JP2002505871A - ３１個のヒト分泌タンパク質 - Google Patents

３１個のヒト分泌タンパク質

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規ヒト分泌タンパク質およびそのようなタンパク質をコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸に関する。ヒト分泌タンパク質を産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法もまた提供される。本発明はさらに、これらの新規ヒト分泌タンパク質に関する障害を診断および処置するために有用な診断方法および治療方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチ
ドによってコードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの使用、ならびにそれらの産生に関する。
【０００２】 （発明の背景） 膜によって取り囲まれる単一コンパートメントとして存在する細菌とは異なり
、ヒト細胞および他の真核生物は、膜によって多くの機能的に異なるコンパート
メントに細分される。それぞれの膜で区切られたコンパートメント、すなわちオ
ルガネラは、そのオルガネラの機能に不可欠な異なるタンパク質を含む。細胞は
、特定の細胞オルガネラにタンパク質を標的化するために、タンパク質内部に位
置するアミノ酸モチーフである「選別シグナル」を使用する。
【０００３】 シグナル配列、シグナルペプチド、またはリーダー配列と呼ばれる選別シグナ
ルの１つの型は、小胞体（ＥＲ）と呼ばれるオルガネラに１つのクラスのタンパ
ク質を指向する。ＥＲは、膜で区切られたタンパク質を、全ての他の型のタンパ
ク質から分離する。一旦、ＥＲに局在すると、両方の群のタンパク質とも、ゴル
ジ装置と呼ばれる別のオルガネラにさらに指向され得る。ここで、ゴルジは、タ
ンパク質を、分泌小胞を含む小胞、細胞膜、リソソーム、および他のオルガネラ
に分布させる。
【０００４】 シグナル配列によってＥＲに標的化されたタンパク質は、分泌タンパク質とし
て細胞外間隙に放出され得る。例えば、分泌タンパク質を含む小胞は、細胞膜と
融合し得、そして細胞外間隙にその内容物を放出し得る（エキソサイトーシスと
呼ばれるプロセスである）。エキソサイトーシスは、構成的に、または誘発シグ
ナルの受け取りの後に生じ得る。後者の場合には、タンパク質は、エキソサイト
ーシスが誘発されるまで、分泌小胞（または分泌顆粒）に貯蔵される。同様に、
細胞膜上に存在するタンパク質はまた、タンパク質を膜に保持する「リンカー」
のタンパク質分解切断によって、細胞外間隙に分泌され得る。
【０００５】 近年大きく進歩したにもかかわらず、ヒトの分泌タンパク質をコードする遺伝
子は少数しか同定されていない。これらの分泌タンパク質としては、商業的価値
のあるヒトインスリン、インターフェロン、第ＶＩＩＩ因子、ヒト成長ホルモン
、組織プラスミノーゲンアクチベーター、およびエリスロポエチン（ｅｒｙｔｈ
ｒｏｐｏｅｉｔｉｎ）が挙げられる。したがって、ヒトの生理学における分泌タ
ンパク質の広範な役割を考慮すると、新規のヒトの分泌タンパク質およびそれら
をコードする遺伝子を同定および特徴付けるための必要性がある。この知見は、
分泌タンパク質またはそれらをコードする遺伝子を使用することによって、医学
的障害を検出、処置、および予防することを可能にする。
【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、新規ポリヌクレオチドおよびコードされたポリペプチドに関する。
さらに、本発明は、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベク
ター、宿主細胞、抗体、および組換え方法に関する。このポリペプチドに関連す
る障害を検出するための診断方法、およびこのような障害を処置するための治療
方法もまた提供される。本発明は、さらに、このポリペプチドの結合パートナー
を同定するためのスクリーニング方法に関する。
【０００７】 （詳細な説明） （定義） 以下の定義は、本明細書全体を通して使用される特定の用語の理解を容易にす
るために提供される。
【０００８】 本発明において、「単離された」とは、その本来の環境（例えば、それが天然
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、その
天然の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリ
ヌクレオチドは、ベクターまたは物質の組成物の一部であり得るか、あるいは細
胞中に含まれ得、そしてなお「単離されている」。なぜなら、そのベクター、物
質の組成物、または特定の細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないから
である。
【０００９】 本発明において、「分泌」タンパク質とは、ＥＲ、分泌小胞、または細胞外間
隙にシグナル配列の結果として指向され得るタンパク質、ならびにシグナル配列
を必ずしも含まないが細胞外間隙に放出されるタンパク質をいう。分泌タンパク
質が、細胞外間隙に放出される場合、この分泌タンパク質は、「成熟」タンパク
質を産生するために細胞外プロセシングを受け得る。細胞外間隙への放出は、エ
キソサイトーシスおよびタンパク質分解切断を含む多くの機構によって生じ得る
。
【００１０】 特定の実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、長さが３００ｋｂ、
２００ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、または７．５ｋｂ未
満である。さらなる実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、コード配
列の少なくとも１５ヌクレオチド連続するヌクレオチドを含むが、任意のイント
ロンの全てまたは一部を含まない。別の実施態様において、コード配列を含む核
酸は、ゲノム隣接遺伝子のコード配列（すなわち、ゲノムにおける遺伝子に対し
て５’または３’）を含まない。
【００１１】 本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘに含まれ
る核酸配列を有する分子、またはＡＴＣＣに寄託されたクローン内に含まれるｃ
ＤＮＡをいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および３’非翻訳配列、シグ
ナル配列を含むかもしくは含まないコード領域、分泌タンパク質コード領域を含
む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列、ならびにこの核酸配列のフラグメント
、エピトープ、ドメイン、および改変体を含み得る。さらに、本明細書で使用さ
れる場合、「ポリペプチド」とは、広く定義される場合、ポリヌクレオチドから
生じた翻訳されたアミノ酸配列を有する分子をいう。
【００１２】 本発明では、配列番号Ｘとして同定された全長配列は、しばしば、複数のクロ
ーンに含まれる配列を重複させることによって生成された（コンティグ分析）。
配列番号Ｘについての配列のすべてまたはほとんどを含む代表的クローンを、ア
メリカンタイプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託した。表１に示
すように、各クローンは、ｃＤＮＡクローンＩＤ（識別子）およびＡＴＣＣ受託
番号によって同定される。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂ
ｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０
９，ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承
認に関するブダペスト条約の条項に拠って行われた。
【００１３】 本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体、またはＡＴＣＣに寄
託されたクローン内のｃＤＮＡにハイブリダイズし得るポリヌクレオチドを含む
。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミ
ド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム）、５０
ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキス
トラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃
での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルタ
ーを洗浄することをいう。
【００１４】 より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で本発明のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた意図される。ハイブリダイゼー
ションのストリンジェンシーおよびシグナル検出の変化は、主として、ホルムア
ミド濃度（より低い百分率のホルムアミドが、低下したストリンジェンシーを生
じる）；塩条件、または温度の操作を通じて達成される。例えば、より低いスト
リンジェンシー条件は、６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．
２Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ
、３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶
液中、３７℃で一晩のインキュベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ Ｓ
ＤＳを用いた５０℃での洗浄を含む。さらに、さらにより低いストリンジェンシ
ーを達成するために、ストリンジェントなハイブリダイゼーション後に行われる
洗浄は、より高い塩濃度（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
【００１５】 上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラ
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の含有および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、お
よび市販の専売処方物が挙げられる。特異的ブロッキング試薬の含有は、適合性
の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要とし得る。
【００１６】 もちろん、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’末
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオ
チドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体を含む任意の核酸分子（例えば
、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）にハイブリダイズするので、「ポリヌ
クレオチド」の定義に包含されない。
【００１７】 本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキ
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、ハイブリッド分子（一本鎖、もしくはより代表的には二本鎖、または一
本鎖および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含む）から構成
され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡ
およびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはま
た、安定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された
塩基またはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては
、例えば、トリチル化された塩基、およびイノシンのような普通でない塩基が挙
げられる。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得；したがって、
「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含
む。
【００１８】 本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すな
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該技術分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで、改
変され得る。このような改変は、基本テキスト、およびより詳細な研究論文、な
らびに多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖
、およびアミノ末端またはカルボキシル末端、を含むポリペプチドのどこにでも
生じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまた
は種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多く
の型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分
枝状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない、環状であ
り得る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセ
スから生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセ
チル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム
部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質また
は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄ
ｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メ
チル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホ
ルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、
ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）
、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル
化、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加（例えば
、アルギニル化）、およびユビキチン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩ
ＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥ
Ｓ、第２版、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ
Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩ
ＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩ
ＮＳ、Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ、１−１２頁（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ １８２：６２６−６４６（１９９０）；Ｒａｔｔａｎら、Ａｎｎ ＮＹ Ａ
ｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８−６２（１９９２）を参照のこと）。
【００１９】 「配列番号Ｘ」とは、ポリヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ」とは、
ポリペプチド配列をいい、両方の配列とも、表１に特定された整数によって同定
される。
【００２０】 「生物学的活性を有するポリペプチド」とは、特定の生物学的アッセイで測定
した場合、用量依存性を伴なっても伴なわなくても、本発明のポリペプチド（成
熟形態を含む）の活性と類似であるが、必ずしも同一ではない活性を示すポリペ
プチドをいう。用量依存性が存在する場合、ポリペプチドの用量依存性と同一で
ある必要はないが、むしろ本発明のポリペプチドと比較した場合に、所定の活性
における用量依存性に実質的に類似する（すなわち、候補ポリペプチドは、本発
明のポリペプチドと比較して、より大きな活性を示すか、またはせいぜい約１／
２５、そして好ましくはせいぜい約１／１０の活性、そして最も好ましくはせい
ぜい約１／３の活性を示す）。
【００２１】 （本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド） （遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＮＹＦＰＶＨＴＶＱＰＮＷＹＶ（配列番号７７）。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドはまた、本発明に包含される。開示されるｃＤＮＡ
をコードする遺伝子は、第１染色体上にあると考えられる。従って、本発明に関
連するポリヌクレオチドは、第１染色体の連鎖分析におけるマーカーとして有用
である。
【００２２】 この遺伝子は、主に全脳および胎児脳の組織において発現され、より少ない程
度にＴ細胞および胎児肺組織において発現される。
【００２３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経変性障害を包含す
るがそれに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。
同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または
細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織ま
たは細胞、特に中枢神経系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（す
なわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対し
て有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する
個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織および癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、お
よび髄液）、あるいは別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され得る
。
【００２４】 胎児脳組織および全脳組織のような神経組織における組織分布は、この遺伝子
に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性障害の診断および
／または処置に有用であることを示す。さらに、脳組織における組織分布は、こ
の遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、神経変性疾患状態
および行動障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病
、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執狂、強迫性障害、恐慌性障害
、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン
、平衡、および知覚の障害を含む）の検出／処置に有用であることを示す。
【００２５】 さらに、遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連した発生障害、ま
たは伴性障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質
ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マ
ーカーおよび/または免疫治療標的としての有用性を示し得る。配列番号表に示 される最初のおよそ３３３ｎｔの配列は、当業者にすぐに認識されるベクター配
列である。
【００２６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１１に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１１の１〜７７６の任意の整数であり、ｂは１５〜７９０の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１１に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００２７】 （遺伝子番号２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に結腸組織において発現される。
【００２８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに胃腸障害および結腸癌
を包含するがそれに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用
である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組
織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上
記組織または細胞、特に胃腸管系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベ
ル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）
に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、胃腸管組織およ
び癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、
滑液、および髄液）、あるいは別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出
され得る。
【００２９】 好ましいエピトープには、配列番号４５において、残基Ｓｅｒ−６９〜Ｌｙｓ
−７４として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【００３０】 結腸組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドが、結腸癌の診断および処置に有用であることを示す。さらに、胃
腸管組織（結腸）における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド
およびポリペプチドが、種々の代謝障害（例えば、テイ−サックス病、フェニル
ケトン尿症（ｐｈｅｎｙｌｋｅｎｏｎｕｒｉａ）、ガラクトース血症、ポルフィ
リン症、およびフルラー症候群）の診断、予防、および／または処置のために有
用であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上
記の組織のための腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示
し得る。
【００３１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１２に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１２の１〜５４０の任意の整数であり、ｂは１５〜５５４の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１２に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００３２】 （遺伝子番号３によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：Ｐ
ＶＦＴＶＮＦＬＡＷＶＨＡＰＰＶＳＩＴＶＤＬＩＰＴＬＡＱＡＷＳ（配列番号７
８）を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発
明により包含される。
【００３３】 この遺伝子は、主に結腸組織において発現される。
【００３４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに胃腸障害および結腸癌
を包含するがそれに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用
である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組
織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上
記組織または細胞、特に胃腸管系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベ
ル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）
に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、胃腸組織および
癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑
液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞試料の中で、慣用的に検出され
得る。
【００３５】 結腸組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドが、結腸癌の診断および処置に有用であることを示す。さらに、胃
腸組織（結腸）における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、種々の代謝障害（例えば、テイ−サックス病、フェニルケ
トン尿症、ガラクトース血症、ポルフィリン症、およびフルラー症候群）の診断
、予防、および／または処置のために有用であることを示す。タンパク質、なら
びにこのタンパク質に対する抗体は、上記の組織のための腫瘍マーカーおよび／
または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【００３６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１３に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１３の１〜１０９２の任意の整数であり、ｂは１５〜１１０
６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１３に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【００３７】 （遺伝子番号４によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＷＩＱＲＩＲＴＳＡＤＱＬＧＰＫＫＶＶＸＦＧＬＡＣＣＧＶＳＧＬＦＹＡ（
配列番号７９）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、
本発明に包含される。
【００３８】 この遺伝子は、ＣＤ３４陽性細胞において発現される。
【００３９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに炎症、アレルギー、お
よび移植片拒絶、ならびに免疫系障害を包含するがそれに限定されない疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫
学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に造血系および免疫
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低い
レベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定
の組織または細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液
（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、あるいは別の組織
または細胞試料の中で、慣用的に検出され得る。
【００４０】 ＣＤ３４陽性細胞における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、炎症のような造血障害および免疫障害、ならびに免疫
調節および分化の診断および／または処置に有用である。さらに、ＣＤ３４陽性
細胞におけるこの遺伝子の発現は、潜在的に全ての造血細胞系統（血液幹細胞を
含む）の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。
この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置における有用
性（例えば、免疫応答をブーストすることにより）もまた示唆し得る他のプロセ
スの調節に関与し得る。
【００４１】 この遺伝子が、リンパ系起源の細胞において発現されるので、遺伝子またはタ
ンパク質、ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織につい
ての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。従っ
て、これはまた、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、
慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫学的障
害についての薬剤として使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液
系統の幹細胞および方向付けられた前駆体細胞の拡大、ならびに種々の細胞型の
分化および／または増殖における商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならび
にこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカー
および／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。当業者は、いくつかの
ベクターヌクレオチド配列が、配列表においてこの遺伝子について示される配列
の５’および３’末端に含有されることを認識する。
【００４２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１４に関し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１４の１〜５５４の任意の整数であり、ｂは１５〜５６８の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１４に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００４３】 （遺伝子番号５によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【００４４】
【化１】 これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって包
含される。
【００４５】 この遺伝子は、主にＬＮＣＡＰ未処理細胞株および子宮内膜腫瘍組織で発現さ
れ、そしてより少ない程度で、他の癌性組織（例えば、副腎腫瘍組織および滑膜
肉腫組織）で発現される。
【００４６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに癌（すなわち、制
御されない細胞の増殖および／または分化）を含むがそれらに限定されない疾患
および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための
免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に前立腺組織お
よび子宮内膜組織の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち
、障害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意により高い
またはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から
採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、生殖組織、胃腸組織、癌性組織
および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および
髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、検出され得る。
【００４７】 好ましいエピトープとしては、配列番号４８中で残基：Ｌｙｓ−３７〜Ｉｌｅ
−４５として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００４８】 子宮内膜組織、滑膜組織および副腎組織の癌性組織のような癌性組織における
組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、腫
瘍の診断および／または処置、ならびに細胞の増殖および／または分化の調節に
有用であることを示す。増殖中の細胞によって特徴付けられる細胞供給源の中で
の発現は、このタンパク質が、細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして
癌および他の増殖障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そし
て癌の治療においてさらに有用であり得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療の標的として有用性を示し得る。
【００４９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１５の１〜３６７８の任意の整数であり、ｂは１５〜３６
９２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１５に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５０】 （遺伝子番号６によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【００５１】
【化２】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明によって包
含される。開示されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第９染色体上に存在
すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、第９染色体に
対する連鎖解析におけるマーカーとして有用である。
【００５２】 この遺伝子は、主に活性化Ｔ細胞において発現される。
【００５３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害を含むが
それらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同
様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細
胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織また
は細胞、特に免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち
、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意
により高いかまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有
する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、およ
び髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る
。
【００５４】 主にＴ細胞での組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドが、活性化Ｔ細胞を含む免疫障害（例えば、不適切な胸腺、肝臓、お
よび／または脾臓機能に関する疾患）の診断および／または処置に有用であるこ
とを示す。さらに、Ｔ細胞におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む
潜在的にすべての造血細胞系統の増殖；生存；分化；および／または活性化の調
節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカインの産生、抗原提示、ま
たは癌の処置（例えば、免疫応答をブーストすることによる）においての有用性
もまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
【００５５】 この遺伝子はリンパ起源の細胞において発現されるので、この遺伝子またはタ
ンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織につい
ての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。従っ
て、これはまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性
関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫学的障害の
ための薬剤として使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の
幹細胞および方向付けられた前駆細胞の増殖において、ならびに種々の細胞型の
分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。Ｔ細胞におけるこの
遺伝子産物の発現はまた、免疫機能および免疫監視機構におけるこのタンパク質
についての役割を強く示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は
、上記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫療法標的として有
用性を示し得る。
【００５６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１６の１〜１４１４の任意の整数であり、ｂは１５〜１４
２８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１６に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５７】 （遺伝子番号７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ラットのカリウム依存ナトリウム−カルシウム交換
体（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜２６６２４６１を参照のこと）ならびにＢｏ
ｓ ｔａｕｒｕｓ由来のカリウム依存ナトリウム−カルシウム交換体と配列相同
性を共有する。これらのタンパク質は、網膜杆体フォトレセプターの、杆外部セ
グメント（ＲＯＳ）を越えるＣａ２＋フラックスの調節に重要であると考えられ
ている。
【００５８】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＧＧＸＤＤＤＥＧＰＹＴＰＦＤＴＰＳＧＫＬＥＴＶＫＷＡＦＴＷＰＬＳＦＶ
ＬＹＦＴＶＰＮＣＮＫＰＲＷＥＫＷＦ（配列番号９３）。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。
【００５９】 Ｊｕｒｋａｔ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から採取し
た上清は、ＮＦ−ｋＢ転写因子を活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊｕｒｋ
ａｔ細胞を活性化し、そしてより低い程度で、これらの細胞において見出されて
いる転写因子の活性化により他の免疫細胞を活性化するようである。核因子ｋＢ
は、細胞の活性化、分化またはアポトーシスを誘導する広範な種々の薬剤により
、活性化された転写因子である。ＮＦ−ｋＢプロモーターエレメントに利用する
レポーター構築物を使用して、上清をそのような活性についてスクリーニングす
る。
【００６０】 さらに、Ｊｕｒｋａｔ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞か
ら採取した上清は、ＧＡＳアッセイを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊｕ
ｒｋａｔ細胞を活性化し、そしてより低い程度で、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝
達経路を介して、他の免疫細胞を活性化するようである。γ活性化配列（ＧＡＳ
）は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流にみられるプロモー
ターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖に
関与する、広範なシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合に
より反映される、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関
与するタンパク質を示すために用いられ得る。
【００６１】 同様に、Ｋ５６２白血病細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞
から採取した上清は、ＩＳＲＥアッセイを活性化した。従って、この遺伝子は、
白血病細胞を活性化し、そしてより低い程度で、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達
経路を介して他の細胞を活性化するようである。インターフェロン感受性応答エ
レメントは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流に見られるプ
ロモーターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および
増殖に関与する、広範なシグナル伝達経路である。従って、ＩＳＲＥエレメント
の結合により反映される、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および
分化に関与するタンパク質を示すために用いられ得る。
【００６２】 この遺伝子は胎児および乳児の脳組織において主に発現される。
【００６３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに色盲、光感受性お
よび神経学的障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特に視覚系および神経系の多くの障害に関し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織ま
たは体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、視覚組織、神経組織、癌性組織および創傷組織）または体液
（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは
細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００６４】 胎児および乳児の脳組織におけるこの組織分布、ならびに網膜のカリウム依存
ナトリウム−カルシウム交換体遺伝子に対する相同性は、この遺伝子に対応する
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、杆体のフォトレセプターにおける光適
応に関与する種々の視覚障害（例えば、色盲および光感受性）診断および／また
は処置に有用であることを示す。より一般的に、脳組織における組織分布は、こ
の遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、アルツハイマー病
、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、
痴呆、パラノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉
、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）
のような神経変性疾患状態および行動障害の検出／処置に有用であることを示す
。
【００６５】 さらに、この遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連する発生障害
または性関連障害の処置および／または検出において役割をはたし得る。タンパ
ク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫
瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的として有用性を示し得る。
【００６６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１７の１〜１４７５の任意の整数であり、ｂは１５〜１４
８９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００６７】 （遺伝子番号８によってコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１７染色体に存在すると考えら
れる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１７染色体の連鎖解析
におけるマーカーとして有用である。
【００６８】 この遺伝子は、主に胎盤組織において発現され、より低い程度で、胸部組織お
よびメラニン形成細胞において発現される。
【００６９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに乳癌および黒色腫
を含むがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用で
ある。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織
または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記
組織または細胞、特に免疫系、代謝系および外皮系（ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔａｌ
ｓｙｓｔｅｍ）の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、
障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に
より高いかまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有す
る個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、代謝組織
、外皮組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血
漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣
用的に検出され得る。
【００７０】 胎盤組織および胸部組織での組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオ
チドおよびポリペプチドが、特定の癌（乳癌および黒色腫を含む）の診断および
／または処置に有用であることを示す。胚組織および増殖している細胞によって
特徴付けられる他の細胞供給源内での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節
に役割を果たし得、そして癌および他の増殖障害の診断および処置における有用
性を示し得ることを示す。同様に、胚発生はまた、パターン形成における細胞分
化および／またはアポトーシスを含む決定を含む。従って、このタンパク質はま
た、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そして癌治療においてもまた有用
であり得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げた
組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫療法標的として有用性を示し得る
。
【００７１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１８の１〜１９２６の任意の整数であり、ｂは１５〜１９
４０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１８に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７２】 （遺伝子番号９によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ヒト造血細胞タンパク質−チロシンキナーゼ（ＨＣ
Ｋ）と非常に小さなブロックの配列相同性を共有する。ｈｃｋ遺伝子は、ｐｐ５
６ｌｃｋ（リンパ球特異的タンパク質−チロシンキナーゼ）と密接に関連する５
０５残基のポリペプチドをコードする。マウスゲノム遺伝子を用いることによっ
て部分的に規定されたｈｃｋ遺伝子のエキソン中断点によって、ｈｃｋが、ｓｒ
ｃ遺伝子ファミリーのメンバーであり、そして哺乳動物進化の間の強力な選択圧
に供されてきたことが実証される。これらの細胞は最終的に分化され、そして代
表的にはインビボで数時間のみ生存するので、顆粒球におけるｈｃｋ転写物の高
レベルの発現は、特に刺激性である。
【００７３】 従って、ｈｃｋ遺伝子は、ｓｒｃ遺伝子ファミリーの他のメンバーと同様に、
増殖能をほとんど有さない細胞において主に機能するようである。この遺伝子の
翻訳産物は、タンパク質間の配列類似性に基づいて、ＨＣＫと特定の生物学的活
性を共有すると予測される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第２０
染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、
第２０染色体についての連鎖分析におけるマーカーとして有用である。
【００７４】 この遺伝子は、主に前立腺癌において発現され、そしてより少ない程度で活性
化された好中球および始原樹状細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃ
ｅｌｌ）において発現される。
【００７５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに前立腺癌；造血障
害；免疫不全；感染に対する感受性；および炎症を含むが、これらに限定されな
い疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に前立腺
および／または免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわ
ち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有
意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体
から採取された特定の組織または細胞型（例えば、胃腸組織、免疫組織、癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および
髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００７６】 前立腺癌組織、樹状細胞、および好中球における組織分布、ならびにｈｃｋに
対する相同性の短いブロックは、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドが、前立腺癌、ならびに免疫系の障害の診断および／または処置の
ために有用であることを示す。例えば、この遺伝子産物は、前立腺癌と同時に生
じる異常な細胞増殖において役割を果たすと考えられる。この遺伝子産物の作用
のインヒビターは、前立腺癌の処置における有益な治療適用を有する。あるいは
、好中球および樹状細胞における発現は、この遺伝子産物が、造血細胞の生存、
増殖、および／または分化において役割を果たし得、そして炎症および免疫にお
ける重要な役割を果たし得ることを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に
対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫
治療標的として有用性を示し得る。
【００７７】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１９の１〜１５７８の間の任意の整数であり、ｂは１５〜
１５９２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１９に示されるヌク
レオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００７８】 （遺伝子番号１０によってコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１３染色体に存在すると考えら
れる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、第１３染色体についての連
鎖分析におけるマーカーとして有用である。
【００７９】 この遺伝子は、始原樹状細胞において主に発現される。
【００８０】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫障害；免疫に
おける欠損；感染に対する感受性；および造血障害を含むがこれらに限定されな
い疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系
の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個
体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはよ
り低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取され
た特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００８１】 好ましいエピトープとしては、配列番号５３において残基：Ｇｌｕ−３５〜Ｌ
ｙｓ−４４、Ｃｙｓ−８３〜Ｇｌｙ−８８として示される配列を含むエピトープ
が挙げられる。
【００８２】 始原樹状細胞におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、種々
の免疫障害の診断および／または処置に有用であることを示す。樹状細胞による
この遺伝子産物の発現は、この遺伝子産物が、免疫認識／提示プロセスにおいて
役割を果たし得、従って免疫の調節に関与し得ることを示す。あるいは、この遺
伝子産物は、樹状細胞のような細胞によって産生され、次いで他の造血細胞型に
対して効果を有し、それによってこれらの細胞の生存、増殖、活性化、および／
または分化を調節するタンパク質を示し得る。従って、この遺伝子産物は、種々
の造血障害において治療的利益を有し得る。さらに、始原樹状細胞におけるこの
遺伝子産物の発現はまた、免疫機能および免疫サーベイランスにおけるこのタン
パク質の役割を強く示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、
上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的とし
て有用性を示し得る。
【００８３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２０の１〜１３９６の任意の整数であり、ｂは１５〜１４
１０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２０に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００８４】 （遺伝子番号１１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に始原樹状細胞において発現される。
【００８５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに造血障害；免疫不
全；低減した免疫；および感染に対する感受性を含むがこれらに限定されない疾
患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよ
びこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のため
の免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多
くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由
来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低
いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または
体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もし
くは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００８６】 好ましいエピトープとしては、配列番号５４において残基：Ａｌａ−１０７〜
Ｓｅｒ−１１２として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００８７】 始原樹状細胞におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、造血
障害の診断および／または処置に有用であることを示す。特に始原樹状細胞にお
けるこの遺伝子産物の発現は、この遺伝子産物が免疫応答において役割を果たし
得ることを示す。従って、この遺伝子産物は、低減した免疫機能または感染に対
する感受性によって特徴付けられる種々の障害における臨床的有用性を有し得る
。あるいは、この遺伝子産物は、樹状細胞のような特定の細胞によって産生され
、他の細胞型（最も顕著には、他の造血細胞系統）の生存、活性化、増殖、およ
び／または分化に対して効果を有する遺伝子産物を示し得る。従って、この遺伝
子産物は、種々の造血障害の処置において治療的有用性を有し得る。さらに、始
原樹状細胞におけるこの遺伝子産物の発現はまた、免疫機能および免疫サーベイ
ランスにおけるこのタンパク質の役割を強く示す。タンパク質ならびにこのタン
パク質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／ま
たは免疫療法の標的として有用性を示し得る。
【００８８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２１の１〜１７１３の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
２７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００８９】 （遺伝子番号１２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に始原樹状細胞において発現される。
【００９０】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに造血障害；免疫不
全；感染に対する感受性；および炎症を含むがこれらに限定されない疾患および
状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害
に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常
組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベル
のこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織
もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例
えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞
サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００９１】 好ましいエピトープとしては、配列番号５５において残基：Ｓｅｒ−１０６〜
Ｌｅｕ−１１３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００９２】 始原樹状細胞におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、免疫
障害の診断および／または処置に有用であることを示す。樹状細胞におけるこの
遺伝子産物の特異的な発現は、免疫機能における役割を示す。従って、この遺伝
子産物は、感染に対する感受性または低減した免疫サーベイランスのような、低
減または改変された免疫不全によって特徴付けられる障害において臨床的に有用
であり得る。あるいは、この遺伝子産物は、樹状細胞のような細胞によって産生
され、他の細胞型（最も顕著には、他の造血細胞系統）の生存、増殖、活性化、
および／または分化に対して効果を有する遺伝子産物を示し得る。従って、この
遺伝子産物は、広範な造血障害を処置する際、および幹細胞数を増加させる際に
臨床的な有用性を有し得る。さらに、始原樹状細胞におけるこの遺伝子産物の発
現はまた、免疫機能および免疫サーベイランスにおけるこのタンパク質の役割を
強く示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙され
た組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的として有用性を示し
得る。
【００９３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２２の１〜１２０４の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
１８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２２に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００９４】 （遺伝子番号１３によりコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１染色体に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１染色体の連鎖解析にお
けるマーカーとして有用である。
【００９５】 この遺伝子は、胎児肝臓および脾臓組織において主に発現され、そしてより低
い程度に脳組織でおよびホジキンリンパ腫において発現される。
【００９６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫不全；造血障
害；乳癌；およびホジキンリンパ腫を含むがこれらに限定されない疾患および状
態の診断のための、試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および乳房の
多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体
由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより
低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された
特定の組織もしくは細胞型（例えば、乳房組織、免疫組織、癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または
別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００９７】 好ましいエピトープとしては、配列番号５６において残基：Ｔｙｒ−４１〜Ｐ
ｒｏ−４６として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００９８】 胎児肝臓／脾臓組織、乳房組織、およびホジキンリンパ腫における組織分布は
、この遺伝子のタンパク質産物が、種々の造血障害（ホジキンリンパ腫を含む）
、ならびに乳房の障害（最も顕著には乳癌）、ならびに発現が観察された他の組
織の癌の診断および／または処置のために有用であることを示す。造血組織（特
に、胎児肝臓のような造血に関与する組織）におけるこの遺伝子産物の発現は、
この遺伝子が、造血系列の生存、増殖、活性化、および／または分化において役
割を果たし得ることを示唆する。特に、ホジキンリンパ腫における発現は、この
遺伝子が増殖および／または形質転換に関与し得ることを示し、このことは、こ
の遺伝子がまた、種々の癌プロセスの一因であり得ることを示唆する。乳房にお
ける発現は、この遺伝子が、正常な乳房機能において、乳癌において、授乳期の
乳児の重大な栄養分として、関与し得ることを示すか、または乳房のリンパ節内
での発現を反映し得ることを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する
抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標
的として有用性を示し得る。
【００９９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２３の１〜６９８の間の任意の整数であり、ｂは１５〜７
１２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１００】 （遺伝子番号１４によりコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第８染色体に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第８染色体の連鎖解析にお
けるマーカーとして有用である。
【０１０１】 この遺伝子は、乳児脳組織において主に発現され、そしてより低い程度にＴ細
胞において発現される。
【０１０２】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経変性障害を含
むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための、試薬として有用であ
る。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織ま
たは細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組
織または細胞、特に中枢神経系（ＣＮＳ）の多くの障害に関して、標準の遺伝子
発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現
レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、
このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば
、神経組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血
漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的
に検出され得る。
【０１０３】 好ましいエピトープとしては、配列番号５７において残基：Ａｌａ−６７〜Ｇ
ｌｕ−７２、Ｔｈｒ−９１〜Ｉｌｅ−１００として示される配列を含むエピトー
プが挙げられる。
【０１０４】 乳児脳組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドが、神経変性疾患状態、および行動障害（例えば、アルツハイマ
ー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁
病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、
自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含
む））の検出／処置に有用である。
【０１０５】 さらに、この遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚に関連する発生障害
、または伴性障害の処置および／あるいは検出において役割を果たし得る。タン
パク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げた組織の腫瘍マーカ
ーとしておよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【０１０６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２４の１〜１４０８の間の任意の整数であり、ｂは１５〜
１４２２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２４に示されるヌク
レオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１０７】 （遺伝子番号１５によりコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ホスファチジルエタノールアミンＮ−メチルトラン
スフェラーゼ（ラットから単離された）との配列相同性を共有する（ＧｅｎＢａ
ｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号：ｇ３１０１９５およびＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６８（２２）、１６６５５〜１６６６３（１９９３）を参照のこと）。ホス
ファチジルエタノールアミンＮ−メチルトランスフェラーゼは、肝細胞において
ホスファチジルエタノールアミンからのホスファチジルコリンの合成を触媒する
際に重要であると考えられる。ラットのホスファチジルエタノールアミンＮ−メ
チルトランスフェラーゼとこの遺伝子の翻訳産物との間の配列類似性に基づいて
、この２つのタンパク質は、特定の生物学的活性を共有すると予期される。
【０１０８】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む
：
【０１０９】
【化３】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含され
る。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１７染色体に存在すると考え
られる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１７染色体の連鎖解
析におけるマーカーとして有用である。
【０１１０】 この遺伝子は、肝臓細胞において主に発現され、そしてより低い程度に胎盤組
織において発現される。
【０１１１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに肝不全および肝臓
代謝障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための、試薬と
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗
体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用で
ある。上記組織または細胞、特に内分泌系および肝系の多くの障害に関して、標
準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体
液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子
の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞
型（例えば肝臓、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清
、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣
用的に検出され得る。
【０１１２】 好ましいエピトープとしては、配列番号５８において残基：Ｐｒｏ−５〜Ｌｅ
ｕ−１０として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１１３】 肝臓組織における組織分布、およびホスファチジルエタノールアミンＮ−メチ
ルトランスフェラーゼに対する相同性は、この遺伝子のタンパク質産物が、肝臓
の疾患、および癌（例えば、胚芽腫、黄疸、肝炎、肝臓代謝疾患、および肝細胞
前駆体細胞の分化に帰因する状態）の処置ならびに／または診断に有用であるこ
とを示す。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げた組
織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る
。
【０１１４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２５の１〜１０２４の間の任意の整数であり、ｂは１５〜
１０３８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２５に示されるヌク
レオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１１５】 （遺伝子番号１６によりコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、熱ショックタンパク質９０との配列相同性を共有す
る。熱ショックタンパク質９０は、細胞の増殖において重要であると考えられる
。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む
：
【０１１６】
【化４】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含され
る。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第３染色体に存在すると考えら
れる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第３染色体の連鎖解析に
おけるマーカーとして有用である。
【０１１７】 この遺伝子は、胎盤組織において主に発現され、そしてより低い程度にメラニ
ン形成細胞において発現される。
【０１１８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに全身性エリスマト
ーデスおよび他の自己免疫疾患、急性白血病、および発生障害を含むがこれらに
限定されない疾患および状態の診断のための、試薬として有用である。同様に、
ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の
示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞
、特に免疫系および発生系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（す
なわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対し
て有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害
を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば免疫組織、発生
中の組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿
、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
【０１１９】 好ましいエピトープとしては、配列番号５９において残基：Ｈｉｓ−１３〜Ｌ
ｅｕ−２１、Ｇｌｕ−３６〜Ｔｙｒ−４４、Ｔｈｒ−１０３〜Ｔｒｐ−１０９と
して示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１２０】 胎盤組織における組織分布、および熱ショックタンパク質９０に対する相同性
は、この遺伝子のタンパク質産物が、全身性エリスマトーデスの処置ならびに／
または診断に有用であることを示す。なぜなら、ＳＬＥ（全身性エリスマトーデ
ス）において、このタンパク質の過剰発現が存在し、このタンパク質の表面局在
、およびこのタンパク質に対する自己抗体が観察されたからである。より一般的
には、胎盤組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、胎盤の障害の診断および／または処置に有用であることを
示す。胎盤内での特異的発現は、この遺伝子産物が、胎盤機能の適切な確立およ
び維持において役割を果たし得ることを示す。
【０１２１】 あるいは、この遺伝子産物は、胎盤によって産生され、次いで胚へと輸送され
る。この場合、この遺伝子産物は、発生中の胚または胎児の発生および／あるい
は生存において重要な役割を果たし得る。血管が豊富な組織（例えば、胎盤）に
おけるこの遺伝子産物の発現はまた、この遺伝子産物が、内皮細胞中または循環
内でより一般的に産生され得ることを示す。このような例において、この遺伝子
産物は、血管機能（例えば、新脈管形成）においてより一般化された役割を果た
し得る。この遺伝子産物はまた、血管系において産生され得、そして循環内の他
の細胞（例えば、造血細胞）に対して効果を有し得る。この遺伝子産物は、造血
細胞および身体全体の他の細胞の増殖、生存、活性化、ならびに／または分化を
促進するように働き得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、
上記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的として有
用性を示し得る。
【０１２２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２６の１〜１８９２の間の任意の整数であり、ｂは１５〜
１９０６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２６に示されるヌク
レオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１２３】 （遺伝子番号１７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、血液組織関門にとって重要と考えられるプロスタグ
ランジンＤシンテターゼと配列相同性を共有する。特定の実施態様において、本
発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＧＧＩＨＲＬＨＮＧＡＬ
ＱＬＲＶＬＱＲＶＥＨＬＨＬＬＨＨＡＶＫＨＩＣＴＡＳＬＰＶＬＨＧＦＩＡＡＱ
ＣＲＰＧＸ（配列番号１０４）。これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレ
オチドはまた、本発明によって包含される。
【０１２４】 この遺伝子は、主に精巣上体（ｅｐｉｄｉｄｙｍｕｓ）組織において発現され
る。
【０１２５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに多発性硬化症、メ
ッケル症候群、腎多嚢胞病および生殖性障害を包含するがそれらに限定されない
疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドお
よびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に神経系、
生殖系および腎臓系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち
、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意
に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体か
ら採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、腎臓組織、生殖組
織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、
滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検
出され得る。
【０１２６】 精巣上体組織における組織分布およびプロスタグランジンＤシンテターゼに対
する相同性は、この遺伝子のタンパク質産物が、血液組織関門、血液脳脊髄液関
門、血液網膜関門、血液房水関門、および血液精巣関門に関する疾患の処置およ
び／または診断について有用であることを示す。さらに、一般的には、この遺伝
子のタンパク質産物は（その組織分布に基づき）、精巣上体の機能不全に関する
雄性生殖障害の検出およびまたは処置のために有用である。タンパク質、ならび
にこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカー
および／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１２７】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２７の１〜８３３の間の任意の整数であり、ｂは１５〜８
４７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ
以上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１２８】 （遺伝子番号１８によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、フルクトーストランスポータータンパク質および他
の糖トランスポータータンパク質と相同性を有する。他の糖トランスポータータ
ンパク質に対する配列類似性に基づいて、この遺伝子の翻訳産物は、これらのタ
ンパク質と特定の生物学的活性（例えば、糖トランスポーター活性）を共有する
ことが予想される。このような活性は、当該分野で公知の方法によりアッセイさ
れ得る。
【０１２９】 線維芽細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含有する細胞から取り出さ
れた上清は、ＥＧＲ１（初期増殖応答遺伝子１）プロモーターエレメントを活性
化した。従って、この遺伝子は、ＥＧＲ１シグナル伝達経路を通じて、線維芽細
胞を活性化し、そしてより少ない程度に、外皮細胞および組織において活性化す
るようである。ＥＧＲ１は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴからの別のシグナル伝達経路であ
る、ＥＧＲ１プロモーターを含有する遺伝子は、活性化の際、種々の組織および
細胞型に導入され、細胞に分化および増殖を被らせる。
【０１３０】 特定の実施態様では、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
【０１３１】
【化５】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明により包含
される。
【０１３２】 この遺伝子は、主に、子宮内膜間質部細胞で発現される。
【０１３３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖および代謝の
疾患および／または障害、特に糖尿病を含むがこれらに限定されない疾患および
状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内分泌系の多くの障
害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない個体由来の
健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこ
の遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もし
くは細胞型（例えば、生殖組織、代謝組織ならびに／または癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、ま
たは別の組織もしくは細胞サンプルの中で、検出され得る。
【０１３４】 好ましいエピトープとしては、配列番号６１において残基：Ｐｈｅ−４５〜Ｔ
ｒｐ−５０、Ａｌａ−５２〜Ｐｒｏ−５９、Ｓｅｒ−１４９〜Ｌｅｕ−１５４、
Ｇｌｙ−２１９〜Ｃｙｓ−２３３として示される配列を含むエピトープが挙げら
れる。
【０１３５】 糖トランスポータータンパク質（特にＧＬＵＴ５）に対する相同性は、このク
ローンのタンパク質産物が、糖代謝障害（例えば、糖尿病）の処置および／また
は診断のために有用であることを示す。さらに、本発明のポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドは、糖尿病を処置するための特許請求の範囲のポリヌクレオチド
およびポリペプチド（遺伝子配列Ｔ６６４９５−９６を参照のこと）の投与によ
りインビボで発現され得るか、またはグルコースに対応してインスリンを分泌す
る組換え細胞（これは糖尿病を処置するために患者に投与され得る）を調製する
ために宿主細胞において発現される。あるいは、子宮内膜間質部細胞での組織分
布は、検出されたＥＧＲ１の生物学的活性と組み合わせて、このタンパク質が、
生殖および発生の疾患および／または障害の診断、処置および／または予防のた
めに有用であることを示唆する。このタンパク質は、増殖性状態の処置および／
または検出において有用である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗
体は、上記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的と
して有用性を示し得る。
【０１３６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２８の１〜９７１の任意の整数であり、ｂは１５〜９８５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２８に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１３７】 （遺伝子番号１９によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＨＥＬＲＬＲＫＮＴＶＫＦＳＬＹＲＨＦＫＮＴＬＩＦＡＶＬＡＳＩＶＦＭＧ
ＷＴＴＫＴＦＲＩＡＫＣＱＳＤＷ（配列番号１０９）。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。
【０１３８】 この遺伝子は主に、子宮内膜癌組織において発現され、より少ない程度に胎盤
組織において発現される。
【０１３９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに発生および生殖の
疾患および／または障害、特に子宮内膜腫瘍を含むがそれらに限定されない疾患
および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための
免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多く
の障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由
来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低
いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織もしくは細胞型（例えば、発生組織、生殖組織、ならびに癌性組織およ
び創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、羊水、滑液、およ
び髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る
。
【０１４０】 好ましいエピトープとしては、配列番号６２中で残基：Ｐｒｏ−２７〜Ａｒｇ
３３、Ａｓｐ−４１〜Ｉｌｅ−４７、Ｔｈｒ−７３〜Ａｓｐ−８５として示され
る配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１４１】 子宮内膜腫瘍組織および胎盤組織における組織分布は、この遺伝子のタンパク
質産物が子宮内膜腫瘍ならびに発現が観察された他の組織の腫瘍の処置、診断お
よび／または予防のために有用であることを示す。さらにこの遺伝子に対応する
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、発生障害の診断、検出および／または
処置のために有用である。
【０１４２】 胎盤組織および子宮内膜におけるこの遺伝子産物の相対的に特異的な発現は、
それが、発生中の種々の細胞型の増殖、維持および／または分化において重要な
役割を果たすものであり得ることを示す。それは、また細胞および組織型の特異
性を制御するためのモルフォゲンとして作用し得る。増殖および分化における潜
在的な役割により、この遺伝子産物は、組織再生および癌の処置のために成体に
おける適用を有し得る。増殖性細胞により特徴付けられる細胞供給源における発
現は、このタンパク質が、細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌お
よび他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
【０１４３】 同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトー
シスに関与する決定に依存する。アポトーシスの調節不全は、いくつかの癌の発
生において生じるように、細胞死の不適切な抑制を生じ得るか、または後天性免
疫不全および特定の神経変性性障害（例えば、棘筋萎縮症（ＳＭＡ））において
生じると考えられるような細胞死の程度を制御することの不全を生じ得る。従っ
て、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、変性性状態の他の型に加
えて、これらの疾患および状態の処置、検出および／または予防において有用で
ある。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化を調節し得
、そして、変性性または増殖性の状態および疾患の検出、処置および／または予
防において有用である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上
記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的として有用
性を示し得る。
【０１４４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２９の１〜９００の任意の整数であり、ｂは１５〜９１４
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２９に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１４５】 （遺伝子番号２０によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、タンパク質輸送、タンパク質の翻訳後プロセシング
および改変、タンパク質分泌ならびに分泌タンパク質の安定化に重要である、Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＳ．ｐｏｍｂｅ由来の
保存的ドリチル−リン酸βグルコシルトランスフェラーゼ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ受
託番号ｇｉｌ５３５１４１を参照のこと）と相同性を有することが示された。グ
リコシル化事象に関与するタンパク質は、当該分野で周知である用途、および上
記の用途に取って代わる用途を有する。
【０１４６】 特定の実施態様では、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
【０１４７】
【化６】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明によって包
含される。
【０１４８】 この遺伝子は主に、乳児の脳組織において発現され、そしてより少ない程度で
卵巣癌組織において発現される。
【０１４９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発生、代謝、神経
および増殖性の疾患および／または障害、特に多発性硬化症、痴呆および卵巣癌
を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用で
ある。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織
または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記
組織または細胞、特に中枢神経系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺
伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の
発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現
が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、発生組織
、代謝組織、増殖組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば
、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞
サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１５０】 好ましいエピトープとしては、配列番号６３において残基：Ｇｌｙ−２６〜Ｇ
ｌｎ−３２、Ｐｒｏ−４２〜Ｓｅｒ−５０として示される配列を含むエピトープ
が挙げられる。
【０１５１】 乳児の脳組織におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、特に
脳における発生的プロセスと関連する欠陥または問題の処置および／または診断
のために有用であることを示す。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅおよびＳ．ｐｏｍｂｅ由来のドリチル−リン酸β−グルコシルトランスフ
ェラーゼとの相同性は、このタンパク質が、正常の細胞代謝およびタンパク質代
謝において重要な役割を果たし、そして遺伝子治療を介して代謝欠損を補正する
ことに加えて、増殖性障害を処置するにおいて有用であることを示す（すなわち
、タンパク質は、重要な分泌タンパク質または酵素の適切なコンフォメーション
および安定性に必要とされ得、そして幹細胞へのコード遺伝子の安定な挿入は、
この欠損を矯正し得る）。
【０１５２】 増殖性細胞により特徴付けられる乳児組織および他の細胞供給源における発現
は、このタンパク質が、細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌およ
び他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得る（すなわち、本発
明の内因性の等価物の阻害を介して重要な細胞周期調節因子を阻害し得る）こと
を示す。同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはア
ポトーシスに関与する決定に依存する。アポトーシスの調節不全は、いくつかの
癌の発生において生じるように、細胞死の不適切な抑制を生じ得るか、または後
天性免疫不全および特定の神経変性性障害（例えば、棘筋萎縮症（ＳＭＡ））に
おいて生じると考えられるような細胞死の程度を制御することの不全を生じ得る
。
【０１５３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、変性性状態の他の
型に加えて、これらの疾患および状態の処置、検出および／または予防において
有用である。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化を調
節し得、そして、変性性または増殖性の状態および疾患の検出、処置および／ま
たは予防において有用である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体
は、上記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的とし
て有用性を示し得る。
【０１５４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３０の１〜１１６９の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
８３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３０に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１５５】 （遺伝子番号２１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ニワトリリングジンクフィンガータンパク質と配列
相同性を共有し、そして転写の調節において重要であると考えられている。ジン
クリングフィンガータンパク質は、当該分野で周知の用途を有し、この用途は本
明細書中に他に記載される。手短に言うと、このタンパク質は、細胞間内伝達お
よび増幅事象に関与し得、移動または分化、そしておそらくアポトーシスおよび
細胞死を導く。このタンパク質を、引き続きクローニングし、そして別の群によ
って配列決定した（例えば、Ｌｏｍａｘ，Ｍ．Ｉ．、Ｐｒｉｍ．Ｓｅｎｓ．Ｎｅ
ｕｒｏｎ（１９９８）を参照のこと、これは本明細書中で参考として援用される
）。
【０１５６】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む
：
【０１５７】
【化７】 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第３染色体に存在すると考えられる
。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第３染色体の連鎖解析におけ
るマーカーとして有用である。
【０１５８】 この遺伝子は、多くの成人組織および胎児組織において発現される。
【０１５９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに発生性、免疫性、
および神経性の疾患および／または障害を含むがそれらに限定されない疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対して指向される抗体は、組織または細胞型の示差的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に造血系
、中枢神経系、免疫系および他の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（
すなわち、障害を有していない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）
に対して、有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害
を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発生組織、免
疫組織、神経組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リ
ンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１６０】 好ましいエピトープとしては、配列番号６４において残基：Ａｓｎ−４３〜Ａ
ｓｐ−４９、Ｓｅｒ−７１〜Ａｌａ−７６、Ｐｒｏ−８４〜Ｇｌｙ−９１として
示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１６１】 胎児組織におけるこの組織分布は、リングジンクタンパク質に対する相同性と
併せて、この遺伝子のタンパク質産物が、免疫系、造血系における疾患および発
生障害を処置および／または診断に有用であることを示す。この分泌タンパク質
はまた、抗体を惹起するために、組織マーカーとして、同系リガンドまたはレセ
プターを単離するために、それらの相互作用を調節する因子を同定するために、
および栄養補充物として、生物学的活性を決定するために使用され得る。
【０１６２】 このクローンのタンパク質産物はまた、非常な広範な種々の生物学的化成を有
し得る。これらの代表的なものは、サイトカイン、他のサイトカインの細胞増殖
／分化調節活性または誘導；免疫刺激／免疫抑制活性（例えば、ヒト免疫不全ウ
イルス感染、癌、自己免疫疾患およびアレルギーを処置するため）；造血調節（
例えば、貧血を処置するためまたは化学治療に対する補助剤として）；骨、軟骨
、腱、靱帯および／または神経の刺激または成長（例えば、創傷の処置、卵胞刺
激ホルモンの刺激（受胎能の制御のため）；走化性およびケモキネシス活性（例
えば、感染、腫瘍の処置のため）；止血性または血栓崩壊性活性（例えば、血友
病、心筋梗塞などを処置するため）；抗炎症性活性（例えば、敗血症性ショック
、クローン病を処置するため）；抗菌；乾癬または他の過剰増殖疾患を処置する
ため；代謝および行動の調節のためがある。遺伝子治療手順における対応する核
酸の使用がまた意図される。
【０１６３】 さらに、胎児組織内の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割
を果たし得、そして癌および他の増殖障害の診断および処置において有用性を示
し得る。同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはア
ポトーシスを含む決定に依存する。アポトーシスの調節不全は、いくつかの癌の
発生において生じるような細胞死の不適切な抑制を生じ得るか、または、後天性
免疫不全および特定の神経変性障害（例えば、棘筋萎縮症（ＳＭＡ））において
生じると考えられるような、細胞死の程度を制御できないことを生じ得る。従っ
て、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、上記の障害および状態、
さらに他の型の変性状態の処置、検出、および／または予防に有用である。従っ
て、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化を調節し得、そして変
性状態および変性疾患または増殖状態および増殖疾患の検出、処置、および/ま たは予防においてもまた有用である。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対
する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治
療標的としての有用性を示し得る。
【０１６４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３１の１〜２３６３の任意の整数であり、ｂは１５〜２３
７７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１６５】 （遺伝子番号２２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、腎臓機能および透析において重要であると考えられ
る腎臓トランスポーターと配列相同性を共有する（Ｇｅｎｅｂａｎｋ登録番号：
ｇｉ｜３８３１５６６（ＡＦ０５７０３９）を参照のこと）。このタンパク質を
、次いで別の群によってクローン化し、そして配列決定した（例えば、Ｒｅｉｄ
，Ｇ．、Ｋｉｄｎｅｙ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓ．Ｒｅｓ．２１（２−４）、２
３３−２３７（１９９８）を参照のこと（これは本明細書中に参考として援用さ
れる））。
【０１６６】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０１６７】
【化８】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれる。
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１染色体に存在すると考えられる
。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１染色体の連鎖解析におけ
るマーカーとして有用である。
【０１６８】 この遺伝子は主に、胎児の脳、胎児腎臓および成人腎臓の組織において発現さ
れる。
【０１６９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに発生疾患および／
または障害、特に腎臓および神経障害を含むがそれらに限定されない疾患および
状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対して指向される抗体は、組織または細胞型の示差的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に腎系およ
び泌尿器系の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有
していない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して、有意に高
いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発生組織、神経組織、腎組織、尿
生殖組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血
清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中
で、慣用的に検出され得る。
【０１７０】 胎児および成人腎臓組織におけるこの組織分布は、腎臓特異的トランスポータ
ーに対する相同性とともに、この遺伝子のタンパク質産物が、腎系および泌尿器
系障害、ならびに中枢神経系の発生障害の処置および／または診断に有用である
ことを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、ウィルムス腫瘍疾患、お
よび先天性の腎臓異常（例えば、馬蹄腎、多発性嚢胞腎、およびファンコーニ（
Ｆａｌｃｏｎｉ）症候群）に加えて、腎不全、腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｕｓ）、尿
細管性アシドーシス、蛋白尿、膿尿、水腫、腎盂腎炎、水腎（ｈｙｄｒｏｎｅｐ
ｈｒｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群、圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛お
よび腎臓結石の処置および／または診断に有用であり得る。
【０１７１】 あるいは、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ア
ルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、ツレット症候群、髄膜
炎、脳炎、脱髄疾患、抹消神経障害、新形成、外傷、先天性異常、脊髄傷害、虚
血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執症、強迫性障
害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄
養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含むが、これらに限定されな
い神経変性疾患の検出、処置、および／または予防に有用である。さらに、脳の
領域におけるこの遺伝子産物の発現の上昇は、これが正常な神経機能において役
割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達
、学習、認識、恒常性、あるいはニューロンの分化または生存に関連する。タン
パク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げた組織の腫瘍マーカ
ーとしておよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【０１７２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３２の１〜７８１の任意の整数であり、ｂは１５〜７９５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３２に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１７３】 （遺伝子番号２３によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、代謝プロセス、組織修復、および創傷治癒において
重要であると考えられる、ユビキチン特異的プロテアーゼ、ＵＢＰ２（Ｇｅｎｅ
ｓｅｑ登録番号第Ｒ３６７３０号を参照のこと）と配列相同性を共有する。
【０１７４】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０１７５】
【化９】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれる。
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第２１染色体に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第２１染色体の連鎖解析に
おけるマーカーとして有用である。
【０１７６】 この遺伝子は主に、胎児の脳およびそれらの腫瘍において発現される。
【０１７７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに発生疾患および／
または障害、特に癌を含むがそれらに限定されない疾患および状態の診断のため
の試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対して指向される抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関し
て、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない個体由来の健常組織
または体液中の発現レベル）に対して、有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝
子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細
胞型（例えば、発生組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例え
ば、リンパ、血清、血漿、尿、羊水、滑液、および髄液）、または別の組織もし
くは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１７８】 好ましいエピトープとしては、配列番号６６において残基：Ｔｙｒ−２９〜Ｇ
ｌｎ−４６として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１７９】 胎児組織およびそれらの腫瘍におけるこの組織分布は、ヒトユビキチン特異的
プロテアーゼに対する相同性とともに、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド
およびポリペプチドが、癌および発生障害の処置および／または診断に有用であ
ることを示す。さらにこの遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドは、発生障害の診断、検出、および／または処置に有用であり、そして発生中
に種々の細胞の増殖、維持、および／または分化において重要な役割を果たし得
る。これはまた、細胞および組織型の特異化を制御するためのモルフォゲンとし
て作用し得る。増殖および分化における潜在的な役割のため、この遺伝子産物は
、組織再生および癌の処置のための成人における適用を有し得る。
【０１８０】 増殖細胞によって標識される胎児組織および他の細胞供給源内の発現は、この
タンパク質が、細胞分裂の調節に役割を果たし得、そして癌および他の増殖障害
の診断および／または処置における有用性を示し得ることを示す。同様に、発生
組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシスを含む決定
に依存する。アポトーシスの調節不全は、いくつかの癌の発生において生じるよ
うな細胞死の不適切な抑制を生じるか、または、後天的免疫不全および特定の神
経変性障害（例えば、棘筋萎縮症（ＳＭＡ））において生じると考えられるよう
な、細胞死の程度を制御することの失敗を生じ得る。従って、本発明のポリヌク
レオチドおよびポリペプチドは、上記の障害および状態、さらに他の型の変性状
態の処置、検出、および／または予防に有用である。従って、このタンパク質は
、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そして変性または増殖性の状態およ
び疾患の処置、検出、および／または予防に有用である。タンパク質、ならびに
このタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーお
よび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１８１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通アクセス可能である。これらの配列のいくつかは
、配列番号３３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかも
しれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲
から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ま
しくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで
、ａは配列番号３３の１〜２６４２の任意の整数であり、ｂは１５〜２６５６の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３３に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【０１８２】 （遺伝子番号２４によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＱＩＡＴＳＶＨＨＮＩＮＲＫＫＲＳＶＬＲＬＬ（配列番号１５２）。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０１８３】 この遺伝子は主に、胎児心臓組織において発現される。
【０１８４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに発生および心臓血
管疾患および／または障害、特に心臓疾患を含むがそれらに限定されない疾患お
よび状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこ
れらのポリペプチドに対して指向される抗体は、組織または細胞型の示差的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に心臓
の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して、有意に高いまたは低
いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織もしくは細胞型（例えば、発生組織、心臓血管組織、ならびに癌性組織
および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、羊水、血漿、尿、滑液、
および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され
得る。
【０１８５】 好ましいエピトープとしては、配列番号６７において残基：Ｓｅｒ−１９〜Ｓ
ｅｒ−２５、Ｐｒｏ−２７〜Ｇｌｙ−３３、Ｐｒｏ−４０〜Ａｓｎ−４７、Ｐｒ
ｏ−６５〜Ｇｌｎ−７０として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１８６】 胎児心臓組織におけるこの組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、心臓疾患の診断および／または処置に有用であること
を示す。このタンパク質は、先天性誕生不全、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化
症、動脈硬化症、心内膜炎、心筋症、および心筋炎を含むがこれらに限定されな
い、処置および／または検出に有用である。
【０１８７】 さらに、胎児組織内の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割
を果たし得、そして癌および他の増殖障害の診断ならびに処置において有用性を
示し得る。同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／または
アポトーシスを含む決定に依存する。アポトーシスの調節不全は、いくつかの癌
の発生において生じるような、細胞死の不適切な抑制を生じ得るかまたは、後天
的免疫不全および特定の神経変性障害（例えば、棘筋萎縮症（ＳＭＡ））におい
て生じると考えられるような、細胞死の程度の制御の失敗を生じ得る。従って、
本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、上記の障害および状態、さら
に他の型の変性状態の処置、検出、および／または予防に有用である。従って、
このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化を調節し得、そして変性ま
たは増殖性の状態および疾患において有用であり得る。タンパク質、ならびにこ
のタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよ
び／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１８８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通アクセス可能である。これらの配列のいくつかは
、配列番号３４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったかも
しれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲
から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好ま
しくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで
、ａは配列番号３４の１〜２５５２の任意の整数であり、ｂは１５〜２５６６の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３４に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【０１８９】 （遺伝子番号２５によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０１９０】
【化１０】 これらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドはまた、本発明に包含
される。
【０１９１】 この遺伝子は、主に、活性化Ｔ細胞において発現される 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫の障害および
／または疾患ならびに造血の障害および／または疾患を含むが、これらに限定さ
れない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免
疫系の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さ
ない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いま
たはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌
性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液お
よび髄液）の中で、慣用的に検出され得る。
【０１９２】 好ましいエピトープとしては、配列番号６８で残基：Ｇｌｎ−２３〜Ａｓｎ−
２８、Ｇｌｙ−３８〜Ｉｌｅ−４３として示される配列を含むエピトープが挙げ
られる。
【０１９３】 活性化Ｔ細胞におけるこの組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、種々の免疫系障害の診断および／または処置のために
有用であることを示す。さらにこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、造
血細胞系統の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示
す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば
、免疫反応をブーストすることによる）に有用性を示す他のプロセスの調節に関
与し得る。
【０１９４】 この遺伝子はリンパ球系起源の細胞で発現されるので、天然の遺伝子産物は、
免疫機能に関与し得る。したがって、これは関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免
疫不全疾患、白血病、関節リウマチ、肉芽腫性の疾患、炎症性腸疾患、敗血症、
挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷
害性）；移植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片および移植片
対宿主の疾患）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体組
織傷害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘引溶血性貧血、慢性関節リウマ
チ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤として
もまた使用され得る。さらに、このタンパク質は、他の血球の分化または挙動に
影響するか、あるいは造血細胞を損傷部位に補充する分泌因子を提示し得る。さ
らに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方向付けられた前駆細
胞の拡大において、ならびに多様な細胞型の分化および／または増殖において商
業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、
上記に挙げた組織の腫瘍マーカーとしておよび／または免疫治療の標的として有
用性を示し得る。
【０１９５】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号３５の１〜１６５４の任意の整数であり、ｂは１５〜１６６
８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３５に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【０１９６】 （遺伝子番号２６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、炎症性応答において重要であると考えられる、グル
タチオン−Ｓ−トランスフェラーゼと配列相同性を共有する。
【０１９７】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０１９８】
【化１１】 これらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドはまた、本発明に包含
される。
【０１９９】 この遺伝子は、主にケラチノサイト、メラノサイト、および胎児皮膚組織にお
いて発現される。
【０２００】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、そして外皮の疾患および／
もしくは障害、炎症性の疾患および／もしくは障害、ならびに／または発生の疾
患および／もしくは障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断
のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプ
チドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブ
の提供に有用である。上記組織または細胞、特に皮膚の多くの障害に関して、標
準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない個体由来の健常組織にお
ける発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は、
このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば
、外皮組織、炎症性組織、発生組織、代謝組織、ならびに癌性組織および創傷組
織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または
別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２０１】 外皮細胞および外皮組織におけるこの組織分布は、グルタチオン−Ｓ−トラン
スフェラーゼに対する相同性と組み合わせて、この遺伝子のタンパク質産物が、
炎症および皮膚疾患の診断および処置に有用であることを示す。さらに、この遺
伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、先天性の障害（すなわ
ち、母斑、色素性母斑、そばかす、蒙古斑、血管腫、ブドウ酒様症候群（ｐｏｒ
ｔ−ｗｉｎｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、外皮腫瘍（すなわち、角化症、ボーエン
病、基底細胞癌、扁平上皮癌、悪性黒色腫、パジェット病、菌状息肉腫、および
カポージ肉腫）、皮膚の傷害および炎症（すなわち、創傷、発疹、紅色汗疹障害
、乾癬、皮膚炎）、アテローム硬化症、じんま疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、湿疹、
羞明、自己免疫障害（すなわち、エリテマトーデス、白斑、皮膚筋炎、限局性強
皮症、強皮症、類天疱瘡、および天疱瘡）、ケロイド、線条、紅斑、点状出血、
紫斑病、および眼瞼黄板症を含む様々な皮膚障害の処置、診断および／または予
防に有用である。さらに、そのような障害は、皮膚のウイルス性および細菌性感
染（すなわち、単純ヘルペス、イボ、水痘、伝染性軟属腫、帯状ヘルペス、腫脹
、蜂巣炎、丹毒、膿痂疹、輪癬、みずむし（ａｌｔｈｌｅｔｅｓ ｆｏｏｔ）、
および白癬）に対する感受性を増大して個体を罹患しやすくさせ得る。
【０２０２】 さらにこの遺伝子のタンパク質産物はまた、種々の結合組織障害（例えば、関
節炎、外傷、腱炎、軟骨軟化症（ｃｈｒｏｎｄｏｍａｌａｃｉａ）および炎症）
、自己免疫障害（例えば、慢性関節リウマチ、狼瘡、硬皮症、および皮膚筋炎）
、ならびに小人症、脊椎変形、および特定の関節異常、ならびに軟骨形成不全（
すなわち、先天性脊椎骨端形成異常、家族性変形性関節症、ＩＩ型骨形成不全（
Ａｔｅｌｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｙｐｅ ＩＩ）、シュミット型骨幹端軟
骨形成不全）の処置または診断に有用であり得る。タンパク質ならびにこのタン
パク質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／ま
たは免疫療法標的として有用性を示し得る。
【０２０３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３６の１〜９６９の任意の整数であり、ｂは１５〜９８３
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３６に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０２０４】 （遺伝子番号２７によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０２０５】
【化１２】 これらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドはまた、本発明に包含
される。開示されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第４染色体上に存在す
ると考えられる。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは、第４染色体の
連鎖解析におけるマーカーとして有用である。
【０２０６】 この遺伝子は、主に腎臓組織において発現され、より少ない程度でケラチノサ
イト、Ｔヘルパー細胞、子宮内膜腫瘍細胞および乳児脳組織において発現される
。
【０２０７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、そして視覚の疾患および／
または障害ならびに免疫の疾患および／または障害を含むが、これらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞の多くの障
害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない個体由来
の健常組織における発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベル
のこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織
もしくは細胞型（例えば、視覚組織、免疫組織、ならびに癌性組織および創傷組
織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または
別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２０８】 好ましいエピトープとしては、配列番号７０において残基：Ｔｈｒ−６〜Ｔｒ
ｐ−１３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０２０９】 腎臓組織におけるこの組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、視覚障害（緑内障、網膜／黄斑変性、白内障、結膜炎（ｃ
ｏｎｊｕｎｃｔａｖｉｔｉｓ）、および／または自己免疫疾患を含むが、これら
に限定されない）の処置および／または診断に有用であることを示す。さらに、
免疫組織におけるこの遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、造血細胞系統の
増殖；生存；分化；および／または活性化を調節する役割を示す。この遺伝子産
物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫反応をブー
ストすることによる）に有用性を示す他のプロセスの調節に関与し得る。
【０２１０】 この遺伝子はリンパ球系起源の細胞で発現されるので、天然の遺伝子産物は、
免疫機能に関与し得る。従って、これは関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不
全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、慢性肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫
瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害
性）；移植器官および移植組織に対する免疫反応（例えば、宿主対移植片病およ
び対宿主性移植片病）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水
晶体組織傷害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘引溶血性貧血、慢性関節
リウマチ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む、免疫学的障害のための薬
剤としてもまた使用され得る。さらに、このタンパク質は、他の血球の分化およ
び挙動に影響を及ぼすか、または損傷部位に対して造血細胞を漸増する分泌因子
を提示し得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方向
付けられた前駆細胞の拡大において、ならびに多様な細胞型の分化および／また
は増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に
対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫
治療標的として有用性を示し得る。
【０２１１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３７の１〜２３３７の任意の整数であり、ｂは１５〜２３
５１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２１２】 （遺伝子番号２８によってコードされるタンパク質の特徴） Ｊｕｒｋａｔ細胞株およびＵ９３７細胞株に対して試験した場合、この遺伝子
を含む細胞から得られた上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化配列）プロモーターエレ
メントを活性化した。従って、この遺伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経
路を介して、前骨髄性細胞およびＴ細胞、ならびにより少ない程度で免疫細胞お
よび免疫組織を活性化するようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与
する多くの遺伝子の上流に見出されるプロモーターエレメントである。このＪａ
ｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖に関与する、大きなシグナル伝達経
路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合により反映される、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために用
いられ得る。
【０２１３】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０２１４】
【化１３】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる
。
【０２１５】 この遺伝子は、主に腎臓組織において発現される。
【０２１６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに腎臓の疾患および
／もしくは状態ならびに／または尿生殖器の疾患および／もしくは状態を含むが
、これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。
同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または
細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織ま
たは細胞、特に腎臓の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち
、障害を有していない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して
有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、腎臓組織、尿生
殖器組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血
清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で
、慣用的に検出され得る。
【０２１７】 腎臓組織におけるこの組織分布は、検出されたＧＡＳ生物学的活性と組み合わ
せて、この遺伝子に対応するヌクレオチドおよびポリペプチドが、腎臓疾患の処
置および／または診断に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク
質産物は、腎不全、腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｕｓ）、尿細管性アシドーシス、蛋白
尿、膿尿、水腫、腎盂腎炎、水腎（ｈｙｄｒｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ネフロー
ゼ症候群、圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛および腎臓結石、さらにウィ
ルムス腫瘍疾患、および先天性の腎臓異常（例えば、馬蹄腎、多発性嚢胞腎、お
よびファルコーニ（Ｆａｌｃｏｎｉ）症候群）を含む腎臓疾患の処置および／ま
たは検出において使用され得る。あるいは、精巣におけるこの遺伝子産物の発現
は、この遺伝子産物を正常な精巣機能と関連づけ得る。さらに、この遺伝子産物
は、男性不妊の処置において有用であり得、そして／または男性用避妊薬として
使用され得る。さらに不妊症および精子数の減少のような状態は、本発明を用い
て、この状態が遺伝子もしくは遺伝子変化の存在と関連するか、またはそれによ
って引き起こされるか否かを決定するために評価され得る。タンパク質、ならび
にこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカー
および／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０２１８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号３８の１〜１５２０の任意の整数であり、ｂは１５〜１５３
４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３８に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【０２１９】 （遺伝子番号２９によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＥＮＦＰＥＴＲＥＶＲＡＦＳＰＲＥＮＬＥＬＣＴＣＫＳ（配列番号：１７３
）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含ま
れる。
【０２２０】 この遺伝子は、Ｋ５６２細胞において主に発現される。
【０２２１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫または造血の
障害および／または状態、特に白血病を含むが、これらに限定されない疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫
学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫の多くの障害
に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない個体由来の健
常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの
遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の
組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２２２】 Ｋ５６２細胞における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、白血病の診断および／または処置のために有用であること
を示す。この遺伝子のタンパク質産物は、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球
減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病）の処置および診断に有用
であることを示す。なぜなら、間質細胞は、造血系統の細胞の産生において重要
であるからである。この使用には、骨髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄再
構成、新形成の放射線治療または化学療法を含む。この遺伝子産物はまた、リン
パ球産生に関連し得る。従って、この遺伝子産物は、免疫障害（例えば、感染、
炎症、アレルギー、免疫不全など）において使用され得る。さらに、この遺伝子
産物は、幹細胞および種々の血液系統の方向付けられた前駆細胞の増殖において
、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し
得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組
織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得
る。
【０２２３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３９の１〜１１６８の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
８２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２２４】 （遺伝子番号３０によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＡＬＹＣＳＰＳＬＱＩＤ（配列番号１７４）。これらのポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０２２５】 この遺伝子は、活性化Ｔ細胞において主に発現される。
【０２２６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫のおよび造血
の疾患および／または障害を含むがそれらに限定されない疾患および状態の診断
のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプ
チドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブ
の提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関して、
標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または
体液中の発現レベル）に対して有意により高いかまたはより低いレベルのこの遺
伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは
細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）また
は体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組
織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２２７】 活性化Ｔ細胞における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、免疫系の障害の診断および／または処置のために有用であ
ることを示す。さらに、この遺伝子産物の発現は、造血細胞系列（血液幹細胞を
含む）の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割を示す。
この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免
疫反応をブーストすることによる）に有用性を示し得る他のプロセスの調節に関
与し得る。
【０２２８】 この遺伝子は、リンパ系起源の細胞において発現するので、この天然の遺伝子
産物は、免疫機能に関与し得る。従って、これはまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳ
のような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、慢性肉芽腫症、炎症性腸疾
患、敗血症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細
胞媒介細胞障害）；移植器官および組織に対する免疫反応（例えば、宿主対移植
片および移植片対宿主疾患）、または自己免疫障害（例えば、自己免疫不妊症、
水晶体組織傷害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導溶血性貧血、慢性関
節リュウマチ、シェーグレン病、強皮症）ならびに組織を含む、免疫学的障害の
ための薬剤としてもまた使用され得る。
【０２２９】 さらに、このタンパク質は、他の血液細胞の分化または挙動に影響する分泌因
子、または損傷部位へ造血細胞を補充する分泌因子を示し得る。さらに、この遺
伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方向付けられた前駆体の増大におい
て、および種々の細胞型の分化および／または増殖において、商業的な有用性を
有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙され
た組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的として有用性を示し
得る。
【０２３０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４０の１〜１８２７の任意の整数であり、ｂは１５〜１８
４１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４０に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２３１】 （遺伝子番号３１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、急性骨髄性白血病の素因において重要であると考え
られるヒトＡＦ−６遺伝子産物（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｎｌ｜ＰＩＤ｜ｄ
１０３３４４６（ＡＢ０１１３９９）を参照のこと）と相同性を有することが示
された。
【０２３２】 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＣＨＣＳＭＬＫＳＨＧＤＶＱＮＶＬＴＬＦＶＴＶＬＳＤＶＳＹＬＱＱＩＱＫ
ＫＬＲ（配列番号１７５）；および／またはＣＹＦＨＱＫＡＱＳＮＧＰＥＫＱＥ
ＫＥＧＶＩＱＮＦＫＲＴＬＳＫＫＥＫＫＥＫＫＫＫ（配列番号１７６）。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。開示
されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第６染色体上に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは、第６染色体の連鎖解析にお
けるマーカーとして有用である。
【０２３３】 この遺伝子は、主としてメルケル細胞で発現される。
【０２３４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫のおよび造血
の障害および／または疾患、特に白血病を含むが、これらに限定されない疾患ま
たは状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこ
れらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免
疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの
障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来
の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、白血病性の細胞、ならびに癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、およ
び髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る
。
【０２３５】 ＡＦ−６遺伝子に対する相同性と組み合わせたメルケル細胞における組織分布
は、ポリヌクレオチドおよびこの遺伝子に対応するポリペプチドが、免疫障害の
診断および／または処置のために有用であることを示す。この遺伝子のタンパク
質産物は、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板
減少症、または白血病）の処置および診断に有用である。なぜなら、間質細胞は
、造血系統の細胞の産生において重要であるからである。この使用には、骨髄細
胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄再構成、新形成の放射線治療または化学療法
を含む。この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関連し得る。従って、この遺伝
子産物は、免疫障害（例えば、感染、炎症、アレルギー、免疫不全など）におい
て使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の方
向付けられた前駆細胞の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／ま
たは増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク
質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または
免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０２３６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４１の１〜１１８３の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
９７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２３７】
【表１】 表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド
配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「
ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連の
ＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列から構築され
た。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各ヌ
クレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最終
的な配列を得た。
【０２３８】 ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ受託番号Ｚ
および日付」において列挙される対応する受託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、
ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
【０２３９】 「総ヌクレオチド配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグに
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたクローンは、これらの配列の全て
またはほとんどを含み得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５’ヌク
レオチド」および「クローン配列の３’ヌクレオチド」として示されるヌクレオ
チドの位置によって反映される。推定開始コドン（メチオニン）の配列番号Ｘの
ヌクレオチドの位置は、「開始コドンの５’ヌクレオチド」として同定される。
同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペ
プチドの第一のアミノ酸の５’ヌクレオチド」として同定される。
【０２４０】 翻訳されたアミノ酸配列は、メチオニンで始まり、「アミノ酸配列番号Ｙ」と
して同定されるが、他のリーディングフレームもまた、公知の分子生物学技術を
使用して容易に翻訳され得る。これらのオルタナティブオープンリーディングフ
レームによって生成されるポリペプチドは、本発明によって具体的に意図される
。
【０２４１】 推定シグナルペプチドの配列番号Ｙの第一および最後のアミノ酸の位置は、「
シグナルペプチドの第一のアミノ酸」および「シグナルペプチドの最後のアミノ
酸」として同定される。分泌部分の配列番号Ｙの推定される第一のアミノ酸の位
置は、「分泌部分の推定される第一のアミノ酸」として同定される。最後には、
オープンリーディングフレームにおける最後のアミノ酸の配列番号Ｙのアミノ酸
の位置は、「ＯＲＦの最後のアミノ酸」として同定される。
【０２４２】 配列番号Ｘおよび翻訳される配列番号Ｙは、十分に正確であり、そしてそうで
なければ、当該分野において周知でありかつ以下でさらに記載される種々の使用
に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配列ま
たは寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーシ
ョンプローブを設計するために有用である。これらのプローブはまた、生物学的
サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の種々の法医学
の方法、および診断の方法を可能にする。同様に、配列番号Ｙから同定されるポ
リぺプチドは、表１において同定されるｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製するために使用され得る。
【０２４３】 それにもかかわらず、配列決定反応によって生成されるＤＮＡ配列は、配列決
定のエラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、また
は生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する
。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列の
リーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合にお
いて、作製されるＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０
００塩基にわたるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠
失）を超えて同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミ
ノ酸配列とは異なる。
【０２４４】 従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこ
れらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定される作製されたヌクレ
オチド配列、および配列番号Ｙとして同定される推定の翻訳されたアミノ酸配列
のみではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明の
ヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。寄託された各
々のクローンのヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたクローンの
配列決定によって容易に決定され得る。次いで、推定アミノ酸配列は、このよう
な寄託物から証明され得る。さらに、特定のクローンによってコードされるタン
パク質のアミノ酸配列はまた、ペプチド配列決定によって、または寄託されたヒ
トｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中でタンパク質を発現し、このタンパク質を収
集し、そしてその配列を決定することによって、直接的に決定され得る。
【０２４５】 本発明はまた、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、または寄託されたクローンに対応す
る遺伝子に関する。対応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用
して、公知の方法に従って単離され得る。このような方法は、開示された配列か
らプローブまたはプライマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源
から対応する遺伝子を同定または増幅する工程を包含する。
【０２４６】 本発明においてまた提供されるものは、種相同体である。種相同体は、本明細
書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして所
望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングすることによって単離お
よび同定され得る。
【０２４７】 本発明のポリぺプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。このようなポリ
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換え的に生成さ
れたポリぺプチド、合成的に生成されたポリぺプチド、またはこれらの方法の組
合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺプチドを
調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
【０２４８】 ポリぺプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか、ま
たはより大きいタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（以下
を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する配列
（例えば、複数のヒスチジン残基）、または組換え生成の間の安定性のためのさ
らなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利である。
【０２４９】 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、単離された形態で提供され、そして好
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌されるポリぺプチドを含む）
の組換え的に生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、ＳｍｉｔｈおよびＪ
ｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の
方法によって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、当該分野に
おいて周知である方法における分泌タンパク質に対して惹起される本発明の抗体
を使用して、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
【０２５０】 （シグナル配列） タンパク質が、シグナル配列、ならびにその配列についての切断点を有するか
否かを予測するための方法が、利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ、Ｖｉ
ｒｕｓ Ｒｅｓ． ３：２７１−２８６（１９８５）の方法は、短いＮ末端荷電
領域およびそれに続く完全な（切断されていない）タンパク質の非荷電領域から
の情報を使用する。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６）の方法は、切断部位の周辺の残基（
代表的に−１３〜＋２残基）からの情報を使用し、ここで、＋１は、分泌タンパ
ク質のアミノ末端を示す。これらの方法のそれぞれについての、公知の哺乳動物
分泌タンパク質の切断点を予測することの正確さは、７５〜８０％の範囲にある
（ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、２つの方法は、所定のタンパク質に
ついて、同じ推定切断点を必ずしも生成するとは限らない。
【０２５１】 本発明の場合において、分泌されるポリぺプチドの推定アミノ酸配列は、Ｓｉ
ｇｎａｌＰと呼ばれるコンピュータープログラム（Ｈｅｎｒｉｋ Ｎｉｅｌｓｅ
ｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１−６（１９９７））
によって分析された。このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてタンパク質の
細胞での位置を予測する。この局在化のコンピューター予測の一部として、Ｍｃ
Ｇｅｏｃｈおよびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅの方法が援用される。このプログラムに
よって、本明細書中に記載される分泌タンパク質のアミノ酸配列の分析は、表１
において示される結果を提供した。
【０２５２】 しかし、当業者に理解されるように、切断部位は、時折、生物に応じて変化し
、そして絶対的な確実性を伴っては予測され得ない。従って、本発明は、配列番
号Ｙにおいて示される配列を有する分泌されるポリぺプチドを提供し、これは推
定切断点の５残基（すなわち、＋または−５残基）内で始まるＮ末端を有する。
同様に、ある場合において、分泌タンパク質からのシグナル配列の切断は、必ず
しも均一ではなく、１つより多くの分泌される種を生じることもまた認識される
。これらのポリぺプチド、およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌク
レオチドは、本発明によって意図される。
【０２５３】 さらに、上述の分析によって同定されるシグナル配列は、天然に存在するシグ
ナル配列を必ずしも予測しないかもしれない。例えば、天然に存在するシグナル
配列は、推定シグナル配列からさらに上流にあり得る。しかし、推定シグナル配
列は、分泌タンパク質をＥＲに指向し得るようである。これらのポリぺプチド、
およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドは、本発明によっ
て意図される。
【０２５４】 （ポリヌクレオチド改変体およびポリぺプチド改変体） 「改変体」とは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドとは異なるが
、それらの本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリぺプチドをいう
。一般に、改変体は、全体的に密接に類似し、そして、多くの領域において、本
発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドに同一である。
【０２５５】 本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」である
ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによって、ポリヌクレオチド配列が
ポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり
５つまでの点変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配
列が参照配列に対して同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオ
チドを得るために、参照配列のヌクレオチドの５％までが別のヌクレオチドで欠
失または置換され得るか、または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの多数
のヌクレオチドが参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は
、表１に示される配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または
本明細書中で記載されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
【０２５６】 実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌク
レオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、ま
たは９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログラムを使用して従
来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象配列との間の最も
良好な全体的な適合性（全体的な配列整列ともいう）を決定するための好ましい
方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ．（１９９０）
６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープロ
グラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配列および対象
配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵからＴに変換すること
によって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、同一性パーセント（％
）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整
列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ
、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎ
ｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎ
ｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇ
ａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００
または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２５７】 対象配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合
わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。こ
れは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列
の５’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断
される対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い
合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない対象配列の５’およ
び３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌ
クレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって
決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特
定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最
終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明
の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問
い合わせ配列と一致／整列されいていない、対象配列の５’および３’塩基の外
側の塩基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される
。
【０２５８】 例えば、９０塩基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために１００塩
基の問い合わせ配列に整列される。対象配列、および従って、ＦＡＳＴＤＢ整列
の５’末端で生じる欠失は、５’末端で最初の１０塩基の一致／整列を示さない
。１０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端で
の塩基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのためＦＡＳＴＤＢプロ
グラムによって算定される同一性パーセントのスコアから１０％が差し引かれる
。残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％
である。別の例では、９０塩基の対象配列は、１００塩基の問い合わせ配列と比
較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせ配列と一
致／整列しない対象配列の５’または３’に塩基がない。この場合、ＦＡＳＴＤ
Ｂによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列の５’または３’の塩基のみが手動で補正さ
れる。他の手動の補正は、本発明の目的ではなされない。
【０２５９】 本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、対象ポリぺプチド配列が問い合わ
せアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み
得ることを除いて、対象ポリペプチドのアミノ酸配列は問い合わせ配列に同一で
あることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも９５
％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、対象配列におけ
るアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））また
は別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列
のアミノ末端もしくはカルボキシ末端部位で生じ得るか、またはそれらの末端部
位の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列内の
１つ以上の連続するグループにおいてのいずれかで、散在される。
【０２６０】 実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１に示されるアミ
ノ酸配列に対して、または寄託されたＤＮＡクローンによってコードされるアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラムを使
用して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象配列との間での最
良の全体的な一致（全体的配列整列ともいう）を決定するための好ましい方法は
、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ． Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ． （１９９０）
６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープロ
グラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせおよび対象配列
は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配列であるかの
いずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセントで示される
。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉ
ｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１
、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒ
ｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓ
ｉｚｅ ＝ 配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐ
ｅｎａｌｔｙ ＝ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象アミ
ノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２６１】 対象配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問
い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する
場合に、対象配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末
端およびＣ末端で切断される対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一
性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対象残
基と一致／整列しない対象配列のＮ末端およびＣ末端側である問い合わせ配列の
残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されているか否
かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセン
トは、同一性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによっ
て特定のパラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコア
に到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使用さ
れるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端およ
びＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で考
慮される。すなわち、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側の問い
合わせ残基位置のみである。
【０２６２】 例えば、９０アミノ酸残基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために
１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が対象配列のＮ末端で生じ、そ
してそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示
さない。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およびＣ
末端での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳＴ
ＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差し
引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセントは
９０％である。別の例において、９０残基の対象配列が、１００残基の問い合わ
せ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わせ
配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。こ
の場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正され
ない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整列
しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置のみが手動で補正される。
他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０２６３】 改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、
コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化しない変化を含むポリヌクレ
オチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって生
成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて５〜
１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加される改変体
もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、多様な理由（例えば、特定の宿
主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、Ｅ．ｃ
ｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化する））ために、生成さ
れ得る。
【０２６４】 天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、ポ
リヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し得
る。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発技術によってまたは直接的
な合成によって生成され得る。
【０２６５】 タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化するために作製され得る。例えば
、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実質的な欠損を伴わずに、分泌タンパ
ク質のＮ末端またはＣ末端から欠失され得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６８：２９８４−２９８８（１９９３）の著者らは、３、８、または２７
個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後であってもヘパリン結合活性を有す
る改変体ＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンγは、このタ
ンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失した後、１０倍
までのより高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ ７：１９９−２１６（１９８８））。
【０２６６】 さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異
体を作製した。複数の変異が、全ての可能なアミノ酸の位置で試験された。この
研究者らは、「分子の大部分は、結合活性または生物学的活性のいずれかに対し
てほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照のこ
と）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わずか
２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生成
した。
【０２６７】 さらに、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失
が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じたとしても、他の生物学的
活性はなお保持され得る。例えば、分泌される形態を認識する抗体を誘導および
／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌される形態の残基の過半数未満が
、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持されるようである。タンパク質
のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺプチドが、このような免疫原
性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載される、およびそうでなければ当
該分野において公知の慣用の方法によって容易に決定され得る。
【０２６８】 従って、本発明はさらに、実質的な生物学的活性を示すポリぺプチド改変体を
含む。このような改変体としては、活性に対する影響をほとんど有さないように
、当該分野において公知の一般的な法則に従って選択される、欠失、挿入、逆位
、反復、および置換が挙げられる。例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置
換を作製する方法に関する指針は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４７：１３０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは
変化に対するアミノ酸配列の許容性を研究するための２つの主要なストラテジー
があることを指摘する。
【０２６９】 第１のストラテジーは、進化の過程の間の天然の選別によるアミノ酸置換の許
容性を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存されるアミノ
酸が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機能について
重要であるようである。対照的に、置換が天然の選別によって寛容されたアミノ
酸の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従っ
て、アミノ酸置換を許容する位置は改変され得るが、タンパク質の生物学的活性
をなおも維持する。
【０２７０】 第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クロ
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中の各残基で１つずつのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。
【０２７１】 著者らが言及するように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミ
ノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミ
ノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示
す。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、
非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。
さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡ
ｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；水酸基残基のＳｅｒおよびＴｈｒ
の置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよびＧｌ
ｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基のＰ
ｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡｌａ
、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。
【０２７２】 保存的なアミノ酸置換以外に、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的
なアミノ酸残基での置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによ
ってコードされるアミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、
または（ｉｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉ
ｉ）別の化合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加
するための化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチド
の融合、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプ
チド、またはリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポ
リぺプチドへの融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教
示から、当業者の範囲内であることが考えられる。
【０２７３】 例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸での、荷電されたアミ
ノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、よ
り少ない凝集性）を伴うタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝集
体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（Ｐ
ｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０（
１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（１
９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄ
ｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３）
）。
【０２７４】 本発明のさらなる実施態様は、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、５０
アミノ酸置換を超えず、さらに好ましくは、４０アミノ酸置換を超えず、なおよ
り好ましくは、３０アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは、
２０アミノ酸置換を超えない、アミノ酸配列を有する本発明のアミノ酸配列を含
むポリペプチドに関する。当然、好ましさの増大する順番に、ポリペプチドは、
少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、多くてせいぜい１０、９、８、７、６
、５、４、３、２、または１アミノ酸置換を含む本発明のアミノ酸配列を含むア
ミノ酸配列を有することが非常に好ましい。特定の実施態様において、本発明の
アミノ酸配列またはそのフラグメント（例えば、本明細書に記載の成熟形態およ
び／または他のフラグメント）における付加、置換、および／または欠失の数は
、１〜５、５〜１０、５〜２５、５〜５０、１０〜５０、または５０〜１５０で
あり、保存的アミノ酸置換が好ましい。
【０２７５】 （ポリヌクレオチドフラグメントおよびポリぺプチドフラグメント） 本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、寄託されたクロー
ンに含まれるか、または配列番号Ｘにおいて示される核酸配列を有する短いポリ
ヌクレオチドをいう。短いヌクレオチドフラグメントは、好ましくは、少なくと
も約１５ヌクレオチド、およびより好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、
なおより好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、およびさらにより好ましく
は少なくとも約４０ヌクレオチドの長さである。「少なくとも２０ヌクレオチド
の長さ」のフラグメントは、例えば、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配
列または配列番号Ｘにおいて示されるヌクレオチド配列からの２０塩基以上連続
した塩基を含むことが意図される。これらのヌクレオチドフラグメントは、本明
細書中で考察されるように、診断プローブおよびプライマーとして有用である。
もちろん、より大きなフラグメント（例えば、５０、１５０、５００、６００、
２０００ヌクレオチド）が好ましい。
【０２７６】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表的な例は、例えば、配
列番号Ｘまたは寄託されたクローンにおいて含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド番
号の約１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２
５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４
５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７
５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９
５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５
０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１
〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、
１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１
７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８
５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、または２００１〜
最後の配列を有するフラグメントを含む。この状況において、「約」は、具体的
に列挙される範囲、いずれかの末端もしくは両方の末端で、いくつか（５、４、
３、２、もしくは１個）のヌクレオチドだけより大きなまたはより小さな範囲を
含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性を有するポリぺプチ
ドをコードする。より好ましくは、これらのポリヌクレオチドは、本明細書にお
いて考察されるようにプローブまたはプライマーとして使用され得る。
【０２７７】 本発明において、「ポリぺプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙにおいて含
まれるか、または寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡによってコードされる
、短いアミノ酸配列をいう。タンパク質フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ
−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」であり得るか、またはフラグメントが部分または領域を
形成するより大きなポリぺプチド内に、最も好ましくは単一の連続した領域とし
て、含まれ得る。本発明のポリぺプチドフラグメントの代表的な例は、例えばコ
ード領域のアミノ酸番号の約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、
８１〜１００、１０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、または１６
１〜最後のフラグメントを含む。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、約２０
、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３
０、１４０、または１５０アミノ酸の長さであり得る。この状況において、「約
」は、具体的に列挙される範囲、いずれかの末端または両方の末端で、いくつか
の（５、４、３、２、または１個）アミノ酸長だけより大きなまたはより小さな
範囲を含む。
【０２７８】 好ましいポリぺプチドフラグメントは、分泌タンパク質および成熟形態を含む
。さらに好ましいポリぺプチドフラグメントは、アミノ末端もしくはカルボキシ
末端、またはその両方から、連続した一連の欠失された残基を有する、分泌タン
パク質または成熟形態を含む。例えば、１〜６０個の範囲の任意の数のアミノ酸
は、分泌ポリペプチドまたは成熟形態のいずれかのアミノ末端から欠失され得る
。同様に、１〜３０個の範囲の任意数のアミノ酸が、分泌タンパク質または成熟
形態のカルボキシ末端から欠失され得る。さらに、上述のアミノ末端およびカル
ボキシ末端の欠失の任意の組み合わせが好ましい。同様に、これらのポリぺプチ
ドフラグメントをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、好ましい。
【０２７９】 構造ドメインまたは機能ドメイン（例えば、αヘリックスおよびαヘリックス
形成領域、βシートおよびβシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コ
イルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親
媒性領域、可撓性領域、表面形成領域、基質結合領域、および抗原性指標の高い
領域を含むフラグメント）によって特徴付けられるポリぺプチドおよびポリヌク
レオチドのフラグメントもまた、好ましい。保存されるドメイン内にある配列番
号Ｙのポリぺプチドフラグメントは、本発明によって具体的に意図される。さら
に、これらのドメインをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、意図
される。
【０２８０】 他の好ましいフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントである。生物学
的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活性に類似の活性を示すが
、必ずしも同一の活性を示す必要はないフラグメントである。フラグメントの生
物学活性は、改善された所望の活性、または低減された所望されない活性を含み
得る。
【０２８１】 （エピトープおよび抗体） 本発明において、「エピトープ」とは、動物において、特にヒトにおいて、抗
原性活性または免疫原性活性を有するポリぺプチドフラグメントをいう。本発明
の好ましい実施態様は、エピトープを含むポリぺプチドフラグメント、およびこ
のフラグメントをコードするポリヌクレオチドに関する。抗体が結合し得るタン
パク質分子の領域は、「抗原性エピトープ」と定義される。対照的に、「免疫原
性エピトープ」は、抗体応答を誘発するタンパク質の一部と定義される。（例え
ば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：
３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。
【０２８２】 エピトープとして機能するフラグメントは任意の従来の手段によって産生され
得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ．Ｒ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）、米国特許第４，６３
１，２１１号でさらに記載される、を参照のこと）。
【０２８３】 本発明において、抗原性エピトープは、好ましくは少なくとも７つ、より好ま
しくは少なくとも９つ、そして最も好ましくは約１５〜約３０の間のアミノ酸の
配列を含む。抗原性エピトープは、エピトープに特異的に結合する抗体（モノク
ローナル抗体を含む）を惹起するために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、
Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，Ｊ．Ｇ．
ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−６６６（１９８３）を参照のこと）。
【０２８４】 同様に、免疫原性エピトープは、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導す
るために使用され得る（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら
、前出；Ｃｈｏｗ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，Ｆ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒ
ｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原
性エピトープは分泌タンパク質を含む。免疫原性エピトープは、動物系（例えば
、ウサギまたはマウス）にアルブミンのようなキャリアタンパク質とともに提示
され得るか、または免疫原性エピトープが十分に長い場合（少なくとも、約２５
アミノ酸）には、キャリアなしで提示され得る。しかし、わずか８〜１０アミノ
酸を含む免疫原性エピトープは、変性ポリペプチドにおいて（例えば、ウエスタ
ンブロッティングにおいて）、少なくとも直鎖状エピトープに結合し得る抗体を
惹起するのに十分であることが示されている。
【０２８５】 本明細書中で使用される用語「抗体」（Ａｂ）または「モノクローナル抗体」
（Ｍａｂ）は、タンパク質に特異的に結合し得るインタクトな分子および抗体フ
ラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）2フラグメント）を含むことを 意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）2フラグメントは、インタクトな抗体のＦ ｃフラグメントを欠損し、循環からより迅速に排除され、そしてインタクトな抗
体よりも少ない非特異的組織結合を有し得る。（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍ
ｅｄ．２４：３１６−３２５（１９８３））。従って、これらのフラグメントは
、ＦＡＢの産物または他の免疫グロブリン発現ライブラリーと同様に好ましい。
さらに、本発明の抗体はキメラ抗体、単鎖抗体、およびヒト化抗体を含む。
【０２８６】 （融合タンパク質） 本発明の任意のポリペプチドは、融合タンパク質を産生するために使用され得
る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパク質と融合される場合、抗
原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチドに対して惹起される抗体は
、ポリペプチドに結合することによって、第２のタンパク質を間接的に検出する
ために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質は、細胞位置を輸送シグナ
ルに基づいて標的化するので、本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦
融合されると標的化分子として使用され得る。
【０２８７】 本発明のポリペプチドと融合され得るドメインの例は、異種シグナル配列のみ
ならず、他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要はな
いが、リンカー配列を介して起こり得る。
【０２８８】 さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特徴を改良するため
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主
細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性および持続性を改善
するためにポリペプチドのＮ末端へ付加され得る。また、ペプチド部分は精製を
容易にするためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチ
ドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするための
ペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られる慣用の技術である。
【０２８９】 さらに、本発明のポリペプチド（フラグメント、そして特にエピトープを含む
）は、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの一部と組み合わせられ得、キ
メラポリぺプチドを生じる。これらの融合タンパク質は精製を容易にし、そして
インビボにおける半減期の増大を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリ
ペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖また
は軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する（ＥＰ
Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４
−８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有
する融合タンパク質もまた、単量体分泌タンパク質またはタンパク質フラグメン
ト単独よりも、他の分子に結合しそして中和するのにさらに有効であり得る（Ｆ
ｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３９５８−３９６４
（１９９５））。
【０２９０】 同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応特許第２０４５８６９
号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに免疫グロブリン分子の定常
領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク
質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改善さ
れた薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは
、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原として
使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の発
見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニス
トを同定するための高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分
と融合されてきた（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏ
ｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）
。
【０２９１】 さらに、本発明のポリペプチドはマーカー配列（例えば、融合されたポリペプ
チドの精製を容易にするペプチド）に融合され得る。好ましい実施態様において
、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐ
ＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，
Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、
これらの多くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１
９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の利便性
の良い精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タ
グは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗ
ｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４））。
【０２９２】 従って、任意のこれら上記の融合物は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドを使用して操作され得る。
【０２９３】 （ベクター、宿主細胞、およびタンパク質の産生） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および
組換え技術によるポリペプチドの産生に関連する。例えば、ベクターは、ファー
ジベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベ
クターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製
欠損であり得る。後者の場合、一般的にウイルス増殖は、補完性（ｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉｎｇ）宿主細胞にのみ生じる。
【０２９４】 ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含むベクター
に連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物のよ
うな沈澱物において、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクター
がウイルスである場合、ウィルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使
用してインビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る
。
【０２９５】 ポリヌクレオチド挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げれば、例えば
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によ
って発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、お
よび翻訳されたポリペプチドの末端に適切に位置付けされる終結コドン（ＵＡＡ
、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
【０２９６】 示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカー
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためにはジヒドロ葉酸レダクタ
ーゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細
菌において培養するためにはテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシリ
ン耐性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例としては、細菌細胞（例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ細胞およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞；Ｄｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｓ２細胞およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；Ｃ
ＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような
動物細胞；ならびに植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。上記の宿
主細胞のための適切な培養培地および培養条件は、当該分野で公知である。
【０２９７】 細菌における使用のために好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ならびにｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２
３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの
中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳ
ＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。他の適切なベク
ターは当業者に容易に明らかである。
【０２９８】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６）のような多くの
標準的研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、組換えベクタ
ーを欠損する宿主細胞によって実際に発現され得ることが特に意図される。
【０２９９】 本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
【０３００】 本発明のポリペプチド、および好ましくは分泌形態はまた、以下から回収され
得る：直接単離されるかまたは培養されるかにかかわらず、体液、組織および細
胞を含む天然の供給源から精製された産物；化学的合成手順の産物；ならびに、
例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を
含む、原核生物宿主または真核生物宿主から組換え技術によって産生された産物
。組換え産生手順に使用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリ
コシル化されてもまたはグリコシル化されていなくともよい。さらに、本発明の
ポリペプチドはまた、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において
、最初の改変されたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コド
ンによってコードされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞において翻
訳後に任意のタンパク質から高い効率で除去されることは当該分野において周知
である。ほとんどのタンパク質においてＮ末端メチオニンはまた、ほとんどの原
核生物において効果的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原
核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存
して非効率的である。
【０３０１】 本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を包含することに
加えて、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の一次（ｐｒｉｍ
ａｒｙ）宿主細胞、二次（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細
胞を含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、コード配列）を欠
失または置換するように操作されており、そして／または本発明のポリヌクレオ
チドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレオチド配列）を
含むように操作されており、そして内因性のポリヌクレオチドを活性化、変更、
および／または増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、相同組換えを介し
て、異種制御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）および
内因性ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結するために使用され得る（例えば
、１９９７年６月２４日に発行された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９
６年９月２６日に公開された国際公開番号第ＷＯ ９６／２９４１１号；１９９
４年８月４日に公開された国際公開番号第ＷＯ ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌ
ｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８
９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３
５−４３８（１９８９）を参照のこと。これら各々の開示は、それら全体におい
て参考として援用される）。
【０３０２】 （ポリヌクレオチドの使用） 本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法に
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
【０３０３】 本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列デ
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング（ｍａｒｋｉｎｇ）試薬は現在ほ
とんど利用可能ではないので、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在し
ている。本発明の各々のポリヌクレオチドは、染色体マーカーとして使用され得
る。
【０３０４】 簡潔に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列からＰＣＲプライマー（好
ましくは１５〜２５ｂｐ）を調製することによって染色体にマッピングされ得る
。プライマーが、ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたが
らないように、プライマーは、コンピューター分析を使用して選択され得る。次
いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰ
ＣＲスクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含
むそれらのハイブリッドのみが、増幅したフラグメントを産生する。
【０３０５】 同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰ
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが決定され得る。さらに、ポリヌクレオチドの
準局在化（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグメントの
パネルで達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピングストラテジーは、イ
ンサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ ｆｌ
ｏｗ ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤ
ＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択を含む
。
【０３０６】 ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して達
成され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ：ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）を参照のこと。
【０３０７】 染色体マッピングについて、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体または
その染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位および
／または複数染色体をマークするために）使用され得る。好ましいポリヌクレオ
チドは、ｃＤＮＡの非コード領域に対応する。なぜなら、コード配列は、遺伝子
ファミリー内により保存される傾向があり、従って、染色体マッピングをする間
の交叉ハイブリダイゼーションの機会が増加するからである。
【０３０８】 一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、そのポリヌク
レオチドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体
位置と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確
立する。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄ
ｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉ
ｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを
通してオンラインで利用可能）において見い出される）。１メガベースのマッピ
ング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子を仮定すると、疾患と関連する染色体
領域に正確に位置付けられるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
１つであり得る。
【０３０９】 従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間でのポ
リヌクレオチドおよびその対応する遺伝子における差異が試験され得る。まず、
染色体中の可視的構造改変（例えば、欠損または転位）が染色体スプレッドにお
いて、またはＰＣＲによって試験される。構造的改変が存在しない場合、点変異
の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患個体で観察されるが、正常な個
体では観察されない変異は、その変異が疾患を引き起こし得ることを示す。しか
し、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよびその対応する遺伝子の完全
な配列決定が、その変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型性が
同定される場合、この多型性ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用され
得る。
【０３１０】 さらに、非罹患個体と比較した罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現は
、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの改変（改
変された発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
【０３１１】 前記に加えて、ポリヌクレオチドは、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮ
ＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御するために使用され得る。両方の方
法は、ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。これらの技
術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常２０〜４０塩基長であり、そして
転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：
４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６
０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ
，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ
−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ
ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒ
ａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相補的である。三重らせん形成は、
最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写の遮断を生じるが、アンチセンスＲＮＡハイブ
リダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳をブロックする。両
方の技術は、モデル系において有効であり、そして本明細書に開示される情報は
、疾患を処置するための試みにおいて、アンチセンスまたは三重らせんポリヌク
レオチドを設計するために使用され得る。
【０３１２】 本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治
療の１つの目標は、遺伝子欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生
物に正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは
、高度に正確な様式でこのような遺伝子欠損を標的化する手段を提供する。別の
目標は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入し、それによって
宿主細胞中に新しい形質を生成することである。
【０３１３】 ポリヌクレオチドはまた、微量な生物学的サンプルから個体を同定するために
有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限酵素ＤＮＡ断片
長の多型（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノム
ＤＮＡを１つ以上の制限酵素で消化し、そして職員を同定するための固有なバン
ドを生じるようにサザンブロットでプローブする。この方法は、「認識票（Ｄｏ
ｇ Ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれたりするこ
とにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない。本発明
のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとして使用さ
れ得る。
【０３１４】 本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰに対する代替として使用
され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡ（これは、次いで配列
決定され得る）を増幅しそして単離するためのＰＣＲプライマーを調製するため
に使用され得る。各個体が固有のＤＮＡ配列のセットを有するので、この技術を
使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベースが個体について
確立されると、個体が生存していようとまたは死亡していようとにかかわらず、
個体のポジティブ同定が、極めて少量の組織サンプルからなされ得る。
【０３１５】 法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を
使用することから利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例
えば、血液、唾液、精液など）のような非常に少量の生物学的サンプルから得ら
れるＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。１つの先行技術において、
ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子座から増幅された遺伝子
配列は、個体を同定するための法医学生物学において使用される（Ｅｒｌｉｃｈ
，Ｈ．，ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．（１
９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が増幅されると、これらは１
つ以上の制限酵素で消化され、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮ
Ａでプローブされたサザンブロット上で同定するバンドのセットを生じる。同様
に、本発明のポリヌクレオチドは、法医学的目的のための多型性マーカーとして
使用され得る。
【０３１６】 また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例
えば、法医学において、未知の起源の組織が提供される場合、このような必要性
が生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される特定の組織に特
異的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは
、種および／または器官の型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これら
の試薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニングするために使用され得る
。
【０３１７】 少なくとも、本発明のポリヌクレオチドは、サザンゲルでの分子量マーカーと
して、特定の細胞型における特異的ｍＲＮＡの存在に関する診断プローブとして
、新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスでの公知の配列を「差し引き（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」するためのプローブとして、「遺伝子チップ」また
は他の支持体に付着させるためのオリゴマーを選択および作製するため、ＤＮＡ
免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体を惹起させるため、ならびに免疫応答を誘発する
抗原として、使用され得る。
【０３１８】 （ポリペプチドの使用） 本明細書中に同定される各ポリペプチドは、多くの方法に使用され得る。以下
の説明は、例示としてみなされるべきであり、そして公知の技術を利用する。
【０３１９】 本発明のポリペプチドは、抗体に基づいた技術を使用して生物学的サンプル中
のタンパク質レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、組織における
タンパク質発現は、古典的な免疫組織化学法を用いて研究され得る（Ｊａｌｋａ
ｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５
）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−
３０９６（１９８７））。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用である、
抗体に基づいた他の方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）お
よびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが含まれる。適切な
抗体アッセイの標識は、当該分野で公知であり、そして、グルコースオキシダー
ゼのような酵素標識、ならびにヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）
、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およびテ
クネチウム（９９ｍＴｃ）のような放射性同位体、ならびにフルオレセインおよ
びローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。
【０３２０】 生物学的サンプル中の分泌タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、タ
ンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質をインビボ
で画像化するための抗体の標識またはマーカーとしては、Ｘ線ラジオグラフィー
、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能なものが挙げられる。Ｘ線ラジオグラフィ
ーについて、適切な標識としては、検出可能な放射線を発するが、被験体に対し
て明白に有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位体が挙げられ
る。ＮＭＲおよびＥＳＲに適切なマーカーには、例えば重水素のような検出可能
な特徴的なスピンを有するものが含まれ、これは、関連したハイブリドーマにつ
いての栄養素を標識することにより抗体に取り込まれ得る。
【０３２１】 放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、放射線不透過
性物質、または核磁気共鳴により検出可能な物質のような適切な検出可能な画像
化部分で標識された、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、哺乳動
物に（例えば、非経口的に、皮下内に、または腹腔内に）導入される。被験体の
サイズおよび用いられる画像化システムが、診断画像を生成するために必要とさ
れる画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分
の場合、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃの約
５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フラグ
メントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先的に蓄積する。インビボ腫
瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋ
ｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈ
ｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの
第１３章、Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓ
ｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。
【０３２２】 従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、この方法は、（ａ）個体の細胞
または体液中の本発明のポリペプチドの発現をアッセイする工程；（ｂ）この遺
伝子発現レベルを標準の遺伝子発現レベルと比較する工程を包含し、これによっ
て、標準的な発現レベルと比較して、アッセイされたポリペプチドの遺伝子発現
レベルの増加または減少が、障害の指標になる。
【０３２３】 さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患を処置し得る。例えば、患者は、
ポリペプチド（例えば、インスリン）の非存在またはレベルの減少を元に戻すこ
と、異なるポリペプチド（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ）の
非存在またはレベルの減少を補充すること、ポリペプチド（例えば、腫瘍遺伝子
）の活性を阻害すること、ポリペプチドの活性を（例えば、レセプターに結合す
ることによって）活性化すること、遊離リガンド（例えば、炎症を低減させる際
に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）と膜結合レセプターと競合させることに
よって膜結合レセプターの活性を減少させること、または所望の応答（例えば、
血管の成長）をもたらすことに取り組む試みにおいて、本発明のポリペプチドを
投与し得る。
【０３２４】 同様に、本発明のポリペプチドに指向される抗体もまた使用されて疾患を処置
し得る。例えば、本発明のポリペプチドに指向される抗体の投与により、そのポ
リペプチドに結合して、その過剰産生を低減し得る。同様に、抗体の投与によっ
て、例えば、膜に結合したポリペプチド（レセプター）へ結合することにより、
そのポリペプチドを活性化し得る。
【０３２５】 少なくとも、本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−
ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され
得る。ポリペプチドはまた、抗体を惹起するために使用され得、次いで、宿主細
胞の形質転換を評価する方法として、この抗体を使用して組換え細胞からのタン
パク質発現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドを使用して、以下の生物
学的活性を試験し得る。
【０３２６】 （生物学的活性） 本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドをアッセイに用いて、１つ以上
の生物学的活性について試験し得る。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドが、特定のアッセイにおいて活性を示す場合、これらの分子は、生物学的活
性に関連した疾患に関与し得る可能性がある。従って、このポリヌクレオチドお
よびポリペプチドを用いて、関連する疾患を処置し得る。
【０３２７】 （免疫活性） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、免疫細胞の増殖、分化、ま
たは移動（走化性）を活性化または阻害することによって、免疫系の不全または
障害を処置する際に有用であり得る。免疫細胞は、造血と称されるプロセス、す
なわち、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小板、赤血球、好中球、およびマクロ
ファージ）およびリンパ系細胞（ＢおよびＴリンパ球）を産生するプロセスを介
して発生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性（例え
ば、癌またはいくつかの自己免疫障害）、後天性（例えば、化学治療もしくは毒
素による）、または感染性であり得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドは、特定の免疫系の疾患または障害のマーカーまたは検出因子と
して使用され得る。
【０３２８】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、造血細胞の不全または障害
を処置または検出するのに有用であり得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドを使用して、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連する
障害を処置するための取り組みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化お
よび増殖を増加させ得る。免疫学的な不全症候群の例には、以下が挙げられるが
それらに限定されない：血液タンパク質障害（例えば、無ガンマグロブリン血症
、低ガンマグロブリン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、
ディ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症
候群、リンパ球減少、食細胞殺菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、
ヴィスコット−オールドリッチ障害、貧血、血小板減少症、または血色素尿。
【０３２９】 さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、止血活性（出
血を停止する）または血栓崩壊活性（血餅の形成）を調節するために使用され得
る。例えば、止血または血栓崩壊活性を増加させることによって、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは、血液凝固障害（例えば、無フィブリノーゲ
ン血症、因子欠乏）、血液血小板障害（例えば、血小板減少症）、または外傷、
手術もしくは他の原因から生じる創傷を処置するために使用され得る。あるいは
、止血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る、本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドを用いて、凝固を阻害または溶解し得る。これらの分子は、心臓
発作（梗塞）、発作、または瘢痕の処置に重要であり得る。
【０３３０】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、自己免疫障害を処置ま
たは検出するのに有用であり得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって、
自己を外来物質として不適切に認識することからもたらされる。この不適切な認
識は、その宿主組織の破壊を導く免疫応答を生じる。従って、免疫応答、特にＴ
細胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドの投与は、自己免疫障害を予防する際に有効な治療であり得る。
【０３３１】 本発明によって処置または検出され得る自己免疫障害の例としては、以下が挙
げられるが、それらに限定されない：アディソン病、溶血性貧血、抗リン脂質症
候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、グッド
パスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力症、神経炎、眼結
膜炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑、ライター病、スティ
ッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肺
炎症、ギヤンバレー症候群、インスリン依存性真性糖尿病、および自己免疫炎症
性眼病。
【０３３２】 同様に、例えば、喘息（特にアレルギー性喘息）または他の呼吸問題のような
アレルギー性反応および状態はまた、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドにより処置され得る。さらに、これらの分子を用いて、アナフィラキシー、
抗原性分子に対する過敏症、または血液型不適合性を処置し得る。
【０３３３】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、器官拒絶または対宿主
性移植片病（ＧＶＨＤ）を処置および／または予防するために用いられ得る。器
官拒絶は、宿主免疫細胞が免疫応答を介して移植された組織を破壊することによ
り生じる。同様に、免疫応答はまた、ＧＶＨＤに関与しているが、この場合、外
来の移植された免疫細胞は宿主組織を破壊する。免疫応答、特にＴ細胞の増殖、
分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの
投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤを予防する際に有効な治療であり得る。
【０３３４】 同様に、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、炎症を調節す
るために用いられ得る。例えば、このポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、
炎症性応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子は、以
下を含む炎症状態（慢性および急性の両方の状態）を処置するために使用され得
る：感染に関連した炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎
症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血性再灌流障害、内毒素死亡、関節炎、補体媒
介性超急性拒絶、腎炎、サイトカインまたはケモカイン誘導性肺傷害、炎症性腸
疾患、クローン病、またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過
剰産生からもたらされる状態。
【０３３５】 （過剰増殖性障害） ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、新生物を含む過剰増殖性障害を処置
または検出するために使用され得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドは、直接的相互作用または間接的相互作用を介して障害の増殖を阻害し得る
。あるいは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、過剰増殖性障害
を阻害し得る他の細胞を増殖させ得る。
【０３３６】 例えば、免疫応答を増加させることによって、特に過剰増殖性障害の抗原性の
質を上げることによって、またはＴ細胞の増殖、分化、もしくは移動によって、
過剰増殖性障害は処置され得る。この免疫応答は、存在する免疫応答を増強させ
るかまたは新たな免疫応答を開始させるかのいずれかによって上昇され得る。あ
るいは、免疫応答の減少はまた、化学療法剤のような過剰増殖性障害を処置する
方法であり得る。
【０３３７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置され得るかまたは検
出され得る過剰増殖性障害の例には、以下に見出される新生物が含まれるがこれ
らに限定されない：腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（
副腎、上皮小体、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、
神経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならび
に泌尿生殖器。
【０３３８】 同様に、他の過剰増殖性障害もまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチドにより処置または検出され得る。このような過剰増殖性障害の例としては
、以下が挙げられるがこれらに限定されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ
球増殖性障害、パラプロテイン血症、紫斑、サルコイドーシス、セザリー症候群
、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ゴーシェ病、組織球増殖症、お
よび任意の他の過剰増殖性疾患、加えて上記に列挙した器官系に見出される新生
物。
【０３３９】 （感染性疾患） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、感染因子を処置または検出
するために用いられ得る。例えば、免疫応答を上昇させることによって、特にＢ
細胞および／またはＴ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性
疾患が処置され得る。免疫応答は、既存の免疫応答を上昇させるか、または新た
な免疫応答を開始させるかのいずれかにより上昇され得る。あるいは、本発明の
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、必ずしも免疫応答を誘発すること
なく、感染因子を直接阻害し得る。
【０３４０】 ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドにより処置また
は検出され得る疾患あるいは症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイ
ルスの例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮＡウイルス科が挙げられるがこれら
に限定されない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アル
テリウイルス、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリチウイルス科、サル
コウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、フラビウイル
ス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメガ
ロウイルス、単純ヘルペス、帯状ヘルペス）、モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅ
ｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、モルビリウイルス、ラブド
ウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザ）、パポバウ
イルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例え
ば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レト
ロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガ
ウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下
を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎
、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、脳炎、眼性感染症（例えば、
結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動
性、デルタ）、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキット
リンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病
、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）
、およびウイルス血症。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて
、任意のこれらの症状もしくは疾患が処置または検出され得る。
【０３４１】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドもし
くはポリペプチドによって処置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌性因
子は、以下のグラム陰性およびグラム陽性細菌科および真菌類を含むがこれらに
限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏ
ｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、
Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄ
ｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓ
ｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ
ｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐ
ｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏ
ｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感
染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｐａ
ｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａ
ｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、およびＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃａｌ。これらの細菌または真菌の科は、以下を含むがこれらに限定され
ない疾患または症状を引き起こし得る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、
結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染
症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道感染症（例えば、百
日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱
、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ラ
イ病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマ
チ熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔ
ｏｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状もしくは疾患を処置ま
たは検出し得る。
【０３４２】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドにより処置または検
出され得る疾患あるいは症状を引き起こす寄生生物性因子としては以下のファミ
リーが挙げられるがこれらに限定されない：アメーバ、バベシア、コクシジウム
、クリプトスポリジウム、二核アメーバ（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、
交疫、外部寄生生物、ジアルジア鞭毛虫、蠕虫、リーシュマニア、タイレリア、
トキソプラスマ、トリパノソーマ、およびトリコモナス。これらの寄生生物は、
以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：疥
癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）
、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠
合併症、およびトキソプラスマ。本発明のポリペプチドもしくはポリヌクレオチ
ドを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置あるいは検出し得る。
【０３４３】 好ましくは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いる処置は、
患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者から細胞を取り出して、
本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして患者に操作した細胞を戻
す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る。さらに、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原として用いられて、感染
性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
【０３４４】 （再生） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて、細胞を分化させ、増
殖させ、そして誘引して、組織の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５
９−８７（１９９７）を参照のこと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷
（創傷、熱傷、切開、または潰瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関
節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を
含む手術、線維症、再灌流傷害、もしくは全身性サイトカイン損傷により損傷を
受けた組織を修復、置換、または保護し得る。
【０３４５】 本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
脈管（脈管およびリンパを含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱、お
よび靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減されて生
じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。
【０３４６】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、治癒するのが困難
な組織の再生を増加し得る。例えば、腱／靭帯再生を増大させることによって、
損傷後の回復時間が早まる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはま
た、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。処置され得る特定の疾
患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯欠損を含む。非治癒創
傷の組織再生のさらなる例は、褥瘡性潰瘍、ならびに脈管不全、外科的創傷、お
よび外傷性創傷に関連する潰瘍を含む。
【０３４７】 同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本
発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用することによって再生され得
る。本方法を用いて処置され得る疾患は、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患
、神経障害、または機械的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳
血管疾患、および発作（ｓｔｏｋｅ））を含む。詳細には、末梢神経傷害と関連
する疾患、末梢神経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）
、局在神経障害、および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキン
ソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候
群）はすべて、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて処置され
得る。
【０３４８】 （走化性） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性活性を有し得る。走
化性分子は、細胞（例えば、単球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好
酸球、上皮細胞、および／または内皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、
炎症、感染、または過剰増殖の部位）に誘引または駆動する。次いで、駆動した
細胞は、特定の外傷または異常性を撃退および／または治癒し得る。
【０３４９】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、特定の細胞の走化性活性を
増大し得る。次いで、これらの走化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標
的化した細胞の数を増加させることによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、ま
たは任意の免疫系障害を処置し得る。例えば、走化性分子を使用して、傷害を受
けた位置に免疫細胞を誘引することによって、組織に対する創傷および他の外傷
を処置し得る。本発明の走化性分子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷
を処置するために使用され得る。
【０３５０】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが走化性活性を阻害し得ること
もまた意図される。これらの分子はまた、障害を処置するために使用され得る。
従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性のインヒビタ
ーとして使用され得る。
【０３５１】 （結合活性） 本発明のポリペプチドは、ポリペプチドに結合する分子、またはポリペプチド
が結合する分子をスクリーニングするために使用され得る。ポリペプチドと分子
との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を活性化（アゴニスト）、
増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。そのような分子の例とし
ては、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば、レセプター）、または
低分子が挙げられる。
【０３５２】 好ましくは、分子は、ポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガンドのフ
ラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは機能的模
倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）： 第５章（１９９１）を参照のこ
と）。同様に、分子は、ポリペプチドが結合する天然のレセプター、または少な
くともポリペプチドによって結合され得るレセプターのフラグメント（例えば、
活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても、分子は、公知の技術
を用いて合理的に設計され得る。
【０３５３】 好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、ポリペプチドを、分
泌タンパク質としてまたは細胞膜上でのいずれかで発現する適切な細胞を産生す
る工程を包含する。好ましい細胞としては、哺乳動物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ、またはＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞が挙げられる。次いで、ポリペプチドを発
現する細胞（または、発現されたポリペプチドを含む細胞膜）は、好ましくは、
ポリペプチドまたは分子のいずれかの結合、刺激、または活性の阻害を観察する
ための分子を潜在的に含む試験化合物と接触される。
【０３５４】 アッセイは、ポリペプチドへの候補化合物の結合を簡単に試験し得、ここで結
合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイにおい
て検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がポリペプチドへの結合によっ
て生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
【０３５５】 あるいは、アッセイは、細胞を含まない調製物、固体支持体に接着されたポリ
ペプチド／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され
得る。アッセイはまた、ポリペプチドを含む溶液を候補化合物と混合する工程、
ポリペプチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分
子の活性または結合を、標準と比較する工程を簡単に包含し得る。
【０３５６】 好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的な結合のいずれか、またはポリペプチドとの基質についての競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
【０３５７】 これらの上記のアッセイの全ては、診断マーカーまたは予後マーカーとして使
用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子
を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者における
特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッ
セイは、適切に操作された細胞または組織からのポリペプチドの産生を阻害また
は増強し得る因子を発見し得る。
【０３５８】 従って、本発明は、以下の工程を含む本発明のポリペプチドに結合する化合物
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
【０３５９】 （他の活性） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、先に議論されるように
造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化もしくは増殖を増加または減少し得る。
【０３６０】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、哺乳動物の特徴（例え
ば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組織の割合、色素沈着、大きさ、
および形（例えば、美容外科）を調節するために使用され得る。同様に、本発明
のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、異化作用、同化作用、プロセシング
、利用、およびエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調節するため
に使用され得る。
【０３６１】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、バイオリズム、カリカディ
ック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑うつ性障害を含む）、暴力の傾
向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アクチビンまたはインヒビン様活性
によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベル、食欲、性欲、記憶、ストレ
ス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによって、哺乳動物の精神状態また
は身体状態を変更するために使用され得る。
【０３６２】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、例えば、貯蔵能力、脂
肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、補因子、または
他の栄養成分を増加または減少させるような食品添加物または保存剤として使用
され得る。
【０３６３】 （他の好ましい実施態様） 本願発明の他の好ましい実施態様は、配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少な
くとも約５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む、単離された核酸分子を含み、ここで、Ｘは表１に規定さ
れるような任意の整数である。
【０３６４】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼクローン配列の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、
そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置
の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい
。
【０３６５】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼ開始コドンの５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そ
してほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の
範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい。
【０３６６】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌ
クレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌク
レオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核
酸分子も同様に好ましい。
【０３６７】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約１５０の連続したヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子もまた好ましい。
【０３６８】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約５００の連続したヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子はさらに好ましい。
【０３６９】 さらに好ましい実施態様は、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、
ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチ
ドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチド
で終わる配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオ
チド配列を含む核酸分子である。
【０３７０】 さらに好ましい実施態様は、配列番号Ｘの完全なヌクレオチド配列に、少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３７１】 ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で核酸分子にハイブリダイ
ズする単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記のハイブリダイズする核
酸分子は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、Ａ残基のみま
たはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズし
ない。
【０３７２】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローン
を含むＤＮＡ分子を含む物質の組成物もまた好ましく、このＤＮＡ分子は、アメ
リカンタイプカルチャーコレクションに寄託された物質中に含まれ、そして上記
のｃＤＮＡクローンＩＤについて表１中に示されるＡＴＣＣ受託番号を与えられ
ている。
【０３７３】 表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローンのヌ
クレオチド配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、
このＤＮＡ分子は表１において示されるＡＴＣＣ受託番号を付与された寄託物中
に含まれる。
【０３７４】 上記の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列が、上記ヒトｃＤＮＡク
ローンによってコードされる完全なオープンリーディングフレームの配列のヌク
レオチド配列中に含まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３７５】 上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列中の少なく
とも１５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３７６】 さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
ヌクレオチド配列中の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３７７】 さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
完全なヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子である。
【０３７８】 さらに好ましい実施態様は、以下からなる群から選択される配列中の少なくと
も５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である
：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１において規定される
ような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定さ
れ、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌク
レオチド配列；上記の方法は、上記の群から選択される配列と、上記のサンプル
中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する工程、および上
記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記の選択された配列に対して少なくと
も９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
【０３７９】 上記の配列を比較する工程が、上記サンプル中の核酸分子と、上記の群から選
択される上記の配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度
を決定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、上記の配列を比
較する工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、
上記の群から選択される配列とを比較する工程によって実施される、上記方法も
また好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３８０】 さらに好ましい実施態様は、生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同
定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中
の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工
程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１におい
て規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤに
よって同定され、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡ
ＴＣＣ受託番号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコー
ドされるヌクレオチド配列。
【０３８１】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なく
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一である。
【０３８２】 表１において同定される分泌タンパク質をコードする遺伝子の異常な構造また
は発現と関連する病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好
ましく、この方法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の
連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を
含む、核酸分子を、（もしあれば）上記被験体から得られる生物学的サンプルに
おいて検出する工程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表
１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示され
るＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコ
ードされるヌクレオチド配列。
【０３８３】 病理学的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで
、上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の群から選択される配列中の少
なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
【０３８４】 上記の核酸分子のヌクレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネルを含む、単離された核酸分子を含む物質の組成物もまた好ましく、ここで
上記のパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列
中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であ
る：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表１において規定されるような
任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、か
つ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する
寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列
。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３８５】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に
、少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた
好ましく、ここでＹは、表１において規定されるような任意の整数である。
【０３８６】 上記連続したアミノ酸の配列が、表１中の配列番号Ｙについて示されるような
、ほぼ分泌部分の第１のアミノ酸の位置の残基で始まり、そしてほぼオープンリ
ーディングフレームの最後のアミノ酸の残基で終わる位置の範囲で、配列番号Ｙ
のアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３８７】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に
少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好
ましい。
【０３８８】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列
に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさら
に好ましい。
【０３８９】 配列番号Ｙの完全なアミノ酸配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含
む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３９０】 表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１中の上記のｃＤＮ
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃ
ＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全なアミノ酸配列にお
いて、少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一のア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３９１】 上記の連続したアミノ酸の配列が、表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同
定され、かつ表１中の上記のｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タ
ンパク質の分泌部分のアミノ酸配列に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３９２】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮ
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒト
ｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列中
の少なくとも約３０の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３９３】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮ
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒト
ｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列中
の少なくとも約１００の連続的なアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一である
アミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３９４】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮ
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃ
ＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列に少
なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた
、好ましい。
【０３９５】 以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０個の連続的なアミノ
酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対し
て特異的に結合する単離された抗体は、さらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸
配列（ここで、Ｙは表１で規定される任意の整数である）；および表１における
ｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１のこのｃＤＮＡクローンにつ
いて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３９６】 以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０個の連続的なアミノ
酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生
物学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸
配列（ここで、Ｙは表１で規定される任意の整数である）；および表１における
ｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、かつ表１においてこのｃＤＮＡクロー
ンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡ
クローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列；この方法は、こ
のサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列をこの
群から選択された配列と比較する工程、およびこのサンプル中におけるこのポリ
ペプチド分子の配列が、少なくとも１０個の連続的なアミノ酸のこの配列と少な
くとも９０％同一であるかどうかを決定する工程を包含する。
【０３９７】 このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を
、この群から選択される配列と比較するこの工程は、以下からなる群から選択さ
れる配列中の少なくとも１０個の連続的なアミノ酸の配列に対して、少なくとも
９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特異的に結合する抗体に対
する、このサンプル中のポリペプチドの特異的な結合の程度を決定する工程を包
含する、上記の方法もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙ
は表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローン
ＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣ
Ｃ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされ
るタンパク質の完全アミノ酸配列。
【０３９８】 配列を比較する工程が、このサンプル中のポリペプチド分子から決定されるア
ミノ酸配列を、この群から選択される配列と比較することによって行われる、上
記の方法もまた好ましい。
【０３９９】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する方法もまた好ましく、こ
こでこの方法は、このサンプル中のポリペプチド分子（このポリペプチドは、も
し存在するならば、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０
の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む）
を検出する工程を含む：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定さ
れる任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同
定されかつ表１においてこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる、分
泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４００】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する上記の方法もまた好まし
く、ここでこの方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ
酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少
なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列における少なくとも１０の
連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
【０４０１】 被験体において、表１において同定された分泌タンパク質をコードする遺伝子
の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい。
ここで、この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少な
くとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分
子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下
からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配
列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表
１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤ
によって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受
託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０２】 これらの方法のいずれかにおいて、このポリペプチド分子を検出する工程は、
抗体を使用することを包含する。
【０４０３】 以下からなる群から選択された配列中の、少なくとも１０の連続的なアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列と、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、
Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴ
ＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコード
される分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０４】 ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、原核生物宿主でのこのポリペ
プチドの発現について最適化されている、単離された核酸分子もまた、好ましい
。
【０４０５】 ポリペプチドが以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離され
た核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に
規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによ
って同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌
タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０６】 上記の単離された核酸分子のいずれかをベクター中に挿入する工程を含む、組
換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換え
ベクターも、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換え宿
主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細胞も
また、好ましい。
【０４０７】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、このポリペプチドが発現さ
れるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチ
ドを回収する工程を包含する、方法もまた、好ましい。単離されたポリペプチド
を作製するこの方法もまた好ましく、ここでこの組換え宿主細胞は真核生物細胞
であり、そしてこのポリペプチドは、以下からなる群から選択されたアミノ酸配
列を含む、ヒト分泌タンパク質の分泌部分である：配列番号Ｙの分泌部分の第１
のアミノ酸の位置の残基で始まる、配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表
１に記載される整数であり、そして配列番号Ｙの分泌部分の第１のアミノ酸の位
置は表１に規定される）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同
定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有
する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質
の分泌部分のアミノ酸配列。この方法によって生成された単離されたポリペプチ
ドもまた、好ましい。
【０４０８】 増加したレベルの分泌タンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた
、好ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタ
ンパク質の活性のレベルを増加させるのに有効な本願発明の単離されたポリペプ
チド、ポリヌクレオチド、または抗体の量を含む薬学的組成物を投与する工程を
包含する。
【０４０９】 概して、本発明を記載してきたが、本発明は、例示の目的のために提供され、
そして限定を意図しない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解
される。
【０４１０】 （実施例） （実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離） 引用されるＡＴＣＣ寄託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを示す。多くの場合において、ライブラリーを構築す
るために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクターで
ある。直下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各ファージ
ベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクローンが
ベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に示される場合、
対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
【０４１１】
【表２】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ． １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．
Ａ．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １
７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏ
ｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市
販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオ
マイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（こ
れもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得る。ｐ
ＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４つの形態で入荷する。Ｓおよび
Ｋとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「Ｋ」とは、Ｋ
ｐｎＩのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端での最初の部位で
ある）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリンカーの配向を
いう。「＋」または「−」とは 、ある方向においてｆ１ ｏｒｉから開始され
る一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方においてアンチセン
スであるようなｆ１複製起点「ｏｒｉ」の配向をいう。
【０４１２】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏ
ｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全ての
Ｓｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株Ｄ
Ｈ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能であ
る）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ
１５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎ
ｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、ア
ンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質
転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２
００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本
発明のポリヌクレオチドは、表１における特定のクローンについて同定されたフ
ァージベクター配列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列
を含まない。
【０４１３】 表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に示され
る各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表１
に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個の
プラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を含
む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃＤ
ＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含み
得る。
【０４１４】 表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サン
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
【０４１５】 特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告され
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製す
る。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混
合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術
または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を
用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択
薬剤（例えば、アンピシリン）を含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転
換体（コロニー）の密度で播種する。これらのプレートを、細菌コロニースクリ
ーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、（
１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従って
、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
【０４１６】 あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’Ｎ
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅
する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃ
ＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。慣用の反応混合物
は、１．５〜５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２ ０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマ
ーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ
（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１
分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを
用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想
される分子量のＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を、ＤＮ
Ａ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって選択された配列であ
ることを確認する。
【０４１７】 寄託されたクローンに存在しないかもしれない遺伝子の５’非コード部分また
は３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これら
の方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異
的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３
’「ＲＡＣＥ」プロトコルと類似するかまたは同一のプロトコル。例えば、５’
ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成するため
に利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ． ２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
【０４１８】 簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をお
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
【０４１９】 この上記の方法は、所望の供給源から単離された総ＲＮＡを用いて開始するが
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。こ
の反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連
結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
【０４２０】 この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を連
結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の
公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のため
のテンプレートとして使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そして
分析して５’末端配列が所望の遺伝子に属するかを確認する。
【０４２１】 （実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離） ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
【０４２２】 （実施例３：ポリペプチドの組織分布） 本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用
いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡ
プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従
って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００ TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用し
て、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、精製
した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験する
。
【０４２３】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号Ｐ
Ｔ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションお
よび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露し
、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０４２４】 （実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング） オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ， Ｉｎｃ
）に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。
反応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれ
かで分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１０
０ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
【０４２５】 （実施例５：ポリペプチドの細菌性発現） 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説する
ように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチド
プライマーを使用して増幅して、挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物
を増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニ
ングするために、好ましくはプライマーの５’末端にＢａｍＨＩおよびＸｂａＩ
のような制限部位を含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩは、細
菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ， Ｉｎｃ．， Ｃｈａｔｓｗｏｒ
ｔｈ， ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、抗生物
質耐性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能なプロモ ーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−ヒスチ
ジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする。
【０４２６】 ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅され
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
しながら、ｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで連結混合物を、ｌａｃＩリプ
レッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲ ＥＰ４の多重コピーを含む、Ｅ． ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ
， Ｉｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、それらのＬＢプ
レート上で生育できる能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン
耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって
確認する。
【０４２７】 所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種す
るために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の吸光度６００（Ｏ．Ｄ．600 ）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピ
ラノシド）を最終濃度１ ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリプ
レッサーの不活化によりＰ／Ｏの活性化を誘導し、遺伝子発現の増加を導く。
【０４２８】 細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×
ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６
ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させる
。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、ニ
ッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムにロ
ードする（ＱＩＡＧＥＮ， Ｉｎｃ． 前出より入手可能）。６×Ｈｉｓタグを
有するタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１
工程手順で精製され得る（詳細には、ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ （１
９９５） ＱＩＡＧＥＮ， Ｉｎｃ．， 前出を参照のこと）。
【０４２９】 手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ ８のカラムにロード
し、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ ８で洗浄し、
次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ ６で洗浄し、最後にポリペプ
チドを、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ ５で溶出する。
【０４３０】 次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対し
て透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラム
に固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りであ
る：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ ｍＭ ＮａＣｌ、２０％ グリ
セロール、２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の
直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである
。再生後、タンパク質を２５０ ｍＭ イミダゾールの添加によって溶出させる
。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム ｐＨ ６の緩衝
液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製
したタンパク質を、４℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。
【０４３１】 上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マー
カーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ． ｃｏｌ
ｉ複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレータ
ー配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレ
ッサー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオ
ペレーター配列を合成的に作製する。
【０４３２】 ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８によっ
てベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きなフラグ
メント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対である
べきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮＡ
挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ
、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプラ
イマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。Ｐ
ＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物および
ベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
【０４３３】 操作されたベクターは、上記のプロトコールにおいて、細菌系でタンパク質を
発現させるために容易に置換され得る。
【０４３４】 （実施例６：封入体由来のポリペプチドの精製） 以下の別の方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ． ｃ
ｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定さ
れない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
【０４３５】 Ｅ． ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そ
して１５，０００ ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ
）によって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想
される収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの
適切な量（重量による）を、１００ ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤＴＡ、
ｐＨ ７．４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して
均質な懸濁液に分散させる。
【０４３６】 次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｃｏｒｐ． またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，
Ｉｎｃ．）に２回、４０００〜６０００ ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解
させる。次いでホモジネートを、最終濃度０．５ Ｍ ＮａＣｌになるようにＮ
ａＣｌ溶液と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られた
ペレットを、０．５ Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、ｐＨ ７．４を使用して再度洗浄する。
【０４３７】 得られた洗浄した封入体を、１．５ Ｍ 塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２
〜４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄
し、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧ
ｕＨＣｌ抽出を可能にする。
【０４３８】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、Ｇｕ
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ ｍＭ ナトリウム、ｐ
Ｈ ４．５、１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、２ ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩
衝液とを、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳
みした希釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで
４℃で保つ。
【０４３９】 再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄化にするために、あらかじめ準備した
４０ ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する
０．１６μｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌ
ｔｒｏｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏ
ｒｏｓ ＨＳ−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロ
ードする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で洗浄し、そし
て同じ緩衝液中の２５０ ｍＭ、５００ ｍＭ、１０００ ｍＭ、および１５０
０ ｍＭ ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０ ｎｍにおけ
る吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
ってさらに分析する。
【０４４０】 次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次
いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ
−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（
Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交
換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．０、２００ ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラム
を１０カラム容量の直線的勾配（０．２ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナト
リウム、ｐＨ ６．０から１．０ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．５の範囲）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ280モニ タリング下で収集する。次いで、（例えば、１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって
判明した）ポリペプチドを含む画分をプールする。
【０４４１】 得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高
い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
から観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ
混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０４４２】 （実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングお
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体ウイルス
（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘｂ
ａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス４
０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために
使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にある
弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含
む。挿入された遺伝子は両方の側で、クローン化したポリヌクレオチドを発現す
る生存可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同
組換えのためのウイルス配列と隣接する。
【０４４３】 他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌など（必要とされる場合、シグナルペプチドおよびインフレームなＡＵ
Ｇを含む）のために適切に配置されたシグナルを提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９ （１９８９） に記載される。
【０４４４】 具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列（これは、表１に示
されるＡＵＧ開始コドンおよび天然に付随するリーダー配列を含む）を、実施例
１に記載されるＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナ
ル配列を使用して分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグ
ナルペプチドを必要としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら（「Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅ
ｄｕｒｅｓ」、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ． １５５５ （１９８７））
に記載される標準的な方法を用いて改変して、バキュロウイルスリーダー配列を
含ませ得る（ｐＡ２ ＧＰ）。
【０４４５】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ）を使用して、１％アガロース
ゲルから単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再び
１％アガロースゲルで精製する。
【０４４６】 プラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野で公
知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸し得る。次
いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ
．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離する。
【０４４７】 フラグメントおよび脱リン酸したプラスミドを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用い
て互いに連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ
）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転換し、そし
て培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニー由来のＤ
ＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析することにより同定
する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によって確認する
。
【０４４８】 このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９
８７）によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の
線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌｏｖｉ
ｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ととも
に同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTMウイルスＤＮＡ
および５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含む、
マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌの
リポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５
分間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清グレ
ース培地１ｍｌを加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（
ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加える。次いでプレートを２７℃で５
時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をプレートから除
去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加す
る。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
【０４４９】 ４日後上清を収集し、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、前出によって記載さ
れたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むアガロース
ゲルを、ｇａｌが発現しているクローン（青色に着色したプラークを生ずる）の
容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークアッ
セイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，９−１０頁によって頒布される、昆虫細胞培養およ
びバキュロウイルス学のための使用者ガイドの中に見出され得る）。適切なイン
キュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例えば、
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、
２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、そして
組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ｍｍディッシュに播種したＳｆ９
細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの上清を採
集し、次いで４℃に貯蔵する。
【０４５０】 ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレ
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。放射性標識
したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオニ
ンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に置き換え
る。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−システイ
ン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間インキ
ュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質および細胞
内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、次いでオートラジオグラフィーに
よって（放射性標識した場合）分析する。
【０４５１】 精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
【０４５２】 （実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現） 本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞中で発現させ得る。代表的な哺乳動物
発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を仲介するプロモーターエレメント、タ
ンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要な
シグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、および
、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列を
含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レ
トロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴ
Ｒ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成
される。しかし、細胞内エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もま
た、使用され得る。
【０４５３】 本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターは、例えば、ｐＳＶＬおよび
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃ
ａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、
ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、ならび
にｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動物宿
主細胞は、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、
マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ ７細胞
およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイニー
ズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
【０４５４】 あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０４５５】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百のコピーまたは数千ものコピーさえも有する細胞株の開発に有用
である。（例えば、Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１
３５７−１３７０（１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ，Ｊ．Ｌ．およびＭａ，Ｃ．、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１０９７：１０７−１４３（
１９９０）：Ｐａｇｅ，Ｍ．Ｊ．およびＳｙｎｄｅｎｈａｍ，Ｍ．Ａ．、Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照のこと）。別の有用
な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら
、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎ
ｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２
））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そ
してもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組
み込まれた、増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）
およびＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。
【０４５６】 プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体であ
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４３８−４４７（
１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハンサ
ー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））のフラ
グメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制限酵
素切断部位を有するマルチプルクローニングサイトは、目的の遺伝子のクローニ
ングを容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロインシュ
リン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初期プロ
モーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
【０４５７】 具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６は、適切な制限酵素によって消化され
、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ）を使用して脱リン酸する。次いで、ベクターを１％アガロースゲルか
ら単離する。
【０４５８】 本発明のポリヌクレオチドは、実施例１に概説するプロトコルに従って増幅さ
れる。天然に存在するシグナル配列が、分泌タンパク質を産生するために使用さ
れる場合、ベクターは、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天
然に存在するシグナル配列が使用されない場合には、ベクターは異種シグナル配
列を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０４５９】 増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲルから
単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再び１％
アガロースゲル上で精製する。
【０４６０】 次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲ
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸したベクターを
、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１または
ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入されたフ
ラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
【０４６１】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠損するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクト
する（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優勢選択マ
ーカーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵
素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し
、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／
ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプ
レート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後、
単一のクローンをトリプシン処理し、次いでメトトレキサートの異なる濃度（５
０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウ
ェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサー
トの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μＭ
、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに移
す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで
繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエス
タンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０４６２】 （実施例９：タンパク質融合物） 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これら
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７もまた参照のこと；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３３１：８４−８６.0（１９８８））。同様に、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ
−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発明
のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下局在
性に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマーまたはホモダイマーは、融合
タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合タンパク質はまた、１つより
多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に、融合タンパク質は、非融合
タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性および／または安定性を増大さ
せ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリぺプチドのＩｇＧ分子への融
合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に記載されるプロトコルを改変
することによって作製され得る。
【０４６３】 簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位を有するべきである。
【０４６４】 例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限され、ベクターを線状化し、そして実施例１に記
載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、この
ＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクローン
化され、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意すること。
【０４６５】 天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。 ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域：
【０４６６】
【化１４】 （実施例１０：ポリぺプチドからの抗体の産生） 本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと。）例えば、本発明のポリぺプチドを発現
する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導するために動物に投与
される。好ましい方法において、分泌タンパク質の調製物が調製され、そして精
製されて、天然の夾雑物を実質的に含まないようにされる。次いで、このような
調製物は、動物に導入されて、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を生成
する。
【０４６７】 最も好ましい方法において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体（または、
そのタンパク質結合フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体は、
ハイブリドーマ技術を使用して調製され得る（Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ． ６：５１１（１９７６）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ． ６：２９２（１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅ
ｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、このよ
うな手順は、動物（好ましくは、マウス）をポリぺプチドで免疫化すること、ま
たはより好ましくは、分泌ポリぺプチド発現細胞での免疫化を含む。このような
細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養され得る；しかし、１０％ウシ
胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミ
ノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレ
プトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地において細胞を培養する
ことが好ましい。
【０４６８】 このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切なミエローマ細胞株と融合
される。任意の適切なミエローマ細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しか
し、ＡＴＣＣから入手可能な親ミエローマ細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好
ましい。融合後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に
維持し、次いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２
５−２３２（１９８１））に記載されるように限界希釈によってクローニングす
る。このような選択によって得られるハイブリドーマ細胞は、次いでポリぺプチ
ドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。
【０４６９】 あるいは、ポリぺプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗イディオタイプ抗体
を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗体それ
自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得ることが可能である
という事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体が使用されて
、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾細胞を
使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、ハイブリドーマ細胞は、タ
ンパク質特異的抗体に結合する能力がポリぺプチドによってブロックされ得る抗
体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングされる。このような抗体
は、タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そして動物を
免疫してさらなるタンパク質特異的抗体の形成を誘導するために使用され得る。
【０４７０】 ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに本発明の抗体の他のフラグメントは、本
明細書中で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。このような
フラグメントは、代表的には、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）
またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するため）のような酵素を
使用して、タンパク質分解性切断によって産生される。あるいは、分泌タンパク
質結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術の適用により、または合成化学により
産生され得る。
【０４７１】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、「ヒト化」キメラモノクローナル
抗体を使用することが好ましくあり得る。このような抗体は、上記のモノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝的構築物を使用すること
によって産生され得る。キメラ抗体を産生するための方法は当該分野で公知であ
る。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２
（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）
；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら
、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅ
ｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７
１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３ （１９８４）；Ｎ
ｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと
。） （実施例１１：高処理能力スクリーニングアッセイのための分泌タンパク質の
産生） 以下のプロトコルは、試験されるべきポリぺプチドを含有する上清を産生する
。次いで、この上清は、実施例１３〜２０に記載されるスクリーニングアッセイ
において使用され得る。
【０４７２】 第一に、ポリ−Ｄ−リジン（６４４ ５８７ Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎ
ｎｈｅｉｍ）ストック溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウム
もマグネシウムも含まない１７−５１６Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で１
：２０に希釈して、作業溶液５０μｇ／ｍｌにする。２００μｌのこの溶液を、
各ウェル（２４ウェルプレート）に添加し、室温で２０分間インキュベートする
。溶液を各ウェルにわたって分配させることを確実にする（注：１２チャンネル
ピペッターは、１つおきのチャンネルにチップをつけて使用され得る）。ポリ−
Ｄ−リジン溶液を吸引除去し、そして１ｍｌ ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水
）でリンスする。ＰＢＳは、細胞をプレートする直前までウェル中に残すべきで
あり、そしてプレートは２週間前までに予めポリリジンでコーティングし得る。
【０４７３】 ２９３Ｔ細胞（Ｐ＋２０を過ぎて細胞を保有しない）を、２×１０5細胞／ウ ェルで、０．５ｍｌのＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地）（４．
５Ｇ／ＬのグルコースおよびＬ−グルタミン（１２−６０４Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔ
ｔａｋｅｒ）を含む）／１０％熱非働化ＦＢＳ（１４−５０３Ｆ Ｂｉｏｗｈｉ
ｔｔａｋｅｒ）／１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐ（１７−６０２Ｅ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａ
ｋｅｒ）中にプレートする。細胞を一晩増殖させる。
【０４７４】 翌日、滅菌溶液容器（ｂａｓｉｎ）中で、３００μｌＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉ
ｎｅ（１８３２４−０１２ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）および５ｍｌ Ｏｐｔｉｍｅ
ｍ Ｉ（３１９８５０７０ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）／９６ウェルプレートを、一
緒に混合する。小容量のマルチチャンネルピペッターを用いて、実施例８または
９に記載する方法によって産生されたポリヌクレオチド挿入物を含有する約２μ
ｇの発現ベクターを、適切に標識された９６ウェルの丸底プレート中にアリコー
トする。マルチチャンネルピペッターを用いて、５０μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａ
ｍｉｎｅ／Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ混合物を各ウェルに添加する。ピペットで緩やか
に吸い上げたり下げたりして混合する。室温で１５〜４５分間インキュベートす
る。約２０分後、マルチチャンネルピペッターを使用して１５０μｌのＯｐｔｉ
ｍｅｍ Ｉを各ウェルに添加する。コントロールとして、挿入物を欠失するベク
ターＤＮＡの１つのプレートは、トランスフェクションの各セットでトランスフ
ェクトされるべきである。
【０４７５】 好ましくは、トランスフェクションは、以下の作業をタッグチームを組んで（
ｔａｇ−ｔｅａｍｉｎｇ）行うべきである。タッグチームを組むことによって、
時間に関する労力は半減され、そして細胞にはＰＢＳ上であまり多くの時間を過
ごさせない。まず、Ａさんは、培地を細胞の４つの２４ウェルプレートから吸引
除去し、次いでＢさんが０．５〜１ｍｌのＰＢＳで各ウェルをリンスする。次い
で、Ａさんは、ＰＢＳリンスを吸引除去し、そしてＢさんは、チャンネル１つお
きにチップのついた１２チャンネルピペッターを使用して、２００μｌのＤＮＡ
／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ／Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ複合体を、まず奇数のウェ
ルに、次いで偶数のウェルにと、２４ウェルプレート上の各列に添加する。３７
℃で６時間インキュベートする。
【０４７６】 細胞をインキュベートする間に、１×ペンストレップ（ｐｅｎｓｔｒｅｐ）を
有するＤＭＥＭ中の１％ＢＳＡか、または２ｍＭグルタミンおよび１×ペンスト
レップを含むＣＨＯ−５培地（１１６．６ｍｇ／ＬのＣａＣｌ2（無水物）；０ ．００１３０ｍｇ／Ｌ ＣｕＳＯ4−５Ｈ2Ｏ；０．０５０ｍｇ／ＬのＦｅ（ＮＯ 3 ）3−９Ｈ2Ｏ；０．４１７ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；３１１．８０ｍｇ ／ＬのＫＣｌ；２８．６４ｍｇ／ＬのＭｇＣｌ2；４８．８４ｍｇ／ＬのＭｇＳ Ｏ4；６９９５．５０ｍｇ／ＬのＮａＣｌ；２４００．０ｍｇ／ＬのＮａＨＣＯ3 ；６２．５０ｍｇ／ＬのＮａＨ2ＰＯ4−Ｈ2Ｏ；７１．０２ｍｇ／ＬのＮａ2ＨＰ
Ｏ4；０．４３２０ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；０．００２ｍｇ／Ｌのアラ キドン酸；１．０２２ｍｇ／Ｌのコレステロール；０．０７０ｍｇ／ＬのＤＬ−
α−酢酸トコフェロール；０．０５２０ｍｇ／Ｌのリノール酸；０．０１０ｍｇ
／Ｌのリノレン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのミリスチン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌの
オレイン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミトオレイン酸（ｐａｌｍｉｔｒｉｃ
ａｃｉｄ）；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミチン酸；１００ｍｇ／ＬのＰｌｕｒｏ
ｎｉｃ Ｆ−６８；０．０１０ｍｇ／Ｌのステアリン酸；２．２０ｍｇ／ＬのＴ
ｗｅｅｎ８０；４５５１ｍｇ／ＬのＤ−グルコース；１３０．８５ｍｇ／ｍｌの
Ｌ−アラニン；１４７．５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アルギニン−ＨＣｌ；７．５０ｍ
ｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン−Ｈ2Ｏ；６．６５ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン 酸；２９．５６ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン２ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；３１．２９ｍｇ／ ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ；７．３５ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン酸；３６
５．０ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン；１８．７５ｍｇ／ｍｌのグリシン；５２．
４８ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン−ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；１０６．９７ｍｇ／ｍｌの Ｌ−イソロイシン；１１１．４５ｍｇ／ｍｌのＬ−ロイシン；１６３．７５ｍｇ
／ｍｌのＬ−リジンＨＣｌ；３２．３４ｍｇ／ｍｌのＬ−メチオニン；６８．４
８ｍｇ／ｍｌのＬ−フェニルアラニン；４０．０ｍｇ／ｍｌのＬ−プロリン；２
６．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−セリン；１０１．０５ｍｇ／ｍｌのＬ−スレオニン；
１９．２２ｍｇ／ｍｌのＬ−トリプトファン；９１．７９ｍｇ／ｍｌのＬ−チロ
シン（Ｔｒｙｒｏｓｉｎｅ）−２Ｎａ−２Ｈ2Ｏ；９９．６５ｍｇ／ＬのＬ−バ リン；０．００３５ｍｇ／Ｌのビオチン；３．２４ｍｇ／ＬのＤ−Ｃａパントテ
ン酸；１１．７８ｍｇ／Ｌの塩化コリン；４．６５ｍｇ／Ｌの葉酸；１５．６０
ｍｇ／Ｌのｉ−イノシトール；３．０２ｍｇ／Ｌのナイアシンアミド；３．００
ｍｇ／ＬのピリドキサールＨＣｌ；０．０３１ｍｇ／ＬのピリドキシンＨＣｌ；
０．３１９ｍｇ／Ｌのリボフラビン；３．１７ｍｇ／ＬのチアミンＨＣｌ；０．
３６５ｍｇ／Ｌのチミジン；および０．６８０ｍｇ／ＬのビタミンＢ12；２５ｍ
ＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤；２．３９ｍｇ／Ｌのヒポキサンチンナトリウム；０．１
０５ｍｇ／Ｌのリポ酸；０．０８１ｍｇ／Ｌのプトレシンナトリウム−２ＨＣｌ
；５５．０ｍｇ／Ｌのピルビン酸ナトリウム；０．００６７ｍｇ／Ｌの亜セレン
酸ナトリウム；２０μＭのエタノールアミン；０．１２２ｍｇ／Ｌのクエン酸第
二鉄；４１．７０ｍｇ／Ｌのリノール酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロデキ
ストリン；３３．３３ｍｇ／Ｌのオレイン酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロ
デキストリン；ならびに１０ｍｇ／Ｌのレチナールと複合体化したメチル−Ｂ−
シクロデキストリン）のいずれかの適切な培地を調製する。（１０％ＢＳＡスト
ック溶液のために、１Ｌ ＤＭＥＭ中にＢＳＡ（８１−０６８−３ Ｂａｙｅｒ
） １００ｇを溶解する）。培地を濾過し、そして５０μｌを内毒素アッセイの
ために１５ｍｌポリスチレンコニカル中に収集する。
【０４７７】 トランスフェクション反応を、好ましくはタッグチームを組んでインキュベー
ション時間の終わりに終結させる。Ａさんは、トランスフェクション培地を吸引
除去し、その間Ｂさんは、１．５ｍｌの適切な培地を各ウェルに添加する。使用
された培地に依存して４５または７２時間、３７℃でインキュベートする：１％
ＢＳＡは４５時間、またはＣＨＯ−５は７２時間。
【０４７８】 ４日目に、３００μｌのマルチチャンネルピペッターを使用して、６００μｌ
を１ｍｌの深底ウェルプレート１枚にアリコートし、そして残りの上清を２ｍｌ
の深底ウェルにアリコートする。次いで、各ウェルからの上清を実施例１３〜２
０に記載するアッセイにおいて使用し得る。
【０４７９】 活性が、上清を使用して以下に記載する任意のアッセイにおいて得られる場合
、この活性は、ポリぺプチドから直接に（例えば、分泌タンパク質として）か、
またはこのポリぺプチドによって誘導される他のタンパク質の発現（これは、次
いで上清中に分泌される）のいずれかに由来することが特に理解される。従って
、本発明はさらに、特定のアッセイにおける活性によって特徴づけられる上清中
のタンパク質を同定する方法を提供する。
【０４８０】 （実施例１２：ＧＡＳレポーター構築物の構築） 細胞の分化および増殖に関与する１つのシグナル伝達経路は、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路と呼ばれる。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化タンパク質は、多くの遺伝子
のプロモーターに位置する、γ活性化部位「ＧＡＳ」エレメントまたはインター
フェロン感受性応答エレメント（「ＩＳＲＥ」）に結合する。これらのエレメン
トに対するタンパク質の結合は、関連する遺伝子の発現を変化させる。
【０４８１】 ＧＡＳおよびＩＳＲＥエレメントは、転写のシグナルトランスデューサーおよ
びアクチベーター、すなわち「ＳＴＡＴ」と呼ばれる転写因子のクラスによって
認識される。ＳＴＡＴファミリーには６つのメンバーが存在する。Ｓｔａｔ１お
よびＳｔａｔ３は、Ｓｔａｔ２と同様に（ＩＦＮαに対する応答が広範であるよ
うに）、多くの細胞型において存在する。Ｓｔａｔ４は、より限定されており、
そして多くの細胞型には存在しないが、ＩＬ−１２での処理後のＴヘルパークラ
スＩ細胞に見出されている。Ｓｔａｔ５は、元々は乳房成長因子と呼ばれたが、
骨髄細胞を含む他の細胞においてより高い濃度で見出されている。それらは、多
くのサイトカインによって組織培養細胞において活性化され得る。
【０４８２】 ＳＴＡＴは活性化されて、Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅ（「Ｊａｋｓ」）ファミ
リーとして知られる１セットのキナーゼによるチロシンリン酸化に際して細胞質
から核へ移動する。Ｊａｋは、可溶性のチロシンキナーゼの独特のファミリーを
表わし、そしてＴｙｋ２、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、およびＪａｋ３を含む。これら
のキナーゼは、有意な配列類似性を示し、そして一般には休止細胞において触媒
的に不活性である。
【０４８３】 Ｊａｋは、以下の表によって要約されるように広範なレセプターによって活性
化される。（ＳｃｈｉｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．６４：６２１−５１（１９９５）による総説から改変。）Ｊａｋを活
性化し得るサイトカインレセプターファミリーは、２つの群に分けられる：（ａ
）クラス１は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９
、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、Ｅｐｏ、ＰＲＬ、ＧＨ、Ｇ−ＣＳＦ、
ＧＭ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、およびトロンボポエチンについてのレセプタ
ーを含み；そして（ｂ）クラス２は、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、およびＩＬ−１
０を含む。クラス１レセプターは、保存されたシステインモチーフ（４つの保存
されたシステインおよび１つのトリプトファンのセット）、およびＷＳＸＷＳモ
チーフ（Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘｘｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（配列番号２）をコードする
膜近接領域）を共有する。
【０４８４】 従って、リガンドのレセプターへの結合の際に、Ｊａｋは活性化され、これは
次いでＳＴＡＴを活性化し、これは、次いで移動し、そしてＧＡＳエレメントに
結合する。この全プロセスは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に包含される
。
【０４８５】 それゆえ、ＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントの結合によって反映されるＪａｋ
−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示す
ために使用され得る。例えば、成長因子およびサイトカインは、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路を活性化することが知られている。（以下の表を参照のこと）。従って、
レポーター分子に連結したＧＡＳエレメントを使用することにより、Ｊａｋ−Ｓ
ＴＡＴ経路のアクチベーターが同定され得る。
【０４８６】
【表３】 実施例１３〜１４に記載される生物学的アッセイにおいて使用されるプロモー
ターエレメントを含む合成ＧＡＳを構築するために、ＰＣＲに基づいたストラテ
ジーを用いてＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーター配列を産生する。５’プライマーは
、ＩＲＦ１プロモーターにおいて見出され、そして一定の範囲のサイトカインで
の誘導の際にＳＴＡＴに結合することが以前に証明されたＧＡＳ結合部位の４つ
の直列のコピーを含むが（Ｒｏｔｈｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４５７−
４６８（１９９４））、他のＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントを代わりに使用し
得る。５’プライマーはまた、ＳＶ４０初期プロモーター配列に対して相補的な
１８ｂｐの配列も含み、そしてＸｈｏＩ部位に隣接する。５’プライマーの配列
は以下である：
【０４８７】
【化１５】 下流プライマーはＳＶ４０プロモーターに対して相補的であり、そしてＨｉｎ
ｄ ＩＩＩ部位に隣接する：５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧ
ＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列番号４）。
【０４８８】 ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したＢ−ｇａｌ：プロモータープラ
スミド中に存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを用いて実施する。得
られたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩ／Ｈｉｎｄ ＩＩＩを用いて消化し、そし
てＢＬＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。順方向プラ
イマーおよび逆方向のプライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列
を含むことを確認する：
【０４８９】
【化１６】 次に、ＳＶ４０プロモーターに結合したこのＧＡＳプロモーターエレメントを
用いて、ＧＡＳ：ＳＥＡＰ２レポーター構築物を操作する。ここで、このレポー
ター分子は、分泌アルカリホスファターゼ、すなわち「ＳＥＡＰ」である。しか
し、明らかに、この実施例または他の実施例のいずれにおいても、任意のレポー
ター分子が、ＳＥＡＰの代わりとなり得る。ＳＥＡＰの代わりに使用され得る周
知のレポーター分子としては、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラー
ゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダー
ゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、または抗体により検出可能な任意のタンパ
ク質が挙げられる。
【０４９０】 合成ＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーターエレメントと確認された上記の配列を、Ｇ
ＡＳ−ＳＥＡＰベクターを作製するために、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩを用
いて、ＳＶ４０プロモーターを、増幅したＧＡＳ：ＳＶ４０プロモーターエレメ
ントで効率的に置換し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐＳＥＡＰ−プロモータ
ーベクターにサブクローニングする。しかし、このベクターはネオマイシン耐性
遺伝子を含まず、それゆえ、哺乳動物の発現系には好ましくない。
【０４９１】 従って、ＧＡＳ−ＳＥＡＰレポーターを発現する哺乳動物の安定な細胞株を作
製するために、ＧＡＳ−ＳＥＡＰカセットを、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを用いて
ＧＡＳ−ＳＥＡＰベクターから取り出し、そしてＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベク
ターを作製するために、マルチクローニング部位におけるこれらの制限部位を用
いて、ネオマイシン耐性遺伝子を含むバックボーンベクター（例えば、ｐＧＦＰ
−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ））に挿入する。一旦、このベクターを哺乳動物細胞に
トランスフェクトすれば、次いでこのベクターは、実施例１３〜１４に記載され
るようにＧＡＳ結合についてのレポーター分子として使用され得る。
【０４９２】 他の構築物を、上記の記載を使用し、そしてＧＡＳを異なるプロモーター配列
で置換して、作製し得る。例えば、ＮＦＫ−ＢおよびＥＧＲプロモーター配列を
含むレポーター分子の構築を、実施例１５および１６に記載する。しかし、多く
の他のプロモーターをこれらの実施例に記載のプロトコルを使用して置換し得る
。例えば、ＳＲＥ、ＩＬ−２、ＮＦＡＴ、またはオステオカルシンのプロモータ
ーを単独で、または組み合わせて（例えば、ＧＡＳ／ＮＦ−ＫＢ／ＥＧＲ、ＧＡ
Ｓ／ＮＦ−ＫＢ、Ｉｌ−２／ＮＦＡＴ、またはＮＦ−ＫＢ／ＧＡＳ）置換し得る
。同様に、他の細胞株（例えば、ＨＥＬＡ（上皮細胞）、ＨＵＶＥＣ（内皮細胞
）、Ｒｅｈ（Ｂ細胞）、Ｓａｏｓ−２（骨芽細胞）、ＨＵＶＡＣ（大動脈細胞）
、または心筋細胞）を、レポーター構築物の活性を試験するために使用し得る。
【０４９３】 （実施例１３：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ） 以下のプロトコルを、例えば、Ｔ細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およ
びサイトカインのような因子を同定することによりＴ細胞の活性を評価するため
に使用する。Ｔ細胞の活性を実施例１２で作製したＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構
築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊａｋｓ−
ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化する能力を示す。このアッセイに使用した
Ｔ細胞は、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＴＩＢ−１５２）であるが
、Ｍｏｌｔ−３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５５２）およびＭｏｌｔ−４
細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８２）細胞もまた使用し得る。
【０４９４】 Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞は、リンパ芽球性ＣＤ４＋ Ｔｈ１ヘルパー細胞である
。安定な細胞株を作製するために、およそ２００万のＪｕｒｋａｔ細胞をＤＭＲ
ＩＥ−Ｃ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＧＡＳ−ＳＥＡＰ
／ｎｅｏベクターでトランスフェクト（以下に記載のトランスフェクション手順
）する。このトランスフェクトした細胞を、およそ２０，０００細胞／ウェルの
密度で播種し、そして１ｍｇ／ｍｌのジェネティシン（ｇｅｎｔｉｃｉｎ）に対
して耐性であるトランスフェクト体を選択する。耐性コロニーを増殖させ、次い
で、漸増する濃度のインターフェロンγに対するそれらの応答について試験する
。選択したクローンの用量応答を示す。
【０４９５】 詳細には、以下のプロトコルにより、２００μｌの細胞を含む７５のウェルに
ついて十分な細胞を得る。従って、複数の９６ウェルプレートについて十分な細
胞を産生するために、スケールアップするか、または複数で実施するかのいずれ
かである。Ｊｕｒｋａｔ細胞を１％のＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ＋１０
％血清中で維持する。Ｔ２５フラスコ中で２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１０μｇのプラスミドＤＮＡとを組み合わ
せる。５０μｌのＤＭＲＩＥ−Ｃを含む２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭを添加し
、そして、室温で１５〜４５分間インキュベートする。
【０４９６】 インキュベート時間の間、細胞濃度をカウントし、必要な細胞数（トランスフ
ェクションあたり１０7個）をスピンダウンし、そして最終濃度が１０7細胞／ｍ
ｌとなるようにＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で再懸濁する。次いで、１ｍｌのＯＰＴＩ−
ＭＥＭ中の１×１０7個の細胞をＴ２５フラスコに加え、そして３７℃で６時間 インキュベートする。インキュベーションの後、１０ｍｌのＲＰＭＩ＋１５％の
血清を添加する。
【０４９７】 Ｊｕｒｋａｔ：ＧＡＳ−ＳＥＡＰ安定レポーター株をＲＰＭＩ＋１０％ 血清
、１ｍｇ／ｍｌジェネティシン、および１％のＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ中で維持する
。これらの細胞を実施例１１に記載されるプロトコルにより産生されるようなポ
リペプチドを含む上清で処理する。
【０４９８】 上清での処理日に細胞を洗浄すべきであり、そして１ｍｌあたり５００，００
０個の密度となるように新鮮なＲＰＭＩ＋１０％血清中に再懸濁するべきである
。必要な細胞の正確な数は、スクリーニングされる上清の数に依存する。１枚の
９６ウェルプレートについて、およそ１０００万個の細胞（１０枚のプレートに
ついて１億個の細胞）を必要とする。
【０４９９】 細胞を、１２チャンネルのピペットを用いて９６ウェルのディッシュに分与す
るために、三角のリザーバーボートに細胞を移す。２００μｌの細胞を、１２チ
ャンネルのピペットを用いて、それぞれのウェルに移す（従って、ウェル当たり
１００，０００個の細胞を添加する）。
【０５００】 全てのプレートに播種した後、５０μｌの上清を、１２チャンネルピペットを
用いて、上清を含む９６ウェルプレートから各ウェルに直接的に移す。さらに、
外来性のインターフェロンγの用量（０．１、１．０、１０ｎｇ）を、ウェルＨ
９、ウェルＨ１０、およびウェルＨ１１に添加し、アッセイについてのさらなる
陽性コントロールとして供する。
【０５０１】 上清で処理したＪｕｒｋａｔ細胞を含む９６ウェルディッシュをインキュベー
ターに４８時間置く（注：この時間は４８〜７２時間の間で変更可能である）。
次いで、各ウェルから３５μｌのサンプルを１２チャンネルのピペットを用いて
、不透明な９６ウェルプレートに移す。不透明なプレートを（セロファンのカバ
ーを用いて）覆うべきであり、そして実施例１７に従うＳＥＡＰアッセイを行う
まで、−２０℃で保存するべきである。残存する処理した細胞を含むプレートを
４℃に置き、そして、所望するならば、特定のウェル上でのアッセイを繰り返す
ための物質の供給源として供する。
【０５０２】 陽性コントロールとして、１００ユニット／ｍｌのインターフェロンγを使用
し得、これは、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を活性化することが公知である。代表的に
は、３０倍を超える誘導が、陽性コントロールのウェルにおいて観察される。
【０５０３】 上述のプロトコルは、過渡的でそして安定な両方の形質転換細胞の作成に用い
られ得、このことは当業者に明らかである。
【０５０４】 （実施例１４：骨髄性の活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ） 以下のプロトコルを、骨髄性細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およびサ
イトカインのような因子を同定することにより骨髄性の活性を評価するために使
用する。骨髄性細胞の活性を実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／
Ｎｅｏ構築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊ
ａｋｓ−ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化させる能力を示す。このアッセイ
に使用した骨髄性細胞は、Ｕ９３７、前単球（ｐｒｅ−ｍｏｎｏｃｙｔｅ）細胞
株であるが、ＴＦ−１、ＨＬ６０、またはＫＧ１も使用し得る。
【０５０５】 Ｕ９３７細胞を、実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構
築物で、一過性にトランスフェクトするために、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ法（
Ｋｈａｒｂａｎｄａら、１９９４，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｉｏｎ，５：２５９−２６５）を用いる。最初に、２×１０ｅ7個 のＵ９３７細胞を回収し、そしてＰＢＳで洗浄する。Ｕ９３７細胞を、通常、１
００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補
充した１０％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ １６４０培地中
で増殖させる。
【０５０６】 次に、０．５ｍｇ／ｍｌ ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ、８μｇのＧＡＳ−ＳＥ
ＡＰ２プラスミドＤＮＡ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、３７５μＭ
Ｎａ2ＨＰＯ4・７Ｈ2Ｏ、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、および６７５μＭ ＣａＣｌ2 を含む１ｍｌの２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．４）緩衝液に細胞を懸
濁する。３７℃で４５分間インキュベートする。
【０５０７】 １０％ ＦＢＳを含むＲＰＭＩ １６４０培地で細胞を洗浄し、次いで、１０
ｍｌの完全培地に再懸濁し、そして３７℃で３６時間インキュベートする。
【０５０８】 ＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｕ９３７安定細胞を、４００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細
胞を増殖させることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を使用して、慣用的に
増殖させるが、１〜２ヶ月毎に細胞を二継代の間、４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８
中で再増殖させるべきである。
【０５０９】 これらの細胞を１×１０8個の細胞を回収すること（これは１０枚の９６ウェ ルプレートアッセイのために十分である）により試験し、そしてＰＢＳで洗浄す
る。上記の２００ｍｌの増殖培地中に、５×１０5細胞／ｍｌの最終密度で細胞 を懸濁する。９６ウェルプレートにおいてウェルあたり２００μｌの細胞をプレ
ートする（すなわち、１×１０5細胞／ウェル）。
【０５１０】 実施例１１に記載されるプロトコルにより調製された上清を５０μｌ添加する
。３７℃で４８〜７２時間インキュベートする。陽性コントロールとして、１０
０単位／ｍｌのインターフェロンγを使用し得、これはＵ９３７細胞を活性化さ
せることが公知である。代表的には、３０倍を超える誘導が、陽性コントロール
ウェルにおいて観察される。ＳＥＡＰは、実施例１７に記載のプロトコルに従っ
て上清をアッセイする。
【０５１１】 （実施例１５：ニューロン活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ
） 細胞が分化および増殖を経る場合、一群の遺伝子が多くの異なるシグナル伝達
経路を介して活性化される。これらの遺伝子の１つであるＥＧＲ１（初期増殖応
答遺伝子１）は、活性化時に種々の組織および細胞型において誘導される。ＥＧ
Ｒ１のプロモーターはこのような誘導を担う。レポーター分子に結合したＥＧＲ
１プロモーターを使用して、細胞の活性化を評価し得る。
【０５１２】 詳細には、以下のプロトコルをＰＣ１２細胞株におけるニューロン活性を評価
するために使用する。ＰＣ１２細胞（ラット褐色細胞腫（ｐｈｅｎｏｃｈｒｏｍ
ｏｃｙｔｏｍａ ｃｅｌｌ））は、多くのマイトジェン（例えば、ＴＰＡ（テト
ラデカノイルホルボールアセテート）、ＮＧＦ（神経成長因子）、およびＥＧＦ
（上皮増殖因子））での活性化により増殖および／または分化することが公知で
ある。この処理の間にＥＧＲ１遺伝子発現を活性化する。従って、ＳＥＡＰレポ
ーターに結合したＥＧＲプロモーターを含む構築物でＰＣ１２細胞を安定にトラ
ンスフェクトすることにより、ＰＣ１２細胞の活性化を評価し得る。
【０５１３】 ＥＧＲ／ＳＥＡＰレポーター構築物を以下のプロトコルにより組み立て得る。
ＥＧＲ−１プロモーター配列（−６３３〜＋１）（Ｓａｋａｍｏｔｏ Ｋら、Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ ６： ８６７−８７１（１９９１））を以下のプライマーを用
いて、ヒトゲノムＤＮＡからＰＣＲ増幅し得る：
【０５１４】
【化１７】 次いで、実施例１２において作製したＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを使
用して、ＥＧＲ１増幅産物をこのベクターに挿入し得る。制限酵素ＸｈｏＩ／Ｈ
ｉｎｄＩＩＩを使用してＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを線状化し、ＧＡＳ
／ＳＶ４０スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）を取り除く。これらと同じ酵素を用
いて、ＥＧＲ１増幅産物を制限処理する。ベクターとＥＧＲ１プロモーターとを
連結する。
【０５１５】 細胞培養のための９６ウェルプレートを調製するために、コーティング溶液（
コラーゲンＩ型（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．カタログ番号０８
−１１５）の３０％エタノール（滅菌濾過）での１：３０希釈）を１つの１０ｃ
ｍプレートあたり２ｍｌ、または９６ウェルプレートのウェルあたり５０ｍｌ添
加し、そして２時間風乾させる。
【０５１６】 ＰＣ１２細胞を、予めコートした１０ｃｍ組織培養ディッシュ上で、ペニシリ
ン（１００単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充
した、１０％ウマ血清（ＪＲＨ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ、カタログ番号１２４
４９−７８Ｐ）、５％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４
０培地（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で慣用的に増殖させる。１つから４つ
への分割を３〜４日毎に行う。細胞を掻き取ることによりプレートから取り出し
、そして１５回より多く上下にピペッティングして再懸濁する。
【０５１７】 ＥＧＲ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物を、実施例１１に記載のＬｉｐｏｆｅｃｔａ
ｍｉｎｅプロトコルを使用して、ＰＣ１２にトランスフェクトする。ＥＧＲ−Ｓ
ＥＡＰ／ＰＣ１２安定細胞を、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細胞を増殖させ
ることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を慣用的増殖のために使用するが、
１〜２ヶ月毎に、細胞を２〜３継代の間、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で再増
殖させるべきである。
【０５１８】 ニューロン活性をアッセイするために、およそ７０〜８０％コンフルエントで
ある細胞を有する１０ｃｍプレートを、古い培地を除去することによりスクリー
ニングする。細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を用いて１回洗浄する。
次いで、細胞を低血清培地（抗生物質とともに１％ウマ血清および０．５％ Ｆ
ＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０）中で一晩、飢餓させる。
【０５１９】 翌朝、培地を除去し、そしてＰＢＳで細胞を洗浄する。プレートから細胞を掻
き取り、細胞を２ｍｌの低血清培地中でよく懸濁する。細胞数をカウントし、そ
してより低血清の培地を添加し、５×１０5細胞／ｍｌの最終細胞密度に到達さ せる。
【０５２０】 ２００μｌの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルに添加する（１×１
０5細胞／ウェルに等しい）。実施例１１により産生された５０μｌの上清を、 ３７℃で４８〜７２時間加える。陽性コントロールとして、ＥＧＲを介してＰＣ
１２細胞を活性化することが公知の成長因子（例えば、５０ｎｇ／μｌの神経成
長因子（ＮＧＦ））を使用し得る。代表的には、５０倍を超えるＳＥＡＰ誘導が
陽性コントロールウェルにおいて見られる。ＳＥＡＰは実施例１７に従って、上
清をアッセイする。
【０５２１】 （実施例１６：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ） ＮＦ−κＢ（核因子κＢ）は、広範な種々の薬剤（炎症性サイトカインである
ＩＬ−１およびＴＮＦ、ＣＤ３０およびＣＤ４０、リンホトキシン−αおよびリ
ンホトキシン−βを含む）により、ＬＰＳまたはトロンビンへの曝露により、な
らびに特定のウイルス遺伝子産物の発現により活性化される転写因子である。転
写因子として、ＮＦ−κＢは免疫細胞の活性化に関与する遺伝子の発現、アポト
ーシスの制御（ＮＦ−κＢは、アポトーシスから細胞を保護するようである）、
Ｂ細胞およびＴ細胞の発生、抗ウイルス応答および抗菌応答、ならびに複数のス
トレス応答を調節する。
【０５２２】 刺激されない条件において、ＮＦ−κＢは、Ｉ−κＢ（インヒビターκＢ）を
有する細胞質に保持される。しかし、刺激の際に、Ｉ−κＢはリン酸化され、そ
して分解（ｄｅｇｒａｄｅｄ）され、ＮＦ−κＢの核への往復（ｓｈｕｔｔｌｅ
）を引き起こし、これにより標的遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢにより
活性化される標的遺伝子としては、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＡ
Ｍ−１およびクラス１ＭＨＣが挙げられる。
【０５２３】 その中心的な役割および一定の範囲の刺激に応答する能力に起因して、ＮＦ−
κＢプロモーターエレメントを利用するレポーター構築物を、実施例１１におい
て産生された上清をスクリーニングするために使用する。ＮＦ−κＢのアクチベ
ーターまたはインヒビターは、疾患の処置に有用である。例えば、ＮＦ−κＢの
インヒビターを、急性または慢性的なＮＦ−κＢの活性化に関連するこれらの疾
患（例えば、慢性関節リウマチ）を処置するために使用し得る。
【０５２４】 ＮＦ−κＢプロモーターエレメントを含むベクターを構築するために、ＰＣＲ
に基づいたストラテジーを用いる。上流のプライマーは、ＮＦ−κＢ結合部位（
ＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣ）（配列番号８）の４つの直列のコピー、ＳＶ４０初
期プロモーター配列の５’末端に対して相補的な１８ｂｐの配列を含み、そして
ＸｈｏＩ部位に隣接する：
【０５２５】
【化１８】 下流プライマーは、ＳＶ４０プロモーターの３’末端に対して相補的であり、
そしてＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接する： ５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列
番号４）。
【０５２６】 ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐβ−ｇａｌ：プロモータープ
ラスミドに存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを使用して行う。得ら
れたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＢＬ
ＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。Ｔ７およびＴ３プ
ライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むことを確認する：
【０５２７】
【化１９】 次に、ＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを使用して、ｐＳＥＡＰ２−プロモータ
ープラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に存在するＳＶ４０最小プロモーターエレメ
ントをこのＮＦ−κＢ／ＳＶ４０フラグメントと置換する。しかし、このベクタ
ーはネオマイシン耐性遺伝子を含まず、そしてそれゆえ哺乳動物の発現系には好
ましくない。
【０５２８】 安定な哺乳動物細胞株を作製するために、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカ
セットを制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを使用して上記のＮＦ−κＢ／ＳＥＡ
Ｐベクターから取り出し、そしてネオマイシン耐性を含むベクターに挿入する。
詳細には、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩでｐＧＦＰ−１を制限処理した後に、ＮＦ−
κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカセットをｐＧＦＰ−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に挿入
し、ＧＦＰ遺伝子を置換した。
【０５２９】 一旦、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを作製した後は、実
施例１３に記載のプロトコルに従って、安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を作製し、
そして維持する。同様に、これらの安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を含む上清をア
ッセイするための方法がまた、実施例１３に記載される。陽性コントロールとし
て、外因性のＴＮＦα（０．１、１、１０ｎｇ）をウェルＨ９、Ｈ１０、および
Ｈ１１に添加し、代表的には、５〜１０倍の活性化が観察される。
【０５３０】 （実施例１７：ＳＥＡＰ活性についてのアッセイ） 実施例１３〜１６に記載されるアッセイのためのレポーター分子として、ＳＥ
ＡＰ活性を、以下の一般的な手順に従ってＴｒｏｐｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉ
ｇｈｔ Ｋｉｔ（カタログ番号ＢＰ−４００）を用いてアッセイする。Ｔｒｏｐ
ｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉｇｈｔ Ｋｉｔは、以下で使用される希釈緩衝液、
アッセイ緩衝液、および反応緩衝液を供給する。
【０５３１】 ディスペンサーに２．５×希釈緩衝液を満たし、そして１５μｌの２．５×希
釈緩衝液を３５μｌの上清を含むオプティプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）に分
与する。プラスチックシーラーでプレートをシールし、そして６５℃で３０分間
インキュベートする。一様でない加温を避けるためにオプティプレートを離して
おく。
【０５３２】 サンプルを室温まで１５分間冷却する。ディスペンサーを空にし、そしてアッ
セイ緩衝液を満たす。５０μｌのアッセイ緩衝液を添加し、そして室温で５分間
インキュベートする。ディスペンサーを空にし、そして反応緩衝液を満たす（以
下の表を参照のこと）。５０μｌの反応緩衝液を添加し、そして室温で２０分間
インキュベートする。化学発光シグナルの強度は時間依存的であり、そしてルミ
ノメーターで５つのプレートを読み取るために約１０分間を費やすので、１回に
５つのプレートを処理し、１０分後に２つ目のセットを開始するべきである。
【０５３３】 ルミノメーターにおける相対的な光の単位（ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔ）を読み取
る。ブランクとしてＨ１２をセットし、そして結果を印字する。化学発光の増加
は、レポーター活性を示す。
【０５３４】
【表４】 （実施例１８：低分子の濃度および膜透過性における変化を同定する高処理能
力スクリーニングアッセイ） レセプターへのリガンドの結合は、カルシウム、カリウム、ナトリウムのよう
な低分子およびｐＨの細胞内レベルを変化させ、さらに膜電位を変化させること
は公知である。これらの変化を特定細胞のレセプターに結合する上清の同定を行
うアッセイで測定し得る。以下のプロトコルは、カルシウムについてのアッセイ
を記載するが、このプロトコルは、カリウム、ナトリウム、ｐＨ、膜電位、また
は蛍光プローブにより検出可能な任意の他の低分子における変化を検出するよう
に容易に改変し得る。
【０５３５】 以下のアッセイは、蛍光測定画像化プレートリーダー（「ＦＬＩＰＲ」）を使
用して低分子と結合する蛍光分子（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）におけ
る変化を測定する。明らかに、低分子を検出する任意の蛍光分子を本明細書で用
いるカルシウム蛍光分子、ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，
Ｉｎｃ．；カタログ番号Ｆ−１４２０２）の代わりに使用し得る。
【０５３６】 接着細胞については、細胞を１０，０００〜２０，０００細胞／ウェルで、底
が透明なＣｏ−ｓｔａｒ黒色９６ウェルプレートに播種する。プレートをＣＯ2 インキュベーター内で２０時間インキュベートする。接着細胞をＢｉｏｔｅｋ洗
浄器内で２００μｌのＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で二回洗浄し、最後の洗浄後、緩衝液１００μｌを残す。
【０５３７】 １ｍｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４のストック溶液を１０％プルロン酸（ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ ａｃｉｄ）ＤＭＳＯで作製する。細胞にｆｌｕｏ−４を負荷するため、
１２μｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４（５０μｌ）を各ウェルに添加する。このプレー
トをＣＯ2インキュベーター中、３７℃で６０分間インキュベートする。プレー トをＢｉｏｔｅｋ洗浄器で、ＨＢＳＳにより４回洗浄し、緩衝液１００μｌを残
す。
【０５３８】 非接着細胞については、細胞を培養培地からスピンダウンする。細胞を、５０
ｍｌのコニカルチューブ内でＨＢＳＳを用いて２〜５×１０6細胞／ｍｌに再懸 濁する。細胞懸濁液１ｍｌあたり、１ｍｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４の１０％プルロ
ン酸ＤＭＳＯ溶液４μｌを加える。次に、チューブを３７℃の水浴中に３０〜６
０分間置く。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、１×１０6細胞／ｍｌに再懸濁し、 そしてマイクロプレートに１００μｌ／ウェルずつ分配する。プレートを１００
０ｒｐｍで５分間遠心分離する。次に、プレートをＤｅｎｌｅｙ ＣｅｌｌＷａ
ｓｈ中で２００μｌで一回洗浄した後、吸引工程により最終容量を１００μｌに
する。
【０５３９】 非細胞ベースのアッセイについては、各ウェルは、ｆｌｕｏ−４のような蛍光
分子を含有する。上清をウェルに添加し、そして蛍光変化を検出する。
【０５４０】 細胞内カルシウムの蛍光を測定するため、ＦＬＩＰＲを以下のパラメーターに
ついて設定する：（１）システムゲインは、３００〜８００ｍＷであり；（２）
曝露時間は、０．４秒間であり；（３）カメラＦ／ストップは、Ｆ／２であり；
（４）励起は４８８ｎｍであり；（５）発光は５３０ｎｍであり；そして（６）
サンプル添加は５０μｌである。５３０ｎｍにおける発光の増加は、細胞内Ｃａ ++ 濃度の増加を生じる、細胞外シグナリング事象を示す。
【０５４１】 （実施例１９：チロシンキナーゼ活性を同定する高処理能力スクリーニングア
ッセイ） プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、多様な群の膜貫通キナーゼおよび
細胞質キナーゼを表す。レセプタープロテインチロシンキナーゼ（ＲＰＴＫ）群
内に、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＨＧＦおよびインスリンレセプター
サブファミリーを含む、一定の範囲の有糸分裂促進性（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ）お
よび代謝性成長因子のレセプターがある。さらに、対応するリガンドが未知であ
る大きなＲＰＴＫファミリーがある。ＲＰＴＫのリガンドは、主として分泌され
る低分子量タンパク質を含むが、膜結合型および細胞外マトリックスタンパク質
も含む。
【０５４２】 リガンドによるＲＰＴＫの活性化は、リガンド媒介レセプター二量体化を含み
、これはレセプターサブユニットのトランスリン酸化および細胞質チロシンキナ
ーゼの活性化を生じる。細胞質チロシンキナーゼとしては、ｓｒｃファミリー（
例えば、ｓｒｃ、ｙｅｓ、ｌｃｋ、ｌｙｎ、ｆｙｎ）のレセプター関連チロシン
キナーゼ、ならびにＪａｋファミリーのような非レセプター結合型および細胞質
ゾルプロテインチロシンキナーゼが挙げられる。これらのメンバーは、サイトカ
インスーパーファミリー（例えば、インターロイキン、インターフェロン、ＧＭ
−ＣＳＦおよびレプチン）のレセプターによって誘発されるシグナル伝達を媒介
する。
【０５４３】 チロシンキナーゼ活性を刺激し得る公知の因子は広範であるため、チロシンキ
ナーゼシグナル伝達経路を活性化し得るこれらの新規なヒト分泌タンパク質の同
定は興味深い。従って、以下のプロトコルを設計して、チロシンキナーゼシグナ
ル伝達経路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質を同定する。
【０５４４】 標的細胞（例えば、初代ケラチノサイト）を約２５，０００細胞／ウェルの密
度で、Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ（Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）から購入した９６
ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅに播種す
る。プレートを１００％エタノールで３０分間、二回リンスして滅菌し、水でリ
ンスした後、一晩乾燥させる。幾つかのプレートを、１００ｍｌの細胞培養グレ
ードＩ型コラーゲン（５０ｍｇ／ｍｌ）、ゼラチン（２％）またはポリリジン（
５０ｍｇ／ｍｌ）（これらは全て、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入し得る）で、またはＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から購入した１０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ、あるいは仔
ウシ血清で２時間コートし、ＰＢＳでリンスした後、４℃で保存する。増殖培地
に５，０００細胞／ウェルを播種し、製造業者のＡｌａｍａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）が記載するように、ａｌａ
ｍａｒＢｌｕｅを使用して４８時間後に細胞数を間接定量することにより、これ
らのプレート上の細胞増殖をアッセイする。Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）のＦａｌｃｏｎプレートカバー＃３０７１を使用し、
Ｌｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅを覆う。Ｆａｌ
ｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩ細胞培養プレートもまた、いくつかの増殖
実験において使用し得る。
【０５４５】 抽出物を調製するため、Ａ４３１細胞をＬｏｐｒｏｄｙｎｅプレートのナイロ
ン膜上に播種し（２０，０００／２００ｍｌ／ウェル）、そして完全培地中で一
晩培養する。細胞を無血清基本培地中で２４時間インキュベートして静止させる
。ＥＧＦ（６０ｎｇ／ｍｌ）または実施例１１で生成した上清５０μｌで５〜２
０分間処理した後、培地を除去し、１００ｍｌの抽出緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．５，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，０．
１％ＳＤＳ，２ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4，２ｍＭ Ｎａ4Ｐ2Ｏ7およびＢｏｅｈｅｒｉ ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から入手した
プロテアーゼインヒビターの混合物（＃１８３６１７０））を各ウェルに添加し
、そしてプレートを回転振盪器上、４℃で５分間振盪する。次に、プレートを真
空トランスファーマニホールド（ｖａｃｕｕｍ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍａｎｉｆ
ｏｌｄ）に設置し、そしてハウスバキュームを使用して抽出物を各ウェルの底の
０．４５ｍｍ膜で濾過する。抽出物をバキュームマニホールドの底の９６ウェル
捕獲／アッセイプレートに集め、そして直ちに氷上に置く。遠心分離により明澄
化した抽出物を得るため、界面活性剤で５分間可溶化した後、各ウェルの含有物
を取り出し、４℃、１６，０００×ｇで１５分間遠心分離する。
【０５４６】 濾過抽出物をチロシンキナーゼ活性のレベルについて試験する。チロシンキナ
ーゼ活性を検出する多数の方法が公知であるが、本明細書においては方法の一つ
を記載する。
【０５４７】 一般的に、特定の基質（ビオチン化ペプチド）上のチロシン残基をリン酸化す
る能力を決定することにより、上清のチロシンキナーゼ活性を評価する。この目
的に使用し得るビオチン化ペプチドとしては、ＰＳＫ１（細胞分裂キナーゼｃｄ
ｃ２−ｐ３４のアミノ酸６〜２０に相当）およびＰＳＫ２（ガストリンのアミノ
酸１〜１７に相当）が挙げられる。両ペプチドは、一連のチロシンキナーゼの基
質であり、そしてＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能である
。
【０５４８】 以下の成分を順に添加することにより、チロシンキナーゼ反応を設定する。ま
ず、５μＭビオチン化ペプチド１０μｌを添加した後、順に、ＡＴＰ／Ｍｇ2+（
５ｍＭ ＡＴＰ／５０ｍＭ ＭｇＣｌ2）１０μｌ、５×アッセイ緩衝液（４０ ｍＭ塩酸イミダゾール、ｐＨ７．３、４０ｍＭ β−グリセロリン酸塩、１ｍＭ
ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＭｇＣｌ2、５ｍＭ ＭｎＣｌ2、０．５ｍｇ／ｍｌ
ＢＳＡ）１０μｌ、バナジン酸ナトリウム（１ｍＭ）５μｌ、最後に水５μｌを
加える。成分を穏やかに混合し、反応混合物を３０℃で２分間プレインキュベー
トする。コントロール酵素または濾過上清１０μｌを加えて反応を開始させる。
【０５４９】 次に、１２０ｍＭ ＥＤＴＡ １０μｌを添加することによりチロシンキナー
ゼアッセイ反応を停止し、反応物を氷上に置く。
【０５５０】 反応混合物の５０μｌのアリコートをマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）モ
ジュールに移し、３７℃で２０分間インキュベートすることにより、チロシンキ
ナーゼ活性を測定する。これにより、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖａ
ｄｉｎ）コーティング９６ウェルプレートをビオチン化ペプチドと会合させる。
ＭＴＰモジュールを３００μｌ／ウェルのＰＢＳで４回洗浄する。次に、西洋ワ
サビペルオキシダーゼに結合体化した抗ホスホチロシン（ｐｈｏｓｐｏｔｙｒｏ
ｓｉｎｅ）抗体（抗Ｐ−Ｔｙｒ−ＰＯＤ（０．５ｕ／ｍｌ））７５μｌを、各ウ
ェルに添加した後、３７℃で１時間インキュベートする。ウェルを上記のように
洗浄する。
【０５５１】 次に、ペルオキシダーゼ基質溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ
）１００μｌを加え、室温で少なくとも５分間（最長３０分間）インキュベート
する。ＥＬＩＳＡリーダーを使用して、４０５ｎｍにおけるサンプルの吸光度を
測定する。結合したペルオキシダーゼ活性のレベルをＥＬＩＳＡリーダーを使用
して定量し、これは、チロシンキナーゼ活性のレベルを反映する。
【０５５２】 （実施例２０：リン酸化活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ） 実施例１９に記載のプロテインチロシンキナーゼ活性アッセイの可能性のある
代替物および／または補完物（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）として、主要な細胞内シ
グナル伝達中間体の活性化（リン酸化）を検出するアッセイもまた使用し得る。
例えば、下記のように、一つの特定のアッセイは、Ｅｒｋ−１およびＥｒｋ−２
キナーゼのチロシンリン酸化を検出し得る。しかし、Ｒａｆ、ＪＮＫ、ｐ３８Ｍ
ＡＰ、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）、ＭＥＫキナーゼ、Ｓｒｃ、筋肉特異
的キナーゼ（ＭｕＳＫ）、ＩＲＡＫ、ＴｅｃおよびＪａｎｕｓのような他の分子
、ならびに他の任意のホスホセリン、ホスホチロシンまたはホスホスレオニン分
子のリン酸化を、以下のアッセイにおいてこれらの分子でＥｒｋ−１またはＥｒ
ｋ−２を置き換えることにより検出し得る。
【０５５３】 詳細には、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートのウェルをプロテインＧ（１μｇ／
ｍｌ）０．１ｍｌにより室温（ＲＴ）で２時間コーティングしてアッセイプレー
トを作製する。次に、プレートをＰＢＳでリンスし、３％ＢＳＡ／ＰＢＳにより
ＲＴで１時間ブロックする。次に、プロテインＧプレートをＥｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２に対する二つの市販のモノクローナル抗体（１００ｎｇ／ウェル）（Ｓ
ａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で処理（ＲＴで１時間）す
る。（他の分子を検出するために、上記の任意の分子を検出するモノクローナル
抗体を交換することにより、この工程を容易に改変し得る）。ＰＢＳで３〜５回
リンスした後、使用時まで、プレートを４℃で貯蔵する。
【０５５４】 Ａ４３１細胞を２０，０００／ウェルで９６ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅフィル
タープレートに播種し、増殖培地中で一晩培養する。次に、細胞を基本培地（Ｄ
ＭＥＭ）中で４８時間飢餓させた後、ＥＧＦ（６ｎｇ／ウェル）または実施例１
１で得た上清５０μｌで５〜２０分間処理する。次に、細胞を可溶化し、抽出物
を濾過して直接アッセイプレート中に入れる。
【０５５５】 抽出物を用いてＲＴで１時間インキュベートした後、ウェルを再度リンスする
。陽性コントロールとして、市販のＭＡＰキナーゼ調製物（１０ｎｇ／ウェル）
をＡ４３１抽出物の代わりに使用する。次に、プレートを、Ｅｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２キナーゼのリン酸化エピトープを特異的に認識する市販のポリクローナ
ル（ウサギ）抗体（１μｇ／ｍｌ）で処理する（ＲＴで１時間）。この抗体を標
準的な手順によりビオチン化する。次に、結合ポリクローナル抗体をユーロピウ
ムストレプトアビジンおよびユーロピウム蛍光増強剤とＷａｌｌａｃ ＤＥＬＦ
ＩＡ装置内で連続的にインキュベートする（時間分解性蛍光）ことによって定量
する。バックグラウンドを超える蛍光シグナルの増加は、リン酸化を示す。
【０５５６】 （実施例２１：ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における変化の決定方法） 目的の表現型（例えば、疾患）を提示する家族全員または個々の患者から単離
されたＲＮＡを単離する。次に、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分
野で公知のプロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。
次に、このｃＤＮＡを、配列番号Ｘにおける目的の領域を取り囲むプライマーを
用いるＰＣＲのテンプレートとして使用する。示唆されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄ
ｒａｎｓｋｙ，Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：７０６（１９９１）に記載の
緩衝溶液を使用し、９５℃で３０秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；およ
び７０℃で６０〜１２０秒間の３５サイクルからなる。
【０５５７】 次に、ＰＣＲ産物を、ＳｅｑｕｉＴｈｅｒｍ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｅｐｉ
ｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、５’末端にＴ４ポリヌクレ
オチドキナーゼで標識したプライマーを使用して配列決定する。選択したエキソ
ンのイントロン−エキソン境界もまた決定し、ゲノムＰＣＲ産物を分析してその
結果を確認する。次に、疑わしい変異を有するＰＣＲ産物のクローン化および配
列決定を行い、直接配列決定の結果を確認する。
【０５５８】 ＰＣＲ産物を、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｔ．Ａ．およびＧｒａｈａｍ，Ｍ．Ｗ．，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９：１１５６（１９９１）に記
載のようにＴテールベクターにクローン化し、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）で配列決定する。罹患個体を、非罹
患個体には存在しない変異により同定する。
【０５５９】 ゲノム再配置もまた、ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における改変を決定
する方法として観察する。実施例２に従って単離したゲノムクローンを、ジゴキ
シゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈ
ｅｉｍ）を用いてニックトランスレーションし、そしてＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｇ．
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３５：７３−９９（１９９１）に記
載のようにＦＩＳＨを行う。対応するゲノムの遺伝子座への特異的ハイブリダイ
ゼーションのために、大過剰のヒトｃｏｔ−１ ＤＮＡを用いて標識プローブと
のハイブリダイゼーションを行う。
【０５６０】 染色体を、４，６−ジアミノ−２−フェニリドールおよびヨウ化プロピジウム
で対比染色し、ＣおよびＲバンドの組み合わせを生成する。正確なマッピングの
ための整列イメージを、三重バンドフィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（Ｐ
ｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）および可変励起波長フィルター
（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃｖ．ら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．，
８：７５（１９９１））とを組み合わせて用いて得る。ＩＳｅｅ Ｇｒａｐｈｉ
ｃａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ， Ｄｕｒｈａｍ， ＮＣ）を使用して、イメージ収集、分析および
染色体部分長測定を行う。プローブがハイブリダイズしたゲノム領域の染色体変
化を、挿入、欠失および転座として同定する。これらの変化を関連疾患の診断マ
ーカーとして使用する。
【０５６１】 （実施例２２：生物学的サンプル中のポリペプチドの異常レベルを検出する方
法） 本発明のポリペプチドは生物学的サンプル中で検出され得、そしてポリペプチ
ドレベルの上昇または低下が検出されるなら、このポリペプチドは、特定表現型
のマーカーである。検出方法は数多くあり、そしてそれ故、当業者は以下のアッ
セイをそれらの特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。
【０５６２】 例えば、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡを使用し、サンプル中、好ましくは、生
物学的サンプル中のポリペプチドを検出する。マイクロタイタープレートのウェ
ルを、特異的抗体を最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌで用いてコーティングする
。この抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであって、そし
て実施例１０に記載の方法により産生される。ウェルに対するポリペプチドの非
特異的結合が減少するように、このウェルをブロックする。
【０５６３】 次に、コーティングしたウェルを、ポリペプチド含有サンプルを用いてＲＴで
２時間を超えてインキュベートする。好ましくは、サンプルの系列希釈を使用し
て結果を確認すべきである。次に、プレートを脱イオン水または蒸留水で三回洗
浄し、非結合ポリペプチドを除去する。
【０５６４】 次に、特異的抗体−アルカリホスファターゼ結合体５０μｌを２５〜４００ｎ
ｇの濃度で加え、室温で２時間インキュベートする。プレートを再び脱イオン水
または蒸留水で三回洗浄し、未結合の結合体を除去する。
【０５６５】 ４−メチルウンベリフェリルリン酸（ＭＵＰ）またはｐ−ニトロフェニルリン
酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキ
ュベートする。反応物をマイクロタイタープレートリーダーにより測定する。コ
ントロールサンプルの系列希釈を使用して標準曲線を作成し、そしてＸ軸（対数
スケール）にポリペプチド濃度を、そしてＹ軸（直線スケール）に蛍光または吸
光度をプロットする。標準曲線を用いてサンプル中のポリペプチド濃度を補間す
る。
【０５６６】 （実施例２３：ポリペプチドの処方） 分泌ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド
単独処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の
因子を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ）を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とす
る「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
【０５６７】 一般的提案として、用量当り、非経口的に投与される分泌ポリペプチドの合計
薬学的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲
にあるが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、こ
のホルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして
最も好ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と約１ｍｇ／ｋｇ／日と
の間である。連続投与する場合、代表的には、分泌ポリペプチドを約１μｇ／ｋ
ｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは
連続皮下注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内
用バッグ溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応
答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
【０５６８】 本発明の分泌タンパク質を含む薬学的組成物を、経口的、直腸内、非経口的、
槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏
、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔
スプレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体
、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をい
う。本明細書で用いる場合、用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、
胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０５６９】 分泌ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組
成物の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の
半透過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリ
ラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタ
ミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．
ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２
−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ
．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＲ．Ｌａｎ
ｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビ
ニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキ
シ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソーム
に封入されたポリペプチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソーム
は、それ自体が公知である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅ
ｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６
８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；
ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４
１；日本国特許出願第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号
および同第４，５４４，５４５号；ならびにＥＰ第１０２，３２４号。通常、リ
ポソームは、小さな（約２００〜８００Å）ユニラメラ型であり、そこでは、脂
質含有量は、約３０モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適
分泌ポリペプチド治療のために調整される。
【０５７０】 非経口投与のために、１つの実施態様において、一般的に、分泌ポリペプチド
は、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる
投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と
適合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で
混合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、
およびポリペプチドに対して有害であることが公知である他の化合物を含まない
。
【０５７１】 一般的に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいは
その両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次いで、必要であれ
ば、生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャ
リア、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このような
キャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキスト
ロース溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性ビ
ヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
【０５７２】 キャリアは、等張性および化学安定性を高める物質のような微量の添加剤を適
切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対
して毒性がなく、このような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩
、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビン酸のよう
な抗酸化剤；低分子量（約１０残基より少ない）ポリペプチド（例えば、ポリア
ルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリ
ンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシ
ン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セルロ
ースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖
類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトール
またはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；およ
び／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン性界
面活性剤が挙げられる。
【０５７３】 分泌ポリペプチドは、代表的には約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好
ましくは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル
中に処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用すること
により、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
【０５７４】 治療的投与に用いられるべき任意のポリペプチドは無菌状態であり得る。滅菌
濾過膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）を通して濾過することにより無菌状
態は容易に達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポ
ートを有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用
溶液バッグまたはバイアルに配置される。
【０５７５】 ポリペプチドは、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプル
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
【０５７６】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を満たした一つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
【０５７７】 （実施例２４：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法） 個体における分泌タンパク質の標準または正常発現レベルの低下により引き起
こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態で投与すること
により処置し得ることが理解される。従って、本発明はまた、ポリペプチドのレ
ベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方法は、このような個体に
、このような個体でポリペプチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを
含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【０５７８】 例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、ポリペプチドを、１日用量
０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、ポリペプチドは
分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、実施例２
３に提供されている。
【０５７９】 （実施例２５：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法） アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技
術は、ガンのような様々な病因に起因するポリペプチド、好ましくは分泌形態の
ポリペプチドのレべルを低下させる方法の１つの例である。
【０５８０】 例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチ
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性があれば
、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポリヌクレオチド
処方物は、実施例２３に提供されている。
【０５８１】 （実施例２６：遺伝子治療を使用する処置方法） 遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移
植する方法である。一般的に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験体から得られ
る。得られた組織を組織培養培地中に配置し、そして小片に分割する。この組織
の小塊を組織培養フラスコの湿潤表面に置き、ほぼ１０片を各フラスコに置く。
このフラスコを倒置し、密封し、そして室温で一晩放置する。室温で２４時間後
、フラスコを反転させ、そして組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そ
して新鮮培地（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを
含有するＨａｍのＦ１２培地）を添加する。次いで、フラスコを３７℃で約１週
間インキュベートする。
【０５８２】 この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。そしてさらに
二週間培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さ
らに大きなフラスコにスケールアップする。
【０５８３】 Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉ
ｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、続いて仔ウシ腸ホスファターゼで処
理する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用し
て精製する。
【０５８４】 本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、実施例１に記載のそれぞれ５
’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好ま
しくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨｉ
ｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線状骨格お
よび増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡリ
ガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメントを連結す
るのに適した条件下で維持する。次いで、連結混合物を使用し、細菌ＨＢ１０１
を形質転換する。次いで、それを、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を
有することを確認することを目的として、カナマイシンを含む寒天上にプレーテ
ィングする。
【０５８５】 アンフォトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、
１０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌ
ｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな
密度まで増殖させる。次いで、遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、そし
てパッケージング細胞にベクターを形質導入する。このとき、パッケージング細
胞は遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞
をプロデューサー細胞という）。
【０５８６】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、続いて培地を１０ｃ
ｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地をミリポアーフィルターを通して濾過し、はがれたプ
ロデューサー細胞を除去し、次いで、この培地を使用して、線維芽細胞を感染さ
せる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そしてプ
ロデューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そして
新鮮培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽細
胞が感染され、そして選択は必要ではない。力価が非常に低い場合、ｎｅｏまた
はｈｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用すること
が必要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、線維芽細胞を分析し
、タンパク質が産生されているか否かを決定する。
【０５８７】 次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキ
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで宿主に移植する。
【０５８８】 （実施例２７：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ） 本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。遺伝子治療法は、ポリペプチドの発現を増大
または減少させるための、裸の核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮ
ＡまたはＲＮＡ）配列の動物への導入に関する。本発明のポリヌクレオチドは、
プロモーターまたは標的組織によるポリペプチドの発現に必要な任意の他の遺伝
子エレメントに作動可能に連結され得る。このような遺伝子治療および送達の技
術および方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ９０／１１０９２、ＷＯ
９８／１１７７９；米国特許第５６９３６２２号、同第５７０５１５１号、同第
５５８０８５９号；Ｔａｂａｔａ Ｈ．ら、（１９９７） Ｃａｒｄｉｏｖａｓ
ｃ． Ｒｅｓ． ３５（３）：４７０−４７９， Ｃｈａｏ Ｊら、（１９９７
） Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｒｅｓ． ３５（６）：５１７−５２２， Ｗｏｌ
ｆｆ Ｊ．Ａ．（１９９７） Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７（５
）：３１４−３１８， Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｂ．ら（１９９６） Ｇｅｎｅ Ｔ
ｈｅｒ． ３（５）：４０５−４１１， Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙ．ら、（１９９６
）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４（１２）：３２８１−３２９０（本明細書中に
参考として援用される）を参照のこと。
【０５８９】 ポリヌクレオチド構築物は、注射可能な物質を動物の細胞に送達する任意の方
法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など）の間隙空間への注射
）によって送達され得る。ポリヌクレオチド構築物は、薬学的に受容可能な液体
または水性キャリア中で送達され得る。
【０５９０】 用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡは、細胞への侵入を補
助、促進または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、本発明のポリヌクレオチドはまた、当業者に
周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒ
Ｐ．Ｌ．ら （１９９５） Ａｎｎ． ＮＹ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ７７２：
１２６−１３９およびＡｂｄａｌｌａｈ Ｂ．ら、（１９９５）Ｂｉｏｌ． Ｃ
ｅｌｌ ８５（１）：１−７で教示されたもの）中で送達され得る。
【０５９１】 遺伝子治療方法において使用されたポリヌクレオチドベクター構築物は、好ま
しくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にする配列を含まない構築物で
ある。当業者に公知の任意の強力なプロモーターは、ＤＮＡの発現を駆動するた
めに用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の核酸配列を標的細胞に
導入する１つの主要な利点は、細胞におけるポリヌクレオチド合成の一過性の性
質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの
間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示された。
【０５９２】 ポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓
、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精
巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間隙空
間に送達され得る。組織の間隙空間は、細胞間液、器官組織の細網線維間のムコ
多糖マトリックス、血管または室の壁における弾性線維、線維性組織におけるコ
ラーゲン線維、結合組織鞘性筋肉細胞内または骨の裂孔中の同じマトリックスを
包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャンネルのリンパ液によ
り占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達は、以下に記載の理由の
ために好ましい。それらは、これらの細胞を含む組織への注射によって、好都合
に送達される。それらは、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され
、そしてその細胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または
完全には分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）に
おいて達成され得る。インビボ筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そし
て発現する能力において、特に適格である。
【０５９３】 裸のポリヌクレオチド注射のための、ＤＮＡまたはＲＮＡの有効投薬量は、約
０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましくは、投
薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好ま
しくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が
認識するように、この投薬量は、注射の組織部位に従って変化する。核酸配列の
適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして処置される
状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路は、組織の間隙空間への非
経口注射経路によってである。しかし、他の非経口経路もまた用いられ得、これ
には、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉または鼻の粘膜への送達のための
エアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸のポリヌクレオチド構築物が
、血管形成術の間にこの手順において用いられるカテーテルによって動脈に送達
され得る。
【０５９４】 インビボでの筋肉における注入ポリヌクレオチドの用量応答効果を、以下のよ
うにして決定する。本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの生成のための
適切な鋳型ＤＮＡを、標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。鋳型ＤＮ
Ａ（これは環状または直鎖状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡとして使用す
るか、またはリポソームと複合体化するかのいずれかである。次いで、マウスの
四頭筋に、種々の量の鋳型ＤＮＡを注射する。
【０５９５】 ５〜６週齢の雌および雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％Ａｖｅ
ｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿前部で
行い、そして四頭筋を直接可視化する。鋳型ＤＮＡを、０．１ｍｌのキャリアに
入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通して１分間にわたって、筋肉の遠位挿
入部位から膝に約０．５ｃｍで、そして約０．２ｃｍの深さで注射する。縫合を
、将来的な局在化のための注射部位にわたって行い、そして皮膚をステンレス鋼
クリップで閉じる。
【０５９６】 適切なインキュベーション時間（例えば、７日）後、筋肉抽出物を、四頭全体
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、タ
ンパク質発現について組織化学的に染色する。タンパク質発現についての時間経
過は、異なるマウスからの四頭筋を異なる時間で採取すること以外は、同様な様
式で行い得る。注射後の筋肉中のＤＮＡの持続性を、注射マウスおよびコントロ
ールマウスからの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清を調製した後、サザンブロ
ット分析によって決定し得る。マウスにおける上記実験の結果は、裸のＤＮＡを
用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投薬量および他の処置パラメーター
を推定するために使用され得る。
【０５９７】 （実施例２８：トランスジェニック動物） 本発明のポリペプチドはまた、トランスジェニック動物において発現され得る
。マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ブタ、ミニブタ（ｍｉｃ
ｒｏ−ｐｉｇ）、ヤギ、ヒツジ、ウシおよびヒト以外の霊長類（例えば、ヒヒ、
サルおよびチンパンジー）を含むがこれらに限定されない任意の種の動物は、ト
ランスジェニック動物を作製するために用いられ得る。特定の実施態様において
、本明細書に記載されるかまたはさもなければ当該分野で公知の技術が、遺伝子
治療プロトコルの一部として、ヒトにおける本発明のポリペプチドの発現のため
に用いられる。
【０５９８】 当該分野で公知の任意の技術を、導入遺伝子（すなわち、本発明のポリヌクレ
オチド）の動物への導入に用いて、トランスジェニック動物の創始系統（ｆｏｕ
ｎｄｅｒ ｌｉｎｅ）を生成し得る。このような技術は、前核マイクロインジェ
クション（Ｐａｔｅｒｓｏｎら、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．４０：６９１−６９８（１９９４）；Ｃａｒｖｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１１：１２６３−１２７０（１９９３）；Ｗｒｉｇｈｔ
ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：８３０−８３４（１９９１）；お
よびＨｏｐｐｅら、米国特許第４，８７３，１９１号（１９８９））；生殖系列
（Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｕｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８２：６１４８−６１５２（１９８５））、胚盤胞または胚へのレトロ
ウイルス媒介遺伝子移入；胚幹細胞における遺伝子標的化（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら
、Ｃｅｌｌ ５６：３１３−３２１（１９８９））；細胞または胚のエレクトロ
ポレーション（Ｌｏ、１９８３、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：１８０３−
１８１４（１９８３））；遺伝子銃を用いた本発明のポリヌクレオチドの導入（
例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１７４５（１９９３）を参照
のこと）；胚多能性（ｐｌｅｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞への核酸構築物の導入
および胚盤胞へのこの幹細胞の再移入；ならびに精子媒介遺伝子移入（Ｌａｖｉ
ｔｒａｎｏら、Ｃｅｌｌ ５７：７１７−７２３（１９８９））；などを含むが
これらに限定されない。このような技術の総説については、本明細書中にその全
体が参考として援用される、Ｇｏｒｄｏｎ、「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍ
ａｌｓ」、Ｉｎｔｌ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１１５：１７１−２２９（１９８９
）を参照のこと。
【０５９９】 当該分野で公知の任意の技術を用いて、本発明のポリヌクレオチドを含むトラ
ンスジェニッククローンを生成し得る（例えば、培養された、静止状態に誘導さ
れた胚細胞、胎児細胞または成体の細胞由来の除核した卵母細胞への核移入（Ｃ
ａｍｐｅｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ ３８０：６４−６６（１９９６）；Ｗｉｌｍｕ
ｔら、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３（１９９７）））。
【０６００】 本発明は、その全ての細胞に導入遺伝子を有するトランスジェニック動物、な
らびにいくつかの細胞（しかしその全ての細胞ではない）に導入遺伝子を有する
動物（すなわち、モザイク動物またはキメラ）を提供する。導入遺伝子は、１つ
の導入遺伝子としてまたはコンカテマー（例えば、頭−頭タンデム型または頭−
尾タンデム型）のような複数のコピーとして組み込まれ得る。この導入遺伝子は
また、例えば、Ｌａｓｋｏらの教示（Ｌａｓｋｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６２３６（１９９２））に従って特定
の細胞型に選択的に導入され得、そして活性化され得る。このような細胞型特異
的活性化に必要とされる調節配列は、目的の特定の細胞型に依存し、そしてそれ
らは当業者に明らかである。ポリヌクレオチド導入遺伝子が、内在性遺伝子の染
色体部位に組み込まれることが所望される場合、遺伝子の標的化が好ましい。手
短に言えば、このような技術が、利用されるべきである場合、内在性遺伝子に対
して相同ないくつかのヌクレオチド配列を含むベクターが、染色体配列との相同
な組換えを介して内在性遺伝子のヌクレオチド配列に組み込まれ、そのヌクレオ
チド配列の機能を破壊することを目的として設計される。導入遺伝子はまた、特
定の細胞型に選択的に導入され得、従って、例えば、Ｇｕらの教示（Ｇｕら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２６５：１０３−１０６（１９９４））に従って、導入された細
胞型においてのみ内在性遺伝子が不活化される。そのような細胞型特異的不活化
に必要とされる調節配列は、目的の特定の細胞型に依存し、そしてそれらは当業
者に明らかである。
【０６０１】 一旦トランスジェニック動物が作製されると、その組換え遺伝子の発現は、標
準的な技術を利用してアッセイされ得る。最初のスクリーニングは、サザンブロ
ット分析またはＰＣＲ技術によって達成されて、動物組織の分析により導入遺伝
子の組み込みが起きたことを確認し得る。トランスジェニック動物の組織におけ
る導入遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルはまた、動物から得た組織サンプルのノーザ
ンブロット分析、インサイチュハイブリダイゼーション分析および逆転写酵素Ｐ
ＣＲ（ｒｔ−ＰＣＲ）を含むがこれらに限定されない技術を用いて評価され得る
。トランスジェニック遺伝子発現組織のサンプルはまた、導入遺伝子産物に特異
的な抗体を用いて免疫細胞化学的または免疫組織化学的に評価され得る。
【０６０２】 一旦、創始動物が生成されると、それらは、交配され、同系交配され、異系交
配されるかまたは交雑されて、特定の動物のコロニーを生成し得る。そのような
交配戦略の例は、以下を含むがそれらに限定されない：別の系統を樹立するため
の１つより多くの組み込み部位を有する創始動物の異系交配；各導入遺伝子の相
加的発現効果によって、より高いレベルで導入遺伝子を発現する複合トランスジ
ェニックを生成するための別々の系統の同系交配；増強された発現およびＤＮＡ
分析による動物のスクリーニングの必要性の排除の両方のための、所定の組み込
み部位に対してホモ接合性の動物を生成するヘテロ接合性トランスジェニック動
物の交雑；複合ヘテロ接合性またはホモ接合性系統を生成するための別々のホモ
接合系統の交雑；ならびに目的の実験モデルに適切な異なるバックグラウンド上
に導入遺伝子を配置するための交配。
【０６０３】 本発明のトランスジェニック動物は、本発明のポリペプチドの生物学的機能の
詳述、異常な発現に関連する状態および／または障害の研究、ならびにこのよう
な状態および／または障害の改善に有効な化合物についてのスクリーニングに有
用な動物モデル系を含むがこれらに限定されない使用を有する。
【０６０４】 （実施例２９：ノックアウト動物） 内因性遺伝子発現もまた、標的化された相同性組換えを使用して遺伝子および
／またはそのプロモーターを不活性化あるいは「ノックアウトする」ことによっ
て減少し得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：２３０−
２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ、Ｃｅｌｌ ５１：
５０３−５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ５：３１３−３
２１（１９８９）を参照のこと；これらの各々は、本明細書中でその全体が参考
として援用される）。例えば、内因性ポリヌクレオチド配列（この遺伝子のコー
ド領域または調節領域のいずれか）と相同性のＤＮＡに隣接される、本発明の変
異体、非機能的なポリヌクレオチド（または完全に関連のないＤＮＡ配列）を、
選択マーカーおよび／またはネガティブ選択マーカーの存在あるいは非存在下で
使用し、インビボで本発明のポリペプチドを発現する細胞をトランスフェクトし
得る。別の実施態様において、当該分野で公知の技術を、目的の遺伝子を含むが
、発現しない細胞中でノックアウトを生じるために使用する。標的化された相同
性組換えを介した、このＤＮＡ構築物の挿入は、標的遺伝子の不活性化を生じる
。このようなアプローチは、胚性幹細胞に対する改変が不活性な標的遺伝子を有
する動物の子孫を作製するために使用され得る研究および農業分野に特に適応す
る（例えば、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ １９８７およびＴｈｏｍｐ
ｓｏｎ １９８９、前出を参照のこと）。しかし、このアプローチは、当業者に
明白な、適切なウイルスベクターを使用して、提供された組換えＤＮＡ構築物が
インビボで要求された部位に直接投与され、または標的化される場合、ヒトにお
ける使用に慣用的に適合され得る。
【０６０５】 本発明のさらなる実施態様において、本発明のポリペプチドを発現するために
遺伝的に操作される細胞、あるいは本発明のポリペプチドを発現しないように遺
伝的に操作された細胞（例えば、ノックアウト）を、インビボで患者に投与する
。このような細胞は、患者（すなわち、ヒトを含む動物）またはＭＨＣ適合性ド
ナーから入手され得、そして線維芽細胞、骨髄細胞、血球（例えば、リンパ球）
、脂肪細胞、筋細胞、内皮細胞などを含み得るが、それらに限定されない。この
細胞を、例えば、形質導入（ウイルスベクターおよび好ましくは細胞ゲノム中に
導入遺伝子を組み込むベクターを使用する）、またはトランスフェクション手段
（プラスミド、コスミド、ＹＡＣ、裸のＤＮＡ、エレクトロポレーション、リポ
ソームなどの使用を含むが、これらに限定されない）によって、細胞中に本発明
のポリペプチドのコード配列を導入するために、あるいはこのコード配列および
／または本発明のポリペプチドに関連する内因性の制御配列を破壊するために、
組換えＤＮＡ技術を使用して遺伝的にインビトロで遺伝的に操作する。本発明の
ポリペプチドのコード配列を強力な構成的プロモーターもしくは誘導性プロモー
ターまたはプロモーター／エンハンサーの制御下に配置し、本発明のポリペプチ
ドの発現および好ましくは分泌を達成し得る。本発明のポリペプチドを発現およ
び好ましくは分泌する操作した細胞を、例えば、循環中において、または腹腔内
で患者中へ全身的に導入し得る。
【０６０６】 あるいは、この細胞をマトリックスに組み込み得、そして身体に移植し得る（
例えば、遺伝的に操作した線維芽細胞を皮膚移植片の一部として移植し得る）；
遺伝的に操作した内皮細胞をリンパ移植片または脈管移植片の一部として移植し
得る（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４９号；および
ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＷｉｌｓｏｎ、米国特許第５，４６０，９５９号を参照
のこと。これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される）。
【０６０７】 投与される細胞が非自己または非ＭＨＣ適合性細胞である場合、それらを、こ
の導入細胞に対する宿主免疫応答の発生を妨害する周知の技術を使用して投与し
得る。例えば、この細胞を被包性の形態で導入し得、構成成分の即時の細胞外環
境との交換が可能である間は、導入細胞が宿主免疫系によって認識され得ない。
【０６０８】 本発明のトランスジェニックおよび「ノックアウト」動物は、異常な発現に関
連する状態および／または障害を研究して、本発明のポリペプチドの生物学的機
能を上昇させる場合に有用な動物モデル系、ならびにこのような状態および／ま
たは障害を寛解させる場合に有効な化合物のスクリーニングにおいて有用な動物
モデル系を含むが、それらに限定されない使用を有する。
【０６０９】 本発明は、前記の説明および実施例において詳細に記載される場合以外に実施
され得ることは明らかである。本発明の多数の改変および変更が、上記の教示を
考慮して可能であり、従って添付の特許請求の範囲内である。
【０６１０】 本発明の背景、詳細な説明および実施例において引用された各文書の全開示（
特許、特許出願、学術文献、要約、実験マニュアル、書籍または他の開示を含む
）はその結果、本明細書中に参考として援用される。さらに、本明細書に添付の
配列表のハードコピーおよび対応するコンピュ−ター可読形態は、両方とも本明
細書中にその全体が参考として援用される。
【０６１１】
【表５】
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 17/02 ４Ｈ０４５ 17/00 19/02 17/02 25/00 19/02 25/14 25/00 25/16 25/14 25/18 25/16 25/22 25/18 25/24 25/22 25/28 25/24 29/00 25/28 １０１ 29/00 35/00 １０１ 37/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/00 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (31)優先権主張番号 ６０／０７７，６９６ (32)優先日 平成10年３月12日(1998．3．12) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０７７，７１４ (32)優先日 平成10年３月12日(1998．3．12) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 9410 Ｋｅｙ Ｗｅｓｔ Ａｖｅｎｕｅ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， Ｍａｒｙｌａｎ ｄ 20850， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅ ｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 フェリー， アン エム． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01876， テュークスバリー， フォック ス ラン ドライブ 120 (72)発明者 ローゼン， クレイグ エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20882， レイトンズビル， ローリング ヒル ロード 22400 (72)発明者 フローレンス， チャールズ アメリカ合衆国 メリーランド 20851， ロックビル， アトランティック アベ ニュー 12805 (72)発明者 ヤング， ポール イー． アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザーズバーグ， ベックウイズ ス トリート 122 (72)発明者 ユ， グオ−リャン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94705， バークレー， グラバット ドライブ 242 (72)発明者 ニ， ジャン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA80 CA07 DA02 DA05 DA11 EA04 FA02 GA01 GA11 HA01 HA03 HA11 4B063 QA01 QA19 QQ01 QR33 QR59 QR77 QR80 QS05 QS25 QS36 QX01 4B064 AG01 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA57X AA90X AA93Y AB01 AB04 BA02 BA08 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 CA53 CA56 CA59 NA14 ZA021 ZA121 ZA151 ZA161 ZA181 ZC781 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 DA76 EA20 EA50 FA72 FA74 GA26

Claims (23)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号Ｘのポリヌクレオチドフラグメント、または配列番号Ｘにハイ
    ブリダイズし得るＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列のポリヌクレオチ
    ドフラグメント； （ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチド
    、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤ
    ＮＡ配列によってコードされるポリペプチドフラグメントをコードするポリヌク
    レオチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドドメインをコードするポリヌクレオチド、ま
    たは配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ
    配列によってコードされるポリペプチドドメインをコードするポリヌクレオチド
    ； （ｄ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープをコードするポリヌクレオチド、
    または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮ
    Ａ配列によってコードされるポリペプチドエピトープをコードするポリヌクレオ
    チド； （ｅ）生物学的活性を有する配列番号Ｙのポリペプチドをコードするポリヌク
    レオチド、または生物学的活性を有する、配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡ
    ＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列； （ｆ）配列番号Ｘの改変体であるポリヌクレオチド； （ｇ）配列番号Ｘの対立遺伝子改変体であるポリヌクレオチド； （ｈ）配列番号Ｙの種相同体をコードするポリヌクレオチド； （ｉ）（ａ）〜（ｈ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つに
    ストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、こ
    こで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列
    を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌ
    クレオチド、 からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有
    するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
  2. 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、分泌タンパク質をコ
    ードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
  3. 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｙとして同
    定される配列をコードするヌクレオチド配列、または配列番号Ｘにハイブリダイ
    ズし得るＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリ
    ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核
    酸分子。
  4. 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｘの全体の
    ヌクレオチド配列、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ受託番号
    Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
  5. 【請求項５】 前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかか
    らの連続するヌクレオチド欠失を含む、請求項２に記載の単離された核酸分子。
  6. 【請求項６】前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかから
    の連続するヌクレオチド欠失を含む、請求項３に記載の単離された核酸分子。
  7. 【請求項７】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、組換えベクタ
    ー。
  8. 【請求項８】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、組換え宿主細
    胞を作製する方法。
  9. 【請求項９】 請求項８に記載の方法によって産生される、組換え宿主細胞
    。
  10. 【請求項１０】 ベクター配列を含む、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
  11. 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに
    含まれるコードされた配列のポリペプチドフラグメント； （ｂ）生物学的活性を有する配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、または
    生物学的活性を有するＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるコードされた配列のポリペ
    プチドフラグメント； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドドメイン、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含ま
    れるコードされた配列のポリペプチドドメイン； （ｄ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含
    まれるコードされた配列のポリペプチドエピトープ； （ｅ）配列番号Ｙの分泌形態、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるコードさ
    れた配列の分泌形態； （ｆ）配列番号Ｙの全長タンパク質、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるコ
    ードされた配列の全長タンパク質； （ｇ）配列番号Ｙの改変体； （ｈ）配列番号Ｙの対立遺伝子改変体；または （ｉ）配列番号Ｙの種相同体、 からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    単離されたポリペプチド。
  12. 【請求項１２】 前記分泌形態または前記全長タンパク質が、Ｃ末端または
    Ｎ末端のいずれかからの連続するアミノ酸欠失を含む、請求項１１に記載の単離
    されたポリペプチド。
  13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結
    合する、単離された抗体。
  14. 【請求項１４】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドを発現する、
    組換え宿主細胞。
  15. 【請求項１５】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、 （ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１４に記載の組換
    え宿主細胞を培養する工程；および （ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、 を包含する、方法。
  16. 【請求項１６】 請求項１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチ
    ド。
  17. 【請求項１７】 医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、
    請求項１１に記載のポリペプチドまたは請求項１に記載のポリヌクレオチドの治
    療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。
  18. 【請求項１８】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
    る感受性を診断する方法であって、 （ａ）請求項１に記載のポリヌクレオチドにおいて変異の存在または非存在を
    決定する工程；および （ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて病理学的状態、または病理学的状
    態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
  19. 【請求項１９】 被験体において、病理学的状態、または病理学的状態に対
    する感受性を診断する方法であって、 （ａ）生物学的サンプルにおいて、請求項１１に記載のポリペプチドの発現の
    存在または発現の量を決定する工程、および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または発現の量に基づいて病理学的状態、
    または病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナー
    を同定する方法であって、 （ａ）請求項１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；
    および （ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすかどうかを決定す
    る工程、 を包含する、方法。
  21. 【請求項２１】 配列番号ＹのｃＤＮＡ配列に対応する、遺伝子。
  22. 【請求項２２】 生物学的アッセイにおいて活性を同定する方法であって、
    ここで該方法が、以下： （ａ）細胞において配列番号Ｘを発現させる工程； （ｂ）その上清を単離する工程； （ｃ）生物学的アッセイにおいて活性を検出する工程；および （ｄ）該活性を有する該上清においてタンパク質を同定する工程、 を包含する、方法。
  23. 【請求項２３】 請求項２０に記載の方法によって産生される、産物。
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