CN114591434B - 抗Siglec15抗体及其制备方法和用途 - Google Patents

抗Siglec15抗体及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了抗Siglec15抗体、其抗原结合片段及其医药用途，还提供了包含所述抗体CDR区的嵌合抗体、人源化抗体、包含抗Siglec15抗体及其抗原结合片段的药物组合物，以及所述抗体在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。本发明的抗Siglec15抗体具有与Siglec15蛋白较高的结合活性，展现出更好的抑制肿瘤生长的效果。

Description

抗Siglec15抗体及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体的涉及一种针对Sigelc15的抗体或其抗原结合片段。
背景技术
唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding Ig-like lectins，Siglecs)是一类免疫球蛋白超家族成员，属于一类I型跨膜蛋白，主要包括唾液酸结合性N端IgV结构域、IgC2可变区结构域、跨膜区和胞质区，可通过识别含有唾液酸的糖链结构，介导细胞与细胞或病原体间的相互作用。Siglec家族主要分为两类，一类亚型主要包括CD33相关的序列可变的Siglecs，如Siglec7、Sglec8、Siglec9等，另一类是序列保守的Siglecs，包括唾液酸黏附素、CD22、MAG和Siglec15；近年来的研究表明Siglec家族成员在自身免疫病、炎症反应以及肿瘤的发生中发挥重要的免疫调控作用，从而成为药物治疗的靶标。
最近的研究发现Siglec15蛋白是一个重要的免疫抑制分子，Siglec15通过与免疫T细胞上的配体结合从而抑制免疫T细胞的增殖，Siglec15抗体通过阻断Sigelc15与其配体的结合从而解除免疫T细胞的抑制，其可作为肿瘤免疫正常化策略的潜在靶点(Siglec-15as an immune suppressor and potential target for normalization cancerimmunotherapy，Jun wang,et al.,nature medicine 4(25):656-666(2019))。Siglec15mRNA在大多数正常人体组织和各种免疫细胞亚群中均罕见不表达，但是TCGA数据显示Siglec15 mRNA在人类的肿瘤上有广泛的表达谱，包括结肠癌、子宫内膜样癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌和肝癌等，以及肿瘤浸润的巨噬细胞上也能检测到Siglec15的表达。Siglec15在临床中有着广泛的应用前景，因此亟待开发Siglec15抗体以满足本领域病人的治疗需求。
中国专利CN110035769A公开了一种特异性结合Siglec15的抗体或其抗原结合片段。
目前，针对Siglec15的抗体及其效果有待进一步提高和完善。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段。
本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链可变区，所述的重链可变区包含至少1个如下HCDR：
HCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列；
HCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:13所示，或包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:13所示氨基酸序列；
HCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列；和
轻链可变区，所述的轻链可变区包含至少1个如下LCDR：
LCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:14所示，或包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:14所示氨基酸序列；
LCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，或包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列；
LCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，或包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的HCDR1。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的HCDR2。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的HCDR2。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的HCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的LCDR1。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的LCDR1。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的LCDR2。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，本发明提供一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，或与SEQ ID NO:7具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，和/或所述的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，或与SEQ ID NO:8具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体为鼠源抗体或其片段。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体或其片段重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且其中所述的抗体轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的鼠源抗体或其片段，其重链可变区进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链FR区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的鼠源抗体或其片段，其进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的鼠源抗体或其片段，其抗体轻链可变区进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链FR区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的鼠源抗体或其片段，其进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体为嵌合抗体或其片段。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15嵌合抗体或其片段，其进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，优选人源κ轻链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15嵌合抗体或其片段，其进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG4重链恒定区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15嵌合抗体或其片段，所述抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，或与SEQ ID NO:9具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，或与SEQ ID NO:10具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体为人源化抗体或其片段。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链FR区，优选包含人源IgG1或IgG4重链FR区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，重链可变区序列选自如SEQ ID NO:15、17、19或22所示序列中的任意一种，或与SEQID NO:15、17、19或22具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG4重链恒定区，更优选所述的人源IgG1重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示，或所述的人源IgG4重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其轻链可变区进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链FR区，优选人源κ轻链FR区。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其轻链可变区序列选自如SEQ ID NO:16、18、20或21所示序列中的任意一种，或与SEQID NO:16、18、20或21具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，优选人源κ轻链恒定区，更优选人源κ轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:15具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:16具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:18具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:19具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:21具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15人源化抗体或其片段，其重链可变区包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:22具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
本领域技术人员根据上述的抗体重轻链可变区和恒定区的氨基酸序列，可以容易地知道上述抗体重轻链的全序列，并以此得知抗体序列全信息。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其片段，其轻链变体优选在轻链可变区有0-10个氨基酸变化。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的抗Siglec15抗体或其片段，其重链变体优选在重链可变区有0-10个氨基酸变化。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗原结合片段选自Fab、Fv、scFv或F(ab’)2。
本发明进一步提供一种生物材料，该生物材料可以是：
(1)编码如上所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的DNA分子；所述DNA分子可以分别编码抗体的重链和轻链部分，本领域技术人员根据抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列，可以推知DNA序列，并为其设置合适的表达元件，使DNA分子能够表达本发明的抗体或其抗原结合片段；
(2)含有如上所述的DNA分子的表达载体；
(3)含有如上所述的DNA分子或表达载体的宿主细胞，或上述宿主细胞经培养后获得的培养液、菌悬液等培养物。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明提供的宿主细胞，其中所述的宿主细胞优选为人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。
本发明进一步提供一种生产抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的方法，包括步骤：培养如上所述的宿主细胞；进一步地，还包括从获得的培养物中分离抗体；以及对所述抗体进行纯化。
本发明进一步提供一种药物组合物，其含有根据本发明所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段和可药用的赋形剂、稀释剂或载体。
本发明进一步提供一种检测或诊断试剂盒，其含有根据本发明所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，用于检测、诊断、预后Siglec15或Siglec15介导的疾病或病症。
本发明进一步提供一种根据本发明所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段、生物材料(如DNA分子、表达载体、宿主细胞及其培养物)在制备用于治疗或预防Siglec15介导的疾病或病症的药物中的用途。
本发明进一步提供一种根据本发明所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段、生物材料(如DNA分子、表达载体、宿主细胞及其培养物、组合物以及试剂盒)在检测、诊断、预后Siglec15或Siglec15介导的疾病或病症中的用途。
本发明进一步提供一种治疗和预防Siglec15介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予所需患者治疗有效量的根据本发明所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段、或包含所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的药物组合物。
本发明所述的Siglec15介导的疾病或病症为表达Siglec15的癌症，如结直肠癌、子宫内膜样癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、头颈部癌、乳腺癌、卵巢癌或肝癌。
本发明的抗Siglec15抗体及其抗原结合片段具有与Siglec15蛋白较高的结合活性，较好的体外逆转免疫细胞增殖抑制的功能，而且展现出更好的抑制肿瘤生长的效果。
附图说明
图1：本发明的鼠源抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞抑制的结果。
图2：本发明的嵌合抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞抑制的结果。
图3：本发明的嵌合抗体在MC38-humanSiglec15结直肠癌模型上的抗肿瘤活性。
图4：本发明的人源化抗体对于CHO-humanSiglec15细胞的结合能力。
图5：本发明的人源化抗体对于MC38-mouseSiglec15细胞的结合能力。
图6：本发明的IgG4型人源化抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞抑制的结果，图中标示浓度表示抗体浓度。
图7：本发明的IgG1型人源化抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞抑制的结果，图中标示浓度表示抗体浓度。
具体实施方式
术语和定义
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
本发明所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
本发明所述的抗体是指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。
在本发明中，本发明所述的抗体轻链可进一步包含轻链恒定区，所述的轻链恒定区包含人源或鼠源的κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
在本发明中，本发明所述的抗体重链可进一步包含重链恒定区，所述的重链恒定区包含人源或鼠源的IgG1、2、3、4或其变体的重链恒定区。
抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(V区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区(C区)。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。发明所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR1-3)，或者符合kabat和chothia的编号规则。
术语“鼠源抗体”在本发明中为根据本领域知识和技能制备的针对人Siglec15的单克隆抗体。制备时用Siglec15抗原注射试验对象(鼠)，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体。在本发明一个优选的实施方案中，所述的鼠源Siglec15抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。
术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要选建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再要根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。
在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗Siglec15嵌合抗体的抗体轻链可变区进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链FR区，抗体轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。所述的抗Siglec15嵌合抗体的抗体重链可变区进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链FR区，抗体重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG4重链恒定区。人抗体的轻链恒定区可选自人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，优选包含人源κ轻链恒定区。
术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指在不显著影响抗原结合特性的情况下，将非人来源(如小鼠)的CDR序列移植到人的抗体可变区框架。人源化抗体可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的免疫应答反应的缺点。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区进行最少反向突变，以保持活性。
本发明中所述的“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段，以及与人Siglec15结合的Fv片段、scFv片段，包含本发明所述的SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chainantibody)或单链Fv(scFv)。
Fab片段即由VL、VH、CL、CH1结构域组成的单价片段。
F(ab’)2即由通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段。
生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法在现有技术中熟知和能找到，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。如，小鼠可以用人Siglec15或其片段免疫，所得到的抗体能被复性，纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。
本发明所述的抗体或mAb，指由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的、原核的或噬菌体的克隆细胞株。抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、合成技术(如CDR-grafting)，或其它现有技术进行重组得到。
“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。
“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，诸如包含本发明的任一种抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，无论是通过诱导这类症状退化还是抑制这类症状发展到任何临床程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻，如根据本领域已知的统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定。
“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene,TheBenjamin/Cummings Pub.Co.,第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。在本发明中，所述抗体轻链或重链的变体即为在轻链或重链中发生0-10个氨基酸的“保守修饰”或“保守置换或取代”，本领域技术人员可以预期该变体具有与修饰或取代前基本相同的活性。
“有效量”包含足以改善或预防医学病症或症状的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
“外源性”指要根据背景在生物、细胞或人体外产生的物质。“内源性”指根据背景在细胞、生物或人体内产生的物质。
“序列同一性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如如果两个DNA分子的每一个位置都被腺嘌呤占据时，那么所述分子在该位置是同一的。两个序列之间的同一性百分率是两个序列共有的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100的函数。例如，在序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置有6个匹配或同源，那么两个序列为60％同一性。一般而言，当比对两个序列而得到最大的同一性百分率时进行比较。本领域技术人员可以判断序列同一性百分比所表示的变化的碱基数或氨基酸数量。
本文使用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞株”可互换使用，并且所有这类名称都包括后代。因此，“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物，而不考虑转移数目。还应当理解的是，由于故意或非有意的突变，所有后代在DNA含量方面不可能精确相同，包括具有与最初转化细胞中筛选的相同的功能或生物学活性的突变后代。在意指不同名称的情况下，其由上下文清楚可见。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
在本发明中，Siglec15蛋白或S15蛋白或Siglec15抗原的GenBank登记号为NM_213602。本发明使用人Siglce15胞外区(20-263)作为抗原免疫小鼠，使其发生免疫反应产生针对Siglec15的鼠源抗体。
hS15-his是指在人Siglec15蛋白胞外区的C端连接6个组氨酸的融合蛋白。
hS15-Fc是指在人Siglec15蛋白胞外区的C端连接了人IgG1恒定区Fc片段的融合蛋白。
在本发明中，“hS15-Fc介导的对人T细胞的抑制”是指人Siglec15蛋白通过与免疫T细胞上的配体结合从而抑制免疫T细胞增殖的现象。
在本发明中，“抗人CD3抗体(克隆OKT3，biolegend)”是指针对免疫T细胞上的CD3抗原的抗体，用于激活T细胞的增殖。
MC38-humanSiglec15体内肿瘤模型为在C57BL/6N小鼠上建立的小鼠结直肠癌模型。将编码人Siglec15的cDNA序列(GenBank登记号NM_213602)转染至MC38空白细胞中，得到过表达人Siglec15的稳定细胞株MC38-humanSiglec15(MC38-hS15)。
本发明中涉及的编码抗Siglec15抗体的CDR、可变区或轻重链的DNA序列可以根据相应的氨基酸序列设计，这是本领域的常规技术。
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围，本领域技术人员可由本说明书所公开的内容了解本发明的其他优点及效果。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册，分子克隆手册；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1Siglec15鼠源抗体的制备
1.1动物免疫
通过常规的动物免疫和融合方法制备针对人Siglec15的杂交瘤抗体，即Siglec15鼠源抗体：将编码人Siglec15的DNA插入表达载体，通过瞬转的方式转染Expi293F细胞(Lifetechnologies,12338-018)，进一步纯化得到免疫抗原人Siglec15。用500μg人Siglec15抗原与等体积的弗氏完全佐剂(Sigma-Aldrich)按照1:1混合乳化，乳液皮下免疫雌性C57BL/6N小鼠(北京维通利华)。随后，在第14天和28天皮下注射按照1:1混合的250μg人Siglec15蛋白和弗氏不完全佐剂(Sigma-Aldrich)的乳液，对小鼠进行加强免疫。第三次免疫完后，用酶联免疫吸附分析法(Elisa)测定小鼠血清的抗体滴度：将浓度为0.5μg/mL的hS15-his以100μL/孔的体积加入到96孔板中4℃包被过夜。用PBST(含有0.05％吐温20的磷酸盐缓冲液)洗涤3次后，并将其用200μL/孔的含1％牛血清蛋白(BSA)的PBST在37℃封闭1小时。随后弃去封闭液，向每个孔加入不同稀释比(首浓度用稀释液按照1：100稀释，后续按照2倍梯度稀释9个浓度)的100μL上述免疫的小鼠血清稀释液，然后在室温下孵育1小时。将板用PBST洗涤三次，并用100μL/孔的缀合辣根过氧化物酶的山羊抗小鼠IgG(JacksonImmunoresearch，115-035-003)在37℃孵育0.5小时。将板用PBST洗涤五次，然后加入TMB显色液(TIANGEN，S7717)并在室温下在黑暗中孵育15分钟。通过加入50μL的1mol/L HCl终止液(Sigma)终止反应，使用酶标仪在OD450nm的条件下读数并分析数据。在杂交瘤融合前4天，对展现出最高抗体滴度的2只小鼠进行Siglec15蛋白的加强免疫。
1.2杂交瘤融合和筛选
处死加强免疫的小鼠，提取脾脏并进行均质化以产生单细胞悬液，同时准备骨髓瘤细胞(SP2/0)(SGST)单细胞悬液。使用电融合将脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合。将融合的细胞重悬于含杂交瘤细胞选择剂DMEM+20％FBS+HAT(Gibco)的完全培养基中，并以200μL/孔接种至96孔板中。将96孔板在37℃ 5％CO2的孵箱中培养6～7天，取细胞上清，采用ELISA检测鼠源抗体与Siglec15蛋白的结合情况。筛选出的优选杂交瘤克隆使用有限稀释法进行亚克隆。将杂交瘤细胞在37℃ 5％CO2中培养1周后，对上清液进行ELISA结合检测，根据鼠源抗体与Siglec15蛋白结合及功能筛选出针对Siglec15的鼠源抗体E05。
对鼠源抗体E05可变区进行测序：提取杂交瘤细胞的mRNA，逆转录为cDNA后，通过通用引物进行PCR，将PCR得到的DNA产物进行测序分析，再翻译成氨基酸序列，并对可变区序列使用Kabat规则进行CDR区分析，其中，重链CDR1根据IMGT原则增加了5个氨基酸，得到结果如表1所示。
表1 Siglec15鼠源抗体E05的氨基酸序列
名称 序列编号
重链CDR1 SEQ ID NO:1
重链CDR2 SEQ ID NO:2
重链CDR3 SEQ ID NO:3
轻链CDR1 SEQ ID NO:4
轻链CDR2 SEQ ID NO:5
轻链CDR3 SEQ ID NO:6
重链可变区 SEQ ID NO:7
轻链可变区 SEQ ID NO:8
实施例2Siglec15鼠源抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞的抑制
抽取健康志愿者的外周血，利用密度梯度离心方法分离人外周血淋巴细胞(PBMC)，实验前将冻存的PBMC复苏并重悬于1640+10％FBS(Gibco)的完全培养基中；将抗人CD3抗体(克隆OKT3，biolegend，317302)用PBS稀释至0.05μg/mL，100μL/孔包被于96孔板中4℃过夜。实验前吸出未结合的OKT3上清液，并用PBS洗涤三遍；将可溶性人Siglec15与人Fc的融合蛋白(hS15-Fc)50μL/孔(终浓度1.5μg/ml)与E05抗体50μl/孔(2μg/ml)混合加入到96孔板中，同时设置不加E05(OKT3+hS15-Fc 1.5μg/ml)和不加hS15-Fc和E05抗体(OKT3)的对照孔；收集PBMC，用PBS洗涤一遍后用PBS重悬，加入5μM荧光染料CFSE(羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂)在37℃下孵育15分钟，孵育完成后用PBS洗涤2次，用1640+10％FBS的完全培养基重悬至3E06的细胞密度，50μL/孔加入到96孔板中，96孔板在37℃、5％CO2培养箱中孵育72小时。将细胞转移至圆底板96孔板上，用PBS缓冲液洗涤两次后，通过流式细胞术进行分析PBMC的增殖效果。
参照中国专利CN110035769A记载的方法制备得到鼠源抗体5G12(mIgG1)，作为阳性对照组，进行对照试验。
如图1所示：鼠源抗体E05可以显著的阻断hS15-Fc对T细胞的增殖抑制作用，且阻断效果优于阳性对照抗体5G12(图1中，“不加OKT3”为阴性对照，即只有PBMC细胞)。
实施例3Siglec15嵌合抗体的制备
将鼠源抗体E05的重、轻链可变区分别定向插入含有信号肽和人IgG1恒定区、含有信号肽和人轻链kappa恒定区的表达载体pcDNA3.4(GenScript)中。
复苏Expi293F细胞至Expi293表达培养基(Gibco)中，在37℃ 8％CO2的摇床中培养；转染前24小时将细胞密度调至2E6，转染前对细胞计数；将2ml预热的Opti-MEM(Gibco)培养基平分至两个离心管中，每管中加入相应量的抗体轻、重链质粒，并进行混匀；将100μl的转染试剂加入另一试管，室温孵育5分钟；将质粒与转染试剂混合，并室温孵育20分钟，然后加入到Expi293F细胞中；转染16小时后加入相应量的Enhancer1和Enhancer 2培养基(Gibco)至细胞培养液中；培养表达5天后收集上清液，采用MabSelect PrismA(GE,10293703)进行纯化，得到Siglec15嵌合抗体ChE05。
表2嵌合抗体ChE05的氨基酸序列
抗体名称 重链 轻链
ChE05 SEQ ID NO:9 SEQ ID NO:10
实施例4Siglec15嵌合抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞的抑制
参照实施例3的方法，同时参照中国专利CN110035769A制备得到人源化的5G12抗体(h5G12)作为阳性对照组进行对照试验，其中，CN110035769A仅公开h5G12的可变区，本申请发明人将其与人IgG1恒定区组合制备得到人源化的5G12抗体全长序列。
表2对照抗体h5G12的氨基酸序列
抗体名称 重链 轻链
h5G12 SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:12
参照实施例2的方法，检测本发明Siglec15嵌合抗体ChE05阻断hS15-Fc介导的对人T细胞的抑制。
如图2所示，Siglec15嵌合抗体ChE05可以较好的阻断hS15-Fc对T细胞的增殖抑制作用，且其阻断效果优于阳性对照抗体h5G12。
实施例5Siglec15嵌合抗体体内抑制结直肠癌模型中肿瘤生长的效果
采用MC38-humanSiglec15体内肿瘤模型测量本发明抗体的体内免疫调节活性。
将编码人Siglec15的cDNA序列(GenBank登记号NM_213602)转染至MC38空白细胞中，得到过表达人Siglec15的稳定细胞株MC38-humanSiglec15(MC38-hS15)。C57BL/6N雌鼠(杭州医学院)，6～8周；收集MC38-hS15肿瘤细胞，PBS洗涤2遍后重悬至5E06的细胞密度，按照200μL/只的细胞量接种于C57BL/6N小鼠的右腹侧。接瘤后将小鼠随机分组，每组6只，接瘤数小时后开始腹腔给药，每只小鼠注射抗体10mg/kg，一周给药两次，共给药5次；每周3次测量小鼠体重和肿瘤大小，按(长度×宽度^2)*0.5计算肿瘤体积，每组小鼠取肿瘤体积的平均值作肿瘤生长曲线图。
采用实施例4中的h5G12抗体，作为阳性对照组，进行对照试验。
如图3显示，Siglec15嵌合抗体ChE05抑制MC38-hS15肿瘤生长的效果显著优于对照组h5G12。
实施例6Siglec15人源化抗体的设计和抗体制备
在上述实施例获得鼠源抗体轻链可变区、重链可变区的基础上进行人源化改造。将鼠源抗体重链和轻链的6个CDR嫁接到与鼠源FR区具有较高相似度的人源模板上，人源模板是在PDB数据库通过BLAST获得与鼠源抗体序列相似度较高的germline序列，其中轻链可变区模板为人种系轻链IGKV4-1*01，重链可变区的模板为人种系重链IGHV3-7*01。
CDR移植完成的抗体通过同源建模，预测在鼠抗FR区中可能决定抗体结构的关键氨基酸，此外对移植后的序列进行翻译后修饰(PTM)分析，发现抗体轻链可变区CDR1以及重链可变区的CDR2含有异构化修饰位点，采用回复突变的方法，将FR区个别人源模板的氨基酸回复突变回鼠源氨基酸，此外对CDR中PTM位点进行随机突变，通过亲和筛选，最终获得人源化的抗体。回复突变后的重链CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO:13，回复突变后的轻链CDR1的氨基酸序列为：SEQ ID NO:14。
对得到的人源化抗体进行测序：根据人源化抗体轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列合成cDNA，并插入含有信号肽和人IgG1或IgG4(S228P)重链恒定区、含有信号肽和人轻链kappa恒定区的pcDNA3.4表达载体(GenScript)中，得到全长抗体的表达质粒。重链和轻链表达质粒共转染Expi293F细胞，培养6～7天后收获上清进行Protein A纯化，得到本发明的人源化抗体。
表3：人源化抗体序列
Figure BDA0003601985980000141
Figure BDA0003601985980000151
实施例7人源化抗体亲和力测定
采用Biacore T200生物大分子相互作用仪(GE Healthcare)进行人源化抗体亲和测定。在芯片上偶联抗人IgG-Fc抗体，利用抗人IgG抗体捕获Siglec15人源化抗体，以抗原Siglec15-his为流动相，使用6个浓度梯度(20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125nM)，然后进行20秒缔合步骤和进行360秒的解离步骤。使用10mM甘氨酸-盐酸缓冲液进行再生，时间为60s；使用Biacore T200数据分析软件3.1处理数据。检测结果如表4所示。
表4：Biacore测定人源化抗体与Siglec15抗原的亲和力
Figure BDA0003601985980000152
实验结果表明本发明的ChE05的人源化抗体都保持了和Siglec15结合活性，具有和嵌合抗体ChE05近似的亲和力。
实施例8FACS测定Siglec15人源化抗体对于CHO-hS15和MC38-mS15细胞的结合
将编码人Siglec15和鼠Siglec15的cDNA序列(GenBank登记号NM_001101038.2)分别转染至CHO和MC38空白细胞中，得到过表达人Siglec15和鼠Siglec15的稳定细胞株CHO-HumanSiglec15(CHO-hS15)和MC38-mouseSiglec15(MC38-mS15)。将CHO-hS15和MC38-mS15用PBS重悬至细胞密度为4E06。将细胞按照50μL/孔加入到96孔板中，并添加50μL终浓度范围为30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01μg/ml的Siglec15人源化抗体。将细胞在4℃孵育30分钟，然后用PBS缓冲液洗涤两次。将细胞用100μL山羊抗人IgG-FITC二抗(JacksonImmunoresearch，109-545-003)1:200稀释液重悬，4℃孵育30分钟并用PBS缓冲液洗涤两次，通过流式细胞术进行分析，结果如图4、5所示。
结果表明，本发明的人源化抗体和ChE05嵌合抗体与CHO-hS15和MC38-mS15细胞的结合没有显著差别，且具有种属交叉性。
实施例9Siglec15人源化抗体逆转hS15-Fc介导的对人T细胞的抑制
抽取健康志愿者的外周血，利用密度梯度离心方法分离人外周血淋巴细胞(PBMC)，实验前将冻存的PBMC复苏并重悬于1640+10％FBS的完全培养基中；将抗人CD3抗体(克隆OKT3，Biolegend)用PBS稀释至0.05μg/mL100μL/孔包被于在96孔板中4℃过夜。实验前吸出未结合的OKT3上清液，并用PBS洗涤三遍；将可溶性hS15-Fc 50μl/孔(终浓度1.5μg/ml)与不同浓度的本发明的S15人源化抗体(两种亚型IgG1和IgG4)50μl/孔(20、6.67、2.22、0.74、0.24μg/ml)混合加入到96孔板中，同时设置不加S15人源化抗体(OKT3+hS15-Fc 1.5μg/ml)和不加hS15-Fc和S15人源化抗体(OKT3)的对照孔；收集PBMC，用PBS洗涤一遍后用PBS重悬，加入5μM CFSE在37℃下孵育15分钟，孵育完成后用PBS洗涤2次，用1640+10％FBS的完全培养基重悬至3E06的细胞密度，50μL/孔加入到96孔板中，96孔板在37℃CO2培养箱中孵育72小时。将细胞转移至96孔圆底板上，用PBS缓冲液洗涤两次后，通过流式细胞术进行分析PBMC的增殖效果。
如图6、图7所示，本发明的Siglec15人源化抗体可以较好的阻断hS15-Fc对T细胞的增殖抑制作用，且阻断活性优于阳性对照h5G12抗体(图6和图7中，“不加OKT3”组为阴性对照；图6中“ChE05-4、h5G12-4”为将ChE05和h5G12的重链恒定区IgG1替换为IgG4所得)。
实施例10Siglec15人源化抗体体内抑制肿瘤生长的效果
具体实施方法参照实施例5，采用MC38-humanSiglec15体内肿瘤模型测量本发明Siglec15人源化抗体的体内免疫调节活性，与不给药的空白组相比，本发明嵌合抗体和人源化抗体的抑制肿瘤的效果如表5所示。
表5：Siglec15人源化抗体体内抑制肿瘤生长的效果
组别 ChE05 E05-0 E05-1 E05-2 E05-5
抑瘤率％ 19.81 37.79 56.91 64.72 56.65
结果表明，本发明Siglec15人源化抗体与ChE05嵌合抗体相比，具有更加显著的抑制MC38-hSiglec15的肿瘤生长效果。抑瘤率＝((空白组体积-实验组体积)/空白组体积)*100％。
表6：序列信息
Figure BDA0003601985980000171
Figure BDA0003601985980000181

Claims (23)

1.抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链可变区和轻链可变区，
其中，所述的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且所述的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5和SEQ IDNO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者，
所述的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且所述的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者，
所述的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且所述的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者，
所述的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；且所述的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.如权利要求1所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，或与SEQ ID NO:7具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，和/或所述的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，或与SEQ ID NO:8具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
3.如权利要求2所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，为鼠源抗体或其抗原结合片段，进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链FR区，和/或进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链FR区。
4.如权利要求2所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，和/或进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
5.如权利要求2所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，为嵌合抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区；和/或进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。
6.如权利要求5所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源κ轻链恒定区，和/或包含人源IgG1或IgG4重链恒定区。
7.如权利要求5所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，或与SEQ ID NO:9具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，或与SEQ ID NO:10具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
8.如权利要求1所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，为人源化抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链FR区，和/或进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链FR区。
9.如权利要求8所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源IgG1或IgG4重链FR区，和/或进一步包含人源κ轻链FR区。
10.如权利要求8所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中，所述的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15、17、19或22所示，或与SEQ ID NO:15、17、19或22具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；和/或所述的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16、18、20或21所示，或与SEQ ID NO:16、18、20或21具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
11.如权利要求10所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，或与SEQ ID NO:15具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示，或与SEQ ID NO:16具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；或者
所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，或与SEQ ID NO:18具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；或者
所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示，或与SEQ ID NO:19具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；或者
所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；或者
所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，或与SEQ ID NO:17具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，或与SEQ ID NO:21具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性；或者
所述抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，或与SEQ ID NO:22具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性，且其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，或与SEQ ID NO:20具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列一致性。
12.如权利要求11所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，和/或进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
13.如权利要求12所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，进一步包含人源IgG1或IgG4重链恒定区，和/或进一步包含人源κ轻链恒定区，其中，所述的人源IgG1重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示，或所述的人源IgG4重链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNO：25所示，和/或所述人源κ轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示。
14.如权利要求1-13任一项所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗原结合片段选自Fab、Fv、scFv或F(ab’)2。
15.一种生物材料，为：
(1)编码如权利要求1-14任一项所述的抗体或其抗原结合片段的DNA分子；
(2)含有如(1)所述的DNA分子的表达载体；
(3)含有如(1)所述的DNA分子或如(2)所述的表达载体的宿主细胞或其培养物。
16.如权利要求15所述的生物材料，其中，所述的宿主细胞为人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。
17.一种生产抗Siglec15抗体或其抗原结合片段的方法，包括步骤：培养权利要求15或16中所述的宿主细胞。
18.如权利要求17所述的方法，其中，还包括从获得的培养物中分离抗体，以及对所述抗体进行纯化。
19.一种药物组合物，其含有如权利要求1至14任一项所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段和可药用的赋形剂、稀释剂或载体。
20.一种检测或诊断试剂盒，其含有权利要求1-14任一项所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段。
21.如权利要求1-14任一项所述的抗Siglec15抗体或其抗原结合片段、如权利要求15或16所述的生物材料在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防Siglec15介导的疾病或病症。
22.如权利要求21所述的用途，其中，所述的Siglec15介导的疾病或病症为表达Siglec15的癌症。
23.如权利要求22所述的用途，其中，所述表达Siglec15的癌症为结直肠癌、子宫内膜样癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、头颈部癌、乳腺癌、卵巢癌或肝癌。
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