CN109789197A - 用于调节lair信号转导的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

提供了用于调节LAIR‑1的组合物以及其使用方法。例如，提供了降低LAIR‑1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂。此类剂可用于增加有需要的受试者的免疫应答。示例性剂包括(i)可溶性LAIR‑2多肽或融合蛋白，(ii)可溶性LAIR 1多肽或融合蛋白，(iii)功能阻断性抗LAIR‑1抗体，(iv)消减LAIR‑1阳性细胞的抗体，以及(v)它们的组合。还提供了增加LAIR‑1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂。此类剂可用于降低有需要的受试者的免疫应答。示例性剂包括：(i)功能活化性抗LAIR‑1抗体，(ii)功能阻断性抗LAIR‑2抗体，以及(iii)它们的组合。

Description

用于调节LAIR信号转导的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年8月3日提交的美国临时专利申请号62/370,334和2017年1月25日提交的美国临时专利申请号62/450,300的权益和优先权，所述专利申请两者均以引用的方式整体并入。
对序列表的引用
以名称为“LAIR1ST25.txt”的文本文件于2017年8月3日提交的序列表(于2017年8月3日创建并且具有136千字节大小)依据美国法典第37篇第1.52条(e)款(5)特此以引用的方式并入。
技术领域
本发明总体上涉及免疫调节领域，并且更特别地涉及用于调节LAIR-1信号传导以增加或降低免疫应答和用于通过直接调控白血病细胞存活和自我更新来治疗白血病的组合物和方法。
发明背景
白细胞相关的免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)是一种抑制性细胞表面受体，其在许多免疫细胞上表达并且通过两个细胞质基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)结构域发挥抑制信号传导(Verbrugge等人,2006,J.Leukoc.Biol.79:828-836)。LAIR-1通过多种胶原、补体组分C1q和表面活性蛋白D(SP-D)交联以诱导抑制免疫细胞成熟、增殖和脱粒的负性信号传导(Lebbink等人,2009,Matrix Biol.28:202-210；Meyaard.,2008,J.Leukoc.Biol.83:799-803)。人(而不是小鼠)基因组编码可溶性LAIR-2蛋白(Sun等人,2014,Gene552:140-145)。LAIR-2蛋白与LAIR-1结合相同的配体，并且因此可充当诱饵以减少通过LAIR-1的抑制信号。
LAIR-1抑制性信号传导可预防自身免疫性疾病，如红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺疾病和动脉粥样硬化以及接触性超敏反应(Sun等人,2014,Gene 552:140-145)。慢性淋巴细胞性白血病细胞上LAIR-1的表达降低与疾病增加相关(Poggi等人,2008,Leukemia 22:980-988；Perbellini等人,2014,Haematolagica99:881-887)。LAIR-1还已显示在上皮性卵巢癌细胞和其他人肿瘤上表达，但是在实体瘤上表达的LAIR-1的功能仍不清楚(Meyaard等人,1997,Immunity 7:283-290；Cao等人,2015,Biochem.Biophys.Res.Commun.458:399-404)。
急性骨髓性白血病(AML)细胞和潜在地急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞上的LAIR-1表达已被证明是它们通过磷酸酶独立性LAIR-1-SHP-1-CAMK1-CREB信号传导途径的生长所必需的，所述信号传导途径抑制白血病干细胞的细胞凋亡和分化以保留这些细胞的自我更新能力或“干性质(stemness)”(Kang等人,2015,Nat.Cell Biol.17:665-677)。
总之，关于LAIR-1的累积数据表明免疫稳态中的重要作用，然而，仍然需要调节LAIR-1以用于治疗疾病和病症的组合物和方法。
因此，本发明的目的是提供增加LAIR-1负性信号传导的组合物以及所述组合物用于治疗炎性疾病和病症以及自身免疫性疾病的使用方法。
本发明的另一个目的是提供减少LAIR-1负性信号传导的组合物以及所述组合物用于治疗癌症和感染性疾病的使用方法。
发明内容
提供了用于调节LAIR-1的组合物以及其使用方法。例如，提供了降低LAIR-1表达、配体结合、交联、信号转导或它们的组合的免疫调节剂。LAIR-1可由例如骨髓细胞、T细胞、自然杀伤(NK)细胞或它们的组合表达。骨髓细胞可以是抗原呈递细胞，例如单核细胞、巨噬细胞或树突细胞。在一些实施方案中，所述组合物特异性地靶向前述细胞类型中的一种或多种。
所公开的剂可用于增加有需要的受试者的免疫应答。免疫应答可以是，例如，对抗原的初次免疫应答或效应细胞功能的增加，如增加T细胞的抗原特异性增殖、促进T细胞产生细胞因子、刺激分化或它们的组合。示例性剂包括(i)可溶性LAIR-2多肽或融合蛋白，(ii)可溶性LAIR-1多肽或融合蛋白，(iii)功能阻断性抗LAIR-1抗体，(iv)可用于消减LAIR-1阳性细胞的抗体，以及(v)它们的组合。在一些实施方案中，所述免疫调节剂是LAIR-1的拮抗剂。
在特定实施方案中，所述剂是LAIR-2融合蛋白，例如包含与免疫球蛋白结构域连接的LAIR-2或其功能变体的细胞外结构域的融合蛋白。示例性融合蛋白包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述剂是LAIR-2蛋白或其功能片段或变体。例如，所述LAIR-2蛋白或其功能片段或变体可与SEQ ID NO:6具有至少80％、90％、95％或100％序列同一性。
所述剂可以是LAIR-1融合蛋白，例如包含与免疫球蛋白结构域连接的LAIR-1或其功能变体的细胞外结构域的融合蛋白。示例性LAIR-1融合蛋白包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述剂是可溶性LAIR-1蛋白或其功能片段或变体。例如，所述可溶性LAIR-1蛋白可由LAIR-1或其功能片段或变体的细胞外结构域组成。示例性可溶性蛋白质与SEQ ID NO:2具有至少80％、90％、95％或100％序列同一性。
增加受试者的免疫应答的方法通常包括向有需要的受试者施用有效量的降低LAIR-1表达、配体结合、交联、信号转导或它们的组合的免疫调节剂。所述受试者可患有例如癌症或感染性疾病。
在一些实施方案中，所述受试者、所述癌症或所述疾病的特征在于LAIR-1的表达增加、LAIR-1配体的表达增加、LAIR-2的表达降低或它们的组合。在特定实施方案中，所述癌症是卵巢癌、肺癌、胃肠癌、急性骨髓性白血病(AML)或急性淋巴性白血病(ALL)。所述剂可作为单一组合物与疫苗或其组分一起同时或组合施用。
还提供了增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂。此类剂可用于降低有需要的受试者的免疫应答。示例性剂包括：(i)功能活化性抗LAIR-1抗体，(ii)功能阻断性抗LAIR-2抗体，和(iii)它们的组合。
一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体由选自由以下组成的组的杂交瘤产生：1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a以及12E10b。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有由选自由以下组成的组的杂交瘤中的一者或多者产生的抗体的至少一条轻链或至少一条重链：1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a和12E10b。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变轻链，所述可变轻链与具有根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的氨基酸序列的可变轻链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变重链，所述可变重链与具有根据SEQ ID NO:23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的氨基酸序列的可变重链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变轻链，所述可变轻链与具有根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的氨基酸序列的可变轻链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及可变重链，所述可变重链与根据SEQ ID NO:23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有互补决定区(CDR)，所述互补决定区选自具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的CDR的组：SEQ ID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-118。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有选自由以下组成的组的多个CDR：SEQ ID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-117。所述多个CDR可以是2-12。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:124中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:128中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:130中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:132或SEQ ID NO:134中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:136中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:138或SEQ ID NO:140中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:142中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种编码抗体的核酸序列，所述抗体具有根据SEQ ID NO:124、130、136或142的轻链氨基酸序列和/或根据SEQ ID NO:120、122、126、128、132、134、138或140的重链氨基酸。
另一个实施方案提供了一种核酸序列，所述核酸序列编码根据SEQ ID NO 19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的可变轻链和/或根据SEQ ID NO 23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的可变重链。编码所述轻链和/或重链的核酸可以是表达载体的一部分。所述核酸可由细胞表达。表达可以是诱导型或组成型的。
另一个实施方案提供了一种细胞，所述细胞组成型地或诱导型地表达特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞具有编码根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103、111或它们的组合的氨基酸序列的一种或多种核酸。
另一个实施方案提供了一种细胞，所述细胞组成型地或诱导型地表达特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞具有编码根据SEQ ID NO:120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142或它们的组合的氨基酸序列的一种或多种核酸。
降低受试者的免疫应答的方法通常包括向有需要的受试者施用有效量的增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂。在一些实施方案中，所述受试者患有炎症、自身免疫性病症。在一个特定实施方案中，所述受试者患有类风湿性关节炎。
在一些实施方案中，所述受试者或所述疾病或疾患的特征在于LAIR-1的表达降低、LAIR-1配体的表达降低、LAIR-2的表达增加或它们的组合。
所公开的方法中的任一种可包括单独或与一种或多种另外的治疗剂组合向所述受试者施用免疫调节剂。
一个实施方案提供了一种用于通过向有需要的受试者施用有效量的药物组合物来治疗所述受试者的白血病的方法，所述药物组合物包含LAIR-1单克隆抗体、可溶性LAIR-1多肽、可溶性LAIR-2多肽、LAIR-1融合蛋白、LAIR-2融合蛋白或它们的组合，以抑制或减少白血病细胞中的LAIR-1信号转导并且由此抑制白血病细胞存活或促进对所述白血病细胞的抗肿瘤免疫应答。所述白血病可以是急性骨髓性白血病。
一个实施方案提供了一种用于通过测定需要治疗的受试者的细胞以确定所述细胞是否表达LAIR、LAIR的结合配偶体或两者来评估或预测使用抗LAIR结合部分的治疗的功效的方法。待测定的示例性细胞包括但不限于从所述受试者获得的癌细胞。示例性癌细胞包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)细胞。表达多种相互作用抑制性受体的癌细胞据信对使用抗LAIR结合部分的治疗更好地反应。示例性LAIR结合配偶体包括但不限于跨膜胶原(XIII、XVII和XXIII)和LILRB4。图3示出基于癌细胞上LAIR-1或LAIR-1的结合配偶体的存在的预测治疗结果。
一个实施方案提供了一种根据SEQ ID NO:9、10、11、12、13、14、15、16、17或18的融合蛋白。
附图说明
图1A是示出来自克隆1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a和12E10b的抗LAIR-1抗体中可变轻链的氨基酸序列的表。图1B是示出来自克隆1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3和12E10(a和b)的抗LAIR-1抗体中可变重链的氨基酸序列的表。
图2A是来自所指示杂交瘤的可变轻链的多路比对图。图2B是来自所指示杂交瘤的可变重链的多路比对图。
图3是示出基于LAIR-1、LAIR-1结合配偶体或它们的组合的表达的预计治疗结果的表。
图4是说明免疫功能和稳态的LAIR调控的示意图。
图5是作为治疗剂的LAIR-2Fc和LAIR-1单克隆抗体(mAb)的示意图。
图6A示出LAIR-2Fc的SDS PAGE凝胶。图6B示出LAIR-2Fc的尺寸排阻色谱图。
图7A是用LAIR-2Fc染色、随后用抗hIg-PE染色的K562-Col17细胞的荧光活化细胞分选(FACS)直方图。图7B是用LAIR-2Fc染色、随后用抗hIg-PE染色的对照细胞的FACS直方图。图7C是用LAIR-1Fc染色、随后用抗hIg-PE染色的对照细胞的FACS直方图。图7D是用LAIR-1Fc染色、随后用抗hIg-PE染色的对照细胞的FACS直方图。图7E是LAIR-1Fc和LAIR-2Fc的非还原性SDS-PAGE凝胶。
图7F是还原性SDS-PAGE凝胶LAIR-1Fc和LAIR-2Fc。
图8A是用α-LAIR-1染色的Jurkat T细胞的FACS直方图。图8B是用LAIR-1Fc染色的Jurkat T细胞的FACS直方图。图8C是用LAIR-2Fc染色的Jurkat T细胞的FACS直方图。图8D是用α-LAIR-1染色的K562Col17细胞的FACS直方图。图8E是用LAIR-1Fc染色的K562Col17细胞的FACS直方图。图8F是用LAIR-2Fc染色的K562Col17细胞的FACS直方图。图8G是用α-LAIR-1染色的THP-1AML细胞的FACS直方图。图8H是用LAIR-1Fc染色的K562Col17细胞的FACS直方图。图8I是用LAIR-2Fc染色的K562Col17细胞的FACS直方图。
图9A是％NF-kB-GFP+对比抗CD3(μg/ml)的线图。LAIR-2Fc(●)、对照Fc(■)和培养基(▲)。图9B是NFAT-Lucia(RLU)对比蛋白质(μg/ml)的线图。LAIR-2Fc(●)和对照Fc(■)。图9C是IL-2(pg/ml)对比10μg/m蛋白质的条形图；对于左侧的LAIR-2Fc和右侧的对照Fc。图9D是TNF-α(pg/ml)对比10μg/m蛋白质的条形图；对于左侧的LAIR-2Fc和右侧的对照Fc。
图10A是MFI对比蛋白质(μg/ml)的线图，其示出与对照Fc(■)相比，LAIR-2Fc(●)以剂量依赖性方式结合至THP-1细胞。图10B是条形图。图10B是用1μg/ml LPS和LAIR-2Fc(每对的右列)或对照Fc(每对的左列)处理的THP-1细胞的IRF(干扰素调控因子)诱导-RLU的条形图。图10C是用RPMI培养基和LAIR-2Fc(每对的右列)或对照Fc(每对的左列)处理的THP-1细胞的IRF诱导-RLU的条形图。
图11A是对于用LAIR-2Fc(●)或对照Fc(▼)处理的CD4+T细胞，通过CFSE稀释的细胞群体对比OKT3(μg/ml)测量的T细胞增殖％的线图。图11B是对于用LAIR-Fc(●)或对照Fc(▼)处理的CD8+细胞，T细胞增殖CFSE增殖％对比OKT3(μg/ml)的线图。
图12A是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1710CD3+CD4+T细胞的直方图。图12B是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1710CD3+CD8+T细胞的直方图。图12C是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体CD3-CD16+CD56+NKC细胞的直方图。图12D是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1710CD14+单核细胞的直方图。图12E是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1711CD3+CD4+T细胞的直方图。图12F是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1711CD3+CD8+T细胞的直方图。图12G是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1711CD3-CD16+CD56+NKC细胞的直方图。图12H是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1711CD14+单核细胞的直方图。图12I是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1712CD3+CD4+T细胞的直方图。图12J是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1712CD3+CD8+T细胞的直方图。图12CK是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1712CD3-CD16+CD56+NKC细胞的直方图。图12L是从用LAIR-2Fc处理的外周血单核细胞(PBMC)分离的供体1712CD14+单核细胞的直方图。
图13是体内OT-1T细胞扩增的处理的图。图13B是用LAIR-2Fc(□)或对照Fc(○)处理的细胞的总CD8+T细胞的OT-1％(供体)对比OT-1移植天数的线图。
图14A是流式细胞术直方图，其示出用不含卵白蛋白(OVA)肽的CD45.1脾细胞激发的小鼠中CFSE水平和比例的注射前评估。图14B是流式细胞术直方图，其示出用负载有OVA肽(CFSE hi)的CD45.1脾细胞激发的小鼠中CFSE水平和比例的注射前评估。图14C是细胞计数直方图，其示出在没有OVA肽(CFSE lo)和有OVA肽(CFSE hi)的情况下用CD45.1脾细胞激发的小鼠中CFSE水平和比例的注射前评估。图14D是脾细胞转移后48小时的细胞计数直方图：用未处理的对照(无OT-1)评估脾脏中的标记的细胞(在CD45.1+细胞上门控)(宿主细胞是CD45.2)。图14E是脾细胞转移后48小时的细胞计数直方图：用OT-1对照Fc处理的脾脏中标记的细胞(在CD45.1+细胞上门控)(宿主细胞是CD45.2)的评估。图14F是脾细胞转移后48小时的细胞计数直方图：用OT-1LAIR-2Fc处理的脾脏中标记的细胞(在CD45.1+细胞上门控)(宿主细胞是CD45.2)的评估。图14G是对于用Fc处理的小鼠(左列)和用LAIR-2Fc处理的小鼠(右列)，计算为特异性裂解％＝[1-(无OT-I控制比例)/实验比例)]x 100的特异性裂解％的条形图。
图15A是在第0天注射5e6ID8-OVA肿瘤细胞腹膜内注射(ip)的处理模型的图。在肿瘤后3周腹膜内注射OT-IT细胞。用200ug的LAIR-2Fc或对照Fc处理在T细胞转移后一天并且每4天开始，总计5个剂量。图15B是重量增加(肿瘤负荷)对比ID8.OVA接种后天数的线图；对照(○)；LAIR-2Fc(●)。图15C是存活百分比对比ID8.OVA接种后天数的线图。对照(虚线)，LAIR-2Fc(实线)。
图16是在注射ID8-OVA肿瘤细胞并在T细胞转移后一天和每4天开始用200ug的LAIR-2Fc或对照Fc处理持续总计5个剂量或用所指示处理进行处理的小鼠中，存活对比ID8.OVA接种后天数的线图。数据示出LAIR-2Fc与抗PD-1是卵巢癌中的有效组合免疫疗法。(□)顺铂、(△)顺铂+LAIR-2Fc、(○)抗-PD-1+LAIR-2Fc、抗-PD-1、(◇)LAIR-2Fc、(六边形)对照IgG。
图17A是使用LAIR-2Fc的示例性淋巴瘤治疗方案的图。图17B是用对照Fc(○)或LAIR-2Fc(□)处理的小鼠中肿瘤体积对比肿瘤接种后天数的线图。图17C是用对照Fc(虚线)或LAIR-2Fc(实线)处理的小鼠中存活百分比对比肿瘤接种后天数的线图。
图18是所指示(单克隆抗体)mAb与(对于每组从左至右)以下细胞系的结合的阳性百分比的条形图：HL-60(LAIR-1+)、MV-4-11(LAIR-1+)K562-LAIR-1转染的)和U266B1(阴性对照)。
图19是所指示mAb的吸光度(450nm)的条形图，其示出LAIR-1Fc与I型和III型胶原的结合的阻断或增强。对于每种mAb，I型胶原是左列，并且III型胶原是右列。
图20是用于结合至C1q和SP-D的所指示mAb的吸光度(450nm)的条形图。每组的左列是C1q，并且右列是SP-D。
图21是示出LAIR-1嵌合mAb表位分区测定的结果的表。加单下划线的抗体显示无阻断。加双下划线的抗体显示阻断。由于结合饱和，结合同一表位的mAb与LAIR-1Fc的结合将受到阻断，如在使用相同mAb作为第一和第二mAb时可观察到的(未加下划线，点刻的背景)。
图22是LAIR-1嵌合mAb分区图的图。此图示出存在mAb的显著重叠，而许多占据LAIR-1分子上的不同位点。
图23是示出使用Octet RED96仪器(ForteBio)进行的所指示的LAIR-1mAb的最佳亲和力评估的表。
图24A是所指示的LAIR-1mAb的IRF诱导–RLU的条形图，其示出当将所述mAb包被至板时，THP-1细胞中干扰素报告基因活性的差异诱导。图24B是所指示的LAIR-1mAb的IRF诱导–RLU的条形图，其示出当以可溶性蛋白质形式添加所述mAb时，THP-1细胞中干扰素报告基因活性的差异诱导。
图25A是所指示的mAb的NFAT诱导–RLU的条形图，其示出当用抗CD3(00.5μg/ml的OKT3)包被板时，Jurkat T细胞报告基因活性的诱导。在抽吸OKT3后，将LAIR-1mAb或LAIR-2Fc和对照Fc以10ug/ml包被24小时。在添加Jurkat T细胞NFAT-Lucia途径报告细胞(Invivogen)之前，吸出未结合的蛋白质。将Jurkat T细胞以50,000个细胞/孔按200ul总体积接种。在48小时时，取出10ul上清液并转移至单独的板中。根据方案添加Quanti-Luc(Inivivogen)。使用Perkin Elmer Envision板读数器评估发光。图25B是所指示的mAb的NFAT诱导–RLU的条形图，其示出当LAIR-1mAb、LAIR-2Fc和对照Fc以可溶性形式添加时，Jurkat T细胞报告基因活性的诱导(如图25a中)。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，如果这种结合表现出抗体与其同源抗原的特异性和亲和力，则称分子能够“免疫特异性地结合”第二分子。如果这种结合涉及免疫球蛋白分子的抗原识别位点，则称抗体能够免疫特异性地结合至抗原的靶区或构象(“表位”)。如果另一种抗原具有如通过例如免疫测定、测定或本领域中已知的其他测定确定的抗原识别位点识别的一些序列或构象相似性，则免疫特异性地结合至特定抗原的抗体可以较低亲和力结合至其他抗原，但不会结合至完全不相关的抗原。然而，在一些实施方案中，抗体(以及其抗原结合片段)将不会与其他抗原交叉反应。凭借分子的其他区域/结构域中不涉及抗原识别位点的结构域(如Fc区)，抗体也可以非免疫特异性的方式结合至其他分子，如结合至FcR受体。
如本文所用，如果这种结合表现出受体与其同源结合配体的特异性和亲和力，则称分子“生理特异性地结合”第二分子。分子可能能够生理特异性地结合至多于一种其他分子。
如本文使用，术语“抗体”意图表示具有“可变区”抗原识别位点的免疫球蛋白分子。术语“可变区”意图将免疫球蛋白的这种结构域与抗体所广泛共享的结构域(如抗体Fc结构域)区分开。可变区包括“高变区”，其残基负责抗原结合。高变区包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(即，通常在轻链可变结构域中的大约残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)处以及重链可变结构域中的大约残基27-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处；Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(即，轻链可变结构域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重链可变结构域中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-917)。“框架区”或“FR”残基是除如本文定义的高变区残基外的那些可变结构域残基。术语抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、骆驼化抗体(参见例如，Muyldermans等人,2001,Trends Biochem.Sci.26:230；Nuttall等人,2000,Cur.Pharm.Biotech.1:253；Reichmann和Muyldermans,1999,J.Immunol.Meth.231:25；国际公布号WO94/04678和WO 94/25591；美国专利号6,005,079)、单链Fv(scFv)(参见例如，参见Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994))、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、胞内抗体和抗独特型(抗Id)抗体(包括例如，针对抗体的抗Id和抗-抗Id抗体)。特别地，此类抗体包括任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个部分，所述一个或多个部分含有抗体的互补决定区(“CDR”)和任选的包含抗体的“可变区”抗原识别位点的框架残基并且表现出免疫特异性地结合抗原的能力。此类片段包括Fab'、F(ab')2、Fv、单链(ScFv)及其突变体、天然存在的变体以及包含抗体的“可变区”抗原识别位点和异源蛋白(例如，毒素、不同抗原的抗原识别位点、酶、受体或受体配体等)的融合蛋白。
如本文所用，术语“片段”是指包含至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列的肽或多肽。
如本文所用，术语“调节”涉及改变作用、结果或活性(例如，信号转导)的能力。这种调节可以是激动性的或拮抗性的。拮抗性调节可以是部分的(即，减弱但不消除)，或者它可完全消除这种活性(例如，中和)。调节可包括抗体结合后受体的内化或靶细胞上受体的表达降低。激动性调节可增强或以其他方式增加或增强活性(例如，信号转导)。在另一个实施方案中，这种调节可改变配体与其同源受体之间的相互作用的性质，以便改变引发的信号转导的性质。例如，通过与配体或受体结合，分子可改变此类分子与其他配体或受体结合的能力，并且由此改变它们的整体活性。在一些实施方案中，这种调节将提供可测量的免疫系统活性的至少10％的变化、这种活性的至少50％的变化或这种活性的至少2倍、5倍、10倍或至少100倍的变化。
在结合或表现出作用的上下文中使用的术语“基本上”意图表示所观察到的作用是生理学上或治疗上相关的。因此，例如，如果阻断的程度是生理学上或治疗上相关的(例如如果这种程度大于60％完全、大于70％完全、大于75％完全、大于80％完全、大于85％完全、大于90％完全、大于95％完全或大于97％完全)，则分子能够基本上阻断配体或受体的活性。类似地，如果此类免疫特异性和特征大于60％相同、大于70％相同、大于75％相同、大于80％相同、大于85％相同、大于90％相同、大于95％相同或大于97％相同)，则称分子具有与另一分子基本上相同的免疫特异性和/或特征。
如本文所用，“共刺激”信号涵盖阳性共刺激信号(例如，导致增强活性的信号)和阴性共刺激信号(例如，导致抑制活性的信号)。
术语“衍生物”是指抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段免疫特异性地结合至亲本或参考抗体的相同靶标，但其氨基酸序列不同于亲本或参考抗体或其抗原结合片段，包括相对于亲本或参考抗体或其抗原结合片段的一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代、添加、缺失或修饰。在一些实施方案中，此类衍生物将具有与亲本或参考抗体或其抗原结合片段基本上相同的免疫特异性和/或特征，或相同的免疫特异性和特征。此类衍生物的氨基酸取代或添加可包括天然存在的(即，DNA编码的)或非天然存在的氨基酸残基。术语“衍生物”涵盖，例如，嵌合或人源化变体以及具有改变的CH1、铰链、CH2、CH3或CH4区以便形成例如抗体等的变体，所述变体具有表现出增强的或受损的效应子或结合特征的变体Fc区。
如本文所用，“嵌合抗体”是抗体的不同部分来源于不同免疫球蛋白分子的分子，所述不同的免疫球蛋白分子如具有来源于非人抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指包含人框架区和来自非人(通常是小鼠或大鼠)免疫球蛋白的一个或多个CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”，并且提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。恒定区不需要存在，但是如果它们存在，则它们应与人免疫球蛋白恒定区基本上相同，即至少约85％-99％或约95％或更多相同。因此，除可能的CDR外，人源化免疫球蛋白的所有部分都与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本上相同。人源化抗体是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。例如，人源化抗体将不涵盖典型的嵌合抗体，因为例如嵌合抗体的整个可变区是非人的。
术语“内源性浓度”是指细胞(所述细胞可以是正常细胞、癌细胞或受感染的细胞)天然表达(即，在不存在表达载体或重组启动子的情况下)分子的水平。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”和“治疗性用途”是指消除、减轻或改善疾病或病症的一种或多种症状。如本文所用，“治疗有效量”是指足以介导此类症状的临床上相关的消除、减轻或改善的治疗剂的量。如果其强度足以影响受者受试者的健康或预后，则作用是临床上相关的。治疗有效量可指足以延迟或最小化疾病发作(例如延迟或最小化癌症的扩散)的治疗剂的量。治疗有效量还可以是指在疾病的治疗或控制中提供治疗益处的治疗剂的量。
如本文所用，术语“预防剂”是指可在检测到病症或疾病的任何症状之前用于预防这种病症或疾病的剂。“预防有效”量是足以介导这种保护的预防剂的量。预防有效量还可指在疾病的预防中提供预防益处的预防剂的量。
如本文所用，术语“癌症”是指由细胞的异常不受控制的生长产生的赘生物或肿瘤。如本文所用，癌症明确地包括白血病和淋巴瘤。术语“癌症”是指涉及具有转移至远端部位并且表现出与非癌细胞的表型性状不同的表型性状(例如在诸如软琼脂的三维基质中形成集落或者在三维基底膜或细胞外基质制剂中形成管状网络或网状基质)的细胞的疾病。非癌细胞不在软琼脂中形成集落并且在三维基底膜或细胞外基质制剂中形成不同的球状结构。
如本文所用，“免疫细胞”是指来自造血来源的任何细胞，包括但不局限于T细胞、B细胞、单核细胞、树突细胞以及巨噬细胞。
如本文所用，“炎症分子”是指产生炎症应答的分子，包括但不限于细胞因子以及金属蛋白酶，如包括但不限于IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-18、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。
如本文所用，“效价”是指每个分子可利用的结合位点的数量。
如本文所用，术语“免疫性(immunologic)”、“免疫学(immunological)”或“免疫(immune)”应答是在受者患者体内针对肽的有益的体液性(抗体介导的)和/或细胞性(由抗原特异性T细胞或其分泌产物介导的)应答的发展。这种应答可以是通过施用免疫原而诱导的主动应答或通过施用抗体或致敏T-细胞而诱导的被动应答。细胞免疫应答通过结合I类或II类MHC分子来呈递多肽表位以便活化抗原特异性CD4+T辅助细胞和/或CD8+细胞毒性T细胞来引发。所述应答还可涉及单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、嗜碱性粒细胞、树突细胞、星形细胞、小神经胶质细胞、嗜酸性粒细胞的活化、嗜中性粒细胞或先天性免疫的其他组分的活化或募集。细胞介导的免疫应答的存在可通过增殖测定(CD4+T细胞)或CTL(细胞毒性T淋巴细胞)测定来确定。体液和细胞应答对于免疫原的保护或治疗作用的相对贡献可通过单独地将抗体以及T-细胞从免疫接种的同系动物中分离并且测量在第二受试者中的保护或治疗作用来区分。
“免疫剂”或“免疫原”能够在任选地结合佐剂来施用至哺乳动物时诱导针对本身的免疫应答。
如本文所用，术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指哺乳动物，包括但不限于人、啮齿动物(如小鼠和大鼠)以及其他实验动物。
如本文所用，术语“多肽”是指具有任何长度的氨基酸链，而无论是否修饰(例如，磷酸化或糖基化)。术语多肽包括蛋白质及其片段。多肽可以是“外源的”，意味着它们是“异源的”，即对所利用的宿主细胞是外来的，如由细菌细胞产生的人多肽。本文公开了多肽作为氨基酸残基序列。这些序列在从氨基末端至羧基末端的方向上从左至右书写。根据标准命名法，氨基酸残基序列由三字母或单字母代码命名，如下所示：丙氨酸(Ala，A)、精氨酸(Arg，R)、天冬酰胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、谷氨酰胺(Gln、Q)、谷氨酸(Glu，E)、甘氨酸(Gly，G)、组氨酸(His，H)、异亮氨酸(Ile，I)、亮氨酸(Leu，L)、赖氨酸(Lys，K)、甲硫氨酸(Met，M)、苯丙氨酸(Phe，F)、脯氨酸(Pro，P)、丝氨酸(Ser，S)、苏氨酸(Thr，T)、色氨酸(Trp，W)、酪氨酸(Tyr，Y)以及缬氨酸(Val，V)。
如本文所用，术语“变体”是指不同于一种或多种参考多肽、但保留必要特性的一种或多种多肽。多肽的典型变体与另一个参考多肽在氨基酸序列上不同。一般来说，差异是受限的，以使得参考多肽和变体的序列总体上是紧密类似的并且在许多区中是相同的。变体和参考多肽可通过一种或多种修饰(例如，取代、添加和/或缺失)而在氨基酸序列上不同。取代或插入的氨基酸残基可以是或可以不是被遗传密码编码的氨基酸残基。多肽的变体可以是天然存在的，诸如等位基因变体，或者它可以是未知为天然存在的变体。
可在本公开的多肽的结构中进行修饰和变化，并且仍然获得具有与所述多肽相似的特征(例如，保守性氨基酸取代)的分子。例如，某些氨基酸可被取代成序列中的其他氨基酸而无明显的活性丧失。因为正是多肽的相互作用能力和性质决定了多肽的生物学功能活性，所以可在多肽序列中进行某些氨基酸序列取代，然而获得具有相似性质的多肽。
在做出此类改变时，可考虑氨基酸的亲水性指数。本领域中通常了解亲水性氨基酸指数在赋予多肽相互作用性生物功能方面的重要性。已知某些氨基酸可被取代成具有类似亲水性指数或分数的其他氨基酸且仍然产生具有类似生物活性的多肽。已基于各氨基酸的疏水性和电荷特征对它指定亲水性指数。那些指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；以及精氨酸(-4.5)。
据信，氨基酸的相对亲水特性决定所得多肽的次级结构，其进而限定多肽与其他分子(如酶、底物、受体、抗体、抗原和辅因子)的相互作用。本领域中已知氨基酸可被具有类似亲水性指数或分数的其他氨基酸取代且仍然获得功能上等效的多肽。在此类变化中，其亲水性指数在±2内的氨基酸的取代是优选的，在±1内的那些是特别优选的，并且在±0.5内的那些是甚至更优选的。
类似氨基酸的取代也可基于亲水性进行，特别是在由此产生的生物功能等效多肽或肽意图用于免疫学实施方案的情况下。以下亲水性值已指定给氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；脯氨酸(-0.5±1)；苏氨酸(-0.4)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。应理解，氨基酸可被取代成具有相似亲水性值的另一种氨基酸，并且仍然获得生物学上等效的且特别是免疫学上等效的多肽。在此类变化中，其亲水性值在±2内的氨基酸的取代是优选的，在±1内的那些是特别优选的，并且在±0.5内的那些是甚至更优选的。
如上所述，氨基酸取代通常是基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑到各种前述特征的示例性取代是本领域技术人员熟知的并且包括(原始残基：示例性取代)：(Ala:Gly、Ser)、(Arg：Lys)、(Asn：Gln、His)、(Asp：Glu、Cys、Ser)、(Gln：Asn)、(Glu：Asp)、(Gly：Ala)、(His：Asn、Gln)、(Ile：Leu、Val)、(Leu：Ile、Val)、(Lys：Arg)、(Met：Leu、Tyr)、(Ser：Thr)、(Thr：Ser)、(Tip：Tyr)、(Tyr：Trp、Phe)以及(Val：Ile,Leu)。因此，本公开的实施方案考虑了如上所述的多肽的功能或生物学等效物。特别地，多肽的实施方案可包括与目标多肽具有约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的变体。
术语“序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并且在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比之后，候选序列中与参考核酸序列中的核苷酸或氨基酸相同的核苷酸或氨基酸的百分比。用于确定序列同一性百分比的目的的比对可以本领域技术范围内的各种方式实现，所述方式例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。用于测量比对的适当参数(包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法)可通过已知的方法来确定。
出于本文的目的，给定核苷酸或氨基酸序列C对于、与或针对给定核酸序列D的序列同一性％(其可替代地措词为给定序列C具有或包含对于、与或针对给定序列D的某一序列同一性％)如下计算：
100×分数W/Z，
其中W是通过序列比对程序在所述程序的C和D的比对中评分为相同匹配的核苷酸或氨基酸的数目，并且其中Z是D中的核苷酸或氨基酸的总数。应理解，当序列C的长度不等于序列D的长度，C与D的序列同一性％将不等于D与C的序列同一性％。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”涵盖任何标准的药物载体，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液(如油/水或水油型乳液)以及各种类型的润湿剂。
II.组合物
提供了LAIR结合部分，所述LAIR结合部分可用于调节通过LAIR蛋白的信号转导。图4示出免疫功能和稳态的LAIR调控。图5示出LAIR-1mAb和LAIR-2Fc如何可用作治疗剂。
A.LAIR多肽
公开了LAIR-1和LAIR-2多肽。所述多肽可包含全长LAIR-1或LAIR-2蛋白、或其片段或变体、或其融合蛋白的氨基酸序列。
LAIR-1是一种抑制性细胞表面受体，其在许多免疫细胞上表达并且通过两个细胞质基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)发挥抑制信号传导(Verbrugge等人,2006)(图4)。人和非人灵长类动物(而不是小鼠)基因组编码LAIR-2基因，所述LAIR-2基因是LAIR-1的可溶性同源物(Sun等人，2014)。LAIR-2缺乏跨膜结构域和细胞质结构域，但与LAIR-1结合相同的配体，并且因此可充当诱饵以减少通过LAIR-1的抑制信号(Meyaard，2008)。LAIR-1和LAIR-2与多种胶原相互作用，包括I型和III型纤维状胶原以及跨膜胶原13、17和23，但由于识别规范的Gly-Pro-Hyp羟脯氨酸重复序列，也可在不同程度上结合其他胶原(Meyaard，2008)。LAIR-1和LAIR-2还结合至补体组分C1q、表面活性蛋白D(SP-D)和甘露糖结合凝集素(MBL)。这些分子与白细胞质膜上的LAIR-1的交联诱导抑制免疫细胞成熟、增殖和脱粒的负性信号传导(Lebbink等人，2009)，Meyaard，(2008))。
LAIR-1抑制性信号传导可预防自身免疫性疾病，如红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺疾病和动脉粥样硬化以及接触性超敏反应(Sun等人,2014)。同时，LAIR-2的过表达可通过LAIR-1配体的诱饵结合促进自身免疫性。LAIR-1配体的LAIR-2结合可基本上减少LAIR-1的细胞表面交联，从而限定导致过反应性免疫功能的抑制性信号传导途径。相反，假设增加的LAIR-2水平可通过相同的机制促进抗肿瘤免疫。
慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞上LAIR-1的表达降低与疾病增加相关(Poggi等人,2008；Perbellini等人,2014)。相反，研究表明，急性骨髓性白血病(AML)上LAIR-1的表达增加通过维持干细胞样状态以及预防分化和细胞凋亡来促进AML存活(Kang等人，2015)。为支持这一观点，其他研究也表明LAIR-1在AML和急性成淋巴细胞性白血病(ALL)癌症中增加(Mirkowska等人,Blood,2013；Chen等人,Nature,2015；Zhang等人,综述于life.sciechina.com,2015中)。LAIR-1还已显示在上皮性卵巢癌细胞和其他人肿瘤上表达，但是在实体瘤上表达的LAIR-1的功能仍不清楚(Meyaard等人,1997；Cao等人,2015)。
肿瘤微环境通常富含细胞外基质蛋白(ECM)，包括胶原(Rygiel等人，2011)。因此，可通过Lair-1的胶原交联和随后的抑制性信号传导特别地抑制定位于肿瘤微环境的表达LAIR-1的细胞。令人感兴趣的是，胶原和C1q两者均已显示限制或改变通过LAIR-1的抗原呈递细胞(单核细胞/巨噬细胞/DC)分化和活化。研究表明，在NK细胞上交联Lair-1，T细胞可抑制增殖和功能。然而，LAIR-1在调控抗肿瘤免疫中的作用需要进一步研究。
总之，关于LAIR-1的累积数据表明在免疫调节中的重要作用。然而，LAIR-1在鼠类和人细胞上的差异表达以及LAIR-2在人中的存在、但在小鼠中不存在已经表明小鼠研究可能不能指示人中LAIR-1/LAIR-的功能。然而，假设由于LAIR-2的存在，人系统可能更容易在治疗上利用。换句话说，LAIR-2可在治疗上用于调节人体中的LAIR-1功能，这在鼠类系统中是不可能的。因此，LAIR-2Fc诱饵蛋白或阻断(拮抗剂)LAIR-1mAb可有效用于癌症免疫疗法，以通过阻止通过细胞表面LAIR-1的信号传导来增强免疫功能(图5)。相反，激动剂LAIR-1mAb或mAb对LAIR-2的阻断可用于治疗自身免疫性疾病，因为这将基本上增加通过LAIR-1的信号传导，从而下调免疫应答。
1.LAIR-1
提供了LAIR-1的序列。在一些实施方案中，前导甲硫氨酸氨基酸以蛋白质的翻译后形式裂解。
a.人LAIR-1
人LAIR-1的序列是本领域中已知的。例如，LAIR-1a(同种型1)的共有序列是
(SEQ ID NO:1，UniProtKB-Q6GTX8(LAIR1_人))，其中氨基酸1-21是信号序列，氨基酸22-165(加下划线)是细胞外结构域，氨基酸166-186是跨膜结构域，并且氨基酸187-287是细胞质结构域。氨基酸29-117形成Ig样C2-结构域。氨基酸249-254和279-284分别形成ITIM基序1和2。LAIR-1b(也称为同种型2)相对于SEQ ID NO:1缺失氨基酸122-138。LAIR-1c(也称为同种型3)相对于SEQ ID NO:1缺失氨基酸23-23和122-138。LAIR-1d(也称为同种型4)相对于SEQ ID NO:1缺失氨基酸210-287。
如上所述，人LAIR-1的细胞外结构域可以是
(SEQ ID NO:2)或其片段，例如，Ig样C2-结构域(SEQ ID NO:2的加下划线的氨基酸8-96)，或由在SEQ ID NO:1的氨基酸49-101(SEQ ID NO:2的氨基酸28-80，以斜体示出)之间形成二硫键的半胱氨酸框住的区域。
LAIR-1的已知变体和突变体包括相对于SEQ ID NO:1的E63D、Y251F和Y251F。有证据表明，当与F-281缔合时，Y215F减少酪氨酸磷酸化和与PTPN6和CSK结合的丧失以及抑制活性的完全丧失、以及磷酸化的丧失和钙动员的抑制(Xu等人,J.Biol.Chem.275:17440-17446(2000)；Verbrugge等人,Int.Immunol.,15:1349-1358(2003)；Verbrugge等人,Eur.J.Immunol.,36:190-198(2006))。Y281F显示减少的酪氨酸磷酸化和与PTPN6的结合的丧失，以及细胞毒活性的部分抑制。
Meyaard,2008,J.Leukoc.Biol.83:799-803表明LAIR-1在人免疫细胞上广泛表达。在研究论文中对实际流式细胞术表达数据的检查表明，LAIR-1在骨髓谱系细胞如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞上的表达远高于T细胞和NK细胞上(Meyaard等人,1997,Immunity7:283-290)。然而，B细胞在分化过程中差异地表达高水平的LAIR-1(van derVuurst de Vries等人,1999,Eur.J.Immunol.29:3160-3167)。还发现LAIR-1在急性骨髓性白血病细胞、急性成淋巴细胞性白血病细胞和慢性淋巴细胞性白血病细胞上表达(van derVuurst de Vries等人,1999,Eur.J.Immunol.29:3160-3167；Poggi等人,2000,Eur.J.Immunol.30:2751-2758；Zocchi等人,2001,Eur.J.Immunol.31:3667-3675；Perbellini等人,2014,Haematologica,99:881-887；(Kang等人,2015,Nat.Cell Biol.17:665-677)。最后，LAIR-1显示在若干人肿瘤细胞系上表达(Meyaard等人,1997,Immunity 7:283-290；Cao等人,2015,Biochem.Biophys,Res.Commun.458:399-404；(Kang等人,2015,Nat.Cell Biol.17:665-677)。
在人和小鼠中，LAIR-1以高亲和力结合几种类型的胶原(Meyaard,2008,J.Leukoc.Biol.83:799-803和Meyaard,2010,Immunol.Lett.128:26-28)。在人中，LAIR-1也已显示结合补体组分C1q(Son等人,2012,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 109:E3160-3167)和C型胶原凝集素表面活性蛋白质-D(SP-D)，其是在肺对微生物和抗原激发的先天免疫应答中起重要作用的胶原碳水化合物结合糖蛋白(胶原凝集素)(Olde Nordkamp等人,2014,J.Leukoc.Biol.96:105-111)。尚未检查鼠LAIR-1结合C1q和SP-D的能力。
系统性红斑狼疮(SLE)是一种原型性自身免疫性疾病，其特征在于免疫耐受性丧失。C1q的免疫抑制作用得到高百分比的发展SLE的C1q缺陷型个体的支持。Son博士和她的Feinstein研究所合作者Betty Diamond博士、Frances Santiago-Schwarz博士和YousefAl-Abed博士已经证明C1q是LAIR-1的功能性配体，其被称为通用胶原受体。他们已经进一步证明C1q通过经由LAIR-1的接合来抑制单核细胞至DC分化和pDC活化而促进耐受性(Son和Diamond,Mol.Med.,2015,20:559-568；Son等人,PNAS,109(46):E3160-3167)。这一发现对狼疮领域具有很大影响，因为这些发现阐明了补体系统调控耐受性和预防自身免疫性疾病(如狼疮)的机制。
所有胶原由3条多肽链组成，所述多肽链的特征在于重复Gly-X-X'序列，其中X通常是脯氨酸，并且X'经常是4-R-羟基脯氨酸(Hyp，O)(Brondijk,Blood,115(7):1364-1373(2010)。GPO三联体几乎是胶原的独有特征，并且允许形成特征性三螺旋胶原结构。
已知的免疫球蛋白超家族胶原受体LAIR-1、GPVI和OSCAR的胞外结构域由1或2个免疫球蛋白样结构域组成。尽管GPVI和LAIR-1在功能上不同，但它们的胶原结合特性相似。然而，如Zhou等人,Blood,127(5):529-537(2016)中所论述的，尽管它们具有结构同质性，但所述三种蛋白质具有非常不同的胶原识别位点。GPVI与具有序列富含甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸(GPO)的III型胶原束(GPO)10的模型胶原相关肽和一些含有1或2个GPO三联体的Toolkit肽(III-1、III-30和III-40)最强地结合(Jarvis等人,Blood,111(10):4986-4996(2008))。LAIR-1还显示对III-30和一子组富含氨基酸的肽具有高亲和力，但不太紧密地结合III-1和胶原相关肽(Lebbink等人,Matrix Biol.,28(4):202-210(2009))。
诱变和核磁共振滴定指示LAIR-1的膜远端区域上的一组残基，所述残基与模型三螺旋肽(THP)接触，从而驻留于由链C、C9、F和FG环组成的沟中。(Brondijk,Blood,115(7):1364-1373(2010)，其明确地以引用的方式整体并入)。例如，与固定的I型、III型和IV型胶原的粘附在R59A、E61A、R65A和E111A突变体中显著降低，尽管影响的幅度取决于所测试的胶原的类型。此外，对于突变体R62A和N69A，粘附略微降低，所述突变体在流式细胞术测定中显示接近野生型胶原结合。Brondijk等人报告，LAIR-1残基E61、S66、Y68、I102、W109和Y115提供范德华相互作用，而与配体的氢键通常涉及LAIR-1残基R59、E63、R100、E111和Q112，并且得出结论，R59、E61以及还有W109构成胶原结合位点的核心，而更多的外周残基如E111对结合的贡献较小(残基参考例如，SEQ ID NO:1)。
b.小鼠LAIR-1
小鼠LAIR-1(mLAIR-1)的序列是本领域中已知的。例如，mLAIR-1a(同种型1)的共有序列是
(SEQ ID NO:3，UniProtKB-Q8BG84(LAIR1_小鼠))，其中氨基酸1-21是信号序列，氨基酸22-144(加下划线)是细胞外结构域，氨基酸145-165是跨膜结构域，并且氨基酸166-263是细胞质结构域。氨基酸27-115形成Ig样C2-结构域。氨基酸226-231和255-260分别形成ITIM基序1和2。mLAIR-1b(也称为同种型2)相对于SEQ ID NO:3缺失氨基酸124-133。同种型3具有被ELCLWFLLYPWATLELIMCTWDAWKETLEYFL(SEQ ID NO:8)置换的氨基酸25-56[SEQID NO:3的SLPDITIFPNSSLMISQGTFVTVVCSYSDKHD(SEQ ID NO:7))]并且相对于SEQ ID NO:3缺失氨基酸57-263。mLAIR-1d(也称为同种型5)相对于SEQ ID NO:3缺失氨基酸24-172。mLAIR-1e(也称为同种型6)缺失氨基酸134-172。
如上所述，鼠LAIR-1的细胞外结构域可以是
(SEQ ID NO:4)或其片段，例如，Ig样C2-结构域(SEQ ID NO:4的加下划线的氨基酸6-94)，或由在SEQ ID NO:3的氨基酸49-99(SEQ ID NO:4的氨基酸28-78，以斜体示出)之间形成二硫键的半胱氨酸框住的区域。人和小鼠细胞外结构域的示例性比对如下所示：
查询1是SEQ ID NO:2，并且Sbjct是SEQ ID NO:4。
LAIR-1的已知变体和突变体包括相对于SEQ ID NO:3的在氨基酸位置143-145处的IYI→MYM、V149G、L154P和H263R。
Meyaard(2008,J.Leukoc.Biol.83:799-803)指示LAIR-1在小鼠免疫细胞上的广泛表达，一个主要差异是LAIR-1在B细胞上显示为阴性，与在人B细胞亚群上高度表达形成对照。与人表达模式一样，在检查LAIR-1表达的实际流式细胞术数据时，据发现再次，LAIR-1在单核细胞、巨噬细胞和DC上高度表达，而T细胞、NK细胞和Gr-1+细胞以相对较低的水平表达LAIR-1(Lebbink等人,2007Int.Immunol.19:1011-1019；Tang等人,2012,J.Immunol.188:548-558)。
Tang等人(2012,J.Immunol.188:548-558)研究了LAIR-1缺陷型小鼠的表型。KO小鼠是健康和可育的，并且显示免疫功能改变的迹象，但没有在CTLA-4KO小鼠中观察到的总体自身免疫性或炎症。LAIR-1KO小鼠具有增加的树突细胞、脾B细胞和调控性T细胞的数量，以及较高频率的活化和记忆T细胞，从而表明增强的T细胞反应性。然而，在LAIR-1wt和KO小鼠的EAE和结肠炎疾病模型没有差异。这些疾病模型对于研究LAIR-1KO表型可能不是最佳的，并且未进行LAIR-1缺陷型免疫细胞亚群的体外功能研究。还推测LAIR-1KO小鼠可能由于差异表达和人中可溶性LAIR-2的存在而不能指示LAIR-1在人中的作用。鼠和人内脏器官中LAIR-1遗传途径之间的差异
在Sun等人,Gene,552:14-145(2014)中进行了论述，并且可在利用小鼠模型设计和评价实验时考虑在内。
2.LAIR-2
提供了LAIR-2及其融合蛋白的序列。在一些实施方案中，前导甲硫氨酸氨基酸以蛋白质的翻译后形式裂解。
人LAIR-2的序列是本领域中已知的。例如，LAIR-2a(同种型1)的共有序列是
(SEQ ID NO:5，UniProtKB-Q6ISS4(LAIR2_人))，其中氨基酸1-21是信号序列，氨基酸22-152(加下划线)是白细胞相关的免疫球蛋白样受体2结构域。氨基酸29-117形成Ig样C2-结构域。LAIR-2b(也称为同种型2)相对于SEQ ID NO:5缺失氨基酸122-138。
如上所述，人LAIR-2的白细胞相关的免疫球蛋白样受体2结构域可以是
(SEQ ID NO:6)或其片段，例如，Ig样C2-结构域(SEQ ID NO:6的加下划线的氨基酸8-96)，或由在SEQ ID NO:1的氨基酸49-101(SEQ ID NO:6的氨基酸28-80，以斜体示出)之间形成二硫键的半胱氨酸框住的区域。
LAIR-2的已知变体和突变体包括相对于SEQ ID NO:5的G78S、H87R和F115Y。
已经显示人中的LAIR-2以比LAIR-1更高的亲和力结合胶原和SP-D(Meyaard,2008,J.Leukoc.Biol.83:799-803)。Linde Meyaard博士已经证明LAIR-2还结合C1q和甘露糖结合凝集素(MBL)，两者都含有胶原样结构域(Olde Nordkamp等人,J.Innate Immun.,2014,6(3):284-92)。这一发现证实Son等人的证据，即LAIR-2结合C1q(Son等人,2012,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 109:E3160-3167)。虽然胶原和C1q普遍表达，但SP-D主要限于粘膜表面(肺泡表面和胃肠道)，其中它充当针对病原体的一线先天防御(Herias等人,2007,Mol.Immunol.44:3324-3332)。
人LAIR-1和人LAIR-2细胞外结构域的示例性比对如下所示：
查询是SEQ ID NO:2，并且Sbjct是SEQ ID NO:6。
B.免疫调节剂
提供了免疫调节剂，包括LAIR-1的激动剂和拮抗剂以及LAIR-2的拮抗剂。LAIR-1的激动剂通常诱导、加强或活化LAIR-1负性信号传导。LAIR-1的拮抗剂通常预防、减少或阻断LAIR-1负性信号传导。LAIR-2的拮抗剂通常降低或阻止LAIR-2结合其配体(包括LAIR-1和LAIR-2所共有的配体)的能力。所述组合物和方法可用于调节例如包括抗原呈递细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞或树突细胞)、T细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞或它们的组合的骨髓细胞上的LAIR-1负性信号传导。在一些实施方案中，使所述组合物特异性地靶向一种或多种细胞类型。可以是LAIR-1的激动剂或拮抗剂和LAIR-2的拮抗剂的示例性分子在下文更详细地论述。
在一些实施方案中，LAIR-1拮抗剂(包括抗LAIR-1功能阻断性抗体)结合或以其他方式干扰LAIR-1的胶原结合结构域、C1q结合结构域、SP-D结合结构域或它们的组合。例如，在一些实施方案中，LAIR-1拮抗剂结合至、阻断LAIR-1残基R59、E61、R62、E63、R65、S66、Y68、N69、I102、R100、W109、E111、Q112和Y115或前述中任一者的任何组合，产生所述残基的构象变化或以其他方式干扰所述残基。在一些实施方案中，LAIR-1功能阻断性抗体或其功能片段特异性地结合至表位，所述表位包括R59、E61、R62、E63、R65、S66、Y68、N69、I102、R100、W109、E111、Q112和Y115(例如，相对于SEQ ID NO:1)中的一种或多种。在一些实施方案中，所述免疫调节剂不会干扰OSCAR结合或活性、GPVI结合或活性或它们的组合。
1.抗体
所述免疫调节剂可以是抗体。合适的抗体是本领域中已知的或可由本领域技术人员制备。LAIR-1和LAIR-2的核酸和多肽序列是本领域中已知的，并且上文提供了示例性蛋白质序列。如下文更详细地论述，本领域技术人员可使用所述序列来制备对LAIR-1或LAIR-2具有特异性的抗体或其抗原结合片段。因此，所述抗体或其抗原结合片段可以是LAIR-1的激动剂或拮抗剂或LAIR-2的拮抗剂。
对LAIR-1或LAIR-2具有特异性的抗体或其抗原结合片段的活性(即，激动剂或拮抗剂)可使用本领域中已知并且包括下文论述的测定的功能测定来确定。通常，所述测定包括确定所述抗体或其抗原结合片段是增加(即，激动剂)还是减少(即，拮抗剂)通过LAIR-1的信号传导。在一些实施方案中，所述测定包括确定所述抗体或其抗原结合片段是减少(即，激动剂)还是增加(即，拮抗剂)由LAIR-1负调控的免疫应答。
在一些实施方案中，所公开的抗体及其抗原结合片段免疫特异性地结合至LAIR-1或LAIR-2(例如，SEQ ID NO:1-6中的任一个)。在一些实施方案中，所述抗体结合至LAIR-1或LAIR-2的细胞外结构域。
例如，提供了可免疫特异性地结合至LAIR-1的分子：
(I)所述LAIR-1排列在细胞(尤其是活细胞)的表面上；
(II)所述LAIR-1以内源性浓度排列在细胞(特别是活细胞)的表面上；
(III)所述LAIR-1排列在活细胞的表面上，并且所述分子调节LAIR-1与其配体之间的结合；
(IV)所述LAIR-1排列在活细胞的表面上，并且所述分子减少或抑制LAIR-1的免疫遏制；
(V)所述LAIR-1排列在活细胞的表面上，并且所述分子诱导或增强LAIR-1的免疫遏制；
(VI)所述LAIR-1排列在活细胞的表面上，其中所述细胞是包括抗原呈递细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞或树突细胞)、T细胞、自然杀伤(NK)细胞或它们的组合的骨髓细胞；
(VII)I-IV与VI的组合；
(VIII)I-III与V-IV的组合；并且
(IX)所述LAIR-1排列在活骨髓细胞或淋巴来源的癌细胞(AML或ALL)的表面上，并且所述分子增强细胞凋亡和分化，从而导致癌症干细胞的自我更新减少。
还提供了可免疫特异性地结合至可溶性内源性LAIR-2的分子。在一些实施方案中，所述分子减少或阻止LAIR-2与其配体结合或以其他方式相互作用。
在一些实施方案中，所述分子能够通过其他机制诱导表达LAIR-1的细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)或细胞凋亡。
为了制备特异性地结合至LAIR-1或LAIR-2的抗体或其抗原结合片段，可使用LAIR-1或LAIR-2的纯化的蛋白质、多肽、片段、融合物或表位，或由其核酸序列表达的多肽。所述抗体或其抗原结合片段可使用本领域中已知的任何合适的方法(如下文更详细论述的那些)来制备。
a.人和人源化抗体
许多非人抗体(例如，源自小鼠、大鼠或兔的那些)在人内天然地具有抗原性，并且因此可在施用至人时产生不合需要的免疫应答。因此，在所述方法中使用人或人源化抗体用来减少施用至人的抗体将产生不合需要的免疫应答的机会。
可使用转基因动物(例如，小鼠)，所述转基因动物在免疫后能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体库。例如，已经描述了在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的纯合子缺失导致完全抑制内源性抗体产生。人种系免疫球蛋白基因阵列在这种种系突变小鼠中的转移将导致在抗原激发后产生人抗体。
任选地，所述抗体在其他物种中产生并且“人源化”以在人中施用。非人(例如鼠)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体抗体的互补决定区(CDR)的残基被来自诸如小鼠、大鼠或兔的非人物种(供体抗体)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换。在一些情况下，所述人免疫球蛋白的FR框架残基被对应的非人残基置换。人源化抗体还可含有既不发现于接受者抗体中也不发现于输入CDR或框架序列中的残基。通常，所述人源化抗体将含有至少一个且通常两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些CDR区且全部或基本全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。所述人源化抗体最佳地还将含有免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。
本领域中熟知用于人源化非人抗体的方法。参见例如Jones,P.T.,等人(1986).Replacing the complementarity-determining regions in a human antibody withthose from a mouse.Nature 321,522–525。总体上，人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。抗体人源化技术总体上涉及使用重组DNA技术来操纵编码抗体分子的一个或多个多肽链的DNA序列。可通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来基本上进行人源化。因此，非人抗体(或其片段)的“人源化”抗体是嵌合抗体或片段，其中基本上小于完整人可变结构域已被来自非人物种的对应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代。
用于制备人源化抗体的人可变结构域轻链与重链的选择对降低抗原性来说是非常重要的。根据“最佳拟合”方法，针对已知的人可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。与啮齿动物的序列最接近的人序列然后被接受作为人源化抗体的人框架(FR)。另一种方法使用源自特定亚组的轻链或重链的全部人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于若干不同的人源化抗体。
还重要的是，抗体被人源化成保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物特性。为实现这一目标，可使用亲本序列和人源化序列的三维模型通过亲本序列和各种概念上人源化产物的分析方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常可用并且是本领域的技术人员熟悉的。示出并显示出所选的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可用的。这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可从共有序列和输入序列中选择并组合FR残基，从而实现所需的抗体特征，诸如增加的对靶抗原的亲和力。通常，CDR残基直接并且最基本地参与影响抗原结合。
所述抗体可与底物结合或用可检测部分标记或者结合并标记。本发明组合物考虑的可检测部分包括荧光标记物、酶标记物和放射性标记物。
b.单链抗体
用于产生单链抗体的方法是本领域技术人员所熟知的。通过使用短肽接头将重链和轻链的可变结构域融合在一起来产生单链抗体，从而在单个分子上重构抗原结合位点。已经开发了单链抗体可变片段(scFv)，其中一个可变结构域的C-末端经由15至25个氨基酸的肽或接头与另一可变结构域的N-末端连接，而没有显著破坏抗原结合或结合的特异性。选择接头以允许重链和轻链以其适当的构象取向结合在一起。这些Fv缺乏天然抗体的重链和轻链中存在的恒定区(Fc)。
c.单价抗体
体外方法也适于制备单价抗体。消化抗体以产生其片段，尤其，Fab片段，可使用在本领域中已知的常规技术来完成。例如，消化可使用木瓜蛋白酶来执行。抗体的木瓜蛋白酶消化通常产生两个相同抗原结合片段，称为Fab片段，其各自具有单一抗原结合部位，和残留Fc片段。胃蛋白酶处理产生片段，称为F(ab’)2片段，其具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原。
在抗体消化中产生的Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于重链结构域的羧基末端处添加几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab’)2片段是二价片段，其包含通过铰链区处的二硫桥键连接的两个Fab'片段。Fab’-SH在本文中表示恒定结构域的半胱氨酸残基携带至少一个游离硫醇基的Fab'。抗体片段最初作为Fab'片段对来产生，在其之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
d.杂合抗体
抗体可以是杂合抗体。在杂合抗体中，一个重链和轻链对与在针对一种表位产生的抗体中发现的重链和轻链对同源，而另一个重链和轻链对与在针对另一种表位产生的抗体中发现的一对同源。这产生多功能效价的性质，即同时结合至少两种不同表位的能力。此类杂合体可通过融合产生对应组分抗体的杂交瘤或通过重组技术形成。当然，此类杂合体也可使用嵌合链形成。
e.抗体片段的缀合物或融合物
抗体的靶向功能可通过将抗体或其片段与治疗剂偶联来治疗性地使用。抗体或片段(例如，免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分)与治疗剂的这种偶联可通过制备免疫缀合物或通过制备融合蛋白来实现，所述免疫缀合物或融合蛋白包含抗体或抗体片段和治疗剂的。
抗体或片段与治疗剂的这种偶联可通过制备免疫缀合物或通过制备融合蛋白，或通过将抗体或片段连接至核酸(如siRNA)来实现，所述缀合物或融合蛋白包含抗体或抗体片段和治疗剂的。
在一些实施方案中，对抗体进行修饰以改变其半衰期。在一些实施方案中，希望增加抗体的半衰期，以使得其在循环中或在治疗部位存在更长的时间段。例如，可能需要将抗体的滴度保持在循环中或待治疗的位置中持续延长的时间段。可使用延长半衰期的Fc变体，例如使用XtendTM抗体半衰期延长技术(Xencor,Monrovia,CA)来工程化抗体。在其他实施方案中，降低抗DNA抗体的半衰期以减少潜在副作用。所公开的缀合物可用于修饰给定生物应答。药物部分不应被解释为限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质或多肽。此类蛋白质可包括，例如，毒素如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素。
f.示例性抗体
一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体由选自由以下组成的组的杂交瘤产生：1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a以及12E10b。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有由选自由以下组成的组的杂交瘤中的一者或多者产生的抗体的至少一条轻链或至少一条重链：1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a和12E10b。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变轻链，所述可变轻链与具有根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的氨基酸序列的可变轻链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变重链，所述可变重链与具有根据SEQ ID NO:23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的氨基酸序列的可变重链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有可变轻链，所述可变轻链与具有根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的氨基酸序列的可变轻链具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及可变重链，所述可变重链与根据SEQ ID NO:23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有互补决定区(CDR)，所述互补决定区选自具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的CDR的组：SEQ ID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-118。
另一个实施方案提供了一种抗LAIR抗体，所述抗LAIR抗体具有选自由以下组成的组的多个CDR：SEQ ID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-117。所述多个CDR可以是2-12。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:124中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:128中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:130中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:132或SEQ ID NO:134中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:136中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种嵌合抗体，所述嵌合抗体具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:138或SEQ ID NO:140中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:142中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
另一个实施方案提供了一种编码抗体的核酸序列，所述抗体具有根据SEQ ID NO:124、130、136或142的轻链氨基酸序列和/或根据SEQ ID NO:120、122、126、128、132、134、138或140的重链氨基酸。
另一个实施方案提供了一种核酸序列，所述核酸序列编码根据SEQ ID NO 19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的可变轻链和/或根据SEQ ID NO 23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的可变重链。编码所述轻链和/或重链的核酸可以是表达载体的一部分。所述核酸可由细胞表达。表达可以是诱导型或组成型的。
2.蛋白质和多肽
a.蛋白质和多肽组合物
免疫调节剂可以是蛋白质、多肽或融合蛋白。例如，免疫调节剂可以是LAIR-1或LAIR-2的分离的或重组的蛋白质或多肽、或其功能片段、变体或融合蛋白。
所述蛋白质或多肽、或其功能片段、变体或融合蛋白可以是激动剂或拮抗剂。例如，在一些实施方案中，LAIR-1的拮抗剂是LAIR-1或LAIR-2多肽或其与LAIR-1的配体结合的片段或融合蛋白。所述多肽可以是可溶性片段，例如LAIR-1或LAIR-2的细胞外结构域、或其功能片段、或其融合蛋白。在一些实施方案中，LAIR-1的可溶性配体可充当激动剂，从而增加通过LAIR-1的信号转导。
LAIR-1或LAIR-2的蛋白质或多肽或其任何片段、变体或融合蛋白的活性(即激动剂或拮抗剂)可使用本领域中已知的功能测定来确定，并且包括下文论述的测定。通常，所述测定包括确定所述蛋白质、多肽或其片段、变体或融合蛋白是增加(即，激动剂)还是减少(即，拮抗剂)通过LAIR-1受体的信号传导。在一些实施方案中，所述测定包括确定所述蛋白质、多肽或其片段、变体或融合蛋白是增加(即，激动剂)还是降低(即，拮抗剂)与LAIR-1相关的免疫应答(即，共刺激或共抑制)。通常，所述测定包括确定所述蛋白质、多肽或其片段、变体或融合蛋白是增加(即，激动剂)还是减少(即，拮抗剂)通过LAIR-1的信号传导。在一些实施方案中，所述测定包括确定所述蛋白质、多肽或其片段、变体或融合蛋白是降低(即，激动剂)还是增加(即，拮抗剂)由LAIR-1负调控的免疫应答。在一些实施方案中，所述测定包括确定所述蛋白质、多肽或其片段、变体或融合蛋白是否增加(即，拮抗剂)导致AML和ALL干细胞的自我更新能力降低的急性骨髓性白血病细胞和急性成淋巴细胞性白血病细胞的凋亡和分化。
LAIR-1和LAIR-2的核酸和多肽序列是本领域中已知的，并且上文提供了示例性蛋白质和肽序列。如下文更详细地论述，本领域技术人员可使用所述序列来制备LAIR-1或LAIR-2的任何蛋白质或多肽或其任何片段、变体或融合蛋白。通常，LAIR-1和LAIR-2的蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物由包含编码信号序列的序列的核酸表达。通常从未成熟多肽裂解信号序列以产生缺乏信号序列的成熟多肽。可使用标准分子生物学技术来将信号序列置换为另一多肽的信号序列，以影响多肽的表达水平、分泌、溶解度或其他性质。公开了具有和不具有信号序列的LAIR-1和LAIR-2。应理解，在一些情况下，本领域中已知或描述的成熟蛋白质(即无信号序列的蛋白质序列)是推定成熟蛋白质。在正常细胞表达期间，可通过细胞肽酶除去信号序列以产生成熟蛋白质。可使用本领域中已知的方法来确定或确认成熟蛋白质的序列。
i.片段
如本文所用，LAIR-1或LAIR-2的片段是指多肽的任何子集，所述多肽比全长蛋白质短至少一个氨基酸。有用的片段包括保留与其一种或多种天然配体结合的能力的片段。与全长蛋白质相比，为任何全长LAIR-1或LAIR-2的片段的多肽通常具有至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、100％或甚至超过100％的分别结合其天然配体的能力。
LAIR-1和LAIR-2的片段包括无细胞片段。无细胞多肽可以是全长、跨膜多肽的片段，所述片段可从产生细胞中脱落、分泌或以其他方式提取。无细胞的多肽片段可包括多肽的一些或全部细胞外结构域，并且缺乏全长蛋白质的一些或全部细胞内和/或跨膜结构域。在一个实施方案中，多肽片段包括全长蛋白质的整个细胞外结构域。在其他实施方案中，多肽的无细胞片段包括保留全长蛋白质的生物活性的细胞外结构域的片段。细胞外结构域可包括来自跨膜结构域的1、2、3、4或5个连续氨基酸，和/或来自信号序列的1、2、3、4或5个连续氨基酸。可替代地，所述细胞外结构域可有1、2、3、4、5个或更多个氨基酸被从C-末端、N-末端或两个末端除去。在一些实施方案中，细胞外结构域是片段的唯一功能结构域(例如，配体结合结构域)。
ii.变体
还提供了LAIR-1和LAIR-2的变体及其片段。在一些实施方案中，所述变体与SEQID NO:1-6中的任一个至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98或99％相同。有用的变体包括如本文描述的任何测定所指示增加生物活性，或增加所述蛋白质的半衰期或稳定性的那些变体。可工程化LAIR-1或LAIR-2的蛋白质和多肽及其片段、变体和融合蛋白以增加生物活性。例如，在一些实施方案中，LAIR-2多肽、蛋白质或其片段、变体或融合物已经用至少一个增加其功能的氨基酸取代、缺失或插入进行修饰。
其他变体是经工程化以相对于其他LAIR-1和/或LAIR-2配体选择性地结合至一种或多种类型的LAIR-1和/或LAIR-2配体的变体。例如，可工程化变体以优先结合至一种或多种胶原、SP-D、C1q或MBL或其特定组合。优先结合是指对于一种类型的配体超过另一种类型的配体至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大的结合。
仍然其他变体可经工程化以便与另一种配体相比与一种配体具有降低的结合。这些变体可与具有更强的结合特性的变体组合使用以便以中度影响来调节免疫应答。
在仍然其他实施方案中，可将变体工程化为相对于其他胶原结合位点具有与一个或多个胶原结合位点的降低的结合。如Brondijk等人,Blood,18(115):1364-73(2010)中所论述的，具有LAIR-1的残基的突变可对与不同胶原配体的结合产生不同的影响。例如，与固定的I型、III型和IV型胶原的粘附在R59A、E61A、R65A和E111A突变体中显著降低，尽管影响的幅度取决于所测试的胶原的类型。此外，对于突变体R62A和N69A，粘附略微降低。在一些实施方案中，所述变体相对于SEQ ID NO:1在R59、E61、R62、E63、R65、S66、Y68、N69、I102、R100、W109、E111、Q112和Y115中的一个或多个处突变。在一些实施方案中，所述变体在R59、E61、R65、E111、R62A和N69A中的一个或多个处突变。在特定实施方案中，所述突变是被丙氨酸取代。
最终，变体多肽可经工程化以便相对于野生型具有增加的半衰期。这些变体通常经修饰以便抵抗酶降解。示例性修饰包括抵抗酶降解的修饰的氨基酸残基以及修饰的肽键。实现这一目的的各种修饰是本领域中已知的。可修饰变体以在血清和内体pH下调节受体对蛋白质、多肽、片段或融合物的半衰期的亲和力的影响。
iii.融合蛋白
融合多肽具有第一融合配偶体，所述第一融合配偶体包含直接或经由与第二多肽融合的接头肽序列与第二多肽融合的多肽LAIR-1或Liar-2的全部或部分。所述融合蛋白任选地含有起作用以便使两个或更多个融合蛋白二聚化或多聚化的结构域。肽/多肽接头结构域可以是单独的结构域，或者可替代地可包含于融合蛋白的其他结构域(第一多肽或第二多肽)中的一个内。同样地，起作用以便使融合蛋白二聚化或多聚化的结构域可以是单独的结构域，或者可替代地可包含于融合蛋白的其他结构域(第一多肽、第二多肽或肽/多肽接头结构域)中的一个内。在一个实施方案中，二聚化/多聚化结构域以及肽/多肽接头结构域是相同的。
本文公开的融合蛋白具有式I：
N-R1-R2-R3-C
其中“N”表示融合蛋白的N-末端，“C”表示融合蛋白的C-末端。在一些实施方案中，“R1”是LAIR-1或Liar-2或其片段或变体的多肽或蛋白质，“R2”是任选的肽/多肽接头结构域，并且“R3”是第二多肽。或者，R3可以是LAIR-1或Liar-2的多肽或蛋白质或其片段或变体，并且R1可以是第二多肽。在一些实施方案中，LAIR-1或Liar-2多肽是细胞外结构域或其片段，如Ig样C2-结构域，或由如上所述形成二硫键的半胱氨酸框住的区域。
二聚化或多聚化可经由二聚化或多聚化结构域在两个或更多种融合蛋白之间发生。可替代地，融合蛋白的二聚化或多聚化可通过化学交联发生。所形成的二聚体或多聚体可以是同源二聚体/同源多聚体或异源二聚体/异源多聚体。
在一些实施方案中，融合蛋白包含与Ig Fc区融合的LAIR-1或LAIR-2或其片段或变体的细胞外结构域。重组Ig融合蛋白可通过将细胞外结构域或其片段或变体的细胞外结构域的编码区融合至人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或小鼠IgG2a的Fc区或其他合适的Ig结构域来制备，如先前所描述(Chapoval担任,Methods Mol.Med.,45:247-255(2000))。
iv.示例性融合蛋白
下文提供示例性融合蛋白。信号序列通过加双下划线表示，LAIR-1或LAIR-2细胞外结构域通过加单下划线表示，并且Ig结构域通过斜体表示。信号序列通常在成熟蛋白质中除去。另外，可使用(例如，取代)来自其他多肽或生物体的信号肽以在制造期间促进从宿主分泌融合蛋白。
hLAIR1.hG1
在一些实施方案中，人LAIR1-hIg融合蛋白(hIgG1)(hLAIR1.hG1)与以下氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列同一性：
无信号序列的SEQ ID NO:9是
人LAIR1-hIg(hIgG1)(hLAIR1.hG1)可通过充当LAIR-1配体的诱饵而是LAIR-1信号传导的拮抗剂，并且可用于治疗癌症或感染性疾病。hLAIR1.hG1也可以是用于测试hLAIR2.hG1的活性的对照。
hLAIR1.mG2a
在一些实施方案中，人LAIR1-mIg融合蛋白(mIgG2a)(hLAIR1.mG2a)与氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列同一性：
(SEQ ID NO:11)，有或无信号序列。
无信号序列的SEQ ID NO:11是
(SEQ ID NO:12)。
在一些实施方案中，人LAIR1-mIg融合蛋白(mIgG2a)(hLAIR1.mG2a)用于产生抗hLAIR1抗体。抗体可以是，例如，LAIR-1拮抗剂抗体(例如，mAb或其片段)，其可用于治疗癌症；或LAIR-1激动剂抗体(例如，mAb或其片段)，其可用于治疗自身免疫性疾病。
mLAIR1.mG2a
在一些实施方案中，小鼠LAIR1-mIg融合蛋白(mLAIR1.mG2a)与氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列同一性：
无信号序列的SEQ ID NO:13是
在一些实施方案中，小鼠LAIR1-mIg融合蛋白是用于小鼠模型中的体内研究的小鼠类似物。
hLAIR2.hG1
在一些实施方案中，人LAIR21-hIg融合蛋白(hIgG1)(hLAIR2.hG1)与以下氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列同一性：
(SEQ ID NO:15)，有或无信号序列。
无信号序列的SEQ ID NO:15是
(SEQ ID NO:16)。
人LAIR2-hIg融合蛋白(hIgG1)(hLAIR2.hG1)可通过充当LAIR-1配体的诱饵而是Liar-1信号传导的拮抗剂，并且可用于治疗癌症或感染性疾病。
LAIR2.mIg
在一些实施方案中，人LAIR2.mIg融合蛋白(mIgG2a)与氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列同一性：
(SEQ ID NO:17)，有或无信号序列。
无信号序列的SEQ ID NO:17是
(SEQ ID NO:18)。
人LAIR2.mIg融合蛋白(mIgG2a)可用于产生拮抗性抗LAIR2(例如，mAb或其片段)，其可用于治疗自身免疫性疾病。
v.多肽修饰
所述多肽和融合蛋白可通过可存在于正常细胞环境中的多肽中的化学部分进行修饰，例如磷酸化、甲基化、酰胺化、硫酸化、酰化、糖基化、苏素化(sumoylation)和泛素化。融合蛋白也可用能够直接或间接地提供可检测信号的标记来修饰，所述标记包括但不限于放射性同位素以及荧光化合物。
所述多肽和融合蛋白也可通过通常不添加至细胞环境中的多肽的化学部分来进行修饰。例如，所公开的融合蛋白也可通过聚合物链，包括但不限于聚乙二醇聚合物(PEG)链(即，聚乙二醇化)的共价连接来进行修饰。最近出现了大分子与PEG的缀合作为改变多种药物的药代动力学(PK)概况的有效策略，并且由此改进了它们的治疗潜力。PEG缀合通过防止酶消化、减慢肾脏过滤和减少中和抗体的产生来增加药物在循环中的保留。另外，PEG缀合物可用于允许融合蛋白的多聚化。
可通过以下方式将修饰引入分子中：使多肽的靶向氨基酸残基与有机衍生化剂反应，所述有机衍生化试剂能够与选定侧链或末端残基反应。另一种修饰是蛋白质的环化。
多肽的化学衍生物的实例包括用琥珀酸酐或其他羧酸酐衍生化的赖氨酰和氨基末端残基。用环状羧酸酐衍生化具有逆转赖氨酰残基的电荷的作用。用于衍生化含氨基的残基的其他合适的试剂包括亚氨酸酯，如甲基吡啶亚胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯代硼氢化物；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2,4戊二酮；以及转胺酶催化的与乙醛酸盐的反应。羧基侧基、天冬氨酰基或谷氨酰基可通过与碳二亚胺(R—N＝C＝N--R')，如1-环己基-3-(2-吗啉基-(4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3-(4-氮翁-4,4-二甲基戊基)碳二亚胺反应而选择性地修饰。此外，天冬氨酰基和谷氨酰基残基可通过与氨反应而转化为天冬酰胺酰和谷酰胺酰残基。融合蛋白还可包含取代一个或多个L-氨基酸的一个或多个D-氨基酸。
vi.修饰的结合性质
所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物的结合性质与待施用的剂量和剂量方案有关。在一个实施方案中，所公开的蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物具有与LAIR-1配体的结合性质，所述结合性质表现出相对于与其结合的其他受体分子，对结合位点(例如，配体上)的更高阶或更高百分比的占据。在其他实施方案中，所公开的蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物相对于野生型蛋白质具有降低的与LAIR-1配体的结合亲和力。
在一些实施方案中，所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物对LAIR-1配体具有相对高的亲和力，并且因此可具有相对慢的解离速率。在其他实施方案中，所述蛋白质多肽、片段、其变体和融合物在数天、数周或数月的时间段内间歇地施用以阻抑免疫应答，所述免疫应答允许在下次施用之前恢复，这可用于改变免疫应答而无需完全打开或关闭免疫反应并且可避免长期副作用。
3.分离的核酸分子
本文公开了编码所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物的分离的核酸序列。如本文所用，“分离的核酸”是指与哺乳动物基因组中存在的其他核酸分子分离的核酸，包括通常位于哺乳动物基因组中的核酸的一侧或两侧的核酸。如本文关于核酸使用的术语“分离的”还包括与任何非天然存在的核酸序列的组合，因为此类非天然存在的序列在自然界中不存在并且在天然存在的基因组中不具有直接连续的序列。
分离的核酸可以是例如DNA分子，条件是通常在天然存在的基因组中紧邻所述DNA分子侧翼发现的核酸序列之一被除去或不存在。因此，分离的核酸包括但不限于作为独立于其他序列的单独分子存在的DNA分子(例如，化学合成的核酸或通过PCR或限制性核酸内切酶处理产生的cDNA或基因组DNA片段)，以及并入载体、自主复制质粒、病毒(例如，逆转录病毒、慢病毒、腺病毒或疱疹病毒)中或并入原核生物或真核生物的基因组DNA中的重组DNA。此外，分离的核酸可包括工程化的核酸，如作为杂合或融合核酸的一部分的重组DNA分子。存在于例如cDNA文库或基因组文库中的数百至数百万的其他核酸或含有基因组DNA限制性消化的凝胶切片中的核酸不被认为是分离的核酸。
编码所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物的核酸可被优化用于在所选择的表达宿主中表达。密码子可用编码相同氨基酸的替代密码子取代，以解释核酸序列所来源的哺乳动物与表达宿主之间的密码子使用的差异。以这种方式，可使用表达宿主偏爱的密码子来合成核酸。
核酸可处于有义或反义取向，或可与编码LAIR-1或LAIR-2的多肽或蛋白质的参考序列互补。核酸可以是DNA、RNA或核酸类似物。可在碱基部分、糖部分或磷酸主链上修饰核酸类似物。这种修饰可改进例如核酸的稳定性、杂交或溶解性。碱基部分处的修饰可包括用于脱氧胸苷的脱氧尿苷，和用于脱氧胞苷的5-甲基-2'-脱氧胞苷或5-溴-2'-脱氧胞苷。糖部分的修饰可包括修饰核糖的2'羟基以形成2'-O-甲基或2'-O-烯丙基糖。可修饰脱氧核糖磷酸主链以产生吗啉代核酸，其中每个碱基部分与六元吗啉代环或肽核酸连接，其中脱氧磷酸主链被假肽主链置换并且保留四个碱基。参见例如，Summerton和Weller(1997)Antisense Nucleic Acid Drug Dev.7:187-195；以及Hyrup等人(1996)Bioorgan.Med.Chem.4:5-23。另外，脱氧磷酸主链可用例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主链、亚磷酰胺或烷基磷酸三酯主链置换。
编码多肽的核酸可施用至有需要的受试者。核酸递送涉及将“外来”核酸引入细胞中并最终引入活动物体内。用于将核酸递送至受试者的组合物和方法是本领域中已知的(参见Understanding Gene Therapy,Lemoine,N.R.,编辑,BIOS Scientific Publishers,Oxford,2008)。
4.载体和宿主细胞
还提供了编码所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物的载体。可将核酸(如上述核酸)插入载体中以在细胞中表达。如本文所用，“载体”是另一个DNA片段可插入其中以便引起所插入区段复制的复制子，如质粒、噬菌体或粘粒。载体可以是表达载体。“表达载体”是包含一个或多个表达控制序列的载体，并且“表达控制序列”是控制并调控另一个DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。
载体中的核酸可与一个或多个表达控制序列可操作地连接。如本文所用，“可操作地连接”是指并入遗传构建体中，以使得表达控制序列有效地控制目标编码序列的表达。表达控制序列的实例包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是由DNA分子的区域组成的表达控制序列，通常在转录开始点上游的100个核苷酸内(通常在RNA聚合酶II的起始位点附近)。为了使编码序列处于启动子的控制下，有必要将多肽的翻译阅读框的翻译起始位点定位在启动子下游的1与约50个核苷酸之间。增强子在时间、位置和水平方面提供表达特异性。与启动子不同，增强子可在距离转录位点不同的距离处起作用。增强子也可位于转录起始位点的下游。当RNA聚合酶能够将编码序列转录成mRNA时，编码序列在细胞中“可操作地连接”并且处于表达控制序列的“控制下”，所述mRNA然后可翻译成由编码序列编码的蛋白质。
合适的表达载体包括但不限于源自例如噬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、痘苗病毒、腺病毒和腺相关病毒的质粒和病毒载体。许多载体和表达系统可从诸如Novagen(Madison,WI)、Clontech(Palo Alto,CA)、Stratagene(LaJolla,CA)和Invitrogen Life Technologies(Carlsbad,CA)的公司商购。
表达载体可包括标签序列。标签序列通常被表达为与编码的多肽融合。此类标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。有用的标签的实例包括但不限于绿色荧光蛋白(GFP)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、多组氨酸、c-myc、血凝素、FlagTM标签(Kodak,NewHaven,CT)、麦芽糖E结合蛋白和蛋白A。在一个实施方案中，编码所公开多肽之一的核酸分子存在于含有编码Ig重链恒定区的一个或多个结构域的核酸，例如具有对应于人免疫球蛋白Cγ1链的铰链、CH2和CH3区域的载体中。
含有待表达核酸的载体可转移到宿主细胞中。术语“宿主细胞”意图包括重组表达载体可引入其中的原核和真核细胞。如本文所用，“转化的”和“转染的”涵盖通过许多技术中的一种将核酸分子(例如，载体)引入细胞中。尽管不限于特定技术，但是在本领域中已经良好地建立了许多这些技术。可通过例如电穿孔或氯化钙介导的转化用核酸转化原核细胞。可通过包括例如磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质转染、电穿孔或显微注射的技术将核酸转染到哺乳动物细胞中。宿主细胞(例如，原核细胞或真核细胞，如CHO细胞)可用于例如产生本文所述的蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物。
所描述的载体可用于在细胞中表达所述蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物。示例性载体包括但不限于腺病毒载体。一种方法包括核酸转移至培养的原代细胞中，然后将离体转化的细胞自体移植到宿主中，全身或者进入特定器官或组织。离体方法可包括例如从受试者收获细胞、培养所述细胞、用表达载体转导它们以及将细胞维持在适于表达编码的多肽的条件下的步骤。这些方法在分子生物学领域中是已知的。转导步骤可通过用于离体基因疗法的任何标准方法完成，所述方法包括例如磷酸钙、脂质转染、电穿孔、病毒感染和生物弹基因转移。可替代地，可使用脂质体或聚合物微粒。然后可选择已成功转导的细胞，例如，用于表达编码序列或药物抗性基因。然后可对细胞进行致死照射(如果需要)并注射或植入受试者体内。在一个实施方案中，将含有编码融合蛋白的核酸的表达载体转染到施用于有需要的受试者的细胞中。
体内核酸疗法可通过在体内将功能活性DNA直接转移到哺乳动物体细胞组织或器官中来实现。例如，编码本文公开的多肽的核酸可直接施用至淋巴组织中。或者，可使用淋巴组织特异性转录调控元件(TRE)，如B淋巴细胞、T淋巴细胞或树突细胞特异性TRE来实现淋巴组织特异性靶向。淋巴组织特异性TRE是本领域中已知的。
核酸也可通过病毒方式体内施用。编码融合蛋白的核酸分子可使用产生复制缺陷型逆转录病毒的包装细胞系包装到逆转录病毒载体中，如本领域所熟知的。也可使用其他病毒载体，包括重组腺病毒和痘苗病毒，可使所述病毒载体为非复制性的。除裸DNA或RNA或病毒载体外，工程化的细菌也可用作载体。
核酸也可由其他载体递送，包括脂质体、聚合物微米和纳米颗粒以及聚阳离子如脱唾液酸糖蛋白/聚赖氨酸。
除体内病毒和载体介导的基因转移外，本领域中熟知的物理方式可用于DNA的直接转移，包括质粒DNA的施用和粒子轰击介导的基因转移。
一个实施方案提供了一种细胞，所述细胞组成型地或诱导型地表达特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞具有编码根据SEQ ID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103、111或它们的组合的氨基酸序列的一种或多种核酸。
5.小分子
免疫调节剂可以是小分子。LAIR-1的小分子激动剂和拮抗剂以及LAIR-2的拮抗剂是本领域中已知的或者可使用常规筛选方法来鉴定。
在一些实施方案中，筛选测定可包括随机筛选大的测试化合物文库。或者，所述测定可用于集中于特定类别的疑似调节LAIR-1或LAIR-2的水平的化合物。测定可包括LAIR-1信号传导活性或抑制性应答介导的LAIR-1的确定。其他测定可包括核酸转录或翻译、mRNA水平、mRNA稳定性、mRNA降解、转录速率和翻译速率的测定。
C.药物组合物
提供了包含所公开的免疫调节剂的药物组合物。含有免疫调节剂的药物组合物可通过肠胃外(肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、透皮(被动或使用离子电渗法或电穿孔)或经粘膜(经鼻、阴道、直肠或舌下)施用途径或使用可生物侵蚀的插入物施用并且可配制成适合于每种施用途径的剂型。
在一些体内方法中，本文公开的组合物以治疗有效量施用于受试者。如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、抑制或减轻所治疗的病症的一种或多种症状或以其他方式提供所希望药理学和/或生理学作用的剂量。确切剂量将根据各种因素，如受试者依赖变量(例如年龄、免疫系统健康状况等)、疾病以及所实现的治疗而变化。
对于所公开的免疫调节剂，在进行进一步研究时，关于治疗不同患者的不同病状的适当剂量水平的信息将出现，并且本领域普通技术人员，考虑到接受者的治疗情况、年龄以及一般健康状况，将能够确定适当剂量。选择的剂量取决于所希望的治疗作用、施用途径以及所需的治疗持续时间。对于所公开的免疫调节剂，通常将每日0.001至20mg/kg体重的剂量水平施用至哺乳动物。通常，对于静脉内注射或输注，剂量可更低。
在某些实施方案中，免疫调节剂例如通过直接注射到待治疗的部位中而局部施用。通常，注射引起免疫调节剂组合物的局部浓度增加，其大于可通过全身施用实现的浓度。免疫调节剂组合物可与如上所述的基质组合以便通过减少多肽从待治疗的部位中被动扩散出来而帮助建立多肽组合物的增加的局部浓度。
1.用于肠胃外施用的制剂
在一些实施方案中，本文公开的组合物(包括含有肽和多肽的那些)以水溶液形式通过肠胃外注射来施用。所述制剂也可呈悬浮液或乳液的形式。通常，提供了包含有效量的肽或多肽并且任选地包含药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载体的药用组合物。此类组合物任选地包括以下中的一种或多种：稀释剂、无菌水、各种缓冲剂含量、pH和离子强度的缓冲盐水(例如，Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)；以及添加剂，如洗涤剂和增溶剂(例如，TWEEN 20(聚山梨醇酯20)、TWEEN 80(聚山梨醇酯80))、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、焦亚硫酸钠)和防腐剂(例如，硫柳汞、苯甲醇)和増量物质(例如，乳糖、甘露醇)。非水性溶剂或媒介物的实例是乙醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油和玉米油)、明胶以及可注射有机酯，如油酸乙酯。可将制剂冻干并在使用前立即重新溶解/重新悬浮。所述制剂可通过(例如)经由细菌保留过滤器过滤、通过将灭菌剂并入组合物中、通过辐射处理组合物、或通过加热组合物来进行灭菌。
2.用于口服施用的制剂
在实施方案中，所述组合物被配制用于口服递送。口服固体剂型总体上描述于Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版1990(Mack Publishing Co.EastonPa.18042)第89章中。固体剂型包括片剂、胶囊、丸剂、糖锭剂或锭剂、扁囊剂、丸粒、粉末或颗粒，或将物质并入聚合化合物如聚乳酸、聚乙醇酸等的微粒制剂中或脂质体中。此类组合物可影响所公开的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。参见，例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版(1990,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.18042)第1435-1712页，其以引用的方式并入本文。所述组合物可以液体形式制备，或者可呈干燥粉末(例如，冻干)形式。脂质体或类蛋白包封可用于配制组合物。可使用脂质体包封，并且所述脂质体可用各种聚合物衍生化(例如，美国专利号5,013,556)。还参见Marshall,K.于:由G.S.Banker和C.T.Rhodes第10章,1979编辑的Modern Pharmaceutics中。通常，所述制剂将包含肽(或其化学修饰的形式)和惰性成分，所述惰性成分保护胃环境中的肽以及在肠中释放生物活性物质。
可对剂进行化学修饰，以使得衍生物的口服递送是有效的。通常，所考虑的化学修饰是至少一个部分与组分分子本身的连接，其中所述部分允许从胃或肠摄取到血流中，或直接摄入肠粘膜中。还需要一种或多种组分的整体稳定性的增加以及体内循环时间的增加。聚乙二醇化是药物用途的示例性化学修饰。可使用的其他部分包括：丙二醇、乙二醇与丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚脯氨酸、聚-1,3-二氧戊环和聚-1,3,6-三氧杂环己烷[参见例如，Abuchowski和Davis(1981)"SolublePolymer-Enzyme Adducts,"in Enzymes as Drugs.Hocenberg和Roberts,编辑(Wiley-Interscience:New York,N.Y.)第367-383页；和Newmark等人(1982)J.Appl.Biochem.4:185-189]。
另一个实施方案提供了用于口服施用的液体剂型，包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液和糖浆，其可含有其他组分，包括惰性稀释剂；佐剂如润湿剂、乳化剂和悬浮剂；以及甜味剂、调味剂和芳香剂。
控制释放口服制剂可以是合乎需要的。所述剂可并入惰性基质中，所述基质允许通过扩散或浸出机制(例如树胶)释放。缓慢变性的基质也可并入制剂中。另一种形式的控制释放是基于Oros治疗系统(Alza Corp.)，即将药物封闭在半透膜中，所述半透膜允许水进入并由于渗透作用通过单个小开口将药物推出。
对于口服制剂，释放的位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。在一些实施方案中，释放将通过保护所述剂(或衍生物)或通过将所述剂(或衍生物)释放到胃环境以外(如肠中)来避免胃环境的有害作用。为了确保完全的胃阻力，不可渗透至少pH 5.0的包衣是必不可少的。用作肠溶包衣的更常见的惰性成分的实例是乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、HPMCP50、HPMCP 55、聚乙酸邻苯二甲酸乙烯酯(PVAP)、Eudragit L30DTM、AquatericTM、邻苯二甲酸乙酸纤维素(CAP)、Eudragit LTM、Eudragit STM以及ShellacTM。这些包衣可用作混合膜。
3.用于局部施用的制剂
所公开的免疫调节剂可局部施用。局部施用对于大多数肽制剂并不能良好地起作用，但是如果施加至肺、鼻腔、口腔(舌下、颊腔)、阴道或直肠粘膜，则它可以是尤其有效的。
组合物在以具有小于约5微米的气体动力学直径的气雾剂或喷雾干燥颗粒形式递送时可在吸入时被递送至肺并且横穿肺上皮衬里到达血流。
可使用被设计用于肺部递送治疗产物的广泛范围的机械装置，包括但不局限于雾化器、计量剂量吸入器以及粉末吸入器，其全部是本领域技术人员所熟悉的。可商购装置的一些具体实例是Ultravent雾化器(Mallinckrodt Inc.,St.Louis,Mo.)；Acorn II雾化器(Marquest Medical Products,Englewood,Colo.)；Ventolin计量剂量吸入器(GlaxoInc.,Research Triangle Park,N.C.)；以及Spinhaler粉末吸入器(Fisons Corp.,Bedford,Mass.)。Nektar、Alkermes以及Mannkind都具有经过批准或处于临床试验中的可吸入胰岛素粉末制剂，其中这种技术可应用于本文描述的制剂。
施用至粘膜的制剂通常将是喷雾干燥的药物颗粒，它们可并入片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳液中。标准药物赋形剂从任何配方设计师处可获得。
还可制备经皮制剂。这些通常是软膏、洗剂、喷雾剂或贴剂，其全部可使用标准技术来制备。经皮制剂可能需要包含渗透促进剂。
4.受控递送聚合物基质
本文公开的免疫调节剂也可以受控释放制剂形式施用。可制造受控释放聚合物装置以便在植入聚合物装置(杆、圆柱体、薄膜、盘)或注射(微粒)之后全身性长期释放。所述基质可呈诸如微球的微粒形式，其中剂分散于固体聚合物基质或微胶囊内，其中核心具有与聚合物外壳不同的材料，并且肽分散或悬浮于在性质上可为液体或固体的核心中。除非本文明确定义，否则微粒、微球以及微胶囊可互换使用。可替代地，所述聚合物可铸造成从数纳米至四厘米范围内的薄板或薄膜、通过研磨或其他标准技术产生的粉末，或甚至诸如水凝胶的凝胶。
可使用不可生物降解或生物可降解的基质来递送融合多肽或编码所述融合多肽的核酸，但是在一些实施方案中生物可降解基质是优选的。这些基质可以是天然或合成聚合物，但是在一些实施方案中合成聚合物由于降解以及释放概况的更好表征而是优选的。所述聚合物是基于所需的释放时段来选择的。在一些情况下，线性释放可以是最有用的，但是在其他情况下脉冲释放或“整体释放”可提供更有效的结果。聚合物可呈水凝胶(通常吸收达约90重量％的水)形式，并且可任选地与多价离子或聚合物交联。
所述基质可通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取以及本领域技术人员已知的其他方法来形成。可生物蚀解的微球可使用开发用于制备微球以便进行药物递送的任何方法来制备，所述方法例如由Mathiowitz和Langer,J.Controlled Release,5:13-22(1987)；Mathiowitz等人,Reactive Polymers,6:275-283(1987)；以及Mathiowitz等人,J.Appl.Polymer Sci.,35:755-774(1988)所描述。
所述装置可进行配制以用于局部释放来治疗植入或注射区域—其通常将递送比用于治疗整个身体或全身递送的剂量少得多的剂量。这些装置可被植入或注射至皮下、肌肉内、脂肪或被吞咽。
III.制造方法
A.制备抗体的方法
所述抗体可在细胞培养物、噬菌体或各种动物中产生，包括但不限于牛、兔、山羊、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、绵羊、狗、猫、猴、黑猩猩、猿。因此，在一个实施方案中，抗体是哺乳动物抗体。噬菌体技术可用于分离初始抗体或产生具有改变的特异性或亲合力特征的变体。此类技术是常规的并且是本领域中熟知的。在一个实施方案中，所述抗体通过本领域中已知的重组方式来产生。例如，可通过用包含编码抗体的DNA序列的载体转染宿主细胞来产生重组抗体。一种或多种载体可用于转染宿主细胞中表达至少一个VL和一个VH区的DNA序列。抗体产生和生产的重组方法的示例性描述包括Delves,Antibody Production: Essential Techniques(Wiley,1997)；Shephard等人,Monoclonal Antibodies(OxfordUniversity Press,2000)；Goding,Monoclonal Antibodies:Principles And Practice(Academic Press,1993)；Current Protocols In Immunology(John Wiley&Sons，最新版本)。
所公开的抗体可通过重组方式进行修饰以增加抗体在介导所需功能中的更大功效。因此，可使用重组方式通过取代修饰抗体在本发明的范围内。通常，所述取代将是保守取代。例如，抗体的恒定区中的至少一个氨基酸可用不同的残基置换。参见例如，美国专利号5,624,821、美国专利号6,194,551、申请号WO 9958572；以及Angal等人,Mol.Immunol.30:105-08(1993)。氨基酸的修饰包括氨基酸的缺失、添加和取代。在一些情况下，进行此类改变以减少不希望的活性，例如补体依赖性细胞毒性。通常，通过共价或非共价连接提供可检测信号的物质来标记抗体。已知多种标记和缀合技术，并且在科学和专利文献中广泛报道。可筛选这些抗体与LAIR-1或LAIR-2的蛋白质、多肽或融合蛋白的结合。参见例如，Antibody Engineering:A Practical Approach(Oxford University Press,1996)。
例如，可使用包括但不限于：增殖、迁移、粘附、软琼脂生长、血管生成、细胞-细胞通信、细胞凋亡、转运、信号转导的体外测定和诸如抑制肿瘤生长的体内测定来鉴定具有所需生物活性的合适的抗体。本文提供的抗体也可用于诊断应用中。作为捕获或非中和抗体，可筛选它们结合至特异性抗原的能力而不抑制抗原的受体结合或生物活性。作为中和抗体，所述抗体可用于竞争性结合测定。
可用于所公开的组合物和方法中的抗体包括任何类别的完整免疫球蛋白(即完整抗体)、其片段以及至少含有抗体的抗原结合可变结构域的合成蛋白质。可变结构域在抗体间的序列上不同，并且用于每种特定抗体对它的特定抗原的结合和特异性中。然而，可变性通常不是均匀地分布于抗体的可变结构域内。它通常被集中在轻链和重链可变结构域二者中的被称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。所述可变结构域的更高保守性的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用由三个CDR连接的β-折叠构型，所述CDR形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每种链中的CDR由FR区紧密靠近地保持在一起，与来自另一个链的CDR促成了抗体的抗原结合位点的形成。
还公开了具有生物活性的抗体片段。无论是否与其他序列连接，片段包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其他选定修饰，条件是与未修饰的抗体或抗体相比，片段的活性不会显著改变或受损。
技术也可适用于产生对抗原肽具有特异性的单链抗体。用于产生单链抗体的方法是本领域技术人员所熟知的。可通过使用短肽接头将重链和轻链的可变结构域融合在一起来产生单链抗体，从而在单个分子上重构抗原结合位点。已经开发了单链抗体可变片段(scFv)，其中一个可变结构域的C-末端经由15至25个氨基酸的肽或接头与另一可变结构域的N-末端连接，而没有显著破坏抗原结合或结合的特异性。选择接头以允许重链和轻链以其适当的构象取向结合在一起。
可通过连接两个scFv来工程化二价单链可变片段(di-scFv)。这可通过产生具有两个VH和两个VL区的单一肽链、从而产生串联scFv来进行。还可用接头肽设计scFv，所述接头肽对于两个可变区而言太短而不能折叠在一起(约5个氨基酸)，从而迫使scFv二聚化。这种类型称为双抗体。已显示双抗体的解离常数比相应的scFv低至多40倍，这意味着它们对其靶标具有高得多的亲和力。仍然更短的接头(一个或两个氨基酸)导致三聚体(三抗体或三体)的形成。还产生了四抗体。与双抗体相比，它们对其靶标具有甚至更高的亲和力。
单克隆抗体从抗体的大致上均质的群体获得，即，除了可存在于抗体分子的较小子集中的可能天然存在的突变以外，群体内的个别抗体是相同的。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链的其余部分与源自另一物种或属于另一个抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需拮抗活性。
可使用产生单克隆抗体的任何程序来制备单克隆抗体。在杂交瘤方法中，小鼠或其他适当宿主动物通常用免疫剂来进行免疫以引发淋巴细胞，所述淋巴细胞产生或能够产生将特异性地结合至免疫剂的抗体。或者，淋巴细胞可在体外免疫。
还可通过重组DNA方法来制备抗体。编码所公开抗体的DNA可容易地分离并且使用常规程序(例如，通过使用能够特异性地结合至编码鼠抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)来测序。还可使用噬菌体展示技术来产生和筛选抗体或活性抗体片段的文库。
使用蛋白质化学制备抗体的方法也是本领域中已知的。产生包括抗体的蛋白质的一种方法是通过蛋白质化学技术将两个或更多个肽或多肽连接在一起。举例来说，肽或多肽可使用当前可获得的实验室设备使用Fmoc(9-芴基甲氧基羰基)或Boc(叔丁氧基羰基)化学来化学合成。(Applied Biosystems,Inc.,Foster City,CA)。本领域技术人员可容易了解例如对应于抗体的肽或多肽可通过标准化学反应来合成。举例来说，肽或多肽可合成并且不从其合成树脂上裂解，而抗体的另一个片段可合成并且随后从树脂上裂解，从而暴露另一个片段上的被功能性阻断的末端基团。通过肽缩合反应，这两个片段可经由肽键分别在其羧基和氨基末端共价连接，以形成抗体或其片段。或者，肽或多肽在体内独立地合成，如上所述。一旦分离，这些独立肽或多肽可经由类似肽缩合反应来连接以形成抗体或其抗原结合片段。
举例来说，克隆或合成肽区段的酶连接允许相对较短肽片段连接以产生较大肽片段、多肽或全蛋白质结构域。或者，合成肽的天然化学连接可用于从较短肽片段来合成地构建较大肽或多肽。这种方法包括两步化学反应。第一步骤是不受保护的合成肽-α-硫酯与含有氨基-末端Cys残基的另一个不受保护的肽区段的化学选择性反应以给出硫酯连接的中间物作为初始共价产物。在反应条件没有变化的情况下，此中间物经历自发、快速分子内反应以在连接部位形成天然肽键。
B.用于生产蛋白质的方法
所公开的蛋白质、多肽、其片段、变体和融合物可使用本领域中已知的常规技术来制备。分离的融合蛋白可通过例如化学合成或通过在宿主细胞中重组产生来获得。为了重组产生蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物，含有编码所述蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物的核苷酸序列的核酸可用于转化、转导或转染细菌或真核宿主细胞(例如，昆虫、酵母或哺乳动物细胞)。通常，核酸构建体包括与编码所述蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物的核苷酸序列可操作地连接的调控序列。调控序列(在本文中也称为表达控制序列)通常不编码基因产物，而是影响它们可操作地连接的核酸序列的表达。
用于表达和产生多肽的有用的原核和真核系统是本领域中熟知的，包括例如大肠杆菌菌株如BL-21和培养的哺乳动物细胞如CHO细胞。
在真核生物宿主细胞中，可利用许多基于病毒的表达系统来表达融合蛋白。基于病毒的表达系统是本领域中熟知的，并且包括但不限于基于杆状病毒、SV40、逆转录病毒或基于痘苗的病毒载体。
可使用具有适当控制元件和选择性标记的表达载体来产生稳定表达蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物的哺乳动物细胞系。例如，真核表达载体pCR3.1(InvitrogenLife Technologies)和p91023(B)(参见Wong等人(1985)Science 228:810-815)适用于在例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、COS-1细胞、人胚肾293细胞、NIH3T3细胞、BHK21细胞、MDCK细胞和人血管内皮细胞(HUVEC)中表达蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物。另外合适的表达系统包括通过Lonza Group Ltd可获得的GS Gene Expression SystemTM。
在通过电穿孔、脂质转染、磷酸钙或氯化钙共沉淀、DEAE葡聚糖或其他合适的转染方法引入表达载体后，可选择稳定的细胞系(例如，通过代谢选择，或对G418、卡那霉素的或潮霉素的抗生素抗性)。可培养转染的细胞，以使得表达目标多肽，并且可从例如细胞培养上清液或裂解的细胞中回收多肽。或者，可通过(a)将扩增的序列连接到哺乳动物表达载体如pcDNA3(Invitrogen Life Technologies))和(b)使用小麦胚芽提取物或兔网织红细胞裂解物进行体外转录和翻译来产生蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物。
蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物可使用例如色谱方法分离，如亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法、DEAE离子交换、凝胶过滤和羟基磷灰石色谱法。在一些实施方案中，可将蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物工程化为含有另外的结构域，所述另外的结构域含有允许多肽被捕获到亲和基质上的氨基酸序列。例如，可使用蛋白A柱分离细胞培养上清液或细胞质提取物中的Fc融合多肽。另外，诸如c-myc、血凝素、多组氨酸或FlagTM(Kodak)的标签可用于辅助多肽纯化。此类标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。可使用的其他融合物包括有助于检测多肽的酶，如碱性磷酸酶。免疫亲和色谱法也可用于纯化多肽。融合蛋白可另外工程化为含有分泌信号(如果不存在已经存在的分泌信号)，所述分泌信号引起所述蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物由产生它的细胞分泌。然后可方便地从细胞培养基中分离分泌的蛋白质、多肽、其片段、变体或融合物。
C.用于产生分离的核酸分子的方法
分离的核酸分子可通过标准技术产生，所述方法包括但不限于常见的分子克隆和化学核酸合成技术。例如，聚合酶链式反应(PCR)技术可用于获得编码变体多肽的分离的核酸。PCR是其中酶促扩增靶核酸的技术。通常，可采用来自目标区域的末端或更远区域的序列信息来设计寡核苷酸引物，所述寡核苷酸引物在序列上与待扩增模板的相反链相同。PCR可用于扩增来自DNA以及RNA的特定序列，包括来自总基因组DNA或总细胞RNA的序列。引物的长度通常是14至40个核苷酸，但长度可在10个核苷酸至数百个核苷酸的范围内。一般PCR技术描述于例如PCR Primer:A Laboratory Manual,Dieffenbach和Dveksler编辑,ColdSpring Harbor Laboratory Press,1995中。当使用RNA作为模板来源时，逆转录酶可用于合成互补DNA(cDNA)链。连接酶链反应、链置换扩增、自主序列复制或基于核酸序列的扩增也可用于获得分离的核酸。参见例如，Lewis(1992)Genetic Engineering News 12:1；Guatelli等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:1874-1878；以及Weiss(1991)Science254:1292-1293。
分离的核酸可作为单个核酸分子或作为一系列寡核苷酸化学合成(例如，使用亚磷酰胺技术用于3'至5'方向上的自动DNA合成)。例如，可合成一对或多对长寡核苷酸(例如，>100个核苷酸)，所述寡核苷酸含有所需序列，其中每对含有短互补性区段(例如，约15个核苷酸)，以使得当所述寡核苷酸对退火时形成双链体。DNA聚合酶可用于延伸寡核苷酸，从而每个寡核苷酸对产生单个双链核酸分子，然后可将所述分子连接到载体中。分离的核酸也可通过诱变获得。编码蛋白质的核酸可使用标准技术进行突变，所述技术包括寡核苷酸定向诱变和/或通过PCR进行的定点诱变。参见，Short Protocols in Molecular Biology.第8章,Green Publishing Associates and John Wiley&Sons,由Ausubel等人,1992编辑。
IV.测定和抗体筛选
用于癌症疗法的LAIR-2Fc融合蛋白(“LAIR-2-Fc”)的产生绕过了开发和筛选LAIR-1mAb的需要。因为LAIR-2具有比LAIR-1更大的亲和力，所以在一些实施方案中，相对于LAIR-1Fc融合蛋白(“LAIR-1-Fc”)，选择LAIR-2-Fc作为治疗性治疗。在一些实施方案中，LAIR-1-Fc可用于小鼠临床前模型中，因为小鼠中不存在LAIR-2。
A.用于LAIR-2-Fc的测定
1.通过ELISA确认结合多种形式的胶原、SP-D、C1q和MBL的能力。
2.确认LAIR-2-Fc抑制多种胶原、SP-D和C1q与LAIR-1的结合的能力。这可通过以下方式进行测试：1)ELISA竞争测定，和2)使用在滴定量的LAIR-2-Fc和荧光标记的LAIR配体存在下孵育的LAIR-1转染的细胞的流式细胞术。
3.分析与LAIR-1相比，LAIR-2-Fc与配体的结合亲和力。
4.用于确认LAIR-2-Fc阻止表达LAIR-1的细胞的信号传导的功能测定。报告细胞可用于这些测定，或初级LAIR-1+细胞是另一种选择。
B.用于LAIR-2阻断mAb的测定和抗体筛选
因为LAIR-2不存在于小鼠中，所以野生型小鼠可用于产生针对LAIR-2的高亲和力mAb。因为LAIR-2是可溶性的并且与可溶性配体结合，所以筛选转染的细胞不是这种分子的选择。
1.第I阶段筛选：通过ELISA，mAb与LAIR-2结合，但不与LAIR-1结合。这些mAb应对LAIR-2具有高度特异性。
2.第II阶段筛选：LAIR-2特异性mAb必须阻断LAIR-2与多种胶原、SP-D、C1q和MBL的结合。可能没有单个mAb将阻断所有三种配体的结合，并且因此，可能必须同时使用多种LAIR-2mAb作为制剂来阻断所有相互作用以获得最大治疗作用。
3.第III阶段筛选：用于确认LAIR-2mAb或mAb的组合在滴定量的可溶性LAIR-2存在下在滴定量的多种胶原、SP-D、C1q和MBL存在下增加LAIR-1信号传导的功能测定。(即LAIR-2mAb应阻断配体对可溶性LAIR-2的接近，从而导致配体与细胞表面上的LAIR-1结合并诱导负性信号传导途径)。
第II阶段和第III阶段测定可用于预测阻断体内配体的生理学水平所需的LAIR-2mAb的浓度。
C.用于LAIR-1阻断mAb或LAIR-1消减mAb的测定和抗体筛选
LAIR-1缺陷型(“敲除”)小鼠或野生型小鼠可用于使用专有免疫技术产生针对LAIR-1的高亲和力mAb。
1.第I阶段筛选：通过ELISA，mAb与LAIR-1结合，但不与LAIR-2结合。mAb与转染以表达细胞表面LAIR-1的细胞系结合。另外，mAb应具有结合在原代人细胞亚群的表面上内源性表达的LAIR-1的能力。这些mAb应对LAIR-1具有高度特异性。
2.第II阶段筛选：LAIR-1特异性mAb应阻断LAIR-1与多种胶原、SP-D和C1q中的一种或多种的结合。可能没有单个mAb将阻断所有三种配体的结合，并且因此，可能必须同时使用多种LAIR-1mAb作为制剂来阻断所有相互作用以获得最大治疗作用。
3.第III阶段筛选：用于确认LAIR-1mAb或mAb的组合在滴定量的多种胶原、SP-D和C1q(拮抗剂或阻断mAb)存在下降低LAIR-1信号传导的功能测定。这些测定将利用表达内源性LAIR-1的细胞系(如THP-1细胞)或原代细胞(如人单核细胞、巨噬细胞和树突细胞亚群)来评估在LAIR-1mAb存在下的功能。另外，报告细胞系可用于确定在与LAIR-1mAb一起培养后是否改变信号传导途径如NFkB(NFkB报告基因)或NFAT(NFAT报告基因)。
4.第IV阶段筛选：用于确定LAIR-1mAb是否能够通过其他机制诱导表达LAIR-1的细胞系的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)或细胞凋亡的功能测定。特别地，将测试LAIR-1mAb通过这些方法中的一种来消减已知在细胞表面上表达LAIR-1的白血病细胞系如THP-1的能力。LAIR-1mAb也可进行工程化以消减表达LAIR-1的细胞，并且如本文件后面通过已知方法所描述进行测试。
5.第V阶段筛选：用于确定LAIR-1mAb是否能够经由LAIR-1将负信号(激动剂)递送或诱导至表达LAIR-1的细胞中以抑制细胞功能的功能测定。在用LAIR-1mAb培养后，将评估内源性表达LAIR-1的细胞系如THP-1或U937或细胞系如K562的转染子的抑制作用。在其他测定中，报告细胞系将用于确定LAIR-1mAb是否阻抑阳性信号传导途径，如NF-kB(NF-kB报告基因)或其他已知的细胞信号传导报告基因。还将评价诸如THP-1和U937的细胞系中的细胞凋亡的诱导。
第II阶段和第III阶段测定可用于预测阻断体内配体的生理学水平所需的LAIR-1mAb的浓度。
V.使用方法
迄今为止的证据说明LAIR-1细胞表面受体的抑制作用，并且LAIR-2通过结合与LAIR-1相同的配体间接地拮抗LAIR-1的功能，因此基本上充当诱饵受体。肿瘤微环境通常富含细胞外基质蛋白(ECM)，包括LAIR-1配体胶原(Rygiel等人,2011,Mol.Immunol.49:402-406)。因此，可通过LAIR-1的胶原交联和随后的抑制性信号传导特别地抑制定位于肿瘤微环境的表达LAIR-1的细胞。增加的LAIR-1表达和信号传导已被证明可抑制若干免疫细胞亚群的增殖、分化和功能，并且因此据信可抑制抗肿瘤免疫，特别是在具有高水平LAIR-1配体胶原、C1q和SP-D的肿瘤微环境中。
胶原和C1q两者均已显示限制或改变通过LAIR-1的抗原呈递细胞(单核细胞/巨噬细胞(DC))分化和活化。还发现LAIR-1在NK细胞和T细胞上表达，但其水平远低于APC上。然而，研究表明，使NK细胞和T细胞上的LAIR-1交联可抑制增殖和功能。因此，据信减少LAIR-1交联可增加针对癌症和感染性疾病的免疫应答。据信LAIR-2的水平增加通过相同的机制促进抗肿瘤免疫。因此，可溶性LAIR-1和可溶性LAIR-2(包括LAIR-1和LAIR-2多肽以及LAIR-1和LAIR-2融合蛋白)可用于人疾病的疗法。例如，LAIR-2Fc蛋白可用于癌症免疫疗法，以通过阻止配体与LAIR-1的结合来增强免疫功能。这种策略是特别有前景的，因为LAIR-2以比LAIR-1更高的亲和力结合配体。
或者，通过表达高水平的LAIR-1的AML癌细胞上的LAIR-1信号传导通过经由独特的LAIR-1-SHP-1-CAMK1-CREB途径抑制细胞凋亡和分化来维持AML细胞的自我更新能力或“干细胞性”(Kang等人,2015,Nat.Cell Biol.17:665-677)。在这些癌症中，LAIR-1信号传导降低导致AML细胞死亡。因此，认为对白血病的LAIR-1信号传导的阻断(即拮抗作用)是用于根除白血病的治疗。因此，用LAIR-1单克隆抗体或用可溶性LAIR-1和可溶性LAIR-2(包括LAIR-1和LAIR-2多肽以及LAIR-1和LAIR-2融合蛋白)阻断LAIR-1信号传导可用于通过直接抑制癌细胞存活以及通过促进抗肿瘤免疫应答来治疗白血病。
相反，LAIR-1表达或功能降低与几种自身免疫性表现相关，同时LAIR-2的过表达可通过LAIR-1配体的诱饵结合促进自身免疫性。LAIR-1配体的LAIR-2结合可基本上减少LAIR-1的细胞表面交联，从而限定导致过反应性免疫功能的抑制性信号传导途径。因此，据信增加LAIR-1交联可减少过度活跃或不适当的免疫应答，例如在自身免疫性疾病或炎症的情况下。例如，mAb对LAIR-2的阻断可用于治疗自身免疫性疾病，因为这将增加配体与LAIR-1的结合，从而下调免疫应答。靶向LAIR-2将在细胞表面LAIR-1与可溶性LAIR-2的表达之间存在不平衡的疾病中特别有效，如对于类风湿性关节炎所示(Lebbink等人,2008,J.Immunol 180:1662-1669)。
下文更详细地论述示例性方法。
A.免疫应答刺激
1.治疗策略
提供了诱导或增强受试者的免疫应答的方法。通常，所述方法包括向受试者施用有效量的免疫调节剂或用免疫调节剂离体引发的细胞。免疫应答可以是，例如，对抗原的初次免疫应答或效应细胞功能的增加，如增加T细胞的抗原特异性增殖、促进T细胞产生细胞因子、刺激分化或它们的组合。在一些实施方案中，所述剂可增加初始T细胞发育成Th1、Th17、Th22或分泌或引起其他细胞分泌炎性分子的其他细胞的发育，所述炎性分子包括但不限于IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。在一些实施方案中，所述剂可降低或抑制Treg的活性、减少来自Treg的细胞因子如IL-10的产生、减少Treg的分化、减少Treg的数量、降低免疫细胞群体内Treg的比例或减少Treg的存活。免疫调节剂可以有效量施用至有需要的受试者以克服T细胞衰竭和/或T细胞无变应性。克服T细胞耗竭或T细胞无变应性可通过使用已知技术测量T细胞功能来确定。
所述方法可在体内或离体用作免疫应答刺激性治疗应用。因此，在一些实施方案中，将所述剂或编码所述剂的核酸直接施用于受试者。在一些实施方案中，将所述剂或编码所述剂的核酸离体与细胞(例如免疫细胞)接触，并将治疗细胞施用于受试者(例如过继转移)。通常，所公开的免疫调节剂可用于治疗患有或易患受试者的免疫系统产生针对其的免疫应答的任何疾病或病症的受试者。所述剂可使更稳健的免疫应答成为可能。所公开的组合物可用于刺激或增强涉及T细胞的免疫应答。
用于增加免疫应答的免疫调节剂通常是降低LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的那些。例如，所述剂可以是LAIR-1的拮抗剂，如拮抗剂(阻断)抗LAIR-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，拮抗剂结合至LAIR-1胶原结合结构域(参见例如，Brondijk等人,Blood,18(115):1364-73(2010)和Zhou等人,Blood,127(5):529-537(2016)及其补充信息，其明确地以引用的方式整体并入)。在一些实施方案中，LAIR-1拮抗剂如功能阻断性抗体或其功能片段特异性地结合至表位，所述表位包括LAIR-1的R59、E61、R62、E63、R65、S66、Y68、N69、I102、R100、W109、E111、Q112和Y115(例如，相对于SEQ ID NO:1)中的一种或多种。所述剂也可以是LAIR-1多肽(例如可溶性多肽或其融合蛋白)，其可充当一种或多种LAIR-1配体的诱饵受体。所述剂也可以是LAIR-2或其功能片段或融合蛋白，其可充当一种或多种LAIR-1配体的诱饵受体。
例如，在一些实施方案中，将有效量的LAIR-2融合蛋白(例如LAIR-2-Fc)施用于患有癌症或感染的受试者。用LAIR-2-Fc治疗患者将导致LAIR-1受体的交联减少，并且随后降低LAIR-1+细胞的抑制性信号传导并改进免疫功能。与细胞表面LAIR-1相比，使所述比率朝向于增加的可溶性LAIR-2水平倾斜(特别是在其中LAIR-1/2配体的表达高度表达的肿瘤微环境中)将有利于增强的抗肿瘤免疫。
具有高水平的胶原、SP-D和/或C1q以及具有表达高水平LAIR-1的免疫浸润物的肿瘤微环境对于所公开的免疫疗法(例如，LAIR-2-Fc免疫疗法)将是理想的。虽然卵巢癌具有高水平的胶原，但尚不清楚SP-D和C1q水平是否高。然而，肺癌和胃肠癌可能具有高水平的胶原和SP-D，并且因此可能是用LAIR-2-Fc靶向的癌症。在其他实施方案中，使用可溶性LAIR-2、可溶性LAIR-1或LAIR-1融合蛋白(例如，LAIR-1-Fc)。在一些实施方案中，可选择基于LAIR-2的分子，因为LAIR-2结合配体的亲和力比LAIR-1更高。
LAIR-1阻断(例如使用功能阻断性抗LAIR-1抗体)可以是可溶性LAIR-1和LAIR-2多肽和融合蛋白的替代剂或补充剂。例如，在一些实施方案中，LAIR-1阻断并与诱饵受体如可溶性LAIR-1或LAIR-2或其融合蛋白组合。组合的治疗(例如，LAIR-2-Fc和LAIR-1阻断)可以是互补的。
在一些实施方案中，免疫应答刺激疗法(例如，在癌症或感染的治疗中)包括LAIR-1+细胞的消减。LAIR-1在小鼠和人卵巢癌腹水中高度表达。LAIR-1的上调仅限于免疫调控性巨噬细胞和F4/80+DC，两者共同表达高水平的PD-L1。因此，靶向表达LAIR-1的细胞的消减将通过除去免疫调节群体来改进肿瘤微环境的总体条件。虽然尚未观察到LAIR-1在卵巢癌中的其他细胞亚群上的表达，但由于LAIR-1具有普遍抑制作用，所以其他LAIR-1+细胞的消减也将具有降低免疫抑制和改善抗肿瘤免疫的作用。LAIR-1也已显示在急性骨髓性白血病癌症的表面上表达，并且对于急性骨髓性白血病癌症的发展是至关重要的(Kang等人,Nature Cell Biology,第17卷,第5期,2015；第665-679页)。因此，用LAIR-1消减mAb消减造血(“血液”)癌症将具有减少或根除LAIR-1阳性癌症的直接作用。
可根据已知的构建和筛选方法(包括本文论述的那些)进行LAIR-1消减mAb的开发和鉴定。参见例如，Reff等人,Blood.第83卷,第2期,1994:第435-445页，其描述了抗CD20嵌合抗体的制备，所述抗体与人C1q结合并且在人补体存在下介导补体依赖性细胞溶解(CDCC)以及与人效应细胞一起介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。利妥昔单抗破坏B细胞并且因此用于治疗以过度活跃、功能失调或过量B细胞数量为特征的疾病。其他B细胞消减抗体包括奥瑞珠单抗和奥法木单抗。在另一个实例中，CD3Ab可优先靶向并消减活化的效应T细胞，同时保留CD4+Foxp3+Treg。尽管所述抗体不显示或几乎不显示补体依赖性和抗体依赖性细胞毒性，但它们瞬时消减T细胞。已经显示由于交联由两种不同细胞(在一侧上的细胞毒性CD8+T细胞和在另一侧上的其他靶T细胞)表达的CD3分子的能力所致的重定向的细胞溶解，然而，T细胞消减主要来自AICD(综述于You,Front Immunol.2015；6:242中)。
在一些实施方案中，所述细胞消减抗体减少LAIR-1阳性巨噬细胞、F4/80+DC、癌细胞或它们的组合的数量。
2.待治疗的受试者
a.癌症的治疗
所公开的组合物和方法可用于治疗癌症。通常，所述剂用于通过向所述受试者施用一定量的免疫调节剂来刺激或增强受试者对癌症的免疫应答，所述免疫调节剂减少LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合。所述方法可减轻癌症的一种或多种症状。
免疫系统是针对癌症起始和生长的有效防御。免疫应答的调控受细胞表面相互作用控制，所述细胞表面相互作用沿着特定途径指导免疫细胞功能，包括针对癌细胞的活化或抑制。LAIR-1是若干免疫细胞(白细胞)亚群表面上的抑制性受体，所述受体可阻止最佳免疫应答。然而，LAIR-2是充当阻断LAIR-1介导的抑制的诱饵的可溶性同源物。
在一个实施方案中，LAIR-2Fc融合蛋白在体外和体内促进免疫应答。在另一个实施方案中，LAIR-2Fc减少肿瘤生长并促进存活。在仍然另一个实施方案中，LAIR-2Fc促进抗PD-1免疫疗法。本文提供的日期证明LAIR-1mAb在人T细胞和骨髓细胞系中具有体外活性，从而显示出对特定mAb克隆的特异性激动剂和拮抗剂活性。这些发现证明了LAIR-2Fc或LAIR-1mAb对癌症和其他疾病的免疫治疗干预的潜在LAIR-1途径调节。
在另一个实施方案中，LAIR-Fc增加对TCR刺激的原代人T细胞反应性。在另一个实施方案中，LAIR-2Fc在体内增加抗原特异性T细胞应答。
尽管通过各种机制，但是癌细胞在其发育过程中获得了一组特有的功能。此类能力包括逃避细胞凋亡、生长信号的自自足性、对抗生长信号的不敏感性、组织侵袭/转移、无限的解释潜力和持续性血管生成。术语“癌细胞”意在涵盖恶化前和恶性癌细胞。在一些实施方案中，癌症是指良性肿瘤，其仍然是局部的。在其他实施方案中，癌症是指恶性肿瘤，其侵入并破坏邻近的身体结构并扩散至远处部位。在其他实施方案中，癌症与特定癌症抗原(例如，泛癌抗原(KS1/4)、卵巢癌抗原(CA125)、前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、CD19、CD20、HER2/neu等)相关。
本文公开的方法和组合物可用于治疗或预防多种癌症或其他异常增生性疾病，包括(但不限于)以下：癌，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌；包括鳞状细胞癌；淋巴谱系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤；骨髓谱系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和外周神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡状癌和畸胎癌。
由细胞凋亡的畸变引起的癌症也可通过所公开的方法和组合物来治疗。此类癌症可包括但不限于滤泡性淋巴瘤，伴有p53突变的癌，乳腺、前列腺和卵巢的激素依赖性肿瘤，以及癌前病变如家族性腺瘤样息肉病和脊髓发育不良综合征。在具体实施方案中，在卵巢、膀胱、乳腺、结肠、肺、皮肤、胰腺或子宫中通过所述方法和组合物治疗或预防恶性肿瘤或异常增生性变化(如化生和发育不良)或过度增生性病症。在其他具体实施方案中，通过所述方法和组合物治疗或预防肉瘤、黑素瘤或白血病。
所公开的组合物和方法特别可用于治疗与表达异常高水平的LAIR-1、高水平的LAIR-1配体、低水平的LAIR-2或它们的组合的细胞相关的癌症。
可通过本文公开的方法和组合物治疗或预防的特定癌症和相关病症包括但不限于，白血病，包括但不限于急性白血病，急性淋巴细胞性白血病，急性髓细胞性白血病如成髓细胞性、前髓细胞性、髓单核细胞性、单核细胞性、红白血病以及脊髓增生异常综合征，慢性白血病，如但不限于慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病；真性红细胞增多症；淋巴瘤如但不限于霍奇金氏病或非霍奇金氏病淋巴瘤(例如，弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALK)阴性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性ALK+间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、急性骨髓性淋巴瘤(AML))；多发性骨髓瘤，如但不限于郁积型多发性骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、骨硬化骨髓瘤、浆细胞性白血病、孤立性浆细胞瘤以及髓外浆细胞瘤；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；意义未明的单克隆丙种球蛋白病；良性单克隆丙种球蛋白病；重链病；骨和结缔组织肉瘤，如但不限于骨肉瘤(bone sarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、骨髓瘤骨病、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、恶性巨细胞肿瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管内皮瘤)、纤维肉瘤、卡波济氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤；脑肿瘤，包括但不限于神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、脑脊髓膜瘤、松果体细胞瘤、成松果体细胞瘤、脑原发性淋巴瘤；乳腺癌，包括但不限于腺癌、小叶(小细胞)癌、管内癌、乳房髓质癌、乳腺粘液癌、管状乳癌、乳头状乳癌、佩吉特氏病以及炎性乳癌；肾上腺癌如但不限于嗜铬细胞瘤以及肾上腺皮质癌；甲状腺癌如但不限于乳头状或滤泡性甲状腺癌、髓样甲状腺癌以及甲状腺未分化癌；胰腺癌，包括但不限于胰岛素瘤、胃泌素瘤、升糖素瘤、舒血管肠肽瘤、生长抑素分泌型肿瘤、以及类癌瘤或胰岛细胞肿瘤；垂体癌症，包括但不限于库兴氏病、催乳激素分泌型肿瘤、肢端肥大症、以及尿崩症；眼癌，包括但不限于眼部黑色素瘤如虹膜黑色素瘤、脉络膜黑色素瘤、以及睫状体黑色素瘤、以及视网膜母细胞瘤；阴道癌，包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌、以及黑色素瘤；外阴癌，包括但不限于鳞状细胞癌、黑色素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤、以及佩吉特氏病；宫颈癌，包括但不限于鳞状细胞癌以及腺癌；子宫癌，包括但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤；卵巢癌，包括但不限于卵巢上皮癌、边界肿瘤、生殖细胞肿瘤、以及基质肿瘤；食道癌，包括但不限于鳞癌、腺癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺鳞癌、肉瘤、黑色素瘤、浆细胞瘤、疣状癌、以及燕麦细胞(小细胞)癌；胃癌，包括但不限于腺癌、蕈伞型(息肉)、溃疡型、浅表扩散型、弥散扩散型、恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤雏肉瘤以及癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，包括但不限于肝细胞癌和肝母细胞瘤；胆囊癌，包括但不限于腺癌；胆管癌，包括但不限于乳头状，结节性和弥漫性；肺癌，包括但不限于非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(上皮癌)、腺癌、大细胞癌以及小细胞肺癌；睾丸癌，包括但不限于胚组织瘤、精原细胞瘤、退化发育、经典(典型)、精母细胞瘤、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤癌、绒毛膜癌(卵黄囊肿瘤)；前列腺癌，包括但不限于腺癌，平滑肌肉瘤以及横纹肌肉瘤；阴茎癌(penal cancer)；口癌，包括但不限于鳞状细胞癌；基底癌症；唾液腺癌症，包括但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌；咽癌，包括但不限于鳞状细胞癌和疣型；皮肤癌，包括但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌以及黑色素瘤、浅表性扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、小痣恶性黑色素瘤、肢端雀斑样黑色素瘤；肾癌，包括但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或输尿管)；韦尔姆斯氏肿瘤；膀胱癌，包括但不限于移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。此外，癌症包括粘液肉瘤、骨原性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、成血管细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌(关于此类病症的综述，参见Fishman等人,1985,Medicine,第2版,J.B.Lippincott Co.,Philadelphia和Murphy等人,1997,Informed Decisions:The Complete Book of Cancer Diagnosis,Treatment,andRecovery,Viking Penguin,Penguin Books U.S.A.,Inc.,United States of America)。
b.感染的治疗
所公开的组合物和方法可用于治疗感染和感染性疾病。通常，所述剂用于通过向所述受试者施用一定量的免疫调节剂来刺激或增强受试者对引起感染的剂的免疫应答，所述免疫调节剂减少LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合。所述方法可减轻感染的一种或多种症状。此外，因为可溶性LAIR-1和/或LAIR-2可结合补体因子C1q，所以表达异常高水平的可溶性LAIR-1或LAIR-2的受试者在一些情况下可具有降低的补体介导的感染免疫清除。因此，可向具有异常高水平的LAIR-1或LAIR-2并且发现表现出补体功能降低的受试者施用诸如LAIR-1和LAIR-2mAb的剂，所述剂分别阻断LAIR-1和LAIR-2与补体因子C1q的结合，以便改善补体级联并且因此改善对感染的先天免疫应答。
感染或疾病可由细菌、病毒、原生动物、蠕虫或其他微生物病原体引起，所述病原体细胞内进入并受到攻击，即受到细胞毒性T淋巴细胞的攻击。
感染或疾病可以是急性或慢性的。急性感染通常是短期感染。在急性微生物感染期间，免疫细胞开始表达免疫调节受体。因此，在一些实施方案中，所述方法包括增加针对急性感染的免疫刺激反应。
感染可由例如但不限于白色念珠菌、单核细胞增生性李斯特菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌或分枝杆菌引起。
在一些实施方案中，所公开的组合物用于治疗慢性感染，例如已经发生T细胞耗竭或T细胞无变应性的感染，从而导致感染在延长的时间段内与宿主保持在一起。
待治疗的示例性感染是由肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)、疱疹病毒、埃-巴二氏病毒或人乳头瘤病毒引起的慢性感染。
因为病毒感染主要由T细胞清除，所以T细胞活性的增加在更快速或彻底的感染性病毒剂清除对动物或人受试者将有益的情况将是治疗上有用的。因此，可施用所公开的组合物用于治疗局部或全身病毒感染，包括但不限于免疫缺陷病毒(例如，HIV)、乳头状瘤病毒(例如，HPV)、疱疹病毒(例如，HSV)、脑炎病毒、流感病毒(例如，人流感病毒A)和普通感冒病毒(例如，人鼻病毒)以及由例如HTLV、肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、痘苗病毒和狂犬病病毒引起的其他病毒感染。可局部施用分子以治疗病毒性皮肤病，如疱疹病变或带状疱疹或生殖器疣。所述分子还可全身施用以治疗全身性病毒性疾病，包括但不限于AIDS、流感、普通感冒或脑炎。
可治疗的代表性感染包括但不限于由微生物引起的感染，所述微生物包括但不限于放线菌属、鱼腥藻属、芽孢杆菌属、拟杆菌属、蛭弧菌属、博德特氏菌属、疏螺旋体属、弯曲杆菌属、柄杆菌属、衣原体、绿菌属、着色菌属、梭菌属、棒状杆菌属、噬细胞菌属、奇异球菌属、埃希氏菌属、弗朗西斯氏菌属、盐杆菌属、螺杆菌属、嗜血杆菌属、B型流感嗜血杆菌(HIB)、生丝微菌属、军团菌属、钩端螺旋体病、李斯特菌属、脑膜炎球菌A型、B型和C型、甲烷杆菌属、微球菌属、分枝杆菌属、支原体属、粘球菌属、奈瑟氏菌属、硝化菌属、颤藻属、原绿藻属、变形杆菌属、假单胞菌属、红螺菌属(Phodospirillum)、立克次氏体属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、螺旋菌属、螺旋体属、葡萄球菌属、链球菌属、链霉菌属、硫化叶菌属、热原体属、硫杆菌属和密螺旋体属、弧菌属、耶尔森氏菌属、新型隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌、热带念珠菌、星状诺卡氏菌、立氏立克次氏体、斑疹伤寒立克次氏体、肺炎支原体、鹦鹉热衣原体、沙眼衣原体、恶性疟原虫、布氏锥虫、溶组织内阿米巴、刚地弓形虫、阴道毛滴虫和曼氏血吸虫。
可使用所公开的组合物和方法治疗的其他微生物包括细菌，如克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、巴氏杆菌属的那些；与霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫和莱姆病相关的病原体；或真菌或寄生病原体，如念珠菌属(白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌等)、隐球菌属、曲霉属(烟曲霉、黑曲霉等)、毛霉菌目属(毛霉属、犁头霉属、根霉属)、孢子丝菌属(申克氏孢子丝菌)、芽生菌属(皮炎芽生菌)、副球孢子菌属(巴西副球孢子菌)、球孢子菌属(粗球孢子菌)和组织胞浆菌属(荚膜组织胞浆菌)、溶组织内阿米巴、结肠小袋绦虫、福氏纳格里阿米巴原虫、棘阿米巴属、贾第鞭毛虫、隐孢子虫属、卡氏肺孢子虫、间日疟原虫、微小巴贝虫、布氏锥虫、克氏锥虫、刚地弓形虫等)、孢子丝菌属、芽生菌属、副球孢子菌属、球孢子菌属、组织胞浆菌属、溶组织内阿米巴、肠袋虫属、纳氏虫属、棘阿米巴属、贾第虫属、隐孢子虫属、肺孢子虫属、疟原虫属、巴贝虫属或锥虫属等。
B.免疫应答抑制
1.治疗策略
提供了减少或抑制受试者的免疫应答的方法。通常，所述方法包括向受试者施用有效量的免疫调节剂或用免疫调节剂离体引发的细胞。免疫应答可以是，例如，对抗原的初次免疫应答或效应细胞功能的增加，如增加T细胞的抗原特异性增殖、促进T细胞产生细胞因子、刺激分化或它们的组合。因此，在一些实施方案中，所述剂减少T细胞增殖、T细胞细胞因子产生、T细胞分化或它们的组合。在一些实施方案中，所述剂可减少初始T细胞发育成Th1、Th17、Th22或分泌或引起其他细胞分泌炎性分子的其他细胞的发育，所述炎性分子包括但不限于IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。在一些实施方案中，所述剂可增加或促进Treg的活性、增加来自Treg的细胞因子如IL-10的产生、增加Treg的分化、增加Treg的数量、提高免疫细胞群体内Treg的比例或增加Treg的存活。
所述方法可在体内或离体用作免疫应答抑制性治疗应用。因此，在一些实施方案中，将所述剂或编码所述剂的核酸直接施用于受试者。在一些实施方案中，将所述剂或编码所述剂的核酸离体与细胞(例如免疫细胞)接触，并将治疗细胞施用于受试者(例如过继转移)。通常，所公开的免疫调节剂可用于治疗患有或易患受试者的免疫系统产生针对其的少过度活跃或不适当的免疫应答的任何疾病或病症的受试者。所述剂可使不太稳健的免疫应答成为可能。所公开的组合物可用于减少或抑制涉及T细胞的免疫应答。
用于降低免疫应答的免疫调节剂通常是增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的那些。例如，所述剂可以是LAIR-1的激动剂，如激动剂(刺激)抗LAIR-1抗体或其抗原结合片段。所述剂也可以是LAIR-2的拮抗剂，如拮抗性(阻断)抗LAIR-2抗体，所述拮抗剂降低LAIR-2充当一种或多种LAIR-1配体的诱饵受体的能力。
例如，在一些实施方案中，将有效量的诱导LAIR-2阻断的剂施用至患有自身免疫性疾病或炎性疾病或病症的受试者。LAIR-1信号传导用于界定免疫应答，这对于预防自身免疫和免疫自身反应表现尤其重要。因此，LAIR-1表达降低可能导致自身免疫性提高。或者，增加的LAIR-2水平可通过阻止LAIR-1的配体交联和抑制性信号传导来促进自身免疫性。实际上，已经报告了患有类风湿性关节炎的患者中LAIR-2的水平增加(Olde Nordkamp等人2011,Arthritis Rheum.63:3749-3757)。因此，尽管RA患者中LAIR-1的水平增加，但因为LAIR-2具有较高的配体亲和力，因此LAIR-1表达的增加几乎没有影响。因此，阻断LAIR-2与胶原、SP-D和C1q的结合将导致LAIR-1的交联增加，随后免疫炎症途径减少。消减LAIR-2或阻断LAIR-2配体结合的mAb对于治疗其中LAIR-2的全身或局部水平增加的自身免疫性疾病可能特别有效。事实上，LAIR-2和LAIR-1两者的表达增加的自身免疫性疾病在LAIR-2mAb免疫疗法的情况下将最有可能成功，因为一旦LAIR-2被中和，则高水平的LAIR-1将具有比在具有低水平的LAIR-1表达的疾病中更大的抑制作用。因此，在一些实施方案中，LAIR-2mAb免疫疗法用于治疗患有类风湿性关节炎的受试者。
a.炎症应答
所公开的组合物和方法可用于治疗炎症。通常，所述剂用于通过向所述受试者施用一定量的免疫调节剂来降低或抑制受试者的免疫应答，所述免疫调节剂增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合。所述方法可减轻炎症的或多种症状。在一些实施方案中，炎症可以是急性、慢性或持续性炎症。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂减缓免疫系统。例如，剂可用于控制引起健康组织损害的超炎症应答。因此，在一些实施方案中，所述剂施用于经历超炎症应答的受试者。在此类情况下，控制过度免疫应答可能对受试者有益。
b.炎性和自身免疫性疾病/病症
增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的剂也可用于治疗炎性或自身免疫性疾病和病症。代表性炎性或自身免疫性疾病/病症包括但不限于，类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋巴增生综合征(alps)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、白塞病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻性皮炎、慢性疲劳综合征免疫缺陷综合征(CFIDS)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素病、肢端硬皮综合征(Crest syndrome)、克罗恩病、恶性萎缩性丘疹病(Dego’s disease)、皮肌炎、幼年型皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯病、格林-巴利、桥本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、Iga肾病、胰岛素依赖性糖尿病(I型)、幼年型关节炎、梅尼尔病、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、寻常天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺氏现象、莱特尔综合征、风湿热、类肉状瘤病、硬皮病、斯耶格伦综合征、僵人综合征、高安氏动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
在一些实施方案中，炎症或自身免疫性疾病由病原体引起，或者是感染的结果。
V.组合疗法
所公开的免疫调节剂可单独或与一种或多种另外的治疗剂组合施用至有需要的受试者。在一些实施方案中，所述免疫调节剂和另外的治疗剂分开、但同时施用。免疫调节剂和另外的治疗剂也可作为相同组合物的一部分施用。在其他实施方案中，所述免疫调节剂和第二治疗剂分开且在不同的时间施用，但作为相同治疗方案的一部分。
受试者可在施用第二治疗剂之前1、2、3、4、5、6或更多小时、或者1、2、3、4、5、6、7或更多天施用第一治疗剂。在一些实施方案中，可在第一次施用第二剂之前每1、2、3、4、5、67、14、21、28、35或48天向所述受试者施用一个或多个剂量的第一剂。所述免疫调节剂可以是第一或第二治疗剂。
所述免疫调节剂和另外的治疗剂可作为治疗方案的一部分施用。例如，如果第一治疗剂可每四天施用于受试者，则第二治疗剂可在第一天、第二天、第三天或第四天或它们的组合施用。可在整个治疗方案中重复施用第一治疗剂或第二治疗剂。
示例性分子包括但不限于细胞因子、化学治疗剂、放射性核素、其他免疫治疗剂、酶、抗生素、抗病毒剂(尤其是单独或与核苷组合用于治疗HIV或乙型肝炎或丙型肝炎的蛋白酶抑制剂)、抗寄生虫(蠕虫、原生动物)、生长因子、生长抑制剂、激素、激素拮抗剂、抗体以及其生物活性片段(包括人源化、单链和嵌合抗体)、抗原和疫苗制剂(包括佐剂)、肽药物、抗炎药、结合至Toll样受体(包括但不限于CpG寡核苷酸)以活化先天免疫系统的配体、动员和优化适应性免疫系统的分子、活化或上调细胞毒性T淋巴细胞的作用的其他分子、自然杀伤细胞和辅助T细胞以及使抑制性或调控性T细胞失活或下调的其他分子。
基于待治疗的疾患、病症或疾病选择另外的治疗剂。例如，所述免疫调节剂可与一种或多种另外的剂共同施用，所述剂用于增强或促进免疫应答或者减少或抑制免疫应答。
A.增加免疫应答
1.抗微生物剂
例如，如上所述，LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂可用于治疗和预防疾病中的预防或防治作用中，并且还可在严重创伤，如大面积烧伤、开放性骨折、意外截肢或其他伤口的背景下使用。因此，LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂可与抗微生物剂如抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂或精油组合施用于受试者。
在一些实施方案中，在入院时向受试者施用LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂和/或抗微生物剂以预防进一步的细菌、真菌或病毒并发症。抗生素可靶向病原体，并且LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂可刺激免疫系统，以提供治疗或预防进一步感染或疾病的增强的应答。
2.化学治疗剂
LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂可与一种或多种化学治疗剂和促凋亡剂组合。代表性化学治疗剂包括但不限于安吖啶、博来霉素、白消安、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、左旋门冬酰胺酶(crisantaspase)、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、柔红霉素、多西他赛、阿霉素、表柔比星、依托泊苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、亚叶酸、脂质体阿霉素、脂质体柔红霉素、洛莫司汀、美法仑、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、喷司他丁、丙卡巴肼、雷替曲塞、沙铂、链脲霉素、替加氟-尿嘧啶、替莫唑胺、替尼泊苷、噻替派、硫鸟嘌呤、托泊替康、曲奥舒凡、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨或它们的组合。代表性促凋亡剂包括但不限于牛磺孢子素(fludarabinetaurosporine)、环己酰亚胺、放线菌素D、乳糖酰基神经酰胺、15d-PGJ(2)以及它们的组合。
3.其他免疫调节剂
a.PD-1拮抗剂
在一些实施方案中，LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂与PD-1拮抗剂共同施用。程序性死亡-1(PD-1)是CD28受体家族的成员，其在T细胞上诱导时产生负性免疫应答。PD-1与其配体中的一种(B7-H1或B7-DC)之间的接触诱导抑制性应答，所述抑制性应答降低T细胞增殖和/或T细胞应答的强度和/或持续时间。合适的PD-1拮抗剂描述于美国专利号8,114,845、8,609,089和8,709,416中，所述专利明确地以引用的方式整体并入本文，并且包括结合至并阻断PD-1配体以干扰或抑制所述配体与PD-1受体的结合，或直接结合至并阻断PD-1受体而无需通过PD-1受体诱导抑制性信号转导的化合物或试剂。
在一些实施方案中，所述PD-1受体拮抗剂直接结合至PD-1受体而不触发抑制性信号转导，并且还结合至PD-1受体的配体以减少或抑制配体触发通过PD-1受体信号转导。通过减少结合至PD-1受体并触发抑制信号的转导的配体的数量和/或量，更少的细胞通过由PD-1信号转导递送的负信号减弱，并且可实现更稳健的免疫应答。
据信PD-1信号传导通过结合至由主要组织相容性复合物(MHC)呈递的肽抗原非常接近的PD-1配体(如B7-H1或B7-DC)而驱动PD-1信号传导(参见例如，Freeman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,105:10275-10276(2008))。因此，防止T细胞膜上PD-1和TCR的共连接的蛋白质、抗体或小分子也是有用的PD-1拮抗剂。
在一些实施方案中，PD-1受体拮抗剂是小分子拮抗剂或抗体，其通过结合至PD-1的配体或PD-1本身来减少或干扰PD-1受体信号转导，尤其是在PD-1与TCR的的共连接不遵循这种结合的情况下，从而不会触发通过PD-1受体进行的抑制性信号转导。
本发明的方法考虑的其他PD-1拮抗剂包括结合至PD-1或PD-1的配体的抗体，以及其他抗体。
合适的抗PD-1抗体包括但不限于以下出版物中描述的那些：
PCT/IL03/00425(Hardy等人，WO/2003/099196)
PCT/JP2006/309606(Korman等人，WO/2006/121168)
PCT/US2008/008925(Li等人，WO/2009/014708)
PCT/JP03/08420(Honjo等人，WO/2004/004771)
PCT/JP04/00549(Honjo等人，WO/2004/072286)
PCT/IB2003/006304(Collins等人，WO/2004/056875)
PCT/US2007/088851(Ahmed等人，WO/2008/083174)
PCT/US2006/026046(Korman等人，WO/2007/005874)
PCT/US2008/084923(Terrett等人，WO/2009/073533)
Berger等人,Clin.Cancer Res.,14:30443051(2008)。
抗PD-1抗体的具体实例是Kosak，US 20070166281(2007年7月19日公布)在部分42)中描述的抗体，一种人抗PD-1抗体，其在一些实施方案中以3mg/kg的剂量施用。
示例性抗B7-H1抗体包括但不限于在以下公布中描述的那些：
PCT/US06/022423(WO/2006/133396，2006年12月14日公布)
PCT/US07/088851(WO/2008/083174，2008年7月10日公布)
US 2006/0110383(2006年5月25日公布)
抗B7-H1抗体的具体实例是描述的抗体(WO/2007/005874，2007年1月11日公布))，一种人抗B7-H1抗体。
2014/0044738中公开了另外的抗PD-1和抗B7-H1抗体，所述专利以引用的方式整体并入本文。
对于抗B7-DC抗体，参见7,411,051、7,052,694、7,390,888和美国公布的申请号2006/0099203。
其他示例性PD-1受体拮抗剂包括但不限于B7-DC多肽，包括这些的同源物和变体以及任何前述的活性片段，以及并入这些中的任一种的融合蛋白。在一些实施方案中，所述融合蛋白包含与抗体的Fc部分偶联的B7-DC的可溶性部分(如人IgG)，并且不包含人B7-DC的全部或部分跨膜部分。
PD-1拮抗剂也可以是例如来自小鼠或灵长类动物(如人)的哺乳动物B7-H1的片段，其中所述片段结合至并阻断PD-1但不导致通过PD-1进行的抑制性信号转导。所述片段也可以是融合蛋白的一部分，例如Ig融合蛋白。
其他有用的多肽PD-1拮抗剂包括与PD-1受体的配体结合的那些。这些包括PD-1受体蛋白或其可溶性片段，其可结合至PD-1配体如B7-H1或B7-DC，并且阻止与内源性PD-1受体结合，从而阻止抑制性信号转导。B7-H1还显示结合蛋白B7.1(Butte等人,Immunity,Vol.27,pp.111-122,(2007))。此类片段还包括PD-1蛋白的可溶性ECD部分，所述ECD部分包含突变，如A99L突变，所述突变增加与天然配体的结合(Molnar等人,PNAS,105:10483-10488(2008))。B7-1或其可溶性片段也是有用的，其可结合至B7-H1配体并阻止与内源性PD-1受体的结合，从而阻止抑制性信号转导。
PD-1和B7-H1反义核酸(DNA和RNA)以及siRNA分子也可以是PD-1拮抗剂。此类反义分子阻止T细胞上PD-1的表达以及T细胞配体(例如B7-H1、PD-L1和/或PD-L2)的产生。例如，与载体如聚乙烯亚胺复合的siRNA(例如，长度约21个核苷酸，其对编码PD-1或编码PD-1配体的基因具有特异性，并且所述寡核苷酸可容易地商购)(参见Cubillos-Ruiz等人,J.Clin.Invest.119(8):2231-2244(2009)容易地被表达PD-1以及PD-1的配体的细胞吸收，并且减少这些受体和配体的表达以实现T细胞中的抑制性信号转导减少，从而活化T细胞。
b.CTLA4拮抗剂
用于介导T细胞在免疫应答中的作用的其他分子也被考虑作为另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述分子是CTLA4的拮抗剂，例如拮抗性抗-CTLA4抗体。预期用于本发明方法中的抗-CTLA4抗体的实例包括PCT/US2006/043690(Fischkoff等人,WO/2007/056539)中描述的抗体。
抗PD-1、抗B7-H1和抗-CTLA4抗体的剂量是本领域中已知的，并且可以在例如0.1至100mg/kg的范围内，或者在1至50mg/kg或10至20mg/kg的范围内。对于人受试者的合适剂量可在5与15mg/kg之间，其中10mg/kg的抗体(例如，人抗PD-1抗体)是具体实施方案。
可用于本发明方法中的抗-CTLA4抗体的具体实例是以例如约10mg/kg的剂量施用的伊匹单抗(一种人抗-CTLA4抗体)和以例如约15mg/kg的剂量施用的曲美木单抗(一种人抗-CTLA4抗体)。还参见Sammartino等人,Clinical Kidney Journal,3(2):135-137(2010)，2009年12月在线公布。
在其他实施方案中，所述拮抗剂是小分子。已显示一系列小有机化合物结合至B7-1配体以阻止结合至CTLA4(参见Erbe等人,J.Biol.Chem.,277:7363-7368(2002)。此类小有机物可单独施用或与抗CTLA4抗体一起施用，以减少T细胞的抑制性信号转导。
4.增效剂
在一些实施方案中，另外的治疗剂包括增效剂。增效剂用于可能地通过多于一种机制增加免疫应答上调剂的功效，尽管精确作用机制对于本发明的广泛实践并不是必需的。
在一些实施方案中，增效剂是环磷酰胺。环磷酰胺(CTX、或)是一种氧氮磷环(oxazahosphorine)类药物，并且类似物包括异环磷酰胺(IFO，Ifex)、培磷酰胺、氯乙环磷酰胺(trophosphamide)(曲磷胺；Ixoten)以及其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药和代谢物(美国专利申请20070202077，其整体并入)。异环磷酰胺是环磷酰胺的结构类似物，并且其作用机制被认为与环磷酰胺的作用机制相同或基本上类似。培磷酰胺(4-氢过氧环磷酰胺)和氯乙环磷酰胺也是烷化剂，其在结构上与环磷酰胺有关。例如，培磷酰胺烷基化DNA，从而抑制DNA复制和RNA以及蛋白质合成。已经设计并评价了新的氧氮磷环衍生物，试图通过降低的宿主毒性来提高选择性和应答性(Liang J,HuangM,Duan W,Yu XQ,Zhou S.Design of new oxazaphosphorine anticancer drugs.CurrPharm Des.2007；13(9):963-78.Review)。这些包括马磷酰胺(NSC 345842)、葡磷酰胺(D19575，β-D-葡糖基异膦酰胺氮芥)、S-(-)-溴异环磷酰胺(bromofosfamide)(CBM-11)、NSC 612567(醛磷酰胺全氢噻嗪)和NSC613060(醛磷酰胺噻唑烷)。马磷酰胺是一种氧氮磷环类似物，其是4-羟基-CPA的化学稳定的4-硫代乙烷磺酸盐。葡磷酰胺是IFO衍生物，其中异磷酰胺氮芥(IFO的烷基化代谢物)与β-D-葡萄糖分子糖苷键连接。另外的环磷酰胺类似物描述于题为“Cyclophosphamide analogs useful as useful as tumor-tumor agents”的美国专利5,190,929中，其以引用的方式整体并入本文。
虽然CTX本身是无毒的，但一些它的代谢物是诱导DNA交联并且在较高剂量下诱导链断裂的细胞毒性烷化剂。许多细胞对CTX具有抗性，因为它们表达高水平的解毒酶醛脱氢酶(ALDH)。CTX靶向增殖淋巴细胞，因为淋巴细胞(但不是造血干细胞)仅表达低水平的ALDH，并且循环细胞对DNA烷基化剂最敏感。
低剂量的CTX(<200mg/kg)可具有免疫刺激作用，包括刺激人和癌症小鼠模型中的抗肿瘤免疫应答(Brode&Cooke Crit Rev.Immunol.28:109-126(2008))。这些低剂量是亚治疗剂并且不具有直接的抗肿瘤活性。相比之下，高剂量的CTX抑制抗肿瘤应答。若干机制可解释CTX在增强抗肿瘤免疫应答中的作用：(a)CD4+CD25+FoxP3+Treg(特别是增殖Treg，其可尤其具有抑制作用)的消减；(b)B淋巴细胞的消减；(c)诱导一氧化氮(NO)，从而导致肿瘤细胞生长的抑制；(d)动员和扩增CD11b+Gr-1+MDSC。这些主要影响具有许多次要影响；例如，在Treg消减后，巨噬细胞产生更多的IFN-γ和更少的IL-10。CTX还显示诱导I型IFN表达并促进淋巴细胞的稳态增殖。
Treg消减最常被引用作为CTX加强抗肿瘤免疫应答的机制。这一结论部分地基于过继转移实验的结果。在AB1-HA肿瘤模型中，第9天的CTX处理给出75％的治愈率。在第12天转移纯化的Treg几乎完全抑制CTX应答(van der Most等人CancerImmunol.Immunother.58:1219-1228(2009)。在HHD2肿瘤模型中观察到类似的结果：在CTX预处理后CD4+CD25+Treg的过继转移消除了对疫苗的治疗反应(Taieb,J.J.Immunol.176:2722-2729(2006))。
许多人临床试验已证明低剂量CTX是一种安全、耐受良好且有效的促进抗肿瘤免疫应答的剂(Bas,&Mastrangelo Cancer Immunol.Immunother.47:1-12(1998))。
CTX增强抗肿瘤免疫应答的最佳剂量是通过将Treg水平降低至正常范围以下来降低总体T细胞计数但为亚治疗剂的剂量(参见Machiels等人Cancer Res.61:3689-3697(2001))。
在CTX已被用作免疫增强剂的人临床试验中，通常使用300mg/m2的剂量。对于平均男性(6ft，170磅(78kg)，体表面积为1.98m2)，300mg/m2是8mg/kg或624mg的总蛋白质。在小鼠癌症模型中，已在15-150mg/kg范围内的剂量下发现功效，其涉及在30g小鼠中0.45-4.5mg的总蛋白质(Machiels等人Cancer Res.61:3689-3697(2001)；Hengst等人CancerRes.41:2163-2167(1981)；Hengst Cancer Res.40:2135-2141(1980))。
对于较大的哺乳动物，如灵长类动物(如人、患者)，可使用这样的mg/m2剂量，但也可使用在有限时间间隔内施用的单位剂量。此类单位剂量可每天施用持续有限的时间段，如最多3天、或最多5天、或最多7天、或最多10天、或最多15天或最多20天或最多25天全部由本发明具体地考虑。相同的方案可应用于本文所述的其他增效剂。
在其他实施方案中，增效剂是降低调控性T淋巴细胞(T-reg)的活性和/或数量的剂，如舒尼替尼抗TGFβ或伊马替尼所述治疗方案还可包括施用佐剂。
有用的增效剂还包括有丝分裂抑制剂，如紫杉醇、芳香酶抑制剂(例如来曲唑)和血管生成抑制剂(VEGF抑制剂，例如阿瓦斯丁、VEGF-Trap)(参见例如，Li等人,Vascularendothelial growth factor blockade reduces intratumoral regulatory T cellsand enhances the efficacy of a GM-CSF-secreting cancer immunotherapy.ClinCancer Res.2006年11月15日；12(22):6808-16)、蒽环霉素、奥沙利铂、阿霉素、TLR4拮抗剂和IL-18拮抗剂。
B.降低免疫应答
1.免疫遏制剂
在一些实施方案中，通过向受试者施用LAIR-1或LAIR-2免疫调节剂和作为免疫抑制剂的第二剂来治疗免疫应答或炎性/自身免疫性疾病/病症。免疫遏制剂包括但不限于针对其他淋巴细胞表面标志物(例如CD40、α-4整联蛋白)或针对细胞因子)的抗体、融合蛋白(例如，CTLA-4-IgTNFR-IgTNF-α阻断剂，如依那西普(Enbrel)、Remicade(英利昔单抗)、Cimzia(英利昔单抗)和阿达木单抗(Humira)、环磷酰胺(CTX)(即 RevimmuneTM)、甲氨喋呤(MTX)(即)、贝利单抗(即)或其他免疫遏制药物(例如，环孢菌素A、FK506样化合物、雷帕霉素化合物或类固醇)、抗增殖剂、细胞毒性剂或可有助于免疫遏制的其他化合物。
治疗剂可以是CTLA-4融合蛋白，如CTLA-4-Ig(阿巴西普)。CTLA-4-Ig融合蛋白与T细胞上的共刺激受体CD28竞争以便结合至抗原呈递细胞上的CD80/CD86(B7-1/B7-2)，并且因此起作用来抑制T细胞活化。在另一个实施方案中，治疗剂是被称为贝拉西普的CTLA-4-Ig融合蛋白。贝拉西普含有在体内显著地增加其对于CD86的亲合力的两个氨基酸取代(L104E和A29Y)。在另一个实施方案中，治疗剂是Maxy-4。
在另一个实施方案中，治疗剂是环磷酰胺(CTX)。环磷酰胺(Cyclophosphamide)(RevimmuneTM的通用名称)，又称为环磷酰胺(cytophosphane)，是来自噁唑弗林(oxazophorine)组的氮芥烷基化剂。它用于治疗不同类型的癌症以及一些自身免疫病症。环磷酰胺(CTX)是用于患有肾狼疮的患者的弥漫增生性肾小球肾炎的主要药物。
所述治疗剂可以减少抗-双链DNA(抗-ds DNA)自身抗体的血液或血清水平和/或减少有需要的患者的蛋白尿的有效量来施用。
在另一个实施方案中，所述治疗剂增加血清中的腺苷量，参见例如WO 08/147482。例如，第二治疗剂可以是增加CD73表达的CD73-Ig、重组CD73或另一种剂(例如细胞因子或单克隆抗体或小分子)，参见例如WO 04/084933。在另一个实施方案中，所述治疗剂是干扰素-β。
所述治疗剂可以是抑制或减少Th1、Th17、Th22和/或分泌或引起其他细胞分泌炎性分子的其他细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌的小分子，所述炎性分子包括但不限于IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-18IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。在另一个实施方案中，所述治疗剂是与Treg相互作用、增强Treg活性、促进或增强Treg的IL-10分泌、增加Treg数量、增加Treg的抑制能力或其组合的小分子。
在一些实施方案中，组合物增加Treg活性或产生。示例性Treg增强剂包括但不限于糖皮质激素氟替卡松，沙美特罗(salmeterol)，针对IL-12、IFN-γ和IL-4的抗体；维生素D3，以及地塞米松及它们的组合。
在一些实施方案中，所述治疗剂是抗体，例如针对促炎性分子如IL-6、IL-23、IL-22或IL-21的功能阻断性抗体。
如本文所用，术语“雷帕霉素化合物”包括中性三环化合物雷帕霉素、雷帕霉素衍生物、雷帕霉素类似物，以及被认为具有与雷帕霉素相同的作用机制(例如，抑制细胞因子功能)的其他大环内酯类化合物。措辞“雷帕霉素化合物”包括与雷帕霉素具有结构相似性的化合物，例如具有被修饰以便增强其治疗有效性的相似大环结构的化合物。示例性雷帕霉素化合物是本领域中已知的(参见例如，WO95122972、WO95116691、WO 95104738、美国专利号6,015,809；5,989,591；美国专利号5,567,709；5,559,112；5,530,006；5,484,790；5,385,908；5,202,332；5,162,333；5,780,462；5,120,727)。
措辞“FK506样化合物”包括FK506以及FK506衍生物和类似物，例如与FK506具有结构相似性的化合物，例如具有被修饰以便增强其疗效的相似大环结构的化合物。FK506样化合物的实例包括例如WO 00101385中描述的那些化合物。在一些实施方案中，如本文所用的措辞“雷帕霉素化合物”不包括FK506样化合物。
2.抗炎药
其他合适的治疗剂包括但不局限于抗炎剂。抗炎剂可以是非类固醇、类固醇或它们的组合。一个实施方案提供含有约1％(w/w)至约5％(w/w)、通常约2.5％(w/w)抗炎剂的口服组合物。非类固醇抗炎症剂的代表性实例包括但不局限于昔康类药物，如吡罗昔康、伊索昔康、替诺昔康、舒多昔康；水杨酸酯类，例如阿斯匹林、双水杨酸酯制剂(disalcid)、贝诺酯(benorylate)、三水杨酸胆碱镁(trilisate)、沙发普林(safapryn)、索普林(solprin)、双氟尼酸(diflunisal)以及芬多沙(fendosal)；乙酸衍生物，如双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美汀(tolmetin)、伊索克酸(isoxepac)、呋罗芬酸(furofenac)、硫平酸(tiopinac)、齐多美辛(zidometacin)、阿西美辛(acemetacin)、芬替酸(fentiazac)、佐美酸(zomepirac)、克仑达那(clindanac)、奥昔平酸(oxepinac)、吩布默克(felbinac)以及酮咯酸(ketorolac)；芬那酯衍生物类(fenamates)，如甲灭酸(mefenamic)、甲氯芬那酸(meclofenamic)、氟灭酸(flufenamic)、尼氟灭(niflumic)以及托芬那酸酸(tolfenamic acid)；丙酸衍生物，如布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬布芬(fenbufen)、吲哚洛芬(indopropfen)、吡洛芬(pirprofen)、卡洛芬(carprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、普拉洛芬(pranoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、硫噁洛芬(tioxaprofen)、舒洛芬(suprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)以及噻洛芬酸(tiaprofenic)；吡唑，如苯基丁氮酮(phenylbutazone)、羟保松(oxyphenbutazone)、非泼拉酮(feprazone)、阿扎丙酮(azapropazone)以及三甲保泰松(trimethazone)。也可采用这些非类固醇抗炎剂的混合物。
类固醇抗炎药物的代表性实例包括但不限于皮质类固醇类，如氢可的松、羟基-曲安西龙、α-甲基地塞米松、地塞米松磷酸酯、二丙酸倍氯米松、氯倍他索戊酸酯、羟泼尼缩松、去氧米松、乙酸去氧皮质酮、地塞米松、双氯松(dichlorisone)、双氟拉松双乙酸酯(diflorasone diacetate)、双氟米松戊酸酯、氟氢缩松、氟氯缩松(flucloroloneacetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、氟米松特戊酸酯(flumethasone pivalate)、游离氟轻松(fluosinolone acetonide)、氟轻松乙酸酯(fluocinonide)、氟氯可汀丁基酯(flucortine butylesters)、氟可龙(fluocortolone)、氟泼尼定(fluprednidene；fluprednylidene)乙酸酯、氟雄诺龙(flurandrenolone)、哈西缩松(halcinonide)、乙酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、氢可的松丁酸酯(hydrocortisone butyrate)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、肤轻松(flucetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二氟若松双乙酸酯(difluorosone diacetate)、氟若卓龙(fluradrenolone)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二氟乐松双乙酸酯(diflurosonediacetate)、氟若卓龙安奈德(fluradrenolone acetonide)、甲羟松(medrysone)、安西那飞(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松(betamethasone)以及其平衡酯、氯泼尼松(chloroprednisone)、克洛泼尼龙乙酸酯(chlorprednisone acetate)、可洛替龙(clocortelone)、可洛西龙(clescinolone)、双氯松(dichlorisone)、二氟泼耐酯(diflurprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼缩松(flunisolide)、氟米龙(fluoromethalone)、氟培龙(fluperolone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氢可的松戊酸酯(hydrocortisone valerate)、氢可的松环戊丙酸酯(hydrocortisonecyclopentylpropionate)、氢可松氨酯(hydrocortamate)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、波尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、曲安西龙(triamcinolone)以及它们的混合物。
VI.AML生物标志物
一个实施方案提供了一种用于通过测定需要治疗的受试者的细胞以确定所述细胞是否表达LAIR、LAIR的结合配偶体或两者来评估或预测使用抗LAIR结合部分的治疗的功效的方法。待测定的示例性细胞包括但不限于从所述受试者获得的癌细胞。示例性癌细胞包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)细胞。表达多种相互作用抑制性受体的癌细胞据信对使用抗LAIR结合部分的治疗更好地反应。示例性LAIR结合配偶体包括但不限于跨膜胶原(XIII、XVII和XXIII)和LILRB4。图3示出基于癌细胞上LAIR-1或LAIR-1的结合配偶体的存在的预测治疗结果。
VII.药盒
所公开的LAIR-1和LAIR-2免疫调节剂可包装在指示数量的气密密封容器中，如安瓿或小药囊。所述剂可作为处于气密密封容器中的干燥无菌冻干粉末或无水浓缩物来提供，并且可例如用水或盐水重构至用于向受试者施用的适当浓度。例如，所述剂可作为处于气密密封容器中的干燥无菌冻干粉以至少5mg或至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg或至少75mg的单位剂量来提供。所述冻干剂可在2℃与8℃之间储存在它们的原始容器中，并且通常在重构后12小时内或6小时内、或5小时内、或3小时内或1小时内施用。
在替代实施方案中，剂以液体形式提供在指示量和浓度的气密密封容器中。在一些实施方案中，液体形式的剂提供在包括至少1mg/ml或至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少100mg/ml、至少150mg/ml、至少200mg/ml的所述剂的气密密封容器中。
还提供了药物包和药盒，其包括一个或多个装有剂的容器。另外，适用于治疗疾病的一种或多种其他预防剂或治疗剂也可包括在药物包或药盒中。所述药物包或药盒还可包括一个或多个装有所公开的药物组合物的一种或多种成分的容器。任选地，与所述容器相伴的可为由管制医药或生物产品的制造、使用或销售的政府机构开具的呈表格形式的报告书，所述报告书反映由制造、使用或销售的机构核准供人施用。
还提供了被设计用于上述方法的药盒。实施方案通常包括一种或多种LAIR-1和/或LAIR-2免疫调节剂。在特定实施方案中，药盒还包括在一个或多个容器中适用于治疗癌症的一种或多种其他预防剂或治疗剂。在其他实施方案中，药盒还包括一种或多种适用于治疗一个或多个容器中的炎性和自身免疫性疾病的抗炎剂。
实施例
实施例1：LAIR抗体及其重链和轻链序列
材料和方法
小鼠抗人LAIR-1单克隆抗体
用与鼠G2a Fc(SEQ ID NO:10)融合的可溶性人LAIR-1(可溶性LAIR-1是指LAIR-1的细胞外结构域)免疫小鼠。在2周后用相同的免疫原激发小鼠。在两周后小鼠接受第3剂量的抗原。在最后一次加强后3天，收获小鼠脾细胞并重新悬浮于补充有10％FBS和谷氨酰胺的RPMI中，并且稍后融合以形成杂交瘤。
RACE
根据以下方案进行RACE(cDNA末端的快速扩增)鉴定重链和轻链：(1)mRNA变性，(2)cDNA合成，(3)5'RACE反应，(4)分析的PCR结果(在琼脂糖凝胶上以可视化扩增的DNA片段-正确的抗体可变区DNA片段应具有500-700碱基对之间的大小，(5)TOPO克隆的PCR阳性条带；(6)PCR扩增的TOPO克隆，随后凝胶电泳并从琼脂糖凝胶中回收，(7)总计测序218个克隆，(8)使用测序数据进行CDR分析(CDR区域使用可通过vbase2.org获得的VBASE2定义)。
结果
使用RACE方法克隆抗体。抗体序列分析鉴定了13种抗体杂交瘤(本文称为1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a和12E10b)的一条可变重链和一条可变轻链。序列在下文和上文提供。重链和轻链序列和CDR在上文、下文提供，并在图1A和1B中示出。
1E11序列
1E11VL氨基酸序列
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQ KPGQSPQVLIYQMSSLASGVPDRFSSSGSGTEFTLRISRVEAEDVG VYYCAQNLELPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:19)
1E11VL的CDR1
1E11VL的CDR1的氨基酸包含
RSSKSLLHSNGITYLY(SEQ ID NO:20)
1E11VL的CDR2
1E11VL的CDR2的氨基酸包含
QMSSLAS(SEQ ID NO:21)。
1E11VL的CDR3
1E11VL的CDR3的氨基酸包含
AQNLELPLT(SEQ ID NO:22)。
1E11VH氨基酸序列
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYDINWVKQRP GQGLEWIGWIYPRDGSTKYNEKLKGKATLTVDTSSRTAYMELHS LTSEDSAVYFCARGGYYDYDGYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:23)
1E11VH的CDR1
1E11VH的CDR1的氨基酸包含
SYDIN(SEQ ID NO:24)。
1E11VH的CDR2
1E11VH的CDR2的氨基酸包含
WIYPRDGSTKYNEKLKG(SEQ ID NO:25)。
1E11VH的CDR3
1E11VH的CDR3的氨基酸包含
GGYYDYDGY(SEQ NO:26)。
1G7序列
1G7VL氨基酸序列
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGK SPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQ QLYSTPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:27)。
IG7VL的CDR1
1G7VL的CDR1的氨基酸包含
LASQTIGTWLA(SEQ ID NO:28)。
IG7VL的CDR2
1G7VL的CDR2的氨基酸包含
AATSLAD(SEQ ID NO:29)。
IG7VL的CDR3
1G7VL的CDR3的氨基酸包含
QQLYSTPLT(SEQ ID NO:30)。
1G7VH氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTNAMYWVRQAP GKGLEWVARIRSKSSNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQM NNLKTEDTARYYCVRGGSGFFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:31)。
1G7VH的CDR1
1G7VH的CDR1的氨基酸包含
TNAMY(SEQ ID NO:32)。
1G7VH的CDR2
1G7VH的CDR2的氨基酸包含
RIRSKSSNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:33)。
1G7VH的CDR3
1G7VH的CDR3的氨基酸包含
GGSGFFAY(SEQ ID NO:34)。
4B3序列
4B3VL氨基酸序列
DIVMKQSPSSLRVSAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAW YQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFALTISSVQAE DLAVYYCQNDHSYPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:35)
4B3VL的CDR1
4B3VL的CDR1的氨基酸包含
KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ ID NO:36)。
4B3VL的CDR2
4B3VL的CDR2的氨基酸包含
GASTRES(SEQ ID NO:37)。
4B3VL的CDR3
4B3VL的CDR3的氨基酸包含
QNDHSYPFT(SEQ ID NO:38)。
4B3VH氨基酸序列
QIQLQQSGAELARPGASVKLPCKASDYIFISYGLNWVRQTTG QGLEWIGEIYPRSGHTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLT SEDSAVYFCARRSVFYDYDKNGFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:39)。
4B3VH的CDR1
4B3VH的CDR1的氨基酸包含
SYGLN(SEQ ID NO:40)。
4B3VH的CDR2
4B3VH的CDR2的氨基酸包含
EIYPRSGHTYYNEKFKG(SEQ ID NO:41)。
4B3VH的CDR3
4B3VH的CDR3的氨基酸包含
RSVFYDYDKNGFDY(SEQ ID NO:42)。
5A6序列
5A6VL氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASLGERVSFSCRASQDIGSSLNWLQQEPDGT IKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVEYYCLQ YDSFPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:43)。
5A6VL的CDR1
5A6VL的CDR1的氨基酸包含
RASQDIGSSLN(SEQ ID NO:44)。
5A6VL的CDR2
5A6VL的CDR2的氨基酸包含
ATSSLDS(SEQ ID NO:45)。
5A6VL的CDR3
5A6VL的CDR3的氨基酸包含
LQYDSFPYT(SEQ ID NO:46)。
5A6VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRT GQGLEWIGEIYPRRGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSL TSEDSAVYFCARQLFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:47)。
5A6VH的CDR1
5A6VH的CDR1的氨基酸包含
SYGIS(SEQ ID NO:48)。
5A6VH的CDR2
5A6VH的CDR2的氨基酸包含
EIYPRRGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO:49)。
5A6VH的CDR3
5A6VH的CDR3的氨基酸包含
QLFAY(SEQ ID NO:50)。
5E1序列
5E1VL氨基酸序列
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDG TVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQ QGNTLPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:51)。
5E1VL的CDR1
5E1VL的CDR1的氨基酸序列包含
RASQDISNYLN(SEQ ID NO:52)。
5E1VL的CDR2
5E1VL的CDR2的氨基酸序列包含
YTSRLHS(SEQ ID NO:53)。
5E1VL的CDR3
5E1VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQGNTLPRT(SEQ ID NO:54)。
5E1VH氨基酸序列
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTGYFMNWVKQSP EKSLEWIGEIHPSTGSIIYNQKFKAKATLTIDKSSSTAYMQLKSLTS EDSAVYYCARFDYSNSFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:55)。
5E1VH的CDR1
5E1VH的CDR1的氨基酸序列包含
GYFMN(SEQ ID NO:56)。
5E1VH的CDR2
5E1VH的CDR2的氨基酸序列包含
EIHPSTGSIIYNQKFKA(SEQ ID NO:57)。
5E1VH的CDR3
5E1VH的CDR3的氨基酸序列包含
FDYSNSFAY(SEQ ID NO:58)。
6B2序列
6B2VL氨基酸序列
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGK SPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQ QLYSTPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:59)。
6B2VL的CDR1
6B2VL的CDR1的氨基酸序列包含
LASQTIGTWLA(SEQ ID NO:60)。
6B2VL的CDR2
6B2VL的CDR2的氨基酸序列包含
AATSLAD(SEQ ID NO:61)。
6B2VL的CDR3
6B2VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQLYSTPLT(SEQ ID NO:62)。
6B2VH氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFNINAMNWVRQAP GKGLEWVARIRSKSNNYETYYADSVKDRFTISRDDSESMVYLQM NNLKTEDTAMYYCVRSLWFVYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:63)。
6B2VH的CDR1
6B2VH的CDR1的氨基酸序列包含
INAMN(SEQ ID NO:64)。
6B2VH的CDR2
6B2VH的CDR2的氨基酸序列包含
RIRSKSNNYETYYADSVKD(SEQ ID NO:65)。
6B2VH的CDR3
6B2VH的CDR3的氨基酸序列包含
SLWFVY(SEQ ID NO:66)。
6F4序列
6F4VL氨基酸序列
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINSYLSWVQQKPGK SPKTLIDRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYC LQYDEFPPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:67)。
6F4VL的CDR1
6F4的CDR1的氨基酸序列包含
KASQDINSYLS(SEQ ID NO:68)。
6F4VL的CDR2
6F4的CDR2的氨基酸序列包含
RANRLVD(SEQ ID NO:69)。
6F4VL的CDR3
6F4的CDR3的氨基酸序列包含
LQYDEFPPYT(SEQ ID NO:70)。
6F4VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELAKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQR PGQGLEWIGYINPFSGHTKYNQKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSS LTYEDSAVYYCARNFDQWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:71)。
6F4VH的CDR1
6F4VH的CDR1的氨基酸序列包含
SYWMH(SEQ ID NO:72)。
6F4VH的CDR2
6F4VH的CDR2的氨基酸序列包含
YINPFSGHTKYNQKFKD(SEQ ID NO:73)。
6F4VH的CDR3
6F4VH的CDR3的氨基酸序列包含
NFDQ(SEQ ID NO:74)。
6G6序列
6G6VL氨基酸序列
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQNVGTAVAWYQQKPG QSPKLLIYWASIRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYF CQQYSSHPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:75)。
6G6VL的CDR1
6G6VL的CDR1的氨基酸序列包含
KASQNVGTAVA(SEQ ID NO:76)。
6G6VL的CDR2
6G6VL的CDR2的氨基酸序列包含
WASIRHT(SEQ ID NO:77)。
6G6VL的CDR3
6G6VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQYSSHPYT(SEQ ID NO:78)。
G6G VH氨基酸序列
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTTYYMNWVKQSH GKSLEWIGNINPDNGITSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSL TSEDSAVYYCARGKSLAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:79)。
6G6VH的CDR1
6G6VH的CDR1的氨基酸序列包含
TYYMN(SEQ ID NO:80)。
6G6VH的CDR2
6G6VH的CDR2的氨基酸序列包含
NINPDNGITSYNQKFKG(SEQ ID NO:81)。
6G6VH的CDR3
6G6VH的CDR3的氨基酸序列包含
GKSLAY(SEQ ID NO:82)。
7G3序列
7G3VL氨基酸序列
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQ KPGQSPQVLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTEFTLRISRVEAEDVG VYYCAQNLEFPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:83)。
7G3VL的CDR1
7G3VL的CDR1的氨基酸序列包含
RSSKSLLHSNGITYLY(SEQ ID NO:84)。
7G3VL的CDR2
7G3VL的CDR2的氨基酸序列包含
QMSNLAS(SEQ ID NO:85)。
7G3VL的CDR3
7G3VL的CDR3的氨基酸序列包含
AQNLEFPLT(SEQ ID NO:86)。
7G3VH氨基酸序列
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGYTFTTYDINWVKQRP GQGLEWIGWIYPRDGTTKYNEKFKGKATLTVDTSSTTAYMELHS LTSEDSAVYFCARGGYYDYDGYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:87)。
7G3VH的CDR1
7G3VH的CDR1的氨基酸序列包含
TYDIN(SEQ ID NO:88)。
7G3VH的CDR2
7G3VH的CDR2的氨基酸序列包含
WIYPRDGTTKYNEKFKG(SEQ ID NO:89)。
7G3VH的CDR3
7G3VH的CDR3的氨基酸序列包含
GGYYDYDGY(SEQ ID NO:90)。
9H6序列
9H6VL氨基酸序列
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGR SPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKINSLQAEDFVSYYC QQLYSTPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:91)。
9H6VL的CDR1
9H6VL的CDR1的氨基酸序列包含
LASQTIGTWLA(SEQ ID NO:92)。
9H6VL的CDR2
9H6VL的CDR2的氨基酸序列包含
AATSLAD(SEQ ID NO:93)。
9H6VL的CDR3
9H6VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQLYSTPFT(SEQ ID NO:94)。
9H6VH氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFNTHAMNWVRQAP GKGLEWVARIRTKSNNYATYYADSVKDRFIISRDDSENMVYLQM NNLKTEDTAIYYCVRLRGGFLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:95)。
9H6VH的CDR1
9H6VH的CDR1的氨基酸序列包含
THAMN(SEQ ID NO:96)。
9H6VH的CDR2
9H6VH的CDR2的氨基酸序列包含
RIRTKSNNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:97)。
9H6VH的CDR3
9H6VH的CDR3的氨基酸序列包含
LRGGFLDY(SEQ ID NO:98)。
11B3序列
11B3VL氨基酸序列
DIQMAQSSSSFSVSLGDRVTITCKASEDIYIRLAWYQQKPGNA PRLLISTATSLETGVPSRFSGSGSGKDYTLSITSLQTEDVATYYCQQ YWSTPYTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:99)。
11B3VL的CDR1
11B3VL的CDR1的氨基酸序列包含
KASEDIYIRLA(SEQ ID NO:100)。
11B3VL的CDR2
11B3VL的CDR2的氨基酸序列包含
TATSLET(SEQ ID NO:101)。
11B3VL的CDR3
11B3VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQYWSTPYT(SEQ ID NO:102)。
11B3VH氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASDFTFNTYAMHWVRQAP GKGLEWVARIRTKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQM NNLTTEDTAMYYCVRDRYGGAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:103)
11B3VH的CDR1
11B3VH的CDR1的氨基酸序列包含
TYAMH(SEQ ID NO:104)。
11B3VH的CDR2
11B3VH的CDR2的氨基酸序列包含
RIRTKSNNYATYYADSVKD(SEQ ID NO:105)。
11B3VH的CDR3
11B3VH的CDR3的氨基酸序列包含
DRYGGAMDY(SEQ ID NO:106)。
12E10a序列
克隆12E10据发现具有两条轻链(12E10a和12E10b).mb
12E10a VL氨基酸序列
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVRSAVAWYQQKPG QSPKTLIYLASNRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYF CLQHWNYPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:107)。
12E10a VL的CDR1
12E10a VL的CDR1的氨基酸序列包含
KASQNVRSAVA(SEQ ID NO:108)。
12E10a VL的CDR2
12E10a VL的CDR2的氨基酸序列包含
LASNRHT(SEQ ID NO:109)。
12E10a VL的CDR3
12E10a VL的CDR3的氨基酸序列包含
LQHWNYPLT(SEQ ID NO:110)。
12E10(a和b)VH氨基酸序列
QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSCGLSWVKQRT GQGLEWIGEIYPSNGNSYYSDKVKDKATLTADKSSSTAYMELRSL TSEDSAVYFCARAYYTNGYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:111)。
12E10VH的CDR1
12E10VH的CDR1的氨基酸序列包含
SCGLS(SEQ ID NO:112)。
12E10VH的CDR2
12E10VH的CDR2的氨基酸序列包含
EIYPSNGNSYYSDKVKD(SEQ ID NO:113)。
12E10VH的CDR3
12E10VH的CDR3的氨基酸序列包含
AYYTNGYYAMDY(SEQ ID NO:114)。
12E10b VL氨基酸序列
DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHES PRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQS NSWPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:115)。
12E10b VL的CDR1
12E10b VL的CDR1的氨基酸序列包含
RASQSISNNLH(SEQ ID NO:116)。
12E10b VL的CDR2
12E10b VL的CDR2的氨基酸序列包含
YASQSIS(SEQ ID NO:117)。
12E10b VL的CDR3
12E10b VL的CDR3的氨基酸序列包含
QQSNSWPLT(SEQ ID NO:118)。
实施例2：LAIR-2Fc的纯化
方法和材料
通过使用Lonza GS载体转染的CHOK1SV KO亲本系产生LAIR-2hIgG1(下文称为LAIR-2Fc)。此细胞系用于表达先导候选物LAIR-2hIgG1(天然IgG1)和突变的Fc型式LAIR2-hIgG1Fc(L145A/L146A)。通过蛋白A色谱法纯化LAIR-2Fc，并通过SDS-PAGE(图6A)和尺寸排阻色谱图评估纯度(图6B)。与对照相似地制备LAIR-1Fc，通过尺寸排阻色谱法纯化LAIR-2Fc，并使用SDS PAGE可视化。
结果
图6A是SDS-PAGE凝胶，其示出在还原和非还原条件下的LAIR-2Fc。图6B是示出38.550分钟处的单个主峰的色谱图。数据证实了LAIR-2Fc的预期大小，以及在此所描述的研究中使用的LAIR-2Fc蛋白的高水平纯度。
实施例3：LAIR-2Fc与胶原结合
材料和方法
将具有胶原17的稳定表达的K562AML细胞系或缺乏胶原17的对照用1ug的LAIR-2Fc和LAIR-1Fc染色，在冰上孵育30分钟，然后在FACS缓冲液(PBS+1％FBS)中洗涤细胞，然后用0.05ug抗hIgG-PE在冰上染色30分钟。洗涤细胞，重新悬浮于FACS固定缓冲液(含3％多聚甲醛的PBS)中并通过流式细胞术评估。
结果
通过结合在K562细胞表面上表达的内源性跨膜配体胶原17的能力来评估LAIR-2Fc(图7A和7B)和LAIR-1Fc(图7C和7D)功能性。LAIR-2Fc和LAIR-1Fc的SDS-PAGE分析用于评估在本研究和随后研究中使用的蛋白质的纯度(图7E和7F)。对于此处所示的所有数据，LAIR-2Fc和LAIR-1Fc的纯度大于95％是标准的。
实施例4：AML细胞系上的LAF-1表达以及LAIR-1Fc和LAIR-2Fc结合
方法和材料
在用TruStain FcX(Biolegend)和hIgG(Innovative Research)阻断Fc受体后将Jurkat T细胞、K562Col 17细胞和THP-1细胞用10mg/mL抗LAIR-1-PE(eBioscience，NKTA255)或用10mg/mL生物素化的LAIR-1Fc或LAIR-2Fc染色。在孵育30分钟后，用FACS缓冲液洗涤细胞并用0.4ug/mL链霉亲和素-PE染色。通过流式细胞术评估表达。
结果
证实LAIR-1在特定AML细胞系上高度表达。LAIR-2Fc与特定AML细胞系表面上的未知分子结合，而未观察到LAIR-1Fc结合。
为了评估可用于体外测定的细胞系，评估造血系统来源的AML细胞系的LAIR-1表达，以及通过LAIR-2Fc和LAIR-1Fc结合的潜在结合(图8A-8I)。
图8A-8I是用抗LAIR-1、LAIR-1Fc或LAIR-2Fc处理的所指示细胞系的流式细胞术的直方图。图8A-8C分别示出用抗LAIR-1、LAIR-1Fc和LAIR-2Fc处理的Jurkat细胞。
图8D-8F分别示出用抗LAIR-1、LAIR-1Fc和LAIR-2Fc处理的K562Col 17细胞。
图8G-8I分别示出用抗LAIR-1、LAIR-1Fc和LAIR-2Fc处理的THP-1细胞。
如所示，Jurkat T细胞(T细胞白血病)和THP-1细胞(单核细胞白血病)两者均表达高水平的LAIR-1，而K562细胞则不表达。此外，LAIR-2Fc与THP-1细胞以及阳性对照表达K562-胶原17的细胞结合，但不与Jurkat T细胞结合。根据这些结果，选择用信号传导途径报告基因转导的Jurkat T细胞和THP-1细胞用于体外研究。
实施例5：LAIR-2Fc在Jurkat T细胞中诱导NF-κB和NFAT信号传导。
材料和方法
将96孔平底板用滴定量的抗CD3(OKT3)包被过夜，然后在添加细胞之前进行抽吸。在10ug/ml LAIR-2Fc、对照Fc存在下或无蛋白质的情况下，将具有NF-kB-GFP途径报告基因的Jurkat T细胞以50,000个细胞/孔/200ul RPMI-C接种。将细胞培养1天。从板收获细胞并通过流式细胞术评估GFP表达。
在0.5ug/mL包被的抗CD3和滴定量的可溶性LAIR-2Fc或对照Fc存在下培养具有NFAT途径报告基因的Jurkat T细胞。在大约24小时，根据方案(Invivogen)评估上清液的分泌的Lucia水平。用Perkin-Elmer Envision板读数器记录读数。
通过MSD细胞因子分析评估来自用10ug/ml LAIR-2Fc或对照Fc处理的Jurkat-NFAT-Lucia T细胞的上清液的IL-2和TNF水平。
结果
体外测定表明LAIR-2Fc能够在造血系统来源的白血病细胞系中诱导活性。将具有NF-kB-GFP途径报告基因的Jurkat T细胞与滴定浓度的包被的抗CD3在10ug/ml的LAIR-2Fc、对照Fc或培养基对照存在下一起培养，并通过流式细胞术分析GFP+细胞百分比评估NF-kB诱导(图9A)。此测定显示LAIR-2Fc促进Jurkat T细胞中NF-kB信号传导的诱导。这种效应在LAIR-2Fc与Jurkat T细胞没有明显结合的情况下发生，因此表明LAIR-2Fc充当配体与Jurkat T细胞的质膜上表达的LAIR-1结合的诱饵。
使用具有NFAT-Lucia途径报告基因的第二Jurkat T细胞系，证明在一组浓度的抗CD3存在下以LAIR-2Fc剂量依赖性方式诱导NFAT(图9B)
在10ug/ml的LAIR-2Fc或对照Fc存在下，将NFAT报告基因测定中来自Jurkat T细胞的上清液针对IL-2和TNF细胞因子水平进行测试(图9C和9D)。LAIR-2Fc培养的Jurkat T细胞显示更高水平的两种细胞因子，与途径报告基因诱导一致。由于LAIR-2Fc未显示与Jurkat T细胞直接结合，因此认为LAIR-2Fc正在破坏LAIR-1与可溶性因子的相互作用，或通过其他机制破坏LAIR-1抑制性信号传导以增强Jurkat报告基因活性。
实施例6：LAIR-2Fc结合至THP-1细胞并诱导报告基因活性。
材料和方法
在用Trustain FcX(Biolegend)和hIgG(Innovative Research)进行Fc受体阻断后，将0.1ug/ml的生物素化的LAIR-2Fc添加至冰上的THP-1细胞。随后用FACS缓冲液洗涤细胞，并用0.4ug/mL链霉亲和素-PE第二(Biolegend)在冰上染色30分钟。将细胞洗涤、固定并通过流式细胞术进行分析。
将THP-1细胞以50,000个细胞/孔添加至96孔平底板。添加1ug/ml最终浓度的LPS或RPMI完全培养基，然后添加10ug/ml最终浓度的LAIR-2Fc或对照Fc。所有孔包括200ul的最终体积。将细胞孵育指定的天数，然后根据方案(Invivogen)分析上清液的分泌的Lucia。使用Perkin-Elmer Envision板读数器进行读数。
结果
还评估了THP-1途径报告细胞在LAIR-2Fc或对照Fc存在下的应答。令人感兴趣地，据发现除LAIR-1表达外，LAIR-2Fc以剂量依赖性方式结合至THP-1细胞(图10A)。这可能是因为THP-1细胞表达为已知LAIR-2配体的跨膜胶原(数据未示出)。在有或没有Toll样受体配体LPS的情况下培养THP-1细胞，所述配体已知在THP-1细胞中诱导干扰素途径。在LPS和LAIR-2Fc存在下，与具有对照Fc的LPS相比，干扰素调控因子(IRF)诱导显著增加(图10B)。此外，即使在不存在LPS的情况下，LAIR-2Fc也能够诱导干扰素信号传导诱导，从而显示对THP-1细胞的直接作用而不需要共信号传导(图10C)。作用机制可能是阻断LAIR-1与跨膜胶原的结合，因为LAIR-2Fc不太可能能够通过跨膜胶原诱导信号传导。
实施例7：LAIR-2Fc增强原代T细胞增殖。
材料和方法
从健康供体PBMC分离包括CD4+和CD8+T细胞的Pan T细胞。通过MACS磁珠富集(Miltenyi)从总PBMC中分离CD4+T细胞和CD8+T细胞，用1uM CFSE(LifeTechnologies)标记并在4度下添加至预先用滴定量的抗CD3(OKT3)包被的96孔板过夜。以10ug/ml添加LAIR-2Fc或对照Fc，并且培养细胞72小时，然后通过流式细胞术分析。对于特异性T细胞亚群的流式细胞术分析，将细胞用抗CD4和抗CD8mAb染色。因此对CD4和CD8T细胞亚群进行门控并评估CFSE稀释度作为增殖的量度。
结果
接下来评估LAIR-2Fc对原代人T细胞的作用。结果表明在LAIR-2Fc存在下通过CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖增加(图11A和11B)。
实施例8：LAIR-2Fc不直接结合至人PBMC细胞亚群。
材料和方法
将来自三个正常健康供体的新鲜人PBMC用CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3-CD16+CD56+NK细胞和CD14+单核细胞染色，并用流式细胞术进行分析。
结果
为了确定这种作用是否是由于LAIR-2Fc与T细胞的直接结合，将健康供体PBMC用LAIR-2Fc染色。图12A-12D示出分别来自用LAIR-2Fc处理的供体1710的CD4、CD8、NK细胞和单核细胞。图12E-12H示出分别来自用LAIR-2Fc处理的供体1711的CD4、CD8、NK细胞和单核细胞。图12I-12L示出分别来自用LAIR-2Fc处理的供体1712的CD4、CD8、NK细胞和单核细胞。
数据示出LAIR-2Fc不与人T细胞直接结合。此外，LAIR-2Fc似乎不结合显著水平的任何PBMC细胞亚群。因此，可能LAIR-2Fc破坏LAIR-1与在这种培养系统中存在或表达的LAIR配体的相互作用。这些发现还表明LAIR-2Fc不应对体内造血细胞小姐产生任何影响，而细胞表达跨膜LAIR配体可能潜在地消减或受到其他待研究的方式的直接影响。
实施例9：LAIR-2Fc在促进体内抗原特异性CD8+T细胞扩增。
材料和方法
使用在鼠C57BL/6MHC I类(H-2Kb)的背景下对模型抗原鸡卵白蛋白(OVA)具有特异性的CD8+T细胞。当与H-2Kb结合时，CD8+OT-IT细胞识别OVA肽SIINFEKL(SEQ ID NO:119)。在佐剂存在下，OT-IT细胞经历扩增阶段，然后是收缩阶段。OVA和聚I:C佐剂用于确定OT-I扩增是否增加和/或收缩是否延迟。
实验设计在图13A中示出。在第-2天和第5天用500ug对照Fc或LAIR-2Fc处理10只小鼠/组。在第0天，通过MACS分离(Miltenyi)从OT-I x Ly5.1F1小鼠分离CD8+T细胞，并腹膜内注射2e5细胞。在第1天，腹膜内注射总体积为300ul/小鼠的100ug的SIINFEKL(SEQ IDNO:119)肽(Peptides International)和150ug的聚I:C佐剂(Invivogen)。在免疫前第0天对小鼠放血，并在第1、3、5、7、10和14天通过流式细胞术通过在TCR Vbeta2+CD8+T细胞和Ly5.1(CD45.1)上门控对血液中的OT-IT细胞进行分析。
结果
接下来在体内测试LAIR-2Fc以确定LAIR-2Fc是否将增强抗原特异性T细胞应答。图13B示出相对于对照Fc，到第5天总CD8+T细胞的OT-I的百分比显著增加。结果表明，与用对照Fc处理的小鼠相比，OT-IT细胞在LAIR-2Fc存在下经历显著增强的扩增(图13B)。这些结果与表达OVA的肿瘤模型直接相关，以评估肿瘤抗原特异性T细胞应答。
实施例10：LAIR-2Fc处理的小鼠具有显著改善的抗原特异性回忆应答。
材料和方法
在初始扩增后约10周，用相同数量(各自1e6)的CD45.1脾细胞激发小鼠，所述脾细胞负载有OVA肽(CFSE hi)或不含肽(CFSElo)。48小时后，将小鼠实施安乐死，并通过流式细胞术评估脾细胞的未负载的与负载OVA的脾细胞的比率作为OT-I介导的抗原特异性记忆CTL杀伤活性的量度。
结果
将来自OT-I扩增实验(实施例9)的小鼠静养约10周，且然后评估抗原特异性记忆CTL回忆应答，以确定LAIR-2Fc增强的扩增是否转化为通过负载抗原的脾细胞的CTL杀伤所示的增强的功能性回忆应答。
评估未注射的对照的CFSE峰值门控和起始比率(图14A至14C)。各组中CFSE hi与lo比率的代表性实例在图14D至14F中示出。结果表明，在OT-IT细胞的初始扩增期间用LAIR-2Fc处理的小鼠(注意在回忆应答期间未施用处理)具有显著更好的回忆应答，其被计算为负载OVA的脾细胞的特异性溶解(图14C)。
实施例11：LAIR-2Fc控制1D8-OVA卵巢癌生长并延长存活。
材料和方法
用5e6ID8-OVA细胞腹膜内注射C57BL/6小鼠，随后在3周后腹膜内注射1e6CD8+OT-IT细胞。然后在OT-I转移后一天开始用LAIR-2Fc或对照Fc处理小鼠，并且每四天处理一次，共计5次处理。每2-3天监测重量增加。为了评估存活率，当观察到腹水产生时将小鼠安乐死，并且小鼠从起始体重增加50％。图15A是示例性治疗方案的图，在第0天腹膜内注射5e6ID8-OVA肿瘤细胞。
结果
研究了使用表达OVA的肿瘤模型和OT-IT细胞由LAIR-2Fc处理介导的改善的抗原特异性T细胞应答是否转化为改善的抗肿瘤免疫。先前已确定在肿瘤接种后3周转移的OT-IT细胞不是保护性的，并且OT-IT细胞发展功能障碍或耗尽的表型。因此，这是用于确定免疫治疗剂可促进抗原特异性T细胞应答和/或逆转/防止发生耗竭的有用模型。
结果显示显著延迟的体重增加以及长期存活的显著增加(图15B和15C)。与20％的对照相比，60％的小鼠长期存活，表明使用LAIR-2Fc显著整体治愈(图15C)。
实施例12：LAIR-2Fc与抗PD-1是卵巢癌中的有效组合免疫疗法。
材料和方法
如图15A中所示处理小鼠，除了在第0天腹膜内注射更多(6e6)ID8-OVA肿瘤细胞，并且在3周时过继性转移更少的OT-1T细胞(5e5)。200ug的LAIR-2Fc或对照Fc处理在T细胞转移后一天开始并且每4天一次，总计5个剂量。每2-3天监测小鼠重量，并且当观察到腹水产生时将小鼠安乐死并且小鼠从起始体重增加50％。
结果
研究了与抗PD-1免疫疗法和顺铂化学疗法相比，单独的LAIR-2Fc以及与PD-1和顺铂的组合以检查协同作用(图16)。结果显示在此模型中单独使用LAIR-2Fc的适度作用。然而，所观察到的最佳反应是使用LAIR-2Fc与抗PD-1的组合，其中50％的小鼠活过13周。其他单一或组合疗法中的小鼠均未存活至13周。
实施例13：LAIR-2Fc延迟肿瘤生长并增加皮下淋巴瘤模型的存活率。
材料和方法
在第0天，将4e5A20肿瘤细胞皮下(sc)植入。在第4天开始并且每4天腹膜内施用200ug的LAIR-2Fc或对照Fc持续5次治疗。监测肿瘤生长并测量2-3次/周，并且当平均肿瘤直径达到15mm或2000mm3时处死小鼠。图17A是使用A20肿瘤模型的示例性治疗方案。
结果
结果显示肿瘤生长显著延迟(图17B)。另外，存在存活期的显著延长，一只动物长期保持无肿瘤(图17C)。
实施例14.LAIR-1mAb的产生、选择和表征。
材料和方法
使用来自Precision Antibody CRO的服务进行抗人LAIR-1mAb的免疫、融合和克隆。NextCure产生人LAIR-1mG2a Fc融合蛋白，用于在Precision Antibody进行5只SJL品系小鼠的免疫和加强。用来自具有高滴度的两只小鼠的脾细胞和淋巴结进行电融合。通过ELISA针对与人LAIR-1hG1Fc融合蛋白的结合并通过流式细胞术针对与表达内源性LAIR-1的AML肿瘤细胞系(Jurkat，HL-60)的结合筛选大约1200个杂交瘤克隆。
将抗人LAIR-1杂交瘤克隆上清液与已知表达LAIR-1的细胞系(HL-60，MV-4-11)、对针对LAIR-1转染以测试特异性的LAIR-1呈阴性的细胞系(K562-LAIR-1)以及已知对LAIR-1表达呈阴性的细胞系(U266B1)一起孵育。简言之，将50ul上清液与1e5细胞在96孔圆底板中一起孵育30分钟。用FACS缓冲液(PBS+1％FBS)洗涤细胞，并用0.05ug抗小鼠IgG-PE第二抗体(Ab)染色30分钟。洗涤细胞并在含100ul 3％多聚甲醛的PBS中固定，以用于流式细胞术分析。所显示的数据是在背景培养基+第二染色对照(最后一列)之上染色的细胞的百分比。
结果
示出最终15个选定克隆的结果(图18)。来自杂交瘤的上清液具有与特定细胞类型的不同水平的结合。这可能是由于细胞上清液中不同水平的mAb，或者与质膜上的LAIR-1的不同强度(亲合力)的结合。然而，由于一些上清液在某些细胞类型上以较高水平结合至LAIR-1，因此LAIR-1mAb克隆仍然可能与肿瘤细胞系上的特定糖型或其他修饰形式的LAIR-1结合。
在以下序列中，粗体和带下划线的文字表示前导序列。在一些实施方案中，除去前导序列。
嵌合1E11的序列：
hG1HC
hG1重链的氨基酸序列是
hG1重链的核酸序列是
hG4P HC
hG4P重链的氨基酸序列是：
hG4P的核酸序列是：
轻链
嵌合1E11的轻链的氨基酸序列是：
嵌合1E11的轻链的核酸序列是：
嵌合5E1的序列
hG1HC
hG1重链的氨基酸序列是：
hG1重链的核酸序列是：
hG4P HC
hG4P重链的氨基酸序列是：
hG4P重链的核酸序列是：
轻链
嵌合5E1的轻链的氨基酸序列是：
嵌合1E5的轻链的核酸序列是：
嵌合6G6的序列
hG1重链
hG1重链的氨基酸序列是：
hG1重链的核酸序列是：
hG4P重链的氨基酸序列是：
hG4P重链的核酸序列是：
轻链的氨基酸是：
轻链的核酸序列是：
嵌合11B3的序列
hG1HC
hG1重链的氨基酸序列是：
hG1重链的核酸序列是：
hG4P HC
hG4P重链的氨基酸序列是：
hG4P重链的核酸序列是：
轻链
轻链的氨基酸序列是：
轻链的核酸序列是：
通过将轻链与所公开的重链之一组合来产生嵌合抗体。
实施例15：针对LAIR-1Fc与I型和III型胶原的结合的阻断或增强筛选LAIR-1杂交瘤上清液。
材料和方法
用PBS将1ug/ml的I型胶原或III型胶原(Millipore)包被(在单独的板中以用于单独的筛选)过夜。洗涤板，用ELISA封闭缓冲液(含5％BSA的PBS)封闭。在洗涤后，将50ul的LAIR-1杂交瘤上清液添加至板，然后添加50ul的2ug/ml人LAIR-1Fc-生物素。洗涤板并以1:10000稀释度添加SA-HRP(eBio)。在孵育30分钟后，添加TMB，随后添加终止溶液。用PerkinElmer Envision分析仪测定吸光度。
结果
图19示出LAIR-1杂交瘤筛选的结果。克隆P1-A4、P1-D6和P6-F4被鉴定为LAIR-1Fc与I型和III型胶原的结合的增强剂。发现克隆P1-E11、P2-A10、P4-B3、P5-A6、P5-E1、P6-B2、P6-G6、P7-G3、P9-H6、P10-G7、P11-B3和P12-E10是LAIR-1Fc与I型和III型胶原的结合的阻断剂。
实施例16：针对LAIR-1Fc与C1q和SP-D的结合的阻断或增强筛选LAIR-1杂交瘤上清液。
材料和方法
用PBS将1ug/ml的C1q(Sigma)或SP-D(R&D Systems)包被(在单独的板中以用于单独的筛选)过夜。洗涤板，用ELISA封闭缓冲液(含5％BSA的PBS)封闭。在洗涤后，将50ul的LAIR-1杂交瘤上清液添加至板，然后添加50ul的2ug/ml人LAIR-1Fc-生物素。洗涤板并以1:10000稀释度添加SA-HRP(eBio)。在孵育30分钟后，添加TMB，随后添加终止溶液。用PerkinElmer Envision分析仪测定吸光度。
结果
图20示出筛选测定的结果。发现克隆P1-A4、P1-D6和P6-F4增强LAIR-1Fc与C1q和SP-D的结合。发现克隆P1-E11、P2-A10、P4-B3、P5-A6、P5-E1、P6-B2、P6-G6、P7-G3、P9-H6、P10-G7、P11-B3和P12-E10是LAIR-1Fc与C1q和SP-D的结合的阻断剂。
实施例17：LAIR-1嵌合mAb分区。
方法和材料
Octet RED96仪器(ForteBio)用于分区测定。使LAIR-1Fc(hIgG1)与抗人IgG传感器结合。在确认LAIR-1Fc在传感器上的稳定性后，将传感器浸入位于左侧列的含有第一mAb的孔中。通过使过量mAb与LAIR-1Fc结合来使第一mAb的结合饱和。接下来，将传感器放置在含有第二mAb的孔中，如顶行所示。由于结合饱和，结合同一表位的mAb与LAIR-1Fc的结合将受到阻断，如在使用相同mAb作为第一和第二mAb时可观察到的(图21，未加下划线和点刻的细胞)。无阻断表明表位远隔，以及缺乏空间位阻。部分阻断可能是由于表位轻微重叠或由于mAb结合位点接近所致的结合的空间位阻。基于非常弱的结合(低亲合力)，从进一步研究中除去了其中的三个克隆，留下12个克隆。包括两个商业抗人LAIR-1克隆DX26和NKTA用于比较目的。
结果
图21示出LAIR-1嵌合Ab分区的结果。无阻断由单下划线指示。阻断通过双下划线指示。所述数据允许鉴定结合至LAIR-1的细胞外结构域(ECD)上的相似、重叠或不同位点(表位)的mAb，并允许构建LAIR-1mAb结合的表位图。
根据分区结果，确定在此组12个克隆内存在mAb的四个主要小区(bin)(图22)。这些是：小区1：11B3、6B2、6F4；小区2：5E1和4B3；小区3：5A6和6G6；小区4：1E11、7G3、1A4和10G7。
实施例18：LAIR-1嵌合mAb分区图。
材料和方法
使用图21中生成的分区数据，以2D格式构建结合位点的图谱，以便对相对结合位点进行可视化。
结果
使用实施例17中生成的分区数据，以2D格式构建结合位点的图谱，以便对相对结合位点进行可视化(图22)。此图展示存在mAb的显著重叠。同时，许多mAb占据LAIR-1分子上的不同位点。与LAIR-1具有最大重叠以及对与LAIR-1的结合具有最大阻断的mAb被认为是一个小区。总之，此数据表明mAb组覆盖了LAIR-1蛋白的很大一部分。
实施例19：使用Octet RED96仪器(ForteBio)进行优化的亲和力评估。
材料和方法
使抗人IgG捕获传感器以一定密度结合至嵌合LAIR-1mAb，以确保与各种浓度的溶液中的单体LAIR-1-His(R&D Systems)1:1结合。测定缓冲液是含有0.05％Tween-20的PBS，并且再生缓冲液是10mM甘氨酸pH 1.5。首先，将嵌合LAIR-1mAb加载到传感器上。接下来是与LAIR-1-His的缔合步骤，以及在单独的LAIR-1-His游离孔中的解离步骤。使用ForteBio数据分析软件9.0处理数据。在减去参考孔后使用全局拟合。报告的平均KD值是来自基于X2和R2值具有高确信精度的至少三个独立的Octet运行。注意，测试了12E10的两种嵌合型式。两者都具有相对低的亲和力，而12E10V2mAb由于非常低的亲和力而从使用中去除。
结果
图23示出亲和力评估的结果。基于解离(Kdis)和缔合(Kon)速率，解离常数(Kd)以nM值在第三列中示出。大多数mAb具有非常强的缔合速率，但也具有相对快的解离速率。1E11、7G3和11B3、5E1和6G6全部具有<5nM的Kd值，表明对LAIR-1具有非常强的亲和力。
实施例20：LAIR-1mAb表现出对THP-1细胞中干扰素报告基因活性的差异诱导。
材料和方法
将具有干扰素调控因子(IRF)报告基因的THP-1-双细胞(Invivogen)以96孔板中每孔25,000个细胞接种至已预先用LAIR-1mAb(10ug/ml)包被(图24A)或未包被(图24B)的板中。对于图24B，LAIR-1mAb以10ug/ml可溶性蛋白质形式添加。还包被(图24A)或以可溶性蛋白质形式添加(图24B)LAIR-2Fc或对照Fc，作为阳性对照和阴性对照。
将LPS以1ug/ml形式添加用于低水平IRF诱导，以便测试LAIR-1mAb是增强还是抑制IRF途径诱导。在72小时时，从测定板中取出10ul上清液并转移至单独的板用于分析。根据方案添加Quanti-luc(Invivogen)并用PerkinElmer Envision测量发光
结果
板结合的LAIR-1mAb表明三种mAb，11B3、6G6和5E1可增强IRF信号传导，而两种mAb，1E11和7G3几乎没有作用或实际上可能抑制IRF诱导(图24A)。mAb在可溶形式下具有类似的作用(图24B)。令人感兴趣的是，属于同一小区的1E11和7G3似乎具有相似的功能。相反，11B3、6G6和5E1落入单独的小区中，但似乎具有相似的功能，这与克隆1E11和7G3形成对比。
实施例21：针对Jurkat T细胞报告基因活性的诱导的LAIR-1mAb筛选。
材料和方法
将96孔板在4℃下用0.5ug/ml的抗CD3(OKT3)包被过夜。通过抽吸除去未结合的CD3。在抽吸OKT3后，将LAIR-1mAb或LAIR-2Fc和对照Fc以10ug/ml包被24小时(图25A)。在添加Jurkat T细胞NFAT-Lucia途径报告细胞(Invivogen)之前，吸出未结合的蛋白质。将Jurkat T细胞以50,000个细胞/孔按200ul总体积接种。在48小时时，取出10ul上清液并转移至单独的板中。根据方案添加Quanti-Luc(Inivivogen)。使用Perkin Elmer Envision板读数器评估发光。对于图25B，与图25A相同地进行，但是蛋白质以可溶性形式添加而不是包被在板上。
结果
结果显示1E11对NFAT报告基因诱导具有很小或没有影响，而11B3、6G6和5E1诱导NFAT诱导(图25A)。在类似的测定中，将LAIR-1mAb或LAIR-2Fc和对照Fc以可溶性蛋白质形式添加(图25B)。在此测定中，观察到任何一种处理的影响都很小。注意，7G3仅在THP-1测定中进行测试，而不在Jurkat测定中进行测试。
总之，实施例中的数据表明LAIR-1mAb在基于细胞系途径报告基因的测定中的特定功能性。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语都与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义具有相同的含义。本文所引用的出版物和致使它们被引用的材料是以引用的方式特别并入。
本领域的技术人员将认识到，或者仅仅使用常规实验就能够确知本文所述的发明的具体实施方案的许多等效方案。此类等效方案旨在由以下权利要求书涵盖。
序列表
<110> 奈斯科尔公司
D·B·法尔斯
L·刘
S·朗格曼
<120> 用于调节LAIR信号转导的组合物和方法
<130> 064467.002PCT
<150> 62/370,334
<151> 2016-08-03
<150> 62/450,300
<151> 2017-01-25
<160> 143
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 287
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ser Pro His Pro Thr Ala Leu Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Ala
1 5 10 15
Gln Thr Ile His Thr Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser
20 25 30
Ala Glu Pro Gly Thr Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val
35 40 45
Cys Arg Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Tyr Asn Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser
65 70 75 80
Glu Ser Glu Ala Arg Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala
85 90 95
Gly Pro Tyr Arg Cys Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln
100 105 110
Ser Asp Tyr Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp
115 120 125
Ser Pro Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro
130 135 140
Ser Asp Asn Ser His Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys
145 150 155 160
Ala Glu His Leu Tyr Ile Leu Ile Gly Val Ser Val Val Phe Leu Phe
165 170 175
Cys Leu Leu Leu Leu Val Leu Phe Cys Leu His Arg Gln Asn Gln Ile
180 185 190
Lys Gln Gly Pro Pro Arg Ser Lys Asp Glu Glu Gln Lys Pro Gln Gln
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Arg Pro Asp Leu Ala Val Asp Val Leu Glu Arg Thr Ala Asp Lys Ala
210 215 220
Thr Val Asn Gly Leu Pro Glu Lys Asp Arg Glu Thr Asp Thr Ser Ala
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Leu Ala Ala Gly Ser Ser Gln Glu Val Thr Tyr Ala Gln Leu Asp His
245 250 255
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260 265 270
Lys Pro Met Ala Glu Ser Ile Thr Tyr Ala Ala Val Ala Arg His
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<210> 2
<211> 144
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
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1 5 10 15
Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg Gly Pro Val
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Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro Tyr Arg Cys
65 70 75 80
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<210> 3
<211> 263
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 3
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<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 4
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<210> 5
<211> 152
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
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35 40 45
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Ser Asp Phe Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp
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Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Asp Arg Ala Lys Tyr Lys
35 40 45
Asp Ser Tyr Asn Val Phe Arg Leu Gly Pro Ser Glu Ser Glu Ala Arg
50 55 60
Phe His Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Leu Tyr Arg Cys
65 70 75 80
Leu Tyr Tyr Lys Pro Pro Gly Trp Ser Glu His Ser Asp Phe Leu Glu
85 90 95
Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Thr Val Pro Gly Thr Glu Ala Ser Gly Phe
115 120 125
Asp Ala Pro
130
<210> 7
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 7
Ser Leu Pro Asp Ile Thr Ile Phe Pro Asn Ser Ser Leu Met Ile Ser
1 5 10 15
Gln Gly Thr Phe Val Thr Val Val Cys Ser Tyr Ser Asp Lys His Asp
20 25 30
<210> 8
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 8
Glu Leu Cys Leu Trp Phe Leu Leu Tyr Pro Trp Ala Thr Leu Glu Leu
1 5 10 15
Ile Met Cys Thr Trp Asp Ala Trp Lys Glu Thr Leu Glu Tyr Phe Leu
20 25 30
<210> 9
<211> 387
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu
20 25 30
Pro Gly Thr Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg
35 40 45
Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser Arg Ser
50 55 60
Thr Tyr Asn Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser Glu Ser
65 70 75 80
Glu Ala Arg Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro
85 90 95
Tyr Arg Cys Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln Ser Asp
100 105 110
Tyr Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro
115 120 125
Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro Ser Asp
130 135 140
Asn Ser His Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys Ala Glu
145 150 155 160
His Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
165 170 175
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
180 185 190
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
195 200 205
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
210 215 220
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
225 230 235 240
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
245 250 255
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
260 265 270
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
275 280 285
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
290 295 300
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
305 310 315 320
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
325 330 335
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
340 345 350
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
355 360 365
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
370 375 380
Ser Pro Gly
385
<210> 10
<211> 368
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu Pro Gly Thr
1 5 10 15
Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg Gly Pro Val
20 25 30
Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser Arg Ser Thr Tyr Asn
35 40 45
Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser Glu Ser Glu Ala Arg
50 55 60
Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro Tyr Arg Cys
65 70 75 80
Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln Ser Asp Tyr Leu Glu
85 90 95
Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro Ser Asp Asn Ser His
115 120 125
Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys Ala Glu His Asp Lys
130 135 140
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
180 185 190
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
210 215 220
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
260 265 270
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
275 280 285
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
<210> 11
<211> 393
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu
20 25 30
Pro Gly Thr Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg
35 40 45
Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser Arg Ser
50 55 60
Thr Tyr Asn Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser Glu Ser
65 70 75 80
Glu Ala Arg Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro
85 90 95
Tyr Arg Cys Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln Ser Asp
100 105 110
Tyr Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro
115 120 125
Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro Ser Asp
130 135 140
Asn Ser His Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys Ala Glu
145 150 155 160
His Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
165 170 175
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
180 185 190
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
195 200 205
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
210 215 220
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
225 230 235 240
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
245 250 255
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
260 265 270
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
275 280 285
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
290 295 300
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
305 310 315 320
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
325 330 335
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
340 345 350
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
355 360 365
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
370 375 380
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
385 390
<210> 12
<211> 374
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu Pro Gly Thr
1 5 10 15
Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val Cys Arg Gly Pro Val
20 25 30
Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser Arg Ser Thr Tyr Asn
35 40 45
Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser Glu Ser Glu Ala Arg
50 55 60
Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Pro Tyr Arg Cys
65 70 75 80
Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln Ser Asp Tyr Leu Glu
85 90 95
Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Pro Thr Gln Arg Pro Ser Asp Asn Ser His
115 120 125
Asn Glu His Ala Pro Ala Ser Gln Gly Leu Lys Ala Glu His Glu Pro
130 135 140
Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys
165 170 175
Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn
195 200 205
Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg
260 265 270
Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp
290 295 300
Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
340 345 350
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser
355 360 365
Phe Ser Arg Thr Pro Gly
370
<210> 13
<211> 374
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Glu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Thr Ile Phe Pro Asn
20 25 30
Ser Ser Leu Met Ile Ser Gln Gly Thr Phe Val Thr Val Val Cys Ser
35 40 45
Tyr Ser Asp Lys His Asp Leu Tyr Asn Met Val Arg Leu Glu Lys Asp
50 55 60
Gly Ser Thr Phe Met Glu Lys Ser Thr Glu Pro Tyr Lys Thr Glu Asp
65 70 75 80
Glu Phe Glu Ile Gly Pro Val Asn Glu Thr Ile Thr Gly His Tyr Ser
85 90 95
Cys Ile Tyr Ser Lys Gly Ile Thr Trp Ser Glu Arg Ser Lys Thr Leu
100 105 110
Glu Leu Lys Val Ile Lys Glu Asn Val Ile Gln Thr Pro Ala Pro Gly
115 120 125
Pro Thr Ser Asp Thr Ser Trp Leu Lys Thr Tyr Ser Ile Tyr Glu Pro
130 135 140
Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys
165 170 175
Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn
195 200 205
Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg
260 265 270
Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp
290 295 300
Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
340 345 350
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser
355 360 365
Phe Ser Arg Thr Pro Gly
370
<210> 14
<211> 355
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Gln Glu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Thr Ile Phe Pro Asn Ser Ser Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Gln Gly Thr Phe Val Thr Val Val Cys Ser Tyr Ser Asp
20 25 30
Lys His Asp Leu Tyr Asn Met Val Arg Leu Glu Lys Asp Gly Ser Thr
35 40 45
Phe Met Glu Lys Ser Thr Glu Pro Tyr Lys Thr Glu Asp Glu Phe Glu
50 55 60
Ile Gly Pro Val Asn Glu Thr Ile Thr Gly His Tyr Ser Cys Ile Tyr
65 70 75 80
Ser Lys Gly Ile Thr Trp Ser Glu Arg Ser Lys Thr Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Val Ile Lys Glu Asn Val Ile Gln Thr Pro Ala Pro Gly Pro Thr Ser
100 105 110
Asp Thr Ser Trp Leu Lys Thr Tyr Ser Ile Tyr Glu Pro Arg Gly Pro
115 120 125
Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu
130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu
180 185 190
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr
195 200 205
Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser
210 215 220
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln
245 250 255
Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val
260 265 270
Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val
275 280 285
Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg
305 310 315 320
Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val
325 330 335
Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
340 345 350
Thr Pro Gly
355
<210> 15
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Glu Gly Ala Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu
20 25 30
Pro Gly Thr Val Ile Ser Pro Gly Ser His Val Thr Phe Met Cys Arg
35 40 45
Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Asp Arg Ala
50 55 60
Lys Tyr Lys Asp Ser Tyr Asn Val Phe Arg Leu Gly Pro Ser Glu Ser
65 70 75 80
Glu Ala Arg Phe His Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Leu
85 90 95
Tyr Arg Cys Leu Tyr Tyr Lys Pro Pro Gly Trp Ser Glu His Ser Asp
100 105 110
Phe Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro
115 120 125
Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Thr Val Pro Gly Thr Glu Ala
130 135 140
Ser Gly Phe Asp Ala Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375
<210> 16
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Gln Glu Gly Ala Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu Pro Gly Thr
1 5 10 15
Val Ile Ser Pro Gly Ser His Val Thr Phe Met Cys Arg Gly Pro Val
20 25 30
Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Asp Arg Ala Lys Tyr Lys
35 40 45
Asp Ser Tyr Asn Val Phe Arg Leu Gly Pro Ser Glu Ser Glu Ala Arg
50 55 60
Phe His Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Leu Tyr Arg Cys
65 70 75 80
Leu Tyr Tyr Lys Pro Pro Gly Trp Ser Glu His Ser Asp Phe Leu Glu
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Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Thr Val Pro Gly Thr Glu Ala Ser Gly Phe
115 120 125
Asp Ala Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
130 135 140
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
145 150 155 160
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
165 170 175
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
180 185 190
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
195 200 205
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
210 215 220
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
225 230 235 240
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
245 250 255
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
260 265 270
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
275 280 285
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
290 295 300
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
305 310 315 320
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
325 330 335
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
340 345 350
Ser Leu Ser Pro Gly
355
<210> 17
<211> 382
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Glu Gly Ala Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu
20 25 30
Pro Gly Thr Val Ile Ser Pro Gly Ser His Val Thr Phe Met Cys Arg
35 40 45
Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Asp Arg Ala
50 55 60
Lys Tyr Lys Asp Ser Tyr Asn Val Phe Arg Leu Gly Pro Ser Glu Ser
65 70 75 80
Glu Ala Arg Phe His Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Leu
85 90 95
Tyr Arg Cys Leu Tyr Tyr Lys Pro Pro Gly Trp Ser Glu His Ser Asp
100 105 110
Phe Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro
115 120 125
Asp Thr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Gly Thr Val Pro Gly Thr Glu Ala
130 135 140
Ser Gly Phe Asp Ala Pro Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys
145 150 155 160
Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
165 170 175
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser
180 185 190
Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp
195 200 205
Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln
210 215 220
Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser
225 230 235 240
Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys
245 250 255
Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile
260 265 270
Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
275 280 285
Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met
290 295 300
Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn
305 310 315 320
Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser
325 330 335
Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn
340 345 350
Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu
355 360 365
His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
370 375 380
<210> 18
<211> 363
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Gln Glu Gly Ala Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser Ala Glu Pro Gly Thr
1 5 10 15
Val Ile Ser Pro Gly Ser His Val Thr Phe Met Cys Arg Gly Pro Val
20 25 30
Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Asp Arg Ala Lys Tyr Lys
35 40 45
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Phe His Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala Gly Leu Tyr Arg Cys
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Leu Tyr Tyr Lys Pro Pro Gly Trp Ser Glu His Ser Asp Phe Leu Glu
85 90 95
Leu Leu Val Lys Glu Ser Ser Gly Gly Pro Asp Ser Pro Asp Thr Glu
100 105 110
Pro Gly Ser Ser Ala Gly Thr Val Pro Gly Thr Glu Ala Ser Gly Phe
115 120 125
Asp Ala Pro Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys
130 135 140
Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
145 150 155 160
Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val
165 170 175
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile
180 185 190
Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr
195 200 205
His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro
210 215 220
Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
225 230 235 240
Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro
245 250 255
Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu
260 265 270
Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp
275 280 285
Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr
290 295 300
Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
305 310 315 320
Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu
325 330 335
Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His
340 345 350
His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Val Leu Ile Tyr Gln Met Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<213> 小家鼠
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Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
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Gln Met Ser Ser Leu Ala Ser
1 5
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<213> 小家鼠
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1 5
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Leu
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
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<212> PRT
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Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Leu Lys
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Gly
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<213> 小家鼠
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Gly Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr
1 5
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<213> 小家鼠
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1 5 10 15
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20 25 30
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Arg Tyr
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1 5
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Asp Ile Val Met Lys Gln Ser Pro Ser Ser Leu Arg Val Ser Ala Gly
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Lys
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Gly
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Gly
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Gly Tyr Phe Met Asn
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Ala
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<213> 小家鼠
<400> 58
Phe Asp Tyr Ser Asn Ser Phe Ala Tyr
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 59
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<213> 小家鼠
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<213> 小家鼠
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<400> 74
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1
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<213> 小家鼠
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<211> 7
<212> PRT
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<212> PRT
<213> 小家鼠
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 79
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Gly
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Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
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<213> 小家鼠
<400> 85
Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 86
Ala Gln Asn Leu Glu Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 87
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 87
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Thr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 88
Thr Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 89
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 89
Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Thr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 90
Gly Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr
1 5
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 92
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 93
Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 94
Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 95
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Thr His
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asp Ser Glu Asn Met
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Leu Arg Gly Gly Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 96
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 96
Thr His Ala Met Asn
1 5
<210> 97
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 97
Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 98
Leu Arg Gly Gly Phe Leu Asp Tyr
1 5
<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 99
Asp Ile Gln Met Ala Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ile Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Thr Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 100
Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ile Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 101
Thr Ala Thr Ser Leu Glu Thr
1 5
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 102
Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 103
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 104
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 104
Thr Tyr Ala Met His
1 5
<210> 105
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 105
Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 106
Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 107
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 108
Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Ala Val Ala
1 5 10
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 109
Leu Ala Ser Asn Arg His Thr
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 110
Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 111
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 111
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Cys
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Asn Ser Tyr Tyr Ser Asp Lys Val
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Tyr Thr Asn Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 112
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 112
Ser Cys Gly Leu Ser
1 5
<210> 113
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 113
Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Asn Ser Tyr Tyr Ser Asp Lys Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 114
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 114
Ala Tyr Tyr Thr Asn Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 115
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 115
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 116
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His
1 5 10
<210> 117
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 117
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 118
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 118
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 119
<211> 8
<212> PRT
<213> 原鸡
<400> 119
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu
1 5
<210> 120
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 120
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Leu Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Arg
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly
465
<210> 121
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 121
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctcag 60
gttcagttgc agcagtctgg ccctgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagctgtct 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcaccagc tacgacatca actgggtcaa gcagaggcct 180
ggacagggac tcgagtggat cggctggatc taccctagag atggctccac caagtacaac 240
gagaagctga agggcaaagc taccctgacc gtggacacct cctctcggac cgcttacatg 300
gaactgcact ccctgacctc tgaggactcc gccgtgtact tttgtgccag aggcggctac 360
tacgactacg atggctattg gggacagggc accctggtca cagtgtctgc tgcttctacc 420
aaggggccct ccgtgttccc tctggcccct tccagcaagt ctacctctgg cggcacagcc 480
gctctgggct gcctcgtgaa ggactacttc cccgagcctg tgaccgtgtc ctggaactct 540
ggcgctctga catccggcgt gcacaccttc cctgctgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 600
tccctgtcct ccgtcgtgac cgtgccttcc agctctctgg gcacccagac ctacatctgc 660
aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggaacc caagtcctgc 720
gacaagaccc acacctgtcc cccttgtcct gcccctgaac tgctgggcgg acccagcgtg 780
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 840
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cctgaagtga agttcaattg gtacgtggac 900
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 960
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1020
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caaggccaag 1080
ggccagcccc gggaacccca ggtgtacaca ctgcccccta gcagggacga gctgaccaag 1140
aaccaggtgt ccctgacctg tctcgtgaaa ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1200
tgggagtcca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggactcc 1260
gacggctcat tcttcctgta cagcaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1320
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380
ctgtccctga gccccggctg a 1401
<210> 122
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 122
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Leu Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Arg
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455 460
<210> 123
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 123
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctcag 60
gttcagttgc agcagtctgg ccctgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagctgtct 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcaccagc tacgacatca actgggtcaa gcagaggcct 180
ggacagggac tcgagtggat cggctggatc taccctagag atggctccac caagtacaac 240
gagaagctga agggcaaagc taccctgacc gtggacacct cctctcggac cgcttacatg 300
gaactgcact ccctgacctc tgaggactcc gccgtgtact tttgtgccag aggcggctac 360
tacgactacg atggctattg gggacagggc accctggtca cagtgtctgc tgcttctacc 420
aaggggccct ccgtgttccc tctggcccct tgctccagat ccacctccga gtctaccgcc 480
gctctgggct gcctcgtgaa ggactacttc cccgagcctg tgaccgtgtc ctggaactct 540
ggcgctctga cctctggcgt gcacaccttc cctgctgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 600
tccctgtcct ccgtcgtgac cgtgccttcc agctctctgg gcaccaagac ctacacctgt 660
aacgtggacc acaagccctc caacaccaag gtggacaagc gggtggaatc taagtacggc 720
cctccctgcc ctccttgccc agcccctgaa tttctgggcg gacccagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccaggaaga tcccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag gaacagttca actccaccta ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcccag ctccatcgaa aagaccatct ccaaggccaa gggccagccc 1080
cgggaacccc aggtgtacac actgcctcca agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctcgtgaa aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actctcgcct gaccgtggac aagtcccggt ggcaggaagg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
tctctgggat ga 1392
<210> 124
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 124
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro
20 25 30
Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser
35 40 45
Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Val Leu Ile Tyr Gln Met Ser Ser Leu Ala
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe
85 90 95
Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 125
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 125
atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgc 60
gatatcgtga tgacccaggc cgccttcagc aatcctgtga cactgggaac ctccgcctcc 120
atctcctgca gatcctctaa gtccctgctg cactccaacg gcatcaccta cctgtactgg 180
tatctgcaga agcccggcca gtctcctcag gtgctgatct accagatgtc ctctctggcc 240
tctggcgtgc ccgacagatt ctcttcttct ggctctggca ccgagttcac cctgcggatc 300
tctagagtgg aagctgagga cgtgggcgtg tactactgcg cccagaatct ggaactgcct 360
ctgacctttg gcgctggcac caagctggaa ctgaagcgta cggtggccgc tccctccgtg 420
ttcatcttcc caccttccga cgagcagctg aagtccggca ccgcttctgt cgtgtgcctg 480
ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 540
tccggcaact cccaggaatc cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctactccctg 600
tcctccaccc tgaccctgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgaa 660
gtgacccacc agggcctgtc tagccccgtg accaagtctt tcaaccgggg cgagtgctga 720
<210> 126
<211> 0
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 126
000
<210> 127
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 127
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gttcagttgc agcagtctgg ccccgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ctggctactc cttcaccggc tacttcatga actgggtcaa gcagtcccct 180
gagaagtccc tggaatggat cggcgagatc catccttcca ccggcagcat catctacaac 240
cagaagttca aggccaaggc taccctgacc atcgacaagt cctcttccac cgcctacatg 300
cagctgaagt ctctgacctc tgaggactcc gccgtgtact actgcgccag attcgactac 360
tccaactcct tcgcttattg gggccagggc accctggtta ccgtgtctgc tgcttctacc 420
aaggggccct ccgtgttccc tctggcccct tccagcaagt ctacctctgg cggcacagcc 480
gctctgggct gcctcgtgaa ggactacttc cccgagcctg tgaccgtgtc ctggaactct 540
ggcgctctga catccggcgt gcacaccttc cctgctgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 600
tccctgtcct ccgtcgtgac cgtgccttcc agctctctgg gcacccagac ctacatctgc 660
aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggaacc caagtcctgc 720
gacaagaccc acacctgtcc cccttgtcct gcccctgaac tgctgggcgg acccagcgtg 780
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 840
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cctgaagtga agttcaattg gtacgtggac 900
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 960
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1020
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caaggccaag 1080
ggccagcccc gggaacccca ggtgtacaca ctgcccccta gcagggacga gctgaccaag 1140
aaccaggtgt ccctgacctg tctcgtgaaa ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1200
tgggagtcca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggactcc 1260
gacggctcat tcttcctgta cagcaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1320
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380
ctgtccctga gccccggctg a 1401
<210> 128
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 128
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Gly Tyr Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Glu Ile His Pro Ser Thr Gly Ser Ile Ile Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Asp Tyr Ser Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455 460
<210> 129
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 129
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gttcagttgc agcagtctgg ccccgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ctggctactc cttcaccggc tacttcatga actgggtcaa gcagtcccct 180
gagaagtccc tggaatggat cggcgagatc catccttcca ccggcagcat catctacaac 240
cagaagttca aggccaaggc taccctgacc atcgacaagt cctcttccac cgcctacatg 300
cagctgaagt ctctgacctc tgaggactcc gccgtgtact actgcgccag attcgactac 360
tccaactcct tcgcttattg gggccagggc accctggtta ccgtgtctgc tgcttctacc 420
aaggggccct ccgtgttccc tctggcccct tgctccagat ccacctccga gtctaccgcc 480
gctctgggct gcctcgtgaa ggactacttc cccgagcctg tgaccgtgtc ctggaactct 540
ggcgctctga cctctggcgt gcacaccttc cctgctgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 600
tccctgtcct ccgtcgtgac cgtgccttcc agctctctgg gcaccaagac ctacacctgt 660
aacgtggacc acaagccctc caacaccaag gtggacaagc gggtggaatc taagtacggc 720
cctccctgcc ctccttgccc agcccctgaa tttctgggcg gacccagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccaggaaga tcccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag gaacagttca actccaccta ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
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cgggaacccc aggtgtacac actgcctcca agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctcgtgaa aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actctcgcct gaccgtggac aagtcccggt ggcaggaagg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
tctctgggat ga 1392
<210> 130
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 130
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn
100 105 110
Thr Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 131
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 131
atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgc 60
gatatccaga tgacccagac cacctccagc ctgtctgctt ctctgggcga cagagtgacc 120
atctcctgca gagcctctca ggacatctcc aactacctga actggtatca gcagaaaccc 180
gacggcaccg tgaagctgct gatctactac acctccagac tgcactccgg cgtgccctct 240
agattttctg gctctggatc tggcaccgac tactccctga ccatcagcaa cctggaacaa 300
gaggatatcg ctacctactt ctgccagcaa ggcaacaccc tgcctagaac ctttggcgga 360
ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacct 420
tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 540
gaatccgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 600
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 660
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 705
<210> 132
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 132
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Thr Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asn Pro Asp Asn Gly Ile Thr Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Lys Ser Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
<210> 133
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 133
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gttcagttgc agcagtctgg ccccgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcaccacc tactacatga actgggtcaa gcagtcccac 180
ggcaagtccc tggaatggat cggcaacatc aaccccgaca acggcatcac ctcctacaac 240
cagaagttca agggcaaagc taccctgacc gtggacaagt cctcctccac cgcctacatg 300
gaactgagat ccctgacctc tgaggactcc gccgtgtact actgtgccag aggcaagtct 360
ctggcttatt ggggccaggg cacactggtc acagtgtctg ctgcttccac caaggggccc 420
tccgtgttcc ctctggcccc ttccagcaag tctacctctg gcggcacagc cgctctgggc 480
tgcctcgtga aggactactt ccccgagcct gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg 540
acatccggcg tgcacacctt ccctgctgtg ctgcagtcct ccggcctgta ctccctgtcc 600
tccgtcgtga ccgtgccttc cagctctctg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac 660
cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag aaggtggaac ccaagtcctg cgacaagacc 720
cacacctgtc ccccttgtcc tgcccctgaa ctgctgggcg gacccagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccacgagga ccctgaagtg aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag gaacagtaca actccaccta ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg ccctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ccaaggccaa gggccagccc 1080
cgggaacccc aggtgtacac actgccccct agcagggacg agctgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctcgtgaa aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggactc cgacggctca 1260
ttcttcctgt acagcaagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
agccccggct ga 1392
<210> 134
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 134
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Thr Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asn Pro Asp Asn Gly Ile Thr Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Lys Ser Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455 460
<210> 135
<211> 1383
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 135
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gttcagttgc agcagtctgg ccccgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcaccacc tactacatga actgggtcaa gcagtcccac 180
ggcaagtccc tggaatggat cggcaacatc aaccccgaca acggcatcac ctcctacaac 240
cagaagttca agggcaaagc taccctgacc gtggacaagt cctcctccac cgcctacatg 300
gaactgagat ccctgacctc tgaggactcc gccgtgtact actgtgccag aggcaagtct 360
ctggcttatt ggggccaggg cacactggtc acagtgtctg ctgcttccac caaggggccc 420
tccgtgttcc ctctggcccc ttgctccaga tccacctccg agtctaccgc cgctctgggc 480
tgcctcgtga aggactactt ccccgagcct gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg 540
acctctggcg tgcacacctt ccctgctgtg ctgcagtcct ccggcctgta ctccctgtcc 600
tccgtcgtga ccgtgccttc cagctctctg ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac 660
cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc 720
cctccttgcc cagcccctga atttctgggc ggacccagcg tgttcctgtt ccccccaaag 780
cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg 840
tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac 900
gccaagacca agcctagaga ggaacagttc aactccacct accgggtggt gtccgtgctg 960
accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 1020
ggcctgccca gctccatcga aaagaccatc tccaaggcca agggccagcc ccgggaaccc 1080
caggtgtaca cactgcctcc aagccaggaa gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1140
tgtctcgtga aaggcttcta cccctccgat atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag 1200
cctgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggact ccgacggctc cttcttcctg 1260
tactctcgcc tgaccgtgga caagtcccgg tggcaggaag gcaacgtgtt ctcctgctcc 1320
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaagt ccctgtccct gtctctggga 1380
tga 1383
<210> 136
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 136
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser
20 25 30
Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn
35 40 45
Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg His Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser
100 105 110
Ser His Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 137
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 137
atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgc 60
gacatcgtga tgacccagag ccacaagttc atgtccacct ccgtgggcga cagagtgtcc 120
atcacatgca aggcctctca gaatgtgggc accgccgttg cctggtatca gcagaaacct 180
ggccagtctc ctaagctgct gatctactgg gcctccatca gacacaccgg cgtgccagat 240
agattcaccg gctctggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatctctaa cgtgcagtct 300
gaggacctgg ccgactactt ctgccagcag tacagctctc acccctacac ctttggcgga 360
ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacct 420
tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 540
gaatccgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 600
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 660
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 705
<210> 138
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 138
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Thr Phe
35 40 45
Asn Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Thr Thr Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
180 185 190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly
465
<210> 139
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 139
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gtgcagttgg ttgaatctgg cggcggactg gtgcagccta agggatctct gaagctgtct 120
tgcgccgcct ccgacttcac cttcaatacc tacgccatgc actgggtccg acaggcccct 180
ggaaaaggac tggaatgggt cgccagaatc cggaccaagt ccaacaacta cgccacctac 240
tacgccgact ccgtgaagga cagattcacc atctctcggg acgactccca gtccatgctg 300
tacctgcaga tgaacaacct gaccaccgag gacaccgcca tgtactactg cgtgcgggat 360
agatatggcg gcgctatgga ttattggggc cagggcacat ctgtgaccgt gtcctctgct 420
tccaccaagg ggccctccgt gttccctctg gccccttcca gcaagtctac ctctggcggc 480
acagccgctc tgggctgcct cgtgaaggac tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg 540
aactctggcg ctctgacatc cggcgtgcac accttccctg ctgtgctgca gtcctccggc 600
ctgtactccc tgtcctccgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac ccagacctac 660
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 720
tcctgcgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 780
agcgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 840
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 900
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacaactcc 960
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgccccca tcgaaaagac catctccaag 1080
gccaagggcc agccccggga accccaggtg tacacactgc cccctagcag ggacgagctg 1140
accaagaacc aggtgtccct gacctgtctc gtgaaaggct tctacccctc cgatatcgcc 1200
gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1260
gactccgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgacag tggacaagtc ccggtggcag 1320
cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380
aagtccctgt ccctgagccc cggctga 1407
<210> 140
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 140
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Thr Phe
35 40 45
Asn Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Thr Thr Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
180 185 190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val
210 215 220
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys
225 230 235 240
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly
245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Gly
465
<210> 141
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 141
atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60
gtgcagttgg ttgaatctgg cggcggactg gtgcagccta agggatctct gaagctgtct 120
tgcgccgcct ccgacttcac cttcaatacc tacgccatgc actgggtccg acaggcccct 180
ggaaaaggac tggaatgggt cgccagaatc cggaccaagt ccaacaacta cgccacctac 240
tacgccgact ccgtgaagga cagattcacc atctctcggg acgactccca gtccatgctg 300
tacctgcaga tgaacaacct gaccaccgag gacaccgcca tgtactactg cgtgcgggat 360
agatatggcg gcgctatgga ttattggggc cagggcacat ctgtgaccgt gtcctctgct 420
tccaccaagg ggccctccgt gttccctctg gccccttgct ccagatccac ctccgagtct 480
accgccgctc tgggctgcct cgtgaaggac tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg 540
aactctggcg ctctgacctc tggcgtgcac accttccctg ctgtgctgca gtcctccggc 600
ctgtactccc tgtcctccgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac caagacctac 660
acctgtaacg tggaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagcgggt ggaatctaag 720
tacggccctc cctgccctcc ttgcccagcc cctgaatttc tgggcggacc cagcgtgttc 780
ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga agtgacctgc 840
gtggtggtgg atgtgtccca ggaagatccc gaggtgcagt tcaattggta cgtggacggc 900
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agttcaactc cacctaccgg 960
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 1020
aaggtgtcca acaagggcct gcccagctcc atcgaaaaga ccatctccaa ggccaagggc 1080
cagccccggg aaccccaggt gtacacactg cctccaagcc aggaagagat gaccaagaac 1140
caggtgtccc tgacctgtct cgtgaaaggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1200
gagtccaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggactccgac 1260
ggctccttct tcctgtactc tcgcctgacc gtggacaagt cccggtggca ggaaggcaac 1320
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tccctgtctc tgggatga 1398
<210> 142
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 142
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Ala Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser
20 25 30
Val Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp
35 40 45
Ile Tyr Ile Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Ser Thr Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr
85 90 95
Ser Leu Gln Thr Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp
100 105 110
Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 143
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 143
atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgt 60
gatatccaga tggcccagtc ctcctccagc ttctctgtgt ctctgggcga cagagtgacc 120
atcacatgca aggcctccga ggacatctac atccggctgg cctggtatca gcagaagcct 180
ggaaacgccc ctcggctgct gatctctacc gctacatctc tggaaaccgg cgtgccctct 240
agattctctg gctctggatc tggcaaggac tacaccctgt ctatcaccag cctgcagacc 300
gaggatgtgg ccacctacta ctgccagcag tactggtcta ccccttacac ctttggcggc 360
ggaacccggc tggaaatcaa acgtacggtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacct 420
tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 540
gaatccgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 600
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 660
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 705

Claims (68)

1.一种药物组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的降低LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂：
(i)可溶性LAIR-2多肽或融合蛋白，
(ii)可溶性LAIR-1多肽或融合蛋白，
(iii)增加免疫应答的LAIR-1mAb。
(iv)消减LAIR-1阳性细胞的抗体，以及
(iv)它们的组合；
以增加有需要的受试者的免疫应答。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是LAIR-2融合蛋白。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述LAIR-2融合蛋白包含与免疫球蛋白结构域连接的LAIR-2或其功能变体的细胞外结构域。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述LAIR-2融合蛋白包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是LAIR-1融合蛋白。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述LAIR-1融合蛋白包含与免疫球蛋白结构域连接的LAIR-1或其功能变体的细胞外结构域。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述LAIR-1融合蛋白包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是LAIR-2蛋白或其功能片段或变体。
9.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述LAIR-2蛋白或其功能片段或变体包含与SEQ ID NO:6的至少80％、90％、95％或100％序列同一性。
10.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是可溶性LAIR-1蛋白或其功能片段或变体。
11.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述LAIR-1蛋白由LAIR-1或其功能片段或变体的细胞外结构域组成。
12.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述LAIR-1蛋白或其功能片段或变体包含与SEQ ID NO:2的至少80％、90％、95％或100％序列同一性。
13.如权利要求1-12中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫应答是对抗原的初次免疫应答或效应细胞功能的增加，如增加T细胞的抗原特异性增殖、促进T细胞产生细胞因子、刺激分化或它们的组合。
14.一种增加有需要的受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-13中任一项所述的药物组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述癌症的特征在于LAIR-1的表达增加、LAIR-1配体的表达增加、LAIR-2的表达降低或它们的组合。
17.如权利要求14或15所述的方法，其中所述癌症是卵巢癌、肺癌或胃肠癌。
18.如权利要求14所述的方法，其中所述受试者患有感染性疾病。
19.如权利要求14-18中任一项所述的方法，其中向所述受试者同时施用所述药物组合物与疫苗或其组分。
20.如权利要求14-19中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用第二治疗剂。
21.一种药物组合物，其包含有效量的选自由以下组成的组的增加LAIR-1表达、配体结合、交联、负性信号传导或它们的组合的免疫调节剂：
(i)功能活化性抗LAIR-1抗体，
(ii)功能阻断性抗LAIR-2抗体，以及
(iii)它们的组合；
以降低有需要的受试者的免疫应答。
22.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述免疫应答是对抗原的初次免疫应答或效应细胞功能的增加，如增加T细胞的抗原特异性增殖、促进T细胞产生细胞因子、刺激分化或它们的组合。
23.一种降低有需要的受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求21或22所述的药物组合物。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述受试者患有炎症。
25.如权利要求23所述的方法，其中所述受试者患有自身免疫性病症。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述自身免疫性病症是类风湿性关节炎。
27.如权利要求21-26中任一项所述的方法，其中所述受试者或疾病或疾患的特征在于LAIR-1的表达降低、LAIR-1配体的表达降低、LAIR-2的表达增加或它们的组合。
28.如权利要求21-27中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用第二治疗剂。
29.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述LAIR-1在骨髓细胞、T细胞、自然杀伤(NK)细胞或它们的组合上表达。
30.如权利要求29所述的组合物或方法，其中所述骨髓细胞是抗原呈递细胞。
31.如权利要求30所述的组合物或方法，其中所述抗原呈递细胞是单核细胞、巨噬细胞或树突细胞。
32.一种用于治疗有需要的受试者的白血病的方法，所述方法包括：
向所述受试者施用有效量的包含LAIR-1单克隆抗体、可溶性LAIR-1多肽、可溶性LAIR-2多肽、LAIR-1融合蛋白、LAIR-2融合蛋白或它们的组合的药物组合物，以抑制或减少白血病细胞中的LAIR-1信号转导来由此抑制白血病细胞存活或促进对所述白血病细胞的抗肿瘤免疫应答。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述白血病是急性骨髓性白血病。
34.一种抗LAIR抗体，其由选自由以下组成的组的杂交瘤产生：1E11、1G7、4B3、5A6、5E1、6B2、6F4、6G6、7G3、9H6、11B3、12E10a以及12E10b。
35.一种抗LAIR抗体，其包含如权利要求34所述的抗体的至少一条轻链或至少一条重链。
36.一种抗LAIR抗体，其包含可变轻链，所述可变轻链与具有选自由以下组成的可变轻链的组的氨基酸序列的可变轻链具有至少95％序列同一性：SEQ ID NO19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107以及115。
37.一种抗LAIR抗体，其包含可变重链，所述可变重链与具有选自由以下组成的可变重链的组的氨基酸序列的可变重链具有至少95％序列同一性：SEQ ID NO23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103以及111。
38.一种抗LAIR抗体，其包含互补决定区(CDR)，所述互补决定区选自具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的CDR的组：SEQID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-118。
39.一种抗LAIR抗体，其具有选自由以下组成的组的多个CDR：SEQ ID NO:20-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44-46、48-50、52-54、56-58、60-62、64-66、68-70、72-74、76-78、80-82、84-86、88-90、92-94、96-98、100-102、104-106、108-110、112-114以及116-118。
40.如权利要求39所述的抗体，其中所述多个CDR是2-12个CDR。
41.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括与抗PD-1抗体或其抗原结合片段组合或交替向有需要的受试者施用有效量的LAIR-2Fc。
42.如权利要求40所述的方法，其中所述癌症是卵巢癌。
43.一种用于降低有需要的受试者的肿瘤负荷的方法，所述方法包括与抗PD-1抗体或其抗原结合片段组合或交替向有需要的受试者施用有效量的LAIR-2Fc。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述肿瘤是卵巢肿瘤。
45.如权利要求41或43中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤是淋巴瘤。
46.一种用于促进有需要的受试者的原代T细胞扩增的方法，所述方法包括向宿主施用治疗有效量的LAIR-2Fc。
47.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:21和SEQ ID NO.:22中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:24、SEQ ID NO.:25和SEQ ID NO.:26中列出的氨基酸序列。
48.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:28、SEQ ID NO.:29和SEQ ID NO.:30中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:32、SEQ ID NO.:33和SEQ ID NO.:34中列出的氨基酸序列。
49.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:36、SEQ ID NO.:37和SEQ ID NO.:38中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:40、SEQ ID NO.:41和SEQ ID NO.:42中列出的氨基酸序列。
50.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:44、SEQ ID NO.:45和SEQ ID NO.:46中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:48、SEQ ID NO.:49和SEQ ID NO.:50中列出的氨基酸序列。
51.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:52、SEQ ID NO.:53和SEQ ID NO.:54中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:56、SEQ ID NO.:57和SEQ ID NO.:58中列出的氨基酸序列。
52.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:60、SEQ ID NO.:61和SEQ ID NO:62中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQ IDNO.:64、SEQ ID NO.:65和SEQ ID NO:66中列出的氨基酸序列。
53.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:68、SEQ ID NO.:69和SEQ ID NO.:70中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:72、SEQ ID NO.:73和SEQ ID NO.:74中列出的氨基酸序列。
54.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:76、SEQ ID NO.:77和SEQ ID NO.:78中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:80、SEQ ID NO.:81和SEQ ID NO.:82中列出的氨基酸序列。
55.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:84、SEQ ID NO.:85和SEQ ID NO.:86中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:88、SEQ ID NO.:89和SEQ ID NO.:90中列出的氨基酸序列。
56.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:92、SEQ ID NO.:93和SEQ ID NO.:94中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQID NO.:96、SEQ ID NO.:97和SEQ ID NO.:98中列出的氨基酸序列。
57.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:100、SEQ ID NO.:101和SEQ ID NO.:102中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQ ID NO.:104、SEQ ID NO.:105和SEQ ID NO.:106中列出的氨基酸序列。
58.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:108、SEQ ID NO.:109和SEQ ID NO.:110中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQ ID NO.:112、SEQ ID NO.:113和SEQ ID NO.:114中列出的氨基酸序列。
59.一种特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链互补决定区，所述轻链互补决定区具有SEQ ID NO.:116、SEQ ID NO.:117和SEQ ID NO.:118中列出的氨基酸序列；以及重链互补决定区，所述重链互补决定区具有SEQ ID NO.:112、SEQ ID NO.:113和SEQ ID NO.:114中列出的氨基酸序列。
60.如权利要求47-59中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含人Fc结构域。
61.一种抗体，其包含重链，所述重链具有与SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:123中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
62.一种抗体，其包含重链，所述重链具有与SEQ ID NO:126或SEQ ID NO:128中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:130中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
63.一种抗体，其包含重链，所述重链具有与SEQ ID NO:132或SEQ ID NO:134中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:136中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
64.一种抗体，其包含重链，所述重链具有与SEQ ID NO:138或SEQ ID NO:140中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:142中列出的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
65.一种编码抗体的核酸序列，所述抗体包含根据SEQ IDNO:124、130、136或142的轻链氨基酸序列和/或根据SEQ ID NO:120、122、126、128、132、134、138或140的重链氨基酸。
66.一种核酸序列，其编码根据SEQ ID NO19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107或115的可变轻链和/或根据SEQ ID NO23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103或111的可变重链。
67.一种细胞，其组成型地或诱导型地表达特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含编码根据SEQID NO:19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103、111或它们的组合的氨基酸序列的一种或多种核酸。
68.一种细胞，所述细胞组成型地或诱导型地表达特异性地结合至LAIR-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含编码根据SEQ ID NO:120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142或它们的组合的氨基酸序列的一种或多种核酸。
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