HUT77980A - Kalciumreceptor-aktív vegyületek - Google Patents

Kalciumreceptor-aktív vegyületek Download PDF

Info

Publication number
HUT77980A
HUT77980A HU9802491A HU9802491A HUT77980A HU T77980 A HUT77980 A HU T77980A HU 9802491 A HU9802491 A HU 9802491A HU 9802491 A HU9802491 A HU 9802491A HU T77980 A HUT77980 A HU T77980A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
phenyl
compounds
calcium
cells
Prior art date
Application number
HU9802491A
Other languages
English (en)
Other versions
HU228150B1 (en
Inventor
Manuel F. Balandrin
Eric G. Delmar
Scott T. Moe
Edward F. Nemeth
Bradford C. Van Wagenen
Original Assignee
Nps Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23390556&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HUT77980(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US1994/012117 external-priority patent/WO1995011221A1/en
Priority claimed from US08/353,784 external-priority patent/US6011068A/en
Application filed by Nps Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Nps Pharmaceuticals, Inc.
Publication of HUT77980A publication Critical patent/HUT77980A/hu
Publication of HU228150B1 publication Critical patent/HU228150B1/hu

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A61P3/14—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis for calcium homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A61P5/20—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of PTH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/27—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by saturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/28—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring having amino groups linked to the six-membered aromatic ring by unsaturated carbon chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/30—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring the six-membered aromatic ring being part of a condensed ring system formed by two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/58—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms with amino groups and the six-membered aromatic ring, or the condensed ring system containing that ring, bound to the same carbon atom of the carbon chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/62—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms linked by carbon chains having at least three carbon atoms between the amino groups and the six-membered aromatic ring or the condensed ring system containing that ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C225/00—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones
    • C07C225/02—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C225/14—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated
    • C07C225/16—Compounds containing amino groups and doubly—bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton, at least one of the doubly—bound oxygen atoms not being part of a —CHO group, e.g. amino ketones having amino groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated and containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/32—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/32—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to an acyclic carbon atom of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Obesity (AREA)

Description

A találmány szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozni képes vegyületekre, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményekre, valamint ezeknek a gyógyszerkészítményeknek az alkalmazására vonatkozik.
A test bizonyos sejtjei nemcsak a tisztán kémiai jelekre, hanem az ionokra, például az extracelluláris kalciumionokra (Ca2+) is reagálnak. Az extracelluláris kalciumionok koncentrációjának a változásai - az extracelluláris kalciumionkoncentrációt a továbbiakban [Ca2+]-val jelöljük - megváltoztatják ezeknek a sejteknek a működésbeli válaszreakcióit. Egy ilyen differenciálódott sejt a mellékpajzsmirigy hormonját (PTH) kiválasztó mellékpajzsmirigysejt. A PTH a legfontosabb belső elválasztású faktor, amely a Ca2+-homöosztázist a bélben és a sejten kívüli testnedvekben szabályozza.
A PTH a csontsejtekre és a vesesejtekre kifejtett hatásával megnöveli a vérkalcium-koncentrációt. A [Ca2+]-nak ez a növekedése azután negatív visszacsatoló jelként működve csökkenti a PTH-kiválasztást. A kalciumion-koncentráció és a PTHkiválasztás közötti fordított függvénykapcsolat az alapja annak a fontos mechanizmusnak, amely fenntartja a testben a kalciumionok homöosztázisát.
Az extracelluláris kalciumionok a mellékpajzsmirigy-sejtekre közvetlenül hatva szabályozzák a PTH-kiválasztást. Bebizonyosodott, hogy létezik a mellékpajzsmirigy-sejtek felületén egy fehérje, amely észleli a [Ca2+]-ban bekövetkezett változásokat [Brown és munkatársai: Natúré, 366, 574. (1993)]. Ez a fehérje a mellékpajzsmirigysejtekben az extracelluláris kalciumionok receptoraként működve (ez a fehérje a kalcium• · • ·· · ···· ·
- 3 receptor) észleli a [Ca:+] változásait és kezdeményezi a sejt működésbeli válaszreakcióját, a PTH-kiválasztást.
Amint ez a Nemeth és munkatársai által elkészített szakirodalmi szemléből [Cell Calcium, 11, 319 (1990)] kitűnik, az extracelluláris kalciumionok hatást gyakorolnak a különböző sejtfunkciókra. Németh egy másik cikkben [Cell Calcium, 11, 323 (1990)] a parafollikuláris sejtekben (a C-sejtekben) és a mellékpajzsmirigysejtekben levő extracelluláris kalciumionok szerepét vizsgálja. Ezekről a sejtekről korábban már kimutatták, hogy hasonló kalciumion-receptorokkal rendelkeznek [Brown és munkatársai: Natúré, 366, 574 (1993); Mithal és munkatársai, 9. Suppl. 1 J. Boné and Mineral Rés., s282 (1994) és Garrett és munkatársai: 9. Suppl. 1 J. Boné and Mineral Rés. s409 (1994)]. Zaidi cikkéből [Bioscience Reports, 10, 493 (1990)] kitűnik, hogy milyen hatást gyakorolnak az extracelluláris kalciumionok a csontlebontó sejtekre. Ezenkívül a keratinociták, a juxtaglomeruláris sejtek, a trofobiasztok, a hasnyálmirigy béta-sejtjei, valamint a zsír/háj sejtek valamennyien reagálnak az extracelluláris kalciumkoncentráció növekedésére, ami valószínűleg azzal van összefüggésben, hogy az említett sejtek kalciumreceptorai aktiválódnak.
Számos szakirodalmi hely foglalkozik különböző vegyületeknek azzal a képességével, hogy in vitro körülmények között képesek szimulálni az extracelluláris kalciumionokat [Nemeth és munkatársai: Calcium-Binding Proteins in Health and Disease (A kalcium megkötésére alkalmas fehérjék szerepe az egészség megőrzésében és a betegségek kialakulásában), Academic Press, Inc., 1987, 33.-35. oldalak (spermin és spermidin); Brown és munkatársai: Endocrinology, 128, 3047 (1991) (például neomicin); Chen és munkatársai: J. Boné and Mineral Rés., 5, 581 (1990) (diltiazem és analogonja, TA3090); Zaidi és munkatársai: Biochem. Biophys. Rés. Conunon., 167, 807 (1990) (verapamil); Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959) és Nemeth és munkatársai: PCT/US92/07175. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 93/04373)]. A felsorolt szakirodalmi helyeken olyan vegyületeket ismertetnek, amelyek képesek szabályozni egy szervetlen ionnak a szervetlenionreceptorral rendelkező sejtekre gyakorolt hatását.
A felsorolt szakirodalmi helyeket nem tekintjük a találmány leírását kiegészítő referenciaanyagnak.
A találmány szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozni képes vegyületekre, valamint olyan, betegségek vagy rendellenességek kezelésére alkalmas eljárásokra vonatkozik, amelyek a szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásán alapulnak. Előnyösen azok a vegyületek alkalmazhatók, amelyek szimulálni vagy blokkolni képesek az extracelluláris kalciumnak a sejtek felületén lévő kalciumreceptorokra gyakorolt hatását.
A szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásával kezelhető betegségekre, illetve rendellenességekre a következő típusú jellegzetességek legalább egyike jellemző: (1) rendellenes szervetlenion-homöosztázis, előnyös esetben kalcium-homöosztázis; (2) rendellenes mennyiségű extracelluláris vagy intracelluláris hírvivő, amelynek a termelődése szervet99
- 5 lenion-receptorok - előnyös esetben kalciumreceptorok - aktivitásával befolyásolható; (3) egy intracelluláris vagy extracelluláris hírvivő rendellenes - például jellegében vagy nagyságában eltérő - hatása, amely szervetlenion-receptorok előnyös esetben kalciumreceptorok - aktivitásának köszönhetően javulhat; és (4) a szervetlenion-receptorok - előnyös esetben a kalciumreceptorok - aktivitásának a szabályozása pozitív hatást gyakorol, mint például olyan betegségek, illetve rendellenességek esetében, amelyeknél egy intracelluláris vagy extracelluláris hírvivőnek a receptor aktivitásának köszönhetően fokozott mértékű termelődése kompenzálja egy másik hírvivő rendellenes mennyiségét. Azokra az extracelluláris hírvivőkre, amelyeknek a kiválasztása és/vagy a hatása befolyásolható a szervetlenion-receptorok aktivitásának a szabályozásával, példaként megemlítjük a szervetlen ionokat, a hormonokat, a neurotranszmittereket, a növekedési faktorokat és a kemokinokat. Az intracelluláris hírvivők közé tartozik a cAMP, a cGMP, az IP3 és a diacil-glicerin.
A találmány szerinti vegyületek tehát előnyösen szabályozzák a kalciumreceptor aktivitását, és olyan betegségek vagy rendellenességek kezelésére alkalmazhatók, amelyek a kalciumreceptor egy vagy több aktivitásának a szabályozásával befolyásolhatók. A kalciumreceptor fehérjéi képessé tesznek bizonyos speciális sejteket arra, hogy reagáljanak az extracelluláris kalciumion-koncentráció változásaira. így például az extracelluláris kalciumion gátolja a mellékpajzsmirigyhormon kiválasztódását a mellékpajzsmirigysejtekből, akadályozza, hogy a csont a csontlebontó sejtek hatására ·· · · felszívódjék és serkenti a C-sejtekből a kalcitonin kiválasztódását.
A találmány egyik előnyös megvalósítási módja szerint a találmány szerinti vegyületeket olyan betegség vagy rendellenesség kezelésére alkalmazzuk, amely betegségre vagy rendellenességre a csontnak és az ásványi anyagoknak a megszokottól eltérő homöosztázisa, előnyösebb esetben kalciumhomöosztázisa jellemző. A szigorú homöosztatikus ellenőrzés alatt lévő extracelluláris kalciumionok különböző folyamatokat szabályoznak, így a véralvadást, az idegek és az izmok ingerlési folyamatát, valamint a megfelelő csontképződést. A kalcium-homöosztázis rendellenességét a következő jelenségek közül legalább egy jelzi: (1) a vérszérum kalciumkoncentrációjának rendellenes növekedése vagy csökkenése; (2) a kalciumkoncentráció rendellenes növekedése vagy csökkenése a kiválasztott vizeletben; (3) a kalciumkoncentráció rendellenes növekedése vagy csökkenése a csontokban (ezt például a csontban lévő ásványianyagok sűrűségének a mérése alapján lehet megállapítani); (4) az elfogyasztott ételben levő kalcium rendellenes felszívódása; (5) a vérszérum kalciumszintjét befolyásoló hírvivők - például a mellékpajzsmirigy-hormon és a kalcitonin - termelődésének és/vagy felszabadulásának rendellenes növekedése vagy csökkenése; és (6) a vérszérum kalciumszintjét befolyásoló hírvivők által kiváltott válaszreakciókban bekövetkező rendellenes változás. A kalcium-homöosztázisnak ezekben az eltérő megjelenési formáiban tapasztalható, a normálistól eltérő növekedés vagy csökkenés általában előfordul a lakosságnál, és rendszerint betegséggel vagy rendeilenességekkel függ össze.
A normálistól eltérő kalcium-homöosztázisban megnyilvánuló betegségek és rendellenességek a sejtek különböző hiányosságainak, például a kalciumreceptorok hibás működésének, a kalciumreceptorok csökkent számának vagy hatását egy kalciumreceptor mellett kifejtő hibás intracelluláris fehérjének tulajdoníthatók. így például a mellékpajzsmirigysejtekben a kalcium-receptor a Gi~fehérjéhez kapcsolódik, amely viszont gátolja a ciklusos AMP termelődését. A Gi-fehérjében előforduló hibák befolyásolhatják a Gi-fehérjének a ciklusos AMP termelődését gátló képességét.
A találmány először is olyan, szervetlenion-receptorokat szabályzó vegyületekre vonatkozik, amelyek (I) általános képletében
- Ari jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogénalkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, N(CHÚ csoporttal, fenilcsoporttal, fenoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, α,α-dimetil-benzil-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(0H) csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Ar. jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxicsoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- q jelentése 0, 1, 2 vagy 3; és
- R jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú aikilcsoport.
A találmány tárgyát képezik az (I) általános képletű vegyületek farmakológiái szempontból elfogadható sói, valamint komplexei is.
A találmány szerinti vegyületek kedvező sztereokémiájú vegyületek. Az (I) képletben a metilcsoport egy királis centrumhoz kapcsolódik, így a-(R)-metil-szerkezet jön létre. Az (I) általános képletben az R szubsztituens szintén királis centrumhoz kapcsolódik, így - amennyiben R jelentése metilcsoport - (R)-metil-szerkezet alakul ki. Abban az esetben tehát, ha R jelentése metilcsoport, az (I) általános képletű vegyület sztereokémiái szempontból (R,R)-vegyület.
A szervetlenion-receptor aktivitásai olyan folyamatokban nyilvánulnak meg, amelyek szervetlenion-receptor aktiválásának az eredményeként mennek végbe. Ilyen folyamatok közé sorolható azoknak a molekuláknak a termelődése, amelyek intra• · celluláris vagy extracelluláris hírvivőként működhetnek.
A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek közé tartoznak az ionomimetikumok, az ionolitikumok, a kalcimimetikumok és a kalcilitikumok. Az ionomimetikumok olyan vegyületek, amelyek hozzákötődnek egy szervetlenion-receptorhoz és szimulálják (vagyis kiváltják vagy fokozzák) egy szervetlen ion hatásait a szervetlenion-receptoron. A vegyület előnyös esetben a kalciumionreceptor egy vagy több aktivitását befolyásolja. A kalcimimetikumok olyan ionomimetikumok, amelyek befolyásolják a kalciumreceptorok egy vagy több aktivitását és hozzákötődnek a kalciumreceptorokhoz.
Az ionolitikumok olyan vegyületek, amelyek hozzákötődnek egy szervetlenion-receptorhoz és blokkolják (vagyis gátolják, illetve csökkentik) a szervetlenion-receptoron egy szervetlen ion által kiváltott egy vagy több aktivitást. A vegyület előnyös esetben egy vagy több kalciumreceptor-aktivitást befolyásol. A kalcilitikumok olyan ionolitikumok, amelyek blokkolják a kalciumreceptor extracelluláris kalcium által kiváltott egy vagy több aktivitását és hozzákötődnek a kalciumreceptorhoz.
Az ionomimetikumok és az ionolitikumok megkötődhetnek a receptornak ugyanazon a helyén, ahol a természetes szervetlenion-ligandum megkötődik, de megkötődhetnek attól eltérő például alloszterikus - helyen is. így például a kalciumreceptorhoz kötődő NPS R-467 kalciumreceptor-aktivitást eredményez, és így az NPS R-467-et a kalcimimetikumok csoportjába sorolják. Az NPS R-467 azonban az extracelluláris kalcium kötőhelyétől eltérő helyen - vagyis alloszterikus helyen - kő• · · · ·· V * ·
- 10 tődik a kalciumreceptorhoz.
Egy vegyület hatásosságának a mértékét úgy lehet meghatározni, hogy az adott vegyületre kiszámítják az EC5o vagy az IC50 értéket. Az EC50 az a koncentráció, amelyben egy vegyületnek jelen kell lennie ahhoz, hogy a maximális szimuláló hatás felét kifejtse. Az IC50 az a koncentráció, amelyben egy vegyületnek jelen kell lennie ahhoz, hogy a maximális blokkoló hatás felét kifejtse. Kaiciumreceptoron levő vegyületekre az EC50 és az IC50 értékeket úgy határozzák meg, hogy mérik a kalciumreceptoron levő extracelluláris kalcium egy vagy több aktivitását. Az EC5u és az IC5o értékek mérésére szolgáló mennyiségi elemzésre vonatkozó példák találhatók Nemeth és munkatársai szabadalmi bejelentéseiben [PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (nemzetközi közrebocsátási száma: WO 94/18959.) és PCT/US92/07175. sz. nemzetközi bejelentés (nemzetközi közrebocsátási száma WO 93/04373.)], valamint a leírás további részében. (Az előbb említett két nemzetközi bejelentést a találmány ismertetését kiegészítő referenciaanyagnak tekintjük.) Ezekhez a mennyiségi elemzésekhez hozzátartozik az oocita-expresszió vizsgálata és egy intracelluláris kalciumion-koncentrációnál ([Ca2+]i) a kalciumreceptor aktivitásának köszönhetően tapasztalható növekedés mérése is. Ezeknek a vizsgálatoknak a keretében előnyös esetben egy kalciumreceptor aktivitásával kapcsolatos jellemző hormon felszabadulását vagy gátlását mérik.
Egy szervetlenion-receptort szabályzó vegyület előnyös esetben szelektíven célozza meg egy adott setjben a szervetlenion-receptor aktivitását. Egy kalciumreceptor-aktivirás • · * ·
- 11 például szelektíven megcélozható egy olyan vegyülettel, amely adott koncentrációban alkalmazva egy bizonyos típusú sejtben nagyobb hatást gyakorol a kalciumreceptor-aktivitásra, mint egy másik típusú sejtben. Jn vivő vagy in vitro körülmények között mérve a differenciális hatás legalább tízszeres. Még előnyösebb, ha a differenciális hatást in vivő körülmények között, a vegyület koncentrációját pedig a vérplazmában vagy az extracelluláris fluidumban mérik, és a mért hatás extracelluláris hírvivőktől - például vérplazmában lévő kalcitonintól, mellékpajzsmirigy-hormontól vagy vérplazmában levő kalciumtól - származik. így például az egyik előnyös megoldás szerint olyan vegyületet alkalmaznak, amely a kalcitoninelválasztás helyett a PTH-szekréciót befolyásolja szelektíven.
A vegyület előnyös esetben olyan kalcimimetikum vagy kalcilitikum, amelynek a kalciumreceptoron az EC5n- vagy IC5o-értéke a későbbiekben ismertetésre kerülő mennyiségi elemzések egyikével meghatározva legfeljebb 5 μΜ, még előnyösebb esetben pedig legfeljebb 1 μΜ, például 100 nM, 10 nM vagy 1 nM. Még előnyösebb, ha az intracelluláris kalciumionokat a humán mellékpajzsmirigy kalciumreceptorát manifesztáló és fura-2-vel feltöltött nukleinsavval átalakított HEK 293-as sejtekben határozzuk meg mennyiségileg. A kisebb EC50- és ICJu-értékek előnyösek, mert lehetővé teszik a vegyületek kisebb koncentrációban való alkalmazását in vivő vagy in vitro körülmények között. Kis EC50-értékekkel vagy IC5o~értékekkel rendelkező vegyületek felfedezése lehetővé teszi további, hasonló vagy még jobb hatékonysággal és/vagy szelektivitással rendelkező vegyületek tervezését és szintetizálását.
A találmány tárgyát képezik továbbá - farmakológiai szempontból elfogadható sóikkal és komplexeikkel együtt - azok a szervetlenion-receptorok szabályozására alkalmas vegyületek, amelyek (II) általános képletében
- Ar3 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, a,a-dimetil-benzil-csoporttal, NO2 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, N(CH3)2 csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal - adott esetben helyettesített naftilvagy fenilcsoport;
- Ar4 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- R8 jelentése hidrogénatom vagy fenilcsoport;
- R9 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
« ν ··» ··· ·
- 13 - Rio jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy fenilcsoport .
A találmány tárgyát képezik továbbá - farmakológiai szempontból elfogadható sóikkal és komplexeikkel együtt - azok a vegyületek, amelyek (III) általános képletében
- Ar5 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH_ csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, a, cc-dimetil-benzil-csoporttal, NO2 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, acetilcsoporttal, etilén-dioxi-csoporttal és/vagy -CH=CH-fenil-csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Ars. jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig acetilcsoporttal, rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, metoxi-karbonil-csoporttal, OCH2C(O)C2H5 csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Rn jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és • ·· ·
- 14 - R12 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
A találmány tárgyát képezik továbbá azok a gyógyszerkészítmények, amelyek találmány szerinti szervetlenion-receptor szabályzó vegyület mellett fiziológiailag elfogadható hordozóanyagot tartalmaznak. Gyógyszerkészítmények-nek emlősök mindenekelőtt emberek - szervezetébe való bejuttatásra alkalmas kiszerelési formájú kompozíciókat nevezünk. A farmakológiai kompozíciók előnyös esetben megfelelő kiszerelési formában elegendő mennyiségű kalciumreceptor-szabályozó vegyületet tartalmaznak ahhoz, hogy az emberi szervezetben gyógyító hatást fejtsenek ki.
A szakemberek tisztában vannak azzal, hogy milyen szempontok figyelembevételével lehet előállítani a szervezetbe való bejuttatásra alkalmas kiszerelési formákat. Figyelembe kell venni például a mérgező hatásokat, az oldhatóságot, az adagolás módját és az aktivitás megőrizhetőségét. így például a véráramba injektált farmakológiai kompozícióknak oldhatóknak kell lenniük.
A gyógyhatású vegyületek farmakológiai szempontból elfogadható sók (például savaddíciós sók) és komplexek alakjában is formálhatók. Ilyen sók előállításával meg lehet könnyíteni egy hatóanyag gyógyszerként való alkalmazását: a fizikai tulajdonságok megváltoztathatók a fiziológiai hatás befolyásolása nélkül.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy olyan eljárás is, amely szerint a szervetlenion-receptor aktivitásának a szabályozásával lehet kezelni betegeket a találmány szerinti ionreceptor-szabályozó vegyületek alkalmazása által. Az eljá• ·· ·
- 15 rás keretében olyan gyógyszerkészítményt juttatunk be a beteg szervezetébe, amely a gyógyító hatáshoz elegendő mennyiségben tartalmaz szervetlenion-receptort szabályozó vegyületet. Az eljárás egyik előnyös megvalósítási módja szerint a betegséget vagy a rendellenességet a kalciumreceptor aktivitásának a szabályozásával kezeljük olyan módon, hogy a beteg szervezetébe a gyógyító hatáshoz megfelelő mennyiségben kalciumreceptor-szabályozó vegyületet juttatunk.
A betegek kezelésére szervetlenion-receptort szabályozó vegyületek, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó készítmények használhatók fel. A beteg kifejezést olyan emlősök megjelölésére használjuk, amelyeknek az állapotát előnyösen lehet befolyásolni egy szervetlenion-receptor szabályozásával. Azokat a betegeket, akiknek szükségük van a szervetlenion-receptorok szabályozásán alapuló gyógykezelésre, a gyógyító munkában jártas szakemberek számára ismert, szokásosan alkalmazott módszerekkel azonosítani lehet.
Előnyös esetben a beteg olyan ember, akinél olyan rendellenességet állapítottak meg, amelyre a következő szabálytalanságok legalább egyike jellemző: (1) szabálytalan szervetlenion-homöosztázis, előnyösebb esetben szabálytalan kalcium-homöosztázis; (2) a normálistól eltérő koncentrációban van jelen az a hírvivő, amelynek a termelődését vagy elválasztását befolyásolja a szervetlenion-receptor aktivitása, előnyösebb esetben a kalciumreceptor aktivitása; és (3) a normálistól eltérő koncentrációjú vagy aktivitású azon hírvivő, amelynek a működését befolyásolja a szervetlenion-receptor aktivitása, előnyösebb esetben a kalciumreceptor aktivitása.
• ·
- 16 A normálistól eltérő kalcium-homöosztázisban megnyilvánuló betegségek közé tartozik például a mellékpajzsmirigytúlműködés, a csontritkulás és más, csonttal és ásványianyagokkal összefüggő rendellenességek, amelyeket például a szokásos gyógyászati szövegkönyvekben - így például a Harrison's Principles of Internál Medicine (Hamison: A belgyógyászat alapelvei) - ismertetnek. Ezeket a betegségeket olyan, kalciumreceptor-szabályozó vegyületekkel kezelik, amelyek a kalciumreceptoron az extracelluláris kalciumion legalább egy hatását szimulálják vagy blokkolják, és ezáltal közvetlenül vagy közvetve befolyásolják a beteg szervezetében a fehérjék vagy más vegyületek koncentrációját.
Gyógyászati szempontból hatásos mennyiség-nek nevezzük egy vegyületnek azt a mennyiségét, amely bizonyos mértékben enyhíti a páciensnél diagnosztizált betegségnek vagy rendellenességnek egy vagy több kórtünetét; részben vagy teljes mértékben visszaállít a normális szintre egy vagy több olyan fiziológiai vagy biokémiai paramétert, amely összefüggésben van a betegséggel vagy a rendellenességgel, illetve amelynek a megváltozása kiváltotta a betegséget vagy a rendellenességet .
Előnyösen alkalmazható a találmány szerinti eljárás például olyan betegek esetében, akiknek a betegségére vagy a rendellenességére egy vagy több kalciumreceptor-szabályozó komponens normálistól eltérő koncentrációja utal, és a vegyület hatást fejt ki a következő sejtek valamelyikének kalciumreceptorán: mellékpajzsmirigysejt, csontlebontó sejt, juxtaglomerulárís vesesejt, a test középpontjához közel eső
vesecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornából származó sejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében lévő, úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), bélsejt, vérlemezke, vaszkuláris simaizomsejt, szívpitvarból származó sejt, gasztrint kiválasztó sejt, glükagont kiválasztó sejt, mezangiális vesesejt, emlősejt, béta-sejt, zsír/haj sejt, immunsejt, a gyomor- és béltraktusból származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfüggelékmirigy-sejt, hipotalamuszsejt, és a szubfornikális szervből származó sejt.
Előnyösebb esetben a sejtek a következők lehetnek: mellékpazsmirigysejtek, a központi idegrendszerből származó sejtek, a perifériás idegrendszerből származó sejtek, a vese Henle-kacsának a vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejtek, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejtek (C-sejtek), bélből származó sejtek, a gyomor- és béltraktusból származó sejtek, az agyfüggelékmirigvből származó sejtek, hipotalamuszsejtek és a szubfornikális szervből származó sejtek.
A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítási módja szerint olyan vegyületet alkalmazunk, amely kalcimimetikus hatást gyakorol a mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptorára és csökkenti a mellékpajzsmirigy-hormon szintjét a beteg vérszérumában. Még előnyösebb esetben a mellékpajzsmirigy-hormon szintje olyan mértékben csökken, amely elegendő • ·
- 18 ahhoz, hogy kiváltsa a vérplazma kalciumion-koncentrációjának a csökkenését. A legelőnyösebb esetben a mellékpajzsmirigyhormon szintje az egészséges embereket jellemző koncentrációértékre csökken.
Egy másik előnyös esetben a vegyület valamilyen kalcilitikum, amely hat a mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptorára és megnöveli a beteg vérszérumában a mellékpajzsmirigy-hormon szintjét. Még előnyösebb esetben a mellékpajzsmirigy-hormon szintje olyan mértékben növekszik, amely elegendő ahhoz, hogy előidézze a beteg csontjában az ásványi anyagok sűrűségének a növekedését.
Az ilyen kezelésre szoruló betegeket szokásos orvosi módszerekkel - így vérelemzéssel vagy vizeletelemzéssel· - azonosíthatjuk, például olyan módon, hogy méréssel megállapítjuk annak a fehérjének a hiányát, amelynek a termelődését vagy szekrécióját befolyásolják a szervetlenion-koncentrációkban bekövetkező változások, illetve az elemzési eredmények alapján megállapítjuk, hogy a szervetlenion-homöosztázist befolyásoló szervetlenionok vagy hormonok koncentrációi eltérnek a szokásos értékektől.
Különböző példákat közlünk valamennyi alkalmazási lehetőség ismertetésére. A közölt példák azonban semmilyen vonatkozásban nem korlátozzák a találmányt.
A találmány többi jellegzetessége és előnye nyilvánvalóan kitűnik a következő ábrákból, a találmány részletes ismertetéséből, a példákból, valamint az igénypontokból.
A rajzmellékletek rövid ismertetése
Az l.a)-l.r) ábrákon különböző vegyületek kémiai szerke19 zetét szemléltetjük.
A 2.-131. ábrákon a leírásban szereplő jellegzetes vegyületek fizikai adatait közöljük.
A találmány előnyös megvalósítási formáinak ismertetése
A találmány szerinti vegyületek képesek szabályozni egy szervetlenion-receptor egy vagy több aktivitását. Ezek a vegyületek előnyös esetben szimulálni vagy blokkolni tudják egy extracelluláris ionnak egy szervetlenion-receptorral rendelkező sejtre gyakorolt hatását. Még előnyösebb esetben az extracelluláris ion kalciumion és a hatás egy kalciumreceptorral rendelkező sejtre gyakorolt hatás. A kalciumaktivitással, a kalciumreceptorral és/vagy a kalciumreceptor-szabályozó vegyületekkel foglalkozó szakirodalmi helyek közül megemlítjük a következőket: Brown és munkatársai: Natúré, 366, 574 (1993); Nemeth és munkatársai: PCT/US943/01642. sz. nemzetközi szabadalmi leírás (nemzetközi közzétételi száma: WO
943/18959); Nemeth és munkatársai: PCT/US92/07175. sz. nemzetközi szabadalmi leírás (nemzetközi közzétételi száma: WO
93/04373); Shoback és Chen: J. Boné Mineral Rés., 9, 293 (1994), valamint Racke és munkatársai: FEBS Lett., 333, 132 (1993). A felsorolt szakirodalmi helyek szövegét nem tekintjük a találmány leírását kiegészítő referenciaanyagnak.
I. Kalciumreceptorok
A kalciumreceptorok eltérő típusú sejteken lehetnek jelen, és a különböző típusú sejteken eltérő lehet az aktivitásuk. A következő sejteknek a kalciumionokra reagálva kifejtett farmakológiai hatásai összefüggésben vannak a kalcium···· *
- 20 receptor jelenlétével: mellékpajzsmirigysejt, csontlebontó sejt, juxtaglomeruláris vesesejt, a test középpontjához közel eső vesecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornából származó sejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), bélsejt, vérlemezke, vaszkuláris simaizomsejt, szívpitvarból származó sejt, gasztrint kiválasztó sejt, glükagont kiválasztó sejt, mezangiális vesesejt, emlősejt, béta-sejt, zsír/háj sejt, immunsejt, a gyomor- és béltraktusból származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfüggelékmirigy-sejt, hipotalamuszsejt, és a szubfornikális szervből származó sejt.
Ezenkívül megemlítjük, hogy fizikai adatokkal már igazolták a kalciumreceptorok jelenlétét a következő sejteken: mellékpazsmirigysejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vese Henle-kacsának a vastag felszálló ágából és/vagy a vese gyűjtővezetékéből származó sejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), bélből származó sejt, a gyomorés béltraktusból származó sejt, az agyfüggelékmirigyből származó sejt, hipotalamuszsejt és a szubfornikális szervből származó sejt.
Ezeken az eltérő típusú sejteken különböző kalciumreceptorok lehetnek jelen. Az is lehetséges, hogy egy sejten egynél több típusba sorolható kalciumreceptor van. A kalcium21 receptor-aktivitások és az eltérő sejtekből származó aminosav-szekvenciák összehasonlítása alapján megállapítható, hogy különféle kalciumreceptor-típusok léteznek. A kalciumreceptorok például különböző kétértékű és háromértékű kationokra reagálhatnak. A mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptora Ca'-ra és Gd3+-ra egyaránt reagál, míg a csontlebontó sejtek kalciumreceptora a kétértékű ionokra - például a kalciumionra - reagál, de a Gd3+-ra nem. A mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptora tehát farmakológiai szempontból különbözik a csontlebontó sejt kalciumreceptorától.
Más részről azonban a mellékpajzsmirigysejtekben és a Csejtekben jelenlevő, kalciumreceptorokat kódoló nukleinsavszekvenciák azt mutatják, hogy ezek a receptorok nagyon hasonló aminosav-szerkezettel rendelkeznek. A kalcimimetikus vegyületek azonban farmakológiai szempontból különböznek, és a mellékpajzsmirigysejteken, valamint a C-sejteken eltérő aktivitásokat szabályoznak. A kalciumreceptorok farmakológiai tulajdonságai tehát jelentős mértékben függhetnek annak a sejtnek vagy szervnek a típusától, amelyben ezek a receptorok manifesztálódnak, így a kalciumreceptorok szerkezetei hasonlók, sőt azonosak is lehetnek.
A kalciumreceptoroknak általában kicsi az affinitásuk az extracelluláris kalciumionokhoz (a látszólagos Kd rendszerint nagyobb mint körülbelül 0,5 mM). Cooper, Bloom és Roth meghatározása szerint [The Biochemical Basis of Neuropharmacology (A neurofarmakológia biokémiai alapjai), Ch., 4.] a kalciumreceptorok szabadéifektoros vagy kötöttéifektoros mechanizmussal működhetnek, így tehát különböznek az intracelluláris
- 22 kalciumreceptoroktól, például a kalmodulintól és a troponinektől.
A kalciumreceptorok reagálnak az extracelluláris kalciumszintek változásaira. Hogy pontosan milyen változások következnek be, az az adott receptortól és a receptort tartalmazó sejtvonaltól függ. így például a kalciumnak a mellékpajzsmirigysejtben lévő kalciumreceptorra in vitro körülmények között gyakorolt hatása következtében:
1. növekszik a belső kalciumion-koncentráció. A növekedés a külső kalciumionok beáramlásának és/vagy a belső kalciumtartalom mobilizálásának tulajdonítható. A belső kalciumionkoncentráció növekedése a következőkben nyilvánul meg:
(a) gyorsan, a csúcsértéket 5 másodpercen belül elérve átmenetileg nő a [Ca2+]iz a növekedés 1 μΜ La3+-nal vagy 1 μΜ Gd3+-nal nem gátolható meg, de ionomicines előkezeléssel - extracelluláris kalciumionok távollétében - megakadályozható;
(b) a növekedést dihidropiridinszármazékok nem gátolják;
(c) az átmeneti növekedés megszüntethető 10 mM nátrium-fluoriddal való 10 perces előkezeléssel;
(d) az átmeneti növekedés mérsékelhető a C-proteinkináz (PKC) valamelyik aktivátorával - például forbol-mirisztát-acetáttal (PMA), mezereinnel vagy (-)-V-indolaktámmal - végzett előkezeléssel. A C-protein-kináz aktivátora végül is a kalciumkoncentráció/válaszreakció görbéjét jobbra tolja anélkül, hogy ez a változás a válaszreakció maximális értékét befolyásolná; és « ♦ ·* · · · ···.
·«·· · · « ·*
- 23 (e) a 100 ng/ml pertusszisz-toxinnal legalább 4 órán át végzett előkezelés nem befolyásolja a növekedést;
2. gyorsan - 30 másodpercen belül - fokozódik az inozit-1,4,5-trifoszfát vagy a diacil-glicerin képződése. A 100 ng/ml koncentrációban alkalmazott pertusszisz-toxinnal több mint 4 órán át végzett előkezelés ezt a növekedést nem befolyásolja;
3. a ciklusos AMP dopaminnal és izoproterenollal stimulált képződése gátolt; ezt a hatást blokkolni lehet 100 ng/ml koncentrációban alkalmazott pertusszisz-toxinnal több mint 4 órán át végzett előkezeléssel; és
4. a PTH-kiválasztás gátolt; a PTH-kiválasztás gátlását a 100 ng/ml koncentrációban alkalmazott pertusszisz-toxinnal több mint 4 órán át végzett előkezelés nem befolyásolja.
A kalciumnak a különböző sejtekben levő más kalciumreceptorokra gyakorolt hatását a szakterületen ismert módszerekkel könnyen meg lehet határozni. Ezek a hatások hasonlóak lehetnek a belső kalciumion-koncentrációnak a mellékpajzsmirigysejteknél megfigyelt növekedéséhez. Más vonatkozásokban viszont a hatások várhatóan eltérnek, például abban a tekintetben, hogy kiváltják-e vagy akadályozzák egy, a mellékpajzsmirigytől eltérő hormon felszabadulását.
II. Szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek
A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek egy a szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozzák. Kalciumreceptor-szabályozó vegyületként előnyösen alkalmazhatók a kalcimimetikumok és a kalcilitikumok. A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületeket olyan vegyületek
szűrővizsgálata alapján lehet azonosítani, amelyeket egy jellegzetes aktivitást mutató vegyület - az úgynevezett vezérvegyület - szerkezetének az ismeretében terveztek meg és állítottak elő.
Az egyik előnyösen alkalmazható módszer szerint a [Ca~']i változásának mérése alapján lehet meghatározni a kalciumreceptor aktivitását. A [Ca2+]i változását különböző módszerekkel lehet mérni. így például a humán mellékpajzsmirigy kalciumreceptorát manifesztáló és fura-2-vel feltöltött nukleinsavval átalakított HEK 293-as sejtek alkalmazásával, valamint egy kalciumreceptor genetikai kódját tartalmazó nukleinsavval injektált Xenopus oocyte-ben a kloridion-áramlás fokozódásának a mérésével [Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)]. így például poli (A)+ mRNS-t lehet kinyerni olyan, kalciumreceptort manifesztáló sejtekből, mint a mellékpajzsmirigysejt, a csontlebontó sejt, a juxtaglomeruláris vesesejt, a test középpontjához közel eső vesecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornából származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), a bélsejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vérlemezke, a vaszkuláris simaizomsejt, a szívpitvarból származó sejt, a gasztrint kiválasztó sejt, a glükagont kiválasztó sejt, a mezangiális vesesejt, az emlősejt, a béta-sejt, a zsír/háj sejt, az immunsejt, a gyomor25 és béltraktusból származó sejt. A nukleinsav előnyös esetben mellékpajzsmirigysejtből, C-sejtből vagy csontlebontó sejtből származik. Még előnyösebb, ha a nukleinsav kódol egy kalciumreceptort és jelen van egy plazmidban vagy egy vektorban.
A találmány előnyösen valósítható meg, ha a kalciumreceptor-szabályozó vegyület olyan kalcímimetikum, amely in vivő körülmények között megakadályozza, hogy a csontlebontó sejtek hatására a csont felszívódjék, in vitro körülmények között megakadályozza, hogy csontlebontó sejtek hatására a csont felszívódjék, in vitro vagy in vivő körülmények között serkenti a kalcitonin kiválasztódását a C-sejtekből, in vitro körülmények között gátolja a mellékpajzsmirigy-hormon kiválasztódását a mellékpajzsmirigysejtekből és in vivő körülmények között mérsékli a PTH-kiválasztódást, in vivő körülmények között növeli a kalcitoninszinteket, illetve in vitro körülmények között blokkolja a csontlebontó sejtek hatására végbemenő csontielszívódást és in vivő körülmények között gátolja a csontfelszívódást.
Egy másik előnyös megvalósítási mód szerint a kalciumreceptor-szabályozó vegyület olyan kalcilitikum, amely in vitro körülmények között kiváltja a mellékpajzsmirigy-hormon kiválasztódását a mellékpajzsmirigysejtekből és in vivő körülmények között fokozza a mellékpajzsmirigy-hormon koncentráció j át.
Előnyös esetben' a vegyület egy jellegzetes sejtben szelektíven befolyásolja a szervetlenion-receptor aktivitását, még előnyösebb esetben a kalciumreceptor aktivitását. A szelektíven szó azt jelenti, hogy a vegyület egy adott kon• · « ·
- 26 centrációban nagyobb hatást gyakorol egy bizonyos típusú sejtben levő szervetlenion-receptor aktivitására, mint egy másik típusú sejtben levő szervetlenion-receptoréra. Előnyös esetben az egyik hatás legalább 10-szer akkora, mint a másik. A koncentráció előnyös esetben vérplazmabeli koncentrációt jelent, a mért hatás pedig extracelluláris hírvivők - például a vérplazmában levő kalcitonin, a mellékpajzsmirigy-hormon vagy a vérplazmában lévő kalcium - képződése. Az egyik előnyös megvalósítási módot például az jellemzi, hogy a vegyület a kalcitoninkiválasztással szemben szelektíven befolyásolja a
PTH-kiválasztást.
Egy másik előnyös kiviteli mód szerint a vegyület EC5o_ értéke vagy IC50-értéke a következő sejtek közül legalább egynél - de nem valamennyinél - legfeljebb 5 μΜ: mellékpajzsmirigysejt, csontlebontó sejt, juxtaglomeruláris vesesejt, a test középpontjához közel eső vesecsatornából származó sejt, a test középpontjától távol eső vesecsatornából származó sejt, a központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vesében lévő úgynevezett Henle-kacs vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a felhámból származó szarusejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), bélsejt, vérlemezke, vaszkuláris simaizomsejt, szívpitvarból származó sejt, gasztrint kiválasztó sejt, glükagont kiválasztó sejt, mezangiális vesesejt, emlősejt, béta-sejt, zsír/háj sejt, immunsejt, a gyomor- és béltraktusból származó sejt, bőrsejt, mellékvesesejt, agyfüggelékmirigy-sejt, hipotalamuszsejt, és a szubfornikális szervből származó sejt. Még előnyösebb esetben a sejtek a következők közül kerülnek ki: mellékpazsmirigysejt, központi idegrendszerből származó sejt, a perifériás idegrendszerből származó sejt, a vese Henlekacsának vastag felszálló ágából és/vagy gyűjtő vesevezetékből származó sejt, a pajzsmirigyből származó parafollikuláris sejt (C-sejt), bélből származó sejt, a gyomor- és béltraktusból származó sejt, az agyfüggelékmirigyből származó sejt, hipotalamuszsejt és a szubfornikális szervből származó sejt. Az ebbe a csoportba tartozó sejteknél a kalciumreceptor jelenlétét fizikai módszerekkel - például in situ hibridizálással és antitestes színezéssel - már igazolták.
A szervetlenion-receptort szabályozó vegyületek előnyös esetben olyan módon szimulálják vagy blokkolják a szervetlenion-receptorral rendelkező sejten az extracelluláris ion hatásait, hogy gyógyhatást fejtenek ki. A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek a morfológiai szempontból különböző típusú szervetlenion-receptorokkal rendelkező sejtekre - így például a szabályos szervetlenion-receptorokkal rendelkező sejtekre, a szokásos számú szervetlenion-receptort tartalmazó sejtekre, a szabálytalan szervetlenion-receptorokkal rendelkező sejtekre és a szokásostól eltérő számú szervetlenion-receptort tartalmazó sejtekre - azonos vagy eltérő módon hathatnak.
A kalciumreceptor-szabályozó vegyületek a kalciumreceptorral rendelkező sejtben előnyös esetben az extracelluláris ion valamennyi hatását szimulálják vagy blokkolják. Ezzel kapcsolatban azonban megjegyezzük, hogy a kalcimimetikumoknak nem kell rendelkezniük az extracelluláris kalciumionok vala28 mennyi biológiai aktivitásával. Ehhez hasonlóan a kalcilitikumokról is elmondhatjuk, hogy nem kell blokkolniuk az extracelluláris kalciumionok által létrehozott aktivitások mindegyikét. Ehhez még azt is hozzátehetjük, hogy a különböző kalcimimetikumok és különböző kalcilitikumok nemcsak akkor tudják kifejteni a hatásukat, ha a kalciumreceptornak ugyanahhoz a helyéhez kötődnek, mint az extracelluláris kalciumionok .
A szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületeknek nem szükséges ugyanolyan mértékben vagy ugyanolyan módon befolyásolniuk a szervetlenion-receptor aktivitását, mint a természetes ligandumnak. Egy kalcimimetikum például - azáltal, hogy más kötőhelyhez kapcsolódik vagy más affinitással rendelkezik, mint a kalciumreceptorra hatást gyakorló kalciumion - a kalciumionhoz képest eltérő mértékben és eltérő ideig befolyásolhatja a kalciumreceptor aktivitását.
A) Kalcimimetikumok
1. (I) általános képletű vegyületek
A kalciumreceptorok aktivitását szabályozni képes vegyületek (I) általános képletében
- Ari jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogénalkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, N(CH-.·)- 29 csoporttal, fenilcsoporttal, fenoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, α,α-dimetilbenzil-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport; a szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyösen CH3, CH3O, CH3CH2O, metilén-dioxi-csoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, cf3o, cf3ch2o, ch3s, oh, ch2oh, conh2, cn, no2, ch3ch2, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, terc-butil-csoport vagy acetoxicsoport lehet; még előnyösebb esetben Arx jelentése 1-5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel, mégpedig izopropilcsoporttal, metoxicsoporttal, metil-tio-csoporttal, trifluor-metoxi-csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal, trifluor-metil-csoporttal és/vagy metilcsoporttal, legelőnyösebb esetben trifluor-metoxi-csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal és/vagy trifluor-metil-csoporttal helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
Ar2 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogénalkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 cső30 porttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport; a szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyösen CH3, CH30, CH3CH20, metilén-dioxi-csoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CF3CH2O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2/ propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, terc-butil-csoport vagy acetoxicsoport lehet; még előnyösebb esetben Ar2 jelentése 1-5 egymástól független szubsztituenssel - mégpedig izopropilcsoporttal, metoxicsoporttal, metil-tio-csoporttal, trifluor-metoxi-csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal, trifluor-metil-csoporttal és/vagy metilcsoporttal, legelőnyösebb esetben trifluormetoxi-csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal, metoxicsoporttal és/vagy trifluor-metil-csoporttal - helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- q jelentése 0, 1, 2 vagy 3; és
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
A kalciumreceptor aktivitását szabályozni képes vegyületek közé tartoznak az (I) általános képletű vegyületek farmakológiailag elfogadható sói, valamint komplexei is.
A rövid szénláncú alkilcsoport kifejezés olyan 1-4 szénatomos - előnyös esetben 1-3 szénatomos - telített szénhidrogéncsoportra vonatkozik, amely egyenes szénláncú és elágazó szénláncú egyaránt lehet.
A rövid szénláncú alkoxicsoport kifejezés olyan 031 rövid szénláncú alkilcsoport-ra vonatkozik, amelyben 0 a rövid szénláncú alkilcsoporthoz kapcsolódó oxigénatomot jelent .
A rövid szénláncú tio-alkil-csoport kifejezés S-rövid szénláncú alkilcsoport-ra vonatkozik, amelyben az S a rövid szénláncú alkilcsoporthoz kapcsolódó kénatomot jelent.
A rövid szénláncú halogén-alkil-csoport kifejezés legalább egy halogénatommal helyettesített, rövid szénláncú alkilcsoportra vonatkozik. A rövid szénláncú halogén-alkilcsoportban előnyös esetben csak a láncvégi szénatom van helyettesítve halogénatommal, és a csoport 1-3 halogénatomot tartalmaz. Még előnyösebb, ha a rövid szénláncú halogén-alkilcsoport 1 szénatomot tartalmaz. Előnyös, ha a halogénszubsztituensek klóratomok vagy fluoratomok.
A rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoport kifejezés 0rövid szénláncú halogén-alkil-csoport-ra vonatkozik, amelyben 0 rövid szénláncú halogén-alkil-csoporthoz kapcsolódó oxigénatomot jelent.
a) Arx helyén és Ar2 helyén egyaránt adott esetben szubsztituált fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek
Az előnyösen alkalmazható vegyületek egyik csoportját képezik az Ar- helyén és Ar2 helyén egyaránt adott esetben helyettesített fenilcsoportot tartalmazó vegyületek. Ezeknek a vegyületeknek a köre az (la) általános képlettel adható meg, amelyben
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
- m és n jelentése - egymástól függetlenül - 0, 1, 2, 3, vagy 5;
- az X szubsztituensek jelentése - egymástól függetlenül - rövid szénláncú alkilcsoport, halogénatom, rövid szénláncú alkoxicsoport, rövid szénláncú tio-alkil-csoport, metiléndioxi-csoport, rövid szénláncú halogén-alkil-csoport, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoport, OH, CH2OH, CONH2, CN, acetoxicsoport, N(CH3)2, fenilcsoport, fenoxiesoport, benzilcsoport, benzil-oxi-csoport, a, a-dimetil-benzil-csoport, N02, CHO, CH3CH(OH), acetilcsoport és/vagy etilén-dioxi-csoport ; az X szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyös esetben CH3, CH3O, CH3CH2O, metilén-dioxi-csoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CF3CH2O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2í CN, NO. , CHsCH;, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, t-butil-csoport és/vagy acetoxicsoport; az X csoportok jelentése egymástól függetlenül még előnyösebb esetben izopropilcsoport, CH3O, CH3S, CF3O, I, Cl, F, CFés/vagy CH3, legelőnyösebb esetben CF3O, I, Cl, F és/vagy CF3;
és
- a Z szubsztituensek jelentése - egymástól függetlenül rövid szénláncú alkilcsoport, halogénatom, rövid szénláncú alkoxicsoport, rövid szénláncú tio-alkil-csoport, metiléndioxi-csoport, rövid szénláncú halogén-alkil-csoport, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoport, OH, CH2OH, CONH2, CN és/vagy acetoxicsoport; a Z szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyös esetben CH3, CH3O, CH3CH2O, metilén-dioxicsoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CF3CH2O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, CH3CH2, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, t-butil-csoport és/vagy
- 33 acetoxicsoport; a Z szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül még előnyösebb esetben izopropilcsoport, CH3O, CH3S, CF3O, CF3, I, Cl, F és/vagy CH3.
Még előnyösebbek azok a vegyületek, amelyeknek legalább az egyik Z szubsztituense meta-helyzetben van. Még előnyösebben alkalmazhatók azok a vegyületek, amelyek (Ib) általános képletében
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
- m jelentése 0, 1, 2, 3, 4 vagy 5, előnyös esetben 1 vagy 2, és
- az X szubsztituensek jelentése - egymástól függetlenül - rövid szénláncú alkilcsoport, halogénatom, rövid szénláncú alkoxicsoport, rövid szénláncú tio-alkil-csoport, metiléndioxi-csoport, rövid szénláncú halogén-alkil-csoport, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoport, OH, CH2OH, CONH2, CN, acetoxicsoport, N(CH3)2, fenilcsoport, fenoxicsoport, benzilcsoport, benzil-oxi-csoport, a,a-dimetil-benzil-csoport, NO2, CHO, CH3CH(OH), acetilcsoport és/vagy étilén-dioxicsoport; az egymástól független jelentésű X szubsztituensek jelentése előnyös esetben CH3, CH3O, CH3CH2O, metilén-dioxicsoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CF3CH2O, CH.S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, t-butil-csoport és/vagy acetoxicsoport; legelőnyösebb esetben izopropilcsoport, CH:,O, CH3S, CF30, CF3, I, Cl, F és/vagy CH3.
Még előnyösebben alkalmazhatók azok a vegyületek, amelyek (Ic) általános képletében
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
• ·· · • · · · · ·*»· ·
- 34 - Rí jelentése halogénatom vagy hidrogénatom, előnyös esetben fluoratom vagy hidrogénatom;
- R:? jelentése hidrogénatom, halogénatom, rövid szénláncú alkilcsoport, rövid szénláncú halogén-alkil-csoport vagy rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoport, előnyös esetben hidrogénatom, trifluor-metil-csoport, metilcsoport, trifluormetoxi-csoport vagy fluoratom; és
- R3 jelentése hidrogénatom, halogénatom vagy alkoxicsoport, előnyös esetben klóratom, fluoratom, hidrogénatom vagy metoxicsoport, még előnyösebb esetben metoxicsoport.
A (Ic) általános képletű vegyületek közül előnyösebben alkalmazhatók azok a vegyületek,
- amelyek az Rí, az R2 és az R3 szubsztituensek közül legalább kettőnek a helyén halogénatomot - előnyös esetben fluoratomot R helyén pedig hidrogénatomot vagy metilcsoportot tartalmaznak;
- amelyek R helyén hidrogénatomot vagy metilcsoportot, R2 helyén rövid szénláncú halogén-alkil-csoportot vagy rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoportot - előnyös esetben trifluor-metoxi-csoportot vagy trifluor-metil-csoportot -, valamint Rí és R3 helyén hidrogénatomot tartalmaznak;
- amelyek R helyén metilcsoportot, R3 helyén halogénatomot - előnyös esetben klóratomot, - Rí helyén halogénatomot vagy hidrogénatomot - előnyösen fluoratomot vagy hidrogénatomot - és R2 helyén hidrogénatomot, rövid szénláncú alkilcsoportot, rövid szénláncú halogén-alkil-csoportot vagy rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoportot, előnyös esetben hidrogénatomot, trifluor-metil-csoportot, metilcsoportot, trifluor35 metoxi-csoportot vagy fluoratomot tartalmaznak.
b) Ar2 helyén naftilcsoportot, q helyén pedig 0-t tartalmazó (I) általános képletű vegyületek
Az előnyösen alkalmazható vegyületek egy másik csoportját az Ar2 helyén naftilcsoportot, q helyén pedig 0-t tartalmazó (I) általános képletű vegyületek képezik. Ezeknek a vegyületeknek az (Id) általános képletében
- Ari jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, hidroxilcsoporttal, hidroxi-metil-csoporttal, amino-karbonil-csoporttal, cianocsoporttal, acetoxicsoporttal, dimetil-amino-csoporttal, fenilcsoporttal, fenoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxicsoporttal, a,α-dimetil-benzil-csoporttal, nitrocsoporttal, aldehidcsoporttal, 2-hidroxi-etil-csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport; a szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyösen metilcsoport, metoxicsoport, etoxicsoport, metilén-dioxi-csoport, brómatom, klóratom, fluoratom, jódatom, trifluor-metil-csoport, difluor-metil-csoport, fluor-metil-csoport, trifluor-metoxi-csoport, trifluor-etoxi-csoport, metil-tio-csoport, hidroxilcsoport, hidroxi-metil-csoport, amino-karbonil-csoport, cianocsoport, nitrocsoport, etilcsoport, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, t-butil-csoport vagy acetoxi• ·1 «·4 • · · ' · » ·* ·* .* β· ··
·.·♦ : : ··.*··.
- 36 csoport lehet; még előnyösebb esetben Ari jelentése 1-5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel, mégpedig izopropilcsoporttal, metoxicsoporttal, metil-tio-csoporttal, trifluor-metil-csoporttal, trifluor-metoxi-csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal és/vagy metilcsoporttal helyettesített naftil- vagy fenilcsoport.
Még előnyösebben alkalmazhatók azok az Ari helyén adott esetben helyettesített fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek, amelyeknek (le) általános képletében a fenilcsoport adott esetben létező X szubsztituenseinek a jelentését - az előnyös szubsztituensekkel, valamint a szubsztituensek n számával együtt - korábban már megadtuk.
Még előnyösebben alkalmazhatók azok az (I) általános képletű vegyületek szűkebb körét képező vegyületek, amelyek (If) általános képletében
- R jelentése metilcsoport vagy hidrogénatom;
- R4 jelentése rövid szénláncú alkilcsoport, halogénatom vagy alkoxicsoport, előnyösen izopropilcsoport, klóratom vagy metoxicsoport; és
- R5 jelentése hidrogénatom, rövid szénláncú alkilcsoport vagy halogénatom, előnyösen metilcsoport, brómatom vagy klóratom .
c) Ar2 helyén naftilcsoportot, q helyén pedig 2-t tartalmazó (I) általános képletű vegyületek
Az előnyösen alkalmazható vegyületek egy másik csoportját az Ari helyén helyettesített fenilcsoportot, Ar2 helyén naftilcsoportot, q helyén pedig 2-t tartalmazó (I) általános képletű vegyületek alkotják. Ezeknek a vegyületeknek (lg) ál·* * «V «« »· • · · k
·»
- 37 talános képletében
- R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
- n jelentése 0, 1, 2, 3, 4 vagy 5, előnyös esetben 1 vagy 2; és
- az X szubsztituensek jelentése - egymástól függetlenül rövidszénláncú alkilcsoport, halogénatom, rövidszénláncú alkoxicsoport, rövidszénláncú tio-alkil-csoport, metiléndioxi-csoport, rövidszénláncú halogén-alkil-csoport, rövidszénláncú halogén-alkoxi-csoport, OH, CH2OH, CONH2, CN, acetoxicsoport, N(CH3)2, fenilcsoport, fenoxicsoport, benzilcsoport, benzil-oxi-csoport, a,a-dimetil-benzí1csoport, NO2, CHO, CH3CH(OH), acetilcsoport és/vagy etiléndioxi-csoport lehet; a szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül előnyösen CH3, CH3O, CH3CH2O, metilén-dioxi-csoport, Br, Cl, F, I, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CF3CH2O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, t-butil-csoport vagy acetoxicsoport, még előnyösebb esetben izopropilcsoport, CH3O, CH3S, CF3O, CF3, I, Cl, F vagy CH3 lehet.
Még előnyösebben alkalmazhatók azok a vegyületek, amelyek (Ih) általános képletében
R6 jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú halogénalkil-csoport vagy rövidszénláncú halogén-alkoxi-csoport, előnyös esetben hidrogénatom, trifluor-metoxi-csoport vagy trifluor-metil-csoport; és
R? jelentése halogénatom vagy hidrogénatom, előnyös esetben klóratom vagy hidrogénatom.
Külön megemlítjük azokat a vegyületeket is, amelyeknek az ··«
- 38 R, az R6 és az R7 szubsztituenseit - az előnyös szubsztituensek megjelölésével együtt - korábban már megadtuk, azzal a megkötéssel, hogy ha R és R6 jelentése egyaránt hidrogénatom, R7 klóratomtól eltérő jelentésű; és R jelentése CH3 csoport, mig R6, valamint R7 jelentése a már megadott (az előnyös szubsztituensekkel együtt).
2. (II) általános képletű vegyületek
A (II) általános képletben
- Ar3 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkílcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, α,α-dimetilbenzil-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, N(CH3) 2 csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal, előnyös esetben dimetil-aminocsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal vagy rövidszénláncú alkilcsoporttal - adott esetben helyettesített naftilvagy fenilcsoport;
- Ar- jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid s zénláncú halogén-alkoxi-csoporttal,
OH csoporttal, CH2OH • · · ·
- 39 csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal, előnyös esetben rövidszénláncú alkoxicsoporttal, még előnyösebb esetben metoxicsoporttal adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Rg jelentése hidrogénatom vagy fenilcsoport, előnyös esetben hidrogénatom;
- Ro jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és
- Rio jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy fenilcsoport; még előnyösebb, ha R10 metilcsoport és a hozzá kapcsolódó királis szénatom az (R)-sztereoizomer.
A (II) általános képletű vegyületekben az a-metil-csoport előnyös esetben (R)-α-metil-csoport.
3. (III) általános képletű vegyületek
A (III) általános képletben
- Ar5 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alki1-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, a,a-dimetil-benzilcsoporttal, NO2 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, acetilcsoporttal, etilén-dioxi-csoporttal és/vagy -CH=CH-fenil-csoporttal, előnyös esetben rövidszénláncú alkilcsoporttal, fenoxicsoporttal, -CH=CH-fenilcsoporttal, dimetil-benzil-csoporttal, metoxicsoporttal, metiléncsoport és/vagy etiléncsoporttal - adott esetben helyettesített
- 40 naftil- vagy fenilcsoport;
- Arn jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel, mégpedig acetilcsoporttal, rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, metoxi-karbonil-csoporttal, OCH2C(O)C2H5 csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal, előnyös esetben metoxicsoporttal, rövidszénláncú alkilcsoporttal, fenilcsoporttal, halogénatommal, trifluor-metil-csoporttal, cianocsoporttal, metoxi-karbonilcsoporttal és/vagy OCH2C(O)C2H5 csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
R:i jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; ha R1X jelentése metilcsoport, az a szénatom, amelyhez Ru kapcsolódik, előnyös esetben (R) -sztereoizomer; és
Ri2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; ha R12 jelentése metilcsoport, az a szénatom, amelyhez R12 kapcsolódik, előnyös esetben R12-sztereoizomer.
4. Kalcimimetikus aktivitás
A vegyületeknek azt a képességét, hogy szimulálni tudják a kalciumionoknak a kalciumreceptorokon mutatott aktivitását, a szakmában ismert és Nemeth, valamint munkatársai által le is írt módszerrel [Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] lehet meghatározni. így például in vitro körülmények között mellékpajzsmirigysejteken vizsgálva a • ·
- 41 kalcimimetikumok a következő aktivitások közül eggyel vagy többel - előnyös esetben valamennyivel - rendelkeznek:
1. Gyorsan, a csúcsértéket 5 másodpercen belül elérve átmenetileg növelik az intracelluláris kalciumkoncentrációt, és a növekedés 1 μΜ La3+-nal vagy 1 μΜ Gd3+-nal nem gátolható meg. A [Caz+]i növekedése intracelluláris kalciumionok távollétében folytatódik, de ionomicines előkezeléssel - extracelluláris kalciumionok távollétében - kiküszöbölhető.
2. Fokozzák a [Ca2+]i~nek a maximális koncentrációknak megfelelő mennyiségeknél kisebb mennyiségben jelenlévő extracelluláris kalciumionok által kiváltott növekedését.
3. A dihidropiridinszármazékok nem gátolják a [Ca2+]i-nek az extracelluláris kalciumionok által kiváltott növekedését.
4. A [Ca2+]i általuk kiváltott átmeneti növekedése 10 nM nátrium-fluoriddal 10 percig végzett előkezeléssel kiküszöbölhető .
5. A [Ca2ji általuk kiváltott átmeneti növekedése mérsékelhető a C-protein-kináz (PKC) valamelyik aktivátorával - például forbol-mirisztát-acetáttal (PMA), mezereinnel vagy (-)-V-indolaktámmal - végzett előkezeléssel; a C-protein-kináz aktivátora végül is a koncentráció/válaszreakció görbéjét jobbra tolja anélkül, hogy ez a változás a válaszreakció maximális értékét befolyásolná.
6. Gyorsan - 30 másodpercen belül - fokozzák az inozit-1, 4,5-trifoszfát vagy a diacil-glicerin képződését.
7. Gátolják a ciklusos AMP dopaminnal és izoproterenollal stimulált képződését.
8. Gátolják a PTH-szekréciót.
- 42 9. A ciklusos AMP-képződésre gyakorolt gátlóhatásukat a 100 mg/ml pertusszisz-toxinnal legalább 4 órán át végzett előkezelés blokkolja, de a [Ca2t]i, az inozit-1,4,5-trifoszfát vagy a diacil-glicerin koncentrációnövekedése, illetve a PTHszekréció csökkenése nem befolyásolja.
10. Szarvasmarha vagy ember mellékpajzsmirigysejtjeiből származó, poli (A)+-szal dúsított mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ben kiváltják a kloridion-áramlás fokozódását, de a vízzel vagy májból származó mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ben hatástalanok.
11. Mellékpajzsmirigyből származó, klónozott kalciumreceptor alkalmazása esetén hasonló módon váltanak ki válaszreakciót a receptor génállományát tartalmazó, speciális cDNS-sel vagy mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ből.
A különböző kalciumaktivitások mérhetők a rendelkezésre álló módszerekkel [v.ö. Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)]. A leírás példái, valamint Nemeth és munkatársai [Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] kutatásai alapján nyilvánvaló, hogy hasonló módon definiálhatók a kalciumionok aktivitását más, kalciumra reagáló sejteken szimuláló vegyületek.
A vegyület a leírásban ismertetett biológiai vizsgálatok vagy a Nemeth és munkatársai által leírt mérések [Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés, (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] szerint meghatározva a következő aktivitások közül előnyös esetben • ·· · ···· ·
- 43 legalább eggyel, még előnyösebb esetben valamennyi felsorolt aktivitással rendelkezik: kiváltja - előnyös esetben a belső kalciumtartalom mobilizálásával - a belső kalciumkoncentráció átmeneti - 30 másodpercnél rövidebb ideig tartó - növekedését; kiváltja a [Ca2+]i gyors - 30 másodpercnél rövidebb ideig tartó - növekedését; kiváltja - célszerűen a belső kalciumtartalom beáramlásának előidézésével - a [Ca2+]i tartós (30 másodpercet meghaladó ideig tartó) növekedését; kiváltja - célszerűen 60 másodpercen belül - az inozit-1,4,5-trifoszfát vagy a diacil-glicerin koncentrációjának a növekedését; és gátolja a dopaminnal vagy az izoproterenollal serkentett ciklusos AMP-képződést.
A [Ca2+]i átmeneti növekedését előnyös esetben a sejt 10 percen át tartó, 10 mM nátrium-fluoriddal végzett előkezelésével megszüntetjük vagy csökkentjük olyan módon, hogy a sejtet rövid - 10 percet meg nem haladó - ideig a C-protein-kináz enzim valamelyik aktivátorával - előnyösen forbol-mirisztát-acetáttal (PMA), mezereinnel vagy (-)-V-indolaktámmal - előkezeljük.
C) Kalcilitikumok
Egy vegyületnek azt a képességét, amellyel blokkolni tudja egy kalciumreceptoron az extracelluláris kalcium aktivitását, ennek a leírásnak az alapján szokásos módszerekkel meg lehet határozni. [Ezzel kapcsolatban felhívjuk még a figyelmet Nemeth és munkatársai PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentésére (a nemzetközi közrebocsátásí irat száma: WO 94/18959)]. így például azok a vegyületek, amelyek mellékpajzsmirigysejtek esetében blokkolják az extracelluláris kalcium hatását, mellékpajzsmirigysejteken in vitro körülmények között vizsgálva a következő jellemzők közül legalább eggyel, előnyös esetben valamennyi felsorolt jellemzővel rendelkeznek:
1. Részlegesen vagy teljesen blokkolják a megnövekedett koncentrációban jelen levő extracelluláris kalciumionoknak azt a képességét, hogy:
(a) növelik a [Cv‘]:-í;
(b) mobilizálják az intracelluláris kalciumionokat;
(c) fokozzák az inozit-1,4,5-trifoszfát-képződést;
(d) csökkentik a ciklusos AMP-nek a dopamínnal vagy izoproterenollal serkentett képződését; és (e) gátolják a PTH kiválasztódását.
2. Szarvasmarha vagy ember mellékpajzsmirigysejtjeiből extracelluláris kalciumionokkal vagy kalcimimetikus vegyületekkel kiváltott poli (A)+-mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ben akadályozzák, vízzel vagy máj-mRNS-sel injektált Xenopus oocytes-ben azonban nem gátolják a kloridionáram növekedését.
3. Mellékpajzsmirigyből származó kalciumreceptor alkalmazása esetén hasonló módon blokkolják az extracelluláris kalciumionokkal vagy kalcimimetikus vegyülettel kiváltott válaszreakciót olyan Xenopus oocytes-ben, amelybe a kalciumreceptor génállományát tartalmazó speciális cDNS-t, mRNS-t vagy cRNS-t fecskendeztünk be.
A leírás példái, valamint Nemeth és munkatársai [PCT/US93/01642. sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] alapján nyilvánvaló, hogy a kalciumionokra válaszreakciót adó sejteken a kalciumionok aktivitását blokkoló vegyületeket hasonló módon lehet • · ········· · • · · · · * · · · · · · • · · ·««·· definiálni .
III. BETEGSÉGEK VAGY RENDELLENESSÉGEK KEZELÉSE
A szakemberek ismerik azokat a betegségeket és rendellenességeket, amelyeket a kalciumreceptor aktivitásának a szabályozásával kezelni lehet. A kalciumreceptor aktivitásának a szabályozásával kezelhető betegségeket például a kalciumreceptorok aktivitásával szabályozott sejtek funkcionális válaszreakcióinak az alapján lehet azonosítani. A kalciumreceptor által szabályozott sejtek funkcionális válaszreakciói - beleértve a mellékpajzsmirigysejtek általi PTH-kiválasztást, a C-sejtek általi kalcitoninkiválasztást és a csontlebontó sejtek által előidézett csontfelszívódást - a szakmabeliek ismerik.
Az ilyen funkcionális válaszreakciók különböző betegségekkel vagy rendellenességekkel kapcsolatosak. így például a mellékpajzsmirigy-túlműködés eredményeként megnő a vérplazmában a PTH koncentrációja. A vérplazmabeli PTH-szintek csökkentése lehetőséget nyújt a mellékpajzsmirigy-túlműködés hatásos kezeléséhez. Hasonló módon, a kalcitonin-koncentráció vérplazmabeli növekedése a csontfelszívódás gátlásával van összefüggésben. A csontfelszívódás gátlásával hatásosan kezelhető a csontritkulás. A kalciumreceptor aktivitásának a szabályozásával tehát kezelni lehet olyan betegségeket, mint amilyen a mellékpajzsmirigy túlzott működése és a csontritkulás .
A szervetlenion-receptorok - előnyös esetben a kalciumreceptor - aktivitásának a szabályozásával kedvező módon lehet befolyásolni igen különböző betegségekben vagy rendelle46 nességektől szenvedő betegek állapotát. A csontritkulás például az öregedéssel összefüggő rendellenesség, amelyre az jellemző, hogy csökken a csonttömeg és nő a csonttörések kockázata. A csontromboló csontfelszívódás megakadályozása céljából a vegyületeket - például csontlebontó ionomimetikus vegyület esetén - közvetlenül vagy - például C-sejtes kalcimimetikum esetén - közvetetten, az endogén kalcitoninszintek növelésével lehet alkalmazni. A mellékpajzsmirigysejtek kalciumreceptorával szemben aktív kalcilitikumok is növelik a keringő mellékpajzsmirigy-hormon koncentrációját és serkentik a csontképződést. Mind a három módszer alkalmazása jótékonyan hat a csontritkulásban szenvedő betegekre.
Ezenkívül az is ismert, hogy a PTH időszakonkénti adagolása anabolikus hatással van a csonttömegre és a csont megfelelő újjászerveződésére. így a mellékpajzsmirigy-hormon termelődését átmenetileg fokozó vegyületekkel és étrenddel - például valamilyen mellékpajzsmirigysejt-ionolitikum időszakos adagolásával - növelhető a csontritkulásban szenvedő betegek csonttömege.
További betegségeket és rendellenességeket lehet azonosítani a sejtek kalciumreceptor-aktivitással szabályozott és a betegséggel vagy a rendellenességgel összefüggő további funkcionális válaszreakcióinak a felismerése alapján. A más szervetlenion-receptorok szabályozásával kezelhető betegségeket vagy rendellenességeket hasonló módon lehet meghatározni.
A találmány szerinti, szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek képesek egy vagy több celluláris hatást és »· ···· ·
- 47 ezzel végül is gyógyhatású kiváltó módon befolyásolni egy szervetlenion-receptort. A találmány szerinti kalciumreceptor-szabályozó vegyületek olyan módon képesek hatást gyakorolni a kalciumreceptorokra, hogy a sejtek szintjén egy vagy több, végül is gyógyhatású eredményező aktivitást váltanak ki. A különböző betegségeket a találmány szerint a kalciumreceptorral rendelkező sejtek célbavételével lehet kezelni.
így például az elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködést (HPT) az emelkedett vérkalciumtükör és a keringő PTH-nak a normálistól eltérő mértékben megnövekedett koncentrációja jellemzi. A HPT egyik fő típusára jellemző hiányosság abban nyilvánul meg, hogy csökken a mellékpajzsmirigysejteknek az extracelluláris kalciumionok által végzett negatív visszacsatolásos szabályozásra való érzékenysége. Az elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködésben szenvedő betegekből származó szövetben tehát az extracelluláris Ca2+ névleges értéke jobbra tolódik, és így a szokásosnál magasabb extracelluláris kalciumkoncentrációk szükségesek a PTH-kiválasztás csökkentéséhez. Sőt, elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködés esetén az extracelluláris kalciumionok még nagy koncentrációkban alkalmazva is gyakran csak részben csökkentik a PTH kiválasztását. Másodlagos (urémiás) mellékpajzsmirigy-túlműködés esetén az extracelluláris kalciumionokra vonatkozóan a névleges érték hasonló növekedése figyelhető meg annak ellenére, hogy a kalciumionoknak a mellékpajzsmirigy-hormon kiválasztásának a megszüntetéséhez csak szokásos koncentrációban kell jelen lenniük. A PTH-kiválasztás változásai hasonlóak a [Ca2+]i változásaihoz: a [Ca2+]i-nek az extracelluláris kalciumionok által ···· ·*·· *
- 48 indukált növekedéseihez tartozó névleges értékek jobbra tolódnak, és ezeknek a növekedéseknek a nagysága csökken.
A betegek a másodlagos mellékpajzsmirigy-túlműködés mellett veseműködésre visszavezethető csontképződési zavaroktól is szenvedhetnek. Úgy tűnik, hogy ilyen betegeknél a kalcimimetikumok eredményesen használhatók fel mind a szabályostól eltérő PTH-kiválasztás, mind a csontképződési zavarok kezelésére.
Az extracelluláris kalciumionok hatását szimuláló vegyületek eredményesen használhatók fel mind az elsődleges, mind a másodlagos mellékpajzsmirigy-túlműködés hosszútávú kezelésére. Ezek a vegyületek szolgáltatják azt a pluszhatást, amely szükséges a mellékpajzsmirigy-hormon-kiválasztás elfojtásához (ez önmagában a vérkalciumtükör emelésével nem érhető el), és ezáltal ezek a vegyületek segítik a hiperkalcémiás állapot enyhítését. Az extracelluláris kalciumionoknál nagyobb hatékonyságú vegyületek elfojthatják a PTH-kiválasztódás látszólag kiküszöbölhetetlen komponensét is, amely különösen a mellékpajzsmirigy daganata által okozott elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködésnél - HPT megjelenési formájánál - kellemetlen. Ezeket vagylagosan vagy kiegészítésképpen alkalmazva csökkenteni lehet a szintézis útján létrejött PTH mennyiségét. Kimutatták, hogy tartósan magas vérkalciumtükör esetén csökken a marha és az ember daganatos mellékpajzsmirigy-szövetében a preproPTH mRNS szintje. A hosszú ideig fenntartott magas vérkalciumtükör in vitro körülmények között csökkenti a mellékpajzsmirigysejtek burjánzását is, így a kalcimimetikumok hatásosan korlátozhatják a mellékpajzs• · ··«· ··«· · • · · · · · • · »····· • · · ····· ···· · « ·*
- 49 mirigysejteknek a másodlagos HPT-re jellemző túlzott mértékű szövetszaporodását is.
A mellékpajzsmirigysejtektől eltérő sejtek közvetlenül reagálhatnak az extracelluláris kalciumionok koncentrációjában végbemenő fiziológiai változásokra. Például a kalcitonin kiválasztását a mellékpajzsmirigy parafollikuláris sejtjeiből (a C-sejtekből) az extracelluláris kalciumionok koncentrációjának a változásai szabályozzák.
Az izolált csontlebontó sejtek az extracelluláris kalciumionok koncentrációjának a növekedésére úgy reagálnak, hogy - részben az intracelluláris kalciumionok mobilizálásával megfelelő mértékben növelik a [Ca2+]i-t. A csontlebontó sejtekben a [Ca2+]i növekedése összefüggésben van a csont felszívódás gátlásával. A kalcium közvetlenül serkenti a lúgos foszfatáz enzim felszabadulását a csontképző sejtekből.
Az extracelluláris kalciumionok koncentrációjának a növelésével csökken - a kiválasztott PTH mennyiségéhez hasonlóan - a vesében lévő juxtaglomeruláris sejtekből kiválasztott renin enzim mennyisége is. Az extracelluláris kalciumionok ezekben a sejtekben előidézik az intracelluláris kalciumionok mobilizálódását. A kalciumra más vesesejtek a következőképpen reagálnak: a kalciumionok megnövekedett koncentrációja gátolja a test középpontjához közelebb eső vesecsatorna sejtjeit az 1,25 (OH) 2-D-vitamin képzésében, serkenti a kalciummegkötő fehérje termelődését a test középpontjától távolabb eső vesecsatorna sejtjeiben, gátolja a kalciumionok és a magnéziumok ismételt felszívódását a vesevezetékekben, valamint a vazopresszin hatását a Henle-kacs vastag felszálló ágára (MTAL) , ··«· «··· · csökkenti a vazopresszin hatását a kéreg gyűjtőcsatornájának a sejtjeiben és befolyásolja a vaszkuláris simaizomsejtek működését a vese glomeruluszában levő véredényekben.
A kalcium ezenkívül elősegíti a bél nyálkasejtjeinek, az emlősejteknek, valamint a bőrsejteknek a differenciálódását, megakadályozza a pitvari nátriuretikus peptid kiválasztódását a szívpitvarból, csökkenti a vérlemezkékben a cAMP felhalmozódását, megváltoztatja a gasztrin- és a glükagonelválasztást, arra készteti a vaszkuláris simaizomsejteket, hogy módosítsák az erekre hatást gyakorló faktorok sejtbeli kiválasztódását és befolyásolják a központi idegrendszer, valamint a perifériális idegrendszer sejtjeit.
Elég sok minden utal tehát arra, hogy a kalciumronok - azon kívül, hogy a sejteken belül mindenhol jelzőszerepet játszanak - extracelluláris jelként is működve szabályozzák bizonyos speciális sejtek válaszreakcióit. A találmány szerinti vegyületeket fel lehet használni olyan betegségek és rendellenességek kezelésére, amelyek azzal függnek össze, hogy ezekben a sejtekben megszűntek a válaszreakciók.
Az érintett sejtekre alapozva kezelhető vagy megelőzhető jellegzetes betegségek és rendellenességek közé tartoznak a következők: a központi idegrendszer betegségei és rendellenességei - például a rohamok, az agyvérzés, a fejsérülések, a gerincvelő sérülései és az oxigénhiány - például a szívműködés megszűnése vagy a szülési bonyodalmak miatt fellépő oxigénhiány - következtében fellépő idegsejtkárosodások, epilepszia, az idegrendszer elfajulásos betegségei - például az Alzheimer-kór, a Huttington-kór és a Parkinson-kór -, elme• ·· · • « · « · ···· ·
- 51 baj, izomfeszülés, depresszió, szorongás, pánikbetegség, rögeszmés és kényszerképzetes rendellenességek, baleset által okozott stressz miatt kialakuló rendellenességek, tudathasadás, rosszindulatú neuroleptikus tünetegyüttes, Tourettetünetegyüttes, a vese által újra abszorbeált, fokozott menynyiségű víz miatt kialakuló betegségek - így például a nem-megfelelő ADH-kiválasztást (SIADH) kísérő tünetegyüttes, a cirrhózis, a pangásos szívkárosodás és a nefrózis -, magas vérnyomás, kationos antibiotikumok - például aminoglükozid antibiotikumok - alkalmazása után fellépő mérgezettségi állapot, a belek mozgékonyságával kapcsolatos rendellenességek - például a hasmenés és a vastagbélgörcs -, a gyomor- és béltraktus fekélyes betegségei, a gyomor- és béltraktusnak a túlzott mértékű kalciumfelszívódás miatt kialakuló betegségei
- például a szarkoidózis -, autoimmun betegségek és a beültetett szerv kilökődésével fenyegető állapotok.
Bár a találmány szerinti kalciumreceptor-szabályozó vegyületek tipikus felhasználási területe az embergyógyászat, az említett vegyületek más melegvérű állatfajták - például egyéb főemlősök, háziállatok, így például disznók, szarvasmarhák és háziszárnyasok, továbbá sportoláshoz igénybe vett állatok és állatkedvencek, például lovak, kutyák és macskák - hasonló vagy azonos betegségeinek a kezelésére is felhasználhatók.
IV. Alkalmazás
A találmány szerinti különböző vegyületeket - annak a tulajdonságuknak köszönhetően, hogy szabályozzák a szervetlenion-receptorok, előnyös esetben a kalciumreceptorok aktivitá52 sát - fel lehet használni különféle betegségek és rendellenességek kezelésére. A találmány szerinti vegyületeket a különböző adagolási módoknak - például a szisztémás, a nem általános vagy a helyi adagolási módnak - megfelelően lehet formálni. A formálási eljárások és a kiszerelési formák általános ismertetése megtalálható a szakirodalomban [Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, USA]. Az ionomimetikumok és az ionolitikumok alkalmazását Nemeth és munkatársai [PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] tárgyalj ák.
Hogy milyen adagolási formák megfelelőek, az részben az alkalmazás vagy a szervezetbe juttatás módjától függ, tehát például attól, hogy a készítményt szájon keresztül, bőrön keresztül vagy injektálással juttatjuk be a szervezetbe. Ezeknek az adagolási formáknak lehetővé kell tenniük, hogy a vegyület elérje a célsejtet, függetlenül attól, hogy a célsejt multicelluláris bacilusgazda vagy tenyészet formájában van-e jelen. így például a véráramba fecskendezett, farmakológiai szempontból aktív vegyületeknek vagy kompozícióknak oldhatóknak kell lenniük. Más, a szakterületen ismert szempontokat is figyelembe kell venni, így például a toxicitást és olyan adagolási formák alkalmazhatóságát, amelyek késleltetik a vegyület vagy a kompozíció hatásának a kifejtését.
A vegyületeket farmakológiai szempontból elfogadható sóik - például savaddíciós sóik - és komplexeik alakjában is lehet formálni. Farmakológiai szempontból elfogadható sóknak azokat a sókat nevezzük, amelyek az alkalmazott koncentráció• * * * « λ • · «·»«·* • · > €♦·· · ····· « · ··
- 53 bán nem mérgezőek. Ilyen sók előállítása megkönnyítheti a hatóanyag gyógyászati célú alkalmazását, mert a sóképzés anélkül változtatja meg a hatóanyag fizikai jellemzőit, hogy gátolná a fiziológiai hatások kifejtését. A fizikai tulajdonságok előnyös változásai közé tartozik az olvadáspont csökkentése (könnyebbé válik a gyógyszer alkalmazása a nyálkahártyán keresztül) és az oldhatóság növekedése (könnyebb nagy koncentrációkban alkalmazni a gyógyszert).
A farmakológiai szempontból elfogadható sók közé tartoznak a savaddíciós sók, például a szulfátok, a hidrokloridok, a maleátok, a foszfátok, a szulfamátok, az acetátok, a cifrátok, a laktátok, a tartarátok, a metánszulfonátok, az etánszulfonátok, a benzolszulfonátok, a p-toluolszulfonátok, a ciklohexil-szulfamátok és a kininsav sói [lásd például a PCT/US92/03736. sz. nemzetközi bejelentést, amelynek a szövegét a találmány ismertetését kiegészítő referenciaanyagnak tekintjük]. A farmakológiai szempontból sókat savakból, például sósavból, maleinsavból, kénsavból, foszforsavból, szulfamidsavból, ecetsavból, citromsavból, tej savból, borkősavból, malonsavból, metánszulfonsavból, etánszulfonsavból, benzolszulfonsavból, p-toluolszulfonsavból, ciklohexil-szulfaminsavból és kininsavból lehet előállítani.
A farmakológiai szempontból elfogadható sók előállíthatok a szokásos eljárásokkal. A vegyületet szabad bázis formájában például feloldjuk valamilyen oldószerben - például a megfelelő savat tartalmazó vagy vizes-alkoholos oldatban majd a sót az oldat bepárlásával elkülönítjük. Egy másik megoldás szerint úgy állítjuk elő a sót, hogy a szabad bázist szerves ··*♦ * · V « · » • *··» W · • ·*
- 54 oldószerben savval reagáltatjuk.
Fel lehet használni hordozóanyagokat vagy kötőanyagokat is a hatóanyag alkalmazásának a megkönnyítése céljából. A hordozóanyagokra és a kötőanyagokra példaként megemlítjük a kalcium-karbonátot, a kalcium-foszfátot, a különböző cukrokat - így a laktózt, a glükózt és a szacharózt -, a különböző típusú keményítőket, a cellulózszármazékokat, a zselatint, a növényolajokat, a polietilénglikolokat és a fiziológiai szempontból kompatibilis oldószereket. A hatóanyagokat és a gyógyszerkészítményeket különböző módokon, például vénába fecskendezve, a hasüregbe fecskendezve, bőrön át fecskendezve, izomba fecskendezve, szájon keresztül, helyileg és nyálkahártyán keresztül - lehet alkalmazni.
A szisztémás alkalmazások közül az orális alkalmazás előnyös. Alternatív megoldásként injekciót is lehet adni, például izomba, vénába, a hasüregbe és bőr alá. Az injektáláshoz a találmány szerinti vegyületeket cseppfolyós oldatokkal, előnyösen fiziológiai szempontból kompatibilis pufferoldatokkal - például Hank-féle oldattal vagy Ringer-féle oldattal - lehet formálni. A hatóanyagokból ezenkívül szilárd kiszerelési formákat is elő lehet állítani, amelyekből közvetlenül a felhasználás előtt lehet újra oldatokat vagy szuszpenziókat készíteni. Elő lehet állítani liofilizált kiszerelési formákat is.
Szisztémás hatás elérése céljából a hatóanyagokat a nyálkahártyán vagy a bőrön keresztül is be lehet juttatni a szervezetbe és - amint ezt már említettük - szájon keresztül is lehet alkalmazni. A nyálkahártyán vagy a bőrön keresztüli al55
V»· ··.. * *« · * · « » · · ··· • · ···· « kalmazás esetén a gáton való áthatolás elősegítésére alkalmas adalékot alkalmazunk a formáláshoz. Az ezen a szakterületen dolgozók általában ismerik az erre a célra alkalmas adalékanyagokat, amelyek közé tartoznak például a transzmukozális alkalmazáshoz megfelelő epesavas sók és fuzidénsavszármazékok. Az áthatolás megkönnyítése céljából ezenkívül detergenseket is fel lehet használni. A nyálkahártyán keresztüli alkalmazáshoz megfelelőek például az orrpermetek és a kúpok. Szájon keresztüli alkalmazáshoz a hatóanyagokból a szokásos orális adagolási formákat, például kapszulákat, tablettákat és cseppfolyós készítményeket állíthatunk elő.
Helyi alkalmazási célra a találmány szerinti vegyületekből - amint ez a szakterületen általánosan ismert - kenőcsöket, keneteket, géleket és krémeket lehet formálni.
Szokásos eljárásokkal meg lehet határozni, hogy a találmány szerinti különböző vegyületekből milyen mennyiségeket kell a szervezetbe juttatni. A hatóanyagnak a gyógyhatás kifejtéséhez szükséges mennyisége rendszerint körülbelül 1 nM és 3 μΜ, előnyös esetben 0,1 nMés 1 μΜ között van, a hatóanyag EC5o vagy ICso értékétől, a kezelt beteg korától és testtömegétől, valamint a paciens betegségétől vagy rendellenességétől függően. A kezelt ember vagy állat 1 kg testtömegére vonatkoztatva a szükséges hatóanyagmennyiség általában körülbelül 0,1 és 50 mg között, előnyös esetben 0,01 mg és 20 mg között van.
V. Példák
A következő példák a találmány különböző lehetőségeinek és megvalósítási formáinak a szemléltetésére szolgálnak. A ·· · · ·,· · · · ··
- 56 közölt példák tehát semmilyen vonatkozásban sem korlátozzák a találmányt.
1. példa
Emberi mellékpajzsmirigy-daganatból származó humán mellékpaj zsmirigy-kalciumreceptor klónozása
Ezzel a példával ismertetjük az emberi mellékpajzsmirigydaganatból származó humán mellékpajzsmirigy-kalciumreceptor klónozását, amelyhez hibridizációs mintaként pBoPCaRl-et használunk fel [v.ö. Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)]. A mintát úgy használtuk fel az emberi mellékpajzsmirigy kalciumreceptorának a génállományát tartalmazó nukleinsav azonosítására, hogy kevésbé szigorú kereszthibridizálást hajtottunk végre.
Hírvivő RNS-t készítettünk emberi mellékpajzsmirigy-daganatból, amelyet egy olyan, 39 éves kaukázusi férfiből távolítottunk el, akinél elsődleges mellékpajzsmirigy-túlműködést diagnosztizáltunk. Hibridizációs mintaként pBoPCaRl-t használva, ennek az mRNS-nek a Northern foltelemzésével körülbelül 5 kilobázisos és körülbelül 4 kilobézisos kalciumreceptor-transzkriptumokat azonosítottunk. Az mRNS-ből cDNS-könyvtárat állítottunk össze. 3 kilobázispárnál többet tartalmazó, kettős szálú cDNS-t különítettünk el méret szerint agarózgélen, és kapcsoltunk hozzá a lambda - ZapII klónozóvektorhoz. Elvégeztük ötszázezer primer rekombináns fág szűrővizsgálatát olyan módon, hogy hibridizációs mintaként a pBoPCaRl 5,2 kilobázispáros cDNS inszerciós szekvenciát alkalmaztunk. A pBoPCaRl inszerciós szekvenciát az lxlO9 • · ········· ·· • · · · · · • · ·«···· • · · ····· · ····· · · ··
- 57 beütés/(min x pg) fajlagos aktivitás eléréséhez megfelelő mennyiségű [32P]-dCTP felhasználásával a statisztikus rendezetlenség állapotából kiindulva végrehajtott szintézis útján radioaktív izotóppal jelöltük.
Genomkönyvtár-szűrést hajtottunk végre 38 °C-on végzett hibridizálással (400 mM Na+, 50 tömeg% formamid). Vérlemezke foltból álló szűrőket hibridizáltunk 20 órán át 500 000 beütés/(min x ml) koncentrációjú mintával. A hibridizálást követően a szűrőket 40 °C-on 1 órán át egyszer mostuk SSC-ben.
Az első szűrővizsgálat során körülbelül 250, pBoPCaRl-gyel végzett keresztezéssel azonosított pozitív kiónt határoztunk meg. Ezek közül a kiónok közül hetet egy második és egy harmadik szűrővizsgálatnak vetettünk alá, hogy elkülönítsük a pBoPCaRl-mintával kereszteződött egyes kiónokat. Ezt a hét kiónt restrikciós enzimes feltérképezéssel és Southern folt-analízissel elemeztük. A kiónok közül három körülbelül 5 kilobázispáros cDNS inszerciós szekvenciákat tartalmazott, és úgy tűnik, hogy ezek a teljes hosszúságú kiónok az 5 kilobázisos mRNS-nek felelnek meg. A kiónok közül kettő körülbelül 4 kilobázispáros cDNS inszerciós szekvenciákat tartalmazott, és úgy tűnik, hogy ezek teljes hosszúságú kiónok, amelyek a 4 kilobázisos mRNS-nek felelnek meg.
A két különböző méretű inszerciós szekvencia restrikciós enzimmel való feltérképezése azt mutatja, hogy ezek az inszerciós szekvenciák 5'-végeiken hasonló szekvenciájú régiókkal, 3'-végeiken azonban eltérő szekvenciákkal rendelkeznek. A DNS-szekvenciaanalízisek eredményeiből azt a következtetést lehet levonni, hogy a kisebb inszerciós szekvencia a ···· ···· ·
- 58 nagyobb inszerciós szekvenciában lévő poliadenilezési helytől felfelé átmeneti módon végbemenő poliadenilezésből származhat .
A két méretosztály tipikus cDNS inszerciós szekvenciáit SK-pBluescript plazmidvektorba szubklónoztuk. A lineárissá tételt követően T7-es RNS-polimeráz-enzim felhasználásával in vitro körülmények között végzett átírással cRNS-transzkriptumokat kaptunk. Funkcionális elemzés elvégzése céljából a cRNS-transzkriptumokat Xenopus oocytákba injektáltuk (150 ng/μΐ RNS; 50 nl/oocyta). 2-4 nap inkubálási idő eltelte után vizsgáltuk, hogy vannak-e az oocytákban jelen funkcionális kalciumreceptorok. Mindkét klóntípusnál létrejöttek funkcionális kalciumreceptorok. Erre abból lehet következtetni, hogy megfelelő kalciumreceptor-agonisták hozzáadása serkenti a kalcium által aktivált kloridáramokat. Az ismert kalciumreceptor-agonisták - beleértve az NPS R-467-et és az NPS R-568-at [v.ö. Nemeth és munkatársai: PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátási irat száma: WO 94/18959)] - az oocyta által manifesztált receptort körülbelül ugyanolyan koncentrációkban alkalmazva aktiválták, mint amilyen koncentrációkban ismereteink szerint hatásosak a már a születéskor meglévő mellékpajzsmirigysejt-receptorokkal szemben. így tehát mindkét klón tartalmazza egy funkcionális humán mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptorának a génállományát .
Plazmidokat készítettünk olyan módon, hogy az egyes, méret szerint osztályozott inszerciós szekvenciákat pBluescript-be szubklónoztuk, és ennek eredményeként pHuPCaR5.2-t és pHuPCaR ·· ···· ···· • · · ·
- 59 4.0-t kaptunk. Az inszerciós szekvenciák nukleinsav-szekvenciája és aminosav-szekvenciája az 1. és a 2. szekvenciaazonosítási listán látható.
A két cDNS inszerciós szekvencia nukleinsav-szekvenciái között megfigyeltünk néhány eltérést. A két cDNS inszerciós szekvenciaelemzéseiből arra lehet következtetni hogy legalább két, egymástól a transzláció által nem érintett 3'-régióban eltérő szekvenciaváltozat létezik, és ennek az oka alternatív poliadenilezés lehet. Ezenkívül szekvenciaváltozat létezik az inszerciós szekvencia 5'-végén is. Ezek a különböző szekvenciák a transzláció által nem érintett régióknak felelnek meg, és keletkezésük valószínűleg annak tulajdonítható, hogy a transzkripcióhoz két kiindulási és/vagy kapcsolódási hely áll rendelkezésre.
A pHuPCaR5.2 és a pHuPCaR4.0 cDNS-klónok kódoló tartományain belül további szekvenciavariációs helyeket figyeltünk meg (lásd az 1. és a 2. szekvenciaazonosítási listát), ami arra utal, hogy ezek a cDNS-klónok különféle fehérjék génállományát foglalják magukban. A humán CaR-gén szekvenciaelemzése azt mutatja, hogy a pHuPCaR4.0 cDNS-klónhoz képest a pHuPCaR5.2 cDNS kiónban lévő további 30 DNS-bázispár az alternatív mRNS kapcsolódási lehetőségek eredménye. A vagylagos mRNS-illeszkedési lehetőségeknek tulajdonítható 10 további aminosav beékelődése a pHuPCaR5.2 cDNS által kódolt génállományú CaR-polipeptidbe a pHuPCaR5.2 cDNS által kódolt polipeptidben levő aa#536 és aa#537 közötti helyen. Ezenkívül a pHuPCaR4.0 az aa#925. helyen glutamint (Gin), a 990. helyen pedig glicint (Gly) foglal magában, míg a pHuPCaR5.2-ben mindkét megfelelő helyen arginin (Arg) van. A humán CaR ezeken a helyeken - az említés sorrendjében - Gln-t és Arg-t kódol. Úgy tűnik, hogy a pHuPCaR4.0 cDNS és a humán DNS közötti eltérés valóságos szekvenciapolimorfizmust képvisel az emberi populáción belül, míg a pHuPCaR5.2-belüli egyetlen bázisváltozás valószínűleg a klónozás során bekövetkező mutáció eredménye. Mindkét cDNS tartalmazza funkcionális kalciumreceptorok génállományát, amit az bizonyít, hogy az ezekből a cDNS-klónokból készített cRNS-sel injektált Xenopus oocytes képes arra - amint ez a kloridion-vezetőképesség mérése alapján megállapítható -, hogy 10 mM extracelluláris kalciumionra reagáljon. Lehetséges azonban, hogy ez a két receptorizoforma funkcionálisan és/vagy farmakológiai szempontból eltérő.
2. példa
Kalciumreceptort expresszáló, stabil rekombináns sejtek kiválasztása
Olyan klonális sejtvonalakat különítettünk el, amelyek stabilan expresszálják a két humán kalciumreceptort és a szarvasmarha-kalciumreceptort. A kalciumreceptorok cDNS-eit két különböző, kereskedelmi forgalomban lévő expressziós vektorba - a Pharmacia cégtől beszerzett pMSG-be és az Invitrogén cégtől beszerzett Cep4B-be - szubklónoztuk. Az első vektor tartalmazza a szelektálható jelzőgént a xantin/guanin-foszforibozil-transzferázhoz (gpt), amely lehetővé teszi, hogy a stabilan transzfektált sejtek legyőzzék a purinos bioszintetikus mechanizmus 2 gg/ml aminopterin és 25 gg/ml mikofenolsav beadagolásával kialakított blokádját. A második vektor tartalmaz egy olyan gént, amely ellenállóképességet biztosít a 200 μg/ml koncentrációban alkalmazott antibiotikus higromicinnel szemben. A HuPCaR5.2 és a HuPCaR4.0 cNDS-eit (a megemlítés sorrendjében az 1. és a 2. szekvenciaazonosítási listán láthatók) Nőt I-es és Hind Ill-as restrikciós enzimekkel távolítottuk el a parentális bluescript plazmidból, majd közvetlenül hozzákapcsoltuk őket a Nőt I és a Hind III enzimmel egyaránt digerált Cep4B-hez, vagy a DNS-polimeráz klenow fragmentumával kezeltük, majd tompa végű ligáció útján pMSG-vel digerált Sma I-hez kapcsoltuk őket.
A HuPCaR5.2 inszerciós szekvenciát tartalmazó pMSG-szubklónt a már ismertetett módon CHO-sejtekbe transzfektáltuk. 20 rezisztens kiónt különítettünk el, amelyeknek a jellemzése jelenleg folyik. A HuPCaRó.2 inszerciós szekvenciát tartalmazó Cep4B szubklónt a már ismertetett módon HEK 293-as sejtekbe transzfektáltuk. Higromicines szelektálással stabil kiónokból álló folyadékot gyűjtöttünk össze. A HuPCaR4.0 receptor izoformát manifesztáló kiónokat hasonló módon készítettük el.
HuPCaR5.2 inszerciós szekvenciát tartalmazó Cep4B-vel transzfektált és higromicinnel szelektált HEK 293-as sejteket tartalmazó összegyűjtött folyadékból kinyert sejtekkel kollagénnel bevont Aklar-kockákat fedtünk be, amelyeket előzőleg 12 mérőhelyes szövettenyésztő lemezek külön-külön mérőhelyein helyeztünk el. A közeget 2-6 nappal később eltávolítottuk, és a sejteket stabilizált sóoldattal és 1 ml mennyiségű, 1 μΜ fura-2-AM-et, 1 mM kalcium-kloridot és 0,1 tömeg% BSA-t tartalmazó pufferoldattal mostuk. A kalciumreceptor-agonistákra
- 62 való reagálásra jellemző fluoreszcenciaértékeket 37 °C-on spektrofluoriméterrel mértük. A gerjesztéshez 340 nm-es hullámhosszúságú fénysugarakat használtunk, a kibocsátott fénysugarak hullámhosszúsága 510 nm volt. A jelkalibráláshoz a Fmax értékét 40 μΜ ionomicin hozzáadása után, a látszólagos Fmin értékét pedig 0,3 M EGTA és 2,5 M Trisz-HCl hozzáadásával (pH = 10) határoztuk meg. A [Ca2t]i nagymértékű növekedését figyeltük meg a következő kalciumreceptor-antagonisták hozzáadását követően: Ca2+ (10 mM) , Mg2+ (20 mM) és NPS R-467. A funkcionális K-receptorokat manifesztáló kontrollsejtek nem reagáltak ezekre a kalcimimetikus vegyületekre.
További klónozó anyagokat különítettünk el pHuPCaR4.0 szekvenciával transzfektált HEK 293-as sejtekből. Vizsgáltuk, hogy ezek az anyagok hogyan reagálnak a kalcimimetikumokra. A vizsgálatokat a már leírt módon végeztük azzal az eltéréssel, hogy a sejteket szuszpendált állapotban teszteltük.
3. példa
Fura-2-vel feltöltött mellékpajzsmirigy-sejtek felhasználása a kalciumreceptor-aktivitás méréséhez
Ebben a példában azt ismertetjük, hogy miként lehet kinyerni mellékpajzsmirigysejteket borjakból és emberekből, továbbá hogyan lehet felhasználni a mellékpajzsmirigysejteket a kalciumreceptor-aktivitás méréséhez.
Frissen levágott 12-15 hetes borjakból a helyi vágóhídon eltávolitottuk a mellékpajzsmirigyeket, majd a laboratóriumba szállítottuk őket 126 mM nátrium-kloridot, 4 mM kálium-kloridot, 1 mM magnézium-kloridot, 20 mM Na-HEPES-t, 5, 6 mM glükózt és változó mennyiségű - például 1,25 mM - kalcium···· ····
- 63 -kloridot tartalmazó, jéghideg mellékpajzsmirigysejt-pufferoldatban (PCB) (pH=7,4). A humán mellékpajzsmirigyek olyan betegekből származtak, akiknek elsődleges mellékpajzsmirigytúlműködés vagy urémiás mellékpajzsmirigy-túlműködés (urémiás HPT) miatt eltávolították a mellékpajzsmirigy-szövetét. Ezeket a mirigyeket a borjakból származó szövetekhez hasonlóan kezeltük.
A mirigyekről lenyestük a zsírfelesleget, valamint a kötőszövetet, majd a mirigyeket éles ollóval körülbelül 2-3 mm élhosszúságú kockákra vágtuk. Kollagenázenzimes digerálással elkülönítettük, majd Percoll-pufferben való centrifugálással tisztítottuk az elkülönült mellékpajzsmirigysejteket. Fáziskontrasztos mikroszkóppal és B-szudánfeketével való megfestéssel kimutattuk, hogy a kapott mellékpajzsmirigysejt-készítmény vörösvérsejtektől és zsírsejtektől gyakorlatilag mentes volt. A disszociált és tisztított mellékpajzsmirigysejtek 5-20 sejtet tartalmazó kis halmazokban voltak jelen. Rutinszerűen végzett munka esetén a tripánkékes vagy etidium-bromidos kizárással megállapított jelzőszám alapján a sejtek 95 %-a volt életképes.
Bár a sejteket ebben az állapotban fel lehet használni kísérleti célokra, a fiziológiai válaszreakciókat - például a PTH-szekréció elfő j thatóságát és a szövetek [Ca2+]i maradékkoncentrációit a sejtek egy éjszakán át való tenyésztése után kell meghatározni. A primer tenyészetnek megvan az az előnye is, hogy a sejtek radioizotópos megjelölésekor majdnem el lehet érni az izotópegyensúlyt, ami az inozit-foszfátos metabolizmusra vonatkozó mérésekre kiterjedő vizsgálatokhoz szüksé• · ·····»··· · · • ♦ · · · · • · ·*··«· • * 4 ·«·«· »
- 64 ges .
A sejteket tisztítás után (Percoll-gradiensek) a Ham-féle F12 és 50 μg/πιl mennyiségű sztreptomicinnel, 100 E/ml mennyiségű penicillinnel, 5 μg/ml mennyiségű gentamicinnel és ITS+-szal kiegészített, Dulbecco által módosított Eagle-féle közeg (GIBCO) 1:1 arányú elegyével többször mostuk. Az ITS+ egy keveréssel előkészített oldat, amely inzulint, transzferint, szelént, valamint marhaszérum-albuminból (BSA) és linolénsavból álló elegyet (Collaborative Research, Bedford, MA, USA) tartalmaz. A sejteket ezután áttöltöttük Falcon-gyártmányú, 75 vagy 150 cm3-es edényekbe, majd egy éjszakán át 37 °C-on, 5 % szén-monoxidot tartalmazó nedves légkörben inkubáltuk őket. Ezekhez a tenyészetekhez az éjszaka folyamán nem adtunk szérumot, minthogy a szérum jelenléte lehetővé teszi, hogy a sejtek a műanyaghoz tapadjanak, elszaporodjanak és dedifferenciálódjanak. Az ismertetett körülmények között tenyésztett sejteket dekantálással könnyen el lehetett távolítani az edényekből. Az eltávolított sejtek ugyanolyan életképességet mutattak, mint a frissen kipreparált sejtek.
Tisztított mellékpajzsmirigysejteket újra szuszpendáltunk μΜ fura-2-acetoxi-metil-észtert tartalmazó 1,25 mM CaCl2~ % BSA-CPB-ben, majd a szuszpenziót 37 eC hőmérsékleten 20 percig inkubáltuk. A sejteket ezután pelleteztük, ugyanabban a pufferoldatban - de az észterkomponens nélkül - újra szuszpendáltuk, majd további 15 percig 37 °C-on inkubáltuk. A sejteket ezt követően 0,5 mM kalcium-kloridot és 0,5 tömeg% BSA-t tartalmazó PCB-vel kétszer mostuk és szobahőmérsékleten - körülbelül 20 °C-on - tartottuk. Közvetlenül a felhasz• ·
- 65 nálás előtt a sejteket ötszörös mennyiségű, előmelegített 0,5 mM CaCl2-PCB-vel hígítottuk, hogy a BSA végkoncentrációja 0,1 tömeg% legyen. A fluoreszcenciás méréshez felhasznált küvettában jelenlévő sejtek koncentrációja (1-2) x 106/ml volt.
Az indikátorral töltött sejtek fluoreszcenciáját 37 ’C-on mértük egy termosztált küvettatartóval és mágneses keverővei felszerelt spektrofluoriméterrel (Biomedical Instrumentation Group, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA, USA) . A gerjesztéshez 340 nm hullámhosszúságú fénysugarakat használtunk, a kibocsátott sugárzás hullámhosszúsága pedig 510 nm volt. A fluoreszkálás mutatja a sejtplazmában levő kalciumionok koncentrációját. A fluoreszcencia-jeleket digitoninnal kalibrálva (50 ug/ml, végső érték) megkaptuk a fluoreszcencia-maximumot (Fmax) , EGTA-val kalibrálva pedig (10 mM, pH = 8,3, végső érték) a fluoreszcencia-minimumot (Fmiri) , továbbá a 224 nM-es disszociációs állandót. A színezékveszteség függ a hőmérséklettől. A legnagyobb veszteség a küvettában lévő sejtek melegítését követő első két percen belül következik be. Ezt követően a színezékveszteség csak nagyon lassan növekszik. A kalibrálásnak a színezékveszteséggel való korrigálása céljából egy küvettában sejteket helyeztünk el, amelyeket 37 °C-on 2-3 percig kevertünk. A sejtszuszpenziót ezután eltávolítottuk, a sejteket pelleteztük, és a felülúszót visszavezettük a küvetta tisztítása céljából. A felülúszót ezután a színezékveszteség meghatározása céljából digitonines EGTA-val kezeltük. A színezékveszteség tipikus esetben a teljes Ca2+-függő fluoreszcens jel 10-15 %-a volt. Ezt a becsült értéket • · ·«···*««· *· * > · » · · « · <·»··· • * · ·« / · · »
- 66 kivontuk a látszólagos Fmin-értékből.
4. példa
Fura-2-vel feltöltött HEK 293/pHuPCaR4.0 sejtek felhasználása a kalciumreceptor-aktivitás mérése céljából
Ebben a példában azokat az eljárásokat ismertetjük, amelyek keretében fura-2-vel feltöltött HEK 293/pHuPCaR4.0 sejtek felhasználásával vizsgálni lehet a kalciumreceptor aktivitását. Fura-2-vel töltöttünk fel pHuPCaR4.0-val transzfektált HEK 293-os sejteket olyan módon, hogy a környezet hőmérsékletén 1 órán keresztül inkubáltuk őket körülbelül 5 μΜ fluo-3/AM-t tartalmazó, 20 mM mennyiségű HEPES-szel pufferolt, Dulbecco által módosított Eagle-féle közegben. A sejteket ezután Hank-féle stabilizált sóoldattal öblítettük, majd 1 mM kalcium-kloridot és 1 mM magnézium-kloridot tartalmazó, 20 mM mennyiségű HEPES-szel pufferoltuk. Ezután a vizsgálandó vegyületeket hozzáadtuk a sejtekhez, és fluoreszcenciaméréseket végeztünk (a gerjesztést 340 nm hullámhosszúságú fénysugarakkal hajtottuk végre, az emittált fénysugarak hullámhosszúsága pedig 510 nm volt).
5. példa
A vegyületek kalciumreceptor-aktivitás-szabályozó képességének mérése
Különböző vegyületeknek a kalciumreceptor-aktivitás szabályozására való képességét vizsgáltuk olyan módon, hogy fura-2-vel feltöltött sejteket vagy fura-2-vel feltöltött sejtek alkalmazásával feltöltött mellékpajzsmirigysejteket felhasználva a pHuPCaR4.0 génállományát tartalmazó nukleinsavval ti ·*···>··· ·· * · · · · · • · ······ • · · ·«···
- 67 transzfektált HEK 293-as sejtekben mértük a [Ca2+]i növekedését. A különböző kísérletek eredményeit az l.a), az l.b)l., az l.b)2., az l.c) és a 2. táblázatokban foglaljuk össze. Az l.a), az l.b), az l.b)l., az l.b)2. és az l.c) táblázatokban található adatok a különböző koncentrációkban alkalmazott vegyületeknek a kalciumreceptor-aktivitásra gyakorolt hatásait mutatják a 4. példában ismertetett vizsgálat alapján, azaz a pHuPCaR4.0 génállományát tartalmazó nukleinsavval transzfektált, fura-2-vel feltöltött Hek 293-as sejtek alkalmazása esetén.
A 2. táblázatban különböző kísérletek eredményeit foglaljuk össze. Az EC50-értékeket fura-2-vel feltöltött mellékpajzsmirigy vagy Hek 293/pHuPCaR4.0-sejtekre számítottuk ki. A sejteket fura-2-vel töltöttük fel, és olyan módon vizsgáltuk, ahogy a 2. példában (mellékpajzsmirigysejtekre vonatkozóan), vagy a 3. példában (HEK 293/pHuPCaR4.0-sejtekre vonatkozóan) leírtuk.
la) táblázat: Kalcimimetikus vegyületek, amelyek 3,3 ng/ml koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakciót váltanak ki a humán kalciumreceptort expresszáló HEK 293-as sej tekben
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
Ref e rend a vegyületek
R-ssa 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
24X 126 109 124 109
24Y 119 120 127 102
17J 116 118 122 102
25A 122 120 114 92
17E 116 110 110 92
24Z 13 3 13 8 135 90
14S 116 106 105 88
25Ξ 132 129 122 85
17G 125 128 119 77
14T 126 125 117 77
17H 126 124 111 74
140 119 119 102 74
251 119 113 114 74
12J 131 130 113 68
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
121 '115 111 93 68
25G 130 115 99 66
9R 108 101 64
12F 118 110 101 63
120 110 117 94 62
23Z 129 126 100 61
17M 115 99 59
16V 114 102 58
250 126 115 96 57
25J 119 123 105 56
16L 146 138 98 55
12N 115 106 102 55
16T 97 88 55
25U 107 107 ~95 55
17P ' 101 86 54
16Q 110 88 53
23Ξ 137 113 102 53
17C 113 120 99 52
25L 97 97 85 52
az 101 97 52
17X 105 93 51
13R 132 98 51
170 112 96 51
23Q 122 114 98 51
16X 111 96 51
24V 127 98 71 50
130 115 94 50
17N 108 86 49
2IV 122 116 99 48
24M 132 134 99 48
13U 108 79 47
·«··
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
24P • 140 138 110 46
17Y 109 94 79 46
11X 100 76 45
25H 115 107 89 45
22J 99 71 45
9C 104 82 45
13S 102 87 45
10Q 103 100 84 44
13P 110 83 44
8K 98 81 44
13N 114 88 43
ION 106 97 77 43
12H 114 115 94 43
25P 90 81 75 41
18A 111 88 40
14L - 109 78 40
b.l. táblázat: Kalcimimetikus vegyületek, amelyek 33 ng/ml
koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakciót váltanak ki a humán kalciumreceptort expresszáló HEK 293-as sej tekben
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
Referenciavegyületek
R-568 95 69 24
17P 101 85 54
17X 105 93 51
12C 134 125 98 39
151 121 117 96 36
Aktivitás négy koncentrációértéknél (%) • · · · · · • · · · * ·♦· • ♦ · »··· « ·«·< · « * ·«
A vegyületek kódszáma
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
17D 108 91 38
17F 111 90 20
24C 116 113 87 32
25K 124 107 86 35
13F 125 122 85 38
21F 109 85 36
21S 132 131 85 34
10F 96 84 27
14R 106 107 84 37
13G 111 128 82 29
142 118 103 82 20
16N 122 159 82 8
8U 123 129 82 11
23W 117 97 81 25
12G 13 9 139 81 35
15G 113 80 32
25M 118 100 79 25
13V 110 79 33
14P 112 103 78 30
6T 123 129 78 15
14Q 101 78 35
17L 111 104 78 31
24K 106 78 30
24U 106 106 78 25
25Q 116 95 77 20
8J 104 77 39
23H 121 114 '•,77 28
21C-4U 134 114 ·. 75 17
25F 97 85 76 28
1SR 100 76 25
171 118 97 76 18
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
24J 103 75 31
210 109 75 37
24G 109 94 75 22
151 111 93 75 24
21D 104 75 17
20Y 117 . 95 74 24
10P 102 74 3
23M 113 97 74 26
14Y 109 73 17
17K 93 97 73 37
12E 117 121 73 23
172 99 73 37
ísw 102 73 4
23K 10S 107 72 24
25X 95 94 72 22
13W 109 71 12
23? 125 99 70 22
1SB 111 96 59 25
21Y 100 63 36
17W 92 67 13
23A 103 67 24
23G 127 93 67 13
13M 92 65 15
21U 104 104 66 18
2 ÍR 100 65 15
10S/10T 35 65 13
17R 93 65 13
13X 102 65 13
4N 100 65 13
21Ξ 94 64 4
15J 80 75 64 13
·
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
22Y 114 64 28
21G SS 63 18
24L 105 62 10
10V 99 62 8
10W/10X 93 61 9
17B 92 61 · 19
23 Y 106 87 61 16
11Y 103 61 20
,b.2. táblázat: Kalcimimetikus vegyületek, amelyek . 33 ng/ml
koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakciót váltanak ki a humán kalciumreceptort expresszáló HEK 293-as sej tekben
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
Referenciavegyületek
R563 95 69 24
17P 101 86 54
17X 105 93 51
18C 99 87 60 18
23T 102 74 60 31
4V 93 59
8G 84 59 6
231 102 58 3
21M 102 58 17
240 137 114 58 8
3U 89 57
9A 82 56 6
12M 98 86 56 11
12B 130 110 56 4
»·«· ·
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
21P 92 ' 56 13
8T 85 . 55 13
10L/10M 99 55 4
241 109 84 55 11
14N 89 55 15
23R 104 SS 54 13
23S 97 53 3
21T 133 112 53 3
10W/10X 81 53 4
13T 90 53 6
5R 94 52 7
201 87 52 12
24A 122 85 52 9
12D 128 109 52 5
6X 84 52 10
18T 99 74 52 14
2IX 119 101 51 2
23J 102 61 51 29
102 96 51 5
1SZ 88 51 9
23N 96 50 2
1SU 85 50 4
11D 96 50 4
23X 94 49 1
17A 88 49 7
20J 80 48 8
22X 86 48 10
23U 87 48 3
9Z 74 48 4
16J 92 76 47 31
25N 94 73 46 8
4P 81 46 8
·»*« ·9·9 ·
A vegyületek kódszáma Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
230 111 79 46 13
13Q 95 46 5
4G 83 46
12Y 80 46 10
12L 88 45 10
23F 82 45 5
11W 81 44 2
8H 88 44 7
25V 89 59 43 26
25W 55 69 42 3
10R 82 42 7
2 IN 124 98 42 4
8S 73 . 42 7
8X 75 40 19
13E 123 94 40 2
l.c) táblázat: Kalcimimetikus vegyületek, amelyek 330 ng/ml koncentrációban alkalmazva 40 %-osnál nagyobb válaszreakciót váltanak ki a humán kalciumreceptort expresszáló HEK 293-as sej tekben
A vegyületek Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
kódszáma 3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
Referenciavegyületek R568
17P
17X
7X
3H
3L
ISO
8O/8Q
95 69 24
101 86 54
105 93 51
85
84
81 28
81 21 2
80 14 0
·«·** ···» · ♦ * • A « « · · » · · « ··♦
A vegyületek Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
kódszáma 3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
14A 93 78 10 7
23L 107 77 37 9
1T 75
7W 75 '
4H 77 37
BD 75
5M 73 21
4U 72
24Ξ 94 71 35 6
16M 130 68 11 4
4M 58 34
2S 67 29
17V 91 56 27 -1
2X 65 15
23D 91 66 35 13
4P 65 32
5B/5C 65 20
3M 64 19
16K 78 62 36 8
5D 62 18
4D 61 13
24B 75 61 34 11
24H 81 60 32 13
5L 60 16
2Y 59 10
5G 58 16
3V 56 14
2Q 56 4
14B 75 55 11 4
13Z 93 54 22 5
8A 54
24D 87 53 34 39
(.«w ·ί»· · • · * » » « ··«· ··· k 9 • t
A vegyületek Aktivitás négy koncentrációértéknél (%)
kódszáma 3300 ng/ml 330 ng/ml 33 ng/ml 3,3 ng/ml
ID 53
131 85 52 3 1
3B 52 15
8C 51
14H 112 49 5 5
7U 49
5E 48 7
13H 88 48 36 12
13Y 10S 47 2 4
4J 47 8
141 80 45 11 7
4B 45 8
3D 45 4
3R 45 2
3A 41 7
14J 55 41 6 5
41 40 9
2. táblázat: A mellékpajzsmirigysejt kalciumreceptorán in vitro körülmények között aktív aril-alkil-amin-származék kalcimimetikumok az 1. ábráról (ECS0 1 5 μΜ)
A vegyületek kódszáma (az 1. ábráról) ECso (μΜ) A vegyületek kódszáma (az 1. ábráról) ECS0 (μΜ)
NPS R-467 2.0 . 11X 0.83
NPS R-568 0.50 11Y 2.8
317 0.54 12L 1.7
3V 1.8 1217 1.2
4A 1.4 12V 0.42
4B 2.0 12W 3.2
«··· ·»*· ·
4C 2.0 12Y 2.0
4D 4.4 12Z 0.11
4G 1.8 13Q ca. 0.8
4H >3.0· 13R 0.25
4J 2.2 13S . <0.13
4M 2.1 13U 0.19
4N 0.8 13X <0.75
4P 1.6 14L 0.26
4R/6V 4.2 14Q 0.47
4S 3.3 14U 0.13
4T/4U 1.6 14V 1.7
4V 2.5 14Y 0.38
4W 2.3 - 1SG ca. 0.5
4Y 1.3 16Q 0.04
4Z/5A 4.4 16R 0.36
5B/5C 2.8 16T 0.04
5W/5Y 3.6 16V <0.13
6E 2.7 16W 0.59
SF(R,R-) 0.33 16X 0.10
SR 3.4 17M 0.15
ST 2.9 170 0.04
6X 2.5 17P 0.04
7W 3.2 17R 0.39
7X 1.1 17W 0.43
8D 2.5 17X 0.02
SJ 0.78 20F <1.0
8K 1.3 201 >1.0
8R 2.6 20J >3.0
8S 1.7 20R 2.4
ST 1.8 20S 4.2
au 0.44 21D 3.0
8X 0.76 21F 0.38
az 0.40 21G 1.1
• · ·
9C 0.60 210 0.26
9D 1.4 21P 0.43
9R 0.25 21Q 1.4
9S 4.3 21R 0.37
10F 0.89 25C > 2
11D 1.3 25D 0.019
6-17. példák A vegyületek szintézise
A leírásban szereplő vegyületek ismert eljárásokkal - például a Nemeth és munkatársai által leírt módon [PCT/US93/01642 sz. nemzetközi bejelentés (a nemzetközi közrebocsátás! irat száma: WO 94/18959)] - szintetizálhatók. A továbbiakban példákat közlünk a szövegben szereplő vegyületek tipikus előállítási módszereire.
A 9R, a 14U és a 17P kódszámú vegyületeket kereskedelmi forgalomban levő aldehidből vagy ketonból állítottuk elő reduktív aminálással, az aminálást primer aminnal végeztük nátrium- [ciano-trihidro-borát](1-) vagy nátrium-[triacetoxi-hidro-borát](1-) jelenlétében. Hasonló módon állítottuk elő a 11Y, a 12H, a 12K, a 12M, a 14S, a 14T, a 16L-0, a 17E, a 17G, a 17J, a 24X, a 24Y, a 25A, a 25E-25K és a 250 kódszámú vegyületeket.
Azt tapasztaltuk, hogy az említett három vegyület (9R, 14U és 16P) szintézisekor nátrium-(triacetoxi-hidro-borát] (1-) alkalmazása esetén nagyobb diasztereoszelektivitással keletkeznek a kívánt diasztereoizomerek, mint nátrium-[ciano-trinidro-borát](1-) alkalmazása esetén. A dúsított elegyből ··
- 80 további tisztítással állítjuk elő a kívánt diasztereomert. A készített normálfázisú nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel vagy szerves oldószerrel való átkristályosítással végezzük.
A 8J, a 8U, a 11X, a 17M és a 25Y kódszámú vegyületeket úgy állítottuk elő, hogy primer aminokat aldehiddel vagy ketonnal titán(IV)-izopropoxid jelenlétében kondenzáltunk. Az így kapott intermedier imineket ezután nátrium-[ciano-trihidro-borát] (l-)-szal, nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)szal vagy nátrium-[triacetoxi-hidro-borát](1-)-szál in situ redukáltuk. A 8U kódszámú vegyület szintetizálásához az intermedier amint szénhordozóra felvitt palládium-dihidroxid alkalmazásával katalitikusán redukáltuk.
A 12U, a 12V és a 12Z kódszámú vegyületeket úgy állítottuk elő, hogy amint diizobutil-alumínium-hidrid (DIBAL-H) közvetítésével nitrillel kondenzáltunk. A keletkezett intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) -szál vagy nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-szál in situ redukáltuk. Az intermedier alkéneket (a 12U és a 12V kódszámú vegyületeket) szénhordozóra felvitt palládium alkalmazásával etanolban végrehajtott katalitikus hidrogénezéssel redukáltuk. A vegyületeket úgy alakítottuk át a megfelelő hidrokloridokká, hogy a szabad bázisokat éteres sósavval kezeltük, és ennek eredményeként fehér színű szilárd anyagot kaptunk.
Az ezekhez a szintézisekhez felhasznált aminokat az Aldrich Chemical Co.-tól (Milwaukee, WI, USA) vagy a Celgene Corp.-tői (Warren, NJ, USA) szereztük be, illetve hagyományos eljárások alkalmazásával szintetizáltuk. Az összes többi, re- 81 ágensként használt vegyszert az Aldrich Chemical Co.-tól vásároltuk .
6. példa
A 25Y kódszámú vegyület {N-[3-(2-fenil)-propil]-l-(1-naftil)-etil-amin} előállítása
135 mg (1 mmol) 3-fenil-l-propil-amint, 170 mg (1 mmol)
1'-acetonaftont és 355 mg (1,3 mmol) titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet 1 órán keresztül a környezet hőmérsékletén kevertünk. A reakcióelegyhez ezután 1 ml 1 M etanolos nátrium- [ciano-trihidro-borát] (1-)-oldatot adtunk, és az így keletkezett elegyet a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertük. A reakcióelegyet dietil-éterrel hígítottuk, és 0,1 ml vízzel kezeltük. Az így keletkezett reakcióelegyet centrifugáltuk, majd a dietil-éteres réteget eltávolítottuk és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott tejszerű olaj egy kis részét (10 mg-ot) nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel (Phenomenex, 1,0 x 25 cm, 5 μΜ szilicium-dioxid) tisztítottuk. A tisztítást gradienselúcióval valósítottuk meg: eluálószerként olyan, 0,1 % izopropil-amint tartalmazó diklór-metánból és metanolból álló elegyet alkalmaztunk, amelyben a 10 %-os koncentráció eléréséig folyamatosan növeltük a metanol koncentrációját. így szabad bázis formájában egyetlen komponensként kaptuk meg a terméket: GC/EL-MS (Rt = 10,48 min); m/z (relatív intenzitás) 289 (M+, 11), 274 (63),
184 (5), 162 (5), 155 (100), 141 (18), 115 (8), 91 (45), 77 (5) .
7. példa
A 8J kódszámú vegyület [N-(3-fenil-propil)-1-(3-tiometil-fenil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise ml koncentrált savoldat, 4 g jég és 8 ml víz elegyében feloldottunk 2,7 g (20 mmol) 3'-amino-acetofenont, majd a keletkezett oldatot 0 °C-ra hűtöttük és 3 - 5 ml vízben feloldva 5 perc alatt hozzáadtunk 1,45 g (21 mmol) nátrium-nitritet, miközben a hőmérsékletet 6 °C alatt tartottuk. 1,75 g (25 mmol) nátrium-tio-metoxidot feloldottunk 5 ml vízben, majd a kapott oldatot 0 °C-ra hűtöttük. Ehhez az oldathoz 10 perc alatt hozzáadtuk a diazóniumsót, miközben a hőmérsékletet 10 °C alatt tartottuk. A reakcióelegyet további 1 órán keresztül kevertettük, miközben hagytuk, hogy az elegy felmelegedjék a környezet hőmérsékletére. Ezt követően a reakcióelegyet megosztottuk dietil-éter és víz között. A dietil-éteres réteget elkülönítettük, nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és nátrium-klorid-oldattal mostuk, majd nátrium-szulfáttal szárítottuk. A dietil-éter elpárologtatása után 74 %-os hozammal kaptuk meg a 3'- (tio-metil)-acetofenont. A nyersterméket csökkentett nyomáson végzett desztillálással tisztítottuk.
0,13 g (1 mmol) 3-fenil-propil-amint, 0,17 g (1 mmol) 3'-(tio-metil)-acetofenont és 0,36 g (1,25 mmol) titán(IV)-izopropoxidot összekevertünk, majd az így keletkezett elegyet 4 órán át állni hagytuk. Ezután beadagoltunk 1 ml etanolt és 0,063 g (1 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát](l-)-t, majd a reakcióelegyet egy éjszakán át kevertük. A reakcióelegyet ezt követően 4 ml dietil-éterrel és 200 μΐ víz • · · • ·· ·· · • · · hozzáadásával feldolgoztuk. Az elegyet örvénylő áramoltatással kevertettük, majd a szilárd anyagokat centrifugálással elválasztottuk. A dietil-éteres elegyet a csapadéktól elkülönítettük, és az oldószert vákuumban ledesztilláltuk. Az így kapott olaj szerű anyagot feloldottuk diklór-metánban, és az oldatot preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítottuk. Eluálószerként 3 %-os metanol/diklór-metán elegyet alkalmaztunk. Tiszta olaj formájában kaptuk meg a cím szerinti vegyületet: GC/EI-MS (R = 7,64 min); m/z (relatív intenzitás) 285 (M+, 18), 270 (90), 180 (17), 151 (100), 136 (32), 104 (17), 91 (54), 77 (13).
8. példa
A 8U kódszámú vegyület [N-3-(2-metoxi-fenil)-1-propil-(R)-3-metoxi-α-metil-benzil-amin-hidroklorid] szintézise
3,02 g (20 mmol) (R)-(+)-3-metoxi-a-metil-benzil-aminból, 3,24 g (20 mmol) 2-metoxi-fahéjsavaldehidből és 8,53 g (30 mmol; 1,5 ekvivalens) titán(IV)-izopropoxidból álló elegyet 2 órán át kevertünk szobahőmérsékleten, majd hozzáadtunk 20 ml 1 M etanolos nátrium[ciano-trihidro-borát] (1-) -oldatot. A reakcióelegyet egy éjszakán (16 órán) át kevertük, dietil-éterrel hígítottuk, majd a hígított elegyhez hozzáadtunk 1,44 ml (80 mmol; 4 ekvivalens) vizet. Az így kapott reakcióelegyet 1 órán keresztül kevertük, majd centrifugáltuk, a dietil-éteres réteget eltávolítottuk és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olajszerű anyagot jégecetben feloldottuk, palládium-hidroxiddal rázattuk és a környezet hőmérsékletén 2 órán át 4,14 χ 105 Pa hidrogénnyomáson hidrogéneztük. A katalizátort szűréssel eltávolítottuk, és a kapott ol·· ·······>· ·· • · · · · · • · ·♦···· • · · ····· · ····· · · ··
- 84 dat bepárlása után sűrű, olaj szerű anyagot kaptunk. Ezt az olajszerű anyagot feloldottuk diklór-metánban, és a kapott oldatot 1 N nátrium-hidroxid-oldattal semlegesítettük. A diklór-metános oldatot a vizes fázistól elválasztottuk, vízmentes kálium-karbonáttal szárítottuk, majd bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olaj szerű anyagot dietil-éterben feloldottuk, és az oldatot 1 M dietil-éteres sósavoldattal kezeltük. A keletkezett fehér színű, szilárd csapadékot öszszegyűjtöttük, majd dietil-éterrel mostuk és levegőn megszárítottuk. Az így szabad bázis formájában előállított anyag a gélkromatográfiás vizsgálat szerint - GC/E1-MS (Rt = 6,99 min) - egyetlen komponensből állt: m/z (relatív intenzitás) 299 (M+, 21), 284 (100), 164 (17), 150 (8), 135 (81), 121 (40), 102 (17), 91 (43), 77 (18).
9. példa
A 9R kódszámú vegyület [(R)-N-[l-(2-naftil)-etil]-(R)-1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise
10,0 g (58 mmol) (R)-(+)-1-(1-naftil)-etil-aminból, 9,4 g (56 mmol) 2'-acetonaftonból, 20,7 g (73,0 mmol) titán(IV)-izopropoxidból és 100 ml abszolút etanolból álló elegyet 3 órán keresztül 60 “C-on tartottunk. Az elegyhez ezután hozzáadtunk 3,67 g (58,4 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát](1-) -t (NaCNBH3) . A reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 18 óra hosszat kevertük. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtunk 1 liter dietil-étert és 10 ml vizet, majd a kivált csapadékot centrifugálással elkülönítettük. A felülúszót vákuumban bepároltuk, és a nyersterméket forró hexánból négyszer átkristályosítottuk. így 1,5 g tiszta (98 %-os-nál nagyobb tisztása······ ·· • · · · ·
• · ·
- 85 gú) diasztereomert kaptunk. A szabad bázist hexánban feloldottuk, és az oldatból fehér színű szilárd anyag formájában dietil-éteres sósavoldattal· kicsaptuk a terméket. így 1,1 g mennyiségben 6 %-os hozammal kaptuk meg a cím szerinti vegyületet, amely 200 °C és 240 °C között bomlás közben meglágyul.
10. példa
A 11X kódszámú vegyület [N-(4-Izopropil-benzil)-(R)-1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] előállítása
1,06 g (6,2 mmol) (R) - ( + )-1-(1-naftil)-etil-aminból, 0,92 g (6,2 mmol) 4-izopropil-benzaldehidből és 2,2 g (7,7 mmol) titán(IV)-izopropoxidból álló elegyet 5 percig 100 °C-on tartottunk, majd 4 órán keresztül a környezet hőmérsékletén kevertünk. Ezután az elegyhez hozzáadtunk 0,39 g (6,2 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-t (NaCNBH3) , majd 1 ml etanolt. A reakcióelegyet 18 órán át a környezet hőmérsékletén kevertük, majd hozzáadtunk 100 ml dietil-étert és 1 ml vizet. A keletkezett csapadékot centrifugálással elkülönítettük. A felülúszót vákuumban bepároltuk, és a bepárlási maradékként kapott nyersterméket szilikagélen kromatografáltuk. A kromatografáláshoz 50 mlx35 cm-es oszlopot, valamint eluálószerként 1 %-os MeOH/triklór-metán elegyet használtunk. A kromatografált anyagot ezután hexánban feloldottuk, és az oldatból dietil-éteres sósavoldat hozzáadásával kicsaptuk a cím szerinti terméket. 35 %-os hozammal 0,67 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk, amelynek az olvadáspontja 257-259 ’C.
• · • · · « ···· ·
- 86 11. példa
A 12U kódszámú vegyület [N-3-(2-metil-fenil)-1-propil-(R)-3-metoxi-α-metil-benzil-amin-hidroklorid] szintézise
1,43 g (10 mmol) 2-metil-fahéjsavnitrilt feloldottunk 10 ml diklór-metánban, majd a keletkezett oldatot 0 °C-ra hűtöttük, és 15 perc alatt cseppenként hozzáadtunk 10 ml 1 M diklór-metános diizobutil-alumínium-hidrid-oldatot. A reakcióelegyet 0 °C-on 15 percig kevertük, majd 15 perc alatt cseppenként hozzáadtunk 1,51 g (10,0 mmol) (R)-(+)-3-metoxi-a-metil-benzil-amint 10 ml 1 M diklór-metános oldat formájában. A reakcióelegyet 0 °C-on 1 órán át kevertük, majd 100 ml 1 g (16 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-t tartalmazó etanolos oldatba öntöttük. A reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 48 órán át kevertük, majd dietil-éterrel hígítottuk és 1 N nátrium-hidroxid-oldattal semlegesítettük. A dietil-éteres réteget eltávolítottuk, vízmentes nátrium-karbonáttal szárítottuk, majd bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olajszerű anyagot szilikagélen kromatografáltuk. A diklór-metános gradienseluálás során olyan metanol/diklór-metán elegyet alkalmaztunk, amelyben a metanol koncentrációját az 5 %-os koncentráció eléréséig folyamatosan növeltük. Ilyen módon egyetlen komponensként kaptuk meg a telítetlen intermediert: GC/EI-MS (Rt = 10,06 min); m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 17), 266 (59), 176 (19), 146 (65), 135 (73),
131 (100) , 91 (21) ,77 (13) .
A telítetlen intermediert etanolban a környezet hőmérsékletén, szénhordozóra felvitt palládium katalizátor jelenlétében 4,14xl05 Pa hidrogénnyomáson 16 órán át hidrogéneztük. A
- 87 reakcióterméket 1 M dietil-éteres sósav-oldattal átalakítottuk hidrokloridsóvá. A cím szerinti vegyületet egyetlen komponensként, szabad bázis formájában kaptuk meg: GC/EI-MS (Rt = 9,31 min); m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 21), 268 (100), 164 (12), 148 (8), 135 (85), 121 (12), 105 (49), 91 (23), 77 (21) .
12. példa
A 12V kódszámú vegyület [N-3-(3-metil-fenil)-1-propil-(R) -3-metoxi-a-metil-benzil-amin-hidroklorid] szintézise
A cím szerinti vegyületet a 11. példában ismertetett eljárással állítottuk elő, azzal az eltéréssel, hogy 2-metil-fahéjsavnitrilt használtunk fel. A telítetlen intermediert egyetlen komponensként kaptuk meg: GC/EI-MS (Rt = 10,21 min); m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 57), 266 (86), 146 (98),
135 (88), 131 (100), 115 (43), 102 (26), 91 (43), 77 (18).
Ezt az intermediert a 11. példában leírtak szerint redukáltuk, majd hidrokloridsóvá alakítottuk át. A cím szerinti vegyületet szabad bázis formájában, egyetlen komponensként kaptuk meg: GC/EI-MS (Rt = 9,18 min); m/z (relatív intenzitás) 283 (M3, 19), 268 (100), 164 (11), 148 (8), 135 (76), 121 (16), 105 (45), 91 (23), 77 (21) .
13. példa
A 12Z kódszámú vegyület [N-3-(2-klór-fenil)-1-propil-(R) -1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise
A cím szerinti vegyületet a 11. példában leírt módon állítottuk elő, de 10 mmól mennyiségben 2-klór-hidrofahéjsavnitrilt és (R)-(+)-1-(1-naftil)-etil-amint alkalmaztunk. A • · ·· · · · · ···· · • · · · · • · · · · • · · ····· · *···· · · ··
- 88 reakcióelegyet szilikagélen gradienselúció alkalmazásával kromatografáltuk. Az eluáláshoz olyan metanol/diklór-metán elegyet használtunk fel, amelyben a metanol mennyiségét az 5 %-os koncentráció eléréséig folyamatosan növeltük. így az 5 % metanolt tartalmazó diklór-metán felhasználásával végzett vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel a terméket egyetlen komponens formájában kaptuk meg, amelyből 1 M dietil-éteres sósavoldattal hidrokloridsót állítottunk elő.
14. példa
A 14U kódszámú [ (R)-N-[l-(4-metoxi-fenil)-etil]-(R)-1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise
1,1 g (6,2 mmol) (R)-(+)-1-(1-naftil)-etil-aminból, 0,93 g (6,2 mmol) 4’-metoxi-acetofenonból, 2,2 g (7,7 mmol) titán (IV)-izopropoxidból és 1 ml abszolút etanolból álló elegyet 3 órán át 60 °C-on tartottunk. Ezután beadagoltunk 0,39 g (6,2 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-t (NaCNBH3) , és az így kapott reakcióelegyet 18 órán át a környezet hőmérsékletén kevertük. A reakcióelegyhez ezután 200 ml dietil-étert és 2 ml vizet adtunk, majd a keletkezett csapadékot centrifugálással elkülönítettük. A felülúszót vákuumban bepároltuk, és a bepárlási maradékként kapott nyersterméket szilikagélen kromatografáltuk (25 mm x 25 cm-es oszlop; eluálás:
%-os metanolt tartalmazó triklór-metán eleggyel). Ennek az anyagnak egy részét nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel tisztítottuk [Selectosil, 5 μΜ szilikagél; 25 cm x 10,0 mm-es oszlop [Phenomenex, Torrance, CA (USA)], 4 ml/min térfogatsebesség; UV-detektálás: 275 nm-en; eluálás: 12 % etil-acetátot és 88 % hexánt tartalmazó eleggyel; eluálási • · ········· · · • · · · · · • · ······ • · · ····· idő: 12,0 min]. A nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel tisztított diasztereomert ezután hexánelegyben feloldottuk, majd az oldatból dietil-éteres sósavoldattal fehér színű szilárd anyag formájában 20 mg cím szerinti vegyületet csaptunk ki, amelynek az olvadáspontja - bomlás közben mérve - 209-210 °C.
15. példa
A 17M kódszámú vegyület [N-(3-klór-4-metoxi-benzil)-(R)-1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise
6,6 g (39 mmol) (R)-(+)-1-(1-naftil)-etil-aminból, 6,6 g (39 mmol) 3’-klór-4’-metoxi-benzaldehidből, 13,8 g (18,8 mmol) titán(IV)-izopropoxidból és 30 ml abszolút etanolból álló elegyet 30 percen át 80 °C-on tartottunk, majd a környezet hőmérsékletén 3 órán át kevertettünk. Az elegyhez ezt követően hozzáadtunk 2,45 g (39 mmol) nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-t. A reakcióelegyet 18 órán át a környezet hőmérsékletén kevertük. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtunk 100 ml dietil-étert és 2 ml vizet, majd a keletkezett csapadékot centrifugálással elkülönítettük. A felülúszót vákuumban bepároltuk, és a bepárlási maradékként kapott nyersterméket szilikagélen kromatográfáltuk (50 mm x 30 cm-es oszlop; eluálás: diklór-metánnal). A kromatografált anyagot ezután 50 ml hexánban feloldottuk, NORIT®-tal derítettük, szűrtük (0,2 μΜ), majd dietil-éteres sósavoldat hozzáadásával kicsaptuk a cím szerinti terméket. így 10,2 g mennyiségben, 56 %-os hozammal fehér színű szilárd anyagot kaptunk, amely 241-242 °C-on bomlás közben olvad.
- 90 16. példa
A 17P kódszámú vegyület [(R) -N-[l-(4-metoxi-3-metil-fenil)-etil)-(R)-1-(1-naftil)-etil-amin-hidroklorid] szintézise
A 17P kódszámú elővegyület (4-metoxi-3-metil-acetofenon) előállítása
5,0 g (33,3 mmol) 4'-hidroxi-3'-metil-acetofenonból, 5,7 g (40,0 mmol) jód-metánból, 23,0 g (167 mmol) granulált vízmentes kálium-karbonátból és 250 ml acetonból álló elegyet 3 órán keresztül visszafolyatás közben forraltunk. A reakcióelegyet ezután a környezet hőmérsékletére hűtöttük, a szervetlen sók eltávolítása céljából szűrtük és vákuumban bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott nyersterméket 100 ml dietil-éterben feloldottuk és 2 x 20 ml vízzel mostuk. A szerves réteget nátrium-szulfáttal szárítottuk, majd bepároltuk. Ilyen módon 4,5 g mennyiségben, 82,4 %-os hozammal egy ketont kaptunk, amelyet minden további tisztítás nélkül használtunk fel a szintézis következő lépésében.
A 17P kódszámú vegyület előállítása
4,24 g (24,8 mmol) (R)-( + )-1-(1-naftil)-etil-aminból, 4,06 g (24,8 mmol) 4'-metoxi-3’-metil-acetofenonból, 8,8 g (30,9 mmol) titán(IV)-izopropoxidból és 1 ml abszolút etanolból álló elegyet 2 órán keresztül 100 °C-on tartottunk. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtunk 45 ml izopropanolt, majd az így kapott elegyet jeges fürdőben 10 ’C-ra hűtöttük. Ezt követően 15 perc alatt részletekben beadagoltunk 10,5 g (49,5 mmol) nátrium-[triacetoxi-hidro-borát] (1-)-t [NaHB (O2CCH3) 3]. A reakcióelegyet ezt követően 18 órán át 70 °C-on tartottuk, ···* «*
- 91 majd a környezet hőmérsékletére hűtöttük és 400 ml dietil-éterbe öntöttük. A keletkezett szuszpenziót centrifugáltuk, a felülúszót összegyűjtöttük, pelletizáltuk és 400 ml dietil-éterrel mostuk. A szerves mosófolyadékokat összegyűjtöttük és vákuumban bepároltuk. A bepárlási maradékot 400 ml dietil-éterben feloldottuk, és először 4 x 50 ml 1 N nátrium-hidroxid-oldattal, majd 2 x 50 ml vízzel mostuk. A szerves réteget nátrium-szulfáttal szárítottuk, szűrtük és vákuumban bepároltuk. A nedves bepárlási maradékhoz abszolút etanolt adtunk, és az így kapott elegyet forgó bepárlóberendezésben óvatosan szárazra pároltuk. Az így keletkezett olajszerű elegyet ezután szilikagélen kromatografáituk (50 mm x 30 cm-es oszlop, eluálás: 1 % metanolt és 1 % IPA-t tartalmazó triklór-metánnal) . így 4,8 g olaj szerű anyagot kaptunk.
Az előállítani kívánt diasztereomert nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel tovább tisztítottuk [SUPELCOSIL® PLC-Si, 18 μΜ szilikagél; 25 cm x 21,2 mm-es oszlop (Supelco, Inc., Bellefonte, PA, USA); 7 ml/min térfogatsebesség, UV detektálás: 275 nm-en; eluálás: 20 % etil-acetátot és 80 % hexánt tartalmazó eleggyel; eluálási idő: 9,5 - 11,0 min]. A 100 mg/ml koncentrációjú, eluálószeres oldatból kipipettázott 800 μΐ-es mennyiségek befecskendezése után 65 mg mennyiségben kaptuk meg a kívánt izomert. Többszöri HPLC-injektálással 1,0 g mennyiségben kaptuk meg a tisztított anyagot. A nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel tisztított anyagot 50 ml hexánban feloldottuk, és a hidrokloridsót dietil-éteres sósavoldattal kicsaptuk. A sót zsugorított üvegszűrővel kiszűrtük és hexánnal mostuk. így 1,0 g fehér színű szilárd • · »«·*··♦··
- 92 anyagot kaptunk, amelynek az olvadáspontja 204-205 °C.
17. példa
A 17X kódszámú vegyület [ (R,R)-N-(l-etil-4’-metoxi-3'-klór-fenil)-1-(1-naftil-etil)-amin] szintézise
3-Klór-4-metoxi-benzaldehid előállítása g (160 mmol) 3-klór-4-hidroxi-benzaldehidből, 27,25 g (192 mmol) jód-metánból, 110,6 g (800 mmol) granulált vízmentes kálium-karbonátból és 300 ml acetonból álló elegyet 3 órán át visszafolyatás mellett forraltunk. A reakcióelegyet ezután a környezet hőmérsékletére hűtottük. A reakcióelegyhez 500 ml dietil-étert adtunk, majd az így kapott elegyet a szervetlen szilárd anyagok eltávolítása céljából szűrőpapíron átszűrtük. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároltuk, a bepárlási maradékot 800 ml dietil-éterben feloldottuk és 3 x 100 ml mennyiségű, 0, 1 N nátrium-hidroxid-oldattal mostuk. A szerves réteget nátrium-szulfáttal szárítottuk és vákuumban bepároltuk. Bepárlási maradékként 24 g végterméket kaptunk (92 %-os hozam). A nyersterméket szilikagélen végzett kromatografálással tovább tisztítottuk (50 ml x 30 cm-es oszlop; eluálás: hexán és etil-acetát 5:1 arányú elegyével). Ilyen módon 56 %-os hozammal fehér színű szilárd anyag formájában 15,02 g anyagot kaptunk: TLC (hexán és etil-acetát 5:1 arányú elegye) Rf = 0,24; GC (Rt = 4,75 min); MS (El) m/z 170 (Μ’) , 172 (M+2) .
1-Metil-(3’-klór-4'-metoxi-benzil)-alkohol előállítása g (76,5 mmol) 3-klór-4-metoxi-benzaldehidből, 52 g (153 mmol) metil-magnézium-kloridból és 300 ml tetrahidrofu*·· <t ··«« «
- 93 ránból álló elegyet 3 órán át visszafolyatás mellett forraltunk. A reakcióelegyet ezután a környezet hőmérsékletére hűtöttük, majd cseppenként beadagoltunk 6 ml telített ammónium-klorid-oldatot, ezt követően pedig 500 ml dietil-étert. Az így kapott elegyet a szervetlen szilárd anyagok eltávolítása céljából szűrőpapíron átszűrtük. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároltuk, és a bepárlási maradékként kapott szilárd anyagot 300 ml dietil-éterben feloldottuk. Az oldatot 4 x 25 ml vízzel mostuk. A szerves réteget nátrium-szulfáttal szárítottuk és csökkentett nyomáson bepároltuk. így 11,3 g mennyiségű nyersterméket kaptunk (80 %-os hozam). A nyersterméket szilikagélen végzett kromatografálással tovább tisztítottuk (50 mm x 30 cm-es oszlop; eluálás: diklór-metánnal) . így 63 %-os hozammal 11,3 g olajszerű anyagot kaptunk: TLC (CH2C12) Rf = 0,25; GC Rt = 5,30 min; MS (El) m/z 186 (M+) , 188 (M+2).
3'-Klór-4’-metoxi-acetofenon
7,6 g (41 mmol) 1-metil-(3’-klór-4'-metoxi-benzil)-alkoholból, 13,16 g (61,5 mmol) piridinium-klór-kromátból (PCC) és 300 ml diklór-metánból álló elegyet 2 óra hosszat kevertünk a környezet hőmérsékletén. Ezután beadagoltunk 1000 ml dietil-étert és az így kapott elegyet szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáltuk (50 mm x 30 cm-es oszlop; eluálás: dietil-éterrel). Ilyen módon 97 %-os hozammal 7,3 g szilárd nyersterméket kaptunk, amelyet gélkromatográfiás módszerrel elemeztünk és megállapítottuk, hogy 99 %-os tisztaságú. Ezt az anyagot minden további tisztítás nélkül használtuk fel a következő szintézislépésben. TLC (dietil-éter) Rf = *t> ·♦»···*·* »* • · · · · * · ··«··· * t · *·«· « * «···· · · ··
1,0; GC Rt = 5,3 min; MS (El) m/z 183 (M+) , 184 (M+2).
A 17X kódszámú vegyület előállítása
5,3 g (29 mmol) 3'-klór-4’-metoxi-acetofenonból, 4,98 g (29 mmol) (R)-(+)-1-(1-naftil)-etil-aminból, 10,2 g (36 mmol) titán(IV)-izopropoxidból és 20 ml izopropanolból álló elegyet 3 órán át 100 °C-on tartottunk. Ezt követően 10 perc alatt részletekben beadagoltunk 12,29 g (58 mmol) nátrium-[triacetoxi-hidro-borát] (1-)-t. A reakcióelegyet 30 percig visszafolyatás mellett forraltuk, majd a környezet hőmérsékletén 18 órán át kevertük. Az elegyet ezután 500 ml dietil-éterbe öntöttük, 2 ml vizet adtunk hozzá, majd a kapott szuszpenziót a titánsókból álló finom csapadék eltávolítása céljából centrifugáltuk. A felülúszót összegyűjtöttük és a pelletet 500 ml dietil-éterrel mostuk. A szerves rétegeket egyesítésük után nátrium-szulfáttal szárítottuk és vákuumban bepároltuk. Ilyen módon 70 %-os hozammal 6,81 g mennyiségű nyersterméket kaptunk.
A nyersterméket szilikagélen kromatografálva tovább tisztítottuk (50 mm x 30 cm-es oszlop; eluálás: 3 % metanolt és 97 % diklór-metánt tartalmazó eleggyel). Ilyen módon 2,01 g mennyiségű olajszerű anyagot kaptunk. A diasztereomert átkristályosítással tovább tisztítottuk. Az 1,98 g mennyiségű szabad bázist dietil-éteres sósavoldattal hidrokloridsóvá alakítottuk át. A hidrokloridsót 65 ml forró izopropanolban feloldottuk, majd a kapott oldatot szűrőpapíron átszűrtük. A szűrletet vákuumban bepároltuk, és a kapott szilárd anyagot 30 ml izopropanolban feloldottuk. Az oldatot a környezet hőmérsékletén 18 órán át állni hagytuk, majd a kristályos szi«· »»»· ·* · ·
- 95 lárd anyagot elkülönítettük, 20 ml hideg izopropanollal mostuk és megszárítottuk. Ilyen módon a szabad bázisból 40 %-os hozammal 0,87 g mennyiségű, a diasztereomeria szempontjából tiszta hidrokloridsót kaptunk: olvadáspont (bomlás közben
mérve) : 236- 237 °C ; TLC (MeOH-CH2Cl2 [99:1]) Rf = 0,25; GC Rt =
11,06 min; FTIR ( 'KBr-pellet, cm'1) 3433, 2950, 2931, 2853,
2803, 2659, 2608, 2497, 1604, 1595, 1504, 1461, 1444, 1268,
1260, 1067, 1021, 802, 781, 733; MS (El) m/z 339 (M+) , 341
(M+2).
18. példa
További szintézisek: a 22Z kódszámú vegyület [(S,R)-N-[4- (3-trifluor-metoxi-fenil) -2-butil]-l- (3-metoxi-fenil) -etil-amin] és a 23A kódszámú vegyület [ (R,R)-N-[4-(3-trifluor-metoxi-fenil) -2-butil]-l- (3-metoxi-fenil) -etil-amin] előállítása
100 ml dimetil-formamidban feloldottunk 2,173 g (54,325 mmol) 60 %-os olajos nátrium-hidridet, majd az így keletkezett oldathoz keverés közben cseppenként hozzáadtunk 12,47 g (55,65 mmol) trietil-foszfono-acetátot. A keletkezett elegyet 30 percen át kevertük a környezet hőmérsékletén. Ezt követően cseppenként beadagoltunk egy olyan oldatot, amely 50 ml dimetil-formamidban feloldva 10,0 g (52,6 mmol) m-(trifluor-metoxi)-benzaldehidet tartalmazott. A kapott oldatot 30 percig a környezet hőmérsékletén, majd 30 percig 100 °C-on kevertük. A reakciót víz beadagolásával befagyasztottuk. A reakcióelegyet 500 ml dietil-éter felhasználásával választótölcsérbe öntöttük át. Az éteres oldatot 4 x 500 ml telített ammónium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfáttal •k « » «ί * · · • » * 4 „ · « · ···· * *·*· ♦ · *
- 96 szárítottuk, szűrtük, majd bepároltuk. Ilyen módon olajszerű anyag formájában kaptuk meg a m-(trifluor-metoxi)-fahéjsav-etil-észtert: m/z (relatív intenzitás): 260 (M+, 19), 232 (16), 215 (100), 187 (21), 101 (28).
A kapott etil-észtert 100 ml etanolban katalitikus (10 tömeg%) mennyiségű palládium-hidroxid jelenlétében 4,14 x 105 Pa hidrogénnyomáson redukáltuk. A reakcióelegyet 2 órán át a környezet hőmérsékletén tartottuk, majd szűrtük és a szűrletet bepároltuk. így olajszerű anyag formájában kaptuk meg a m-(trifluor-metoxi)-hidrofahéjsav-etil-észtert: m/z (relatív intenzitás) 262 (M+, 16), 217 (7), 188 (100), 175 (28), 103 (31), 91 (18), 77 (23) .
A telített etil-észtert a környezet hőmérsékletén 16 órán át hidrolizáltuk etanol és 10 M nátrium-hidroxid-oldat 1:1 arányú elegyében. Ezt követően az elegyet megsavanyítottuk és dietil-éterrel extraháltuk. A dietil-éteres oldatot vízmentes magnézium-szulfáttal szárítottuk, majd bepároltuk. Ilyen módon szilárd anyag formájában kaptuk meg a m-(trifluor-metoxi)-hidrofahéjsavat: m/z (relatív intenzitás) 234 (M+,
46), 188 (100), 174 (65), 103 (27), 91 (12), 77 (17).
A kapott savat a környezet hőmérsékletén 4 órán át feleslegben alkalmazott tionil-kloridban kevertük. Ezt követően a tionil-klorid feleslegét csökkentett nyomáson 100 °C-on elpárologtattuk. így olajszerű anyag formájában kaptuk meg az m-(trifluor-metoxi)-hidrofahéjsav-kloridot. A terméket minden további tisztítás nélkül használtuk fel a következő szintézislépésben.
9,8 g (39 mmol) m-(trifluor-metoxi)-hidrofahéjsav-klorid »» ·.*· Η»· · · · · · <r. » · · • * · · ··*· · · ···
Ο · · tetrahidrofurános oldatát -78 °C-ra hűtöttük, majd cseppenként hozzáadtunk 13 ml 3 M tetrahidrofurános metil-magnézium-bromid-oldatot (39 mmol). A reakcióelegyet 4 órán át -78 °C-on, 8 órán át pedig a környezet hőmérsékletén kevertük, majd hígított sósavoldattal a reakciót befagyasztottuk. A reakcióelegyet dietil-éterrel extraháltuk. Az éteres fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítottuk, majd szűrtük és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olajszerű anyagot szilikagélen gradienseluálással kromatografáltuk. Az eluáláshoz hexán és aceton elegyét használtuk, amelyben a hexán koncentrációját 100 %-tól 0 %-ig folyamatosan változtattuk. így olajszerű anyag formájában kaptuk meg a 4-[3-(trifluor-metoxi )-feni l]-2-butanont: m/z (relatív intenzitás) 232 (M+,
68), 217 (7), 189 (59), 175 (31), 103 (28), 43 (100).
2,32 g (10 mmol) 4-[3-(trifluor-metoxi)-fenil]-2-butanont, 1,51 g (10 mmol) (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint és 3,55 g (12,5 mmol) titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertettünk. A reakcióelegyhez ezután 10 ml mennyiségű 1 M etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-t adtunk, majd az így keletkezett elegyet a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertettük. A reakcióelegyet 50 ml dietil-éterrel hígítottuk, majd 0,72 ml (40 mmol) vízzel kezeltük. Az oldatot gondosan összekevertük, majd centrifugáltuk, és az éteres réteget dekantálás után bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olajos, szilárd anyagot dietil-éterben szuszpendáltuk, 0,45 μΜ CR PTFE Acrodisc-en átszűrtük, majd bepároltuk. Ilyen módon 5 % metanolt és 95 % kloroformot tartalmazó elegy felhasználásával, ···· ···· ·
- 98 ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárással kaptuk meg a két diasztereomert: a 22Z kódszámú (S, R)-N-[4-[3- (trifluor-metoxi) -fenil]-2-butil]-l- (3-metoxi-fenil) -etil-amint [m/z (relatív intenzitás) 367 (M+, 3), 352 (20), 232 (4), 178 (47), 135 (100), 105 (14), 91 (10), 77 (11)] és a 23A kódszámú (R,R) -N-[4-[3- (trif luor-metoxi) -f enil]-2-butil]-l- (3-metoxi-fenil)-etil-amint; m/z (relatív intenzitás) 367 (M+,
3), 352 (19), 232 (7), 178 (43), 135 (100), 105 (19), 91 (10), 77 (11) .
A 22X és a 22Y kódszámú vegyületek előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű 4-[3- (trifluor-metoxi)-fenil]-2-butanont, 1 ekvivalens mennyiségű (R)-1-(1-naftil)-etil-amint és 1,25 ekvivalens mennyiségű titán ( IV) -izopropoxidot, és az intermedier imint etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) etanolos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eleggyel végzett ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (S, R)-N-[4-(3- (trifluor-metoxi) -fenil]-2-butil]-l- (1-naftil) -etil-amint, vagyis a 22X kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 387 (M+, 3), 372 (15), 198 (15), 176 (12), 155 (100), 128 (8), 115 (6), 109 (4), 103 (5), 77 (8)], valamint az (R, R) -N-[4-[3- (trifluor-metoxi) -fenil]-2-butil]-l- (1-naftil) -etil-amint, vagyis a 22Y kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 387 (M+, 2), 372 (12), 198 (16), 176 (11), 155 (100), 128 (8),
115 (6), 109 (4), 103 (5), 77 (8)].
···· ···· ·
- 99 A 4T kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű, o-klór-benzaldehidből előállított 4-(2-klór-fenil)-2-butanont, 1 ekvivalens mennyiségű (R)-1-(3-metoxif-enil)-etil-amint, valamint 1,25 ekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot, és az intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) alkoholos oldatában redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt és 95 % kloroformot tartalmazó elegy felhasználásával végrehajtott ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (R, R) -N-[4- (2-klór-fenil) -2-butil]-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 4T kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 317 (M+, 3), 302 (16), 178 (62), 178 (62), 135 (100), 125 (15), 105 (10), 91 (6), 77 (8) .
A 21Y kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű, m-(trifluor-metil)-benzaldehidből előállított 4-[3—(trifluor-metil) -f enil]-2-butanont, (R) -1- (3-metoxi-f enil) -etil-amint és 1,25 ekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot, és az intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) alkoholos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eleggyel végzett ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (R, R) -N-[4-[3- (trif luor-meti81) - fenil]-2-butil]-1- ( 3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 21Y kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 351 (M+, 2), 336 (18), 216 (4), 202 (3), 178 (45), 135 (100), 105 (13), 91 (9), 77 (8)] és az (S,R)-N—[4—[3— (trifluor-metil) -fenil]-2-butil]-l- (3-metoxi-fenil) • ·· · ···« ···· · ί **;
- 100 -etil-amint, vagyis a 21X kódszámú vegyületet.
A 25C és a 25D kódszámú vegyületek előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű 4—[3—
- (trifluor-metil) -fenil]-2-butanont, (R) -1- (1-naftil) -etil-amint és 1,25 ekvivalens titán(IV)-izopropoxidot, és az intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) alkoholos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eleggyel végzett ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (S, R) -N-[4-[3- (trifluor-metil) -fenil]-2-butil]-l- (1-naftil)-etil-amint, vagyis a 25C kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 371 (M+, 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 109 (3)Ö, 77 (2), 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 109 (3), 77 (2)] és az (R, R) -N-[4-[3- (trifluor-metil) -fenil]-2-butil]-l- (1-naftil) -etil-amint, vagyis a 25D kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 371 (M+, 3), 356 (16), 198 (15), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 109 (3), 77 (2)].
A 21D kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű 4-fenil-2-butanont (Aldrich Chemical Co.), (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint és 1,25 ekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot, és az intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) etanolos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eleggyel végzett ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (R, R)-N-(4-fenil-2- 101 -butil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 21D kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 4) , 263 (13) , 178 (45), 135 (100), 105 (15), 91 (43), 77 (11)] és az (S,R)-N-(4-fenil-2-butil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 21E kódszámú vegyületet.
A 21F kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 ekvivalens mennyiségű 4-f enil-2-butanont (Aldrich Chemical Co. ) , 1' ekvivalens menynyiségű (R)-1-(1-naftil)-etil-amint és 1,25 ekvivalens menynyiségű titán(IV)-izoproxidot, és az intermedier imint nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-) alkoholos oldatával redukáltuk. A feldolgozás és az 5 % metanolt, valamint 95 % kloroformot tartalmazó eleggyel végzett ismétléses preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárás után megkaptuk az (R,R)-N-(4-fenil-2-butil)-1-(1-naftil)-etil-amint, vagyis a 21F kódszámú vegyületet; m/z (relatív intenzitás) 303 (M+, 6) , 288 (14), 198 (22), 155 (100), 129 (8), 115 (5), 91 (19), 77 (4).
A 12Z kódszámú vegyület előállítása
100 ml diklór-metánban feloldottunk 1,66 g (10 mmol) 2-klór-hidrofahéjsavnitrilt (Aldrich Chemical Co.), majd az így kapott oldatot -78 °C-ra hűtöttük, és keverés közben cseppenként hozzáadtunk 1,42 g (10 mmol) diizobutil-alumínium-hidridet. A reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 1 órán át kevertük, majd -78 °C-ra hűtöttük, és hozzáadtunk 25 ml diklór-metánban feloldva 1,71 g (10 mmol) 1—(1-naftil)-etil-amint. A reakcióelegyet jeges fürdőre tettük és 2 órán át kevertük. Ezt követően a reakcióelegyet keverés • · · ·· · ···· · • · · · · • · · · • · · ·' • · · · « ·
- 102 közben közvetlenül beleöntöttük 50 ml 0,2 M etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-oldatba, amely 10 mmol mennyiségű nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-t tartalmazott. Az elegyet a környezet hőmérsékletén 30 percig kevertük, és a nátrium-[tetrahidro-borát] (1-) feleslegét 10 %-os sósavoldat hozzáadásával semlegesítettük. Az oldatot ezután 10 N nátrium-hidroxid-oldat beadagolásával meglúgosítottuk és 300 ml dietil-éterrel átmosva választótölcsérbe töltöttük. A vizes fázist eltávolítottuk, és a megmaradt szerves fázist 3 x 100 ml 1 N nátrium-hidroxid-oldattal mostuk. A szerves réteget vízmentes magnézium-szulfáttal szárítottuk és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olaj szerű anyagot gradiens eluálást alkalmazva szilikagélen kromatografáituk. Az eluáláshoz kloroformot használtunk, amelyben a metanol koncentrációját folyamatosan 10 %-ra növeltük. Ilyen módon 72 %-os hozammal 2,34 g mennyiségben kaptuk meg tiszta olaj formájában az (R) -N-[3- (2-klór-fenil) -propil]-l-(1-naftil) -etil-amint, vagyis a 12Z kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 323 (M+, 2), 308 (63), 288 (7), 196 (5), 184 (5), 155 (100), 125 (24), 115 (8), 103 (4), 91 (3), 77 (7).
A 12B kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 4-metil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imino-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-) szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R) -N-[3- (4-met i 1-f enil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-f enil) - etil···· ··♦* ·
- 103 -amint, vagyis a 12B kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 6), 266 (5), 176 (27), 146 (75), 135 (63), 131 (100), 115 (25), 105 (21), 91 (21), 77 (21).
A 12C kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 2-metil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és a keletkezett intermedier alumínium- imin-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R) -N-[3- (2-metil-fenil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-fenil) -etil-amint, vagyis a 12C kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 4), 266 (15), 176 (18), 146 (62), 135 (58), 131 (100), 115 (23), 105 (19), 91 (38), 77 (17).
A 12D kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 2,4,6-trimetil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imin-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-ftetrahidro-borát] (1-)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában megkaptuk az (R) -N-[3- (2,4, 6-trimetil-fenil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-
-fenil)-etil-amint, vagyis a 12D kódszámú vegyületet: m/z
(relatív intenzitás) 309 (M+, 8) , 294 (25) , 174 (82), 159
(100), 135 (52), 129 (29), 105 (21) , 91 (17), 77 (14) .
A 12E kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 4-izopropil-fahéjsavnitrilt diizobutil104
-alumínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imin komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-ftetrahidro-borát] (1-)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R) -N-[3- (4-izopropil-fenil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 12E kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 309 (M+, 9), 294 (7), 174 (98), 159 (22), 135 (80), 117 (100), 105 (35), 91 (37), 77 (19).
A 12F kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 2,4-dimetil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel reagáltattunk, és az intermedier alumínium-imin-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R) -N-[3- (2,4-dimetil-fenil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 12F kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 295 (M+, 8), 294 (15), 174 (29), 160 (75), 145 (100), 135 (68), 117 (21), 105 (30), 91 (26), 77 (19) ·
A 12G kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 3-metil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imin-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-) -szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tisz• · · ·e · ·**· • · · · « · * * · ·· ··—· : : ··;··..·
- 105 ta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R)— -N-[3- (3-metil-fenil) -prop-2-enil]-l- (3-metoxi-fenil) -etil-amint, vagyis a 12G kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 5), 266 (9), 176 (24), 146 (71), 135 (62),
131 (100), 115 (23), 105 (19), 91 (41), 77 (18).
A 25E kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és az intermedier alumínium-imin-komplexet (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-) -szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R)-N-(3-fenil-prop-2-enil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 25E kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 267 (M+, 3), 252 (14), 176 (17), 135 (62), 117 (100), 105 (28), (56) , 77 (33) .
A 25G kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon α-metil-fahéjsavnitrilt diizobutil-alumínium-hidriddel kezeltünk, és a keletkezett intermedier alumínium-imin-komplexet (R) -1- (3-metoxi-fenil)-etil-aminnal reagáltattuk. Az intermedier imint etanolos nátrium-[tetrahidro-borát] (1-)-szál kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az (R)-N-(2-metil-3-fenil-prop-2-enil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 25G kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 281 (M+, 5), 266 (18), 190 (12), 146 (78), 135 (82), 131 (100), 115 (21), 105 (21), 91 » ·*· · «· ·
- 106 (62), 77 (19).
A 6Χ kódszámú vegyület előállítása
150 ml dimetil-formamidban feloldottunk 1,8 g (75 mmol) nátrium-hidridet. A kapott oldathoz keverés közben 50 ml dimetil-formamidban feloldott 13,3 g (75 mmol) dietil-ciano-metil-foszfonátot adtunk. A reakcióelegyet 30 percig a környezet hőmérsékletén kevertük. Ezt követően a reakcióelegyhez 10,54 g (75 mmol) 3-klór-benzaldehidet adtunk, és az így keletkezett elegyet 1 órán át a környezet hőmérsékletén, 30 percig pedig 60 °C-on kevertük. A reakciót ezután 200 ml víz beadagolásával befagyasztottuk. A reakcióelegyet 300 ml dietil-éter felhasználásával választótölcsérbe töltöttük, és a kapott szerves fázist 5 x 300 ml vízzel, valamint nátrium-klorid-oldattal mostuk. A szerves fázist vízmentes kálium-karbonáttal szárítottuk és bepároltuk. Bepárlási maradékként szilárd anyag formájában 11,06 g 3-klór-fahéjsavnitrilt kaptunk. A szilárd anyagot 50 ml tetrahidrofuránban feloldottuk, diborán-felesleggel kezeltük, és a környezet hőmérsékletén 30 percig kevertük. A reakcióelegyet jég és 10 %-os sósavoldat elegyére öntöttük. A savas vizes fázist 2 x 200 ml dietil-éterrel mostuk. A vizes fázist 10 N nátrium-hidroxid-oldat beadagolásával meglúgosítottuk, majd 200 ml dietil-éterrel extraháltuk. A dietil-éteres extraktumot vízmentes kálium-karbonáttal szárítottuk, majd bepároltuk. Ilyen módon 0,6 g (3,54 mmol) olajszerű anyag formájában 3-(3-klór-fenil)-propil-amint kaptunk. 0,6 g 3- (3-klór-fenil)-propil-amint, 0,53 g (3,54 mmol) 3'-metoxi-acetofenont és 1,25 mólekvivalens (1,26 g, 4,43 mmol) titán(IV)-izopropoxidot tar• ·
- 107 talmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk, és az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos [nátrium-(ciano-trihidro-borát) ] (1-)-oldattal (5 mmol) kezeltük. A reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertük, majd 5 ml dietil-éterrel hígítottuk és 0,32 ml (17,7 mmol) vízzel kezeltük. Az oldatot gondos összekeverés után centrifugáltuk, és a dietil-éteres réteget bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott első szilárd anyagot dietil-éterben szuszpendáltuk és 0,45 μΜ CR PTFE Acrodisc-on átszűrtük. A dietil-éteres fázist mostuk és bepároltuk. A bepárlási maradékként kapott olaj szerű anyagot szilikagélen preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárással tisztítottuk. Eluálószerként 3 % metanolt és 97 % mennyiségű, 0,1 % izopropil-amin-tartalmú diklór-metánt használtunk. Ilyen módon kaptuk meg az N—[3—(3— -klór-fenil) -propil]-l-(3-metoxi-fenil) -etil-amint, vagyis a 6X kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 303 (M+, 3), 288 (40), 196 (3), 164 (8), 135 (100), 125 (46), 103 (26), 91 (29) , 77 (29) .
A 6V kódszámú vegyület előállítása mólekvivalens mennyiségű, 4-klór-benzaldenhidből már a leírtakhoz hasonló módon előállított 3-(4-klór-fenil)-propil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 3'-metoxi-acetofenont és
1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk, és az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-szál (5 mmol) kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után olajszerű anyag formájában kaptuk meg az N-[3-(4-klór-fenil)-propilj-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 6V »«*«
- 108 kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 303 (M+, 8),
288 (91), 196 (4), 164 (10), 135 (100), 125 (61), 103 (21), (21), 77 (18) .
A 20A kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon, a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk 1 mólekvivalens mennyiségű 1-(1-metoxi-feni1)-eti1-aminból, 1 mólekvivalens mennyiségű 4-(t-butil)-acetofenonból és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidból álló elegyet, majd az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal (5 ml) kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálés után olajszerű anyag formájában kaptuk meg az (R)-N-[l-[4-(terc-butil)-fenil]-etil]-l- (1-naftil)-etil-amint, vagyis a 20A kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 331 (M+, 12), 316 (29),
161 (70), 155 (100), 131 (14), 127 (13),115 (10), 105 (6), 91 (10), 77 (7) .
A 25H és a 25G kódszámú vegyületek előállítása
Hasonló módon, a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertettünk egy olyan elegyet, amely 1 mólekvivalens mennyiségű (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű transz-4-fenil-3-butén-2-ont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot tartalmazott, majd az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-triizo-borát] (1-) -oldattal (5 mmol) kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az (R,R)-N-(2-metil-4-fenil-but-3-enil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 25H kódszámú vegyületet [m/z (relatív inten109 zitás) 283 (M+, 4), 268 (13), 178 (40), 135 (100), 105 (15), 91 (47), 77 (13)], valamint az (S, R)-N-(2-metil-4-fenil-but-3-enil)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 251 kódszámú vegyületet [m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 4), 268 (13), 178 (40), 135 (100), 105 (15), 91 (47), 77 (13)].
A 16L és a 16M kódszámú vegyületek előállítása
Hasonló módon kevertünk 4 órán át szobahőmérsékleten 1 mólekvivalens mennyiségű (R)-1-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 3-metoxi-acetofenont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(V)-izopropoxidot tartalmazó elegyet, majd az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-triizo-borát] (1-)-oldattal (5 mmol) kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után olaj szerű anyag formájában
kaptuk meg az (R,R ) -N-[l- (4-metoxi-fenil) -etil]-l- (3-metoxi-
-fenil)-etil-amint, vagyis a 16L kódszámú vegyületet [m/z
(relatív intenzitás) 284 (M-l , 1) , 270 (85), 150 (83), 135
(100), 120 (12), 105 (28), 9 (25) , 77 (23)] és - ugyancsak
olajszerű anyag formájában - az (S, R)-N-[l-(4-metoxi-fenil) -etil]-l-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 16M kódszámú vegyületet . [m/z (relatív intenzitás) 284 (M-l, 1), 270 (53), 150 (98), 135 (100), 120 (11), 105 (33), 91 (25), 77 (23)].
Az 5B/5C kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon használtunk fel 4-klór-acetofenont 3-metil-3-(4-klór-fenil)-fahéjsavnitril előállítására. A nitrilt palládium-hidroxid és ecetsav jelenlétében 4,14 x 10° Pa hidrogénnyomáson 2 órán át katalitikusán redukálva 3-metil-3-(4-klór-fenil)-propil-amint állítottunk elő. 1 mólekvivalens
110 mennyiségű amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 3'-metoxi-acetofenont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk, és az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal (5 mmol) kezeltünk. A feldolgozás és a kromatografálás után olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az N-[3-metil-3-(4-klór-fenil)-propil]-l-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis az 5B/5C kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 317 (M+, 12), 302 (74), 210 (2), 182 (4), 164 (12), 135 (100), 121 (25), 103 (40), 91 (19), 77 (28) .
A 4Z/5A kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 3-klór-acetofenont használtunk fel 3-metil-3-(3-klór-fenil)-fahéjsavnitril előállítására. A nitrilt palládium-hidroxid és ecetsav jelenlétében 4,14 x 105 Pa hidrogénnyomáson 2 órán át katalitikusán redukálva 3-metil-3-(3-klór-fenil)-propil-amint állítottunk elő. 1 mólekvivalens mennyiségű amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 3'-metoxi-acetofenont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk, és az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal (5 mmol) kezeltünk. A feldolgozás és a kromatografálás után olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az N-[3-metil-3-(3-klór-fenil)-propil]-!-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis az 4Z/5A kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 17), 268 (71), 164 (13), 135 (100), 121 (21), 105 (27), 91 (26), 77 (14).
- 111 A 4Y kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 2-klór-acetofenont használtunk fel 3-metil-3-(2-klór-fenil)-fahéjsavnitril előállítására. A nitrilt palládium-hidroxid és ecetsav jelenlétében 4,14 χ 105 Pa hidrogénnyomáson 2 órán át katalitikusán redukálva 3-metil-3-(2-klór-fenil)-propil-amint állítottunk elő. 1 mólekvivalens mennyiségű amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 3'-metoxi-acetofenont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk, és az intermedier imint 5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal (5 mmol) kezeltük. A feldolgozás és a kromatografálás után olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az N-[3-metil-3-(2-klór-fenil)-propil]-!-
-(3-metoxi -fenil)-etil-amint, vagyis a 4Y kódszámú vegyüle-
tét: m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 17 ) , 268 (71), 164
(13), 135 (100), 121 (21), 105 (27) , 91 (26) , 77 (14 ) -
A 6T kódszámú vegyület előállítása
30,3 g (100 mmol) NPS R-568 diklór-metános oldatához -78 °C-on cseppenként hozzáadtunk 50 g (200 mmol) bór-tribromidot. A reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 1 órán át kevertük, majd jégre öntöttük. A vizes fázisból a hidrogén-bromidot kloroformmal extraháltuk. A kloroformos oldatot
4x100 ml 50 %-os sósavoldattal mostuk. A kloroformos fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítottuk, majd bepároltuk. Ilyen módon szilárd anyag formájában kaptuk meg az (R)-N-[3- (2-klór-fenil) -propil]-!- (3-hidroxi-fenil) -etil-amin-hidrokloridot. 0,48 g (20 mmol) nátrium-hidrid dimetil-formamidos oldatát 3,25 g (10 mmol) (R)-N-[3-(2-klór-fenil)-propil]-!-(3• · · ·
- 112 -hidroxi-fenil)-etil-amin-hidrokloriddal kezeltük, és a reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 1 órán át kevertük. A reakcióelegyhez ezután hozzáadtunk 1,71 g (11 mmol) jód-etánt, és az így kapott elegyet a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertük. A feldolgozás és a kromatografálás után (szilikagél, eluálószer: 3 % metanolt és 97 % kloroformot tartalmazó elegy) olaj szerű anyag formájában kaptuk meg az (R) -N-[3- (2-klór-fenil) -propil]-l- (3-etoxi-fenil) -etil-amint, vagyis a 6T kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 216 (M+, 1), 302 (100), 282 (11), 196 (5), 178 (7), 149 (74), 121 (34), 103 (25), 91 (28), 77 (29).
A 6R kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon használtunk fel NPS R-467-et (R)-N-(3-fenil-propil)-1-(3-etoxi-fenil)-etil-amin, vagyis a 6R kódszámú vegyület előállítására, amelyet olajszerű anyag formájában kaptunk meg: m/z (relatív intenzitás) 283 (M+, 100), 268 (74), 178 (11), 162 (8), 149 (100), 121 (30), 103 (16), 91 (86) , 77 (29) .
A 3U kódszámú vegyület előállítása
2,11 g (1 mólekvivalens, 10 mmol) 3,3-difenil-propil-amint, 1,70 g (1 mólekvivalens, 10 mmol) 1'-acetonaftont és 3,55 g (1,25 mólekvivalens, 12,5 mmol) titán(IV)-izopropoxidot tartalmazó elegyet a környezet hőmérsékletén 4 órán át kevertünk. A reakcióelegyet ezután 12,5 ml 1 M etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal (12,5 mmol) kezeltük, majd a keletkezett elegyet a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertük. A reakcióelegyet 5 ml dietil-éterrel hígítottuk, ···· ···· · • · • · ······ • · · ····· · ···· · · · ··
- 113 és hozzáadtunk 0,72 ml (40 mmol) vizet. Az elegyet gondos összekeverés után centrifugáltuk, és az éteres réteget dekantáltuk. Az éteres réteg bepárlásával tejszerű olajat kaptunk. Az olajat dietil-éterben szuszpendáltuk és 0,45 μΜ CR PTFE Acrodisc-on átszűrtük. A dietil-éteres szűrletet bepárolva tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az N-(3,3-difenil-propil)-1-(1-naftil)-etil-amint, vagyis a 3U kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 355 (M+, 17), 350 (19), 181 (23), 155 (100), 141 (25), 115 (11), 91 (13) , 77 (6) .
A 6F kódszámú vegyület előállítása
Az előbb leírtakhoz hasonló módon kevertünk 1,51 g (1 mólekvivalens, 10 mmol) 1- (3-metoxi-fenil)-etil-aminból, 1,70 g (1 mólekvivalens, 10 mmol) 2'-acetonaftonból és 3,55 g (1,25 mólekvivalens, 12,5 mmol) titán(IV)-izopropoxidból álló elegyet. A feldolgozás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az N-[l-(2-naftil)-etil]-l-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 6F kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 305 (M+, 1), 290 (35), 170 (49), 155 (100), 135 (55), 115 (8), 105 (10), 91 (9), 77 (10).
A 4G kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon összekevertünk 1 mólekvivalens mennyiségű (R)-1-fenil-etil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 1'-acetonaftont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot, és a keletkezett intermedier imint etanolos nátrium[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal redukáltuk. A feldolgozás és a kromatografálás után tiszta, színtelen, olaj• · ·
- 114 szerű anyag formájában kaptuk meg az N-[l-(1-naftil)-etil]-l-fenil-etil-amint, vagyis a 4G kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 275 (M+, 16), 260 (79), 155 (100), 127 (27), 105 (70), 77 (32).
A 4H kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 1 mólekvivalens mennyiségű (R)-l-fenil-etil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 2'-acetonaftont és
1,25 mólekvivalens mennyiségű titán(IV)-izopropoxidot összekevertünk, és a keletkezett intermedier imint etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal redukáltuk. A feldolgozás és a kromatográfálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az N-[l- (1-naftil) -etil]-l-fenil-etil-amint, vagyis a 4H kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 275 (M+, 1), 260 (61), 155 (100), 120 (36), 105 (55), 77 (15) .
A 6E kódszámú vegyület előállítása
Hasonló módon 1 mólekvivalens mennyiségű l-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, 1 mólekvivalens mennyiségű 1’-acetonaftont és 1,25 mólekvivalens mennyiségű titán (IV)-izopropoxidot összekevertünk, és a keletkezett intermedier imint etanolos nátrium-[ciano-trihidro-borát] (1-)-oldattal redukáltuk. A feldolgozás és a kromatográfálás után tiszta, színtelen, olajszerű anyag formájában kaptuk meg az N-[l-(l-naftil)-etil]-l-(3-metoxi-fenil)-etil-amint, vagyis a 6E kódszámú vegyületet: m/z (relatív intenzitás) 305 (M+, 10), 290 (30), 170 (43), 155 (100), 135 (69), 115 (9), 105 (14), 77 (18) .
(15), 91 • · ··** ··*· ·
- 115 19. példa
Gyógys zerkés z í tmények
A 3. táblázatban egy olyan gyógyszerkészítmény adatait közöljük, amellyel kalcimimetikum juttatható be beteg ember szervezetébe.
3. táblázat
A komponensek megnevezése A komponensek mennyisége, mg/kapszula 5000 kapszula elkészítéséhez tipikus esetben szükséges komponensmennyiség, g
NPS R-568 56, 0 280, 0
Előzselatinált ke- ményítő (NF) 134,0 670,0
Mikrokristályos cellulóz (NF) 34,0 170,0
Kolloid szilícium- -dioxid 1,0 5, 0
Összesen 225 1125
Az NPS (R)-568-hidroklorid-készítmények és adagolási formák további példái közé tartoznak a szokásos eljárásokkal előállított hosszantartó vagy elnyújtott hatású készítmények.
A készítmények adagolása is szokásos módszerek alkalmazásával történhet. Az egyik kísérletsorozat végrehajtása során például 10 - 400 mg orális dózisban alkalmazva az NPS (R)-568-hidroklorid a kezelt embereknél farmakológiai aktivitást mutatott. Az NPS (R)-568-hidroklorid orális alkalmazását követően az emberi vérplazmában megfigyeléseink szerint nagy volt a 17 kódszámú vegyület O-glükuronid-konjugátumának - az NPS (R)-568 fő anyagcseretermékének - a koncentrációja. A 17Q kódszámú vegyület glükuronid-konjugátuma tehát bizonyos kedvező hatást gyakorolhat.
Az NPS (R)-568-ra szokásos módszerekkel más megfelelő adagolási határértékeket is meg lehet határozni.
• · · ·
- 116 A bejelentésben közölt ismeretek alapján az adott területen jártas szakember a leírásban szereplő többi vegyületre vonatkozóan is meg tudja határozni a megfelelő adagolási határértékeket, készítményeket és adagolási formákat.
A leírás végén közölt igénypontok más megvalósítási formákat is meghatároznak. Arról van szó tehát, hogy bár a leírásban számos megvalósítási módot bemutattunk és ismertettünk, azok különbözőképpen módosíthatók anélkül, hogy az új változatok eltérnének a találmány szellemétől és meghaladnák a találmány terjedelmét.
» · ········· ··
117
Szekvencia lista (1) ÁLTALÁNOS INFORMÁCIÓK:
(i) BEJELENTŐ: NPS Pharmaceuticals, Inc.
(ii) A TALÁLMÁNY CÍME: KALCIUM RECEPTOR-AKTÍV VEGYÜLETEK (iii) A szekvenciák száma: 2 (iv) LEVELEZÉSI CÍM:
(A) CÍMZETT: Lyon & Lyon
(B) UTCA: First Interstate World Center, Suite 4700 633 West Fifth Street
(C) VÁROS: Los Angeles
(D) ÁLLAM: Kalifornia
(E) ORSZÁG: USA
(F) IRÁNYITÓSZÁM: 90017
(v) SZÁMÍTÓGÉPES LEOLVASÁS:
(A) ESZKÖZTÍPUS: 3,5 diszkett, 1,44 Mb-os tárolási kapacitás
(B) SZÁMÍTÓGÉP: IBM-kompatibilis személyi számítógép
(C) OPERÁCIÓS RENDSZER: PC-DOS/MS-DOS
(D) SZOFTVER: FastSeq
(Vi) A JELENLEGI BEJELENTÉSRE VONATKOZÓ ADATOK:
(A) A BEJELENTÉS SZÁMA:
(B) A BEJELENTÉS NAPJA:
(C) OSZTÁLYOZÁS:
(vii) KORÁBBI BEJELENTÉSEK ADATAI:
A korábbi bejelentések száma - az alábbiakban ismertetett bejelentést is beleértve - összesen: 2
(A) A BEJELENTÉS SZÁMA: US 08/353 784
(B) A BEJELENTÉS NAPJA: 1994. december 8.
(A) A BEJELENTÉS SZÁMA: PCT/US/94/12117
(B) A BEJELENTÉS NAPJA: 1994. október 21.
(viii) ÜGYVIVŐKRE VONATKOZÓ INFORMÁCIÓK:
(A) NÉV: Heber, Sheldon 0.
(B) REGISZTRÁCIÓS SZÁM: 38 179 (C) REFERENCIA/ÉRTÉK SZÁM: 215/304
118 (ix) TELEKOMMUNIKÁCIÓS INFORMÁCIÓK:
(A) TELEFON: (213) 489-1600 (B) TELEFAX: (213) 955 0440 (C) TELEX: 67-3510 (2) Az 1. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIÁRA VONATKOZÓ INFORMÁCIÓK:
(i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZÚSÁG: 5006 bázispár
(B) TÍPUS: nukleinsav
(C) S ZÁLÚSÁG: egyszálú
(D) TOPOLÓGIAI ADAT: lineáris
MOLEKULA TÍPUS: cDNS - mRNS
(ix) ISMERTETŐJEL:
(A) NÉV/KULCS: CDS
(B) HELYZET: 436..3699
(D) EGYÉB INFORMÁCIÓK:
(xi) AZ 1. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIA ISMERTETÉSE:
GCTGCTGTGG CCGGACCCGA AGGCGGGCGC CGGGAGCGCA 40
GCGAGCCAGA CGCGCCTCTC CAAGACCGTG ACCTTGGCAT 80
AGGGAGCGGG GCTGCGCGCA GTCCTGAGAT CAGACCAGAG 120
CTCATCCTCG TGGAGACCCA CGGCCGAGGG GCCGGAGCTG 160
CCTCTGTGCG AGGGAGCCCT GGCCGCGGCG CAGAAGGCAT 200
CACAGGAGGC CTCTGCATGA TGTGGCTTCC AAAGACTCAA 240
GGACCACCCA CATTACAAGT CTGGATTGAG GAAGGCAGAA 280
ATGGAGATTC AAACACCACG TCTTCTATTA TTTTATTAAT 320
CAATCTGTAG ACATGTGTCC CCACTGCAGG GAGTGAACTG 360
CTCCAAGGGA GAAACTTCTG GGAGCCTCCA AACTCCTAGC 400
TGTCTCATCC CTTGCCCTGG AGAGACGGCA GAACC 435
ATG GCA TTT TAT AGC TGC TGC TGG GTC CTC TTG GCA Met Alá Phe Tyr Ser Cys Cys Trp Val Leu Leu Alá
5 10
471
- 119 -
CTC ACC Leu Thr TGG Trp 15 CAC His ACC TCT GCC TAC GGG CCA Gly Pro GAC Asp CAG Gin 507
Thr Ser Alá Tyr 20
CGA GCC CAA AAG AAG GGG GAC ATT ATC CTT GGG GGG 543
Arg Alá Gin Lys Lys Gly Asp Ile Ile Leu Gly Gly
25 30 35
CTC TTT CCT ATT CAT TTT GGA GTA GCA GCT AAA GAT 579
Leu Phe Pro Ile His Phe Gly Val Alá Alá Lys Asp
40 45
CAA GAT CTC AAA TCA AGG CCG GAG TCT GTG GAA TGT 615
Gin Asp Leu Lys Ser Arg Pro Glu Ser Val Glu Cys
50 55 60
ATC AGG TAT AAT TTC CGT GGG TTT CGC TGG TTA CAG 651
Ile Arg Tyr Asn Phe Arg Gly Phe Arg Trp Leu Gin
65 70
GCT ATG ATA TTT GCC ATA GAG GAG ATA AAC AGC AGC 687
Alá Met Ile Phe Alá Ile Glu Glu Ile Asn Ser Ser
75 80
CCA GCC CTT CTT CCC AAC TTG ACG CTG GGA TAC AGG 723
Pro Alá Leu Leu Pro Asn Leu Thr Leu Gly Tyr Arg
85 90 95
ATA TTT GAC ACT TGC AAC ACC GTT TCT AAG GCC TTG 759
Ile Phe Asp Thr Cys Asn Thr Val Ser Lys Alá Leu
100 105
GAA GCC ACC CTG AGT TTT GTT GCT CAA AAC AAA ATT 795
Glu Alá Thr Leu Ser Phe Val Alá Gin Asn Lys Ile
110 115 120
GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC TGC AAC TGC TCA 831
Asp Ser Leu Asn Leu Asp Glu Phe Cys Asn Cys Ser
125 130
GAG CAC ATT ccc TCT ACG ATT GCT GTG GTG GGA GCA 867
Glu His Ile Pro Ser Thr Ile Alá Val Val Gly Alá
135 140
ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA GTG GCA AAT CTG 903
Thr Gly Ser Gly Val Ser Thr Alá Val Alá Asn Leu
145 150 155
CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG GTC AGT TAT GCC 939
Leu Gly Leu Phe Tyr Ile Pro Gin Val Ser Tyr Alá
160 165
TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC AAG AAT CAA TTC 975
Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ser Asn Lys Asn Gin Phe
170 175 180
··«· « * β · • · · · · 9 • · · · » »♦ • · « ·»·· · ·»«·· · · ·
- 120 -
AAG Lys .TCT TTC CTC CGA ACC ATC Ile CCC Pro AAT Asn GAT GAG CAC 1011
Ser Phe Leu Arg 185 Thr Asp 190 Glu His
CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC ATC GAG TAT TTC 1047
Gin Alá Thr 195 Alá Met Alá Asp Ile 200 Ile Glu Tyr Phe
CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT GCA GCT GAT GAC 1083
Arg 205 Trp Asn Trp Val Gly 210 Thr Ile Alá Alá Asp 215 Asp
GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG AAA TTC CGA GAG 1119
Asp Tyr Gly Arg 220 Pro Gly Ile Glu Lys 225 Phe Arg Glu
GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC ATC GAC TTC AGT 1155
Glu Alá 230 Glu Glu Arg Asp Ile 235 Cys Ile Asp Phe Ser 240
GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT GAG GAA GAG ATC 1191
Glu Leu Ile Ser Gin 245 Tyr Ser Asp Glu Glu 250 Glu Ile
CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA AAT TCC ACG GCC 1227
Gin His Val 255 Val Glu Val Ile Gin 260 Asn Ser Thr Alá
AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT GGC CCA GAT CTT 1263
Lys 265 Val Ile Val Val Phe 270 Ser Ser Gly Pro Asp 275 Leu
GAG CCC CTC ATC AAG GAG ATT GTC CGG CGC AAT ATC 1299
Glu Pro Leu Ile 280 Lys Glu Ile Val Arg 285 Arg Asn Ile
ACG GGC AAG ATC TGG CTG GCC AGC GAG GCC TGG GCC 1335
Thr Gly 290 Lys Ile Trp Leu Alá 295 Ser Glu Alá Trp Alá 300
AGC TCC TCC CTG ATC GCC ATG CCT CAG TAC TTC CAC 1371
Ser Ser Ser Leu Ile 305 Alá Met Pro Gin Tyr 310 Phe His
GTG GTT GGC GGC ACC ATT GGA TTC GCT CTG AAG GCT 1407
Val Val Gly 315 Gly Thr Ile Gly Phe 320 Alá Leu Lys Alá
GGG CAG ATC CCA GGC TTC CGG GAA TTC CTG AAG AAG 1443
Gly 325 Gin Ile Pro Gly Phe 330 Arg Glu Phe Leu Lys 335 Lys
GTC CAT CCC AGG AAG TCT GTC CAC AAT GGT TTT GCC 1479
Val His Pro Arg 340 Lys Ser Val His Asn 345 Gly Phe Alá
• « • · ·· ·« <
« · * « « » » · « ···· · • fΛ
- 121 -
AAG GAG TTT TGG GAA GAA ACA TTT AAC TGC CAC CTC 1515
Lys Glu 350 Phe Trp Glu Glu Thr 355 Phe Asn Cys His Leu 360
CAA GAA GGT GCA AAA GGA CCT TTA CCT GTG GAC ACC 1551
Gin Glu Gly Alá Lvs 3 65 Gly Pro Leu Pro Val 370 Asp Thr
TTT CTG AGA GGT CAC GAA GAA AGT GGC GAC AGG TTT 1587
Phe Leu Arg 375 Gly His Glu Glu Ser 380 Gly Asp Arg Phe
AGC AAC AGC TCG ACA GCC TTC CGA CCC CTC TGT ACA 1623
Ser 385 Asn Ser Ser Thr Alá 390 Phe Arg Pro Leu Cys 395 Thr
GGG GAT GAG AAC ATC AGC AGT GTC GAG ACC CCT TAC 1659
Gly Asp Glu Asn 400 Ile Ser Ser Val Glu 405 Thr Pro Tyr
ATA GAT TAC ACG CAT TTA CGG ATA TCC TAC AAT GTG 1695
Ile Asp 410 Tyr Thr His Leu Arg 415 Ile Ser Tyr Asn Val 420
TAC TTA GCA GTC TAC TCC ATT GCC CAC GCC TTG CAA 1731
Tyr Leu Alá Val Tyr 425 Ser Ile Alá His Alá 430 Leu Gin
GAT ATA TAT ACC TGC TTA CCT GGG AGA GGG CTC TTC 1767
Asp Ile Tyr 435 Thr Cys Leu Pro Gly 440 Arg Gly Leu Phe
ACC AAT GGC TCC TGT GCA GAC ATC AAG AAA GTT GAG· 1803
Thr 445 Asn Gly Ser Cys Alá 450 Asp Ile Lys Lys Val 455 Glu
GCG TGG CAG GTC CTG AAG CAC CTA CGG CAT CTA AAC 1839
Alá Trp Gin Val 460 Leu Lys His Leu Arg 465 His Leu Asn
TTT ACA AAC AAT ATG GGG GAG CAG GTG ACC TTT GAT 1875
Phe Thr 470 Asn Asn Met Gly Glu 475 Gin Val Thr Phe Asp 480
GAG TGT GGT GAC CTG GTG GGG AAC TAT TCC ATC ATC 1911
Glu Cys Gly Asp Leu 485 Val Gly Asn Tyr Ser 490 Ile Ile
AAC TGG CAC CTC TCC CCA GAG GAT GGC TCC ATC GTG 1947
Asn Trp His 495 Leu Ser Pro Glu Asp 500 Gly Ser Ile Val
TTT AAG GAA GTC GGG TAT. TAC AAC GTC TAT GCC AAG 1983
Phe 505 Lys Glu Val Gly Tyr 510 Tyr Asn Val Tyr Alá 515 Lys
- 122 -
AAG Lys GGA GAA AGA CTC TTC ATC AAC GAG GAG AAA ATC 2019
Gly Glu Arg 520 Leu Phe Ile Asn Glu 525 Glu Lys Ile
CTG TGG AGT GGG TTC TCC AGG GAG CCA CTC ACC TTT 2055
Leu Trp 530 Ser Gly Phe Ser Arg 535 Glu Pro Leu Thr Phe 540
GTG CTG TCT GTC CTC CAG GTG CCC TTC TCC AAC TGC 2091
Val Leu Ser Val Leu 545 Gin Val Pro Phe Ser 550 Asn Cys
AGC CGA GAC TGC CTG GCA GGG ACC AGG AAA GGG ATC 2127
Ser Arg Asp 555 Cys Leu Alá Gly Thr 560 Arg Lys Gly Ile
ATT GAG GGG GAG CCC ACC TGC TGC TTT GAG TGT GTG 2163
Ile 5S5 Glu Gly Glu Pro Thr 570 Cys Cys Phe Glu Cys 575 Val
GAG TGT CCT GAT GGG GAG TAT AGT GAT GAG ACA GAT 2199
Glu Cys Pro Asn 58Ő. Gly Glu Tyr Ser Asp 535 Glu Thr Asp
GCC AGT GCC TGT AAC AAG TGC CCA GAT GAC TTC TGG 2235
Alá Ser 590 Alá Cys Asn Lys Cys 595 Pro Asp Asp Phe Trp 600
TCC AAT GAG AAC CAC ACC TCC TGC ATT GCC AAG GAG 2271
Ser Asn Glu Asn His 605 Thr Ser Cys Ile Alá 610 Lys Glu
ATC GAG TTT CTG TCG TGG ACG GAG CCC TTT GGG ATC 2307
Ile Glu Phe 615 Leu Ser Trp Thr Glu 620 Pro Phe Gly Ile
GCA CTC ACC CTC TTT GCC GTG CTG GGC ATT TTC CTG 2343
Alá 625 Leu Thr Leu Phe Alá 630 Val Leu Gly Ile Phe 635 Leu
ACA GCC TTT GTG CTG GGT GTG TTT ATC AAG TTC CGC 2379
Thr Alá Phe Val 640 Leu Gly Val Phe Ile 645 Lys Phe Arg
AAC ACA CCC ATT GTC AAG GCC ACC AAC CGA GAG CTC 2415
Asn Thr 650 Pro Ile Val Lys Alá 655 Thr Asn Arg Glu Leu 660
TCC TAC CTC CTC CTC TTC TCC CTG CTC TGC TGC TTC 2451
Ser Tyr Leu Leu Leu 665 Phe Ser Leu Leu Cys 670 Cys Phe
TCC AGC TCC CTG TTC TTC ATC GGG GAG CCC CAG GAC 2487
Ser Ser Ser 675 Leu Phe Phe Ile Gly 630 Glu Pro Gin Asp
• · • · ·
- 123 -
TGG ACG TGC CGC CTG CGC CAG CCG GCC TTT GGC ATC 2523
Trp 685 Thr Cys Arg Leu Arg 690 Gin Pro Alá Phe Gly 695 Ile
AGC TTC GTG CTC TGC ATC TCA TGC ATC CTG GTG AAA 2559
Ser Phe Val Leu 700 Cys Ile Ser Cys Ile 705 Leu Val Lys
ACC AAC CGT GTC CTC CTG GTG TTT GAG GCC AAG ATC 2595
Thr Asn 710 Arg Val Leu Leu Val 715 Phe Glu Alá Lys Ile 720
CCC ACC AGC TTC CAC CGC AAG TGG TGG GGG CTC AAC 2631
Pro Thr Ser Phe His 725 Arg Lys Trp Trp Gly 730 Leu Asn
CTG CAG TTC CTG CTG GTT TTC CTC TGC ACC TTC ATG 2667
Leu Gin Phe 735 Leu Leu Val Phe Leu 740 Cys Thr Phe Met
CAG ATT GTC ATC TGT GTG ATC TGG CTC TAC ACC GCG 2703
Gin 745 Ile Val Ile Cys Val 750 Ile Trp Leu Tyr Thr 755 Alá
CCC CCC TCA AGC TAC CGC AAC CAG GAG CTG GAG GAT 2739
Pro Pro Ser Ser 760 Tyr Arg Asn Gin Glu 765 Leu Glu Asp
GAG ATC ATC TTC ATC ACG TGC CAC GAG GGC TCC CTC 2775
Glu Ile 770 Ile Phe Ile Thr Cys 775 His Glu Gly Ser Leu 780
ATG GCC CTG GGC TTC CTG ATC GGC TAC ACC TGC CTG 2811
Met Alá Leu Gly Phe 785 Leu Ile Gly Tyr Thr 790 Cys Leu
CTG GCT GCC ATC TGC TTC TTC TTT GCC TTC AAG TCC 2847
Leu Alá Alá 795 Ile Cys Phe Phe Phe 800 Alá Phe Lys Ser
CGG AAG CTG CCG GAG AAC TTC AAT GAA GCC AAG TTC 2883
Arg 805 Lys Leu Pro Glu Asn 810 Phe Asn Glu Alá Lys 815 Phe
ATC ACC TTC AGC ATG CTC ATC TTC TTC ATC GTC TGG 2919
Ile Thr Phe Ser 820 Met Leu Ile Phe Phe 825 Ile Val Trp
ATC TCC TTC ATT CCA GCC TAT GCC AGC ACC TAT GGC 2955
Ile Ser 830 Phe Ile Pro Alá Tyr 835 Alá Ser Thr Tyr Gly 840
AAG TTT GTC TCT GCC GTA GAG GTG ATT GCC ATC CTG 2991
Lys Phe Val Ser Alá 845 Val Glu Val Ile Alá 850 Ile Leu
• ** • · · · · · ’ • · ·*···· • · · ·*··· ···· · · · ··
- 124 -
GCA GCC Alá Alá AGC Ser 855 TTT Phe GGC TTG CTG Leu GCG Alá 860 TGC Cys ATC Ile TTC Phe TTC Phe 3027
Gly Leu
AAC AAG ATC TAC ATC ATT CTC TTC AAG CCA TCC CGC 3063
Asn Lys Ile Tyr Ile Ile Leu Phe Lys Pro Ser Arg
865 870 875
AAC ACC ATC GAG GAG GTG CGT TGC AGC ACC GCA GCT 3099
Asn Thr Ile Glu Glu Val Arg Cys Ser Thr Alá Alá
880 835
CAC GCT TTC AAG GTG GCT GCC CGG GCC ACG CTG CGC 3135
His Alá Phe Lys Val Alá Alá Arg Alá Thr Leu Arg
890 895 900
CGC AGC AAC GTC TCC CGC AAG CGG TCC AGC AGC CTT 3171
Arg Ser Asn Val Ser Arg Lys Arg Ser Ser Ser Leu
905 910
GGA GGC TCC ACG GGA TCC ACC CCC TCC TCC TCC ATC 3207
Gly Gly Ser Thr Gly Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ile
915 920
AGC AGC AAG AGC AAC AGC GAA GAC CCA TTC CCA CGG 3243
Ser Ser Lys Ser Asn Ser Glu Asp Pro Phe Pro Arg
925 930 935
CCC GAG AGG CAG AAG CAG CAG CAG CCG CTG GCC CTA 3279
Pro Glu Arg Gin Lys Gin Gin Gin Pro Leu Alá Leu
940 945
ACC CAG CAA GAG CAG CAG CAG CAG CCC CTG ACC CTC- 3315
Thr Gin Gin Glu Gin Gin Gin Gin Pro Leu Thr Leu
950 955 960
CCA CAG CAG CAA CGA TCT CAG CAG CAG CCC AGA TGC 3351
Pro Gin Gin Gin Arg Ser Gin Gin Gin Pro Arg Cys
965 970
AAG CAG AAG GTC ATC TTT GGC AGC GGC ACG GTC ACC 3387
Lys Gin Lys Val Ile Phe Gly Ser Gly Thr Val Thr
975 980
TTC TCA CTG AGC TTT GAT GAG CCT CAG AAG AAC GCC 3423
Phe Ser Leu Ser Phe Asp Glu Pro Gin Lys Asn Alá
985 990 995
ATG GCC CAC AGG AAT TCT ACG CAC CAG AAC TCC CTG 3459
Met Alá His Arg Asn Ser Thr His Gin Asn Ser Leu
1000 1005
GAG GCC CAG AAA AGC AGC. GAT ACG CTG ACC CGA CAC 3495
Glu Alá Gin Lys Ser Ser Asp Thr Leu Thr Arg His
1010 1015 1020
• · • ·· · ·*·· « • · · · · • · ·· ···
- 125 CAG CCA TTA CTC CCG CTG CAG TGC GGG GAA ACG GAC 3531
Gin Pro Leu Leu Pro Leu Gin Cys Gly Glu Thr Asp
1025 1030
TTA GAT CTG ACC GTC CAG GAA ACA GGT CTG CAA GGA 35S7
Leu Asp Leu Thr Val Gin Glu Thr Gly Leu Gin Gly
1035 ' 1040
CCT GTG GGT GGA GAC CAG CGG CCA GAG GTG GAG GAC 3603
Pro Val Gly Gly Asp Gin Arg Pro Glu Val Glu Asp
1045 1050 1055
CCT GAA GAG TTG TCC CCA GCA CTT GTA GTG TCC AGT 3 63 9
Pro Glu Glu Leu Ser Pro Alá Leu Val Val Ser Ser
1060 1065
TCA CAG AGC TTT GTC ATC AGT GGT GGA GGC AGC ACT 3 675
Ser Gin Ser Phe Val Ile Ser Gly Gly Gly Ser Thr
1070 1075 1080
GTT ACA GAA AAC GTA GTG AAT TCA TAAAATGGAA 370 9
Val Thr Glu Asn Val Val Asn Ser
1085
GGAGAAGACT GGGCTAGGGA GAATGCAGAG AGGTTTCTTG 3749
GGGTCCCAGG GATGAGGAAT CGCCCCAGAC TCCTTTCCTC 3789
TGAGGAAGAA GGGATAATAG ACACATCAAA TGCCCCGAAT 3829
TTAGTCACAC CATCTTAAAT GACAGTGAAT TGACCCATGT 3869
TCCCTTTAAA ATTAAAAAAA AGAAGAGCCT TGTGTTTCTG 3909
TGGTTGCATT TGTCAAAGCA TTGAGATCTC CACGGTCAGA 3949
TTTGCTGTTC ACCCACATCT AATGTCTCTT CCTCTGTTCT 3989
ATCCCACCCA ACAGCTCAGA GATGAAACTA TGGCTTTAAA 4029
CTACCCTCCA GAGTGTGCAG ACTGATGGGA CATCAAATTT 4069
GCCACCACTA GAGCTGAGAG TCTGAAAGAC AGAATGTCAC 4109
CAGTCCTGCC CAATGCCTTG ACAACAGACT GAATTTTAAA 4149
TGTTCACAAC ATAAGGAGAA TGTATCTCCT CCTATTTATG 4189AAAACCATAT GATATTTTGT CTCCTACCTG CTGCTGCTAT 4229
TATGTAACAT CCAGAAGGTT TGCACCCCTC CTATACCATA 4269
TGTCTGGTTC TGTCCAGGAC ATGATACTGA TGCCATGTTT 4309
AGATTCCAGG ATCACAAGAA TCACCTCAAA TTGTTAGGAA 4349 • · « ·· · ···· • · « · · · • · ······
- 126 -
GGGACTGCAT AAACCAATGA GCTGTATCTG TAATTAATAT 4389
TCCTATATGT AGCTTTATCC TTAGGAAAAT GCTTCTGTTG 4429
TAATAGTCCA TGGACAATAT AAACTGAAAA ATGTCAGTCT 4469
GGTTTATATA AGGCAGTATT ATTGAGCTCT ATTTCCCCAC 4509
CCCACTATCC TCACTCCCAT AAGCTAAGCC TTATGTGAGC 4549
CCCTTCAGGG ACTCAAGGGT CCAGAAGTCC CTCCCATCTC 4589
TACCCCAAAG AATTCCTGAA GCCAGATCCA CCCTATCCCT 4629
GTACAGAGTA AGTTCTCAAT TATTGGCCTG CTAATAGCTG 4669
CTAGGGTAGG AAAGCGTGGT TCCAAGAAAG ATCCACCCTC 4709
AAATGTCGGA GCTATGTTCC CTCCAGCAGT GGTATTAATA 4749
CTGCCGGTCA CCCAGGCTCT GGAGCCAGAG AGACAGACCG 4789
GGGTTCAAGC CATGGCTTCG TCATTTGCAA GCTGAGTGAC 4829
TGTAGGCAGG GAACCTTAAC CTCTCTAAGC CACAGCTTCT 4869
TCATCTTTAA AATAAGGATA ATAATCATTC CTTCCCCTCA 4909
GAGCTCTTAT GTGGATTAAA CGAGATAATG TATATAAAGT 4949
ACTTTAGCCT GGTACCTAGC ACACAATAAG CATTCAATAA 4989
ATATTAGTTA ATATTAT 5006
(2) A 2. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIÁRA VONATKOZÓ INFORMÁCIÓK:
(i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZÚSÁG: 3809 bázispár
(B) TÍPUS: nukleinsav
(C) S ZÁLÚSÁG: egyszálú
(D) TOPOLÓGIAI ADAT : lineáris
MOLEKULA TÍPUS: cDNS - mRNS
(ix) ISMERTETŐJEL:
(A) NÉV/KULCS: CDS
(B) HELYZET: 373 . .3606
(D) EGYÉB INFORMÁCIÓK:
(xi) A 2. AZONOSÍTÁSI SZÁMÚ SZEKVENCIA ISMERTETÉSE:
• ··
127 -
TTTCGCGCAG GAGAGTGGAA GGAGGGAGCT GTTTGCCAGC 80
ACCGAGGTCT TGCGGCACAG GCAACGCTTG ACCTGAGTCT 120
TGCAGAATGA AAGGCATCAC AGGAGGCCTC TGCATGATGT 160
GGCTTCCAAA GACTCAAGGA CCACCCACAT TACAAGTCTG 200
GATTGAGGAA GGCAGAAATG GAGATTCAAA CACCACGTCT 240
TCTATTATTT TATTAATCAA TCTGTAGACA TGTGTCCCCA 280
CTGCAGGGAG TGAACTGCTC CAAGGGAGAA ACTTCTGGGA 320
GCCTCCAAAC TCCTAGCTGT CTCATCCCTT GCCCTGGAGA 360
GACGGCAGAA CC ATG GCA Met Alá 1 TTT TAT AGC TGC TGC TGG Phe Tyr Ser Cys Cys Trp 5 396
GTC CTC TTG GCA CTC ACC TGG CAC ACC TCT GCC TAC Tyr 20 432
Val Leu 10 Leu Alá Leu Thr Trp 15 His Thr Ser Alá
GGG CCA GAC CAG CGA GCC CAA AAG AAG GGG GAC ATT 468
Gly Pro Asp Gin Arg Alá Gin Lys Lys Gly Asp Ile
25 30
ATC CTT GGG GGG CTC TTT CCT ATT CAT. TTT GGA GTA 504
Ile Leu Gly Gly Leu Phe Pro Ile His Phe Gly Val
35 40
GCA GCT AAA GAT CAA GAT CTC AAA TCA AGG CCG GAG 540
Alá Alá Lys Asp Gin Asp Leu Lys Ser Arg Pro Glu
45 50 55
TCT GTG GAA TGT ATC AGG TAT AAT TTC CGT GGG TTT 576
Ser Val Glu Cys Ile Arg Tyr Asn Phe Arg Gly Phe
60 65
CGC TGG TTA CAG GCT ATG ATA TTT GCC ATA GAG GAG 612
Arg Trp Leu Gin Alá Met Ile Phe Alá Ile Glu Glu
70 75 80
ATA AAC AGC AGC CCA GCC CTT CTT CCC AAC TTG ACG 648
Ile Asn Ser Ser Pro Alá Leu Leu Pro Asn Leu Thr
85 90
CTG GGA TAC AGG ATA TTT GAC ACT TGC AAC ACC GTT 684
Leu Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Thr Cys Asn Thr Val
95 100
TCT AAG GCC TTG GAA GCC ACC CTG AGT TTT GTT GCT 720
Ser Lys Alá Leu Glu Alá Thr Leu Ser Phe Val Alá
105 110 115
··· ·
- 128 -
CAA AAC AAA ATT GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC 755
Gin Asn Lys Ile 120 Asp Ser Leu Asn Leu 125 Asp Glu Phe
TGC AAC TGC TCA GAG CAC ATT CCC TCT ACG ATT GCT 792
Cys Asn 130 Cys Ser Glu His Ile 135 Pro Ser Thr Ile Alá 140
GTG GTG GGA GCA ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA 828
Val Val Gly Alá Thr 145 Gly Ser Gly Val Ser 150 Thr Alá
GTG GCA AAT CTG CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG 864
Val Alá Asn 155 Leu Leu Gly Leu Phe 160 Tyr Ile Pro Gin
GTC AGT TAT GCC TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC 900
Val 165 Ser Tyr Alá Ser Ser 170 Ser Arg Leu Leu Ser 175 Asn
AAG AAT CAA TTC AAG TCT TTC CTC CGA ACC ATC CCC 936
Lys Asn Gin Phe 180 Lys Ser Phe Leu Arg 185 Thr Ile Pro
AAT GAT GAG CAC CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC 972
Asn Asp 190 Glu His Gin Alá Thr 195 Alá Met Alá Asp Ile 200
ATC GAG TAT TTC CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT 1008
Ile Glu Tyr Phe Arg 205 Trp Asn Trp Val Gly 210 Thr Ile
GCA GCT GAT GAC GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG 1044
Alá Alá Asp 215 Asp Asp Tyr Gly Arg 220 Pro Gly Ile Glu
AAA TTC CGA GAG GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC 1080
Lys 225 Phe Arg Glu Glu Alá 230 Glu Glu Arg Asp Ile 235 Cys
ATC GAC TTC AGT GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT 1116
Ile Asp Phe Ser 240 Glu Leu Ile Ser Gin 245 Tyr Ser Asp
GAG GAA GAG ATC CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA 1152
Glu Glu 250 Glu Ile Gin His Val 255 Val Glu Val Ile Gin 260
AAT TCC ACG GCC AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT 1188
Asn Ser Thr Alá Lys 265 Val Ile Val Val Phe 270 Ser Ser
GGC CCA GAT CTT GAG CCC CTC ATC AAG GAG ATT GTC 1224
Gly Pro Asp 275 Leu Glu Pro Leu Ile 280 Lys Glu Ile Val
• ·· * ···« »
- 129 -
CGG CGC AAT ATC ACG GGC AAG ATC TGG CTG GCC AGC
Arg 285 Arg Asn Ile Thr Gly 290 Lys Ile Trp Leu Alá 295 Ser
GAG GCC TGG GCC AGC TCC TCC CTG ATC GCC ATG CCT
Glu Alá Trp Alá 300 Ser Ser Ser Leu Ile 305 Alá Met Pro
CAG TAC TTC CAC GTG GTT GGC GGC ACC ATT GGA TTC
Gin Tyr 310 Phe His Val Val Gly 315 Gly Thr Ile Gly Phe 320
GCT CTG AAG GCT GGG CAG ATC CCA GGC TTC CGG GAA
Alá Leu Lys Alá Gly 325 Gin Ile -Pro Gly Phe 330 Arg Glu
TTC CTG AAG AAG GTC CAT CCC AGG AAG TCT GTC CAC
Phe Leu Lys 335 Lys Val His Pro Arg 340 Lys Ser Val His
AAT GGT TTT GCC AAG GAG TTT TGG GAA GAA ACA TTT
Asn 345 Gly Phe Alá Lys Glu 350 Phe Trp Glu Glu Thr 355 Phe
AAC TGC CAC CTC CAA GAA GGT GCA AAA GGA CCT TTA
Asn Cys His Leu 360 Gin Glu Gly Alá Lys 365 Gly Pro Leu
CCT GTG GAC ACC TTT CTG AGA GGT CAC GAA GAA AGT
Pro Val 370 Asp Thr Phe Leu Arg 375 Gly His Glu Glu Ser 380
GGC GAC AGG TTT AGC AAC AGC TCG ACA GCC TTC CGA
Gly Asp Arg Phe Ser 385 Asn Ser Ser Thr Alá 390 Phe Arg
CCC CTC TGT ACA GGG GAT GAG AAC ATC AGC AGT GTC
Pro Leu Cys 395 Thr Gly Asp Glu Asn 400 Ile Ser Ser Val
GAG ACC CCT TAC ATA GAT TAC ACG CAT TTA CGG ATA
Glu 405 Thr Pro Tyr Ile Asp 410 Tyr Thr His Leu Arg 415 Ile
TCC TAC AAT GTG TAC TTA GCA GTC TAC TCC ATT GCC
Ser Tyr Asn Val 420 Tyr Leu Alá Val Tyr 425 Ser Ile Alá
CAC GCC TTG CAA GAT ATA TAT ACC TGC TTA CCT GGG
His Alá 430 Leu Gin Asp Ile Tyr 435 Thr Cys Leu Pro Gly 440
AGA GGG CTC TTC ACC AAT GGC TCC TGT GCA GAC ATC
Arg Gly Leu Phe Thr Asn Gly Ser Cys Alá Asp Ile
445 450
12S0
1296
1332
1368
1404
1440
1476
1512
1548
1584
1620
1556
1692
1728 • · · · · · • · * · · · · » · ·« ·*·· ·*·· ·
- 130 -
AAG AAA GTT GAG GCG TGG CAG GTC CTG AAG CAC CTA 1764
Lys Lys Val 455 Glu Alá Trp Gin Val 460 Leu Lys His Leu
CGG CAT CTA AAC TTT ACA AAC AAT ATG GGG GAG CAG 1800
Arg 465 His Leu Asn Phe Thr 470 Asn Asn Met Gly Glu 475 Gin
GTG ACC TTT GAT GAG TGT GGT GAC CTG GTG GGG AAC 1836
Val Thr Phe Asp 480 Glu Cys Gly Asp Leu 485 Val Gly Asn
TAT TCC ATC ATC AAC TGG CAC CTC TCC CCA GAG GAT 1872
Tyr Ser 490 He Ile Asn Trp His 495 Leu Ser Pro Glu Asp 500
GGC TCC ATC GTG TTT AAG GAA GTC GGG TAT TAC AAC 1908
Gly Ser Ile Val Phe 505 Lys Glu Val Gly Tyr 510 Tyr Asn
GTC TAT GCC AAG AAG GGA GAA AGA CTC TTC ATC AAC 1944
Val Tyr Alá 515 Lys Lys Gly Glu Arg 520 Leu Phe He Asn
GAG GAG AAA ATC CTG TGG AGT GGG TTC TCC AGG GAG 1980
Glu 525 Glu Lys Ile Leu Trp 530 Ser Gly Phe Ser Arg 535 Glu
GTG CCC TTC TCC AAC TGC AGC CGA GAC TGC CTG GCA 2016
Val Pro Phe Ser 540 Asn Cys Ser Arg Ásd 545 Cys Leu Alá
GGG ACC AGG AAA GGG ATC ATT GAG GGG GAG CCC ACC 2052
Gly Thr 550 Arg Lys Gly Ile Ile 555 Glu Gly Glu Pro Thr 560
TGC TGC TTT GAG TGT GTG GAG TGT CCT GAT GGG GAG 2088
Cys Cys Phe Glu Cys 565 Val Glu Cys Pro Asp 570 Gly Glu
TAT AGT GAT GAG ACA GAT GCC AGT GCC TGT AAC AAG 2124
Tyr Ser Asp 575 Glu Thr Asp Alá Ser 580 Alá Cys Asn Lys
TGC CCA GAT GAC TTC TGG TCC AAT GAG AAC CAC ACC 2160
Cys 585 Pro Asp Asp Phe Trp 590 Ser Asn Glu Asn His 595 Thr
TCC TGC ATT GCC AAG GAG ATC GAG TTT CTG TCG TGG 2196
Ser Cys Ile Alá 600 Lys Glu Ile Glu Phe 605 Leu Ser Trp
ACG GAG CCC TTT GGG ATC GCA CTC ACC CTC TTT GCC 2232
Thr Glu 610 Pro Phe Gly Ile Alá 615 Leu Thr Leu Phe Alá 620
- 131 -
GTG Val CTG Leu GGC Gly ATT Ile TTC Phe 625 CTG ACA GCC TTT GTG CTG GGT 2268
Leu Thr Alá Phe Val 630 Leu Gly
GTG TTT ATC AAG TTC CGC AAC ACA CCC ATT GTC AAG 2304
Val Phe Ile 635 Lys Phe Arg Asn Thr '64 0 Pro Ile Val Lys
GCC ACC AAC CGA GAG CTC TCC TAC CTC CTC CTC TTC 2340
Alá 645 Thr Asn Arg Glu Leu 650 Ser Tyr Leu Leu Leu 655 Phe
TCC CTG CTC TGC TGC TTC TCC AGC TCC CTG TTC TTC 2376
Ser Leu Leu Cys 660 Cys Phe Ser Ser Ser 665 Leu Phe Phe
ATC GGG GAG CCC CAG GAC TGG ACG TGC CGC CTG CGC 2412
Ile Gly 670 Glu Pro Gin Asp Trp 675 Thr Cys Arg Leu Arg 680
CAG CCG GCC TTT GGC ATC AGC TTC GTG CTC TGC ATC 2448
Gin Pro Alá Phe Gly 685 Ile Ser Phe Val Leu 690 Cys Ile
TCA TGC ATC CTG GTG AAA ACC AAC CGT GTC CTC CTG 2484
Ser Cys Ile 695 Leu Val Lys Thr Asn 700 Arg Val Leu Leu
GTG TTT GAG GCC AAG ATC CCC ACC AGC TTC CAC CGC 2520
Val 705 Phe Glu Alá Lys Ile 710 Pro Thr Ser Phe His 715 Arg
AAG TGG TGG GGG CTC AAC CTG CAG TTC CTG CTG GTT 2556
Lys Trp Trp Gly 720 Leu Asn Leu Gin Phe 725 Leu Leu Val
TTC CTC TGC ACC TTC ATG CAG ATT GTC ATC TGT GTG 2592
Phe Leu 730 Cys Thr Phe Met Gin 735 Ile Val Ile- Cys Val 740
ATC TGG CTC TAC ACC GCG CCC CCC TCA AGC TAC CGC 2628
Ile Trp Leu Tyr Thr 745 Alá Pro Pro Ser Ser 750 Tyr Arg
AAC CAG CAG CTG GAG GAT GAG ATC ATC TTC ATC ACG 2664
Asn Gin Glu 755 Leu Glu Asp Glu Ile 760 Ile Phe He Thr
TGC CAC GAG GGC TCC CTC ATG GCC CTG GGC TTC CTG 2700
Cys 765 His Glu Gly Ser Leu 770 Met Alá Leu Gly Phe 775 Leu
ATC GGC TAC ACC TGC CTG CTG GCT GCC ATC TGC TTC 2736
Ile Gly Tyr Thr Cys Leu Leu Alá Alá Ile Cys Phe
780 785
- 132 -
TTC TTT GCC TTC AAG TCC CGG AAG CTG CCG GAG AAC 2772
Phe Phe 790 Ala Phe Lys Ser Arg 795 Lys Leu Pro Glu Asn 800
TTC AAT GAA GCC AAG TTC ATC ACC TTC AGC ATG CTC 2808
Phe Asn Glu Ala Lys Phe Ile Thr Phe Ser Met Leu
805 810
ATC TTC TTC ATC GTC TGG ATC TCC TTC ATT CCA GCC 2844
Ile Phe Phe Ile Val Trp Ile Ser Phe Ile Pro Ala
815 820
TAT GCC AGC ACC TAT GGC AAG TTT GTC TCT GCC GTA 2880
Tyr Ala Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Val Ser Ala Val
825 830 835
GAG GTG ATT GCC ATC CTG GCA GCC AGC TTT GGC TTG 2916
Glu Val Ile Ala Ile Leu Ala Ala Ser Phe Gly Leu
840 845
CTG GCG TGC ATC TTC TTC AAC AAG ATC TAC ATC ATT 2952
Leu Ala Cys Ile Phe Phe Asn Lys Ile Tyr Ile Ile
850 855 860
CTC TTC AAG CCA TCC CGC AAC ACC ATC GAG GAG GTG 2988
Leu Phe Lys Pro Ser Arg Asn Thr Ile Glu Glu Val
865 870
CGT TGC AGC ACC GCA GCT CAC GCT TTC. AAG GTG GCT 3024
Arg Cys Ser Thr Ala Ala His Ala Phe Lys Val Ala
875 880
GCC CGG GCC ACG CTG CGC CGC AGC AAC GTC TCC CGC 3060
Ala Arg Ala Thr Leu Arg Arg Ser Asn Val Ser Arg
885 890 895
AAG CGG TCC AGC AGC CTT GGA GGC TCC ACG GGA TCC 3096
Lys Arg Ser Ser Ser Leu Gly Gly Ser Thr Gly Ser
900 905
ACC CCC TCC TCC TCC ATC AGC AGC AAG AGC AAC AGC 3132
Thr Pro Ser Ser Ser Ile Ser Ser Lys Ser Asn Ser
910 915 920
GAA GAC CCA TTC CCA CAG CCC GAG AGG CAG AAG CAG 3168
Glu Asp Pro Phe Pro Gin Pro Glu Arg Gin Lys Gin
925 930
CAG CAG CCG CTG GCC CTA ACC CAG CAA GAG CAG CAG 3204
Gin Gin Pro Leu Ala Leu Thr Gin Gin Glu Gin Gin
935 940
CAG CAG CCC CTG ACC CTC CCA CAG CAG CAA CGA TCT 3240
Gin Gin Pro Leu Thr Leu Pro Gin Gin Gin Arg Ser
945 950 955
·· ·*»»
- 133 -
CAG CAG Gin Gin CAG Gin CCC AGA Pro Arg 960 TGC AAG CAG AAG GTC ATC TTT 3276
Cys Lys Gin Lys Val 965 Ile Phe
GGC AGC GGC ACG GTC ACC TTC TCA CTG AGC TTT GAT 3312
Gly Ser 970 Gly Thr Val Thr Phe 975 Ser Leu Ser Phe Asp 980
GAG CCT CAG AAG AAC GCC ATG GCC CAC GGG AAT TCT 3348
Glu Pro Gin Lys Asn 985 Ala Met Ala His Gly 990 Asn Ser
ACG CAC CAG AAC TCC CTG GAG GCC CAG AAA AGC AGC 3384
Thr His Gin 995 Asn Ser Leu Glu Ala Gin Lys 1000 Ser Ser
GAT ACG CTG ACC CGA CAC CAG CCA TTA CTC CCG CTG 3420
Asp Thr 1005 Leu Thr Arg His Gin 1010 Pro Leu Leu Pro Leu 1015
CAG TGC GGG GAA ACG GAC TTA GAT CTG ACC GTC CAG 3456
Gin Cys Gly Glu Thr 1020 Asp Leu Asp Leu Thr 1025 Val Gin
GAA ACA GGT CTG CAA GGA CCT GTG GGT GGA GAC CAG 3492
Glu Thr Gly 1030 Leu Gin Gly Pro Val 1035 Gly Gly Asp Gin -1040
CGG CCA GAG GTG GAG GAC CCT GAA GAG TTG TCC CCA 3528
Arg Pro Glu Val Glu Asp 1045 Pro Glu Glu Leu 105C Ser ) Pro
GCA CTT GTA GTG TCC AGT TCA CAG AGC TTT GTC ATC 3564
Ala Leu Val 1055 Val Ser Ser Ser Gin 106C Ser Phe 1 Val Ile
AGT GGT GGA GGC AGC ACT GTT ACA GAA AAC GTA GTG 3600
Ser Gly 1065 Gly Gly Ser Thr 1070 Val Thr Glu Asn Val 1075 Val
AAT TCA TAAAATGGAA GGAGAAGACT GGGCTAGGGA 3636
Asn Ser
GAATGCAGAG AGGTTTCTTG GGGTCCCAGG GATGAGGAAT 3676
CGCCCCAGAC TCCTTTCCTC TGAGGAAGAA GGGATAATAG 3716
ACACATCAAA TGCCCCGAAT TTAGTCACAC CATCTTAAAT 3756
GACAGTGAAT TGACCCATGT TCCCTTTAAA AAAAAAAAAA 3795
AAAAAGCGGC CGC

Claims (9)

1. Szervetlenion-receptorok egy vagy több aktivitását szabályozó vegyületek, amelyek (I) általános képletében
- Ar! jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metílén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, hidroxilcsoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, N(CH3)2 csoporttal, fenilcsoporttal, fenoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, α,α-dimetil-benzil-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, acetilcsoporttal és/vagy etilén-dioxi-csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Ar2 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
135
- q jelentése 0, 1, 2 vagy 3; és
- R jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport, valamint az (I) általános képletű vegyületek farmakológiai szempontból elfogadható sói és komplexei.
2. Az 1. igénypont szerinti szervetlenion-receptor vegyületek közül a kalciumreceptorokkal szemben aktív kalcimimetikumok, amelyek (I) általános képletében
- Arx jelentése olyan fenilcsoport, amely adott esetben helyettesítve van 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel az alábbi csoportból kiválasztva: izopropilcsoport, CH3O csoport, CF3 csoport, CH3S csoport, CF3O csoport, jódatom, klóratom, fluoratom és metilcsoport;
- Ar2 jelentése olyan fenilcsoport, amely adott esetben helyettesítve van 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel az alábbi csoportból kiválasztva: izopropilcsoport, CH3O csoport, CH3S csoport, CF3O csoport, jódatom, klóratom, fluoratom, CF3 csoport és metilcsoport.
3. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül a q helyén 2-t, Ari helyén 1-5 szubsztituenssel helyettesített fenilcsoporttal és Ar2 helyén 1-5 szubsztituenssel helyettesített fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek.
4. A 3. igénypont szerinti vegyületek közül az Ar2 helyén m-metoxi-fenil-csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek.
5. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül a q helyén 0• « ······ • · · ··«·· · ····* · * ··
- 136 -t, Ar2 helyén pedig naftilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek.
6. Az 5. igénypont szerinti vegyületek közül az Ari helyén 1-5 szubsztituenssel helyettesített fenilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek.
7. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül a q helyén 2-t, Ari helyén 1-5 szubsztituenssel helyettesített fenilcsoportot, Ar2 helyén pedig naftilcsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek.
8. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül az
- Ari helyén 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel, mégpedig CF30 csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal és/vagy CF3 csoporttal helyettesített fenilcsoportot; és
- Ar2 helyén 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel, mégpedig CF3O csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal, CH3O csoporttal és/vagy CF3 csoporttal helyettesített fenilcsoportot tartalmazó vegyületek.
9. A 3. igénypont szerinti vegyületek közül az
- Ari helyén 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel, mégpedig CF3O csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal és/vagy CF3 csoporttal helyettesített fenilcsoportot; és
- Ar2 helyén 1-5, egynél több szubsztituens esetén egymástól független szubsztituenssel, mégpedig CF3O csoporttal, jódatommal, klóratommal, fluoratommal, CH3O csoporttal és/vagy CF3 csoporttal helyettesített fenilcsoportot
138
- Ar4 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- R8 jelentése hidrogénatom vagy fenilcsoport;
- R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és
- Rio jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy fenilcsoport;
valamint a (II) általános képletű vegyületek farmakológiai szempontból elfogadható sói és komplexei.
17. Szervetlenion-receptorokat szabályozó vegyületek, amelyek (III) általános képletében
- Ar5 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal·, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, acetoxicsoporttal, benzilcsoporttal, benzil-oxi-csoporttal, a,a-dimetil-benzil-csoporttal, N02 csoporttal, CHO csoporttal, CH3CH(OH) csoporttal, acetilcsoporttal, etilén-dioxi-csoporttal és/vagy -CH=CH-fenil-csoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy • * «·>··· • · · »··» * « ··· F* · · ·~ »«
139 fenilcsoport;
- Ar6 jelentése legfeljebb 5, egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituenssel - mégpedig acetilcsoporttal, rövid szénláncú alkilcsoporttal, halogénatommal, rövid szénláncú alkoxicsoporttal, rövid szénláncú tio-alkil-csoporttal, metilén-dioxi-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkil-csoporttal, rövid szénláncú halogén-alkoxi-csoporttal, OH csoporttal, CH2OH csoporttal, CONH2 csoporttal, CN csoporttal, metoxi-karbonil-csoporttal, OCH2C(O)C2H5 csoporttal és/vagy acetoxicsoporttal - adott esetben helyettesített naftil- vagy fenilcsoport;
- Rn jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és
- R12 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
18. Gyógyszerkészítmények, amelyek farmakológiai szempontból elfogadható hordozóanyag mellett az 1.-17. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek egyikét tartalmazzák.
19. Eljárás kezelésre szoruló betegek gyógykezelésére, azzal jellemezve, hogy a beteg szervezetébe a gyógykezeléshez hatásos mennyiségben juttatjuk be a 18. igénypont szerinti gyógyszerkészítmények valamelyikét.
20. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy betegként embert kezelünk, mégpedig olyat, akinek a betegségére a következő jelenségek közül legalább az egyik jellemző: (1) szabálytalan kalcíum-homöosztázis és (2) a szokásostól eltérő mennyiségben jelen lévő olyan extracelluláris vagy intracelluláris hírvivő, amelynek a termelődését kalciumreceptor-aktivitással befolyásolni lehet; továbbá hatóanyagként valamilyen kalcimimetikumot alkalmazunk.
···· ·
140
21. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy betegként embert kezelünk, mégpedig olyat, aki elsődleges vagy másodlagos mellékpajzsmirigy-túlműködésben, Paget-kórban, túl magas vérkalciumtükörrel összefüggő rosszindulatú betegségben, csontritkulásban, magas vérnyomásban vagy renális csontképződési zavarban szenved.
HU9802491A 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments HU228150B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1994/012117 WO1995011221A1 (en) 1991-08-23 1994-10-21 Calcium receptor-active arylalkyl amines
US08/353,784 US6011068A (en) 1991-08-23 1994-12-08 Calcium receptor-active molecules
PCT/US1995/013704 WO1996012697A2 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT77980A true HUT77980A (hu) 1999-02-01
HU228150B1 HU228150B1 (en) 2012-12-28

Family

ID=23390556

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9802491A HU228150B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, medicaments comprising them, and the use of said medicaments
HU0700718A HU229474B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, pharmaceutical compositions containing them and use of the compositions

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0700718A HU229474B1 (en) 1994-10-21 1995-10-23 Calcium receptor-active compounds, pharmaceutical compositions containing them and use of the compositions

Country Status (25)

Country Link
US (1) US6211244B1 (hu)
EP (4) EP1275635A1 (hu)
JP (3) JP2882882B2 (hu)
KR (2) KR100293621B1 (hu)
CN (2) CN1147459C (hu)
AT (2) ATE359259T1 (hu)
AU (1) AU709303B2 (hu)
BR (1) BRPI9509411B8 (hu)
CA (1) CA2202879C (hu)
CZ (2) CZ290670B6 (hu)
DE (4) DE69535461T2 (hu)
DK (1) DK1203761T3 (hu)
ES (2) ES2234768T3 (hu)
FR (1) FR05C0029I2 (hu)
HK (4) HK1002454A1 (hu)
HU (2) HU228150B1 (hu)
LU (1) LU91182I2 (hu)
NL (1) NL300199I2 (hu)
NZ (1) NZ297157A (hu)
PL (1) PL183499B1 (hu)
PT (1) PT1203761E (hu)
RU (1) RU2195446C2 (hu)
TW (2) TW200402407A (hu)
UA (1) UA55374C2 (hu)
WO (1) WO1996012697A2 (hu)

Families Citing this family (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4426245A1 (de) 1994-07-23 1996-02-22 Gruenenthal Gmbh 1-Phenyl-3-dimethylamino-propanverbindungen mit pharmakologischer Wirkung
EP1275635A1 (en) * 1994-10-21 2003-01-15 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor-active compounds
WO1997005252A2 (en) * 1995-07-26 1997-02-13 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chimeric receptors and methods for identifying compounds active at metabotropic glutamate receptors and the use of such compounds in the treatment of neurological disorders and diseases
ES2326004T3 (es) * 1996-05-01 2009-09-28 Nps Pharmaceuticals, Inc. Compuestos activos de receptor de ion inorganico.
EP1258471B1 (en) * 1996-05-01 2007-01-24 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
EP1770083B1 (en) * 1996-05-01 2009-04-29 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
JP4331264B2 (ja) 1996-07-08 2009-09-16 協和発酵キリン株式会社 カルシウムレセプター活性化合物
US6210964B1 (en) * 1997-08-18 2001-04-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Avian extracellular calcium-sensing receptor
AU760889B2 (en) 1998-10-14 2003-05-22 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. 1,2-disubstituted cyclopropanes
US20040214889A1 (en) * 1999-07-31 2004-10-28 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
EP1074539B1 (en) * 1999-08-04 2007-10-17 Sumitomo Chemical Company, Limited Process for producing optically active 3,3,3,-trifluoro-2-hydroxy-2-methylpropionic acid, and salt thereof
JP4595178B2 (ja) * 1999-08-04 2010-12-08 住友化学株式会社 アミン化合物、中間体、製造法および光学分割剤
US6797842B2 (en) * 2000-05-11 2004-09-28 Central Glass Company, Limited Process for producing optically active 1-(fluoro- or trifluoromethyl-substituted phenyl) ethylamine and process for purifying same
FR2809396B1 (fr) * 2000-05-24 2005-10-14 Centre Nat Rech Scient Nouvelles molecules possedant une activite calcimimetique et leur mode de preparation
AR038658A1 (es) * 2001-06-15 2005-01-26 Novartis Ag Derivados de 4-aril-2(1h) quinazolinona y 4-aril-quinazolina 2-sustituidas, un proceso para su preparacion, composiciones farmaceuticas y el uso de dichos derivados para la preparacion de un medicamento
US7176322B2 (en) 2002-05-23 2007-02-13 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6908935B2 (en) 2002-05-23 2005-06-21 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6849761B2 (en) 2002-09-05 2005-02-01 Wyeth Substituted naphthoic acid derivatives useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
GB0230015D0 (en) * 2002-12-23 2003-01-29 Novartis Ag Organic compounds
US7105537B2 (en) * 2003-01-28 2006-09-12 Bristol-Myers Squibb Company 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators
US7205322B2 (en) * 2003-02-12 2007-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
US7265145B2 (en) * 2003-05-28 2007-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method
FR2855754B1 (fr) * 2003-06-05 2005-07-08 Oreal Compsition, notamment cosmetique, comprenant une amine carbonylee
ES2655435T3 (es) * 2003-09-12 2018-02-20 Amgen Inc. Formulación de disolución rápida de cinacalcet
US20050186658A1 (en) * 2003-10-17 2005-08-25 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chimeric metabotropic glutamate receptors and uses thereof
JP4629036B2 (ja) 2004-05-28 2011-02-09 田辺三菱製薬株式会社 アリールアルキルアミン化合物及びその製法
US20050288377A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-29 Cantor Thomas L Use of calcimimetic as an adynamic bone disease related treatment
JP2008506746A (ja) * 2004-07-22 2008-03-06 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． ジアステレオマーに富んだ化合物の調製方法
US7361789B1 (en) 2004-07-28 2008-04-22 Amgen Inc. Dihydronaphthalene compounds, compositions, uses thereof, and methods for synthesis
US20060276534A1 (en) * 2005-03-17 2006-12-07 Amgen Inc. Methods of decreasing calcification
FR2885129B1 (fr) * 2005-04-29 2007-06-15 Proskelia Sas Nouveaux derives de l'ureee substituee parun thiazole ou benzothiazole, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et utilisation.
WO2006125026A2 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for preparing cinacalcet hydrochloride
ES2334260T3 (es) * 2005-05-23 2010-03-08 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Procedimientos para la preparacion de la forma i cristalina de clorhidrato de cinacalcet.
MX2007000982A (es) * 2005-05-23 2007-04-16 Teva Pharma Clorhidrato de cinacalcet amorfo y preparacion del mismo.
US8486381B2 (en) 2005-09-02 2013-07-16 Amgen Inc. Methods of modulating intestinal fluid balance
US7595161B2 (en) 2005-11-10 2009-09-29 Hansjoerg Martin Rothe Efficacy of calcimimetic agents
US7563930B2 (en) * 2005-11-22 2009-07-21 Teva Pharmaceutical Industries Ltd Crystal forms of Cinacalcet HCI and processes for their preparation
ES2335360T3 (es) 2005-11-25 2010-03-25 Galapagos Sas Derivados de urea utiles como moduladores de los receptores de calcio.
US20070129444A1 (en) * 2005-12-06 2007-06-07 Mallinckrodt Inc. Novel weight reduction composition and uses thereof
EP3095447B1 (en) 2006-02-03 2021-11-24 OPKO Renal, LLC Treating vitamin d insufficiency and deficiency with 25-hydroxyvitamin d2 and 25-hydroxyvitamin d3
AU2007230724B2 (en) 2006-03-23 2014-01-30 Amgen Inc. Methods and compositions for making and using polymorphs of cinacalcet
KR20080110681A (ko) * 2006-04-20 2008-12-18 암겐 인코포레이티드 안정적 에멀젼 조제물
TW200811082A (en) * 2006-04-27 2008-03-01 Teva Pharma Process for the preparation of cinacalcet base
ATE447546T1 (de) * 2006-04-27 2009-11-15 Teva Pharma Verfahren zur herstellung einer cinacalcetbase
PT2037936E (pt) 2006-06-21 2014-09-04 Opko Renal Llc Método de tratamento e prevenção do hiperparatiroidismo secundário
WO2008000422A1 (en) * 2006-06-27 2008-01-03 Sandoz Ag Amorphous form of cinacalcet
WO2008000423A1 (en) * 2006-06-27 2008-01-03 Sandoz Ag Crystalline form of cinacalcet
EP1914224A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sandoz AG Amorphous organic compound
GB0613674D0 (en) * 2006-07-10 2006-08-16 Proskelia Sas Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
WO2008027522A2 (en) * 2006-09-01 2008-03-06 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Solid composites of a calicum receptor-active compound
CN101547922B (zh) * 2006-10-04 2012-06-20 辉瑞产品公司 作为钙受体拮抗剂的吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮衍生物
JP5470653B2 (ja) * 2006-10-26 2014-04-16 アムジエン・インコーポレーテツド カルシウム受容体調節剤
WO2008058236A2 (en) * 2006-11-08 2008-05-15 Dr. Reddy's Labortories, Ltd. Methods for preparing cinacalcet hydrochloride
US20080146845A1 (en) * 2006-11-20 2008-06-19 Boaz Gome Process for preparing Cinacalcet
CA2672560A1 (en) * 2006-12-15 2008-06-26 Ruprecht-Karls-Universitaet Heidelberg Methods for treating podocyte-related disorders
CA2681582C (en) 2007-03-30 2015-07-14 Amgen Inc. Methods of treating bowel disorders
CA2701638A1 (en) * 2007-04-02 2008-10-09 Concert Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical calcimimetics
US11752158B2 (en) 2007-04-25 2023-09-12 Eirgen Pharma Ltd. Method of treating vitamin D insufficiency and deficiency
CN104523707B (zh) 2007-04-25 2022-08-26 欧普科Ip 控股Ii 有限公司 包含维生素d化合物和蜡质载体的口服控释组合物
WO2008139947A1 (ja) * 2007-05-08 2008-11-20 Ajinomoto Co., Inc. 下痢の予防又は治療剤
CA2691196C (en) * 2007-06-21 2016-05-24 Amgen Inc. Methods of synthesizing cinacalcet and salts thereof
ITMI20071261A1 (it) * 2007-06-22 2008-12-23 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet
AU2008275595B2 (en) * 2007-07-10 2013-11-14 Amgen Inc. Derivatives of urea and related diamines, methods for their manufacture, and uses therefor
WO2009025792A2 (en) * 2007-08-16 2009-02-26 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Crystalline forms cinacalcet fumarate and cinacalcet succinate and processes for preparation thereof
AU2008328362A1 (en) * 2007-11-23 2009-05-28 Leo Pharma A/S Novel cyclic hydrocarbon compounds for the treatment of diseases
WO2009107660A1 (ja) 2008-02-25 2009-09-03 味の素株式会社 糖尿病又は肥満病の予防又は治療剤
JPWO2009107579A1 (ja) * 2008-02-25 2011-06-30 味の素株式会社 コク味付与剤
WO2009119554A1 (ja) * 2008-03-24 2009-10-01 味の素株式会社 消化管の重炭酸分泌促進剤
US8609655B2 (en) * 2008-03-28 2013-12-17 Amgen Inc. Calcimimetic compound for use in the treatment of epithelial injury
JP5533648B2 (ja) 2008-04-17 2014-06-25 味の素株式会社 免疫賦活剤
US8614354B2 (en) * 2008-06-18 2013-12-24 Erregierre S.P.A. Process for the synthesis of cinacalcet hydrochloride
US20110178326A1 (en) * 2008-08-06 2011-07-21 Actavis Group Ptc Ehf Unsaturated cinacalcet salts and processes for preparing cinacalcet hydrochloride
US9133140B2 (en) 2008-08-22 2015-09-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Cycloalkylamne derivatives
WO2010043721A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Oryzon Genomics, S.A. Oxidase inhibitors and their use
US20110318417A1 (en) * 2008-12-08 2011-12-29 Actavis Group Ptc Ehf Highly pure cinacalcet or a pharmaceutically acceptable salt thereof
US8993808B2 (en) 2009-01-21 2015-03-31 Oryzon Genomics, S.A. Phenylcyclopropylamine derivatives and their medical use
WO2010086129A1 (en) 2009-01-27 2010-08-05 Rathiopharm Gmbh Inclusion complex comprising cinacalcet and cyclodextrin
AU2010215520B2 (en) 2009-02-19 2016-07-21 F.I.S. - Fabbrica Italiana Sintetici S.P.A. Process for preparing Cinacalcet hydrochloride
CA2754209A1 (en) 2009-03-05 2010-09-10 Cipla Limited Process for the preparation of cinacalcet and salts thereof, and intermediates for use in the process
EP2406211B1 (en) 2009-03-09 2018-06-27 Megafine Pharma (P) Ltd. A new method for the preparation of cinacalcet and new intermediates thereof
WO2010103429A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Pfizer Inc. 1,1-(Dimethyl-Ethylamino)-2-Hydroxy-Propoxy]-Ethyl}-3-Methyl-Biphenyl-4- Carboxylic Acid Derivatives As Calcium Receptor Antagonists
WO2010104882A1 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Amgen Inc. Methods of modulating sperm motility
WO2010118055A1 (en) * 2009-04-09 2010-10-14 Cognition Therapeutics, Inc. Inhibitors of cognitive decline
WO2010128388A2 (en) 2009-05-08 2010-11-11 Aurobindo Pharma Limited An improved process for the preparation of intermediate compounds useful for the preparation of cinacalcet
WO2010136037A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Leo Pharma A/S Novel calcium sensing receptor modulating compounds and pharmaceutical use thereof
US8785494B2 (en) 2009-05-27 2014-07-22 Leo-Pharma A/S Calcium sensing receptor modulating compounds and pharmaceutical use thereof
WO2010150837A1 (ja) * 2009-06-25 2010-12-29 第一三共株式会社 インドリン誘導体
EP2458983B1 (en) 2009-07-31 2015-07-08 Cognition Therapeutics, Inc. Inhibitors of cognitive decline
ES2445532T3 (es) 2009-09-10 2014-03-03 Zach System S.P.A. Proceso para preparar cinacalcet
US8759586B2 (en) 2009-09-16 2014-06-24 Ranbaxy Laboratories Limited Processes for the preparation of cinacalcet
MX338041B (es) 2009-09-25 2016-03-30 Oryzon Genomics Sa Inhibidores de demetilasa-1 especificos de lisina y su uso.
US8722732B2 (en) 2009-09-29 2014-05-13 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
WO2011056325A2 (en) 2009-09-29 2011-05-12 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
US8946296B2 (en) 2009-10-09 2015-02-03 Oryzon Genomics S.A. Substituted heteroaryl- and aryl-cyclopropylamine acetamides and their use
EP2314286A1 (de) 2009-10-21 2011-04-27 Ratiopharm GmbH Schmelzgranuliertes Cinacalcet
CN102119137A (zh) * 2009-11-02 2011-07-06 上海威智医药科技有限公司 盐酸西那卡塞的合成方法
IT1396623B1 (it) 2009-11-26 2012-12-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di cinacalcet e suoi intermedi
US9186337B2 (en) 2010-02-24 2015-11-17 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with Hepadnaviridae
WO2011106574A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Oryzon Genomics, S.A. Inhibitors for antiviral use
WO2011123476A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Cytochroma Inc. Methods and compositions for reducing parathyroid levels
ES2607081T3 (es) 2010-04-19 2017-03-29 Oryzon Genomics, S.A. Inhibidores de desmetilasa específica de lisina-1 y su uso
WO2011146583A2 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Elan Pharma International Limited Nanoparticulate cinacalcet formulations
RU2599788C2 (ru) * 2010-06-30 2016-10-20 Лео Фарма А/С Новая полиморфная форма кальцимиметического соединения
EP2588445A1 (en) * 2010-06-30 2013-05-08 Leo Pharma A/S New polymorphic form of a calcimimetic compound
US8921606B2 (en) * 2010-07-16 2014-12-30 Hetero Research Foundation Process for cinacalcet hydrochloride
EP2598480B1 (en) 2010-07-29 2019-04-24 Oryzon Genomics, S.A. Cyclopropylamine derivatives useful as lsd1 inhibitors
LT2598482T (lt) 2010-07-29 2018-07-10 Oryzon Genomics, S.A. Demetilazės lsd1 inhibitoriai arilciklopropilamino pagrindu ir jų medicininis panaudojimas
WO2012045883A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Oryzon Genomics S.A. Cyclopropylamine inhibitors of oxidases
CN101993379B (zh) * 2010-10-22 2013-06-19 能特科技股份有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
US20130261132A1 (en) 2010-11-26 2013-10-03 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
JP2014508104A (ja) 2010-11-26 2014-04-03 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ カルシウム感知受容体活性化合物
JP2014500882A (ja) 2010-11-26 2014-01-16 レオ ファーマ アクティーゼルスカブ カルシウム感知受容体活性化合物
US20130245084A1 (en) 2010-11-26 2013-09-19 Leo Pharma A/S Calcium-sensing receptor-active compounds
WO2012072713A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Oryzon Genomics, S.A. Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with flaviviridae
EP2651448B1 (en) 2010-12-13 2018-11-28 QuiaPEG Pharmaceuticals AB Water-soluble, non-peptidic, non-nucleotidic phosphoramidate functionalized polymers
WO2012107498A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 Oryzon Genomics S.A. Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative disorders
BR112014009306B1 (pt) 2011-10-20 2021-07-20 Oryzon Genomics S.A. Compostos de (hetero)aril ciclopropilamina como inibidores de lsd1
CA2849564C (en) 2011-10-20 2020-10-20 Oryzon Genomics, S.A. (hetero)aryl cyclopropylamine compounds as lsd1 inhibitors
CZ303627B6 (cs) 2011-11-25 2013-01-16 Zentiva, K.S. Zpusob výroby Cinacalcetu
CN103450027B (zh) 2012-05-29 2015-07-29 上海京新生物医药有限公司 盐酸西那卡塞的制备方法
CA2876315C (en) 2012-06-12 2021-05-25 Marek Kwiatkowski Conjugates of biologically active molecules to functionalized polymers
WO2014031755A1 (en) * 2012-08-21 2014-02-27 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Fendiline derivatives and methods of use thereof
IN2015MN00421A (hu) * 2012-08-27 2015-09-04 Lupin Ltd
FR2995307A1 (fr) 2012-09-07 2014-03-14 Prod Chim Auxiliaires Et De Synthese Procede de preparation du cinacalcet et de ses sels pharmaceutiquement acceptables
PL2730279T3 (pl) 2012-11-09 2015-12-31 K H S Pharma Holding Gmbh Preparaty cynakalcetu o natychmiastowym uwalnianiu
WO2014096277A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Synthon B.V. Tablet composition comprising cinacalcet hydrochloride
KR101847947B1 (ko) 2013-03-15 2018-05-28 옵코 아이피 홀딩스 Ⅱ 인코포레이티드 안정화되고 변형된 비타민 ｄ 방출 제형
CA2915432C (en) 2013-06-26 2019-03-05 Jubilant Life Sciences Limited Disintegrant free composition of cinacalcet
EP4023294A1 (en) 2014-01-31 2022-07-06 Cognition Therapeutics, Inc. Isoindoline compositions and methods for treating alzheimer's disease
EP3148972B1 (en) 2014-05-27 2019-08-21 Cardioxyl Pharmaceuticals, Inc. Pyrazolone derivatives as nitroxyl donors
CN104045568A (zh) * 2014-06-18 2014-09-17 中山奕安泰医药科技有限公司 一种合成(r)-1–(萘-1-基)乙胺的新工艺
CR20170085A (es) 2014-08-07 2017-04-25 Opko Ireland Global Holdings Ltd Terapia adjuntiva con 25-hidroxi vitamina d
CN104478736B (zh) * 2014-12-16 2016-07-13 成都启泰医药技术有限公司 一种盐酸西那卡塞的制备方法
US20180155270A1 (en) 2015-05-29 2018-06-07 Lupin Limited Process for preparation of cinacalcet intermediate and cinacalcet hydrochloride
KR20180123100A (ko) 2016-03-28 2018-11-14 옵코 아일랜드 글로벌 홀딩스 리미티드 비타민 d 치료 방법
EP4011396A1 (en) 2017-03-10 2022-06-15 QuiaPEG Pharmaceuticals AB Releasable conjugates
BR112019023851A2 (pt) 2017-05-15 2020-08-18 Cognition Therapeutics, Inc. compostos, suas composições farmacêuticas e métodos para tratamento de doenças neurodegenerativas
JP2021535920A (ja) 2018-09-12 2021-12-23 キアペグ ファーマシューティカルズ アクチエボラグ 放出可能なｇｌｐ−１コンジュゲート
CN111196759B (zh) * 2018-11-16 2023-03-24 上海博志研新药物技术有限公司 盐酸西那卡塞及其中间体的制备方法
MX2022002282A (es) * 2019-08-28 2022-03-25 Unilever Ip Holdings B V Compuestos novedosos para aclarar la piel.
WO2021191417A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of synucleinopathies
RU2739376C1 (ru) * 2020-07-24 2020-12-23 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) Способ получения фендилина

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2276618A (en) 1942-03-17 N-phenylaliphatic bihxdroxithenyl-
US2930731A (en) 1952-04-08 1960-03-29 Upjohn Co Bis[beta-(ortho-hydrocarbonoxyphenyl)iso-propyl]amines
BE570596A (hu) 1957-08-26
BE621300A (hu) 1961-08-14
US3262977A (en) 1962-03-10 1966-07-26 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet N-aralkyl-1, 1-diphenyl-propylamine derivatives
NL293886A (hu) 1962-06-19 1965-04-12 Merck Ag E
US3318952A (en) * 1964-01-22 1967-05-09 Sandoz Ag Dibenzylsulfamides
US3459767A (en) 1965-08-10 1969-08-05 Pfizer & Co C Aminomethylindoles
GB1109924A (en) 1965-11-29 1968-04-18 Roche Products Ltd Novel substituted diphenylalkyl amines and a process for the manufacture thereof
DE1618005A1 (de) 1966-09-22 1971-09-09 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur Herstellung von neuen Amino-dihalogen-phenyl-aethylaminen
CH480791A (de) 1967-01-17 1969-11-15 Ciba Geigy Schädlingsbekämpfungsmittel
GB1263987A (en) 1969-05-30 1972-02-16 Allen & Hanburys Ltd Phenethylamine derivatives
US4129598A (en) * 1972-05-31 1978-12-12 Synthelabo Phenylethylamine derivatives
GB1448437A (en) 1973-02-24 1976-09-08 Beecham Group Ltd Diphenylpropylamines
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US4000197A (en) * 1973-07-23 1976-12-28 The University Of Iowa Research Foundation Asymmetric synthesis of phenylisopropylamines
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (hu) 1974-03-08 1982-06-04
US4014937A (en) 1974-08-26 1977-03-29 Pfizer Inc. 3,4-And 3,5-dialkoxyphenethylamines
HU169507B (hu) * 1974-09-25 1976-12-28
US3987201A (en) 1974-12-24 1976-10-19 Eli Lilly And Company Method for treating arrhythmia
US4105602A (en) 1975-02-10 1978-08-08 Armour Pharmaceutical Company Synthesis of peptides with parathyroid hormone activity
JPS5390272A (en) 1977-01-13 1978-08-08 Sendai Fukusokan Kagaku Kenkiy Method of producing optically active salsolizine
US4608391A (en) 1977-07-05 1986-08-26 Cornell Research Foundation Inc. Catecholamine derivatives, a process for their preparation and pharmaceutical compositions thereof
US4289787A (en) 1977-12-19 1981-09-15 Eli Lilly And Company Quaternary ammonium antiarrhythmic drugs
DD144050A5 (de) 1978-06-05 1980-09-24 Ciba Geigy Ag Verfahren zur herstellung von n-alkylierten aminoalkoholen
DE2825961A1 (de) 1978-06-14 1980-01-03 Basf Ag Fungizide amine
CA1142954A (en) 1978-07-03 1983-03-15 Jack Mills Phenethanolamines, compositions containing the same, and method for effecting weight control
US4391826A (en) 1978-07-03 1983-07-05 Eli Lilly And Company Phenethanolamines, compositions containing the same, and method for effecting weight control
ZA794872B (en) 1978-09-20 1980-11-26 Schering Corp A phenylalkylaminoethylsalicylamide,its preparation and pharmaceutical compositions containing it
FR2436773A1 (fr) 1978-09-22 1980-04-18 Roussel Uclaf Nouveaux derives du 3-(aminoethyl) phenol et leurs sels, procede de preparation et application a titre de medicaments
DE2841184C2 (de) * 1978-09-22 1986-09-25 Hochtemperatur-Reaktorbau GmbH, 4600 Dortmund Vorrichtung zur Durchmischung der Heißgassträhnen bei einem gasgekühlten Hochtemperaturreaktor
US4360511A (en) 1978-11-29 1982-11-23 Medi-Physics, Inc. Amines useful as brain imaging agents
DD150456A5 (de) 1979-03-01 1981-09-02 Ciba Geigy Ag Verfahren zur herstellung von derivaten des 3-amino-1,2-propandiols
EP0023385B1 (en) 1979-06-16 1982-12-15 Beecham Group Plc Ethanamine derivatives, their preparation and use in pharmaceutical compositions
JPS603387B2 (ja) 1980-07-10 1985-01-28 住友化学工業株式会社 新規光学活性イミダゾリジン−２−オン誘導体およびその製法
HU183430B (en) 1981-05-12 1984-05-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing cyclodextrine inclusion complexes of n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine or n-bracket-1-phenylethyl-bracket closed-3,3-diphenylpropylamine-hydrochloride
US4591605A (en) 1981-11-10 1986-05-27 Research Foundation Of State University Of New York Method and ingestible formulation for inhibiting the secretion of stomach acid
US4658060A (en) 1982-04-26 1987-04-14 Schering Corporation Preparation of (-)-5-(beta)-1-hydroxy-2-((beta)-1-methyl-3-phenylpropyl)aminoethyl) salicylamide
DE3225879A1 (de) 1982-07-10 1984-01-12 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Trans-3-(4'-tert.-butylcyclohexyl-1')-2-methyl-1-dialkyl-aminopropane, ihre herstellung und verwendung als arzneimittel
CA1258454A (en) 1982-08-10 1989-08-15 Leo Alig Phenethanolamines
US4647446A (en) 1982-08-18 1987-03-03 The Regents Of The University Of California Rapid brain scanning radiopharmaceutical
JPS5950358A (ja) 1982-09-14 1984-03-23 Sumitomo Chem Co Ltd 光学活性なカルボン酸をグラフトしたクロマトグラフ充填剤およびそれを用いる鏡像体混合物の分離法
US4677101A (en) 1983-09-26 1987-06-30 Merck & Co., Inc. Substituted dihydroazepines useful as calcium channel blockers
US4661635A (en) 1983-11-21 1987-04-28 Mcneilab, Inc. Aralykyl (arylethynyl)aralkyl amines and their use as vasodilators and antihypertensives
DE3405333A1 (de) * 1984-02-15 1985-08-22 Sandoz-Patent-GmbH, 7850 Lörrach Neue allylamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5334628A (en) 1984-06-09 1994-08-02 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Amine derivatives, processes for preparing the same and fungicides containing the same
US4587253A (en) 1984-07-30 1986-05-06 Merck & Co., Inc. Bridged pyridine compounds useful as calcium channel blockers and analgesics
US4609494A (en) 1985-02-21 1986-09-02 Merck & Co., Inc. 5-acetyl-3,4,5,6-tetrahydro-4-oxo-2,6-methano-2H-1,3,5-benzothiazocine(benzodiazocine)-11-carboxylates useful as calcium channel blockers
US4839369A (en) 1985-04-16 1989-06-13 Rorer Pharmaceutical Corporation Aryl and heteroaryl ethers as agents for the treatment of hypersensitive ailments
GB8522186D0 (en) 1985-09-06 1985-10-09 Erba Farmitalia Cycloalkyl-substituted 4-aminophenyl derivatives
DE3541181A1 (de) 1985-11-21 1987-05-27 Basf Ag Propylamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als fungizide
US4675321A (en) 1986-02-07 1987-06-23 Merck & Co., Inc. Substituted pyrimidines useful as calcium channel blockers
US5034514A (en) 1986-03-17 1991-07-23 Cetus Corporation Novel cross-linking agents
US5030576A (en) 1986-04-30 1991-07-09 Genentech, Inc. Receptors for efficient determination of ligands and their antagonists or agonists
US4808718A (en) 1986-05-06 1989-02-28 Merck & Co., Inc. Fused polycyclic and bridged compounds useful as calcium channel blockers
HU200591B (en) 1986-07-11 1990-07-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new diphenyl propylamine derivatives and pharmaceutical compositions comprising such compounds
US4797411A (en) 1986-07-18 1989-01-10 Farmitalia Carlo Erba S.P.A. Cycloalkyl-substituted 4-pyridyl derivatives and use as aromatase inhibitors
HU207280B (en) 1986-09-25 1993-03-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new phenyl-alkyl-amines and pharmaceutical compositions containing them
US5064657A (en) 1986-10-20 1991-11-12 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of amino acid receptor function
US4925664A (en) 1986-10-20 1990-05-15 University Of Utah Spider toxins and methods for their use as blockers of calcium channels and amino acid receptor function
DE3782010T2 (de) 1986-12-04 1993-02-18 Toyo Jozo Kk Vom calcitonin-gen abgeleitete peptidderivate.
GB8720115D0 (en) 1987-08-26 1987-09-30 Cooper G J S Treatment of diabetes mellitus
GB8709871D0 (en) 1987-04-27 1987-06-03 Turner R C Peptides
US4916145A (en) 1987-07-10 1990-04-10 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted n-[(pyridyl)alkyl]aryl-carboxamide
EP0348490B1 (en) 1988-01-11 1995-09-27 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5001251A (en) 1988-01-15 1991-03-19 E. R. Squibb & Sons, Inc. Optical resolution of DL-3-acylthio-2-methylpropanoic acid
AU3548089A (en) 1988-04-04 1989-11-03 Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc., The Calcium channel compositions and methods
US5082837A (en) 1988-06-28 1992-01-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Lactamimides as calcium antagonists
US4925873A (en) 1988-09-01 1990-05-15 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method of treating skin injuries using thromboxane A2 receptor antagonists
JPH02200658A (ja) 1989-01-28 1990-08-08 Kumiai Chem Ind Co Ltd Ｎ―（置換）ベンジルカルボン酸アミド誘導体及び除草剤
RU2005717C1 (ru) * 1989-02-17 1994-01-15 Такеда кемикал-индастриз Лтд Способ получения производных аралкиламинов или их кислотно-аддитивных солей
US5011834A (en) 1989-04-14 1991-04-30 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon PCP receptor ligands and the use thereof
DD298412A5 (de) 1989-04-28 1992-02-20 ������@���Kk�� Verfahren zur herstellung von polypeptiden, die geeignet sind als antagonisten exzitatorischer aminosaeure-neurotransmitter und/oder blocker der calciumkanaele
AU5957390A (en) 1989-07-03 1991-02-06 New York University Use of polyamines as ionic-channel regulating agents
GB8915712D0 (en) 1989-07-08 1989-08-31 Macintyre Iain Medical treatment
US5021599A (en) 1989-08-31 1991-06-04 Serpentix Conveyor Corporation Redox-responsive anion receptors
US5053337A (en) 1989-10-30 1991-10-01 Neurogenetic Corporation DNA encoding an α2B -adrenergic receptor
CA2071897A1 (en) 1989-12-28 1991-06-29 Richard A. Glennon Sigma receptor ligands and the use thereof
JP2818958B2 (ja) 1990-02-23 1998-10-30 塩野義製薬株式会社 ４―（４―アルコキシフェニル）―２―ブチルアミン誘導体およびその製造法
US5096908A (en) 1990-05-04 1992-03-17 Eli Lilly And Company Method of inhibiting gastric acid secretion
WO1992007829A1 (en) 1990-11-02 1992-05-14 The Upjohn Company Indole-3-methanamines useful as anti-diabetic, anti-obesity and anti-atherosclerotic agents
JPH06506455A (ja) 1991-02-08 1994-07-21 ケンブリッジ・ニューロサイエンス・インコーポレイテッド 神経伝達物質放出調節剤としてのグアニジン置換体及びその誘導体ならびに神経伝達物質放出遮断物質を同定するための新規な方法
US5312928A (en) 1991-02-11 1994-05-17 Cambridge Neuroscience Calcium channel antagonists and methodology for their identification
DE69206306T2 (de) * 1991-04-08 1996-06-13 Sumitomo Chemical Co Optisch aktive Sekundär-Aminverbindung, Verfahren zur Herstellung einer optisch aktiven Sekundär-Aminverbindung und Verfahren zur Herstellung optisch aktiver Carbonsäure durch die Verwendung dieser Verbindung.
US5688938A (en) 1991-08-23 1997-11-18 The Brigham & Women's Hospital, Inc. Calcium receptor-active molecules
JP2728564B2 (ja) * 1991-08-23 1998-03-18 エヌピーエス・ファーマシウティカルズ・インコーポレイテッド カルシウム受容体活性化分子
US5763569A (en) 1991-08-23 1998-06-09 The Brigham And Women's Hospital, Inc Calcium receptor-active molecules
CA2173747C (en) 1991-08-23 2006-05-23 Edward F. Nemeth Calcium receptor-active arylalkyl amines
ATE161821T1 (de) 1991-11-12 1998-01-15 Pfizer Azyklische ethylendiaminderivate als 'substance p rezeptor' antagonisten
DE69217992T2 (de) 1991-12-30 1997-06-12 Janssen Pharmaceutica Nv Alpha-substituierte benzenmethanamin-derivate
AU3588693A (en) 1992-01-29 1993-09-01 Smithkline Beecham Corporation N-benzyloxamic acid, oxamate, and oxamide derivatives and their use as TNF and PDE IV inhibitors
JP3175339B2 (ja) * 1992-10-07 2001-06-11 住友化学工業株式会社 光学活性アミン化合物、その製法、その中間体及びその用途
RU2146132C1 (ru) 1993-02-23 2000-03-10 Брихэм энд Уимен З Хоспитал, Инк. Фармацевтическая композиция, активная в отношении рецептора кальция, способ лечения пациента, способ анализа соединения оказывать влияние на активность рецептора неорганического иона, нуклеиновая кислота, кодирующая рецептор, рецептор кальция
GB9326403D0 (en) 1993-12-24 1994-02-23 Oxford Asymmetry Ltd Improvements in or relating to chiral syntheses
US5631401A (en) * 1994-02-09 1997-05-20 Abbott Laboratories Inhibitors of protein farnesyltransferase and squalene synthase
EP1275635A1 (en) * 1994-10-21 2003-01-15 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor-active compounds
US7043457B1 (en) 2000-06-28 2006-05-09 Probuild, Inc. System and method for managing and evaluating network commodities purchasing
US20060283332A1 (en) 2001-12-11 2006-12-21 Garman Michael H Hot beverage maker
US8526300B2 (en) 2008-03-31 2013-09-03 Ericsson Ab Method and apparatus for providing resiliency in multicast networks
KR101411428B1 (ko) 2012-07-12 2014-06-24 한국과학기술원 집광식 휴대용 형광 검출 시스템

Also Published As

Publication number Publication date
JP2007204482A (ja) 2007-08-16
HU229474B1 (en) 2014-01-28
ATE287390T1 (de) 2005-02-15
TW568896B (en) 2004-01-01
HK1020041A1 (en) 2000-03-10
DK1203761T3 (da) 2005-04-11
FR05C0029I1 (hu) 2005-08-12
NL300199I2 (nl) 2005-10-03
BRPI9509411B8 (pt) 2021-07-06
EP1275635A1 (en) 2003-01-15
ES2285707T3 (es) 2007-11-16
FR05C0029I2 (fr) 2006-12-29
CN1312116C (zh) 2007-04-25
WO1996012697A9 (en) 2000-08-24
DE69533948T2 (de) 2005-12-15
NZ297157A (en) 1999-08-30
HK1052685A1 (zh) 2003-09-26
PT1203761E (pt) 2005-04-29
KR100403094B1 (ko) 2003-11-13
CZ292709B6 (cs) 2003-11-12
ATE359259T1 (de) 2007-05-15
JP4353985B2 (ja) 2009-10-28
WO1996012697A3 (en) 1996-06-13
CZ290670B6 (cs) 2002-09-11
CN1147459C (zh) 2004-04-28
CA2202879C (en) 2005-08-30
CN1534016A (zh) 2004-10-06
EP0787122B9 (en) 2007-10-17
DE69535461T2 (de) 2008-09-25
LU91182I2 (fr) 2006-07-11
HU0700718D0 (en) 2008-12-29
EP1203761A3 (en) 2002-05-15
LU91182I9 (hu) 2019-01-07
TW200402407A (en) 2004-02-16
CZ118297A3 (en) 1997-09-17
JPH11130737A (ja) 1999-05-18
NL300199I1 (nl) 2005-08-01
EP0787122B1 (en) 2007-04-11
EP0787122A2 (en) 1997-08-06
CN1220658A (zh) 1999-06-23
DE69533948D1 (de) 2005-02-24
HK1046900B (zh) 2005-07-29
DE122005000033I1 (de) 2005-09-29
JP2882882B2 (ja) 1999-04-12
AU4195796A (en) 1996-05-15
JP4002338B2 (ja) 2007-10-31
JPH10513436A (ja) 1998-12-22
HK1002454A1 (en) 1998-08-28
UA55374C2 (uk) 2003-04-15
BRPI9509411B1 (pt) 2016-12-06
EP1203761A2 (en) 2002-05-08
ES2234768T3 (es) 2005-07-01
DE69535461D1 (de) 2007-05-24
WO1996012697A2 (en) 1996-05-02
BRPI9509411A (pt) 1997-12-30
RU2195446C2 (ru) 2002-12-27
HK1046900A1 (en) 2003-01-30
PL183499B1 (pl) 2002-06-28
EP1203761B1 (en) 2005-01-19
US6211244B1 (en) 2001-04-03
CA2202879A1 (en) 1996-05-02
HU228150B1 (en) 2012-12-28
AU709303B2 (en) 1999-08-26
PL319812A1 (en) 1997-09-01
DE122005000033I2 (de) 2006-11-23
KR100293621B1 (ko) 2001-11-26
EP1553078A1 (en) 2005-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT77980A (hu) Kalciumreceptor-aktív vegyületek
US6001884A (en) Calcium receptor-active molecules
AU702629B2 (en) Calcium receptor-active arylalkyl amines
KR100251995B1 (ko) 칼슘 수용체 활성 분자
ES2280460T3 (es) Compuestos activos frente a receptores de iones inorganicos.
US6313146B1 (en) Calcium receptor-active molecules
US5962314A (en) Calcium receptor-active molecules
AU747853B2 (en) Calcium receptor-active compounds
KR100300450B1 (ko) 칼슘 수용체-활성 화합물
MXPA97002938A (en) Active compounds for cal receiver
AU3122699A (en) Calcium receptor active arylakyl amines

Legal Events

Date Code Title Description
AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: CINACALCET OR ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, PREFERABLY CINACALCET; REG. NO/DATE: EU/1/04/292/001-012 20041022

Spc suppl protection certif: S1300018

Filing date: 20130513

Expiry date: 20151023

HC9A Change of name, address

Owner name: NPS PHARMACEUTICALS, INC., US

Free format text: FORMER OWNER(S): NPS PHARMACEUTICALS, INC., US

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: CINACALCET OR ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, PREFERABLY CINACALCET HYDROCHLORIDE; REG. NO/DATE: EU/1/04/292/001-012 20041022

Spc suppl protection certif: S1300018

Filing date: 20130513

Expiry date: 20151023

Extension date: 20191022