UA105397C2 - Терапевтичний dll4-зв'язувальний білок - Google Patents

Abstract

Винахід належить до зв'язувального білка, який містить антигензв'язувальний домен, який здатний зв'язуватися з людським DLL4.

Description

Посилання на споріднені заявки

У даній заявці вимагається пріоритет попередньої заявки на патент США Мо 61/238152, поданої 29 серпня 2009 р., і попередньої заявки на патент США Мо 61/261728, поданої 16 листопада 2009 р.

Галузь, до якої належить винахід

Даний винахід стосується одержання і застосування 0 |4-зв'язувальних білків з поліпшеними властивостями, і їх використання для пригнічення, попередження і/або лікування ракових захворювань, пухлин і/або інших асоційованих з ангіогенезом захворювань, таких як очна неоваскуляризація, або захворювань, які не асоційовані з ангіогенезом і характеризуються порушенням експресії або активності ОІ І 4, таких як аутоїмунні розлади.

Попередній рівень техніки

Міжклітинні взаємодії необхідні для здійснення множини біологічних процесів, таких як диференціювання, проліферація і гомеостаз. Однією з систем, використовуваних еукаріотами широкого ряду, є шлях передачі сигналу Моїспй. Цей шлях, зокрема рецептор Моїсй, також грає важливу роль в функціональному ангіогенезі пухлини. Таким чином, інгібування функції рецептора

Моїсій, блокування рецептора Моїсі і/або блокування шляху передачі Моїсп-сигналу є стратегією, яка може бути застосована для одержання протиракових композицій і розробки методів лікування раку.

Було встановлено, що невеликі молекули-інгібітори рецептора Моїспй є токсичними, оскільки вони пригнічують експресію рецептора Моїсй в тканинах дикого типу (нормальних тканинах) у всьому організмі. Таким чином, різні члени шляху передачі сигналу Моїсй повинні розглядатися як потенційні мішені для терапії.

Лігандом судинної мережі для рецептора Моїсіп є дельта-4 або дельта-подібний ліганд 4 (0 | 4). рі 4, який експресується, головним чином, в судинній мережі, грає важливу роль в розвитку судин (Хап еї аї., Сіїп. Сапсег Вев., 19(24): 7243-7246 (2007); Зпицег єї аІ., Сепе5 Оеєм., 14(11): 1313-1318 (2000); Саїе еї а!., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА, 101(45): 15949-15954 (2004); Кгерз вї аї., Сепе5 ЮОем., 14(11): 1343-1352 (2000)). Миші, гетерозиготні по 0 Г 4, гинуть на стадії ембріонального розвитку, що зумовлено значними порушеннями розвитку судин (саїе еї аїЇ., Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА, 101(45): 15949-15954 (2004); ЮОцапе єї а!І., сепез ЮОєм., 18(20): 2474-2478 (2004); Ктерз вії аІ., Сепез Оеєум., 18(20): 2469-2473 (2004)). Експресія О0І 14 може бути індукована МЕСЕ (Ціи еї аї., Мої. Сеї! Віої, 23(1): 14-25 (2003); ІГором єї аї., Ргос. Май. Асад. бсі. ОБА, 104(9): 3219-3224 (2007)). В свою чергу, 014 може знижувати передачу сигналу МЕСЕ, частково за допомогою інгібування МЕСЕКЗ і індукування МЕСК 1 (Натіпоаюг евї а!., Містомазс. Вез., 75(2): 144-154 (2008); Зиспііпа єї аї., Ргос. Маї). Асад. сі ОБА, 104(9): 3225-3230 (2007)). Тонка координація між 014 і МЕСЕ грає важливу роль в функціональному ангіогенезі.

Крім своєї фізіологічної ролі 0/4 також активується в кровоносних судинах пухлин (сзаїе еї аї.,

Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА, 101(45): 15949-15954 (2004); Маїноз єї аї!., ОіїМегепііайоп, 69(2-3): 135-144 (2001); Раїєї! еї аІ., Сапсег Вез., 65(19): 8690-8697 (2005); Раїве! еї аї., Сі. Сапсег Вев., 12(16): 4836- 4844 (2006); Модиега- Ггоїіве єї а!., Майшге, 444(7122): 1032-1037 (2006)). Блокування 01 І 4 приводить до сильного інгібування росту первинної пухлини в багатьох моделях (Модиега-Тгоіївєе єї аї., Майте, 444(7122): 1032-1037 (2006); Віддмау еї аї!., Майте, 444(7122): 1083-1087 (2006); ЗсеНпеї еї аї., Віоса, 109(11): 4753-4760 (2007)). Таке інгібування 01 4 є ефективним навіть стосовно пухлин, резистентних до терапії анти-МЕСЕ антитілами. Комбіноване інгібування 0/4 ї МЕСЕ приводить до підвищення протипухлинної активності. Цікаво зазначити, що на відміну від інгібування МЕСЕ, яке знижує утворення пухлинних судин, блокування 0/4 приводить до підвищення щільності судинної мережі пухлини, де вказані судини є аномальними, не можуть забезпечувати ефективне проходження кровотоку і є функціонально неефективними. Таким чином, 0/4 є потенційною мішенню для лікування раку.

Тому необхідно одержати такі терапевтичні засоби, які можуть бути націлені на шлях ОІ | 4-Моїсі і тим самим інгібувати цей шлях або навіть запобігати ангіогенезу і росту пухлини.

Опис суті винаходу

Даний винахід стосується білків, які зв'язуються з 014, включаючи антитіла, СОК-прищеплені антитіла і їх зв'язувальні фрагменти, що мають здатність зв'язуватися з 01/14. Описаний тут зв'язувальний білок, переважно, зв'язується з 0114 з високою афінністю. Більш переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має здатність нейтралізувати 0/4. Даний винахід також стосується способів одержання і застосування Обі | 4-зв'язувальних білків, включаючи людські ОГ І 4- зв'язувальні білки. Перевага даного винаходу полягає в тому, що він не вимагає одержання гуманізованих і | 4-зв'язувальних білків, що дозволяє уникнути проблем, виникаючих при використанні гуманізованих БІ І 4-зв'язувальних білків.

У одному зі своїх аспектів даний винахід стосується зв'язувального білка, що містить антигензв'язувальний домен, здатний зв'язуватися з людським 0114, де вказаний антигензв'язувальний домен включає щонайменше одну або декілька СОК, вибраних з групи, що складається з:

СОВ-НІ: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7 (ЗЕО ІЮ МО: 99), де:

Хі являє собою 5 або М;

Хг являє собою 5, С або М;

Хз являє собою 5, М, Т, С або г;

Ха являє собою У;

Х5 являє собою У або Н;

Хе являє собою МУ; і

Х7 являє собою 0;

СОВ-На: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Хів (ЗЕО ІЮ МО: 100), де:

Хі являє собою Ю;

Хг являє собою І;

Хз являє собою У, М або 5;

Ха являє собою У;

Х5 являє собою Т, М, А, І, 5 або Е;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою 5, М, Т або 0;

Хв являє собою Т;

Хе являє собою У;

Хо являє собою У;

Хії являє собою М;

Хіг являє собою Р;

Хіз являє собою 5;

Ха являє собою І;

Хі5 являє собою К; і

Хівє являє собою 5, М, О або о;

СОВ-НЗ: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хо-Х1о-Хії (ЗЕО ІЮО МО: 101), де:

Хі являє собою Е, У, Е, О, МУ, Ї. або А;

Хг являє собою Ю, А, 5, 0, М, Е або М;

Хз являє собою М, М, ГІ, Р або А;

Ха являє собою |, А, Р, РЕ, 5, К, О, М, б, М або Е;

Х5 являє собою |, У, Е або М;

Хв являє собою РЕ, 0, 5, О або А;

Х7 являє собою 0;

Хв являє собою б, А або 5;

Хе являє собою 5, А, І, М, В або о;

Хіо являє собою Ю; і

Хії являє собою У, ОЮ, 5, М, Н.Е, Б, І, Р, С, І, М, Т, О або К;

СОВ-11: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х1о-Хії (ЗБОЮ МО: 102), де:

Хі являє собою 5;

Хг являє собою 0;

Хз являє собою О, Е або 0;

Ха являє собою Р, 5, б, М, К, І. або Т;

Х5 являє собою |;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою О або Е;

Хв являє собою К;

Хе являє собою У;

Хо являє собою А або М; і

Хії являє собою 5;

СОВ-12: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7 (ЗЕО ІЮ МО: 103), де:

Хі являє собою Е або 0);

Хг являє собою Ю;

Хз являє собою 5, І, Т, А, Е або Е;

Ха являє собою К, Т, Е, М, О, 5 або М;

Х5 являє собою Е;

Хе являє собою Р; і

Х7 являє собою 5; і

СОВ-І З: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5-Хв-Х7-Хв-Хо (5ЕО ІЮ МО: 104), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою А;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою Ю;

Х5 являє собою РЕ, 5, М, Е, М, о або К;

Хе являє собою О або Е;

Х7 являє собою Т, М, А, 5 або М;

Хв являє собою б, А або С; і

Хе являє собою У.

Переважно, антигензв'язувальний домен 0 |4-зв'язувального білка згідно з винаходом містить щонайменше одну СОЕ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: залишків 31-37 5ЕО ІЮ МО: 1 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 1 (СОВ-Н2); залишків 100-110

ЗЕО ІО МО: 1 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІО МО: 111 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО ІЮ МО: 111 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІО МО: 111 (СОВ-Ї 3);

ЗЕО ІО МО: 117 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 118 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 119 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 121 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 122 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 123 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 125 (СОВ-НІ); 5ЕО ІЮ

МО: 126 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 127 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 129 (СОВ-НІ); 5ЕО 10 МО: 130 (СОВ-Нг);

ЗЕО ІО МО: 131 (СОВ-НЗ); 5ЕО 0 МО: 133 (СОВ-НІ); 5ЕО 10 МО: 134 (СОВ-Н2); 5ЕО ІО МО: 135 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 137 (СОВ-НІ); 5ЕО ІЮ МО: 138 (СОВ-Нг); 5ЕО І МО: 139 (СОВ-НЗ); 5ЕО І

МО: 141 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 142 (СОВ-Н2); 5ЕО І МО: 143 (СОВ-НЗ); 5ЕО 10 МО: 145 (СОВ-НІ1);

ЗЕО ІО МО: 146 (СОВ-Н2г); 5ЕО ІО МО: 147 (СОВ-НЗ); 5ЕО 10 МО: 149 (СОВ-НІ); 5ЕО ІО МО: 150 (СОВ-Н2); 5ЕО 10 МО: 151 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІЮ МО: 153 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 154 (СОВ-Н2г); 5ЕО І

МО: 155 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 157 (СОВ-НІ); БЕО ІО МО: 158 (СОВ-Н2); 5ЕО І МО: 159 (СОВ-НЗ);

ЗЕО ІО МО: 161 (СОВ-НІ); 5ЕО ІО МО: 162 (СОВ-Нг2); 5ЕО 10 МО: 163 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 165 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 166 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 167 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 169 (СОВ-НІ); 5ЕО ІЮ

МО: 170 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 171 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 173 (СОВ-НІ); 5ЕО 10 МО: 174 (СОВ-Нг);

ЗЕО ІО МО: 175 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 177 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 178 (СОВ-Н2); 5ЕО ІО МО: 179 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 181 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 182 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 183 (СОВ-НЗ); 5ЕО І

МО: 185 (СОВ-НІ); 5ЕО ІО МО: 186 (СОВ-Н2); 5ЕО І МО: 187 (СОВ-НЗ); 5ЕО 10 МО: 189 (СОВ-НІ1);

ЗЕО ІО МО: 190 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 191 (СОВ-НЗ); 5ЕО 10 МО: 193 (СОВ-НІ); 5ЕО ІО МО: 194 (СОВ-Н2г); 5ЕО 10 МО: 195 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 197 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 198 (СОВ-Н2г); 5ЕО І

МО: 199 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 201 (СОВ-НІ); 5ЕО ІО МО: 202 (СОВ-Н2); 5ЕО 10 МО: 203 (СОВ-НЗ);

ЗЕО ІЮ МО: 205 (СОВ-НІ); 5ЕО ІЮ МО: 206 (СОВ-Нг2); 5ЕО 10 МО: 207 (СОВ-НЗ); 5ЕО ІО МО: 209 (СОВ-НІ); 5ЕО І МО: 210 (СОВ-Н2г); 5ЕО І МО: 211 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 213 (СОВ-НІ); 5ЕО ІЮ

МО: 214 (СОВ-Н2г); 5ЕО ІО МО: 215 (СОВ-НЗ); 5ЕО І МО: 217 (СОВ-11); 5ЕО ІО МО: 218 (СОВ-12);

ЗЕО Ю МО: 219 (СОВ-13); 5БЕО ІО МО: 221 (СОВ-1 1); 5ЕО ІЮ МО: 222 (СОВ-12); БЕО ІЮ МО: 223 (СОВ-

Г 3); БЕО ІЮ МО: 225 (СОВ-11); 5ЕО І МО: 226 (СОВ-12); 5ЕО І МО: 227 (СОВ-І 3); 5ЕО ІЮ МО: 229 (СОВ-11); 5ЕО ІЮ МО: 230 (СОВ-12); БЕ І МО: 231 (СОВ-1 3); БЕО 1О МО: 233 (СОВ-1 1); 5ЕО ІЮ МО: 234 (СОВ-І2); БЕО ІО МО: 235 (СОВ-І 3); 5ЕО ІЮ МО: 237 (СОВ-11); 5ЕО ІЮ МО: 238 (СОВ-12); 5ЕО І

МО: 239 (СОВ-І 3); 5ЕО 10 МО: 241 (СОВ-І1); 5ЕО І МО: 242 (СОВ-12); 5ЕО І МО: 243 (СОВ-Ї 3);

ЗЕО Ю МО: 245 (СОВ-11); 5БЕО ІО МО: 246 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 247 (СОВ-І 3); БЕО ІЮ МО: 249 (СОВ-

І1); 5ЕО ІЮ МО: 250 (СОВ-12); 5ЕО І МО: 251 (СОВ-І 3); 5ЕО І МО: 253 (СОВ-11); 5ЕО ІЮ МО: 254 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 255 (СОВ-І 3); БЕО І МО: 257 (СОВ-11); БЕО І МО: 258 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 259 (СОВ-І 3); БЕО ІО МО: 261 (СОВ-1І1); БЕО І МО: 262 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 263 (СОВ-І 3); 5ЕО 10

МО: 265 (СОВ-11); 5ЕО ІО МО: 266 (СОВ-І2); 5ЕО 10 МО: 267 (СОВ-13); 5ЕО І МО: 269 (СОВА 1);

ЗЕО ПО МО: 270 (СОВ-12); 5БЕО ІО МО: 271 (СОВ-І 3); БЕО ІО МО: 273 (СОВ-І 1); БЕО ІЮ МО: 274 (СОВ- 12); БЕО ІЮ МО: 275 (СОВ-13); 5ЕО І МО: 277 (СОВ-11); 5ЕО І МО: 278 (СОВ-І12); 5ЕО ІЮ МО: 279 (СОВ-13); 5ЕО ІЮ МО: 281 (СОВ-І 1); БЕО І МО: 282 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 283 (СОВ-І 3); БЕО ІЮ МО: 285 (СОВ-І1); БЕО ІО МО: 286 (СОВ-12); 5ЕО ІЮ МО: 287 (СОВ-1 3); 5ЕО ІЮ МО: 289 (СОВ-1 1); 5ЕО І

МО: 290 (СОВ-І2); 5ЕО ІО МО: 291 (СОВ-І3); 5ЕО ІЮ МО: 293 (СОВ-11); 5ЕО І МО: 294 (СОВ-1 2);

ЗЕО Ю МО: 295 (СОВ-13); 5ЕО ІО МО: 297 (СОВ-1 1); 5ЕО ІО МО: 298 (СОВ-12); ЕС ІЮ МО: 299 (СОВ-

Г 3); БЕО ІЮ МО: 301 (СОВ-11); 5ЕО І МО: 302 (СОВ-12); 5ЕО І МО: 303 (СОВ-І 3); 5ЕО І МО: 305 (СОВ-11); 5ЕО ІЮ МО: 306 (СОВ-1 2); 5ЕО І МО: 307 (СОВ-1 3); БЕО 10 МО: 309 (СОВ-1 1); 5ЕО ІЮ МО: 310 (СОВ-І2); БЕО ІО МО: 311 (СОВ-І 3); 5ЕО ІО МО: 313 (СОВ-1 1); 5ЕО ІЮ МО: 314 (СОВ-12); 5ЕО І

МО: 315 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 334 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 334 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 334 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 335 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 335 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 335 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 336 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 336 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 336 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 337 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 337 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 337 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 338 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 338 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 338 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 339 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 339 (СОВ-12); залишків 88-

А

96 5ЕО ІЮ МО: 339 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 340 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО І МО: 340 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 340 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 341 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 341 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 341 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 342 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 342 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 342 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 343 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 343 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 343 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 344 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 344 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 344 (СОВ-НЗ); залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО: 345 (СОВ-І 1); залишків 50-56 5ЕО І МО: 345 (СОВ-12); залишків 89- 97 5БЕО ІЮ МО: 345 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 346 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 346 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 346 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 347 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 347 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 347 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 348 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 348 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО ІЮ МО: 348 (СОВ-НЗ); залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО: 349 (СОВ-1 1); залишків 50-56 5ЕО І МО: 349 (СОВ-12); залишків 89- 97 5БЕО ІЮ МО: 349 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 350 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО І МО: 350 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 350 (СОВ-НЗ); залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО: 351 (СОВ-1 1); залишків 50-56 5ЕО І МО: 351 (СОВ-12); залишків 89- 97 5БЕО І МО: 351 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 352 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 352 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 352 (СОВ-НЗ); залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО: 353 (СОВ-І 1); залишків 50-56 5ЕО І МО: 353 (СОВ-12); залишків 89- 97 5БЕО ІЮ МО: 353 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 354 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО: 354 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 354 (СОВ-НЗ); залишків 24-34 5ЕО Ір МО: 355 (СОВ-І 1); залишків 50-56 5ЕО І МО: 355 (СОВ-12); залишків 89- 97 5БЕО ІЮ МО: 355 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 356 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО І МО: 356 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 356 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 357 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 357 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 357 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 358 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО І МО: 358 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 358 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 359 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 359 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 359 (СОВ-Ї 3); залишків 31-37 5ЕО 1О МО: 360 (СОВ-НІ); залишків 52-67 5ЕО І МО: 360 (СОВ-Н2); залишків 100- 110 5ЕО І МО: 360 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 361 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 361 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 361 (СОВ-Ї 3).

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше З СОК, описані вище.

Переважно, 01 | 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить одну або декілька описаних вище

СОК. Більш переважно, вказаний зв'язувальний білок містить три або більше СОК, описаних вище.

Найбільш переважно, 0 І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить шість СОК, описаних вище, тобто СОВ-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ, СОВ-І 1, СОВ-1І2 ії СОВ-І З, описані вище.

У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше З СОК, вибрані з групи, що складається з описаних вище послідовностей.

Більш переважно, зв'язувальний білок містить З СОМ, вибрані з набору СОК варіабельного домену, вибраного з нижченаведеної групи: набір МН ЕО СОК

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕОІЮО МО: 1,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮО МО: 1,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 1; набір М. Е9 СО

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІО МО: 111,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 111,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО І МО: 111;

набір МН Е9.4 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 117,

СОвВ-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 118,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 119; набір МІ. Е9.4 СОМ

СОВ-11: БО І МО: 229,

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 230,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 231; набір МН Е9.11 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 121,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 122,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 123; набір МІ. Е9.11 СОК

СОВ-11: 5ЕО І МО: 233,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 234,

СОВ-І 3: 5ЕО ІО МО: 235; набір МН Е9.14 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 125,

СОв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 126,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 127; набір МІ. Е9.14 СОК

СОВ-11: БО І МО: 237,

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 238,

СОВ-І 3: 5ЕО ІЮ МО: 239; набір МН Е9.17 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 129,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 130,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 131; набір МІ. Е9.17 СОК

СОВ-11: 5ЕО І МО: 241,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 242,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 243; набір МН Е9.18 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО І МО: 133,

СОВв-Н2г: З5ЕО ІЮ МО: 134,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІО МО: 135; набір МІ. Е9.18 СОК

СОВ-11: 5ЕО І МО: 245,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 246,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 247; набір МН Е9.19 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 137,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 138,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 139; набір МІ. Е9.19 СОВ

СОВ-11: 5ЕО І МО: 249,

СОВ-12: 5ЕБЕО ІЮ МО: 250,

СОВ-І 3: 5ЕО ІЮ МО: 251; набір МН Е9.22 СОМ

СОВ-НІ1: 5ЕО ІЮ МО: 141,

СОвВ-Н2г: З5ЕО ІЮ МО: 142,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 143; набір МІ Е9.22 СОК

СОВ-11: БО І МО: 253,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 254,

СОВ-І 3: БО ІЮ МО: 255; набір МН Е9.48 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 145,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 146,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 147; набір МІ. Е9.48 СОК

СОВ-11: 5ЕБО І МО: 257,

б

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 258,

СОВ-І 3: БО ІЮ МО: 259; набір МН Е9.65 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 149,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 150,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 151; набір МІ. 9.65 СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 261,

СОВ-12: 5ЕБЕО ІЮ МО: 262,

СОВ-І 3: 5ЕО ІЮ МО: 263; набір МН Е9.66 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 153,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 154,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІО МО: 155; набір МІ. 9.66 СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 265,

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 266,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 267; набір МН Е9.71 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 157,

СОВв-Н2г: З5ЕО ІО МО: 158,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 159; набір МІ. Е9.71 СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 269,

СОВ-12: 5ЕБЕО І МО: 270,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 271; набір МН Е9.13 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 161,

СОвВ-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 162,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІО МО: 163; набір МІ. Е9.13 СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 217,

СОВ-12: 5ЕБЕО І МО: 218,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 219; набір МН Е9.16 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 165,

СОвВ-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 166,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 167; набір МІ. Е9.16 СОВ

СОВ-11: 5ЕО І МО: 221,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 222,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 223; набір МН Е9.38 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 169,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 170,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 171; набір МІ Е9.38 СОК

СОВ-11: 5ЕБО І МО: 225,

СОВ-12: 5ЕБЕО І МО: 226,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 227; набір МН Е9.2В СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 173,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 174,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 175; набір МІ Е9.28 СОК

СОВ-11: 5ЕО І МО: 273,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 274,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 275; набір МН Е9.1Е СОК

СОВ-НІ1: 5ЕО І МО: 177,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 178,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 179;

набір МІ. ЕЛЕ СОК

СОВ-11: 5ЕО І МО: 277,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 278,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 279; набір МН ЕЗЛОН СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 181,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 182,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІО МО: 183; набір М. ЕЗЛОН СОК

СОВ-11: 5ЕБО І МО: 301,

СОВ-12: 5ЕБЕО ІЮ МО: 302,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 303; набір МН Е9.5Е СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІО МО: 185,

СОв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 186,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 187; набір МІ. Е9У.5Е СОК

СОВ-11: БО І МО: 293,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 294,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 295; набір МН Е9.1ОС СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 189,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 190,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 191; набір МІ. ЕЗ.1ОС СОК

СОВ-11: 5ЕБО І МО: 281,

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 282,

СОВ-І 3: 5ЕО ІЮ МО: 283; набір МН Е9.7Е СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 193,

СОВв-Н2г: З5ЕО ІЮ МО: 184,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 195; набір МІ. ЕЗ.7Е СОК

СОВ-11: 5ЕБО І МО: 289,

СОВ-12: 5ЕО ІЮ МО: 290,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 291; набір МН Е9.128 СОК

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 197,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 198,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 199; набір МІ. Е9.128 СОК

СОВ-11: БО І МО: 297,

СОВ-12: 5ЕО І МО: 298,

СОВ-І 3: 5ЕО ІЮ МО: 299; набір МН Е9.1ОЕ СОК

СОВ-НІ1: 5ЕО ІЮ МО: 201,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 202,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 203; набір МІ. ЕЗУ.1ОЕ СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 285,

СОВ-12: 5ЕБЕО ІЮ МО: 286,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 287; набір МН Е9.6бА СОК

СОВ-НІ1: 5ЕО ІЮ МО: 205,

СОВв-Н2г: 5ЕО ІЮ МО: 206,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 207; набір МІ. ЕЗУ.бА СОК

СОВ-11: 5ЕБО ІЮ МО: 305,

СОВ-12: 5ЕБЕО ІЮ МО: 306,

СОВ-І 3: 5ЕО І МО: 307; набір МН Е9.7А СОК

СОВ-НІ1: 5ЕО ІЮ МО: 209,

З

СОВ-Н2: 5ЕО ІЮ МО: 210,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 211; набір МІ Е9.7А СОВ

СОВ-11: 5ЕО І МО: 309,

СОВ-12: БЕО І МО: 310,

СОВ-І З: 5ЕО І МО: 311; набір МН Е9.8Н СОВ

СОВ-НІ: 5ЕО ІЮ МО: 213,

СОВ-Н2: 5ЕО ІЮ МО: 214,

СОВ-НЗ: 5ЕО ІЮ МО: 215; набір МІ. Е9.8Н СО

СОВ-11: 5ЕО І МО: 313,

СОВ-12: БЕО І МО: 314,

СОВ-І З: 5ЕО ІО МО: 315; набір МН Е9.1 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮО МО: 334,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 334,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 334; набір МІ Е9.1 СОК

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІО МО: 335,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 335,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 335; набір МН Е9-5Е1 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 336,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 336,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО: 336; набір МІ Е9-5БЕ1 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 337,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 337,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО І МО: 337; набір МН Е9-5Е2 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО: 338,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 338,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮО МО: 338; набір МІ Е9-5Е2 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 339,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 339,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО: 339; набір МН Е9-БЕЗ СОВ

СОВ-НІ1: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 340,

СОВ-Н2: залишки 52-67 ЗЕО ІО МО: 340,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮО МО: 340; набір МІ. Е9-5ЕЗ СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІО МО: 341,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО ІЮО МО: 341,

СОВ-І 3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 341; набір МН Е9-5Е4 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО: 342,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 342,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО: 342; набір МІ Е9-5Е4 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 343,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 343,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 343; набір МН Е9-БЕ5 СОВ

СОВ-НІ1: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 344,

СОВ-Н2: залишки 52-67 ЗЕО ІО МО: 344,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 344; набір МІ. Е9-БЕ5 СОВ

СОВ-11: залишки 24-34 5ЕО ІЮО МО: 345,

СОВ-12: залишки 50-56 5ЕО ІО МО: 345,

СОВ-І 3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО: 345;

набір МН Е9-5ЕЄ6 СОВ

СОВ-НІ1: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 346,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІО МО: 346,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО: 346; набір МІ. Е9-5Е6 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІО МО: 347,

СОВ-І2: залишки 49-55 5ЕО ІО МО: 347,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 347; набір МН Е9-5Е7 СОВ

СОВ-НІ1: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 348,

СОВ-Н2: залишки 52-67 ЗЕО ІО МО: 348,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 348; набір МІ. Е9-5Е7 СОВ

СОВ-11: залишки 24-34 5ЕО ІЮО МО: 349,

СОВ-12: залишки 50-56 5ЕО І МО: 349,

СОВ-І 3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО: 349; набір МН Е9-5ЕВ СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮО МО: 350,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 350,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮО МО: 350; набір МІ. Е9-5ЕВ СОВ

СОВ-11: залишки 24-34 5ЕО ІО МО: 351,

СОВ-12: залишки 50-56 5ЕО ІО МО: 351,

СОВ-(3: залишки 89-97 5ЕО ІО МО: 351; набір МН Е9-ЕНІ СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО: 352,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 352,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮО МО: 352; набір МІ Е9-ЕНІ СОН

СОВ-11: залишки 24-34 5ЕО ІО МО: 353,

СОВ-12: залишки 50-56 5ЕО ІО МО: 353,

СОВ-(3: залишки 89-97 5ЕО ІО МО: 353; набір МН Е9-ЕН2 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 354,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 354,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 354; набір МІ. ЕЗ-ЕН2 СОВ

СОВ-11: залишки 24-34 5ЕО ІО МО: 355,

СОВ-12: залишки 50-56 5ЕО ІО МО: 355,

СОВ-(3: залишки 89-97 5ЕО ІО МО: 355; набір МН Е9.71 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 356,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 356,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮО МО: 356; набір МІ Е9.71 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІО МО: 357,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 357,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 357; набір МН Е9.71(М) СОВК

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІО МО: 358,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 358,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІО МО: 358; набір МІ Е9.71(М) СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 359,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 359,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 359; набір МН Е9.71(03 СОК

СОВ-НІ: залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО: 360,

СОВ-Н2: залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО: 360,

СОВ-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО: 360; набір МІ. Е9.71() СОК

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 361,

СОВ-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО: 361,

СОВ-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО: 361.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з З СОК варіабельних важких ланцюгів (МН), вибраних з будь-якого набору з 3 СОК МН у вищезгаданій групі, і набір з 3 СОК варіабельних легких ланцюгів (МІ), вибраних з будь-якого набору з З СОК У. у вищезгаданій групі.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з З СОК ланцюгів, позначених УН, і набір з З СОК ланцюгів, відповідно позначених МІ, у вищезгаданій групі. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом містить щонайменше два набори СОЕК варіабельних доменів, вибрані з групи наборів СОК варіабельних доменів, що складається з: набору МН Е9 СОК і набору МІ Е9 СОК, набору МН Е9.4 СОК і набору МІ Е9.4 СОК, набору МН Е9.11 СОК і набору МІ Е9.11 СОК, набору МН Е9.14 СОК і набору МІ Е9.14 СОК, набору МН Е9.17 СОК і набору МІ Е9.17 СОК, набору МН Е9.18 СОК і набору МІ Е9.18 СОК, набору МН Е9.19 СОК і набору МІ Е9.19 СОК, набору МН Е9.22 СОК і набору МІ Е9.22 СОК, набору МН Е9.48 СОК і набору МІ Е9.48 СОК, набору МН Е9.65 СОК і набору МІ Е9.65 СОК, набору МН Е9.66 СОК і набору МІ Е9.66 СОН, набору МН Е9.71 СОК і набору МІ Е9.71 СОК, набору МН Е9.13 СОК і набору МІ Е9.13 СОК, набору МН Е9.16 СОК і набору МІ Е9.16 СОК, набору МН Е9.38 СОК і набору МІ Е9.38 СОК, набору МН Е9.2В СОК і набору МІ Е9.28 СОБК, набору МН ЕЗ9Л1Е СОК і набору МІ ЕЗ9ЛЕ СОВ, набору МН Е9ЛОН СОК і набору МІ Е9.1ОН СОБК, набору МН Е9.5Е СОК і набору МІ Е9.5Е СОБК, набору МН Е9.10С СОК і набору МІ Е9.1ОС СОБК, набору МН Е9.7Е СОК і набору МІ Е9.7Е СОБК, набору МН Е9.12В8 СОК і набору МІ Е9.128 СОК, набору МН Е9.1ОЕ СО і набору МІ Е91ОЕ СОК, набору МН Е9.6А СОК і набору МІ Е9.бА СОК, набору МН Е9.7А СОК і набору МІ Е9.7А СОБК, набору МН Е9.8Н СОК і набору МІ Е9.8Н СОК, набору МН Е9-5Е1 СОК і набору МІ Е9-5Е1 СОВ, набору МН Е9-5Е2 СОК і набору МІ Е9-5Е2 СОВ, набору МН Е9-5ЕЗ СОК і набору МІ Е9-5ЕЗ СОВ, набору МН Е9-5Е4 СОК і набору МІ Е9-5Е4 СОВ, набору МН Е9-5Е5 СОК і набору МІ Е9-5Е5 СОВ, набору МН Е9-5Е6 СОК і набору МІ Е9-5Е6 СОВ, набору МН Е9-5Е7 СОК і набору МІ Е9-5Е7 СОВ, набору МН Е9-5Е8 СОК і набору МІ Е9-5Е8 СОВ, набору МН Е9-ЕКІ1 СОК і набору МІ Е9З-ЕВІ СОН, набору МН Е9-ЕГК2 СОК і набору МІ ЕЗ-ЕВН2 СОВ, набору МН Е9.71 СОК і набору МІ Е9.71 СОК, набору МН Е9.71(М) СОК і набору МІ. Е9.71(М) СОК, і набору МН Е9.71(13 СОК і набору МІ Е9.71(3 СОК.

У іншому варіанті винаходу описаний вище зв'язувальний білок також містить людську акцепторну каркасну область. Переважно, людська акцепторна каркасна область містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: послідовностей акцепторної каркасної області важкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: 6-22, акцепторних послідовностей важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 35-62, акцепторних послідовностей легкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: 23-34, і акцепторних послідовностей легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 63-98.

У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, яка включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області, де вказана амінокислотна послідовність каркасної області щонайменше на 6595 ідентична послідовності вказаної людської акцепторної каркасної області і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних залишкам вказаної людської акцепторної каркасної області.

У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, що включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області в положенні ключового залишку, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: залишку, суміжного з СОК; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським ОІ І 4; канонічного залишку; залишку зони контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; і залишку в області, яка перекривається з областю СОКІ варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату.

Переважно, ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: 2Н, 4Н, 24Н, 26Н, 27Н, 29Н, 34Н,

З5Н, 37Н, ЗОН, 44Н, 45Н, 47Н, 48Н, 49Н, 5ОН, 51 НН, 58Н, 59Н, 6ОН, 6ЗН, 67Н, 69Н, 71Н, 7зН, 76Н, 78Н, 91Н, 93Н, 94Н, 21, 41, 251, 291, 2761, 331, 341, З6І, 381, 431, 441, 46Ї, 471, А8І, 491, 551, 581, 621, 641, 711, 871, 891, 901, 911, 941, 951.

У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить консенсусний людський варіабельний домен.

У переважному варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: ЗЕ

ІО МО: 1, 111, 116, 228, 120, 232, 124, 236, 128, 240, 132, 244, 136, 248, 140, 252, 144, 256, 148, 260, 152, 264, 156, 268, 160, 216, 164, 220, 168, 224, 172, 272, 176, 276, 180, 300, 184, 292, 188, 280, 192, 288, 196, 296, 200, 284, 204, 304, 208, 308, 212, 312, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360 і 361.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить два варіабельних домени, де вказані два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з: ЗЕО ІЮ МО: 1 і 111, ЗЕО ІО МО: 116 ї 228, 5ЕО ІЮ МО: 120 і 232, ЗЕО ІЮ МО: 124 і 236,

ЗЕО ІЮ МО: 128 ї 240, 5ЕО ІЮ МО: 132 ії 244, 5ЕО ІЮ МО: 136 і 248, 5ЕО ІЮ МО: 140 і 252, 5ЕО ІЮ МО: 144 і 256, 5ЕО ІЮ МО: 148 і 260, 5ЕО ІЮО МО: 152 і 264, 5ЕО ІЮО МО: 156 і 268, ЗЕО ІЮ МО: 160 і 216,

ЗЕО ІЮО МО: 164 і 220, 5ЕО ІЮ МО: 168 і 224, ББО ІЮО МО: 172 і 272, 5ЕБЕО ІЮ МО: 176 і 276, 5ЕБО І МО: 180 ї 300, 5ЕО ІЮ МО: 184 і 292, 5ЕО ІЮО МО: 188 ї 280, 5ЕО ІЮ МО: 192 і 288, 5ЕО ІЮО МО: 196 і 296,

ЗЕО ІЮО МО: 200 і 284, 5ЕО ІЮ МО: 204 і 304, 5ЕБЕО ІО МО: 208 і 308, 5ЕО ІЮ МО: 212 і 312, 5ЕБЕО І МО: 334 і 335, 5ЗЕО ІЮ МО: 336 і 337, 5ЕО ІЮ МО: 338 і 339, ЗЕО ІЮО МО: 340 ї 341, 5ЗЕО ІЮ МО: 342 і 343,

ЗЕО ІЮ МО: 344 і 345, 5ЕО ІЮ МО: 346 і 347, 5ЕО ІЮ МО: 348 і 349, 5ЕО ІЮ МО: 350 і 351, 5ЕО ІЮ МО: 352 і 353, ЗЕО ІЮ МО: 354 і 355, 5ЕО ІЮО МО: 356 і 357, 5ЕО ІО МО: 358 і 359, ЗЕО ІЮ МО: 360 і 361.

У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), де, переважно, МН включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з:

ЗЕО ІЮ МО: 1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 і 360.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга (М), де, переважно, Мі. включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з:

ЗЕО І МО: 111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 276, 300, 292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 і 361.

У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить УН і Мі, де, переважно, УН і МІ. являють собою будь-яку з описаних вище послідовностей.

У іншому варіанті даний винахід стосується зв'язувального білка, що має здатність зв'язуватися з людським ПО І --4, де вказаний зв'язувальний білок містить: константну область важкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 2 ії 5ЕО ІЮО МО: 3; константну область легкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 4 ії 5ЕО ІЮО МО: 5; варіабельну область важкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з:

ЗЕО ІЮ МО: 1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 і 360; і варіабельну область легкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з:

ЗЕО І МО: 111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 276, 300,

292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 і

У іншому аспекті даний винахід стосується зв'язувального білка, який містить антигензв'язувальний домен, що має здатність зв'язуватися з людським 0114, де вказаний антигензв'язувальний домен містить щонайменше одну або декілька СОМ, вибраних з групи, що складається з:

СОВ-НІ: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5 (ЗЕО ІЮ МО: 105), де

Хі являє собою 5, М або 0;

Хг являє собою Н або У;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою М;

Х5 являє собою 5 або Н;

СОВ-На: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17 (ЗЕБЕО ІЮ МО: 106), де:

Хі являє собою І, О, М або Т;

Хг являє собою І;

Хз являє собою 5;

Ха являє собою У, М, 5, 0, М, Т, Н або 0;

Хо являє собою Ю;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою 5, В, І, Т, б, К, Н або М;

Хв являє собою М, У, 5, І або Т;

Хе являє собою К, М, М, О, Е, Т, Е, 5, А або! ;

Хо являє собою У, О або Е;

Хії являє собою 5 або У;

Хіг являє собою А;

Хіз являє собою Ю;

Ха являє собою 5;

Хі5 являє собою У;

Хівє являє собою К; і

Хі? являє собою 0;

СОВ-НЗ: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хо-Х1іо (ЗЕО ІЮ МО: 107), де:

Хі являє собою А;

Хг являє собою б, А або В;

Хз являє собою 0;

Ха являє собою 0, 5 або А;

Х5 являє собою М;

Хе являє собою М або М;

Х7 являє собою 0;

Хв являє собою Е, І, М або М;

Хе являє собою Ю; і

Хо являє собою І, 5 або |;

СОВ-11: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х1о-Хії (ЗБОЮ МО: 108), де:

Хі являє собою 5;

Хг являє собою А або о;

Хз являє собою Ю;

Ха являє собою К, М, І, 0, М, Е, 5, Т, с або 0;

Х5 являє собою і ;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою Т, 5, М, А, С або Е;

Хв являє собою К, о, М або г;

Хе являє собою У;

Хо являє собою М або І; і

Хії являє собою 5;

СОВ-12: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7 (ЗЕО ІЮ МО: 109), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою Ю;

Хз являє собою А, с, МУ, 5 або 0;

Ха являє собою К, М, О, М, ГІ, Т, І або Е;

Х5 являє собою Е;

Хе являє собою Р; і

Х7 являє собою 5; і

СОВ-І З: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5-Хв-Х7-Хв-Хо (5ЕО ІЮ МО: 110), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою 5 або А;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою Ю;

Х5 являє собою Р, 5, 0, Р, А, М, УМ або М;

Хе являє собою 5, 0, І, М, В або Т;

Х7 являє собою О або о;

Хв являє собою М, А, Р або Е;і

Хе являє собою У.

Переважно, антигензв'язувальний домен 0 |4-зв'язувального білка згідно з винаходом містить щонайменше одну СОЕ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 112 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 112 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 112 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 113 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 113 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 113 (СОВ-Ї 3); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 316 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 316 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 316 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 317 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 317 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 317 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 318 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 318 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 318 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 319 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 319 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 319 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 320 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 320 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО Ір МО: 320 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 321 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 321 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 321 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 322 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 322 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 322 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 323 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 323 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО Ір МО: 323 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 324 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 324 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО І МО: 324 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 325 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 325 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО Ір МО: 325 (СОВ-НЗ); залишків 31-35 5ЕО ІЮ МО: 326 (СОВ-НІ); залишків 50-66 5ЕО ІЮ МО: 326 (СОВ-Н2); залишків 99- 108 5ЕО Ір МО: 326 (СОВ-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 327 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 327 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 327 (СОВ-1 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 328 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 328 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 328 (СОВ-Ї 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 329 (СОВ-1 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 329 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 329 (СОВ-1 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 330 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 330 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 330 (СОВ-Ї 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 331 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 331 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО ІЮ МО: 331 (СОВ-Ї 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 332 (СОВ-І 1); залишків 49-55 5ЕО І МО: 332 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 332 (СОВ-1 3); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО: 333 (СОВ-11); залишків 49-55 5ЕО ІЮ МО: 333 (СОВ-12); залишків 88- 96 5ЕО І МО: 333 (СОВ-1 3).

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше З СОК, описані вище.

Переважно, 01 | 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить одну або декілька описаних вище

СОК. Більш переважно, вказаний зв'язувальний білок містить три або більше СОК, описаних вище.

Найбільш переважно, 0 І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить шість СОК, описаних вище, тобто СОБ-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ, СОВ-11, СОВ-1І2 ї СОК-І 3, описані вище.

У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше 3 СОК, вибрані з групи, що складається з описаних вище послідовностей.

У іншому переважному варіанті винаходу, зв'язувальний білок містить З СОР, вибрані з набору

СОК варіабельного домену, вибраного з нижченаведеної групи: набір МН АТО СО

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІО МО: 112,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО 10 МО: 112,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 112; набір МІ. АТО СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 113,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 113,

СОВ- 3: залишки 88-96 5ЕО ІЮО МО: 113; набір МН А10.3 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІО МО: 316,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІО МО: 316,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІО МО: 316; набір МІ А10.3 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5БЕО ІЮ МО: 327,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО: 327,

СОВ-1 3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 327; набір МН А10.КЗО СОН

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО 10 МО: 317,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО 10 МО: 317,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 317; набір МН А10.К42 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮО МО: 318,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІО МО: 318,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІО МО: 318; набір МН А10.9А СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮО МО: 319,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІО МО: 319,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО І МО: 319; набір МН А10.8А СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 320,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 320,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 320; набір МН АТО.1А СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮО МО: 321,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО 10 МО: 321,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІО МО: 321; набір МН А10.50 СОВ

СОВ-НІ1: залишки 31-35 5ЕО ІО МО: 322,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 322,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІО МО: 322; набір МН А10.ЗА СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 323,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 323,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 323; набір МІ А10.ЗА СОК

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 330,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 330,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО І МО: 330; набір МН А10.68 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 324,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО 10 МО: 324,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 324; набір МІ. А10.68 СОК

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 331,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 331,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 331; набір МН А10.30 СОВ

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 325,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 325,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІО МО: 325; набору МІ А10.30 СОВ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО І МО: 332,

СОВ-12: залишки 49-55 5ЕО І МО: 332,

СОВ-(3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 332;

набір МН А10.4С СО

СОВ-НІ: залишки 31-35 5ЕО І МО: 326,

СОВ-Н2: залишки 50-66 5ЕО І МО: 326,

СОВ-НЗ: залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 326; набір МІ. А10.4С СОК

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО: 333,

СОВ-І2: залишки 49-55 5ЕО ІО МО: 333,

СОВ-І3: залишки 88-96 5ЕО ІО МО: 333; набір МІ. А10.145 СОР

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО: 328,

СОВ-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО: 328,

СОВ-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО: 328; набір МІ А10.1 73 СОМ

СОВ-11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО: 329,

СОВ-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО: 329,

СОВ-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО: 329.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з 3 СОК варіабельних важких ланцюгів (МН), вибраних з будь-якого набору з 3 СОК МН у вищезгаданій групі, і набір з 3 СОК варіабельних легких ланцюгів (МІ), вибраних з будь-якого набору з З СОК У. у вищезгаданій групі.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з З СОК ланцюгів, позначених УН, і набір з 3 СОК ланцюгів, відповідно позначених МІ. у вищезгаданій групі. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом містить щонайменше два набори СОЕК варіабельних доменів, вибрані з групи наборів СОК варіабельних доменів, що складається 3: набору МН АТО СО і набору МІ АТО СОБ; набору МН АТ0.3 СОК і набору МІ А10.3 СОК: набору МН АТО.ЗА СОК і набору МІ АТО.ЗА СОК; набору МН А10.68 СОК і набору МІ АТ10.68 СОК; набору МН АТ0.30 СОК і набору МІ А10.30 СОБ; набору МН АТ10.4С СОК і набору МІ А10.4С СОН; набору МН АТО.КЗО СОК і набору МІ А10.3 СОБК; набору МН АТО.К42 СОК і набору МІ А10.3 СОБК; набору МН АТ0.3 СОК і набору МІ. А10.145 СОК; набору МН АТ0.3 СОК і набору МІ. А10.1 73 СОК; набору МН АТ0.9А СОК і набору МІ А10.3 СОБ; набору МН АТ0.8А СО і набору МІ А10.3 СОБ; набору МН АТОЛ1А СОК і набору МІ А10.3 СОК; і набору МН АТ10.50 СОК і набору МІ А10.3 СОК.

У іншому варіанті винаходу описаний вище зв'язувальний білок також містить людську акцепторну каркасну область. Переважно, людська акцепторна каркасна область містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: послідовностей акцепторної каркасної області важкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: 6-22, акцепторних послідовностей важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 35-62, акцепторних послідовностей легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 23-34 і акцепторних послідовностей легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 63-98.

У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, яка включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області, де вказана амінокислотна послідовність каркасної області щонайменше на 6595 ідентична послідовності вказаної людської акцепторної каркасної області і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних залишкам вказаної людської акцепторної каркасної області.

У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, що включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області в положенні ключового залишку, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається 3: залишку, суміжного з СОК; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським ОІ І 4; канонічного залишку; залишку зони контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; і залишку в області, яка перекривається з областю СОКІ варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату.

Переважно, ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: 2Н, 4Н, 24Н, 26Н, 27Н, 29Н, з34Н,

З5Н, 37Н, ЗОН, 44Н, 45Н, 47Н, 48Н, 49Н, 5ОН, 51Н, 58Н, 59Н, 6бОН, 6ЗН, 67Н, 69Н, 71Н, 7ЗН, 76Н, 78Н, 91Н, 93Н, 94Н, 21, 41, 251, 291, 2761, 331, 341, З6І, 381, 431, 441, 46Ї, 471, 481, 491, 551, 581, 621, 641, 711, 871, 891, 901, 911, 941, 951.

У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить консенсусний людський варіабельний домен.

У переважному варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: ЗЕ

ІО МО: 112, 113, 316, 327, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 330, 324, 331, 325, 332, 326, 333, 328 і 329.

У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить два варіабельних домени, де вказані два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 112 і 113, ЗЕО ІЮ МО: 316 і 327, 5ЕО ІЮО МО: 323 і 330, ЗЕО ІЮО МО: 324 і 331,

ЗЕО ІО МО: 325 і 332 і ЗЕО ІЮ МО: 326 і 333.

У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), де, переважно, МН включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 112, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325 і 326.

У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга (М), де, переважно, Мі. включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5БЕО ІЮО МО: 113, 327, 328, 329, 330, 331, 332 і 333.

У іншому варіанті даний винахід стосується зв'язувального білка, що має здатність зв'язуватися з людським ПО І --4, де вказаний зв'язувальний білок містить: константну область важкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 2 ії 5ЕО ІЮО МО: 3; константну область легкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 4 ії 5ЕО ІЮО МО: 5; варіабельну область важкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 112, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325 і 326; і варіабельну область легкого ланцюга Ід, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 113, 327, 328, 329, 330, 331, 332 і 333.

Відповідно до даного винаходу варіабельні домени важкого ланцюга (МН) і варіабельні домени легкого ланцюга (МІ) 0 І 4-зв'язувальних білків, описаних в даній заявці, можуть бути також піддані процедурі перестановки ланцюгів рекомбінантними методами, відомими фахівцям, з метою одержання і відбору додаткових БІ | 4-зв'язувальних білків, що містять різні комбінації описаних тут доменів МН і МІ...

У переважному варіанті винаходу 0 І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом зв'язується з людським 014 (пиб/ І 4) ії щонайменше з одним 0114 іншого виду. Більш переважно, описаний тут

РІГ 4-зв'язувальний білок зв'язується з людським 0114 Її 0114, вибраним з групи, що складається з мишачого 0114 (ти 14), 0/4 яванського макака (01/14 яванського макака, супобІ І 4), щурячого ра ії їх комбінацій.

У іншому варіанті винаходу 0 І 4-зв'язувальним білком є повністю людське антитіло або його антигензв'язувальна частина.

У іншому варіанті винаходу 0 І4-зв'язувальним білюм є СОК-прищеплене антитіло. Більш переважно, І І/4-зв'язувальний білок являє собою СОК-прищеплене антитіло або його антигензв'язувальну частину, що містить одну або декілька описаних вище СОК.

Ще більш переважно, СОК-прищеплене антитіло або його антигензв'язувальна частина містять описаний вище варіабельний домен. Більш переважно, СОК-прищеплене антитіло або його антигензв'язувальна частина містять два вищеописаних варіабельних домени. Переважно, СОБК- прищеплене антитіло або його антигензв'язувальна частина містять людську акцепторну каркасну область. Більш переважно, вказаною людською акцепторною каркасною областю є будь-яка з вищеописаних людських акцепторних каркасних областей.

Більш переважно, зв'язувальний білок має здатність нейтралізувати активність 0/4, вибраного з групи, що складається з людського 0 4, мишачого 04, БІ І 4 яванського макака, щурячого ОГ | 4 і їх комбінацій. Оцінка нейтралізації активності 0 4 може бути проведена за допомогою декількох іп міго і іп мімо аналізів, відомими фахівцям. Репрезентативними параметрами для оцінки нейтралізації активності 0І 1/4 є, але не обмежуються ними, антитіла, які інгібують взаємодію 0114 з рецептором

Моїсп і/або шлях передачі Моїсп-сигналу при величинах ІСво, що складають приблизно щонайменше 105 М; щонайменше 107 М або щонайменше 103 М.

У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу швидкості асоціації (Коп) відносно 0/4, що складає щонайменше приблизно 102 М"с7; щонайменше приблизно 103 М"с"; щонайменше приблизно 107 М"с7; щонайменше приблизно 105 М'с!" або щонайменше приблизно 106 М"с", як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу швидкості асоціації (Коп) відносно 014, що складає в межах 102 М"с7 - 103 М"с7; 103 М"с7 - 104 М"7с7; 102 Мис - 105 М"с" або 105 М"с" - 106 М- 1с7, як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу.

У іншому варіанті винаходу, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу швидкості дисоціації (Кок) відносно 04, що складає приблизно максимум 103 с"; приблизно максимум 107 с"; приблизно максимум 105 с" або приблизно максимум 105 с", як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу швидкості дисоціації (Кок) відносно 01 14, що складає в межах 103 с - 104 с; 1034 с - 105 ст або 105 сл - 106 с- 1, як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу.

У іншому варіанті винаходу, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу дисоціації (Ко) відносно 0/4, що складає приблизно максимум 10-7 М; приблизно максимум 108 М; приблизно максимум 107 М; приблизно максимум 1079 М; приблизно максимум 10-" М; приблизно максимум 1072

М і максимум 10-73 М. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу дисоціації (Ко) відносно 0 4, що становить 10-77 М - 109 М; 109 М - 109 М; 109 М - 1079 М;1079 М - 1071 М; 107 М - 1072 М або 1072 М - 1073 М.

У одному з варіантів даний винахід стосується конструкції антитіла, що включає будь-який з вищеописаних І 4-зв'язувальних білків і поліпептидний лінкер або константний домен імуноглобуліну. У переважному варіанті винаходу конструкцію антитіла згідно з винаходом вибирають з групи, що складається з молекули імуноглобуліну, моноклонального антитіла, химерного антитіла,

СОВ-прищепленого антитіла, гуманізованого антитіла, Бар, Раб, (ар), Ем, Ем, зв'язаного дисульфідним зв'язком, 5сЕм, однодоменного антитіла, діантитіла, мультиспецифічного антитіла, антитіла з подвійною специфічністю і біспецифічного антитіла.

У переважному варіанті винаходу конструкція антитіла згідно з винаходом містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що складається з константного домену людського ДМ, константного домену людського Ідс1, константного домену людського І/дс2, константного домену людського ДОЗ, константного домену людського Ід04, константного домену людського ІДЕ і константного домену людського ІдА, їі мутантів Ід вищезгаданих підтипів, які можуть модифікувати зв'язування з рецептором Ес-гамма, зв'язування з ЕсКп і зв'язування з С1д і можуть змінювати фармакокінетичні властивості і/або ефекторні функції Ес.

У іншому варіанті винаходу конструкція антитіла є глікозилованою. Переважно, вказаний профіль глікозилування є характерним для людини.

У іншому варіанті винаходу описаний тут 01 І 4-зв'язувальний білок кон'югований з агентом.

Кон'югатами зв'язувального білка згідно з винаходом є кон'югати антитіл, в яких описана тут конструкція антитіла кон'юЮгована з агентом. Вказаний агент переважно вибирають з групи, що складається з молекули імуноадгезину, візуалізуючого агента, терапевтичного засобу і цитотоксичного агента. У переважному варіанті винаходу візуалізуючий агент вибраний з групи, що складається з радіоактивної мітки, ферменту, флуоресцентної мітки, люмінесцентної мітки, біолюмінесцентної мітки, магнітної мітки і біотину. Більш переважно, вказаним візуалізуючим агентом є радіоактивна мітка, вибрана з групи, що складається з: ЗН, 70, 555, 90, 99Тс, 111, 125І, 1911, 177 у, 766Но і 7535т. У переважному варіанті винаходу терапевтичний або цитотоксичний засіб вибраний з групи, що складається з антиметаболіту, алкілувального агента, антибіотика, фактора росту, цитокіну, антиангіогенного агента, антимітотичного засобу, антрацикліну, токсину і апоптотичного агента.

У іншому варіанті винаходу описані вище 0 4-зв'язувальний білок, конструкція антитіла або кон'югат зв'язувального білка (включаючи кон'югати антитіла) присутні у вигляді кристалів.

Переважним кристалом є фармацевтичний кристал, що не містить носія, з контрольованим вивільненням. У переважному варіанті винаходу вказані кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон'югат антитіла мають більш тривалий час напівжиття іп мімо, ніж їх розчинний аналог. У іншому переважному варіанті винаходу вказані кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон'югат зв'язувального білка (включаючи кон'югат антитіла) зберігають біологічну активність після кристалізації.

У одному зі своїх аспектів, даний винахід стосується ізольованої нуклеїнової кислоти, що кодує

РІГ 4-зв'язувальний білок, конструкцію антитіла, кон'югат І | 4-зв'язувального антитіла або його 01 | 4- зв'язувальну частину. Особливо переважною є ізольована нуклеїнова кислота, яка кодує поліпептид, вибраний з групи, що складається з: поліпептиду, що містить варіабельний домен важкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен важкого ланцюга включає СОК-НІ, СОВ-Н2 або СОБ-НЗ, описані вище; поліпептиду, що містить варіабельний домен легкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен легкого ланцюга включає СОМК-І1, СОВ-І2 або СОМК-ІЇ3, описані вище, або комбінації обох поліпептидів.

У іншому варіанті даний винахід стосується вектора, що містить описану вище ізольовану нуклеїнову кислоту. У переважному варіанті винаходу вказаний вектор вибраний з групи, що складається з: рсОМА, ртТ (ЮОигоспег еї аї., Мисі. Асійз Кев., 30(2е9): 1-9 (2002)), рттЗ (рт з додатковими сайтами множинного клонування), РЕЕВО5 (Мі2изпіта еї аї., Мисі. Асій5. Кев., 18 (17):

5322 (1990)), РНУБЕ, рВМ, рум ї рвВу, і будь-яких інших експресійних векторів, придатних для їх використання в прокаріотичних або еукаріотичних клітинах.

У іншому аспекті даний винахід стосується клітини-хазяїна, трансформованої вищеописаним вектором. Вказаною клітиною-хазяїном може бути прокаріотична або еукаріотична клітина.

Переважною прокаріотичною клітиною-хазяїном є ЕзсПегіспіа соїї. Переважно, еукаріотична клітина вибрана з групи, що складається з клітини протист, клітини тварини, клітини рослини і клітини грибів.

Більш переважно, клітиною-хазяїном є клітина ссавця, включаючи, але не обмежуючись ними, клітини

СНО ії СО5. Переважними клітинами грибів є, але не обмежуються ними, клітини Засспаготусев5 сегемізіае. Переважною клітиною комахи є клітина 519.

У іншому аспекті даний винахід стосується способу продукування зв'язувального білка, який зв'язується з людським 01/14, де вказаний спосіб включає стадію культивування будь-якої з вищеописаних клітин-хазяїнів в культуральному середовищі в умовах, придатних для продукування зв'язувального білка, який зв'язується з людським 014. У іншому варіанті даний винахід стосується зв'язувального білка, одержаного способом, описаним вище.

У одному з варіантів даний винахід стосується композиції для вивільнення бі І 4-зв'язувального білка згідно з винаходом, де вказана композиція містить склад, який, в свою чергу, містить кристалізований БІ І 4-зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізований кон'югат зв'язувального білка (включаючи кон'югати антитіла), описані вище; і інгредієнт, а також щонайменше один полімерний носій. Переважним полімерним носієм є полімер, вибраний з однієї або декількох груп, що складаються з поліакрилової кислоти, поліціаноакрилатів, поліамінокислот, поліангідридів, полідепсипептидів, поліефірів, полімолочної кислоти, співполімеру молочної і гліколевої кислоти або РІСА, полі-В-гідроксибутирату, полікапролактону, полідіоксанону, поліетиленгліколю, полігідроксипропілметакриламіду, поліорганофосфазену, поліортоефірів, полівінілового спирту, полівінілпіролідону, співполімерів малеїнового ангідриду-алкілвінілового ефіру, поліолів плюроніків, альбуміну, альгінату, целюлози і похідних целюлози, колагену, фібрину, желатину, гіалуронової кислоти, олігосахаридів, глікаміногліканів, сульфатованих полісахаридів і їх сумішей і співполімерів. Переважно, вказаний інгредієнт вибраний з групи, що складається з альбуміну, сахарози, трегалози, лактиту, желатину, гідроксипропіл-В-циклодекстрину, метоксиполієтигенгліколю і поліетиленгліколю.

У іншому варіанті даний винахід стосується способу лікування ссавця, який включає стадію введення вказаному ссавцю ефективної кількості композиції, що містить кристалізований ОІ ї4- зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізований кон'югат білка (включаючи кон'югати антитіла), описані вище.

Даний винахід також стосується фармацевтичної композиції, що містить ОІ І 4-зв'язувальний білок, конструкцію антитіла або кон'югат білка (включаючи кон'югати антитіла), описані вище, і фармацевтично прийнятний носій. У іншому варіанті винаходу фармацевтична композиція містить щонайменше один додатковий агент. Вказаним додатковим агентом може бути терапевтичний засіб, використовуваний для лікування розладу, асоційованого з негативним впливом 0/4. Переважно, фармацевтична композиція містить додатковий агент, вибраний з групи, що складається з терапевтичного засобу, візуалізуючого агента, протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу (такого як ДНК-алкілувальний агент, цисплатин, карбоплатин, антитубуліновий агент, паклітаксел, доцетаксел, доксорубіцин, гемцитабін, гемзар, антрациклін, адріаміцин, інгібітор топоізомерази |, інгібітор топоізомерази ІЇ, 5-фторурацил (5-РУ), лейковорин, іринотекан) і інгібіторів тирозинкіназних рецепторів (наприклад, ерлотинібу, гефітинібу), інгібітору СОХ-2 (наприклад, целекоксибу), інгібітору кінази і інгібітору ангіогенезу (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-МЕСЕ антитіло або МЕСБЕ- пастка); блокатора костимулюючої молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-87.1 антитіло, анти-В7.2 антитіло, СТІ А4-Ід, анти-СО20 антитіло); блокатора адгезивної молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-Ї ЕА-1 антитіло, антитіло проти Е/ -селектину і інгібітор невеликої молекули); антитіла проти цитокінів або його функціонального фрагмента (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-іІЇ-18 антитіло, анти-ТМЕ антитіло і анти-ІЇ-б6 антитіло/антитіло проти рецептора цитокіну), метотрексату, циклоспорину, рапаміцину, ЕК5БОб, детектованої мітки або репортера, антагоніста ТМЕ, протиревматичного засобу, м'язового релаксанту, наркотичного засобу, нестероїдного протизапального засобу (НСПЗ33), аналгетику, анестетику, седативного засобу, місцевого анестетику, нейром'язового блокатора, протимікробного засобу, засобу проти псоріазу, кортикостероїду, анаболічного стероїду, еритропоетину, імунізуючого засобу, імуноглобуліну, імунодепресанту, гормону росту, лікарського засобу для гормонзамісної терапії, радіофармацевтичного засобу, антидепресанту, антипсихотичного засобу, стимулятора, протиастматичного лікарського засобу, бета-агоніста, стероїду, що вводиться шляхом інгаляції, епінефрину або його аналога, цитокіну і антагоніста цитокіну.

У іншому аспекті даний винахід стосується способу інгібування активності людського 0114, який включає контактування людського 01 І 4 з описаним вище зв'язувальним білком в цілях інгібування або нейтралізації людського БІ /4. У своєму спорідненому аспекті, даний винахід стосується способу інгібування активності 0/4 у людини, страждаючої розладом, асоційованим з негативним впливом рі14, де вказаний спосіб включає введення вказаній людині вищеописаного зв'язувального білка в цілях інгібування людського 0/4 у людини і лікування вказаного пацієнта, страждаючого даним розладом. Вказаний розлад переважно вибраний з групи, що включає первинний і метастатичний рак, включаючи карциноми молочної залози, товстої кишки, прямої кишки, легень, ротоглотки, гортані, стравоходу, шлунка, підшлункової залози, печінки, жовчного міхура і жовчних проток, тонкої кишки, сечових шляхів (включаючи нирки, сечовий міхур і уротелій), жіночих статевих органів (включаючи шийку матки, матку і яєчники, а також хоріокарциноми і трофобластоз у вагітних), чоловічих статевих органів (включаючи передміхурову залізу, сім'яні пухирці, яєчка і ембріональноклітинні пухлини), ендокринних залоз (включаючи щитовидну залозу, кору надниркової залози і гіпофіз) і шкіри, а також гемангіоми, меланоми, саркоми (включаючи саркоми кісток і м'яких тканин, а також саркому Капоші), пухлини головного мозку, нервових тканин, очей і мозкової оболонки (включаючи астроцитоми, гліоми, гліобластоми, ретинобластоми, невроми, нейробластоми, шваноми і менінгіоми), солідні пухлини, що походять від гемопоетичних злоякісних пухлин, такі як лейкоз і лімфоми (ходжкінська і неходжкінська лімфоми), метастази пухлини, очну неоваскуляризацію (включаючи сліпоту при діабеті, ретинопатію, вікову дегенерацію жовтої плями і почервоніння), набряки, ревматоїдний артрит, розсіяний склероз, атеросклеротичні бляшки, хворобу Крона, запальне захворювання кишечнику, асцит, що важко піддається лікуванню, псоріаз, саркоїдоз, артеріосклероз, сепсис, пептичні виразки, опіки, панкреатит, полікістоз яєчника (ПКЯ), ендометріоз, фіброму матки, злоякісну гіпертрофію передміхурової залози і інші асоційовані і неасоційовані з ангіогенезом захворювання, що характеризуються аберантною активністю ОГ І 4.

У іншому аспекті даний винахід стосується способу лікування пацієнта, страждаючого розладом, асоційованим з негативним впливом людського 01/14, де вказаний спосіб включає стадію введення будь-якого з описаних вище зв'язувальних білків до, під час або після введення другого агента, описаного вище. У переважному варіанті винаходу вказаний другий агент вибраний з групи, що складається з: засобу для променевої терапії; протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу (такого як ДНК-алкілувальний агент, цисплатин, карбоплатин, антитубуліновий агент, паклітаксел, доцетаксел, таксол, доксорубіцин, гемцитабін, гемзар, антрациклін, адріаміцин, інгібітор топоїзомерази

І, інгібітор топоіїзомерази ІЇ, 5-фторурацил (5-Е), лейковорин, іринотекан) і інгібіторів тирозинкіназних рецепторів (наприклад, ерлотинібу, гефітинібу), інгібітору СОХ-2 (наприклад, целекоксибу), інгібітору кінази і інгібітору ангіогенезу (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-МЕСЕ антитіло або МЕСБЕ- пастка); блокатора костимулюючої молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-87.1 антитіло, анти-В7.2 антитіло, СТІ А4-Ід, анти-СО20 антитіло), блокатора адгезивної молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-Ї ЕА-1 антитіло, антитіло проти Е/ -селектину і інгібітор невеликої молекули); антитіла проти цитокінів або його функціонального фрагмента (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-іІЇ-18 антитіло, анти-ТМЕ антитіло і анти-ІЇ-б6 антитіло/антитіло проти рецептора цитокіну), метотрексату, циклоспорину, рапаміцину, ЕК5БОб, детектованої мітки або репортера, антагоніста ТМЕ, протиревматичного засобу, м'язового релаксанту, наркотичного засобу, нестероїдного протизапального засобу (НСПЗ33), аналгетику, анестетику, седативного засобу, місцевого анестетику, нейром'язового блокатора, протимікробного засобу, засобу проти псоріазу, кортикостероїду, анаболічного стероїду, еритропоетину, імунізуючого засобу, імуноглобуліну, імунодепресанту, гормону росту, лікарського засобу для гормонозамісної терапії, радіофармацевтичного засобу, антидепресанту, антипсихотичного засобу, стимулятора, протиастматичного лікарського засобу, бета-агоніста, стероїду, що вводиться шляхом інгаляції, епінефрину або його аналога, цитокіну і антагоніста цитокіну.

У переважному варіанті винаходу вищеописані фармацевтичні композиції вводять індивідууму щонайменше одним способом, вибраним з групи, що складається з парентерального введення, підшкірного введення, внутрішньом'язового введення, внутрішньовенного введення, внутрішньосуглобового введення, внутрішньобронхіального введення, внутрішньоочеревинного введення, інтракапсулярного введення, внутрішньохрящового введення, внутрішньопорожнинного введення, внутрішньочеревного введення, внутрішньомозочкового введення, інтрацеребровентрикулярного введення, введення в товсту кишку, інтрацервікального введення, внутрішньошлункового введення, введення в печінку, введення в міокард, внутрішньокісткового введення, внутрішньотазового введення, введення в перикардій, інтраперитонеального введення, інтраплеврального введення, введення в передміхурову залозу, інтрапульмонарного введення, інтраректального введення, внутрішньониркового введення, введення в сітківку ока, інтраспінального введення, введення в синовіальну рідину, введення в грудну клітку, внутрішньоматкового введення, інтравезикулярного введення, введення у вигляді болюсу, вагінального введення, ректального введення, трансбукального введення, під'язикового введення, інтраназального введення і черезшкірного введення.

У іншому аспекті даний винахід стосується щонайменше одного антиідіотипічного анти-О1 | 4 антитіла проти щонайменше одного 0 |4-зв'язувального білка згідно з винаходом. Таким антиіїдіотипічним антитілом є будь-яка білок- або пептидвмісна молекула, що включає щонайменше частину молекули імуноглобуліну, таку як, але не обмежується ними, щонайменше одна гіперваріабельна область (область, що визначає комплементарність (СОК)) важкого або легкого ланцюга або її лігандзв'язувальна частина, варіадбельна область важкого ланцюга або легкого ланцюга, константна область важкого ланцюга або легкого ланцюга, каркасна область або будь-яка їх частина, які можуть бути включені в зв'язувальний білок згідно з винаходом.

Будь-який з ряду форматів імунодетектуючих аналізів може бути адаптований для використання

РІГ 4-зв'язувального білка згідно з винаходом з метою детектування 0114 в суміші, в розчині або в біологічному зразку. Такими форматами імунодетектуючих аналізів є, але не обмежуються ними, радіоімуноаналіз (РІА), імунопреципітація, твердофазний імуноферментний аналіз (ЕГІЗА), імуноблот- аналіз (наприклад, вестерн-блот-аналіз), імунологічні смужки (наприклад, індикаторні тест-смужки), що містять ОЇ І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, адсорбований або іммобілізований на субстраті,

ЕАСЗБ і т. п. Детектування 01 4 з використанням БІ І 4-зв'язувального білка згідно з винаходом може бути проведене іп міїго в суміші, в розчині або в біологічному зразку. Біологічними зразками, які можуть бути піддані контактуванню зі зв'язувальним білком згідно з винаходом для детектування 01 | 4 або для вимірювання його рівня в зразку, є, але не обмежуються ними, сеча, слина, мазок з ротової порожнини (щічний мазок, мазок з язика або із зіва), шкірний мазок, зскрібок зі шкіри, мазок з прямої кишки, вагінальний мазок, проба цільної крові, проба плазми, проба сироватки, біоптат тканини і будь- який інший зразок, взятий у індивідуума відповідно до процедури, відомої фахівцям. У іншому варіанті винаходу ОЇ 4-зв'язувальний білок може бути використаний для детектування 01 Г4 іп мімо різними методами томографії і сканування, включаючи, але не обмежуючись ними, рентгенівську комп'ютерну томографію (КТ), магнітно-резонансну томографію (МРТ) і позитронно-емісійну томографію (ПЕТ).

Докладний опис винаходу

Даний винахід стосується 0 4-зв'язувальних білків, зокрема анти-ОЇ!14 антитіл або їх антигензв'язувальних частин, які зв'язуються з 0114. У різних аспектах даний винахід стосується антитіл ії фрагментів антитіл і фармацевтичних композицій, що містять такі антитіла і фрагменти, а також нуклеїнових кислот, рекомбінантних експресійних векторів і клітин-хазяїнів, використовуваних для одержання таких антитіл і фрагментів. У обсяг даного винаходу входять також способи застосування антитіл згідно з винаходом для детектування людського 0/4 або мишачого ОІ 4, способи інгібування активності людського або мишачого бі | 4 і/або людського або мишачого МЕСЕНК2 або МЕСКТ, іп міїго або іп мімо, і способи регуляції експресії генів.

Якщо це не обумовлено особливо, то всі технічні і наукові терміни, використовувані в даній заявці, мають значення, в основному, зрозумілі середньому фахівцю в галузі, до якої належить винахід.

Значення і обсяг термінів повинні бути зрозумілі фахівцям в даній галузі, однак, у випадку виникнення яких-небудь прихованих різночитань, потрібно віддати перевагу визначенням, наданим в даній заявці, а не тим визначенням, які наводяться в словниках або в інших джерелах. Крім того, якщо це не суперечить контексту даного опису, то іменники, застосовувані в однині, можуть означати і іменники у множині, і навпаки. У даній заявці, застосування слова "або" означає "і/або", якщо це не обумовлено особливо. Крім того, термін "який включає", а також інші його форми, такі як "включати" або "включений", є необмежувальними. Такі терміни, як "елемент" або "компонент" охоплюють як елементи, так і компоненти, які включають одну одиницю, і елементи і компоненти, які включають більше ніж одну субодиницю, якщо це не обумовлено особливо.

У загальних рисах, номенклатура і способи, що стосуються клітин, тканинних культур, молекулярної біології, імунології, мікробіології, генетики, хімії білків і нуклеїнових кислот і гібридизації описаних тут білків і нуклеїнових кислот, добре відомі фахівцям і широко застосовуються в даній галузі. Даний винахід звичайно здійснюють стандартними методами і способами, добре відомими фахівцям і описаними в різних загальних керівництвах і в спеціальній науковій літературі, які цитуються і обговорюються в даному описі, якщо це не вказано особливо. Ферментативні реакції і способи очищення здійснюють відповідно до інструкцій виробників, звичайно рекомендованих фахівцям або запропонованих в даній заявці. Використовувана номенклатура і лабораторні процедури, а також методи аналітичної хімії, хімії органічного синтезу і медичної фармацевтичної хімії, описані в даній заявці, добре відомі і широко застосовуються фахівцями. Для хімічних синтезів, хімічних аналізів, фармацевтичних складів, складів доставки і для лікування пацієнтів застосовуються стандартні методи.

Для кращого розуміння даного винаходу нижче наводяться визначення окремих термінів.

Використовуваний тут термін "поліпептид" означає будь-який полімерний ланцюг з амінокислот.

Терміни "пептид" і "білок" є синонімами терміна "поліпептид", а також означають полімерний ланцюг з амінокислот. Термін "поліпептид" охоплює нативні або штучні білки, фрагменти білків і поліпептидні аналоги послідовності білка. Поліпептид може бути мономерним або полімерним. При застосуванні терміна "поліпептид" мається на увазі, що він включає поліпептид і його фрагменти і варіанти (включаючи фрагменти варіантів), якщо це не суперечить контексту винаходу. Що стосується антигенного поліпептиду, то фрагмент поліпептиду містить, але необов'язково, щонайменше один епітоп з безперервним ланцюгом або нелінійний епітоп поліпептиду. Точні границі щонайменше одного фрагмента епітопа можуть бути визначені середнім фахівцем в даній галузі. Цей фрагмент містить щонайменше приблизно 5 суміжних амінокислот, наприклад щонайменше приблизно 10 суміжних амінокислот, щонайменше приблизно 15 суміжних амінокислот або щонайменше приблизно суміжних амінокислот. Варіанти поліпептиду описані в даній заявці.

Терміни "ізольований білок" або "ізольований поліпептид" означають білок або поліпептид, які, за своїм походженням або в своєму джерелі, не асоціюються з природними компонентами, разом з якими вони звичайно присутні в своєму природному стані; по суті, не містять інших білків, що походять від одного і того ж виду; експресуються клітиною іншого виду або не існують в природі. Таким чином, поліпептид, який синтезується хімічними методами або синтезується в клітинній системі, відмінній від його природної клітинної системи, буде розглядатися як поліпептид, "їізольований" з його природного оточення. Білок може також, по суті, не містити природних компонентів в результаті його виділення методами очищення білка, добре відомими фахівцям.

Використовуваний тут термін "виділення" означає спосіб одержання хімічних молекул, таких як поліпептид, який, по суті, не містить природних компонентів в результаті його виділення, наприклад, методами очищення білка, добре відомими фахівцям.

Використовуваний тут термін "людський 01 І 4" (скорочено позначуваний тут "ПОГ І 4" або "пи І 4") включає декілька ЕСЕ-подібних доменів і домен ОБ, необхідні для зв'язування з рецептором. Цей термін включає білок розміром приблизно 74-75 кДа. Структура і виведені послідовності ДНК і послідовності білка людського ОІ І 4 більш детально описані, наприклад, 5пиНег еї аї., Сепез 8 Оем., 4: 1313-1318 (2000). Використовуваний тут термін "людський 0114" також включає рекомбінантний людський 0БІ1/4 (ТОЇ 1/4), який може бути одержаний стандартними рекомбінантними методами експресії.

Використовуваний тут термін "біологічна активність", якщо він стосується 0І 14, означає всі біологічні властивості, характерні для 0 4. Біологічними властивостями 01 Г 4 є, але не обмежуються ними, зв'язування з рецептором Моїсі, активація рецептора Моїсі, інгібування передачі сигналу МЕСЕ, пригнічення МЕСЕКа і індукування МЕСЕКІ.

Використовувані тут терміни "специфічне зв'язування" або "який специфічно зв'язує", якщо вони стосуються взаємодії антитіла, білка або пептиду з другою хімічною молекулою, означають, що така взаємодія залежить від присутності конкретної структури (наприклад, антигенної детермінанти або епітопа) на хімічній молекулі, так, наприклад, антитіло розпізнає специфічну білкову структуру, а не білки загалом, і зв'язується з цією структурою. Якщо антитіло є специфічним до епітопа "А", то присутність молекули, що містить епітоп А (або вільний немічений А), в реакційній суміші, що включає мічений "А" і антитіло, буде приводити до зниження кількості міченого А, зв'язаного з антитілом.

Використовуваний тут термін "антитіло", в своєму широкому значенні, означає будь-яку молекулу імуноглобуліну (Ід), що складається з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких ланцюгів (Н) і двох легких ланцюгів (І), або будь-які її функціональні фрагменти, мутанти, варіанти або похідні, що зберігають основні епітопзв'язувальні властивості молекули Ід. Такі типи мутантних, модифікованих або дериватизованих антитіл відомі фахівцям. Необмежувальні варіанти таких антитіл обговорюються нижче.

У повнорозмірному антитілі кожний важкий ланцюг складається з варіабельної області важкого ланцюга (позначуваної тут НСМК або МН) і константної області важкого ланцюга. Константна область важкого ланцюга складається з трьох доменів, СНІ, СН2 ї СНЗ. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної області легкого ланцюга (позначуваної тут ЇСМК або МІ) і константної області легкого ланцюга. Константна область легкого ланцюга складається з одного домену, СІ. Області МН і МІ. можуть бути також поділені на гіперваріабельні області, звані областями, що визначають комплементарність (СОК), які чергуються з областями, які є більш консервативними і називаються каркасними областями (ЕК). Кожна МН і МІ. складається з трьох СОК і чотирьох ЕК, розташованих в напрямі від амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: ЕК1, СОКІ, ЕК2, СОМК2, ЕКЗ, СОКЗ і

ЕК4. Молекулами імуноглобуліну можуть бути молекули будь-якого типу (наприклад, Ідс, ЧЕ, І9М,

ІЧО, ІдЗА і Іду), класу (наприклад, Ідс1, Ідса2, Ід, Ід, ДА і ІдАг2) або підкласу.

Термін "Рс-область" використовується для визначення С-кінцевої області важкого ланцюга імуноглобуліну, яка може бути одержана шляхом гідролізу інтактного антитіла папаїном. Ес-областю може бути Есо-область нативної послідовності або Ес-область її варіанта. Ес-область імуноглобуліну звичайно містить два константних домени, домен СН2 і домен СНЗ, і включає, але необов'язково, домен СНЯА4. Заміни амінокислотних залишків в Ес-частині, що вводяться для зміни ефекторної функції антитіла, відомі фахівцям (патенти США МоМо 5648260 і 5624821). Ес-частина антитіла опосередковує декілька важливих ефекторних функцій, наприклад індукування цитокінів, АЮСС, фагоцитоз, комплементзалежну цитотоксичність (СОС), час напівжиття/швидкість кліренсу антитіла і утворення комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках бажано, щоб терапевтичне антитіло мало ці ефекторні функції, але в інших випадках, залежно від терапевтичного застосування, такі функції можуть бути необов'язковими або навіть небажаними. Деякі ізотипи людських Ідс, зокрема Ідсі1 і

ІдОЗ3, опосередковують АЮСС і СОС за допомогою зв'язування з ЕсукК і з комплементом С1а4, відповідно. Ес-рецептори у новонароджених (БсКп) являють собою важливі компоненти, що визначають час напівжиття антитіл в кровотоці. У іншому варіанті винаходу щонайменше один амінокислотний залишок в константній області антитіла, наприклад в Ес-області антитіла, замінюють так, щоб це приводило до зміни ефекторних функцій антитіла. Димеризація двох ідентичних важких ланцюгів імуноглобуліну опосередковується димеризацією доменів СНЗ і стабілізується дисульфідними зв'язками в шарнірній області (Нибег еї аї!., Майшиге; 264: 415-420 (1976); ТНієзв еї аї.,».

МОЇ. Віої!; 293: 67-79 (1999)). Мутація цистеїнових залишків в шарнірних областях, що проводиться з метою запобігання утворенню дисульфідних зв'язків між важкими ланцюгами, буде дестабілізувати димеризацію доменів СНЗ. Були ідентифіковані залишки, відповідальні за димеризацію СНЗ (ОаігАсдиа Віоспет. 37: 9266-9273 (1998)). Тому це дає можливість одержати одновалентну половину

Ід. Цікаво зазначити, що такі одновалентні молекули, що становлять половину Ід, були виявлені в природі для імуноглобулінів підкласів Іде і ІдА (Зеїїдтап, Апп. Іттипої. 129: 855-70 (1978); Вієжшепда еї аї., Сіп Ехр Іттипо!ї 51:395-400 (1983)). Стехіометрія Ес-області ЕсКп:Ід, як було визначено, становить 2:11 (УуУев5і еї аї.,, Віоспет. 39: 9698-9708 (2000)) і половина Ес є достатньою для опосередковування зв'язування з ЕсКп (Кіт еї аї., Еиг. У. Іттипої.; 24: 542-548 (1994)). Мутації, що вводяться для порушення димеризації домену СНЗ, більше не зможуть негативно впливати на зв'язування з ГсКп, оскільки залишки, що грають важливу роль в димеризації СНЗ, розташовані на внутрішній поверхні Д-складчастої структури СНЗ, а область, відповідальна за зв'язування з ЕсКп, розташована за межами границі доменів СН2.-СНЗ. Однак половина молекул ЇД може мати певну перевагу з точки зору проникнення в тканину, що зумовлено її меншим розміром в порівнянні із звичайним антитілом. У одному з варіантів винаходу щонайменше один амінокислотний залишок в константній області зв'язувального білка згідно з винаходом, наприклад в Ес-області, замінюють так, щоб це приводило до зміни димеризації важких ланцюгів і до утворення половинних молекул Ід.

Протизапальна активність дО повністю залежить від сіалілування М-зв'язаного глікану Ес-фрагмента

Ід. Було визначено, що присутність глікану є обов'язковою умовою для надання протизапальної активності, оскільки його присутність дозволяє створити відповідний Ес-фрагмент Ідс1 і, тим самим, одержати повністю рекомбінантний сіалілований Ес-фрагмент досі зі значно більш високою активністю (Апіпопу еї а!., Ззсіеєпсе 320: 373-376 (2008)).

Використовуваний тут термін "антигензв'язувальна частина" антитіла (або просто "частина антитіла") означає один або декілька фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (тобто з конкретним епітопом антигену, таким як епітоп 01/14). Було показано, що антигензв'язувальна функція антитіла може бути реалізована завдяки фрагментам повнорозмірного антитіла. Такі варіанти антитіл можуть бути також біспецифічними, мати "подвійну" специфічність або бути мультиспецифічними, тобто специфічно зв'язуватися з двома або більше різними антигенами (або з двома або більше різними епітопами на одному і тому ж антигені).

Прикладами фрагментів, що зв'язуються, які входять в обсяг терміна "антигензв'язувальна частина" антитіла, є () Рар-фрагмент, одновалентний фрагмент, що складається з доменів МІ, УН, СІ. і СНІ; (ії)

Каб')2-фрагмент, двовалентний фрагмент, що включає два Рар-фрагменти, зв'язані дисульфідним містком в шарнірній області; (ії) а-фрагмент, що складається з доменів МН і СНІ; (їм) Ем-фрагмент, що складається з доменів Мі. їі МН одного плеча антитіла; (м) ЧАрБ-фрагмент (Мага еї аї., Майшге 341: 544- 546 (1989); публікація РСТ УМО 90/05144АЇ), який містить один варіабельний домен; і (мі) ізольована гіперваріабельна область (СОК). Крім того, хоч два домени Ем-фрагмента, МІ їі МН, кодуються окремими генами, однак, вони можуть бути приєднані один до одного рекомбінантними методами за допомогою синтетичного лінкера, який дозволяє створити один білковий ланцюг, де області МІ. ії МН спарюються, утворюючи одновалентні молекули (відомі як одноланцюжковий Ем (5СЕм); див. наприклад, Віга еї аї., Зсіепсе 242: 423-426 (1988); і Нивіоп еї аї!., Ргос. Май. Асай. 5сі ОБА 85: 5879- 5883 (1988)). Такі одноланцюжкові антитіла також входять в обсяг терміна "антигензв'язувальна частина" антитіла. У обсяг цього терміна також входять і інші форми одноланцюжкових антитіл, таких як діантитіла. Діантитіла являють собою двовалентні біспецифічні антитіла, в яких домени МН і мі. експресуються на одному поліпептидному ланцюгу, але сполучені за допомогою лінкера, який є дуже коротким для утворення пари міх двома доменами на одному і тому ж ланцюгу, а тому домени вимушені спарюватися з комплементарними доменами іншого ланцюга і утворювати два антигензв'язувальних сайти (див., наприклад, НоїЇїдег еї аїЇ., Ргос. Май. Асад. 5сі ОБА 90: 6444-6448 (1993); РоЦйак ВА.)., Зісішгте 2:1121-1123 (1994)). Такі антигензв'язувальні частини антитіла відомі фахівцям (Копіегтапп 85: Юибреї еаз., Апіїбоду Епдіпеегіпд. Зргіпдег-Мепад. Мем МогК, 2001 р. 790 (ІЗВМ 3-540-41354-5)). Крім того, одноланцюжковими антитілами також є "лінійні антитіла", що містять пару тандемних Ему-сегментів (МН-СНІ-МН-СНІ), які, разом з комплементарними поліпептидами легкого ланцюга, утворюють пару антигензв'язувальних областей (7араїа еї аї., Ргоївіп Епд. 8(10): 1057-1062 (1995); і патент США Мо 5641870).

Використовуваний тут термін "конструкція антитіла" (або "конструкція анти-О1 | 4 антитіла") означає поліпептид, що містить одну або декілька антигензв'язувальних частин згідно з винаходом, зв'язаних з лінкерним поліпептидом або з константним доменом імуноглобуліну. Лінкерні поліпептиди містять два або більше амінокислотних залишків, зв'язаних пептидними зв'язками, і використовуються для зв'язування з однією або декількома антигензв'язувальними частинами. Такі лінкерні поліпептиди добре відомі фахівцям (див., наприклад, НоїїЇїдег еї аї., Ргос. Май. Асад. бсі. ОБА, 90: 6444-6448 (1993);

РоЦак В.)., Бігисіште, 2: 1121-1123 (1994)). Термін "константний домен імуноглобуліну" означає константний домен важкого або легкого ланцюга. Амінокислотні послідовності константного домену важкого і легкого ланцюгів людського Ід відомі фахівцям і представлені в таблиці 1.

Таблиця 1

Послідовність константного домену важкого ланцюга людського

Іо і константного домену легкого ланцюга людського до послідовності 217111111111111011112315678901232567890123456789012

А5ТКОРОМЕЕГАРБЗКОТЗОСТААТОСТЬУКрУ

ЕРЕРУТУЗИМ5ЗСАГТ5СУНТЕРАУТО55СТУ5 155УУТУРЗЗВІСТОТУІСМУМНЕРОЗМТКУ ТК

Константна область ЗЕОІЮ МО: 2 КУЕРКЗСОКТНТІТСРРОРАРЕТІТССРОУМЕГЕРР

Ід-гамма 1 КРКОТІМІ5ЗВТРЕУТСУУУВУЗНЕОРЕУКЕМ

УУОСУЕУНМАКТКЕРЕЕЕОУМОТУВУУ ЗУ ТМ,

НОРЖ1МСОКЕУКСКУ5МКАГРАРІЕКТІ5ЗКАКО 11111111 112345678901234567890123456789012

ОРЕЕРОУУТІРРОВЕЕМТКМОУЗІТСТУКОСКУ

РОБІАМЕМЕОБМСОРЕММУКТТРРУГОБООБЕЕ

ГУ5КІТУРК5ВИООСМУЕЗС5УМНЕАТНМНУТ

ОоК5ІБІБРОоК

А5ТКОРОМЕРІГАРБЗКОТЗОСТААТОСТУКрУ

ЕРЕРУТУЗИМ5ЗСАГТ5СУНТЕРАМУТО55СТУ5 155УУТУРЗЗВІСТОТУІСМУМНЕРОМТКУ ОК

КУЕРКЗСОКТНТІТСРРОРАРЕААССРОМЕТЕРР

Мутантна константна ЕКРКОТІМІЗБЕТРЕУТСУУУВУ5НЕОРЕУКЕМИ область ЗЕОІЮО МО: З УУОСУЕУНМАКТКЕРЕЕКОУМОТУВУМ5УТ ТУТ

Ід-гамма 1 НОРУЖТМОКЕУКСКУ5МКАГРАРІЕКТІ5ЗКАКС

ОРВЕЕРОМУТІРРОВЕЕМТКМОУ5ІТСТУКОСВКУ

РЗБІАМУМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРУТОБОСЗЕЕ

ГУ5КІТУрК5ВИООСМУЕЗС5УМНЕАТНМНУТ

ОК51515РОК

ТМААРБМЕТЕРРБООЕОГКОСТАВБУМУМСІБММЕУ деиинненоркююю. ОО ОТИННЯ, каппа І У5І55ТІТІЗКАРУЕКНКУУАСЕУТНОСІ БР

УТКЗЕМВСЕС

ОРКААРЗУТГЕРРЗБЕЕТОАМКАТІМСТІБОЕ дннннкююює 00 ЛИХ, лямбда І УААБ5БУТБІТРЕОЖКОНЕ5ЗУ5СОУТНЕСОЗТУВ

КТІУАРТЕС5

Крім того, антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть бути частиною більш великих імуноадгезивних молекул, утворених за допомогою ковалентного або нековалентного зв'язування даного антитіла або його антигензв'язувальної частини з одним або декількома іншими білками або пептидами. Прикладами таких імуноадгезивних молекул є корова область стрептавідину, використовувана для одержання тетрамерної молекули 5сЕм (Кіргіуапом еї аї,, Нитап Апіірбодієз апа

Нубіідотазв, 6: 93-101 (1995)), цистеїновий залишок, маркерний пептид і С-кінцева поліпептидна мітка, використовувана для одержання двовалентних і біотинільованих молекул 5сЕм (Кіргіуапом еї аї., Мо).

Іттипої, 31: 1047-1058 (1994)). Частини антитіл, такі як Бар- і Р(абБ)»-фрагменти, можуть бути одержані з цілих антитіл стандартними методами, такими як гідроліз цілих антитіл папаїном або пепсином, відповідно. Крім того, антитіла, частини антитіл і імуноадгезивні молекули можуть бути одержані стандартними методами рекомбінантних ДНК, описаними в даній заявці і відомими в даній галузі техніки.

Використовуваний тут термін "ізольоване антитіло" означає антитіло, яке, по суті, не містить інші антитіла, що мають різні специфічності до антигену (наприклад, ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з ПОГ І 4, в основному, ізольоване від антитіл, які специфічно зв'язуються з антигенами, що не є ПОЇ (4). Однак ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з ПО! 14, може перехресно реагувати з іншими антигенами, такими як молекули 01/14, що походять від інших видів (наприклад, ти 14). Крім того, ізольоване антитіло може бути, в основному, відділене від іншого клітинного матеріалу і/або інших хімічних речовин.

Використовуваний тут термін "моноклональне антитіло" або скорочено "Мар" і "тАбБ" означає антитіло, одержане від популяції, в основному, гомогенних антитіл, тобто окремих антитіл, що складають дану популяцію, які є ідентичними за винятком антитіл з можливими природними мутаціями, які можуть бути присутніми в невеликих кількостях. Моноклональні антитіла є високою мірою специфічними і направлені проти одного антигену. Крім того, на відміну від складів поліклональних антитіл, які звичайно включають різні антитіла, направлені проти різних детермінант (епітопів), кожне тАбБ направлене проти однієї детермінанти на антигені. Визначення "моноклональний" не означає, що дане антитіло повинно бути продуковане яким-небудь конкретним методом.

Використовуваний тут термін "людське антитіло" включає антитіла, які мають варіабельні і константні області, що походять від послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії. Людські антитіла згідно з винаходом можуть включати амінокислотні залишки, що не належать до послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії (наприклад, в них можуть бути введені мутації за допомогою неспецифічного або сайт-специфічного мутагенезу іп міго або за допомогою соматичної мутації іп мімо), наприклад, такі залишки можуть бути присутніми в СОК, зокрема в СОКЗ.

Однак використовуваний тут термін "людське антитіло" не включає антитіла, в яких послідовності

СОК, що походять від зародкової лінії ссавців інших видів, таких як миша, були приєднані до людських каркасних послідовностей.

Використовуваний тут термін "рекомбінантне людське антитіло" включає всі людські антитіла, які були одержані, експресовані, сконструйовані або виділені рекомбінантними методами, наприклад антитіла, експресовані з використанням рекомбінантного експресійного вектора, трансфікованого в клітину-хазяїна, антитіла, виділені з бібліотеки рекомбінантних комбінаторних людських антитіл (Ноодепроот, Тгепаз Віоїеснпої!. 15: 62-70(1997); А22аг2у в Ніднетійй Сіїп. Віоспет. 35: 425-445(2002);

Саміопао 8. Іатіск ВіоТесппіднев 29: 128-145 (2002); Ноодепроот 4 Спатев, Іттипої. Тодау 21: 371- 378 (2000)), антитіла, виділені у тварин (наприклад, мишей), які є трансгенними відносно генів людського імуноглобуліну (див. Тауїог еї аї., Мисі. Асід5 Кев. 20: 6287-6295 (1992); КеПептапп 5 Стееп,

Сит. Оріп. ВіоїєсНнпої!. 13: 593-597 (2002); І іШе еї аї., Іттипої. Тодау 21: 364-370 (2000)), або антитіла, які були одержані, експресовані, сконструйовані або виділені іншими методами, що включають сплайсинг послідовностей генів людського імуноглобуліну з утворенням інших послідовностей ДНК.

Такі рекомбінантні людські антитіла мають варіабельні і константні області, що походять від послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії. Однак, в деяких варіантах винаходу, такі рекомбінантні людські антитіла піддають мутагенезу іп міго (або, якщо використовується тварина, яка є трансгенною відносно послідовності людського Ід, її піддають соматичному мутагенезу іп мімо), і, таким чином, амінокислотні послідовності областей УН і МІ рекомбінантних антитіл являють собою послідовності, які, якщо вони походять від послідовностей МН і Мі людської зародкової лінії і є спорідненими з цими послідовностями, звичайно не входять в репертуар людських антитіл зародкової лінії іп мімо.

Термін "химерне антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, що походять від одного виду, і послідовності константної області, що походять від інших видів, такі як антитіла, що мають мишачі варіабельні області важкого і легкого ланцюгів, приєднані до людських константних областей.

Використовуваний тут термін "СОК" означає гіперваріабельну область у варіабельних послідовностях антитіла. У кожній з варіабельних областей важкого ланцюга і легкого ланцюга присутні три СОК, які, для кожної варіабельної області, позначаються СОКІ, СОМК2 і СОКЗ.

Використовуваний тут термін "набір СОР" означає групу з трьох СОК, які присутні в одній варіабельній області, що має здатність зв'язуватися з антигеном. Точні границі цих СОК були визначені різним чином залежно від різних систем. Система, описана Кебатом (КаБбаї еї а!., Зедиепсез5 ої Ргоївіп5 ої

Ітітипоїодіса! Іпіегеб5ї (Майопа! Іпбзійшев ої Неанй, ВеїШезаа, Ма. (1987) ії (1991)), має не тільки однозначну систему нумерації залишків, застосовувану до будь-якої варіабельної області антитіла, але також їі точні границі залишків, що визначають три СОК. Ці СОК можуть називатися "СОК по

Кебату". Чотія і співробітники (Споїпіа 8 І е5К, У. Мої. Віої. 196: 901-917 (1987) і Споїнпіа еї аї!., Маїшге 342: 877-883 (1989)) виявили, що деякі субположення в СОК по Кебату набувають майже ідентичної конформації пептидного кістяка, незважаючи на те, що вони мають значні відмінності на рівні амінокислотної послідовності. Такі підобласті були позначені "11", "12" ї "3" або "НІ", "Н2г" ї "НУ", де "Мі "Н" означають області легкого і важкого ланцюгів, відповідно. Такі області, які мають границі, що перекриваються з СОМ по Кебату, можуть називатися "СОК по Чотіа". Інші границі, що визначають перекривання СОМ з СОР. по Кебату, були описані в публікації Радіап, ЕАЗЕВ .). 9: 133-139 (1995) і

МассСаїйшт, .). Мої. Віої. 262(5): 732-45 (1996). Інші визначення границь СОК можуть, але не суворо, відповідати одній з описаних тут систем, але проте ці границі перекриваються з СОК по Кебату, хоч ці області можуть бути коротшими або довшими, ніж це було передбачено або одержано з експериментальних даних, які вказують на те, що конкретні залишки або групи залишків або навіть повнорозмірні СОК не здійснюють значного впливу на зв'язування з антигеном. У описаних тут способах можуть використовуватися СОК, визначені відповідно до будь-якої з цих систем, хоч в деяких варіантах використовуються СОК, визначені по Кебату або Чотія.

Використовувані тут терміни "нумерація по Кебату", "визначення по Кебату" і "мічення по Кебату" є синонімами. Ці терміни, відомі фахівцям, означають систему нумерації амінокислотних залишків, які є більш варіабельними (тобто гіперваріабельними), ніж інші амінокислотні залишки у варіабельних областях важкого і легкого ланцюгів антитіла або його антигензв'язувальної частини (КарБбаї еї аї., Апп.

МУ Асад. зсі., 190: 382-391 (1971) апа Кабаї єї аї., хХедоепсевз ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві. БА

Еайіоп. 0.5. ЮОерагптепі ої Неайй апа Нитап Зегмісе5, МІН Рирбіїсайоп Мо 91-3242 (1991)). Для варіабельної області важкого ланцюга (МН) гіперваріабельна область простягається в межах від амінокислотного положення 31 до амінокислотного положення 35 для СОКІ1, від амінокислотного положення 50 до амінокислотного положення 65 для СОК2, і від амінокислотного положення 95 до амінокислотного положення 102 для СОКЗ. Для варіабельної області легкого ланцюга (МІ) гіперваріабельна область простягається в межах від амінокислотного положення 24 до амінокислотного положення 34 для СОМК1, від амінокислотного положення 50 до амінокислотного положення 56 для СОК2, і від амінокислотного положення 89 до амінокислотного положення 97 для

СОВ3.

За останні 20 років спостерігається збільшення загальнодоступних баз даних і даних аналізу наявних в них амінокислотних послідовностей варіабельних областей важких і легких ланцюгів, що дозволяє фахівцям визначити типові граничні області між каркасними областями (ЕК) і послідовностями СОК, присутніми в послідовностях варіабельних областей, і точно ідентифікувати

СОК відповідно до нумерації по Кебату, нумерації по Чотіа або відповідно до інших систем нумерації.

Див., наприклад, Мапіп. "Ргоївїпй Зедцепсе апа Зігисішге Апаїубзіз ої Апіїбоду Магіабіе Ротаїпв",

Копієптапп апа рорбреї, едв5., Апіїбоду Епдіпеегіпуд (Зргіпдег-Мепад, Вегіїп, 2001), розділ 31, сторінки 432-433. Нижче наводиться приданий метод визначення амінокислотних послідовностей СОК по

Кебату, присутніх в амінокислотних послідовностях варіабельних областей важкого ланцюга (МН) і легкого ланцюга (МІ):

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОК-Ї 1: приблизно перші 24 амінокислотних залишки від амінокінця області МІ; залишком перед послідовністю СОК-І 1 завжди є цистеїн (С); залишком після послідовності СОК-Ї 1 завжди є триптофан (М/), звичайно Тгр- Туг-СсІп (МУ-У-О), але також і Тгр-Гецш-Ссїп (ММ-І-О), Тиер-Рпе-Сіп (МУ-Е-О) і Тгтр-Туг-Геи (МУ-ХУ-І); довжина звичайно складає від 10 до 17 амінокислотних залишків.

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОК-Ї 2: завжди перші 16 залишків після СОК-1 1; залишками перед послідовністю СОК-І2 звичайно є Пе-ТГуг (І-У), але також і МаІ-Туг (М-ХУ), Пе-Гуз (І-

К) і Пе-Рпе (І-Р); довжина завжди становить 7 амінокислотних залишків.

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОМК-Ї З: завжди перші 33 амінокислоти після СОК-Ї 2; залишком перед амінокислотною послідовністю СОК-І З завжди є цистеїн (С); залишками після послідовностями завжди є Рпе-Спу-Х-Спіу (Б-с4-Х-5) (ЗЕО ІЮ МО: 374), де Х являє собою будь-яку амінокислоту; довжина звичайно складає від 7 до 11 амінокислотних залишків.

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОК-НІ1: приблизно перші 33 амінокислотних залишки від амінокінця області МН і завжди 9 залишків після цистеїну (С); залишками перед послідовністю завжди є Субз-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х (5БО ІЮО МО: 375), де Х являє собою будь-яку амінокислоту; залишком після послідовності завжди є Тгр (МУ), звичайне Тгр-Ма! (М/-М), але також ії Тгр-Пе (М/-|Ї) ї

Тер-Аїа (МУ-А); довжина звичайно складає від 5 до 7 амінокислотних залишків.

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОК-НО: завжди перші 15 амінокислотних залишків після СОК-НІ1; залишками перед послідовністю звичайно є І еи-с1и- Гтр-Пе-Спу (І-Е-МУ-І-с) (ЗЕО ІЮ МО: 376), але можливі також і інші варіанти; залишками після послідовності є І уз/Агод-ІешПе/Ма/Рпе/ТПпи/Аїіа-Тиг/ЗегЛів/АІа / (К/В-І ЛЛ//ЕЛ/УА-

Т/БЛ/А);

довжина звичайно складає від 16 до 19 амінокислотних залишків.

Ідентифікація амінокислотної послідовності СОК-НЗ: завжди перші 33 амінокислотних залишки після СОК-НАІ і завжди З залишки після цистеїну (С); залишками перед послідовністю завжди є Сувб-Х-Х(С-Х-Х), де Х являє собою будь-яку амінокислоту, а звичайно Суз-АІа-Аго (С-А-В); залишками після послідовності завжди є Ттр-Сіу-х-сСтіу (МУ-с-Х-5) (ЗЕО ІО МО: 377), де Х являє собою будь-яку амінокислоту; довжина звичайно складає від З до 25 амінокислотних залишків.

Термін "СОК-прищеплене антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, які походять від одного виду, але в яких послідовності однієї або декількох СОК-областей МН і/або МІ замінені послідовностями СОК інших видів, наприклад, такі антитіла мають мишачі варіабельні області важкого і легкого ланцюгів, в яких одна або декілька мишачих СОК (наприклад, СОКЗ) були замінені людськими послідовностями СОВ.

Термін "гуманізоване антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, що походять від ссавців, що не є людиною (наприклад, миші), але в яких щонайменше частина послідовності МН і/або МІ. була модифікована для надання їй більшої схожості з послідовністю людського антитіла, тобто більшої схожості з варіабельними послідовностями людської зародкової лінії. "Гуманізоване антитіло" являє собою антитіло або його варіант, похідне, аналог або фрагмент, які імуноспецифічно зв'язуються з антигеном, що представляє інтерес, і містять каркасну область (ЕК), що має, в основному, амінокислотну послідовність людського антитіла і гіперваріабельну область (СОК), що має, в основному, амінокислотну послідовність нелюдського антитіла. Використовуваний тут термін "в основному", що стосується СОК, означає, що СОК має амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 809565, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9895 або щонайменше на 9995 ідентична амінокислотній послідовності СОМ нелюдського антитіла. Гуманізоване антитіло включає в основному всі або щонайменше один, а звичайно два варіабельних домени (Раб, Рар', Е(ар)», Рарс, Гм), в яких всі або в основному всі області СОК відповідають нелюдському імуноглобуліну (тобто донорному антитілу), а всі або в основному всі каркасні області являють собою області, що мають консенсусну послідовність людського імуноглобуліну. У одному з варіантів винаходу гуманізоване антитіло також містить щонайменше частину константної області імуноглобуліну (Ес), а звичайно людського імуноглобуліну. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить легкий ланцюг, а також щонайменше варіабельний домен важкого ланцюга. Таке антитіло також може включати області СНІ, шарнірну область і області СН2, СНЗ ії СН4 важкого ланцюга. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований легкий ланцюг. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований важкий ланцюг. У конкретних варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга і/або гуманізований важкий ланцюг.

Гуманізоване антитіло може бути вибране з імуноглобулінів будь-якого класу, включаючи ІМ, дос,

І9ДО, ІдА і ІдЧЕ, і будь-якого ізотипу, включаючи, але не обмежуючись ними, Ідс1, Ідс2, дез і Ідса4.

Гуманізоване антитіло може містити послідовності, що походять від антитіл більше ніж одного класу або ізотипу, а конкретні константні домени можуть бути вибрані для оптимізації потрібних ефекторних функцій методами, добре відомими фахівцям.

Каркасні області і СОК гуманізованого антитіла необов'язково повинні точно відповідати батьківським послідовностям, так, наприклад, СОК донорного антитіла або консенсусна каркасна область можуть бути піддані мутагенезу шляхом заміни, інсерції і/або делеції щонайменше одного амінокислотного залишку так, щоб СОК або каркасний залишок в цьому сайті не відповідав залишку донорного антитіла або консенсусній каркасній області. Однак, в переважному варіанті винаходу, такі мутації не повинні бути надмірними. Звичайно залишки гуманізованого антитіла щонайменше на 8095, переважно щонайменше на 8595, більш переважно щонайменше на 9095, а найбільш переважно щонайменше на 9595 відповідають залишкам послідовностей батьківських ЕК і СО.

Використовуваний тут термін "консенсусна каркасна область" означає каркасну область в консенсусній послідовності імуноглобуліну. Використовуваний тут термін "консенсусна послідовність імуноглобуліну" означає послідовність, що походить від амінокислот, що найчастіше зустрічаються (або нуклеотидів), в сімействі споріднених послідовностей імуноглобуліну (див., наприклад, У/іппакег,

Егот Сепе5 0 Сіопе5 (Мепадздезеїїб5спай, УМмеіппейт, 1987)). "Консенсусна послідовність імуноглобуліну" може також містити "консенсуснуй(і) каркасну(і) область(і)" або "консенсусну(ї) СОК". У сімействі імуноглобулінів кожне положення в консенсусній послідовності зайняте амінокислотою, що найчастіше зустрічається в цьому положенні вказаного сімейства. Якщо дві амінокислоти зустрічаються з однаковою частотою, то в консенсусній послідовності може бути присутньою будь-яка з цих амінокислот. "Афінно зрілим" антитілом є антитіло, яке має одну або декілька модифікацій в одній або декількох

СОКБ, які приводять до підвищення афінності антитіла до антигену-мішені, на відміну від батьківського антитіла, що не має такої(их) модифікації(й). Репрезентативні афінно зрілі антитіла мають наномолярну або навіть пікомолярну афінність відносно антигену-мішені. Афінно зрілі антитіла одержують різними методами, відомими фахівцям. У публікації Магкз еї а!., ВіоТесппоїоду, 10: 779-783 (1992), описане афінне дозрівання, що досягається за допомогою перестановки доменів МН і Мі.

Неспецифічний мутагенез СОК і/або каркасних залишків описаний в публікаціях: Ваграх еї аї., Ргос.

Маї. Асайд. бсі. ОБА, 91: 3809-3813 (1994); 5спієг єї аІ., Сепе, 169: 147-155 (1995); Меп еї аї.,».

Іттипої, 155: 1994-2004 (1995); дЧаскз5оп еї аї., У. Іттипої, 154(7): 3310-3319 (1995); Намкіпз 6вї аї., у.

Мої. Віої, 226: 889-896 (1992). Селективна мутація в селективних положеннях мутагенезу і контактування або гіпермутація із заміною амінокислотним залишком, що підвищує активність, описано в патенті США О5691412881.

Термін "полівалентний зв'язувальний білок" означає зв'язувальний білок, що містить два або більше антигензв'язувальних сайтів (також званих тут "антигензв'язувальними доменами").

Полівалентний зв'язувальний білок переважно конструюють так, щоб він містив три або більше антигензв'язувальних сайтів і, по суті, не був природним антитілом. Термін "мультиспецифічний зв'язувальний білок" означає зв'язувальний білок, який здатний зв'язуватися з двома або більше спорідненими або неспорідненими мішенями, включаючи зв'язувальний білок, який здатний зв'язуватися з двома або більше різними епітопами однієї і тієї ж молекули-мішені.

Використовуваний тут термін "біспецифічне антитіло" означає повнорозмірні антитіла, які одержують із застосуванням квадромної технології (див. Міїбієїп еї аї., Маїшге, 305(5934): 537-540 (1983)), хімічного кон'югування двох різних моноклональних антитіл (див. 5іаег еї аї., Майшге, 314(6012): 628-631 (1985)) або із застосуванням технології "вузли в дірках" або аналогічних технологій, які дозволяють вводити мутації в Ес-область (див. НоїЇїдег еї аї., Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА, 90(14): 6444-6448 (1993)), що приводить до одержання множини різних молекул імуноглобуліну, з яких тільки одна молекула є функціональним біспецифічним антитілом. Завдяки своїй молекулярній функції, біспецифічне антитіло зв'язується з одним антигеном (або епітопом) на одній з двох гілок, що зв'язуються (одна пара НСЛ/ С), і з іншим антигеном (або епітопом) на другій гілці (інша пара НСЛ/ С).

Згідно з таким визначенням, біспецифічне антитіло має дві окремих антигензв'язувальних гілки (відмінні по специфічності і по послідовностях СОК) і є одновалентним для кожного антигену, з яким воно зв'язується.

Використовуваний тут термін "антитіло з подвійною специфічністю" означає повнорозмірні антитіла, які можуть зв'язуватися з двома різними антигенами (або епітопами) в кожній зі своїх двох гілок, що зв'язуються (пара НС/ С) (див. публікацію заявки РСТ МО 02/02773). Відповідно до цього, зв'язувальний білок з подвійною специфічністю має дві ідентичних антигензв'язувальних гілки з ідентичною специфічністю і ідентичними послідовностями СОК і є двовалентним для кожного антигену, з яким він зв'язується.

Білки, що зв'язуються "з двома варіабельними доменами" ("МО") згідно з винаходом містять два або більше антигензв'язувальних сайтів і можуть являти собою двовалентні білки, що зв'язуються (з двома антигензв'язувальними сайтами), чотиривалентні білки, що зв'язуються (з чотирма антигензв'язувальними сайтами), або полівалентні білки, що зв'язуються. ЮМО можуть бути моноспецифічними, тобто вони можуть зв'язуватися з одним антигеном (або з одним специфічним епітопом), або мультиспецифічними, тобто вони можуть зв'язуватися з двома або більше антигенами (тобто з двома або більше епітопами однієї і тієї ж молекули антигену-мішені або з двома або більше епітопами різних антигенів-мішеней). Переважний зв'язувальний ЮМО-білок містить два ОМО- поліпептиди важкого ланцюга і два ОМО-поліпептиди легкого ланцюга і називається "0МО- імуноглобуліном" або "ОМО-Ід". Тому такий зв'язувальний білок ЮОМО-Ід є тетрамерним і нагадує молекулу Ідс, але має більшу кількість антигензв'язувальних сайтів, ніж молекула дос. Таким чином, кожна половина тетрамерної молекули ЮОМО-Ід нагадує одну половину молекули Ідс і включає ОМО- поліпептид важкого ланцюга і ОМО-поліпептид легкого ланцюга, але на відміну від пари важкого і легкого ланцюгів молекули ЇдС, яка має один антигензв'язувальний домен, пара важкого і легкого ланцюгів молекули ОМО-Ід має два або більше антигензв'язувальних сайтів.

Кожний антигензв'язувальний сайт зв'язувального білка ОМО-Ід походить від донорного ("батьківського") моноклонального антитіла, а тому містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН) і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), де загальне число СОЕК, що беруть участь в зв'язуванні з антигеном, в кожному антигензв'язувальному сайті дорівнює шести. Відповідно до цього, зв'язувальний білок ЮМО-Ід, який зв'язується з двома різними епітопами (тобто з двома різними епітопами двох різних молекул антигенів або з двома різними епітопами однієї і тієї ж молекули антигену), містить антигензв'язувальний сайт, що походить від першого батьківського моноклонального антитіла, і антигензв'язувальний сайт, що походить від другого батьківського моноклонального антитіла.

Опис конструювання і експресії, а також характеризація молекул ЮМО-ІД, що зв'язуються, наводиться в публікації заявки РСТ Мо УМО 2007/024715, в патенті США Мо 7612181 і в публікації УМи еї а!., Маїшге Віоїесп., 25: 1290-1297 (2007). Переважним прикладом таких молекул ЮОМО-Ід є молекули,

які містять важкий ланцюг, що має структурну формулу МО1-(Х1)п-М02-0-(Х2)п, де МО1 являє собою перший варіабельний домен важкого ланцюга, МО2 являє собою другий варіабельний домен важкого ланцюга, С являє собою константний домен важкого ланцюга, Х1 являє собою лінкер, за умови, що він не є СНІ, Х2 являє собою Ес-область, а п дорівнює 0 або 1, а переважно 1; і легкий ланцюг, що має структурну формулу МО1-(Х1)п-МО2-6-(Х2)п, де МО1 являє собою перший варіабельний домен легкого ланцюга, МО2 являє собою другий варіабельний домен легкого ланцюга, С являє собою константний домен легкого ланцюга, Х1 являє собою лінкер, за умови, що він не є СНІ, а Х2 не містить Ес-області, п дорівнює 0 або 1, а переважно 1. Такий ОМО-Ід може містити два вказаних важких ланцюги і два вказаних легких ланцюги, де кожний з цих ланцюгів містить варіабельні домени, тандемно приєднані один до одного без проміжної константної області, звичайно присутньої між варіабельними областями, де важкий ланцюг і легкий ланцюг зв'язані один з одним і утворюють тандемні функціональні антигензв'язувальні сайти, а пара важкого і легкого ланцюгів може бути зв'язана з іншою парою важкого і легкого ланцюгів з утворенням тетрамерного зв'язувального білка, що має чотири функціональних антигензв'язувальних сайти. У іншому прикладі молекула ОМО-Ід може містити важкий і легкий ланцюги, кожний з яких включає три варіабельних домени (МО1, МО2, МОЗ), тандемно приєднані один до одного без проміжної константної області, звичайно присутньої між варіабельними областями, де важкий і легкий ланцюги можуть бути зв'язані один з одним і утворюють три антигензв'язувальних сайти, а пара важкого і легкого ланцюгів може бути зв'язана з іншою парою важкого і легкого ланцюгів з утворенням тетрамерного зв'язувального білка, що має шість антигензв'язувальних сайтів.

У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок ОМО-Ід згідно з винаходом не тільки здатний зв'язуватися з одними і тими ж молекулами-мішенями, зв'язаними з батьківськими моноклональними антитілами, але також має одну або декілька потрібних властивостей, які мають одне або декілька батьківських моноклональних антитіл. Переважно, такою додатковою властивістю є властивість антитіла, характерна одному або декільком батьківським моноклональним антитілам. Властивостями антитіл, які можуть бути надані зв'язувальному білюу ОМО-Ід одним або декількома батьківськими моноклональними антитілами, є, але не обмежуються ними, специфічність до антигену, афінність до антигену, активність, біологічна функція, розпізнавання епітопа, стабільність білка, розчинність білка, ефективність продукування, імуногенність, фармакокінетичні властивості, біологічна доступність, здатність перехресно реагувати з тканинами і здатність до зв'язування з ортологічним антигеном.

Зв'язувальний білок ЮМО-Ід згідно з винаходом зв'язується щонайменше з одним епітопом людського білка 01/14. Необмежувальними прикладами зв'язувального білка ЮМО-І9д згідно з винаходом є зв'язувальний білок ЮМО-Ід, який зв'язується з одним або декількома епітопами людського ОІ І 4; зв'язувальний білок ОМО-Ід, який зв'язується з епітопом людського 01 | 4 і з епітопом рІ14 інших видів (наприклад, миші); і зв'язувальний білок ЮМО-Ід, який зв'язується з епітопом людського О1 | 4 і з епітопом іншої молекули-мішені (наприклад, МЕСЕК2 або МЕСЕКТІ). "Функціональний антигензв'язувальний сайт" зв'язувального білка являє собою сайт, здатний зв'язуватися з антигеном-мішенню. Афінність зв'язування антигензв'язувального сайта з антигеном необов'язково повинна бути такою ж високою, як і афінність батьківського антитіла, від якого походить антигензв'язувальний сайт, однак здатність зв'язуватися з антигеном повинна бути детектованою будь-яким з різних методів, звичайно застосовуваних для оцінки зв'язування антитіла з антигеном.

Крім того, афінності зв'язування кожного антигензв'язувального сайта полівалентного антитіла з антигеном необов'язково повинні бути кількісно рівноцінними.

Використовувані тут терміни "акцептор" і "акцепторне антитіло" означають антитіло або послідовність нуклеїнової кислоти, які містять або кодують, відповідно, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або 10095 від всіх амінокислотних послідовностей однієї або декількох каркасних областей (ЕК). У деяких варіантах винаходу термін "акцептор" означає амінокислотну послідовність або нуклеотидну послідовність антитіла, яка включає або кодує, відповідно, константну(ї) область(ї). У іншому варіанті винаходу термін "акцептор" означає амінокислотну послідовність або нуклеотидну послідовність антитіла, яка містить або кодує, відповідно, одну або декілька каркасних областей і константних областей. У конкретному варіанті винаходу термін "акцептор"' означає амінокислотну послідовність або нуклеотидну послідовність людського антитіла, що містить або кодує, відповідно, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або 10095 від всіх амінокислотних послідовностей однієї або декількох каркасних областей. Відповідно до цього варіанта, акцептор може містити щонайменше 1, щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5 або щонайменше 10 амінокислотних залишків, які не присутні в одному або декількох конкретних положеннях людського антитіла. Акцепторна каркасна область і/або акцепторна(ї) константна(ї) область(ї) можуть, наприклад, походити або можуть бути одержані з гена антитіла зародкової лінії, гена зрілого антитіла і функціонального антитіла (наприклад, антитіл, добре відомих фахівцям, антитіл, що знаходяться на стадії конструювання, або комерційно доступних антитіл).

Використовуваний тут термін "канонічний" залишок означає залишок в СОЕК або каркасній області,

який визначає конкретну канонічну структуру СОК, визначену Чотіа і ін. (див. публікації Споїпіа еї аї.,..

Мої. Віої, 196: 901-917 (1987); Споїніа еї а!., У. Мої. Віої, 227: 799-817 (1992), які вводяться в даний опис за допомогою посилання). Відповідно до опису Чотія і ін., положення СОР. багатьох антитіл, що грають важливу роль, мають майже ідентичну конформацію пептидного кістяка, незважаючи на значну варіабельность на рівні амінокислотних послідовностей. Кожна канонічна структура визначає, головним чином, серію кутів закручування пептидного кістяка для безперервного сегмента з амінокислотних залишків, що створюють петлю.

Використовувані тут терміни "донор" і "донорне антитіло" означають антитіло, що містить одну або декілька СОК. У переважному варіанті винаходу донорним антитілом є антитіло, що походить від видів, відмінних від тих видів, від яких були одержані або від яких походять каркасні області антитіла.

Термін "донорне антитіло", якщо він належить до гуманізованого антитіла, означає нелюдське антитіло, що має одну або декілька СОК.

Використовувані тут терміни "каркасна область" або "каркасна послідовність" означають інші послідовності варіабельної області мінус СОК. Оскільки точне визначення послідовності СОК може бути надане, виходячи з інших систем (наприклад, див. вище), то термін "каркасна послідовність" може мати, відповідно, іншу інтерпретацію. Шість СОК (СОК-11, -12 і -Ї3 легкого ланцюга і СОБ-НІ, -

Н2 і -НАЗ3 важкого ланцюга) також розділяють каркасні області в легкому ланцюзі і у важкому ланцюзі на чотири підобласті (ЕК1, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4) на кожному ланцюзі, де СОК1 розташована між ЕК! і ЕК2,

СОК2 розташована між ЕК2 і ЕКЗ, і СОКЗ розташована між ЕКЗ і ЕК4. Не претендуючи на точне визначення конкретних підобластей, таких як ЕК1, ЕК2, ЕКЗ або ЕК4, можна також сказати, що каркасна область являє собою об'єднані ЕК у варіабельній області в одному природному ланцюзі імуноглобуліну. Використовуваний тут термін "область ЕК" означає одну з чотирьох підобластей, а термін "області ЕК" означає дві або декілька з чотирьох підобластей, що складають каркасну область.

Послідовності акцепторних людських важких і легких ланцюгів відомі фахівцям. У одному з варіантів винаходу послідовності акцепторних людських важких і легких ланцюгів вибрані з послідовностей, представлених в таблицях 2 і 3.

Таблиця 2

Акцепторні послідовності важкого ланцюга

МО.; близькоспоріднене | Послідовність сімейство заредкової лінії !

ШО 1153аБо7ВОб1о34Еств5о15315ЕВ505 й УНІ-ЛУТНе ЕКЗ | ВЕОТІБКОТЗКАМОУУСТМТММОРУЮТАТХУУСАК 19 УНІ-69ЛІНО ЕКО МУВОАРСОСТЕММО

779 |Унілалневка ойсосттутуєє! 30303030 60 |онузаувко | МЙУВОАРОКССЕЙУА 10101010

Таблиця З

Акцепторні послідовності легкого ланцюга

ЗзБО1р Область білка;

МО.: | |близькоспоріднене Послідовність сімейстас зародкової лінії 7771770 112325678901231567890123256789012

86 окУЗр-ізлювва |ЕСОСІВІВІКВ 77777771 88 флакултівв; 00 |йуоокРоовРкТУТу 01010111 89 |Токулівв3 0 |СІРОБЕБСБМОСООАТІТІБЗІОАЕРУАУУУС 790 окугіквка | воосткувІКВО 01010101 95 |ібгузлліввя о |воссткітуЬ 38010101

Використовувані тут терміни "ген антитіла зародкової лінії" або "генний фрагмент" означають послідовність імуноглобуліну, кодовану нелімфоїдними клітинами, які не піддавалися процесу дозрівання, що приводить до генетичного реаранжування і мутації, для експресії конкретного імуноглобуліну (див., наприклад, Зпаріго еї аї., Стії. Кем. Іттипої. 22(3): 183-200 (2002); Магсна|опів єї а!., Аду. Ехр. Мед. Віо!. 484: 13-30 (2001)). Одна з переваг різних варіантів даного винаходу полягає в тому, що гени антитіла зародкової лінії з більшою імовірністю, ніж гени зрілого антитіла, будуть зберігати основні структури амінокислотної послідовності, характерні для індивідуумів даного виду, а отже, менш ймовірно, що вони будуть розпізнаватися як послідовності, що походять з чужорідного джерела, при їх терапевтичному застосуванні в даних видах.

Використовуваний тут термін "ключовий залишок" означає певні залишки варіабельної області, які впливають значний чином на специфічність зв'язування антитіла і/або афінність антитіла, зокрема гуманізованого антитіла. Ключовими залишками є, але не обмежуються ними, один або декілька з нижченаведених залишків: залишок, який є суміжним з СОЕ; потенційний сайт глікозилування (М- або

О-глікозилування); рідкий залишок; залишок, що має здатність взаємодіяти з антигеном; залишок, що має здатність взаємодіяти з СОК; канонічний залишок; залишок в зоні контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишок в зоні Верньєра; і залишок в області, яка перекривається з СОКІ1 варіабельного важкого ланцюга, як визначено по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, як визначено по Кебату.

Використовуваний тут термін "зона Верньєра" означає субнабір з каркасних залишків, які можуть здійснювати коректування структури СОК і тонке коректування для адаптації цих залишків до даного антигену, як описано Еооїе і ММіпіег (У. Мої. ВіоїЇ, 224: 487-499 (1992)). Залишки зони Верньєра утворюють шар, що лежить в основі СОК, і можуть впливати на структуру СОК ії афінність даного антитіла.

Використовуваний тут термін "нейтралізація" стосується запобігання біологічній активності антигену при його специфічному зв'язуванні з антитілом. У одному з варіантів винаходу нейтралізуючий зв'язувальний білок зв'язується з антигеном і знижує його біологічну активність щонайменше приблизно на 20, 40, 60, 80, 8595 або більше.

Термін "активність" включає таку активність, як специфічність/афінність зв'язування антитіла з антигеном, наприклад анти-пПОІ 4 антитіла, яке зв'язується з антигеном 0114, і/або нейтралізуючу активність антитіла або анти-ПОЇ | 4 антитіла, яке зв'язується з ПОГ 4 і тим самим інгібує біологічну активність ПОГ 4, наприклад інгібує зв'язування рецептора в аналізі на зв'язування "ліганд-рецептор", або інгібує активацію рецептора в аналізі, що проводиться з використанням репортера людського рецептора Моїсі, або стимулює проліферацію в аналізі на розростання ендотеліальних клітин.

Термін "епітоп" включає будь-яку поліпептидну детермінанту, здатну специфічно зв'язуватися з імуноглобуліном або Т-клітинним рецептором. У деяких варіантах винаходу антигенні детермінанти або епітопи включають хімічно активні поверхневі групи молекул, таких як амінокислоти, цукрові бічні ланцюги, фосфорил або сульфоніл, а в деяких варіантах винаходу вони можуть мати специфічні тривимірні структурні властивості і/або можуть мати конкретний заряд. Епітоп являє собою область антигену, що зв'язується з антитілом. Так, наприклад, епітоп складається з амінокислотних залишків області антигену (або його фрагмента), який, як відомо, зв'язується з комплементарним сайтом на специфічному партнері по зв'язуванню. Антиген або його фрагмент можуть містити більше ніж один епітоп. Так, наприклад, для фахівця в даній галузі очевидно, що кожний "антигензв'язувальний сайт" молекули антитіла зв'язується з епітопом молекули антигену, а кожна молекула антигену може мати один, два, декілька або множину епітопів. Крім того, для фахівців в даній галузі очевидно, що два незалежно виділених антитіла проти молекули антигену можуть зв'язуватися з одним і тим же епітопом або з двома різними епітопами на молекулі антигену.

У деяких варіантах винаходу вважається, що антитіло специфічно зв'язується з антигеном, якщо воно розпізнає антиген-мішень в складній суміші білків і/або макромолекул. Кажуть, що антитіла "зв'язуються з одним і тим же епітопом", якщо вони перехресно конкурують з іншими антитілами (тобто одне з них запобігає зв'язувальній або модулюючій дії іншого). Крім того, структурні визначення епітопів (які перекриваються, аналогічні, ідентичні) є інформативними, а функціональні визначення часто є більш релевантними, оскільки вони включають структурні параметри (зв'язування) і функціональні параметри (модуляцію, конкурування).

Використовуваний тут термін "поверхневий плазмонний резонанс" означає оптичне явище, яке дозволяє проаналізувати біоспецифічні взаємодії в реальному часі за допомогою детектування змін концентрацій білка в біосенсорній матриці, наприклад, з використанням системи ВіАсогеф (ВіІАсоге

Іпі'єгпайопаї! АВ, а СЕ Неайсаге сотрапу, Оррзаїа, Змедеп і Різсаїамжау, МУ). Більш докладний опис можна знайти в публікаціях Уоп55оп М. еї аїЇ.,, Апп. ВіоїЇ. Сіїп. 51: 19-26 (1993); допезоп Ш. еї аї.,

ВіоТесппіднев 11: 620-627 (1991); дхопп55оп В. еї аї. (1995) 9. Мої. Кесодпії. 8: 125-131; і допппзоп В. еї а!., Апаї!., Віоспет. 198: 268-277 (1991).

Використовуваний тут термін "Коп" означає константу асоціації зв'язувального білка (наприклад, антитіла) з антигеном з утворенням, наприклад, комплексу "антитіло/антиген", відомого фахівцям. "Коп" також називається "константою швидкості асоціації" або "Ка", і ці терміни є синонімами. Дана величина означає швидкість зв'язування антитіла з його антигеном-мішенню або швидкість утворення комплексу антитіла і антигену, і може бути також представлена нижченаведеним рівнянням:

Антитіло ("АБ") ж Антиген ("А9д")--сАр-Ад.

Використовуваний тут термін "Коя' означає константу дисоціації або "константу швидкості дисоціації" зв'язувального білка (наприклад, антитіла), наприклад, з комплексу "антитіло/антиген", відомого фахівцям. Дана величина означає швидкість дисоціації антитіла з його антигену-мішені або розділення комплексу АБ-Ад протягом певного періоду часу з утворенням вільного антитіла і антигену, і представлена нижченаведеним рівнянням:

Ар-Ад--АБр-АЗ.

Використовувані тут терміни "константа рівноважної дисоціації" або "Ко" є синонімами і означають величину, одержану шляхом вимірювання титрів при рівновазі або шляхом ділення константи швидкості дисоціації (Кої) на константу швидкості асоціації (Коп). Константа швидкості асоціації, константа швидкості дисоціації і константа рівноважної дисоціації використовуються для визначення афінності зв'язування антитіла з антигеном. Методи визначення констант швидкості асоціації і дисоціації добре відомі фахівцям. Застосування флуоресцентних методів дозволяє з високою мірою чутливості проаналізувати зразки в фізіологічних буферах при рівновазі. Можуть бути застосовані і інші експериментальні підходи, такі як аналіз ВіАсогеФ (аналіз на біомолекулярну взаємодію) і експериментальне обладнання (наприклад, обладнання, що постачається компанією ВіАсоге

Іпіегпайопаї АВ, а СЕ Неайрсаге сотрапу, Оррзаїа, Змедеп). Крім того, може бути також використаний аналіз КіпЕХАФ (кінетичний ексклюзійний аналіз), розроблений компанією Зарідупе Іпзігитепів (Воіве,

Ідано).

Терміни "мітка" і "детектована мітка" означають молекулу, яка приєднується до партнера, що специфічно зв'язується, такого як антитіло або аналіт, наприклад, для забезпечення реакції між членами пари специфічного зв'язування, такими як антитіло і аналіт, де вказана мітка є детектованою, а вказаний партнер по специфічному зв'язуванню, наприклад мічені таким чином антитіло або аналіт, також є "детектовано міченим". Таким чином, використовуваний тут термін "мічений зв'язувальний білок" означає білок з міткою, включеною в нього з метою ідентифікації вказаного зв'язувального білка. У одному з варіантів винаходу, міткою є детектований маркер, який може продукувати сигнал, детектований візуально або за допомогою приладів, наприклад за допомогою включення радіоактивно міченої амінокислоти або приєднання до поліпептиду біотинільних груп, які можуть бути детектовані поміченим авідином (наприклад, стрептавідином, який містить флуоресцентний маркер або має ферментативну активність, яка може бути детектована оптичними або колориметричними методами).

Прикладами міток для поліпептидів є, але не обмежуються ними, радіоїзотоп або радіонукліди (наприклад, ЗН, 720, 555, 90, 99ТГо, 111, 125|, 191), 177| у, 166Но і 5351711); хромогени, флуоресцентні мітки (наприклад, ФІТЦ, родамін, флуоресціюючі речовини лантанідної групи), ферментативні мітки (наприклад, пероксидаза хрону, люцифераза, лужна фосфатаза); хемілюмінесцентні маркери; біотинільні групи; попередньо визначені поліпептидні епітопи, розпізнавані вторинним репортером (наприклад, послідовностями пари "лейцинова блискавка", сайтами зв'язування з "другими" антитілами, металзв'язувальними доменами, епітопними мітками); і магнітні агенти, такі як хелатні комплекси гадолінію. Репрезентативними прикладами міток, найбільш часто використовуваних в імуноаналізах, є молекули, які випромінюють світло, наприклад сполуки акридинію, і молекули, що мають флуоресцентну дію, наприклад флуоресцеїн. У даній заявці описані і інші мітки. У зв'язку з цим потрібно зазначити, що сама така молекула не може бути детектовано міченою, але може стати детектованою після її реакції з іншою молекулою. Використання "детектовано міченої" молекули включає детектоване мічення останнього типу.

Термін "кон'югат антитіла" означає зв'язувальний білок, такий як антитіло, хімічно зв'язане з другою хімічною молекулою, такою як терапевтичний або цитотоксичний засіб. Використовуваний тут термін "агент" означає хімічну сполуку, суміш хімічних сполук, біологічну макромолекулу або екстракт, одержаний з біологічних матеріалів. Переважно, терапевтичними або цитотоксичними засобами є, але не обмежуються ними, коклюшний токсин, таксол, цитохалазин В, граміцидин 0, етидійбромід, еметин, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідроксіантрациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин р, 1-дегідротестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин і його аналоги або гомологи.

Використовувані тут терміни "кристал" і "кристалізований" стосуються білка, що зв'язується (наприклад, антитіла), або його антигензв'язувальної частини, які присутні у формі кристала. Кристали являють собою одну з форм твердого стану речовини, яка відрізняється від інших форм, таких як аморфний твердий стан або рідкий кристалічний стан. Кристали складаються з регулярних, повторюваних тривимірних кристалічних решіток атомів, іонів, молекул (наприклад, білків, таких як антитіла) або молекулярних агрегатів (включаючи комплекси Рабр/антиген). Ці тривимірні кристалічні решітки є впорядкованими відповідно до їх математичних співвідношень, які добре відомі фахівцям в даній галузі. Фундаментальна одиниця або структурний блок, повторювані в кристалах, називаються асиметричною коміркою. Повторення асиметричної комірки в даній структурі, яка відповідає добре визначеній кристалографічній симетрії, дозволяє називати її "елементарною коміркою" кристала.

Повторення цієї елементарної комірки за допомогою регулярної трансляції у всіх трьох вимірюваннях утворює кристал. Див. Зієде еї аї., СтуєїаїІй:акноп ої Мисіевїс Асіаз і Ргоїеїіп5, а Ргасіїса! Арргоасі, 2па еєа. (ОЮОисгиїх апа Сіеде, еаз.) (Охіога Опімегейу Ргез5, Мем/ уогК, 1999), розділ 1, стор. 1-16.

Термін "полінуклеотид" означає полімерну форму, що складається з двох або більше нуклеотидів, а саме рибонуклеотидів або дезоксирибонуклеотидів, або модифіковану форму, що складається з нуклеотидів будь-якого типу. Цей термін включає одноланцюжкову і дволанцюжкову форми ДНК.

Термін "ізольований полінуклеотид" означає полінуклеотид (наприклад, геномну ДНК, кДНК, синтетичну ДНК або їх комбінацію), який, за своїм походженням, не зв'язаний з повнорозмірним полінуклеотидом або з його частиною, разом з якими даний "ізольований полінуклеотид" виявляється в природі; або полінуклеотид, який функціонально приєднаний до полінуклеотиду, з яким він не зв'язаний в природі; або полінуклеотид, який не існує в природі як частина більш великої послідовності.

Термін "вектор" означає молекулу нуклеїнової кислоти, здатну здійснювати транспорт іншої нуклеїнової кислоти, з якою він був зв'язаний. Одним з типів вектора є "плазміда", що являє собою кільцеву дволанцюжкову ДНК-петлю, в яку можуть бути ліговані додаткові ДНК-сегменти. Іншим типом вектора є вірусний вектор, у вірусний геном якого можуть бути ліговані додаткові ДНК-сегменти. Деякі вектори мають здатність автономно реплікуватися в клітині-хазяїні, в яку вони були вбудовані (наприклад, бактеріальні вектори, що мають бактеріальний ориджин реплікації і епісомні вектори ссавців). Інші вектори (наприклад, неепісомні вектори ссавців) можуть бути інтегровані в геном клітини-хазяїна після їх введення в цю клітину-хазяїна, а потім реплікуватися разом з геномом хазяїна.

Крім того, деякі вектори здатні направляти експресію генів, до яких вони функціонально приєднані.

Такі вектори називаються тут "рекомбінантними експресійними векторами" (або просто "експресійними векторами"). У загальних рисах, експресійні вектори, застосовувані в методах рекомбінантних ДНК, часто присутні у формі плазмід. У даному описі терміни "плазміда" і "вектор" можуть бути синонімами, оскільки плазміда найчастіше використовується як вектор. Однак даний винахід включає і інші форми експресійних векторів, таких як вірусні вектори (наприклад, дефектні по реплікації ретровіруси, аденовіруси і аденоасоційовані віруси), які мають еквівалентні функції. У даному винаході можуть бути також використані РНК-варіанти векторів (включаючи вірусні РНК-вектори).

Термін "функціонально приєднаний" стосується положень в області стику (юкста-положень), де описані компоненти знаходяться в такому взаємозв'язку, який відповідним чином забезпечує їх функціонування. Регуляторна послідовність, "функціонально приєднана" до кодуючої послідовності, лігована так, щоб експресія кодуючої послідовності досягалася в умовах, сумісних з умовами дії регуляторних послідовностей. "Функціонально приєднаними" послідовностями є послідовності регуляції експресії, які є суміжними з геном, що представляє інтерес, і послідовності регуляції експресії, які здійснюють регуляцію гена, що представляє інтерес, іп їгап5, тобто розташовані не на молекулі гена, що представляє інтерес, а на молекулі іншої нуклеїнової кислоти, а також послідовності регуляції експресії, які розташовані на тій же самій молекулі нуклеїнової кислоти, але на деякій відстані від гена, що представляє інтерес. Використовуваний тут термін "послідовність регуляції експресії" означає полінуклеотидні послідовності, які необхідні для експресії і процесингу кодуючих послідовностей, з якими вони ліговані. Послідовностями регуляції експресії є відповідні послідовності ініціації транскрипції, послідовності термінації транскрипції, промотори і енхансерні послідовності; сигнали для ефективного РНК-процесингу, такі як сигнали сплайсингу і поліаденілювання; послідовності, що стабілізують цитоплазматичну мРНК; послідовності, що підвищують ефективність трансляції (тобто консенсусна послідовність Козака); послідовності, що підвищують стабільність білка, і, якщо це необхідно, послідовності, що підвищують рівень секреції білка. Природа таких регуляторних послідовностей варіюється залежно від типу організму-хазяїна, наприклад, в прокаріотах такими регуляторними послідовностями звичайно є промотор, сайт зв'язування з рибосомою і послідовність термінації транскрипції, а в еукаріотах такими регуляторними послідовностями звичайно є промотори і послідовність термінації транскрипції. Термін "регуляторні послідовності" включає компоненти, присутність яких грає важливу роль в експресії і процесингу, і ці послідовності можуть також включати додаткові компоненти, присутність яких є переважною, наприклад лідерні послідовності і послідовності партнерів по злиттю.

Термін "трансформація" означає будь-який спосіб, за допомогою якого екзогенна нуклеїнова кислота (наприклад, молекула ДНК) може бути введена в клітину-хазяїна. Трансформація може бути здійснена в природних умовах або в умовах, штучно створених різними методами, добре відомими фахівцям. Трансформація може бути здійснена будь-яким методом, придатним для вбудовування чужорідних послідовностей нуклеїнової кислоти в прокаріотичні або еукаріотичні клітини-хазяїни. Цей метод вибирають, виходячи з трансформованої клітини-хазяїна, і таким методом може бути, але не обмежується ними, одержання плазміди, проникаючої через клітинну мембрану, інфікування вірусом, електропорація, ліпофекція і бомбардування частинками. Вказаними ""трансформованими" клітинами є стабільно трансформовані клітини, в яких вбудована ДНК має здатність реплікуватися або як автономно реплікована плазміда, або як частина хромосоми хазяїна. Такими клітинами також є клітини, які тимчасово експресують вбудовану ДНК або РНК протягом обмеженого періоду часу.

Термін "рекомбінантна клітина-хазяїн" (або просто "клітина-хазяїн") означає клітину, в яку була вбудована екзогенна ДНК. У одному з варіантів винаходу клітина-хазяїн включає дві або більше (наприклад, множину) нуклеїнових кислот, що кодують антитіла, наприклад клітини-хазяїни, описані, наприклад, в патенті США Мо 7262028. Ці терміни стосуються не тільки клітини, що конкретно розглядається, але також і потомства такої клітини. Оскільки в подальших генераціях можуть бути присутніми деякі модифікації, зумовлені або мутацією, або впливом навколишнього середовища, то таке потомство, фактично, не може бути ідентичним батьківській клітині, але воно також входить в обсяг використовуваного тут терміна "клітина-хазяїн"'. У одному з варіантів винаходу клітинами- хазяїнами є прокаріотичні і еукаріотичні клітини, вибрані з царства живих організмів. У іншому варіанті винаходу еукаріотичними клітинами є клітини найпростіших, грибів, рослин і тварин. У іншому варіанті винаходу клітинами-хазяїнами є, але не обмежуються ними, прокаріотична клітинна лінія Е.соїї;

клітинні лінії ссавців СНО, НЕК 293, СО5, М5О, 5Р2 і РЕК.Сб; клітинна лінія комах 519 і клітинна лінія грибів, таких як Засспаготусез сегемівзіає.

Для одержання рекомбінантних ДНК, а також для олігонуклеотидного синтезу, культивування і трансформації тканин можуть бути застосовані стандартні методи (наприклад, електропорація, ліпофекція). Методи із застосуванням ферментативних реакцій і методи очищення можуть бути здійснені відповідно до інструкцій виробників або згідно зі стандартними процедурами, відомими фахівцям, або відповідно до опису в даній заявці. Вищезазначені методи і процедури можуть бути здійснені стандартними методами, добре відомими фахівцям, і описаними в різних загальних і спеціальних керівництвах, цитованих і обговорюваних в даній заявці. Див., наприклад, Ззатьгоок еї аї.,

Моїесшіаг СіІопіпд: А І абогагу Мапиаї, зесопа еєа. (Сода 5ргіпд Нагброг Гарогаїгу Ргез55, Соїйа Зргіпд

Наброг, 1989).

Термін "трансгенний організм", відомий фахівцям, означає організм, що має клітини, які містять трансген, де вказаний трансген, введений в організм (або "предок" такого організму), експресує поліпептид, який в природі не експресується в даному організмі. "Трансген" являє собою ДНК- конструкцію, яка стабільно і функціонально інтегрується в геном клітини, від якої походить такий трансгенний організм, і направляє експресію кодованого генного продукту в клітини або тканини трансгенного організму одного або декількох типів.

Використовувані тут терміни "регуляція" і "модуляція" є синонімами і означають зміни або модифікації активності молекули, що представляє інтерес (наприклад, біологічної активності ПОГ І 4).

Модуляція може приводити до збільшення або зниження величини певної активності або функції молекули, що представляє інтерес. Репрезентативними активністю або функціями молекули є, але не обмежуються ними, зв'язувальні властивості, ферментативна активність, активація клітинного рецептора і передача сигналу.

Відповідно до цього, термін "модулятор" означає сполуку, здатну змінювати або модифікувати активність або функцію молекули, що представляє інтерес (наприклад, біологічну активність ПОГ І 4).

Так, наприклад, модулятор може сприяти збільшенню або зниженню величини певної активності або функції молекули, що представляє інтерес, в порівнянні з величиною активності або функції, спостережуваною за відсутності даного модулятора. У деяких варіантах винаходу модулятором є інгібітор, який сприяє зниженню величини щонайменше однієї активності або функції молекули.

Репрезентативними інгібіторами є, але не обмежуються ними, білки, пептиди, антитіла, пептидні антитіла, вуглеводи і невеликі органічні молекули. Пептидні антитіла описані, наприклад, в публікації

РСТ Мо МУО01/83525.

Термін "агоніст" означає модулятор, який, при його контактуванні з молекулою, що представляє інтерес, викликає збільшення величини певної активності або функції даної молекули, в порівнянні з величиною активності або функції, спостережуваною за відсутності даного агоніста. Конкретними агоністами, що представляють інтерес, є, але не обмежуються ними, члени шляху передачі сигналу

Моїсй, поліпептиди і нуклеїнові кислоти 014, вуглеводи або будь-які інші молекули, які зв'язуються з рі 4.

Використовувані тут терміни "антагоніст" або "інгібітор" означають модулятор, який, при його контактуванні з молекулою, що представляє інтерес, викликає зниження величини певної активності або функції даної молекули, в порівнянні з величиною активності або функції, спостережуваною за відсутності даного антагоніста. Конкретними антагоністами, що представляють інтерес, є антагоністи, які блокують або модулюють біологічну або імунологічну активність 0/4, зокрема людського Бі | 4 (прі 4). Антагоністами і інгібіторами ПОЇ 4 можуть бути, але не обмежуються ними, білки, нуклеїнові кислоти, вуглеводи або будь-які інші молекули, які зв'язуються з ПОГ І 4 і/або з ОБІГ 4 гризунів.

Використовуваний тут термін "ефективна кількість" означає кількість терапевтичного засобу, яка є достатньою для ослаблення тяжкості розладу або одного або декількох його симптомів і/або для зниження їх тривалості, і для попередження прогресування розладу, а також для досягнення ремісії даного розладу, для запобігання або попередження виникнення рецидивів, розвитку, початку або прогресування одного або декількох симптомів, асоційованих з даним розладом, для виявлення даного розладу або для посилення або поліпшення профілактичного(их) або терапевтичного(их) ефекту(ів) іншого терапевтичного засобу (наприклад, профілактичного або терапевтичного засобу).

Терміни "пацієнт" і "індивідуум" можуть бути використані тут як синоніми і означають тварину, таку як ссавець, включаючи приматів (наприклад, людину, мавп і шимпанзе), ссавців, що не є приматами (наприклад, корів, свиней, верблюдів, лам, коней, кіз, кроликів, овець, хом'ячків, морських свинок, кішок, собак, щурів, мишей і китів), птахів (наприклад, качок або гусей) і акул. При цьому переважним пацієнтом або індивідуумом є людина, наприклад людина, яка проходить лікування або обстеження з приводу якого-небудь захворювання, розладу або стану; людина з ризиком розвитку у нього даного захворювання, розладу або стану; людина, страждаюча даним захворюванням, розладом або станом; іабо людина, що піддається лікуванню даного захворювання, розладу або стану. При цьому більш переважно, якщо даний пацієнт або індивідуум піддається лікуванню з приводу раку або іншого захворювання або обстеженню на наявність раку або іншого захворювання, при якому наявне порушення експресії 0 4 підтверджує наявність раку або іншого захворювання, а інгібування або пригнічення активності 01 | 4 є бажаним для лікування раку або іншого захворювання.

Використовуваний тут термін "зразок" застосовується в найбільш широкому розумінні.

Використовуваний тут термін "біологічний зразок" включає, але не обмежується ними, будь-яку кількість речовини, взяту у живої істоти або у раніше живої істоти. Такими живими істотами є, але не обмежуються ними, людина, миші, щури, мавпи, собаки, кролики і інші тварини. Вказаними речовинами є, але не обмежуються ними, кров (наприклад, цільна кров), плазма, сироватка, сеча, амніотична рідина, синовіальна рідина, ендотеліальні клітини, лейкоцити, моноцити, інші клітини, органи, тканини, кістковий мозок, лімфоузли і селезінка.

Терміни "компонент", "компоненти" і "цшонайменше один компонент" означають іммобілізоване антитіло, детектуюче або кон'юговане антитіло, контроль, калібрувальний маркер, серію калібрувальних маркерів, набір тест-сполук для визначення чутливості, контейнер, буфер, розріджувач, сіль, фермент, кофактор для ферменту, детектуючий реагент, реагент/розчин для попередньої обробки, субстрат (наприклад, у вигляді розчину), блокувальний розчин і т. п., які можуть бути включені в набір для аналізу тест-зразка, такого як проба сечі, сироватки або плазми пацієнта, який проводиться відповідно до описаних тут методів і інших методів, відомих фахівцям. Таким чином, в контексті даного винаходу терміни "цдонайменше один компонент", "компонент" і "компоненти" можуть включати поліпептид або інші аналіти, описані вище, такі як композиція, що містить аналіт, такий як поліпептид, необов'язково іммобілізований на твердому носії, наприклад, за допомогою зв'язування з антитілом проти аналіту (наприклад, проти поліпептиду). Деякі компоненти можуть бути присутніми в розчині або в ліофілізованій формі, яку потім розводять для використання в аналізі.

Термін "ризик" означає можливість або імовірність здійснення конкретної події або на даний час, або в який-небудь момент в майбутньому. "Стратифікація ризику" означає набір відомих клінічних факторів ризику, який дозволяє лікарю класифікувати пацієнтів як пацієнтів з низьким, помірним, високим або дуже високим ризиком розвитку конкретного захворювання, розладу або стану.

Терміни "специфічний" і "специфічність", застосовувані в зв'язку з взаємодією між членами пари, що специфічно зв'язується, наприклад антигену або його фрагмента і антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, стосуються селективної реактивності даної взаємодії. Термін "специфічно зв'язується 3 ..." і аналогічні терміни стосуються здатності антитіл (або їх антигензв'язувальних фрагментів) специфічно зв'язуватися з аналітом (або з його фрагментом), але не з іншими молекулами. "Партнер по специфічному зв'язуванню" являє собою член пари, що специфічно зв'язується. Пара, що специфічно зв'язується, містить дві різних молекули, кожна з яких специфічно зв'язується одна з одною по хімічному або фізичному механізму. Тому крім пари, що специфічно зв'язується, такої як антиген-антитіло, можуть бути використані і інші пари, що специфічно зв'язуються, які можуть включати біотин і авідин (або стрептавідин), вуглеводи і лектини, комплементарні нуклеотидні послідовності, молекули ефекторів і рецепторів, кофактори і ферменти, інгібітори ферментів і ферменти і т. п. Крім того, пари, що специфічно зв'язуються, можуть включати члени, які є аналогами вихідних членів, що специфічно зв'язуються, таких як, наприклад, аналіт-аналог. Імунореактивними членами, що специфічно зв'язуються, є антигени, фрагмент антигену і антитіла, включаючи моноклональні і поліклональні антитіла, а також комплекси, фрагменти і варіанти (включаючи фрагменти варіантів), незалежно від того, чи є вони виділеними або рекомбінантно продукованими.

Використовуваний тут термін "варіант" означає поліпептид, який, по своїй амінокислотній послідовності, відрізняється від даного поліпептиду (наприклад, поліпептиду 0/4 або анти-ОІ І 4 антитіла), що зумовлено додаванням (наприклад, інсерцією), делецією або консервативною заміною амінокислот, але при цьому зберігає біологічну активність даного поліпептиду (наприклад, варіант рі 4 може конкурувати з 01 І 4 дикого типу за зв'язування з анти-О1І | 4 антитілом, якщо варіант О/ І 4 зберігає вихідний антигензв'язувальний сайт (епітоп) 01 І 4 дикого типу). Консервативна амінокислотна заміна, тобто заміна однієї амінокислоти на іншу амінокислоту з аналогічними властивостями (наприклад, гідрофільністю і мірою розподілу заряджених областей), може бути легко здійснена фахівцем, оскільки звичайно така заміна є дуже несуттєвою. Такі незначні заміни можуть бути, частково, ідентифіковані шляхом визначення гідропатичного індексу амінокислот, відомого фахівцям (див., наприклад, Куїє еї аї.,.). Мої. ВіоЇ. 157: 105-132 (1982)). Гідропатичний індекс амінокислот визначають, виходячи з їх гідрофобності і заряду. Фахівцям в даній галузі відомо, що при заміні амінокислот на амінокислоти з аналогічними гідропатичними індексами функції білка можуть бути збережені. У одному з аспектів винаходу, амінокислоти, що мають гідропатичні індекси 52, є заміненими. Гідрофільність амінокислот може бути також використана для виявлення замін, які мають приводити до одержання білків, що зберігають свою біологічну функцію. Визначення гідрофільності амінокислот в даному пептиді дозволяє обчислити найбільшу локальну середню гідрофільність цього пептиду, яка, як повідомлялося, є цінним параметром, добре корелюючим з антигенністю і імуногенністю (див., наприклад, патент США Мо 4554101). Заміна амінокислот, які мають аналогічні значення гідрофільності, може приводити до одержання пептидів, які зберігають біологічну активність,

наприклад імуногенність, як відомо фахівцям. У одному з аспектів винаходу кожну амінокислоту замінюють амінокислотою, що має величину гідрофільності в межах 22. На індекс гідрофобності і на величину гідрофільності амінокислот впливає конкретний бічний ланцюг цієї амінокислоти. Згідно з цим спостереженням, вибір амінокислотних замін, сумісних з біологічною функцією, залежить від відносної схожості амінокислот, зокрема від схожості бічних ланцюгів цих амінокислот, що може бути виявлено по гідрофобності, гідрофільності, заряду, розміру і інших властивостях амінокислот. Термін "варіант" може бути також використаний для опису поліпептиду або його фрагмента, який був підданий альтернативному процесингу, такому як протеоліз, фосфорилування або інша посттрансляційна модифікація, і який зберігає свою біологічну активність або реактивність відносно антигену, наприклад здатність зв'язуватися з 0 4. Використовуваний тут термін "варіант" включає фрагменти варіанта, якщо це не суперечить контексту опису винаходу.

Використовуваний тут термін "зразок" застосовується в найбільш широкому розумінні.

Використовуваний тут термін "біологічний зразок" включає, але не обмежується ними, будь-яку кількість речовини, взяту у живої істоти або у раніше живої істоти. Такими живими істотами є, але не обмежуються ними, людина, миші, щури, мавпи, собаки, кролики і інші тварини. Вказаними речовинами є, але не обмежуються ними, кров, сироватка, сеча, синовіальна рідина, клітини, органи, тканини, кістковий мозок, лімфоузли і селезінка.

І. Антитіла, які зв'язуються з людським ОГ І 4

У одному з аспектів даний винахід стосується ізольованих людських моноклональних антитіл або їх антигензв'язувальних частин, які зв'язуються з 0/4 з високою афінністю, низькою швидкістю дисоціації і/або з високою нейтралізуючою активністю. Такі людські антитіла або їх антигензв'язувальні частини, які зв'язуються з 01 4, переважно можуть бути використані в медицині як терапевтичні засоби, які можуть бути введені людині і дають мінімальну імунну відповідь або взагалі не продукують імунної відповіді у людини на терапевтичний 0 | 4-зв'язувальний білок, що вводиться. Відповідно до цього, у пацієнта може спостерігатися сприятливий ефект від введення таких повністю людських І І 4-зв'язувальних білків в процесі всього курсу повторних введень. У інших аспектах даний винахід стосується химерних антитіл, які зв'язуються з 0114, ії СОК-прищеплених антитіл або їх антигензв'язувальних частин, які зв'язуються з 0/4. Переважними антитілами або їх частинами є ізольовані антитіла. Переважними антитілами згідно з винаходом є нейтралізуючі людські анти-ОІ І 4 антитіла.

А. Спосіб одержання анти-О1 | 4 антитіл

Антитіла згідно з винаходом можуть бути одержані будь-яким з ряду відомих методів. Переважним методом є технологія представлення мРНК РКОГизіоп, описана в прикладі 2 цієї заявки. Іншим методом є імунізація трансгенних гризунів (наприклад, трансгенних мишей), які несуть функціональний комплемент людського гена імуноглобуліну, людським 0114 або його антигензв'язувальною частиною, з подальшим проведенням стандартної гібридомної технології для одержання гібридом, експресуючих повністю людські моноклональні антитіла, які зв'язуються з людським 0114. Рекомбінантні людські антитіла, одержані таким методом, мають варіабельні і константні області, що походять від послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії. Такі методи дозволяють одержати повністю людські 01 І 4-зв'язувальні білки і не вимагають якого-небудь додаткового проведення одного або декількох раундів гуманізації з метою зниження рівня антигенності, джерелом якої є нелюдські молекули моноклонального анти-О1 | 4 антитіла. Відповідно до цього, методи, що проводяться з використанням матеріалу, що походить від множини видів, є менш переважними, але, проте, вони можуть бути застосовані.

Потрібно також зазначити, що використовуваний тут термін "моноклональне антитіло" не обмежується антитілами, одержаними із застосуванням гібридомної технології. Термін "моноклональне антитіло" означає антитіло, що походить від одного клону, включаючи будь-які еукаріотичні, прокаріотичні або фагові клони, незалежно від методу, яким воно було одержане.

Додаткові аспекти різних методів, які можуть бути застосовані для одержання молекул моноклональних анти-О/- І 4 антитіл згідно з винаходом, описані нижче. 1. Одержання анти-О1| | 4 моноклональних антитіл за допомогою гібридомної технології

Моноклональні антитіла можуть бути одержані із застосуванням методів широкого ряду, відомих фахівцям, включаючи застосування гібридомних технологій, рекомбінантних методів і методів фагового представлення або їх комбінацій. Так, наприклад, моноклональні антитіла можуть бути продуковані гібридомними методами, включаючи методи, відомі фахівцям і описані, наприклад, в публікації Нагіоуи еї аї., Апіїбодіев5: А І арогаїгу Мапиаї, зесопа еайіоп (Соїдй 5ргіпд Нагрог І арогаїогу

Ргезв, Сода бргіпд Нагброг, 1988); Наттетійна єї аї., Мопосіопа! Апіїродієз апа Т-Сеї! Нубгідотавз, радев5 563-681 (ЕІбеміег, Мем/ МогКк, 1981) (вказані публікації у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання). Методи продукування і скринінгу специфічних антитіл із застосуванням гібридомної технології є рутинними і добре відомі фахівцям. У одному з варіантів даний винахід стосується способів одержання моноклональних антитіл, а також антитіл, одержаних способом, який включає культивування гібридомних клітин, секретуючих антитіло згідно з винаходом, де переважно вказану гібридому одержують шляхом злиття спленоцитів, виділених у мишей, імунізованих антигеном згідно з винаходом, з мієломними клітинами, а потім скринінгу гібридом, одержаних за допомогою такого злиття, на гібридомні клони, секретуючі антитіло, здатне зв'язуватися з поліпептидом згідно з винаходом. Коротко, миша може бути імунізована антигеном 014. У переважному варіанті винаходу антиген 0/4 вводять разом з ад'ювантом для стимуляції імунної відповіді. Такими ад'ювантами є повний або неповний ад'ювант Фрейнда, КІВІ (мурамілдипептиди) або ІЗСОМ (імуностимулюючі комплекси). Такі ад'юванти можуть захищати поліпептид від швидкого диспергування шляхом його поміщення в місцевий депозитарій, або вони можуть містити речовини, стимулюючі секрецію факторів хазяїна, які індукують хемотаксис макрофагів і інших компонентів імунної системи. Якщо вводиться поліпептид, то схема імунізації буде переважно включати два або більше введень поліпептиду протягом декількох тижнів, однак, даний поліпептид може бути також введений і один раз.

Після імунізації тварини антигеном 01 | 4, у цієї тварини можуть бути продуковані антитіла і/або від цієї тварини можуть бути одержані антитілопродукуючі клітини. Сироватку, що містить анти-ОІ І 4 антитіло, одержують шляхом забору крові у тварини або її умертвіння. Сироватка може бути використана в тому вигляді, в якому вона була одержана від тварини, і з цієї сироватки може бути виділена імуноглобулінова фракція, або з цієї сироватки можуть бути виділені анти-О1/ | 4 антитіла.

Одержані таким чином сироватка або імуноглобуліни є поліклональними і мають неоднорідний набір властивостей.

Після детектування імунної відповіді, антитіла, специфічні до антигену 0114, наприклад, детектують в мишачій сироватці, а потім у мишей витягують селезінку і виділяють спленоцити. Потім спленоцити піддають злиттю добре відомими методами з будь-якими придатними мієломними клітинами, наприклад з клітинами, що походять від клітинної лінії 5Р20О, наявної в Американській колекції типових культур (АТСС, Мапаззав, Мігдіпіа, О5). Гібридоми відбирають і клонують шляхом лімітуючого розведення. Після цього гібридомні клони аналізують методами, відомими фахівцям, на клітини, секретуючі антитіла, здатні зв'язуватися з 0 Г 4. Асцитна рідина, яка звичайно містить високі рівні антитіл, може бути одержана шляхом імунізації мишей позитивними гібридомними клонами.

У іншому варіанті винаходу антитілопродукуючі імморталізовані гібридоми можуть бути одержані від імунізованої тварини. Після імунізації тварин умертвляють, і В-клітини селезінки піддають злиттю з імморталізованими мієломними клітинами методом, добре відомим фахівцям. Див., наприклад, Нагіом/ апа Гапе, див. вище. У переважному варіанті винаходу мієломні клітини не секретують імуноглобулінові поліпептиди (несекреторна клітинна лінія). Після злиття і відбору на резистентність до антибіотиків, гібридоми скринують з використанням 014 або його частини, або клітин, експресуючих 01 4. У переважному варіанті винаходу попередній скриниг здійснюють за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІЗА) або радіоімуноаналізу (РІА), і переважно ЕЇГ І5А.

Приклад ЕГІЗА-скринінгу наводиться в публікації заявки РСТ Мо УМО 00/37504, яка вводиться в даний опис за допомогою посилання.

Гібридоми, продукуючі анти-О1І 4 антитіла, відбирають, клонують, а потім скринують на потрібні властивості, включаючи стабільний ріст гібридом, високий рівень продукування антитіл і бажані властивості антитіл, як обговорюється нижче. Гібридоми можуть бути культивовані і розмножені іп мімо у сингенних тварин, у тварин, у яких відсутня імунна система, наприклад у "голих" мишей, або іп міго в клітинній культурі. Методи відбору, клонування і розмноження гібридом добре відомі середньому фахівцю в даній галузі.

У переважному варіанті винаходу гібридомами є мишачі гібридоми, описані вище. У іншому варіанті винаходу гібридоми продукують у тварин, що не є людиною або мишами, наприклад у таких тварин, як щури, вівці, свині, кози, велика рогата худоба або коні. У ще одному переважному варіанті винаходу, гібридомами є людські гібридоми, в яких людська несекреторна мієлома гібридизована з людськими клітинами, експресуючими анти-О1І І 4 антитіло.

Фрагменти антитіл, що розпізнають специфічні епітопи, можуть бути одержані відомими методами.

Так, наприклад, Еабр- і Е(аб)»-фрагменти згідно з винаходом можуть бути одержані шляхом протеолітичного розщеплення молекул імуноглобуліну з використанням ферментів, таких як папаїн (для одержання Рар-фрагментів) або пепсин (для одержання Е(ар')»5-фрагментів). Е(ар')»-фрагменти містять варіабельну область, константну область легкого ланцюга і домен СНІ важкого ланцюга. 2. Одержання анти-0І І 4 моноклональних антитіл з використанням 5ІАМ

У іншому аспекті винаходу рекомбінантні антитіла одержують з одиночних виділених лімфоцитів відповідно до процедури, званої фахівцями методом відбору антитілопродукуючих лімфоцитів (ЗІ АМ), описаним в патенті США Мо 5627052, в публікації заявки РСТ УМО 92/02551 і в публікації Вабсоск 9.5. еї аі!., Ргос. Маї. Асад. сі. ОБА 93: 7843-7848 (1996). В цьому методі одиночні клітини, секретуючі антитіла, що представляють інтерес, наприклад лімфоцити, що походять від будь-якої імунізованої тварини, описаної в розділі ІА.1 (див. вище), скринують за допомогою аналізу методом антигенспецифічних гемолітичних бляшок, де антиген 014, субодиницю 0114 або її фрагмент піддають взаємодії з баранячими еритроцитами за допомогою лінкера, такого як біотин, і використовують для ідентифікації одиночних клітин, секретуючих антитіла, специфічні до 0/4. Після ідентифікації антитілосекретуючих клітин, що представляють інтерес, кКДНК варіабельної області важкого і легкого ланцюгів витягують з клітин за допомогою ПЛР із зворотною транскриптазою (З3тТ-

ПЛР), після чого такі варіабельні області можуть бути експресовані в оточенні відповідних константних областей імуноглобулінів (наприклад, людських константних областей) в клітинах-хазяїнах ссавців, таких як клітини СО5 або СНО. Ці клітини-хазяїни, трансфіковані ампліфікованими послідовностями імуноглобуліну, що походять від іп мімо відібраних лімфоцитів, можуть бути піддані додатковому аналізу і відбору іп міго, наприклад, шляхом пенінгу трансфікованих клітин з метою виділення клітин, експресуючих антитіла проти 0/4. Потім ампліфіковані послідовності імуноглобуліну можуть бути модифіковані іп міго, наприклад методами афінного дозрівання іп міо. Див., наприклад, публікацію заявки РСТ УМО 97/29131 і публікацію заявки РОСТ УУО 00/56772. 3. Одержання анти-ОІ І 4 моноклональних антитіл з використанням трансгенних тварин

У іншому варіанті винаходу антитіла продукують шляхом імунізації тварини, яка не є людиною і містить деякими або всім локуси людських імуноглобулінів, антигеном 0/4. У переважному варіанті винаходу тварина, що не є людиною, являє собою трансеенну мишу ХЕМОМОШ5БЕФ, тобто штучно сконструйований штам миші, який містить великі фрагменти локусів людського імуноглобуліну і є дефіцитним по продукуванню мишачого антитіла. Див., наприклад, сгееп еї аї., Майїшге Сепеїїісв5 7:1 3- 21 (1994), і патенти США МоМо 5916771, 5939598, 5985615, 5998209, 6075181, 6091001, 6114598 і 6130364. Див. також публікації заявок РСТ УМО 91/10741, УМО 94/02602, УМО 96/34096, УМО 96/33735,

МО 98/16654, УМО 98/24893, УМО 98/50433, УМО 99/45031, УМО 99/53049, ММО 00/09560 і УМО 00/037 504.

Трансгенна миша ХЕМОМОИШ5БЕЄФ продукує репертуар повністю людських антитіл, подібних антитілам дорослої людини, і генерує антигенспецифічні людські моноклональні антитіла. Трансгенна миша

ХЕМОМОИШБЕФ містить приблизно 8095 репертуару людських антитіл, що зумовлено введенням фрагментів локусів людського важкого ланцюга і х локусів людського легкого ланцюга, що мають розмір мегаоснов і конфігурацію зародкових ліній МАС. Див. публікації Мепае? еї аї!., Маиге Сепеїїс5 15: 146-156 (1997), Стеєп 8 УаКороміїв У. Ехр. Мед. 188: 483-495 (1998), опис яких вводиться в даний документ за допомогою посилання. 4. Одержання анти-0/ 1/4 моноклональних антитіл з використанням бібліотек рекомбінантних антитіл

Методи іп міго можуть бути також застосовані для одержання антитіл згідно з винаходом, де вказану бібліотеку антитіл скринують для ідентифікації антитіла, що має потрібну специфічність зв'язування з 0 І 4. Методи такого скринінгу бібліотек рекомбінантних антитіл добре відомі фахівцям і включають методи, описані, наприклад, в патенті США Мо 5223409 (І адпег еї аї.); в публікації заявки

РСТ Мо МО 92/18619 (Капо еї а1.); в публікації заявки РСТ Мо УМО 91/17271 (ромег еї аї.); в публікації заявки РСТ Мо УМО 92/20791 (УмМіпег еї а1.); в публікації заявки РСТ Мо УУО 92/15679 (Маткіапа еї аї.); в публікації заявки РСТ Мо МО 93/01288 (Вгейіпуд еї а!.); в публікації заявки РСТ Мо УМО 92/01047 (МсСанегіу еї а1.); в публікації заявки РСТ Мо УУО 92/09690 (Саїтага еї а1.); Риснз еї аї!., Віо/Тесппоіоду, 9: 1369-1372 (1991); Нау єї аЇ., Нит. Апіїрод. Нубгідотав, З: 81-85 (1992); Низе еї аї., Зсієпсе, 246: 1275-1281 (1989); МеСанНепу еї аї!., Майте, 348: 552-554 (1990); Сиінйне єї аІ., ЕМВО 3., 12: 725-734 (1993); Наужіпз вї аї., У. Мої. Віої, 226: 889-896 (1992); СіасКвоп вї а!., Мате, 352: 624-628 (1991); Стат еї аї.,, Ргос. Маї. Асад. бсі. ОБА, 89: 3576-3580 (1992); Сатага еї аї., Віо/Тесппоіоду, 9: 1373-1377 (1991); Ноодепроот еї аї., Мисі Асіаз Вев., 19: 4133-4137 (1991); Ваїбаз еї аї., Ргос. Маї). Асад. 5сі.

ИБА, 88: 7978-7982 (1991); в публікації заявки на патент США Мо 2003/0186374 і в публікації заявки

РСТ Мо МО 97/29131, які вводяться в даний опис за допомогою посилання.

Бібліотека рекомбінантних антитіл може бути одержана у індивідуума, імунізованого 0/4 або частиною ОБІГ 4. Альтернативно, бібліотека рекомбінантних антитіл може бути одержана у індивідуума, що раніше не брав участі в експериментах, тобто у індивідуума, який не був імунізований ОІ 1 4, наприклад, може бути одержана бібліотека людських антитіл, що походить від людини, яка не була імунізований людським 014. Антитіла згідно з винаходом відбирають шляхом скринінгу бібліотеки рекомбінантних антитіл з використанням пептиду, що містить людський 0/4, з метою одержання антитіл, що розпізнають 04. Методи проведення такого скринінгу і відбору добре відомі фахівцям і описані в публікаціях, вказаних в попередньому параграфі. Для відбору антитіл згідно з винаходом, що мають конкретну афінність зв'язування з Бі | 4, таких як антитіла, які дисоціюють з людського ОІ І 4 з конкретною константою швидкості дисоціації Кої, може бути застосований добре відомий метод поверхневого плазмонного резонансу, який дозволяє проводити відбір антитіл, що мають потрібну константу швидкості дисоціації Кож. Для відбору антитіл згідно з винаходом, що мають конкретну активність нейтралізації БОЇ 1/4, таких як антитіла з конкретним значенням ІСво, можуть бути застосовані стандартні методи, відомі фахівцям в галузі аналізу на інгібування активності ОІ І 4.

У одному з аспектів даний винахід стосується виділеного антитіла або його антигензв'язувальної частини, які зв'язуються з людським 014. Переважним антитілом є нейтралізуюче антитіло. У різних варіантах винаходу вказаним антитілом є рекомбінантне антитіло або моноклональне антитіло. Так, наприклад, антитіла згідно з винаходом можуть бути також одержані різними методами фагового представлення, відомими фахівцям. У методах фагового представлення функціональні домени антитіл представлені на поверхні фагових частинок, які несуть полінуклеотидні послідовності, що кодують ці домени. Такий фаг може бути використаний для представлення антигензв'язувальних доменів, експресованих з репертуару або комбінаторної бібліотеки антитіл (наприклад, людських або мишачих антитіл). Фаг, експресуючий антигензв'язувальний домен, який зв'язується з антигеном, що представляє інтерес, може бути відібраний або ідентифікований з використанням антигену, наприклад міченого антигену або антигену, зв'язаного з твердою поверхнею або сферою або іммобілізованого на цій поверхні або сфері. Фагом, використовуваним в цих методах, звичайно є нитчастий фаг, що включає зв'язувальні домени фагів Та і М13, експресовані з фага, що має домени Бар-фрагмента, Ем- фрагмента або стабілізованого дисульфідом Еу-фрагмента антитіл, рекомбінантно приєднані до білка фагового гена І або МІ. Репрезентативними методами фагового представлення, які можуть бути застосовані для одержання антитіл згідно з винаходом, є методи, описані ВгіпКтапп еї аї.,.). Іттипої.

Меїподз 182: 41-50 (1995); Атез еї аї., уУ. Іттипої. Меїшоаз 184: 177-186 (1995); КешШеброгоцаон еї аї.,

Еишг. 9У. Іттипої. 24: 952-958 (1994); Регвіс єї аЇ., Сепе 187:9-18 (1997); Випоп еї аї., Адмапсез іп

Іттипоіоду 57: 191-280 (1994); в заявці РСТ Мо РСТ/ЗВУ91/01134; в публікаціях заявок РСТ УМО 90/02809; УМО 9110737; УМО 92/01047; УМО 92/18619; УМО 93/11236; УМО 95/15982; УМО 95/20401; і в патентах США МоМо 5698426; 5223409; 5403484; 5580717; 5427908; 5750753; 5821047; 5571698; 5427908; 5516637; 5780225; 5658727; 5733743 і 5969108, які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання.

Як описано в цитованих вище роботах, після відбору фага, антитілокодуючі області фага можуть бути виділені і використані для одержання повнорозмірних антитіл, включаючи людські антитіла або будь-який інший потрібний антигензв'язувальний фрагмент, і експресовані в будь-якому потрібному хазяїні, включаючи клітини ссавців, клітини комах, клітини рослин, дріжджі і бактерії, наприклад, детально описані нижче. Так, наприклад, способи рекомбінантного продукування Рарб-, Рарб"- і Е(аб)»г- фрагментів можуть бути також виконані із застосуванням методів, відомих фахівцям, таких як методи, описані в публікації заявки РСТ УМО 92/22324 і в публікаціях Миїйїпах еї а!., ВіоТесппідце5 12(6): 864- 869 (1992); і замаї єї аї!.,, Ат. у. Кергод. Іттипої. 34: 26-34 (1995); і Вецег вії аІ., Зсівепсе 240: 1041-1043 (1988) (вказані публікації у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання).

Прикладами методів, які можуть бути застосовані для продукування одноланцюжкових Еу-фрагментів і антитіл, є методи, описані в патентах США 4946778 і 5258498; і в публікаціях Ни:5іоп еї аї!., Меїйод5 іп

Епгутоїіоду 203: 46-88 (1991); пи еї а!., Ргос. Маї!. Асай. осі. ОБА 90: 7995-7999 (1993); і ЗКеїта еї аї.,

Зсіепсе 240: 1038-1041 (1988).

Як альтернатива скринингу бібліотек рекомбінантних антитіл методом фагового представлення, використовуваному для ідентифікації антитіл згідно з винаходом, можуть бути застосовані і інші методи, відомі фахівцям в галузі скринінгу великих комбінаторних бібліотек Одним з типів альтернативної експресійної системи є система, в якій бібліотеку рекомбінантних антитіл експресують у вигляді гібриду "РНК-білок", як описано в публікації заявки РСТ УМО 98/31700 (52051аК і Кобегів) і в публікації Корегіх 5 57о51аК, Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 94: 12297-12302 (1997). В цій системі ковалентне зв'язування здійснюється між мРНК і пептидом або білком, які вона кодує, за допомогою іп міїго трансляції синтетичних мРНК, що несуть біля свого 3'-кінця пуроміцин, тобто антибіотик-акцептор пептидилу. Таким чином, специфічна мРНК може бути збагачена з комплексної суміші мРНК (наприклад, комбінаторної бібліотеки), виходячи з властивостей кодованого пептиду або білка, наприклад антитіла або його частини, таких як зв'язування антитіла або його частини з антигеном з подвійною специфічністю. Послідовності нуклеїнових кислот, кодуючі антитіла або їх частини, виявлені шляхом скринінгу вказаних бібліотек, можуть бути експресовані описаними тут рекомбінантними методами (наприклад, в клітинах-хазяїнах ссавців), і, крім того, вони можуть бути піддані подальшому афінному дозріванню шляхом проведення або додаткових раундів скринінгу гібридів "МРНК-пептид", де в їх спочатку відібрану(ї) послідовність(ості) були введені мутації, або іншими методами афінного дозрівання рекомбінантних антитіл іп міго, описаними вище. Переважним прикладом такої методики є технологія представлення РКОГизіоп, використовувана в Прикладах (див. нижче).

У іншому підході, антитіла згідно з винаходом можуть бути також одержані методами дріжджового представлення, відомими фахівцям. У методах дріжджового представлення, для зв'язування доменів антитіл зі стінками дріжджових клітин і їх представлення на поверхні дріжджів застосовуються генетичні методи. Зокрема, такі дріжджі можуть бути використані для представлення антигензв'язувальних доменів, експресованих з репертуару або комбінаторної бібліотеки антитіл (наприклад, людських або мишачих антитіл). Прикладами методів дріжджового представлення, які можуть бути застосовані для одержання антитіл згідно з винаходом, є методи, описані в патенті США

Мо 6699658 (УМіНгир еї аї.), який вводиться в даний опис за допомогою посилання.

В. Продукування рекомбінантних анти-О1 І 4 антитіл

Антитіла згідно з винаходом можуть бути продуковані будь-якими методами, відомими фахівцям.

Так, наприклад, експресію в клітинах-хазяїнах, де експресійний(і) вектор(и), що кодує(ють) важкий і легкий ланцюги, був(ли) перенесений(ї) у вказану клітину-хазяїна, здійснюють стандартними методами. Різні форми терміна "трансфекція" охоплюють широкий ряд методів, звичайно застосовуваних для введення екзогенної ДНК в прокаріотичні або еукаріотичні клітини-хазяїни, наприклад, електропорацію, осадження фосфатом кальцію, трансфекцію, опосередковувану ОЕАЕ- декстраном, і т. п. Хоч антитіла згідно з винаходом можуть експресуватися в прокаріотичних або еукаріотичних клітинах-хазяїнах, однак, переважною є експресія антитіл в еукаріотичних клітинах, а найбільш переважно в клітинах-хазяїнах ссавців, оскільки такі еукаріотичні клітини (зокрема, клітини ссавців) з більшою імовірністю, ніж прокаріотичні клітини, будуть піддаватися злиттю і секретувати "правильно" укладене і імунологічно активне антитіло.

Переважними клітинами-хазяїнами ссавців, використовуваними для експресії рекомбінантних антитіл згідно з винаходом, є клітини яєчника китайського хом'ячка (клітини СНО) (включаючи клітини апт-Сно, описані Огіацб і Спавзіп, Ргос. Маї). Асайд. 5сі. ОБА 77: 4216-4220 (1980)), використовувані разом з ОНЕК-селективним маркером, наприклад, як описано Кашїйтап і Зпагр 9. Мої. Віо!. 159: 601- 621 (1982), клітини мієломи МБО, клітини СО і клітин 5Р2. Після введення рекомбінантних експресійних векторів, що містять гени антитіл, в клітини-хазяїни ссавців, антитіла одержують шляхом культивування клітин-хазяїнів протягом періоду часу, достатнього для експресії антитіла в клітинах- хазяїнах або, більш переважно, секреції антитіла в культуральне середовище, в якому вирощують клітини-хазяїни. Антитіла можуть бути виділені з культурального середовища стандартними методами очищення білків.

Клітини-хазяїни можуть бути також використані для продукування функціональних фрагментів антитіла, таких як Рар-фрагменти або молекули 5сЕм. Абсолютно очевидно, що в обсяг даного винаходу входять варіанти вищеописаних процедур. Так, наприклад, може виявитися бажаною трансфекція клітин-хазяїнів ДНК, що кодує функціональні фрагменти легкого ланцюга і/або важкого ланцюга антитіла згідно з винаходом. Техніка рекомбінантних ДНК може бути також застосована для видалення деяких або всіх ДНК, що кодують легкий або важкий ланцюг або обидва цих ланцюги, які не є необхідними для зв'язування з антигенами, що представляють інтерес. У обсяг терміна "антитіла згідно з винаходом" також входять молекули, експресовані такими усіченими молекулами ДНК. Крім того, можуть бути продуковані біфункціональні антитіла, в яких один важкий ланцюг і один легкий ланцюг являють собою антитіло згідно з винаходом, а інші важкий і легкий ланцюги є специфічними до антигену, що не представляє інтерес з точки зору даного винаходу, де вказаний спосіб продукування здійснюють шляхом перехресного зшивання антитіла згідно з винаходом з другим антитілом стандартними хімічними методами перехресного зшивання.

У переважній системі рекомбінантної експресії антитіла або його антигензв'язувальної частини згідно з винаходом, рекомбінантний експресійний вектор, що кодує важкий ланцюг і легкий ланцюг антитіла, вбудовують в клітини апіт-СНО методом трансфекції, опосередковуваної фосфатом кальцію.

У рекомбінантному експресійному векторі гени важкого і легкого ланцюгів антитіла функціонально приєднані до регуляторних елементів "енхансер СММ/промотор АЯаМІ Р", що приводить до запуску транскрипції генів на високому рівні. Рекомбінантний експресійний вектор також несе ген ОНЕК, що дозволяє проводити відбір клітин СНО, трансфікованих вектором, шляхом їх культивування в присутності метотрексату/ампліфікації. Відібрані трансформовані клітини-хазяїни культивують для експресії важкого і легкого ланцюгів антитіла, і з культурального середовища виділяють інтактне антитіло. Для одержання рекомбінантного експресійного вектора і для трансфекції клітин-хазяїнів, відбору трансформантів, культивування клітин-хазяїнів і виділення антитіла з культурального середовища застосовують стандартні методи молекулярної біології. Даний винахід також стосується способу синтезу рекомбінантного антитіла згідно з винаходом шляхом культивування клітин-хазяїнів згідно з винаходом у придатному культуральному середовищі з одержанням рекомбінантного антитіла згідно з винаходом. Цей спосіб може також включати виділення рекомбінантного антитіла з культурального середовища. 1. Анти-ОІ ГІ 4 антитіла

Амінокислотні послідовності МН- і Мі-областей виділених повністю людських антитіл, які зв'язуються з людським 0114, представлені для клонів Е9 і АТО в таблиці 4 (див. нижче в розділі "Приклади"). Було встановлено, що ізольовані послідовності СОК анти-О1/14 антитіл Е9 ї А10 належать до двох нових сімейств ОІ І 4-зв'язувальних білків, виділених відповідно до даного винаходу, і містять поліпептиди, які включають послідовності СОК, що походять від ЕЗ9 і його афінно зрілих клонів, і послідовності СОК, що походять від А10 і його афінно зрілих клонів. Варіабельні області і

СОК моноклонального антитіла ЕЗ9 і його афінно зрілих похідних вказані в таблицях 4, 8, 14, 18 і 19.

Варіабельні області і СОК моноклонального антитіла А10 і його афінно зрілих похідних вказані в таблицях 4, 9 і 10. Для продукування і для відбору СОК з метою одержання білків, що зв'язуються, згідно з винаходом, що мають переважну активність зв'язування з 0 І 4 і/або нейтралізації 01/14, а саме людського 0/4, можуть бути застосовані відомі стандартні методи одержання білків, що зв'язуються, згідно з винаходом і оцінки здатності цих білків, що зв'язуються, зв'язуватися з Оі | 4 і/або нейтралізувати їх активність, включаючи, але не обмежуючись ними, методи, конкретно описані в даній заявці.

Виходячи з результатів зіставлення амінокислотних послідовностей СОК варіабельних областей важкого ланцюга (МН) і варіабельних областей легкого ланцюга (МІ) клонів анти-ОІ 4 антитіла Е9, описаних в даній заявці, був одержаний бі | 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, що містить антигензв'язувальний домен, здатний зв'язуватися з людським 0114, де вказаний антигензв'язувальний домен містить щонайменше одну або декілька СОК, вибраних з групи, що складається з:

СОВ-НІ: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5-Хв-Х7 (5ЕО ІЮ МО: 99), де:

Хі являє собою 5 або М;

Хг являє собою 5, С або М;

Хз являє собою 5, М, Т, С або г;

Ха являє собою У;

Х5 являє собою У або Н;

Хе являє собою МУ; і

Х7 являє собою 0;

СОВ-На: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Хів (ЗЕО ІЮ МО: 100), де:

Хі являє собою Ю;

Хг являє собою І;

Хз являє собою У, М або 5;

Ха являє собою У;

Х5 являє собою Т, М, А, І, 5 або Е;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою 5, М, Т або 0;

Хв являє собою Т;

Хе являє собою У;

Хо являє собою У;

Хії являє собою М;

Хіг являє собою Р;

Хіз являє собою 5;

Ха являє собою І;

Хі5 являє собою К; і

Хівє являє собою 5, М, О або о;

СОВ-НЗ: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хо-Х1о-Хії (ЗЕО ІЮО МО: 101), де:

Хі являє собою Е, У, Е, О, МУ, Ї. або А;

Хг являє собою Ю, А, 5, о, М, Е або М;

Хз являє собою М, М, ГІ, Р або А;

Ха являє собою |, А, Р, РЕ, 5, К, О, М, б, М або Е;

Х5 являє собою |, У, Е або М;

Хв являє собою РЕ, 0, 5, О або А;

Х7 являє собою 0;

Хв являє собою б, А або 5;

Хе являє собою 5, А, І, М, В або о;

Хіо являє собою Ю; і

Хії являє собою У, ОЮ, 5, М, Н.Е, Б, І, Р, С, І, М, Т, О або К;

СОВ-11: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х1о-Хії (ЗБОЮ МО: 102), де:

Хі являє собою 5;

Хг являє собою 0;

Хз являє собою О, Е або 0;

Ха являє собою Р, 5, б, М, К, І. або Т;

Х5 являє собою і ;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою О або Е;

Хв являє собою К;

Хе являє собою У;

Хо являє собою А або М; і

Хії являє собою 5;

СОВ-12: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7 (ЗЕО ІЮ МО: 103), де:

Хі являє собою Е або 0);

Хг являє собою Ю;

Хз являє собою 5, І, Т, А, Е або Е;

Ха являє собою К, Т, Е, М, О, 5 або М;

Х5 являє собою Е;

Хе являє собою Р; і

Х7 являє собою 5; і

СОВ-І З: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хо (5ЕО ІЮ МО: 104), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою А;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою Ю;

Х5 являє собою РЕ, 5, М, Е, М, о або К;

Хе являє собою О або Е;

Х7 являє собою Т, М, А, 5 або М;

Хв являє собою б, А або С; і

Хе являє собою У.

Переважно, ОІІ4-зв'язувальний білок, що містить одну або декілька вищеописаних СОБК, зв'язується з людським ("пПи", "п") 01 4, а також з одним або декількома білками 014, вибраними з групи, що складається з мишачого ("ти") 0 4, БІ | 4 яванського макака ("супо") і щурячого ОГ І 4.

Виходячи з результатів зіставлення амінокислотних послідовностей СОК варіабельних областей важкого ланцюга (УН) і варіабельних областей легкого ланцюга (МІ) клонів анти-ОІ 4 антитіла А10, описаних в даній заявці, був одержаний бі | 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, що містить антигензв'язувальний домен, здатний зв'язуватися з людським 0114, де вказаний антигензв'язувальний домен містить щонайменше одну або декілька СОМ, вибраних з групи, що складається з:

СОВ-НІ: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5 (5ЕО ІЮ МО: 105), де:

Хі являє собою 5, М або 0;

Хг являє собою Н або У;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою М; і

Х5 являє собою 5 або Н;

СОВ-На: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17 (ЗЕБЕО ІЮ МО: 106), де:

Хі являє собою І, О, М або Т;

Хг являє собою І;

Хз являє собою 5;

Ха являє собою У, М, 5, 0, М, Т, Н або 0;

Хо являє собою Ю;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою 5, В, І, Т, б, К, Н або М;

Хв являє собою М, У, 5, І або Т;

Хе являє собою К, М, М, О, Е, Т, Е, 5, А або! ;

Хо являє собою У, О або Е;

Хії являє собою 5 або У;

Хіг являє собою А;

Хіз являє собою Ю;

Ха являє собою 5;

Хі5 являє собою У;

Хівє являє собою К; і

Хі? являє собою 0;

СОВ-НЗ: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хо-Х1іо (ЗЕО ІЮ МО: 107), де:

Хі являє собою А;

Хг являє собою б, А або В;

Хз являє собою 0;

Ха являє собою 0, 5 або А;

Х5 являє собою М;

Хе являє собою М або М;

Х7 являє собою 0;

Хв являє собою Е, І, М або М;

Хе являє собою Ю; і

Хо являє собою І, 5 або |;

СОВ-11: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе-Х1о-Хії (ЗБОЮ МО: 108), де:

Хі являє собою 5;

Хг являє собою А або о;

Хз являє собою 0;

Ха являє собою К, М, І, 0, М, Е, 5, Т, с або 0;

Х5 являє собою і ;

Хе являє собою 0;

Х7 являє собою Т, 5, М, А, С або Е;

Хв являє собою К, о, М або г;

Хе являє собою У;

Хо являє собою М або І; і

Хії являє собою 5;

СОВ-12: Хі-Х2-Хз-Ха-Х5-Хв-Х7 (5ЕО ІО МО: 109), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою Ю;

Хз являє собою А, с, МУ, 5 або 0;

Ха являє собою К, М, О, М, ГІ, Т, І або Е;

Х5 являє собою Е;

Хе являє собою Р;

Х7 являє собою 5; і

СОВ-1 3: Хі-Х2-Хз-Ха-Хв-Хв-Х7-Хв-Хе (ЗЕО ІЮ МО: 110), де:

Хі являє собою с);

Хг являє собою 5 або А;

Хз являє собою МУ;

Ха являє собою Ю;

Х5 являє собою Р, 5, 0, Р, А, М, УМ або М;

Хе являє собою 5, 0, І, М, В або Т;

Х7 являє собою О або о;

Хв являє собою М, А, Р або Е;і

Хе являє собою У.

Переважно, ОІІ4-зв'язувальний білок, що містить одну або декілька вищеописаних СОБК, зв'язується з людським ("Пи") 0 І 4, а також з 0! 4 яванського макака ("супо"). 2. Химерні анти-бОі | 4 антитіла

Химерне антитіло являє собою молекулу, в якій різні частини антитіла походять від тварин різних видів, і таке антитіло має варіабельну область, що походить від мишачого моноклонального антитіла, і константну область людського імуноглобуліну. Див., наприклад, Могтізоп, Зсіепсе, 229: 1202-1207 (1985); ОЇ еї аї!., ВіоТесппідев, 4: 214 (1986); СсШіев еї аї., у). Іттипої. Меїйодв, 125: 191-202 (1989); патенти США МоМо 5807715, 4816567 і 4816397, які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання. Крім того, можуть бути застосовані методи продукування "химерних антитіл" шляхом сплайсингу генів молекули мишачого антитіла, що має відповідну специфічність до антигену, разом з генами молекули людського антитіла, що має відповідну біологічну активність. Див., наприклад, публікації Могтгізоп еї аї!., Ргос. Маї). Асад. Зсі. О5А, 81: 6851-6855 (1984); Меибрегаег вї аї.,

Маїшйге, 312: 604-608 (1984); ТаКеда єї аїЇ., Маїшге, 314: 452-454 (1985), які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання. 3. СОВ-прищеплені анти-ОІ І 4 антитіла

Ізольовані послідовності СОР. анти-ОІ І 4 антитіла згідно з винаходом можуть бути використані для одержання СОК-прищеплених антитіл з метою модуляції властивостей вихідного антитіла. Такими властивостями є, але не обмежуються ними, кінетика зв'язування, афінність, біологічна активність, видова перехресна реактивність, молекулярна видова перехресна реактивність, епітоп, фізико-хімічні властивості, фармакокінетичні властивості, фармакодинамічні властивості або фармакологічні властивості. СОК-прищеплені антитіла містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, що походять від людського антитіла або антитіла приматів, що не є людиною, де одна або декілька областей СОК ланцюга МН і/або МІ замінені СОК-послідовностями вихідного анти-Оі 4 антитіла. Каркасна послідовність, що походить від будь-якого людського антитіла або антитіла приматів, що не є людиною, може служити як матриця для приєднання СОК. Однак заміна прямого ланцюга на таку каркасну послідовність часто приводить до деякої втрати афінності зв'язування з антигеном. Чим більше гомологія людського антитіла або антитіла тварини іншого виду з вихідним людським антитілом, тим менше імовірність того, що об'єднання СОК з новою людською каркасною областю або каркасною областю приматів, що не є людиною, буде вносити зміни в СОК, що приводять до зниження афінності або до погіршення інших властивостей. Тому, переважно, щоб варіабельна каркасна область, вибрана для заміни людської варіабельної каркасної області, не включаючи СОК, була щонайменше на 3095 ідентична каркасній варіабельній області людського антитіла. Більш переважно, щоб варіабельна каркасна область, вибрана для заміни людської варіабельної каркасної області, не включаючи СОК, була щонайменше на 4095 ідентична каркасній варіабельній області людського антитіла. Більш переважно, щоб варіабельна каркасна область, вибрана для заміни людської варіабельної каркасної області, не включаючи СОК, була щонайменше на 5095 ідентична каркасній варіабельній області людського антитіла. Більш переважно, щоб варіабельна каркасна область, вибрана для заміни людської варіабельної каркасної області, не включаючи СОК, була щонайменше на 6095 ідентична каркасній варіабельній області людського антитіла. Більш переважно, щоб нова каркасна область варіабельної області людини або приматів, що не є людиною, і вихідна людська варіабельна каркасна область, не включаючи СОК, мали послідовності, ідентичні щонайменше на 7095. Більш переважно, щоб нова каркасна область варіабельної області людини або приматів, що не є людиною, і вихідна людська варіабельна каркасна область, не включаючи СОК, мали послідовності, ідентичні щонайменше на 7595. | найбільш переважно, щоб нова каркасна область варіабельної області людини або приматів, що не є людиною, і вихідна людська варіабельна каркасна область, не включаючи СОЕК, мали послідовності, ідентичні щонайменше на 8095. Навіть при використанні у високій мірі гомологічних каркасних людських послідовностей і послідовностей приматів, що не є людиною, для приєднання до СОК вихідного людського анти-0ОЇ 4 антитіла, одержане прищеплене антитіло може до деякої міри втрачати афінність зв'язування з антигеном. У цьому випадку, для відновлення афінності необхідно включити щонайменше одну або декілька замін ключових каркасних залишків вихідного антитіла у відповідне положення одержаного прищепленого антитіла. Такий ключовий залишок може бути вибраний з групи, що складається з: залишку, суміжного з СОК; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським ОІ І 4; канонічного залишку; залишку, розташованого в зоні контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; і залишку в області, яка перекривається з областю СОКІ варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату. 4. Гуманізовані анти-бОі | 4 антитіла

Хоч для композицій згідно з винаходом не потрібне одержання гуманізованих антитіл, однак, такі гуманізовані анти-0ОЇ! 1/4 антитіла можуть бути одержані з використанням композицій згідно з винаходом. Гуманізовані антитіла являють собою молекули антитіл, що походять від антитіл нелюдських видів, які зв'язуються з потрібним антигеном, і мають одну або декілька гіперваріабельних областей (СОМ), що походять від нелюдських видів, і каркасні області молекули людського імуноглобуліну. Відомі послідовності людських Ід описані, наприклад, в інтернеті на уер-сайтах (м/мм.), наприклад, пебі.піт.пій.дом/епіге2/диегу. сад; аїсс.огу/рпаде/пар.пІіті; взсідпеві.соту/; арсат.соту/; апіродугезошсе.сот/опіїпесотр.пІті; рибіїс.іавзіаіє.еди/.ароцї. редго/гезєеагсі о015.піті; тдеп.ипінеідеІрего.де/ЗВ/ЛТ/Т.Іті; м пітеетап.сот/ттипоіоду/СнНОоБЖиБуоБ. іт;

Погагу іпКдпневі.огд/12429/Лттипе/Апіїбоау. піті;

Ппті.ога/дгапізЛесійге5/1996/мар/; раїй.-сат.ас.ОкК/.арошцї. тгс7/пікеітадев.піті; апіродугезошгсе.соту/; теб.Пагмага.еди/Віої іпк5/ттипо!іоду. піті; іттипо|одуїїнК.сот/; раїпрох гмивії.еди/.ароці.псепіег/іпаех. піті; ріотесп. ші. еди/.арош.е/; ребіо.сот/ра/340913-/340913.пІті; па. изаа.дом/аміс/рирз/апіїроду/; т.епітеи.асір/.арош.уазипйо/ЕЇїва. піті; ріодезідп.сот/Лабів.азр; іспех.иК/ахр/Ласз/даміезЛіп-Кв5.пІті;

Біотеснп. ші. еди-/.ароші ссі/ргоїюсої літі; івас-пеї.огу/зйе5 део.піті; ахіті ті ипі-тагтиг9.ае/.ароці тек/АЕР-Бїан.піті; разегу.исі.Кип.пі/.ароші.|гааївЛіпкКві. піті; гесар.ипі-на.де/лттипо.рте.пуми.еди/; тгсо-сре.сат.ас.ик/ті-дос/рибіїс/ Мт ВО.іті;

Ірг.ипат.тх/міг/У тісе.піті; ітді.спивс. 81047; ріоспет.исі.ас.ик/.ароці. тапіп/арз/іпаєх.піті; апіроаду.рат.ас.ик/;

ардеп.смт ати. едиЛарлумлиардеп. піті; ипі2и.сп/.абоцї. попедде/АНО-зетіпаг/5Іїде01.піті; сгузі.БЬК.ас.ик/.ароші.ирс9о 757; пітг.тис.ас.икК/СС/ссаємд/ссаємо. піт; ра.сат.ас.ик/.арош. тгс7/питапізайоп/ТАННР.пІті;

Ірг.ипат.тх/міг/вігисіиге/віаї аіт.піті;

Біозсі.тів5ойцгі.еди/втіпар/Іпаєх. пІті; стуві.ріос.сат.ас.ик/.ароші тоїїпа/л/"еррадез/Рері/врої-їесп.піті; егіпі.деЛітодисів. піт; раїепів.ІЮт.сот/Ют.піті, Кабаї еї аЇ., Зедиепсев ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпієгтев5і, 0.5. Оері.

Неакй (1983), які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання. Такі "імпортні" послідовності можуть бути використані для зниження імуногенності або для зниження, посилення або модифікацій зв'язування, афінності, швидкості асоціації, швидкості дисоціації, авідності, специфічності, часу напівжиття або будь-яких інших придатних властивостей, відомих фахівцям.

Каркасні залишки в людських каркасних областях можуть бути замінені відповідним залишком донорного антитіла з СОК з метою зміни, наприклад поліпшення, зв'язування з антигеном. Такі каркасні заміни ідентифікують методами, добре відомими фахівцям, наприклад, шляхом моделювання взаємодій СОК і каркасних залишків з метою ідентифікації каркасних залишків, що грає важливу роль в зв'язуванні з антигеном, і порівняння послідовностей з метою ідентифікації каркасних залишків, що рідко зустрічаються, в конкретних положеннях (див., наприклад, патент США Мо 5585089 (О!цееп еї аї.); і публікацію Кіесптапп еї аї., Маїиге 332: 323-327 (1988), які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання). Тривимірні моделі імуноглобулінів є загальнодоступними і відомі фахівцям в даній галузі. Існують комп'ютерні програми, які ілюструють і представляють вірогідні тривимірні конформаційні структури вибраних послідовностей-кандидатів імуноглобуліну. Аналіз таких представлень дозволяє визначити вірогідну роль цих залишків в функціонуванні послідовності- кандидата імуноглобуліну, тобто виявити залишки, що впливають на здатність імуноглобуліну- кандидата зв'язуватися з антигеном. Таким чином, залишки ЕК можуть бути вибрані з консенсусних послідовностей і "імпортних" послідовностей і об'єднані так, щоб одержати антитіло з бажаними властивостями, такими як підвищена афінність відносно антигену(ів)-мішені(ей). У загальних рисах, залишки СОК безпосередньо і найвищою мірою впливають на зв'язування з антигеном. Антитіла можуть бути гуманізовані різними методами, відомими фахівцям, такими як, але не обмежуються ними, методи, описані в публікаціях Уопез еї аї., Маїиге 321: 522-525 (1986); Метовеуеп 6вї аї., 5сіепсе 239: 1534-1536 (1988)), бітв еї аї., у. Іттипої. 151: 2296-2308 (1993); Спотіа апа І езК, 9. Мої. Віо!. 196: 901-907 (1987), Сапег еї а!ї., Ргос. Маї). Асад. сі. О.5.А. 89: 4285-4289 (1992); Ргевіа вї аї., у. ІттипоЇї. 151: 2623-2632 (1993), Радіап, МоіІєсшаг Іттипоіоду 28(4/5): 489-498 (1991); 5щапіскКа еї аї., Ргоївіп

Епдіпеєтіпд 7(6): 805-814 (1994); КодихкКа Е.А. еї аї., Ргос. Маї). Асад. Зсі. 0О.5.А. 91: 969-973 (1994); в публікації РСТ МоМо УМО 91/09967, УМО 99/06834 (РСТ/О598/16280), УМО 97/20032 (РСТ/О596/18978),

МО 92/11272 (РСТ/О591/09630), УМО 92/03461 (РСТ/О591/05939), МО 94/18219 (РСТ/О594/01234),

УМО 92/01047 (РСТ/5891/01134), УО 93/06213 (РСТ/5892/01755), УО90/14443, У/О90/14424 і

МО90/14430; в публікаціях Європейських патентних заявок МоМмо ЕРО59106, ЕРО519596 і ЕРО239400; в патентах США МоМо 5565332, 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, 5225539 і 4816567, які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання, включаючи роботи, цитовані там.

С. Одержання антитіл і антитілопродукуючих клітинних ліній

Анти-0ОЇ14 антитіла згідно з винаходом переважно мають високу здатність знижувати або нейтралізувати активність пухлин відносно ангіогенезу, оцінювану, наприклад, за допомогою будь- якого з декількох існуючих аналізів іп міїго і іп мімо, відомих фахівцям. Оцінка нейтралізації активності рІ/4 може бути проведена за допомогою декількох іп міго і іп мімо аналізів, відомих фахівцям.

Репрезентативними параметрами для оцінки нейтралізації активності ОЇ 14 є, але не обмежуються ними, антитіла, які інгібують взаємодію 0/4 з рецептором Моїсп і/або шлях передачі сигналу Моїсп при величинах ІСво, що складають приблизно щонайменше 105 М, щонайменше 107 М або щонайменше 103 М.

Переважно, анти-О1 І 4 антитіла згідно з винаходом також мають високу здатність знижувати або нейтралізувати активність ОГ І 4.

У переважних варіантах винаходу ізольоване антитіло або його антигензв'язувальна частина зв'язується з людським ПІ | 4, де вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина дисоціюється з людського БІ/4 з константою швидкості дисоціації Кожє приблизно 0,1 с" або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або інгібує 0 І 4 і/або активність людського

РІ14 3 ІСво приблизно 1х106 М або менше. Альтернативно, вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть дисоціюватися з людського О0І/14 з константою швидкості дисоціації Кок приблизно 1х102 с" або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або можуть інгібувати людський 04 і/або активність людського 0/4 з ІСсо приблизно 1х1077 М або менше. Альтернативно, вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть дисоціюватися з людського 0/4 з константою швидкості дисоціації Кої приблизно 1х103 с! або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або можуть інгібувати людський 014 з ІСво приблизно 1їх108 М або менше. Альтернативно, вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть дисоціюватися з людського 0/4 з константою швидкості дисоціації Кок приблизно 1х107 с" або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або можуть інгібувати активність людського 04 з ІСсо приблизно 1х109 М або менше.

Альтернативно, вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть дисоціюватися з людського 01/14 з константою дисоціації Кож приблизно 1х105 с" або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або можуть інгібувати 01 4 і/або активність людського

РІ1/4 з ІСво приблизно 1їх1079 М або менше. Альтернативно, вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина можуть дисоціюватися з людського О0І/14 з константою швидкості дисоціації Коєгє приблизно 1х105 с" або менше, як було визначено методом поверхневого плазмонного резонансу, або можуть інгібувати ОІ | 4 і/або активність людського І 4 з ІЇСво приблизно 1х10-" М або менше.

У деяких варіантах винаходу антитіло містить константну область важкого ланцюга, таку як константна область Іде1, Ідс2, дез, Ідс4, ДА, ІЗ9Е, І9М або ІдО. Переважно, константна область важкого ланцюга являє собою константну область важкого ланцюга ІдС1 або константну область важкого ланцюга Ідса4. Крім того, вказане антитіло може містити константну область легкого ланцюга, тобто або константну область легкого ланцюга каппа, або константну область легкого ланцюга лямбда. Переважно, вказане антитіло містить константну область легкого ланцюга каппа.

Альтернативно, частина антитіла може являти собою, наприклад, Раб-фрагмент або одноланцюжковий Ем-фрагмент.

Заміни амінокислотних залишків в Ес-частині що вводяться для зміни ефекторної функції антитіла, відомі фахівцям (див. патенти США МоМо 5648260 і 5624821 (УмМіпіег еї аІ.). Ес-частина антитіла опосередковує декілька важливих ефекторних функцій, наприклад індукування цитокінів,

АрСС, фагоцитоз, комплементзалежну цитотоксичність (СОС), час напівжиття/швидкість кліренсу антитіла і утворення комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках бажано, щоб терапевтичне антитіло мало ці ефекторні функції, але в інших випадках, залежно від терапевтичного застосування, такі функції можуть бути необов'язковими або навіть небажаними. Деякі ізотипи людських до, зокрема Ідс1 і Ї(д3, опосередковують АОСС і СОС за допомогою зв'язування з ЕсукК і з комплементом

Ста, відповідно. Ес-рецептори у новонароджених (БСКп) являють собою важливі компоненти, що визначають час напівжиття антитіл в кровоці. У іншому варіанті винаходу щонайменше один амінокислотний залишок в константній області антитіла, наприклад в Ес-області антитіла, замінюють так, щоб це приводило до зміни ефекторних функцій антитіла.

У одному з варіантів даний винахід стосується міченого зв'язувального білка, де вказані антитіло або частина антитіла згідно з винаходом дериватизовані іншою функціональною молекулою (наприклад, іншим пептидом або білком) або зв'язані з такою молекулою. Так, наприклад, мічений зв'язувальний білок згідно з винаходом може бути дериватизований шляхом функціонального приєднання антитіла або частини антитіла згідно з винаходом (шляхом хімічної взаємодії, генетичного злиття, нековалентного зв'язування або т. п.) до однієї або декількох інших молекул, таких як інше антитіло (наприклад, біспецифічне антитіло або діантитіло), детектований агент, цитотоксичний засіб, фармацевтичний засіб і/або білок або пептид, які можуть опосередковувати зв'язування антитіла або його частини з іншою молекулою (такою як корова область стрептавідину або полігістидинова мітка).

Придатними детектованими агентами, якими може бути дериватизоване антитіло або частина антитіла згідно з винаходом, є флуоресцентні сполуки. Репрезентативними детектованими флуоресцентними сполуками є флуоресцеїн, флуоресцеїну ізотіоціанат, родамін, 5-диметиламін-1- нафталінсульфонілхлорид, фікоеритрин і т. п. Антитіло може бути також дериватизоване детектованими ферментами, такими як лужна фосфатаза, пероксидаза хрону, глюкозооксидаза і т. п.

Якщо антитіло дериватизоване детектованим ферментом, то він може бути детектований шляхом додавання допоміжних реагентів, які використовуються ферментом для продукування детектованого реакційного продукту. Так, наприклад, якщо таким детектованим агентом є пероксидаза хрону, то додавання пероксиду водню і діамінобензидину приводить до утворення забарвленого реакційного продукту, який є детектованим. Антитіло може бути також дериватизоване біотином і детектоване шляхом посереднього вимірювання рівня зв'язування з авідином або стрептавідином.

У іншому варіанті даний винахід стосується кристалізованого 0 |4-зв'язувального білка. У переважному варіанті даний винахід стосується кристалів описаних тут ОІ | 4-зв'язувальних білків, включаючи повнорозмірні анти-ОІ І 4 антитіла, їх фрагменти, а також конструкції антитіл і кон'югати зв'язувальних білків (включаючи кон'югати антитіл), описані в даній заявці, і складів і композицій, що містять такі кристали. У одному з варіантів винаходу кристалізований зв'язувальний білок має більш тривалий час напівжиття іп мімо, ніж його розчинний аналог. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок зберігає біологічну активність після кристалізації. Кристалізовані зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути одержані методами, відомими фахівцям і описаними в публікації заявки РСТ

МО 02/72636, яка вводиться в даний опис за допомогою посилання.

У іншому варіанті даний винахід стосується глікозилованого зв'язувального білка, де антитіло або його антигензв'язувальна частина містять один або декілька вуглеводних залишків. Зростаючий ланцюг білка при його продукуванні іп мімо може потім піддаватися процесингу, відомому як посттрансляційна модифікація. Зокрема, цукрові (глікозильні)) залишки можуть бути приєднані ферментативно, способом, відомим як глікозилування. Одержані білки, що несуть ковалентно зв'язані олігосахаридні бічні ланцюги, відомі як глікозиловані білки або глікопротеїни. Глікозилування білка залежить від амінокислотної послідовності білка, яка представляє інтерес, а також від типу клітини- хазяїна, в якій експресується такий білок. Різні організми можуть продукувати різні глікозилуючі ферменти (наприклад, глікозилтрансферази і глікозидази) і мають різні доступні субстрати (нуклеотидні цукри). Завдяки таким факторам характер глікозилування білка і склад глікозильних залишків можуть варіювати залежно від системи хазяїна, в якій експресується конкретний білок.

Глікозильними залишками, використовуваними в даному винаході, є, але не обмежуються ними, залишки глюкози, галактози, манози, фукози, М-ацетилглюкозаміну і сіалової кислоти. Переважно, глікозилований зв'язувальний білок містить глікозильні залишки, що мають характер глікозилування, спостережуваний у людини.

Фахівцю в даній галузі відомо, що зміна характеру глікозилування білка може приводити до зміни властивостей білка. Так, наприклад, ефективність терапевтичного білка, продукованого в мікроорганізмі-хазяїні, такому як дріжджі, і глікозилованого по ендогенному дріжджовому шляху, може бути нижче, ніж ефективність того ж самого білка, експресованого в клітинах ссавців, таких як клітинна лінія СНО. Такі глікопротеїни можуть бути також імуногенними для людини і мають зменшений час напівжиття іп мімо після введення. Специфічні рецептори у людини і інших тварин можуть розпізнавати специфічні глікозильні залишки і стимулювати швидке виведення білка з кровотоку. Іншими побічними ефектами можуть бути зміна укладання білка, його розчинності, чутливості до протеаз, перенесення, транспорту, компартменталізації, секреції, розпізнавання іншими білками або факторами, а також антигенності або алергенності. Відповідно до цього, практичний лікар може вибрати терапевтичний білок, що має конкретний склад і характер глікозилування, наприклад білок, в якому склад і характер глікозилування ідентичні або щонайменше аналогічні складу або характеру глікозилування білка, продукованого в людських клітинах або у видоспецифічних клітинах тварини, що розглядається.

Експресія глікозилованих білків, відмінних від білків клітин-хазяїнів, може бути досягнута шляхом генетичної модифікації клітин-хазяїнів, здійснюваної так, щоб ці клітини-хазяїни експресували гетерологічні глікозилуючі ферменти. З застосуванням відомої техніки фахівець-практик може самостійно одержати антитіла або їх антигензв'язувальні частини, що мають характер глікозилування, властивий людському білку. Так, наприклад, дріжджові штами були генетично модифіковані з метою експресії неприродних глікозилуючих ферментів, так, щоб глікозиловані білки (глікопротеїни), продуковані в цих дріжджових штамах, мали характер глікозилування білка, ідентичний характеру глікозилування, властивому клітинам тварин, зокрема людським клітинам (див. публікації заявок на патент США МоМо 2004/0018590 і 2002/0137134).

Крім того, для фахівця в даній галузі очевидно, що білок, що представляє інтерес, може бути експресований з використанням бібліотеки клітин-хазяїнів, генетично сконструйованих з метою здійснення експресії різних глікозилуючих ферментів, для того, щоб члени бібліотеки клітин-хазяїнів продукували білок, що представляє інтерес, який має змінений характер глікозилування. Фахівець- практик може потім самостійно вибрати і виділити білок, що представляє інтерес, який має конкретний новий характер глікозилування. При цьому переважно, щоб білок, який має конкретно вибраний новий характер глікозилування, мав поліпшені або змінені біологічні властивості. р. Застосування ОІ І 4-зв'язувальних білків

Враховуючи здатність зв'язуватися з людським 014 і з мишачим 014, потрібно зазначити, що описані тут ОБІГ 4-зв'язувальні білки, включаючи антитіла і їх частини, можуть бути використані для детектування або вимірювання рівня БІ 4 в зразку (наприклад, в суміші, в розчині або в біологічному зразку, такому як кров, сироватка або плазма) за допомогою будь-якого зі стандартних імуноаналізів, відомих фахівцям, таких як твердофазні імуноферментні аналізи (ЕГІ5А), радіоіїмуноаналіз (РІА) або імуногістохімічний аналіз тканини. Даний винахід стосується способу детектування людського 01 | 4 і/або мишачого 01 4 в зразку, де вказаний спосіб включає контактування зразка з 0 І 4-зв'язувальним білком і детектування бі | 4-зв'язувального білка, зв'язаного з людським 014 і/або мишачим ОІ 4, або незв'язаного зв'язувального білка з метою визначення рівня людського Бі | 4 і/або мишачого 01 І 4 в зразку. Описаний тут 0 І 4-зв'язувальний білок може бути прямо або опосередковано помічений детектованою речовиною для полегшення детектування зв'язаного або незв'язаного ОО а4- зв'язувального білка. Придатними детектованими речовинами є різні ферменти, простетичні групи, флуоресцентні речовини, люмінесцентні речовини і радіоактивні речовини. Прикладами придатних ферментів є пероксидаза хрону, лужна фосфатаза, В-галактозидаза або ацетилхолінестераза; прикладами придатних комплексів з простетичними групами є стрептавідин/біотин і авідин/біотин; прикладами придатних флуоресцентних речовин є умбеліферон, флуоресцеїн, флуоресцеїну ізотіоціанат, родамін, дихлортриазиніламін флуоресцеїну, дансилхлорид або фікоеритрин; прикладом люмінесцентної речовини є люмінол, а прикладами придатних радіоактивних речовин є ЗН, 770, 355, зо, ес, 111 п, 125|, 191, 177) у, 166Но або 1535111.

Біологічними зразками, які можуть бути оцінені на 01 4, є сеча, фекалії, кров, сироватка, плазма, піт, слина, мазок з ротової порожнини (щічний мазок, мазок з язика або із зіва), вагінальний мазок, мазок з прямої кишки, шкірний мазок, зскрібок зі шкіри, біоптат тканини, а також будь-який інший зразок тканини, який може бути одержаний методами, відомими фахівцям.

Альтернативно міченню зв'язувального білка, людський 0/4 може бути проаналізований в біологічних рідинах за допомогою конкуретного імуноаналізу, що проводиться з використанням стандартних рекомбінантних людських (г) 0/4, мічених детектованою речовиною, і описаного тут неміченого ОІ | 4-зв'язувального білка. У цьому аналізі, біологічний зразок, мічені грі І 4-стандарти і

РІГ 4-зв'язувальний білок об'єднують і визначають кількість міченого ГПО І4-стандарту, зв'язаного з неміченим зв'язувальним білком. Кількість людського 01/14 в біологічному зразку зворотно пропорційна кількості міченого гпОІІ/4-стандарту, зв'язаного з ІІ 4-зв'язувальним білком.

Аналогічним чином, людський 0/4 може бути також проаналізований в біологічних рідинах за допомогою конкурентного імуноаналізу, що проводиться з використанням ПО І 4-стандартів, мічених детектованою речовиною, і описаного тут неміченого І | 4-зв'язувального білка.

Переважно, І І 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом мають здатність нейтралізувати активність ріл4, зокрема активність ПОГ І 4, іп міїго і іп мімо. Відповідно до цього, такі зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути використані для інгібування активності 0 І 4, наприклад, в клітинній культурі, що містить ОБІГ 4, у людини або у інших ссавців, у яких експресуються 014, перехресно реагуючий зі зв'язувальним білком згідно з винаходом. У одному з варіантів даний винахід стосується способу інгібування активності 0 4, де вказаний спосіб включає контактування 01 4 з анти-ОІ | 4 антитілом або його частиною згідно з винаходом з подальшим інгібуваннням активності О0І І 4. Так, наприклад, в клітинній культурі, що містить або передбачувано містить 0/4, антитіло або його частина згідно з винаходом можуть бути додані в клітинне середовище з метою інгібування активності ОІ І 4 в культурі.

У іншому варіанті даний винахід стосується способу зниження активності 01/14 у індивідуума, і переважно у індивідуума, страждаючого захворюванням або розладом, асоційованим з негативним впливом 0114 або активності ОЇ 1/4. Даний винахід стосується способів зниження рівня 0/4 або активності БІ 4 у індивідуума, страждаючого вказаним захворюванням або розладом, де вказаний спосіб включає введення індивідууму 0 І 4-зв'язувального білка згідно з винаходом з метою зниження рівня 0/4 або активності 0114 у індивідуума. Переважно, 0/4 являє собою людський 0114, а вказаним індивідуумом є людина. Альтернативно, таким індивідуумом може бути ссавець, експресуючий ПІ | 4, з яким може зв'язуватися І І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом. Крім того, таким індивідуумом може бути ссавець, якому був введений 0/4 (наприклад, шляхом прямого введення 014 або за допомогою експресії і І 4-трансгена). Антитіло або інший БІ | 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом може бути введений людині в терапевтичних цілях. Крім того, ОІІ 4- зв'язувальний білок згідно з винаходом може бути введений ссавцю, який не є людиною і експресує 014, з яким може зв'язуватися вказаний зв'язувальний білок, де вказаний білок вводять для лікування вказаної тварини або використовують для створення тварини з моделлю людського захворювання. У останньому випадку такі тварини-моделі можуть бути використані для оцінки терапевтичної ефективності антитіл і інших ОІ І 4-зв'язувальних білків згідно з винаходом (наприклад, для тестування доз і проведення курсів лікування шляхом введення вказаного білка).

Використовуваний тут термін "розлад, асоційований з негативним впливом ОПО 4 і/або з активністю передачі Моїсп-сигналу", включає такі захворювання, як рак і інші розлади, при яких у індивідуумів, страждаючих вказаним розладом, спостерігається присутність 0 4 і/або активність передачі Моїсп- сигналу, які, як було встановлено або як підозрюється, відповідальні за патофізіологію вказаного розладу або є фактором, що підвищує тяжкість даного розладу. Відповідно до цього, розладом, асоційованим з негативним впливом 0 4 і/або з активністю передачі МоїЇсп-сигналу, є розлад, при якому зміна рівня 0114 і/або активності передачі Моїсп-сигналу, як передбачається, сприяє ослабленню симптомів і/або прогресування вказаного розладу (наприклад, росту пухлини). Такі розлади можуть виявлятися такими ознаками, як посилення ангіогенезу у індивідуума, страждаючого вказаним розладом (наприклад, збільшення концентрації різних білків, відомих фахівцям, в сироватці, в плазмі, в синовіальній рідині і т. п. у індивідуума в процесі росту і утворення пухлини), де вказане посилення ангіогенезу може бути встановлене, наприклад, з використанням анти-О1І 14 антитіла, описаного вище. Необмежувальними прикладами розладів, які можуть бути піддані лікуванню з використанням антитіл згідно з винаходом, є розлади, обговорювані в нижченаведеному розділі, що стосується фармацевтичних композицій антитіл згідно з винаходом.

ІЇ. Фармацевтичні композиції

Даний винахід також стосується фармацевтичних композицій, що містять ОІ І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом і фармацевтично прийнятний носій. Фармацевтичні композиції, що містять ОІ І 4- зв'язувальні білки згідно з винаходом, застосовуються в цілях, але не обмежуються ними, діагностики, детектування або моніторингу розладу, а також для попередження, лікування, усунення або зниження тяжкості розладу або одного або декількох його симптомів, і/або в дослідженнях. У конкретному варіанті винаходу композиція містить один або декілька бі | 4-зв'язувальних білків згідно з винаходом.

У іншому варіанті винаходу фармацевтична композиція містить один або декілька зв'язувальних білків згідно з винаходом і один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів, які не є зв'язувальними білками згідно з винаходом і використовуються для лікування розладу, асоційованого з негативним впливом 01/14 і/або активності 0/4. Переважно, профілактичні або терапевтичні засоби, як відомо, можуть бути використані, вже були використані або використовуються на даний час для попередження, лікування, усунення або зниження тяжкості розладу, наприклад раку або пухлини, або одного або декількох їх симптомів. Відповідно до цих варіантів вказана композиція може також містити носій, розріджувач або наповнювач.

Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути включені в фармацевтичні композиції, придатні для введення індивідууму. Звичайно фармацевтична композиція містить 0 І 4-зв'язувальний білок (або його 01 /4-зв'язувальну частину) згідно з винаходом і фармацевтично прийнятний носій.

Використовуваний тут термін "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-які і всі розчинники, дисперсійні середовища, матеріал для покриттів, антибактеріальні і протигрибкові засоби, ізотонічні агенти і агенти, що уповільнюють абсорбцію, і т. п., які є фізіологічно сумісними. Прикладами фармацевтично прийнятних носіїв є один або декілька компонентів, таких як вода, фізіологічний розчин, забуферений фосфатом фізіологічний розчин, декстроза, гліцерин, етанол і т. п., а також їх комбінації. У багатьох випадках у вказану композицію можуть бути включені ізотонічні агенти, наприклад цукри, багатоатомні спирти, такі як маніт і сорбіт, або хлорид натрію. Фармацевтично прийнятні носії можуть також містити невеликі кількості допоміжних речовин, таких як змочувальні або емульгуючі агенти, консерванти або буфери, які дозволяють збільшувати термін зберігання або ефективність антитіла або його частини.

Різні системи доставки відомі фахівцям і можуть бути використані для введення одного або декількох ОІ І 4-зв'язувальних білків згідно з винаходом або комбінацій одного або декількох ОГ | 4- зв'язувальних білків згідно з винаходом і профілактичного або терапевтичного засобу, придатного для попередження, лікування, усунення або зниження тяжкості розладу або одного або декількох його симптомів, наприклад для пригнічення ангіогенезу пухлини, де вказане введення здійснюють шляхом інкапсулювання в ліпосоми, в мікрочастинки, в мікрокапсули, в рекомбінантні клітини, здатні експресувати 01 4-зв'язувальний білок; шляхом рецептор-опосередковуваного ендоцитозу (див., наприклад, Ми 5 УМи, У. Віої. Спет. 262: 4429-4432 (1987)) і шляхом конструювання нуклеїнової кислоти як частини ретровірусного або іншого вектора, і т. п. Методи введення профілактичного або терапевтичного засобу згідно з винаходом включають, але не обмежуються ними, парентеральне введення (наприклад, інтрадермальне, внутрішньом'язове, внутрішньоочеревинне, внутрішньовенне і підшкірне), епідуральне введення, введення в пухлину і введення в слизову (наприклад, інтраназальне і пероральне введення). Крім того, введення в легені може бути здійснене, наприклад, з використанням інгалятора або аерозольного розпилювача і складу, який містить агент, що утворює аерозоль. Див., наприклад, патенти США МоМо 6019968, 5985320, 5985309, 5934272, 5874064, 5855913, 5290540 і 4880078; і публікації заявок РСТ УМО 92/19244, МО 97/32572, МО 97/44013, МО 98/31346 і УМО 99/66903, які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання. У одному з варіантів винаходу ОЇ 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, засоби для комбінованої терапії або композицію згідно з винаходом вводять із застосуванням технології доставки лікарського засобу в легені АІКеппез5 АІКФ (АїІКептев, Іпс., Сатбьгідде, Маззаспизейв, 05). У конкретному варіанті винаходу профілактичні або терапевтичні засоби згідно з винаходом вводять внутрішньом'язово, внутрішньовенно, всередину пухлини, перорально, інтраназально, в легені або підшкірно.

Профілактичні або терапевтичні засоби можуть бути введені будь-яким стандартним способом, наприклад шляхом вливання або ін'єкції ударної дози, шляхом абсорбції через епітеліальну або шкірно-слизову вистілку (наприклад, через слизову ротової порожнини, слизову прямої кишки і тонкої кишки і т. п.), і можуть бути також введені в комбінації з іншими біологічно активними засобами.

Введення може бути системним або місцевим.

У конкретному варіанті винаходу може виявитися бажаним місцеве введення профілактичних або терапевтичних засобів згідно з винаходом в область, на яку направлене лікування; і це може бути досягнуте, наприклад, такими способами, але не обмежуються ними, як місцева інфузія, ін'єкція або введення імплантата, де вказаний імплантат складається з пористого або непористого матеріалу, включаючи мембрани і матриці, такі як сіаластичні мембрани, полімери, волокнистий матрикс (наприклад, Тіз5цеке) або колагеновий матрикс. У одному з варіантів винаходу ефективну кількість одного або декількох БІ | 4-зв'язувальних білків-антагоністів згідно з винаходом вводять пацієнту місцево в уражену область для попередження, лікування, усунення і/або зниження тяжкості розладу або його симптомів. У іншому варіанті винаходу ефективну кількість одного або декількох ОГ І 4- зв'язувальних білків згідно з винаходом вводять місцево в уражену область в комбінації з ефективною кількістю одного або декількох терапевтичних засобів (наприклад, одного або декількох профілактичних або терапевтичних засобів), які не є зв'язувальним білком згідно з винаходом і використовуються для попередження, лікування, усунення і/або зниження тяжкості розладу або одного або декількох його симптомів.

У іншому варіанті винаходу профілактичний або терапевтичний засіб може бути доставлений у вигляді системи контрольованого вивільнення або системи уповільненого вивільнення. У одному з варіантів винаходу для досягнення контрольованого або уповільненого вивільнення може бути використаний насос (див. І апдег (Зсіепсе, 249: 1527-1533 (1990)); Зепйоп, САС Ст. Веї. Віотеєд. Епод., 14: 201-240 (1987); Виспмайа еї а!., Зигдегу, 88: 507-516 (1980); Зацаек еї аї., М. Епаї. У. Мед., 321: 574- 579 (1989)). В іншому варіанті винаходу для забезпечення контрольованого або уповільненого вивільнення терапевтичних засобів згідно з винаходом можуть бути використані полімерні матеріали (див. наприклад, сСоодзоп у). М. Іп Меадіса! Арріїсайопе ої СопігоїІєд Веїєазе. Мої. ІІ. Арріїсайоп5 апа

ЕмаїІнайопв. (Іапдег апа Муізе, єдв.), (САС Ргезв Іпс., Воса Нашюп, 1984), спарієї 6, раде5 115-138;

Сопігоїеа Огид Віоамайаріїйу. Огид Ргодисі Оєзідп апа Репогтапсе. Зтоїеп апа Ваї! (едв.) (Му, Мем/

УоК, 1984); І апдег апа Реррав, у). Масготої. сі. Вем. Мастотої. Спет. РНуз., б23: 61-126 (1983); див. також Гему еї аї., Зсіепсе, 228: 190-192 (1985); Оиппа еї аі., Апп. Мештої, 25: 351-356 (1989); Номага єї аІ.,, У. Мешйгозига., 71: 105-112 (1989); патенти США МоМо 5679377, 5916597, 5912015, 5989463 і 5128326; і публікації заявок РСТ МоМо УМО 99/15154 і УЛО 99/20253). Прикладами полімерів, використовуваних в складах уповільненого вивільнення, є, але не обмежуються ними, полі(2- гідроксіетилметакрилат), поліметилметакрилат, поліакрилова кислота, співполімер етилену і вінілацетату, поліметакрилова кислота, полігліколіди (ПЛГ), поліангідриди, полі-М-вінілпіролідон, полівініловий спирт, поліакриламід, поліетиленгліколь, полілактиди (РГА), співполімери лактиду і гліколіду (РІ ОА) і поліортоефіри. У одному з варіантів винаходу полімер, використовуваний в складі уповільненого вивільнення, є інертним, не містить вилуговуваних домішок, є стабільним при зберіганні, стерильним і біологічно розкладаним. У іншому варіанті винаходу система контрольованого або уповільненого вивільнення може бути введена поблизу від профілактичної або терапевтичної мішені, для чого буде потрібна лише частина системної дози (див., наприклад, сооазоп, Меаісаї

Арріїсайопв ої СопігоїІєйа Веїєазе (1984), радез 115-138).

Системи контрольованого вивільнення обговорюються в роботі І апдег (1990, 5сіепсе 249: 1527- 1533). Для одержання складів уповільненого вивільнення, що містять один або декілька терапевтичних засобів згідно з винаходом, може бути застосований будь-який метод, відомий фахівцям в даній галузі. Див., наприклад, патент США Мо 4526938, публікації заявок РСТ УМО 91/05548 і УМО 96/20698, Міпо еї а!., "Іпігаїштога! Кадіоіттипоїпегару оїа Нитап Соїоп Сапсег Хеподгай О5іпд а зЗивіаіпед-НеІєазе Стів!" Вадіошег. Опсої, 39: 179-189 (1996); 5опд еї аї., "Апіроду Медіагтед Гипд

Тагдеїйпу ої ІГопд-Сіксшайтд Етиівіопе" РОА у). РНапт. Зсі.Тесп., 50: 372-377 (1996); Сієек еї аї., "Віодедгадавіе Роїутегіс Саггіег5 Тог а БЕСЕ Апіїбоду бог Сагаїомазсшцїаг Арріїсайоп" Ргосеєа. Іпії. Зутр.

Сопіго! ВАеї. Віоасі. Маїег., 24: 853-854 (1997), і їат еї аї., "Місгоепсарзшіайоп ої Кесотріпапі

Нитапігей Мопосіопа! Апіїроаду Гог І оса! ОеєїЇїмегу" Ргосеєд. Іпії. Зутр. Сопіго! Веї. Віоасі. Магїег.: 24: 759-760 (1997), які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання.

У конкретному варіанті винаходу, якщо композицією згідно з винаходом є нуклеїнова кислота, що кодує профілактичний або терапевтичний засіб, то така нуклеїнова кислота може бути введена іп мімо для стимуляції експресії кодованих нею профілактичних або терапевтичних засобів, де вказану нуклеїнову кислоту конструюють як частину відповідного вектора, експресуючого нуклеїнову кислоту, і вводять таким чином, щоб вона проникала всередину клітини, наприклад, за допомогою ретровірусного вектора (див. патент США Мо 4980286), за допомогою прямої ін'єкції або за допомогою бомбардування мікрочастинками (наприклад, з використанням "дробовика" для вистрілювання генів;

Віоїїстіс, биропі) або шляхом покриття ліпідами, рецепторами клітинної поверхні або трансфікуючими агентами; або шляхом її включення у формі, зв'язаній з гомеобоксоподібним пептидом, який, як відомо, вбудовується в ядро (див., наприклад, чоїїої еї аїЇ., Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 88: 1864-1868 (1991)). Альтернативно, нуклеїнова кислота може бути введена всередину клітини і вбудована в ДНК клітини-хазяїна для експресії за допомогою гомологічної рекомбінації.

Фармацевтичну композицію згідно з винаходом одержують у формі, сумісній з передбачуваним способом введення. Прикладами способів введення є, але не обмежуються ними, парентеральне введення (наприклад, внутрішньовенне введення), інтрадермальне введення, підшкірне введення, пероральне введення, інтраназальне введення (наприклад, шляхом інгаляції), трансдермальне введення (наприклад, місцеве введення), введення через слизову і ректальне введення. У конкретному варіанті винаходу вказану композицію приготовляють рутинними методами у вигляді фармацевтичної композиції, адаптованої для внутрішньовенного, підшкірного, внутрішньом'язового, перорального, інтраназального або місцевого введення людині. Звичайно композиції для внутрішньовенного введення являють собою розчини в стерильному ізотонічному водному буфері. За необхідності, така композиція може також включати солюбілізуючий агент і місцевий анестетик, такий як лігнокаїн, для полегшення болю на ділянці ін'єкції.

Якщо композиції згідно з винаходом вводять місцево, то вони можуть бути приготовані у вигляді мазі, крему, черезшкірного пластиру, лосьйону, гелю, шампуню, спрею, аерозолю, розчину, емульсії або іншої форми, добре відомої фахівцям. Див., наприклад, Кетіпдіоп'є Рпаппасецшіїйса! Зсіепсе5 апа

Іпігодисіоп То РНаптасешіса! Юозаде ЕБоптв5. 191 єйд. (Маск Рибіїзніпуд Со., Еазюп, РеппзуїЇамапіа, 1995). Для цього звичайно використовуються лікарські форми для місцевого введення, що не є спреєм, а також в'язкі або напівтверді або тверді форми, що містять носій або один або декілька наповнювачів, які сумісні з місцевим введенням і мають динамічну в'язкість, яка перевищує динамічну в'язкість води. Придатними складами є, але не обмежуються ними, розчини, суспензії, емульсії, креми, рідкі мазі, порошки, пастоподібні мазі, тверді мазі і т. п., які за необхідності можуть бути стерилізовані або змішані з допоміжними агентами (наприклад, з консервантами, стабілізаторами, змочувальними агентами, буферами або солями) для зміни різних властивостей, таких як, наприклад, осмотичний тиск. Іншими придатними лікарськими формами для місцевого введення є розпилювані аерозольні склади, в яких активний інгредієнт, присутній в комбінації з твердим або рідким інертним носієм, упакований у вигляді Суміші з леткими речовинами під тиском (наприклад, з газоподібним пропелентом, таким як ЕКЕОМФ)) або поміщений в бутель під тиском. У фармацевтичні композиції і в лікарські форми можуть бути додані, якщо це необхідно, зволожувачі або змочувальні засоби.

Приклади таких додаткових інгредієнтів добре відомі фахівцям.

Якщо спосіб згідно з винаходом включає інтраназальне введення композиції, то така композиція може бути приготована в формі аерозолю, спрею, парів, що утворюють туман, або в формі крапель.

Зокрема, профілактичні або терапевтичні засоби, використовувані в даному винаході, можуть бути легко доставлені в формі аерозольного спрею з упаковок під тиском або аерозольного інгалятора з використанням прийнятного пропеленту (наприклад, дихлордифторметану, трихлорфторметану, дихлортетрафторетану, діоксиду вуглецю або іншого придатного газу). У випадку використання аерозолю під тиском, уніфікована доза лікарської форми може бути визначена за допомогою дозуючого клапана. Можуть бути приготовані капсули і картриджі (що складаються, наприклад, з желатину) для їх використання в інгаляторі або в інсуфляторі, де вказані капсули і картриджі містять порошкоподібну суміш сполуки і придатної порошкоподібної основи, такої як лактоза або крохмаль.

Якщо спосіб згідно з винаходом включає пероральне введення, то композиції для такого перорального введення можуть бути приготовані в формі таблеток, капсул, саше, гелевих капсул, розчинів, суспензій і т. п. Таблетки або капсули можуть бути одержані стандартними методами з використанням фармацевтично прийнятних наповнювачів, таких як зв'язувальні агенти (наприклад, кукурудзяний крохмаль в попередній стадії желатинізації, полівінілпіролідон або гідроксипропілметилцелюлоза); наповнювачі (наприклад, лактоза, мікрокристалічна целюлоза або біросфат кальцію); замаслювачі (наприклад, стеарат магнію, тальк або двоокис кремнію); дезінтегратори (наприклад, кукурудзяний крохмаль або натрійвмісний гліколят крохмалю) або змочувальні агенти (наприклад, лаурилсульфат натрію). На таблетки можуть бути нанесені покриття добре відомими методами. Рідкі склади для перорального введення можуть бути приготовані в таких формах, але не обмежуються ними, як розчини, сиропи або суспензії, або вони можуть бути одержані у вигляді сухого продукту, який, перед його застосуванням, може бути розведений водою або іншим придатним носієм. Такі рідкі склади можуть бути одержані стандартними методами з використанням фармацевтично прийнятних добавок, таких як суспендуючі агенти (наприклад, сорбітоловий сироп, похідні целюлози або гідрогенізовані харчові жири); емульгуючі агенти (наприклад, лецитин або аравійська камедь); безводні носії (наприклад, мигдалева олія, ефіри олій, етиловий спирт або фракціоновані рослинні олії) і консерванти (наприклад, метил- або пропіл-п-гідроксибензоати або сорбінова кислота). Ці склади можуть також містити забуферювальні солі, ароматизатори, барвники і підсолоджувачі, якщо це необхідно. Склади для перорального введення можуть бути відповідним чином приготовані для досягнення контрольованого вивільнення або уповільненого вивільнення профілактичного(их) або терапевтичного(их) засобу (засобів).

Спосіб згідно з винаходом може включати введення композиції, приготованої в комбінації з агентом, що утворює аерозоль, в легені, наприклад, з використанням інгалятора або аерозольного розпилювача. Див., наприклад, патенти США МоМо 6019968, 5985320, 5985309, 5934272, 5874064, 5855913, 5290540 і 4880078; і публікації заявок РСТ МоМо УМО 92/19244, МО 97/32572, МО 97/44013,

УМО 98/31346 і УМО 99/66903, які у всій своїй повноті вводяться в даний опис за допомогою посилання.

У конкретному варіанті винаходу, антитіло згідно з винаходом, засіб для комбінованої терапії і/або композицію згідно з винаходом вводять із застосуванням технології доставки лікарського засобу в легені АІкеппе5 АІКФ (АІКептезв, Іпс., Сатбгідде, Маззаспивзейв, 05).

Спосіб згідно з винаходом може включати введення композиції, приготованої для парентерального введення шляхом ін'єкції (наприклад, шляхом ін'єкції ударної дози або безперервного вливання).

Композиції для ін'єкції можуть бути приготовані в уніфікованій лікарській формі (наприклад, в ампулах або в контейнерах для багаторазового введення доз) з додаванням консерванту. Композиції можуть бути одержані в таких формах, як суспензії, розчини або емульсії в масляних або водних носіях, і можуть містити агенти для приготування композицій, такі як суспендуючі, стабілізуючі і/або диспергуючі агенти. Альтернативно, активний інгредієнт може бути приготований в порошкоподібній формі, яка, перед її застосуванням, може бути розведена придатним носієм (наприклад, стерильною апірогенною водою).

Спосіб згідно з винаходом може також включати введення композицій, приготованих у вигляді депо-складів. Такі склади уповільненої дії можуть бути введені шляхом імплантації (наприклад, підшкірно або внутрішньом'язово) або шляхом внутрішньом'язової ін'єкції. Так, наприклад, композиції можуть бути приготовані з використанням придатних полімерних або гідрофобних матеріалів (наприклад, у вигляді емульсії у відповідному маслі) або іонообмінних смол, або у вигляді слабкорозчинних похідних (наприклад, у вигляді слабкорозчинної солі).

Способи згідно з винаходом включають введення композицій, приготованих у вигляді нейтральної або сольової форми. Фармацевтично прийнятними солями є солі, утворені аніонами, такими як аніони хлористоводневої, фосфорної, оцтової, щавлевої, винної кислот і т. п., і солі, утворені катіонами, такими як катіони натрію, калію, амонію, кальцію, гідроксидів заліза(3), ізопропіламіну, триетиламіну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну і т. п.

Звичайно інгредієнти композицій постачаються або окремо, або в суміші в уніфікованій лікарській формі, наприклад у вигляді сухого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері, такому як ампула або саше, з вказаною кількістю активного агента. Якщо способом введення є вливання, то композиція може бути розфасована по бутлях для вливання розчину, що містять стерильну воду фармацевтичної якості або фізіологічний розчин. Якщо способом введення є ін'єкція, то ампулу зі стерильною водою для ін'єкцій або з фізіологічним розчином приготовляють так, щоб інгредієнти могли бути змішані перед введенням.

Зокрема, даний винахід також стосується одного або декількох профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичних композицій згідно з винаходом, упакованих в герметично запаяний контейнер, такий як ампула або саше, з вказаною кількістю активного агента. У одному з варіантів винаходу один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичні композиції згідно з винаходом постачаються у вигляді сухого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері і можуть бути розведені (наприклад, водою або фізіологічним розчином) до відповідної концентрації, необхідної для введення індивідууму.

Переважно, один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичні композиції згідно з винаходом постачаються у вигляді сухого стерильного ліофілізованого порошку в герметично запаяному контейнері в уніфікованій дозі що складає щонайменше 5 мг, а більш переважно щонайменше 10 мг, щонайменше 15 мг, щонайменше 25 мг, щонайменше 35 мг, щонайменше 45 мг, щонайменше 50 мг, щонайменше 75 мг або щонайменше 100 мг. Ліофілізовані профілактичні або терапевтичні засоби або фармацевтичні композиції згідно з винаходом повинні зберігатися при 2-8 "С в контейнері, в якому вони були одержані, і ці профілактичні або терапевтичні засоби або фармацевтичні композиції згідно з винаходом повинні бути введені через 1 тиждень, а переважно через 5 днів, через 72 години, через 48 годин, через 24 години, через 12 годин, через 6 годин, через 5 годин, через З години або через 1 годину після розведення. У альтернативному варіанті винаходу один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичні композиції згідно з винаходом постачаються в рідкій формі в герметично запаяному контейнері з вказаною кількістю і концентрацією агента. Переважно, композиція, що вводиться в рідкій формі, постачається в герметично запаяному контейнері в кількості, що складає щонайменше 0,25 мг/мл, а більш переважно щонайменше 0,5 мг/мл, щонайменше 1 мг/мл, щонайменше 2,5 мг/мл, щонайменше 5 мг/мл, щонайменше 8 мг/мл, щонайменше 10 мг/мл, щонайменше 15 мг/кг, щонайменше 25 мг/мл, щонайменше 50 мг/мл, щонайменше 75 мг/мл або щонайменше 100 мг/мл. Така рідка форма повинна зберігатися при 2-8 "С в контейнері, в якому вона була одержана.

Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути включені в фармацевтичну композицію, придатну для парентерального введення. Переважно, зв'язувальний білок одержують у вигляді розчину для ін'єкцій, що містить 0,1-250 мг/мл антитіла. Розчин для ін'єкцій може складатися з рідкої або ліофілізованої лікарської форми і знаходитися в посудині з кремнію або янтарної смоли, в ампулі або в попередньо заповненому шприці. Буфер може являти собою 1-50 мМ І-гістидин (оптимально 5- мМ), при рН 5,0-7,0 (оптимально рН 6,0). Іншими придатними буферами є, але не обмежуються ними, сукцинат натрію, цитрат натрію, фосфат натрію або фосфат калію. Хлорид натрію може бути використаний для зниження токсичності розчину при концентрації 0-300 мМ (для рідкої лікарської форми оптимальною є концентрація 150 мМ). У ліофілізовану лікарську форму можуть бути включені кріозахисні агенти, головним чином 0-1095 сахароза (оптимально 0,5-1,095). Іншими придатними кріозахисними агентами є трегалоза і лактоза. У ліофілізовану лікарську форму можуть бути включені агенти, що надають об'єм, головним чином 1-1095 маніт (оптимально 2-495). У рідких і ліофілізованих лікарських формах можуть використовуватися стабілізатори, головним чином 1-50 мМ І-метіоніну (оптимально 5-10 мМ). Іншими придатними агентами, що надають об'єм, є гліцин і аргінін, які можуть бути включені у вигляді 0-0,0595 полісорбату-80 (оптимально 0,005-0,0195). Додатковими поверхнево- активними речовинами є, але не обмежуються ними, полісорбат-20 і поверхнево-активні речовини в.

Композиції згідно з винаходом можуть мати різні форми. Такими формами є, наприклад, рідкі, напівтверді і тверді лікарські форми, такі як рідкі розчини (наприклад, розчини для ін'єкцій і інфузій), дисперсії або суспензії, таблетки, драже, порошки, ліпосоми і супозиторії. Вибір таких форм залежить від передбачуваного способу введення і терапевтичного застосування. Типовими композиціями є композиції у формі розчинів для ін'єкцій або інфузій, такі як композиції, аналогічні композиціям, використовуваним для пасивної імунізації людини іншими антитілами. Вибраним способом введення є парентеральне введення (наприклад, внутрішньовенне, підшкірне, внутрішньоочеревинне, внутрішньом'язове введення). У переважному варіанті винаходу описаний тут 01 4-зв'язувальний білок вводять шляхом внутрішньовенного вливання або внутрішньовенної ін'єкції. У іншому переважному варіанті винаходу 0 І 4-зв'язувальний білок вводять шляхом внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції.

Терапевтичні композиції звичайно повинні бути стерильними і стабільними в умовах їх одержання і зберігання. Така композиція може бути приготована у вигляді розчину, мікроемульсії, дисперсії, ліпосоми або іншої впорядкованої структури, придатної для введення лікарського засобу у високій концентрації. Стерильні розчини для ін'єкцій можуть бути одержані шляхом введення активної сполуки (тобто антитіла або його частини) в потрібній кількості у відповідному розчиннику разом з одним з перерахованих тут інгредієнтів або з їх комбінаціями, якщо це необхідно, з подальшою стерилізацією шляхом фільтрації. Взагалі кажучи, дисперсії одержують шляхом введення активної сполуки в стерильний носій, що містить основне дисперсійне середовище і інші необхідні інгредієнти з числа інгредієнтів, перерахованих в даній заявці У випадку використання стерильних ліофілізованих порошків для одержання стерильних розчинів для ін'єкцій, такі порошки переважно приготовляють із попередньо стерильно відфільтрованого розчину шляхом його вакуумного сушіння і сушіння розпиленням з одержанням порошку, що містить активний інгредієнт плюс будь-який додатковий потрібний інгредієнт. Відповідна текучість розчину може підтримуватися, наприклад, з використанням покриття, такого як лецитин, шляхом збереження необхідного розміру частинок у випадку дисперсії і з використанням поверхнево-активних речовин. Уповільнена абсорбція композицій для ін'єкцій може досягатися шляхом включення в дану композицію агента, що уповільнює абсорбцію, наприклад моностеаратних солей і желатину.

РІГ 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути введені різними методами, відомими фахівцям, хоч, в одному з варіантів винаходу, для багатьох терапевтичних застосувань, переважним шляхом/способом введення є підшкірна ін'єкція, внутрішньовенна ін'єкція або інфузія. Потрібно зазначити, що шлях і/або спосіб введення варіюють залежно від бажаних результатів. У деяких варіантах винаходу активна сполука може бути одержана з використанням носія, який буде захищати дану сполуку від швидкого вивільнення, наприклад, у вигляді складу з контрольованим вивільненням, включаючи імплантати, черезшкірні пластири і мікроіїнкапсульовані системи доставки. Можуть бути використані біологічно розкладані, біологічно сумісні полімери, такі як етиленвінілацетат, поліангідриди, полігліколева кислота, колаген, поліортоефіри і полімолочна кислота. Багато які методи одержання таких складів запатентовані або, як правило, відомі фахівцям в даній галузі техніки. Див., наприклад, Зивіаіпеа апа СопігоПей Кеїеазе Огид Оеїїмегу Зуз(етв, у. К. Кобіпзоп, ед. (Магсеї! ОеккКег,

Іпс., Мем/ МогК, 1978).

У деяких варіантах винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом може бути введений перорально, наприклад, разом з інертним розріджувачем або з легко засвоюваним харчовим носієм.

Сполука (і інші інгредієнти, якщо це необхідно) може бути поміщена в жорсткі або м'які желатинові капсули, спресована в таблетки або включена безпосередньо в їжу індивідуума. Для перорального терапевтичного введення сполуки можуть бути введені разом з наповнювачами і використані в формі таблеток для проковтування, защічних таблеток, пастилок, капсул, еліксирів, суспензій, сиропів, облаток і т. п. Для введення сполуки згідно з винаходом непарентеральними методами може виявитися необхідним нанесення на сполуку покриття з матеріалу, що попереджає її інактивацію, або спільне введення сполуки з цим матеріалом.

У композиції можуть бути також включені допоміжні активні сполуки. У деяких варіантах винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом приготовляють і/або вводять разом з одним або декількома іншими терапевтичними засобами, які можуть бути використані для лікування розладів, асоційованих з негативним впливом активності 0 І 4. Так, наприклад, анти-пибі І 4 антитіло або його частина згідно з винаходом можуть бути приготовані і/або введені разом з одним або декількома додатковими антитілами, які зв'язуються з іншими мішенями (наприклад, з антитілами, які зв'язуються з іншими цитокінами або з молекулами клітинної поверхні). Крім того, один або декілька зв'язувальних білків згідно з винаходом можуть бути використані в комбінації з двома або більше вищезазначеними терапевтичними засобами. У такій комбінованій терапії можуть застосовуватися переважно більш низькі дози терапевтичних засобів, що вводяться, що дозволяє уникнути можливої токсичності або ускладнень, асоційованих з різними монотерапіями.

У деяких варіантах винаходу І І 4-зв'язувальний білок згідно з винаходом приєднують до відомого носія, що збільшує час напівжиття цього білка. Такими носіями є, але не обмежуються ними, Ес- домен, полієтиленгліколь і декстран. Такі носії описані, наприклад, в патенті США Мо 6660843 В1 ів опублікованій заявці РСТ УМО 99/25044, які вводяться в даний опис за допомогою посилання.

У конкретному варіанті винаходу методами генотерапії що проводиться з метою лікування, попередження, усунення або зниження тяжкості розладу або одного або декількох його симптомів, є введення нуклеотидних послідовностей нуклеїнової кислоти, що кодують зв'язувальний білок згідно з винаходом або інший профілактичний або терапевтичний засіб згідно з винаходом. Генотерапія означає терапію, здійснювану шляхом введення індивідууму нуклеїнової кислоти, що експресована або експресується. У цьому варіанті винаходу нуклеїнові кислоти продукують кодовані ними зв'язувальний білок або профілактичний або терапевтичний засіб згідно з винаходом, які опосередковують профілактичний або терапевтичний ефект.

У даному винаході може бути застосований будь-який з методів генотерапії, відомих фахівцям.

Загальний огляд цих методів генотерапії можна знайти в публікаціях Соїдз5рієї еї аї., Сіп. Рнаптасу, 12: 488-505 (1993); Ми апа Ми, Віоїпегару, З: 87-95 (1991); ТоІвіо5Пем, Апп. Неу. Рпаптасої. Тохісої, 32: 573-596 (1993); Миїйїдап, Зсівєпсе, 260: 926-932 (1993); і Могдап апа Апдегзоп, Апп. Кеу. Віоспет., 62: 191-217 (1993); Кобріпзоп С. Тгепа5 Віоїесппої, 11(53: 155 (1993). Методи, добре відомі фахівцям в галузі техніки рекомбінантних ДНК, можна знайти в керівництві А!,5иБбеї еї аї. (еав5.), Сиггепі Ргоїосої!5 іп

Моїесшіаг Віоїоду (Чойп Уу/Пеу 6 опе, Мем/ мок, 1993); апа Кпиедієї, Сепе Тгапвіег апа Ехргезвіоп. А

Гарогаїгу Мапиа! (5іосКіоп Ргез5, Мем/ МогкК, 1990). Докладний опис різних методів генотерапії наводиться в публікації заявки на патент США Мо 20050042664 АТ, яка вводиться в даний опис за допомогою посилання.

У іншому аспекті даний винахід стосується способу терапії (наприклад, лікування, інгібування, ослаблення симптомів, уповільнення або запобігання розвитку або повторній появі або рецидиву) або попередження розвитку ОІ І 4-асоційованої пухлини у індивідуума. Вказаний спосіб включає введення індивідууму ОІ І 4-зв'язувального білка, наприклад анти-О1і І 4 антитіла або його фрагмента, описаних в даній заявці, в кількості, достатній для лікування або попередження розвитку 0 | 4-асоційованої пухлини або 01 І 4-асоційованого ракового захворювання. Антагоніст 0/4, тобто анти-ОІ Г 4 антитіло або його фрагмент, може бути введений індивідууму окремо або в комбінації з іншими терапевтичними засобами, описаними в даній заявці. 014 грає важливу роль в розвитку патології, асоційованої з рядом захворювань, включаючи імунні і запальні компоненти, зокрема ангіогенез при раковому захворюванні і пухлині. Прикладами

РІ 4-асоційованих розладів є, але не обмежуються ними, розлади, які негативно впливають на нижченаведені біологічні процеси: на функцію і розвиток нервової системи; на стабілізацію артеріальних ендотеліальних процесів і ангіогенез; на регуляцію основних клітинних взаємодій між ендокардом і міокардом під час зародження клапана і розвитку і диференціації шлуночків; на гомеостаз серцевого клапана, а також на процеси, що викликають інші розлади у людини, включаючи розлади серцево-судинної системи; тимчасове диференціювання клітинних ліній ендокринного або екзокринного відділу підшлункової залози; на вибір клітиною одного 3 двох шляхів лінії диференціювання, а саме вибір між секреторною і абсорбційною лініями диференціювання в кишечнику; на збільшення компартменту гемопоетичних стовбурових клітин в процесі розвитку кістки і участь в комітуванні клітин в остеобластну лінію диференціювання, наприклад в процесі розвитку остеопорозу; на регуляцію вибору клітиною шляху диференціювання в молочних залозах на деяких окремих стадіях розвитку; і на певні неядерні механізми, такі як регуляція рівня актину в цитоскелеті за допомогою тирозинкінази АБ1. Більш конкретно, ОІІ4-асоційованими розладами є, але не обмежуються ними, рак, Т-ГЛЛ (Т-клітинний гострий лімфобластний лейкоз), САСАФЗІЇ. (церебральна аутосомно-домінантна артеріопатіяї, асоційована з інфарктами в підкорковому шарі і лейкоенцефалопатією), РС (розсіяний склероз), тетралогія Фалло і синдром Алажілля. Антитіла і їх антигензв'язувальні частини, описані в даній заявці, переважно використовувати для лікування раку і пухлин.

Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути використані окремо або в комбінації один з одним, тобто більше ніж один описаний тут 01 І 4-зв'язувальний білок може бути використаний для лікування раку, пухлини або іншого розладу, при яких, на здоров'я індивідуума, найбільш сприятливий ефект надають зв'язування з І І 4, інгібування ОБІГ 4 і/або нейтралізація 0/4, або такий ефект може бути досягнутий іншими способами.

Потрібно зазначити, що 01 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути використані окремо або в комбінації з додатковим агентом, наприклад з терапевтичним засобом, де вказаний додатковий агент може бути вибраний самим фахівцем залежно від мети введення. Так, наприклад, додатковим агентом може бути терапевтичний засіб, який, як відомо, може бути використаний для лікування раку, пухлини або захворювання або стану, при якому зв'язування з бі | 4 або інгібування рі4 розглядається як бажаний або переважний фактор для лікування раку, пухлини або іншого захворювання або стану. Додатковим агентом може бути також агент, який надає терапевтичній композиції додаткової ефективності, наприклад агент, який поліпшує в'язкість композиції.

Потрібно також зазначити, що комбінації згідно з винаходом являють собою комбінації, які можуть бути використані з метою даного винаходу. Засоби, описані нижче, наводяться лише для ілюстрації і не обмежують обсягу винаходу. Комбінаціями, які є частиною даного винаходу, можуть бути антитіла згідно з винаходом, що вводяться в поєднанні щонайменше з одним додатковим агентом, вибраним з нижченаведеного списку. Комбінація може також включати більше ніж один додатковий агент, наприклад два або три додаткових агенти, якщо такою комбінацією є одержана композиція, яка може здійснювати потрібні функції.

Переважними комбінаціями є нестероїдні прозапальні засоби, також звані НСПЗ3, які включають лікарські засоби, подібні до ібупрофену. Іншими переважними комбінаціями є кортикостероїди, включаючи преднізолон; при цьому добре відомі побічні ефекти використовуваних стероїдів можуть бути знижені або навіть усунені шляхом зменшення дози стероїдів, використовуваних для лікування пацієнтів в комбінації з анти-ОІ 4 антитілами згідно з винаходом. Необмежувальними прикладами терапевтичних засобів для лікування ревматоїдного артриту, з якими можуть бути об'єднані антитіло або його частина згідно з винаходом, є інгібуючі цитокін прозапальні засоби (ЦІП3З); антитіла або антагоністи проти інших людських цитокінів або факторів росту, наприклад ТМЕ, СТ, 1-1, 1-2, 1-3, І - 4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 11-15, 11-16, 1-18, 1-21, інтерферонів, ЕМАР-ЇЇ, СМ-СЗЕ, ЕСЕ і РОСБЕ. Антитіла згідно з винаходом або їх антигензв'язувальні частини можуть бути об'єднані з антитілами проти молекул клітинної поверхні, таких як СО2, СОЗ3, 204, 208, 2025, 2028, Сс030, 2040, 2045, С0О69, сорво (87.1), СО86 (87.2), СООО, СТІ А або їх ліганди включаючи СО154 (др39 або СО401І).

Переважні комбінації терапевтичних засобів можуть впливати на різні ділянки шляхів передачі проонкогенного або проангіогенного сигналу. Переважними прикладами терапевтичних засобів, які можуть бути використані в способах і композиціях згідно з винаходом, є протипухлинні засоби, засоби для променевої терапії і хіміотерапевтичні засоби, такі як ДНК-алкілувальні агенти, цисплатин, карбоплатин, антитубулінові агенти, паклітаксел, доцетаксел, таксол, доксорубіцин, гемцитабін, гемзар, антрацикліни, адріаміцин, інгібітори топоізомерази І, інгібітори топоізомерази ЇЇ, 5-фторурацил (5-3), лейковорин, іринотекан, інгібітори тирозинкіназних рецепторів (наприклад, ерлотиніб, гефітиніб), інгібітори СОХ-2 (наприклад, целекоксиб) і інгібітори кінази.

РІГ 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути також об'єднані з такими агентами, як метотрексат, 6-МР, азатіоприн, сульфасалазин, месалазин, олсалазин, хлорохінін/гідроксихлорохін, пеніциламін, ауротіомалат (що вводиться внутрішньом'язово і перорально), азатіоприн, колхіцин, кортикостероїди (ін'єктовані перорально, шляхом інгаляції і місцево), агоністи адренорецептора бета-2 (сальбутамол, тербуталін, сальметерал), ксантини (теофілін, амінофілін), кромоглікат, недокроміл, кетотифен, іпратропій і окситропій, циклоспорин, ЕК5БОб, рапаміцин, мікофеноляту мофетил, лефлуномід, НСПЗ3, наприклад ібупрофен, кортикостероїди, такі як преднізолон, інгібітори фосфодіестерази, агоністи аденозину, антитромботичні засоби, інгібітори комплементу, адренергічні засоби, агенти, що блокують передачу сигналу прозапальними цитокінами, такими як 1-1 (наприклад, інгібітори кіназ ІКАК, МІК, ІКК, р38 або МАР), інгібітори І--1р- і ТМЕа-конвертуючих ферментів (ТАСЕ), інгібітори Т-клітинних конвертуючих ферментів, інгібітори передачі ТМЕа-сигналу, такі як інгібітори кінази, інгібітори металопротеїнази, сульфасалазин, азатіоприн, б-меркаптопурини, інгібітори ангіотензинконвертуючого ферменту, розчинні рецептори цитокінів і їх похідні (наприклад, розчинні рецептори ТМЕ р55 або р75 і похідні Р/У5ТМЕКІде (Епьбге! м ї раОзЗТМЕКІдо (Ленерцепт)), 511-181, в1/- 1ВІЇ, 51 -6К), прозапальні цитокіни (наприклад, 1-4, 1-10, 11-11, 1-13 ї ТОЕВД), целекоксиб, фолієва кислота, сульфат гідроксихлорохіну, рофекоксиб, етанерцепт, інфліксимаб, напроксен, вальдекоксиб, сульфасалазин, метилпреднізолон, мелоксикам, ацетат метилпреднізолону, тіомалат золота-натрію, аспірин, ацетонід триамцинолону, напсилат пропоксифену/АРАР, фолат, набуметон, диклофенак, піроксикам, етодолак, диклофенак натрію, оксапрозин, оксикодон-НСІ, бітартрат гідрокодону/АРАР, диклофенак натрію/мізопростол, фентаніл, анакінра, людський рекомбінантний трамадол-НСІ, салсалат, суліндак, ціанокобаламін/лЛа/піридоксин, ацетамінофен, алендронат натрію, преднізолон, сульфат морфіну, гідрохлорид лідокаїну, індометацин, сульфат глюкозаміну/хондроїтин, амітриптилін-

НСІ, сульфадіазин, оксикодон-НСі/ацетамінофен, олопатадин-НеСЇ, мізопростол, напроксен натрію, омепразол, циклофосфамід, ритуксимаб, І/-1, ТВАР, МВА, СТІ А4-ІС, ІІ -18 ВР, анти-1ІІ -18 антитіло, анти-ІЇ 15 антитіло, ВІВВ-796, 5С10-469, МХ-702, АМа-548, УХ-740, рофлумеласт, ІС-485, СОС-801 і мезопрам. Переважні комбінації включають метотрексат або лефлуномід, а у випадку помірного або важкого ревматоїдного артриту - циклоспорин.

Необмежувальними прикладами терапевтичних засобів для лікування раку, з якими може бути об'єднаний ОІІ4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, є нижченаведені засоби: будезонід; епідермальний фактор росту; кортикостероїди; циклоспорин, сульфасалазин; аміносаліцилати; 6- меркаптопурин; азатіоприн; метронідазол; інгібітори ліпоксигенази; месаламін; олсалазин; балсалазид; антиоксиданти; інгібітори тромбоксану; антагоністи рецептора 1-1; моноклональні анти-

І--18 антитіла; моноклональні анти-іЇ!-б антитіла; фактори росту; інгібітори еластази; сполуки піридинілімідазолу; антитіла або антагоністи, направлені проти інших людських цитокінів або факторів росту, наприклад ТМЕ, ГТ, 1-1, 1-2, 1-6, 1-7, 1-8, 11-15, 11-16, 1-17, 1-18, ЕМАРА-ЇЇ, СМ-С5Е, РОБ і

РОСБР. Антитіла згідно з винаходом або їх антигензв'язувальні частини можуть бути об'єднані з антитілами проти молекул клітинної поверхні, таких як СО2, СОЗ, 204, СО08, 2025, С028, 030, С040, сра5, с069, С0О0, або їх лігандів. Антитіла згідно з винаходом або їх антигензв'язувальні частини можуть бути об'єднані з такими засобами, як метотрексат, циклоспорин, ЕК5БОб, рапаміцин, мікофеноляту мофетил, лефлуномід, НСПЗЗ3, наприклад ібупрофен, кортикостероїди, такі як преднізолон, інгібітори фосфодіестерази, агоністи аденозину, антитромботичні засоби, інгібітори комплементу, адренергічні засоби, засоби, що блокують передачу сигналу прозапальними цитокінами, такими як 1-1 (наприклад, ІКАК, шляхи передачі МІК-сигналу прозапальними цитокінами, такими як

ТМГЕа, ІКК, рз38 або інгібітори кінази МАР), інгібітори І--1р-конвертуючого ферменту, інгібітори ТМЕа- конвертуючого ферменту, інгібітори передачі Т-клітинного сигналу, такі як інгібітори кінази, інгібітори металопротеїнази, сульфасалазин, азатіоприн, б-меркаптопурини, інгібітори ангіотензинконвертуючого ферменту, розчинні рецептори цитокінів і їх похідні (наприклад, розчинні рецептори ТМЕ р55 або р75, 51І -1 ВІ, 511 -1 ВІЇ, 51 -6К) і прозапальні цитокіни (наприклад, ІІ -4, 1-10, І - 11,11-13ї ТОВ).

Іншими прикладами терапевтичних засобів, з якими може бути об'єднаний бі | 4-зв'язувальний білок, є наступні засоби: антагоністи ТМЕ, наприклад анти-ТМЕ антитіла, 02Е7 (публікація заявки РСТ

Мо УМО 97/29131; НОМІКАФ), СА2 (ВЕМІСАОЕФ), СОР 571, конструкції ТМЕК-ІяЯ, (р7/5ТМЕВІЗС (ЕМВВАЕГ Ф) і ро5ТМеЕКІЧО (І ЕМЕРСЕРТ)) і інгібітори РОЕ4. Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути об'єднані з кортикостероїдами, наприклад з будезонідом і дексаметазоном. Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути також об'єднані з такими засобами, як сульфасалазин, 5- аміносаліцилова кислота і олсалазин, і з засобами, що блокують синтез або дію прозапальних цитокінів, таких як ІІ -1, наприклад інгібітори І--1В-конвертуючого ферменту і ІІ-Тга. 0 І 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути також використані разом з інгібіторами передачі Т-клітинних сигналів, наприклад з інгібіторами тирозинкінази, б-меркаптопуринами. ОГ | 4-зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути об'єднані з 1ІЇ-11. Зв'язувальні білки згідно з винаходом можуть бути об'єднані з мезаламіном, преднізоном, азатіоприном, меркаптопурином, інфліксимабом, натрію сукцинатом метилпреднізолону, дифеноксилатом/сульфатом атропіну, гідрохлоридом лопераміду, метотрексатом, омепразолом, фолатом, ципрофлоксацином/декстрозою-водою, бітартратом гідрокодону/АРАР, гідрохлоридом тетрацикліну, флуоцинонідом, метронідазолом, тимерозалом/борною кислотою, холестираміном/сахарозою, гідрохлоридом ципрофлоксацину, сульфатом гіосціаміну, гідрохлоридом меперидину, гідрохлоридом мідазоламу, оксикодоном-

НСі/ацетамінофеном, гідрохлоридом прометазину, фосфатом натрію, сульфаметоксазолом/триметопримом, целекоксибом, полікарбофілом, напсилатом пропоксифену, гідрокортизоном, полівітамінами, балсалазиду динатрієм, фосфатом кодеїну/АРАР, колесевеламом-

НОСІ, ціаанокобаламіном, фолієвою кислотою, левофлоксацином, метилпреднізолоном, наталізумабом і інтерфероном-гамма.

Необмежувальними прикладами терапевтичних засобів, з якими може бути об'єднаний зв'язувальний білок згідно з винаходом, є: аспірин, нітрогліцерин, мононітрат ізосорбіду, сукцинат метопрололу, атенолол, тартрат метопрололу, безилат амлодипіну, гідрохлорид дилтіазему, динітрат ізосорбіду, бісульфат клопідогрелю, ніфедипін, аторвастатин кальцію, хлорид калію, фуросемід, симвастатин, верапаміл-НСІ, дигоксин, гідрохлорид пропранололу, карведилол, лізиноприл, спіронолактон, гідрохлортіазид, малеат еналаприлу, надолол, раміприл, еноксапарин натрію, натрійвмісний гепарин, валсартан, гідрохлорид соталолу, фенофібрат, езетиміб, буметанід, лозартан калію, лізиноприл/гідрохлортіазид, фелодипін, каптоприл і фумарат бізопрололу.

Фармацевтичні композиції згідно з винаходом можуть включати "терапевтично ефективну кількість" або "профілактично ефективну кількість" зв'язувального білка згідно з винаходом. Термін "герапевтично ефективна кількість" означає кількість, яка, у відповідних дозах і протягом необхідного періоду часу, є ефективною для досягнення бажаного терапевтичного ефекту. Терапевтично ефективна кількість зв'язувального білка може бути визначена самим фахівцем, і така кількість може варіюватися залежно від таких факторів, як тип патологічного розладу, вік, стать і маса індивідуума, а також від здатності зв'язувального білка виробляти бажану відповідь у індивідуума. Терапевтично ефективна кількість також означає кількість, при якій терапевтично сприятливі ефекти перевищують будь-які токсичні або негативні ефекти вказаного зв'язувального білка. Термін "профілактично ефективна кількість" означає кількість, яка, у відповідних дозах і протягом необхідного періоду часу, є ефективною для досягнення бажаного профілактичного ефекту. Звичайно, оскільки профілактична доза вводиться індивідуумам до початку розвитку захворювання або на ранній стадії його розвитку, профілактично ефективна кількість повинна бути меншою терапевтично ефективної кількості.

Схеми введення доз можуть бути скоректовані для одержання оптимальної бажаної відповіді (наприклад, терапевтичної або профілактичної відповіді). Так, наприклад, протягом певного періоду часу може бути введена одна ударна доза або може бути введено декілька дробових доз, або ця доза може бути пропорційно знижена або збільшена залежно від терапевтичної ситуації. Для полегшення введення і для досягнення однорідності дози, особливо переважно, якщо композиції для парентерального введення будуть одержані в уніфікованій лікарській формі. Застосовуваний тут термін "Уніфікована лікарська форма" означає фізично дискретні одиниці, використовувані як унітарні дози для лікування ссавців; причому кожну дозу такої одиниці, що містить попередньо визначену кількість активної сполуки, обчислюють так, щоб досягався бажаний терапевтичний ефект в комбінації з необхідним фармацевтичним носієм. Визначення специфікації дози такої уніфікованої лікарської форми згідно з винаходом безпосередньо залежить від (а) унікальних властивостей активної сполуки і від терапевтичного або профілактичного ефекту, що конкретно досягається, і (5) обмежень, відомих фахівцям і пов'язаних з приготуванням такої активної сполуки, з точки зору сприйнятливості індивідуума до такого лікування.

Репрезентативна і необмежувальна терапевтично або профілактично ефективна кількість Оі І 4- зв'язувального білка згідно з винаходом складає в межах 0,1-20 мг/кг, а більш переважно 1-10 мг/кг.

При цьому потрібно зазначити, що рівні доз можуть варіюватися залежно від типу і тяжкості стану, що піддається лікуванню. Крім того, очевидно, що для будь-якого конкретного індивідуума конкретна схема введення доз повинна бути скоректована залежно від часу, що вимагається для лікування індивідуума, і від призначення лікаря, що здійснює введення або спостереження за введенням таких композицій, причому наведені тут інтервали доз є лише ілюстративними і не обмежують обсяг або практичне застосування заявленої композиції.

Для фахівця в даній галузі абсолютно очевидно, що в описані тут способи можуть бути внесені і інші придатні модифікації і зміни, які можуть бути здійснені з використанням приданих еквівалентів, що не виходять за рамки обсягу даного винаходу або його варіантів, описаних в даній заявці. Хоч даний винахід досить детально описаний в даній заявці, однак, для кращого його розуміння, в цьому описі наводяться посилання на нижченаведені приклади, які представлені лише з метою ілюстрації і не обмежують обсягу винаходу.

Приклади

Приклад 1: Іп міго аналізи для визначення функціональної активності анти-Оі І 4 антитіл

Приклад 1.1. Визначення афінності із застосуванням технології поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕФ

Аналіз із застосуванням технології поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕФ (Віасоге, Іпс,

Різсаїаулау, Мем/ Уегхеу, О5) дозволяє визначити афінність антитіл або ЮОМО-Ід шляхом кінетичних вимірювань констант швидкості асоціації і дисоціації. Зв'язування анти-ОЇ 4 антитіл з очищеним рекомбінантним позаклітинним доменом 0114 визначали методом поверхневого плазмонного резонансу на обладнанні ВіасогеФ (Віасоге 2000, Віасоге 3000 або Віасоге Т100; СЕ Неайнсаге,

Різсаїаулау, Мем/ дегзеу, 05) з використанням робочого буфера НВЗ-ЕРВ (10 мМ НЕРЕЗ |рН 7,41, 150

ММ Масі, З мМ ЕОТА, 0,1 мг/мл ВЗА ії 0,00595 поверхнево-активної речовини Р20) при 25 С. Так, наприклад, приблизно 9000 резонансних одиниць козячого поліклонального антитіла проти людського

Ес (Тпепто Різпег Зсіепійіс Іпс., КоскКтога, Шіпої5, 5), розведеного в 10 мМ ацетату натрію (рн 4,5), безпосередньо іммобілізували на біосенсорному чипі СМ5 експериментальної якості за допомогою стандартного набору для зв'язування з аміном відповідно до інструкцій виробників, і ці процедури здійснювали при 25 мкг/мл. Молекули, що не прореагували, на поверхні біосенсора блокували етаноламіном. Для кінетичних аналізів рівняння швидкості асоціації і дисоціації, виведені, виходячи з лангмюрівської моделі зв'язування 1:11, апроксимували одночасно для множини ін'єкцій антигену (шляхом проведення загального емпіричного аналізу) з використанням комп'ютерної програми

Зегпирбрег 2 (Віої одіс оїмаге), Віасоге ВіаемаІчайоп 4.0.1 зопйулаге або оцінної комп'ютерної програми

Віасоге Т100. Очищені антитіла розводили в робочому буфері для захоплення козячого антитіла проти людського Ес, специфічного до реакційної поверхні. Антитіла, які були захоплені як ліганд (1 мкг/мл), ін'єктували на реакційні матриці, при швидкості потоку 10 мкл/хв. У процесі аналізу, як контроль, всі вимірювання були проведені для "пустої" поверхні для захоплення (тобто за відсутності іммобілізованого анти-ОбІ І 4 антитіла). Константи швидкості асоціації і дисоціації, Коп (М с") і Кот (с7) визначали при постійній швидкості потоку 80 мкл/хв. Константи швидкості асоціації і дисоціації обчислювали шляхом вимірювання кінетики зв'язування при різних концентраціях антигену в межах 1,23-900 нМ, одержаних внаслідок серійного З-кратного розведення, і були включені ін'єкції тільки буфера (використовуваного як подвійний контроль). Потім константу рівноважної дисоціації Ко (М) в реакції між антитілами і антигсеном-мішенню обчислювали виходячи з констант швидкості кінетичної реакції за наступною формулою: Ко-Кояй/Коп.. Потім реєстрували зв'язування залежно від часу і обчислювали константи швидкості кінетичної реакції. У цьому аналізі можуть бути виміряні швидкості асоціації з верхньою межею 109 М"с7 і швидкості дисоціації з нижньою межею 106 с.

Приклад 1.2. Зв'язування анти-О1І І 4 антитіл з розчинним позаклітинним доменом 01 4, яке було визначене за допомогою ЕГІЗА

Метод 1 (ЕГІЗА із захопленням) 9б-ямкові планшети Мипо-Іттипо (25439454) покривали 5 мкг/мл антитіла проти людського дО

(специфічного до Есу-фрагмента, Часкбзоп ІттипоКезеагсі, Ж109-005-098, 100 мкл/ямку) в О-РВ5 (сірсо 214190) і інкубували протягом ночі при 4 "С. ЕІ ІЗА-планшети З рази промивали промивальним буфером (РВ5, 0,0595 Твін-20), а потім блокували 200 мл/ямку блокувального буфера (0О-РВ5, 195

ВБА, 1 мМ Сасі», 0,0595 Твін-20) протягом 1 години при 25 "С. Планшети З рази промивали і інкубували зі 100 мкл/ямку анти-01 14 антитіл (0,0001-100 нМ, 10-кратне серійне розведення в блокувальному буфері) протягом 1 години при 25 "С, а потім знов З рази промивали. Планшети, що містять захоплене анти-ОІ | 4 антитіло, інкубували з позаклітинним доменом людського ОІ І 4, міченим біотином (10 нМ в блокувальному буфері, 100 мкл/ямку) протягом 1 години при 25 "С, З рази промивали і інкубували зі стрептавідином, кон'югованим з ПХ (КРІ. 2474-3000, розведення 1:10000 в блокувальному буфері, 100 мкл/ямку) протягом 1 години при 25 "С. Після останнього промивання планшети інкубували зі 100 мкл/ямку субстрату для ЕГІЗА (1-5їер Ойга ТМВ-ЕТІЗА, Ріегсе 5340280).

Реакцію припиняли через 2 хвилини при 25 "С додаванням 100 мкл/ямку 2н Небо і зчитували оптичну густину на 450 нм. Дані аналізували за допомогою комп'ютерної програми Сгарпрай Ргіхт і реєстрували величини ЕСзо.

Метод 2 (планшент, покритий міддю)

Перед використанням 9б-ямкові планшети, покриті міддю (Тпегто Зсіепійс 15143), З рази промивали промивальним буфером (РВ5, 0,0595 Твін-20), а потім інкубували зі 100 мл/ямку людського рі 4-пі5 або мишачого 01 4-пі5, або 0 | 4-піх яванського макака при 1 мкг/мл в РВ5, протягом 1 години при 25"С зі струшуванням. Потім планшети З рази промивали. Після цього в планшет додавали 100 мкл/ямку рекомбінантних щурячих/людських химерних або рекомбінантних людських анти-ОЇ 14 антитіл (0,00164-27 нМ, 4-кратне серійне розведення в ЕГІЗА-буфері - РВЗТ, 1095 зирегріоскК (Ріегсе Ж37515)) протягом 1 години при 25"С зі струшуванням, а потім знов З рази промивали. Планшети інкубували з ПХ-кон'югованим козячим антилюдським антитілом (Ріегсе Ж31412) (розведення 1:40000 в ЕГІ5А-буфері, 100 мкл/ямку) протягом 1 години при 25 "С зі струшуванням, а потім З рази промивали. Після останнього промивання, планшети інкубували з 100 мкл/ямку субстрату для ЕГІЗА (Зідта 218665). Реакцію припиняли через 8 хвилин при 25 "С додаванням 100 мкл/ямку Ін

НОЇ ї зчитували оптичну густину на 450 нм. Дані аналізували за допомогою комп'ютерної програми

Сгарпраа Ргіхт і реєстрували величини ЕСово.

Приклад 1.3. Зв'язування моноклональних анти-О1І 14 антитіл з поверхнею людських пухлинних клітинних ліній, оцінюване за допомогою проточної цитометрії (ЕАС5)

Стабільні клітинні лінії, надекспресуючі ЮГ 14 клітинної поверхні, збирали з колб з клітинною культурою, чотири рази промивали і ресуспендували в забуференому фосфатом фізіологічному розчині (РВ5), що містить 195 альбуміну бичачої сироватки і 1 мМ Сасіг (ГЕАС5-буфер). 1,5х105 клітин інкубували з антитілами в різних концентраціях в РЕАС5-буфері протягом 60 хвилин на льоду. Клітини два рази промивали, а потім додавали 50 мкл кон'югованого з К-фікоеритрином Е(ар')»-фрагмента антитіла проти щурячих Ідс (розведення 1:200 в ЕАС5-буфері) (даскзоп ІттипоКезеагсі, Умев5і Сгоме,

Реппзуїмапіа, О5, Саї-я! 12-116-072). Після інкубування на льоду (4 "С, 60 хвилин) клітини три рази промивали і ресуспендували в ГАС5З-буфері. Флуоресценцію вимірювали на проточному цитометрі

Весіоп Оіскіпвоп ГАС5Саїїри-НТ5 (Весіоп ОісКіпбоп, Зап дозе, Саїйогпіа, О5). Дані аналізували з використанням комп'ютерної програми Сгарпрай Ргіхт, і величини ЕСво реєстрували як концентрацію антитіла, при якій рівень зв'язування досягає 5095 від максимального рівня зв'язування анти-ОІ І 4 антитіл з ОІ І 4-експресуючими клітинами.

Приклад 1.4. Інгібування взаємодії Моїсп-1 з розчинним позаклітинним доменом 0114 під дією анти-ОІ 4 антитіл (ЕГІЗА на конкурентне зв'язування) 96-ямкові планшети Мипс-Іттипо (2439454 для ЕГІЗА пПибі І 4) і 96-ямкові планшети Созіаг (29018 для ЕГІЗА тибІі І 4) покривали 16 нМ людського Моїсп-1 (НО бузівт5 23647-ТК, 100 мкл/ямку в О-

РВЗ) і інкубували протягом ночі при 4 "С. Потім планшети З рази промивали промивальним буфером (РВ5, 0,0595 Твін-20), а потім блокували 200 мкл/ямку блокувального буфера (0О-РВ5, 195 ВЗА, 1 мМ

Сасі», 0,0595 Твін-20) протягом 1 години при 25 "С. При блокуванні мічений біотином людський позаклітинний домен 01 4 (14 нМ) змішували з антитілом (30 пмМ-66 нМ, З-кратне серійне розведення в блокувальному буфері) протягом 1 години при 25 "С зі струшуванням. Після блокування аналітичні планшети промивали і інкубували з сумішами ОО І4/антитіло (100 мкл/ямку, 1 год. при 25" зі струшуванням). Потім планшети знов промивали і додавали 100 мкл/ямку стрептавідину, кон'югованого з ПХ (Ейгдегаій Жб5К-5104РНЕРХ, розведеного 1:5000 в блокувальному буфері), і залишали на 1 годину при 25 "С зі струшуванням. Після останнього промивання планшети проявляли з використанням 100 мкл/ямку субстрату (ТМВ бідта 218665), реакцію припиняли після 8-хвилинного інкубування при 25 "С (для ЕГІЗА ти 14), а потім інкубували 20 хвилин при 25 С (для ЕГІЗА пи0Г 14) з використанням 100 мкл/ямку їн НС, ії оптичну густину зчитували на 450 нм. Дані аналізували за допомогою комп'ютерної програми Сгарпрай Ргізт, і величини ІСзо реєстрували як концентрацію антитіла, при якій досягається 5095-е зниження рівня зв'язування 01 І 4 з Моїсп-1.

Приклад 1.5. Блокування зв'язування розчинного Моїсйп з І І 4-надекспресуючими клітинами 29305 під дією моноклональних анти-Оі | 4 антитіл, оцінюване за допомогою проточної цитометрії (ЕАС5 на конкурентне зв'язування)

Аналіз на блокування Моїсй. Коротко, стабільні клітинні лінії, надекспресуючі ОІ/14 клітинної поверхні, збирали з колб для культивування тканини і ресуспендували в забуференому фосфатом фізіологічному розчині (РВ5), що містить 195 альбумін бичачої сироватки і 1 мМ Сасіг (ЕАС5-буфер).

НЕК293-НОІ І 4- або НЕК293-тОІ І 4-клітини розподіляли по 96б-ямковому планшету (з М-подібним дном) при густині 1,5х10» клітин/ямку в ЕАС5-буфері. Після центрифугування клітин і відкидання супернатанту, в кожну ямку додавали 50 мкл очищеного до з відповідним розведенням і інкубували на льоду при 4 "С протягом 60 хвилин, а потім додавали 50 мкл/ямку Моїсп-1-біотину при 0,2 мкг/мл для ПОГ 1 4-2930 або 2,0 мкг/мл для тОі І 4-2935 (1,0 або 0,1 мкг/мл кінцевого розчину) і додатково інкубували ще 1 годину на льоду при 4 "С. Після двократного промивання клітин ЕАС5-буфером додавали 50 мкл стрептавідину, кон'югованого з К-фікоеритрином (розведення 1:150 в ЕАС5-буфері) (Часквоп ІттипоВезеагсі, М/езі Стоме, Реппзуїмапіа, О5, саїаіод по. 016-110-084). Після інкубування на льоду (4"С, 60 хвилин) клітини три рази промивали і ресуспендували в ЕАСсС5-буфері.

Флуоресценцію вимірювали на проточному цитометрі Весіоп біскіпвоп РАСзСаїїбиг-НТ5 (Весюп

Оіскіпбоп, Зап дуовзе, Саїйогпіа, 05). Дані аналізували з використанням комп'ютерної програми

Старпраад Ргіхт, і величини ЕСзо реєстрували як концентрацію, при якій досягається 5096-е зниження рівня зв'язування Моїсйп-1 з 0 І 4-експресуючими клітинами.

Приклад 1.6. Інгібування І І 4-залежного збільшення рівня 5МЕСЕКІ (5БЇ ТІ) в клітинах ЕА.пуб26 під дією анти-ОІ І 4 антитіл 9б-ямкові планшети з тканинною культурою покривали 100 мкл/ямку людського позаклітинного домену 014 при 1,67 мг/мл в Ю-РВ5 (сібрсо 414190) і інкубували протягом ночі при 4 "С. Потім планшети один раз промивали О-РВ5, і клітини ЕА.пу926 висівали при густині 4000 клітин/ямку за відсутності або в присутності антитіл. Проліферацію клітин вимірювали через чотири дні з використанням набору для аналізу на проліферацію клітин СУСООАМТ (Іпмігодеп, ЖС35007). Експресію 5МЕСЕНК'І в кондиціонованому середовищі детектували за допомогою набору для ЕГІЗА відповідно до інструкцій виробників (КО бЗузіет5 ЖОМА100В). Рівні «МЕСЕК1 нормалізували по КРИ, визначених за допомогою аналізу СУООАМТ, з урахуванням відмінностей в проліферації клітин.

Приклад 1.7. Інгібування 0 |4-залежної активації Моїсп в клітинах ЕА.пуб26 під дією анти-О1 | 4 антитіл за допомогою аналізу на Моїсп-репортер

У 96б-ямкові чорні планшети з прозорим дном для культивування тканин висівали 7000 сконструйованих клітин ЕА.пуЗ2б/ямку, експресуючих люциферазу, індуковану Моїсп-чутливим промотором. Антитіла серійно розводили, виходячи з концентрації 200 нМ, і змішували протягом 15 хвилин з рівним об'ємом 5000 клітин НЕК29З3С/ямку, експресуючих повнорозмірний 014. Клітини 2930/0114 культивували разом з Моїсп-репортервмісними клітинами ЕА.пу926 протягом 24 годин в присутності тестованих антитіл. Люциферазну активність аналізували з використанням субстрату

Рюотеда (Рготеда я Е2940).

Приклад 1.8. Методи аналізу і методика визначення ідентичності молекул і їх фізико-хімічних властивостей

Метод ПЕГ-преципітації

Використання ПЕГ для індукування фазового фракціонування твердого білка відповідно до принципу витіснення об'єму являє собою придатний спосіб оцінки розчинності білка. Використання

ПЕГ, в порівнянні з іншими осаджувальними речовинами, має декілька переваг, включаючи мінімальну денатурацію білків при температурах навколишнього середовища (що не впливає на третинну структуру білка) і відсутність необхідності в регуляції температури в межах від 4 "С до 30 "С, тобто дослідження по преципітації можуть бути проведені при температурі навколишнього середовища в лабораторних умовах.

Звичайно преципітацію білків за допомогою ПЕГ можна пояснити ефектом витіснення об'єму.

Відповідно до цієї теорії, білки стерично витісняються з областей розчинника, які зайняті лінійними ланцюгами ПЕГ. У результаті білки концентруються і, зрештою, осаджуються, якщо вони мають надмірну розчинність. З точки зору термодинаміки, стеричне витіснення приводить до збільшення хімічного потенціалу білка доти, поки він не перевищить хімічний потенціал білка, який знаходиться в абсолютно твердому стані, що буде приводити до преципітації білка. Це відбувається, головним чином, через небажану високу вільну енергію взаємодії між ПЕГ і білками і приводить до зниження бажаної гідратації білка, що зумовлено ефектами стеричного витіснення. У водних розчинах така переважна гідратація сприяє збереженню нативної структури білків. Було показано, що витіснення об'єму стає більш ефективним при збільшенні молекулярної маси ПЕГ, тобто із зростанням молекулярної маси ПЕГ потрібна менша кількість ПЕГ для преципітації білків.

Молекулярна маса ПЕГ 3000 була вибрана для оцінки розчинності антитіл, які входять в обсяг даного винаходу. 5096-й розчин ПЕГ одержували шляхом розчинення ПЕГ в деїіонізованій воді у відношенні один грам ПЕГ на 1 мл води. Потім розчин ПЕГ додавали до розчину антитіла, вихідна концентрація якого становила 0,5 мг/мл або менше, а об'єм становив 0,5 мл. Після цього постійно додавали розчин ПЕГ і змішували до першої появи стійкої каламутності. Процент ПЕГ 3000, необхідний для досягнення такої преципітації, обчислювали як 50 х (об'єм доданого розчину ПЕГ

З000/вихідний об'єм розчину антитіла перед додаванням ПЕГ).

Процент ПЕГ 3000, необхідний для досягнення такої преципітації білка, порівнювали з процентом, необхідним для преципітації білка з відомою водорозчинністю. Так, наприклад, водорозчинність адалімумабу перевищує 200 мг/мл. Отже, якщо процент, необхідний для преципітації білка, що представляє інтерес, аналогічний проценту, необхідному для преципітації адалімумабу, то передбачувана розчинність цього білка аналогічна розчинності адалімумабу.

Метод визначення істинної розчинності

Істинну розчинність визначали з використанням центрифужних фільтрів Атісоп для концентрування білка в розчині доти, поки не спостерігалося осадження білка з розчину, або доти, поки не був досягнутий мінімальний об'єм, при якому білок може концентруватися в фільтруючому пристрої. У останньому випадку 15-мілілітрові центрифужні фільтри Атісоп мають мінімальний об'єм приблизно 50 мкл, а 4-мілілітрові центрифужні фільтри Атісоп мають мінімальний об'єм приблизно 15 мкл.

Спочатку білок діалізували з одержанням відповідного(их) складу(ів). У цих дослідженнях кількість антитіла становила 10 мг або набагато менше. Потім розчин білка поміщали в камеру центрифужного фільтра Атісоп для ретентату. Цю камеру приєднували до нітроцелюлозної мембрани з порами, які дозволяють молекулам, що мають менше ніж 10-30 кілодальтон, проходити під дією відцентрової сили. Антитіла, розмір яких звичайно становить 140 кілодальтон, утримувалися, а вода, буферні молекули, невеликі наповнювачі і солі проходили через пори. Потім фільтр центрифуги обертали відповідно до інструкцій виробника доти, поки не спостерігалося осадження білка з розчину, або доти, поки не був досягнутий мінімальний об'єм, при якому білок може концентруватися в фільтруючому пристрої.

Після центрифугування розчин білка видаляли з камер для ретентату і вимірювали концентрацію по поглинанню ультрафіолету. Потім розчин залишали на 1-2 дні при 257С і 57С їі проводили моніторинг на ознаки осадження.

Методи спектроскопії кругового дихроїзму (КД) в ближньому УФ-діапазоні

КД-спектроскопія в області ближнього УФ дає важливу інформацію про третинну структуру білків і є одним з найбільш широко застосовуваних методів для цих цілей. КД означає диференціальне поглинання складових плоскополяризованого випромінювання з лівою і правою круговою поляризацією. Для білків хромофорами, що мають спектр КД в області ближнього УФ (250-320 нм), є ароматичні амінокислоти, тобто триптофан, тирозин і фенілаланін і дисульфідні зв'язки, а КД-ефект спостерігається в тому випадку, якщо хромофори мають асиметричну (приховану) конформацію.

Сигнали в області від 250 до 270 нм відповідають фенілаланіновим залишкам, сигнали в області від 270 до 290 нм відповідають тирозину, сигнали в області від 280 до 300 нм відповідають триптофану.

Дисульфідні зв'язки дають широкі слабі сигнали по всьому спектру ближнього УФ. КД-спектр в ближньому УФ може бути чутливим до невеликих змін третинної структури, наприклад до змін, що викликаються взаємодіями білок-білок, і/або змін умов одержання складу.

Існує також ряд інших факторів, які можуть впливати на КД-спектри ароматичних амінокислот.

Такими факторами, серед інших, є: (1) жорсткість молекули білка, (2) природа водневих зв'язків і (3) взаємодії між різними ароматичними амінокислотами. Крім того, білки з великою кількістю амінокислот можуть мати більш дрібні КД-смуги, що зумовлено гасінням позитивних і негативних смуг.

Коротко, білок діалізували з одержанням потрібного(их) складу(ів) при 1 мг/мл і сканували на довжині хвилі 250-320 нм або 240-320 нм на КД-спектрометрі Щдазсо 800. Також сканували відповідний склад без білка, і зареєстровані дані віднімали з даних, одержаних в результаті сканування розчину білка. КД-спектр в ближньому УФ являє собою графік залежності молярної еліптичності від довжини хвилі в області від 250 або 240 до 320 нм.

Загалом, для антитіл КД-спектр в ближньому УФ з напівсигмоїдним профілем вказує на хороше укладання третинної структури, а більш плоский і менш чітко виражений профіль вказує на значну тенденцію до розгорнення білка. Компактне укладання асоціюється з хорошою стабільністю, тоді як погане укладання вказує на внутрішню частину, яка може викликати гідрофобні взаємодії між молекулами білка і приводити до утворення небажаних агрегатів.

ДСК-технологія

Термостабільність антитіл оцінювали на ДСК-обладнанні. Використовуване ДСК-обладнання являє собою автоматизоване МР-ДСК-обладнання, забезпечене капілярними комірками (Місгоса!Ї, СЕ

Неайрсаге Ца./Місгоса!ї, ВисКіпдпат»іге, ОК). Дослідження по розгорненню молекул оцінювали шляхом сканування при швидкості 1 "С/хв. при температурі 25-95 С для 1 мг/мл зразка. Додатковими параметрами вимірювань є період апроксимації 16 секунд і час очікування перед скануванням, що становить 10 хвилин, де вказані вимірювання проводили в режимі відсутності зворотного зв'язку. Для кожного конкретного вимірювання 420 мкл зразкал/контролю поміщали в тримач для зразків вимірювального ДСК-пристрою згідно зі схемою заповнення планшетів, описаною нижче. Одержані термограми були побудовані для двох нестаціонарних моделей з метою одержання середніх температур і ентальпії різних переходів.

Додатковою вимогою, що пред'являється до кандидата на успішне його використання в біологічних дослідженнях, є збереження нативного стану і конформації білка. Білок у водному розчині знаходиться в рівновазі між його нативною (укладеною) конформацією і денатурованою (розгорненою) конформацією. Стабільність білка в нативному стані визначається величиною вільної енергії Гіббса (ро) даної системи і термодинамічним взаємозв'язком між змінами ентальпії (ОН) і ентропії (05).

Позитивна ОС вказує на те, що нативний стан є більш стабільним, ніж денатурований стан, тобто чим вище позитивна ОС, тим вище стабільність. Для розгорнення білка стабілізуючі сили повинні бути усунені. Конформаційна ентропія долає стабілізуючі сили, що приводить до розгорнення білка при температурах, при яких ентропія стає домінантною. ДСК дозволяє вимірювати ОН розгорнення білка в результаті теплової денатурації. Згідно із загальним законом термодинаміки можна стверджувати, що чим вище середня температура переходу (Тт), тим більш стабільним є білок при більш низьких температурах. При проведенні тієї самої експериментальної ДСК можна також вимірювати зміну теплоємності (ОСр) для денатурації білка. Зміни теплоємності, асоційовані з розгорненням білка, зумовлені, головним чином, змінами характеру гідратації бічних ланцюгів, які приховані в нативному стані, але стають більш доступними для розчинника в денатурованому стані. Було показано, що ДСК є цінним прогностичним фактором стабільності білків і інших біологічних макромолекул в рідких складах (Веттеїе апа Сотрої?, ВіоРнатт., 13: 36-46 (2000), і Кеттеїе еї а!., Рпагт. Кев., 15: 200-208 (1998)).

ЕХ-технологія

Ексклюзійна хроматографія застосовується для розділення білків по розміру. Білки, що містяться у водній рухомій фазі, пропускають через пористу смолу, упаковану як стаціонарна фаза на колонці.

Час утримування в колонці залежить від гідродинамічного розміру білка і розміру пор шару упакованої смоли. Більш дрібні молекули можуть проникати в менші пори в смолі і утримуються довше, ніж більш великі молекули. Після елюювання з колонки білки детектували по УФ-поглинанню. У ЕХ-методі використовували захисний гель Т5К (ТОБОН Віозсіепсе5, МопідотегуміПе, Реппзуїмапіа, О5, саї. по. 08543) і гель Т5К ЗО0005МУХІ. (ТО5ОН Віозсіепсе5, МопідотегуміПе, Реппзуїмапіа, О5, саї. по. 08541).

Як рухому фазу використовували 100 мМ Ма»НРО»:, 200 мМ Маг5О»5, рН 6,8. Швидкість потоку становила 0,25 мл/хв. Об'єм впорскування становив 20 мкл від 1 мг/мл зразка. Колонка мала кімнатну температуру. Температура автоматичного пристрою для взяття зразків становила 2-8 "С. Загальний час проведення процедури становив 55 хвилин. Детектування проводили по УФ-поглинанню на довжині хвилі 214 нм, де ширина смуги становила 8 нм, причому як стандарт використовували поглинання на довжині хвилі 360 нм з шириною смуги 100 нм.

Метод заморожування-розморожування

Розчини антитіл в потрібному складі в концентрації 1 мг/мл заморожували при -80 "С протягом щонайменше 4 годин, а потім розморожували при 30 С на водяній бані. Потім розчин знов заморожували при -80 "С. Таким чином, проводили 5 циклів заморожування-розморожування. Після проведення певних циклів заморожування-розморожування, наприклад другого і четвертого циклів, частина розчину може бути взята для ЕХ-аналізу з подальшим повторним заморожуванням. Аналіз стабільності в умовах заморожування-розморожуванняпроводили при низьких концентраціях білка для одержання "гіршого сценарію", зумовленого більш високою імовірністю денатурації молекул білка на границі розділу "лід-вода". При більш високих концентраціях імовірність співударяння білка з поверхнею розділу "лід-вода" прямо пропорційно знижується, а замість цього, він стикається з іншими молекулами білка.

Прискорений метод визначення стабільності

Розчини антитіл в потрібному складі в концентрації 1 мг/мл пропускали через ПВДФ-фільтри з розміром пор 0,22 мкм в стерильних умовах і інкубували при 40 "С і/або 50 "С протягом щонайменше 21 дня. На 7 і 21 дні брали аліквоти в стерильних умовах і піддавали ЕХ-аналізу. Потім розчини знов інкубували.

Приклад 2: Продукування і виділення людських моноклональних анти-ОІ 4 антитіл Е9 ії АТО із застосуванням технології представлення МРНК РКОгИи5іоп

З застосуванням технології представлення мРНК РКОгТизіоп (див. Спипу-Міпуд Нвгіє!п еї аї., публікацію заявки на патент США Мо 2010/0099103), за сім раундів відбирали об'єднані бібліотеки антитіл проти антигенів І 4 селезінки і лімфоузлів: 100 нМ міченого біотином позаклітинного домену людського 01 Г 4 (раунди 1 і 2), суміші 50 нМ міченого біотином позаклітинного домену людського ОІ | 4 і 50 нМ міченого біотином позаклітинного домену мишачого ОП 4 (раунд 3), 100 нМ міченого біотином позаклітинного домену людського ОІ' Г 4 (раунди 4 і 5), клітин 2930, стабільно експресуючих людський рІЛ4, ї 100 нМ міченого біотином позаклітинного домену людського 014 (раунд 6), і клітин ВАЕЗ, стабільно експресуючих людський і мишачий ПІ 4 (раунд 7). А10 і Е9 ідентифікували після відбору бібліотек антитіл в раунді 7 (таблиця 4). При конструюванні людського ІдсС1 дикого типу ці конструкції позначали А10.1 і Е9.1, відповідно.

Таблиця 4

Дані про послідовності клонів Е9 ї АТО повністю людських анти-О1І 1 4 антитіл РКОЇи5іоп (СОК, пронумеровані по Кебату, підкреслені) ва лінія 00100000... |12315618501951567550.

ЕУсрОББаРОЦУКРЕЕТТЕ

ТтСтУвосвІвовО Очі

УН УНаА-39 ОРРОКСТЕМНІСРІчУТОЗТУ

УМРОІКОВУТІЗУРрТОКМОК

ЗІКІВБУТААБТАУХХСАРЕ

Людські пиде1; оУтПЕбсБОЖНСОЄСТЬУТУВ

ЕЗ |лімфо- МО, 5 (ЗЕО ІВ МО: вузли УНІ 234, ЗЖЕПТОВРБЗУВУВРООТАВІ 235А) тТОВбОВІсОКУАдМуООКРО

МД. м2-1 ОЗРУТСІТХЕОЗКАРООСЇРЕВ

КЕБОБМНЗОТАТЬТІВОТОРМ

ПЕАОХУСОАИПвОгОУ КОХ тТВУтТУБ (БЕ Ір

МО:111)

ЕУОПТЕЗСССІУКВОСВ РІ,

БСААБСЕТЕВЗНММОМУКОХ мн МНІЗ-3о РОКСЬЕНЧАТІЗУрОВМИХВ

АраУкОоКЕТІВВОМВКМТСУ

ГОБМИЗОКАЕОТАУУЖСАКАЄ

- ВШдО: СОМУСЕБІМОСОСІМУТУВО родова Мо. (БО ІБ МО:112)

АТО УН( 234, БРУБТОРРІУЗУВРООТАВІ 235А) м Уг-1 ТСБАОКІСТКУУВИХООКРО

ОЗРУТУІЖОВАКВРОСІРЕК

ЕЗСВМЗСМТАТІТІДОСТОТМ оЕАрУГСОВМОВВрУУКЦОВ тТКУТУЄ (5ЕО Її

МО:113)

Приклад 3: Характеризація іп міго антитіл Е9 ії АТО РКОЇИи5іоп

Афінність зв'язування з антигеном 0/4 для антитіл Е9У і А10 визначали із застосуванням

ВІАСОВЕ-технології, як описано в прикладі 1.1. Як показано нижче в таблиці 5, Е9 і АТО мають аналогічні величини констант рівноважної дисоціації відносно людського 0/4 (Ко-3,36 і 6,68 нМ, відповідно) і 0/4 яванського макака (Ко-4,2 і 7,8 нМ, відповідно). Е9У також перехресно реагує з мишачим і щурячим ОГ 4 (Ко 16 і 15 нМ, відповідно).

Таблиця 5

Кінетика зв'язування анти-Оі | 4 антитіл

РКО:изіоп, оцінювана методом Віасоге

Кінетика по Віасоге і МАВ вра СО сво ТЯ ВСЮ ши 14 СО хвцЦялА Со

Бо хо 8.6 3.36 Е.В 74 42 І. 2.5 16 1.9 39 ТУ ! ЕНОЯ | Б-О5 ой | Б-о5 НЯ | 8-04 НМ) Е-о4

АЮ 22 1.5 | в. ра 15 рт МВ МВ ' ! ЕНМ | Б-М вч | БМ

МАБ - моноклональне антитіло; Е - порядок величини (величина, помножена на 10, тобто означає експоненту; Ка (М" с");

Ка (с7)у; Ко (НМ); МВ - не зв'язується (900 нм І 4).

Активність зв'язування антитіла з антигеном також оцінювали за допомогою ЕГІЗА- і ЕАСзЗ-аналізів (як описано в прикладі 1.2, 1.3, де величини ЕСзхо представлені в таблиці 3). Антитіла Е9 і А10, крім їх зв'язування з рекомбінантним позаклітинним доменом 014 (ЕСО), можуть також зв'язуватися з СІ І 4, експресованим на клітинній поверхні (таблиця 6).

Здатність антитіл блокувати взаємодію 0/4 з рецептором МоїсСп-1 оцінювали за допомогою

ЕНІЗА- і РАСзЗ-аналізів на конкурентне зв'язування, описаних в прикладах 1.4 і 1.5. Як показано в таблиці 6, Е9 і АТО ефективно блокують взаємодію Моїсп-1 з БІ 1/4 (в формі позаклітинного домену (ЕСО) і в клітинно-асоційованій формі). Крім того, клітинні функціональні аналізи були також розроблені для визначення здатності антитіл нейтралізувати 0 |4-опосредованную клітинну активність іп міго (як описано в прикладах 1.6 і 1.7). Антитіла Е9 ї А10 інгібували 0 І 4-індуковану активацію Моїсі і експресію 5МЕСЕМІ1 в клітинах ЕА.пуг26 (таблиця 6).

Таблиця 6

Активність анти-ОГ 4 антитіла РКЕОгТив5іоп іп міго

Аналізи на пряме Я Я виналряме | Аналізи на функціональне блокування

БИІЗА з ЕАС5 конкурентне конкурентне Інгібування захопленням ; ур ; ур 5МЕСЕНІ1 . - (ЕСво, нМ) (ЕСво, нм) зв'язування зв'язування (ІСво, НМ) Інгібування активації

МАВ ' ІСво, НМ) ІСво, НМ) ' Моїсп в співкультурі рма- ЕСООІТ4/ | нимоїсп-л/ом 4-| СВО порі а-клітин

ЕСООІ 14 : : ЕСО/клітин (ІСво, нМ) клітини пиМоїс-1 клітини Еану

А10|0.17| - |044|093| - |26| - | 51 | 44 | - | 15| - | 73

МАБ - моноклональне антитело; пи - людські; ти - мишачі; супо - яванського макака.

Приклад 4: Афінне дозрівання антитіл Е9 і АТО РКОГИ5іоп

Афінне дозрівання анти-біІ І 4 антитіла Е9

Вирівнювання послідовностей показало, що анти-ОЇ!1/4 антитіло Е9У має найбільш високу ідентичність з МН4-39/9Н4 і М2-1/)/.6 людських зародкових ліній. Для підвищення афінності Е9О до 014, залишки гіпермутованої СОК ідентифікували, виходячи з інших послідовностей людських антитіл, що є в базі даних ЮВГАБТ, які також виявляють високу ідентичність з МН4.-39 і М2-1 зародкової лінії. Потім відповідні залишки СОК Е9 піддавали обмеженому мутагенезу за допомогою

ПЛР з використанням праймерів, що мають низьку виродженість кодів в цих положеннях, з метою створення бібліотек антитіл в форматі 5сЕм, придатному для їх застосування в процедурі дозрівання афінності. Перша бібліотека містила мутації в положеннях залишків 30, 31, 32, 33, 50, 54, 561165 в

СОКІ ї СОКО2 МН (нумерація по Кебату); друга бібліотека містила мутації в положеннях залишків 95- 100, 100а, 10060, 100с ії 102 в СОКЗ МН; а третя бібліотека містила мутації в положеннях залишків 27, 30, 31, 33, 52, 53, 93-96 в трьох СОК МІ. Для подальшого підвищення ідентичності Е9У з послідовностями каркасної області людської зародкової лінії залишок Аг в положенні МІ. 103 замінювали залишком Г ух, а в третю бібліотеку також вносили подвійну виродженість в положеннях 80 (А/Р) і 100 (5/У) МІ. (таблиця 7).

Таблиця 7

Мутації в амінокислотній послідовності МН і МІ. Е9, введені для ініціації дозрівання афінності о Мутована послідовність МНЕЗ(5ЕО Ю МО: 114)

БУОБОЕБСРСТУКРОЕТЬВІТСТУВОСВІЗІЗІУХМОМІВОРРОКСЬЕМІСРІУУТОВТУХ

МОМ 5 ММ

МТ і. АТ

В

МРАЕБЖЯВУТІЗУЮТВКМОКЗКЬЗВУТААРТАУУХСАКЕрУТЬНОСВрУМСОСТЬУТУ ВЕ

М Е УАМАХОСАХ О р ЕВЗЬРЕ5 БІ, 5

Го ОБЗРЕМОо У М

МВА КН

ЕК Е

Ам о в

У І

М с

М

Мутована послідовність Мі г9(5ЕО ІД МО: 115)

ЗУЕБТОРРЗУБУВРООТАВІТСВСОВІСОКУАЗМИХООКРООЗРУГУІУЕРЗКЕРОЗОІРЕК

ЕВ Б У о їт

М АМ

Кк ЕО й ЕЗ

ЕВЗСЕМЗООТАТЬТІВОТОРМОВАрУУСОАИОВОТОУКсУСТВУ ТУ

А ЗЕУА З Кк

М до

Е 5

М М

Кк

Ці бібліотеки Е9 переносили в клітини і представляли на клітинній поверхні для відбору на позаклітинний домен біотинільованого 01 | 4 з низькою концентрацією методом магнітної візуалізації, а потім методом клітинного сортингу з активацією флуоресценції (ГАС5). Потім проводили відбір на більш високі величини констант асоціації, дисоціації або тих і інших, після чого послідовності білків- антитіл клонів Е9 з модульованою афінністю (таблиця 8) регенерували для зворотного перетворення в формат до для подальшої характеризації.

Таблиця 8

Послідовності білків-клонів антитіл, ідентифікованих, виходячи з бібліотек дозрівання афінності для анти-Оі І 4 антитіла Е9

Афінно зріліклони області важкого ланцюгтасунні 0000

Ко4 БУСБОБЕСрОСУКеВБЕТЬвоТСТУВОосвІВВВУУсСЯІКОРЕСКОСТЕКІССІ У У

ТОВБТУУМеЕБІКБЕУТІВУГТЕКМОКВОКІЗВУТААПТАУУУСАВУПУВІ ССО чсостІмтУувБ (БО ТО МО:115) ск сок сов

ЗОЗ5УУо ПІУХУТоВТУХМеОК5 хпУувоасоВоВ (БЕЛО ТР МО:117) (БЕСО ЇВ МО: 118, сБЕО ЛО МОЗ) нншнТнТтТшнТтТтнтнининншна

ЕЛ ЕУОСОПЛОКБВИрРОСБУКРВЕТІВИТСтТУВосзвІВддавХУУяІвОоКрРаКОасЕчІрІ У

ТОЗТУУМЕБІКОвУТІВУОТВКМОКЗІКІЗОУТААБТАУХУСАВЕАУРІСОоСООХ

ОТУТ МБ (БО 10 МО:120) те 25202 2 2 2 2 «5 2000 БУТ ваБУУКН ПІХУТОИВТУУМРаКа КАУРІСООоБОУ лют ре Про 2025 Р « Р 944 вусьовЕВБОРОЗСУКЮРОЕТЬБИОТСТУВОССОЮВІОМЗВХНИСсМІвОовРОоОКОСЕМНТОВЕУ

ТтОеТУХМР.РЕБКАЗКУТІ БУТТІ ЗАМОКІКІЗОУТАВОТАУУУСАКЕВУ ТКУ шосте УтТУовВ (КО 10 МО:124 ері 000000 Терв0000ТодВя 000000

МБЕХНиС БІТУТОБТУХМеБІКО БІУтТЬКОооОрУ (5ЕО ТО ОМО:125) (ЗБ ТО МО:126) (БКО ТО МО:177)

Б9.17 БУСБОББОБРОБУКРЕБЕТЬВІТОСТУВООВІВВБВБУХУМОМІКОРЕСКОТЕКІСВБІХУ

ШЕ мсостьУТУвВ (5БО ІБ МО:128) нин с: ни Кн спи

ЗМ БІУЖТОБТХУМЕВЕК ЕБЕАТіспОВОУ (БЕ ІРО МО:12891 (БЖОо Її що: 150, ОБО ТО ЩО:131) нин аа ня ПОЛ

Е9Л15 БУСІПОКВОрОПУКЕВЕТИВИТСТУВвОоВІВВаОУ МІК ТОІМУ

АО5ТУУМРКЗМТІ МОЗКУ КЗЗУТААБВТАУХУСАВЕБВУТТКОСОБУ

ОТУТ (БЕ 10 МО:139)

Прі соб Со вазУУк ПІМУАСТХУМЕВКЕ ОУТОБОоООру (БО ТО МО:133) (БВЕО ТО МО:134) СаО І МОо:135) тр

ЕЗІ19 ЕУСсТОоОвВОоРОГУКРЗЕТІВІТОТУВОосВІОвоОХКМОоМІКОоВРОоКОосЕМІОБЕУХ

ТОБТУУМеБЕКВКУТІВУСТОЗКМОКІІКІЗОУТААБТАМУУСАКЕБУВІОВБОВО жшсоестіиитУда (БО ІБ МО:136

-А-ТЇоюи З З 5 9 10650237 103. З о Гвюсювонз» |скотвлонзю | (вво о козою (БО ІВ МО:137) (БО ІРР МО:138) (БО І МО:139)

ТШЧШ0И052222 2 2 «2 Р «ОО о

Е9.22 ЕМОГОВББОРСГМКРОЕТІВБІТСТУВБОСБІВМОКУНИСКІВКОРРОКОСТЕМІСІУУ

ШЕ ши: пиши шоОостТІУтТУВВ (5БО ІВ МО:140)

ПОН т; ПОН ПНЯ Ст НОЯ

МОЗКУНИО РІУУТОВТУУМРБІКО ЕрМІГКОСВорУ о Дбюль юю вкотю югяоу | вво в ковим) -2Ж 5 -2З 2 2 Ж 5 ЩР«,.Ж 2 З З 2 2 6«(ЩЖЮЖЩЖХЖЗ « (Щ « ЩлЩРФИ--20257-5-

Е9.48 ЕМОГОЕБОРСОСГМКРОЕТІВБІТСТУБВОСВІВВОСУУМОМІКОРРОКОСТЕЛІСРІМУ

КО5ТУУМРОГЇКОЗКУТІВЗУМОТЗКМОЕЗІКІ55УТААПТАУУУСАКЕРМІТКОСВОрУ йшсОостТІУТУуВВ (5БО І МО: 144)

НИМ то; ПОН НС: У ПОН Ст ННЯ

ЗОМ РІМУКОСБТУУМРоІК5 ЕрРМІГКОСБрУ о бююлю юзею вклю юєяє | евво в кг

ПН ПОП ПОЛОН ПОЛ

Е9.65 ЕМОГОВБОРСОСГМКЕРОБЕТІВБІТСТУБОСБІКМОЗКУНИСКІВКОРРОКОСТЕМІСОІУУ

ТОЗТУУМРБІКОКУТІВБУРТЗКМОВгВІКІБОУТААРТАУУУСАКЕВМІГКОСВБОУ

ШЕ ОН

ПИ Кт; ПНЯ Не: з ПНЯ Ст ННЯ о Мбюсююмею |фкото лоно | вво в кою (БО І МО:149) (БО І МО:150) (5ЕО ІБ МО:151) - 525-202 2 2 :юЮ5 юЩЖ « ЄЖ- - Щ6 Щ АЙШЗ2З2ШЗЗШЗШЩШН-0353353

Е9.66 ЕМОГОЕБОРСОСГУМКРОЕТІВБІТСТУВОСВБІВВОВУУМОМІКОРРОКСОСТЕЛІСОІУУ

ТО5ТУУМРОІКЗКЕУТІЗУРЮТЗКМОЕЗІКІЗВБУТААРТАУУУСАКЕСУ РІ СОБАК йсОостТІУтТУВВ (5БО ІВ МО:152)

НИМ 5 ПОН У ПНЯ Сх ННЯ ось юнь (ото хоняо вот козу (5БКО ІРР МО:153) (5ЕО ІРР МО:154) (БО І МО:155)

ПН ПОП ПОЛОН ПОЛО

Е9.71 ЕМОГОВБОРСГМКРОЕТІВБІТСТУБОСБІВВОБУХУМОМІВОРРОКОСТЕЛІСОІУУ

ШЕ вшашин

МоОостТІУтТУувВ (БО І МО:156)

ПОМ тт ПОН У ПНЯ Ст ННЯ о бюсю юнь» кот хонею | (вво в ков) (БО ІВ МО:157) (БО І МО:158) (5ББО ІБ МО:159)

ПОН ПОП ПОЛЯ ПОЛО

Е9.13 ЕМОГОЕБОРСОСГУМКРОЕТІВБІТСТУБВОСБІВВОВУУМОМІКОРРОКСОСТЕЛІСОІУУ

ШЕ звшшшщи йсОостТІУтТУВВ (5БО ІЮ МО:160)

ПИ Кс ПОН Не: з ННЯ КС ННЯ о бютькомєю оівюсючонез |в троюгіяз (5БКО ІРР МО:161) (5ЕО ІРР МО:162) (бББО І МО:1563)

ПН ПОП ПОЛОН ПОЛ

Е9.16 ЕМОГОВБОРСГМКРОЕТІВБІТСТУБОСБІВВОБУХУМОМІВОРРОКОСТЕЛІСОІУУ

ТО5ТУУМРБОГІКЗЕУТІБВБУРТЗ5КМОВг5ІКІ55УТААРТАУМУУСАБКЕВМІГДКОСВОУ

МОоОстТІУТУувБВ (БО І МО: 164)

ПИ т; ПНЯ Не: ПНЯ Ст ННЯ о бю юне |свотохонєюу | (во в когієт (БО ІРР МО:165) (БО ІРР МО:166) (5ББО ІВ МО:167) - 525- 2 Л С ФЛ « 23ЩЬ Ж Щ 2 З 2 0252 2525-5232

ТО5ТУУМРОІКО5ВУТІЗУЮТОЗКМОКЕЗІКІЗ5УТААОТАУУХУСАВЕРУТІВССБрУ о Болт юс ютєю 00 7 1сові//////////// |срв?////////////////// |совв,Ї) 5Б55УхИС РІУУТСО5ТУУМРОТК5 ЕРУІтІЇВвОсСсС5рУ о бювкойєю осот вюєт | і5во о югіт ннншпнннннннН8НшинннннннннннннЯЗя ІНН

Е9.28 | ЕМОГОЕБОРСІУМКРОЕТІЗІТСТУВСОЗІЗВБМУУМСОМІВОРРОКСТЕМІСРІМУ

ЕВ ДЕН псОостТІУтТУВЗВ (58О ІЮ МО:172) сові 01010110 Тс? 1св30010101ї1С

Б5МУУМо РІМУМСМТУУМРБТК5 ЕАМАГОССАрО о | вотокомту (вот люті во т кот) тсСНтьяьвппаа

БЕ91Е | ЕУОТОЕ5СРСІУКРОЗЕТІЗІТСТУВЗСОСЗІЗЗСЗУУМСМІВОРРОКСТЕМІСРІМУ

ЕВ ДВА я

УсОостІУТУВЗВ (5БО І МО:176) сові 01010101 сов 00101010 |сбв30010101010101сС. зоБУхис РІМУІчІСЗТУУМРЗІКУ ЕАУЗЕСССАОрУ о бвютокот» котвнюйту | ово лю хост). нн

Г9.10П | ЄЕЄУОТОВЕБОРСІУКРОЕТІбІТСТУВСОЗІЗББВОСХУМОМІВОРРОКСІВЕМІСРІХУ

ТОМТУХМРЗІКМЕУТІ5ЗУРТЗКМОКЕЗІКІ55УТААРТАУУУСАВЕЕМІТСССАВО

МсОостТІМТУББ (БО І МО:180 7 0сові 7 |Їсов?2///////////// |совв,!,) о бютьковю сосв ном | во то отв (БО Ір МО:181) (б5ЕО ІЮ МО:182) (5ЕО Ір МО:183) нн" ші

Е9.5БЕ | ЕУОТОЕ5СРСІУКРОЕТІЗІТСТУЗСОЗІЗВВУХМСМІВОРРОКСІВЕМІСВІМУ

ІСБТУУМРБІКВЕУТІБЗБУРТЗ5КМОКЕБІКІВБУТААРТАУУУСАВЕБУРІСССАРЕ

УпсСОостТІУТУЗВ (5БО ІЮ МО:184) 7 1сові 7 |срв?/////////////// |совв,Ї) вухо РІМУІСЗТУУМРЗІКВ ЕЗУРІССОСАОЕ бюро кое оскотолюгеєу | іово то осів

СЯ й

Е9.10С | ЕУОТОЕ5СРСІУКРОЕТІЗІТСТУЗСОЗІЗБОЗУУМСОМІВОРРОКСІВЕМІСРІХУ

ТО5ТУУМРБІКВЕУТІЗУРТЗКМОКЕБІКІ55УТААРТАУУУСАВОАУМуСССБОМ йсостіУутТУЗВ (5ЕО ІРР МО:188) сові 01010100 1со820101010101011|с083 11111 током воно |в ково, (5КО Ір МО:189) (КО І МО:190) (5КБО Ір МО:191)

Яд

Е9ЛЕ | ЕМОТОВЕБОРСІУКРОЕТІЗІТСТУВСОЗІЗББВБУХМОМІВОРРОКСІВЕМІСРІХУ

АСЗТУХМРУЗІКОВЕУТІЗУЮТЗКМОКЕЗІКІ55УТААОТАУУУСАВЕОМІТСССАОМ

МсОостІУтТУВВ (58О ІД МО:192) сові 01010100 1сов2 01010101 Їс0В3 00101011 битою своею |що ков (БО Ір МО:193) (КО ІД МО:194) (5ЕО Ір МО:195) нин

Е9.12В8 | ЕУОТОЕ5СРСІУКРОЗЕТІ ЗІ ТСТУЗСОЗІЗЯЗМУУМОМІВОРРОКСІВЕМІСВІХУ

ТО5ТУУМРБЗІКЗЕУТІЗУРТЗКМОКЕБІКІ55УТААРТАУУУСАВЕАУВЕСССАОВ

УсОостТІУТУВЗВ (5БО І МО:196) 7 0сові 7 |сов?//////////// |совВ/////// о бютокоою сю стрюмеюу | око то остов). (БО Ір МО:197) (БО ІД МО:198) (5ЕО ІРР МО:199)

ОБОЛОБ | ЕУСТОБЯСРСОТУКРЯЕТЬВОТСТОУБООВІМЯСМУХИОМІВОРРОКСПЕНІСрІВУ ! шсостьуУтТУуУ БО І МО:200) і смс (ОІБВУТОБВТУУМРІТК кЕВУМУСсеСсоо

ГБОУФА | КУСЬОБОСРСЬУКРЕЕТЬЗЬТСТУВОооВІЗБЕВУХИСМІКОРРОКСІКНІСОІМІ ! АСЕЄТУУМРЗІКМЕУТІЗУрТВКМОКЗІКЬВОУТААОТАУХУСАВЕАУАВОССАрЯ ! МОСТУ ТУВУ (ЗО І0 МО:204) ! БУХ 'БІМУАСУТУУМРЕШКМ КАХУАБСОСАЮВ (8БО ІЮ МО:205) 1580 І МО:206) (8ЕО ІВ МО:207)

ІКУЛА 1 БУСОБОБОСРСІУКРОЕТІЗЬТОТУВОСВІСВВВЖЖНСМІКОРРОКСЬЕНІООІМУ

АСЕТУУМРОЗІКУКУТІЗУЮТВКМОКВКІВУТААЮТАУТУСАКЕРУКЕСССАРІ,

ЯСОСТЬУТУВЗ (5БО І0Р МО:208) ваБУЖНо (БІМУАСЕТУУМРЕБЬКЕ ЕРУКЕСССАРВЬ

ІБУЖН КУСОК ОРСЬУКРЕЕТЬЗЬТСТУБОСВІБВОВУХЖОМІВОРРОКОССЕНІСРІТУ і тТОВТХУМРЕІЖМНВУТІЗУРТВКМОКВІКІЗ5УТААОТАУУХСАВЕВУРЬССОВОМ і вевучис | ОІХУРОБВТХХМРЕІКМ ЕВУРІСССАрМ

Афінно зрілі клони: області легкого ланцюга (Мі)

ГБО | БУКОТОРРБУЗУЗРООТАБІТСВООТЬСОКУУВИТООКРООБРУСУТТКОЕЕВРВ

СІРЕВЕЗСЕМЗСОТАТЬТІЗОТОРМОКАВУУСОДМОВЕТОУКОВОТКУ ТУ, ! (8КО ІВ МО:215) зсотЬьоркухУВ ІП БОВКВРЗ ОАйОБЕТОУ

ІБОЛ16 | Б5УКОТОРРБУБУЗРООТАВІТСВОЕВЬОТКУУВИХООКРОФІРУТЧІТУЕОЕКВР

СІРЕВЕЗОСЕМОЗООТАТЬТІЗСТОРМОВАрУУСОДНОВрТСУКОТОТКУ ТУ, ! (8КО І о МО:220) (ко ЇІ0 МО:29213 1 5ШО І МО:222) (ЗО І МО:223) /БОЗЕ | БУКПТОРРБУЗУЗРООТАБІТСЗСОВОСОКУУВНУООКРООБРУСУТТЕрЕКАР ! СІРЕВЕЗОЕМЗОВТАТЬТІВОТОРМОВАВУУСОДИрВрУСУКОВОТКУ ТУ ! (шко то МО:224) ! сові свв? сок

Ср восвоеркиує 00 ТЕВВКЕР5 00000000 ОАКВАОУЄМ ОО 00 11141 85О ї0 Мо:225) (550 І МО:225) | (5БО 10 МО:227) вод т

СІРЕКЕ5БО5МООРТАТІТІБЗБОСТОРМОЕАРУУСОАМОКОТОУВОУОТКУТУТ, ооо ббювювю 000000

ПИ сх ПОН І: ПОН С: ННЯ (5ЕО ІД МО:229) (5ЕО І МО:230) тт

Е9ЛІ ЗУЕГТОРРЬУ5БУВРООТАВІТСВСОКТООКУАБИУООКРООБРУГТУМІХЕОБККРБ5

СІРЕКЕ5О5МООРТАТІТІБЗБОТОРМОВЕАРУУСОАМОВОТОУВгОУОТКУТУТ, (5БЕО ІВ МО:232) ев 2001 16ю. 73737 І683. И3З37-- отв югях іно то ногозю | 08О То погозв) (5ЕО ІБ МО:233) (5БЕО ІРР МО:238) (5ЕО ІВ МО:235)

ПОН ПОП ПОЛЯ ПОЛО

Е9.14 ЗУВГТОРРЬУБУВРООТАБВІТСВЗСОКТСОКУАБНУООКРООБРУГУІХУХЕРБКВРБ5

СІРЕКЕ5О5ЗМЗОРТАТІТІЗСОТОРМОВЕАВУУСОАМОКОТОУВгОУОТКУТУТ, (5ЕО ІВ МО:236) тов 02111110 10ю. 374 І083. /3З37--- отр юя іно то нога | ово то погозо) (5ЕО ІБ МО:237) (5БЕО ІБР МО:238) (5БЕО І МО:239)

Ш- 5625 5 565 6 « «ЛО «Ж ПО 2 Л -З2 2 (-И252ЗГБЗИЗШЗ-0502525353555 5

Е9.17 ЗУЕГПТОРРЬУБУВРООТАБВБІТСВЗСОКІСОКУАБМУООКРООБРУГУІХЕОБКЕР5

СІРЕКЕ5ЗОЗМЗОРТАТІТІЗОСТОРМОВЕАРУ ТУ СОАМОКОТОУВОТОТКУТМ, (5БЕО ІВ МО:240) тов 02111110 10ю. 374 053. /3З37--- (5ЕО ІБ МО:241) (5ЕО І МО:242) (5БЕО І МО:243) - 2 62 2 2 - 2 252 2З2ВВЖВКАЖА 2 -л -тЛ 52 5 --

Е9.18 ЗУЕГПТОРРОЬУ5УЗРООТАВІТСЗООКІСОКУАВБУООКРООБРУГМІХЕОБККР5

ЕЕ ти (БО ІВ МО:244) тові 21111110 1ою. 374 Іою3. 555 о бютвхюємху (чно т хогмєу (55 то хогояту -- (5БЕО ІБ МО:245) (БО ІРР МО:246) (БЕО І МО:247) 72 2 «ЗТ 12

Е9.19 ЗУВЕГПТОРРБУ5УМЗРООТАВІТОСВЗСОКІСОКУАВБИТООКРООБРУГМІХЕООККР5

СІРЕВЕ5О5МОООТАТІТІЗСОТОРМОВАРУУСОАМОКОТОУВОУСТКУТУТ, (5ЕО ІВ МО:248) тов 20202010 10ю. 0 /З3З37-- Іову. 3 о Гбюлвкюгмюу |іво сю ногової | (вхо о кого (5ЕО ІВ МО:249) (БО І МО:250) (5ББО І МО:251) ---505202020Ш020202-20202020202Ш5-25202520225222232523Ш--223202202020353553533

Е9.22 ЗУЕПТОРРЗМ5УМЗРООТАВБІТСВЗСОКІООКТАВБИТООКРООБРУЦПМІЧТЕОВККРО

СІРЕВЕ5О5МОООТАТІТІЗСОТОРМОВЕАРУУСОАМОКОТОУВОУОТКУТУТ, (5ЕО ІБ МО:252) тов 22101000 16ю. 3З37--- Іов. (ЗВО Ір МОг253) БО 19 Ког255)

ТТ-5И.520Ш0Ш2Ш25202020202020202020-25205202022522-20202020202020-552-2320502020000020333

Е9.45 ЗУЕГПТОРРІУ5УМЗРООТАВІТСВООКІООКУАВБИУООКРООБРУГМІХЕРОЗККР5

СІРЕВЕБОБМОООТАТІТІЗОСТОРМОВАРУУСОАМОКОТОУВОУСТКУТУТ, (5БЕО ІБ МО:25656) тові 22001000 10ю. 0 /З3З37-- Іову. 73 о бюлвноюу» Цавво сю могеюу | (вхо то хогозю) (5БЕО ІВ МО:257) (БО ІРР МО:258) (5ББО І МО:259)

--27-7-7-27-27-2-27-7-2--2--.---. 0-3

КАРБОТРЕКЕБОЗМОИПОТАТІЛІБИТОРМОВАПУУСОАМУПКПТИУваИМОтТ

КУТМІ. (5ЕО ІЮ МО: 260 тов 000211 (сю 37 108.7

ЗООКІСОКтАВ ЕО5КІГг5 ОАМОКОТОУ оо Іббюлоююю бвомовю 00 |бВОМоовЮ птн

Е9.66 З5УЕПТОРРОУ5УМЗРООТАБВБІТСВЗСОКГООКУАВБИУООКРООБРУТМІХЕОСОККР5

ШЕ одній (5ЕО ІРР МО:264)

ПИ Кт; ПНЯ Пе ПНЯ НС ПНЯ 5ООКІСОКУА5 ЕРЗККРО ОАиОКОрТоУ оо Дбвсвкоєєву |ввотокогоєю | во то лого». нн

Е9.71 ЗУЕПТОРРОУ5БУМЗРООТАБІТСВЗСОВКГООКУАВМИУООКРООБРУТМІХЕОСОККР5 перен (5ЕО ІРР МО:268) 7 |сові 9000111 15202374. ІФ. 7

ЗСОКІСОКУА5 ЕОЗКЕРО ОАкОКорТоУ оо внутокоювю |ввото кою | вхо то хоготу,

Т--52-20202--20222252025222 2222-5022

Е9.28 ЗУЕПТОРРОУ5УМЗРООТАБІТСВОЕСТООКУУВИУООКРООЗБРУТМІХЕОВТКР5

СІРЕКЕБОБМБООТАТІТІ5ОТОРМОВБАПУУСОАМОБЕТОУВОБОТКУТМІ,

Шана

ПИ Кт; ПНЯ ПУ ПНЯ НС ПНЯ

Зоо ОооКУМ5 ЕО5ТКРЗ ОАМОоБЕТОУ ооо Дю воготу |(ввотв коютю |во то хоггтв), ннвшТтТтТтнттнннининшнн

Е9ЛЕ ЗУЕПТОРРОУ5УМЗРООТАБІТСОСВЗООКГООКУУВИУООКРООЗБРУТМІХЕВВОКР5

ШИ ооо сш (5ЕО ІРР МО:275)

Тов 02320707 1ою 23232323 |с55.--- ою коту |сввотв кот | во т могло), (БО ІВ МО:277) (БО ІВ МО:278) (БО І МО:279)

Т--50-202020525-522252---2052022552222--5020205535555335

Е9.10 5БУВЕгТОРРБУБУБРООТАБІТСВООВБТООКУУВИТООКРООБРУТУІУВЕОБЕКРБ с СІРЕВЕБО5МОСОТАТІТІЗСТОАМОКАПУУСОАМОБЕТСУКОБСТКУТ (БЕО

І МО:280)

Ток 0202027 1ою. 3З3237-- |05-3 всрБІсоКкУУ5 ЕОРБЕВРБ5 ОАМНОБЕТОСУ оо Гбвютоковю |ввотв кою» | ко 19 хогова),

ТШ-.-520-202525255-22 25252220

Е9.10 5БУЕПТОРРБОУ5УБРООТАБІТСВСЕСІООКУУБВИТООКРООБРУГМІХЕОВЕКРБ

Е СІРЕКЕЗОЗМ5ЗООТАТІТІ5ЗСТОАМОЕАРУУСОАМОВЕАСУКО5ОТКУТ (50 б плррщ и моно ню С с Тсою 3207 Іою З3З370--- |Ф557 оо бю когвьу |ввото ков | око 10 логовт, (5ЕО І МО:285) (БО І МО:286) (БО І МО:287) -252 52 « « Ж « «2 «ю« юЮЖ «Щ «6 «2 «ло

Е9.7Е 5БУЕГТОРРБОБУВУВРООТАБІТСВООКГЦООКУУВИТООКРОСОБРУТМІХУЕО

Б5БЕВРЗСІРЕВЕБСОСЗМОЗООТАТІТІЗСТОАМОЕАБВУУСОАМОбЕАЛСУКО ВО

ТКУТ (БО ТО МО:288)

1 (сові 77777771 1сова (сов 5СОВІСрКУУВ ЕРБЕВР5 ОАМОЗЕАСУ оо волюлюювю во ногоооу | ево 1 хогов) но

Е9.5Е | БУЕІТОРР5ЗУБУЗРООТАЗІТСВСОМІСОКУУВУУООКРСОСОЗРУГМІХУЕОРВОВРУ

Ше іні (5ЕО ІД МО:292)

ПИ ПС: ПН НС: У ННЯ НС: ННЯ

БсрМІСрКУУВ ЕРБОВР5 ОАМОБЕТСУ оо бвутотоггозу о евото могою ово то тогоов)

ПО

Е9.12 | БУЕГТОРРОУЗУ5РОСОТАбІТСВСОСІСОКУУВУУООКРСО5РУГМУІУЕОЯТВАРЕ в СІРЕВЕ5СЗМ5ЗСРТАТІТІЗСТОРМОБАРУУСОАМОВЕБСУКСЗСТКУТ (БО

Ір МО:296)

ПИ ПС о:з ПОН НС: У ПНЯ НС: ННЯ 5сосІСсоКУУВ ЕОБТВРБ ОАМОБЕВСУ ооо Сбвототюєгюю вро ногооєу ово то погоов)

ПИ

Е9.10 | БХУЕІТОРРОУБЗБУ5ЗРООТАБІТСВСЕВІСОКУУВИУООКРСОЗ5РУГМІУЕОЗКВРУ н СІРЕВЕ5СЗМ5ЗСРТАТІТІЗСТОАМОБАРУУСОАМОСЕТСУКСВЗСТКУТ

ВЕ о Й (сові 77777711 1срва 7 |срв3 оо Ібюлоюєою вої ного | Бо о погзог) (5ЕО ІЮ МО:301) (5ЕО ІД МО:302) (5ЕО ІД МО:303) нин

Е9.бА | БУЕІТОРР5ЗУБУЗРООТАЗІТСВСОМІСОКУУВУУООКРСОЗ5РУГМІУЕРТМВР осів (5ЕО ІЮ МО:3045)

ПИ КСс;о: ОН Ес:ох У ПОН Но: ПНЯ

БсРМІСрКУУВ ЕРТМВР5 ОАМОБЕТСУ оо волю чюгзоє ово то ноггоє | (ово то когзог).

ПОН

Е9.7А | БУЕІТОРРОУБУЗРООТАбІТСВСЕВІСОКУУВУУООКРСОБ5РУГМІУОРАМВРЕ

СІРЕВЕ5С5М5ОРТАТІТІЗСТОАМОЕАРУУСОАМОМЕТСМЕОЗСТКУТ (5ЕО І МО:308) сві 11111111 0св? 01111111 |сов3з/С 5СЕВЗІСОКУМУВ ОБАМВР5 ОАМОМЕТСУ ооо еюолютюгог вот нозі | (евото хогго) но

Е9.8Н | БУЕГТОРРОУБУЗРСООТАЗІТСВСЕВІСОКУУВИУООКРСОСО5РУГМІУЕОЯМВРБ

ВИЙ

Ір МО:312) сві 010101010771111101св2020303010101011 |о5в3 3333 5СЕБІСОКУУ5 ЕОБМЕВРБ5 ОАМОБЕУСУ ооо бвоточогіу о бевото мог) ово т огеіву

Афінне дозрівання анти-ОІ І 4 антитіла А10

Аналогічно дозріванню афінності Е9, описаному вище, вирівнювання послідовностей показало, що анти-ОІ І 4 антитіло А10 має найбільш високу ідентичність з МНЗ-30 і М2-1 людських зародкових ліній.

Людські послідовності МН і МА, що походять від МНЗ-30 їі М2-1, відповідно, брали з бази даних МСВІ

ІдВіаєї для створення логосу послідовності. Ці логоси використовували для того, щоб вирішити, які саме послідовності повинні бути введені для генерування афінно зрілих бібліотек.

Бібліотеки АТО переносили в клітини і представляли на клітинній поверхні для відбору на позаклітинний домен біотинільованого 01 | 4 з низькою концентрацією методом магнітної візуалізації, а потім методом клітинного сортингу з активацією флуоресценції. Потім проводили відбір на більш високі величини констант асоціації, дисоціації або тих і інших, після чого послідовності білків-антитіл клонів АТО з модульованою афінністю регенерували для зворотного перетворення в формат дО для подальшої характеризації. Області важкого ланцюга (УН) афінно зрілих клонів представлені нижче в таблиці 9, а області легкого ланцюга (МІ) афінно зрілих клонів представлені нижче в таблиці 10.

Таблиця 9

Варіабельні області важкого ланцюга (УН) афінно зрілих клонів А10

Областьбілка 10010000 ПюсСлІДОВНІСТЬ ії2з456789012345678н90123456789О

І ЕБУОГЗЕВОСООІ УКОСІВ СЛАДОКТУВ, з10.3 і ним ОовесксьіЕМАТІВОСВМКВ по Е док сТІсвЕОМЕеКИТЬХ ОМА О ще І твУХХСАКАВОСМУСЕрІНСОСТМУТИВА хід. З ! Запишки 31-35 ув т ісов-ні послідовності НИМ км ЕМО МОВ хм дідп.з І залишки 51-66 сво що і шіІв-НУ послідовності тІБУЮСВИКУВАЮВУКИ

І Е 5ЕСИО МО:9316 в1і0.3 ! Залишки 95-10 чо ссоЖ-ні посліДОВНОСТІ АоБемУсЕвЕ й І ЕС ІО МО:316

І ЕБУОТМЕБООДУ РОЗ ЕІЗСАВЗСКТКС нНиМеО КОХ ЕСКаЦЕЧУКОХВБОСНЯККя шо І доБчкСВктІЗвОнЗКиТ СОВА ВАВИ 7 і ТАМУЖСАКАВШСМУСЕВІНСОСТМУ ТУ

ЕС ІВЮ МО:317) лів.жло ' ; залишки 31-95 ами ссов-ні послідовності ним дійок і залишки 50-88 че ши і сІт-НЕ послідовності ПІВББрОБХКУхАСВУКО

Ш і ЗЕСИО МО:317 вій.к3о ! Залишки 985-108 в Щі осов-н3 послідовності АОССМУВЕВЕ

ША А А А А А « З « О 1 ОО МО 51

ЖИТ МЕВОССОТУОРВССВИКОЗСААВИКТИЙ дід. ха | ним кОоЛЕСсКОсі Есе МІВчОСТІКХХ

У ши І дова ВОоКОКиТВх ОВК що І ТАУХЕСАКАВССМУЄЕНІНОСОВІМУТУВЕ іона? п Залишки 31-95 нини пнинннлжлжллллтТттнинннннни! що о тсов-Ві послідовності зни

ПОМ Кн ДК о Не УДК КОКО: вів.ка І Залишки 50-66

У ПСов-не послІДОВНОСТІ МІБХООТІКУХАЮВУКО і ЗЕС С МО:З18 п с12345678901234567890П1234567899 в1і0.к39 . | алишки ВН і що осСов-ві послідовності ( весенустої вів вх | Іі БХНМЕХУВОВРСКССЬЕКУАТІВУЮОСКМКОХ пам | ПО АЮБУКСВЕТІВКОМВККТЕТБОЇМЕБВАЕВ З

Щі | ГТАХУХСАКАССОМУСЕВІНОСООТМУТУЮХ вия 0 сзЗалишкиЯі3в ро послідовності | БУКМе пи пи МД ее В ТОД КОЖ Ех Три зно діб.а Залишки 50-В6 :

У послідовності : тІВБжРОВИКОиЖАВБУКО дів алишки У9-ТІ м послідовності і АвшсМУСЕоХ Е

ЩІ ' ЗЕСІС МО: 319 ; Е ! ПЕУОТУВББСОСУМОРОСВЬНЬСААЗОКТЕО міо, | МнНиМбхокоОАвОоКсІкосавІВБОСВиКУХ мин ПО АЮБЗУКОВЕТІЗВОКОКМТИУТОІМВІКАКО що ' ІТАУХЕСАКАССОМУСЕВІНСОСІМУТУВА ' ГБО ІЮБ МО:320) Е шо послідовності і Мннм5 Е вав. Залишки 50-68 евеняачинна тен тн | послідовності І рІББОСОКІКХТАЮВУКО й і ЕС ЦО МОЯ 20 і Е

В1іб.вх залишки ч9-Т08 : ов шк послідовності : скасує

ЕМО УКВССОСУУОРОСЯТВТБОСААЗОЕТЕН

АМКІХ | І БНИМЕКУВОВРОХССЕМУАМІБОООВНКОЯ м (АРБУКСКЕТІВВОМОКМТЬУЄОГМНЯІБВАКО

ГТАХУХСАКААСОМУСТЮТНОСООТМУТУЮИ т алишки отв нан їх | послідовності : 5нКМе вон п еВ ВДЕ В ПО, вів залишки 50-66 : чо , послідовності ЕМІБОВОВНКОЖАВЕУКО пи ' алИшкИи Ч9- | Е ва , послідовності і АВОсМУСЄТОХ

Що ' ЗЕ ОО МО: 321 | Е

ГЕФОТАЖ ВССУ МОНО ВВСАВВИКТКО х1іб.5о | | ЗНЯМЕУВОАРОКСІОТМОТЕЧОСВНКУВ пив ' і воаукОоветІввонЗкитук КОМИ ВАВ ще В і ТАУХУУСАРВААСОМУСТЮБИСОСТМУУТУВВО збі залишки 31-35 : ма | послідовності :вЕнМЕ : ЕС СМ: 399 і Ї пен | послідовності : рІБУрРОВНКУВАЮВУКО ! ЗЕС С МО: 322 і Е і 123456789112345678901234567890 іт. 58 Залишки 988-108

Ве послідовності і ААСеМУСЬОО

І ї УС є МО рова КО І діа за | ВИНМОНУВОБРОКСЬЕМУАВІВЗВОСНУКУХ рай " АрЕУКОКЕТІВВОМНОКИТЬХІОБМЗОВАЮО З й | ТАУХУХСАКАВОСМУСЕОІНООСТМУТУВВ ; ОІБЕО їб МО:323) . сад. залишки 91-35 Е их послідовності п жниМУ ! ; ЗБОЮ МО 393 : . і Аіп.3А алишки оо7оо : риш послідовності | ВІБВОСВУКУХАЮВУКО 7 ЗЕСИО МО:523 Ї І вто. зд залишки УУ10В 1 ля послідовності вОСенУСЕВІ

І ї УСЕ ОО ОО САООЕТКО дід. ОМНИМЕОУВОАРОКСЬЕНУАРІВНОСВУКУХ цех Е ареУукакКЕтІВвОДОКИТХ Оце КАВО І і ще Е ТАУХКСАКАВСОМЗВ ЕН ТУТУВа

І ОБО ХО МОЗ

ГА. 6В Залишки 31785. ; ін послідовності | нниМУ

СО МО: 324 : І і іо. вв Залишки 50-66 : І ре послідовності і ВІББОСВУКУТАЮВУКС : Ш ЕС МС 324 : І і вів. єв Залишки 97109 Щ

Ве послідовності і АБОСМУЄЕВІ : р ЗЕС С МО: 324 Е І

І ї УС ЛЕнва є МО рОКООКІОСАВОСЕКЕВ дів 5о | БНИМЕНВОАРСКСЬКИЧТАВІВОЮСЕУКУХ

Біо | ВОБУКСВЕТІСВОНОКИТЬХТОМеВЬВАЖО

М ІП ТАУУХСАВААССМУСКОТНООСТМОТУВЕ

СІ5ЕО ХО Ме:335 І іАтв.зв алишки з:

І ще ПОСЛІДОВНОСТІ знима і ЗЕСОІОМО395 ; де 235 алишки о0-56 ' ! рі послідовності ! ПІВОООЗУКУТАЮВУКО !

Б ЗЕС ОПО МО: 320 Е о од10.30 щ алишки 86 ' рих послідовності С АНОСМУСЕВІ

Й ЗЕ МО 325 | І

ОП ЕУОІМЕВСССУУЙРОСЗЬКІОСАВВСЕТЕО

: аі2.46 | ВНИМЕКОВОАРОКСЬЕМУАРІВНОСВУАТУВ ве |ВОБМКСКЕТІВКОМОКИТЬТОМВООКАЄВ

Б І ТАУХ САЛОМ УСЕОІМОСО МУРУ

І о | ГБЕС ІВ МО:329) І перш я й . ! во є послідовності : вним

ГУВ ЗБЕС ПО МО: 326 і віп.яс ЩІ Залишки 50-66 :

Бу послідовності "| РІБНОСВУВУВАЮВУЮС

ШИ ЗЕССІОМО325 ; дідодео 010000 1ЕЗалишки 995-109 нити ч Е і послідовності дОЧИМУСЕВЕ

Таблиця 10

Варіабельні області легкого ланцюга (МІ) афінно зрілих клонів А10

Сбпасть білка! осСлІДОБНІСТЬ нн 22211. 183А56ТВО015345678901234567850 : | ЗУБІТОВРаОУЗУВРООТАВІТОВАПКЬОТК 830.3 , : ЖУВИТЦОКРСОВРУБУІХОВАКВРБСІРЕК шо : | ЕОЗИНОМ ТАТІТІВОТОТМОКАВУТСОВИ

Й : | повдпуУуУКОСЯтКетТУТ БЕО ІП : ! | ко:3271 «л. що ісора-їі1 : послідовності БАрЕЗСТКТУЄ й й і ЗЕСІЮ МО. 39 аа залишки яв т пох п ее Ж Те рису гля ПИ 8.3 Е "Залишки в8-ЧЕ се т сов-ЕЗ іпослідовності озковагилу

В ЗЕС-ЄО МО. 521 : ! БУКІТОРРаУаУВРОСТАНЕКОВАВЕВОТО 810.145 , ЖИТО КиСОВЕУЬТІХОВАТНЕЕСІРЕВ «т, Е ! КВсОВБОМТАТО Іо ТОВМОВАОУу Сов т : | ряБсутссстикьту (ВБО ІВ : ! КкО:328) 310.35 ! алишки 9-9. . что 0000001 СОоБУБ1 послідовності ЗАБЕБСТОХУЄ й ЗЕ МО. 399 сл яд З т залишки 49-

Шо : і ЗЕСІО МО: 328 а10.295 о, Залишки 88-96 «т. і шок-БЗ : послідовності ОАнОовЕачУ

Е З ЗЕСІС МО 398 : і аУкТтТоКРЗУВоБРОСТАЗІСВООМЬОВО дій.ьт3 | ЖУЗНТООКРООВЕУБУІУОВАОКРУСІРЕВ.

Шо : і ОВОСУУКСССТЕРТУВ (5ЗЕО ІВ мблиз о Залишки 25-93 чт. обов-т1 послідовності спо хУв : ЗЕ МО 29 діб : | залишки 49-55 чт сСовео : ПОСЛІДОВНОСТІ спвоврЕ і те С | ща о 2052333 АЛИшШКИ ВЕ-Яб

ШЕУ? совеьз 0 послідовності оджоввсту

ЕМО

Е З ТК ТОвРаУВУЗРООТАВІТСВАВМНЬСВЕ віб.14х : УчУМуОсЕРООЗВУБУХХОВАТНеВСІвЕВ о : тВОоЯМЗОИтТАТІ Тато МОВАВУХсОВИ : і рабам КссОоТКІУЇ 150 ОЇ : | ко: зла ли і залишки 23-

Е 15ЕС МО. 39 ттппптпрпптрлі53а56ув5015345678501554567856 хі0,3А залишки 49-55 т, Псев-ге послідовності ОБАТАРЕ ввіз залишки 88-96 000 1СВА-ІЗ послідовності О5МО55САХ

Шо і ЕС МО. 530 ї ЗУБІТОВВВОВоВРСОТВЕІТСВАВНЬОСМО вів єв ! УВИТООКРОООРУМУТУОВОМЕРОСІРЕВ ше аа Я ЕВСИМОСМТАТЕТІССТОАМОВБАЛУХСОАИ

Шо Е рибсЕЧКССОоТКМТУ; (ЗОЇ і мо:331) діб.бв ! Залишки 23-33 чт щи ісрв-ті послідовності ЗВАЮМОБНОЖУВ

Що : ЗЕВС МО 331 шт псрЕ-ьа послідовності оромеРа

Шо ! СО МО. т ее СЕ нен пе ісБА-Б3 послідовності ОАНОЖВСВУ

ШИ Ей ІЗЕСІО МО: 331 і ПУЕБТОРЕЗУПУОЕСОТАВІТСВАВКООКЕ

АВ. ЗВ ! ХУБИТООКРООЗРУГ УТ ХОПОМИРЯСІгЕВ пори ЕЗсВМЗсМнтТАтІтІяотоВМОКАТУСОВИ

Шо ! розваутоссткотУуь (3БО їв вівозв Залишки 23-39 «ла Е сек-Ті1 послідовності БАБВКІСТКУУВ і ! со мо. віболво залишки 49-55 чо СЕК-БУ послідовності орсомвере

ПОН КК пе КВ До УНН КИ вів. зр ! залишки 89-96 шк 7700 р освк-3 послідовності озировову

Шо ! ЗЕСНО МО. 332 ! БХЕБТОввІУВУВеООТАВІВСВАОМОСМО план чУВН КО КРОДВУТЧІХОЮОМЕРВОСІ ЕВ а -3с | ЕЗОСВМИДОМТАТЕТІВЗСТОАМОЕАВТХСОКИ о і рпевсаутосетвтмі сБКО 10 ! що: тя 07 1сва-ті послідовності БАрншоМОчУВ

Що : ЗЕ МО. 333 ! ківі залишки 49-55 шк о гфсСовова послідовності сором 0 Д5ЕСЮМОС383 віра залишки 88-98 ро бо ї1сов--3 послідовності ОАШВЗБСАХ п КВ ДК ве СКК КК

Приклад 5: Конструювання СОК-прищеплених антитіл Е9

СОК МН Е9 приєднували до консенсусної каркасної області МНЗ3 (прищеплені МН-ЕЗмп392), а СОК

МІ. Е9 приєднували до каркасної області МІ 2-1 анти-О1 І 4 антитіла А10 (прищеплені МІ -Еда1Омідг) і до каркасної області МК АТО зародкової лінії (найбільш близької за своєю гомологією до МІ Е9) (прищеплені МІ -ЕЗАМК). Альтернативно, репарацію каркасної області (БУМ) також проводили з використанням МН Е9У; і ця ЕМ/ була збережена, але амінокислоти, які можуть викликати нестабільність антитіла, були замінені (репарована МН-ЕЗУНАг2). Зворотні мутації каркасної області вводили в СОК-прищеплену і в ЕМ/-репаровану області для збереження структури і функції антитіла (таблиця 11 і таблиця 14).

СОК Е9 також приєднували до каркасних областей анти-1ЇІ -18 ї анти-ІЇ-12 антитіл. Зокрема, СОК

МН Е9 приєднували до каркасної області МН5-51 анти-ІІ-18 антитіла (прищеплені МН-ЕЗМНЗ25) і до каркасної області МН2-70 анти-ІЇ-12 антитіла (прищеплені МН-ЕЗМНІ104.1). СОМ МІ Е9 приєднували до каркасної області МК 12/16 анти-ІЇ-12 (прищеплені МІ -Е9МІ 325) і до каркасної області МК ВЗ анти-ІЇ-12 антитіла (прищеплені МІ -Е9МІ 104.1). Зворотні мутації каркасної області вводили в СОК- прищеплену область для збереження структури і функції антитіла (таблиця 15 і таблиця 18).

Іп 5йісо сконструйовані СОК-прищеплені антитіла, описані вище, синтезували безпосередньо у вибрану плазміду із застосуванням біотехнологічного методу Віце Негоп. Варіабельну область важкого ланцюга вбудовували, із збереженням рамки зчитування, в кКДНК-фрагмент, що кодує константну область людського ЇДС1 дикого типу, і в КДНК-фрагмент, що кодує константну область людського ЇДОС1, що містить дві амінокислотні мутації в шарнірній області. Ці мутації були одержані внаслідок заміни лейцину аланіном в положенні 234 (відповідно до Європейської системи нумерації) і заміни лейцину аланіном 235 (І шипа еї аї., 9. Іттипої., 147: 2657 (1991)). Варіабельну область легкого ланцюга вбудовували, із збереженням рамки зчитування, в людську константну область лямбда і в людську константну область каппа. Після одержання синтезованих конструкцій методом Віне Негоп,

ДНК масштабували і підтверджували її послідовність. "Правильно" СОК-прищеплені важкі і легкі ланцюги, відповідні кожному антитілу (таблиці 11 і 14) (таблиці 15 і 18), спільно переносили в клітини

НЕК-293-6Е для короткочасного продукування повнорозмірних СОК-прищеплених анти-О1 І 4 антитіл.

У таблиці 11 систематизовані всі створені варіанти антитіл Е9 і дані експресії НЕК-293-6е. Клітинні супернатанти, що містять рекомбінантне людське антитіло, були очищені за допомогою хроматографії на білку А-сефарозі, і зв'язане тіло елюювалося при додаванні кислотного буфера. Антитіла діалізували в РВ5.

Здатність очищених СОК-прищеплених антитіл зв'язуватися з 0 | 4 або інгібувати активність 0 | 4 визначали за допомогою аналізів різних типів, таких як ЕГІЗА (Приклад 1.2, метод 2), Віасоге (Приклад 1.2) ї проточна цитометрія (ЕАС5) (Приклад 1.3). В таблиці 12 і в таблиці 16 представлені величини

ЕСвхо, одержані в аналізах ЕГІ5ЗА і ГАС5, і афінності СОК-прищеплених антитіл, визначені методом

Віасоге і описані, відповідно, в таблиці 11 і в таблиці 15 для людського 0/4, мишачого БІ 14 ї 01 | 4 яванського макака. В таблиці 13 і в таблиці 17 представлені величини ІСво, одержані за допомогою

ЕНІЗА-аналізу на блокування (Приклад 1.4) і аналізу ЕАС5 на блокування (Приклад 1.5) людського рії4 ії мишачого 0/4 СОК-прищепленими антитілами, описаними, відповідно, в таблиці 11 ів таблиці 15.

Таблиця 11

Систематизовані дані одержаних і експресованих варіантів антитіла Е9 тетдівен мг/л

Е9-5Б1 Едупіо? Еда10хм1в2

Е9-5Е? ЕоМЗе?

Е9-5ЕЗ ЕдуйАт2 Е9.1 839 9-5 воатомв? 166

Б9-5Е5 Б9АУК

Е9-5Е6 ЕОупата Еда10х1в2

Е9-5Е7 Е9УПЗв2 Е9АУК

Е9-5Е8 ЕОУНАт2 ЕЗАУК

Таблиця 12

Афінності зв'язування варіантів антитіла Е9 з людським 04, мишачим рІ14 її 01 4 яванського макака, визначені за допомогою ЕГІ5ЗА, Віасоге і ЕАС5

ОО Людський ОТ 4 Мишачий О.А ри 4 яванського макака

ЕПІЗА на |Віасогє| ЕАСЗ на ЕПІБА на |Віасоге| ЕРАС5 на ЕПІБА на |Віасоге

Антитіло| зв'язування | (Ка, |)/зв'язування | зв'язування | (Ка, | зв'язування | зв'язування | (Ка,

ЕСво, НМ) | НМ) (Ка, нм) ЕСво, НМ) | нм) (Ка, нм) ЕСво, НМ) | нм)

Е9-ЗЕЇ 12,83

Е9-ЗЕ2 15,09

Е9-5ЕЗ

Е9-ЗЕ4 10,52

Е9-ЗЕБ5 12,77

Е9-ЗЕ6 10,04

Е9-5Е7 16,22

Е9-ЗЕВ8 13,03

12,77 х вже наявні дані; пс - не обчислювали.

Таблиця 13

Нейтралізуюча активність варіантів антитіла Е9 відносно людського і мишачого ОГ І.4, визначена за допомогою ЕГ І5А і ЕАС5 ви Людський ОМА Мишачий ОА

ЕПІ5А на ЕАСЗ на ЕПІ5А на ЕАСЗ на

Антитіло блокування блокування блокування блокування

ІСво, НМ) ІСво, НМ) ІСво, НМ) ІСво, НМ)

Е9-5ЕЇ

Е9-5Е2

Е9-5ЕЗ

Е9-5Е4

Е9-5Е5

Е9-5Е6

Е9-5Е7

Е9-5ЕВ

Таблиця 14

Амінокислотні послідовності УНІ МУ, людських

СПЕ-пришеплених антитіл Е9 вк Сюла: . . ою опасть Послідовність і з234явтаЗазизаетазвіиа вата о

І 5аБУХИсМІКОРЕОКОТЕнНІсСвЕУ тових 1334 чн ЕЗ9.ї тУуюРаБКЕрутТІВУЮтТЕкМОвКО иа ТАХ

ПТАХУТСАВЕЮОУТВКОсВОУИсОтТіУТУя

Іов ке,ї Залишки 31-97 ! ! евв-ні послІДОВНОСТІ ввечтМе

Я ІЙ ЕС ІС МО 334 ов 55,1 Залишки 52-67 ! ! есрв-но ПОСЛІДОВНОСТІ ртхттсБтТУхМивьЬКЕ ча 9.1 Залишки 100-110 свк-ВЗ послідовності вЕОухтькосВрУу ! р ЗЕСИС МО. 354 123455з8901234557890123и557890 р пн нн ! ХАБИХООКРОООРУБУІТУКОШКВРООІВЕВ ! за5 Б ЕВ. СВО ТАТ ТІВСТОРМОКАСТ СО пЕртТеуксуєтиттуьо ось ЕВ. 1 Залишки 23-33 освн-Ії послідовності ББОКЕСОКУАВ чл. кЗ.1 Залишки 49-55 евв-І? послідовності ЕОВКЕРЕ

ЕЕ нн ВМО МОВ яння «й 9.1 залишки 89-96 срв-їЗ послідовності ОАМОВИТОСУ

Я і ЗЕС ПО МО. 330 і1234557890123А58З0123450585О ! БЕБХУМСХІВОАРОКОСТЕНІСОТУХТОВТУ ! 336! ся шО-5К1 УмРЕВЕКВВУТІВУЮТаКИВЕЖІОМИВЬвАЕ ! ПРАЧУХСАВЕНТІЮВСОБОУХООСТЬУТУВ оуновО-ЧЕ1 залишки 31-37 ! ссвв-ні послідовності зазучтие «що БОеЧЕІ залишки 52-87 ! вві послідовності ПІЧУТОБТУУМРЕЬКО рУмитне ЗЕ О МО. 338 ово в9-єв1 Залишки 100-110 свв послідовності ЕПУТІНСОБОХ ! ! МАТИ ОБЕСІС МО. 396 ! і23455789012345678901238557890

ШИ Пр пудра вваУВУКРООТАВІТСВЕОВОВОК і і АВМ КРИОВЗРОЇЧІУВЮЧКВРОСІРЕР ! 387 Мь ЕВ-БЕї уУЗОпиЗОртатотІВатОтТМорЕАоХ СОВИ ! овртаУкосетКУТУЦО юмнюяЯюЯт 1 о пол еноетатрсвовлмв єть

У ко-ВшІ1 Залишки 23-33 що ! сов-ї1 послідовності ВСОВІСОКТА а и а а о еВ КИ ст то дв Залишки 49-55 спв-ото послідовності ЕОБКЕВ

ВАННИ МОН КАК в ВТО В ЕК КОКО «п, ш9-8кї Залишки 89-96 спшетя послідовності данрвОотеуУ

ЗЕСІС МО. З

ОО 01 2 2 20О17272121 2121 п5зовео153356в9віз3іюю ! яВБУЖНсСМІВОсЬьвоКСсІВнІсоЖЖХтТОоВх з й Ка-5Ке УМРОБКЯРУТІСТОЗТЛКМВКУОММЯКАВЕ

СТАУХХсАКЕОУТЬНОМичсо и КУ

В чвошоєвв? Залишки 31-37 сок-8 1 7 послідовності БіЗУчне

М ЗБС ПО МО. ЗВ са вовк Залишки 52-87 совещо послідовності ПІХУТОЗТУУМНРЯЬКО спо щастя Залишки 100-170 0) бе 00 |босідоеоє до нечтьасовви п по п В ПК КЕ КК СТО

ЗУКІЖОввдУУВроООтТаЗІТсВООВОоВ ї ХАБИУООКРОСОПРТУБОБУЕОВКВЕОСІБЕЕ рВОТаткауОтЕМУц

Фь шО-8К? Залишки 23-33 сов- ц 1 послідовності ваОвБІсВКУАВ зл шо-вКО Залишки 49-55 спв-та послідовності вОВКеРЕ

ЗЕС ОО МО. 359 «т, ша-еко Залишки 88-96 ! спв-зЗ послідовності ОвИБВОТОУ

ЕС ИЮ МО. 399

І іззапЕІВнОа193455789012 3456590 за0 УНН жа-БЕЗ УКРЕІКВЕУТІЗУОТЗККНОКЖІКІВЗУВАЕ ! вІвУхЕсАгВПЛУІвнаснОЄ ТУ ов ЕО-сКІ Залишки 31-37 срв-ві послідовності зЗзаужнс

ЗЕСІС МО. 340 ун вО-ЯЕЗ Залишки 52-87 ЩО ! сов-но послідовності ПЕХХТОВТТУМРяБиО

ЗЕС ОО МО: З40

«но жо св3 0000 Залишки 100-110.) спв-н3. ї послідовності о ВоУтКВвОБНХ ї ЗБСІО МО: 540 : нн нн нн ОО ЗОТВОВ1234 67800123 67890 ! ОЯУЕПТОРЕЗУНУЧРСОТАНІТСВООНОСЮК і ! ! | | УАБИУООКРООЗРоЇУІУЕряКВРЕСІРЕВ

Ям БЯ-БЕЗ ! ; ОаЗНОО АТС АСУУСОВИ ши тт одно ВВЕ КО ої, Ко-кЕЗ : Залишки 29-33 ; свв послідовності | БООвЕсоКчАВ ' ток ово МО 3411

У, шо-виЗ Залишки 48-55 сов-їий і послідовності | ЖОБКЕРе

ОЗЕООМОСЗЯ1 цто ша дж ії Залишки 99-96 ! дво :послІДОВНОСТІ І ОАНОВОТаУ сота БО МОс341 0 ши п пн КЕКС ЕК СКС ! панни, п ек Аа сви

Е | | БВБУЯНСНІВОСРОКСІЕМІСВІУУТОЯТУ заз чн БО-БЕ4 : : УМРБЗІЖБКУТІБУСТВКМОЮВЬКОВ УТА і і | ПУТАХУЗСАРЖПЧІБНОСЕВрЯУНОСОСТЬУТУВ ! ун о ЕО-4ЕЯ "Залишки 31-37 сав-ні ІпослІДОВНОСТІ івЕВутНе і 1ЗЕСІО МО. 342 : і ун шфОчшед : алишки 2-7 .

Е свв : послідовності | ПІЖЯТСеТУУМЕсЬКЕ сов-В? 5Е0І0МОс342 "Залишки 100-110 ! ун о ЕЗО-БЕЙ послідовності т , сок-на БОЮ МОсЗ42 0 ТЧОНОХ на ХА М КЕ ЕЕ ЕС

Е : ОУКИЛОвеаоЗУЗРООТАВІТОВООВЬСОВ «ль кЗ-кКА | | ХАВИТООКРЗОЗРУТУІУВОВКВРОСІРЕВ і 343 Н ЕЕЕлЕМНООТАТОТІЗОТОТМПВАБВУТСОВИ : | рВОТсУКаСЄТЕУТТЬС ув ошеєвна ЗАЛИШКИ 2333

Е своя : послідовності . ВаОвЕСОКтАВ , ст ВЕС МО: 343 ! т, вЗ-8Еа ! залишки 49-55 і вел і послідовності | ЖОЗКВЕВ «т; то та ! Залишки 88-96 : епв-ї3 : послідовності : ДАО

Е с тхЗа5атвові За Ва0123о61и80 пики п ЕЕ ЕС ДИ зай КИООВОООМУКРНЕТЬоТУ Во

ББВЕУТИСМІВОРРОКСІМІСрІХ УТ чн ке-вЕ5 ЯМРЕБКЄВУТІВУОТЕКНОКВЬКІВВУТАА

РТАгТУСАВЕВВОУТЬНОСВВУ КОТУ ун ве-5Р5 Залишки 91-37 ! пон послідовності завутнс ! суксну ЗЕС ЦО МО. 344 «що шо-ве Залишки 52-87 і сов да послідовності ПІУХТОВТУУМееЬКО і

ЗЕСИЦО МО: 344 ! шо шк Залишки 100-110

НЕ па? послідовності крУттвОосВру соконо ЗЕСНО МО 344 015234 56У89935345678503534567889 01 ЕЖЛОВРОРОВУТРКЕКУТІТСВООВІОВ 345 «п, ка-анЕ КХАБНУООКРООЗРКІУІХШОВКВРЕОТЬ ! ВЕВИЗМОСОРАТЬТІМЗІЕАКОВАТУУСОА

МОБОТОУКСОСТКУВІКВ і «т. кО- 85 Залишки 24-94 і сові послідовності вООКЬООКХАЯ і

ЗЕСИО МО. 345 І «Л,. ЕО-2Е5 залишки 50-56 і еби-їо послідовності ЕрОКЕРБ і т ЗБОЮ МО. 345 чт шЗ-ВЕВ залишки 89-97 своя послідовності САМОВОТСУ і

ЗЕС О МО. 345 ! пн п ЕК КК МО

ЗаБУУВСНІКОВЕОоКСТЕНІСрХХЖТаЯТХ

І з4б чн ка-вЕЄ МРЕБКЕВУТІВУ0ТУКНОКУЬКІВяУвАЕ !

ОТАУТУСАВЕВУТМВООВОХНООСТІТУВ уц ЕБ-БЖЕ залишки 31-37 ерв-ва послідовності вавттне

НИ ЗБОЮ МО. з48 І ун жа-ВЕЄ Залишки 52-67 й ! ств-яо посліДОВНОСТІ БІЖУТОВТУТНРеКО і

ПЕ КН сн я ВУ ВВ «НН ПК, о. Залишки 100-110

ТВ КатеКе послідовності коутквосяру !

СІК-НО ЗЕС р МО. 348 01323456 789932345678903934557899

УУБТОВРЕУВУВРОИТАНІТСВСОВЬСОК

(347 чль к9-8кб ЧАЗНХООКРООВЕУНУТТЕОБКЕРВОЇРЕК ОЇ

ЕБОБМЕСОТАТЬТІВСТОТМОКАВУВСОВЕ пвотсутоссткУТУТЙ

І іт23а5втазнозазетвооозазот вай «т. вО-8Е5 залишки 25-33 спв-ті послідовності : ВБОВІСЗОКУАя ши ЗЕСОІМОС 347, ж во-ЗЕЄ Залишки 18-55 стд-ї послідовності і ЕОшККРЕ ! ! ОБСПО МО: 54 ! !

У БО-ЗЕЄ "Залишки 88-96 епв-ІЗ послідовності | чАНОВрІСУ сш ШШШВББВ БОБ МО зав ГЕУОБУКБЕСОСІУОРССВЬВОЗСАУВОСВІВ о БББУХИСНІВОДРОКСІЕНІСОЖЖЖТОВТХ тн ЕЗ-ЗЕ7 | ХМРАБКОРУТІВУОТОКНОКУрОМИВОВАЮ і ОТаУХуСАнЕРУМІЬВООВВУ НОСТІ Туя тв кЗ-5ЕТ Залишки 31-37 ; спв-ні І послідовності ! зако п ЗБЕС ОО МО. 345 і он о ко-дЕт Залишки 52-67 ! спр-цо послідовності ООТУУТОВТУУКРЕТКО ши м ПОПОВ ке ВД ек ла ВИНИ НИКИ

Залишки 100-110

УК ОЕЗ-щЕ послідовності і веочІВССсВОУ сов-ні ЗЕСОІМОсЗ48 ! ПТ БУУБТОВВОКОВУХРКЕКТРІТОВЕОВІЯВ і 49 - і ЕХАЗИХОЗКРООЗРКЕУЇТХЕЮВКАРВСУКВ чув БО-БЕ? | ВЕЗСЕМОЗПОАТЬТІМВЕКАЕПААТУХСОА

ЖОВОТоУКСОстТКУКІКА ть К9-3и7 Залишки 24-34 ств-т послідовності і ООвьБОКуАВ !

ЗЕС ОО МО: 349 «п. ЕЗ-ЯЕЗ Залишки 50-56 і ство послідовності І БОЗККРЕ ! ЗЕС ПО МО. 549 ! ! хь ЖоеВЕ? Залишки ВАТУ спв-їз послідовності | ЯАНОВОТеМ нини в аакери А: ВААНААААА ! п123456789012345678901234567890 о а5д | ЗБНУХНСПІКОАРОКСЬВНІСОТУЄТОЯТУ

Ун Ба-ве8 | ОуМРОБКЗВУТІВУЮТЕКМОКУЦКОЗНУВАЄ ! |ОТАХЖУСЬВЕПУТІВОБООУНСОВТЬУТУВ «ну тости Залишки 31-37

І М ЕЕ - - Н І оливи послідовності . Ва5УХио й 5БСІО МО з50 і чіт ско Залишки 52-67

І чноЗ-5Ба й й ЕН евв-8о послідовності ООІХУТОВТУХМрРЕТКЕ ! ний ЗБОЮ МО. 350 оч ко БЕВ Залишки 100-110 іп о »Біа-е»о . . й се і спря-енаі послідовності віч тТкСоВОу

ШИ ЗЕ МО. 350 пон п і ЕСЕ

ЖУУМТОБЕОКОЗУТВККЕУ ТІТОВ зві . КУАБУТООКРООВЕКІТІ ВОВКОМ чи ЕЗ-ВЕВ АКВСЗПЯСОВАТІ ТІНІ ВАКОЛАТЖУСОВ

Пол, ка-вкв Залишки 24-94 ев шо послідовності сОБІЗОКУАВ ! нини ЕС МО. 351

Іль во-8е8 Залишки 50-66 еп послідовності КЕОБКАРЗ

ША 07 0000ШВБЗА-- ЗЕМ і утеотаоств залишки 89-97 їмМі. ЕЗ-ЗЕВ . . і і

Іесре-їз послідовності ОАЖОВОТСУ !

НОВ ЗЕВС МО. 551 І

Снетематизавані дані олержаних і експресованих варіантів антитіла КО оТт'ттфввттТтТтнннтннттнтвинтТтТттчТнинни

Антитіло Назви УМ 300 йазваМб | БитрНЕКО2ОВБое(мом) : і Н :

КК ЕН ИН НН НН нн и Ан нн

Б9-ЕКІ | Е9ЗУМИЗ25 | ЕЗУТ325 | 29 Щ ою БМ овУлом | тат

Ї удялуде яння од нстннт тент коки дотри педрад ож оно пні од

Таблиця 15

Систематизовані дані одержаних і експресованих варіантів антитіла ЕЗ

Титр НЕК-293-бе (мг/л

Е9-ЕВІ ЕЗУНЗ25 Е9МІ-325

Е9-ЕВ2 ЕЗУНТО4А.1 ЕЗМІ-104.1

Таблиця 16

Афінності зв'язування СОК-прищеплених антитіл Е9 з людським 0114, мишачим рІ14 її 01 4 яванського макака, визначені за допомогою ЕЇ І5А, Віасоге і ЕАС5

Що Людський 11 4 Мишачий О.А ря яванського макака

ЕПЗА на Віасоге ЕАС5 на ЕПЗА на Віасоге ЕАСЗ на ЕПЗА на Віасоге

МАБ | зв'язування (ка, нм) зв'язування | зв'язування (ка, нм) зв'язування | зв'язування (ка, нм)

ЕСво, нМ) ' (Ка, нм) ЕСвхо, нМ) ' (Ка, нм) ЕСво, НМ) ' 51 ол пе |і зи | ож | 05. 0,035

Таблиця 17

Нейтралізуюча активність СОК-прищеплених антитіл Е9 відносно людського і мишачого ОГ І.4, визначена за допомогою ЕГ І5А і ЕАС5

Функціональні данні ни Людський ОМА Мишачий ОСА

ЕШ5А на ЕАСЗ на ЕСІ5А на ЕАСЗ на

-- 1 чек, че чек

ІСво, НМ) ІСво, НМ) ІСво, НМ) ІСво, НМ)

Таблиця 18

Амінокислотні послідовності УНН її У, людських СОК-прищеплених антиті. що. | лка | і

ПЕУСІСТОВСТЕУККРОВОБКІВСХУВОСВІВ і ! | З9Б5УУНСЛІВОМРОКСІЕЧІСВІЧУТСВТУ 382 ми Ко-ЖВІ | | УМРЗІКВОУТІБУРТЯУМТЕКСОМЕЗЬКАВ : | | ПТАМУТСВВЕПУТЬВОСЗВУНООСТМТУВ оімжоваєтвку 0 алишКи ЗІ б етводьо | послідовності с евБуУтно

Мои к ПИВ п хе вдо рес У ННІ МИ хо що-РВі ГЗалишки АВ

Соерв-до | посліІДОВНОСТІ о пІУУТОЄТУУКРВЬКО шк що Пі в ВІ В ВСЕ Пн г "Залишки 100-110. : мя ЖатЕКІ | послідовності | кОУТІВССЕВУ

ШЕ Сук-нО зЕО І МО. 9352 ! шк шити ол Ер

Е ! сЕЖУВТОВбКАКОЬЕХЗРСКЕАВТЬОСВСОРИИО ж : ! | ЖЕУАБХУОЗКРООЯРЕЗУІУЕОБКВРОРІВА : ут ЕЗ-ЕВІ | | РЗСВМОСОЖАТЬТІЗВІОЗЕОЕАУТ СО : | , МОовртєУтсостиікІКЕ. ять. та і послідовності і ЗСОВІСОКУАВ ша 8ВЕСІОМО. 353

ВЕ шу- ЕВ і залишки 50-55

ШИН оБЕСІМОС 353

В рин ГЗЯЛИШКИ НУ ! г м БЕК / послідовності і САмоВотеу ооОБОКСЬ ОЗЕОІО МО. 353

ПО ВІБЕУВОВІЗ З ЕЕОВОБЕ ЗІБ, . | ОЕУТОЕРВЕБСРАБУКРТОТИТЬТСТУВОВІВ

БББУЧУНСМІНОРРОКОСЕМІСЮТТУТОНТУ з5а ун жКао-кВо | | УМРВІКЕВУКІБУЮТОКМОКТМТИТИМОВО і | | ПТАТУУСАНЕВУТЬНОСЯВУМОСИТТУ ТУ ож же-тко 0 рОаЛишШКИ НИ осві / послідовності /яаБУтУнс

НК НЕ ПІКОВІ КОН ос ова-гВО | Залишки 52-67 ш ств-НО. що | послідОВНОСТІ |ОБІЖУТОВТУТКРІСКА пн рн БЕМОМОЯВЯ ннннннннннннннннннннннннннннннн

С доже-тво (Залишки 100-110 : : птв-ця но | послідОоВНОСТІ ОшОУТОВОСВОЯ рр | ОБЕСО МО. 354 !

І5315ЕОВОбІ254к и ТВОО1п3а5Е о енд нн я ИН и ННЯ вк Ї я | | БУАБНТООКРООБЕКІСІУЕОЕКВРЕСІРО 355 : чи Е9-ЕВа ! | ВЕБСЗЕБЕВОВТЕТІВОТОвЕрУМУХТСОА і жМокотсуКсОооУКУЮТЕВ,

МД пох ПИ ШК КК прожаокУ ї залишки 24-34 ть КатЕщо ї послідовності ВСОВІСОКУАЄ сокир ЗБОЮ МО. 355 ст, кате : залишки 20-68 ернето . послідовності ЕПВКЕРа

ЕС МО. 355 будов ї Залишки 89-97

У ВЕК : : Я . . сорв-ра : пОслІДОВНОСТІ ОАКОБСНОУ

ВИННА М КОМ Во Кс НИ ПО

Приклад 6: Подальше конструювання афінно зрілого антитіла Е9-71

Е9-71(М) і Е9-2Я1 (І)

Було проведене подальше конструювання важкого і легкого ланцюгів афінно зрілого анти-ОЇ | 4 антитіла Е9-71. Метіонін (М) в СОК-НЗ важкого ланцюга Е9-71 замінювали лейцином (Г) шляхом конструювання прямих і зворотних праймерів, що перекриваються, які містять мутовані нуклеотиди.

Потім проводили послідовну двостадійну полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ампліфікації повнорозмірного гена варіабельної області з використанням двох праймерів, що несуть мутовані нуклеотиди, і двох найбільш крайніх праймерів, що містять виступаючі послідовності, комплементарні одержаному вектору.

Сигнальний пептид, використовуваний для легкого ланцюга Е9У-71 (М) і Е9-71 (У), називається сигнальним пептидом лямбда а. Каркасну область 4 (ЕМУ4) ПОЇ -1 легкого ланцюга Е9-71 замінювали областю п.)/2 для надання їй більшої сумісності з константною областю пиС1і2 антитіла. Потім конструювали прямі і зворотні праймери, що містять мутовані нуклеотиди. Потім проводили послідовну двостадійну полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ампліфікації повнорозмірного гена варіабельної області з використанням двох праймерів, що несуть мутовані нуклеотиди, і двох найбільш крайніх праймерів, що містять виступаючі послідовності, комплементарні одержаному вектору.

ПЛР-продукти, одержані після проведення кожного збирання кДНК, розділяли на агарозному гелі, і смугу, відповідну передбаченій кКДНК варіабельної області, вирізали по розміру і очищали.

Варіабельну область важкого ланцюга вбудовували, із збереженням рамки зчитування, в кДНнК- фрагмент, що кодує константну область людського ІдС1, яка містить дві амінокислотні мутації в шарнірній області, шляхом гомологічної рекомбінації в бактеріях. Такими мутаціями є заміна лейцину аланіном в положенні 234 (відповідно до Європейської системи нумерації) і заміна лейцину аланіном в положенні 235 (І па еї аї., 9У. Іттипої, 147: 2657 (1991)). Варіабельну область легкого ланцюга вбудовували, із збереженням рамки зчитування, між людським сигнальним пептидом лямбда а і людською константною областю лямбда за допомогою гомологічної рекомбінації. Бактеріальні колонії виділяли, плазмідну ДНК екстрагували і КДНК-вставку секвенували кДНК по всій довжині. "Правильні" важкі і легкі ланцюги, відповідні кожному антитілу (таблиця 19), спільно переносили в клітини НЕК- 293-6Е для короткочасного продукування повнорозмірних антитіл проти людського 0 І 4, Е9-71(М) або

Е9-71(()3. Обидва ці антитіла Е9У.71(М) ії Е9У.71(Ї) мали один і той же легкий ланцюг. Клітинні супернатанти, що містять рекомбінантне людське антитіло, були очищені за допомогою хроматографії на білку А-сефарозі і зв'язане тіло елюювалося при додаванні кислотного буфера. Антитіла нейтралізували і діалізували в РВ5.

Таблиця 19

Амінокислотні послідовності УН і Мі, людських сконструйованих антитіЖ ЕІ

КУ І мо. білка 123486785012395578901234567850 ваЕБтУНЯМ ХВОРИМИ ЕМ рІЕТаВТЯ

ЗБЕ У Жо.7у УНРЕОКЕВУТІВУОТИКМОКВЬКОКВ СТАВ

ПТЖУтУСАИОЬЬАМЕВВВКУОТІТМЕ

З ' спеекі послідовності БаБутиа дм но ім МОМ ВВ нон чн ше. і залишки 52-67 ! спвені послідовності ОІТУТОосТУХНиВЬКа се ЖД КВ Ина. і о Залишки 100-110 : іх вт. послідовності рАавАМСЯаСВОК :

СектНу ЕС Ю МО: 356 пи п ек

ЕБЖЕБТОРРОУЗУЗРОСТАВІТСВООВЬСОК що УАВИХУСОКРООСРОГ А ІХКОВКВРАСІРЕВ оБОТОУКСтСтТюи то '

Вот залишки 23-33 : св послідовності ВБОВІДШОКУАЄ тховво алишки Я8-о ! сов-ї 7 послідовності ЕОБККРЗ

ІЩЕ ЗЕ ІС МО. 5 ' точ алишки в9-УБ

ПОН НА НИНІ не о ВАК о Ка Й ВМ 123255 НОТИ 3а5Б ВООЗ БЕН, ввнУунсХІВОВІсКСЬЕМТсрІКиТавтя за Ун ка.71(Мм) УМРВІЖВКУТІВУЮТЕКНОКВЬКООЗУТАА

ПТУ ХСАВОВІАМНОСОВОКУСОВТІАНМВ

! пен рід ШИ УТ жа. (М) послідовності ззвуУна : сов-Ві ЄЕС ЛЮ МО 358

У алишки 52-8 ' шо, (М послідовності РІХУТОВТЧУМНЕЗЬКЯ : нн ТВ нн СО МО З днннннннннннннннннннннннннннннннннннн чн Залишки 100-110 : ше.тТ1(М) послідовності сАцАМОСОВОК : сповна ЗЕ ОО МО. 358 0 ф183а5БтТВод13345Б7 ВООЗ ВОЮ,

ТАЗ ЗЯ56789012345678501234567890

І | БІЕОТОЕРІУБВУВЕСОТАБВІТСБООВЬОВК і ше - | ХАБИХОСКРООЗРУТЗІУВОВЕВРЕСІВЕК 359 че ЕВ.Тті (м) | ЕОЗНОС ТАТІ ТОНОЕАСТУСОДИ !

ВИНИ ПІД НИК Пес а ск ке иВИНННННННН і У 'запишки 23-33 Я : ЕБОТІ (М) послідовності ВООВЬСОКУАя !

ПИ ШІ коосее НН опе Д Ко лесЕТИЩИ ПОМ

ЗЕ, і Залишки 45-55 І : ЕООТІ (МІ послідовності ЕОЕЖВРЕ і сов-та ЗЕСОЮ МО: 359

І Ух Залишки 88-98 ! . свя-З /ЗЕСІо МО: 359 і | і234557а5012456789012 35567890

З | БІБУЖНСПІВОРРОКСБЕНІСрЕХУТОВЕХ оюта сін но рісфінні нііойе інн ! ПТКУХУСАКОАБАТОВОВОКИСОСТЯ КТЗ

ЕВОТІ ТІ / послідовності БЗБУЧНС срд-ні ЕС МО 360

І УА залишки 52-57 ! і свв-НІ "ЗЕСНО МО. 380 ' ! й " Залишки 100-110 і порок послідовності тт ! спд-нз 00 ЗБОЮ МОсаво ОХ ! | 1234558 501234567и3012345п7 890 : 61 БХЕБТОРЕБУВУВРООТАВІТСВЗООВИСОК !

І і | ТАБЧУСОКРООЗРУМІМІУКООКВРЕСІРЕВ

О.7і(ї) | ТЕОЕМЕСОТАТЬТЕОСТОРМОВАВУХСОВИ

І | ОБУ КСсОоСЕкІ ти !

ФЕ Запишки 23-33

О.І З послідовності ВБОВІСОКУАВ !

МИ МА есе У ЗМ пе ІН го ІгИ М КАК

І У, Залишки 49-55 ! : кат " послідовності ЕОБКЕРЕ 0001 о сря-во 0/0 ЗЕ МО: ЗВ і ват / послідовності ОАМОВрІСуУ ! і сов-23 ЕС МО: ЗВ

Приклад 7: Конструювання сигнального пептиду Е9-71 (М)

Для генерування анти-О1 14 антитіла Е9-71(М) використовували сигнальний пептид лямбда 1а.

Були також досліджені альтернативні сигнальні пептиди. Передбачувані дані відносно процента "правильного" розщеплення антитіла в процесі експресії іп 5ййсо сконструйованих амінокислотних послідовностей М-кінцевої варіабельної області Е9-71(М) з різними сигнальними пептидами, що походять від сімейства сигнальних пептидів лямбда і каппа, можуть бути знайдені в Інтернеті за допомогою сервера Зідпаі ІР 3.0 (наприклад, на угер-сайті ср5.йи.ак/б5егмісез/Зідпа!Р/) або з використанням інших еквівалентних комп'ютерних програм. Були вибрані сигнальні пептиди, передбачувано, з найбільш високим процентом "правильного" відщеплення, по одному від кожного сімейства: пептид лямбда Зр, що належить до сімейства лямбда, і пептид 23, що належить до сімейства каппа. Був також вибраний мутований варіант, що походить від вихідного сигнального пептиду лямбда 1а, з двома амінокислотними замінами (гліцину на аргінін і серину на валін). Для конструювання легкого ланцюга, що містить сигнальний пептид лямбда 1а, здійснювали одностадійну полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ампліфікації повнорозмірного гена варіабельної області з використанням двох найбільш крайніх праймерів, що містять виступаючі послідовності, комплементарні "приймаючому" вектору, де один з них містить мутовану нуклеотидну послідовність.

Для одержання легкого ланцюга, що містить сигнальний пептид лямбда Зр і сигнальний пептид каппа

Ї23, були створені два праймери, що перекриваються, з метою конструювання області сигнального пептиду, а потім була проведена полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) для ампліфікації повнорозмірного гена варіабельної області з використанням двох найбільш крайніх праймерів, що містять виступаючі послідовності, комплементарні "приймаючому" вектору. З використанням сигнальних пептидів лямбда Зр і каппа І 23 були одержані два варіанти варіабельних областей Е9-71, де один з них мав повнорозмірну варіабельну область, а інший - варіабельну область, в якій був відсутній перший серин (5) біля М-кінця. Сигнальний пептид лямбда 1а був присутнім тільки в сконструйованій повнорозмірній варіабельній області. ПЛР-продукти, одержані після кожного збирання

КДНК, розділяли на агарозному гелі, і смугу, розмір якої відповідав передбаченій кДНК варіабельної області, вирізали і очищали. Варіабельну область важкого ланцюга вбудовували із збереженням рамки зчитування в КДНК-фрагмент, що кодує константну область людського Їдс1, що містить дві амінокислотних мутації в шарнірній області, шляхом гомологічної рекомбінації в бактеріях. Такими мутаціями є заміна лейцину аланіном в положенні 234 (відповідно до Європейської системи нумерації) і заміна лейцину аланіном в положенні 235 (І па еї аї., 9. Іттипої, 147: 2657 (1991)). Варіабельну область легкого ланцюга з людською константною областю лямбда вбудовували, із збереженням рамки зчитування, за допомогою гомологічної рекомбінації. Бактеріальні колонії виділяли, плазмідну

ДНК екстрагували, і кКДНК-вставку секвенували по всій її довжині. "Правильні" важкі і легкі ланцюги, відповідні кожному антитілу (таблиця 19), спільно переносили в клітини НЕК-293-6Е для короткочасного продукування повнорозмірних антитіл проти людського 01/14, Е9-71(М). Клітинні супернатанти, що містять рекомбінантне людське антитіло, очищали за допомогою хроматографії на білку А-сефарозі і зв'язане антитіло елюювалося при додаванні кислотного буфера. Антитіла діалізували в РВ5. Очищене антитіло Е9.71(М) аналізували за допомогою мас-спектрометрії (МС) для підтвердження послідовності інтактного антитіла. У таблиці 20, наведеній нижче, представлені амінокислотні послідовності різних сигнальних пептидів, використовуваних для одержання антитіла

Е9.71(М). У таблиці 21, наведеній нижче, представлені сайти розщеплення антитіла Е9.71(М), проаналізовані за допомогою мас-спектрометрії.

Таблиця 20

Амінокислотні послідовності сигнальних пептидів, використовуваних для конструювання Е9.71(М) з Антитіло Сигнальний пептид. Послідовність сигнального пептида Повнорозмірна ! БУлЛИиМу. | Ха | МАЖЕРСЕЕЛІЛЕНСАСВ КА Мкінцевий одно пн ВО МОВО 00000000 відсутній

ЕЛ (М | ха (50 ВУ МАХБРІКТЬПНСАКУМА у. ІПовнорозмірна (56О ПУ МСКЗ63) Ш Повнорозмірна

БЗЛЦМ Х зр МАЖТРІДДРЛТЕСТУВВА Ї повноровмірна о Шк СБОПпУМОЗу о Щ

КОТУ Хр МАМТРІЛЬРІЛЛЕСТУВЗВА М-кінцевий ! тн МіЯ Карра Г23 | МОМЕУРАОККОТІ СМР РОАКС Тповнорозмірна чик вдо ЗД дня

БЕЗ 7 М) Каррі 1.23 | МОМЕУРАОКЕОЛІЛУКРОАЕС М-кінцевий . нн ВМІВ рн відс

Таблиця 21

Сайти розщеплення антитіла Е9.71(М), проаналізовані за допомогою мас-спектрометрії (МС)

"Аитнійно Головний сайт розщеплення зи те в піка з Є

КОН МАЖБРІНТИТНОСАОСІЯУАІВУВІЛОРРУУВ З і о (БО Те МО і і ШИ

ЕОМ | МАМОРЕСТИТНСАКУЖАЇВУЄСТОРРОУ5 96 видав: ЗЕ рло с

КОМ? | МАЖТРІЛІ ВЕОТЕСТУВЕА |З ЖВІЛОРРУЄ 9 !

Я ЗВО ЦУМОУДИ Ц

ОБОЛИМОА | МААЖМТРОСЬРЕСТЕСТУВВА УЛ ОРРБУВ ! 97 ! БО МОЬа Ш Ш ї ш

На у кях как ті со ШИ щи КІ кг іже ла хуя Ї : ЕБЯЦ-Я МОМЕХУРАЮВЬСЬСЬКМ ЕРОДЕСІУУВЕТОРЕВУВ це визначали ! БЯЛІЦМІ-5 МОМКУРАОКЕСТ ЕВРО ЛЕСІУВЬТОРРБУХ ' Не визначали

Її 0. ЕОМ іш з сх

Приклад 8: Характеризація іп міго сконструйованих антитіл РКОЇИи5іоп

Афінність зв'язування сконструйованих антитіл РКОГиз5іоп з антигеном визначали із застосуванням

ВІАСОВЕ-технології, як описано в прикладі 1.1., і ці дані представлені нижче в таблиці 22. Іп міго активність репрезентативних антитіл також оцінювали іншими методами, описаними в прикладі 1, і результати такої оцінки представлені в таблиці 23.

Таблиця 22

Кінетика зв'язування сконструйованих анти-ОІ І 4 антитіл РКОГи5іоп, оцінювана методом Віасоге ' Кінетика зв'язування

ЕБСО людського БІ14 | ЕСОМмишачого ОДА ! Кк. Ж Ко Ке Ка Ка Кк. Ка Ко

С Антитіло | (м?є? | (67) 0 (М) 0 см'є?; (5 | (М) | (м'є? | (0) 0 юю ' вно Б-05 | НЯ р-05 вод р-05 в ререре гер варю ря ретро з ререте ре тте ре ре рег

МАБ - моноклональне антитіло; М/О - не визначали; МВ - не зв'язується.

Таблиця 23

Характеризація відібраного сконструйованого анти-0І 4 антитіла РКОЇИ5іоп 771 | Аналізинапрямезв'язування | Аналізина функціональнеблокуванняд//-://.-З"уоД(

ЕСІ5ЗА на Інгібу-

ЕМІЗА з ЕАСУ конкурентне ЕАСЗ на конкурентне вання нич (ЕСво, нМ) зв'язування св нМ). активації 50, ІСво, НМ) 50; Моїсп

Антитіло . пиМоїс- в спів-

ЕСО ВІ 14 рі.4-клітини ІЕСООГІ А/пиМоїсн-1 МОМ А-клітини культурі пи І 4- пи ти | супо пи ти пи ти | супо пи ти клітин

ІСво, НМ)

Е9-28

Е9-71

Е9-19

Е9-11 14,75

Е9-16

9-17 | Мо |Ммо| мо 8 | 257 | мо | мо|мої| 71979 | Мо | 1 9-66 | М/о |Ммо| мо 202 007 | мо |мо|Ммо| 503 | 09 | Мо

ООН | М/о | М/о | м/о 8552 | 082 | м/о |Ммо|Ммо| 565 | 06 | Мо

Приклад 9: фізико-хімічні властивості вибраних антитіл РКОЇи5іоп

Ідентичність моноклональних антитіл, специфічних до 0114, визначали за допомогою мас- спектрометрії, описаної нижче.

Мас-спектрометричний аналіз Е9-71

Аналіз молекулярної маси легкого ланцюга і важкого ланцюга: Зразок Е9-71 розводили до 1 мг/мл шляхом додавання води Мій-С. До 20 мкл розведеного зразка додавали 1 мкл 1М ОТТ. Зразок інкубували при 37 "С протягом 30 хвилин. 1 мкл відновлених зразків впорскували в РХ/МС-систему

Адіієпї 65610 О-ТОЕ, забезпечену упакованою дифенілом колонкою Магіап ЮірпепуЇ. Буфер А являє собою 0,02 95 трифтороцтову кислоту (ТЕА), 0,08 95 мурашину кислоту (БА) у воді. Буфер В являє собою 0,02 95 ТЕА, 0,08 95 РА в ацетонітрилі. Вихідний градієнт становив 595 В, а потім його збільшували до 35 95 В за 5 хвилин і до 38 95 В за 15 хвилин. Після цього градієнт збільшували до 95 905 В за 1 хвилину і втримували при 95 95 В протягом 4 хвилин, а потім знижували до 5 905 В за 1 хвилину. Швидкість потоку становила 50 мкл/хв. Мас-спектрометр працював при напрузі розпилення 5

КВ, а інтервали сканування становили 600:3200 (відношення маса:заряд). Молекулярна маса легкого ланцюга 22649 дальтон чітко відповідає теоретичній величині для легкого ланцюга, де біля М-кінця присутня амінокислота У. Три невеликих піки спостерігалися при молекулярній масі 22014 дальтон, 22737 дальтон і 22937 дальтон. Пік при 22014 дальтон відповідав М-кінцевому фрагменту, що складається з 6 амінокислот. Цей пік, ймовірно, виник внаслідок фрагментації повнорозмірного легкого ланцюга в іонному джерелі, оскільки зниження "величини фрагмента" в мас-спектрометрі приводило до зникнення цього піка. Пік при 22737 дальтон відповідав теоретичній величині для легкого ланцюга з амінокислотою 5, присутньою біля М-кінця. Пік при 22937 дальтон відповідав легкому ланцюгу з сигнальним пептидом, подовженим на амінокислоти "5" на М-кінці. Молекулярні маси важкого ланцюга добре відповідали теоретичним величинам. Спостережувані молекулярні маси становили 50263 дальтон, 50426 дальтон і 50588 дальтон, де різниця в 162 дальтон є результатом відмінності в глікозилуванні.

Мас-спектрометичний аналіз Е9-71 (М)

Метод, описаний в розділі "Мас-спектрометричний аналіз Е9-71", був використаний для аналізу зразка Е9-71(М). Молекулярна маса легкого ланцюга, що дорівнює 22645 дальтон, добре відповідала теоретичній величині, одержаній для легкого ланцюга з амінокислотою 5, присутньою біля М-кінця.

Невеликий пік, спостережуваний для молекулярної маси 22989 дальтон, відповідав легкому ланцюгу з сигнальним пептидом, подовженим на амінокислоти "ЗМУА" біля М-кінця. Спостерігався також дуже невеликий пік з молекулярною масою 21923 дальтон, хоч, ймовірно, він виник внаслідок фрагментації повнорозмірного легкого ланцюга в іонному джерелі, оскільки зниження "величини фрагмента" в мас- спектрометрі приводило до зникнення цього піка. Молекулярні маси важкого ланцюга добре відповідали теоретичним величинам. Спостережувані молекулярні маси становили 50263 дальтон, 50426 дальтон і 50588 дальтон, де різниця в 162 дальтон є результатом відмінності в глікозилуванні.

Мас-спектрометичний аналіз Е9-71 (І)

Метод, описаний в розділі "Мас-спектрометричний аналіз Е9-71", був використаний для аналізу зразка Е9-71(3. Молекулярна маса легкого ланцюга, що дорівнює 22645 дальтон, добре відповідала теоретичній величині, одержаній для легкого ланцюга з амінокислотою 5, присутньою біля М-кінця.

Невеликий пік, спостережуваний для молекулярної маси 22989 дальтон, відповідав легкому ланцюгу з сигнальним пептидом, подовженим на амінокислоти "ЗМУА" біля М-кінця. Спостерігався також дуже невеликий пік з молекулярною масою 21923 дальтон, хоч, ймовірно, він виник внаслідок фрагментації повнорозмірного легкого ланцюга в іонному джерелі, оскільки зниження "величини фрагмента" в мас-

спектрометрі приводило до зникнення цього піка. Молекулярні маси важкого ланцюга добре відповідали теоретичним величинам. Спостережувані молекулярні маси становили 50245 дальтон, 50407 дальтон і 50569 дальтон, де різниця в 162 дальтон є результатом відмінності в глікозилуванні.

Мас-спектрометичний аналіз Е9-71(М)-3

Метод, описаний в розділі "Мас-спектрометричний аналіз Е9-71", був використаний для аналізу зразка Е9-71(М)-3. Молекулярна маса легкого ланцюга, що дорівнює 22558 дальтон, добре відповідала теоретичній величині. Спостерігався також дуже невеликий пік з молекулярною масою 21923 дальтон, хоч, ймовірно, він виник внаслідок фрагментації повнорозмірного легкого ланцюга в іонному джерелі, оскільки зниження "величини фрагмента" в мас-спектрометрі приводило до зникнення цього піка. Спостережувані молекулярні маси важкого ланцюга добре відповідали теоретичним величинам. Спостережувані молекулярні маси становили 50263 дальтон, 50426 дальтон і 50588 дальтон, де різниця в 162 дальтон є результатом відмінності в глікозилуванні.

Розчинність антитіл оцінювали шляхом преципітації поліетиленгліколем (ПЕГ) 3000. Така розчинність, тобто істинна розчинність, була визначена прямим методом шляхом концентрування антитіл в спеціальному розчині і/або буфері за допомогою центрифужних фільтрів Атісоп з подальшим моніторингом якої-небудь преципітації при 25 "С ї 5 "С. Стабільність оцінювали методом спектроскопії в ближньому ультрафіолеті - кругової поляризації (УФ-КД) і методом диференціальної скануючої калориметрії (ДСК). Стабільність при заморожуванні і розморожуванні і при підвищених температурах (прискорений тест на стабільність) оцінювали за допомогою ексклюзійної хроматографії (ЕХ). Ці методи детально описані в прикладі 1.8, а результати описані нижче, в розділі: Оцінка розчинності за результатами ПЕГ-преципітації.

У таблицях 24 і 26 вказаний процент ПЕГ 3000, необхідний для індукування преципітації серії клонів Е9. Ці клони і еталонний адалімумаб приготовляли в концентрації 0,2 мг/мл. Відповідно до цих результатів було встановлено, що клони, такі як Е9-4, Е9-14, Е9-22 і Е9-19, мали розчинність, аналогічну розчинності адалімумабу (приблизно 200 мг/мл), а такі клони, як Е9-11 і Е9-17, оцінювали як клони, що мають набагато меншу розчинність.

У таблиці 25 вказаний процент ПЕГ 3000, необхідний для індукування преципітації серії стабільних сконструйованих клонів Е9. Ці клони і еталонний адалімумаб приготовляли в концентрації 0,2 мг/мл.

Відповідно до цих результатів було встановлено, що клони Е9-5ЕЇ в даній серії мали найвищу розчинність, але при цьому не передбачалося, що їх розчинність буде аналогічна розчинності адалімумабу (приблизно 200 мг/мл), і такі клони, як Е9-5Е5, мали набагато меншу розчинність.

Таблиця 24

Процент ПЕГ 3000, необхідний для індукування преципітації серії антитіл Е9 (антитіла приготовляли в концентрації 0,2 мг/мл)

ПЕ Зоо

А-1242367.0 1718299 РІ1А-Е9-11 ШеС1Л.

А-1242368.0 1718300 РІ14-Е9-17 Шеб1/. 000017000001111волво

А-1242369.0 1718301 РІЛА-Е9-18 еСІ1Л,

А-1242370.0 1718302 РІ14-Е9-48 Ше ІЛ, нини

Ш07-1-- оплво3ивт 1 601

А-1242371.0 1718303 РІЛА-Е9-66 ВІеСІ1Л,

А-1241120.0 1716682 0І14-Е9-16 ШоСІ/І, 10.00

А-1242795.0 1718785 ПІ1А-Е9-13 ШввсіІ/Л, 10.00

А-1241121.0 1716683 ПІ14-Е9-38 ШеСІ/, 11.00

А-12428500.0 1718790 ПІЛ1А-Е9-71 Персі, 11.00

А-1242794.0 1718784 ПІІ4-Е9-4А Шосі/, 12.00

А-1242796.0 17187856 ПІ А-Е9-14 Прі, 12.00

А-1242798.0 17187558 ПІ1А-Е9-22 ПврС1/І, 12.00

А-1242797.0 1718757 ПІ14-Е9-19 ШосіІ/Л, 14.00 01111111 едалімумаб.д//| 14.00

Таблиця 25

Процент ПЕГ 3000, необхідний для індукування преципітації серії стабільних сконструйованих антитіл Е9 (антитіла приготовляли в концентрації 0,2 мг/мл)

БЗ-ЗЕ5 | 77771160

БЗ-ЗЕ2 7 | 77771789002ЮЖ 12К

ЕБЗ-ЗЕЗ 7 | 777717117896.00.ЮЖЮЄЮК (щЧЕЯЛ 777771 Ї17771711196.002ЮЖЮюКкз

Таблиця 26

Процент ПЕГ 3000, необхідний для індукування преципітації серії антитіл Е9 (антитіла приготовляли в концентрації 0,2 мг/мл)

Результати скринінгу на істинну розчинність: Е9У, Е9-19, ЕЗ-71, Е9-28, ЕЗ9-1Б.

Були одержані розчини, що містять 12 мг Е9, Е9-71, Е9-1Е і Е9-19 і 5,5 мг Е9-2В. Е9 являє собою

Ід451 мутантного ізотипу. Об'єми всіх розчинів знижували до величини нижче 1 мл шляхом ультрацентрифугування 15-мілілітрових пробірок на центрифузі Атісоп ЗОК.

Після проведення цієї стадії одержували наступні антитіла: Е9-2В і Е9-19, які були прозорими, і Е9,

Е9-71 і Е9-1Е, які були злегка каламутними.

У кожну пробірку додавали 10 мл 15 мМ гістидинового буфера при рН 5,03, і розчини знов концентрували до 1 мл. Потім ці розчини переносили в 4-мілілітрові пробірки Атісоп ЗОК і концентрували до найнижчого об'єму, наскільки це можливо.

Після проведення цієї стадії при кімнатній температурі одержували наступні антитіла:

Е9: 163 мг/мл; об'єм-0,05 мл; рН-5,12;

Е9-19: 132 мг/мл; об'єм-:0,05 мл; рН.-5,06;

Е9-71: 193 мг/мл; об'єм-:0,05 мл; рН-5,32;

Е9-2В: 64 мг/мл; об'єм-:0,1 мл; рН-5,29;

Е9-1Е: 100 мг/мл; об'єм-:0,1 мл; рН-5,31.

Для концентрування антитіл Е9-2В і Е9-1Е була потрібна набагато більша кількість часу, ніж для трьох інших. Це дозволяє передбачити, що їх в'язкість є високою в умовах приготування складів.

Потім розчини залишали на два дні при 5 "С для оцінки розчинності при цій температурі. Були одержані наступні антитіла:

Е9: залишалося прозорим при 5 "С і при доведенні до кімнатної температури,

Е9-71: залишалося прозорим при 5 "С і при доведенні до кімнатної температури,

Е9-1Е: виявляло дуже незначну каламутність при 5 "С і ставало прозорим після доведення до кімнатної температури через 20 хвилин,

Е9-2В8: виявляло незначну каламутність при 5 "С і ставало прозорим після доведення до кімнатної температури через 20 хвилин,

Е9-19: виявляло явну каламутність при 5 "С і ставало прозорим після доведення до кімнатної температури через 20 хвилин.

Результати скринінгу на істинну розчинність Е9-71

4 мг Е9-71 в розчині концентрували з використанням центрифужних фільтрів Атісоп до 60 мг/мл.

Якого-небудь осадження або помутніння не спостерігалося ні при 25 "С, ні після зберігання протягом 1 дня при 5 "С.

Характеризація третинної структури за результатами спектроскопії кругового дихроїзму в ближньому діапазоні УФ-випромінювання.

Спектроскопію кругового дихроїзму в ближньому Уф-діапазоні здійснювали для зразків Е9, Е9-19,

Е9-71, ЕЗ9-28 і Е9-1Р при 1 мг/мл. Спектри виявляли сигмоїдальні профілі, що звичайно спостерігаються для "правильно" укладених антитіл. Цим методом не було виявлено якого-небудь неправильного укладання антитіл.

Характеризація внутрішньої стабільності методом диференціальної скануючої калориметрії (ДСК).

ДСК здійснювали на зразках Е9, Е9-19, Е9-71, Е9-2В і Е9-1Е в концентрації 1 мг/мл. Результати представлені в таблиці 27. Спочатку визначали температуру, при якій починається розгортання. Крім того, антитіло ЇД звичайно проходить три фази розгортання (Тт): розгортання інтактного антитіла, яке асоціюється з плавленням домену СН2 в Ес-фрагменті, плавлення домену СНЗ в Ес-фрагменті і плавлення Раб-фрагмента. Попередні величини дозволили передбачити, що найбільш стабільними є антитіла ЕЯ, Е9-19 і Е9-71. Звичайно клони, які мають більш високі величини Тт, є більш переважними, ніж клони з більш низькими величинами.

Таблиця 27

Внутрішня стабільність клонів анти-ОІ / 4 антитіла Е9, визначена методом ДСК при 1 мг/мл

С БеЮ | 6566107701-1 56

Оцінка стійкості до стресу в умовах заморожування-розморожування

Стійкість до стресу в умовах заморожування-розморожування оцінювали для зразків Е9, Е9-19, Е9- 71, Е9-2В їі Е9-1Е в концентрації 1 мг/мл. У таблиці 28 представлені результати ЕХ-аналізу зразків після проведення п'яти циклів заморожування-розморожування. Всі протестовані антитіла виявилися стійкими до стресу в умовах заморожування-розморожування. Якої-небудь явної втрати мономерів не спостерігалося навіть після проведення 5 циклів заморожування-розморожування.

Таблиця 28

Процент мономерних молекул, кількісно визначених за допомогою ЕХ перед заморожуванням при -80 "С і після проведення п'яти циклів заморожування при -80 "С і розморожування при 30 "С на водяній бані для клонів анти-О1| І 4 антитіл заморожуванням заморожування-розморожування

НЕ: в А ЛИН ПО СТЕК: ООН КО ТУ: ПО

В: 1: НИ ПО: ТК ООН КО ТК: ПО

Оцінка стабільності при підвищених температурах (прискорена оцінка стабільності)

Стабільність при підвищених температурах оцінювали для зразків Е9У, Е9-19, Е9-71, Е9-28 і Е9З-1Е при концентрації 1 мг/мл. У таблиці 29 представлені результати ЕХ-аналізу зразків на час 0, і через 7 днів і 21 день при 40 "С ї 50 "С. Кінетика розщеплення для всіх антитіл показала приблизно 8 95-е зниження процента мономерів через 21 день при 50 "С.

Таблиця 29

Процент різних молекул клонів анти-О1 І 4 антитіл, визначений за допомогою ЕХ на час 0, і після інкубування протягом 7 днів і 21 дня при 40 "Сі 507

(зразки приготовляли в концентрації 1 мг/мл) 9; . Фо мономерів | 9юо мономерів | 9о мономерів | 95 мономерів . о мономерів на й .

Антитіло час 0 через 7 днів через 7 днів | через 21 день | через 21 день при 40 С при 507 при 40" при 507

Я /177777/798992 | 986 | 868 | 909 | вв І"

Еб9-71 17777 .969 | 964 2 | 954 | 950 | 90

Еб2В 17777990 | 986 2 | 970 | 971 | 924 щ 96 агрегатів на Фо агрегатів Фо агрегатів до агрегатів до агрегатів

Антитіло час через 7 днів через 7 днів | через 21 день | через 21 день при 407 при 507 при 40 С при 507

ЕЯ ЇЇ 03 6 Щщ| 03 | 03 | 05 | 06

ЕБЗ2В | 05 | 04 | 05 | 09 | 17

БЗТЕ ЇЇ 03 | 03 | 03 | 06 | 16 9; . Фо фрагментів | 96 фрагментів | 96 фрагментів | 96 фрагментів

Антитіло о фрагментів через 7 днів приІчерез 7 днів при| через 21 день | через 21 день на час с 50 с при 407 при 50 "С

ЕБЗ2В | 06 2 | 170 | 25 | 20 | 59

Приклад 10: Оцінка фармакокінетичних властивостей анти-Оі | 4 антитіл у гризунів

Для оцінки фармакокінетичних властивостей анти-О1/ 4 антитіл, мишам 5СІО з природженою відсутністю природних клітин-кілерів (п-З3 на антитіло) внутрішньоочеревинно (і.р.) вводили одну дозу антитіла в концентрації 5 або 30 мг/кг, залежно від перехресної реактивності антитіла з мишачим рі14. У кожної тварини протягом 21 дня безперервно брали проби сироватки (5 мкл цільної крові, розведеної 1:50 в НВЗ-ЕР--буфері в певний момент часу). Концентрації в сироватці визначали із застосуванням 0 І4-специфічного методу Віасоге. Коротко, людський 0114 іммобілізували на сенсорному чипі, і зразки впорскували через проточну кювету при швидкості 5 мкл на хвилину протягом 5 хвилин, а потім вимірювали рівні зв'язування і величини порівнювали зі стандартами. Для оцінки фармакокінетичних параметрів: Стах (максимальна концентрація в сироватці), СІ (кліренс) і

Г/» (час напівжиття антитіла), використовували криву залежності концентрації в сироватці від часу, і одержані дані систематизували в таблиці 30. Що стосується антитіл Е9У і АТО РЕКОГи5іоп, то їх фармакокінетичні властивості були поліпшені завдяки конструюванню СОК в процесі дозрівання афінності.

Таблиця 30

Фармакокінетичні параметри анти-О1 І 4 антитіл у мишей

ЗСІО з природженою відсутністю природних клітин- кілерів

. ква Стах СІ. би

Антитіло сег) (метмг) о (мл/одокг) ОДН)

Бо З КлЯ зло 3

Б9З-С 3 165 0.2 5.2

Бо-1ОБ зо 263 097 МО во-1ОН 30 235 1.49 з 9-12 30 наб І.32 З. 9-19 30 179 1.05 А о-1е 30 269 0.59 42 9-28 30 І65 0.65 5

БО-5Е 30 234 0.95 30 9-66 зо па 2.90 Ба

Е9-71 30 102 110 43 9-7) за 145 0,83 4 ко-7 (МО 30 из 1.07 ск У в5О-ЛЕ 30 130 123 88 діб 5 10.5 5.80 31 дібкзо 5 15.6 0.69 Пил: ік 5 12.5 0.93 138

А10145 5 15.6 0.63 ІЗЯ

Приклад 11: Обробка анти-О1 І 4 антитілом приводила до збільшення розростання ендотеліальних клітин іп міго

Аналіз на розростання клітин, присутніх на сферах фібринового гелю, проводили для оцінки іп міго активність клітин НОМЕС (пасаж 2-3, Гоп7а) стосовно ангіогенезу, як описано в літературі (МакКаїзи еї а|., Містомазс. Нев., 66: 102-112 (2003)). Коротко, розчин фібриногену розводили апротиніном (4 од/мл) і тромбіном (50 од/мл). На З сфери з цитодексу (Атегзпат РІагтасіа Віоїесп) наносили 350-400 клітин НОМЕС на сферу і залишали на ніч. Приблизно 20 сфер, покритих НОМЕС, поміщали в фібриновий згусток на ямку в 96-ямкові планшети для культивування тканин. Поверх гелю наносили кондиціоноване середовище, що походить від нормальних людських фібробластів (МНІ Р, І опа) при конфлюентності 80 95. Після цього в ямку додавали анти-О1 | 4 антитіло і контрольне антитіло КІ Н при мкг/мл. На 10 ії 12 дні зображення спостерігали за допомогою інвертованого мікроскопа і ПЗС- камери МікКоп. Інгібування 0/4 антитілами ЕЗЯ і АТО приводило до посилення розростання ендотеліальних клітин іп міїго (дані не наводяться).

Приклад 12: Обробка анти-О1 | 4 антитілом приводила до інгібування росту пухлини іп мімо

Вплив анти-ОІ І 4 антитіл на ріст пухлини оцінювали на мишах 5СІО з природженою відсутністю природних клітин-кілерів, яким підшкірно імплантували пухлинні ксенотрансплантати СаїЇи-6. Коротко, 2х106 клітин підшкірно інокулювали в правий задній бік самиць мишей 5СІЮ з природженою відсутністю природних клітин-кілерів. Мишей залишали на 14-18 днів для росту пухлин, після чого вимірювали об'єм пухлини в даний момент часу електронним штангенциркулем. Розмір пухлини обчислювали за формулою: І хУуг/2. Мишей розподіляли по експериментальних групах (п-10 на групу) так, щоб кожна група тварин, перед початком проведення терапії, мала еквівалентний середній об'єм пухлини (звичайно в межах від 180 до 250 мм3У). Потім тваринам внутрішньоочеревинно вводили дозу анти-ОІ 4 антитіл два рази на тиждень протягом двох тижнів (всього 4 дози). Під час проведення експерименту об'єм пухлини вимірювали в середньому два рази на тиждень доти, поки середній об'єм пухлини у мишей в кожній групі не досягав 22000 мм3. Результати представлені в таблиці 31. Антитіла

РКОГизіоп серії Е9, що мають поліпшені фармакокінетичні властивості (як показано в прикладі 9), виявляли тенденцію до посилення протипухлинної активності іп мімо.

Таблиця 31

Ефективність анти-О1 І 4 антитіл у тварин з моделлю ксенотрансплантата людського не дрібноклітинного раку легень СаЇш-б а. 96Т/С - середній об'єм пухлини у експериментальної групи/об'єм пухлини у контрольної групи х 100. Величини Р (показані зірочками) були одержані при порівнянні експериментальної і контрольної груп із застосуванням І-критерію Стьюдента. Вимірювання проводили на дні 25/26/27. р. 951. 5-(Т-С3/Сх100, де Т - медіанний час до кінцевого вимірювання в експериментальній групі, а С - медіанний час до кінцевого вимірювання в контрольній групі. Величини Р (показані зірочками) були одержані при порівнянні експериментальної і контрольної груп із застосуванням Іод-рангового критерію Каплана-Мейєра. Кінцевий об'єм пухлини становив 2000 мм3. "р«0,05; ре0,01.

Зміст всіх цитованих документів (включаючи літературні джерела, патенти, патентні заявки і угер- сайти), які можуть згадуватися в цій заявці, у всій своїй повноті і у всіх цілях вводяться в даний опис за допомогою посилання.

Еквіваленти

Даний винахід може бути здійснений і в інших конкретних формах, що не виходять за рамки його суті або основних відмітних ознак. Тому всі вищезгадані варіанти у всіх своїх аспектах носять ілюстративний характер і не обмежують даний винахід. Таким чином, обсяг даного винаходу визначений в прикладеній формулі винаходу, а не у вищенаведеному описі, а тому всі внесені зміни не повинні виходити за рамки значень і серії еквівалентів, визначених в формулі винаходу.

пи тк плен щці и крїх пжЕевБнЕкК побпедовносики

Ме Ффуки і Ко год му ше КК

АБ Іо улЛ іш ауолаеи, пи. ди я ВУ У ан

МУК ятТОаММм у ЖАТЬ М

Ки пЕсУД ЛІЧИТИ ДОлУушТ СІ уТЬВМ Оп лИТ М, кішйи ТЕРАЛИВЖМЧНУ Бра З нтУВдльнХ БТНКИ

Лю З лущо сю п

АС А МКМ, МКК ве ен нн ВН «пли пошти, ке дпа есиниЗ

ЛИ опа їх

ФВЛрІх ОН нки «ІРО шоп анІ-І1е

ВН ЛЕ льш тя т Ул лю втдеїеко ви ТУ Щ вн. ТИ у МО я ллтА с,

ЧНО Н

«ті ву дО АЖ «Ля ою, шия ве МАЛА, нс мтнйлу сш кн

Ма 0 Би» жарти з втіх я ше ялини - прах й Уж тая ся ух м ик мні ми ОД тонна ум Фу піч щі пт фе злоба мало У Бус ах їду. Ух УЖ о нх хжежЖ бід 1 й їх че 4 й Мі х5 а ке Фе Татує Мер зх ЯМ ую І ак тки КУ ши лум иуюун дм им пт Мей ха бла жмпЕх тую ТЕ Чві Вех шу ошАУ опХ АЖ ХК ВАХ ОМВО Х ти ст пд

М шо Я фер Мк. ти пе Ко у пом Ффіео фри жо ті у шкі р

Дж см Же о бкросім сйет їі дух з фата им оліхо бод іх фен й оЗ-т ІМ КЕЖ о ЖКЮ бу ЩЕ АФ ва ба ОККО БИб балу Бу сум пе опа й. 35 хи тов Вр К ушач Ло ху ик Якоб рхи спкемо фе личіо віх у Ех гу Мр

КшЖЕ апа осчлу вярофішфОСБМА СКХ ХК пішж ждех То тут ут Дял Бкм ех

ВМ я ко

Тут ба Шум о кіі СИ ба бле Мах Зал де тв кодах Тов щодУє гІт МНХ і муж ЖК Кох ТУЯ МАЛЕ хУуВтТ ХА МИТ БОЖА ММ МАТ: мА ОсКла

Ку па ти ст шо Бен кл ще сту жах токди на их Шик тайує Для Мт кт Вухо щі шо тю Хр лік п и диф і Ж Ор Уа жну Аза Мік чем АЖ ЗА ОМ УМ Ху п рен ре пл Ка КВ. пад Моя ками с ут І 17 яка. ТЕ, 1 ак Аа и НН лу ма жа Хо Фея ВвшЖО У весла вхо сих ЗКУ меж лев ТтуУХ ЕЕ КУ 155 15 тій гі ту вена а на ну НН я

Ач НЕ З М В В ЗК ЗО о п ок

ЦЕНА тий

МА їй «дПЛКМО «ів щу «ЕМ ДІЛУ

МАЯ 0 ЩЗАМУ люду вим кт -

БЕН Ше ж ілу Що Св вом ім Б ди Мало би: ші) бр Трошки Само Му Ту

МА ТУ Как о сюш хну ж ск жа шо ВЄ іму мадрожтєс щцедоех пуд 1 ї її 15 шахах ТЛ дер 23 хх р Же дл Жде і сек фі Ма пи Вшуї Жіке шал пк сяк сбду лем Жлу Мосс аа ін ОА мо Суши аа ТУ Е АЕХХ Т хх

Й ях Зп дич, и і: жу ЛИ КО хр Фах бе ул у. ЯК отих рю туту ше: КЖ ша МО Ка М УЖ юка КО Авпосах шу ла осілюд ак дотуУ пт ЗК йі по уну б ни Аля та і Дим. Ж (шия и уж в ЗА нів Тих це бго дай УВаМ бе йій беж Бак опо бла тую пек ж Ух Б тою кожи ФЗ:ую ДИдОСВ Хує пня. Хр шим; рю тур дих То Ялом Ура тулсия емо жшВвх Пес Мак Уа тб а о Бжш о Шех су Зах бе Су мо САММЖО М. а Жах ас б ТУ 5

Хе Тік уз дю щи Ні їли Мт сміху Дах тик ом Мчло да їх

Кук Ті Суз дзи Уа Ал НЕ був Кк цех баб тах Муз М Двро ух пк чи ще

Тс Мі сф) бує бик пе бле Авт Мих ТКУ вав лик ром йо мет ах ку уд зам о кжОо Вуд о пБх обу Ааронж кт вла тпх о СезоБКОо жк о Сулх жна ик ще

Мо 15 що

Фінна ул оно ДУкіє та сту М ФТІ ж: пляж о лУмех тех лем ФМ ки ХК Фін, дк їйхт о Аха БЕ бі фе інн ТУ Щі Бко пет уві це Бе) оББе Екс БК ту пла Не

І; Ам жи тохищі ДВ Тобто Ммую Мері мо Фк. МЕ збо кю Мом о вух їни пр ду ім гм пу Бу о МПуд пою ЧвБлоіїлир Меї КЕ дек обла п бус шів ЗБЕ отТах Сх чи че аг 115 135 ува ях ча МАЯ Маю йо шле ЗК м и шин Ум (1 хг грим УКХ ллу Яд. дл УА УА р ЖщА ЯКУ Кіш Мі до гло о ж фу МР ОО МА

М Її 15 ТЕЗ

Чун ота ду іх Мщя блаї лм ште ше; їв сбдхв ле хе Паху дує пд

ТУЖШО УА Вер Оду хи ж А КИ ЛУ бек мух ія жа БЕЛА су ів5 то ІВ й (Ух хи ші са СИР ю Сім Дячиж МЯ пшо ХЖдоу та ЯМ ММ фік

ІМ озжМИа лом І АЛЛУ ЛОЮ СУДИ УАЖАЮ У. мя дІБКО ЖК САДМІ МИ ЖО ж М Х лих я я Дт

КЗ хо АВО під міт долу пк, їі дум (Зак тд ім іа тдукє тим о тТучи ві й дим

ПАЛ їМмемл їжу тро ах о плИй Фу мух пи щ ут шмупОоМую пмув УщА стА зиИ

Зх йо ІП хх сп смт Шах ЩІ а но кв оо нн Но НН НК На муж оса М КЕМХ вкаоя та ЗА А УМ ої Мх те Пежо Уолт Се уВ Му би сл х Клео

ХА вн ек йо енуІ их Фр Туди ДИ ги 0 СМіжає Тоючії. ази ТМ Фа дюни 0 ТИМ даль ожує ААУ МУ КА Я хало УМХ УДЕ де Кс мус ле Мих хг ск пебье туля г тю, зд ет ве хе Кан,

Мі спі Тек о Жаіє 7 блін зму ЛУ фея о їхих Мало гук щі бі су

ГО СЦж дже т їх б Є хм п Сл ем ож ШИ ау БЖ ух сих, я Ж Я

Ох що «ли фе Іру дош т ою гц 111 сруху Фу: ід фія гли я Дюту жУтТлх пд

Вже Аж пів вича біз туром песо вва пі бле БЕ ОБ АЖ «ил ер сутиг «Ми пл ОА моху стю Мо тік Лу и М Думою А кі СТ йому М жу Мр ря щі ду ваи о отухо ву так ота Бус БО таз БецоАзр шаколят шу рах Буш Боб яю я лу тил стюую бимо тіж тал АЮ ХидОКо Дод То у. дону, КТ пл м ци п щш імла бух ех о слеш дм СКК АЛ Авт Бус мат АТ Бу пАВОМІМ СКУ ЯНА ях сут сут

ЙО Пе Зх тв сддукє ЖЕ ує сли, Жан пли КО р ит А тс и, ФА стен ЗИ мак гушк о млж су лат мо солі ЯЗ пл Вій цем о Яке ли пів їм супу шт У з: За амп КЕ АЛЬ ТЗ ду іх ити мо то Шут ше их я ЗУ

Тем рум мЕу мам Ло інж АЖ бе лпАУ мух зх КСО р -

УМА 4 яті пат

ЖК чеи п.м пихи ла ЛМЛИМ

Ось тр гріх учити ут иту «ФЕМ Клуцна сллла дови «ях «Ла Шутантнмиа кл уднуна плани ЗО кАЛоМ У пра шу Сію їм 1 їй п дк ріж дп; Ти М усу си ким Ти

Аме ощаХ Жах Су ду Жто цех ві Бе тт Ба овАвВ ху сах Хехо Був х п М Мо

Фе Тежедю шию 1; ях пи р що ка Сік руках ці МАО ок. Все лу

ББФвК ТПУ Бак опіу пі ТАС вів Мій пФе ЕМ Сув Бам о Увь Муш ле бух де п "и тихі дани ЛА жит Ці Чу хі дю ту. Джури уко тм Тіюу є йду хар КИТ УА Ж. Мф: ДО СУ мжХ сишІ 2Дт левд ше мА ОЇКА ТЛІ лІХ що У пли кА щодо бреує Шо балу Кк п їхАЛО ЛНі иже шо бі т тму Тео пилу зим Мах ва Тек ОоББа: ХО Ак Уай о Пймобій жає Бас пуу за ТМ лу тд ге Б

С З Ту тм. йимо сим хі 4МУ1 се ХМ фут. домо лиш ор тав уро сю шик, Же

Мем ождопк бек УВА УА Хду да Белошдтекх сш ек сиМме су МУ ше УЗУ як ту те шо

У Зх ее ши пато та од пд дю дя М ооо іні Шут. Тем СК бує ходу хи тУуЖ хаш СВ опаи Уща шо ЗІЗ бу ЖЕО ОБЖ ви жВЕ зму Уа пр ух их зп чц по Ви о їх пу тех біди Торт бом б с лшжут Мр Спи Між ва ем Муту шву рю

Ммужшо ад пд жЕжО МмУуБО еХ буд си муш сих о пЖ гпЕ сухо кко би шу х зай тв, НИ схо, чо же Мила моли ов. ши кл ШУ: ук ся ІА ла Мах списку ЗМ: пух аз жа сш мех опа шу ФУ Бжо пло Бе інх Бра от БХЄ

ТЕ: ВЕ НЕННЯ

ТК ж З г. їх ж, Федик щух со ен и НО Ши НН НН «ил Хрл «Міхожю тук був ою Му же Тих ме о Мем о пле ячж Дт їллоКже спАШ УМАяАВ Ти пух грат ще долу

ІМ АТ АТО

ПАЛ їИ ЗйАО фу Хо пд ма що Ку од Фет ла хе в ито Ба ау бе

УФ. ХАД УщА ЛЖДНИ МАЕ ЛЄМЖ ОТ що схід АФ МЕ уза т леущ дна сющіх СКо зх яп 155 Ка аж хм мо АГ деко їн Жду сит Шщі КЗ «раї док ло А до ток ТА суха Дрю Моя т

Ма Маі дерму ві піб о ЗБі Ніз од» Аа Бе Тв щу Еко Мали їх «чи йчк

ЕК У Мох акне нен ши НН НК тех бана дю Ж ту ли Ж Хом МИ ДдКщ М ТЕ у ОН ГА Ж Б 7 я ми хх ях т а Цех Но мн ІОВ мад о щрамйоТух едоІ шшкК о Улпх ЖУК Мило Ул УВА ВК Уа зи сих Уа ОХ

Б зи ложу хйх їн шен

Фрі ЗУ фодух сруєкі оди богу блю. Тит (Ту схо «що то аж У пд дон чав м Ажи титр о Пед о дяйп шу Був о бЗіймосБул вед бух Буш УХА Мет АЖ

З ук, Зп ге, їм Вій Хама Кто Важ Мжю ол бід Буш Тйх дув цЗе МУ Ах пу Ку тій ІВ ЕЛ піт хі Мк п пічу сі ру ля Віру тими; Мет ту бо дис сіл ств пог ТЕ ЛОБ їх КЧих сі Мед м бл сля Кама ДУ МАО ЛИтЮ хз слу й Зо ду тай щи Арт ох ах й ЗЕ «фтує унк Сік бик Тит М їх иа ЛУ ую мет сп о Кув ве піп МАХ сих Бей ТД СУув пт ув. БУ жк Бра ТУ тис тус лю пз «к- ко

Ми Дюк дер ТМ о йіц Ма ри тую: й фев Бий іх «(и фу 13 Ат тт» дек АВ дл КА ОА ШУ ЖЖЮ лм век дл У ЗАЛЕЖАЛА

ЛКЕІТУ ТК, Ул ку рон ге,

Тут туя Ж тю их ую уже Ферум Де. Ша літу щих их ру

ТК М МЖХ ожоущ КІ СКОХ пл БЕЖ СЖЗоа Мем лЖрЕ мих дев ошУ пе ОБО о хле

ІТ, ти іУ є, «Ех УМ ех тні фут от бух МЕ бик о Уаі блю буш Ддеїх дір о йфко піл шій іУ Ав тА их ши МУ сЕМО МК Халл озуйх шк Ам хо зл г ау ЖК

В шчЕ ОО ші иа жа том пере Хв жд йо хі да я ол Пі що щу ЩЧідо бут Че чаї Кпе лає був лек Мах о Мес Ніш Зі АдЗво іа Мая АвпоЯлв Хе ТИХ

Ух чи пк прп

КЕ що 15 ЗиО пат лю ши їбам; Пежо бами Пеамо ому піс стих пат У НИ МІ ит М ЩО ОБЛИЛ СХ МУ мМ тт хи ших п

КИ ТУ й ша жк, пк

Жах їй

Ки пцляих

А ІАТАМЕ

ЖЖ МІ му яашІЄе

СУЯ 1 гр ж ЖІ ЩО Ах диф, сн Хю Шчи ір ДХх пу пе що. у ПИ. ж,

Ти УА Адо мал» ча шЖ о мА БІО са КТ ЖЕО жшлах шву МощЮ) м І х т ТЕ каша Пул шеЕ САУ де паз Лех Уві Ма пух мем пе жало Благо го УМХ

Ну. хи ча

Ж ХМ х

Фр жмут о Ток Ж кож их ою ік уд Кут МЛ иа уд, виб Ух ар км дя муж хо лю Вуж ж Ло Ві ом зм Спа Оснят, а БЖ хо м г. их, - й ях й туя и - ух талон - мя

ЗКУ Аз шиЖж бла «бл в Уві лтТит ЗМУ ліц Ба ах пУуй влр о пеє Тех

Бо Св І пек Фо иа НИ ня Ан нн ни З НА ОНИ ПН Локтях, ся КЛ и охота

ХУ еВ БМ сша: лев БИ ЯКИХ УМ смека вепХо зушО ід о смці БЕХ о біМм слух

БА зе 7 зх м їх Не п. шіє см Мді фбеж Від о бура ім Уа отВк піз пі пі ре лют божої ваш ому о Млоа бує Ма Са рам оба Блог омувосапйошьУ Бе оюшек саше

БЖЯ т М ях ЗИ Зх

У ТЗ Бод Зак Ей ВВ одежі см) пед ча ТВ оМуд Зак КЕР вл оОдЕе бу лю СХ й чук

МНЕ Мо «ші В я З

УСИК 12

У КК гія Ваше шврійця ей са жен піл уч бос біз длов вує Пежо ві це Хе Мещо їбкту Хі бак бе із йідб0 Его Ук Віз Ал фу ех Уві Же ем без о Бо БХО Зв обек ЗМ : сі їй т ся тома й. р тарт. що т рвеує Тих у й и Ти ТОМ Химия ПИ піца ем сб ід би сим Адя жу БшМмоМщ МОм ім. МАО ЛИХ М ли в се зп

ЯМ ве ар тт фік с Кз за жи на ША Щі снення ух В о лі ву даю фМету. МК

МЕ ЖЕКи шалу за мах твЕ Хаї дів тероМук Ахв бар дек Зає Бко щу 3 то С

Жозе Ал Мід» Ми пт те ші Фк бує іт ром ій ди й зує бле зуж о Аїа Су таї ЗБми Таб ть їв бо Зах Буз піп оЗзст Ай дЗи був ки ек пл ву зи шу я ПА РАК Тигу думак верх. ри та жи пани пр ун Ти Ми бух іа Ав шізу бат бує іш спеяжшЖ зи юлж го дум сіл штук Буд ше

З ТТ 75 на нн нн і а на нон НН ак и о онов на во А НАУ нив де жу бос шен пив бій Ужі тп нуз сам сім с дех ТВО сх

Би РЕ Зх зи ту Шшщї дів бут ть Му. був дет

Буш хпт Мал пд КЕЄО дДЖ шим СУ мит 10а то5 шлю ОТ є и А с «ЛІ За ее жу

Ми кожен их Еичная УЛЯНИ АСК ил

Тим сте ДЕмзенжеумннй попліІДдУВЖНОтТе паЖжистИ лаицюта Б УНпХ ЗИ сли В

С уи 2 ож а кн о нок но о но КН КН НН млі жах У сбяМм Ах Ма стає шу БКО баб дм Мао мух ту сви дл ї 5 1ї т.к, а у У ще

Фе би спі іазір Лиую жиє. ах КМУ о інв й Ви стамі фу 1йпК ог лж мо в БУУЖО упо гра дес шу Кгрж МІК АВМ п хі -Ух хе

М ж Ба

КСЕЛМ Що шля Я

ОМ я М ко ВІК

ОО ШННеня НОЯ мл у, Мене Ммумом хи, им с я жому Мн ТОЛК «Ей

СВ сх З тівии дзгим о лукм яння мм: му ИЙ ХЕ шли а

Еш» бкцдаптовиа послхмовнисть зазмсот) дамцюгра КИ УНК рон

Не» Е «Чем Ж их ли мо ЗА Микула АТ Та й ух бом А їх за пЕщ о міпоБжо БО ку Муз вій а ша Ох ем одух ї т ми пи И ОВ ню чл ших пий си ПІШИХ зер ІВАлІМИЮ. ее Шен ккатя, текст ху яки Си

БУСАНАЯ пЛУуММІЮ ПАЛ АМОВВ ТИМ ню ення

Ст Мем ве У таку пі тем пре стомриікіІМм й НИВА кашиМ ВкцОЗптораав смУлеоновнаість важкого манцдщез ВО НЕ ЗспИсвЕ и ц какао пе т ту. тла шу тую руку Стр схе Толуєто Дмт ІЛ й Я дуету. ви

ЄМ ВК УМ МАЮ Я У суще СХБУТ НМ ми МН ладі МАМО ЛАМУ ЗНА ОАЕ ї 5 МО 15

Де тку ост ють покла о сщбокх Чт й ру тм лу Ко М во м х

Май ЖпХ Адй Мес Впр оре Уді бар отлє Ака Тих Лух бує уз Бі Зх - зх, КУ ле й 3 «иа ока НИМ жи ие ення Вл хи УАДУ «и Уди ежичаа поп деюН ть

Нео «ШУ АК ЦиОрНа лрзсмлдум тв веж о язтюиа ж ние То «ак Я

Бен ови оч нь ож а в дн НН

ТЖЖУ ААУ алу Му СК ТУ Ху му ху дж дао я ї г

АШІТ НН хшАМИ КУ сив ВІН

ФЕМ. ру пМа тнУуДМІМЛ ВИСТУ вання туту кн ни НН НН НН ИНА чий» бунтом ців нОоВнлте важкОотТоОо ланцюгз КУ Упав пО пт д ся 15

Зла дл Ро лихі зр 33; ших сіла Юу судо темі МАХ То бут тм т мі ж М Ед МУ о схалі ди ХУ і: шо УВО Мав Ма о лм ЖЕО ВЖ ЗІ

Н т тх те : Е на КУ яви Тодда ре топ Мі жк их Ву из ДМ Сеча тах оїжн: ЖЖ ба Твко судо Чнж ях дей пу іш жо їм их й лк 3 долу 17

Ам Я тИті1 хи

КИ КУЄ

ТАМ ЖИЙ КИ

ТМ, п/з ачи плиту ит умі олег, жк и Му УМА ТИЛ УВУ ТА КУЛІ пом

ХЕ дей сю дош сит тамтикои м тихі хи и УМ шлами: кітчу ДЧХ кА Кер пиши ЖІ СЮМО. ПОМХМПЛ ДУНаЬстЬ в жЕалтг пий КО УНН ОУсНО сдстя поки тих пн ті ЗЕ Тр пишу ж суне лиж ж ум ям ЕН Мов Кок зу ММ КИМ ЖАВ ЖУК. чут оп мм Ммек сук ех сли ях УФ БИ їпХ 3 х хАх та яд ок о фур Ме й шкі МАО фукажх ДО ую итнт Мри скит В при тмекосаж лей отишк о ле КК Уа дю отит Аза Тех сут ук су Б Ак тату з БЯ

М ке БІ и тух 1

Фа 12

ХЕ ОЙ

«УЛ ТЛ

ТІ прі спеці меці

ВАЛИ мишу шип дДлю Ул ех вена

ПОС офі ем г КП ил у рух лдо ніякі ітд втім ВИЙ хи У Тр кий» бжичплеерми ЛИ кдОМНіу» жБКОеИс ЛанмЕня БЖ Мито АННЕ

ЕІ Тух 1пИ

МАМИ поз дах міт феї мя ік дер вм Зі ку тд МАО ни іс т зія маї «(шт їжи УЗ шим БЕК Ослу Му ПІ Мої Мн ОД лусю А мМосвіу ї В то 15

Яке боку дови зу А Аж Ази що у да ння. М ТУЮ був бат йо Аж ме пе Пупожал Вт йеЖж о пуу КІМ Тих Бі днях ст Зк п иа ж СештУ лют т ее ну вия З «ут же

УШОЖ ЕЗК ень люту ко нн АН м ноу СаО ЗК «є ШК

Уют, и НН зпсдити є гегтиуійуу СИЩІМО ІМС МЖК УМ кдд МРТ ЖсТяХЯ Болить дажистт пвзнцюта їх Уплесш КУ О Во дит, ше хе

УЗ у БАЖеи Док БД Ву лю рж ЛИ ФІЛ ХЕ ж яки ІТ То. т, їгсуї Коля вро жях ск ШЕ МЕ о гКО си Су шАУ Семх дам осбЕВ хаосу

І Б; т і ї о «кВ ца шення пе сій ВІДШх пл ПИЙ УТИЯТ УМОЛЕХ МАЛЖМІЛОДИХ пулу ух пах я хх ит ти при ті суми. рідне ЩИХ хи АСРрИМ ТИ ТИ

Бак ласі тснУна поса шовнасль» БЗЖЕсО пан а оУКаАЗсИИпНЕУИНо

Ки хи кн ан но і Но я яр ку ЖІ Їохї сту кую това є

МАО ЗшА а як УОлу УВК соц мех Був мат бах по Ж ЕЛЕ КІКлХ

З х 1 М пат фен, яю Тим тож риє 2 й Си п и хи Міо м АЛ ду ия су сАЖТЮ ШК ЯМА Ммупотлкх БА щоБщу Зп оБіщ «АСУ К СКУХ Ху сій УА тає тюу ЕН «п МОЙ У чик

КУМ Не що ча хе Б сія штянчи

А ема, од ші ТД ЛУМАТА ТИ сем шли ту ошугиттттим кі тя милий хірур х. сили денти ртуть тихися ТМ: ЦИ З. ля д, з Ууию БацелииоміІ СУМИ ТИ ше АКВА БФ ІАТИ ХА МІМИ СТ МИХ «ОД ТУТ хх

А Уи Ед ло о ти А рі м т; М их Теля лк ги их АЮ М п ЖК а бла УК шу йех пі шу СпіУ їжа Уду мм ЄЕОа УеУ щу

А й ги їх

Фі Жах Маєдю о Моєтух іх Моди Дуо ща ху Кі яю ЛУК ТИ КО: ник

МЖК ТУ ТЯ ар УМ Чиж Ул жі ВКМ КАМ СМТ ОФЕУТ ОЖУЦИ НИХ - ат пр ко УМ М «ій 15 ті 14 нлюхсяу шу ше шах рен штук іслам Ууюе. мШртех ке ситу Діма си екв т йти матір Б сія ти чий бМицепжорна посплдоеніїсть важкоюо плмуцюра ЕІ УНІ ЛИНЕ и тугу 1

Ех ко тет уд джу ліво дів би іх Ум і ей і сбуту Му дає їж о УахМ лЕЗ пій йіа ето слу Бу жаш і сій тТтр Ушь має : Фк НК ї У У

ТМ ту На до пух я-МУЮ іо де ее и З ше оо ними зак

ЕІ оШежаця поп улдлвнаснве плиту

ШАНИ ломи вмів МК ЕН и шт панцках ЕлЛО Ева Я Клин, я масть жоммш МУ паж пада мі жим:

Киев ШИШКУ

ІМЯ її тод Му ЛИ кю ис дж Тешуи: ит. А, тож туш жу Ти я лико Тл

З СМ Ту сКАВО МИЬ П1/ЖА О МЛМ їй ши ем Ух А УК о ел МІХ х во КЕ Й виш Фото Лот ях ЗДА І уйткх Стіни Ві Ти Пеумо жує тю; ул ол доня

ММ ЗУБАХ би М тм ФО ОФ1ЮМа ше ЗБ уд лав реа Ух ТУТ Був маш пуд хг т, 32 ке «и -

шо» пе шхами ОХ «шій БІЛОЮ

МІШОК причина лоні ух пкт «ШИ тут діру ід. среди туї кот пою пізхсітууної МУЛ зим ШИМИ еЖ М Акиепиолюна посиденьки: вумжкОоює лвшова КВ ОМ «ап 18 латки М сла Хай Ам Мед удо шар; пет сі Вуж піп Уві шуб Був Бо шаф ше

А п и А атирмо 42103 тк дю дути хз СА лм тю Зх М хо аю шах о ждА му мив шк у юУМм а пло У ІЛ ЛО СЄТКХ У.

ТО пе ча

ХІТ

ОСЬ ли ве уз. дя тч

А пух еле Тяєчотусию фтор сн, чЖО ММ шими ТЛО А КУЄ Во. илуєютх Мінугиичамилищ уче сері риси иа схемі м тоуух уп мвл.оша йти хо ТАКІБЖУМЮТІУМІВ ОБЛЮМТА УМ ОДА. ЛІМА юУй би Ох ВІЗ Оп «хай 18 дао 15 мини ЗА сти 1 ДІ Фіто тях с, Тл «ко таті 313 мину мдю З їчу їщшв о Уа вк бійоАКа Бо бл обі шкУу босі пев мес Зі»

ХМ ва Ка сх пл дам шу

СІЛЬ їх мок Ма лк шт почи ие тіж БІЛОК ну 0 Шемет пе вИСЖЧех МтТУчНІ Да Доц пиття

Я Я

«лає АшімаУмотуми ом чем тв ВИМ пику пт зе лц

ВХ вкисхуваорна поослідсвмістев важеого нпамоюта КВлОщкІ-ЕВАЧНе

Ва ШК вх с шани і НН в НН ЗЕ

Акт ма ТЕ Та Лв Аза блробую дех ХХ Бех Твя дз Тк Мат 13 ч з па КК тот пак бе би пор дю 11 бод ба до ЦЯ пу хо то й хо ді

Петй Беж пех їжа ду ех Сад Азв олвг о АУя Уві т ЩУК Шуз АТ ка дО ХЕ зо ен ка ся мух кох лю чл

КчеИ ЯН: мо етична пути жах ОБЕЛОК чт шу трат підр м чКІ1Ох ручний тРаслідово вк

Ба а Дауна порт дала морю пожнвноуттих смола но Фо М ли

Тит АкичІнтуми плиплщовищКтти М лоелиюта жткА папи МНе

ШДтуу КУ не УрЗиия ші це і типа лю Мк дл 7 у дод ЛЯ) Людов бе-о тодо усу 1 я бій Майї біз їнба У см дет сту дій ошіз чвЕ Шу пул Бже сіу Ві їх У же Кк пк що тур и дусі ну бл п фу сі ЯМ ММ ПЕ -жи ша ву мА мЕжК СУМ Зуш ой ших сіУ Ту пад оп ОУуБУ

А б Зп келй ЖЕ им «стій Зх зр ОТ. птятртя З вче о див БЕНОЖК шоАЦИ ОМП МІНІ РАМАМИ, «лі

Сам дер КиАт ут рик и юе і и ту. Фу хлазкиуи ЗМШюЧИ Хирів

КИшИВ о Бидалторма пославсвнійть зЗпжкоси лавцюга Ву УнрехвАОНЕ

АОС се Лю Спр змія Стрючю Микиті пу вра Ирую Фдий ТК мо жо пз дог. І т МЖК ОТвпк ому шмиж тМми шт жу жо срАах о шеХ Львів Кук мех Ір т в зл тк ї з Ти їЗ тар Для дих фтор Віхи Джі ему бруд піщ и ім відо ки шив ол ов ан БХб сам ва сло Бу лдозна А Мух ум овля вид - -к ах

А УП Ки «МЕ 0 ел й их я ні слсю 0 дттим тв? ТАК «ВД пок Злий позує стві и ОПУВУЄМАХЬ ЛІКАХ МОЛ ХК» псютутух чия «ТУ 00 Мета сн смУвН я еирв при ет монивин що дути

Тек сто? МЛК сСсий СЛУ УХИ их БК ЄтТ ЛІЦ Бах. еле лалюЯ слух пл «ап ла ши рух т Му мая (слу юю их шк Ше три Мі ло их Жук тили 71 х др В ж МОУ у ссовпожах ск МИМО КЛ де АХ ЖИ. МИТО ММ ОА ТУ т «к 7 акт ї с 12 15 шт ду Аза тки ті да пуд шісовка за тьх ІФ бза дув

У ех ва дах А ой дуттук

До БІЛО зх ух Зо т ну а уки ро, «т Штучма послідовних их М зерня не Но ВН НЯ дучяжюі чат іт ужчн ДЛ МИ жи «Ве дЕценптовиа послудевність лети гоО панцете КВлОБВОЗИИКЯ

Ач р «апох са танки як ПЕ ут Тохмише Же їі у йо Мету Тизшо Та там Та Спужи їхшо бук Фа ІКЕт ут биту у Ма оБтос Бус Тоде сумо Хв Біла ут т х вух ях ї я щу й ша пх Ош кла хх п ти Ох м плас маля КУА ждобух Цит УКЛ М У КУ їх «ил тях тил уроку олія флечит ти димхуі ти остудьртуц ит, лтоутггт тим. ДИМ др чої «и Там. УКВ есрий словах палю ситі УГТ Кая кот чо спе ож іх Я сіре об шму Що чу іх милою ую ух и ту ТОЖ йоду Кох чек зт сУда Ел р АХ вп ЄшЖЕопОЖ Сех сиіу Має шу Те паро т пу ї 5 ТО її тшит свв ІЛ поко сту ом йти. Мі що Ашуу ХМ рт хи бує ун пт

ПА ОЖБЛУ Тв жк ву бе ши о Міз За Атро чМаї Дів Уа СТУК ТУЮ Сук

КУ ни х, й шу СН

ВО й пюре У

ЕТ НИ

УТ мхоиия.

Соня ЕК «Я зйечецй ФА вні, я іЗЗлучЕМА МР ев КТ хх

ТУ г у. ом шк Шк фен Ки т. ох хв Н ями Об ик яю ріпу ин і шутерів ут им МОЖЯ ОЙ ТРрТу я ЕТ тННМ Тло сив его у нт п шу; лапу хе фе З те жі хи їни тоди ХМ бу ту Лот ле му су лу пх сю УЗА м хі Бут лк х ц хх х ї ще ях й ге у, пух

УЕух сх ялюрж о Баш К лу пивохеєів поті пері их

КЛЕМ Те пс Орла Сх жд

ТИЖ я Лодия Сх ж с Доки, 4 - що ще МАТ яри й

ДИМОМ сову русими часі пт мі ем смс пити і жк их окоту орМа поолідавнасть леркОУКо панцюта КЕВІ Бека «аю 27 йлаф ух й фею СК м дю ан, Влд би бима Фа ЮА бло ето ЄКїлх шви Між МА Ми ЖМх Філ обзж Кто Аа жМу об Жак Єві шах вить спху ї Е Її ї5 пла дують Мід пере Тсуй ШаАКОУТОЮ р а із т с ШК От за трах га

ОО с еп ве хх Ах п пики яшайе ОПЕЛОК яки РУЧНІ ТАЛА ДОвВИТАУМИХ»

БУК сети доігтуєчисьуюсю ужити рим ки ік ліски мА КА о їрись 0 АІМвиИТуИнИи ДИНАМО Мами БАМИ КИ МАЯ КОХ ек с лечу яки ПУТ Пи Ті. Же ик лі щу шення вчи Ти т хх Ж ро пу

ХЖТ шшж ем т Аж МЕ Бу ж дум мой што дЕш Бей й Б ух ї х їо 15

А М «дО «Ії 3

СК лю. СВОИ дя РУХ ет м тути кути ТРИ ситу ви яд МУ шИКЮ ТО КОТА ДЦП лі шоп Жуіниемицаит суті ни ну. смт тіжме іде ВООЗ УК

УЖ вну уводоне послав сИИсККМ сіжМи у Кл ух МК «Ви МВ юки ДТ ох, їх: еух ро «юю тю их ТЛ Ауи Жде и Го сАмикю СКУ уж Порки у шу АЖ БЖО ЛАД МЕФОФ Ок шк мА ХУ сіли меш ФСлУ МЕ БЦ Же у х ху ку В, тую спри Кох: Мизає бах ов ті Жоре сі: душ ЗК А ТО т и фу хх, бом Бдяк су ЗеЖ семи слаповат М Ат па о лЛІЩ УДО БУК уж кт -е їх

АЙ «2 З ями по.

ФО мої кА АТ я стул хм пуп «ап ше ВЕДОК «ЖЕ прут КОХ мае дле щурушнт пт лалевимте

ЕВ

«люту Фкліжручом по пул дееЕчУЄТ Маки ки КщІ хі дка жит яд «ОКХ. Я

Хе ті ті Мурко ти лю поз Ту ТЯ пі Там йди Мйіщ ду гу бліх дна МА ОМ МЕН Тр ско шеХ БЕ ет диму шин ЩБяХ о МБаішовел май у 1 « в як

Мт ВКЧ Ж ТтТвЕ Та ТАЄ Сех и «ЖИ ЗІ гати 15 вин Її шу ду «ий ВИНО Є кр ух - г -

Б О0ОПАЙЦИАЮ пактіуЯ НЕД, сих ММК. ІЛ ЛУХ ДЛ КИ моли ходу

У ТЕМ ли ет ІК Кі зи У, гіеа лм дл я и Не НК Я

МО Акушнітсшинй песладевнаость бетгкоса панна КвЯ ОБОРОТ КА

ЕЕ, Я

АЗОВ ОО тип вм. ру БІ, отак біжи ЕД як 1 ху тлу що ла и, жі то

Теж Сту Бій шив Буш ВКОУ із Буг дід Бр Буг Шило Цкнр ХАОС ТУЄ не г зи ут

М - КУ Ма пл чо

ЗАМ Я птухтую ті шиФдки ох аа ЕРА тилу, Мах віку куті и кт, «их омтУуХМНАй ПОСЛЕ ДОВНАа ТЕ пику жил

ФО ОКО Мфімхеомуі пре во мовці ай пед Е у пмгаітиуєу КБ тс КИ «тека лкЕнспторнай поОсшихистанІсШЕЬ литукИКОо лийнЕа вка плеса пт, пр ких и моїхк зд ау і ож ФИч шо деки Тіло Ме ут» Сни дошк; Мр Сб шою МО Ж х Ж. хр Мтж т хі люд У ШО ЯКІ У ХЛ о ФАВЕ БОЖ ОМ ї їх 16 15

Фомут бу СР хж о Шо Жора ФІ ІІ її мі ми беру бу ту цім шим ЗИ жа сш шик мем ско о кле повер о сле сла їляОКУК бшх ух п ла: хи

Бе и ях о че ето є сЕЇЛ я ОБЖИСЕ

ДОМІКИХ мч МОМ КАМІНА УЮ у ту паз ет шунт тиви. мих дам сінном КМУ том, кий хаших омМюЕдЕнІТОМйМя посла дсовВна ши пОКМоОмо памиюа Кі шию запо 34

Фовую Те й мо Мрю. сні Яр оую Фея МВ лих ЛІ бек бугцо би Зк ух

ВМО доню м УМ АЛЕ ошКтр су Кт ол єси АХ сш вав се а УА уУ ї її в в ї ш 15 щ-ае тех Доних іо пуно тох іди тов пр опа Уа ЗОБЖх АВ їй о Сид

М

АННИ ла

Оля ля и НА

Мчч Б сук. ие ках БІЛОК «ТЕ піддали й ди им ше МЕПУу ща ДІТУШАУА ДОТИК ОКУ лий шо пн вн ВН НО АНЯ «ха пюцептлопий послудовиУчть йперкОро плазинюта ЕБлОПВРИ Ки нати лю я ха мо ник ні и ни Нв нн НН в На НН НН НИ Жора тИжуу

ЕЕ о лух пат пал пуд шко «су Муї Ав ка будо їси їм МА лУє 1 є 15 т х. - м МІХ пік її «ких до мем ЧА ли ан - А шпик «Мій ВІНОК пледи щЩЕУуЧчИа ПОСЛА ДОВНОК «ЛЕМ пад

ФЛУТЄу т 0 Мер дич вага ам расу: бек ЖЕО ТУ кит мидаптораа зимова зМажкотт панда дж зла

НН ШИНУ че лк ба Ля ПО то дою дежавю пах тд Ж же личеаути Суимує ДОВ шу Узі біа їж; бпАпольа Жшеат плу бус Фу Мей о Узі СУБ Бе дм 5

А З Ам хЗ ей Тіма сих Тому бр юн Іжа Фк (ак т ху ож те Фо

Так ОоМли дет ем тТх бе Тл Усі Зех І ші бЗох 115 5-х зо 5 зо

ПАМ й тю ле цк хшВА АЖ «шій БІЛОК та 0 Музи е МИНА АХ ЛУ ТНТУ

Хлат «ШИХ

Коди ДженІНЕДЬМИМ кі мит ВИ дМТмИІ надрміциеа КІЗ упщуднв у

Мохиж МУ ТУКІЇНЛТКТИМО ТКУ ИКЕ БХМЖКІМЕМЛО НАМИ ХТИС БІ ОпмуАХОВ ВУ апп тв ба тт рити о шар ких сх тро іх спроб ж ту аа я з зано ом коре В МА о М с ПИ А КН п Я СЕ КЯ в Мк, по с Ттух ту

НЕ» й я БХМОг доме пп чаа АЦМАЛОаЖил У «ПИ еелюиИТ В. Лотчч Ікру хх гу риску сити лини «дидсдили тих мих шиті ж ту сш ГАК ЦИМИ ТЛ ЛОЦОМА КОВО МЕИЖРЧА а с НДЛВИМ до БАМИ З кру х ї7 чецИ ої їх п дІАЙ лу жк дм ТЕ оо о і ск СИ КО пня ву и ток ТоттУ

Ам Мат ХИХ Ор бМжю шт МАЮ Ол КЗВХ о шу Мущ й ща Кі су. де них х 5 1 як ти СА Тл Мало пу Мо А души вує Мт КМ ху кум лив. у ня шити? Пежо шх жх зх Бля Мп о лилте по пах мМ ОгеК лох ММ УКВ льлчй

АН ж Я чих КК сх ч1

БЕ лі тА КО ша ТОТЕ

Ки мя ФІ МЛН ВЛ сиг іх

Мини м що Дошлалрсууетехкчсім о ефезиж рт а ЗМІ УТ Сб І УУ иую, У суд и ЛХ ск Акрертовна посміибдевмастях всажерімх данлюта ЯК ТОМУ «я ЩЕ

Чек; біз рам твлоуи Мо тТихту Мед ст лин пд шу

ТжЖтТ ША МД КУ бЗІЛУ лм іч ЖК ІМК ОУНА пе пих

ХМ Що. а яти А. Зх «кіл ВИ ух ут хх БЛІН «яму штучна папа мех сля ями

Ве аску учомо ем пет іллтях моуиоитУЄ: зеаіюм ЛШ тм. ож 0 РОЦІ Мма тс діам те сажу тІ пядуююв лк ау З чн и дою, хг тіло; Ху Зихуа Т Меж пурхя мк Іде Таз щу тую и; зх про т-хлоУщА шАЇ Мем о УщУ ша лиж сапу Ку сх Ж ех мя СІЛ ТУ ЗіУу пі і 5 її НК які Том Моно ол Має й жит М я тк Факел тк у Я о ж ох сце Аелоічи Ше Сув ів МБ) дек схе ші ПпеК ліва мех щи МЕ су ш У ТО пох, їй вини км пе хх еичЯ пеннае сим МНК «ІІ Штучна псплаідузаність ою Тех, ях

УМ сокіг ту АІС ви Му поділене фрлілляліжучсю МУ МТК р, жк вда Кусунха сип лОовиася» баижкорОо паийюшги Ейх зізих ик ад я

Яви у

Чуєте дж бл пи кож пух Кома іі тк ті ху да АЖШЦЩ ЗАТ ОМ ТЕМ Оу муж сим мшМосшюя Еш ха ому. 1 З їй сш им хі ші ча люлі дя «І ВІЛОЮ міт прозової сем пре бив тую й оМЕрулямиа ДОЛЕ МІК

МНН тк БУДІНЕУ ЄЮ ЮНИХ ІБН ОЦеЛАМІ АХ ШУДІ» ЖІНОК С АНІ Боба Али ших л

НН щх

Мт Ця стру Ж гаю зу ЗАТ усу ТЕзуєс Жид ає Тем Що. Мали ШіТаєх дико щих ЛІ пу жа їпж о тля бак удо виш лм сил мл см Мет Щит мУХ Мем ої х т та 15 длут о гот сп Тох и ЩА ЕК ситі. пеня АК ЦО ІВ ік ут Мих ЩО схо же

Мат Арт має димі Ето шк морока ява ух ут зу мал оОсКОХу кт шк роє о яд ях окон ШК ее т шк А, ик потом.

ШУЙ М Прах сами мої пружина шив» шт чАО ЛО ПАНОУИЬТИ вени шт багет мий Тед В іму ха кекси учи секту мий селі. шити

ОКХ ТУКА ТГУуСрИт спос ИМОшМАеМО Спок татю ЛІД ЗО АНТ ДИ тах ТУ жару ких

Фон, ур, а пт їн тн Ма м доми кри м ек бій мм супд ої да лк Ма ба лиху 1 У НІ м и Ме

Флегу 45 «іт» 35 или у дж роди оду КК БІК хи шЕжУчна у НОВНА тх сх

УА

Бр етики кра хотів ин, се іпїшюх ЩИХ СІцтІйд

МОЯ 00 джем еміегуєизи мМ пив семи скік МД Си сш дЕВЖМІТсОпИЗа МОПлЛЕнсВнКлЛх» БлЖЕОоТО паНЦюЄВ ЕК ша сад» 8 ах ато мм темі Фр іт сини Шіх ре й тив кю мк лУжих Та М лій та сів зец ша сам оз ші КСО пі дей У Ту ВОК АМ КУ п

І д я че

ТЯ р НЕ Мт хеурю ств даю Хм па км лий дою Міна ху. Жуки Тов луг

Му МмшЖий меш лиц щуп судо тк жо демо утАСИ САМ ЯКИМ ТУ ха п г хх? ек я пли ло ях Я вве НИНІ пе З злету печія «жійМ БЛОК шкал Штучна диасдіновнмтнь ше

Юлю Млесзштмиче кот сис щу морі ие допмушттлийиих пен МОТО ПІІ шо суштиг Шрзданивомавй поптлмлатністув ВЕК Жжт пиними КАК ОЦЯ вени в зу в дю: 1 Аа шету Зх же 00 де Тир ода суху Те І ха КЕ ад д аВІЬ ТАМ Кт азМІУ УЖ бл ММ шіМ ЛІ Ат мА У ї щ п

У т, щх «ЯВИ З ше лою их

А «я, лі шІшНоХ.

УЖ АІХ МКУ ПІН ЛОД ВАК.

МоКх тож МИ

«сю Ахонемуусимав сих ііі у важеоами старим Ж га ий чо, ТУ РУЮАНІЩЦІМ Я ТЛІ НМя МОХ ВАЖКЕ панцюмЗз см ДК У то

Дати 2 сацих Я рин ІД и то м ДО С джу емо пи гам Мою 2 у Ищам бхжкує бан Ток

Би ка і.О ІМТ: Ф0БтЮ ЗиЖЕХ міри: АХІЛЛА ий Су мати су пя УД ми уз ї 5 1-7 як не аж ЗЛ руч

Еш вимо Сади. єси у ВХ дошк Чим мл скиту миуиш сб АСУ що луки и МУ ЗТ. ЩА МАТИ МА ЇхіЛЬ ЖЕО МИХ ал ММ ТП МК Хі ЗАМ МА ту и хи ої Я У

ІБ Іх й оя ил т

ТЕЙ пану

ЛУ я, Пекло ти вих т. ач. «У Цечна клопа мі се ких

Мел еннх Тисі ух и масі с пси ут из т фасумити мати сту шій сеа й А ЛККТЮ луки. вдідеунуєуміх мл уУЄХ Ех СВІД тТІ ІК КЛЮТО ка пОима полу мМ

КОАУРі ть, 5

КИ Ем

Яка. Тбрзе жу ст У МИ То АЮ ри Я ще пи

ЕК дю ХУСТ ЗІ ТК о «ших уТЬМ МА УщЩА ВИХ ИХ ї 5 и

Вежа Два

Мекка ж! кА ХУ ночі пе лу БІЛОК и и пиИМУИчче ВНД ЛОНА А ШУЙ» плюрХх, кими слуху Коні пли мох Я 5 тик. М

ОО Акисптсриз поплін ств дажист паницюпа КАБ ОТИНУВ- НІ код

Кия» х пла ин нн шк а ня НН Но о нь нн НУ нь оо ж ох МАУ А А тю ТУ ам 0 см УпА Оу мух я МАМ сх

А У КО То

Кк ї жо У ки ин З о п шт е - « пошли мм ХА ж сут мл м УК сбОЖ мкм осли АЛОЕ о 48 з і тию АВ пи У шик м, й и У лота хе кУАЯченЯ долютхх пеміцих фашисти пл, лик их ПгАМмеЩ ІЕМ ДЕ ВІДО

ЛЮД пику, ко В маже Муміт ЗЛЮ ОМ МитАтою «Ей Беца тяа попламяєніть важиоста прита БИ тич

Ку п іч Хлао Мантіо сут ж. маше сяє тіла Му УЛ юю Жду ким роду хх,

І Аж мс АТ МН. БТ ОДУ мух с У ЕМ ем КТ АЖ ОВУ зу к я «й1іх З

МЛ ШУ. му ФАієтлужеєтщ сетіхеей пуд рих як и аа тят ИНА КОТ

Сен ви

«ТЕЛЕ 0 Діртедлхимімийх сет нев гм, подкеиіа прадтзматів ІМ СеетЦ и чиї евнитусрнаА лані ловма сть важкого даниюма Ка НУ єн

ТЕМ ЦІХх ля пе Мак те То Деми що душа Си Ж ве м стих іх три бизує 225 в хат мекг ХУ 2 ФУ. Ж СИМВАМ ШЕ ПАЛ жЧлЄ БМ сумо отума тис нам їх ті х х її 15

Чек Шу Діє жо ло ші ес має Арою и тріхе сблаяю фам МІ ж

Тут Щшед о їМЖт Хм Му Лі стюех дам обме АТа За ТУЮ бух був Дів бей т я пох йи І БУ еліт у ціх

УКЛ пе шт о хі «шо БЕН лах ШУМАНА и ТМАТА ТИ ЛИХ дк, ет ю 0 фрегат стих мі прруєт і ох гутіжувниутиї етан МИ ТМ ед. ще ЙТИ оди ЖКП ЛТЕТуУМТАА ХМ МЛИМАНАХіх БИК Та УМ МЖБІДЖЕУТА ЖЕК дик АК

Ех пи

АТМ Тих ум, Уран й и ж м Ми хто нумо ИН бує бум шу Му са зму СКЛ ФУ. ЗА СМ МІ, АХ ЛЕ - ІЗ їй ! Ку 1

Кене п «МІ ХУ ст му п лік ОО шу шви сжЖин ШЕЛОК ла Зидеуєтттт ту тати пику і тт, «14 Штучна поплцевня сив поки п г Маша енугкис сих пемацві тис Ул сухих С тич м ЛИКУ МУ СТАНИ КОСІ ДОМА Кі МООАКИЗАЧ ТД НІМОКа Би А Ж М калу пе тари Бу «Кая кв пою жи Мито лі шиє ЩИХ из Ж фо З Ти СТ Свою пли тах уп Бей АК пл спимо уж БКОо вій мам ува п кКХхо ТЕ сад я «. У ВЕ ї я Ге КН зе ли ЛО жим ух мм рю кл па аю Фе Три ку гвжї їм ТБу ей ТЕК ОСоз Жах Уві шШевЕ о блу СЛУ Жероїжи ех ян пиц Б р ше М меня шт щи ще

НН й

АйТІіЗ Та шт Ку ЕК Унех я хі ше мех

Кт, Ібячхеєртиту пит слушне вони ПУЧКИ ЛУНА КУЛАК ще

МАМАЙ ту Мвт см ми пресі джере ваних щи рирУте я

ЛЕШЛИХ феном мли мопи колах БдЖжктИи панцюУА МАХ БИЙ сит пуИТЕ ха зЖ

ХК ЕЕ МІЛЬ шля МАЛІ ївуу УЖЕ ЛУ У МЕМ ІЛЛІ Б км У,

Н п КО лют пс мо дииит п еВ Не ле ЖІ У дя их БІЛІ шести прут пи пет ую пек

НЕ ех

І

: х ч ско шоосюомфо Мир еліт джижнувссума попи цивнии» паж плити ЗК І ин

ОКА ІМКЦЕИУВОКМЯЕ ОУЕН БК ео ДЕ ОБ ХМ 5 ве нвя Я

ШКТ ра чек очало йди сви ак офодойли ст шімУ бої Жди ТЕ лецомаї ТРЖ фіш дело ба оди пс бек ії вай бій ЕйЕ ба би тах

З В хо М 5, т ТЕ ди Ди жи МА дм візи. й Лу У пеки йти Щур вен. Тв ОоВип Мої Аз бут Ті базротах Аза Теж Жух Ту Шев Ба бу п Кк З ви ве тв ечаНКя КНУ яти при махи кат «КУ» о штучне РІДНІМ «их

Т.З ї доти хздхшмучь пами пи зими «Ей бжислозриа слеслодовнисте зако дандари св ТИШУ ТИН пли х т хр уча пох ук пз дл кі и 42. спеку хи дуж шию. пошу бів пу щує їй Уа їн УЗ щах сег ї т за «Ми ОВ «ТМ де ши 0 МНК

Щи ЯМ вро ун вена ДОБ МТУ ю ре а» я : аск пд мапи А МУ томи «Еш Ажіниткотмма пол АДОСВНІстЕ важЕзиЗ дани. КАТ ТОНУ

ЗОН их мех баз шт їйкз вим За о цек о йісз ік лю ремі МІ бив де Зі ЩіУ

Зам уах шАВ їн) МемоБіа мех о сбоу бу см ее УйІ Був ек Оу Ух к зх НИЗ ї х МО Не 5 е ді Тло драм 1 че в Не пек оф Акт їі ет Му ЯЗ Бім дет БУ Спо ТВ Бра лтт т й й ху Б о ш М

КУ КА

ФЕВ 35 пли Мих мМ шу люжучна силова т пд. : г с. . як шо тити ВАТ люде ТУФЕЛЬ ТУ ТЕ сищдафс ви дещинєй свинеєщо ЖИ ДМ, «лат вкцпалсторищ послійликстк век єевУІЮЮЩ х

ФАТУ сяк ра о х ду пу чи п тд т тай Втр лій віщо о бко пі Бех біз іа Плюс тТіьх УНІ Уд стЮвоущА ВЕЧ садово КК шУЮ Бу му мимо ст є із й І: ши

ЕМ 5 «1 ОЗ

ЕХО БІЛОК ла Петлі під На хх «ПК пишу стяЯВх ПМ МАМ ЕН Ота

Ул «ШО

СК Туш кіш сли тузі ит. пами сама ух ПАС СТІК З. й МКФ тООНня послешпаЄНна сить пил пава! КМ Дима у сих с дуг бвщ лиху Ті даху жим о Ахуу дат Си зда й пн Вам ба Жим й, поле ах лад ех медом АТ шиком мило сМЄ КОЖ Б ет і З НЯ 15

Жутх А КЕ ВІ Довж т тн жи В, 1-1 трек тех йти ЩО ож, мзи ол шид они Ж Алл пл й жк о Ака ск Лук тут сОуп о б Ух

Ай зу сУуг

З мо ау ск лк жк хдійВ пу шок ох хх пут дфеонимоя «шій ВО х нти До, Чіа шм ие і мо єшУВУ ОжжУНнНИ ПОРАД

ЛДУ сеї Трави мо сиг стУвеу йно пси их пляж МА ТОНИ. пили хм ДКДаТИтОВЯа ПОСЛІД ттт сек плещюиво ККУ Бен лелАТЕ лай» Я билин лою тлу Ера пк Мох де гля кб хх їжкІт мду цій ша БУ Меб Уа УпХ УВІ пає має

Х У ги) ше пох

ТЕЖ пр

Со не

ХЕ ААУ

МІУ побтнУх жк о Я пеня сани мех УМих жтУичуя хх ми Філ

Ха ВУ цМа ТШХ ДЕ КУТЕ

Ашан коза жойсютях 0 Міеінеатитоміли рих пихи т тедовмтУ діт, МУ) тіше

ОшШЛХ ЛЕМЛЕМІТОКа Оу Ви а щтх ЕОМ ЗИМИ. КМ Ам тала х ха пла Мі 0ллї тез еї йіч Єщеж АК піч піз Мі чді ій бух па м ще зи оУщі і бей Чаї пі Жею ШЕ су піу ма А я бек у щу У 1 п І 15 «Яооу тег км тах ту бою для Мк о прує МІ Тина Біжи: Чо ЛІ

СИ мі пек пов Аха під Пе пі Бит ста попі

Веж сем бра без Сехд Су Ака Азл о беш ЛІіу Би обтде ЕБе піу пе ти. КН а КУ зу пли ж

МУК си ж ч:

ПКД М лук, вух «МУК. МШтуєзмла гослицоюї гу ер тюлі Мілкуа тати жи му м щодччититиу Указ моми НИЖ ти. чих ЩИТ УРтІюИКЯ ПЛИТИ БАЖАЄ ТЬ МаБлахА МІЙ сСІсмТУ ЦК Х шаг А таці о о

Черуф ХЕ слюею ТУ СМС ду Тккчх М стрий ІЛ ще ПЛ МХУ Ме. хг Оу

ТКроУужо кт І хво пе сум АХ Бош пїмМА Зам гтр УМА мАж х Кя НН шт туя щ уд МОХ «пл ХХ я мим КІМ лож ПРЕ УСАБНЕ Кос ОТО ТАшУК Е

ПЕД

ФЛ ТІ М Хек тет іо Бик тт ни гіпо ніитй ьслутютіив ТУ ТИМ вання ТАЖ УВОШМВА ДОЛ ЦСМНлЛАТІ ЗТ ЛЮ М да ІК чо 1 ду Ме сво ти ий фот: ер щодуу км Томи Щщдую ЗИ жі кум тоді ик

ЇЖЩщ ОЄтТух ХХ да й милу мер фам ах ух мим ІМК лам ут мам шАТУ ї Ах пл зх х й не їх

Збори доші Пижмо бю Може До Ж Щмаж Мф ст 13501 зу пд тла Ти форт. зам ЖИ хиИЗЖ сиМАа пжер УА ілі Блю тиж А м рух ср Му ТБ ния

Вч т, хи

Ох дО,

ЗОшОюти я чіж ре ця шо ха планом ший

УК Кан

ЕП Шиян талів Мат

Ук ме пд Сент сзиУрі панк им сіверян лави ДЕ УВА ВИХ хохОлаля змити Олесі БЖ лІКМДЮЕИХ УК сліди М ет шл вра ен куже чут (и и пли КІР тя МУК Деу рр й шик ху бхжЖ пом сюу ХБи Мет ува Бу жа Мехо ках

У с КН ги й А шлю шт ши Оу ог НИ.

Ве пу «ій» ІЛ «їм о шщтуана уми Внісх в ол Тх політ дамами суч ссУмуці меми (межує ума зімсми КАС Й чити УКВ ІК Ба жим КХ БИЛИ К Нема МУ Ва ШУ МТ

Сена я

ЖК ред

Пігжмю Зрхаи і Томцре ймномо 2 купує Штрихи хе Шюмо ТЛ Пди спеиу ях ТЕ у сло ух зла їм КТК сад шо КК ІМТ ща Ще п: дм гл хх Моз МО . ся х 15 1 Е М 1 сур до шує ло жи ско

УЖ ОТАКЯ МК ФМ Спо МУ т по «КИ оов5а «літа 1А пит Вени «Ешри БІЛИМ кл печах перев т гра «КА. штухінх поОослІДОВНМИТЬ «Во х пк потіти учитух Ен рн СЕУ фУєи: сохрани у зим. ОМЖИКІНАТИтТАМЬчи ТАМИ НИХ ЯМИ УКУС ЛФИЛІМИ в ММ М ю ша пе шал. В сиріт я ЕХ у охо с ах жи шко пл я тону АЛ Лю хх

ЖЕО АТ СБК ХЛуМ СГ УА У ЯХТ ЖеК Ом Коша мМаф лав ТУЮ : х и ях : т НЕ ке клі 0 Ах,

ХМ я хх ша БАК

ЖОВ Мун САВА али ки туту чиййМ о Дюпштвеомвах БІ НноВність поскоеО ланцюєи Кл ТВЕН дію шц

КА шо паз рт пе фу 1 мк рн дек іє зак одеє пек піз лю тва зідо оте мау Ді шт сх АМОМИД же дБ у балу спек одЕВ ШЕУ плу ЗМ ОМ по КМ 1 х їе Ки тала самоти пи у ях ахя ху ДУ Мо сйіхн, ли: кгд МУ зх рія я пт окт хів шах сСау ХМК сілоКЕс Мет МлхрошаЗМ Аа в оКУух лм ОшУш щи -ч 4; й ші т

СІ У п «Іс 5

МАЮ У

НО Ір де. жа РУС

ФА пре прі Делі: фе, лій Штучна поелОлавВнісюь сита ву, чи

СЕТ ж Васі игп мчати а іа ек шен. тал ттмУт МІК те КА ВЕ нене килитовмца попі дсовність пюесбкого ланнюта Ба ТКУ АТМ кв п теуу шо си - зе мир ту т уче хх схо

НЕ І М. ТМ от Тег осі І ЧВни д К

ЖЖ шу ХУЮК сб ТлаКовуУул о УшА ЛК Ул мех ї З б хахах в ху де шок тя уж ря лдаххл АН у. пижйяіХ МгУтп ек т мн шжУчНя ПОП ОМашЕЬшхь пу хм яю джчуєвотмій монумент яеУкорОо міищиюма ШІ три

Чиж Е Й жЗкиститсовна поспльнсшнАсВ леЕЖжКОКО оз Та жа мм зх рин І -ТЮХ ге та лк сі базу Тр ім Ше Шк Пер о Ойпі дит сушу шах о би Те та шщед жк са ем о їпкх само Жто жЖКО мех на сет УДО еко Кит са ше т 5 тд 55 х У ЩО хЗ бір А, т СЮ ни г би Ав о шВаБро ба дик Сх й ве Нне ШИШКИ «ли ЖЕ -ил ух,

ТАКО У дя БІЛОК

НОТ, Трреєку і, фс току в. яю цеБучуюо БЛІДА ВА КИМ

КЕ

Ка

УИлах йкцептОяа попамцпеоевніс нетхомо ланмшжюез БЕЖ Хо ИнНі

Слон ще ве ея ТК лох «Мих ТД ЖІ У Жах Діти Сх о ух льш ти у ЛЮ. умі Хр шо ту

ТжвОлук Са ІМ мує УК ш (іУу лій дело Бко хв ем ще БУ о тух. 3 ц й 5 х й Ам Пп яп ух шля

ХЕ о Ух «ФІМОЗ

ЖАН ДОМ

Свв сш утума сити ИНА Али

ЕЙ шлл Точне МАЕ тем урі ет стек, потуж ЕС ТЗ

ЗИ ЛУКОМ На Полярна екв о лані Ма їв соурьх са

АДМ пи бе лів бе ії ким фу фуд іх де В: би А Моз Лу ДА я

Шу от шЖЮ МАХ ЛУКОМ чо скру ЖИ Аних хм бе ЕрОТВУ МК вл і 5 хо 15 тони: сту; тла тю тк тв І уж Мо йду Ті:Ю М хо дещо ичи Свою (ту іт ж фіж шШеу слу ХрЖ МУ Бка о Меї Аше піп Аеробтжу бує пми по п Зо с ТЮх 7 ую є дю. їй

ЖЖ ЛюІВ ня «стад БІ жі ПфрнхмІВя палити стр ри хе Мт Ле уУшМИ СЛУХУ о у

СИХ дешева песязноама сть зБігкиаУо ледиюка КА ОА МАТИ рН ту

Ятрію тю МОХ ан ша ни нн а Шк НН НН ма МАУ су ЛВ пух їма Ам Май ме ому 4 ГУ тк гру а «Ех вч шли пої ях ОО ши Ген яр ли, я - т. тре. с ще «Ж ММ шОвУчняа пептділввністть пкт хшех

Вл 0 дшчісвуфтомнит тзгері пи мит ех. сві дім ЖІ затії

ОТ ЕВ ЕБТ СНИ ЗИЗсрЛ ОДА УутЕ. ПпеЕиКОГО Дамо КМ Алік і

Аль т лих КМ фІ: божуюю Су Кюо двечиу УВУ Ми ЩО. руде тА тю Шин п хи Тр тру

Гуля іа Жмпоший ККб гло село Уа УТ С УЩА ШО ГА ОМ ЛАЯХ УКВ - ш -к ак ї ТЕ г аг

Алла йдююо Ж ру ток (хх їла деко хавопм СУК

ВН че

Лю Ух сл ло шт ге пжемия МО ти шум ПДМ ОХ КК мяких пил ее и ИН додзінн ДУ ЖІ МЖА кусисеви Зищценторис пись оннастик пегклуєз панцюга КИ ТОУХУ

Вени я

Чеануу хм км тую жор м лк тм жі фірею Ха т шк А Хе че гтроїУю Біл пів був Фест паж Сіл да Био о Уже Сем омад Ка тує т. з тре ох, х КУ ж Мо их 3 шли ТЕ. я хтущіи, жи ОКА

Кен МИХ УМ ПИЛИ ТЛА «ШО

Плюти одлфещтІуштіюиЯ ту уфиішеї риску і их пут твіти МК СГ и

Ед ІУх вки таюни ММА тлю закис левцюКа пли ат штатну СКЗ ха Не гук т рою їхніх її Вон ММ Шамо їЗісу хом йду КМ хи Доу ЛУ Мото у п ЗА МЕ см ла Кс олЕах вБаАУу ших ваВи ж сУусУу йшЖвф жаКОбБАщ ул : х їн їй

У ня ке Я. те пк жо и Фо іо дек; яко плюс Дод ув вх оо тв тів пек жку тик обі Буз мак о Алробій діа ЗЕ ТУЮ Те СУБ щО м ЗО лен ния ші ОМ си ОБХЛОК по е и ня стук шен ТА Др БЕ ЕТУ япгйх «дотутуя для я чи долі . їй дужі де птиці тони селі стем єм: спедтеактутн; Злив ПИ тили й ху суки лилишна розши пев уєу ДезЦюютв ОЛАХ кох й кт чи шах їй бу фік пью ко У ху тот учи Ж сі пи піу піш ши То Ууй ся у Мах о лец жх «ій 5 сх уж У пу їх «Ех ОБІДОК пд хррулною пен доза

КОКОки

ЗІ» 0 будо елраиийй поомідовМи ся петлею кацихе ЩО тили я сдкицженжшмна мМодладомх ж пеки сто паццеша КМ ОдХ тА

УА хау їз

У скии т ТАЖ, ж (ну Ми Ужиу Хиу ТЕ ах ДА 1 пом. Ху Фо як пита о хуЖх ж Аи) УЖ бл БО БЕО бек де ве УВА ших БЕФОсЬуУ АЙ

А й за Щх те щтц ад тм ки б

ТвжоВлв бах 1-5 ТЕ ОС Ух студ іт ІК я: Ех сут В вач Б «Ей БІЛИК

ДАХ Пишу УА мет ти «ших м ми стурутюунц тросі мктиміме погюсти пах ДУ Орли лю МУ ТЕМИ ЛЮНХ ТРОСА ДДТУ АУВЬ ЛИКУ ПІЦУ хе дум калом ота тя св ст лов Ми ВХ ІЛ ІМ Дятел тим бі ті тю

ТЕО бек лай ле Му ЖЖ паб Бій оЗех Бро ува їм Уші лів Тук

Й г та 15 ше --

ТИВ Ії ех потече ле дожХ КУ яхту пемзи муж ех хх У преет лм рима стики, «ЛИКУ

ТЕС дош ефе етери рі ад ит прути вих. Моз. ДВО СИЛ «МУ мкилиторна ссжлудевиМстев дабкоОго пз жо зи Іту ся т

КА і шсраю хр кі сті кс ВКА божа (Зі от сло тю і ло хи ім пи шу ВА КО б Ель тТле СБК Малу сс о сдУуйй зшХ о осиу ЩІ Кл ВІВ ОК : к а Зк х па и чия тм; М ую Стовпи Й зу ую м ух б Жоую Ар о ух ею ам б нх, шви ВК ха пек шу хих шт ОК ес зай оз пан Же МЕ ХА сум а тут З трійка -А

АЙ НЯ ххх кА

КОД їх бТух шия их пу ни нн КН ха ило шУКИчНІИ ПОЛУ ЛеВЕКМУ

Ул хи

ТИ джшсімтентуюнід сп па ек г Ум. мули порт КА тіні ше ОАВЕНИТИСЮИВ МмОпНУДОоВщАСтЕ лЕрмОКОо пани Я дет АУ ОК ау ТЯ «ау т о они на кн в НН НИ пух тя паску лу ім тах Муз УВУ Тахо Уа ри обу 1 їх що «ПЕ ке шк х «КІ кош кон нен зажди МеВ ихю я Печені темі мері гемі сх шЖучна понос чим пледи домірромсуур спі ям Тит осами смузі МЩО ОРОС хе пиилипхоонЗ поснпідевмаже пшерисоюс паннютЕ БА ДЖ А дани СТИ «а 1 пз ижее да Ух При ур см ну Деу Ех ст» Фолиюо ЯК Ж о пк діячу Тих

За тУЄ Заїі бу ТБ оплпоЗаи го Ав ОББО бій Жех Уда тмж о Єхо Без 1 їх 1й їк 3 ї. с Н гель т те й діє тем ді шен гл ку йо

Зам жа Ж дОМЕК ЗК ОСУШ ща

ЗІ хм пай ви чими ЗМ ке чННеКХ хЕМ А клея «ій ОВЖХЛОК ит сїх, Флеш лін тиха тЯ ит, ї ень укттуміми мими УА ТА Кл

УЕЖАМХ

«вжив вкцемтсмова поллановнаахев пЕекОом панцююмв Мщи ГЕ УйЙМИтИХ «екю йо

Учех Сх МИТ ЕЕ Ж Діян вух й йду у За дих поїв ем

ШИЕОХУЮ сам КАМ ОЇТХуО КИТ ВЕшОсХЬЙ шк КТ Меш хшИ СУА кА УЮ

Н У Кк Ма хи їх хаїішж БІВ. дм. МУ ВИ ОВ ЛІТ, ей ех луту» оду ешитьмі дит житі режимам ІМ Мімеячи. См ВІЙСВУМО МОЯ гелуМИ ри

БУК ІКЦ: МмМма уп МІ шк жд Нуюшио КиУ СИМ Ах ши я «я Ов пи два Вир осподе дет їмо іме слі ше мив лих су й ще пове Жов чо і Ма БхшосевУ Аж ИТНа пвх ку ет Вот одЗет ЗіУу уже дя Ві ОТИХ

З т ока З ц 1 км КЕ Км нин на нн У НО Не Кон У ОДН ШОК не ми нн но НН о о НЯ мс ТБ ХІз АдлоЗФж ім о щІМй бука м Аве Аз обі вх тує Жук пує -щ ах ще

З Хо но «дл СВ

АНЯ л

ТАКЕ МА пух оте и чим БК шо Фабіан зе сМшУучил поолідсовицУєте ее шли доші свр унів мекв кі М, кіпстиртия я гуни РОТОМ Вишка «ТЕ Акисплоюна послідовно те вптесте данцевав ища ФММ АЙ штучну У дари БЕ пе б у Бу, р па пад ому М. 3 ю ст и кме обі ШІ Сзіу Так бує Уві 12 118 пуп ту т ж ІН лк хх, до тпм п сії иЗ яю УХ, птрие «ших БІЛЕ ит тя пфрегта иа иа оо пеки Шкуана послідовною сли ау поле тин вві пестити нову нив МЖК ступи Я В тиж ОкцелтоюМма лплсліумдовність пебксто ванцитеа ЕБІ ЩОКУ» ІО пи чхт; чав 5 иМі я сук Кох Мем мо их ужити. стиму лу 4 дя бити СА сАбожух Уа деє умзх біпожак Кро дід бл бер Шеак Мей пах Ж Ду з г ях дк

Н У М УЗ ше пра Алею жна їі лу Жук шоаМ МИЧа су БП БеМмолВу КЕ й ям гір п

ТЕЖ АЛКК м чув 15 ше лопии плдшЗ БІЛО жа я шу циой пллАдДеВнІп сітуту, вели ст ші и тва я помити мж у ую М тет «ие Акрсруворня посльдовнистть пдетийттУ дане ЕЕ ФФКУ ШТ ЮХ «АЛ Б «ризи тин ню ЛИ Тхмо дХумих «ел ву ую М Ту бо Ж ув як жо куд ап ше Уж Кшсл ЗУ сибопщУ КБКсОоІмч зм тп АЖ УХ 1 ї зу ах 1 т 15 МІ яд ОКУ

Са Влі

Хот йт хуя ля САМОК, ни ум тех Р рим піку ще «кій С Утучна пелена ке

МІУ тт, дози вивих ІІ о и ТК мяких. ж ттчтейкг У тури ве тий брцнипукоюеЗ посадовими ть лисжоКо зазидека КВ ТИМ М

Сина У шал Ох

Хе Ті бус ду Ваше Зв бю ті ит йує Буг бі дам Шк дія плиюк

ЕЕ Аж ЕХО са ДЕ Клш шах му ат ду: ших ЗА пвдум сер а Ех ї т хи Не

Хооже ММ ух рух Ху т ги МИ Я шу 3 ок прут Ку при ку

Мем бл КАХ ума ЖЕ Мтадобхат ж сад взролив вав Ул гук о КуУю лух з ї В. З - п жа КІ ся на ран су еліти МУЗ шххи БЕК сту пітомуєрм о тили педа сни

ЩІ мот утвя Ед У лу

М сл Жмчсттічтєтйнмо спе неті ше сег їі підріттіття МЙЙО ри готи ви ЛАМПОЮ МЛК ут тку єЄ пМмівВ БІ дулю «ам ХВ аку пи лих Чую тут то хх ог тоже йорж. мм ше хАтЬ хМі М ук елЮроеца полу Має мух зх ї ї о тиха щу шлю з

Я юх ок

В а ки,

Коен и НН КМ «КІМ. Ж Ум пом м плиту дих

У ТИМИ ТОСОЛ ДНК км. ММА ПІБ ЖАТЬ ІД ВІТ М ттх полу їх и ОВ щі Су УР ржету СпТїя: бІ7 є дж Юре довж яп ія СД стало є стад: сх али Бут УА ІМЦ АК ся ХЕ Кк АЖІЮ МЯА ОзЗем Аа Уям мет АЙ лю 1 5 зл т,

Н м А мера

Фунт ря им му йти им піц в Аїа Тих лій Ашоа бух хи скл Аа «иїше кВ склу ЕК МУМ

МУ ІА

КОМА Чіпедмим спла п в ен ж мА уІнА ТРОС ККДССВК СМ е плют шжшЕКИХ ян 0 Ді тиюм о Ук ва пити. пт еу мітукути ЗЩМИ СТЕ

Мина дкмсепфсви вила сяВ лего лики БЖ ДК єю саецих Кх оію хи Ж ек нн нн о во ни МИ а о ІІ

КОЖУХ сзадьЕроммт мушо жЖтх МКУ лАТ Ж ЖжЕсУ ДУХ сем ХМ Ач Ух

У г 2 БУН п х МУ 12 стю пу сф жа АМ п пт шт ма 0ОшпАНИЕ сил ПШВУЧНА ПОСЛАВ ТУ -ййпи люті Хол укі лений т учи, ж едджекюєтяних рум хуос мч ІД Стихи д її

Чит Лук томи додану о ско пани БАЛОК УнЯ хо пу шо шо ст Ж уки дохти Матея Кит Вик ОХ че душив сш ПЗ пошани сти и око

ЛИ Б Ко МІ МЛ ЗК Кит лвжК хі лав АВ сУшХУ БУ АшУ бій Бі ТИХ і В 15 МУ тдші СВфоре М семи Між том Уют Мо 35 у І до жд и свт п ін ТИЖ Ж тет ето са сш Вів пі о АОо Уаі Вів Уві У мш МЕ

За 5 ЗЕ яекуйни пух

ХЛ аа пі ож М ех тух УутУє

ТМ ОККО шо овех спфдематм. еп іні я сах преумелю порлідавн ть «тро» пеклюх туп іметиняося іти стукіт спеу руку ій вимо ЗО ТУ и

Ме ІМЕНАМИ ММ ДИЛИ КЛ Кит ЗЕ ОО Лана сЄБА дети яхалицюх зп

ОЧІ М шию тт Лек прі МБ сту ЖоЖ СТУ Ж яю то ско шТнЕ ду Бу мау ж Буш УА спа за Буд ТУ : г зх им її хі ж хх ве А м АЦИ хе«ї вед уєилууи «шій МОХ ож 0 УЩЕНК ТРОЛЛУ МДЗ ЕН БАУт пт «шо р тя бумпоктувивиохМ склу повісив песиеОо нашим КІ ореол дал ДКидН вон я улов ь» деки КО мана КА Кс тА гум З «оп ові іл ит Ма іде отв ОЛІЮ УТ еко пшу Мало лем ма ке фрі и Ів іш. М УМА МА ОСАптТ сало тт СКЛО шЕЖ Ух шк оУшА БЕК КК НАМ МЛ ій Е а ня х ї 19 їх таж ові бек Тая ТВ ОСуВ бук: й кт по

БИ еи чи су ри

УК Ес еВ маки слони плит х тити і тини ми. ши Кл ШСБУСККТЮ ДТУКОСЛ МДЕ ТТ А ШТ вЕСІНИвУ

Коней Ікона сеанс ухке о уки інд ен пууєфтуєстя кає ДЕД Ст х г. их ІРЖІ еМУЮ ДОЛАЛИ НКУ ХІВ ЗБ ТК ТІ ЛЮДНІМЮХТ Бош Бе Ж Уют,

ОДУ 27. пух Ме: кт. тег. Гол де т и са ех ми, ФУ т як т. ад ті р. з те 7 ТІ МК тт Шу. ха и ж щем мс Ха бе ша Ту лих;

Ктж ТЕЖ ОЇ я Божу у сф о жЖед о Бхо Хві сей Ма ха осбух - КУ їй о,

Х СУ НК ХтІ

Чі ВЗ

Тулі м, ле ше ко ях

ФШІУХ литий пл ІАЕ ЖИМ едикт, пихи

Салькя Метр уєаивкі кв ВУ МЕ вовчі хечжтист у мтвитіДУУСА ОД СР ТІ у» лекси оріЗ ТММ овна сь пиужслмо плянюта КА Мом ших ВХ стаю тих беж Урі до хну бу. пін дра До. Мт ія йо їди Мф о пу ем МАО КХТ НМ Ко тий мах о смру сшЕ сАЩЕ О ШК пу сх є Ах ОСКТІХ 4 г У г х КУ Не М тод МВ, т З зо сти КЛ тк тлу ж ух дж пок лов Мих ху Кік

ЛА УуЮ СКпд Аля УЖЕ Зно СКЛУ шБТ Ж ЖЕ ФМ Ю бюд: Уха ЦИ ХО АВ КУУУК г зу, р силі А стул ях

РКО

ЕК БІДОК ших вит уч зум в Ул су їх сут ких жим Ів АВ ИЛЛИЛЮНЯЯ ПОД ми. лем ЖК фр сивим сад ЗА пет дише Ах її о тадра Хйа же р. сіли п Сну мМ МІХ ІЛК му ща Оплот ІТК 1 З 18 слі 055 «туї Бе «РКО ей ОЖЕЛОК

ПЛ тра ТММ т Ім шило яса тилон акісиь «ФИШИх сл доречний ее им тик фот дм моткм туї дети 0ОЖАКЛІНЛІ ІДИ ТЕН ЛОДІЄКЮМа ля МФ пою УВ ВмА БОЛЮ сах Бе «емо Тих сушу Спхуше ЛИ р ті у Спати: Те Уа. Же в ла пд лою пи дієт ту ою, йпело бук ща і1МзНМАа ЯМ АТ МЖЄ тжІю телоуУший. ОБЖ МЖК леви Кт ку скат» і у їв 15 тк ді жало гл ка су

ЯМ

КТ ЗЕ

«ЕІ 15 «йо БЕНОК я я сх трек мим Кт туш Врожх Змі ДЕ МІ «ЖИ х лот 0 йжисвуорих спині яовнацшжше пегжиує павннямч: тя см у а АТУх се ас Ом те, пси ПИ у иа опа лек Ла ВУ Хати тери Оті дк ву ух тЕВФ ХЖУуТ ЗМУ МИ МЕЖ жу ФАШОЛАМОЕтТ жк ЖАХ оїинА ви дж Ух ї ГЯ й зп «Кіш СМ

ЄЕК ЖЕ

ДЕ О БИЩИК. вк Піннюгф мм опо Ак пси, КЕ Имя

НИКИ 00 цу МЧНй ДЛ ДАКЛ ТМ ТТЛЛЕ: пс сут й ніх се мі мех, Мф: мамо МІ жи

ИЙ ЕМО ТОсТтНА ІММІЮДІИнНЯАгУЮМ дуБИКОЮО сіаМюЮва ей ших аа яса Щи: пл тт те: ПЛ: Ще ше о пюи 31 шу Де шу із хи юю МХтаю лю домо дом ЛЬ УА МО ВХ СТЕК шАУ пило ШІ ЗІ рСаУу жи пи Бі их ї «к и Уц і х я аю

Кн нан тсекойім ТЕ цій тТвж Мих Дзо ші Кіл о бзвосней бух ув

Ме жи їі ЖК ХУ ЖК оз ОоТпх Ме бро дж Бр Оу АХ у ря р Іа ех Пе «дам КУ «й ВІН

ІТ тюя Месії Мп июк

ВИК ЛІЯ Мт Сум да ох

Не п щ їв : од уетим печімжим, дя МТУ КУ чаша» бтецептскиа посизалавніств легкого мавошента КВ ХМ ТАХУ

У КБУ фото бЗзе скік ТМ Ту іде лю Че ХР Ти пт слу ау шу ох муж сУВМ дл да и і 5 13 оо ЛЬ з В. в

Ме Іди «кій БІК

Ту 0 Мрекхтірі пи, пд Тік, вик шрежчИи посуд Внмоте

УЛ

КЕН кт І: ння : «с ЗБОЇ смт й пдв г у рен пес стуюма ем мудамі в ША ати; УМ Ти тил Кона швнсуєма посипжлевнхсв СДАНІ ват ОоБОїЇ дизнат та

ХАН доклад 1дх аж МілІММ. ПВ гММЕ нах, туї г

БИ КЕ.

ЕВ СХ оніля» себона Возео

ХК шиті Мотя» фмУАТІММИ «Еш МІ ГЕАРТІАХ зочуг вч лех

Чай ЄВ атм Може чек; В «Ж ву М

Ех й овемлаФ о леТщую М, їх аТКх

Ки ххх ший ОМЛИМО ЕБАТИКЕ кт, Я пух дик 153.05

КО писати. уж та п Якими

Ук. о ДІВИ АЙ ОМ М, Си ОКУ Ох читМх пива мЕВе ККаХМКе

ЩІ я ТВ. ет Ех «ди С. т З. менкуВ сезая Кути, Щ.

ЕХ М КА дя ЛНАМ Ж ВОМ

ТК Хо ха ква сжжва мк о хаво КЕ ооОгу дОВІЇТЬХ яті

ЖЕО ЕВ

«й ш СВІДОК ту щу ХНаА ПОНАД Мт ев ве пули деиадд утіх т ит що ду ТУЮ витяз хі МК ОТОЙ озсдзя тис

ЖАХ КинавнаУнах пиканлідсАнатттв кий чпи детискією анУпЖилА сто или тю АЖ ЕМ ТВЕЄВИЙ а ТУ. МКУ ХАТУ «иши ХУ И.

ЛЮТА ЛИ сх, Фома сті ет офе ШАМ си Хо зикла сок її, Мом й плтсуд код их пз іш рда твяу тиші МІМ БІЗУГОВА

ПТК пу ге «ки ТТюр. алІЇ ре ходячи у СУ г М - шо хи

ТІМ ОАЕ СУС, їмо. ох, ОО ащО

Кл х амАх жуть УЕИх мет шия МЕЗО МКЕАУЮНИЕ

ЛЕМ ІТ. тку, бо єттфжеетюМ єго ки Ії Мі пожити шия М о йюлІНМ ШОЖММЮ 0, М, бом о кут, зеЖ ух «Ву» БІО ЕМТОЖЕ линяє НЕ дя КІ яз ТАК, са Шо зум смкутю, и тк Томи г «ИШИВМ шо вЕлве сюище щу, М. ТКОВлН х «Ям 100 жена в ен ни а о на нд а Не Не НН НН КН НН

Мав хі сква Тука су хайоскі дим тукх МЕТ КБЕФ СХ. ЗУБ ВИЛО АНЯ : г. У зе ї У хо хл ші ЗЛІ

КАМ Мі ше 13 ва 4 чи пло ли БАМИ

ШК рем пише мі пет тих ечЬкУ штучок дл т тк

ЧУ. с шемпоаздоУммалй праці ПСОДОеНПЛ дим пчагляя «ШИ Копстносуєиал тили лІааматуйть Сея днтмеюоБа ант р

КОДИ мити ЕВ сб. МАО КИ КИТ діям ТІ пл шо план ми БО... тро м, лу дяки В ій Ж о ЕжнА Лем БО ОЖ, б, Й; м, Модна "пи поислтю МВ ГКІ ІХ, ер МЕ КЕМУМКЕ

ФІЛІЮ, ху ака

УишЕМ. ,е ож ХОСЕ ПОЛЕМ ЙМ ко йхь бю блю мою ж ХУ З шт

ОН» ме сан МОН Я «Еш ЗИМУЄ ЖЖКАЖИКЕ «САТ їх дах ки збе І лен ши УДК їх укху М

БСК МОВНІ ПУКМК Мо лю м, МО ВИКЛ М є Лю сш ом КИДТПВИ шах Я їх дош 1: яти ЗК удюттид аю о слиттн ї їх ш ш їх. х т сх її М пін Ж ах В о а ов он у З ІЧ У ШО Кк, Зк ож му б, пк хх

КО

«ИЛІУ

ФВ Та ОМІДС ВКЕТОВЕ шлях, зліз пх

Ки ж лік лу йо дреди Я те шоку їх «ЕД ОХ дм сиза 4. Ж. Ж ом. «ЕК

ВІЙ ТЮ кра Аг вн МІП БЕАТИКЕ чулртя ше щи осо в и НКИ ; -ЕВят ІБР. УСЕ) склі ЗИ зх тісумх. разу Ух ка у годин

ФУТ х вАВНаФО шІМУсЮ М, М, МО

ХЕ кети т Має ЛУКА ЛУКИ «Еш МІУ УБАЛОТАЕ шедух ек пох зви МІ

КВ ООМ жшдрди матчах ШО ОО А Ему Є

ХІМ Ж ме ЛОлИМО бе Мо я люк, хЛОВІМУХ шу» едтих згковІтх туди Ом ПВС Е ста рлух гла уч їж. 15 тр соти пижма МОЖ Ж яд -

ХУЙ ЙХ ал о А ї Ся то дру. ет ОНИ СТУК ЗУ жо М.Ю ТАС лЕШИХх сш МАВ КБАТИВЕ

Ех НН А и» ую МА шу Зоо кт бмичйхн х - т щі т їх т 53 пт т хх «ж Фоозужим КО хх о й дилдж ММ Ху Ю, 5, Му Я, БУ Мр о Бу Ж бю Ху кю Ху отих М пд яд

ХЬМІКМ КН схо вд г то ст М ща ук жо Ул свиту дою пера Хжа Май Ха лах За щу Хав йла Алі Ха : т й пек сту «хх 205 яти хакі їх хе ПАК лю, Чехии платина дич х рф г, сх Ми ПРУТ ДУМ ДИНА Сх рен шхки я п НН сн НН СА КН їх МенсшнНоУсиат ПОЗОВ Сех вісти дихала шу пт уєовІ под ка ОМ ЕЕ МО ти кчх их вино Ткані пт Ж пут лики Й си:

ДО ХОНлЕлЕ НОЮ Щ. БОщІМО С корти, сут о м юрКАИНЕ «кВ МІП ЖИРНЕ дров НИ гаї ня 15115, лет ПАоозаастивюм ситу со 7 м й Жди с чих й дала соми Му 0, ЗУ, Му Бу МоОЩІМО Х

СУШУ пт Мт ЕК ши МАХИ ЖЕМУТИ ВИ

С Ту ту «йо Ср «Ж х двлаж дмтею лі ВО

ЄП

ОД пт жид, хм МАКИ ЕЕУТОКЕ ях НН ГИ лох ами ху шт поле сизим ДО жу «их хо ШИК ЛО ДО ТУ ДИН хх

КИ БИ кум ММ х

Мт. їх пу бот мр МІ Ж, Фохеяі бах Хахю тах пек Сіу Хва Хап їла Зіу Хава У тую лящ лек ї т У чиїй а

КАХ 7

МЕ лк сти я За иПУ1СЕю 0 Печія молі пивні их

СН щу МІа МИ ІІ НАХ

Чт ух Зоя скииттела Фе ери ай пит. ІМ пік МД. кримі пд хеш БМ еи ку. ВАЖКА МИЛЕ С и ЖАХ ФТУуЖ МТ км ШО КОТ

МТ тих вич але стю моліМз фмУХЛЧТУКИ

КОН мів ЄБАБОЖЕ, шив її ших Мо жвляш ут Ковш «СЕ Тух сш МИ КЖКАТОБІ ил шк 2-х чими Р.О. она нн НН ом СУ че т ода С дО ЙО ЯМІ СИ ТАТ У Му М, оту ОО

Бкя «ий ОМІБС С ККАГИКЕ шк МУ, мч У яд її шли Мо ссуєілтитах пуху Й су т Не 2 т ек Ух дах МОДЕЛІ МУК й, СМ. Ж. Ми с. ал ОМ

ЯН КУНА ож Мн Еко що одне їхати Пуєх хХав о вні Хда Хасовше Бус лиВЕ щі ГУ

І шОА лю ни хі

ЕК А В

Еш БИК» нюх іНеекгіївиє пити мі тур тих «У КД пЕРУучма поси хнИВН Кум сих ик Кемаиснсуснах глрпллаовносяев ПИйЙ-Ба анти им щнтишіма

МТУ.

ЗМОЖУ пох моїше фуд лМ ВК «ЩЕ МІП КЕАТОВЕ

Ти. їц мох ших Б. . кое йти гихеи шх У їх є осаелут М ями я Ооданиий ср т, У М, Б, М, б що кжяЦ лат мій УАЛІМУИ вами ШЕЩІ:. ЖОЛЛУВТУКТ клан Як оч сухи о 5... 01 шили, яоодреюч и ска т ду члодх ож пуМОМ о ЗОМ «УТ шк ТАТИ леТВотІ ТЕ мА ТІ. БІЖИ КАІ пзіткн г ті ва М В «ЕОМ ожматях ПСРЕМЗЕК ХУ М; В, ЦоОЖмУ М

БУ ит що да тдмх ша тІУЮ

Ма ломи си ЖІМАКИМА

МД Ль ЗЕ. их чих и МОВИ ЛУуМУСЕ ом, у ОПО аа ля

КІЛ фр лину миня Мо га ох р ІОН

МІОМА. УЮ УМ сю сп Лю ХВ КВ, х х ж я Не

Здам. ІП ї211ї1М 5

КА в шу г прюю

ЖЖ АОЛАМИ

«ВІД щівучнйй посіла юь вар о на а А и в нн Не ж п тонсшнтутцмх послався Се вУ сзмшмегпіВ пити жАла «ЕТ ме МА МИМУК ОВ

СУ 13 п

Іде Еко її

ДІЙ хх Х о шпощх пи М Мох

Ух и хОЖИЮЛІХ ПОХНЮ Л, ОМОмУ

ПДМ сплять ДИ шЕОопІпУє

Ух УМ. ВЕУ п г 13 лі х и. Ха ет х п ся к х я т Дх оду пек, ня чне йо ВЕН ЯЕ слюМ З М ї «рих сах о и и ди МІЙ ЕКДТИдЕ под хх зх пихи р. умі с Д ол чию Мо джу йо ОХ о йеище собою юю «дртя ОБО хва Хаа Те» Мах Хо т ї: ка й ій

СІМКИ НЕ си1ї1 17 сли бу жеулиМу ши ОВЕНОК яд: пЬИАлМмМ. и Є ем

ОТРИ дморзиа поли фнОовНмЕх ких нку мли - ке рих ячучух о цех уж -

ТУ тома смамд или поді ПНО пагуУЩе ЦО Я соди ие коаноаєсусмай пошлАадоВАМИОтТЕ СИХ лиття сут ллв.

МИТТЮ днякид тя маш еломемщн щих МЕЖ БЕК «ЕВ УТ. тла х Ж дви че т тром дк ях ИЙ ок ВВЛНЄ ХМК ХУ М, Же ІМ сх етккту сих лівою Мт фМА ВИ жодні ТУКХАЮ ЖЕД АХ

УС КХ ік

ПЛИТ 2: сети укуси ву «ї гу с м же

ЦІЙ Жов стлютлю хх, В, й, 4, У, 8, Щ еМУ ш

Фет

ТИМИ

ШЕ МІН БедтОЖЕ 27 ЕЕ пт «М» рр КІ шипректих На ШИ й я св. хх -. нич лу восени вв о з ЗВ В п п и р п ЗТ НЯ «тю

ХМ

СУМ у о мою ую ОН х,

КОДУ УДК КОЖ МИХ але 31

ЗЛУ, х. хх хх, с Ся Як. ї хо т «дю Хо вЕлифо сммицом, ої, З. ї ал іл

Можаєтти хх ший МУ: КАЖЕ ши Ум их

Тих р. КЗ

Маки ек ов ах о Слиз Ме сі М М ЦО З М а с М а о я о ДЯ

«ТИ «ЮК «ищіш МІВ УБАМУКЕ

НИ пух НАННМ

ОС РАМИ Ам туту, У. сикеклк тис житя НА ЧА ЧК «дим ХМ о шешаєссиилах о, Ов

Ж ах яру жи ЗАТ ши 0 МО. ГЕ ЧКЕ нтучиті тлу її они бат

Ул ух чі рія: А ам зами, х хи ХМ оявинс пебОаю Бош У ши п аб до

Молю п сл ді духу (пл сим Мом Мах Мах Мн мо дому вів А Хо за АМеошне Хипз ЗВ о ЗішЖ хаз йза Хай хща Хаз Біз пар Зак ТВі Буш 1 їх Му ху

СОЯ 1 че ке у ик

АС о «ши ЩЕ ЛОК тах шШтузих поснідати яка «ЕЕ Жоїенсуєнай попмінежність СОВ-Нл лджиепій,а анжмхал тат ж Й я слину ну ЖЖ іх дВЯТК «ші МІЙ О ЕБАТУВЕ

ЛлЕЙТХ ТВОЄ тах уж ки Кк тики Ж жшеидЕ сосок, в по «Де -шйіх МИМО ВККС плит р Ах хм Уа и теми МИС схкую же скучили жу М «тк о що осомалря сх б, М оалих В итих

БАеев» ня мо миє ІМЕАЖИКИ

Ух МРІЙ БКИХІ У, три мк вт пес ШИЯ ги

Я о: куту х А А НН ї шо ховЕЦЯЖ СОЛОМУ ЗО М сишОх тиж мл веАТНВЕ ка ДО тм пл МЕ реве їв ща «ши (й В,

УТ ад ту пи В т, оолужь ТБ. «кихИиМ дойЕЛАЯАШ СОБОЮ В, М л але шт,

ОК

«шкі ОМЕЛИ ВИМОВИ кер жк ху «ЛЕ СЕ, Гш г, тео деле сотку о м

М АОВШНТИО МО дою МО ЛО шо Хо

Мі Хо хі хи т Ж Є хи й тд

АЛ бе халу Укл МЕМ АЛ баку АЛИл ІМ лм А . х ще ул ті.

ПАНИ МЕ шлю пд як 0 прим та сло МІУТИТА ДЛ ях тю дитсадки ре МІ рік учиию СИ. рвана ТІК А луки уз

ХІТ ПТК М ТАМ Ж ЕМ МЛК ТЕБЕ хни ФСУ ВУК шику

Ук ситі МІДИ ВБКАЛОВЕ еліт, дик жу ви Вк у теж А півЛлЕНИ СОН ТМ МКМ. ач плн хатлинє дпа ру хх МІВ ЖЕУТОКЕ ут сх Ах мижии поет пи шоу тод т гону в окт 2 сйфиці о сізенстм 15, йоомо х ІЗ т поажиУ Ті чих А ДЕЛНШ ФІМУМО Ж, ХМ. М. М. М. Ж м. Ж. ОТИХ ОЙ «ШЕ пт Мк дю ли ИА т МТП КЕАЖОКЕ суть тк: 2 хх ст, ноту В хо дк шеооолох ркічю Я щоО йУ дідик я си ОХ двлає стою т, З, М, Б, 0 Зо ад шля адек юю ЦИх тих МАО ЕКЛУТОВХ нуту ще да пи чук гЕ Нр хх ТВ ит мо сф тет сечею К. т Коди з тих 0 Жоалне Смак МК, 5 Я зо хв

Я ірит рБАдТите вини МІС КЕАЖПКЄ

Кос я пе іх кун а тяж Мовою КУМнЛЮХ МО ВЕМО Х тай ло слюМмино ШИ рн но не НН нн НА НА НН Не

Бах хза Де оклав за ЗМУ за Ха Тжг ожив жу і о М епуйх ТЦ ходову Кене,

ЖАХ ! вику залпи шк ВАЛИК ми ВуМучІа Олек ДАО УТ куту ил Микиту Мета В гу ТАКІ лю подамяе ТУЯ спідчняще их шия шому мсєцях пешлодтшенлшть (Пл Зои стр МмешіІйЙЮ пІжитУя «ДТ птуя дажмих фр крме хкхіх МАЛ ХІІ «Й я ср.

УМ ФУ НІ утш ДІМ КИ че ХхК ОМ жМоОЮНУ Хх плиту

В бдлошух дМУеоМІИ чих ХЕ ВОК «ЛИТИХ Го жя Гек

СИХ гр... елют а А А НЯ ки -ї її т т то дічни им я я у у ОК С В . у М м Р М С каву, «т «ах о Хе п 2 - Но фоячи 2 - й пот пф ке у лм ій взу Май дав впдсФ жу пах сх М хАЄ

ОВНом щу кліпи мпАгишЕ.

ил прі ми вед мк и сл ПВ Мнна ФО ЛАДОВНУлЕК плете

В

«ту лен го чне ще : дет ие М тя од їх ї

МО ТИ клани чинив гл ПТН виді. помер т жили КОНлеБИаУснат пОллюдетн о ТИ ЗРУБ ЦіІмУйх НТІВ пкт чих кличка важ вх де му ліку. МІВ ВКАЖЕ

Устим, гтхУ їі «и ки КІ якою Мо жщалне сок я с А пло век давати ка пит лАдЯчТ

Заша людши МТМ АК пута и щи Мих вки ук: ум етуиюті - кі - з НН » г сиди ж ями т СЕУ КО ОО ОЇ г. М дк М ши «АБИ ФУБУАХ Кк, ж жа Ж їх Ж Йо хмУ М муку

ХХ МІХ талу МТД КВТ тк о Ти ВЕДУЧИ итутьтя г яд меж ї5р. МІ мес хх чо Кк СУ КН с

ШУ ОМ впли сидулюу о ОЇ о одних СВ «скан ОХ овилаят шою б, 0, ОТ, М, Ж опо

ТАТІ кам длухн м ситі МУЧИТИ щі МІЖ КЕР Е

Кожен итрх їх дж кб

МТ у «вах гриви зи, осли п ток А ДВЛЯФ ЛООЮ МОВО

М шику Важка рих но ОК «ши Я В ту ставу спон КЕ хх «ний М овали пебою Ук КА, Вовк код сят шли КО белоую шижяю с ех Мох на на НН НЯ лій дах ТЕТ БлроХас Хай жав ква х х лету» 1ї7 тями ЕХ «кал 0 кн МИХ. ших ек сш «дах лі оче Не тот Мо т ЖК Же пі мує Кс амяе фіни гул Ух пек тую РИ сдемостевх пСіцсЕсбо Сто дак чаї Бек Уві ж Болю лу са їх 5 о хх пу щі шими Мо луку бує ек М мо дач їм іх й тест щі ж

СЕ лів аеж ле їМе був Бек пі Шамо вхо зи Зі Во Був блуд вах ши їх ха сир свт ба ко ху и ча пУущо Буи лін піт дао йжко бл Тел щі тесту

ЕК ЖІ КЖХОсМИ ззату пухоМЕсосаАУ бзІітлу сеж жЕщО МАХ пп Уа леж ух

Бачя Б У -л Фюшиино Жити СЛУ. шити гади ЛИХ пою ші яті щи ва пад а Ж

Ай ожину смт ММ УМО Кл ХУЖУ сус сапово тили умо Вл Про олеавд САУ лах п З їх джує був лі у пе ідо ск бах сире т бук башти сл, Щі МК

ЛАжУ Ж ЛАВ КІ пк ля КОХ Мем АЖ Мало жеЖ Іру ПО башт КО Мет дл ха тр пи

ТУ ТЕ їн ЩО поеох пу Лю ща ку пркаю дин пута мли, Ту их соску пи лу У АН двросва: АдвОозВИи ту ТУХ о Пуш щмо ВАво'тхюК Бур те бар Бо пі УдА п, ли пк

МІВ то Зх тк тіж тіж Лу леву меж Ж ву ча, ха я ПАМ ОТУЮ Ж СМ МЖЩОУДА НЕ Мих оОдо ха зах ти пу жАМО ТА чн я вени ОІВ

ВН НМ НА НЯИ пт, Фірми; сер кл шлях Нопко шораєсих кота хх

ЕНН т піп ом су ій ла шо бек ші Фу Фу ім Уко упо оєех зі у

Бу ц С Кк ї У З їх

Єкоуо їди тс фр За б жі то бювет ну Зрас стіури дйчсю пк бак ціх пех лм йку БМзи Зак Сх пі сука шах оспуу ва тп тийЗ Ко Ох мія пух У лх гу

Кк ях Ех перу мав о усе ФфФерту МАЯ смак б Аля бен Ул То й вот ФЛ бе слі

МЖК ши Ткр Узу дик оси Ата Бо ду БУД б МОЯ ша ОХІЮ УТА зи се о во ха Б тт торг Ху жк Мая Те шоу Ве аж фу Шахи: Мох. тю Тома В віФ Аж Та ох бук Аж бу За Ан Був бух Ще Аа дер беж ді а 55 ва

Жах стих кі Мис Мк бпїч Ул; Між Дуст Дахи сх локх. жшенхо Дати о Ж ху Сугуя мжФосне у МО БІВ АТАК сою ШЕ УК АВ АКТІ ОХ Її; ОД плов БУХ ши шо п ще хо МІ У пр тд: Кт. тож иа гу Тамуї Ди Ма пл Фут ПМ ж кю ик п пиши Пій ме оп йду МУ Дт гла пе дж тп ба щ ЗУ ТК Ух о ее У

Ма тн Ат із й по хм Мі ля; ших Му: г Пера ПУбах т щу дав Буш ТА МАМ Оу зЕЖ Дей жа су Кислота МЕ му само Ах ла г: 3 не КА кА те Му й Мк ді ших У

Тьж Меє УВІ тир ові ек Ех

МА юлх хх «Ул 1135 ких НЯ хщіїВ ху

БИ чкя КЕ

ТЕ сБаяни шафи чад 13 ха пу 4) лами пе що худу фі Фен ліц буд ЗЕ ща фу ГІ плн и Ка Мами див рт мам оку оЖІУ ПмеХЖ Мам соВМ бах оп Мже Му мам

Е в: їв 15

Тих Аза бет дів Тв ше ДВК Алла о ввр Бу шва сб Бл сМух ТУЮ Уві. рах по: во

Й я хо дк кі би сіл га зи рід» т б Люміх га тан Ма ТІ отих

ОС СКІТА МшХ зал біт МУЛ МЖЮ бу мих ки жАМ Ай МВ Діл 1 ХУ

ХЕ ре» Бах

Ух Дохиу ЛЕ як дак Дема ди юю, ін, ТА пози тк ми і шу бід дав Хкх Буд Ох Вус бак СКУ 138 ЕуУ пе пла вле шик оСіВ Жак г їй шт

ІВ п М шт ет Зх Ав ХИХ Бі стпх і ЖМУ ба йшло ші ХВ ОМ Ж Ме шо па Кк пий рев Ге б рочя пе тла діа дежу ду зд лиш (іх Цих стру Дчує Мет пелуУ зу па жд

Жута сдлм сама Ел ЖЖ ЗУ Смш СО сУувУ тр гущу Мет АХ ЖАВИ За Мох а с за тил. еМі под (шт ру тих Мід лук Ух пе зі ях ах АХ УМПУ МУмо УЖ АСКПХ ма. ШВИ

А МО

Очна тий ші ді

ЖИТА ТЕ КА

«іш пІНШЕ

Ж дШі ПОЕМИ КНУ МОЖ УКХ гли и тя мужа п пе МІЛаМНюМУЄТЬ Ум Баш Мт

Ля тру МІЖО ЕБАЖИВЕ «ЛИ ме НИ ал ел Чули сумки МУ Фосу вже ТУ «и Ж овал лою хх, Му т оаймМ М яти

МАК люта м прати во МИЖМІ КАМИ их ІЗ..1ЗХ «ТИМ о Жожнллнх ТИкЛОюЮО МОВУ М

Кр в внов и

ЕК вач рим

АЕИ ЛОЮ Ом БЕН пл х НУ На

КНТю ий ЛИ

ШУ Тоозуутяо ачлив, СУ боса М

ТИХ дви сно З, їх о щлмо М

МИ плит хятІ депОУулч ва

Еш МИ ІЖИУ ТЛ МКУ геуеутия хх гахх «ий АЛ, А хе ту ух. х о - чик о т он їх хо пу а

ТАЗ Ох шіаляМ Маю лоб. 9, - ВОЗ В их пит МОБІМУ Лех ТУК шш ДМ ОМІЩИТ КАЖЕ, ши Яр

Ул Ех, У ФрФш ками стику с ТАКУ т. ешний Можна щшеаею Є, Ж озох ох яю жа лютих, жо ФМ ТТМУ «ЕМО МІС КБАКОКЕ пиши іа. .154

І, М шишок, Ж, очи ї «шо хо швлее сумитаю я ОО ОМ

КА

Хол их. киш МЕС КЕНЕ люту епох ПЕ лю Ул АЛІ «туту и чу ку х і: т оди лет ОК. СИЛУМОМ Сх М. ба М сх зо Кк

СЛ. ель я, мламУ грати ли Ки ЖУКИ ИСХ яУєьт вищ щи

УМХ ТІК; У ЛИТІ

ШИХ ж и латині -Е (5 М Є її «ШИА» Коделиф ос й, М, ОД їх «их ще шктшию рчхи мВ

ШІ ЖЖ ЖІХМІ МА ту тиек код ге пути Вр гттули ЗИ догюттаун схутими ту пумт й оди ЩО МКМ ЗЛЮМУЧИХ люк ЇМ, МО ІРД що сил туя я УТИТ ПФ ВИРІ «и МО БААХОКК клю гопюту пух ее ет Оп ж ІННИ Х

ЗУ, й тет. сег. тил ктю їх акти їх

ФЕЯ Хо ява песо мое

Є шТух сюрту ал ех руУтіЙйМі чхайіх МІ ЕКАТИБИ шля, жи тій

УТ их ТАМИ,

Ок усю Я далтмо чин КОО6ООКОтуЩОто доц В

ОХ спо ЕМАЛЬ ук КЕ їж очи юки А ЕМ сх к М туя х, по и і рожа «ик МЕ БЕАХУКЕ «Ух БІЙ, І мим там. МАХ етютитух САН чн вх г г х б осхитну. У их Хо нплна сим б. В, бу хе Ж, ТІ м мезо ЯН тетдних фУЕетІТК

ТІ У МІШС ЖКАТИВЕ,

ШЕУ ру рих дити Оля. У ЩХ

ІК ит а етан питних Й м ле

У У те МЕМАКЖ УМО Ж му м М т є шим лк м шЕТут пох

АТХ МІВ ЕКАТУуКЕ пхутитя пеше чи по

ММ Міо. М, у у МО пото кни Вч зу. що З дак М жиє ХО Бжліда ЄооУ Її; СОУ в, За Ка МУ Маю М ожЕ Х «ШУ сою млі ройтице

НУЕННиоя МІЩИ ЕКАТИКЕ

СТЮ гли зви «ишни АК нях я тя т Мо здутті феї ще доку Кк дол т мЕмІхЕО «ЛШОНІК М, Ж, Ко дО М

ЧИ

«дуть дети и дк

ОДНИХ МІ ВКА КИ плату Не МА

ПМ емо енчи Кс пу тя Со паху мий ІК ОО 3 вина и ЕуУХ ж зала совОю Б, у З, Мона В «ДЯ птутх зала пилами шк МЕМ ЄКАРБОМХ ера сту Е;

Модму пеня т

СИ, м томи сим Фопдркчу ДК чи шаММ МО шЕЛудж ско тм, ШшОВМО А шує я МКМ мкА И

ВАША их ММ ЮК

ВИ А ШК. МАШІ

С чь яхти осики С ї т «Роккі М «их жо пили СК О, А. 3, МО ВХМО ХХ ис тю хяхіІМУ пива иТІ ех МІЮТ ББАЛІЮКЕ

УТ лігу гру я тлі: 0. ММ

ШЕ лит Олі пажжяк ЛУ. т 2 Ку її Гі го т. їт- т тоди М.

ІЙ Хо двлЛяє соб те 0. фа М; М. ше Ж. Му Ж, З, 4 лк М тіпгУх ти

Ух 1

Б ях ит т щи мая ка ИМтя Шмач щи Тата АЖ зу ее дру у ел МА бно: СБ оХМьМ сім о лем о шАУ ЖЕ сВиу хм хла мух умо тю мим : г Кан Я алею кції ран ох Між У ву АЮ юю І (1 Жар. М Му дух, їпЕ цем осях ЗФМ ДЕ и оулх хх ак опа бІУ мат фі дих Ха дних я по Зо

ХищроЧеде бук о сТе бю буму їли иа піт Мал Ме тт Туш г Маші двом ук лк зам щу од ми АР а ЖІ пу му зим о шец и «ЧЕ ут з « чи ал пря 1 іх й г шо суда Мч аю У Ме чи ух Тих. зажив у

Ткхеводів Зі дам Гл оХва ух ха Сіу Ха Тл ТУує Ту Аза Вко о йоу пл пк Ще тр Лиш Ж лови ха КУ Ку км ОА що Че Море тд вну КУ З кох іль) Му Хжа суп маії ПМ Ті о пех Уаі Ар офбкк ат Боз Алла Шбп Бра ше За ТЕХ, мі шт НЯ Ех чи ен нн ни НА В Но и в НН о НК М КН Я

Пежо їяема МВ се шех йпежЖ о увх тах ово Ха ля Тих дів Улпь тУдД о тух

РЕЯ тах р тім 63 мо лук Ж бал Ж умо Моз ба мМ 1 Ма ен нн о Не пу Ва вх хви Ха» аж Ха Хща Хаз біу аа сХза Еш Хай о тжш пу я т п ц льш

Ми Несе Ки тІЯ о уд сук жо ХУ Ос Ми как с шт ААУ КАШ лив ХА СКП ща ел оО ВХ уз Еш

Бл КУ «п Ах сша 105 ух пектин «МІ ЛУКИСК елект 0 Меохєрмії опизеетМі пемзмі геме хо пУДМКИХ ДЛ ЗлОВМа Те клИяИ жяЖлія кт сит А їх зхиплуілмуУ Є Я прнтві пх ТЦ «ик мМутамал в дм дловІсмиМ ОМ Ви ВАл ПТ ау шлехі мли пот «силі миле ЕЕ КЕ туту я дк

ЖИМУ бебі «ЕТУЮ о и о НН Не в Я ЛА ЛЕНИ ЛИСНИХУМ о б У хи «ТВ стеж МЕ фрдтітУє «ше МЕН ЖЕУРКНК

Я МЛ ду 02 уУ тий їх. уХіЙ пре НН Фо й. ую пох ми В ях ДОСУВЯМАВ СУЛОМІИМ ЇМ, Лю їх лю М, МО ВІК у

КИ киют тих крем «ших о МІУ КВІНКЕ

ТМ тшх НЯ

Тии у ТЕС и у зику М кв Умхвитю: Ах. В сишУк х данпаш сосну мон Є «ШЕ»

Сол палки шреутинк си ШАНИ. ЖОВІНЕ хи 12, БИ нки чо ем сив ок,

ЕОМ Хо щеанишй сАмУуа Бо хх сен Мч КВІНКЕ

НН КИ

Кл «шо гади хи чок а ЯН ут «. «тки сеча ШО сиютит, 3 лиже им МНЛЖМИУ ШОК шолЕмо У код пли 0 МЕ шиДлИю рат шт. ВИК хжиш. ВІ. коді о десьдє пек, щої АЮ щу сшкІ Ж вела пойою У мМ; Т, А, Ж оз Ох пуху р, ях топ МмІШУ БИЛИ оса МИ ЛИХА, соя НУ чан

БУК оз нен Не «Ля Мо звіт сзиирзухюу те ГИ є т о одіхує М

Єжи М дви сом й. б; о КеоМ, 00 хх аЩО М

Три

ВОК» шЕШ МО КЕАТЧЕКЕ тки С У

ЕН Ки Че

ШІ М о ядалжю ЕМО Бод слу

УЖ

ТК пиши БАЛИ пи БА ЩА ВІЮТЬ.

ФУ Не о лиж м сй дощ сиМмУлю м. її. М; Ж, М олоЗ ХХ ях «А ОМКО БЕ НИЕ лікті и ауд ел одежі мисом 1 Фо «Еш» Ж яйця смашнІю ОВТ в ші ит тд ФПУА ЗУ ми ЩО БІНУВ МАХ,

УЖЕ КЕ гщ5а уж МЖК; ее МВ,

ОК Хо веди пабу. МО Од подсм см ий Ж.О вЕживг Шомааю Ж. У, А. овлО М

ХИМиХх «Ас МІ БИ мкл ту ощх пам и. «и М нале собою З, МАО ати ОО «Еш хи греих ВЧХКрИМИ киш МЕ ЕБАТИМИ

ФО чад бах кУСКкофе чар; тих Фо саюсімх пами осаду

ФжпЕ с щосадЕшМми с КлЛю Ж СНИ Сх их я гуллих прак «ши МУВІ ККаХУВИ ту тик тп

ЯМ ГАМУ. Ми, кт, фону зими ЩІ ай ЛУ сили М онвАнє сою Болт: К пд тік

БеВя :ї15

Фе С лу Ток ти єди. 1-2 Шон. чх а ги леву ЕЛ ХУ Ша мк

Ми ОфУуд о шми; Ме лю стю Кл МКдалвж УА ЛА мя! с0иВК шт У бай

Н й Ах и зррущинн да ту соис Лву я их Фо ОМ Аж г тиху: лих Зп Тк уд тиж ол пе 0ют УМмУу пу леву му хх я См у дишло му ТУЄ АХ т си чо хо хи Ку г - 2 ке п КУ чу -ї ох сон не чне зв пт стем лає пл мол чани фичих ті щі ар ит: М Жим ЩІ ти вн пе ай кп

ЛЕ м хм зом са шу, Жир мою фут. лежу: Шо іме т шим ой дн Знав ойім Ша щих о бжю жало ли пор їла алшж слу даАшОтТищомАМ Од МЕ дек су йде

Ех «й в ти вжи м

Ту. важ пл: дю ока пох Тр фр ТУ хе У, перс кріт их Че МИ. п МЕЖ М ЖИВЕ ОАЖУЮ ФК. хи мчМОУМк дж шШеК су улЕ бе хе пт «- за зе щі план ож древа Маю (то у Ан; й Ух Жща сшцо мокод УдАї поро піз ха шо бух Тео дув п Аа бтм БО Хза хХваа хав ва Ул я ЗЕ ЗЕ при хх дес ем Мо ха вх їдь зно пи ЖХащ як т ло я в сю дл теп

Бр піУ Ха Так о хах Хв отвк ді пед зт хх «У д: НК слів 1 пли лох 11 кю ою хи жАНОМХ

ТИ пу бімкмлігим ие тт т тих. сюда ЛИЖ УучНна Тими аг Мети Ка га сви тмих ри пивналі сід ОД сш МнтюсизитьЬ афенНно суки ксо амтиешома лрурют Ух УЖ. З і ИН то КА п М сон ТоТос, ТІ я ит муху ув М тм ух Фа тує шо МІ лаз ВМ Уж шк сш Ж ем БЕК су и да МУуш Бл де оса 4 їх - т,

Х У І я про о тиі й тим Між їм Кі гаї шує і їли Фауст Ша. Деу

Мих о цедосет о мшиа ЇлЖ Сум ху жах пеж осаду їхуУу дай ода шт дак оо ла хи т «М Б я «граю Птхя Схашю Мах ТИЛ в рих Ася ТА т ум бе Пл. Том жі як ром. Ту шиКОочУх кжЕ Хшжроосу Жхб хів Ак шо МКс гХо ше м МУЗ ХУ дм сом ча ак так ух мя ю соку Бу ку зу Си Ки сію ру Лек Лю мю щІмн біску бурхжя

Ти біз піу зр о фтї- ТУЮ Жук Тдк слу беж бпжх ТукотТук Вал о бгс Бех м уд щл

Й, З Фо

Тк: ших ру уч ХА Жнах тих сіє Та о хе мах Шуми хм мм тк Бе ін муз Змх бхц о уах Тис дов век тах бю їм Щек БУХ Депосіт Ріха 5 за 15 ао чім Лувіт Жим Хор Шкею с Шкемо пуд Сифон дух лето Там ДЕД хи ке лили

ДУ Мед мер сш лейлоО ше ма й омая вам ою рої пот УМ УДО МУ п луг ах их о ч тхющо Бод Зір бі бод АЖ реж. им ла Журі ек Кору ку Пі мих МІ; пек Віз Бу ТУХ бзвоУві ех без бл Оу Зет Зах дше Нр биту САУ 1па пл тій

Але іч ОМ

УП Фе тс З СЛ ХЕ а ом пт бМОУ ХУИХ Мей жах г ох ек оту я «й іх жи сіток шу жу моди : піт фотки

ЗШ ОШИОК позу хх Пелех ен Я ри мА доми пи НІ ТО лА ДИМ ТИ поту

ЛИ лсю ПТУ ди МУ Й дуети я ТОЙ кдй М се ВУ меню щетусулоа КОХ хаптую їДЛ боже Жук о Шіасю бує січ Че кі нях

ХЕ ошек сх о КжХ ул гр МУ стю 1 «ШИП 13

Кене НО

КАТЯ На ен птпееЕ чке о БІЛОК еВ Мер ви: кни ВІВ. рано нЯ пу ю жо ит. ди ПУ ОЙ даспеманілхя КА ший МИЛА Х лиж іуюя аМуУМжтдМщ Ми «айо» ЗІ дехто Жах пу Су тА хр КАК тату тує Дт: 2Зиху шко тих дещо де дж Ха о буж Чую Би ім жщак Ту Ух ТУуж Аве Блхю Вет смат в імНех ій г вк НЕ - В: Ам ре ек шле шк году не иОя ее; шу з

Мах І. ху ц пло мен ни АНЯ «Ж пре стем тодот ня слу псих чими

ОН иТІМУМ ТК сфултути ЗМО ДО плити б ни Мр «дит шен БАЛУ ИВИ джшриван М Я дю ху змо дише (до ше о тодаї із хг пк пер му М

Бук оджр Хві Мак они БІ вм Щек Нек лю МЕ ї « їй х о 15 о НИ

КОМІ Ме ва ст і ср

ЗА зх еп пін хикиь ІМЯ ях КОХ Пуми тних лЛаумима ЄМ, «их ел их, те пе «вет; Ек Тем щік сич Дт и Унсмиве анптюсшвО дити: М. Ух ви У ит ск иа Тих ТУ лот ух фени талон сти лек пу т, пав о інд ЗЛІ Уя ПЕЖО У жо ХУ їжа Ха, Буж лле пах мал з а Са з: -ї 2 ЗИ? А мем. стою пд ди Поштою Мк и ами пу (І ги ую Св ЛАЄ Ши Му

Мід бик МАТ ЛАНА ЛЕ су ЗХ ва деж вБу ФДМУ ем сл са мех осях

Те З а змо пдую ти орли ку пам кі й ем паці та Филжо лю бі Ася м АК КУЛОНИ МАЛУ. ЖЖ ХЕ ВАТ ОД КМ ТУ МДУ УВА МКМ АХ са їх и ау чну Тл ИЙ іх ши ши лиш Сад лю п М лено ха ом бує Же

Жук і лю ма рани УЖЕ СІМ рлжх му ше Ожни жук сгруєю ий сус Зах

У ща п тий х че и нн НН и НН АН Нв а НН и Не ее бено пмеро Мат ху УНаО ХК ІТ БІ Зв обро жає ето Буз ви пуб Бе ще -а тк, БУ їКХ и ЕІ: о пранюо лою та То Ше п ЗИМ під о щі Доу. Ми птм. дО сЖбкрр пзюю пед ошЩнк бух я шехУ пшЕ хво ЗЕ бАш оса схВуІМ ТИ йшл УВМ СУК МУ ок пи -е ях Б У що: що шк з ду дж кдд; годиї 31 Мі и це да М Спуск пр плов ФК лк МВ Ви ЖЕО саши слу сім об шшЖ дишОАУЕ БЮ шу тов 1 НЕ ко НЕсне їх тіж ах сви гри Соми Зі дих па

МАТОМ ЖК ОКО ДА ОСЬ Х оУпую яю уми вякя рий не Кен са гух лі

ЖИТ ЧИ я Ми ту - вки ! дж ДІТИ килрии ШУМ ТИН ВАТИ. жим чих дпинені антисемва птитинА МИХ, я я ми МК дл жд сю а Ск ра М алое хм Ж ЖК ІТ НАУ

ЕК ве ту м у.

КА

«М лх штТлОоК сла Ілазехтдтєт пи крути ит кій о о Бшучні пелла дети єю сотки, вени

МСЛКлх ФММ А дідмни ТИХ дидхкуинї ти ОС

ЖИ блуд дети ДЕТУТ сб: МА

Кр Учня

КУ Я 1-х дожео То пох стук рр пря шу Спи и Сад ик дя ку шко Тигр жа ох джу ат. Кум ти ух тп що ех са УК СКЖЕ бли жує оч от мус ву х Я ея 5 х х КІ хх сЕвсю 28 гла чи й У ОК поту отюу 0 ше мМ сш ЗМК пора НН АК вени ту ІМ ТС ЕДОВнУсВЕ

Ох сити я КД. СІ сип УМ дпнтмчіяаА МО коки Смт АЖ МОмая МТА Да мл «дну: пу хожМ ке. тля для ко Мт Три ід Фуко дом Му ліІМ овзіа жща СКО Бл обу ху са ек лек хуУХ - і: те : їх хи ло, ЗЕ

ИШМх КА шли їли кни ІА пл чали ПАН

Ши. Мфдхиєм сллмнр тмче й ин шій иО МЕН ЧИЙ Оп БлЛОІВнХИма «ЛК ЗЕ тих кари сити ММ пе т щи ІАЛОТОУ сш Жнециаисоте нал внжитин ЕОМ дм 1-й «ах Ах гл лю полк див МІ рії юю 31 Хек ТІЛУ тб М Тло БтЕ дує ща пло жа че ЛИНЕ ОЮА СВІ ау ТО М МА ж мух АХ ДЯК їх 1 5 їЄ ї5 рі тя Шен Той: ббраю сйчуо Уфа (А Зіни ФК ТР дин пло рик лавок їн поем ожеак цес Ж пу тйх Уві ше у сПАу ЗеЖ іш шжеА Бзий пак

Ка 5 Зо дек тик ЕЛ би ОЙ ж тяйу СЖО Р де брату ку. пи их пи й рю тужити ЛЕ и точи УТ

ИпЧ ОКУ па трон ЖЖ щу о МАТ ЖУКИ А Мал тик млУу сш УМО мЕМИ ам п су 45 поп М. БА пеки о р вих умо у Мк Чан т ру ура а и ВМ алу. Ме

ТЕТ» ТЕ ме у шо ж лЕЖО ХУш Ух тази ощу я шиХ Оп рук Ух лим тус липу ж М во тийтю Блю Му брет хлюі ТК о г3іе жовт б Вефьосту Шик буду Жетп їі пе ет м Ше йо Уа те РАБ ОЕВК ЗТаІ дош тиху хек пу Ем бій ЕТ т то 5 до датою уд Хм ку беж що РУ АТиА рі бат ре дао сф Лк ж век бам муз жил ех пет Ме. ТВ Аза (Ми о йзро тик Алла бас стук ТУх п се пу

Мох М по тез АЛ ус хім беж па 1 Кдня Же дріх білком йовуу ре Сбучу со су дО М АЗІЛЬ КВИУ ЗОБА Ме дам КМ ІК У у, у шк о шІХ УМХ ХО у

І М ТЕ

Кору лив ді Троя Уа т ні си Сх ар шу ХХ мем яд лює ж делодех 115 їго

ЖИМУ ОТЕХ ик - «лі Кх 4 реа чия їдвк 0 ШХКОК

Сл Ьичя 1. тих - сх ом чя Тих ТИНИ МЛИНА УКХ птУптрх «ХЛ шлю прив. ця п и в Но НН

Мовне «СОВА НІ шфентисіЯИЬЯ щитки в ПЗ. с еіхеу ясує

І. БАЛУ

Мшу шт дамі Мо Бе бух пЕИи жу ВлчЧ лу Кий отТКОв сію кості я ти ОТ ИУ жук я

У аяная ная еВ

ШИХ Ст пет рітуєо Я стві

Жим ШЕУ БООУМІ уза СТЮ тку гу

ЗОН

-да ШВА анжшмепмлй смажити Ка у тк хар мк

Вар оліФ тує Туло тмвт ЗіУ щех ХВО Тут ТУ Ашіа ВАТ опеХ Зм пух пет

Х у В В Х З х х ту КН т хе А раки ря сш рун сиза же «йШИХ ню, КІМ хууил, хи супи рес су -: 1 ей СТЕ НЯ вна кни вита В.14Я ха т миле бліх М Ж Орд о болих уст Ту тя. дашок піку мм ЗК ОА ЗАЧ ОМмЕМ гм ОбАЖ мау тпжк ЕОМ т

Б ї НЯ

Ба усу вас 1

Са у пвх шви лиИй в» МОЄМУ жа йідчуєухтти. лази прис кет,

Ха му ПИЛОМ ММА ЛИ птугуд ки М гл БЕфоєиціутттіхчо па ЕВ схід ти ЗЕ все Неля ант оБшх зими ти БО. кедр їз жирУтик аа у шо гро лому ТЛ ку сиру мм би ІННИ ЗІ Жахи У тон зхмах сим МТУ

МКМ ж АЛЕ КД сь сл ХУЖТ су МК «АСУ ет Ум ПУ НБЖУКОяХ о

Н Й НК ЛУ стеує жіня шию ки спри бю сша лящ схем лі и уми Тл фи дико Шум

АЖ МД лейко оч АВЖ ОО СУТО ХЛ Олешко шу ІМ лен ММ пу лей Оп

З лк, з треку. цю стою ж вгу Фе Свт дугу и ку умо лют ато я уч; тії птЕ о дУк ТуУК ОККО бу ЖЕО ХА ж же Б бхок ху МщБОХРОу Ж лу т ст ще во С їх люд ен ШО хо жагу и СИ и Тим и хуя Микол ких мує. Фк

ШИ 4аєадму АБО ла ЕМ СУХУ су щшжЖ ЖМХоО ГУК ОСЖА НПУ Ес шмх

БІ т за

Тим бло Фу дач ле ря іх ід а гу дуєєу Лу. Щі стоки дет Лу Ка.

Та Буш Жак ово Зі тварі дих Мах дж ліру дет ШУ дао ре п кі тв ще ян У ши те Ті ню ери и Ед А Во суду ті САЛА. ЗА Ж бу

Пежо оБед ди їимщі пех вало уні Хто дій ів о Внротмх Аа оУаХ ТРК ТМ по ЗУ пли с йо Талі іх ТЛ, ств ев у ши ню ув хх Фу луку УК и

М іа дих ПАЮ ОПІіа ака ба беп м ошуу спа СЛОВ ЮВОКМУ ХХ ш з Ую па вшЯ ча

Ам М КН штат жу и Іди МАО рон ХУ пор пики піп опіУ Тв о бжа Ма ТАК бай йзу ек те уза оч ши сум тт, ких КІ

ОМ ня всучотюя ФУВЛИИ

Тут ДдЕМОНОХУ

САНЯ пеки вили грім ик

БУКА шт Учищ Ос Й сим

ЖАХ ит ИМУЖДЕ ІЛ стул сет й хх мА ТІ ПОТУ ий ши УВІ мАих ОКА М, ХК

На НН плям і гуч бум бу ли ших Ех ЛЕ КК юЮЕ ЕЕ Ух з «с двух ЗИ

УК Ам. МУ сжіи хо сна плиту ій МАМА шия 0 Мовомцває син мое ря ож Мова ЛИШ ЛК НЛТУ

«иУ м шию НЯ чан азеннм і мі ЩО 17 я МНК БУГУ М А ЗУ КУПАЛА Лео

Аг 13 дну их стучно Медик фу Ір ух М піт вія Жуля хну. жд Ж ток уки

АЕРО Мая сУУЖ УК пк ошжу МІЖ ОїТпХ МУК о ХУтТ МлроБЕО беж ач Буш пек ї З 1 ї5 их ВІ ск її ях хі пий БЛОК ск ПілучиєчівіМ МіІХКМ. щетини «ши Цтучна морозах тнх дих моде ОСІ МО одеммдея Я овррдонуме ії пл МЮУ

ТТ Маю дЕТУЄЗ ММ дю сНЮ ПТ. «дийих сл пт гін кіщо ті Фуж тиж ю ЗХтхк иа ау Ми твід лом шах Маю хе аа шаф су лу мех лет Кшх

А З АХ кН чн

КУ гля

Кн чрлеу

ЖЕ Ж а и За Я сх пилхюдію ІМЗ і «мм г

ЖЖ ТУЯ Тула КЕ

Кл,

А

ШИТИ у ФІ Зіни хау УК садна тосім ІДХЮ ЗУ

ЛИЙ пес Уунвихв ТИ МУ жишитаив БТ, УЗ сятуя, де лаАпроз 155

БОБ Ак не Ши Ши Н пек слух ди М Юю Шити МТ у С то ху у и зїли тий за Валу чіт А ЖЕ Ж ЖАХ ж ККУ их Хна му о шує лит сих

І ту 15 15

Фіре Бе мо Тист Сім «Єцудо сть ст же ШЕУ Міф о йАе та шо Шишко лк

Тл дну. шеЖ і см СУв дБ ЖЕК ша Ку су ше да ІМ щед іа зи че чиї птахи тут Же о стаехя суху м Ті що сл ую деку Ми і тТдам Зк ба Тих зм тТУЮОУЖЮ СІМ ХІМ ж ДАО Шеллі шжухУ Ел п ю іржі ДВІ 3

Зо мо 5 чешу. Ло д итлу лужу тих у м Мах дим лю сбакю бу ожжу ФМ ув

ТУ БбЕл ху пу ді Лу ХХ Ер шуЖ Бак ОоКаК сук Ух ОМ ОКО сх

Бо -х ЯН . ЧНУ солдото сад хо дю МО жодум кю ма ж жи маш и Мі пен бив о БЗшИ йищ чаї тк хе опер шах Блев обме дек (УВО т тю ЕрнЕ

КЕ т Не ве бики Ж Хв т хх ня и Тих Ах п чне ННЯ г уко бю тлу

За б БшлоБец Зак бБає аа тбпу Зі діа дЕФ ТвВг мів Уві Тую Туш пу за Кк п зп Зх фе ідо ел Довж а ті ту Дж і шли Мт Лук о ву 211 пи ока: МЕ само ФМ Уа Ж шу АЖ АЖ у МБО АЕШ МУ БК лагу

Ух ие, ТЗ ке лм БА их и чи в нн и ННЯ

ОЗІЙ ОшАЮЮ МП ОМ ва ТмЖК Ол. ЖЕ ла 115 вдо

УЖЕ сут

ТУ БИ

ФВ ями птЖОК хегд дл МКУ ча ТЕСТИ, доліт

ХА пледи СЯ сліуни ПД дмаимнімоа ШИ ЛЕ жо СдМАМН С дІДЖТОЮМУО щМЖжила ма ши о. хау» ТА ди Шеюю сірою о б феую ІА дк ех Оіу Ук тТух ХЕрОшІу

У ї и та лих КОМИ. Мч «ТА І

УЖ ВН ом пер нн «кій» Штучна послюдовихсу в ож

Ока «ОК МИШІ дмсеах о ТО дракчеві в МО БЕ

Мох си лРую озерні НИхА дити иа Ж. Тих

Кия вне сб па

Хм Тл щу брате ідо пл ху. а тру суха сію Вт; Ус ліхує Тоахт; То ж

ЖІ» Ма вм БМК АВ ЗІ ОЙ К ОСкЗУ Ку о жУлуаавшнь нд су сакт; сум мах ї її г з х Е їз 1 мод ю ст

ТЕХ МТ Млл шлях, «з хх Хі пжстию ФУ, луки мл,

ЖК Ти Ех, х -е я пера ун ша Пекло ря суду кв «кій ШеУчма послідсвніее

ЖИМ

СІ ПЕОМ дже й дув ма Й 1 секле Сни вм Змооя шШнтижала ЕМО ій 15 я Ви ЛЕМ Тр» Бала бр (Дт 1 ж сдошж Те шім» дев МВІ ЇЗш їнм пк бе бі Пежо сувт БУХ щ г їх

Х їх МО ит тех че

ЕМ 13 тю, Б

КА КУ

УА МАНКИ

«лах 0 пАтдІ Мт Стих Уго ки

МЕОКНлнК МЕЛОУЧХ ВМО КРУК ДАК ТАНК Ко. ий

ЕЕ ю Здктл и кс іиия татаум.- ЖК Й ссдетуиттст око НО хх «роми я РУКУ ЄТЮ Мня ОЗЛуНМНеЯр; КИ. Й кох Б

МКУ ах й; ЩюутО жу Тем тат тая бук пілу ли лю тал ух т за тич: юю пою (Зі бенх плм Обл дж сХу БЕЗ ОБІУ до УкТ Му кто бзх бів - 2 а: Ух

ТИПОМ АКОТ ЗУЖ МАЯ уп цех само шАЖ шли зАшж ОК, М те сек ще Б де ж Зк паюеосбмдирвоптяшє течі ЖУРІаР тт ло Ж; пі ит Шух: ЛУ пиво бук зх ам о БУЖ ЖУуТ дю Ку ЖшМ От АТ МАЛО ДО КО жу мух бдо вяМмостЕм

Бе 40 ЕН пон тах пл ло де аж кухар ух Тежу ях ку Му лу Прзую А шу Ми Вр тео Ке ла Ав лі тую тую вт у век ТВЕ тТук Тут йвт Еко ше

І 5 ви їі їмо іх Кут злу дк лю и АЛ ОС УуМ бр ха дао аю ми іш бу с МДОУ ЖОВХ Я ошасй Увпі ВЗролт ек пу ВОЮ СМТ гБтнй ви ККУ Му Б

Фкемо Тим їм тлу, шко бюємо ХЛ б що Ту йому і 11 Ді МО ста Ту ла ім Куд о оянйМм о легд А ю. хсюМ п во вал у п АВ ОохВКОотТуУК КуХ трх: цех ня п ХМ НУ йкич о Щі да ших вх Ма бе самі ім бі и ша мА р лЛюмає р сСжз о йпаш ах ти Ал Уда пеє димі пу САМ обл лек Ас о лНпХУ суд паду

КИ тІхм чїй

КОС хм не

Мара те спіую о Її «гл. кю Хм маша бе штору ж дам о МЕКА СЮ ма миро шу

ВІВ Ще шт їх, чи зе Дт кл силі я «сих ОБЕНСЮЕ я швучна поблпОлашністшь тує ями кт тух, хе Мі им АТУТ Я днини йо з свй М сСИкеві аж йлу защевол МОЗ. ах З

МИ ло

Фів во Дозу ХИВИ рр ек бу ПИ, івт о левт дей Ту гшш хм обу х к, ї 5 и НН с 15 туту, пе

АВ ДНО шля они жу і гирі и, пуд п пулмциа МЛС Ух «их шетмти ух 0 ЖИМ Я. доми ТУ иа ва та хе ОНИ діва свита на мух

Му НБеКИ чн нн но не вн в НН В НН

Зввотіє тех тек оте бу ек о тВвх тує тує АвпоккО мек бзо Суш пе Е 1 г. а зу кожртовх Усі пли У пуд лі

ШАТИ сту. ж ми

ОЗ УА,

ПИЛ хо о

АКА ЗСЖ чи ІММОМІ ОТ о уки те повені аптиіпидуй зварена ня НК ши и пет я жу

Ше фу в и б пре лін роках тих Тих туш В и ЖЕ ХИВМОМАМУ за у шу М МЕ : х, ее х о НЕ

«тя ах иа ДВ пт Зк

УА ек лижі МпАЖИЖ, тю ах плита. зи й суди «кій ги чна Уміє а туту ших слу Тип іма мим саги ТКК сзшгуєтами вчи ОО «ши УНЗОоблатть лМмеАЗСМИБЯ антлжал МОСТУ «НМ» 140 птах ху щум м жі Ву. Шлуюх ТЛ ї15 їі ТТ хе бок ЦІ Ти Шум 3 ух ім отак бал ом са За лає пАу Кк! обі їлюю Ма БМтЩ Жто ех ЗВІД 3 5 1 15 тю Бе лійм ос фах, Мо бно Чу га Пе се фа палу сто ші му ме

Тпхж о бе; веж о фомо б пуд о талоУ «з Бех їх ВУ ошАм хи са й Ж МИТ.

ХВ т Зх щу міни о Цім о спшму,; КТ с: ленту. Улеуу ее ті їв Шик Іі; Ж ПАХ ТД пл пЕЩОТУХ ПА ХХХ ПАХ ХХ лож КО МАМО ОКХ тт УМ мутоскуУ дийд бМа т дм дз п С 32 он и и и нь ни о а на на а о Зиу сштронячя МАУ їм БА КАЖЕ Зух ТвЕ Олі У я ОКИаКОКА дух пли ко ох по ла вх тод до т пост З рую ж ую до Мих мує юю Хм и гу р має пУЖЖ САУ Вжщ о Уша шМлЖ ле жит Узі бузи Зак обу з»уш ши бід Бле пос Ех з й-х сх СУ НО е тео без їв Тем Се су а ть хтш й ле Ву дід ві брюк чу

ПЕЖО дім) мущшо мсМм дих жу жах Ве дів Віа АЕВ ТВ Ліз Уа тух Тух ди ча чи ок те м Лу її й М жі ре Ву м ші мк о щур зи би 1 ху пут Кіз Вко бій йо Уві Її цез ко Бі ШУ БеЕ мЗв обух Тхю сі ду ЕК пат ошіо сти ми ЗХ их З перех пібосккУу ТМ пзеуг чаї тТмйх Уа Шет ех

Гн ах о чЕТіх мери ная и ня «ВУ Бтучна послі мажнтшутх «МОУ т сут джеми вит си МІ, Й «й СОМ вишами авнемжла КОМИ, соди, ярок

КІМ ДК дови опееюо Фуко оз ші м сб у дво бех вх УЮ Нхж Ххросхіх я с. лай 4 лю ке вени КУ понос КН пд ЛЕ сл іх ее пи тує Ко скали ШТУЧНА ІІ УДОВНА тю х ве и

Кук ТИЖ ОЦІ семи сумчиал ід ЗБК чих СПА еНо шаную самзиеилама БУМ мг под ль дошеит ТОК ту тину ую ил Сину Ту я лах ли ошурки дом Ту Ти у ву МАО ОшЖУуХ КМТ ОТИКошАУ УЖ КМЛХУ УЖ Мух вж БИ пПппу зхМм о муж у й х ния хї

Що о Ми Ал ж я сек. 153 шк Іщ пл У шЕМи БЕЛЯК ил 0 ауд чу ми в

УА Шут теУШЛХИОВ ЕЕ «ЛУСТУМ

АЙ

«шия ЦІНУ анеаегМ оо ашуиша а КЗ и или Ах

АТМ МІХ пліт дек паї ті Тему ДУ і щі ім Аж у дл ий Упі Ал ем о АЛИК ЛА їі Уу шли Ху

У г чи їх. Мч Ам

БУК, ід шк сьо Мску чаю жУМИАНС «дя М без Псеччжетв ЕВ ех би,

КУ Ше ня пучка песня лит «Лях км

ШАНИ КЕ се петедм дм До сліпу мч Мо (Ж ши СУнесшлауть алтея мих антумувла тут. Я «АПОв А ня паї мін тем п пер шк Фк йти тм Задора ее ким хілі Мило дз Мед ої ме ше ау тує тлу осяма жах опа о КЕЙ п сам я ще 4 А

Че. раху: Фтм боиглу іж інчрк, Ме В а р и а Ту м т о

Тахо їн пе за ж Му тбпхХ УЖза деж щу сам пе ле шодо ВК пмХ де У Є п -к лид

С «У в йому; бак азу лу ЗУ от ию учик у дини учи ПИ КЕ тю КК ото ЙТИ іш тУкОоКЕу ХМ зЗім ТІВ оо вла сум го РКО су дув САМ Бе май тк зх те

В 45 о оч о же деку бю ди її» мак Он ЗИ рає Чіхи фюхоау дія Ма

Кк» ТМ ПА дар оїїіФ баб отук вка бУ Жак отвх Жук ТУуК ей Буш БЕ кх до ще

ГУя и їх що хм Тут Це фо Мило скии ті бруду Ка балом фм п; ШЕ їши Сув пихх Вхо У Тих Ті БЕЗ УЩї Авро Ту дек обу вим ша Кп мя ли А Кп шує жор тик і дюро пажше й тд се міо ЩІ доші лежу пут холку пе пе ма МУ о їдМНе МмЕХ ше же гвЖ важиш АВ АЛХ Млл УВА МУТ ГТУЄ ща Фа За ен НН я «аю мл тонах дж І: ХУ Фу Ху пліж е о

Еш од ВЕ ом схо У МА АЮ ТУТ Ку му й ло МУТО гКМ о мАУ

УПА чу ух ши кр ТАМ Хом Ім Тен о жо п

І ше МІТЕ УЕМО КК ЛО дл чт их ок, ко

НН ГЕ ше фртух ках шт з «шо В плрксух дя «ит БЛОК дя Фірлзтату цім чик рин В та, пи хдмшутнаЗ КУЛОН ОЛИВ «і ТЕНТИ коти КТ о с еватиат я, ша их

ТЕЖ СИК-мі дити пвоЗ антутіла БУ, и «пом ЦІ зак о жжЕ плу Жук тек ТКвоку ке 4 ес НИШНЧКЯ Й пеАМя іх сх, НЕ мол ХК «Его ЖІНОК ших Треххдітих опти гри вка нос, м ОЦеРУЧчНІя Ло лОоВМА Ця

ММ в ди СМ сзипледйй сзмчімті пл о «ШЕ ІА еНХ пане зиритіци пи 485 тату уд

Аа 14 дхмжи Тл ою сбзкр онемо чне пеіую М дан й хе - к м

Ажшу Те луцу спе др І су Ох пику ін Мт Шегу Жили Ти тихих

ТУЯ Те овал Уолт ому паж о лпеозшК ух ли во лад сте пумолих « й 15 хх х зі те НЕ сту, тат . піки М

КО я «Кік» хі до Пеезичема гумі ому Я ся о Штучна пошле амі сх тку

ЧИХ пт ту. деяке ти їй дюни нх Ма яд сук аю єцо Ел е міЛ ЖИТІ КЯ, ХВ

Не НУ

ХК? А: пу тд ха аю че ши клея шо ТВ уже зЗзій джроУні Ха би лк зом ку Бак двюЕ Тух ї ц їй

Кт 3 ду хи ож

ДМ лою РК слух шоб лим ех ОБІЛЮХ - Перенаітя рими тд і

ПАХ ЖУТЬ ТРІСК ЩИТ АКУЛ

СЕ пе чн и А и НН вита ХЕ Н А ЕК НТУ ил УмиМ УКуЛУЄТСМЯМа пит. лУХ «АТМ 145

КИ пді реостат ша. лі грн РАХ тий ЗЯщО тлу ЕЕ Віз 1 шал мах сало сйУ Кал шпем ою шу БА Ам МшпМ с УЩМ АУМО КБАХИ ІМВУ лу 4 т. зх и

КУ т У М тром два от Тік. Уж фут ко щої едикт до ду

Жву мем ляже ОХ лий ХВ о Мві п бів слу сіж аа буку лу пех то В її тих жує ри и пт тк, ри ж І фену Щит: 014» їди зар й

Вяж ух МНЕ ря пеу ЯЖро МА сш сій жо ВО Фо Бузв СА хар Оп пу зй 45 пед Слово; дамхт у гли ую тку сах ру, і паю вує Худ Фету; у аж лу А АЖ ДУХ ЗБЕ мл о сбзуу лах ких юю СУХУ ЮЖте щ що КЦ. ко тет їх п Мч ля тр т підт Р йду і дж Ким дош ко мех ву ЗКУ ЛИ Укр ЖМЕ дове мя мі. УТ РПЖО Є ЗМИЖ ЛУКТІ пра опде ще т тя, па вчи пе ик Не і ою хЩ мезо Вл А іл Ман У т, роли ОК де ДНІ Буш се ММ ОСА Мало сжМи Ап а ВВ Ме Аля жо тк Ух пт сх р

Кх - Я пк НИКИ ит з Док ЗИМ. Жост іх лим Ка кожи ик ку у Ти був АМма Же Плов до. Ко Бей ТЯ У Оу ЕМ дер ух Тв о шуу тлх тк З л

БО МІХ хо попу. флокс двух ЖЕ рум и ук ки йпемзо шу У суму сл жа аХ омвМ шоу т я

Ах їм шт Та кажи ОА «о що Нермеурвою зим ИН Мі Не «Ех Перу чеиюх змал дама ле

БИКаииЯ их ХИМАННІ шнтиЗигЬа Батитуль Бл, ЗХ

Капо ТЯ з п зм руди КЕ де спря ОК

Зято шах ВУ тк ка Торо гу ї п

Ко ху ха лАМ МІ лк, як лою А хе мА пвх 0 прахлрту лет тт врі

ХОМУТ ше чИМА БІЛІ ДІМА МИТІ гля

КК СУМ діяло й помад ія мо щі «Ж ССОКеНя анвжиазоБоа витатхна Бл шій БИ ком МлМ

Ха Ж рт спзую СКуги ие Мік тож ви тю прик лк Ми и їм Б я

ЛУ у уут лук тп су сем свпюкотУЮ Бут ловтль шко ше ВК пе ау ч п ій ця

Кя х а че вАчНКЯ зх ищАМА моя

КН ВИШ

ХАІ М пр ле «уп ВІЛОК. шОВЛ ТИМ реак зе ни гу

ФЕМ Броучнх полі довмі ги ке лАННЯ чужі схаснин їМТ.Д пеггдмнн АПУ,

ЕМ МЕНЯ антена шнтишіяа КОВО «апр 152 пічповаш мМ те сід Му і щує пек зе оТоє ш Мощі І Ком му Му му шек му кує хи МЕ ІТК Х.

ЯК ДО їхх. «йти БІЛОЮ Я я ПКУ ТИЦІ МУ шик

Ка ши

СТУ 0 Литі пепямя жа ШОВ я жКкустТИЛуМ м АВМ ІЙ ЛУ. ДІТКИ шлю «о КО тал си - ойИть 0 рт одн БИ о ую Да тт суда ХЛ бояр діаєло гу МИЛІ пал Уа сіб сей ша бій ощех шум Без бду демо з ух бо фет о ср й х 1 15 зльж інд «маш а пе ОоМпУМ Гм ад ше Му схІМ бах 10 Лео шМмиЄ ле

ХО ши и шфкомо струс уми оЧіеу: ті бут: лог дю Її Ки бу бе и Тит І То р пи ох ут ШТромАМ ЯХу КМ АЖ пал ОХ ЕТО жМ дув АЮ ЛУКИ ОЯКАТ за зи 35 пі ік ую дому; Та са ху их Журн о п ау пе ие Спа Стхує Дж ко й

ГМО сим РАЖуА РМ гупОшя БАУу чех смт Ту чух ие кла ляж по гу В

Фалло Муха дит ХА лиж де ки 1 Ши Сей лу тк КІЛ ку пк їжа Муз Зеу Атсл Чай ХВ лі о Веву Улі Блю Ат бат ШУ дв ЦО Ошце ря чих тва пох їБУ Ух На й

Фі То бе Тжую ую мо УК мух ідо Ще дод р ХА чу тую шк озти озум мем жа жну хо пс омав ад ов би ла жах МУуХ тус ох. 5 гтутй дтп ті тва кА піди Тед тв пулу ях ля ож; ток ік су вів поч ос жу Уа ожко ін пху МАУ У йАла Ар ле КхЮ. ЗМУ хе НЕ 1

М їщО 1 ші їі сфрюи Човді АВ СТвИиЄ тай ше пет шавоСІМ ЖжМмЖ бер о УЖЕ Те Зах пехо Бех че Бач

КД Ж оду че «ЕЛ» АЛІ

ЖИ : «тм плоти

ДИ. ТУЕЛОВ

Ж пря чвя попи еловнаеи

Сл ки ел УДО одіаттЇИ М діншкі до У Ще мий ХК ШОУ. АТОМИ Х НІХ МОЙ. МУ

ЧИ» М пря ау у дім о пАкя тує Й С

Зет яшма оку о к'то ку Є

ПДК МП сиМУук о А

СТА М па прю Іл стік тт м и ку, жи ІЮи шт УМІЮ гудумІ ОВК ит

Маг чут ен а НЯ хай СлдАенО анти свя вижитаия М. ет чт пил Кене

Мао Ж дує менаю Мих Ку. 1 ху. мем М фуИю готую км дя Ши дош тоди ож дя

ЕФ ЖОВ тут Жул жид обу ам лах осую хут МИ жтоО ся ал Му кл Х слух, чиЕц дя ВО ДЛ

Емі 1Х док попи кит БАН очне НІ зт и пис Мр ус, нь шт чнІ гилоелуютовх ціх тра ду ТУ ЦО седан ПТО пуродчкі сім 5. КЕ їй СЕЗ На анптисиМо вита КО, е

Кутя ЩЕ запи 35 пра ст, що шт ім іх; м і дя дл пок ша ми у жа. ЖЕ ШИХ СОММ Аа у му КОЛЕ цу

Н З Ти ««Утрю АД зі шжчИ КУ

НЯ по

СОВА Я ил ІНОЕ: ям А 0 БВ ЗШ ТТА ЛУК ЛУ»

М уТИ я

СО и Не НН или Хи-сопцалтть вилив автитійа БІ, сиг поводу «еВ пл пір одкня їе томи ігр шт й плех їміу аю теп лев тая фену ую під о мв3 опіхй їн бів паб о пі Бу ще ВИК МЖК, лм ЕЯЛО ЇЖА АЛІ : ва то їх тою стояли т ху: ЛАМИ сля рію ЧО суду МЛМ ТР Зх дУт дих Мине спиш

Тв обмма ето) ЖЕ пу о жнк Ус пет бу пу ех рій ее 0еуУ Щек тут у У и ОЗ ож піду Тіт стаю ру гід) сут Ж дет: МУ Би, Фет; Фу туя о б п йПеу Жук Тут те піу хжю бле АКУ Бій же Без Зі Му шб у люмйо сх 15 А перу сте Ви т су бери кю пу шк у Мекку ши леж, шк хКвошіФ сю ж ба ух лк УМХ ЗІ Щек Тех о Хух Тут деп оту ах па зді це ши М У хват ост пай вдо Шо Мета тв, рин ху дві вв осли біо Марк зу вх о Ммуд сш дод за ЛЕ АЖ шяК І ОосАВи ЧО СХ мушок сад и па пе Б

Ше й їм ше Пе Зам ЧІ сне Вів Аза они ТВО АК ві тую те щої Ту ту вх во ЗУ пт ідо щуж дохо лиц лох Мк т з туя си Ки тк Ток т пл па Вл вхо ій Аїв іні Від Ме сіу У пі шЖек о бпроМуй Тл БАУ уд в зи

МА А МО КМ

Фріяя Птах у їла Жде бує хи пиво бю пп душ АБЕ Ома має їмо Удх хх КЕ

ТУ ту пух я «дім ХУ; теща сю плей ши а длАМ

АМКУ поля ЛИ МДУ ях еле я

МмихО я шу ту спади ТИХ Ж дізідитоі сни ПВ ОА

ЛИХ МмемхміІкі зпЕМпУмт у еЮ ЛІДИТИРИТНх КВ. М 2 под ш ук К ії пшу те шин Мату у мух г пах лай лек ух ут тлу пу ц х -ВІійх еп ті Але «гі: 15 жі ит, др ипеме шиї МЕНО хо 0 ЛІЖУТюМИ. УМОЛЛАЛИКУ ВЕК ІИХ

СИЛ ит ФОР. ВИМ. фани У МОТО замети що жили ТАН ННХ хати я шехевала УТ ча» ке 2 КІ те боти ту с. ой т уую т М м Пи Шлях Тит, Є Си - кт Зло ТУ х ; ли ше пу бух спо Ду у мето Ту Бр Живе вро хуя МА оуло ху сбюру ле ОКХ ух дут увт што сли шу БЕЖ ОСливЕ ї « ми хо щ

Н Я 15 15 их ЗЕ яки ОО АТИТ

Ат Ж «УЛ шт

Фе Сфою Медуо п п Вм

АЮ 0 Мудутжни пОеспАдОоМнлуиут кг

Синя РИ. дерпцее му ой перттмичії са БО

ХЕ ПОБ-НО зіпщейі знтитіла У; сала ха ве

У г чн шен ул З л « піт й тан Мі мит (із широ щі лиж Дах ек

Мі ЯКО АлАТ САЛІ УЖ їі мон у шу ЄМ УЮ ух 1 г хх х ю ІН пкт рн вжи не Ки жа 35:

ПЕКИ Ма ї пс теки «Ми БІ лиш АВ Шджуня ллАДУВНЛ тиж полу Ме едчвмімвх мур й перемі м и т «й МН ласувь мані ветижае ШВИ «ах шо

У УКЕХ ши прі це філ. фах Мр тт педа ЛЮ чу тлу тім Зими т хи ех дм ше УК да ЕМ хіт с ледК А у Ж зм км М АУБ мА ВД : ц Б як, чере Тоецрь рили Жак фр те Тв й кате т ік их т щі Фев щу сиЖ їй чт му ІМПжОоСУВ уУ мА жшК шу МАМ сяЖ ЛАЄ ЗОМ спЖ ому

МИ п Зп те уч Стіни Мед ув нити жа шт, тла би 11 у бміу ди тачку М ст игту. ТИ Ку пт УТ ГУД ОККИ ху АЮ лдІШ лЛЖУ МАР КБиО КЕ СВК КУМ ОМУ Б'ям чі

АТ Кк їх

ЗА чи я

Же тт пл дю бюд Ж дю чім фуру МУК ТІ дв вки імнат Тут М Ми Бі

Три літо АУ Апт де хХух ру квж сбду ХХ ЧУБ Щдук ту МЕ БУХ пФ и туї п т Фе пе бу ЛЕМ Мед Же ше ЛО хи ма фо гео й й. й бли смУуй ше овЕщоУм ол АФ шу і ТУ лк Оошак о гм ВА СТІЛ ТЛ у Не Го: Ба самця оп ту Соатиа д и зн Не нн о З ВАННЯ г асан

ПОМ АЖ їх зем лико сс ж их мл а АЖЮ КОХ БІД ОХ Тех ху м щи ЗЕ и но нон нн НЕ ВІН НК док тлу тА, Фо му плн рити Тр

Ж Аіа АТ Мамо 0Вр Ул щік ана ЖК Оу БМ жало во лу СБК Обл У их ат ту ще що ТЛ ів дк ум и лід В их гоп

Мамоїаьм лак пеМ УА УлХ я пад лах дп луги

АХ ки тут, п «яму шк

Се: ее Е шк пот пучи яд ЯМІНОК ло АЄЯ ходузлана ТАЛА ЛИХ СИ кпк

ЛИ

ПТС, ТМ їх дети ями пт ех х сих ПІКУ НУ шнижисмума знлюжани КЗ, касок мих кеку «ем би дю ах МЖК бо КТК ие Уж еВ КУЮ ШМК у я п 1 Б. ин, Од шко тих 18 хиТйх ВІНОК ли пжУчМма пен девиа сти «ги секту», КЕ Я сх ке, ДІКА піаєтейт тити Мур

АЮ Кл. ет сл ЛЮКИ МН ПОЛЕ. ОТ стату тот вача шх дит ті зихут пд рі пт Срруєє МК мо Жук сви дл грі, щу Жишво Том строю вади 4Оаж ул ОкуЖО жМЯ медом вихо сКуХ ут кт тло пехосижи лм ду

І хх и АТ нку, лож жи КИ. КА «дм ВІЛОх

ЖАШМХ Мод ум ТРУКУИА ТИВ А КТК. жи муль УТІЖЩК. МОВ сдедиисиртию БЕЖ ОМ схтуинтя чи хо Фо

ТЯ сен ситизі мий двититіла Я «пл 183

ФЕраю Ще ху УТ ках док ит фу ши сг ТА мА ЇМ ждА МАЛЕ ОРИЖМ АЛЛУ Ам сбВМУу ледд лІБОКух

Н їх Ай хх тий хи схо пока НЕК

АЛ ТА пику за тлігих ких ВІНОК пли Шненна посла днів. тджии «ЕМО УуМнонаолю смавме охої видала ШВА них «Ж рЯЗННОУ НЕ пз: мА сім том ла У миє тк піч ТТ Ждшту Леди боки фу пря их п ад М шт М ХЕ і Ю ОБЕШ ШМ ОМА ХОМ СИ ЕТАТА ОВК Тх

М ОЗ вч їУ чірги сті х и Ту сйжюр плтуг фра ЩІ ик Оу жука мо тю су шо им

ТБ ев Ше фига АЖ Имя ТИХ тю (ОХ, жо у шт. МАО КК ЛИМ ХУ х ни ня ня я. же їй «дя сраку бик рю Ж Му Чі Ж дю думи и ау дей: тк Ту юю тах я шко Ин ни же зи дани МО п Не А р м я В з и п ЕК ню М З

Зх п п

У о о ти ж сс; Євр те стю боро Ще ша ткож Ддаге при т йши свої слу ВБЗрОоТІе тує хую ТБ БІУ Бак отак ТУЮ Жух Лат о Бко о пею кл щи: ме тон тео Шуую ючи ХИщО бю жу 3 ЛОЮ яку рію гу води пов п м еп ув о бек ВКо Уві ТК ла Сех УЗХ Азов отих ехо зу пат шал КБе па За тп Еї

НЯ То о ки чи нин в НН и КН а нн в НО НН щеЕаж ЕМ шу шм маЖК шех ва дуг Ма таВЄІ ЯКО ХНХ йпІіВ УВА шюЮОТуХ пк т ри

М щх як пбішо духу що ста дозу су лоша уж; пд лоти щи Мом ху пря 1 хх

Ше н О УАА ВІЛ 2АШТ» УК ЛА БЖД БО йу малу снЖ пу фгукоклютаУу пе зи так

М їла МК піп осаж ах їм мах тТйхомай меж Мах 115 ту

ЗБ тих п - «й1Ух 7 шах ШУЙ ми ЛОЮ

ТУ дилему сек хрі я

Он ви туз посллдзильня те

Со чими она УСТИМ. ЩО осях ШТ р тиви кни ла

Жідшжн шиБ-Ка ант авЯа дети жала ЕДК.1е «АК: ІВ прим СХ Юні сти Ср ге

З ет лак оВИих Кут жуків ооху ших КК ши ОАЕ їі хе плютж дили «шМИиле. МІ ОК шо підатухтт педа ЗУ т типо ру удня ТНХЛА ДИ НЛО

Комети ля МУ пила тим ТОМИ вади ни і вах і па 1

УА Ак ен ни ва о жУТІ Юм оютью екю М «ах 155 хв т шо унія ла Мф пт жає Аж дн Мехит. Дурі ІМК Пп Стор о ше па МЕ Ух отрут фпжЖомАу БЖ СХХ АУЖОТтуд АР КЛЮЄ душу АЛ ОМУщЖ ЗТ план їд7 ке 4

З Аз стук я, пери «вій ВІК шити Мем мой зрив икї ик р Ух вини Пе лжвця ТИХО ЛУ ДОВІВ ГУЄ тк».

УТ ван шт СІЧ их й хи юкі ни ЩО 1 пали СІМКА сперма Мо стнжижхпа М, кох их

М МЕ: по дюпту ЗИ тів фрукт Шоу як пе ож мл. дош мопс су шоу шлХ о БарОоОсує ї «, я х т Во «Ам ее

ШТ ря 1

АЖ їхКА шою ПАМ «г же Цовучна послудсвнасть пух

ХМ ен НН птн КО И хОІШТ Зоб длоть смт: антені ма ВЗ. ясайох ве шт у дещо су по Мр у ам ІМ у пл т ОА дм гу ша ко ах п Же бло сам» Пі Ума яд ПІУ Кто пу їмо Уві Муз Бхо пед ПЛИ і Кк та 1 інн Ст, ро нн пику стю Мн пи МЕ и МА Ктнучує ті Ср сік ру тп оїмна мат Фа БТЗзХх ост уйх лі бят бзію ші бер опіє бе де ех

Й В я

Фарм бою біуує Чиж ті тля вугор дхк Моалу фс ми; от стем гу. Та І зако ЖЖ Чт МАУ ЖЕ КІ ля СЛ КуоО шт пл Вуж мам ляплоуМуц кое а т пе сх У Фа у дю бр ния с шу ЯМ ех тлу є Дохю фури ув тя Ка бу БЕ ХА Лу ЖЕ ожнптІ Вам Вел чих от гук суша ЕКО ЗЕ пл - ши я ах ши тд дит Зм Кер у тео ще ні ой Жню йти изд ов сі шк їшех ЯЗууо сМмаЖ ДЖ УК Ж ож ЇМКУ бл свт поему тео шаг. смла ще Чиух т, йо

У а ТУ то

Фк Лат тбожкю оч у дю ОК у ев ов Ша на ня

Хек оїми Був без о йпех бЗаж таі тк Аза Аа Авр тТБх пів що тую ух

ЕЕ ЩІ жа узи у заст ТЗ з ушу кдщою жа ла. у М Тіз и ду пк ку

ПЕВ АЛ Ач Ве УДО Хе фс АД жу су ЗжУ люк шкр ому дип ту о

Ще їп5 їі пе, КІ своп Жду ЗО жо ЛК ро Дік ол шу СХ Св ж СХ ТюК о М ие хх зок НІ ох я «тм ТЕ

Ам Мт «ЕЕ у «гів ОВЖНОЮЄ шив уу Италии дитин

ЖАВ Мед У щМмЕ ДИЛИ ЛІМІТ хх, пеуушеМКІ поше ек ання ії м В, З щих 00 хек ху сімюхих ЛУКА ЛІ лою ЮЛ вени КУ г Фе Зі М'юи мо Ям тку ШИ г шпжюжЖ иБу пап їх мух О УМО лу ій к, «сили 17 ач : чкії» Т15 клю тух йотллує. дж их ОБР К нах ПИШУ ТИНОМ ТВ тут ср тух он КН ННЯ ший СшБеЯИ даеиен шасі да ЩО Оля

СН з зеукіи ко

Мвт ів тую ту Чнж йл у деж тр бек тов одні туФфолаєю мит бо дви гум г. УЖ Мут ахж скЗу «пх оз умі гмломни ма платю лит поп

І В їй ї5 ня тт кА Кк

Кох з чат Ох кр у, порт «жк вІЛИК х Проти тії ее

ЗА я ХЕМСДІНХ БІДНИМ УК я Утух

ХО щ підуть слані КНТ оеіхаі зу КОТИ «ши СІМ НО антиеКНо снтитіпа ЗО для 17 хм КА мл Хежю 2 бух уж. Круг ому Демко бик щЕЕО Уа бле а ть Су су шк ЕТ БУХ з 5 ї2 пис т лох М чу

І Ше

СОННе Ви влити уп шк КУЄ «ТІ дум ня склі пов лтуть «а Сю

ЧИЖ ще х : шу чих

УееНеи тд пен. фам а 3, т ех Не сблаоув антиебоМа Фднтмжлля ТИВ. сагую То сагцух ТТЕ г - хз чудо зиих Ж і х з і сон лох Мету аю кг у я -щ Мал тиж ес ох; БО пами удо біб Пец бій пило пах пЗіУ БуО ви бен Увло мує Бк бал УЗ й й не 3 о М хз ге з хе . ге я Ка до до люд ух тво бем о шед бУши бИх лоб у Ма дшу У (у лу гів бю Зсек Бор ско гемо Шех їуши ТИ -Мш Ол шлю ЄУ У фу УМ А ХО п пк и з хе тк три ще тт гів'одаЕм Щі ргИй бе ШОУ Бр (с іямй ПІВ

Вип отек бує Тию Ху Ер зе Ак спав о Кжа бис пхю Му сш із піп

ДІМ ОЮТЕО У ї і; ІЗ З ;

АХ аг ав

Ж вже ЕВ

Ву Ти ях т т л. сиюофФфлу зу Дох МУ віє хи ем ми. ха тЕжЕ Її м АВ ї18а йшиа тТУк овларо діє да п»х ху їУК ЕЛ КЕО хеХ

ТжКЕ Обі сум пр дв ШО УК вро сіУ па іп хУХ су із

І ло шо

Я уко т БУ яко слу хі бок ту си Пе шим муж вс у дО Ох УЖ У.О еВ СК иНЖХ МУФТ хм

Е я Що ї що ок, п ПИ ТО Би

Я НЕ ЕЯ вн ч зву, пен и Ан

СУЧН ож Же ша дак о Миї бу ій ойід дао ну Ва а бод ту дал ЛИВО у Камо я ло Ула АР схід овоч МОЮ ХК ТЮК х. Х Ми

Й БУ п ах т З

2 йшов 313 й А ща А тщії Іі па шию М кує т, пан

Пежо Ав ЖЕКи С АКА Хвала гц пі ім ше Мій Фси гад спи щу пу але ко Сі АМа хяі і рез бі ВіУ шк йіс Блю обаю тТуве шу еп тп тах

Її А й гм ил У зе МД. п АКА ЛО Що ше меті ся. Хе ж лі ж ЛюМ лЛУйК лей т чт

Ж хи «ЕІ РІЗ не ч жди ? «812 ВІЛОК жа МЕБузна посла дежиУстЕ «ФИШКХ нути. тр о мирі К ТИЙ сі моадев ія пболи ле СМ: дра егмо В витменла КО. В часах 173 ші пу док є уую фо жу КЛІ

Каж бек лева тую бує тет у кул поча я я шко Ох ту ут за ли кар ЗМК из их ІДУ ІОИЛЛЛ уд Хо

СИХ

ЄТУТУ Ех УТІК сту УТ рег кис ИЙ СУ «ВКА» ПШИШВеДО дхеМЦію хнетмтзика ВОК ат рій ке де тя нн о не нн ни о но ШИ о ШО

ТМ а й УЖ мм яма ЛОКК ОУшХ и. ХМ ям ил зу МАХ 4 ц КИ тц щу У Ко їй яшлх лу ши КІ

Кен Я п дя, пк «там ВІК

ККУ фірмі таж В туя ник чел шу чни пло хдОиютЕ «щи

Є СИ ти ДДАІ петля То демо сот ПОЗ

Ер ШИМИ ел пОЕн мах ЗДНТИШАла пп єю сани У пз дош мі їла ху А ПЕ ОА З лу дО паж Або ма Бій пас сфу Бі ШЕ Аз Клро да х ТУ ТЗ

НПМ тк

ЦИМ АЮ

Мене ясул хи ких

ВІЙ ВІНИК пк дню иа вт І ша ж ММ ПЛ ЛИН МОШТ

ФЕйИх еле п ит Муки сюжет поиск КИ пп «Еш Уест вмшКоУЮІлЛую ви жіля ВВ.1Е поштутух ше» лог бедох с(ш у тоцут мо лі кої кі 1 Ат р адят Н ера ож; Фаємо па ММ іл де пал ій олЕх СУ Бхо У Їде: Чі Буж Жто Мпех ри 7 І ах п

Х ї Мо ах бЧекок ту ша Тиси Стат для Мк СТА Ссспудуяє ЕЙ т лю дк СТА шлю дум Тк

ЄРИМО МашМУ ЦВК о сир КТ Оу, Ж ма МажЖ сн шу УЖТО ФМ ЛИВЖ МЕЖ О.Є сп -ц Бе и ШО 4 юр Спр сяк ж жт ху меру Млин ну ЖІ, бите ст талі пеКосую їук тжрвосиу Тра біш Же са БІ жо лу ЗМ Оп У Бий Зі

ШЕ и А пут т Ті Деу тів опх зищим о Ж із од Я и йихує сб і их ик їх жів о зКш Ащтх Хі о йзи пк жін СіУ дах ЗБ тую їх Ай МЕ дю ціх пут, що укл Хо ложе дя м лю Ко Пи ДК жу о мримо я Же м ру дих

ЇнБдосугжо шен дже Мак о тТМмто би пех Хві зр отвкх Бах Був дал о сдМм Мт а ща п пи

Яке Те но

Єего Жуки сб Жолоб дує м фу Мр ло лу у щі їмо му плує

Ох Ка ма боб пих пет суда Мбвх бій Міз Аву. ТВУ Віз Уві ЖЕК тує п чи хе

Уени М Мод КА Ж яю хо бю ДТ тя «ху І М М Фуко Мн МОУ

Ме їх щ АЛ бра б. ХІМ Дак ОГЄ Згу Яблю ше дя тмвуИ лив ЖК Оу

КІН пох лю жх ак Еко. Ку «аж ту ще їі М ри У у и

САМ ОСІ М СУЦрО зшжиХ жаб: ДК. УА МО КМ

МА Ен сх т, 7 шию пут ой «ЖИ ОБІТУК «ФА И бшучна талі мовна сть лих ел ух, М І.. Р ослужитси ЇМО. пуд Я ну МУ ви пил зи шкУБАМЯ ДМмУРВА ЛЕ жим шал 47

Ку Ах йеу ЗІМ о Жат тух ХжЕ ВЕБОСІТЄ у Рея

З З ень пух чк т, кт теїй ОКЛИЖ ау щтумниа било Коха т ти, сухі ТЖЕО В птн ем й м ТИЛУ и. чаша СИА-ВХ влтиним взититили БВОХЕ ри тя ми ке

Що ХУ шо Ма бю то ди ну туя Ту Мік Мово Мих вх он зу шаку влЕлашо Ли Сеу МА пам Ве УК Кк Ух ЕТ БЕОб сшж ад) Буш Лех ї с т НЕ шт ітгц лих хх шлюзу ЗЕ пі

МУ аТля НАУ кад ЧУМА ПОЛА Дт «Еш шля ТМ ля жим. ОК: діт їх 1 мо

ЛЕТИ МАЙЯ ЩІ ОДІБТУтТНЯ БАК Т ІБ ге. газу Ул хЯМтИ 11 йМмтью м от дл, м ТУ МИ Из и А дн ну шАОМІЩ щи лей ТИТА уУ ШЕУ маАУ Біо лВУ: лох

Щ т У у ум ШК длпіМма ОО АШЕ «сю 10

ТАК кА друк пли жи пок

ЖІ МУ ЧНИ ДЕУЖУХ ДОВ ЕНУ лес хм не зернини даті ТУКИЛУЙ осладтилуєуї ун ЩО ЛІ пий х о УКестдаслтьо запи Я риму та ЖИТО ож еви АК жан ше ан и ен он Нв и НН о Ов НЯ БАН Жоїжяє Люухтию Хялю уУх місь Уа коЗійа Сет сл си Макоспа у со ЗВУ шо хМаї Був Бо Ме ОсЕ

У КН р НЯ еру. товща ЗИ С Фр ска у пух Му усю шеде фул ду гл лю мишу Сі хо ху у

Ми АЮ Еш дО АТ у СЖпК Маю пк оба У шу ОБЕ а ІМК ЮК (УТ з п чи ох жк я шуруп Кк бек міч тету Тл МЕ ЩІ бра бут міс ра МіМмсгарт ри шу тую тТук ТюЕЮОЦІУ ТЕВ ОЇ меш бі бу бжа пьУ Буш ІМ ше дв

Я СУ 25 тп піз дош фах Ся; же ек Ох ди у свіхує віхи пух и п тшжЕ дів шує ВЕБ бух ЖУХ УЖ ім АЕОТВХ чую ТУ пп БЕ ЕХ ци хг м о У її тиру Жоюуше дюджу дв Лк Чреиє Жлошо дою хр даук Я шк бота лоді тла дор Літ І МИМО СМ МА а УА ЛАТ ПХТ Мр юю шАФО БТМА ще тА ШК шт оно А ни НН НН ІНН А НОМ З ед сА у щі ЛЕ ти и

ДО ме ДЖЕ У Мт Мат УА СУД жо АН НО КА та лю РУХ ККУ по пк уп шт їх ху х п же йбчтумо Дом Ма Іа на Ж жк шу пл хе шк яю Дід щлуМ ск би т муж см АЖ шАМ Об а ЖщМ Мє мети опе У шу ФА ОПОЗЮ бал ов У тре сх; 5

АМиО 1215 ж тах бл кю Я. Тори ем фу Я рих Жоют папі ТЕ о шем о УзоО лах Уа сшЕ ще тт Ух п Рош йвик 15 пк ря пух тет пт

ВО МКК, шле лютні СМ вчи и т,

ХУЙ МЕ ТКий ДАХУ НИ МКК їв. вх є ва петуш а с ант КОЮ мита я а 1пи

МИ зош сли мою ЛИТВА М МИ

КН несу п он шЖжеш жк ше КухОо ВЖК ос лАУ сш НЕ шо т сих ВЕЛО

ОБЕОКю ЖМірам сині птУєИ Я ие ехо Муи у цк ПН ДІДУ ЛИХ

ФО ктх. етюди ТИХА камені ім МИ жи 0 МИЖАЗИИ: ФВУСКМОЗКОМ Мих лю ЖИУТ КН УТА «ак ХЕ тру тах ижня бут фею УЗ сдая ЗБ ко стидту тую садку ІЖ2иХ Лиха Хіхя ри ох лл І ЮЖт бе ж ма У АВТ ТпПК Оу Фут АЖДТІЮ Мп медок (ук

Н 5 15 1 штук, шок; тихих у сит 31 як ух, дитя кит. шашку

А жтУМАИА ЛОслІДОВНІ и

КК Еь

СТВО ЄущУМА лий пічні ти ДОЛ хай шеВУНо дижиЕтОБОа АВ ХАА шУКАМИ ай. срев чаш 155 піз б Мало гло їнмр обі лик ою Ді дону в

ПОМ. кА ДЕМО ЕМ САУ жу Му Ва ФІ МЕ . - з рен «із 12 їжі ТКА глухих пане «я ОБО:

ИЙ жа Пррхнімюіо гер прера ютть пет штусштма: ТИМ ТА Ву

ЕІ ЛЮТ я

Он туту, А иЧНЯ шк НГ фрекчені ма СБ ПИ

КУН Ууйеаацтв ваті антені мла ВО са, щи «КУ їх пт омало лу тами пін лає хх сю уко сті Ти; ЩА То и ту пл піп смаї бів їн пів ЗР Жах слу БЕЗ Бім Ще Уві Туя Ше Шех Зій : 5 в ї5 тб Жив пк божа но блю Сію йо ох р що дж їі жом о брю бу

ТКУ о ЖУшт М ОХ СУК ЛК МА ЖЕ аж Му ХА УНК сля Х ВК

Бе ШУ і прин сх Мимем Маск гЗ и Мен Же Мр жі у них іржу ТЕТ Же І Ух пятоїшМ Імя БЖ ву лтр кл ФяЩО ТУР шЖТ БЮ гу мух оп АУ зви МО п ах ї5

ЛК. ск. Ат яти жЖч ирю водія Лю ське блю СТ іл даю САУ ук: бик душем Спати о

Кт. Жде т Бдт їв йо Жду о йме Яку цех тити Ту тех би жу пе

Н У і 7 В. З зЯН У о ик, шаг днк МАЙ СВЕдю У ши Я дну дно пал из оди о ми інша туя Екс Аллу МВ ОТиЄ ТМе ойех ві взротву гпх Був дже під оЖле ех Й -е - г п шт що ХЛ п «х т -х КУ г «те ие чн и ни НН а НН НА НН НН дету шо думи лез пед ет МаА ТЗІ Бій АЛІ АЖБОЖЬУ бід Уда КУХ Ух щи ах си

Б Я Ко їх здо ож 21: ду ли ших; Точки (о у р п рр дя їужо Бі ол о опех Хві шт фо са у сау ших Бл пЗБ о бим Укр А пору. т, лих

КИ КМ МАМ пт А дя ЖИ у са ХЕЩОЮ Ся ЦИ ни Ж пу оЗіжс тв МешоМні тво Май дах ба

С їн ах їж сх шу шли «Км ОБІДОК кю Піхетюігу ЦИ хи ит я ТИМ Шеручних послі дов вь

ТИМ

«стю у, Гая т зимові т сктовти кт хх ОСІ

ХХ СОоКБеВе зм Я детитімйа ВБОО0 «Дт им ах У їх АН ща Га за «М кі гео лах Жак петю сбуж смугу іо

Пегойпах Жак тую Жуж тро суу : - «и 1Ух 1Елу еЕі хо

Зраїжии Мем скл пу чнав ля кДдОоВКУТЕ

Ж, М слух. ИСТАТМ.. ШЕ сиурртти УК Й Пресвяту рибу щих «ЕЖИМ ЕС НИ АМЖИ ЗХ вити іФ ЗУчЧЕ ет ге «Кл щу ра с нь няно а а ШУ їх нн пзвро аж Ази СкКуУЖ да шю пнх ТАЄ ТУЮ ОКХ пзмй кКжОо ЗаЄбє іш Буд смах 1 З щу 15 зле фу. тп вве Ти кЕКїх і

УшАЙХ СІК

ДРЯ Ітехуєті м стента мм і иемЕ щепи пря МЛ ЛОДА МА ЛЕ лу

АТХ И

«ІМ. СИМ зантре МОЯ дм талево ВИЗ. БІ сАгіх Мол

КУКИ КК пох Фен А ЛУ шал ли Ук Ех Об чек МТ їх Лв ла КА МАМ ому А М СХ йо Кр

В в Ід «пух ОТВЕ вель жа «вай ОВлИЗЕ

ЕЕ ж учна тил пі ДОВ ти «ЦЕ

УТ СІ ин ред, Мах ГИ прі грвхо ЗИХю СІ чими ЖИМ РОБИ амогвия ЗІКА пух МО

ЛДУ ве бу жо МТ Ж ор Тл тил сад 0 щи шеуних ТТ ям хат Зяючі пд мух

ІД ЖАВ ДЛ ХТО МА МЕТО ХІМ МТУ ХВасу А УМО Ну м а ЗІ і ту р Не зр. фа бо Хом СПЕ пижиши Таки СУ удо хі Локк зе Мане Томи дою ит Ух, тп ба шт сашМ гло Уує МУ УщА ЖшЖА шим сзАЛУ плат лдЛодб пЕгосет су бл т ря сних хм хм бюд і ХК нки ЛЬ дллитх жи (7 хи фонд тд ХК т ої пи Ух МЕ Еш сІУ 1 АЮМШЖ УВО пав о Ето БК ЗМУ БмБ о ААУ ж ша д си «Е

ХУ ЗО хх р Ше нари нн он нон о и Нв чн а в НН ННЯ тТлвохіш у ЛЮ КАФ Шут СКУД ХпХ бу ше обох шжух бух ЛЯЖЕ Жшт дах

Б шт «ку т У ТМ

Тай лоз Фуко ит А тв три рю хи он Ян дво бик, й 3 НЯ їж худ лЕЖ й Ма хи БА беж УЛ ЛЕ БЕ ссЕ Му ДЕПО МВ КМ гц п ти за кий КУ ще п по - ни Ан А и нн НО НН пщ пух бух йлю о омми еВ МБ пеї леж Мам тм ла Ах» пЕроїмнЕ Аа чаготух ух

ЕВ ли ЗЕ пз Ж я де т що лов хг їду жи фол плиех уки щем канву кт ит Ту пт Ай дж пам ОоБіх ха не жУут Еш Сху ма спепт шт да гм пДУ зла п5 СТЬЯН

ВИ МИ НЕ пл моря ПУМОВО Тотії йно ті я жид пд пі шМУ ТИЖ бу МАКОМ Ха. пек ллх а МКУ о чих М «ФІ сорті жУрагую гм п НК НН ух пет си ОСЬ У Дома КИКх мохом пою 2МЖ-ЯИ детей дині йх М СрОЄ пп амЕючилд авт лю АТМ МЛ НХ МУМО КО

Ах ОКО дак о шер о Дек Чех бхемо дк Зх лак ду ОХ ДУ ЛУК КК ЧИХ « с

КЯ вн ни туге ме ини 135

СУшнья ЕК ван ско

УЗИ шлам; мае Мінхуртем гаки гра ся 0 щИТучН Це БОМ С «Ж и ОК еБУ лет Я мури ск 1 ках й сах за

КИМ А дсдфу Тв фі біз Ар пу ж СР сМаєм й фл слу лак кі Ж хи фею ше Бе стук ТУ тво Щіу ет Лав бук тую ВЕа яко деко інь Буш ет х щ й я

М КУ УМ - сту - ду «хо А шоу од он НИ

ХМ ПЛ

Ей в ЦВучщо помулноууВЕ виь пли «Вал ФЯЗА-НПЛ сррте ПИЙ вані ше, 0

Мами ХОМ М ЕНВЕрТ поли ВДЕ В, КУ

ЯН МІ пт у ФІ Ми ху (и і хх ук ту щи йо

ОАпогМа па щжИтуО УК му АТ ЗВУ ШК МОЮ УМ з х зе і 5 хг сх ча шиіх АТ твліж Уві «ЕІ дт МЕЛОК ж ЧЕМулАВИОМ ПИЖМА ХМК ОТ

Вл «шив МА етудлшлие дет тюмаМа пнитижтий ПЛОВ тай 127 важ вини Ак пір фі ікду блт ЩІ Фу мо шу (Лю Тобі МАЛО тю Би пише ПИ шАМОЖшХ ШОЮ пт ум МУ жслЖ Їхеу шлю А У ит МО ншя. ЮЛ хм сіл т ц с хв 4 щ АЄЮ :

Мета о де ТМ ММЕде пе що Оуає кю шхаум ГХфах Хі у Хуху. ТЗ ДУмх у Жіху

УпПЖ ам жи цем о Смж МБ су ж ле ю ему піУу ФК мо шиЕ си Ок хи 2 зп хи й и біз хом лен Кі бу ті кю доня ТИ т: 21ХкІу ху (вх боже ТУріх уча по

МВ Кулосхшх Ху КМУ СКУ ха ЛЕ ша КА ОКХ «1 Ж му ша мМ ЗАМ ія ях ще ле 41 БІ умі Ж кину щу ТЯ оби ау пу фару Ту Му Му дю ХЖучиж ша

АЖ КАЄ ек У лю доме Тухо што ше пек іх ту УК АР ККо ле ся пу за хіх їди рик томах т я тя Фе АЖ Лі Ту шину хи Туш у ша злі пл Ор ОоБХК ДА СОУ ЇТа бах пі Вип АТ лив цу мл хЗадДь Ми

СІ т т Б

Фо тами из ам Мах пуск Вгдо щ Ддлю и дО т ху зе оте мух ши шк ож взМ їй АуЗз й Зав о бпх Аха Удао ХЕ Ух

Зк ий ж бзят хм ке я дме Мо 1 ої тт вк СА Мети ЗУ зх, КІ.

Сук ово Ах Бім йБшЕоМеЖ лів Сен піу Су ЗМУ йза ЛЕК ВИ ЖУв щу

КО 1ХНУ КО пох Фі тА Ума Чл ри жмою пк Шах тм ЗУ ЖБт гемо Упіа ХНЕУ Ул ожек Ше 1: 5 яеу

НЕ, нак кон ШИШКИ

Тед кит. я «р «пів втпОЕ лат шум ТУТ ДВ ит о и нь НН Но е туди Шляхта ДІТИ К шРЕСБУуКУ ЧОМ СМІЙх «ІЙ хг опути

АЛЕ Мих ке т. дак Міли х КУ сла

Шиєт слжу Му и СПА ук де УТ ЄМ К. У У УК З ЕК ту і т

Ах У яоїлтуж уд ше я ма АХ ЕЖУ лак МВА «ши 0 щЕ жу ПММ ТАДИДЖВКЛЛИУ кННия

Креркн УТА ММ спеку АТМ. ТД ожилий муть ЗИ ТІ хи 0 СМІжщУТ ПІНА: дат жк «щі о ула ди Ж йо ху ДО що прі ху Шрот ріко сову спухіє Дт Жбжтх обу тощо Тизуу Дхук

Авт клю шжут тТух ва Олі щЕех вх о ттК БУК Ам БЖи сеж дим. Мом где і Фі кл З

КУ я м. М си Ох и тя, З ж А сяк пк дух ша ОМАНУ жопоюля МУКУ М ДАЦЮК ис

УА пкт спе данним дижтіноа КОТ Е чих шик оО вужа Зою дихала жу ою

Ве НЯ шо М й Мошкю Мом лам Ума. ІЗ КОСА ДИКІ АЮ що анко ху

МАСЛОМ ИЧВХ. МАО ЇМЕМО бу. дтАЛУИ СтІСу АКНЕ ЛАКТЬ ЗБ

Н ХМ Ал лик су «Міо АМЕ

А 1 или ух, ПІТ

ВН ЛАТ, під КІШУТАКНИХ ТКУ ОНА Т А СТЮ даси шахи сон на Ко ОА НИ ше МНезшлессув вижити житя тінпза БУ, «ай 145 повин нан я пу т Хі Ж 2: ЇХ втру. У ода. лд Тони УМ кт дою УЛ я пал ож МмАЯх За бот хм лек ша БА пі Ус У а уУуВоклІ пло рі

У З ІВ їз "Чедч пов перо Тих СТЬ мо бю біз А да ті ху Ук; дез СХ ух б іо и спаУу бан о йну Бей отв Сех Тло Мах бек обл су Шек Ха Зах пеЖх ух й а з долучати Уулох, ок М жи гади Ж тм тк ХЛ ак Ух тку лшжи Тую Тух їквошуу ТЕБ ГБ овоч бій БО бке сбіу Буш де БамоБи по АК ТІ

Яги Ми мо ся яю ди М рих пу ув і гУХ зав Чу етику йошт ТУ Шо іл МА І у Аж Ма. КОМ ОХ Ву У деж СКК ОТ ЖЖ АОЮТО ША МДУ ЛЕ

У -Е 3

Жфімтух Жохкщо сижу ж лив рн т дію дру ТА Шу ємо ху у: МДЕ інд муж шех Хо Ж ОТТО АХ МАК УА ДНЯ лу ЖАХ ПУТ М фриз: тТуФ ду З тр ви поп ще НУ де ше фо ах фі и пік Кл ляє в то ше юю ол А ти ие шило їмямх Буш дних ЯМУ УА СКМХ яКущ ба вт о МНХ пла жає дух Ух аа ЗЕ жук тою Сутню М 5 в зм с м вих ит ФІЛ хх діа ложу у яму Й пи А жо що пі Уа пеЕ ББЖ осіб зі Ду ій би Ме сут шХу

КЗНЕНН ха, ЗІЙ вич ДЕК їла пік; тт тво тд ЦО св ЩІ піріує суд ти МТЮ му Ся УЖ. хх УжідО ЛУК СЕК Ж ЦК ве 155 їх ок ско ОТ «Ж Ме 4 «Еш ОМІЇНОЮ «І Пущі м те кі чаш ше учих посадове

Ох аа дк тм пити сумні ЩО ОТУЩ вже УеМІХУТТУ. ЛУКИ" АТУШКОМ АТ ЄВ, АК пауОом У

Шакойех б Ся Тек Жир іх лящ ши декм Сук мм ло свУух

З х сс Бий п/о з лЕАІ Вк іржтух яп «ях БІЛОК шли Мппблія міра В а лу МУшуЛА ТИХ КОЛЕ ПИ

Ки ет ти. служ ПИ Ю Ж паєттамірлтв б ши СКЗ дл но вм іца ВЧ пон лхЕ дат те ЧожЖ лю Ті пі ет блю бек жук дам пу ВЕт їні Бук Жах

ВОК сих КУХ дм ІМЯ оса лУВТ Кл МОСК Х АВ МА мат ди Ме Оле ї ЯЛА ІЗ х й ЖЕ 15 «Ему ІчЕ ж ю бує АТ Є ож хх. МеКнИе хх ДНК шли Питомі прут є

ЕК ши ТОЛІ КУЄ» сх ек лятя ХІМ спе ТІК зує ти КОС пет МалАТИ ДЕТУТ і СМАЖТКВКНА УТ. ММА

КАЗЕ зх дія КВУ ря дом: тру, Ві пі ср СТ Ух АЛ оди двух сам сша хх сОжЕ сглжш У ААУ У ЛК Ол У Х

І (и чл х 5 Ки плюс рих

А хи в НН ай ОЖХДОК шхУлут лит пит роди З ходах УЖ МСА ДОА А АТ ТХ шию «хх я ІМ мист мл І й ек орт т оми ТЬИ яАШИТ ХО БОБИ ЦК ВМ ОВОУЛИХ МУКУ САЛИЗ, гаї Би «ами дМс три мн гелі і палі шШіаук о йлізк тега пл тва щі тс туту Шерк щі пам оха сапй й шапоЗаМм шшЕ ду сш хау Мей оУш Зх ту шех й с с, А я пах бидло Жим БМ ск. лежу Мк МА ди ЛА Хі до Ме Дддую жк ХУ тях бли ЖЕ дез о тУпх ху тпжохавк о пнт су буму ББЖ О Хе лаву Ж їКІіх ст чи зв шо тва Мк пику Тл уч 1 ом р ми ху щи т охищо Ви боки БАЛУ

Ажт Хух Жук ТЕрОосСаУу ТЕ Болт шжс оба хе Су бу ідбж ру с ум

У Б «й писк іш Таку. Му Ух ни нн нн а в НЕ кН ШОСУМ а те х - уже Стик г. НИЗ у ух ко ТУ КВ НК зу -х г йьЬУ ик шк раз ШУ

ЖЕ ОАЕ о схю АВродів жах ЗХ лу зе ХО КВХ ух уж МЕЄ БК Ла ка ек ст ах КНУ КК

Ті Так деко пе миші лм сті сим МІ ау свідо жує хи дош у ше б Аж пеХ ОМ УА АОСТТХ МАВ Й УА ВМ ХТО лев ДУ вт ВІЛ ШТ лі туї жо пух я ТІ В по шШхує Тим фо тоді Здаю Мих 1. Тан и он ння НН ЯН Ви ак Бео був цез о бех ек УЩ ТВу під Аза Аве бТМх бів У ТУЮ ХУ щу пол сп

ТУ 5 ап

Фіз ог шо ск М йаг Мщя Мт лив о й11х іх сах о Мах ря муку

Пущшо жщв Мхфроіхім опр Єві Мет ум пу пі МУ мА А МЕЖ Бе

МЕ ни 115 ік пл тви Туща Му має пл ді же шлпосаиш так обмо Уа тк о жай шк ВАХ гл та ст Бум

ЗАКО МІ

ХЕ Ах ї хх мА рано нин ее» ТУ чІНА ПОШИ ЬИТК їх

ХУ

«РЕЯ МАХ днтиетнлие днтмткАяа М.О «ашнум о ях пух Мт же До; о вує о ЛК Іх шако сі в ЖК КУух шир шу ї г

М З я Тюю 0ОЗІТ?

ЕМО АХ

БУКИНИчЯ шк штир Пілехучик кл тиме рії пен В ІК жи шЖучна пссладевнастЕ піт у, ТЦ АШДОВ спомин ТД кита мо ДЛ

ТЕЙ ШЕ еВО вірив Я нтів МВ. шйтихя УТ кап по

Те ТІ шию ба вну ФО я Тахо Лужок хви КЕ ІМ: «тд дя був Су, з

Мео гі ша туго пк опАУ Бод ольЕ бух Те дало ро бшж їм Му пає х ї 18 х5 дю їх: вх

КУВОВНННЯХ вх ек, у чи Мал 11 «ЕП БУЄ «й Мерусщає ПОЛ АляИТИ ух пкт Ек ши слитют УУпищМя дат КО Ко діння ЩО ПДХ хи ще й ІС МОЛодих СЕК Та ПМ, ІМ рень НИ п т Зйщло мих буре о туї, лук ща гм ве ше паж о двже сві шт орех М Ах Ж што АТ ХВ К 1 в пл

Кене ТА ями КО ее т тиха КйХ

ОДИН. Іа ЕД сиди х ЯКО и ілехуєу свт и может сн,

Фі МУЛ і ТИЛ А ДУТИ схуткр «хх оо ТЕ дати и, етан КИ, щожмуєиеє т жу м, по Се сша ММ мищтх ВІЗА овіибвктітнх БОКАХ «дтп слуха кап жу

КН то ги Лад ит єю ил я шує т пк Мои Ов сттуі б ди МК

Завод (ФЛ і.) СЛ ТМ лак слу Мха бу аб св Туя то мат ЗБ ї Е Ух тк

Ї ї Що їх току ою стю о Ме ой сумкою рі дюсй стуічю тат оті Зрди йщшк пд їмж о яДужиа зас лем пе осв ІМК аа шЕЖ САУ ВІ ШКО р ОМаЖ смак «КАХ й 25 За умі ТА умо ск дню СМ еще То ма у тн г дя їжи й дуу тах й пах ОКуУХ хУуХО ХХфосиУ ЛДУ Ес Ху Ме Бпле БЕ дк ал ом бен о у ау ах тд, кл гак ет пра Мат а мосту М ую пух тях Лоу ли Мих їв ож ші йо же бЗзй ТУК дав сОаУу МОЖ ОоТпк о Хух ХуколВИ ЛО ЛЕК

З Зк и жа шуМ Лето лРтТ Уві ХВО їле жах о Маї бзротТнх пек мух дай ОгоБне йх їй Ж йо о НМА он КОН шу, о ДАІ Мун Й ЖІх в Ен р и Ан бе Кия

ШЕ о сшяшМмо душ неп о шеш шак твМ хи ді мах ЗЕ дл А УЗ ЕМЖК ОМУХ гу г з ме ВО ях ши ДК що ой ситу що й жу Стщіз гля У дя лю дося ху Фе лику й пут жа вт Сі Віа ся Аква лм. Піу ку шу Віа позврожех о хУХю му пп їх 16

ХЕ БО КОЖ п м Ж г спла тв ду ЖИ Шк ал ЗУ їйпх їм ча о УпК о УВЕ ес Оки чі яз я БО тт Зх бої я ГІ ке З «ших БІЛОК

МНЕ ппезичи м стрезуз ат их

ХМ чуТучних ПОЧУЛИ рост

Сн «МЕ: ОВО знтиетьа пнтятиня. КЗ. А

Ар жшиЙ

Фа ІК гою да Теж срячух ол да ек чеЕ Бек тету Тут жЕрОУЄ т - лк У

ОН пл. «КИМ О ЕЛЕ «Му де «щі БЕК «ДА цу чня пул лен кмх лютих ее ЯРМО спамити В ДО пли ОО КВ

ЛИЙ се Зв нм ЗИ Ох А ка ллх пуд ай Км

Мел тт дя тк во лю Му ТОВ и Мевх Мету сних их тка Ме

Ладо ЗА ОМ ОХ Зі: бобж ша отих Ху Тулолать гКо ую зл омумо па х к я як і не ї У «віх шо ша А сли ОБ НСЮ «ТУЮ изд ричні пу «и ЦорУчНн роті лемент їх рен кА

Се герих.. 7 : 2. й сшаумісйн і ярі М ДО ший СИВАК автис ех яжиткив БУ, УА

Уа віт хи хг бра оАЛа са гом тем пр ко хх Адо кит Врах піш АВа ду Ен беи ШЕУ Ду У Авфя Авпрошех ї 2 ее жі МЕ

Б А

М тя пло це шо БОМ «сами жена почуті пев т ков жу после. лих сих га хтери ую темі прісній Тут Я шина п п.с А

Ж 0 жЛістИйЛІсшв о па ІКТ О.А затих СС век ЛАНИ бігпбоудло ші би) Ці щі ит іх ше, Шах фу МАХ їла же дих й піп хат піт без біз ша беж ЗАМ ОЕЖО ШУ Ве Уші Буш о бжш беж УГа 1 п с т ї Ян У НЕ

Фк Хода дини т ацую ки фот ах ї5щ Мік М дя й: ди Лю ни у дя

ФМХлОотипА УЖ АШМР БЖ УУтТ ЛЛЬХ мл ЗУШТОЗМУМ де У Аз ХУ ЖБК ХМтТХ сут КщЯ з по КЕ: У пуд Мушми лету Ме я ТВА тити 312 їхух підеу й: т с соня дя сх о тТУХ ЖЕК ЖХвВ оБіУу ТЕБО Її й Бій го то ШУ 1 БКУу Сец шх и ж Б туя Те ли ушу ко Зущім й Дю р ую Му. Ліну Зі Ми я Ж їхе Ме опліуш вн о ї1ї« Ат Тух Вій спі Сех Те о Тує Тук й БКо БЕК за пе в

Тед жи Шум докт хо Мф мо С ко Хещі дик Й уУ Вш о бемо йхує ти Би п-ц му лак мле ЖЖ ЕпХ ЛАМИ ЖАВ СКМХ ІМБУ мушок МАТ МІВ по Тх Р по під точ Ту У пи о плу чі Тв мі лЛіш й тк ВА О Уді еи тбую

ЛВ о зи ізМІх МеВМО шах Мт жд А ло с см ЗИ КАЛУ зл Ї Мк Ух а И ЗА ее дет ТЕ. родині М тост рих дл Мрія Мою я дою ху руху

Му ЕМ Угри жо А ух Біне угм шу слу Бів Б2роха ТК оЗіЗ че ху хи

Аме АК Мах гі гу ми рек ток тд тю МА жк ши пимлопішж пий дей охдІі лек оУла сну ва «ак ще «І ТУх пп шт жх, тт дя ди БОКИ К лю АХ ВУ МИВ ІМТ ЕН ВІ»

УКЕОвУ км СК дн пзммач гм ОСЬ дя и КК от ЛуЖКИ ли ВНУТ УК АСВ ЛУМ я яд туру чих «У

Фут дм уко лили Змлах пу ту вад ожшело ях ДУХ МК СЬО ЮА У г в ххх ді стю -Е

ЕВ ОО1 туту поп «я щ пІДОМ ян где дому УВС сти тіх сип ати МУ. зірки ТИ й о овлзіала т їмо ід

Мих ЦИ дНтуи синам Дитя М.О у ти кл

ЯН ен ни о и НН сь ва ноя а о гкщю ен и нн НА

Ар 112 Мат бух ВіЩОЕУу ЕХО ЖБУ Тук тУхобам Кто Желе су цех х кп ли Ух х м М Кя пштюут ур

ХхохраТКля Ах яті ля ях жах Ск щ- пт «іш ВІЛИХ лю піймати умо, ами щвуцьне посла леве шт ИЗГУНЯ ослдвтяни КРОО щас лиц ДЛ ТЯ дЕй я ХП НО ана ПРЛЯЮ прита МЗ.ТА ших. лі пл дек АТО Удуло їУвих (Хлх Уюіу із Що Ме тих ам олАЖМ Уа МУш СПФ їм КУ су Фа ля НА з п Я сту ут зі перцем «ев ОпЕН ли ух Тип мм му Ути «хай ШТ УМНаА ПОНАД сВЕ.

УлюТУух

Ян ти «Муки смівіді ВАТ М й спини мі со ди шко 0 Ле ОТИХ ТІ шик ЕОСЖВ р Ту,

Ат, оту «айпх ТІЕ делла ху мужа Лют 3 му ую шлю Ж хо злу Лк т шию ЗИМОЮ о лиш Тккту сажа ат при ожаА щшАї вид алу Зк пек ба ЕТО шу ПЦМ МК ОУН КАЛ НВК холі т тк че ях

КЯ В КН я ема мя у моїх Миру йди м, ТАМ и шен ТУ ря СК Фони пром, іди пт т

ТП о БЕНА ШОЕ ДА ФМ АЖ АТ ЖЖ С еЖ оду су Бе Ада МТ шеЖ АМОУ п сх, Кві рн и и о в и НО зх ку пт ж я тала. п аж оБУК о ук тром ли ЗаФж Бл Ап о КЕ КуОо су Вуд оду Ди АРАТ тТжи їМе дату бароїзе тТух Ушк УКХ бе шех ХМ Бук ул вн то ех

Бо щ5 «В тлу Хол од Кок пк мно Жах дим да В ЖЕ пд Ти дм Пр Те

ІІ Вулотави Мр І шлЕ МФ сміх мамою Тахо охійх Бу т села 1 ТУ пл, щи що Ро; На йо стю сті Котел дру бр М скид Ву Тим Ех Км тд Еш сп Пхущи

Шекховем Був фецоцдет Зал Ма пу За Абе Апо тних піщ Узх ту УЮ за а сти Ж що щоку шию ж іюю Дтитчих Ж шіх «У фі. ЖИ дю ЖІ Кут Ми и ср 1 суп ок ко іі миж о УВі БЖ Ббед бі бю КУ Дія виробам ср що У я зах Не

Ко 105 ІЙ па фло тає Ума у вує хг кох бБіпоу ТпаЕЖ Ле УВА ти да ех Сех кл чо «Ех хі

АК 7 вух поча як БЛОК

ЗО Теги тки дожив ит ик,

ЛЬ ПЕНЯ ж ЛІМІТ АЛВН КТ, ші, тк т тмутю ці плей ТІК пам пи ОО й «ше ЩІК -На. антиеоїн валижілаь Б.В ее тру «апп ж уся М «Ф посту ТЕ их оч пешобим мах ем Е гук підросту ее не сих 1й 1 КУДИ Я чні БАДи й я Медик т зи тури и «Жук ШВУ ЧИЙ ТЕМІ ХДОВНМ СМ

Ух, ше

ФМ Зх ТИВ сакшату тій щарумитлід КЩЮ ЦВ хай 0 щен нти мій сМОЖТрКЕаНЮ Бл. Юл сиг сети «даніх сх рн нн на НН ак А На на нн НН А НН пе дрож кує Тут Тих ду Жак Тл ТеЄ Тех ойоЗв Бродах бай Було Аж «4 х Ка ла пл, «ук сили Мо пеки 1 «дими а «сИтй ЖУЛОК

Ж вх, и «ху ОТ Уч ПОЛІ ІІ Кот

ЛЕ ху ку лит ТВОЯ щодо сузиттктий ово Щиро щи аМ ММК еВІЯ вили тіицях вант ВО М дих, бук чаш паю я ую ТС дн Ха и ко тях ит шк Дж кум ск

УМАМО МЕ ШУМ ЖЖ дж Ммо М АР У МІУ фе МАМУ КК 1 - Та кт РИ

ХЕ А т Ся сек 0 я ИН ме АХ, «ММ ШтучИЙ ПОСДОЛОВНІСТЕ

«ЛЕВ Еуи сиЕа МЕ бив вм. поети жхімла К.І дат при хни УЛ о Нв НН їолАхрю ЧЛ у и Умузузо уж А 1 тлу ул аю дихаю їУюру (лок чих УЖШЖОЗЕМ ше ои бе жо Кс сш ха сови мах ха ро У САТ т м Ех Зх х Пю Ми Зх ке ен нн вн а но а о ЧА Ох ху тд Фгто тлихи ти ах ол оту Ді тохХ був жк слу Дер Так фе сіУ Авзросує тут УА

КезІ Ки ЗО на нон нове НК нн он на и на НН КИ НН Шь шж ежЕ Кук май от мита БК ою щи жи У МАО ТяКА У той ху о ах пл: ие зи сф ую шими; Пшк їілу сет, ЖЩ133 сю Пе бу ща ших

АТОМ ВЕЖ бгАТА НКУ ллеопеХ Мат ле жу хмей ма Кп ОБЖ обу шох по М 5 дхуу сшлеюу Лях вн, ж дю ЕЕ гор ях У, лу и и ре т ми ДК

Хай ошеК САМ ЛеротТБЕ Абе стТвЕ ївйЗ Ту Їли ЕЕ САУ ТБ шій Ко Ме де щі ТЕ на дозу я В Демчук Жчгмо бямш 22) ло що му лами; Фу Ту ср ту ли дзевояМмі Ахв влротук Тек пу обі Аза ЖхроАже Чех бій тип па АХ де и Б

Пх ей за пі пи шаною пек т Ша м ЗБжЕ о тпхду км БА щеЖ бау ки шує Ж дих ма о мем

Тпй жи

Ам Мо ек д Заїр

ОНА

«ТМ нію сут

ТК пл «МВ Циммечяа цевих «ЕОМ или дія УТ вет ТЯ дачні пух Мел едйдш вн анти Му минав Мах

СБНеи нм хирОууєи ЕК

Фет ТЛОХИ лежу ТП. Фожія Тгія Мк та тю духу т ою Ер ЖЛУ ма шу бБароМмуш тую Ма У ! й то пЕЛОВ ХВ

ЛЕ - кл : ку плном хат о дак. сади Мууєма ла ум ут дк х їм «е«шийУ ве Би анти цій ажитіла КО. ХХ «щу В ту Два щож ух гу сбовнум Дієти ОЗ тім о пЗІх аж па М КК ОК ства зу «ДІ пі ярих сш ях МмипУМг. хх ех ІВАНА

ОНИ Урни В пеню ге как ПИТАЮ ІМПЛАНТИ «І» жу іш дуже дмтуіма Я.О т поеми МК ТМоМма ЗиХАЖа Ма М.А

ААУ зт

ЖАХ шт их потові сарі Ко уж иа рю и ук хг піз ока тТквоВоюь дей об ЖЕО ХВУу Уві

І В ур нути я сю кут я тет У пря, стик конем ноя як 0 ПРИжОЯЮ ПОМАДОЮ, стру ие

УДУТЩ дібевирахами спало, пихи іва КО чна ин зок ме а у ва и в м м т у З С и о м о я «Дрю ж ака и Й г косу Ву 1 ЕН. и кн ЗАЛОМ ЖИ ду би аж люк гжУ ол іа Тая осат МЖК о штТОО мжи о УФ окМих М СКД тт Зі Мол ї ї І НУ ня А я о пу Хм ке бо мм й хі я Дж хі 211133 упо ха кю Зх А снЖж ад дах Ж ВЕЖ См бе СУ бід СвАЖО МЕМ оса Мед МУ КУХО ВІ а ук «й ши пш 2 кн ШНнво но а и о на і в НК НН ЕН ВН ну пяК АДМ УЖ ща ПпАМООМУХ Ж МАСУ АЛ пет же ува ме па їх Тух -к ай 5 я пи Кк ля Моихю Ма тою конит УМ дю СТАТ. СТ су Уже 1 ко пори «лииюю ПУХ у сту шоп вази о яллеа Ук лу Ме имих ААУ ЛА ПЖЕ зам Ух тиж ЛО ММ щчеХх то ух, БІ

Ме це стю Де пір мів сина фол ЕКО ї прє сту ж (іл мк ма дві ШЕЖ бу Ав лак одіз стих іде тВЕ ще Бех лпеу ТйпЕ Фа Буш мех де - -ц Ол ща ге ко Ко.

БУ М лют рах прути МА, ше ик. М ух, о кри Душ юних ТК ліві КУ ик пзивочмі ква бе ТУЮ ОСух ща вів ТЕ одеровку барони пе З шу ЗА тут їхню пити ія ЖУрлу бю мо студ І ки М жо

Класи Бу ЮМми бу лих ут ал жМт мя хи

ЗА чл

Кл юю ши у

ШК кх «КУ я ее» М су МерлтУю «шк ЖІНИК ки жу ПВА ВМТ

ХОЯ тю дя не КВ щдитти МУ Тк ї я ПИ

ЖОВТИХ ит ЖИТ ЬН Я ДТ УА т, я В пджтух сет шумок ск 2 и 1 нит М шию ЕЛ хи Жди м М шк і буму Маю ді Зигд ЛюхУ Мою бух хух мі ОХ 1 ш з г

КО НИКА шАШИ жит вчи : ай СБТЛОЮ штанях. млі тигр етиці их

КАК М утАВИК ТЛ МА ве

М ЯчНои

ШОСУТМТіся РА ТЛУ паз цих СКУБІ Й Зеніт ад люкс Миті пруОМИ тую я ВУЖ КулЛилихо лей 1 доять пн о Ажо Пе Ку Лют Бус жає ї «, пл, птуз

УЮ ий сухі пе 1 «вій ОВІЛЯК ша чНь ки пулхчиущці ЖИЛА ДН ень хи тру ПСІУЖ-НУ У дір Я вені па щи К

ПОТ. ОН на о ке в ВИ с о Ср ке о В МАШИН «япйтри сх ван Ша не НА НО АНА зай опа жи ва одер воротях Со Ул «силу же паза ЗЕ «Ват 10 слух прре висо»: ПІНОЖ яошАСЯ ОП Жутумл пл ил.Оц ВАК. «прах ск Ж прикуті. дроту: ТІЙ шили мо ДЮ ОМ си ші чутяноуюь о нт Ого вилити х ВИХ. Е ков АЖ ах ше

Фу Пк а ти те і дим. дух и Ех Фу: ТАМ бах бич с у, вал гм лбАщОМЕНМ о КБу бл ого Кб о псу чі шжх Май деї Бтз бу хів я 5 за 15

Че до щі т мм о ббидо жиди! ФІ УК ех и не вт оАіВ Беж се тТвх ОО ж лк чаш вАпОовХа гам слу ВБромук КХ ХЛ У тих 7. люту

В й НІ «де Чим иа ДА МІ нг Сойжню дні М же Те Пи кун тоди ЦЮ ху ет ТВОЮ ММ ХМ жмт зу ГКУ У ХІД ЯЮ ФУ Штусо ай їж МАМ МА ОМУХ

ШУ а хв тат мк лад фон уж у дю у: т во ит, ім кі бір Шен ЛїЗ У тк пи жна МудозХд кут мл соломи ол го ха доО бжцп Кп мех су ких в НК НИ мк ие (ли п В до тя т Фан т ре си пи т ну ни де іжмпи село сг у ве КУ Жиут АЛЛО ХийМмО ЗАКО ЗА Ху м СА ХК КИ туту

ВУ 1 г ща вне и Б в а и НН НН ШО Не Ам тих сі МО АТО МБО КУЯ УКХ су шо Мі о тЕрод ВЕОСЛУЄЮ ЛАМЮ ОТ МАЛУ МКУ п, щи Зк їх о С

Па 1 м жи Лю ПИ Тем М в тов ів ба у ша о бАУу лиж СУБ УЗ ДЕ УшаУ шим

НО чтУц

Ах КУ ш

СЕ ТЕ, ни «І ялліж лі шлю ше

Комо БІЛОК сяде Шучна поолІдакнло кт «ЕЕ

Уют ух... пін ТЕ кінної до лю СІВ

КОХ. мМ: ДВКИМ С ліде ДІТУНЕМлЛІ В. ИЙ ел их, «Фк пл КУ дух Ст рон и но НО «МИТ му мА Юм ММ МУ МТМ МУ Є ТУ до А пох : ІК хО «ях яв ет тя 7

НО х Я тут пупгех «кін БМІБХ баса інсеармищі фу Ух юр ем

ХІД «Ху ІМ А АД ВАТ» пли и. пилу ця ем ага чи на дк ах їх пОкеви анти зититона п алу І каш ко ту дозу еує Жак Ди аку зх ІН УМА МИ ТЯ ЖАТИ У т х кі «віїМ З «Ел БЛОК длуло Прлехочмато еритема тт «А МмжУумнНня гплоелЕдДОНте діт, тує «ух п АТ дили я дисмтіна ПО ЗЕ . «ЖИ ЛОНО паж МгАмй вилитіла п, ЗЕ

СИ МАЯ

Жим хо ет ДЯ дроби вк; ді лу щі фак Ми шАлотащ ту лю Мі вар ХМ уж ла «ж Спич

Коза НН «ЕК 15 пал АЛЕ тах ТИНА тХ их чити аниї, ти тт, сша щи кцМма послу ловнахУКих «ий шк, ХР, дедни еніЕйодадат щрой

Бе Хата юю ЗІКу Я ОДЕЖУ Ма ж ат 00 птуЮ де: беж МТА ТАМ Ме ай Ти: ТМ: у ами З с ЛУЩ ох СПЕ (1 му М ул шк ОКХ бащ сам пк ошАаАМ КЕОБХО пк Уда ХлеХ о хНІ І0МБК ТІМ Па Ко 1 5 Мо 15 стро лу и ТМ у км. и З раки ше и нон нн но Не ь

ТК ов ях АП ти лЛолоут міх ким скит АТ ВО МУ МЕ мул мул ях -к -е

М СУ м ванн овоч в НА На о нн ШИ о и АН НН и На НЯ

САТ Олю угод лю мг Ес спам маг ЖК Ел ли ма УА МД СТЮ з ай ях нн о Ух вне ше ШЕ НН ни НК он в Но НН Тит Мито еру. Пі и у ім о Аж ОсяХ був дк о Кхо дак очну Хе жо пб!лю Ме Бінж Бех осхрУу ох зі хх 50

Доу Пи 5 дв ки до кт раю тую ую Ук СЕ тах. пет Має

ШУ ДУ ММ ЗАВІТ БІД ФюкФО ЗХ сіиА АУБ 1 ЖК ЩЕ КО ААУ МТУХ СІВІЛК БИ ЛОФТКУ хх ла СК п оду ШУ ТТ Лют лм базу Ар те КО Кі сво джу Вт им ТКУ лі кн х бовжк міді бл бро ух ХМ ув М Віз ЖуЮ о Аже Акт Ат о Тбне шу МУ зе щи пах лі я ЩІх

Тра (Пл лек ех ни зим в тв ко ба ду

Бра сю жк СБУ ТЛ Був зах тпкобаї гу рада зац ие КАК я ст

АТМ «км ин НН «Ки 13

Кен вВинАлх дилем БІЛОК

УК я СИфахімох иці міх на ж 3 ЛЬ пгвУудма лика доти ху

ХЛ мет й

СУТ НТ опи ен ТУ МОЙ, саму їла І й лк Ше ІТ спалити надра да ОХ хай шия дак Пі 31 джено а Ух ду хо він пі ше лев шу їЗІМ ОЗ ік ІМ ОблНа Ба ух луш мах т є УтУ «ЕМ СИ яшйтл шою, ШТ тИКе кекси КМУ

СКЛО 0 феном тим мені ее, пед шлунав посли Ав. «ШТ лм, ТУ. схили пасуюдо ЛЬ хи ММ таня САВСтИ СТИ. ФТІ МДЕ шву За

МАЯ ОМ ти ле шт Ідам уві: боку екю шлмоМмт'ує пові рт ВУхХр жлю хм

ЩІ Х,

ХХ п я«ЕПім й паля Мжиглди

УКХ БМК дО пирутни трат жна сс вони деку тм УДО У о діїнеди У десант ПО пІдяОЛО УК ЗКУ ТІМ СБЖКУФТИ ДІМА ОМУТ о дл лих ве лани Ум пк ую т ее нн о а Ше Н

МмеМмір слів АХфОЖЮЕ КУ Блю КИаХ пАу те п х паї ХЕ

Б УКННичЯ ХХ

Ра НИК «30 0 прзудии фриз й пуск,

Хей шВучна пола довнаиь зуутх ик тру -ї чидели доти мий діматі ст ШО ши За елюИжв антитшньО антмхллл Бя:ЗІ ди зу

Зо ИН

Фо і «15 тмут Ую ія луен бенуцЇ Фо дл уд ТА -Мм мн, та я шк кмЖ бБац о шФаМм о зВК о ФАЛлОгрКе ХЕОп олива ек УдА мпУ КУ МАМУ ХМ

КУ «У не ж сті тю л оч т атге ож иих Тис С ка г г. дюни 72 М и сук ШК яки 1 хх

Тк овкв оплх їі1іва Тапх Суп пьх ЗР Ка Алло їх їіБу вро ому їх мл ах ле т й й ке првує бю, боту (31 ж бо Пух Мр ів ше Му Ма бан МАО тю пу

Шак тТжеотую Пі зій Се гка с Сфу бів Бек Во осмавх Сев баї іх ТУ

З Ат я, ї5 ло ХУ ті Ду Ще думі Мч Тег Ко оче ми а А в Ко а пам лмамй па омут вКч Бр ха ху бах МЕ «из виз Кий ЛеКК ЩА Па п че ще по ЗО о

Хто и Мет Мн гл и ваш руно т шах р ву про гру МЕ

ММА УМЖХ сві М лу ББЖ А ТУ зі ЗХ дашок мо САТ бат гл МТ са з "ТЕ КО ж У що сами пи Мк бук ЧДУ Мо булу А окуучо Ложку, ек о лк дк лев Бі віз Ам тую тТУЕ Су ій Аза тТхройзев да Мед тво ж Ма щЕ ще Б

НЯ жо лі шин і хх ок й до Стр бо М ня МАЛО гам

Ббая пі тю іх ТК бує Уві Тнт оУау істу па Мк тд да ее ВН: КИ вчи Я ши» ВІЛОК

ВІ Фе Ме кт

КАШ смхухниа ПОСАДОВИМ веб слуху вч тки : теж З ях ПбК-Х зви н Мой вити 1, сдотхт я лют жах я їЯтвжобЗім щі" Да їй ПіУ Адух її ТуХ Вій ша ї Е та

Н 5 Но ж ши

ВН 7 «ШЕ ЖЕК

СА т зі ке тр ВК гул, «ЕМ б учна послідов Х сте тю УТ оди я и ТКА зачин ри СМТ «ий» ПИТ НХ ДВ УТ Ісьих ЛІЖКУ Та кл, я й злуд я ОВ бір діт бат била Мел би зд

АЛЕ ОЖМВЕЮ сУй т яті МИ ЖЕ У

А х ха их ши Ак о пт пи уищи шити СОЛюЦТМК, шларож Пром фітю йеитоХ пйжгірі ет пи Ж КУЗЬ БОС ДСТНАКТУТЬ

Б жуки

Тло ДНУ тя ИЙ дач пох Я як МИТА авжиЗі дзвін І самє Ух

Км А ео тім щі теку мм уж дежавю тік хр

Мр оБокше свя ЕН ВУХ ФАО ЖЖ БМ тд ява юх скщи

ХЕ. ши «ія 105

Бе Еш

ЖАВ ВАЛИК и ІМТ тич отри хх дозу диф мк МУЖНІМ Думу КМТ ух

Я куту пт сх чн : ох лю т АКОМидТИу БИТТЯ МЕТУ А що хх сах чеки тай ВЕ їх пневмо нн НН НН он в З и АН пакотУук Сп Бей тнх о пхл Бто Ко Чекотв) ек Уви Єтвж Бк пі ше

М З їх 1 а ше нь нн НН а нн С НН а НН а ви Ака Ба Мі Хлпж бує йлж ОМ» под АтЯ Пес БА У зи мух ЗУуД ла юр хх, я хо шо ах

Фа М, бюро Тр ук ах толяху ви й ху тла довию. Бр Му Ж ну ж В пе ЖЕО УК ОСА ЇМ ху БО їзіУ зм ши БКО Улі фей ді ТА тує т ях Кк г КИ Ко

У Б пи й; омалту Чо тиці ком ср жі що ум з З Веде лі; их пізоквроЗатє ув око Му Шеу ЗУ 1 о їтуоО хо г БЕ о Зет су пех «а 5 «о

Б ес Її113ю му у а ох ху ТЛ І м КЕ. баку на

Аве пех біу дю Твпхо ВЛА ТМ мА Хв лів дакошьу ТВЖобіМм шт МБ, пе -х мА що

Тк и 1 ЗИ

Авш по: Бі Бвросбук ТЕХ пу о ВАВ ОТкрв ВОЮ Аа Аве лк С У чо зе жууию Ле пи дк ТУТ на ни и НК У ЧИ типа шиму Жук сім тах СУушо УМ Олика тн

КИ Тіку я ко

МИЖ Ох спи

ОЧНУ ие Мк штук узи чпіше БІЦОЕ

З АЧАНИ ШЕННЯ КЛ моя ли

ЗИМ чен птішТЬ. ді й щік ПОЛА хе ішла смт тіМаїи ДЕ ЛУуу их ЖИТ тушу дл «ле оо

Пов ти лу Мк Мову п не Хо См А пеху и обу шаг леж мим ша и БУубж фук ана пох тире "єї кА ох «ую ті

ЛЕ, дтп «лик БІДИ «А и 0 щвуУЧМа ПІІ ВИЮІХ чий яю Уч т залу КОТИ сн ж ДВ У

М ЩІ вна мія арвміла Ка

ШИ чи каш КИ ті дан ши ррх же ет мк зім о зЗзаИй шеЄ мужа вхо сеІш ле йо -с,й кош х ЛЮТ

ЕД - сту плавно чі БІС вич пУЕЖЧАЯ ТЕМІ АД КІЛ ТУ ноу ях ре пай СНИ: цем еїиИй вичтомя мл ше Каті ДІТКИ міряю ОДІУЖМИ ТЕХ сю. чаю Ух

Шик ди ЛЮ хе пня ду чию утекти пили кт піт дів СТЕВ Ав ААУ Верожм жу ай 4 Кк х її

ЛИХ лах ххвіМ ї95 морю ОВУ ак и ЕНН я пл птждіМу сіті мем і ги хм о шжеучинз попанлаьдевналчтев пил

ОДН

2 МТУ т буденні пит Я птащиі м БО

ОХ Хозоблаюяе: нти а ант шата ЗК

Сави и «апп Я «шк прю ПК шці Ма пу; фан ухету бал МА Фуюгю ЛИХ бі Дек: буу хе тя,

ЄМ ОМ чех Тло ЖЖ бр о Бко бо блшЕе да їж Хв. сежЖ б 0 От

І п КЯні их і. 3; М НЕ тлу Во и ри вм Б КУ и І Там т нт в Тр ДЛ хБтомамо вк лАш Квт лу лек о млм пАТОБХЦ А) маш ВаИ мУБОсКМУ МФ 2 я о щен оститю бу фури ло лу ши ща, мл ши фени ЩІ тирі а ше ли плу жир Ми Фа сп Бук о Жже шу сх шк ж Те уши СО Ха Ух те ді Як,

АЕ по Я пар вет лу бог дим Бик дет її КУ Ми Мі дай ру Дт б йпщк ша ми шЯМ ж ФК УЖ ши мем ДЕ КЕ САМО УСО КТ ЖК су м по МІХ то может бив 1 Лат, чию КОТ Ех Та ст и нак А Са лих Ми

НО ЖИЗХ сза Я сКпХо А ХРО «шжМО КИйХО МФ УВК шим ЗХ баг КТ мету

ШИ їи я МУ йдомж ті Що пошу бул Ж фл. М щу жи дошку ум фев ля п ву Цих мишою Зі! Ма ЖУК жа о сТує охо Моя жк БВлу АЛеУ лобом меш мех р 0 т ехо о нн нн нн ШК и Нв Ше теж слу Хуг ік тих пух Ух їйх о Уах їх ха ий о. МУ слі. ЗА

УМ Еья «лм З жим ОВЕН

Упр поемами Фї и мм кн,

ЯК шу МН ЩО У

Й

ЖЖ я тух рушія пад М Я іно шщої веиннеи тему вет юю ДТЕК А УМ дО «Пнх лаз тем ДІ шля Мчч ли Мч Ха ни Ар лм шву см мо лю з Зх цтш Зух мух АкКнотеу

Н ї 15 туя сах

ТУКА МУК ля ях, І ши МАХ Н

Ат. ПАКТ,

КО Ційхисіи пат птуачи и,

Мне МВ ЧИ ДИМОМ ЛЕВ Тх гйВхах п юю їм Ссзргезхі ТИВ дани пд тро сій МАТ ня МІРИ я т ОІВ АКЯ сум

АТ пд б. же м тк пут дух дор блю вана іже лу о АЖУ Сюй ВК

ХУ З

ШТ ка ши ШО оереДНН мя вм «их 0 БЖЕЛОК ях Пдезучлю тив овризич рі яку ул

ОХ жу гла ДОИКИтЕ ки

Пе «дйлк ЩИРО анти антитіла МІ. пд лий

Кая 5 і для фо приж Дохау. ТАБ й ки ух іх о Ата Те йзробре леж тмр обі Уві 3 ія ї я «діл паї овен НН жа ТАТ пк хуя, запи

Мих пр «ВВІВ пеучжня Бодя дови ллуве ти ух,

СИХ

ША Мт ть зовн іі антввіма ВНОЇ лу зи

А дах пошко мяи люд То б У фетру ли зу ще МА р жу ДИЛІЮ МІК

ШЕУ МЕ сему да зем. май ж МЕ ос ща аК мат беш шо сшАЮ КЛ 1 х т 2 МОЖ 4 З КшХ чи тро пою ою Ж ржи ВКх мко шко ті ху тт дж гам: ІМК Мого тихе хе міц

ТМ. Ага дак ія ть бус яше піу І АТ бен Піу Бишо Був Же ові хи а хг парео Чеусуч бяуф б, сту бик фі и: «М г ж мит йти ЩА та ТЕМОЮ СТ до тлу

БЕЖ ОСЕКЕ РМ шим слі зем ЄтТл мміру хоп М ост жиЦ АК АК БА ОТУ Ух «х ап Ка

Я Б Пл гла хо Мт І Ту Му Микити пси Му фу А а сх зе ЛЮ люМЙ ШУ флутло АТ Бящм ост сим ДАМО БК Защд о АТ СИ ШЕ МУ сх

Б) ще Бо ке не нин о но ОНИ вне ово нео тлох Фу б ую ЕЕ т Уж ах.

Вл слу са У їхщує МОХ о сзАа лк бе) ЛЕ Да ших с АТ СТЮ БЕ Мат, «5 пи тА ЩО згин ех с олхуу Лв Межа м йскуш 1 Мр тк Ву вих а чих их ки ик кпиш озмАМм о за тео Ошю АМСУ ОА мів тТх Мол Вс З ОшЛК пі ах й зв Б

Ти ря ам дя А ух Кене ве НА ма піу Тх ЗК ЛьХ 0МЕо фЩА Тьх УВІ бай хг хг, о ва ке й «їі лийлУ ОЖЕДОК «ВЕ шточна пост НиВні ве ях

ЄМ У ІМ. З т АЛ злу пе. зії

Яий СЦИЦеТИ вне тьма анти на 1. яп Я

ТИТА ИЙ МИ

Фокін Мо мя хо жу а ху що рю зеж шує ша Ас За паж впр оду УК Маю ха х М 1 жди КчеН «ВІ є ВІНОК тлі Темат оби життя хм «А ТУ ЧЕЕ ПОСЛІДУ ЧЕ «ИшИх

УТА, Є ДиКАТ ОТ Маля ТИ СОМ юки УМО, яка йк мкл ЗижхиЗМеия аНХиИТАЛ м. У тн Ак мае А бій йху дав тей вки бе Ск чамоавзевосЗею оУп о авкс Хе «КО а ша В ям ЛІ она Піх: ит кут и дл штуки оссинпаідавМмусве «ЖЕ

Саня ЕВ с ІЙ плит єнвх тт ОТ АЮ.

ФИя М ПИВ аптикиивЯа снесряттяз БМ. М

Кок ихЯ ді

І ши

ТИФ ЛК Тк дохе, тич. ра бро ух ха в ша ово ЖЮ ЗК ХИЧООВЕ СМпЖ шАМ МІ ї ел лвю Лю

ХОМ. ЖЕ я а

Са жНК шили

Уеіжй САМИМ

ТЕХ щмжучна редут пох дл ше ден гній зититінко КО 1 хи я тлебдмомрми тв АМрУК СТИХИ антитіла М. З

СИЧ а еушут я біли ик юю Мр Мих: Пл их Ту лютим ДЮ сЗтучє УР биауне ІК АЖ ра «МЕТО будо ках фа ЯМ МТ же тус ЛЕК ді сїМат УщА схаК Ки зЗіа - к ж й

Н й Нео 15 в нн НН а ОА шт їду міхи ду сь слу лБтомі мех кає їлтосеа цех о схму сла ва іа о ЗіУу Авт Був Тут А1а

УТ я й хх пт -кА шеф тех би про ах оо пт. Ту пл шк ко ЇМО одну ха кто служ пем Одже о і1мАОомМг їУИ суб Кл су сплю хшЕ кла мал вм Ух А МЕ

З 40 35 тІТЛ: ую пух бор и пухує тт гм фін ЛЯ у Ж ик би Урі; пд о влролак о пух й Кто шк шіу 125 бус ія ВЕ Біб бе перу лу щу ще пт

М тао щи бут йо ти До тугу ші шо ЗИфуєю Ух СИ ою Тео ктюує фах аю ти дно Фа,

ТЕ їМеТ сх МЕ ВЕ Мі ТЕЖ іЇнна СМАК оп ошеЕ Оу ХЕ см Ка Меу пк БЕ тух шуй

Не т їх що й ті. х - я я ще Є Е ше К де таті и дат; ре о стбумю о бяєноїУюм Діла Жегу Деу Ве Жито фія щах ка ло шАСЛ Ма ЛВ 7лУЮК КУ Су ст піз тро Аа Ак лив ожнт ЗУ Увай

КН БО З

Хр р ім у ую тод Ж тує АТ ло па ому Ух оса Ко Ммудшо У. пп о Ула зе їла 105.

Ми жив ша а шах диктанту са Дищка их, пежлот Шісезічхітох грі хтрі тт а ет мя ОМЕШучНЯя ТЕЛЛЬ ВНАЄВЕ тиху

КИ ПРОТ ср ТАТ й, фік т ФК «иа СОКУ внтисмима днлитале КА: дп йди хаціи ха

Фен ТЕТ 2Уриу Щвиотовту ТЕХ; бинт Ток бек Мр пилу

ПЕЖО да Ас їм пІю дет БУВ ЛУК Ада пах

Н - У

ЖІ У чих 7 т хейМО ЕМО МАІХ: «М ДИжуча УС МАНУВНЛ лять ву лютих, МУ диму 1 вою ей лиц «шо боки Ки ЗрувчяжНогя дней КО, «М дл ті пбошую лев Бас Люуиє Шоиер Пжею. мм олиВи лшфю сухою шо сх : гЯ рин жи

Еш алу питав в» ге нржтьт, шоу явля БІЛИК тих МІЛуцмо им Ех плит «лк Б Не ШИН пт а : ши жд «ЕМ СК дим пититіла ЕП сапоп СУ плн Мо тт Ще А мису роми Мр м: ет зи

У АЖ Жир Вл Ат дви твя лу ві ли МКК бух АТЛІ му я о млу ва. х ц «Мп ВИ

Б ь ШИНКУ кання КК плечу мок «ит БЛОК

ШК пАпхрщо ері п ие ем, щи и зиму ТРК ЛА ж УТ киш ше хропе п ФУХот. й сумні мл Ж КТ «ИЙ о МіетеМмівиже аву іоЯ вмишажАла ЛО ХХ ел. ра ких «и

Ху Йти Яр ши пізно Лю дню ди дю МОМ ау ху умо Мох ит су зу

МЕТ упо мА ім МЛК АТХ Кто рт леж мМ лив УА пе КЖО А АЛ ї У 15 хх

Чия Аа шужуУ ла Му що Ваме ЩИи и, што Ж піхи о Таж Тиху хе М; їх Аа шех пі тля сих сах КУ Пі бла ЇМ іїхкм Ен МУ Змх па до з -

Ж Кк КІ фр жу йим 0 ту тт я фищо Мжуию ії и т уд Мо зи тв Кн бл тую шЕТ ІЛ ДУХ ші ІхІД ЗШух Кт Ум пі п КХоє ща дим: хе о дк СКУ о о Б уїла. дсвну шШуюмо тд Мом Жити Ту: їх То їхня 31: сту ФП Шиує Мис мож мпіМмодвр жах Буш Ви тс Дек щі Гье о Бюзобіц дтУх БВ опдех мк ех зи я «З

Щот іли Фк думту Тім Адм жЖама СМіує Тл ше бшок 31 хи Сі ПИ о ку М: апп оваш слу впро йкв тв Бей отас Тіш пек біУ ТК ЖЕ йто Ме кк че рт кг шт р М М

Мате Зі дя ді Ту Суд ЯМ 1 А Ат дії кг ди; лу сту т алпполвай ОА МБО Оу Уус тих поли оз мае о пХщ Ж о зпХ ху Ул щи зе ЗА пу й «акт КТ ТКУ жк що ву ХА товах

Біца Зі Ку ПАХ ХВ мує Ул. шМХ МА ВИ зму рах

МК о кам ри тая «сх хх що, «шк 0 лОде

Ти БАНК підло 0 дув МІЛА Дома к лЕйшх .

Как туп спаді хи і ни КИ ши КО СМНОМОМ се ЗК дя ДНА ЛЕ Кт КК

ОК «ІС хм ЕЕ ни нн НН нн он и ни а АН НО НЯ пнЖ о Зго дох оди Гц пл дае Му бух Аа МЕ х з я 1 я ях шик ту р «каш о им шик фути ле ААУ и птАМмАЄІ ему оц КІ гм

ДА ОО МИМИІ ТАМДНЛ МА СТЕ

«и гла МжУе У пере ій дае вх ДОВ

МА ЖИТ Ат ТАЖ ТіЛЬНшоЯ ЛЕТ А МЛ ВИХ. кум дл тії пе сим Лог Ку ри бе

УМО ЗюВу лет мух клю Ето пех ту -г: дили я шах шу нія іеттІнМмо хх 0 БНО «ШОК прим чма ЖИМУ ІЛІ ВН

М ий ше ав ОО змив лхава Ух саАйтих пилу тая илх піз ту т сб дк Локую Мал тва пил рт зт блю хХЮв АЖ ЛЕ бешО ЛК ОошЕМ час яп п пе и ях ел ри хи ОБ а

ЯК шАЛКИХ стул пін сут п пев і тина чали шлУЧчНЙ ИМЕНИ ЛІМИХ

ВУ

«ЕВ ЗЛ оєиатев зіонееЯЯ марні ЖЧ.ЯК кое па «апп шу пат бмк За ба» тво Міо Бк бто ек Уві ву Ух Яаж ее ді Я; «МИ ЗМ УК хМАух ІМЛО МАТ ЯМ ТУ ЖК УЖшКі. «АТО ЖК ОЕЖК КАб см їх

М ї ви Но бе Дод птах 3 ан в и нн и В и НН

Ул ОАЄ ашиНК доме Імя ОСУД ся ЗКУ ЗхМТОУУАМЬ іМКАссівіу вовк у о кжх вій іт як и ве ях Би рою уж и ук МУЖА фот Ту В Мп ж ЗІ у УУДОКО Мадта. МК Жрмосрлуе пе Бут ТУАОсзИи ШУуво їм УКОо сЗІх Мо шва ОоБдОо Хв. ей ж НИ За я пл 42 З пл щини Води Там о щу ук Фідер тд Ша, Шк лю ШІ: ту Мою лу тує

Фідий І сх Аж Вл ПКУ шою КА БА Ху БІ ЕМЗЖ сх Мб су м ко ря пи 1 5 оці дихаю Хо ви А пк Тим шу т шим І орі тиж, них Ме

Зал аю пу Були Аа ть Мед Жири РАЗ Шех ху КБХ іл Би мех сх ТУ та ВИ

Теж О.В до пф Мухи Мат тя Ме лою нн дж г джу Тен Кт я ул

МЕ осюі йоя ЗрошУує теКоцув іп са ЕК овош Ко Вл осля пду ХУ

Я па я

БОЖУ мл Си ов Не А А НА НА НН зе ба УК спа ХО Му УА СУМ ХО Вл. всі яп КНУ че ВУ

Коня пуху пли ап тую, НН

ХЕ А

«лю Ош ЛК не я ОХУ

Ух Підчтчечуєттв о пігкоч сто приз ню ан

ФилдЙ МИХ уУутНИМ ФБЛЕМІЛОДО КИ АХ ЛУЛЕ «им

ОСТ СТЕ. Ту служелча С ЛК сфе тки. п ЩЕ в нея ями ЗрА щитом: аруветіях ТИЙ. си речи «УДК иа пн кота кн і р и о НН Я АНЯ дж ут спо аа гає су Вар осо жи Ід ее ї 5 15 ел рух пух чяЛлЮМ о Ку «М слу тух меті сим ІПиК ит з йпнімахео о сти мим тв, ук п ПУСТА ТЕХАИТМІЛ КМТ АА тк лих г, ТРИ. о ут ТУТ чапчукані уі О ОВ сам о плей джипі антів КЗ «апп ВВ їі Деу їв Буря Щиро бек; Це т їзІіМ ОАЕ МжЖЛ му Хщ яютт сту х у кт Ла а жди «МУ «пі х п живо ЖЕК

Ма ж уцаия лона ЛИ НАУюо ст чими нету ТУТ ТОЮ осоукнти У.О сг ри ЇВ «ї я УЮх ПЕНЯ дийиемиУуа антитіла КЗІЯВ

Ах за

УМ МАВ тую фур дату Каигу шу Жіру. іх щі

Зі Аза Таз Авробх3 Даю ТЇЗу бах Уа йо Ук васжиски УКХ я їп ять же хи БІЛО «Ту почну: м тий тм сви неви Ж уТЕН ТИЛ КЕЛА ВКА СХ шле,

МІК тоже рин дм В внемтіма КОВО КУ в НиКУ Міутоціции БМ МечоаМіия ам ла лего «кт х СЕУ шо ех ши слиз ур: знах стих п Мр Беру Щек За ду ді Пет Бус іш ім пах лук пло ІК КУМ сват БЖ Хо деЖКо о У ВХ СеЖ ОО ЛО МА ху кА ху х п ТЕ тк ї х не МІХ тв для ми Ті ве у тм Жи І дотто дент (Щі я Дт пух ТК Олі дит йАішй шах ТА ХлЕ бУуш ек су сть укл бе бу УТ ПУ ТУКА ж чи пах, Ул жо йшло «ТИ

Уран нич нн нн и в на а Нв Ве НН НН НН НН Я

СЕУ СБ СУХО БІЛЬ схітк Оу МАЛ су снОТЬ шЯХ МЖХ ж ому жваУ сок ух її шт сжЯ

ЗЕ ж ВУ ііі до Тахо бом Му ау Пік Хто їх ТОМ домо ТМ ож т ів мА СДН жи оут жжлро вуж пак мі За ККоОосхКи Лі це пяех бу Очх т цу да

М У БУ дося ем ут ую йоду Уж Код СИ бик ру о ер Й и С Чяяю м де ТМ то йди шШЕ сСху БИ тик Адсв о Увх Ка Тл Тов Шех ОС. їв си Биюо мае що Уе трі діє мА ме зу пе дн Аа ше д С ею мен ни ан ННЯ Аж т ия о лі У под хи УЗ т,

Блурожіцч йувз вЗу бУуЄ ЕУшЕК п Мп дій ТТ АвроБжа Бдусбпю БЛмМ Уда пе гуд ак пл МО ЛЕТ іх 3 45 б Фієє боює Уущї іни й тах вва у Тек БІ ЖНя же Уа бли М їй ях 25 р р т гум тку ж М кю

БО ВНЕ ШИН

Еш А ще кожи жк лу пе М дао мшжучняа пПоОслЛІДВВАМСЖЕ лу

СоКененЯ ФІТУТи ссвіІЛК УК Й сироті дк а о єсц ходи мото аншмеМмАава акта ла кт, си ная ОО

КМ Кшх будує Ля Муки лу Жук ри ах тк я дя стю оба У щуп вмс зим м Уую о гю Ммум охує тка, мих х п й ї 5 Та вчи хо я «шМмит БІНОК віх ШеуУчНа послідовВихтстх «ЕХ «Лео Сент мене, пні м Ки, «ші пише И мли еніли: анти шілай ММ, «дл БиЯ

ОМ Ля Я шпаи БЗЮ о жело мух БІД жо мЕХ

Н «г

ІМ пай

БАЧУ х чо У «ШИ ОБО ток РЕННЯ

АБУ ше ЧНИй мому ве длетрик жААхИТИ

У Кт НН я дили ме в ШО ок, чаш ПОКИ лимтчній вічка с М. ех само щі

Ша Мт Сп што М м джу нот МА ож не НК НАМ пу стпломАм Уві «ли дж

ДИ МУ не чи ІБАПИК шшЛМУ пес ва УМІЛІ ям жиму хЕЙЛле ючммралтю яви ЗиеВЯ внтржле Б.В шани ЗК кет КАК тур Мер р ро Мін Фк бу би Шк В Жори що фугю хро ураху рв пжш у ша ве ЦО ТИХ шаАТ бКО Бус ших УЗпіо пежЖ ах шеК ХО шу А 1 В 13 М ем дл ша жор спи мух м ПИбАКОУ ЩО Твою Тим и А тину ув КД

УЗУу мив АЖ УМ ШУ ех ЧУ ШІ ОлЕс жи ж шо зу Гук пи іх ле т

Ко Кая хо не о ов на А а Но и и в Не НН Шо не ен ж АШЕВОТУК САЛО САД дО БК бу ВО дна Мох ЩА ЕМО Як УК ап ЗЕ ит Мо шою ду Дня Шут. у и дя М жо чих, Хе Міо дує ФУ ле пай гуд хеЖ о муш їькбр ож т ших Мам я го піц РУК тя ет К ХМ М Х я зу и

Жид сШрюи ОДУрЯХ беде ствде й я ої ую Же дою юю мух ом фам, АК ппосшт ші дви оХпх Ада СЕ з фах тА о деж шу ТК о шапо Буш МехУ

СЯ Б У па

Федя тла Ву Ми Люки Марину ту би Жутух Ану саму ум де хгж диш саа оАІіВ Хтшохук УЖ Су аль Аа до йжлр бу лах КОХ ох Уа шу Во ях шим «Ах юю Буї юю спи АЮ ІК геї зиму

Бтнх їЕмМ о тТУк У Вих жлєю чМаї тих Уа т

Не чих

ІЩЕ їх

УТ ЗЕц

Іо» асо глррістх х

ХЕ 1 сі др уд У пли д риє мумо ре т уУЯ ух,

УХА шуми пПОшламлОовниІчаих. парту

ХГ

ОК Л УКХ зи Кожне Що» їх евйпм СОКеБІ лиже Ния змумхіла КОКО я як паю гли по дер томах бут дату Му сила ду дя задхосму піп АЖ пПем ос уМ бЕІ Пух СЕ Ака ех я є зй х з з ао нННЯ кЕіоу хе

ЕМ сш Ки СЖКЕНОК жирах дямачни Болю сот «ЛІЛЯ шити тк клмски ІЩЕ М. дшиченвні ма по мало ММА тя: КК ЗРК ЕВ АЛИЙ ЛМо О ши МБ и: шт ра ток. думі Кі ко їх МТК ХЛХ ле МА ДОМ ЛОЮ т К «и пт «Ух, ух екю шітрдя вух ХК нь Це пит уві хх,

ТАМ Мтучна пана дет «СІЛО Х люту ТИ. плат МИ КТ сеунтис нд Мед чих ТММ КИ ОМКИД КК ТАТА ЖМОШТВ М. УЖ.

ТМ Ух ЕТ їмо теку дош: Мои боях СПЕуЩИ ул Кк

Мід вл о ШЕ УК КОВО ТЛ пюУ МВ, х Н г: З с : є тут Уже «ЕІ з ЖЕ

Ки НЕО чі БЕ жо Ву чаАХ ШИТИ МЛМИ ІОН

КО Кя

В Мои мен двом МОСТІ хи МЛ УНМИЩ ТИМ СВИТИ ВУХ УМО г иа я я часи пе нн нн и нн і ОН А о мед ОлЖт бзіх дихм о сСКпХ само фо тшІМ Лія і З і ще ККУ мА

З 5 ке ях, у що ни У чи Мо ри Ро чу ідо ром хе дян тд й г гади чаю Дх пк КІ Те тесть: ще че пі шій дет іх біз дет так ле й уп мл .УшТ ДФ о пк шу ОХ бу АТ АК Ше сау М Ж Оу Ох сх чо БЖ хИ ил БУ дтихак лять СВляхє пли є То. ач. (ИЕ йлею тшуу я У Фа о яту пфр ж уч

Пех ХЕЖЕ ж зЕМа сі бея ска см Фа опех БгОй о уд Без ба ке ту мор 5 пок, ли хм ах пу Машу ие Ух леж у я и ТА фгих КТ за ач ою Фу ти тк

М Ві пет БУ Аж Ба сМеК хім 1 Бл ша Ви т ех см ех р пе КОХ

КК пд Би дже ким 013су фо ТМ ою т о тво Ждм ру. Тож лам х11 ху рі тет дж Мат

Аа о шеХ лу БВжЕ Так ВАВ Жах Майо бле ФоБОШех їМУу жило Кто мах де ех -к ях 7 їй йо дет мір Мід де рію хи ба у АЛ у А Щонту жо ко їх

Аве МАМОЮ МЕ БЕЖ ОБЖА ЖЖ Зам ова зт дбпроБкщЩроовре флХоїкуУ У ай п ЩІ су п п ПО кбчк РІК схе ЯТлоюи Сію ох Мр трі хи та твпе мау хХуж іме ТИЖ імя ХО ЖМХ М Хе те чт

ММ НЕ ек ки тими ме поко

КАН АД

Уж М

СТІ, йде. трилер тт

КУТЯ Мт утЯ я: ТИЛумМІЛдумн и

ТУТ киш ел, СУД курник д. дит їй дол

ТЕМ ПН ДИ Я Межа Вих салих ше я хи ку ву Ли тож кож но но на ке Кая дат о шкху лай ОВ!КЯ вамошжМу виб ОЗзул ук й. Є Е х 3 їй

«ВИ Ол О шик

У ОБЛАТУ 7 ший лм 0 БжагМ тк МОХ

Коен Те чяхн і прита мук Зп:

ТАЛА УКХ Уа ПЗ л ТИВ

ТЛ. теки шу СТУ мив ма кі мжю КОМ шиЖ.ММ неси жкаяемоит антихійа МІ: каш я лм о жу. Кук бі жил ХУ Ше с-м» пек оз йхщо што хех і 5

І х че хх

М и «и з

ВО ПО шАСМЮОМХ Мвмпмя ПКУА ЛІВА МІ

Сх

ХЕ КХ тк УМХ, хід до ІТИ йо камер їмо лися: МмадАСМІ ДІВУЮ юю ЗМУМмтТМпВ БМ. п піт юр Сон мя лику сх ми Му Му их 1: бамь ові Сто Аа для Злр отв веж Мі ї х ек НИШеЖНУ

Ум Ахя пі пу зл хуя ве жоинни ІМ ТУ в ьЬКя ХА ЗМІ ЛОВІ ух «АТ пеня ФК АТМ зт пон ПХТ дшлуеситюі а. Мр: ве УНН вжи еПоОоя вежурліа Аж

АД ля

ТИТА ка жін бах піз Ума ік оті по А Шут да уд да мі пе Хм суди я пах ух Зі їн ТЕ ОПпіл ОКХ о; Вус пед оХв3) бетомах пек про сх МУ шт я « ях ж х З ій ха «раб Вів рено тв ми бро бах плак іа бі їдма шле вом їв бук Мк сп ов сну іш ТйЕ Чудо жо М сам слу Мам Бк Ал Буш тую ді у БК Кору рам хх в дме ни Пік Ум йукує Ту ШУ пк р им б Я лову и и ето фжре о хмЕ бай М це БуФ се ет Умжу ХО Ух ши Стою ДЖ О ТУ тА т 2 пр онучи ЖЕК ЛУ жу ект, сбесує тупу сук прути. ЇМ Шк Ех паю хх З іш дя Шешжх ЛВ пт жо Шев См ЇЇ бю» са Бжаа бле ех бі 08 п. СЕ по дав жЖеатг йпі» фба тик о Хів ве бохо лак т дет Ці Тих о йім боб Мах тещІ Уж Кому ТЗ слж ОМ АЛУЮ ях ОТпХ ха лу бу ТфаЖ сам ОоКтОо ех ве: пе ту во дотх і ю Мб лю беж бек бод опіх АлА СбЖ фут дев ша лтЬУ б ла бвИи оса дхвоБхв ту їзеЕ о ЗюВ мЕЙй ба Ук влЮ ос М ЧІ ЕХ Ух па з М люк пи Пер б м суд М ни мате тв оз Ме су ил дру мало суб о УА ин

МО хай

«1 гох пл

ТІ Те 13

Жов жо ев плетую пед МАННУ хи, Пім чіт: де стилем тати и К. хх шу у Я ЦД МИ ях ек ПТУ АЮТИ пюре ня кт ВОД води по ДОС те шидемх ВКтиеиМиЗ ШНЖХЛМло міх

УП и ох сх Пр трі) сія жом дк дру блю пк АХ их -Е о шехЖ мамо »шМ МУ длЮовуш УКОЛ сш

Х ц КУ яса х чия

Так ям лю жк ит їх мч БІЛИК

БИ торгова ли пох вім КиУм шкі шк пола мОМ тт роми

Кок ФТІ вк МмІА В То ув ми ик домо І

БО САМ мі ІТ ІХ лк» поста

Пл. й, ЕТИЮЮО Мр су Схже Ух поль ойЕВОМВХ ТВ дХО што ех т хх ї й ення ЗюТІ «Еш МУ

Ех З мир Я стю ЛЕДІ «ше ОБИ ЛК «ЖЕО фун пен КтУте «их биту УМТИ.. ОХ модзнсиТУЄ ТО зт Я і що алу «ай НЕО Ж звшинисій янтешжіва ВО «АЛуя ІВ бі Ака тт Авроімет сь БІ УЖЕ «пт ЗВ

Ж Ме

ШИ БІЛОК шим шлумн лані ДОВ УКЬ каре Й клю, ПУЖ ок я дике В рені а КІ

Еш ММ живих знтмтіла КОХ ел яз

Жана Тк ШЕ лиУи ши Пплеборшимл Бо дшх Маї Зем Уві ек Бус у СІЙ 1 ї Ії хх ті Ал ши ло есе одежу мли дує домі Чим сш Види 1ирво лаях М

Тл йта шк ЦЕ ме ТММ Ме ім буди я їжм СУМ Ат Бета ож пк вон хх ш й г й щУ гл г Жохитщо Пт ї3Лоує ІА дію 00 Еш тами ДДТ тлу зас їше ТУЮ ДІЛОМ о Мув Бяс сМРу ВО Чах Бо тям КО УВУ тха ХуЄ по Оп ут гра м шию їх оби др Сх прі Ск УНН х с шо Б па офбодо дим Мій дж. ши дет сх Мах діти му й ШК ами із р

МАМОЮ ВЕЖ шал му шжЕО М ДУ ЖЖ САМОФУЮЦ сл ВОК САМ ПЕ в З БУ бю бул МКУ А де бик у рим бух тен т шию пе ТАКУ о С у жах

ІДІТЬ шу МКУ ТМ вх оба лихо їмнх ву діє какоОпьу ХХ іИй лол Ми п пр Кі що в т Га Б дому т Щі що сш им о йду тло у М що сАуку Дами мує тт: Мом ил, ТАЗ

АввошАм Ма Ол ОТухк Ху шу п ма ХТЮю АВ МИХ СА ОВІій ам ба вх я вах о а о А НН КН якшо Сью жМЕХ Му КИ ху ка лу МІ сМвМ

Ін зп і ки Вих

НЕ КО вч тя хдами дя ел дв зпшоюК Є МИ УмУ

СТУС 0 Зідеити ттф і пт сто, хо ми 0 ШРТУ ЧНІ ТІМ АДІВЬКТХ ЇХ секту,

КУН ал ТИМ. олія БИ порно ШКО тайи СОВеВі дить зшита в ЧУ АХ кож тю ли уу б пс де Дохниуо Жауії тк г готую ід Фо ел ослу Ввр ока Спа сІУу Алюо БУ ТУуХ Мав ше

І ь 12 тай» ЖІН «і еяїдо БМК ж шен молі леви их

Еш зкжутчна опр а стю «утих си ШЮВ-ОМмХ ние ОЯ мишах ВЗ.

АЛ шоп тіл: ж НЕ ОСЮ3МО ДЕ БА ЖЕ з х ше шоу хват В ах па

ХлЖУМ В п УБІК А ЛТД АТИИ сх каш пове янжмеМО:а авеитях КВ.М даю та «ами В сті СА я я Клум опти: Щі щі ти піл ойія блю бр Мак пл БІЙ дж УпА 1 5 оно Ше

ЛО КЕ як ІТ

Я штУМлих «ші БЛЕМ

Ел Тх призи Фе зи и В М

Ж Пд жна ОМ АО ВНС

«си

В: ех кози ше га ВА УА ли УК меми Се Й плахти хи ах СУЛУ ОЦІНОК штамом ВТ яА Б. «Ай Уа мен нн мому тині ЗУ ню хг зу шо фі из їі им дай стю моїм Тв пі фут Бр дл За Мет щі ик ВБлуу у ли беж осую шім іду Бу йпій бус рюз Бек Уві йевоУузь Бех ВоУ Ду шу ї ІЗ 2 ук і З ко м тер я ни Мод ку ун ду сля я лу. дк ово и МО УЧИ

Мпж га лев до жаЕ пу леж о спху Бзроак Сер оса? ЗЕ дУВ Жую чах йо У ХО од рани Муки є їЗ м сту фен Зі мн шко дю МД том їі 1 Су чу жив отут шує Сів Буш Беб о сіуУу БіпошеК БО Увь Без УВІ іс Тих

З5 дії їх

ЄтЕї пу о ЛАШНИН ет їх ум КУ ТТ кан Мр учи кох шу я СИ «доп у щЗех ледь Моб БО лек слу хаб шт мА опис о жлаВ Шек о спау пах п2х гук НІ хх ред и хар одтлУ пі дян ва дл доски сао фу гл У Мі РКК птв. Мій Мих: даЕарошех ААУ ви ТЕ оман ул їн Юм да Ж САМ СХПЕ зЧОже Важ ОМе

ФІ. тека ТЕ СОЯ

Ка 2 5 ме з -з ха ду пкт чі Урі КІ «т з х пк ща сут, ля

Ж нон ЩОКИ Зм САМ. ЖЖ ся: АКИВ ж пОшІК Т Я ом Се випрозам ній заг Кжх ЖЕ УУЄ ат мА хи Аще бВх ба ЖК опау вл па Зп з те ігр обшиті Му тд Лид ке

Бе Піт Зазж сю Так ПУуз ча ТАК ах г да «Ам А речи ло

ЖАЄ А

Кт пліт

Пякх ж шх КІМ УМТУ, г Ку Пртєстрщ тд жо ТИНА ПОСУДИНУ ки для ЄЧМІАТИВ спрюлтеми АК До ліка ст В ТУ

Аа «Ці дити антжитіши БУК

Ух пд чАМОВ дах он нн в нан НК ЕК и НО ВХ ек о шпку Вию шу МецішУю гр ме ЗК Уа ВЕ 1 5 10 нку дез сві «ХВ я ж З мілких ОКР, нт, де зяуксий сис лк чек и яр ве шиКулами ТИЛУ ТК АТИВЕ туту Ехя,

ХМ

ОК пи стін ром м ЛК

М спри анти ана Мт ож ст» яко о ших о нн в он Нв и полю свв ме опАМм ЗО ВІ пах «ийца от сих иеТьс " жо «т.

ть люк пе

Ж МАС демо я пілотом прє пит тех,

МЕ КК НА ПОВ ХУ Ех

Саня путь іш жк : Що га злих в На ЕЕ зу УМА вили Ммиих ВНТУ ла ви у «поз Ві пло цій тущо дк цих срді Тв р ущі же ва СшюЮ Ай ши ХМ гаХ ол у М.

А я квІ сах ил змі

ЖАКА Мк ям БІЛ яд АКУЮТУМКЯ У тю о Мовчить ик бфуусм ик жаовуМи УВУ. ЦЮ ДЯ КУ яхті «их хни нами че Й мачо ілтх МОТО до ЛЕХ іти треки Я ЕЕ СВА ХОМ У МІЖ, шк г стапОвжо ж жі бан тії та Же сі бат Му; ПД ИАЛО йшшо ми щи ши її п

МАО М Ж спал Бе Кт ХІІ ККУ ШТ Хух МеХ Мпа жу ло олтиВт жит Юа Мох Ко х Зх НК а дип Вдома жан ад о и іл тиху (З ху Даю Лоу ту. хуя тах олйлю ло опе КТ ду Туш ДИМУ Хпйю плу ТИМА Му фу дпУв о сКуло УА

Ух т хх, хі Я Ка діло би: бо пл ув; там бут пл йти пу 3інму МАЛО жа ло Ті тр

ЛУ ІЛ МЖК їв о бнл пух жу сиМ ДаАТК ст Х МИХ ва ЗИМА жк МА УМХ п й З

ОКУ З за то. доші мин ле слу Мох о ух тр ад ті уех ЗК вд і ам змІМм ом о ФлЖ би ЗАКО БЖ УК му ВМО БО саш гшч БІ век осоу М «рогу п пи 2 ж бу

У шо хх - піно кл -к - ке ж сх У Но пози лути М дит ших г дл в жів тиву тТизу фе жі Шрек сурми пу лих Мі зап оваКошАу зЗЗроТпХ ла хйу хшм їпКОоїкх жБеХ о спау ХП ЗМ ово пає шк те Во ча щх то її й щетх шіам Ж А щенду Чи Фукух че их дід о шу; Вк дюн от Ал тр Мах бли зі дит р жує їм ДІ пл ОдІД дж ЩЕ МКМ СпАЮ вла ша «хх аг ср

Ку Ба ВУ те ші ж бю сук пн МАХ СТЕ впа щАж шах су тлу АКОТ їз «ПЕ у ЛИ яхта ВХ «й ОБІДОК

ОМ ФИлинтіо рили ві (тих плеАЛІМ УгрУучНІМ МІ ДОН «Й М лих Та же Еш ем ху, ЕН вче УМ ІНВ МОІЮ шШЕТУЕЛОЛВ ЖІ КОТУ ит, пед ци КМ зднео пе і Фі ік ву шк ща Ли лез що сх їж аку м су ле лу МЗЕжоОЗмух їуУулоудА ОО ЖВХ 1 В ХО

«и уп Е ші «рве БІЛОК

Тк А НЕБУ ЛЕНЯ ТМ ЧУЄТА ДНА МУ пу

КО о НН тп озйк

Йо СТМРХДН Хода М ммлифті и КО ОД зах иє ШАСІ ЩІК юки СКАЛАТ «ал пе пен п я: Жов сб туя. доме их. ох

МмемаА Му НК бі ОТ КК ЕК

Що х,

ДОН зії чі В

Ем ле Ген шля, Мік п. о оух дотри вим шоу штучна та цо лень

СІ щен 0ОРЗКДФАТ Я сад тю й понят п СО т лек хди чі внктискійь ати жмя Уж АМЕ кал щу

Ку лИЇ тло, я уч соду пу ТА кт пи хх т.п олха Кор оБвЛЮр о ЗеК си Бі сю УдА нсктїнх ЗВ бек у дО а зпйй яд Мт Оки плюшки

А МИХ,

Ух чну ці си і чу а туєнх ех, шу тодом в ЯОЕК о

ПЛОВ йди пк пмзидтій ЩО ОхЕ хлЖ зі авлас арен БОа смт БУТ

Як жи

Зако Бик шівя бо тк Щі бБкОо суб Жак о бпі пек ті шер Бус у ІВ

КО гу іх мем о жиж ес Ес шо шХ чав оси У НК КО М сх ї 5 її я х У їі М ту до Фе и тк щу бух ті дохо шу Фк ди ем зро

МЕ ий о яшаХ дАФО МІ Сув шк су АшйьодКя Бей осьу диф вуж шує жах ту а, хгу

БУ я яз; тр ситу ик Ііщо й бохіт мул т тоюю тя я; Еко дих ги рі дл З теж сш лет Бук сл осей шУмЕО КАМ ОЛЮУ АТ ЕХ ЖХО хщм пі Ма ї1МВОСКУХ злу «и КН вітах Мі офі йо Дт Ум вими пак мм у КІ Мою У км ВТ хм в ши бно пет біл йжму Бхш ет шу ХЛ фу Мо о дхо МИ о дех ПУ бах ши по ки жор спа пот пеню осв Фурмо Ух ЗПфає мо мер ст) тою пня ді що мд ов жк оду ЕК ЖК ува скпЖ фей лий Влж шт М тТИилоламй лі мех

І КВ ТЕ Зо дош тую дл де лах хр пт мм дл поету Кі де 2/1 до м тА ік хм ола: жід жу уко Ши силова З КЕ ма У біо сих па

БУ пд т ун гул АУ при: Ті ТАКУ б ча УРА ТЕ У

Млеак мим ЛЯЙМОсиду МІХТО МУ УЛА СММІ пл ами

«Сх КН шій БТ

М Пітт дві тричі ук паї ек, пу НИМУулЯВ о Ж ДУ ЛЕ досту

ЕХ

Клхсита, ЩІ... сер УК ТІЙ прик 4 ро вень шийемх шншиепжім антианіма КЗ. «ат У. ла з чи ше нка ин НН НН НК НЯ шу ПІ ДЕу: Броб їкма шт АЮ бур бук Удо жо : й «й

Н в МУ

Кт лих кіш спо

НКУ У ит ту тп «ми ОБІДОК

ОК 0 фрі ситі кг изя

АЖ 0 Шиян СЛ ЕДИВАКТЕ в УеННия яти ФЛ. адм ММ 1 сперми ЦО хх Ул вити хиа антижбала У. хх им 00 ких т х ше вті В Я 2 ім обе ти йірй бе бує йиу піч Оове бак діб бло Кут ау лк тях, яд жи ЖІ пах В ит, прим хкійшк БІДОК лю пер Кидати

Ки МУ Нти РЯСНО

ИЙ Х слу гтиЕШІІСУ дере. сучеомоні ла КОС

Ох УКЛ ОМАН САМЕ СІ ЖОВКВА ЛИ ОМ

Би «ях

У: жо міч дум лід у. у до лю м сіподі тт Вами цех осла ВЗ ру хах

Н « «ехмітьх 0Ощру

Укішх пк для пі жа мн сЕБЖВ ОО ВБІК пень Пен офуєт Ффицмеі милі ит

ТАС 0 пЕДуУТЯН ДАТА ДАНЬ «ЖИВ косе ІТИ ух, гетастию тую Ко пиття сі дИТу КИ

ТУМЯОК тихим у ЧАТИ СЧЯМИМЙ свв іа ЯЗ. ВИ са сю

Ж Ох шин Тбжюячи ИЙ т пу у ЛИ клин Ліни миє 1ВАЛ ую 1 Кшяю Тю и МИ пет шт І ши ЖОХ МІ ше Блб Бах о Хві дек хв олаж Бі уж п т їх Ко роли КИ дек Тит, х г. я МЛ и Теги Ди сти и Тл, т; Хо Мо ЗА тик 2 пох Ти ТОжО Єямт Сжце 1 ікси. Ди: Тит 7 ку доку ЦИ жи гаї

ПЕЖО БИ ОиИ мл СЕ лу 8 п ОЧКУу Атоми у Мол у йпдуМ БУДУТ Мал, хо У Б сиру пТюте еюи Фе сію ж швед і і бло ее дл темі дООСті тож ипчЕ ЕТО УуУуКохм щмшАТ У ЖЕО с шАМ май єн ж о Ущ МЕ УЖЕ КОЗУ Х «те, - їх в т а тії1ї иа людою ги о дужі фу опи ФІ КЗ о дув: РТ що М бик пн йду плід ойзу деж са вжи же екю ТЕ Божої Вес спе же пл ех г З ши дет йелобім йо тТВЕ ів Тит спец ЛА ліс ВеХх іо ЖнЕ ЗІ Ес еко поло У ЗЕ БУ

М їллая я ами іх маки лює. Шу У що тю Дт був ХУ Чт тлі и ач о бім лід о АЕУ ЖУух ут щук щшМ АЛЬ Жир оду пет бід тип ПАМ ЗЕ еВ С З ту т хі Шкрю ої в точи Ша ую тМиФо їм ЖИЖК Ма у аж мук ма МЕ

Не

КМ во АЛАИХ ХОЛ пк пу

ЕТ шкіл СТУ тев

Се пилок умі Мх мими зму АЛ М

Бони стюмсуя, жу спо ТТ с уличвтян я тугу ДАЛО ТЦУХ и оЛЯЖАюТВІ ЕЛЕКТ Мо РУКУ Лати опо От их и є ст кт чек міх (їх й то Ук 1 Бе пз ім Авт МВІ Гей піш йо пу Тк Уді Зах ї гЯ 1 шо пу. типа сш ж ке

У Еи Кл

Ти КІНА ня трясти строми лики и «КОМИ ЦИТ ЧУВ ПЛАТОНА МК УЖЕ, сер пкм,

ЕМ

Кая УМ М схргвх ти КУТИ дат В ша по тиха пИАевьо антиеу з» антихіда би ап у «Фапх 334 пащойювр о лю шу дис Бк те

Н х мя ДВ ак З м, туге «ших ОО УГНИЕ у АЛ ММ ДИМУ шкруким» ях

ТИХА

ЛУ Ля КАТ мадам МО залу ЦО у вич они МАМАМИ ВУ САТКШКОК АМКУ й. ВЕ а» «их тк що оту дує шику пт лавр ця лим

Уві мах шиу ЕВух леж о скАЛдОСІТЬХ ХУ М ї є 1 т пес сб «шим й нини ЯЗ слух шип сууа я МУшутуи ЛЕК ЮМКТЕ ТЛ АТИЇВ пулу, мм лис сю хни вн, пд ВИ Й ги ли: МЮУ

Си ХМ ФМ ДІ пивиа па МІ. ВБИВ

НОЯ с тами йо по Босй ФОктІ жу сТоУшлО жи МТ и ША ЇМнНИУ Си Се в че 1 Паою «Чеити: ТТЛ мл

Шев Ж Фі тм ХВО ЗХЗтЮ Болт БЕ дело ем Мало ехо кт хм АБ

Е 5 ха 18 ткк;е ді «хг тт самє бах ш шум МЛК Мат Мр те ТК ду тор соку зі т діа шо ті ств пика ех МЛ бл пр ба КУ Вл суч соку лі

ХТКЖ мед ж БА АТМ Аж ше Х о УкУу ЗниЖук та у самі птж ЗМ ут ут ую м Ук КН ше спи пит ТТ їмо тиж де: Тл» Утгф свй жи; А Ту лируй тр вх

Ж СТЮ УК ши АМОУУ Ся су ОАмо ем до Уа иа ях АДМ Х 55 4 5 тіту дує шк три Ще юки. Шум щік ж ми ув дур ІМ іно прах шо лу дозу ва ТТХ Бер кЖою шах см у Мала КУЄ Фея Ар ІМК СМАК КУ МЕМ ща У БО

ЩШегі людом вує М що томат Ті ож АЮ пір клі яю у у ен гу дк йвіи пає бУМу ЖЖ М Вл оБИймО НК ХМЗуУ ІФ лив І У ЛЮ біла КО МК ух за чує: пт и НВ По по маю Іі АЛ да стру тям фу ТЕ Що ен джу шк тт іде (Зм ХА авЕЖ ок АЛ ЛИЙ ую жук сСхивопАв маш жу Ат ФелоАМ ІМ. баУ «ВА чи КНУ т плаю ша тремо ку тлкщо фо Те

Бик ше ес пу Же обу Уа ТЕ зуп у пт ле «ша ло

ША ОТ тет пери мі БІЛОК «я пр при кт вх бАУАЛА ОО ВУМНИ ТРОЯН МИХ чен св лечь гато вечкиНН и УНН Мимюти ої ВИХ ЛИ КЕ АХ шмж миктюу ЖЕ тихя ЗМУМ МН км. кий саги сут «ами дя шко пра: дав, ШТУЛТЮ Том и душе Бад тр дпа

ПекКО Її АЖ шу фобія Амух Бу шу ЖАКА вх і: г 1 вх ОйМВ

МА т кпішх БАЛОК ит, Пак іати г пря мкВ,

АДМІ шум ДСК ВІХИ Ох

ТЕХ

Кутя сту ТО опдазмсти ММК ТОД схяринтитмої их ТО мое ти уит АдХУ ЛЮБИХ там ЗИ ДЛ ПЛ» тн тку колу ЛИ оо нн НН Не зМеМосвІ лето МТМО УМ МАУ ДОЛ

ОА ШУ

Фтптл В

ПІК їх пт я ех ва Кя ТВОЮ

Де ЬН «дихати гли трлн.

МО МИХ Мк ТЕЛ ТДІМАРА СУК стих, «ШИ «й ЧЕНІ сват антитіл ВОМ

СК рас

Іон ЩІ Знищ ее и ви пе ОНИ

ШАР ІК АЮ СТІ БИЙ ФУ сла ЧО лі МО ЖАХ яВіїє пу ам МО

ЕМ В ві ІЛ екрисуя токж маку кесірї км «ж ШМю Бучма посла дОвчиУтЕ пиря вк кий о МЕзосблеив шнтметмма авжиутИла Б МПя

НІК НИШАННИ

ЛА ва йча мо бчтуує То тації сайує БЖ, їни кі мує бала Шу і се биту 11

ЩШех о схшу їФхїлР іні Шіле бхТїїю Бксл о Муй Зет Уа ех Уві Пет Ел Мі ПЛ

І г й ті

А Ку КУ 1 епуюо Міхов то тк Ду фею чат по ми (ЛУ дев бо бик б гвплховіжх вк ЇМ тих Зужш ех Сім бій Зак бен сі Варобув Тук Уві) во 5 І шШкемо Ж созуєі г ТТ Тлукто жи А» (3113 бу піну Ко б Задото У их щМакоЖкЕв пух што сім У Бит па Ап пж Бе Уві Пед Мах Бе Хух як Кн Б по и пл шт ве уд фа щомія бери вн ИН тих їні МУ р ужити ТУ бе тіл р ша овоЗо оси УЗ мли ЖЖ Фе ма АВ О шт шАБ КК БіІМа ЛК мам о плХ яд ки що щи М о дет бум Лк Ми Му у Мк Там ко жу тю зу Жим у, іо Ми

Авт Шу. біб ле ТБХ Аза ТК Бей тбнх Хе ек ПУ ТОХ бій Адз Ме шт пе - що

Ви ще 75 що

Мат. З ду ши вія чук ха ВАТ От ат Дому КМ фа таз вра Мр: хх вели мА вий о лЕК ЖУХ ХУ СУП о шт га длЩ щу шКж Ам Ом ху УудА ї5 Зо о

Фу ЇХ шує Ух ТК ти лк ух ше жу пеж ФУ Тв о Був а тах

Мих ван ШТ. «киІ ІД шинки 0 шЛЕДИ ливо ще: «Ж 0 Повх пт мух

ОСНО я шт ММ пох УХ виття люту ОО СЖЖІЖдК. У сдамнідКИЙ мохи соми Мей евц

ТІЙ МИМО ШУРУЛІ Ал мих ЗЛА ЄТ МЖИЖ М. МІ

МАТИ Я

МАТ Од

Чиж М ЇМ у міш тат У чи Жду бло шу Мам Ух сш о шжАш САМ ОЖлЛ пища Одоу АЖ пу мушок УК х ІЗ НК

«ші ОО сЛИх соль акне т ваш КН еп ММ ет стжеєхучити о пгеотети Води тив,

БОНН мим ТВА МОМ А МУ Тх их плед езгуА шрице є, демона мо КО ООМИЕ

Б перу давши, анти віма КМ. ТИ глтнх по чн вч - доме прожи том дувщо бен ше пада ек ме вер тий мя 3 кі ил їх, уп ххх зи дизт ц ха - злеусух мипгує «їй ММК, нн піелоакощо ек КК и «и БИ шу мна послами тм «ДЛ

Ти мое ТИМИ олдаюи ТУТ. скіни зу гуму тЕВДМ Ос дише антишімла ШИМИ

Во сут «сапйх З 3 У ху мя Ул ю мн зубок ух ил

ЗІ ОАКа бл вВаро слу бах УВЖ Ома Уу ХУ ї ту еолютетухи тгух

КН лю «гі М ктурхх тт пу еліхи вІЛОЖ кл З прнсуєо бе піди иа ша ОО 3иИжшутчв упо ТАЛУ ких

Зою отут дій літі ки БО пд сах тисооуисть днтисмимі аитишане пло самих дея

Фа и ПУ -а бичі пух (тло, Мет их Жим ХАІ кул пу ие іх у кет ТУк ша без тп бів Бко Бхо ет Уго бех о Улі ак Бо БУ шЕлЗ т « ча - х, ї с ХЕ 1 уп дод ідо Що по ж щі -в ке фоні ВІ Я Я не «г про й шрот тот фе 011 м Дату Ме ші із Дж ро хе у хр їж тА ЖИ За хх. Ху Мишко їюу еМВЕМоО МЕЖ Знос асу, БХЖИХ чу МЕ Уа п п й

М шу ж. баси ету ех Ці цд Ем Ууиске їмоу іс) і дж Ба я Тим В Сі ую дакотжт ТУх Ода СІМ бУУ Бо біу бій оМак БлеоМаї баб УВІ лів о тух и їй 4 ги щі із Дод до Фрфу сло Шу фо 1УКІі Бфаз долиє бля стою Ід ле

Зі Блю оббат о оАХе ел Бі пет м Бк БЕО СВО АТ Мов дих пу Ех ши ла ре дови Шовк тт мину тА щодо У тв моя Тра м дреди в Мт М

Авт яп шпАУу Нр ЖЕт Міо Тих імБа ЖАТ Те пехо ода у сл АБО Мах вх Ша пк пп дет пи дав думи пафу остйчажу Фут Щбіщфутщ туу дже Ше 0371 смфую т до джу лий МмлвВОМИШ ХУ ААУ сут ПАЇ ІК АТО мМ шВХ М ІпЖ МАУ А

Я НИ А

Же ЩО М же Р В Сто ТА у

Хлбобхим ладно ВУ Пух ха тих

Ам пгт у о ДІ Мх МК лют т ту чит У ятлмрлюу кити

А ПУХУ»

Бач СУЯ БОТИ НІ чих

Де УНН М пе ТИЙ дили нвя шо по йд чай им тма пишу ем Еи ВЗ М жать тегу, вк ЗМ «их я Вс Мих СТ одхх СЛ хо ря її жкхі кн І зу іишЕ пам ДЕ МИЛО ем о сху ехо мук ТК о Удл цеху ін ц ЗІ

Н й ли «гу зи чім пов

Ії 7 пстюху чере хи ЗаНОК «тії штучна послідовність сут ши

Фліт ОО ЕЦІАТ,М спе мів КО Б ших ем ті НЖИСІьи ИНЖИшаИа дю пам вх хх Оу гі дош тую дела ори дих ух чаМм ім БИиЖ о йлгпОцу ми с їх о ня хи окон м кові З шлюбу шумних «шви БІЛОК іх 0 Піратм омулемері ри ек жо АДИЄ ПУ ТАНІЮ ТУТ ДЕ и. «ТК «ЛИ, УВІ гфриютти (МВВ снасті нм ВИ ОХ «ше ШКО зидтнеММКа витизілиЕ КА аа дуть ва А пли І СНИ я сих прю кт лм щі аж, биту дор стю Ху вл

МАапомжійа ДЖ КЕ ся мим отвКоску ах хз зе «ЕМВ «ха ІЇС «Ві» ВІНШХ пет АЙ 0 МТДулв печлАдилвкмтти яп шйжи? пух Ярі щі підую ТК клучтвцвя пщо альо прє МТ ХАХМН АХ іМ ЕМВ УЄТАХТ МОХ. ЯКИМ НА м. ОКА ях Зах пі стиша гру. Тон ту пом ші Фетр шу бд Ор мі хлмі Шик сїхюих чл щі

Пежо удшт ім ої бу лу бе Бо пет Уві дзвзл уві пех Бета су У МД і ї їй же 4 Ту їх Кк пек шо Де Кіш Мвт теж Ждаст ТІЛІ 031 Десни Хуує сулохи Ду Тихим

КпЖ мА ЄмЕТ ВАШ ОСКПУ С ШшуЖ лев ПАМ У МЕТ Мед сЖЬУ ал МУ ТУух. Уа при. т жо

БУ хо ЩО пли жк Ми му ло тку ди МИ КО 7 шо ин я й Такт тост лада жу ЗМ ши сум пет мм мот ючи ЖЖ ло АМЖЕ ТК ОМ ОКуУХ е; З ме як юку сло шви и ні Но а В кі ши м ще біпсдяв діа Мех йо о БЕжо ех сум Ха Бо сій хе от мех су лес

У У Ко пером оміе дер ває Мед ствах там Як ту ст ті тен їм Жра Ммее

Адн (ТК (А У у ЗМО даю ОКТЕЖО ААМХЬ ЖЖ СЛ СУ ША У МТК стада ЗАКО ТК

ЩЕ сту сих, КН

У т ТУ о доли р Що дон ле бно ин у, до ли йогує ММ трі Аа мі ді

Ап па оВаВ БблроїуЄ тек пуш о зЗілоАУВ хро Аже М пай ЖТЄ пає Ух до п де шок 11 ук кім Мних ів М ну тм діб ФедосбА У ТАЖ Село М ТлХ ях

НУ ол Чи:

ЗАМ ДМ хЕїжх А нев и пжегих ли БЛОК «кЕМам Щтучиа песЗАвозиКсте

Тит, ями

Во сут спрвутит й спр ни МЛК хай СПК БА вижити ьа анитишіма ЛА

АНЯ запа

КУКА ники ток І 213 Дех тТемі ЩО Дал им хи МА ОО ще та о спау цьом сег бе шу Алюровув ТУКМ Уа сх х З 1 ет пд уж КИ ши ее ЧИ

КК !

ЕН НАЗВА ем ОО ЖНОК ее Церучинмв спломі лова литх

ЖАКЕТ ЗКЩуЗКНХ ТОМА ДУМУ К юю «ЕЛИУХ

МСЕ пив детей петмтівма КВ. ЛЕ лет окт мих Ккик антитіла И.В. жі ЗМО трат йо Вів Ме Бл Во Щек шля тя

Вч ча пах пут -

МК З дих плацу

УМ АСМОМХ

ВО, мя ХНА КИ Е

Акт, А ши СТЕ -ОИ пилки дру ШО ТА «АТМ Ух прю З що и лют пд 1 рен ит тк сатлеь кжя ер сжЕц м: ВІ ІЛ САУ МАУ т г

ХЕ 3 сл У е «лі БЕ шт ут чЕУ М ЗК рик шок сш ОБІДОК пах о ит Міга гі пап шось мапу зАЖУМО АХА А ХУ ЛОЮГ У М,

ЛЕФИХ пли Мои дм ВИ ВА суто, пи вки міна сиво НМ аптешіла ЖВОМИ

Я Сива шен Тіто іх оту ЖУК удо сераюи пінних дими МИ сюда хтю Сдщи ках лк и ша Ск УІЛИ шемОІ СІК хВаді жтло БЖ МТ МА пеВК УА ХО МЖК Аг ї Бе їг їх змія Лв; сн Ем жа ТОЮ ТИВ гри Ж овзуу (жу Сб, Сол ка хр пйпх би т дов Тих ШУ Мих рю Я Є Б хІ1У У ПУ ОО їМА ва нд ди ої ме ху во ше Жету лита п І іду биту ил 12 би у Мед ст ам яд та тк зако вЖ ше и шт муж што ж маг о шмЕу ЕЖЖО ж АК Ул да СКуХ п чо АТ а десрі пом М жи ІМнкІУ є (7 Ж мою лу мук и: ом хе ж бзль долу СКАТ АЛЛУ ла МИ сх му Мо МАХ ЗМО РКК ХМаЖЮ ЛО бЖЮМУ ЛИХ

У У кп лам ши їх» йду Вон ідо лує там; Ху ті брижі чЧеафе рми Ма дво ошех пу Ажролвл вв тм дез Тих хле пет Бім штнк піл Ето Ме 35, ж ще це

З. її КБУ щи

Амуу пл хо щодух смякю Кажу хЗтуюо т долоні Мито МИ КА тлу Уго

Аж пл вів Бзвотує Тут Яущ За Аа лкрофмцх Пежо ід утіх Ма де що пе цк й 15 пл вас лю дея ля ю шу Ім фо лози 1кщо оріу ле солу жму сжну лм дув хм ІМ

ВИ ту 4 жит ах

В АНЯ

Аля шах ил УМЖучрщ. ЗИМА ДИМ ВТ путгтрю, «их

КУТУ я паси й ци ДО ПМ тик КДАВТ МАЦУЗ ФНЕТ а Я ж МИ капи

Єр Тло 0, Хо стю ПМ і Зохжюю муку 110 ую

З о маіцровех Фей сиху ЗЕ Му жує ха шлу х ц тії х ш Ки ати» да шифр ху - «шт Е БІЛЕ яти нн

ВУ МІДУТАВ УИТМИТуМАМЛЕАА МТУ

КОХ

КІМ ФтИеХ щентиен МІ ,й с шнтжі вд КЗ. КИи моя сАапееін тА Змід Фе тТМаля ММ. ЩИи

ТАЛИХ пл бкіЛЬ ки ПД МИРУ СІК КІЛО у «ЛЕ тя ту «ШІ З яоА у ви кій БІЛОК едтю туя Плпйжгтмило Іти тує их же А Учаи НКИ СУ пох

ДИМ ОСУД. врряии й додамо пл М ЩЕ бите 0 Міжна веж его диво Ум, ВХ

СДН ТЕ,

ВК я

ПІ лот ин ох Фк пк. ща пи -ї пл Аа тер о Анв йек ФІ. УЛ ім удо 1 к шля. 5 «11 т их хх ев дою КОБІНОХ паж панди КВ худа ик и ФОН ТИХА ДУМУ ЬАти шу ми ж ух, Пт жи их зе ванн Ї воно ни НН тк вона Містиасас» аижиЗмеьа шиті ВІ. стих 15 гошн о Ук тла лу Ті: би она їх Уж поюиАМ ОС Стр пор дю бажала Мт Мах оса поях о буу ж су би Уда ух пек шу ОКУ т ц КИ Ко битим Втр и суто міш Мі ломє алалі рих спос пали: доня бін Мік авшжЕ мед мк ме сш УВО лі ла сум Ба отим ил вх лах МУЗ с я тег мяч Мах до бачу ХЕ ср ле М вени КТ тож Тк тої ях ту МК щи мак жже МЕ жах тА МАУ Мід овжє пі У муж ом Ж Ка пам осту Уа ще й ге

ЯУ ЗИ С ек нен и А о ов НО Не НАР ВЧ НИ ОН НО НО ВН А НЯ дай маш Ал ожнк ух бро шу спи був шуй Мух тт й Вр олет жах ши т ца ми ЛУ «й

Тим ле Акт Овс Тих тв Свр оду пл й ом Туст дя ви ба лют пу піУ АкУ Бе Тис її ЖекЕ Бро Вар оДЕнй опе Буш пат ти їжа ге пк ту ек щи

З ЕКЗ Не БУ

Тим ойіж фа й Моро: Мис юр що піз джур КУ іш щі бю вк тн

Мемобпіт Беб далее Мем ойкхло вів ги вчи тТвеодій щі теж бук ув

Ец пап пом

Від отв ду шісб ці піс дет мапі іх ти фл ті СБУ шлу ПЛ о пажоБУуШВ сх ЗАМ ау МЕш ШІ хі піу пе оо їде тт жу міпровАМ 11 хх. зх су ЯК КК у нн НН КН лм мис жа АТО ЩА Ще о ІМК тр пожх т ж ши ЕМ За; яп х 1ооту же тих «й1Хх ВІНИК

КН, ЖМісрижнту Щури у и тик, ва ПИЕОКВ ВЕ ЛЯУАК ЛУВВТМИМИх

ТК Мети ді мате ВВ О Бл

ТИКИ ІНСТИ т НА ІМЯ ММА ІНИ 250. КОКО яхту пл

ТММ п:

и ло тт та МЛ Ост пуге ст: Ух ші ПАТО Ищ тік ем Із ХЛ шо жа бю джу а з Мел спам озим шу хаос зу шу сю 4 е ех кц лай їди Ви бе Шакобох діа й пет біз ба тв Ше пз» йди с Міз сло мМ пи м УДО У КОМ ше хе ШИ ху БО дУКО мш оку УМ МУЗ

Ж х5 сів

Зебету Мак о юем бе хі бу ро ЖК Мак; Мін лужних фору га сквомек шер тр оУах Ко зЗійп ха же Пп хо озуж лам мим лек Ки жа шк КН ТУ п дошк, Ури с рую спи Мш МЕЇО сймн там бивжо слен ВУ ях хан и хх зх ния «ту УК сх хом КИ зу ТУї: пагони ООН Ж. ЗК зва шт З ото ха пБросхУу пущу оС» У хХук зва лю сті хау лі ца ех

Я по щУ зи ля ит Мн Кін б ває реж Мк тро мине лк ою М Уіила Чу ушу с КІВ ГлХ о км ОшЕ МЕ АШКМОАсМ ОТ зу ой тло о мец Ух

НИХ за зи НИ п НО ги ІН тТ- щЛі тами дод Зако таж; Ду Аз що щу Мом ка щі о ХМ тує мо пт вяжи ей ам датлосмак хе) пЕсп ол за о АХ УБу пл М ТУ КУДО Ух шо Зо щу шле був дл ті й: ЕХ нує Зк лм ЕЙ; фе С ач ПЕ ту (ших гу МУ Ле САУ сві Ку йплй Улоб слаУ гу АБИ жає ЕЕ У САЛО СУУ згум чим ху

А ве ху

Чех Мав хдю: Му Лел. Ше ух. їмх Маб бі ТЕ мМщл БмУ Пеу

МИ пт хі ц

Шк Те Ху сив НИ

СО А си БЕК шрам зчен піитім іме еЗи ПМ ЛОЛИ Ме лугу чих не нн швея тат Й пезеуї ко Віт ОО мдУ жяхи ЧТ ИДлУв ТУШ савтижхлота о. г о ШЕ чтащИиМх о я піп!робж щі там ні сиіу аск іо зді шу Теза да ту Мис лю и

МАО УК сіль сема ж иЕВМоІшеХ Сау су би Мей уУах жа КкКО боту ї що хо ХУ пд блшіу йо то ша фу УТ О Мри дм йг ху Ктфу нн Мф н ІМЯ кру там мЖЖО зд. Ви овшеЙ ХМЖК СУ Мт вет МЕТ бу ШЕ СКЛО УТ ХМК ПЕЕАООТРЛОВ тр зук зу

Кк «я м божу. де аю тк І дери М ух З шкур ст ах тя Ки воичкнА СИ

ТЕроМтат їмкк ххр ха до зі АМа без пі ЗзушЖ о пйУ Бей осмо же о мад

КК «о ах пшоно ТК и тим Да шу м Ж тим бує Жуки й до ку сзм 12

ЛЮ УКТУ дамо леДК Сем тиху ж МпХ Ат мушу гул мА ОН НВК СУТ що У я тд й луюту чи Во ту шар Бичяо дод Думи тах ду но Ук т

Аж кн о мм с п з в а в а п в з з В З В ВЕ о МЕ Ва МН ши те хр дих и 16 ТЕ ЗЕ окис ниш і ншо і в на в Нр Нонна А и НН У НН НН мимо зм АЖ СОЖшХУ зи ФМ ой САМО ФУММ СЛЖ йпійа тах МЕ Кук су па ж Б дл птеювай люто ТИ, по ох нь аа ИН АН ее НААН Аа чих пі мук йхая ку у шу яп оже зЗиу ЕЖпа о ВвоЗзв о де тТЕжп о кжАУу ОТ су

ВКА чук, тій

АТАК тив мА

Уряд Ен рн ІД ми я

Тс ожац МаМОотТвж Сало їМматє лек хе в не хо рик тих

Сея Кк

Ми коО БеечнЯд я КД Є их

СЕТ «Мур ки ся, вику КИ ТОЖ стутинти хи Кт кт ск и Яиееміта ЗЕ МР ОВА В А. ЯН и тл піл да Тс аж ай пи Зою сша с мою 133» МД НК тт ху ща М зі а шал вк тай шк жк ЗУ шу Слу в та шк о Бо МУ АК

У 2 ХМ Мо "ДАМ Тож: ДЕ им п а ЩІ реж Сита ВК зифе о цкух, мих М лю сейто шЕМА ЖК ше вл ХЕ Міо Щешомаш кла пк ВІК ле ух ши ВА х прик Ую. іо ІНК. Пух хг йти Док и ние їх у І ота уки ЗА гтромеє меж їсроУаі ко Оки ойЗа Бк блУу Муш ЗУ а М Тк оМщаї мч А їх о х У вл ості Ул мує сим ато М уч Аему ідо долу лу ДТ вх соку і віз тТВЖ Тж дет ук дво СіУ Бл Аза Був Впротух Два взроБек Уа в» т ще

НІ я 5

Ул ст кат Лю ТУКіху раю Ка 3 дк пану ше З Мох ло оч пі муж іму шт ТКА ЮМт о Бесч ОБ Мих ОО АТ ДЯ су ІК ІК ЗАЖО Тух рух ре, кіш де шт 5-й її па

У дену ух чн в в с а НН А Но А пло свіа де Взлп пз бе вка Вів слі Ашу Тихо бів жа тую фУуЖ ув

За 5 шо хлящо сю рію та имя шо КЦО Ой ., жиИчи Мав Стан хчущо йиюлУ Кт КИ хів Буш Аа ошауУ пі БУ ДЕН ОМ су Ве Ліц тІЄ ТЕ аю біо у

ТАМ МУ Бе

Упуєле ОЛОВО ЗИ ЩИТ Зк Ми о они спи Оомахоа Мт УщА ши сет я «У чий

НН НИ ут їв

Ж БВ

«І КІНО шхАМи Об УТАОВ ПИЛ А КУА ТД

Ме кає ди МН стююьттю зижшисіМии; анмтажімва АМІЕВ сиди А сш. Ди пітла дО СИНУ. Хот ЩО ул у клю рт уж сл А АТ У Фени рю ГИ ду шик ла смт дими Ма бом ЛО палу спаУу см да УФди ЗАЛ шт мауУу їх 4 се 18 18

КУ НЕ Б Є ди обимл Ми: Тих Ще ох; кі Аа зи лах Юм тн Мк сл ою кт МОХ ше о МмФеи АК цим ОК рт кю ві ОшЕ сю Бе ть где су Ж ой Оопиш ох ян Ов п І Б бух ФІ О іє им: (що кі пуфи дороодзуу їх бат шу род Ф3Т13 ситзу ді

Блтя МяЖ мат. тт: МаЛОВЕщ діб дувовхо бід Су жу фен Шамо сг Уві. зи п БУ ву души т сего бик пл іа дит тет Кл пхи ихиро ОККО мод мує туї дв оанвши пл лЕелс о пешж жи опЕу Ук Кши БУш гуколбук жа алу лук м

С дк ди ве Пп ах іди лм що да Єна ху Мк дю Моя екю. тут Лю Лв ходу кіт пул смс Бжщ ле о жнх ХА вал Алі МІЙ Мо они МЕ МТ СКРХК о жу ят ех -ук т що ш Тих по там: и дя Аме Флюс дя ду пл М и дл стету рхутя и

Чер підло за Аве пах і ВХ Ака сій вх шо яву Ат УКОСУ КМ ШУх

ЖИ Б пе і тив іа луки іл га йду г лі Зо до тлу ли вх иа дав Буш Біщ жлм пу САМО АЖТУ УДА ду Гі АК Ті Тбтв ду ЗИ ШУ тт 1535 їй

Али шо, КН пе бити ша Ю.О іа дя и ка

ХО УРІХу ЄМ ОТМК ла шт у ИЙ ке

Ах тлу ЕК тулАМи ля сжіс за жа т ОК Е

Ук пт ий ГАМК шахти Тиса т С сгвеи и ди ік кю,

ВКМ ЦеЕРУЗЧАНЖУ ПІКИ КОТА КЗ г паля вх

КОМУ пити к пе зи тігпв ДІЛО хи Унеогуластв пли зикитієв ДІПО1х ку ул

АТХ КІ яму дк А. щіц шві біз бам; баг оті ду (їз кутю я удо штуці пів УЮ піп Бей чає шо. Зако обі ШЕ су Мі Мав пів Бее ДРУ Ку ї ї ХЕ І шани Тоні Дожтрь о Тк, Щеажо См Щі Дій; ет ІА Би пн па Бїя пуху НІ ек оцев йЕщ бло вах СЕ Віз бій ех ЗО БО Теж бБа ока йек нів

Ж У, 4 току бум кю би ЩІК рони й ам як божу ЛИХ тая кт ту, КА схвоМає ек тк сві Бк був Аза Бк йіуУ Сує ТУ да пі Тут Уді рух пл до х и ж

Б ро мен А о ну нов нн НН і Не НН НН НН Не аа Мах ас йлжу па обдю сбзіу АКИ пз овУує йЕшОТУХ Вл Бар шеу Вау по Ж ДІ сти ХХ БА форищ М х кі Ух зиск длду ом йо лову Шк дл мах фею рот Ток уде пУук мА жу ЕМ ОТВХ БТ бет Бу АВ ЛЕВ БК БЖ БиИОТЕЕЖ Бех тук ще та в Ви корі: СПУ у Тож ПВХ ск Коші них Що Мік Мне т М мо ЛУ яті ск жо мий яд тх ІА ЖК Я ДЕНО МІК сїздод Іф РУБЛІ ТК АЮ мя УК БУХ ях, те за он а и и но Но Ка ви нн НН Но ОНИ КІН г

Акта Бк о піа ув ші БЕ ЕВ МВ ЛІіУу Це бе о шШіс ЕФ ФАУ МІД ШУ зна хх м но На КУ

Ток Му сті тлу ЖЖ Фу хх яТРШ ТТ ад УМХ С ситу УМХ пок щу и ву вах же бат АЛ слюсую ум жди МБО с З Діти ерету р с, и й худу плслАдиниХИхе

Суто х пе ка нн НН і МНН «ха таж анти тюгбнх ЕК ВІ Ух бай» хату хх куки ета хто фІдщ томах т и мо ж їх ті газу ж ли Фо рух 7 хи А хх

САМО Чем ми УХА беалю пжж бЗіш о зЗе шию дл г о пу ЗУ ша ї гу Не 5 4 о де 42 під бу доми Таміу бух тм що тка Шу тублу Укомо спішу фія їх Шум Під

ОХ о слайид ЛУК МЕМІ СЕ Ом КІ 2 леж. шум ОМ ІМК Би І МОМ ПАС сегу ях, м шк Ки Кк

Че Ми Ши бю Мк о лю зу До них ПИ Му А хх Ж ху; іх теж,

КЕШ ЗОМ сл ща ли ЛЬ У г УМ УЖ слу УМ Юма МОХ пу па зе А де с и Ж

Фо т Фе Мер Ти шо и у покути ТА ад Аа ск с АТ

Між Бо ге Пехо Мило ДЕНЬ ЇЗіУ с Деу Дт ет бурж Зет дів Введи Мді

І лк ВИ

Ук ШО ми дити Уа ТАТ тт их Жоузж са ум ди сли Ж Моди Лк у духу Ли У

Беж обі Ал Бін Чат ле о дзту БЖ бар о Аво цех Буд Адо о жмт лем о тух

У ке З дих по То 15 пи

ЕНН ее НН НН НЕ п мі и ЩО ши руч тя ито

Мемдоіма Має би пт хе Бк фу схід ЛЕ ЛИХ Вів сві. ХО Ук ув п Зо п

З аю тю ло щі мк пУЖ т лют І хат. Тс у фу Томмі (ох т тт мас ВХ оо КАЛ пі іїхку жимх ха бу мо дросмЕу УЖуУ ба сім пу чий т за

МУ ЗУ А ск на ні в

УпзхотУгшу ах Сью ща щшеК о шку 1х5 ока я «дк КЗ реч топи хі ш ЛУНОЮМ

МЛ Олия Міна ги нен тАНИКНЯ

Ід МухУлащй СМТ МАУ

УТ

Ти

Клим Муки питанню КО Міглнмиї ж КЯ ОГІД хижих твтшйдалив дн мем ит руда Юм гати зл кА Ге ті лох СИ нене я - ие и хх КІ прин м

ПІ Фу Ти ли пул Еш М хх; щи щі ху БУХ ФО

САМО бать ми МЕ ЗМ шеак о спиу плу БІ УА УВА САМО КЕО Су зу і к її І

Че Жипі. ль Жосятя Жже гм ЩІ ді Фк ИЙ єм Мун: бах Баш тал дя ах лад їв же ой лек бух мій пл жшш А Кіш їм вл плу АЗИ Ощаьх

В. й ї Н У

КІ ША Зо п, КАН Фари Мих ЗУ ЛЬ пом мли ит ШК пою тірА сх тя щЩ- Кола ято жЖхе Мет Жак тк УВЛо АТ «сл ові Бус щи БУВ пу Тер іль ЖЕро МА

Кк Ж ЕК хі пря, ж с фтию рем оду МТЗ лушии км у тин иуі Щ йоду у щї

Зів о Зврофіжш ших Бех вав осуу аку Жуюх Буд ТМЕ о тТУхХ Вій бше пек бах

Не ЗЕ Ба ти Ді дю ун сну т пав одрі Ачі» щч ад с ен я мух мах ст гл МУЗ дампомшжл мл блМ си левлоагма биту стю лін СКАЖУ

ШЕ ТЕО тк ва

ЕДДІ ЩІ хо Жах я Тему фу Від пів о щдт Бір дія я сю ик іжУх Бл аєс Або йезхІ Мем меш Віз піц влротвУу Аввомні лук ТУ Суй п чи ЗЕ

ВІ Тени йо іс дшхи Ми брак ть йду. Ту ця ху (лож у віз Буш Аіа ФУ САУ ЗМУ Асть Май пі Книш АщроїМе ЖЕроумм схе ХМ хх ши М тему Ма АЮ ситу Р три я пед ФМ мах ЗХ оба мли Ох ж «ПО 134 у УТІХ тр ла

ТЕКУ 1 пет Малу

Би ІМАЛІХЯ ТУ «са клж. ЛуУЧчиа поУаАУдсВНісУТь

ЖИ яд поз -тмЕцдгтех, За МИ щеріевіна дова

ХХХ УСЕ МАЛа г ЗУРШКЗШКИІНК щагтУсІі па чашиМ Зхя ту лю бу, таза; 17 ЩО иМІ змайсю пи яя Си Устя дух туу уд чин Стр ну Уж тки туя

ША ХА ЕТ Ід За ек лу хм м біу ьо УА м КЕО бю шу я що 1 М пек бути дей фи; Пехм був ді да пад їі бе ів фев МІС Аа Мід ша зи Мт дя пшеХ у вій мка пеж ау ме їли кп су па піз

Зк хе т

А й ща беру дай сЗа пит ЧАН Млчу хуй й пкт: с3фрау Хі суди г тут сим т пером Заб остов Увь ка в Ата Бео ЗрУу Му сви їм ПО ВУХ Уві їх ак 45 дощ Ве Тов Зам Ват Щі Тео лін Бдояо бчим о біли да би сигю й

ТІ А каш ЕЕ ЗХ АЖ МАУ ми ожут мує лЗжЕЖ бух Зів лиш слу УА

Я «:5 хх воно и о іде ож дих до я ти да дж Ву фетру би шт стру тях их

МУ о піш БІЩО ЕйеОТЬьХ Кі Бе Ах Ав о взц Ву БушоАжте ХУ демо лих й: як мл - хо НО т по тиз ім тому йон М Лат Доник дл ох ШУуФчІ лю ст М я жі пік три, жид сл! ба шт ЕК зи БІЩ АТа Бір дл сХижЖ Лід ща Жею ух суп

ДЕ зо ЗЕ іш и дл Фо, Масу Іль Жуки бле лях Шо бод т ох ди (яю тк То мА ОВЕЖЖ та шоу шаУ слу гуо чаї шу КПз бро ТЕО су кіп склу

КУН тм тля чек їди Ід во ШО бю пе

ТОпЖ оп УщО Как Оохла, сег пе «ще

ТУ пт чук ких т ж ттц ші Ко Ії «шле ЖИЛЮК ве ХУТТИ ЧЕК ГДК УКХ ТМ или шлю СЗТ мочити лає ПТУРОТОЙ клав мою ТО

ЖІ МОХ УТ ЛуМиКуУгу гулі іа САТБУХИХ АЛ ИН К. МО п УА ва НА ох тА ж т 7-1 Соня с: с БАЖН у У її м ет ях ж хх. хім ай бій Семи Уі М Жак пльу біусплі» МА уеї сіа Бхо щу ху з «, хи 1ц

М КУ Мо пт біти би Чу газу дю Му п ху ЖИ. іх Феміда уую ЦК.

САТ лМаЖИХ МЕ Мец джу щу М схе сх ХИВХ ЗМІ ХЛ ФІЛО БИс Буш ошаю плт я гц тту ж МАМ у зму Мою ом лину ЛА Мних Лу дО пи ту т ЩО и Др тятиву їКИЛ

Жхш пах ошнНХ АЮ о УаА о мк а лів го о МоОБеп обу щи підт ож

Ла БУ а руни рень А ан ША УЖ я юю боях Хол Тіни Чі Дещо и шию З лов о Люму ЗЕ УЖ зим; фр зу жк оуУу мух ЩУХ ТУЮ ЯМ ЖЕО ЛеВМО У п по М я теж ше кл ба мк сах о вит йно Дей шШат о тси хм пк бещостоОх

Муш шу ж те зпХх ллє лох ДЕ вно си Вело дал лк с УЮ по чи НУ по п " Їх щи ток Пити ще ую си Доки у тая чи що кю пп у ем ошат Ме дай бек о бопо лей дів сл) вБзротжих лід о сбаї тТрЕ тТуУХ Су ця чи ак хі вето міх дл пах док р тр» ва пе Гл тру путі ся тека АКТ Мах ва РАМ МОМ ТК УКХ Ду ле осАВТ в вже бал тю плоту 1п5 їх "жакио Мр Діпо пплу Зла здо тівде

Гл ОМ Жапо смУ мах ях МЕ 138 жі Бе

УКХ БЖ

«ПМ их На. «ек СБЕНОК пит Мудианя тростини штук

Мих

ФУТ ве НН а НА Ока

ВІКИ т УМ КЮ пи ТІТКАА ВІКУ ВАЛИХ МО ЗК

ЯМІ Ода пла пл т тн ли у я ти т и, КУТ их ях шо уки Фу 1 й,

ВМО ЖВА АЙ ОМ УПА МАО ШУ ШІ НАУ КАУ УМ ХМ сії Бтла схКуУ су х ї її ха «сх : Щит жо ше біт Ж ду Фо ст: Б щ- ва ее з ці дет ЦО дж плац Бек Суд бій Аза Чех щу ББа о тве пе спхУу Бак НіЗ 731 ек сл кЙ ее ПУ бут, Мр о фу луухчо хлЖ дою т м Ма ху Та гі т й слуєюу хл тв ому пед бАу УЖ Аллу май Ба ктсн пМу МЕ ЗУ Шечз св жур Ук зи їй дл 4 и ДІ

Мало сдових. Б. клю. буда о ло ну бум тт р дю п хи еру ДТ

Дудтю сУщІ дя ШЕ ООВНКу росу АК УЮ пай ОКУК ши ЛИ АВ Ж УВУ 3 ХХ ЗУ го їі Бий шу рих ха важ хек Ву лі дме Ар феуйо блю гм лу

МІД ВАСУ ІМУХУ ДОД МУК АЦЛО МЖК АТО ЦК МИЛО леБА оАбух жУчуЄ АК фл мух

ЯК ТЕХ "т, Шу

БК Тл У но о нен НК Ле. Іри. Доу па прі и АТ беж лу ик сімі бай Од ОАЕ шпик БМ ФМ Ме ща гл Так олія Мах т ЖЕО ЖХ ху а: Б сук ца КІ ти

УТА Ти ДІ сплю рк кутю дова й фл Зах Дж, Му по ЕЛ гм сг хя

Аів Муз пла шу ПУ ЛЕМ Ав Уж шу Бе й г; тТЕБОУКю ОХ ОСІ У ше АВ Ах

Ям п. бю бтж я Тор Хі твсоМмею УзУ їплоадо пет Зх те ших кам сер «йІш БЕН х тю 0 Мипутамоя зе пи учать ху ЛІ утна лизХЛХАлЕНИ КИМ

ЕЛ ниж тух Ж дик ях ит дане УК Й пет і мл МОХ ших ХЕечотидость ват е ввжджіцяа ПІ. паших «и

Фе бу вх Бо. Му ТЕ ху ли Жпикух о хх А ЗНАТЬ дю ну ЛО КЛ Ух

Шеж Тек Бій іо ТВж осів о Бко сто бек обай дек Маі ек БрОо шт бій ї х, НЕ че

Ах о НК лу люк щі су що ую тім ме п таж Фі о Ху ти ую ох хе пл хо від пеУ дів о тТлх Сеа цеє Аз АЕМ БУ би пі ТВЕОоБує Тук Уді. 2й зуе пе їй їх М

Шев биту бу си пт то ззуру сах пи ко їх ки ра пд ку р

Бех о Хлю ух сіл сю Беж Бус сіб М Бек БуФ о Удао фейк Ма і ТЕ хщ да їх, п пло Ко пиво дж оман лм дукл Бюигхсща Шля ЖрУк Вуу й о вагм ЇХНІ Що гм Ву па моАЖК Оля лонем ло мЕо спе шу да жо САМО ЕТ ЗФК Оса у аж

ЗО кЕ що и о ну ке и А НН НН У ан о

Ето ше ЗМУ ЖИ ТВ Лв СКЛ Е сбима БИЖ о гМеБ їх бах тиж ОБи тик Мех ву то та Зо

Маг ак пу дн жу Тоді Ем 3 Аа м дума пух Жан о фбєтз ім лив сушім іще ха щу Я М НМ Худ З лей ІЛЛІ ЛУ УК лЛеВЛО КИМ ж АЛОСЮДА по Па дих. Фах кіз У хи ТА ши ТМ лк тиву

Жлме му стАЛУ СТАЛИ СКМ. АСТМА ПХО ХК МЕМ ях ялг вежаая Ал шик, ря «ся як Х «тре СМ жк їм шк пло ши БО тд Чехии джин прі мех

КУВЯСИм ЖУКИ ТОМІ ЛІ ЕМ егбо»

ТИ Фрези ММ Мо ТІ сх ніх ДИТ до читсуізсь анІМмтриа ШМтТтИжалЛа ЛУ мч пайка пу «АК» Ми «буку хи ДІЯ Хоевух Ти ЕКО ноя, се на ЗВАЧАХИН Ки Кі шах Ме й ТК шк тТмх Сом о зец тТипжЖ Сам обро ше Оу зо Бах Удао шМИпЕ оОсЕОо ЗАш ІЙ ї У хі їх зі Мт п У им їх зах бо баміх ті бах пити ус се же гак м о кн вк олив цех діє тТпх Су хек о йла Внробій (иа шу ХВ осі гБуло хв,

З т КО. про мае Жагує МТ лоту глек їхуєи ПИ хх ТУф У стружю дра ХРО авт М Ст у ія

Закоїки Тех йімдосра іш Бус шу Ін За Бто таї пебомаУ їїе о тТух пе Б Бо го доме. йо За Воко вух Має их жу уч фа ду Шімо блеж сії: фе

Пій Ав вав лат АтороБиа пек шу із БЖ Ми АтоффоЄвле їаї бу Шех

З З5 В том ше ит пд Мед До пд оту ах офтх ш темМ о тілах пов кдд дай дак цпіу блхй вх ів тих без тех їїе дек щі тах Бій АкМа ще де в -е дк

У ТИ ше пк пад ФІ До йому СПИ пз туш ФИл и; М до ую Ду Ди фам їй ую Учут тії

Аврослю дв бу іжЖл Оки ослУя ЗМ вів же о АШЕ ЛЯ ех бло уж Уві. п пи пе по а п уки рю т п ху пи де бом ЛЯ МАО т

НжжосКу МАУ сплау МЕ ДІМ ї158МО Ол ОХ зви чи Я

НЕ гу 1 105

УВЕЯН ЗУ хуя сгри «КЕ ОхпЄ тру, сутки сш ОБІТЛОК

АУД Дек 22. при ті Упр вил ж кіш це ХЗМІЛЮ ТИЖ А ДИВ ВУ УКХ чи

ЧЕКИ пп, МЕТ и Ку ли зліт є ТИВ о пллникю мої БОР Тр тету

ФЕМ Муесиміаєте» аНеМІУО вичитЕна БІЙ

УТ, злу жах их ші тази тім жа Мр ті пе; Фі им лим М хи хе дум УКХ сті тку

Жах ТшЕЖ бла слайи ТК Осій Кос оБже Пежо МвМ жає А ех Бо ше см : « чи ях х 2 Ми їх теж щі дах Жло пку блю фл щію тую дит Тит бі Хду й бчем сищ

ХиптІ опащокаК МАш п Шота Меу паУ ЕТ жив ЗБ пАУ Ве осо СКуУХ о хх тк ле, чи ки. хо я

Мід ЗИ ме жи Кт ВЗ том мс ті и пт буху Ми ста Ії те хе

Ал ТТ КО здЛЮ ЗІ. дм КА хм ть шХ БЖ хз. ша Мад ха Ми лук. пох к

Зх АХ 35 пі Диру дія ВІ дит шиті їшу сіл Мі рух 1 4у уд фа дихах (115 пом піт дЕр. Акад пи тлі Яну МЛ ГЕ Му (лу Ва ЕВ дк Су пк

ЕН) Б що дет пеки ія Мур ту дао ствов У ет, Вих їїм пше йУе; так опдіІй ді мит

ЖІ ФЕКЖ ІюЮ у ЖИВИ ДКЕ КУ М ТЮЮ емо ЯК Ах ЩО МОМ ЖК зл ЗВО

Дт зе зи аа о ух їх ж

У т. В. АЛощ Аді ли ка ба ТИЛ МИ хе паю дош Лу Му ел дал пу сетль ХІМ Таж СК т лук шАТ пк СЖЮ сАШВЕ ЖІ ФУЖтТ іх МЕ Жах с зо з

Кіхя Піч су с тплогбев бум їй Заг оїхка т - - У з ту и тк ку АЛ ст суль чат ЛО ож КМ 1пЗ чих МАПУ силу щеусва доплат вен ши Кт щту вичеид Я врариві ДАІ, ший ХАТУ МАХОМ НКУ ТАКІ ВЖУМЕУВ ИМА УКХ КУ МТУ ап 435 веАКчИ БОКУ

Фо тую сто Рем, тео жіно фугу пен якому пу и ра п

ПЯХО СКУ МІД ОМА КН ША мл што лабл о охагосжж УаА о пЕЛ ОКО ФбАЖ ОСА

Н й НЕО АЛЕ перу Кю дгу Жов СУ отит пи 1 ю Духи балу ую сш мо Тих им

ЗХ ові джж іже ТВА В т Діє Ав дви Бей освБу ши о Бук кмкх Ул їх 5 гу стае биту сйзру СИюИ ЧПК А о тфоийо сжу іл и КТ пк сану й до МО тлщо сля пчЖ о яЖу Хут зиль шо пух пжк му чо вх БЖе УщфА бен Ух ТАБОМУХ а ка 5 ів о Клрру й стр й Ме се сл ли три а ди Мем бок р буге пп пзрволІа лЛвЕ ху Бсса бек ПУ Те Бо бл о Аку Бе беж пу беж

НАУ БЕ ВО

Фен Ше РУ Ав ТвВх Міо Елйк бехі БАХ Лі бек Ву Тс піт ал Ма оо те ТУ 5

Мат тт дів Де ух ю Мек поешО УА авг бут ву Ша бак ойпієс АВ Од два опІй Аза Аве ТУук Жук пу ОКО Мел тис йзроЗек бек обішж Абе У

ВІ КІ зу пвнм сіл тіл» «фр Гі ри Мер БЕ ху НИ

Кт п У ЗЕМ опт ТвжЖ обу бер тм а зі ях тех юю, М хх пен НИ

ЗАМ Е А пли м ти шо ЕВ «міш БИ «ШЕ шемена посилилося нісстть их чих Уют ам ію прут нях ті Мо ЖИМ. тами З

Пре бе о іі оте пи бір бегу но аю її биж луд фут Шк ст шу ШУБИ пех ЖЖ оваш Ме сп пу жо вхо сили Уа пеяло до а пд сім пул ї з ще я іч У Ах М

ЯМюу юю и Б, тен за ши М ру дя Дж тин МІ жо МЕМ меха кл іпсомлдосзу АВ ОоКИиК о суй ха АХ аю й і шу МЕ ОБАМ Ту УТІ -Й хЗ хо подих ис Мам ВХ йти окис їуную М ди ит го Лу ТИАТЬООСТя че нон чн пет біти КУХ ОЗІМ ій Буш Кжш Зі ли Бех МО М) бик і Те тує но Не ДІЯ

За по рес сія Дарт то МЕК ди Шк Ви йізм оті о йем й дутоЖниа Зак Шо щу чАлогЕЕ ШУ МеІ Бл КЕЛОСЖХ САМ о дЖОЖОСаШ АХ ЮТш СК УЮ ж: че «ог Кт пли спа іа вет сих АЛ ОТ То скид ут Дю ім сту іш о доля о фмиж

Млподак шу ДюпОоЇВЕІ Аква Тв Бец отак тує Вех ПАУ Тв піх Ада Мах

У щу ТЕ о двроліч дів дню Тут ух СЕЗ Піп оОАТа Тв АкросСкр дет Пі штн Ма

У Зо ЗУ їїнох сбіхе (кю Зм спбкиє око о Буеиі С Хих бахут на па У шЖ Ома СХМХ о Зу МЕ ЮК ж М

НК а сямую ха різ мч

Ки ОМ

ЕЕ Ми РИХ «пи» пірнає из мех,

А буси ТИЛ ЛІНКИ ти

А

«ЖЖ 0 Мети вво нам ешоці антиткяа АХ ЯМ хату з ке ХО пре еКЯ

Ферум о сбіую о ра; Тек СА пекж фе Фу оз я в і паю Мк ху

Бетотуш сій ес Хто Біт Еко БЕХ обетжх УА Жак Уві дек Бк оЗрУ ша зх г «в Ук

А М М МО

Хе Мід ослає їхе ТВх ув о бех вла бу ож фе і Тих оМуз Бук Уві я шле Що йпМ «ий те деко см бю сі іо бом Щимі: 11) Хрін Фін; ха там тк те й ЖХЕ оТує ЄМ; Пія Бора Ве Пту Сім бат Фто Уа оцез Узі 118 тТух

ЗУ 35 45 бій дам ой Ме жи бе, ши і бю мі у ду Шах км Лу поки спапоазролІш Аво хо Бдо ля ма У АФ ОоКЕо Мо АТ є ше іі м лах

Ки 5 що дош. шує гід що ев й я кажан Ж ру студ тя ім МАО МИ

Аа о шжЕ Оу Ажий ТлпЕ Віа тах шо ТВ ОТ пдеУ Піт Тих пов Акз Мах ск чт чи по

Ух Не У п шоу ту хх зу в у їх ша м тет й : - що хв гвЕ дм о Фвш жрВ ОКУ утоми шемую ла АшуУ сиро ое плас млуУ ВАВ Ох щу к 5 тип

З щи ЛА

Шик об ти яЗхи о ю зри тат ее Мат

ЕТНЖ Фу сз У -е СТЬМ муж м ти Мадо у

ЕН ув шо 128 шля зу

ІІ Я

«ларі лад сі ПУ тр ший ска БІМЛИШЕ иа Луцке тт ХДлІт Ки

МБТ. «МИТ Хосе лим а щити па пог вас ам ІМ СКК ЕМАТІи Я ШЕ ККМКК и КИ ую шій ЗА там Я овен нн нн НВ НОСИ аа нач ІНЬ нн АНЯ а НИ ЗННе ОН

Шех Тух Пц ої ТЕО САпоОбут Бклобеж Мі ак Уді аж Же ру са 1 с ях ік а - Бак конк теру СТЮ др Фе бує ам их, ге дов тоб ТА ТюМх Теля ІВчухю ХР

ХК ОВІвВ бжх дБ ТБЕ Се ОБеК ВХ Кар олпЕЧ ої мпіу Бийосже Тут ха 29 за зо

Фу фату жує літ Пт; Ти собак, М ів оду Шик, бл т Ма іш лок

Киг тк ЖХУЖ бій ошів Буд обио ШУ біпобшу Бке Уві Геи Май ті рух пи а КН ти ди бі Мах лит Бе щи Лю Ж. босу Фшлар ит ОК Щек біз щих

Сів вве обі Меб олжу бро ак ше Щіє то об для Кіш лех су Бех що Зх Бе

А НН чу сі Стах р Ук шию Я: АК й я Мод Мр: даштронех луу ап ОТбОХ Бі тик іо УБт фі Бех щу ТБ Ме Вів Меу зи 75 У ПИ фе гл Міс ву, ку сю ел ти ММ йо: Же аж ххх Мід хв

Що ша оВІЗ хво УК КМ УЖ ша мл гію ву мпежю свЖж сю пл а де зи з иа ЗІ м о У торшер ву КО ХО тих пбв'ому му ши УЖ мух ми пХо я Ана ї0о5 НН стул З «их ЗАЗ шпя їкя т ие їКх шольняо Как йнни хх ОБВАНИК

Кожен Піст тари сиру и и тіж ПТМ чНИ пут А ЛОВ КОМУ сур, ех шум гою піталрити я ГУК залитий т газ

Мих МІД ВІСН імя АВТ ЛМ п, ами пуд «ап па йті а Дт й юю ку Мт кол сша Кс. Тени у ХХ тою УМА Столи жи ІТ

МС о Упла АЛ МАМО А САМО ПУ У СОМ їхі ши СУ МИ ЗКУ КО І ЛО х т ха ІВ дих тив Дб ул СсИфрю мо сб схем пив 2315 жи сшор ле дух ШИЄМО Щек

Ул опе дек тем сквх опм Тв за Шев оЗзЕу с шає бле Вех Бех ощех па сг: хг

Фр Тухля дек ТА ну Ме 4 ух жах, пути пул Жак жи лсяю Ха КИ

Пт ДУШ бух скит ау ТЕЖ Ко Вкщ ігтп ФУ бкоош у БуЖ сю мем ке з 32 4 бер Мах бух ламкі Мод уи ху ру Ук ду кто си ах Му п

ХЖМ ЛІЖ СТІЛЮ ЕТ ДАО ЖЖ СМ ХК іхУ шк ОСКпХ УК ЮК. УЖ МЖО их «й 5 Га тому Хо оМююис МУ ит ДМ нят ви Ск Я лану М но бно лим Аощ «За, ік

Мая о М СИМ Лу ИН У ЖОВ Ппех о уві ХМК лм лО мя ЗДО ЗТ: ХТО я т, дл п ти 15 -

Пажоуми Томи Ло Су Кущ ДА тА ж не НК о НН о Я

ПеЖ о умах лох ТА Мат хни х бй. Же Віа АК ле Тех Вів ма ІМК ОСКУУ под пих 5

По Зх туш Море ак пут Зк хи Ж, и ви ху Лк клю ме Маю Ман ПЛ т, су ва шо мелі Ж ж Я дит Ер хі у су МЕЖ ОЛЕК Бук шт ОшАУ з 1:15 НЯНИ

Ма 155 Аа

ПОЛ, Є я ву тожур (А вка и нн хи ТМ че му АМЖ еяМ да Ж що шик о шку а т яр В мій ЗА ши ЗАВ ит т «ЕМ 17 1 М ЩІІНкУЮ. основ па п, теж си і рих коитах «Ж пре шма уплхлацовт ть шк хі

КОЖ лит ех дл, й вити тіма КУ,

Мет ж ЦО СТИКИ ЗІБТМ АЛІ ШО, а Я тУдЛжМ Б шок ой М фам АК ак ст. ди Би Мем ЛУЮТЖ спі ЗІ Фі ім м т

МХех о сжлнт Зм Сад ле бі бить Бл ет Мак пек ув Ще Бк осюБу ил ; х: ТЗ 15

Х ї То МО лЯчає М ач и фує фию Фон СПІЛ у 1 Дах лі и дет З ит Пт У щ гвх Від дек ГЕ ХНх бує жало чаш ПІ обр лен уу Аве Му бух Ав суд хв па ях си ти «ке пу ук и: Ж Поу фі и; ла КЗ Шило ун, мА ше др ту у пехожхш Лу ЛАТ ОЛщ Буш вто дЬуУ Мох смеу Хто мах б я 1 ТИХ

Ж о їх - щ Б Тло Х НК ді яч я. поту ска под пли є пін о фліх Дає ФУупо ки Шко Шар о йРу тіс рус плели вл Пе ПО ЖЖ пам овБзродшеат йбУув Бл Жхо шед о пду лає Бу сяхІіЛ: УМ Пумжо МЕЖ СКММ ж х пл Я да м нн но ен на в НН о нь а нн в На НК м др ожУжХ склу яму ЇМх дао так о лео их їЗ8 Беж лу ТК опій йЖха Ме

Ви КО З ва фа тя ую дю Лек. и б ли Ал. ух ни Дн ах ин хг мишам о ДЕ УЖ Су Ук мат БВ ЖЕ БЖ дир о лаж ЗУуКУ М

ЩЕ їй ча аа ФИтодо кю пд ку тупик дих, век АВМ о МЛ пва шу ТюК о бауУ лих Аз Уві ЖНУ У Хаща ШЕУ

ЗОУту их т, ТЕ,

ПА АМА МКК люта ух «ДІМ ОЛЕНУ ель Жити умо и зла вити

КОЛ ПРИ УТАвМ ТИЛ МТУ Ух

БАН чих Хе дтУрь Му ЦіМ сами Же АХ хом же хіх Мі а я. З) Мо лиха ую М п лох змо Лк ил ех Лют М ду

ША СЖЖ мет: МжЖМОо зе МО ДК шу ту М. ма шах стітю галі М сх 1 х 10 їх гине ху нн но чо ВУ ен нон нан нь НН паж їм: Меч їм Ват ма іа Уві ех пі моїм йхеЙ ММ ї1МаМ ХО УНЛУ що іх У

З хх їй жк й Ж шнек сту. лит Мер Міс т шо щи 1 йди тпм бо іх том щі ши Уже о рул о ТЕЖщ слу дрож га Зп ода КЕс сам МУ Шу ЗШ і й 4 ях боти у рф у ях доку Й ги ххх их ою ут ша Мо ню ет м и шу іш Аш о су лот За Ху УК ОУБВЕ ЗІіМ о хеаю од ух дух мн БЕоО ше «Ці т ху ци БО фо тові: здую стю дяк МВ мує жл се сфе схем даху божу жу вк бами ІК їв Бе пе Аж Маф оЖиЕ Бі пет Узі Ав хБж Пежо буш дамо сей Ба їх це тЕ й

Чек зе пік Має жопу дах ої о пки пій пли ши Че ді а рю ее

КУух фжий БІ Ме йо дж їв вка лій зів дню ТБ льш Уаії тТук ТУХ

В ап У пд нки р Ше лм. с тю ул іч ти б Долуч бус чиу М Ксу

МІЛЬ БАЗА схК роми; мим жа Ка) мМ. маш ААУ КТ мар Еш жу мл у

Фет тп 11

Аме МО АТО гі "ху и тода: ЩО Чл (АХ ши тує мий ко УМО М АОАТО АКВНИЯ жа ОСАТЮХО Ма ЗО МАК ле та

МАХ З и Я

Мене зд

КАЄ щи? р птиця «а пи ДОК 23 дехкчна Ця кох п ичиа ЦП МНИХ

КТ о, ве нути зх ие го вий: -і пилком «иУтлі м очи я варом пріо ї и ше ШЕ ких Мов ЗНаинвя внтитал ЩЕ «и зл

НО НИ

Темі блю ума їх нот ди Мт отбгю Ми Фщя лід би. ет ру пу

НУМО ЮК о У Мел. Те опбілю бка бло бзж Уві Жшекоуді бу БЖ сі У ОМ

Н х ї2 А у кА че Ач - гак мі де фі сті М - - ж 4-

ТУ іо пу ті Же бує Шар мі мл о одреимх тим МК щу Тлщшо тож вл по жеюх сл дме КТК Сдую шах слу спайс ни пу МороМмУК ЖУХ Ми

А иц зА

Ко Же дО на А АН : т оту Ех г х, ух шву т ект Су ми ри Оті чав Бкос пі пів бах о бБео уві беуб Уа ів Тех

То гЖІЮ ЩУул о шату сІп СУ кКЕоО о бау см шах гео Ух хм УФО доавотЕХ

У « п

У у Ту

Фплало Док сер тт Мане їжи ох гот Ях іх зу а ло ОМ сти б пий УМ ЯТІ ел ше У МАЄ ККОобзБМи ла БИ си ку ПЕ лк по и

Жар Жир Й оду Му я Мр тю Ам жи Ши пи як и М ую М хат: сб лхіу кову см МАЛО ЛК дк ОУМХ ба Хо М Ж б, пУпЕ МУ

ВЕ па 75 ши що Но тІх що реа в о не в он о а пода Дт ха ван Иезу йду

Ллу МАО МіО Б ЖЕ Лузі Сумі лу Бая Стр Аве АБО вет тих ШЕУ Ух я ци пи звана а нон В нн КН о НН І та вне БВіу зім зи Тс Муз Узі тих Уві Газ міх а Ко

МУ МО;

КОНЯ и я 533 леді щі млю см имя жо пе ИУТю сх ПІЦ М ху бок у ек ВИДУ пло мумЕН У Є

КЕ

Кая Укесоласшти зихипова зихитула шЧеВКХ мл пи

ДІ хе

ТУ: Зла т тжці щі і пе ПД Кр як п ох а у АНЯ пдв ові сової Хві піз бек обіу бі піду зви Уа ос Бхо ЗУ пУУ 1 х: "й ж м, 4 й; АЮ Ко

Пух бом ати їж; шу маю Дт аю Пугро узі лу и шу гло оо ух Ск

Сем о УжМм 2дю мо шеК Су мли УА СЕК Му спам о -зак фай Еш Фе о ютЕ -жї лег ха а ле т пою фік січ Мет ох фу йте Дня пт Вря Крах Тен 1 им СЯ

ШПекоЧут Бук Тер о БЕ ткро ге Аж сів ові Бра Бі бек і Без са

ЗЕ ФО 1 тб Жах Ти я Моро яку Мч фу ПМ Фа ТАКІ, ую же ж С Ммух ати Фк

Кк олав о ліу Ер о А юуУх укових шим ше ЗБЕ о ху ЖИ АБО ГЕ ВОК ча цк ще пи ПЗ о ї х пошее пе ТИ тА р ОА ни м еоуке -е - с іні М ши й осад це 1185 пвх За) днз Мт пли ба Дамо шт Бере шЗ В 5 п би дну ТО т с нн дач дулі ил шу тля А АТО ту Мих їЖх о Бзи біт МЕМ Аве пет Хм ЕП ой пл дО ОЇАж Ліж чаї жує Тух ло ле 5 йти Мі дух ох Фея г Як ходу доку М кі т кю три ду шию тку ІМ пуп каАВ Аа ім АвроУєі фе спам йо сів піт цех бур тую Тгроіх тай ЗЕ 15

ЕЯ ТЕ А па т Етюд ши сви сю пАУу ХМХ МАМ УаА ТИХО МАМ Бета

Ук їх бле хо дк вже ллЛД У «ВІ ВІЛЮЮ «ск сил птиці порі ть с дюим МГ ДуТЯНИХ. ПКТ КОВО СЕ ве

Я

Кн ХВ лайт паяячя ТИ Й питати ря оди пах К ІКТ ВУУКИВ літ тМ «пжТУ иа лити МИ я В рен ново нн но в нави нн о и а НН нм НН НН зак шж сам о вем для шо Бо вро дак хв сла УА шЕИЖХ КЖжО шАу МАМ т ц У ях: тий дів ху лі мк об ц о ву іх й дет бемі Ша ше Тахо лір т лк ОЛАЖОЮЖЕ ДФ ЖИЖ ХЛ ШЕ СУ біло МепошуУ Ал »ух ЖУул о мхя и КУ п ше бю біо пла (кр То Шуту 2 ре ди пеигу у то М їх сук маю о пшо хУХ сзальЬошоатю му! што шву Бай ОМА ШЕ УВА їщши) УВУ Оз о суух лий Б іх ліц дет аю Моз Дей омпеи с дму ам тів Бий пім Джо ба шар опім шах паіш апІрвоес буз ший Ето о Олх Баш їїе гЕи дім Ох гла Вшх о пІіУ Жах пу «1 ки на у по

Мт ие со; бе тину ДІА ШК Тих спр бл тт ток ще т кох Мох розу баку ЖЕО уйх Лех КОХ ад тиж са мб КУ ХМ Мо БУХ Ме па сп це

Ко Ти бо о ще ух длх ом Теж МІ они ЧИ Мп щоби уд у пози кум ух р виносом оса виш ук сх ше Бо о Аіа їж пВИоБХсо Бр ОоїТВХ о лзуу Ух пк -к цк хо Зк ОЗ

ТМ (1 же Мету. 21 ф ех ср Абстр дк ом сві хрУло ол їх пів осбхву СТУК лу дк ла Хв же Май Бей обох 12 КН си Я

Ж ВА я Би БНО еп о ЦкУуЧна псалаідоОвкиувх нти «иа сшнесУуавпатвь аМмтМеЗюДЮ дУсвм те ЦИ ке ЗО щіль ЗМдло флеш УЛ 13342 ша 33; хви су Фі Я з ихмо еику ТУфрх шзацомаж їкт інна кіт шекокком тКо пу аяБА За У У От ау ал

Ї й МИ їх

Як ото Щі Ти.; АР; бут СУМ ряд хх чу є бул пор ж іх о хиха лиш Зі:

Тих овес БЕЗ оОпт був Тих Ма ЗЕ ші слу пе Ха снах ехо Зах хе «и 3

Шев осреху хи Фе спім отв тіж хро ім вла шен біт тлі їх Ту й: чит Жук Ту ТЕ МУ ТІВ ТІ дю ВІ АМа бо пу їди ОБЛ бе ЗД о по а р ни и на и НН М р не нов о Не о м в НН

ЯК кА 15 ЕВ АФ лук ЖЕК о ТмЕ пам Мат ТалоКук і! жМ ОМ ЕХ ЛІ Му т її М тож Того лудикт АВМ Стан мл шує ЗО св, Му с дя лох ку Пн То пешоМув шви дк мі ТЕ Те Ше УВІ Леротпс Шелл омуВ бзп шал га

І пл та яп ен нн а НН о пяти Ху Кн зх СК я Фр паж жо

Бує ле: жа Мей жах паж Мі дта бле» За Бар ТМ Ака ба! Ттук тух де чо п тій ох А ду Ли Му Лящ ІТК то ух МУ КАУ ДО що Му Маю ний их,

ШО МАК ЕМ УмИиК Б А Смт ІДНА ВХ см їх У Бл ОойБЕ її Тхв о у хо Мих То сік лк сни їх ди лк а Фижю Мих

ЖТАЛК ВАЛИ АЙ Ам МІ МКУ жщ лий УТІХ я: 4 хх 1 Али -ехуд хх ті ЗУ седій 107 ша БІД

РІ пилу і М. спієЗЕ у у щі спе

Й ЦМ шеумнж ткана лек увЕ хлулу у сиди слух, ее доти АТО сасачаєі соя ПІ... вена УК ІМлаи ть ЛЕМ САРЕТКУКАЛИВМ ПЛИТ. «апп а «Гном б ТУТяу бита: Ве СИ ах пен и. Кей мо 1 оби ЖИ. Ли мо деиих б ню ше о сУЖт сім О МБжО Бах ОМА ОТЖЕ ДТТХ МЛМ Ома. пал оудої трах шт см Кі т - те 5

А в 1 їх пе Да стою до лю. я шк Фліт ах тоди ги ри То тин

Тзх бід сбет ТР ТЕ сук ша шим м пд мем пом Бпрошжа уко лод хо Я о

Кв мк нови на но аа но о НН у КН НА На ших СХ дм САН зу жує ку МАВ ОСЛУ те ЧАЮ бла лах Ті У

Я З 5 біг блтх Щі бий о било бура дак ре біз бує сім Ак ко Ше біли ах саш цу зе оУуп ока Ко Бех ау Ма СО см о АжЖер ть шеКостуу Зах ци ще що

Юа сх по

Мп оди (сх: Ме вк що у ром тої Стр ТЕЛ пк іх Тек по Зн МДдЕ йди х Меоеу у Киї з ри ша о теки Ло ду ма

Ази одет ЗМш Ай оте ВІВ ТВ Бмб3 їх З1а ак ошлу ТБЕОФіп Кхо Мах ту ча тех шт (у: шу 1 5 ни піч Ах Фалті дю Сб хх 0: ЗУ досфУуу дошк й хр рум із Ми

Анвосія Аха дер тТУх Тут пул і Мія Ттв й Акч бл Тахо шщіу ад я яні з

Кі КУ пи 05 ТАК чу і тд ЛО Хор ва бу тек Оу ТМ ЕФ оУВЬ тВвк ОМ беи ЧУ

ТА ме они пе ся лад «та ТИ стю же ки ІЛИК пен Ментаруугт. уризахі тв ніде мА я ЖІВВНХ ДМА ВУХ

ЛИЙ» дн які я й отит й 3 ката сут. тека виде си ий ві й за ях Негода сть внуйепова антивала Качка клитх, заз ри ККУ три стю лугт пи Мій пін осЄекК бі бу і тими МВ о лумаш Мить ик ода пори о жуть ф-и Пій сі шек су КО бпоау еач Ма лм Кая кох х В хи М поро ТІМ УЧ ОО щоюо бдтво СТпіз и У тк У бер Кот лу. юю Шу Малу.

Мт збу ам ОоБеМА КплОоМиЖ ТММ УА ЧяЖ САУ бХІЛХ ПК Бл А щшеЄ ат по Рая 3 їж мо УЮ ук пі Тут її жаби Бу Му» ші б Бур ую гу і леж Тухо тує шлю слу тп їх Джо бал вжОо вто Шіу Бош ошат емо 1: 3 не ох рам зо

Чбуюужи ТЛ МПбуМ о фемтю Ж хе ла о ик МУ 011 мк Сію МАТ Сб секту юн Ще ежДК зт млу см да я Ку лоУю о пХ у ат пл о гуХ жук яегокОс лек

ЗО У Би пода. тут ше т ТЕ мін Мт пишу а щу ко жує оз дон ул кн ім муз Мел омуб я ох кує пйех Уві влротпя цех мух Аве ато яєпе

З а ле по нн ни НН о НН ІН хі тугіше теує МД шо Лу Мих милу лек зима ЗИрж сш сш нах ЖЖ Еш я тьма АдНи Зх маса гуд ку їх за Б

Мбіє Дідо фаст но ту МА тре сен кто мо ле Соя шк бою ситу Сх

ТПув о Ак бас ЕМ дев оУді Те без вка са б Бай ше ТУХ Тхрошіу

УМ 1215 її

По 105 МІ

Мт Си лоц Мур бух ух таро Ха пуд ую піпобіш УВУ їео ар свт ові ех шеУ тд чл 115 ее пис ах «Ії Ол єлвисю БЛОК кре ас ПУСК ЦО ге ких тучних плодом их. дИшІх «Є ЕІУЮ Мічуняситіх пи Ол вису мана МНН ДКУ ау» ТАЗ

Усхи Пуєє (АЛ Об МИМ м т ух поети ис М зум ут ше них п їмвм Бук Ома Мей сля (ПАМ ОБЖО штт шпех Ма Завк очах жало Бо ЗУ Ук ї 2 їв 15 он и а на а АНА На НН ьн лоджія тку А аа ММ ЖІ. АЖ ВАТА МУШОК сви сем ФАТУ Хр олавм о схІиМм р пу ХУ КМ чих УК К дО Х зо «ім бу: бах рити буси Шен ТЛ ху ту шу Кен, ЗА ета ач

Зах ТЕшШ о Туюк бів сл Був о БО жу пу Пеху Кто УМ ШшроЗай Ха Тк

ЗУ Ай 5

Тл ламкі ще от дн ри дк ри ЛУ жтх Я у доня пихи бок их Ще з бЕЩщОКмЯЖ Муш ЖИ ЕКО си лем Ті го бла Вха п мех сху ща

Б то тих дак У щблдуу ЗК В юр оту б ль ша ЛЗ у рних ТИ, зн Аж пеайп оЗек пу Бар бл вія Жп Бош Та Що дл БЇУ Тл осів ТвХ Мах

У БІО о ча у «а; Мі ц щц Чем фі ай «ко До еру оду беру дон ж ЕМ. Фа и роми із рої Уул вима хУущ ай моде Кр Фр екс лю тп су Ул, шт Ж МО рда (Мр тях поле лЯкуж Ху р яма ЗИ Жах ТЛ хх пе балу дім служ ху Буш ах Тьома Бай Ку ди з я Мих «ІЙ» лях

ЯМ дю ТІ вух вух жили ЛЕТИ

ЩЕ КУМИР ГРУНЛІ БУКА ТИ В єю ю ее

ТЕР МНетихнаствв» сети ціа свлитинв ЖЕК шах дл промо дю слу Туру ЗЛІ Же хх ня о Бам Шжі Ли зму емо хи

МАЛА ЖАХ ІКТ ЗАХО заду чем мод зм ко сім ПА ві Мущш КУЄ йЖЕ ОМ 1 5 та їх такою сфіхуї уіхит Тоді Хв мук щи щує ке КУ шко в Ми ту

УТУМО АУВХЮЬ КАМ М Як су пло ШИ У ше У ЖЕО ДОЮ МТК МЕМ Мч Х

Ук є ї- «М хо Бк пов Ол ННЯ Ли п жу то Ат т пе: Петр Мак лож ШК хр ТИ йетХх Кук їтук їх міт ТК дм Ах ПАМ БІК Бус У Буш жу Тим СВД ї5 45 45 бат СІМ 1 Ух йдем жк пад Ми у Кк бик ть дух Ід А у ща тх

Та іш пу лав Ті ТУ Жук ТВХ СІу бак Же тех ТХух АБ Бу Бах

Не Бі що т Жижш слу ди фрі саке га шим АЮ даху Тік пт Туш даті із ше їшиа Буш ВОК ЛЕП Заі тв фі ФУ Уді АвЮ»отТлх ше МУЖ АШМОВІіІвВ Бе щи п Та ча щи КН Не пи

Ше Тони Ти бю шт у Мт ям рми мо що йо ую І ни НО

Ж фа Буш аМі шшЖх сто УА СИХ ВПІ пі шк фпПХ оВІаш За охут мах

Б МО 5 тина да омруєюр Ин Мн СІ Ж брутто Ка УТ и БИ де домо Мом и ук їх

Су о Ві БЦ ЛІ Вт Мі 4 )е пес БЕжб сім ші ех У Може УЖ іх у вк тех Кен

КАМИ ВМлл Ал: хто сх хи ВЕ тлу У жи мщі шах пщшую щпідопіу кт аб Мах Те ща ех о пнх

Мих ХХ она Заг ші дн ду он ША «ІК НН: «Кіш БІЛЕ

ОМ Ор Міхов А учи і кри

ОТ штижнна пуху ум

Ех шию Дб ие димок дей щертумві па КВК

СЕ Метали Убж еВ оа дворі ЖНАЕУ «М ЗИ тії Чек я їх ва мів Чак о рето Алі баба пл; й ше МІ бриф) Бех піш тут узазх пе; о їбеЕ бів» дах клоблю КБбе сії Бах Мвза Тв о БуЗ бУув : х Мо 5 іл ХУиза Хм гро Хо ме гук фак сліз М Де їжа 1 Де Тиха ру

Сід Був Ж ОСТвл ої лЛнж буд Бех Сіу Біл о Люс ілі Що Аше обу Ук

КІ ЖИ Зо поход щу інн йзукмо пр пи и пе о ьо че т меч НА

АМеошех сер ХХ іхіл хх му о КхоО Авт яів їм БжОо бук фея УВА хів

Ки Я аб, тс лобі Щі їз Вис іХктУ шари ля бух иа фот не Ши п тІмх шій зр о деах Був бно хо пек піу Мві Бо ел ка шйе Бу ЗКУ

Б хх а нон а ян У ра ОН Шон кН вна в нн о АН НН Но НС

АК єшї сСУмаХ щу С АЖНМО сеЗЕ хі СУМ дет САМО ДоОМЕК РАДО ЮК ші 0 Ло

У а 5 З ті ДУ Ох Депо. ую ТА таж ти и УМ У. блдку Фр прут. Дн ТОКМАК пАМОгЖЕ сш а ЗИ ОКХ ух уп Сапойа юю сур ЛЕ мо лшІ КМУ СМ

С ш слу божі: Ме в ЕЕ зу у позі 1 гало

Зі кад: ошл в ді тьвЕ фо оці лів 3 пут леж ей ЖТИХ пу шо САУ ХМК ху ДА саю ока шу АК

Мо їх хі» В4в евІії8 МВ спи тух прути ше іш шжУЧНЯ ТИЛ ДОВИИ ЕЕ лу шшВОе Мне смуллиь спеивиеиНійЯ валить ля БНО «шо лав пт зяб и о кКал у те опще іЗ1 а» де. тлу одту УДО студе фу єурею гіду само АН ВК хтів ОоппеЕК ил Ст слу КБащ ол дж р о сАУ сим

Н но ЕХ таж СЕ Рости фішка Чет: тут Пор Ти шок клю ЯХТ т шен шо дим:

ЖРВУуб ЖІ пло меш тлЖ шле М о блеля ШАХ ОУМЬУ МВТ дак па ЛА жу ще «с де

АТ кт. рак нини и и о нен р нов о я нн о иа НН НИ КН ет СУК ЖЕ Ахху им лом лА БЖД ша МАВ шо УМ ую се у зим су

За рев. АЗ те Фо тт вд мм «Маю лиж АВ Му у шк Ар тую тує МеВ Інф Зре схрогхвоялу же рі КМ Х ух ТВт СУК ЩшяХ ЖЕ От шо КУМ ЖИ КАА УФ, а п о ті уч шо щачу ХВ М є Кіш мух МЕ Вода пи За Тим Де пі ОК;

Му сот шнх Бу ах сх ХА (Ма ЗДА МО Хто сш Му лав оса ох КЕ ск Кк Б пт У м що

Зеаж Зк Бо би дя беж в лож ол і жом му А що ет трах мур гуж оз Буз ба бек Бех отаі ве Аша сім БарвотиУ іш Узі Тук ТУук

Ул сх 55 шо ке Мо ббаа Ван жи ти дат чав о тимУ утро ст дау борг в три щім був хів одко іш Аг УА Те бо Ако шіу ПіУ йдлу б ТУуК Ткр о ЗУ ил чтуй с що ках о іп ЗМУ Тв о бези УВІ ТБЕ осві еУ шок 127 шо лЯЗ

Є, ТЕ

ВА КМ коми

ШЕ млтнУх ах ПШАЛ «жим пл ка дмгсллИУуВнНікиХи

Ов У пу «ШЕ Мітшдасть антиешньа антУтала Ми

СЕННЯ ЗАТ те ши пл шу Спи Ох: еру ІА для пи що емо ут тт лов,

Тая ЕК ме КМ ТИ Ю ш:Ех Бк БЕО Жак Ма! йдеу Уві ЗаєЄ Бо піт Зла ї 5 15 5 пер свв феєю тм ак хм шум ті поча. дж Жив ПіК в те ок В ху Мн ме хат ТМмА сут тло А У бхать АЖЛІ зи ау МлЛю ув УЖ ВІЙ су пе з ра теку и ІЗ ЖІ бземо Ма б ку Мер и ЗО тіахую МА ТЛ щу

ШІ ЕР КЕ пат дал Буш шо ЗА сю шЕХ гБЕО Хв. ММК оуУєо даІшОТУХ : ай 25 ї5 30 25 тій мит ж бо Люки лиця сім ІЛ Хто мих лох; Му Кене сх ТУрІЮ иик шапомйБу яжт Ззуш ле кис шоу шо КЕ ІМ о саУтЬ Кіт ож зяКу пях

Бе жо і ско стиля І Фу фрез дСь що пн Мом Му т ух ін ТИ ДІ яд лу у БИ дя пет бпіу под тик Аз ХВЕх Хе тиж Зав Зак у ТК бій тах оша п: зе т щи

Те ТО НУ реж дом ІД і Від о ору лихе фдхлроутчю У Мох бут йят дн дови тою т ве Сихова КАЗрОлух Бечосуш біо Ал ЕКЕ ср ох лак кл ою Ул их о ще

ПАОЛО Уфі рр хе. Ма тва І Ла ур

ЕП ОО Ж МАУ САУ КПЕ ШУ УМ ДЛЖ Уа Мем Ку п ак

Ам А кт те зап «ДІА п «1 їх сша ДИНЮ

Гл Поеми еру вх «ТІ шШетучиз посмідовмісве «ЕЛИХ ший СУ есудастеь внтме па аіжнтенлх Бе тан ХВ і 2 ялту шк олім. сту дух с ке пл хх ЕМ їх до п Фу лих хх зе Ук шоб РУ Ул с ше 3 У шу Ко у се У ЗІ КО 5УуУ са ї 5 м Ух сах бар даси дит оурнує сх ЖІ що М кох Мах ут сте р тва Жим сю пак о Кеа биту нд а бу жк Мах шко ші У пу зх Ре мех свя щих до ах 1 хо У о чбаую Сх бек тв кку ул жу Ха луки ше дл до ді пу тю ху там І пек тух тТул жлр ху тую хів бка 5) ха Бе су ую СЕУ хм ша 35 С У

Фежут СТО и ла й ток ек шк у Фр Ю.А сам Чую Дому бяеку Шіхсу тв оті слу йле сі було кух Жвт фу пех Же Шут ек Ав тт ШеХ по 2 тим тий Шум б Мих сЗпуг Жах Жим ло фе СВ ую тон ЛУ Жид Шу х

Мам одшевш шк Ол ДИКО АФ УЖ що ЖКО СХЕ сш упо МІ ХАЛАТ НЕ ше та 75 Б трі стю я Ід Место му мя ке о дж че Щі Мері лі ее

Гу їско Зі Ме дЕлопех мем вкзч вів оба ев ТК ові сі ут ту 5 КУ п пек А Хомик «ті: р В ХУ тер Дж МИ кл ду вод Велико Мун ФП

ЗеЖЖ ФАШ М яКИ ма ЖУЗО бЗжо мат опти ВІЗ шМу слу спчх зар ока шурожку 1 КЕН КН іш Ен А ма ож ТВЕ Цей ХЕ СКж ОЗУЛі пилу ЗБЕ й 11ї лу

МАМ КУ плліую дай

ВАК ха ас тик

Кия ОНА

М с Ціехеифрнй Мине МУ ин

ЗАМ ОЕМ хНщ БОГ а ВИК

АТ

Тих «Етики кт ШУ ТТ машин рію БД І хи діт САЖІ МАЛЯТІ УМ а НИ жамих з біз: о стяме А Ж рр їі Ди о бфки й Ме сти; дим За ЖК Тех тис падожУХ ай мацо ДДдя ЩА ОЖ ЕХО паро Бля сбапоши ах оТОХ БЕ МУХ : З зе 15 у точ АЛ ОСТ Ту уки ха уж я ит р дн ня КЛ тя Жвн тхА шащо шу ла АВУ Дао лю ущ пи зом ща БА ФМ сему лкплу муз ме хщ п Б я КІ 3 т; їх ламає били уч Поу КЛ бою бно у То пух тую бу фа МАТ ух

Важ мах тилу ХУуХ БІЖ шо Був БЕ йЕр Фіат о пеЯЖ БО Бу офемі Уа дах с «їй Ех, во хи й

Між Лю ет ум Ж их Мини ХУ сур 123 ЯК 1 ке ди доня ль рю (4

МЖЕК сем лю кт мимо кл шт су за шо пс Ж гл ов су це пл й що ме ще сах тах кн йо дою М ж Кф Ж у Ж ух ик тич із АХ йпех бзи мсек о сіу йвроАНюЮ Мід жнх жи Тк о ТіФ лап одеж без піш Бій «В то Та Щи ларі мо М Ішов у нн а НВ ре Можу Хуг х ож М ж ках

Шодоєувує Аа АЛЬ дл БЖД ОКУ уж папоАлз хКвовае вич дЕшохМХ бу п тур щу пл пе З

І шия слу сту Шк М є хх ла (0 Ж ую тру

Усю. ВЕ щаУ пай су ЗМ муж мах 15 Те Бух па пох я

Ми ТІ «и лад я 01 ше піки «Еких ОКО К шлю ух фази піст тії ги

БАКИ Мф ШРІ Є. «Ех лютих, с пу тес. «т вач ТУ ок ща УЄТ гемо І пихи «ЖИВІ Сун етонасвь лету я затяті ВОНО

КН кл вас аКея ТОМУ

Пів оУщі лі їй Ло («па Дешу (31 ух ЩІ М талу МІУ аж Шеежу ТІЇ ах

УМО жМА Кіт од см ши ж СІМ ТІ х ЧА У Мою лу ють ЖК ТАЖ КІ х ч лгу шк

У Ти уж Жим кує ха Ма: КА их У ев нь оч НН НУ

ТВх бу ВеЄ без УМмУ бук ТВ Майї безе бів шу ак о Хаш о бах Боб мех ти их Зо бак Чи бу жу» сл ті Држжя НК ід их п ко ж ож ни нон шу Щи Уго щИ зум мо МА ши М А ККУ мишу и ЗМІ

БЖ жл я пере ДУ кру В доро бум ту фу тд ФК Му мук В - сх

Чер Кл Мр ому 1 ем тую Віа пл хи шву Кк обі пою шт Мет йти

ТшВ офі сСпху ВЗр од ЕЕ Оу т п о скм о шшЕ Уж уМЕ дух АЖ, Бу су п Я су

Унизу тим Же. пли ло ую біз сухо дл бат ск маю тя Вот фр. УМ, мимо еНжи пижх мЕпо А ЇВ Хіт см УМ мери ОосЄХ ушу шо єтиЙй и т, У шл шо М ги у тиж о їмнмь ря лага ик дж Уа й ЩІ сля; дет У Дю дл те мч

ВУЖ мух семи шо Зшк Ул ма зи б Ер ОслаК вов Уве ох ул з: НК ще

З на пл пз Мо щих іх й 3 т тал ки іти аю Ши се Різун ту ст Абе Акту піп о Деаш Уж ді ої Ака Зі слугу Же вероУх тм опау зп их з гу

ММЗ МИ Ех тілах ШМО 0» шко Ти ЗА. УМ ла. Мах стю хіп У ТИЖ бли УщуУ Сех о Уво сук шах 115 ж хід їх «Ло дл «ДЯ Ло Тс плитою 0 шию во МІОК км штучна тестя сю

МС ль, и АЛ

КЛЕШИЩою Атерома ж аа НЕ

Мене УМО сто. ВТ их ЗЕМ ІА ум у дух их

ЖК ИЙ каси я піешо я Ух тре у х тв су хЕ схо - ту піцротави хало їду ми пр буру ТУютє ехо ій Ху шу МЕиЮЮ бури бен Тк під тує мал Бо Жфнт пі беж о ВЕжсп Аа оБет бій Ве Мах отв Бус Бех

В ц пот, Би ї Ж М У пох вудо ЮКООТх пло р, я па Ач я пла фл ху ТР ло фур КО Ля тло ОК у де ШО МІ Дю тим (хр хи ух зл му Удао З АїЕ ОТИХ Суй Зеаж У пово лу: май фоУ др ОоСую Ту тлу пре ха хи шт кІе

КІ По Мету блуюж (Ж п мо Усю Ве й МУ роки у кн т

Акасшек Ти уж са шій му ВЕо АБИ СІМ Зет ТО Се ії МВА Хі зе гу є

КУ Ап їх,

Чиж спі шк; Це Ли йон Буд с бі ур й лою Ок пу 013

МЕЖ їй ТУ (МЕЖ сук о ш жо ЕК бих кві кХК Овес кош вд ма У

ПО че й нн нн но Не Ден Щи я стае галі Ма о дода пн боту 1 тр

Зап АЕО о ЩПех сі дже Авто фра тн Сабо тиж Хі бази деко леви бе Бі вл Ти ТА ви аа дахи й, Або РІ Хи Пух тлу пк ур С до ух Мед уж ах. кет Ту КУ я

Ям о АВТ Мово А КМ 1 УлО ХшЖ УМО вО бо кор зкхуМо ладу БЮ ХЛЖ ХА У в У я ФМ чут туя ИЙ Ж о ХИТ ТЛ пу Ох ни ох,

УМ. ЖТНИ АТ СВІТ МУ БЖ оду УщА ША АВ Лу УК тобутю ттх5

МІ 105 спрунхх я «жу З пл х КІМ пря птн сЕЕкВоО БІЛОК шия Пилат Мей умі и

ТИЙ ПТЛула/мих ил Дж УА ти хх

КТК ТЕМ Му ги садили ТК С легтлміин титя ДИВА в ек тЕМЛЛЯИУЙИ жмут ДІТИ УЛ Ота жим

ТУ ЛУХ ОМС шу ймрю Уж пк, Удод у леянуІ Фую р зррщю МУ ДМА Ти Лозко би жи кт я ую пам жо мат маю і сід МжлоОсАУ УТ уч ах Бу о мушо жЖтхУ хАОМ клі і т п ВН У

Фіто Туди тку ик лю тт їде Мо б 3 А ТО пе си ем их

Фе о Ту: Гуїк то о дат був Бу 51 Бан Зм о ще: 12 бек цех -ї даш оїЛимі Буї їж йпеаш бу Був Угі дет бу ШУ шо зів Бек пек пе бу ц й

М я ля

Фо Кк пік спі (Ех стру, их дити; роми пуиу сн ту тв М. вело кеж жуУЄ бштуХ МАМО САЖУЮ Мб тлу мАЛОУЮУ мХоО ем мЖлю АТ АЙ БА т С 5 ппуту. СМ ж рія сала Млин тт; ик ПАЮ Му паю М Шви Йих

Тжро ле А У ОВО МАО УК о вил ОошаУУ МОХ МТ УКЛ Х ВИЙ шт Опу

Б А жМ пове й дей тм Б А ви шою Ох бЧлхче шоалюю. ЖМНрим й Ве ХК те: (лу ще 1ІілЛь За ЖИ; Я ДЕК жало ща Мр А дик СБст Бази Мак це 55 та та но

Шахи; Я й ту я пу шин и Шо о в В НН НН НН ший ій. (МО джю пак о йпшж НС жа йо щеж й Тис ойів Меб о жек ху що: смт т чЕ и з тА о Жга ді жи Ма ооуте ти кий пуб іє ту Мф свои бо і

Бр лю Кор л Млшо ва дує ші пд сах їж ЗХ аж Сук косу ви уп п їпе 15 М тк ло ск МІК. щі пев ха о ху

Мо пьу жХаЖ о Маст ах жцпж ах МЖК ОСеЕ хх ТД

Вих їх стик хх

ТАМ лей шля а де

Ж 15 я 13 Не щих Оп шк у Мах иа ТЯ м «ЙЕ3У пшвучна пеоЛІдДОоВНь ть

УТ яма Ту вир вм ймеенійя БОКИ

АХ Уго вь САМИХ ТІЛІ Вмтижіма вик

АТ то.

АВМ Тк. пух, Ам лкщо та Ак ся кю рану що саває Хвоя А Ве ри

АБО М ел ЖЖ о сжл ех Блє Вів тТрк бите ек ва Мат Бей О01У т ГУ "й чиї пли в ді Фін їди ие стук ие о пбізк пам джем тадо щі Ват т ух сСаА ОВК ТММ ТМЖЕ зе УК Хм их ху па Од Ту нжиО ХА у юр у ух гуту РІВ пд

Ах жо Ак щі ке не в ни о а на о НО А НН ННЯ

МІ леЕл о лла СА жтТО АЙ АЙ ОМУЖ КАК оу ху о шВХ гм ОМтШш а ЖК ОА МЕ а Б 5

ЗУ У дл

Че Хі щу ших ого Щоріж пути мо ми Ж їх Моди ІМЯ шлю Ху їмЕж пам о БзЗМ ож Му бл жЖто Щек Вих бує Бжа Бій Аня Біда Ля лу тд Зх У и ях УМХ пориюю вує: суши СБУрІХ Жуки 73 дк юю и щу шию шує Тих ПИЛ щу Сер бек йзпо дж щшух пз ОЗМа Ала такое Тит Тіт Бек ше едосніт лу

Н п тЕх, що ж У ж. рон що ци бжеа дод дл тк Пих бод йів Від сут джу шит йдт бмю т ши оваф ле іо очі ук ту сСУув ІВ лав ур Айр Аа двротТаЕ о луу чо сх,

З фл щі Ок Ля оту я тет ТІ уЮК Ср том ой ща Жив спау спало ошау пах йо мем мам ха КМЕ СИ

У 1йц

ГО чо

ТК м, ще

ЖІ ВУ вия їхА сту ж дтиму хпішй ВІНОК ес лучх пісеклшкит ит мус ни вичок пута Ти Ди еЕТУх шити Пи ли пхати ТМ рах кАМНАКТ От ІМУМ.ЛММТУ. ших УП тут тлими о сввжАЗІИМООЮ лу тийВ ОКУ дих МАЯ

Хх Зх пі дл та тил Ме тла. бром р шфиу Ма Тими Лек бек фах Ам п

Амос ХК ЖИ ФК ІД НЛХ Зі У о ЖУК З'чМО УТЬВОМЕ шЛУМ АХ МТ.

КУ А Б НУ себужю ов к йік их Тим: ум (тах Б Лід шШухуя Брі 1 ру Фах фугу т т»ЕЖ Ми Щлю бо тру був ЛИХ хв БУ Шіу сіру даж їі: ОоБах бли Ба ки зе ня

КМ ЩО БИ

Ше пе Сук о сбкру і гук Хр ойей ше пк Му іх тою Що Жим ШМИБИ йпеКотут ую тросі Тер оттіз ба сії Бк ко піч Бу ФУ бром и пу дії кх ее «о 45 бу біс її бе у ик боро фе пе ме па пПаке спо Дт ко шеу тки обі БУ Ваш бів бук Тек Жпу сі Бех їбку тую Тух дев кхО ех

Ба о

Мем Буд овах пла МжЖУ Жах Та о бей Май Ат ХМ ат дує Аа іль Ба ша чи А за че їй ТУ 35

ЗК жі ах йди тіки Ки Му соду Шини шу Ми ло мо уки ях

У омх Япл шУ От схштТК му ЗЕ жук Ул Ву Удт Бад бТХ хм Ол УХ пе З шк

КХ Зо ЩО їхащо Міо дж й Дт З У тех ти Дао й Зх й Маус Тек о тиує ср

МеЖЖо тки МОУ шАДОМВЛУу УА СА ІКВМ РТ Шу ху жу Ну БУХ Ху шу зпи тп тп

МУ Ам Ах плн ку кає ее пір ДР М іх пд піп озіу Тл ожБу УвзУ фах оУаі дз омек «жк чу

МІЗ Мах ше ЛНУ «лів 145 я лю шия. зх Кк МАК

НВ прах пи і жив шо 0 ща ІМЗО НЯ НЯ лах туру «Ещашо Меешшнисть аитиепЬва азтитана БОКУ кит чих еяплую ЗУ дюни. ху 01 Ту ТІ Шорти ниє фкшяч Ям Там МЛ ло Хо хлкує фл ТЕХ їжу я УДШ о УжА ММА СТИК би МІК одиЕ ЖЕ ТЕТ до беж Мао жд шо АК МА У 3 сеї 10 Мт

Вл. щен. дл и АР У лу дош; тн ми Му ти Ми Кл и ши зу Спи ій ОлпЕш Аля Лів Авт пе т схуМ МАВ ВХ ММ ЗіУ ші Му О ТУХ тт зе я я от «Ж ло о ФбищУ ббуух сухе т ММ тож фіни фу ТЗ ру строку. чу АТМ Туди ФУТ, лм сх АЮ Лоу мою дл зує Ж сю МАО се КшО аж ім ЗМ ОБ із 15

ТУуК о хМЬ АНО ДУ оре Ж Бик дет ЛУ Тік Бк бами Бхщ бі пек слу

І т КВ бло кат р щік Щі вт: віщо сук тдма Січ Со фс сх Тоді їз ДІ пет думи ше о біу пд о АВ біз Хто ба. бик о башО Беж ше Се піт Кіа 5 ла тк па спи М щи М ла вшу О рмооха тю яд бум тую туя дО пи: щу щорік лам пе да вало ЕМ БУХ муво сій оміа зло ве ВХ Ал швЖХ гу їх «а за

ЗАЛ бат Я фо ті жи гл их як лиц лаз тя том дуття

Мві шва ше піУу ПІ Бо Без Узі бра її: у МІ яп яке

М М сь їми хі Зм «пі 151 тю згт «хіх БІЛОК сш МЕ УЧна ла ХДдиВнс тк кох виОЗАТе «Тита ие хр скриня ОО чия Уайт ди Мцій вити да З. ТУ «МТМ, 3 тари А утіх здо У Кия с3ах те Ку гі ут ли гожа 1251 лих) б буран ту мам ож мет іа сій ос й су шо сам хм У пу Є шеХ сад 1 К 15 І не нн и нн НН АН

ТМ без Белл о Бе) тм бу ТпХ Уаї пох біу щі ас оїїсФ Звс дв бзе я кт Бай

Фе спуую ут бр Ку яку Кл шим змо ух лінку пах Ти п єх гела бух пПпежотуХ Тук Тс ОСіУу ТтроГля йха спів Бус БЕ о шіУ Боз обме ем СІ ах З 15 фот ві З ху дере Ж що яд Му им ух бю оо им ім Жах тут ож

Тх Ва зму шо ха ух тую охО»Х ба ето Бе УЖЕ Фет ЕХ КЕ и З ЗО нн нн нн нн НН НН А НН НН НН АНУ ЧИ іже Му дає бо ма вх Зк о пех Малі Ввробнял девлогуум їжте сло Мі

З п те а рен о не НА НН Во НИ Лето лю МЕ ВТО Дт тем ру

ПК мЕжлюі Му Ха лик шт жВі фцЕ ЛІД АК ово ХПУ АК ОК ОШжеК Ух ау Зо ЗЕ тіж ях сне тля ЛЕТ Тв ЙО сю пу р жу туя еру шу У здеуо ММених кт ту ух діщ йх щу МІХ ТЬ ЛАЗ ЖІ ха У МА і Хо їВуУ йпжЖМ ди ут ФЩ мах їУУ НУ КАМ

Фшлту тд ик тож ді тих У БЕ ее пої мож КМЖ шле Уда жпи що йиЖ полю

А КМ

«Іти

КАМ ЯМ

Кая НУ сн шк ИН шими Бл К иа линяє сти Я пив те пшучна тпеспладанщцаисве сти, ех ші тпм дв ЕН ий схилу тд или о со А сне ВаВ ВІК и з се В М ЗК ших лю яю ти йти ря В діти думу ду хи мих Я Ід кути ся хм,

БЖ тут сім ід) ЖБК і тля Риб ет УВА шШех У о пят пу ФІТ Ф0ЮІх х Ба їп 5

ЧПУ Мі щ дика лш ложу. сухо хек тт ау. дог рдд Ту ет Теми бив для пвх оМБіа ся БУ СБУ бурею ЖЕО У іп оАтвч ПЕоо слу ВЯЮОЛУп Кеш лій тут «к А п І КН - як - -л -л є г я п Є те шої ху жі бер ех жлжю жУЄЮ плпОсСадоМут Фу пАУу біг жк БЕлошай бли ща ЗДАЄ ТИХ

Бу ОН Б

Д к ноя це З Е утіх до ую ух т дим о ни й фечлью кт ю Таж, дж. ит. уитих Ех ках ку и

ШАХИ ЛАВ дух ХО БЖУ ВЕЖ ЛДУ даш суті МАЗОК О БІБИ УФК САМ ЖЕ пе мух: Ра о яко о

Мет дим (ях Же Же А і Ті ТЕ и рю р ук пл Мргу Мох

Дай одех ШУ АЕшЖОЖжлт ій о ТтВЕ Беш ож іс ще ше ВН Се бро. Мак ще лих ШЕ їх пух р ли ря

Хо се АЛ бу Поу кю їМум. і Діор Ме дич: ду СИ (ЛІ

Аптроїцй Аа Демо Лух Тух МН О АТ У Те вага у ух ях

У з щЕ шх Що ух Ти Теж ти и в ех тий КД вве опт тУуЖ ПІ Уу ЖК ЗУБ УВІ ТВ УВІ пез у їй зи

Ма Кок сл х тай піч. ясуя не и ду ек, торти чиї БІіпих

Є фргеллуутто тити пущі ит жо АО Мшутави ПЛ А МОВА

Сея шли ту, ЕЕ и ул . зд ТИКИ Й легкий тет ЩО их

Ма Уєи МК етихиауті атм а антишлз КОТУ Не ох У ве

Кадиш ЦЕ уУ зі щі щі 1 ів тт шен о Мр ку З Дод хо їх ям п

Мам очах п» Бей оспій сів шехш бат ву шу бо ха Му тс ел За ї З ке її

Мр стищтр; спи им. Мік сїЗА пра р Мел ж тт рх: шо ла дов саду ху вк орем пет без Тпх оС пу Уві Же ПпуУ 5ІіУ БЕЖ її5 Бех Бек Шах нах ж ха

Мао сяк Му т г яю ач ТЗ. т ж щен, ик; г дич и т іх пек ух МЕ шо са Уу жур м ми мА жуть окт шу Буш ст шип Ам

КУ У М пк тів пу Шимко 311 У и м юю оду Мати. Дозу.

А АМІНИ АЮ ух УЖ Ул САМ сш ЗК УК ом тю ЖИ сут

МО ке Я тТощі болю шко домо 1МЦОЇ лжкаю 0 Ту Ме З даху Між яю ткож тат УК мви о Муш дж ак ві лк 1 СВК ЗО лавах Вк оЗУулЛОВЗИй ФА ріна а т Що Во оч ЧчЧчИНьЯ не і Кк р КН чен и нс ни НА и важ зим о пуш зам ошех спшЕ А ЗХ дош опа ЛЕБОЗТЖ Біл ха о Муха Ух

Б рек

Фтхуєт Удод зма йо и хи Тл ху (тд; Шо Тедтх ож би хх шип малю В МІГ Ум мч ад ж аю пАашЖ ож жи ви овУуЄ т па У за АТМ вла пртяУ ил і ато тити См ХЕ Ха для

МІД КМ М лижі й жом бат дає тп ху

А ММ шию зіту ах лях шу ее шт ОАЕ рози нан

Ух ення

Км Петі ІМЗО ПВ «сла х Шетучна повара нНіше ких

ПИТ щу Сичов, підт й мадян м ОТ ІМУ сиди Месмйнвста рве сазана БМ. Му ти тігут сич о дю беж іх лм Же (11 кю ех шен ем Майо дими ЗИЖІ бере би і (Зх дак БУК ШІМ ем Таж См Бто Бо ек о тТаі За ад бек тб шу СІ х цк ЦК че,

Е - в о Ко чию АЛ мі зем ох ля їх Фа лог ек уки Ху; Й лету Хо шио аю МА їпойіз пет рів ких Сум лк му ж вх ши шу ВЕ МУ буд Бі «у; -УЕ по т в За пам о й'мту сАзум МУ му Ти Сто. тундру бич КИ Химия

Щало живо луХ ЕМО дав ОПуж бух ку пл пек Бут Уа Зец А Та Хух 8 хе ц тлу ЗО оч й тужити тує юних Ум Федик. Ум и чем: ХМ Жадан ті ху шк АВ ето сзуй КЗ ВХ левж МУ МУ Хо їі: й гін дик слу Ол хо У ЗМ дшжо Пк брюк дод, Ян ор и тем Св брак а. с» Жан Лор, би их МЕ

Ашт пПех піж Аяротїмх Мій Так баб ТВЕК о біє Зак Шу ХМ бо Ко Маю шк А тк ий

Фк То доню лохуу пах ху ху В, туя Деу ек зі юю гля кт шт ПАМ о ва шо сю о КУХ ух ме ша ЛІВ Кр оз лет пароля лу Ух ях щи 5 ке пе ши й: йди Вод Таз ТМ. ущо та ль х

КРАЩОМУ шу ША КМТ ху нам ОоЗІхК жи ФМ жу

Мао І «пада Б дім ЯМ или тя хосжч жд де кора ШЕ Вени

ХА КИ МАТИ

НО ЧЯ чшжмима пиши хім Вих

ЕЛ степи рн М. зму пя ВАСІ У дали х до

АЗМШВ А муцсмві іт бСимі; ім ЗИ Жак С руту іх Там дО 2б,у вжи ІУ Лл

ЦреА Жак схадЬ Ей АС ЗздО лев шому Ж, ХВАСМ о А УМА 12 ОГЛЕ ЖВХ ЛА : ся 1 15

«жа юо Тобі ліру. Ст: Ми ин пі ЩИТ ше Кун тил умо улов пшу пя

М тм Мат Адм СКЛУ АУшИЮ. ГЛ Мі ІМ бю п У шах Бі яма о дЯХ УСЕ

ЖИ пи п

КМ хо Ух ди хи блю свячуу (Тл ки Ж дує т их бе Лю Федак УТ плІ ТК ожлжХ хХХуросм БЕК Ів мул лав гкФ КІФ ККУ Му КХлю Му чх 1 Км й, ее хи ж же гі б» духух Зо бик щи РАХ ее Чую см Че Ве моих шо хЮ ОА шу ВЗ ода стек Ух ЩдийК о шМу пеХ ЩА рух бук депо єтО ШшЕХ п па Що хх я хи плашую йжач Ху МИ З и ни А и НН но зУВМм ув ошЕЕ БЕЖ о аА СКП дл леВХ сил маш мк осВаК УУтО пл ба МТК КТна п о МУ Щи паж томі бохо Тосета би фам в но Вл М до дух Сі А т р чеку ие пет ше пух о фей лек отак ЧЕ тик Ву Віхж Бе тип АМа ло бук ту це зи п го А доти тлу тал ро хх пе ЖУРІ х суми ху дух То Че; т мущ ом Б бал їх лаєм ІВ дев Му шу су ал оОАЖЮ ву жтроО АХ їх род ча

Мих А а ія М ряи про шк АЮ Пн Леди ках папок х т пл обещ Мах отв ВУ Лу їх 115 ї20 са Мій жах вки чн «кам У; ю шли жим Ах пут як доажн годи ж жу ПОТ ЕДОВНАМИВ чих ит МИХ шести, роти подив ри ДОС Ти «я зі лИхи анжиеммі ЗМлмжАНя БЕ, ЗІ сім'я ли вени ша мож гою Шаров фе о ле; дХкию ет щу З. ок пух дими Шут й ую ід сб УК ша НАМ МК стю КЕ тс о савЖж шві ОК о ещлосак с лу МА їх З 1 ї5 чек Маю фам ЛІ ду фут ж сук й и ом Ху т хи Адуя бом ху Ах

УТ ЖАВ ЩЕЖ ОДА ТМ УЛ ТУ СВУ цем мб вехМмО СІЛ схВу ша ХУ мА тк с Б

М їх о шко Люк Тех ФИлк, ПТеУ сік чених ШЛЛь тя 1 хх Ех. бін І тя дм Му ту зе Емо ух само АБО Бум што шу ЮАМОЗЕ жу Мал їн: Ма Бу ТУ з Ся а

КН вже 1 йду юю ис рі бери шок (ЗА ТЛ щО ФФіних 23. пр ЗМ пек дк їм шу вдо сш МБЖЦрожтш тпеХЖ о МиМ МБ кл умо ОфКеТЬ Мой ск їі ше щи ще п

БМ У їй

ТштУ Жлує Філ Щадхх і Даю Мо буму; Му. Жора ил ху Мі йти кл ик

З Є Фу ув АК Аа у Зж о мм ТЛ Ко ех їм ДАЄ Сх жо МЕ пк ту тр р о БО їх я доші ля В до лу за юка Ер у Су ик чт би Мощі З ку др проси жав влрохух дуУупт ом лАпОВІД же Ап ОпХч МЗЕ о ИлолАх УдУ

ПУ пе у гла Ії ЗУ о МИ сто Тимля ферм Ум Уч ока піт бі їх ТЕ пуд м Тл ЧІ Тїка ЗЕ г

Мо па ря зи

Уч ека ШЕ ет хх ох сон пло шу «штам ВІЛОоК

ЗА це. дах винне ЦІМ Соду «Ін ОНА ме щМід сну Ша Пе бедУ ТУкКих їм бо ти їх шк Щі до тчих й 11 мах дав УДО леж жк КА гі бжЯР Тло фо БКпхХ ПЗ о сухо лом мА : 5 уд ге меж лжтО дл куту уж дом ле «шими 15 реч пчлизм «ил 0 БИ «я нн

ЖІ ОКО ТМ ЛИВІ, сяімМух ЗаУ хек В досту Лугує Лету. Темі КВ ет хи доз ст ую ру яри жит ВЛ Дрю:

ТЕ Уа я суші Ж сАшІ Бл ЗО Їж о Бео Хі тя з КОЖ Ба ли 1 У хо 125 та ТЕ піз. «по» п «ЕІ» 1

НА МАМА ек іст уч кра и 0 БВсимк» мате уч зд «щи шк

Ми Дол и ую Мене пух. Ток о НО тр Тури Ту іст Ми й сту гл ІТТ Зп АМКУ Без їн ішер; о Бко Жемі Тедді ЖпУу р сут КпХ УА 3 к а 35 кг я ОН

ЖК ОМ ші ли меч ТК «кої я плаче «хі ТУБНО

МК ОД Вус: свЗрвАСЛЕ сесію лях здаємо що сту ом о сфожну Тамлі би Ух діє Толя одвую пере М сю см Кі гало мА УЮ ОФДХ шт БЕК МД еЕМ о жтоМ пд ем тля п СУ ІпКОУдІ т т, НЕ чок,

Пежо дАМОМВАІХ пек, ТЕГ

УЖ М ло

БАН дих «я МАО лих «дат БАЛОК «ФиЗв. сколи поем тару ж ди Жрхху СМ кутею ЗМ інн МУ Для тнє ТАМ звик ма тиху ТИ ТУТ мес пзЕоМехє йеч АЮ о Бт Віз піп Акт за шау Мем обмми ех па бр

Й с КН НІ х ї МУ о зе Бхо зу вів ВХ сук пд ям пли вові ами ЯКУ стр Тех «Ягве МІЛОК вес А Я важ МІЯ ЛеЦІЛЛИНЯ чия чит «КІ Оу

Мушево Лухоех Ми фун ЛА ЗО нт А и Туя Том 0 хи това Тир. ло тА их

МАТ Ци цес вВуа Чаї БуОоділ пів МА ІТ жі ЛИ дяйЛХ ХНИ УДОД У

І в їй х5 пев Ше ах М Мичих. хх

Бе Бл Зау Лід окр сук ро ножл іт ЗЕ

Ам ВИ а ше хо ке зеклситя пев рад НН, еонновя АК. по нн и холи Штучна поши деВнск лк, хи умх

Саки гий ІчУутІрвО точ фут ма РОТ МУ ле Сашщшт розвепланмя витиліма БУ, 14М чари Зх ши у що сфууу шуик фею Удачі ФИдех лить Чиє та т тв МО пі пзує ля іх меш вБія Тхрожеж Бит ман о фоє Мец обме їх ТВ о піх Куб дія Оу х х та їх п і: ДІ Фен тк ТТ то Мн й ни Жили шк ШО де пвкожЖкКропід пжк Лух Бім пеб жу бай рес тс Бак о Ул де

ЛИ В ва:

ЕК Я шт к «и я. ти БІЛОЮ

М ЛІТО ие Подуєтттчу ості поету уж,

КОМ ІШЛСУ ЧА ГЮСМІЕ ДВО КАТ ВХ

«УТ; яю парк же о мія щу ОХ Тр

УЖ пам шунт ява ші ла ших. б м «али щи стапих ОЯКе ж ав нд а нки НН т на он ен и он о на НК ШИ

Ма пу жбІв Оле жо сацшохт пшМм ому ши хв осла пла ую Акдоло

Н «є зт я

А й На ЯХТУ сало остлуту ді пах бісу кіля гені МЕ Ім бус во Шах ба ле тал отлявф о Аіа ех Тех дім йез тт Зімй хо бто Зак тТаї боях

ВН чи чл о хи М пт ди «ями У «ал

І» ве кру. ВАДИ тий МІУ ще лити пух гу «и пре на НН ФО Ем шим їМатул роздати вння сзижшеулхуа шия. ткіМ) ся

БЕН г о нь ре Хан Унн Шо чя сти учи Тих. хх то Лота Тато Тих Із Ку ще Х зд Мі Ах

Мито йека Жуфо жУюЮ Боба бужи би: б бус ПЕ ТиМмІ ТИк др же пода т « її ях

Її У и М бо бла для ліве Ссбіум їз ола. Щек Фк, цю фу их ЕД дек піч йкМа пЕх Ту Піч їз Тпжх бів ре Бго дек узі ех жи 2 Ж шлю рю Ссща стік Ох

ЕК, УТІК. я яЮ ХГ ЛеК

Мо НН чи пу мита ТАТА ДК ЗЛ, «у уя, «ЕЕЕМ т г"дВМмМи уперта йти ДЕТЮОСТ ня «Ка опдіу фуммнадижниях сани ити КЗ. ТЕЙ оди зе «АМКУ паю Мр. изк: ура фату Стоджкї біде СХ їто ШУичн. ак. Жов. я о Шев б УК Мер

Мат Аве Та Чек Кох ше Пец ши Вих Гей се Та вва Пудо ТВ ву 3 5 їа ІВ щи ж що их у Гя Фо мох ИТВ, Кит ХК, т мої ши Ух свт шій щі пом зи ре пас ик, іх. у ек очмаЩаї пах -вЕошан овал ук їх мемх ЖЖ саМт Кл окКус вед па лох

З РК сту пл щи Гют -йїх жи ох ще поту «жі МОНЕ зем пУРУчА МЛС ДВА Х Я кре ьей «ДК У шли, кн А в НН а НИ я КУ ших сизий шли шесІМиті шив УЄТІУ Ум, І «Ал лих мих дет МЕ дю М їйу ДЗ тім щит о ткді йім оте тем тки й ки

Матї Дек Мах вк ЗЕ Хо Аза рБіполпжщ ше опа М Спад мем цю Мамо уко що т її тьох, х М ЗА ях тим Мих дю лю ет тм ув ок р. мя ли о му Шетх бан Ше КІ таж вс бу їх лим уж ж Жук шум оо жо АЖ КЕХлО юбЕоО ЮК МУ п хи зах пу

ЕМ УТ

«ЯМ КМ ке пером ОМ ЗДАМ МОХ

Ех люлі ре в в НН и З НН жи 0 БМК Усе Ж мМЬ и. за ТІ ко кі ший Дю вик Мужик ТЕ шити стулок ек си ки ні їх тома Торт Ло ук

Ма Бр оМмаМ Бха уд гл АВ ОЗІМ йАЛлІ і ПпАт МлчІ зам лаві зима у не БУ У Вл до лУмує Ме міш цен сим Ук іх жом; жу ТВ Уся У шим ВУ у

Бр» ВХ хе важ М мн УЖ Ам о лае тВх пап БЖО БЕ Жак о МЗл.О иВх шт я зд до Х» ле

КОНЯ й

ОНИ чи ех

СЕ 4 вони я. «ЕТШУ БІЛОК

Овни УМ ЛІЦ ОМ мс Пед в поемі ОО СІВ альна ДзтлЕлДдьУдим пепти В ках

ИЙ

«ши МИМО БЕК кеш Гр ОА

ВУ о мя щЕМІНИКИМ ФЛИЛДУМІК ХУ МИТО УКОУ. ВИКЛ ук еп а р нон на о НИ

МІЖ У МА сх им «жі Ох деяку ту пе 1 А кал ОБО чиїм щеучна мпомлудаіих «ях сел пев кучтрі нм сірим ог

Ту ТЕТ АКТА ОК СТЬ ДМ УА У шиКК се щих аж ТавуьК а ШЕ МОН На ит Мо окхуудих слати Фо Кими: Коемі я йми Джі мур вит що си рик Ен их Жоможе яшоитУує сом пульсу ЗМаАнНОКМаелдшту я треш нННЯМ ел петх

КАМ я ТУ пух Хай Ула Ха Хай йовз йзаосХла о Каз ї х «врох 75 мае Я я Ко ч-ійв ОБІНОК че КУ МНІ ТЛ ДІДОВМУЮЕЬ

ПОД ЛУКИ М пев МИ СЯ ЗІШМ «щих 375 ут ля ба. Ки КЛ ока пд їде МАЛО ЇХ і Би «и Імю Оу «што «дл длеук;

ЕН БАЙТ

ЄСИ тя Педро ал и мису Ки

КА Мтжеял о УМА уче еАТИТ В. лк

ФУ Мер трат що сему ти с, ТИ чна визнаю ТДМУ шо ке МОЖ ІМУуУунИиХ о жи Мел КУКА СИТІ

КЕЙ Па ВХ полю и и и пит сага фіг и, мне ХО МЛ са ЧИ ТЛЛумомІ соус КУ ВЕЛО ин Кум

КВН ст ки М учні ФЛ ди Мед тя жкІуЄ За жав пу й

Claims (1)

1. Зв'язувальний білок, який містить антигензв'язувальний домен, причому вказаний зв'язувальний білок Здатний зв'язуватися з людським 0114, де вказаний антигензв'язувальний домен містить шість СОК: СОВ-НІ, СОК-Н2О, СОК-НЗ, СОК-І1, СОК- 121 СОК-1І 3, як визначено нижче: СОК-НІ, вибрана з групи, яка складається з: ХіІ-Хо-Хз3-Хі-Х5-Хе-Х7 (5ЕО ІЮ МО:99), де: Хі являє собою 5 або М;

Хо являє собою 5, Сабо М;

Хз являє собою 5, М, Т, С або К; Ха являє собою У;

Х» являє собою У або Н;

Хе являє собою М/; 1

Х7 являє собою 0;

залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:1;

ЗЕО ІЮ МО:117;

ЗЕО ІЮ МО:121;

ЗЕО ІЮ МО:125;

ЗЕО ІЮ МО:129;

ЗЕО ІЮ МО:133;

5ЕО І МО:137;

ЗЕО ІЮ МО:141;

ЗЕО ІЮ МО:145;

ЗЕО ІЮ МО:149;

ЗЕО ІЮ МО:153;

5ЕО І МО:157;

5ЕО І МО:161;

ЗЕО ІЮ МО:165;

ЗЕО ІЮ МО:169;

ЗЕО ІЮ МО:173;

5ЕО І МО:177;

5ЕО І МО:181;

ЗЕО ІЮ МО:185;

ЗЕО ІЮ МО:189;

ЗЕО ІЮ МО:193;

5ЕО І МО:197;

5ЕО І МО:201;

5ЗЕО ІЮ МО:205;

5ЗЕО ІЮ МО:209;

ЗЕО ІЮ МО:213;

залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:334; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:336; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:338; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:340; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:342; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:344; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:346; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:348; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:350; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:352; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:354; залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:356;

залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:3558; 1 залишки 31-37 5ЕО ІЮ МО:360; СОК-НУО, вибрана з групи, яка складається з: Хі1-Хо-Хз-Ха-Х5-Хв-Х7-Хв-Хо-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16 (5ЕО ІЮ МО:100), де Хі являє собою І;

Хо являє собою Ї;

Хз являє собою У, М або 5;

Ха являє собою У;

Х» являє собою Т, М, А, І, 5 або К; Хв являє собою ОС;

Х7 являє собою 5, М, Т або 0; Хв являє собою Т;

Хо являє собою У;

Хіо являє собою У;

Хі являє собою М;

Хі? являє собою Р;

Хіз являє собою 5;

Хі являє собою І;

Хі являє собою К; 1

Хів являє собою 5, М, І або О; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:1; ЗЕО ІЮ МО:118;

ЗЕО ІЮ МО:122;

ЗЕО ІЮ МО:126;

ЗЕО ІЮ МО:130;

ЗЕО ІЮ МО:134;

5ЗЕО ІЮ МО:138;

ЗЕО ІЮ МО:142;

ЗЕО ІЮ МО:146;

ЗЕО ІЮ МО:150;

ЗЕО ІЮ МО:154;

5ЗЕО ІЮ МО:158;

5ЕО І МО:162;

ЗЕО ІЮ МО:166;

ЗЕО ІЮ МО:170;

ЗЕО ІЮ МО:174;

ЗЕО ІЮ МО:178;

5ЕО І МО:182;

ЗЕО ІЮ МО:186;

ЗЕО ІЮ МО:190;

ЗЕО ІЮ МО:194;

ЗЕО ІЮ МО:198;

5ЕО І МО:202;

ЗЕО ІЮ МО:206;

ЗЕО ІЮ МО:210;

ЗЕО ІЮ МО:214;

залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:334; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:336; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:338; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:340; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:342;

залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:344; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:346; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:348; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:350; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:352; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:354; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:356; залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:358; 1 залишки 52-67 5ЕО ІЮ МО:360; СОК-НЗ, вибрана з групи, яка складається з: Хі-Хо-Хз3-Хі-Х5-Хе-Х7-Хв-Хо-Х10-Х1и1 (5ЕО ІЮ МО:101), де: Хі являє собою Е, У, Е, О, МУ, І, або А; Хо являє собою І, А, 5, СО, У, Е або М; Хз являє собою У, М, І,, Р або А;

Ха являє собою І, А, Р.

К, 5, К, О, У, О, М або Е; Х» являє собою І,, У, Е або М;

Хе являє собою К, С, 5, О або А;

Х7 являє собою ОС;

Хв являє собою С, А або 5;

Хо являє собою 5, А, І,, У, К або С; Хіо являє собою Ю; 1

Хії являє собою У, ОД, 5, М, Н.Е, К, 1, Р.

С.

І, М, Т, О або К; залишки 100-110 5БО ІЮ МО:1;

ЗЕО ІЮ МО:119;

ЗЕО ІЮ МО:123;

ЗЕО ІЮ МО:127;

5ЕО І МО: 131;

ЗЕО ІЮ МО:135;

ЗЕО ІЮ МО:139;

ЗЕО ІЮ МО:143;

ЗЕО ІЮ МО:147;

5ЕО І МО:151;

5ЗЕО ІЮ МО:155;

ЗЕО ІЮ МО:159;

ЗЕО ІЮ МО:163;

5ЕО І МО:167;

ЗЕО ІЮ МО:171;

ЗЕО ІЮ МО:175;

ЗЕО ІЮ МО:179;

ЗЕО ІЮ МО:183;

5ЕО І МО:187;

5ЕО І МО:191;

ЗЕО ІЮ МО:195;

ЗЕО ІЮ МО:199;

ЗЕО ІЮ МО:203;

5ЕО І МО:207;

ЗЕО ІЮ МО:211;

ЗЕО ІЮ МО:215;

залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:334; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:336; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:338;

залишки 100-110 5БО ІЮ МО:340; залишки 100-110 5БО ІЮ МО:342; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:344; залишки 100-110 5БО ІЮ МО:346; залишки 100-110 5БО ІЮ МО:348; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:350; залишки 100-110 5БО ІЮ МО:352; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:354; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:356; залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:3558; 1 залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:360; СОК-111, вибрана з групи, яка складається з: Хі-Хо-Хз3-Хі-Х5-Хе-Х7-Хв-Хо-Х10-Х1и1 (5ЕО ІЮ МО:102), де: Хі являє собою 5;

Хо являє собою ОС;

Хз являє собою О, Е або;

Ха являє собою К, 5, С, М, К, І. або Т; Х» являє собою І;

Хв являє собою ОС;

Х7 являє собою І або Е;

Хв являє собою К;

Хо являє собою У;

Хіо являє собою А або М; 1

Хі являє собою 5;

залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:111; ЗЕО ІЮ МО:217;

ЗЕО ІЮ МО:221;

ЗЕО ІЮ МО:225;

ЗЕО ІЮ МО:229;

ЗЕО ІЮ МО:233;

5ЕО І МО:237;

ЗЕО ІЮ МО:241;

ЗЕО ІЮ МО:245;

ЗЕО ІЮ МО:249;

ЗЕО ІЮ МО:253;

5ЕО І МО:257;

5ЕО І МО:261;

ЗЕО ІЮ МО:265;

ЗЕО ІЮ МО:269;

ЗЕО ІЮ МО:273;

5ЕО І МО:277;

5ЕО І МО:281;

ЗЕО ІЮ МО:285;

ЗЕО ІЮ МО:289;

ЗЕО ІЮ МО:293;

5ЕО І МО:297;

ЗЕО ІЮ МО:301;

ЗЕО ІЮ МО:305;

ЗЕО ІЮ МО:309;

ЗЕО ІЮ МО:313;

залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:335;

залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:337; залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:339; залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:341; залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:343; залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:345; залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:347; залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:349; залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:351; залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:353; залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:355; залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:357; залишки 23-33 БЕО ІЮ МО:359; 1 залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:361; СОК-12, вибрана з групи, яка складається з: Хі-Хо-Хз3-Ха-Х5-Хе-Х7 (5ЕО ІЮ МО:103), де: Хі являє собою Е або 0;

Хо являє собою І;

Хз являє собою 5, 1,, Т, А, Е або Е; Ха являє собою К, Т, Е, М, О, 5 або М; Х» являє собою К;

Хев являє собою Р; 1

Х7 являє собою 5;

залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:111; ЗЕО ІЮ МО:230;

ЗЕО ІЮ МО:234;

5ЗЕО ІЮ МО:238;

ЗЕО ІЮ МО:242;

ЗЕО ІЮ МО:246;

ЗЕО ІЮ МО:250;

ЗЕО ІЮ МО:254;

5ЗЕО ІЮ МО:258;

5ЕО І МО:262;

5ЗЕО ІЮ МО:266;

ЗЕО ІЮ МО:270;

ЗЕО ІЮ МО:218;

5ЗЕО ІЮ МО:222;

ЗЕО ІЮ МО:226;

ЗЕО ІЮ МО:274;

ЗЕО ІЮ МО:278;

ЗЕО ІЮ МО:302;

ЗЕО ІЮ МО:294;

5ЕО І МО:282;

ЗЕО ІЮ МО:290;

5ЗЕО ІЮ МО:298;

ЗЕО ІЮ МО:286;

5ЗЕО ІЮ МО:306;

ЗЕО ІЮ МО:310;

ЗЕО ІЮ МО:314;

залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:335; залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:337; залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:339;

залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:341; залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:343; залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:345; залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:347; залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:349; залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:351; залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:353; залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:355; залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:357; залишки 49-55 БЕО ІЮ МО:359; 1 залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:361; і

СОК-13, вибрана з групи, яка складається з: Хі-Хо-Хз3-Ха-Х5-Хе-Х7-Хв-Хо (ББО ІЮ МО :104), де: Хі являє собою 0;

Хо являє собою А;

Хз являє собою УМ;

Ха являє собою І;

Х» являє собою К, 5, М, Е, М, СО або К; Хв являє собою І або Е;

Х7 являє собою Т, У, А, 5 або М; Хв являє собою СО, А або С; 1 Хо являє собою У;

залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:111; 5ЕО І МО:231;

ЗЕО ІЮ МО:235;

ЗЕО ІЮ МО:239;

ЗЕО ІЮ МО:243;

ЗЕО ІЮ МО:247;

5ЕО І МО:251;

5ЗЕО ІЮ МО:255;

ЗЕО ІЮ МО:259;

ЗЕО ІЮ МО:263;

5ЕО І МО:267;

ЗЕО ІЮ МО:271;

ЗЕО ІЮ МО:219;

ЗЕО ІЮ МО:223;

5ЗЕО ІЮ МО:227;

ЗЕО ІЮ МО:275;

ЗЕО ІЮ МО:279;

5ЗЕО ІЮ МО:303;

ЗЕО ІЮ МО:295;

ЗЕО ІЮ МО:283;

5ЕО І МО:291;

ЗЕО ІЮ МО:299;

5ЕО І МО:287;

5ЕО І МО:307;

5ЕО І МО:311;

ЗЕО ІЮ МО:315;

залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:335; залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:337;

залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:339; залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:341; залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:343; залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:345; залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:347; залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:349; залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:351; залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:353; залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:355; залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:357; залишки 88-96 5БЕО ІЮ МО:359; 1 залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:361.

2. Зв'язувальний білок за п. І, де щонайменше одна вказана СОК містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: залишків 31-37 5ЕО ІЮ МО:1 (СОК-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО:1 (СОК-Н2); залишків 100-110 5БО Ю МО:1 (СОК-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:111 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:111 (СОК-І2); залишків 85-96 5ЕО І МО: 111 (СОК-1 3); 5ЕО І МО:117 (СОК-НІ); 5БО І МО:118 (СОК-Н2); 56О І МО:119 (СОК-НЗ); 5БО І МО:121 (СОК-НІ); 5ЕО ІЮ МО:122 (СОК-Н2); 56О І МО:123 (СОК-НЗ); 56О ІЮ МО:125 (СОБК-НІ); 5ЕО ІЮ МО:126 (СОК-Н2); 5ЕО І МО:127 (СОК-НЗ); 5ЕО ІЮ МО:129 (СОБ-НІ); 5ЕО І МО:130 (СОК-Н2); 56О І МО:131 (СОК-НЗ); 56О І МО:133 (СОК-НІ); 5БО І МО:134 (СОК-Н2); 5ЕО ІЮ МО:135 (СОК-НЗ); 56О І МО:137 (СОК-НІ); 56О ІЮ МО:138 (СОК-Н2); 5ЕО ІЮ МО:139 (СОК-НЗ); 5ЕО І МО:141 (СОБК-НІ); 5ЕО І МО:142 (СОК-Н2); 5ЕО ІЮ МО:143 (СОК-НЗ); 56О І МО:145 (СОК-НІ); 5БО І МО:146 (СОК-Н2); 5БО І МО:147 (СОК-НЗ); 5ЕО ІЮ МО:149 (СОК-НІ); 5БО І МО:150 (СОК-Н2); 56О І МО:151 (СОК-НЗ); 560 ІЮ МО:153 (СОК-НІ); 5ЕО І МО:154 (СОК-Н2); 56О І МО:155 (СОК-НЗ); 5ЕО І МО:157 (СОК-НІ); 56О І МО:158 (СОК-Н2); 56О І МО:159 (СОК-НЗ); 5БО І МО:161 (СОК-НІ); 5ЕО ІЮ МО:162 (СОК-Н2); 56О І МО:163 (СОК-НЗ); 56О ІЮ МО:165 (СОК-НІ); 560 ІЮ МО:166 (СОК-Н2); 5ЕО І МО:167 (СОК-НЗ); 5БО І МО:169 (СОК-НІ); 5ЕО І МО:170 (СОК-Н2); 56О І МО:171 (СОК-НЗ); 56О І МО:173 (СОК-НІ); 5БО І МО:174 (СОК-Н2); 5ЕО ІЮ МО:175 (СОК-НЗ); 56О І МО:177 (СОК-НІ); 56О ІЮ МО:178 (СОК-Н2); 560 І МО:179 (СОК-НЗ); 5ЕО І МО:181 (СОК-НІ); 56О І МО:182 (СОК-Н2); 5ЕО І МО:183 (СОК-НЗ); 56О І МО:185 (СОК-НІ); 5БО І МО:186 (СОК-Н2); 5БО І МО:187 (СОК-НЗ); 5ЕО ІЮ МО:189 (СОК-НІ); 5БО І МО:190 (СОК-Н2); 56О ІО МО:191 (СОК-НЗ); 560 ІЮ МО:193 (СОК-НІ); 5ЕО І МО:194 (СОК-Н2); 56О І МО:195 (СОК-НЗ); 5ЕО ІЮ МО:197 (СОК-НІ); 56О І МО:198 (СОК-Н2); 56О І МО:199 (СОК-НЗ); 5БО І МО:201 (СОК-НІ); 5ЕО ІЮ МО:202 (СОК-Н2); 56О І МО:203 (СОК-НЗ); 56О ІЮ МО:205 (СОК-НІ); 560 ІЮ МО:206 (СОК-Н2); 5ЕО І МО:207 (СОК-НЗ); 5БО І МО:209 (СОК-НІ); 5ЕО І МО:210 (СОК-Н2); 56О І МО:211 (СОК-НЗ); 56О І МО:213 (СОК-НІ); 5БО І МО:214 (СОК-Н2); 5БО І МО:215 (СОК-НЗ); 5БО І МО:217 (СОК-І1); 5БО ІЮ МО:218 (СОК-І2); 5ЕО І МО:219 (СОК-І 3); 56О ІЮ МО:221 (СОК-11); 5ЕО І МО:222 (СОК-12); 5ЕО ІЮ МО:223 (СОК-І3); 5БО ІЮ МО:225 (СОК-І11); 5ЕО ІЮ МО:226 (СОК-І2); 5ЕО Ір МО:227 (СОК-І3); 5ЕО ІЮ МО:229 (СОК-І1); 5БО ІЮ МО:230 (СОК-І2); 5БЕО ІЮ МО:231 (СОК-І3); БЕО ІЮ МО:233 (СОК-111); 5БО І МО:234 (СОК-І2); 5ЕО І МО:235 (СОК-1 3); 5ЕО ІЮ МО:237 (СОК-І1); 5БО ІЮ МО:238 (СОК-І2); 5ЕО І МО:239 (СОК-І3); 5ЕО І МО:241 (СОК-І1); 5БО І МО:242 (СОК-І2); 5БО ІЮ МО:243 (СОК-І 3); 5ЕО І МО:245 (СОК-11); 5ЕО І МО:246 (СОК-І 2); 56О ІЮ МО:247 (СОК-13); 5ЕО ІЮ МО:249 (СОК-11); 5ЕО ІЮ МО:250 (СОК-І2); 5БО ІЮ МО:251 (СОК-І3); 5ЕО І МО:253 (СОК-І1); 56О І МО:254 (СОК-І2); 5БЕО І МО:255 (СОК-І 3); 5БО ІЮ МО:257 (СОК-І1); 5ЕО І МО:258 (СОК-І2); 5ЕО ІЮ МО:259 (СОК-І 3); 5ЕО ІЮ МО:261 (СОК-І11); 5ЕО ІЮ МО:262 (СОК-І2);

5ЕО І МО:263 (СОК-І3); 5ЕО ІЮ МО:265 (СОК-І1); 5ЕО ІЮ МО:266 (СОК-І2); 5ЕО І МО:267 (СОК-1І3); 5БО ІЮ МО:269 (СОК-І1); 5БО І МО:270 (СОК-І2); 5ЕО ІЮ МО:271 (СОК-13); 5ЕО І МО:273 (СОК-І1); 56О ІЮ МО:274 (СОК-І12); 5ЕО ІЮ МО:275 (СОК-1І 3); 5ЕО І МО:277 (СОК-І1); 5ЕО ІЮ МО:278 (СОК-І2); 5ЕО ІЮ МО:279 (СОК-І3); 5ЕО І МО:281 (СОК-І1); 5БО І МО:282 (СОК-12); 5БО І МО:283 (СОК-13); 5ЕО ІЮ МО:285 (СОК-11); 5ЕО І МО:286 (СОК-І 2); 56О ІЮ МО:287 (СОК-13); 5ЕО ІЮ МО:289 (СОК-11); 5ЕО І МО:290 (СОК-І12); 5ЕО ІЮ МО:291 (СОК-І3); 5ЕО ІЮ МО:293 (СОК-І11); 5ЕО І МО:294 (СОК-І2); 5БО ІЮ МО:295 (СОК-13); 5БО І МО:297 (СОК-І1); 5ЕО ІЮ МО:298 (СОК-І2); 5ЕО І МО:299 (СОК-І 3); 56О ТО МО:301 (СОК-11); 5ЕО ІЮ МО:302 (СОК-12); 5ЕО І МО:303 (СОК-І3); 5ЕО ІЮ МО:305 (СОК-11); 5ЕО ІЮ МО:306 (СОК-І2); 5ЕО І МО:307 (СОК-13); 5БО ІЮ МО:309 (СОК-11); 5БО І МО:310 (СОК-І2); 5ЕО ІЮ МО:311 (СОК-13); 5ЕО ІЮ МО:313 (СОК-І1); 5ЕО І МО:314 (СОК-1І 2); 5ЕБО ІЮ МО:315 (СОК-1 3); залишків 31-37 5БО ІЮ МО:334 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:334 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:334 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:335 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:335 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:335 (СОК-1 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:336 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:336 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:336 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:337 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:337 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:337 (СОК-1 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:338 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:338 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:338 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:339 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:339 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:339 (СОК-1 3);

залишків 31-37 5ЕО І МО:340 (СОК-НІ); залишків 52-67 5ЕО ІЮ МО:340 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:340 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:341 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:341 (СОК-І2); залишків 85-96 5ЕО І МО:341 (СОК-1І 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:342 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:342 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:342 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:343 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:343 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:343 (СОК-1 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:344 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:344 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:344 (СОК-НЗ);

залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО:345 (СОК-І1); залишків 50-56 5ЕО І МО:345 (СОК-І2); залишків 89-97 5ЕО І МО:345 (СОК-1І 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:346 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:346 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:346 (СОК-НЗ);

залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:347 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:347 (СОК-І2); залишків 85-96 5ЕО І МО:347 (СОК-1І 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:348 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:348 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:348 (СОК-НЗ);

залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО:349 (СОК-І1); залишків 50-56 5ЕО І МО:349 (СОК-І2); залишків 89-97 5ЕО І МО:349 (СОК-1І 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:350 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:350 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:350 (СОК-НЗ);

залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО:351 (СОК-І1); залишків 50-56 5ЕО І МО:351 (СОК-І2); залишків 89-97 5ЕО ІЮ МО:351 (СОК-1І 3);

залишків 31-37 5БО ІЮ МО:352 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:352 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО ІЮ МО:352 (СОК-НЗ);

залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО:353 (СОК-І1); залишків 50-56 5ЕО І МО:353 (СОК-І2);

залишків 89-97 5ЕО ІЮ МО:353 (СОК-1 3); залишків 31-37 5БО ІЮ МО:354 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:354 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО І МО:354 (СОК-НЗ); залишків 24-34 5ЕО ІЮ МО:355 (СОК-І1); залишків 50-56 5ЕО І МО:355 (СОК-І2); залишків 89-97 5ЕО ІЮ МО:355 (СОК-1 3); залишків 31-37 5БО ІЮ МО:356 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:356 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО І МО:356 (СОК-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:357 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:357 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:357 (СОК-1 3); залишків 31-37 5БО ІЮ МО:358 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:358 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО І МО:358 (СОК-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:359 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:359 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:359 (СОК-1 3); залишків 31-37 5БО ІЮ МО:360 (СОК-НІ); залишків 52-67 5БЕО І МО:360 (СОК-Н2); залишків 100-110 5ЕО І МО:360 (СОК-НЗ); залишків 23-33 5ЕО ІЮ МО:361 (СОК-І1); залишків 49-55 5ЕО І МО:361 (СОК-І2); залишків 88-96 5ЕО ІЮ МО:361 (СОК-1 3).

3. Зв'язувальний білок за п. 1 або п. 2, де вказаний зв'язувальний білок містить щонайменше 3 СОК, вибрані з групи наборів СОК варіабельного домену, що складаються з: набору УН ГЕО СІК СОК-НІ: залишки 31-37 5БО ІЮ МО.:1, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БО ІЮ МО.:1, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО.1; набору МІ, Е9 СІК СОК-11: залишки 23-33 5ЕО І МО:111, СОК-12: залишки 49-55 5ЕО І МО:111, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:111; набору УН Е9.А СОК СОК-НІ:5ЕО І МО:117, СОК-НО: 5ЕО І МО:118, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:119; набору МІ, Б9.А СОК СОК-І1: 560 ІЮ МО:229, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:230, СОК-І 3: 5ЕО ІЮ МО:231; набору УН Е9ЛІ СОК СОК-НІ: 5БО Ю МО:121, СОК-НО: 5ЕО І МО:122, СОК-НЗ: 5ЕО ІЮ МО:123; набору МІ, Е9ЛІ СОК СОК-І1: 5Е6О ІЮ МО:233, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:234, СОК-І 3: 5ЕО ІЮ МО:235; набору УН Е9.14 СОК СОК-НІ: 5БО Ю МО:125, СОК-НО: 52О І МО:126, СОК-НЗ: 5БО ІЮ МО:127; набору МІ, Е9.14 СОК СОК-І1: 560 ІЮ МО:237, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:238, СОК-І 3: 5ЕО ІЮ МО:239;

набору УН Е9.17 СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:129, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:130, СОК-НЗ: 5БО ІЮ МО:131; набору МІ, Е9.17 СОК

СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:241, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:242, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:243; набору УН Е9.18 СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:133, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:134, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:135; набору МІ, Е9.18 СОК

СОК-І1: 56О І МО:245, СОК-І2: 56О І МО:246, СОК-І 3: БО ІЮ МО:247; набору УН Е9.19 СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:137, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:138, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:139; набору МІ, Е9.19 СОК

СОК-І1: 56ЕО ІЮ МО:249, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:250, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:251; набору УН Е9.22 СІК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:141, СОК-НО: 5ЕО ІЮ МО:142, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:143; набору МІ, Е9.22 СОК

СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:253, СОК-І2: 5БО І МО:254, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:255; набору УН Е9.48 СОВ.

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:145, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:146, СОК-НЗ: 5БО ІЮ МО:147; набору МІ, Е9.48 СОК

СОК-І1: 5БЕО І МО:257, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:258, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:259; набору УН Е9.65 СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:149, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:150, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:151; набору МІ, Е9.65 СОК

СОК-І1: 56ЕО ІЮ МО:261, СОК-І2: 56О І МО:262, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:263; набору УН Е9.66 СІК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:153, СОК-НО: 5Б6О ІЮ МО:154,

СОК-НЗ: 5БО Ю МО:155; набору МІ, Е9.66 СОК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:265, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:266, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:267; набору УН Е9.71 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:157, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:158, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:159; набору МІ, Е9.71 СОК СОК-І1:55БЕО ІЮ МО:269, СОК-І2: 56О І МО:270, СОК-І3:5ЕО ІЮ МО:271; набору УН Е9.13 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:161, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:162, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:163; набору МІ, Е9.13 СОК СОК-І1: 5БЕО І МО:217, СОК-І12:5ЕО ІЮ МО:218, СОК-І3:5ЕО ІЮ МО:219; набору УН Е9.16 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:165, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:166, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:167; набору МІ, Е9.16 СОК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:221, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:222, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:223; набору УН Е9.38 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:169, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:170, СОК-НЗ: 5БО ІЮ МО:171; набору МІ, Е9.38 СОК СОК-І1:56О І МО:225, СОК-І2: 56О І МО:226, СОК-І 3: БО ІЮ МО:227; набору УН Е9.2В8 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:173, СОК-НО: 5БО І МО:174, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:175; набору МІ, Е9.28 СІК СОК-І1: 5БЕО І МО:273, СОК-І2: 56О І МО:274, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:275; набору УН Е9Л1Е СОК СОК-НІ: 5БО ІЮ МО:177, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:178, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:179; набору МІ, Е9Л1Е СОК СОК-І1: 5ЕО І МО:277,

СОК-І2: 56О І МО:278, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:279; набору УН Е9ЛОН СІК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:181, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:182, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:183; набору МІ, Е9.1ОН СОК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:301, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:302, СОК-ІГ 3: 5ЕО ІЮ МО:303; набору УН Е9.5Е СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:185, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:186, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:187; набору МІ, Е9.5Е СІК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:293, СОК-І2: 5БО І МО:294, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:295; набору УН Е91ОС СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:189, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:190, СОК-НЗ: 5БО Ю МО:191; набору МІ, Е9.1ОС СОК СОК-І1: 5БЕО ІЮ МО:281, СОК-І2: 5БО І МО:282, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:283; набору УН Е9.7Е СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:193, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:194, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:195; набору МІ, Е9.7Е СОК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:289, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:290, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:291; набору УН Е9.128 СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:197, СОК-Н2О: 5ЕО Ю МО:198, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:199; набору МІ, Е9.128 СОК СОК-І1: 56ЕО І МО:297, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:298, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:299; набору УН Е9.1ОЕ СОК СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:201, СОК-НО: 5БО ІЮ МО:202, СОК-НЗ: 5ЕО І МО:203; набору МІ, Е9.Л1ОЕ СОК СОК-І1: 5ЕО ІЮ МО:285, СОК-І2: 5ЕО ІЮ МО:286, СОК-І3: 5ЕО ІЮ МО:287; набору УН Е9О.бА СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:205,

СОК-Н2О: 5ЕО ІЮ МО:206,

СОК-НЗ: 5ЕО ІЮ МО:207;

набору МІ, Е9бА СОК

СОК-І11: 5ЕО І МО:305,

СОК-І2: 5ЕО І МО:306,

СОК-І 3: 5ЕО І МО:307;

набору УН Е9.7А СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:209,

СОК-Н2О: 5ЕО ІЮ МО:210,

СОК-НЗ: 5ЕО Ю МО:211;

набору МІ, Е9.7А СІК

СОК-І11: 5ЕО І МО:309,

СОК-І2: 5ЕО І МО:310,

СОК-І 3: 5ЕО І МО:311;

набору УН Е9.8Н СОК

СОК-НІ: 5ЕО ІЮ МО:213,

СОК-НО: 5ЕО ІЮ МО:214,

СОК-НЗ: 5ЕО ІЮ МО:215;

набору МІ, Е9.8Н СОК

СОК-І11: 5ЕО І МО:313,

СОК-І2: 5ЕО І МО:314,

СОК-І 3: 5ЕО І МО:315;

набору УН Е9.1 СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:334, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:334, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:334; набору МІ, Е9.1 СІК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:335, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:335, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:335; набору УН Е9-5Е1 СІК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:336, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:336, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:336; набору МІ, Е9-5Б1 СОК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:337, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:337, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:337; набору УН Е9-522 СІОЖ

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:338, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:338, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:338; набору МІ, Е9-552 СОК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:339, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:339, СОК-І 3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:339; набору УН ЕО-5Е3 СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:340, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:340, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:340;

набору МІ, Е9-5Е3 СОК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:341, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:341, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:341; набору УН Е9-5Б4А СІК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:342, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:342, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:342; набору МІ, Е9-524 СОК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:343, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:343, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:343; набору УН ЕО-5Е5 СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:344, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:344, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:344; набору МІ, Е9-5Е5 СОК

СОК-І11: залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:345, СОК-І2: залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:345, СОК-І3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:345; набору УН ЕО-5566 СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:346, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:346, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:346; набору МІ, Е9-5Е6 СОК

СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:347, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:347, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:347; набору УН Е9-5Е7 СІК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:348, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:348, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:348; набору МІ, Е9-5Е7 СОК

СОК-І11: залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:349, СОК-І2: залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:349, СОК-І3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:349; набору УН ЕО-5Е8 СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:350, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:350, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:350; набору МІ, Е9-5Е8 СОК

СОК-І11: залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:351, СОК-І2: залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:351, СОК-І3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:351; набору МН Е9-ЕКІ СОК

СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:352, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:352, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:352; набору МІ, Е9-ЕКІ СОК

СОК-І11: залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:353, СОК-І2: залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:353,

СОК-І3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:353; набору УН Е9О-ЕК2 СОК СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:354, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:354, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:354; набору МІ, Е9-ЕК2 СІК СОК-І11: залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО:355, СОК-І2: залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО:355, СОК-І3: залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО:355; набору УН Е9.71 СОК СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:356, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:356, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:356; набору МІ, Е9.71 СОК СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:357, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:357, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:357; набору УН Е9.71(М) СОК СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:358, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:358, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:358; набору МІ, Е9.7І(М) СОВ. СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:359, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:359, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:359; набору УН Е9.7ЦІ1) СОК СОК-НІ: залишки 31-37 БЕО ІЮ МО:360, СОК-Н2О: залишки 52-67 5БЕО ІЮ МО:360, СОК-НЗ: залишки 100-110 5ЕО ІЮ МО:360; набору МІ, Е9.71113) СОК СОК-І11: залишки 23-33 5ЕО ІЮ МО:361, СОК-І2: залишки 49-55 5ЕО ІЮ МО:361, СОК-І3: залишки 88-96 5ЕО ІЮ МО:361.

4. Зв'язувальний білок за п. 3, який містить щонайменше два набори СОК. варіабельних доменів.

5. Зв'язувальний білок за п. 4, де вказані щонайменше два набори СОК. варіабельних доменів вибрані з групи, що складається з: набору УН ЕГО СОК 1 набору МІ, Е9 СОВ, набору УН Е9.4 СОК 1 набору МІ, Е9.4 СОК, набору УН Е9.11 СОК 1 набору МІ, Е9.11 СОК, набору УН Е9.14 СОК 1 набору МІ. Е9.14 СОК, набору УН Е9.17 СОК 1 набору МІ, Е9.17 СОК, набору УН Е9.18 СОК 1 набору МІ, Е9.18 СОК, набору УН Е9.19 СОК 1 набору МІ, Е9.19 СОК, набору УН Е9.22 СІК 1 набору МІ, Е9.22 СОК, набору УН Е9.48 СОК 1 набору МІ, Е9.48 СОК, набору УН Е9.65 СОК 1 набору МІ, Е9.65 СОК, набору УН Е9О.66 СОК 1 набору МІ, Е9.66 СОК, набору УН Е9.71 СОК 1 набору МІ, Е9.71 СОК, набору УН Е9.13 СОК 1 набору МІ, Е9.13 СОК, набору УН Е9.16 СОК 1 набору МІ, Е9.16 СОК,

набору УН Е9.38 СОК 1 набору МІ, Е9.38 СОК, набору УН Е9.2В8 СОК і1 набору МІ, Е9.2В8 СОК, набору УН Е9.1Е СОК 1 набору МІ, Е9.1Е СОВ, набору УН Е9.1ОН СОК і набору МІ, Е9.1ОН СОК, набору УН ЕО.5Е СОК і1 набору МІ. Е9О.5Е СОК, набору УН Е9.10С СО 1 набору МІ, Е9.10С СОК, набору УН Е9.7Е СОК і1 набору МІ. Е9.7Е СОК, набору УН Е9.12В8 СОК 1 набору МІ, Е9.128 СОК, набору УН Е9.10Е СОК 1 набору МІ, Е9.10Е СОБК, набору УН Е9О.бА СОК 1 набору МІ, Б9.бА СОВ, набору УН Е9.7А СОК 1 набору МІ, Е9.7А СОВ, набору УН Е9.8Н СОК 1 набору МІ, Б9.8Н СО, набору МН Е9О-5Е1 СОК 1 набору МІ, Е9-5Е1 СОК, набору МН Е9-5Е2 СОК 1 набору МІ, 9-52 СОК, набору МН Е9-БЕЗ СОК 1 набору МІ, Е9-5Е3 СОК, набору МН Е9о-5Е4 СОК 1 набору МІ, 9-54 СІК, набору МН Е9О-БЕ5 СОК 1 набору МІ, Е9-5Е5 СОК, набору МН Е9О-5Еб СОК 1 набору МІ, Е9-526 СОК, набору МН Е9-БЕ7 СОК 1 набору МІ, Е9-5Е7 СОК, набору МН Е9О-БЕ8 СОК 1 набору МІ, Е9-5Е28 СОК, набору УН Е9О-ЕКІ СОК 1 набору МІ, Е9-ЕКІ СОК, набору УН ЕО-ЕК2 СОК 1 набору МІ, Е9-ЕК2 СОК, набору УН Е9.71 СОК 1 набору МІ, Е9.71 СОК, набору УН Е9.71(М) СІВ і набору МІ, Е9.7 (М) СОВ, і набору УН Е9.71(1) СОВ і набору МІ. Е9.7 ЦІ) СОВ.

б. Зв'язувальний білок за будь-яким з пп. 1-5, який також містить людську акцепторну каркасну область.

7. Зв'язувальний білок за п. б, де вказана людська акцепторна каркасна область містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО І МО:7, 5ЕО І МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕБО Ю МО:11, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:13, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕБО Ю МО:15, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МО:17, 5ЕО ІЮ МО:18, 5БО Ю МО:19, 5ЕО І МО:20, 5ЕО Ю МО:21, 5ЕО І МО:22, 5ЕО ІЮ МО:35, 5ЕО І МО:36, 5ЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІЮ МО:38, 5ЕО І МО:39, 5ЕО І МО:40, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5БО Ю МО:43, 5ЕО І МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:46, БЕО Ю МО:47, 5ЕО І МО:48, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, 5ЕО І МО:51, 5ЕО І МО:52, 5ЕО ІЮ МО:53, 5ЕО І МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, 5ЕО І МО:56, 5ЕО ІЮ МО:57, 5ЕО ІЮ МО:58, 5ЕО ІЮ МО:59, 5ЕО І МО:60, 5ЕО ІЮ МО:61, 5ЕО Ю МО:62, 5ЕО ІЮ МО:23, 5ЕБЕО Ю МО:24, 5ЕО І МО:25, 5ЕО ІЮ МО:26, 5ЕО І МО:27, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО І МО:29, 5ЕО ІЮ МО:30, 5ЕО ІЮ МО:31, 5ЕО І МО:32, 5ЕО І МО:33, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО ІЮ МО:63, 5ЕО І МО:64, 5ЕО І МО:65, 5ЕО ІЮ МО:66, 5ЕО Ю МО:67, 5ЕО ІЮ МО:68, 5ЕО І МО:69, 5ЕО ІЮ МО:70, 5ЕО ІЮ МО:71, БО Ю МО:72, 5ЕО І МО:73, 5ЕО ІЮ МО:74, 5ЕО ІЮ МО:75, 5БЕО Ю МО:76, 5ЕО І МО:77, 5ЕО ІЮ МО:78, 5ЕО ІЮ МО:79, 5ЕО І МО:80, 5ЕО І МО:81, 5ЕО ІЮ МО:82, 5ЕО ІЮ МО:83, 5ЕО І МО:84, 5ЕО І МО:85, 5ЕО ІЮ МО:86, 5ЕО ІЮ МО:87, 5ЕО ІЮ МО:88, 5ЕО І МО:89, 5ЕО ІЮ МО:90,

5ЕО ІРР МО:91, 5БО І МО:92, 5БО ІЮ МО:93, 5ЕО І МО:94, 5ЕО ІЮ МО:95, 5БО ІЮ МО:96, 5ЕО ІЮ МО:97, 1 БЕО ІЮ МО:98.

8. Зв'язувальний білок за п. 7, де вказана людська акцепторна каркасна область містить щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області в положенні ключового залишку, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: залишку, суміжного з СОК; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським ОП А; канонічного залишку; залишку зони контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; 1 залишку в області, яка перекривається з областю СЮОКІ варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату. 9, Зв'язувальний білок за п. 85, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: 2Н, 4Н, 24Н, 26Н, 27Н, 29Н, 34Н, 35Н, 37Н, ЗОН, 44Н, 45Н, 47Н, 48Н, 49Н, 5ОН, 51ІН, 58Н, 59Н, бОН, 63ЗН, 67Н, 69Н, 7ІН, 7ЗН, 76Н, 78Н, 91Н, 93Н, 94Н, 21, 41, 251, 291,, 2760, 331, 341, З6І,, 381, 431,, 441,, 461, 471, 481, 491,, 551, 581, 621, 641, 711, 871, 89І,, 901, 911,, 941,1 951,

10. Зв'язувальний білок за будь-яким з пп. 1-9, де вказаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО.:1, 111, 116, 228, 120, 232, 124, 236, 128, 240, 132, 244, 136, 248, 140, 252, 144, 256, 148, 260, 152, 264, 156, 268, 160, 216, 164, 220, 168, 224, 172, 272, 176, 276, 180, 300, 184, 292, 188, 280, 192, 288, 196, 296, 200, 284, 204, 304, 208, 308, 212, 312, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360 1 361.

11. Зв'язувальний білок за п. 10, де вказаний зв'язувальний білок містить два варіабельних домени, де вказані два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з БХЕО ІЮ МО:1 1 111, 5ЕО ІЮ МО:116 1 228, 5ЕО ІЮ МО:120 1 232, 5ЕО Ю МО:124 1 236, 5БО ІЮ МО:128 1 240, 5ЕО ІЮ МО:132 1 244, 5ЕО ІЮ МО:136 1 248, 5ЕО І МО:140 1 252, 5ЕО ІЮ МО:144 1 256, 5БО ІЮ МО:148 1 260, 5ЕО ІЮ МО:152 1 264, 5БО І МО:156 1 268, 5ЕО ІЮ МО:160 1 216, 5БО ІЮ МО:164 1 220, 5ЕО ІЮ МО:168 1 224, 5БО І МО:172 1 272, 5ЕО ІЮ МО:176 1 276, 5БО ІЮ МО:180 1 300, 5ЕО ІЮ МО:184 1 292, 5БО І МО:188 1 280, 5ЕО ІЮ МО:192 1 288, 5БО ІЮ МО:196 1 206, 5БЕО ІЮ МО:200 1 284, 5БО І МО:204 1 304, 5ЕО ІЮ МО:208 1 308, 5БО ІЮ МО:212 1 312, 5ЕО ІЮ МО:334 1 335, 5БО І МО:336 1 337, 5БЕО ІЮ МО:338 1 339, 5БО ІЮ МО:340 1 341, 5ЕО ІЮ МО:342 1 343, 5БО І МО:344 1 345, 5ЕО ІЮ МО:346 1 347, 5БО ІЮ МО:348 1 349, 5ЕО ІЮ МО:350 1 351, 5БО І МО:352 1 353, 5ЕО ІЮ МО:354 1 355, 5БО ІЮ МО:356 1 357, 5ЕО ІЮ МО:358 1 359, 5БО І МО:360 1 361.

12. Зв'язувальний білок за п. 10, де вказаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО.1, 111, 116, 228, 120, 232, 124, 236, 128, 240, 132, 244, 136, 248, 140, 252, 144, 256, 148, 260, 152, 264, 156, 268, 160, 216, 164, 220, 168, 224, 172, 272, 176, 276, 180, 300, 184, 292, 188, 280, 192, 288, 196, 296, 200, 284, 204, 304, 208, 308, 212, 312, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360 1 361.

13. Зв'язувальний білок за п. І, який також містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що складається з константного домену людського ІєМ, константного домену людського Ібб1, константного домену людського ІФО2, константного домену людського ІбО3, константного домену людського Іб(04, константного домену людського ІвЕ 1 константного домену людського ІА.

14. Зв'язувальний білок за п. 13, де вказаний константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну являє собою константний домен людського Ієбі, при цьому вказаний константний домен людського Іобі1 містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:2 1 5ЕО ІЮ МО:3.

15. Зв'язувальний білок за п. 1, який додатково містить константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, де вказаний константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну являє собою константний домен Ів каппа людини, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4.

16. Зв'язувальний білок за п. 1, який додатково містить константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, де вказаний константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну являє собою константний домен Іс лямбда людини, що містить амінокислотну послідовність 50) Ю МО:5.

17. Зв'язувальний білок за п. І, де вказаний зв'язувальний білок вибраний з групи, що складається з молекули імуноглобуліну, 5сСЕу, моноклонального антитіла, людського антитіла, химерного антитіла, гуманізованого антитіла, однодоменного антитіла, Рар- фрагмента, Еаб'-фрагмента, Е(аб')»-фрагмента, Еу-фрагмента, Гу, зв'язаного дисульфідним зв'язком, однодоменного антитіла, діантитіла, мультиспецифічного антитіла, біспецифічного антитіла і антитіла з подвійною специфічністю.

18. Зв'язувальний білок за п. 17, де вказаним зв'язувальним білком є людське антитіло.

19. Зв'язувальний білок, який має здатність зв'язуватися з людським ПІ, - 4, де вказаний зв'язувальний білок містить: константну область важкого ланцюга Іє, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:2 1 5ЕО І МО:3; константну область легкого ланцюга Іс, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:4 1 5ЕО І МО:5; варіабельну область важкого ланцюга Іє, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається 3: 5ЕО ІЮ МО.1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 3581 360;1 варіабельну область легкого ланцюга Іє, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається 3: 5БЕО Ю МО:111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 216, 300, 292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 1 361.

20. Зв'язувальний білок за п. 19, де вказаною константною областю легкого ланцюга Іс є 5Е0О Ю МО:5.

21. Зв'язувальний білок за будь-яким з пп. 1-20, де вказаний зв'язувальний білок має здатність блокувати взаємодію 011.4 з білком Моїсії, вибраним з групи, що складається з Моїсі- 1, Моїсі-2, Моїсвп-3, Могїсь-4 і їх комбінацій.

22. Зв'язувальний білок за п. 21, де вказаний зв'язувальний білок має здатність блокувати взаємодію ПІЛА з Моїсв- 1 1 Моїсп-4.

23. Зв'язувальний білок за будь-яким з пп. 1-22, де вказаний зв'язувальний білок має здатність модулювати біологічну функцію РІ А.

24. Зв'язувальний білок за будь-яким з пп. 1-23, де вказаний зв'язувальний білок має здатність нейтралізувати ОТ 4.

25. Нейтралізуючий зв'язувальний білок за п. 24, де вказаний 011.4 вибраний з групи, що складається з людського 0114, мишачого ОІ1ТА4, РІ 4 яванського макака 1 щурячого ІА.

26. Модулюючий зв'язувальний білок за п. 23, де вказаний модулюючий зв'язувальний білок має здатність знижувати нормальний ангіогенез.

27. Нейтралізуючий зв'язувальний білок за п. 24, де вказаний нейтралізуючий зв'язувальний білок має константу дисоціації (Ко), вибрану з групи, що складається з: приблизно максимум 107 М; приблизно максимум 107 М; приблизно максимум 107 М; приблизно максимум 1079 М; приблизно максимум 107! М; приблизно максимум 10!" М і максимум 1077 М.

28. Нейтралізуючий зв'язувальний білок за п. 24, де вказаний нейтралізуючий зв'язувальний білок має швидкість асоціації, вибрану з групи, що складається з: щонайменше приблизно 102 МС! щонайменше приблизно 109 МС! щонайменше приблизно 104 МС; щонайменше приблизно 107 М'"с7" і щонайменше приблизно 107 МС,

29. Нейтралізуючий зв'язувальний білок за п. 24, де вказаний нейтралізуючий зв'язувальний білок має швидкість дисоціації, вибрану з групи, що складається з: приблизно максимум 10 зе: приблизно максимум 107с"; приблизно максимум 107с7 і приблизно максимум 107с.

30. Мічений зв'язувальний білок, що містить зв'язувальний білок за п. 17, де вказаний зв'язувальний білок кон'югований з детектованою міткою.

31. Конструкція антитіла, яка містить зв'язувальний білок за п. І, а також поліпептидний лінкер або константний домен імуноглобуліну.

32. Конструкція антитіла за п. 31, вибрана з групи, що складається 3: молекул імуноглобуліну, моноклонального антитіла, химерного антитіла, СОК-прищепленого антитіла, гуманізованого антитіла, Еаб, Еаб, гав)», ЕМ, Еу, зв'язаного дисульфідним зв'язком, см, однодоменного антитіла, діантитіла, мультиспецифічного антитіла, антитіла з подвійною специфічністю 1 біспецифічного антитіла.

33. Конструкція антитіла за п. 31, де вказана конструкція антитіла включає константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що складається 3: константного домену людського ІМ, константного домену людського ІвС1, константного домену людського ІгО2, константного домену людського ІгО3, константного домену людського ІвгО4, константного домену людського ІсЕ, константного домену людського ІвА 1 варіанта константного домену ІС з однією або декількома мутаціями, що змінюють силу зв'язування з неонатальним Ес-рецептором, рецепторами Ес-гамма або С1а.

34. Кон'югат антитіла, який містить конструкцію антитіла за п. 31, де вказана конструкція антитіла кон'югована з терапевтичним або цитотоксичним засобом.

35. Кон'югат антитіла за п. 34, де вказаний терапевтичний або цитотоксичний засіб вибраний з групи, що складається з антиметаболіту, алкілувального агента, антибіотика, фактора росту, цитокіну, антиангіогенного агента, антимітотичного засобу, антрацикліну, токсину 1 апоптотичного агента.

36. Ізольована нуклеїнова кислота, яка кодує поліпептид, вибраний з групи, що складається з: поліпептиду, що містить варіабельний домен важкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен важкого ланцюга включає одну або декілька з СЮОК-НІ, СОК-Н2О або СЮОК-НЗ за п. 1; поліпептиду, що містить варіабельний домен легкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен легкого ланцюга включає одну або декілька з СЮОК-І1, СОК-І2 або СОК-І З за п. 1; або комбінації обох поліпептидів.

37. Вектор, який містить ізольовану нуклеїнову кислоту за п. 36.

38. Клітина-хазяїн, яка містить вектор за п. 37.

39. Клітина-хазяїн за п. 38, де вказана клітина-хазяїн є еукаріотичною клітиною, вибраною з групи, що складається з клітини протистів, клітини тварини, клітини рослини і клітини грибів.

40. Клітина-хазяїн за п. 39, де вказаною еукаріотичною клітиною є клітина тварини, вибрана з групи, що складається з клітини ссавця, клітини птахів і клітини комахи.

41. Клітина-хазяїн за п. 39, де вказаною клітиною-хазяїном є клітина СНО, клітина СОБ5, клітина 519 або дріжджова клітина.

42. Спосіб одержання зв'язувального білка, який зв'язується з людським ПІ144, де вказаний спосіб включає культивування клітини-хазяїна за п. 38 в культуральному середовищі в умовах, достатніх для продукування зв'язувального білка, який зв'язується з людським ОА.

43. Зв'язувальний білок, одержаний способом за п. 42.

44. Кристалізований зв'язувальний білок, який включає зв'язувальний білок за п. І, де вказаний зв'язувальний білок присутній у вигляді кристала.

45. Фармацевтична композиція, яка містить зв'язувальний білок за п. 1 1 фармацевтично прийнятний носій.

46. Фармацевтична композиція за п. 45, яка також включає щонайменше один додатковий терапевтичний засіб для лікування розладу, асоційованого з негативною активністю ОА.

47. Фармацевтична композиція за п. 46, де вказаний додатковий засіб вибраний з групи, що складається з інгібітору ангіогенезу; інгібіторів кінази; блокаторів костимулюючої молекули; блокаторів адгезивної молекули; антитіла проти цитокіну або його функціонального фрагмента; метотрексату; кортикостероїдів; циклоспорину; рапаміцину; ЕК506б 1 нестероїдних протизапальних засобів.

48. Спосіб зниження активності людського 01144, який включає контактування людського РІ зі зв'язувальним білком за будь-яким з пп. 1-35, яке приводить до зниження ПІІ А- активності.

49. Спосіб зниження активності людського 0І14 у людини, страждаючої розладом, асоційованим з негативною активністю 1144, де вказаний спосіб включає введення вказаному індивідууму зв'язувального білка за будь-яким з пп. 1-35, яке приводить до зниження активність 0114 у людини.

50. Спосіб за п. 49, де вказаний розлад вибраний з групи, що складається з раку молочної залози, раку товстої кишки, раку прямої кишки, раку легень, раку ротоглотки, раку гортані, раку стравоходу, раку шлунка, раку підшлункової залози, раку печінки, раку жовчного міхура, раку жовчних проток, раку тонкого кишечнику, раку сечових шляхів, раку жіночих статевих органів, раку чоловічих статевих органів, раку ендокринних залоз, раку шкіри, гемангіоми, меланоми, саркоми, пухлини головного мозку, раку нервових тканин, раку очей, раку мозкової оболонки, солідних пухлин, що походять від гемопоетичних злоякісних пухлин, метастазів пухлин, очної неоваскуляризації, набряків, ревматоїдного артриту, розсіяного склерозу, атеросклеротичних бляшок, хвороби Крона, запального захворювання кишечнику, асциту, що важко піддається лікуванню, псоріазу, саркоїдозу, артеріосклерозу, сепсису, пептичних виразок, опіків, панкреатиту, полікістозу яєчника (ПКЯ), ендометріозу, фіброми матки, злоякісної гіпертрофії передміхурової залози і інших асоційованих і не асоційованих з ангіогенезом захворювань, що характеризуються аберантною активністю

РА.

51. Спосіб лікування пацієнта, страждаючого розладом, асоційованим з негативним впливом РІЛА, де вказаний спосіб включає стадію введення зв'язувального білка за будь-яким з пп. 1-

до, під час або після введення другого агента, де вказаний другий агент вибраний з групи, що складається з антитіла або його фрагмента, що має здатність зв'язуватися 3 людським МЕСЕК2О; метотрексату, антитіла або його фрагмента, що має здатність зв'язуватися з людським ТМЕ; кортикостероїдів; циклоспорину; рапаміцину; ЕК»506б і нестероїдних протизапальних засобів.

52. Зв'язувальний білок, здатний зв'язуватися з людським ОІ144, де вказаний зв'язувальний білок містить антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, при цьому антитіло або антигензв'язувальний фрагмент містять: варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:156, варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:268.

53. Зв'язувальний білок за п. 52, який додатково містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО:2 1 5БО ІЮ МО:3, 1 константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БХЕО ІЮ МО:4 1 560 Ю МО:5.

54. Зв'язувальний білок, здатний зв'язуватися з людським ОІ14, де вказаний зв'язувальний білок містить антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, при цьому антитіло або антигензв'язувальний фрагмент містять: варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:360, варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:361.

55. Зв'язувальний білок за п. 54, який додатково містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО:2 1 5БО ІЮ МО:3, 1 константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БХЕО ІЮ МО:4 1 560 Ю МО:5.

56. Зв'язувальний білок, здатний зв'язуватися з людським ОІ144, де вказаний зв'язувальний білок містить антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, при цьому антитіло або антигензв'язувальний фрагмент містять: варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:156, варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:359.

57. Зв'язувальний білок за п. 56, який додатково містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО І МО:2 1 5БО ІЮ МО:3, 1 константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БХЕО ІЮ МО:4 1 560 Ю МО:5.

58. Зв'язувальний білок за пп. 53, 55 або 57, який додатково містить сигнальний пептид легкого ланцюга, при цьому зазначений сигнальний пептид легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність 520 ІЮ МО:365.