EA005996B1 - Пирролзамещенный 2-индолинон, фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой - Google Patents

Пирролзамещенный 2-индолинон, фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой Download PDF

Info

Publication number
EA005996B1
EA005996B1 EA200200862A EA200200862A EA005996B1 EA 005996 B1 EA005996 B1 EA 005996B1 EA 200200862 A EA200200862 A EA 200200862A EA 200200862 A EA200200862 A EA 200200862A EA 005996 B1 EA005996 B1 EA 005996B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
hydrogen
alkyl
carboxylic acid
pyrrole
Prior art date
Application number
EA200200862A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200200862A1 (ru
Inventor
Томас Войковский
Чун Чэнь Вэй
Сяоюань Ли
Цонгсин Лянг
Тодд Миллер
Асаад С. Нематалла
Ли Сунь
Пенг Чо Танг
Майкл Холи
Шахрзад Ширазиан
Original Assignee
Сьюджен, Инк.
Фармасиа Энд Апджон Кампэни
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA005996(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Сьюджен, Инк., Фармасиа Энд Апджон Кампэни filed Critical Сьюджен, Инк.
Publication of EA200200862A1 publication Critical patent/EA200200862A1/ru
Publication of EA005996B1 publication Critical patent/EA005996B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Polyurethanes Or Polyureas (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к пирролзамещенным 2-индолинонам формулы (I)и к их фармацевтически приемлемым солям, которые модулируют активность протеинкиназ и, таким образом, можно ожидать, что такие соединения могут быть использованы для профилактики и лечения клеточных нарушений, связанных с протеинкиназой, таких как рак.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к определенным 3-пирролзамещенным соединениям 2индолинона, которые модулируют активность протеинкиназ (ПК). Следовательно, соединения по настоящему изобретению используют при лечении нарушений, связанных с аномальной активностью ПК. К изобретению относятся также фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, содержащих такие соединения, и способы их получения.
Уровень техники
В данном разделе представлена информация только о предпосылках создания изобретения, причем данную информацию не следует рассматривать как предшествующий уровень техники настоящего изобретения.
ПК являются ферментами, катализирующими фосфорилирование гидроксильных групп остатков тирозина, серина и треонина в белках. Такая простая на первый взгляд активность имеет глубокие последствия: рост, дифференциация и пролиферация клеток, то есть практически все аспекты функционирования клеток так или иначе зависят от активности ПК. Более того, аномальная активность ПК связана с широким спектром нарушений в организме-хозяина от совместимых с жизнью заболеваний, таких как псориаз, до чрезвычайно опасных заболеваний, таких как глиобластома (рак мозга). Обычно ПК разделяют на два класса: тирозинкиназы (ТК) и серин-треонинкиназы (СТК).
Одним из основных аспектов активности ТК является ее взаимосвязь с рецепторами ростовых факторов - белками, расположенными на поверхности клеток. При связывании рецепторов ростовых факторов с лигандом ростового фактора они превращаются в активную форму, которая взаимодействует с белками, расположенными с внутренней стороны клеточной мембраны. В результате происходит фосфорилирование остатков тирозина рецептора и других белков, а также образование внутри клеток комплексов с рядом цитоплазматических сигнальных молекул, которые в свою очередь влияют на многочисленные типы клеточного ответа, такие как деление клеток (пролиферация), дифференциация клеток, рост клеток, влияние изменения метаболизма на внеклеточное микроокружение и т. п. Более подробная информация приведена в статье ЗсЫекщпдет и υΐΐΓίοΗ. 1992, Ыеитоп. 9:303-391, которая включена в данное описание в качестве ссылки, включая любые фигуры, как полностью изложено в данном описании.
Рецепторы факторов роста, обладающие активностью ТК, известны как рецепторные ТК (РТК). К таким рецепторам относится многочисленное семейство трансмембранных рецепторов с разнообразной биологической активностью. В настоящее время идентифицировано по крайней мере девятнадцать (19) различных подсемейств РТК. Примером таких подсемейств является подсемейство, названное РТК НЕК, включающее рецептор эпителиального фактора роста (ЕСЕК), НЕК2, НЕК3 и НЕК4. Указанные РТК состоят из внеклеточного гликозилированноголиганд-связывающего домена, трансмембранного домена и внутриклеточного цитоплазматического каталитического домена, который может фосфорилировать остатки тирозина в белках.
Другое подсемейство РТК включает рецептор инсулина (1К), рецептор инсулиноподобного фактора роста I (1СЕ-1К) и рецептор 1КК - родственный рецептору инсулина. 1К и 1СЕ-1К взаимодействуют с инсулином, 1СЕ-1 и 1СЕ-11 с образованием гетеротетрамера, состоящего из двух полностью внеклеточных гликозилированных субъединиц α и двух субъединиц β, которые пересекают клеточную мембрану и содержат домен ТК.
К третьему подсемейству РТК относится группа рецепторов фактора роста тромбоцитов (РЭСЕК), которая включает РЭСЕКа, РЭСЕКв, С8Е1К, с-кй и с-Гпъ. Эти рецепторы состоят из гликозилированных внеклеточных доменов, содержащих вариабельное число иммуноглобулин-подобных петель, и из внутриклеточного домена, в котором последовательность тирозинкиназного домена прерывается другими (неродственными) аминокислотными последовательностями.
Другой группой, которую иногда из-за схожести с подклассом РЭСЕК относят к вышеупомянутому подклассу, является подсемейство рецепторных киназ из эмбриональной печени (рецепторные киназы Г1к). Предполагают, что упомянутая группа рецепторов включает дополнительный киназный домен рецептора Г1к-1 (1ОК/ЕБК-1. УЕСЕ-К2), Г1к-1К, Г1к-4 и Гпъ-подобную тирозинкиназу-1 (111-1).
К другим членам семейства рецепторных ТК, являющихся рецепторами факторов роста, относится подгруппа рецепторов фактора роста фибробластов (ЕСЕ). Эта группа включает четыре рецептора, ЕСЕК1-4, и семь лигандов, ЕСЕ1-7. Согласно предварительным данным рецепторы состоят из гликозилированных внеклеточных доменов, содержащих вариабельное число иммуноглобулин-подобных петель, и из внутриклеточного домена, в котором последовательность тирозинкиназы прерывается участками неродственных аминокислотных последовательностей.
К другим членам семейства рецепторных ТК, являющихся рецепторами факторов роста, относится подгруппа рецепторов фактора роста эндотелия сосудов (УЕСЕ). По строению УЕСЕ аналогичен димерному гликопротеину РЭСЕ, но характеризуется другими биологическими функциями и специфичностью в отношении клеток-мишеней ίη νίνο. В настоящее время, прежде всего, считают, что УЕСЕ играет существенную роль при васкулогенезе (росте сосудов), а также при ангиогенезе (развитии кровеносных
- 1 005996 сосудов).
Более подробное описание известных подсемейств РТК представлено в статье Ρ1ο\νιη;·ιη и соавт., 1994, ΌΝ&Ρ, 7(6):334-339, которая полностью включена в данное описание в качестве ссылки, включая любые фигуры.
Кроме семейства РТК существует также семейство полностью внутриклеточных ТК, названных нерецепторные ТК или клеточные ТК. Последнее название, сокращенно КТК, будет использовано в данном тексте описания. КТК не содержат внеклеточного и трансмембранного доменов. В настоящее время идентифицировано более 24 КТК, включающих 11 подсемейств (8гс, Ргк, В1к, Скк, ЛЫ, Ζαρ70, Рек, Ррк, Рак, 1ак и Аск). До настоящего времени подсемейство 8гс является самым многочисленным семейством КТК и включает в себя 8гс, Уек, Руп, Ьуп, Ьск, В1к, Нск, Рдг и Угк. Более подробное описание КТК можно найти в статье Во1еп, 1993, Опсоцепе, 8:2025-2031, которая включена в данное описание в качестве ссылки, включая любые фигуры.
Серин-треонинкиназы СТК, аналогично КТК, являются преимущественно внутриклеточными, хотя известно несколько рецепторных киназ типа СТК. СТК является основной цитозольной киназой, то есть киназой, выполняющей функцию в данной части цитоплазмы, а не в цитоплазматических органеллах и цитоскелете. Цитозолем называется область внутри клетки, в которой проявляется большинство видов метаболитической и биосинтетической активности, опосредованной клеткой, например, именно в цитозоле происходит синтез белков на рибосомах.
Все РТК, КТК и СТК принимают участие в развитии многочисленных патологических процессов в организме хозяина, включая, главным образом, онкологические заболевания. К другим патологическим состояниям, ассоциированным сТК, относятся, без ограничения перечисленным, псориаз, цирроз печени, диабет, ангиогенез, рестеноз, глазные заболевания, ревматоидный артрит и другие воспалительные процессы, иммунологические заболевания, такие как аутоиммунное заболевание, сердечно-сосудистые заболевания, такие как атеросклероз и ряд почечных нарушений.
Что касается рака, в настоящее время существуют две основные гипотезы, объясняющие взаимосвязь избыточной пролиферации клеток, которая приводит к развитию опухоли, с функциями, известными как регулируемые протеинкиназами. Так например, предполагают, что злокачественный рост клеток является результатом нарушения механизмов, контролирующих процессы деления кпеток и/или дифференциации. Показано, что белковые продукты ряда прото-онкогенов включены в пути передачи сигналов, регулирующих рост и дифференциацию клеток. Указанные белковые продукты прото-онкогенов включают внеклеточные факторы роста, трансмембранные рецепторы факторов роста ТК(РТК), цитоплазматические ТК (КТК) и цитозольные СТК, описанные выше.
С точки зрения очевидной взаимосвязи между регулируемой ПК клеточной активностью и широким спектром разнообразных патологических состояний у человека нет ничего удивительного в том, что были предприняты многочисленные попытки найти способ модулирования активности ПК. К некоторым из них относятся подходы с использованием биомиметиков, то есть больших молекул, созданных по аналогии с молекулами, включенными в реальные клеточные процессы (например, мутантные лиганды (заявка на выдачу патента США Νο 4966849); растворимые рецепторы и антитела (заявка Νο \¥О 94/10202, статья Кепба11 и Тйотак, 1994, Ргос. ΝαΙ'Ι Асаб. 8ск, 90:10705-09, статья К1ш и соавт. 1993, №1иге, 362:841-844); лиганды РНК (статьи 1е1шек и соавт., Вюсйетщйу. 33:10450-56; Такапо и соавт., 1993, Мо1. Вю. Се11. 4:358А ; Кшке11а и соавт., 1992, Εχρ. Се11 Век.. 199:56-62; \Угщ111 и соавт., 1. Се11и1аг Рйук., 152:448-57) и ингибиторы ТК (№О 94/03427; ΑΌ 92/21660; ΑΌ 91/15495; ΑΌ 94/14808; патент США № 5330992; статья Мапаш и соавт., 1994, Ргос. Ат. Аккос. Сапсег Век.. 35:2268).
Кроме вышеперечисленных исследований были предприняты попытки идентифицировать малые молекулы, действующие как ингибиторы ПК. Например, в качестве ингибиторов ТК описаны соединения бис-моноциклических, бициклических и гетероциклических арильных производных (заявка РСТ \УО 92/20642), производные виниленазаиндола (заявка РСТ XV О 94/14808) и 1-циклопропил-4пиридилхинолоны (патент США № 5330992). В качестве ингибиторов ТК, используемых при лечении рака, описаны стирильные производные (патент США № 5217999), стирилзамещенные пиридильные производные (патент США № 5302606), производные хиназолина (заявка на выдачу европейского патента № 0566266 А1), селенаиндолы и селениды (заявка РСТ VО 94/03427), трициклические полигидроксильные соединения (заявка РСТ VО 92/21660) и соединения бензилфосфоновой кислоты (заявка РСТ \ν() 91/15495).
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к определенным 3-пирролзамещенным 2-индолиноновым соединениям, которые проявляют модулирующую ПК активность и, следовательно, могут быть использованы при лечении нарушений, связанных с аномальной активностью ПК.
Таким образом, одним объектом настоящего изобретения являются 3-пирролзамещенные 2индолиноны формулы (I)
- 2 005996
где
К1 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероалициклическую группу, гидрокси, алкокси, -(СО)К15, -ΝΚ13Κ14, -(СН2)ГК16 и -Ο(Θ)ΝΚ8Κ9;
К2 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, тригалогенметил, гидрокси, алкокси, циано, -ΝΚ13Κ14, -№К.13С(О)К14, -С(О)К15, арил, гетероарил, -8(Θ)2ΝΕ13Κ14 и -8О2К20 (где К20 означает алкил, арил, аралкил, гетероарил или гетероаралкил);
К3 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, тригалогенметил, гидрокси, алкокси, -(СО)К15, -ΝΚ13Κ14, арил, гетероарил, -ΝΚ +(()).+ \ -8(О);\'К';К'4. -]\1К13С(О)К14, -МЕ13С(О)ОК14 и -8О2К20 (где К20 означает алкил, арил, аралкил, гетероарил или гетероаралкил);
К4 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, гидрокси, алкокси и -ΝΚ13Κ14;
К5 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и -С(О)К10;
К6 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и -С(О)К10;
К7 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, арила, гетероарила, -С(О)К17 и -С(О)К10; или
К6 и К7 могут быть объединены с образованием группы, выбранной из ряда -(СН2)4-, -(СН2)5- и -(СН2)6; при условии, что по крайней мере один из заместителей К5, К6 или К7 должен означать -С(О)К10;
К8 и К9 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила или арила;
К10 выбирают из группы, состоящей из гидрокси, алкокси, арилокси, -^КП)(СН2)ПК12 и -ΝΒΙ3Β1'1;
К11 выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила;
К12 выбирают из группы, включающей в себя -МЕ13К14, гидрокси, -С(О)К15, арил, гетероарил, -^(О-)К13К14, -^ОН)К13 и -МНС(О)Ка (где Ка означает незамещенный алкил, галогеналкил или аралкил);
К13 и К14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, цианоалкил, циклоалкил, арил и гетероарил; или
К13 и К14 могут быть объединены с образованием гетероциклической группы;
К15 выбирают из группы, состоящей из водорода, гидрокси, алкокси и арилокси;
К16 выбирают из группы, состоящей из гидрокси, -С(О)К15, -ΝΒ13Β1'1 и -С(О)МК?3К14;
К17 выбирают из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила и гетероарила;
К20 означает алкил, арил, аралкил или гетероарил; и η и г независимо равны 1, 2, 3 или 4; или их фармацевтически приемлемые соли.
Предпочтительно, когда К1 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероалициклическую группу, гидрокси, алкокси,-С(О)К15, -ΝΕ13^4, -(СН2)ГК16 и -С(О)\К8К';
К2 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, тригалогенметил, гидрокси, алкокси, -ΝΕ/Ή14, -МЕ13С(О)К14, -С(О)К15, арил, гетероарил и -8(О)^К13К14;
К3 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, тригалогенметил, гидрокси, алкокси, -(СО)К15, -№13К14, арил, гетероарил, -ЙК138(О)2К14, -8(О)2МЕ13К14, -МЕ13С(О)К14 и -МК13С(О)ОК14;
К4 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, алкил, гидрокси, алкокси и -ИК.13К14;
К5 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и -С(О)К10;
К6 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и -С(О)К10;
К7 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, арила, гетероарила, -С(О)К17 и -С(О)К10;
К6 и К7 могут быть объединены с образованием группы, выбранной из ряда -(СН2)4-, -(СН2)5- и -(СН2)6-, при условии, что по крайней мере одна из групп К5, К6 или К7 должна означать -С(О)К10;
К8 и К9 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и арила;
К10 выбирают из группы, состоящей из гидрокси, алкокси, арилокси, -^КП)(СН2)ПК12 и -ΝΕ/Ή14;
К11 выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила;
К12 выбирают из группы, включающей в себя -МЙ.13К14, гидрокси, -С(О)К15, арил и гетероарил;
К13 и К14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, циклоалкил, арил и гетероарил;
К13 и К14 могут быть объединены с образованием группы, выбранной из ряда из -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2О(СН2)2- и -(СН2)2К(СНэ)(СН2)2-;
К15 выбирают из группы, состоящей из водорода, гидрокси, алкокси и арилокси;
- 3 005996
К16 выбирают из группы, состоящей из гидрокси, -С(О)К15, -ΝΚ13Κ14 и -Ο(Θ)ΝΚ13Κ14;
К17 выбирают из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила и гетероарила; и η и г независимо равны 1, 2, 3 или 4; или их фармацевтически приемлемая соль.
Вторым объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый наполнитель.
Третьим объектом настоящего изобретения является способ лечения заболеваний, опосредованных аномальной активностью протеинкиназы (ПК), прежде всего рецепторной тирозинкиназы (РТК), нерецепторной протеинтирозинкиназы (КТК) и серин-треонин ПК(СТК), в организме, прежде всего человека, причем способ заключается во введении в упомянутый организм фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы
I. Такие заболевания включают в себя в качестве примера, без ограничения перечисленным, рак, диабет, цирроз печени, сердечно-сосудистые заболевания, такие как атеросклероз и ангиогенез, иммунологические заболевания, такие как аутоиммунная болезнь, а также заболевания почек.
Согласно четвертому объекту, настоящее изобретение относится к способу модулирования каталитической активности ПК, прежде всего, рецепторной тирозинкиназы (РТК), нерецепторной ПТК (КТК) и СТК с использованием соединения по настоящему изобретению, причем способ можно осуществлять ίη νίΐτο или ίη νίνο. В частности, рецепторную протеинкиназу, каталитическую активность которой модулируют соединением по настоящему изобретению, выбирают из группы, включающей в себя ЕСР, НЕК2, НЕК3, НЕК4, 1К, ЮР-1К, 1КК, РОСЕНк. РОСЕИр. С8Р1Р. С-Κίΐ, С-£шк, Р1к-1К, Р1к4, КПК/Е1к-1, Р11-1, РСРК-1К, РСРК-2К, ЕСЕК-3К и ЕСЕК-4К. Клеточную тирозинкиназу, каталитическую активность которой модулируют соединением по настоящему изобретению, выбирают из группы, включающей в себя 8тс, Ргк, В1к, Скк, ЛЫ, ΖΑΡ70, Рек/Ррк, Рак, 1ак, Аск, Уек, Руп, Ьуп, Ьек, В1к, Нек, Рдт и Утк. Серинтреонин протеинкиназу, каталитическую активность которой модулируют соединением по настоящему изобретению, выбирают из группы, состоящей из СЭК2 и Как
Пятым объектом настоящего изобретения является использование соединения формулы (I) в получении лекарственного средства для лечения заболевания, опосредованного аномальной активностью ПК.
Шестым объектом настоящего изобретения является промежуточное соединение формулы (II):
где 5 10
К5 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил и -С(О)К10;
К6 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил и -С(О)К10;
К7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, арил, гетероарил, -С(О)К17 и -С(О)К10;
К6 и К7 могут быть объединены с образованием группы, выбранной из ряда -(СН2)4-, -(СН2)5- и -(СН2)6-, при условии, что по крайней мере одна из групп К5, К6 или К7 должна означать -С(О)К10;
К10 выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, алкокси, арилокси, -^Кп)(СН2)пК12 и -МК13К14;
К11 выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила;
К12 выбирают из группы, включающей в себя -ПК13К14, гидрокси, -С(О)К15, арил и гетероарил;
К13 и К14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, цианоалкил, циклоалкил, арил и гетероарил; или
К13 и К14 могут быть объединены с образованием гетероциклической группы;
К15 выбирают из группы, включающей в себя водород, гидрокси, алкокси и арилокси;
К17 выбирают из группы, включающей в себя алкил, циклоалкил, арил и гетероарил группы; и η равно 1, 2, 3 или 4.
Предпочтительно, когда в соединении формулы II К5 и К6 означают -С(О)К10;
К6 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, более предпочтительно водород или метил;
К5 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, более предпочтительно водород или метил, если К6 означает -СОК10;
К6 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, более предпочтительно водород или метил, если К5 означает -СОК10;
К7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил и арил, более предпочтительно водород, метил или фенил;
К10 выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, алкокси, -^Кп)(СН2)пК12 и АК.|3К.14;
- 4 005996
В11 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, более предпочтительно водород или метил;
В12 выбирают из группы, включающей в себя -ΝΒ13Β14;
В13 и В14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород или алкил; или
В13 и В14 могут быть объединены с образованием гетероциклической группы; и η равно 1, 2 или 3.
Среди перечисленных выше предпочтительных групп, более предпочтительными группами промежуточных соединений являются те, при которых В5, В6, В11, В12, В13 или В14 независимо означают группы, описанные ниже в разделе Предпочтительные варианты воплощения изобретения.
Седьмым объектом настоящего изобретения является способ получения соединений формулы I.
Наконец, настоящее изобретение относится также к выявлению химического соединения, модулирующего каталитическую активность протеинкиназы путем контактирования клеток, экспрессирующих упомянутую ПК, с соединением или солью по настоящему изобретению, а затем изучению действия соединения на упомянутые клетки.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Определения
Если не оговорено иначе, следующие используемые в описании и формуле изобретения термины имеют нижеследующие значения.
Алкил означает насыщенный алифатический углеводородный радикал с разветвленной или неразветвленной цепью, содержащей от 1 до 20 атомов углерода (приведенные интервалы численных значений, например 1-20, означают, что группа, в данном случае алкильная группа, может содержать 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода и т.д. вплоть до 20 атомов углерода включительно). Алкильные группы, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, называют низшими алкильными группами. Если низшие алкильные группы не имеют заместителей, их называют незамещенными низшими алкильными группами. Более предпочтительно алкильная группа является алкилом среднего размера, содержащим от 1 до 10 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изо-бутил, третбутил, пентил и другие. Наиболее предпочтительная низшая алкильная группа содержит от 1 до 4 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изо-бутил или трет-бутил и т. п. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В замещенных алкильных группах предпочтительно по меньшей мере один, более предпочтительно от одного до трех, наиболее предпочтительно один или два заместителя независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкокси, арил, необязательно замещенный по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, арилокси, необязательно замещенный по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, 6-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 атомов азота в кольце, атомы углерода необязательно замещенные по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, 5-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, включающей в себя азот, серу или кислород, атомы углерода и азота необязательно замещенные по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, 5- или 6-членная гетероалициклическая группа, содержащая от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, атомы углерода и азота (при наличии), необязательнозамещенные по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, меркапто, (незамещенный низш. алкил)тио, арилтио, необязательно замещенный по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, циано, ацил, тиоацил, О-карбамил, Ν-карбамил, Отиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, В188(О)-, В188(О)2-, -С(О)ОВ18, В18С(О)О- и -ΝΕΑ19, где В18 и В19 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, незамещенный низш. алкил, тригалогенметил, незамещенный (С3-С6)циклоалкил, незамещенный низш. алкенил, незамещенный низш. алкинил и арил, необязательно замещенный по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкилокси.
Алкильная группа предпочтительно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, включающей в себя гидрокси, 5- или 6-членную гетероалициклическую группу, содержащую от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, атомы углерода и азота (при наличии), необязательно замещенные по меньшей мере одним заместите
- 5 005996 лем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, 5-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, атомы углерода и азота, необязательно замещенные по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, 6-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 атомов азота в кольце, атомы углерода в кольце, необязательно замещенные по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, или ΝΚ18Κ19, где К.18 и К19 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород и незамещенный низш. алкил. Алкил наиболее предпочтительно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, диметиламино, этиламино, диэтиламино, дипропиламино, пирролидино, пиперидино, морфолино, пиперазино, 4-низш. алкилпиперазино, фенил, имидазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, оксазолил, триазинил и т.п..
Циклоалкил означает моноциклическое углеродное кольцо, содержащее от 3 до 8 атомов углерода, углеродный 5-членный/6-членный или 6-членный/6-членный конденсированный бицикл или полициклическое конденсированное кольцо (в конденсированной циклической системе каждое кольцо в системе содержит общую пару соседних атомов углерода с каждым другим кольцом в системе), в которых одно или более колец могут содержать одну или более двойных связей, но ни одно кольцо не содержит полностью сопряженную систему п-электронов.
Примерами циклоалкильных групп без ограничения перечисленным, являются циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклопентен, циклогексан, циклогексадиен, адамантан, циклогептан, циклогептатриен и т.п.. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В замещенных циклоалкилах предпочтительно по меньшей мере один, более предпочтительно один или два заместителя, независимо выбирают из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкокси, арил, необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, арилокси, необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил или незамещенный низш. алкокси, 6-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 атомов азота в кольце, атомы углерода в кольце, необязательно замещенные по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, 5-членный гетероарил, содержащий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, атомы углерода и азота, необязательно замещенные по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, 5- или 6-членную гетероалициклическую группу, содержащую от 1 до 3 гетероатомов, которые выбирают из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, атомы углерода и азота (при наличии), необязательно замещенные по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, меркапто, (незамещенный низш. алкил)тио, арилтио, необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкил и незамещенный низш. алкокси, циано, ацил, тиоацил, О-карбамил, Ν-карбамил, Отиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, К188(О)-, К188(О)2-, -С(О)ОК18, К18С(О)О- и -ΝΚ18Κ19, определенные выше.
Алкенил означает низшую алкильную группу, согласно приведенному в данном контексте определению, включающую по крайней мере два атома углерода и содержащую по крайней мере одну двойную связь углерод-углерод. Типичными примерами, без ограничения перечисленными, является этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-, 2- или 3-бутенил и т.п..
Алкинил означает низшую алкильную группу, согласно приведенному в данном контексте определению, включающую по крайней мере два атома углерода и содержащую по крайней мере одну тройную связь углерод-углерод. Типичными примерами, без ограничения перечисленными, являются этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-, 2- или 3-бутинил и т.п..
Арил означает углеродное моноциклическое кольцо или конденсированные полициклические группы (то есть систему колец, которые содержат общую пару соседних углеродных атомов), содержащую от 1 до 12 атомов углерода и полностью сопряженную систему п-электронов. Примерами, без ограничения перечисленными, являются фенил, нафталинил и антраценил. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. В замещенных арильных группах, предпочтительно по крайней мере один, более предпочтительно один, два или три, наиболее предпочтительно один или два заместителя незави
- 6 005996 симо выбирают из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкокси, меркапто, (незамещенный низш. алкил)тио, циано, ацил, тиоацил, О-карбамил, Ν-карбамил, О-тиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, В188(О)-, В188(О)2-, -С(О)ОВ18, В18С(О)О- и -ЛВ18В19, где В18 и В19 определены выше. Арильная группа предпочтительно по выбору замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Ν-сульфамидо группу.
Гетероарил означает моноцикл или конденсированную систему колец (то есть систему колец, которые содержат общую пару соседних атомов углерода), содержащую в кольце от 5 до 12 атомов, из которых один, два или три являются гетероатомами, выбранными из группы, включающей в себя азот, кислород и серу, и остальными атомами углерода, и, кроме того, содержащую полностью конденсированную систему п-электронов. Примерами незамещенных гетероарильных соединений, без ограничения перечисленным, являются пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, пиразол, пиридин, пиримидин, хинолин, изохинолин, пурин и карбазол. Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной. В замещенных гетероарильных группах, предпочтительно по меньшей мере один, более предпочтительно один, два или три, наиболее предпочтительно один или два заместителя независимо выбирают из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкокси, меркапто, (незамещенный низш. алкил)тио, циано, ацил, тиоацил, Окарбамил, Ν-карбамил, О-тиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8сульфонамидо, В188(О)-, В188(О)2-, -С(О)ОВ18, В18С(О)О- и -ΝΒ18Β19, где В18 и В19 определены выше. Гетероарильная группа предпочтительно по выбору замещена одним или двумя заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Ν-сульфонамидо.
Гетероалициклическая группа означает моноцикл или систему конденсированных колец, содержащих в кольце от 5 до 9 атомов, из которых один или два атома являются гетероатомами, выбранными из Ν, О или 8(О)П (где η является целым числом от 0 до 2), и остальными атомами углерода. Кольца могут также содержать одну и более двойных связей. Однако кольца не имеют полностью сопряженной системы п-электронов. Примерами незамещенных гетероалициклических групп, без ограничения перечисленными, являются пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, тиоморфолино, гомопиперазино и т. п.. Гетероалициклическое кольцо может быть замещенным или незамещенным. В замещенных гетероалициклах, предпочтительно по меньшей мере один, более предпочтительно один, два или три, наиболее предпочтительно один или два заместителя независимо выбирают из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, галоген, гидрокси, незамещенный низш. алкокси, меркапто, (незамещенный низш. алкил)тио, циано, ацил, тиоацил, О-карбамил, Ν-карбамил, Отиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидо, Ν-амидо, нитро, Ν-сульфонамидо, 8-сульфонамидо, В188(О)-, В188(О)2-, -С(О)ОВ18, В18С(О)О- и -НВ18В19, где В18 и В19 определены выше. Гетероалициклическая группа предпочтительно по выбору замещена одним или двумя заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей в себя галоген, незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, гидрокси, меркапто, циано, Ν-амидо, моно- или диалкиламино, карбокси или Ν-сульфонамидо.
Гетероцикл означает насыщенный циклический радикал, содержащий от 3 до 8 атомов в кольце, из которых один или два являются гетероатомами, выбранными из Ν, О или 8(О)П (где η является целым числом от 0 до 2), и остальными атомами в кольце - атомами углерода, из которых один или два атома могут необязательно быть замещены на карбонильную группу.
Гетероциклическое кольцо может необязательно быть независимо замещенным одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, включающей в себя необязательно замещенный низш. алкил (замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из карбокси или сложноэфирной групп), галогеналкил, цианоалкил, галоген, нитро, циано, гидрокси, алкокси, амино, моноалкиламино, диалкиламино, аралкил, гетероаралкил, -СОВ (где В является алкилом) или -СООВ (где В является водородом или алкилом). Более подробно термин гетероциклил включает в себя, без ограничения перечисленным, тетрагидропиранил, 2,2-диметил-1,3-диоксолан, пиперидино, Ν-метилпиперидин-З-ил, пиперазино, Ν-метилпирролидин-З-ил, 3-пирролидино, морфолино, тиоморфолино, тиоморфолино-1оксид, тиоморфолино-1,1-диоксид, 4-этилоксикарбонилпиперазино, 3-оксопиперазино, 2-имидазолидон, 2-пирролидинон, 2-оксогомопиперазино, тетрагидропиримидин-2-он и их производные. Гетероциклическая группа предпочтительно по выбору замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, включающей в себя галоген, незамещенный низш. алкил, низш. алкил, замещенный карбоксигруппой, гидроксисложноэфирной группой, моно- или диалкиламино.
Гидрокси означает -ОН группу.
Алкокси означает -О-(незамещенный алкил) и -О-(незамещенный циклоалкил) группы. Типичными примерами, без ограничения перечисленными, являются метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси и т.п..
Арилокси означает -О-арил и -О-гетероарил группы, как определено в данном контексте. Типичными примерами, без ограничения перечисленным, являются фенокси, пиридинилокси, фуранилокси,
- 7 005996 тиенилокси, пиримидинилокси, пиразинилокси и т.п., а также их производные.
Меркапто означает -8Н группу.
Алкилтио означает -8-(незамещенный алкил) и -8-(незамещенный циклоалкил) группы. Типичными примерами, без ограничения перечисленным, являются метилтио, этилтио, пропилтио, бутилтио, циклопропилтио, циклобутилтио, циклопентилтио, циклогексилтио и т.п..
Арилтио означает -δ-арил и -δ-гетероарил группы, как определено в данном контексте. Типичными примерами, без ограничения перечисленным, являются фенилтио, пиридинилтио, фуранилтио, тиенилтио, пиримидинилтио и т.п., а также их производные.
Ацил означает -С(О)-К группу, где Я выбирают из группы, включающей в себя водород, незамещенный низш. алкил, тригалогенметил, незамещенный циклоалкил, арил, необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогенметил, незамещенный низш. алкокси, галоген и -ΝΚ1δΚ.19, гетероарил (присоединенный через атом углерода в кольце), необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, незамещенный низш. алкокси, галоген и -ΝΚ1δΚ.19, а также гетероалицикл (присоединенный через атом углерода в кольце) необязательно замещенный по меньшей мере одним, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, включающей в себя незамещенный низш. алкил, тригалогеналкил, незамещенный низш. алкокси, галоген и -ЫЯ18Я19 Примерами ацильных групп, без ограничения перечисленными, являются ацетил, трифторацетил, бензоил и т. п..
Альдегид означает ацильную группу, в которой Я означает водород.
Тиоацил означает -С(8)-Я группу, где Я определен в данном контексте.
Сложный эфир означает -С(О)О-Я группу, где Я определен в данном контексте, но не означает водород.
Ацетил означает -С(О)СН3 группу.
Галоген означает фтор, хлор, бром или иод, предпочтительно фтор или хлор.
Тригалогенметил означает -СХ3 группу, где X означает галоген, как определено в данном контексте.
Тригалогенметансульфонил означает Х3С8(=О)2- группу, где X определен выше.
Циано означает ^=Ν группу.
Метилендиокси означает -ОСН2О- группу, где два атома кислорода связаны с соседними атомами углерода.
Этилендиокси означает -ОСН2СН2О- группу, где два атома кислорода связаны с соседними атомами углерода.
8-сульфонамидо означает -8(О)2МЯ18Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте. Ν-сульфонамидо означает -КЯ188(О)2Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте. О-карбамил означает -ОС(О)NЯ18Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте. Ν-карбамил означает Я18ОС(О)NЯ19- группу, Я18 и Я19 определены в данном контексте. О-тиокарбамил означает -ОС(8)NЯ18Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте. Ν-тиокарбамил означает Я18ОС(8)NЯ19- группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте. Амино означает -ЯЯ18Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте.
С-амидо означает -С(О)ЯЯ18Я19 группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте.
Ν-амидо означает Я18С(О^Я19- группу, где Я18 и Я19 определены в данном контексте.
Нитро означает -ЫО2 группу.
Галогеналкил означает незамещенный алкил, предпочтительно незамещенный низш. алкил, как определено выше, замещенный одним или более одинаковыми или различными атомами галогена, например, -СН2С1, -СЕ3, -СН2СГ3, -СН2СС13 и другие.
Аралкил означает незамещенный алкил, предпочтительно незамещенный низш. алкил, как описано выше, замещенный арильной группой, как определено выше, например, -СН2фенил, -(СН2)2фенил, -(СН2)3фенил, -СН3СН(СН3)СН2фенил и т.п., а также их производные.
Гетероаралкил означает незамещенный алкил, предпочтительно незамещенный низш. алкил, как определено выше, замещенный гетероарильной группой, например, -СН2пиридинил, -(СН2)2пиримидинил, -(СН2)3имидазолил и т.п., а также их производные.
Моноалкиламино означает радикал -МНЯ, где Я означает незамещенный алкил или незамещенный циклоалкил, как определено выше, например, метиламино, (1-метилэтил)амино, циклогексиламино и т. п..
Диалкиламино означает радикал -ΝΡΚ где каждый Я независимо означает незамещенный алкил или незамещенный циклоалкил, как определено выше, например, диметиламино, диэтиламино, (1метилэтил)этиламино, циклогексилметиламино, циклопентилметиламино и т.п.
Цианоалкил означает незамещенный алкил, предпочтительно незамещенный низш. алкил, какописано выше, замещенный одной или двумя цианогруппами.
Термин по выбору или необязательно означает, что последовательно описываемое событие или
- 8 005996 условие могут существовать, а могут и не существовать, и что описание содержит примеры, в которых включены событие и условие, а также содержит примеры в которых они не существуют. Например, гетероцикл, необязательно замещенный алкильной группой означает, что алкильная группа может суще ствовать, а может и не существовать, и описание содержит пример, в котором гетероцикл является замещенным алкильной группой, и пример, в котором гетероцикл не замещен алкильной группой.
Термины 2-индолинон, индолин-2-он и 2-оксиндол взаимозаменяемы и используются в тексте для обозначения молекулы со следующей химической формулой:
Термин пиррол употребляется для обозначения молекулы следующей химической формулы:
Термины пиррол-замещенный 2-индолинон и 3-пирролиденил-2-индолинон являются взаимозаменяемыми и используются в тексте для обозначения химического соединения общего химического строения, представленного формулой I.
Соединения с одинаковой химической формулой, которые различаются природой или последовательностью связей атомов или пространственным расположением атомов называют изомерами. Изомеры, различающиеся пространственным расположением атомов, называют стереоизомерами. Стереоизомеры, которые не являются зеркальным отображением друг друга, называют диастереомерами, не переводимые друг в друга зеркально-отображенные изомеры называют энантиомерами. В случае, если соединение содержит ассиметрический центр, например, атом, соединенный с четырьмя различными группами, для него возможно существование пары энантиомеров. Энантиомер может быть охарактеризован абсолютной конфигурацией ассиметрического центра и описывается согласно Я- и 8- номенклатуре, введенной Сайп и Рге1од, или по вращению плоскости поляризации света на правовращающие и левовращающие (то есть (+) и (-) изомеры, соответственно). Хиральное соединение может содержать индивидуальный энантиомер или являться смесью изомеров. Смесь равных количеств энантиомеров называют рацемической.
Соединения по настоящему изобретению могут содержать по меньшей мере один ассиметрический центр, поэтому эти соединения могут быть получены как индивидуальные (Я)- или (8)- стереоизомеры или их смесь. Например, если заместитель Я6 в соединении формулы (I) означает 2-гидроксиэтил, то атом углерода, к которому присоединена гидроксильная группа, является ассиметрическим центром, а значит соединение формулы (I) может существовать как (Я)- или (8)- стереоизомер. Если не оговорено иначе, описание и название конкретного соединения в описании и формуле изобретения включает оба индивидуальных энантиомера, а также их рацемические и нерацемические смеси. Способы определения параметров стереохимии и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области техники (см. книгу 1. Магсй, Лбуаисеб Огдашс Сйешщйу (Современная органическая химия), гл.4, 4-е издание, 1ойи \УПеу и 8опк. Ыете Уогк, 1992).
Соединения формулы I могут обладать свойством таутомеризма и существовать в форме изомеров. Например, описываемые соединения могут иметь Е или Ζ конфигурацию относительно двойной связи, соединяющей остаток 2-индолинона и остаток пиррола, а также быть смесью этих изомеров. Данное изобретение подразумевает любые таутомерные или структурные изомеры, а также их смеси, которые обладают способностью модуляции активности РТК, КТК и/или СТК и не ограничены конкретной таутомерной или структурно изомерной формой.
Фармацевтическая композиция означает смесь одного или более описываемых здесь соединений или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей и пролекарств, с другими химическими компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и наполнители. Целью создания фармацевтической композиции является облегчение введения соединения в организм.
Соединение формулы (I) может также действовать в качестве пролекарства. Термин пролекарство означает агент, который превращается в исходное лекарство ш у1уо. Пролекарства часто используются, так как в некоторых случаях введение в виде пролекарства является более простым способом по сравнению с введением в виде исходного лекарства. Например, пролекарства могут быть биодоступными при оральном введении в отличии от исходного лекарства. Пролекарство в составе фармацевтической композиции может обладать более высокой растворимостью по сравнению с исходным лекарством. Примером пролекарства, без ограничения перечисленным, может быть соединение по настоящему изобретению, которое вводят в виде сложного эфира (пролекарства) с целью облегчения прохождения соединения через клеточную мембрану, где растворимость в воде оказывает отрицательное воздействие на подвиж
- 9 005996 ность, однако затем при прохождении внутрь клетки, где растворимость в воде является положительным свойством, соединение подвергается метаболитическому гидролизу с образованием карбоновой кислоты, то есть активного соединения.
Другим примером пролекарства может быть короткий полипептид, например, без ограничения перечисленным, 2-10-членный пептид, присоединенный посредством концевой аминогруппы к соединению по настоящему изобретению, причем полипептид гидролизуется или происходит его метаболитическое превращение ίη νίνο с высвобождением активной молекулы.
Кроме того, предполагается, что соединение формулы (I) будет метаболизировано ферментами в организме, таком как организм человека, с образованием метаболита, который может модулировать активность ПК. Такие метаболиты включены в объем данного изобретения.
Использованный в данном тексте термин физиологически/фармацевтически приемлемый носитель означает носитель или разбавитель, который не вызывает значительного раздражения организма и не приводит к отрицательному действию на биологическую активность и свойства введенного соединения.
Термин физиологически приемлемый наполнитель означает инертное вещество, которое добавляют в фармацевтическую композицию для дальнейшего облегчения введения соединения. Примеры наполнителей, без ограничения перечисленным, включают в себя карбонат кальция, фосфат кальция, различные типы сахаров и крахмалов, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
Использованный в данном контексте термин фармацевтически приемлемая соль означает такие соли, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства исходного соединения. Такие соли включают в себя:
(1) кислотно-аддитивную соль, которую получают взаимодействием свободного основания исходного соединения с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, хлорная кислота и другие, или органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, (Ό) или (Ь) яблочная кислота, малеиновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота и малоновая кислота и другие, предпочтительно соляная кислота или (Ь)-яблочная кислота, например, соль(Ь)-яблочной кислоты и 5-(5фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-диэтиламиноэтил)амида; или (ίί) соли, образованные исходным соединением, содержащим кислый протон, который замещается на ион металла, например, ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион алюминия; или образует координационную связь с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, Ν-метилглюкозоамин и т.п..
Используемый в данном тексте термин ПК означает рецепторную тирозиновую протеинкиназу (РТК), нерецепторную или клеточную тирозинкиназу (КТК) и серин-треонинкиназу (СТК).
Термин способ означает способ, средства, методы и методики, используемые для достижения поставленной цели, включающие в себя, без ограничения перечисленным, такие способы, средства, методы и методики, которые либо известны специалистами в области химии, фармацевтики, биологии, биохимии и медицины, либо легко могут быть созданы на основе известных способов, средств, методов и методик.
Используемый в данном тексте термин модуляция или модулирование означает изменение каталитической активности РТК, КТК и СТК. Прежде всего, модулирование означает активирование каталитической активности РТК, КТК и СТК, предпочтительно активирование или ингибирование каталитической активности РТК, КТК и СТК, в зависимости от концентрации соединения или соли, воздействию которой подвергаются РТК, КТКи СТК, более предпочтительно ингибирование каталитической активности РТК, КТК и СТК.
Используемый в данном тексте термин каталитическая активность означает скорость фосфорилирования тирозина при прямом иди опосредованном действии РТК и/или КТК, или фосфорилирования серина и треонина при прямом или опосредованном действии СТК.
Используемый в данном тексте термин контактирование означает осуществление взаимодействия соединения по изобретению с ПК-мишенью таким образом, чтобы соединение могло воздействовать на каталитическую активность ПК, непосредственно, т.е. взаимодействуя с самой киназой, или опосредованно, т. е. взаимодействуя с другой молекулой, от которой зависит каталитическая активность киназы. Такое контактирование можно проводить ίη νίίτο, т.е. в пробирке, в чашке Петри и т.п. Контактирование в пробирке может включать только соединение и исследуемую ПК или целые клетки. Клетки можно культивировать или выращивать в чашках для культивирования клеток (планшетах) и вводить в контакт с соединением, присутствующем в среде. В связи с этим способность конкретного соединения воздействовать на патологическое состояние, связанное с ПК (т.е. величину его 1С50. которая будет определена ниже), можно определить до проведения исследований ίη νίνο на более сложных живых организмах. Для испытания на клетках вне организма, известно множество способов осуществления контактирования ПК с соединениями, хорошо известных специалистам в данной области техники, включая, без ограниче
- 10 005996 ния перечисленным, микроинъекцию непосредственно в клетку и множество способов с использованием трансмембранных переносчиков.
Термин ίη νίίτο означает методики, проводимые в искусственной среде, такой как, без ограничения перечисленным, пробирка или культуральная среда.
Термин ίη νίνο означает методики, выполняемые на живом организме, таком как, без ограничения перечисленным, мышь, крыса или кролик.
Термины нарушение, связанное с ПК, нарушение, вызванное ПК и аномальная активность ПК означают состояние организма, для которого характерна необычная, т. е. низкая или в основном, более высокая, каталитическая активность ПК, причем конкретная ПК может быть РТК, КТК или СТК. Необычная каталитическая активность может быть обусловлена следующими причинами: (1) экспрессией ПК клеткой, которая в норме не экспрессирует ПК, (2) повышенной экспрессией ПК, ведущей к нежелательной клеточной пролиферации, дифференциации и/или росту, или (3) снижением экспрессии ПК, ведущей к нежелательному снижению клеточной пролиферации, дифференциации и/или росту. Гиперактивность ПК означает или амплификацию гена, кодирующего конкретную ПК, или продуцирование ПК с уровнем активности, который коррелирует с нарушением клеточной пролиферации, дифференциации и/или роста (т. е. с увеличением уровня ПК возрастает степень проявления (серьезность) одного или нескольких симптомов нарушения функционирования клетки). Гипоактивность дает обратный эффект, когда проявление одного или нескольких симптомов нарушения функционирования клетки возрастает по мере понижения активности ПК.
Термины лечить и лечение означают способ облегчения симптомов или устранение вызванных ПК нарушений функционирования клеток и/или сопутствующихсимптомов. В отношении опухолевых заболеваний этот термин означает, что способ позволяет продлить предполагаемую продолжительность жизни человека (онкологического больного), или несколько смягчить один или несколько симптомов болезни.
Термин организм означает любое живое существо, включая по крайней мере одну клетку. Живой организм может быть простым, например, таким как одна эукариотическая клетка, или сложным, таким как организм млекопитающего, включая человека.
Термин терапевтически эффективное количество означает количество введенного в организм соединения, которое в некоторой степени ослабляет один или несколько симптомов заболевания, подлежащего лечению. В отношении лечения опухолей, терапевтически эффективное количество означает количество соединения, которое приводит к следующим результатам: (1) уменьшает размер опухоли, (2) подавляет (т.е. в некоторой степени замедляет, предпочтительно останавливает) метастазирование, (3) в некоторой степени подавляет (т.е. в некторой степени замедляет, предпочтительно останавливает) рост опухоли, и/или (4) в некоторой степени ослабляет (или предпочтительно устраняет) один или несколько симптомов, ассоциированных с раком.
Термин мониторинг означает наблюдение или обнаружение результата контактирования соединения с клеткой, экспрессирующей конкретную ПК. Наблюдаемый или обнаруженный эффект может представлять собой изменение клеточного фенотипа, каталитической активности ПК или изменение взаимодействия ПК с природным связывающимся партнером (лигандом). Способы наблюдения или обнаружения таких явлений хорошо известны специалистам.
Вышеупомянутый эффект выбирают из следующих результатов: изменение или отсутствие изменений клеточного фенотипа, изменение или отсутствие изменений каталитической активности упомянутой ПК или изменение или отсутствие изменений во взаимодействии вышеупомянутой ПК с природным связывающимся партнером (лигандом).
Клеточный фенотип означает внешние признаки клетки или ткани или биологические функции клетки или ткани. Примеры клеточного фенотипа включают в себя, без ограничения перечисленным, размер клетки, клеточный рост, клеточную пролиферацию, дифференциацию клеток, выживание клеток, апоптоз, поглощение и использование питательных веществ. Такие характеристики фенотипа могут быть определены по методикам, известным в данной области техники.
Природный связывающийся партнер (лиганд) означает полипептид, который связывается с конкретной ПК в клетке. Природные лиганды могут выполнять (определенную) функцию в процессе передачи сигнала, опосредованном ПК. Изменение взаимодействия природного лиганда с ПК может проявляться непосредственно, как увеличение или уменьшение концентрации комплекса ПК/природный лиганд, и как наблюдаемое изменение способности ПК опосредовать передачу сигнала.
Примеры соединений по настоящему изобретению приведены ниже в табл. 1.
- 11 005996
Таблица 1
При мер
Формула
Название
4-Метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроинДОЛ-3илиденметил)-1 Н-пиррол-2-карбоновая кислота
4-Метил-5-(1-метил-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-2карбоновая кислота
Метиловый эфир 4-метил-5-(2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиценметил)-1 Н-пиррол-2карбоновой кислоты
Этиловый эфир 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4-метил- 1Н-пиррол2-карбоновой кислоты
5-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дитвдроиндол-З-илиденметил)-4-метил-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром2-оксо-1,2-дигвдроиндол-3-илиденметил)-4метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илипенметил)-4метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амиц 5-(5-бром-2-оксо1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(2-оксо-6фени1-1,2-дигвдроиндал-3-илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты
- 12 005996
10 (2-Диэтиламиноэтил)метиламид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дипщроиндол-З’Илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты
11 - (2-Диэтиламиноэтил)метиламид 5-(2-оксо-6фенил-1,2-дигццроиндол-3-илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты
12 (З-Диэтиламинопропил)амид 3-метил-5-(2оксо -1,2-дигидроиндол- 3 -илиденметил) -1Н пиррол-2-Карбоновой кислоты
13 (З-Диэтнламинопропил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илцденметил)-3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
14 (З-Диэтиламинопропил)амид 3-метил-5-(2оксо-6-фенил-1Д-дигидроиндол- 3-илиденметал)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
15 (З-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-метокси-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3метил-1Н-пиррол- 2-карбоновой кислоты
16 о^й (З-Диэтиламинопропил)амид 5-(6-метокси-2оксо-1,2-дигвдроиндол-3-илиденметил)’3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
17 а'ХХ^*т (2-Диэтиламиноэтил)амид 3-(5-бром-2-оксо1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагцдро-2Н-изоишюл-1-карбоновой кислоты
18 •ХхД’ г> (З-Диэтиламинопропил)амид 3-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
19 •'тсс^&р О (3-Пирролидин- 1-ил-пропил)амид 3-(5-бром- 2-оксо-1,2-дип1дроиндол-3-илиден.метил)- 4,5,6,7-Т€Трагидро-2Н-изоиндол-1-карбоно- вой кислоты
20 (2-Диэтиламиноэтил) амид 3-(2-оксо-6пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1карбоновой кислоты
21 (З-Диэтиламинопропил)амид 4-бензоил-5-{5бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
- 13 005996
22 (3-Морфолин-4-ил-пропил)амид 4-бензоил-5(5-бром-2-оксо- 1,2-дигцдроиндол-З-илиденметил)-3-метил-1 Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
23 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амвд 4-бензоил- 3-метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3- илиденметил)-1 Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
24 (3-Пирролвдин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил5-(5-бром-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-Зилиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
25 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амвд 4-бензоил3-метил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)- 1Н-гшррол-2-карбоновой кислоты
26 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил- 5-(6-метокси-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
27 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил5-(5-метокси-2-оксо-1,2-дигидроивдол-Зилиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
28 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-Зилиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
29 (З-Диэтиламинопропил)амид 4-ацетил-5-(5бром-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
30 -χΑ·0 (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-ацетил- 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигвдроиндол-3илиденметил)-3-метал-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
31 (3-Морфолин-4-ил-пропил)амид 4-ацетил-5- (5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-3-метил- 1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
32 (З-Гидроксипропил)амвд 4-ацетил-5-(5-бром- 2-оксо-1,2-дипмроиндол-3-илиденметил)-3- метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
33 (2-Гидроксиэтил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты
- 14 005996
(2-Морфолин-4-ил-этил)амвд 4-ацетил-5-(5бром-2-оксо-1,2-дигцдроиндол-3-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 4-ацетил-5-(5бром-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты [2-(4-Гидроксифенил)этил)амид 4-ацетил-5(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (3-Диэтиламинопропил)амвд 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром2-оксо-1,2-дитидроиндол-3-шгиденметил)-2изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты [3-(4-Метилпиперазин-1-ил)пропил]амид 5(5-бром-2-оксо-1,2-дигицроиндол-З-илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
5-(5-Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-Зилиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Нпиррол-3-карбоновая кислота (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(6-(2метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил|-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Диметиламиноэтил)амид 5-[6-(2-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
- 15 005996
46 ί+ Этиловый эфир 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-метил-4-фенил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
47 Ό <с (З-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигицроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил- 1Н-пиррол-3-карбоновой
кислоты
48 >й (2-Диметилах£ИНОэтил)амид 5-(5-бром-2-
η- оксо-1,2-дигидроивдол-3-илиденметил)-2,4-
ъ ν диметил-Ш-пиррол-З-карбоновой кислоты
49 Л. (2-Диметиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-
ί оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-З-илиден-
^й метил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
50 (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-
αΎ>τ 1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-
Μ -λ° диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
51 3-й (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-
Ύ4 Ή 1,2-дигидроиндол- 3-илиденметил)-2,4-
τ диметил-1Н-гтиррол-3-карбоновой кислоты
52 3-Й (2-Пирролвдин-1-ил-этил)амид 5-(5-бром-2-
г8 % оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-
ν' диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
53 (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром-2-
*Ό оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-
*Μ»*· Й диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
54 Λ- (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(6-(2-метокси-
СХ^ фекил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиден-
ύ- метил) -2,4-диметил-1 Н-гтиррол-З-карбоновой
кислоты
55 Λ- (2-Диметиламиноэтил)амид 5-[6-(3-метокси-
ΓΤ1 фенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиден-
метил|-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой
кислоты
56 >4 (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-
τΏ оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденме-
ъ *»3 тил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
57 >4 (2-Пирролидин-1-ил-этил)аммд 2,4-диметил-
Οψ Γθ 5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигвдроиндол-З-
к, νό илиденметил)-1 Н-пиррол-З-карбоновой
кислоты
- 16 005996
58 (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 2,4-диметил- 5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3илвденметил)- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
59 (А'? (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пИррол-3-карбоновой кислоты
60 (2-Пирролидин-1-ид-этил)амвд 2,4-диметил- 5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-Зилиденметил)- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
61 СгоА0, (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 2,4-диметил- 5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигид роиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
62 (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(6-(3,5-дихлорфенил)-2-оксо-1,2-дигвдроиндол-З-илиденметил|-2,4-дим етил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
63 оА'г (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2оксо-6-пиридин-З-ил- 1,2-дигцдроиндол-Зилиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
64 о (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 2,4-диметил5-(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
65 „А- (З-Диметиламинопропил)амид 2,4-диметил-5(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-Зилиденметил) -1 Н-пиррол- 3 -карбоновой кислоты
66 \_3“Ν·~Ζ Μ' (З-Диметиламинопропил)амид 2,4-диметил-5(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-Зилиденметил)-1 Н-пиррол- 3 -карбоновой кислота
67 (З-Диэтиламинопропил)амид 2,4-диметил-5(2-оксо-5-феяил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
68 А'4· (З-Диэтиламинопропил)амид 2,4-диметил-5- (2-оксо-6-фенил-1,2-дагидроиндол-З-илиден- метил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
69 1йАс (3-Хлор-4-метоксифенил)амид 3-(4-(3диэтиламино-пропилкарбамоил)-3,5-диметил1Н-пиррол-2-ил-метилен]-2-оксо-2,3дигидро-1Н-индол-4-карбоновой кислоты
- 17 005996
70 уЗ-н (З-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
71 (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо1>2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диизопропил- 1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты
72 ^й (З-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиядол-3-илиденметил)-2,4диизолрогшл-1Н- пиррол-3 -карбоновой кислоты
73 хх^^о (3-Пирролицин-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром- 2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диизопропил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты
74 (Пиридин-4-ил-метил)амил 5-(5-бром-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-3-илиценметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
75 (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(6-(4бугилфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-Зилиденметад]-2,4-Диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
76 (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(6-(5изопропил-2-метоксифенил)-2-оксо-1,2дипздроиндол-3-илиденметил]-2,4-диметил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
77 (2-Пирролмдин-1-ил-этил)амид 5-(6-(4этил фенил) -2-оксо -1,2 - дигидроиндол-3 илвденме1ил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты
78 (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(6-(2,4диметоксифенил)-2-оксо- 1,2-дигилроиндол-Зилиденметил(-2,4-диметил-Ш-пиррол-3карбоновой кислоты
79 (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(6-(3изопропил фенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол3-илиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты
80 (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо- 1,2-дипадроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
81 3-[4-(2-Диэтиламиноэтилкарбамоил)-3,5диметил-1Н-пиррол-2-иЛ’Метилен]-2-оксо2,3-дигицро-1Н-индол-6-карбоновая кислота
- 18 005996
(2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(5-диметил сульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З илиденметил)-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(5-(3 хлорфенилсульфамоил)-2-оксо-1,2-дитидроиндол-3-илиденметил]-2,4-диметил- 1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 2,4-диметил
5-[2-оксо-5-(пиридин-3-ил-сульфамоил)-1,2 дигидроиндол-3 -илиденметил] -1 Н-пиррол-Зкарбоновой кислоты
3-[3,5-Диметил-4-(4-метилпиперазин-1 карбонил)-1Н-пиррол-2-илметилен]-4-(2гидроксиэтил)-1,3-дигидроиндол-2-он
Фениламид 3-(3,5-диметил-4-(4-метмлпипе разин-1 -карбонил) -1 Н-пиррол-2-илметилен]
2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амвд 5-(5-диметилсуль фамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиден метил)-2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[5-(3-хлорфенил сульфамоил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-З илиденметил]-2,4-Диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (2-Диметиламиноэтил)амид 3-(5-бром-2 оксо-1 (2-дип1дроиндол-3-илиденметил)
4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1 -карбоновой КИСЛОТЫ
Этиловый эфир 3-(2-оксо-1,2-дигидроиндол3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Низоиндол-1-карбоновой кислоты
Этиловый эфир 3-(4-метил-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол- 1-карбоновой кислоты
Этиловый эфир 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигид роиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагидро
2Н-ИЗОИНДОЛ-1-карбоновой кислоты
3-(3-Этоксикарбонил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н изоиндол- 1-илметилен)-2-оксо-2,3-дигидро1Н-индол-5-карбоновая кислота
- 19 005996
94 ‘оА; Этиловый эфир 3-(5-метокси-2-оксо-1,2дигцг1роиндол-3-илвденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1 -карбоновой кислоты
95 Этиловый эфир 3-(2-оксо-5-фенил-1,2дипщроиндол* 3 -илиденметил) -4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол- 1-карбоновой кислоты
96 Этиловый эфир 3-(2-оксо-5-сульфамоил-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол- 1-карбоновой кислоты
97 Этиловый эфир 3-(5-метилсульфамоил-2оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
98 Этиловый эфир 3-(5-диметилсульфамоил-2оксо-1,2-дигидроиндол-З-илиденметил)4,5,6,7-тетрагииро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
99 Этиловый эфир 3-(2-оксо-5-фенилсульфамоил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
100 Этиловый эфир 3-(6-бром-2-оксо-1,2-дигиироиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагицро2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
101 Этиловый эфир 3-(2-оксо-6-феяил-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1 -карбоновой кислоты
102 .,сА 3-(3-Этоксикарбонил-4,5,6,7-тетрагидро-2Низоиндол-1-ил-метилен)-2-оксо-2,3-дигцдро1Н-индол-6-карбоновая кислота
103 Этиловый эфир 3-(6-метокси-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1 -карбоновой кислоты
104 -%д Этиловый эфир 3-(5-изопропилсульфамоил2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты
105 3-(3-Метилкарбамоил-4,5,6,7-тетрагидро-2Низоиндол-1-ил-метилен)-2-оксо-2,3-дигидро1Н-индол-5-карбоновая кислота
- 20 005996
3-(3-Диметилкарбамоил-4,5,6,7-тетрагидро2Н-изоиндол- 1-ил-метилен)-2-оксо-2,3дигидро-1Н-индол-5-карбоновая кислота
2-Оксо-3-[3-(пирролвдин-1-карбонил)4,5,6,7-тетрападро-2Н-изоиндол-1 -ил-метилен] -2,3-дигвдро-1 Н-индол-5-карбоновая кислота
3-[3-(Морфолин-4-карбонил)-4,5,6>7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-ил-метилен|-2-оксо2,3-дигндро-1Н-индол-5-карбоновая кислота
3-[3-(Морфолин-4-карбонил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-ил-метилен]-2-оксо2,3-дигидро-1Н-индол-6-карбоновая кислота
Метиламин 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигицроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Низоиндол-1-карбоновой кислоты
Диметиламид 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагид ро-2Низоиндол-1-карбоновой кислоты
5-Бром-3-[3-(морфолин-4-карбонил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1 -илметилен]-1,3дигидроиндол-2-он
3-(3-Диметилкарбамоил-4,5,6,7-тетрагидро2Н-изоиндол-1-илметилен)-2-оксо-2,3дигидро-1Н-индол-6-карбоновая кислота
115
4-Метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)- 1Н-пиррол-3карбоновая кислота
Этиловый эфир {(4-метил-5-(4-метил-5метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбонил]амино}уксусной кислоты
Этиловый эфир {[4-метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигвдроиндол-З-илиденметил)- 1Н-пиррол-3-карбонил1амино}уксусной кислоты
- 21 005996
118
{[4-Метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2дигиироиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3карбонил]амино}уксусная кислота
119
Метиламин 3-[3-метил-4-(пиперидин-1карбонил)-1Н-пиррол-2-илметилен]-2-оксо2,3-Дигцдро- 1Н-индол-5-сульфоновой кислоты
121
122
123
5-Метил-2-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илвденметил)-1 Н-пиррол-З-карбоновая кислота
Этиловый эфир 5-метил-2-(2-оксо-1,2дигицроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
Этиловый эфир 2-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-метил- 1Н-пиррол3-карбоновой кислоты
2-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илииенметил)-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновая кислота
124
125
126
127
128
(2-пирролцдин-1-ил-этил)амвд 2-(5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-диэтиламиноэтил)амид 2-(5-бром-2-оксо1,2-дигвдроиндол-3-илиденметил)-5-метил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Пирролидин- 1-илэтил)амид 2,4-даметил-5-[2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил- 1Н-гтирролновой кислоты (2-Пирролидин- 1-илэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил] -2,4-диметил-1Нпиррол-З -карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-ДИметил-5-(2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
129
- 22 005996
130 (2-Пирролидин-1 -илэтил)амид 5-[5-хлор-2-оксо1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 413 [М+1]
131 (2-Диметиламиноэтил )амид 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил] -2,4-диметил-1Нпиррол- 3 -карбоновой кислоты 353 [М+1]
132 (2-Дим етиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол- (3Ζ) -илиденметил ] 2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 371 [М+1]
133 (2-Ацетиламиноэтил)амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил|2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 399 [М-1]
134 'аЯ (2-Ацетиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дипадроиндол-(32)-илиденметил]2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 383 [М-1]
135 0 ___,йуСН· а^· (2-Ацетиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты 365 [М-11
136 [3-(2-Оксотетрагидропиримидин-1-ил)пропил]амид 5[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 500 [М+1] 502 [М+1]
137 [3-(2-Оксотетрагидропиримидин-1-ил)пропил]амид 5[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты 454 [М-1]
138 таР+ [3-(2-Оксотетрагидропиримидин- 1-ил)-пропил]амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил] 2,4-диметил-1Н-лиррол-3карбоновой кислоты 438 [М-1]
139 [3-(2-Оксотетрагвдропиримвдин-1 -ил)-пропил]амид 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил|-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты 422 [М+1]
140 [3-(2-Оксотетрагидропиримидин-1-ил)пропил]амид 5(5-циано-2-оксо-1,2-дигидροиндοл-(32)-илиденмеτил]2,4-диметил-1Н-гшррол-3карбоновой кислоты 447 [М+1]
141 Трифторацетат 4-[2-({5-|5бром-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил- 1 Н-пиррол-З-карбонил}амино)этил)-2-оксопиперазин-1-ия 486 [М+1] 488 [М+1]
142 ’М^“· [3-(2-Оксопирролидин-1 ил)пропил|амид 5-[5-циано2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты 430 [М-1]
143 УТА •хА [2-(2-Оксоимидазолидин-1 ил)этил)амид 5-[5-бром-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил)-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты 470 [М-1] 472 [М-1]
- 23 005996
новой кислоты новой кислоты (Цианометиламино) этил]новой кислоты бонил}амино)этил] -пилера|2-(2-Оксоимидазолидин-1 пиррол-3-карбоновой
2-(2-Оксоимидазолидин-1(Згьиликнметил -2,4-диЭтиловый эфир {4-12-({5-[53-(2-Оксоазепан- 1-ил)пророл-3-карбоновой кислоты
Этиловый эфир {4-|2-({5-|5зин-1-ил}уксусной кислоты
3-(2-Оксоазепан- 1-ил)про2-(2-Оксоимидазолвдин-1(Зг)-ипидеяметил -2,4-ди3-(2-Оксоазепан-1-ил)пропиррол-3-карбоновой кислоты [3-(2-Оксоазепан- 1-ил)пропиррол-3-карбоновой кислоты
2-(2-Оксоимидазолвдин-1иетил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты
3-(2-Оксоазепан-1-ил)пропиррол-3-карбоновой
1,2-дигидроиндол-(32)карбоновой кислоты бром-2-оксо-1.2-дигидроинзин-1-ил}уксусной кислоты (2-Ацетиламиноэтил)амид карбоновой кислоты ил)этил]амид 5-[5-хлор-2оксо-1,2-дигидроиндолил)этил амид 5- 5-фтор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил|-2,4-диил)этил]амиа 2,4-диметил-52-оксо-1,2-дигццроиндол(32)-илиденметил]-1Нил)этил амид 5- 5-циано-2оксо-1,2-дигидроиндолдол-(32)-илиценметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-кар□онил1амино)этил -пиперахлор-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4зин-1-ил}уксусной кислоты фтор-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-(32)-илвденметил -2,4дим етил- 1Н-пиррол-3-карбонил}амино)этил -пипераилиденметил|-1Н-пиррол-3пил амид 5- 5-бром-2-оксо1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил -2,4-диметил-1Нпил]амид 5- э-хлор-2-оксо1,2-дигицроиндол-(Зг)-илиденметил -2,4-диметил-1Нпил]амид 5-[5-фтор-2-оксо|,2-дигидроиндол-(зг)-илиденметил 1-2,4-диметил-1Нгшл амид 2,4-диметил-5- 2оксо- 1,2-дигидроицдол(32)-илиденметил]-1Н-пирпил амид 5- 15-циано-2оксо-1,2-дигидроиндол(Згьилиденметил 1-2,4-ди5- 5-бром-2-оксо-1,2-дитидроиндол-(32)-илиденметил|2,4-диметил-ΙΗ-пиррол-З- 24 005996
Трифторацетат 4- [2-((5-(5фтор-2-оксо- 1,2-дигидроиндол-(32)-илидеяметил]-2,4диметил- 1Н-пиррол-3-карбонил}амино)этил]-2-оксопиперазин-1-ия
Трифторацетат 4-(2-((2,4диметил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илвденметил] -1 Н-пиррол- З-карбонюОамшкОэтилН-оксопиперазин-1-ия
Трифторацетат 4-(2-({5-[5циано-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32) -илиденметил ] 2,4-диметил-1 Н-пиррол- 3карбонил}амино)этил]-2оксопиперазин-1 -ия [2-(2-Цианоэтиламино)этил]амид 5-[5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил- 1 Н-пирролновой кислоты [2-(2-Цианоэтиламино)этил]амид 5-[5-хлор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
[2-(2-Цианоэтиламино)этил]амид 5-[5-фтор-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пирролновой кислоты
[ 2-(2-Цианоэтиламино)этил]амид 2,4-диметил5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
[2-(2-Цианоэтиламино)этил]амид 5-[5-циано-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илвденметил ] - 2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
[2-(4-Метилпиперазин-1ил)этил]амид 5-[5-фтор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиленметил1-2,4-диметил-1Н-пирролновой кислоты
[2-(4-Метилпиперазин-1ил)этил]амид 5-[5-хлор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-З -карбоновой кислоты
[2-(4-Метилпиперазин-1ил)этил]амид 5-[5-бром-2оксо-1,2-дигвдроиндол(32)-илиденметил] -2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты
[2-(4-Метилпиперазин-1 ил)этил]амид 2,4-диметил-5[2-оксо- 1,2-дигидроиядол(32)-илиденметил]- ΙΗпиррол-З-карбоновой кислоты
|2-(3,5-Диметилпиперазин1-ил)этил|амид 2,4-диметил5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]- 1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
(2-(3,5-Диметилпиперазин1-ил)этил|амид 5-[5-фтор-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
- 25 005996
[2-(3,5'Диметилпиперазин1-ил)этил]амид 5-[5-хлор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-ДИметил- 1Н-пирролновой кислоты [2-(3,5-Диметилпиперазин1-ил)этил]амид 5-[5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил] -2,4-Диметил-1 Н-пирролновой кислоты [3-(4-Метилпиперазин-1ил)пропил]амид 2,4-диметил-5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил|1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты [ 3 -(4- Метилпиперазин-1 ил)пропил]амид 5-[5-фтор2-оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илмденметил] -2,4- диметил- 1Н-гтирролновой кислоты [ 3-(4- Метилпиперазин-1 ил)пропил]амид 5-[5-хлор2-оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илвденметил]-2,4-ДИметил- 1Н-пирролновой кислоты [3-(4-Метилпиперазин-1ил)пропил]амид 5-[5-бром2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил|-2,4-диметил- 1Н-пирролновой кислоты
ил)этил]амид 2,4-диметил-5[ 2-оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты [2-(4-Бензилпиперазин-1ил)этил]амид 5-[5-фтор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илмденметшг]-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты [2-(4-Бензилпиперазин-1ил)этил]амид 5-(5-хлор-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил|-2,4-диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты [2-(4-Бензидпиперазин-1 ил)этил]амид 5-]5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-ДИметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты (З-Пирролидин- 1-ил-2-он)амвд 5-[5-хлор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-Диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
Трифторацетат 4-[2-({5-[5хлор-2-оксо-1 >2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-3-карбонил)амино)этил]-2-оксопиперазин-1-ия (З-Пирролидин-1 -ил-2-он)амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илвденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
(З-Пирролидин- 1-ил-2-он)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил|-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
- 26 005996
188
189
(З-Пирролидин-1 -ил-2-он)амид 5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил] 2,4-диметил-1 Н-пиррол-З карбоновой кислоты (2-Пиридмн-2-ил-этил)амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]2,4-диметил- 1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
190
Трифторацетат (2-пиридин2-ил-этил)амида 5-[5-фтор2-оксо- 1,2-Дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4- диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
191
Гидрохлорид (2-ПИРИДИН-2ил-этил)амида 5-[2-оксо1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-Диметил-1Нпиррол-3 -карбоновой кислоты
192
Трифторацетат (2-пиридин2-ил-этил)амида 5-[5-бром2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил|-2,4-ДИметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
193
(2-Этиламиноэтил)амид 5[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]2,4-ДИметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты
194
(2-Аминоэтил)амид 5-(5фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
196
197
200
(2-Диэтил-М-оксоаминоэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил}-2,4-Диметил-2,4диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-Этил-1Ч-гидроксиаминоэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо1,2-дигвдромндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил- 1Нпиррол- 3-карбоновой кислоты (2-Диэтиламино-2-гидроксиэтил)амвд 5-[5-фтор-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил}-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты [2-Этил-2-(2-гидроксиэтил)аминоэтил]амид 5-[5-фтор2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты [2-Этил-2-( 1-гидроксиэтил)аминоэтил]амид 5-[5-фтор2-оксо-1,2-дигидроиндол(32)-клиденметил|-2,4-диметил- 1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2-М-ацетиламиноэтил)амид 5- [5-циано-2-оксо-1,2-дигидроиндол- (32)-илвденметил|-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (Карбоксиметил)амид 5-[5фтор-2-оксо-1,2-дигицроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1 Н-пиррол-З-карбоновой кислоты
201
- 27 005996
202 [2-(2-Гидроксиэтиламино)зтил]-амид 5-|5-фтор-2оксо- 1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил) - 1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты
203 ся,со,м Трифторацетат (2-пиридин2-ил-этил)амица 5-[5-ииано-2-оксо- 1,2-дигцдроиндол-(32) -илиденметил] -1Нпиррол-3-карбоновой кислоты
204 “Хер' Трифторацетат (3-пирролидин-1 -ил-2-он-пропил)амида 5-[5-бром-2оксо-1,2-дигидроиндол(32)-илиденметил]-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты
Номера соединений соответствуют номерам примеров в разделе Примеры. Таким образом, синтез соединения 1 в табл. 1 описан в примере 1. Соединения представлены в табл. 1 только для иллюстрации, но ни в коей мере не для ограничения объема притязаний настоящего изобретения.
Предпочтительные варианты воплощения изобретения
Так как наиболее широкое определение представлено в разделе Краткое содержание изобретения, определенные соединения формулы (I), приведенные ниже, являются предпочтительными.
(1) Предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой К1, Я3 и Я4 означают водород.
(2) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я1, Я2 и Я4 означают водород.
(3) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я1, Я2 и Я3 означают водород.
(4) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я2, Я3 и Я4 означают водород.
(5) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я1, Я2, Я3 и Я4 означают водород.
(6) Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я5, Я6 или Я7, предпочтительно Я5 или Я6, более предпочтительно Я6 означает -СОЯ10, где Я10 означает -ЫЯП(СН2)ПЯ12, а Я11 означает водород или незамещенный низш. алкил, предпочтительно водород или метил, η равно 2, 3 или 4, предпочтительно 2 или 3, и Я12 означает -ЫЯ13Я14, где Я13 и Я14 независимо означают алкил, более предпочтительно незамещенный низш. алкил или Я13 и Я14 объединены с образованием группы, которую выбирают из следующего ряда: -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2О(СН2)2- или -(СН2)2Ы(СН3)(СН2)2-, причем предпочтительно Я13 и Я14 независимо означают водород, метил, этил, или они объединены с образованием следующих групп: морфолин-4-ил, пирролидин-1-ил, пиперазин-1-ил или 4-метилпиперазин-1-ил.
Более предпочтительно, когда Я5 или Я6, указанные выше в пункте (6), означают Ы-(2-диметиламиноэтил)аминокарбонил, Ы-(2-этиламиноэтил)-М-метиламинокарбонил, N-(3 -диметиламинопропил) аминокарбонил, №(2-диэтиламиноэтил)аминокарбонил,№(3-этиламинопропил)аминокарбонил,№(3диэтиламинопропил)аминокарбонил, 3 -пирролидин-1-илпропиламинокарбонил, 3-морфолин-4-илпропиламинокарбонил, 2-пирролидин-1-илэтиламинокарбонил, 2-морфолин-4-илэтиламинокарбонил, 2-(4метилпиперазин-1 -ил)этиламинокарбонил, 2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропиламинокарбонил, 2-(3,5диметилпиперазин-1 -ил)этиламинокарбонил или 2-(3,5-диметилпиперазин-1-ил)пропиламинокарбонил, еще более предпочтительно №(2-диэтиламиноэтил)аминокарбонил или №(2-этиламиноэтил)аминокарбонил.
(7) Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я5, Я6 или Я7, предпочтительно Я5 или Я6, более предпочтительно Я6 означает -СОЯ10, где Я10 означает NЯ13Я14, где Я13 означает водород, а Я14 означает алкил, предпочтительно низш. алкил, замещенный одной из следующих групп: гидрокси, арил, гетероарил, гетероалициклическая группа или карбокси, более предпочтительно метил, этил, пропил или бутил, замещенный одной из следующих групп: гидрокси, арил, гетероалициклическая группа, такая как пиперидин, пиперазин, морфолин и т.п., гетероарил или карбокси. Наиболее предпочтительно в пункте (7) Я5 или Я6 означает 2-этоксикарбонилметиламинокарбонил, карбоксиметиламинокарбонил, 3-гидроксипропиламинокарбонил, 2-гидроксиэтиламинокарбонил, 3-триазин-1-илпропиламинокарбонил, триазин-1-илэтиламинокарбонил-4-гидроксифенилэтиламинокарбонил,3-имидазол-1-илпропиламинокарбонил, пиридин-4-илметиламинокарбонил,2пиридин-2-илэтиламинокарбонил или 2-имидазол-1-илэтиламинокарбонил.
(8) Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой Я5, Я6 или Я7, предпочтительно Я5 или Я6, более предпочтительно Я6 означает -СОЯ10, где Я10 означает
- 28 005996
-МВП(СН2)ПВ12, а В11 означает водород или алкил, предпочтительно водород или метил, η равно 2, 3 или 4, предпочтительно 2 или 3, и В12 означает -ΝΕΑ14, где В13 и В14 объединены с образованием гетероцикла, предпочтительно 5-, 6- или 7-членного гетероцикла, содержащего карбонильную группу и 1 или 2 атома азота. Предпочтительно, когда В5 или В6 означают 2-(3-этоксикарбонилметилпиперазин-1-ил)этиламинокарбонил, 2-(3 -оксопиперазин-1-ил)этиламинокарбонил, 2-(имидазолидин-1-ил-2-он)этиламинокарбонил, 2-(тетрагидропиримидин-1-ил-2-он)этиламинокарбонил, -(2-оксопирролидин-1-ил)этиламинокарбонил,3-(4-метилпиперазин-1-ил)пропиламинокарбонил, 3 -(3 -этоксикарбонилметилпиперазин-1ил)пропиламинокарбонил, 3-(3-оксопиперазин-1 -ил)пропиламинокарбонил, 3-(имидазолидин-1-ил-2он)пропиламинокарбонил, 3 -(тетрагидропиримидин-1-ил-2-он)пропиламинокарбонил, 3 -(2-оксопирролидин-1-ил)пропиламинокарбонил, 2-(2-оксогомопиперидин-1-ил)этиламинокарбонил или 3-(2-оксогомопиперидин-1-ил)пропиламинокарбонил.
(9) Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В5, В6 или В7, предпочтительно В5 или В6, более предпочтительно В6 означает-СОВ10, где (а) В10 означает NΒ11(СН2)ηΒ12, а В11 означает водород или алкил, предпочтительно водород или метил, η равно 2, 3 или 4, предпочтительно 2 или 3, и В12 означает -№В13В14, где В13 означает водород, а В14 означает цианоалкил или -МНСОВа, где Ва означает алкил, или (б) В10 означает -МВ13В14, где В13 и В14 объединены с образованием гетероцикла, не содержащего карбонильную группу в составе цикла. Предпочтительно, когда В5 или В6 означают 2-(2-цианоэтиламино)этиламинокарбонил, 2-(ацетиламино)этиламинокарбонил, морфолинокарбонил, пиперидин-1-илкарбонил, 2-цианометиламиноэтиламинокарбонил или пиперидин-1илкарбонил.
(10) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В5 означает -СОВ10, где В10 означает -МВ13В14, а В13 означает водород и В14 означает низший алкил, замещенный группой гидрокси, низш. алкил, замещенный группой гидроксиалкиламино, карбокси или NΒ18Β19, где В18 и В19 независимо означают водород или незамещенный низш. алкил, более предпочтительно В5 означает 2-[(диэтиламино)-2-гидроксиэтил]аминокарбонил, 2-(№этил-И-2-гидроксиэтиламино)этиламинокарбонил, карбоксиметиламинокарбонил или 2-(2-гидроксиэтиламино)этиламинокарбонил.
(11) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В6 означает -СОВ10, где В10 означает -МВ13В14, а В13 означает водород, и В14 означает низш. алкил, замещенный группой гидрокси, низш. алкил, замещенный группой гидроксиалкиламино, карбокси или -ЫВ18В19, где В18 и В19 независимо означают водород или незамещенный низш. алкил, В6 более предпочтительно означает [2-(диэтиламино)-2-гидрокси]этиламинокарбонил, 2-(Ы-этил-М-2-гидроксиэтиламино) этиламинокарбонил, карбоксиметиламинокарбонил или 2-(2-гидроксиэтиламино)этиламинокарбонил.
(12) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В5 означает -СОВ10, где В10 означает -МВП(СН2)ПВ12, а В12 означает -^(ОДЖ^В14 или -Ы(ОН)В13, а В13 и В14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород и незамещенный низш. алкил, предпочтительно В5 означает 2-(Ы-гидрокси-М-этиламино)этиламинокарбонил или 2-|Н'(О-)(С2Н5)2| этиламинокарбонил.
(13) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В6 означает -СОВ10, где В10 означает -МВП(СН2)ПВ12, и В12 означает -Ы+(О-)МВ13В14 или -Ы(ОН)В13, а В13 и В14 независимо выбирают из группы, включающей водород и незамещенный низш. алкил, В6 предпочтительно означает 2-(№гидрокси-Ы-этиламино)этиламинокарбонил или 2-[Ν+(О-)(С2Н5)2] этиламинокарбонил.
(14) Если в перечисленных выше предпочтительных группах (6)-(13) В5 означает -СОВ10, то более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В6 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил или н-бутил, более предпочтительно водород или метил, и В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, арил, гетероарил и -С(О)В17, где В17 означает гидрокси, алкил или арил, более предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, н-, изо-, или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, еще более предпочтительно метил, водород или фенил.
(15) Если в перечисленных выше предпочтительных группах (6)-(13) В5 означает -СОВ10, то другой более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В6 и В7 объединены с образованием -(СН2)4-.
(16) Если в перечисленных выше предпочтительных группах (6)-(13) В6 означает -СОВ10, то более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В5 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил или н-бутил, более предпочтительно водород или метил, и В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, арил, гетероарил и -С(О)В17, где В17 означает гидрокси, алкил или арил, более предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, н-, изо-, или трет-бутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, еще более предпочтительно метил, водород или фенил. (17) Среди перечисленных выше предпочтительных и более предпочтительных групп (6)-(16) еще более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В1 означает водород, алкил, -С(О)№В8В9, незамещенный циклоалкил или арил, предпочтительно водород, фенил, 3,4-диметоксифениламинокарбонил, 4-метокси-3-хлорфенилами
- 29 005996 нокарбонил, еще более предпочтительно водород или метил, наиболее предпочтительно водород, В2 означает циано, водород, галоген, низш. алкокси, арил или -8(Ο)2ΝΒ13Β14, где В13 означает водород, а В14 означает водород, арил или алкил, В2 предпочтительно означает водород, хлор, бром, фтор, метокси, этокси, фенил, диметиламиносульфонил, 3-хлорфениламиносульфонил, карбокси, аминосульфонил, метиламиносульфонил, фениламиносульфонил, пиридин-3-ил-аминосульфонил, изопропиламиносульфонил, более предпочтительно водород, фтор или бром, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низший алкокси, -С(О)В15, -ΝΒ13ϋ(Ο)Β14, арил, предпочтительно арил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, которые выбирают из группы, включающей в себя низш. алкил, галоген, или низш. алкокси, и гетероарил, предпочтительно гетероарил, по выбору замещенный одним или двумя заместителями, которые выбирают из группы, включающей в себя низш. алкил, галоген или низш. алкокси, предпочтительно водород, метокси, карбокси, фенил, пиридин-3-ил, 3,4-дихлорфенил, 2метокси-5-изопропилфенил, 4-н-бутилфенил, 3-изопропилфенил, более предпочтительно водород или фенил, и В4 означает водород.
(18) Другой предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В1 означает водород, алкил, -С(Ο)NΒ8Β9, незамещенный циклоалкил или арил, предпочтительно водород, 3,4-диметоксифениламинокарбонил, 4-метокси-3-хлорфениламинокарбонил, еще более предпочтительно водород или метил, прежде всего водород, В2 означает циано, водород, галоген, низш. алкокси, арил или -8(Ο)2NΒ13Β14, где В13 означает водород, а В14 означает водород, арил или алкил, В2 предпочтительно означает водород, хлор, бром, фтор, метокси, этокси, фенил, диметиламиносульфонил, 3-хлорфениламиносульфонил, карбокси, метокси, аминосульфонил, метиламиносульфонил, фениламиносульфонил, пиридин-3-иламиносульфонил, диметиламиносульфонил, изопропиламиносульфонил, более предпочтительно водород, фтор или бром, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низший алкокси, -С(О)В15, -NΒ13С(Ο)Β14, арил, предпочтительно арил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, которые выбирают из группы, включающей в себя низш. алкил, галоген, или низш. алкокси, и гетероарил, предпочтительно гетероарил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, которые выбирают из группы, включающей в себя низш. алкил, галоген или низш. алкокси, предпочтительно водород, метокси, карбокси, фенил, пиридин-3-ил, 3,4-дихлорфенил, 2-метокси-5изопропилфенил, 4-н-бутилфенил, 3-изопропилфенил, более предпочтительно водород или фенил, и В4 означает водород.
В приведенной выше предпочтительной группе (18) более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В5 означает -СОВ10, где В10 имеет значение, определенное в разделе Краткое описание изобретения, предпочтительно -NΒ11(СΗ2)ηΒ12 или NΒ13Β14, как определено в разделе Краткое описание изобретения.
В6 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил или н-бутил, более предпочтительно водород или метил, и В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, арил, гетероарил и -С(О)В17, где В17 означает гидрокси, алкил или арил, более предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, н-, изо- или третбутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, еще более предпочтительно метил, водород или фенил.
В приведенной выше предпочтительной группе (18) другой более предпочтительной группой соединений является такая группа, в которой В6 означает -СОВ10, где В10 имеет значение, определенное в разделе Краткое описание изобретения, предпочтительно -NΒ11(СΗ2)ηΒ12 или NΒ13Β14, как определено в разделе Краткое описание изобретения.
В5 выбирают из группы, включающей в себя водород и алкил, предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил или н-бутил, более предпочтительно водород или метил, и В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, алкил, арил, гетероарил и -С(О)В17, где В17 означает гидрокси, алкил или арил, более предпочтительно водород, метил, этил, изопропил, н-, изо- или третбутил, фенил, бензоил, ацетил или карбокси, еще более предпочтительно метил, водород или фенил.
(19) Другой более предпочтительной группой соединений формулы (I) является такая группа, в которой В1 и В4 означают водород, В2 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, низш. алкокси, -С(О)В15 и -8(Ο)2NΒ13Β14, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкокси, -С(О)В15, -8(Ο)2NΒ13Β14, арил и гетероарил, В5 означает -С(О)В10, В6 выбирают из группы, включающей в себя водород и низш. алкил, и В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил и С(О)В17.
Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, имеющее структуру, описанную в пункте (15), в котором В10 выбирают из группы, состоящей из гидрокси, низш. алкокси и -NΒ11(СΗ2)ηΒ12, где η равно 2 или 3, В11 выбирают из группы, состоящей из водорода и низш. алкила, и В12 выбирают из группы, состоящей из арила и -ΝΚ.Ι3Κ.14.
Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, имеющее структуру, описанную в двух предыдущих абзацах, В13 и В14 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, низш. алкила и они могут быть объединены с образованием -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2О(СН2)2- или -(СН2)^(СН3)(СН2)2-.
(20) Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соедине
- 30 005996 ние, в котором В1 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил, -(СН2)ГВ16 и -С(О)ИВ8В9, В2 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, арил и 8(О)2ИВ13В14, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил, низш. алкокси, арил, гетероарил и -С(О)В15, В4 означает водород, В5 выбирают из группы, состоящей из водорода и низшего алкила, В6 означает -С(О)В10, В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил и арил, В16 выбирают из группы, состоящей из гидрокси и -С(О)В15, а г равно 2 или 3.
Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, имеющее структуру, описанную в предыдущем абзаце, в котором В3 означает арил, необязательно замещенный одной или более группами, выбранными из ряда, состоящего из низш. алкила, низш. алкокси и галогена.
(21) Аналогичным образом, другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, в котором В1 выбирают из группы, состоящей из водорода, низш. алкила, -(СН2)ГВ16 и -С(О)ИВ8В9, В2 выбирают из группы, состоящей из водорода, галогена, арила и -8(О)2ИВ13В14, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил, низш. алкокси, арил, гетероарил и -С(О)В15, В4 означает водород, В5 выбирают из группы, состоящей из водорода и низш. алкила, В6 означает -С(О)В10, В7 выбирают из группы, состоящей из водорода, низш. алкила и арила, В16 выбирают из группы, состоящей из гидрокси и -С(О)В15, и г равно 2 или 3.
В10 выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, низш. алкокси, -ИВ13В14 и -ИВ11(СН2)пВ12, где η равно 1, 2 или 3, В11 означает водород, а В12 выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, низш. алкокси, -С(О)В15, гетероарил и -ИВ13В14.
(22) Еще одним предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, имеющее структуру, описанную в предыдущем абзаце, в котором В13 и В14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил, гетероарил и они могут быть объединены с образованием -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2О(СН2)2- или -(СН2)А(СН3)(СН2)2-.
(23) Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, в котором В1 означает -С(О)ИВ8В9, где В8 означает водород, а В9 означает арил, необязательно замещенный одной или более группами, выбранными из ряда, состоящего из галогена, гидрокси и низш. алкокси, В2 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, арил и -8(О)2ИВ13В14, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил, низш. алкокси, арил, гетероарил и -С(О)В15, В4 означает водород, В5 выбирают из группы, включающей в себя водород и низш. алкил, В6 означает -С(О)В10, В7 выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил и арил, В16 выбирают из группы, состоящей из гидрокси и -С(О)В15, и г равно 2 или 3.
(24) Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, в котором В1 выбирают из группы, состоящей из водорода и низшего алкила, В2 выбирают из группы, состоящей из водорода, галогена, низш. алкокси, арила, -С(О)В15 и -8(О)2ИВ13В14, В3 выбирают из группы, включающей в себя водород, галоген, арил, гетероарил и -С(О)В15, В4 означает водород, В5 означает -С(О)В10, В6 и В7 объединены с образованием группы -(СН2)4-.
Предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является такой вариант соединения, имеющего структуру, описанную в предыдущем абзаце, в котором В10 выбирают из группы, включающей в себя гидрокси, алкокси, -ЫВ13В14 и -ЫН(СН2)пИВ13В14, где η равно 2 или 3.
Еще одним предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является соединение, имеющее структуру, описанную в двух предыдущих абзацах, в котором В13 и В14 независимо выбирают из группы, включающей в себя водород, низш. алкил и они могут быть объединены с образованием -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2О(СН2)2- или
Применение
ПК, каталитическая активность которых модулируется соединениями по настоящему изобретению, включают ТК трех типов, а именно рецепторные (РТК), клеточные (КТК) и серин-треонинкиназы (СТК). Перенос сигнала, опосредованный РТК, инициируется путем внеклеточного взаимодействия клетки со специфическим ростовым фактором (лигандом) с последующей димеризацией рецептора, временной стимуляцией собственной тирозинкиназной активности и фосфорилированием. Благодаря этому участки связывания становятся доступными для соединений, локализованных в цитоплазме и принимающих участие во внутриклеточной передаче сигнала, что способствует образованию комплексов с целым спектром цитоплазматических сигнальных молекул, которые содействуют формированию соответствующего клеточного ответа (например, деление клетки, метаболические изменения во внеклеточной микросреде и т.п.). См. статью 8сЫе58шдег и и11пск 1992, №игоп, 9:303-391.
Установлено, что участки фосфорилирования тирозина у рецепторов ростовых факторов обладают высокой специфичностью связывания 8Н2 доменов (гомологичных §гс) сигнальных молекул. См. статьи Еап11 и соавт., 1992, Се11, 69:413-423; 8опдуапд и соавт., 1994, Мо1. Се11. ΒίοΙ, 14:2777-2785; 8опдуапд и соавт., 1993, Се11, 72:767-778; Кос11 и соавт., 1991, 8с1епсе, 252: 668-678.
Идентифицировано несколько внутриклеточных белков, связывающихся с РТК. Эти белки могут быть подразделены на две основные группы: 1) субстраты, содержащие каталитический домен, (2) субстраты, лишенные каталитического домена, но выполняющие функции посредника и ассоциированные с
- 31 005996 каталитически активными молекулами. См. статью 8опдуапд и соавт., 1993 Се11, 72: 767-778. Специфичность взаимодействия между рецепторами и 8Н2 доменами, содержащимися в соответствующих субстратах, определяется аминокислотными остатками, соседними с остатком тирозина, подлежащего фосфорилированию. Различие в сродстве связывания 8Н2 доменов и аминокислотными последовательностями в конкретных рецепторах, окружающими остаток фосфотирозина, коррелирует с наблюдаемыми различиями в профилях фосфорилирования субстратов. См. статью 8опдуапд и соавт., 1993 Се11, 72:767778. Эти данные свидетельствуют о том, что функция каждой РТК зависит не только от характера их экспрессии и доступности лиганда, но также от схемы путей последовательной передачи сигнала, которая активируется данным рецептором. Таким образом, фосфорилирование представляет собой ключевую регуляторную стадию, которая определяет селективность сигнального пути, используемого рецепторами конкретного ростового фактора, а также рецепторами фактора дифференциации.
СТК, содержащиеся преимущественно в цитозоле, действуют на внутреннюю биохимию клетки часто в виде периферического ответа на события с участием РТК. Предполагают, что СТК участвует в сигнальном процессе, который инициирует синтез ДНК и последующий митоз, ведущий к клеточной пролиферации.
Таким образом, перенос сигнала с участием ПК, наряду с прочими событиями, приводит к пролиферации, дифференциации, росту клеток и изменению метаболизма. Аномальная пролиферация клеток может повлечь за собой множество нарушений и заболеваний, включая развитие неоплазии, такой как, карцинома, саркома, гиобластома и гемангиома, нарушений, таких как, лейкоз, псориаз, артериосклероз, артрит, диабетическая ретинопатия и прочие нарушения, связанные с неконтролируемым ангиогенезом и/или васкулогенезом.
Для воплощения настоящего изобретения на практике не обязательно знать механизм ингибирования ПК соединениями по настоящему изобретению. Однако, не вдаваясь в детали какого-либо механизма или теории, авторы полагают, что соединения взаимодействуют с аминокислотными остатками в каталитическом домене ПК. ПК обычно имеют двудольную структуру, причем установлено, что АТФ связывается в щели между двумя долями, где локализованы консервативные аминокислотные остатки ПК. Считается, что ингибиторы ПК связываются за счет нековалентных взаимодействий, таких как, водородные связи, вандерваальсовы силы и ионные взаимодействия, именно в этом ключевом участке, где с ПК связывается вышеупомянутый АТФ. Более подробно, следует полагать, что 2-индолиноновый фрагмент соединений по настоящему изобретению связывается с участком, обычно занятом адениновым циклом АТФ. В таком случае специфичность конкретной молекулы для данной ПК может быть обусловлена дополнительными взаимодействиями между различными заместителями, содержащимися в 2индолиноновом фрагменте, и аминокислотными доменами, специфичными для данной ПК. Таким образом, различные индолиноновые заместители могут способствовать предпочтительному связыванию с данной ПК. Возможность выбирать соединения, активные к различным участкам связывания АТФ (или другого нуклеотида), позволяет использовать соединения по настоящему изобретению для действия на любой белок, содержащий такие участки связывания. Таким образом, описанные в тексте соединения пригодны как для анализа таких белков ίη νίίτο, так и для проявления ίη νίνο терапевтического действия за счет взаимодействия с такими белками.
Кроме того, соединения по настоящему изобретению позволяют разработать подход к лечению многих видов солидных опухолей, включая, без ограничения перечисленным, карциномы, саркомы, включая саркому Капоши, эритробластому, глиобластому, менингиому, астроцитому, меланому и миобластому. Настоящее изобретение относится также к лечению или профилактике несолидных опухолевых заболеваний, таких как лейкоз. Показания могут включать, без ограничения перечисленным, рак мозга, рак мочевого пузыря, рак яичника, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак ободочной кишки, рак крови, рак легких, рак костной ткани.
Другие примеры нарушений, связанных с аномальной активностью ПК, в случае которых описанные в тексте соединения могут быть использованы для профилактики, лечения и обследования, включают, без ограничения перечисленным, нарушения, связанные с клеточной пролиферацией, фиброзные нарушения и метаболические нарушения.
Клеточные пролиферативные нарушения, для профилактики, лечения и обследования которых могут быть использованы соединения по настоящему изобретению, включают рак, пролиферативные нарушения в кровеносных сосудах и мезангиальные пролиферативные нарушения.
Пролиферативные нарушения кровеносных сосудов означают нарушения, связанные с аномальным васкулогенезом (образованием кровеносных сосудов) и ангиогенезом (развитием кровеносных сосудов). Васкулогенез и ангиогенез играют центральную роль во многих нормальных физиологических процессах, таких как, эмбриональное развитие, образование желтого тела, заживление ран и регенерация органов, кроме того, они играют центральную роль в развитии онкологического заболевания, в процессе которого они приводят к образованию новых капилляров, необходимых для выживания опухоли. Другие примеры пролиферативных нарушений в кровеносных сосудах включают артрит, при котором растущие капиллярные кровеносные сосуды внедряются в сустав и разрушают хрящевую ткань, и глазные болезни, подобные диабетической ретинопатии, при которых растущие капилляры внедряются в сетчатую обо
- 32 005996 лочку стекловидного тела, кровоточат и вызывают слепоту.
Установлено, что две близкие в структурном отношении РТК связывают УЕСЕ с высоким сродством: Гтк-подобный тирозиновый рецептор-1 (Гй— 1) (см. статьи 8й1Ьиуа и соавт., 1990, Опсодеп. 5:519524; Ое Упек и соавт., 1992, 8с1епсе, 255:989-991) и рецептор КОЯ/ЕЬК-1, известный также, Как УЕСЕЯ2. В литературе описано, что фактор роста эндотелия сосудов (УЕСЕ) является специфическим митогеном эндотелиальных клеток, обладающим свойством стимулировать рост клеток эндотелия ш νίΙΐΌ. См. статьи Ееггага и Непхе1, 1989, Вюсйет. Вюрйук. Яек. Сотт., 161:851-858; Уа1ктап и соавт., 1990, 1. Вю1. Сйет., 265:19461-19566. Информация, приведенная в заявках на выдачу патента США № 08/193829, 08/038596 и 07/975750, определенно свидетельствует о том, что УЕСЕ не только отвечает за пролиферацию эндотелиальных клеток, но, кроме того, является основным регулятором ангиогенеза в норме и при патологии. См. статьи К1адкЬит и 8окег, 1993, Сиггеп! Вю1оду, 3(10):699-702: Ноиск соавт., 1992. 1. Вю1. Сйет., 267:26031-26037.
Нормальный васкулогенез и ангиогенез играют центральную роль во многих физиологических процессах, таких как, эмбриональное развитие, заживление ран, регенерация органов и репродуктивные процессы у женщин, такие как образование фолликула в желтом теле во время овуляции и рост плаценты в процессе беременности. См. статью Ео1ктап и 8Ыпд, 1992, 1. Вю1. Сйет.. 267(16):10931-10934. Неконтролируемый васкулогенез и/или ангиогенез связаны с заболеваниями, такими как диабет, а также злокачественными солидными опухолями, которые для своего роста нуждаются в васкуляризации. См. статьи К1адкЬигп и 8окег, 1993, Сиггеп! Вю1оду. 3(10):699-702; Ео1ктап, 1991, 1. ЫаЙ. Сапсег ШкЕ, 82:4-6; \Уе1бпег и соавт., 1991, Ыете Епд1. 1. Меб.. 324:1-5.
Предполагаемая роль УЕСЕ в пролиферации эндотелиальных клеток и миграции в процессе ангиогенеза и васкулогенеза свидетельствует о центральной роли рецептора КОЕ/ЕЬК-1 в этих процессах. Неконтролируемый ангиогенез может быть причиной таких заболеваний, как сахарный диабет (см. доклад Ео1ктап и соавт. ш Х1111 Сопдгекк оГ ТйготЬокЕ и Наеток!ак1к (11-ый Конгресс по тромбозу и гемостазу), под ред. Уегк!гае1а и соавт., 198, Ьеиуеп Ишуегкйу Ргекк, Ьеиуеп, стр. 583-596), артрит и рост злокачественных опухолей (см., например, статью Ео1ктап, 1971, N. Епд1. 1. Меб., 285:1182-1186). Рецепторы, с которыми специфически связывается УЕСЕ, представляют собой важную и эффективную терапевтическую мишень для регуляции и модулирования васкулогенеза и/или ангиогенеза и множества серьезных заболеваний, которые обусловлены аномальным ростом клеток, вызванным такими процессами (см.статью Р1о\утап и соавт., 1994, ΌΝ & Р. 7(6):334-339). Прежде всего, высокоспецифичная роль рецепторов КОЯ/ЕЬК-1 в неоваскуляризации позволяет считать их предпочтительной мишенью для терапевтических подходов к лечению рака и других болезней, связанных с неконтролируемым образованием кровеносных сосудов.
Таким образом, настоящее изобретение относится к соединениям, способным регулировать и/или модулировать передачу сигнала, опосредованную ТК, включая передачу сигнала рецептором КОЯ/ЕЬК1, с целью ингибирования или индуцирования ангиогенеза и/или васкулогенеза, т. е. к соединениям, которые ингибируют, предотвращают процесс передачи сигнала или препятствуют передаче сигнала, опосредованный рецептором КОЯ/ЕЬК-1 при активации лигандами, такими как, УЕСЕ. Хотя считается, что соединения по настоящему изобретению взаимодействуют с рецептором или другим компонентом, включенным в цепь передачи сигнала, опосредованной ТК, возможно также, что эти соединения непосредственно действуют на опухолевые клетки, образующиеся при неконтролируемом ангиогенезе.
Хотя рецепторы Г1к-1 человека и мыши имеют различные названия, сами рецепторы во многих отношениях взаимозаменяемы. У рецептора мыши, Е1к-1, и его аналога в организме человека, КОЯ, гомология аминокислотной последовательности внутриклеточного домена составляет 93,4%. Аналогичным образом, рецептор мыши, Е1к-1, связывает УЕСЕ человека с таким же сродством, что и УЕСЕ мыши, и, соответственно, активируется лигандом любого вида. См. статьи МШаиег и соавт., 1993, Се11. 72:835-846; Ошпп и соавт., 1993, Ргос. №И. Асаб. 8ск И8А. 90:7533-7537. Кроме того, Е1к-1 связывается и следовательно фосфорилирует остатки тирозина в субстратах РТКчеловека (например, РЬС-у или р85) при совместной экспрессии в клетках линии 293 (фибробласты почек эмбриона человека).
Следовательно, модели, разработанные на основе рецептора ЕЬК-1, можно непосредственно использовать для изучения КОЯ рецептора. Например, данные, полученные при использовании мышиного рецептора ЕЬК-1 в методиках, с помощью которых идентифицированы соединения, регулирующие путь передачи сигнала в организме мыши, могут быть непосредственно использованы для идентификации соединений, способных осуществлять регуляцию пути передачи сигнала в организме человека, т.е. соединений, регулирующих активность, связанную с КОЯ рецептором. Таким образом, химические соединения, идентифицированные как ингибиторы КОЯ/ЕЬК-1 ш уйго, могут быть исследованы на соответствующих моделях ш у1уо. Установлено, что обе модели животных для испытаний ш у1уо, мыши и крысы, вполне пригодны для изучения клинических возможностей агентов, действующих на путь передачи сигнала, индуцированный КОЯ/ЕЬК-1.
Таким образом, настоящее изобретение относится к соединениям, которые регулируют, модулируют и/или ингибируют васкулогенез и/или ангиогенез, путем действия на ферментативную активность рецептора КОЯ/ЕЬК-1 и препятствуя передаче сигнала, передаваемого КОЯ/ЕЬК-1. Следовательно, на
- 33 005996 стоящее изобретение относится к разработке подхода к терапевтическому лечению многих видов солидных опухолей, включая, без ограничения перечисленным, глиобластому, меланому и саркому Капоши, а также карциномы яичника, легких, молочной железы, предстательной железы, поджелудочной железы, ободочной кишки и эпидермоидного рака. Кроме того, имеющиеся данные свитедельствуют о том, что введение соединений, которые ингибируют путь передачи сигнала, опосредованный КБВ/РБК-1, также могут быть использованы при лечении гемангиомы, рестеноза и диабетической ретинопатии.
Кроме того, настоящее изобретение относится к ингибированию васкулогенеза и ангиогенеза по другим путям, опосредованным рецепторами, включая путь с участием рецептора £16-1.
РТК, принимающая участие в передаче сигнала, инициируется посредством внеклеточного взаимодействия со специфическим ростовым фактором (лигандом) с последующей димеризацией рецептора, временной стимуляцией собственной тирозинкиназной активности и автофосфорилированием. При этом образуются участки связывания для молекул, обеспечивающих внутриклеточную передачу сигнала, которые приводят к образованию комплексов с рядом цитоплазмаческих сигнальных молекул, что приводит к соответствующему клеточному ответу, например, клеточному делению и метаболическим изменениям во внеклеточной микросреде. См. статью 8сЬ1екктдег и БИпсй 1992, №еигоп. 9:1-20.
Близкая гомология внутриклеточных участков КБВ/РБК-1 и рецептора ΡΌΟΡ-β (гомология 50,3%) и/или близкого по строению рецептора £11-1 указывает на индукцию перекрывающихся путей передачи сигнала. Например, в случае рецептора ΡΌΟΡ-β показано, что члены семейства кгс (см. статью Тетат1еу и соавт., 1993, Ргос. №а11. Асаб. 8ск И8А. 90:7696-7700), фосфатидилинозит-3'-киназа (см.статью Ни и соавт., 1992, Μοί. Се11. ΒίοΙ., 12:981-990), фосфолипаза су (см.статью КакЫкЫап и Οοοροτ, 1993, Μοί. Се11. ΒίοΙ., 4:49-51), гак-ГТФаза-активирующий белок (см. статью КакЫкЫап и соавт., 1992, ΕΜΒΟ 1., 11:13731382), ΡΤΡ-ΙΌ/кур (см. статью Ка71аи8ка8 и соавт., 1993, Ргос. №111. Асаб. 8ск И8А. 90:6939-6943), ОгЬ2 (см. статью АМбкгоп и соавт., 1994, Μοί. Се11. ΒίοΙ., 14:6715-6726), и регуляторные субъединицы 811с и №ск (см. статью №1кЫтига и соавт., 1993, Μοί. Се11. ΒίοΙ., 13:6889-6896) связываются в областях, включающих различные участки автофосфорилирования. Общие сведения см. в статье С.Ίаеккοη-\Vе1к11. 1994, Ргод. Ого\\111 ЕасГОг Век., 5:37-54. Таким образом, можно предположить, что пути передачи сигнала, активируемые КБВ/РБК-1, включают путь, опосредованный гак (см. статью Ροζ;ι1<1κ и соавт., 1992, №аЫге. 360:689-692) и пути, опосредованные киназами ΡΙ-3', кгс и р1су. Каждый из этих путей может играть центральную роль в ангиогенном и/или васкулогенном действии КБВ/РБК-1 на эндотелиальные клетки. Следовательно, еще один аспект настоящего изобретения относится к применению описанных в данном тексте органических соединений для модулирования ангиогенеза и васкулогенеза, поскольку такие процессы контролируются указанными путями.
Способы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения и профилактики нарушений противоположной этиологии, связанных с сжатием, сокращением или смыканием стенок кровеносных сосудов, таких как, рестеноз.
Фиброзные нарушения означают аномальное формирование внеклеточного матрикса. Примеры фиброзных нарушений включают цирроз печени и пролиферативные нарушения мезангиальных клеток. Цирроз печени характеризуется ростом компонентов внеклеточного матрикса, приводящим к образованию печеночного рубца. Гипертрофированный внеклеточный матрикс, приводящий к образованию печеночного рубца, может быть также вызван вирусной инфекцией, такой как вирус гепатита. В развитии цирроза печени центральная роль, по-видимому, принадлежит жировым клеткам. Другим примером фиброзных нарушений является атеросклероз.
Пролиферативные нарушения мезангиальных клеток означают нарушения, вызванные аномальной пролиферацией мезангиальных клеток. Такие заболевания включают различные почечные заболевания человека, такие как, гломерулонефрит, диабетическая нефропатия и злокачественный нефросклероз, а также такие нарушения, как тромботические микроангиопатические синдромы, отторжение трансплантата и гломерулопатии. В поддерживании пролиферации мезангиальных клеток принимает участие РТК ΡΌΟΡΒ. См. статью РЫеде и соавт., 1993, К1бпеу 1п1егпа1юпа1. 43:478-548.
Многие онкологические заболевания являются нарушениями, связанными с пролиферацией клеток, а, как отмечалось выше, ПК непосредственно связаны с нарушениями пролиферации клеток. Таким образом, вполне естественно, что ПК, такие, например, как члены семейства РТК, непосредственно связаны с развитием рака. Некоторые из этих рецепторов, например, ΕΟΡΒ (см. статьи Τυζι и соавт., 1991, Βγ. 1. Сапсег. 63:227-233; Το гр и соавт., 1992, АΡΜI8. 100:713-719), НЕВ2/пеи (см. статью 81атοη и соавт., 1989, 8с1епсе. 244:707-712) и ΡΌΟΡ-В (см. статью КитаЬе и соавт., 1992, Опссдеп, 7:627-633) характеризуются повышенной экспрессией во многих опухолях и/или устойчиво активированы в аутокринных петлях. Действительно, показано, что эти рецепторы характеризуются гиперэкспрессией при большинстве обычных и острых онкологических заболеваний (см.статьи АкЬакак и 8ипег-АкЬакак и соавт., 1992, 1. №еиго1. 8с1. 111:119-133; Бюктоп и соавт., 1992, Сапсег Тгеа1теШ Век., 61:249-273; Κόιό и соавт., 1992, 1. С11п. 1п\'ек1., 90:1352-1360 и аутокринных петлях (см.статьи Бее и ^οηοдЬие, 1992, ШеИЕю^, 118:10571070; Κόιό и соавт., см. выше; АкЬакак и 8ипег-АкЬакак и соавт., см.выше). Например, ΡΟΡΒ связан с эпидермоидным раком, астроцитомой, глиобластомой, раком головы и шеи, раком легких и раком моче
- 34 005996 вого пузыря. НЕВ2 ассоциирован с раком молочной железы, яичника, желудка, легких, поджелудочной железы и мочевого пузыря. РИСЕВ ассоциирован с глиобластомой и меланомой, а также с раком легких, яичника и предстательной железы. РТКс-тс1 ассоциирован с образованием злокачественных опухолей. Например, с-теί ассоциируется наряду с другими онкологическими заболеваниями, с колоректальной, тиреодной, панкретической, желудочной и гепатоцеллюлярной карциномами и лимфомами. Кроме того, с-теί связан с лейкозом. Гиперэкспрессия гена с-теί обнаружена также у пациентов с болезнью Ходжкина и болезнью Буркитта.
1СЕ-1В, кроме включения в процессы парентерального питания и диабета второго типа, также ассоциирован с некоторыми типами онкологических заболеваний. Например, для некоторых типов опухолей 1СЕ-1 выступает в роли аутокринного стимулятора роста, например, для клеток карциномы молочной железы человека (см. статью Айеада и соавт., 1989, 1. С1ш. ΙηνοδΙ.. 84:1418-1423) и мелкоклеточного рака легких (см. статью Масаи1еу и соавт., 1990, Сапсег Век., 50:2511-2517). Кроме того, 1СЕ-1, в полной мере участвующий в процессе нормального роста и дифференциации (клеток) нервной системы, по-видимому, является также аутокринным стимулятором глиомы человека.
См. статью и соавт., 1993, Сашет Век., 53:2475-2478). Важное значение 1СЕ-1В и его лигандов для клеточной пролиферации подтверждается тем, что рост многих типов клеток в культуре (фибробласты, эпителиальные клетки, клетки гладких мышц, Т-лимфоциты, миелоидные клетки, хондроциты и остеобласты (стволовые клетки костного мозга)) стимулируется 1СЕ-1. См. статью СоИттд и Со1йттд, 1991, Ецкатюйс Сене Ехртеккюю 1:301-326. В публикациях Вакегда и Сорро1а сообщается, что 1СЕ-1В играет центральную роль в механизме трансформации и поэтому может быть предпочтительной мишенью для терапевтического действия на широкий спектр злокачественных опухолей. См. статьи Вакегда, 1995, Саг1сег Век., 55:249-252; Вакегда, 1994, Се11, 79:927-930; Сорро1а и соавт., 1994, Мо1. Се11. Вю1., 14:4588-4595.
СТК связывают со многими типами рака, особенно рака молочной железы (см. статью Сапсе и соавт., 1993, Ιηί. 1. Саисеи 54:571-577.
Взаимосвязь аномальной активности ПК со многими заболеваниямм не ограничивается раком. Например, РТК связана с такими заболеваниями, как псориаз, сахарный диабет, эндометриоз, ангиогенез, развитие атеросклеротических бляшек, болезнь Альгеймера, болезнь Гиппеля-Линдау, эпидермальная гиперпролиферация, нейродегенеративные заболевания, возрастная дегенерация желтого пятна и гемангиомы. Например, ЕСЕВ участвует в корнеальном и дермальном ранозаживлении. Дефекты в рецепторе инсулина и 1СЕ-1В связывают с сахарным диабетом типа-ΙΙ. Более сложная корреляция между специфическими РТК и их терапевтическими показаниями описана в статье Р1о\ута1'1 и соавт. 1994, ΌΝ & Р, 7:334-339.
Как отмечалось ранее, в передаче пролиферативного и метаболического сигнала наряду с РТК принимают участие и СТК, включающие, без ограничения перечисленным, кгс, аЫ, Грк, уек, 1уп, 1ущ 1ск, Ык, Иск, Гдг и угк (см. обзор Во1еи и соавт., 1992, ЕА8ЕВ 1., 6:3403-3409). Таким образом, можно ожидать, и это уже установлено, что они связаны со многими нарушениями, опосредованными ТК, и к которым относится настоящее изобретение. Например, установлено, что мутированный кгс (ν-кгс) является онкобелком (рр60’кгс) в организме цыпленка. Более того, его клеточный гомолог, прото-онкоген рр60с-кгс переносит онкогенные сигналы многих рецепторов. Гиперэкспрессия ЕСЕВ или НЕΒ2/ηеи в опухолях приводит к конститутивной активации рр60 , наличие которого характерно для злокачественных клеток, но который отсутствует в нормальных клетках. С другой стороны, мыши, с недостаточной экспресией с-кгс, имеют фенотип мраморной болезни (врожденный системный остеопетроз), что свидетельствует о ключевой роли с-кгс в функционировании остеокластов и возможном его участии в подобных нарушениях.
Аналогичным образом, Ζ;ψ70 принимает участие в передаче сигналов в Т-клетках, которые имеют отношение к аутоиммунным заболеваниям.
СТК ассоциированы с воспалительными процессами, аутоиммунным заболеванием, иммунными реакциями и гиперпролиферативными нарушениями, такими как, рестеноз, фиброз, псориаз, остеоартрит и ревматоидный артрит.
ПК также принимают участие в имплантации эмбриона. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для разработки эффективного способа предотвращения имплантации эмбриона и благодаря этому могут быть использованы в качестве средства регулирования рождаемости. К другим нарушениям, которые можно вылечить или предотвратить с использованием соединений по настоящему изобретению относятся иммунологические нарушения, такие как аутоиммунное заболевание, СПИД и сердечно-сосудистые нарушения, такие как атеросклероз.
Наконец, в настоящее время предполагают, что РТК и СТК принимают участие в процесах гипериммунных нарушений.
Примеры действия ряда типичных соединений по настоящему изобретению на различные ТК приведены в табл. 2 (см. ниже). Любые описанные соединения и результаты не могут рассматриваться, как ограничивающие объем притязаний настоящего изобретения.
Введение соединений и фармацевтические композиции
Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно вво
- 35 005996 дить человеку отдельно или в составе фармацевтических композиций, в которых вышеупомянутые материалы смешаны с подходящими носителями или наполнителем (наполнителями). Методы получения и введения лекарственных средств можно найти в последнем издании книги КеттдЮп'к Р11агтасо1од1са1 Заепсек (Фармакологические науки Ремингтона), Маск РиЫкЫпд Со., ЕаЛоп. РА. Используемые в данном тексте термины вводить или введение означают доставку соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его соль по настоящему изобретению, в организм с целью профилактики или лечения нарушения, связанного с ПК.
Подходящие способы введения включают, без ограничения перечисленным, пероральное, ректальное, чрезслизистое или кишечное введение или внутримышечные, подкожные, интрамедуллярные, подоболочечные, прямые интравентрикулярные (внутрижелудочковые), внутривенные, интравитреальные, внутрибрюшинные, интраназальные или внутриглазные инъекции. Предпочтительными являются пероральный и парентеральный способы введения.
В альтернативном варианте, предпочтительным способом введения соединения является не системный, а местный способ, например, инъекция соединения непосредственно в солидную опухоль, часто в виде композиции пролонгированного или длительного действия.
Кроме того, лекарственное средство можно вводить в форме системы доставки лекарственного средства, например, в виде липосомы, покрытой антителами, специфичными к опухоли. Липосомы будут доставлены к мишени и специфически поглощены опухолью.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть получены способами, известными в данной области техники, например, путем обычного смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, включения в полимерные материалы и лиофилизации.
Фармацевтические композиции для применения по настоящему изобретению можно получить с помощью общепринятых способов с использованием по меньшей мере одного физиологически приемлемого носителя, включая наполнители и вспомогательные средства, которые облегчают переработку активных соединений в лекарственные препараты, используемые в фармацевтике. Состав композиции зависит от требуемого способа введения.
Для инъекций соединения по изобретению получают в виде водных растворов, предпочтительно в физиологически совместимых буферных растворах, таких как, раствор Хенкса, раствор Рингера или физиологический раствор. Для чрезслизистого введения в композицию вводят смачивающие агенты, способствующие проникновению через биологический барьер. Такие смачивающие агенты обычно известны в данной области техники.
Для перорального введения в состав композиции могут быть включены активные соединения в смеси с фармацевтически приемлемыми носителями, хорошо известными специалистам. Такие носители позволяют получить соединения по изобретению в виде следующих лекарственных форм, предназначенных для приема внутрь: таблетки, пилюли, лепешки, драже, капсулы, растворы, гели, сиропы, взвеси, суспензии и т.п., Фармацевтические композиции для перорального применения могут быть получены с использованием твердого наполнителя, необязательно с измельчением полученной смеси, и обработкой смеси гранул после добавления при необходимости других вспомогательных материалов, для получения таблеток или ядер драже. Подходящими наполнителями являются, прежде всего, носители, такие как, сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит, производные целлюлозы, такие как, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, и прочие материалы, такие как желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, и/или поливинилпирролидон (ПВП). При необходимости могут быть добавлены дезинтегрирующие агенты, такие как, сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота. Кроме того, можно использовать соль, такую как альгинат натрия.
Ядра драже покрывают подходящим покрытием. Для этой цели используют концентрированные растворы сахаров, которые по выбору содержат аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, карбопол-гель, полиэтиленгликоль, и/или диоксид титана, растворы лака и пригодные органические растворители или смеси растворителей. С целью идентификации или маркировки различных комбинаций доз активного компонента в покрытие таблеток или драже могут быть добавлены красители или пигменты.
Фармацевтические композиции для перорального применения включают штампованные капсулы из желатина, а также мягкие заплавленные капсулы из желатина и пластификатора, такого как, глицерин или сорбит. Штампованные капсулы могут содержать активные компоненты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связующим компонентом, таким как, крахмал, и/или замасливателем, таким как, тальк или стеарат магния и, необязательно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные компоненты могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как нелетучие масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, в эти композиции могут быть добавлены стабилизаторы.
Фармацевтические композиции, которые могут быть также использованы, включают твердые капсулы из желатина. В качестве примера, без ограничения перечисленным, можно привести лекарственный
- 36 005996 состав в капсуле для перорального введения, в которой величина дозы активного соединения составляет 50 и 200 мг (код состава 1-011248-ЛЛ-00 и 1-011248-АА-01, соответственно). Два вида доз получают из одних и тех же гранул путем наполнения твердых капсул из желатина различного размера, для дозы 50 мг используют капсулы размером 3, а для дозы 200 мг используют капсулы размером 0. Пример композиции состава приведен в табл. 2.
Таблица 2
Название Концентрация в Количество в Количество в
компонента/ составе гранул капсуле на 50 мг капсуле на 200 мг
марка ( мас.%) (мг) (мг)
Код состава Р011248-АА Ι-0Ι1248-ΑΑ-00 3-011248-АА-01
Активное 65,0 50,0 200,0
соединение ΝΡ
Маннит ΝΡ 23,5 18,1 72,4
Натрий 6,0 4,6 18,4
кроскармелоза
ΝΡ
Повидон К 30 ΝΡ 5,0 3,8 15,2
Стеарат магния ΝΡ 0,5 0,38 1,52
Капсулы, желтые Размер 3 Размер 0
ΝΡ, Швеция
Для защиты от действия света на активное соединение капсулы могут быть упакованы во флаконы из темного стекла или пластика. Емкости, содержащие капсулы с активным соединением, можно хранить при контролируемой комнатной температуре (15-30°).
Для введения путем ингаляции соединения по настоящему изобретению его можно вводить в форме аэрозоля с использованием герметичной упаковки или с использованием распылительной насадки и подходящего газа-вытеснителя, например, без ограничения перечисленным, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана или диоксида углерода. В случае герметичного аэрозоля дозировку можно регулировать с помощью клапана для доставки отмеренного количества лекарственного средства. Капсулы и картриджи, например, из желатина для использования в ингаляторе или в инсуффляторе, могут содержать порошок активного соединения в смеси с подходящей порошкообразной основой, такой как лактоза или крахмал.
Активные соединения могут быть также получены в виде композиций для парентерального введения, например, путем струйной инъекции или непрерывного вливания. Композиции для инъекции могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы, например, в ампулах или в упаковке на несколько доз, с добавлением консервантов. Композиции могут быть в виде суспензий, растворов и эмульсий в масляных или водных носителях, могут содержать композиционные материалы, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты.
Фармацевтические композиции для парентерального введения включают водные растворы водорастворимой формы активного соединения, такой как, без ограничения перечисленным, его соль. Кроме того, суспензии активных соединений могут быть получены в липофильном носителе. Подходящие липофильные носители включают нелетучие масла, такие как, кунжутное масло, синтетические эфиры жирных кислот, такие как, этиловый эфир олеиновой кислоты, и триглицериды, или материалы, такие как, липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такие как, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, сорбит или декстран. По выбору, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы и/или агенты, которые увеличивают растворимость соединений, что позволяет получать высококонцентрированные растворы.
В альтернативном варианте, активный компонент может быть получен в порошкообразной форме для смешивания перед использованием с подходящим носителем, например, стерильной апирогенной водой.
- 37 005996
Соединения могут быть также получены в виде ректальных композиций, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, с использованием, например, общепринятых суппозиторных основ, таких как кокосовое масло или другие глицериды.
Кроме вышеописанных композиций соединения могут быть получены в виде препаратов пролонгированного действия. Такие долгодействующие композиции имплантируют (например, подкожно или внутримышычно) или вводят внутримышечной инъекцией. Для такого способа введения соединение по изобретению может быть получено в составе смеси с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в фармакологически приемлемом масле), с ионообменными смолами, или в виде труднорастворимого производного, такого как, без ограничения перечисленным, труднорастворимая соль.
Примером фармацевтического носителя для гидрофобных соединений по изобретению, без ограничения перечисленным, является система сорастворителей, включающая бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество (ПАВ), водорастворимый органический полимер и водную фазу, такая как система сорастворителей νΡΌ. Система νΡΌ включает раствор следующего состава: 3 мас./об.% бензилового спирта, 8 мас./об.% неполярного ПАВ полисорбат 80, 65 мас./об.% полиэтиленгликоля 300 и абсолютный этанол (до 100 об.%). Система сорастворителей νΡΌ (νΡΌ:Ό5Α) включает раствор νΡΌ, разбавленный в соотношении 1:1 5%-ным раствором декстрозы в воде. Эта система сорастворителей хорошо растворяет гидрофобные соединения и при системном введении обладает низкой токсичностью. Естественно соотношения компонентов в такой системе сорастворителей могут заметно варьировать без изменения растворяющей способности и токсичности. Кроме того, может быть изменена природа отдельных компонентов: например, вместо полисорбата 80 можно использовать другие малотоксичные неполярные ПАВ, можно варьировать фракционный состав полиэтиленгликоля, использовать вместо полиэтиленгликоля другие биосовместимые полимеры, например, поливинилпирролидон, в вместо декстрозы использовать другие сахара или полисахариды.
В альтернативном варианте можно использовать другие системы доставки гидрофобных фармацевтически приемлемых соединений. Общеизвестными примерами носителей и наполнителей для систем доставки гидрофобных соединений являются такие носители, как липосомы и эмульсии. Кроме того, могут быть также использованы некоторые органические растворители, такие как диметилсульфоксид, хотя в большинстве случаев они обладают более высокой токсичностью.
Кроме того, для доставки соединения могут быть использованы системы пролонгированного действия, такие как полупроницаемые матриксы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие терапевтический агент. Множество материалов пролонгированного действия хорошо известны специалистам в данной области техники. В зависимости от своей химической природы капсулы пролонгированного действия могут высвобождать соединения в течение периода от нескольких недель до более 100 дней. В зависимости от химической природы и биологической стабильности терапевтического агента могут быть использованы дополнительные методы стабилизации белков.
Описанные в тексте фармацевтические композиции могут также включать подходящие твердые или гелевые носители или наполнители. Примеры таких носителей или наполнителей включают, без ограничения перечисленным, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин, и полимеры, такие как полиэтиленгликоли. Многие из соединений по изобретению, модулирующие ПК, могут быть получены в виде физиологически приемлемых солей, причем заявленное соединение может иметь положительный или отрицательный заряд. Примеры солей, в которых соединение образует положительно заряженный остаток, включают, без ограничения перечисленным, соли четвертичного аммония (определенного в данном описании), такие как гидрохлорид, сульфат, карбонат, лактат, тартрат, малат, малеат, сукцинат, причем атом азота в группе четвертичного аммония, взаимодействующей с соответствующей кислотой, является атомом азота в соединении по изобретению. Соли, в которых соединение по изобретению образует отрицательно заряженный остаток, включают в себя, без ограничения перечисленным, соли натрия, калия, кальция и магния, образованные при взаимодействии карбоксильной группы соединения по изобретению с соответствующим основанием (например, гидроксидом натрия (ΝαΟΗ), гидроксидом калия (КОН), гидроксидом кальция (Са(ОН)2) и т.п.).
Фармацевтические композиции, подходящие для применения по настоящему изобретению, включают в себя композиции, в которых активные компоненты содержатся в количестве, достаточном для достижения поставленной цели, т. е. модулирования активности ПК или лечения или профилактики нарушения, связанного с ПК.
Более подробно, терапевтически эффективное количество означает количество соединения, которое обеспечивает эффективную профилактику и смягчение или снижение интенсивности симптомов заболевания или продлевает жизнь пациента, подлежащего лечению.
Терапевтически эффективное количество определяют специалисты в данной области техники, особенно с учетом информации, детально изложенной в данном тексте.
Для любого соединения, используемого в способах по изобретению, терапевтически эффективное количество или доза могут быть определены путем анализа с использованием клеточной культуры. Затем может быть определена дозировка для испытаний на модельных животных, обеспечивающая диапазон
- 38 005996 циркулирующей концентрации, включающий величину 1С50, найденную с использованием анализа на клеточной культуре (т.е. концентрации исследуемого соединения, при которой наблюдается ингибирование активности ПК на 50%). Затем полученные данные можно использовать для более точного определения дозы для введения человеку.
Токсичность и терапевтическую эффективность соединений, описанных в данном тексте, определяют с использованием обычных фармацевтических методов в экспериментах на клеточных культурах или на подопытных животных, например, путем определения 1С50 и ЬИ50 (оба параметра определены в данном тексте) для исследуемых соединений. Данные, полученные при испытаниях на клеточной культуре и на подопытных животных, используют для определения диапазона доз для введения человеку. Дозы могут варьировать в зависимости от применяемой формы лекарственного средства и способа введения. Точный состав композиции, способ введения и доза определяются лечащим врачом в соответствии с состоянием больного. (См. книгу Ρίη§1 и соавт., 1975 Т11С Рйаттасо1од1са1 Ваак оГ Тйегареийск (Фармакологические основы применения терапевтических средств), гл. 1,стр. 1).
Количество доз и интервал между введениями подбирают индивидуально с целью создания в плазме крови такого уровня активных соединений, который является достаточным для поддержания эффектов модулирования киназы. Эти уровни в плазме названы минимально эффективные концентрации (МЭК). МЭК варьирует для каждого соединения, но их можно определить по результатам испытаний ίη νίίτο, например, по результатам испытаний, описанных в данном тексте, можно определить концентрацию, необходимую для ингибирования киназной активности на 50-90%. Дозировки, необходимые для достижения МЭК зависят от индивидуальных характеристик и способа введения. Концентрация в плазме может быть определена методом ВЭЖХ или с помощью биоиспытаний.
Интервалы между дозами также определяют, исходя из величины МЭК. Соединения следует вводить по такой схеме, которая обеспечивает поддерживание уровня в плазме, превышающего МЭК в течение 10-90% времени, предпочтительно в течение 30-90% времени, наиболее предпочтительно 50-90% времени.
В настоящее время терапевтически эффективное количество соединений формулы I может изменяться от приблизительно 25 мг/м2 до 1500 мг/м2 в сутки, предпочтительно приблизительно 3 мг/м2/сутки. Еще более предпочтительно от 50 мг/г до 400 мг/г.
В случае местного введения или избирательного поглощения, эффективная местная концентрация лекарственного средства может быть не связана с концентрацией в плазме, и для определения точной дозы и интервалов введения следует использовать другие методики, известные специалистам в данной области техники.
Количество введенной композиции, естественно, зависит от пациента, подлежащего лечению, от степени тяжести заболевания, способа введения, заключения лечащего врача и т.п.
При необходимости композиции могут представлять собой упаковку или дозирующее устройство, такое как набор, утвержденный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (РИА), которые могут содержать одну или более стандартных лекарственных доз, содержащих активный компонент. Для упаковки могут быть использованы, например, металлическая фольга или полимерная пленка, например, для упаковки в виде блистера. К упаковке или дозирующему устройству может прилагаться инструкция по применению лекарственного средства. К упаковке или дозирующему устройству может также прилагаться информация, нанесенная на упаковку и составленная в форме, установленной правительственной организацией по контролю за производством, использованием и продажей фармацевтических средств, причем эта информация должна соответствовать нормам, установленным для форм композиций для введения человеку или для ветеринарного назначения, утвержденным соответствующей организацией. При составлении такой информации можно, например, использовать маркировку, утвержденную Управлением по контролю за продуктами и лекарствами для назначения лекарств, или лист-вкладыш, также утвержденный указанной организацией. Могут быть получены также композиции, содержащие соединение по настоящему изобретению в совместимом фармацевтическом носителе, помещенные в соответствующую упаковку с этикеткой, содержащей инструкции по применению для лечения определенных заболеваний. Подходящие условия, указанные на этикетке, могут включать в себя лечение опухолей, ингибирование ангиогенеза, лечение фиброза, диабета и т.п.
Кроме этого, аспект настоящего изобретения заключается в том, что описанное соединение или его соль или пролекарство может быть использовано совместно с другими химиотерапевтическими агентами для лечения вышеупомянутых заболеваний и нарушений. Например, соединение, соль или пролекарство по настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании с алкилирующими агентами, например, фторурацил (5-ЕЙ), отдельно или в сочетании с лейковорином; или с другими алкилирующими агентами, например, без ограничения перечисленным, другими пиримидиновыми аналогами, такими как, ИЕТ, капецитабин, гемцитабин и цитарабин; алкилсульфонатами, например, бусульфаном (применяющимся при лечении хронического гранулоцитарного лейкоза), импросульфаном и пипосульфаном; азиридинами, такими как, бензодепа, карбоквон, метуредепа и уредепа; этилениминами и метилмеламинами, например, алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; (азотистыми) горчичными маслами, такими как, хлорамбуцил (применяющийся при
- 39 005996 лечении хронического лимфолейкоза, первичной макроглобулинемии и неходжкинской лимфомы), циклофосфамид (применяющийся при лечении болезни Ходжкина, множественной миеломы, нейробластомы, рака молочной железы, рака яичника, рака легких, аденосаркомы почки (опухоли Вильмса) и рабдомиосаркомы), эстрамустин, ифосфамид, новембрихин, преднимустин и урациловое горчичное масло (применяющееся при лечении первичного тромбоцитоза, неходжкинской лимфомы, болезни ходжкина и рака яичника); триазинами, например, дакарбазин (применяющийся при лечении саркомы мягких тканей).
Соединение, соль или пролекарство по изобретению могут быть использованы в сочетании с другими химиотерапевтическими агентами, являющимися антиметаболитами, например, без ограничения перечисленным, аналоги фолиевой кислоты, например, метотрексат (применяющийся при лечении острого лимфолейкоза, хориокарциномы, микозно-грибовидного рака молочной железы, рака головы и шеи и остеогенной саркомы) и птероптерин; аналоги пурина, такие как меркаптопурин и тиогуанин, которые находят применение при лечении острого гранулоцитарного лейкоза, острого лимфолейкоза и хронического гранулоцитарного лейкоза.
Можно также ожидать, что соединение, соль или пролекарство по изобретению будут эффективными в сочетании с химиотерапевтическими агентами на основе природных продуктов, таких как, без ограничения перечисленным, алкалоиды барвинка розового, например, винбластин (применяющийся при лечении рака молочной железы и рака яичка), винкристин и виндезин; эпиподофилотоксины, например, этопозид и тенипозид, каждый из которых применяется при лечении рака яичка и саркомы Капоши; химиотерапевтические антибиотики, например, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, митомицин (применяющийся при лечении рака желудка, шейки матки, ободочной кишки, молочной железы, мочевого пузыря и поджелудочной железы), дактиномицин, темозоломид, пликамицин, блеомицин (применяющийся при лечении рака кожи, пищевода и мочеполового тракта), и ферментативные химиотерапевтические агенты, такие как Ь-аспарагиназа.
Кроме того, соединение, соль или пролекарство по изобретению могут быть использованы в сочетании с координационными комплексами платины (цисплатин и др.); замещенными производными мочевины, такими как, гидроксимочевина; производными метилгидразина, например, прокарбазином; адренокортикоидными супрессантами, например, митотаном, аминоглютетимидом; гормонами и антагонистами гормонов, такими как, адренокортикостероиды (например, преднизолон), прогестины (например, гидроксипрогестерон капроат); эстрогенами (например, диэтилстильбестерол); антиэстрогенами, таким как, тамоксифен; андрогенами, например, тестостерон пропионат; и ингибиторами ароматазы, такими как, анастрозол.
Наконец, можно ожидать, что соединения по изобретению окажутся эффективными в композиции с митоксантроном или паклитакселом при лечении солидных опухолей или лейкозов, таких как, без ограничения перечисленным, острый миелоидный (нелимфоцитарный) лейкоз.
Общая методика синтеза
Для синтеза соединений, представленных в настоящем изобретении, используют следующую общую методологию.
Соответственно замещенный 2-оксиндол (1 экв.), соответственно замещенный альдегид (1,2 экв.) и основание (0,1 экв.) смешивают в растворителе (1-2 мл/ммоль 2-оксиндола), и затем смесь нагревают в течение от приблизительно 2 ч до приблизительно 12 ч. После охлаждения образующийся осадок фильтруют, промывают холодным этанолом или эфиром и сушат в вакууме. При этом получают твердый продукт. Если осадок не образуется, то реакционную смесь концентрируют и остаток растирают со смесью дихлорметан/эфир, образующийся в результате твердый продукт собирают фильтрованием и затем сушат. В дальнейшем продукт необязательно может быть очищен хроматографически.
Основание может быть органическим или неорганическим. Если используется органическое основание, то предпочтительно используют азотсодержащие основания. Примеры таких оснований включают в себя без ограничения перечисленным диизопропиламин, триметиламин, триэтиламин, анилин, пиридин, 1,8-диазабицикло[5.4.1]ундец-7-ен, пирролидин и пиперидин.
Примеры неорганических оснований включают в себя без ограничения перечисленным аммиак, фосфаты, карбонаты, бикарбонаты, бисульфаты и амиды щелочных металлов или щелочно-земельных металлов. Щелочные металлы включают литий, натрий и калий, а щелочно-земельные металлы - кальций, магний и барий.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения в случае, если используют протонный растворитель, такой как вода или спирт, основанием служат неорганические основания щелочных или щелочноземельных металлов, предпочтительно используют гидроксиды щелочных или щелочноземельных металлов.
Для специалистов в данной области техники, с учетом общих принципов органического синтеза, и настоящего изобретения, представляется очевидным выбор наиболее подходящего основания для предполагаемой реакции.
Растворитель, в котором протекает реакция, может быть протонным или апротонным, предпочтительнее использовать протонный растворитель. Термин протонный растворитель означает раствори
- 40 005996 тель, который содержит атом(ы) водорода, ковалентно связанные с атомами кислорода или азота, которые придают атому водорода кислотность, и таким образом, способность соединяться с растворенным веществом через водородные связи. Примерами протонных растворителей без ограничения перечисленным являются вода и спирты.
Апротонные растворители могут быть полярными и неполярными, однако, в любом случае они не содержат кислых атомов водорода и, следовательно, неспособны образовывать водородные связи с растворенным веществом. Примерами неполярных апротонных растворителей без ограничения перечисленным являются пентан, гексан, бензол, толуол, хлористый метилен и четыреххлористый углерод. Примерами полярных апротонных растворителей являются хлороформ, тетрагидрофуран, диметилсульфоксид и диметилформамид.
В настоящем предпочтительном варианте воплощения данного изобретения используется протонный растворитель, предпочтительнее вода или спирт, такой как этанол.
Реакцию проводят при температуре выше комнатной. Обычно температура находится в интервале от приблизительно 30°С до приблизительно 150°С, предпочтительно от приблизительно 80°С до приблизительно 100°С, наиболее предпочтительно от приблизительно 75°С до приблизительно 85°С, то есть около температуры кипения этанола. Термин приблизительно означает, что отклонение от указанной температуры составляет 10°С, более предпочтительно 5°С, наиболее предпочтительно 2°С. Например, приблизительно 75°С означает 75°С±10°С, предпочтительно 75°С±5°С и наиболее предпочтительно 75°С ±2°С.
2-Оксиндолы и альдегиды легко синтезируют по методикам, которые широко известны в органической химии. Специалистам в этой области представляется очевидным, что доступны другие синтетические схемы синтеза соединений, представленных в изобретении, и следующие схемы представлены в качестве примера без ограничения перечисленным.
Примеры
Следующие методики и примеры представлены для более полного понимания и применения на практике настоящего изобретения. Эти примеры представлены только в качестве иллюстрации и не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения.
Примеры синтеза
Метод А. Формилирование пирролов.
РОС13 (1,1 экв.) добавляют по каплям к диметилформамиду (3 экв.) при -10°С с последующим добавлением соответствующего пиррола, растворенного в диметилформамиде. После перемешивания в течение 2 ч реакционную смесь разбавляют Н2О и подщелачивают до рН 11 с помощью 10н. КОН. При этом образуется осадок, который собирают фильтрованием, затем его промывают Н2О и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают требуемый альдегид.
Метод Б. Омыление эфиров пирролкарбоновых кислот.
Смесь эфира пирролкарбоновой кислоты и КОН (2-4 экв.) в этаноле кипятят с обратным холодильником до тех пор, пока данные тонкослойной хроматографии (ТСХ) не указывают о завершении реакции. Охлажденную реакционную смесь подкисляют до рН 3 с помощью 1н. НС1. При этом образуется осадок, который собирают фильтрованием, затем его промывают Н2О и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают требуемую пирролкарбоновую кислоту.
Метод В. Амидирование.
К раствору пирролкарбоновой кислоты в диметилформамиде (0,3 М) при перемешивании добавляют 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (1,2 экв.), 1-гидроксибензотриазол (1,2 экв.) и триэтиламин (2 экв.). Затем добавляют соответствующий амин (1 экв.) и реакционную смесь перемешивают вплоть до завершения реакции, которую контролируют по данным ТСХ. Затем к реакционной смеси добавляют этилацетат, и раствор промывают насыщенным раствором NаНСО3 и солевым раствором (с избыточным содержанием соли), сушат над безводным Мд8О4 и концентрируют для получения требуемого амида.
Метод Г. Конденсация альдегидов и оксиндолов, содержащих заместители с остатками карбоновых кислот.
Смесь оксиндола (1 экв.), 1 экв. альдегида и 1 - 3 экв. пиперидина (или пирролидина) в этаноле (0,4 М) перемешивают при 90°- 100°С до завершения реакции, которую контролируют по данным ТСХ. Затем реакционную смесь концентрируют, и остаток подкисляют с помощью 2н. НС1. Образующийся осадок промывают Н2О и Е1ОН, и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают требуемый продукт.
Метод Д. Конденсация альдегидов и оксиндолов, не содержащих заместителей с остатками карбоновых кислот.
Смесь оксиндола (1 экв.), 1 экв. альдегида и 1 - 3 экв. пиперидина (или пирролидина) в этаноле (0,4 М) перемешивают при 90-100°С до завершения реакции, которую контролируют ТСХ. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и образующееся при этом твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и сушат. Если при охлаждении осадок не образуется, то реакционную смесь концентрируют и очищают колоночной хроматографией.
- 41 005996
Примеры синтезов оксиндола
Следующие примеры синтеза представителей ряда оксиндола составлены не для ограничения объема настоящего изобретения. Альтернативные способы синтеза оксиндолов и другие оксиндолы, которые будут использованы для синтеза соединений в настоящем изобретении, представляются очевидными для специалистов в данной области техники на основании следующего описания. Такие синтезы и оксиндолы включены в объем и сущность настоящего изобретения.
5-Амино-2-оксиндол.
5-Нитро-2-оксиндол (6,3 г) гидрируют в метаноле над 10% палладием на углероде с образованием 3,0 г (выход 60%) указанного продукта в виде твердого вещества белого цвета.
5-Бром-2-оксиндол.
2-Оксиндол (1,3 г) в 20 мл ацетонитрила охлаждают до -10°С и медленно при перемешивании добавляют 2,0 г Ν-бромсукцинимида. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при -10°С и 2 ч при 0°С. Осадок собирают, промывают водой и сушат. При этом получают 1,9 г (выход 90%) указанного соединения.
4- Метил-2-оксиндол.
Диэтилоксалат (30 мл) в 20 мл сухого эфира добавляют при перемешивании к 19 г этоксида калия, суспендированного в 50 мл сухого эфира. Реакционную смесь охлаждают в бане со льдом и медленно добавляют 20 мл 3-нитро-о-ксилола в 20 мл сухого эфира. Густую реакционную смесь темно-красного цвета кипятят с обратным холодильником в течение 0,5 ч, затем концентрируют до образования твердого вещества темно-красного цвета и обрабатывают 10% раствором гидроксида натрия до полного растворения твердого вещества. Смесь темно-красного цвета обрабатывают 30% раствором пероксида водорода до изменения окраски с красной на желтую. Другой способ заключается в обработке смеси 10% раствором гидроксида натрия и 30% раствором пероксида водорода до исчезновения темно-красной окраски. Твердое вещество отфильтровывают, а фильтрат подкисляют с помощью 6 н. соляной кислоты. В результате образуется осадок, который собирают фильтрованием в вакууме, промывают водой, сушат в вакууме. При этом получают 9,8 г (выход 45%) 2-метил-6-нитрофенилуксусной кислоты в виде твердого вещества грязно-белого цвета. Это вещество гидрируют в метаноле над 10% палладием на углероде, что приводит к образованию 9,04 г требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.
7-Бром-5-хлор-2-оксиндол.
5- Хлор-2-оксиндол (16,8 г) и 19,6 г Ν-бромсукцинимида суспендируют в 140 мл ацетонитрила и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. После кипячения в течение 2 ч данные ТСХ (силикагель, этилацетат) показывают присутствие 5-хлор-2-оксиндола или Ν-бромсукцинимида (КГ 0,8), продукта (КТ 0,85) и второго продукта (КГ 0,9), причем их соотношение не меняется после еще одного часа кипячения. Реакционную смесь охлаждают до 10°С, осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают 25 мл этанола и отфильтровывают досуха на воронке в течение 20 мин. При этом получают 14,1 г влажного продукта (выход 56%). Твердый продукт суспендируют в 200 мл денатурированного этанола, суспензию перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин. Реакционную смесь охлаждают в бане со льдом до 10°С. Твердый продукт собирают фильтрованием в вакууме, промывают 25 мл этанола и сушат в вакууме при 40°С. При этом получают 12,7 г (выход 51%) 7-бром-5-хлор-2-оксиндола.
5-Фтор-2-оксиндол.
5-Фторизатин (8,2 г) растворяют в 50 мл гидразингидрата и кипятят с обратным холодильником в течение 1,0 ч. Затем реакционную смесь выливают в ледяную воду. Осадок фильтруют, промывают водой и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают указанный продукт.
5-Нитро-2-оксиндол.
2-Оксиндол (6,5 г) растворяют в 25 мл концентрированной серной кислоты, и поддерживают температуру реакционной смеси в интервале от - 10 до -15°С. При этом добавляют по каплям 2,1 мл дымящейся азотной кислоты. После добавления азотной кислоты реакционную смесь перемешивают в течение 0,5 ч при 0°С и затем выливают в ледяную воду. Осадок собирают фильтрованием, промывают водой и кристаллизуют из 50% уксусной кислоты. Кристаллический продукт фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме. При этом получают 6,3 г (выход 70%) 5-нитро-2-оксиндола.
5-Аминосульфонил-2-оксиндол.
В колбу объемом 100 мл, содержащую 27 мл хлорсульфоновой кислоты медленно добавляют 13,3 г 2-оксиндола. При этом температуру реакции поддерживают ниже 30°С. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч, нагревают при 68°С в течение 1 ч, охлаждают и выливают в воду. Осадок промывают водой и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают 11,0 г (выход 50%) 5-хлорсульфонил-2-оксиндола, который используется без дополнительной очистки.
5-Хлорсульфонил-2-оксиндол (2,1 г) добавляют к 10 мл гидроксида аммония в 10 мл этанола и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и твердый продукт собирают фильтрованием в вакууме. При этом получают 0,4 г (выход 20%) указанного продукта в виде твердого вещества грязно-белого цвета.
5-Изопропиламиносульфонил-2-оксиндол.
В колбу объемом 100 мл, содержащую 27 мл хлорсульфоновой кислоты, медленно добавляют 13,3 г
- 42 005996
2-оксиндола. При этом температуру реакционной смеси поддерживают ниже 30°С. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч, затем нагревают при 68°С в течение 1 ч, охлаждают и выливают в воду. Осадок, который при этом образуется, отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакуумном сушильном шкафу. При этом получают 11,0 г (выход 50%) 5-хлорсульфонил2-оксиндола, который используется без дополнительной очистки.
Суспензию 3 г 5-хлорсульфонил-2-оксиндола, 1,15 г изопропиламина и 1,2 мл пиридина в 50 мл дихлорметана перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. При этом образуется твердое вещество белого цвета. Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, суспензию промывают горячим этанолом, охлаждают, собирают фильтрованием в вакууме и сушат в вакууме при 40°С в течение ночи. При этом получают 1,5 г (выход 45%) 5-изопропиламиносульфонил-2-оксиндола.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,69 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,63 (бб, 1=2 и 8 Гц, 1Н), 7,59 (б, 1=2 Гц, 1Н), 7,32 (б, 1=7 Гц, 1Н, ЦН-ЗО^), 6,93 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,57 (8, 2Н), 3,14-3,23 (т, 1Н, СН-(СН3)2), 0,94 (б, 1=7 Гц, 6Н, 2хСН3).
5-Фениламиносульфонил-2-оксиндол.
Суспензию 5-хлорсульфонил-2-оксиндола (1.62 г, 7 ммоль), анилина (0,782 мл, 8,4 ммоль) и пиридина (1 мл) в дихлорметане (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (300 мл) и подкисляют с помощью 1н. соляной кислоты (16 мл). Органический слой промывают раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, сушат и концентрируют. Остаток промывают этанолом (3 мл) и хроматографируют на силикагеле, элюируют смесью метанол/дихлорметан 1:9. При этом получают 5-фениламиносульфонил-2-оксиндол.
1Н ЯМР (360 МГц, ЭМСО-б6) δ 10,71 (8, Ьг, 1Н, ЯН), 10,10 (8, Ьг, 1Н, ЯН), 7,57-7,61 (т, 2Н), 7,177,22 (т, 2Н), 7,06-7,09 (т, 2Н), 6,97-7,0 (т, 1Н), 6,88 (б, 1=8,4Гц, 1Н), 3,52 (8, 2Н).
Пиридин-3-ил-амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты.
Раствор 5-хлорсульфонил-2-оксиндола (3 г) и 3-аминопиридина (1,46 г) в пиридине (15 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, при этом образуется твердое вещество коричневого цвета. Этот продукт отфильтровывают, промывают этанолом и сушат в вакууме. При этом получают 1.4 г (выход 38%) пиридин-3-ил-амида 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,74 (8, 1Н, ΝΗ), 10,39 (8, 1Н, 5О;\11), 8,27-8,28 (б, 1Н), 8,21-8,23 (т, 1Н), 7,59-7,62 (т, 2Н), 7,44-7,68 (т, 1Н), 7,24-7,28 (т, 1Н), 6,69-6,71 (б, 1Н), 3,54 (8, 2Н). МС т/ζ (АРС1+) 290,2
5-Фенилоксиндол.
5- Бром-2-оксиндол (5 г, 23,5 ммоль) растворяют в 110 мл толуола и 110 мл этанола при перемешивании и слабом нагревании. Тетракис-(трифенилфосфин)палладий (0) (1,9 г, 1,6 ммоль) добавляют в реакционную смесь, затем добавляют 40 мл (80 ммоль) 2 М водного раствора карбоната натрия. К реакционной смеси добавляют бензолборную кислоту (3,7 г, 30,6 ммоль) и нагревают до 100°С на масляной бане в течение 12 ч. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом (500 мл), промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл), водой (200 мл), 1 н. НС1 (200 мл) и солевым раствором (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют до получения твердого вещества коричневого цвета. Растирают с дихлорметаном и получают 3,8 г (выход 77%) 5-фенил-2оксиндола в виде твердого вещества желто-коричневого цвета.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,4 (8, Ьг, 1Н , ΝΗ), 7,57 (бб, 1=1,8 и 7,2 Гц, 1Н), 7,5-7,35 (т, 5Н), 7,29 (т, 1Н), 6,89 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 3,51 (8, 2Н, СН2СО). МС т/ζ 209 [М+].
Аналогичным образом можно получить следующие оксиндолы:
6- (3,5-Дихлорфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,46 (Ьг, 1 Н, МН), 7,64 (б, 1=1,8 Гц, 2Н), 7,57 (т, 1Н), 7,27 (т, 2Н), 7,05 (б, 1=1,1 Гц, 1Н), 3,5 (8, 2Н).
МС-ΕΣ т/ζ 277/279 [М]+.
6-(4-Бутилфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,39 (8, 1Н, КН), 7,49 (б, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,25 (б, 1=8 Гц, 3Н), 7,17 (бб, 1=1,5 и 7,8 Гц, 1Н), 6,99 (б, 1=1,5 Гц, 1Н), 3,48 (8, 2Н, СН2СО), 2,60 (1, 1=7,5 Гц, 2Н, СН2СН3), 1,57 (т, 2Н, СН2), 1,32 (т, 2Н, СН2), 0,9 (1, 1=7,5 Гц, 3Н, СН3).
6-(5-Изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,29 (8, Ьг, 1Н, ЦН), 7,16-7,21 (т, 2Н), 7,08 (б, 1=2,4 Гц, 1Н), 6,977,01 (т, 2Н), 6,89 (б, 1=0,8 Гц, 1Н), 3,71 (8, 3Н, ОСН3), 3,47 (8, 2Н, СН2СО), 2,86 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,19 (б, 1=6,8 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-ΕΣ т/ζ 281 [М]+.
6-(4-Этилфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 10,39 (8, Ьг, 1Н, НН), 7,50 (б, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,28 (б, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,25 (б, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,17 (бб, 1=1,6 и 7,5 Гц, 1Н), 6,99 (б, 1=1,6 Гц, 1Н), 3,48 (8, 2Н, СН2СО), 2,63 (ц, 1=7,6 Гц, 2Н, СН2СН3), 1,2 (1, 1=7,6 Гц, 3Н, СН2СН3).
МС-ΕΤ т/ζ 237 [М]+.
- 43 005996
6-(3 -Изопропилфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 10,37 (8, Ьг, 1Н, ΝΗ), 7,43 (т, 1Н), 7,35-7,39 (т, 1Н), 7,17-7,27 (т, 3 Н), 7,01 (й, 1=1,8 Гц, 1Н), 3,49 (8, 2Н, СН2СО), 2,95 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,24 (й, 1=6,8 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 251 [М]+.
6-(2,4-Диметоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-Й6) δ 10,28 (8, Ьг, 1Н, ΝΗ), 7,17 (т, 2Н), 6,93 (йй, 1=1,6 и 7,6 Гц, 1Н), 6,86 (й, 1=1,6 Гц, 1Н), 6,63 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 6,58 (йй, 1=2,4 и 8,5 Гц, 1Н), 3,79 (8, 3Н, ОСН3), 3,74 (8, 3Н, ОСН3), 3,45 (8, 2Н, СН2СО).
МС-Е1 т/ζ 269 [М]+.
6-Пиридин-3-ил-1,3 -дигидроиндол-2-он.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 10,51 (8, 1Н, ЫН), 8,81 (й, 1=2,5 Гц, 1Н), 8,55 (йй, 1=1,8 и 5,7 Гц, 1Н), 8 (т, 1Н), 7,45 (йй, 1=5,7 и 9,3 Гц, 1Н), 7,3 (т, 2Н), 7,05 (8, 1Н), 3,51 (8, 2Н, СН2СО).
МС-Е1 т/ζ 210 [М]+.
(3 -Хлор-4-этоксифенил)амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-4-карбоновой кислоты.
К раствору 4-карбокси-2-оксиндола (200 мг, 1,13 ммоль) и 3-хлор-4-метоксифениламина (178 мг, 1,13 ммоль) в диметилформамиде (15 мл) при комнатной температуре добавляют гексафосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (реагент ВОР, 997 мг, 2,26 ммоль). Затем добавляют 4диметиламинопиридин (206 мг, 1,69 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч. Затем ее разбавляют этилацетатом (300 мл), промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл), водой, 2 н. соляной кислотой (100 мл), водой (3x200 мл) и солевым раствором. Затем сушат над сульфатом магния и концентрируют. Остаток растирают с этилацетатом. При этом получают (3-хлор-4-метоксифенил)амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-4-карбоновой кислоты в виде твердого вещества розового цвета.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 10,50 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 10,12 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,9 (8, 1=2,5 Гц, 1Н), 7,62 (йй, 1=2,5 и 9 Гц, 1Н), 7,38 (й, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,32 (1, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,13 (й, 1=9 Гц, 1Н), 6,98 (й, 1=7,6 Гц, 1Н), 3,83 (8, 3Н, ОСН3), 3,69 (8, 2Н, СН2).
МС-Е1 т/ζ 316 [М]+.
4-Карбокси-2-оксиндол.
Раствор триметилсилилдиазометана в гексане (2 М) добавляют по каплям к раствору 2,01 г 2-хлор3-карбоксинитробензола в 20 мл метанола при комнатной температуре до прекращения выделения газа. Затем добавляют уксусную кислоту для гашения избытка триметилсилилдиазометана. Реакционную смесь упаривают в вакууме, и остаток сушат в сушильном шкафу в течение ночи. Полученный 2-хлор-3метоксикарбонилнитробензол является достаточно чистым для его использования в дальнейшем без дополнительной очистки.
Диметилмалонат (6,0 мл) добавляют в суспензию 2,1 г гидрида натрия в 15 мл ДМСО, охлажденную льдом. Реакционную смесь перемешивают при 100°С в течение 1 ч, и затем охлаждают до комнатной температуры. 2-Хлор-3-метоксикарбонилнитробензол (2,15 г) добавляют одной порцией к реакционной смеси, и затем нагревают ее при 100°С в течение 1,5 ч.
Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, выливают в ледяную воду, подкисляют до рН 5 и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают соляным раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. При этом получают 3,0 г диметил-2метоксикарбонил-6-нитрофенилмалоната.
Диметил-2-метоксикарбонил-6-нитрофенилмалонат (3,0 г) кипятят с обратным холодильником в 50 мл 6н. соляной кислоты в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют досуха, затем добавляют 20 мл этанола и 1,1 г хлорида олова (II) и опять кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтруют через целит, концентрируют и хроматографируют на силикагеле, используя в качестве элюента смесь этилацетат/гексан/уксусная кислота. При этом получают 0,65 г (выход 37%) 4карбокси-2-оксиндола в виде твердого вещества белого цвета.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 12,96 (8, Ьг, 1Н, СООН), 10,74 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,53 (й, 1=8 Гц, 1Н), 7,39 (I, 1=8 Гц, 1Н), 7,12 (й, 1=8 Гц, 1Н), 3,67 (8, 2Н).
Синтез пиррол замещенных 2-индолинонов.
Пример 1. 4-Метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота.
Имеющийся в продаже этиловый эфир 4-метил-2-пирролкарбоновой кислоты подвергают формилированию по методу А. При этом образуется этиловый эфир 5-формил-4-метил-2-пирролкарбоновой кислоты с выходом 73%. Затем это соединение гидролизуют по методу Б, что приводит к образованию 5формил-4-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (выход 58%).
Оксиндол (133 мг, 1 ммоль) конденсируют с 5-формил-4-метил-пиррол-2-карбоновой кислотой (153 мг) по методу Г. При этом получают 268 мг (выход 100%) требуемого продукта в виде твердого вещества красно-оранжевого цвета.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,84 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 12,84 (8, Ьг, 1Н, СООН), 10,98 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,82 (й, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,67 (8, 1Н, Н-винил), 7,18 (I, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,01 (I, 1=7,5 Гц, 1Н), 6,88 (й, 1=7,5 Гц,
- 44 005996
1Н), 6,71 (а, 1=2,2 Гц, 1Н), 2,32 (8, 3Н, СН3).
МС (отрицательный режим) 266,8 [М-1]+.
Пример 2. 4-Метил-5-(1-метил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота.
1-Метил-1,3-дигидроиндол-2-он (147 мг, 1 ммоль) конденсируют с 5-формил-4-метил-1Н-пиррол-2карбоновой кислотой (153 мг) по методу Г. При этом получают 250 мг (выход 86%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-а6) δ 13,82 (8, Ьг, 1 Н, ΝΗ), 12,88 (8, Ьг, 1Н), 7,83 (ά, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,65 (8, 1Н, Н-винил), 7,26 (1, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,02-7,09 (т, 2Н), 6,70 (ά, 1=2,2 Гц, 1Н), 2,32 (8, 3Н, СН3). МС т/ζ 283,0 [М+1]+.
Пример 3. Метиловый эфир 4-метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-2карбоновой кислоты.
Оксиндол (105 мг, 0.79 ммоль) конденсируют с метиловым эфиром 5-формил-4-метил-1Н-пиррол2-карбоновой кислоты (110 мг, 0,67 ммоль) по методу Д. При этом получают 153,2 мг (выход 81%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-а6) δ 13,98 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 10,97 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 7,82 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,67 (8, 1Н, Н-винил), 7,2 (ά1, 1=1,2 и 7,7 Гц, 1Н), 7,01 (ά1, 1=1,2 и 7,7 Гц, 1Н), 6,90 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 6,77 (ά, 1=2 Гц, 1Н).
МС (Е8) т/ζ 283 [М++1].
Пример 4. Этиловый эфир 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4-метил-1Н-пиррол2-карбоновой кислоты.
5-Хлор-1,3-дигидроиндол-2-он (2,22 г, 13,2 ммоль) конденсируют с этиловым эфиром 5-формил-4метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (2,43 г) по методу Д. При этом получают 4,1 г (выход 94%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-άό) δ 13,95 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 7,98 (ά, 1=2,2 Гц, 1Н, Н-4), 7,78 (8, 1Н, Нвинил), 7,18 (άά, 1=2,2 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,87 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 7,34 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-3'), 4,27 (ц, 1=7,2 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,33 (8, 3Н, СН3), 1,29 (1, 1=7,2 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 330 [М+].
Пример 5. 5-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4-метил-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота.
Смесь этилового эфира 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4-метил-1Н-пиррол-2карбоновой кислоты (1,3 г, 4 ммоль) и гидроксида калия в метаноле (25 мл) и этаноле (25 мл) кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Нерастворимые продукты удаляют фильтрованием, и затем реакционную смесь нейтрализуют с помощью 6н. соляной кислоты. При этом получают 0,876 г (выход 70%) требуемого продукта.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-άό) δ 13,80 (8, Ьг, 1Н, ЦН), 12,90 (8, Ьг, 1Н, СООН), 11,06 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,02 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-4), 7,81 (8, 1Н, Н-винил), 7,20 (άά, 1=1,8 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,89 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 6,72 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-3'), 2,35 (8, 3Н, СН3).
МС-Е1 т/ζ 302 [М+].
Пример 6. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,16 г, 0,76 ммоль) конденсируют с (3-пирролидин-1-илпропил)амидом 5-формил-4-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (0,2 г, синтезированным по методу В). При этом образуется 60 мг (выход 17%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ,3^^^6) δ 13,61 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 11,02 (8, Ьг, 1Н, ЦН), 8,42 (1, 1=5,8 Гц, 1Н, СО^СН^, 8,12 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-4), 7,78 (8, 1Н, Н-винил), 7,30 (άά, 1=1,8 и 8,4 Гц, 1Н, Н-6), 6,82 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-7), 6,77 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н, Н-3'), 3,22-3,31 (т, 2Н, СН2), 2,38-2,43 (т, 6Н, 3хСН2), 2,35 (8, 3Н, СН3), 1,62-1,71 (т, 6Н, 3хСН2).
МС-Е1 т/ζ 456 и 458 [М+-1 и М++2].
Пример 7. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,16 г, 0,75 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом-5-формил-4-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (0,2 г, синтезированным по методу В). При этом получают 30 мг (выход 8%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-άό) δ 13,61 (8, Ьг, 1Н, ИН), 11,02 (8, Ьг, 1Н, ИН), 8,40 (т, 1Н, СОХНСН-). 8,12 (ά, 1=1,5 Гц, 1Н, Н-4), 7,78 (8, 1Н, Н-винил), 7,30 (άά, 1=1,5 и 8,2 Гц, 1Н, Н-6), 6,82 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н, Н-7), 6,78 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н, Н-3'), 3,23 (т, 2Н, СН2), 2,38-2,45 (т, 6Н, СН2 и ^СН^НЮ, 2,35 (8, 3Н, СН3), 1,61 (т, 2Н, СН2), 0,93 (1, 1=7,1 Гц, 6Н, К(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 458 и 460 [М+-1 и М++2].
Пример 8. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н
- 45 005996 пиррол-2-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (212 мг, 1 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (полученным из этилового эфира пиррол-2-карбоновой кислоты, синтезированным по методам А, Б и затем В). При этом получают 162 мг (выход 38%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 13,53(8, Ьг, 1Н, ПН), 11,06 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 8,37 (1, 1Н, СОЫНСН2), 7,89 (т, 2Н), 7,32 (άά, 1=2,0 Гц, 1Н), 6,96 (8, 1Н), 6,80-6,84 (т, 2Н), 3,3 (т, 2Н, СН2), 2,45-2,55 (т, 6Н, Ы(СН2СН3)2 и СН2), 0,95 (I- 1=7,2 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 430 и 432 [М+-1 и М++2].
Пример 9. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты.
6- Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (209 мг, 1 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 182 мг (выход 42%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6) δ 13,56 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 11,06 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 8,36 (1, 1Н, СОЫНСН2), 7,77 (8, 1Н, Н-винил), 7,73 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,64 (ά, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,46 (т, 2Н), 7,32 (т, 2Н), 7,11 (8, 1Н), 6,96 (т, 1Н), 6,80 (т, 1Н), 3,31-3,32 (т, 2Н, СН2), 2,46-2,53 (т, 6Н, Ы(СН2СН3)2 и СН2), 0,96 (1, 1=6,9 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 428 [МД
Пример 10. (2-Диэтиламиноэтил)метиламид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)1 Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (212 мг, 1 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)метиламидом 5-формил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 246 мг (выход 55%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-Й6) δ 13,54(8,Ьг, 1Н, ЫН), 11,06 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,90 (т, 2Н), 7,33 (άά, 1=1,8 и 8,4 Гц, 1Н), 6,82-6,85 (т, 3Н), 3,55 (8, Ьг, 2Н, СН2), 3,25 (8, Ьг, 3Н, ЫСН3), 2,57 (1, 1=6,5 Гц, 2Н, СН2), 2,45 (т, 4Н, Ы(СН2СН3)2), 0,91 (т, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 444 и 446 [М+-1 и М++1].
Пример 11. (2-Диэтиламиноэтил)метиламид 5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)1 Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
6- Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (209 мг, 1 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)метиламидом 5-формил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 277 мг (выход 63%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 13,58 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 11,04 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,78 (8, 1Н, Н-винил),
7,73 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,64 (ά, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,46 (т, 2Н), 7,33-7,36 (т, 2Н), 7,11 (8, 1Н), 6,84 (т, 1Н), 6,78 (т, 1Н), 3,55 (8, Ьг, 2Н, СН2), 3,25 (8, Ьг, 3Н, ЫСН3), 2,58 (1, 2Н, СН2), 2,44 (т, 4Н, Ы(СН2СН3)2), 0,92 (т, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
Пример 12. (3-Диэтиламинопропил)амид 3-метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты.
Оксиндол (66,5 мг, 0,5 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-3-метил1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (который получают из этилового эфира 3-формил-3-метил-1Н-пиррол2-карбоновой кислоты по методам Б и В). При этом получают 39 мг (выход 21%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,34 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 10,88 (8, Ьг, 1 Н, ЫН), 7,62-7,67 (т, 3Н), 7,17 (т, 1Н), 6,99 (т, 1Н), 6,87 (ά, 1=7,6, 1Н), 6,63 (ά, 1=1 Гц, 1Н), 3,26-3,32 (т, 2Н, СН2), 2,41-2,48 (т, 6Н, СН2 и Ы(СН2СН3)2), 2,29 (8, 3Н, СН3), 1,63 (т, 2Н, СН2), 0,93 (1, 1=7,2 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 380 [МД
Пример 13. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (106 мг, 0,5 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 35 мг (выход 15%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,35(8, Ьг, 1Н, ЫН), 11,00 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,89 (ά, 1=1,9 Гц, 1Н, Н-4), 7,80 (8, 1Н, Н-винил), 7,74 (1, 1=5,3 Гц, 1Н, СОЫНСН2), 7,31 (άά, 1=1,9 и 8,4 Гц, 1Н, Н-6), 6,83 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-7), 6,63 (8, 1Н, Н-3'), 3,26 (т, 2Н, СН2), 2,41-2,48 (т, 6Н, СН2 и Ы(СН2СН3)2), 2,29 (8, 3Н, СН3), 1,63 (т, 2Н, СН2), 0,93 (1, 1=7,1 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 458 и 460 [М+-1 и М++1].
Пример 14. (3-Диэтиламинопропил)амид 3-метил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
6- Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (105 мг, 0,5 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил )амидом 5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 67,8 мг (выход 30%) требуемого соединения.
- 46 005996 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6) δ 13,37 (к, Ьг, 1Н, Ν^, 11,02 (к, Ьг, 1Н, N4), 7,23-7,73 (т, 11Н), 3,29 (т, 2Н, СН2), 2,41-2,48 (т, 6Н, СН2 и ^СН2СН3)2), 2,29 (к, 3Н, СН3), 1,64 (т, 2Н, СН2), 0,94 (ί, 1=7,0 Гц, 6Н, ^СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 456 [М*].
Пример 15. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-метокси-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5- Метокси-1,3-дигидроиндол-2-он (82,5 мг, 0,5 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил) амидом 5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 80 мг (выход 39%) требуемого соединения.
!Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6) δ 13,45 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 10,70 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,68-7,70 (т, 2Н), 7,32 (й, 1=1,8 Гц, 1Н), 6,72-6,79 (т, 2Н), 6,60 (к, 1Н), 3,73 (к, 3Н, ОСН3), 3,28 (т, 2Н, СН2), 2,41-2,48 (т, 6Н, СН2 и ^СН2СН3)2), 2,29 (к, 3Н, СН3), 1,63 (т, 2Н, СН2), 0,93 (ί, 1=7,0 Гц, 6Н, ^СН2СН3)2).
МС т/ζ 410 [М*].
Пример 16. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(6-метокси-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
6- Метокси-1,3-дигидроиндол-2-он (82,5 мг, 0,5 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил) амидом 5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты. При этом получают 63 мг (выход 31%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6) δ 13,22 (к, Ьг, 1Н, Ν^, 10,86 (к, Ьг, 1Н, Ν^, 7,39-7,63 и 6,37-6,55 (т, 6Н), 3,73 (к, 3Н, ОСН3), 3,3 (т, 2Н, СН2), 2,45 (т, 6Н, СН2 и ^СН2СН3)2), 2,28 (к, 3Н, СН3), 1,63 (т, 2Н, СН2), 0,93 (т, 6Н, ^СН2СН3)2).
МС т/ζ 410 [М*].
Пример 17. (2-Диэтиламиноэтил)амид 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
Этиловый эфир 4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты (см. статью Мау, Эошйй А., ЬакИ, Тппо111у Ό., 1. Огд. СИет., 1992, 57:18, 4820-4828) формилируют по методам А и Б, при этом получают 3-формил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновую кислоту.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (1,43 г, 6,8 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 3формил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты (1,97 г). При этом получают 2,2 г (выход 67%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-Й6) δ 13,47 (к, 1Н, ЯН), 11,00 (к, 1Н, ЯН), 8,0 (й, 1Н, Ν^, 7,70 (к, 1Н, СН), 7,28 (йй, 1=2,1 и 8,2 Гц, 1Н, АгН), 7,16 (т, 1Н, АгН), 6,8 (й, 1=8,3 Гц, 1Н, АгН), 3,3 (к, 2Н, СО\11), 2,5 (т, 6Н, 3χΝ^2), 2,78 (т, Ьг 2Н, пиррол СН2), 2,72 (т, Ьг 2Н, пиррол СН2), 1,7 (т, Ьг, 4Н, ^СН^НДД, 1,74 (к, Ьг, 4Н, СН2СН2СН2СН2), 0,96 (ί, 1=7,4 Гц, 6Н, ^СН^НДД.
МС-Е1 т/ζ 484 и 486 [М*-1 и М*+1].
Пример 18. (3-Диэтиламинопропил)амид 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-
4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (20 мг, 0,1 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 3формил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты (30 мг). При этом получают 33 мг (выход 46%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 10,9 (к, 1Н, КН), 8,0 (т, 1Н, КН), 7,68 (т, 1Н, АгН), 7,4 (т, 1Н, АгН), 7,29 (й, 1=1,9 и 8,5 Гц, 1Н, АгН), 6,8 (й, 1=8 Гц, 1Н, АгН), 2,7 (т, Ьг, 4Н, 2χΝ^2), 2,4 (т, 8Н, 4χΝ^2), 1,7 (т, Ьг, 4Н, ^СЩСНДД, 1,6 (т, Ьг, 2Н, СН2СН2СН2), 0,93 (ί, 1=7,4 Гц, 6Н, ^СН^НДД.
МС-Е1 т/ζ 499 и 501 [М* и М++2].
Пример 19. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 3-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-
4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (80 мг, 0,4 ммоль) конденсируют с (3-пирролидин-1-илпропил)амидом 3-формил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты (120 мг). При этом получают 43 мг (выход 22%) требуемого соединения в виде твердого вещества рыжевато-коричневого цвета.
!Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,4 (к, 1Н, ЯН), 10,9 (к, 1Н, ЯН), 8,0 (т, 1Н, ЯН), 7,69 (т, 1Н, АгН), 7,49 (т, 1Н, АгН), 7,28 (й, 1=1,7 и 7,8 Гц, 1Н, АгН), 6,8 (й, 1=8 Гц, 1Н, АгН), 3,3 (т, Ьг, 2Н, 2χΝ^2), 2,8 (т, 4Н, 2хпиррол СН2), 2,5 (т, Ьг, 4Н, ^СЩСНДД, 1,6 (т, Ьг, 8Н, 2хпиррол СН2СН2, СН2СН2СН2 и СО^СЩ).
МС-Е1 т/ζ 497 и 499 [М* и М*+2].
Пример 20. (2-Диэтиламиноэтил)амид 3-(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-
4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
6- Пиридин-3-ил-1,3-дигидроиндол-2-он (60 мг, 0,4 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил) амидом 3-формил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты (80 мг). При этом получают 50 мг (выход 38%) требуемого соединения в виде твердого вещества красноватого цвета.
!Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,4(5, 1Н, НН), 11 (к, 1Н, НН), 8,9 (й, 1Н, НН), 8,7 (йй, 1Н, АгН), 8,1 (йй, 1Н, АгН), 7,9 (й, 1Н, АгН), 7,6 (к, 1Н, СН), 7,5 (йй, 1Н, АгН), 7,3 (йй, 1Н, АгН), 7,1 (т, 2Н, АгН), 3,35
- 47 005996 (т, 2Н, СОNНСН2), 2,8 (т, 4Н, 2хпиррол СН2), 2,5 (т, Ьг 6Н, ^СН2СН3)2 и ЫСН2), 1,75 (8, Ьг, 4Н, 2хпиррол СН2СН2), 0,9 (1, 6Н, К(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 484 |М'].
Пример 21. (3-Диэтиламинопропил)амид 4-бензоил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
К смеси бензоил хлорида (1 экв.) и хлорида алюминия (1 экв.) в дихлорэтане при 0°С добавляют этиловый эфир 3,5-диметил-2-пирролкарбоновой кислоты (1 экв.). Реакционную смесь перемешивают при 80°С в течение 4 ч. Затем ее экстрагируют этилацетатом (ЕЮАс) и Н2О. Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, сушат и концентрируют. При этом получают 4-бензоил-3,5-диметил-1Н-пиррол-2-карбоновую кислоту (выход 51%).
Смесь этилового эфира 4-бензоил-3,5-диметил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (4,13 г, 15,2 ммоль) и церий аммоний нитрата (33 г, 4 экв.) в 50 мл смеси тетрагидрофуран (ТГФ)/уксусная кислота (УК)/Н2О, 1:1:1 кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Затем реакционную смесь охлаждают, экстрагируют ЕЮАс и подщелачивают до рН 9 с помощью карбоната натрия. Органический слой промывают солевым раствором, сушат (Мд8О4) и концентрируют с последующей колоночной хроматографией. При этом получают 3,25 г (выход 75%) этилового эфира 4-бензоил-5-формил-3-метил-1Нпиррол-2-карбоновой кислоты в виде твердого вещества желтого цвета.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с 4-бензоил-5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2карбоновой кислотой по методу Г. При этом получают 4-бензоил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновую кислоту.
Затем указанная кислота взаимодействует с ^№диэтил-1,3-пропандиамином по методу В, при этом получают требуемое соединение.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-Й6) δ 7,96 (т, 1Н, СОЫНСН2), 7,76 (ά, 1=7,0 Гц, 2Н), 7,68 (1, 1Н), 7,56 (т, 2Н), 7,40 (8, 2Н), 7,33 (άά, 1=1,6 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,84 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,33 (т, 2Н, СН2), 2,42-2,46 (т, 6Н, 3хСН2), 2,10 (8, 3Н, СН3), 1,65 (т, 2Н, СН2), 0,94 (1, 1=7,0 Гц, 6Н, ^СН2СН3)2).
МС, Электронный удар т/ζ 564 |М' + 1|.
Пример 22. (3-Морфолин-4-ил-пропил)амид 4-бензоил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил )-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 14,10 (8, 1Н, ΝΉ), 11,14 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,92 (т, 1Н, СО^СН2), 7,75 (т, 2Н), 7,69 (1, 1Н), 7,56 (т, 2Н), 7,42 (т, 2Н), 7,33 (άά, 1=1,9 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,85 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,56 (т, 4Н, 2хСН2), 3,33 (т, 2Н, СН2), 2,35 (т, 6Н, 3хСН2), 2,10 (8, 3Н, СН3), 1,70 (т, 2Н, СН2).
Пример 23. (3-Пирролидин-1-илпропил)амид 4-бензоил-3-метил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 14,18 (8, 1Н, ΝΉ), 11,14 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,01 (т, 1Н, СО^СН2),
7.74 (т, 1Н), 7,67 (т, 1Н), 7,55 (т, 1Н), 7,32 (8, 1Н, Н-винил), 7,17 (т, 1Н), 6,92 (т, 1Н), 3,36 (т, 2Н, СН2), 2,44 (т, 6Н, 3хСН2), 2,11 (8, 3Н, СН3), 1,65-1,75 (т, 6Н, 3хСН2).
МС, Электронный удар т/ζ 482 |М'|.
Пример 24. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 14,01 (8, 1Н, ЯН), 11,18 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,98 (т, 1Н, СОХНСНА
7.75 (т, 2Н), 7,68 (т, 1Н), 7,55 (т, 2Н), 7,40 (т, 2Н), 7,33 (άά, 1=2,0 и 8,2 Гц, 1Н, Н-6), 6,84 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н, Н-7), 3,34 (т, 2Н, СН2), 2,42-2,47 (т, 6Н, 3хСН2), 2,09 (8, 3Н, СН3), 1,70 (т, 2Н, СН2), 1,64 (т, 4Н, 2хСН2).
Пример 25. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил-3-метил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 14,15 (8, 1Н, Ν^, 11,16 (8, Ьг, 1Н, МН), 7,98 (т, 1Н, СОКНСН), 7,77 (ά, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,69 (т, 1Н), 7,53-7,63 (т, 4Н), 7,44 (т, 2Н), 7,33-7,37 (т, 2Н), 7,24 (8, 2Н), 7,12 (8, 1Н), 3,36 (т, 2Н, СН2), 2,43-2,48 (т, 6Н, 3хСН2), 2,12 (8, 3Н, СН3), 1,74 (т, 2Н, СН2), 1,69 (т, 4Н, 2хСН2).
МС, Электронный удар т/ζ 558 |М'|.
Пример 26. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил-5-(6-метокси-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,99 (8, 1Н, ЫН), 11,05 (8, Ьг, 1Н, НН), 7,93 (т, 1Н, СОЫНСН2), 7,72 (т, 2Н), 7,65 (т, 1Н), 7,54 (т, 2Н), 7,15 (8, 1Н, Н-винил), 7,04 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-4), 6,51 (άά, 1=2,3 и 8,4 Гц, 1Н, Н-5), 6,44 (ά, 1=2,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,74 (8, 3Н, ОСН3), 3,35 (т, 2Н, СН2), 2,42-2,46 (т, 6Н, 3хСН2), 2,10 (8, 3Н, СН3), 1,12 (т, 2Н, СН2), 1,65 (т, 4Н, 2хСН2).
МС, Электронный удар т/ζ 512 [ М' ].
Пример 27. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил-5-(5-метокси-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 14,24 (8, 1Н, №), 10,90 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,97 (т, 1Н, ^^^),
7,75 (ά, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,69 (т, 1Н), 7,56 (т, 2Н), 7,24 (8, 1Н, Н-винил), 6,79 (т, 2Н), 6,66 (т, 1Н), 3,67 (8,
- 48 005996
3Н, ОСН3), 3,34 (т, 2Н, СН2), 2,43-2,48 (т, 6Н, 3хСН2), 2,14 (к, 3Н, СН3), 1,71 (т, 2Н, СН2), 1,66 (т, 4Н, 2хСН2).
МС, Электронный удар т/ζ 512 |М'|.
Пример 28. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-бензоил-5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 14,20 (к, 1Н, ΝΉ), 11,14 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,03 (т, 1Н, СО^СН2),
7,75 (т, 2Н), 7,68 (т, 1Н), 7,55 (т, 2Н), 7,38 (к, 1Н, Н-винил), 7,08 (т, 1Н), 7,01 (т, 1Н), 6,87 (т, 1Н), 3,34 (т, 2Н, СН2), 2,42-2,48 (т, 6Н, 3хСН2), 2,09 (к, 3Н, СН3), 1,70 (т, 2Н, СН2), 1,65 (т, 4Н, 2хСН2).
МС, Электронный удар т/ζ 500 |М'|.
Пример 29. (3-Диэтиламинопропил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 4-ацетил-5-формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (который получают из этилового эфира 4-ацетил-5формил-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты по методам Б и затем В).
При этом получают требуемое соединение.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 14,19 (к, 1Н, ΝΉ), 11,19 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,15 (т, 1Н,СО^СН2), 8,11 (к, 1Н, Н-винил), 7,72 (б, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-4), 7,38 (бб, 1=1,8 и 8,2 Гц, 1Н, Н-6), 6,87 (б, 1=8,2 Гц, 1Н, Н-7), 3,27 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,46 (т, 9Н, СН3 и 3хСН2), 1,64 (т, 2Н, СН2), 0,93 (ΐ, 1=7,1 Гц, 6Н, ЖСН2СН3)2).
Пример 30. (3-Пирролидин-1-ил-пропил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 8,14 (т, 1Н, СОБ1НСН2), 8,10 (к, 1Н, Н-винил), 7,70 (б, 1Н, Н-4), 7,36 (бб, 1=1,6 и 8,1 Гц, 1Н, Н-6), 6,85 (б, 1=8,1 Гц, 1Н, Н-7), 3,32 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,44 (к, 3Н, СН3), 2,35-2,48 (т, 6Н, 3хСН3), 1,65-1,71 (т, 6Н, 3хСН2).
МС т/ζ 499 и 501 [М+] и [М++2].
Пример 31. (3-Морфолин-4-ил-пропил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 14,20 (к, 1Н, ΝΉ), 11,26 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,09 (т, 2Н, Н-винил и СОМ 1С1Ь), 7,73 (б, 1=1,5 Гц, 1Н, Н-4), 7,38 (бб, 1=1,5 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,87 (б, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,55 (т, 4Н, 2хСН2), 3,26 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,44 (к, 3Н, СН3), 2,35 (т, 6Н, 3хСН3), 1,68 (т, 2Н, СН2).
МС^ т/ζ 514 и 516 [М+-1] и [М++2].
Пример 32. (3-Гидроксипропил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 14,17 (к, 1Н, ΝΉ), 11,25 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,10 (к, 1Н, Н-винил), 8,03 (т, 1Н, СОМ 1С1 ГУ 7,71 (к, Ьг, 1Н, Н-4), 7,37 (б, Ьг, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-6), 6,87 (б, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-7), 4,51 (к, Ьг, 1Н, ОН), 3,51 (к, Ьг, 2Н, СН2), 3,36 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,43 (к, 3Н, СН3), 1,70 (т, 2Н, СН2).
МС^ т/ζ 445 и 447 [М+-1] и [М+ +1].
Пример 34. (2-Морфолин-4-ил-этил)амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 14,19 (к, 1Н, ΝΉ), 11,14 (к, Ьг, 1Н, ΝΉ), 8,10 (к, 1Н, Н-винил), 7,84 (т, 1Н, ^N40^), 7,71 (б, 1=1,8 Гц, 1Н, Н-4), 7,38 (бб, 1=1,8 и 8,2 Гц, 1Н, Н-6), 6,87 (б, 1=8,2 Гц, 1Н, Н7), 3,58 (т, 4Н, 2хСН2), 3,40 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,45 (т, СН3 и СН2).
МС^ т/ζ 500 и 502 [М+-1] и [М++1].
Пример 3 5. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид-4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 14,17 (к, 1Н, ΝΉ), 11,23 (к, 1Н, ΝΉ), 8,11 (к, 1Н, Н-винил), 7,91 (т, 1Н, СОМ 1С1 СУ 7,73 (б, 1=1,9 Гц, 1Н, Н-4), 7,39 (бб, 1=1,9 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,88 (б, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,40 (т, 2Н, СН2), 2,62 (т, 2Н, СН2), 2,57 (к, 3Н, СН3СО), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,44 (к, 3Н, СН3), 1,69 (т, 4Н, 2хСН2).
Пример 36. [2-(4-Гидроксифенил)этил]амид 4-ацетил-5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-3 -метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 14,21 (к, 1Н, ΝΉ), 11,18 (к, 1Н, ОН), 9,09 (к, 1Н, Ν^, 8,06-8,10 (т, 2Н), 7,73 (к, 1Н), 7,38 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,04 (б, 1=7,1 Гц, 2Н), 6,88 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,67 (б, 1=7,1 Гц, 2Н), 3,42 (т, 2Н, СН2), 2,72 (т, 2Н, СН2), 2,56 (к, 3Н, СН3СО), 2,37 (к, 3Н, СН3).
МС^ т/ζ 507 и 509 [М+-1] и [М++1].
Пример 37. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь солянокислой соли 2-аминоацетофенона (1 экв.), этилизобутирилацетата (1,2 экв.) и ацетата натрия (2,4 экв.) в Н2О перемешивают при 100°С в течение 18 ч и затем охлаждают до комнатной темпе
- 49 005996 ратуры. Водный слой декантируют, а масляный растворяют в этилацетате. Затем его промывают водой и солевым раствором, сушат. При этом получают этиловый эфир 2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (выход 93%) в виде масла красно-коричневого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 11,21 (8, Ьг, 1Н, ΝΗ), 7,14-7,27 (т, 5Н), 6,70 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 4,02 (Я, 1=7,1 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 3,65 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,22 (ά, 1=7,5 Гц, 6Н, СН(СН3)2), 1,04 (ΐ, 1=7,1 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 257 [М+].
Полученный пиррол формилируют по методу А. При этом получают этиловый эфир 5-формил-2изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (выход 41%) в виде твердого вещества красноватого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 12,35 (8, Ьг, 1Н, ЯН), 9,14 (8, 1Н, СНО), 7,36 (8, 5Н), 3,96 (ц, 1=7,1 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 3,74 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,29 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, СН(СН3)2), 0,9 (ΐ, 1=7,1 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 285 [М+].
Эфир пирролкарбоновой кислоты гидролизуют по методу Б. При этом получают 5-формил-2изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (выход 57%) в виде твердого вещества бежевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 12,28 (8, Ьг, 1Н, СООН), 12,02 (8, Ьг, 1Н, ЯН), 9,10 (8, 1Н, СНО), 7,35 (8, 5Н), 3,81 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,28 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 257 [М+].
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (120 мг, 0,31 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (полученным по методу В). При этом получают 120 мг (выход 71%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 14,23(8, Ьг, 1Н, ЯН), 11,08 (8, Ьг, 1Н, ЯН), 7,38-7,55 (т, 7Н, Аг-Н и СОХ11(41,+ 7,30 (8, 1Н, Н-винил), 7,26 (άά, 1=1,8 и 7,8 Гц, 1Н), 6,85 (ά, 1=8,7 Гц, 1Н), 3,36 (т, 1Н, СН(СН3)2), 3,07 (т, 2Н, СН2), 2,34 (ц, 1=7,1 Гц, 4Н, ^СН2СН3)2), 2,22 (ΐ, 1=6,9 Гц, 2Н, СН2), 1,40 (т, 2Н, СН2), 1,31 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, СН(СН3)2), 0,86 (ΐ, 1=7,1 Гц, 6Н, ^СН2СН3)2).
МС т/ζ 565,1 [М++1].
Пример 38. (3-Пирролидин-1-илпропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-(5-Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (127 мг, 0,28 ммоль) конденсируют с 3-пирролидин-1-илпропиламином (43 мг, 0,336 ммоль). При этом получают 140 мг (выход 66%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 14,40 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,38-7,47 (т, 7Н), 7,23-7,27 (т, 2Н), 6,84 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,36 (т, 1Н, СН(СН3)2), 3,08 (т, 2Н, СН2), 2,30 (т, 4Н, 2хСН2), 2,20 (ΐ, 1=7,0 Гц, 2Н, СН2), 1,62 (т, 4Н, 2хСН2), 1,42 (ΐ, 1=7,0 Гц, 2Н, СН2), 1,31 (ά, 1=7,2 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 560 и 562 [М+-1 и М++1].
Пример 39. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (57 мг, 0,27 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (120 мг). При этом получают 78 мг (выход 53%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 14,23 (8.Ьг, 1Н, МН), 11,09 (8, Ьг, 1Н, МН), 7,38-7,51 (т, 6Н), 7,257,28 (т, 2Н), 7,19 (ΐ, 1Н, СОИНСН2), 6,85 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 3,43 (т, 1Н, СН(СН3)2), 3,11 (т, 2Н, СН2), 2,28-2,39 (т, 6Н, И(СН2СН3)2 и СН2), 1,31 (ά, 1=6,9 Гц, СН(СН3)2), 0,85 (ΐ, 1=7,0 Гц, 6Н, И(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 548 и 550 [М+-1 и М++1].
Пример 40. [3-(4-Метилпиперазин-1-ил)пропил]амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (53 мг, 0.25 ммоль) конденсируют с [3-(4-метилпиперазин-1ил)пропил]амидом 5-формил-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (300 мг). При этом получают 65 мг требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 14,22 (8, Ьг, 1Н, ИН), 11,08 (8, Ьг, 1Н, ИН), 7,23-7,50 (т, 9Н), 6,85 (ά, 1=8,7 Гц, 1Н), 3,37 (т, 1Н, СН(СН3)2), 3,05 (т, 2Н, СН2), 2,24 (т, 8Н, 4хСН2), 2,11 (т, 5Н, СН2 и СН3), 1,42 (т, 2Н, СН2), 1,31 (ά, 1=7,2 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 589 и 591 [М+-1 и М++1].
Пример 41. 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-изопропил-4-фенил-1Н-пиррол-3карбоновая кислота.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (170 мг, 0,8 ммоль) конденсируют с 5-формил-2-изопропил-4-фенил1Н-пиррол-3-карбоновой кислотой (205 мг) по методу Г. При этом получают 210 мг (выход 58%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР(300 МГц, ДМСО-46) δ 14,31 (8, Ьг, 1Н, ИН), 11,16 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 7,26-7,44 (т, 7Н), 7,11 (8,
- 50 005996
1Н, Н-винил), 6,85 (а, 1=7,8 Гц, 1Н), 3,78 (т, 1Н, СН(СН3)2), 1,34 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 452 [М+1].
Пример 42. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (44 мг, 0,21 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (70 мг, полученным аналогично изопропиловому аналогу, как описано выше). При этом получают 0,03 г (выход 27%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-а6) δ 13,87(5, Ьг, 1Н, ΝΉ), 11,11 (5, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,36-7,51 (т, 6Н), 7,26 (άά, 1=1,8 и 8,1 Гц, 1Н), 7,2 (5, 1Н, Н-винил), 7,09 (т, 1Н, СОЯНСН2), 6,83 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,17 (т, 2Н, ЫСН2), 2,48 (т, СН3), 2,29-2,35 (т, 6Н, 3хЫСН2), 1,59 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/ζ 518 и 520 [М+-1 и М++1].
Пример 43. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-[6-(2-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил]-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- (2-Метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (50 мг, 0,21 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1илэтил)амидом 5-формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (70 мг). При этом получают 0,04 г (выход 35%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-а6) δ 13,82 (5, Ьг, 1Н, ЯН), 11,02 (5, Ьг, 1Н, ЯН), 7,48 (т, 2Н), 7,43 (т, 1Н), 7,38 (т, 2Н), 7,32 (т, 1Н), 7,24 (т, 2Н), 7,16 (5, 1Н, Н-винил), 7,08 (т, 2Н), 7,03 (т, 1Н), 7,0 (т, 2Н), 3,74 (5, 3Н, ОСН3), 3,19 (т, 2Н, ЫСН2), 2,49 (т, СН3), 2,32-2,38 (т, 6Н, 3хЫСН2), 1,59 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/ζ 546 [М+].
Пример 44. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (46 мг, 0,22 ммоль) конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (65 мг). При этом получают 60 мг (выход 55%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
1Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-а6) δ 13,86 (5,Ьг, 1Н, МН), 11,09 (5, Ьг, 1Н, ЫН), 7,47-7,49 (т, 2Н), 7,387,41 (т, 4Н), 7,26 (άά, 1=2,2 и 8,3 Гц, 1Н), 7,21 (5, 1Н, Н-винил), 7,04 (т, 1Н, СОБНСН2), 6,77 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н), 3,15 (т, 2Н, НСН2), 2,48 (т, СН3), 2,16 (ΐ, 1=6,8 Гц, 2Н, 3хНСН2), 2,02 (5, 6Н, 2хНСН3).
МС т/ζ 493 и 494,8 [М+ и М++2].
Пример 45. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-[6-(2-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- (2-Метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (53 мг, 0,22 ммоль) конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5-формил-2-метил-4-фенил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (65 мг). При этом получают 0,05 г (выход 44%) требуемого соединения в виде смолы оранжевого цвета.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 13,82(5, Ьг, 1Н, ИН), 11,02 (5, Ьг, 1Н, КН), 7,37-7,52 (т, 5Н), 7,32 (т, 1Н), 7,22-7,27 (т, 2Н), 7,16 (5, 1Н), 7,08 (т, 2Н), 7,03 (т, 1Н), 7,0 (т, 2Н), 3,74 (5, 3Н, ОСН3), 3,15 (т, 2Н, БГСН2), 2,49 (т, СН3), 2,16 (ΐ, 1=6,5 Гц, 2Н, БГСН2), 2,02 (5, 6Н, 2хНСН3).
МС т/ζ 521 [М++1].
Пример 46. Этиловый эфир 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2-метил-4-фенил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (60 мг, 0,29 ммоль) конденсируют с этиловым эфиром 5-формил-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (75 мг). При этом получают 78 мг (выход 60%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-άό) δ 14,01 (5, Ьг, 1Н, НН), 11,13 (5, Ьг, 1Н, НН), 7,42-7,46 (т, 3Н), 7,277,34 (т, 4Н), 7,12 (5, 1Н), 6,84 (άά, 1=2,2 и 8,3 Гц, 1Н), 3,99-4,03 (т, 2Н, ОСН2СН3), 2,61 (5, 3Н, СН3), 0,981,03 (т, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 450 и 452 [М+-1 и М++1].
Пример 47. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,47 г, 2,2 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2-метил-4-фенил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,75 г). При этом получают 0,11 г (выход 42%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, Д^СО^) δ 13,86 (5, Ьг, 1Н, Ν^, 7,42-7,46 (т, 3Н), 7,37-7,50 (т, 7Н), 7,24-7,28 (т, 2Н), 6,83 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,09 (т, 2Н, БГСН2), 2,45 (5, 3Н, СН3), 2,38 (ц, 1=7,1 Гц, 4Н, 2.\ХСН;СН;). 2,26 (ΐ, 1=6,9 Гц, 2Н, ΝΟ^), 1,42 (т, 2Н, БГСН2), 0,87 (ΐ, 1=7,1 Гц, 6Н, 2х1\[СН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 535,0 и 537 [М+ и М++2].
Пример 48. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь трет-бутил-3-оксобутирата и нитрита натрия (1 экв.) в уксусной кислоте перемешивают при комнатной температуре. При этом получают трет-бутил-2-гидроксимино-3-оксобутират.
- 51 005996
Этил-3-оксобутират (1 экв.), порошкообразный цинк (3.8 экв.) и полученный неочищенный третбутил-2-гидроксимино-3-оксобутират в уксусной кислоте перемешивают при 60°С в течение 1 ч. Реакционную смесь выливают в Н2О и фильтруют, собирают фильтрат. При этом получают 2-трет-бутилоксикарбонил-3,5-диметил-4-этоксикарбонилпиррол (выход 65%).
Смесь 2-трет-бутилоксикарбонил-3,5-диметил-4-этоксикарбонилпиррола и триэтилортоформиата (1,5 экв.) в трифторуксусной кислоте перемешивают при 15°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрируют и остаток очищают. При этом получают 2,4-диметил-3-этоксикарбонил-5-формилпиррол (выход 64%) в виде игольчатых кристаллов желтого цвета.
2,4-Диметил-3-этоксикарбонил-5-формилпиррол гидролизуют по методу Б.
При этом получают 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (выход 90%).
Ή ЯМР (360 МГц, ,ΠΜ№-66) δ 12 (к, Ьг, 2Н, ΝΗ и СО2Н), 9,58 (к, 1Н, СНО), 2,44 (к, 3Н, СН3), 2,40 (к, 3Н, СН3).
МС т/ζ 267 |М'|.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,17 г, 0,8 ммоль) конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,2 г, полученным по методу В) с использованием метода Б. При этом получают 0,3 г (выход 83%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-66) δ 13,60 (к, Ьг, 1Н, ΝΗ), 10,94 (к, Ьг, 1Н, ΝΗ), 8,07 (б, 1=1,8 Гц, 1Н, Н4), 7,75 (к, 1Н, Н-винил), 7,44 (1, 1=5,2 Гц, 1Н, СО№НСН2),7,24 (бб, 1=1,8 и 8,4 Гц, 1Н, Н-6), 6,82 (б, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-7), 3,26-3,33 (т, 2Н, №СН2), 2,42 (к, 3Н, СН3), 2,41 (к, 3Н, СН3), 2,38 (1, 1=6,7 Гц, 2Н, №СН2), 2,18 (к, 6Н, №(СН3)2).
ΜΌ-ΕΙ т/ζ 430 и 432 [Μ+-1 и М++1].
Пример 49. (2-Диметиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-ил иденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (0,17 г, 0,8 ммоль) конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,2 г). При этом получают 0,13 г (выход 36%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ЖСО^) δ 13,59 (к,Ьг, 1Н, №Н), 10,93 (к, Ьг, 1Н, №Н), 7,85 (б, 1=7,92 Гц, 1Н, Н4), 7,63-7,65 (т, 3Н), 7,40-7,47 (т, 3Н), 7,32-7,36 (т, 1Н, Аг-Н), 7,30 (бб, 1=1,6 и 7,9 Гц, 1Н, Н-5), 7,11 (б, 1=1,6 Гц, 1Н, Н-7), 3,28-3,34 (т, 2Н, №СН2), 2,43 (к, 3Н, СН3), 2,41 (к, 3Н, СН3), 2,38 (1, 1=6,8 Гц, 2Н, №СН2), 2,18 (к, 6Н, №(СН3)2).
ΜΌ-ΕΙ т/ζ 428 [М4].
Пример 50. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Хлор-1,3-дигидроиндол-2-он (0,1 г, 0,6 ммоль) конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,15 г). При этом получают 0,22 г (выход 90%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,61 (к, Ьг, 1Н, №Н), 10,98 (к, Ьг, 1Н, №Н), 7,96 (б, 1=2,0 Гц, 1Н, Н4), 7,75 (к, 1Н, Н-винил), 7,50 (1, 1=5,5 Гц, 1Н, СО№НСН2), 7,12 (бб, 1=2,0 и 8,3 Гц, 1Н, Н-6), 6,86 (б, 1=8,3 Гц, 1Н, Н-7), 3,26-3,31 (т, 2Н, №СН2), 2,42 (к, 3Н, СН3), 2,40 (к, 3Н, СН3), 2,36 (1, 1=6,6 Гц, 2Н, №СН2), 2,17 (к, 6Н, №(СНэ)2).
ΜΟ-ΕΙ т/ζ 386 |\1'|.
Пример 51. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,17 г, 0,8 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,2 г). При этом получают 0,09 г (выход 26%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 13,61 (к, Ьг, 1Н, №Н), 10,98 (к, Ьг, 1Н, №Н), 8,09 (б, 1=1,7 Гц, 1Н, Н4), 7,76 (к, 1Н, Н-винил), 7,42 (1, 1=5,5 Гц, 1Н, СО№НСН2), 7,24 (бб, 1=1,7 и 8,0 Гц, 1Н, Н-6), 6,82 (б, 1=8,0 Гц, 1Н, Н-7), 3,23-3,32 (т, 2Н, №СН2), 2,46-2,55 (т, 6Н, 3х№СН2), 2,43 (к, 3Н, СН3), 2,42 (к, 3Н, СН3), 0,96 (1, 1=7,2 Гц, 6Н, 2х№СН2СН3).
ΜΌ-ΕΙ т/ζ 458 и 460 [М+-1 и М++1].
Пример 52. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,09 г, 0,4 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1 -ил-этил )амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,1 г). При этом получают 0,14 г (выход 81%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,61 (к, Ьг, 1Н, №Н), 10,98 (к, Ьг, 1Н, №Н), 8,09 (б, 1=1,9 Гц, 1Н, Н4), 7,76 (к, 1Н, Н-винил), 7,53 (1, 1=5,5 Гц, 1Н, СО№НСН2), 7,24 (бб, 1=1,9 и 8,5 Гц, 1Н, Н-6), 6,81 (б, 1=8,5 Гц, 1Н, Н-7), 3,29-3,35 (т, 2Н, №СН2), 2,54 (1, 1=6,9 Гц, 2Н, №СН2), 2,47 (т, пик ДМСО), 2,42 (к, 3Н, СН3), 2,40 (к, 3Н, СН3), 1,66-1,69 (т, 4Н, 2хСН2).
- 52 005996
МС-ΕΤ т/ζ 456 и 458 [М+-1 и М++1].
Пример 53. (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5- Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,09 г, 0,4 ммоль) конденсируют с (3-имидазол-1-илпропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,1 г). При этом получают 0,1 г (выход 59%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,63 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 10,99 (8, Ьг, 1Н, ЦН), 8,09 (б, 1=2,2 Гц, 1Н, Н4), 7,77 (8, 1Н, Н-винил), 7,71 (1, 1=5,7 Гц, 1Н, (ШТСНД 7,65 (8, 1Н, Аг-Н), 7,25 (бб, 1=2,2 и 8,4 Гц, 1Н, Н-6), 7,20 (8, 1Н, Аг-Н), 6,89 (8, 1Н, Аг-Н), 6,81 (б, 1=8,4 Гц, 1Н, Н-7), 4,02 (1, 1=6,7 Гц, 2Н, Ν№2), 3,18 (ц, 1=6,7 Гц, 2Н, Ν№2), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 1,93 (т, 2Н, СН2).
МС-ΕΊ т/ζ 467 и 469 [М+-1 и М++1].
Пример 54. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-[6-(2-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- (2-Метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (30 мг, 0,13 ммоль) конденсируют с (2- диметиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (30 мг). При этом получают 0,06 г (выход 100%) требуемого соединения в виде смолы желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,60 (8, бг, 1Н, ΝΚ), 10,89 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 7,79 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,63 (8, 1Н, Н-винил), 7,46 (1, 1=5,5 Гц, 1Н, СОЖН), 7,28-7,35 (т, 2Н), 6,99-7,11 (т, 4Н), 3,76 (8, 3Н, ОСН3), 3,27-3,31 (т, 2Н, ЦСН), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,39 (8, 3Н, СН3), 2,37 (т, 2Н, ЦСН), 2,18 (8, 6Н, ЦССНэ),).
МС-ΕΊ т/ζ 458 [М+].
Пример 55. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-[6-(3-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-(3-Метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (30 мг, 0,13 ммоль) конденсируют с (2диметиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (30 мг). При этом получают 8 мг (выход 14%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 13,59 (8, Ьг, 1Н, ΝΈ), 10,92 (8, Ьг, 1Н, ΝΈ), 7,84 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,65 (8, 1Н, Н-винил), 7,42 (т, 1Н, СОЖСН^, 7,36 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,29 (бб, 1=1,6 и 7,6 Гц, 1Н), 7,20 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,14 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,11 (б, 1=1,6 Гц, 1Н), 6,91 (бб, 1=2,8 и 7,8 Гц, 1Н), 3,82 (8, 3Н, ОСН3), 3,21-3,33 (т, 2Н, ΝΟ^), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 2,36-2,40 (т, 2Н, Ν^2), 2,18 (8, 6Н, Ν(№3)2).
МС-ΕΊ т/ζ 458 [М+].
Пример 56. (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (80 мг, 0,4 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,1 г) по методу Б. При этом получают 79 мг (выход 46%) требуемого соединения.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,66 (8, бг, 1Н, ΝΚ), 10,95 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 8,15 (б, 1=1,2 Гц, 1Н), 7,81 (8, 1Н, Н-винил), 7,71 (б, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,40-7,47 (т, 4Н), 7,31 (т, 1Н), 6,95 (б, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,2-3,31 (т, 2Н, 2,46-2,55 (т, 6Н, 3xNСН2), 2,44 (8, 6Н, 2хСН3), 0,96 (1, 1=7,4 Гц, 6Н, 2xNСН2СН3).
МС-ΕΊ т/ζ 456 [М+].
Пример 57. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (0,04 г, 0,2 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-ил-этил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,04 г). При этом получают требуемое соединение в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,65 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 10,96 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 8,15 (б, 1=1,0 Гц, 1Н),
7.80 (8, 1Н, Н-винил), 7,71 (б, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,49 (1, 1=6,3 Гц, 1Н, СОNΉСН2), 7,41-7,46 (т, 3Н), 7,31 (т, 1Н), 6,95 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 4,08 (т, 4Н, 2xNСН2), 3,32 (т, 2Н, Να^), 2,55 (1, 1=7,1 Гц, 2Н, Ν^), 2,47 (т, пик ДМСО), 2,43 (8, 6Н, 2хСН3), 1,66 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-ΕΊ т/ζ 454 [М+].
Пример 58. (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (8 мг, 0,04 ммоль) конденсируют с (3-имидазол-1-илпропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (10 мг). При этом получают 10 мг (выход 59%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 13,67 (8, Ьг, 1Н, ΝΚ), 10,96 (8, Ьг, 1Н, НИ), 8,16 (б, 1=1,2 Гц, 1Н),
7.81 (8, 1Н, Н-винил), 7,65-7,72 (т, 4Н), 7,44 (т, 3Н), 7,31 (т, 1Н,СОNΉСН2), 7,21 (8, 1Н, Аг-Н), 4,02 (1, 1=6,5 Гц, 2Н, ЦСН), 3,19 (ц, 1=6,5 Гц, 2Н, СОNΉСН2), 2,44 (8, 6Н, 2хСН3), 1,93 (т, 2Н, СН2СН2 СН2).
МС^ т/ζ 465 [М].
Пример 59. (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
- 53 005996
6-Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (0,08 г, 0,4 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,1 г). При этом получают 65 мг (выход 38%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-66) δ 13,61 (8, Ьг, 1Н, N4), 10,99 (8, Ьг, 1Н, N4), 7,86 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н),
7.62- 7,66 (т, 3Н), 7,40-7,47 (т, 3Н), 7,28-7,36 (т, 2Н), 7,10 (ά, 1=1,2 Гц, 1Н), 3,26 (т, 2Н, ^Н2), 2,46-2,55 (т, 6Н, 3χΝ0Π2), 2,44 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 0,97 (1, 1=7,2 Гц, 6Н, 2х^Н2СН3).
МС-ΕΣ т/ζ 456 [М*].
Пример 60. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (30 мг, 0,15 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (40 мг). При этом получают 5,9 мг (выход 8,5%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-66) δ 13,60 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 10,99 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,86 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н),
7.63- 7,66 (т, 3Н), 7,51 (т, 1Н, СО1МНСН2), 7,45 (т, 2Н), 7,28-7,36 (т, 2Н), 7,10 (ά, 1=1,5 Гц, 1Н), 3,31 (т, 6Н, 3χΝ042), 2,55 (1, 1=6,6 Гц, 2Н, Νϋ^), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-ΕΣ т/ζ 454 [М*].
Пример 61. (3-Имидазол-1-ил-пропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (8 мг, 0,04 ммоль) конденсируют с (3-имидазол-1-илпропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (10 мг). При этом получают 7,3 мг (выход 43%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,62 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 10,99 (8, Ьг, 1Н, ΝΉ), 7,86 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,62-7,70 (т, 5Н), 7,45 (т, 2Н), 7,35 (т, 1Н), 7,30 (άά, 1=1,4 и 8,2 Гц, 1Н), 7,21 (8, 1Н), 7,10 (ά, 1=1,4 Гц, 1Н), 6,89 (8, 1Н), 4,02 (1, 1=6,9 Гц, 2Н, СН2), 3,19 (т, 2Н, №Н2СН2), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 1,93 (1, 1=6,9 Гц, 2Н, Ж.’Н2).
МС-ЭУ т/ζ 465 [М*].
Пример 62. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[6-(3,5-дихлорфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-(3,5-Дихлорфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (64 мг, 0,23 ммоль) конденсируют с (2диэтиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (60 мг). При этом получают 53 мг (выход 44%) требуемого соединения в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-άό) δ 13,62 (8, Ьг, 1Н, NН), 10,99 (8, Ьг, 1Н, N4), 7,89 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н, Н4), 7,69-7,71 (т, 3Н), 7,55 (т, 1Н, СО1\1НСН2), 7,37 (т, 2Н), 7,14 (ά, 1=1,4 Гц, 1Н, Н-7), 3,27 (т, 2Н, ^Н2), 2,48-2,58 (т, 6Н, 3х^Н2), 2,45 (8, 3Н, СН3), 2,42 (8, 3Н, СН3), 0,97 (1, 1=6,8 Гц, 6Н, 3х^Н2СН3).
МС т/ζ 526.9 [М*+1].
Пример 63. (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-Пиридин-3-ил-1,3-дигидроиндол-2-он (40 мг, 0,19 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 29 мг (выход 33%) требуемого соединения в виде твердого вещества светло-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,62 (8, Ьг, 1Н, N4), 11,05 (8, Ьг, 1Н, NН), 8,86 (8,Ьг, 1Н), 8,53 (ά, 1=5,8 Гц, 1Н), 8,04 (т, 1Н),7,91 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,70 (8, 1Н, Н-винил), 7,40-7,48 (т, 2Н), 7,35 (ά, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,14 (8, 1Н), 3,26 (т, 2Н, ^Н2), 2,48-2,55 (т, 3х^Н2), 2,42 (8, 3Н, СН3), 2,38 (8, 3Н, СН3), 0,96 (1, 1=6,9 Гц, 6Н, 2х^Н2СН3).
МС^ т/ζ 457 [М*].
Пример 64. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-Пиридин-3-ил-1,3-дигидроиндол-2-он (60 мг, 0,28 ммоль) конденсируют с (2 -пирролидин- 1 - ил этил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (75 мг). При этом получают 90 мг (выход 71%) требуемого соединения в виде твердого вещества светло-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО^6) δ 13,61 (8, Ьг, 1Н, N^5 11,05(8, Ьг, 1Н, N4), 8,86 (ά, 1=1,5 Гц, 1Н), 8,54(άά, 1=1,5 и 4,8 Гц, 1Н), 8,05 (т, 1Н),7,91 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,70 (8, 1Н, Н-винил), 7,44-7,53 (т, 2Н), 7,36 (άά, 1=1,5 и 8,1 Гц, 1Н), 7,15 (ά, 1=1,2 Гц, 1Н), 3,33 (т, 2Н, №Н2), 2,47-2,57 (т, 6Н, 3х^Н2), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2).
МС^ т/ζ 455 [М*].
Пример 65. (3-Диметиламинопропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-пиридин-3-ил-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-Пиридин-3-ил-1,3-дигидроиндол-2-он (42 мг, 0,2 ммоль) конденсируют с (3-диметиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 67 мг (выход 75%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-коричневого цвета.
- 54 005996
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,61 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 11,00 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 8,86 (8, Ьг, 1Н), 8,54 (8, Ьг, 1Н), 8,04 (т, 1Н), 7,90 (й, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,69 (8, 1Н, Н-винил), 7,63 (т, 1Н), 7,45-7,48 (т, 1Н), 7,35 (йй, 1=1,7 и 8,0 Гц, 1Н), 7,15 (й, 1=1,7 Гц, 1Н), 3,21-3,27 (т, 2Н, МСН2), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 2,28 (т, 2Н, :ИСН2), 2,14 (8, 6Н, 2хМСН3), 1,64 (т, 2Н, СН2).
МС-Е1 т/ζ 443 [М4].
Пример 66. (3-Диметиламинопропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (67 мг, 0,32 ммоль) конденсируют с (3-диметиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (81 мг). При этом получают 40 мг (выход 28%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,66 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 10,92 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 8,14 (8, 1Н), 7,79 (8, 1Н), 7,71 (т, 2Н), 7,62 (т, 1Н), 7,44 (т, 3Н), 7,32 (т, 1Н), 6,95 (т, 1Н), 3,33 (т, 2Н, МСН2), 2,43 (8, 6Н, 2хСН3), 2,27 (т, 2Н, МСН2), 2,13 (8, 6Н, 2хМСН3), 1,63 (т, 2Н, СН2).
МС-Е1 т/ζ 442 [М4].
Пример 67. (3-Диэтиламинопропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5- Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (1,5 г, 7,16 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2 г). При этом получают 1,3 г (выход 40%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,64 (8, 1Н, ЫН), 10,91 (8, 1Н, ЫН), 8,14 (й, 1=1,4 Гц, 1Н, АгН), 7,8 (8, 1Н, АгН), 7,7 (йй, 1=1,2 и 8,5 Гц, 2Н, АгН), 7,6 (I, 1=5,3 Гц, 1Н, СО1\1НСН2), 7,4 (т, 3Н, АгН), 7,3 (I, 1=7,4 Гц, 1Н, АгН), 6,9 (й, 1=8,0 Гц, 1Н, АгН), 3,2 (т, 2Н, СО1\1НСН2), 2,5 (т, 12Н, 3х]»СН2 и 2хСН3), 1,61 (т, 2Н, СН2СН2СН2), 0,93 (I, 1=6,7 Гц, 6Н, ХСН.-СН 3).
МС-Е1 т/ζ 470 [М4].
Пример 68. (3-Диэтиламинопропил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-6-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- Фенил-1,3-дигидроиндол-2-он (1,5 г, 7,16 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (2 г). При этом получают 1,9 г (выход 57%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,58 (8, 1Н, МН), 10,94 (8, 1Н, МН), 7,8 (й, 1=7,9 Гц, 1Н, АгН), 7,6 (т, 4Н, АгН), 7,4 (I, 1=7,5 Гц, 2Н, АгН), 7,3 (т, 2Н), 7,1 (й, 1=1,4 Гц, 1Н, АгН), 3,2 (т, 2Н, СΟМΗСΗ2), 2,5 (т, 12Н, 3xМСΗ2 и 2хСН3), 1,61 (т, 2Н, СН2СН2СН2), 0,93 (I, 1=6,7 Гц, 6Н, МСΗ2СΗ3).
МС-Е1 т/ζ 470 [М4].
Пример 69. (3-Хлор-4-метоксифенил)амид 3-[4-(3-диэтиламинопропилкарбамоил)-3,5-диметил-1Нпиррол-2-илметилен]-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-4-карбоновой кислоты.
(3-Хлор-4-метоксифенил)амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-4-карбоновой кислоты (1 г, 3,16 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (1 г, 3,58 ммоль). При этом получают 1,7 г (выход 85%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
МС-Е1 т/ζ 578,2 [М+].
Пример 70. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (0,5 г, 2,36 ммоль) конденсируют с (3-диэтиламинопропил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (0,51 г). При этом получают 0,84 г требуемого соединения в виде твердого вещества красно-оранжевого цвета.
'Н ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,61 (8, 1Н, ЫН), 10,99 (8, 1Н, ЫН), 8,09 (й, 1=1,8 Гц, 1Н, АгН), 7,7 (т, 4Н), 7,2 (йй, 1=1,8 и 8,3 Гц, 2Н, АгН), 6,8 (й, 1=7,8 Гц, 1Н, АгН), 3,3 (8, йг, 4Н, 2χΝ^2), 3,2 (т, 2Н, СΟМΗСΗ2), 2,6 (8, Ьг, 2Н, ЫСН и 2хСН3), 2,4 (8, 6Н, 2хСН3), 1,66 (т, 2Н, СН2СН2СН2), 0,98 (I, 1=7,1 Гц, 6Н, МСΗ2СΗ3).
МС-Е1 т/ζ 472 и 474 [М+-1 и М++1].
Пример 71. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (100 мг, 0,47 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (150 мг). При этом получают 0,15 г (выход 62%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6) δ 13,97 (8, 1Н, ЫН), 10,95 (8, 1Н, ЫН), 8,09 (й, 1=1,3 Гц, 1Н, АгН), 7,84 (т, 1Н), 7,79 (8, 1Н), 7,23 (йй, 1=1,3 и 8,1 Гц, 1Н, АгН), 6,8 (й, 1=8,1 Гц, 1Н, АгН), 3,5 (т, 1Н, СН), 3,3 (т, 3Н, СН и ХНСН^, 2,5 (т, Ьг, 6Н, 3xМСΗ2), 1,28 (й, 1=6,9 Гц, 6Н, 2хСН3), 1,23 (й, 1=6,6 Гц, 6Н, 2хСН3), 0,96 (т, 6Н, 2хСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 514 и 516 [М+-1 и М++1].
Пример 72. (3-Диэтиламинопропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4- 55 005996 диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (90 мг, 0,42 ммоль) конденсируют с (З-диэтиламинопропил)амидом
5-формил-2,4-диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (140 мг). При этом получают 54 мг (выход
25%) требуемого соединения в виде твердого вещества красно-коричневого цвета.
Ί1 ЯМР (300 МГц, ДМСО-кб) δ 13,98 (8, 1Η, ΝΗ), 10,96 (8, 1Η, ΝΗ), 8,09 (ά, 1=1,7 Гц, 2Н), 7,78 (8, 1Н, Н-винил), 7,23 (άά, 1=1,7 и 8,1 Гц, 1Н, АгН), 6,82 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н, АгН), 3,5 (т, 1Н, СН), 3,25 (т, 2Н, ΝΗΟΗ2), 3,15 (т, 1Н, СН), 2,7 (8, Ьг, 6Н, 3χΝΟΗ2), 1,7 (т, Ьг, 2Н, СН2СН2СН2), 1,28 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, 2хСН3), 1,24 (ά, 1=5,9 Гц, 6Н, 2хСН3), 1,06 (т, 6Н, 2хСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 528 и 530 [М+-1 и М++1].
Пример 73. (3-Пирролидин-1-илпропил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)2,4-диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (130 мг, 0,6 ммоль) конденсируют с (3-пирролидин-1 -илпропил)амидом 5-формил-2,4-диизопропил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (150 мг, 0,45 ммоль). При этом получают 36 мг (выход 15%) требуемого соединения в виде твердого вещества коричневаторыжеватого цвета.
Ί1 ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 13,98 (8, 1Η, ΝΗ), 10,97 (8, 1Η, ΝΗ), 8,10 (ά, 1=1,6 Гц, 2Н), 7,78 (8, 1Н, Н-винил), 7,23 (άά, 1=1,6 и 7,6 Гц, 1Н, АгН), 6,82 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н, АгН), 3,5 (т, 1Н, СН), 3,25 (т, 2Н, ΝΗΟΗ2), 3,15 (т, 1Н, СН), 2,7 (8, Ьг, 6Н, 3χ^Η2), 1,7 (т, Ьг, 6Н, 3ХЫСЩСЩ), 1,28 (ά, 1=5,6 Гц, 6Н, 2хСН3), 1,24 (ά, 1=5,7 Гц, 6Н, 2хСН3).
МС-Е1 т/ζ 526 и 528 [М+-1 и М++1].
Пример 74. (Пиридин-4-илметил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Бром-1,3-дигидроиндол-2-он (170 мг, 0,8 ммоль) конденсируют с (пиридин-4-ил-метил)амидом 5формил-2,4-диметил-Ш-пиррол-3-карбоновой кислоты (200 мг). При этом получают 14 мг (выход 4%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ί1 ЯМР (300 МГц, ДМСОШ6) δ 13,67 (8, 1Η, ΝΗ), 11,01 (8, Ьг, 1Η, ΝΗ), 8,51 (άά, 1=1,6 и 4,3 Гц, 2Н), 8,23 (1, 1=6,0 Гц, 1Н, №ΝΗΟΗ2), 8,11 (ά, 1=1,9 Гц, 1Н), 7,78 (8, 1Н, Н-винил), 7,31 (ά, 1=6,0 Гц, 2Н), 7,25 (άά, 1=1,9 и 8,1 Гц, 1Н), 6,82 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 4,45 (ά, 1=6,0 Гц, 2Н, ΝϋΗ2), 2,46 (8, 6Η, 2хСН3).
МС-ЭУ т/ζ 450 и 452 [М+-1 и М++1].
Пример 75. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-[6-(4-бутилфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил] -2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5- [6-(4-Бутилфенил)]-1,3-дигидроиндол-2-он (50 мг, 0,19 ммоль) конденсируютс(2-пирролидин-1илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 74 мг (выход 76%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ί1 ЯМР (360 МГц, ДМСО-46) δ 13,58 (8, 1Η, ΝΗ), 10,93 (8, Ьг, 1Η, ΝΗ), 7,82 (ά, 1=7,9 Гц, 2Η), 7,63 (8, 1Η, Н-винил), 7,54 (ά, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,46 (т, 1Η, (ΌΝΙ1). 7,26 (т, 3Η), 7,09 (8, 1Η), 3,30 (т, 2Η, СЩ), 2,52-2,63 (т, 4Η, 2хСЩ), 2,49 (т, 4Η, 2хСЩ), 2,43 (8, 3Η, СЩ), 2,40 (8, 3Η, СЩ), 1,68 (т, 4Η, 2хСЩ), 1,58 (т, 2Η, СЩ), 1,34 (т, 2Η, СЩ), 0,91 (1, 1=7,2 Гц, 3Н, СЩСЩ).
МС-Е1 т/ζ 510 [М+].
Пример 76. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-[6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3 -илиденметил] -2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6- (5-Изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (50 мг, 0,17 ммоль) конденсируют с (2пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (45 мг). При этом получают 67 мг (выход 75%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ί1 ЯМР (360 МГц, ДМСОШ6) δ 13,60 (8, 1Η, ΝΗ), 10,82 (8, Ьг, 1Η, ΝΗ), 7,77 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,61 (8, 1Η, Н-винил), 7,45 (т, 1Η, (ΌΝΙΙ). 7,0-7,19 (т, 5Н), 3,73 (8, 3Н, ОСН3), 3,32 (т, 2Н, СН2), 2,87 (т, 1Н, СН(СН3)2), 2,56 (т, 2Н, СН2), 2,48 (т, 4Н, 2хСЩ), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 1,68 (т, 4Н, 2хСН2), 1,21 (ά, 1=6,8 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 527,2 [М++1].
Пример 77. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-[6-(4-этилфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-(4-Этилфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (45 мг, 0,19 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1 -илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 60 мг (выход 65%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ί1 ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 13,59 (8, 1Η, ΝΗ), 10,96 (8, Ьг, 1Η, ΝΗ), 7,83 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,64 (8, 1Η, Н-винил), 7,51-7,56 (т, 3Η), 7,25-7,30 (т, 3Н), 7,08 (ά, 1=1 Гц, 1Н), 3,31 (т, 2Н, СН2), 2,63 (т, 2Н, СН2СН3), 2,55 (т, 2Н, СН2), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,42 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2), 1,20 (1, 1=7,5 Гц, 3Н, СН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 482 [МЦ
Пример 78. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 5-[6-(2,4-диметоксифенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
- 56 005996
6-(2,4-Диметоксифенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (51 мг, 0,19 ммоль) конденсируют с (2пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 30 мг (выход 31%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-46) δ 13,59 (8, 1Н, НН), 10,86 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 7,75 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,60 (8, 1Н, Н-винил), 7,49 (т, 1Н, СОЯН), 7,22 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,03 (т, 1Н), 6,97 (8, 1Н), 6,58-6,65 (т, 2Н), 3,79 (8, 3Н, ОСН3), 3,76 (8, 3Н, ОСН3), 3,33 (т, 2Н, СН2), 2,55 (т, 2Н, СН2), 2,50 (т, 4Н, 2хСН2), 2,42 (8, 3Н, СН3), 2,39 (8, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/ζ 514 [М+].
Пример 79. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-[6-(3-изопропилфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
6-(3-Изопропилфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он (48 мг, 0,19 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-
1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (50 мг). При этом получают 59 мг (выход 63%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-άό) δ 13,63 (8, 1Н, ЫН), 10,97 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 7,87 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,68 (8, 1Н, Н-винил), 7,24-7,55 (т, 6Н), 7,13 (8, 1Н), 3,34 (т, 2Н, СН2), 3,30 (т, 1Н, СН(СН3)2), 2,60 (т, 2Н, СН2), 2,50 (т, 4Н, 2хСН2), 2,45 (8, 3Н, СН3), 2,43 (8, 3Н, СН3), 1,70 (т, 4Н, 2хСН2), 1,27 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н, СН(СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 496 [МЦ
Пример 80. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Фтор-1,3-дигидроиндол-2-он (0,54 г, 3,8 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты. При этом получают 0,83 г (55%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-зеленого цвета.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-άό) δ 13,66 (8, 1Н, ЦН), 10,83 (8, Ьг, 1Н, Ν^, 7,73 (άά, 1=2,5 и 9,4 Гц, 1Н), 7,69 (8, 1Н, Н-винил), 7,37 (1, 1Н, СОМНСН2СН2), 6,91 (т, 1Н), 6,81-6,85 (т, 1Н), 3,27 (т, 2Н, СН2), 2,51 (т, 6Н, 3хСН2), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 0,96 (1, 1=6,9 Гц, 6Н, К(СН2СН3)2).
МС-Е1 т/ζ 398 [М+].
Пример 80. (Альтернативный синтез). (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Гидразингидрат (55%, 3000 мл) и 5-фторизатин (300 г) нагревают до 100°С. Через 120 мин добавляют порциями по 100 г при перемешивании 500 г 5-фторизатина. Смесь нагревают до 110°С и перемешивают в течение 4 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и твердый продукт собирают фильтрованием в вакууме. При этом получают 748 г неочищенного гидразида (2-амино-5фторфенил)уксусной кислоты. Гидразид суспендируют в 700 мл воды и рН смеси доводят до значения <3 с помощью 12н. соляной кислоты. Затем реакционную смесь перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собираютфильтрованием в вакууме и дважды промывают водой, сушат в вакууме. При этом получают 5-фтор-1,3-дигидроиндол-2-он (600 г, выход 73%) в виде порошка коричневого цвета.
1Н ЯМР (диметилсульфоксид-ά6) δ 3,46 (8, 2Н, СН2), 6,75, 6,95, 7,05 (3 х т, 3Н, ароматика), 10,35 (8, 1Н, ΝΚ). МС т/ζ 152 [М+1].
К смеси 2-трет-бутилового эфира, 4-этилового эфира 3,5-диметил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты (2600 г) и этанола (7800 мл) при интенсивном перемешивании медленно добавляют 10 н. соляную кислоту (3650 мл). Температуру повышают с 25°С до 35°С, при этом начинается выделение газа. Реакционную смесь нагревают до 54°С и перемешивают, продолжают повышать температуру, и в течение 1 ч температуру реакционной смеси поддерживают равной 67°С. Затем реакционную смесь охлаждают до 5°С, и при перемешивании в нее медленно добавляют 32 л смеси льда и воды. Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме и трижды промывают водой. Затем данный продукт сушат на воздухе до постоянного веса. При этом получают 1418 г (выход 87%) этилового эфира 2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты в виде твердого вещества розоватого цвета.
Ή ЯМР (диметилсульфоксид-ά6) δ 2,10, 2,35 (2x8, 2х3Н, 2хСН3), 4,13 (ц, 2Н, СН2), 6,37 (8, 1Н, СН), 10,85 (8, 1Н, ΝΚ). МС т/ζ 167 [М+1].
Диметилформамид (322 г) и дихлорметан (3700 мл) охлаждают на бане со льдом до 4°С, после чего добавляют при перемешивании 684 г оксихлорида фосфора. Твердый этиловый эфир 2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (670 г) небольшими порциями медленно добавляют в течение 15 мин. Температура реакционной смеси достигает 18°С. Затем ее кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают до 10°С на бане со льдом и при интенсивном перемешивании быстро вливают в реакционную смесь воду со льдом (1,6л). Температура реакционной смеси повышается до 15°С. При интенсивном перемешивании добавляют 1,6 л 10н. соляной кислоты. Температура реакционной смеси повышается до 22°С. Выключают перемешивание и оставляют реакционную смесь на 30 мин для разделения слоев. Температура достигает максимального значения, равного 40°С. рН водного слоя доводят до значения 1213 с помощью 10 н. гидроксида калия (3,8 л) с такой скоростью, чтобы в процессе добавления щелочи
- 57 005996 температура реакционной среды достигла и сохранялась равной 55°С. После завершения прибавления щелочи реакционную смесь охлаждают до 10°С и перемешивают в течение 1 ч. Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме и четыре раза промывают водой. При этом получают 778 г (выход 100%) этилового эфира 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (ДМСО^6) δ 1,25 (1, 3Н, СН3), 2,44, 2,48 (2x8, 2х3Н, 2хСН3), 4,16 (ф 2Н, СН2), 9,59 (8, 1Н, СНО), 12,15 (8, Ьг, 1Н, ЫН). МС т/ζ 195 [М+1].
806 г этилового эфира 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, 548 г гидроксида калия, 2400 мл воды и 300 мл метанола при перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, затем охлаждают до 8°С. Реакционную смесь экстрагируют дважды дихлорметаном. Поддерживая температуру ниже 15°С, доводят рН водного слоя до значения, равного 4, с помощью 1000 мл 10н. соляной кислоты. Для облегчения перемешивания добавляют воду. Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, затем его трижды промывают водой и сушат в вакууме при 50°С. При этом получают 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (645 г, выход 93,5%) в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (ДМСО^6) δ 12,40, 2,43 (2x8, 2х3Н, 2хСН3), 9,57 (8, 1Н, СНО), 12,07 (8, Ьг, 2Н, ЫН+СООН). МС т/ζ 168 [М+1].
К смеси 1204 г 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты и 6020 мл диметилформамида при перемешивании при комнатной температуре добавляют 2071 г гидрохлорида 1-(3-диметил) аминопропил-3-этилкарбодиимида, 1460 г гидроксибензотриазола, 2016 мл триэтиламина и 1215 мл диэтилэтилендиамина. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, затем разбавляют 3000 мл воды, 2000 мл солевого раствора и 3000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, доводят рН среды до значения, превышающего 10, с помощью 10 н. раствора гидроксида натрия. Реакционную смесь экстрагируют дважды порциями по 5000 мл 10% метанола в дихлорметане и экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом магния и упаривают досуха на роторном испарителе. Затем смесь разбавляют 1950 мл толуола и опять упаривают досуха на роторном испарителе. Остаток растирают со смесью гексан/диэтиловый эфир, 3:1 (4000 мл). Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, дважды промывают 400 мл этилацетата и сушат в вакууме при 34°С в течение 21 ч. При этом получают (2-диэтиламиноэтил)амид 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (819 г, выход 43%) в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.
Ή ЯМР (ДМСО^6) δ 0,96 (1, 6Н, 2хСН3), 2,31, 2,38 (2x8, 2хСН3), 2,51 (т, 6Н, 3хСН2), 3,28 (т, 2Н, СН2), 7,34 (т, 1Н, амид ЫН), 9,56 (8, 1Н, СНО), 11,86 (8, 1Н, пиррол ЫН). МС т/ζ 266 [М+1].
Смесь 809 г (2-диэтиламиноэтил)амида 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, 438 г 5-фтор-1,3-дигидроиндол-2-она, 8000 мл этанола и 13 мл пирролидина нагревают при 78°С в течение 3 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры, и твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, затем промывают этанолом. Твердое вещество перемешивают с 5900 мл этанола при 72°С в течение 30 мин. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Твердое вещество собирают фильтрованием в вакууме, затем промывают этанолом и сушат в вакууме при 54°С в течение 130 ч. При этом получают 1013 г (выход 88%) (2-диэтиламиноэтил)амида 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή ЯМР (диметилсульфоксид^6) δ 0,98 (1, 6Н, 2хСН3), 2,43, 2,44 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,50 (т, 6Н, 3хСН2), 3,28 (ф 2Н, СН2), 6,84, 6,92, 7,42, 7,71, 7,50 (5хт, 5Н, ароматика, винил, СОЫН), 10,88 (8, 1Н, СОЫН), 13,68 (8, 1Н, пиррол ЫН). МС т/ζ 397 [М-1].
Пример 81. 3 -[4-(2-Диэтиламиноэтилкарбамоил)-3,5-диметил-1Н-пиррол-2-ил-метилен]-2-оксо-2,3дигидро-1Н-индол-6-карбоновая кислота.
2-Оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-6-карбоновую кислоту (80 мг, 0,45 ммоль) конденсируют с (2диэтиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты. При этом получают 210 мг (выход 92%) требуемого соединения в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 13,6 (8, 1Н, ЫН), 7,76 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,66 (8, 1Н, Н-винил), 7,57 (άά, 1=1,5 и 8,0 Гц, 1Н), 7,40-7,42 (т, 2Н), 3,28 (т, 2Н, СН2), 2,88 (т, Н-пиперидин), 2,54 (т, 6Н, 3хСН2),
2,44 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 1,56 (т, Н-пиперидин), 0,97 (1, 1=6,98 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС т/ζ 424 [М+].
Пример 82. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид [5-(5-диметилсульфамоил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Диметиламид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфокислоты (90 мг, 0,38 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-ил-этил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг). При этом получают 100 мг (выход 54%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО^6) δ 13,65 (8, 1Н, ЫН), 11,30 (8, Ьг, 1Н, ЫН), 8,25 (ά, 1Н), 7,92 (8, 1Н, Нвинил), 7,48-7,53 (т, 2Н), 7,07 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 3,33 (т, 2Н, СН2), 2,61 (8, 6Н, Ы(СН3)2), 2,56 (1, 2Н, СН2), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,45 (8, 3Н, СН3), 2,44 (8, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2).
- 58 005996
МС-ΕΙ т/ζ 485 [М4].
Пример 83. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-[5-(3-хлорфенилсульфамил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол3-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
(3-Хлорфенил)амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфокислоты (120 мг, 0,38 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг). При этом получают 150 мг (выход 69%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтооранжевого цвета.
Ή ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 13,55 (к, 1Н, ΝΗ), 11,26 (к, Ьг, 1Н, ΝΗ), 10.30 (к, Ьг, 1Н, ΝΗ), 8,26 (б, 1Н), 7,79 (к, 1Н, Н-винил), 7,51-7,57 (т, 2Н), 7,22 (ΐ, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,15 (т, 1Н), 7,07 (т, 1Н), 7,0 (т, 2Н),
3,44 (т, 2Н, СН2), 2,57 (ΐ, 1=7,0 Гц, 2Н, СН2), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,44 (к, 3Н, СН3), 2,43 (к, 3Н, СН3), 1,68 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-ΕΙ т/ζ 568 [М+].
Пример 84. (2-Пирролидин-1-ил-этил)амид 2,4-диметил-5-[2-оксо-5-(пиридин-3-илсульфамоил)-1,2дигидроиндол-3 -илиденметил]-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Пиридин-3-иламид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты (110 мг, 0,38 ммоль) конденсируют с (2-пирролидин-1-ил-этил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг), при этом получают 150 мг (74%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-66) δ 13,58 (к, 1Н, МН), 8,21 (б, 1=2,0 Гц, 2Н), 8,04 (т, 1Н), 7,76 (к, 1Н, Нвинил), 7,49-7,54 (т, 2Н), 7,41 (т, 1Н), 7,14 (т, 1Н), 6,94 (б, 1=8,5 Гц, 1Н), 3,33 (т, 2Н, СН2), 2,56 (ΐ, 1=7,06 Гц, 2Н, СН2), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,43 (к, 6Н, 2хСН3), 1,68 (т, 4Н, 2хСН2).
МС т/ζ 535 [М4].
Пример 85. 3 -[3,5-Диметил-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-1Н-пиррол-2-илметилен] -4-(2-гидроксиэтил)-1,3-дигидроиндол-2-он.
4-(2-гидроксиэтил)-1,3-дигидроиндол-2-он (71 мг, 0,4 ммоль) конденсируют с 3,5-диметил-4-(4метилпиперазин-1-карбонил)-1Н-пиррол-2-карбальдегидом, при этом получают 90 мг (55%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-66) δ 14,25 (к, 1Н, МН), 10,88 (к, 1Н, МН), 7,57 (к, 1Н, Н-винил), 7,03 (т, 1Н), 6,75-6,82 (т, 2Н), 4,86 (т, 1Н, ОН), 3,70 (т, 2Н, СН2), 3,04 (т, 2Н, СН2), 2,48 (т, 4Н, 2хСН2), 2,28 (Ьг к, 7Н), 2,19 (к, 3Н, СН3), 2,18 (к, 3Н, СН3).
МС т/ζ (+уе) 4.09.3 [М4].
Пример 86. Фениламид3-[3,5-диметил-4-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-1Н-пиррол-2-илметилен]-
2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты.
Фениламид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты (110 мг, 0,4 ммоль) конденсируют с 3,5-диметил-4-(4-метил-пиперазин-1-карбонил)-1Н-пиррол-2-карбальдегидом (100 мг), при этом получают 50 мг (24%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
!Н-ЯМР(300 МГц, ДМСО-66) δ 13,52(8, 1Н, МН), 11,26 (к, 1Н^Н), 10,08 (к, 1Н, МН), 8,21 (6, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,75 (к, 1Н, Н-винил), 7,50 (бб, 1=1,6 & 8,3 Гц, 1Н), 7,19 (т, 2Н), 7,10 (т, 2Н), 6,97 (т, 2Н), 2,49 (т, 4Н, 2хСН2), 2,28 (т, 10Н, 2хСН3 & 2хСН2), 2,18 (к, 3Н, СН3).
МС-ΕΙ т/ζ 519 [М4].
Пример 87. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-диметилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Диметиламид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты (90 мг, 0,38 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг), при этом получают 80 мг (43%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ 11,30 (к, 1Н, МН), 8,27 (б, 1=1,7 Гц, 1Н), 7,94 (к, 1Н, Н-винил), 7,49 (бб, 1=1,7 и 8,0 Гц, 1Н), 7,44 (т, 1Н, СОМНСН2СН2), 7,07 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 3,26 (т, 2Н, СН2), 2,60 (к, 6Н, Ы(СН3)2), 2,53 (т, 2Н, СН2), 2,45-2,50 (т, 10Н, 2хСН3 и Ы(СН2СН3)2), 0,96 (ΐ, 1=7,2 Гц, 6Н, М(СН2СН3)2).
МС-ΕΙ т/ζ 487 [М4].
Пример 88. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[5-(3-хлорфенилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
(2-Хлорфенил)амид 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты (120 мг, 3,8 ммоль) конденсируют с (2-диэтиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (100 мг), при этом получают 80 мг (37%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-б6) δ 13,55 (к, 1Н, МН), 11,24(к, 1Н, МН), 10,29 (к, 1Н, МН), 8,25 (б, 1=1,87 Гц, 1Н), 7,79 (к, 1Н, Н-винил), 7,52 (бб, 1=1,87 и 8,3 Гц, 1Н), 7,42 (т, 1Н, СОМНСН2СН2), 7,22 (ΐ, 1=8,02 Гц, 1Н), 7,15 (ΐ, 1=2 Гц, 1Н), 7,08 (т, 1Н), 7,0 (т, 2Н), 3,27 (т, 2Н, СН2), 2,48-2,57 (т, 6Н, 3хСН2), 2,45 (к, 3Н, СН3), 2,44 (к, 3Н, СН3), 0,97 (ΐ, 1=7,0 Гц, 6Н, Ы(СН2СН3)2).
МС т/ζ 570,1 [М4].
Пример 95. Этиловый эфир 3-(2-оксо-5-фенил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
- 59 005996
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,74 (к, 1Н, Ν^, 11,00 (к, 1Н, Ν^, 8,13 (й, 1=1,7 Гц, 1Н), 7,74 (к, 1Н, Н-винил), 7,70 (й, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,49 (йй, 1=1,7 и 8,0 Гц, 1Н), 7,44 (ί, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,32 (т, 1Н), 6,96 (й, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,26 (ф 1=7,0 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,79 (т, 2Н, СН2), 2,72 (т, 2Н, СН2), 1,73 (т, 4Н, 2хСН2), 1,30 (ί, 1=7,0 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 412 [М*].
Пример 99. Этиловый эфир 3-(2-оксо-5-фенилсульфамоил-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-карбоновой кислоты.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,64(к, 1Н, Ν^, 11,33 (к, 1Н, Ν^, 10,07 (к, 1Н, Ν^, 8,24 (й, 1=1,8 Гц, 1Н), 7,74 (к, 1Н, Н-винил), 7,57 (йй, 1=1,8 и 8,0 Гц, 1Н), 7,21 (ί, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,11 (й, 1=7,6 Гц, 2Н), 6,99 (й, 1=8,0 Гц, 1Н), 6,98 (й, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,27 (ф 1=7,0 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,80 (т, 2Н, СН2), 2,73 (т, 2Н, СН2), 1,73 (т, 4Н, 2хСН2), 1,30 (ί, 1=7,0 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 491 [М*].
Пример 109. 3-[3-(Морфолин-4-карбонил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-илметилен]-2-оксо-
2.3- дигидро-1Н-индол-6-карбоновая кислота.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,60 (к, 1Н, Ν^, 12,75 (Ьг.к, 1Н, СООН), 11,08 (к, 1Н, Ν^, 7,85 (й, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,71 (к, 1Н, Н-винил), 7,62 (йй, 1=1,4 и 7,8 Гц, 1Н), 7,41 (й, 1=1,4 Гц, 1Н), 3,65 (т, 4Н, 2хСН2), 3,55 (т, 4Н, 2хСН2), 2,81 (т, 2Н, СН2), 2,54 (т, 2Н, СН2), 1,73 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/х421 [М*].
Пример 112. 5-Бром-3-[3-(пирролидин-1-карбонил)-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-ил-метилен]-
1.3- дигидроиндол-2-он.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,56 (к, 1Н, Ν^, 11,00 (к, 1Н, Ν^, 8,05 (й, 1=1,8 Гц, 1Н), 7,74 (к, 1Н, Н-винил), 7,28 (йй, 1=1,3 и 8,3 Гц, 1Н), 6,83 (й, 1=8,3 Гц, 1Н), 3,57 (т, 4Н, 2хСН2), 2,79 (т, 2Н, СН2), 2,65 (т, 2Н, СН2), 1,88 (т, 4Н, 2хСН2), 1,71 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/ζ 439 и 441 [М*-1] и [М**1].
Пример 114. 3-(3-Диметилкарбамоил-4,5,6,7-тетрагидро-2Н-изоиндол-1-ил-метилен)-2-оксо-2,3дигидро-1Н-индол-6-карбоновая кислота.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,60 (к, 1Н, Ν^, 12,72 (Ьг.к, 1Н, СООН), 11,05 (к, 1Н, Ν^, 7,85 (й, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,72 (к, 1Н, Н-винил), 7,62 (йй, 1=1,3 и 7,9 Гц, 1Н), 7,42 (й, 1=1,3 Гц, 1Н), 3,03 (к, 6Н, Ν(^3)2), 2,81 (т, 2Н, СН2), 2,55 (т, 2Н, СН2), 1,73 (т, 4Н, 2хСН2).
МС-Е1 т/ζ 379 [М*].
Пример 115. 4-Метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-
3-карбоновая кислота.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6) δ 13,56 (Ьг.к, 1Н, Ν^, 8,24 (й, 1=1,5 Гц, 1Н), 7,86 (к, 1Н, Н-винил), 7,74 (й, 1=2,96 Гц, 1Н), 7,56 (йй, 1=1,5 и 8,1 Гц, 1Н), 7,20 (Ьг.т, 1Н, ГОВД), 7,03 (й, 1=8,1 Гц, 1Н), 2,57 (к, 3Н, СН3), 2,41 (к, 3Н, СН3).
МС-Е1 т/ζ 361 [М*].
Пример 116. Этиловый эфир {[4-метил-5-(4-метил-5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3 -карбонил] амино }уксусной кислоты.
Этиловый эфир 4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (описано в работе Э.О. СТеид, Т.Ь Войтам и Е. ЬеСоГГ, 1. Не1егосусйс СИет., 1976; т. 13, стр. 1145-1147) формилируют с использованием метода А, гидролизуют с использованием метода Б, с последующим амидированием (метод В), при этом получают этиловый эфир [(5-формил-4-метил-1Н-пиррол-3-карбонил)амино]уксусной кислоты.
4-Метил-5-метиламиносульфонил-2-оксиндол (50 мг, 0,21 ммоль) конденсируют с этиловым эфиром [(5-формил-4-метил-1Н-пиррол-3-карбонил)амино]уксусной кислоты (100 мг, 0,42 ммоль) и пиперидином (0,1 мл) в этаноле (2 мл), при этом получают 50 мг (52%) требуемого соединения.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,59 (к, 1Н, Ν^, 11,29 (’егу Ьг.к, 1Н, ХН-СО), 8,33 (ί, 1=5,8 Гц, 1Н, СО^СН^, 7,83 (й, 1=3,11 Гц, 1Н), 7,80 (к, 1Н, Н-винил), 7,71 (й, 1=8,5 Гц, 1Н), 7,34 (Ьг.т, 1Н, ^^), 6,89 (й, 1=8,5 Гц, 1Н), 4,11 (ф 1=7,1 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 3,92 (й, 1=5,8 Гц, 2Н, С1уСН2), 2,86 (к, 3Н, СН3), 2,48 (к, 3Н, СН3), 2,42 (й, 1=4,71 Гц, 3Н, НNСН3), 1,20 (ί, 1=7,1 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС-Е1 т/ζ 460 [М*].
Пример 117. Этиловый эфир {[4-метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбонил]амино}уксусной кислоты.
Смесь 5-метиламиносульфонил-2-оксиндола (0,06 г, 0,22 ммоль), этилового эфира[(5-формил-4метил-1Н-пиррол-3-карбонил)амино]уксусной кислоты (0,075 г, 0,27 ммоль) и пиперидина (2 капли) в этаноле (5 мл) нагревают в закрытой емкости при 90°С в течение 12 ч. После охлаждения осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом, растирают со смесью дихлорметан/эфир и сушат, при этом получают 0,035 г (36%) требуемого соединения в виде твердого вещества желтоватокоричневого цвета.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-й6) δ 13,6(8, 1Н, Ν^, 11 (’егу Ьг.к, 1Н, ΝΗ-СО), 8,30 (ί, 1=5,7 Гц, 1Н, СО^СН^, 8,25 (й, 1=1,2 Гц, 1Н), 7,88 (к, 1Н, Н-винил), 7,84 (й, 1=3,3 Гц, 1Н), 7,57 (йй, 1=1,9 и 8,5 Гц, 1Н), 7,14 (Ьг.т, 1Н, БНСНД 7,04 (й, 1=8,5 Гц, 1Н), 4,11 (д, 1=6,7 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 3,92 (й, 1=5,7 Гц, 2Н,
- 60 005996
С1уСН2), 2,55 (5, 3Н, СН3), 2,41 (т, 3Н, Να^), 1,20 (ΐ, 1=6,7 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС т/ζ 446 [М+].
Пример 118. {[4-Метил-5-(5-метилсульфамоил-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3 -карбонил]амино [уксусная кислота.
Смесь этилового эфира [(5-формил-4-метил-1Н-пиррол-3-карбонил)амино]уксусной кислоты (0,142 г, 0,59 ммоль) и 1н. №ОН (1,2 мл) в метаноле (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрируют и полученный осадок конденсируют с 5-метиламино сульфонил-2-оксиндолом (0,13 г, 0,48 ммоль) и пиперидином (0,12 мл) в этаноле (12 мл), при этом получают 0,11 г (52%) требуемого соединения.
Ή-ЯМР (300 МГц, 'ЯМСО^) δ 13,98 (Ьг.5, 1Н, ЮН), 8,17 (5, 1Н), 7,80 (5, 1Н), 7,75 (ά, 1=3,1 Гц, 1Н), 7,51 (άά, 1=2 и 8,2 Гц, 1Н), 7,21 (т оп Ьг.5, 2Н), 6,97 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,41 (ά, 1=4,2 Гц, 2Н, СН21\Н), 2,54 (5, 3Н, пиррол-СН3), 2,39 (5, 3Н, АгСН3).
МС т/ζ 417 [М-1]+.
Пример 120. 5-Метил-2-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновая кислота.
Ή-ЯМР (300 МГц, ЗМСО^) δ 13,77 (Ьг.5, 1Н, №), 12,49 (5, 1Н, СООН), 11,07 (5, 1Н, ЮН), 8,39 (5, 1Н, Н-винил), 7,43 (ά, 1=7,47 Гц, 1Н), 7,20 (ΐ, 1=7,47 Гц, 1Н), 7,03 (ΐ, 1=7,47 Гц, 1Н), 6,91 (ά, 1=7,47 Гц, 1Н), 6,49 (ά, 1=1,53 Гц, 1Н), 2,34 (5, 3Н, СН3).
МС т/ζ 269 [М+Н]+.
Пример 121. Этиловый эфир 5-метил-2-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДИСО^) δ 13,79 (Ьг.5, 1Н,ИН), 11,08 (5, Ш/ХН), 8,31 (5, 1Н, Н-винил), 7,45 (ά, 1=7,52 Гц, 1Н), 7,20 (ΐ, 1=7,52 Гц, 1Н), 7,03 (ΐ, 1=7,52 Гц, 1Н), 6,91 (ά, 1=7,52 Гц, 1Н), 6,50 (ά, 1=2,1 Гц, 1Н), 4,26 (ц, 1=7,2 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,33 (5, 3Н, СН3), 1,32 (ΐ, 1=7,2 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС т/ζ 297,1 [М+Н]+.
Пример 122. Этиловый эфир 2-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-метил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты.
Ή-ЯМР (360 МГц, ДМСО-άό) δ 13,72 (Ьг.5, 1Н, ИН), 11,16(5, 1Н. ИН), 8,29 (5, 1Н, Н-винил), 7,53 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,35 (άά, 1=2,0 и 8,05 Гц, 1Н), 6,87 (ΐ, 1=8,05 Гц, 1Н), 6,53 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н), 4,28 (ц, 1=7,03 Гц, 2Н, ОСН2СН3), 2,35 (5, 3Н, СН3), 1,33 (ΐ, 1=7,03 Гц, 3Н, ОСН2СН3).
МС т/ζ 375 и 377 [М+Н]+.
Пример 123. 2-(5-Бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновая кислота.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-ά6) δ 13,72 (Ьг.5, 1Н, ]ХН), 12,57 (5, 1Н, СООН), 11,19 (5, 1Н, )^),8,36(5, 1Н, Н-винил), 7,51 (ά, 1=1,4 Гц, 1Н), 7,34 (άά, 1=1,4 и 8,17 Гц, 1Н), 6,87 (ΐ, 1=8,17 Гц, 1Н), 6,52 (ά, 1=2,5 Гц, 1Н), 2,35 (5, 3Н, СНз).
МС т/ζ 347 и 349 [М+Н]+.
Пример 124. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 2-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Краствору 2-формил-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (250 мг, 1,63 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляют 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (376 мг, 1,2 экв.), 1гидроксибензотриазол (265 мг, 1,2 экв.), триэтиламин (0,45 мл, 2 экв.) и 1-(2-аминоэтил)пирролидин (0,23 мл, 1,1 экв.). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь разбавляют насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором (содержащим избыток соли), экстрагируют 10% раствором метанола в дихлорметане. Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, при этом получают 130 мг (2-пирролидин-1-илэтил)амида 2-формил-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь 5-бром-2-оксиндола (106 мг, 0,5 ммоль), (2-пирролидин-1-ил-этил)амида 2-формил-5-метил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (125 мг, 1 экв.) и пиперидина (0,2 мл) в этаноле (2 мл) нагревают в закрытой емкости при 80 °С в течение 1 ч и затем охлаждают. Полученный осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и этилацетатом, сушат, при этом получают требуемое соединение в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-άό) δ 13,62 (5, Ш^Н), 11,06 (Ьг.5, Ш/ХН), 8,56 (5, 1Н,Н-винил), 8,15 (т, 1Н, СОХ11СН;). 7,48 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н),7,31 (άά,Ι=1,8 и 7,9 Гц, 1Н), 6,86 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н), 6,60 (ά, 1=2,3 Гц, 1Н), 3,35 (т, 2Н, 2,56 (ΐ, 1=6,91 Гц, 2Н, НЖСН2СН2), 2,35 (5, 3Н, СН3), 1,67 (т, 4Н, 2хСН2).
МС т/ζ 443 и 445 [М+ и М++2].
Пример 125. (2-Диэтиламиноэтил)амид 2-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
К раствору 2-формил-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (320 мг, 2,1 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляют 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (483 мг, 1,2 экв.). 1-гидроксибензотриазол (340 мг, 1,2 экв.), триэтиламин (0,59 мл, 2 экв.) и Ν,Ν-диэтилэтилендиамин (0,32 мл, 1,1
- 61 005996 экв.). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь разбавляют насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором (содержащим избыток соли), экстрагируют 10% раствором метанола в дихлорметане. Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, при этом получают (2диэтиламиноэтил) амид2-формил-5-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь 5-бром-2-оксиндола (106 мг, 0,5 ммоль), (2-диэтиламиноэтил)амида 2-формил-5-метил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (126 мг, 1 экв.) и пиперидина (0,2 мл) в этаноле (2 мл) нагревают в закрытой емкости при 80°С в течение 1 ч и затем охлаждают. Полученный осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и этилацетатом, сушат, при этом получают требуемое соединение в виде твердого вещества оранжевого цвета.
1Н-ЯМР (360 МГц,ДМСО-б6) δ 13,62(8, 1Н,НН), 11,11 (Ьг.8, Ш’ИН), 8,54 (8, 1Н, Н-винил), 8,1 (т, 1Н, СОМНСН2), 7,49 (б, 1=2,2 Гц, 1Н), 7,31 (бб, 1=2,2 и 8,3 Гц, 1Н), 6,86 (б, 1=8,3 Гц, 1Н), 6,58 (б, 1=2,24 Гц, 1Н), 3,31 (т, 2Н, ИНСН2СН2), 2,59 (т, 6Н, 3хСН2), 2,36 (8, 3Н, СН3), 0,99 (1, 1=6,8 Гц, 6Н, К(СН2СНэ)2).
МС т/ζ 445 и 447 [М и М+2].
Пример 126. (2-Диэтиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь 1,3-дигидроиндол-2-она (266 мг, 2 ммоль), (2-диэтиламиноэтил)амида 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (530 мг, 2 ммоль) и пиперидина (1 капля) в этаноле нагревают при 90°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, полученный осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и сушат, при этом получают 422 мг (55%) требуемого соединения в виде твердого вещества светло-желтого цвета.
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 13,7 (8, 1Н, ΝΉ), 10,9 (8, 1Н, ΝΉ), 7,88 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,64 (8, 1Н, Н-винил), 7,41 (1, 1=5,4 Гц, 1Н, ЯН), 7,13 (б1, 1=1,2 и 7,6 Гц, 1Н), 6,99 (б1, 1=1,2 и 7,6 Гц, 1Н), 6,88 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 3,28 (т, 2Н), 2,48-2,55 (т, 6Н), 2,44 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 0,97 (1, 1=7,2 Гц, 6Н, К(СН2СНэ)2).
МС +уеАРС1 381 [М+1].
Пример 127. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Смесь 5-хлор-1,3-дигидроиндол-2-она (335 мг, 2 ммоль), (2-диэтиламиноэтил )амида 5-формил-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (530 мг, 2 ммоль) и пиперидина (1 капля) в этаноле нагревают при 90°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, полученный осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и сушат, при этом получают 565 мг (68%) требуемого соединения в виде твердого вещества оранжевого цвета.
!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 13,65 (8, 1Н,МН), 11,0 (8, 1Н, ЯН), 7,98 (б, 1=2,1 Гц, 1Н), 7,77 (8, 1Н, Н-винил), 7,44 (1, ИН), 7,13 (бб, 1=2,1 и 8,4 Гц, 1Н), 6,87 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,28 (д, 2Н), 2,48-2,53 (т, 6Н),
2,44 (8, 3Н, СН3), 2,43 (8, 3Н, СН3), 0,97 (1, 1=7,0 Гц, 6Н, К(СН2СН3)2).
МС +уе АРС1 415 [М+1].
Пример 128. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
1,3-Дигидроиндол-2-он конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, при этом получают требуемое соединение.
МС +уе АРС1 379 [М+1].
Пример 129. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Фтор-1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, при этом получают требуемое соединение.
МС +уе АРС1 397 [М+1].
Способ получения в препаративном масштабе.
5-Формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (61 г), 5-фтор-1,3-дигидроиндол-2-он (79 г), этанол (300 мл) и пирролидин (32 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. К смеси добавляют уксусную кислоту (24 мл) и продолжают кипятить с обратным холодильником еще 30 мин. Смесь охлаждают до комнатной температуры и твердую фазу собирают фильтрованием в вакууме и затем промывают дважды этанолом. Твердую фазу перемешивают в течение 130 мин в 40% растворе ацетона в воде (400 мл), содержащем 12н. соляную кислоту (6,5 мл). Твердую фазу собирают фильтрованием в вакууме и дважды промывают 40% раствором ацетона в воде. Твердую фазу сушат в вакууме, при этом получают 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (86 г, выход 79%) в виде твердого вещества оранжевого цвета. 1Н-ЯМР (диметилсульфоксид-б6) δ 2,48, 2,50 (2x8, 6Н, 2хСН3), 6,80, 6,88, 7,68, 7,72 (4хт, 4Н, ароматика и винил), 10,88 (8, 1Н, СОХИ). 12,12 (8, 1Н, СООН), 13,82 (8, 1Н, пиррол Ν4). МС т/ζ 299 [М-1].
5-[5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую ки- 62 005996 слоту (100 г) и диметилформамид (500 мл) перемешивают и к смеси добавляют гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис(диметиламино)фосфония (221 г), 1-(2-аминоэтил)пирролидин(45,6 г) и триэтиламин (93 г). Смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре окружающей среды. Твердый продукт собирают фильтровнием в вакууме и промывают этанолом. Твердую фазу промывают перемешиванием в этаноле (500 мл) в течение 1 ч при 64 °С и охлаждают до комнатной температуры. Твердую фазу собирают фильтрованием в вакууме, промывают этанолом и сушат в вакууме, при этом получают (2пирролидин-1-илэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (101,5 г, выход 77%). 1Н-ЯМР (диметилсульфоксид^) δ 1,60 (т, 4Н, 2хСН2), 2,40, 2,44 (2х8, 6Н, 2хСН3), 2,50 (т, 4Н, 2хСН2), 2,57, 3,35 (2хт, 4Н, 2хСН2), 7,53, 7,70, 7,73, 7,76 (4хт, 4Н, ароматика и винил), 10,88 (8, 1Н, СОИН), 13,67 (8, 1Н, пиррол ЯН). МС т/ζ 396 [М+1].
Пример 130. (2-Пирролидин-1-илэтил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты.
5-Хлор-1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с (2-пирролидин-1-илэтил)амидом 5-формил-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, при этом получают требуемое соединение.
МС + νе АРС1 413 [М++1].
Пример 131. (2-Диметиламиноэтил)амид 2,4-диметил-5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты, при этом получают требуемое соединение.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-46) δ 13,63 (8, 1Н, ЦН), 10,90 (8, 1Н, ЦН), 7,78 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,63 (8, 1Н, Н-винил), 7,48 (ΐ, 1Н, ЦН), 7,13 (άΐ, 1Н), 6,98 (άΐ, 1Н), 6,88 (ά, 1=7,7 Гц, 1Н), 3,31 (ц, 1=6,6 Гц, 2Н), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,40 (8, 3Н, СН3), 2,38 (ΐ, 1=6,6 Гц, 2Н), 2,19 (8, 6Н, М(СН2СН3)2).
МС +νе АРС1 353 [М++1].
Пример 132. (2-Диметиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-Фтор-1,3-дигидроиндол-2-он конденсируют с (2-диметиламиноэтил)амидом 5-формил-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, при этом получают требуемое соединение.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-46) δ 13,68 (8, 1Н, ЦН), 10,90 (8, 1Н, ЦН), 7,76 (άά, 1=2,4 и 9,4 Гц, 1Н), 7,71 (8, 1Н, Н-винил), 7,51 (ΐ, 1Н, ЦН), 6,93 (т, 1Н), 6,84 (άά, 1=4,6 и 8,4 Гц, 1Н), 3,31 (ц, 1=6,6 Гц, 2Н), 2,43 (8, 3Н, СН3), 2,41 (8, 3Н, СН3), 2,38 (ΐ, 1=6,6 Гц, 2Н), 2,19 (8, 6Н, М(СН2СН3)2).
МС + νе АРС1 371 [М+1].
Пример 193. (2-Этиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
(2-Этиламиноэтил)амид 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (99 г), этанол (4000 мл), 5-фтор-2-оксиндол (32 г) и пирролидин (1,5 г) кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч при перемешивании. Смесь охлаждают до комнатной температуры и твердую фазу собирают фильтрованием в вакууме. Твердые вещества перемешиивают в этаноле при 60°С, охлаждают до комнатной температуры и собирают фильтрованием в вакууме. Продукт сушат в вакууме, при этом получают (2этиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3карбоновой кислоты (75 г, выход 95%).
Ή-ЯМР (диметилсульфоксид^) δ 1,03 (ΐ, 3Н, СН3), 2,42, 2,44 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,56 (ц, 2Н, СН2), 2,70, 3,30 (2χΐ, 4Н, 2хСН2), 6,85, 6,92, 7,58, 7,72, 7,76 (5хт, 5Н, ароматика, винил и СО1\1Н), 10,90 (Ьг.8, 1Н, СОМН), 13,65 (Ьг.8, 1Н, пиррол МН). МС т/ζ 369 [М-1].
Пример 195. (2-Диэтил-К-оксоаминоэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Метод А. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (598 мг) и дихлорметан (60 мл) на ледяной бане обрабатывают 3-хлорпербензойной кислотой (336 мг), смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель упаривают на роторном испарителе и остаток суспендируют в метаноле (20 мл). К смеси добавляют воду (20 мл), содержащую гидроксид натрия (240 мг) и смесь перемешивают в течение 1 ч. Осадок собирают фильтрованием в вакууме, промывают 5 мл воды и сушат в вакууме, при этом получают (2-диэтил-К-оксоаминоэтил)амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (510 мг, выход 82%) в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή-ЯМР (ДМСО-46) δ 13,72 (Ьг.8, 1Н, ЦН), 11,02 (Ьг.8, 1Н, СОХНк 9,81 (Ьг.8, 1Н, СО1\1Н), 7,75 (άά, 1Н, ароматика), 7,70 (8, 1Н, ароматика), 6,93 (ΐά, 1Н, ароматика), 6,84 (т, 1Н, ароматика), 3,63 (т, 2Н, СН2), 3,29 (т, 2Н, СН2), 3,14 (т, 4Н, 2хСН2), 2,47 (8, 1Н, СН3), 2,45 (8, 3Н, СН3), 1,64 (ΐ, 6Н, 2хСН3). МС т/ζ 415 [М+1].
Метод Б. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (10 г) суспендируют в дихлорметане (100 мл) и охлаждают на водяной бане. К смеси при перемешивании добавляют 3-хлорпероксибензойную кислоту (13,1 г) и смесь нагревают до комнатной температуры и затем
- 63 005996 перемешивают в течение ночи. Смесь упаривают на роторном испарителе досуха и хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируют 20% раствором метанола в дихлорметане. Содержащие продукт фракции объединяют и упаривают на роторном испарителе досуха, при этом получают (2-диэтил-№оксоаминоэтил)амид 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (9 г, выход 83%).
(2-Диэтил-№-оксоаминоэтил)амид 5-формил-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (9 г), 5фтор-1,3-дигидроиндол-2-он (3 г) и пирролидин (0,1 г) кипятят с обратным холодильником в этаноле (30 мл) в течение 4 ч. Смесь охлаждают на ледяной бане и осадок собирают фильтрованием в ваккуме, промывают этанолом. Твердое вещество перемешивают в этилацетате (30 мл), собирают фильтрованием в вакууме, промывают этилацетатом и сушат в вакууме, при этом получают (2-диэтил-№-оксоаминоэтил) амид 3-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (10,3 г, выход 80%) в виде твердого вещества оранжевого цвета.
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 13,72 (Ьг к, 1Н, №Н), 11,02 (Ьг к, 1Н, СО№Н), 9,81 (Ьг к, 1Н, СО№Н), 7,75 (бб, 1Н, ароматика), 7,70 (к, 1Н, ароматика), 6,93 (1б, 1Н, ароматика), 6,84 (т, 1Н, ароматика), 3,63 (т, 2Н, СН2), 3,29 (т, 2Н, СН2), 3,14 (т, 4Н, 2хСН2), 2,47 (к, 1Н, СН3), 2,45 (к, 3Н, СН3), 1,64 (1, 6Н, 2хСН3). МС т^415 [Μ+1].
Пример 190. [2-(Пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (120 мг, 0,4 ммоль) встряхивают с ΕΌΟΉΟ (96 мг, 0,5 ммоль), безводным 1-гидроксибензотриазолом (68 мг, 0,5 ммоль) и 2-(2-аминоэтилпиридином) фирмы А1бг1сН в безводном ДМФ (3 мл) в течение 2-3 суток при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляют 1М раствором №аНСО3 (1,5 мл), затем 8 мл воды. Выпавший в осадок неочищенный продукт собирают фильтрованием, промывают водой, сушат и очищают кристаллизацией или хроматографией, при этом получают [2-(пиридин-1ил)этил]амид 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1 Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Пример 189. [2-(Пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Соединение получают в соответствии с предыдущим примером, но вместо5-[5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты используют 5-[5-хлор2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (127 мг), при этом получают [2-(пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Пример 191. [2-(Пиридин-1-ил)этил]амид 5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Соединение получают в соответствии с примером 190, но вместо 5-[5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты используют 5-[2-оксо-
1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (113 мг), при этом получают [2-(пиридин-1-ил)этил]амид 5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты.
Пример 192. [2-(Пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Соединение получают в соответствии с примером 190, но вместо 5-[5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты используют 5-[5-бром2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (145 мг), при этом получают [2-(пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Пример 203. [2-(Пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-циано-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-
2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Соединение получают в соответствии с примером 190, но вместо 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты используют 5-[5-циано-2-оксо-
1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (123 мг), при этом получают [2-(пиридин-1-ил)этил]амид 5-[5-циано-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4диметил-1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты.
Примеры 142, 186, 187, 188 и 204.
Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2(2-аминоэтил)пиридина используют 1-(2-аминоэтил)пирролидин фирмы А1бг1сН СЬешюа1 ί,’οтрапу 1пс., при этом получают требуемые соединения.
Примеры 143-147. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют 1-(2-аминоэтил)имидазолин-2-он, полученный нагреванием диметилкарбоната с бис(2-аминоэтил)амином (2 экв.) в закрытой колбе при 150°С в течение 30 мин, с использованием методики, описанной в патенте США N 2613212 (1950), выданном ВοЬш &
- 64 005996
Наа8 Со. Неочищенный продукт очищают на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:25:2, при этом получают требуемые соединения.
Примеры 148-151 и 184.
Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2(2-аминоэтил)пиридина используют этиловый эфир 4-(2-аминоэтил)пиперазин-1-уксусной кислоты, который получают следующим образом: этиловый эфир пиперазин-1-уксусной кислоты (11,22 г) обрабатывают иодацетонитрилом (5,0 мл) в присутствии карбоната кальция (6,9 г) в этилацетате (260 мл) при 0°С. После завершения добавления иодацетонитрила (45 мин) реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 11 ч. Реакционную смесь фильтруют и фильтраты упаривают. Остаток гидрируют в присутствии борида кобальта (полученного из СоС12 и боргидрида натрия) при комнатной температуре при 344,75 кПа в течение 2 суток в этаноле. Полученную смесь фильтруют, упаривают и очищают хроматографией с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:25:2, при этом получают требуемый амин (3,306 г) в виде маслообразного вещества светло-желтого цвета, при этом получают требуемые соединения.
Примеры 152-153. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют 2-[(2-аминоэтиламино)|ацетонитрил (который получают следующим образом: раствор иодацетонитрила (50 ммоль) в этиловом спирте (80 мл) добавляют к раствору этилендиамина (150 мл) в этиловом спирте (60 мл) при 0°С в течение 30 мин. Перемешивание продолжают в течение еще 1 ч при 0°С, затем при комнатной температуре в течение 14 ч. Добавляют 55 ммоль карбоната калия, перемешивают в течение 30 мин, фильтруют и фильтрат концентрируют при комнатной температуре. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:15:1,5, при этом получают 2-[(2аминоэтиламино)|ацетонитрил (3,550 г), который немедленно используют), при этом получают требуемые соединения.
Примеры 154-158. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют 1-(3-аминопропил)азепин-2-он (который получают по методике, описанной в работе Кгай А., 1. Сйет. 8ос. Регкт Тгап8., 1999, т.1, Ν 6, стр. 705-14, за исключением того, что гидролиз БВИ проводят точно при 145°С в присутствии гидроксида лития (1 ч, 5 мл БВИ, 2 мл воды, 420 мг гидрата гидроксида лития). Неочищенный продукт очищают на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:40:4, при этом получают 1-(3-аминопропил)азепин-2-он (4,973 г, выход 87%)), при этом получают требуемые соединения.
Примеры 133-135, 159 и 200. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют Ν-ацетилэтилендиамин (который получают нагреванием смеси этилацетата с этилендиамином (1,5 экв.) при 160 °С в течение 1 ч в закрытом сосуде. После перегонки в вакууме получают требумый продукт с выходом 56%. Ν-ацетилендиамин также производит фирма АИпсй), при этом получают требуемые соединения.
Примеры 146-140. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют 1-(3-аминопропил )тетрагидропиримидин-2-он, который получают аналогично 1-(3-аминопропил)азепин-2-ону в соответствии с методикой, описанной в работе Кгай А., 1. Сйет. 8ос. Регкт Тгап8., 1999, т.1, Ν 6, стр. 705-14. Краткое описание: 1,3,4,6,7,8гексагидро-2Н-пиримидо[1,2-а]пиримидин (4,939 г), гидрат гидроксида лития (918 мг) и 2 мл воды нагревают без растворителя в закрытом сосуде до 145°С в течение 1 ч. Неочищенный продукт очищают на колонке с силикагелем с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:40:4, при этом получают чистый амин (5,265 г, выход 94%).
Примеры 141, 160-162 и 185.
Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2(2-аминоэтил)пиридина используют 1-(2-аминоэтил)пиперазин-2-он (который получают следующим образом: чистый трет-бутилдифенилсилилхлорид (25 мл, 97,7 ммоль) по каплям добавляют в раствор БВИ (19,5 мл, 130 ммоль) и бис(2-аминоэтил)амин (4,32 мл, 40 ммоль) в безводном диметилацетамиде (80 мл) при комнатной температуре при охлаждении на водяной бане в течение 5 мин. Смесь перемешивают в течение 5 ч. Затем осторожно добавляют этиловый эфир бромуксусной кислоты (6,7 мл, 60 ммоль) при охлаждении до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивают в течение 25 мин, затем упаривают в высоком вакууме. Остаток растворяют в метаноле (200 мл), добавляют КНСО3 (10 г) и КР (12 г, 200 ммоль) и смесь перемешивают при 60°С в течение 5 ч. Добавляют 10 г №2СО3, перемешивают в течение 10 мин, охлаждают и фильтруют. Фильтраты упаривают. Остаток экстрагируют гексаном (2 раза по 250 мл). Нерастворимое в гексане соединение растворяют в этаноле (60 мл), фильтруют и упаривают. Неочищенный остаток очищают на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ/метанол/водный раствор аммиака, 80:40:4, при этом получают чистый амин (4,245 г, выход 74%)), при этом получают требуемые соединения.
Примеры 163-167. Соединения получают в соответствии с описанием примеров 190, 189, 191, 192 и 203, но вместо 2-(2-аминоэтил)пиридина используют 3-[(2-аминоэтил)амино]пропионитрил (который
- 65 005996 получают из этилендиамина (150 ммоль) и акрилонитрила (50 ммоль) в ТГФ при комнатной температуре, как описано в работе кгае! М. и соавт., 1. Меб. Сйет., 1964, т. 7, стр. 710-16, при этом получают требумый амин (4,294 г)), при этом получают требуемые соединения.
Пример 168. [2-(4-Метилпиперазин-1-ил)этил]амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
К перемешиваемой опалесцирующей смеси желтого цвета 5-[5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3Ζ)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (90 мг), ДМФ (0,8 мл) и триэтиламина (0,084 мл) в реакционной пробирке объемом 20 мл добавляют реагент ВОР (199 мг). Через 5 мин смесь становится прозрачной. К прозрачной смеси добавляют 2-(4-метилпиперазин-1-ил)этиламин (51 мг). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. В реакционной смеси образуется осадок желтого цвета. По данным тонкослойной хроматографии (10% метанол в хлористом метилене) все исходные вещества превращаются в продукт реакции. Твердое вещество выделяют фильтрованием в вакууме и промывают этанолом (1 мл). Твердую фазу озвучивают в диэтиловом эфире (2 мл) в течение 20 мин и собирают фильтрованием в вакууме. После высушивания в вакууме получают (4метилпиперазин-1-илэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (79 мг, выход 62%).
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 2,13 (к, 3Н, СН3), 2,40, 2,42 (2хк, 6Н, 2хСН3), 2,41 (т, 2Н, СН2), 2,47 (т, 8Н, 4СН2), 3,30 (т, 2Н, СН2), 6,82 (бб, 1=4,5, 8,7 Гц, 1Н), 6,91 (1б, 21=2,4, 31=8,8 Гц, 1Н), 7,43 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,70 (к, 1Н), 7,75 (бб, 1=2,8, 9,6 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,88 (к, 1Н, СОМН), 13,67 (к, 1Н, МН).
ЖХ-МС (тА)424,4(М-1).
Пример 169. (4-Метилпиперазин-1-илэтил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 168, но вместо 5-[5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(3Ζ)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты используют 5-[5-хлор2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3Ζ)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту (95 мг, 0,3 ммоль), получают (4-метилпиперазин-1-ил-этил)амид 5-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (76 мг, 58%).
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 2,13 (к, 3Н, СН3), 2,41, 2,42 (2хк, 6Н, 2хСН3), 2,42 (т, 2Н, СН2), 2,48 (т, 8Н, 4хСН2), 3,30 (т, 2Н, СН2), 6,84 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,11 (бб, 1=2,0, 8,0 Гц, 1Н), 7,44 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,76 (к, 1Н), 7,97 (б, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,98 (к, 1Н, СОМН), 13,62 (к, 1Н, МН).
ЖХ-МС (т/ζ) 440,2 (М-1).
Пример 170. (4-Метилпиперазин-1-ил-этил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 168, но с заменой 5-(5-хлор-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты на 5-(5-бром-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту, получают (4-метилпиперазин-1 -илэтил)амид 5-(5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (39 мг, 54%), полученный из 8ИО11670 (54 мг, 0,15 ммоль).
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 2,14 (к, 3Н, СН3), 2,41, 2,42 (2хк, 6Н, 2хСН3), 2,42 (т, 2Н, СН2), 2,48 (т, 8Н, 4хСН2), 3,31 (т, 2Н, СН2), 6,80 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,23 (бб, 1=2,0, 8,0 Гц, 1Н), 7,44 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,76 (к, 1Н), 8,09 (б, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,99 (к, 1Н, СОМН), 13,61 (к, 1Н, МН).
ЖХ-МС (т/ζ) 486,6 (М).
Пример 171. (4-Метилпиперазин-1-илэтил)амид 5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 168, но с заменой 5-(5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (8ИО14900) на 5-(2-оксо-
1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновую кислоту, получают (4-метилпиперазин-1 -илэтил)амид 5-(2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, 8ИО14903 (136 мг, 84%), полученный из 8ИО12120 (112,8 мг, 0,4 ммоль).
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 2,13 (к, 3Н, СН3), 2,39, 2,42 (2хк, 6Н, 2хСН3), 2,42 (т, 2Н, СН2), 2,48 (т, 8Н, 4хСН2), 3,30 (ΐ, 2Н, СН2), 6,86 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 6,96 (ΐ, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,10 (ΐ, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,41 (ΐ, 1=5,4 Гц, 1Н), 7,62 (к, 1Н), 7,76 (б, 1=7,6 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,88 (к, 1Н, СОМН), 13,61 (к, 1Н, МН). ЖХ-МС (т/ζ) 406,6 (М-1).
Пример 172. [2-(3,5-Диметилпиперазин-1-илэтил]амид 5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3Ζ)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
К перемешиваемой опалесцирующей смеси желтого цвета 5-[2-оксо-1,2-дигидроиндол-(3Ζ)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (112,8 мг, 0,4 ммоль), ДМФ (0,5 мл) и триэтиламина (0,111 мл) в реакционной пробирке объемом 20 мл добавляют реагент ВОР (265 мг). Через 5 мин смесь становится прозрачной. К прозрачной смеси добавляют 2-(2,6-диметилпиперазин-1ил)этиламин (68,6 мг) (см. статью Тар1а Ь А1опко-С1гек, Р. Ьорех-Тибапса, Я. Мокциега, Ь ЬаЬеада, А. ШпегагЦу, А. Ог|а1ек, 1. Меб. Сйет., 1999, т. 42, стр. 2870-2880). Полученную смесь перемешивают при
- 66 005996 комнатной температуре в течение ночи. По данным тонкослойной хроматографии (10% метанол в хлористом метилене) все исходные вещества превращаются в продукт реакции. Реакционную смесь упаривают досуха и очищают экспресс-хроматографией (СН2С12/СН3ОН=20/1-15/1) и перекристаллизацией, при этом получают [2-(3,5-диметилпиперазин-1-ил)этил]амид 5-[2-оксо-1,2-дигидрондол-(32)-илиденметил]2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (83 мг, выход 50%).
Ή-ЯМР (ДМСО^6) δ 1,15, 1,16 (2x8, 6Н, 2хСН3), 1,95 (1, 1=11,6 Гц, 2Н, СН2), 2,41, 2,47 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,50 (т, 2Н, СН2), 3,03 (ά, 1=10 Гц, 2Н), 3,19 (т, 2Н), 3,30 (т, 2Н, СН2), 6,86 (ά, 1=8,0 Гц, 1Н), 6,97 (1, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,11 (1, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,48 (1, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,61 (8, 1Н), 7,75 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,88 (8, 1Н, СОМН), 13,62 (8, 1Н, N4). ЖХ-МС (т/ζ) 422,2 (М+1).
Пример 173. [2-(3,5-Диметилпиперазин-1-ил)эти]амид. 5-[5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 168, получают требуемое соединение (60 мг, 0,2 ммоль).
Ή-ЯМР (ДМСО^6) δ 0,891, 0,907 (2x8, 6Н, 2хСН3), 1,49 (1, 1=10,4 Гц, 2Н), 2,40, 2,42 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,41 (т, 2Н, СН2), 2,74 (т, 4Н), 3,30 (т, 2Н), 6,82 (άά, 1=4,5, 8,7 Гц, 1Н), 6,90 (1ά, 21=2,4 Гц, 31=8,4 Гц, 1Н), 7,42 (1, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,70 (8, 1Н), 7,74 (άά, 1=4,6, 8,4 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,88 (8, 1Н, ^:^), 13,65 (8, 1Н, N4). ЖХ-МС (т/ζ) 438,4 (М-1).
Пример 174. [2-(3,5-Диметилпиперазин-1-ил)этил]амид 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 171, получают требуемое соединение (31,2 мг, 34%) из 5-[5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (63 мг, 0,2 ммоль).
1Н-ЯМР(ДМСО^6) δ 1,15, 1,16 (2x8, 6Н, 2хСН3), 1,95 (1, 1=11,6 Гц, 2Н, СН2), 2,40, 2,42 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,50 (т, 2Н, СН2), 3,03 (ά, 1=11,2 Гц, 2Н), 3,19 (т, 2Н), 3,30 (т, 2Н, СН2), 6,85 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,11 (άά, 1=2,0, 8,0 Гц, 1Н), 7,52 (1, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,76 (8, 1Н), 7,97 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,99 (8, 1Н, СО1\1Н), 13,63 (8, 1Н, NН). ЖХ-МС (т/ζ) 456,2 (М+1).
Пример 175. [2-(3,5-Диметилпиперазин-1-ил)этил)амид 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
В соответствии с методикой, описанной в примере 171, получают требуемое соединение (40 мг, 40%) из 5-[5-бром-2-оксо-1,2-дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (74 мг, 0,2 ммоль).
1Н-ЯМР(ДМСО^6) δ 1,15, 1,16 (2x8, 6Н, 2хСН3), 1,95 (1, 1=11,6 Гц, 2Н, СН2), 2,40, 2,42 (2x8, 6Н, 2хСН3), 2,50 (т, 2Н, СН2), 3,03 (ά, 1=10,4 Гц, 2Н), 3,19 (т, 2Н), 3,30 (т, 2Н, СН2), 6,81 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,24 (άά, 1=2,0, 8,4 Гц, 1Н), 7,51 (1, 1=5,6Гц, 1Н), 7,76 (8, 1Н), 8,10 (ά, 1=2,0 Гц, 1Н) (ароматика и винил), 10,99 (8, 1Н, СО1\1Н), 13,62 (8, 1Н, NН). ЖХ-МС (т/ζ) 498,4 (М-1).
Биологические испытания (примеры)
Описанные ниже исследования были использованы для отбора соединений, проявляющих оптимальный уровень требуемой активности.
А. Методы анализа.
Описанные ниже методы анализа могут быть использованы для определения уровня активности и действия различных соединений по настоящему изобретению на одну или более ПК. Аналогичные методы анализа могут быть выработаны по одним и тем же схемам для любых ПК с применением методик, хорошо известных в данной области техники.
Некоторые из анализов, описанных в настоящем описании, проводят методом ИФА (иммуноферментный анализ) (см. книгу Уо11ег и соавт., Епхуте-Ып1^ !ттипо8ОгЬсп1 А88ау (Иммуноферментный анализ), Маппиа1 оГ С11шса1 !ттипо1оду (Руководство по клинической иммунологии), Изд. 2-е, под ред. Яо8е ηηά Ρπеάтаη, (1980), стр. 359-371, Ат. 8ос. оГ МюгоЬю1оду, \Уа811тд1оп. Ό.Ο) В основном, методика анализа заключается в следующем: соединение добавляют к клеткам, природным или рекомбинантным, экспрессирующим исследуемую киназу, инкубируют в течение определенного периода времени, а затем, если исследуемая киназа является рецептором, добавляют лиганд, известный как активатор рецептора. Клетки лизируют и лизат переносят в лунки планшета для ИФА, предварительно покрытые антителами, специфичными к субстрату реакции ферментативного фосфорилирования. Компоненты клеточного лизата, не являющиеся субстратом, отмывают и степень фосфорилирования определяют количественно с использованием антител, специфичных к фосфотирозину, по сравнению с контрольными клетками, не обработанными исследуемым соединением.
Таким образом, ниже приведены наиболее предпочтительные методики определения активности специфичных ПК методом ИФА. Однако, возможные модификации указанных методик для определения активности соединений по отношению к другим членам семейства РТК, а также к КТК и СТК, очевидные для специалистов в данной области техники, включены в объем настоящего изобретения. Другие анализы, описанные в тексте настоящей заявки, позволяют определить количество ДНК, синтезированной в ответ на активацию исследуемой киназы, что является общепринятым методом определения про
- 67 005996 лиферативного ответа. В основном, методика данного анализа заключается в следующем: соединение добавляют к клеткам, природным или рекомбинантным, экспрессирующим исследуемую киназу, инкубируют в течение определенного периода времени, а затем, если исследуемая киназа является рецептором, добавляют лиганд, который известен как активатор рецептора. После инкубирования в течение по крайней мере ночи добавляют реагент для введения метки в ДНК, такой, как бромдезоксиуридин (ВгбИ) или 3Н-тимидин. Количество меченой ДНК определяют либо при помощи антител анти-ВгбИ, либо путем измерения радиоактивности, по сравнению с контрольными клетками, не обработанными исследуемым соединением.
Биохимическое исследование С8Т-РБК-1
Данный метод анализа используют для определения киназной активности рецептора С8Т-РЬК-1 на поли(д1и, (уг)пептидах.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты Согшпд для ИФА, производства фирмы Согшпд (номер по каталогу 580596).
2. Лиофилизирующий препарат поли(д1у, 1уг) 4:1, производства фирмы 81дта (номер по каталогу РО275).
3. Приготовление планшета, покрытого поли(д1у, 1уг) (ρΕΥ): в каждую лунку наносят 2 мкг поли(д1у, 1уг) (ρΕΥ) в 100 мкл РВ8, выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч или при 4 °С в течение ночи. Планшет тщательно закрывают, чтобы исключить испарение.
4. Буферный раствор РВ8: на 1 л смешивают 0,2 г КН2РО4, 1,15 г ^ЩРО^ 0,2 г КС1 и 8 г №61 в приблизительно 900 мл бН2О.
Когда все компоненты растворятся, рН доводят до 7,2 с помощью НС1. Конечный объем доводят до 1 л бН2О.
5. Буферный раствор РВ8Т: на 1 л РВ8 добавляют 1,0 мл Т\гееп-20.
6. Блокирующий буферный раствор ТВВ: на 1 л смешивают 1,21 г Трис, 8,77 г №С1, 1 мл Твин-20 в приблизительно 900 мл бН2О. рН доводят до 7,2 с помощью НС1. Добавляют 10 г БСА, перемешивают до растворения. Общий объем доводят до 1 л с помощью бН2О. Отфильтровывают от твердых частиц.
7. 1% раствор БСА в РВ8: Чтобы приготовить рабочий исходный раствор 1х, добавляют 10 г БСА к приблизительно 990 мл РВ8, перемешивают до растворения. Общий объем доводят до 1 л буфером РВ8, отфильтровывают от твердых частиц.
8. Нере8, 50 мМ, рН 7,5.
9. С8Т-Р1к1сб, очищенный от рекомбинантного трансформированого бакуловируса (фирмы δυΟΕΝ, Шс.).
10. 4% раствор ДМСО в бН2О.
11. 10 мМ АТФ в 6Н2О.
12. 40 мМ МпС12.
13. Буферный раствор для разбавления киназы (БРК): смешивают 10 мл Нере8 (рН 7,5), 1 мл 5 М №С1, 40 мкл 100 мМ ортованадата натрия и 0,4 мл 5% раствора БСА в бН2О с 88,56 мл бН2О.
14. Полипропиленовые 96-луночные планшеты с У-образным дном NυNС (фирмы Аррйеб 8с1епНПс. номер по каталогу А8-72092).
15. ЭДТУ: смешивают 14,12 г этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТУ) с приблизительно 70 мл бН2О. Добавляют 10н. №1ОН до растворения ЭДТУ. рН доводят до 8,0. Общий объем доводят до 100 мл с помощью бН2О.
16. Буферный раствор для разбавления антител 1°: смешивают 10 мл 5% БСА в РВ8 с 89,5 мл ТВ8Т.
17. Моноклональные антитела, специфичные к фосфотирозину, конъюгированные с пероксидазой хрена (НВР) ^Υ99 НВР, 8ап1а Сгих Вю1есй).
18. 2,2'-Азинобис(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновая кислота) (АВТ8, Мо88, номер по каталогу АВ8Т).
19. 10% раствор 8Ό8.
Методика
1. В лунки 96-луночного планшета Согшпд для ИФА наносят по 2 мкг пептида ροΗΕΥ в стерильном РВ8, как описано на стадии 3 в разделе Материалы и реагенты.
2. Удаляют несвязанную жидкость из лунок переворачиванием планшета. Промывают один раз ТВ8Т. Избыток жидкости удаляют, постукивая планшетом по бумажному полотенцу.
3. В каждую лунку добавляют по 100 мкл 1% раствора БСА в РВ8. Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
4. Повторяют стадию 2.
5. В лунки добавляют 50 мМ раствора Нере8 (рН 7,5) (по 150 мкл в лунку).
6. Разбавляют исследуемое соедиение смесью бН2О/4% раствор ДМСО до требуемой конечной концентрации исследуемого соединения (в 4 раза) в полипропиленовых планшетах.
7. В лунки планшета для ИФА наносят по 25 мкл разбавленного исследуемого соединения. В контрольные лунки добавляют по 25 мкл смеси бН2О/4% раствор ДМСО.
- 68 005996
8. В каждую лунку добавляют по 25 мкл 40 мМ раствора МпС12, содержащего раствор 4х АТФ (2 мкМ).
9. В лунки отрицательного контроля добавляют по 25 мкл 0,5 М ЭДТУ.
10. Разбавляют С8Т-Р1к раствором БРК до концентрации 0,005 мкг (5 пг) в каждой лунке.
11. В каждую лунку наносят по 50 мкл разбавленного фермента.
12. Инкубируют при встряхивании в течение 15 мин при комнатной температуре.
13. Реакцию останавливают добавлением по 50 мкл 250 мМ раствора ЭДТУ (рН 8,0).
14. Промывают три раза ТВ8Т и постукивают планшетом по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости.
15. В каждую лунку добавляют по 100 мкл конъюгата антител с ИРГ против фосфотирозина, разбавление 1:5000 в буфере для разбавления антител. Инкубируют при встряхивании в течение 90 мин при комнатной температуре.
16. Промывают, как описано на стадии 14.
17. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора АВТ8 при комнатной температуре.
18. Инкубируют при встряхивании в течение от 10 до 15 мин. Удаляют все пузырьки воздуха.
19. Реакцию останавливают добавлением в каждую лунку по 20 мкл 10% раствора 8Ό8.
20. Результаты считывают с использованием ридера для ИФА Эупа1есН МК.7000: фильтр для образца при 410 нм фильтр сравнения при 630 нм.
Биохимическое исследование ΡΥΚ2
Данный анализ используют для измерения киназной активности ίη νίίτο рекомбинатной киназы, содержащей последовательность рук2 концевого фрагмента НА эпитопа полной длины (РЬ.рук2-НА) с использованием метода ИФА.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ИФА фирмы Согшпд.
2. Моноклональные антитела против НА 12СА5 (фирмы 8ибЕЫ, 1пс).
3. Буферный раствор ΡΒ8 (фирмы 61Ьсо, номер по каталогу 450-1300ЕВ).
4. Буферный раствор ТВ8Т: на 1 л раствора смешивают 8,766 г №1С1. 6,057 г Трис и 1 мл 0,1% Тритон Х-100 в приблизительно 900 мл йН2О. рН доводят до 7,2, объем доводят до 1 л.
5. Блокирующий буферный раствор: на 1 л раствора смешивают 100 г 10% БСА, 12,1 г 100 мМ Трис, 58,44 г 1М ЫаС1 и 10 мл 1% Твин 20.
6. Лизаты РЬ.рук2-НА, полученные из клеток 8Г9 (фирмы 8иСЕХ, 1пс).
7. 4% ДМСО в воде МПНОис.
8. 10 мМ АТФ в йН2О.
9. 1 М МпС12.
10. 1 М М§С12.
11. 1 М дитиотреитол (ОТТ).
12. Исходный буфер 10Х для фосфорилирования киназы: смешивают 5,0 мл 1,0 М Нере8 (рН 7,5), 0,2 мл 1 М МпС12, 1,0 мл 1 М МдС12, 1,0 мл 10% Тритон Х-100 в 2,8 мл йН2О. Непосредственно перед использованием добавляют 0,1 мл 1М ОТТ.
13. 96-луночные полипропиленовые планшеты с ν-образным дном фирмы ΝϋΝΟ
14. 500 мМ ЭДТУ в йН2О.
15. Буферный раствор для разбавления антител: на 100 мл раствора смешивают 1 мл 5% БСА/ΡΒδ и 1 мл 10% Твин-20 в 88 мл ТВ8.
16. Конъюгированные с НКГ антитела απίί-ΡίνΓ ΡΥ99 фирмы 8ап1а Сгих, Вю1ес11, номер по каталогу 8С-7020.
17. Реактив АВТ8 фирмы Мо88, номер по каталогу АВ8Т-2000.
18. 10% 8Ό8.
Методика:
1. В лунки 96-луночного планшета для ИФА фирмы Согшпд добавляют по 0,5 мкг антител 12СА5 апй-НА в 100 мкл ΡΒ8. Хранят в течение ночи при 4°С.
2. Не связавшиеся антитела против НА удаляют из лунок, переворачивая планшет. Планшет промывают йН2О. Для удаления избытка жидкости планшетом постукивают по бумажному полотенцу.
3. В каждую лунку добавляют по 150 мкл блокирущего буфера. Инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре.
4. Планшет промывают 4 раза буферным раствором ТВ8-Т.
5. Лизат разбавляют в ΡΒ8 (1,5 мкг лизата/100 мкл ΡΒ8).
6. В каждую лунку добавляют по 100 мкл разбавленного лизата. Встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч.
7. Промывают, как описано на стадии 4.
8. В лунки планшета для ИФА, покрытого рук 2-НА, добавляют по 50 мкл буферного раствора 2Х для определения киназной активности.
9. В каждую лунку добавляют по 25 мкл 400 мкМ раствора исследуемого соединения в 4% ДМСО.
- 69 005996
В контрольные лунки добавляют только 4% ДМСО.
10. В лунки для отрицательного контроля добавляют по 25 мкл 0,5 М ЭДТУ.
11. Во все лунки добавляют по 25 мкл 20 мкМ АТФ. Инкубируют при встряхивании в течение 10 мин.
12. Реакцию останавливают добавлением во все лунки по 25 мкл 500 мМ ЭДТУ (рН 8,0).
13. Промывают, как указано на стадии 4.
14. В каждую лунку добавляют по 100 мкл НКР-конъюгированных антител ап11-Р1уг, разбавленных 1:6000 в буфере для разбавления антител. Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
15. Планшет промывают 3 раза буферным раствором ТВЗТ и 1 раз РВЗ.
16. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора АВЗТ.
17. При необходимости развитие реакции останавливают добавлением в каждую лунку по 20 мкл 10% 8Ό8.
18. Планшет считывают с использованием ридера для ИФА (фильтр образца при 410 нм и фильтр сравнения 630 нм).
Биохимическое исследование ЕСЕК1
Данный анализ используют для измерения киназной активности ίη νί1Γ0 ЕСЕ1-К с использованием ИФА.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты Со81аг для ИФА (фирмы Сотшпд, номер по каталогу 3369).
2. Поли(С1и-Туг) (фирмы 81§та, номер по каталогу РО275).
3. Буферный раствор РВЗ (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 450-1300ЕВ).
4. 50 мМ буферный раствор Нере8.
5. Блокирующий буфер (5% БСА/РВЗ).
6. Очищенный С8Т-ЕСЕК1 (фирмы Зидеп, 1пс.).
7. Буферный раствор для разбавления киназы. Смешивают 500 мкл 1 М Нере8 (С1Ьсо), 20 мкл 5% БСА/РВ8, 10 мкл 100 мМ ортованадата натрия и 50 мкл 5 М №С1.
8. 10 мМ АТФ.
9. Смесь для фосфорилирования АТФ/МпС12: смешивают 20 мкл АТФ, 400 мкл 1М МпС12 и 9,56 мл άΗ2О.
10. 96-луночные полипропиленовые планшеты ΝϋΝΟ с У-образным дном (фирмы Αρρ^ά 8аеп1Шс, номер по каталогу А8-72092).
11. 0,5 М ЭДТУ.
12. 0,5% ТВ8Т, добавляют 500 мкл Твин и объем доводят до 1 л ТВ8.
13. Поликлональная сыворотка кролика против фосфотирозина (фирмы ЗиСЕН 1пс.).
14. НКР -конъюгированные козьи антитела против 1дС кролика (фирмы Вю8оитсе, номер по каталогу АЫ0404).
15. Раствор АВТ8.
16. Раствор АВТЗ/Н2О2.
Методика
1. 96-луночные планшеты Со81аг для ИФА покрывают раствором поли(С1и,Туг), в каждую лунку добавляют по 1 мкг в 100 мкл РВЗ. Хранят в течение ночи при 4°С.
2. Планшеты с покрытием промывают 1 раз РВ8.
3. В каждую лунку добавляют по 150 мкл блокирующего буфера 5% БСА/РВ8. Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
4. Планшет промывают 2 раза РВ8. затем 1 раз 50 мМ Нере8. Для удаления избытка жидкости и пузырьков воздуха планшетом постукивают по бумажному полотенцу.
5. В планшет добавляют по 25 мкл 0,4 мМ раствора исследуемого соединения в 4% ДМСО и в контрольные лунки только 4% ДМСО.
6. Очищенный С8Т-ЕСЕК1 разбавляют БРК (в каждую лунку по 5 нг киназы/50 мкл БРК).
7. В каждую лунку добавляют по 50 мкл разбавленной киназы.
8. Киназную реакцию инициируют добавлением в каждую лунку по 25 мкл свежеприготовленного раствора АТФ/Мп++ (0,4 мл 1 М МпС12, 40 мкл 10 мМ АТФ, 9,56 άΗ2О).
9. Данная киназная реакция проходит с высокой скоростью и должна быть остановлена добавлением по 25 мкл 0,5 М ЭДТУ способом, аналогичным добавлению АТФ.
10. Планшет промывают 4 раза свежеприготовленным раствором ТВ8Т.
11. Готовят буфер для разбавления антител: на 50 мл раствора смешивают 5 мл 5% БСА, 250 мкл 5% сухого молока и 50 мкл 100 мМ раствора ванадата натрия. Конечный объем доводят 0,05% ТВ8Т.
12. В каждую лунку добавляют по 100 мкл антител против фосфотирозина (разбавление 1:10000 в растворе для разбавления антител). Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
13. Промывают, как описано на стадии 10.
- 70 005996
14. В каждую лунку добавляют по 100 мкл НКР-конъюгированных козьих антител против 1дС кролика (фирмы В1о8оигсе) (разбавление 1:6000 в растворе разбавления антител). Инкубируют при встряхивании в течение 1 ч при комнатной температуре.
15. Промывают, как описано на стадии 10, и затем РВ8 для удаления пузырьков воздуха и избытка Твина.
16. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2.
17. Инкубируют при встряхивании в течение от 10 до 20 мин. Все пузырьки воздуха удаляют.
18. Результаты считывают с использованием ридера для ИФА Иупа1есй МК7000 (фильтр для образца при 410 нм, фильтр сравнения при 630 нм).
Биохимический метод исследования рецептора ЕСЕК
Данный метод предназначен для определения киназной активности ίη νίίτο рецептора ЕСЕ1-К с использованием метода ИФА.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ИФА фирмы Согшпд.
2. Моноклональные антитела апй-ЕСЕК 8иМО1 (производства фирмы 8идеп, 1пс.).
3. Буферный раствор РВ8.
4. Буферный раствор ТВ8Т.
5. Блокирующий буферный раствор: на 100 мл раствора смешивают 5,0 г обезжиренного быстрорастворимого молока фирмы Сагпайоп со 100 мл РВ8.
6. Лизат клеток А431 (производства фирмы 8идеп, 1пс.).
7. Буферный раствор ТВ8.
8. Буферный раствор ТВ8 + 10% ДМСО: на 1 л раствора смешивают 1,514 г Трис, 2,192 г ЫаС1 и 25 мл ДМСО, и конечный обем доводят до 1 л άН2О.
9. Аденозин-5'-трифосфат (АТФ из мышц лошади, производства фирмы 81дта, номер по каталогу А-5394), 1,0 М раствор в άН2О. Указанный реагент готовят непосредственно перед использованием и хранят во льду.
10. 1,0 мМ МпС12.
11. Раствор для фосфорилирования АТФ/МпС12: на 10 мл раствора смешивают 300 мкл 1 мМ АТФ, 500 мкл МпС12 и 9,2 мл дН2О. Данный реагент готовят непосредственно перед использованием и хранят во льду.
12. 96-луночные полипропиленовые планшеты с У-образным дном ЫИЫС.
13. ЭДТУ.
14. Кроличья поликлональная сыворотка к фосфотирозину (производства фирмы 8идеп 1пс.).
15. НКР-Коньюгат козьих антител против 1дС кролика (фирмы Вю8оигсе, номер по каталогу АИ10404).
16. Реагент АВТ8.
17. 30% раствор перекиси водорода.
18. Смесь АВТ8/Н2О2.
19. 0,2 М раствор НС1.
Методика
1. 96-луночный планшет для ИФА фирмы Согшпд обрабатывают антителами 8иМО1, добавляя в каждую лунку по 0,5 мкг 8иМО1 в 100 мкл РВ8, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Несвязанные антитела 8иМО1 удаляют путем переворачивания планшета и удаления раствора. Планшет промывают 1 раз άН2О. Избыток раствора удаляют, постукивая планшетом по бумажному полотенцу.
3. В каждую лунку добавляют по 150 мкл блокирующего буферного раствора и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании.
4. Планшет промывают 3 раза деионизированной водой, затем один раз раствором ТВ8Т. Планшетом постукивают по бумажнму полотенцу для удаления избытка жидкости и пузырьков воздуха.
5. Лизат разбавляют раствором РВ8 (7 мкг лизата в 100 мкл РВ8).
6. В каждую лунку добавляют по 100 мкл разбавленного лизата, планшет встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч.
7. Планшет промывают, как указано на стадии 4 выше.
8. В каждую лунку планшета для ИФА, с нанесенным рецептором ЕСЕК, добавляют по 120 мкл раствора ТВ8.
9. Исследуемое соединение разбавляют в ТВ8 в соотношении 1:10 и добавляют в лунки.
10. В лунки планшета для ИФА добавляют по 13,5 мкл разбавленного исследуемого соединения. В контрольные лунки добавляют по 13,5 мкл ТВ8 в 10%ДМСО.
11. Планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре и при встряхивании.
12. Во все лунки, кроме лунок с отрицательным контролем, добавляют по 15 мкл смеси для фосфорилирования, конечный объем смеси в каждой лунке должен составлять приблизительно 150 мкл, конечная концентрация компонентов в каждой лунке составляет 3 мкМ АТФ/5 мМ МпС12. Планшет инкуби
- 71 005996 руют в течение 5 мин при встряхивании.
13. Реакцию останавливают путем добавления в каждую лунку по 16,5 мкл раствора ЭДТУ при непрерывном встряхивании, после добавления раствора ЭДТУ планшет встряхивают в течение 1 мин.
14. Планшет промывают 4 раза деионизированной водой, два раза раствором ТВ8Т.
15. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора антител к фосфотирозину (разбавление в ТВ8Т 1:3000). Инкубируют в течение 30-45 мин при комнатной температуре при встряхивании.
16. Промывают, как указано на стадии 4 выше.
17. В каждую лунку добавляют по 100 мкл ΗΚΡ-конъюгата козьих антител против 1дС кролика фирмы Вю8оигсе (разбавленного в ТВ8Т 1:2000). Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин при встряхивании.
18. Промывают, как указано на стадии 4 выше.
19. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора АВТЗ/ЩО^
20. Инкубируют в течение от 5 до 10 мин при встряхивании, удаляют любые пузырьки воздуха.
21. При необходимости реакцию останавливают путем добавления в каждую лунку по 100 мкл 0,2 М раствора Ηί,Ί.
22. Поглощение в лунках измеряют на ридере Бупа1ес11 МК7000 ЕЫ8А (фильтр для образцов - 410 нм, фильтр сравнения - 630 нм).
Биохимический метод исследования рецептора РБСЕК
Данный метод предназначен для определения ίη νίΐτο киназной активности рецептора ЕСЕ1-К с использованием метода ИФА.
Материалы и реагенты
1. 96-луночные планшеты для ИФА фирмы Согшпд.
2. Моноклональные антитела апЦ-РБСЕЕ 28Б4С10 (производства фирмы 8идеп, 1пс.).
3. Буферный раствор РВ8.
4. Буферный раствор ТВ8Т.
5. Блокирующий буферный раствор (аналогично буферному раствору, использованному для биоиспытаний ЕСЕК).
6. Лизат клеток ΝΙΗ 3Т3, экспрессирующих рецептор РБСЕК-β (производства фирмы 8идеп. 1пс.)
7. Буферный раствор ТВ8.
8. Буферный раствор ТВ8 + 10% ДМСО.
9. АТФ.
10. МпС12.
11. Смесь для фосфорилирования киназой: на 10 мл раствора смешивают 250 мкл 1 М Трис, 200 мкл 5 М №1С1, 100 мкл 1 М МпС12 и 50 мкл 100 мМ Тритона Х-100, объем доводят άΗ^ до 10 мл.
12. 96-луночные полипропиленовые планшеты с У-образным дном ΝυΝΟ
13. ЭДТУ.
14. Кроличья поликлональная сыворотка к фосфотирозину (производства фирмы 8идеп 1пс.).
15. ΗΚΡ-Коньюгат козьих антител против 1дС кролика (производства фирмы Вю8оигсе, номер по каталогу АЬ10404).
16. Реагент АВТ8.
17. 30% раствор перекиси водорода.
18. Смесь АВТ8/ЩО2.
19. 0,2 М раствор ΗΟ.
Методика
1. 96-луночный планшет для ИФА фирмы Согшпд обрабатывают антителами, добавляя в каждую лунку по 0,5 мкг 28Б4С10 в 100 мкл РВ8, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Несвязанные антитела 28Б4С10 удаляют путем переворачивания планшета для удаления жидкости. Планшет промывают 1 раз άΗ^. Избыток жидкости удаляют, постукивая планшетом по бумажному полотенцу.
3. В каждую лунку добавляют по 150 мкл блокирующего буфера и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании.
4. Планшет промывают 3 раза деионизированной водой, затем один раз раствором ТВ8Т. Планшетом постукивают по бумажному полотенцу для удаления избытка жидкости и пузырьков воздуха.
5. Лизат разбавляют раствором ΗNТС (10 мкг лизата в 100 мкл ΗΝΊΌ).
6. В каждую лунку добавляют по 100 мкл разбавленного лизата, планшет встряхивают при комнатной температуре в течение 60 мин.
7. Планшет промывают, как указано на стадии 4 выше.
8. В каждую лунку планшета для ИФА, содержащего связанный рецептор РБСЕЕ, добавляют по 80 мкл рабочего раствора для фосфорилирования киназой.
9. Исследуемое соединение разбавляют в ТВ8 в соотношении 1:10 в лунках 96-луночного полипропиленового планшета.
10. В лунки планшета для ИФА добавляют по 10 мкл разбавленного исследуемого соединения. В
- 72 005996 контрольные лунки добавляют 10 мкл ТВ8 + 10% ДМСО.
11. Во все лунки, кроме лунок с отрицательным контролем, добавляют по 10 мкл раствора АТФ (конечный объем смеси в каждой лунке должен составлять приблизительно 100 мкл, конечная концентрация АТФ в каждой лунке составляет 20 мкМ). Планшет инкубируют в течение 30 мин при встряхивании.
12. Реакцию останавливают путем добавления в каждую лунку по 10 мкл раствора ЭДТУ.
13. Планшет промывают 4 раза деионизированной водой, два раза раствором ТВ8Т.
14. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора антител к фосфотирозину (разбавление в ТВ8Т 1:3000). Инкубируют в течение 30-45 мин при комнатной температуре при встряхивании.
15. Промывают, как указано на стадии 4 выше.
16. В каждую лунку добавляют по 100 мкл НВР-конъюгата козьих антител против 1дС кролика фирмы Вю8оигсе (разбавленного в ТВ8Т 1:2000). Инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин при встряхивании.
17. Промывают, как указано на стадии 4 выше.
18. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора АВТ8/Н2О2.
19. Инкубируют в течение от 10 до 30 мин при встряхивании, удаляют любые пузырьки воздуха.
20. При необходимости реакцию останавливают путем добавления в каждую лунку по 100 мкл 0,2 М раствора НС1.
21. Поглощение в лунках измеряют на ридере Бупа1есй МВ7000 ЕЫ8А (фильтр для образцов - 410 нм, фильтр сравнения - 630 нм).
Исследование киназы НЕК-2 на клеточном уровне
Этот метод анализа используют для определения активности киназы НЕВ-2 на целых клетках в формате ИФА.
Материалы и реагенты
1. Среда БМЕМ (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 11965-092).
2. Эмбриональная сыворотка коровы (ЕВ8, фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 16000-044), инактивированная нагреванием на водяной бане в течение 30 мин при 56°С.
3. Трипсин (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 25200-056).
4. Ь-Глутамин (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 25030-081).
5. Нере8 (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 15630-080).
6. Среда для роста клеток: смешивают 500 мл БМЕМ, 55 мл инактивированной нагреванием ЕВ8, 10 мл Нере8 и 5,5 мл Ь-глутамина.
7. Среда для истощения: смешивают 500 мл БМЕМ, 2,5 мл инактивированной нагреванием ЕВ8, 10 мл Нере8 и 5,5 мл Ь-глутамина.
8. РВ8.
9. 96-луночные планшеты для микротитрования культуральных тканей с плоским дном (фирмы Согшпд, номер по каталогу 25860).
10. Чашки Петри для культуральных тканей диаметром 15 см (фирмы Согппд, номер по каталогу 08757148).
11. 96-луночные планшеты для ИФА фирмы Согшпд.
12. 96-луночные полипропиленовые планшеты с У-образным дном ΝυΝΟ
13. Картриджи для переноса Со81аг для Тгап81аг 96 (фирмы Со81аг, номер по каталогу 7610).
14. 8иМО 1: моноклональные антитела против ЕСЕВ (фирмы 8идеп 1пс.).
15. Буферный раствор ТВ8Т.
16. Блокирующий буферный раствор: 5% быстрорастворимое сухое молоко Сагпайоп в РВ8.
17. Лиганд ЕСЕ: ЕСЕ-201 (фирмы 8Ыпсо Атепсап, 1арап). Порошок суспендируют в 100 мкл 10 мМ НС1. Добавляют 100 мкл 10 мМ №ОН. Добавляют 800 мкл РВ8 и переносят в пробирку Эппендорф, хранят при -20°С до использования.
18. Буферный раствор для лизиса НОТС: исходный раствор 5Х НNТС: смешивают 23,83 г Нере8, 43,83 г №1С1 500 мл глицерина и 100 мл Тритон Х-100, конечный объем доводят до 1 л άН2О. Исходный буферный раствор 1Х НОТС*: смешивают 2 мл НОТС, 100 мкл 0,1 М ^зУО^ 250 мкл 0,2 М ΝοίΑ и 100 мкл ЭДТУ.
19. ЭДТУ.
20. Nа3VО4. Исходный раствор: смешивают 1,84 г Nа3VО4 с 90 мл άН2О. рН доводят до 10. Кипятят в микроволновой печи в течение 1 мин (раствор становится прозрачным). Охлаждают до комнатной температуры. рН доводят до 10. Повторяют стадии нагревание/охлаждение до тех пор, пока рН составляет 10.
21. 200 мМ №14Р2О-.
22. Поликлональная антисыворотка кролика против фосфотирозина (антитела апО-РАг, фирма 8идеп 1пс.).
23. Антисыворотка, очищенная аффинной хроматографией, козьи антитела против 1дС кролика, конъюгат с НВР (фирмы Вю8оигсе, номер по каталогу АЫ0404).
- 73 005996
24. Раствор АВТ8.
25. 30% раствор пероксида водорода.
26. АВТ8/Н2О2.
27. 0,2 М НС1.
Методика
1. 96-луночные планшеты Сотшпд для ИФА покрывают 8иХО1. добавляя в каждую лунку по 1,0 мкг антител в РВ8, конечный объем в каждой лунке доводят до 100 мкл. Хранят в течение ночи при 4°С.
2. В день использования удаляют буферный раствор для покрытия и планшет промывают 3 раза бН2О и 1 раз буферным раствором ТВ8Т. Если не оговорено иначе, все стадии промывки выполняют, как описано выше.
3. В каждую лунку добавляют по 100 мкл блокирующего буферного раствора. Планшет инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре. Планшет промывают непосредственно перед использованием.
4. В данном эксперименте используют линию клеток химерного белка ЕСЕг/НЕЯ-2/3Т3-С7.
5. Выбирают чашки, в которых конфлюентность составляет 80-90%. Клетки отбирают трипсинизацией и центрифугированием при 1000 об/мин при комнатной температуре в течение 5 мин.
6. Клетки ресуспендируют в среде для истощения и количество клеток подсчитывают с использованием Тгурап Ь1ие. Необходимая жизнеспособность должна составлять приблизительно более 90%. Клетки высевают в среде для истощения при плотности 2500 клеток в лунке, по 90 мкл в лунку 96-луночного планшета для микротитрования. Пересеянные клетки инкубируют в течение ночи при 37°С в присутствии 5% СО2.
7. Эксперимент начинают через 2 дня после пересева.
8. Исследуемые соединения растворяют в 4% ДМСО. Затем образцы еще раз разбавляют в планшете с использованием истощенной среды ΌΜΕΜ. Обычно разбавление составляет 1:10 или более. Затем содержимое всех лунок переносят в чашки с клетками при дальнейшем разбавлении 1:10 (10 мкл образца и среды в 90 мкл среды для истощения). Конечная концентрация ДМСО составляет 1% или менее. Может быть также использовано стандартное серийное разбавление.
9. Инкубируют в присутствии 5% СО2 при 37°С в течение 2 ч.
10. Готовят раствор лиганда ЕСЕ путем разбавления исходного раствора ЕСЕ (16,5 мкМ) теплой средой ЭМЕМ до 150 нМ.
11. Готовят свежеприготовленный НМТС* в количестве, достаточном для нанесения по 100 мкл в каждую лунку; раствор хранят во льду.
12. После инкубирования в течение 2 ч с исследуемым соединением к клеткам добавляют приготовленный раствор лиганда ЕСЕ, в каждую лунку по 50 мкл, конечная концентрация лиганда составляет 50 нМ. В лунки с положительным контролем добавляют такое же количество ЕСЕ. В лунки с отрицательным контролем ЕСЕ не добавляют. Инкубируют при 37°С в течение 10 мин.
13. Исследуемое соединение удаляют, ЕСЕ и ЭМ ЕМ. Клетки промывают один раз РВ8.
14. В клетки переносят НОТС*, в каждую лунку по 100 мкл. Помещают в лед на 5 мин. В это время из планшета для ИФА удаляют блокирующий буфер и промывают.
15. Клетки собирают из планшета микродозатором и клеточный материал гомогенизируют с помощью многократного повторения операций засасывания и выдавливания раствора для лизиса НОТС*. Лизат переносят в лунки покрытого, заблокированного и промытого планшета для ИФА. Или для переноса лизата в планшет используют картридж для переноса Со81аг.
16. Инкубируют при встряхивании при комнатной температуре в течение 1 ч.
17. Лизат удаляют и лунки промывают. В планшет для ИФА переносят свежерастворенные антитела ап11-Р1уг (1:3000 в ТВ8Т, 100 мкл в лунке).
18. Инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре.
19. Антитела апН-Р1уг удаляют, планшет промывают. В планшет для ИФА добавляют свежеразбавленные антитела Вю8оигсе (разбавление 1:8000 в ТВ8Т, по 100 мкл в каждую лунку).
20. Инкубируют при встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре.
21. Антитела Вю8оигсе удаляют, планшет промывают. В планшет для ИФА переносят свежеприготовленный раствор АВТ8/Н2О2, по 100 мкл в лунку.
22. Инкубируют при встряхивании в течение 5-10 мин. Все пузырьки воздуха удаляют.
23. Реакцию останавливают добавлением в каждую лунку по 100 мкл 0,2 М НС1.
24. Поглощение в лунках измеряют на ридере Оупа1ес11 МЯ7000 ЕЬ18А (фильтр для образцов - 410 нм, фильтр сравнения - 630 нм).
Исследование комплекса СИК2/циклин А
Данный анализ используют для определения ш νίΙΐΌ активности серин-треонинкиназы в системе сбк2 человека/циклин А с использованием сцинтилляционного анализа (СА).
Материалы и реагенты
1. 96-луночные гибкие планшеты из сополимера полиэтилена и терефталата \Уа11ас (фирмы \Уа11ас, номер по каталогу 1450-401).
- 74 005996
2. [у33Р]-АТФ Атегкйат Вебгуие (фирмы Атегкйат, номер по каталогу АН 9968).
3. Поливинилтолуоловые гранулы Атегкйат для СА, покрытые стрептавидином (фирмы Атегкйат, номер по каталогу Κ.ΡΝΟ00071). Гранулы ресуспендируют в РВ8 в отсутствии магния или кальция, концентрация гранул составляет 20 мг/мл.
4. Активированный ферментный комплекс сбк2/циклин А, очищенный от клеток 8Г9 (фирмы 8идеп 1пс.).
5. Биотинилированный пептидный сусбтрат (ОеЬйбе). Пептид биотин-Х-РКТРККАККЬ растворяют в бН2О при концентрации 5 мг/мл.
6. Смесь пептид/АТФ: на 10 мл раствора смешивают 9,979 мл бН2О, 0,00125 мл холодного АТФ, 0,010 мл ЭеЬибе и 0,010 мл у33Р АТФ. Конечная концентрация в лунке составляет 0,5 мкМ холодного АТФ, 0,1 мкг ЭеЬибе и 0,2 мкКи у33Р АТФ.
7. Буферный раствор для определения киназы: на 10 мл раствора смешивают 8,85 мл бН2О, 0,625 мл Трис (рН 7,4), 0,25 мл 1 М МдС12, 0,25 мл 10% №40 и 0,025 мл 1 М ΌΤΤ, который добавляют свежеприготовленным непосредственно перед использованием.
8. 10 мМ АТФ в бН2О.
9. 1 М Трис, рН доводят до 7,4 с использованием НС1.
10. 1 М М§С12.
11. 1 М ΌΤΤ.
12. РВ8 (фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 14190-144).
13. 0,5 М ЭДТУ.
14. Раствор для остановки реакции: на 10 мл раствора смешивают 9,25 мл РВ8, 0,005 мл 100 мМ АТФ, 0,1 мл 0,5 М ЭДТУ, 0,1 мл 10% Тритон Х-100 и 1,25 мл (20 мг/мл) гранул для СА.
Методика
1. Готовят растворы исследуемых соединений с концентрацией, в 5 раз превышающей конечную, в 5% ДМСО. В каждую лунку добавляют по 10 мкл. В лунки с отрицательным контролем добавляют только по 10 мкл 5% ДМСО.
2. 5 мкл раствора сбк2/циклин А разбавляют в 2,1 мл буферного раствора 2х для определения активности киназы.
3. В каждую лунку добавляют по 20 мкл фермента.
4. В лунки с отрицательным контролем добавляют по 10 мкл 0,5 М ЭДТУ.
5. Для инициирования киназной реакции в каждую лунку добавляют по 20 мкл смеси пептид/АТФ. Инкубируют в течение 1 ч без встряхивания.
6. В каждую лунку добавляют по 200 мкл раствора для остановки реакции.
7. Планшет выдерживают в течение по крайней мере 10 мин.
8. Планшет центрифугируют при приблизительно 2300 об/мин в течение 3-5 мин.
9. Радиоактивность в планшете измеряют с использованием ридераТп1их или с использованием аналогичного ридера.
Анализ трансфосфорилирования МЕТ
Данный анализ используют для определения уровней фосфотирозина в субстрате поли(глутаминовая кислота/тирозин) (4:1) с целью идентификации агониста/антагониста процесса трансфосфорилирования субстрата с помощью МЕТ.
Материалы и методы
1. 96-луночные планшеты Согшпд для ИФА (фирмы Согшпд, номер по каталогу 26805-96).
2. Поли(С1и,Туг), 4:1, фирмы 8щта, номер по каталогу Р 0275.
3. РВ8, фирмы С1Ьсо, номер по каталогу 450-1300ЕВ.
4. 50 мМ Нерек.
5. Блокирующий буферный раствор: 25 г БСА, фирмы 81дта, номер по каталогу А-7888, растворяют в 500 мл РВ8, фильтруют через фильтр с диаметром пор 4 мкм.
6. Очищенный гибридный белок С8Т, содержащий домен киназы МЕТ, фирмы 8идеп 1пс.
7. Буферный раствор ТВ8Т.
8. 10% водный (Н2О М|Ш0) раствор ДМСО.
9. 10 мМ водный (бН2О) раствор аденозин-5'-трифосфата, фирмы 8щта, номер по каталогу А-5394).
10. Буферный раствор 2х для разбавления киназы: на 100 мл раствора смешивают 10 мл 1 М НЕРЕ8 при рН 7,5 с 0,4 мл 5% смеси БСА/РВ8, 0,2 мл 0,1 М ортованадата натрия и 1 мл 5 М хлорида натрия в 88,4 мл бН2О.
11. Реакционная смесь АТФ 4х: на 10 мл раствора смешивают 0,4 мл 1 М хлорида марганца и 0,02 мл 0,1 М АТФ в 9,56 мл бН2О.
12. Смесь 4х для отрицательного контроля: на 10 мл раствора смешивают 0,4 мл 1 М хлорида марганца в 9,6 мл бН2О.
13. 96-луночные полипропиленовые планшеты ΝϋΝΟ с У-образным дном, фирмы Аррйеб 8с1еп1|Пс, номер по каталогу 8-72092.
- 75 005996
14. 500 мМ раствор ЭДТУ.
15. Буферный раствор для разбавления антител: на 100 мл раствора смешивают 10 мл 5% смеси БСА/РВ8, 0,5 мл 5% быстрорастворимого сухого молока СатпаБоп в РВ8 и 0,1 мл 0,1 М ортованадата натрия в 88,4 мл ТВ8Т.
16. Кроличьи поликлональные антитела к фосфотирозину, фирмы 8идеп, 1пс.
17. НКР-Конъюгат козьих антител против 1§С кролика, фирмы Вю5оигсе 1пс.
18. Раствор ЛВТ8: на 1 л раствора смешивают 19,21 г лимонной кислоты, 35,49 г Жа2НРО4 и 500 мг ЛВТ8, конечный объем раствора доводят άН2О до 1 л.
19. Смесь ЛВТ8/Н2О2: смешивают 15 мл раствора ЛВТ8 с 2 мкл Н2О2 за 5 мин до использования.
20. 0,2 М НС1.
Методика
1. В лунки планшета для ИФА добавляют по 2 мкг поли(С1и-Тут) в 100 мкл РВ8, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Планшет блокируют 150 мкл 5% смеси БСА/РВ8 в течение 60 мин.
3. Планшет промывают 2 раза РВ8, одни раз буферным раствором Нере5, рН 7,4.
4. Во все лунки добавляют по 50 мкл разбавленной киназы. (Очищенную киназу разбавляют буферным раствором для разбавления киназы. Конечная концентрация составляет 10 нг в лунке.)
5. В каждую лунку добавляют исследуемое соединение (в 4% ДМСО), а в контрольные лунки только ДМСО (4% ЙН2О).
6. Инкубируют смесь киназа/соединение в течение 15 мин.
7. В лунки с отрицательным контролем добавляют по 25 мкл 40 мМ МпС12.
8. Во все остальные лунки (кроме лунок с отрицательным контролем) добавляют по 25 мкл смеси АТФ/МпС12. Инкубируют в течение 5 мин.
9. Реакцию останавливают добавлением 25 мкл 500 мМ ЭДТУ.
10. Планшет промывают три раза ТВ8Т.
11. В каждую лунку добавляют по 100 мкл кроличьих поликлональных антител апБ-РКг, разбавленных в соотношении 1:10000 буферным раствором для разбавления антител. Инкубируют при встряхивании при комнатной температуре в течение 1 ч.
12. Планшет промывают три раза ТВ8Т.
13. Конъюгат НКР с антителами к 1дС кролика фирмы Вю5оитсе разбавляют при соотношении 1:6000 буферным раствором для разбавления антител. В каждую лунку добавляют по 100 мкл и инкубируют при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч.
14. Планшет промывают один раз РВ8.
15. В каждую лунку добавляют по 100 мкл раствора ЛВТ8/Н2О2.
16. При необходимости реакцию останавливают добавлением в каждую лунку 100 мкл 0,2 М НС1.
17. Поглощение в лунках измеряют на ридере ОупаЮсН МК7000 ЕЫ8Л (фильтр для образцов - 410 нм, фильтр сравнения - 630 нм).
Анализ трансфосфорилирования 1СР-1
Данный анализ используют для определения уровней фосфотирозина в субстрате поли(глутаминовая кислота/тирозин) (4:1) с целью идентификации агониста/антагониста в процессе трансфосфорилирования сусбтрата с помощью §5ΐ-Ι6Ε-1.
Материалы и методы
1. 96-луночные планшеты Сотшпд для ИФА.
2. Поли(61и,Тут), 4:1, фирмы 8фта, номер по каталогу Р 0275.
3. РВ8, фирмы 61Ьсо, номер по каталогу 450-1300ЕВ.
4. 50 мМ Нере5.
5. Блокирующий буферный раствор ТВВ: на 1 л раствора смешивают 100 г БСА, 12,1 г άТрис (рН 7,5), 58,44 г хлорида натрия и 10 мл 1% Твин-20.
6. Очищенный гибридный белок С8Т, содержащий домен киназы ЮЕ-1, фирмы 8идеп 1пс.
7. Буферный раствор ТВ8Т: на 1 л раствора смешивают 6,057 г Трис, 8,766 г хлорида натрия и 0,5 мл Твин-20, конечный объем раствора доводят до 1 л άН2О.
8. 4% раствор ДМСО в Н2О МШРО.
9. 10 мМ АТФ в άН2О.
10. Буферный раствор 2х для разбавления киназы: на 100 мл раствора смешивают 10 мл 1 М НЕРЕ8 (рН 7,5), 0,4 мл 5% БСА в άН2О, 0,2 мл 0,1 М ортованадата натрия и 1 мл 5 М хлорида натрия, конечный объем доводят άН2О до 100 мл.
11. Реакционная смесь АТФ 4х: на 10 мл раствора смешивают 0,4 мл 1 М МпС12, 0,008 мл 0,01 М АТФ и 9,56 мл άН2О.
12. Смесь 4х для отрицательного контроля: смешивают 0,4 мл 1 М хлорида марганца в 9,6 мл άН2О.
13. 96-луночные полипропиленовые планшеты ΝυΝΌ сУ-образным дном.
14. 500 мМ раствор ЭДТУ в άН2О.
15. Буферный раствор для разбавления антител: на 100 мл раствора смешивают 10 мл 5% БСА в
- 76 005996
РВЗ, 0,5 мл 5% обезжиренного быстрорастворимого сухого молока СагпаНоп в РВЗ и 0,1 мл 0,1 М ортованадата натрия в 88,4 мл ТВЗТ.
16. Кроличьи поликлональные антитела к фосфотирозину, фирмы Зидеп, 1пс.
17. НКР-Конъюгат козьих антител против 1дС кролика, фирмы Вю8оигсе.
18. Раствор АВТЗ.
19. Смесь АВТЗ/Н2О2: смешивают 15 мл раствора АВТЗ с 2 мкл Н2О2 за 5 мин до использования.
20. 0,2 М НС1 в άΗ2О.
Методика
1. В лунки планшета для ИФА добавляют по 2 мкг поли(С1и-Туг) 4:1 (фирмы З1дта, номер по каталогу Р0275) в 100 мкл РВЗ, хранят в течение ночи при 4°С.
2. Планшет промывают 1 раз РВЗ.
3. В каждую лунку добавляют по 100 мкл блокирующего буфера ТВВ. Планшет инкубируют в течение 1 ч при встряхивании при комнатной температуре.
4. Планшет промывают один раз РВЗ, затем два раза 50 мМ буферным раствором Нере8, рН 7,5.
5. В каждую лунку добавляют по 25 мкл исследуемого соединения в 4% ДМСО (который получают разбавлением исходного 10 мМ раствора исследуемого соединения в 100% ДМСО с άΗ2О).
6. Во все лунки добавляют по 10,0 нг киназы д81-1СЕ-1 в 50 мкл буферного раствора для разбавления киназы.
7. Киназную реакцию инициируют добавлением по 25 мкл реакционной смеси АТФ 4х во все лунки с исследуемым соединением и в лунки с положительным контролем. Во все лунки с отрицательным контролем добавляют по 25 мкл смеси для отрицательного конроля 4х. Инкубируют в течение 10 мин при встряхивании при комнатной температуре.
8. Во все лунки добавляют по 25 мкл 0,5 М ЭДТУ (рН 8,0).
9. Планшет промывают буферным раствором ТВЗТ четыре раза.
10. В каждую лунку добавляют кроличью поликлональную антисыворотку против фосфотирозина, разбавленную в сооотношении 1:10000 в 100 мкл буферного раствора для разбавления антител. Инкубируют при встряхивании при комнатной температуре в течение 1 ч.
11. Планшет промывают, как описано на стадии 9.
12. Во все лунки добавляют по 100 мкл НКР-конъюгата с антителами к 1дС кролика фирмы Вю8оигсе, разбавленного в соотношении 1:10000 буферным раствором для разбавления антител. Инкубируют при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч.
13. Планшет промывают, как описано на стадии 9, затем один раз РВЗ для удаления пузырьков воздуха и избытка Твин-20.
14. Реакцию проявляют добавлением в каждую лунку по 100 мкл смеси АВТЗ/Н2О2.
15. Через приблизительно 5 мин поглощение в лунках измеряют на ридере ЕЫЗА (фильтр для образцов - 410 нм, фильтр сравнения - 630 нм).
Определение включения метки Вгйи
В следующем анализе используют клетки, полученные методом генной инженерии с целью экспрессии определенного рецептора, для оценки влияния исследуемого соединения на активность индуцированного лигандом синтеза ДНК путем определения включения метки ВМИ в ДНК.
Следующие материалы, реагенты и методики являются общими для всех анализов с использованием ВМИ. Специфические варианты анализа приведены ниже.
Материалы и реагенты
1. Соответствующий лиганд.
2. Соответствующие клетки, созданные методом генной инженерии.
3. Реагент для введения метки ВМИ: 10 мМ раствор в буфере РВЗ (рН 7,4), производства фирмы ВоеНппдег, МаппНепп. Германия.
4. Е1хЭепа1: раствор для фиксации (готовый для использования), производства фирмы ВоеНппдег, МаппНет, Германия.
5. АпН-ВМи-РОО: конъюгат мышиных моноклональных антител с пероксидазой, производства фирмы ВоеНппдег, МаппНет, Германия.
6. Раствор субстрата ТМВ: тетраметилбензидин (ТМВ), производства фирмы ВоеНппдег, МаппНет, Германия.
7. Раствор для промывки, РВЗ: РВЗ 1Х, рН 7,4.
8. Бычий сывороточный альбумин (БСА): фракция V, порошкообразный, производства фирмы З1дта СНетка1 Со., США.
Общая методика
1. Клетки культивируют в 96-луночном планшете в количестве 8000 клеток в лунке в присутствии 2 мМ раствора глутамина в среде ЭМЕМ, 10% СЗ. Клетки инкубируют при 37°С в 5% СО2 в течение ночи.
2. Через 24 ч клетки промывают раствором РВЗ, затем среду истощают, заменяя среду на бессывороточную среду (0% СЗ в ОМЕМ, 0,1% БСА) и инкубируя клетки в течение 24 ч.
3. На третий день к клеткам одновременно добавляют соответствующий лиганд и тестируемое со
- 77 005996 единение. В лунки с отрицательным контролем добавляют только бессывороточную среду ЭМЕМ, содержащую 0,1% БСА, в лунки с положительным контролем - лиганд, но без исследуемого соединения. Растворы исследуемых соединений готовят в 96-луночном планшете в бессывороточной среде ЭМЕМ в смеси с лигандом и последовательно разбавляют, получая семь концентраций тестируемого соединения.
4. Активацию лиганда проводят в течение 18 ч, затем добавляют разбавленный реагент Вгйи для введения метки (1:100 в среде ЭМЕМ, содержащей 0,1% БСА) и клетки инкубируют с реагентом Вгйи (конечная концентрация 10 мкМ) в течение 1,5 ч.
5. После инкубирования с реагентом для введения метки, среду удаляют декантацией и постукиванием перевернутого планшета по бумажному полотенцу. Добавляют раствор Е|.хОепа1 (по 50 мкл в лунку) и планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 45 мин на качалке для планшет.
6. Раствор для фиксации тщательно удаляют декантацией и постукиванием перевернутого планшета по бумажному полотенцу. В качестве блокирующего буфера добавляют молоко (5% раствор обезвоженного молока в ΡΒ§, по 200 мкл в лунку) и планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин на качалке для планшет.
7. Блокирующий раствор удаляют декантацией и лунки промывают один раз раствором ГВА Добавляют раствор конъюгата антител АпЦ-Вгйи-ЕОО (разбавленный 1:200 в ЕВ8, содержащем 1% БСА, по 50 мкл в лунку) и планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 90 мин на качалке для планшет.
8. Конъюгат антител тщательно удаляют декантацией и промыванием лунок 5 раз раствором ΡΒ§, затем планшет сушат путем переворачивания и постукивания планшетом по бумажному полотенцу.
9. Добавляют раствор субстрата ТМВ (по 100 мкл в лунку) и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре на качалке для планшет до образования окрашивания, достаточного для фотометрического измерения.
10. Поглощение образцов измеряют при 410 нм (в режиме двойной длины волны с использованием фильтра при 490 нм в качестве сравнения) на ридере Эупа1есН ЕЫ8А.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором ЕСЕ
Материалы и реагенты
1. Мышиный ЕСЕ, 201 (фирмы ТоуоЬо Со., Ый., Япония).
2. 3Т3/ЕСЕКс7.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором ЕСЕ и Нег-2 Материалы и реагенты
1. Мышиный ЕСЕ, 201 (фирмы ТоуоЬо Со., Ый., Япония).
2. 3Т3/Е6Ег/Нег2/Е6Ег (ЕСЕг, содержащий домен киназы Нег-2).
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором ЕСЕ и Нег-4 Материалы и реагенты
1. Мышиный ЕСЕ, 201 (фирмы ТоуоЬо Со., Ый., Япония).
2. 3Т3/Е6Ег/Нег4/Е6Ег (ЕСЕг, содержащий домен киназы Нег-4).
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором РБСЕ Материалы и реагенты
1. ΡΌ6Ε человека В/В (фирмы Воейппдег, МаппНепп, Германия).
2. 3Т3/ЕСЕКс7.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором ЕСЕ
Материалы и реагенты
1. ЕСЕ2/ЬЕСЕ человека (фирмы С1Ьсо ВКЬ, США).
2. 3Т3с7/ЕСЕг.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором 1СЕ1
Материалы и реагенты
1. Рекомбинантный 1СЕ1 человека (С511, фирмы Еготеда Согр., США).
2. 3Т3/ЮЕ1Г.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного инсулином
Материалы и реагенты
1. Кристаллический инсулин быка, препарат с цинком (13007, фирмы С1Ьсо ВКЬ, США).
2. 3Т3/Н25.
Анализ включения метки Вгйи, индуцированного фактором НСЕ Материалы и реагенты
1. Рекомбинантный НСЕ человека (номер по каталогу 249-НС, фирмы Κ&Ό 8у81ет8, 1пс., США).
2. Клетки ВхРС-3 (АТСС СКЬ-1687).
Методика
1. Клетки культивируют в 96-луночном планшете в количестве 9000 клеток в лунке в присутствии К₽М1 10% ЕВ8. Клетки инкубируют при 37°С в 5% СО2 в течение ночи.
2. Через 24 ч клетки промывают раствором ΡΒ§, затем среду истощают, заменяя среду на 100 мкл бессывороточной среды (КБМ!, содержащей 0,1% БСА) и инкубируя клетки в течение 24 ч.
- 78 005996
3. На третий день к клеткам добавляют 25 мкл лиганда (приготовленного следующим образом: 1 мг/мл в ВРМЕ содержащей 0,1% БСА, конечная концентрация НОР составляет 200 нг/мл) и тестируемые соединения. В лунки с отрицательным контролем добавляют 25 мкл бессывороточной среды ВРМЕ содержащей только 0,1% БСА, в лунки с положительным контролем - лиганд (НОР), но без исследуемого соединения. Растворы исследуемых соединений готовят в 96-луночном планшете в бессывороточной среде ΒРМI в смеси с лигандом при концентрации в 5 раз большей их конечной концентрации, и последовательно разбавляют, получая семь концентраций исследуемого соединения. Обычно наибольшая конечная концентрация исследуемого соединения составляет 100 мкМ, при этом используют разбавление 1:3 (то есть конечная концентрация исследуемого соединения находится в интервале 0,137 - 100 мкМ).
4. Активацию лиганда проводят в течение 18 ч, затем в каждую лунку добавляют 12,5 мкл разбавленного реагента Вгби для введения метки (1:100 в среде ΒРМI, содержащей 0,1% БСА) и клетки инкубируют с реагентом Вгби (конечная концентрация 10 мкМ) в течение 1 ч.
5. Эту стадию проводят аналогично общей методике.
6. Эту стадию проводят аналогично общей методике.
7. Блокирующий раствор удаляют декантацией и лунки промывают один раз раствором РВ8. Добавляют раствор конъюгата антител ЛпЦ-Вгби-РОЭ (разбавленный 1:100 в РВ8, содержащем 1% БСА, по 100 мкл в лунку) и планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 90 мин на качалке для планшет.
8. Эту стадию проводят аналогично общей методике.
9. Эту стадию проводят аналогично общей методике.
10. Эту стадию проводят аналогично общей методике.
Исследование с использованием клеток НиУ-ЕС-С
Следущая методика предназначена для определения активности исследуемых соединений по отношению к рецепторам РООР-В, РОР-В, ΥΕΟΕ, аРОР или Р1к-1/КЭВ, причем все перечисленные рецепторы являются природными соединениями, экспрессируемыми клетками НиУ-БС.
Нулевой день
1. Клетки НиУ-ВС-С (эндотелиальные клетки пупочной вены человека из коллекции Атепсап Туре
Си11иге СоПесбоп, номер по каталогу 1730 СВЬ) промывают и обрабатывают трипсином. Клетки промывают раствором Э-РВЗ (фосфатный буфер, содержащий хлористый натрий, ЭЫЬессо, производства фирмы О1Ьсо ВВЬ, номер по каталогу 14190-029) два раза объемом приблизительно 1 мл на флакон с площадью 10 см2. Клетки обрабатывают раствором 0,05% трипсин-ЭДТУ в несодержащем ферментов растворе для диссоциации клеток (производства фирмы СНет1са1 Сотрапу, номер по каталогу С-1544).
0,05% раствор трипсина готовят путем разбавления раствора 0,25% трипсин/1 мМ ЭДТУ (производства фирмы О1Ьсо, номер по каталогу 25200-049) в растворе для диссоциации клеток. Клетки обрабатывают трипсином объемом приблизительно 1 мл на флакон с площадью 25-30 см2 в течение 5 мин при 37°С. Когда клетки сняты с поверхности флакона, добавляют равный объем среды для анализа и переносят в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл (производства фирмы Р18Йег 8с1еп1Шс, номер по каталогу 05-539-6).
2. Клетки промывают приблизительно 35 мл среды для анализа в стерильной центрифужной пробирке объемом 50 мл путем добавления среды для анализа, центрифугирования при приблизительно 200хд в течение 10 мин, удаления супернатанта и ресуспендирования в 35 мл раствора Э-РВ8. Клетки промывают еще два раза раствором Э-РВЗ, затем клетки ресуспендируют в среде для анализа в объеме приблизительно 1 мл на культуральный флакон площадью 15 см2. Среда для анализа содержит среду Р12К (производства фирмы О1Ьсо ВВЬ, номер по каталогу 21127-014) и 0,5% инактивированной нагреванием РВ8. Число клеток подсчитывают на приборе Сои11ег Соип1ег® (производства фирмы Сои11ег ΕΚ^ιόι'1Κ8 Шс.) и добавляют среду для анализа до концентрации клеток 0,8-1,0х105 клеток/мл.
3. В каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном добавляют по 100 мкл клеточной суспензии или по 0,8-1,0х104 клеток, инкубируют при 37°С в присутствии 5% СО2 в течение приблизительно 24 ч.
Первый день
1. Готовят серию двухкратных разведений исследуемого соединения в отдельном 96-луночном планшете, в основном в диапазоне концентрации от 50 мкМ до 0 мкМ. Используют вышеупомянутую среду для анализа, как указано на стадии 2 выше в нулевой день. Разведения получают путем добавления в верхнюю лунку определенного столбца лунок в планшете 90 мкл 200 мкМ раствора исследуемого соединения (раствор 4Х). Так как концентрация исходного раствора исследуемого соединения обычно составляет 20 мМ в ДМСО, то концентрация раствора лекарственного средства составляет 200 мкМ, а концентрация ДМСО - 2%.
В качестве раствора для разбавления исследуемого соединения используют среду для анализа (Р12К+0,5 % РВ8), содержащую 2% ДМСО, с целью разбавления исследуемого соединения при постоянной концентрации ДМСО. В каждую из остальных лунок в (столбце) добавляют по 60 мкл указанного раствора для разбавления. Из верхней лунки, содержащей 120 мкл 200 мкМ раствора исследуемого соединения, отбирают 60 мкл и смешивают их с 60 мкл раствора во второй лунке столбца. Затем отбирают
- 79 005996 мкл из этой лунки и смешивают их с 60 мкл третьей лунки столбца и разбавления продолжают до завершения двухкратных разведений. Когда смешивание в предпоследней лунке столбца завершено, из нее отбирают 60 мкл раствора и отбрасывают их. В последней лунке столбца оставляют 60 мкл среды, содержащей ДМСО, и используют эту лунку как контрольную, не содержащую исследуемого соединения. Готовят 9 столбцов с разбавлениями исследуемых соединений, которых достаточно для проведения анализа в трех повторных сериях для каждого исследуемого соединения: (1) фактор УЕСЕ (полученный на фирме РергоТеск 1пс., номер по каталогу 100-200), (2) фактор роста эндотелиальных клеток (ЕССЕ), известный также под названием кислый фибробластный фактор роста или аЕСЕ (полученный на фирме Воекппдег Маппкет Вюскетюа, номер по каталогу 1439 600) или (3) фактор РИСЕ В/В человека, полученный на фирме Воекппдег Маппкеш, Германия) и контроль со средой для анализа. ЕССЕ используют в виде препарата, содержащего натриевую соль гепарина.
2. В 96-луночный планшет для анализа, содержащий в каждой лунке по 0,8-1,0.4104 клеток НиУЕС-С в 100 мкл среды, полученных в течение нулевого дня, переносят по 50 мкл разбавленного исследуемого соединения из каждой лунки планшета с разбавлениями, и инкубируют в течение приблизительно 2 ч при 37°С в присутствии 5% СО2.
3. В три повторные серии лунок, содержащих исследуемое соединение, добавляют по 50 мкл раствора фактора УЕСЕ с концентрацией 80 мкг/мл, раствора фактора ЕССЕ с концентрацией 20 нг/мл или контрольной среды. По аналогии с концентрацией исследуемых соединений концентрация факторов роста в четыре раза выше (раствор 4Х) по сравнению с необходимой конечной концентрацией. Для разбавления факторов роста до необходимой концентрации используют среду для анализа, описанную на стадии 2 нулевого дня. Клетки инкубируют приблизительно в течение 24 ч при 37°С в присутствии 5% СО2. В каждой лунке содержится 50 мкл исследуемого соединения, 50 мкл фактора роста или среды и 100 мкл клеток, общий объем в лунке составляет 200 мкл. Таким образом раствор 4Х исследуемого соединения и фактора роста разбавляется в 4 раза (образуется раствор 1Х) после добавления всех указанных компонентов в лунку.
Второй день
1. В каждую лунку добавляют по 10 мкл (1 мкКи) раствора 3Н-тимидина (производства фирмы Атег8кат, номер по каталогу ТКК-686), указанный раствор с радиоактивностью 100 мкКи/мл получают в среде КРМ1 + инактивированная нагреванием 10% ЕВ8. Планшет инкубируют в течение приблизительно 24 ч при 37°С в присутствии 5% СО2. Среду КРМ1 получают на фирме С1Ьсо ВВЬ, номер по каталогу 11875-051.
Третий день
1. Планшеты замораживают при -20°С и хранят в течение ночи.
Четвертый день
Планшеты размораживают и клетки снимают на полоски фильтровальной бумаги (производства фирмы \Уа11ас, номер по каталогу 1205-401) с использованием прибора для сбора клеток Тот1ес Нагуе81ег 96®. Количество радиактивности определяют на жидкостном сцинтиляционном счетчике \Уа11ас Ве1ар1а1е™.
В табл. 3 представлены результаты биологического исследования некоторых соединений из примеров по изобретению. Результаты представлены в виде величины 1С50. то есть микромолярной концентрации (мкМ) исследуемого соединения, которая вызывает 50% изменение активности ТК-мишени по сравнению с активностью ТК в контрольных лунках, в которые исследуемое соединение не добавляют. Более подробно, полученные результаты означают концентрацию исследуемого соединения, которая требуется для снижения активности ТК-мишени на 50%. Результаты биохимических исследований, которые были проведены или могут быть проведены для оценки соединений, будут подробно описаны ниже.
- 80 005996
Таблица 3
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2,1СИ СА анализ
ЛкОЗТ. ГЕЕВ1, РОЕГ, ЕЕР, !С50 уровне (мкМ) киназы рук2,1СВ
1См 1С50 1С„ (мкМ) ЕЕР, 1СЮ еЬк2,1СИ (мкМ)
(мкМ) (мкМ) (мкМ) (МКМ) (МКМ)
1 57.68 15.16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9.85 9.62 >100 >100 >100 >100
4 3.57 >20 >100 >100 >100 >100
5 8.3 16.06 >100 >100 >100 >100
б 4.04 >100 3.26 7.82 2.43
7 7.74 >100 5.07 9.8 4.24
δ 12.1 >100 51.34 20.08 5.5
9 0.96 >100 >100 >100 16.38
10 5.72 >100 94.04 15.86 8.06
11 9.77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21.46 >100 27.73
13 >20 81.92 8.17 2.66
14 13.01 42.41 >100 66.02
15 >20 >100 >100 98.61
16 >20 98.06 >100 23.32
17 8.25 2.47 94.35 0.83 11.47 15.94 >10
18 2.67 2.57 9.23 4.99
- 81 005996
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2,1СЮ СА анализ
ЙкбЗТ, Р0РЯ1, РЮОР, ΕΘΡ, 1СИ уровне (мкМ) киназы рук2.1СИ
!СИ ю„ ю» (мкМ) БОР, 1СМ сс1к2, Юд, (мкМ)
(мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ)
19 7.5 6.86 34.18 8.37
20 11.53 >100 41.16 8
21 7.18 >100 40.34 27.69
22 >20 >100 >100 87.67
23 >20 >100 36.64 4.05
24 >100 16.84 5.31
25 12.55 >100 23.48 7.9
26 16.03 66.87 34.67 10.04
27 >100 26.5 3.91
26 4.5 71.27 53.66 2.67
29 10.12 >100 26.72 3.98
30 9.4 >100 18.69 4.1
31 >50 >100 9.83 47.19
32 45.74 5.94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
- 82 005996
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2,1СИ СА анализ
пквзт. РВРН1, РОВР, ЕВР, 1СИ уровне (мкМ) киназы рт. Юи
1СЮ 'с« 1СИ (мкМ) ЕВР, 1Сге с0к2,1СЗД (мкМ)
(мхМ) (мкМ) (мхМ) (мкМ) (мкМ)
35 >20 >100 80.4 54.14
35 >20 >100 >100 >100
37 0.22 3.06 10.78 9.84 1.4
38 4.17 3.06 6.04 8.97 2.16
39 3.38 4.69 367 14.54 3.53
40 4.5 7.9 6.52 6.27
42 0.1 0.12 11.95 74.65 20.43
43 1.12 8.38 >100 37.33 53.37
44 <0.05 0.02 20.73 67.46 6.99
45 1.71 >100 >100 29.95 >100
46 30.52 6.18 >100 >100 >100
47 0.08 1.56 0.06 11.42 41.54 8.4 >20 1.05
48 0.006 0.3 <0.78 17.88 21.58 7.93 0.09
49 <0.78 >100 43.86 >100
50 <0.78 >100 20.34 >100
51 0.006 1.66 0.01 18.1 21.61 23.24 16.69 0.35
- 83 005996
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2,1СИ СА анализ
ЛкОЗТ, Р6РН1, Ρ0ΘΕ ЕОР. 1СИ уровне (мкМ) киназы рук2,1СМ
1СМ 1С» (мкМ) ΕΘΡ, 1С* Сйк2.1СМ (мкМ)
(мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ)
52 0.08 1.26 <0.78 12.53 >100 >100 10.66 0.45
53 <0.78 >100 >100 >100
54 1.98 <0.78 23.88 9.76 7.02
55 0.27 0.53 6.03 35.99 77.82
56 2.32 3.19 >100 10.03 7.11
57 0.06 7.98 >100 9.97 6.94
58 21.14 >100 >100 >100
59 <0.78 >100 >100 >100
60 <0.78 >100 >100 >100
61 <0.78 >100 >100 >100
62 8.00 8.32 >100 >100 >100
63 0.21 <0.78 8.59 >100 >100
64 0.55 <0.78 30.49 >100 >100
65 0.37 <0.05 >100 74.36 15.97
66 <0.05 >100 11.84 2.76
- 84 005996
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2, 1СИ СА анализ
ИкбЗТ, Р6РЙ1, РОСР, ЕОР, 1СИ уровне (мкМ) киназы рук2,1Сте
1С« «с» 1СИ (мкМ) Е6Р, 1СИ «1к2,1СИ (мкМ)
(мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ)
67 0.39 24.77 31.38 19.79 2.56
68 1.16 0.03 >100 23.52 34.13
69 0.3 56.55 >100 97.54 >100
70 0.09 1.50 0.0030 10.57 6.42 7.99 12.62 0.63
71 15.21 22.5 >100 9.91
72 6.06 10,54 >100 39.94 9.65
73 5.95 14.12 >100 39.5 8.59
74 1.2 0.09 46.75 >100
75 2.7 61.55 >100 >100
76 3.33 19.18 5.11 3.01
77 0,49 25.01 >100 >100
78 1.94 70.62 9.33 4.25
79 1.49 >100 27.39 >100
80 0.13 4.29 0.001 >100 50.19 17.19 0.28
81 0.21 0.18 >100 >100
- 85 005996
При- Биохим. Биохим. Биохим. Биохим. Анализ на Киназа Анализ Биохим.
мер анализ анализ анализ анализ клеточном Нег2,1СИ СА анализ
ЛкОЗТ, Р0БВ1, РЦ6Р, ЕОБ, 1¾ уровне (мкМ) киназы рук2,1СЯ
!СИ 1СЙ (мкМ) ЕОР, 1С„ Сс1к2, 1СИ (мкМ)
(мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ) (мкМ)
82 2.03 7.69 6.88 >100 >100 0.31
83 0.34 0.41 9.46 2.18 86.9 0.008
84 1.38 12.51 67.2 5.86 0.006
85 0.2 0.8 2.59 >100 3.76
86 1.45 1.3 19.6 41.8 >100 3.58
87 3.27 7.56 6.46 >100 9.1 0.17
88 0.35 1.18 8.06 2.36 >100 0.09
89 7.84 47.58 8.53 9.67 15.97
115 7.3 7.48 >100 >100 0.006
116 >20 >100 >100 >100 <0.0005
117 0.91 12.9 >100 >100 0.006
118 1.93 1.2 >100 >100 0.002
119 1.38 61.63 >100 >100 <0.0005
Модели животных ΐη νΐνθ
Ксенотрансплантатные модели животных
Способность опухоли человека расти в виде ксенотрансплантата в мышах с отсутствующей вилочковой железой (например, мыши Ва1Ь/с, пи/пи) позволяет использовать таких мышей в качестве модели ίη у1уо для исследования биологического ответа при терапии опухолей человека. С момента первой успешной ксенотрансплантации опухолей человека в мышь без вилочковой железы (см. статью Яудаай и Роу18еп, 1969, Ас1а Ра1Ьо1. М1сгоЪю1. 8саЮ., 77:758-760) множество клеточных линий различных опухолей человека (например, молочной железы, легких, мочеполового тракта, желудочно-кишечного тракта, головы и шеи, глиобластомы, костей и злокачественных меланом) были трансплантированы и успешно развивались в голых мышах. Следующие методы анализа могут быть использованы для определения уровня активности, специфичности и действия различных соединений по настоящему изобретению. Для изучения соединений используют три основных типа анализа: клеточно-каталитический, клеточнобиологический анализы и анализ ίη у1уо. Целью клеточно-каталитического анализа является оценка действия соединения на степень фосфорилирования с помощью ТК остатков тирозина в известном субстрате в клетке. Целью клеточно-биологического анализа является оценка действия соединения на стимулиро
- 86 005996 ванный ТК(тирозинкиназой) клеточный ответ. Целью анализа ш νίνο является оценка действия соединения на модельное животное с определенным заболеванием, таким как рак.
Подходящие клеточные линии для подкожных ксенотрансплантатных экспериментов включают клетки С6 (глиома, АТСС # ССЬ 107), клетки А375 (меланома, АТСС # СВЬ 1619), клетки А431 (эпидермоидный рак, АТСС # СВЬ 1555), клетки Са1и 6 (легкие, АТСС # НТВ 56), клетки РС3 (предстательная железа, АТСС # СВЬ 1435), клетки 8КΟV3ΤΡ5 и фибробластные клетки №1Н 3Т3, модифицированные методом генной инженерии с целью получения гиперэкспрессии рецепторов ΕΟΡΒ, ΡΌΟΡΒ, ΙΟΡ-1Β или любой другой исследуемой киназы. Следующую методику можно использовать для проведения ксенотрансплантатных экспериментов:
Самки мышей с отсутствующей вилочковой железой (ΒΛΕ·ΒΛ, пи/пи) получают на фирме 8^шοηкеη Ва^га^иек (ΟίΙΐΌ.ν, СА). Всех животных содержат в чистых условиях в микроклетках с подстилкой типа А1рка-бг1. Животные получают стерильный корм для грызунов и стерильную воду в неограниченном количестве.
Клеточные линии выращивают в соответствующей среде (например, среды ΜΕΜ, ΌΜΕΜ, Нат'к Ρ10 или Нет'к Ρ12, содержащие 5%-10% ΡΒ8 и 2 мМ глутамина). Все среды для культуральных линий, глутамин и ΡΒ8, если особо не указано, получены на фирме Οί№ο Ь1£е ТесЬи-то^щек (Юи-тб 1к1апб, ΝΥ). Все клетки выращивают во влажной атмосфере, содержащей 90-95% воздуха и 5% СО2 при 37°С. Все клеточные линии пересеивают дважды в неделю, причем клеточные линии не содержат микоплазму, отсутствие которой контролируют по методу Μусο1ес1 (производство фирмы Οί№ο).
Клетки собирают путем добавления смеси 0,05% трипсин-Ε^ΤΛ в состоянии конфлюэнтности или перед конфлюентностью и осаждают центрифугированием при 450хд в течение 10 мин. Осадок ресуспендируют в стерильном растворе ΡΒ8 или в среде, не содержащей ΡΒ8, до соответствующей концентрации и клетки имплантируют в заднюю часть бока мыши (8-10 мышей в группе, 2-10х106 клеток на одно животное). Рост опухоли измеряют через 3-6 недель с использованием штангенциркуля. Объем опухоли рассчитывают, если особо не указано, как произведение длина х ширина х высота. Величину Р рассчитывают с использованием 1-критерия Стьюдента. Исследуемые соединения в 50-100 мкл наполнителя (ДМСО или νΡΌ:Ό5\ν) можно вводить внутрибрюшинно при различных концентрациях в основном через один день после имплантации.
Модель прорастания опухоли
Следующая модель прорастания опухоли была разработана для оценки терапевтического действия и эффективности соединений, селективно ингибирующих рецептор КБВ/ЕЬК-1.
Методика
В качестве экспериментальных животных используют 8-ми недельных голых мышей (производства фирмы 8^шοηкеη 1пс.). Имплантацию опухолевых клеток проводят в проточном ламинаре. Анестезию проводят путем внутрибрюшинного введения смеси ксилазин/кетамин (100 мг/кг кетамина и 5 мг/кг ксилазина). Делают центральный надрез (длиной приблизительно 1,5 см) для доступа в брюшную полость для введения опухолевых клеток в количестве 107 в 100 мкл среды. Клетки вводят в дуоденальную долю поджелудочной железы или в серозную оболочку ободочной кишки. Брюшину и мышцы сшивают, накладывая непрерывный шелковый шов (6-0) и кожу смыкают с использованием скоб для заживления ран. За животными ведут ежедневное наблюдение.
Анализ
Через 2-6 недель, в зависимости от общих наблюдений за животными, мышей забивают, вырезают местные метастазы в различных органах (легкие, печень, мозг, желудок, селезенка, сердце, мышцы) и анализируют их (измеряют размер опухоли, степень прорастания, проводят иммунохимический анализ, гибридизацию ш к11и и т.п.).
Анализ с-кй
Данный анализ используют для определения уровня фосфорилирования тирозина в с-к11.
Клетки МО7Е (острого миелолейкоза человека) истощают по сыворотке в течение ночи в 0,1%-ной сыворотке. Клетки предварительно обрабатывают соединением (одновременно с истощением) до стимуляции лигандом. Клетки стимулируют 250 нг/мл гЬ-8СР в течение 15 мин. Затем после стимулирования клетки лизируют и проводят иммуноосаждение с антителами к с-к11. Уровни фосфотирозина и белка определяют вестерн-блоттингом.
Анализ пролиферации с использованием МТТ
Клетки МО7Е истощают по сыворотке и предварительно обрабатывают соединением, как описано в экспериментах по фосфорилированию. Клетки вносят в 96-луночный планшет для культивирования в количестве 4х105 клеток/в лунку в 100 мкл среды ΒΡΜΙ + 10%-ная сыворотка. Затем добавляют гЬ-8СР (100 нг/мл) и планшет инкубируют в течение 48 ч. Затем добавляют 10 мкл раствора (5 мг/мл) МТТ (бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия) и инкубируют в течение 4 ч. Затем добавляют подкисленный изопропанол (100 мкл 0,04 н. НС1 в изопропаноле) и измеряют оптическую плотность при 550 нм.
Анализ апоптозных клеток
Клетки МО7Е инкубируют в присутствии или отсутствии 8СР и в присутствии или отсутствии со
- 87 005996 единения в 10%-ной эмбриональной сыворотке теленка (РВ8) в смеси с гЬ-СМ-С8Р (10 нг/мл) и гН-!К-3 (10 нг/мл). Образцы анализируют через 24 ч и 48 ч. Для определения активированной каспазы-3 образцы промывают буферным раствором РВ8 и пропитывают ледяным 70%-ным этанолом. Затем клетки проявляют РЕ-конъюгатом поликлональных кроличьих антител против активной каспазы-3 и анализируют в активируемом флуоресценцией анализаторе клеток (РАС8). Для определения количества расщепленной РАКР (поли-АТФ-рибозилполимеразы), образцы лизируют и анализируют вестерн-блоттингом с использованием антител к РАКР.
Прочие методы анализа
Прочие методы анализа, которые могут быть использованы для испытания соединений по настоящему изобретению, включают, без ограничения перечисленным, анализ Ыо-Дк-1, анализ химерного рецептора ЕСР рецептор/НЕК2 на целых клетках, анализ Ыо-ктс, анализ Ыо-1ск и анализ определения фосфорилирующей функции гак. Методики каждого из указанных анализов можно найти в заявке на выдачу патента США регистрационный Νο 09/099842, которая включена в данное описание в качестве ссылки, включая любые фигуры.
Определение цитотоксичности
Соединения, предназначенные для терапии, должны проявлять в большей степени ингибирующую активность по отношению к активности рецепторов ТК, и не обладать цитотоксическим действием. Эффективность действия и цитотоксичность соединения определяют по терапевтическому индексу, то есть по соотношению ^50/ΕΌ50. КА, означает дозу, необходимую для достижения 50% ингибирования, которую определяют по стандартному методу, такому как представленный в данном описании. ЬО50 означает дозу, которая приводит к 50% токсичности, и которую также определяют по одному из стандартных методов: (см. статью Мокктапп, 1983, 1. Iттиηο1. МеФойк. 65:55-63), путем измерения количества высвобождающегося БЭН (см. статью 1<огхеше\\'кк| и Сайе^аей, 1983, 1. Iттиηο1. МеБюйк. 64:313, Эсскег и Еойтапп-Маййек, 1988, 1. Iттиηο1. МеИойк. 115:61) или путем измерения летальной дозы на модельных животных. Предпочтительными являются соединения с более высоким терапевтическим индексом. Терапевтический индекс должен быть более 2, предпочтительно по крайней мере 10, более предпочтительно по крайней мере 50.
Б. Пример результатов анализа на клеточном уровне с использованием (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты.
Для подтверждения активности (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80), определенной с использованием биохимических методов анализа (см. ниже), исследуют способность упомянутого соединения ингибировать лиганд-зависимое РТК фосфорилирование с использованием методов анализа на клеточном уровне и полученных методом генной инженерии мышиных клеток ШН-3Т3, характеризующихся гиперэкспрессией Р1к-1 или РОСРКр человека. (2-Диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует УЕСР-зависимое Р1к-1 фосфорилирование тирозина, причем величина Κ'\0 составляет приблизительно 0,03 мкМ. Эта величина близка к величине К1, равной 0,009 мкМ и определенной методом биохимического анализа для ингибирования Р1к-1 в присутствии (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80). Этот факт свидетельствует о том, что (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) легко проникает в клетки. В соответствии с биохимическими данными (см. ниже), с помощью которых показано, что (2диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (соединение 80) обладает сопоставимой активностью в отношении РЬК-1 и РОСРКв, было также показано, что это соединение ингибирует РОСР-зависимое фосфорилирование рецептора в клетках, причем величина КУ, составляет приблизительно 0,03 мкМ. Способность (2диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоновой кислоты (соединение 80) ингибировать рецептор с-кй, который представляет собой родственную РТК и связывает фактор стволовых клеток (8СР), определяют с использованием клеток МО7Е, экспрессирующих этот рецептор. При использовании этих клеток (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует 8СР-зависимое фосфорилирование с-кй, причем величина КУ, составляет 0,01-0,1 мкМ. Это соединение ингибирует также 8СР-стимулированное фосфорилирование с-кй в бластных клетках острого миелолейкоза, выделенных из периферической крови пациентов.
Кроме испытания способности (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибировать лигандзависимое фосфорилирование рецептора в клетках, исследуют также его действие на лиганд-зависимый пролиферативный ответ клеток, определенный ίη νί\Ό (см. табл. 4). В этих экспериментах в клетках, которые дезактивируют истощением по сыворотке в течение ночи, индуцируют синтез ДНК с помощью добавления соответствуещего митогенного лиганда. Как показано в табл. 4, (2-диэтиламиноэтил)амид 5
- 88 005996 (5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3 -карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует РОСЕ-индуцируемую пролиферацию клеток NIН-3Т3, характеризующихся гиперэксперссией РОСЕЯЗ или РОСЕЯа, причем величины 1С50 составляют 0,031 и 0,069 мкМ, соответственно, и ингибирует §СЕ-индуцируемую пролиферацию клеток МО7Е, причем величина 1С50 составляет 0,007 мкМ.
Таблица 4
Биохимические испытания Испытания на клеточном уровне
Рецептор К,' (мкМ) Фосфорилирование рецептора (мкМ) Лиганд-зависимая пролиферация (мкМ)
Нк-1/ΚϋΚ 0,009 0,03г 0,004’
ΡϋΟΡΚχζ 0,008 0,034 0,0314
ΡϋΟΡΚ^ н/о н/о 0,069’
РОРК 0,83 н/о 0,7’
с-кй н/о 0,01-0,1® 0,007“
н/о - не определено 1 - определено с использованием рекомбинантного фермента 2 - определено с использованием истощенных по сыворотке клеток ΝΙΗ-3Τ3, экспрессирующих Нк-1 9 - определено с использованием истощенных по сыворотке клеток НЦУЕС 4 - определено с использованием истощенных по сыворотке клеток Ν1Η-3Τ3, экспрессирующих ΡΟΟΡΚσ 5 - определено с использованием истощенных по сыворотке клеток ΝΙΗ-3Τ3, экспрессирующих РБСРКД е - определено с использованием истощенных по сыворотке клеток МО7Е
Как показано в табл. 4, наблюдается общее соответствие между биохимической и клеточной активностью (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80), что подтверждает вывод о том, что указанное соединение проникает через клеточные мембраны. Более того, можно сделать вывод, что клеточные ответы происходят в результате активности соединения 80 по отношению к указанной мишени. И наоборот, при тестировании в присутствии полной среды роста ш νίΙΐΌ, для ингибирования роста ряда опухолевых клеток человека требуются значительно более высокие концентрации (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) (>10 мкМ) (см. табл. 5). Указанные данные означают, что соединение ингибирует рост этих клеток косвенно (не напрямую) при концентрациях, которые требуются для ингибирования фосфорилирования лиганд-зависимого рецептора и клеточной пролиферации.
Таблица 5
Клеточная линия Источник 1СЮ (мкМ) (мкМ)
НТ29 Карцинома ободочной кишки 10 22
А549 Карцинома легких 9,5 22
ΝΟΙ-Η460 Карцинома легких N30 8,9 20
5Е767Т Глиома 7,9 14
А431 Эпидермоидная карцинома 6,0 18
- 89 005996
Краткое описание: результаты, представленные в табл. 5, получают при инкубировании клеток в течение 48 ч в полной среде роста в присутствии серийных разведений (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты. При завершении периода роста определяют относительное число клеток. Величины 1С50 рассчитывают как концентрацию соединения, при которой происходит ингибирование роста клеток на 50% по сравнению с необработанными клетками. Величины ЬО50 рассчитывают как концентрацию соединения, которая вызывает снижение числа клеток на 50% по сравнению с исходными клетками до начала эксперимента.
Более значимым анализом на клеточном уровне, в котором исследуют противоангиогенное действие (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80), является анализ митогенеза ш νίΐΓΌ с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека (НиУЕС) в качестве модельной системы для пролиферации эндотелиальных клеток, определяющей ангиогенный процесс. В этом методе анализа митогенный ответ, измеряемый как увеличение синтеза ДНК, индуцируют в истощенных по сыворотке клетках НиУЕС путем добавления УЕСЕ или ЕСЕ. В этих клетках (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует УЕСЕ- и ЕСЕ-индуцированный митогенный ответ по дозозависимому механизму, причем величины 1С50 составляют 0,004 мкМ и 0,7 мкМ, соответственно, если соединение присутствует в течение всего 48часового периода анализа.
Краткое описание: выше упомянутые результаты получают с использованием истощенных по сыворотке клеток НиУЕС, которые инкубируют при митогенной концентрации УЕСЕ (100 нг/мл) или ЕСЕ (30 нг/мл) в присутствии серийных разведений (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) в течение 24 ч. Митогенный ответ в течение следующих 24 ч в присутствии лиганда и ингибитора рассчитывают путем измерения синтеза ДНК, которое основано на включении бромдезоксиуридина в клеточную ДНК.
По данным других экспериментов соединение 80 ингибирует УЕСЕ-зависимое фосфорилирование ЕКК 1/2 (киназа р42/44МАР), более ранней из последовательных мишеней киназы Е1к-1/КОК, по дозозависимому механизму. Показано также, что ингибирующая активность соединения 80 является продолжительным процессом в данной системе; ингибирование УЕСЕ-зависимого фосфорилирования ЕКК 1/2 наблюдается в течение 48 ч после удаления (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) из среды после краткосрочного инкубирования (2 ч) при микромолярных концентрациях соединения.
Показано, что УЕСЕ является важным фактором для выживания эпителиальных клеток. В связи с тем, что (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует УЕСЕ-зависимый митогенный ответ клеток НиУЕС, исследуют влияние соединения на выживание клеток НиУЕС. В этих экспериментах в качестве признака апоптоза используют расщепление каспазы 3, субстрата поли-АТФ-рибозилполимеразы (РАКР). Клетки НиУЕС, культивированные в отсутствии сыворотки в течение 24 ч, характеризуются значительными уровнями расщепления РАКР, которое определяют по накоплению фрагмента расщепления РАКР размером 23 кДа. Такое явление в значительной степени предотвращается при добавлении УЕСЕ в клеточную среду, что указывает на действие УЕСЕ в качестве фактора выживания в данном эксперименте. Показано, что (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует передачу сигнала КОК. Соответственно, (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует УЕСЕ-опосредованное выживание клеток НиУЕС по дозозависимому механизму. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что соединение 80 индуцирует апоптоз эндотелиальных клеток в культуре в присутствии УЕСЕ.
В. Испытания эффективности ш νί\Ό.
ΐ. Эффективность в отношении развитых ксенотрансплантатных опухолей.
Эффективность ш νί\Ό (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) исследуют на подкожных ксенотрансплантатных моделях с использованием опухолевых клеток человека, привитых в задний бок мыши без вилочковой железы. После имплантации перед пероральным введением соединения животных выдерживают до развития опухоли до размеров 100-550 мм3.
При ежедневном пероральном введении соединение 80 проявляет дозозависимое ингибирование роста опухоли А431, если лечение начинают при опухоли размером 400 мм3. При этом наблюдается статистически значимое ингибирование (Р<0,05) роста опухоли при введении дозы 40 мг/кг/сут (74% ингибирование) и дозы 80 мг/кг/сут (84% ингибирование) (см. табл. 6). По данным предварительных экспериментов более высокая доза (160 мг/кг/сут) соединения не превышает эффективность в отношении развитых опухолей А431 по сравнению с дозой 80 мг/кг/сут. Кроме того, мыши, получавшие дозу соединения 160 мг/кг/сут, теряют в весе, что свидетельствует о том, что более высокая доза проявляет пониженную толерантность. Аналогичные результаты получают в экспериментах с использованием опухолей А431, достигающих размеров 100 мм3 (см. табл. 5). В этом втором эксперименте наблюдается полная
- 90 005996 регрессия опухолей у шести из восьми животных, получавших дозу 80 мг/кг/сут в течение 21 суток. У этих шести животных опухоли не вырастают снова при наблюдении в течение 110 дней после завершения лечения. У двух животных, у которых опухоли выросли снова до огромных размеров (2000-3000 мм3), наблюдается регрессия опухолей после второго курса лечения соединением 80. Важно отметить, что во всех экспериментах по определению эффективности (2-диэтиламиноэтил)амид5-(5-фтор-2-оксо1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) проявляет удовлетворительную толерантность при дозе 80 мг/кг/сут, даже при продолжительном лечении в течение более 100 суток.
Таблица 6
Исходный размер опухоли (мм3) Соединение1 (мг/кг/сут) Ингибирование в % (сут) Величина Р
400 80 84 (36) 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,130
100 80 93 (40) 0,002
40 75 (40) 0,015
10 61 (40) 0,059
1 - соединение 80
Краткое описание: результаты, представленные в табл. 6, получают с использованием клеток А431 (0,5х106 клеток/мышь), которые прививают подкожным способом в задний бок мыши без вилочковой железы. Ежедневное пероральное введение (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) в наполнителе на основе кремофора или введение контрольного наполнителя начинают в момент, когда опухоли достигают указанного среднего размера. Размеры опухоли измеряют с использованием штангенциркуля и рассчитывают как произведение длина х толщина х высота. Величины Р рассчитывают при сравнении размеров опухолей у животных, получивших дозу соединения 80 (п=8), с размерами опухолей у животных, получивших наполнитель (п=16), в последний день эксперимента с помощью двухфакторного анализа с использованием ΐ-критерия Стьюдента.
Эффективность соединения 80 определяют в отношении развитых опухолей человека в виде ксенотрансплантатов из различных источников: Со1о205 (карцинома ободочной кишки), 8Р763Т (глиома) и ЫС1-Н460 (не мелкоклеточная карцинома легких), см. табл. 7. Эти эксперименты проводят с использованием (2-диэтиламиноэтил)амида 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Нпиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80), которое вводят пероральным способом в дозе 80 мг/кг/сут, причем указанная доза является эффективной и обладает удовлетворительной толерабельностью.
Таблица 7
Тип опухоли Исходный размер опухоли (мм3) Ингибирование в % (сутки) Величина Р
А4311 Эпидермоид 100 93 (40) 0,002
А4311 Эпидермоид 400 84 (36) 0,001
Со!о205 Ободочная кишка 370 77 (54) 0,028
- 91 005996
Тип опухоли Исходный размер опухоли (мм3) Ингибирование в % (сутки) Величина Р
ЫС1-Н460 Легкие 300 61 (54) 0,003
3Ε763Τ Глиома 550 53 (30) 0,001
1 - данные получены из эксперимента, представленного в Таблице 5
В вышеупомянутых экспериментах соединение 80 вводят ежедневно один раз в сутки в дозе 80 мг/кг в наполнителе на основе кремофора при достижении указанных размеров опухоли. При завершении эксперимента рассчитывают процент ингибирования по сравнению с контрольной группой, получавшей наполнитель. Величины Р рассчитывают при сравнении размеров опухолей у животных, получивших дозу соединения, с размерами опухолей у животных, получивших наполнитель, с помощью двухфакторного анализа с использованием 1-критерия Стьюдента.
Несмотря на то, что (2-диэтиламиноэтил)амид 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты (соединение 80) ингибирует рост всех видов опухолей, указанных в табл. 7, наблюдаются различия в ответе различных ксенотрансплантатных моделей. Более подробно, при обработке (2-диэтиламиноэтил)амидом 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты рост опухолей NСI-Η460 и ЗЕ763Т останавливается или значительно замедляется, в то время как опухоли Со1о205, подобные опухолям А431, регрессируют.
Для определения причины на молекулярном уровне различия в ответе ксенотрансплантатных моделей исследуют опухоли ЗЕ763Т. Таким образом, опухоли ЗЕ763Т, которые характеризуются меньшей чувствительностью к обработке (2-диэтиламиноэтил)амидом 5-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3илиденметил)-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты, исследуют на молекулярном уровне с использованием иммуногистологических методов с целью определения влияния обработки соединением. Такие исследования проводят с использованием указанного типа опухоли в начале эксперимента, так как опухоли ЗЕ763Т значительно васкуляризуются с микрососудами, которые характеризуются гиперэкспрессией маркера СЭ31 эндотелиальных клеток и следовательно хорошо подходят для исследования плотности микрососудов (ПМС) опухоли. Иммуногистологические исследования опухолей ЗЕ763Т показали, что опухоли обработанных животных характеризуются пониженной ПМС относительно контрольных животных, обработанных наполнителем, что согласуется с противоангиогенным механизмом действия соединения 80, причем величина ПМС у обработанных соединением 80 животных составляет 24,2±4,1, а у животных, которые получали только наполнитель, составляет 39,3±5,7. Какожидалось в связи с остановкой роста опухоли, представляется очевидным значительное ингибирование пролиферации опухолевых клеток в опухолях, обработанных соединеним 80. Митотический индекс таких опухолей составляет половину величины индекса опухолей, обработанных наполнителем (данные не приведены). Действие соединения 80 на ПМС и клеточную пролиферацию свидетельствует о том, что соединение 80 обладает высоким противоангиогенным и противоопухолевым действием даже в условиях, в которых опухоли не регрессируют.
Способность соединения 80 ингибировать фосфорилирование РИСЕК и последующую передачу сигнала ш νί\Ό исследуют также с использованием опухолей ЗЕ763Т, которые экспрессируют высокие уровни РИСЕКЗ. Обработка опухолей ЗЕ763Т соединением 80 приводит к значительному ингибированию фосфорилирования тирозина РИСЕКЗ в развитых опухолях ЗЕ763Т. Соединение 80 снижает также уровни фосфорилированной (активированной) фосфолипазы С гамма (ФЛС-γ), промежуточного последующего индикатора активации РИСЕК. Эти данные свидетельствуют о том, что пероральное введение соединения 80 вызывает прямое действие на активность мишени (РИСЕК) в опухолях ш νί\Ό.
На основании данных о том, что способность соединения 80 ингибировать УЕСЕ-зависимую передачу сигнала в клетках НИУЕС ш νίΐΐΌ является продолжительной (см. выше), исследуют эффективность соединения при более редком введении в модель опухоли Со1о205. Как показано в табл. 8, доза 80 мг/кг (ингибирование 91%) и доза 40 мг/кг (ингибирование 84%) эффективны при ежедневном введении, но не эффективны при введении два раза в неделю. И наоборот, более высокая доза соединения 80 (160 мг/кг) ингибирует (ингибирование 51%) рост развитых опухолей Со1о205 при введении два раза в неделю, что свидетельствует об эффективности этого соединения при более редком введении в более высокой дозе. Следует отметить, что схему приема лекарственного средства может определить специалист в данной области медицины без дополнительных экспериментов.
- 92 005996
Таблица 8
Доза (мг/кг) Частота введения Ингибирование, % Величина Р
160 Два раза в неделю 52 0,085
Один раз в неделю 17 Н/д
80 Ежедневно 91 0,039
Два раза в неделю 19 Н/д
Один раз в неделю 0 Н/д
40 Ежедневно 84 0,028
Два раза в неделю 36 Н/д
Н/д - недостоверные результаты (Р>0,05)
Краткое описание: результаты, представленные в табл. 8, получают с использованием клеток Со1о205 (0,5х106 клеток/мышь), привитых в задний бок мыши без вилочковой железы. Пероральное введение соединения 80 начинают проводить в соответствии с указанной схемой при достижении размера опухолей до 400 мм3. Размеры опухоли измеряют с использованием штангенциркуля и рассчитывают как произведение длина х толщина х высота.
Величины Р рассчитывают при сравнении размеров опухолей у животных, получивших дозу соединения 80, с размерами опухолей у животных, получивших наполнитель, в последний день эксперимента с помощью двухфакторного анализа с использованием ΐ-критерия Стьюдента.
ΐΐ. Эффективность соединения 80 в отношении модели распространенной опухоли.
Кроме обеспечения продолжительного роста солидных первичных опухолей, ангиогенез является важным компонентом, обеспечивающим развитие распространенной опухоли путем метастаза первичной опухоли. Действие соединения 80 на развитие распространенной опухоли исследуют с использованием модели колонизации меланомы В16-Е1 легких мыши. В этой модели, клетки В16-Е1, привитые внутривенно через хвостовую вену мыши без вилочковой железы, образуют в легких колонии и опухоли. Как показано в табл. 8, пероральное введение соединения 80 в дозе 80 мг/кг/сут приводит к эффективному снижению содержания клеток В 16-Е 1 в легких по данным измерения общей массы легких. Эти данные свидетельствуют о том, что соединение 80 ингибирует распространение опухоли т у|уо.
Таблица 9
Масса легких (г) Ингибирова- ние% Величина Р
Наполнитель 0,83 ±0,07 - -
Соединение1 0,41 ±0,04 50 <0,001
1 - соединение 80
Краткое описание: результаты, представленные в табл. 9, получают с использованием мышей без вилочковой железы с опухолевыми клетками В16-Е1 (5х105 клеток/мышь), привитыми внутривенно через хвостовую вену. Мыши получают ежедневно перорально соединение 80 в дозе 80 мг/кг/сут (п=10) или носитель (п=18) в течение 24 ч после прививки опухолевых клеток. После завершения периода обработки мышей забивают, легкие удаляют и взвешивают. Процент ингибирования рассчитывают при сравнении массы легких у животных, получивших дозу соединения 80, с массой легких у животных, получивших только наполнитель. Величины Р определяют с помощью двухфакторного анализа с использованием ΐ-критерия Стьюдента.
Г. Примеры биологической активности
Примеры активности соединений по настоящему изобретению ш уйго представлены в табл. 2.
- 93 005996
Заключение
В экспериментах по исследованию фармакокинетических характеристик соединений по предпочтительным вариантам настоящего изобретения показано, что пероральное введение однократной дозы упомянутых соединений характеризуется высокой пероральной биодоступностью у мышей. Удовлетворительная пероральная биодоступность и линейная фармакокинетика свидетельствуют о благоприятных фармакокинетических характеристиках соединений по предпочтительным вариантам настоящего изобретения.
Кроме того, соединения по вариантам воплощения настоящего изобретения являются высокоактивными ингибиторами тирозинкиназной активности расщепленного киназного домена РТК Е1к-1 и ΡΌΟΕΚ, которые включены в ангиогенез, а также РТК с-кк, рецептора фактора стволовых клеток (АСЕ), который включен в процессы некоторых гематологических раков. При высоких концентрациях соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения ингибируют также тирозинкиназную активность ЕСЕК-1, третьей РТК, включенной в ангиогенез. В соответствии с их биохимической активностью соединения по предпочтительным вариантам воплощения настоящего изобретения ингибируют лигандзависимое фосфорилирование тирозина РТК-мишеней и митогенный ответ ш \йго клеток НИУЕС, стимулированный УЕСЕ или ЕСЕ, экспрессирующих ΡΌΟΕΕ клеток NIΗ-3Т3, стимулированный ΡΌΟΡ, и клеток МО7Е острого миелолейкоза, стимулированный АСЕ. И наоборот, соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения не напрямую ингибируют пролиферацию опухолевых клеток в полной среде роста за исключением концентраций, на 2-3 порядка превышающих величины доз, необходимые для ингибирования лиганд-зависимых митогенных ответов. По данным исследования ксенотрансплантатных моделей у мышей соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения ингибируют рост развитых опухолей человека из различных источников по дозозависимому механизму и при концентрациях, которые характеризуются удовлетворительной толерантностью даже в течение продолжительного введения лекарственного средства (>100 суток). В дозе 80 мг/кг/сут соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения индуцируют регрессию крупных развитых опухолей А431 и Со1о205, вызывают значительное ингибирование роста или стаза опухолей АЕ763Т и NСI-Η460. У мышей-носителей опухолей АЕ763Т соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения вызывают снижение плотности микрососудов, фосфорилирования ΡΌΟΡΚ в опухолях и митогенного индекса опухолевых клеток. В указанной дозе соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения ингибируют также колонизацию опухолевых клеток В16-Е1 в легких на модели метастаза опухоли. По данным изучения схем введения соединений показано, что соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения являются наиболее эффективными при ежедневном введении. Прямое доказательство проявления противоангиогенной активности соединений по предпочтительным вариантам настоящего изобретения выявлено в опухолях АЕ763Т, в которых снижается плотность микрососудов. Прямое доказательство проявления соединениями по предпочтительным вариантам настоящего изобретения ингибирующей активности в отношении фосфорилирования ΡΌΟΡΚ и передачи сигнала ш νί\Ό было также получено на опухолях АЕ763Т.
Суммируя вышеизложенное, следует отметить, что полученные данные подтверждают предположение о том, что соединения по предпочтительным вариантам настоящего изобретения являются противоангиогенными агентами, используемыми при лечении рака, включая солидные опухоли и гематологические злокачественные заболевания, в патологии которых определяющим фактором являются ангиогенез и/или передача сигнала через с-кй.
Следует понимать, что соединения, способы и фармацевтические композиции по настоящему изобретению являются эффективными модуляторами активности ПК и следует ожидать, что указанные соединения и композиции могут быть эффективно использованы в качестве терапевтических средств для лечения нарушений, связанных с активностью РТК, КТК и СТК.
Для специалистов в данной области техники представляется совершенно очевидным, что настоящее изобретение разработано не только для достижения упомянутых целей и преимуществ, но и для достижения других целей, характерных для настоящего изобретения. Молекулярные комплексы и способы, методики, способы лечения, молекулы, специфические соединения представлены в данном описании в качестве предпочтительных вариантов воплощения настоящего изобретения и не ограничивают объем изобретения. Любые изменения и другие способы использования, очевидные для специалистов в данной области техники, включены в объем настоящего изобретения, определенный в пунктах формулы изобретения.
Для специалистов в данной области техники представляется очевидным, что изменение заместителей и другие модификации предметов, представленных в данном описании, также включены в объем притязаний и сущность настоящего изобретения.
Все упомянутые патенты и публикации представлены для определения уровня техники для специалистов, для которых предназначено данное изобретение. Все упомянутые в данном описании патенты и публикации включены в описание в качестве ссылок таким же образом, как отдельные публикации, про каждую из которых в тексте описания упомянуто, что она включена в качестве ссылки в текст описания.
Настоящее изобретение описано в иллюстративном варианте и может быть использовано в отсутст
- 94 005996 вии любого элемента или элементов, ограничения или ограничений, которые подробно не описаны в данном описании. Таким образом, например, в данном описании в каждом конкретном случае любой из терминов включающий, в значительной степени включающий и состоящий из может быть заменен на один из оставшихся двух терминов. Термины и выражения, использованные в данном описании, предназначены для описания, но не для ограничения объема изобретения и, следовательно, использование таких терминов и выражений не означает исключение любых эквивалентов описанных признаков или их части, но при этом следует понимать, что возможны различные модификации в пределах заявленного объема изобретения. Таким образом, следует понимать, что несмотря на подробное описание предпочтительных вариантов воплощения изобретения и признаков по выбору, для специалиста в данной области техники представляется возможным модифицировать и изменить концепцию изобретения, и что такие модификации и изменения будут рассматриваться как включенные в объем притязаний настоящего изобретения, заявленный в пунктах прилагаемой формулы изобретения.
Кроме того, если признаки или аспекты изобретения описаны в терминах групп Маркуша, то для специалиста в данной области техники представляется очевидным, что в настоящем изобретении описаны любой индивидуальный член или подгруппа членов группы Маркуша. Например, если Х описан как выбранный из группы, включающей в себя бром, хлор и иод, то пункты формулы изобретения, в которых Х означает бром, и пункты формулы, в которых Х означает бром и хлор, полностью описаны.
Другие варианты воплощения изобретения включены в следующие пункты формулы изобретения.

Claims (24)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пирролзамещенный 2-индолинон формулы I где
    Я1 выбран из группы, включающей в себя водород, галоген, С1-С4алкил, С3-С8циклоалкил, С6-С10 арил, гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М гетероциклил, содержащий 3-6 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М гидрокси, С1-С4алкокси, -(СО)Я15, -МЯ13Я14, -(СН2)ГЯ16 и -С(О)МК8Я9;
    Я2 выбран из группы, включающей в себя водород, галоген, С1-С4алкил, тригалогенметил, гидрокси, С1-С4алкокси, -МЯ13Я14, -МЯ13С(О)Я14, -(СО)Я15, С6-С10арил, гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М и -8(О)2МК13Я14;
    Я3 выбран из группы, включающей в себя водород, галоген, С1-С4алкил, тригалогенметил, гидрокси, С1-С4алкокси, -(СО)Я15, -МЯ13Я14, С6-С10арил, гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М -МЯ138(О)2Я14, -8(О)2МЯ13Я14, -МЯ13С(О)Я14, -МЯ13С(О)ОЯ14;
    Я4 выбран из группы, включающей в себя водород, галоген, С1-С4алкил, гидрокси, С1-С4алкокси и -МЯ13Я14 ;
    Я5 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С4алкила и -С(О)Я10;
    Я6 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С4алкила и -С(О)Я10;
    Я7 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С4алкила, С6-С10арила, гетероарила, содержащего 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М -С(О)Я17 и -С(О)Я10; или
    Я6 и Я7 объединены с образованием групп, выбранных из следующего ряда:
    -(СН2)4-, -(СН2)5- и -(СН2)6-; при условии, что по меньшей мере один из радикалов Я5, Я6 или Я7 означает -СОЯ10;
    Я8 и Я9 независимо выбраны из группы, включающей в себя водород, С1-С4алкил и С6-С10арил;
    Я10 выбран из группы, включающей в себя гидрокси, С1-С4алкокси, С6-С10арилокси, -МК11(СН2)пЯ12 и -МЯ13Я14;
    Я11 выбран из группы, включающей в себя водород и С1-С4алкил;
    Я12 выбран из группы, включающей в себя -МЯ13Я14, гидрокси, -СОЯ15, С6-С10арил и гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М;
    Я13 и Я14 независимо выбраны из группы, включающей в себя водород, С1-С4алкил, С3-С8циклоалкил, С6-С10арил и гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, М или
    Я13 и Я14 могут быть объединены с образованием группы, состоящей из -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2-О(СН2)2- или -(СН2)2М(СН3)(СН2)2-;
    - 95 005996
    К15 выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, С1-С4алкокси и С6-С!0арилокси;
    К16 выбран из группы, состоящей из гидрокси, -С(О)К15, -ΝΚ13Κ14 и -С(О)МК13К14;
    п и г независимо равны 1, 2, 3 или 4;
    или его фармацевтически приемлемые соли.
  2. 2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, отличающееся тем, что К6 означает -СОК10, где К10 означает -МК11(СН2)пК12, где К11 означает водород или незамещенный низший С1-С4 алкил, п равно 2 или 3, а К12 означает -КК13К14, где К13 и К14 независимо означают незамещенный низший С1-С4алкил.
  3. 3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, отличающееся тем, что К6 означает -СОК10, где К10 означает -МК11(СН2)пК12, где К11 означает водород или незамещенный низший С1-С4 алкил, п равно 2 или 3, а К12 означает -МК13К14, где К13 и К14 объединены с образованием групп, выбранных из следующего ряда: -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2-О-(СН2)2- или -(СН2)2К(СН3)(СН2)2-.
  4. 4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.3, отличающееся тем, что К13 и К14 объединены с образованием -(СН2)4-.
  5. 5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, отличающееся тем, что
    К1 выбран из группы, включающей в себя водород, низший С1-С4алкил, -(СН2)ГК16 и -С(О)МК8К9;
    К2 выбран из группы, включающей в себя водород, галоген, С1-С4алкил, С6-С!0арил, гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, Ν и -8(О)2КК13К14;
    К3 выбран из группы, включающей в себя водород, низший С1-С4алкил, низший С1-С4алкокси, С6С10арил, гетероарил, содержащий 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, Ни -(СО)К15;
    К4 представляет собой водород;
    К5 выбран из группы, состоящей из водорода и низшего С1-С4алкила;
    К6 представляет собой -С(О)К10,
    К7 выбран из группы, состоящей из водорода, низшего С1-С4алкила и С6-С10арила;
    К16 выбран из группы, состоящей из гидрокси и -С(О)К15; и г равно 2 или 3.
  6. 6. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.5, отличающееся тем, что К3 означает С6-С10арил, необязательно замещенный по меньшей мере одной группой, выбранной из группы, состоящей из низшего С1-С4алкила, низшего С1-С4алкокси и галогена.
  7. 7. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.5, отличающееся тем, что К10 выбран из группы, состоящей из гидрокси, низшего С1-С4алкокси, МК11(СН2)пК12 и -МК13К14, где К11 означает водород, п равно 1, 2 или 3, а К12 выбран из группы, состоящей из -МК13К14, гидрокси, низшего С1-С4алкокси, -СОК15 и гетероарила, содержащего 3-5 атомов углерода и 1-2 гетероатома, выбранных из О, 8, Ν.
  8. 8. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.7, отличающееся тем, что К13 и К14 независимо выбраны из группы, состоящей из -(СН2)4-, -(СН2)5-, -(СН2)2-О-(СН2)2- или -(СН;);\(СН;)(СН;);-.
  9. 9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что К1 означает водород;
    К2 означает хлор, фтор или бром;
    К3 означает водород;
    К4 означает водород;
    К5 означает метил;
    К6 представляет собой -С(О)К10, где К10 означает -К(К11)(СН2)пК12;
    причем К11 означает водород или незамещенный низший С1-С4алкил;
    п равно 2 или 3;
    К12 означает -ΝΕΑ'1, где К13 и К14 независимо означают незамещенный низший С1-С4алкил;
    К7 означает метил.
  10. 10. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, отличающееся тем, что оно выбрано из группы, включающей в себя
    - 96 005996
  11. 11. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.10, отличающееся тем, что фармацевтически приемлемой солью являются Ь-малаты.
  12. 12. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.10, отличающееся тем, что оно имеет следующую формулу
  13. 13. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.12, отличающееся тем, что солью является Ь-малат.
  14. 14. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.10, отличающееся тем, что оно имеет следующую формулу
  15. 15. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
  16. 16. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п.10 и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
  17. 17. Способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, отличающийся тем, что проводят контактирование упомянутой протеинкиназы с соединением по п.1 или его солью.
  18. 18. Способ по п.17, отличающийся тем, что упомянутую протеинкиназу выбирают из группы, включающей в себя рецепторную тирозинкиназу, нерецепторную тирозинкиназу и серинтреонинкиназу.
  19. 19. Способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой, отличающийся тем, что вводят в упомянутый организм терапевтически эффективное количество соединения или соли по п.1.
  20. 20. Способ по п.19, отличающийся тем, что упомянутое нарушение, связанное с протеинкиназой, выбирают из группы, включающей в себя нарушение, связанное с рецепторной тирозинкиназой, нарушение, связанное с нерецепторной тирозинкиназой и нарушение, связанное с серин-треонинкиназой.
    - 97 005996
  21. 21. Способ по п.19, отличающийся тем, что упомянутое заболевание, связанное с протеинкиназой, выбирают из группы, включающей в себя нарушение, связанное с ΕОРΒ, нарушение, связанное с РООРВ, нарушение, связанное с ЮРВ, и нарушение, связанное с Дк.
  22. 22. Способ по п.19, отличающийся тем, что упомянутым нарушением, связанным с протеинкиназой, является рак, выбранный из группы, включающей в себя плоскоклеточную карциному, астроцитому, саркому Капоши, глиобластому, рак легких, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, меланому, рак яичника, рак предстательной железы, рак молочной железы, мелкоклеточный рак легких, глиому, рак ободочной и прямой кишки, рак мочеполового тракта и рак желудочно-кишечного тракта.
  23. 23. Способ по п.19, отличающийся тем, что упомянутое нарушение, связанное с протеинкиназой, выбирают из группы, включающей в себя диабет, аутоиммунное нарушение, нарушение, связанное с гиперпролиферацией, рестеноз, фиброз, псориаз, болезнь Гиппеля-Линдау, остеоартрит, ревматоидный артрит, ангиогенез, воспалительные процессы, иммунологические нарушения и сердечно-сосудистые нарушения.
  24. 24. Способ по п.19, отличающийся тем, что упомянутым организмом является организм человека.
EA200200862A 2000-02-15 2001-02-15 Пирролзамещенный 2-индолинон, фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой EA005996B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27
PCT/US2001/004813 WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200200862A1 EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
EA005996B1 true EA005996B1 (ru) 2005-08-25

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200200862A EA005996B1 (ru) 2000-02-15 2001-02-15 Пирролзамещенный 2-индолинон, фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (ru)
EP (1) EP1255752B1 (ru)
JP (1) JP3663382B2 (ru)
KR (1) KR100713960B1 (ru)
CN (1) CN1329390C (ru)
AR (1) AR034118A1 (ru)
AT (1) ATE369359T1 (ru)
AU (2) AU2001239770B2 (ru)
BE (1) BE2010C009I2 (ru)
BG (1) BG65764B1 (ru)
BR (2) BRPI0108394B8 (ru)
CA (1) CA2399358C (ru)
CO (1) CO5280092A1 (ru)
CR (2) CR20120009A (ru)
CY (3) CY1108032T1 (ru)
CZ (1) CZ303705B6 (ru)
DE (3) DE60129794T2 (ru)
DK (1) DK1255752T3 (ru)
EA (1) EA005996B1 (ru)
ES (1) ES2290117T3 (ru)
FR (1) FR08C0002I2 (ru)
HK (1) HK1051188A1 (ru)
HR (1) HRP20020751B1 (ru)
HU (1) HU228979B1 (ru)
IL (1) IL151127A0 (ru)
IS (1) IS2491B (ru)
LT (1) LTC1255752I2 (ru)
LU (2) LU91407I2 (ru)
ME (1) ME00415B (ru)
MX (1) MXPA02008021A (ru)
MY (1) MY130363A (ru)
NL (2) NL300332I2 (ru)
NO (4) NO325532B1 (ru)
NZ (1) NZ520640A (ru)
PE (1) PE20011083A1 (ru)
PL (1) PL211834B1 (ru)
PT (1) PT1255752E (ru)
RS (1) RS50444B (ru)
SI (1) SI1255752T1 (ru)
SK (1) SK287142B6 (ru)
TW (1) TWI306860B (ru)
UA (1) UA73976C2 (ru)
WO (1) WO2001060814A2 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2535975C2 (ru) * 2008-09-05 2014-12-20 Империал Инновейшнз Лимитед Производные изатина для применения в качестве агентов визуализации in vivo
RU2774382C1 (ru) * 2021-03-19 2022-06-20 Общество с ограниченной ответственностью «АксельФарм» Способ получения аморфной формы n-[2-(диэтиламино)этил]-5-[(z)-(5-фтор-1,2-дигидро-2-оксо-3h-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида малата, продукт и его применение для лечения онкологических и иммунологических заболеваний

Families Citing this family (334)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
DE60045474D1 (de) 1999-01-13 2011-02-17 Univ New York State Res Found Neues verfahren zum erschaffen von proteinkinase-inhibitoren
ME00415B (me) * 2000-02-15 2011-10-10 Pharmacia & Upjohn Co Llc Pirol supstituisani 2-indol protein kinazni inhibitori
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
CA2410509A1 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
US6635640B2 (en) 2000-06-30 2003-10-21 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
KR100600550B1 (ko) 2000-10-20 2006-07-13 에자이 가부시키가이샤 질소 함유 방향환 유도체
JP2004518669A (ja) 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
US6599902B2 (en) 2001-05-30 2003-07-29 Sugen, Inc. 5-aralkysufonyl-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
JP2004536097A (ja) * 2001-06-29 2004-12-02 アブ サイエンス 自己免疫疾患を治療するためのチロシンキナーゼ阻害剤の使用法
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
EP3168218B1 (en) 2001-08-15 2018-11-14 Pharmacia & Upjohn Company LLC A crystal comprising an l-malic acid salt of n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide for use as a medicament
CA2459879A1 (en) 2001-09-10 2003-03-20 Sugen, Inc. 3-(4,5,6,7-tetrahydroindol-2-ylmethylidiene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
EP1434774A1 (en) * 2001-10-10 2004-07-07 Sugen, Inc. 3-(4-substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
US7129225B2 (en) * 2001-10-22 2006-10-31 The Research Foundation Of State University Of New York Protection against and treatment of hearing loss
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
EP1466297A4 (en) * 2001-12-17 2005-10-19 Int Barcode Corp AS A SINGLE CODE, DOUBLE-SIDED CODE
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
DE60205776T2 (de) 2001-12-27 2006-06-14 Theravance Inc Indolinon-derivative als protein-kinasehemmer
PL372302A1 (en) 2002-02-15 2005-07-11 Pharmacia & Upjohn Company Process for preparing indolinone derivatives
WO2003097854A2 (en) * 2002-05-17 2003-11-27 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
US20060084697A1 (en) * 2002-08-08 2006-04-20 Hallahan Dennis E Pi3k antagonists as radiosensitizers
AU2003259713A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
TW200418836A (en) * 2002-09-10 2004-10-01 Pharmacia Italia Spa Formulations comprising an indolinone compound
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
AU2003302665B2 (en) * 2002-11-15 2009-12-24 Symphony Evolution, Inc. Kinase modulators
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
MXPA05009063A (es) 2003-02-26 2005-12-12 Sugen Inc Compuestos de aminoheteroarilo como inhibidores de proteina cinasa.
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
EP1604665B1 (en) * 2003-03-10 2011-05-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. C-kit kinase inhibitor
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
RU2319702C2 (ru) * 2003-10-02 2008-03-20 Фармация Энд Апджон Компани Ллс Негигроскопическая кристаллическая малеатная соль 5-[(z)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3h-индол-3-илиден)метил]-n-[(2s)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида, фармацевтическая композиция и способ лечения рака
JP4686465B2 (ja) * 2003-10-16 2011-05-25 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 繊維芽細胞増殖因子レセプター−１阻害物質及びその治療方法
KR101167573B1 (ko) 2003-11-07 2012-07-30 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스 인코포레이티드 개선된 약학적 성질을 갖는 퀴놀리논 화합물의 약학적으로허용가능한 염
US7683172B2 (en) 2003-11-11 2010-03-23 Eisai R&D Management Co., Ltd. Urea derivative and process for preparing the same
AU2004294981A1 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Scripps Research Institute Advanced indolinone based protein kinase inhibitors
JP2007513967A (ja) * 2003-12-11 2007-05-31 セラヴァンス， インコーポレーテッド 変異レセプターチロシンキナーゼが駆動する細胞増殖性疾患の処置において使用するための組成物
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
CA2571421A1 (en) 2004-06-24 2006-01-05 Nicholas Valiante Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
PL1786785T3 (pl) * 2004-08-26 2010-08-31 Pfizer Enancjomerycznie czyste związki aminoheteroarylowe jako kinazy białkowe
WO2006030826A1 (ja) 2004-09-17 2006-03-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. 医薬組成物
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
US20060287381A1 (en) * 2004-11-26 2006-12-21 The Scripps Research Institute Enhanced indolinone based protein kinase inhibitors
NZ561138A (en) * 2005-03-23 2009-06-26 Pfizer Prod Inc Anti-CTLA4 antibody and indolinone combination therapy for treatment of cancer
EP1877444A2 (en) 2005-04-26 2008-01-16 Pfizer, Inc. P-cadherin antibodies
US20080193448A1 (en) * 2005-05-12 2008-08-14 Pfizer Inc. Combinations and Methods of Using an Indolinone Compound
CA2608201C (en) 2005-05-18 2013-12-31 Array Biopharma Inc. Heterocyclic inhibitors of mek and methods of use thereof
CA2609353C (en) 2005-05-23 2015-04-28 Novartis Ag Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-quinolin-2-one lactic acid salts
WO2007015569A1 (ja) 2005-08-01 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を予測する方法
EP1925676A4 (en) 2005-08-02 2010-11-10 Eisai R&D Man Co Ltd TEST METHOD FOR THE EFFECT OF A VASCULARIZATION INHIBITOR
EA201300320A1 (ru) 2005-09-07 2014-02-28 Эмджен Фримонт Инк. Моноклональные антитела человека к киназе-1, подобной рецептору активина
ES2328407T3 (es) 2005-09-19 2009-11-12 Pfizer Products Incorporated Formas salinas solidas de una 2-indolinona sustituida con pirrol.
JPWO2007052849A1 (ja) 2005-11-07 2009-04-30 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質とｃ−ｋｉｔキナーゼ阻害物質との併用
UA96139C2 (ru) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитело к нейропилину-1 (nrp1)
KR20080083341A (ko) * 2005-12-29 2008-09-17 더 스크립스 리서치 인스티튜트 인돌리논의 아미노산 유도체 기재의 단백질 키나제 억제제
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
TW200808739A (en) 2006-04-06 2008-02-16 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolines for PDK1 inhibition
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
US20070293491A1 (en) 2006-04-19 2007-12-20 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Indazole compounds and methods for inhibition of cdc7
CA2651629A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Pfizer Products Inc. Cycloalkylamino acid derivatives and pharmaceutical compositions thereof
WO2007136103A1 (ja) * 2006-05-18 2007-11-29 Eisai R & D Management Co., Ltd. 甲状腺癌に対する抗腫瘍剤
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
EP2044939A1 (en) * 2006-06-29 2009-04-08 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for liver fibrosis
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
CA2656836A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
PE20080538A1 (es) 2006-08-04 2008-06-18 Takeda Pharmaceutical Derivado heterociclico fusionado y su uso
HUE033894T2 (en) * 2006-08-23 2018-01-29 Kudos Pharm Ltd 2-Methylmorpholine pyrido-, pyrazo- and pyrimido-pyrimidine derivatives as MTOR inhibitors
WO2008026748A1 (fr) 2006-08-28 2008-03-06 Eisai R & D Management Co., Ltd. Agent antitumoral pour cancer gastrique non différencié
AU2007294686B2 (en) 2006-09-15 2013-10-31 Equinox Sciences, Llc Kinase inhibitor compounds
SG176461A1 (en) 2006-11-06 2011-12-29 Supergen Inc Imidazo[1,2-b]pyridazine and pyrazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives and their use as protein kinase inhibitors
WO2008056634A1 (fr) * 2006-11-06 2008-05-15 Theravalues Corporation Nouveau dérivé d'hydroxyindole
EP2123649B1 (en) 2006-12-04 2012-02-29 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R&D Co., Ltd. 3-pyrrolo-cyclohexylene-2-dihydro-indolinone derivatives and uses thereof
CN101600694A (zh) 2007-01-29 2009-12-09 卫材R&D管理有限公司 未分化型胃癌治疗用组合物
JP4523073B2 (ja) 2007-02-06 2010-08-11 ファイザー・インク 癌を治療するためのＨＳＰ−９０阻害剤としての２−アミノ−５，７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体
JPWO2008114819A1 (ja) 2007-03-20 2010-07-08 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
US20090004213A1 (en) 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
CL2008001626A1 (es) 2007-06-05 2009-06-05 Takeda Pharmaceuticals Co Compuestos derivados de heterociclos fusionados, agente farmaceutico que los comprende y su uso en la profilaxis y tratamiento del cancer.
WO2009025358A1 (ja) 2007-08-23 2009-02-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited 複素環化合物およびその用途
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
CA2736177A1 (en) 2007-09-06 2009-03-12 Boston Biomedical, Inc. Compositions of kinase inhibitors and their use for treatment of cancer and other diseases related to kinases
RS53552B1 (en) 2007-10-11 2015-02-27 Astrazeneca Ab DERIVATI PIROLO [2,3-D] PIRIMIDINA KAO INHIBITORI PROTEIN KINAZE B
CA2704000C (en) 2007-11-09 2016-12-13 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination of anti-angiogenic substance and anti-tumor platinum complex
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
WO2009067686A2 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
WO2009074862A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
PE20131210A1 (es) 2007-12-19 2013-10-31 Genentech Inc Derivados de 5-anilinoimidazopiridina como inhibidores de mek
PA8809001A1 (es) 2007-12-20 2009-07-23 Novartis Ag Compuestos organicos
WO2009082687A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 Genentech, Inc. Azaindolizines and methods of use
CA2713930A1 (en) * 2008-01-29 2009-08-06 Eisai R & D Management Co., Ltd. Combined use of angiogenesis inhibitor and taxane
WO2009100929A1 (en) * 2008-02-13 2009-08-20 Ratiopharm Gmbh Pharmaceutical compositions comprising n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2- dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
WO2009104021A2 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
WO2009124037A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing sunitinib and salts thereof
EP2280960A1 (en) * 2008-04-16 2011-02-09 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
CA2725001C (en) * 2008-05-23 2014-05-13 Jiangsu Chiatai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd. Dihydroindolone derivatives
WO2009154697A2 (en) 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
EP2313371B1 (en) * 2008-06-13 2012-08-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
EP2313396A1 (en) * 2008-06-23 2011-04-27 Natco Pharma Limited Process for the preparation of high purity sunitinib and its pharmaceutically acceptable salt
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
WO2010005527A1 (en) 2008-06-30 2010-01-14 Angioblast Systems, Inc. Treatment of eye diseases and excessive neovascularization using a combined therapy
MX2011000150A (es) * 2008-06-30 2011-04-05 Cylene Pharmaceuticals Inc Compuestos de oxoindol.
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
CN102137842A (zh) * 2008-07-02 2011-07-27 基因里克斯(英国)有限公司 3-吡咯取代的2-吲哚酮衍生物的制备
AU2009269768A1 (en) * 2008-07-10 2010-01-14 Generics [Uk] Limited Processes for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
EP2342195B1 (en) 2008-07-24 2014-09-10 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
KR20110036588A (ko) * 2008-07-24 2011-04-07 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 아세테이트 및 이의 다형을 통한 수니티닙 말레이트의 제조 방법
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
CN102203125A (zh) * 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂及其使用方法
SI2350129T1 (sl) 2008-08-25 2015-11-30 Amplimmune, Inc. Sestavki PD-1 antagonistov in postopek njihove uporabe
JP2012500838A (ja) * 2008-08-25 2012-01-12 ジェネリクス・（ユーケー）・リミテッド スニチニブの新規な多形およびその調製方法
AU2009286520A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Crystalline form of sunitinib and processes for its preparation
CA2735900A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Medimmune, Llc Antibodies directed to dll4 and uses thereof
CN102177155A (zh) * 2008-10-10 2011-09-07 麦迪凯姆股份公司 一种3-吡咯取代的2-吲哚酮苹果酸盐的制备工艺
EP2181991A1 (en) 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
JP5579619B2 (ja) 2008-12-01 2014-08-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
TW201028410A (en) 2008-12-22 2010-08-01 Astrazeneca Ab Chemical compounds 610
US20120114667A1 (en) 2008-12-23 2012-05-10 Medimmune Limited TARGETED BINDING AGENTS DIRECTED TO a5BETA1 AND USES THEREOF
US8329740B2 (en) 2009-01-02 2012-12-11 Hetero Research Foundation Polymorphs of sunitinib malate
TWI447108B (zh) 2009-01-16 2014-08-01 Exelixis Inc Ｎ－（４－｛〔６，７雙（甲氧基）喹啉－４－基〕氧基｝苯基）－ｎ’－（４－氟苯基）環丙烷－１，１－二甲醯胺之蘋果酸鹽及其結晶型
RU2545080C2 (ru) 2009-02-05 2015-03-27 Иммьюноджен, Инк. Новые производные бензодиазепина
US20100204221A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Hariprasad Vankayalapati Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
WO2010103094A1 (en) 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
WO2010118986A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CA2771675A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
EP2477978A1 (en) 2009-09-16 2012-07-25 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
BR112012009327A2 (pt) 2009-10-20 2017-06-06 Cellzome Ltd análogos de heterociclil pirazolopirimidina como inibidores de jak
WO2011058521A2 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
WO2011061613A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib
DK3279215T3 (da) 2009-11-24 2020-04-27 Medimmune Ltd Målrettede bindemidler mod b7-h1
EP2507237A1 (en) 2009-12-03 2012-10-10 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Imidazoquinolines which act via toll - like receptors (tlr)
US10166142B2 (en) 2010-01-29 2019-01-01 Forsight Vision4, Inc. Small molecule delivery with implantable therapeutic device
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
CN105001334A (zh) 2010-02-10 2015-10-28 伊缪诺金公司 Cd20抗体及其用途
BR112012019635A2 (pt) 2010-02-22 2016-05-03 Hoffmann La Roche compostos inibidores de pirido[3,2-d] pirimidina pi3k delta e métodos de uso
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
WO2011107585A1 (en) 2010-03-04 2011-09-09 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mtor inhibitors
CA2792039A1 (en) 2010-03-04 2011-09-09 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
WO2011119777A2 (en) 2010-03-23 2011-09-29 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
WO2011128699A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
KR20130094693A (ko) 2010-04-30 2013-08-26 셀좀 리미티드 Ｊａｋ 저해제로서의 피라졸 화합물
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
MX2012014776A (es) 2010-06-25 2013-01-29 Eisai R&D Man Co Ltd Agente antitumoral que emplea compuestos con efecto inhibidor de cinasas combinados.
US20130143915A1 (en) 2010-07-01 2013-06-06 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
CN103097418A (zh) 2010-07-09 2013-05-08 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗神经毡蛋白抗体及使用方法
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
JP2013534233A (ja) 2010-08-20 2013-09-02 セルゾーム リミティッド 選択的ｊａｋ阻害剤としてのヘテロシクリルピラゾロピリミジン類似体
WO2012027716A1 (en) 2010-08-27 2012-03-01 Collabrx, Inc. Method to treat melanoma in braf inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
US8846953B2 (en) 2010-11-01 2014-09-30 Scinopharm Taiwan, Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
CA2815330A1 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
JP2014503500A (ja) 2010-11-18 2014-02-13 シンタ ファーマスーティカルズ コーポレーション 低酸素状態に基づく酸素感受性薬剤による治療に適した被験体の事前選択
US20140031769A1 (en) 2010-11-19 2014-01-30 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
AR083868A1 (es) 2010-12-03 2013-03-27 Lilly Co Eli Compuestos de oxazol[5,4-b]piridin-5-ilo
EP2654797B1 (en) 2010-12-23 2017-11-08 Nektar Therapeutics Polymer-des-ethyl sunitinib conjugates
JP6002149B2 (ja) * 2010-12-23 2016-10-05 ネクター セラピューティクス ポリマー−スニチニブコンジュゲート
KR101928116B1 (ko) 2011-01-31 2018-12-11 노파르티스 아게 신규 헤테로시클릭 유도체
PL2675479T3 (pl) 2011-02-15 2016-09-30 Cytotoksyczne pochodne benzodiazepiny
US20130324532A1 (en) 2011-02-17 2013-12-05 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
CA2827172C (en) 2011-02-17 2019-02-26 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
JP2014510122A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 セルゾーム リミテッド ｍＴＯＲ阻害剤としてのジヒドロピロロピリミジン誘導体
CN103945696B (zh) * 2011-04-08 2016-06-29 贝达医药公司 新颖吲哚啉酮蛋白激酶抑制剂
AU2012246490B2 (en) 2011-04-18 2016-08-04 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
EP2714937B1 (en) 2011-06-03 2018-11-14 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2013013188A1 (en) 2011-07-21 2013-01-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
JP2014521623A (ja) 2011-07-28 2014-08-28 セルゾーム リミティッド Ｊａｋ阻害剤としてのヘテロシクリルピリミジンアナログ
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
RU2014115476A (ru) 2011-09-20 2015-10-27 Целльзом Лимитед Производные пиразоло[4, 3-с]птридина в качестве ингибиторов киназ
CA2849189A1 (en) 2011-09-21 2013-03-28 Cellzome Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as mtor inhibitors
BR112014008241A2 (pt) 2011-10-07 2017-04-18 Cellzome Ltd composto, composição farmacêutica, métodos para tratar, controlar, retardar ou prevenir doenças e distúrbios, e para preparar um composto, e, uso de um composto
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
CA2853256C (en) 2011-10-28 2019-05-14 Novartis Ag Novel purine derivatives and their use in the treatment of disease
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
WO2013092854A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Cellzome Limited Pyrimidine-2,4-diamine derivatives as kinase inhibitors
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
WO2013140232A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Laurus Labs Private Limited An improved process for the preparation of sunitinib and its acid addition salts thereof
US8969361B2 (en) 2012-04-20 2015-03-03 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
MX359257B (es) 2012-05-04 2018-09-19 Pfizer Antígenos asociados a próstata y regímenes de inmunoterapia basados en vacuna.
SG11201406550QA (en) 2012-05-16 2014-11-27 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
DK2859017T3 (da) 2012-06-08 2019-05-13 Sutro Biopharma Inc Antistoffer omfattrende stedsspecifikke ikke-naturlige aminosyrerester, fremgangsmåder til fremstilling heraf og fremgangsmåder til anvendelse heraf
US9732161B2 (en) 2012-06-26 2017-08-15 Sutro Biopharma, Inc. Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
CN104736533B (zh) 2012-08-17 2016-12-07 癌症治疗合作研究中心有限公司 Vegfr3抑制剂
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
ES2728864T3 (es) 2012-08-31 2019-10-29 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
JP6243918B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-06 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２調節因子およびそれらの使用方法
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
KR20150098605A (ko) 2012-12-21 2015-08-28 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 퀴놀린 유도체의 비정질 형태 및 그의 제조방법
EP2961435B1 (en) 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2014134483A2 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
CA2904152A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Boston Biomedical, Inc. 3-(aryl or heteroaryl) methyleneindolin-2-one derivatives as inhibitors of cancer stem cell pathway kinases for the treatment of cancer
TR201911151T4 (tr) 2013-03-14 2019-08-21 Tolero Pharmaceuticals Inc Jak2 ve alk2 inhibitörleri ve bunların kullanım yöntemleri.
CA2905496A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
JP6411379B2 (ja) 2013-05-14 2018-10-24 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 レンバチニブ化合物に対する子宮内膜がん対象の応答性を予測及び評価するためのバイオマーカー
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
PT3039424T (pt) 2013-08-28 2020-09-03 Crown Bioscience Inc Taicang Assinaturas de expressão genética que permitem prever a resposta de um sujeito a um inibidor multiquinase e métodos de utilização do mesmo
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
US9278955B2 (en) 2013-10-18 2016-03-08 Sun Pharmaceutical Industries Limited Ascorbic acid salt of sunitinib
CA2838587A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta Pure crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
KR102006527B1 (ko) 2013-11-01 2019-08-02 화이자 인코포레이티드 전립선-연관 항원의 발현을 위한 벡터
KR20160095035A (ko) 2013-12-06 2016-08-10 노파르티스 아게 알파-이소형 선택성 포스파티딜이노시톨 3-키나제 억제제를 위한 투여 요법
CN104829596B (zh) 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
CN107106551A (zh) 2014-08-08 2017-08-29 弗赛特影像4股份有限公司 受体酪氨酸激酶抑制剂的稳定且可溶的制剂和其制备方法
ES2926687T3 (es) 2014-08-28 2022-10-27 Eisai R&D Man Co Ltd Derivado de quinolina muy puro y método para su producción
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3789027A1 (en) 2015-01-13 2021-03-10 Kyoto University Bosutinib, sunitinib, tivozanib, imatinib, nilotinib, rebastinib or bafetinib for preventing and/or treating amyotrophic lateral sclerosis
US20180028662A1 (en) 2015-02-25 2018-02-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for Suppressing Bitterness of Quinoline Derivative
CA2978226A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Merck Sharpe & Dohme Corp. Combination of a pd-1 antagonist and a vegfr/fgfr/ret tyrosine kinase inhibitor for treating cancer
CA2982928A1 (en) 2015-04-20 2016-10-27 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
KR102608921B1 (ko) 2015-05-18 2023-12-01 스미토모 파마 온콜로지, 인크. 생체 이용률이 증가된 알보시딥 프로드러그
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
CA2988707C (en) 2015-06-16 2023-10-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination of cbp/catenin inhibitor and immune checkpoint inhibitor for treating cancer
CN108289861B (zh) 2015-08-03 2021-11-02 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗癌症的组合疗法
MX2018003462A (es) 2015-09-22 2018-09-06 Graybug Vision Inc Compuestos y composiciones para el tratamiento de trastornos oculares.
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
CA3002954A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Novartis Ag Dosage regimen for a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
EA038755B1 (ru) 2015-11-12 2021-10-14 Грейбаг Вижн, Инк. Агрегирующие микрочастицы для обеспечения замедленного высвобождения терапевтического агента для внутриглазной доставки
WO2017132617A1 (en) 2016-01-27 2017-08-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-cd74 antibody conjugates, compositions comprising anti-cd74 antibody conjugates and methods of using anti-cd74 antibody conjugates
WO2017139417A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Vitrisa Therapeutics, Inc. Compositions with improved intravitreal half-life and uses thereof
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
EP3507305A1 (en) 2016-09-02 2019-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
SG10202104386UA (en) 2016-10-28 2021-05-28 Icahn School Med Mount Sinai Compositions and methods for treating ezh2-mediated cancer
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
KR102495436B1 (ko) 2016-12-05 2023-02-02 에이프로스 테라퓨틱스, 인크. 산성 기를 함유하는 피리미딘 화합물
CN110267659A (zh) 2016-12-08 2019-09-20 西奈山伊坎医学院 用于治疗cdk4/6介导的癌症的组合物和方法
WO2018119000A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
BR112019019452A2 (pt) 2017-03-23 2020-04-14 Graybug Vision Inc composto, e, uso de um composto
AU2018265415A1 (en) 2017-05-10 2019-10-31 Graybug Vision, Inc. Extended release microparticles and suspensions thereof for medical therapy
EP3658588A1 (en) 2017-07-26 2020-06-03 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
JP7423513B2 (ja) 2017-09-18 2024-01-29 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド 抗葉酸受容体α抗体コンジュゲート及びその使用
WO2019075367A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
CN112154146A (zh) 2018-03-06 2020-12-29 西奈山伊坎医学院 丝氨酸苏氨酸激酶(akt)降解/破坏化合物和使用方法
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
JP7351859B2 (ja) 2018-06-04 2023-09-27 アプロス セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｔｌｒ７の調節に関係する疾患を処置するのに有用な酸性基を含むピリミジン化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
AU2019288740A1 (en) 2018-06-21 2021-01-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai WD40 repeat domain protein 5 (WDR5) degradation / disruption compounds and methods of use
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CA3103995A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Methods for treating diseases associated with abnormal acvr1 expression and acvr1 inhibitors for use in the same
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
US11034710B2 (en) 2018-12-04 2021-06-15 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
US20220040324A1 (en) 2018-12-21 2022-02-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
MX2021009371A (es) 2019-02-12 2021-09-10 Sumitomo Pharma Oncology Inc Formulaciones que comprenden inhibidores de proteina cinasa heterociclicos.
US11793802B2 (en) 2019-03-20 2023-10-24 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
MX2021011289A (es) 2019-03-22 2021-11-03 Sumitomo Pharma Oncology Inc Composiciones que comprenden moduladores de isoenzima m2 muscular de piruvato cinasa pkm2 y metodos de tratamiento que usan las mismas.
EP3958845A1 (en) 2019-04-25 2022-03-02 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
US20220362394A1 (en) 2019-05-03 2022-11-17 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
US20230022524A1 (en) 2019-05-06 2023-01-26 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
US20220298143A1 (en) 2019-08-31 2022-09-22 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole Derivatives for FGFR Inhibitor and Preparation Method Thereof
WO2021089791A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
US12103924B2 (en) 2020-06-01 2024-10-01 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) degradation compounds and methods of use
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用
CN118221652A (zh) * 2022-12-19 2024-06-21 沈阳药科大学 一种吲哚-2-酮衍生物及其制备方法和用途
WO2024188282A1 (zh) * 2023-03-14 2024-09-19 康百达（四川）生物医药科技有限公司 吲哚酮衍生物及其在医药上的应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL230368A (ru) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (ru) 1950-11-18
BE553661A (ru) 1955-12-23
NL96047C (ru) 1956-06-08
NL251055A (ru) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (ru) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (ru) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
EP0124482B1 (de) 1983-04-29 1989-11-08 Ciba-Geigy Ag Neue Imidazolide und deren Verwendung als Härter für Polyepoxidverbindungen
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
US4971996A (en) 1987-03-11 1990-11-20 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds which are useful as tyrosine kinase inhibitors
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
ES2110965T3 (es) 1989-07-25 1998-03-01 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Derivado de oxoindol.
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
WO1992020642A1 (en) 1991-05-10 1992-11-26 Rhone-Poulenc Rorer International (Holdings) Inc. Bis mono-and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit egf and/or pdgf receptor tyrosine kinase
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
CA2119155C (en) 1991-10-18 1999-06-15 Dennis Paul Phillion Fungicides for the control of take-all disease of plants
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
DE59402281D1 (de) 1993-06-28 1997-05-07 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
ES2208935T3 (es) 1996-08-01 2004-06-16 Merckle Gmbh Acidos acil-pirrol-dicarboxilicos y acidos acil-indol-dicarboxilicos, asi como sus derivados como inhibidores de la fosfolipasa a2 citosolica.
EP0984930B1 (en) * 1997-05-07 2005-04-06 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
AU759226B2 (en) * 1998-05-29 2003-04-10 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CZ20012113A3 (cs) 1998-12-14 2001-11-14 Cellegy Pharmaceuticals, Inc. Prostředky a způsoby pro léčbu onemocnění anorektální oblasti
ES2192877T3 (es) * 1998-12-17 2003-10-16 Hoffmann La Roche 4-alquenil (y alquinil) oxindoles como inhibidores de kinasas ciclina-dependientes, en particular cdk2.
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
EP1139754A4 (en) * 1998-12-31 2002-12-18 Sugen Inc 3-HETEROARYLIDENYL-2-INDOLINONE COMPOUNDS FOR MODULATION OF PROTEIN KINASE ACTIVITY AND IN CANCER CHEMOTHERAPY
AU1928501A (en) * 1999-11-24 2001-06-04 Sugen, Inc. Formulations for pharmaceutical agents ionizable as free acids or free bases
DK1255536T3 (da) * 1999-12-22 2006-10-30 Sugen Inc Indolinonderivater til modulation af c-kit-tyrosinproteinkinase
ME00415B (me) * 2000-02-15 2011-10-10 Pharmacia & Upjohn Co Llc Pirol supstituisani 2-indol protein kinazni inhibitori
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
US6635640B2 (en) * 2000-06-30 2003-10-21 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
JP2004518669A (ja) * 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2535975C2 (ru) * 2008-09-05 2014-12-20 Империал Инновейшнз Лимитед Производные изатина для применения в качестве агентов визуализации in vivo
RU2774382C1 (ru) * 2021-03-19 2022-06-20 Общество с ограниченной ответственностью «АксельФарм» Способ получения аморфной формы n-[2-(диэтиламино)этил]-5-[(z)-(5-фтор-1,2-дигидро-2-оксо-3h-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида малата, продукт и его применение для лечения онкологических и иммунологических заболеваний

Also Published As

Publication number Publication date
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
US6573293B2 (en) 2003-06-03
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
YU61402A (sh) 2005-07-19
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
AU3977001A (en) 2001-08-27
CR20120009A (es) 2012-02-07
IL151127A0 (en) 2003-04-10
CN1439005A (zh) 2003-08-27
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
BE2010C009I2 (ru) 2020-01-30
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
IS2491B (is) 2009-01-15
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
ME00415B (me) 2011-10-10
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
PT1255752E (pt) 2007-10-17
BG107078A (bg) 2003-04-30
PL361209A1 (en) 2004-09-20
US7125905B2 (en) 2006-10-24
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
UA73976C2 (ru) 2005-10-17
RS50444B (sr) 2010-03-02
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
NO20023831L (no) 2002-10-15
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
NO325532B1 (no) 2008-06-09
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
AR034118A1 (es) 2004-02-04
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
BR0108394A (pt) 2004-06-22
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
TWI306860B (en) 2009-03-01
LU91407I9 (ru) 2018-12-28
CN1329390C (zh) 2007-08-01
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
NZ520640A (en) 2005-04-29
US7572924B2 (en) 2009-08-11
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
HU228979B1 (en) 2013-07-29
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
FR08C0002I1 (ru) 2008-03-21
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
CA2399358C (en) 2006-03-21
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
IS6501A (is) 2002-08-13
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
CR20120007A (es) 2012-02-24
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA005996B1 (ru) Пирролзамещенный 2-индолинон, фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой
JP3677501B2 (ja) 蛋白質キナーゼ阻害剤としての３−（４−アミドピロール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体
US7053086B2 (en) 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
EA005032B1 (ru) Пирролзамещенные 2-индолиноны (варианты), фармацевтическая композиция (варианты), способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, способ лечения или профилактики нарушения в организме, связанного с протеинкиназой
JP2004518669A (ja) ４−アリール置換インドリノン
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
ND4A Extension of term of a eurasian patent
MH4A Revocation of a eurasian patent in part
ND4A Extension of term of a eurasian patent
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
TK4A Corrections in published eurasian patents
ND4A Extension of term of a eurasian patent
MK4A Patent expired

Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM