gxu Xj<£\9 kí a* ^9 Asp
7S S
Z<* A·» SwÁk z* z> k3t7,\AÍ Z*,«*<ZX 'kS^vJkv ίΤ*ΠΓ* λ. Ww ζΧίΤ'Ζ’ 2 775
His v*< 7 <.-« \jfXU Gly Sár Lau
730
ZZít 9Xk3“ k Τ1·Γ sK- Λν X Z' CX Qik Sa* W Z* .'x ívk Ζ>ΜΧ·>Ζ< kkw 2811
z< 7 Sy Xa y Gyr T** 7 Ű Π: » ja ki Cys <Li$£U
TT7 <Gk-G *w*«z A iU AAG JAJXyi^yX 9 kt 9* > X 847
Phs 7 w. ?k9>£5. Phe Lys Sár
800
AAG GAA ζχζ'-ζ-» Vku AAG 9 X w *> X 883
Asn Giu AXa Lys PH-^
815
íf>íT*z7 X k v TGC 9 ί9>Ζ* rt.’v GGG GGG -> 3X3
Phe Pha lka Vak Grp
£S £C v 9· X3
zv.-xz' k\yk AGG AGG Zkz* z* ky Lx <a 2555
Aka Sár Ghr Gyr Gky
84 Ó
GGG ATT h?ky \a» jn, «XfX zhk\y Z'ZCíZ' Vy 9 'aa* 2 G O 7 a· .9
VsX X 9» 'w Aka lka ? ,$s»n AWW <A
850
-Γ <Sf' Λ s,X?*'X 4
Cm Alá <**/**/*· VÍVk-V. Alá X Λ*· X*· AurU S&r sss ώ í i Phe Z< ,·*Α X*» Gly Z'M’W.i·''» 1 1 VT leu Leu Ζ» /X/X Va O Ara 580 X*:<**ZX 1 C*\k> Gys ATC Xle f^***íZ*e 1 X'Vv Phe zx x V Αχ» PH'S' 3 027
AAC AAG ATC «Χ-νχ ,«X A ATC ATT Λ»/Χ C X :V*· «p»**·* Z’ ik 1 \λ> AAkír Z^z^x lllA W'Z'^Z' {**·^*ψ,Λ*ί 3 053
Asn T -» * r» X* y S Ile H^x *v» A V A. rle rle len Phe XiVS Pro Ser Arc
8 SS 870 875
AAC * Z-V* X W,'*' v. GAG Z* x y· vsZi'cr kX k? 11? Z^Z*<*> \-X? 1 k-r'Z’· Z' X V?^. X ,-*> ·*« ?*1 űPÁj- ACC /* z*x 1ΊΛ G(GT 3029
Asn X «.irv rle Glu Gin ♦ kik Arg ^M«y s Ser ψΗ ** Ai& Sk
sso 585
CAC r'* r*c*í5 \r-« c ?γ«χ*Ζ*: r 1 c. AAG 'sí 1 k5 Τ*»/***** V?\x» X J~k. <MA AV W ^v0 A** ,k*> AV AsmRCPX»?: GCC X ,'w'Z'v ÍXkUrCS <**<**<«*« i c3 k** 3135
XX < )G ΧΧμ«* Ck2 A1& Phe lys X ν«λ Alá Alá Arc Ara y'yx-y Xul&tX Arg
3 90 895 900
Vmvíő fc. Z'»/'» .{AW AAC .**ff*XZ* <J ií. «* Z* Z* X Um \·ν Z*z* z* cw AAG CGG zw.Z-Sf**: AGC X Z*yX .ttktavM ZXZ^Z^i 3171
Arg Ser Aá> π Var Ser Arc XXV 3 Arg Ser Ser Ser leu
SOS 910
Λ/!/* W V^C. i W \e> x Z’z** A^V kSVSZÍi ,«χν ,·»«,/*« M. 1m 1m AGG /*»<** r* VcmV „«*>>** i il TGC Φ.ΛΖ» X W Ve ATC 3 207
Gly Gly Ser 'T'^X'X' ~y *< Ser Thr Pro Ser Ser Ser rle
SIS 920
X Z*:,*X .^Vvjr^· XS ;**.;*· nva^ AAG AGG ARC X Z^ Z* kAcíű GAA Λ'Φ X ·/* wvu yfx’yx .***> X λ ^WM x*>«xx WCkNTk VWÍ 3243
S^x Ser lys Ser Asn Glu Asp ?2TO PhU Pro Arg
925 53.3 93 5
GAG X Z*.-*» zlvsü? >*7k.í*x AAG /XX vx •C-A-ÍC2 z*x z^ ΙμηΛ,'-Χ? CAG λ'’*Ζ^ζ* VSw>\3 VÍV /Χ·'Ζ<Ζ· kíVxV. CTA 3273
Pro Glu X 'y»?**· .Fm-jm Gin lys Gin Gin Gin Pro X4&U. Ars iü
940 845
ACC CAG CAA ,**» X Λ* v?Mvs «A .-> <mZX.c3· <·*. r* ükkR'cy CAG CAG \> Vk- C-k X Zt .k'X w&kVk'Ve CTC 3 3 IS
Thr Gin Gin Gin Gin z*^ *> Gin Gin Pro i;§U Thr
950 955 Z> ·*· Λ «2
W~W. ζ°>·χ /°> Wttfc? <Χ·Χ Z^ VÁu CAA z^z*X V. v<í»^\ 7CT z* x z** wto CAG Z*X z* Χ.Λ'Χϊ z**·**^ W \«k AGA Z**Z*» Z-* ikUrV 3 351
Pro Gin Gin Gin Arg Sár Gin GaXu Gin Pro Arg ?*V, y MA \-/o
955 970
AAG Z^X ΛΧ X ?» . /X aVlG GTC ATC Φ Jk· i XX iái x* **,·*< V3\y\~ X <» ,rí Λ\3\μ ,y< /**,*»: ACG ACC 3387
uvs Gin XíVS Val x- X xxc* Phe Gly Ser Gly ΈλΙΧ* Val «f»·^ ·>>
37S 980
TTC TGA /«W?x AGG Ζ*Λ XX mi /XX k** /» wyyw Αχ!.· i CAG AAG AAC /x/*> ,*e UU Cm 3423
Phe Ser leu Ser P'ne Aso Glu Pro Gin Lys Asn Alá
sas 930 995
ATG Z* vif V* iw Z*^ SamC^Íw* X Z-Z* ΛίΚί AAT w\w w AGG CAC CAG AAC TCC CTG 3452
Met Ara Kis Arg Asn Ser Φ'χχχ* Ví c rl*l Gin Asn Ser Xu&U.
X; >A f* Λ .Α» «í \Z V x r. λ * C. v V ·» 5
<3AÜ zx z«*Z» :UVv CAG AAA ·* Z«Z* jrtkVSV. X ,·*><*« Λι3\μ · Z<X <χν kxíx»i X ZX,U\3 ΛΧ \χ» ki x /*· .*>« ^ImVa CGA CAC 3435
Z* ' 4 t JS4 Gin ivs Ser Ser Asn Th.x SA Thr
x f*·, z$ «X* W Xk ^<0 X >V* se .X v X3 •X Λ x zx .>» cí kji i?
* 9 ««*9
/Ό* 06 ,<* uik* Gin CCA Pro Τ'χ'Ά JLi<£U, “*M Á X Leu x««z-xz«< Lb \X Pro 102: X XXJ Leu. 5 CAG χ,Σα. <V»£VZ6 Cys· ?·*·> .·*< Z-o xí\y‘-py Gly <** X ο* Λ ^λλ λ.ζ··ζ η ] ϊ t \Χ víz »Λ A jnÁaX Λ ΛΛ Λ\ Λ 10 j0 ZX'X z*x \i?^haXMa Asp 3531
TTA GAT <*«*</* a í'·’*»**· z°> «*·/*> Vaa X Xa· Z·» * Z9 $X»*W GAA X ·/*** S*· /•Τ’ \2\X X CTG CAA GGA 35 57
Asp Leu Thr Vei Z* Ϊ y, \?xxl Glu ζτ< :Λ* > ·> Z '4X V leu Gin Cxxy
'·* ·< ZV A Z> xviw
/*><*?<*> \|*·\|»· X GTu *a<^X GGA GAG XA\? \a- 'χϊ'Χζ· CCA .Z* χ ,ZV x?Á\y GTG GAG «Ζ-» 1$. ./«* χΧΛΧΗ· Z x«5 X» «?
Pro T T ~ 5 V <&, X. Z***, M A <*Ί M A VjfvL V Asp Gin Arq Pro Glu 7 ? ~ y /- R X X v ·Λ'4. w xw Asn
104 <A 7 Π· £ Π· X S# V K' 1025
<-*> »«w*< \2&λ Z*« V\ .·*> SwXrt-XJ í'f'M»}'**··* <“*» <*6<ΟΛ{ X \a» \aí CCA GCA z«**W*s \z X X Ufi **Su Z*»ZV<6Z«V ryx/^jzx \oA X <Artf m. Va* Xm * Z*ÍX*Í ziksX 3535
Ör*jr> V· *<· *W» .'** 7 . , X?X u. U Leu Ser X3^ ”**<**{ Jw ύ* \ff Alá Val Val Sár Ser
lOSi 1055
•m/*f i .Λ Z9 Ά Z9 WtG * /”* z* ΛΡΐ«^Χ?ρ Z»W,»*v ÓUX •j\ «τ»ζ* Λ^Χ>Χ -X Z*« *x*> ΛΧΧΧ GGA z*<ZS-,z> <ft Z*f ,zN A\a3\z« ACT 3575
Ser Gin Ser Phe Val He Ser Gly Gly Gly Ser 4. **·χ.
XG7í 3. 1072 1080
GTT x Ζ*:·»ς GAA AAC AOÍf'**'* \χ ΙΛ z*»*v>z·*· {X?X\2 X * **< λα; TCA TAAAATGGAA 3705
Var T b r*. MV Í4A· Glu Asn Val Val ^í,sj$ X! Ser
/*»,Ζ«»Ά. /* <Λ -X Z*> * »*tz*v Vő-xatí^^ísrAAUrAs-. x .*>» ,z*t Z*« .«ΆΧΑί-Λ .''ÍZ'»» M»\ » xs^xrxyU ,xa*^\*wí -χ ά zr*,M»x z·'*·’* z** X Z* : VHA X \? Χ^ΛΙΧΓΛ^ x /^zíwww/^vwprzí éVxrkíx X X V X x Xí? 3745
.>*< /<·»,MA Z?VZ*Í .Z«! Z*\-'6 .,**i A s^xy^yx UvUwto ,Z9 «X J*Z< .*9 * /** Z*> X ·* z<9 \5Λ% X \^Λ.’χΧΓ<ΛΛ\Λ X U\SXz X. WXWk.^z ζγν ζ'ΛίγκζΤ'^Ζ','νίγ».'' X Xa \μλ X X X Χ»Λλ· X X> 3735
mz-i χ <*»/*< ·*; \ zx 'X * SaSXay^a, X ΑΛ i A-l\í ACACATCAAA Z^.Z'V Zí't .'ZV ZTZ^ZVf·^ * *9» X ''•χ. Χοτ \κ» * ss 2«
VrtA»iv ./«χτίβΛίΖβι-χ jZí* ΖΆ 9 X <Λ\«· ♦ '»ζΛ \aaM?i Ma* ,'’*'*» «r*,»**♦?**** X τ< ΆΤ ^MA*X XaM X X ΧΤύν^Χχ A GACAGTGAAT (•AíVA Z****/'’* X «»<»*« X >«.\*^<. X Xr X 3859
TGGCTTTAAA ATTAAAAAAA AGAAGAGCCT <^^ί^ζ^ζν“«*θ(ζζ^ Λ^ζβζ.ρ·'» X Smz X Xí X X X \x> x \5 3909
X Í ΙΙίΧΛΧ X TGTCAAAGCA rwr*.'*** ί·» x er*»'**?*^ X X ^*Í&áAx U X U UÁ\zv3%y X νΛΧΑί·* 3549
i X -X ·>ϊ'<Χ« Λ χβ? ΛΛ X \λα z**·* z»xz^r«* 'w x AATGTCTCTT ,««> zeZW^'Wz’X^ZfV Z*>ÍTÍ UwU XUX .iU.i 3539
ATCCGAGCCA ACAGGTCAGA GATCAAACTA TGGCTTTAAA 4029
CTACGGTGGA oAüs x<2 x \χ?^Α\χ? «X Z*>Z**Z»> X ζγχ ZO<<IWVZ<< ·χ Λ\ί~ X VZatta X \m?\S<XWA CATCAAATTT 4QSS
.«M^yeyxtk Z*XZ^>-X \αλ \x<»Á x*> λ Λα TGTGAAAGAC AGAATGTCAC 4.109
Χί»νΛ\'χΛ Λ 'X* Xa l \ϊ\οίζ 9. ««VZ*» ZX/»VZ<9Z*<a*x> i X X x> A'CAACAGACT GAATTTTAAA 4149
>-Z? a-SS-ZJXtafA + /*· *Χ *- Ζ~Χ ilxSX X XaA'whAu ATAAGGAGAA ZW’ ZX.'V’f X 'w X Z% X Sva- X ΛίΧ» X /V v'wrt'S W'TW* w,<*x U\-X**í,a X X a^X x? 418 9
AAAACCATAT j-e a «* 7¾ ZAffAZtAfAjzAt ,<zz)m. \ÁrtxXJrtaX XX x\«3 X. CTCCTACGTG /ν;<γϊΖ<\ Λ<*\Ζ* »*«Ζ*<ν W X». X vSJXa X kxx%. X ΛΧ X A 0 -7 a οχ X X» -z
Λ·»'* ^ί*,***?**'·; X Λχχχ 1 Ζ** X <-S X zU^Xaa^. X CCAGAAGGTT W/^Z* X /VzOXf**,»***(*>,^ X 'vSKa^l^'^Vaa'wa. X X- xa iAi-ÁUWliX 4259
.zxjzfíwz*» i ÍW v2\J 4 ÍU x íx x vkjAwAv ATGATACTGA *0Λ*Ζβ\Ζ*<ν\ ^,ZOZJ>W.«*> i yia^AAMí i J. 4309
AGATTGCAGG ATCACAAGAA 7CACCTCAAA. TTGTTAGGAA 4349
«:
i
- ··:
«»» ,·» }**
GGGACVGCAT AAACCAATGA GCTGTATCTG TAATTAATAT 4 3 33
TGGTATATGT AGCTTTATCC TTAGGAAAAT GCTTCTGTTG 4429
TAATAGTCGA TGGAGAATÁT AAACTGAAAA ATGTCAGTCT 4459
GGTTTATATA AGGCAGTATT ATTGAGCTCT ATTTCCGGAC 4.5 OS
CCCACTATCC TGAGTCGCAT AAGCTAAGCC TTATGTGAGG 4343
CCCTTCAGGG ACTCAAGGGT CCAGAAGTCC CTCCCATCTC 4389
TACGCGAAAG AATTCCTGAA GCCAGATCCA CCCTATCCCT 4529
GTACAGAGTA AGTTCTCAAT TATTGGCCTG CTAATAGCTG 4SSS
GTAGGGTAGG AAAGCGTGGT TCCAAGAAAG ATCCACCCTC 4703
AAATGTCGGA GGTATGTTCG GTCCAGCAGT GGTATTAATA 4749
GTGGGGGTCA CCCAGGCTGT GGAG CCAGAG AGACAGACCG 47 SS
GGGTTCAAGC CATGGCTTGG TCATTTGCAA GGTGAGTGAC 4529
TGTAGGGAGG GAACCTTAAC CTCTCTAAGC CACAGCTTCT 4353
TCATCTTTAA AATAAGGATA ATAATCATTC CTTCCCCTCA 4303
GAGCTCTTAT GTGGAITAAA CGAGATAATG TATATAAAGT 4949
Aö Ti í AvjuCT GGTACCTAGC ACACAATAAG CATTCAATAA 4383
ATATTAGTTA AVATTAT SSÖ5
2) A 2. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIÁBA VONATKOZÓ
INKORMÁT1ŐK:
U) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZÚSÁG: 3SG0 bázispár
(Sí TiBÚS: nukieinsav
003 SZÁLUSÁG: egyszáiú
ξ D) TÓIOLŐGLAT ADAT: lineáris
<11) MOLEKULA TÍPUS:: eSMS - OXNS í 2X) ISMERTETŐCE L:
ÍAf NÉV/KOLCS: CDS (£0 HELYZET; 37 3.,.,3606
MA EGYÉB ÍNEOBMÁCIÖK:
A 2. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIA. ISMERTETÉSE:
X X xU.'avtfUUí GAGAGTGGAA Z*<z* X ,«z* χ »*9.·**<(9> ^V-XA^^^a^sX'^ X /«A AfAK»A»{A«f ««A^ «**? Ζ* X Z*Z* UAi i <Jk»y,S\3U δ
X z< Ζ·\«**4 <X '4’>Z*WW G'd'nVt; χ vi yyM>Z** Z*'«>‘*ZA< Ζ*· X Z** XZ** X '«Jí <%* xJJSwí «ww£\S«Xir$XXr AH Ζ-κχ x Ζ*·,«χ Λ·Λ^Χ Sjí:U^rt.Uv^:U X x <2 * ^„w^yitZA Íl .**>**/*«**: xX Va \a> X \2XXl2 X \*· X 12
Ζ«Ζ·» /** * Z* ·* * *«/*, * X ΧνΧΛ^ΛΛ, X 'ΧαΊ AAGGCATCAC M^xrAnsv?^ \«. x <w j^A^VX χ «99 Z** 9 Z*9Z*»<99 X ^WíTíJa'ÍÍ X? X IS
,-** /9z9Z»9z»s z*><zy ·χ ·* χ ·,*** χ /*9<Τ</*>Χ X >'9Z*»x WU X Z9*9X ζ«ζ^ζ·Χ x z?9 '«.'^ν’Α,λ-Λ'^Λ X Z«X Z>»X « XWZ'W/*· ΧΛ'\αχμ*Λ^ x \» X x? *$ .Λ •aX ’X
wx rrwr'/*^ /**** x a \2«í^ X X 's^í'íu’Xf<«ííxí^ /«Z’?** ζ* X x χ οκζ» <2 ^ΛΜήΛ X ’ΧΪ Z» * f*' x “X X X ΙϊΜϊΛΙ X W'XfWX Va’Ía'w XaXaVa Sa* k XX •Ζ*. ,4 4Í*fc
» WW* ,Mp>W«Wí 4. \αΛ Α» «Ακ X >jki Άν X X ZJ9A ZT-ZMA X X «ι, ΛΧ XΛΧτ». X ΑαλΛ,Λ z*« ^x*9 <*» «w AC A ZZ ..XZjX .·*9Χ*< χΧγ**ΧΧ Ζ* X Λ \Ϊ <W kx «k Sv. \«A \* twdHk 23
,.'«*<|y|».*»is /* \«m* X 'X«\^.«í'\X!’'Xf\^?X^AXy ZJXZ^X X ,·ΖΧί9»Ζ“» Ζ9Ζ·9Ζ“> -X ' <X!íu!x<ÍT\iwr χ Χ$ ν>«> X <«w CAAGGGAGAA X ,,^^^4994-9(-^ Ζ9Ζ*(Ζ9 χ A*·* X i s* A \£ί£<ΛΛ 32
jendh—WAjAX/^» χ X ZX Xf X> ''«· X Xx '«.'iTwíXabX'ec. **< Z*z*rt9 χ y*f ^wa^aw, X χζ> AaTÍ^XÍVÍ GTCATCGCTT z·* «·“* z·* z9«r* λ** x*» χ /*» λ \2X- X, X> X \2 Χ?Λ^Λ 35
GAGGGGAGAA Uv«, zxXaxt Heh Alá z'^z'zcz* z*( χ zx x z*x Z4 c*??(/9/x X X X Xí\X í*Vs?Xa X.\2<~ XVJfU X'Xí'Xf Phe Tyr Ser Cys Cys Trp 3 3
Z94** .*9 X» X Xa Val /*«***·/*» \α X \αα Leu Χΰ Leu GCA Ara x X. Len ACC Th.Xt χγ<.Ζ*:Ζ9 x 'χίΑχ X X^O 15 CAG *'*'v ZA XXx,·» ·* z-· .'*» ΛΧαΑμ jTí'zí»* X \a> X Ser Z’y,·*’*/·’! \2\z\- Ars TAG Tvr 20 á. m*5 t: .3 A
Z-> 4·9Ζ“< XJVÍX5 Ζ*Ζ99\ \αα\αααΧ /**Α <** 'ΟΛΧ XeÁy^kXJF CGA <*4Ζ*<.*9 \$\α· Ά» GAA X ft /·«' 2*xrW AAG />*?** Z9 \2xJ\2 Z* X 4*4 X í*X X ·* 453
<X > v \»'X< Erő Asp Gin Arg Alá Gin Lys Lys <**> «/ txxY Asp He
25 x C?
-s ΛνΧ \ν X X Ζ9Ζ9Ζ9 «yrO GGG Z9Z*<Z*< X. X X X X X zAez*«w ATT αλΤ, X X X /9,«-Χ X WH. Z*«9*>X wxn 504
Ile Len Gly Gly Lati Pro ne Kis P**S Gly Val
35 4 0
^•CA ,-9 «*9Ζ*9 \2\α· X ΑΑΆ GAT CAA ,**>:*(!»· \X#ÍkX iw. X Xv AAA TCA A\A5 GGG GAG 540
Alá Alá Lvs Asp Gin Asp Isu Lys Ser Arg' Pro Gx.u
45 S3 £ E x «?
TCT 9*\4φ*Ζ9 yr Α\3 GAA TGT 9 X*9Z( x X* AGG TAT AAT TTC Z’^z-íí'*» X, \2 X GGG 57S
^:'Ö2T Val Glu Cys Ile Arg Asn Éhe Arg Gly Pne
60 δ 5
/9/9/9 X«Xíx* TGG TTA CAG GGT AGG Z1aM> TTT Z9 Z9Z*« ίΛ^ΑΑ AA· ATA GAG <ΧϊΛΧ2 3X2
Arg Trp Len Gin Alá Heh ne Eke Alá Ila tu JL *x Glu
*9 S\ ϊ 'X 75 SO
ATA X X ζ* «f*5víVvA •\ /** /*> Λ'ΙΪΧ AGG Z*»**’*· VsaXcÍ. jMtZVZf 'KS^-S^ V X x £9<r*m .V*lZ*».**< Χ> \βλ\ι·α AAC i X\2 AGG 543
He Asn Ser S«t Pro SS Alá Leu Len Pro Asn 30 Leu Thr
Z9*99Z*( UiU λ\^·Λ \Χ'\2α*Χ TAC AGG ATA TTT GAG AGT y*4Z°< /*· XAcrx. AAG ACC Λί»(«Λ ΑΪΧ X S S4
ieJ^AX ,«9 X · « V χϊχγ Tyr Arg Ile Pha Asp Thr Cys Asn tu** A *ir. Val
35 i Λ Λ J. Μ V
*5*£*ϊ·. AAG GGG GAA GGG 9· Z9Z*< A'XSw (*«7*-*« \» X \ÁÍ •kz*»m Λ<Χϊ X Z'*****^ k2X X ζ» ζ*Χ*9 *9 Z\ t (X w
«Ζ Α«Λ^ Lys Alá ix&kx Q-xU Alá Thr Len Ser í: >x£í Vei X /T * Ck*A'Zv íX
1« . .αΧ, α> *ζ 1X0 1X5
*'*« *
GAA Gin AAG Asn AAA Lys ATT He 120 z·* W •'Τ' vAi Asp Λ \<v X Ser ywíp'rt: X X v? Leu Asn γ**<^κ?* 7,κχ;λ 125 «** \?A i Asp Z** rtl /**< visMks «** rt v v ALJX,U X X \n» Phe 75 δ
X'xs\m AAG TGC Tr a GAG GAG ATT í*«/*,<«< Vsx Π η«ΐ/Μΐιη χ. Η X Λ Z*» .««X ATT GCT 7Q 7 (X.
Cvs Asn Cys Ser Glu Kis He Pro Ser f·?·'j·^ X Αά'Αί Ha Alá
130 132 140
V? XLX <χχ?γ« κχ X? X Vjt GGA GGA AGT GGG «'.'«’Λ X Χ#ΖΧ /“X .·'» .·*« GTG TCC -* Λ'-xvVX j·**/*'*'» 82 S
V Val Gly Alá Gly Ser Gly Val C5x> >» Xa* \m «k. A · *X Alá
14 S 150
.'X-Wíí-v \X 4c «£ GGA AAT V.4KÍ •U x\s Z*,*»?* '·» X \#r *WW(V«» 'ÍJ'-X Λ iHv ATT GAG 5s4
Val ÁiSt- Asn £,4&\Λ Leu /** X Λ vjrj^y Len Pha Tyrt* Ha Pro Gin
15 5 ISO
«1 ím X κ^Μ-γχ fTvX? X *** -x r**< ΧΛχ e** *XíX«? \x» X Se»» <“**?·* X. X» \λ» AGG AGA K*X X Sw AGG AAC 300
val Ser 7?vr Alá Ser Ser <3<»v- wV*, Arg Ix&H Xí^'U· ν' *κ w λ. Asn
xss rt *T írt X. ' V X / ϊκ
AAG AAT GAA j&t X X AAG X X X X X» .-i'^er··?'**· X* X \w kx>\GG^. AGG rrr r^u» v»> GGG 23 S
Lys Asn. Gin Pha Lys Ser Pha T .4»<* ««^ A~9 *T>XsX~ A Α4Ά» T j jj> Pro
ISO 185
AAT Γ’Δ’Τ’ t?AG GAG /'•«Λ κ* snrVd? ,»«K V'-H AGT Z*· κ»#·*< x ,<WA* Λ.1^? GGA íxíAC Λ *í* »w<» zrt-X Va 972
Asn Asp Glu Kis Gin Alá Thr 6 rt: ~ Met Alá Aá»p He
ISO 195 200
TAT χγίίγχ.'»» x x Π •κ’χ <f*#**<.'•o XUrtxr AAG X<2V U X'xy χΧ'χ?^»#' λχΑ ATT 1008
He Glu Tyr Pha Ars Trp Asn •rt^-^-xx X Xr k/ Val GÍV X iÁAr Ha
* 205 210
GGA í*»., \$ \sA X GAT GAG >**·». <**> TAT GGG κ\ »«*/*» Vxa’tf GGG GGG x\ *Τ*ίΤ^ λ; X GAG 1044
X Ί a jTjw^w 'Λ'ν AÍcL Asp Asp Asp Tyr z-· rt « . ^~Y Arg Pro Gly Xle Glu
J ΐ st -*.L 220
AAA TTC GGA GAG GAA «/>W SJU X GAG GAA •J\ .**,«** κ*> *> w GíAl * **^,y*« X^i 's* λΤ« X\3\~ 1080
Lys Phe Arg Glu Glu Alá &χΛχ ni 'u X?Xic «* Ars Asp He Cys
225 230 235
ATG GAC TTC AGT GAA CTG ATC #γ»:^*«κ* GAG Z*XX> TCT GAT 111S
Asp Phe Sár Glu Len Ile ·««> sX χ. Gin Tyr Ser Asp
240 24 5
Λ*»·!* *» \sA\j GAA GAG ATG GAG GAT Ui\í ^1Λ (Sx^CJ GTG Λ Λ.Χ X GAA ”! « £-> X* Μ* *κ *4*
Gru Glu ni v> \ú£ «X* kx Xle Gin Kis Val Val Glu Val He Gin
? <vfl M w> <«» 7 5XC X» wZ 25 0
AAT f^*í<*H>** Λ· AGG .**«·/»< í«* AAA í^W/rt tíl^ Xrtri Aw GTG /-*<-*>**^5 <s3 X X χγχ*?* <·** X \«> X Xw> Vo# AGT 11S8
Asn Ser Thr AiS Lvs Val He Val Val Pfe§í· Ser Ser
25 5 <“> *»'·Λ Z f u
κ* .»*><*» HflXH CCA GAT <***eV<x*s Π X ú, κ*κ*/'$ '<χ,ΠΧ*> CTG ATG AAG ,·^-·Λ κ-í \£XVx? &<W£í: .A^vW, Uxk~ rt *5·η Λ di áé d£
Gly Pro Asp Leu Gin Pro XX Ha XűVS Glu He Val
275 230
♦ 4
* * ♦ ♦ « * * * «»«*«> * * # * > »« * « «Χ«Φ ♦ * Λ V*
/ o C
'Xt ~ Z-.·
X*. Vxarky Λ •sxfx •Γλ-χ. 2 55 GGG 2i yrv Λ^κβ. *-X x -x <-r» AAa Asn •Ά i?*x; Í^A \x. aIs *. '«X A've'vJ' Thr GGG Oly 250 AAG Lys
GAG GGG wv* A \JW GCC AGG W /“* X* 4» ΆΑχ
/-**< ..». kz»í ιΖ^Λ SöX .Alá ^i^yewOn AJ a ssá»-'** X5 <k Ser Xí JO «XX v. áSí · X5 S«z> J»
3 00
X»'* ,**· x<X x* 4.^Χ\μ :*y»x*tX*x CAC χ>χ*>χ\ \S'.i X2 X>er*.«»< ΧΪ A A f'K X'» X* 'ví’jyAn
Gin ^TX^x-y» Kis * ? 7 V «X Val Gly
hX -Jfcr Ö 315
X* X»XX <jrk-.F ν,Λ,ΑΧί AAG X< ywx<^s ÓH A .XSX*t-« X^kJXS í** ?i ,X* XvzCkX? ATG
Alá Len oys Ai& Gly Gin He
32S
X^X*· !** 4. X w k» «5» ki? AAG Β.ΔΓ* /•KW* XT A Ae. ,<*>v-V C~\ Uí\i r«Xi X«-Vw.\<iZ
Phe len Lys Lys V <A _A. Kis Pro
335
AAT GGT X*» X*»./·»» AjAw \x AAG GAG TTT
Asn f* ’í 5 « wAx y Phe * T ~ ΛΑΛ Lys .<** Ί: « ». \m Ad Phe
345 350
AAG X*VXí,Xf λ. \5\» •í*»'* x*. ν»Λ.Α jA*WZ*l Αχ 4« Xm GAA uAA, x*x»:«W UUi
Asn Cvs Kis Len Gin Glu X« 1 - * ’<y Ay
350
χ ·»:<*?> tzü X *4ΪΑ\ί X*/* X*« AGG ^XX^X*·* Ά A \í AGA
Pro Val Asp Thr Pha Len Arg
370 375
\JíY3-w GAG AGG AGG ή,Ό X x*x* ΛΑϊΑλ
Gly Asp Arg Phe Ser Asn Ser
355
Xi Xe* Αβ* /•w'r·}'*'» Vi X vs· vryxí'xt ** **/. A AGA GGG GAT GAG
Pro Lau Cys Thr Gly Asp Glu
3 SS
X* X χ*. VaíAy? AGG GGT TAG ATA GAT TAG
X» f , , <Xf X U. V* 4. 444. r-xv} » -X» ·*? Tyr X JLe Asn Tyr
405 410
^^**0 l'T' X X** A «XK* AAT «Λ»,*»· k2 ikí w-x X* A X» χν·Λ \nA
Ser Tyr Asn Vai Tyr & Λ a Λι»
420
X»^ X» Xz<é*»t\z> G'^G TTG GAA GAT ·*< Xf*A *** χΛ A
Alá Ist Gin Asp xl« ϊΤΆ·Ζλχ·
430 435
AGA Χ^.^ΧΧ /'W“«\X'> \áí- A Vm TTG AGG AAT Χ^χ* ΧΎ <ν3\3\«
X V* X4 ίΧζάν U·* rp v ~~.í Leu Phe Thr Ash r*'*· % >*<3 «4« y
44 5
A λ; \χ. He XWXxX» A 'T'V'xx A A. k.· X»f«X». Se. X V? Len X* l** X Alá 235 AGG Ser 1260
x*zys« i<eu ATG lie 305 GCC Alá ATG Me r X>,X»Í>Í> w. v*· A Pro 12 9S
Λ.»«» kítóU Gly AGG Thr ATT 11 s χχ ,x* x UxSlrs. Gly *?\y**Xx Ά, 4» Phs 320 1332
CGA Gro GGG Gly TTG Phs 330 Χί,χ.χφ kvXzjXi? Arg GAA Glu 13 5 8
AGG 4xíír 340 ín «· J*í Lye cwxwt X S^r ΛΖ^Χ*. <«3 i Λ»* 5 > ze. P 'Z 03. Je GAG Kis j«*fc vóe
TGG Trp GAA Z*« T o v WÍA.U GAA Giu AGA ’T’Vx v* 4. 355 WfJííT1· Phe 2440
GCA Alá AAA Lys 3 SS GGA Gly χχ^χρ* SerVz. -X Φ .» *w> •wr A 4.** len χΛ / ο
X*,xx*« UúS A Glv GAG HÍS GAA Glu GAA Glu AGT Ser 330 Λ « 7 -·> ώ,νΐ Aiz
TCG Ser AGA Thr GGG Alá 330 Phe GGA Arg 1543
AAG Asn 400 -5\ VF*r* Λ1 Ile AGG Ser » /'«Τ' Λ Ser x*x*<x* \3 4. Jv Vei In 3 4
ACG 'T’Vt-x CAT yt a ’pwr*·?·. X. Χ.Λ Leu \x.\3\X yg 4 χί>· ATA He 1320
<5 i Ax Vei m* xx ΙΛά Tvr 425 X*X X» Xí zi. ke. tz Ser -» xys’ív' ΛΛ i He X* xsx*» Aj'xxxH 15 SS
AGG χχ,χ·» ,-χς Gye TTA Geu χχχνχρχ \» kx A Pro GGG Glv 440 1SS2
rfíX^/X* λ Α»Ά· Ser ί'»ϊΛ Cys UvA Alá 4 50 y* x x*< Ax Asp X χ\χχ Λ·Λ Π ζΧ xe ; <7 -5 a «V» f A9 W
* ν « *
y u? Τ' - LRö ~ τ
AAG AAA Ζ’χχζ* vw-Vcs ex ,1*».*» \é*Ne'\X> W*< J*C-Z* 1 si-\X CAG e'Ayvxyv» k: a \x zx*e>z*< bHí AAG CAG CTA 1784
Lys Lys Val Z*f! , v NJ3 X $X Alá Trp Gin var XÁ Lvs Has Leu
455 450
CGG Gjívx Z'*^ X kaA AAC TTT ACA AAC AAT ATG z*Z^z* ·—X;O GAG 1800
Arg His Χί^λλ Asn Phe. Thr Asn Asn Mer Giy Glu Gin
4 SS 470 4 75
Z* «*,»** 'dí A AGG *S“»X*««V X 4. X ssAi ZXXS ex TGT (e'í,~'Aeíe VU'i GAC Ζ*>·Ζ>Ζ** >* 1 SJ3 \>y á %? Z*z»z^ NA2N3 AAC 1838
Val Thr ·*> «i \» Asp Glu ΖΎ» p,«v V y x> z*f ? , ? «~y Asp Len Val Glv Aso
480 4 SS
TAT X NeH x rr*.’*» Λ1 U ATC AAG i NÍA? CAC CTC ef*Z*ZX zw V CCA GAG GAT XS72
Tyr Ser in£ n& Asn Trp Has Leu Ser Pro íxJcxx. Aso
4 90 4SS 500
GGC JXXyexZ* 4½. \θ* ·& *í*z* Zx Ne Z»Z«e*> NH'-d Z'WT A X A AAG WX -Λ kírZVi. Z'er'Z* \?X s* N5V<A? TAT «r*-\ z** ΧΛΝ-, AAC 1908
Glv Ser Hs V & X. Phe Lys ex 1 V' Ne A ex Val GlV Tyr Tyr Asn
SOS 510
GTC WX e«X X Λι Ζ*ΖΧΖ·Χ X, X Z* AAs«? AAG GGA GAA AGA CTG ATG AAG 1944
Val Tyr Αχ. 3 Lys Lvs Glv Ne A> ke. Arg Leu 5£i& Hs Asn
515 S20
GAü AAA f>*f»z** Λ 4. Ne Ne X Ne ej* **< ,-*-> X ’nJXX •x z**?* ^^Ne X e^Z*:'·** *τ·>γίζχ X A Ne TCC AGG Víyzx*»? 2980
Glu Glu Lys T 1«» *i> Leu Trp ger «41 Phe Ser Arg Glu
525 530 535
'«?ÍU \λ S«,ke <f*j***zx X >k Ne TCC AAG ye*-;**» ,vm> X aÍ’Sa· AGC ζ·*ζ*·χ WA GAG ,*>>/*> i u Xuy GCA 2018
Val Pro Phe Ser Asn Cys Ser Arg Asp Cys ueu Alá
540 545
e\í\J ACC AUíkjr AAA ex z* k5N0S%X ATC ATT GAG z</*·?**> SvyvyNJ· Z* ». zx VSjrtAs GCC ACG 2052
Λ.5 v «~Z v. X ÜZ Arg Lvs yx Ί ’i r NsXy Xle He Glu oly .Z»H yy Pro Thr
580 555 580
TGG X \λ?\λ> X X i. e»^ e«> Nsy^-ko? Tk5 a Ne A N5 GAG TG*''* GAT Z*e«ZX VXTNSNS GAG *7 i^Ö3 A· ke Se
Cys Cys Phe Glu Cys Val Glu Cys Pro Asp Z*> T » f HfX.\ 1 \ii
sss 570
«Χ*> X Z*X ,Χ.^ΧΑ. X Z'xeyv X GAT /·»*z^ \?A\? ACA z** w nL*íX GCC x z*1*?* .&<ώ λ .»*»,<*<· z> NSkete TGT AAC AAG 7 T 2 «
Ser Asp Z*'! ♦♦ N? X> SA φί.« .V Ü A· ASp Alá Ser Alá Cys Asn Lya
S7S 550
W*z* exiVO CCA GAT ζχχ ΖΦ NtólV <?^Z?x zx ZX/xZX A w\3 AAT Z·» *. z* AAG GAC AW\x 2180
Cys Όv*z* Asp Asp Phs A Xe Sár Asn Glu Asn Hls 4v*hX
585 ssb 555
TGC ATT Z'o.exz'* kXXw· kw AAG GAG ATC e* A Z* •tó*%Aír Zexx^Z* \e X N5 mz*z«< x Nebr •VXZ^Z'* XSXfxy 2138
Ser Cys He Alá Lys Glu £r& Glu The Lee Ser Λ> j»'
SCO SOS
AGG Ζ’Ά Z** ζ*>ζ·*ζ^ - A A, A GGG ATC ζί£3ί. e-wf’i Zí Π -x> H AGG Ζ“»>χ*ζ*ί Π X :Ne Λ X X .evz*Z* 2232
>y>S v X <X<XX Glu l?x*c* 55Ηλ A JiáSi Giy He Alá Lesi TJnr Leu Phe Alá
510 815 820
Z*Zf*Z* i ’<? Val :Z*z«z«ií «** i v? LSU Z*.'”' ,™> VíttfV, Gly Λ1 4 •4 Ct^e ·*» 4 4a> Pha 5xC3 Z»{<«Z· 4 kG ?.*?» ACA Thsr GGC Ara X 4. Λ· Pha GTG Val 630 ZW,·^ 4^ X **? Lau Ζ°Χ Ζν·“Ζ> νϊίνϊώ Gly 2265
GTG ATC AAG zí^zz>z*c üC Z'ZZ'· Z<> SeV? V* AAC AGA zxz’Z··* ATT Z*íz*xz^ \S X. '«AA AAG 2304
Val Pha Ila Lys Pha Arg Asn WV-v x Alix £>r“f> A* *X> Váí» Ila Val Lvs
535 •640
ooo ACG AAG Z*Z*( 'fti W»ÍX GAv? Vív «y»zt 4 V^w TAG i >* Z*Zf*Z*< \x i \x Qí-wyx 234 0
Alá Thr Asn Arc Glu Leu Ssx Tvr Pau Cau Lau Phe
645 z -Z z δ SS
TCC Viki y-ζρζν cr· <*< z-< «X Ví?Ve J*f»>Z** 4« ι?'·μ yMcZt*^ A- 4 Ve }?/«W X VeVx x zvz'w A^\*. Z«Z*Z»: Z> zpoz*» \x 1 Aj? zpwr**** X i, \a> *r*z«z*< 1· 4 \»> ó <í > ?
Ser Lau Len Cys Cys Phe ö Vx 4m3 W A. Sár Sár Lau Phe
560 X» ja J* <s»5
A Z«\ í%i> V> ZX Z»ZX íjVív? X» •'S »*s V?Hv? V»> V'Ve z>·* Z* Zx <& zc vm,ve Zffrz*.**» 4 '-dGA ACG yV'f.AA χ^ Z1'?*’ z* .ΛίΤ'Ζ* vív GGC •η λ · -* *> jCTS X <oi
lle Gly y’*·’* χΛ kSófcU $2x*“z\ •*a <Aa \»á Gin Aso Trp >U A *-iz Cys Arc Lau Arc
570 575 660
CAG CCG *V*Z< yw*w 4k AA Λ x**z*z* «ft >*ί/Λ Ai'v %',ΛΛ /^.<4 Ve *1 '«· χκχχΖ'Χ^Χ K2 i.\y zAjytz·' •JV Xt %* ZJ^Z*/** χ mz·» Ai v 244 3
Gin PlTO Alá Phe Gly Ila Sár Phe Val Lau Cys Xla
685 530
TGA Z-íZ·· z» χ <τ·?·~> Λ* ζ*«φ*:ζ*< VXU yAA^AAyMV Wi'x? AAA ACC AAC CGT GTC ZVTÍZ1* Λ» X Z^Zf'Z** Xj Cí 2 4 34
Ser Z'V y.*» Ila :Lau Val XjVS T b j» *4«>» Asn Arg Val íbx<5«x Lau
595 7 0
GTG X> V <1* ?**> X z^ V3MV? Z·» .'VZN AAG -x^r* UTVX. «Μ» z*z~>z*< V» Sa» Ve Λό ’w X Λ««ΖΧ TTC CAG 2520
Val Phe Glu Alá XiVS τ Ί λ •X. ««. w· Pro Thr Sár Phe Hús Arg
705 *?·* Λ / 4V 715
AAG zpiZ^z*1 X V3V? ZíZ'íZ' 4 \zV? xX.ZíZ^ CSVftúf Z»J*»ÍZ* V** 4» 4^* AAG .ZWf»^ Vx X< V? Λ* Z* *w*tz> <h Xx l«A 'V»i\í .z^wz». Ve» i v? GTT 2SS6
hys Trp Trp z* Ί > < kSUA v Lau Asn Xwi£Év ti tx? ttü 1?$X5 Lau Lau Val
72Q 725
TTC CTC Í^Z^Z-í iüíve AGG x*«zyx»**» 4. V V» AGG CAG GTC X w z* 4 tarjt, GTG 2392
Phe Leu Cys 4 1 ükf Pha Ma t Gin T * Α» <dt. «Χ* Val 21a Cys Val
730 735 740
>ft *9·» ,»** Ai Ve lüfb Z*wr<z* V»» X* «ΑΛ >*< ·* z-í X> ΛΧμ * .*»/**' j&V* \w Ζ·> Ζ»Ζ·Χ v?Uvy •W S*< f* OCO TGA AGG W* z* £ GGC 2626
Ils * V „ A ii$S ti Tyr Thr Ax^ Pro Χ>*·ζν ív xix· aZ Ser Sár ZFxzY' 4» X* Axg
745 750;
AAC GAG GAG z'»*r>z*f Vi'-Ó GAG GAT GAG Vrt» ATC zysrwz·* «*> A 7^· ATC ACG 2564
Asn Gin Glu xu£\4 mU Asp Glu X χ~ Ila Phe 11a Thr
755 <& V
TGC ζ*<χ ,**«· •Wxv Λ * z** V?^V5 Z*Z·» Z« tG%Sd ÍT'?·*,*'* 4 wV* ,'Α^γχ ζλ Ve X> 9e ATG ζ» ζ^ζ** 'βίΝχ.'χ*- CTG ΖΤΖίχνχ yv'M'í’vz^ i ir \M> JZ’w»'»z'» Ve Λ «5 Λ Z\ xi ? ftá V.·
Cys His CXu Gly San Leu Mar Alá T ,£fc4< .^w^Vkx lúA Gly pb-A- A ΛΑ W T Űf4 S XvíVvVX
755 770 *77^
•λ <*z«z« &ív .'•«Z'* Z*» V?V$ V* TAC AGG r^z^z** 4 VfV CTG CTG Ζ*«zwp 'tí \χ* ^¢. z*« z^ze \μ?4α\χ. χ»γ*ζ» Λ Λ x. zz-zíz^ 4 t)3Kx Λ Λ V* 2736
lle Glv Tvr Tb** x & IX^» Cys Lau i«i <5:15. Alá Ax& Ír a Zv> z cv vyS Phe
730 7S5
TW/'í ί- Α Ad Phe Λ «. A Pha 7 Sí Λ ( d> <rf GC:C Alá TTC AAG Lvs «γ»Λ Á AjrtAsd Ser CGG Arg 725 AAG Lys Aa· 1 AS Leu z*»z*>z*« HAd'AS Pro Glu X ?·. íCk/iH Asn 800 *? ·*?' *7 *j *k* i > «X*
*M><w./«e AΑ» * X >** zGXa GAA \ρ\*·\χ AAG TTC ATC Ά. Z**./*» Λ./.Π TTC X .«**y*x ÁRPA» X w··*’ CTG 2 8 0 3
Pha Asn Glu Alá Lvs Pha Ha Th^ Pha Sár Len
305 8X3
x W v*·’ λ; a» «‘ro'f* γο» «λ <*\ΖΆ Λ. X. α» ZXZ»\Z«> A? A X« Zfí'**. :<** x AfkíG ATC *t*j**e /*i A A> Ax· <Φ>ργι<{·«\ •X Í^«V> /^A A CCA <*” Z*« dX U H Ad 2844
He ?Γ;θ Pns He Val T'í^n X 4dX>Z He Ser Pha He df 4d Ad' Alá
3X5 820
TAT GCC AGG AGG *T> x w i.:A 4· GGC AAG Ά A. X GTC TGT /*»** A* AÍ'Sd'At GTA 2S3 0
Tyr A Ί v» Sár Thr Tyr Gly Lys Pha Vei Ser Alá Vei
825 830 835
TAG Z*><***< M \X Λ W ATT «•«M0. Ad Ad Ad X «««Ad*» Ai A CTG GCA GCC AGG A A A ^*ΛΧί** a?A3A^ í»w*«d** a i'a 222.S
Glu Val He Alá He i'W'S A Alá Alá Ser Phe Gly Len
840 345
i-sjr /-</** Z* «*:.«*♦ /*« iV<- ATG zyxer» z* A X Ad A A A* AAG AAG X. w-í** A; Ad ζγ« χ .«*» AZAAd Λί C ATT 2952
Lau Ά1& Cys He Phe Phe Asm Lys He Tyr He He
350 85 S 8SQ
Ad·. A Ά, fywr’.f*· AAG CCA :*«** «*»>*» A A A* AAG ACC X w «*·» Ai Ad GAG GAG ΖΑΧΤίΖ·’» VAí AA? 2988
Leu Phs Lys Pro: Ser Arg Asm Thr He Glu GXu ’í’'» Ί * £3.-ύν
8 ö~- 870
W·*· Z*ÍZ· z*« «Α \w? Srr X ζ^ζλ .«AJV AGG γ~>,··**-κ Z» Z*»’’** ΑΛΑ. A CAG z*< /««η·» A3 Ax> A AAG ,dOt««d*« XJ A A? Z*>4*W« A?^M> * 3024
Arg ./*» « -R S λ»λΠ 4. k^d» Alá Alá HÍS Alá Phe Lys Vei Alá
375 888
aP’Ao Ad Z«*íZ^ZA VxíUr GCC χ /v* Aa/AS <R* A A? Art· Art \*Λ ..ZXJ*».,**· 1β»·ΑΡ / AGG AAG ->P «* Ad A A» Ád CGC 3080
Alá Arg Alá 4»- Len X X*AV Aa,.\4 Arg Ser Asn 7a I Ser Arg
885 820 825
AAG ZNZ'XZ* W*J*< iVV X f'tf'* AsPV AGC CTTT GGA ,Z*Zíí’*’! \^ΪΑΡΑ» TCC AGG GGA 9, \>d Art 3098
Lys A <z»z«* -**** ts Sár Ser Ser Lan Gly Gly Sár A X*-Ar Gly Ser
SOO 205
ACC \a.X*í<XX W z»z*X A WZ’íZ·'» •i Ad \x* TCC Ai\· AGG AGG AAG AGG AAC AGC 3X32
T<>. V* xk HÍ Pro Sár Ser Ser He Ser* Ser Lys Ser Asn Ser
5X0 9X5 923
GAA Α?Λ·\^ CCA CCA CAG ΑχΆ· A* GAG AGG CAG AAG CAG 3X58
Glu ASS> Pro Phe Pro Gin Pro Glu Arg Gin Lys Gin
S25 230
CAG z»*> ./* ζχζ’*ζχ Α» Ad A? /'«Τ’/* w.X\? z* ζ»*.1ί«χ vu GTA AcC Z*<X. Z*< •uiu z* ·*, «>. UhA GAG ΑμΛ-αΡ CAG 3204
Gin Gin 'W'» Λ, jw. Xj*5XX Alá Leu Thr Gin Grm vy Ad Α» r< i χ-. A*? A. A A Gin
235 940
CAG >* Akaí^A? Z*ez**z* A»· Ad «Λ CTG AGG CCA GAG CAG CAA CAA TCT 3240
/T ’S r% XHi* ÚPXHX lu&ll Thr L-au Pro Gin Gin Α>Χλ Arg Ser
245 250: 855
*♦«* * z
Z** .* VÁ4K? V^mZmKm /X X /X vx*áAkm .VKt AGA *X>í<X/X AAG CAG S Α·Π· Λμ. mKm GTC XX /X Í^XSWJC 3275
Gin Kí-All Pro Arc «/ Cys Lys Z*í w k?-A44 Ws Val 3le Phs
$60 S SS
Z* yx <»* X λ> s·* Á\^rU AXyVWZX K3KJU /XyX zn.Ay..j yxzx »-* K3 A Km AGG ^Wí/v A A Kor yx/xv A k«<& Z'Mr»,** Km it. Km »A,*» A\íU *3 'í O «X mÍ As Mm
Gly £5» >* Gly T zx X- V A&Mm Var n'V. m LiÜM £3 Ser Leu Ser Phe Aap
s?o 97=: •S i M* $SQ
ΛΧ X yx vAkjr .MM> óli CAG •X X ex ΛΛ\? AAG Z-> ,*í/rt| •x o>x z* Λ. A k? Zx/X./X <3KxKm CAG GGG x x /χ* w./'w «hAi a u a 3343
«« KM Aa ÍA P:XO /X'S Μ» \3mUA-A Lys Ásn Alá Mer Alá Kis Gly Asn Ser
5 § 5 $50
X ·χχ.,.«χ ZVmmK? CAG CAG AAC <χ*ζχζ*< A Km Km .«Χίχχ,-Χ Km A K? GAG GCC /X X Z* ÁAkj AAA X/X ZX x χχ /X HÍJ Km AkAU 3384
Τ' V*.τ* Hís £p, Asn Ser Leu Glu X X ιλ. í *3 AA-^K W* ΓΊ x* kJfoAii Lys Ser Ser
Λ XX -x c? 100C
z* * -ν> ΚΛ^ X AGG 1» A X ZXZX CGA ΧΧ-χ XX Wm Z-fX z^ W\ÁS GCA í^*XX X A 4.ZX A V χχ/χ/χ zxf^z*» \vk-rCA KíiKÍ 3420
ÁSp Thr Leu Tx<x~ X 1-ZMm ít x*Z* KÍS ί’ζΐ tt ΆΓ Mm > 4 Pro Leu Xjt€o A* Pre Leu
1005 -} Λ 5 Λ Xv mm '•x 1013
TOC Z*. ZXZ** \5\3KJS GAA ACát /x x ,.*» KVík. «r«XXX A 4.Λ GAT Z’XX'/X Kz ÁN3 X /XXX/X /X x z* O i i~ wíiKJ 3458
Gin Cvs Gly Glu 7k^ iiiA Asp Τ,Λί * 4eXkA ΚΛ Asp AaSU Thr Vei Gin
a, W-sá s. 1 1 «Μ* \X *a Ar
GAA AGA k?k7 X zxxxxx Lm. * A? CAA GGA /χ>·**4Τ< CTG ^,Xn<V» WA ΛΧ/ΧΧ ’kskxíx χχχ/χ ,-χχχχ 3452
Glu Thr ·.*·*· t A Leu Gxn Gly Pro Vei Gly Gly Asp Gin
1030 ' OGS ww- XX x -x * -1040
CGG GGA /X-\ /X •XMfxzX «ÍV »** X Ζ» KÍ2*AkG /** x ,/* >»6 4Z Λ GAA GAG ίγχ^,-Χ a. A^y XíZ^ZX z^z^x A 'wle» Kw\xM> >ir 3528
Ara Pro Glu rx«. V &Á. fi Ή < Knf mo V6 ÁSÓ Pro «Λ · · KmUa mA Glu Leu Ser Pro
104 5 105 C
GCA Λμμ A A z**x»x L· iA Zx/’zryx /ΧζΧΧΧ X z^’X’ ΛαΑ* A <X»:,«*XX A'wA Z*X< f* AGG TTT .XXX XX X XX XX A X* 4p3c A 3364
Ara Len Val Val Ssir Ser Ser Gin Ser Phe Vei Ile
1055 1050
AGT GGT Ζ*</χχ V<Aíh GGG AGG X Z***v* M'mm A /χχχχχ V? A A AGA GAA AAG XXXXfi Ζ*«Χ*χΧ ίίΙΛ KlfAKS 3500
Ser Gly Ájrxy Gly Ser Var Thr Glu Aá»n Vai Val
1065 1070 1073
TAAAATGGAA GGAGAAGACT GGGGTAGGGA ί 8 3 5
AAT TGA
Asn Ser
,*X *A X· ΧΧΧΧ/Χχ <x>x X* κχΛΑ A A,.?k^e^u^.Ur /AkG^G? A X 4 mm X A Km Z^/X/X/AV/X/X.'X·*. z*zx· tASKS A κμ\μ'κμ-ΛΑΛμ» .xí*.mmz»x»x kíáT, a m A^Jk.s&KÍ·^ A •X /* *X Λ*· -S § / Ö
XS AVZX/X ZXXX X. .X -Λ zx \* K? \a' X. Km 'ΚμαΛκΑΛκ* m^v/x z>*x*yx<x> ,/x z****· Z* Λ K>X*- A A A K-m\m X Km TGA.GGAAGAA GGGATAATAG mM f mK 'Ό
ACACATCAAA w/xXjXZ'Z'Z'·* ·Λ*Τ* A A* MM kVI'^aÁA X WX*S % ZKZr^Z*’** .'X'X XX: A A wiwiv χχ x «'•zxmw* * X χρ κΑι'κ a. ιλΛλι 3 7 35
yx x Zfít jfxzxxx x ·χ /*x 'KÍ'Ó-<Km^GK2 A ‘ASz^mí-AA x> M>ZXX«X A Αί^ΚΜ-χ/'χχίΑ A-VÍ Α» ?ν,,*Λ .'X/xxxxx^lx 'X. Λ λΑμΚμ'μμ i a. ΑΛΛΛ A4AAAAAAAA 3758
AAAAAGGGGG GGG .3803
* - ν Φ

Claims (28)

  1. Szabadalmi
    Az alábbi képlettel rendelkező vegyület alkalmazása gyógyszerként:
    ahol a képletben Aíy jelentése femlcsoport, adott esetben 0-5 sznb-sztitnenssel helyettesítve, egymástól függetlenül a kővetkező csoportból választva: 1-4 szénatomos alkilcsoport, balogénatom, 1-4 szénatomos alkoxi-, 1-4 szénatomos íioaikik metílén-dioxi-, 1-4 szénatomos babaitól-, 1-4 szénatomos haloAoxi-, OH-, OON.H?-, CN-, aeetoxk bornak h&nziiexk dímeliihenxik NO?-, -CHO-, CHsCH(OH)-, Nk’H?}?-, acetii- és etiléndioxi-esoport;
    Ár4 jelentése fenilcsoport, adott eseten 0-5 szubsztituensse! helyettesítve, egymástól függetlenül a következő csoportból választva: 1-4 szénatomos-alkil-csoport, halogénatom, 1-4 szénatomos alkoxl-, 1-4 szénatomos tioaltók, metilén-dioxk 1-4 .szénatomos haloalkik 1-4 szénatomos haioalkoxk öfk, C'H?Obk CON14?-, CN- és acetoxi-csoport;
    IN jelentése vagy hidrogénatom vagy femlcsoport;
    Kijelentése vagy hidrogénatom vagy metílesoport; és
    Rfiijelentése vagy hidrogénatom, metilcsoport vagy fenílcsoport;
    vagy annak gyógyászatílag elfogadható sója vagy komplexe.
  2. 2, Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol a képletben Ar·;. jelentése femlcsoport, adott esetben 0-5 szobsztiíuenssel helyettesítve, egymástól függetlenül a következő csoportból választva; halogén-atom, 1-4 szénatomos alkik 1-4 szénatomos alkoxl-, 1-4 szénatomos tíoalkik mefilén-dioxi-, 1-4 szénatomos haloalkik 1-4 szénatomos haioalkoxk OH~, CH2.ÖH-, CONH?-, CN-, acetoxi-, benzik benziloxl-, dimeülbenzik NO?-, CHÖ-, CHjCHföH)-, NfCí'k)?-, aeetíl- és etilén-dioxt-csoport;
    Ár.·? jelentése feniicsoport, adott eseten 0-5 szubsztituenssel helyettesítve, egymástól függetlenül a kővetkező csoportból választva; 1-4 szénatomos alkil-csoport, halogénatom, 1-4 szénatomos álkoxi-, 1-4 szénatotnos tloalkil-, metilén-dioxi-, 1-4 szénatomos haloalkil-, .1-4 szénatomos haloalkoxi-, ÖH-, CH2ÖB-.,€ONH2-, CN- és acetoxi-csoport.
  3. 3. A 2, igénypont szerinti vegyüiet, amelyben Arj jelentése fenilesoporl, adott esetben ö5 szxtbsztituenssei helyettesítve, egymástól függetlenül a következő csoportból választva: 1 -4 szénatomos alkilesopori 1-3 .szénatommal, halogénatom, 1-4 szénatomos alkoxicsoport 1-3 szénatommal, 1-4 szénatOmos tioaíkil-esoport 1-3 szénatommal, meülén-dioxi-esoport, 1-4 szénatomos haloalkil-csopori 1-3 szénatommal, 1-4 szénatomos haloalkoxi-csoport 1-3 szénatommal, 011-, CFUOH-, COMB-, CN-, aeetoxí-, benztk·, benziloxi-, dimedífeenzil-, Ν02--, CHO-, CBjCH(OH)-, NíCHyh-, acetil~ és etilén-dtoxi-csoport;
    Ai4 jelentése fenilesoport, adott eseten 0-5 szubsztituenssel helyettesítve, egymástól függetlenül a következő csoportból választva; 1-4 szenatomos alkil-csoport .1-3 szénatommal, halogénaíom, 1-4 szénatomos aikoxt-esoport 1-3 szénatommal, 1-4 szénatomos tioalkilcsoport 1-3 szénatommal, mefíién-dioxi-csoport, 1-4 szénatomos haloalkíi-esopori 1-3 szénatommal, 1-4 szénatomos haloalkoxi-csoport 1-3 szénatommal, OH-, Ci-BOB-, CONH?-, CN- ésaeetoxi-csoport.
  4. 4. Az alábbiak közül választott képlettel rendelkező vegyüiet gyógyszerként történő alkalmazásra:
    Φ* XX»* »Φ*« **** X Λ X *
    Φ »♦ * »» φ * φ Φ » » ♦ ♦ «4,χ Μ* »Φ »» Φ φ » «δ
    '<Χ^
    ÓCH$.
    CCH* VVíX Ν
    Γ
    ..--Χ\. .•SZ
    '\Ζν
    X > « \ΑΧ\/
    114
  5. 5. A Í2C számú, '(R)-N-(3-(2-«ietíIfení.l)prop-2~enil|pK>p2.-exúl)l-<3“meto.xiteml)~ etííamin kémiai nevű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra,
  6. 6. A 12D számú, ((R)--N--í3--(2,4,ő-tnmetll'lénil}pTOp~2-eniij í-(3metoxífeml>etilamin kémiai nevű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra.
  7. 7. A 12E számú, (R)~{3-(4~lzopmpilforiii)prop”2-enilj-l-(3-metoxifemI)~etilamin kémiái nevű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra.
  8. 8. A I2F számú, '((K}-N-[3(2,4>dimetilfenö)prop-2-emri-l-(3-metoxífeni0-etilamm kémiai nevű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra.
  9. 9. A 12G .számú, {(RnN“p-(3-metilténil)prop-2~enilj-l'-(3-metoxifonii)-etilamln kémiai nevű vegyület vagy annak, gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra.
  10. 10.. A 25B számú, ((R)~N-(3-femlprop~2~en-I-íl}-l-(3-metoxi&nil)-etilamln kémiai nevű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történd alkalmazásra.
  11. 11. A 25G számú, t.R)'-N(2-metik3-fenllprop~2-enil}-l-(3-metoxlfenll)-etilamin kémiai nevű vegyület vagy annak, gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra,
    -1 = 512. A 25Η számú,. ((R.,R)”N-(2-metil-4-íéniÍbut-3-enii}-l-(3-metoxifenil)~etilamÍn kémiai nevű vegyidet vagy annak gyógyaszartlag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra.
  12. 13. A 251 számú, .(S,R)-N-('2-metíM~fénil.b«t-3-enÍl)-H3“t»etoxií:énii>etiÍamin kémiai nevű vegyüíet vagy annak győgyászarilag elfogadható sója vagy komplexe gyógyszerként történő alkalmazásra,
  13. 14.. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vegyidet gyögyászatílag hatásos mennyiségét tartalmazó gyógyászati készítmény.
  14. 15. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vegyület alkalmazása, abnormális csont és ásványi anyag bomeosztázissal jellemzett betegséggel vagy rendellenességgel rendelkező páciens kezelésére történő gyógyszer előállítására.
  15. 16. Az 1-13, igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása ibperparaííroidizrnussai rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására,
  16. 17. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása Paget-kórral rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
    IS. Az 1.-13, igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása csontritkulással rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására,
  17. 19. Az 1-1.3. igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása magas vérnyomással rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
  18. 20. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása vese oszteodisztrofíával rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
  19. 21, Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vegyidet alkalmazása bi perkai címiás zavarral rendelkező beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
    ... π 6....
  20. 22. A Ι2Β számú, ((R.)-N~(3~(4-metilfenii)píO|>2.-€ml)-l.-(3-metexiferal>etnamin kémiai nevű vegyüiet vagy annak győgyászaíilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása egy betegben: a paratlroid hormonszint csökkentésére szolgáló gyógyszer előállítására előnyös hatás elérése érdekében,
  21. 23. A 25E számú, ((R)~N-(3fofolprop~2~en-i-íl)-l-(3-metoxifoníl)-etilamÍn kémiai nevű vegyüiet vagy annak gyógyászati.Ing elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása egy betegben .a paratiroid hormonszánt csökkentésére szolgáló gyógyszer előállítására -előnyős hatás elérése érdekében.
  22. 24. A 25E számú, {(R)-N-(3-fefííiprop-2~en-l-il)-l-(3-metoxifeml)-eíilamin .kémiai nevű vegyüiet vagy annak gyögyászfoilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása egy betegben esontreszorpcíó gátlására szolgáló gyógyszer előállítására.
  23. 25. Az alábbi szerkezeti képlettel rendelkező vegyüiet;
    vagy annak gyógyászatifog elfogadható sója vagy komplexe.
  24. 26. A 25. igénypont szerinti vegyületet, annak gyogyászatílag elfogadható sóját vagy komplexét és a gyógyászablag elfogadható védőanyagot tartalmazó gyógyászati készítmény.
  25. 27. A 25. igénypont szerinti vegyüiet, annak gyógyászatifog elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása abnormális csont- és ásványi homeosztázissal jellemzett betegség vagy rendellenességgel rendelkező páciens kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
    ... t Γ7 -28. A 25.. igénypont szerinti vegyület, annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása hipetparatiroidízHmssal rendelkező páciens kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
    2-9. A 25, igénypont szerinti vegyület, annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása Paget-kórral rendelkező páciens kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására,
  26. 30·. A 25, igénypont szerinti vegyület, annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása csontritkulással rendelkező páciens kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
  27. 31. A 25, igénypont szerinti vegyület, annak gyógyászatilag elfogadható sója vagy komplexe alkalmazása magas vérnyomással rendelkező- beteg kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
  28. 32. A 25, igénypont szerinti vegyület, annak gyógyászatilag elfogadható- sója vagy komplexe alkalmazása vese oszteodiszirofiávaí rendelkező páciens kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.
HU9802491A 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments HU228150B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1994/012117 WO1995011221A1 (en) 1991-08-23 1994-10-21 Calcium receptor-active arylalkyl amines
US08/353,784 US6011068A (en) 1991-08-23 1994-12-08 Calcium receptor-active molecules
PCT/US1995/013704 WO1996012697A2 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT77980A HUT77980A (hu) 1999-02-01
HU228150B1 true HU228150B1 (en) 2012-12-28

Family

ID=23390556

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0700718A HU229474B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, pharmaceutical compositions containing them and use of the compositions
HU9802491A HU228150B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0700718A HU229474B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, pharmaceutical compositions containing them and use of the compositions

Country Status (25)

Country Link
US (1) US6211244B1 (hu)
EP (4) EP0787122B9 (hu)
JP (3) JP2882882B2 (hu)
KR (2) KR100403094B1 (hu)
CN (2) CN1147459C (hu)
AT (2) ATE359259T1 (hu)
AU (1) AU709303B2 (hu)
BR (1) BRPI9509411B8 (hu)
CA (1) CA2202879C (hu)
CZ (2) CZ290670B6 (hu)
DE (4) DE122005000033I2 (hu)
DK (1) DK1203761T3 (hu)
ES (2) ES2234768T3 (hu)
FR (1) FR05C0029I2 (hu)
HK (4) HK1002454A1 (hu)
HU (2) HU229474B1 (hu)
LU (1) LU91182I2 (hu)
NL (1) NL300199I2 (hu)
NZ (1) NZ297157A (hu)
PL (1) PL183499B1 (hu)
PT (1) PT1203761E (hu)
RU (1) RU2195446C2 (hu)
TW (2) TW200402407A (hu)
UA (1) UA55374C2 (hu)
WO (1) WO1996012697A2 (hu)

Families Citing this family (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4426245A1 (de) 1994-07-23 1996-02-22 Gruenenthal Gmbh 1-Phenyl-3-dimethylamino-propanverbindungen mit pharmakologischer Wirkung
PT1203761E (pt) * 1994-10-21 2005-04-29 Nps Pharma Inc Compostos activos do receptor de calcio
WO1997005252A2 (en) * 1995-07-26 1997-02-13 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chimeric receptors and methods for identifying compounds active at metabotropic glutamate receptors and the use of such compounds in the treatment of neurological disorders and diseases
EP1258471B1 (en) * 1996-05-01 2007-01-24 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
EP1770083B1 (en) * 1996-05-01 2009-04-29 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
AU731146C (en) * 1996-05-01 2005-02-03 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
US6362231B1 (en) * 1996-07-08 2002-03-26 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor active compounds
US6210964B1 (en) * 1997-08-18 2001-04-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Avian extracellular calcium-sensing receptor
US6172091B1 (en) 1998-10-14 2001-01-09 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. 1,2-Disubstituted cyclopropanes
US20040214889A1 (en) * 1999-07-31 2004-10-28 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
DE60036758T2 (de) * 1999-08-04 2008-07-24 Sumitomo Chemical Co., Ltd. Verfahren zur Herstellung von optisch aktiver 3,3,3-Trifluor-2-hydroxy-2-methylpropionsäure und deren Salze
JP4595178B2 (ja) * 1999-08-04 2010-12-08 住友化学株式会社 アミン化合物、中間体、製造法および光学分割剤
US6797842B2 (en) * 2000-05-11 2004-09-28 Central Glass Company, Limited Process for producing optically active 1-(fluoro- or trifluoromethyl-substituted phenyl) ethylamine and process for purifying same
FR2809396B1 (fr) * 2000-05-24 2005-10-14 Centre Nat Rech Scient Nouvelles molecules possedant une activite calcimimetique et leur mode de preparation
AR038658A1 (es) * 2001-06-15 2005-01-26 Novartis Ag Derivados de 4-aril-2(1h) quinazolinona y 4-aril-quinazolina 2-sustituidas, un proceso para su preparacion, composiciones farmaceuticas y el uso de dichos derivados para la preparacion de un medicamento
US6908935B2 (en) 2002-05-23 2005-06-21 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US7176322B2 (en) * 2002-05-23 2007-02-13 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6849761B2 (en) 2002-09-05 2005-02-01 Wyeth Substituted naphthoic acid derivatives useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
GB0230015D0 (en) * 2002-12-23 2003-01-29 Novartis Ag Organic compounds
US7105537B2 (en) * 2003-01-28 2006-09-12 Bristol-Myers Squibb Company 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators
US7205322B2 (en) * 2003-02-12 2007-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
US7265145B2 (en) * 2003-05-28 2007-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method
FR2855754B1 (fr) * 2003-06-05 2005-07-08 Oreal Compsition, notamment cosmetique, comprenant une amine carbonylee
PT1663182E (pt) * 2003-09-12 2013-03-14 Amgen Inc Formulação de dissolução rápida de cinacalcet hcl
US20050186658A1 (en) * 2003-10-17 2005-08-25 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chimeric metabotropic glutamate receptors and uses thereof
EP1757582B1 (en) 2004-05-28 2015-12-30 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Arylalkylamines and process for production thereof
US20050288377A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-29 Cantor Thomas L Use of calcimimetic as an adynamic bone disease related treatment
CN1989097A (zh) * 2004-07-22 2007-06-27 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于制备非对映异构体富集的化合物的方法
US7361789B1 (en) 2004-07-28 2008-04-22 Amgen Inc. Dihydronaphthalene compounds, compositions, uses thereof, and methods for synthesis
AU2006227429A1 (en) * 2005-03-17 2006-09-28 Amgen Inc. Methods of decreasing calcification
FR2885129B1 (fr) 2005-04-29 2007-06-15 Proskelia Sas Nouveaux derives de l'ureee substituee parun thiazole ou benzothiazole, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et utilisation.
WO2006125026A2 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for preparing cinacalcet hydrochloride
CA2605736A1 (en) * 2005-05-23 2006-11-30 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Purification of cinacalcet
CA2605764A1 (en) * 2005-05-23 2006-11-30 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Amorphous cinacalcet hydrochloride and preparation thereof
AU2006285080B2 (en) * 2005-09-02 2012-05-03 Amgen Inc. Methods of modulating intestinal fluid balance
US7595161B2 (en) 2005-11-10 2009-09-29 Hansjoerg Martin Rothe Efficacy of calcimimetic agents
JP2009516655A (ja) * 2005-11-22 2009-04-23 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド シナカルセット塩酸塩の結晶形フォーム（Ｆｏｒｍ）、およびそれらの調製方法
US7875609B2 (en) * 2005-11-25 2011-01-25 Galapagos Sasu Urea derivatives, processes for their preparation, their use as medicaments, and pharmaceutical compositions containing them
US20070129444A1 (en) * 2005-12-06 2007-06-07 Mallinckrodt Inc. Novel weight reduction composition and uses thereof
ES2593047T3 (es) 2006-02-03 2016-12-05 Opko Renal, Llc Tratamiento de la insuficiencia y deficiencia de vitamina D con 25-hidroxivitamina D2 y 25-hidroxivitamina D3
CA2645494C (en) * 2006-03-23 2016-01-12 Amgen Inc. Methods and compositions for making and using polymorphs of cinacalcet
CA2648939C (en) 2006-04-20 2014-07-08 Amgen Inc. Stable emulsion formulations
DE602007003067D1 (de) * 2006-04-27 2009-12-17 Teva Pharma Verfahren zur herstellung einer cinacalcetbase
EP1928817A1 (en) * 2006-04-27 2008-06-11 Teva Pharmaceutical Industries Ltd Process for the preparation of cinacalcet base
ES2670029T3 (es) 2006-06-21 2018-05-29 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Terapia usando agente de repleción de la vitamina D y agente de reemplazo de la hormona de la vitamina D
WO2008000423A1 (en) * 2006-06-27 2008-01-03 Sandoz Ag Crystalline form of cinacalcet
EP2069285A1 (en) * 2006-06-27 2009-06-17 Sandoz AG Amorphous form of cinacalcet
EP1914224A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sandoz AG Amorphous organic compound
GB0613674D0 (en) * 2006-07-10 2006-08-16 Proskelia Sas Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
US20080181959A1 (en) * 2006-09-01 2008-07-31 Ilan Zalit Solid composites of a calcium receptor-active compound
KR101129868B1 (ko) * 2006-10-04 2012-04-12 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 칼슘 수용체 길항제로서의 피리도［4,3-ｄ］피리미딘-4(3Ｈ)-온 유도체
CA2672956C (en) * 2006-10-26 2015-02-10 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
WO2008058236A2 (en) * 2006-11-08 2008-05-15 Dr. Reddy's Labortories, Ltd. Methods for preparing cinacalcet hydrochloride
WO2008063645A1 (en) * 2006-11-20 2008-05-29 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Process for preparing cinacalcet
EP2114390A2 (en) * 2006-12-15 2009-11-11 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Methods for treating podocyte-related disorders
AU2008233088B2 (en) 2007-03-30 2013-09-26 Amgen Inc. Calcimimetic compounds for use in the treatment of bowel disorders
WO2008122010A1 (en) * 2007-04-02 2008-10-09 Concert Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical calcimimetics
DK2148684T3 (da) 2007-04-25 2013-04-22 Cytochroma Inc Fremgangsmåde til behandling af vitamin D-insufficiens og -deficiens
EP2762132A1 (en) 2007-04-25 2014-08-06 Cytochroma Inc. Controlled Release 25-Hydroxyvitamin D
JP5321452B2 (ja) * 2007-05-08 2013-10-23 味の素株式会社 下痢の予防又は治療剤
WO2009002427A2 (en) 2007-06-21 2008-12-31 Amgen Inc. Methods of synthesizing cinacalcet and salts thereof
ITMI20071261A1 (it) 2007-06-22 2008-12-23 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet
AU2008275595B2 (en) 2007-07-10 2013-11-14 Amgen Inc. Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
WO2009025792A2 (en) * 2007-08-16 2009-02-26 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Crystalline forms cinacalcet fumarate and cinacalcet succinate and processes for preparation thereof
WO2009065406A2 (en) * 2007-11-23 2009-05-28 Leo Pharma A/S Novel cyclic hydrocarbon compounds for the treatment of diseases
CA2716780A1 (en) 2008-02-25 2009-09-03 National University Corporation Hokkaido University Prophylactic or therapeutic agent for diabetes or obesity
JPWO2009107579A1 (ja) * 2008-02-25 2011-06-30 味の素株式会社 コク味付与剤
WO2009119554A1 (ja) 2008-03-24 2009-10-01 味の素株式会社 消化管の重炭酸分泌促進剤
AU2009228069B9 (en) * 2008-03-28 2014-07-10 Amgen Inc. Calcimimetic compound for use in the treatment of epithelial injury
EP2286836A4 (en) 2008-04-17 2011-10-12 Ajinomoto Kk IMMUNOSTIMULATING AGENT
EP2321256B1 (en) * 2008-06-18 2014-11-12 ERREGIERRE S.p.A. Process for the synthesis of cinacalcet hydrochloride
WO2010015935A2 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Actavis Group Ptc Ehf Unsaturated cinacalcet salts and processes for preparing cinacalcet hydrochloride
US9133140B2 (en) 2008-08-22 2015-09-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Cycloalkylamne derivatives
WO2010043721A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Oryzon Genomics, S.A. Oxidase inhibitors and their use
EP2376424A1 (en) 2008-12-08 2011-10-19 Actavis Group PTC EHF Highly pure cinacalcet or a pharmaceutically acceptable salt thereof
EP2389362B1 (en) 2009-01-21 2019-12-11 Oryzon Genomics, S.A. Phenylcyclopropylamine derivatives and their medical use
WO2010086129A1 (en) 2009-01-27 2010-08-05 Rathiopharm Gmbh Inclusion complex comprising cinacalcet and cyclodextrin
CA2748595C (en) 2009-02-19 2017-03-14 Zach System S.P.A. Process for preparing cinacalcet hydrochloride
JP2012519677A (ja) 2009-03-05 2012-08-30 シプラ・リミテッド シナカルセト及びその塩の製造方法、並びに該方法に使用する中間体
WO2010103531A2 (en) 2009-03-09 2010-09-16 Megafine Pharma (P) Ltd. A new method for the preparation of cinacalcet and new intermediates thereof
WO2010103429A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Pfizer Inc. 1,1-(Dimethyl-Ethylamino)-2-Hydroxy-Propoxy]-Ethyl}-3-Methyl-Biphenyl-4- Carboxylic Acid Derivatives As Calcium Receptor Antagonists
WO2010104882A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Amgen Inc. Methods of modulating sperm motility
AU2010234518A1 (en) * 2009-04-09 2012-02-02 Cognition Therapeutics, Inc. Inhibitors of cognitive decline
WO2010128388A2 (en) 2009-05-08 2010-11-11 Aurobindo Pharma Limited An improved process for the preparation of intermediate compounds useful for the preparation of cinacalcet
US8765676B2 (en) 2009-05-27 2014-07-01 Leo Pharma A/S Calcium sensing receptor modulating compounds and pharmaceutical use thereof
EP2435400A2 (en) 2009-05-27 2012-04-04 Leo Pharma A/S Novel calcium sensing receptor modulating compounds and pharmaceutical use thereof
WO2010150837A1 (ja) * 2009-06-25 2010-12-29 第一三共株式会社 インドリン誘導体
ES2547730T3 (es) 2009-07-31 2015-10-08 Cognition Therapeutics, Inc. Inhibidores del deterioro cognitivo
CA2769659C (en) 2009-09-10 2017-10-24 Zach System S.P.A. Process for preparing cinacalcet
US8759586B2 (en) 2009-09-16 2014-06-24 Ranbaxy Laboratories Limited Processes for the preparation of cinacalcet
CN102639496B (zh) 2009-09-25 2014-10-29 奥瑞泽恩基因组学股份有限公司 赖氨酸特异性脱甲基酶-1抑制剂及其应用
US8722732B2 (en) 2009-09-29 2014-05-13 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
AU2010315805B2 (en) 2009-09-29 2015-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
EP2486002B1 (en) 2009-10-09 2019-03-27 Oryzon Genomics, S.A. Substituted heteroaryl- and aryl- cyclopropylamine acetamides and their use
EP2314286A1 (de) 2009-10-21 2011-04-27 Ratiopharm GmbH Schmelzgranuliertes Cinacalcet
WO2011050499A1 (zh) * 2009-11-02 2011-05-05 上海威智医药科技有限公司 盐酸西那卡塞的合成方法
IT1396623B1 (it) * 2009-11-26 2012-12-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet e suoi intermedi
WO2011106573A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with hepadnaviridae
US9616058B2 (en) 2010-02-24 2017-04-11 Oryzon Genomics, S.A. Potent selective LSD1 inhibitors and dual LSD1/MAO-B inhibitors for antiviral use
PT2552484T (pt) 2010-03-29 2020-04-03 Opko Ireland Global Holdings Ltd Métodos e composições para redução dos níveis de parafróides
BR112012026694A2 (pt) 2010-04-19 2016-07-12 Oryzon Genomics Sa inibidores da desmetilase específica para lisina 1 e seu uso
WO2011146583A2 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Elan Pharma International Limited Nanoparticulate cinacalcet formulations
JP5968881B2 (ja) 2010-06-30 2016-08-10 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ カルシウム模倣化合物の新規多形
CN102958907A (zh) 2010-06-30 2013-03-06 利奥制药有限公司 钙敏感受体激动化合物的新多晶型
US8921606B2 (en) * 2010-07-16 2014-12-30 Hetero Research Foundation Process for cinacalcet hydrochloride
WO2012013728A1 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Oryzon Genomics S.A. Arylcyclopropylamine based demethylase inhibitors of lsd1 and their medical use
WO2012013727A1 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine derivatives useful as lsd1 inhibitors
US9061966B2 (en) 2010-10-08 2015-06-23 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine inhibitors of oxidases
CN101993379B (zh) * 2010-10-22 2013-06-19 能特科技股份有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
JP2014500882A (ja) 2010-11-26 2014-01-16 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ カルシウム感知受容体活性化合物
RU2013128981A (ru) 2010-11-26 2015-01-10 Лео Фарма А/С Соединения, активные в отношении чувствительных к кальцию рецепторов
WO2012069421A1 (en) 2010-11-26 2012-05-31 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
WO2012069419A1 (en) 2010-11-26 2012-05-31 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
WO2012072713A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with flaviviridae
US8846941B2 (en) 2010-12-13 2014-09-30 Quiapeg Ab Functionalized polymers
WO2012107498A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative disorders
RU2681211C2 (ru) 2011-10-20 2019-03-05 Оризон Дженомикс С.А. (гетеро)арилциклопропиламины в качестве ингибиторов lsd1
SG11201401066PA (en) 2011-10-20 2014-10-30 Oryzon Genomics Sa (hetero)aryl cyclopropylamine compounds as lsd1 inhibitors
CZ2011770A3 (cs) 2011-11-25 2013-01-16 Zentiva, K.S. Zpusob výroby Cinacalcetu
CN103450027B (zh) 2012-05-29 2015-07-29 上海京新生物医药有限公司 盐酸西那卡塞的制备方法
US10010621B2 (en) 2012-06-12 2018-07-03 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Conjugates of biologically active molecules to functionalized polymers
US20150344407A1 (en) * 2012-08-21 2015-12-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Fendiline derivatives and methods of use thereof
IN2015MN00421A (hu) * 2012-08-27 2015-09-04 Lupin Ltd
FR2995307A1 (fr) 2012-09-07 2014-03-14 Prod Chim Auxiliaires Et De Synthese Procede de preparation du cinacalcet et de ses sels pharmaceutiquement acceptables
DK2730279T3 (en) 2012-11-09 2015-10-26 K H S Pharma Holding Gmbh CINACALCETFORMULERINGER immediate release
US9895325B2 (en) 2012-12-21 2018-02-20 Synthon B.V. Tablet composition comprising cinacalcet hydrochloride
KR101847947B1 (ko) 2013-03-15 2018-05-28 옵코 아이피 홀딩스 Ⅱ 인코포레이티드 안정화되고 변형된 비타민 ｄ 방출 제형
EP3013324A1 (en) 2013-06-26 2016-05-04 Jubilant Generics Limited Disintegrant free composition of cinacalcet
DK3498692T3 (da) 2014-01-31 2022-05-16 Cognition Therapeutics Inc Isoindolin-sammensætninger og fremgangsmåder til behandling af neurodegenerativ sygdom og makulær degeneration
WO2015183839A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Cardioxyl Pharmaceuticals, Inc. Pyrazolone derivatives as nitroxyl donors
CN104045568A (zh) * 2014-06-18 2014-09-17 中山奕安泰医药科技有限公司 一种合成(r)-1–(萘-1-基)乙胺的新工艺
SG10201911274TA (en) 2014-08-07 2020-02-27 Opko Ireland Global Holdings Ltd Adjunctive therapy with 25-hydroxyvitamin d
CN104478736B (zh) * 2014-12-16 2016-07-13 成都启泰医药技术有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
US20180155270A1 (en) 2015-05-29 2018-06-07 Lupin Limited Process for preparation of cinacalcet intermediate and cinacalcet hydrochloride
TWI747893B (zh) 2016-03-28 2021-12-01 愛爾蘭商歐科愛爾蘭全球控股股份有限公司 維生素ｄ治療之方法
WO2018163131A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Releasable conjugates
BR112019023851A2 (pt) 2017-05-15 2020-08-18 Cognition Therapeutics, Inc. compostos, suas composições farmacêuticas e métodos para tratamento de doenças neurodegenerativas
EP3849660A1 (en) 2018-09-12 2021-07-21 QuiaPEG Pharmaceuticals AB Releasable glp-1 conjugates
CN111196759B (zh) * 2018-11-16 2023-03-24 上海博志研新药物技术有限公司 盐酸西那卡塞及其中间体的制备方法
US20220313581A1 (en) * 2019-08-28 2022-10-06 Conopco, Inc. , d/b/a UNILEVER Novel compounds for skin lightening
EP4125840A1 (en) 2020-03-27 2023-02-08 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of synucleinopathies
RU2739376C1 (ru) * 2020-07-24 2020-12-23 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) Способ получения фендилина

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2276618A (en) 1942-03-17 N-phenylaliphatic bihxdroxithenyl-
US2930731A (en) 1952-04-08 1960-03-29 Upjohn Co Bis[beta-(ortho-hydrocarbonoxyphenyl)iso-propyl]amines
BE570596A (hu) 1957-08-26
BE621300A (hu) 1961-08-14
US3262977A (en) 1962-03-10 1966-07-26 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet N-aralkyl-1, 1-diphenyl-propylamine derivatives
NL293886A (hu) 1962-06-19 1965-04-12 Merck Ag E
US3318952A (en) * 1964-01-22 1967-05-09 Sandoz Ag Dibenzylsulfamides
US3459767A (en) 1965-08-10 1969-08-05 Pfizer & Co C Aminomethylindoles
GB1109924A (en) 1965-11-29 1968-04-18 Roche Products Ltd Novel substituted diphenylalkyl amines and a process for the manufacture thereof
DE1618005A1 (de) 1966-09-22 1971-09-09 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur Herstellung von neuen Amino-dihalogen-phenyl-aethylaminen
CH480791A (de) 1967-01-17 1969-11-15 Ciba Geigy Schädlingsbekämpfungsmittel
GB1263987A (en) 1969-05-30 1972-02-16 Allen & Hanburys Ltd Phenethylamine derivatives
US4129598A (en) * 1972-05-31 1978-12-12 Synthelabo Phenylethylamine derivatives
GB1448437A (en) 1973-02-24 1976-09-08 Beecham Group Ltd Diphenylpropylamines
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US4000197A (en) * 1973-07-23 1976-12-28 The University Of Iowa Research Foundation Asymmetric synthesis of phenylisopropylamines
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (hu) 1974-03-08 1982-06-04
US4014937A (en) 1974-08-26 1977-03-29 Pfizer Inc. 3,4-And 3,5-dialkoxyphenethylamines
HU169507B (hu) * 1974-09-25 1976-12-28
US3987201A (en) 1974-12-24 1976-10-19 Eli Lilly And Company Method for treating arrhythmia
US4105602A (en) 1975-02-10 1978-08-08 Armour Pharmaceutical Company Synthesis of peptides with parathyroid hormone activity
JPS5390272A (en) 1977-01-13 1978-08-08 Sendai Fukusokan Kagaku Kenkiy Method of producing optically active salsolizine
US4608391A (en) 1977-07-05 1986-08-26 Cornell Research Foundation Inc. Catecholamine derivatives, a process for their preparation and pharmaceutical compositions thereof
US4289787A (en) 1977-12-19 1981-09-15 Eli Lilly And Company Quaternary ammonium antiarrhythmic drugs
DD144050A5 (de) 1978-06-05 1980-09-24 Ciba Geigy Ag Verfahren zur herstellung von n-alkylierten aminoalkoholen
DE2825961A1 (de) 1978-06-14 1980-01-03 Basf Ag Fungizide amine
US4391826A (en) 1978-07-03 1983-07-05 Eli Lilly And Company Phenethanolamines, compositions containing the same, and method for effecting weight control
IL57672A (en) 1978-07-03 1983-03-31 Lilly Co Eli Phenethanolamines,their preparation and pharmaceutical compositions containing the same
ZA794872B (en) 1978-09-20 1980-11-26 Schering Corp A phenylalkylaminoethylsalicylamide,its preparation and pharmaceutical compositions containing it
DE2841184C2 (de) * 1978-09-22 1986-09-25 Hochtemperatur-Reaktorbau GmbH, 4600 Dortmund Vorrichtung zur Durchmischung der Heißgassträhnen bei einem gasgekühlten Hochtemperaturreaktor
FR2436773A1 (fr) 1978-09-22 1980-04-18 Roussel Uclaf Nouveaux derives du 3-(aminoethyl) phenol et leurs sels, procede de preparation et application a titre de medicaments
US4360511A (en) 1978-11-29 1982-11-23 Medi-Physics, Inc. Amines useful as brain imaging agents
DD150456A5 (de) 1979-03-01 1981-09-02 Ciba Geigy Ag Verfahren zur herstellung von derivaten des 3-amino-1,2-propandiols
EP0023385B1 (en) 1979-06-16 1982-12-15 Beecham Group Plc Ethanamine derivatives, their preparation and use in pharmaceutical compositions
JPS603387B2 (ja) 1980-07-10 1985-01-28 住友化学工業株式会社 新規光学活性イミダゾリジン−２−オン誘導体およびその製法
HU183430B (en) 1981-05-12 1984-05-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing cyclodextrine inclusion complexes of n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine or n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine-hydrochloride
US4591605A (en) 1981-11-10 1986-05-27 Research Foundation Of State University Of New York Method and ingestible formulation for inhibiting the secretion of stomach acid
US4658060A (en) 1982-04-26 1987-04-14 Schering Corporation Preparation of (-)-5-(beta)-1-hydroxy-2-((beta)-1-methyl-3-phenylpropyl)aminoethyl) salicylamide
DE3225879A1 (de) 1982-07-10 1984-01-12 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Trans-3-(4'-tert.-butylcyclohexyl-1')-2-methyl-1-dialkyl-aminopropane, ihre herstellung und verwendung als arzneimittel
CA1258454A (en) 1982-08-10 1989-08-15 Leo Alig Phenethanolamines
US4647446A (en) 1982-08-18 1987-03-03 The Regents Of The University Of California Rapid brain scanning radiopharmaceutical
JPS5950358A (ja) 1982-09-14 1984-03-23 Sumitomo Chem Co Ltd 光学活性なカルボン酸をグラフトしたクロマトグラフ充填剤およびそれを用いる鏡像体混合物の分離法
US4677101A (en) 1983-09-26 1987-06-30 Merck & Co., Inc. Substituted dihydroazepines useful as calcium channel blockers
US4661635A (en) 1983-11-21 1987-04-28 Mcneilab, Inc. Aralykyl (arylethynyl)aralkyl amines and their use as vasodilators and antihypertensives
DE3405333A1 (de) * 1984-02-15 1985-08-22 Sandoz-Patent-GmbH, 7850 Lörrach Neue allylamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5334628A (en) 1984-06-09 1994-08-02 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Amine derivatives, processes for preparing the same and fungicides containing the same
US4587253A (en) 1984-07-30 1986-05-06 Merck & Co., Inc. Bridged pyridine compounds useful as calcium channel blockers and analgesics
US4609494A (en) 1985-02-21 1986-09-02 Merck & Co., Inc. 5-acetyl-3,4,5,6-tetrahydro-4-oxo-2,6-methano-2H-1,3,5-benzothiazocine(benzodiazocine)-11-carboxylates useful as calcium channel blockers
US4839369A (en) 1985-04-16 1989-06-13 Rorer Pharmaceutical Corporation Aryl and heteroaryl ethers as agents for the treatment of hypersensitive ailments
GB8522186D0 (en) 1985-09-06 1985-10-09 Erba Farmitalia Cycloalkyl-substituted 4-aminophenyl derivatives
DE3541181A1 (de) 1985-11-21 1987-05-27 Basf Ag Propylamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als fungizide
US4675321A (en) 1986-02-07 1987-06-23 Merck & Co., Inc. Substituted pyrimidines useful as calcium channel blockers
US5034514A (en) 1986-03-17 1991-07-23 Cetus Corporation Novel cross-linking agents
US5030576A (en) 1986-04-30 1991-07-09 Genentech, Inc. Receptors for efficient determination of ligands and their antagonists or agonists
US4808718A (en) 1986-05-06 1989-02-28 Merck & Co., Inc. Fused polycyclic and bridged compounds useful as calcium channel blockers
HU200591B (en) 1986-07-11 1990-07-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new diphenyl propylamine derivatives and pharmaceutical compositions comprising such compounds
IL83163A (en) 1986-07-18 1991-06-10 Erba Carlo Spa Cycloalkyl-substituted 4-pyridyl derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
HU207280B (en) 1986-09-25 1993-03-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new phenyl-alkyl-amines and pharmaceutical compositions containing them
US4925664A (en) 1986-10-20 1990-05-15 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of calcium channels and amino acid receptor function
US5064657A (en) 1986-10-20 1991-11-12 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of amino acid receptor function
EP0270376B1 (en) 1986-12-04 1992-09-30 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Calcitonin gene-related peptide derivatives
GB8720115D0 (en) 1987-08-26 1987-09-30 Cooper G J S Treatment of diabetes mellitus
GB8709871D0 (en) 1987-04-27 1987-06-03 Turner R C Peptides
US4916145A (en) 1987-07-10 1990-04-10 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted n-[(pyridyl)alkyl]aryl-carboxamide
DE68924372T2 (de) 1988-01-11 1996-05-09 Amylin Pharmaceuticals Inc Behandlung von diabetes mellitus typ 2.
US5001251A (en) 1988-01-15 1991-03-19 E. R. Squibb & Sons, Inc. Optical resolution of DL-3-acylthio-2-methylpropanoic acid
EP0424397B1 (en) 1988-04-04 1996-06-19 The Salk Institute Biotechnology Industrial Associates, Inc. Calcium channel compositions and methods
US5082837A (en) 1988-06-28 1992-01-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Lactamimides as calcium antagonists
US4925873A (en) 1988-09-01 1990-05-15 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method of treating skin injuries using thromboxane A2 receptor antagonists
JPH02200658A (ja) 1989-01-28 1990-08-08 Kumiai Chem Ind Co Ltd Ｎ―（置換）ベンジルカルボン酸アミド誘導体及び除草剤
RU2005717C1 (ru) * 1989-02-17 1994-01-15 Такеда кемикал-индастриз Лтд Способ получения производных аралкиламинов или их кислотно-аддитивных солей
US5011834A (en) 1989-04-14 1991-04-30 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon PCP receptor ligands and the use thereof
DD298412A5 (de) 1989-04-28 1992-02-20 ������@���Kk�� Verfahren zur herstellung von polypeptiden, die geeignet sind als antagonisten exzitatorischer aminosaeure-neurotransmitter und/oder blocker der calciumkanaele
EP0597830A1 (en) 1989-07-03 1994-05-25 New York University Nyu Medical Center Use of polyamines as ionic-channel regulating agents
GB8915712D0 (en) 1989-07-08 1989-08-31 Macintyre Iain Medical treatment
US5021599A (en) 1989-08-31 1991-06-04 Serpentix Conveyor Corporation Redox-responsive anion receptors
US5053337A (en) 1989-10-30 1991-10-01 Neurogenetic Corporation DNA encoding an α2B -adrenergic receptor
EP0507863A4 (en) 1989-12-28 1993-07-07 Virginia Commonwealth University Sigma receptor ligands and the use thereof
JP2818958B2 (ja) 1990-02-23 1998-10-30 塩野義製薬株式会社 ４―（４―アルコキシフェニル）―２―ブチルアミン誘導体およびその製造法
US5096908A (en) 1990-05-04 1992-03-17 Eli Lilly And Company Method of inhibiting gastric acid secretion
WO1992007829A1 (en) 1990-11-02 1992-05-14 The Upjohn Company Indole-3-methanamines useful as anti-diabetic, anti-obesity and anti-atherosclerotic agents
EP0940139B1 (en) 1991-02-08 2005-02-02 Scion Pharmaceuticals, Inc. Substituted guanidines and derivatives thereof as modulators of neurotransmitter release and novel methodology for identifying neurotransmitter release blockers
US5312928A (en) 1991-02-11 1994-05-17 Cambridge Neuroscience Calcium channel antagonists and methodology for their identification
DE69206306T2 (de) * 1991-04-08 1996-06-13 Sumitomo Chemical Co Optisch aktive Sekundär-Aminverbindung, Verfahren zur Herstellung einer optisch aktiven Sekundär-Aminverbindung und Verfahren zur Herstellung optisch aktiver Carbonsäure durch die Verwendung dieser Verbindung.
US5688938A (en) 1991-08-23 1997-11-18 The Brigham & Women's Hospital, Inc. Calcium receptor-active molecules
ES2218531T3 (es) * 1991-08-23 2004-11-16 Nps Pharmaceuticals, Inc. Arilalquilaminas activas sobre los receptores del calcio.
MX9204881A (es) * 1991-08-23 1993-04-01 Nps Pharma Inc Composicion farmaceutica que comprende moleculas activas, receptoras de calcio.
US5763569A (en) 1991-08-23 1998-06-09 The Brigham And Women's Hospital, Inc Calcium receptor-active molecules
EP0613458B1 (en) 1991-11-12 1998-01-07 Pfizer Inc. Acyclic ethylenediamine derivatives as substance p receptor antagonists
EP0620809B1 (en) 1991-12-30 1997-03-05 Janssen Pharmaceutica N.V. $g(a)-SUBSTITUTED BENZENEMETHANAMINE DERIVATIVES
WO1993015044A1 (en) 1992-01-29 1993-08-05 Smithkline Beecham Corporation N-benzyloxamic acid, oxamate, and oxamide derivatives and their use as tnf and pde iv inhibitors
JP3175339B2 (ja) * 1992-10-07 2001-06-11 住友化学工業株式会社 光学活性アミン化合物、その製法、その中間体及びその用途
KR100296899B1 (ko) * 1993-02-23 2001-10-24 쉘비 칼베르그 모르스 칼슘수용체활성분자
JP2964639B2 (ja) 1993-05-19 1999-10-18 東レ株式会社 混繊複合仮撚糸およびその製造方法ならびにその糸を用いてなる編織物
US5631401A (en) * 1994-02-09 1997-05-20 Abbott Laboratories Inhibitors of protein farnesyltransferase and squalene synthase
PT1203761E (pt) * 1994-10-21 2005-04-29 Nps Pharma Inc Compostos activos do receptor de calcio
US7043457B1 (en) 2000-06-28 2006-05-09 Probuild, Inc. System and method for managing and evaluating network commodities purchasing
US20060283332A1 (en) 2001-12-11 2006-12-21 Garman Michael H Hot beverage maker
US8526300B2 (en) 2008-03-31 2013-09-03 Ericsson Ab Method and apparatus for providing resiliency in multicast networks
KR101411428B1 (ko) 2012-07-12 2014-06-24 한국과학기술원 집광식 휴대용 형광 검출 시스템

Also Published As

Publication number Publication date
JPH10513436A (ja) 1998-12-22
NZ297157A (en) 1999-08-30
WO1996012697A9 (en) 2000-08-24
JP2882882B2 (ja) 1999-04-12
ATE359259T1 (de) 2007-05-15
ES2285707T3 (es) 2007-11-16
HK1046900A1 (en) 2003-01-30
FR05C0029I1 (hu) 2005-08-12
JP4353985B2 (ja) 2009-10-28
NL300199I1 (nl) 2005-08-01
WO1996012697A3 (en) 1996-06-13
HK1046900B (zh) 2005-07-29
CN1534016A (zh) 2004-10-06
EP0787122B1 (en) 2007-04-11
CN1312116C (zh) 2007-04-25
LU91182I9 (hu) 2019-01-07
UA55374C2 (uk) 2003-04-15
EP1275635A1 (en) 2003-01-15
KR100403094B1 (ko) 2003-11-13
LU91182I2 (fr) 2006-07-11
PT1203761E (pt) 2005-04-29
CZ118297A3 (en) 1997-09-17
CN1147459C (zh) 2004-04-28
HU229474B1 (en) 2014-01-28
DE69535461D1 (de) 2007-05-24
WO1996012697A2 (en) 1996-05-02
HK1002454A1 (en) 1998-08-28
CA2202879C (en) 2005-08-30
NL300199I2 (nl) 2005-10-03
FR05C0029I2 (fr) 2006-12-29
HK1052685A1 (zh) 2003-09-26
JP2007204482A (ja) 2007-08-16
EP1203761B1 (en) 2005-01-19
HU0700718D0 (en) 2008-12-29
EP1553078A1 (en) 2005-07-13
HUT77980A (hu) 1999-02-01
ATE287390T1 (de) 2005-02-15
DE122005000033I2 (de) 2006-11-23
ES2234768T3 (es) 2005-07-01
CZ292709B6 (cs) 2003-11-12
EP0787122A2 (en) 1997-08-06
RU2195446C2 (ru) 2002-12-27
BRPI9509411A (pt) 1997-12-30
DE69533948T2 (de) 2005-12-15
PL183499B1 (pl) 2002-06-28
JPH11130737A (ja) 1999-05-18
DE122005000033I1 (de) 2005-09-29
AU4195796A (en) 1996-05-15
PL319812A1 (en) 1997-09-01
KR100293621B1 (ko) 2001-11-26
CN1220658A (zh) 1999-06-23
DK1203761T3 (da) 2005-04-11
EP1203761A3 (en) 2002-05-15
BRPI9509411B1 (pt) 2016-12-06
EP1203761A2 (en) 2002-05-08
US6211244B1 (en) 2001-04-03
HK1020041A1 (en) 2000-03-10
BRPI9509411B8 (pt) 2021-07-06
EP0787122B9 (en) 2007-10-17
TW200402407A (en) 2004-02-16
CA2202879A1 (en) 1996-05-02
CZ290670B6 (cs) 2002-09-11
DE69533948D1 (de) 2005-02-24
DE69535461T2 (de) 2008-09-25
JP4002338B2 (ja) 2007-10-31
AU709303B2 (en) 1999-08-26
TW568896B (en) 2004-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228150B1 (en) Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments
DE69834824T2 (de) Nukleinsäure, welche einen von lektin abstammenden faktor zur präservierung von progenitorzellen kodiert
TW200823232A (en) Metastin derivatives and use thereof
HU227870B1 (en) Neurotrophic factors
CN102639496A (zh) 赖氨酸特异性脱甲基酶-1抑制剂及其应用
PL154336B1 (en) Method for manufacturing peptides
Dicky et al. Molecular cloning and expression studies of a prolactin receptor in goldfish (Carassius auratus)
US10080775B2 (en) Peptide having skin whitening activity, and use thereof
CN107106517A (zh) 用于调节癌干细胞的组合物及其用途
Drüeke et al. The dilemma of parathyroidectomy in chronic renal failure
SI9200081A (en) Galanin antagonist
JP2003521900A (ja) 前駆細胞保存因子、並びに関連する方法および産物
JP2002520050A (ja) ７１個のヒト分泌タンパク質
JP2003512304A (ja) 医薬組成物および分泌フリズル化関連タンパクを用いる方法
Kim et al. Saurolactam inhibits osteoclast differentiation and stimulates apoptosis of mature osteoclasts
Friedl et al. Atrial natriuretic hormones raise the level of cyclic GMP in neural cell lines
HU230373B1 (hu) Mitogén aktivitású Bv8-nukleinsavak és polipeptidek
CN109715190A (zh) 将赘生性细胞转化成非赘生性细胞的生长因子受体激动剂和黏附蛋白抑制剂的药物缔合物及其用途
CN109715191A (zh) 将赘生性细胞转化成非赘生性细胞的药物缔合物及其用途
CN102272152B (zh) 通过中电导钙激活钾通道调控细胞-细胞融合的组合物及方法
JP2002505871A (ja) ３１個のヒト分泌タンパク質
TW459046B (en) Expression systems utilizing autolyzing fusion proteins and a novel reducing polypeptide
KR102211959B1 (ko) Ｄｕｓｐ５를 유효성분으로 모두 포함하는 골대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
EP3196208B1 (en) Peptide having osteoclast differentiation and activation inhibition, and use of same
AU772932B2 (en) Novel guanosine triphosphate (gtp) binding protein-coupled receptor proteins

Legal Events

Date Code Title Description
AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: CINACALCET OR ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, PREFERABLY CINACALCET; REG. NO/DATE: EU/1/04/292/001-012 20041022

Spc suppl protection certif: S1300018

Filing date: 20130513

Expiry date: 20151023

HC9A Change of name, address

Owner name: NPS PHARMACEUTICALS, INC., US

Free format text: FORMER OWNER(S): NPS PHARMACEUTICALS, INC., US

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: CINACALCET OR ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, PREFERABLY CINACALCET HYDROCHLORIDE; REG. NO/DATE: EU/1/04/292/001-012 20041022

Spc suppl protection certif: S1300018

Filing date: 20130513

Expiry date: 20151023

Extension date: 20191022