CN110035769A - 针对siglec-15的抗体及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

提供了Siglec‑15结合分子。所述分子通常是免疫特异性结合Siglec‑15的抗体或其抗原结合片段。还提供了Siglec‑15配体结合分子。所述分子通常是Siglec‑15多肽或融合蛋白。还提供了使用所述分子减少有需要的受试者中Siglec‑15介导的免疫抑制的方法。

Description

针对SIGLEC-15的抗体及其使用方法
相关申请案的交叉引用
本申请案要求2017年5月3日提交的美国临时专利申请62/500,578、2017年1月27日提交的美国临时专利申请62/451,271和2017年9月21日提交的美国临时专利申请62/397,794的权益和优先权，这些专利申请在允许的情况下全文以引用方式并入。
技术领域
本发明总体上涉及免疫调节领域，并且更具体地涉及用于调节Siglec-15及从其发起的信号传导的组合物和方法。
背景技术
唾液酸结合性Ig样凝集素(“Siglec”)是Ig超家族的成员。这些1型跨膜蛋白包括唾液酸结合性N端V组结构域、C2组Ig结构域可变成员、跨膜区和胞质尾，并且特异性结合附着于细胞表面糖缀合物的末端区域的唾液酸。已经鉴定了Siglec的两个主要亚类：一个亚类包括CD-33和CD33相关Siglec诸如人类中的siglec-5、siglec-6、siglec-7、siglec-8、siglec-9、siglec-10、siglec-11、siglec-14和siglec-16，及小鼠中的CD33和siglec-E、siglec-F、siglec-G和siglec-H(Crocker和Redelinghuys，Biochemical SocietyTransactions,36(6):1467-1471(2008))。第二亚类由Sn(唾液酸粘附素)(siglec-1)、CD22(siglec-2)、MAG(髓磷脂相关糖蛋白)(siglec-4)和siglec-15构成，其全部在哺乳动物中是非常保守的。除了在神经系统中表达的MAG之外，Siglec在各种亚类的白细胞上差异性表达，其中它们在免疫应答和炎症反应的正负调节中起作用(McMillan和Crocker,Carbohydr.Res.,343:2050–2056(2008)及Crocker等人，Nat.Rev.Immunol.,7:255 266(2007))。
研究表明，许多Siglec在免疫细胞上表达并具有免疫抑制特性。然而，Siglec的一个亚类，包括Siglec-15，与12kDa的信号衔接分子DNAX活化蛋白(DAP12)相关，该蛋白具有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)并参与免疫细胞活化(Takamiya等人，Glycobiology,23(2):178-87(2013))。Siglec-15在脾脏和淋巴结的巨噬细胞和树突细胞上特异性表达并且优先识别sTn抗原(Angata等人，Glycobiology,17(8):838-46(2007)电子出版2007年5月4日)。过度表达sTn(H157/ST6GalNAc-I)的H157细胞刺激TGF-β从表达Siglec-15的M-CSF诱导的巨噬细胞分泌(Takamiya等人，Glycobiology,23(2):178-87(2013))。另外，TGF-β从THP-1细胞的分泌分别受THP-1细胞中的Siglec-15和H157细胞中的ST6GalNAc-I(负责sTn结构生物合成的酶)的过度表达而增强，其方式可以是部分依赖于Siglec-15-DAP12诱导的信号传导以及一种或多种DAP12非依赖性、Sky依赖性或可能是Sky非依赖性的途径。TGF-β由肿瘤细胞和肿瘤浸润性白细胞(包括巨噬细胞)产生并且通过例如增强肿瘤细胞侵袭和通过抑制免疫细胞功能而促使肿瘤进展和转移(Flavell等人，NatRev Immunol,10:554-567(2010))。这些数据可表明，Siglec-15对肿瘤相关sTn的识别激活了信号转导途径的DAP12-Syk途径，所述DAP12-Syk途径增强骨髓细胞的TGF-β生成，并最终改变对肿瘤细胞有利的肿瘤微环境(Takamiya等人，Glycobiology,23(2):178-87(2013))。Siglec15在其胞质结构域中具有典型ITIM结构域(SNYENL(SEQ ID NO:191))。其功能尚待表征。
然而，仍然需要用于调节Siglec-15和从其发起的信号传导的工具和技术。
因此，本发明的一个目的是提供用于检测和调节Siglec-15的组合物。
本发明的另一个目的是提供调节Siglec-15和从其发起的信号传导以增加免疫应答或减少或逆转免疫抑制的方法。
本发明的另一个目的是提供调节破骨细胞分化以减少骨吸收或增加骨形成的方法。
本发明的另一个目的是提供通过调节Siglec-15和从其发起的信号传导来治疗疾病和病症的方法。
发明内容
提供了Siglec-15结合分子。所述分子通常是免疫特异性结合Siglec-15的抗体或其抗原结合片段。例如，在一些实施方案中Siglec-15结合分子包括六个互补决定区(CDR)，其中所述CDR包括选自由以下项组成的组的多肽的三个轻链CDR：SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107，或与SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，和选自由以下项组成的组的多肽的三个重链CDR：SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119，或与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，并且其中所述Siglec-15结合分子结合Siglec-15。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子包括本文称为1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A的小鼠抗人单克隆抗体中的一种小鼠抗人单克隆抗体的轻链和/或重链CDR。
在一些实施方案中，Siglec-15结合分子包括：含有选自由以下项组成的组的多肽的氨基酸序列的轻链可变区：SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107，或与SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体；和/或含有选自由以下项组成的组的多肽的氨基酸序列的重链可变区：SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119，或与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子包括本文称为1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A的小鼠抗人单克隆抗体中的一种小鼠抗人单克隆抗体的轻链和/或重链可变区。
在一些实施方案中，Siglec-15结合分子结合
(I)排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的Siglec-15
(II)以内源性浓度排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的Siglec-15
(III)排列在活细胞表面上的Siglec-15，并且调节Siglec-15(SEQ ID NO:1、SEQID NO:2等)与Neu5Acα2-6GalNAcα、LRRC4C、Siglec-15-反受体(S15-CR)或它们的组合之间的结合；
(IV)排列在活细胞表面上的Siglec-15，并减少、防止或抑制TGF-β分泌；
(V)排列在活细胞表面上的Siglec-15；或
(IV)它们的组合。
内源性表达Siglec-15的细胞包括巨噬细胞、树突细胞和癌细胞。
Siglec-15结合分子可包括一个或多个来自免疫球蛋白恒定区(Fc)的恒定结构域。恒定结构域可以是人恒定结构域，例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。在特定实施方案中，人IgG恒定结构域为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4结构域。Siglec-15结合分子可经可检测地标记或包含缀合的毒素、药物、受体、酶、受体配体。Siglec-15结合分子可为单克隆抗体、人抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体，或它们的抗原结合片段。所述抗体可为单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体或多特异性抗体。
一个实施方案提供了一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQID NO:195、197、199、201或209的氨基酸序列的可变轻链。
另一个实施方案提供了一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQID NO:203、206或207的氨基酸序列的可变重链。
另一个实施方案提供了一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQID NO:195、197、199、201或209的氨基酸序列的可变轻链和一条或多条具有SEQ ID NO:203、206或207的氨基酸序列的可变重链。
一个实施方案提供了一种抗体，其具有SEQ ID NO:209、195、207、199或201的轻链CDR和SEQ ID NO:203、206或207的重链CDR及它们的组合。
另一个实施方案提供了一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:209、210或211的轻链氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:212、213、215或216的重链氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:209、210或211的轻链氨基酸序列和根据SEQ ID NO:212、213、215或216的重链氨基酸序列。
在一些实施方案中，Siglec-15结合分子经修饰，使得所述分子将表现出削弱的或无Fc受体(FcR)结合活性。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子经修饰为表现出增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。
一个实施方案提供了一种与SEQ ID NO:193或194至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的融合蛋白。
还提供了包括Siglec-15结合分子和生理上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子减少或防止Siglec-15与配体和/或其反受体的结合，减少或防止Siglec-15介导的信号转导，或它们的组合。配体可以是唾液酸化糖蛋白。配体可在肿瘤细胞表面上表达。下面的实施例显示含富亮氨酸重复序列的蛋白质4C(LRRC4C)是Siglec-15的配体，并且可由癌细胞表达。Siglec-15反受体也可在免疫细胞诸如T细胞的表面上表达，其在被Siglec-15接合时，导致T细胞抑制。
还提供了治疗有需要的受试者的方法。通常，该方法包括向受试者施用有效量的Siglec-15结合分子，例如药物组合物形式的Siglec-15结合分子。
在一些实施方案中，拮抗性Siglec-15结合分子增强免疫应答、阻碍或防止肿瘤生长、抑制肿瘤介导的免疫抑制、消除肿瘤、消耗或阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的活性以便改变其活性，降低TAM介导的免疫抑制、减少或逆转T细胞抑制、增加T细胞增殖，或它们的组合。在一些实施方案中，癌症或肿瘤包括表达Siglec-15的巨噬细胞。按有效量向受试者施用Siglec-15结合分子以减少巨噬细胞对TGF-β的表达和/或分泌。在一些实施方案中，受试者患有癌症或感染性疾病。癌症可包括表达或过度表达Siglec-15配体的细胞。
还提供了通过向受试者施用有效量的拮抗性Siglec-15结合分子而减少破骨细胞分化，减少骨吸收，增加骨形成及它们的组合的方法。
在一些实施方案中，拮抗性Siglec-15结合分子降低免疫应答、增加或增强T细胞抑制、增加T细胞增殖或它们的组合。可按有效量向受试者施用Siglec-15结合分子以增加巨噬细胞对TGF-β的表达和/或分泌。在一些实施方案中，受试者有炎症、自身免疫性疾病，或者是移植受者。
一些实施方案包括向受试者施用第二治疗剂。
还提供了检测和诊断方法。任何检测和诊断方法均可与治疗方法联合。例如，检测或诊断疾病、病症或感染的方法可包括(a)使用公开的Siglec-15结合分子测定受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达，以及(b)将Siglec-15水平与对照水平作比较，其中与对照水平相比，测定的Siglec-15水平增加表明有所述疾病、病症或感染。
监测疾病、病症或感染进展的方法可包括(a)使用公开的Siglec-15结合分子测定在第一时间点和之后时间点获得的受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较第一时间点和之后时间点的受试者细胞或组织样品中的Siglec-15表达水平，其中与第一时间点相比，之后时间点测定的Siglec-15水平增加表明所述疾病、病症或感染进展。
提供了一种监测对治疗的应答的方法，其包括：(a)测定使用公开的Siglec-15结合分子进行治疗之前和之后受试者细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较随时间变化的Siglec-15水平，由此与治疗之前的Siglec-15水平相比，治疗之后测定的Siglec-15水平降低表明对所述治疗应答良好。
附图说明
图1是示出两只免疫的和两只未免疫的Siglec-15敲除小鼠的血浆抗体滴度的曲线。
图2A至图2C是示出1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B和105A的轻链可变区序列，并且突出显示第一(2A)、第二(2B)和第三(2C)互补决定区(CDR)的比对。
图3A至图3C是示出1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B和105A的重链可变区序列，并且突出显示第一(3A)、第二(3B)和第三(3C)互补决定区(CDR)的比对。
图4A是用于测量抗Siglec-15抗体与人或小鼠Siglec-15表达细胞的直接结合的测定的图表。图4B(1B2、1C3、1C12、1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9)和图8C(6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)和105A(NC105))是示出在图4A中示出的测定中抗Siglec-15抗体与Siglec-15表达细胞的结合(阳性细胞％)的柱状图。图4C是示出抗Siglec-15抗体(1B2、1C3、1C12、1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)和105A(NC105))与福尔马林固定的Siglec-15表达细胞的结合(阳性细胞％)的柱状图。
图5A至图5B是示出纯化的1C12、8H8、5G12、3H10、9A5、6F8、8C8、1H3、10G9、1B2和1C3抗体(Ab)与K562.hS15细胞的结合(9A，减去了本底结合)和与293T.mS15细胞(9B)的结合的线形图(平均荧光强度(MFI)作为一抗浓度(μg/ml)变化的函数)。图5C是纯化的1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9Ab与K562.hS15细胞的结合(MFI)相对于与293T.mS15的结合(MFI)的点阵图。
图6A是示出用1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8和10G9 Ab中的每一种检测到的hS15+U87细胞的百分比的柱状图。图6B是示出用1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8和10G9 Ab中的每一种检测到的hS15+U87细胞的MFI的柱状图。图6C是示出用1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9 Ab中的每一种检测到的S15+U87细胞的百分比的柱状图。
图7A是示出抗体阻断测定的卡通画。将表达配体LRRC4C的293T细胞用可溶性受体(hS15.hG1)和抗S15抗体处理，随后用PE抗hFc抗体检测结合的受体。图7B是示出hS15.hG1-1和10G9、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、1C3、1C12、1H3、3H10、1B2、NC1、NC5、NC7 28A(NC28)、NC38、NC41、NC53、63A(NC63)、NC73、NC74、NC76、77A(NC77)、82B(NC82)、NC84、NC87、NC90、92A(NC92)、CI3-33、CI1-33)抗体的hS15.G1结合％的柱状图。图7C是示出对照mAb和1B2、1C3、1H3、8H8、6F8、8C8、9A5、1C12、3H10、10G9和5G12抗体的S15/LRRC4C阻断(％)的柱状图。图7D是示出1B2、1C3、1C12 1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9的S15/LRRC4C阻断(％)的柱状图。图7E是示出6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)和105A(NC105))的S15/LRRC4C阻断(％)的柱状图。
图8A是T细胞抑制测定的图表。图8B和图8C是柱状图，将S15 mAb对hS15.hG1介导的人T细胞抑制的逆转示出为CD8+T细胞的分裂％(12B)和CD4+T细胞的分裂％(12C)，以及比较用(例如，+hS15.hG1)(每对中的左手柱)和不用(例如，-hS15.hG1)(每对中的右手柱)hS15.hG1对抗体1B2、1C3、1C12 1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9进行的测定。图8D至图8G是柱状图，对于用hS15.hG1对抗体1B2、1C3、1C12 1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9(图8D和图12E)和6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)和105A(NC105)(图8F和图8G)进行的测定，将S15 mAb对hS15.hG1介导的人T细胞抑制的逆转示出为CD8+T细胞的分裂％(图8D和图8F)和CD4+T细胞的分裂％(图8E和图8G)。图8H和图8I是示出CD8 T细胞增殖作为％hS15_LRRC4C阻断活性的函数的点阵图。
图9A是用于测量INFγ分泌改变的测定的图表。图9B是示出对抗体1B2、1C3、1C121H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9进行图13A中图示的测定的结果的柱状图。
图10是示出在对以2种方式从新鲜PBMC分离和富集的单核细胞的破骨细胞形成测定中，在抗体1C12、8H8、5G12、3H10、9A5、6F8、8C8、1H3、10G9、1B2和1C3存在下的TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)(Ab 540nm)的柱状图，所述2种方式为：MACS柱分选(左小图)或附着于无血清培养基中的塑料上(右小图)。
图11是示出Siglec-15对肿瘤微环境(TME)中免疫力的负调节模型的图表，所述模型包括Siglec-15(S15):Siglec-15-反受体(S15-CR)>>>T细胞指导的对增殖和细胞因子的抑制，和/或Siglec-15:LRRC4C>>>巨噬细胞的TGF-β生产及TME中的免疫抑制。所述图表显示了骨髓细胞、T细胞和癌细胞对Siglec-15及其配体的表达，及来自其的信号传导，以及分子抗Siglec-15(阻断和靶向)和LRRC4C抗体与Siglec-15融合蛋白(非交联/阻断)之间的相互作用。
图12A是示出人源化5G12可变轻链L1-L5的氨基酸序列的表。图12B是示出人源化5G12可变重链H1-H3的氨基酸序列的表。
图13A示出了人源化5G12可变轻链VL1-VL5与鼠类VL的序列比对。图13B示出了人源化5G12可变重链VH1-VH3的序列比对。
图14A是T细胞的增殖％对照人S15 Fc(μg/mL)的线形图，其示出了T细胞的增殖％随S15 Fc浓度增加而降低。图14B是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的IFN-γ(pg/ml)的柱状图。图14C是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的TNF-α(pg/ml)的柱状图。图14D是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的IL-6(pg/ml)的柱状图。
图15A和图15B是示出纯化自杂交瘤的S15 mAb与表达人S15或小鼠S15的细胞结合的阳性细胞百分比的柱状图。
图16A和图16B是经指定抗体处理的分裂CD8+T细胞的百分比的柱状图。图16C和图16D是经指定抗体处理的分裂CD4+T细胞的百分比的柱状图。
图17A和图17B是示出在经5G12处理的动物中存活百分比对照肿瘤细胞接种后天数的线形图。图17C是增重百分比对照ID8.OVA接种后天数的线形图。
图18是增重百分比对照ID8.OVA接种后天数的线形图。
图19A是示意图，示出使用Mitenyi单核细胞磁珠从人PBMC收获人CD14+单核细胞，然后在人M-CSF和人RANKL连同指定抗体的存在下接种在96孔板中。图19B是示出如所指示用1H3处理的破骨细胞的显微照片。图19C是7天后收集用于抗酒石酸酸性磷酸酶分析的上清液的540nm吸光度的柱状图。
图20是示出INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A和TNF-α细胞因子(pg/mL)的柱状图。
图21是在RANKL连同指定抗体存在下培养的小鼠RAW 264.7巨噬细胞的540nm吸光度的柱状图。
图22示出了1H3可变轻链的示例性人源化氨基酸序列的比较。
图23示出了1H3可变重链的示例性人源化氨基酸序列的比较。
图24是对提出的Siglec-15作用模式的说明。
图25A是计数对照Siglec-15 PE的FACS直方图，示出了M2巨噬细胞表达Siglec-15。图25B是M1巨噬细胞的计数对照Siglec-15 PE的FACS直方图。图25C是经巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)处理的小鼠骨髓来源的骨髓细胞的计数对照Siglec-15 PE的FACS直方图。图25D是经M-CSF和白细胞介素-10(IL-10)处理的小鼠骨髓来源的骨髓细胞的计数对照Siglec-15 PE的FACS直方图。图25E是经M-CSF或M-CSF+IL10处理并用同种型-PE(灰色方框)或抗Siglec-15 PE染色的小鼠骨髓来源的骨髓细胞的MFI-PE的柱状图。
图26A是来自供体#1603的接种在涂有Siglec-15 Fc(浓度点左侧柱)或可溶性Siglec-15(各浓度点右侧柱)的板中的人CD14+单核细胞的上清液的450nm吸光度的柱状图。图26B是来自于供体#1704的接种在涂有Siglec-15 Fc(浓度点左侧柱)或可溶性Siglec-15(各浓度点右侧柱)的板中的人CD14+单核细胞的上清液的450nm吸光度的柱状图。图26C是来自供体#1603的细胞的TNF-α(pg/mL)对照Siglec-15Fc(μg/mL)的柱状图。图26D是来自供体#1603的细胞的IL-6(pg/mL)对照Siglec-15 Fc(μg/mL)的柱状图。图26E是来自供体#1603的细胞的IL-1β(pg/mL)对照Siglec-15 Fc(μg/mL)的柱状图。图26F是来自供体#1704的细胞的TNF-α(pg/mL)对照Siglec-15 Fc(μg/mL)的柱状图。图26G是来自供体#1704的细胞的IL-6(pg/mL)对照Siglec-15 Fc(μg/mL)的柱状图。图26H是来自供体#1704的细胞的IL-1β(pg/mL)对照Siglec-15 Fc(μg/mL)的柱状图。
图27A是实施例19的实验方案的图表。图27B是经S15 Fc预处理的人骨髓细胞；和未成熟DC的CD8增殖％的柱状图，所述经S15 Fc预处理的人骨髓细胞；和未成熟DC与CFSE标记的经阴性选择的自体pan-T细胞按1个骨髓细胞:2个T细胞的细胞比率连同抗CD3/CD28珠粒(1个pan-T细胞:2个珠粒)一起共同培养。图27C至图27G从左至右各柱为：单独的T细胞，T细胞+珠粒、经S15 Fc处理的、和未成熟DC。图27C是如上处理的细胞的IFN-γ(pg/mL)的柱状图。图27D是如上处理的细胞的TNF-α(pg/mL)的柱状图。图27E是如上处理的细胞的CD4增殖百分比。图27F是如上处理的细胞的IL-6(pg/mL)的柱状图。图27G是如上处理的细胞的IL-10(pg/mL)的柱状图。
图28A是来自供体1709的细胞的450nm吸光度对照mAb(μg/mL)的线形图。顶部线条是对照mAb而底部线条是S15 mAb。图28B与图28A相同，但细胞来自于供体1713。
图29是说明Siglec-15在破骨细胞形成中所起作用的图表。
图30A是在第0天用S15 Fc处理并用抗-αvβ3整联蛋白mAb染色的人CD14+单核细胞的FACS直方图。图30B是在第6天用S15 Fc处理并用抗-αvβ3整联蛋白mAb染色的人CD14+单核细胞的FACS直方图。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，称分子能够“免疫特异性结合”第二分子的条件是此类结合表现出抗体对其同源抗原的特异性和亲和力。称抗体能够免疫特异性结合抗原的靶区或靶构象(“表位”)的条件是此类结合涉及免疫球蛋白分子的抗原识别位点。免疫特异性结合特定抗原的抗体可以较低亲和力结合其它抗原，其条件是如通过例如免疫测定、测定或本领域已知的其它测定所确定，所述其它抗原具有被抗原识别位点所识别的一些序列或构象相似性，但所述免疫特异性结合特定抗原的抗体不会结合完全无关的抗原。然而，优选地，抗体(及其抗原结合片段)将不会与其它抗原交叉反应。抗体也可以非免疫特异性方式来与其它分子结合，例如借助于所述分子的不涉及抗原识别位点的其它区域/结构域内的结合结构域(诸如Fc区)而与FcR受体结合。
如本文所用，称分子“生理特异性结合”第二分子的条件是此类结合表现出受体对其同源结合配体的特异性和亲和力。分子可以能够生理特异性结合一种以上的其它分子。
如本文所用，术语“抗体”旨在表示具有“可变区”抗原识别位点的免疫球蛋白分子。术语“可变区”旨在将免疫球蛋白的此类结构域与抗体所广泛共享的结构域(诸如抗体Fc结构域)区分开。可变区包括这样的“高变区”，所述“高变区”的残基负责抗原结合。高变区包括来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(即，通常在轻链可变结构域中处于大致残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)处和在重链可变结构域中处于大致残基27-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处；Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))和/或那些来自“高变环”的残基(即轻链可变结构域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)和重链可变结构域中的残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-917)。“构架区”或“FR”残基是除本文所定义的高变区残基之外的那些可变结构域残基。术语抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、骆驼化抗体(参见例如，Muyldermans等人，2001,Trends Biochem.Sci.26:230；Nuttall等人，2000,Cur.Pharm.Biotech.1:253；Reichmann和Muyldermans,1999,J.Immunol.Meth.231:25；国际公开案第WO94/04678号和第WO94/25591号；美国专利第6,005,079号)、单链Fv(scFv)(参见例如，参见Pluckthun在ThePharmacology of Monoclonal Antibodies中，第113卷，Rosenburg和Moore编辑，Springer-Verlag,New York，第269-315页(1994))、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、内抗体(intrabodies)和抗独特型(抗Id)抗体(包括，例如抗Id抗体和抗-抗Id抗体的抗体)。具体而言，此类抗体包括任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个部分，所述一个或多个部分含有抗体互补决定区(“CDR”)和任选地包括抗体“可变区”抗原识别位点的构架残基，并且表现出免疫特异性结合抗原的能力。此类片段包括Fab'、F(ab')2、Fv、单链(ScFv)及其突变体、天然存在的变体，及包括抗体“可变区”抗原识别位点和异源蛋白(例如，毒素、不同抗原的抗原识别位点、酶、受体或受体配体等)的融合蛋白。
如本文所用，术语“片段”是指包括至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列的肽或多肽。
如本文所用，术语“调节”与改变效应、结果或活性(例如，信号转导)的能力有关。此类调节可以是激动性或拮抗性的。拮抗性调节可以是部分的(即，减弱但不消除)或者可以完全消除此类活性(例如，中和)。调节可包括受体在抗体结合之后内化或受体在靶细胞上的表达减少。激动性调节可以增强或以其它方式增加或增强活性(例如，信号转导)。在又一实施方案中，此类调节可以改变配体与其同源受体之间相互作用的特性，以便改变所引发的信号传导的特性。例如，分子可以通过与配体或受体结合而改变此类分子与其它配体或受体结合的能力，从而改变其总体活性。优选地，此类调节将提供可测量免疫系统活性的至少10％变化，更优选地，此类活性的至少50％变化，或此类活性的至少2倍、5倍、10倍或更加优选地至少100倍的变化。
正如在结合或表现的效应的情况下使用的，术语“基本上”旨在表示所观察到的效应是生理上或治疗上相关的。因此，例如，如果阻断程度是生理上或治疗上相关的(例如如果此程度大于60％完成、大于70％完成、大于75％完成、大于80％完成、大于85％完成、大于90％完成、大于95％完成，或大于97％完成)，则分子能够基本上阻断配体或受体的活性。类似地，称分子具有与另一分子基本上相同的免疫特异性和/或特征，其条件是此类免疫特异性和特征大于60％相同、大于70％相同、大于75％相同、大于80％相同、大于85％相同、大于90％相同、大于95％相同、或大于97％相同)。
如本文所用，“共刺激”信号涵盖共刺激正信号(例如，导致增强活性的信号)和共刺激负信号(例如，导致抑制活性的信号)。
如本文所用，术语“衍生物”是指这样的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段免疫特异性结合亲本抗体或参考抗体的相同靶标，但在氨基酸序列上与亲本抗体或参考抗体或其抗原结合片段的不同之处在于，相对于亲本抗体或参考抗体或其抗原结合片段包括一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代、添加、缺失或修饰。优选地，此类衍生物将具有与亲本抗体或参考抗体或其抗原结合片段基本上相同的免疫特异性和/或特征，或相同的免疫特异性和特征。此类衍生物的氨基酸取代或添加可包括天然存在的(即，DNA编码的)或非天然存在的氨基酸残基。术语“衍生物”涵盖例如嵌合或人源化变体，以及具有改变的CH1区、铰链区、CH2区、CH3区或CH4区的变体，以便形成例如具有变异Fc区的表现出增强或受损的效应子或结合特征的抗体等。
如本文所用，“嵌合抗体”是这样的分子，在所述分子中抗体的不同部分源自不同的免疫球蛋白分子，例如抗体具有源自非人抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指包括人构架区和一个或多个来自非人(通常为小鼠或大鼠)免疫球蛋白的CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白称为“供体”而提供构架的人免疫球蛋白称为“受体”。不需要存在恒定区，但如果它们存在，则它们应该与人免疫球蛋白恒定区基本上相同，即至少约85-99％，优选约95％或更多相同。因此，可能除CDR外，人源化免疫球蛋白的所有部分与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本上相同。人源化抗体是包括人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。例如，人源化抗体将不涵盖典型嵌合抗体，因为例如嵌合抗体的整个可变区是非人的。
如本文所用，术语“内源性浓度”是指由细胞(所述细胞可以是正常细胞、癌细胞或受感染细胞)天然表达(即，在不存在表达载体或重组启动子的情况下)的分子的水平。
如本文所用，术语“治疗”和“治疗用途”是指消除、减轻或改善由Siglec-15或其配体加剧的疾病或病症的一种或多种症状。
如本文所用，“治疗有效量”是指治疗剂的足以介导此类症状的临床相关性消除、减轻或缓解的量。如果效应幅度足以影响受体受试者的健康或预后，则所述效应是临床相关的。治疗有效量可以指治疗剂的足以延迟或最小化疾病发作的量，例如足以延迟或最小化癌症扩散的量。治疗有效量还可以指在疾病的治疗或管理中提供治疗益处的治疗剂的量。
如本文所用，术语“预防剂”是指在检测到病症或疾病的任何症状之前可用于预防此类病症或疾病的药剂。“预防有效”量是预防剂的足以介导此类保护的量。预防有效量还可以指预防剂的在疾病预防中提供预防益处的量。
如本文所用，术语“癌症”是指由细胞异常不受控制的生长产生的赘生物或肿瘤。如本文所用，癌症明确包括白血病和淋巴瘤。术语“癌症”是指涉及具有转移至远端位点的潜力并且表现出与非癌细胞不同的表型性状的细胞的疾病，所述表型性状为例如在三维基质诸如软琼脂中形成集落或者在三维基底膜或细胞外基质制剂中形成管状网络或网状基质。非癌细胞不会在软琼脂中形成集落，而是在三维基底膜或细胞外基质制剂中形成不同的球状结构。
如本文所用，“免疫细胞”是指来自造血来源的任何细胞，包括但不限于T细胞、B细胞、单核细胞、树突细胞和巨噬细胞。
如本文所用，“价”是指每个分子可用的结合位点的数量。
如本文所用，术语“免疫性”、“免疫学”或“免疫”应答是针对受体患者中的肽发展有益的体液(抗体介导的)和/或细胞(由抗原特异性T细胞或其分泌产物介导的)应答。此类应答可以是通过施用免疫原诱导的主动应答或通过施用抗体或初免T细胞诱导的被动应答。通过与I类或II类MHC分子有关联的多肽表位的呈递以激活抗原特异性CD4+T辅助细胞和/或CD8+细胞毒性T细胞，来引发细胞免疫应答。该应答还可能涉及单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、嗜碱性粒细胞、树突细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、嗜酸性粒细胞的激活，嗜中性粒细胞或先天免疫的其它组分的激活或募集。可以通过增殖测定(CD4+T细胞)或CTL(细胞毒性T淋巴细胞)测定来确定细胞介导的免疫应答的存在。体液应答和细胞应答对免疫原的保护或治疗效应的相对贡献可以通过单独从经免疫的同系动物中分离抗体和T细胞并测量在第二受试者中的保护或治疗效应来进行区分。
如本文所述，“免疫原性剂”或“免疫原”能够在任选地连同佐剂一起施用给哺乳动物时诱导针对其自身的免疫应答。
如本文所用，术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指哺乳动物，包括但不限于人、啮齿动物(诸如小鼠和大鼠)和其它实验动物。
如本文所用，术语“多肽”是指任何长度的氨基酸链，而与修饰(例如磷酸化或糖基化)无关。术语多肽包括蛋白质及其片段。多肽可以是“外源的”，意指它们是“异源的”，即是所利用的宿主细胞外来的，例如由细菌细胞产生的人多肽。本文将多肽公开为氨基酸残基序列。那些序列按氨基末端到羧基末端的方向从左到右书写。根据标准命名法，氨基酸残基序列以三字母或单字母代码命名，如下所示：丙氨酸(Ala，A)、精氨酸(Arg，R)、天冬酰胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、谷氨酰胺(Gln，Q)、谷氨酸(Glu，E)、甘氨酸(Gly，G)、组氨酸(His，H)、异亮氨酸(Ile，I)、亮氨酸(Leu，L)、赖氨酸(Lys，K)、甲硫氨酸(Met，M)、苯丙氨酸(Phe，F)、脯氨酸(Pro，P)、丝氨酸(Ser，S)、苏氨酸(Thr，T)、色氨酸(Trp，W)、酪氨酸(Tyr，Y)和缬氨酸(Val，V)。
如本文所用，术语“变体”是指与参考多肽或多核苷酸不同但保持基本特性的多肽或多核苷酸。多肽的典型变体在氨基酸序列方面与另一参考多肽不同。通常，差异是有限的，使得参考多肽和变体的序列总体上非常相似，并且在许多区域中是相同的。变体和参考多肽可以在氨基酸序列方面因一个或多个修饰(例如，取代、添加和/或缺失)而不同。取代或插入的氨基酸残基可以是或可以不是由遗传密码编码的氨基酸残基。多肽的变体可以是天然存在的，诸如等位基因变体，或者可以是不知道会天然存在的变体。
可以在本公开的多肽的结构中进行修饰和改变，并仍然获得具有与多肽相似的特征(例如，保守性氨基酸取代)的分子。例如，某些氨基酸可以取代序列中的其它氨基酸而没有明显的活性丧失。因为多肽的相互作用能力和性质限定了多肽的生物功能活性，所以可以在多肽序列中进行某些氨基酸序列取代，并且仍然获得具有类似性质的多肽。
在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。在本领域中通常理解氨基酸亲水指数在赋予多肽相互作用生物功能方面的重要性。已知某些氨基酸可以取代具有相似亲水指数或评分的其它氨基酸，并且仍然产生具有相似生物活性的多肽。已经基于其疏水性和电荷特征，而为每种氨基酸指定了亲水指数。那些指数为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。
据信氨基酸的相对亲水特性决定了所得多肽的二级结构，多肽的二级结构又限定了多肽与其它分子诸如酶、底物、受体、抗体、抗原和辅因子的相互作用。本领域已知氨基酸可以被具有相似亲水指数的另一种氨基酸取代，并仍然获得功能等同的多肽。在此类改变中，优选取代亲水指数在±2内的氨基酸，特别优选在±1内的那些氨基酸，甚至更特别优选在±0.5内的那些氨基酸。
类似氨基酸的取代也可以基于亲水性进行，特别是在由此产生的生物功能等同的多肽或肽旨在用于免疫学实施方案的情况下。已经为氨基酸残基指定以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；脯氨酸(-0.5±1)；苏氨酸(-0.4)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。应当理解，氨基酸可以取代具有相似亲水性值的另一种氨基酸，并仍然可以获得生物学等同的，特别是免疫学上等同的多肽。在此类改变中，优选取代亲水性值在±2内的氨基酸，特别优选在±1内的那些氨基酸取代，甚至更特别优选在±0.5内的那些氨基酸。
如上所述，氨基酸取代通常基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如其疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑到各种前述特征的示例性取代是本领域技术人员公知的并且包括(原残基：示例性取代)：(Ala：Gly、Ser)、(Arg：Lys)、(Asn：Gln、His)、(Asp：Glu、Cys、Ser)、(Gln：Asn)、(Glu：Asp)、(Gly：Ala)、(His：Asn、Gln)、(Ile：Leu、Val)、(Leu：Ile、Val)、(Lys：Arg)、(Met：Leu、Tyr)、(Ser：Thr)、(Thr：Ser)、(Tip：Tyr)、(Tyr：Trp、Phe)和(Val：Ile、Leu)。因此，本公开的实施方案考虑了如上所述的多肽的功能等同物或生物等同物。具体而言，多肽的实施方案可包括与目标多肽具有约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的变体。
术语“序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列和引入空位(如有必要)以达到实现最高序列同一性百分比之后，候选序列中核苷酸或氨基酸与参考核酸序列中的核苷酸或氨基酸相同的百分比。用于测定序列同一性百分比的比对可以通过本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公共可用的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大限度比对所需的任何算法，可以通过已知方法确定。
为了本文的目的，给定核苷酸或氨基酸序列C对于、相比于或针对给定核酸序列D的序列同一性％(其可以替代地表达为给定序列C对于、相比于或针对给定序列D所具有或包含的一定序列同一性％)计算如下：
100乘以分数W/Z，
其中W是通过序列比对程序(在该程序中比对C和D)评分为相同匹配的核苷酸或氨基酸数量，其中Z是D中核苷酸或氨基酸的总数。可以认识到，序列C的长度不等于序列D的长度，C对于D的序列同一性％不等于D对于C的序列同一性％。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括任何标准药物载体，诸如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液，诸如油/水乳液或水/油乳液，和各种类型的润湿剂。
如本文所用，术语“抗原决定簇”和“表位”可互换使用，并且是指抗体识别的结构。
如本文所用，“构象表位”是包括抗原氨基酸序列的不连续区段的表位。抗体基于抗原的3-D表面特征、形状或三级结构结合构象表位。
如本文所用，“线性表位”是由来自抗原的氨基酸的连续序列形成的表位。线性表位通常包括约5至约10个连续氨基酸残基。抗体基于抗原的一级序列结合线性表位。
如本文所用，“互补位”，也称为“抗原结合位点”，是抗体识别并结合抗原的部分。
II.组合物
A.Siglec-15序列
唾液酸结合性Ig样凝集素15(“Siglec-15”，也称为CD33类抗原3，和CD33L3)是在人脾脏和淋巴结的巨噬细胞和/或树突细胞上表达的1型跨膜蛋白(Angata等人，Glycobiology,17(8):838-46(2007)，其明确地全文以引用方式并入本文)。Siglec-15胞外结构域结合唾液酸化糖蛋白并且优先识别Neu5Acα2-6GalNAcα-结构。
Siglec-15经由其跨膜结构域中的赖氨酸残基(残基K274)与活化衔接蛋白DNAX活化蛋白(DAP)12和DAP10缔合，表明它起到活化信号分子的作用。Siglec-15的直系同源物不但存在于哺乳动物中，而且存在于脊椎动物的其它分支中，并且被认为在脊椎动物免疫系统中起到保守性调节作用。
Siglec-15通过抑制T细胞增殖和促炎细胞因子的产生而直接调节T细胞功能。Siglec-15通过骨髓细胞间接影响T细胞功能。在肿瘤细胞或M2巨噬细胞上表达的Siglec-15与骨髓细胞上的其结合配偶体相互作用，提供存活和分化信号，产生生成TNF-α、IL-6和IL-1β的独特骨髓细胞群。分泌的细胞因子进一步促进肿瘤生长。这一亚类的骨髓细胞可以通过减少T细胞中的IFN-γ产生而影响T细胞功能。
人Siglec-15的氨基酸序列在本领域中已知并且包括，例如
(SEQ ID NO:1)，UniProtKB-Q6ZMC9(SIG15_HUMAN)，其明确地全文以引用方式并入。
人Siglec-15包括来自SEQ ID NO:1的氨基酸1-19的信号肽序列，来自SEQ ID NO:1的氨基酸20-263的胞外结构域(用粗体和斜体字母表示)，来自SEQ ID NO:1的氨基酸264-284的跨膜结构域，及来自SEQ ID NO:1的氨基酸285-328的胞质结构域。预测Ig样V型结构域来自SEQ ID NO:1的氨基酸40-158(用单下划线表示)，并且预测Ig样C2型结构域来自SEQID NO:1的氨基酸168-251(用双下划线表示)。据信在残基64和142之间；95和104之间；及187和237之间形成二硫键，并且预测在残基172处糖基化。已将氨基酸276-279称为聚亮氨酸结构域。已知变体为F273L取代变体。
小鼠Siglec-15的氨基酸序列在本领域中已知并且包括，例如
(SEQ ID NO:2)，UniProtKB-A7E1W8(A7E1W8_MOUSE)，其明确地全文以引用方式并入。
小鼠Siglec-15包括来自SEQ ID NO:2的氨基酸1-23的信号肽序列，来自SEQ IDNO:2的氨基酸24-262的胞外结构域(用粗体和斜体字母表示)，来自SEQ ID NO:2的氨基酸263-283的跨膜结构域，和来自SEQ ID NO:2的氨基酸284-342的胞质结构域。预测Ig样V型结构域来自SEQ ID NO:2的氨基酸40-145(用单下划线表示)，并且预测Ig样C2型结构域来自SEQ ID NO:2的氨基酸169-250(用双下划线表示)。
B.Siglec-15结合分子
提供了Siglec-15结合分子，诸如抗体及其抗原结合片段以及与Siglec-15结合的其它多肽。下面提供了来自小鼠抗Siglec-15抗体的重链可变区和轻链可变区及其CDR的序列。提供了包括下面序列及其变体中的一者或多者的抗体、抗原结合片段和其它多肽。例如，提供了这样的抗体、抗原结合片段和多肽，所述抗体、抗原结合片段和多肽包括抗Siglec-15抗体轻链可变区的一个、两个或三个CDR和/或抗Siglec-15抗体重链可变区的一个、两个或三个CDR，结合Siglec-15。在一些实施方案中，所述抗体、抗原结合片段和多肽包括抗-Siglec-15抗体的轻链可变区、抗-Siglec-15的重链可变区或它们的组合，并且可以结合Siglec-15。
例如，所公开的分子可以免疫特异性结合Siglec-15(例如，SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2等)。例如，提供的分子可以免疫特异性结合：
(I)排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的人Siglec-15；
(II)以内源性浓度排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的人Siglec-15；
(III)排列在活细胞表面上的人Siglec-15，并且调节Siglec-15(例如，SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2等)与Neu5Acα2-6GalNAcα、LRRC4C、Siglec-15-反受体(S15-CR)或它们的组合之间的结合；
(IV)排列在活细胞表面上的人Siglec-15，并减少、防止或抑制TGF-β分泌；
(V)排列在活细胞表面上的人Siglec-15，其中细胞为骨髓细胞(诸如巨噬细胞或树突细胞)或癌细胞(例如，脑癌细胞、肾细胞癌细胞(RCC)、尤因肉瘤(Ewing sarcoma)细胞、乳腺癌细胞或卵巢癌细胞)；
(IV)它们的组合。
1.小鼠抗人Siglec-15抗体序列
如下文实施例中所述，用经CFA(完全弗氏佐剂)乳化的hS15.mIg(与小鼠IgG2a融合的人Siglec15胞外结构域[ECD])免疫Siglec-15敲除小鼠(n＝2)以产生一组小鼠抗人Siglec-15mAb。
下面提供了由二十四个杂交瘤产生的单克隆抗体的轻链可变区和重链可变区的序列，所述单克隆抗体在本文中称为1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A(也称为NC6和#6)、28A(也称为NC28和#28)、63A(也称为NC63和#63)、71A(也称为NC71和#71)、77A(也称为NC77和#77)、80A(也称为NC80和#80)、82B(也称为NC82和#82)、83B(也称为NC83和#83)、92A(也称为NC92和#92)、93B(也称为NC93和#93)、99B(也称为NC99和#99)、104B(也称为NC104和#104)，和105A(也称为NC105和#105)。在轻链序列和重链序列的上下文中CDR加下划线并且为粗体。在图2A至图3C的比对中也示出了序列和CDR。
a.1B2序列：
i.轻链
1B2轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:3)，其中
1B2轻链CDR1：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:24)
1B2轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
1B2轻链CDR3：FQGSHVPWT(SEQ ID NO:39)。
编码1B2轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAG
(SEQ ID NO:74)。
ii.重链
1B2重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:13)，其中
1B2重链CDR1：GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:46)
1B2重链CDR2：YISSGSSIIYYADTVKG(SEQ ID NO:56)
1B2重链CDR3：DHYHGNGSDY(SEQ ID NO:67)
编码1B2重链可变区的核酸序列为：
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTCGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACATTAGTAGTGGCAGTAGTATCATCTACTATGCAGACACAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGGGACCACTACCATGGTAACGGGTCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:85)。
b.1C3序列：
i.轻链
1C3轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:4)，其中
1C3轻链CDR1：RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:25)
1C3轻链CDR2：RMSNLAS(SEQ ID NO:33)
1C3轻链CDR3：MQHLEYPYT(SEQ ID NO:40)。
编码1C3轻链可变区的核酸序列为：
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTATATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTTTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAGGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:75)。
ii.重链
1C3重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:14)，其中
1C3重链CDR1：GYIFTDYYVN(SEQ ID NO:47)
1C3重链CDR2：KIGPGSVSIYYNEKFKG(SEQ ID NO:57)
1C3重链CDR3：(SEQ ID NO:68)。
编码1C3重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGCTACATCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGGAAGTGTTAGTATTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:86)。
c.1H3序列：
i.轻链
1H3轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:5)，其中
1H3轻链CDR1：KASDHINNWLA(SEQ ID NO:26)
1H3轻链CDR2：GATSLET(SEQ ID NO:34)
1H3轻链CDR3：QQYWSSPLT(SEQ ID NO:41)。
编码1H3轻链可变区的核酸序列为：
GACATCCAGATGACACAGGCTTCATCCTCCTTGTCTGTATCTCTAGGAGGCAGAGTCACCATTACTTGCAAGGCAAGTGACCACATTAATAATTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAATGCTCCTAGGCTCTTAATATCTGGTGCAACCAGTTTGGAAACTGGGGTTCCTTCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGAAAGGATTACACTCTCAGCATTACCAGTCTTCAGACTGAAGATGTTGCTACTTATTACTGTCAACAGTATTGGAGTTCTCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:76)。
ii.人源化轻链
一个实施方案提供了具有以下可变轻链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC-15抗体
1H3轻链CDR1：
1H3轻链CDR2：
1H3轻链CDR3：
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
另一个实施方案提供了具有以下可变轻链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC-15抗体
1H3轻链CDR1：
1H3轻链CDR2：
1H3轻链CDR3：
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
还有另一个实施方案提供了具有以下可变轻链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC-15抗体
1H3轻链CDR1：
1H3轻链CDR2：
1H3轻链CDR3：
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
iii.重链
1H3重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:15)，其中
1H3重链CDR1：NYGVH(SEQ ID NO:48)
1H3重链CDR2：LIWSDGSTTYNSALKS(SEQ ID NO:58)
1H3重链CDR3：HPYDDYSGYYYTMDY(SEQ ID NO:69)。
编码1H3重链可变区的核酸序列为：
CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCACCGTCTCAGGGTTCTCATTAAGCAATTATGGTGTACACTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGTACTGATATGGAGTGATGGAAGCACAACCTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTCCAAACTGGTGACACAGCCATGTACTACTGTGCCAGACATCCCTATGATGATTATTCCGGCTATTACTATACTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:87)。
iv.人源化重链
一个实施方案提供了具有以下可变重链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC15抗体
其中
1H3重链CDR1：NYGVH(SEQ ID NO:48)
1H3重链CDR2：LIWSDGSTTYNSALKS(SEQ ID NO:58)
1H3重链CDR3：HPYDDYSGYYYTMDY(SEQ ID NO:69)。
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
另一个实施方案提供了具有以下可变重链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC15抗体
其中
1H3重链CDR1：NYGVH(SEQ ID NO:48)
1H3重链CDR2：LIWSDGSTTYASALKS(SEQ ID NO:214)
1H3重链CDR3：HPYDDYSGYYYTMDY(SEQ ID NO:69)。
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
还有另一个实施方案提供了具有以下可变重链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC15抗体
其中
1H3重链CDR1：NYGVH(SEQ ID NO:48)
1H3重链CDR2：LIWSDGSTTYNPSLKS(SEQ ID NO:224)
1H3重链CDR3：HPYDDYSGYYYTMDY(SEQ ID NO:69)。
加下划线的氨基酸是相对于亲本序列改变的。
另一个实施方案提供了具有以下可变重链氨基酸序列的人源化抗SIGLEC-15抗体
其中
1H3重链CDR1：NYGVH(SEQ ID NO:48)
1H3重链CDR2：LIWSEGSTTYASALKS(SEQ ID NO:217)
1H3重链CDR3：HPYDDYSGYYYTMDY(SEQ ID NO:69)。
d.1C12序列：
i.轻链
1C12轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:3)，其中
1C12轻链CDR1：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:24)
1C12轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
1C12轻链CDR3：FQGSHVPWT(SEQ ID NO:39)。
编码1C12轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAA
(SEQ ID NO:77)。
ii.重链
1C12重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:16)，其中
1C12重链CDR1：GFSFSDYGMH(SEQ ID NO:49)
1C12重链CDR2：YISSGSSILYYADIVK(SEQ ID NO:59)
1C12重链CDR3：DHYHGNGSDY(SEQ ID NO:67)。
编码1C12重链可变区的核酸序列为：
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGTTTCTCTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACATTAGTAGTGGCAGTAGTATCCTCTACTATGCAGACATAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGGGACCACTACCATGGTAACGGGTCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:88)。
e.3H10序列：
i.轻链
3H10轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:6)，其中
3H10轻链CDR1：SASSSTSFMH(SEQ ID NO:27)
3H10轻链CDR2：DTSKLA(SEQ ID NO:35)
3H10轻链CDR3：HQRSAYPWT(SEQ ID NO:42)。
编码3H10轻链可变区的核酸序列为：
CAAATTATTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTACAAGTTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCACCTCCCCCAAAAGATGGATTTTTGACACATCCAAACTGGCTTCTGGAGTCCCTGGTCGCTTCATTGGTAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCACCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCATCAGCGGAGTGCTTACCCATGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
(SEQ ID NO:78)。
ii.重链
3H10重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:17)，其中
3H10重链CDR1：GFNIKDYYMH(SEQ ID NO:50)
3H10重链CDR2：RIDPEDGDIEYDPKFQG(SEQ ID NO:60)
3H10重链CDR3：DYDYDGGWFAY(SEQ ID NO:70)。
编码3H10重链可变区的核酸序列为：
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAAAGAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGGTGATATTGAATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGTTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTATTGTGTCACGGACTATGATTACGACGGAGGCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:89)。
f.5G12序列：
i.轻链
5G12轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:7)，其中
5G12轻链CDR1：KASQDINSYLS(SEQ ID NO:28)
5G12轻链CDR2：RANRLVD(SEQ ID NO:36)
5G12轻链CDR3：LQYDEFPYT(SEQ ID NO:43)。
编码5G12轻链可变区的核酸序列为：
GACATCAAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCATGTATGCATCTCTAGGAGAGAGAGTCACTATCACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTAATAGCTATTTAAGCTGGTTCCAGCAGAAACCAGGGAAATCTCCTAAGACCCTGATCTATCGTGCAAACAGATTGGTAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGCAAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGTATGAAGATATGGGAATTTATTATTGTCTACAGTATGATGAGTTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:79)。
ii.重链
5G12重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:18)，其中
5G12重链CDR1：GYTFTSYWIT(SEQ ID NO:51)
5G12重链CDR2：DIYCGSDTMHYNEKFKN(SEQ ID NO:61)
5G12重链CDR3：WWDYGSSYDYFDY(SEQ ID NO:71)。
编码5G12重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGATACAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATTGTGGTAGTGATACTATGCACTACAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATGGTGGGACTACGGTAGTAGCTACGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:90)。
g.6F8序列：
i.轻链
6F8轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:8)，其中
6F8轻链CDR1：RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:25)
6F8轻链CDR2：RMSNLAS(SEQ ID NO:33)
6F8轻链CDR3：MQHLEYPYT(SEQ ID NO:40)。
编码6F8轻链可变区的核酸序列为：
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTATTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:80)。
ii.重链
6F8重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:19)，其中
6F8重链CDR1：GYTFTDYYVN(SEQ ID NO:52)
6F8重链CDR2：KIGPGSVSIYYNEKFKD(SEQ ID NO:62)
6F8重链CDR3：YYYGFAY(SEQ ID NO:68)。
编码6F8重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGACCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCGAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACGGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGGAAGTGTTAGTATTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:91)。
h.8C8序列：
i.轻链
8C8轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:9)，其中
8C8轻链CDR1：RSSKSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:25)
8C8轻链CDR2：RMSNLAS(SEQ ID NO:33)
8C8轻链CDR3：MQHLEYPYT(SEQ ID NO:40)。
编码8C8轻链可变区的核酸序列为：
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:81)。
ii.重链
8C8重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:20)，其中
8C8重链CDR1：GYTFTDYYVN(SEQ ID NO:52)
8C8重链CDR2：KIGPESVSIYYSEKFKA(SEQ ID NO:63)
8C8重链CDR3：YYYGFAY(SEQ ID NO:68)。
编码8C8重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGAAAGTGTTAGTATTTATTACAGTGAGAAGTTCAAGGCCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:92)。
i.8H8序列：
i.轻链
8H8轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:10)，其中
8H8轻链CDR1：RSSSGAVTTGNFAN(SEQ ID NO:29)
8H8轻链CDR2：GTNNRAP(SEQ ID NO:37)
8H8轻链CDR3：ALWYSNHWV(SEQ ID NO:44)。
编码8H8轻链可变区的核酸序列为：
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTTCTGGGGCTGTTACAACTGGTAACTTTGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCACTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTA
(SEQ ID NO:82)。
ii.重链
8H8重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:21)，其中
8H8重链CDR1：GFTFSGFWMS(SEQ ID NO:53)
8H8重链CDR2：DINSDGSAINYAPSIKD(SEQ ID NO:64)
8H8重链CDR3：YDDYGYFDV(SEQ ID NO:72)。
编码8H8重链可变区的核酸序列为：
GAAGTGCAGCTGTTGGAGACTGGAGGAGGCTTGGTGCAACCGGGGGGGTCACGGGGACTCTCTTGTGAAGGCTCAGGGTTCACTTTTAGTGGCTTCTGGATGAGCTGGGTTCGACAGACACCTGGGAAGACCCTGGAGTGGATTGGAGACATTAATTCTGATGGCAGTGCAATAAACTACGCACCATCCATAAAGGATCGATTCACTATCTTCAGAGACAATGACAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAATGTGCGATCGGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGTGAGATATGATGATTACGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:93)。
j.9A5序列：
i.轻链
9A5轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:11)，其中
9A5轻链CDR1：KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:30)
9A5轻链CDR2：LVSKLDS(SEQ ID NO:38)
9A5轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码9A5轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAGTCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:83)。
ii.重链
9A5重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:22)，其中
9A5重链CDR1：GYTFTSYGLI(SEQ ID NO:54)
9A5重链CDR2：EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO:65)
9A5重链CDR3：SSPHGDY(SEQ ID NO:73)。
编码9A5重链可变区的核酸序列为：
CACGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGTTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTTTAATCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACATATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGTTCCTCTCCTCACGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:94)。
k.10G9序列：
i.轻链
10G9轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:12)，其中
10G9轻链CDR1：RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO:31)
10G9轻链CDR2：GTNNRAP(SEQ ID NO:37)
10G9轻链CDR3：ALWYSNHWV(SEQ ID NO:44)。
编码10G9轻链可变区的核酸序列为：
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCACTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTA
(SEQ ID NO:84)。
ii.重链
10G9重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:23)，其中
10G9重链CDR1：GFTFSDFWMS(SEQ ID NO:55)
10G9重链CDR2：DINSDGSAVNYAPSIKD(SEQ ID NO:66)
10G9重链CDR3：YDDYGYFDV(SEQ ID NO:72)。
编码10G9重链可变区的核酸序列为：
GAAGTGCAGCTGTTGGAGACTGGAGGAGGCTTAGTGCAACCTGGGGGGTCACGGGGACTCTCTTGTGAAGGCTCAGGGTTCACTTTTAGTGACTTCTGGATGAGCTGGGTTCGACAGACACCTGGGAAGACCCTGGAGTGGATTGGAGACATTAATTCTGATGGCAGTGCAGTTAACTACGCACCATCCATAAAGGATCAATTCACTATCTTCAGAGACAATGACAAGAGGACCCTGCACCTGCAGATGATCAATGTTCGATCGGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGTGAGATATGATGATTACGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:95)。
l.6A序列
i.轻链
6A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:96)，其中
6A轻链CDR1：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:24)
6A轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
6A轻链CDR3：FQGSHVPLT(SEQ ID NO:157)。
编码6A轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAGGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:120)。
ii.重链
6A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:108)，其中
6A重链CDR1：DDYMH(SEQ ID NO:162)
6A重链CDR2：CIDPENGDTEYASKFQD(SEQ ID NO:170)
6A重链CDR3：YVGFAY(SEQ ID NO:182)。
编码6A重链可变区的核酸序列为：
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAACTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATACTGAATATGCCTCGAAATTCCAGGACAAGGCCACTATAACAACAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTACA
(SEQ ID NO:133)。
m.28A序列
i.轻链
28A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:97)，其中
28A轻链CDR1：KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:30)
28A轻链CDR2：LVSELDS(SEQ ID NO:153)
28A轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码28A轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGATTCCCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGTAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTCATCTATCTGGTGTCTGAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAAGATTTGGGAGTTTATTATTGTTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:121)。
ii.重链
28A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:109)，其中
28A重链CDR1：SYGIT(SEQ ID NO:163)
28A重链CDR2：EIHPRSGNTYYNENFKD(SEQ ID NO:171)
28A重链CDR3：GGPGDY(SEQ ID NO:183)。
编码28A重链可变区的核酸序列为：
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCATAAGCTATGGTATAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAATTTCAAGGACAGGGCCTCACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGGTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGGGGTGGGCCGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:134)。
n.63A序列
i.轻链
63A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:98)，其中
63A轻链CDR1：KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:30)
63A轻链CDR2：LVSKLDS(SEQ ID NO:38)
63A轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码63A轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGTTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:122)。
ii.重链
63A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:110)，其中
63A重链CDR1：SYGIS(SEQ ID NO:164)
63A重链CDR2：QIYPRSDNTYYNERFKGK(SEQ ID NO:172)
63A重链CDR3：EGGPDY(SEQ ID NO:184)。
编码63A重链可变区的核酸序列为：
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTAGAAGTGACAATACTTACTACAATGAGAGGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGCGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGAGGGGGGTCCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:135)
o.71A序列
i.轻链
71A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:99)，其中
71A轻链CDR1：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:24)
71A轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
71A轻链CDR3：FQGSHVPLT(SEQ ID NO:157)。
编码71A轻链可变区的核酸序列为：
GACGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTACAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:123)。
ii.重链
71A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:111)，其中
71A重链CDR1：DDYMH(SEQ ID NO:162)
71A重链CDR2：CIDPENGDIEYASRFQG(SEQ ID NO:173)
71A重链CDR3：YVGFGY(SEQ ID NO:185)。
编码71A重链可变区的核酸序列为：
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATATTGAATATGCCTCGAGGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCACCAGCCTGACATCTGCGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:136)。
p.77A序列
i.轻链
77A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:100)，其中
77A轻链CDR1：RSSQNIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:146)
77A轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
77A轻链CDR3：FQGSHVPLT(SEQ ID NO:157)。
编码77A轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTTTGATGACCCAAAGTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAACATAGTACATAGTAATGGTAACACCTATTTAGAATGGTACCTGAAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTCTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAATGTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGAGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:124)。
ii.重链
77A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:112)，其中
77A重链CDR1：DDYMH(SEQ ID NO:162)
77A重链CDR2：CIDPENGDTEYASKFQG(SEQ ID NO:174)
77A重链CDR3：YVGFGY(SEQ ID NO:185)。
编码77A重链可变区的核酸序列为：
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGTATTGATCCTGAGAATGGTGATACTGAATATGCCTCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGTCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAGGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:137)。
q.80A序列
i.轻链
80A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:101)，其中
80A轻链CDR1：KSNQSLLNSGDQKNYLT(SEQ ID NO:147)
80A轻链CDR2：WASTRES(SEQ ID NO:154)
80A轻链CDR3：QNDYSYPLT(SEQ ID NO:158)。
编码80A轻链可变区的核酸序列为：
GACATTGTGATGACACAGTCTCCATCCTCCCTGACTGTGACAGCAGGAGAGAAGGTCACTATGAGCTGCAAGTCCAATCAGAGTCTGTTAAACAGTGGAGATCAAAAGAACTACTTGACCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTATTGATCTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAATTTATTACTGTCAGAATGATTATAGTTATCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:125)。
ii.重链
80A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:113)，其中
80A重链CDR1：DFYIN(SEQ ID NO:165)
80A重链CDR2：RIYPGSDETYYNEKFKD(SEQ ID NO:175)
80A重链CDR3：WFFDV(SEQ ID NO:186)。
编码80A重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAACTGAAGCAGTCTGGGGCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAGGGCTTCTGGCTACACTTTCACTGACTTCTACATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGCAAGGATTTATCCTGGAAGTGATGAGACTTACTACAATGAGAAGTTTAAGGACAAGGTCACACTGACTGCAGAAAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCTGTCTATTTCTGTGCCCTCTGGTTCTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:138)。
r.82B序列
i.轻链
82B轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:102)，其中
82B轻链CDR1：KSSQSLLDSDGNTYLN(SEQ ID NO:148)
82B轻链CDR2：LVSELDS(SEQ ID NO:153)
82B轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码82B轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACTATTGGACAATCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCCTAGATAGTGATGGAAACACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATTTGGTGTCTGAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:126)。
ii.重链
82B重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:114)，其中
82B重链CDR1：SDGIT(SEQ ID NO:166)
82B重链CDR2：QIHPRSGNTYYNGKFKG(SEQ ID NO:176)
82B重链CDR3：TGTGDY(SEQ ID NO:187)。
编码82B重链可变区的核酸序列为：
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGTTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACCTTCACAAGCGATGGTATTACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACCTACTACAATGGGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAGATCCTCCAGCACAACGTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAAAACTGGGACGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:139)。
s.83B序列
i.轻链
83B轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:103)，其中
83B轻链CDR1：QATQDIVKNLN(SEQ ID NO:149)
83B轻链CDR2：YATELAE(SEQ ID NO:155)
83B轻链CDR3：LQFYEFPYT(SEQ ID NO:159)。
编码83B轻链可变区的核酸序列为：
GAAATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTATGTCTGCATCTCTGGGAGACAGAATAACCATCACTTGCCAGGCAACTCAAGACATTGTTAAGAATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAACCCCCTTCATTCCTGATCTATTATGCAACTGAACTGGCAGAAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGTCAGACTATTCTCTGACAATCAGCAACCTGGAGTCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTCTACAGTTTTATGAATTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:127)。
ii.重链
83B重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:115)，其中
83B重链CDR1：DYNMH(SEQ ID NO:167)
83B重链CDR2：YINPNNGGTSYNQKFKD(SEQ ID NO:177)
83B重链CDR3：SDWEDC(SEQ ID NO:188)。
编码83B重链可变区的核酸序列为：
GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGGTACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAAACAAGTCCTCCAGCACAGCCTTCATGGAGCTCCGCAGCCTGGCATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGGTCTGACTGGGAAGACTGCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:140)。
t.92A序列
i.轻链
92A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:104)，其中
92A轻链CDR1：SASSSVSYMH(SEQ ID NO:150)
92A轻链CDR2：RTSNLAS(SEQ ID NO:156)
92A轻链CDR3：HQWSSWT(SEQ ID NO:160)。
编码92A轻链可变区的核酸序列为：
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCTAGGGGAGGAGATCACCCTAATTTGCAGTGCCAGCTCGAGTGTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACTTCTCCCAAACTCTTGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTTCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTTTTATTCTCTTACAATCAGCAGTGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCGATTATTACTGCCATCAGTGGAGTAGTTGGACGTTCGGTGGAGGCACCCAGCTGGAAATCAAA
(SEQ ID NO:128)。
ii.重链
92A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:116)，其中
92A重链CDR1：SGYYWN(SEQ ID NO:168)
92A重链CDR2：YIRHDGSNNYNPSLKN(SEQ ID NO:178)
92A重链CDR3：EIYDGSSGYFDVWGT(SEQ ID NO:189)。
编码92A重链可变区的核酸序列为：
GATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAATTTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTGGTTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACATAAGACACGATGGTAGCAATAACTACAACCCGTCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGATTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGTAAGAGAGATCTATGATGGTTCCTCCGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:141)。
u.93B序列
i.轻链
93B轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:105)，其中
93B轻链CDR1：KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:151)
93B轻链CDR2：WASTRES(SEQ ID NO:154)
93B轻链CDR3：QNDYSFPFT(SEQ ID NO:161)。
编码93B轻链可变区的核酸序列为：
GACATTGTGATGACACAGTCTCCATCCTCCCTGACTGTGACAGCAGGAGAGAAGGTCACTATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGTCTGTTAAACAGTGGAAATCAAAAGAATTACTTGACCTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAACTGTTGATCTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAATGTGCAGCCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGAATGATTATAGTTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAGAGTTGGAAATGAAA
(SEQ ID NO:129)。
ii.重链
93B重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:117)，其中
93B重链CDR1：DYYIN(SEQ ID NO:169)
93B重链CDR2：RIYPGNGNTDYNEKFKD(SEQ ID NO:179)
93B重链CDR3：WYFDV(SEQ ID NO:190)。
编码93B重链可变区的核酸序列为：
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGGGCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACTTTCACTGACTACTATATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGCAAGGATTTATCCTGGAAATGGTAATACTGACTACAATGAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACACTGACTGCAGAAAAATCCTCCACCACTGCCTACATACAACTCAGCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCTGTCTATTTCTGTTGCCTCTGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:142)。
v.99B序列
i.轻链
99B轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:106)，其中
99B轻链CDR1：KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:30)
99B轻链CDR2：LVSKLDS(SEQ ID NO:38)
99B轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码99B轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAATTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
(SEQ ID NO:130)。
ii.重链
99B重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:118)，其中
99B重链CDR1：SDGIT(SEQ ID NO:166)
99B重链CDR2：QIHPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO:180)
99B重链CDR3：TGTGDY(SEQ ID NO:187)。
编码99B重链可变区的核酸序列为：
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACCTTCACAAGCGACGGTATAACCTGGCTGAAACAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACCTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAAAACTGGGACGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:143)。
w.104B序列
i.轻链
104B轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:107)，其中
104B轻链CDR1：KSSLSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:152)
104B轻链CDR2：LVSKLDS(SEQ ID NO:38)
104B轻链CDR3：WQGTHFPFT(SEQ ID NO:45)。
编码104B轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCTGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCATCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAATTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAGTAAAA
(SEQ ID NO:131)。
ii.重链
104B重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:119)，其中
104B重链CDR1：SYGIS(SEQ ID NO:164)
104B重链CDR2：QIHPRSGNTYYNENFKG(SEQ ID NO:181)
104B重链CDR3：EGGPDY(SEQ ID NO:184)。
编码104B重链可变区的核酸序列为：
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGCCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAAAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGCCAAATCCTCCAGCACAGCGTACCTGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGAGGGGGGTCCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
(SEQ ID NO:144)。
x.105A序列
i.轻链
105A轻链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:99)，其中
105A轻链CDR1：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:24)
105A轻链CDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:32)
105A轻链CDR3：FQGSHVPLT(SEQ ID NO:157)。
编码105A轻链可变区的核酸序列为：
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTACAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
(SEQ ID NO:132)。
ii.重链
105A重链可变区氨基酸序列为：
(SEQ ID NO:111)，其中
105A重链CDR1：DDYMH(SEQ ID NO:162)
105A重链CDR2：CIDPENGDIEYASRFQG(SEQ ID NO:173)
105A重链CDR3：YVGFGY(SEQ ID NO:185)。
编码105A重链可变区的核酸序列为：
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATATTGAATATGCCTCGAGGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCACCAGCCTGACATCTGCGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
(SEQ ID NO:145)。
2.抗Siglec-15抗体及其抗原结合片段
公开了与一种或多种Siglec-15多肽或融合蛋白或其片段或变体结合的Siglec-15结合分子，包括抗体及其抗原结合片段。本文公开的抗体通常是结合Siglec-15多肽或其片段或融合体上存在的表位的单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体结合构象表位。在一些实施方案中，抗体结合线性表位。线性表位的长度可以是4、5、6、7、8、9、10、11个或更多个连续氨基酸。表位可包括一个或多个非氨基酸元件、翻译后修饰或它们的组合。翻译后修饰的示例包括但不限于糖基化、磷酸化、乙酰化、瓜氨酸化和泛素化。例如，抗体可以结合至少部分由一个或多个糖基形成的表位。
抗体或其抗原结合片段可以结合存在于内源Siglec-15多肽或重组Siglec-15多肽或它们的组合上的表位。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合Siglec-15的胞外结构域或其片段或由其形成的表位。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是功能阻断抗体，其减少或阻止Siglec-15与一种或多种其配体结合，减少受Siglec-15调节的细胞内信号传导，或它们的组合。
如以上所讨论的，Siglec-15唾液酸化糖蛋白并且优先识别Neu5Acα2-6GalNAcα-结构。下面的实验实施例说明Siglec-15与含富亮氨酸重复序列的蛋白4C(LRRC4C)(也称为Netrin-G1配体，和NGL-1)结合，这可能依赖于或不依赖于Neu5Acα2-6GalNAcα-结构。LRRC4C的核酸和多肽序列是本领域已知的，并且包括例如
MLNKMTLHPQQIMIGPRFNRALFDPLLVVLLALQLLVVAGLVRAQTCPSVCSCSNQFSKVICVRKNLREVPDGISTNTRLLNLHENQIQIIKVNSFKHLRHLEILQLSRNHIRTIEIGAFNGLANLNTLELFDNRLTTIPNGAFVYLSKLKELWLRNNPIESIPSYAFNRIPSLRRLDLGELKRLSYISEGAFEGLSNLRYLNLAMCNLREIPNLTPLIKLDELDLSGNHLSAIRPGSFQGLMHLQKLWMIQSQIQVIERNAFDNLQSLVEINLAHNNLTLLPHDLFTPLHHLERIHLHHNPWNCNCDILWLSWWIKDMAPSNTACCARCNTPPNLKGRYIGELDQNYFTCYAPVIVEPPADLNVTEGMAAELKCRASTSLTSVSWITPNGTVMTHGAYKVRIAVLSDGTLNFTNVTVQDTGMYTCMVSNSVGNTTASATLNVTAATTTPFSYFSTVTVETMEPSQDEARTTDNNVGPTPVVDWETTNVTTSLTPQSTRSTEKTFTIPVTDINSGIPGIDEVMKTTKIIIGCFVAITLMAAVMLVIFYKMRKQHHRQNHHAPTRTVEIINVDDEITGDTPMESHLPMPAIEHEHLNHYNSYKSPFNHTTTVNTINSIHSSVHEPLLIRMNSKDNVQETQI(SEQ ID NO:192，UniProtKB-Q9HCJ2LRC4C_HUMAN并且其明确地全文以引用方式并入本文)。
Siglec-15也可以结合免疫细胞诸如T细胞上的反受体(S15-CR)。
因此，在一些实施方案中，功能阻断性(拮抗性)Siglec-15结合分子减少、抑制或阻止Siglec-15与其配体(诸如具有Neu5Acα2-6GalNAcα-结构的糖蛋白、LRRC4C或Siglec-15-反受体)之间的相互作用。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与Siglec-15的结合可以增加免疫活化，减少免疫抑制或它们的组合。例如，在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合Siglec-15的Ig样V型结构域或Ig样C2型结构域。在一些实施方案中，表位包括Siglec-15的唾液酸结合位点(例如，表位包括SEQ ID NO:1的残基143)。
在一些实施方案中，抗体与单克隆抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A结合相同表位的一部分或全部。表位可以是线性表位或构象表位。在一些实施方案中，抗体具有与单克隆抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A相同的表位特异性。这可以通过产生含有单克隆抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A的互补位的重组抗体来实现。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子包括任何小鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A的一些或所有轻链CDR、整个轻链可变区、一些或所有重链CDR、整个重链可变区，或它们的组合。
Siglec-15结合分子可以包括与以上所列克隆物的CDR氨基酸序列至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同并且表现出对Siglec-15的免疫特异性结合的CDR。
例如，所公开的分子可包括具有SEQ ID NO:24-45和146-161中任一者的氨基酸序列的一个或多个轻链CDR。所述分子可至少包括一个轻链CDR1、一个轻链CDR2和一个轻链CDR3。例如，所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的轻链CDR1：SEQ IDNO:24-31和146-152。所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的轻链CDR2：SEQ ID NO:32-38和153-156。所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的轻链CDR3：SEQ ID NO:39-45和157-161。
在特定实施方案中，所述分子包括轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中所述轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3包括以下氨基酸序列：
所公开的分子可包括具有SEQ ID NO:46-73和162-190中任一者的氨基酸序列的一个或多个重链CDR。所述分子可至少包括一个重链CDR1、一个重链CDR2和一个重链CDR3。所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的重链CDR1：SEQ ID NO:46-55和162-169。所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的重链CDR2：56-66和170-181。所述分子可包括含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的重链CDR3：SEQ IDNO:67-73和182-190。
在特定实施方案中，所述分子包括重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，其中所述重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3包括以下氨基酸序列：
Siglec-15结合分子可以包括与以上任何克隆物产生的抗体的可变重链和/或轻链氨基酸序列至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％相同并且表现出对Siglec-15的免疫特异性结合的可变重链和/或可变轻链氨基酸序列。
例如，所公开的Siglec-15结合分子可包括具有以下的氨基酸序列的轻链可变区：SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107，或与SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，并且所述轻链可变区表现出对Siglec-15的免疫特异性结合。
另外或替代性地，所公开的Siglec-15结合分子可包括具有以下的氨基酸序列的重链可变区：SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119，或与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，并且所述重链可变区表现出对Siglec-15的免疫特异性结合。
Siglec-15结合分子可以是免疫球蛋白分子(例如抗体、双链抗体、融合蛋白等)，其包括一个、两个或三个轻链CDR和一个、两个或三个重链CDR(例如，在一些实施方案中，为三个轻链CDR和三个重链CDR)，其中所述轻链CDR包括：
(1)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1；
(2)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR2；
(3)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR3；
(4)小鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1和轻链CDR2；
(5)小鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1和轻链CDR3；
(6)小鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR2和轻链CDR3；
或
(7)小鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。
所述分子可以是免疫球蛋白分子，其包括一个、两个或三个轻链CDR和一个、两个或三个重链CDR(例如，在一些实施方案中，为三个轻链CDR和三个重链CDR)，其中所述重链CDR包括：
(1)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1；
(2)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR2；
(3)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR3；
(4)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1和重链CDR2；
(5)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1和重链CDR3；
(6)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR2和重链CDR3；
或
(7)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3。
所述分子可以是免疫球蛋白分子，其包括一个、两个或三个轻链CDR和一个、两个或三个重链CDR(例如，在一些实施方案中，为三个轻链CDR和三个重链CDR)，其中所述轻链CDR包括：
(1)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1；
(2)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR2；
(3)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR3；
(4)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1和轻链CDR2；
(5)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1和轻链CDR3；
(6)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR2和轻链CDR3；
或
(7)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
并且其中所述重链CDR包括：
(1)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1；
(2)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR2；
(3)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR3；
(4)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1和重链CDR2；
(5)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1和重链CDR3；
(6)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR2和重链CDR3；
或
(7)鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其人源化变体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3。
例如，所述抗体可以具有以下抗体的一个或多个CDR：鼠1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A或其嵌合抗体，或具有的CDR与鼠抗人Siglec-15抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B或105A的CDR相对应的人源化变体。
一个实施方案提供了一种人源化单克隆抗体，其具有的可变轻链氨基酸序列与选自由SEQ ID NO:227、228和229组成的组的氨基酸序列至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％相同和/或可变重链氨基酸序列与选自由SEQ ID NO:230、231、233和235组成的组的氨基酸序列至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％相同。
3.抗体组合物
所公开的Siglec-15结合分子可以是抗体或其抗原结合片段。所公开的抗体及其抗原结合片段包括任何类别的完全免疫球蛋白(即完整抗体)，其片段和至少含有抗体的抗原结合可变结构域的合成蛋白质。在一些实施方案中，所公开的分子包含抗体轻链以及至少抗体重链的可变结构域。在其它实施方案中，此类分子还可包括重链的CH1区、铰链区、CH2区、CH3区和CH4区中的一者或多者(尤其是CH1区和铰链区，或CH1区、铰链区和CH2区，或CH1区、铰链区、CH2区和CH3区)。抗体可选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，恒定结构域是补体固定恒定结构域，其中期望抗体表现出细胞毒活性，并且该类别通常为IgG1。在其它实施方案中，在不需要此类细胞毒活性时，恒定结构域可以是IgG2或IgG4类别。抗体可包括来自一种以上类别或同种型的序列，并且选择特定恒定结构域以优化所需效应子功能是在本领域普通技术范围内。
抗体中序列的可变结构域不同，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中。然而，变异性通常不是均匀地分布在抗体的可变结构域中。其通常集中在轻链和重链可变结构域中称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。可变结构域更高度保守的部分称为构架(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用β-折叠构型，通过三个CDR连接，形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密靠近保持在一起，并且来自另一条链的CDR有助于形成抗体的抗原结合位点。
还公开了具有生物活性的抗体片段。无论是否与其它序列连接，片段包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其它选择的修饰，条件是与未修饰的抗体或抗体片段相比，该片段的活性不会显著改变或受损。
有技术也可以适用于产生对本公开的抗原蛋白具特异性的单链抗体。用于产生单链抗体的方法是本领域技术人员熟知的。可以通过使用短肽接头将重链和轻链的可变结构域融合在一起来产生单链抗体，从而在单个分子上重构抗原结合位点。已经开发了单链抗体可变片段(scFv)，其中一个可变结构域的C末端通过15至25个氨基酸的肽或接头拴系到另一个可变结构域的N末端，而没有显著破坏抗原结合或结合特异性。选择接头以允许重链和轻链以其适当的构象取向结合在一起。
可以通过连接两个scFv来工程改造二价单链可变片段(二聚scFv)。这可以通过产生具有两个VH区和两个VL区的单肽链来完成，产生串联scFv。scFv还可以设计为具有接头肽，所述接头肽对于两个可变区而言太短而不能折叠在一起(约5个氨基酸)，迫使scFv二聚化。这种类型称为双链抗体。已显示双链抗体的解离常数比相应scFv低至多40倍，这意味着它们对其靶标具有高得多的亲和力。更短的接头(一个或两个氨基酸)导致形成三聚体(三链抗体或三体)。还生产了四链抗体。与双链抗体相比，它们对靶标具有更高的亲和力。
单克隆抗体从基本上同源的抗体群体获得，即除了可能存在于一小部分抗体分子中的可能天然发生的突变外，群体内的各个抗体是相同的。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体，以及此类抗体的片段中的相应序列相同或同源，只要它们表现出所需的拮抗活性即可。
a.嵌合抗体和人源化抗体
还提供了嵌合抗体及其抗原结合片段，其包括所公开的一个或多个序列及其功能变体。
产生嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见例如，Morrison,1985,Science 229:1202；Oi等人，1986,BioTechniques 4:214；Gillies等人，1989,J.Immunol.Methods 125:191-202；和美国专利第6,311,415号、第5,807,715号、第4,816,567号和第4,816,397号。包括来自非人物种的一个或多个CDR和来自人免疫球蛋白分子的构架区的嵌合抗体可以使用本领域已知的各种技术产生，包括例如CDR移植(EP 239,400；国际公开案第WO91/09967号；和美国专利第5,225,539号、第5,530,101号和第5,585,089号)、饰面或表面重修(veneering or resurfacing)(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,1991,MolecularImmunology28(4/5):489-498；Studnicka等人，1994,Protein Engineering 7:805；及Roguska等人，1994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:969)和链改组(美国专利第5,565,332号)。
所公开的分子可以是人或人源化抗体，或其抗原结合片段。许多非人抗体(例如，源自小鼠、大鼠或兔的那些抗体)在人体中是具天然抗原性，因此当施用于人时可以产生不良免疫应答。因此，在该方法中使用人或人源化抗体用于减少施用于人的抗体将会引起不良免疫应答的机会。
可以采用在免疫后能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体库的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的纯合性缺失导致对内源性抗体产生的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致在抗原激发后产生人抗体。
任选地，抗体在其它物种中产生并且“人源化”以在人类中施用。人源化形式的非人(例如鼠类)抗体是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其它抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体抗体的互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔的具有所需特异性、亲和力和能力的CDR的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架残基被相应的非人残基置换。人源化抗体还可含有既不存在于受体抗体中也存在于导入的CDR或构架序列中的残基。一般而言，人源化抗体将含有至少一个，通常两个可变结构域的基本上全部，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体最佳地还将含有免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。
用于将非人抗体人源化的方法是本领域熟知的，参见，例如，欧洲专利第EP 239,400号、第EP 592,106号和第EP 519,596号；国际公开案第WO91/09967号和第WO93/17105号；美国专利第5,225,539号、第5,530,101号、第5,565,332号、第5,585,089号、第5,766,886号和第6,407,213号；和Padlan,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人，1994,Protein Engineering 7(6):805-814；Roguska等人，1994,PNAS91:969-973；Tan等人，2002,J.Immunol.169:1119-1125；Caldas等人，2000,Protein Eng.13:353-360；Morea等人，2000,Methods20:267-79；Baca等人，1997,J.Biol.Chem.272:10678-10684；Roguska等人，1996,Protein Eng.9:895-904；Couto等人，1995,Cancer Res.55(23增刊):5973s-5977s；Couto等人，1995,Cancer Res.55:1717-22；Sandhu,1994,Gene 150:409-10；Pedersen等人，1994,J.Mol.Biol.235:959-973；Jones等人，1986,Nature 321:522-525；Reichmann等人，1988,Nature 332:323-329；和Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596)。
通常，人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为“导入”残基，其通常取自“导入”可变结构域。抗体人源化技术通常涉及使用重组DNA技术来操纵编码抗体分子的一条或多条多肽链的DNA序列。可以通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来基本上进行人源化。因此，人源化形式的非人抗体(或其片段)是嵌合抗体或片段，其中基本上少于完整的人可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。
为了降低抗原性，用于制备人源化抗体的人可变结构域(轻链和重链)的选择可能是非常重要的。根据“最佳拟合”方法，针对已知人可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。然后接受最接近于啮齿动物的人序列作为人源化抗体的人构架(FR)。另一种方法使用源自特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列的特定构架。相同的构架可用于几种不同的人源化抗体。
更重要的是，将抗体人源化而保留对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了实现这一目标，可以通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的并且是本领域技术人员熟悉的。可获得说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从共有序列和导入序列中选择并组合FR残基，从而实现所需的抗体特征，诸如对靶抗原的增加的亲和力。一般而言，CDR残基直接且最大量地参与影响抗原结合。
人、人源化或嵌合抗体衍生物可包括至少一个且通常两个可变结构域的基本上全部可变结构域，在所述可变结构域中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白(即，供体抗体)的那些CDR区并且所有或基本上所有构架区是人免疫球蛋白共有序列的那些构架区。此类抗体还可包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。可以针对所提出的抗体功能，尤其是可能需要的效应子功能来选择此类抗体的恒定结构域。在一些实施方案中，此类抗体的恒定结构域是或者可以包括人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。在一个具体实施方案中，当人源化抗体衍生物旨在用于治疗用途并且需要抗体效应子功能如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)活性时，使用人IgG恒定结构域，尤其是IgG1和IgG3同种型的恒定结构域。在替代实施方案中，当抗体旨在用于治疗目的而不需要抗体效应子功能时，使用IgG2和IgG4同种型。Fc恒定结构域包括改变抗体效应子功能的一个或多个氨基酸修饰，诸如美国专利申请公开案第2005/0037000号和第2005/0064514号中公开的那些。
人源化抗体的构架和CDR区不需要与亲本序列精确对应，例如，可以通过至少一个残基的取代、插入或缺失来诱变供体CDR或共有构架，使得该位点处CDR或构架残基不对应于共有序列或供体抗体。在一些实施方案中，此类突变不广泛。通常，至少75％的人源化抗体残基将对应于亲本构架区(FR)和CDR序列的那些残基，更常见的是90％，或高于95％。可以使用本领域已知的多种技术产生人源化抗体，包括但不限于CDR移植(欧洲专利第EP239,400号；国际公开案第WO 91/09967号；和美国专利第5,225,539号、第5,530,101号和第5,585,089号)、饰面或表面重修(veneering or resurfacing)(欧洲专利第EP 592,106号和EP 519,596号；Padlan,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人，1994,Protein Engineering 7(6):805-814；和Roguska等人，1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973)、链改组(美国专利第5,565,332号)，以及例如美国专利第6,407,213、第5,766,886号、第5,585,089号，国际公开案第WO 9317105号，Tan等人，2002,J.Immunol.169:1119-25,Caldas等人，2000,Protein Eng.13:353-60,Morea等人，2000,Methods20:267-79,Baca等人，1997,J.Biol.Chem.272:10678-84,Roguska等人，1996,Protein Eng.9:895-904,Couto等人，1995,Cancer Res.55(23增刊):5973s-5977s,Couto等人，1995,Cancer Res.55:1717-22,Sandhu,1994,Gene 150:409-10,Pedersen等人，1994,J.Mol.Biol.235:959-73,Jones等人，1986,Nature 321:522-525,Riechmann等人，1988,Nature 332:323和Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596公开的技术。
往往，构架区中的构架残基将被来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变，例如改善抗原结合。这些构架取代通过本领域熟知的方法鉴定，例如，通过CDR和构架残基的相互作用建模来鉴定对抗原结合重要的构架残基以及序列比较以鉴定特定位置的异常构架残基。(参见，例如，Queen等人，美国专利第5,585,089号；美国公开案第2004/0049014号和第2003/0229208号；美国专利第6,350,861、6,180,370号、第5,693,762号、第5,693,761号、第5,585,089号和5,530,101号及Riechmann等人，1988,Nature 332:323)。
所公开的鼠类抗人Siglec-15抗体的人、嵌合或人源化衍生物可用于人体内方法。鼠类抗体或其它物种的抗体可有利地用于许多用途(例如，体外或原位检测测定、急性体内使用等)。此类人或人源化抗体可包括一个或多个非人CDR中的氨基酸残基取代、缺失或添加。与非衍生的人源化抗体相比，人源化抗体衍生物可具有基本上相同的结合，更强的结合或更弱的结合。在具体实施方案中，已取代、缺失或添加(即突变)CDR的一个、两个、三个、四个或五个氨基酸残基。全人抗体特别适用于人类受试者的治疗性治疗。
此类人抗体可通过本领域已知的多种方法制备，包括使用源自人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法(参见美国专利第4,444,887号和第4,716,111号；和国际公开案第WO 98/46645号、第WO 98/50433号、第WO 98/24893号、第WO 98/16654号、第WO 96/34096号、第WO 96/33735号和第WO 91/10741号)。可以使用不能表达功能性内源免疫球蛋白但可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生此类人抗体。
例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可以随机地或通过同源重组引入小鼠胚胎干细胞中。替代性地，除了人重链和轻链基因之外，可以将人可变区、恒定区和多变区引入小鼠胚胎干细胞中。可以单独地或在通过同源重组引入人免疫球蛋白基因座的同时致使小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因无功能性。具体而言，JH区的纯合性缺失阻止了内源性抗体产生。将修饰的胚胎干细胞扩增并显微注射到胚泡中以产生嵌合小鼠。然后使嵌合小鼠繁殖产生表达人抗体的纯合子后代。使用常规方法用选择的抗原(例如整个或部分多肽)免疫转基因小鼠。可以使用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠中获得针对抗原的单克隆抗体(参见，例如，美国专利第5,916,771号)。转基因小鼠携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，随后进行类别转换和体细胞突变。因此，使用此类技术，可能产生治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。关于这种用于产生人抗体的技术的概述，参见Lonberg和Huszar(1995,Int.Rev.Immunol.13:65-93，其全文以引用方式并入本文)。关于这种用于产生人抗体和人单克隆抗体的技术以及用于产生此类抗体的方案的详细讨论，参见例如国际公开案第WO 98/24893、第WO 96/34096和第WO 96/33735号；和美国专利第5,413,923号、第5,625,126号、第5,633,425号、第5,569,825号、第5,661,016号、第5,545,806号、第5,814,318和第5,939,598号，其全文以引用方式并入本文。另外，诸如Abgenix,Inc.(Freemont,CA)和Medarex(Princeton,NJ)等公司可以使用与上述类似的技术来提供针对所选抗原的人抗体。
编码人受体构架序列的DNA序列包括但不限于来自人种系VH区段VH1-18和JH6和人种系VL区段VK-A26和JK4的FR区段。在一个具体实施方案中，使用常规重组DNA技术将一个或多个CDR插入构架区内。构架区可以是天然存在的或共有构架区和人构架区(参见，例如，Chothia等人，1998,“Structural Determinants In The Sequences OfImmunoglobulin Variable Domain,”J.Mol.Biol.278:457-479中的人构架区列表)。
i.人源化5G12
一个实施方案提供了人源化5G12抗体或其抗原结合片段。
b.单链抗体
Siglec-15结合分子可以是单链抗体。用于产生单链抗体的方法是本领域技术人员熟知的。通过使用短肽接头将重链和轻链的可变结构域融合在一起来产生单链抗体，从而在单个分子上重构抗原结合位点。已经开发了单链抗体可变片段(scFv)，其中一个可变结构域的C末端通过15至25个氨基酸的肽或接头拴系到另一个可变结构域的N末端，而没有显著破坏抗原结合或结合特异性。选择接头以允许重链和轻链以其适当的构象取向结合在一起。这些Fv缺乏天然抗体的重链和轻链中存在的恒定区(Fc)。
c.单价抗体
体外方法也适于制备单价抗体。消化抗体以产生其片段，特别是Fab片段，可以使用本领域已知的常规技术完成。例如，可以使用木瓜蛋白酶进行消化。木瓜蛋白酶消化抗体通常产生两个称为Fab片段的相同抗原结合片段和残留的Fc片段，每个Fab片段具有单个抗原结合位点。胃蛋白酶处理产生称为F(ab’)2片段的片段，其具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原。
在抗体消化中产生的Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于在重链结构域的羧基末端添加了一些残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab’)2片段是二价片段，其包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab’片段。Fab’-SH是本文中Fab’的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基。抗体片段最初是作为成对Fab’片段产生的，它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶合也是已知的。
d.抗体片段的缀合物或融合体
可以通过将抗体或其片段与治疗剂偶合而在治疗上使用抗体的靶向功能。抗体或片段(例如，免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分)与治疗剂的这种偶合可以通过制备免疫缀合物或通过制备包含抗体或抗体片段和治疗剂的融合蛋白来实现。
抗体或片段与治疗剂的这种偶合可以通过制备免疫缀合物或通过制备融合蛋白，或通过将抗体或片段连接至包含抗体或抗体片段和治疗剂的核酸(例如siRNA)来实现。
在一些实施方案中，修饰抗体以改变其半衰期。在一些实施方案中，需要增加抗体的半衰期，使其在循环中或在治疗部位存在更长的时间。例如，可能需要将循环中或待治疗位置的抗体滴度维持更长时间。可以使用延长半衰期的Fc变体，例如使用XtendTM抗体半衰期延长技术(Xencor,Monrovia,CA)对抗体进行工程改造。在其它实施方案中，降低抗DNA抗体的半衰期以减少潜在副作用。所公开的缀合物可用于改变给定生物应答。药物部分不应解释为限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质或多肽。此类蛋白质可包括，例如毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素。
e.单特异性和多特异性抗体
在一些实施方案中，所公开的抗体为单特异性，仅与Siglec-15结合。还提供了此类抗体的双特异性衍生物，此类抗体的三特异性衍生物或具有更高多特异性的衍生抗体，除了对人Siglec-15的特异性外，其还对不同免疫系统靶标显示出特异性。例如，此类抗体可结合人Siglec-15和抗原，该抗原对于将抗体靶向特定细胞类型或组织(例如，靶向与所治疗肿瘤的癌抗原相关的抗原)很重要。在另一个实施方案中，此类多特异性抗体结合参与替代免疫调节途径的分子(受体或配体)，诸如B7-H1、PD-1、CTLA4、TIM3、TIM4、OX40、CD40、GITR、4-1-BB、LIGHT或LAG3，以便增强免疫调节作用并在一个分子中结合多种作用机制，诸如配体阻断、免疫细胞活化和直接肿瘤靶向。
f.衍生物
还公开了任何公开的Siglec-15结合分子的“衍生物”的产生和用途。衍生物分子，例如抗体或抗体片段，可以使用本领域技术人员已知的技术通过化学修饰来进行修饰，包括但不限于特定化学裂解、乙酰化、配制、衣霉素(tunicamycin)代谢合成等。术语衍生物涵盖非氨基酸修饰，例如，氨基酸可以糖基化(例如，具有改变的甘露糖、2-N-乙酰葡糖胺、半乳糖、岩藻糖、葡萄糖、唾液酸、5-N-乙酰神经氨酸、5-乙二醇神经氨酸等含量)、乙酰化、磷酸化、酰胺化，通过已知的保护/阻断基团衍生化，蛋白水解裂解，与细胞配体或其它蛋白质连接等。在一些实施方案中，改变的碳水化合物修饰调节以下一项或多项：抗体的溶解，促进抗体的亚细胞转运和分泌，促进抗体组装，构象完整性和抗体介导的效应子功能。
在一个具体实施方案中，相对于缺乏碳水化合物修饰的抗体，改变的碳水化合物修饰增强抗体介导的效应子功能。导致抗体介导的效应子功能改变的碳水化合物修饰是本领域熟知的(例如，参见Shields,R.L.等人(2002)“Lack Of Fucose On Human IgG N-Linked Oligosaccharide Improves Binding To Human Fcgamma RIII And Antibody-Dependent Cellular Toxicity.,”J.Biol.Chem.277(30):26733-26740；Davies J.等人(2001)“Expression Of GnTIII In A Recombinant Anti-CD20 CHO Production CellLine:Expression Of Antibodies With Altered Glycoforms Leads To An Increase InADCC Through Higher Affinity For FC Gamma RIII,”Biotechnology&Bioengineering74(4):288-294)。改变碳水化合物含量的方法是本领域技术人员已知的，参见例如，Wallick,S.C.等人(1988)“Glycosylation Of A VH Residue Of A MonoclonalAntibody Against Alpha(1----6)Dextran Increases Its Affinity For Antigen,”J.Exp.Med.168(3):1099-1109；Tao,M.H.等人(1989)“Studies Of AglycosylatedChimeric Mouse-Human IgG.Role Of Carbohydrate In The Structure And EffectorFunctions Mediated By The Human IgG Constant Region,”J.Immunol.143(8):2595-2601；Routledge,E.G.等人(1995)“The Effect Of Aglycosylation On TheImmunogenicity Of A Humanized Therapeutic CD3 Monoclonal Antibody,”Transplantation60(8):847-53；Elliott,S.等人(2003)“Enhancement Of TherapeuticProtein In Vivo Activities Through Glycoengineering,”Nature Biotechnol.21:414-21；Shields,R.L.等人(2002)“Lack Of Fucose On Human IgG N-LinkedOligosaccharide Improves Binding To Human Fcgamma RIII And Antibody-DependentCellular Toxicity.,”J.Biol.Chem.277(30):26733-26740)。
可以通过重组方式修饰所公开的抗体，以增加抗体在介导所需功能中的更大功效。因此，可以使用重组方式通过取代来修饰抗体。通常，取代将是保守性取代。例如，抗体恒定区中的至少一个氨基酸可以用不同的残基置换。参见，例如美国专利第5,624,821号、美国专利第6,194,551号、申请第WO 9958572号；及Angal等人，Mol.Immunol.30:105-08(1993)。氨基酸的修饰包括氨基酸的缺失、添加、取代。在一些情况下，进行此类变化以减少不希望的活性，例如补体依赖性细胞毒性。经常，通过共价或非共价连接提供可检测信号的物质来标记抗体。已知多种标记和缀合技术，并且在科学和专利文献中广泛报道。可以筛选这些抗体与Siglec-15多肽或其片段或融合体的结合。参见例如，Antibody Engineering:A Practical Approach(Oxford University Press,1996)。
在一些实施方案中，抗体衍生物将具有与亲本抗体相似或相同的功能。在另一个实施方案中，抗体衍生物相对于亲本抗体表现出活性改变。例如，衍生抗体(或其片段)可以比亲本抗体更紧密地结合其表位或对蛋白水解抗性更高。衍生化抗体中的取代、添加或缺失可以是在抗体的Fc区中，并且因此可以用于改变抗体与一种或多种FcγR的结合亲和力。用于修饰与一种或多种FcγR的结合改变的抗体的方法是本领域已知的，参见例如PCT公开案第WO 04/029207号、第WO 04/029092号、第WO 04/028564号、第WO 99/58572号、第WO 99/51642号、第WO 98/23289号、第WO 89/07142号、第WO 88/07089号和美国专利第5,843,597号和第5,642,821号。
在一些实施方案中，抗体已经缺失Fc区(例如，Fab或F(ab)2等)或经修饰使得该分子表现出Fc受体(FcR)结合活性降低或没有表现出Fc受体(FcR)结合活性，或表现出抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性增强。在一些实施方案中，抗体对活化FcγR(例如FcγRIIIA)的亲和力改变。此类修饰还可具有改变的Fc介导的效应子功能。影响Fc介导的效应子功能的修饰是本领域熟知的(参见美国专利第6,194,551号和第WO00/42072号)。在一个特定实施方案中，Fc区的修饰导致抗体具有改变的抗体介导的效应子功能、改变的与其它Fc受体(例如，Fc活化受体)的结合、改变的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性、改变的C1q结合活性、改变的补体依赖性细胞毒性活性(CDC)、吞噬活性或其任何组合。
衍生化抗体可用于改变哺乳动物(诸如人)中亲本抗体的半衰期(例如，血清半衰期)。例如，此类改变可导致半衰期大于15天，大于20天，大于25天，大于30天，大于35天，大于40天，大于45天，大于2个月，大于3个月，大于4个月或大于5个月。人源化抗体或其片段在哺乳动物(诸如人)中的半衰期增加导致哺乳动物中所述抗体或抗体片段的血清滴度更高，从而降低了所述抗体或抗体片段的施用频率和/或降低了要施用的所述抗体或抗体片段的浓度。体内半衰期增加的抗体或其片段可以通过本领域技术人员已知的技术产生。例如，通过修饰(例如，取代、缺失或添加)经鉴定为参与Fc结构域和FcRn受体之间的相互作用的氨基酸残基，可以产生体内半衰期增加的抗体或其片段。可以工程改造人源化抗体以增加生物半衰期(参见例如美国专利第6,277,375号)。例如，可以在Fc-铰链结构域中工程改造人源化抗体以具有增加的体内或血清半衰期。
体内半衰期增加的抗体或其片段可以通过附连于所述抗体或抗体片段聚合物分子诸如高分子量聚乙二醇(PEG)来产生。PEG可以通过PEG与所述抗体或抗体片段的N-末端或C-末端的位点特异性缀合或通过赖氨酸残基上存在的ε-氨基用或不用多功能接头附连到所述抗体或抗体片段上。将使用导致最小生物活性损失的直链或支链聚合物衍生化。通过SDS-PAGE和质谱法密切监测缀合度，以确保PEG分子与抗体的正确联度。可以通过例如尺寸排阻色谱法或离子交换色谱法将未反应的PEG与抗体-PEG缀合物分离。
还可以通过Davis等人描述的方法和偶合剂修饰抗体。(参见美国专利第4,179,337号)，以便提供可以注入哺乳动物循环系统中而基本上没有免疫原性反应的组合物。
可以修饰人源化抗体的构架残基。构架区中的残基可以用来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变例如改善抗原结合。这些构架取代可以通过本领域熟知的方法鉴定，例如通过CDR和构架残基的相互作用建模来鉴定对抗原结合重要的构架残基以及序列比较以鉴定特定位置的异常构架残基。(参见，例如，美国专利第5,585,089号；和Riechmann,L.等人(1988)“Reshaping Human Antibodies For Therapy,”Nature 332:323-327)。所公开的Siglec-15结合分子可以与异源分子(即，无关分子)重组融合或化学缀合(包括共价和非共价缀合)。融合不一定需要是直接的，但可以通过接头序列进行。
在一些实施方案中，此类异源分子是具有至少10个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个或至少100个氨基酸的多肽。替代性地，此类异源分子也可以是酶、激素、细胞表面受体、药物部分，诸如：巨噬细胞特异性靶向试剂(诸如细胞内羧酸酯酶、hCE1(Needham,L.A.等人(2011)“Drug Targeting ToMonocytes And Macrophages Using Esterase-Sensitive Chemical Motif,”J.Pharmacol.Exp.Ther.DOI:10.1124/jpet.111.183640)、几丁质和壳聚糖(Muzzarelli,R.A.(2010)“Chitins And Chitosans As Immunoadjuvants And Non-Allergenic DrugCarriers,”Mar Drugs8(2):292-312)、半乳糖化低密度脂蛋白(Wu,F.等人(009)“Galactosylated LDL Nanoparticles:A Novel Targeting Delivery System ToDeliver Antigen To Macrophages And Enhance Antigen Specific T CellResponses,”Molec.Pharm.6(5):1506-1517)、N-甲酰基-Met-Leu-Phe(fMLF)、巨噬细胞特异性趋化蛋白(Wan,L.等人(2008)“Optimizing Size And Copy Number For PEG-Fmlf(N-Formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanine)Nanocarrier Uptake By Macrophages,”Bioconjug.Chem.19(1):28-38)、马来酰化或甘露糖基化蛋白，诸如马来酰化白蛋白(Anatelli,F.等人(2006)“Macrophage-Targeted Photosensitizer ConjugateDelivered By Intratumoral Injection,”Mol Pharm.3(6):654-664；Bansal,P.等人(1999)“MHC Class I-Restricted Presentation Of Maleylated Protein Binding ToScavenger Receptors,”J.Immunol.162(8):4430-4437)；还请参见Mukhopadhyay,A.等人(2003)“Intracellular Delivery Of Drugs To Macrophages,”Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.84:183-209)、毒素(诸如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素(即PE-40)、白喉毒素、蓖麻毒素、白树毒素(gelonin)或商陆抗病毒蛋白)、蛋白质(诸如肿瘤坏死因子、干扰素(诸如α-干扰素、β-干扰素)、神经生长因子、血小板源性生长因子、组织纤溶酶原激活物或凋亡剂(例如肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β))、生物反应调节剂(诸如淋巴因子(例如，白细胞介素-1(“IL-1”)、白细胞介素-2(“IL-2”)、白细胞介素-6(“IL-6”))、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或巨噬细胞集落刺激因子(“M-CSF”)或生长因子(例如生长激素(“GH”)))、细胞毒素(例如细胞抑制剂或杀细胞剂，诸如紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁(emetine)、丝裂霉素、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙素(colchicin)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、心得安(propranolol)和嘌呤霉素及其类似物或同系物)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷化剂(例如氮芥(mechlorethamine)、苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法仑(melphalan)、(卡莫司汀(carmustine)；BSNU)和洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、环磷酰胺、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂(cisplatin))、蒽环霉素(例如柔红霉素(daunorubicin)(以前称为道诺霉素)和多柔比星(doxorubicin))、抗生素(例如更生霉素(dactinomycin)(以前称为放线菌素)、博来霉素(bleomycin)、光神霉素和氨茴霉素(AMC))或抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)。
在另一个实施方案中，如Segal在美国专利第4,676,980号中所述，将分子与第二抗体缀合以形成抗体异源缀合物。此类异源缀合抗体可另外结合半抗原(诸如荧光素等)或细胞标记(例如，4-1-BB、B7-H1、PD-1、CD4、CD8、CD14、CD25、CD27、CD40、CD68、CD163、CTLA4、GITR、LAG-3、OX40、TIM3、TIM4、TLR2、LIGHT等)或细胞因子(例如，IL-4、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、TGF-β、IFNg、Flt3、BLy)或趋化因子(例如，CCL21)等。
融合蛋白的Fc部分可以按同种型或亚类改变，可以是嵌合的或杂交的，和/或可以修饰，例如以改善效应子功能，控制半衰期、组织可及性，增强生物物理学特征诸如稳定性，及提高生产效率(且成本更低)。用于构建公开的融合蛋白的许多修饰及其制备方法是本领域已知的，参见例如Mueller,J.P.等人(1997)“Humanized Porcine VCAM-SpecificMonoclonal Antibodies With Chimeric IgG2/G4 Constant Regions Block HumanLeukocyte Binding To Porcine Endothelial Cells,”Mol.Immun.34(6):441-452,Swann,P.G.(2008)“Considerations For The Development Of Therapeutic MonoclonalAntibodies,”Curr.Opin.Immun.20:493-499(2008)和Presta,L.G.(2008)“MolecularEngineering And Design Of Therapeutic Antibodies,”Curr.Opin.Immun.20:460-470。在一些实施方案中，Fc区是天然IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，Fc区是杂交体，例如由IgG2/IgG4 Fc恒定区组成的嵌合体。对Fc区的修饰包括但不限于修饰IgG4以防止与Fcγ受体和补体结合，修饰IgG1以改善与一种或多种Fcγ受体的结合，修饰IgG1以最小化效应子功能(氨基酸变化)，IgG1具有改变的聚糖/无聚糖(通常通过改变表达宿主)和IgG1具有改变的pH依赖性FcRn结合。Fc区可包括整个铰链区，或小于整个铰链区。用利妥昔单抗(rituximab)(一种针对CD20的嵌合小鼠/人IgG1单克隆抗体)治疗非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)或华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)的患者的治疗结果与个体表达对人IgG1的Fc结构域具有不同内在亲和力的Fcγ受体等位基因变体相关。具体而言，具有低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)的高亲和力等位基因的患者显示出更高的反应率，并且在非霍奇金淋巴瘤的情况下，提高了无进展存活率。因此，Fc结构域可以是公开的抗体和片段的，其含有一个或多个氨基酸插入、缺失或取代，降低与低亲和力抑制性Fc受体CD32B(FcγRIIB)的结合并保持与低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)结合的野生型水平或增强其结合。
另一个实施方案包括IgG2-4杂交体和IgG4突变体，其减少了与FcγR的结合，这增加了它们的半衰期。代表性IgG2-4杂交体和IgG4突变体在Angal,S.等人(1993)“A SingleAmino Acid Substitution Abolishes The Heterogeneity Of Chimeric Mouse/Human(Igg4)Antibody,”Molec.Immunol.30(1):105-108；Mueller,J.P.等人(1997)“HumanizedPorcine VCAM-Specific Monoclonal Antibodies With Chimeric IgG2/G4 ConstantRegions Block Human Leukocyte Binding To Porcine Endothelial Cells,”Mol.Immun.34(6):441-452；和美国专利第6,982,323号中进行了描述。在一些实施方案中，修饰IgG1和/或IgG2结构域；例如，Angal,S.等人(1993)描述了其中丝氨酸241被脯氨酸置换的IgG1和IgG2变体。
在一些实施方案中，此类分子的Fc结构域含有增强与CD16A结合的氨基酸插入、缺失或取代。人IgG1的Fc结构域中增加与CD16A结合而减少与CD32B结合的大量取代是本领域已知的，并且在Stavenhagen,J.B.等人(2007)“Fc Optimization Of TherapeuticAntibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And ControlsTumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors,”CancerRes.57(18):8882-8890中进行了描述。与CD32B结合减少和/或与CD16A结合增加的人IgG1Fc结构域的示例性变体含有F243L、R929P、Y300L、V305I或P296L取代。这些氨基酸取代可以以任何组合存在于人IgG1 Fc结构域中。在一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有F243L、R929P和Y300L取代。在另一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有F243L、R929P、Y300L、V305I和P296L取代。在另一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有N297Q取代，因为该突变消除了FcR结合。
将治疗部分与抗体缀合的技术是熟知的；参见，例如，Arnon等人，“MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,in MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(编辑),1985,第243-56页，Alan R.Liss,Inc.)；Hellstrom等人，“Antibodies For Drug Delivery”，在Controlled Drug Delivery(第2版)中，Robinson等人(编辑)，1987，第623-53页，Marcel Dekker,Inc.)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”，在Monoclonal Antibodies‘84中：Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(编辑)，1985，第475-506页)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”，在MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy中，Baldwin等人(编辑)，1985，第303-16页，Academic Press；和Thorpe等人(1982)“The Preparation And Cytotoxic PropertiesOf Antibody-Toxin Conjugates,”Immunol.Rev.62:119-158。
任何公开的分子都可以与标记序列(例如肽)融合，以利于纯化。在一些实施方案中，标记氨基酸序列是六-组氨酸肽，对应于源自流感血凝素蛋白的表位的血凝素“HA”标签(Wilson,I.A.等人(1984)“The Structure Of An Antigenic Determinant In AProtein,”Cell,37:767-778)和“flag”标签(Knappik,A.等人(1994)“An ImprovedAffinity Tag Based On The FLAG Peptide For The Detection And Purification OfRecombinant Antibody Fragments,”Biotechniques 17(4):754-761)。
所公开的Siglec-15结合分子可以与诊断剂或治疗剂或需要增加其血清半衰期的另一种分子缀合。抗体可以在诊断上(在体内、原位或体外)用于例如监测疾病、病症或感染的发展或进展，作为临床测试程序的一部分，以例如确定给定治疗方案的功效或选择更可能对特定疗法有反应的患者(诸如表达高水平Siglec-15的那些患者)。
通过将分子(诸如抗体或其抗原结合片段)偶合至可检测物质可以利于检测。可检测物质的示例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、放射性物质、正电子发射金属和非放射性顺磁金属离子。可检测物质可以使用本领域已知的技术直接地或通过中间体(例如，本领域已知的接头)间接地偶合或缀合至抗体。对于可以与抗体缀合以用作诊断剂的金属离子，参见，例如美国专利第4,741,900号。此类诊断和检测可以通过将抗体与可检测物质偶合来完成，所述可检测物质包括但不限于各种酶，酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基复合物，例如但不限于链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；荧光物质，例如但不限于，伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质，例如但不限于鲁米诺(luminol)；生物发光物质，例如但不限于荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白(aequorin)；放射性物质，例如但不限于铋(213Bi)、碳(14C)、铬(51Cr)、钴(57Co)、氟(18F)、钆(153Gd、159Gd)、镓(68Ga、67Ga)、锗(68Ge)、钬(166Ho)、铟(115In、113In、112In、111In)、碘(131I、125I、123I、121I)、镧(140La)、镥(177Lu)、锰(54Mn)、钼(99Mo)、钯(103Pd)、磷(32P)、镨(142Pr)、钷(149Pm)、铼(186Re、188Re)、铑(105Rh)、钌(97Ru)、钐(153Sm)、钪(47Sc)、硒(75Se)、锶(85Sr)、硫(35S)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、锡(113Sn、117Sn)、氚(3H)、氙(133Xe)、镱(169Yb、175Yb)、钇(90Y)、锌(65Zn)；使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属，和非放射性顺磁金属离子。所公开的分子可以附着于特别适合用于免疫测定或纯化靶抗原或能够结合靶抗原的其它分子的固体支撑物，所述靶抗原已经通过与抗体或抗原结合片段结合而固定在支撑物上。此类固体支撑物包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。还公开了编码任何此类抗体、融合蛋白或片段的核酸分子(DNA或RNA)，以及能够传递或复制此类核酸分子的载体分子(诸如质粒)。核酸可为单链、双链，可以含有单链和双链部分。
3.制备方法
Siglec-15结合分子可以通过本领域已知可用于产生多肽的任何方法产生，例如体外合成、重组DNA产生等。人源化抗体通常通过重组DNA技术产生。可以使用重组免疫球蛋白表达技术产生抗体。包括人源化抗体的免疫球蛋白分子的重组产生在美国专利第4,816,397号(Boss等人)、美国专利第6,331,415号和第4,816,567号(均属于Cabilly等人)、英国专利GB2,188,638(Winter等人)和英国专利GB2,209,757中有描述。用于重组表达免疫球蛋白(包括人源化免疫球蛋白)的技术也可以在Goeddel等人，Gene Expression Technology Methods in Enzymology第185卷Academic Press(1991)，和Borreback,Antibody Engineering,W.H.Freeman(1992)中找到。另外关于重组抗体的生成、设计和表达的信息可 以在Mayforth,Designing Antibodies,Academic Press,San Diego(1993)中找到。
用于产生重组嵌合抗体的示例性方法可包括以下：a)通过常规分子生物学方法构建编码并表达抗体重链的表达载体，其中抗Siglec-15抗体的CDR和可变区与源自人免疫球蛋白的Fc区融合，从而产生用于表达嵌合抗体重链的载体；b)通过常规分子生物学方法构建编码并表达鼠类抗人Siglec-15单克隆抗体的抗体轻链的表达载体，从而产生用于表达嵌合抗体轻链的载体；c)通过常规分子生物学方法将表达载体转移至宿主细胞，以产生用于表达嵌合抗体的转染宿主细胞；以及d)通过常规细胞培养技术培养转染的细胞，以产生嵌合抗体。
用于产生重组人源化抗体的示例性方法可包括以下：a)通过常规分子生物学方法构建编码和表达抗人Siglec-15重链的表达载体，其中CDR和保持供体抗体结合特异性所需的可变区构架最小部分源自抗人Siglec-15抗体的人源化变体，并且抗体的其余部分源自人免疫球蛋白，从而产生用于表达人源化抗体重链的载体；b)通过常规分子生物学方法构建编码和表达抗体轻链的表达载体，其中CDR和保持供体抗体结合特异性所需的可变区构架最小部分源自非人免疫球蛋白，诸如公开的鼠类抗人Siglec-15抗体，抗体的其余部分源自人免疫球蛋白，从而产生用于表达人源化抗体轻链的载体；c)通过常规分子生物学方法将表达载体转移至宿主细胞，以产生用于表达人源化抗体的转染宿主细胞；及d)通过常规细胞培养技术培养转染的细胞，以产生人源化抗体。
关于任一示例性方法，宿主细胞可以与此类表达载体共转染，所述表达载体可以含有不同的选择标记，但除重链和轻链编码序列外，可以是相同的。该方法提供重链和轻链多肽的同等表达。替代性地，可以使用编码重链和轻链多肽两者的单一载体。重链和轻链的编码序列可包括cDNA或基因组DNA或两者。用于表达重组抗体的宿主细胞可以是细菌细胞诸如大肠杆菌(Escherichia coli)，或真核细胞(例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或HEK-293细胞)。表达载体的选择取决于宿主细胞的选择，并且可以选择以便在所选宿主细胞中具有所需的表达和调控特征。可以使用的其它细胞系包括但不限于CHO-K1、NSO和PER.C6(Crucell,Leiden,Netherlands)。
任何公开的抗体均可以使用本领域技术人员熟知的技术用于产生抗独特型抗体(参见，例如，Greenspan,N.S.等人(1989)“Idiotypes:Structure And Immunogenicity,”FASEB J.7:437-444；和Nisinoff,A.(1991)“Idiotypes:Concepts And Applications,”J.Immunol.147(8):2429-2438)。
C.Siglec-15配体结合分子
还提供了结合Siglec-15配体的分子，诸如Siglec-15蛋白、Siglec-15融合蛋白及其片段和变体。Siglec-15配体结合分子可以结合Siglec-15配体，诸如唾液酸化糖蛋白、LRRC4C、Siglec-15-反受体等。在一些实施方案中，Siglec-15配体结合分子可以诱导通过Siglec-15配体的信号转导。在一些实施方案中，Siglec-15配体结合分子阻断或以其它方式减少Siglec-15与其配体之间的相互作用，而不诱导通过Siglec-15或其配体的信号转导。Siglec-15配体结合分子可如下文更详细讨论和实施例中所示，用于调节Siglec-15活性，并且可用于治疗性治疗有需要的受试者。
1.Siglec-15多肽
在一些实施方案中，Siglec-15配体结合分子为Siglec-15或其片段或变体。例如，在一些实施方案中，Siglec-15配体结合分子包括与SEQ ID NO:1或2至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽，或其片段诸如胞外结构域，或其亚结构域诸如IgV结构域、IgC结构域或它们的组合。在一些实施方案中，Siglec-15多肽可溶或是无细胞的。例如，在一些实施方案中，Siglec-15缺乏跨膜结构域、胞质结构域或前导序列中的一种或多种。
2.Siglec-15融合蛋白
在一些实施方案中，Siglec-15配体结合分子是Siglec-15融合蛋白。提供了含有Siglec-15多肽的融合蛋白，Siglec-15多肽与其它多肽偶合形成融合蛋白。Siglec-15融合多肽可具有包含整个或部分Siglec-15蛋白的第一融合配偶体，Siglec-15蛋白(i)直接与第二多肽融合，或(ii)任选地与和第二多肽融合的接头肽序列融合。融合蛋白任选地含有起到使两种或更多种融合蛋白二聚化或多聚化的作用的结构域。在一些实施方案中，融合蛋白不是或并未二聚化或多聚化。肽/多肽接头结构域可以是单独的结构域，或替代性地可以包含在融合蛋白的其它结构域(Siglec-15多肽或第二多肽)之一中。类似地，起到使融合蛋白二聚化或多聚化的作用的结构域可以是单独的结构域，或替代性地可以包含在融合蛋白的其它结构域(Siglec-15多肽、第二多肽或肽/多肽接头结构域)之一中。在一些实施方案中，二聚化/多聚化结构域和肽/多肽接头结构域相同。
本文公开的融合蛋白具有式I：
N-R1-R2-R3-C
其中“N”表示融合蛋白的N-末端，“C”表示融合蛋白的C-末端，“R1”为Siglec-15多肽，“R2”为任选的肽/多肽接头结构域，并且“R3”为第二多肽。替代性地，R3可为Siglec-15多肽并且R1可为第二多肽。
融合蛋白可以二聚化或多聚化。二聚化或多聚化可以通过二聚化或多聚化结构域在两种或更多种融合蛋白之间发生。替代性地，融合蛋白的二聚化或多聚化可通过化学交联发生。形成的二聚体或多聚体可以是同型二聚体/同型多聚体或杂二聚体/杂多聚体。如以上所讨论，在一些实施方案中，融合蛋白不是或并未二聚化或多聚化。
在一些实施方案中，第二多肽含有免疫球蛋白重链恒定区的一个或多个结构域，例如对应于人免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和/或CH3区，鼠类免疫球蛋白Cγ2a链的铰链区、CH2区和/或CH3区，人免疫球蛋白Cγ1的CH2区和/或CH3区的氨基酸序列。
融合蛋白的Fc部分可以按同种型或亚类改变，可以是嵌合的或杂交的，和/或可以修饰，例如以改善效应子功能，控制半衰期、组织可及性，增强生物物理学特征诸如稳定性，及提高生产效率(且成本更低)。用于构建公开的融合蛋白的许多修饰及其制备方法是本领域已知的，参见例如Mueller等人，Mol.Immun.,34(6):441-452(1997),Swann等人，Cur.Opin.Immun.,20:493-499(2008)和Presta,Cur.Opin.Immun.20:460-470(2008)。在一些实施方案中，Fc区是天然IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，Fc区是杂交体，例如由IgG2/IgG4 Fc恒定区组成的嵌合体。对Fc区的修饰包括但不限于修饰IgG4以防止与Fcγ受体和补体结合，修饰IgG1以改善与一种或多种Fcγ受体的结合，修饰IgG1以最小化效应子功能(氨基酸变化)，IgG1具有改变的聚糖/无聚糖(通常通过改变表达宿主)和IgG1具有改变的pH依赖性FcRn结合。Fc区可包括整个铰链区，或小于整个铰链区。
用利妥昔单抗(一种针对CD20的嵌合小鼠/人IgG1单克隆抗体)治疗非霍奇金淋巴瘤或华氏巨球蛋白血症的患者的治疗结果与个体表达对人IgG1的Fc结构域具有不同内在亲和力的Fcγ受体等位基因变体相关。具体而言，具有低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)的高亲和力等位基因的患者显示出更高的反应率，并且在非霍奇金淋巴瘤的情况下，提高了无进展存活率。Fc结构域可以含有一个或多个氨基酸插入、缺失或取代，降低与低亲和力抑制性Fc受体CD32B(FcγRIIB)的结合并保持与低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)结合的野生型水平或增强其结合。
另一个实施方案包括IgG2-4杂交体和IgG4突变体，其减少了与FcR的结合，这增加了它们的半衰期。代表性IgG2-4杂交体和IgG4突变体在Angal,S.等人，MolecularImmunology,30(1):105-108(1993)；Mueller,J.等人，Molecular Immonology,34(6):441-452(1997)；Wang等人的美国专利第6,982,323号中进行了描述。在一些实施方案中，IgG1和/或IgG2结构域缺失，例如，Angal等人描述了丝氨酸241被脯氨酸置换的IgG1和IgG2。
在一些实施方案中，Fc结构域含有增强与CD16A结合的氨基酸插入、缺失或取代。人IgG1的Fc结构域中增加与CD16A结合而减少与CD32B结合的大量取代是本领域已知的，并且在Stavenhagen等人，Cancer Res.,57(18):8882-90(2007)中进行了描述。与CD32B结合减少和/或与CD16A结合增加的人IgG1 Fc结构域的示例性变体含有F243L、R929P、Y300L、V305I或P296L取代。这些氨基酸取代可以以任何组合存在于人IgG1 Fc结构域中。在一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有F243L、R929P和Y300L取代。在另一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有F243L、R929P、Y300L、V305I和P296L取代。在另一个实施方案中，人IgG1 Fc结构域变体含有N297Q取代，因为该突变消除了FcR结合。
所公开的融合蛋白任选地含有肽或多肽接头结构域，其将Siglec-15多肽与第二多肽分开。在一些实施方案中，接头结构域含有免疫球蛋白的铰链区。在一个优选实施方案中，铰链区源自人免疫球蛋白。铰链可以源自其中的合适的人免疫球蛋白包括IgG、IgD和IgA。在一个优选实施方案中，铰链区源自人IgG。免疫球蛋白铰链区和其它结构域的氨基酸序列是本领域熟知的。
示例性融合蛋白为Siglec15 ECD-IgG1 Fc融合蛋白(L234F/L235E/P331S)。
鼠类前导序列以下划线示出。Siglec-15胞外结构域(ECD)为斜体。铰链区加双下划线。其余序列源自IgG1 Fc。IgG1 Fc结构域中的L234F/L235E/P331S突变为粗体且加有点线式下划线。
在一些实施方案中，前导序列从融合蛋白上裂解或以其它方式丢失。例如，融合蛋白可具有序列：
在一些实施方案中，融合蛋白与SEQ ID NO:193或194至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
在一些实施方案中，前导序列、接头(例如，铰链区)、第二融合配偶体(例如，IgG1Fc结构域)或它们的组合是其它序列(例如，替代性前导序列、铰链、Fc结构域)的取代物。合适的取代物是本领域熟知的。参见，例如美国专利第9,005,616号，其明确地全文以引用方式并入。
3.Siglec-15核酸和细胞
还提供了编码Siglec-15多肽、其片段和融合体的载体。可以将核酸(如上所述那些)插入载体中以在细胞中表达。因此，还提供了含有和表达Siglec-15多肽、其片段和融合体的细胞。如本文所用，“载体”是复制子，诸如质粒、噬菌体、病毒或粘粒，其中可以插入另一个DNA区段以便实现插入区段的复制。载体可以是表达载体。“表达载体”是包括一个或多个表达控制序列的载体，“表达控制序列”是控制和调节另一DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。
载体中的核酸可以与一个或多个表达控制序列可操作地连接。如本文所用，“可操作地连接”意指并入遗传构建体中，使得表达控制序列有效地控制目标编码序列的表达。表达控制序列的示例包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是由DNA分子的通常在转录起始点上游100个核苷酸内(通常在RNA聚合酶II的起始位点附近)的区域组成的表达控制序列。为了使编码序列处于启动子的控制下，必须将多肽翻译阅读框的翻译起始位点定位在启动子下游的1至约50个核苷酸之间。增强子在时间、位置和水平方面提供表达特异性。与启动子不同，增强子可以在位于距转录位点的不同距离时起作用。增强子也可位于转录起始位点的下游。当RNA聚合酶能够将编码序列转录成mRNA，然后mRNA可以翻译成由编码序列所编码的蛋白质时，编码序列与细胞中的表达控制序列“可操作地连接”且处于表达控制序列的“控制下”。
合适的表达载体包括但不限于源自例如噬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、痘苗病毒、腺病毒和腺相关病毒的质粒和病毒载体。许多载体和表达系统可从诸如Novagen(Madison,WI)、Clontech(Palo Alto,CA)、Stratagene(LaJolla,CA)和Invitrogen Life Technologies(Carlsbad,CA)等公司商购获得。
表达载体可包括标签序列。标签序列通常表达为与编码的多肽的融合体。此类标签可以插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。有用标签的示例包括但不限于绿色荧光蛋白(GFP)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、聚组氨酸、c-myc、血凝素、FlagTM标签(Kodak,NewHaven,CT)、麦芽糖E结合蛋白和蛋白A。在一些实施方案中，编码Siglec-15融合多肽的核酸分子存在于含有编码Ig重链恒定区的一个或多个结构域的核酸的载体中，所述结构域例如，对应与人免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和CH3区的氨基酸序列。
含有待表达核酸的载体可以转移到宿主细胞中。术语“宿主细胞”旨在包括可向其中引入重组表达载体的原核和真核细胞。如本文所用，“转化”和“转染”涵盖通过许多技术之一将核酸分子(例如载体)引入细胞中。尽管不限于特定的技术，但是在本领域中已经很好地确立了许多这些技术。可以通过例如电穿孔或氯化钙介导的转化用核酸转化原核细胞。可以通过包括例如磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质转染、电穿孔或显微注射的技术将核酸转染到哺乳动物细胞中。宿主细胞(例如，原核细胞或真核细胞诸如CHO细胞)可用于，例如，产生本文所述的Siglec-15融合多肽。
所述载体可用于在细胞中表达Siglec-15。示例性载体包括但不限于腺病毒载体。一种方法包括将核酸转移到培养的原代细胞中，然后将离体转化的细胞自体移植到宿主全身或移植到特定器官或组织内。离体方法可包括，例如，从受试者收获细胞，培养细胞，用表达载体转导细胞，以及将细胞保持在适于表达所编码多肽的条件下的步骤。这些方法在分子生物学领域中是已知的。转导步骤可以通过用于离体基因疗法的任何标准方式完成，包括例如磷酸钙、脂质转染、电穿孔、病毒感染和基因枪(biolistic)基因转移。替代性地，可以使用脂质体或聚合物微粒。然后可以选择已成功转导的细胞，例如，用于表达编码序列或抗药性基因。然后细胞可以进行致死性照射(如果需要)并注射或植入受试者体内。在一个实施方案中，将含有编码融合蛋白的核酸的表达载体转染到细胞中，将细胞施用给有需要的受试者。
体内核酸疗法可以通过将功能活性DNA直接转移到哺乳动物体组织或体内器官中来实现。例如，编码本文公开的多肽的核酸可以直接施用于淋巴组织或肿瘤。替代性地，可以使用淋巴组织特异性转录调控元件(TRE)诸如B淋巴细胞、T淋巴细胞或树突细胞特异性TRE来实现淋巴组织特异性靶向。淋巴组织特异性TRE在本领域中是已知的。
核酸也可以通过病毒方式在体内施用。如本领域所熟知的，可以使用产生复制缺陷型逆转录病毒的包装细胞系将编码融合蛋白的核酸分子包装到逆转录病毒载体中。也可以使用其它病毒载体，包括重组腺病毒和痘苗病毒，可以使其为非复制型。除裸DNA或RNA或病毒载体外，工程菌也可用作载体。
核酸也可以通过其它载体递送，包括脂质体、聚合物微粒和纳米颗粒以及聚阳离子诸如脱唾液酸糖蛋白/聚赖氨酸。
除体内病毒和载体介导的基因转移外，本领域熟知的物理方法可用于DNA的直接转移，包括质粒DNA施用和粒子轰击介导的基因转移。
D.药物组合物
提供了包含所公开的Siglec-15结合分子的药物组合物。含有Siglec-15结合分子的药物组合物可用于通过肠胃外(肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、透皮(被动地或使用离子电渗疗法或电穿孔)或经粘膜(鼻、阴道、直肠、或者舌下)施用途径或使用生物可侵蚀的插入物施用，并且可以配制成适于每种施用途径的剂型。
在一些体内方法中，将本文公开的组合物以治疗有效量施用给受试者。如本文所用术语“有效量”或“治疗有效量”意指足以治疗、抑制或减轻所治疾病的一种或多种症状或以其它方式提供所需药理学和/或生理学作用的剂量。精确剂量将根据多种因素而变化，例如受试者依赖性变量(例如，年龄、免疫系统健康等)、疾病和正在实施的治疗。
对于所公开的Siglec-15结合分子，随着进行进一步研究，将出现关于治疗不同患者的各种病状的适当剂量水平的信息，并且考虑到受者的治疗背景、年龄和总体健康状况，普通技术人员将能够确定恰当剂量。所选剂量取决于所需疗效、施用途径和所需治疗持续时间。通常，对于静脉内注射或输注而言，剂量可能较低。
向患者施用的剂量通常为0.01mg/kg至100mg/kg患者体重。向患者施用的剂量可以是例如在0.01mg/kg患者体重与20mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与10mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与5mg/kg患者体重之间、在0.01患者体重与2mg/kg患者体重之间、在0.01患者体重与1mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.75mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.5mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.25mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.15mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.10mg/kg患者体重之间、在0.01mg/kg患者体重与0.05mg/kg患者体重之间，或在0.01mg/kg患者体重与0.025mg/kg患者体重。示例性的具体剂量包括但不限于0.2mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg。低至0.01mg/kg的剂量被认为适合具有明显的药效学效果。预测0.10-1mg/kg的剂量水平最合适。预计更高的剂量(例如，1-30mg/kg)也有效。
通常，由于对外来多肽的免疫应答，人抗体在人体内具有比来自其它物种的抗体更长的半衰期。因此，较低剂量的人抗体和较低频率施用常常是可能的。此外，本发明的抗体或其片段的施用剂量和频率可以通过修饰例如脂化而增强抗体的摄取和组织渗透来降低。
在某些实施方案中，Siglec-15结合分子局部施用，例如通过直接注射到待治疗的部位。通常，注射引起Siglec-15结合分子组合物的局部化浓度增加，高于全身施用可达到的浓度。Siglec-15结合分子组合物可以与如下所述的基质组合，以通过减少多肽从待治疗部位中被动扩散来帮助产生增加的多肽组合物局部化浓度。
1.用于肠胃外施用的制剂
在一些实施方案中，本文公开的组合物呈水溶液通过肠胃外注射或输注进行施用。制剂也可以呈悬浮液或乳液的形式。一般而言，提供药物组合物，其包括有效量的Siglec-15结合分子，并任选地包括药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载体。此类组合物任选地包括以下一种或多种：稀释剂、无菌水、不同缓冲剂含物(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲盐水；和添加剂，诸如去垢剂和增溶剂(例如TWEEN20(聚山梨醇酯-20)、TWEEN80(聚山梨醇酯-80))、抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠)和防腐剂(例如Thimersol、苯甲醇)和膨胀物质(例如乳糖、甘露醇)。非水溶剂或媒介物的示例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。可以将制剂冻干并在使用前立即重新溶解/重新悬浮。可以对制剂灭菌，例如通过细菌截留过滤器过滤，通过将灭菌剂掺入组合物中，通过照射组合物，或通过加热组合物。
2.受控递送聚合物基质
本文公开的Siglec-15结合分子也可以控释制剂形式施用。在植入聚合物装置(棒、圆筒、薄膜、圆盘)或注射(微粒)后，控释聚合物装置可以长期全身性释放。基质可以呈微粒诸如微球的形式，其中药剂分散在固体聚合物基质或微胶囊内，其中核是与聚合物壳不同的材料，并且肽分散或悬浮在核中，核实质上可以为液体或固体。除非本文明确定义，否则微粒、微球和微胶囊可互换使用。替代性地，聚合物可以铸成范围为几纳米到4厘米的薄板或薄膜，通过研磨或其它标准技术生产的粉末，或甚至凝胶(诸如水凝胶)。
不可生物降解或可生物降解的基质均可用于递送融合多肽或编码融合多肽的核酸。这些可以是天然或合成聚合物。合成聚合物通常具有更好的降解和释放曲线特征。基于期望释放的周期来选择聚合物。在一些情况下，线性释放可能是最有用的，但在其它情况下，脉冲释放或“大量释放”可提供更有效的结果。聚合物可以呈水凝胶的形式(通常吸收高达约90重量％的水)，并且可以任选地与多价离子或聚合物交联。
基质可以通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和本领域技术人员已知的其它方法形成。生物可侵蚀的微球可以使用开发用于制备进行药物递送的微球的任何方法来制备，例如，如Mathiowitz和Langer,J.Controlled Release,5:13-22(1987)；Mathiowitz等人，Reactive Polymers,6:275-283(1987)；及Mathiowitz等人，J.Appl.Polymer Sci.,35:755-774(1988)所述。
可以将装置配制用于局部释放以治疗植入或注射区域-其通常会递送远小于用于治疗整个身体-或全身递送的剂量的剂量。这些可以皮下植入或注射到肌肉、脂肪内或吞咽。
III.使用方法
还提供了使用公开的Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子的方法。公开了此类分子增强免疫应答，延缓或阻止肿瘤生长，抑制肿瘤介导的免疫抑制，消除肿瘤和/或消耗或阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的活性，从而改变其活性，降低TAM-介导的免疫抑制，减少或逆转T细胞抑制的用途。还提供了此类分子在癌症和其它疾病的诊断和治疗中的用途。
TAM在炎症和癌症之间提供联系。巨噬细胞是源自活化血液单核细胞的免疫系统细胞。它们主要因起作用以去除(即吞噬)病原体，死细胞、细胞碎片和细胞外基质(ECM)的各种组分而被认为参与了由病原体或组织损伤诱导的炎症反应。已经发现巨噬细胞构成肿瘤微环境中的重要成分并且占高达50％的肿瘤质量。
除介导吞噬作用外，巨噬细胞还分泌促血管生成生长因子和基质重塑蛋白酶，从而在肿瘤发展和生长所需的血管基础结构的发展(即血管生成)中发挥作用(Pollard,J.W.(2009),Nat.Rev.Immunol.9:259-270)。肿瘤内巨噬细胞的存在似乎有助于肿瘤的生长。许多研究提供证据表明肿瘤内肿瘤相关巨噬细胞的存在是生存的负面预后因素(Farinha,P.等人(2005),Blood 106:2169-2174；Dave,S.S.等人(2004),N.Engl.J.Med.351:2159-2169；Solinas,G.等人(2009),J.Leukoc.Biol.86(5):1065-1073)。TAM以及嗜中性粒细胞、成纤维细胞和其它细胞与肿瘤细胞协作以促进肿瘤中的血管生成(Nucera,S.等人(2011),Int.J.Dev.Biol.doi:10.1387/ijdb.103227sn；Zamarron,B.F.等人(2011),Int.J.Biol.Sci.7(5):651-658；Liu,J.等人(2011),PLoS One.6(4):e19495；Rigo,A.等人(2010),Molec.Cancer9(273):1-13；Lin,J.Y.等人(2011),Chin.J.Cancer30(4):280-286；Vergati,M.(2011),J.Biomed.Biotechnol.2011:182413)。
研究表明Siglec-15在TAM上可诱导表达，并通过将肿瘤细胞识别与DAP12-Syk信号转导途径联系起来而增强TGF-β分泌(Takamiya等人，Glycobiology,23(2):178-87(2013)。在Takamiya提出的特定模型中，肿瘤细胞分泌的M-CSF诱导单核细胞分化为巨噬细胞，伴有Siglec-15表达。唾液酸-Tn抗原与Siglec-15之间的相互作用增强通过DAP12–Syk途径由巨噬细胞产生TGF-β，使肿瘤微环境在免疫抑制的方向上倾斜，从而使肿瘤进展甚至转移。
功能阻断或减少抗Siglec-15抗体与Siglec-15的结合可导致减少、阻断、拮抗、减弱或完全消除Siglec-15与一种或多种配体结合的能力，因此降低或防止抑制性免疫信号传导，包括但不限于Siglec-15介导的TGF-β分泌。TGF-β表达增加常常与许多癌症的恶性程度和对TGF-β的细胞生长抑制反应的缺陷相关，并导致基于免疫抑制的肿瘤发生。减少Siglec-15介导的TGF-β分泌导致免疫应答总体增加和受试者中的肿瘤进展直接或间接减少。
下面的实施例表明，功能降低和阻断抗Siglec-15抗体，包括本文公开的那些，可以逆转外周血单核细胞(PBMC)增殖测定中对Siglec-15介导的CD4+和CD8+T细胞增殖的抑制。
因此，提供了减少免疫抑制和/或增加免疫应答的方法，该方法最常通过向有需要的受试者施用有效量的抗Siglec-15功能阻断抗体。
本文公开了合适的抗体、多肽和融合蛋白，并且可以通过体外测定，包括但不限于：增殖、迁移、粘附、软琼脂生长、血管生成、细胞间通信、细胞凋亡、转运、信号转导，和体内试验诸如抑制肿瘤生长来进一步选择。用于测试公开的抗体的功能的示例性测定在下面实施例中提供。
本文提供的抗体还可用于诊断和研究应用。例如，非中和抗体可以结合特异性抗原而不抑制抗原的受体结合或生物活性，并且可以用于捕获测定和其它下拉(pull-downs)测定(例如ELISA)中。中和(例如，功能阻断)抗体可用于竞争性结合测定。
抗体也可用于量化Siglec-15多肽或其配体。
A.免疫应答增强性分子
1.治疗和预防用途
提供了免疫特异性结合人Siglec-15的分子和Siglec-15配体结合分子的治疗和/或预防用途，并且所述分子能够减少Siglec-15与一种或多种配体和/或反受体之间的结合(例如，拮抗剂分子)。
在一些实施方案中，所述分子减少或防止Siglec-15与唾液酸化糖蛋白配体(例如由受试者细胞内源表达的唾液酸化糖蛋白)之间的结合，并减少或防止Siglec-15介导的信号转导。另外或替代性地，分子可以减少或防止Siglec-15与其反受体之间的结合，并减少或防止Siglec-15介导的信号转导和/或通过反受体的信号转导。例如，所公开的分子可以在Siglec-15上的一个或多个位点与抗原结合，所述位点破坏了唾液酸结合位点(例如，包括SEQ ID NO:1的残基143的表位)和/或对与Siglec-15反受体结合很重要的结合位点。示例性组合物在下面的实施例中有说明。例如，在一些实施方案中，5G12、6F8、8C8、1C3、1C12、3H10和1B2是(“强阻断剂”)而10G9、8H8和9A5是(“部分阻断剂”)。因此，在一些实施方案中，用于上调免疫应答的分子包括5G12、6F8、8C8、1C3、1C12、3H10、1B2、10G9、8H8或9A5的一个、两个、三个、四个、五个或全部六个CDR。在一些实施方案中，分子包括5G12、6F8、8C8、1C3、1C12、3H10、1B2、10G9、8H8或9A5的轻链可变区和/或重链可变区。在一些实施方案中，是鼠类抗人5G12、6F8、8C8、1C3、1C12、3H10、1B2、10G9、8H8或9A5，或其嵌合或人源化变体。
如以上所讨论，Siglec-15和唾液酸化糖蛋白配体和/或Siglec-15反受体之间的相互作用可以抑制T细胞增殖并增加细胞因子诸如TGF-β的产生。因此，在一些实施方案中，向受试者施用公开的Siglec-15结合分子通过阻断或以其它方式拮抗Siglec-15-配体和/或反受体结合/相互作用来上调受试者的免疫系统。在另一个实施方案中，抗Siglec-15抗体的亲合力和/或亲和力可以使其仅与表达非常高水平的Siglec-15的细胞结合，并因此允许特异性靶向该细胞群，所述细胞例如是肿瘤相关巨噬细胞(TAM)或癌细胞。因此，在一些实施方案中，所述分子减少例如在肿瘤微环境中的TGF-β产生。在一些实施方案中，表达Siglec-15的细胞是单核细胞。在更具体的实施方案中，表达Siglec-15的细胞是巨噬细胞，例如TAM。
如上所述，所公开的抗体和抗原结合片段可以结合并基本上阻断TAM，从而调节其免疫抑制活性。此外，此类抗体可用于消除肿瘤微环境内的Siglec-15 TAM，或消耗其在外周血中的TAM浓度。在一个实施方案中，使用结合位点的Siglec-15抗体完成此类调节或消耗，从而损害或破坏正常Siglec-15功能。作为此类破坏的结果，降低(调节)了TAM活性，和/或消耗了肿瘤中巨噬细胞的实际或有效(功能)浓度。替代性地，使用与毒素缀合的抗Siglec-15抗体完成此类调节或消耗，使其与TAM的结合导致巨噬细胞死亡。
另外，所公开的拮抗剂分子可用于诱导、增加或增强T细胞增殖。在一些实施方案中，通过减少或防止Siglec-15与T细胞上的反受体结合来诱导T细胞应答。在治疗癌症和慢性感染中特别需要免疫系统上调，因此所公开的组合物可用于治疗此类病症。
2.待治疗的受试者
a.癌症的治疗
所公开的功能降低组合物和方法可用于治疗癌症。通常，该方法包括通过向受试者施用一定量的Siglec-15结合分子来刺激或增强对癌症的免疫应答，减少或防止肿瘤生长或进展，或它们的组合。该方法可以减少癌症的一种或多种症状。
尽管通过各种机制，癌细胞在其发育过程中获得了一组特有的功能能力。此类能力包括逃避细胞凋亡，生长信号自足性，对抗生长信号的不敏感性，组织浸润/转移，无限的发展潜力和持续血管生成。术语“癌细胞”意在涵盖恶性前癌细胞和恶性癌细胞。在一些实施方案中，癌症是指仍然是局部的良性肿瘤。在其它实施方案中，癌症是指侵袭并破坏邻近身体结构并扩散到远侧部位的恶性肿瘤。在其它实施方案中，癌症与特定癌抗原(例如，泛癌抗原(KS1/4)、卵巢癌抗原(CA125)、前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、CD19、CD20、HER2/neu等)。
本文公开的方法和组合物可用于治疗或预防多种癌症或其它异常增生性疾病，包括(但不限于)以下：癌，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌；包括鳞状细胞癌；淋巴谱系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Berketts lymphoma)；髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌(tetratocarcinoma)、神经母细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其它肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病(xenodermapegmentosum)、角化棘皮瘤(keratoactanthoma)、精原细胞瘤、甲状腺滤泡状癌以及畸胎癌。
由细胞凋亡异常引起的癌症也可以通过所公开的方法和组合物治疗。此类癌症可包括但不限于滤泡性淋巴瘤、具有p53突变的癌、乳腺、前列腺和卵巢激素依赖性肿瘤，以及癌前病变，诸如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生异常综合征。在具体的实施方案中，用所述方法和组合物治疗或预防卵巢、膀胱、乳腺、结肠、肺、皮肤、胰腺或子宫中的恶性肿瘤或异常增生性变化(诸如化生和发育异常)或过度增生性病症。在其它具体实施方案中，用所述方法和组合物治疗或预防肉瘤、黑素瘤或白血病。
所公开的组合物和方法尤其可用于治疗与表达异常高水平的Siglec-15本身或Siglec-15的糖蛋白配体的细胞相关的癌症，具有大量肿瘤相关巨噬细胞的癌症(特别是如果巨噬细胞表达Siglec-15时)，和/或其中另一细胞类型表达高水平的Siglec-15或Siglec-15配体的癌症。
可通过本文公开的方法和组合物治疗或预防的具体癌症和相关病症包括但不限于白血病，包括但不限于急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(诸如成髓细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、单核细胞性白血病、红血球性白血病和骨髓发育异常综合征)、慢性白血病(例如但不限于慢性髓细胞性(粒细胞)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病)；真性红细胞增多症；淋巴瘤，例如但不限于霍奇金病或非霍奇金病淋巴瘤(例如，弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALK)阴性、大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性、大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)；间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性、ALK+间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、急性髓性淋巴瘤(AML))；多发性骨髓瘤，例如但不限于冒烟型多发性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤；华氏巨球蛋白血症；意义不明的单克隆丙种球蛋白病；良性单克隆丙种球蛋白病；重链病；骨和结缔组织肉瘤，例如但不限于骨质肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管内皮瘤)、纤维肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤；脑肿瘤，包括但不限于神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、松果细胞瘤、成松果体细胞瘤、原发性脑淋巴瘤；乳腺癌，包括但不限于腺癌、小叶(小细胞)癌、管内癌、髓样乳腺癌、粘液性乳腺癌、肾小管乳腺癌、乳头状乳腺癌、佩吉特病(Paget's disease)和炎性乳腺癌；肾上腺癌，包括但不限于嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌；甲状腺癌，例如但不限于乳头状或滤泡性甲状腺癌、甲状腺髓样癌和甲状腺未分化癌；胰腺癌，包括但不限于胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、血管活性肠肽瘤(vipoma)、生长激素抑制素分泌肿瘤，以及类癌或胰岛细胞瘤；垂体癌，包括但不限于库欣氏病(Cushing'sdisease)、催乳素分泌肿瘤、肢端肥大症和尿崩症(diabetes insipius)；眼癌，包括但不限于眼黑素瘤，诸如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和睫状体黑素瘤，以及视网膜母细胞瘤；阴道癌，包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌和黑素瘤；外阴癌，包括但不限于鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤和佩吉特病；宫颈癌，包括但不限于鳞状细胞癌和腺癌；子宫癌，包括但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤；卵巢癌，包括但不限于卵巢上皮癌、交界瘤、生殖细胞肿瘤和间质瘤；食道癌，包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺鳞癌、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦细胞(小细胞)癌；胃癌，包括但不限于腺癌、真菌状(息肉样)、溃疡性、浅表扩散性、弥漫扩散性、恶性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，包括但不限于肝细胞癌和肝母细胞瘤；胆囊癌，包括但不限于腺癌；胆管癌，包括但不限于乳头状、结节状和弥漫性胆管癌；肺癌，包括但不限于非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌；睾丸癌，包括但不限于生殖细胞瘤、精原细胞瘤、间变性瘤、经典性(典型性)瘤、精细胞瘤、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤癌、绒毛膜癌(卵黄囊肿瘤)；前列腺癌，包括但不限于腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤；penal癌；口腔癌，包括但不限于鳞状细胞癌；基底癌；唾液腺癌，包括但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌；咽癌，包括但不限于鳞状细胞癌和疣状癌；皮肤癌，包括但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、浅表扩散性黑素瘤、结节性黑素瘤、恶性雀斑样黑素瘤、肢端雀斑样痣黑素瘤；肾癌，包括但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或尿道癌)；威尔姆斯肿瘤(Wilms'tumor)；膀胱癌，包括但不限于移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。另外，癌症包括粘液肉瘤、成骨肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮细胞肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、成血管细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌(此类病症的综述，参见Fishman等人，1985,Medicine，第2版，J.B.LippincottCo.,Philadelphia和Murphy等人，1997,Informed Decisions:The Complete Book ofCancer Diagnosis,Treatment,and Recovery,Viking Penguin,Penguin Books U.S.A.,Inc.,United States of America)。
b.感染的治疗
所公开的功能降低组合物和方法可用于治疗感染和感染性疾病。通常，该方法包括通过向受试者施用一定量的Siglec-15结合分子来刺激或增强对感染引发剂的免疫应答，减少或预防感染性疾病进展，或它们的组合。该方法可以减少一种或多种感染症状。
感染或疾病可以由进入细胞内并受到细胞毒性T淋巴细胞攻击的细菌、病毒、原生动物、蠕虫或其它微生物病原体引起。
感染或疾病可以是急性或慢性的。急性感染通常是持续时间短的感染。在急性微生物感染期间，免疫细胞开始表达免疫调节受体。因此，在一些实施方案中，该方法包括增强针对急性感染的免疫刺激反应。
感染可以由例如但不限于白色念珠菌(Candida albicans)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)或分支杆菌(Mycobacterium)引起。
在一些实施方案中，所公开的组合物用于治疗慢性感染，例如已经发生T细胞衰竭或T细胞无能的感染，导致感染随宿主保持更长时间。
待治疗的示例性感染是由肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)，人T淋巴细胞病毒(HTLV)、疱疹病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)或人乳头瘤病毒引起的慢性感染。
因为病毒感染主要由T细胞清除，所以T细胞活性的增加在治疗上可用于更快速或彻底地清除感染病毒剂对动物或人类受试者有益的情形。因此，可以施用所公开的组合物用于治疗局部或全身性病毒感染，包括但不限于免疫缺陷(例如HIV)、乳头瘤(例如HPV)、疱疹(例如HSV)、脑炎、流感(例如，人流感病毒A)和普通感冒(例如人鼻病毒)以及由例如HTLV、肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、痘苗病毒和狂犬病病毒引起的其它病毒感染。可以局部施用所述分子以治疗病毒性皮肤病，诸如疱疹病变或带状疱疹或生殖器疣。所述分子还可以全身施用以治疗全身性病毒性疾病，包括但不限于AIDS、流感、普通感冒或脑炎。
可以治疗的代表性感染包括但不限于由微生物引起的感染，所述微生物包括但不限于放线菌属(Actinomyces)、鱼腥藻属(Anabaena)、杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)、蛭弧菌属(Bdellovibrio)、博代氏菌属(Bordetella)、疏螺旋体属(Borrelia)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、柄杆菌属(Caulobacter)、衣原体属(Chlamydia)、绿菌属(Chlorobium)、着色菌属(Chromatium)、梭状芽胞杆菌属(Clostridium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、噬纤维菌属(Cytophaga)、奇球菌属(Deinococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、弗朗西斯菌属(Francisella)、嗜盐菌属(Halobacterium)、螺杆菌属(Heliobacter)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、B型流感嗜血杆菌(Hemophilus influenza type B)(HIB)、生丝微菌属(Hyphomicrobium)、军团菌属(Legionella)、钩端螺旋体(Leptspirosis)、李斯特菌属(Listeria)、脑膜炎球菌(Meningococcus)A、B和C、甲烷杆菌属(Methanobacterium)、微球菌属(Micrococcus)、分支杆菌属(Myobacterium)、支原体属(Mycoplasma)、粘球菌属(Myxococcus)、奈瑟球菌属(Neisseria)、硝化菌属(Nitrobacter)、颤藻属(Oscillatoria)、原绿藻(Prochloron)、变形菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、红螺菌属(Phodospirillum)、立克次体(Rickettsia)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺菌属(Shigella)、螺菌属(Spirillum)、螺旋体属(Spirochaeta)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、硫叶菌属(Sulfolobus)、热原体属(Thermoplasma)、硫杆菌属(Thiobacillus)和密螺旋体属(Treponema)、弧菌属(Vibrio)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、白色念珠菌(Candida albicans)、热带念珠菌(Candida tropicalis)、星形诺卡菌(Nocardiaasteroides)、立克次氏立克次氏体(Rickettsia ricketsii)、伤寒立克次体(Rickettsiatyphi)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydial psittaci)、沙眼衣原体(Chlamydial trachomatis)、镰状疟原虫(Plasmodium falciparum)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)和曼氏血吸虫(Schistosomamansoni)。
可以使用所公开的组合物和方法处理的其它微生物包括细菌，例如克雷白杆菌属(Klebsiella)、沙雷氏菌属(Serratia)、巴斯德菌属(Pasteurella)的那些细菌；与霍乱(cholera)、破伤风(tetanus)、肉毒杆菌(botulism)、炭疽(anthrax)、鼠疫(plague)和莱姆病(Lyme disease)相关的病原体；或真菌或寄生虫病原体，例如念珠菌属(白色念珠菌(albicans)、克鲁斯氏念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、热带念珠菌(tropicalis)等)、隐球菌属(Cryptococcus)、曲霉属(Aspergillus)(烟曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger)等)、毛霉目属(Genus Mucorales)(毛霉属(mucor)、犁头霉属(absidia)、根霉属(rhizophus))、孢子丝菌属(Sporothrix)(申克氏孢子丝菌(schenkii))、芽生菌属(Blastomyces)(皮炎芽生菌(dermatitidis))、副球孢子菌属(Paracoccidioides)(巴西副球孢子菌(brasiliensis))、球孢子菌属(Coccidioides)(粗球孢子菌(immitis))和组织胞浆菌属(Histoplasma)(荚膜组织胞浆菌(capsulatuma))、溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)、结肠肠袋虫(Balantidium coli)、福氏耐格里阿米巴(Naegleriafowleri)、棘阿米巴属(Acanthamoeba sp.)、兰伯贾第虫(Giardia lambia)、隐孢子虫属(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、果氏巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、鼠弓形体(Toxoplasma gondi)等)、孢子丝菌属(Sporothrix)、芽生菌属(Blastomyces)、副球孢子菌属(Paracoccidioides)、球孢子菌属(Coccidioides)、组织胞浆菌属(Histoplasma)、内阿米巴属(Entamoeba)、溶组织内阿米巴(Histolytica)、肠袋虫属(Balantidium)、耐格里阿米巴(Naegleria)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)、贾第虫属(Giardia)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、肺囊虫(Pneumocystis)、疟原虫属(Plasmodium)、巴贝虫属(Babesia)或锥虫属(Trypanosoma)。
B.免疫应答降低性分子
1.治疗和预防用途
提供了结合人Siglec-15或其配体并且能够增加或增强Siglec-15与一种或多种配体和/或反受体(例如，激动剂分子)之间的结合的分子(尤其是抗体或其抗原结合片段)的治疗和/或预防用途，或者还提供了直接增加或增强Siglec-15或Siglec-15反受体介导的信号转导。
如以上所讨论，Siglec-15和唾液酸化糖蛋白配体和/或Siglec-15反受体之间的相互作用可以抑制T细胞增殖并增加细胞因子如TGF-β的产生。因此，在一些实施方案中，向受试者施用功能活化性Siglec-15结合分子或功能活化性Siglec-15配体结合分子通过诱导或以其它方式激动Siglec-15-配体和/或反受体结合/相互作用或直接模拟Siglec-15或Siglec-15反受体信号转导而下调受试者的免疫系统。在一些实施方案中，所述分子增加TGF-β的产生和/或其从例如单核细胞(诸如巨噬细胞)的分泌。
另外，所公开的激动剂Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子可用于减少或降低T细胞增殖。在一些实施方案中，通过增加或增强Siglec-15与T细胞上的反受体的结合来诱导T细胞应答。免疫系统的下调在治疗炎性和自身免疫性疾病和病症中是特别理想的，并且治疗或预防移植物排斥和/或移植物抗宿主病是特别理想的，因此所公开的组合物可用于治疗此类病症。
a.炎症反应
在一些实施方案中，Siglec-15激动剂分子用于治疗或减轻一种或多种炎症症状，例如急性、慢性或持续性炎症。
通过施用有效量的Siglec-15结合分子以抑制或降低免疫细胞(例如，T细胞或B细胞)的生物活性或减少炎症部位促炎分子的量，可以抑制或减少受试者，优选人类中包括炎症在内的免疫应答。示例性促炎分子包括但不限于IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-18、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP。
b.过度炎症反应
在一些实施方案中，Siglec-15结合分子减缓免疫系统。例如，Siglec-15结合分子可用于控制对通过过度炎症反应损害健康组织的感染的免疫刺激反应。因此，在一些实施方案中，将所述药剂施用于也正在经历过度炎症反应的受感染受试者。在此类情况下，控制过度免疫应答可能对受试者有益。
c.炎性和自身免疫性疾病/病症
所公开的组合物还可用于治疗炎性或自身免疫性疾病和病症。可以治疗的代表性炎性或自身免疫性疾病/病症包括但不限于类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、斑秃、痉挛性脊椎炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森氏病(Addison’s disease)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋巴增生综合征(阿尔卑斯)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、白塞氏病(Behcet’s disease)、大疱性类天疱疮、心肌病、腹腔口炎性皮炎、慢性疲劳综合征免疫缺陷综合征(CFIDS)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素病、肢端硬皮综合征(肢端硬皮综合征)、克罗恩病(Crohn’s disease)、Dego病、皮肌炎、青少年型皮肌炎、盘状狼疮、基本混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯病(grave’s disease)、格林-巴利综合征(guillain-barre)、桥本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、Iga肾病、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、青少年关节炎、美尼尔氏症(Meniere’s disease)、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、寻常型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象(Raynaud’s phenomenon)、瑞特综合征(Reiter’s syndrome)、风湿热、结节病、硬皮病、干燥综合征(Sjogren’s syndrome)、僵人综合征、大动脉炎(Takayasu arteritis)、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、脉管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)。
在一些实施方案中，炎症或自身免疫性疾病由病原体引起，或是感染的结果。
d.移植
Siglec-15结合分子可用于减少或抑制受试者，优选人类受试者的移植排斥。通过施用有效量的激动剂Siglec-15结合分子以抑制或降低免疫细胞的生物活性或减少促炎细胞因子或与移植部位炎症相关或促进移植部位炎症的其它分子的量，可以抑制或减少受试者中的移植排斥。
移植的材料可以是细胞、组织、器官、肢体、趾或身体(优选人体)的一部分。移植物通常是同种异体的或异种的。通常以有效量向受试者施用激动剂Siglec-15分子以减少或抑制移植排斥。该分子可以通过任何可接受的施用途径全身或局部施用。在一些实施方案中，在移植前、移植时或移植后将分子施用于移植部位。
可以将分子直接施用于待离体移植的细胞、组织或器官。在一个实施方案中，移植前、移植后或两个时间都使移植材料与Siglec-15结合分子接触。
在其它实施方案中，将Siglec-15结合分子施用于免疫组织或器官，诸如淋巴结或脾。
i.细胞
可以将任何类型细胞的群体移植到受试者中。细胞可以是同源的或异源的。异源意指细胞群体含有多于一种类型的细胞。示例性细胞包括祖细胞，诸如干细胞和多能细胞，其可以从供体收获并移植到受试者体内。在移植前任选地离体处理细胞。细胞可以是自体或异种细胞。
ii.组织
任何组织都可以用作移植物。示例性组织包括皮肤、脂肪组织、心血管组织，诸如静脉、动脉、毛细血管、瓣膜；神经组织、骨髓、肺组织、眼组织(诸如角膜和晶状体)、软骨、骨和粘膜组织。如以上所讨论，组织可以改性。
iii.器官
可用于移植的示例性器官包括但不限于肾、肝、心脏、脾、膀胱、肺、胃、眼、舌、胰腺、肠等。如以上所讨论，待移植的器官也可在移植之前进行改性。
一个实施方案提供了抑制或减少受试者中慢性移植排斥的方法，该方法是通过施用有效量的Siglec-15结合分子以抑制或减少相对于对照的慢性移植排斥。
e.移植物抗宿主病(GVHD)
通过施用有效量的Siglec-15结合分子，还可将该分子用于治疗移植物抗宿主病(GVHD)以减轻GVHD相关的一种或多种症状。GVHD是与异基因造血干细胞移植相关的主要并发症，其中移植骨髓中的功能性免疫细胞将受体识别为“外来的”并发动免疫攻击。在某些情况下，也可以在输血中发生。GVD的症状包括皮疹或肤色或肌理改变、腹泻、恶心、肝功能异常、皮肤变黄、感染易感性增加、干燥、眼睛受刺激及口腔敏感或口干。
f.糖尿病
激动剂Siglec-15结合分子也可用于治疗糖尿病。该方法包括在受试者中移植胰岛素生成细胞，并向受试者施用有效量的分子以减少或抑制移植排斥。优选地，胰岛素生成细胞是β细胞或胰岛细胞。在某些实施方案中，胰岛素生成细胞是经工程改造为产生胰岛素的重组细胞。
可以使用合适的聚合物将胰岛素生成细胞包封在基质(诸如聚合物基质)中，合适的聚合物包括但不限于藻酸盐、琼脂糖、透明质酸、胶原、合成单体、白蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白、葡聚糖、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、几丁质、壳聚糖、乙酰肝素、硫酸乙酰肝素或它们的组合。
C.破骨细胞骨吸收的治疗性抑制
研究表明，Signlec-15的表达和功能在破骨细胞生成中很重要(Stuible等人，J.Biol Chem.,289(10):6498–6512(2014),Ishida-Kitagawa,J.Biol.Chem.,287,17493–17502(2012)，其各自全文以引用方式并入)。虽然Siglec-15蛋白在破骨细胞分化期间高度上调，但在非分化细胞中检测不到蛋白质。结果表明，Siglec-15和DAP12在破骨细胞中以内源性表达水平形成复合物。Siglec-15(-/-)敲除小鼠轻度骨质疏松。
体内研究还表明，Siglec-15抗体可抑制生理环境中的破骨细胞活性，并提供减少骨损失的治疗策略。虽然细胞表面受体的激活及其内吞下调常常联合作为限制信号传导强度和持续时间的一种手段，但Siglec-15信号传导和内吞作用似乎彼此排斥地发生，这取决于抗体连接是否诱导受体群集或简单二聚化。
Siglec-15是破骨细胞-内在受体，具有高度限制的表达模式，因此Siglec-15靶向疗法是选择性的。Siglec-15抗体在相对较晚的阶段抑制破骨细胞分化，从而保持破骨细胞与成骨细胞之间的偶合通信并且避免现有破骨细胞靶向疗法的并发症可诱导破骨细胞死亡(双膦酸盐)或在早期阶段阻止其分化(地诺单抗(denosumab))导致不必要的副作用，包括颌骨坏死和股骨非典型骨折。
因此，在一些实施方案中，所公开的免疫特异性结合人Siglec-15，并且能够减少或阻断Siglec-15与其一种或多种配体和/或反受体(例如，激动剂分子)之间的结合的分子(尤其是抗体或其抗原结合片段)也可以按有效量施用给有需要的受试者以减少或抑制破骨细胞的分化、功能或它们的组合。在一些实施方案中，按有效量施用所述分子以减少骨损失，增加骨形成，增加骨矿物质密度或它们的组合。
D.靶向和检测
所公开的Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子，无论它们对Siglec-15功能的影响如何，均可用于分别在细胞或组织上递送治疗性货物(cargo)和/或检测Siglec-15或其配体的存在。例如，Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子可以与目标生物分子缀合形成缀合物。包括药理活性分子(诸如无机分子和有机分子、药剂、药物、肽、蛋白质、遗传物质等)的货物可以与Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子缀合，然后可以将该货物靶向到分别表达Siglec-15或其配体的细胞或组织。Siglec-15分子可通过肽键或化学或肽接头分子与多肽化学连接。将药物或其它小分子药物附连到抗体片段的方法是熟知的，包括双功能化学接头，诸如N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯；磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸；4-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-.A-反式.-(2-吡啶基二硫代)甲苯；磺基琥珀酰亚胺基-6-[.α.-甲基-.A-反式-(吡啶基二硫代)-甲苯酰胺基]己酸酯；N-琥珀酰亚胺基-3-(-2-吡啶基二硫代)-丙酸酯；琥珀酰亚胺基-6-[3(-(-2-吡啶基二硫代)-丙酰胺基]己酸酯；磺基琥珀酰亚胺基-6-[3(-(-2-吡啶基二硫代)-丙酰胺基]己酸酯；3-(2-吡啶基二硫代)-丙酰肼、Ellman试剂、二氯三嗪酸、S-(2-硫代吡啶基)-L-半胱氨酸等。
可以设计融合蛋白以将目标蛋白质置于抗体重链或轻链的氨基末端或羧基末端，尽管可能不需要整个重链。可能的构型包括根据需要使用重链和轻链的截短部分，有或没有间隔序列，以维持附连蛋白的功能完整性。
替代性地，可以设计通用载体系统。例如，各种蛋白质或DNA可以与共同的载体缀合，诸如蛋白质A、聚-L-赖氨酸、六-组氨酸等。然后缀合的载体将与Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子形成复合物。负责结合免疫球蛋白的一小部分载体分子可用作载体。其它类似构型包括与工程化为抗体重链或轻链的蛋白质相互作用的载体设计。
在一些实施方案中，将Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子缀合或以其它方式并入纳米载体中或纳米载体上，以将纳米载体靶向Siglec-15或Siglec-15配体阳性细胞。纳米载体，例如微米或纳米聚合物颗粒、脂质体、纳米管等，可包括用于递送至Siglec-15或Siglect-15配体阳性细胞或其微环境的活性剂。
同样，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可以与可检测标记缀合，或者可以不缀合并用第二试剂检测，分别在体外或在体内检测Siglec-15或Siglec-15配体表达。因此，该分子可用于成像、免疫组织化学和其它测定。
IV.组合疗法
所公开的Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子可以单独地或与一种或多种附加治疗剂组合施用给有需要的受试者。在一些实施方案中，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子和附加治疗剂分开但同时施用。Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子和附加治疗剂也可以作为相同组合物的一部分施用。在其它实施方案中，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子和第二治疗剂分开在不同时间，但作为相同治疗方案的一部分施用。
可以在施用第二治疗剂前1、2、3、4、5、6个小时或更多个小时，或1、2、3、4、5、6、7天或更多天向受试者施用第一治疗剂。在一些实施方案中，可在第一次施用第二药剂之前每1、2、3、4、5、6 7、14、21、28、35或48天向受试者施用一个或多个剂量的第一药剂。Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可以是第一或第二治疗剂。在一些实施方案中，组合施用一种或多种Siglec-15结合分子和一种或多种Siglec-15配体结合分子。
Siglec-15结合分子和/或Siglec-15配体结合分子和附加治疗剂可以作为治疗方案的一部分施用。例如，如果第一治疗剂可以每四天向受试者施用，则第二治疗剂可以在第一天、第二天、第三天或第四天施用或它们的组合。可以在整个治疗方案中重复施用第一治疗剂或第二治疗剂。
示例性分子包括但不限于细胞因子、化学治疗剂、放射性核素、其它免疫治疗剂、酶、抗生素、抗病毒剂(特别是蛋白酶抑制剂，单独或与核苷组合用于治疗HIV或乙型肝炎或丙型肝炎)、抗寄生虫剂(蠕虫、原生动物)、生长因子、生长抑制剂、激素、激素拮抗剂、抗体及其生物活性片段(包括人源化、单链和嵌合抗体)、抗原和疫苗制剂(包括佐剂)、肽类药物、抗炎药，结合Toll样受体(包括但不限于聚肌苷酸:聚胞苷酸(polyI:C)和CpG寡核苷酸)以激活先天免疫系统的配体，调动和优化适应性免疫系统的分子，激活或上调细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤细胞和辅助T细胞的作用的其它分子，以及灭活或下调抑制因子或调节性T细胞的其它分子。
基于待治疗的病状、病症或疾病选择附加治疗剂。例如，Siglec-15结合分子可以与一种或多种起到增强或促进免疫应答或减少或抑制免疫应答的附加试剂共同施用。
A.化学治疗剂
Siglec-15结合分子和Siglec-15配体结合分子可以与一种或多种化学治疗剂和促凋亡剂组合。代表性化学治疗剂包括但不限于安吖啶(amsacrine)、博来霉素、白消安、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、克立他酶(crisantaspase)、环磷酰胺、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素、柔红霉素、多西紫杉醇(docetaxel)、多柔比星、表柔比星、依托泊苷(etoposide)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊立替康(irinotecan)、亚叶酸(leucovorin)、脂质体多柔比星、脂质体柔红霉素、洛莫司汀(lomustine)、美法仑、巯基嘌呤、美司钠(mesna)、甲氨蝶呤、丝裂霉素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、喷司他丁(pentostatin)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷替曲塞(raltitrexed)、赛特铂(satraplatin)、链脲佐菌素、优福定(tegafur-uracil)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、噻替嗪(thiotepa)、硫鸟嘌呤、拓扑替康(topotecan)、曲奥舒凡(treosulfan)、长春碱、长春新碱、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)或它们的组合。代表性促凋亡剂包括但不限于氟达拉滨牛磺孢子素(fludarabinetaurosporine)、环己酰亚胺、放线菌素D、乳糖苷神经酰胺、15d-PGJ(2)及它们的组合。
B.其它免疫调节剂
1.PD-1拮抗剂
在一些实施方案中，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子与PD-1拮抗剂共同施用。程序性死亡-1(PD-1)是CD28受体家族的成员，其在T细胞上被诱导时产生负免疫应答。PD-1与其配体之一(B7-H1或B7-DC)之间的接触诱导抑制性反应，该反应降低T细胞增殖和/或T细胞应答的强度和/或持续时间。合适的PD-1拮抗剂在美国专利第8,114,845、8,609,089号和第8,709,416号中有描述，其明确地全文以引用方式并入本文，并且包括结合并阻断PD-1配体以干扰或抑制配体与PD-1受体的结合，或直接结合并阻断PD-1受体而不诱导通过PD-1受体的抑制性信号转导的化合物或试剂。
在一些实施方案中，PD-1受体拮抗剂直接结合PD-1受体而不触发抑制性信号转导，并且还结合PD-1受体的配体以减少或抑制配体触发通过PD-1受体的信号转导。通过减少与PD-1受体结合并触发抑制性信号转导的配体数量和/或量，更少的细胞通过PD-1信号转导递送的负信号减弱，并且可以实现更强的免疫应答。
据信PD-1信号传导是通过与主要组织相容性复合物(MHC)呈递的肽抗原非常接近的PD-1配体(诸如B7-H1或B7-DC)结合而驱动的(参见，例如，Freeman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,105:10275-10276(2008))。因此，阻止T细胞膜上PD-1和TCR共连接的蛋白质、抗体或小分子也是有用的PD-1拮抗剂。
在一些实施方案中，PD-1受体拮抗剂是小分子拮抗剂或抗体，其通过结合PD-1配体或PD-1本身来减少或干扰PD-1受体信号转导，尤其是在此类结合之后不发生PD-1与TCR共连接的情况下，从而不会触发通过PD-1受体的抑制性信号转导。本发明方法考虑的其它PD-1拮抗剂包括结合PD-1或PD-1配体的抗体，以及其它抗体。
合适的抗PD-1抗体包括但不限于以下美国专利中描述的那些：美国专利第7332582号、第7488802号、第7521051号、第7524498号、第7563869号、第7981416号、第8088905号、第8287856号、第8580247号、第8728474号、第8779105号、第9067999号、第9073994号、第9084776号、第9205148号、第9358289号、第9387247号、第9492539号、第9492540号，其全部全文以引用方式并入本文。
还参见Berger等人，Clin.Cancer Res.,14:30443051(2008)。
示例性的抗B7-H1(也称为抗PD-L1)抗体包括但不限于以下美国专利中描述的那些：美国专利第8383796号、第9102725号、第9273135号、第9393301号和第9580507号，其全部明确地全文以引用方式并入本文。
对于抗B7-DC(也称为抗PD-L2)抗体，参见美国专利第7,411,051号、第7,052,694号、第7,390,888号、第8188238号和第9255147号，其全部明确地全文以引用方式并入本文。
其它示例性PD-1受体拮抗剂包括但不限于B7-DC多肽，包括这些的同源物和变体，以及前述任一种的活性片段，以及并入这些中的任一种的融合蛋白。在一些实施方案中，融合蛋白包括与抗体(诸如人IgG)的Fc部分偶合的B7-DC可溶性部分，并且未并入人B7-DC的整个或部分跨膜部分。
PD-1拮抗剂也可以是哺乳动物B7-H1的片段，例如来自小鼠或灵长类动物(诸如人)，其中该片段结合并阻断PD-1但不引起通过PD-1的抑制性信号转导。片段也可以是融合蛋白的一部分，例如Ig融合蛋白。
其它有用的多肽PD-1拮抗剂包括与PD-1受体配体结合的那些。这些包括PD-1受体蛋白或其可溶性片段，其可以结合PD-1配体，诸如B7-H1或B7-DC，并阻止与内源性PD-1受体结合，从而阻止抑制性信号转导。还显示B7-H1会结合蛋白B7.1(Butte等人，Immunity,第27卷,，第111-122页,(2007))。此类片段还包括PD-1蛋白的可溶性ECD部分，其包括增加与天然配体的结合的突变，诸如A99L突变(Molnar等人，PNAS,105:10483-10488(2008))。可以结合B7-H1配体并防止与内源性PD-1受体结合，从而阻止抑制性信号转导的B7-1或其可溶性片段也有用。
PD-1和B7-H1反义核酸(DNA和RNA)以及siRNA分子也可以是PD-1拮抗剂。此类反义分子阻止T细胞上PD-1的表达以及T细胞配体，诸如B7-H1、PD-L1和/或PD-L2的产生。例如，与载体诸如聚乙烯亚胺复合的siRNA(例如，长度为约21个核苷酸，其对编码PD-1或编码PD-1配体的基因有特异性，以及可以容易地商购的寡核苷酸)(参见Cubillos-Ruiz等人，J.Clin.Invest.119(8):2231-2244(2009)，容易被表达PD-1以及PD-1配体并减少这些受体和配体的表达以实现T细胞中抑制性信号转导减少，从而激活T细胞的细胞摄取。
2.CTLA4拮抗剂
可用于介导T细胞在免疫应答中的作用的其它分子也被考虑作为附加治疗剂。在一些实施方案中，该分子是CTLA4的拮抗剂，例如拮抗性抗CTLA4抗体。考虑用于本发明方法的抗CTLA4抗体的示例包括PCT/US2006/043690(Fischkoff等人，WO/2007/056539)中描述的抗体。
抗PD-1、抗B7-H1和抗CTLA4抗体的剂量是本领域已知的，并且可以在例如0.1至100mg/kg的范围内，或者在1至50mg/kg或10至20mg/kg的较小范围内。人类受试者的适当剂量可介于5与15mg/kg之间，以10mg/kg抗体(例如，人抗PD-1抗体)为特定实施方案。
可用于本发明方法的抗CTLA4抗体的具体示例是伊匹单抗(Ipilimumab)，一种人抗CTLA4抗体，按例如约10mg/kg的剂量施用，和曲美母单抗(Tremelimumab)，一种人抗CTLA4抗体，按例如约15mg/kg的剂量施用。还参见Sammartino等人，2009年12月线上发表的Clinical Kidney Journal,3(2):135-137(2010)。
在其它实施方案中，拮抗剂是小分子。已证实一系列小有机化合物与B7-1配体结合以防止与CTLA4结合(参见Erbe等人，J.Biol.Chem.,277:7363-7368(2002)。此类小有机物可以单独施用或与抗CTLA4抗体一起施用以减少T细胞的抑制性信号转导。
3.增效剂
在一些实施方案中，附加治疗剂包括增效剂。虽然精确的作用机制对于本发明的广泛实践不是必需的，但增效剂可以通过一种以上的机制起作用以增加免疫应答上调因子的功效。
在一些实施方案中，增效剂为环磷酰胺。环磷酰胺(CTX、或)是一种氧氮杂膦类(oxazahosphorine)药物且类似物包括异环磷酰胺(IFO、Ifex)、培磷酰胺(perfosfamide)、氯乙环磷酰胺(trophosphamide)、(曲磷胺(trofosfamide)；Ixoten)及其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药和代谢物(美国专利申请20070202077，其整体并入)。异环磷酰胺是环磷酰胺的结构类似物并且认为其作用机制与环磷酰胺相同或基本相似。培磷酰胺(4-氢过氧环磷酰胺)和氯乙环磷酰胺也是烷化剂，其在结构上与环磷酰胺有关。例如，培磷酰胺使DNA烷基化，从而抑制DNA复制及RNA和蛋白质合成。设计并评价了新的氧氮杂磷杂环己烷类(oxazaphosphorines)衍生物，试图提高选择性和反应并降低宿主毒性(Liang J,Huang M,Duan W,Yu XQ,Zhou S.Design of newoxazaphosphorine anticancer drugs.Curr Pharm Des.2007；13(9):963-78.Review)。这些包括马磷酰胺(mafosfamide)(NSC 345842)、葡磷酰胺(glufosfamide)(D19575，β-D-葡糖基异磷酰胺氮芥)、S-(-)-溴磷酰胺(CBM-11)、NSC 612567(醛磷酰胺全氢噻嗪(aldophosphamide perhydrothiazine))和NSC 613060(醛磷酰胺噻唑烷(aldophosphamide thiazolidine))。马磷酰胺是一种氧氮杂磷杂环己烷类似物，是4-羟基-CPA的化学稳定的4-硫代乙磺酸盐。葡磷酰胺是IFO衍生物，其中异磷酰胺氮芥即IFO的烷基化代谢物与β-D-葡萄糖分子经糖苷键连接。另外的环磷酰胺类似物在标题为glycosidically linked的美国专利5,190,929中有描述，其全文以引用方式并入本文。
虽然CTX本身无毒，但它的一些代谢物是细胞毒性烷化剂，其诱导DNA交联，并且在较高剂量下，诱导链断裂。许多细胞对CTX具有抗性，因为它们表达高水平的解毒酶即醛脱氢酶(ALDH)。CTX靶向增殖淋巴细胞，因为淋巴细胞(但非造血干细胞)仅表达低水平的ALDH，并且循环细胞对DNA烷基化剂最敏感。
低剂量的CTX(<200mg/kg)可具有免疫刺激作用，包括刺激人和小鼠癌症模型中的抗肿瘤免疫应答(Brode和Cooke Crit Rev.Immunol.28:109-126(2008))。这些低剂量是亚治疗性的并且不具有直接的抗肿瘤活性。相反，高剂量的CTX抑制抗肿瘤反应。有几种机制可以解释CTX在抗肿瘤免疫应答增效中的作用：(a)消耗CD4+CD25+FoxP3+Treg(并且特别是可能尤其具有抑制性的增殖Treg)，(b)消耗B淋巴细胞；(c)诱导一氧化氮(NO)，导致肿瘤细胞生长抑制；(d)调动和扩大CD11b+Gr-1+MDSC。这些原发效应有许多继发效应；例如，在Treg消耗后，巨噬细胞产生更多的IFN-γ和更少的IL-10。还证实CTX会诱导I型IFN表达并促进淋巴细胞的稳态增殖。
最常引用Treg消耗作为CTX使抗肿瘤免疫应答增效的机制。该结论部分基于过继转移实验的结果。在AB1-HA肿瘤模型中，第9天的CTX处理产生75％的治愈率。在第12天转移纯化Treg几乎完全抑制CTX反应(van der Most等人Cancer Immunol.Immunother.58:1219-1228(2009)。在HHD2肿瘤模型中观察到类似的结果：CTX预处理后，CD4+CD25+Treg的过继转移消除了对疫苗的治疗反应(Taieb,J.J.Immunol.176:2722-2729(2006))。
许多人类临床试验已证明低剂量CTX是一种安全、耐受良好且有效的促进抗肿瘤免疫应答的药剂(Bas和Mastrangelo Cancer Immunol.Immunother.47:1-12(1998))。
CTX使抗肿瘤免疫应答增效的最佳剂量是通过将Treg水平降低至正常范围以下来降低总体T细胞计数但具亚治疗性的剂量(参见Machiels等人Cancer Res.61:3689-3697(2001))。
在已将CTX用作免疫增效剂的人类临床试验中，通常使用300mg/m2的剂量。对于一般男性(6英尺，170磅(78kg)，体表面积为1.98m2)，300mg/m2为8mg/kg，或624mg总蛋白。在小鼠癌症模型中，已发现在范围为15-150mg/kg的剂量下有效，其涉及30g小鼠中0.45-4.5mg总蛋白(Machiels等人Cancer Res.61:3689-3697(2001),Hengst等人Cancer Res.41:2163-2167(1981),Hengst Cancer Res.40:2135-2141(1980))。
对于较大的哺乳动物，例如灵长类动物，诸如人、患者，可以使用此类mg/m2剂量，但也可以使用在有限时间间隔内施用的单位剂量。此类单位剂量可以每天施用，持续有限时间段，诸如最多3天，或最多5天，或最多7天，或最多10天，或最多15天或最多20天或最多25天，全部由本发明特别考虑到。相同的方案可以应用于本文所述的其它增效剂。
在其它实施方案中，增效剂是降低调节性T淋巴细胞(T-reg)的活性和/或数量的药剂，诸如舒尼替尼(Sunitinib)抗TGFβ或伊马替尼(Imatinib)所述治疗方案还可以包括施用佐剂。
有用的增效剂还包括有丝分裂抑制剂，诸如紫杉醇、芳香酶抑制剂(例如来曲唑(Letrozole))和血管生成抑制剂(VEGF抑制剂，例如阿瓦斯丁(Avastin)、VEGF-Trap)(参见，例如，Li等人，Clin Cancer Res.2006年11月15日；12(22):6808-16.)、蒽环霉素、奥沙利铂、多柔比星、TLR4拮抗剂和IL-18拮抗剂。
C.抗微生物剂
在一个实施方案中，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可用于如以上所讨论的疾病治疗和预防中的防治性或预防性作用，并且还可用于严重外伤性损伤如重大烧伤、开放性骨折、意外截肢或其它创伤的情况下。因此，Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可以与抗微生物剂诸如抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂或精油组合施用给受试者。
在一些实施方案中，受试者在入院时施用Siglec-15结合分子和/或抗微生物剂以预防进一步的细菌、真菌或病毒并发症。抗生素可以靶向病原体，并且Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可以刺激免疫系统提供增强的反应以治疗或预防进一步的感染或疾病。
D.免疫抑制剂
在一些实施方案中，通过向受试者施用Siglec-15结合分子或配体结合分子和作为免疫抑制剂的第二试剂来治疗免疫应答或炎性/自身免疫性疾病/病症。免疫抑制剂包括但不限于针对其它淋巴细胞表面标记(例如，CD40、α-4整联蛋白)或针对细胞因子的抗体，融合蛋白(例如，CTLA-4-IgTNFR-Ig)，TNF-α阻滞剂诸如Enbrel、Remicade、Cimzia和Humira，环磷酰胺(CTX)(即，RevimmuneTM)、甲氨蝶呤(MTX)(即，)、贝利单抗(belimumab)(即，)，或其它免疫抑制药物(例如环孢菌素A、FK506样化合物，雷帕霉素(rapamycin)化合物或类固醇)、抗增殖剂、细胞毒性剂或其它可能有助于免疫抑制的化合物。
治疗剂可以是CTLA-4融合蛋白，诸如CTLA-4-Ig(阿巴西普(abatacept))。CTLA-4-Ig融合蛋白与T细胞上的共刺激受体CD28竞争结合抗原呈递细胞上的CD80/CD86(B7-1/B7-2)，从而起到抑制T细胞活化的作用。在另一个实施方案中，治疗剂是称为贝拉西普(belatacept)的CTLA-4-Ig融合蛋白。贝拉西普含有两个氨基酸取代(L104E和A29Y)，显著增加其对体内CD86的亲合力。在另一个实施方案中，治疗剂是Maxy-4。
在另一个实施方案中，治疗剂是环磷酰胺(CTX)。环磷酰胺(是RevimmuneTM的通用名)，也称为胞磷烷(cytophosphane)，是来自噁唑碱(oxazophorine)基团的氮芥烷基化剂。其用于治疗各种类型的癌症和一些自身免疫性病症。环磷酰胺(CTX)是用于肾狼疮患者弥漫性增生性肾小球肾炎的主要药物。
治疗剂可以按有效量施用以降低抗双链DNA(抗dsDNA)自身抗体的血液或血清水平和/或减少有需要的患者的蛋白尿。
在另一个实施方案中，治疗剂增加血清中腺苷的量，参见例如WO 08/147482。例如，第二种治疗剂可以是CD73-Ig、重组CD73或增加CD73表达的另一种试剂(例如细胞因子或单克隆抗体或小分子)，参见例如WO 04/084933。在另一个实施方案中，治疗剂是干扰素-β。
治疗剂可以是Tysabri或另一种MS治疗剂。在另一个实施方案中，第二治疗剂优先治疗慢性炎症，由此治疗方案靶向急性和慢性炎症。在一个优选实施方案中，第二种治疗剂是TNF-α阻断剂。
治疗剂可以是抑制或减少Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌炎症分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌的小分子，所述炎症分子包括但不限于IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-18、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP。在另一个实施方案中，治疗剂是与Treg相互作用，增强Treg活性，促进或增强Treg分泌IL-10，增加Treg数量，增加Treg抑制能力或它们的组合的小分子。
在一些实施方案中，组合物增加Treg的活性或产生。示例性Treg增强剂包括但不限于糖皮质激素氟替卡松(fluticasone)，沙美特罗(salmeteroal)，IL-12、IFN-γ和IL-4的抗体；维生素D3和地塞米松(dexamethasone)及它们的组合。
在一些实施方案中，治疗剂是抗体，例如，针对促炎分子诸如IL-6、IL-23、IL-22或IL-21的功能阻断性抗体。
如本文所用术语“雷帕霉素化合物”包括中性三环类化合物雷帕霉素、雷帕霉素衍生物、雷帕霉素类似物和其它大环内酯类化合物，它们被认为具有与雷帕霉素相同的作用机制(例如抑制细胞因子功能)。用语“雷帕霉素化合物”包括与雷帕霉素具有结构相似性的化合物，例如具有类似大环结构的化合物，其已经过修饰以增强其治疗效果。示例性雷帕霉素化合物是本领域已知的(参见例如WO95122972、WO 95116691、WO 95104738、美国专利号第6,015,809号、第5,989,591号；美国专利第5,567,709号、第5,559,112号、第5,530,006号、第5,484,790号、第5,385,908号、第5,202,332号、第5,162,333号、第5,780,462号、第5,120,727号)。
用语“FK506样化合物”包括FK506和FK506衍生物和类似物，例如与FK506具有结构相似性的化合物，例如具有相似大环结构的化合物，其已经过修饰以增强其治疗效果。FK506样化合物的示例包括，例如WO 00101385中描述的那些。优选地，如本文所用的用语“雷帕霉素化合物”不包括FK506样化合物。
E.抗炎剂
其它合适的治疗剂包括但不限于抗炎剂。抗炎剂可以是非甾体、甾体或它们的组合。一个实施方案提供了含有约1％(w/w)至约5％(w/w)，通常约2.5％(w/w)抗炎剂的口服组合物。非甾体抗炎剂的代表性示例包括但不限于昔康类(oxicams)，诸如吡罗昔康(piroxicam)、伊索昔康(isoxicam)、替诺昔康(tenoxicam)、舒多昔康(sudoxicam)；水杨酸酯类，诸如阿司匹林(aspirin)、双水杨酸(disalcid)、贝诺酯(benorylate)、三柳胆镁(trilisate)、safapryn、丙磺舒(solprin)、二氟尼柳(diflunisal)和芬度柳(fendosal)；乙酸衍生物，诸如双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、伊索克酸(isoxepac)、呋罗芬酸(furofenac)、硫平酸(tiopinac)、齐多美辛(zidometacin)、阿西美辛(acematacin)、芬替酸(fentiazac)、佐美酸(zomepirac)、环氯茚酸(clindanac)、奥昔平酸(oxepinac)、联苯乙酸(felbinac)和酮咯酸(ketorolac)；芬那酯类(fenfentes)，诸如甲芬那酸(mefenamic)、甲氯芬那酸(meclofenamic)、氟芬那酸(flufenamic)、尼氟酸(niflumic)和托芬那酸(tolfenamic acid)；丙酸衍生物类，诸如布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬布芬(fenbufen)、吲哚洛芬(indopropfen)、吡洛芬(pirprofen)、卡洛芬(carprofen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、普拉洛芬(pranoprofen)、米洛芬(miroprofen)、硫噁洛芬(tioxaprofen)、舒洛芬(suprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)和噻洛芬酸(tiaprofenic)；吡唑类，诸如保泰松(phenylbutazone)、羟基保泰松(oxyphenbutazone)、非普拉宗(feprazone)、阿扎丙宗(azapropazone)和曲保松(trimethazone)。也可以采用这些非甾体抗炎剂的混合物。
甾体类抗炎药物的代表性示例包括但不限于皮质类固醇，诸如氢化可的松(hydrocortisone)、羟基-曲安奈德(hydroxyl-triamcinolone)、α-甲基地塞米松、地塞米松-磷酸盐、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、戊酸氯倍他索(clobetasolvalerate)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoxymethasone)、醋酸去氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate)、地塞米松、双氯松(dichlorisone)、双醋二氟松(diflorasone diacetate)、戊酸二氟米松(diflucortolone valerate)、氟雄诺龙(fluadrenolone)、氟氯奈德(fluclorolone acetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、特戊酸氟米松(flumethasone pivalate)、氟新诺龙丙酮(fluosinolone acetonide)、氟轻松醋酸酯(fluocinonide)、氟可丁醋(flucortine butylester)、氟可龙(fluocortolone)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene)(氟强的松(fluprednylidene))、氟氢缩松(flurandrenolone)、哈西缩松(halcinonide)、醋酸氢化可的松(hydrocortisoneacetate)、丁酸氢化可的松(hydrocortisone butyrate)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、氟奈德(flucetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、双醋二氟拉松(difluorosone diacetate)、氟拉诺龙(fluradrenolone)、氟氢可的松(fludrocortisone)、双醋二氟拉松、氟羟奈德(fluradrenolone acetonide)、甲羟松(medrysone)、安西法尔(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松(betamethasone)及其酯类平衡物、氯泼尼松(chloroprednisone)、醋酸氯泼尼松(chlorprednisoneacetate)、氯可托龙(clocortelone)、克西诺龙(clescinolone)、双氯松(dichlorisone)、醋丁二氟龙(diflurprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼缩松(flunisolide)、氟米龙(fluoromethalone)、氟培龙(fluperolone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、戊酸氢化可的松(hydrocortisone valerate)、氢化可的松环戊丙酸酯(hydrocortisonecyclopentylpropionate)、氢可松氨酯(hydrocortamate)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、强的松龙(prednisolone)、强的松(prednisone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、去炎松(triamcinolone)及其混合物。
V.诊断方法
Siglec-15结合分子，尤其是抗体及其抗原结合片段，可用于诊断目的，例如检测、诊断或监测与Siglec-15表达相关的疾病、病症或感染，或确定或协助确定或鉴定合适的患者群体或概况。任何方法均可与治疗受试者的方法联合，例如，所述治疗方法是通过向受试者施用有效量的一种或多种治疗性Siglec-15结合分子。
疾病、病症或感染(包括但不限于癌症)的检测或诊断可包括：(a)使用免疫特异性结合此类抗原的一种或多种抗体(或其片段)测定受试者细胞、血清、血浆、血液或组织样品(例如，肿瘤样品)中Siglec-15或其衍生物的表达；以及(b)将抗原水平与对照水平(例如正常组织样品中的水平)进行比较，由此与抗原对照水平相比，测定的抗原水平增加表明有所述疾病、病症或感染。此类抗体和片段可用于免疫测定，诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)和荧光活化细胞分选(FACS)。
在一些实施方案中，抗体或片段用于体外或原位组织样品细胞或体内细胞中的IHC分析。因此，抗体和片段可用于检测和诊断人类疾病、病症或感染。在一个实施方案中，此类诊断包括：a)向受试者施用(例如，肠胃外、皮下或腹膜内)有效量的此类标记抗体或抗原结合片段；b)在施用后等待一段时间间隔，以允许标记分子优先在受试者体内表达Siglec-15的部位浓缩(并且未结合的标记分子清除至本底水平)；c)测定本底水平；以及d)检测受试者中的标记抗体，使得局部检测到高于或低于本底水平的标记抗体，表明受试者患有所述疾病、病症或感染和/或显示Siglec-15+组织的位置和相对表达水平。根据该实施方案，抗体可以用成像部分标记，该成像部分可以使用本领域技术人员已知的成像系统在体内检测到。本底水平可以通过各种方法确定，包括将检测到的标记分子的量与先前为特定系统所测定的标准值进行比较。
其它方法包括，例如，通过以下方式来监测疾病、病症或感染的进展：(a)使用Siglec-15结合分子测定在第一时间点和之后时间点获得的受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达，以及(b)比较第一时间点和之后时间点的受试者细胞或组织样品中的Siglec-15表达水平，其中与第一时间点相比，之后时间点测定的Siglec-15水平增加表明疾病、病症或感染进展。
用于监测对治疗的应答的方法可包括，(a)使用Siglec-15结合分子测定治疗之前和之后受试者细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较随时间变化的Siglec-15水平，由此与治疗之前的Siglec-15水平相比，治疗之后测定的Siglec-15水平降低表明对所述治疗应答良好。
在本领域中将理解，受试者的大小和所用的成像系统将决定产生诊断图像所需的成像部分的量。
根据几个变量，包括所用标记类型和施用模式，施用后允许标记分子优先在受试者体内部位浓缩并且未结合的标记分子清除至本底水平的时间间隔为6至48小时或6至24小时或6至12小时。在另一个实施方案中，施用后的时间间隔为5至20天或5至10天。
在一个实施方案中，通过重复用于诊断疾病、病症或感染的方法来进行疾病、病症或感染的监测，例如在初始诊断后一个月，在初始诊断后六个月，在初始诊断后一年等。
可以使用本领域已知的用于体内扫描的方法在受试者中检测标记分子的存在。这些方法取决于所用标记类型。熟练的技术人员将能够确定用于检测特定标记的适当方法。可以用于诊断方法中的方法和装置包括但不限于计算机断层摄影(CT)，诸如正电子发射断层摄影术(PET)的全身扫描，磁共振成像(MRI)和超声波检查。
在一个具体实施方案中，分子用放射性同位素标记，并使用辐射响应式外科器械在患者中检测到(Thurston等人，美国专利第5,441,050号)。在另一个实施方案中，分子用荧光化合物标记，并使用荧光响应式扫描仪在患者中检测到。在另一个实施方案中，分子用正电子发射金属标记，并使用正电子发射断层摄影术在患者中检测到。再一个实施方案中，分子用顺磁标记物标记，并使用磁共振成像(MRI)在患者中检测到。
VI.试剂盒
所公开的Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子可以包装在标明量的密封容器中，诸如安瓿或小袋。分子可以作为干燥灭菌冻干粉末或无水浓缩物在密封容器中提供，并且可以例如用水或盐水重构至适当浓度用于向受试者施用。例如，分子可以作为干燥无菌冻干粉末在密封容器中以至少5mg或至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg或至少75mg的单位剂量提供。冻干分子可以在其原始容器中储存在介于2℃与8℃之间下，并且通常在重构后12小时内，或6小时内，或5小时内，或3小时内，或1小时内施用。
在一个替代性实施方案中，分子在标明量和浓度的密封容器中呈液体形式提供。在一些实施方案中，在密封容器中提供的分子液体形式包括至少1mg/ml或至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少100mg/ml、至少150mg/ml、至少200mg/ml的分子。
还提供了包含一个或多个装有Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子的容器的药包和试剂盒。另外，可用于疾病治疗的一种或多种其它预防或治疗剂也可包括在药包或试剂盒中。药包或试剂盒还可包括一个或多个装有所公开的药物组合物的一种或多种成分的容器。任选地与此类容器相关联的可以是监管药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定形式的通知，该通知反映该机构批准制造、使用或销售用于人类施用。
还提供了为上述方法设计的试剂盒。实施方案通常包括一种或多种Siglec-15结合分子或Siglec-15配体结合分子。在特定实施方案中，试剂盒还在一个或多个容器中包括一种或多种可用于治疗癌症的其它预防或治疗剂。
实施例
实施例1：SIGLEC-15抗体及其重链和轻链序列
材料和方法
小鼠抗人Siglec-15单克隆抗体
用经CFA(完全弗氏佐剂)乳化的hS15.mIg(与小鼠IgG2a融合的人Siglec15胞外结构域[ECD])免疫Siglec-15敲除小鼠(n＝2)。小鼠还接受GM-CSF和抗CD40的注射。2周后用相同免疫原激发小鼠。通过在1:1000至1:100,000,000的不同稀释度下，在hS15.hIg(与人IgG1融合的人Siglec15 ECD)涂布的ELISA板中对从尾部放血收集的血清进行试验来评估抗血清滴度。图1示出在>1:100,000的稀释度下检测到抗hS15抗体。两周后小鼠接受第三剂抗原。最后一次加强3天后，收获小鼠脾细胞并重新悬浮于补充有10％FBS和谷氨酰胺的RPMI中，稍后融合形成杂交瘤。
Siglec-15敲除(S15 KO)脾细胞的电融合
将融合细胞接种在甲基纤维素凝胶/培养基中；剩余融合细胞冷冻保存并且可以解冻用于另一批克隆。挑取单个克隆物并置于10×96孔板(960个克隆物)中。2周后收集上清液。
RACE
根据以下方案进行重链和轻链的RACE(cDNA末端快速扩增)鉴定：(1)mRNA变性，(2)cDNA合成，(3)5'RACE反应，(4)分析PCR结果(在琼脂糖凝胶上观察扩增的DNA片段-正确的抗体可变区DNA片段的大小应在500-700个碱基对之间，(5)TOPO克隆PCR阳性条带；(6)PCR扩增TOPO克隆物，接着进行凝胶电泳并从琼脂糖凝胶中回收，(7)总共测定218个克隆物，(8)使用测序数据进行CDR分析(使用可通过vbase2.org获得的VBASE2定义CDR区)。
结果
使用RACE方法克隆抗体。对218个克隆DNA片段进行测序后，抗体序列分析鉴定出24个抗体样品的一条重链和一条轻链，所述抗体样品在本文中称为1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9、6A、28A、63A、71A、77A、80A、82B、83B、92A、93B、99B、104B和105A。在下面和上面提供了序列。重链和轻链序列及CDR在上面、下面提供，并在图2A至图3C中示出。
1B2序列：
FASTA格式的1B2 VL氨基酸序列
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:3)
FASTA格式的1B2 VL核苷酸序列
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAG(SEQ ID NO:74)
FASTA格式的1B2 VH氨基酸序列
EVQLVESGGGFVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSIIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARDHYHGNGSDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:13)
FASTA格式的1B2 VH核苷酸序列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTCGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACATTAGTAGTGGCAGTAGTATCATCTACTATGCAGACACAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGGGACCACTACCATGGTAACGGGTCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:85)
1C3序列：
FASTA格式的1C3 VL氨基酸序列
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFGGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGFYYCMQHLEYPYTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:4)
FASTA格式的1C3 VL核苷酸序列
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTATATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTTTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAGGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:75)
FASTA格式的1C3 VH氨基酸序列
QVQLKQSGAELVKPGASVKISCKASGYIFTDYYVNWVKQRPGQGLEWIGKIGPGSVSIYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCASYYYGFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:14)
FASTA格式的1C3 VH核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGCTACATCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGGAAGTGTTAGTATTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:86)
1H3序列：
FASTA格式的1H3 VL氨基酸序列
DIQMTQASSSLSVSLGGRVTITCKASDHINNWLAWYQQKPGNAPRLLISGATSLETGVPSRFSGSGSGKDYTLSITSLQTEDVATYYCQQYWSSPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:5)
FASTA格式的1H3 VL核苷酸序列
GACATCCAGATGACACAGGCTTCATCCTCCTTGTCTGTATCTCTAGGAGGCAGAGTCACCATTACTTGCAAGGCAAGTGACCACATTAATAATTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAATGCTCCTAGGCTCTTAATATCTGGTGCAACCAGTTTGGAAACTGGGGTTCCTTCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGAAAGGATTACACTCTCAGCATTACCAGTCTTCAGACTGAAGATGTTGCTACTTATTACTGTCAACAGTATTGGAGTTCTCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:76)
FASTA格式的1H3 VH氨基酸序列
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLSNYGVHWVRQPPGKGLEWLVLIWSDGSTTYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTGDTAMYYCARHPYDDYSGYYYTMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:15)
FASTA格式的1H3 VH核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCACCGTCTCAGGGTTCTCATTAAGCAATTATGGTGTACACTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGTACTGATATGGAGTGATGGAAGCACAACCTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTCCAAACTGGTGACACAGCCATGTACTACTGTGCCAGACATCCCTATGATGATTATTCCGGCTATTACTATACTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA(SEQID NO:87)
1C12序列：
FASTA格式的1C12 VL氨基酸序列
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:3)
FASTA格式的1C12 VL核苷酸序列
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAA(SEQ ID NO:77)
FASTA格式的1C12 VH氨基酸序列
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFSFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSILYYADIVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARDHYHGNGSDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:16)
FASTA格式的1C12 VH核苷酸序列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGTTTCTCTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACATTAGTAGTGGCAGTAGTATCCTCTACTATGCAGACATAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGGGACCACTACCATGGTAACGGGTCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:88)
3H10序列：
FASTA格式的3H10 VL氨基酸序列
QIILTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSTSFMHWYQQKPGTSPKRWIFDTSKLASGVPGRFIGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCHQRSAYPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:6)
FASTA格式的3H10 VL核苷酸序列
CAAATTATTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTACAAGTTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCACCTCCCCCAAAAGATGGATTTTTGACACATCCAAACTGGCTTCTGGAGTCCCTGGTCGCTTCATTGGTAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCACCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCATCAGCGGAGTGCTTACCCATGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA(SEQ ID NO:78)
FASTA格式的3H10 VH氨基酸序列
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDYYMHWVKERPEQGLEWIGRIDPEDGDIEYDPKFQGKATMTADTSSNTAYLQFSSLTSEDTAVYYCVTDYDYDGGWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:17)
FASTA格式的3H10 VH核苷酸序列
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAAAGAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGGTGATATTGAATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGTTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTATTGTGTCACGGACTATGATTACGACGGAGGCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:89)
5G12序列：
FASTA格式的5G12 VL氨基酸序列
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:7)
FASTA格式的5G12 VL核苷酸序列
GACATCAAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCATGTATGCATCTCTAGGAGAGAGAGTCACTATCACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTAATAGCTATTTAAGCTGGTTCCAGCAGAAACCAGGGAAATCTCCTAAGACCCTGATCTATCGTGCAAACAGATTGGTAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGCAAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGTATGAAGATATGGGAATTTATTATTGTCTACAGTATGATGAGTTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:79)
FASTA格式的5G12 VH氨基酸序列
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWITWVIQRPGQGLEWIGDIYCGSDTMHYNEKFKNKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARWWDYGSSYDYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:18)
FASTA格式的5G12 VH核苷酸序列
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGATACAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATTGTGGTAGTGATACTATGCACTACAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATGGTGGGACTACGGTAGTAGCTACGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ IDNO:90)
6F8序列：
FASTA格式的6F8 VL氨基酸序列
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFGGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:8)
FASTA格式的6F8 VL核苷酸序列
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTATTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:80)
FASTA格式的6F8 VH氨基酸序列
QVQLKQSGPELVRPGASVKISCEASGYTFTDYYVNWVKQRPGRGLEWIGKIGPGSVSIYYNEKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCASYYYGFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:19)
FASTA格式的6F8 VH核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGACCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCGAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACGGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGGAAGTGTTAGTATTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:91)
8C8序列：
FASTA格式的8C8 VL氨基酸序列
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFGGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:9)
FASTA格式的8C8 VL核苷酸序列
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:81)
FASTA格式的8C8 VH氨基酸序列
QVQLKQSGAELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYVNWVKQRPGQGLEWIGKIGPESVSIYYSEKFKAKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCASYYYGFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:20)
FASTA格式的8C8 VH核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGACTATTATGTAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAAAGATTGGTCCTGAAAGTGTTAGTATTTATTACAGTGAGAAGTTCAAGGCCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTTCTGTGCAAGTTATTACTACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:92)
8H8序列：
FASTA格式的8H8 VL氨基酸序列
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSSGAVTTGNFANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:10)
FASTA格式的8H8 VL核苷酸序列
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTTCTGGGGCTGTTACAACTGGTAACTTTGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCACTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTA(SEQ ID NO:82)
FASTA格式的8H8 VH氨基酸序列
EVQLLETGGGLVQPGGSRGLSCEGSGFTFSGFWMSWVRQTPGKTLEWIGDINSDGSAINYAPSIKDRFTIFRDNDKNTLYLQMNNVRSEDTATYFCVRYDDYGYFDVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:21)
FASTA格式的8H8 VH核苷酸序列
GAAGTGCAGCTGTTGGAGACTGGAGGAGGCTTGGTGCAACCGGGGGGGTCACGGGGACTCTCTTGTGAAGGCTCAGGGTTCACTTTTAGTGGCTTCTGGATGAGCTGGGTTCGACAGACACCTGGGAAGACCCTGGAGTGGATTGGAGACATTAATTCTGATGGCAGTGCAATAAACTACGCACCATCCATAAAGGATCGATTCACTATCTTCAGAGACAATGACAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAATGTGCGATCGGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGTGAGATATGATGATTACGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ ID NO:93)
9A5序列：
FASTA格式的9A5 VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSVTIGQSASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:11)
FASTA格式的9A5 VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAGTCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:83)
FASTA格式的9A5 VH氨基酸序列
HVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGLIWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADISSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCASSSPHGDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:22)
FASTA格式的9A5 VH核苷酸序列
CACGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGTTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTTTAATCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACATATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGTTCCTCTCCTCACGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:94)
10G9序列：
FASTA格式的10G9 VL氨基酸序列
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:12)
FASTA格式的10G9 VL核苷酸序列
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCACTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTA(SEQ ID NO:84)
FASTA格式的10G9 VH氨基酸序列
EVQLLETGGGLVQPGGSRGLSCEGSGFTFSDFWMSWVRQTPGKTLEWIGDINSDGSAVNYAPSIKDQFTIFRDNDKRTLHLQMINVRSEDTATYFCVRYDDYGYFDVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:23)
FASTA格式的10G9 VH核苷酸序列
GAAGTGCAGCTGTTGGAGACTGGAGGAGGCTTAGTGCAACCTGGGGGGTCACGGGGACTCTCTTGTGAAGGCTCAGGGTTCACTTTTAGTGACTTCTGGATGAGCTGGGTTCGACAGACACCTGGGAAGACCCTGGAGTGGATTGGAGACATTAATTCTGATGGCAGTGCAGTTAACTACGCACCATCCATAAAGGATCAATTCACTATCTTCAGAGACAATGACAAGAGGACCCTGCACCTGCAGATGATCAATGTTCGATCGGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGTGAGATATGATGATTACGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ ID NO:95)
6A序列：
FASTA格式的6A VL氨基酸序列
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:96)
FASTA格式的6A VL核苷酸序列
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAGGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:120)
FASTA格式的6A VH氨基酸序列
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYMHWVKQRPEQGLEWIGCIDPENGDTEYASKFQDKATITTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCTTYVGFAYWGQGTLVTVST(SEQ ID NO:108)
FASTA格式的6A VH核苷酸序列
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAACTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATACTGAATATGCCTCGAAATTCCAGGACAAGGCCACTATAACAACAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTACA(SEQ ID NO:133)
28A序列：
FASTA格式的28A VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSIPIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSELDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:97)
FASTA格式的28A VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGATTCCCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGTAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTCATCTATCTGGTGTCTGAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAAGATTTGGGAGTTTATTATTGTTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:121)
FASTA格式的28A VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFISYGITWVKQRTGQGLEWIGEIHPRSGNTYYNENFKDRASLTADKSSSTAYMEVRSLTSEDSAVYFCARGGPGDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:109)
FASTA格式的28A VH核苷酸序列
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCATAAGCTATGGTATAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAATTTCAAGGACAGGGCCTCACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGGTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGGGGTGGGCCGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:134)
63A序列：
FASTA格式的63A VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:98)
FASTA格式的63A VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGTTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:122)
FASTA格式的63A VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGQIYPRSDNTYYNERFKGKATLTADKSSSTAYMALRSLTSEDSAVYFCAREGGPDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:110)
FASTA格式的63A VH核苷酸序列
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTAGAAGTGACAATACTTACTACAATGAGAGGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGCGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGAGGGGGGTCCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:135)
71A序列：
FASTA格式的71A VL氨基酸序列
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:99)
FASTA格式的71A VL核苷酸序列
GACGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTACAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:123)
FASTA格式的71A VH氨基酸序列
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYMHWVKQRPEQGLEWIGCIDPENGDIEYASRFQGKATMTADTSSNTAYLQLTSLTSADTAVYYCTTYVGFGYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:111)
FASTA格式的71A VH核苷酸序列
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATATTGAATATGCCTCGAGGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCACCAGCCTGACATCTGCGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:136)
77A序列：
FASTA格式的77A VL氨基酸序列
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVHSNGNTYLEWYLKKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGMYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:100)
FASTA格式的77A VL核苷酸序列
GATGTTTTGATGACCCAAAGTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAACATAGTACATAGTAATGGTAACACCTATTTAGAATGGTACCTGAAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTCTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAATGTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGAGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:124)
FASTA格式的77A VH氨基酸序列
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYMHWVKQRPEQGLEWIGCIDPENGDTEYASKFQGKATITADTSSNTVYLQLSSLTSEDTAVYYCTTYVGFGYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:112)
FASTA格式的77A VH核苷酸序列
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGTATTGATCCTGAGAATGGTGATACTGAATATGCCTCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGTCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAGGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:137)
80A序列：
FASTA格式的80A VL氨基酸序列
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSNQSLLNSGDQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAIYYCQNDYSYPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:101)
FASTA格式的80A VL核苷酸序列
GACATTGTGATGACACAGTCTCCATCCTCCCTGACTGTGACAGCAGGAGAGAAGGTCACTATGAGCTGCAAGTCCAATCAGAGTCTGTTAAACAGTGGAGATCAAAAGAACTACTTGACCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTATTGATCTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAATTTATTACTGTCAGAATGATTATAGTTATCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:125)
FASTA格式的80A VH氨基酸序列
QVQLKQSGAELVRPGASVKLSCRASGYTFTDFYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGSDETYYNEKFKDKVTLTAEKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCALWFFDVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:113)
FASTA格式的80A VH核苷酸序列
CAGGTCCAACTGAAGCAGTCTGGGGCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAGGGCTTCTGGCTACACTTTCACTGACTTCTACATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGCAAGGATTTATCCTGGAAGTGATGAGACTTACTACAATGAGAAGTTTAAGGACAAGGTCACACTGACTGCAGAAAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCTGTCTATTTCTGTGCCCTCTGGTTCTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ ID NO:138)
82B序列：
FASTA格式的82B VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSVTIGQSASISCKSSQSLLDSDGNTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSELDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:102)
FASTA格式的82B VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACTATTGGACAATCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCCTAGATAGTGATGGAAACACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATTTGGTGTCTGAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:126)
FASTA格式的82B VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSDGITWVKQRTGQGLEWIGQIHPRSGNTYYNGKFKGKATLTADRSSSTTYMELRSLTSEDSAVYFCAKTGTGDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:114)
FASTA格式的82B VH核苷酸序列
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGTTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACCTTCACAAGCGATGGTATTACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACCTACTACAATGGGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAGATCCTCCAGCACAACGTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAAAACTGGGACGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:139)
83B序列：
FASTA格式的83B VL氨基酸序列
EIQMTQSPSSMSASLGDRITITCQATQDIVKNLNWYQQKPGKPPSFLIYYATELAEGVPSRFSGSGSGSDYSLTISNLESEDFADYYCLQFYEFPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:103)
FASTA格式的83B VL核苷酸序列
GAAATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTATGTCTGCATCTCTGGGAGACAGAATAACCATCACTTGCCAGGCAACTCAAGACATTGTTAAGAATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAACCCCCTTCATTCCTGATCTATTATGCAACTGAACTGGCAGAAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGTCAGACTATTCTCTGACAATCAGCAACCTGGAGTCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTCTACAGTTTTATGAATTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:127)
FASTA格式的83B VH氨基酸序列
EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTSYNQKFKDKATLTVNKSSSTAFMELRSLASEDSAVYYCARSDWEDCWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:115)
FASTA格式的82B VH核苷酸序列
GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAACCCTAACAATGGTGGTACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAAACAAGTCCTCCAGCACAGCCTTCATGGAGCTCCGCAGCCTGGCATCGGAGGATTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGGTCTGACTGGGAAGACTGCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:140)
92A序列：
FASTA格式的92A VL氨基酸序列
QIVLTQSPAIMSASLGEEITLICSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKLLIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTFYSLTISSVEAEDAADYYCHQWSSWTFGGGTQLEIK(SEQ ID NO:104)
FASTA格式的92A VL核苷酸序列
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCTAGGGGAGGAGATCACCCTAATTTGCAGTGCCAGCTCGAGTGTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACTTCTCCCAAACTCTTGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTTCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTTTTATTCTCTTACAATCAGCAGTGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCGATTATTACTGCCATCAGTGGAGTAGTTGGACGTTCGGTGGAGGCACCCAGCTGGAAATCAAA(SEQ ID NO:128)
FASTA格式的92A VH氨基酸序列
DVQLQESGPGLVKFSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYIRHDGSNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVITEDTATYYCVREIYDGSSGYFDVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:116)
FASTA格式的92A VH核苷酸序列
GATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAATTTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTGGTTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACATAAGACACGATGGTAGCAATAACTACAACCCGTCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGATTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGTAAGAGAGATCTATGATGGTTCCTCCGGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ IDNO:141)
93B序列：
FASTA格式的93B VL氨基酸序列
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQPEDLAVYYCQNDYSFPFTFGSGTELEMK(SEQ ID NO:105)
FASTA格式的93B VL核苷酸序列
GACATTGTGATGACACAGTCTCCATCCTCCCTGACTGTGACAGCAGGAGAGAAGGTCACTATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGTCTGTTAAACAGTGGAAATCAAAAGAATTACTTGACCTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAACTGTTGATCTACTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAATGTGCAGCCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGAATGATTATAGTTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAGAGTTGGAAATGAAA(SEQ ID NO:129)
FASTA格式的93B VH氨基酸序列
QVQLKQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTDYYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGNGNTDYNEKFKDKATLTAEKSSTTAYIQLSSLTSEDSAVYFCCLWYFDVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:117)
FASTA格式的93B VH核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGAAGCAGTCTGGGGCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACTTTCACTGACTACTATATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGCAAGGATTTATCCTGGAAATGGTAATACTGACTACAATGAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACACTGACTGCAGAAAAATCCTCCACCACTGCCTACATACAACTCAGCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCTGTCTATTTCTGTTGCCTCTGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ ID NO:142)
99B序列：
FASTA格式的99B VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:106)
FASTA格式的99B VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAATTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA(SEQ ID NO:130)
FASTA格式的99B VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSDGITWLKQRTGQGLEWIGQIHPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCAKTGTGDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:118)
FASTA格式的99B VH核苷酸序列
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACCTTCACAAGCGACGGTATAACCTGGCTGAAACAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACCTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAAAACTGGGACGGGGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:143)
104B序列：
FASTA格式的104B VL氨基酸序列
DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSLSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKIIRVEAEDLGIYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEVK(SEQ ID NO:107)
FASTA格式的104B VL核苷酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCTGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCATCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAATTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAGTAAAA(SEQ ID NO:131)
FASTA格式的104B VH氨基酸序列
QVQLQQSGPELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGQIHPRSGNTYYNENFKGKATLTAAKSSSTAYLELRSLTSEDSAVYFCAREGGPDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:119)
FASTA格式的104B VH核苷酸序列
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGCCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAAAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGACAGATTCATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGCCAAATCCTCCAGCACAGCGTACCTGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGAGGGGGGTCCCGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO:144)
105A序列：
FASTA格式的105A VL氨基酸序列
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:99)
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GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTACAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA(SEQ ID NO:132)
FASTA格式的105A VH氨基酸序列
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYMHWVKQRPEQGLEWIGCIDPENGDIEYASRFQGKATMTADTSSNTAYLQLTSLTSADTAVYYCTTYVGFGYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:111)
FASTA格式的105A VH核苷酸序列
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTTAACATTAAAGACGACTATATGCACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGATGCATTGATCCTGAGAATGGTGATATTGAATATGCCTCGAGGTTCCAGGGCAAGGCCACTATGACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCACCAGCCTGACATCTGCGGACACTGCCGTCTATTACTGTACTACATACGTTGGATTTGGTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA(SEQ ID NO:145)
实施例2：抗huS15抗体结合表达人S15或小鼠S15的细胞
材料和方法
用携带人Siglec15或小鼠Siglec15的慢病毒载体转导人293T和小鼠CRC MC38肿瘤细胞系。分选细胞以建立人S15和小鼠S15稳定细胞系。将293T.hS15和MC38.mS15稳定细胞重新悬浮于FACS缓冲液中，并在与纯化Siglec-15mAb孵育之前封闭Fc受体。将100μLFACS缓冲液中的1E05个细胞等分至独立的管中，并添加1μg纯化mAb。将细胞在4℃下孵育30分钟，然后用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞重新悬浮于100μL FACS缓冲液中，并将0.005μg抗小鼠IgG-PE二抗添加到样品中，孵育30分钟并用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞在固定缓冲液中固定，随后通过流式细胞术进行分析。
该测定在图4A中示出。
结果
测试抗huS15抗体与表达人S15或小鼠S15的细胞的结合，所述抗huS15抗体包括1B2、1C3、1C12、1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9(图4B)和6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、71A(NC71)、NC74、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、NC87、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)、105A(NC105)(图4C)。结果如图4B至图4C所示。
测试抗huS15抗体与福尔马林固定的细胞的结合，所述抗huS15抗体包括1B2、1C3、1C12、1H3、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9和6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)或105A(NC105)。结果如图4D所示。
实施例3：纯化抗体结合小鼠和人Siglec-15
材料和方法
·S15-TM瞬时转染的293T细胞(Operetta)
·S15-TM瞬时转染的K562细胞(FACS)
使用Lipofectamine系统用鼠类Siglec-15质粒DNA瞬时转染293T细胞，并通过电穿孔用人Siglec-15质粒DNA转染K562细胞。将100μl FACS缓冲液(含有0.5％血清的PBS)中的1e5转染细胞等分至独立的管中，并添加1μg纯化mAb。将细胞在4℃下孵育30分钟，然后用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞重新悬浮于100μL FACS缓冲液中，并将0.005μg抗小鼠IgG-PE二抗添加到样品中，孵育30分钟并用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞在固定缓冲液(2％)中固定，随后通过流式细胞术进行分析。
将U87细胞重新悬浮于FACS缓冲液中，并在与纯化Siglec-15mAb孵育之前封闭Fc受体。将100μl FACS缓冲液中的1e5细胞等分至独立的管中，并添加1ug纯化mAb。将细胞在4℃下孵育30分钟，然后用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞重新悬浮于100μl FACS缓冲液中，并将0.005ug抗小鼠IgG-PE二抗添加到样品中，孵育30分钟并用过量的FACS缓冲液洗涤两次。将细胞在固定缓冲液中固定，随后通过流式细胞术进行分析。
结果
测试纯化抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9与由293T细胞(人胚肾293细胞的高度可转染的衍生物)表达的小鼠Siglec-15(mS15)的结合和由K-562细胞(一名53岁患有慢性骨髓性白血病，处于终末爆发危象中的女性胸腔积液)表达的人Siglec-15(hS15)的结合。结果如图5A至图5C所示。
还测试了纯化抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5、10G9和5F10与内源性表达人Siglec-15(hS15)的人U87神经胶质瘤细胞的结合。结果如图6A至图6C所示，其分别显示了每种抗体的hS15+细胞百分比(图6A和图6C)和平均荧光强度(MFI)(图6B)。
实施例4：抗Siglec-15抗体可以阻断Siglec-15功能
材料和方法
hS15.hG1的生产
制备包含与IgG骨架融合的完整S15胞外结构域的单体S15融合蛋白用于亲和力和竞争分析。将凝血酶可裂解的hS15.hFc cDNA亚克隆到pEE17.4中。在37℃下在瞬时转染的CHO细胞中观察到片段化的融合蛋白，但在293细胞中没有。完整融合蛋白在31℃下更有效地表达。
融合蛋白具有以下序列：
信号序列被裂解的成熟融合蛋白为：
鼠类前导序列加下划线示出。Siglec-15胞外结构域(ECD))为斜体。铰链区加有双下划线。其余序列源自IgG1 Fc。IgG1 Fc结构域中的L234F/L235E/P331S突变为粗体且加有点线式下划线。
阻断分析
通过两轮Lenti-LRRC4C转导建立293T.LRRC4C细胞。
将293T.LRRC4C稳定细胞重新悬浮于FACS缓冲液中并在孵育之前封闭Fc受体。将100μl FACS缓冲液中的1E05细胞等分至独立的管中，并且先添加2μg纯化mAb，接着添加0.2ug的hSiglec-15hFc。将细胞在4℃下孵育30分钟，然后用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞重新悬浮于100μl FACS缓冲液中，并将0.005μg抗人IgG-PE二抗添加到样品中，孵育30分钟并用过量FACS缓冲液洗涤两次。将细胞在固定缓冲液中固定，随后通过流式细胞术进行分析以确定Siglec-15与LRRC4C结合。
1μg/mL的hS15.hG1+100μL上清液或33μg/mL的Cl#3、#1
该测定在图7A中示出。
结果
结果如图7B至图7E所示。
·S15/LRRC4C相互作用的完全阻断剂包括但不限于：
ο5G12、6F8、8C8、1C3、1C12、3H10、1B2
·部分阻断剂包括但不限于：
ο10G9、8H8、9A5
实施例5：S15 mAb逆转hS15.hG1介导的对人T细胞的抑制
材料和方法
PBMC扩增测定
·以0.05μg/mL涂布抗CD3
·全人PBMC+/-5μg/mL hS15.hFc和12μg/mL的Siglec-15mAb，或如所示的对照
将抗人CD3(克隆OKT3)于100μL PBS中以0.03μg/mL涂布在96孔平底组织培养板的每个孔上，在4℃下过夜。吸出PBS和未结合的CD3，然后立即添加用于测定的组分。来自健康人供体的全PBMC在37℃下在RPMI完全培养基(含有10％FBS)中用5μM CFSE标记10分钟并洗涤2次，之后重新悬浮以添加到孔中，浓度为2.5E05个细胞/孔。将可溶性hSiglec-15hFc或对照添加到孔中，最终浓度为5μg/ml，同时将纯化Siglec-15mAb或对照添加到孔中，最终浓度为12μg/ml。将板在37℃CO2培养箱中孵育72小时。取出少量上清液用于细胞因子分析后，将细胞转移至圆底板上，封闭Fc受体，并将细胞在4℃下用CD4和CD8荧光mAb染色30分钟。细胞在FACS缓冲液中洗涤两次，接着固定以通过流式细胞术进行分析。用MSD ELISA试剂盒评估条件化上清液中的IFNγ水平。
该测定在图8A和图9A中示出。
结果
在PBMC扩增测定中测试了纯化抗体1B2、1C3、1H3、1C12、3H10、5G12、6F8、8C8、8H8、9A5和10G9(图8B、图8C、图8D和图8E)，及6A(NC6)、28A(NC28)、63A(NC63)、77A(NC77)、80A(NC80)、82B(NC82)、83B(NC83)、92A(NC92)、93B(NC93)、99B(NC99)、104B(NC104)、105A(NC105)(图8F和图8G)。将CD4+T细胞和CD8+T细胞门控并分析CFSE稀释度，作为细胞分裂(扩增)的量度。稀释度增加表明更多细胞增殖。结果显示某些S15 mAb可以逆转hS15.hG1介导的对人T细胞的抑制。
然而，hS15和LRRC4C相互作用的阻断于T细胞功能增强无关联。结果如图8H和图8I所示。
还鉴定了逆转hS15.hG1介导的人T细胞中IFNγ产生减少的S15mAb。结果如图9B所示。
实施例6：S15 mAb可以阻断破骨细胞形成
材料和方法
以2种方式从新鲜PBMC分离和富集单核细胞：
MACS柱分选(图10，左小图)；或
附着于无血清培养基中的塑料((图10，右小图)。
用M-CSF和RANKL，与25E9 mAb或S15 mAb一起培养细胞8天并测定TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)
结果
图15所示的结果显示S15 mAb可以阻断破骨细胞形成。
实施例7：人源化5G12抗体
将克隆物5G12人源化，提供三条人源化重链和五条人源化轻链(图12A和图12B)。
5G12 hVL1
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实施例8：膜结合的S15具免疫抑制性。
材料和方法
用于体外PMBC T细胞抑制测定的方法：
使用标准的ficoll梯度程序从健康供体单采来源的富白细胞产品(KeyBiologics,Memphis,TN)收获外周血单核细胞(PBMC)，然后冷冻保存。在测定当天，将冷冻的PBMC解冻，用RPMI完全培养基(RPMI-C，RPMI[ThermoFisher]+10％FetalClone III血清[HyClone])洗涤并计数。在37℃下将细胞在RPMI-C中用5μM CFSE(ThermoFisher)标记10分钟，接着用RPMI-C洗涤两次。将全PMBC(3E05个细胞/孔)接种在预先涂有抗人CD3(OKT3，50ng/mL；eBioScience)的96孔平底Corning Costar板中以在4℃下过夜。将Siglec-15hG1 Fc融合蛋白按所示最终浓度添加到孔中。将细胞在37℃下培养72小时。在72小时时，从孔中收获50μL上清液并立即冷冻用于分析细胞因子水平。然后通过移液从每个孔收获细胞，并转移至圆底板用于流式细胞术染色和分析。用TruStain FcX(2μL/孔；Biolegend)封闭Fc受体，接着用针对CD4的抗体APC-eFluor 780(2μL/孔；ThermoFisher)和针对CD8的抗体eFluor 450(2μL/孔；ThermoFisher)在4℃下染色一小时。孵育后，用FACS缓冲液(含有1％FetalClone III血清的PBS)将板洗涤两次。将细胞重新悬浮于150μL固定缓冲液(3％甲醛的PBS溶液)中，并用YETI流式细胞仪(Propel Labs)分析。用FlowJo分析数据。数据显示为与未刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞相比，基于CFSE稀释度的分裂细胞百分比。根据说明书，用U-PLEX试剂盒(Meso Scale Diagnostics[MSD)])分析上清液的IFN-γ、TNF-α和IL-6。使用Meso QuickPlex SQ 120仪器读取U-PLEX。
结果
膜结合的S15是具免疫抑制性。图14A是T细胞的增殖％对照人S15 Fc(μg/mL)的线形图，其显示T细胞的增殖％随S15 Fc浓度增加而降低。用CFSE标记人PBMA并添加到抗CD3(OKT3)涂布的96孔板中，并用指定浓度的人S15 Fc融合蛋白培养3天。图14B是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的IFN-γ(pg/ml)的柱状图。图14C是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的TNF-α(pg/ml)的柱状图。图14D是来自于用0或5μg/mL的S15 Fc处理的细胞的条件化上清液中的IL-6(pg/ml)的柱状图。
实施例9：从杂交瘤纯化的s15 mAb与表达人S15或小鼠s15的细胞的结合。
材料和方法
从组织培养物中收获稳定表达人S15的293T细胞(293T.hS15)和稳定表达小鼠S15的小鼠MC38细胞(MC38.mS15)。用PBS洗涤一次后，将细胞接种在96孔U形底板中(5E04个细胞/孔)进行染色。首先将细胞与1μg从小鼠杂交瘤中纯化的指定抗体在FACS染色缓冲液(含有1％FetalClone III血清的PBS)中混合，并在冰上孵育30分钟。然后用FACS缓冲液洗涤细胞1次，接着与PE缀合的抗小鼠Ig抗体(eBioscience)一起在冰上孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤细胞一次，并重新悬浮于100μL FACS缓冲液中，然后用YETI流式细胞仪(PropelLabs)分析。使用FlowJo分析数据。数据显示为通过前向散射(FSC)和侧向散射(SSC)门控的总细胞群中为PE阳性的细胞的百分比。
结果
图15A和图15B示出纯化自杂交瘤的S15 mAb与表达人S15或小鼠S15的细胞结合的阳性细胞百分比。通过对用指定抗体孵育，接着用PE缀合的抗小鼠Ig抗体孵育的细胞进行FACS分析来评定结合。通过FACS分析细胞的PE+群体。
实施例10：来自杂交瘤的纯化S15 mAb逆转膜结合的S15介导的抑制。
材料和方法
用于在全PBMC T细胞增殖测定中用Siglec-15mAb测试对Siglec-15 Fc介导的抑制的逆转的方法：
与上面图14相同，有细微变化：
使用标准的ficoll梯度程序从健康供体单采来源的富白细胞产品(KeyBiologics,Memphis,TN)收获外周血单核细胞(PBMC)，然后冷冻保存。在测定当天，将冷冻的PBMC解冻，用RPMI完全培养基(RPMI-C，RPMI[ThermoFisher]+10％FetalClone III血清[HyClone])洗涤并计数。在37℃下将细胞在RPMI-C中用5μM CFSE(ThermoFisher)标记10分钟，接着用RPMI-C洗涤两次。将全PMBC(3E05个细胞/孔)接种在预先涂有抗人CD3(OKT3，50ng/mL；eBioScience)的96孔平底Corning Costar板中以在4℃下过夜。将Siglec-15hG1融合蛋白按5μg/ml(最终浓度)添加到孔中。然后按12μg/ml(最终浓度)将指定Siglec-15mAb添加到指定孔中。将细胞在37℃下培养72小时。在72小时时，从孔中收获50μL上清液并立即冷冻用于分析细胞因子水平。然后通过移液从每个孔收获细胞，并转移至圆底板用于流式细胞术染色和分析。用TruStain FcX(2μL/孔；Biolegend)封闭Fc受体，接着用针对CD4的抗体APC-eFluor 780(2μL/孔；ThermoFisher)和针对CD8的抗体eFluor 450(2μL/孔；ThermoFisher)在4℃下染色一小时。孵育后，用FACS缓冲液(含有1％F4etalCloneIII血清的PBS)将板洗涤两次。将细胞重新悬浮于150μL固定缓冲液(3％甲醛的PBS溶液)中，并用YETI流式细胞仪(Propel Labs)分析。用FlowJo分析数据。数据显示为与未刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞相比，基于CFSE稀释度的分裂细胞百分比。根据说明书，用U-PLEX试剂盒(Meso Scale Diagnostics[MSD)])分析上清液的IFN-γ、TNF-α和IL-6。使用MesoQuickPlex SQ 120仪器读取U-PLEX。
结果
图16A和图16B是经指定抗体处理的分裂CD8+T细胞的百分比的柱状图。图16C和图16D是经指定抗体处理的分裂CD4+T细胞的百分比的柱状图。
实施例11：三种肿瘤模型中纯化5G12的体内生物活性。
材料和方法
用于体内肿瘤模型的方法
结直肠肿瘤模型
图17A：按100μL中2E05个细胞，将经过转导并分选Siglec-15过度表达的MC38肿瘤细胞(ATCC)皮下注射到C57BL/6N小鼠(Charles River)剃毛的右腹侧。在肿瘤注射6天后开始给5只小鼠/处理组施用200μg对照IgG(Innovative Research)或纯化的无内毒素的抗Siglec-15克隆物5G12。继续处理，每四天一次，总共四个剂量。每周测量肿瘤3次。按(长度×宽度^2)*0.5计算肿瘤体积。当肿瘤达到2000mm3时，对小鼠实施安乐死。
淋巴瘤肿瘤模型
图17B：EG7肿瘤细胞(ATCC)是经转染以表达鸡蛋卵清蛋白(OVA)的EL4肿瘤细胞。将细胞培养10天，之后将2E05个肿瘤细胞皮下注射到C57BL/6N小鼠(Charles River)剃毛的右腹侧。用200μg对照IgG或纯化的无内毒素的抗Siglec-15克隆物5G12处理10只小鼠/处理组。在EG7注射8天后开始处理，并且每4天处理小鼠一次，总共四个剂量。按(长度×宽度^2)*0.5计算肿瘤体积。当肿瘤达到2000mm3时或当肿瘤达到15cm的平均直径时，对小鼠实施安乐死。
卵巢癌模型
图17C：ID8-OVA肿瘤细胞是经稳定转染以表达鸡蛋卵清蛋白(OVA)的鼠类ID8卵巢癌细胞系。将细胞培养10天，之后腹膜内注射5E06个细胞。三周后，通过腹膜内注射通过CD8+T细胞阴性选择(Miltenyi Biotec)分离的5E05个OT-I Tg/Rag2-/-T细胞过继转移小鼠。一天后(第22天；n＝10只/组)开始处理。小鼠每四天接受200μg，总共5个剂量的对照IgG或纯化的无内毒素的抗Siglec-15克隆物5G12。在肿瘤注射30后天开始为小鼠称重，并通过增重来分析肿瘤负荷。数据显示为30天时每只小鼠相对于初始重量的增重百分比。当重量达到150％增重或大于30克时，对小鼠实施安乐死。
结果
5G12在结直肠模型(图17A)和淋巴瘤模型(图17B)中显示出存活百分比增加。5G12也显示出肿瘤负荷减少(图17C)。图18示出了存活百分比对照ID8/OVA接种后天数。
实施例12：重组mAb对S15单体蛋白的亲和力评估
使用抗人Fc捕获(AHC，18–5060；ForteBio)传感器在ForteBio Octet RED96仪器上进行优化的KD实验。测定缓冲液是含有0.05％Tween-20的PBS，并且再生缓冲液是10mM甘氨酸(pH1.5)。首先将抗体以1μg/mL负载600秒。这之后是60秒的基线步骤、S15-胞外结构域(ECD)单体中的300秒缔合步骤，以及最后是1200秒的解离步骤。在两倍稀释系列中单体浓度范围为100nM至1.56nM，并且包括空白孔。使用ForteBio数据分析软件7.0处理数据；使用全局拟合，以及减去参考孔。报告的值是至少三次独立八隅体(octet)运行的平均值。
结果在表1中。
表1：重组mAb对S15单体蛋白的亲和力评估(n＝3-6次运行)
实施例13：S15 mAb表位分箱
使用链霉抗生物素蛋白(SA，18–5019；ForteBio)传感器在ForteBio Octet RED96仪器上进行表位分箱(epitope binning)实验。在30秒基线步骤后，将生物素标记的S15-mG1融合蛋白以10μg/mL负载到传感器上保持600秒。这之后是在第一抗体(30μg/mL)中的600秒缔合步骤、30秒基线以及在第二抗体(15μg/mL)中的400秒缔合步骤。测定缓冲液是PBS，并且再生缓冲液是10mM甘氨酸(pH3.0)。使用ForteBio数据分析软件7.0处理数据，并且单独评定第二抗体曲线的竞争性结合。第二缔合步骤期间的曲线与第一缔合步骤的曲线不同表明与未被占据的表位结合。没有另外的结合表明表位阻断。
结果在表2中。
表2：S15表位箱
实施例14：抗人S15克隆物1H3抑制体外的人破骨细胞形成。
材料和方法
从购自Key Biologics,LLC的单采来源的富白细胞产品中分离PBMC。将富白细胞产品分层涂在Ficoll垫上，并在400 RCF下离心30分钟。去除Ficoll中间相中的细胞，在PBS中洗涤3次，然后在含10％DMSO的FBS中冷冻。实验当天，从液氮储存器中取出一小瓶冷冻的PBMC并解冻。使用MACS单核细胞分离试剂盒(130-096-537；Miltenyi Biotec)按生产商说明书分离单核细胞。分离的细胞99％有活力。将细胞按3E05个细胞/cm2的密度接种在96孔平底组织培养板中，每孔100μL测定培养基中有1E05个细胞。测定培养基由补充有10％FBS、1mM丙酮酸钠、25ng/ml人巨噬细胞集落刺激因子(Miltenyi,103-096-491)和30ng/ml人RANKL(Miltenyi,130-093-988)的α-MEM培养基(Gibco 32571-036)组成。使细胞粘附在平板上3.5小时，之后添加10μL的50μg/mL S15抗体，最终浓度为4.55μg/mL。对于每种抗体，评估三个相同的孔。孵育三天后，更换培养基并添加新鲜抗体。在第7天，将上清液从原始平板转移至圆底96孔板中并离心以去除细胞碎片。使用购自B-Bridge International,Inc.的TRAP染色试剂盒(PMC-AK04F-COS)按照生产商的说明书对单核细胞/破骨细胞进行染色，并使用Invitrogen EVOS FL Color拍摄图像。为了评定上清液中的TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)水平，将50μL TRAP染色试剂盒缓冲液与9μL上清液合并，并在37℃下孵育三小时。记录每个孔在540nM下的吸光度。将剩余的上清液在-80℃冷冻，以用于稍后的细胞因子分析。
结果
图19A是示意图，示出使用Mitenyi单核细胞磁珠从人PBMC收获人CD14+单核细胞，然后在人M-CSF和人RANKL连同指定抗体的存在下接种在96孔板中。图19B是示出破骨细胞的显微照片。图19C是7天后收集的用于抗酒石酸酸性磷酸酶分析的上清液的540nm吸光度的柱状图。
实施例15：1H3减少人单核细胞中由M-CSF和RANKL介导的IL-6和TNF-α的产生。
材料和方法
收集来自上述实验的无RANKL(单独的M-CSF)孔、对照mAB(M-SCF+RANKL+对照mAb)孔和1H3(M-CSF+RANKL+1H3)孔的上清液，并测试进行细胞因子分析。
结果
图20是示出INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A和TNF-α细胞因子(pg/mL)的柱状图。
实施例16：抗人S15 mAb 1H3防止体外小鼠破骨细胞形成
材料和方法
将小鼠RAW 264.7巨噬细胞按1.5E04个细胞/cm2的密度接种在平底96孔板中，每孔90μL培养基中有4800个细胞。培养基由DMEM与10％FBS、1mM丙酮酸钠和50ng/ml小鼠RANKL(eBioscience,14-8612-80)组成。使细胞粘附两小时，之后向孔中添加10μL指定抗体(50μg/mL)，得到5μg/mL的最终浓度；评定三个相同孔中的抗体。使细胞分化五天，此时对细胞染色并如上评估上清液的TRAP含量。
结果
图21是在RANKL连同指定抗体存在下培养的小鼠RAW 264.7巨噬细胞的540nm吸光度的柱状图。
实施例17：在人M2巨噬细胞中Siglec-15表达上调。
材料和方法
Siglec-15的表达
通过磁珠阴性选择试剂盒(Miltenyi Biotec)从人PBMC分离人CD14+单核细胞并用M-CSF处理3天，然后将细胞在IL-10(M2巨噬细胞极化)或IFN-γ/LipiA(M1巨噬细胞极化)存在下培养另外3天。通过抗Siglec-15抗体染色，接着进行FACS分析来检测Siglec-15的细胞表面表达。
Siglec-15表达的诱导
从Balb/C小鼠中收获小鼠骨髓细胞。通过附着到塑料培养皿上去除粘附细胞。收获漂浮的小鼠造血细胞并用M-CSF处理3天，接着再进行直接M-CSF处理或M-CSF+IL-10处理另外4天。收获经处理的细胞并用骨髓细胞标记物(CD11b和F4/80)和PE标记的抗-S15染色，接着进行FACS分析。下部小图中绘制了PE的平均荧光强度。M-CSF使S15表达略微增加。
结果
在人M2巨噬细胞中观察到了Siglec-15表达(图25A)，但在人M1巨噬细胞中未观察到(图25B)。
M-CSF和IL-10增加小鼠骨髓来源的骨髓细胞中的S15表达(图25C至图25E)。
实施例18：Siglec-15促进人骨髓细胞存活并增加促炎细胞因子的产生。
材料和方法
首先通过磁珠阴性选择试剂盒(Miltenyi Biotec)从人PBMC(来自2个健康供体)分离人CD14+单核细胞，并以如图所示的浓度接种到96孔板上，该板涂有Siglec-15融合蛋白(涂有Siglec-15的)或不涂覆但是在培养基中添加Siglec-15融合蛋白(Siglec-15可溶的)。六天后，收集条件化上清液以通过MSD试剂盒进行细胞因子分析。通过向板中添加XTT(ThermoFisher)来评估细胞活力。培养2小时后，通过在450nm下读取的吸光度来测量细胞代谢/活力。
结果
使用涂有Siglec-15 Fc的板和可溶性Siglec-15 Fc板时均在孔中检测到较高的吸光度。细胞因子分析显示S15剂量依赖性地增加经处理孔中的TNF-α、IL-6和IL-1β产生(追溯到在此提供的可溶性S15孔)。
实施例19：经Siglec-15 Fc处理的人骨髓细胞影响人T细胞功能材料和方法
图27A是以下实验的示意图。通过磁珠阴性选择试剂盒(Miltenyi Biotec)从人PBMC(来自2个健康供体)分离人CD14+单核细胞，并如上所述用Siglec-15 Fc处理6天或者极化为M2巨噬细胞或M1巨噬细胞，或用GM-CSF和IL-4处理以使细胞分化为未成熟的树突细胞(imDC)。通过从培养皿中轻轻刮取来收获细胞。离心后，将细胞重新悬浮，并与CFSE标记的经阴性选择的自体pan-T细胞以1个骨髓细胞:2个T细胞的细胞比率，连同抗CD3/CD28珠粒(1个pan-T细胞:2个珠粒)一起共同培养。五天后，使用来自MSD的MSD多重试剂盒收集条件化上清液以用于细胞因子分析。收获细胞并用抗CD4和抗CD8抗体染色。通过FACS分析来分析T细胞增殖以测量CFSE稀释的细胞群。
结果
数据显示使用来自该特定供体(供体#1707)的细胞，经Siglec-15Fc处理的骨髓细胞使抗CD3/CD28珠粒介导的CD4和CD8 T细胞增殖减少，并且抑制不如M2巨噬细胞显著(图27B至图27G)。细胞因子分析揭示经S15处理的骨髓细胞显著损害抗CD3/CD28珠粒介导的IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-10的产生。来自其它受试供体的数据显示经S15处理的细胞对T细胞增殖的抑制有限，但在大多数情况下，对细胞因子的产生抑制显著。
实施例20：Siglec-15mAb剂量依赖性地阻断S15介导的对人骨髓细胞的存活影响。
材料和方法
通过磁珠阴性选择试剂盒(Miltenyi Biotec)从人PBMC(来自2个健康供体)分离人CD14+单核细胞并接种到含5μg/mL的S15 Fc融合蛋白连同抗Siglec-15的mAb(从20μg/mL开始1:2连续稀释)的96孔板中。将细胞培养7天。通过向板中添加XTT(ThermoFisher)来评定细胞活力/代谢。培养2小时后，通过在450nm下读取的吸光度来测量细胞代谢/活力。在含有S15 Fc融合蛋白而无任何抗体(无mAb)的孔中检测到高吸光度。在无S15 Fc融合蛋白(无S15 Fc)的孔中获得低吸光度。
结果
Siglec-15mAb剂量依赖性地降低吸光度(底部线条)。对照抗体(顶部线条)对细胞存活和代谢无影响。图28A(供体1709)和图28B(供体1713)显示，抗S15 mAb剂量依赖性地阻断S15介导的对人骨髓细胞的存活影响。
实施例21：Siglec-15在破骨细胞形成中起关键作用
在成骨细胞和基质细胞上表达的M-CSF诱导骨髓细胞上的Siglec-15表达，其与Siglec-15结合配偶体以顺式或反式相互作用并刺激骨髓细胞产生促炎细胞因子如TNF-α、IL-6和IL-1β并上调αvβ3整联蛋白表达。随同RANKL信号传导，破骨细胞前体细胞融合并形成多核破骨细胞(图29)。
实施例22：Siglec-15在人CD14+单核细胞中诱导αvβ3整联蛋白表达。
材料和方法
通过磁珠阴性选择试剂盒(Miltenyi Biotec)从人PBMC中分离人CD14+单核细胞并用5μg/mL的S15 Fc融合蛋白处理6天。6天后，收获经S15 Fc处理的骨髓细胞并用抗αvβ3整联蛋白(克隆物23C6)染色。
结果
与同种型对照抗体染色以及还有第0天进行S15 Fc处理之前的细胞染色相比，在S15 Fc处理的骨髓细胞中αvβ3整联蛋白表达上调(图30A和图30B)。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与所公开的发明所属领域中技术人员通常所理解的相同含义。本文引用的出版物及其引用的材料以引用方式明确地并入。
本领域技术人员将认识到或能够确定只使用常规实验就能够实现本文所述发明的具体实施方案的许多等同方案。此类等同方案旨在由以上权利要求所涵盖。

Claims (59)

1.一种抗体或其抗原结合片段，其包含六个互补决定区(CDR)，
其中所述CDR包含选自由以下项组成的组的多肽的三个轻链CDR：SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107，或与SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，
和选自由以下项组成的组的多肽的三个重链CDR：SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119，或与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，并且
其中所述抗体或其抗原结合片段结合Siglec-15。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的轻链可变区：SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107，或与SEQ ID NO:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体，
和/或含有选自由以下项组成的组的多肽的氨基酸序列的重链可变区：SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119，或与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的其变体。
3.根据权利要求1-2或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合
(I)排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的Siglec-15
(II)以内源性浓度排列在细胞(尤其是活细胞)表面上的Siglec-15
(III)排列在活细胞表面上的Siglec-15，并且调节Siglec-15(SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2)与Neu5Acα2-6GalNAcα、LRRC4C、Siglec-15-反受体(S15-CR)或它们的组合之间的结合；
(IV)排列在活细胞表面上的Siglec-15，并减少、防止或抑制TGF-β分泌；
(V)排列在活细胞表面上的Siglec-15；或
(IV)它们的组合。
4.根据权利要求1-3或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞为巨噬细胞或树突细胞。
5.根据权利要求1-4或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含来自免疫球蛋白恒定区(Fc)的一个或多个恒定结构域。
6.根据权利要求5或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定结构域为人恒定结构域。
7.根据权利要求6或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人恒定结构域为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。
8.根据权利要求7或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中人IgG恒定结构域为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4结构域。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段经可检测地标记或包含缀合的毒素、药物、受体、酶、受体配体。
10.根据权利要求1-9或46-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单克隆抗体、人抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单特异性、双特异性、三特异性或多特异性抗体。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体经修饰，使得所述分子将表现出削弱的或无Fc受体(FcR)结合活性。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体经修饰为表现出增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。
14.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-13或46-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及生理上可接受的载体或赋形剂，其中所述抗体减少或防止Siglec-15与其配体的结合和/或减少或防止Siglec-15介导的信号转导。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述配体为唾液酸化糖蛋白、含富亮氨酸重复序列的蛋白4C(LRRC4C)、Siglec-15反受体，或它们的组合。
16.根据权利要求14或15所述的组合物，其中所述配体在肿瘤细胞表面上表达。
17.一种治疗有需要的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求14-16中任一项所述的药物组合物。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述受试者患有癌症或感染性疾病。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者患有包含表达或过度表达Siglec-15配体的细胞的癌症。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段增强免疫应答、阻碍或防止肿瘤生长、抑制肿瘤介导的免疫抑制、消除肿瘤、消耗或阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的活性以便改变其活性、降低TAM介导的免疫抑制、减少或逆转T细胞抑制，或它们的组合。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤包含表达Siglec-15的巨噬细胞。
22.根据权利要求21所述的方法，其中按有效量向所述受试者施用所述抗体或其抗原结合片段以减少所述巨噬细胞对TGF-β的表达和/或分泌。
23.根据权利要求17-22中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用第二治疗剂。
24.一种检测或诊断疾病、病症或感染的方法，其包括：(a)使用根据权利要求1-13或46-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段测定受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达，以及(b)将所述Siglec-15水平与对照水平作比较，其中与所述对照水平相比，所述测定的Siglec-15水平增加表明有所述疾病、病症或感染。
25.一种监测疾病、病症或感染进展的方法，其包括(a)使用根据权利要求1-13或46-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段测定在第一时间点和之后时间点获得的受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较所述第一时间点和之后时间点的所述受试者的所述细胞或所述组织样品中的Siglec-15表达水平，其中与所述第一时间点相比，在所述之后时间点测定的所述Siglec-15水平增加表明疾病、病症或感染进展。
26.一种监测对治疗的应答的方法，其包括：(a)使用根据权利要求1-13或46-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段测定治疗之前和之后受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较随时间变化的Siglec-15水平，由此与治疗之前的Siglec-15水平相比，治疗之后测定的所述Siglec-15水平降低表明对所述治疗应答良好。
27.一种减少有需要的受试者中的T细胞抑制的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求14-16中任一项所述的药物组合物。
28.一种增加有需要的受试者的T细胞中的细胞因子生成的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求14-16中任一项所述的药物组合物。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述细胞因子为IFNγ、TNF-α或它们的组合；其中所述T细胞为CD4+T细胞或CD+T细胞或它们的组合；或它们的组合。
30.一种在有需要的受试者中增加骨生长或减少骨吸收的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求14-16中任一项所述的药物组合物。
31.一种减少有需要的受试者中的破骨细胞分化的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求14-16中任一项所述的药物组合物。
32.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-13或46-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及生理上可接受的载体或赋形剂，其中所述抗体增加Siglec-15与其配体的结合和/或增加或增强Siglec-15介导的信号转导。
33.一种在有需要的受试者中减少免疫应答、减少炎症、减少炎症反应、治疗自身免疫性疾病或病症、减少移植物或移植排斥，或治疗移植物抗宿主疾病(GVHD)的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求32所述的药物组合物。
34.一种融合蛋白，其包含第一融合配偶体和第二融合配偶体，所述第一融合配偶体包含Siglec-15多肽或其片段或变体。
35.根据权利要求34所述的融合蛋白，其中所述第二融合配偶体为Fc结构域。
36.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中所述Fc结构域源自IgG1。
37.根据权利要求34-36中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一融合配偶体和第二融合配偶体通过接头连接。
38.根据权利要求37所述的融合蛋白，其中所述接头为铰链结构域或其片段。
39.根据权利要求34-38中任一项所述的融合蛋白，其中所述Siglec-15多肽包含Siglec-15胞外结构域。
40.根据权利要求34-39中任一项所述的融合蛋白，其中所述Siglec-15多肽由所述Siglec-15胞外结构域或其片段组成。
41.根据权利要求40所述的融合蛋白，其中所述片段包含Siglec-15的IgV结构域、IgC或它们的组合。
42.根据权利要求34-41中任一项所述的融合蛋白，其还包含前导序列。
43.一种融合蛋白，其与SEQ ID NO:193或194含至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
44.一种药物组合物，其包含根据权利要求34-43中任一项所述的融合蛋白以及生理上可接受的载体或赋形剂。
45.一种治疗有需要的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求44所述的药物组合物以促进免疫应答。
46.一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其中经人源化的所述抗体来自于克隆物5G12或1H3。
47.一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQ ID NO:195、197、199、201或209的氨基酸序列的可变轻链。
48.一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQ ID NO:203、206或207的氨基酸序列的可变重链。
49.一种人源化抗SIGLEC-15抗体，其具有一条或多条具有SEQ ID NO:195、197、199、201或209的氨基酸序列的可变轻链和一条或多条具有SEQ ID NO:203、206和207的氨基酸序列的可变重链。
50.一种抗体，其具有SEQ ID NO:209、195、207、199或201的轻链CDR和SEQ ID NO:203、206或207的重链CDR及它们的组合。
51.一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:209、210或211的轻链氨基酸序列。
52.一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:212、213、215或216的重链氨基酸序列。
53.一种抗体，其具有根据SEQ ID NO:209、210或211的轻链氨基酸序列和根据SEQ IDNO:212、213、215或216的重链氨基酸序列。
54.一种抑制破骨细胞生成的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1-13或46-53中任一项所述的抗Siglec抗体或其抗原结合片段。
55.一种抑制破骨细胞生成的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的包含轻链可变区和重链可变区的抗Siglec抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:226、227和228组成的组的氨基酸序列并且其中所述重链可变区包含选自由SEQID NO:220、221、223和225组成的组的氨基酸序列。
56.根据权利要求54-55中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含治疗剂或细胞毒性剂。
57.一种组成性或诱导性表达特异性结合Siglec-15的抗体或其抗原结合片段的细胞，其中所述细胞包含一种或多种核酸，所述一种或多种核酸包含编码轻链可变结构域和重链可变结构域的序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO.:120-132中的任一者，所述重链可变结构域选自由SEQ ID NO:133-145中的任一者组成的组。
58.一种组成性或诱导性表达特异性结合Siglec-15的抗体或其抗原结合片段的细胞，其中所述细胞包含一种或多种核酸，所述一种或多种核酸包含编码根据权利要求1-13和44-53中任一项所述的抗体的序列。
59.根据权利要求1-13和44-53中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含治疗剂或细胞毒性剂。
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Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112625132A (zh) * 2021-01-15 2021-04-09 沈阳荣欣生物制药科技有限公司 纳米抗体及其编码基因、表达载体、宿主细胞和应用
WO2021254132A1 (zh) * 2020-06-19 2021-12-23 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种抗siglec15抗体及其应用
WO2022095934A1 (zh) * 2020-11-05 2022-05-12 上海津曼特生物科技有限公司 抗Siglec-15抗体及其在制备药物中的应用
CN114591434A (zh) * 2021-04-30 2022-06-07 杭州邦顺制药有限公司 抗Siglec15抗体及其制备方法和用途
CN114657132A (zh) * 2020-12-22 2022-06-24 未来智人再生医学研究院(广州)有限公司 一种表达Siglec-15靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用
US11390675B2 (en) 2016-09-21 2022-07-19 Nextcure, Inc. Antibodies for Siglec-15 and methods of use thereof
CN114807052A (zh) * 2022-06-07 2022-07-29 江苏亲科生物研究中心有限公司 Siglec15单克隆抗体及其制备方法和用途
WO2022179466A1 (zh) 2021-02-25 2022-09-01 石药集团巨石生物制药有限公司 抗Siglec15抗体及其用途
WO2022193540A1 (zh) * 2021-03-19 2022-09-22 江苏元本生物科技有限公司 一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽
CN115348970A (zh) * 2020-03-27 2022-11-15 博奥信生物技术（南京）有限公司 结合siglec15的抗体及其用途
WO2022237819A1 (zh) * 2021-05-13 2022-11-17 信达生物制药(苏州)有限公司 抗Siglec-15抗体及其用途
WO2023030311A1 (zh) * 2021-08-31 2023-03-09 上海医药集团股份有限公司 靶向Siglec15的抗原结合蛋白及其用途
WO2023093816A1 (zh) * 2021-11-25 2023-06-01 诺纳生物（苏州）有限公司 抗Siglec-15抗体及其应用
CN117447592A (zh) * 2022-07-26 2024-01-26 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗Siglec-15单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
WO2024022008A1 (zh) * 2022-07-26 2024-02-01 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗Siglec-15单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
CN117645665A (zh) * 2024-01-29 2024-03-05 北京热景生物技术股份有限公司 一种针对α-突触核蛋白的抗体及其制备方法和应用

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110386982A (zh) * 2019-04-09 2019-10-29 广东三九脑科医院 鼠抗人Siglec-15蛋白单克隆抗体制备及其用途
US11104732B2 (en) * 2019-04-24 2021-08-31 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Reducing immune inhibition induced by SIGLEC-15
US20220017604A1 (en) * 2020-04-17 2022-01-20 Washington University ANTI-SARS-CoV-2 MONOCLONAL ANTIBODIES
JP2023524997A (ja) * 2020-05-06 2023-06-14 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｃｌｅｃ１２ａを標的とする抗体及びその使用
JP2023543896A (ja) * 2020-09-30 2023-10-18 エヌエー バイオテック コーポレイション 抗アデノシン受容体（Ａ２ａＲ）抗体
US20240093149A1 (en) 2020-12-08 2024-03-21 Guizhou Sinorda Biotechnology CO., Ltd. Modified t cells for adoptive immunotherapy
ES2955819T3 (es) 2021-01-21 2023-12-07 Guizhou Sinorda Biotechnology Co Ltd Linfocitos T modificados para inmunoterapia adoptiva
CN112961214B (zh) * 2021-03-19 2022-08-02 江苏元本生物科技有限公司 一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽
WO2023163956A2 (en) * 2022-02-22 2023-08-31 Nextpoint Therapeutics, Inc. Kir3dl3 inhibitors and immune cell activating agents
WO2023241538A1 (en) * 2022-06-13 2023-12-21 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-siglec15 antibodies and uses thereof
WO2024040195A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
CN117430707B (zh) * 2023-10-25 2024-04-19 重庆天科雅生物科技有限公司 一种cik细胞的制备方法及其在治疗癌症中的用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080260733A1 (en) * 2001-11-26 2008-10-23 Cellmatrix Humanized collagen antibodies and related methods
WO2013034660A1 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Medimmune Limited Anti-siglec-15 antibodies and uses thereof
US20150044722A1 (en) * 2009-10-06 2015-02-12 Alethia Biotherapeutics Inc. Siglec-15 antibodies in treating bone loss-related disease

Family Cites Families (275)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4012112A (en) 1975-08-25 1977-03-15 Honeywell Inc. Microscope stage positioning system
US4063083A (en) 1976-04-21 1977-12-13 Wade Thomas Cathey Data communication system using light coupled interfaces
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0149483A3 (en) 1984-01-16 1987-05-27 DeSOTO, INC. Coatings for magnetic recording structures
US4528364A (en) 1984-04-19 1985-07-09 The Dow Chemical Company Removal of alkaline catalysts from polyether polyols and polyalkylene carbonate polyols
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
AU607686B2 (en) 1985-11-25 1991-03-14 General Electric Company Crosslinkable polycyclic polycarbonate oligomers and methods for their preparation and use
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
JPH0730154B2 (ja) 1986-04-08 1995-04-05 武田薬品工業株式会社 一液性熱硬化型樹脂組成物
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
JP2668534B2 (ja) 1987-10-06 1997-10-27 日本ポリウレタン工業 株式会社 押出成形、射出成形用熱可塑性ポリウレタン樹脂組成物
JP3095168B2 (ja) 1988-02-05 2000-10-03 エル． モリソン，シェリー ドメイン‐変性不変部を有する抗体
US5190929A (en) 1988-05-25 1993-03-02 Research Corporation Technologies, Inc. Cyclophosphamide analogs useful as anti-tumor agents
US20040049014A1 (en) 1988-12-28 2004-03-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
JPH03152181A (ja) 1989-11-09 1991-06-28 Teijin Chem Ltd 防曇性組成物
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US5120727A (en) 1991-05-29 1992-06-09 American Home Products Corporation Rapamycin dimers
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5202332A (en) 1991-08-07 1993-04-13 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressant
US5162333A (en) 1991-09-11 1992-11-10 American Home Products Corporation Aminodiesters of rapamycin
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
CA2507749C (en) 1991-12-13 2010-08-24 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
AU681579B2 (en) 1992-03-30 1997-09-04 Wyeth Rapamycin formulation for IV injection
DK1589107T3 (da) 1992-08-21 2010-04-26 Univ Bruxelles Immonuglobuliner uden lette kæder
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
CH686365A5 (de) 1992-10-06 1996-03-15 Werner Hofliger Mobilkran.
US5434260A (en) 1992-10-13 1995-07-18 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5489680A (en) 1992-10-13 1996-02-06 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
US5441050A (en) 1992-12-18 1995-08-15 Neoprobe Corporation Radiation responsive surgical instrument
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
US5387680A (en) 1993-08-10 1995-02-07 American Home Products Corporation C-22 ring stabilized rapamycin derivatives
WO1995012972A1 (en) 1993-11-08 1995-05-18 Cressy, Wayne, Malcolm Head restraining device
US5385908A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Hindered esters of rapamycin
CN1046944C (zh) 1993-12-17 1999-12-01 山道士有限公司 雷怕霉素类衍生物
JPH0880672A (ja) 1994-07-15 1996-03-26 Honshu Paper Co Ltd 感熱記録体
JPH08194162A (ja) 1995-01-17 1996-07-30 Nikon Corp ステージの駆動装置
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5659421A (en) 1995-07-05 1997-08-19 Neuromedical Systems, Inc. Slide positioning and holding device
CA2188503A1 (en) 1995-12-22 1997-06-23 Neil H. Nodelman Polyurethane resin transfer molding systems
US5780462A (en) 1995-12-27 1998-07-14 American Home Products Corporation Water soluble rapamycin esters
DE19619237A1 (de) 1996-05-13 1997-11-20 Bayer Ag Hydroxyfunktionelle Polyurethancarbonate, ein Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US5856372A (en) 1996-05-23 1999-01-05 Arco Chemical Technology, L.P. Microcellular elastomers with improved processability and properties
US5779203A (en) 1996-06-28 1998-07-14 Edlinger; Erich Adjustable wafer cassette stand
JPH1036474A (ja) 1996-07-17 1998-02-10 Sanyo Chem Ind Ltd 膜モジュールのシール材用ポリウレタン樹脂形成性組成物
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US7411051B2 (en) 1997-03-07 2008-08-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to HDPPA04 polypeptide
US5989591A (en) 1997-03-14 1999-11-23 American Home Products Corporation Rapamycin formulations for oral administration
RU2224766C2 (ru) 1997-04-14 2004-02-27 Микромет Аг Способ получения рецепторов для человеческих антигенов и их применение
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP0896013A1 (en) 1997-08-06 1999-02-10 Shimadzu Corporation Crosslinked polycarbonate and polylactic acid composition containing the same
US5936047A (en) 1997-08-18 1999-08-10 General Electric Company Molecular weight control
US5843597A (en) 1997-12-01 1998-12-01 Eveready Battery Company, Inc. Ribbed gasket for miniature galvanic cell
US6982323B1 (en) 1997-12-23 2006-01-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Chimeric proteins for diagnosis and treatment of diabetes
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ES2532910T3 (es) 1998-04-02 2015-04-01 Genentech, Inc. Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
GB9814640D0 (en) 1998-07-06 1998-09-02 Fujisawa Pharmaceutical Co New use
US6015809A (en) 1998-08-17 2000-01-18 American Home Products Corporation Photocyclized rapamycin
US6311415B1 (en) 1998-09-14 2001-11-06 Lind Shoe Company Bowling shoe with replaceable tip
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6046301A (en) 1999-04-12 2000-04-04 Bayer Corporation Polycarbonate compositions having reduced tendency to splay
US6395554B1 (en) 1999-09-03 2002-05-28 Packard Instrument Company Microarray loading/unloading system
JP3524509B2 (ja) 2000-04-27 2004-05-10 三洋化成工業株式会社 注型用ポリウレタン樹脂形成性組成物
CN1349096A (zh) 2000-10-13 2002-05-15 聿新科技股份有限公司 电化学电极试片及其制造方法
DE10061067C1 (de) 2000-12-08 2002-06-06 Bayer Ag Kontinuierliches Verfahren zur Herstellung von thermoplastisch verarbeitbaren Polyurethanelastomeren mit definiertem und standardisiertem Schmelze-Fließ-Verhalten und hoher Thermostabilität
AUPR376101A0 (en) 2001-03-15 2001-04-12 Vision Biosystems Limited Slide holder for an automated slide loader
JP4759154B2 (ja) 2001-03-22 2011-08-31 帝人株式会社 ポリカーボネート組成物およびその製造方法
DE10138216A1 (de) 2001-08-03 2003-02-20 Bayer Ag Aliphatische Polycarbonathomo- und -copolymere durch DMC-Katalyse
US7140655B2 (en) 2001-09-04 2006-11-28 Multimetrixs Llc Precision soft-touch gripping mechanism for flat objects
JP2003147070A (ja) 2001-11-12 2003-05-21 Shigeru Tasaka 機能性オリゴマーおよびその製造方法
JP2003147185A (ja) 2001-11-15 2003-05-21 Teijin Ltd 芳香族ポリカーボネート組成物、成形物および成形方法
JP2003183405A (ja) 2001-12-14 2003-07-03 Teijin Ltd 粉体ポリカーボネートおよびポリカーボネート粉体組成物
US7820186B2 (en) 2001-12-21 2010-10-26 Galderma Research & Development Gel composition for once-daily treatment of common acne comprising a combination of benzoyl peroxide and adapalene and/or adapalene salt
JP2003192761A (ja) 2001-12-27 2003-07-09 Mitsubishi Chemicals Corp アクリル変性ウレタン樹脂組成物及びその製造方法
US7098274B2 (en) 2002-08-27 2006-08-29 Acushnet Company Compositions for golf equipment
JP3985264B2 (ja) 2002-02-22 2007-10-03 日本ポリウレタン工業株式会社 高官能ポリカーボネートポリオールの製造方法
ATE400523T1 (de) 2002-04-26 2008-07-15 Ventana Med Syst Inc Verfahren und vorrichtung zum automatisierten aufnehmen und ablegen von deckgläsern
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
JP3741085B2 (ja) 2002-07-03 2006-02-01 日立化成工業株式会社 光硬化性樹脂組成物
AU2003281200A1 (en) 2002-07-03 2004-01-23 Tasuku Honjo Immunopotentiating compositions
US7052694B2 (en) 2002-07-16 2006-05-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Dendritic cell potentiation
FR2844513B1 (fr) 2002-09-13 2007-08-03 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps pour adcc et induisant la production de cytokines.
FR2844455B1 (fr) 2002-09-13 2007-12-14 Lab Francais Du Fractionnement Traitement des pathologies echappant a la reponse immune par des anticorps optimises
KR100960560B1 (ko) 2002-09-27 2010-06-03 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법
AU2003288675B2 (en) 2002-12-23 2010-07-22 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses therefor
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7241504B2 (en) 2003-01-17 2007-07-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Diols formed by ring-opening of epoxies
EP1591527B1 (en) 2003-01-23 2015-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human pd-1
WO2004084933A1 (en) 2003-03-28 2004-10-07 Faron Pharmaceuticals Oy Elevation of adenosine level by cytokine-induced expression of cd73
SG10201404132YA (en) 2003-04-11 2014-09-26 Nippon Kogaku Kk Apparatus having an immersion fluid system configured to maintain immersion fluid in a gap adjacent an optical assembly
WO2005026234A1 (de) 2003-09-12 2005-03-24 Basf Aktiengesellschaft Hochfunktionelle, hoch- oder hyperverzweigte polycarbonate sowie deren herstellung und verwendung
DE102004005652A1 (de) 2004-02-04 2005-08-25 Basf Ag Fließfähige Polyesterformmassen
DE102004010138B4 (de) 2004-02-27 2006-04-06 Heraeus Kulzer Gmbh Verstärkte, pressbare Keramikzusammensetzungen für Dentalzwecke
KR101441777B1 (ko) 2004-03-25 2014-09-22 가부시키가이샤 니콘 노광 장치 및 디바이스 제조 방법
WO2005098343A1 (en) 2004-04-05 2005-10-20 George Tunis Armor panel system
DE102004026904A1 (de) 2004-06-01 2005-12-22 Basf Ag Hochfunktionelle, hoch- oder hyperverzweigte Polyester sowie deren Herstellung und Verwendung
RU2297430C2 (ru) 2004-06-24 2007-04-20 Асахи Касеи Кемикалз Корпорейшн Композиция поликарбонатной смолы для применения в производстве субстрата для носителя оптической информации
ES2340500T3 (es) 2004-06-24 2010-06-04 Bayer Materialscience Ag Composiciones de policarbotanato termoestabilizadas.
US20060099203A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Pease Larry R B7-DC binding antibody
ATE461959T1 (de) 2004-07-01 2010-04-15 Bayer Materialscience Ag Inhibierung von katalytisch aktiven verunreinigungen in polycarbonat nach dem schmelzeumesterungsverfahren
MY139705A (en) 2004-07-19 2009-10-30 Basf Ag Mixtures of hyperbranched polyesters with polycarbonates as additive for polyester molding compositions
DE102004035357A1 (de) 2004-07-21 2006-03-16 Basf Ag Kontinuierliches Verfahren zur Herstellung von Polyalkylenarylaten mit hyperverzweigten Polyestern und/oder Polycarbonaten
FR2874217B1 (fr) 2004-08-10 2006-10-27 Agronomique Inst Nat Rech Polycarbonate de glycerol - compositions organiques le contenant - procede d'obtention de ces compositions organiques et procede d'extraction du polycarbonate de glycerol et leurs applications
DE102004038979A1 (de) 2004-08-10 2006-02-23 Basf Ag Schlagzähmodifizierte Polyester mit hyperverzweigten Polyestern
DE102004059243A1 (de) 2004-08-10 2006-02-23 Basf Ag Thermoplastische Formmassen mit verbesserten Fließ- und Entformungseigenschaften
DE102004038976A1 (de) 2004-08-10 2006-02-23 Basf Ag Fließfähige Polyesterformmassen mit ASA/ABS und SAN
DE102004049342A1 (de) 2004-10-08 2006-04-13 Basf Ag Fließfähige Thermoplaste mit halogenfreiem Flammschutz
DE102004050025A1 (de) 2004-10-13 2006-04-20 Basf Ag Fließfähige Thermoplaste mit Halogenflammschutz
DE102004051214A1 (de) 2004-10-20 2006-05-04 Basf Ag Fließfähige Polyoxymethylene
DE102004051241A1 (de) 2004-10-20 2006-05-04 Basf Ag Fließfähige Polyamide mit hyperverzweigten Polyestern/Polycarbonaten
US7140738B2 (en) 2004-11-24 2006-11-28 Cytyc Corporation System and method for calibrating position of microscope slide within storage receptacle
JP2006150500A (ja) 2004-11-29 2006-06-15 Elpida Memory Inc レジンボンド砥石およびそれを用いた半導体チップの製造方法
JP2006160871A (ja) 2004-12-07 2006-06-22 Seikoh Chem Co Ltd 衣料用樹脂組成物
FR2880025B1 (fr) 2004-12-23 2007-03-30 Agronomique Inst Nat Rech Polyesters de polycarbonate de glycerol et d'autres polymeres et copolymeres polyhydroxyles, procede d'acylation et applications
DE102005002119A1 (de) 2005-01-14 2006-07-27 Basf Ag Fließfähige Polyolefine
US7300163B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Cytyc Corporation Slide misload detection system and method
DE102005004856A1 (de) 2005-02-01 2006-08-03 Basf Ag Fliessfähige Polyester mit Carbodilmid-Stabilisatoren
DE102005009166A1 (de) 2005-02-25 2006-08-31 Basf Ag Hochfunktionelle, hoch- oder hyperverzweigte Polycarbonate sowie deren Herstellung und Verwendung
US7374391B2 (en) 2005-12-22 2008-05-20 Applied Materials, Inc. Substrate gripper for a substrate handling robot
CN109485727A (zh) 2005-05-09 2019-03-19 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
DE102005027549A1 (de) 2005-06-14 2006-12-21 Basf Ag Mehrkomponentenformkörper mit Polyesterschichten
MX2007015942A (es) 2005-07-01 2008-03-07 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada.
DE102005032585A1 (de) 2005-07-11 2007-01-25 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Leder
EP1743897A1 (en) 2005-07-15 2007-01-17 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH Biologically active compounds obtainable from Sorangium cellulosum
DE102005034999A1 (de) 2005-07-22 2007-01-25 Basf Ag Fließfähige Polyester mit Polyesterelastomeren
DE102005034980A1 (de) 2005-07-22 2007-01-25 Basf Ag Fasern und Flüssigkeitsbehälter aus PET
US20070098997A1 (en) 2005-11-02 2007-05-03 Bayer Materialscience Llc Composite articles and a process for their production
WO2007056539A2 (en) 2005-11-08 2007-05-18 Medarex, Inc. Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy
CA2631760A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Robert A. Brodsky Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders
WO2007068284A1 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Synergio Ag Intra cardiac device, system and methods
DK1994155T4 (da) 2006-02-13 2022-07-25 Daiichi Sankyo Co Ltd Polynukleotid- og polypeptidsekvenser involveret i fremgangsmåden med knogleremodellering
FR2901164B1 (fr) 2006-05-16 2008-08-15 Aro Soc Par Actions Simplifiee Pince a enserrer des toles, utilisee en association avec un bras manipulateur, et a module d'equilibrage deporte
US7880155B2 (en) 2006-06-15 2011-02-01 Brooks Automation, Inc. Substrate alignment apparatus comprising a controller to measure alignment during transport
US7999940B2 (en) 2006-06-30 2011-08-16 Asml Netherlands B.V. Apparatus for angular-resolved spectroscopic lithography characterization
CN101484496B (zh) 2006-07-12 2012-06-27 三菱化学株式会社 聚氨酯的制造方法及由该制造方法得到的聚氨酯的用途
WO2008009516A2 (de) 2006-07-20 2008-01-24 Basf Se Wasserbasislacke mit hochfunktionellen, hoch- oder hyperverzweigten polycarbonaten
CA2659970A1 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Ikonisys, Inc. Z-motion microscope slide mount
US7948676B2 (en) 2006-08-04 2011-05-24 Ikonisys, Inc. Automated cassette and slide handling system for an automatic microscope
GB2474611B (en) 2006-09-08 2011-09-07 Thermo Shandon Ltd Image based detector for slides or baskets for use in a slide processing apparatus
WO2008043682A1 (de) 2006-10-12 2008-04-17 Basf Se Wärmeleitfähige polyesterformmassen
TW200819421A (en) 2006-10-31 2008-05-01 Univ Nat Chunghsing The method of synthesizing biphenol A, BPA having di-alkoxyl group by using polycarbonate or its waste
US8197715B2 (en) 2006-12-19 2012-06-12 Base Se Thermoplastic moulding compositions having improved ductility
KR20090116712A (ko) 2006-12-20 2009-11-11 바스프 에스이 이방성 셀형 엘라스토머
KR100800713B1 (ko) 2007-01-29 2008-02-01 삼성전자주식회사 휴대용 단말기
PT2115032E (pt) 2007-01-30 2011-02-01 Basf Se Processo para o fabrico de polióis de poliétercarbonato
EP2111231A4 (en) 2007-02-13 2010-12-15 Univ Northeastern METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVING IMMUNE RESPONSES
JP4449998B2 (ja) 2007-03-12 2010-04-14 ヤマハ株式会社 アレイスピーカ装置
US8098956B2 (en) 2007-03-23 2012-01-17 Vantana Medical Systems, Inc. Digital microscope slide scanning system and methods
JP2008311985A (ja) 2007-06-15 2008-12-25 Panasonic Corp 位相調整装置およびデジタルカメラ
DE102007031053A1 (de) 2007-07-04 2009-01-15 Texas Instruments Deutschland Gmbh Integriertes elektronisches Gerät, einschließlich einer Schaltung zur Bereitstellung einer Systemversorgungsspannung von einer Hauptspannungsquelle
DE102007032343A1 (de) 2007-07-11 2009-01-15 Bayer Materialscience Ag Polyurethan- und Polyurethanharnstoffelastomere auf Basis von Polycarbonatpolyolen
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
JP2010535926A (ja) 2007-08-15 2010-11-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 改善された流動性および良好な機械的特性を有するポリエスエル混合物
US7972822B2 (en) 2007-08-17 2011-07-05 Polytechnic Institute Of New York University Enzyme-catalyzed polycarbonate and polycarbonate ester synthesis
US20090057137A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Midwest Research Institute Synthesizing thin films of lithiated transition metal oxide for use in electrochemical and battery devices
JP4436393B2 (ja) 2007-09-11 2010-03-24 本田技研工業株式会社 ワイパー装置
US8501280B2 (en) 2007-10-09 2013-08-06 Basf Se Use of high-functionality highly branched polyetheramine polyols to coat surfaces
SG10201605897RA (en) 2007-10-11 2016-09-29 Daiichi Sankyo Co Ltd ANTIBODY TARGETING OSTEOCLAST-RELATED PROTEIN Siglec-15
NO2225337T3 (zh) 2007-11-19 2018-01-20
BRPI0820427A2 (pt) 2007-11-19 2015-05-26 Basf Se Usos de pelo menos um polímero elevadamente ramificado, e de uma dispersão polimérica aquosa, método para produzir uma dispersão polimérica aquosa, dispersão polimérica aquosa, composição aglutinante, agente de revestimento na forma de uma composição aquosa, e, método para aperfeiçoar a estabilidade de congelamento / descongelamento de uma dispersão polimérica aquosa
JP2011502843A (ja) 2007-11-20 2011-01-27 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア Ｇｉｄ／ｗｉｔのための熱可塑性成形材料の使用
US8446125B2 (en) 2008-06-20 2013-05-21 Superior Communications, Inc. Vehicle power charger
JP2010013523A (ja) 2008-07-02 2010-01-21 Soft99 Corporation 透明樹脂部材の透明性回復方法および透明性回復用コーティング組成物
US7956285B2 (en) 2008-07-03 2011-06-07 Cooper Technologies Company Floor stand for mounting an electrical box
CA2734908A1 (en) 2008-08-25 2010-03-11 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
CN102149746B (zh) 2008-09-08 2013-05-22 诺沃梅尔公司 聚碳酸酯多元醇组合物和方法
CA2749131A1 (en) 2009-01-14 2010-07-22 Bayer Materialscience Llc Long-fiber thermoset composite with low orange peel
US20100222524A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Bayer Materialscience Llc High modulus transparent thermoplastic polyurethanes characterized by high heat and chemical resistance
CN102272306B (zh) 2009-04-09 2017-12-26 第一三共株式会社 抗‑Siglec‑15抗体
ATE517149T1 (de) 2009-05-11 2011-08-15 Basf Se Verstärkte styrolcopolymere
CN101633731B (zh) 2009-08-14 2011-08-03 广州市达志化工科技有限公司 一种脂肪族聚碳酸酯多元醇的制备方法
US20120201982A1 (en) 2009-08-18 2012-08-09 Bayer Materialscience Llc Coating compositions for glass substrates
IN2012DN02753A (zh) 2009-08-31 2015-09-18 Amplimmune Inc
EP2299281B1 (en) 2009-09-16 2023-02-15 Sysmex Corporation Rack collecting unit and sample processing apparatus
CZ2009620A3 (cs) 2009-09-22 2011-04-06 Ústav makromolekulární chemie AV CR, v.v.i. Surovina pro výrobu polyurethanu a zpusob její výroby z odpadního polyurethanu
WO2011068826A1 (en) 2009-12-01 2011-06-09 E.I. Du Pont De Nemours And Company Two-component polyurethane coating compositions
CN102933637B (zh) 2010-01-20 2015-07-01 拜耳知识产权有限责任公司 活化用于制备聚醚碳酸酯多元醇的双金属氰化物催化剂的方法
CN101775129B (zh) 2010-02-04 2012-06-27 东南大学 一种制备聚醚碳酸酯多元醇的方法
US8530567B2 (en) 2010-02-18 2013-09-10 Basf Se Polymer dispersion which comprises a highly branched polycarbonate having unsaturated fatty acid groups
MA34091B1 (fr) * 2010-03-31 2013-03-05 Boehringer Ingelheim Int Anticorps anti-cd40
JP2011221188A (ja) 2010-04-07 2011-11-04 Sony Corp ステージ制御装置、ステージ制御方法及び顕微鏡
US9018334B2 (en) 2010-04-14 2015-04-28 Dow Global Technologies Llc Polycarbonate polyols and polyurethanes made therefrom
US20110274932A1 (en) 2010-05-05 2011-11-10 Basf Se Component comprising an insert part and plastics jacketing, and process for production of the component
JP2012013952A (ja) 2010-06-30 2012-01-19 Sony Corp ステージ装置及び顕微鏡
MX2013003828A (es) 2010-10-05 2013-06-28 Daiichi Sankyo Co Ltd Anticuerpo dirigido a la proteina lectina tipo inmunoglobulina de union a acido sialico-15 relacionada con osteoclastos.
US20120085961A1 (en) 2010-10-12 2012-04-12 Bayer Materialscience Llc Method for improving sound damping performance for automotive interior applications
TWI452136B (zh) * 2010-11-17 2014-09-11 中外製藥股份有限公司 A multiple specific antigen-binding molecule that replaces the function of Factor VIII in blood coagulation
JP6134882B2 (ja) 2010-11-23 2017-05-31 ノボマー， インコーポレイテッド ポリカーボネートポリオール組成物
DE102010061167B3 (de) 2010-12-10 2012-05-31 Leica Microsystems Cms Gmbh Mikroskoptisch
ES2684602T3 (es) 2010-12-22 2018-10-03 Orega Biotech Anticuerpos contra CD39 humano y uso de los mismos
CN102206333B (zh) 2011-04-18 2013-12-04 中科院广州化学有限公司 一种低分子量聚碳酸酯多元醇及其制备方法和用途
RU2625034C2 (ru) 2011-04-20 2017-07-11 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела и другие молекулы, которые связывают в7-н1 и pd-1
CZ2011336A3 (cs) 2011-06-06 2013-01-16 Ústav makromolekulární chemie AV CR, v.v.i. Smes polyolu a zpusob její prípravy
CN102382441A (zh) 2011-06-17 2012-03-21 珠海市远康企业有限公司 光学高透聚碳酸酯材料及其制备方法
EP2548906A1 (de) 2011-07-18 2013-01-23 Bayer MaterialScience AG Verfahren zur Aktivierung von Doppelmetallcyanidkatalysatoren zur Herstellung von Polyetherpolyolen
EP2548907A1 (de) 2011-07-18 2013-01-23 Bayer MaterialScience AG Verfahren zur Herstellung von Polyetherpolyolen
US8790651B2 (en) * 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
MX2014011826A (es) 2012-03-30 2014-11-21 Daiichi Sankyo Co Ltd Anticuerpo anti-siglec-15 novedoso.
JP5911365B2 (ja) 2012-04-20 2016-04-27 オリンパス株式会社 複合型顕微鏡
WO2013170366A2 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Huron Technologies International Inc. Slide tray and receptor for microscopic slides and method of operation
AU2013293062A1 (en) * 2012-07-19 2014-07-24 Alethia Biotherapeutics Inc. Anti-Siglec-15 antibodies
CN102911636B (zh) 2012-09-26 2013-12-18 贵阳时代沃顿科技有限公司 一种双组分聚氨酯胶粘剂及其制备方法和应用
EP2917257B1 (en) 2012-11-07 2019-09-11 Saudi Aramco Technologies Company High strength polyurethane foam compositions and methods
CN104769008B (zh) 2012-11-09 2018-03-23 科思创德国股份有限公司 制备聚醚碳酸酯多元醇的方法
EP2931798B1 (en) 2012-12-14 2019-10-16 Resinate Materials Group, Inc. Reaction products containing hydroxyalkylterephthalates and methods of making and using same
US9001422B2 (en) 2013-02-28 2015-04-07 Ventana Medical Systems, Inc. Slide handling system and techniques
JP6316928B2 (ja) 2013-03-14 2018-04-25 ピーピージー・インダストリーズ・オハイオ・インコーポレイテッドＰＰＧ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｏｈｉｏ，Ｉｎｃ． ポリウレタンおよびそれから調製される物品およびコーティング、ならびにそれらを作製する方法。
WO2014194411A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Clemex Technologies Inc. Automatic slide loading system and method
JP5835273B2 (ja) 2013-06-13 2015-12-24 コニカミノルタ株式会社 熱可塑性樹脂組成物
EP3010970B1 (en) 2013-06-21 2019-09-18 SABIC Global Technologies B.V. Polycarbonate composition to produce optical quality products with high quality and good processability
EP2851384A1 (de) 2013-09-20 2015-03-25 Bayer MaterialScience AG Verzweigte Polyethercarbonatpolyole und Verfahren zu deren Herstellung
JP2016539231A (ja) 2013-11-27 2016-12-15 コベストロ、ドイチュラント、アクチエンゲゼルシャフトＣｏｖｅｓｔｒｏ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ Ａｇ ポリウレタンソフト発泡体を製造するためのポリエーテルカーボネートポリオールとポリエーテルポリオールとの混合物
ES2658301T3 (es) 2014-02-26 2018-03-09 Covestro Deutschland Ag Procedimiento para la preparación de polieterestercarbonatopolioles
EP2915808A1 (en) 2014-03-07 2015-09-09 Construction Research & Technology GmbH 2-Hydroxyethyl 2-oxo-1,3-dioxolane-4-carboxylates, their preparation and use
CN104004179A (zh) 2014-04-19 2014-08-27 上海东大化学有限公司 废旧回收物制备聚醚多元醇、硬泡聚氨酯的方法及产物
US10273332B2 (en) 2014-05-05 2019-04-30 Resinate Materials Group, Inc. Recycle-content polyester polyols
US11422352B2 (en) 2014-05-29 2022-08-23 Rarecyte, Inc. Automated substrate loading
US11300769B2 (en) 2014-05-29 2022-04-12 Rarecyte, Inc. Automated substrate loading
US10802260B2 (en) 2014-05-29 2020-10-13 Rarecyte, Inc. Automated substrate loading
WO2015183691A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Rarecyte, Inc. Apparatus for holding a substrate within a secondary device
US10890748B2 (en) 2014-05-29 2021-01-12 Rarecyte, Inc. Automated substrate loading
US20180003939A1 (en) 2014-05-29 2018-01-04 Rarecyte, Inc. Apparatus for holding a substrate within a secondary device
TWI653701B (zh) 2014-06-09 2019-03-11 日商荏原製作所股份有限公司 Substrate attaching and detaching portion for substrate holder, wet substrate processing device including the substrate attaching and detaching portion, substrate processing device, and substrate transfer method
CN104163976A (zh) 2014-06-09 2014-11-26 江苏欣润塑胶有限公司 一种抗菌防霉塑胶
WO2015192214A1 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Alethia Biotherapeutics Inc. Anti-siglec-15 antibodies for use in treatment of osteogenesis imperfecta
CN104119486B (zh) 2014-06-27 2017-02-08 重庆阮氏塑业有限公司 一种聚碳酸酯复合材料及其制备方法
CA2947926C (en) 2014-06-27 2020-03-10 Ventana Medical Systems, Inc. Automated specimen processing systems and methods of detecting specimen-bearing microscope slides
US10018056B2 (en) 2014-07-02 2018-07-10 United Technologies Corporation Abrasive coating and manufacture and use methods
ES2709474T3 (es) 2014-07-03 2019-04-16 Covestro Deutschland Ag Procedimiento para la purificación de policarbonatopolioles y dispositivo de purificación para ello
TWI721953B (zh) 2014-08-11 2021-03-21 美商盧伯利索先進材料有限公司 具高耐熱性之熱塑性聚胺基甲酸酯及其製造方法
US10294323B2 (en) 2014-08-11 2019-05-21 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Moisture vapor transmission thermoplastic polyurethane with high heat resistance
WO2016028841A1 (en) 2014-08-20 2016-02-25 Resinate Materials Group, Inc. Digestion of keratin
CN107075094A (zh) 2014-10-29 2017-08-18 树脂酸盐材料集团有限公司 来自羟基官能的缩酮酸、酯或酰胺的高再循环含量的聚酯型多元醇
CN104356634A (zh) 2014-11-07 2015-02-18 苏州蔻美新材料有限公司 一种除臭透气医用膜及其制备方法
CN104610872A (zh) 2015-01-28 2015-05-13 芜湖县双宝建材有限公司 一种耐水耐老化水性聚氨酯涂料
US9522976B2 (en) 2015-03-20 2016-12-20 Resinate Materials Group, Inc. Cycloaliphatic polyester polyols from thermoplastic polyesters
MX2017014862A (es) 2015-05-21 2018-08-23 Basf Se Preparacion de polioles de policarbonato hiper-ramificados y su uso.
KR20180011143A (ko) 2015-05-21 2018-01-31 바스프 에스이 에너지 경화성 과분지화된 폴리카보네이트 폴리올 골격 다작용성 아크릴레이트
JP6341888B2 (ja) 2015-07-02 2018-06-13 大日精化工業株式会社 ポリヒドロキシウレタン樹脂及びその製造方法
CN105174822A (zh) 2015-08-18 2015-12-23 苏州赛斯德工程设备有限公司 一种建筑外墙自保温材料的制备方法
RU2761980C2 (ru) 2015-11-10 2021-12-14 Йейл Юниверсити Композиции и способы лечения аутоиммунных заболеваний и рака
CN106008948B (zh) 2016-06-20 2018-05-15 广州财睿投资咨询有限责任公司 一种基于生物质的聚碳酸酯多元醇和制备方法及其聚氨酯
JP7002254B2 (ja) 2016-09-13 2022-01-20 中国塗料株式会社 スラブ式軌道の補修材料、硬化体、スラブ式軌道の補修方法、スラブ式軌道および樹脂組成物
US11390675B2 (en) 2016-09-21 2022-07-19 Nextcure, Inc. Antibodies for Siglec-15 and methods of use thereof
JP6944099B2 (ja) 2016-09-21 2021-10-06 株式会社山根商店 洗浄具
CN108070067A (zh) 2016-11-15 2018-05-25 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种可交联型涂层用抗菌聚氨酯的制备方法
WO2018140073A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Rarecyte, Inc. Automated substrate loading
US10053533B1 (en) 2017-04-13 2018-08-21 Presidium Usa, Inc. Oligomeric polyol compositions
CN110218257A (zh) 2019-06-24 2019-09-10 王跃驹 植物作为宿主在表达Antis15抗体中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080260733A1 (en) * 2001-11-26 2008-10-23 Cellmatrix Humanized collagen antibodies and related methods
US20150044722A1 (en) * 2009-10-06 2015-02-12 Alethia Biotherapeutics Inc. Siglec-15 antibodies in treating bone loss-related disease
WO2013034660A1 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Medimmune Limited Anti-siglec-15 antibodies and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
汪世华主编: "抗体技术", 北京：军事医学科学出版社, pages: 227 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11390675B2 (en) 2016-09-21 2022-07-19 Nextcure, Inc. Antibodies for Siglec-15 and methods of use thereof
CN115348970A (zh) * 2020-03-27 2022-11-15 博奥信生物技术（南京）有限公司 结合siglec15的抗体及其用途
CN115348970B (zh) * 2020-03-27 2023-11-14 博奥信生物技术（南京）有限公司 结合siglec15的抗体及其用途
WO2021254132A1 (zh) * 2020-06-19 2021-12-23 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种抗siglec15抗体及其应用
WO2022095934A1 (zh) * 2020-11-05 2022-05-12 上海津曼特生物科技有限公司 抗Siglec-15抗体及其在制备药物中的应用
CN114657132A (zh) * 2020-12-22 2022-06-24 未来智人再生医学研究院(广州)有限公司 一种表达Siglec-15靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用
CN112625132A (zh) * 2021-01-15 2021-04-09 沈阳荣欣生物制药科技有限公司 纳米抗体及其编码基因、表达载体、宿主细胞和应用
CN112625132B (zh) * 2021-01-15 2022-08-02 沈阳荣欣生物制药科技有限公司 纳米抗体及其编码基因、表达载体、宿主细胞和应用
WO2022179466A1 (zh) 2021-02-25 2022-09-01 石药集团巨石生物制药有限公司 抗Siglec15抗体及其用途
WO2022193540A1 (zh) * 2021-03-19 2022-09-22 江苏元本生物科技有限公司 一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽
CN114591434A (zh) * 2021-04-30 2022-06-07 杭州邦顺制药有限公司 抗Siglec15抗体及其制备方法和用途
CN114591434B (zh) * 2021-04-30 2023-02-28 杭州邦顺制药有限公司 抗Siglec15抗体及其制备方法和用途
WO2022237819A1 (zh) * 2021-05-13 2022-11-17 信达生物制药(苏州)有限公司 抗Siglec-15抗体及其用途
WO2023030311A1 (zh) * 2021-08-31 2023-03-09 上海医药集团股份有限公司 靶向Siglec15的抗原结合蛋白及其用途
WO2023093816A1 (zh) * 2021-11-25 2023-06-01 诺纳生物（苏州）有限公司 抗Siglec-15抗体及其应用
CN114807052A (zh) * 2022-06-07 2022-07-29 江苏亲科生物研究中心有限公司 Siglec15单克隆抗体及其制备方法和用途
CN117447592A (zh) * 2022-07-26 2024-01-26 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗Siglec-15单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
WO2024022008A1 (zh) * 2022-07-26 2024-02-01 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗Siglec-15单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
CN117447592B (zh) * 2022-07-26 2024-05-28 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗Siglec-15单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
CN117645665A (zh) * 2024-01-29 2024-03-05 北京热景生物技术股份有限公司 一种针对α-突触核蛋白的抗体及其制备方法和应用
CN117645665B (zh) * 2024-01-29 2024-05-07 北京热景生物技术股份有限公司 一种针对α-突触核蛋白的抗体及其制备方法和应用

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