BRPI0108394B1 - inibidores de proteína de quinase de 2-indolinona de pirrol substituído, seus sais e composições farmacêuticas compreendendo os mesmos - Google Patents

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Sun Li
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Abstract

"inibidores de cinase de proteína de 2-indolinona de pirrol substituído". a presente invenção refere-se a compostos de 2-indolinona de pirrol substituído e seus sais farmaceuticamente aceitáveis que regulam a atividade de cinases de proteínas e, portanto, se espera sejam úteis na prevenção e tratamento de doenças celulares relacionadas com cinase de proteína tais como câncer.

Description

(54) Título: INIBIDORES DE PROTEÍNA DE QUINASE DE 2-INDOLINONA DE PIRROL SUBSTITUÍDO, SEUS SAIS E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS COMPREENDENDO OS MESMOS (73) Titular: PHARMACIA& UPJOHN COMPANY, Sociedade Norte-Americana. Endereço: 301 Henrietta Street Kalamazoo, Ml 49001, ESTADOS UNIDOS DA AMÉRICA(US); SUGEN, INC., Sociedade Norte-Americana. Endereço:
230 East Grand Avenue, South San Francisco, CA 94080-4811, ESTADOS UNIDOS DA AMÉRICA(US) (72) Inventor: TODD A. MILLER; PENG CHO TANG; XIAOYUAN LI; LI SUN; CHUNG CHEN WEI; SHAHRZAD SHIRAZIAN; CONGXIN LIANG; TOMAS VOJKOVSKY; ASSAD S. NEMATALLA; MICHAEL HAWLEY.
Prazo de Validade: 10 (dez) anos contados a partir de 11/12/2018, observadas as condições legais
Expedida em: 11/12/2018
Assinado digitalmente por:
Liane Elizabeth Caldeira Lage
Diretora de Patentes, Programas de Computador e Topografias de Circuitos Integrados
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para INIBIDORES DE PROTEÍNA DE QUINASE DE 2-INDOLINONA DE PIRROL SUBSTITUÍDO, SEUS SAIS E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS COMPREENDENDO OS MESMOS.
INFORMAÇÕES CORRELATAS
Este pedido de patente reivindica prioridade, de acordo com 35 U.S.C. 119(e), para os Pedidos de Patente Provisórios Nos. de Série 60/182.710 depositado em 15 de fevereiro de 2000, 60/216.422 depositado em 06 de julho de 2000 e 60/243.532 depositado em 27 de outubro de 2000, cujas descrições são aqui incorporadas nas suas totalidades mediante referência.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a alguns compostos de 2-indolinona de 3-pirrol substituído que modulam a atividade de proteínas de quinases (“PKs”). Os compostos desta invenção são, portanto, úteis no tratamento de doenças relacionadas com atividade anormal de PKs. Composições farmacêuticas que compreendem estes compostos, métodos de tratamento de doenças utilizando composições farmacêuticas que compreendem estes compostos e métodos de preparação das mesmas são também descritos aqui.
Estado da Técnica
O que se segue é oferecido apenas como informação sobre fundamentos e não é admitido como sendo técnica anterior da presente invenção.
PKs são enzimas que catalisam a fosforilação de grupos de hidroxi sobre resíduos de proteínas de tirosina, serina e treonina. As consequências desta atividade aparentemente simples são surpreendentes: crescimento, diferenciação e proliferação da célula, isto é, virtualmente todos os
2/265 aspectos da vida da célula de um modo ou de outro dependem da atividade das PKs. Além disso, atividade anormal de PK foi relacionada a inúmeras doenças, variando de doenças relativamente não-ameaçadoras da vida, tal como psoríase, 5 até doenças extremamente virulentas, tal como glioblastoma (câncer cerebral).
As PKs podem ser convenientemente divididas em duas categorias, proteínas de tirosinas quinases serinas-treoninas quinases (STKs).
Um dos principais aspectos da atividade de PTKs é o crescimento.
seu envolvimento com receptores de fatores de
Receptores de fatores de crescimento são proteínas da
superfície da célula. Quando aglutinados por um ligante de
fator de crescimento, os receptores de fatores de
ativa que interage crescimento são convertidos em uma forma com proteínas sobre a superfície interna de uma membrana da célula. Isto conduz tirosina do receptor dentro da célula de moléculas citoplásticas fosforilação sobre de outras proteínas complexos com uma resíduos de e à formação variedade de por sua vez, realizam diversas respostas celulares tais como divisão de célula (proliferação), diferenciação de célula, crescimento de célula, expressão de efeitos metabólicos para o microambiente celular, etc. Para uma discussão mais completa, vide Schlessinger e Ullrich, Neuron, 9:303-391 (1992) que está incorporado mediante referência, incluindo quaisquer desenhos, como se totalmente mencionado aqui.
Receptores de fatores de crescimento com atividade de
PTK são conhecidas como __rec_eptor.__de ^_tirosinas quinases (RTKs) . As mesmas compreendem uma grande família de
3/265
Figure BRPI0108394B1_D0001
receptores de transmembrana com atividade biológica diversa. No momento, pelo menos dezenove (19) subfamílias distintas de RTKs foram identificadas. Um exemplo destas é a subfamília designada RTKs HER, que inclui EGFR (receptor de fator de crescimento epitelial), HER2, HER3 e
HER4. Estas RTKs consistem em um domínio aglutinante de ligante glicosilado extracelular, transmembrana e um domínio intracelular que pode fosforilar proteínas.
um catalítico resíduos de domínio de citoplásmico tirosina sobre
Outra subfamília de RTK consiste em receptor de insulina (IR) , receptor de fator de crescimento I tipo insulina insulina (IGF-1R) (IRR) . IR
IGF-II para formar α glicosiladas e receptor relacionado e IGF-1R interagem com uma heterotetrâmera de com receptor de insulina, IGF-I e duas subunidades inteiramente extracelulares e duas subunidades β que cruzam a membrana da célula e que contêm o domínio
Uma receptor de tirosina quinase.
terceira subfamília de RTK é denominada grupo de fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGFR), o qual inclui PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, c-kit e cfms. Estes receptores consistem em domínios extracelulares glicosilados compostos de números variáveis de laços tipo imunoglobina e um domínio intracelular onde o domínio de 25 tirosina quinase é interrompido por seqúências de aminoácidos não-correlatos.
Outro grupo que, devido à sua similaridade com a subfamília PDGFR, é algumas vezes incluída no último grupo é a subfamília de receptor de quinase de fígado de feto 30 (flk). Acredita-se que este grupo seja constituído por
4/265
Figure BRPI0108394B1_D0002
quinase-1 de fígado fetal de receptor _de domínio de inserção dequinase (KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-lR, flk-4 e tirosina quinase 1 tipo fms (flt-1).
Um elemento adicional da família de receptores de fator de crescimento de tirosina quinase é o subgrupo receptor de fator de crescimento de fibroblasto (FGF). Este grupo consiste em quatro receptores, FGFR1-4, e sete
Figure BRPI0108394B1_D0003
ligantes, FGF1-7. Embora ainda não bem definidos, parece que os receptores consistem em um domínio extracelular glicosilado que contém um número variável de laços tipo imunoglobina e um domínio intracelular no qual a seqüência de tirosina quinase é interrompida por regiões de sequências de aminoácidos não-correlatos.
Ainda outro elemento da família receptora de fator de crescimento de tirosina quinase é o subgrupo receptor de fator de crescimento vascular endotelial (VEGF). VEGF é uma glicoproteína dimérica similar a PDGF mas tem e especificidade de célula alvo in vivo. Em especial, pensa-se atualmente que VEGF tem um papel essencial em vasculogênese e angiogênese.
Uma lista mais detalhada das subfamílias RTK conhecidas está descrita
334-339 (1994) que está em Plowman e outros, DN&P, 7(6):
incorporado mediante referência, incluindo quaisquer desenhos, como se completamente 25 mencionado aqui.
Além das RTKs, existe também uma família de PTKs totalmente intracelulares denominadas não-receptor de tirosinas quinases ou tirosinas quinases celulares. Esta última designação, abreviada CTK, será usada aqui. CTKs não contêm domínios extracelulares e de transmembrana. No
5/265 momento, mais de 24 CTKs em 11
Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, identificadas. A subfamília Src grupo de CTKs e
Fgr e Yrk. Para
Bolen, Oncocrene, subfamílias (Src, Frk,
Fak, parece inclui Src, Yes, Fyn, uma mediante referência,
Btk,
Jak e Ack) ser de longe o
Lyn, Lck, Blk, discussão mais detalhada de CTKs, foram maior
Hck, vide
2025-2031 (1993), que está incorporado incluindo quaisquer desenhos, como se totalmente mencionado aqui.
As serinas/treoninas quinases,
STKs, do mesmo modo que as CTKs, são predominantemente intracelulares, embora existam poucos as mais comuns que que receptores quinases do tipo STK. As
STKs são das citosólicas quinases; isto é, atividade biossintética e célula; por exemplo, é no sintetizadas em ribossomas.
quinases onde ocorre metabólica citosol que a maior parte intermediária as proteínas da da sao
RTKs, CTKs e STKs têm sido todas implicadas em inúmeras patogênicas incluindo, significativamente, câncer.
que têm sido associadas a
PTKs incluem, sem limitação, psoriase, cirrose hepática, diabetes, angiogênese, restenose, doenças oculares, artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias, doenças imunológicas doenças auto-imunes, doenças cardiovasculares aterosclerose e uma variedade de doenças renais.
ao câncer, duas das maiores tais como tal como hipóteses avançaram para excessiva que explicar como a proliferação celular aciona o desenvolvimento do tumor se
6/265 /Λ relaciona com funções que se sabe são reguladas por PK.
Isto é, foi sugerido que o crescimento de células malignas resulta de uma quebra no mecanismo que controla a divisão e/ou diferenciação da célula. Foi mostrado que os produtos de proteína de diversos proto-oncogenes estão envolvidos
Figure BRPI0108394B1_D0004
nos percursos de transdução de sinal que regulam o
crescimento e diferenciação da célula. Estes produtos de
proteína de proto-oncogenes incluem os fatores de
crescimento extracelulares, receptores PTK de fator de
crescimento de t ransmembrana (RTKs), PTKs citiplásmicos
(CTKs) e STKs citosólicos, discutidos acima.
Devido à aparente ligação entre atividades celulares relacionadas com PK e a ampla variedade de doenças humanas, não é surpresa que um grande esforço esteja sendo consumido em uma tentativa para identificar meios para modular atividade de PK. Parte deste esforço tem estado relacionado
Figure BRPI0108394B1_D0005
com técnicas biomimétricas que utilizam grandes moléculas padronizadas naqueles envolvidos nos processos celulares atuais (por exemplo, ligantes de mutação (Pedido de Patente
U.S. No. 4.966.849); receptores solúveis e anticorpos (Pedido de Patente No. WO 94/10202, Kendall e Thomas, Proc.
Nat'1 Acad. Sei., 90:10705-09 (1994), Kim, e outros,
Nature, 362:841-844 (1993)); ligantes RNA (Jelinek, e outros, Biochemistrv, 33:10450-56); Takano, e outros, Mol.
Bio. Cell 4:358A (1993); Kinsella, e outros, Exp. Cell Res. 199:56-62 (1992); Wright, e outros, J. Cellular Phvs.,
152:448-57) e inibidores de tirosina quinase (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; Patente U.S. No. 5.330.992; Mariani, e outros, Proc. Am. Assoe. Câncer Res.,
35:2268 (1994)) .
7/265
Além do mencionado acima, foram feitas tentativas para identificar pequenas moléculas que agissem como inibidoras de PK. Por exemplo, compostos de arila bis- monocíclica, bicíclica e heterocíclica (PCT WO 92/20642), derivados de vinilenoazaindola (PCT WO
94/14808) e 1-ciclopropil-4piridilquinolonas Patente
U.S. No. 5.330992) foram descritos estirila piridila
5.302.606) como inibidores (Patente U.S.
de estirila
No. 0 566
94/03427)
92/21660)
91/15495) úteis no de tirosina quinase. Compostos de substituída (Patente U.S. No.
derivados
266 Al), compostos de quinazolina selenaindolas poliidroxílicos e compostos foram todos tratamento de
SUMÁRIO DA
A presente de ácido descritos câncer.
INVENÇÃO invenção refere-se (Pedido de Patente e selenidas tricíclicos benzilfosfônico como inibidores
EP (PCT (PCT (PCT de
WO
WO
WO
PTK a alguns compostos de 2-
Figure BRPI0108394B1_D0006
indolinona de
3-pirrol substituído que apresentam portanto, úteis no tratamento de doenças relacionadas com atividade anormal de proteínas de quinases.
Consequentemente, em um aspecto, a presente invenção refere-se a 2-indolinona de 3-pirrol substituído de Fórmula
Figure BRPI0108394B1_D0007
(I).
Figure BRPI0108394B1_D0008
8/265 onde:
R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcoxi, -(CO)R15, NR13R14, -(CH2)rR16 e -C(O)NR8R9;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquila, trialometila, hidróxi, alcoxi, ciano, -NR13R14, -NR13C (0) R14, -C(O)R15, arila, heteroarila,
-S (0) 2NR13R14 e -SO2R20 (onde R20 ê alquila, arila, aralquila, heteroarila e heteroaralquila);
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquila, trialometila, hidróxi, alcoxi, -(CO)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S (0) 2R14,
-S (0) 2NR13R14, -NR13C (O) R14, -NR13C (0) OR14 e -SO2R20 (onde R20 é alquila, arila, aralquila, heteroarila e heteroaralquila);
R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , halogênio, alquila, hidróxi, alcoxi e -NR13R14 /
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , alquila e -C(O)R10;
R6 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , alquila e -C(O)R10;
R7 ê selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio, alquila, arila, heteroarila, -C(O)R17 e
C(O)R10; ou
R6 e
R7 podem combinar-se para formar um grupo selecionado a partir do grupo que consiste em -(CH2)4-,
-(CH2)5- e -(CH2)6-;
com a condição de que pelo menos um dentre R5, R6 ou R7 deve ser -C(O)R10;
Figure BRPI0108394B1_D0009
Figure BRPI0108394B1_D0010
Figure BRPI0108394B1_D0011
Figure BRPI0108394B1_D0012
Figure BRPI0108394B1_D0013
*7
9/265 grupo que consiste em hidrogênio, alquila e arila;
R10 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi, alcoxi, ariloxi, -N(R11) (CH2)nR12 θ -NR13R14;
R11 é selecionado a partir do grupo que consiste em 5 hidrogênio e alquila;
R12 é selecionado a partir do grupo que consiste em -NR13R14, hidróxi, -C(O)R15, arila, heteroarila, -N+(0) R13R14,
-N(0H)R13 e -NHC(0)Ra (onde Ra é alquila, haloalquila ou aralquila não-substituída) ;
Oi io
R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, alquila inferior substituída por hidroxialquilamino, cianoalquila, cicloalquila, arila e heteroarila; ou
R13 e R14 podem combinar-se para formar um grupo heterocíclico;
R15 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, alcoxi e ariloxi;
R16 hodroxi,
R17 selecionado a
-C(O)R15, -NR13R14 é selecionado a partir do grupo e -C (O) NR13R14 ;
partir do grupo que que consiste consiste em em alquila, cicloalquila, arila e heteroarila;
R20 é alquila, arila, aralquila ou heteroarila; e ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
De preferência, R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcoxi, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 e -C(O)NR8R9;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquila, trialometila, hidróxi, alcoxi,
Figure BRPI0108394B1_D0014
10/265
-NR13R14, -NR13C (O) R14, -C(O)R15, arila, heteroarila e
-S (0) 2NR13R14;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquila, trialometila, hidróxi, 5 alcoxi, -(CO)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S (0) 2R14,
-S (0) 2NR13R14, -NR13C(O)R14 e -NR13C (O) OR14 ;
R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , halogênio, alquila, hidróxi, alcoxi e -NR13R14 r
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em
10 hidrogênio , alquila e -C (0) R10;
R6 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , alquila e -C(O)R10;
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio , alquila, arila, heteroarila , -C(0)R17 e -
C(O)R10;
R6 e R7 podem combinar-se para formar um grupo selecionado a partir do grupo que consiste em -(CH2)4-,
-(CH2)5- e -(CH2)6-;
·· com a condição de que pelo menos um dentre R5, R6 ou R7
0 deve ser -C(O)R10;
R8 e R9 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila e arila;
R10 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidróxi, alcoxi, ariloxi, -N (R11) (CH2) nR12 e -NR13 R14;
R11 é selecionado a partir do grupo que consiste em
hidrogênio e alquila;
R12 é selecionado a partir do grupo que consiste em
-NR13R14, hidróxi, -C(O)R15 , arila e heteroarila;
R13 e R14 são independentemente selecionados a partir
do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquila,
11/265
Figure BRPI0108394B1_D0015
arila e heteroarila;
R13 e R14 podem combinar-se para formar um grupo selecionado a partir do grupo que consiste em -(CH2)
4“ i
R15 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, alcoxi e ariloxi;
R16 hodroxi,
R17 alquila, selecionado a
-C(O)R15, -NR13R14 é selecionado a partir do grupo e -C (O)NR13R14;
partir do grupo que que cicloalquila, arila e heteroarila; e ou um
Em um consiste consiste em em seu sal farmaceuticamente aceitável.
aceitável e
Em um uma farmacêutica que compreende um ou mais de Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente um excipiente farmaceuticamente terceiro aspecto, esta método anormal de de tirosinas aceitável.
refere-se a um tratamento de doenças proteínas de quinases, mediadas por atividade em especial, receptor de quinases (RTKs), não-receptor de proteínas tirosinas quinases (CTKs) e proteínas de serinas/trioninas quinases (STKs), em um organismo, especialmente seres humanos, método este que compreende referido organismo de uma compreenda um composto de
Fórmula (I) . Tais doenças incluem, a título de exemplo e não de limitação, câncer, diabetes, cirrose hepática, doenças cardiovasculares tais como aterosclerose, angiogênese, doenças imunológicas tais como doenças auto-imunes e doenças renais.
Figure BRPI0108394B1_D0016
12/265
Em um quarto aspecto, esta invenção refere-se a um método de modulação da atividade catalítica de PKs, em especial, receptor de tirosinas quinases (RTKs), nãoreceptor de proteínas de tirosinas quinases (CTKs) e 5 proteínas de serinas/trioninas quinases (STKs), utilizando um composto ser transportado in vitro ou in vivo. Em particular, o receptor de proteína quinase cuja atividade catalítica é modulada por um composto a partir do grupo que consiste em EGF, HER2, HER3,
HER4, IR,
IGF-1R, IRR, PDGFRa,
PDGFRp, CSFIR, C-kit, C-fms,
Flk-IR, Flk4, KDR/Flk-1, Flt1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R e FGFR-4R.
A tirosina quinase celular cuja atividade catalítica modulada por um composto partir do grupo que consiste em Src, Frk, Btk, Csk,
Abl,
ZAP70, Fes/Fps, Fak,
Jak, Ack,
Yes, Fyn, Lyn, Lck,
Blk,
Hck, Fgr e Yrk. A proteína de serina-treonina quinase cuja atividade catalítica modulada por um composto desta selecionada partir do grupo que consiste em CDK2 e
Em um quinto ao uso de um composto de Fórmula (I) na preparação de um medicamento que é útil no tratamento de uma doença mediada por atividade anormal de PK.
Em um sexto aspecto, esta invenção refere-se a um intermediário de Fórmula (II):
Figure BRPI0108394B1_D0017
O (II)
13/265 onde :
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila e
-C (O) R10;
R6 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila e
-C (O) R10;
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, arila, heteroarila, -C(O)R17 e
C (O) R10;
R6 e selecionado
R7 podem a partir combinar-se para formar um grupo do grupo que consiste em -(CH2)4-,
-(CH2)5- e -(CH2)6-;
com que pelo menos um dentre R5, R6 ou
R7 deve ser
-C(O)R10;
Rl° hidróxi,
R11 é selecionado alcoxi, ariloxi, selecionado a partir
-N(R1:L) partir do grupo que consiste (CH2)nR12 e -NR13R14;
do grupo que consiste em em hidrogênio e alquila;
R12
-NR13R14,
R13 selecionado a partir hidróxi, -C(O)R15, arila do grupo que consiste e heteroarila;
em e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cianoalquila, cicloalquila, arila e heteroarila; ou
R13 e R14 podem combinar-se para formar um grupo heterocíclico;
5 R15 ê selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, alcoxi e ariloxi;
R17 é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila, cicloalquila, arila e heteroarila e
14/265
Figure BRPI0108394B1_D0018
Figure BRPI0108394B1_D0019
n é 1, 2 ou 3.
Dentro dos grupos preferidos acima, os grupos de compostos intermediários mais preferidos são aqueles em que R5, R6, R11, R12, R13 ou R14 são independentemente grupos
15/265
Figure BRPI0108394B1_D0020
descritos na seção intitulada modalidades preferidas abaixo.
Em um sétimo aspecto, esta invenção refere-se a métodos de preparação de compostos de Fórmula (I).
Finalmente, esta invenção refere-se também à identificação de um composto químico que module a atividade catalítica de uma proteína de quinase por contato de
Figure BRPI0108394B1_D0021
células que expressam tal proteína de quinase com um composto ou um sal da presente invenção e em seguida monitorando as referidas células para um efeito.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Definições
A não ser que mencionado de outro modo, os termos que nas reivindicações têm os significados discutidos abaixo:
Alquila refere-se a um radical de hidrocarbonetos saturados alifáticos que inclui grupos de cadeia reta e cadeia ramificada de 1 a átomos de carbono (sempre que se mencionar aqui uma faixa numérica, por exemplo, 1-20, isso significa que o grupo, neste caso o grupo de alquila, pode conter átomo de carbono, átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc., até átomos de carbono, inclusive).
Os grupos de alquila que contêm de 1 a 4 átomos de carbono são denominados grupos de alquila inferior.
Quando os referidos grupos de alquila inferior não possuem substitutos, os mesmos são denominados grupos de alquila inferior não substituídos. Mais preferivelmente, um grupo de alquila é uma alquila de tamanho médio que possui 1 a 10 átomos de carbono, por exemplo, metila, etila, propila, 30 2-propila, n-butila, iso-butila, terc-butila, pentila e
Figure BRPI0108394B1_D0022
16/265 similares. Mais preferivelmente, é uma alquila inferior que possui 1 a 4 átomos de carbono por exemplo, metila, etila, propila, n-butila, iso-butila ou terc-butila e similares. O grupo de alquila pode ser substituído ou não-substituído.
Quando substituído, o(s) grupo(s) substituído(s) é(são), de preferência, um ou mais, mais preferivelmente um a três, ainda mais preferivelmente um a dois substituto(s) independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em halo, hidróxi, alcoxi inferior não-substituído, arila
Figure BRPI0108394B1_D0023
opcionalmente substituída por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi inferior não-substituído, ariloxi opcionalmente substituído por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi inferior não-substituído independentemente entre si heteroarila de 6 elementos com a 3 átomos de nitrogênio no anel sendo os carbonos no anel opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de
Figure BRPI0108394B1_D0024
preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi inferior não-substituído, heteroarila de 5 elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio no grupo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi inferior não-substituído, grupo heteroalicíclico de 5- ou 6- elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e
17/265 enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio (se presentes) no grupo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior nãosubstituída ou alcoxi inferior não-substituído independentes entre si, mercapto, (alquila inferior não substituída) tio, ariltio opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi acila, tioacila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila,
N-tiocarbamila, C-amido, N-amido, sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2~, nitro, N-sulfonamido, S-C(O)OR18, R18C(O)O- e
-NR18R19, em que
R18 e R19 são independentemente selecionados dentre grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior não-substituída, trihalometila, cicloalquila de (C3-C6) opcionalmente substituída por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de inferior não-substituído independente entre si.
De preferência, o grupo de alquila é substituído por um ou mais substitutos selecionados dentre o grupo que consiste em hidróxi, grupo heteroalicíclico de
5- ou
6elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio (se presentes) no grupo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de 3 0 preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de
Figure BRPI0108394B1_D0025
18/265 halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi inferior não-substituído independentes entre si, heteroarila de 5- elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, 5 oxigênio e enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio no grupo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi inferior não-substituído, heteroarila de 6- elementos com 1
Figure BRPI0108394B1_D0026
a 3 átomos de nitrogênio no anel, sendo os carbonos no anel opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi inferior não-substituído, ou -NR18R19, em que R18 e R19 são independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior não-substituída. Ainda mais preferivelmente o grupo de alquila é substituído por um ou dois substitutos que são hidróxi, dimetilamino, etilamino, dietilamino, dipropilamino, pirrolidino, piperidino,
Figure BRPI0108394B1_D0027
morfolino, piperasino, 4-alquilpiperasino inferior, fenila, imidazolila, piridinila, piridazinila, pirimidinila, oxazolila, triazinila e similares.
Cicloalquila refere-se a um anel monocíclico de 3 a elementos todos de carbono, um anel bicíclico fundido todo de carbono de 5 elementos/6 elementos ou 6 elementos/6 elementos ou um anel fundido multicíclico (um sistema de anel fundido significa que cada anel no sistema compartilha um par adjacente de átomos de carbono com outro anel no sistema) em que um ou mais dos anéis pode conter
19/265 uma ou mais ligações duplas porém nenhum dos anéis tem um sistema de pi-elétrons completamente conjugados.
Exemplos, ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, cicloexano, cicloexadieno, adamantano, cicloeptano, cicloeptatrieno e similares.
Um grupo de cicloalquila pode ser substituído ou não-substituído. Quando substituído, preferência, um ou mais, mais preferivelmente um ou dois substitutos φ 10 independentemente selecionados dentre o grupo que consiste hidróxi, alcóxi inferior não-substituído, arila opcionalmente substituída por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos que sejam grupos 15 independentes entre si de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi inferior não-substituído, ariloxi opcionalmente substituído por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos que sejam grupos de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi
Figure BRPI0108394B1_D0028
inferior não-substituído independentemente entre si, heteroarila de 6 elementos com 1 a 3 átomos de nitrogênio no anel sendo os carbonos no anel opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos que sejam grupos independentes entre si de 25 halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcóxi inferior não-substituído, heteroarila de 5 elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio no grupo opcionalmente substituídos 3 0 por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos
Figure BRPI0108394B1_D0029
20/265 independentes entre si de halo, hidróxi, alquila inferior não-substituída ou alcoxi inferior não-substituído, grupo heteroalicíclico de 5 ou 6 elementos com 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, 5 oxigênio e enxofre, sendo os átomos de carbono e nitrogênio (se presentes) no grupo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos que sejam grupos de ou alcoxi • 10 mercapto, alquiltio inferior não-substituído, ariltio opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de preferência um ou dois grupos de halo, hidróxi, alquila independentes entre si, ciano, acila, tioacila, O carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, inamido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido,
R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, e definidos acima.
Alquenila refere-se a um grupo de
-NR18R19, são como alquila inferior, como definido aqui, que consiste em pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla de carbonocarbono. Exemplos representativos incluem etenila, 1propenila, 2-propenila, l-,2- ou 3-butenila e similares porém não se limitam aos mesmos.
Alquinila refere-se a um grupo de alquila inferior, como definido aqui, que consiste em pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla de carbonocarbono. Exemplos representativos incluem etenila, 1propenila, 2-propenila, l-,2- ou 3-butenila e similares 30 porém não se limitam aos mesmos.
Figure BRPI0108394B1_D0030
21/265
Arila refere-se a um grupo monocíclico todo de carbono ou policíclico de anel fundido (isto é, anéis que compartilham pares adjacentes de átomos de carbono) de 1 a 12 átomos de carbono com um sistema de pi-elétrons completamente conjugados. Exemplos, sem limitação, de grupos de arila são fenila, naftalenila e atracenila. O grupo de arila pode ser substituído ou não-substituído. Quando substituído(s), o(s) grupo(s) substituído(s) é(são) de preferência um ou mais grupos, mais preferivelmente, um, dois ou três grupos, ainda mais preferivelmente um ou dois independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em alquila inferior não-substituída, trialoalquila, halo, hidróxi, alcoxi inferior não-substituído, mercapto alquiltio inferior não-substituído, ciano, acila, tioacila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido,
R18S (0) -, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, e -NR18R19, sendo R18
e R19 como definidos acima. De preferência, o grupo de
arila é opcionalmente substituído por um ou dois
substitutos independentemente selecionados dentre halo, alquila inferior não-substituída, trialoalquila, hidróxi, mercapto, ciano, N-amido, mono ou dialquilamino, carboxi, ou N-sulfonamido.
Heteroarila refere-se a um grupo monocíclico ou de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos) de 5 a 12 átomos de anel que contêm um, dois ou três heteroátomos de anel selecionados dentre N, 0 ou S, sendo os átomos de anéis remanescentes C e, além disso, tendo um sistema de pi-elétrons completamente conjugados. Exemplos, sem limitação, de grupos de
2½
22/265 imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, quinolina, isoquinolina, purina piridina, pirinidina, carbazol. 0 grupo de heteroarila pode ser substituído ou não-substituído. Quando substituído(s) , o(s) grupo(s) substituído(s) é(são) de preferência um ou mais grupos, mais preferivelmente, um, dois ou três grupos, ainda mais preferivelmente um ou dois independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em alquila inferior não-substituída, trialoalquila, halo, • 10 hidróxi, alcóxi mercapto acila, tioacila,
O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila,
N-tiocarbamila,
S-sulfonamido,
C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido,
R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- e -NR18R19, sendo R18
15 e R19 como definidos acima. De preferência, o grupo de
arila é opcionalmente substituído por um ou dois
substitutos independentemente selecionados dentre halo, trialoalquila, hidróxi, mercapto, ciano, N-amido, mono ou dialquilamino, carboxi, ou N-sulfonamido.
Heteroalicíclico refere-se um grupo monocíclico ou de anel fundido que anel em que selecionados a 2) sendo um ou dentre possui no(s) dois átomos
N, 0 ou S (0)n anel(éis) 5 a 9 átomos de de anel são heteroátomos (onde n é um inteiro de 0 os átomos de anel remanescentes
C. Os anéis também podem ter uma ou mais ligações duplas.
Contudo, os anéis não têm um sistema de pi-elétrons completamente conjugados.
heterocíclicos piperidino,
Exemplos, sem são de grupos piperazino, morfolino, pirrolidino, tiomorfolino,
23/265 homopiperazina e similares. 0 anel heteroalicíclico pode ser substituído ou não-substituído. Quando substituídos, o(s) grupo(s) substituído(s) é(são) de preferência um ou mais grupos, mais preferivelmente, dois ou três grupos, 5 ainda mais preferivelmente um ou dois independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em alquila inferior não-substituída, trialoalquila, halo, hidroxi, alcoxi inferior não-substituído, mercapto, alquiltio inferior não-substituído, ciano, acila, tioacila, 0-
Figure BRPI0108394B1_D0031
carbamila, N-carbamila, 0-tiocarbamila, N-tiocarbamila, Camido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido,
R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(0)0R18, R18C(0)0-, e -NR18R19, sendo R18 e R19 como definidos acima. De preferência, o grupo de arila é opcionalmente substituído por um ou dois 15 substitutos independentemente selecionados dentre halo, alquila inferior não-substituída, trialoalquila, hidroxi, mercapto, ciano, N-amido, mono ou dialquilamino, carboxi, ou N-sulfonamido.
De preferência, o grupo de heteroalicíclico é opcionalmente substituído por um ou dois substitutos independentemente selecionados dentre halo, alquila inferior não-substituída, trialoalquila, hidroxi, mercapto, ciano, N-amido, mono ou dialquilamino, carboxi, ou Nsulfonamido.
Heterociclo significa um radical cíclico saturado de 3 a 8 átomos de anel em que um ou dois átomos de anel são heteroátomos selecionados dentre N, 0 ou S(0)n (onde n é um inteiro de 0 a 2) sendo os átomos de anéis remanescentes C, onde um ou dois átomos C podem ser opcionalmente substituídos por um grupo de carbonila. 0
Figure BRPI0108394B1_D0032
24/265 anel heterocíclico pode ser opcionalmente substituído independentemente por um, dois ou três substitutos selecionados dentre alquila inferior opcionalmente substituída (substituída por 1 ou 2 substitutos independentemente selecionados dentre carboxi ou éster), haloalquila, cianoalquila, halo, nitro, ciano, hidróxi, alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, aralquila, heteroaralquila, -COR (onde R é alquila) ou -COOR (onde R é hidrogênio ou alquila). Mais especificamente o termo 10 heterocíclico inclui tetraidropiranila, 2,2-dimetil-1,3 dioxolano, piperidino, N-metilpiperidino-3-ila, piperazino,
N-metilpirrolidina-3-ila,
3-pirrolidino, morfolino, tiomorfolino, tiomorfolino-1-óxido, tiomorfolino-1,1dióxido, 4-etiloxicarbonilpiperazino,
3-oxopiperazino, 215 imidazolidona,
2-pirrolidinona,
2-oxoomopiperazino, limitam aos mesmos. De preferência, o grupo heterocíclico é opcionalmente substituído por um ou dois substitutos independentemente selecionados dentre halo, alquila carboxi, éster
Hidróxi
Alcoxi hidróxi, mono ou dialquilamino.
refere-se a um grupo de -OH.
refere-se a um grupo de -O-(alquila não25 representativos incluem, por exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi, cicloexiloxi e similares, porém não se limitam aos mesmos.
Ariloxi refere-se a um grupo de -0-arila e -O30 heteroarila, como definido aqui. Exemplos representativos
Figure BRPI0108394B1_D0033
25/265 incluem fenoxi, piridiniloxi, furaniloxi, tieniloxi, pirimidiniloxi, piraziniloxi e similares e seus derivados, porém não se limitam aos mesmos.
Mercapto refere-se a um grupo de -SH.
Alquiltio refere-se a um grupo de -S-(alquila nãosubstituída) e -S-(cicloalquila não-substituída). Exemplos representativos incluem, por exemplo, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio, ciclopropiltio, ciclobutiltio,
Figure BRPI0108394B1_D0034
ciclopentiltio, cicloexiltio e similares, limitam aos mesmos.
porém não se
Ariltio refere-se a um grupo de -S-arila e-Sheteroarila, como definido aqui. Exemplos representativos incluem feniltio, piridiniltio, furaniltio, tieniltio, piridiminiltio e similares e seus derivados, porém não se limitam aos mesmos.
Acila refere-se a um grupo de -C (O) -R, em que R é selecionado dentre o grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior não-substituída, trialometila, cicloalquila não-substituída, arila opcionalmente
Figure BRPI0108394B1_D0035
substituída por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três substitutos selecionados dentre o grupo que consiste em alquila inferior não-substituída, trialometila, alcóxi inferior não-substituído e NR18R19, heteroarila (ligada através de um carbono de anel) opcionalmente 25 substituída por um ou mais grupos, de preferência um, dois ou três substitutos selecionados dentre o grupo que consiste em grupos de alquila inferior não-substituída, trialometila, alcóxi inferior não-substituído, halo e NR18R19 e heterocíclicos (ligados através de um átomo de 30 anel) opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, de
Figure BRPI0108394B1_D0036
26/265 preferência um, dois ou três substitutos selecionados dentre o grupo que consiste em alquila inferior nãosubstituída, trialometila, alcoxi inferior não-substituído, halo e NR18R19. Exemplos representativos de acila incluem acetila, trifluoracetila, benzoíla e similares, porém não se limitam aos mesmos
Aldeido refere-se a um grupo de acila em que R hidrogênio.
Tioacila refere-se a um grupo de -C(S)-R, com
R
Figure BRPI0108394B1_D0037
como definido aqui.
Ester refere-se a um grupo de -C (O) O-R sendo
R como definido aqui exceto que R não pode ser hidrogênio.
Grupo de
Grupo de acetila refere-se a um grupo de -C(O)CH3.
halo refere-se a fluor, cloro, bromo ou
Figure BRPI0108394B1_D0038
iodo, de preferência fluor ou cloro.
grupo de trialometila refere-se a um grupo de -CX3 em que X é um grupo de halo como definido aqui.
Grupo de trialometanossulfonila refere-se a um grupo de X3CS(=O)2- em que X é como definido acima.
Ciano refere-se a um grupo de -C N.
Metilenodioxi refere-se a um grupo de -OCH2O- em que os dois átomos de oxigênio estão ligados a átomos de carbono adj acentes.
O grupo de etilenodioxi refere-se a -OCH2CH2O- onde os dois átomos de oxigênio estão ligados a átomos de carbono adjacentes.
S-sulfonamido refere-se a um grupo de -S (O) 2NR18R19 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
N-sulfonamido refere-se a um grupo de -NR18S (O) 2R19 3 0 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
Figure BRPI0108394B1_D0039
27/265
O grupo de O-carbamila refere-se a um grupo de
-0C(0) NR18R19 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
N-carbamila refere-se a um grupo de R18OC(O)NR19 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
0-tiocarbamila refere-se a um grupo de -OC(S) NR18R19 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
N-tiocarbamila refere-se a um grupo de R18OC(S)NR19 em que R18 e R19 são como definidos aqui.
Amino refere-se a um grupo de
NR18R19 em que R18 e
R19
Figure BRPI0108394B1_D0040
C-amido refere-se um grupo de -C(0) NR18R19 em que
R18
R1S e R19 são como definidos
N-amido refere-se a e R19 são como definidos
Nitro refere-se a um aqui.
um grupo aqui.
grupo de de R18C(O)NR19-, em que
-N02.
Haloalquila significa uma alquila não-substituída, de preferência alquila inferior não-substituída como definido acima, que é substituída por um ou mais átomos de halo iguais ou diferentes, por exemplo, -CH2C1, -CF3,
Figure BRPI0108394B1_D0041
-CH2CF3, -CH2CC13 e similares.
Aralquila significa uma alquila não-substituída, de preferência alquila inferior não-substituída como definido acima que é substituída por um grupo de arila como definido acima, por exemplo, -CH2 fenila, - (CH2) 2 fenila, -(CH2)3 fenila, -CH3CH (CH3) CH2 fenila e similares e seus derivados.
grupo de heteroalquila significa uma alquila nãosubstituída, de preferência alquila inferior nãosubstituída como definido acima, que é substituída por um grupo de heteroarila, por exemplo, -CH2 piridinila, -(CH2)2
28/265 pirimidinila, -(CH2)3 imidazolila e similares e seus derivados.
Monoalquilamino refere-se a um radical -NHR onde R é um grupo de alquila não-substituída ou cicloalquila não5 substituída como definido acima, por exemplo metilamino, (1-metiletil)amino, cicloexilamino e similares.
Dialquilamino refere-se a um radical -NHR onde R é independentemente um grupo de alquila não-substituída ou como definido acima, por exemplo dimetilamino, dietilamino, (1-metiletil)-etilamino, cicloexiletilamino, ciclopentilmetilamino e similares.
Cianoalquila significa uma alquila não-substituída,
de preferência alquila inferior não-substituída como
definido acima que é substituída por 1 ou 2 grupos de
15 ciano.
Opcional ou opcionalmente significa que o evento
ou circunstância descritos subsequentemente podem ocorrer embora não necessariamente, e que a descrição inclui casos em que o evento ou circunstância ocorrem e casos em que não ocorrem. Por exemplo, grupo heterocíclico opcionalmente substituído por um grupo de alquila significa que alquila pode estar presente descrição inclui situações em que o grupo heterocíclico substituído por um grupo de alquila e situações em que grupo heterocíclico não é substituído pelo grupo de alquila.
Os termos 2-indolinina, indolin-2-ona e 2oxindola são utilizados de modo permutável aqui para referirem-se a uma molécula com a estrutura química:
29/265
Figure BRPI0108394B1_D0042
O termo pirrol refere-se a uma molécula que possui a estrutura química:
Figure BRPI0108394B1_D0043
Figure BRPI0108394B1_D0044
Os termos 2-indolinona substituída por pirrol e 3pirrolidenil-2-indolinona são usados de modo permutável aqui para referirem-se a um composto químico que possui a estrutura genérica mostrada na Fórmula (I).
Compostos que possuam a mesma fórmula molecular mas difiram no tipo ou seqüência de ligação de seus átomos ou na organização dos seus átomos no espaço são denominados
Figure BRPI0108394B1_D0045
isômeros.
Isômeros que diferem na organização dos seus átomos no espaço são denominados estereoisômeros.
Estereoisômeros que não sejam imagens refletidas uns dos outros são denominados diasterômeros e aqueles que são imagens refletidas não superimpostas umas das outras são denominados enantiômeros. Quando um composto tem um centro assimétrico, por exemplo, está ligado a quatro grupos diferentes, é possível um par de enantiômeros. Um 20 enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta do seu centro assimétrico e é descrito pelas regras de seqüenciamento R- e S- de Cahn e Prelog, ou pelo
30/265 modo em que a molécula gira o plano da luz polarizada e designada como dextrogiro ou levogiro (isto é, como isômeros ( + ) ou (-) , respectivamente) . Um composto quiral pode existir ou como enantiômero individual ou como uma 5 mistura dos mesmos. Uma mistura que contenha proporções iguais dos enantiômeros é denominada mistura racêmica.
Os compostos desta invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos; por conseguinte tais compostos podem ser produzidos como estereoisômeros (R)- ou (S) 9 10 individuais ou como suas misturas. Por exemplo, se o substituto R6 em um composto de fórmula (I) for 2hidroxietila, então o carbono ao qual o grupo de hidróxi está ligado é um centro assimétrico e portanto o composto de Fórmula (I) pode existir como um estereoisômero (R) - ou (S) -. A não ser que indicado de outro modo, a descrição ou citação de um composto específico na especificação e nas reivindicações destina-se a incluir tanto enantiômeros individuais como misturas, racêmicas ou não, dos mesmos. Os métodos para a determinação de estereoquímica e a separação relato no Capítulo 4 de Advanced (Química Orgânica Avançada) 4a Edição
Organic Chemistry,
J. March, John Willey and Sons, New York, 1992) .
Os compostos de Fórmula (I) podem apresentar os fenômenos de tautomerismo e isomerismo estrutural. Por exemplo, os compostos descritos aqui podem adotar uma configuração em E ou Z em torno da ligação dupla que conecta a porção 2-indolinona à porção pirrol ou podem ser uma mistura de E e Z. Esta invenção abrange qualquer forma tautomérica ou isomérica estrutural e misturas das mesmas
31/265 que possuam a capacidade de regular a atividade RPK, CTK
e/ou STK e não se limita a qualquer umq das formas
tautomérica ou isométrica estrutural.
Uma composição farmacêutica refere -se a uma mistura
5 de um ou mais dos compostos descritos aqui, ou a sais
fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis ou pró-drogas dos mesmos, com outros componentes químicos, tais como carreadores e excipientes fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis. A finalidade de uma composição farmacêutica é facilitar a um organismo.
O composto pró-droga. Uma de Fórmula pró-droga convertido na droga matriz (I) também pode atuar como uma refere-se a um agente que é in vivo.
Pró-drogas são muitas vezes úteis uma vez que, em algumas ser mais fáceis de administrar do que a droga matriz.
Por exemplo, as mesmas podem ser biodisponíveis por oral enquanto que a droga matriz não. A pródroga também farmacêuticas droga matriz. Um exemplo, sem uma pró-droga seria um composto da presente invenção que é administrado como um éster (a pró-droga) para facilitar a transmissão através de uma membrana da célula onde a solubilidade em água é prejudicial à mobilidade, porém é metabolicamente hidrolisada no ácido carboxílico, a entidade ativa, quando no interior da célula
onde a solubilidade em água é benéfica.
Um outro exemplo de uma pró-droga poderia ser um
polipeptídeo curto, por exemplo, sem limitação um
polipeptídeo de 2-10 aminoácidos, ligado através de um
3/^
32/265 grupo de amino terminal a um grupo de carboxi de um composto desta invenção em que o polipeptídeo é hidrolisado ou metabolisado in vivo para liberar a molécula ativa. As pró-drogas de um composto de fórmula âmbito desta invenção.
Além disso, considera-se que um composto de fórmula (I) seria metabolisado por enzimas no corpo do organismo tal como um regular a metabolitos
Como ser humano atividade usado para gerar um metabolito que possa das proteínas quinases. Tais aqui, um carreador fisiologicamente/farmaceuticamente carreador ou diluente aceitável refere-se a um significativa a um organismo e que não anule a atividade biológica e as propriedades do composto administrado.
Um excipiente farmaceuticamente aceitável refere-se a uma substância inerte adicionada a farmacêutica para facilitar ainda mais a um composto. Exemplos, sem limitação, incluem carbonato de cálcio, fosfato de uma composição de excipientes cálcio, diversos açúcares e tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleos vegetais e
Como aceitável biológica usado glicóis de polietileno.
aqui, o termo sal refere-se àqueles sais que e as propriedades do composto farmaceuticamente retêm a eficácia matriz.
Tais sais incluem:
que é obtido através da reação da base livre do composto matriz com ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido
33/265 perclórico e similares ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido málico (D) ou (L), ácido ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico ácido cítrico ácido sucínico ou ácido malônico e similares, de preferência ácido hidroclórico ou ácido málico (L) - tal como o sal L-malato
Figure BRPI0108394B1_D0046
de (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-flúor-2-oxo-l,2dihidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrole-3 carboxílico ou (ii) sais formados quando um próton ácido presente no composto matriz ou é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino terroso ou íon de alumínio ou é coordenado com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina e similares.
PK refere-se a receptor de proteína (RTKs), não receptor ou tirosina quinase tirosina quinase celular (CTKs) e serinas-treoninas quinases (STKs).
Método refere-se a modos, meios, técnicas e processos para realizar uma determinada tarefa que incluem aqueles modos, meios, técnicas e processos que são do conhecimento de profissionais das áreas química, farmacêutica, biológica, bioquímica e médica ou que podem ser facilmente desenvolvidas pelos mesmos a partir de modos, meios, técnicas e processos conhecidos.
Regulação ou regulador refere-se à alteração da atividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs. Em particular, regulador refere-se à ativação da atividade catalítica de 30 RTKs, CTKs e STKs, de preferência à ativação ou inibição da
Figure BRPI0108394B1_D0047
34/265 atividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs, dependendo da concentração do composto ou sal ao qual as RTKs, CTKs ou STKs é exposta ou, mais preferivelmente, à inibição da atividade catalítica das RTKs, CTKs e STKs.
Atividade catalítica refere-se à taxa de fosforilação da tirosina sob a influência direta ou indireta das RTKs e/ou CTKs ou da fosforilação de serina e
Figure BRPI0108394B1_D0048
treonina sob a influência direta ou indireta das STKs.
Contato refere-se à união de um composto desta invenção com um PK alvo de tal modo que o composto possa afetar a atividade catalítica da PK, ou diretamente, isto é, mediante interação com a própria quinase, ou indiretamente, isto é, mediante interação com outra molécula da qual depende a atividade catalítica de quinase.
Tal contato pode ser realizado in vitro” isto é em um tubo de ensaio, uma placa de petri, ou similar. Em um tubo
Figure BRPI0108394B1_D0049
de ensaio, o contato pode incluir apenas um composto e um PK importante ou pode incluir células completas. As células também podem ser mantidas ou desenvolvidas em placas para cultura de células e contatadas com um composto naquele ambiente. Neste contexto, é tentada a capacidade de um composto específico para afetar uma enfermidade relacionada com PK, isto é, o IC50, definido abaixo, pode ser determinado antes da utilização dos compostos in vivo com organismos vivos mais complexos. Para células fora do organismo, existem diversos métodos conhecidos daqueles versados na técnica para colocar as PKs em contato com os compostos que incluem a microinjeção direta nas células e diversas técnicas de carreador de transmembrana, porém não se limitam aos mesmos.
Figure BRPI0108394B1_D0050
35/265
In vitro refere-se a procedimentos realizados em um ambiente artificial tal como, por exemplo, sem limitação, em um tubo de ensaio ou meio de cultura.
In vivo refere-se a procedimentos realizados dentro de um organismo camundongo, rato ou
Enfermidade provocada por todas elas a catalítica de acima, em que
PK uma vivo tal coelho.
relacionada e atividade condição
PK inadequada, a PK específica como, com de PK sem limitação, um
PK , enfermidade anormal referem-se caracterizada por isto é abaixo ou pode ser uma RTK, atividade geralmente uma CTK ou uma STK. A atividade catalítica inadequada pode surgir como que normalmente
PK conduzindo a diferenciação e/ou desenvolvimento indesejados de células, ou (3) menor expressão de PK conduzindo a e/ou desenvolvimento de células.
superatividade de uma
PK refere-se ou da de uma PK específica ou produção de um nível de atividade de PK que possa estar relacionada com uma enfermidade provocada por proliferação, diferenciação e/ou desenvolvimento de células (isto é, à medida que o nível da PK aumenta, aumenta a gravidade de um ou mais dos 25 sintomas da enfermidade celular). Subatividade é evidentemente o contrário, em que a gravidade de um ou mais sintomas de uma enfermidade celular aumenta à medida que diminui o nível da atividade do PK.
Tratar, tratando e tratamento referem-se a um método de minorar ou anular uma enfermidade celular
Figure BRPI0108394B1_D0051
36/265 provocada por PK e/ou seus sintomas associados. Com relação especificamente ao câncer, estes termos significam apenas que a expectativa de vida de um indivíduo com câncer será aumentada ou que um ou mais dos sintomas da doença serão 5 reduzidos.
Organismo refere-se a qualquer ser vivo que compreenda pelo menos uma célula. Um organismo vivo pode ser por exemplo tão simples quanto uma célula eucariótica
Figure BRPI0108394B1_D0052
única ou tão complexo quanto um mamífero incluindo um ser
Figure BRPI0108394B1_D0053
humano.
Quantidade terapeuticamente eficaz refere-se àquela quantidade do composto que é administrada e que aliviará até certo ponto um ou mais dos sintomas da enfermidade sendo tratada. Em relação ao tratamento do câncer, uma 15 quantidade terapeuticamente eficaz refere-se àquela quantidade que tem o efeito de:
(1) reduzir o tamanho do tumor;
(2) inibir (isto é retardar até certo ponto, de preferência interromper) metástases tumorais;
(3) inibir até certo ponto (isto é, retardar até certo ponto, de preferência interromper) o crescimento do tumor e/ou;
(4) aliviar até certo ponto (ou, de preferência, eliminar) um ou mais sintomas associados ao câncer.
Monitorar significa observar ou detectar o efeito do contato de um composto com uma célula que expresse uma PK específica. 0 efeito observado ou detectado pode ser uma alteração no fenótipo da célula, na atividade catalítica de uma PK ou uma alteração na interação de uma PK com um co-
Figure BRPI0108394B1_D0054
37/265
As técnicas para observar conhecidas na técnica.
efeito mencionado acima é selecionado dentre uma alteração ou uma ausência de alteração em um fenótipo de célula, uma alteração ou ausência de alteração na atividade catalítica da referida proteína de quinase ou uma alteração de quinase com um co-participante de ligação natural em um
Fenótipo da célula refere-se a um aspecto externo de uma célula ou tecido da função biológica da tecido. Exemplos, sem limitação, de um fenótipo célula ou da célula são o tamanho da célula, aumento da célula, proliferação da apoptose e absorção e utilização de nutrientes. Tais características fenotípicas são mensuráveis através técnicas bem conhecidas na técnica.
polipeptídeo que se aglutina a uma PK específica em de um uma célula. Os importantes co-participantes de ligação na propagação de um sinal de sinais mediados por PK.
natural podem em um processo
Uma alteração natural com a ser de na
PK pode manifestar-se como uma concentração complexo PK/co-participante de ligação maior ou natural menor do e, como conseqüência, em uma alteração visível na capacidade da PK mostrados na Tabela 1 abaixo.
TABELA 1
38/265
Figure BRPI0108394B1_D0055
Figure BRPI0108394B1_D0056
Exemplo Estrutura Nome
1 αί>· Ácido 4-metil-5-(2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-2-carboxílico
2 Ácido 4-metil-5-(l-metil-2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilideno-metil)- lH-pirrol-2-carboxílico
3 Éster metílico de ácido 4-metil-5(2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-2carboxílico
4 H Éster etílico de ácido 5-(5-cloro- 2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-4-metil-lH-pirrol-2carboxílico
5 Ácido 5-(5-cloro-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-4metil-lH-pirrol-2-carboxílico
6 (3-Pirrolidin-l-il-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-4metil-lH-pirrol-2-carboxílico
7 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-4metil-lH-pirrol-2-carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0057
39/265
8 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol3-ilidenometil)-lH-pirrol-2carboxílico
9 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(2-oxo-6-fenil-l,2-diidroindol- 3-ilidenometil)-lH-pirrol-2carboxílico
10 (2-Dietilaminoetil)-metilamida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-2-carboxílico
11 (2-Dietilaminoetil)metilamida de ácido 5-(2-οχο-6-fenil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-2-carboxílico
12 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 3-metil-5-(2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-2-carboxílico
13 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
14 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 3-mthil-5-(2-oxo-6-fenil1,2-diidroindol-3-ilidenometil)lH-pirrol-2-carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0058
40/265
Figure BRPI0108394B1_D0059
15 (3-Dietilamino-propil) amida de ácido 5-(5-metoxi-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carbóxilico
16 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(6-metoxi-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carbóxilico
17 (2-Dietilamino-etil)amida de ácido 3-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol- 3-ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro- 2 H-i soindol-1-carbóxilico
18 ô (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 3-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1carboxílico
19 ò (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 3 -(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-lcarboxílico
20 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 3-(2-oxo-6-piridin-3-il-l,2diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoin-dol-lcarboxílico
(0 /
41/265
21 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
22 (3-Morfolin-4-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
23 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-3-metil-5-(2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)lH-pirrol-2-carboxílico
24 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
42/265
Figure BRPI0108394B1_D0060
25 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-3-metil-5-(2-oxo6-fenil-l,2-diidroindol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-2carboxílico
26 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(6-metoxi-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3 metil-lH-pir-rol-2-carboxílico
27 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-metoxi-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pir-rol-2-carboxílico
28 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-fluoro-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3meti-lH-pir-rol-2-carboxílico
29 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3- metil-lH-pirrol-2-car-boxílico
30 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
31 Η (3-Morfolin-4-ilpropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo- 1,2-diidroindol-3 -ilidenometil)-3 - metil-lH-pirrol-2-car-boxílico
Figure BRPI0108394B1_D0061
43/265
32 Ο (3-Hidroxipropil)amida de ácido 4-
acetil-5-(5-bromo-2-oxo-l,2-
diidroindol-3-ilidenometil)-3-
metil-lH-pirrol-2-carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0062
33 (2-Hidroxietil)amida de ácido 4acetil-5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
34 (2-Morfolin-4-iletil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3metil-lH-pirrol-2-carboxílico
35 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3- metil-lH-pirrol-2-car-boxílico
36 [2-(4-Hidroxifenil)etil]amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3 metil-lH-pirrol-2-carboxílico
37 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxílico
38 %r° ‘'Crp^ (3-Pirrolidin-1-ilpropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-
Figure BRPI0108394B1_D0063
44/265
carboxílico
39 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2-diidroindol3-ilidenometil)-2-isopropil-4fenil-lH-pirrol-3-carboxílico
40 [3-(4-Metilpiperazin-l- il)propil]amida de ácido 5-(5bromo-2 -oxo-1,2 -di idro indo1-3ilidenometil)-2-isopropil-4-fenillH-pirrol-3-carboxílico
41 Ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2isopro-pil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxílico
42 2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxílico
43 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxílico
45/265
44 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2-diidroindol3-ilidenometil)-2-metil-4-fenillH-pirrol-3-carboxilico
45 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil]-2metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxílico
46 Éster etílico de ácido 5-(5-bromo- 2-oxo-l,2-diidroindol-3- ilidenometil)-2-metil-4-fenil-1Hpirrol-3-carboxilico
47 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxilico
48 (2-Dimetilamino-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxi1ico
49 O M (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6-fenil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-3-carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0064
46/265
50 (2-Dimetilamino-etil)amida de ácido 5-(5-cloro-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
51 yJ-B (2-Dietilamino-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico
52 (2-Pirrolidin-l-il-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
53 (3-Imidazol-l-il-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
54 1 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil]-2,4- dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
55 ,0 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(3-metoxifenil)-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
56 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-5-fenil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-3-carboxílico
47/265
57 (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-5fenil-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
58 (3-Imidazol-l-ilpropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-5fenil-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
59 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6-fenil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-3-carboxílico
60 CrC^ (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
61 (3-Imidazol-l-ilpropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometol)-lH-pirrol-3carboxílico
62 ClçjXK Cl (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(3,5-diclorofenil)-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
48/265
Figure BRPI0108394B1_D0065
63 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6-piridin-3il-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
64 O (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-ΟΧΟ-6piridin-3-il-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0066
65 (3-Dimetilaminopropil) amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-ôpiridin-3-il-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
66 H (3-Dimetilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-5fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboílico
67 O kl h (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-OXO-5fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
68 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-ΟΧΟ-6fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3-
49/265
Figure BRPI0108394B1_D0067
carboxílico
69 (3-Cloro-4-metoxifenil)amida de ácido 3-[4-(3-dietilaminopropilcarbamoil)-3,5-dimetil-lHpirrol-2-ilmetileno]-2-oxo-2,3diidro-lH-indol-4-carboxílico
70 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l, 2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
71 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol- 3-ilidenometil)-2,4-diisopropillH-pirrol-3-carboxílico
72 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l, 2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4diisopropil-lH-pirrol-3 carboxílico
73 H (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4diisopropil-lH-pirrol-3 carboxílico
50/265
Figure BRPI0108394B1_D0068
74 (Piridin-4-ilmetil)-amida de ácido 5 -(5-bromo-2 -oxo-1,2 -di idroindo1- 3-ilidenometil)-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxílico
75 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(4-butilfenil)-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil]- 2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
76 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(5-isopropil-2metoxifenil)-2-oxo-l, 2diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
77 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(4-etilfenil)-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil]- 2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
78 ç N--^ 1 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(2,4-dimetoxifenil)-2oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil]-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico
79 q J^· (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(3-isopropilfenil)-2oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil]-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico
51/265
Figure BRPI0108394B1_D0069
Figure BRPI0108394B1_D0070
Figure BRPI0108394B1_D0071
/// (2-Dietilamino-etil)amida de ácido
5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico
81 o N-x OH M Ácido 3- [4- (2- dietilaminoetilcarbamoil)-3,5dimetil-lH-pirrol-2-ilmetileno]-2oxo-2,3-diidro-lH-indol-6carboxílico
82 o N 2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-(5-dimetilsulfamoil-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
83 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5- [5-(3- clorofenilsulfamoil)-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
84 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-[2-oxo-5(piridin-3-ilsulfamoil)-1,2diidroindol-3-ilidenometil]-1Hpirrol-3-carboxílico
85 3- [3,5-Dimetil-4-(4- metilpiperazina-l-carbonil)-1Hpirrol-2-ilmetileno]-4-(2hidroxietil)-1,3-diidroindol-2-ona
52/265
86 Fenilamida de ácido 3-[3,5- dimetil-4-(4-metilpiperazina-lcarbonil)-lH-pirrol-2-ilmetileno]2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-5sulfônico
87 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5 -(5-dimet i1sulfamoi1-2 -oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
88 c! Q í-f -¾^ (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-[5-(3-clorofenilsulfamoil)-2oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil]-2,4-dimetil-lHpirrol-3 -carboxí1ico
Figure BRPI0108394B1_D0072
89 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 3-[5-bromo-2-oxo-1,2-diidroindol- 3-ilidenometil]-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-l-carboxílico
90 oA Éster etílico de ácido 3-(2-oxo- 1,2-diidroindol-3-ilidenometil]- 4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1carboxílico
91 Éster etílico de ácido 3-(4-metil- 2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil]-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-l-carboxílico
53/265
Figure BRPI0108394B1_D0073
Figure BRPI0108394B1_D0074
92 Éster etílico de ácido 3-(5-bromo- 2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil]-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carboxí1ico
93 Ácido 3-(3-etoxicarbonil-4,5,6,7tetraidro-2H-isoindol-lilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-5-carboxílico
94 Éster etílico de ácido 3-(5metoxi-2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil]-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carboxílico
95 Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-5fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carboxílico
96 -%A Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-5sulfamoil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carboxílico
97 Éster etílico de ácido 3-(5- metilsulfamoil-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-lcarboxílico
98 Éster etílico de ácido 3-(5dimetilsulfamoil-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1-
54/265
Figure BRPI0108394B1_D0075
Figure BRPI0108394B1_D0076
carbóxilico
99 %Α Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-5fenilsulfamoil-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carbóxilico
100 Éster etílico de ácido 3-(6-bromo- 2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carbóxilico
101 -Ρ Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-l-carboxílico
102 Ácido 3-(3-etoxicarbonil-4,5,6,7tetraidro-2H-isoindol-lilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-6 -carbóxilico
103 Éster etílico de ácido 3-(6metoxi-2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-l-carboxílico
104 Αλ r<X<»0 ”iCXl· °t Éster etílico de ácido 3-(5- isopropilsulfamoil-2-oxo-l, 2diidroindol-3-ilidenometil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-lcarboxílico
55/265
Figure BRPI0108394B1_D0077
105 Ácido 3-(3-metilcarbonil-4,5,6,7tetraidro-2H-isoindol-1ilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-5-carboxí1ico
106 ? rW ° A Ácido 3-(3-dimetilcarbonil- 4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-l- ilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lH- indol-6-carboxí1ico
107 •VÂ Ácido 2-oxo-3-[3-(pirrolidina-1carbonil)-4,5,6,7-tetraidro-2Hisoindol-l-ilmetileno]-2,3-diidrolH-indol-5-carboxílico
108 Ácido 3-(3-morfolina-4-carbonil)4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1ilmetileno]-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-5-carboxílico
109 Ácido 3-[3-(morfolina-4-carbonil)- 4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-lilmetileno]-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-6-carboxílico
110 Metilamida de ácido 3-(3-bromo-2oxo-l,2-diidro-indol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro2H-isoindol-1-carboxílico
111 Dimetilamida de ácido 3-(5-bromo- 2-oxo-1,2-diidro-indol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro- 2H-isoindol-1-carboxílico
56/265
Figure BRPI0108394B1_D0078
112 5-Bromo-3-[3-(pirrolidina-1carbonil)-4,5,6,7-tetraidro-2Hisoindol-l-ilmetileno]-1,3-diidroindol-2-ona
113 τχί?; 5-Bromo-3-[3-(morfolina-4- carbonil)-4,5,6,7-tetraidro-2Hisoindol-l-ilmetileno]-1,3-diidroindol-2-ona
114 oçCX^' o Ácido 3-(3-dimetilcarbamoil4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-lilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-6-carboxí1i co
115 Ácido 4-metil-5-(5-metilsulfamoil- 2-oxo-1,2-diidro-indol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
116 O · Éster etílico de ácido {[4-metil- 5-(4-metil-5-metilsulfamoil-2-oxo- 1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)lH-pirrol-3-carbonil]-amino}acético
117 Éster etílico de ácido {[4-metil- 5-(5-metilsulfamoil-2-oxo-l,2di idro-indol-3 -i1idenomet i1)- 1Hpirrol-3-carbonyl]-amino}-acético
118 Ácido {[4-metil-5-(5metilsulfamoil-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carbonil]-amino}-acético
57/265
Figure BRPI0108394B1_D0079
119 Metilamida de ácido 3-[3-metilo4(piperidina-l-carbonil)-1Hpirrol-2-ilidenometil]-2-oxo-2,3diidro-1H-indol-5-sulfônico
120 Ácido 5-metil-2-(2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
121 Éster etílico de ácido 5-metil-2- (2-oxo-l,2-diidro-indol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
122 Éster etílico de ácido 2-(5-bromo- 2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-5-metil-lH-pirrol-3carboxílico
123 Ácido 2 -(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-5metil-lH-pirrol-3-carboxílico
124 »~γ·Ο •a^ (2-Pirrolidin-l-iletil)-amida de ácido 2-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-5metil-lH-pirrol-3-carboxílico
125 A (2-Dietilaminoetil)-amida de ácido 2- (5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol- 3- ilidenometil)-5-metil-lH-pirrol- 3-carboxílico
58/265
126 ^ch, 9 ,Ν Λν7^ Μη, H . A <*3 cVx H ( T >° H (2<ieülaTriroetil)aiidacleáci± 2,4dmEbl-5{2<K>1,2-ciidOin±l43dlidenaTíEtil)-1HprTd-3cartrwlico 381 [MU]
127 rCH3 Q N ^CH3 Cl # hl CH 3 H H (2<ietilsmrTD€til}aTricfacteáa± 5(5dcra2-£M>1,2-dick>in±l-3 ilidenrretiiy^4dnEhl-1HprrclSotodlioo 415 [MU]
123 HC V 3 >—f H /«'TH, [ΓΎ>οΗ H (2-pndidM-etil)-aTicàcteádcb ^4dmetil-5{2-<M>1,2-dick> in±IOdlideraifçtil)-1HpiTCl-3catodlioo 379[MU]
129 HC V __Ό 3 \Λ~Ν fyyCo^ CH3 \An H (2-pndidM-il-etil)-cmdacte ácicb^Sfluic^-oo-l^-dicto· iirU-3ilidenoTíEhiy^4diTrEhl-1F pnd^kHbcNlioo 397 [MU]
130 Hp IjpJMj ri # NCH, cyV! h H (2-pndidn-1-il-diiy6nicfede áadD5(5dao-2-CM>1,2-dick)· in±l^li(±rOTíEtil}-^4drnEíil-1lpnd-3cartrM'lioo 413 [MU]
131 ÇH, 0 z n'CH, CH3 LT>° H (2-dmetila7Írcdil}aTÍcfecb áddo^4dmBtil-5{2-o©-1,2· dich^rctí<3ilideraTEtil)-1H· piid-3<srtrxflÍGO 363 [MU]
132 Q CH, kí (H yyQ Xs^N H (2<imetilamnodil)-aTÍcfecfe áacb5(5flLDO-2-o©-1,2-didOindj-3ilictrTTTEÜl}-2,4drnetil-1H pnd-3cartxxílioo 371 [MU]
Figure BRPI0108394B1_D0080
59/265
133 0 N ch3 οχ Π CH3 1 JO=° Η (2-acetilamino-etil)-amida de ácido 5-[5cloro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-1/7-pirrol-3carboxílico 399 [M-1]
134 Η ru 0 Ν θΗ3 00^0 X ΟΧ -Vs-O CHs ι τ >ο Η (2-acetilamino-etil)-amida de ácido 5-[5fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3carboxílico 383 [M-1]
135 Η ru 0 N^,CH3 Ο-ΛιΟ X οχ /νθ η CH> υοο Η (2-acetilamino-etil)-amida de ácido 2,4dimetil-5-[2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-1H-pirrol-3-carboxílico 365 [M-1]
136 ηΟν Ο ΟΧ Η R. Γ N^CHj Β'χ,χ^Ο Η 3 ΤΙ >° Η [3- (2-oxo-tetraidro-pirimidin-1 -i I )-propil]amida de ácido 5-[5-bromo-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil1 H-pirrol-3-carboxílico 500 [M+1] 502 [M+1]
137 ΗΟ« ο ci-^^Oh CH* Ll^° Η [3- (2-oxo-tetraidro-pirimidin-1 -il)-propil]amida de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil1 H-pirrol-3-carboxílico 454 [M-1]
138 Χ“ CH3 Τ 13=° Η [3- (2-oxo-tetraidro-pirimidin-1 -il)-propil]amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil1 H-pinol-3-carboxílico 438 [M-1]
139 Ο8 ° ,^τ-Ο · 1 >=ο [3- (2-oxo-tetraidro-pirimidin-1 -i l)-propi I]amida de ácido 2,4-dimetil-5-[2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-1 H-pirrol-3carboxílico 422 [M+1]
140 X» Η’Ο Ο / N^CHj OOOO H 1 I >0 H [3- (2-oxo-tetraidro-pirimidin-1 -i l)-propil]amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil1 H-pirrol-3-carboxílico 447 [M+1]
141 O ò o nS HO~n »x^_OX°H’ f? XX>» ;h“· H F trifluoro-acetato de 4-[2-({5-[5-bromo-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-1H-pirrol-3-carbonil}-amino)-etil]2-oxo-piperazin-1 -io 486 [M+1] 488 [M+1]
60/265
142
Figure BRPI0108394B1_D0081
Figure BRPI0108394B1_D0082
143
144
145
146
147
148
149
150
H cHa 1 t >° H [3-(2-oxo-pirrolidin-1-il)-propil]amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2 diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-1 H -pirrol-3-carboxílico 430 [M-1]
r> o. V/S ° Rr / N^CHa B Ύ^τν_ H N H [2-(2-oxo-imidazolin-1-il)-etil]-amida de ácido 5-[5-bromo-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico 470 [M-1] 472 [M-1]
Gh ο. ^>N-/ ^xA-n^ 0 JY H clY^rO L Γ >=° H [2-(2-oxo-imidazolin-1-il)-etil]-amida de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil- 1 H-pirrol-3-carboxílico 428 [M+1]
r> 0 __ Ν-Λ HA L'-- o JY H CH’ 1 I >=o \í=^N H [2-(2-oxo-imidazolin-1-il)-etil]-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil- 1 H-pirrol-3-carboxílico 412 [M+1]
Ah o ΗίΟνγ-Ν 0 An^ch. γτΆ-Λ h í T >=° \?^-N H [2-(2-oxo-imidazolin-1-il)-etil]-amida de ácido2,4-dimetil- 5-[2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-1Hpirrol-3-carboxílico 392 [M-1]
0 __ ,N-7 CHaX- X N c H 3 H [2-(2-oxo-imidazolin-1-il)-etil]-amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil1 H-pirrol-3-carboxílico 419 [M+1]
h3c Rr Π N^CH3 1 T >=0 \í^N H éster etílico de ácido {4-[2-({5-[5- bromo-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometol]-2,4-dimetol-1/7-porrol3-carbonil}-amino)-ethil]-piperazin-1il}-acético 558 [M+1] 560 [M+1]
H,C A N^-o H0 °« AV & 3 y_/~N clYVv ” CH’ \Ã-N H éster etílico de ácido {4-[2-({5-[5- cloro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometol]-2,4-dimetol-1H-porrol3-carbonil}-amino)-ethil]-piperazin-1il}-acético 514 [M+1]
H,C XXX°H éster etílico de ácido {4-[2-({5-[5fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometol]-2,4-dimetol-1H-porrol3-carbonil}-amino)-ethil]-piperazin-1iB-acético 498 [M+1]
Figure BRPI0108394B1_D0083
61/265
0 hH rvO LI>° H [2-{daOiEtil-aTino}dil}^Ticfecte ád(b24<ínretil-5{2<K>1^ (^licÉrrnebQ-IHpiidákHtiMlira 362 [M1]
Jih Br Z .7 B “b uh H [3{2<»oezEpen4l)fr^l]-aTÍcà^ ádcb5{5ban>2<>í>12<iick>indd(3^licUiTiietil}-2,4dmEbl-1l4piTCl-S catodlioo 511 [M-1] 513 [M-1]
O wU) uTÍ Clxz^jh Η ϊ Γ>° Un H |3{2<M3ezEp0rHl)-p^í}aTíicfe cte ádcb5{5da^2<»o12<íidoindd(^hcÉTTTetil>2,4dmEbl-1l4prTd-3catodlioo 469 [MU]
Jv Yyw LA-n H |3(2αο®ΕρθΤΉΐ)-ρφΙ}^ΤΊώ cte ádcb5{5flixiu2<M>1,2-dicfcHiTtí(3^1i(ferriTtil}-2,4dmetil-1Hpiid^ catodlico 453 [MU]
Jv rrv \hN H [3{2<rc>€EEpErril}pqaO-0mcfecte áod32,4dn^bl-5{2<>o-12<íidi>i^ (3^licferairEtil]-1Hpitá^ 435 [MU]
0 üu) JYH U Λ f nU U/V\ H 1 )=o Un H [3{2<K>aEpeNI)fnq3l}€r^ cte ádcb5{5daT>-2<x>12-<iicfcHrxtl(3Z>4lidmcjTiBtil]-2,4-<imetil-1Hpm2i-3cafrNlioo 460 [MU]
TO A kuõ UIZ 2/ )—\=^o °c (2-aoetilaTirc>€til}€mcbcfeácicb5{5boifD-2<»«>12<iidDÍn±l-(3^ilicferrnretil]-^4dnftíl-1Hpnd-3· catxwlioo 443 [M-1] 445 [M-1]
Figure BRPI0108394B1_D0084
62/265
Figure BRPI0108394B1_D0085
160 0 F'O-'C? * CH U~N>0 O [A°» trifluoro-acetato de 4-[2-({5-[5-fluoro-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil}-amino) etil]-2-oxo-piperazin-1 -io 426 [M+1]
161 0 Π’Ο-/ A0Hi UA0 o 15 trifluoro-acetato de 4-[2-({2,4-dimetil-5[2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-1/-/-pirrol-3-carbonil}amino)-etil]-2-oxo-piperazin-1 -io 408 [M+1]
162 CH NC. >*Γ-^/η'°Η3 òH ;Aoh trifluoro-acetato de 4-[2-({5-[5-ciano-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil}-amino) etil]-2-oxo-piperazin-1 -io 433 [M+1]
163 0 H3C IJL Vo H N N H CH3 [2-(2-ciano-etilamino)-etil]-amida de ácido 5-[5-bromo-2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxílico 454 [M-1] 456 [M-1]
164 n3c Jn PI _ # 1 T >° H H 2 0 N-~^Z A“N H ^•CHg [2-(2-ciano-etilamino)-etil]-amida de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1 H-pirrol3-carboxílico 410 [M-1]
165 H3C Al p „ ÍT N T Γ >=o H 3 ,__ζΒ^Ζ '‘CHa [2-(2-ciano-etilamino)-etil]-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol (3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol3-carboxílico 394 [M-1]
166 0 H3C lí _ ÍT N γΓ^τΛ . .. h í T >=0 H ch3 [2-(2-ciano-etilamino)-etil]-amida de ácido 2,4-dimetil-5-[2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-1H-pirrol-3carboxílico 376 [M-1]
167 H3C T T >o H ϋ 0 Z~N H ^0Η3 [2-(2-ciano-etilamino)-etil]-amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol3-carboxílico 401 [M-1]
168 O H’cv>-N αγγν CH1 H °KH o ^,Ν·Ά E? ;Z°H trifluoro-acetato de 4-[2-({5-[5-cloro-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]2,4-dimetil-1H-pinOl-3-carbonil}-amino) etil]-2-oxo-piperazin-1 -io 440 [M-1]
63/265
Figure BRPI0108394B1_D0086
168 0 1 k H lí N CH, X Γ >° H [2-{4<netilpperazin-1-il)-etil]-arrida de áddo 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-didro-indd-3ilidenorreti l)-2,4-dimetil-1 Hpirrd-3carboxílico 424 [M-1]
169 o // \\ H CH, αχ^Α H X Γ >° H [2-(4-metilpiperazir>-1-il}-etil]-arrida de áddo 5-[5-doro-2-oxo-1,2-d idrO-indd-(3Z)ilidenometi l]-2,4-dímetil-1 H-piird-3cartxjxílico 440 [M-1]
170 0 h3cvAn^n^ // \\ H /An CH, Br^^-7/ H X X>° \ZN H [2-(4-mdilpiperazin-1-il)-etil]-arrida de áddo 5-[5-brorro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenornetil]-2,4-di metil-1 H-pirrd-3carboxílico 484 [M-1] 486 [M-1]
171 9 rC // \\ H !Γ H 05=° H [244-metilpiperazin-1-il)-etil]-amda de áddo 2,4-d rrebl-5-[2-oxo-1,2-dido-indd-(3Z}- il idenometil]-1 H-pirrd-3-cartnxílioo 406 [M-1]
172 X3 0 ρ'ΝΗ Ar^ CH= Γχ>° \An H [2-(3,5-dimetil-piperazin-1 -il)-etil]-arrida de áddo 5-[2-oxo-1,2-cfiidro-indol-(3Z)ilidenometil]-1 H-pi nd-3-catoxílico 422 [MH]
173 CH, ο Λ» Ví—h / N CH, Fx/V H ϊΏ=ο H [2-(3,5<ímdil-piperaai>1-il)-etil]-amda de áddo 5-{5-Αιχτο-2-οχο-1,2-düdO-índol-(3Z}il idenorreti l]-2,4-di metil-1 H-pirrd-3cartjoxílico 438 [M-1]
174 CH, ο Λη ^>Λ^ν·Ά /Wh, Clx^X H I X >° \A~n H [2-{3,5-diTEtil-pperazin-1-il)-eíil]-amda de áddo 5-[5-doro-2-Qxo-1,2-didrcHndd-(3^ilidenomeül]-2,4dnnetil-1 H-pirrd-3cartxsálioo 456 [MU]
175 X3 0 h lí N CH. Br-V^sX H I T>° [2-(3,5-di rreiil-piperazin-1-il)-Gíil]-anída de áddo 5-[5-brorro-2-oxo-1,2-diicto-indd-(3Z)ilidenometi l]-2,4d rretil-1 H-pirrd-3catjoxílioo 498 [M-1] 500 [M-1]
Figure BRPI0108394B1_D0087
64/265
176 Hp Η rVL η Ο>° Η [3{4HTTetil-ppetB0i>1-il)früpil]amdadeádcb2,4-cirretil-5-[2cw>1,2-dick>indd-(3^-ilicferD· metil]-1HpiTd-3€srtrwlioo 422 [MH]
177 ο ζ~ν^ν ΗΡ. Αν JkΗ w=° Η [3{4n^l-piperaai>1-il)-prcpil]anrida de ádcb-5{5flLm>2-CM> 1,2dicfcHndd-(3^lident>ntíil]24άπΈΐίΜΙ-Ηιπύ-3<3ΐχΜΊΐω 438 [M-1]
178 Ο κρ Κν JYΗ CIx/vJN I Γ>° Η [3(4nEfil-ppefaziiTl4l)fropil]arrida de ádcb-5{5daO-2-CMD1,2didoindd-{3^liderDnretil}2,4dnrtil-1Hpird-3€arixKlico 454 [Md]
179 ο /^ν7^ Ηρ V^-CH, Jt η I I >° Η [3{4ntíil-piperazin-1-il)-pOpil]anidadeáado-5{54juTrD-2<M] 1,2dick>iixlol-(3^ilidencHnetil]^4dmetik1l-H3rid-3<2ft]CKlioo 488 [M-1] 500 [M1]
180 (-fO 0 ,Ν-/ νΓ crO ΙΑ>° [244-berzil-pipera3rh1-il)-etil]arrida de ádcb 2,4d rretil-5{2a©-1^dick>incbl-(3^ilidenaiEtil]-1FApnd-3· catoálioo 482 [M-1]
181 (''tQ Q nV ργγζτ°* Η [244tenál-piperazin-1-il>etil]arrida de ádcb 5-[5-flLno-2-axr> 1,2didOHndaH3^lidercnEtil}2,4dmstil-1Hpnd-3<2rtxMlioo 500 [M-1]
182 0 Ν-/ /1 OvyQn U/° [2{4tenzil-pperazin-1-il}elil}arrida de ádcb 5-[5dai>2-cx> 1,2didoindoH^liderxTnetil]2,4dnTetik1H43nd-3<zrtiw1icD 517 [M-1]
183 {''(Ο 0 .'n-2 MAj-V'' JYH ΒΓνγ0 \^N H [2(4benzil-piperaán-1-il}€til}anicbcbádcb5{5bnn>2-oo· 1,2dick>iiTÍoH^ilidenTnetil]^4dnfEtik1l4prTd-3cari3CMliaD 560 [M1] 562 [M-1]
Figure BRPI0108394B1_D0088
65/265
184 h3c. cx Η zv H 0 3 *ch3 CH. _NX 0 (3-pirrolidin-1-il-2-ona)-amida de ácido 5-[5cloro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]· 2,4-d im etil-1H -pirrol-3-carboxíl ico 480 [M+1]
h3c xp Ν' ο Λ trifluoroacetato de 4-[2-({5-[5-cloro-2-oxo-1,2
185 ch3 diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H- 440 [M-1 ]
C'O -« = 0 CF3C02H pirrol-3-carbonil}amino)-etil]-2-oxo-piperazin- 1-io
h3c 0 O Nô
186 θΙ-χ/χ. J N H ch3 (3-pirrolidin-1-il-2-ona)-amida de ácido 5-[5-
M N =0 cloro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]·
H 2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
H.A C Ρχ W (3-pirrolidin-1-il-2-ona)-amida de ácido 5-[5-
187 jT XN H ch3 fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-
XX N 0 ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-
H carboxílico
H c^. / 0 X x° tr^c
188 Ί N CN3 (3-pirrolidin-1-il-2-ona)-amida de ácido 5-[2-
í x >=0 oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-
H dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico
189 h3c [í H Â jO N ch3 (2-piridin-2-iletil)-amida de ácido 5-[5-cloro-2-
XJ = 0 cf3co2h oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-
H dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico
h3c ZA X ffl sal (2-piridin-2-iletil)-amida trifluroracetato de
190 í H ^ch3 ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-
O = 0 cf3co2h ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-
H carboxílico
H 3C. ll < ΧΊ] sal (2-piridin-2-iletil)-amida hidrocloreto de
191 í N H ch3 ácido 5-[2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-
\=( 3 CIH ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-
l· carboxílico
192 h3c X /O sal (2-piridin-2-iletil)-amida trifluroracetato de
Brx N H ácido 5-[5-bromo-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-
iítl N = 0 CF3CO2H ilidenometil]-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-
carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0089
66/265
Figure BRPI0108394B1_D0090
193 Λ Η ^-οη, Ι τ >=° Η (2-etilaminoetil)-amida de ácido 5-[5fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-1 /-/-pirrol-3carboxílico
194 Ο ΝΗ, hAXn^ fyy%o CH3 Η (2-aminoetil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2 oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4d imetil-1 H-pirrol-3-carboxílico
195 CHa (2-dietil-N-oxoaminoetil)-amida de ácido 5 [5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3carboxílico
196 F c H 3 íí (2-etil-N-hidroxi-aminoetil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3carboxílico
197 0 F', h3c V H OH YyO CH’ H (2-dietilamino-2-hidroxietil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-1H-pirrol-3-carboxílico
198 r* H3Cy / OH F Λ Γ>Αοη3 γ^τΛ^θκ Η [2-etil-2-(2-hidroxietil)-aminoetil]-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3carboxílico
199 q r~ h’cv>nÇ Fn>o CHi M-tf0 [2-etil-2-(1-hidroxietil)aminoetil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3carboxílico
200 H H3<vk XV H 0 NC J/ ü CH= lí T >° H (2-N-acetilaminoetil)-amida de ácido 5-[5ciano-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3carboxílico
201 HscX.N^COaH F^JTCH’ Ϊ I >=° (carboximetil)-amida de ácido 5-[5-fluoro2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
67/265
202 o H H3CvKN^N^^OH H [2-(2-hidroxetilamino)etil]-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-1H-pirrol-3-carboxílico
203 o * OHi ° CF3CO2H (2-piridin-2-iletil)-amida trifluoroacetato de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-1/-/-pirrol-3-carboxílico
204 0 0 ό Br^^Píj CH3 T H (3-pirrolidin-1-il-2-onapropil)-amida trifluoroacetato de ácido 5-[5-bromo-2-oxo 1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-1/-/-pirrol 3-carboxílico
compostos correspondem números aos números
Figure BRPI0108394B1_D0091
Figure BRPI0108394B1_D0092
Figure BRPI0108394B1_D0093
Exemplos na seção de Exemplos. Isto
Figure BRPI0108394B1_D0094
/
Figure BRPI0108394B1_D0095
síntese
Figure BRPI0108394B1_D0096
Os
Composto na Tabela 1 está descrita no
Exemplo 1.
compostos apresentados
Figure BRPI0108394B1_D0097
Figure BRPI0108394B1_D0098
Figure BRPI0108394B1_D0099
são
Figure BRPI0108394B1_D0100
exemplificativos e não se destinam a limitar de qualquer modo o âmbito desta invenção.
MODALIDADES PREFERIDAS
Embora a definição mais abrangente seja mencionada no
Sumário da Invenção, alguns compostos de Fórmula (I) preferidos.
(D (2) (3) (4) (5) (6)
Um grupo preferido de compostos de Fórmula aquele
Outro aquele
Outro aquele
Outro aquele
Outro aquele
Ainda (I) em que R1, R3 e grupo preferido em que R1, R2 e grupo preferido em que R1, R2 e grupo preferido em que R2, R3 e grupo preferido de compostos de Fórmula
R4 são hidrogênio.
de compostos de Fórmula de compostos de Fórmula de compostos de Fórmula em que R1, R2, R3 e R4 são hidrogênio.
(I) (I) (I) (I) outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R5, R6 ou R7, de preferência R5 ou
Figure BRPI0108394B1_D0101
68/265
Figure BRPI0108394B1_D0102
R6, mais preferivelmente R6 é -COR10 onde R10 é -NR11 (CH2) nR12 onde:
R11 ê hidrogênio ou alquila inferior substituída, de preferência hidrogênio ou metila;
n é 2, 3 ou 4, de preferência 2 ou 3 e alquila, mais preferivelmente alquila inferior
R12 é -NR13R14 onde R13 e R14 são independentemente substituída ou R13 e R14 combinam-se para formar um grupo selecionado a partir de -(CH2)4-, -(CH2)5-, - (CH2)2-O- (CH2)2- ou -(CH2)2N(CH3) (CH2)2-, preferivelmente R13 e R14 são independentemente hidrogênio, metila, etila, ou combinam-se para formar morfolin-4-ila, pirrolidin-l-ila, piperazin-l-ila ou 4-metilpiperazin-l-ila.
Mais preferivelmente, R5 ou R6 em (6) é N-(2dimetilaminoetil)aminocarbonila, N-(2-etilaminoetil)N-metilaminocarbonila, N-(3-dimetilaminopropil)aminocarbonila, N-(2-dietilaminoetil)aminocarbonila, N-(3etilaminopropil)aminocarbonila, N-(3-dietilaminopropil) aminocarbonila, 3-pirrolidin-l-ilpropilaminocarbonila, 3-morfolin-4-ilpropilaminocarbonila, 2pirrolidin-l-iletilaminocarbonila, 2-morfolin-4-iletilaminocarbonila, 2-(4-metilpiperazin-l-il)etilaminocarbonila, 2-(4-metilpiperazin-l-il)propilaminocarbonila, 2-(3,5-dimetilpiperazin-l-il)etilaminocarbonila ou 2-(3,5-dimetilpiperazin-l-il)propilaminocarbonila, ainda mais preferivelmente N- (2dietilaminoetil)aminocarbonila ou N-(2-etilaminoetil) aminocarbonila.
(7) Ainda outro grupo preferido de compostos de Fórmula
Figure BRPI0108394B1_D0103
69/265
Figure BRPI0108394B1_D0104
(I) é aquele em que R5, R6 ou R7, de preferência R5 ou R6, mais preferivelmente R6 é -COR10 onde R10 é -NR13R14 onde R13 é hidrogênio e R14 é alquila, de preferência alquila inferior substituída por hidróxi, arila, heteroarila, heteroalicíclico ou carboxi, mais preferivelmente metila, arila, propila ou butila substituída por hidróxi, arila, heteroalicíclico tal como piperidina, piperazina, morfolina e similares, heteroarila or carboxi. Ainda mais preferivelmente dentro deste grupo (7), R5 ou R6 ê 2-etoxicarbonilmetil-aminocarbonila, carboximetilaminocarbonila, 3hidroxipropil-aminocarbonila, 2-hidroxietilaminocarbonila, 3-triazin-l-ilpropilaminocarbonila, triazin-
1-iletilaminocarbonila, 4-hidróxifeniletilaminocarbonila, 3-imidazol-1-ilpropilaminocarbonila, piridin4-ilmetilaminocarbonila, 2-piridin-2-iletilaminocarbonila ou 2-imidazol-l-iletilaminocarbonila.
(8) Ainda outro grupo preferido de compostos de Fórmula
Figure BRPI0108394B1_D0105
(I) ê aquele em que R5, R6 ou R7, de preferência R5 ou R6, mais preferivelmente R6 é -COR10 onde R10 é -NR11 (CH2) nR12 onde:
R11 é hidrogênio ou alquila, de preferência hidrogênio ou metila;
n é 2, 3 ou 4, de preferência 2 ou 3 e
R12 é -NR13R14 onde R13 e R14 se combinam para formar um heterociclo, de preferência um heterociclo de 5, 6 ou elementos que contém um grupo de carbonila e 1 ou 2 átomos de hidrogênio. De preferência, R5 ou R6 é 2(3-etoxicarbonilmetilpiperazin-1-il)etilaminocarboni30 la, 2-(3-oxopiperazin-l-il)etilaminocarbonila,
270/265 (imidazolidin-l-il-2-ona)etilaminocarbonila, 2-(tetraidropirimidin-l-il-2-ona)etilaminocarbonila, 2- (2oxopirrolidin-l-il)-etilaminocarbonila, 3-(4-metilpiperazin-l-il)-propilaminocarbonila, 3-(3-etoxicar5 bonilmetilpiperazin-l-il)propilaminocarbonila, 3-(3oxopiperazin-l-il)propilaminocarbonila, 3-(imidazolin-l-il-2-ona)propilaminocarbonila, 3-(tetraidropirimidin-l-il-2-ona)propilaminocarbonila, 3-(2-oxo-
Figure BRPI0108394B1_D0106
pirrolidin-l-il)propilaminocarbonila, 2-(2-oxoomopiperidin-l-il)etilaminocarbonila ou 3-(2-oxoomopiperidin-1-il)propilaminocarbonila.
(9) Ainda outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R5, R6 ou R7, de preferência R5 ou R6, mais preferivelmente R6 é -COR10 onde:
(a) R10 é -NR11 (CH2)nR12 onde:
R11 é hidrogênio ou alquila, de preferência hidrogênio ou metila;
n é 2, 3 ou 4, de preferência 2 ou 3 e
R12 é -NR13R14 onde R13 é hidrogênio e R14 é
20 cianoalquila ou -NHCORa onde Ra é alquila; ou
♦ (b) R10 é -NR13R14 onde R13 e R14 se combinam para
formar um heterociclo que não contém um grupo de
carbonila dentro do anel. De preferência, R5 ou R6 é
2-(2-cianoetilamino)etilaminocarbonila, 2-(acetil- amino)etilaminocarbonila, morfolinocarbonila, piperidin-l-il-carbonila, 2-cianometilaminoetilaminocar bonila ou piperidin-l-ilcarbonila.
(10) Outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R5 é -COR10 onde R10 é -NR13R14 onde R13 é 30 hidrogênio e R14 é alquila inferior substituída por
Figure BRPI0108394B1_D0107
71/265 hidróxi, alquila inferior substituída por hidroxialquilamino, carboxi ou -NR18R19 onde R18 e R19 são independentemente hidrogênio ou alquila inferior não-substituída, mais preferivelmente R5 é 25 [(dietilamino)-2-hidroxietil]aminocarbonila, 2-(Netil-N-2-hidroxietilamino)etilaminocarbonila, carboximetilaminocarbonila ou 2-(2-hidroxietilamino)etilaminocarbonila.
Figure BRPI0108394B1_D0108
Figure BRPI0108394B1_D0109
(11) Outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R6 é -COR10 onde R10 é -NR13R14 onde R13 é hidrogênio e R14 é alquila inferior substituída por hidróxi, alquila inferior substituída por hidroxialquilamino, carboxi ou -NR18R19 onde R18 e R19 são independentemente hidrogênio ou alquila inferior não-substituída; mais preferivelmente R6 é 2[(dietilamino)-2-hidróxi]etilaminocarbonila, etil-N-2-hidroxietilamino)etilaminocarbonila,
2- (Ncarboximetilaminocarbonila ou 2 -(2-hidroxietilamino)etilaminocarbonila.
(12) Ainda outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R5 é -COR10 onde R10 é
-NR11 (CH2) nR12 onde R12 é -N+(θ’) NR13R14 ou -N(OH)R13 onde
R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior não-substituída, preferivelmente R5 é 2 - (Nhidroxi-N-etilamino)etilaminocarbonila ou 2-[N+(0) (C2H5) 2] etilaminocarbonila.
(13) Ainda outro grupo preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que R6 é -COR10 onde R10 é
0 -NR11 (CH2) nR12 onde R12 é -N+ (O) NR13R14 ou -N(OH)R13 onde /1>
72/265
R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior não-substituída, preferivelmente R6 é 2-(Nhidróxi-N-etilamino)etilaminocarbonila ou 2-[N+(0~) (C2H5) 2] etilaminocarbonila.
(14)
Nos grupos preferidos acima (6)- (13) quando R5 for
-COR10, então um grupo mais preferido de compostos é aquele em que:
R6 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila, de preferência hidrogênio, metila, etila, isopropila, terc-butila, isobutila ou n-butila, mais preferivelmente hidrogênio ou metila
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, arila, heteroarila e -C (0) R17 onde R17 é hidróxi, alquila ou arila, mais preferivelmente hidrogênio, metila, etila, isopropila, n-, iso ou terc-butila, fenila, (15) benzoila, acetila preferivelmente metila,
Nos grupos preferidos ou carboxi, hidrogênio ou acima (6)-(13) ainda fenila.
quando mais
R5 for
-COR10, então outro grupo mais preferido de compostos é aquele em que R6 e R7 se combinam para formar
-(CH2)4-.
(16)
Nos grupos preferidos acima (6)-(13) quando R6 for
-COR10, então um grupo mais preferido de compostos é aquele em que:
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila, de preferência hidrogênio, metila, etila, isopropila, terc-butila, isobutila ou
Figure BRPI0108394B1_D0110
73/265 n-butila, mais preferivelmente hidrogênio ou metila
R7 é selecionado a em hidrogênio, alquila, partir do grupo que consiste arila, heteroarila e -C (O) R17 onde R17 é hidróxi, alquila ou arila, mais preferivelmente hidrogênio, metila, etila, isopropila, n-, iso ou terc-butila, fenila, benzoila, acetila ou carboxi, ainda mais preferivelmente metila, hidrogênio ou fenila.
(17) Dentro dos grupos preferidos e mais preferidos acima (6)-(16), um grupo ainda mais preferido de compostos é aquele em que:
R1 cicloalquila preferência hidrogênio, ou arila alquila,
-C(O)NR8R9, de hidrogênio, fenila, 3,4-dimetoxifenilaminocarbonila, 4-metoxi-3-clorofenilaminocarbonila, ainda mais preferivelmente hidrogênio ou metila, mais preferivelmente hidrogênio;
R2 é ciano, hidrogênio, halo, alcóxi inferior, arila ou -S (0) 2NR13R14 onde R13 é hidrogênio e R14 é hidrogênio, arila ou alquila, de preferência R2 é hidrogênio, cloro, bromo, flúor, metoxi, etoxi, fenila, dimetilaminossulfonila,
3-clorofenilaminossulfonila, carboxi, metoxi, aminossulfonila, metilaminossulfonila, fenilaminossulfonila, piridin-
3-il-aminossulfonila, dimetilaminossulfonila, iso- propilaminossulfonila, mais preferivelmente hidrogênio, flúor ou bromo;
R3 é selecionado a partir hidrogênio, alcóxi do grupo que consiste em inferior, -C(O)R15,
Figure BRPI0108394B1_D0111
74/265
Figure BRPI0108394B1_D0112
-NR13C (O) R14, arila, de preferência arila opcionalmente substituída por um ou dois substitutos selecionados a partir do grupo que consiste em alquila inferior, halo ou alcóxi inferior, e heteroarila, de preferência heteroarila opcionalmente substituída por um ou dois substitutos selecionados a partir do grupo que consiste em alquila inferior, halo ou alcóxi inferior; de preferência hidrogênio, metoxi, carboxi, fenila, piridin-3-ila, 3,4-diclorofenila, 2-metoxi-5isopropilfenila, 4-n-butilfenila, 3-isopropilofenil, mais preferivelmente hidrogênio ou fenila e
R4 ê hidrogênio.
(18) Outro grupo mais preferido de compostos de Fórmula (I) é aquele em que:
R1 é hidrogênio, alquila, -C(O)NR8R9, cicloalquila ou arila não-substituída, de preferência hidrogênio, 3,4-dimetoxifenilaminocarbonila, 4-metoxi-3-clorofenilaminocarbonila, ainda
Figure BRPI0108394B1_D0113
mais preferivelmente hidrogênio ou metila, mais preferivelmente hidrogênio;
R2 é ciano, hidrogênio, halo, alcóxi inferior, arila ou -S (0) 2NR13R14 onde R13 é hidrogênio e R14 é hidrogênio, arila ou alquila, de preferência R2 é hidrogênio, cloro, bromo, flúor, metoxi, etoxi, fenila, dimetilaminossulfonila, 3-clorofenilaminossulfonila, carboxi, metoxi, aminossulfonila, metilaminossulfonila, fenilaminossulfonila, piridin3-il-aminossulfonila, dimetilaminossulfonila, isopropilaminossulfonila, mais preferivelmente
Figure BRPI0108394B1_D0114
75/265 hidrogênio, flúor ou bromo;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alcoxi inferior, -C(O)R15, -NR13C (0) R14, arila, de preferência arila 5 opcionalmente substituída por um ou dois substitutos selecionados a partir do grupo que consiste em alquila inferior, halo ou alcoxi inferior, e heteroarila, de preferência heteroarila
Figure BRPI0108394B1_D0115
opcionalmente substituída por um ou dois substitutos selecionados a partir do grupo que consiste em alquila inferior, halo ou alcoxi inferior; de preferência hidrogênio, metoxi, carboxi, fenila, piridin-3-ila, 3,4-diclorofenila, 2-metoxi-5isopropilfenila, 4-n-butilfenila, 3-isopropilofenil, mais preferivelmente hidrogênio ou fenila e
R4 é hidrogênio.
Dentro do grupo preferido acima (18) um grupo mais preferido de compostos é aquele em que:
R5 é -COR10 onde R10 ê como definido no Sumário da
Figure BRPI0108394B1_D0116
Invenção, de preferência -NR11 (CH2) nR12 ou -NR13R14 como definido no Sumário da Invenção.
R6 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila, de preferência hidrogênio, metila, etila, isopropila, tec-butila, isobutila ou n-butila, mais preferivelmente hidrogênio ou metila e
R7 ê selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, arila, heteroarila e -C(O)R17 onde R17 é hidróxi, alquila ou arila, mais preferivelmente hidrogênio, metila, etila, isopropila, n-, iso ou terc-butila, fenila, benzoila,
Figure BRPI0108394B1_D0117
76/265
Figure BRPI0108394B1_D0118
acetila ou carboxi, ainda mais preferivelmente metila, hidrogênio ou fenila.
No grupo preferido acima (18) outro grupo mais preferido de compostos é aquele em que:
R6 é -COR10 onde R10 é como definido no Sumário da Invenção, de preferência -NR11 (CH2) nR12 ou -NR13R14 como definido no Sumário da Invenção.
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila, de preferência hidrogênio, metila, etila, isopropila, tec-butila, isobutila ou n-butila, mais preferivelmente hidrogênio ou metila e
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, arila, heteroarila e -C(O)R17 onde R17 é hidróxi, alquila ou arila, mais preferivelmente hidrogênio, metila, etila, isopropila, n-, iso ou terc-butila, fenila, benzoila, acetila ou carboxi, ainda mais preferivelmente metila, hidrogênio ou fenila.
(19) Outro grupo mais preferido de compostos de Fórmula
Figure BRPI0108394B1_D0119
(I) é aquele em que:
R1 e R4 são hidrogênio;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alcoxi inferior, -C(O)R15 e -S (O)2NR13R14;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alcoxi inferior, -C(O)R15 e —S (0) 2NR13R14, arila e heteroarila;
R5 é —C(O)R10;
R6 é selecionado a partir do grupo em hidrogênio e alquila inferior e que consiste
Figure BRPI0108394B1_D0120
77/265
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e -C(O)R17.
É outra modalidade presentemente preferida desta invenção que, em um composto que tem uma estrutura
Figure BRPI0108394B1_D0121
como descrito em (15):
R10 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidroxi, alcoxi inferior e - -NR1·1 (CH2)n pl2 K r onde
n é 2 ou 3;
R11 é selecionado a partir do grupo que consiste
10 em hidrogênio e alquila inferior e
R12 é selecionado a partir do grupo que consiste
em arila e -NR13R14.
modalidade presentemente preferida
E ainda uma que, em um composto que tem uma estrutura como descrito nos dois parágrafos anteriores, R13 e R14 se j am i ndependent ement e selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e, combinados, -(CH2)4-,
-(ch2)5-, - (ch2)20(ch2)2- ou -(ch2)2n(ch3) (ch2)2-.
Figure BRPI0108394B1_D0122
(20) Outra modalidade presentemente preferida desta invenção é um composto em que:
R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, -(CH2)rR16 e -C (O)NR8R9;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, arila e -S (O) 2NR13R14 ;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, alcoxi inferior, arila, heteroarila e -C(O)R15;
R4 ê hidrogênio;
78/265
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidrogênio e alquila inferior;
R6 é -C(O)R10;
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidrogênio, alquila inferior e arila;
R16 ê selecionado a partir do grupo que consiste
Figure BRPI0108394B1_D0123
em hidróxi e -C(O)R15 e r é 2 ou 3.
Uma modalidade presentemente preferida desta invenção é um composto que tem uma estrutura como descrito no parágrafo imediatamente acima no qual R3 é arila opcionalmente substituída por um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em alquila inferior, alcóxi inferior e halo.
(21) Do mesmo modo, é uma modalidade presentemente preferida desta invenção um composto em que:
R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, -(CH2)rRls θ -C (O)NR8R9;
Figure BRPI0108394B1_D0124
20 R2 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidrogênio, halogênio, arila e -S (0) 2NR13R 114 ;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidrogênio, alquila inferior , alcóxi inferior,
arila, heteroarila e -C(O)R15;
25 R4 é hidrogênio;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste
em hidrogênio e alquila inferior;
R6 é —C(O)R10;
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste
30 em hidrogênio, alquila inferior e arila;
79/265
Φ» %
R16 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi e -C(O)R15 r é 2 ou 3,
R10 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi, alcoxi inferior, -NR13R14 e -NR11 (CH2)nR12, onde n é
1, 2 ou 3, R11 é hidrogênio e R12 selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi, alcoxi inferior,
-C(O)R15, heteroarila
-NR13R14 (22) Uma modalidade adicional presentemente preferida desta um composto que tem uma estrutura como descrito no parágrafo imediatamente acima no qual
R3 e
R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, heteroarila e, combinados,
- (CH2)4-,
-(CH2)5-, - (CH2)2O(CH2)2- ou -(CH2)2N(CH3) (CH2)2-.
(23) Outra modalidade presentemente preferida desta invenção é um composto em que:
R1 é -C(O)NR8R9, onde R8 é hidrogênio e R9 é arila
Figure BRPI0108394B1_D0125
opcionalmente substituída por um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidróxi e alcoxi inferior;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, arila e -S (O) 2NR13R14;
5 R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, alcoxi inferior, arila, heteroarila e -C(O)R15;
R4 é hidrogênio;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior;
Figure BRPI0108394B1_D0126
80/265
R6 é -C(O)R10;
R7 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e arila;
R16 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi e -C (0) R15 e (24) Ainda uma outra modalidade presentemente preferida
Figure BRPI0108394B1_D0127
Figure BRPI0108394B1_D0128
desta invenção é um composto em que:
R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior;
R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alcóxi inferior, arila, -C(O)R15 e -S (0) 2NR13R14;
R3 ê selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, arila, heteroarila e -C(O)R15;
R4 ê hidrogênio;
R5 é -C(O)R10 e
R6 e R7 combinam-se para formar um grupo de
-(ch2)4-.
Em um composto que tem uma estrutura como descrita no parágrafo imediatamente acima, é uma modalidade presentemente preferida aquela em que R10 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi, alcóxi, -NR13R14 e -NH (CH2) nNR13R14 onde n é 2 ou 3 .
Uma modalidade presentemente preferida desta invenção é um composto que tem uma estrutura como descrito nos dois parágrafos imediatamente acima no qual R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila
Figure BRPI0108394B1_D0129
81/265 inferior e, combinados, -(CH2)4-, -(CH2)5-, (CH2)2O(CH2)2- ou -(CH2)2N(CH3) (CH2)
UTILIDADE
As PKs cuja atividade catalítica é regulada pelos compostos desta invenção incluem proteínas de tirosinas quinases das quais existem dois tipos, receptor de tirosinas quinases (RTKs) e tirosinas quinases celulares sinais mediados por extracelular com um
RTK fator (ligante), seguido pela é iniciada por de crescimento de específico receptor, transiente da atividade de proteína tirosina quinase intrínseca e fosforilação. Desse modo são criados locais de ligação para moléculas de transdução de sinais intracelulares que conduzem à formação de complexos com um
Figure BRPI0108394B1_D0130
espectro de moléculas de sinalização citoplásmicas que
facilitam a resposta celular apropriada (por exemplo,
divisão da célula, efeitos matabólicos sobre o
microambiente extracelular, etc. ) . Vide, Neuron 9:303-391
de Schlessinger e Ullrich, 1992.
Demonstrou-se que os locais de fosforilação da tirosina nos receptores de fator de crescimento funcionam como locais de ligação de afinidade elevada para domínios SH2 (homologia src) de moléculas de sinalização. Cell 25 69:413-423 de Fantel e outros, 1992, Mol. Cell. Biol.
14:2777-2785, Songyang e outros, 1994, Cell 72:767-778 de Songyang e outros, 1993 e Science 252:668-678 de Koch e outros, 1991. Foram identificadas diversas proteínas de substrato intracelular que se associam às RTKs. As mesmas 30 podem ser divididas em dois grupos principais: (1)
82/265 /Ο substratos que possuem um domínio catalítico e (2) substratos que não possuem tal domínio mas que servem de adaptadores e se associam com moléculas cataliticamente ativas. Cell 72:767-778 de Songyang e outros, 1993. A 5 especificidade das interações entre receptores e domínios
SH2 de seus substratos é determinada pelos resíduos de aminoácido imediatamente adjacentes ao resíduo de tirosina fosforilada. As diferenças nas afinidades de ligação entre
Figure BRPI0108394B1_D0131
domínios SH2 e as seqüências de aminoácidos em torno dos resíduos de fosfotirosina em receptores específicos são compatíveis com as diferenças observadas nos seus perfis de fosforilação de substrato. Cell 72:767-778 de Songyang e outros, 1993. Estas observações sugerem que a função de cada RTK é determinada não só pelo seu padrão de expressão 15 e disponibilidade de ligante mas também pelo conjunto de percursos de transdução de sinais a jusante que são ativados por um receptor específico. Sendo assim, a propicia uma etapa reguladora importante que determina a seletividade de percursos de recrutados por receptores de fator de crescimento específicos, bem como por receptores de fator de
As STKs, sendo principalmente citosólicas, afetam a bioquímica interna da célula, freqüentemente como uma 25 resposta a jusante a um evento PTK. As STKs têm estado envolvidas no processo de sinalização que inicia a síntese do DNA e subseqüente mitose conduzindo à proliferação das células.
Sendo assim, a transdução de sinais PK resulta, entre outras respostas, na proliferação, diferenciação,
Figure BRPI0108394B1_D0132
83/265 crescimento e metabolismo das células. A proliferação anormal de células pode resultar em um conjunto vasto de enfermidades e doenças, incluindo o desenvolvimento de neoplasia tal como carcinoma, sarcoma, glioblastoma e 5 hemangioma, enfermidades tais como leucemia, psoríase, artereoesclerose, artrite e retinopatia diabética e outras enfermidades relacionadas com angiogênese e/ou vasculogênese não controladas.
Figure BRPI0108394B1_D0133
Figure BRPI0108394B1_D0134
Não é necessário um entendimento preciso do mecanismo através do qual os compostos desta invenção inibem as PKs a fim de pôr em prática a presente invenção. Contudo, embora não estando por este meio limitado a qualquer mecanismo ou teoria, acredita-se que os compostos interajam com os aminoácidos na região catalítica das PKs. As PKs possuem tipicamente uma estrutura bilobulada em que ATP parece aglutinar-se na fenda entre os dois lóbulos em uma região em que os aminoácidos são conservados entre PKs. Acreditase que os inibidores das PKs se aglutinem por interações não covalentes tais como pontes de hidrogênio, forças de
Figure BRPI0108394B1_D0135
Van der Waals e interações iônicas na mesma região genérica onde o ATP mencionado anteriormente se aglutina às PKs.
Mais especificamente, acredita-se que o componente 2indolinona dos compostos desta invenção se aglutine no espaço genérico normalmente ocupado pelo anel de adenina de
ATP. A especificidade de uma molécula específica para uma
PK específica pode surgir então como resultado das interações adicionais entre os diversos substitutos da 2indolinona e nos domínios de aminoácidos específicos às PKs específicas. Sendo assim, substitutos de indolinona diferentes podem contribuir para a aglutinação preferencial
Figure BRPI0108394B1_D0136
84/265 a PKs específicas. A capacidade para selecionar compostos ativos em locais de aglutinação de ATP diferentes (ou outro nucleótido) torna os compostos desta invenção adequados para visar qualquer proteína com tal local. Os compostos 5 descritos aqui têm portanto utilidade em testes in vitro para tais proteínas além de exibirem efeitos terapêuticos in vivo através da interação com tais proteínas.
Além disso, os compostos da presente invenção
Figure BRPI0108394B1_D0137
propiciam uma abordagem terapêutica para o tratamento de diversos tipos de tumores sólidos, incluindo carcinomas, sarcomas, incluindo o sarcoma de Kaposi, eritroblastoma, glioblastoma, meningeoma, astrocitoma, melanoma e mioblastoma, porém não se limitam aos mesmos. O tratamento ou prevenção de cânceres de tumores não sólidos tais como leucemia não são considerados por esta invenção. As indicações podem incluir cânceres no cérebro, cânceres de bexiga, cânceres de ovário, cânceres gástricos, cânceres do pâncreas, cânceres do cólon, cânceres do sangue, cânceres de pulmão, cânceres dos ossos, porém não se limitam aos
Figure BRPI0108394B1_D0138
mesmos.
Outros exemplos, sem limitação, dos tipos de enfermidades relacionadas com atividade inadequada da PK que os compostos descritos aqui podem auxiliar a prevenir, tratar e estudar, são enfermidades por proliferação de 25 células, enfermidades fibróticas e enfermidades metabólicas.
As enfermidades por proliferação de células, que podem ser impedidas, tratadas ou adicionalmente estudadas pela presente invenção incluem câncer, enfermidades por
Figure BRPI0108394B1_D0139
85/265 proliferação de vasos sangüíneos e enfermidades por proliferação de células mesangiais.
As enfermidades por proliferação de vasos sangüíneos referem-se a enfermidades relacionadas a vasculogênese 5 anormal (formação de vasos sangüíneos) e angiogênese (proliferação de vasos sangüíneos). Embora a vasculogênese e a angiogênese desempenhem papéis importantes em diversos processos fisiológicos normais tais como desenvolvimento
Figure BRPI0108394B1_D0140
embriônico, formação do lúteo corporal, cicatrização de feridas e regeneração de órgãos, os mesmos também desempenham um papel essencial no desenvolvimento do câncer onde resultam na formação de novas capilaridades necessárias para manter um tumor vivo. Outros exemplos de enfermidades por proliferação de vasos sangüíneos incluem 15 artrite, onde novos vasos sangüíneos capilares invadem a articulação e destroem a cartilagem e doenças oculares, como a retinopatia diabética, onde novos vasos capilares na retina invadem o hialino, sangram e provocam cegueira.
Foram identificados duas
RTKs estruturalmente
Figure BRPI0108394B1_D0141
relacionadas para aglutinar
VEGF com afinidade elevada: o receptor de tirosina 1 tipo fms (Oncogene, :519524 de Shibuya e outros, 1990; Science,
255 : 989-991 de De
KDR/FLK-1, também conhecido como VEGF-R2. 0 fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) foi descrito como um mitogene específico de célula endotelial com atividade promotora de crescimento de célula endotelial in vitro. Biochein. Biophys. Res. Comm., 161:851-858 de Ferrara e Henzel, 1989; J. Biol. Chem., 265:19461-19566 de Vaisman e outros, 1990. Informações apresentadas no pedido de patente U.S. Nos. de Série
86/265
08/193.829, 08/038.596 e 07/975.750, sugerem enfaticamente que o VEGF não é apenas responsável pela proliferação de células endoteliais, mas é também o regulador principal da angiogênese normal e patológica. Vide genericamente, 5 Current Biology, 3(10) 699-702 de Klagsburn e Soker, 1993;
J. Biol. Chem., 267:26031-26037 de Houck e outros, 1992.
As vasculogênese e angiogênese normais desempenham papéis importantes em diversos processos fisiológicos tais como desenvolvimento embriônico, cicatrização de feridas,
Figure BRPI0108394B1_D0142
regeneração de órgãos e processos reprodutivos na mulher tais como o desenvolvimento de folículos no lúteo corporal durante a ovulação e o desenvolvimento da placenta após a gravidez. J. Biological Chem., 267(16):10931-34 de Folkman
e Shing, 1992. As vasculogênese e/ou angiogênese não
controladas têm sido associadas a doenças tais como
diabetes, bem como a tumores sólidos malignos cujo
Current Biology.
3(10) 699-702 de Klagsburn e Soker, 1993;
Inst., 82:4-6 de Folkman, 1991; New Engl.
J. Natl. Câncer
J. Med., 324:1-5 de Weidner e outros, 1991.
das células endoteliais durante a angiogênese e vasculogênese indica um papel importante para o receptor
KDR/FLK-1 nestes processos. Doenças como diabetes mellitus (Folkman, 198,
XIth Congress of Thrombosis and Haemostasis (Verstraeta, e outros, Eds.) pp. 583-596, Leuven University
Press, Leuven) e artrite, bem como desenvolvimento de tumores malignos podem resultar da angiogênese descontrolada. Vide por exemp 1 o, N. Engl. J. Med. ,
285:1182-1186 de Folkman 1971. Os receptores aos quais o
Figure BRPI0108394B1_D0143
87/265
VEGF se aglutina especificamente são um alvo terapêutico importante e forte para a normalização e regulação da vasculogênese e/ou angiogênese e de diversas doenças graves que envolvem o crescimento celular anormal provocado por tais processos. DN&P 7(6):334-339 de Plowman e outros,
1994. Mais especificamente, o papel altamente receptor KDR/FLK-1 na neovascularização faz específico do dele um alvo tratamento do câncer e de outras doenças que envolvam a descontrolada de vasos sanguíneos.
capazes de normalizar e/ou regular a transdução de tirosina quinase incluindo a receptor KDR/FLK-1 a fim de angiogênese e/ou vasculogênese, inibem, impedem inibir isto é, ou interferem no sinal formação compostos de sinais sinais do ou promover a compostos que transduzido por
KDR/FLK-1 quando ativado por ligands tais como VEGF. Embora se acredite que sobre um receptor ou outro componente ao longo do percurso de transdução do sinal da_tirosina quinase, os mesmos podem atuar também diretamente sobre as células do tumor que resultam da angiogênese descontrolada.
Embora a nomenclatura das contrapartes do ser humano e murino do receptor flk-I genérico difira, a mesma é, em 25 muitos aspectos, permutável. O receptor do murino, Flk-1, e a sua contraparte humana, KDR, compartilham uma homologia seqüencial de 93,4% dentro do domínio intracelular. Do mesmo modo, o FLK-1 do murino aglutina-se ao VEGF humano com a mesma afinidade que o VEGF do camundongo e, 30 conseqüentemente, é ativado pelo ligante derivado de ambas
88/265 as espécies. Cell, 72:835-846 de Millauer e outros, 1993;
Proc, Natl. Acad. Sei. USA, 90:7533-7537 de Quinn e outros, 1993. O FLK-1 também se associa aos substratos RTK humano e subsequentemente fosforila com tirosina os mesmos (por exemplo, PLC- ou p85) quando co-expressos em células 293 (fibroblastos do rim embrional humano).
Modelos que dependem do receptor FLK-1 são por conseguinte aplicáveis diretamente para entendimento do receptor KBR. Por exemplo, a utilização do receptor FLK-1
Figure BRPI0108394B1_D0144
do murino em métodos que identifiquem compostos que regulem o percurso de transdução de sinal do murino é diretamente aplicável à identificação de compostos que possam ser utilizados para regular o percurso de transdução de sinal humano, isto é, que regulem a atividade relacionada com o receptor KDR. Sendo assim, compostos químicos identificados como inibidores de KDR/FLK-1 in vitro, podem ser confirmados em modelos in vivo adequados. Tanto camundongos in vivo como modelos animais de ratos têm demonstrado ser de extrema valia para o exame do potencial clínico de
Figure BRPI0108394B1_D0145
agentes que atuam sobre o percurso de transdução de sinal induzido por KDR/FLK-1.
Sendo assim, a presente invenção propicia compostos que normalizam, regulam e/ou inibem a vasculogênese e/ou angiogênese afetando a atividade enzimática do receptor 25 KDR/FLK-1 e interferindo no sinal transduzido por KDR/FLK1. Sendo assim, a presente invenção propicia uma abordagem terapêutica para o tratamento de diversos tipos de tumores sólidos incluindo glioblastoma, melanoma e sarcoma de kaposi e carcinoma ovariano, pulmonar, mamário, prostático, pancreático, do cólon e epidermóide, porém não se limitam
Figure BRPI0108394B1_D0146
89/265 aos mesmos. Além disso, compostos que inibam o mediado por KDR/FLK-1 dados sugerem a administração de percurso de transdução de sinal também pode ser utilizada no tratamento de hemangioma, restenose e retinopatia 5 diabética.
Além disso, esta invenção refere-se à inibição de vasculogênese e angiogênese por outros percursos mediados
Figure BRPI0108394B1_D0147
por receptor, incluindo o percurso que compreende o receptor flt-1.
A transdução de sinal mediado por receptor de tirosina quinase é iniciada por interação extracelular com um fator de crescimento específico (ligante) seguido da dimerização de receptor, estimulação transiente da atividade da proteína de tirosina quinase intrínseca e autofosforilação. Desse modo são criados locais de ligação para moléculas de transdução de sinais intracelulares que conduzem à formação de complexos com um espectro de moléculas facilitam resposta célula, celular apropriada efeitos matabólicos extracelular,
Vide, (por exemplo, divisão da sobre o microambiente
Neuron
9:303-391 de
Schlessinger e Ullrich, 1992.
A homologia próxima das
KDR/FLK-1 com a do receptor PDGF-β (50,3% de homologia) e/ou receptor flt-1 associado, indica a indução de percursos de transdução de sinal de sobreposição. Por exemplo, para o receptor PDGF-β, elementos da família src (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90:7696-7700, de Twamley e outros, 1993), fosfatidillinositol-3'-quinase (Mol. Cell.
Biol., 12:981-990 de Hu e outros, 1992), fosfolipase Cy
Figure BRPI0108394B1_D0148
90/265 (Mol. Cell. Biol., 4:49-51 de Kashishian e Cooper, 1993), proteína ativadora de ras-GTPase, (EMBO J., 11:1373-1382 de Kashishian e outros), PTP-ID/syp (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1090:6939-6943 de Kazlauskas e outros, 1993), Grb2 5 (Mol. Cell. Biol., 14:6715-6726 de Arvidsson e outros,
1994) e as moléculas adaptadoras Shc e Nck (Mol. Cell.
Biol., 13:6889-6896 de Nishimura e outros, 1993),
Figure BRPI0108394B1_D0149
demonstraram aglutinar-se a regiões que envolvam diferentes locais de autofosforilação. Vide genericamente, Procr.
Growth Factor Res., 5:37-54 de Claesson-Welsh, 1994. Sendo assim é provável que os percursos de transdução de sinal ativados por KDR/FLK-1 incluam o percurso ras (Nature, 360:689-692 de Rozakis e outros, 1992), a PI-3'-quinase, os percursos mediados por src e mediados por pley. Cada um 15 destes percursos pode desempenhar um papel importante no efeito angiogênico e/ou vasculogênico do KDR/FLK-1 em células endoteliais. Conseqüentemente, ainda um outro
Figure BRPI0108394B1_D0150
aspecto desta invenção refere-se à utilização dos compostos orgânicos descritos aqui para regular a angiogênese e vasculogênese visto que tais processos são controlados por estes percursos.
Inversamente, enfermidades relacionadas com a retração, contração ou fechamento de vasos sanguíneos, por exemplo a restenose, estão também incluídas e podem ser 25 tratadas ou prevenidas pelos métodos desta invenção.
Enfermidades fibróticas referem-se à formação anormal de matrizes extracelulares. Exemplos de enfermidades fibróticas incluem a cirrose hepatica e enfermidades por proliferação de células mesangiais. A cirrose hepatica caracteriza-se pelo aumento de componentes da matriz
Figure BRPI0108394B1_D0151
91/265 extracelular resultando na formação de uma lesão hepatica.
Uma matriz extracelular aumentada que resulte em uma lesão hepática também pode ser provocada por uma infecção viral como a hepatite. Lipócitos parecem desempenhar um papel 5 principal na cirrose hepática. Outras enfermidades fibróticas envolvidas incluem aterosclerose.
células mesangiais referem-se a enfermidades provocadas anormal de células mesangiais.
Enfermidades por incluem diversas doenças renais em seres humanos tais como glomerulonefrite, nefropatia diabética e nefrosclerose maligna além de enfermidades como síndromes de microangiopatias trombóticas, rejeição a transplante, e glomerulopatias. O RTK PDGFR tem sido 15 envolvido na manutenção da proliferação de células mesangiais. Kidney International 43:47S-54S de Floege e outros, 1993.
Muitos cânceres são enfermidades por proliferação de células e, como mencionado anteriormente, as PKs associadas
Figure BRPI0108394B1_D0152
às enfermidades por proliferação de células. Sendo assim, não é surpreendente que as PKs tais como, por exemplo, elementos da família RTK, tenham sido associados ao desenvolvimento do câncer. Alguns destes receptores, tipo
EGFR (Br. J. Câncer 63:227-233 de Tuzi e outros 1991, APMIF
100:713-719 de Torp e outros 1992) HER2/neu (Science 244:707-712 de Slanon e outros 1989) e PDGF-R (Oncogene 7:627-733 de Kumabe e outros 1992) são superexpressos em muitos tumores e/ou persistentemente ativados por laços de autocrina. Na realidade, nos cânceres mais comuns e graves estas superexpressões do receptor (J. Neural. Sei.,
92/265
111:119-133 de Akbasak e Suner-Akbasak e outros, 1992,
Câncer Treatment Res. 61: 1:249-273
1992, J. Clin. Invest. 90:1352-1360 de e laços de autocrina (J. Cell. Biol. , e Donojhue, 1992, supra de
Suner-Akbasak e outros têm de Dickson e outros
Korc e outros, 1992)
118:1057-1070 de Lee
Korc e outros supra de Akbasa e sido demonstrados. Por exemplo, o EGFR tem sido associado a carcinoma de células escamosas, astrocitoma, glioblastoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer de
Figure BRPI0108394B1_D0153
pulmão e câncer de bexiga. O HER2 tem sido associado aos cânceres de mama, ovário, gástrico, pulmão, pancreas e bexiga. 0
PDGFR tem sido associado aos glioblastoma e melanoma ovário e próstata. A RTK bem c-met formação de tumores malignos.
associada, entre coloretais, da hepatocelulares.
como ao câncer de pulmão, tem
Por outros cânceres, tireóide,
Além disso também sido associada à exemplo, c-met tem sido a carcinomas e linfomas pancreáticos, gástricos e a c-met tem sido associada a leucemia. Supraexpressão do gene c-met também tem sido detectada em pacientes com mal de Hodgkin e mal de
Figure BRPI0108394B1_D0154
Burkitts.
IGF-IR, além de ter nutricional e no diabetes tipo II, também tem sido associada a diversos tipos de cânceres. Por exemplo, IGF-I tem sido comprometido como um estimulador do crescimento de autocrina para diversos tipos de tumor, por exemplo células do carcinoma do câncer
Invest. 84:1418-1423 de da mama
Arteaga de pequenos tumores de pulmão
Macauley e outros 1990).
integralmente envolvido no no ser humano (J. Clin.
e outros, (Câncer Res.,
Além disso, crescimento
1989) e células
50:2511-2517 de
IGF-I, embora normal e na
93/265 diferenciação do sistema nervoso, também parece ser um estimulador de autocrina de gliomas humanos. Câncer Res. 53:2475-2478 de Sandberg-Norpqbist e outros, 1993. A importância de IGF-IR e seus ligantes na proliferação de 5 células é ainda mais sustentada pelo fato de que muitos tipos de células em cultura (fibroblastos, células epiteliais, células de músculos lisos, linfócitos-T, células mielóides, condrócitos e osteoblastos (as células tronco da medula)) são estimuladas pelo IGF-I para que desenvolvam. Eukaryotic Gen Expression, 1:301-326 de
Goldring e Goldring, 1991. Baserga e Coppola sugerem que
EGF-IR desempenha o papel central no mecanismo de transformação e, como tal, poderia ser o alvo preferido para um espectro amplo de malignidades em seres humanos.
Câncer Res., 55:249-252 de
Baserga, 1995, Cell. 79:927-930 de Baserga 1994, Mol. Cell.
Biol., 14:4588-4595 de Coppola e outros, 1994.
As câncer
Câncer,
STKs têm incluindo,
54:571-577 associação sido comprometidas em muitos notavelmente, câncer de mama de Cance e outros (1993)) .
entre atividade anormal tipos de (Int. J.
de PK e exemplo, as
RTKs têm sido associadas a doenças tais como psoríase, diabetes mellitus, endometriose, angiogênese,
5 desenvolvimento de placas ateromatosas, mal de Alzheimer, restenose, mal de Hippel-Lindau, hiperploriferação epidérmica, doenças neurodegenerativas, degeneração macular relacionada com a idade e hemangiomas. Por exemplo, o EGFE tem sido indicado na cicatrização da córnea e de feridas da derme. Defeitos na Insulina-R e IGF-IR são indicados na
Figure BRPI0108394B1_D0155
94/265 diabetes mellitus do tipo II. Uma correlação mais completa entre RTKs específicas e suas indicações terapêuticas é apresentada em DN&P 7:334-339 de Plownar e outros, 1994.
Como mencionado anteriormente, não só as RTKs mas as
CTKs incluindo src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lck, blk, hck, fgr e yrk, porém não se limitando aos mesmos, (revisto por Bolen e outros 1992 FASEB JS. , 6:3403-3409) estão envolvidas no percurso de transdução de sinal proliferativo e metabólico e portanto poder-se-ia esperar e foi demonstrado estarem envolvidos em muitas doenças mediadas por PTK às quais a presente invenção se refere.
Por exemplo, src (v-src) demonstraram ser uma oncoproteína (pp60v'src) em galinhas. Além disso, o seu homólogo celular, o proto-oncogene pp60c’src transmite sinais oncogênicos de muitos receptores. A superexpressão de EGFR ou HER2/neu em constitutiva de pp60 csrc , que malignas, porém ausente camundongos deficientes em na fenótipo osteopetrótipo, tumores conduz é característica células normais. Por expressão de c-src indicando uma de células outro lado, apresentam um importante de c-src na função osteoclástica e um possível envolvimento em enfermidades correlatas.
Similarmente, Zap70 tem sido implicado de células-T que podem estar relacionadas com doenças auto25 imunes.
As STKs têm sido associadas a inflamação, doença autoimune, imunorespostas, e doenças por hiperproliferação tais como restenose, fibrose, psoríase, osteoartrite e artrite reumatóide.
Figure BRPI0108394B1_D0156
95/265
As PKs têm sido implicadas na implantação de embrião. Sendo assim, os compostos desta invenção podem propiciar um método eficaz de impedir tal implantação de embrião e desse modo serem úteis como agentes do controle da natalidade.
Outras enfermidades que podem ser tratadas ou prevenidas utilizando os compostos desta invenção são enfermidades imunológicas tais como doença auto-imune, AIDS e doenças cardiovasculares tais como aterosclerose.
Por fim, suspeita-se atualmente que tanto as RTKs como as CTKs estão envolvidas em enfermidades hiperimunes.
Exemplos do efeito de diversos compostos exemplificativos desta
PTKs são mostrados na Tabela 2 abaixo. Os compostos os dados apresentados não devem ser interpretados de modo nenhum como limitadores do âmbito desta invenção.
ADMINISTRAÇÃO E COMPOSIÇÃO FARMACÊTICA
Um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado como tal a um paciente ou pode ser administrado em misturados com carreadores ou excipientes adequados.
ser encontradas em Remington's Pharmacological Sciences
Nack Publishing Co., Easton, PA., última edição.
Como usado aqui, administrar ou administração refere-se a distribuição de um composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou de uma composição farmacêutica que contenha um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo desta
96/265 tratar uma
Meios limitação, intestinal um organismo com doença associada a a finalidade de prevenir
PK.
adequados podem inclui, administração oral, retal, transmucosal intramedulares, intratecais, ou sem ou subcutâneas, intraventricular direta, intravenosa, intravetreal, intraperitoneal, intranasal ou intraocular. Os meios e parentérico.
Alternativamente, pode-se administrar o composto em um modo local em vez de sistêmico, por exemplo, através de diretamente em um tumor sólido, freqüentemente em uma ou contínua.
Figure BRPI0108394B1_D0157
Além disso, pode-se administrar a droga em um sistema de revestido com anticorpo específico de tumor. Os lipossomas serão o alvo e serão recebidos seletivamente pelo tumor.
Composições farmacêuticas da presente invenção podem ser manufaturadas por processos bem conhecidos na técnica, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, fabricação de drágea, pulverização, emulsificação, encapsulação, aprisionamento ou liofilização.
As composições farmacêuticas para utilização de acordo com a presente invenção podem ser formuladas de modo convencional utilizando um ou mais carreadores fisiologicamente aceitáveis que compreendam excipientes e auxiliares que facilitem o processamento dos compostos ativos em preparações que possam ser utilizadas
97/265 farmaceuticamente. A formulação adequada depende da rota de administração escolhida.
Para injeção, os compostos da invenção podem ser formulados em soluções aquosas, de preferência em soluções tampão fisiologicamente compatíveis tais como solução de
Hanks, solução de Ringer ou solução tampão salina fisiológica.
Para administração transmucosal, são utilizados na formulação penetrantes apropriados à barreira
Figure BRPI0108394B1_D0158
a ser penetrada. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.
Para administração oral, os compostos podem ser formulados combinando os compostos ativos com carreadores farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica. Tais carreadores permitem que os compostos da invenção 15 sejam formulados como comprimidos, pílulas, pastilhas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, pastas fluidas, suspensões e similares para ingestão oral pelo paciente. As preparações farmacêuticas para uso oral podem ser feitas utilizando um excipiente sólido, triturando opcionalmente a
Figure BRPI0108394B1_D0159
mistura resultante e processando a mistura de grãos, após adicionar outros adjuvantes adequados se desejado, para obter núcleos de comprimidos ou drágeas. Excipientes adequados são, em particular, enchedores tais como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol, 25 preparações de celulose tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz e amido de batata e outras substâncias tais como gelatina, adraganto, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, carboximetilcelulose de sódio e/ou polivinil-pirrolidona (PVP). Se desejado, podem ser adicionados agentes desintegradores,
Figure BRPI0108394B1_D0160
98/265 tais como polivinil-pirrolidona encadeada, ágar ou ácido algínico. Também pode ser utilizado um sal tal como alginato de sódio.
Os núcleos de drágeas são munidos de revestimentos adequados. Para este fim, podem ser utilizadas soluções concentradas de açúcar que podem conter opcionalmente goma arábica, talco, polivinil-pirrolidona, carbopol gel, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio, soluções de vernizes e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos comprimidos ou revestimentos das ou para caracterizar diferentes composições de doses do composto ativo.
Composições farmacêuticas que podem ser utilizadas oralmente incluem cápsulas de pressão moderada feitas de gelatina, bem como cápsulas vedadas macias feitas de gelatina e um plastificador tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de pressão moderada podem conter os ingredientes ativos misturados com um enchedor tal como
Figure BRPI0108394B1_D0161
lactose, um aglutinante tal como amido e/ou um lubrificante tal como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas macias, os compostos ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos, parafina líquida ou polietileno 25 glicóis líquidos. Também podem ser misturados estabilizadores nestas formulações.
As composições farmacêuticas que também podem ser utilizadas incluem cápsulas de gelatina duras. Como exemplo não limitativo, a formulação do produto da droga oral da 30 cápsula do composto ativo pode ter potências de dosagem de
Figure BRPI0108394B1_D0162
99/265
Figure BRPI0108394B1_D0163
Figure BRPI0108394B1_D0164
e 200 mg (códigos de formulação J-011248-AA-00 e J011248-AA-01, respectivamente). As duas potências de dosagem são feitas a partir dos mesmos grãos preenchendo cápsulas de gelatina dura de diferentes tamanhos, tamanho 3 para a cápsula de 50 mg e tamanho 0 para a cápsula de 2 00 mg. A composição da formulação pode ser, por exemplo, como indicado na Tabela 2.
TABELA 2
Ingrediente Nome/Tipo Concentração em Granulação (% em peso) Quantidade em Cápsula de 50 mg (mg) Quantidade em Cápsula de 2 00 mg (mg)
Código da Formulação J-011248-AA J-011248-AA-00 J-011248-AA- 01
Composto Ativo NF 65,0 50,0 200,0
Manitol NF 23,5 18,1 72,4
Croscarmelo se sódio NF 6,0 4,6 18,4
Povidona K 3 0 NF 5,0 3,8 15,2
Estearato de magnésio NF 0,5 0,38 1,52
Cápsula, amarelo Sueco NF Tamanho 3 Tamanho 0
As cápsulas podem ser embaladas em recipientes de vidro marrom ou plástico para proteger o composto ativo da luz. Os recipientes que contêm a formulação da cápsula do
100/265 composto ativo devem ser armazenados a temperatura ambiente controlada (15-30°C).
Para administração por inalação, os compostos para uso de acordo com a presente invenção são convenientemente 5 distribuídos na forma de um pulverizador de aerossol utilizando uma embalagem pressurizada ou um nebulizador e um propelente adequado, por exemplo, sem limitação, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetra-
Figure BRPI0108394B1_D0165
fluoroetano ou dióxido de carbono. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade da dosagem pode ser controlada através do fornecimento de uma válvula para administrar uma quantidade dosada. Cápsulas e cartuchos de, por exemplo, gelatina para uso em um inalador ou insuflador podem ser formulados com uma mistura de pó do composto e uma base de 15 pó adequada tal como lactose ou amido.
Os compostos também podem ser formulados para administração parentérica, por exemplo, por injeção de bolo ou infusão contínua. As formulações para injeção podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária, por exemplo, em
Figure BRPI0108394B1_D0166
ampolas ou em recipientes de multidosagem, com um conservante adicionado. As composições podem ter formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e podem conter substâncias de formulação tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou 25 dispersão.
As composições farmacêuticas para administração parentérica incluem soluções aquosas de uma forma solúvel em água, tais como, sem limitação, um sal do composto ativo. Além disso, as suspensões dos compostos ativos podem 30 ser preparadas em um veículo lipofílico. Veículos
101/265 lipofílicos incluem óleos graxos tais como óleo de gergelim, ésteres de ácidos graxos sintéticos tais como etiloleato e triglicerídeos ou substâncias tais como lipossomas. As suspensões para injeções aquosas podem 5 conter substâncias que aumentem a viscosidade da suspensão, tais como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol ou dextrana. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores e/ou agentes adequados que aumentem a solubilidade dos compostos para permitir a preparação de
Figure BRPI0108394B1_D0167
soluções altamente concentradas.
Alternativamente, o ingrediente ativo pode ser na forma de pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água esterilizada isenta de piroxeno, antes de utilização.
Os compostos também podem ser formulados em composições retais tais como supositórios ou clisteres de retenção, utilizando, por exemplo, bases supositórios tais como manteigas de convencionais para cacau ou outros glicerídeos.
anteriormente, os compostos também podem ser formulados como preparações composto desta invenção pode ser formulado para esta rota de administração com substâncias poliméricas ou hidrofóbicas adequadas (por exemplo, em uma emulsão com um óleo farmaceuticamente aceitável), com resinas de troca iônica ou como um derivado levemente solúvel tal como, sem 30 limitação, um sal levemente solúvel.
102/265
Um exemplo não limitativo de um carreador farmacêutico para os compostos hidrofóbicos da invenção é um sistema cosolvente que compreende álcool benzílico, um agente e uma fase aquosa tal como o sistema de co-solventes VPD.
VPD é uma solução de 3% em peso/volume de álcool benzílico,
8% em peso/volume do agente tensoativo não-polar
Polisorbate 80 e
300, completando co-solventes VPD
5% de dextrose
65% em peso/volume o volume com etanol (VPD:D5W) consiste em solução aquosa.
solventes dissolve baixa toxicidade de polietileno glicol absoluto. 0 sistema de em VPD diluído
Este sistema de cobem compostos hidrofóbicos e produz após sistêmica.
podem variar consideravelmente sem destruir as suas características de solubilidade e toxicidade. Além disso, a identidade dos componentes de co-solventes pode variar: por exemplo, podem ser utilizados outros agentes tensoativos toxicidade em vez do Polisorbate 80, o tamanho da fração do polietileno glicol pode variar, outros polímeros biocompatíveis podem substituir o polietileno glicol, por exemplo, polivinil-pirrolidona e outros açúcares ou polissacarídeos podem substituir a dextrose.
Alternativamente, podem ser utilizados outros sistemas
Lipossomas e emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos ou hidrofóbicas.
Além disso, também podem ser utilizados alguns solventes orgânicos tais como dimetilsulfóxido, embora muitas vezes a custo de maior toxicidade.
/0
103/265
Além disso, os compostos podem ser distribuídos utilizando um sistema de liberação contínua, tal como matrizes semi-permeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que contenham o agente terapêutico. Diversas substâncias de liberação contínua estão em vigência e são bem conhecidas daqueles versados na técnica. Cápsulas de liberação contínua, dependendo da sua natureza química, podem liberar os compostos durante algumas semanas até acima de 100 dias.
Figure BRPI0108394B1_D0168
Dependendo da natureza química e da estabilidade biológica do reagente terapêutico, podem ser utilizadas estratégias adicionais para estabilização da proteína.
As composições farmacêuticas aqui também podem compreender carreadores ou excipientes de fase sólida ou gel adequados. Exemplos de tais carreadores ou excipientes incluem carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, diversos açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e polímeros tais como polietileno glicóis, porém não se limitam aos mesmos.
Muitos dos compostos reguladores de PK da invenção
Figure BRPI0108394B1_D0169
podem ser propiciados como sais fisiologicamente aceitáveis em que o composto reivindicado pode formar as espécies carregadas negativa ou positivamente. Exemplos de sais em que o composto forma a porção positivamente carregada inclui, sem limitação, amônio quaternário (definido aqui em 25 outra parte), sais tais como hidrocloreto, sulfato, carbonato, lactato, tartarato, malato, maleato, sucinato em que o átomo de nitrogênio do grupo de amônio quaternário é um nitrogênio do composto selecionado desta invenção que reagiu com o ácido adequado. Sais em que um composto desta 30 invenção forma a espécie carregada negativamente incluem,
104/265 sem limitação, os sais de sódio, potássio, cálcio e magnésio formados pela reação de carbóxilicos no composto com uma exemplo, hidróxido de sódio (NaOH), (KOH), hidróxido de cálcio (Ca(0H)2), um grupo de ácidos base apropriada (por hidróxido de potássio presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos em uma quantidade suficiente para atingir o objetivo pretendido, por exemplo, de uma enfermidade associada a PK.
Mais especificamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade de composto eficaz para prevenir, minorar ou melhorar sintomas da doença ou prolongar a sobrevida do indivíduo sendo tratado.
A determinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz é bem conhecida daqueles versados na técnica especialmente à luz da descrição detalhada fornecida aqui.
Para qualquer composto utilizado nos métodos da ser calculada inicialmente a partir de testes de cultura de células. Em seguida, a dosagem pode ser formulada para uso em modelos animais de modo a obter inclua determinado na cultura de células (isto é, do composto do teste que obtém uma uma faixa de o IC50 como a concentração half-maximal da atividade do
PK) . Tais informações podem ser então utilizadas para determinar com maior exatidão dosagens adequadas em seres humanos.
105/265
A toxicidade e a eficácia terapêutica dos compostos descritos aqui podem ser determinadas por procedimentos experimentais, por exemplo, determinando o IC50 e o LD50 (ambos discutidos aqui em outra parte) para um composto em questão. Os de células humanos. A dados obtidos e estudos em de uma dosagem dosagem utilizada selecionadas pelo faixa pode a partir destes testes de cultura animais podem ser de dosagem para variar dependendo terapeuta levando em conta utilizados na uso em seres da forma de a condição do paciente. (Vide por exemplo, Fingle e outros,
1975, em The
Pharmacological Basis of Therapeutics,
A quantidade e o intervalo da
Cap.
p.l)· dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis de plasma da espécie ativa que sejam suficientes para manter os efeitos reguladores denominados variará para da quinase.
concentrações cada composto
Estes níveis de plasma são eficazes mínimas (MECs) . A MEC mas pode ser calculada a partir de dados in vitro, por exemplo, de uma quinase pode ser calculada utilizando os testes descritos aqui. Dosagens necessárias para obter a MEC dependerão das características do indivíduo e da rota de administração.
Podem ser utilizados testes ou biotestes HPLC para determinar
Os intervalos de dosagem também podem ser determinados utilizando o valor MEC. Os compostos devem ser administrados utilizando um regime que mantenha os níveis
106/265 de plasma acima da MEC durante 10-90% do tempo, de preferência entre 30-90% e muito mais preferivelmente entre 50-90%.
Presentemente, as quantidades terapeuticamente eficazes de compostos de Fórmula (I) podem variar entre aproximadamente 25 mg/m2 e 1.500 mg/m2 por dia; de preferência aproximadamente 3 mg/m2/dia. Ainda mais preferivelmente 50 mg/qm qd até 400 mg/qd.
Nos casos de administração local ou absorção seletiva,
Figure BRPI0108394B1_D0170
a concentração local eficaz da droga pode não estar relacionada com a concentração de plasma e podem ser utilizados outros procedimentos conhecidos na técnica para determinar a quantidade e o intervalo de dosagem corretos.
Evidentemente, a quantidade de uma composição administrada dependerá do indivíduo sendo tratado, da gravidade da enfermidade, do modo de administração, do critério do terapeuta que faz a prescrição, etc.
Se desejado, a composição pode ser apresentada em uma embalagem ou dispositivo de distribuição, tal como um conjunto aprovado pela FDA, que pode conter uma ou mais formas de dosagem unitária com o ingrediente ativo. A embalagem pode, por exemplo, compreender uma folha de metal ou plástico tal como uma embalagem com bolhas. A embalagem ou dispositivo de distribuição também pode vir acompanhado de uma informação associada ao recipiente em uma forma prescrita por uma agencia governamental que regula a fabricação, utilização ou venda de produtos farmacêuticos, nota essa
0 que reflete a aprovação pela agencia da forma das
Figure BRPI0108394B1_D0171
107/265 composições ou da administração em seres humanos ou animais. Tal observação, por exemplo, pode ser uma etiqueta aprovada pela U.S. Food and Drug Administraton para prescrição de drogas ou uma inserção aprovada no produto.
As composições que compreendam um composto da invenção formulado em um carreador farmacêutico compatível também podem ser preparadas, colocadas em um recipiente apropriado e etiquetadas para tratamento de uma enfermidade indicada.
Condições adequadas indicadas na etiqueta podem incluir o tratamento de um tumor, a tratamento de fibrose, diabetes e similares.
É também um aspecto desta invenção o fato de que um composto descrito aqui ou seu sal ou pró-droga possam ser combinados com outros agentes quimioterápicos para o tratamento das doenças e enfermidades discutidas acima. Por exemplo, um composto, sal ou pró-droga desta invenção poderíam ser combinados com agentes de alquilação tais como fluorouracil (5-FU) isoladamente ou combinado com leukovorin; ou outros agentes de alquilação tais como, sem
Figure BRPI0108394B1_D0172
limitação, outros análogos de pirimidina tais como UFT, capecitabina, gemcitabina e citarabina, os sulfonatos de alquila, por exemplo, bussulfan (utilizado no tratamento da leucemia granulocítrica crônica), improssulfan e pipossulfan;
aziridinas, por exemplo, benzodepa, carboquona, meturedepa e uredepa; etileno iminas e metil melaminas, por exemplo, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamina, trietilenotiofosforamida e trimetilolmelamina e as mostardas de nitrogênio, por exemplo, clorambucila (utilizada no tratamento da leucemia linfocítica crônica, macroglobulinemia primária e linfoma
Figure BRPI0108394B1_D0173
108/265 non-Hodgkin), ciclofosfamida (utilizada no tratamento do mal de Hodgkin, mieloma múltiplo, neuroblastoma, câncer mamário, câncer ovariano, câncer pulmonar, tumor de Wilm e rabdomiossarcoma), extramustina, ifosfamida, novembriquina, 5 prednimustina e mostarda de uracila (utilizadas no tratamento de trombocitose primária, linfoma non-Hodgkin, mal de Hodgkin e câncer ovariano) e triasinas, por exemplo, da carbazina (utilizada no tratamento de sarcoma de tecido mole).
Figure BRPI0108394B1_D0174
Um composto, sal ou pró-droga desta invenção também podem ser utilizados em combinação com outros agentes quimioterápicos anti-metabólitos tais como, sem limitação, análogos de ácido fólico, por exemplo, metotrexato (utilizado no tratamento de leucemia linfocítica aguda, 15 coriocarcinoma, câncer mamário por micose fungóide, câncer de cabeça e pescoço e sarcoma osteogênico) e pteropterina e os análogos de purina tais como mercaptopurina e tioguanina que têm aplicação no tratamento das leucemias granulocítica aguda, linfocítica aguda e granulocítica aguda.
Considera-se que um composto, sal ou pró-droga desta invenção também possam ser utilizados em combinação com agentes quimioterapêuticos com base em produtos naturais tais como, sem limitação, os vinca alcalóides, por exemplo, vinblastina (utilizada no tratamento de câncer mamário e testicular), vincristina e vindesina; as epipodofilotoxinas, por exemplo, etoposida e teniposida, ambas adequadas no tratamento do câncer testicular e do sarcoma de Kaposi; os agentes quimioterapêuticos antibióticos, por exemplo, dalnoribicina, doxorubicina, epirubicina, mitomicina (utilizados para tratar câncer do
Figure BRPI0108394B1_D0175
109/265 estômago, cervical, do cólon, da mama, da bexiga e do pâncreas), dactinomicina, temozolomida, plicamicina, bleomicina (utilizadas no tratamento do câncer da pele, esôfago e trato genitourinário) e os agentes 5 quimioterapêuticos enzimáticos tais como L-asparaginase.
Além dos mencionados acima, um composto, sal ou pródroga desta invenção também poderia ser utilizada em combinação com os complexos (cisplatina, hidroxiuréia;
etc.); uréias substituídas tal como derivados de metilidrasina, por exemplo, procarbazina;
supressores adrenocorticais, por exemplo, mitotana, aminoglutetimida e hormônio e antagonistas de hormônios tais como os adrenocorticosteróides (por exemplo, prednisona), progestinas (por exemplo, hidróxi15 progesteronacaproato); estrogênios (por exemplo, dietilestilbesterol); anti-estrogênios tal como tamoxifeno; androgênios, por exemplo testosteronapropianato e inibidores de aromatase tais como anastrozola.
Por fim, também se considera que a combinação de um
Figure BRPI0108394B1_D0176
composto desta invenção será eficaz em combinação com mitoxantrona ou paclitaxel para tratamento de cânceres de tumores sólidos ou leucemias tais como, sem limitação, leucemia (não-linfocítica) mielógena aguda.
PROCEDIMENTO SINTÉTICO GENÉRICO
A metodologia genérica que se segue pode ser utilizada para preparar os compostos desta invenção:
2-0xindola (1 equiv.) apropriadamente substituída, o aldeído (1,2 equiv.) apropriadamente substituído e uma base (0,1 equiv.) são misturados em um solvente (1-2 mL/mmol 230 oxindola) e a mistura é então aquecida durante
Figure BRPI0108394B1_D0177
110/265 aproximadamente 2 a aproximadamente 12 horas. Após esfriamento, o precipitado que se forma é filtrado, lavado com etanol ou éter frios e seco a vácuo para proporcionar o produto sólido. Se não se formar um precipitado, a mistura 5 de reação é concentrada e o resíduo é triturado com diclorometano-éter, o sólido resultante é coletado por filtração e seco em seguida. 0 produto pode ser opcionalmente ainda mais purificado por cromatografia.
A base pode ser uma base orgânica ou inorgânica. Se
Figure BRPI0108394B1_D0178
for utilizada uma base orgânica é de preferência uma base de nitrogênio. Exemplos de bases orgânicas de nitrogênio incluem diisopropilamina, trimetilamina, trietilamina, anilina, piridina, 1,8-diazabiciclo[5,4,1]undec-7-eno, pirrolidina e piperidina, porém não se limitam aos mesmos.
Exemplos de bases inorgânicas são, sem limitação, amônia, hidróxidos de metal alcalino ou alcalino terroso, fosfatos, carbonatos, bicarbonatos, bissulfatos e amidas. Os metais alcalinos incluem lítio, sódio e potássio enquanto que os alcalino terrosos incluem cálcio, magnésio
Figure BRPI0108394B1_D0179
e bário.
Em uma modalidade presentemente preferida desta invenção, quando o solvente é um solvente prótico, como água ou álcool, a base é um metal alcalino ou uma base inorgânica de alcalino terroso de preferência um metal 25 alcalino ou um hidróxido de alcalino terroso.
Ficará claro para aqueles versados na técnica, com base nos princípios genéricos conhecidos da síntese orgânica e nas descrições aqui que base seria mais apropriada para a reação contemplada.
Figure BRPI0108394B1_D0180
111/265
O solvente no qual a reação é realizada pode ser um solvente prótico ou aprótico, de preferência é um solvente prótico. Um solvente prótico é um solvente que tem átomos de hidrogênio covalentemente aglutinados a átomos de 5 oxigênio ou nitrogênio o que torna os átomos de hidrogênio consideravelmente ácidos e portanto capazes de serem compartilhados com um soluto através de uma ligação de hidrogênio. Exemplos de solventes próticos incluem, sem
Figure BRPI0108394B1_D0181
Figure BRPI0108394B1_D0182
limitação, água e álcoois.
Um solvente aprótico pode ser polar ou apoiar porém, em ambos os casos, não contém hidrogênios ácidos e portanto não é capaz de ligação de hidrogênio com solutos. Exemplos de solventes apróticos apoiares, sem limitação, são pentano, hexano, benzeno, tolueno, cloreto de metileno e 15 tetracloreto de carbono. Exemplos de solventes apróticos polares são clorofórmio, tetraidrofurano, dimetilssulfóxido e dimetilformamida.
Em uma modalidade presentemente preferida desta invenção, o solvente é um solvente prótico, de preferência
Figure BRPI0108394B1_D0183
água ou um álcool tal como etanol.
A reação é realizada a temperaturas superiores à temperatura ambiente. A temperatura é geralmente entre aproximadamente 30°C e aproximadamente 150°C, de preferência aproximadamente 80 °C e aproximadamente 100 °C 25 muito mais preferivelmente aproximadamente 75°C e aproximadamente 85°C, que é aproximadamente o ponto de ebulição do etanol. Por aproximadamente pretende-se dizer que a faixa de temperatura é de preferência dentro de 10°C da temperatura indicada, mais preferivelmente dentro de 5°C 30 da temperatura indicada e muito mais preferivelmente dentro
112/265 de 2°C da temperatura indicada. Sendo assim, por exemplo, por aproximadamente 75°C pretende-se dizer 75°C ± 10°C, de preferência 75°C ± 5°C e mais preferível 75°C ± 2°C.
2-0xindolas e aldeídos podem ser facilmente sintetizados utilizando técnicas bem conhecidas na química.
Aqueles versados na técnica devem entender que existem outros percursos sintéticos para formar os compostos da invenção e que o que se segue é propiciado como exemplo e
Figure BRPI0108394B1_D0184
não como limitação.
EXEMPLOS
As preparações e os exemplos que se seguem são propiciados para permitir que aqueles versados na técnica entendam com maior clareza e coloquem em prática a presente invenção. Os mesmos não devem ser considerados como 15 limitadores do âmbito da invenção porém meramente ilustrativos e representativos da mesma.
Exemplos Sintéticos
Método A: Formilação de pirróis
POC13 (1,1 equiv.) é adicionado gota-a-gota a
Figure BRPI0108394B1_D0185
dimetilformamida (3 equiv.) a -10° C seguido pela adição do pirrol adequado dissolvido em dimetilformamida.
Após agitação durante duas horas, a mistura de reação é diluída com H2O e basifiçada para pH 11 com KOH ΙΟΝ. O precipitado que se forma é coletado por filtração, lavado com H2O e seco em um forno a vácuo para produzir o aldeído desejado.
Método B: Saponificação de ésteres de ácido pirrolcarboxí1i co
Uma mistura de éster de ácido pirrolcarboxílico e KOH (2-4 equiv.) em EtOH é refluído até que o término da reação é indicado por cromatografia de camada fina (TLC). A
Figure BRPI0108394B1_D0186
113/265 mistura de reação esfriada é acidificada para pH 3 com HC1 IN. 0 precipitado que se forma é coletado por filtração, lavado com H20 e seco em um forno a vácuo para produzir o ácido pirrolcarboxílico desejado.
Método C: Amidação
A uma solução agitada de um ácido pirrolcarboxílico dissolvido em dimetilformamida(0,3M) é adicionado l-etil-3(3-dimetilamino-propil)carbodiimida (1,2 equiv.),
Figure BRPI0108394B1_D0187
hidroxibenzo-triazol (1,2 equiv.) e trietilamina (2 equiv.). A amina adequada é adicionada (1 equiv.) e a reação agitada até que o término seja indicado por TLC.
Acetato de etila é em seguida adicionado à mistura de reação e a solução lavada com NaHCO3 saturado e salmoura (com sal extra), seca sobre MgSO4 anidro e concentrada para 15 produzir a amida desejada.
Método D: Condensação de aldeídos e oxindóis que contêm substitutos de ácido carboxílico
Uma mistura do oxindol (1 equivalente), 1 equivalente do aldeído e 1 equivalentes de piperidina (or pirrolidina) em etanol (0,4 M) é agitada a 90-100° C até seja indicado por
TLC. A mistura é em seguida concentrada e o resíduo acidifiçado com HC1 2N.
O precipitado que se forma é lavado com H2O e EtOH e em seguida seco em um forno a vácuo para produzir o produto.
Método E: Condensação de aldeídos e oxindóis que não contêm substitutos de ácido carboxílico
Uma mistura do oxindol (1 equivalente), 1 equivalente do aldeído e 1 - 3 equivalentes de piperidina (or pirrolidina) em etanol (0,4 M) é agitada a 90-100° C até 30 que o término da reação seja indicado por TLC. A mistura é
Figure BRPI0108394B1_D0188
114/265 esfriada a temperatura ambiente e o sólido que se forma é coletado por filtração a vácuo, lavado com para produzir o produto. Se não se formar após esfriamento da mistura de reação, etanol e seco um precipitado a mistura é concentrada e purificada por cromatografia de
C. Exemplos de
Os exemplos representativos não coluna.
sínteses de oxindol seguir da síntese de oxindóis se mostrados assim como produzir os compostos para aqueles versados seguir. Tais sínteses
5-Amino-2 -oxindo1
5-Nitro-2-oxindol destinam a limitar de modo algum o
Rotas alternativas para os oxindóis outros oxindóis a serem usados para na técnica baseada nas descrições a e oxindóis estão dentro do âmbito e (6,3 g) foi hidrogenado em metanol sobre paládio a 10% em carbono para produzir 3,0 g (60% de rendimento) do composto título como um sólido branco.
5-Bromo-2 -oxindol
2-Oxindol (1,3
9) em 20 mL de acetonitrila foi esfriado até -10 °C
2,0 g de N-bromossucinimida foi lentamente adicionada com agitação. A reação foi agitada durante i hora a coletado, lavado de rendimento) do
-10° C e 2 horas a 0o com agua e seco para composto título).
C. O precipitado produzir 1,9 g foi (90%
4-Metil-2-oxindol
Oxalato de dietila (30 mL) adicionado com agitação a 19 suspenso em 50 mL de éter seco.
em 2 0 g de mL do éter seco etóxido
A mistura foi um banho de gelo e 2 0 mL de 3-nitro-oxileno foi de potássio esfriada em em 2 0 mL de
115/265 /// éter seco foi adicionado lentamente. A mistura vermelha escura espessa foi aquecida com refluxo durante 0,5 hora, concentrada em um sólido vermelho escuro e tratada com hidróxido de sódio a 10% até que quase todo o sólido dissolveu. A mistura vermelho escura foi tratada com peróxido de hidrogênio a 3 0% até que a cor vermelha mudou para amarelo. A mistura foi tratada alternadamente com hidróxido de sódio a 10% e peróxido de hidrogênio a 30% até que a cor vermelha escura desapareceu. O sólido foi
Figure BRPI0108394B1_D0189
filtrado e o filtrado acidificado com ácido hidroclórico
6N. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração a vácuo, lavado com água e seco sob vácuo para produzir 9,8 g (45% de rendimento) de ácido 2-metil-6-nitrofenilacético como um sólido não-branco. O sólido foi hidrogenado em 15 metanol sobre paládio a 10% em carbono para produzir 9,04 g do composto título como um sólido branco.
7-Bromo-5-cloro-2-oxindol
5-Cloro-2-oxindol (16,8 g) e 19,6 g de N- bromossucinimida foram suspensos eml40 mL de acetonitrila e
Figure BRPI0108394B1_D0190
refluídas durante 3 horas. Cromatografia de camada fina (silica, etil acetato) a 2 horas de refluxo mostrou 5cloro-2-oxindol or N-bromossucinimida (Rf 0,8), produto (Rf 0,85) e um segundo produto (Rf 0,9) cujas proporções não mudam após outra hora de refluxo. A mistura foi esfriada até 10 °C, o precipitado foi coletado por filtração a vácuo, lavado com 25 mL de etanol e seco por sucção durante 20 minutos no funil para produzir 14,1 g do produto úmido (56% de rendimento) . O sólido foi suspenso em 200 mL de etanol desnaturado e lavado de lama por agitação e refluxo 30 durante 10 minutos. A mistura foi esfriada em um banho de
Figure BRPI0108394B1_D0191
116/265 gelo até 10 ° C. O produto sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado com 2 5 mL de etanol e seco sob vácuo a 40° C para produzir 12,7 g (51% de rendimento) de 7-bromo-5-cloro-2-oxindol.
5-Fluoro-2-oxindol
5-Fluoroisatin (8,2 g) foi dissolvido em 50 mL of hidrato de hidrazina e refluído durante 1,0 hora. As foram em seguida vazadas em água gelada.
O precipitado foi em seguida filtrado, lavado com água e seco em um forno a vácuo para produzir o composto título.
5-Nitro-2-oxindol
2-0xindol (6,5 g) foi dissolvido em 25 mL de ácido sulfúrico concentrado e a mistura mantida a -10 a -15 °C enquanto 2,1 mL de ácido nítrico vaporizado foi adicionado gota-a-gota. Após a adição do ácido nítrico a mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 0,5 hora e vazado em água gelada. 0 precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e cristalizado a partir de ácido acético a 50%. O produto cristalizado foi em seguida filtrado, lavado com
Figure BRPI0108394B1_D0192
água e seco sob vácuo para produzir 6,3 g (70%) de 5-nitro2-oxindol.
5-Aminossulfonil-2-oxindol
A um frasco de 100 mL carregado com 2 7 mL de ácido clorossulfônico foi adicionado lentamente 13,3 g de 225 oxindol. A temperatura da reação foi mantida abaixo de 30 °C durante a dição. Após a adição, a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 hora, aquecida a 68 °C durante 1 hora, esfriada e vazada em água. O precipitado foi lavado com água e seco em um forno a vácuo
Figure BRPI0108394B1_D0193
117/265 para produzir 11,0 g de 5-clorossulfonil-2-oxindol (50% de
5-Clorossulfonil-2-oxindol (2,1 g) foi adicionado a mL hidróxido de amônia em 10 mL de etanol e agitado a temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi concentrada e o sólido coletado a vácuo para produzir 0,4 g (20% de rendimento) do composto título como um sólido não-branco.
Figure BRPI0108394B1_D0194
5-1sopropllaminossulfonil-2-oxindol
A um frasco de 100 mL carregado com 2 7 mL de ácido clorossulfônico foi adicionado lentamente 13,3 g de 2oxindol. A temperatura da reação foi mantida abaixo de 30 °C durante a dição. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 hora, aquecida a 68 °C durante 1 hora, esfriada e vazada em água. O precipitado que se formou foi filtrado, lavado com água e seco em um forno a vácuo para produzir 11,0 g (50%) de 5clorossulfonil-2-oxindol (50% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional.
Figure BRPI0108394B1_D0195
Uma suspensão de 3 g de 5-clorossulfonil-2-oxindol,
1,15 g de isopropilamina e 1,2 mL de piridina em 50 mL de diclorometano foi agitada a temperatura ambiente durante 4 horas, tempo durante o qual se formou um sólido branco. 0 sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado para lama 25 com etanol quente, esfriado, coletado por filtração a vácuo e seco sob vácuo a 40° C durante a noite para produzir 1,5 g (45%) de 5-isopropilaminossulfonil-2-oxindol.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,69 (s, br, 1H, NH), 7,63 (dd, J = 2 e 8 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,32 (d, J
Figure BRPI0108394B1_D0196
118/265
Hz, 1H, NH-S02-), 6,93 (d, J = 8 Hz, 1H) , 3,57 (s, 2H)
3,14-3,23 (m, 1H, CH-(CH3)2), 0,94 (d, J = 7 Hz, 6H, 2xCH3)
5-Fenilaminossulfonil-2-oxindol
Uma suspensão de
5-clorossulfonil-2-oxindol (1,62 g, mmol), anilina (0,782 mL, 8,4 mmol) e piridina (1 mL) em diclorometano (20 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (300 mL) e acidificada com ácido hidroclórico
IN (16 mL) .
A camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio salmoura, seca e concentrada. O resíduo foi lavado com etanol (3 mL) e em seguida cromatografado em sílica gel purificando com metanol/diclorometano para produzir
5fenilaminossulfonil-2-oxindol.
1HNMR (3 60 MHz, DMSO-d6)
10,71 (s, br, 1H,
NH) ,
10,10 (s, br, 1H, NH) , 7,57-7,61 (m,
2H), 7,17-7,22 (m,
2H) , 7,06-7,09 (m, 2H) , 6,97-7,0 (m, 1H) , 6,88 (d, J = 8,4
Hz, 1H), 3,52 (s,
Piridin-3-ilamina de ácido 2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-520 sulfônico de 5-clorossufonil-2-oxindol (3 g) e
3aminopiridina (l,46g) em piridina (15 mL) foi agitada temperatura ambiente durante a noite, durante formou um sólido marrom. 0 sólido foi filtrado, a qual lavado etanol e seco sob vácuo para produzir 1,4 g (38%) se com de piridin-3-ilamina de ácido
2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-5sulfônico.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, 1H, NH) , 10,39 (s, 1H, SO2NH) , 8,27-8,28 (d,
1H) , 8,21-8,23 (m, 1H) , 7,59119/265
7,62 (m, 2H), 7,44-7,68 (m, 1H) , 7,24-7,28 (m, 1H), 6,69-
6,71 (d, 1H), 3,54 (s, 2H)
MS m/z (APCI+) 290,2.
5-Feni1oxindol
5 5-Bromo-2-oxindol (5 9, 23, 5 mmol) foi dissolvido em
110 mL de tolueno e 110 mL de etanol com agitação e um
pouco de calor. Tetracis(trifenilfosfina)paládio(0) (1,9 g,
1,6 mmol) foi adicionado seguido por 40 mL (80 mmol) de carbonato de sódio aquoso 2M. A ácido benzeno borônico (3,7 g, aquecida em reação foi mL) , lavada esta
30,6 um banho de óleo esfriada, diluída com bicarbonato
100° água (2 00 mL) ,
HC1 IN (200 camada orgânica mistura foi adicionado mmol) e a
C durante com acetato de mistura foi horas. A etanol (500 de sódio saturado (2 00 mL) , mL) e salmoura (2 00 mL) . A foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrado para produzir um sólido marrom. Trituração com diclorometano produziu 3,8 g (77%) de
5-fenil-2-oxindol como um sólido bronzeado.
ΧΗ NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,4 (br s,
1H, NH), 7,57 (dd,
J = 1,8 e
7,2 Hz, 1H), 7,5 to 7,35 (m, 5H) , 7,29 (m,
1H) ,
6,89 (d, J
8,2 Hz, 1H), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 209 [M+] .
De modo similar os seguintes oxindóis podem ser preparados:
6-(3,5-Diclorofenil)-1,3-diidroindol-2-ona TH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (br, 1H, NH) , 7,64 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,05 (d, J =1,1 Hz, 1H), 3,5 (s, 2H).
MS-EI m/z 277/279 [M]+.
6-(4-Butilfenil)-1,3-dihidroindol-2-ona
Figure BRPI0108394B1_D0197
120/265 XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 ( s, 1Η, NH) , 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8 Hz, 3H), 7,17 (dd, J =
1,5 e 7,8 Hz, 1H) , 6,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 3,48 (s, 2H, CH2CO) , 2,60 (t, J = 7,5 Hz, 2Hz, CH2CH3) , 1,57 (m, 2H, 5 CH2) , 1,32 (m, 2H, CH2) , 0,9 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH3) .
6-(5-Isopropil-2-metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,29 ( br s, 1H, NH)
7,16-7,21 (m, 2H) , 7,08 (d, J = = 2,4 Hz, 1H) , 6,97 -7,01 (m
2H), 6,89 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H, OCH3) , 3,47 (s
10 2H, CH2CO) , 2,86 (m, 1H, CH(CH3) 2), 1,19 (d, J = 6, 8 Hz, 6H
CH(CH3)2) .
z z
z z
MS-EI m/z 281 [M]+.
6-(4-Etilfenil)-1,3-diidroindol-2-ona 3Η NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (br s, 1H, NH), 7,50
15 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,28 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,25 (d, J :
7,5 Hz, 1H) , 7,17 (dd, J = 1,6 & 7,5 Hz, 1H), 6,99 (d, J ;
1,6 Hz, 1H) , 3,48 (s, 2H, CH2CO) , 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2H
CH2CH3) , 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H, CH2CH3) .
MS-EI m/z 237 [M]+.
6-(3-Isopropilfenil)-l,3-diidroindol-2-ona 3Η NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,37 (br s, 1H, NH), 7,43 (m, 1H) , 7,35-7,39 (m, 1H) , 7,17-7,27 (m, 3H) , 7,01 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 3,49 (s, 2H, CH2CO) , 2,95 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,24 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 251 [M]+.
6-(2,4-Dimetoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (br s, 1H, NH), 7,17 (m, 2H) , 6,93 (dd, J = 1,6 & 7,6 Hz, 1H) , 6,86 (d, J = 1,6
Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,58 (dd, J = 2,4 & 8,5
Figure BRPI0108394B1_D0198
121/265
Ηζ, 1Η) , 3,79 (s, 3Η, OCH3) , 3,74 (s, 3H, OCH3) , 3,45 (s,
2H, CH2CO) .
MS-EI m/z 269 [M]+.
6-Piridin-3-il-1,3-diidroindol-2-ona
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,51 (s, 1H, NH) , 8,81
= 2,5 Ηζ, 1H), 8,55 (dd, J = 1,8 e 5,7 Hz, 1H) , 8 (m,
7,45 (dd, J = 5,7 and 9,3 Hz , 1H), 7,3 (m, 2H) , , 7,05
(s, 1H), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 210 [M]+.
Figure BRPI0108394B1_D0199
(3-Cloro-4-etoxifenil)-amida de ácido 2-oxo-2,3-diidro-lHindol-4-carboxílico
A uma solução de 4-carboxi-2-oxindol (200 mg, 1,13 mmol) e 3-cloro-4-metoxifenilamina (178 mg, 1,13 mmol) em dimetilformamida (15 mL) a temperatura ambiente foi 15 adicionado benzotriazol-l-iloxitris(dimetilamino)fosfônio hexafluorofosfato (reagente BOP, 997 mg, 2,26 mmol) seguido por 4-dimetilaminopiridina (206 mg, 1,69 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 72 horas. A reação foi em seguida diluída com acetato de etanol (300
Figure BRPI0108394B1_D0200
mL) , lavada com bicarbonato de sódio saturado (100 mL), água, ácido hidroclórico 2N (100 mL) , água (3x200 mL) e salmoura. Foi em seguida seca sobre sulfato de magnésio e concentrada. O resíduo foi triturado com acetato de etila para produzir (3-cloro-4-metoxifenil)-amida de ácido 2-oxo25 2,3-diidro-lH-indol-4-carboxílico como um sólido rosa.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,50 (s, br, 1H, NH) ,
10,12 (s, br, 1H, NH), 7,9 (s, J = 2,5 Ηζ, 1H), 7,62 (dd, J = 2,5 & 9 Ηζ, 1H) , 7,38 (d, J = 7,6 Ηζ, 1H) , 7,32 (t, J = 7,6 Ηζ, 1H) , 7,13 (d, J = 9 Ηζ, 1H) , 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 30 1H) , 3,83 (s, 3H, OCH3) , 3,69 (s, 2H, CH2) .
Figure BRPI0108394B1_D0201
122/265
MS-EI m/z 316 [M] +.
-Carbóxi-2 -oxindol
Uma solução de trimetilsilildiazometano em hexano (2
M) foi adicionada gota-a-gota a uma
2cloro-3-carbóxi-nitrobenzeno em mL de metanol temperatura ambiente até que não ocorresse qualquer evolução adicional de gás.
Ácido acético foi em seguida adicionado para esfriar rapidamente o excesso de trimetilsilildiazometano. A
Figure BRPI0108394B1_D0202
sob vácuo e o resíduo foi seco em um forno durante a noite.
2-cloro-3-metoxicarbonilnitrobenzeno obtido foi suficientemente puro para a reação a seguir.
Malonato dimetílico (6,0 mL) foi adicionado a uma suspensão gelada de 2,1 g de hidreto de sódio em 15 mL
DMSO. A mistura de reação foi agitada a 100° C durante 1 hora e em seguida esfriada até temperatura ambiente. 2cloro-3-metoxicarbonilnitrobenzeno (2,15 g) foi adicionado em uma porção e a mistura foi aquecida até 10 0° C durante
1,5 hora. A mistura de reação foi em seguida esfriada até temperatura ambiente, vazada em água gelada, acidificada para pH 5 e extraída com acetato de etila.
A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para produzir
3,0 g do dimetil
2-metoxicarbonil-6-nitrofenil-malonato.
Dimetil-2-metoxicarbonil-6-nitrofenilmalonato (3,0 g) foi refluído em 50 mL de ácido hidroclórico 6N durante a noite. A mistura foi concentrada até secar, 20 mL de etanol e 1,1 g de cloreto de estanho(II) foram adicionados e a mistura foi refluída durante duas horas. A mistura foi filtrada através de Celite, concentrada e cromatografada
123/265 sobre sílica gel usando acetato de etila:hexano:ácido acético como purificador para produzir 0,65 g (37%) de 4carboxi-2-oxindol como um sólido branco.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s, br, 1H, COOH) ,
10,74 (s, br, 1H, NH), 7,53 (d, J = 8Hz, 1H), 7,39 (t, J =
8Hz, 1H) , 7,12 (d, J = 8Hz, 1H) , 3,67 (s, 2H) .
D. Síntese de 2-indolinonas de pirrol substituído.
Exemplo 1
Figure BRPI0108394B1_D0203
Ácido 4-metil-5-(2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-2-carboxílico
Éster etílico de ácido 4-metil-2-pirrolcarboxílico (comercialmente disponível) foi formilatado utilizando o método A para produzir (73%) de éster etílico de ácido 5formil-4-metil-2-pirrolcarboxílico. Foi em seguida 15 hidrolisado utilizando o método B para produzir ácido 5formil-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico (58%).
Oxindol (133 mg, 1 mmol) foi condensado com ácido 5formil-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico (153 mg) utilizando o método D para produzir 268 mg (100%) do composto título 20 como um sólido vermelho alaranjado.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,84 (s, br, 1H, NH) ,
12,84 (s, br, 1H, COOH), 10,98 (s, br, 1H, NH), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H, H-vinil), 7,18 (t, J = 7,5 Hz,
1H) , 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1H) ,
6,71 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 2,32 (s, 3H, CH3) .
MS (modo negativo) 266,8 [M-l]+.
Exemplo 2
Ácido 4-metil-5-(l-metil-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilideno metil)-lH-pirrol-2-carboxílico
124/265
1-metil-l,3-diidroindol-2-ona (147 mg, 1 mmol) foi condensado com ácido 5-formil-4-metil-lH-pirrol-2carboxílico (153 mg) utilizando o método D para produzir 250 mg (86%) do composto título XHNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH) ,
12,88 (s, br, 1H) , 7,83 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,65 (s, 1H, H-vinil), 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,02-7,09 (m, 2H), 6,70 (d, J
2,2 Hz, 1H) , 2,32 (s, 3H, CH3) .
MS m/z 283,0 [M+l]+.
O 10
Exemplo
Ester metílico de ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-lH-pirrol-2-carboxílico
Oxindol (105 mg, 0,79 mmol) foi condensado com éster metílico de ácido 5-formil-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico (110 mg,
0,67 mmol) utilizando o método E para produzir (81%) do composto título.
153,2 mg
XHNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, br, 1H, NH),
10, 97 (s, br, 1H, NH) , 7,82 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,67 (s,
1H, H-vinil), 7,2 (dt, J= 1,2 e 7,7 Hz, 1H), , 7,01 (dt, J =
1,2 , 7,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2
Hz, 1H).
MS (ES) m/z 283 [M++l] .
Exemplo 4
Éster etílico de ácido 5-(5-cloro-2-oxo-1,2-diidroindol-325 ilidenometil)-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico
5-Cloro-l,3-diidroindol-2-ona (2,22 g, 13,2 mmol) foi condensado com éster etílico de ácido 5-formil-4-metil-lHpirrol-2-carboxílico (2,43 g) utilizando o método E para produzir 4,1 g (94%) do composto título como um sólido 30 laranja.
125/265
NH), 7,98 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,95 (s, br, 1H,
(d, J = 2 ,2 Hz, 1H, H-4) , 7,78 (s, 1H, H-vinil), 7,18 (dd
J= 2Z2 g 8,3 Hz , 1H, , H-6), 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7)
7,34 (d, J = 1, 8 Hz , 1H, H-3'), 4,27 (q, J = 7,2 Hz, 2H
OCH2CH3) , 2,33 (s, 3H, CH3) , 1,29 (t , J = 7,2 Hz, 3H
OCH2CH3) .
MS-EI m/z 330 [M+] .
Exemplo 5 /
r t
r
Ácido 5-(5-cloro-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)
-410 metil-lH-pirrol-2-carboxílico
Uma mistura de éster etílico de ácido 5-(5-cloro-2oxo-1,2-diidroindol-3 -i1idenomet i1)-4-metil-ΙΗ-pi rrol-2 carboxí-lico (1,3 g, 4 mmol) e hidróxido de potássio em metanol (25 mL) e etanol (25 mL) foi aquecida com refluxo durante a noite.
Materiais insolúveis foram removidos por mistura foi neutralizada com ácido hidroclórico 6N para produzir
0,876 g (70%) do composto título.
δ 13,80 (s, br, 1H, NH) , XHNMR (360
MHz, DMSO-d6)
12 ,90 (s, br, 1H, COOH), 11,06
= 1,8 Hz, 1H, H-4) , 7,81 (s, 1H
e 8,3 Hz, 1H, H-6) , 6,89 (d, J :
J = li ,8 Hz , 1H, H- 3'), 2, 35 (s,
3H, CH3) .
MS-EI m/z 302 [M+] .
Exemplo 6 (s, br, 1H, NH), 8,02 (d, J , H-vinil), 7,20 (dd, J= 1,8
8,3 Hz, 1H, H-7), 6,72 (d, (3-Pirrolidin-l-il-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-4-metil-lH-pirrol-2- carboxí-lico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,16 g, 0,76 mmol) foi condensado com (3-pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 5
Figure BRPI0108394B1_D0204
126/265 formil-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico (0.2 g, preparado pelo método C) para produzir 60 mg (17%) do composto título como um sólido laranja.
XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) ,
11,02 (s, br, 1H, NH) , 8,42 (t, J = 5,8 Hz, 1H, CONHCH2) ,
Figure BRPI0108394B1_D0205
Exemplo 7 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,16 g,
0,75 mmol) foi condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido 5formil-4-metil-lH-pirrol-2-carboxílico (0,2 preparado mg (8 %) do composto título como um sólido laranja.
1HNMR (3 00 MHz, DMSO-d6)
11,02 (s, br, 1H, NH), 8,40 (m,
1H,
1,5 Hz, 1H, H-4) , 7,78 (s, 1H, He 8,2 Hz, 1H, H-6), 6,82 (d, J = 8,2
J = 2,4 Hz, 1H, H-3'), 3,23 (m, 2H,
CH2 e N(CH2CH3)2) , 2,35 (s, 3H, CH3) ,
5,61 (s, , br, 1H, NH) ,
CONHCH2 ), 8,12 (d, J =
íil) , 7, 30 (dd, J = 1,5
Hz, 1H, H-7), 6,78 (d,
ch2) , 2, 38-2,45 (m, 6H,
1,61 (m, , 2H, CH2) , 0,93
(t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 e 460 [M+-l e M++2].
Exemplo 8 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2 30
127/265
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (212 mg, 1 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formillH-pirrol-2-carboxílico (preparado a partir de pirrol-2carboxilato de etila pelo método A, B e em seguida C) produzir 162 mg (38%) do composto título.
para
7,32 (dd, J XH NMR
3,3 (m, 2H,
11,06 (s, br
(300 MHz, DMSO-d6) δ 13,53 (s, br, 1H, NH) ,
1H, NH), 8,37 (t, 1H, CONHCH2) , 7,8 9 (m, 2H) ,
= 2,0 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,80-6,84 (m, 2H) ,
ch2) , 2,45-2,55 (m, 6H, N(CH2CH3)2 e CH2) , 0,95
(t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 430 e 432 [M+-l e
Exemplo 9
M++ (2-Dietilaminoetil)amida de ácido
5-(2-oxo-6-fenil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2-carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (209 mg, lmmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido
5-formillH-pirrol-2-carboxílico para produzir
182 mg (42%) do composto título.
XH NMR (3 00 MHz, DMSO-d6)
11,06 (s,
H-vinil),
2H)
1H)
6H, , 7,46 , 6,80 δ 13,56 (s, br,
1H, NH) , br, 1H, NH), 8,36 (t,
1H, CONHCH2) , 7,77 (s,
1H,
7,73 (d,
J = 7,8 Hz,
1H), 7,64 (d, J = 7,2
Hz, (m, (m,
N(CH2CH3)2
2H) ,
1H) ,
7,32 (m,
3,31-3,32 e CH2) , 0,96 (t,
MS-EI m/z 428 [M+] .
2H) , (m,
7,11 (s, 1H) , 6,96
2H, CH2) , 2,46-2,53 (m, (m,
6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3) 2) .
Exemplo 10 (2-Dietilaminoetil)-metilamida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2-carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (212 mg, 1 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)metilamida de ácido 5-
Figure BRPI0108394B1_D0206
128/265
Figure BRPI0108394B1_D0207
formil-lH-pirrol-2-carboxílico para produzir 246 mg (55%)
do composto título.
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,54 (s, br, 1H, NH) ,
11, 06 (s, br, 1H, NH) , 7,90 (m, 2H) , 7, 33 (dd, J = 1,8 e
5 8,4 Hz, 1H), 6,82-6,85 (m, 3H), 3,55 (s, br, 2H, CH2) , 3,25
(s, br, 3H, NCH3) , 2,57 (t, J = 6,5 Hz, 2H, ch2) , 2,45 (m,
4H, N(CH2CH3)2), 0,91 (m , 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 444 e 446 [M+-l e M+ +1] .
Exemplo 11 (2-Dietilaminoetil)metilamida de ácido 5-(2-oxo-6-fenil-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2-carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (209 mg, 1 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)metilamida de ácido 5formil-lH-pirrol-2-carboxílico para produzir 277 mg (63%) do composto título.
3Η NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13, 58 (s, br, 1H, NH) ,
11,04 (s, br, 1H, NH), 7,78 (s, 1H , H- vinil) , 7,73 (d, J =
7,8 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,46 (m, 2H), 7,33-
7,36 (m, 2H) , 7,11 (s, 1H) , 6,84 (m, 1H) , 6,78 (m, 1H) ,
20 3,55 (s, br, 2H, CH2) , 3,25 (s, br, 3H , nch3) , 2,58 (t, 2H,
• CH2) , 2,44 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0,92 (m, 6H, N (CH2CH3)2) .
Exemplo 12 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 3-metil-5-(2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2-carboxílico
Oxindol (66,5 mg, 0,5 mmol) foi condensado com (3dietilaminopropil)amida de ácido 5-formil-3-metil-lHpirrol-2-carboxílico (preparado a partir de éster etílico de ácido 3-formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico pelo método B e em seguida C) para produzir 39 mg (21%) do composto título.
Figure BRPI0108394B1_D0208
129/265
3H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,34 (s, br, 1H, NH)
10,88 (s, br , 1H, NH) , 7,62-7 ,67 (m, 3H) , 7,17 (m, 1H)
6,99 (m, 1H), 6,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 1 Hz
1Η) , 3,26-3,32 (τη, 2H, CH2) , 2,41-2,48 (m, 6H, CH2 e
N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3) , 1,63 (m, 2H, CH2) , 0,93 (t,
J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 380 [M+] .
Exemplo 13 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2 φ 10 diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2-carboxilico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (106 mg, 0,5 mmol) foi condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido 5formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico para produzir 35 mg (15%) do composto 3Η NMR (300
11,00 (s, br, 1H, (s, (dd,
H-7)
6H, título.
1H, H-vinil),
MHz,
7,74
NH) ,
J = 1,9 e 8,4 Hz, , 6,63 (s,lH, H-3')
DMSO-d6) δ 13,35 (s, br, 1H, NH) ,
7,89 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H-4) , 7,80
(t, J = 5,3 Hz, 1H, CONHCH2) , 7,31
1H, H-6) , 6,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H,
i, 3,26 (m, 2H, CH2) , 2,41-2,48 (m,
CH2 e N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3) , 1,63 (m, 2H, CH2) ,
0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 e 460 [M+-l e M++l] .
Exemplo 14 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 3-mthil-5-(2-oxo-625 fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2 carboxílico condensado com (3-dietilaminopropil)amida formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxilico para
0,5 mmol) foi
de ácido 5-
produzir 67,8
(30%) do composto título.
130/265 XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (s, br, 1H, NH) ,
11,02 (s, br, 1H, NH) , 7,23-7,73 (m, 11H) , 3,29 (m, 2H,
CH2) , 2,41-2,48 (m, 6H, CH2 e N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3) ,
1,64 (m, 2H, CH2) , 0,94 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 456 [M+] .
Exemplo 15 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(5-metoxi-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico
5-Metoxi-1,3-diidroindol-2-ona (82,5 mg, 0,5 mmol) foi condensado com (3-dietilamino-propil)amida de ácido 5formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico para produzir 80 mg (39%) do composto título.
1H NMR (300
MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, br, 1H, NH) ,
J = 1,8
10,70 (s, br, 1H,
NH) , 7,68-7,70 (m, 2H) , 7,32 (d,
Hz, 1H) , 6,72-6,79 (m, 2H) , 6,60 (s, 1H) , 3,73 (s, 3H,
OCH3) , 3,28 (m, 2H, CH2) , 2,41 -2,48 (m, 6H, CH2 e
N(CH2CH3)2) , 2,29 (s, 3H, CH3) , , 1,63 (m, 2H, CH2) , 0,93 (t,
J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/ z 410 [M+] .
Exemplo 16
(3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5-(6-metoxi-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico
6-Metoxi-l,3-diidroindol-2-ona (82.5 mg, 0.5 mmol) condensado com (3-dietilamino-propil)amida de ácido foi
525 formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico para produzir 63 mg (31%) do composto título.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,22 (s, br, 1H, NH) ,
10,86 (s, br, 1H, NH), 7,39-7,63 e 6,37-6,55 (m, 6H), 3,73 (s, 3H, OCH3) , 3,3 (m, 2H, CH2) , 2,45 (m, 6H, CH2 e
131/265
N(CH2CH3)2), 2,28 (s, 3H, CH3) , 1,63 (m, 2H, CH2) , 0,93 (m,
6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+] .
Exemplo 17 (2-Dietilamino-etil)amida de ácido 3-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol1-car-boxílico
Éster etílico de ácido 4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol1-carboxílico (May, Donald A.; Lash, Timothy D.; J. Org.
Chem., 1992, 57:18, 4820-4828) foi formilatado utilizando o método A e em seguida o B para produzir ácido 3-formil4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-l-carboxílico.
(5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (1,43 g, 6,8 mmol) foi condensado com 2-dietilaminoetil)amida de ácido 315 formil-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-l-carboxílico (1,97 g) para produzir 2,2 g (67%) do composto título como um sólido
Figure BRPI0108394B1_D0209
laranja amarelado.
ΧΗ NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,47 (s, 1H, NH) , 11,0
(s, 1H, NH) , 8,0 (d, 1H, NH), 7,70 (s, 1H , CH) , 7,28 (dd, J
= 2,1 e 8,2 Hz, 1H, ArH), 7,16 (m, 1H, ArH) , 6,8 (d, J =
8,3Hz, 1H, ArH) , 3,3 (s, 2H, CONH) , 2,5 ' (m, 6H, 3xNCH2) ,
2,78 (br m, 2H, pirrol CH2) , 2,72 (br m, , 2H, pirrol CH2) ,
1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,74 (br s, 4H, CH2CH2CH2CH2) ,
0,96 (t, J = = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 e 486 [M+-l e M++l] .
Exemplo 18 (3-Dietilamino-propil)amida de ácido 3-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil) -4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol1-car-boxílico
132/265
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (20 mg, 0,1 mmol) foi condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido 3formil-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1-carboxílico (30 mg) para produzir 33 mg (46%) do composto título como um sólido 5 laranja.
XH NMR (360 MHz, DMSO- -d6) δ 10,9 (s, 1H, NH) , 8,0 (m,
1H, NH), 7,68 (m , 1H, ArH) , 7,4 (m, 1H, ArH), 7,29 (d, J =
1,9 e 8,5Hz, 1H, ArH) , 6,8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH), 2,7 (br
m, 4H, 2xNCH2) , 2,4 (m, 8H, 4xNCH2) , 1,7 (br m, 4H,
N(CH2CH3)2), 1,6 (br m, 2H, CH2CH2CH2) , 0,93 (t, J = 7,4 Hz,
6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 499 e 501 [M+ e M++2].
Exemplo 19 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 3-(5-bromo-2-oxo15 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro-2Hisoindol-1-car-boxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (80 mg, 0,4 mmol) foi condensado com (3-pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 3formil-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1-carboxílico (120 mg) para produzir 43 mg (22%) do composto título como um sólido laranja bronzeado.
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH), 10,9 (s,
1H, NH) , 8,0 (m, 1H, NH) , 7,69 (m, 1H, ArH) , 7,49 (m, 1H,
ArH), 7,28 (d, J = 1,7 e 7,8 Hz, 1H, ArH), . 6,8 (d, J = 8
Hz, 1H, ArH), 3,3 (br m, 2H, 2xNCH2) , 2,8 (m, 4H,
2xpirrolCH2) , 2,5 (br m, 4H, N(CH2CH3)2) , 1,6 (br m, 8H,
2xpirrolCH2CH2, CH2CH2CH2 e conhch2) .
Exemplo 2 0
MS-EI m/z 497 e 499 [M+ e M++2] .
(2-Dietilaminoetil)amida de ácido 3-(2 -oxo-6-p i ridin-3 -i1/V
133/265
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-l-car-boxílico
6-Piridin-3-il-l,3-diidroindol-2-ona (60 mg, 0,4 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 35 formil-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-l-carboxílico (80 mg) para produzir 50 mg (38%) do composto título como um sólido avermelhado.
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH) , 11 (s,
1H, NH) , 8,9 (d, 1H, NH) , 8,7 (dd, 1H, ArH), 8,1 (dd, 1H,
ArH), 7,9 (d, 1H, ArH), 7,6 (s, 1H, CH) , 7,5 (dd, 1H, ArH),
7,3 (dd, 1H, ArH), 7,1 (m, 2H, ArH), 3,35 (m, 2H, CONHCH2) ,
2,8 (m, 4H, 2xpirrolCH2) , 2,5 (br m, 6H, N(CH2CH3)2 e NCH2) ,
1,75 (br s, 4H, 2xpirrolCH2CH2) , 0,9 (t, 6H, N(CH2CH3)2). MS-EI m/z 484 [M+] .
Exemplo 21 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-bromo-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2carboxílico
A uma mistura de cloreto de benzoil (1 equiv.) e
Figure BRPI0108394B1_D0210
cloreto de alumínio (1 equiv.) em dicloroetano a 0o C foi adicionado 3,5-dimetil-2-pirrolcarboxilato de etila (1 equiv.) . A mistura foi agitada a 8 0° C durante 4 horas. A mistura foi em seguida extraída com acetato de etila (EtOAc) e H20. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com bicarbonato de sódio saturado e salmoura, secos e concentrados para produzir (51%) de ácido 4-benzoil-3,5dimetil-lH-pirrol-2-carboxílico.
Uma mistura de éster etílico de ácido 4-benzoil-3,5dimetil-lH-pirrol-2-carboxílico (4,13 g, 15,2 mmol) e 30 nitrato de amônio cérico (33 g, 4 equiv.) em 50 mL de
Figure BRPI0108394B1_D0211
134/265 tetraidrofurano (THF): ácido acético (HOAc):H20 1:1:1 foi refluído durante a noite. A mistura de reação foi em seguida esfriada, extraída com EtOAc e em seguida basifiçada para pH 9 com carbonato de cálcio. A camada 5 orgânica foi em seguida lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada, seguido por cromatografia de coluna para produzir 3,25 g (75%) de éster etílico de ácido 4-benzoil5-formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico como um sólido amarelo.
Figure BRPI0108394B1_D0212
5-Bromo-l,3-diidro-indol-2-ona foi condensado com 4benzoil-5-formil-3-metil-lH-pirrol-2-carboxílico utilizando o método D para produzir ácido 4-benzoil-5-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2- carboxí-lico.
O ácido carboxílico acima foi em seguida acoplado com
N,N-dietil-l,3-propanodiamina utilizando o método C para produzir o composto título.
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7,96 (m, 1H, C0NHCH2) ,
7,76 (d , J = = 7,0 Hz, 2H) , 7,68 (t, 1H) , 7,56 (m, 2H) , 7,40
(s, 2H) 7,33 (dd, J = 1,6 e 8,3 Hz , 1H, H-6), 6,84 (d, J =
8,3 Hz, 1H, H-7) , 3,33 (m, 2H, ch2) , 2,42-2,46 (m, 6H,
3xCH2) , 2,10 (s, 3H, CH3) , 1,65 (m , 2H, CH2) , 0,94 (t, J =
7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2) ,
Impacto de Elétrons MS m/z 564 [M++l] .
Exemplo 22 (3-Morfolin-4-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5-bromo2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2carboxílico XH NMR (360 MHz, DMS0-d6) Ô 14,10 (s, 1H, NH) , 11,14 (br s, 1H, NH) , 7,92 (m, 1H, C0NHCH2) , 7,75 (m, 2H) , 7,69
135/265 (t, 1H) , 7,56 (m, 2H) , 7,42 (m, 2H) , 7,33 (dd, J = 1,9 e
8,3 Hz, 1H, H-6) , 6,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7) , 3,56 (m, 4H, 2xCH2) , 3,33 (m, 2H, CH2) , 2,35 (m, 6H, 3xCH2) , 2,10 (s, 3H, CH3) , 1,70 (m, 2H, CH2) .
Exemplo 23 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-3-metil5-(2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-2carboxílico XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,18 (s, 1H, NH) , 11,14 (br s, 1H, NH) , 8,01 (m, 1H, CONHCHJ , 7,74 (m, 1H) , 7,67 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,32 (s, 1H, H-vinil), 7,17 (m, 1H), 6,92 (m, 1H) , 3,36 (m, 2H, CH2) , 2,44 (m, 6 H, 3xCH2) , 2,11 (s, 3H, CH3) , 1,65-1,75 (m, 6H, 3xCH2) .
Impacto de Elétrons MS m/z 482 [M+] .
Exemplo 24 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5bromo-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-
pirrol-: 2-carboxí-lico
XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,01 (s, 1H, NH) , 11,18
2 0 (br s, 1H, NH), 7,98 (m, 1H, C0NHCH2) , 7,75 (m, 2H) , 7,68
(m, 1H) , 7,55 (m, 2H) , 7,40 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 2,0 e
8,2 Hz, 1H, H-6), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7) , 3, 34 (m,
2H, ch2) , 2,42-2,47 (m, , 6 H, 3xCH2) , 2,09 (s, 3H, ch3) , 1,70
(m, 2H, CH2) , 1,64 (m, 4H, 2xCH2) .
Exemplo 25 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-3-metil5-(2-oxo-6-fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol2-carboxí-lico XH NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 14,15 (s, 1H, NH) , 11,16 (br s, 1H, NH), 7,98 (m, 1H, C0NHCH2) , 7,77 (d, J = 7,7 Hz,
136/265
2H) , 7,69 (m, 1H), 7,53-7,63 (m, 4H), 7 ,44 (m, 2H) , 7, , 33-
7,37 (m, 2H) , 7,24 (s, 2H) , 7,12 (s, 1H) , 3,36 (m, 2H,
CH2) , 2,43-2,48 (m, 6 H, 3xCH2) , 2,12 (s, 3H, CH3) , 1,74 (m,
2H, CH2) , 1,69 (m, 4H, 2xCH2) .
5 Impacto de : elétrons MS m/z 558 [M+] .
Exemplo 2 6 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-Cerne toxi -2-oxo-l, 2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lHpir-rol-2-carboxi-lico 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,99 (s, 1H, NH), 11,05 (br s, 1H, NH) , 7,93 (m, 1H, CONHCH2) , 7,72 (m, 2H) ,7,65 (m, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,15 (s, 1H, H-vinil), 7,04 (d, J =
8,4 Hz, 1H, H-4) , 6,51 (dd, J = 2,3 e 8,4 Hz, 1H, H-5),
6,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H, H-7), 3,74 (s, 3H, OCH3) , 3,35(m,
2H, CH2) , 2,42-2,46 (m, 6 H, 3xCH2) , 2,10 (s, 3H, CH3) , 1,72 (m, 2H, CH2) , 1,65 (m, 4H, 2xCH2) .
Impacto de Elétrons MS m/z 512 [M+] .
Exemplo 27
Figure BRPI0108394B1_D0213
(3-Pirrolidin-1-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5metoxi-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lHpir-rol-2-carboxi-lico 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,24 (s, 1H, NH) , 10,90
(br s, 1H, NH) , 7,97 (m, 1H, CONHCH2) , 7,75 (d, J = 7,2 Hz,
2H) , 7,69 (m, 1H) , 7,56 (m, 2H) , 7,24 (s , 1H, H-vinil),
6,79 (m, 2H) , 6,66 (m, 1H) , 3,67 (s, 3H, och3) , 3,34 (m,
2H, CH2) , 2,43-2,48 (m, 6 H, 3xCH2) , 2,14 (s , 3H, CH3) , 1,71
(m, 2H, CH2) , 1,66 (m, 4H, 2xCH2) .
Impacto de Elétrons MS m/z 512 [M+] .
Exemplo 2 8
137/265
Figure BRPI0108394B1_D0214
(3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 4-benzoil-5-(5fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-meti-lH-pirrol-2-carboxí-lico XH NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 14,20 (s, 1H, NH) , 11,14 (br s, 1H, NH) , 8,03 (m, 1H, C0NHCH2) , 7,75 (m, 2H) , 7,68 (m, 1H) , 7,55 (m, 2H), 7,38 (s, 1H, H-vinil), 7,08 (m, 1H) , 7,01 (m, 1H) , 6,87 (m, 1H) , 3,34 (m, 2H, CH2) , 2,42-2,48 (m, 6 H, 3xCH2) , 2,09 (s, 3H, CH3) , 1,70 (m, 2H, CH2) , 1,65 (m, 4H, 2xCH2) .
Impacto de Elétrons MS m/z 500 [M+] .
Exemplo 2 9 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2car-boxílico
5-Bromo-l,3-diidro-indol-2-ona foi condensado com (3dietilaminopropil)amida de ácido 4-acetil-5-formil-3-metillH-pirrol-2-carboxílico (preparado a partir de éster etílico de ácido 4-acetil-5-formil-3-metil-lH-pirol-2carboxílico pelo método B e em seguida
C) para produzir o composto título.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH) , 11,19
(br s, 1H, NH) , 8,15 (m, 1H, CONHCH2) , 8,11 (s, 1H, H-
vinil), 7,72 (d, J = 1 ,8 Hz, 1H , H-4), 7,38 (dd, J = 1,8 e
8,2 Hz, 1H, H-6) , 6,87 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7), 3,27 (m,
25 2H, CH2) , 2, 57 (s, 3H, CH3CO) , 2,46 (m, 9 H, CH3 e 3xCH2) ,
1,64 (m, 2H, CH2 ) , . 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
Exemplo 3 0 (3-Pirrolidin-1-ilpropil)amida de ácido
4-acetil-5-(5bromo-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-meti1-1H30 pirrol-2 -carboxí-1ico
Figure BRPI0108394B1_D0215
138/265 XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 (m, 1H, CONHCH2) , 8,10 (s, 1H, H-vinil), 7,70 (d, 1H, H-4), 7,36 (dd, J = 1,6 e 8,1 Hz, 1H, H-6), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-7), 3,32 (m, 2H, CH2) , 2,57 (s, 3H, CH3CO) , 2,44 (s, 3H, CH3) , 2,35-2,48 5 (m, 6H, 3xCH3) , 1,65-1,71 (m, 6H, 3xCH2) .
MS m/z 499 e 501 [M+] e [M++2] .
Exemplo 31 (3-Morfolin-4-ilpropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-
2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-210 car-boxílico XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, 1H, NH) ,11,26 (br s, 1H, NH) , 8,09 (m, 2H, H-vinil e CONHCH2) , 7,73(d, J = 1,5 Hz, 1H, H-4), 7,38 (dd, J = 1,5 e 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,55 (m, 4H, 2xCH2) , 3,26 15 (m, 2H, CH2) , 2,57 (s, 3H, CH3CO) , 2,44 (s, 3H, CH3) ,2,35 (m, 6H, 3xCH3) , 1,68 (m, 2H, CH2) .
MS-EI m/z 514 e 516 [M+-l] e [M++l] .
Figure BRPI0108394B1_D0216
Exemplo 32 (3-Hidroxipropil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2- carboxí-lico XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, 1H, NH) ,11,25 (br s, 1H, NH) , 8,10 (s, 1H, H-vinil), 8,03 (m,1H,
CONHCH2) , 7,71 (br s, 1H, H-4), 7,37 (br d, J = 8,4 Hz, 1H, 25 H-6), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-7), 4,51 (br s, 1H, OH),
3,51 (br s, 2H, CH2) , 3,36 (m, 2H, CH2) , 2,57 (s,3H,
CH3CO) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 1,70 (m, 2H, CH2) .
MS-EI m/z 445 e 447 [M+-l] e [M++l] .
Exemplo 34 (2-Morfolin-4-iletil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo-2-
Figure BRPI0108394B1_D0217
139/265 oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2 carboxílico
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH), 11,14
(br s, 1H, NH), 8,10 (s, 1H, H-vinil), 7,84 (m, 1H,
5 CONHCH2) , 7,71 (d, J = 1 ,8 Hz, 1H, H-4) , 7,38 (dd, J = 1,8
e 8, .2 Hz, 1H, H-6), 6,87 (d, J = 8, ,2 Hz, 1H, H-7), 3,58 (m,
4H, 2xCH2) , 3,40 (m, 2H, CH2) , 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,49 (m,
4H, 2xCH2) , 2,45 (m, CH3 e CH2) .
MS-EI m/z 500 e 502 [M+-l] e [M++l].
Exemplo 35 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 4-acetil-5-(5-bromo2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-pirrol-2car-boxílico XH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, 1H, NH) , 11,23
(s, 1H, NH) , 8,11 (s , 1H, H-vinil), 7,91 (m, 1H, CONHCH2)
7,73 (d, J = : 1,9 Hz, 1H, H -4), 7,39 (dd, J = 1,9 e 8,3 Hz
1H, H-6) 1 6, 88 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,40 (m, 2H, CH2)
2,62 (m, 2H, CH2) , 2, 57 (s, 3H, CH3CO) , 2,49 (m, 4H, 2xCH2)
2,44 (s, 3H, CH3), 1, 69 (m, 4H, 2xCH2) .
Exemplo 36
Figure BRPI0108394B1_D0218
pirrol-2-carboxílico [2-(4-Hidroxifenil)etil]amida de ácido 4-acetil-5-(5bromo-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-3-metil-lH-
XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,21 (s, 1H, NH) , 11,18
(s, ΙΗ,ΟΗ), 9,09 (s, 1H, NH) , 8, 06-8,10 (m, 2H) , 7, 73 (s,
1H) , 7,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7, 1 Hz , 2H) ,
6,88 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 7,1 Hz, 2H) , 3,42
(m, 2H, CH2) , 2,72 (m, 2H, CH2) , 2,56 (s, 3H, CH3CO) ,
(s, 3H, CH3) .
Figure BRPI0108394B1_D0219
140/265
MS-EI m/z 507 e 509 [M+-l] e [M++l] .
Exemplo 37 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol5 3-car-boxílico
Uma equiv.) , mistura de hidrocloreto de 2-aminoacetofenona (1 isobutirilacetato de etila (1,2 equiv.) e acetato de sódio (2,4 equiv.) em H20 foi agitada a 100° C durante horas e em seguida esfriada até temperatura ambiente.
• 10 camada aquosa foi decantada e o óleo foi dissolvido em acetato de etila. Foi em seguida lavada com água e salmoura e em seguida seca para produzir (93%) de éster etílico de ácido 2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico como um óleo marrom avermelhado.
1HNMR (3 00 MHz, DMSO-d6) δ 11,21 (s, br, 1H,
NH) ,
7,14-7,27 (m, 5H), 6,70 (d,
2,7 Hz, 1H),
4,02 (q,
7,1 Hz, 2H, OCH2CH3) , 3,65 (m,
1H, CH(CH3)2),
1,22 (d,
7,5 Hz, 6H, CH(CH3)2), 1,04 (t,
J = 7,1 Hz, 3H,
OCH2CH3) .
MS-EI m/z
257 [M+] .
pirrol acima foi formilatado utilizando o método A para produzir (41%) éster etílico de ácido
5-formil-2isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxilico como um sólido avermelhado.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,35 (s, br, 1H, NH), 9,14
(s, 1H, CHO) , 7,36 (s, 5H) , 3,96 (q, J = 7,1 Hz, 2H,
OCH2CH3) , 3,74 (m, 1H, CH(CH3)2) 1,29 (d, J = 6,9 Hz, 6H,
CH(CH3)2 ), 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS- -EI m/z 285 [M+] .
éster de ácido pirrolcarboxílico foi hidrolisado utilizando o método B para produzir (57%) de ácido 5-
Figure BRPI0108394B1_D0220
141/265 formil-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico como um sólido bege.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,28 (s, br, 1H, COOH) ,
12,02 (s, br, 1H, NH) , 9,10 (s, 1H, CHO) ,
7,35 (s, 5H) ,
3,81 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz,
6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 257 [M+] .
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (120 mg,
0,31 mmol) foi condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido
5formil-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico φ 10 (preparado pelo método C) para produzir 12 0 mg (71%) do composto título.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ
11,08
7,30
6,85
2H,
6,9
6H,
14,23 (s, br,
1H, NH) (s, br, 1H, NH), 7,38-7,55 (m, 7H, Ar-H e conhch2) (s, (d,
CH2) ,
1H, H-vinil), 7,26 (dd,
J = 8,7 Hz, 1H) ,
2,34 (q, J
7,1
J = 1,8 e 7,8
Hz, 1H)
Hz, 2H, CH2) , 1,40 (m,
3,36 (m, 1H, CH(CH3)2),
3,07
Hz, 4H, N(CH2CH3)2), 2,22 (t,
2H,
CH2) , 1,31 (d, J = 6,9 (m,
Hz,
7,1
Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 565.1 [M++l].
Exemplo 38 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2-isopropil-4-fenil-lH- pirrol-3-car-boxílico
Ácido
5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol-3 ilidenometil)-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (127 mg, 0,28 mmol) foi condensado com 3-pirrolidin-l-ilpropilamina (43 mg, 0,336 mmol) para produzir 140 mg (66%) do composto título.
XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,40 (s, br, 1H, NH) ,
7,38-7,47 (m, 7H) , 7,23-7,27 (m, 2H) , 6,84 (d, J = 8,1 Hz,
142/265
1H) , 3,36 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,08 (m, 2H, CH2) , 2,30 (m, 4H,
2xCH2) , 2, 20 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2) , 1,62 (m, , 4H, 2xCH2) ,
1,42 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2) , 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H,
CH(CH3)2) .
MS-EI m/z 560 e 562 [M+ -1 e M++l].
Exemplo 3 9 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido
5-(5-bromo-2-oxo-l,2-
Figure BRPI0108394B1_D0221
Figure BRPI0108394B1_D0222
diidroindol-3-ilidenometil)-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-
3-car-boxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (57 g. 0,27 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (120 mg) para produzir 78 mg (53%) do composto título como um sólido amarelo.
^NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s, br, 1H, NH) ,
11,09 (s, br, 1H, NH) , 7,38-7,51 (m, 6H) , 7,25-7,28 (m, 2H) , 7,19 (t, 1H, CONHCH2) , 6,85 (d, J = 7,8 Ηζ,ΙΗ), 3,43 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,11 (m, 2H, CH2) , 2,28-2,39 (m, 6H, N(CH2CH3)2 e CH2, 1,31 (d, J = 6,9 Hz, CH(CH3)2), 0,85 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2.
MS-EI m/z 548 e 550 [M+ -1 e M++l].
Exemplo 40 [3 -(4-Metilpiperazin-l-il)propil]amida de ácido 5-(5-bromo2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2-isopropil-4-fenil25 lH-pirrol-3-carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (53 mg, 0,25 mmol) foi condensado com [3 -(4-metilpiperazin-l-il)propil]amida de ácido 5-formil-2-isopropil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (300 mg) para produzir 65 mg do composto título.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,22 (s, br, 1H, NH) ,
Figure BRPI0108394B1_D0223
143/265
11,08 (s, br, 1H, NH) , 7,23-7,50 (m, 9H) , 6,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 3,37 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,05 (m, 2H, CH2) , 2,24 (m, 8H, 4xCH2) , 2,11 (m, 5H, CH2 e CH3),1,42 (m, 2H, CH2) , 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 589 e 591 [M+ -1 e M++l] .
Exemplo 41
Ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l, 2-diidroindol-3-ilidenometil)-2isopro-pi1-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (170 mg, 0,8 mmol) foi condensado com ácido 5-formil-2-isopropil-4-fenil-lHpirrol-3-carboxílico (205 mg) utilizando o método D para produzir 210 mg (58%) do composto título como um sólido amarelo.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,31 (s, br, 1H, NH) ,
11,16 (s, br, 1H, NH), 7,26-7,44 (m, 7H), 7,11 (s, 1H, Hvinil) , 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 3,78 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 452 [M++l] .
Exemplo 42
2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2-
Figure BRPI0108394B1_D0224
diidroindol-3-ilidenometil)-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxí-lico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (44 mg, 0,21 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 525 formil-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (70 mg, preparado do mesmo modo que a isopropila análoga acima) para produzir 0,03 g (27%) do composto título como um sólido amarelo.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,87 (s, br, 1H, NH) ,
11,11 (s, br, 1H, NH), 7,36-7,51 (m, 6H), 7,26 (dd, J = 1,8
Figure BRPI0108394B1_D0225
144/265 e 8,1 Hz, 1H), 7,2 (s, 1H, H-vinil) , 7,09 (m, 1H, CONHCH2) , 6,83 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 3,17 (m, 2H, NCH2) , 2,48 (m, CH3) , 2,29-2,35 (m, 6H, 3xNCH2) , 1,59 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 518 e 520 [M+ -1 e M++l] .
Exemplo 43 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2-metil-4-fenil-lHpirrol-3-car-boxílico • 10
6-(2-Metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona (50 mg, 0,21 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (70 mg) para produzir 0,04 g (35%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (300 MHz , DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH)
11,02 (s, br, 1H, NH), 7,48 (m, 2H) , 7,43 (m, 1H), 7,38 (m
2H) , 7,32 (m, 1H) , 7,24 (m, 2H) , 7,16 (s, 1H, H-vinil)
7,08 (m, 2H) , 7,03 (m, 1H) , 7,0 (m, 2H) , 3,74 (s, 3H
och3) , 3,19 (m, 2H, NCH2) , 2,49 (m, CH3) , 2,32 -2,38 (m, 6H
3xNCH2) , 1,59 (m, 4H, 2xCH2) .
Figure BRPI0108394B1_D0226
MS-EI m/z 546 [M+] .
Exemplo 44 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3carboxí-lico
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (46 mg, 0,22 mmol) foi condensado com (2-dimetilaminoetil)amida de ácido 5-formil2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (65 mg) para produzir 60 mg (55%) do composto título como um sólido amarelo.
Figure BRPI0108394B1_D0227
145/265
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13 , 86 (s, br, 1H, NH) ,
11,09 (s, br, 1H , NH) , 7,47-7,49 (m, 2H) , 7,38-7,41 (m,
4H) , 7,26 (dd, J = 2,2 e 8,3 Hz, 1H) , 7,21 (s, 1H , H-
vinil) , 7,04 (m, 1H, CONHCH2) , 6,77 (d, , J = 8,3 Hz, 1H) ,
3,15 (m, 2H, NCH2) , 2 ,48 (m, CH3) , 2, 16 (t, J = 6,8 Hz, 2H,
3xNCH2) , 2,02 (s, 6H, 2xNCH3) .
MS m/z 493 e 494.8 [M+ e M++2].
Exemplo 45 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)-2 • 10 oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2-metil-4-fenil-lHpirrol-3-car-boxílico
6-(2-Metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona (53 mmol) foi condensado com (2-dimetilaminoetil)amida
5-formil-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico para produzir 0,05 g (44%) do composto título como laranj a.
1HNMR
11,02 (s,
7,22-7,27
1H), 7,0 (300 MHz, DMSO-d6) δ br, 1H, (m, 2H) , (m, 2H) ,
NH) ,
7,16
3,74
13,82 (s, br,
7,37-7,52 (s, 1H), (m,
5H) ,
7,32
mg, 0,22
de ácido
65 mg)
uma goma
1H, NH) ,
(m, 1H) ,
(m,
7,03
7,08 (m,
2H) , (s, 3H, OCH3) , 3,15 (m,
2H, NCH2) ,
2,49 (m, CH3) , 2,16 (t,
J = 6,5 Hz, 2H, NCH2) , 2,02 (s, 6H,
2xNCH3) .
MS m/z 521 [M++l] .
Exemplo 46
Éster etílico de ácido
5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (60 mg, 0,29 mmol) foi condensado com éster etílico de ácido 5-formil-2-metil-
4-fenil-lH-pirrol-3-carboxílico (75 mg) para produzir 78 mg (60%) do composto título como um sólido laranja.
146/265
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,01 (s, br, 1H, NH) ,
11,13 (s, br, 1H, NH) , 7,42-7,46 (m, 3H) , 7,27-7,34 (m,
4H) , 7,12 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 2 ,2 e 8,3 Hz, 1H) , 3 , 99-
4,03 (m, 2H, OCH2CH3) , 2 ,61 (s, 3H, CH3) , 0,98-1,03 (m, 3H,
OCH2CH3) .
MS-EI m/z 450 e 452 [M+
-1 e M++l] .
Exemplo 47 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-310 carboxí-lico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,47 g, 2,2 mmol) foi condensado carboxílico título como 1HNMR
7,42-7,46
6,83 (d, J
CH3) , 2,38 com
5-formil-2-metil-4-fenil-lH-pirrol-3(0,75 g) para produzir um sólido laranja.
(3 00 MHz, DMSO-d6) δ (m,
3H) , 7,37-7,50 (m,
0,11
13,86
7H) ,
8,1 Hz, 1H) , 3,09 (m, 2H, (q.
J = 7,1 Hz, g (42%) do composto (s, br,
1H, NH) ,
7,24-7,28 (m, 2H) ,
NCH2) , 2,45 (s, 3H,
Hz, 2H, NCH2) ,
1,42 (m, 2H,
4H, 2xNCH2CH3) , 2,26 (t,
NCH2) , 0,87 (t, J = 7,1
J = 6,9
Hz, 6H,
2xNCH2CH3) .
MS-EI m/z
535.0 e 537 [M+ e M++2] .
Exemplo 48 (2-Dimetilamino-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-325 carboxílico
Uma mistura de 3-oxobutirato de terc-butila e nitrito de sódio (1 equiv.) em ácido temperatura ambiente para acético foi agitada a produzir terc-butil-2hidroximino-3-oxobutirato.
147/265
Etil-3-oxobutirato (1 equiv.), pó de zinco (3,8 equiv.) e o terc-butil-2-hidroximino-3-oxobutirato cru em ácido acético foi agitado a 60° C durante 1 hora. A mistura em H2O e o filtrado foi coletado para produzir (65%)
2-terc-butiloxicarbonil-3,5-dimetil-4etoxicarbonilpirrol.
Uma mistura de
2-terc-butiloxicarbonil-3,5-dimetil-4 etoxicarbonilpirrol e ortoformato de trietila (1,5 equiv.) em ácido trifluoroacético foi agitada a 15°C durante 1 • 10 hora. A reação foi concentrada e o resíduo foi purificado para produzir (64%)
2,4-dimetil-3-etoxicarbonil-5formilpirrol como agulhas amarelas.
2,4-Dimetil-3-etoxicarbonil-5-formilpirrol foi hidrolisado utilizando o método B para produzir (90%) ácido
5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico.
XH NMR ( 3 60 MHz, DMSO-d6 ) δ 12 (br s, 2H, NH e
CO2H) , 9,58
3H,
CH3) , 2,40 (s, 3H,
CH3) .
MS m/ z
267 [M+] .
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,17
9,
0,8 mmol) foi condensado com (2-dimetilaminoetil)amida de ácido 5-formil2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,2
9, preparado pelo método C) utilizando o método B para produzir 0,3 g (83%) do composto título como um sólido amarelo.
XHNMR (360 MHz, DMSO-d6)
10,94 (s, br, 1H, NH), (s, 1H, H-vinil), 7,44 (t, (dd, J = 1,8 e 8,4 Hz,
1H,
H-7) , 3,26-3,33 (m, 2H,
8,07
J
NCH2) ,
H-6 (d,
δ 13,60 (s, br, 1H,
J = 1,8 Hz, 1H, H-4),
: 5,2 Hz, 1H, CONHCH2) ,
) , 6, 82 (d, J = 8,4 Hz
2,42 (s, 3H, CH3) , 2,4
NH) ,
7,75
7,24
1H, /
(s,
Figure BRPI0108394B1_D0228
148/265
3Η, CH3) , 2,38 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2) , 2,18 (s, 6H,
N(CH3)2) .
MS-EI m/z 430 e 432 [M+-l e M++l] .
Exemplo 49 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3 carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (0,17 g, 0,8 mmol) foi condensado com 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico 10 (0,2 g) para produzir 0,13 g (36%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, br, 1H, NH) ,
10,93 (, br, 1H, NH), 7,85 (d, J = 7,92 Hz, 1H, H-4), 7,63-
7,65 (m, 3H) , 7,40-7,47 (m, 3H,), 7,32-7,36 (m, 1H, Ar-H),
15 7,30 (dd , J = 1,6 e 7,9 Hz, 1H, H-5), 7,11 (d, J = 1,6 Hz,
1H, H-7) , 3, 28-3,34 (m, 2H, NCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,41
(s, 3H, ch3) , 2,38 (t, J = 6,8 Hz, 2H, NCH2 ), 2,18 (s, 6H,
N(CH3)2) .
MS-EI m/z 428 [M+] .
Figure BRPI0108394B1_D0229
Exemplo 50 (2-Dimetilamino-etil)amida de ácido 5-(5-cloro-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
5-Cloro-l,3-diidroindol-2-ona (0,1 g, 0,6 mmol) foi condensado com (2-dimetilamino-etil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,15 g) para
produzir 0, 22 g (90%) do composto título como um sólido
amarelo.
1HNMR (300 MHz, DMSO- -d6) δ 13 ,61 (s, br, 1H, , NH) ,
30 10,98 (, br , 1H, NH) , 7,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H, H-4) , 7,75
Figure BRPI0108394B1_D0230
149/265
(s, 1H, H-vinil) , 7,50 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONHCH2) , 7,12
(dd, J = 2,0 e 8 1,3 Hz, 1H, H- -6) , 6, 86 (d, J = 8,3 Hz, 1H,
H-7), 3,26-3,31 (m, 2H, , nch2) , 2,42 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s,
3H, CH3) , 2,36 (t, J = 6,6 Hz, 2H, NCH2) , 2,17 (s, 6H,
MS-EI m/z 386 [M+] .
Exemplo 51 (2-Dietilamino-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-οχο-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3• 10 carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,17
9,
0,8 mmol) foi condensado com (2-dietilamino-etil)amida de ácido 5-formil2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,2
g) para produzir
0,09 g (26%) do composto título sólido amarelo.
como um
15 XHNMR (360 MHz, DMSO- •d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH),
10, 98 (, br, 1H, NH) , 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 1H, H-4), 7,76
(s, 1H, H-vinil) , 7,42 (t, J = 5 ,5 Hz, 1H, CONHCH2) , 7,24
(dd , J = 1,7 e 8 ,0 Hz, 1H, H-6) f 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 1H,
H-7)
2,46-2,55 /
(m, 6H, 3xNCH2) ,
3,23-3,32 (m, 2H, NCH2) ,
2,43 (s, 3H, CH3) , 2,42 (s, 3H,
CH3) , 0,96 (t, J = 7,2 Hz,
6H, 2xNCH2CH3) .
MS-EI m/z 458 e 460 [M+-l e M++l].
Exemplo 52 (2-Pirrolidin-l-il-etil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo25 1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (0,09 g, 0,4 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,1 g) para
Figure BRPI0108394B1_D0231
150/265 produzir 0,14 g (81%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (300
MHz,
DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H,
NH) ,
7,76
8,09
Hz,
NH) ,
10,98 (, br, 1H, (d, J = 1,9
1H, H-4),
5 (s, 1H, H-vinil), 7,53 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONHCHJ ,
(dd, J = 1,9 e 8,5 Hz, 1H, H-6) , 6,81 (d, J = 8,5 Hz,
H-7) , 3,29-3,35 (m, 2H, NCH2) , 2,54 (t, J = 6,9 Hz,
nch2) , 2,47 (m, sob DMSO) , 2,42 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s,
ch3) , 1,66-1,69 (m, 4H, 2xCH2) .
7,24
3H,
MS-EI m/z
456
Exemplo 53
1H,
2H, e 458 [M+-l e M++l] .
(3-Imidazol-l-il-propil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (0,09 g, 0,4 mmol) foi condensado com (3-imidazol-l-il-propil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,1 g) para produzir 0,1 g (59%) do composto título como um sólido laranj a.
20 • 1HNMR (300 MHz, 10,99 (, br, 1H, NH), DMSO-d6) δ 13,63 (s Hz, , br, 1H, 1H, H-4), NH) , 7,77
8,09 (d, J = 2,2
(s, 1H, H-vinil), 7,71 (t, J = 5,7 Hz, 1H, CONHCH2) , 7,65
(s, 1H, Ar-H), 7,25 (dd, J = 2,2 e 8,4 Hz, 1H, H-6), 7,20
(s, 1H, Ar-H), 6,89 (s, 1H, Ar-H), 6 ,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H,
25 H-7) , 4 ,02 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2) , 3, 18 (q, J = 6,7 Hz,
2H, NCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,41 (s, 3H, CH3) , 1,93 (m,
2H, CH2) .
MS-EI m/z 467 e 469 [M+-l e M++l].
Exemplo 54 (2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(2-metoxifenil)-2-
Figure BRPI0108394B1_D0232
151/265 oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol3-carboxi-lico
6-(2-Metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona mmol) foi condensado com (2-dimetilaminoetil)
5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico produzir 0,06 g (100%) do composto título
1aranj a amare1ada.
DMSO-d6) δ 13,60 (s, ^•HNMR (300 MHz,
10,89 (s, br, 1H, NH),
• 10 1H, H-vinil), 7,46 (t,
(m, 2H), 6,99-7,11 (m,
(m, 2H, NCH2) , 2,43 (s
(m, 2H, NCH2) , 2,18 (s,
MS-EI m/z 458
Exemplo 55
6H, N(CH3)2).
7,79 (d, J = 8,4 Hz,
4H) , 3,76 (s, 3H, OCH3)
J = 5,5 Hz, 1H, CONHCH2)
(30 mg, 0,13
amida de ácido
(30 mg) para
como uma goma
br, 1H, NH) ,
1H) , 7,63 (s,
7,28-7,35 t
3,27-3,31 , 3H, CH3) , 2,39 (s, 3H,
CH3) , 2,37 [M+] .
(2-Dimetilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(3-metoxifenil)-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol3-carboxi-lico
6-(3-Metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona (30 mg,
0,13 mmol) foi condensado com (2-dimetilaminoetil)amida de ácido
5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (30 mg) para produzir 8 mg (14%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (360 MHz,
DMSO-d6) δ 13,59 (s, br,
1H, NH) , (s,
1H, NH) /
7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,65
10,92 (s, br,
1H, H-vin il) , 7,42 (m, 1H, C0NHCH2) , 7,36 (d, J = 7
1H) , 7,29 (dd , J = 1,6 e 7,6 Hz, 1H) , 7,20 (d , J = 7
1H) , 7,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 1,6 Hz
6,91 (dd, J = 2,8 e 7,8 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H, OCH3) ,
3,33 (m, 2H, NCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s, 3H,
Hz,
Hz,
1H) ,
3,21CH3) , ,8 ,8 /
152/265
2,36-2,40 (m, 2H, NCH2) , 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+] .
Exemplo 56 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-55 fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
5-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (80 mg, 0,4 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil
Figure BRPI0108394B1_D0233
Figure BRPI0108394B1_D0234
2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,1 g) utilizando o método B para produzir 79 mg (46%) do composto título.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, br, 1H, NH) , 10,95 (, br, 1H, NH) , 8,15 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 7,81 (s, 1H, H-vinil) , 7,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,40-7,47 (m, 4H) ,
7,31 (m, 1H) , 6,95 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 3,2-3,31 (m, 2H,
NCH2) , 2,46-2,55 (m, 6H, 3xNCH2) , 2,44 (s, 6H, 2xCH3) , 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, 2xNCH2CH3) .
MS-EI m/z 456 [M+] .
Exemplo 57 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo5-fenil-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3 carboxilico
5-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (0,04 g, 0,2 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,04 g) para
25 produzir o composto título como um sólido laranj a
amarelado. 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, br, 1H, NH) ,
10,96 (, br, 1H, NH) , 8,15 (d, J = 1,0 Hz, 1H) , 7,80 (s,
1H, H-vinil) , 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 7,49 (t, J = 6,3
30 Hz, 1H, CONHCH2) , 7,41-7,46 (m, 3H) , 7,31 (m, 1H) , 6,95 (d,
153/265
J = 7,8 Hz, 1H) , 4,08 (m, 4H, 2x NCH2) , 3,32 (m, 2H, NCH2) ,
2,55 (t, J = 7,1 Hz, 2H, NCH2) , 2,47 (m, sob DMSO), 2,43 (s, 6H, 2xCH3) , 1,66 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 454 [M+] .
Exemplo 58 (3-Imidazol-1-ilpropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo5-fenil-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
5-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (8 mg, 0,04 mmol) foi • 10 condensado com (3-imidazol-l-ilpropil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (10 mg) para
produzir 10 mg (59%) do composto título como um sólido
laranj a.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (s, br, 1H, NH) ,
15 10,96 (, br, 1H, NH) , 8,16 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 7,81 (s,
1H, H-vinil) , 7,65-7,72 (m, 4H) , 7,44 (m, 3H) , 7,31 (m, 1H
CONHCHJ , 7,21 (s, 1H, Ar-H), 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H
NCH2) , 3,19 (q, J = 6,5 Hz, 2H, CONHCH2) , 2,44 (s, 6H
2xCH3) , 1,93 (m, 2H, CH2CH2 CH2) .
20 MS-EI m/z 465 [M+] .
Exemplo 59 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (0,08 g, 0,4 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,1 g) para produzir 65 mg (38%) do composto título como um sólido amarelo.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) ,
10,99 (, br, 1H, NH) , 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,62-7,66
154/265 (m, 3H), 7,40-7,47 (m, 3H), 7,28-7,36 (m, 2H), 7,10 (d, J =
1,2 Hz, 1H) , 3,26 (m, 2H, NCH2) , 2,46-2,55 (m, 6H, 3xNCH2) , 2,44 (s, 3H, CH3) , 2,41 (s, 3H, CH3) , 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2xNCH2CH3) .
MS-EI m/z 456 [M+] .
Exemplo 60 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo6-fenil-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (30 mg, 0,15 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (40 mg) para produzir 5,9 mg (8.5%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
15 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH) ,
10,99 (, br, 1H, NH) , 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,63-7,66
(m, 3H), 7,51 (m, 1H, CONHCH2) , 7, 45 (m, 2H), 7,28-7,36 (m,
2H) , 7,10 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 3,31 (m, 6H, 3xNCH2) , 2,55 (t, J = 6,6 Hz, 2H, NCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s, 3H,
Figure BRPI0108394B1_D0235
CH3) , 1,67 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 454 [M+] .
Exemplo 61 (3-Imidazol-l-ilpropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo6-fenil-l,2-diidroindol-3-ilidenometol)-lH-pirrol-325 carboxílico
6-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (8 mg, 0,04 mmol) foi condensado com (3-imidazol-1-ilpropil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (10 mg) para produzir 7,3 mg (43%) do composto título como um sólido 30 laranja.
155/265 ///
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s , br, 1H, NH) ,
10,99 (, br, 1H, NH) , 7,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,62- 7,70
(m, 5H), 7,45 (m, 2H) , , 7,35 (m, , 1H) , 7,30 (dd, J = 1 ,4 e
8,2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,10 (d, J = 1, 4 Hz, 1H) , 6,89
5 (s, 1H) , 4,02 (t, J = 6,9 Hz, : 2H, CH2) , 3, 19 (m , 2H, nch2
ch2) , 2,43 (s, 3H, ch3) , 2,41 (s, , 3H, CH3) , ] .,93 (t, J = : 6,9
Hz, 2H, NCH2) .
MS-EI m/z 465 [M+] .
Exemplo 62 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-[6-(3,5-diclorofenil)2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxí-lico
6-(3,5-Diclorofenil)-1,3-diidroindol-2-ona (64 mg,
0,23 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (60 mg) para produzir 53 mg (44%) do composto título como um sólido marrom claro.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH) ,
10,99 (s, , 1H, NH) , 7,89 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-4), 7, .69- •7,71
20 (m, 3H), 7,55 (m, 1H, CONHCHJ , 7,37 (m, , 2H), 7,14 (d, J =
• 1,4 Hz, 1H, H-7) , 3,27 (m, 2H, NCH2) , 2,48-2,58 (m, 6H,
3xNCH2) , 2,45 (s, 3H, CH3) , 2,42 (s, 3H, CH3) , 0,97 (t, J =
6,8 Hz, 6H, 3xNCH2CH3) .
MS m/z 526.9 [M++l] .
Exemplo 63 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6piridin-3-il-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
6-Piridin-3-il-l,3-diidroindol-2-ona (40 mg, 0,19 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido
Figure BRPI0108394B1_D0236
156/265
5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 29 mg (33%) do composto título como um sólido laranja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH) ,
5 11,05 (s, br, 1H, NH), 8,86 (s, , br, 1H) , 8,53 (d, , J = 5,8
Hz, 1H), 8,04 (m, 1H) , 7,91 (d, , J = 8,1 Hz, 1H) , 7,70 (s,
1H, H-vinil), 7,40-7,48 (m, 2H) , 7,35 (d, J = 7,5 Hz, 1H) ,
7,14 (s, 1H) , , 3,26 (m, 2H, NCH2) , 2 ,48-2,55 (m, 3xNCH2) ,
2,42 (s, 3H, CH3) , 2,38 (s, 3H, ch3) , 0,96 (t, J = 6,9 Hz,
6H, 2xNCH2CH3) .
MS-EI m/z 457 [M+] .
Exemplo 64 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo6-piridin-3-il-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-315 carboxi-lico
6-Piridin-3-il-l,3-diidroindol-2-ona (60 mg, 0,28 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (75 mg) para produzir 90 mg (71%) do composto título como um sólido
• 20 laranja claro.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) ,
11,05 (s, br, 1H, NH) , 8,86 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,54 (dd,
J = 1,5 e 4,8 Hz, , 1H) , 8,05 (m, 1H), 7,91 (d, J = 7,8 Hz,
1H) , 7,70 (s, 1H, H-vinil), 7,44 -7,53 (m, 2H), 7 ,36 (dd, J
25 = 1,5 e 8,1 Hz, 1H), 7, 15 (d, J = = 1,2 Hz, 1H), 3, 33 (m, 2H,
NCH2) , 2,47-2,57 (m, 6H, 3xNCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,41 (s, 3H, CH3) , 1,67 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 455 [M+] .
Exemplo 65 (3-Dimetilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-
Figure BRPI0108394B1_D0237
157/265
6-piridin-3-il-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxí-lico
6-Piridin-3-il-l,3-diidroindol-2-ona (42 mg, 0,2 mmol) foi condensado com (3-dimetilaminopropil)amida de 5 ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 67 mg (75%) do composto título como um sólido marrom amarelado.
XHNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) ,
11,00 (s, br, 1H, NH), 8,86 (s, br, 1H), 8,54 (s, br, 1H),
• 10 8,04 (m, 1H) , 7,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,69 (s, 1H, H-
vinil) 7,63 (m, 1H) , 7,45-7,48 (m, 1H) , r 7,35 (dd, J = 1, 7 e
8,0 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,21-3,27 (m, 2H,
NCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,41 (s, 3H, CH3) , 2,28 (m, 2H,
NCH2) , 2,14 (s, 6H, 2xNCH3) , 1,64 (m, 2H, CH2) .
15 MS-EI m/z 443 [M+] .
Exemplo 66 (3-Dimetilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo5-fenil-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboílico
5-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (67 mg, condensado com (3-dimetilaminopropil)amida formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico produzir 40 mg (28%) laranj a.
1HNMR (360
MHz,
10,92 (s, br,
1H,
NH) ,
2H) , 7,62 (m,
1H) , 7,44 (m, 3H) , 7,32 (m, do composto título
8,14 (s, 1H), 7,79 (s
DMSO-d6) δ 13,66 (s
0,32 mmol) foi
de ácido 5-
(81 mg) para
como um sólido
, br, 1H, NH) ,
1H) , 7,71 (m,
1H) , 6,95 (m,
2H,
1H), 3,33 (m,
2H, NCH2) , 2,43 (s, 6H, 2xCH3) , 2,27 (m,
NCH2) , 2,13 (s, 6H, 2xNCH3) , 1,63 (m, 2H, CH2) .
MS-EI m/z 442 [M+] .
Figure BRPI0108394B1_D0238
158/265
Exemplo 67 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-5fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3 carboxílico
5-Fenil-l,3-diidroindol-2-ona (1,5 g, condensado com (3-dietilaminopropil)amida formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico produzir 1,3 g (40%) do composto título
7,16 mmol) foi
de ácido 5-
(2 g) para
como um sólido
laranja amarelado.
• 10 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s,
1H,
NH)
10,91 (s, 1H, NH) , 8,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H, ArH), 7,8 (s, 1H,
ArH), 7,7 (dd, J = 1,2 e 8,5 Hz, 2H, ArH), 7,6 (t, J = 5,3
Hz, 1H, CONHCH2) , 7,4 (m, 3H, ArH), 7,3 (t, J = 7,4 Hz, 1H,
ArH), 6,9 (d, J = 8,0 Hz, 1H, ArH), 3,2 (m, 2H, CONHCH2) ,
2,5 (m, 12H, 3xNCH2 e 2xCH3) , 1,61 (m, 2H, CH2CH2CH2) , 0,93 (t, J = 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3) .
MS-EI m/z 470 [M+] .
Exemplo 68
Figure BRPI0108394B1_D0239
(3-dietilaminopropil)amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-6fenil-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3carboxílico
6-fenil-l,3-diidroindol-2-ona (1,5 g, condensado com (3-dietilaminopropil)amida formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico do composto título
7,16 mmol) foi
de ácido 5-
(2 g) para
como um sólido
produzir 1,9 g (57%) laranj a.
1HNMR (360 MHz,
DMSO-d6) δ 13,58 (s,
1H,
NH) ,
10,94 (s, 1H, NH) , 7,8 (d,
J = 7,9 Hz,
1H,
ArH), 7,6 (m, 4H,
ArH), 7,4 (t, J = 7,5
Hz, 2H, ArH),
7,3 (m, 2H), 7,1 (d, J
1,4 Hz, 1H, ArH), 3,2 (m, 2H, CONHCH2) , 2,5 (m, 12H,
159/265
3xNCH2 e 2xCH3) , 1,61 (m, 2H, CH2CH2CH2) , 0,93 (t, J = 6,7
Hz, 6H, NCH2CH3) .
MS-EI m/z 470 [M+] .
Exemplo 69 (3-Cloro-4-metoxifenil)amida de ácido 3 -[4 -(3-dietilaminopropilcarbamoil)-3,5-dimetil-lH-pirrol-2-ilmetileno]-2-oxo-
2,3-diidro-lH-indol-4-carboxílico (3-Cloro-4-metoxifenil)amida de diidro-lH-indol-4-carboxílico (1 g, ácido 2 -oxo-2,33,16 mmol) foi
Figure BRPI0108394B1_D0240
condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (1 g, 3,58 mmol) para produzir 1,7 g (85%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
MS-EI m/z 578.2 [M+] .
Exemplo 70 (3-Dietilaminopropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (0,5 g, 2,36 mmol) foi
Figure BRPI0108394B1_D0241
condensado com (3-dietilaminopropil)amida de ácido 5 formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (0,51 g) para produzir 0,84 g do composto título como um sólido laranja avermelhado.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, 1H, NH) ,10,99 (s, 1H, NH) , 8,09 (d, J = 1,8 Hz, 1H, ArH), 7,7 (m,4H) ,
7,2 (dd, J = 1,8 e 8,3 Hz, 2H, ArH), 6,8 (d, J = 7,8 Hz,
1H, ArH), 3,3 (br s, 4H, 2xNCH2) , 3,2 (m, 2H, CONHCH2) , 2,6 (br s, 2H, NCH2 e 2xCH3) , 2,4 (s, 6H, 2xCH3) , 1,66 (m,2H,
CH2CH2CH2) , 0,98 (t, J = 7,1 Hz, 6H, NCH2CH3) .
MS-EI m/z 472 e 474 [M+ -1 e M++l] .
160/265
Exemplo 71 (2-Dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-diisopropil-lH-pirrol-3 carboxí-lico
5-Bromo-1,3-diidroindol-2-ona (100 mg, 0,47 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil-
2,4-diisopropil-lH-pirrol-3-carboxílico (150 mg) para produzir 0,15 g (62%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
10 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,97 (s, 1H, NH) , 10,95
(s, 1H, NH) , 8,09 (d, J = 1,3 Hz, 1H, ArH), 7,84 (m, 1H) ,
7,79 (s, 1H) , 7, 23 (dd , J = 1,3 e 8,1 Hz, 1H, ArH) , , 6,8 (d,
J = 8,1 Hz, 1H, ArH) , 3,5 (m, 1H, CH) , 3,3 (m, 3H, CH e
NHCH2) , 2,5 (br m, 6H, , 3xNCH2) , 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H,
15 2xCH3) , 1,23 (d , J = 6,6 Hz, 6H, 2xCH3) , 0,96 (m, 6H,
2xCH2CH3) .
MS-EI m/z 514 e 516 [M+-l e M++l] .
Exemplo 72
Figure BRPI0108394B1_D0242
(3-Dietilamino-propil)amida de ácido 5 -(5-bromo-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-diisopropil-lH-pirrol-3carboxí-lico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (90 mg, 0,42 mmol) foi condensado com (3-dietilamino-propil)amida de ácido 5formil-2,4-diisopropil-lH-pirrol-3-carboxílico (140 mg) para produzir 54 mg (25%) do composto título como um sólido marrom avermelhado.
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13, ,98 (s, 1H, NH) , 10,96
(s, 1H , NH) , 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 2H) , 7,78 (s, 1H, H-
vinil), 7,23 (dd, J = 1,7 e 8,1 Hz, 1H, ArH), 6 , 82 (d, J =
30 8,1 Hz , 1H, ArH), 3,5 (m, 1H, CH) , , 3, 25 (m, 2H, nhch2) ,
161/265 /A?
3,15 (m, 1H, CH) , 2,7 (br s, 6H, 3xNCH2) , 1,7 (br m, 2H,
CH2CH2CH2) , 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, 2xCH3) , 1,24 (d, J =
5,9 Hz, 6H, 2xCH3) , 1,06 (m, 6H, 2xCH2CH3) .
MS-EI m/z 528 e 530 [M+-l e M++l] .
Exemplo 73 (3-Pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-diisopropil-lH-pirrol3-carbóxi-lico
Figure BRPI0108394B1_D0243
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (130 mg, 0,6 mmol) foi condensado com (3-pirrolidin-l-ilpropil)amida de ácido 5formil-2,4-diisopropil-lH-pirrol-3-carboxílico (150 mg,
0,45 mmol) para produzir 36 mg (15%) do composto título como um sólido laranja bronzeado.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, 1H, NH) , 10,97
15 (s, 1H, NH) , 8,10 (d, J = 1,6 Hz, 2H) , 7,78 (s, 1H, H-
vinil), 7,23 (dd, J = 1 ,6 e 7,6 Hz, 1H, ArH), 6,82 (d, J =
7,6 Hz, 1H, ArH) , 3,5 (m, 1H, CH) , 3, 25 (m, 2H, NHCH2) ,
3,15 (m, 1H, CH) , 2,7 (br s, 6H, 3xNCH2) , 1,7 (br m, 6H,
3xNCH2CH2) , 1,28 (d, J = 5,6 Hz, 6H, 2xCH3) , 1,24 (d, J =
Figure BRPI0108394B1_D0244
5,7 Hz, 6H, 2xCH3) .
MS-EI m/z 526 e 528 [M+-l e M++l].
Exemplo 74 (Piridin-4-ilmetil)-amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-325 carboxílico
5-Bromo-l,3-diidroindol-2-ona (170 mg, 0,8 mmol) foi condensado com (piridin-4-ilmetil)-amida de ácido 5-formil-
2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (200 mg) para produzir 14 mg (4%) do composto título como um sólido amarelo.
Figure BRPI0108394B1_D0245
162/265 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (s, 1H, NH) , 11,01
(s, br, 1H, NH), 8,51 (dd, J = 1,6 e 4,3 Hz, 2H), 8,23 (t,
J = 6,0 Hz, 1H, CONHCH2) , 8,11 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,78
(s, 1H, H-vinil), 7,31 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,25 (dd, J =
5 1,9 e 8, ,1 Hz, 1H) , 6,82 (d, J : = 8,1 Hz, 1H), , 4,45 (d, J =
6,0 Hz, 2H, NCH2) , , 2,46~ (s, 6H, 2xCH3) .
MS-EI m/z 450 e 452 [M+-l e M++l].
Exemplo 7 5
Figure BRPI0108394B1_D0246
(2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(4-butilfenil)2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxi-lico
5-[6-(4-Butilfenil)]-1,3-diidroindol-2-ona (50 mg,
0,19 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 74 mg (76%) do composto título como um sólido laranja.
XHNMR (3 60 (s, br, vinil), (m, 3H)
2xCH2) ch3) ,
MHz,
DMSO-d6)
13,58 (s,
1H, NH) ,
10,93
1H, NH) ,
7,54 (d,
7,09 (s,
7,82 (d, J
7,9
Hz, 1H),
7,63 (s,
1H, HJ = 7,9 Hz, 2H),
7,46 (m,
1H, CONH)
1H) , 3,30 (m, 2H, CH2) , 2,52-2,63
2,49 (m, 4H, 2xCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,40
1,68 (m, 4H, 2xCH2) , 1,58 (m, 2H, CH2) , 1,34 (m, (s, (m,
7,26
4H,
3H,
2H,
CH2) ,
0,91 (t, J= 7,2 Hz, 3H, CH2CH3) .
MS-EI m/z 510 [M+] .
5 Exemplo 7 6 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(5-isopropil-2metoxifenil)-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
6- (5-Isopropil-2-metoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona (50 mg, 0,17 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-1 163/265 iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-
carboxílico (45 mg) para produzir 67 mg (75%) do composto
título como um sólido laranja.
^•HNMR (360 MHz, DMSO-d6) Ô 13, 60 (s, 1H, NH) , 10,82
(s, br, 1H, NH), 7,77 (d, J = 7,9 Hz, , 1H), 7,61 (S, 1H, H-
vinil), 7,45 ; (m, 1H, CONH), 7,0-7, . 19 (m, 5H) , 3 ,73 (s, 3H,
OCH3) , 3,32 (m, 2H, CH2) , 2,87 (m, 1H, CH(CH3)2), 2,56 (m
2H, CH2) , 2,48 (m, 4H, 2xCH2) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s
3H, CH3) , 1,68 (m, 4H, 2xCH2) , 1,21 (d, J = 6,8 Hz, 6H
φ 10 CH(CH3)2).
MS m/z 527.2 [M++l] .
Exemplo 77 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-[6-(4-etilfenil)-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol15 3-carboxi-lico
6- (4-Etilfenil)-1,3-diidroindol-2-ona (45 mg, 0,19 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 60 mg (65%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH) , 10,96 (s, br, 1H, NH), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H, Hvinil), 7,51-7,56 (m, 3H), 7,25-7,30 (m, 3H), 7,08 (d, J =
1 Hz, 1H), 3,31 (m, 2H, CH2) , 2,63 (m, 2H, CH2CH3) , 2,55 (m,
25 2H, CH2) , 2,49 (m, 4H, 2xCH2) , 2,42 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s,
3H, CH3) , 1,67 (m, 4H, 2xCH2) , 1,20 (t, J= 7,5 Hz, 3H,
CH2CH3) .
MS-EI m/z 482 [M+] .
Exemplo 7 8
164/265 (2-Pirrolidin-l-iletil) amida_____de_____ácido_____5- [6- (2,4dimetoxifenil)-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-car-boxílico
6-(2,4-Dimetoxifenil)-1,3-diidroindol-2-ona (51 mg,
0,19 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 30 mg (31%) do composto título como um • 10 sólido laranja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13 ,59 (s, 1H, NH) , io , 86
(s, br, 1H, NH) , 7, ,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7, 60 (s, 1H, H-
vinil), 749 (m, 1H , CONH) , 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7 , 03
(m, 1H) , 6 ,97 (s, 1H) , 6,58-6,65 (m, 2H) , 3,79 (s, 3H,
och3) , 3,76 (s, 3H, . OCH3) , 3,33 (m, 2H , ch2) , 2,55 (m, 2H,
ch2) , 2,50 (m, 4H, 2xCH2) , 2,42 (s, 3H , CH3), 2,39 (s, 3H,
ch3) , 1,67 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/ z 514 [M+] .
Exemplo 79 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido
5- [6- (3isopropilfenil)-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil]-2,420 dimetil-lH-pirrol-3-car-boxílico
6-(3-Isopropilfenil)-1,3-diidroindol-2-ona (48 mg,
0,19 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (50 mg) para produzir 59 mg (63%) do composto título como um sólido laranja.
1HNMR (300 MHz,
DMSO-d6) δ 13,63 (s,
1H, NH), 10,97 (s, br, 1H, NH), 7,87 (d, J
7,8 Hz, 1H),
7,68 (s, 1H, Hvinil), 7,24-7,55 (m,
6H), 7,13 (s, 1H), 3,34 (m, 2H, CH2) ,
3,30 (m, 1H, CH(CH3)2), 2,60 (m, 2H, CH2) ,
2,50 (m, 4H,
2xCH2) , 2,45 (s, 3H, CH3) , 2,43 (s, 3H, CH3) ,
1,70 (m, 4H,
165/265
2xCH2) , 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 496 [M+] .
Exemplo 80 (2-Dietilamino-etil)amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,25 diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3 carboxílico
5-Fluoro-l,3-diidroindol-2-ona (0,54 g, 3,8 mmol) foi condensado com (2-dietilamino-etil)amida de ácido 5-formil-
2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico para produzir 0,83 g (55%) do composto título como um sólido verde amarelado.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, 1H, NH) , 10 , 83
(s, br, 1H, NH) , 7, 73 (dd, J = 2,5 e 9 ,4 Hz, 1H), 7,69 (s,
1H, H-vinil) , 7,37 (t, 1H, CONHCH2CH2) , 6,91 (m, 1H), 6, 81-
6,85 (m, 1H) , 3,27 (m, 2H, CH2) , 2,51 (m, 6H, 3xCH2) , 2 ,43
(s, 3H, CH3) , 2,41 (s, 3H, CH3) , 0,96 (t, J = 6,9 Hz, 6H,
N(CH2CH3)2) .
MS-EI m/z 398 [M+] .
Exemplo 80 (Síntese alternativa) (2-dietilamino-etil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2 -
Figure BRPI0108394B1_D0247
diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Hidrato de hidrazina (55 %, 3000 mL) e 5-fluoroisatin (300 g) foram aquecidos até 100 °C. Foram adicionados 5fluoroisatin adicionais 500 g) em porções (100 g) durante 25 120 minutos com agitação. A mistura foi aquecida até 110 °C e agitada durante 4 horas. A mistura foi esfriada até temperatura ambiente e os sólidos coletados por filtração a vácuo para produzir hidrazida de ácido (2-amino-5-fluorofenil)-acético (748 g) . A hidrazida foi suspensa em água 3 0 (700 mL) e o pH da mistura foi ajustado para < pH 3 com
Figure BRPI0108394B1_D0248
166/265 ácido hidroclórico 12N. A mistura foi agitada durante 12 horas a temperatura ambiente. Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo e lavados duas vezes com água. 0 produto foi seco sob vácuo para produzir 5-fluoro-l,35 diidro-indol-2-ona (600 g, 73 % de rendimento) como um pó marrom. 1H-NMR (dimetilsulfoxeto-d6) δ 3,46 (s, 2H, CH2) ,
6,75, 6,95, 7,05 (3 x m, 3H, aromático),
MS m/z 152 [M+l].
2-Terc-butil éster 4-etil éster de
10,35 (s, 1H, NH).
ácido 3,5-dimetil10 lH-pirrol-2,4-dicarboxílico (2.600 g) e etanol (7.800 mL) foram agitados
10N (3.650 aumentou de
A mistura aquecimento temperatura
L de gelo e mL) vigorosamente enquanto ácido hidroclórico foi adicionado lentamente. A temperatura °C para 3 5 °C foi arrefecida adicional durante era 67 °C.
água foram
O sólido foi coletado até uma evolução °C hora ao de gás começou.
e agitada com final da qual a
A mistura foi esfriada lentamente adicionados a vácuo até com °C e 32 e lavado três vezes com água. O sólido foi seco ao ar até peso constante para produzir éster etílico de ácido
2,4-dimetil-lH-pirrol3-carboxílico (1.418 g, 87 % de rendimento) como um sólido rosado. XH-NMR (dimetilsulf oxeto-d6) δ 2,10,
2,35 (2xs,
2x3H, 2xCH3) , 4,13 (q, 2H, CH2) , 6,37 (s, 1H,
CH) ,
10,85 (s, 1H, NH). MS m/z 167 [M+l].
Dimetilformamida (322 g) e diclorometano (3.700 mL) foram esfriados em um banho de gelo até 4 adicionado oxicloreto de fósforo (684 g) com °C e foi agitação.
sólido (670 g) foi adicionado lentamente em alíquotas durante 15 minutos. A temperatura máxima alcançada foi 18 °
Figure BRPI0108394B1_D0249
167/265
C. A mistura foi aquecida com refluxo durante uma hora, esfriada até 10 °C em um banho de gelo e 1,6 L de água gelada foi rapidamente adicionada com agitação vigorosa. A temperatura aumentou até 15 °C. Foi adicionado ácido 5 hidroclórico 10 N (1,6 L) com agitação vigorosa. A temperatura aumentou até 22 °C. Permitiu-se que a mistura assentasse durante 30 minutos e que as camadas se separassem. A temperatura alcançou um máximo de 40 °C. A camada aquosa foi ajustada para pH 12-13 com hidróxido de 10 potássio 10N (3.8 L) a uma taxa que permitiu que a temperatura alcançasse e permanecesse em 55 °C durante a adição. Após término da adição, a mistura foi esfriada até 10 °C e agitada durante 1 hora. O sólido foi coletado por filtração a vácuo e lavado quatro vezes com água para 15 produzir éster etílico de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico (778 g, 100 % de sólido amarelo. XH-NMR (DMSO-d6) δ 1,25 rendimento) como um (t, 3H, CH3) , 2,44,
2,48 (2xs,
CHO), 12,15
Éster
2x3H, 2xCH3) ,
4,16 (q, 2H,
CH2) , 9,59 (s, 1H, (br s, 1H, NH)
MS m/z 195 [M+l].
etílico de
g) , hidróxido de potássio (548
g) , água (2.400 mL ) e metanol (300 mL) foram refluídos durante duas horas com agitação e em seguida esfriados até 8 °C. A mistura foi extraída duas vezes com diclorometano.
A camada aquosa foi ajustada para pH 4 com 1.000 mL de ácido hidroclórico 10N mantendo a temperatura abaixo de 15 °C. Foi adicionada água para facilitar a agitação. 0 sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado três vezes com água e seco sob vácuo a 50 °C para produzir ácido 5-formil30 2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (645 g, 93.5 % de
168/265 rendimento) como um sólido amarelo. NMR (DMSO-d6) δ 2,40,
2,43 (2xs, 2x3H, 2xCH3) , 9,57 (s, 1H, CHO) , 12,07 (br s,
2H, NH+COOH), MS m/z 168 [M+l].
Ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (1.204 g) e 6.020 mL de dimetilformamida foram agitados a temperatura ambiente enquanto hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2.071 g) , hidroxibenzotriazol (1.460 g) , trietilamina (2.016 mL) e dietiletilenodiamina (1.215 mL) foram adicionados. A mistura foi agitada durante 20 horas a temperatura ambiente. A mistura foi diluída com 3.000 mL de água, 2.000 mL de salmoura e 3.000 mL de solução de bicarbonato de sódio saturado e o pH ajustado para um valor acima de 10 com hidróxido de sódio 10N. A mistura foi extraída duas vezes com 5.000 mL de cada vez de metanol a 10% em dicloro metano e os extratos combinados, secos sobre sulfato de magnésio anidro e evaporados por rotação até secagem. A mistura foi diluída com 1.950 mL de tolueno e evaporada por rotação novamente até secagem. O resíduo foi triturado com hexano:éter dietílico 3:1 (4.000 mL) .
Os sólidos foram duas vezes com 400 mL de acetato de etila e secos sob vácuo a 34 °C durante horas para produzir (2-dietilamino-etil)-amida de formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (819 g, rendimento) como um sólido marrom.
ácido %
5de XH-NMR (dimetilsulfoxeto-d6)
0.96 (t, 6H,
2xCH3) ,
2,31, 2,38 (2xs, 2 x CH3) , 2,51 (m,
6H 3xCH2) , 3,28 (m,
2H,
CH2 ) , 7,34 (m, 1H, amida NH), 9,56 (s, 1H, CHO), 11,86 (s,
1H, pirrol
NH), MS m/z 266 [M+l].
(2-Dietilamino-etil)-amida de ácido
5-formil-2,4169/265 dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (809 g) , 5-fluoro-l,3diidro-indol-2-ona (438 g) , etanol (8.000 mL) e pirrolidina (13 mL) foram aquecidos a 78 °C durante 3 horas. A mistura foi esfriada até temperatura ambiente e os sólidos 5 coletados por filtração a vácuo e lavados com etanol. Os sólidos foram agitados com etanol (5.900 mL) a 72 °C durante 30 minutos. A mistura foi esfriada até temperatura ambiente. Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo, lavados com etanol e secos sob vácuo a 54 °C durante 13 0 10 horas para produzir (2-dietilamino-eiyl)-amida de ácido 5[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (1.013 g, 88 % de rendimento) como um sólido laranja. 1H-NMR (dimetil sul f oxido-d6) δ 0,98 (t, 6H, 2xCH3) , 2,43, 2,44 (2xs, 6H, 2xCH3) , 2,50 (m, 6H, 3xCH2) , 3,28 (q, 2H, CH2) ,
6,84, 6,92, 7,42, 7,71, 7,50 (5xm, 5H, aromático, vinil,
CONH) , 10,88 (s, 1H, CONH) , 13,68 (s, 1H, pirrol NH) , MS m/z 397 [M-1] .
Exemplo 81
Figure BRPI0108394B1_D0250
Ácido_____3- [4-(2-dietilaminoetilcarbamoil)-3,5-dimetil-lHpirrol-2-ilmetileno]-2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-6carboxílico
Ácido 2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-6-carboxílico (80 mg,
0,45 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de 25 ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico para produzir 210 mg (92%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H, NH), 7,76 (d,
J = 8,0 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H, H-vinil), 7,57 (dd, J = 1,5 e
8,0 Hz, 1H) , 7,40-7,42 (m, 2H) , 3,28 (m, 2H, CH2) , 2,88 (m,
Figure BRPI0108394B1_D0251
170/265
H-piperidina), 2,54 (m, 6H, 3xCH2) , 2,44 (s, 3H, CH3) , 2,40 (s, 3H, CH3), 1,56 (m, H-piperidina), 0,97 (t, J = 6,98 Hz,
6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 424 [M+] .
Exemplo 82
2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-(5-dimetilsulfamoil2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxí-lico
Dimetilamida de ácido 2-oxo-2,3-diodro-lH-indol-510 sulfônico (90 mg, 0,38 mmol) foi condensado com 2pirrolidin-l-iletil)amida_de ácido 5-formil-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxílico (100 mg) para produzir 100 mg (54%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
XHNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, 1H, NH) , 11,30 (s, br, 1H, NH), 8,25 (d, 1H), 7,92 (s, 1H, H-vinil), 7,487,53 (m, 2H) , 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 3,33 (m, 2H, CH2) ,
2,61 (s, 6H, N(CH3)2), 2,56 (t, 2H, CH2) , 2,49 (m, 4H,
2xCH2) , 2,45 (s, 3H, CH3) , 2,44 (s, 3H, CH3) , 1,67 (m, 4H,
2xCH2) .
MS-EI m/z 485 [M+] .
Exemplo 83 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido
5- [5- (3clorofenilsulfamoil)-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil]2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (3-Cloro-fenil)amida de ácido 2-oxo-2,3-diidro-lHindol-5-sulfônico (120 mg,
0,38 mmol) foi condensado com (2-pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (100 mg) para produzir 150 mg (69%) do composto título como um sólido laranja amarelado.
Figure BRPI0108394B1_D0252
171/265 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,55 (s, 1H, NH) , 11,26
(br s, 1H, NH) , 10,30 (br s,1H, NH), 8,26 (d, 1H), 7, 79 (s,
1H, H-vinil), 7,51-7,57 (m , 2H) , 7,22 (t, . J = = 8,1 Hz , 1H) ,
7,15 (m, 1H), 7,07 (m, 1H) , , 7,0 (m, 2H), 3,44 (m, 2H, CH2) ,
2,57 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 2,49 (m, 4Η; , 2xCH2) , 2,44
(s, 3H, CH3) , 2,43 (s, 3H, CH3), 1,68 (m, 4H, 2xCH2) .
MS m/z 568 [M+] .
Exemplo 84 (2-Pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 2
4-dimetil-5-[2-oxo-
Figure BRPI0108394B1_D0253
5-(piridin-3-ilsulfamoil)-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]lH-pirrol-3-carboxílico
Piridin-3-ilamida de ácido 2-oxo-2,3-diidro-lH-indol5-sulfônico (110 mg, 0,38 mmol) foi condensado com (2pirrolidin-l-iletil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH15 pirrol-3-carboxílico (100 mg) para produzir 150 mg (74%) do composto título como um sólido laranja.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, 1H, NH) , 8,21 (d, J = 2,0 Hz, 2H) , 8,04 (m, 1H) , 7,76 (s, 1H, H-vinil),
7,49-7,54 (m, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,94 (d, J =
20 8,5 Hz, 1H) , 3,33 (m, 2Η, CH2) , 2,56 (t, J = 7,06 Hz, 2H,
• CH2) , 2,49 (m, 4H, 2xCH2) , 2,43 (s, 6Η, 2xCH3) , 1,68 (m, 4H,
2xCH2) .
MS m/z 535 [M+] .
Exemplo 85
3-[3,5-Dimetil-4-(4-metilpiperazina-l-carbonil)-lH-pirrol2-ilmetileno]-4-(2-hidroxietil)-1,3-diidroindol-2-ona
4-(2-Hidroxietil)-1,3-diidroindol-2-ona (71 mg, 0,4 mmol) foi condensado com 3,5-dimetil-4-(4-metil-piperazina1-carbonil)-lH-pirrol-2-carbaldeído para produzir 90 mg (55%) do composto título como um sólido laranja.
Figure BRPI0108394B1_D0254
172/265 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,25 (s, 1H, NH) , 10,88
(s, 1H, NH), 7,57 (s, 1H, H-vinil), 7,03 (m, 1H), 6,75-6,82
(m, 2H) , 4,86 (m, 1H, OH) , 3,70 (m, 2H, CH2) , 3,04 (m, 2H,
ch2) , 2,48 (m, 4H, 2xCH2) , 2,2 8 (br s, 7H) , 2,19 (s, 3H,
5 CH3) , 2,18 (s, 3H, CH3) ,
MS m/z (+ve) 4,09,3 [M+] .
Exemplo 86
Fenilamida de ácido 3-[3,5-dimetil-4-(4-metilpiperazina-l-
Figure BRPI0108394B1_D0255
carbonil)-lH-pirrol-2-ilmetileno]-2-oxo-2,3-diidro-lHindol-5-sulfônico
Fenilamida de ácido 2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-5sulfônico (110 mg, 0,4 mmol) foi condensado com 3,5dimetil-4-(4-metilpiperazina-l-carbonil)-lH-pirrol-2carbaldeído (100 mg) para produzir 50 mg (24%) do composto título como um sólido amarelo.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,52 (s, 1H, NH) , 11,26
(s, 1H, NH) , 10,08 (s, 1H, NH), 8,21 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ,
7,75 (s, 1H, H-vinil), 7,50 (dd, J = 1,6 e 8,3 Hz, 1H) ,
7,19 (m, 2H) , 7,10 (m, 2H) , 6,97 (m, 2H) , 2,49 (m, 4H,
2 0 2xCH2) , 2,28 (m, 10H, 2xCH3 e 2xCH2) , 2,18 (s, 3H, CH3) .
MS-EI m/z 519 [M+] .
Figure BRPI0108394B1_D0256
Exemplo 87 (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-(5-dimetilsulfamoil-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol25 3-carboxílico
Dimetilamida de ácido 2-oxo-2,3-diodro-lH-indol-5sulfônico (90 mg, 0,38 mmol) foi condensado com (2dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico (100 mg) para produzir 80 mg (43%) do 30 composto título como um sólido amarelo.
Figure BRPI0108394B1_D0257
173/265 XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,30 (s, 1H, NH) , 8,27 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 7,94 (s, 1H, H-vinil) , 7,49 (dd, J = 1,7 e 8,0 Hz, 1H) , 7,44 (m, 1H, CONHCH2CH2) , 7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 3,26 (m, 2H, CH2) , 2,60 (s, 6H, N(CH3)2), 2,53 (m, 2H, CH2) , 2,45-2,50 (m, 10H, 2xCH3 e N(CH2CH3)2, 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 487 [M+] .
Exemplo 88
Figure BRPI0108394B1_D0258
(2-Dietilaminoetil) amida_______de_______ácido_______5- [5- (3clorofenilsulfamoil)-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil]2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (3-Cloro-fenil)amida de ácido 2-oxo-2,3-diodro-lHindole-5-sulfônico (120 mg, 3,8 mmol) foi condensado com (2-dietilaminoetil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lH15 pirrol-3-carboxilico (100 mg) para produzir 80 mg (37%) do composto título como um sólido amarelo.
XHNMR (3 60 MHz, DMSO-d6) δ 13, 55 (s, 1H, NH) , 11,24
(s, 1H, NH), 10,29 (s, 1H, NH), 8 ,25 (d, J = 1,87 Hz, 1H) ,
7,79 (s, 1H, H-vinil) , 7,52 (dd, J = 1 ,87 e 8,3 Hz, 1H) ,
20 7,42 (m, 1H, CONHCH2CH2) , 7,22 (t , J = 8,02 Hz, 1H) , 7,15
(t, J = 2 Hz, 1H), 7,08 (m, 1H) r 7,0 (m, , 2H), 3,27 (m, 2H,
ch2) , , 2,48-2,57 (m, 6H, 3xCH2) , 2, 45 (s, 3H, CH3) , 2,44 (s,
3H, CH3) , 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 570.1 [M+] .
5 Exemplo 95
Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-5-fenil-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol-1-carboxílico XHNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,74 (s, 1H, NH) , 11,00 (s, 1H, NH) , 8,13 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 7,74 (s, 1H, H30 vinil), 7,70 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,49 (dd, J = 1,7 e 8,0
174/265
Hz, 1H), 7,44 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,32 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 4,26 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3) , 2,79 (m,
2H, CH2) , 2,72 (m, 2H, CH2) , 1,73 (m, 4H, 2xCH2) , 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS-EI m/z 412 [M+] .
Exemplo 99
Éster etílico de ácido 3-(2-oxo-5-fenilsulfamoil-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol1-carboxílico
10 1HNMR (360 MHz , DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H, NH) , 11,33
(s, 1H, NH), 10,07 (s, 1H, NH) , 8,24 (d, J = = 1,8 Hz, 1H) ,
7,74 (s, 1H, H-vini 1) , 7,57 (dd , J = 1,8 e 8,0 Hz, 1H) ,
7,21 (t, J = 7,6 Hz , 2H), 7,11 (d, J = 7,6 Hz, 2H) , 6,99
(d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,27 (q , J =
15 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3) , , 2,80 (m, 2H , CH2) , 2,73 (m, 2H, ch2) ,
1,73 (m, 4H, 2xCH2) , 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS-EI m/z 491 [M+] .
Figure BRPI0108394B1_D0259
Exemplo 109
Ácido_____3 - [3 - (morfolina-4-carbonil)-4,5,6,7-tetraidro-2H20 isoindol-l-ilmetileno]-2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-6carboxílico
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s , 1H, NH), 12,75
(br s, 1H, COOH), 11,08 (s, 1H, NH), 7,85 (d, J = 7,8 Hz,
1H) , 7,71 (s, 1H , H-vinil) , 7,62 (dd, J = 1,4 e 7,8 Hz,
25 1H) , 7,41 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 3,65 (m, 4H, 2xCH2) , 3,55
(m, 4H, 2xCH2) , 2,81 (m, 2H, CH2) , 2,54 (m, 2H, CH2),1,73 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 421 [M+] .
Exemplo 112
175/265
5-Bromo-3-[3-(pirrolidina-1-carbonil)-4,5,6,7-tetraidro-2Hisoindol-l-ilmetileno]-1,3-diidro-indol-2-ona 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, 1H, NH) , 11,00
(s, 1H, NH) , 8,05 (d, J = 1,8 Hz, , 1H) , 7,74 (s, 1H, H-
5 vinil), 7,28 (dd, J = 1,3 e 8,3 Hz , 1H) , 6,83 (d, J = 8,3
Hz, 1H), 3,57 (m, 4H, 2xCH2) , 2 ,79 (m, 2H, CH2) , 2,65 (m,
2H, CH2) , 1,88 (m, 4H, 2xCH2) , 1, 71 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 439 e 441 [M+-l] e [M++l] .
Exemplo 114
Ácido 3- (3-dimetilcarbamoil-4,5,6,7-tetraidro-2H-isoindol1-ilmetileno)-2-oxo-2,3-diidro-lH-indol-6-carboxílico 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH) , 12,72 (br s, 1H, COOH) , 11,05 (s, 1H, NH) , 7,85 (d, J = 7,9 Hz,
1H) , 7,72 (s, 1H, H-vinil), 7,62 (dd, J = 1,3 e 7,9 Hz,
1H) , 7,42 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 3,03 (s, 6H, N(CH3)2), 2,81 (m, 2H, CH2) , 2,55 (m, 2H, CH2) , 1,73 (m, 4H, 2xCH2) .
MS-EI m/z 379 [M+] .
Exemplo 115
Ácido 4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-oxo-1,2-diidro-indol-32 0 ilidenometil)-lH-pirrol-3-carboxilico 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 13,56 ( br s, 1H, NH) ,
8,24 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H, H-vinil), 7,74 (d, J = 2,96 Hz, 1H) , 7,56 (dd, J = 1,5 e 8,1 Hz, 1H) , 7,20 (br m, 1H, NHCH3) , 7,03 (d, J
8,1 Hz, 1H) , 2,57 (s, 3H, CH3) ,
2,41 (s, 3H, CH3) .
MS-EI m/z 361 [M+] .
Exemplo 116
Éster etílico de ácido_____{ [4-metil-5- (4-metil-5metilsulfamoil-2-oxo-l,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-1H30 pirrol-3-carbonil]-amino}-acético
775
176/265
Éster etílico de ácido 4-metil-lH-pyirrol-3carboxílico (referência na literatura D. O. Cheng, T. L. Bowman e E. LeGoff; J. Heterocyclic Chem.; 1976; 13; 11451147) foi formilatado usando o método A, hidrolisado usando o método B seguido por amidação (método C) para produzir éster etílico de ácido [(5-formil-4-metil-lH-pirrol-3carbonil)-amino]-acético.
4-Metil-5-metilaminossulfonil-2-oxindola (50 mg, 0,21
Figure BRPI0108394B1_D0260
Figure BRPI0108394B1_D0261
mmol) foi condensado com éster etílico de ácido [(5-formil4-metil-lH-pirrol-3-carbonil)-amino]-acético (100 mg, 0,42 mmol) e piperidina (0,1 mL) em metanol (2 mL) para produzir mg (52%) do composto título.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH) , 11,29 (v,br, s, 1H, NH-CO) , 8,33 (t, J = 5,8 Hz, 1H, CONHCH2) ,
7,83 (d, J = 3,11 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H, H-vinil), 7,71 (d,
J = 8,5 Hz, 1H), 7,34 (br m, 1H, NHCH3) , 6,89 (d, J =
8,5 Hz, 1H), 4,11 ( q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3) , 3 ,92 ( d,
J = 5,8 Hz, 2H, GlyCH2) , 2,86 (s, 3H, CH3) , 2,48 (s, 3H,
ch3) , 2,42 (d, J : = 4,71 Hz, 3H, HNCH3) , 1,20 ( t, J = 7,1
Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS-EI m/z 460 [M+] .
Exemplo 117
Éster etílico de ácido {[4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3-carbonyl]- amino}-acético
Uma mistura de 5-metilaminossulfonil-2-oxindola (0,06 g, 0,22 mmol), éster etílico de ácido [(5-formil-4-metillH-pirrol-3-carbonil)-amino]-acético (0,075 g, 0,27 mmol) e piperidina (2 gotas) em etanol (5 mL) foi aquecida em um 30 tubo selado a 90° C durante 12 horas. Após esfriamento, o
177/265 lavado com • 10 etanol, triturado com produzir 0,035 g (36%) marrom amarelado.
XH NMR (360 MHz, (v,br, s, 1H,
8,25 (d, J
3,3 Hz,
NH-CO),
1,2
1H) , (br m, 1H, NHCH3) , diclorometano/éter e do composto título como seco para um sólido
DMSO-d6) δ
8,30 (t, J
Hz, 1H), 7,88 (s,
7,57
7, 04
6,7 Hz, 2H, OCH2CH3) ,
2,55 (s, 3H, CH3) , 2,41
Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS m/z 446 [M+] .
Exemplo 118 (dd, ( d,
3,92 (m,
13,6 (s, 1H,
5,7 Hz, 1H,
1H, H-vinil),
NH), 11
CONHCH2) ,
7,84 (d,
1,9 e 8,5 Hz, 1H), 7,14
8,5 Hz, 1H), 4,11 ( q, J ( d, J
5,7 Hz, 2H, GlyCH2) ,
3H, NCH3) , 1,20 ( t, J = 6,7
Ácido {[4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-oxo-l,2-diidro-indol3-ilidenometil)-lH-pirrol-3-carbonil]-amino}-acético
Uma mistura de éster etílico de ácido [(5-formil-4metil-lH-pirrol-3-carbonil)-amino]-acético (0,142 g, 0,59 mmol) e NaOH temperatura concentrada
IN (1,2 mL) em metanol (10 mL) foi agitada a ambiente durante e o resíduo metilaminossulfonil-2-oxindola piperidina (0,12 mL) em etanol (52%) do composto título.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) (s,
8,1
3H, foi
1H) ,
Hz, hora. A reação condensado com foi
5(0,13 (12 mL) δ 13,98 g, 0,48 mmol) para produzir 0.11 g (br s, 1H, NH), 8,17
7,80 (s, 1H), 7,75
8,2 Hz, 1H),
1H), 3,41 ( pirrol-CH3) , 2,39
7,21 ( d, J (s, 3H,
MS m/z 417 [M-1] +.
(d, J = 3,1Hz, 1H), 7,51 ( m on br s, 2H) , 6,97 (d,
4,2 Hz, 2H, CH2NH) , 2,54
ArCH3) .
dd, (s,
178/265
Ácido 5-metil-2- (2-oxo-l,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-1Hpirrol-3-carboxílico
Exemplo 120
XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,77 ( br s, 1H, NH) ,
12,49 (S, 1H, COOH), 11,07 (s, 1H, NH) , 8,39 (s , 1H , H-
vinil), 7, 43 (d, J = 7,47 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,47 Hz,
1H), 7,03 (t , J = 7,47 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 7,47 Hz, 1H) ,
6,49 (d, J = 1,53 Hz, 1H) , 2,34 (s, 3H, CH3) .
MS m/z 269 [M+H]+.
Exemplo 121
Éster etílico de ácido 5-metil-2-(2-oxo-l,2-diidro-indol-3ilidenometil)-lH-pirrol-3-carboxílico 1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,79 (s, 1H, NH) , 11,08 (s, 1H, NH) , 8,31 (s, 1H, H-vinil), 7,45 (d, J = 7,52 Hz,
1H), 7,20 (t, J = 7,52 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,52 Hz, 1H),
6,91 (d, J = 7,52 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 4,26 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3) , 2,33 (s, 3H, CH3) , 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3) .
MS m/z 297.1 [M+H]+.
Figure BRPI0108394B1_D0262
Exemplo 122
Éster etílico de ácido 2-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-5-metil-lH-pirrol-3-carboxílico 1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH) , 11,16 (s, 1H, NH) , 8,29 (s, 1H, H-vinil), 7,53 (d, J = 2,0 Hz,
1H) , 7,35 (dd, J = 2,0 e 8,05 Hz, 1H) , 6,87 (t, J = 8,05
Hz, 1H) , 6,53 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 4,28 (q, J = 7,03 Hz,
2H, OCH2CH3) , 2,35 (s, 3H, CH3) , 1,33 (t, J = 7,03 Hz, 3H,
OCH2CH3) .
MS m/z 375 e 377 [M+H] +.
Exemplo 123
179/265
Ácido 2-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-5metil-lH-pirrol-3-carboxílico XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH) , 12,57
(s, 1H, COOH) , 11,19 (s, 1H, NH) , 8,36 (s, 1H, H-vinil),
5 7,51 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 1,4 e 8,17 Hz, 1H),
6,87 (t, J = 8,17 Hz, 1H), 6, 52 (d, , J = 2,5 Hz, 1H), 2,35
(s, 3H, ch3) .
MS m/z 347 e 349 [M+H] +.
Exemplo 124
Figure BRPI0108394B1_D0263
(2-Pirrolidin-l-iletil)-amida de ácido 2-(5-bromo-2-oxo-
1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-5-metil-lH-pirrol-3- carboxílico
A uma solução de ácido 2-formil-5-metil-lH-pirrol-3carboxílico (250 mg, 1,63 mmol) em dimetilformamida (3 mL) foi adicionado l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (376 mg, 1,2 equiv.), 1-hidroxibenzotriazol (265 mg, 1,2 equiv.), trietilamina (0,45 mL, 2 equiv.) e 1-(2aminoetil)pirrolidina (0,23 mL. 1,1 equiv.). Após agitação a temperatura ambiente durante a noite, a reação foi
Figure BRPI0108394B1_D0264
diluída com bicarbonato de sódio saturado e salmoura (com sal extra) e extraída com metanol a 10% em diclorometano.
As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas para produzir 130 mg de (2-pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido
2-formil-5-metil-lH-pirrol-3-carboxílico.
Uma mistura de 5-bromo-2-oxindol (106 mg, 0,5 mmol), (2-pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 2-formil-5-metillH-pirrol-3-carboxílico (125 mg, 1 equiv.) e piperidina (0,2 mL) em etanol (2 mL) foi aquecida em um tubo selado a 3 0 80°C durante 1 hora e em seguida esfriado. O precipitado
180/265 /// que se formou foi coletado por filtração a vácuo, lavado com etanol e acetato de etila e seca para produzir o composto título como um sólido laranja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, 1H, NH) ,11,06 (br s, 1H, NH) , 8,56 (s, 1H, H-vinil), 8,15 (m,1H,
CONHCHs) , 7,48 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,31 (dd, J = 1,8 e 7,9
Hz, 1H) , 6,86 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,60 (d, J = 2,3Hz,
1H) , 3,35 (m, 2H, HNCH2CH2) , 2,56 (t, J = 6,91 Hz,2H,
HNCH2CH2) , 2,35 (s, 3H, CH3) , 1,67 (m, 4H, 2xCH2) .
MS m/z 443/ 445 [M+ e M++2] .
Exemplo 125 (2-Dietilaminoetil)-amida de ácido 2-(5-bromo-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-5-metil-lH-pirrol-3-carboxílico
A uma solução de ácido 2-formil-5-metil-lH-pirrol-315 carboxílico (320 mg, 2,1 mmol) em dimetilformamida (3 mL) foi adicionado l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (483 mg, 1,2 equiv.), 1-hidroxibenzotriazol (340 mg, 1,2 equiv.), trietilamina (0,59 mL, 2 equiv.) e N,N20 dietiletilenodiamina (0,32 mL, temperatura ambiente durante a noite, a reação foi diluída com bicarbonato de sódio saturado e salmoura (com sal extra) e extraída com metanol a 10% em diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas para 25 produzir (2-dietilaminoetil)-amida de ácido 2-formil-5metil-lH-pirrol-3-carboxílico.
Uma mistura de 5-bromo-2-oxindol (106 mg, 0,5 mmol), (2-dietilaminoetil)-amida de ácido 2-formil-5-metil-lHpirrol-3-carboxílico (126 mg, 1 equiv.) e piperidina (0,2 30 mL) em etanol (2 mL) foi aquecida em um tubo selado a 80°C
181/265 durante 1 hora e em seguida esfriado. O precipitado foi a vacuo, lavado com etanol e acetato de etila e seca para produzir composto título como um sólido laranja.
1HNMR (360
MHz,
DMSO-d6)
13,62 (s,
1H, NH), 11,11 (br s,
1H, NH)
8,54 (s,
1H,
H-vinil)
8,1 (m,
1H,
CONHCH2),
7,49 (d,
J = 2,2 Hz,
1H) , 7,31 (dd,
J = 2,2 e
8,3
Hz, 1H),
6,86 (d,
J = 8,3 Hz, 1H) , 6,58 (d,
J = 2,24
Hz,
1H) , 3,31 (m,
2H,
HNCH2CH2) , 2,59 (m, 6H, 3xCH2) , 2,36 (s, • 10
3H, CH3) , 0,99 (t,
J = 6,8 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 445/
447 [M+ e M++2] .
Exemplo 126 (2-Dietilamino-etil)-amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3-carboxílico
Uma mistura de 1,3-diidro-indol-2-ona (266 mg, 2 mmol), (2-dietilamino-etil)-amida de ácido 5-formil-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (530 mg, 2 mmol) e piperidina (1 gota) em etanol foi aquecida a 90°C durante 2 horas. A reação foi esfriada até temperatura ambiente, o
Figure BRPI0108394B1_D0265
precipitado resultante foi coletado por filtração a vácuo, lavado com etanol e seco para produzir 422 mg (55%) do composto título como um sólido amarelo claro.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13 ,7 (s, 1H, NI H) , 10,9
(s, 1H, NH) , 7,88 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,64 (s, 1H. , H-
vinil), 7,41 (t, J = 5,4 Hz, 1H, NH) , 7, 13 (dt, J = 1 , 2 e
7,6 Hz, 1H) , 6,99 (dt, J = 1,2 e 7,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J =
7,6 Hz, 1H) , 3,28 (m, 2H), 2,48-2,55 (m, 6H), 2,44 (s, 3H,
CH3), 2, ,41 (s, 3 H, CH3) , 0,97 (t , J = 7,2 Hz, 6H,
N(CH2CH3) 2) ·
MS + ve APCI 381 [M+ + 1] .
Figure BRPI0108394B1_D0266
182/265
Exemplo 127 (2-Dietilamino-etil)-amida de ácido 5-(5-cloro-2-oxo-1,2 diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Uma mistura de 5-cloro-l, 3-diidro-indol-2-ona (335 mg, 2 mmol), (2-dietilamino-etil)-amida de ácido 5-formil2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (530 mg, 2 mmol) e piperidina (1 gota) em etanol foi aquecida a 90 °C durante 2 horas. A reação foi esfriada até temperatura ambiente, o 10 precipitado resultante foi coletado por filtração a vácuo, lavado com etanol e seco para produzir 565 mg (68%) do composto título como um sólido laranja.
XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, 1H, NH) , 11,0 (s, 1H, NH), 7,98 (d, J = 2,1 Hz, 1H) 7,77 (s, 1H H-vinil), 15 7,44 (t, NH), 7,13 (dd, J = 2,1 e 8,4 Hz, 1H) 6,87 (d, J =
8,4 Hz, 1H), 3,28 (g, 2H), 2,48-2,53 (m, 6H), 2,44 (s, 3H, CH3) , 2,43 (s, 3H, CH3) , 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H,
N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 415 [M+ + 1] .
Exemplo 128 (2-Pirrolidin-l-etil)-amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3-carboxílico
1,3-Diidro-indol-2-ona foi pirrolidin-l-etil)-amida de ácido condensado com (25-formil-2,4-dimetil-lH25 pirrol-3-carboxílico para produzir o composto título.
MS + ve APCI 379 [M+ + 1] .
Exemplo 129 (2-Pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3- carboxílico
183/265
5-Fluoro-l,3-diidro-indol-2-ona foi condensado com (2-pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 5-formil-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico para produzir o composto título.
MS + ve APCI 3 97 [M+ + 1] .
Ácido
5-formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (61 g), 5-fluoro-l,3-diidro-indol-2-ona (79 g), etanol (300 mL) e pirrolidina (32 mL) foram refluídos durante
4,5 • 10 horas. Ácido acético (24 mL) foi adicionado à mistura refluxo continuou durante minutos. A mistura foi esfriada até temperatura ambiente e os sólidos coletados por filtração a vácuo e lavados duas vezes com etanol. Os sólidos foram agitados durante 130 minutos em acetona a 40% 15 em água (400 mL) contendo ácido hidroclórico 12N (6.5 mL).
Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo e lavados duas vezes com acetona a 40% em água. Os sólidos foram secos sob vácuo para produzir ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2diidro-indol-(3Z)-ilidenemetil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-
Figure BRPI0108394B1_D0267
carboxílico (86 g, 79 % de rendimento) como um sólido laranja. 1H-NMR (dimetilsulfoxido-d6) δ 2,48, 2,50 (2xs,
6H, 2xCH3) , 6,80, 6,88, 7,68, 7,72 (4xm, 4H, aromático e vinil), 10,88 (s, 1H, CONH), 12,12 (s, 1H, COOH), 13,82 (s,
1H, pirrol NH), MS m/z 299 [M-1].
Ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)ilideno-metil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (100 g) e dimetilformamida (500 mL) foram agitados e hexafluorofosfato de benzotriazol-1iloxitris(dimetilamino)fosfônio (221 g) , l-(230 aminoetil)pirrolidina (45,6 g) e trietilamina (93 mL) foram
Figure BRPI0108394B1_D0268
184/265 adicionados. A mistura foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. 0 produto sólido foi coletado por filtração a vácuo e lavado com etanol. Os sólidos foram lavados da pasta suspensa por agitação em etanol (500 mL) 5 durante uma hora a 64° C e esfriados a temperatura ambiente. Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo, lavados com etanol e secos sob vácuo para produzir (2pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l, 2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-
10 carboxílico (101,5 9, 77 O, Ό de rendimento). 1H-NMR
(dimetilsulfoxido-d6) δ 1,60 (m, 4H, 2xCH2) , 2,40, 2,44
(2xs, 6H, 2xCH3) , 2,50 (m, 4H , 2xCH2) , 2,57, 3,35 (2xm, 4H,
2XCH2) , 7,53, 7,70, 7,73, 7,76 (4xm, 4H, aromático e
vinil), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,67 (s, 1H, pirrol NH), MS
15 m/z 396 [M+l].
Exemplo 130
(2-Pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5-cloro-2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3- carboxílico
Figure BRPI0108394B1_D0269
5-Cloro-l,3-diidro-indol-2-ona foi condensado com (2pirrolidin-l-il-etil)-amida de ácido 5-formil-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico para produzir o composto título.
MS + ve APCI 413 [M+ + 1] .
Exemplo 131 (2-Dimetilaminoetil)-amida de ácido 2,4-dimetil-5-(2-oxo-
1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-lH-pirrol-3-carboxílico
1,3-Diidro-indol-2-ona foi condensado com (2dimetilamino-etil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxílico para produzir o composto título.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H, NH), 10,90
Figure BRPI0108394B1_D0270
185/265
(s, 1H, NH) , 7,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,63 (s, 1H H-
vinil) , 7,48 (t, 1H, NH) , 7,13 (dt, 1H) , 6,98 (dt , 1H) ,
6,88 (d, J=7,7 Hz, , 1H) , 3,31 (q, J=6,6 Hz, 2H) , 2, 43 (s,
3H, CH3) , 2,40 (s, 3H, CH3) , 2,38 : (t, J=6,6 Hz, 2H) , 2,19
(s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 353 [M+ + 1] .
Exemplo 132 (2-Dimetilaminoetil)-amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-
Figure BRPI0108394B1_D0271
Figure BRPI0108394B1_D0272
diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
5-Fluoro-l,3-diidro-indol-2-ona foi condensado com (2-dimetilaminoetil)amida de ácido 5-formil-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carboxílico para produzir o composto título.
1H NMR (400 MHz,
DMSO-d6) δ 13,68 (s, 1H, NH), 10,90 (s, 1H, NH), 7,76 (dd,
J = 2,4 e 9,4 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H
H-vinil), 7,51 (t,
1H,
NH), 6,93 (m, 1H), 6,84 (dd, J=4,6 e
8,4 Hz, 1H) ,
3,31 (q,
J=6,6 Hz, 2H) , 2,43 (s, 3H, CH3) ,
2,41 (s, 3H,
CH3) ,
2,38 (t, J=6,6 Hz, 2H) , 2,19 (s, 6H,
N(CH2CH3)2)
MS + ve
APCI
371 [M+ + 1] .
Exemplo 193 (2-Etilamino-etil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico (2-Etilamino-etil)-amida de ácido 5-formil-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (99 g), etanol (400 mL), 5fluoro-2-oxindola (32 g) e pirrolidina (1,5 g) foram refluídos durante 3 horas com agitação. A mistura foi esfriada até temperatura ambiente e os sólidos coletados por filtração a vácuo. Os sólidos foram agitados em etanol
186/265 a 60° C, esfriados até temperatura ambiente e coletados por filtração a vácuo. 0 produto foi seco sob vácuo para produzir (2-etilamino-etil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH5 pirrol-3-carboxílico (75 g, 95 % de rendimento). XH-NMR (dimetilsulfoxido-d6) δ 1,03 (t, 3H, CH3) , 2,42, 2,44 (2xs, 6H, 2xCH3) , 2,56 (q, 2H, CH2) , 2,70, 3,30 (2xt, 4H, 2xCH2) ,
6,85, 6,92, 7,58, 7,72, 7,76 (5xm, 5H, aromático, vinil e
CONH), 10,90 (br s, 1H, CONH), 13,65 (br s, 1H, pirrol NH).
MS m/z 369 [M-l].
Exemplo 195 (2-Dietil-N-oxoamino-etil) -amida de ácido 5-[5-fluoro-2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z) -ilidenometil]-2,4-dimetil-lHpirrol-3-carbo-xílico
Método A:
(2-Dietilamino-etil)-amida de ácido 5-[5-fluoro-2oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenemetil]-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxílico (598 mg) e diclorometano (60 mL) em um banho de gelo foram tratados com ácido 3-cloroperbenzóico agitada a temperatura ambiente durante (336 mg) e a mistura
a noite. 0 solvente foi evaporado por rotação
suspenso em metanol (20 mL) . Foi adicionada ;
contendo hidróxido de sódio (240 mg) e a
agitada durante 1 hora 0 precipitado foi i
água mistura coletado e o resíduo (20 mL) foi por filtração a vácuo, lavado com 5 mL de água e seco sob vácuo para produzir (2-dietil-N-oxoamino-etil)-amida de ácido
5[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,430 dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (510 rendimento) como um sólido laranja.
13,72 (br s, 1H, NH) , 11,02 (br s, 1H, mg, XH-NMR
CONH), %
(DMSO-d6)
9,81 (br de s,
Figure BRPI0108394B1_D0273
187/265
1H, CONH), 7,75 (dd, 1H, aromático), 7,70 (s, 1H,
aromático), 6,93 (td, 1H, aromático), 6,84 (m, 1H,
aromático), 3,63 (m. , 2H, CH2) , 3,29 (m, 2H, CH2) , 3,14 (m,
4H, 2xCH2) , 2,47 (s, , 1H, CH3) , 2,45 (s, 3H, CH3) , 1,64 (t,
MS m/z 415 [M+l].
6H, 2xCH3) .
Método B (2-Dietilamino-etil)-amida de ácido
5-formil-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboílico (10
g) foi suspenso em diclorometano (100 mL) e esfriado em um banho de gelo.
Foi adicionado ácido 3-cloro-peroxibenzóico (13,1 g) com agitação e permitiu-se que que a mistura esfriasse até temperatura ambiente e em seguida foi agitada durante a noite. A mistura foi evaporada por rotação até secar e cromatografada em uma coluna de sílica gel purificando com metanol a 20% em diclorometano.
produzir (2-dietil-N-oxoamino-etil)-amida de ácido 5formil-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
O g, % de rendimento).
(2-Dietil-N-oxoamino-etil)-amida de ácido
5-formil-
2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (9 g) diidro-indol-2-ona (9 g, 83 % de rendimento) ((9 g, 83 % de rendimento (0.1 g) ) foram
5-fluoro-l,3e pirrolidina refluídos em etanol (30 mL) durante 4 horas. A mistura foi esfriada em um banho de gelo e o precipitado coletado por filtração a vácuo e lavado com etanol. Os sólidos foram agitados em acetato de etila (30 mL) , coletados por filtração a vácuo, lavados com acetato de etila e secos sob vácuo para produzir (2-dietil-N-oxoamino-etil)-amida de ácido 5-[530 fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4188/265 dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (10,3g 80 % de rendimento) como um sólido laranja. XH-NMR (DMS0-d6) δ 13,72 (br s,
1H, NH) , 11,02 (br s, 1H, CONH) , 9,81 (br s, 1H,
CONH),
6,93
7,75 (dd, 1H, aromático), 7,70 (s, 1H, aromático)
5 (td, 1H, aromático) , 6, 84 (m, 1H, aromático), 3,63 (m,
CH2) , 3,29 (m, 2H, ch2) , 3,14 (m, 4H, 2xCH2) , 2,47 (s,
CH3) , 2,45 (s, 3H, ch3) , 1,64 (t, 6H, 2xCH3) . MS m/z
2H,
1H,
415 [M+l] .
Exemplo 190 • 10 [2 -(Piridin-l-il)etil]-amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-
1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-
3-carboxílico
Ácido
5- [5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (120 mg,
0,4 mmol) foi agitado com EDC, HC1 (96 mg, 0,5 mmol), 1hidróxi-benzotriazol anidro (68 mg, 0,5 mmol) e 2-(2aminoetilpiridina adquirida de Aldrich em DMF anidro (3 mL) durante 2-3 dias a temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com NaHCO3 1M (1,5 ml), em seguida com 8 mL de água. 0 produto precipitado bruto foi coletado por filtração, lavado com água, seco e purificado por cristalização ou cromatografia para produzir [2-(piridin-lil)-etil] amida de ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico.
Exemplo 189 [2-(Piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-l,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Procedendo como descrito no exemplo anterior mas substituindo ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)189/265 ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido
5-[5-cloro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (127 mg) forneceu [2(piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-1,2 5 diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico.
Exemplo 192
Figure BRPI0108394B1_D0274
[2-(Piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-bromo-2-oxo-l,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Procedendo como descrito no Exemplo 190 acima mas substituindo ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido
5-[5-bromo-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,415 dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (145 mg) forneceu [2(piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-bromo-2-oxo-l,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico.
Exemplo 191
Figure BRPI0108394B1_D0275
[2-(Piridin-l-il)etil]amida de ácido 5 -[2-oxo-1,2-diidroindol- (3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3 carboxílico
Procedendo como descrito no Exemplo 190 acima mas substituindo ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)25 ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido 5-[2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (113 mg) forneceu [2-(piridin-lil) etil] amida de ácido 5-[2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico.
Exemplo 203
Figure BRPI0108394B1_D0276
190/265 [2-(Piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-l,2diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Procedendo como descrito no Exemplo 190 acima mas substituindo ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido
5-[5-ciano-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (123 mg) forneceu [2-
Figure BRPI0108394B1_D0277
(piridin-l-il)etil]amida de ácido 5-[5-ciano-2-oxo-1,2 diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3 carboxílico.
Exemplos 142, 186, 187, 188 e 204
Procedendo como nos Exemplos 190, 189, 191, 192 e 203 acima mas substituindo 2-(2-aminoetil)piridina por 1-(215 aminoetil)pirrolidina, adquirida de Aldrich Chemical Company, Inc. propiciou os compostos desejados.
Exemplos 143-147
Procedeu-se como nos Exemplos 190, 189, 191, 192 e
203 acima mas substituindo 2-(2-aminoetil)piridina por 1-
Figure BRPI0108394B1_D0278
(2-aminoetil)imidazolin-2-ona (preparada por aquecimento de carbonato dimetílico com bis(2-aminoetil) amina (2 equivalentes) em um frasco selado até 150 °C durante 30 minutos, seguindo o procedimento descrito na Patente U.S. 2613212 (1950) , de Rohm e Haas Co. O produto bruto foi purificado sobre sílica utilizando uma mistura purificadora clorofórmio-metanol-amônia aquosa 80:25:2) forneceu os compostos desejados.
Exemplos 148-151 e 184
Procedendo como nos Exemplos 190, 189, 191, 192 e 203 acima mas substituindo 2 -(2-aminoetil)piridina por éster
Figure BRPI0108394B1_D0279
191/265 etílico de ácido 4-(2-aminoetil)piperazina-l-acético (preparado como segue: éster etílico de ácido piperazina-lacético (11,22 g) foi tratado com iodoacetonitrila (5,0 mL) na presença de carbonato de potássio (6,9 g) em acetato de 5 etila (260 mL) a 0 °C. Após adição completa da iodoacetonitrila (45 minutos), a mistura de reação foi subseqüentemente agitada a temperatura ambiente durante 11 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado
Figure BRPI0108394B1_D0280
evaporado. 0 resíduo foi hidrogenado na presença de boreto de cobalto (preparado a partir de CoCl2 e boroidreto de sódio) a temperatura ambiente a 3,447 χ 105 Pa durante 2 dias em etanol. Filtração, evaporação e purificação por cromatografia utilizando uma mistura purificadora clorofórmio-metanol-amônia aquosa 80:25:2 forneceu a amina 15 desejada (3,306 g) como um óleo amarelo pálido) forneceu os compostos desejados.
Exemplos 152-153
Procedendo como descrito nos Exemplos 190, 189, 191,
192 e 203 acima mas substituindo 2-(2-aminoetil)piridina por 2-[(2-aminoetilamino)]acetonitrila (preparada como segue:
uma solução iodoacetonitrila (50 mmol) em álcool etílico (80 ml) foi adicionado a uma solução de etileno diamina em álcool etílico (60 ml) a 0 °C durante um período de 30 minutos. A agitação continuou por mais uma hora a °C, em seguida a temperatura ambiente durante 14 horas.
Foi adicionado 55 mmol de carbonato de potássio, agitado durante minutos, filtrado e o filtrado foi concentrado a temperatura ambiente. O resíduo foi purificado sobre sílica utilizando uma mistura purificadora clorofórmio-metanol-amônia aquosa 80:15:1.5 para produzir
192/265
2- [ (2-aminoetilamino)]-acetonitrila (3,550 g) que foi usada imediatamente) forneceu os compostos desejados.
Exemplos 154-158
Procedendo como descrito nos
192 e 2 03 acima mas substituindo
Exemplos 190, 189, 191,
2-(2-aminoetil)piridina por 1-(3-aminopropil)-azepin-2-ona (preparado de acordo com o procedimento em
Kraft A.:
J. Chem. Soc. Perkin Trans.
1,
6, 1999,
705-14, exceto que a hidrólise de DBU foi realizada a 145°C exatos na presença de hidróxido de lítio φ 10 hora, 5 mL de DBU, mL de água, 42 0 mg de hidrato de hidróxido de lítio).
Purificação do produto bruto sobre sílica utilizando uma metanol-amônia aquosa
80:40:4 aminopropil)azepin-2-ona (4,973g, forneceu
1- (3% de rendimento)) forneceu os compostos desejados.
Exemplos 133-135, 159 e 200
192
Procedendo como e 203 acima mas descrito nos
Exemplos 190, 189, 191, substituindo
2-(2-aminoetil)piridina por
N-acetil etileno diamina, (preparada por aquecimento de uma mistura de acetato de etila com etileno diamina (1,5 equivalentes) até 160 rendimento de 56%.
°C durante 1 hora em um recipiente vácuo propiciou produto desejado com
N-acetiletileno diamina é também disponível de Aldrich) forneceu os compostos desejados.
Exemplos 146-140
Procedendo como descrito nos Exemplos 190, 189, 191,
192 e 203 acima mas substituindo 2 -(2-aminoetil)piridina por 1-(3-aminopropil)-tetraidro-pirimidin-2-ona (preparada do mesmo modo que 1-(3-aminopropil)-azepin-2-ona de acordo com o procedimento em Kraft A.: J. Chem. Soc. Perkin Trans.
Figure BRPI0108394B1_D0281
193/265
1, 6, 1999, 705-14: Em resumo, 1,3,4,6,7,8-hexaidro-2Hpirimido[1,2-a]pirimidina (4,939 g) , hidrato de hidróxido de lítio (918 mg) e 2 mL de água foi aquecida sem um solvente em um recipiente selado até
145 °C durante 1 hora.
produto bruto foi purificado em uma coluna de sílica em clorofórmio-metanol-amônia aquosa 80:40:4 para produzir amina pura (5,265g, 94% de rendimento).
Exemplos 141, 160-162 e 185
Procedendo como descrito nos Exemplos 190,
189, 191,
192 e 2 03 acima mas substituindo 2-(2-aminoetil)piridina por 1-(2-aminoetil)-piperazina-2-ona (preparada como segue:
Cloreto de terc-butildifenilsilila não-diluído (25 mL, 97,7 mmol) foi adicionado gota-a-gota a uma solução de DBU (19,5 mL, 130 mmol) e bis(2-aminoetil)amina (4,32 mL, 40 mmol) em acetamida dimetílica anidra (80 mL) a temperatura ambiente após esfriamento em um banho de água em 5 minutos. A mistura foi agitada durante 5 horas.
Éster etílico de ácido bromoacético (6,70 mL, 60 mmol) foi adicionado puro após esfriamento durante minutos, em seguida evaporada a alto vácuo. 0 resíduo
KF (12 agitada foi
9, dissolvido em metanol (2 00 mL) ,
200 mmol) foram adicionados e a 60 adicionados, filtrados. Os
KHCO3 (10 g) e mistura foi °C durante 5 horas. 10 g de agitados durante 10 minutos, filtrados foram evaporados. O extraído com hexanos (2 vezes 250 mL).
em hexano foi dissolvido em etanol evaporado. O resíduo foi purificado em
Na2CO3 foram esfriados e resíduo foi
O material insolúvel (60 mL) , filtrado e uma coluna de sílica em clorofórmio-metanol-amônia aquosa 80:40:4 para produzir
194/265 amina pura (4,25 g, compostos desejados.
Exemplos 163-167
74% de rendimento)) forneceu os
Procedendo como descrito nos Exemplos 190, 189, 191,
192 e 203 acima mas substituindo 2-(2-aminoetil)piridina por 3-[ (2-aminoetil)amino]propionitrila (preparada a partir de etileno diamina (150 mmol) e acrilonitrila (50 mmol) em
THF a temperatura ambiente, como descrito em Israel,
M. e outros: J. Med Chem. 7, 1964, 710-16., forneceu a amina desejada (4,294 g)) forneceu os compostos desejados.
Exemplo 168 [2-(4-metilpiperazin-l-il)-etil]-amida de ácido 5-(5fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico
A uma mistura lodosa amarela agitada de ácido 5- [5fluoro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (90 mg), DMF (0,8 mL) e TEA (0,084 mL) em um tubo de reação de 20 mL, foi adicionado reagente BOP (199 mg) . A mistura tornou-se límpida em 5
Figure BRPI0108394B1_D0282
minutos. Foi adicionada 2-(4-metilpiperazin-l-il)etilamina1 (51 mg) à mistura límpida. A solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Produtos sólidos amarelos precipitaram a partir do sistema de reação.
Cromatografia de camada fina (10% de metanol em cloreto de metano) mostrou que todo o material de partida tinha sido convertido no produto. 0 sólido foi isolado por filtração a vácuo e lavado uma vez com etanol (1 mL) . O sólido foi dissolvido em éter dietílico (2 mL) durante 20 minutos e coletado por filtração a vácuo. Após secar sob vácuo, foi obtido (4-metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5
195/265 fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (79 mg, 62% de rendimento).
3H NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H, ch3) , 2,40, 2,42 (2xs,
6H, 2x CH3) , 2,41 (m, 2H, CH2) , 2,47 (m, 8H, 4xCH2) , 3,30
5 (m, 2H, CH2) , 6,82 (dd, J=4,5, 8,7Hz, 1H) , , 6,91(td, 2J =2,4,
3J=8,8Hz, 1H) , 7,43 (t, J=5,6Hz, 1H) , 7, 70 (s, 1H) , 7,75
(dd, J=2,8, 1 9,6Hz, 1H) (aromático e vinil), 10,88 (s, , 1H,
CONH), 13,67 (s, 1H, NH). LC-MS (m/z) 424, 4 (M-1).
Figure BRPI0108394B1_D0283
Exemplo 169 (4-Metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5-cloro-2oxo-1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol3-carboxilico
Seguindo o procedimento no Exemplo 168 acima mas substituindo ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)15 ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido -[5-cloro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometiil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (95 mg, 0,3 mmol) produziu (4-metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5-cloro-2oxo-1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol
3-carboxílico (76 mg, 58%) .
XH NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H, CH3) , 2,41, 2,42(2xs,
6H, 2x CH3) , 2,42 (m, 2H, CH2) , 2,48 (m, 8H, 4xCH2) ,3,30 (m, 2H, CH2) , 6,84 (d, J=8,0Hz, 1H) , 7,11 (dd, J=2,0, δ,ΟΗζ,ΙΗ), 7,44 (t, J=5,6Hz, 1H) , 7,76 (s, 1H) , 7,97(d,
J=2,0Hz, 1H) (aromático e vinil), 10,98 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH). LC-MS (m/z) 440,2 (M-1).
Exemplo 170 (4-Metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(5-bromo-2oxo-1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol30 3-carboxílico
196/265
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 168, mas substituindo ácido 5-(5-cloro-2-oxo-l,2-diidro-indol-3ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico por ácido 5-(5-bromo-2-oxo-1,2-diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico produziu (4-metilpiperazin1-il-etil)-amida de ácido 5-(5-bromo-2-oxo-l,2-diidroindol-3-iilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (3 9 mg, 54%) que foi obtido a partir de
SU011670 (54 mg,
0,15 mmol).
6H, (m, 1H NMR
2x CH3) , (DMSO-dg)
2,42 (m, δ 2,14 (s, 3H, CH3) ,
2H, CH2) , 2,48 (m,
2H, CH2) , 6,80 (d, J=8,0Hz,
1H) ,
2,41, 2,42 (2xs,
8H, 4xCH2) , 3,31
7,23 (dd, J=2,0,
8,0Hz, 1H), 7,44 (t, J=5,6Hz, 1H),
7,76 (s, 1H) , 8,09 (d,
J=2,0Hz, 1H) (aromático e vinil),
10,99 (s, 1H, CONH),
Figure BRPI0108394B1_D0284
13,61 (s, 1H, NH) . LC-MS (m/z) 486,6 (M) .
Exemplo 172 (4-Metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(2-oxo-l,2diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 168 acima, mas substituindo ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol -3 -ilidenometil) -2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico SU014900 por ácido 5-(2-oxo-l,2-diidro-indol-3ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico produziu (4-metilpiperazin-l-il-etil)-amida de ácido 5-(2-oxo-l,2diidro-indol-3-ilidenometil)-2,4-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico, SU14903 (136 mg, 84%) que foi obtido a partir de SU012120 (112,8 mg, 0,4 mmol).
1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H, CH3) , 2,39, 2,42 (2xs,
6H, 2x CH3) , 2,42 (m, 2H, CH2) , 2,48 (m, 8H, 4xCH2) , 3,30
Figure BRPI0108394B1_D0285
197/265 (t, 2H, CH2) , 6,86 (d, J=8,0Hz, 1H) , 6,96 (t, J=7,4 Hz,
1H), 7,10 (t, J=7,8Hz, 1H), 7,41 (t, J=5,4Hz, 1H), 7,62 (s,
1H) , 7,76 (d, J=7,6Hz, 1H) (aromático e vinil), 10,88 (s,
1H, CONH), 13,61 (s, 1H, NH). LC-MS (m/z) 406,6 (M-1).
Exemplo 171 [2-(3,5-Dimetilpiperazin-l-il)etil)amida de ácido 5-[2-oxo1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol3-carboxí-lico
Figure BRPI0108394B1_D0286
A uma mistura lodosa amarela agitada de ácido 5- [2oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1Hpirrol-3-carboxí-lico (112,8 mg, 0,4 mmol), DMF (0,5 mL) e trietilamina (0,111 mL) em um tubo de reação de 20 mL, foi adicionado reagente BOP (265 mg) . A mistura ficou límpida em 5 minutos. 2-(2,6-dimetilpiperazin-l-il)etilamina (68,6 15 mg) (Vide, Tapia, L. Alonso-Cires, P. Lopez-Tudanca, R.
Mosquera, L. Labeaga, A. Innerarity, A. Orjales, J. Med.
Chem., 1999, 42,
2870-2880) foi adicionada à mistura límpida.
ambiente (metanol material mistura
A solução durante a resultante foi agitada a temperatura noite. Cromatografia de camada fina a 10% em cloreto de metileno) mostrou que todo o de de purificada partida tinha sido convertido no por cromatografia de secar e descarga produto. A em seguida luminosa (CH2C12/CH3OH=2 0/1 -15/1) seguida por produzir [2-(3,5-dimetilpiperazin-l-il)etil)amida de ácido
5-[2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (83 mg, 50% de rendimento).
1H NMR (DMSO- -d6) δ 1,15, 1,16 (2xs, 6H, , 2xCH3) , 1,95
(t, J=ll,6Hz, 2H, CH2) , 2,41, 2,47 (2xs, 6H, 2xCH3) , 2,50
30 (m, 2H, CH2) , 3,03 (d, J=10Hz, 2H) , 3,19 (m, 2H) , 3,30 (m,
198/265
2H, CH2) , 6,86 (d, J=8,0Hz, 1H) , 6,97 (t, J=7,2 Hz, 1H) ,
7,11 (t, J=7,8Hz, 1H) , 7,48 (t, J=5,6 Hz, 1H) , 7,61 (s,
1H) , 7,75 (d, J=7,6 Hz, 1H) (aromático e vinil) , 10,88 (s,
1H, CONH), , 13,62 (s , 1H, NH). LC-MS (m/z) 422,2 (M+l).
Exemplo 173 [2-(3,5-Dimetilpiperazin-l-il)etil)amida de ácido 5-[5fluoro-2-oxo-1,2-diidro______-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 168 acima, foi obtido o composto desejado (60 mg, 0,2 mmol).
1H NMR (DMSO-dg) δ 0,891, 0,907 (2xs, 6H, 2xCH3) , 1,49
(t, J=10,4Hz, 2H), 2,40, 2,42 (2xs, 6H, 2x CH3) , 2,41 (m,
2H, CH2) , 2,74 (m, 4H), 3,30 (m, 2H) , 6 , 82 (dd, J= 4,5,
8,7Hz, 1H), 6,90 (td, 2J=2,4, 3J=8,4Hz, 1H) , 7,42 (t,
J=5,6Hz, 1H) , 7,70 (s, 1H) , 7,74 (dd, J= 4,6, 8,4Hz, 1H)
(aromático e vinil), 10 ,88 (s, 1H, CONH) , 13 ,65 (s, 1H,
NH). LC-MS (m/z) 438,4 (M-l).
Exemplo 174
Figure BRPI0108394B1_D0287
[2-(3,5-Dimetilpiperazin-l-il)etil)amida de ácido 5-[5clpro-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 171 acima, foi obtido o composto desejado (31,2 mg, 34%) a partir de ácido 5-[5-cloro-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)25 ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (63 mg,
0,2 mmol).
XH NMR (DMSO-d6) δ 1,15, 1,16 (2xs, 6H, 2xCH3) , 1,95
(t, J=ll,6Hz, 2H, CH2) , 2,40, 2,42 (2xs, 6H, 2xCH3) , 2,50
(m, 2H, CH2) , 3,03 (d, J=ll,2Hz, 2H) , 3,19 (m, 2H) , 3,30
30 (m, 2H, CH2) , 6,85 (d, J=8,4Hz, 1H) , 7,11 (dd, J=2,0,
199/265 δ,ΟΗζ,ΙΗ), 7,52 (t, J=5,6Hz, 1Η) , 7,76 (s, 1H) , 7,97 (d,
J=2,0Hz, 1H) (aromático e vinil), 10,99 (s, 1H, CONH),
13,63 (s, 1H, NH). LC-MS (m/z) 456,2 (M+l).
Exemplo 175 [2-(3,5-Dimetilpiperazin-l-il)etil)amida de ácido 5-[5bromo-2-oxo-1,2-diidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico
Seguindo o acima, foi obtido procedimento descrito no Exemplo 171 o composto desejado (40 mg, 40%) a partir de ácido
5-[5-bromo-2-oxo-l,2-diidro-indol-(3Z)ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (74 mg, mmol).
0,2
1H NMR (DMS0-d6) δ 1,15, 1,16 (2xs, 6H, 2xCH3) , 1,95
(t, J=ll,6Hz, 2H, CH2) , 2,40, 2,42 (2xs, 6H, 2xCH3) , 2,50
(m, 2H, CH2) , 3,03 (d, J=10,4Hz, 2H) , 3,19 (m, 2H) , 3,30
(m, 2H, CH2) , 6,81 (d, J=8,4Hz, 1H), 7,24 (dd, J=2,0,
8,4Hz, 1H), 7 ,51 (t, J=5,6Hz, 1H), 7,76 (s, 1H) , 8, 10 (d,
J=2 , 0Hz, 1H) (aromático e vinil) , 10,99 (s, 1H, CONH),
13, 62 (s, 1H, NH). LC-MS (m/z) 498,4 (M-1) .
EXEMPLOS BIOLÓGICOS
Os testes que se seguem são utilizados para encontrar aqueles compostos que apresentem o grau ótimo da atividade desej ada.
A. Procedimentos do Teste
Os testes que se seguem podem ser utilizados para determinar o nível de atividade e efeito dos diferentes compostos da presente invenção em um ou mais das PKs. Testes similares podem ser realizados para qualquer PK que utilize técnicas bem conhecidas na técnica.
Figure BRPI0108394B1_D0288
200/265
Diversos testes descritos aqui são realizados em um formato ELISA (Enzyme Linked
Immunosorbent Sandwich Assay) (Teste Imunosorvente Compacto
Ligado por Enzimas) (Voller e outros, 1980,
Enzyme Linked
Immunosorbent Assay, Manual de Imunologia
Clínica, 2 a Ed.,
Rose e Friedman, Am. Soc.
of
Microbiology,
Washington,
D.C. , pp.
359-371).
procedimento genérico é como se segue: um composto introduzido em células que expressem a quinase do teste, naturalmente ou de modo recombinante, por um período ou de tempo selecionado após o qual, se a quinase do teste for um receptor, é adicionado um ligante conhecido para ativar o para as com um cavidades de uma placa ELISA previamente revestida anticorpo específico que reconhece o substrato da reaçao de fosforilação enzimática. Componentes de nãosubstrato do lisato das células são removidos e a quantidade de fosforilação no substrato é detectada com uma fosfotirosina especificamente reconhecedora de anticorpos comparada com com um composto do teste.
Os protocolos presentemente preferidos para realizar os testes ELISA para PKs específicas são fornecidos abaixo. Contudo, a adaptação destes protocolos para determinar a atividade de compostos contra outras RTKs, bem como CTKs e 25 STKs, enquadra-se no âmbito do conhecimento daqueles versados na técnica. Outros testes descritos aqui medem a quantidade de DNA produzido em resposta à ativação de uma quinase de teste, que é uma medida genérica de uma resposta proliferativa. 0 procedimento genérico para este teste é como se segue: um composto é introduzido em células que
201/265 expressem a quinase do teste, ou naturalmente ou de modo recombinante, por um período de qual, se a quinase do teste for tempo selecionado após o um receptor, é adicionado um ligante conhecido para ativar pelo menos durante a noite, é adicionado um reagente rotulador de
DNA tal como 5-bromodeoxiuridina (BrdU) ou H3timidina.
quantidade de DNA rotulado é detectada com um anticorpo anti-BrdU ou através de medição de radioatividade e é comparada com células de controle não contatadas com um composto do teste.
BIOTESTE GST-FLK-1
Este teste analisa a atividade da tirosina quinase de
GST-FLK-1 sobre poli(glu, tir) peptídeos.
Materiais e Reacrentes:
1. Placas ELISA Corning de 96 cavidades (Catálogo
Corning No. 5805-96).
2. Poli(glu, tir) 4:1, liofilizado (Catálogo Sigma
Figure BRPI0108394B1_D0289
No. PO275).
3. Preparação de placas de teste revestidas com poli(glu, tir) (pEY): revestir 2 gg/cavidade de poli(glu, tir) (pEY) em 100 gL de PBS, manter a temperatura ambiente durante 2 horas ou a 4°C durante a noite. Cobrir bem placas para impedir evaporação.
4. Solução Tampão PBS: para 1 L misturar 0,2 g de
KH2PO4, 1,15 g de Na2HPO4/ 0,2 g de KC1 e 8 g de NaCl em aproximadamente 900 mL de dH2O. Quando todos os reagentes tiverem dissolvido, ajustar o pH até 7,2 com HC1. Levar o volume total até 1 L com dH2O.
5. Solução Tampão PBST: a 1 L de solução tampão PBS adicionar 1,0 mL de Tween-20.
202/265
6. Solução Tampão de Bloqueio TBB: para 1 L misturar
1,21 g de TRIS, 8,77 g de NaCl, 1 mL de TWEEN-20 em aproximadamente 900 mL de dH2O. Ajustar o pH até 7,2 com
HC1. Adicionar 10 g de BSA, agitar até dissolver. Levar o volume total até 1 L com dH2O. Filtrar para remover matéria particulada.
7. BSA 1% em
PBS: para fazer uma solução de trabalho lx, adicionar g de BSA a aproximadamente 990 mL de
PBS, agitar para dissolver. Ajustar o volume total até 1 L com solução tampão PBS, filtrar para remover matéria particulada.
9. GST-FLklcd purificado a partir da baculovírus recombinante sf9 (SUGEN, Inc.).
.
DMSO 4% em dH2O.
11.
.
misturar
ATP 10 mM em dH2O.
MnCl2.40
Solução mL de de ortovanadato de com 88,56 .
mM sódio 100 mM e mL de dH2O.
Placas de fundo em V mL de
NaCl 5 M, 40 μΕ
0,4 mL de BSA 5% em dH2O de polipropileno de 96 cavidades
NUNC, Catálogo Científico Aplicado #AS-72092.
.
EDTA:
misturar
14,12 de ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA) a aproximadamente 70 mL de dH2O. Adicionar NaOH 10 N até que EDTA se dissolva.
Ajustar o pH para 8,0. Ajustar o volume total para 100 mL com dH2O.
203/265
16. Primeira Solução Tampão de Diluição de Anticorpo: misturar 10 mL de BSA 5% em solução tampão PBS com 89,5 mL de TBST.
17. Anticorpo monoclonal antifosfotirosina conjugado a peroxidase horseradish (PY99 HRP, Santa Cruz Biotech).
.
Ácido 2,2'-Azinobis(3-etilbenzitiazolina-6sulfônico (ABTS, Moss, Cat. No. ABST).
19. SDS 10%.
Procedimento:
Figure BRPI0108394B1_D0290
1.
Revestir placas ELISA de 96 cavidades Corning com qg de poliEY peptídeo em PBS esterilizado como descrito na etapa 3 de Materiais e Reagentes.
2. Remover líquido não-retido das cavidades invertendo a placa. Lavar uma vez com TBST. Bater de leve a placa em toalha de papel para remover o líquido em excesso.
3. Adicionar 100 μΐ de BSA 1% em PBS a cada cavidade.
Incubar, com agitação, durante lha temperatura ambiente.
4. Repetir a etapa 2.
Embeber as placas com HEPES 50 mM (pH 7,5) (150 qL/cavidade).
6. Diluir o composto do teste com dH2O/DMSO 4% até 4 vezes a concentração desejada do teste final em placas de polipropileno de 96 cavidades.
7. Adicionar 25 qL do composto do teste diluído a placa ELISA. Nas cavidades de controle, colocar 25 qL de dH2O/DMSO 4%.
8. Adicionar 25 qL de MnCl2 40 mM com 4x ATP (2 qM) a cada cavidade.
9. Adicionar 25 qL EDTA 0,5 M às cavidades de controle negativo.
Figure BRPI0108394B1_D0291
204/265
KDB.
cavidade.
Diluir GST-Flk-1 em 0,005 gg (5 ng)/cavidade com
Adicionar 50 μΕ de enzima diluída a cada
Incubar, com temperatura ambiente.
. Interromper a minutos a μΐι de EDTA .
toalha de .
Lavar 3X com
TBST e bater de papel para remover o líquido em
Adicionar
100 μΣ de leve a placa excesso.
conj ugado antifosfotirosina por cavidade, diluição de 1:5.000 diluição de anticorpo. Incubar, na
HRP em com .
.
ambiente .
durante 90
Lavar como
Adicionar min a temperatura ambiente.
na etapa 14.
a temperatura a cada cavidade.
Incubar, com agitação, durante 10 a 15 minutos.
Remover quaisquer bolhas.
μΕ de SDS 10% a cada cavidade.
20. Ler resultados na leitora ELISA Dynatech MR7000 com filtro de teste a 410 nM e filtro de referência a 630 nM.
Bioteste PYK2
Este teste é utilizado para medir a atividade da quinase in vitro de pyk2 de comprimento total marcado epitope HA em um teste ELISA.
Materiais e Reagentes:
1. Placas ELISA Corning de 96 cavidades.
com
Figure BRPI0108394B1_D0292
205/265
2. Anticorpo anti-HA monoclonal 12CA5 (SUGEN, Inc.).
3. PBS (Salina Tamponada de Fosfato da Dulbecco (Catálogo Gibco # 450-1300EB).
4. Solução Tampão TBST: para 1 L, misturar 8,766 g de
NaCl, 6,057 g de TRIS e 1 mL de Triton X-100 0,1% em aproximadamente 900 mL de dH2O. Ajustar o pH para 7,2, ajustar o volume para 1 L.
Solução Tampão de Bloqueio: para 1 L, misturar 100 g de BSA 10%, 12,1 g de TRIS 100 mM, 58,44 g de NaCl 1 M e 10 10 mL de TWEEN-20 1%.
6. FL.pyk2-HA provenientes de lisatos de células sf9 (SUGEN, Inc.).
7 . 8 . DMSO 4% em H20 MilliQue ATP 10 mM em dH2O.
15 9 . MnCl2 1 M.
MgCl2 1 M.
.
11.
.
misturar
Ditiotreitol (DTT) 1 M.
5,0 mL de Hepes 1
1,0 mL MgCl2 1 Μ, 1,0 mL dH2O. Imediatamente antes
M (pH 7,5), 0,2 mL de MnCl2 1
Triton X-100 10% em 2,8 mL
0,1
M, de mL de DTT 1 M.
.
cavidades .
.
Placas de fundo em V de polipropileno
NUNC.
EDTA 500 mM em dH2O.
de
Solução tampão de diluição de anticorpo: para
100 mL, 1 mL
BSA/PBS 5% e 1 mL de Tween-20 10% em 88 mL de TBS.
16.
HRP-anti-Ptyr conjugado PY99, Santa Cruz Biotech
Cat. No.
SC-7020.
17. ABTS, Moss, Cat. No. ABST-2000.
206/265
18. SDS 10
Procedimento:
1. Revestir as placas ELISA Corning de 96 cavidades com 0,5 gg de anticorpo anti-HA 12CA5 por cavidade em 100 qL de PBS. Armazenar durante a noite a 4°C.
invertendo a placa. Lavar placa com dH2O. Bater de leve a placa em toalha de papel para remover o líquido em excesso.
3. Adicionar 150 μΐ de cada cavidade. Incubar, com min a temperatura ambiente.
Lavar placa 4x com TBS-T.
Diluir lisato em PBS (1,5 gg de lisato/100 qL de
PBS) .
Adicionar 100 mL de lisato diluído a cada cavidade.
Agitar a temperatura ambiente durante 1 h.
7. Lavar como na etapa 4.
8. Adicionar 50 gL de Solução Tampão de Quinase 2x à placa ELISA que contém pyk2-HA capturado.
Adicionar 25 gL do composto do teste 400 μΜ em
DMSO 4% a cada cavidade. Para cavidades de controle utilizar
DMSO 4% isoladamente.
10. Adicionar 2 5 μΕ de EDTA 0,5 M às cavidades de controle negativo.
11.
Adicionar 25 μΕ de ATP 20 μΜ a todas as cavidades.
Incubar com agitação durante 10 minutos.
.
500 mM (pH 8,0) a todas as cavidades.
13. Lavar como na etapa 4.
207/265 .
Adicionar 100 qL de anti-Ptyr conjugado HRP, diluição de 1:6.000 em
Tampão de Diluição de
Anticorpo a cada cavidade.
Incubar, com agitação, durante 1 h a temperatura ambiente.
15. Lavar placa 3x com TBST e lx com
PBS.
16. Adicionar 100 qL de a cada cavidade.
17. Se necessário, interromper a reação de desenvolvimento adicionando
0 qL de SDS 10% a cada cavidade.
18. Ler placa na leitora
ELISA com filtro de teste a
410 nM e filtro de referência a
630 nM.
BIOTESTE FGFR1
Este teste é utilizado para medir a atividade da quinase in vitro de FGF1-R em um teste ELISA.
Materiais e Reagentes:
Placas ELISA de 96 cavidades Costar (Catálogo
Corning # 3369).
PBS (Catálogo Gibco # 450-1300EB).
Solução Tampão Hepes 50 mM.
GST-FGFR1 purificado (SUGEN, Inc.).
Solução Tampão de Diluição de Quinase.
Misturar
BSA/PBS
5%, 10 de NaCl
M.
ATP 10
500 qL de Hepes 1 M (GIBCO) , 20 qL de ortovanadato de sódio 10 0 mM e mM.
Mistura de fosforilação ATP/MnCl2: misturar qL de qL qL de ATP,
400 qL de MnCl2 1 M e 9,56 mL de dH2O.
208/265
10. Placas de fundo em V de polipropileno de 96 cavidades NUNC, Catálogo Científico Aplicado #AS-72092.
11. EDTA 0,5 M.
12. TBST 0,05%.
Adicionar 500 μΏ de TWEEN a 1 litro de TBS.
13. Soro anti-fosfotirosina policlonal de coelho (SUGEN, Inc.).
14. Conjugado de peroxidase IgG (Biosource, Catálogo
15. Solução de de # ALI0404).
ABTS .
ABTS/H2O2.
anti-coelho de cabra
Procedimento:
1. Revestir μg de Poly(Glu,
Armazenar durante placas ELISA Costar
Tir) por cavidade a noite a 4°C.
de 96 cavidades em 10 0 μΕ de com 1
Lavar placas revestidas uma vez com PBS.
BSA/PBS
5% a cada cavidade. Incubar, com agitação, durante lha temperatura ambiente.
4. Lavar placa 2x com PBS, em seguida uma vez com
Hepes 50 mM.
Bater de leve as placas em uma toalha de papel para remover líquido em excesso e bolhas.
5. Adicionar 2 5 μΕ do composto do teste 0,4 mM em
DMSO 4% ou DMSO 4% isoladamente (controles) à placa.
6. Diluir GST-FGFR1 purificado em Solução Tampão de Diluição de Quinase (5 ng de quinase/50 μΕ de KDB/cavidade).
7. Adicionar 50 μΕ de quinase diluída a cada cavidade.
8. Iniciar a reação de quinase adicionando 25 μΕ/cavidade de ATP/Mn++ recentemente preparados (0,4 mL de
209/265
MnCl2 1 M, 40 μΕ de ATP 10 mM, 9,56 mL de dH2O) , recentemente preparados.
9. Esta é uma reação de quinase rápida e deve ser interrompida com μΙ, de EDTA 0,5
M em um modo similar à
ATP.
.
11.
Lavar a
Formar placa 4x com TBST por 50 mL: misturar 5 mL μΐ de vanadato de sódio
TBST 0,05%.
novo.
de BSA 5%,
100 mM, . Adicionar 100 μΕ
250 μΐ de leite 5% e 50 ajustar volume final com por cavidade de antifosfotirosina (diluição em
ADB
1:10.000) .
Incubar, com durante lha temperatura ambiente.
.
Lavar como na etapa 10.
Adicionar 100 μΐ por cavidade de conj ugado de peroxidase IgG anti-coelho de de 1:6.000 em
ADB) .
Incubar, com agitação, durante lha temperatura ambiente.
15. Lavar como na etapa e em seguida com
PBS para remover bolhas e TWEEN em excesso.
ABTS/H2O2 a cada cavidade.
17. Incubar, com agitação, durante a 20 minutos.
Remover quaisquer bolhas.
18. Ler resultados na leitora
ELISA
Dynatech MR7000:
filtro de teste a 410 nM e filtro de
BIOTESTE EGFR
Este teste é utilizado para referência a 630 nM.
medir a atividade da
210/265
Figure BRPI0108394B1_D0293
Materiais e Reagentes:
1. Placas ELISA Corning de 96 cavidades.
2. Anticorpo anti-EGFR monoclonal SUM01 (SUGEN, Inc.).
3. PBS.
4. Solução Tampão TBST.
5. Solução Tampão de Bloqueio: para 100 mL, misturar 5,0 g de Leite® sem gordura instantâneo Carnation com 100 mL de PBS.
6. Lisato de células A431 (SUGEN, Inc.).
7. Solução tampão de TBS:
8. TBS + DMSO 10%: para 1 L, misturar 1,514 g de TRIS, 2,192 g de NaCl e 25 mL de DMSO; ajustar o volume total para 1 litro com dH2O.
9. ATP (Adenosina-5'-trifosfato, a partir de músculo
Figure BRPI0108394B1_D0294
de Equino, , Cat. Sigma No. A-5394), solução 1,0 mM em dH2O.
10. MnCl2 1,0 mM.
11. Mistura de fosforilação ATP/MnCl2: para fazer 10
mL, , misturar 300 qL de ATP 1 mM, 500 qL de MnCl2 e 9,2 mL
2 0 de dH2O.
Preparar logo antes de usar, manter em gelo.
12 . Placas inferiores de polipropileno de 96
cavidades V NUNC.
13. EDTA.
14. Soro anti-fosfotirosina policlonal de coelho (SUGEN, Inc.).
15. Conjugado de peroxidase IgG anti-coelho de cabra (Biosource, Catálogo # ALI0404).
16. ABTS.
17. Peróxido de hidrogênio 30%.
Figure BRPI0108394B1_D0295
211/265 • 10
18. ABTS/H2O2.
19. HC1 0,2 M.
Procedimento:
1. Revestir as placas ELISA Corning de 96 com 0,5 μg de SUMO1 em 100 μΒ de PBS por armazenar durante a noite a 4°C.
Remover SUMO1 não-retido das cavidades a placa de leve cavidades cavidade, invertendo para remoção do líquido. Lavar lx com dH2O. Bater a placa em em excesso.
. Adicionar toalha de
150 μΐ de papel para remover o líquido
Bloqueio a cada cavidade.
Incubar, com agitação, durante 3 0 min a temperatura ambiente.
4. Lavar placa 3x com água desionizada, em seguida uma vez com TBST. Bater de leve a placa em toalha de para remover o líquido em excesso e bolhas.
Diluir lisato em PBS (7 μg de lisato/100 papel μΏ de
PBS) .
6.
Adicionar 100 μΒ de lisato diluído a cada cavidade.
Agitar a temperatura ambiente durante 1 h.
7. Lavar placas como na etapa 4, acima.
8. Adicionar 120 μΒ de TBS à placa ELISA que contém EGFR capturado.
9. Diluir o composto do teste 1:10 em TBS, colocar em cavidade.
10. Adicionar 13,5 μΒ do composto de teste diluído à placa ELISA. Às cavidades de controle, adicionar 13,5 μΒ de TBS em DMSO 10%.
212/265
11. Incubar, com agitação, durante 30 minutos a temperatura ambiente.
12. Adicionar 15 μΣ de mistura de fosforilação a todas as cavidades exceto a cavidade de controle negativo.
0 volume final das cavidades deve ser de aproximadamente
150 μΣ com uma concentração final de 3 μΜ de ATP/MnCl2 5 mM em cada cavidade. Incubar com agitação durante 5 minutos.
13. Interromper a reação adicionando 16,5 μΐι de solução EDTA durante agitação. Agitar por mais 1 min.
Figure BRPI0108394B1_D0296
14. Lavar 4x com água desionizada, 2x com TBST.
15. Adicionar 100 μΕ de antifosfotirosina (diluição de 1:3.000 em TBST) por cavidade. Incubar, com agitação, durante 30-45 min a temperatura ambiente.
16. Lavar como em 4, acima.
17. Adicionar 100 μΐ por cavidade de conjugado de peroxidase IgG anti-coelho de cabra (diluição de 1:2.000 em TBST) por cavidade.
Incubar, com agitação, durante 30 min a temperatura ambiente.
Figure BRPI0108394B1_D0297
18. Lavar como em 4, acima.
19. Adicionar 100 μΕ de solução ABTS/H2O2 a cada cavidade.
20. Incubar, com agitação, durante 5 a 10 minutos. Remover quaisquer bolhas.
21. Se necessário, interromper a reação adicionando
100 μΕ de HC1 0,2 M por cavidade.
22. Ler resultados na leitora ELISA Dynatech MR7000: filtro de teste a 410 nM, filtro de referência a 630 nM.
BIOTESTE PDGFR
213/265
Este teste é utilizado para medir a atividade da
Placas ELISA Corning de 96 cavidades.
Anticorpo anti-PDGFR monoclonal 28D4C10 (SUGEN,
PBS .
Solução
Tampão TBST.
Solução mesma do bioteste
EGFR).
Lisato de células NIH 3T3 de (SUGEN,
Solução
TBS + DMSO 10%.
9.
ATP.
.
MnCl2.
11.
solução quinase:
para formar 10 mL, misturar 2 50 μΕ
200 μΕ de
NaCl 5 M,
100 μΕ de
MnCl2 1 M e 50 de μΕ
X-100 100 mM em dH2O suficiente para formar 10 .
cavidades .
.
TRIS 1 M, mL.
de
Triton
Placas de fundo em
V de polipropileno de 96
NUNC.
EDTA.
Soro anti-fosfotirosina policlonal de (SUGEN, Inc.).
coelho
15. Conjugado de peroxidase IgG anti-coelho de cabra (Biosource, Catálogo # ALI0404).
.
.
ABTS .
ABTS/H2O2 .
.
214/265
19. HCI 0,2 Μ.
Procedimento :
1. Revestir as placas ELISA Corning de 96 cavidades com 0,5 qg de 28D4C10 em 100 qL de PBS por cavidade, armazenar durante a noite a 4°C.
2. Remover
28D4C10 não-retido das cavidades invertendo a placa para remoção do líquido. Lavar lx com dH2O. Bater de leve a placa em toalha de papel para remover o líquido em excesso.
3. Adicionar 150 ql de
Bloqueio a cada cavidade. Incubar, com min a temperatura ambiente.
4. Lavar placa 3x com água desionizada, em seguida uma vez com TBST. Bater de leve a placa em toalha de para remover o líquido em excesso e bolhas.
5. Diluir lisato em HNTG (10 qg de lisato/100
HNTG).
papel qL de
Figure BRPI0108394B1_D0298
6. Adicionar 100 qL de lisato diluído a cada cavidade. Agitar a temperatura ambiente durante 60 min.
trabalho
Lavar placas como descrito na Etapa 4.
à placa ELISA que contém EGFR capturado.
Diluir o composto do teste 1:10 em TBS, em placas de polipropileno de 96 cavidades.
10. Adicionar 10 qL do composto de teste diluído à placa ELISA. Às cavidades de controle, adicionar
TBS + DMSO 10%. Incubar, com agitação, durante 30 temperatura ambiente.
11. Adicionar 10 qL de ATP diretamente a cavidades exceto a cavidade de controle negativo qL de minutos a todas as (o volume
215/265 final das cavidades deve ser de aproximadamente 100 μΐ com ATP 20 μΜ em cada cavidade). Incubar durante 30 minutos com agitação.
12. Interromper a reação adicionando 10 μΣ de solução
EDTA a cada cavidade.
Figure BRPI0108394B1_D0299
13. Lavar 4x com água desionizada, duas vezes com
TBST.
14. Adicionar 100 μΕ de antifosfotirosina (diluição
de 1:3.000 em TBST) por cavidade. Incubar. , com agitação,
durante 30-45 min a temperatura ambiente.
15. Lavar como na Etapa 4.
16. Adicionar 100 μΐ por cavidade de peroxidase IgG anti-coelho de conjugado de de 1:2.000 em
TBST) por cavidade.
Incubar, com agitação, durante 30 min a temperatura ambiente.
.
Lavar como na Etapa .
Adicionar 100 μΕ
ABTS/H2O2 a cada cavidade.
19.
Incubar, com agitação, durante a 30 minutos.
Remover quaisquer bolhas.
20. Se necessário, interromper a reação adicionando
100 μΕ de HCI 0,2 M por cavidade.
21. Ler resultados na leitora ELISA Dynatech MR7000 com filtro de teste a 410 nM e filtro de referência a 630 nM.
TESTE DE QUINASE HER-2 CELULAR
Este teste é utilizado para medir a atividade da quinase HER2 em células inteiras em um formato ELISA.
Materiais e Reagentes:
216/265
1. DMEM (Catálogo GIBCO #11965-092) .
2. Soro fetal bovino (FBS, Catálogo GIBCO #16000044), inativado termicamente em um banho de água durante 30 min a 56°C.
Tripsina (Catálogo GIBCO #25200-056) .
L-Glutamina (Catálogo GIBCO #25030-081) .
HEPES (Catálogo GIBCO #15630-080).
6.
Meios de cultura.
Misturar
500 mL de DMEM, 55 mL de FBS inativado termicamente, 10 mL de HEPES e 5,5 mL de
L-Glutamina.
7. Meios de Secagem.
Misturar 500 mL de DMEM, 2,5 mL de FBS inativado termicamente, 10 mL de HEPES e 5,5 mL de
L-Glutamina.
8. PBS.
9. Placas de cultura de tecido de cavidades de Fundo Plano (Catálogo
Corning #25860).
10. Pratos de Cultura de Tecido com 15 cm (Catálogo
Corning #08757148).
11.
Placas ELISA Corning de 96 cavidades.
.
Placas de fundo em V de polipropileno de 96 cavidades
NUNC.
.
Cartuchos de Transferência Costar para a Transtar (Catálogo Costar #7610).
.
Inc.).
.
SUMO1:
anticorpo anti-EGFR monoclonal (SUGEN,
Tampão TBST.
Carnation
5% em PBS.
17.
Ligante EGF: EGF-201, Shinko American, Japão.
.
Figure BRPI0108394B1_D0300
Figure BRPI0108394B1_D0301
17/2
Suspender o po em 100 μΏ de HC1 10 mM. Adicionar 100 μΕ de NaOH 10 mM. Adicionar 800 μΕ de PBS e transferir para um tubo Eppendorf, armazenar a -20°C até que esteja pronto para uso.
18. Solução Tampão HNTG Lysis.
Para 5X de HNTG de Estoque, misturar 23,83 g de Hepes, 43,83 g de NaCl, 500 mL de glicerol e 100 mL de Triton X-100 e dH2O suficiente para formar 1 L de solução total. Para lx de HNTG*, misturar 2 mL de HNTG, 100 μΕ de Na3VO4 0,1 M, 250 μΕ de Na4P2O7 0,2 M e 100 μΕ de EDTA.
19. EDTA.
20. Na3VO4. Para fazer uma solução de estoque, misturar 1,84 g de Na3VO4 com 90 mL de dH2O. Ajustar o pH para 10. Ferver em microondas durante 1 minuto (a solução torna-se transparente). Esfriar até temperatura ambiente. Ajustar o pH para 10. Repetir o ciclo de aquecimento/esfriamento até que o pH permaneça em 10.
21. Na4P2O7 2 00 mM.
22 . Antisoro policlonal de coelho específico para
fosfotirosina (anticorpo anti-Ptyr, SUGEN, Inc.).
23 . Conjugado de peroxidase IgG anti-coelho de cabra
(Biosource, Catálogo # ALI0404).
24 . Solução de ABTS.
25 . Solução de peróxido de hidrogênio 30%.
26 . ABTS/H2O2.
27. HC1 0,2 M.
Procedimento:
1. Revestir as placas ELISA Corning de 96 cavidades com SUMO1 a 1,0 μg por cavidade em PBS, 100 μΕ de volume final/cavidade. Armazenar durante a noite a 4°C.
218/265
2. No dia da utilização, remover a solução tampão de revestimento e lavar a placa 3 vezes com dH2O e uma vez com solução tampão TBST. Todas as lavagens neste teste devem ser realizadas desta maneira, a não ser que especificado em 5 contrário.
bloqueio a cada cavidade. Incubar a placa, com agitação, min a temperatura ambiente. Imediatamente durante 30 antes da utilização, lavar a placa.
4. Utilizar linha de células EGFr/HER-2 chimera/3T3C7 para este teste.
5. Escolher pratos que possuam 80-90% de confluência.
Coletar células através de tripsinização e centrifugar a
1.000 rpm a temperatura ambiente durante 5 min.
6. Suspender novamente as células em meio de secagem e contar com Azul de Tripan. Ê necessária uma viabilidade de aproximadamente 90%. Colocar secaagem a uma densidade de 2.500 gL por cavidade, cavidades. Incubar em uma placa as células no meio células por cavidade, as células semeadas durante a noite de
37° sob CO2 5%.
7. Iniciar o teste dois dias após semeadura.
8. Os compostos do teste são dissolvidos em DMSO 4%.
Em seguida as amostras são ainda mais diluídas diretamente sobre as placas com DMEM seco. Tipicamente, será de 1:10 ou mais. Em seguida todas as cavidades são transferidas para a placa das células a uma diluição adicional de
1:10 (10 gL de amostra e meios em 90 μΏ de meios de secagem).
A concentração final de DMSO deve ser de
219/265
1% ou menos. Pode ser utilizada também uma diluição em
9. Incubar sob CO2 5% a 37°C durante horas .
(16,5 μΜ)
11.
cavidade;
.
Preparar o ligante EGF diluindo em DMEM morno até 150 nM.
Preparar HNTG* novo suficiente colocar em gelo.
o EGF de estoque para 100 μΕ por
Após 2 horas de incubação com o composto do teste, adicionar o ligante EGF preparado às células, 50 μΏ • 10 por cavidade, para uma concentração final de nM.
As cavidades de controle positivo recebem a mesma quantidade de EGF. Os controles negativos não recebem EGF.
Incubar a
37°C durante 10 min.
13. Remover os compostos as células uma vez com PBS.
.
cavidade.
remover a .
do teste, EGF e
DMEM. Lavar
Transferir HNTG*
Colocar em gelo
Raspar as células homogeneizar o material para as células, durante 5 minutos.
100 μΕ por
Entretanto, placa ELISA e lavar.
da placa com uma micropipeta e das células aspirando e distribuindo repetidamente
HNTG* lysis.
Transferir o lisato para uma placa ELISA revestida, bloqueada, lavada. Ou utilizar um cartucho de transferência
Costar para transferir o lisato para a placa.
16. Incubar, com agitação, a temperatura ambiente durante 1 h.
17. Remover o lisato, lavar. Transferir o anticorpo anti-Ptyr recentemente diluído (1:3.000 em TBST) para a placa ELISA, 100 μΕ por cavidade.
220/265
18. Incubar, com agitação, a temperatura ambiente durante 30 min.
Remover o anticorpo anti-Ptyr, lavar. Transferir o anticorpo BIOSOURCE recentemente diluído para a placa
ELISA (1:8.000 em TBST,
100 μΒ por cavidade).
20. Incubar, com durante 30 min.
21. Remover o anticorpo BIOSOURCE, lavar. Transferir
ELISA, 100 abst/h2o2 recentemente preparada μΒ por cavidade.
para a placa
Incubar, com agitação, durante
5-10 minutos.
Remover quaisquer bolhas.
.
HC1 0,2 M .
Interromper a reação com a adição de 100 μΒ de por
Ler com filtro de cavidade.
resultados na leitora ELISA Dynatech MR7000 teste a 410 nM e filtro de referência a
630 nM.
TESTE CDK2/CICLINA A
Este quinase in
Proximidade teste é vitro de utilizado para medir a atividade cdk2/ciclina A humana em um Teste de Cintilação (SPA).
da de
Materiais e
Reacrentes :
cavidades
Placas Wallac de polietileno tereftalato de (flexi) (Catálogo Wallac #1450-401).
[γ33Ρ] ATP de Amersham Redivue (Catálogo Amersham
3. Gotas de polivinil tolueno SPA revestidas
Amersham Streptavidin (Catálogo Amersham #RPNQ 0 0 07) .
gotas devem ser reconstituídas em PBS sem magnésio cálcio, a 20 mg/ml.
de
As ou
221/265
4. Complexo de enzima cdk2/ciclina A ativada purificada a partir de células Sf9 (SUGEN, Inc.).
5. O substrato de peptídeo biotinilado (Debtide). O peptídeo biotin-X-PKTPKKAKKL é dissolvido em dH2O a uma mg/mL.
6. Mistura de peptídeo/ATP: para 10 mL, misturar
9,979 mL de dH2O,
0,00125 mL de ATP frio, 0,010 mL de deptide e 0,010 mL de γ33Ρ
ATP. A concentração máxima por cavidade será de 0,5 μΜ de
ATP frio, 0,1 qg de Deptide e de γ33Ρ ATP.
0,2 qCi
7 . Solução tampão de quinase: para 10 mL, misturar
8,85 mL de dH2O, 0,625 mL de TRIS (pH 7,4) , 0,25 mL de
MgCl2 1 M, 0,25 mL de NP4 0 10% e 0,025 mL de DTT 1 M,
adicionados frescos imediatamente antes da utilização.
mM em dH2O.
8. ATP 10
9. Tris 1 .
11.
.
.
.
mL
MgCl2
DTT 1
M, pH ajustado para 7,4 com HCI.
M.
M.
PBS (Catálogo
EDTA 0,5 M.
Interromper a de PBS, 0,005 mL de
0,1 mL de Triton
X-100
Gibco #14190-144).
solução: para 10 mL, misturar
ATP
10%
9,5
100 mM, 0,1 mL de EDTA
1,2 5 mL de gotas de
0,5 M,
SPA 2 0 mg/mL.
Procedimento:
1. Preparar dos compostos do teste a 5x a em
DMSO 5%. Adicionar 10 qL a cada cavidade. Para controles negativos utilizar 10 qL de
DMSO 5% isoladamente em cavidades.
Figure BRPI0108394B1_D0302
222/265
2. Diluir 5 μΏ de solução de cdk2/ciclina A com 2,1
Adicionar 20 gL de enzima a cada cavidade.
Adicionar 10 qL de EDTA 0,5 M às cavidades de controle negativo.
Para iniciar a reação de jqinase, adicionar 20 μΕ de mistura de peptídeo/ATP a cada cavidade. Incubar durante
6. Adicionar 200 qL cavidade.
Manter pelo menos min.
Girar a placa a aproximadamente 2.300 rpm durante
3-5 min.
Contar as placas utilizando leitora
Trilux ou similar.
TESTE DE
TRANSFOSFORILAÇAO DE MET
Este teste é utilizado para medir os níveis da fosfotirosina em um substrato de poli(ácido glutâmico: tirosina (4:1)) como um meio para identificar agonistas/antagonistas gst-IGF-1 de um substrato.
Materiais e Reagentes:
1. Placas ELISA
Corning de 96 cavidades, Catálogo
Corning # 25805-96.
25 2 . Poli(Glu, Tir) (4:1), Catálogo Sigma # PO275.
3 . PBS (Catálogo Gibco # 450-1300EB).
4 . Hepes 50 mM.
5 . Solução Tampão de Bloqueio: para 1 L , misturar 100
g de BSA, 12,1 g de TRIS (pH 7,5), 58,44 g de cloreto de
30 sódio e 10 mL de TWEEN-20 1%.
223/265 .
domínio de quinase, SUGEN, Inc.
DMSO aquoso 10% (H2O MilliQue).
Adenosina-5'-trifosfato (dH2O) aquoso 10 mM, Cat.
Sigma No. A-5394.
100 mL, misturar 10 mL de Hepes 1
M a pH 7,5 com 0,4 mL de
BSA/PBS cloreto
5%, 0,2 de sódio
11.
4x a misturar
0,1 M em .
misturar mL de ortovanato de sódio 0,1 M e 1 mL de
M em 8 8,4 mL de dH2O.
mistura de reação de ATP: para
0,4 mL de cloreto de manganês 1 M e 0,02 mL
9,56 mL de dH2O.
4x de Mistura de Controles Negativos: para
0,4 mL de cloreto de manganês 1M em 9,6 de mL mL,
ATP mL, de dH2O.
.
Placas inferiores de polipropileno de cavidades
V NUNC, Catálogo Científico Aplicado #AS-72092.
mL .
.
EDTA 500 mM.
Solução Tampão misturar 10 mL de de Diluição de Anticorpo: para 100
BSA/PBS 5%, 0,5 mL de Leite® instantâneo Carnation 5% em PBS e 0,1 mL de ortovanadato de sódio 0,1 M em 88,4 mL de TBST.
16. Anticorpo anti-fosfotirosina policlonal de coelho 25 SUGEN, Inc.
17. Anticorpo conjugado de peroxidase IgG anti-coelho de cabra, Biosource, Inc.
18. Solução ABTS: para 1 L, misturar 19,21 g de ácido cítrico, 35,49 g de Na2HPO4 e 500 mg de ABTS com dH2O suficiente para fazer 1 L.
224/265
19. ABTS/H2O2: misturar 15 mL de solução de ABST com
μ]2 de H2O2 5 minutos
20. HCl 0,2
M.
Procedimento:
Revestir as placas ELISA com 2 μg de poli (Glu,
0 μ!) de
PBS, armazenar durante a noite a 4°C.
Bloquear placa com 150 μΕ de BSA/PBS 5% durante min.
Lavar a de solução tampão placa duas vezes com PBS, uma vez com de Hepes 50 mM pH 7,4.
4. Adicionar 50 μΕ da quinase diluída a todas de as cavidades. A quinase purificada é diluída com Solução
Tampão de Diluição de ser de 10 ng/cavidade.
5 . Adicionar à placa 25 μΕ do composto de teste (em
DMSO 4%) ou DMSO isoladamente (4% em dH2O) para controles.
6 . Incubar a mistura de quinase/composto durante 15
minutos.
7 . Adicionar 25 μΕ de MnCl2 40 mM às cavidades de
controle negativo.
8 . Adicionar 25 μΕ da mi stura de ATP/MnCl2 a todas as
controles outras cavidades (exceto os negativos). Incubar durante 5 min.
9. Adicionar 25 reaçao.
10. Lavar placa μΕ de
3x com
EDTA 500 mM para interromper a
TBST.
11. Adicionar
100 μΕ de anti-Ptyr policlonal de coelho diluído 1:10.000 em Solução Tampão de Diluição de
Anticorpo a cada cavidade. Incubar, com agitação, durante 1 h a temperatura ambiente.
^7
225/265
1:6.000
Adicionar ambiente, .
.
Lavar placa 3x com
Diluir anticorpo
TBST.
conjugado HRP de Biosource de de anticorpo.
0 μΕ por cavidade com agitação, durante 1
Lavar placa lx com PBS.
e incubar hora.
a temperatura
Adicionar 100 μΕ de solução de ABTS/H2O2 a cada cavidade.
16.
Se necessário, interromper a reação de desenvolvimento adicionando
100 μΕ de de HC1 0,2M por cavidade.
17. Ler resultados na
Leitora ELISA Dynatech MR7000 com filtro de teste a 410 nm e filtro de referência a 630 nm.
TESTE DE TRANSFOSFORILAÇÃO IGF-1
Este teste é utilizado para medir o nível de fosfotirosina em poli(ácido glutâmico:tirosina (4:1)) para
Materiais e Reagentes:
de agonistas/antagonistas de
Placas ELISA de 96 cavidades Corning.
PBS, Catálogo Gibco # 450-1300EB.
Hepes 50 mM.
100 g de
BSA, 12,1 g de Tris (pH 7,5), 58,44 g de cloreto de sódio e 10 mL de TWEEN-20 1%.
domínio de quinase IGF-1 (SUGEN, Inc.).
6.
226/265
7. Solução Tampão TBST: para 1 L, misturar 6,057 g de Tris, 8,766 g de cloreto de sódio e 0,5 mL de TWEEN-20 com dH2O suficiente para formar 1 litro.
8. DMSO 4% em H20 Milli-Q.
9. ATP 10 mM em dH2O.
10. 2x Solução Tampão de Diluição de Quinase: para
100 mL, misturar 10 mL de HEPES 1 M (pH 7,5), 0,4 mL de BDA
Figure BRPI0108394B1_D0303
5% em dH2O, 0,2 mL M de ortovanadato de sódio 0,1 M e 1 mL de cloreto de sódio 5 M com dH2O suficiente para formar 100 mL.
11. 4x Mistura de Reação ATP: para 10 mL, misturar
0,4 mL de MnCl2 1 M e 0,008 mL de ATP 0,01 M e 9,56 mL de dH2O.
12. 4x Mistura de Controles Negativos: misturar 0,4 mL de cloreto de manganês 1 M em 9,6 0 mL de dH2O.
Figure BRPI0108394B1_D0304
13 . Placas de fundo em V de polipropileno de 96
cavidades NUNC.
14 . EDTA 500 mM em dH2O.
15 . Solução tampão de diluição de anticorpo: para 100
mL, misturar 10 mL de BSA 5% em , e 0,5 mL de Leite® sem
Gordura Instantâneo Carnation 5% em PBS e 0,1 mL de ortovanadato de sódio 0,1 M em 88,4 mL de TBST.
16. Anticorpo de antifosfotirosina Policlonal de coelho, SUGEN, Inc.
17. Anticorpo conjugado HRP anti-coelho de cabra,
Biosource.
18. Solução de ABTS.
19. ABTS/H2O2: misturar 15 mL de ABTS com 2 μΕ de H2O2 minutos antes da utilização.
20. HC1 0,2 M em dH2O.
Figure BRPI0108394B1_D0305
227/265
Procedimento :
1. Revestir placa ELISA com 2,0 gg/cavidade de Poli (Glu, Tir) 4:1 (Sigma P0275) em 100 pL de PBS. Armazenar placa durante a noite a 4°C.
2. Lavar placa uma vez com PBS.
3. Adicionar 100 pL de Solução Tampão de Bloqueio de TBB a cada cavidade. Incubar a placa, com agitação,
Figure BRPI0108394B1_D0306
Figure BRPI0108394B1_D0307
durante 1 hora a temperatura ambiente.
4. Lavar placa uma vez com PBS, em seguida duas vezes com solução tampão de Hepes 50 mM pH 7,5.
5. Adicionar 25 qL do composto teste em DMSO 4% (obtido por diluição de uma solução de estoque de composto de teste 10 mM em DMSO 100% com dH2O) à placa.
6. Adicionar 10,0 ng de jguinase gst-IGF-1 em 50 gL de Solução Tampão de Diluição de Quinase a todas as cavidades.
7. Iniciar a reação de quinase pela adição de 25 gL de 4x Mistura de Reação ATP a todas as cavidades de teste e cavidades de controle positivo. Adicionar 25 gL 4x de Mistura de Controles Negativos a todas as cavidades de controle negativo. Incubar durante 10 minutos com agitação a temperatura ambiente.
8. Adicionar 25 gL de EDTA 0,5 M (pH 8,0) a todas as cavidades.
9. Lavar placas 4x com Solução Tampão TBST.
10. Adicionar anti-soros de anti-fosfotirosina policlonais de coelho a uma diluição de 1:10.000 em
100 pL de Solução Tampão de Diluição de Anticorpo a
228/265 todas as cavidades. Incubar, com agitação, a temperatura ambiente durante 1 hora.
11.
Lavar placa como na etapa .
Adicionar 100 μΕ de HRP anti-coelho Biosource a uma diluição de 1:10.000
Incubar com agitação, a temperatura ambiente durante hora.
13. Lavar placa como na etapa 9, seguido por uma lavagem com PBS para reduzir bolhas e Tween-20 em φ 10 excesso.
14. Desenvolver pela adição de 100 μΕ/cavidade de
ABTS/H2O2 a cada cavidade.
15. Após aproximadamente 5 minutos,
ELISA com teste referência a 630 ler de filtro a 410 nM e nM.
na leitora filtro de
BRDU
Os testes que se seguem utilizam células proj etadas para expressar um receptor selecionado e em seguida avaliar o efeito de um composto importante sobre a atividade da síntese de
DNA induzida por ligand determinando a de BrdU no DNA.
Os materiais, reagentes e procedimento que se seguem são genéricos a cada um dos testes de incorporação de BrdU que se seguem. São observadas variações nos testes 25 específicos.
Materiais e Reagentes:
1. O ligante apropriado.
2. Células projetadas apropriadas.
3. Reagente de Rotulação BrdU: 10 mM, em PBS (pH 7,4) (Boehringer Mannheim, Alemanha).
229/265
4. FixDenat: solução de fixação (pronta para utilização) (Boehringer Mannheim, Alemanha).
5. Anti-BrdU-POD: anticorpo monoclonal de camundongo conjugado com peroxidase (Boehringer Mannheim,
Alemanha).
6. Solução de Substrato TMB: tetrametilbenzidina (TMB, Boehringer Mannheim, Alemanha).
7. Solução de Lavagem de PBS: lx de PBS, pH 7,4.
8. Albumina, Bovina (BSA), pó V em fração (Sigma
Figure BRPI0108394B1_D0308
Chemical Co., USA).
Procedimento Genérico:
1. As células são semeadas a 8.000 células/cavidade em CS 15%, Gin 2 mM em DMEM, em uma placa de 96 cavidades. As células são incubadas durante a noite a
Figure BRPI0108394B1_D0309
37°C em C02 5%.
2. Após 24 horas, as células são lavadas com PBS e em seguida são livres de soro em meio isento de soro (CS 0% DMEM com BSA 0,1%) durante 24 horas.
3. No terceiro dia, o ligante apropriado e o composto do teste são adicionados simultaneamente às células. As cavidades de controle negativo recebem DMEM sem soro apenas com BSA 0,1%; as células de controle positivo recebem o ligante mas não recebem o composto do teste. Os compostos do teste são preparados em DMEM sem soro com ligante em uma placa de 96 cavidades e diluídos em série para concentrações de 7 testes.
4. Após 18 horas de ativação do ligante, é adicionado o reagente de rotulação BrdU diluído (1:100 em DMEM,
230/265
Figure BRPI0108394B1_D0310
BSA 0,1%) e as células são incubadas com BrdU (concentração final = 10 μΜ) durante 1,5 hora.
5. Após incubação com reagente de rotulação, o meio é removido decantando e batendo de leve a placa invertida sobre uma toalha de papel. E adicionada solução de FixDenat (50 μΙ,/θ3νίά3άθ) e as placas são incubadas a temperatura ambiente durante 45 minutos em um agitador de placa.
6. A solução de FixDenat é cuidadosamente removida decantando e batendo de leve a placa invertida sobre uma toalha de papel. É adicionado leite (leite desidratado 5% em PBS, 200 μΒ/θ3νϊά3άε) como solução de bloqueio e a placa é incubada durante 30 minutos a temperatura ambiente em um agitador de placa.
7. A solução de bloqueio é removida por decantação e as placas são lavadas uma vez com PBS. É adicionada solução anti-BrdU-POD (diluição de 1:200 em PBS, BSA 1%) (50 μ]1/θ3νίά3άε) e a placa é incubada durante 90 minutos a temperatura ambiente em um agitador de placa.
8. 0 conjugado de anticorpo é cuidadosamente removido decantando e enxaguando 5 vezes com PBS e a placa é seca invertendo e batendo de leve sobre uma toalha de papel.
9. É adicionada solução de substrato de TMB (100 μΒ/cavidade) e incubada durante 20 minutos a temperatura ambiente em um agitador de placa até que o desenvolvimento da cor seja suficiente para detecção fotométrica.
Figure BRPI0108394B1_D0311
231/265
10. A absorção das amostras é medida a 410 nM (em um modo de comprimento de onda duplo com uma leitura de filtro a 490 nM, como comprimento de onda referencial) em uma leitora de placa ELISA Dynatech.
Teste de Incorporação BrdU Induzido por EGF
Materiais e Reagentes:
1. Camundongo EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japão).
2. 3T3/EGFRC7.
Figure BRPI0108394B1_D0312
Teste de Incorporação BrdU ativado por Her-2 Induzido por
EGF
Materiais e Reagentes:
1. Camundongo EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japão).
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr com um domínio de quinase Her-2).
Teste de Incorporação BrdU ativado por Her-4 Induzido por
EGF
Materiais e Reagentes:
1. Camundongo EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japão).
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr com um domínio de quinase
Her-4) .
Teste de Incorporação BrdU Induzido por PDGF
Materiais e Reagentes:
1. PDGF B/B humano (Boehring Mannheim, Alemanha).
2. 3T3/EGFRC7.
Teste de Incorporação BrdU Induzido por FGF
Materiais e Reagentes:
1. FGF2/bFGF humano (Gibco BRL, USA).
2. 3T3c7/EGFr.
Teste de Incorporação BrdU Induzido por IGF1
Materiais e Reagentes:
232/265
Recombinante humano (G511, Promega Corp., USA).
3T3/lGFlr.
Teste de
BrdU Induzido por
Isulina
Materiais e Reagentes:
1. Insulina, cristalina, bovina, zinco (13007, Gibco
BRL, USA).
2. 3T3/H25.
Teste de Incorporação BrdU Induzido por
HGF
Materiais e Reagentes:
• 10
HGF recombinante humano (Cat.
No. 249-HG, R&D
Systems,
Inc., USA).
Células BxPC-3 (ATCC CRL-1687).
Procedimento:
1. As células são semeadas a 9.000 células/cavidade em RPMI
FBS 10% em uma placa de cavidades. As células noite a
37°C em CO2
5%.
2. Após lavadas com PBS e em seguida meio isento de soro (RPMI com BSA 0,1%) durante 24 horas.
3. No terceiro dia, 25 μΙ, contendo ligante (preparado a 1 μg/mL em RPMI com BSA 0,1%; concentração de HGF final é de 200 ng/mL) e compostos do teste são adicionados às células. As cavidades de controle negativo recebem 25 μΙ, de RPMI sem soro apenas com
BSA 0,1%; as células de controle positivo recebem o ligante mas não recebem o composto do teste. Os compostos do teste são preparados a 5 vezes as suas concentrações finais em RPMI sem soro com ligante em 3 0 uma placa de 96 cavidades e diluídos em série para
233/265 concentrações de 7 testes. Tipicamente, a concentração final mais elevada do composto do teste é de 100 μΜ e são utilizadas diluições de 1:3 (isto é, a faixa de concentração do composto de teste é de 5 0,137-100 μΜ).
4. Após 18 horas de ativação do ligante, 12,5 μΐι de reagente de rotulação BrdU diluído (1:100 em RPMI, BSA 0,1%) são adicionados a cada cavidade e as
Figure BRPI0108394B1_D0313
células são incubadas com BrdU (concentração final é de 10 μΜ) durante 1 hora.
5. Igual ao Procedimento Genérico.
6. Igual ao Procedimento Genérico.
7. A solução de bloqueio é removida por decantação e as placas são lavadas uma vez com PBS. É adicionada solução anti-BrdU-POD (diluição de 1:100 em PBS, BSA
Figure BRPI0108394B1_D0314
1%) (100 μΙ;/θ3νίά3άθ) e a placa é incubada durante 90 minutos a temperatura ambiente em um agitador de placa.
8. Igual ao Procedimento Genérico.
9. Igual ao Procedimento Genérico.
10. Igual ao Procedimento Genérico.
Teste HUV-EC-C
Este teste é utilizado para medir a atividade do composto contra PDGF-R, FGF-R, VEGF, aFGF ou Flk-l/KDR, todos eles são naturalmente expressos por células HUV-EC.
DAY 0
1. Lavar e tripsinizar células HUV-EC-C (células endoteliais da veia umbilical humana, (American Type Culture Collection, Catálogo no. 1730 CRL). Lavar com 30 salina de solução tampão de fosfato da Dulbecco (D-PBS,
234/265 obtido na Gibco BRL, Catálogo no. 14190-029) 2 vezes a aproximadamente 1 mL/10 cm2 o recipiente de cultura do tecido. Tripsinizar com tripsina-EDTA 0,05% em solução de dissociação de célula não-enzimática (Sigma Chemical 5 Company, Catálogo no. C-1544). A tripsina 0,05% é produzida diluindo tripsina 0,25%/EDTA 1 mM (Gibco, Catálogo no.
25200-049) na solução de dissociação de célula. Tripsinizar com aproximadamente 1 mL/25-30 cm2 do recipiente de cultura • 10 do tecido durante aproximadamente 5 minutos a 37°C. Depois que as células se separaram do recipiente, adicionar um volume igual de meio de teste e transferir para um tubo de centrifugação esterilizado de 50 mL (Fisher Scientific,
Catálogo no. 05-539-6).
Lavar as células com aproximadamente 35 mL do meio de teste no tubo de centrifugação esterilizado de 50 mL adicionando o meio a aproximadamente de teste, centrifugar suspender novamente
200 x com 35 g, aspirar mL de D-PBS.
durante 10 minutos o sobrenadante e
Repetir a lavagem duas vezes mais com
D-PBS, suspender novamente as células em aproximadamente mL de meio de teste/15 cm2 de recipiente de cultura de tecido. O meio em meio F12K (Gibco BRL, Catálogo no.
bovino fetal 0,5% inativado termicamente.
de teste consiste
21127-014) e soro
Contar as células com um Coulter Counter® (Coulter Electronics, Inc.) e 25 adicionar às células o meio de teste para obter uma concentração de 0,8-1,0 χ 105 células/mL.
3. Adicionar células às placas de fundo plano de 96 cavidades a 100 μΕ/θ3νίά3άθ ou 0,8-1,0 χ 104 células/cavidade, incubar ~ 24 h a 37°C, CO2 5%.
DIA 1
Figure BRPI0108394B1_D0315
235/265
1. Compor titulações do composto do teste duas vezes em placas separadas de 96 cavidades, geralmente de 50 μΜ a μΜ. Utilizar o mesmo meio do teste que mencionado no dia
0, etapa 2 acima. As titulações são feitas mediante adição de 90 μL/cavidade do composto do teste a 2 00 μΜ (4x a concentração final das cavidades) à cavidade superior de uma coluna de placas específica. Uma vez que o composto do teste armazenado é normalmente DMSO 20 mM, a concentração de 200 μΜ da droga contém DMSO 2%.
Figure BRPI0108394B1_D0316
Um diluente composto até DMSO 2% em meio do teste (F12K + soro bovino fetal 0,5%) é utilizado como diluente para as titulações do composto do teste a fim de diluir o composto do teste mas manter constante a concentração de
DMSO. Adicionar este diluente às placas remanescentes na coluna a 60 μΕ/cavidade. Retirar 60 μί> dos 120 μΏ da diluição do composto de teste de 200 μΜ na cavidade superior da coluna e misturar com os 60 μΕ na segunda cavidade da coluna. Retirar 60 μΕ desta cavidade e misturar com os 60 diante até completas.
μΕ na terceira cavidade da coluna e assim por duas vezes estejam
Quando a penúltima cavidade for misturada, retirar 60 μύ dos 120 μΕ nesta cavidade e descartar a mesma. Deixar na última cavidade 60 μύ de diluente de
DMSO/meios como um controle que não contém o composto do teste. Formar 9 colunas do composto do teste titulado, suficientes para triplicar cavidades cada uma delas para:
(1) VEGF (obtido na Pepro Tech Inc., Catálogo no. 100-200), (2) fator de desenvolvimento de células endoteliais (ECGF) (também conhecido como fator de desenvolvimento de fibroblasto ácido ou aFGF) (obtido na Boehringer Mannheim
236/265 • 10
Biochemica, Catálogo no. 1439 6000), ou, (3) PDGF B/B humano (1276-956, Boehringer Mannheim, Alemanha) e controle dos meios do teste. O ECGF vem como uma preparação com heparina de sódio.
composto do teste para que contêm 0,8-1,0 x células HUV-EC-C do dia as placas de teste de 96 cavidades
104 células/100 μυ/cavidade das
3. Em triplicado, gg/mL de VEGF, compostos do desenvolvimento
0 ng/mL adicionar 50 μL/cavidade de 80 de do composto teste, as sao
4X a
Utilizar os meios do as concentrações dos teste
ECGF ou controle dos meios a do teste. Como no concentrações do concentração final caso dos fator de desejada.
do dia 0, etapa 2, para formar fatores de desenvolvimento. Incubar aproximadamente 24 horas a 37°C, CO2 5%. Cada cavidade terá μΕ meios total
4X do da ou de de desenvolvimento
200 μυ/cavidade.
composto do teste tornam-se IX logo que cavidades.
DIA 2
686) em e 100
Sendo e os tudo
Adicionar 3H-timidina μΕ de células, o que dá assim, as concentrações um de fatores de desenvolvimento tenha sido adicionado às (Amersham, catálogo no. TRK1 μCi/cavidade (10 μυ/cavidade formada em meio RPMI + soro termicamente inativado) e incubar ~ 24
RPMI é obtido na Gibco BRL, catálogo no.
DIA 3 de 100 μΰί/ηΐυ bovino fetal h a 37°C, CO2
11875-051.
1. Congelar as placas durante a noite a -20°C.
da
10%
5%.
Figure BRPI0108394B1_D0317
237/265
DIA 4
Descongelar as placas e colher com uma colheitadeira de placas de 96 cavidades (Colheitadeira Tomtec 96®) sobre telas de filtro (Wallac, catálogo no. 1205-401), ler as 5 contagens em um contador de cintilações de líquido Wallac Betaplate™.
A Tabela 3 mostra os resultados dos testes biológicos de alguns compostos exemplificativos desta invenção. Os resultados são indicados em termos de IC50, sendo a concentração micromolar (μΜ) do composto testada o que provoca uma alteração de 50% na atividade da PKT alvo comparada com a atividade da PKT em um controle ao qual não se adicionou o composto do teste. Especificamente, os resultados mostrados indicam a concentração de um composto do teste necessária para provocar uma redução de 50% da atividade da PTK alvo. Os biotestes que foram ou podem ser utilizados para avaliar os compostos são descritos detalhadamente abaixo.
Figure BRPI0108394B1_D0318
TABELA 3
Exemplo bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (gM) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) célula EGF IC50 (μΜ) Her2 Quinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
1 57.68 15.16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9.85 9.62 >100 >100 >100 >100
4 3.57 >20 >100 >100 >100 >100
5 8.3 16.06 >100 >100 >100 >100
Figure BRPI0108394B1_D0319
238/265
Figure BRPI0108394B1_D0320
Figure BRPI0108394B1_D0321
Exemplo bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (gM) célula EGF IC50 (μΜ) Her2 cinase IC50 (μΜ) cdk2 spa C50 (gM) bio pyk2 IC50 (gM)
6 4.04 >100 3.26 7.82 2.43
7 7.74 >100 5.07 9.8 4.24
8 12.1 >100 51.34 20.08 5.5
9 0.96 >100 >100 >100 16.38
10 5.72 >100 94.04 15.86 8.06
11 9.77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21.46 >100 27.73
13 >20 81.92 8.17 2.66
14 13.01 42.41 >100 66.02
15 >20 >100 >100 98.61
16 >20 98.06 >100 23.32
17 8.25 2.47 94.35 0.83 11.47 15.94 >10
18 2.67 2.57 9.23 4.99
19 7.5 6.86 34.18 8.37
20 11.53 >100 41.16 8
21 7.18 >100 40.34 27.69
22 >20 >100 >100 87.67
23 >20 >100 36.64 4.05
24 >100 16.84 5.31
25 12.55 >100 23.48 7.9
26 16.03 66.87 34.67 10.04
27 >100 26.5 3.91
28 4.5 71.27 53.66 2.67
29 10.12 >100 26.72 3.98
30 9.4 >100 18.69 4.1
31 >50 >100 9.83 47.19
Figure BRPI0108394B1_D0322
239/265
Figure BRPI0108394B1_D0323
Figure BRPI0108394B1_D0324
Exemplo bio flkGST IC50 (|1M) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (MM) célula EGF IC50 (μΜ) Her2 cinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
32 45.74 5.94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
35 >20 >100 80.4 54.14
36 >20 >100 >100 >100
37 0.22 3.06 10.78 9.84 1.4
38 4.17 3.06 6.04 8.97 2.16
39 3.38 4.69 3.67 14.54 3.53
40 4.5 7.9 6.52 6.27
42 0.1 0.12 11.95 74.55 20.43
43 1.12 8.38 >100 37.33 53.37
44 <0.05 0.02 20.73 67.46 6.99
45 1.71 >100 >100 29.95 >100
46 30.62 6.18 >100 >100 >100
47 0.08 1.56 0.06 11.42 41.54 8.4 >20 1.05
48 0.006 0.3 <0.78 17.88 21.58 7.93 0.09
49 <0.78 >100 43.86 >100
50 <0.78 >100 20.34 >100
51 0.006 1.66 0.01 18.1 21.61 23.24 16.69 0.35
52 0.08 1.26 <0.78 12.53 >100 >100 10.66 0.45
53 <0.78 >100 >100 >100
54 1.98 <0.78 23.88 9.76 7.02
55 0.27 0.53 6.03 35.99 77.82
56 2.32 3.19 >100 10.03 7.11
57 0.06 7.98 >100 9.97 6.94
58 21.14 >100 >100 >100
59 <0.78 >100 >100 >100
240/265
Figure BRPI0108394B1_D0325
Figure BRPI0108394B1_D0326
Exemplo blo flkGST IC50 (gM) bio FGFR1 IC50 (|JM) bio PDGF IC50 (|4M) bio EGF IC50 (|4M) célula EGF IC50 (|4M) Her2 cinase IC50 (gM) cdk2spa C50 (MM) bio pyk2 IC50 (μΜ)
60 <0.78 >100 >100 >100
61 <0.78 >100 >100 >100
62 8.00 8.32 >100 >100 >100
63 0.21 <0.78 8.59 >100 >100
64 0.55 <0.78 30.49 >100 >100
65 0.37 <0.05 >100 74.36 15.97
66 <0.05 >100 11.84 2.76
67 0.39 24.77 31.38 19.79 2.56
68 1.16 0.03 >100 23.52 34.13
69 0.3 56.55 >100 97.54 >100
70 0.09 1.50 0.0030 10.57 6.42 7.99 12.62 0.63
71 15.21 22.5 >100 9.91
72 6.06 10.54 >100 39.94 9.65
73 5.95 14.12 >100 39.5 8.59
74 1.2 0.09 46.75 >100
75 2.7 61.55 >100 >100
76 3.33 19.18 5.11 3.01
77 0.49 25.01 >100 >100
78 1.94 70.62 9.33 4.25
79 1.49 >100 27.39 >100
80 0.13 4.29 0.001 >100 50.19 17.19 0.28
81 0.21 0.18 >100 >100
82 2.03 7.69 6.88 >100 >100 0.31
83 0.34 0.41 9.46 2.18 86.9 0.008
84 1.38 12.51 67.2 5.86 0.006
85 0.2 0.8 2.59 >100 3.76
Figure BRPI0108394B1_D0327
241/265
Exemplo blo flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) célula EGF IC50 (μΜ) Her2 cinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
86 1.45 1.3 19.6 41.8 >100 3.58
87 3.27 7.56 6.46 >100 9.1 0.17
88 0.35 1.18 8.06 2.36 >100 0.09
89 7.84 47.58 8.53 9.67 15.97
115 7.3 7.48 >100 >100 0.006
116 >20 >100 >100 >100 <0.0005
117 0.91 12.9 >100 >100 0.006
118 1.93 1.2 >100 >100 0.002
119 1.38 61.63 >100 >100 <0.0005
Figure BRPI0108394B1_D0328
MODELOS ANIMAIS IN VIVO
MODELOS ANIMAIS XENOENXERTADOS
A capacidade que tumores humanos possuem para se desenvolverem como xenoenxertos em camundongos atímicos (por exemplo, Balb/c, nu/nu) propicia um modelo in vivo útil para o estudo da resposta biológica a terapias para tumores humanos. Desde o primeiro xenotransplante bem sucedido de tumores humanos em camundongos atímicos, (Acta Pathol. Microbial. Scand. 77:758-760 de Rygaard e Povlsen, 1969) , muitas linhas de células de tumores humanos diferentes (por exemplo, mamário, pulmonar, genitourinário, gastrointestinal, cabeça e pescoço, glioblastoma, osso e melanomas malignos) foram transplantados e desenvolvidos com êxito em camundongos desguarnecidos. Os testes que se seguem podem ser utilizados para determinar o nível de atividade, especificidade e efeito dos diferentes compostos da presente invenção. Três tipos genéricos de testes são
Figure BRPI0108394B1_D0329
242/265 úteis na avaliação de compostos: celular/catalítico, celular/biológico e in vivo. O objetivo dos testes celular/catalítico é determinar o efeito de um composto sobre a capacidade de uma TK para fosforilatar tirosinas em um substrato conhecido em uma célula. 0 objetivo dos testes celular/biológico é determinar o efeito de um composto sobre a resposta biológica estimulada célula. O objetivo dos testes in vivo é de um composto em um modelo animal por uma TK em uma determinar o efeito em uma enfermidade específica tal como o câncer.
Linhas de células adequadas para experimentos com xenoenxerto subcutâneos incluem células C6 (glioma, ATCC #
CCL 107), células A375 (melanoma, ATCC # CRL 1619), células
A431 (carcinoma epidermóide, ATCC # CRL 1555), células Caiu
6 (pulmão, ATCC # HTB 56) , células PC3 (prostato, ATCC #
CRL 1435), células SKOV3TP5 e fibroblastos NIH 3T3 geneticamente programados para superexpressar EGFR, PDGFR,
IGF-IR ou qualquer outra quinase de teste. O protocolo que se segue pode ser utilizado para realizar experimentos com xenoenxertos:
Os camundongos atímicos fêmea (BALB/c, nu/nu) são obtidos na Simonsen Laboratories (Gilroy, CA) . Todos os animais são mantidos sob condições higiênicas em jaulas
Micro-isoladoras com revestimento Alfa-dri. Os mesmos recebem ração para roedores esterilizada e água a vontade.
As linhas de células são desenvolvidas em meio apropriado (por exemplo, MEM, DMEM, FIO de Ham, ou F12 de Ham mais 5%-10% de soro bovino fetal (FBS) e glutamina (GLM) 2mM). Todos os meios de cultura de células, a 3 0 glutamina e o soro bovino fetal são adquiridos na Gibco
Figure BRPI0108394B1_D0330
243/265 • 10
Life Technologies (Grand Island, NY) especificado desenvolvidas
10% de C02 nao ser que em contrário. Todas em uma atmosfera úmida de rotineiramente negativas para as células
90-95% de ar são e 537°C. Todas as subcultivadas duas micoplasma como
Mycotect (Gibco).
linhas vezes de por determinado
As células são colhidas na confluência células são semana e são pelo método ou próximo da mesma com Tripsina-EDTA 0,05% e granuladas a 450 x durante 10 min. Os grãos são novamente meios esterilizados (sem FBS) até do camundongo (8-10 camundongos por suspensos em PBS ou uma concentração no flanco posterior grupo, 2-10 x 106 células/animal). O desenvolvimento do tumor é medido durante 3 a volumes dos comprimento outro modo.
Student t.
semanas utilizando paquímetros
Vernier.
Os tumores x largura
Os
Os
VPD:D5W) podem concentrações valore são calculados como um produto de compostos indicado de são calculados utilizando o teste de teste em 50-100 μ1Ι ser fornecidos por injeção IP com começando geralmente no dia
MODELO DE INVASAO DO modelo de desenvolvido e pode
TUMOR (DMSO, ou diferentes após invasão do tumor a seguir ser usado para a estimativa do foi valor terapêutico e eficácia dos componentes identificados para inibir seletivamente o receptor de KDR/FLK-1.
Procedimento
Camundongos de 8
Inc .) são usados como semanas de idade (fêmeas) (Simonsen
244/265 de células tumorais pode ser realizada em coifa de escoamento laminar. Para anestesia, são administrados de modo intraperitonial Coquetel de Xilasina/Cetamina (100 mg/kg de cetamina e 5 mg/kg de xilasina) . Uma incisão 5 central é feita para expor a cavidade abdominal (aproximadamente 1,5 cm em comprimento) para injetar 107 células tumorais em um volume de 100 gL de meio. As células são injetadas no lóbulo duodenal do pâncreas ou sob a
Figure BRPI0108394B1_D0331
serosa do cólon. O peritônio e os músculos são fechados com uma sutura contínua de seda 6-0 e a pele é fechada mediante o uso de grampos para ferimentos. Os animais são observados diariamente.
Análise
Após 2-6 semanas, dependendo das observações grosseiras dos animais, os camundongos são sacrificados e as metástases do tumor local em diversos órgãos (pulmão, fígado, cérebro, estômago, baço, coração, músculo) são estirpadas e analisadas (medição do tamanho do tumor, grau de invasão, imunoquímica, determinação de hibridização in
Figure BRPI0108394B1_D0332
situ, etc.).
TESTE C-KIT
Este teste é utilizado para detectar o nível de fosforilação da tirosina c-kit.
Células MO7E (leucemia mielóide aguda humana) foram 25 privadas de soro durante a noite em soro 0,1%. As células foram pré-tratadas com o composto (concorrente com a privação do soro), antes da estimulação do ligante. As células foram estimuladas com 250 ng/mL de rh-SCF durante 15 minutos. Após estimulação, as células foram lisadas e 30 imunoprecipitadas com um anticorpo anti-c-kit. Os níveis da
245/265 /A fosfotirosina e proteína foram determinados por absorção com mata-borrão Western.
TESTE DE PROLIFERAÇÃO DE MTT
Células MO7E foram privadas de soro e pré-tratadas
5 com o composto como descrito nos experimentos de
fosforilação. As células foram dispostas @ 4 x 105
células/cavidade em uma placa de 96 cavidades, em 100 μΕ de
RPMI + soro 10%. Foi adicionado rh-SCF (100 ng/mL) e a
Figure BRPI0108394B1_D0333
placa foi incubada durante 48 horas. Após 48 horas, adicionou-se 10 μΣ de MTT 5 ng/mL [3-(4,5-dimetiazol-2ilo)-2,5-difeniltetrazolio brometo) e permitiu-se que incubasse durante 4 horas. Foi adicionado isopropanol ácido (100 μΕ de HC1 0,04 N em isopropanol) e a densidade ótica foi medida a um comprimento de onda de 550 nm.
TESTE DE APOPTOSIS
Células MO7E foram incubadas +/- SCF e +/- composto em FBS 10% com rh-GM-CSF (10 ng/mL) e rh-IL-3 (10 ng/mL) . As amostras foram testadas a 24 e 48 horas. Para medir caspase-3 ativada, as amostras foram lavadas com PBS permeabilizadas com etanol 70% esfriado em gelo. Em seguida as células foram manchadas com caspase-3 anti-ativo de coelho policlonal conjugado com PE e analisado por FACS.
Para medir PARP clivado, as amostras foram lisadas e analisadas por absorção com papel higiênico Western com um anticorpo anti-PARP.
Testes Adicionais
Testes adicionais que podem ser utilizados para avaliar os compostos desta invenção incluem, sem limitação, um teste bio-flk-1, um teste de receptor quimérico EGF 30 receptor-HER2 em células completas, um teste bio-src, um
246/265 teste bio-lck e um teste que mede a função de fosforilação de raf. Os protocolos para cada um destes testes podem ser encontrados no Pedido de Patente U.S. No. de Série 09/099.842, que está incorporado aqui mediante referência, incluindo quaisquer desenhos.
Medição de Toxicidade das Células
Os compostos terapêuticos devem ser mais potentes na inibição da atividade de tirosina quinase do receptor do que na aplicação de um efeito citotóxico. Uma medida da 10 eficácia e da toxicidade das células de um composto pode ser obtida determinando o índice terapêutico, isto é, IC50/LD50. IC50, a dose requerida para obter 50% de inibição, pode ser medida utilizando técnicas padrão tais como aquelas descritas aqui. LD50, a dosagem que resulta em 50% de toxicidade, também pode ser medida por técnicas padrão
Figure BRPI0108394B1_D0334
(J. Immunol. Methods, 65:55-63 de Mossman, 1983), medindo a quantidade de LDH liberada (J. Immunol. Methods, 64:313 de Korzeniewski e Callewaert, 1983, J. Immunol, Methods, 115:61 de Decker e Lohmann-Matthes, 1988), ou medindo a dose letal em modelos animais. Os compostos com um índice terapêutico grande são preferidos. O índice terapêutico deveria ser maior que 2, de preferência pelo menos 10, mais preferivelmente pelo menos 50.
B. Exemplo de Resultados de Testes Celulares que Utilizam (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico .
Para confirmar a potência de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3 30 ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
Figure BRPI0108394B1_D0335
247/265
80) detectada em testes bioquímicos (vide infra), a capacidade do referido composto na inibição da fosforilação de RTK dependente de ligante foi avaliada em testes à base de células que utilizam células de camundongos NIH-3T3 5 projetadas para superexpressar Flk-1 ou PDGFRp humano. (2dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carbo10 xílico (Composto dependente aproximadamente
80) de
0,03 inibiu a fosforilação da tirosina FlkVEGF com μΜ. Este um valor de IC50 de valor é similar ao valor
0,009 μΜ Ki determinado para a dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) determinado nos testes bioquímicos.
Isto indica que (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) penetra imediatamente nas células. Consistente com os dados bioquímicos (vide infra) que indicam que (2-dietilamino-etil) amida de ácido
5- (5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) tinha contra Flk-1 e PDGFRp, verificou-se atividade comparável
também que a mesma in:
dependente de PDGF em
25 aproximadamente 0,03 μΜ.
etil) amida de ácido 5-
do receptor células com um valor IC50 de
A capacidade de (2-dietilamino(5-fluoro-2 -oxo-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) para inibir c-kit, uma RTK intimamente associada que aglutina o fator de célula tronco (SCF), foi determinada 30 utilizando células MO7E que expressam este receptor. Nestas
248/265 células, (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol3-carboxílico (Composto 80) inibiu a fosforilação de c-kit dependente de SCF com um valor de IC50 de 0,01-0,1 μΜ. Este 5 composto também inibiu a fosforilação de c-kit estimulada por SCF nos blastos da leucemia mielóde aguda (AML) isolados a partir do sangue periférico de pacientes.
Além de testar a capacidade de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3
Figure BRPI0108394B1_D0336
ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) para inibir a fosforilação do receptor dependente do ligante em células, o seu efeito sobre a resposta proliferativa dependente do ligante de células também foi examinada in vitro (vide Tabela 4). Nestes estudos, células 15 imobilizadas por privação de soro durante a noite foram induzidas a submeter-se à síntese de DNA após adição do ligante mitogênico apropriado. Como mostrado na Tabela 4, (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carbo-
Figure BRPI0108394B1_D0337
xílico (Composto 80) inibiu a proliferação induzida por
PDGF de células NIH-3T3 que superexpressam PDGFRp ou PDGFRa com valores de IC50 de 0,031 e 0,069 μΜ, respectivamente, e a proliferação induzida por SCF de células MO7E com um valor de IC50 de 0,007 μΜ.
TABELA 4
Bioquímico ic50 Celular
Ki1 Fosforilação de Proliferação
Recept (μΜ) Receptor dependente de
or (μΜ) ligante
(μΜ)
Figure BRPI0108394B1_D0338
249/265
Flk- 1/KDR 0,009 0,032 0,0043
PDGFRa 0,008 0,034 0,0314
PDGFRp ND ND 0,0695
FGFR 0,83 ND 0,73
c-kit ND 0,01-0,16 0,0076
ND = Não Determinado 1 Determinado mediante utilização de enzima recombinante 2 Determinado mediante utilização de células NIH-3T3 privadas de soro que expressam Flk-1 3 Determinado mediante utilização de HUVECs privadas de soro 4 Determinado mediante utilização de células NIH-3T3 privadas de soro que expressam PDGFR 5 Determinado mediante utilização de células NIH-3T3 privadas de soro que expressam PDGFR 6 Determinado mediante utilização de células MO7E privadas de soro
Figure BRPI0108394B1_D0339
Como mostrado na Tabela 4, existe um acordo genérico entre as atividades bioquímica e celular de (2-dietilaminoetil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) que sustenta a conclusão de que este composto atravessa membranas celulares. Além disso, pode-se concluir que as respostas celulares são um resultado da atividade do composto 80 contra o alvo indicado. Em contrapartida, quando testadas na presença do meio de desenvolvimento completo in vitro, foram necessárias concentrações substancialmente mais elevadas de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3
Figure BRPI0108394B1_D0340
250/265 ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) (> 10 μΜ) para inibir o desenvolvimento de diversas células tumorais em seres humanos (vide Tabela 5) . Isto indica que o composto não inibiu diretamente o desenvolvimento destas células a concentrações necessárias para inibir a fosforilação do receptor dependente do ligante e a proliferação de células.
Figure BRPI0108394B1_D0341
TABELA 5
Linha da Célula Origem IC50 (μΜ) LD50 (μΜ)
HT2 9 Carcinoma do cólon 10 22
A549 Carcinoma do pulmão 9,5 22
NCI-H460 Carcinoma do pulmão NSC 8,9 20
SF767T Glioma 7,9 14
A431 Carcinoma epidermóide 6,0 18
Resumidamente, os resultados mostrados na Tabela 5 foram obtidos por incubação de células durante 48 h em meio de desenvolvimento completo na presença de diluições em série de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol3-carboxilico. No final do período de desenvolvimento, determinou-se o número relativo de células. Os valores IC50 foram calculados como a concentração do composto que inibiu o desenvolvimento de células em 50% em relação a células não tratadas. Os valores LD50 foram calculados como a concentração do composto que provocou uma redução de 50% no
251/265 número de células em relação àquelas experimento.
Um teste baseado em células mais avaliar o potencial anti-angiogênico de do início do relevante para (2-dietilaminoetil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) é o teste de mitogênese in vitro que utiliza células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) como um endoteliais importantes para o processo angiogênico. Neste teste, uma resposta mitogênica, medida como um aumento da síntese de
DNA, é induzida em HUVECs privadas de soro após adição
VEGF ou FGF. Nestas células, (2-dietilamino-etil) amida de de ácido
2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) inibiu a resposta mitogênica induzida por VEGF e FGF em um modo dependente da dosagem com valores de IC50 de 0,004 μΜ e 0,7 μΜ, respectivamente, quando o composto estava presente durante o teste de 48 h.
Figure BRPI0108394B1_D0342
Resumidamente, os testes mencionados acima foram obtidos utilizando HUVECs privadas de soro que foram incubadas com concentrações mitogências de VEGF (100 ng/mL) ou FGF (30 ng/mL) na presença de diluições em série de (2dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2 diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico (Composto 80) durante 24 h. A resposta mitogênica durante as 24 h seguintes na presença de ligante e inibidor foi quantificada através da medição da síntese de DNA com base na incorporação da bromodeoxiuridina no DNA 30 celular.
Figure BRPI0108394B1_D0343
252/265
Em experimentos separados, o composto 80 inibiu a fosforilação dependente de VEGF de ERK 1/2 (quinase de p42/44MAP), um alvo anteriormente a jusante de Flk-l/KDR, em um modo dependente de dosagem. A atividade inibidora do 5 composto 80 também demonstrou ser duradoura neste sistema;
inibindo a fosforilação dependente de VEGF de ERK 1/2 por um período de 48 horas após remoção de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-
Figure BRPI0108394B1_D0344
ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) do meio após uma exposição curta (2 h) a concentrações micromolares do composto.
Reconheceu-se que o VEGF é um fator de sobrevida importante para células endoteliais. Uma vez que (2dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,215 diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3carboxílico (Composto 80) inibe a resposta mitogência dependente de VEGF das HUVECs, o efeito do composto sobre a
Figure BRPI0108394B1_D0345
sobrevida da HUVEC foi investigado. Nestes experimentos, foi utilizada divagem da polimerase de poli-ADP-ribocila do substrato de caspase 3 como uma leitura para apoptose.
As HUVECs cultivadas em condições isentas de soro durante horas apresentaram níveis substanciais de divagem de
PARP, conforme detectado pelo acúmulo do fragmento de divagem 23 Kda PARP. Isto foi amplamente impedido pela 25 adição de VEGF ao meio de células, indicando que VEGF atua como um fator de sobrevida neste teste. A (2-dietilaminoetil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3 ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto
80) demonstrou inibir a sinalização de KDR.
Conseqüentemente, (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-
Figure BRPI0108394B1_D0346
253/265 fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) inibiu a sobrevida da HUVEC mediada por VEGF em um modo dependente de dosagem.
Sendo assim, estes dados indicam que o composto 80 induziu 5 a apoptose em células endoteliais em cultura na presença de VEGF.
C. Estudos sobre Eficácia in vivo
i. Eficácia contra Xenoenxertos Tumorais
Estabelecidos
Figure BRPI0108394B1_D0347
Figure BRPI0108394B1_D0348
A eficácia in vivo de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) foi estudada em modelos de xenoenxertos (SC) subcutâneos utilizando células de tumores humanos implantadas na região 15 do flanco posterior de camundongos atímicos. Após implantação, permitiu-se que os tumores atingissem um tamanho de 100-550 mm3 antes do início do tratamento oral como composto.
A administração oral diária do composto 80 provocou
Figure BRPI0108394B1_D0349
uma inibição dependente da dosagem de crescimento do tumor
A431 quando o tratamento foi iniciado após os tumores terem crescido até um tamanho de 400 mm3. Inibição estatisticamente significativa (P < 0,05) de crescimento do tumor foi verificada com dosagens de 40 mg/kg/dia (74% de inibição) e 80 mg/kg/dia (84% de inibição) (vide Tabela 6).
Em experimentos preliminares, uma dosagem mais elevada (160 m9/kg/dia) do composto não foi mais eficaz contra tumores
A431 estabelecidos do que a dosagem 8 0 mg/kg/dia. Além disso, camundongos tratados com dosagem de 160 mg/kg/dia do 30 composto perderam peso corporal, indicando que a dosagem
254/265 mais elevada não foi bem tolerada. Foram obtidos resultados similares em um experimento em que se permitiu que tumores A431 atingissem apenas 100 mm3 em tamanho (vide Tabela 5) . Neste segundo experimento, a regressão completa dos tumores ocorreu em seis dos oito animais tratados com 80 mg/kg/dia durante 21 dias. Nestes seis animais, os tumores não voltaram a crescer durante o período de observação de 110 dias após o término do tratamento. Nos dois animais em que os tumores voltaram a aumentar até um tamanho (2000-3000 10 mm3) os tumores regrediram em resposta a uma segunda série de tratamento com o composto 80. É importante o fato de que, em todos os experimentos sobre eficácia, a (2dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-315 carboxílico (Composto 80) em 80 mg/kg/dia foi bem tolerada, mesmo em doses contínuas durante mais de 100 dias.
TABELA 6
Volume Inicial do Tumor (mm3) Composto1 (mg/kg/dia) % Inibição (dia) Valor-P
400 80 84 (36) 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,130
100 80 93 (40) 0,002
40 75 (40) 0,015
10 61 (40) 0,059
1 Compound 8 0.
Resumidamente, os resultados mostrados na Tabela 6 foram obtidos utilizando células A431 (0,5 x 106 células/camundongo) que tiveram CS implantadas na região do
255/265 flanco posterior de camundongos atímicos. A administração oral diária de (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) em um veículo ou controle de veículo à base de cremofore foi iniciada quando os tumores atingiram o volume médio foram medidos utilizando paquímetros tumor foi calculado como o produto de do tamanho dos tumores para o composto 80 (n
8) com tratados com um veículo experimento, utilizando o indicado. Os tumores
Vernier e o volume do comprimento x largura animais que foram tratados com aqueles de animais que foram (n
16) no último dia do teste t de Student de duas caudas.
composto sobre eficácia contra tumores humanos estabelecidos de diferentes origens foi determinado utilizando Colo205 (carcinoma do cólon), SF763T (glioma) e
NCI-H460 (carcinoma pulmonar de células não pequenas) xenoenxertos (vide Tabela 7) . Estes experimentos foram realizados utilizando (2-dietilamino-etil) amida de ácido
5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) administrada oralmente a 80 mg/kg/dia; uma dose que foi eficaz e bem tolerada.
TABELA 7
256/265
Figure BRPI0108394B1_D0350
Tipo de Tumor Volume Inicial do Tumor (mm3) % Inibição (dia) Valor-P
A4311 Epidermóide 100 93 (40) 0,002
A4311 Epidermóide 400 84 (36) 0,001
Colo205 Cólon 370 77 (54) 0,028
NCI-H460 Pulmão 300 61 (54) 0,003
SF763T Glioma 550 53 (30) 0,001
1 Os dados são para os testes registrados na Tabela 5.
Nos experimentos mencionados acima, o composto 80 foi administrado uma vez ao dia a 80 mg/kg em um veículo à base de Cremofore logo que os tumores atingiram o tamanho indicado. A percentagem de inibição comparada com o grupo 5 de controle tratado com o veículo foi calculada no final dos experimentos. Valores de P foram calculados comparando tamanhos de tumor dos animais que tinham sido tratados com o composto com tamanhos de tumor daqueles animais que tinham sido tratados com o veículo, utilizando o teste t de
Figure BRPI0108394B1_D0351
Student de duas caudas.
Embora a (2-dietilamino-etil) amida de ácido 5-(5fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-3-ilidenometil)-2,2-dimetillH-pirrol-3-carboxílico (Composto 80) inibisse o desenvolvimento de todos os tipos de tumores mostrados na 15 Tabela 7, houve uma diferença na resposta dos diferentes modelos de xenoenxertos. Especificamente, o desenvolvimento de tumores NCI-H460 e SF763T foi detido ou muito reduzido enquanto que os tumores Colo2 05, como os tumores A431, regrediram quando tratados com (2-dietilamino-etil) amida
Figure BRPI0108394B1_D0352
257/265 de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3-ilidenometil)2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico.
A fim de determinar a base molecular para a diferença em resposta entre modelos de xenoenxertos, foram estudados 5 os tumores SF763T. Por conseguinte, os tumores SF763T, que foram menos responsivos ao tratamento com (2-dietilaminoetil) amida de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-3ilidenometil)-2,2-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico, foram avaliados ao nível molecular utilizando técnicas imunoφ 10 histológicas para determinar o efeito do tratamento com o composto. Estes estudos foram inicialmente realizados neste tipo de tumor uma vez que os vascularizados com microvasos que expressam fortemente o bem adequados para estudos da densidade de microvasos tumorais (MVD). A avaliação imuno-histológica dos tumores SF763T indicou que tumores de animais tratados apresentaram MVD reduzido em relação aos controles tratados com veículo, consistentes com um mecanismo anti-angiogênico de ação para
Figure BRPI0108394B1_D0353
o composto 80; a MVD foi de 24,2 ± 4,1 em animais tratados com o composto 80, em comparação com 3 9,3 ± 5,7 para aqueles que foram tratados com o veículo apenas. Como esperado a partir da parada de desenvolvimento tumoral associada, foi evidente uma inibição pronunciada da 25 proliferação de células tumorais em tumores que foram tratados com o composto 80. Estes tumores tinham metade do índice mitótico daquele em tumores tratados com veículo (dados não mostrados). O composto eficaz 80 sobre MVD e proliferação de células tumorais indica que o composto teve
Figure BRPI0108394B1_D0354
258/265 efeitos anti-angiogênicos sob condições nas quais os
A capacidade do também níveis com o foi avaliada nos elevados composto tirosina PDGFRP também (ativada) de PDGFRp.
e anti-tumorais profundos, mesmo composto 80 para inibir a inibiu tumores SF763T, que expressam tratamento dos tumores SF763T em tumores SF763T estabelecidos. 0 composto reduziu os níveis de fosfolipase C gama (PLC-γ) fosforilatada, um indicador a jusante imediato da de PDGFR.
Estes composto sobre a atividade alvo (PDGFR) dados demonstram que a provoca em tumores na demonstração de que a capacidade do um efeito direto in vivo.
Com base composto para inibir sinalização dependente de VEGF em HUVECs foi duradoura (vide supra) a avaliada quando o composto foi modelo de tumor Colo205. Como in vitro eficácia do composto foi administrado raras vezes no mostrado na Tabela
8, 80 mg/kg (91% de inibição) e 40 mg/kg (84% de inibição) administrados duas vezes por semana. Inversamente, mais elevada do composto 80 (160 mg/kg) inibiu desenvolvimento de tumores foram quando uma dose (52% de
Colo205 estabelecidos quando administrada duas vezes por semana, sugerindo que este composto pode demonstrar eficácia quando administrado raras vezes em uma dosagem mais elevada. Devese observar que os regimes de dosagem podem ser de t e rmi nado s por aqueles versados na técnica sem indevida.
Figure BRPI0108394B1_D0355
259/265
Figure BRPI0108394B1_D0356
TABELA 8
Dosagem (mg/kg) Frequência % Inibição Valor-P
160 Duas vezes por semana 52 0,085
Uma vez por semana 17 NS
80 Diariamente 91 0,039
Duas vezes por semana 19 NS
Uma vez por semana 0 NS
40 Diariamente 84 0,028
Duas vezes por semana 36 NS
NS: não significativo (P >0,05)
Resumidamente, os resultados mostrados na Tabela 8 foram obtidos utilizando células Colo205 (0,5 x 106 de
Figure BRPI0108394B1_D0357
células/camundongo) que tiveram SC implantadas na região do flanco posterior de camundongos atímicos. A administração oral do composto 80 de acordo com a programação indicada foi iniciada quando os tumores atingiram 400 mm3. Os tumores foram medidos utilizando paquímetros Vernier e o 10 volume do tumor foi calculado como o produto de comprimento x largura x altura. Os valores P foram calculados mediante comparação do tamanho dos tumores para animais que foram tratados com o composto 80 (n = 8) com aqueles de animais que foram tratados com um veículo (n = 16) no último dia do
260/265 experimento, utilizando o teste t de Student de duas caudas.
11. Eficácia do Composto 80 em um Modelo de Doença
Disseminada.
Além de sustentar o crescimento contínuo de tumores primários sólidos, a angiogênese é também um componente essencial na sustentação do desenvolvimento de doença disseminada devido a metástase proveniente do tumor
Figure BRPI0108394B1_D0358
primário. 0 efeito do composto 80 sobre o desenvolvimento de doença disseminada foi examinado no modelo de colonização pulmonar do melanoma em camundongo B16-F1.
Neste modelo, as células B16-F1 inoculadas intravenosamente através da veia da cauda de camundongos atímicos colonizam os pulmões e formam tumores. Como mostrado na Tabela 8, a administração oral do composto 80 a 80 mg/kg/dia reduziu eficazmente a carga das células B16-F1 no pulmão como avaliado pelas medições do peso total do pulmão. Estes dados sugerem que o composto 80 pode inibir doença disseminada in vivo.
Figure BRPI0108394B1_D0359
TABELA 9
Peso do Pulmão (g) % Inibição Valor-P
Veículo 0,83 ± 0,07 - -
Composto1 0,41 ± 0,04 50 <0,001
1 Composto 80
Resumidamente, os resultados mostrados na tabela 9 foram obtidos utilizando camundongos atímicos que tinham sido inoculados com células tumorais B16-F1 (5 x 105 células/camundongo) através da veia da cauda. Os camundongos foram tratados diariamente com composto 80 ¢7/
261/265 administrado oralmente a 80 mg/kg/dia (n (n tumorais. No final foram sacrificados
18) durante
24 dias após a inoculação
do período de tratamento, os
e seus pulmões removidos e
camundongos pesados. A das células percentagem de inibição foi calculada mediante comparaçao do o peso do pulmão daqueles animais que tinham sido tratados com animais que
Valores de P o composto 80, com o peso tinham sido tratados apenas foram determinados utilizando t de duas caudas.
do pulmão dos com o veículo.
o teste Student
D. Exemplos de Atividade Biológica
Exemplos da potência de compostos in vitro desta
Conclusão
Em estudos para investigar as características farmacocinéticas dos compostos das modalidades preferidas de uma dose única biodi sponibi1idade dos oral biodisponibilidade oral referidos compostos resultou em elevada em camundongos. As farmacocinéticas lineares boas indicam que os compostos das modalidades preferidas da características famacocinéticas favoráveis.
Além disso, os compostos das modalidades preferidas da presente invenção são inibidores potentes da atividade da tirosina quinase das RTKs, Flk-l/KDR e PDGFR do domínio da quinase dividida, que estão envolvidos na angiogênese e a RTK c-kit, um receptor para o fator de célula tronco (SCF) , que está envolvido em alguns cânceres hematológicos. A concentrações mais elevadas, os compostos
262/265 /// das modalidades preferidas da presente invenção também inibem a atividade da tirosina quinase de FGFR-1, uma terceira RTK envolvida na angiogênese. De acordo com a sua atividade bioquímica, os compostos das modalidades 5 preferidas da presente invenção inibem a fosforilação da tirosina dependente de ligante de RTKs alvo e a resposta mitogênica in vitro de células endoteliais da veia
Figure BRPI0108394B1_D0360
umbilical humana (HUVECs) estimuladas por VEGF ou FGF, de células NIH-3T3 que expressam PDGFR estimuladas por PDGF e de células de leucemia mielóide aguda MO7E estimuladas com
SCF. Em contrapartida, os compostos das modalidades preferidas da presente invenção não inibem diretamente a proliferação de células tumorais no meio de desenvolvimento completo exceto a concentrações de 2 a 3 ordens de magnitude mais elevadas do que as necessárias para inibir
Figure BRPI0108394B1_D0361
as respostas mitogênicas dependentes de ligante. Em estudos de xenoenxertos de camundongos, os compostos das modalidades preferidas da presente invenção inibiram o desenvolvimento de tumores humanos estabelecidos de diversas origens em um modo dependente de dosagem e a concentrações que foram bem toleradas mesmo após dosagem prolongada (> 100 dias) . A 80 mg/kg/dia, os compostos das modalidades preferidas da presente invenção induziram a grandes tumores A431 e Colo205 estabelecidos e provocaram inibição ou estase substancial do desenvolvimento de tumores SF763T e MCI-H460.
Em camundongos com tumores SF763T, os compostos das modalidades preferidas da presente densidade de microvasos,
PDGFR nos tumores e índice mitótico nas células tumorais.
Figure BRPI0108394B1_D0362
263/265
Com esta dosagem, os compostos das modalidades preferidas da presente invenção também inibiram a colonização do pulmão por células tumorais B16-F1 em um modelo de metástase tumoral. Estudos sobre os regimes demonstraram que os compostos das modalidades preferidas da presente invenção são mais eficazes quando administrados diariamente. A prova direta da atividade anti-angiogênica dos compostos das modalidades preferidas da presente
SF763T em que a densidade • 10 dos microvasos foi reduzida. A prova direta de que os compostos das modalidades preferidas da presente invenção inibem a fosforilação de PDGFR e a sinalização in vivo também foi obtida em tumores SF763T.
Em conjunto, estes dados sustentam a noção de que compostos administrados oralmente das modalidades preferidas da presente invenção são agentes antiangiogênicos para o tratamento de cânceres, incluindo tumores sólidos e malignidades hematológicas em que a angiogênese e/ou sinalização através de c-kit são
Figure BRPI0108394B1_D0363
importantes na patologia da doença.
Deve-se entender que os compostos, métodos e composições farmacêuticas da presente invenção são eficazes na regulação da atividade de PK e, por conseguinte, esperase que sejam eficazes como agentes terapêuticos contra doenças associadas a RTK, CTK e STK.
Aquele versado na técnica deveria também entender facilmente que a presente invenção está bem adaptada para que se realizem os objetivos e se obtenham os propósitos e vantagens mencionados, bem como aqueles inerentes aqui. Os 30 complexos moleculares e os métodos, procedimentos,
264/265 tratamentos, moléculas, compostos específicos descritos aqui são presentemente representativos de modalidades preferidas, são exemplificativos e não se destinam a limitar o âmbito da invenção. Alterações dos mesmos e 5 outras utilizações ocorrerão àqueles versados na técnica alterações que se enquadrem dentro do espírito da invenção e sejam definidas pelo âmbito das reivindicações.
Ficará imediatamente claro para aquele versado na
Figure BRPI0108394B1_D0364
técnica que podem ser realizadas diferentes substituições e modificações da invenção descrita aqui sem divergir do âmbito e do espírito da invenção.
Todos os pacientes e publicações mencionados na
Todas as patentes e mediante referência como se cada publicação individual fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada como referência.
ilustrativamente aqui pode ser *
praticada adequadamente na ausência de quaisquer elemento ou elementos, limitação ou limitações que não estej am especificamente descritos aqui. Sendo assim, por exemplo, em cada caso aqui qualquer dos termos compreendendo, consistindo essencialmente em e consistindo em pode ser substituído por qualquer dos outros dois termos. Os termos e expressões que foram utilizados são usados como termos de descrição e não de limitação e não existe a intenção de que na utilização de tais termos e expressões se exclua quaisquer equivalentes das características mostradas e 30 descritas ou partes das mesmas, porém entende-se que são
265/265 possíveis embora a diversas modificações dentro do âmbito da reivindicada. Sendo assim, deve-se entender que especificamente descrita por modalidades preferidas e características opcionais, modificação e alteração dos conceitos descritos aqui podem ser utilizadas por aqueles versados na técnica e que se considera que tais modificações e alterações se enquadrem no âmbito desta invenção como
Figure BRPI0108394B1_D0365
definido pelas reivindicações em anexo.
Além disso, quando características ou aspectos da invenção forem descritas em termos de grupos Markush, aqueles versados na técnica entenderão que a invenção é também desse modo descrita em termos de qualquer elemento individual ou subgrupo de elementos do grupo Markush. Por 15 exemplo, se X for descrito como selecionado a partir do grupo que consiste em bromo, cloro e iodo, reivindicações para que X seja bromo e reivindicações para que X seja bromo e cloro são totalmente descritas.
Figure BRPI0108394B1_D0366
Outras modalidades enquadram-se nas reivindicações que se seguem.

Claims (3)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que
  3. 5 compreende o composto como definido na reivindicação 1 ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
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