WO2007015569A1 - 血管新生阻害物質の効果を予測する方法 - Google Patents

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Junji Matsui
Taro Semba
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Eisai R & D Management Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to an angiogenesis inhibitor, for example, a substance having an inhibitory activity (hereinafter referred to as “VEGF inhibitor”), for example, vascular endothelial growth factor (hereinafter sometimes referred to as “VEGF”). It is related to a novel method for predicting the effects of '' Background technology
  • angiogenesis inhibitors have been shown to be useful as antitumor agents.
  • bevacizumab a neutralizing antibody preparation against VEGF, which plays an important role in angiogenic factors, has been reported to have an antitumor effect against colorectal cancer in clinical trials ( 1 )
  • angiogenesis inhibitors 4_ (3-chlorodi-4- (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) 17-methoxy-6-quinolinecarboxamide ( 2 and 3) .
  • determining the effect of an angiogenesis inhibitor, determining the concentration indicating the effect of an angiogenesis inhibitor, and predicting the effect of an angiogenesis inhibitor before administration are treatments using an angiogenesis inhibitor. It is very useful to advance the process efficiently and contribute to improving the patient's Q0L ( 4) . A lot of research on the former two is currently underway. Concretely, Dynamic and ontrast linhanced Magnetic Resonance Imaging
  • DCE-MRI Positron Emi ss ion lomograpy (PET), Interstitial Fluid Pressure, serum VEGF, and other methods are known, and DCE-MRI is a method for determining the effects of angiogenesis inhibitors. It is being considered effective as ( 6) .
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and a problem to be solved is to find a method for predicting the effect of an angiogenesis inhibitor.
  • the present inventors have first shown that the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor correlates with the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor. I found it.
  • the antitumor effect of angiogenesis inhibitors can be predicted by measuring the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor and using the number of blood vessels covered with pericytes as an index. I found it. That is, the present invention relates to the following.
  • a cancer patient is vascularized with the step of measuring the number of blood vessels in the tumor and the ratio of the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor to the number of blood vessels in the tumor. And a step of determining whether or not the inhibitor is highly sensitive.
  • a tumor collected from a cancer patient can be used.
  • the measurement of the number of blood vessels covered with pericytes is selected from the group consisting of a_SMA, desmin, chondroitin sulfate proteoglycan 4, force luponin, caldesmon and PDGF receptor At least one expression can be performed as an index, and among them, ⁇ -SMA and / or desmin expression is preferably performed as an index.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be measured by, for example, immunochemical methods, in situ hybridization, or quantitative RT-PCR.
  • the number of blood vessels in the tumor is selected from the group consisting of CD31, wVF, CD34, CD105, CXCR4, CD146, CD133, KDR and KIT.
  • the expression can be performed using at least one expression as an index, and among them, the expression of CD31 is preferably performed as an index.
  • Measurement of the number of blood vessels in the tumor can be performed, for example, by immunochemical methods, in situ hybridization, or quantitative RT-PCR.
  • the angiogenesis inhibitor is, for example, a VEGF receptor kinase inhibitor.
  • VEGF receptor kinase inhibitors are shown below.
  • R 1 represents a formula — V 1 — V 2 _V 3 (wherein V 1 represents a Ci_ 6 alkylene group which may have a substituent; V 2 represents a single bond, an oxygen atom) , A sulfur atom, a carbonyl group, a sulfinyl group, a sulfonyl group, a group represented by the formula —CONR 6 —, a group represented by the formula —S 0 2 NR 6 —, and a formula represented by NR 6 S ⁇ 2 — A group represented by the formula NR 6 CO— or a group represented by the formula NR 6 — (wherein R 6 is a hydrogen atom, optionally having a substituent C i - have a 6 alkyl group or a substituted group means a good C 3 _ 8 cycloalkyl group);.
  • V 3 represents a hydrogen atom, which may have a substituent C - 6 alkyl group, a substituted which may have a group C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 - 6 Arukyuru group which may have a substituent C 3 - 8 cycloalkyl group, a substituted Base Ce—i which may have an aryl group, an optionally substituted 5- to 10-membered heteroaryl group or an optionally substituted 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic ring Means a group represented by the formula:
  • R 2 is Shiano group may have a substituent CI- 6 alkoxy group, carboxyl group, which may have a substituent C 2 _ 7 alkoxycarbonyl group or formula one C ONV allyal 2 (wherein, V al 1 represents a hydrogen atom, which may have a substituent C i - 6 alkyl group which may have a substituent C 2 6 alkenyl group, have a substituent and which may be C 2 6 alkynyl group which may have a substituent C 3 _ 8 Shikuroa alkyl group, which may have a substituent Ce-i.
  • Ariru groups, substituted Means a 5- to 10-membered heteroaryl group or a 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent;
  • Val 2 has a hydrogen atom or a substituent; optionally with C i - 6 alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkyl group, have a substituent and which may be C 3 _ 8 cycloalkyl group which may have a substituent Ce ⁇ .
  • Ariru group which may have a substituent group 5-1 0-membered heteroaryl group, Substituent may have from 3 to 1 0-membered non-aromatic heterocyclic group, a hydroxyl group, which may have an optionally substituted alkoxy group or a substituent.
  • 3 _ 8 Means a cycloalkoxy group.) Means a group represented by
  • a 1 represents an optionally substituted carbon atom or nitrogen atom
  • R 11 represents a hydrogen atom, an optionally substituted C ⁇ e alkyl group, or an optionally substituted group.
  • which may be C 2 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 6 alkynyl group which may have a substituent group c 3 _ 8 cycloalkyl group, which may have a substituent Good C 6 10 aryl group, optionally substituted 5 to 10 membered heteroaryl group, optionally substituted 3 to 10 membered non-aromatic heterocyclic group or substituted
  • R 12 represents a hydrogen atom or an optionally substituted Cu alkyl group
  • V al 3 means an oxygen atom or a sulfur atom
  • a 11 represents a carbon atom or a nitrogen atom which may have a substituent
  • R 13 has a hydrogen atom, a C ⁇ e alkyl group or a substituent which may have a substituent
  • R 14 represents the formula v al 4 —V al 5 (wherein Val 4 represents a single bond or a carbonyl group; Val 5 may have a hydrogen atom, a hydroxyl group, or a substituent) Good Alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkynyl group which may have a substituent C 3 8 cycloalkyl Le group Ce ⁇ which may have a substituent.
  • a substituent group 5 to 10 membered heteroaryl group may have a substituent group 3 to 10 membered non-aromatic heterocyclic group, amino group, substituent group A mono-alkylamino group which may have a di-C 1 -e alkylamino group which may have a substituent, a forminole group, a methoxyl group which may have a substituent or a C 2 _ 7 which may have a substituent
  • An alkoxycarbonyl group is meant.
  • X represents an oxygen atom or a sulfur atom
  • R 3 is a hydrogen atom, which may have a substituent CI- 6 alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group, which may have a substituent good C 2 alkynyl group, which may have a substituent C 3 _ 8 cycloalkyl group, which may have an optionally substituted C 2 7 Ashiru groups or substituents C 2 _ 7 means an alkoxycarbonyl group;
  • R 7 and R 8 are each independently a hydrogen atom, a halogen atom, a cyano group, a nitrite group, an amino group, an optionally substituted C ⁇ e alkyl group, or an optionally substituted group.
  • C 3 _ 8 cycloalkyl group which may have a substituent CI- 6 alkoxy group which may have a substituent C ⁇ 6 alkylthio group, a formyl group, have a location substituent which may be C 2 _ 7 Ashiru group, in which may have a substituent C 2 _ 7 ⁇ alkoxycarbonyl group, or a group of the formula one CON v d 2 (wherein Oyobi ⁇ is hydrogen independently Means an alkyl group optionally having an atom or a substituent.) Means a group represented by:
  • R 9 represents a hydrogen atom, a halogen atom or an optionally substituted C ⁇ e alkyl group
  • w 1 and w 2 each independently represent a carbon atom or a nitrogen atom which may have a substituent.
  • R 4 is a hydrogen atom, which may have a substituent 6 alkyl group which may have a substituent C 2 - 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 - 6 Arukini group, which may have a substituent C 3 - 8 cycloalkyl group which may have a substituent C 2 - 7 Ashiru group or an optionally substituted C 2 - 7 alkoxy Means a rubonyl group;
  • R 5 is a hydrogen atom, which may have a substituent C ⁇ e alkyl group which may have a substituent C 2 - 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 _ 6
  • Arukini group which may have a substituent group c 3 _ 8 cycloalkyl group which may have a substituent C 6 - 10
  • Ariru group 5 may have a substituent 1 A 0-membered heteroaryl group, a 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent, or a pharmacologically acceptable salt thereof. Salts, or solvates thereof.
  • the VEGF receptor kinase inhibitor is selected from 4_ (3-chloro-4 (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) 1-7-methoxy-6_quinolinecarboxamide, Alternatively, a pharmacologically acceptable salt thereof or a solvate thereof is preferable.
  • the angiogenesis inhibitor may be, for example, an anti-VEGF receptor antibody, an anti-VEGF antibody, an FGF receptor kinase inhibitor, a PDGF receptor kinase inhibitor, an EGF receptor kinase inhibitor, It may be at least one selected from the group consisting of an anti-FGF receptor antibody, an anti-PDGF receptor antibody, an anti-EGF receptor antibody, an anti-FGF antibody, an anti-PDGF antibody, and an anti-EGF antibody.
  • a kit for use in the method described in (1) or (2) comprising an anti-a-SMA antibody, an anti-desmin antibody, an anti-chondroitin sulfate proteo darican 4 antibody, an anti-calponin antibody, and an anti-caldesmon antibody And at least one selected from the group consisting of an anti-PDGF receptor antibody.
  • the kit according to the present invention comprising a polynucleotide comprising a partially complementary sequence, provides a method for predicting the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor. More specifically, the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor can be predicted by measuring the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor and using the number of blood vessels covered with pericytes as an index. It has become possible.
  • the method according to the present invention makes it possible to predict an antitumor effect without administering an angiogenesis inhibitor to a patient, so that a patient who can expect a more antitumor effect can be selected and treated. It became possible to contribute to the patient's Q0L.
  • Figure 1 shows the anti-tumor effects and tumor tissue of 4_ (3-chloroguchi 4- (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) -1-7-methoxy-6-quinolinecarboxamide in a mouse model transplanted with a human cancer cell line. This shows the correlation with the number of blood vessels covered with pericytes.
  • Figure 2 shows the relationship between the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor and the number of blood vessels covered with pericytes in a mouse model transplanted with a human cancer cell line.
  • compound 1 is 4 (3-chloro-4_ (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) 1 7-methoxy 1 6-quinolinecarboxamide
  • compound 2 is 5- (5-fluoro-2 —Oxo 1, 1,2-dihydroindole 1-ylidenemethyl) — 2,4-Dimethyl 1 H-pyrrole 3-carboxyl acid (2-jetylaminoethyl) amide.
  • Figure 3 shows 4 (3-chloro- 4 (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) 1- 7-methoxy 6-quino in a human cancer cell line subcutaneous transplantation model. This shows the correlation between the antitumor effect of lincarboxamide and desmin, a marker of pericytes in tumor tissue.
  • the present invention is a method for predicting the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor, comprising measuring a number of blood vessels covered with pericytes in a tumor, and using the number of blood vessels covered with pericytes as an index. And determining whether or not the cancer patient is highly sensitive to an angiogenesis inhibitor. 1. Measuring the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor
  • the tumor is preferably a tumor removed from a cancer patient.
  • a tumor removed from a cancer patient can be obtained, for example, by removing it from a cancer patient by a surgical procedure (for example, biopsy, etc.).
  • the size of a tumor collected from a cancer patient may be any size that can measure the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor.
  • the solid cancer field ⁇ may be the size when collected by biopsy (for example, 2 to 3 mm), or the size when a tissue piece is removed with a scalpel (for example, a rice grain size), limited Is not to be done.
  • the type of tumor is not particularly limited, for example, brain tumor, cervical cancer, esophageal cancer, tongue cancer, lung cancer, Breast cancer, sputum cancer, stomach cancer, small intestine or duodenal cancer, colon cancer (colon cancer, rectal cancer), bladder cancer, kidney cancer, liver cancer, prostate cancer, uterine cancer, ovarian cancer, thyroid cancer, gallbladder cancer, pharyngeal cancer, sarcoma
  • leukemia eg, chronic myelogenous leukemia (CML), acute myeloid leukemia (AML), chronic lymphocytic Leukemia (CLL) and acute lymphoblastic leukemia (ALL), lymphoma, malignant lymphoma, multiple myeloma ( ⁇ ), etc.
  • CML chronic myelogenous leukemia
  • AML acute myeloid leukemia
  • CLL chronic lymphocytic Leukemia
  • ALL acute lymphoblastic leukemia
  • Pericytes also called pericyte, are cells that surround capillaries and veins.
  • Pericytes non-smooth muscle cell types
  • Akuchin a - smooth muscle actin, hereinafter “shed - SMA” is also referred to as
  • desmin a - smooth muscle actin, hereinafter “shed - SMA” is also referred to as
  • desmin a - smooth muscle actin
  • chondroitin sulfate Puroteodarikan 4 hereinafter force when referred to as "NG_2" s
  • Canoreponin force nore desmon (Characteri zat ion of smooth muscle eel ⁇ and pericyte different iat ion in the rat retina in vivo.Invest igat ive. Ophthalmology. Vi sual Science. 45, 2795-2806, 2004.), Platelet -derived growth factor Receptor (Cel lular abnormal iti es of blood vessels as targets in cancer.
  • a blood vessel covered with pericytes means a blood vessel in which all or part of the blood vessel is surrounded by pericytes.
  • “Number of blood vessels covered with pericytes” refers to, for example, the number of blood vessels covered with pericytes per unit area in the tumor, the number of blood vessels covered with pericytes per unit volume in the tumor, Can be calculated as the number of blood vessels covered with pericytes per unit weight. In this step, the number of blood vessels covered with pericytes is, for example, the number of tans expressed in pericytes. Protein and Z or mRNA expression can be measured as indicators.
  • proteins and Z or genes expressed in pericytes include a-SMA, desmin, chondroitin sulfate proteodarican 4, force luponin, caldesmon and PDGF receptor, preferably a-SMA and desmin.
  • a-SMA and desmin can give.
  • by measuring the expression of these proteins and / or mRNA in a tumor collected from a patient it is possible to obtain information such as the type of protein and Z or gene expressed in the tumor, the presence or absence of expression, and the expression level.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be calculated using this information as an index.
  • protein measurements include immunochemical methods (eg, immunohistochemical methods, Western plots, etc.), mass spectrometry methods, etc., preferably immunochemical methods, and particularly preferably immunohistochemistry. Method. These methods can be performed according to conventional methods.
  • examples of mRNA measurement include methods such as in situ hybridization, Northern blot analysis, DNA microarray, RT-PCR, and quantitative RT-PCR, preferably in situ hybridization.
  • examples include Chillon and quantitative RT-PCR. These methods can be carried out according to conventional methods.
  • In situ hybridization can be performed, for example, by the method described in Experimental Medicine separate volume, New Genetic Engineering Handbook, Chapter 4, Yodosha, 2003.
  • Experimental Medicine separate volume New Genetic Engineering Handbook, Chapter 4, Yodosha, 2003.
  • an example of a method for measuring the number of blood vessels covered with pericytes will be described.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be measured by an immunohistochemical method using the expression of proteins specifically expressed in pericytes as an index.
  • Immunohistochemical methods can be performed in accordance with conventional methods (Experimental note series seen in the separate volume of cell engineering, Bio-experimental illustrated 5 ⁇ Proteins are not scary Chapter 5 Immunostaining pl27-pl63, Shujunsha, 1997 ).
  • tissue section of a tumor removed from a cancer patient is prepared.
  • tissue sections include frozen sections and paraffin sections.
  • Tumors removed from cancer patients can be, for example, untreated or fixed.
  • the tumor can be embedded with, for example, an OCT compound. You can.
  • formaldehyde preferably 4% PFA / PBS ( ⁇ ) can be used, and then replaced with 20% sucrose / phosphate buffer or the like.
  • Tissue sections can be retained on a slide glass and pretreated to allow staining.
  • the pretreatment method is not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the protein to be measured and the antibody to be used.
  • tissue sections can be pretreated with a solution containing xylene, formaldehyde, acetone, methanol, and the like.
  • Tissue sections can also be pretreated with a solution containing, for example, BSA, Triton-X100, tween 20, skim milk, casein, and the like.
  • an antibody that recognizes the protein to be measured (hereinafter sometimes referred to as “primary antibody”) is brought into contact with the pretreated tissue section.
  • Primary antibodies may be commercially available or may be prepared.
  • the primary antibody may or may not be labeled with a labeling substance.
  • an antibody that recognizes the primary antibody (hereinafter sometimes referred to as “secondary antibody”) can be contacted.
  • the secondary antibody is preferably labeled with a labeling substance.
  • Labeling substances include, for example, alkaline phosphatase, peroxidase, glucose oxidase, enzyme such as 3-galactosidase, FITC (Fluorescein i sothiocianate, Alexa488, PE, Rhodamin, Texas Red, Cy3, Cy5, Allophycocyanin ⁇ Examples include fluorescent substances such as PharRed, DsRed, AmCyan, ZsGreen, ZsYel low, AsRed, and HcRed, and piotin, etc.
  • the labeling substance is piotin, avidin, streptavidin, and the like can be further contacted. The avidin, streptavidin, etc.
  • a labeling substance for example, an enzyme such as alkaline phosphatase, peroxidase, glucose oxidase, ⁇ -galactosidase, FIT (:, Alexa488, PE, Rhodamin, Texas Red, Cy3, Cyo, Al lophycocyanm ⁇ Phar Red ⁇ DsRed, AmCyan, ZsGreen, ZsYel low,
  • a labeling substance for example, an enzyme such as alkaline phosphatase, peroxidase, glucose oxidase, ⁇ -galactosidase, FIT (:, Alexa488, PE, Rhodamin, Texas Red, Cy3, Cyo, Al lophycocyanm ⁇ Phar Red ⁇ DsRed, AmCyan, ZsGreen, ZsYel low,
  • an enzyme such as alkaline phosphatase, peroxidase, glucose oxidase, ⁇ -galactosidase, FIT (:, Alexa
  • Examples include fluorescent substances such as AsRed and HcRed.
  • Reaction conditions eg reaction solution, The antibody concentration, reaction time, reaction temperature, washing operation, etc.
  • reaction solution eg reaction solution, The antibody concentration, reaction time, reaction temperature, washing operation, etc.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be measured by bringing a substrate and Z or a coloring reagent into contact with a tissue section to cause color development and observing the color development. .
  • the enzyme is peroxidase
  • H 2 0 2 as a substrate
  • DAB diaminobenzidine
  • alkaline phosphatase for example, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate as a substrate and nitrobluetetrazorium as a coloring reagent can be brought into contact with a tissue section.
  • CSPD di sodium 3- (4-methoxyspiro ⁇ 1, 2-dioxetane-3, 2- (5-chloro) tricyclo [3. I 3 ' 7 ] decan ⁇ -4-yl) phenyl phosphate
  • CSPD di sodium 3- (4-methoxyspiro ⁇ 1, 2-dioxetane-3, 2- (5-chloro) tricyclo [3. I 3 ' 7 ] decan ⁇ -4-yl) phenyl phosphate
  • the labeling substance is a fluorescent substance
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be measured by irradiating the tissue section with an excitation light to emit light and observing the fluorescence.
  • the treated tissue section can be subjected to nuclear staining with hematoxylin or methyl green.
  • the treated tissue section can be encapsulated with a water-soluble encapsulant.
  • the number of blood vessels covered with pericytes per unit area in the tumor can be calculated.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can also be calculated as a value per unit volume or a unit weight in the tumor.
  • the number of blood vessels covered with pericytes can be measured by quantitative RT-PCR using the expression of mRNA specifically expressed in pericytes as an index.
  • RNA is purified from tumors removed from cancer patients. Add TRIZOL reagent (Invitrogen) to the tumor and homogenize the tumor tissue. Next, black mouth form is added to the homogenized tumor. The solution is vigorously shaken and stirred for 15 seconds, allowed to stand at room temperature for 2-3 minutes, and then centrifuged (12,000 X g, 10 minutes, 4 ° C). After centrifugation, transfer the aqueous layer to a new tube, add isopropyl alcohol, leave it at room temperature for 10 minutes, and then centrifuge (12,000 X g, 10 minutes, 4 ° C). RNA can be purified by washing the resulting precipitate with 75% ethanol.
  • TRIZOL reagent Invitrogen
  • Quantitative RT-PCR methods include, for example, gene-specific probes (TaqMan Gene Express ion Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND), Applied Technologies) and ABI Pri sm 7900 Sequence Detect ion System (Perkin-timer Appl. i ed Biosystems) can be used as follows.
  • the operation can be performed in two steps: reverse transcription reaction and PCR reaction.
  • the reverse transcription reaction the first step, was performed by adding dNTP, ol igo d (T) 16 primer, RNase Inhibitor, Mu ti scribe Reverse Transcriptase, Perkin—timer Applied Biosystems) to the obtained RNA at 25 ° C. Incubate for 10 minutes and then heat at 48 ° C for 30 'minutes. The reaction is stopped by heating at 95 ° C for 5 minutes.
  • the obtained cDNA is subjected to the second stage PCR reaction.
  • the reaction conditions are 50 ° C for 2 minutes and 95 ° C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 ° C for 20 seconds ⁇ 55 ° C for 20 seconds ⁇ 72 ° C for 30 seconds.
  • Primer first and probe can be, for example, Primer Express ion (Perkin- Elmer Appl ied Biosystems) Kill force 5 to set ten Te use Rere a. It is also possible to use Fufima ' ⁇ and pro 1 ⁇ flop f or, TaqMan Gene Express ion Assays mixture ( ASSAYS-ON-DEMAND, Applied Biosystems Inc.).
  • the comparison of multiple samples can be performed by correcting the quantitative value by the level of mRNA of a housekeeping gene, preferably GAPDH, j3-actin, 18S ribosomal RNA, etc. with little variation in the transcription amount of each sample.
  • the number of blood vessels in the tumor using the expression of protein and / or mRNA specifically expressed in vascular endothelial cells as an index Is preferably measured in advance.
  • Proteins and / or genes (mRNA) specifically expressed in vascular endothelial cells include, for example, CD31, wVF (von Willebrand Factor), CD34, CD105, CXCR4, CD146, CD133, KDR (VEGF type 2 receptor) and KIT (Vascular and haematopoietic stem cells: novel targets for ant i-angiogenesis therapy? Nature Reviews Cancer, 2, 826-35, 2002.), preferably CD31.
  • the number of blood vessels can be calculated by, for example, immunochemical methods, in situ hybridization, quantitative RT-PCR, and the like, in the same manner as the method for measuring the number of blood vessels covered with pericytes.
  • the number of blood vessels covered with pericytes is corrected by the total number of blood vessels (total number of blood vessels covered with pericytes and blood vessels not covered with pericytes).
  • total number of blood vessels covered with pericytes and blood vessels not covered with pericytes is highly sensitive to angiogenesis inhibitors.
  • the value obtained by dividing the number of blood vessels covered with surrounding cells by the total number of blood vessels It can be an indicator.
  • a process to determine whether cancer patients are highly sensitive to angiogenesis inhibitors In this process, cancer patients are treated with the number of blood vessels covered with pericytes measured in the previous process as an index. It can be determined whether or not it is highly sensitive to angiogenesis inhibitors. The antitumor effect of the angiogenesis inhibitor can be predicted from the sensitivity determination result.
  • examples of the number of blood vessels covered with pericytes include the number of blood vessels covered with pericytes per unit area in the tumor, and blood vessels covered with pericytes per unit volume in the tumor.
  • Number, number of blood vessels covered with pericytes per unit weight in tumor, total number of blood vessels in tumors (total number of blood vessels covered with pericytes and blood vessels not covered with pericytes) The ratio of the number of blood vessels covered with pericytes to) can be used as an index. If the number of blood vessels covered by pericytes in the tumor is small, it can be determined that the cancer patient is highly sensitive to angiogenesis inhibitors. On the other hand, when the number of blood vessels covered with pericytes in tumors collected from cancer patients is large, it can be determined that the cancer patients are not highly sensitive to angiogenesis inhibitors.
  • the number of blood vessels covered with pericytes is small, for example, the number of blood vessels (the total number of blood vessels covered with pericytes and blood vessels not covered with pericytes) is covered with pericytes. It can be said that the ratio of the number of blood vessels is 25% or less, preferably 20% or less, more preferably 15% or less, and particularly preferably 10% or less.
  • the number of blood vessels covered with pericytes is large, for example, it can be said that the case does not correspond to the above-mentioned “when the number of blood vessels covered with pericytes is small”.
  • the prediction of antitumor effect is mainly intended to predict the degree of antitumor effect of angiogenesis inhibitors in cancer patients before administration.
  • the angiogenesis inhibitor has a more antitumor effect. For example, if the anti-tumor effect is higher than the average anti-tumor effect in patients with similar symptoms, the anti-tumor effect is higher than in other patients with the same cancer type. This can be the case when the effect can be expected, or when the antitumor effect can be expected to be higher than that of patients suffering from other cancer types.
  • the angiogenesis inhibiting substance originally has an action of inhibiting angiogenesis, and therefore it is determined that the cancer patient is not highly sensitive to the angiogenesis inhibiting substance. However, it is not predicted that the angiogenesis inhibitor has no antitumor effect.
  • a method for selecting a patient highly sensitive to an angiogenesis inhibitor using the number of blood vessels covered with pericytes as an index can be mentioned.
  • the number of blood vessels covered with pericytes is small, it can be determined that the patient is highly sensitive to angiogenesis inhibitors as described above. Therefore, such a patient can be selected as a patient showing high sensitivity to angiogenesis inhibitors.
  • the number of blood vessels covered with pericytes is used as an index. Analyzing sensitivity to angiogenesis inhibitors and classifying patients according to the analysis results. That is, in the method of the present invention, sensitivity to angiogenesis inhibitors can be analyzed as described above, and patients can be classified based on the analysis results. For example, it can be classified into a group with a large number of blood vessels covered with pericytes and a group with a small number of blood vessels covered with pericytes.
  • a method for selecting a patient to be administered with an angiogenesis inhibitor using the number of blood vessels covered with pericytes as an index can be mentioned.
  • Patients with a small number of blood vessels covered with pericytes are expected to be highly sensitive to angiogenesis inhibitors and are therefore candidates for angiogenesis inhibitors.
  • Another embodiment of the present invention is a method for predicting the therapeutic effect of an angiogenesis inhibitor on a patient using the number of blood vessels covered with pericytes as an index.
  • the method of the present invention when the number of blood vessels covered with pericytes is small, it can be determined that the sensitivity to angiogenesis inhibitors is high, and therefore the therapeutic effect of angiogenesis inhibitors in the patient is high. Can be predicted.
  • the present invention includes a method for evaluating the number of blood vessels covered with pericytes derived from the patient in order to predict the degree of sensitivity of the patient to the angiogenesis inhibitor.
  • the evaluation method is as shown in 1. above.
  • the angiogenesis inhibitors are as described below, but preferably 4-(3-chloro-4 (cyclopropinoreaminocanoleboninole) aminophenoxy) — 7-methoxy 6 _quinolinecarbogisamide Or a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the method according to the present invention can be used to predict the degree of effectiveness of an angiogenesis inhibitor in a patient before the angiogenesis inhibitor is administered to the patient. Then, it is possible to treat a disease by selecting a patient who can further expect the effect of an angiogenesis inhibitor. Therefore, the present invention is very useful clinically.
  • the angiogenesis inhibitor has an activity to inhibit angiogenesis. If it is, it will not be specifically limited.
  • Angiogenesis inhibitors include, for example,
  • VEGF inhibitors eg, VEGF receptor kinase inhibitors, anti-VEGF receptor monoantibodies, anti-VEGF antibodies (Cancer Research., 55, 5296-5301, 1995)
  • VEGF receptor kinase inhibitors eg, VEGF receptor kinase inhibitors, anti-VEGF receptor monoantibodies, anti-VEGF antibodies (Cancer Research., 55, 5296-5301, 1995)
  • FGF fibroblast growth factor
  • FGF receptor kinase inhibitor eg, FGF receptor kinase inhibitor, anti-FGF receptor antibody, anti-FGF antibody (Cancer Research., 51, 6180-4, 1991)
  • FGF receptor kinase inhibitor eg, FGF receptor kinase inhibitor, anti-FGF receptor antibody, anti-FGF antibody (Cancer Research., 51, 6180-4, 1991)
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • PDGF receptor kinase inhibitor J. Clinical Investigation., 111, 1287-95
  • anti-PDGF receptor antibody anti-PDGF antibody
  • EGF epidermal growth factor
  • EGF receptor kinase inhibitor eg, EGF receptor kinase inhibitor (Cancer Research., 51, 6180-4, 1991), anti-EGF receptor antibody, anti-EGF antibody
  • Integrin inhibitors eg, ⁇ ⁇ ] 3 3 integrin inhibitors, a v / 3 5 integrin inhibitors (Cl inical Cancer Research., 6, 3056-61, 2000)
  • Endogenous inhibitors eg IL-12, Trombospondin-1, Endostatin, Angiostat in (International J. Cancer., 78, 361-5, 1998), COX-2 inhibitors (Annual s of NY Acad. Science) , 84-6, 1999)
  • inhibitors eg farnesyltransf erase inhibitor, nitric oxide inhibitor, angiotensin converting enzyme inhibitor, HMG-CoA reductase inhibitor, Vascular Target inhibitor, methionine aminopeptidase inhibitor (Science., 282, 1324 -1327, 1998)
  • farnesyltransf erase inhibitor eg farnesyltransf erase inhibitor, nitric oxide inhibitor, angiotensin converting enzyme inhibitor, HMG-CoA reductase inhibitor, Vascular Target inhibitor, methionine aminopeptidase inhibitor (Science., 282, 1324 -1327, 1998)
  • VEGF inhibitor preferably a VEGF receptor kinase inhibitor, an anti-VEGF receptor antibody or an anti-VEGF antibody, and particularly preferably a VEGF receptor kinase inhibitor.
  • halogen atom means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom.
  • halogen atom examples include a fluorine atom and a chlorine atom.
  • dialkyl group means a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples thereof include a methyl group, an ethyl group, and 1_pro Pyl group (n-propyl group), 2-propyl group (i-propyl group), 2-methyl-1-propyl group (i-butyl group), 2-methyl_2_propyl group (t-butyl group), 1-butyl group (n-butyl group), 2-butyl group (s (sec) 1-butyl group), 1-pentyl group, 2-pentyl group, 3 ⁇ nthyl group, 2-methyl_1-butynole group, 3-Methyl — 1-butyl group, 2-Methyl-2-butyl group, 3-Methyl-2-butyl group, 2,2-dimethyl-1-propyl group, 1 xyl group, 2 xyl group, 3 xyl group, 2-methylol _ 1
  • O 6 alkyl group examples include methyl group, ethyl group, 1-propyl group, 2-propyl group, 2-methyl-1-propyl group, 2-methylol-2-propyl group, 1-butyl group.
  • More preferred examples are methyl group, ethyl group, 1-propyl group, 2-propyl group, 2-methyl-1 —Propyl group, 2-methyl-2-propyl group, 1-butyl group, 2-butyl group, and more preferable examples include methyl group, ethyl group, 1_propyl group, 2- Propyl group, the most suitable example Can include a methyl group and an ethyl group.
  • O 6 alkylene group means a divalent group derived by removing one arbitrary hydrogen atom from the above definition “. ⁇ 6 alkyl group”.
  • C 2 _ 6 alkenyl group 1 have a double bond
  • carbon atoms means a 2-6 straight-chain or branched alkenyl group
  • specific examples Is an ethenyl group (butyl group), 1_propenyl group, 2-propenyl group (aryl group), 1-butenyl group, 2-butulyl group, 3-butulyl group, pentulyl group, hexenyl group And so on.
  • C 2 6 alkynyl group triple bond to one Yes, carbon atoms means a 2-6 straight-chain or branched alkynyl group, as specific examples ,
  • An ether group a 1-propynyl group, a 2-propynyl group, a 1-buturyl group, a 2-butynyl group, a 3-buturyl group, a pentur group, a hexul group, and the like.
  • C 3 _ 8 cycloalkyl group the number of 3 was 8 monocyclic or carbon refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group of bicyclic, specific examples are cyclopropyl Group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group, cycloheptyl group, cyclooctyl group, bicyclo [2.1.0] pentyl group, bicyclo [3.1.0] hexyl group, bicyclo [2.1 1] Hexyl, Bicyclo [4. 1. 0] Heptyl, Bisic Mouth [2. 2. 1] Heptyl (norbornyl), Bicyclo [3. 3. 0] Octyl, Bicyclo [3.2 .1] octyl group, bicyclo [2.2.2] octyl group and the like.
  • Suitable examples of " ⁇ 3 _ 8 cycloalkyl group", cyclopropyl group, Shikuropuchi group, can be mentioned a cyclopentyl group, more preferred examples are Shikuropuro pill group.
  • Aryl group means an aromatic hydrocarbon cyclic group having 6 to 10 carbon atoms. Specific examples thereof include a phenyl group, 1 naphthyl group, and the like. Group, 2-naphthyl group, indenyl group, azulenyl group and the like. Preferable examples of “.6 ⁇ . Aryl group” include a phenyl group.
  • heteroatom means a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • the “5- to 10-membered heteroaryl group” means that the number of atoms constituting the ring is 5 to 10, and 1 to 5 heteroatoms are included in the atoms constituting the ring. It means an aromatic cyclic group, and specific examples include furyl, chenyl, pyrrolyl, imidazolyl, triazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, biazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl Group, furazanyl group, thiadiazolyl group, oxadiazolyl group, pyridyl group, birazinyl group, pyridazinyl group, pyrimidinyl group, triazinyl group, purinyl group, pteridinyl group, quinolyl group, isoquinolyl group, naphthyridinyl group, quinoxalinyl group, quinoxalinyl group, quinoxal
  • Preferable examples of the “5- to 10-membered heteroaryl group” include a furyl group, a phenyl group, a pyrrolyl group, an imidazolyl group, a thiazolyl group, a birazolyl group, an oxazolyl group, an isoxazolyl group, an isothiazolyl group, a pyridyl group, and a pyrimidyl group. Can be raised.
  • the number of atoms constituting the ring is 3 to 10,
  • the ring may contain 1 to 2 double bonds
  • the ring may contain 1 to 3 carbonyl groups, sulfinyl groups or sulfonyl groups;
  • (5) means a non-aromatic cyclic group that is monocyclic or bicyclic, and atoms constituting the ring When it contains a nitrogen atom, a bond may come out of the nitrogen atom.
  • heptyl group morpholinyl group, Thiomorpholinyl group, 1,1-dioxothiomorpholinyl group, oxyrael group, oxetanyl group, tetrahydrofuryl group, dioxolanyl group, tetrahydroviranyl group, dioxanyl group, tetrahydrodrenyl group, tetraseptorodroxypyranyl group, oxazolidyl group Nyl group, thiazolidinyl group and the like.
  • “3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group” include aziridinyl group, azetiduyl group, pyrrolidinyl group, piperidinyl group, azepanyl group, piperazil group, diazepanyl group, morpholinyl group, thiomorpholinyl And a 1,1-dioxothiomorpholinyl group, a tetrahydrofuryl group, and a tetrahydrobiryl group.
  • 0 ⁇ 6 alkoxy group means a group in which an oxygen atom is bonded to the terminal of the above definition “. ⁇ 6 alkyl group”, and specifically includes a methoxy group, ethoxy group 1-propoxy group (n-propoxy group), 2-propoxy group (i-propoxy group), 2-methyl-1_propoxy group (i-butoxy group), 2-methyl-2-propoxy group (t-butoxy group) Group), 1-butoxy group (n-butoxy group), 2-butoxy group (s-butoxy group), 1-pentyloxy group, 2_pentinoreoxy group, 3-pentyloxy group, 2_methyl_1 monobutoxy group , 3 _methyl _ 1-butoxy group, 2 _methyl-2-butoxy group, 3-methyl-2-butoxy group, 2,2-dimethyl- 1 _propoxy group, 1 _hexyloxy group, 2 —hexyloxy group, 3 — Hexyloxy group, 2-methyl-1-monopentyloxy, 3-methyl-1-
  • “.-6 alkoxy group” include methoxy group, ethoxy group, 1_propoxy group, 2_propoxy group, 2-methyl-1-monopropoxy group, 2-methyl-1-propoxy group, 1 —Butoxy group, 2-butoxy group, 1_pentyloxy group, 2 —pentyloxy group, 3_pentyloxy group, 2-methyl-1 monobutoxy group, 3-methyl-1-monobutoxy group, 2-methyl-1-butoxy group Group, 3-methyl-2-butoxy group, 2,2-dimethyl-1-propoxy group, and more preferable examples include methoxy group, ethoxy group, 1-propoxy group, 2-propoxy group, 2-methyl-1- 1-propoxy group, 2-methyl-2-propoxy group, 1_butoxy group, 2-butoxy group, and more preferable examples include methoxy group, ethoxy group, 1_propoxy group. Group, 2-propoxy group, and most preferred examples include methoxy group and ethoxy group.
  • d- 6 alkylthio group means a group in which a sulfur atom is bonded to the terminal of the above definition “. ⁇ 6 alkyl group”. Specific examples thereof include a methylthio group and an ethylthio group.
  • 1-propylthio group (n-propylthio group), 2-propylthio group (i-propylthio group), 2-methyl-1-propylthio group (i-butylthio group), 2-methyl-2-propylthio group (t-butylthio group) ), 1-butylthio group (n-butylthio group), 2-butylthio group (s-butylthio group), 1-pentylthio group, 2_pentylthio group, 3-pentylthio group, 2-methyl-1-butylthio group, 3- 1-butylthio group, 2-methylthio group, 2-butylthio group, 3-methyl-2-butylthio group, 2,2-dimethyl-1-propylthio group, 1-hexylthio group, 2-xoxy Thio group, 3 — hexylthio group, 2-methyl _ 1 _ pentylthio group, 3 _ methyl _ 1-pentyl thi
  • alkylthio group examples include methylthio group, ethylthio group, 1-propylthio group (n-propylthio group), 2-propylthio group (i-propylthio group), 2_methyl1-1-propylthio group (i-butylthio group) ), 2-methyl-2-propylthio group (t-butylthio group), 1-butylthio group (n-butylthio group) and 2-butylthio group (s-butylthio group).
  • Ji 3 _ 8 cycloalkoxy group represents a group obtained by terminal oxygen atom is bonded to the above defined “ ⁇ 3 _ 8 cycloalkyl group", as specifically, cyclo To propoxy group, cyclobutoxy group, cyclopentyloxy group, cyclohexyloxy group, cycloheptyloxy group, cyclooctyloxy group, bicyclo [2.1.0] pentyloxy group, bicyclo [3.1.0] Xyloxy group, bicyclo [2. 1.
  • Suitable examples of - "C 3 8 cycloalkoxy group", cyclopropoxy group, a cycloalkyl-butoxy group, can be mentioned cyclopentyl Ruo alkoxy group, more preferred examples may be mentioned cyclopropoxy group.
  • the "mono one Ji alkylamino group” one hydrogen atom in the amino group means a group obtained by substituting the above-defined “c DOO 6 alkyl group”, specific examples include Mechiruamino Group, ethylamino group, 1-propylamino group (n-propylamino group),
  • 2_propylamino group (i-propylamino group), 2-methyl-1-propylamino group (i-butylamino group), 2-methyl_2-propylamino group (t-butylamino group), 1-butylamino group (n -Butylamino group), 2-Butylamino group (s-Butylamino group), 1-Pentylamino group, 2-Pentylamino group, 3-Pentylamino group, 2-Methyl-1-1-Butylamino group, 3-Methyl-1-Butylamino group, 2 —Methyl-1-2-butylamino group, 3-methyl-2-butylamino group, 2, 2_dimethylol
  • the “di- 6 alkylamino group” means a group in which two hydrogen atoms in an amino group are the same or different and each is substituted with the above definition “. ⁇ 6 alkyl group”. Specific examples include N, N-dimethylamino group, N, N-jetylamino group, N, N-di-1-n-propylamino group, N, N-di-i i-propylamino group, N, N-di-one.
  • N-Butylamino group N, N-Di-i-Butylamino group, N, N-Di-s-Butylamino group, N, N-Di-t-Butylamino group, 1 ⁇ _ethyl_! ⁇ -Methylanolamino group, N — N-Propyl N-methylolamino group, N—i-Propyl N-methylamino group, ⁇ _ 1 1 _Butyl 1 ⁇ -methylamino group, N _ i-butyl-N-methylamino group, N _ s-butyl (1) N-methylamino group, N-t-butyl-N-methylamino group, etc.
  • C 2 _ 7 Ashiru group means “. ⁇ 6 alkyl group” bonded to a carbonyl group as defined above, specific examples include, for example, Asechiru group, flop port Pioniru Group, isopropionyl group, butyryl group, isobutyryl group, valeryl group, isovaleryl group, bivaloyl group and the like.
  • C 2 7 alkoxycarbonyl group means that the carbonyl group attached is "Ji 6 alkoxy group" defined above, specific examples, if example embodiment, main butoxycarbonyl group Ethoxycarbonyl group, 1-propyloxycarbonyl group, 2-propyloxycarbonyl group, 2-methyl-2-propoxycarbonyl group, and the like.
  • “may have a substituent” means “may have one or a plurality of substituents arbitrarily combined at a substitutable site”.
  • Specific examples of the substituent include a halogen atom, a hydroxyl group, a thiol group, a nitro group, Shiano group, a formyl group, a carboxyl group, an amino group, a silyl group, methanesulfo two Le group, C 6 alkyl group, C 2 _ 6 .
  • alkenyl groups C 2 - 6 alkynyl group, C 3 "_ link port alkyl group, C 6 - i Ariru group, 5: 1 0-membered to Teroariru group, 3: 1 0-membered non-aromatic heterocyclic group, Ji 6 alkoxy group, Ji alkylthio group, ⁇ 3 _ 8 cycloalkyl alkoxy group, mono-one 6 alkylamino group, di-Ci one 6 alkylamino group, and C 2 one 7 Ashiru group or C 2 _ 7 alkoxycarbonyl Cal Poni Le group .
  • Jii 6 alkyl group C 2 _ 6 alkenyl, C 2 _ 6 alkynyl, C 3 -. 8 cycloalkyl group, Ariru group, heteroaryl group 5-1 0-membered, 3 ⁇ 1 0 members Shikimoto, C - 6 alkoxy group, alkylthio groups, C 3 _ 8 Shikuroa alkoxy group, a mono - alkylamino group, di - alkylamino group, C 2 _ 7 Ashiru groups and C 2 _ 7 alkoxycarbonyl group is independently And may have 1 to 3 groups selected from the group consisting of the following substituent groups.
  • Halogen atom hydroxyl group, thiol group, nitro group, cyano group, Ci-6 alkyl group,
  • the VEGF receptor kinase inhibitor is, for example,
  • A is the formula
  • R 1 represents a formula 1 V — V 2 — V 3 (wherein V 1 represents a Cj-6 alkylene group which may have a substituent; V 2 represents a single bond, oxygen Atom, sulfur atom, carbonino group, sulfinol group, sulphonyl group, group represented by Formula 1 CONR 6 —, group represented by Formula 1 S 0 2 NR 6 _, formula _NR 6 S 0 2 — Means a group represented by the formula _NR 6 CO_ or a group represented by the formula NR 6 _ (wherein R 6 may have a hydrogen atom or a substituent) have a C Bok 6 alkyl group or a substituted group means a good C 3 _ 8 cycloalkyl group);.
  • V 3 represents a hydrogen atom, but it may also have a substituent CI- e alkyl group , which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkynyl group which may have a substituent C 3 - 8 consequent opening alkyl group ,
  • a substituent An aryl group optionally having a 5- to 10-membered heteroaryl group or optionally having a 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group.
  • R 2 is Shiano group which may have a substituent C -6 alkoxy group, carboxyl group, which may have a substituent C 2 _ 7 alkoxycarbonyl group, or a group of the formula one CO NV all V a 12 (wherein, V al 1 is a hydrogen atom, which may have a substituent ⁇ ⁇ 6 ⁇ alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl, substituted which may be C 2 - 6 alkynyl group which may have a substituent C 3 _ 8 cycloalkyl group which may have a substituent ⁇ 6 - 10 Ariru groups, substituted May represent a 5- to 10-membered heteroaryl group or a 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent; Val 2 represents a hydrogen atom, a substituent; optionally having C ⁇ e ⁇ alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have
  • 0-membered heteroaryl group optionally 3 to 1 0-membered non-aromatic heterocycle Shikimoto, hydroxyl, means a closed and which may be C 3 _ 8 cycloalkoxy group which may have a substituent alkoxy groups or substituents. ).
  • a 1 means a carbon atom which may have a substituent or a nitrogen atom.
  • R 11 is a hydrogen atom, an optionally substituted C ⁇ e alkyl group, an optionally substituted C 2 6 alkenyl group, or an optionally substituted C 2 It may have 6 alkynyl groups and substituents. 3 _ 8 cycloalkyl group which may have a substituent Ce-i.
  • R 12 represents a hydrogen atom or a Ci-e alkyl group which may have a substituent.
  • v al 3 means an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a 11 means a carbon atom or a nitrogen atom which may have a substituent.
  • R 13 means a hydrogen atom, which may have a substituent C ⁇ e alkyl group or an optionally substituted C 3 _ 8 cycloalkyl group.
  • R 14 is a formula — val 4 _V a 15 (wherein Val 4 represents a single bond or a carbonyl group; Val 5 may have a hydrogen atom, a hydroxyl group, or a substituent.
  • good 6 Al kill group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 6 alkynyl group, an optionally C 3 8 consequent may have a substituent Mn alkyl group, optionally substituted Cn, aryl group, optionally substituted 5- to 10-membered heteroaryl group, optionally substituted 3- to 10-membered
  • Non-aromatic heterocyclic group, amino group, mono-alkyl alkyl group optionally having substituent, ji-alkyl optionally having substituent, alkylamino group, honoremino group, carboxyl group or be substituted means a good C 2 _ 7 alkoxycarbonyl two Le group.
  • X means an oxygen atom or a sulfur atom.
  • R 3 represents a hydrogen atom, an optionally substituted C alkyl group which may have a substituent C 2 _ 6 alkenyl group which may have a substituent C 2 6 Al Kiniru group, which may have a substituent ⁇ 3 - 8 cycloalkyl group which may have a have C 2 _ 7 optionally Ashiru group or substituent a substituent C 2 7 Alkoxy power means carbonyl group.
  • R 7 and R 8 are each independently a hydrogen atom, a halogen atom, a cyano group, a nitrite group, an amino group, an alkyl group which may have a substituent, or an optionally substituted C 3 8 cycloalkyl group which may have a substituent C - 6 an alkoxy group which may have a substituent alkylthio group, a formyl group, which may have a substituent C 2 _ 7 Ashiru group, in which may have a substituent C 2 _ 7 alkoxycarbonyl group, or a group of the formula CONV dl V d 2 (wherein, V dl and V d 2 is not a hydrogen atom or a substituent independently It means an optionally substituted C alkyl group).
  • R 9 represents a hydrogen atom, a halogen atom or a Ci-6 alkyl group which may have a substituent.
  • W 1 and W 2 each independently represent a carbon atom or a nitrogen atom which may have a substituent.
  • R 4 is a hydrogen atom, an optionally substituted C ⁇ e alkyl group, an optionally substituted C 2 6 alkenyl group, or an optionally substituted C 2 6 alkynyl.
  • group, Ji may have a substituent group 3 _ 8 cycloalkyl group, an optionally C 2 7 alkoxycarbonyl two Le be also have a good C 2 7 Ashiru group or substituent have a substituent Means group.
  • R 5 is a hydrogen atom, an optionally substituted alkyl group, which may have a substituent C 2 6 alkenyl - group, which may have a substituent C 2 6 alkynyl group
  • the compound represented by the general formula (I) can be produced by a known method.
  • WO 02/0328 72 pamphlet W002 / 32872
  • WO 2004/020 434 pamphlet W02004 / 020434
  • International Publication No. 2005/06 3 7 1 3 Pamphlet W02005 / 063713
  • the VEGF receptor kinase inhibitor is preferably
  • General formula (II) is a preferred example of the compound represented by general formula (I).
  • R 1 has the same meaning as defined above.
  • R 1 is a C ⁇ e alkyl group.
  • V 1 when V 1 is a to 6 alkylene group, V 2 is a single bond, and V 3 is a hydrogen atom, R 1 is a C-6 alkyl group.
  • R 1 may have a C ⁇ e alkyl group 3 to 10-membered non-aromatic heterocyclic group, hydroxyl group, Ci-e alkoxy group, amino group, mono-alkyl alkylamino And a substituent selected from a dialkylamino group. More preferred examples of R 1 include a methyl group or a formula
  • R a 3 represents a methyl group
  • R al represents a hydrogen atom or a hydroxyl group
  • R a 2 represents a methoxy group, an ethoxy group, a 1-pyrrolidinyl group, a 1-piperidinyl group, a 4-morpholinyl group
  • a dimethylamino group or a jetylamino group
  • R 1 More preferred examples of R 1 include a methyl group or a 2-methoxy group.
  • R 2 has the same meaning as defined above.
  • R 2 include a cyano group or a group represented by the formula _CONV a 11 V a 12 (wherein V a 11 and Val 2 have the same meaning as defined above).
  • R 2 is, in Shiano radical or formula one CONHV a 16 (wherein, V a 16 represents a hydrogen atom, CI- 6 alkyl group, C 3 - 8 cycloalkyl group, C - 6 an alkoxy group or means a C 3 _ 8 cycloalkoxy group.
  • V al 6 is represented by a halogen atom, which may have a substituent selected from Shiano group, hydroxyl group and C ⁇ e alkoxy group.) Group.
  • R 2 a group represented by Formula 1 CONHV a 17 (wherein Val 7 represents a hydrogen atom, a C — 6 alkyl group or a C ⁇ e alkoxy group) is represented by can give.
  • R 2 is a group represented by the formula 1 CONHV a 18 (wherein Val 8 represents a hydrogen atom, a methyl group or a methoxy group).
  • Y 1 is the formula (Wherein R 7 , R 8 , W 1 and W 2 have the same meaning as defined above).
  • Y 1 is the formula
  • R 7 1 represents a hydrogen atom or a halogen atom
  • R 3 and R 4 have the same meaning as defined above.
  • R 3 and R 4 are hydrogen atom.
  • R 5 has the same meaning as defined above.
  • R 5 examples include a hydrogen atom, C WINCH 6 alkyl group, C 3 _ 8 cycloalkyl group, or C 6 _ 1 0 Ariru group (wherein, R 5 is selected from halogen atoms and methanesulfo sulfonyl group substituted It may have a group).
  • R 5 More preferable examples of R 5 include a methyl group, an ethyl group, and a cyclopropyl group.
  • N 6-Methoxy-4 1 (3-Chloro-4 1 (((ethylamino) carbonyl) amino) phenoxy) 1 7-Methoxy 1-6-quinolinecarboxamide.
  • 4 1 (3-cloguchi 1- (cyclopropylaminocanoleponyl) aminophenoxy) 1 7-methoxy _ 6-quinolinecarboxyl
  • the amide (see formula (IV)).
  • One of the most suitable examples of VEGF receptor kinase inhibitors is 4_ (3-chloro-4-amino (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) -1-7-methoxy-6-quinolinecarboxamide methane. Sulfonates can be mentioned
  • the compound represented by the general formula (II) can be produced by a known method.
  • International Publication No. 0 2 Z 3 2 8 72 Panflet (W002 / 32872) and International Publication No. 2 0 5 Z 0 6 3 7 1 Can be produced by the method described in any of No. 3 pamphlets (W02005 / 063713).
  • the VEGF receptor kinase inhibitor preferably has the general formula (III)
  • General formula (III) is a preferred example of the compound represented by general formula (I).
  • R 1 1 has the same meaning as defined above.
  • R 11 include a 3- to 10-membered non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent or a mono-C ⁇ ealkylamino which may have a substituent. Group It is done.
  • R 11 a formula optionally having a substituent selected from the following substituent group
  • R N1 and R N2 each independently represents a hydrogen atom or a Ci-6 alkyl group which may have a substituent).
  • R 12 has the same meaning as defined above.
  • R 12 is a hydrogen atom.
  • V al 3 has the same meaning as defined above.
  • a preferred example of v a 13 is an oxygen atom.
  • a 11 has the same meaning as defined above.
  • a 1 1 is exemplified carbon atoms.
  • R 4 has the same meaning as defined above.
  • R 4 is a hydrogen atom.
  • R 5 has the same meaning as defined above.
  • R 5 examples include, C - 6 alkyl or C 3 - 8 cycloalkyl group there are up.
  • R 5 is a methyl group.
  • R 9 has the same meaning as defined above.
  • R 9 is a hydrogen atom.
  • the compound represented by the general formula (III) can be produced by a known method. For example, it can be produced by a method described in International Publication No. 2004Z0 20434 Pamphlet (W02004 / 020434).
  • the VEGF receptor kinase inhibitor is, for example, (1) N- (4-bromo-1-fluorophenol) 1-6-methoxy-7- [2- (1H-1,2,2, 3-triazol-1-yl) ethoxy] quinazoline 4-amine (hereinafter referred to as “ZD4190” Cancer Research., 60, 970-975, 2000, Journal of Medicinal Chemistry., 42: 5369-5389 1999.) (see equation (V)),
  • the VEGF receptor kinase inhibitor is, for example, BIBF1120
  • BIBF1120, ZK304709, Exel7647, AMG706 and GW-6554652 Can be produced by a known method
  • examples of the VEGF inhibitor include anti-VEGF receptor antibodies.
  • An anti-VEGF receptor antibody is an antibody having affinity for VEGF receptor or a partial fragment thereof.
  • the anti-VEGF receptor antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to the VEGF receptor to inhibit VEGF activity, for example, vascular endothelial cell proliferation activity.
  • An anti-VEGF receptor antibody can be produced in the same manner as the method for producing an anti-VEGF antibody described later.
  • the anti-VEGF receptor antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • the isotype of the antibody is not particularly limited.
  • the anti-VEGF receptor antibody may be an antibody fragment or a single chain antibody (see the description of the anti-VEGF antibody described later).
  • Anti-VEGF receptor antibody is preferably 2C3 antibody (US6524583, US6676941), IMC-1121b (US6811779), IMC-18F1 (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 45, 694, (Abstract 3005), 2004), IMG -1C11 (US5747651), IMC-2C6 (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 44, 1479, (Abstract 6454), 2003.).
  • 2C3 antibody, IMC-1121b, IMC-18F1, IMC-1C11, and IMC-2C6 can be produced by known methods, for example, by methods described in the respective literatures.
  • the VEGF inhibitor is, for example, PI88, AVE-0005 (Proc. Am. Soc. Cl in.
  • VGA-1155 ⁇ Methylthiobenzoic acid
  • VEGF trap (The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 86 (7), 3377-3386, 2001.), pegaptanib sodium (Macugen (registered trademark)), and the like.
  • PI88, AVE_0005, EG-3306, RPI-4610, NM-3, VGA-1155 and VEGF trap can be manufactured by known methods, for example, by the methods described in the respective literatures. can do.
  • Pegaptanib sodium can be obtained by purchasing Macugen from Huisa.
  • E FGF receptor kinase inhibitor
  • the FGF receptor kinase inhibitor is, for example,
  • PD166866, PD173074, BMS-582664, CT-052923, CHIR258, ⁇ -23057 and SU6668 can be produced by known methods, for example, by the methods described in the respective literatures.
  • examples of the FGF inhibitor include anti-FGF receptor antibodies.
  • the anti-FGF receptor antibody is an antibody having affinity with the FGF receptor or a partial fragment thereof.
  • the anti-FGF receptor 1 antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to the FGF receptor, thereby inhibiting FGF activity, for example, vascular endothelial cell proliferation activity.
  • An anti-FGF receptor antibody can be prepared in the same manner as the method for producing an anti-VEGF antibody described below.
  • the anti-FGF receptor antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • the antibody isotype is not particularly limited.
  • the anti-FGF receptor antibody may be an antibody fragment or a single-chain antibody (see the description of the anti-VEGF antibody described later).
  • examples of the PDGF inhibitor include PDGF receptor kinase inhibitors.
  • PDGF receptor kinase inhibitors include, for example,
  • Imatinib, AG013736, CP-673451, CT-052923, CHIR258, KI_6896, leflunomide, RPR-127963E, SU6668, SU11248, PTK787 / ZK222584 and ABT-869 can be produced by known methods, for example, It can be produced by methods not described in the literature.
  • Imatinib can be obtained by purchasing Darivek (registered trademark) from Novarteis.
  • examples of the PDGF inhibitor include anti-PDGF receptor antibodies.
  • An anti-PDGF receptor antibody is an antibody having affinity for the PDGF receptor or a partial fragment thereof. Anti-PDGF receptor antibody recognizes and binds to the PDGF receptor, thereby inhibiting PDGF activity, such as vascular endothelial cell proliferation activity. A Japanese antibody is preferred.
  • the anti-PDGF receptor antibody can be prepared in the same manner as the anti-VEGF antibody production method described below.
  • the anti-PDGF receptor antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. Further, the isotype of the antibody is not particularly limited.
  • the anti-PDGF receptor antibody may be an antibody fragment or a single chain antibody (see the description of the anti-VEGF antibody described later).
  • examples of the EGF inhibitor include EGF receptor kinase inhibitors.
  • examples of the EGF receptor kinase inhibitor include gefitib and derivatives thereof.
  • Gefitinib refers to 4 1 (3-chloro 1 4-funoleolophenylamino) 1 7-methoxy 1 6- (3 (4-morpholino) propoxy-quinazoline). Is shown in the formula (XLVI).
  • Examples of the derivatives of gefitinib include compounds described in WO 96/33980 pamphlet (W096 / 33980).
  • Gefitinib and its derivatives can be produced by known methods, for example, International Publication No. 9 6/3 3980 brochure (W096 / 33980), Patent No. 3 0 4 0 4 8 6 (JP3040486) and the United States It can be produced by the method described in Japanese Patent No. 577059 (US5770599).
  • Gefitinib can also be obtained by purchasing Iressa (registered trademark) from AstraZeneca.
  • examples of the EGF receptor kinase inhibitor include erucatinib and derivatives thereof.
  • Elguchitinib is 4 (3-ethynylphenylamino) 1, 6,7-bis (2-methoxetoxy) 1 quinazoline, and its structural formula is shown in the following formula (XLVII).
  • examples of the derivative of L mouth tinib include compounds described in International Publication No. 9 6Z3 0347 pamphlet (W096 / 30347).
  • the L-mouth tube and its derivatives can be produced by a known method.
  • International Publication No. 9 6 Z3 0 3 4 7 Pamphlet W096 / 30347
  • Patent No. 3 0 8 8 0 1 8 JP3088018)
  • Japanese Patent No. 3 4 2 0 54 9 JP 342 0549.
  • Enorelotinib can be obtained by purchasing Tarceva (registered trademark) from Genentech.
  • the EGF receptor kinase inhibitor is, for example,
  • the EGF receptor kinase inhibitor is preferably 4-1- (3-ethynylphenylamino) -16,7_bis (2-methoxytoxoxy) monoquinazoline (L-portinib: the above formula (XLVII)).
  • Lapatinib, canertinib, pel itinib, AEE-788 and HIQ-272 can be produced by known methods, for example, by the methods described in the respective literatures.
  • EGF receptor kinase inhibitors include, for example, ARRY-334543 (Am. Assoc. Cancer Research, A3399, 2005.), MP-412 (Am. Assoc. Cancer Research, A3394, 2005., Am. Assoc. Cancer Research, A3405, 2005.).
  • ARRY-334543 and MP-412 can be produced by known methods.
  • examples of the EGF inhibitor include anti-EGF receptor antibodies.
  • the anti-EGF receptor antibody is an antibody having affinity with the EGF receptor or a partial fragment thereof.
  • the anti-EGF receptor antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to the EGF receptor to inhibit EGF activity, for example, vascular endothelial cell proliferation activity.
  • Anti-EGF receptor 1 antibody can be produced in the same manner as the production method of anti-VEGF antibody described later.
  • the anti-EGF receptor antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • the antibody The type is not particularly limited.
  • the anti-EGF receptor antibody may be an antibody fragment or a single chain antibody (see the description of the anti-VEGF antibody described later).
  • the anti-EGF receptor antibody is preferably cetuximab.
  • Cetuximab can be obtained by the method described in JP-A-2002-114710 (JP2004-114710) or JP-A-2-291295 (JP2-291295). Cetuximab can also be obtained by purchasing Erb itux® from Merck.
  • examples of the anti-EGF receptor antibody include nimotuzumab.
  • nimotuzumab can be obtained by the method described in European Patent No. 20 3 1 2 6 (EP203126) or US Pat. No. 5 8 9 1 996 (US5891996).
  • the anti-EGF receptor antibody is pani tumumab (CAS 339177-26-3, Clinical Colorectal Cancer. 2005; 5 (1): 21-3.), Matuzumab (CAS 339186-68-4, Curr Opin Mol Ther. 2004; 6 (1): 96-103.) JMC-11F8 (Am. Assoc. Cancer Research, A5353, 2005.), MDX-447 (ASC0 18: 433, 1999) it can.
  • the angiogenesis inhibitor may form a pharmacologically acceptable salt with an acid or base.
  • the angiogenesis inhibitor in the present invention also includes these pharmaceutically acceptable salts.
  • salts with acids include inorganic acid salts such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphate, and formic acid, acetic acid, lactic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, citrate, tartaric acid,
  • examples include organic acid salts such as stearic acid, benzoic acid, methane sulphonic acid, benzene sulphonic acid, ⁇ -tonoleene sulphonic acid, and trifluoroacetic acid.
  • the salts with bases include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picolin, dicyclohexylenoamine, N , N'-Dibenzenoreethylenediamine, Anoleginine, Examples thereof include organic base salts such as lysine and ammonium salts.
  • the angiogenesis inhibitor includes solvates and optical isomers of these compounds when solvates and optical isomers thereof exist.
  • solvates include hydrates and non-hydrates, and preferably hydrates.
  • the solvent include water, alcohol (eg, methanol, ethanol, n -propanol), dimethylformamide, and the like.
  • the angiogenesis inhibitor may be crystalline or non-crystalline, and when a crystalline polymorph exists, it may be a mixture of any single crystalline form. May be.
  • the angiogenesis inhibitor includes an angiogenesis inhibitor that undergoes metabolism such as oxidation, reduction, hydrolysis, and conjugation in vivo.
  • the angiogenesis inhibitor also includes a compound that produces an angiogenesis inhibitor by receiving metabolism such as oxidation, reduction or hydrolysis in vivo.
  • the anti-VEGF antibody is an antibody having affinity for VEGF or a partial fragment thereof.
  • the anti-VEGF antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to VEGF to inhibit VEGF's vascular endothelial cell proliferation activity.
  • the anti-VEGF antibody is, for example, a polyclonal antibody, a monoclonal antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody (scFV) (Huston et la. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-83. The Pharmacology of Monoclonal Antibody, vol. 113, Rosenburg and Moore ed., Springer Verlag (1994) pp.
  • anti-VEGF antibody may be modified with polyethylene glycol (PEG), etc., if necessary.
  • anti-VEGF antibody can be produced as a fusion protein with 3-galactosidase, MBP, GST, GFP, etc., and may be detected without using a secondary antibody in ELISA or the like. Les. Further, the anti-VEGF antibody may be modified so that the antibody can be recovered using avidin, streptavidin or the like by labeling the antibody with biotin or the like.
  • Anti-VEGF antibodies can be produced according to a conventional method using VEGF or a partial fragment thereof, or cells expressing them as sensitizing antigens (see “Current Protocols in Molecular Biology J (John Wiley & Sons (1987) Section 11)). ⁇ 4-11. 13))
  • VEGF or a partial fragment thereof may be a fusion protein with Fc region, GST, MBP, GFP, AP or the like.
  • Polyclonal and monoclonal antibodies kills it forces 5 to produce by methods well known in the art (Antibodies:. A Laboratory Manual, E. Harlow and D. Lane, ed, Cold Spring Harbor Laboratory (Cold Spring Harbor, NY, 1988 )).
  • Polyclonal antibodies can be obtained, for example, by administering antigens to mammals such as mice, rabbits, rats, etc., collecting blood from the mammals, and separating and purifying the antibodies from the collected blood. Methods of immunization are known to those skilled in the art, and can be performed, for example, by administering the antigen one or more times.
  • the antigen (VEGF or a partial fragment thereof) can be used after being dissolved in an appropriate buffer, for example, an appropriate buffer containing a commonly used adjuvant such as complete Freund's adjuvant or aluminum hydroxide. Depending on the route of administration and conditions, adjuvants may not be used.
  • a polyclonal antibody can be obtained as a polyclonal antiserum.
  • Examples of methods for producing monoclonal antibodies include the hybridoma method. Can do. The hybridoma method first immunizes a mammal in the same manner as polyclonal antibody production. It is preferable to perform partial blood collection after an appropriate number of days after immunization and measure the antibody titer by a known method such as ELISA.
  • the spleen is removed from the immunized animal after sensitization to obtain B cells.
  • the B cells can be fused with myeloma cells according to a conventional method to prepare antibody-producing hybridomas.
  • the myeloma cells used are not particularly limited, and known ones can be used.
  • a cell fusion method a method known in the art such as Sendai virus method, polyethylene darlicol method, protoplast method, etc. can be arbitrarily selected and used.
  • the obtained hybridoma can be cultured in an HAT medium (medium containing hypoxanthine, aminopterin, and thymidine) for an appropriate period of time according to a conventional method, and selection of a hyperidoma can be performed.
  • HAT medium medium containing hypoxanthine, aminopterin, and thymidine
  • the hybridoma can be cloned.
  • a known antibody detection method such as an ELISA method or a radioimmunoassay method can be used.
  • a cloning method a method known in the art can be used. For example, limiting dilution can be used. Method and FACS method can be used.
  • the resulting hybridoma can be cultured in an appropriate culture medium, or can be administered intraperitoneally, for example, that is compatible with hybridomas.
  • the desired monoclonal antibody can be isolated and purified from the thus obtained culture solution or ascites by salting out, ion exchange chromatography, gel filtration, affinity chromatography, or the like.
  • the anti-VEGF antibody preferably includes bevacizumab.
  • Bevacizumab is a human anti-VEGF monoclonal antibody and is marketed by Genentech as Avastin®.
  • Bevacizumab can be obtained by purchasing Avastin from Genentech.
  • the anti-FGF antibody is an antibody having affinity for FGF or a partial fragment thereof.
  • the anti-FGF antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to FGF, thereby inhibiting the vascular endothelial cell proliferation activity of FGF.
  • the preparation of anti-FGF antibody is the same as that of anti-VEGF. It can be prepared in the same manner as the antibody production method.
  • the anti-PDGF antibody is an antibody having affinity for PDGF or a partial fragment thereof.
  • the anti-PDGF antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to PDGF, thereby inhibiting the vascular endothelial cell proliferation activity of PDGF.
  • An anti-PDGF antibody can be produced in the same manner as the above-described method for producing an anti-VEGF antibody.
  • the anti-EGF antibody is an antibody having affinity for EGF or a partial fragment thereof.
  • the anti-EGF antibody is preferably a neutralizing antibody that recognizes and binds to EGF, thereby inhibiting the vascular endothelial cell proliferation activity of EGF.
  • An anti-EGF antibody can be produced in the same manner as the above-described method for producing an anti-VEGF antibody.
  • the present invention relates to an anti-c-SMA antibody, an anti-desmin antibody, an anti-chondroitin sulfate proteodarican 4 antibody, an anti-calponin antibody, an anti-caldesmon antibody and an anti-tumor effect for use in a method for predicting the anti-tumor effect of an angiogenesis inhibitor.
  • a kit comprising at least one selected from the group consisting of an “anti-PDGF receptor” antibody is provided.
  • the antibody is preferably an anti-SMA antibody.
  • the antibody is a method for producing the anti-VEGF antibody.
  • the antibody included in the kit can be used for the measurement of the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor. It may contain components conventionally used in general measurements.
  • kits comprising a polynucleotide that is complementary to at least a portion of RNA that is a transcript of at least one gene selected from the group consisting of children.
  • the gene is preferably a desmin gene.
  • the polynucleotides that make up the kit include, for example, primers and primers used for in situ hybridization, Northern blot analysis, DNA microarray, RT_PCR, quantitative RT-PCR, etc.
  • the desired polynucleotide can be prepared by a known method.
  • the polynucleotide contained in the kit can be used to measure the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor.
  • the kit of the present invention may contain components commonly used in general measurements in addition to the above polynucleotide.
  • base sequence information can be obtained from the following GenBank accession numbers.
  • ct-SMA gene NM—001613
  • PDGF receptor gene ⁇ — 002609
  • the at least part of RNA has a base sequence of at least 15 bases, preferably 15-50 bases, more preferably 20-35 bases, and even more preferably 20-30 bases. Those skilled in the art can appropriately set this.
  • the kit of the present invention is complementary to at least a part of an antibody against a protein specifically expressed in vascular endothelial cells and RNA that is a transcript of a gene specifically expressed in sputum or vascular endothelial cells.
  • a polynucleotide may be included. These antibodies and polynucleotides can be used to measure the number of blood vessels in the tumor (the total number of blood vessels covered with pericytes and those covered with pericytes, but not blood vessels).
  • Examples of the protein specifically expressed in intravascular cells; and / or genes include CD31, wVF, CD34, CD105, CXCR4, CD146, CD133, KDR (VEGF type 2 receptor) and KIT.
  • Example 1 Antitumor effect of angiogenesis inhibitor in human cancer cell line subcutaneous transplantation model (in vivo)
  • Human cancer cell line A375 (purchased from Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), SEKI, HMV-1 (purchased from JCRB cel l bank), FEM (transferred from The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstad) , LOX (purchased from Anticancer), AZ-521 (purchased from Human Science Foundation), MDA-MB-468, DLD-1, HCT116, SW620, PC-3, DU145, AsPC-1, H526, MDA- MB-231, SK-Mel-2, Lovo, A431 (above, purchased from ATCC) at 5 ° /.
  • the cells were cultured in a carbon dioxide incubator with RPMI1640 (containing 10% FBS) until it became about 80% confluent.
  • each cell was recovered by trypsin-EDTA according to a conventional method.
  • Each cell was suspended in a phosphate buffer to prepare an IX 10 8 cel ls / mL or 5 X 10 7 cel ls / mL suspension. Then, 0.1 mL of the cell suspension was transplanted subcutaneously on the nude mouse side. After implantation, the Do ivy time to tumor volume of approximately 100-200 mm 3, 4- (3- chloro 4- (cyclopropylaminocarbonyl) Ryo Minofuenokishi) Single 7- main butoxy one 6- Kino Rinkarubokisami de (100 mg / kg , Twice a day for 1 week orally).
  • Tumor volume (TV) tumor major axis (mm) X tumor minor axis 2 (mm 2 ) / 2
  • ⁇ T / C (tumor volume at day 8 in compound administration group, dayl tumor volume at compound administration group)
  • dayl represents the administration start date
  • day8 represents the 8th day from the administration start date
  • Carboxamide is used to reduce the size of each cancer cell line and to suspend it. Strains and breeding strains. The classification is ⁇ A cancer cell line with T / C ⁇ -30% was selected as a reduced strain, a cancer cell line with -30% ⁇ / ( ⁇ 10% was a resting strain, and a cancer cell line with 10% ⁇ / C was defined as a proliferating strain.
  • Example 2 Preparation and staining method of tumor tissue section of human cancer cell line subcutaneous transplantation model and correlation between antitumor effect of angiogenesis inhibitor and ratio of number of blood vessels covered with pericytes to number of blood vessels
  • Human cancer cell line ⁇ 375 (purchased from Dainippon Pharmaceutical), SEKI, HMV-1 (purchased from JCRB cel l bank), FEM (transferred from The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstad) , L0X (purchased from Anticancer), AZ-521 (purchased from the Human Science Foundation), MDA-MB-468, DLD-1, HCT116, SW620, PC-3, DU145, AsPC-1, H526, MDA- MB-231, SK-Mel_2, Lovo and A431 (purchased from ATCC) were cultured in RPMI 1640 (containing 10% FBS) in a 5% carbon dioxide incubator until approximately 80% confluent.
  • RPMI 1640 containing 10% FBS
  • each cell was recovered by trypsin-EDTA according to a conventional method.
  • Each cell was suspended in a phosphate buffer to prepare an IX 10 8 cel ls / mL or 5 X 10 7 cel ls / mL suspension.
  • 0.1 mL of the cell suspension was transplanted subcutaneously on the nude mouse side. After transplantation.
  • Do to tumor volume about 100-200 mm 3, the mice allowed lethal in C0 2, was removed by implantation human tumor surgery. About 5 mm inside from the periphery of the tumor tissue was cut with a knife, and the tumor tissue was embedded with OCT compound. After that, it was frozen with dry ice and frozen tissue was prepared at -80 ° C.
  • the tumor tissue For the tumor tissue, to produce a thick sections 8 ⁇ ⁇ , it was attached to the slide Dogarasu, washed with running water, and allowed to stand for 10 minutes at 4 ° C in cold ⁇ seton. Washed 3 times with 0.1M phosphate buffer (hereinafter referred to as PBS for washing) containing 0.1% Tween20, and allowed to react for 10 minutes at room temperature with the avidin blocking solution of DAK0 Piotin Blocking Kit. After washing 3 times with PBS for washing, the reaction was allowed to proceed for 10 minutes at room temperature with the biotin blocking solution of DAK0 biotin blocking kit.
  • PBS 0.1M phosphate buffer
  • the reaction was carried out with normal serum in a VECTOR STAIN ABC peroxidase rat IgG kit at room temperature for 20 minutes.
  • anti-CD31 antibody (clone name: MEC13.3, rat IgG, PharMingen, diluted with 600% diluted 1M phosphate buffer solution containing 0.1% fetal bovine serum) BD Biosciences) was reacted at 4 ° C.
  • the avidin reagent in the VECTOR STAIN ABC peroxidase rat IgG kit (A mixture of reagents A and B) was further reacted at room temperature for 30 minutes. After washing three times with 0. 01M phosphate buffer, the color was developed with DAB, and CD31 was stained. Next, the sample was washed with running water and then washed three more times with Tris buffer. Al force phosphatase-labeled anti- ⁇ -SMA antibody (clone name: 1 to 4, mouse IgG, SIGMA-ALDRICH) diluted 100-fold with Tris buffer was reacted at room temperature for 1 hour.
  • Table 1 shows the anti-tumor effects, classification and frequency in mouse models transplanted with 4— (3-Chroosomal 4-cyclo (aminopropyl) aminophenoxy) _ 7-Methoxy-6-quinolinecarboxamide in human cancer cell lines. Shows the percentage of blood vessels covered with skin cells.
  • Example 3 Antitumor effect of angiogenesis inhibitor in human cancer cell line subcutaneous transplantation model (in vivo)
  • the human cancer cell lines AsPC-1 and H526 (both purchased from ATCC) were cultured in RPMI 1640 (containing 10% FBS) in a 5% carbon dioxide incubator until approximately 80% confluent. After culturing, each cell was collected by trypsin-EDTA according to a conventional method. Each cell was suspended in a phosphate buffer to prepare a 5 ⁇ 10 7 ce ls / mL suspension. Then, 0.1 mL of the cell suspension was transplanted subcutaneously into the nude mouse.
  • tumor volume of about 50 - 200 after the timing when the discussions 3, 5- (5-Furuoro 2 Okiso _ 1, 2 _ dihydric de port indole one 3-b Ridenmechiru) one 2, 4 _ Jimechinore _ 1
  • H-pyrrole 1-strength norboxoxylic acid (2-jetylaminoethyl) amide 100 mg / kg, once daily for 1 week, orally was started.
  • Tumor volume (TV) tumor major axis (mm) X tumor minor axis 2 (mm 2 ) / 2.
  • RTV tumor volume on the date of measurement Z tumor volume on the day of administration start
  • an angiogenesis inhibitor is administered to the patient without administering the angiogenesis inhibitor. It was possible to predict the antitumor effect of. Therefore, the method according to the present invention can select a patient who can expect more antitumor effects without administering an angiogenesis inhibitor to the patient, and can contribute to Q0L of the patient.
  • Example 4 Combination of the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor and the ratio of the number of blood vessels covered with pericytes (quantitative RT-PCR) in a human cancer cell line subcutaneous transplantation model (quantitative RT-PCR) 1. Human cancer cells Purification of total RNA in tumor tissue in a strain subcutaneous transplant model
  • Human cancer cell lines MDA-MB-468, DLD-1, HCT116, SW620, PC-3, DU145, AsPC-1, H526, MDA-MB-231, MDA-MB-435, SK-OV-3, Lovo, 7860, 22Rv (Purchased from ATCC), HMV-1 (Purchased from JCRB cell bank, Incorporated Foundation for Pharmaceutical Research), Colo320DM, A549, A375 (purchased from Dainippon Pharmaceutical), FEM (transferred from The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstad), LOX (purchased from Anticancer) in RPMI1640 (including 10% FBS) in a 5% carbon dioxide incubator Incubated until confluent.
  • each cell was collected by trypsin-EDTA according to a conventional method. Each cell was suspended in a phosphate buffer to prepare IX 10 8 cells / mL or 5 X 10 7 cells / mL suspension. Then, 0.1 mL of the cell suspension was transplanted subcutaneously on the nude mouse side. After implantation, when the tumor volume became about 100-200 mm 3, the mice allowed lethal in C0 2, was removed by implantation human tumor surgery. Divide the tumor tissue into two parts and measure the weight. Add 1 mL of TRIZ0L reagent (Invitrogen) to the tumor weight of 50 mg for one of the tumors, homogenize the tumor tissue, and adjust to -20 ° C. And saved.
  • TRIZ0L reagent Invitrogen
  • black mouth form (purchased from Junsei) was added at a rate of 0.2 mL to 1 mL of TRIZ0L reagent. This solution was vigorously shaken and stirred for 15 seconds, allowed to stand at room temperature for 2 to 3 minutes, and then centrifuged (12,000 ⁇ g, 10 minutes, 4 ° C.). After centrifugation, transfer the aqueous layer to a new tube, add isopropyl alcohol (purchased from Wako Pure Chemical Industries) at a ratio of 0.2 mL to 1 mL of the used TRIZ0L reagent, leave it at room temperature for 10 minutes, and perform centrifugation. (12,000 Xg, 10 minutes, 4 ° C). The obtained precipitate was washed with 75% ethanol (purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and then air-dried. The total RNA thus obtained was subjected to subsequent measurements.
  • Quantitative RT-PCR consists of gene-specific probes (TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND), purchased from Applied Biosystems) and ABI Prism 7900 Sequence Detection System (purchased from Perkin-Elmer Applied Biosystems) was used as follows.
  • the operation was performed in two stages: reverse transcription reaction and PCR reaction.
  • the reverse transcription reaction the first step, was performed on the obtained lOOng / juL RNA 3 / L with dNTP 6 ⁇ and oligo d (T) 16 primer.
  • PCR reaction is 5 times diluted with DEPC water 5% for PCR, and TaqMan Universal PCR Master Mix 6.25 ⁇ , 200 nM TaqMan Gene Expression Assays probe 0.625 ⁇ , H 2 0.6 0.6 ⁇ l reaction system It was. Reaction conditions were 50 ° C for 2 minutes and 95 ° C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 ° C for 20 seconds, 55 ° C for 20 seconds, and 72 ° C for 30 seconds.
  • the probe and primer were prepared using the TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND, Mm00802455—sl, shellfish from Applied Biosystems) for desmin measurement, 3—act in root IJ TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND, Mm00607939_sl, purchased from Applied Biosystems) was used.
  • ASSAYS-ON-DEMAND Mm00607939_sl, purchased from Applied Biosystems
  • a calibration curve was prepared using SK-0V-3 mRNA samples.
  • the gene expression level in each cancer cell line was calculated from the calibration curve by Ct (abbreviation of threshold cycle value, which is the number of PCR cycles necessary for a PCR product to reach a certain concentration).
  • Ct abbreviation of threshold cycle value, which is the number of PCR cycles necessary for a PCR product to reach a certain concentration.
  • the value obtained by correcting the expression level of desmin in each cancer cell line with the expression level of -actin was used as a ratio of the expression level of desmin in each cancer cell line and used for comparative analysis.
  • the classification of each cell line was the same as that performed in Example 1.
  • the group of reduced strains and resting strains was classified as sensitive strains.
  • Sensitive and proliferating strains were compared by permutation test, and those with P 0.05 were judged to be significantly different.
  • the present invention provides a method for predicting the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor. More specifically, the antitumor effect of an angiogenesis inhibitor can be predicted by measuring the number of blood vessels covered with pericytes in the tumor and using the number of blood vessels covered with pericytes as an index. It has become possible.
  • the method according to the present invention makes it possible to predict the antitumor effect without administering an angiogenesis inhibitor to the patient, so that a patient who can expect more antitumor effect can be selected. It became possible to contribute to Q0L.

Abstract

本発明の課題は、血管新生阻害物質の効果を予測する方法を見出すことにある。本発明により、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することができる。

Description

明 細 書 血管新生阻害物質の効果を予測する方法 技術分野
本発明は、 血管新生阻害物質、 例えば、 血管内皮細.胞増殖因子 （Vascular Endothel ial Growth Factor (以下、 「VEGF」 と称する場合がある）） 阻害活性を有 する物質 （以下、 「VEGF 阻害物質」 と称する場合がある） の効果を予測する新規 方法に関するものである。 ' 背景技術
臨床試験において、 血管新生阻害物質は、 抗腫瘍剤として有用であることが明 らかにされている。 例えば、 血管新生因子の中で重要な役割を担っている VEGF に対する中和抗体製剤であるべバシズマブは、 臨床試験において、 大腸癌に対し て抗腫瘍効果を示したことが報告されている （1 )。
また、 血管新生阻害物質として、 4 _ ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルァ ミノカルボニル） ァミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサ ミ ドが知られている （2および 3 )。
ところで、 血管新生阻害物質の効果を判定すること、 血管新生阻害物質の効果 を示す濃度を決定すること、血管新生阻害物質の効果を投与前に予測することは、 血管新生阻害物質を用いた治療を効率よく進め、 患者の Q0L向上に貢献するため に、 非常に有用である （4 )。 前二者については現在、数多くの研究がなされている 具体的【こ fま、 Dynamic し ontrast一 linhanced Magnetic Resonance Imaging
(DCE-MRI) , Pos i tron Emi ss ion l omograpy (PET) , Interstit ial Fluid Pressure, serum VEGFなどの方法が知られており、 中でも DCE- MRIは、 血管新生阻害物質の 効果を判定する方法として有効であるとされつつある （6 )。
一方で、 血管新生阻害物質の効果を投与前に予測することは、 治療を受ける患 者にとって無効な薬剤の投与の回避、 副作用の軽減などを可能とするために、 非 常に有益であり、 かつ重要事項である （4 )。 しかしながら、 血管新生阻害物質の効 果を投与前に予測する方法については、 未だ有効な方法は、 見つかっていない。 参考文献
( 1 ) Bevacizumab plus mnotecan, fluorouracil, and leucovorm ior metastatic colorectal cancer, N Engl J Med. 2004, 350, 2335-42
( 2 ) 国際公開第 0 2 Z 3 2 8 7 2号パンフレッ ト
( 3 ) 国際公開第 2 0 0 4 Z 0 8 0 4 6 2号パンフレッ ト
、 4 ) Innibition of vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling in cancer causes loss of endothelial fenestrations, regression of tumor vessels, and appearance of basement membrane ghosts. Am J Pathol.,
2004, 165, 35-52
( 5 ) Direct evidence that the VEGF -specific antibody bevacizumab has antivascular effects in human rectal cancer, Nature Medicine, 2004, 10, 145-147
( 6 ) Dynamic contrast-enhanced magnetic resonance imaging as a biomarker for the pharmacological response of PTK787/ZK 222584, an inhibitor of the vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases, in patients with advanced colorectal cancer and liver metastases- results from two phase I studies., J Clin Oncol., 2003, 21, 3955 64. 発明の開示
本発明は、 このような状況に鑑みてなされたものであり、 その解決しようとす る課題は、 血管新生阻害物質の効果を予測する方法を見出すことにある。
本発明者らは、 上記課題を解決するため、 鋭意検討を重ねた結果、 血管新生阻 害物質の抗腫瘍効果は、 腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数と相関することを初 めて見出した。 そして、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、 腫瘍中の周皮細胞で 覆われた血管数を測定し、 周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予 測することができることを見出した。 すなわち本発明は、 以下に関する。
( 1 ) 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 癌患者が血管新生阻害物質に対し て高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、 前記方法。
( 1 ) に記載の方法において、 腫瘍中の血管数を測定する工程と、 腫瘍中の血 管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標として、 癌患者が 血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程とをさらに含ん でいてもよい。
( 2 ) 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の血管数および腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程 と、
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標 として、 当該癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判 断する工程と、
を含む、 前記方法。
( 1 ) または （2 ) に記載の方法において、 腫瘍は、 癌患者から採取されたも のを使用することができる。
( 1 ) または （2 ) に記載の方法において、 周皮細胞で覆われた血管数の測定 は、 a _SMA、 デスミン、 コンドロイチン硫酸プロテオグリカン 4、 力ルポニン、 カルデスモンおよび PDGF レセプターからなる群から選択される少なく とも一つ の発現を指標に行うことができ、 中でも、 α -SMAおよび またはデスミンの発現 を指標に行うことが好ましい。 周皮細胞で覆われた血管数の測定は、 例えば、 免 疫化学的方法、 in situハイブリダィゼーシヨンまたは定量的 RT-PCRにより行う ことができる。
また、（ 1 )または（2 )に記載の方法において、腫瘍中の血管数の測定は、 CD31、 wVF、 CD34、 CD105、 CXCR4、 CD146、 CD133、 KDRおよび KITからなる群から選択さ れる少なく とも一つの発現を指標に行うことができ、 中でも、 CD31の発現を指標 に行うことが好ましい。 腫瘍中の血管数の測定は、 例えば、 免疫化学的方法、 in situハイブリダイゼーションまたは定量的 RT- PCRにより行うことができる。
(1) または （2) に記載の方法において、 血管新生阻害物質は、 例えば VEGF レセプターキナーゼ阻害物質である。 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質の例を以 下に示す。
一般式 （ I )
、Xz 、R5 (I)
0
[式 （ I ) 中、 Aは
Figure imgf000005_0001
(式中、 R1は、 式— V1— V2_V3 (式中、 V1は置換基を有していてもよい Ci_6アルキレン基を意味する ； V2は、 単結合、 酸素原子、 硫黄原子、 カルボ ニル基、 スルフィニル基、 スルホニル基、 式— CONR6—で表される基、 式 — S 02NR6—で表される基、 式一 NR6 S〇2—で表される基、 式一 NR6C O—で表ざれる基または式一 NR6—で表される基を意味する （式中、 R6は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C i— 6アルキル基または置換基を有して いてもよい C3_8シクロアルキル基を意味する。） ； V3は、 水素原子、 置換基を 有していてもよい C — 6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケ ニル基、 置換基を有していてもよい C2— 6アルキュル基、 置換基を有していて もよい C3— 8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい Ce— i。ァリール基、 置換基を有していてもよい 5〜1 0員へテロァリール基または置換基を有して いてもよい 3〜 10員非芳香族へテロ環式基を意味する。）で表される基を意味 する ；
R2は、 シァノ基、 置換基を有していてもよい Ci— 6アルコキシ基、 カルボキシ ル基、 置換基を有していてもよい C2_7アルコキシカルボニル基または式一 C O N V a l l y a l 2 (式中、 V a l 1は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C i —6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2 6アルケニル基、 置換基を有し ていてもよい C2 6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロア ルキル基、 置換基を有していてもよい Ce— i。ァリール基、 置換基を有していて もよい 5〜 1 0員へテロァリール基または置換基を有していてもよい 3〜1 0 員非芳香族へテロ環式基を意味する ； Va l 2は、 水素原子、 置換基を有してい てもよい C i -6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキ-ル基、置換基を有していてもよい C3 _8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい Ce^。ァリール基、 置換基 を有していてもよい 5〜 1 0員へテロアリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 水酸基、 置換基を有していてもよい アルコキシ基または置換基を有していてもよい。3_8シクロアルコキシ基を意 味する。） で表される基を意味する ；
A1は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する ； R11は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有 していてもよい C 2 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2 6アルキ ニル基、 置換基を有していてもよい c3_8シクロアルキル基、 置換基を有して いてもよい C6 10ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァ リール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基または 置換基を有していてもよいモノ一 C -6アルキルアミノ基を意味する ；
R12は、 水素原子または置換基を有していてもよい Cuアルキル基を意味す る ；
Va l 3は、 酸素原子または硫黄原子を意味する ；
A11は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する ； R13は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基または置換基 を有していてもよい C 3 8シクロアルキル基を意味する ；
R14は、 式 va l 4— Va l 5 (式中、 Va l 4は、 単結合またはカルボ二ル基を 意味する ； Va l 5は、 水素原子、 水酸基、 置換基を有していてもよい ァ ルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有してい てもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C 3 8シクロアルキ ル基、 置換基を有していてもよい Ce^。ァリール基、 置換基を有していてもよ レヽ 5〜1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香 族へテロ環式基、 アミノ基、 置換基を有していてもよいモノー アルキルァ ミノ基、置換基を有していてもよいジ一C -eアルキルアミノ基、 ホルミノレ基、 力 ルポキシル基または置換基を有していてもよい C2_7アルコキシカルボ二ル基を 意味する。） で表される基を意味する。） で表される基を意味する ；
Xは、 酸素原子または硫黄原子を意味する ；
Yは、 式
Figure imgf000007_0001
(式中、 R3は、 水素原子、 置換基を有していてもよい Ci- 6アルキル基、 置換 基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2 アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を 有していてもよい C 2 7ァシル基または置換基を有していてもよい C 2_7アル コキシカルボ二ル基を意味する ；
R7および R8は、 それぞれ独立して水素原子、 ハロゲン原子、 シァノ基、 ニト 口基、 アミノ基、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい Ci— 6アル コキシ基、 置換基を有していてもよい C ^ 6アルキルチオ基、 ホルミル基、 置 換基を有していてもよい C2_ 7ァシル基、 置換基を有していてもよい C2_ 7ァ ルコキシカルボニル基または式一 CON vd 2 (式中、 ぉょび ^は、 それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよい アルキル基 を意味する。） で表される基を意味する ；
R9は、 水素原子、 ハロゲン原子または置換基を有していてもよい C^eアルキ ル基を意味する ； w1および w2は、 それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または 窒素原子を意味する。） で表される基を意味する ；
R4は、 水素原子、 置換基を有していてもよい 6アルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2— 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C 2— 6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3— 8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C2— 7ァシル基または置換基を有していてもよい C2— 7アルコキシ力 ルボニル基を意味する ；
R5は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C 2— 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_ 6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい c3_8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C6— 10ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリ ール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味す る] で表される化合物、 もしくはその薬理学的に許容される塩、 またはそれら の溶媒和物。
( 1 ) または （2) に記載の方法において、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質 は、 4 _ (3—クロロー 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノ キシ） 一 7—メ トキシ一 6 _キノリンカルボキサミ ド、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物であることが好ましい。
また、 （1 ) または（2) に記載の方法において、血管新生阻害物質は、例えば、 抗 VEGF レセプター抗体、 抗 VEGF抗体、 FGF レセプターキナーゼ阻害物質、 PDGF レセプターキナーゼ阻害物質、 EGF レセプターキナーゼ阻害物質、 抗 FGF レセプ ター抗体、 抗 PDGF レセプター抗体、抗 EGF レセプター抗体、抗 FGF抗体、 抗 PDGF 抗体および抗 EGF抗体からなる群から選択される少なく とも一つであってもよい。
(3) ( 1 ) または （2) に記載の方法において使用するためのキットであって、 抗 a- SMA抗体、 抗デスミン抗体、 抗コンドロイチン硫酸プロテオ.ダリカン 4 抗体、 抗カルポニン抗体、 抗カルデスモン抗体および抗 PDGF レセプター抗 体からなる群から選択される少なくとも一つを含む、 前記キット。
(4) ( 1 ) または （2) に記載の方法において使用するためのキッ トであって、 α -SMA遺伝子、 デスミン遺伝子、 コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4遺 伝子、 力ルポニン遺伝子、 カルデスモン遺伝子および PDGF レセプター遺伝 子からなる群から選択される少なく とも一つの遺伝子の転写産物である RNA の少なく とも一部に相補的な配列を含むポリヌクレオチドを含む、 前記キッ b o 本発明により、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法が提供される。 より詳細には、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、 腫瘍中の周皮細胞で覆われ た血管数を測定し、 周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測する ことが可能となった。
本発明に係る方法は、 患者に血管新生阻害物質を投与することなく、 抗腫瘍効 果を予測することが可能となるため、 より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択し て治療することができ、 患者の Q0Lに貢献することが可能となった。 図面の簡単な説明
図 1は、 ヒ ト癌細胞株移植マウスモデルにおける 4 _ ( 3—クロ口一 4— (シ クロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ドの抗腫瘍効果と腫瘍組織中における周皮細胞で覆われた血管 数との相関を示したものである。
図 2は、 ヒ ト癌細胞株移植マウスモデルにおける血管新生阻害物質の抗腫瘍 効果と周皮細胞で覆われた血管数との関連を示したものである。 図 2において、 化合物 1は、 4一 （3—クロロー 4 _ (シクロプロピルアミノカルボニル） アミ ノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ドを、 化合物 2は、 5— ( 5—フルオロー 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロインドール一 3—イリデン メチル） ー 2 , 4—ジメチルー 1 H—ピロ一ルー 3—カルボキシリ ック アシッ ド ( 2—ジェチルアミノエチル） アミ ドを示す。
図 3は、 ヒ ト癌細胞株皮下移植モデルにおける 4一 （3—クロロー 4一 （シ クロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ドの抗腫瘍効果と腫瘍組織中の周皮細胞のマーカーであるデス ミンとの相関を示したものである。 発明を実施するための最良の形態
以下に本発明の実施の形態について説明する。 以下の実施の形態は、 本発明を 説明するための例示であり、 本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではな い。 本発明は、 その要旨を逸脱しない限り、 さまざまな形態で実施をすることが できる。
なお、 本明細書において引用した文献、 および公開公報、 特許公報その他の特 許文献は、 参照として本明細書に組み込むものとする。 また、 2 0 0 5年 8月 1 日に出願し、 本願優先権主張の基礎となる特願 JP2005- 223440号の特許請求の範 囲、 明細書、 図面および要約書の開示内容は、 その全体が参照として本明細書に 組み入れられる。 本発明は、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、 腫瘍中の 周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、 周皮細胞で覆われた血管数を指標 として、 癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断するェ 程とを含む、 前記方法を提供する。 1 . 腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程
本工程において、 腫瘍は、 癌患者より取り出された腫瘍が好ましい。 そして、 癌患者より取り出された腫瘍は、 例えば、 癌患者より外科的処置 （例えば、 バイ ォプシ一など） にて摘出することにより得ることができる。
なお、 癌患者から採取される腫瘍の大きさは、 腫瘍中の周皮細胞で覆われた血 管数を測定できる大きさであればよい。 例えば、 固形癌の場^^は、 バイオプシー により採取したときの大きさ （例えば、 2 〜3 mm) でよく、 メスにより組織片を 切除したときの大きさ （例えば、 米粒大） でもよく、 限定されるものではない。 腫瘍の種類は、 特に限定されず、 例えば、 脳腫瘍、 頸癌、 食道癌、 舌癌、 肺癌、 乳癌、 瞵癌、 胃癌、 小腸または十二指腸の癌、 大腸癌 （結腸癌、 直腸癌） 、 膀胱 癌、 腎癌、 肝癌、 前立腺癌、 子宮癌、 卵巣癌、 甲状腺癌、 胆嚢癌、 咽頭癌、 肉腫
(例えば、 骨肉腫、 軟骨肉腫、 力ポジ肉腫、 筋肉腫、 血管肉腫、 線維肉腫など） 、 白血病 （例えば、 慢性骨髄性白血病 （CML)、 急性骨髄性白血病 （AML)、 慢性リ ン パ球性白血病（CLL)および急性リンパ性白血病（ALL)、 リンパ腫、悪性リンパ腫、 多発性骨髄腫 （匪） など） およびメラノーマなどを挙げることができる。
周皮細胞は、 ペリサイ ト （pericyte) ともよばれ、 毛細血管や静脈を取り囲む ように存在している細胞である。
周皮細胞は、 ひ平滑筋細胞型ァクチン（a - smooth muscle actin、以下「ひ - SMA」 と称する場合がある）、デスミン、コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4 (以下、 「NG_2」 と称する場合力 sある）、 カノレポニン、 力ノレデスモン (Characteri zat ion of smooth muscle eel丄 and pericyte different iat ion in the rat retina in vivo. Invest igat ive. Ophthalmology. Vi sual Sc ience. 45, 2795-2806, 2004. )、 Platelet-derived growth factor Receptor (以下、 「PDGFレセプター」 と称する 場合力 ある) (Cel lular abnormal iti es of blood vessels as targets in cancer. Current Opinion in Genet ics and Development. 15, 102-111. 2005. ) 'など 5§ 現しており、 また、 第 VII I因子 (A new method for i solat ion of smooth muscle cel l s from human umbi l ical cord arteries. Scand J. Cl in. Lab. Invest, ο ι ,
21-29, 1997. ) および GFAP (Local izat ion of Bra in Endothel ial Luminal and Abluminal Transporters wi th Immunogold Electron Mi croscopy. NeuroRx.， 2,
27-43， 2005. )を発現していないため、これらの発現の有無を調べることにより、 他の細胞と区別することができる。
「周皮細胞で覆われた血管」 とは、 周皮細胞によって血管の全部または一部が 取り囲まれた血管を意味する。
「周皮細胞で覆われた血管数」 は、 例えば、 腫瘍中の単位面積あたりの周皮細 胞で覆われた血管数、 腫瘍中の単位体積あたりの周皮細胞で覆われた血管数また は単位重量あたりの周皮細胞で覆われた血管数として算出することができる。 本工程では、 周皮細胞で覆われた血管数は、 例えば、 周皮細胞に発現するタン パク質および Zまたは mRNAの発現を指標として測定することができる。
周皮細胞に発現するタンパク質および Zまたは遺伝子は、 例えば、 a -SMA、 デ スミン、 コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4、 力ルポニン、 カルデスモンお よび PDGF レセプターなどがあげられ、 好ましくは a - SMAおよびデスミンがあげ られる。 例えば、 患者から採取した腫瘍中のこれらのタンパク質および/または mRNAの発現を測定すると、腫瘍中に発現するタンパク質および Zまたは遺伝子の 種類、 発現の有無、 発現量などの情報を得ることができ、 この情報を指標に用い て周皮細胞で覆われた血管数を算出することができる。
タンパク質の測定は、例えば、免疫化学的方法（例えば、免疫組織化学的方法、 ウェスタンプロットなど）、質量分析による方法などがあげられ、好ましくは免疫 化学的方法があげられ、 特に好ましくは免疫組織化学的方法があげられる。 これ らの方法は、 常法に従い行うことができる。
一方、 mRNAの測定は、 例えば、 in situハイブリダィゼーシヨン、 ノーザンブ 口ット解析、 DNAマイクロアレイ、 RT - PCR、定量的 RT-PCRなどの方法があげられ、 好ましくは in situハイブリダィゼーシヨンおよび定量的 RT-PCRがあげられる。 これらの方法は、 常法に従い行うことができる。
In situ ハイブリダィゼーシヨンは、 例えば、 実験医学別冊 新遺伝子工学ハ ンドブック 第 4章、 羊土社、 2003に記載の方法により行うことができる。 以下、 周皮細胞で覆われた血管数の測定方法の一例について記載する。
周皮細胞で覆われた血管数は、 周皮細胞に特異的に発現するタンパク質の発現 を指標として免疫組織化学的方法により測定することができる。
免疫組織化学的方法は、 常法に従い行うことができる （細胞工学別冊 目で見 る実験ノートシリーズ バイオ実験イラストレイテッド 5卷 タンパクなんて こわくない 第 5章 免疫染色 pl27 - pl63、 秀潤社、 1997)。
初めに、 癌患者より取り出された腫瘍の組織切片を作製する。 組織切片は、 例 えば、 凍結切片、 パラフィン切片などがあげられる。
癌患者より取り出された腫瘍は、 例えば、 未処理でもよく、 固定化処理を行つ てもよレ、。 また、 当該腫瘍は、 例えば、 OCT コンパウンドなどにより包埋するこ とができる。
固定化処理には、 ホルムアルデヒ ド、 好ましくは 4% PFA/PBS (-)を用いること ができ、 その後、 20%ショ糖/リン酸緩衝液等で置換することができる。
これらの諸条件は、 測定するタンパク質および使用する抗体等に応じて適宜選 択することができる。
組織切片は、 スライ ドガラスに保持し、 染色が可能な状態に前処理することが できる。 前処理の方法は、 特に限定されず、 測定するタンパク質および使用する 抗体に応じて適宜選択すればよい。 例えば、 キシレン、 ホルムアルデヒ ド、 ァセ トン、 メタノールなどを含む溶液により組織切片を前処理することができる。 ま た、組織切片は、例えば、 BSA、 Tri ton- X100、 tween20、スキムミルク （skim mi lk)、 カゼィンなどを含む溶液により前処理することも可能である。
次に、 前処理した組織切片に測定するタンパク質を認識する抗体 （以下、 「一次 抗体」 と称する場合がある） を接触させる。 一次抗体は、 市販のものを使用して もよく、 作製してもよレ、。 また、 一次抗体は、 標識物質により標識されていても よく、 標識されていなくてもよレ、。 一次抗体が標識されていない場合には、 当該 一次抗体を認識する抗体 （以下、 「二次抗体」 と称する場合がある） を接触させる ことができる。 二次抗体は、 標識物質により標識されていることが好ましい。 標 識物質は、 例えば、 アルカリフォスファタ一ゼ、 ペルォキシダーゼ、 グルコース ォキシダーゼ、 ；3 -ガラク トシダーゼなどの酵素、 FITC ( Fluorescein i sothioc ianate 、 Alexa488、 PE、 Rhodamin、 Texas Red、 Cy3、 Cy5、 Al lophycocyanin^ PharRed, DsRed、 AmCyan、 ZsGreen, ZsYel low、 AsRed、 HcRed などの蛍光物質お よびピオチンなどがあげられる。 標識物質がピオチンである場合には、 さらに、 アビジン、 ストレプトアビジンなどを接触させることができる。 当該アビジン、 ストレプトアビジンなどは、 標識物質により標識されていることが好ましい。 標 識物質は、 例えば、 アルカリフォスファターゼ、 ペルォキシダーゼ、 グルコース ォキシダーゼ、 β -ガラク トシダーゼなどの酵素、 FIT (：、 Alexa488、 PE、 Rhodamin、 Texas Red、 Cy3、 Cyo、 Al lophycocyanm^ PharRed^ DsRed、 AmCyan、 ZsGreen、 ZsYel low、
AsRed、 HcRed などの蛍光物質があげられる。 反応の諸条件 （例えば、 反応溶液、 抗体濃度、 反応時間、 反応温度、 洗浄操作など） は、 測定するタンパク質および 使用する抗体等に応じて適宜選択することができる。
標識物質が酵素である場合には、 基質および Zまたは発色試薬を組織切片に接 触させて発色させ、 当該発色を観察することにより、 周皮細胞で覆われた血管数 を測定することができる。
酵素がペルォキシダーゼの場合は、 例えば、 基質として H202などを、 発色試薬 としてジァミノべンジジン （diaminobenz idine ; DAB) などを組織切片に接触させ ることができる。
酵素がアルカ リ フォスファターゼの場合には、 例えば、 基質と して 5 - bromo- 4-chloro- 3- indolyl phosphateなどを、 発色試薬として二トロブルーテ トラゾリゥム （nitrobluetetrazorium) などを組織切片に接触させることができ る。 また、 酵素がアルカリフォスファターゼの場合には、 例えば、 発色基質とし て CSPD (di sodium 3- (4- methoxyspiro { 1， 2- dioxetane- 3， 2 - (5 -chloro) tricyclo [3. 3· 1. I3' 7] decan} -4-yl) phenyl phosphate)などを組織切片に接触 させることにより化学発光反応を行うこともできる。
また、標識物質が蛍光物質の場合には、励起光を組織切片に照射して発光させ、 当該蛍光を観察することにより、 周皮細胞で覆われた血管数を測定することがで さる。
また、 前記処理をした組織切片は、 へマトキシリンまたばメチルグリーンにて 核染色を行うことができる。
さらに、 前記処理をした組織切片は、 水溶性封入剤で封入することができる。 このようにして、 腫瘍中の単位面積あたりの周皮細胞で覆われた血管数を算出 することができる。 また、 周皮細胞で覆われた血管数は、 腫瘍中の単位体積あた りの値または単位重量あたりの値として算出することもできる。
以下、 周皮細胞で覆われた血管数の測定方法の別の一例について記載する。 周皮細胞で覆われた血管数は、周皮細胞に特異的に発現する mRNAの発現を指標 として定量的 RT- PCRにより測定することができる。
初めに、 癌患者より取り出された腫瘍から RNAを精製する。 腫瘍に対して TRIZOL試薬 （インビトロジヱン社） を添加し、 腫瘍組織をホモジ ナイズする。 次に、 ホモジナイズした腫瘍にクロ口ホルムを添加する。 この溶液 を 15秒間激しく振盪、攪拌し、室温で 2〜 3分間放置後遠心を行う （12, 000 X g、 10分間、 4°C)。 遠心後、 水層を新しいチューブに移し、 これにイソプロピルアル コールを加え、 室温で 10分間放置後遠心を行う （12，000 X g、 10分間、 4°C)。 得 られた沈殿を 75%エタノールにて洗浄することにより、 RNAを精製することがで きる。
定量的 RT-PCR の方法は、 例えば、 遺伝子特異的プローブ （TaqMan Gene Express ion Assays mixture (ASSAYS- ON- DEMAND)、 アプライ ドノ ィォシステムズ 社) および ABI Pri sm 7900 Sequence Detect ion System (Perkin - timer Appl i ed Biosystems社） を用いて、 次のように行うことができる。
操作は、 逆転写反応および PCR反応の 2段階で行うことができる。 最初の段階 である逆転写反応は、 得られた RNA に dNTP、 ol igo d (T) 16プライマー、 RNase Inhibi tor 、 Mu丄 t i scribe Reverse Transcriptase 、 Perkin— timer Appl ied Biosystems) を加え、 25°Cにて 10分間保温後、 48°Cにて 30 '分間加熱することに より行う。 反応を 95°C 5分間加熱することにより停止させる。
得られた cDNAを第 2段階の PCR反応に供する。 PCR反応は、例えば、 4 ng cDNA、 lxSYBR PCR buffer, 3 mM MgCl2、 各 200 M dATP, dCTP, dGTP、 400 M dUTP、 200 nM primer pair, 0. 01 \}/ μ 1 AmpErase腸、 0. 025 U/ 1 Ampl iTaq Gold DNA Polymerase (Perkin- Elmer Appl ied Biosystems) の反応系で行う。 反応条件は、 50°C 2分間、 95°C 10分間の反応後、 95°C 20秒間 · 55°C 20秒間 · 72°C 30秒間 のサイクルを 40サイクルで行う。 プライマ一およびプローブは、 例えば、 Primer Express ion (Perkin— Elmer Appl ied Biosystems)を用レヽて設十すること力 5きる。 また、 フフィマ' ~およびプロ1 ~~プ fま、 TaqMan Gene Express ion Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND, アプライ ドバイオシステムズ社） を用いることもできる。 複数検体の比較は、 定量値を各検体の転写量に変動の少ないハウスキーピング遺 伝子、 好ましくは GAPDH、 j3 - actin、 18S ribosomal RNAなどの mRNA レベルによ り補正して行うことができる。 また、血管内皮細胞に特異的に発現するタンパク質および/または mRNAの発現 を指標として腫瘍中の血管数 （周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆わ れていない血管数の合計） を測定しておくことが好ましい。 血管内皮細胞に特異 的に発現するタンパク質および/または遺伝子 （mRNA) は、 例えば、 CD31、 wVF (von Wi l lebrand Factor) , CD34、 CD105、 CXCR4、 CD146、 CD133、 KDR (VEGF2型 受 体) および KIT (Vascular and haematopoietic stem cel ls : novel targets for ant i-angiogenesi s therapy? Nature Reviews Cancer, 2, 826-35， 2002. ) などがあげられ、 好ましくは CD31があげられる。 血管数は、 周皮細胞で覆われた 血管数の測定方法と同様に、 例えば、 免疫化学的方法、 in si tu ハイブリダィゼ ーシヨン、 定量的 RT-PCRなどの方法により算出することができる。
このとき、 周皮細胞で覆われた血管数を全体の血管数 （周皮細胞で覆われた血 管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計） で補正することにより、 癌 患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かの判断の精度をより向上 することが可能となる。例えば、周辺細胞で覆われた血管数を、全体の血管数（周 皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計） で除し た値を、 当該判断の指標とすることができる。
2 . 癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程 本工程では、 前工程で測定された周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 癌 患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断することができる。 そして、 当該感受性の判断結果から、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する ことができる。
本工程において、 周皮細胞で覆われた血管数としては、 例えば、 腫瘍中の単位 面積あたりの周皮細胞で覆われた血管数、 腫瘍中の単位体積あたりの周皮細胞で 覆われた血管数、 腫瘍中の単位重量あたりの周皮細胞で覆われた血管数、 腫瘍中 の全体の血管数 （周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血 管数の合計） に対する周皮細胞で覆われた血管数の比率などを指標とすることが できる。 腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、 癌患者が血管新生阻害物 質に対して高感受性であると判断することができる。 一方、 癌患者から採取され た腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数が多い場合は、 癌患者が血管新生阻害物質 に対して高感受性でないと判断することができる。
周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合とは、 例えば、 血管数 （周皮細胞で覆 われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計） に対する周皮細胞 で覆われた血管数の比率が、 25%以下、 好ましくは 20%以下、 より好ましくは 15% 以下、 特に好ましくは 10%以下の場合をいうことができる。 周皮細胞で覆われた 血管数が多い場合は、 例えば、 上記の 「周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合」 に該当しない場合をいうことができる。
本発明において、 抗腫瘍効果の予測は、 癌患者において血管新生阻害物質がど の程度抗腫瘍効果を奏するかを投与前に予測することを主目的とするものである。 癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であると判断されたときは、 当該 血管新生阻害物質は、 より抗腫瘍効果を奏すると予測することができる。 より抗 腫瘍効果を奏する場合として、 例えば、 同様の症状の患者における平均的な抗腫 瘍効果よりも高い抗腫瘍効果を期待できる場合、 同一の癌種に罹患した他の患者 よりも高い抗腫瘍効果を期待できる場合、 または他の癌種に罹患した患者よりも 高レ、抗腫瘍効果を期待できる場合などをあげることができる。
ただし、 後述のように、 本発明において血管新生阻害物質は、 本来血管新生を 阻害する作用を有するために、 癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性でな いと判断されたときであっても、 当該血管新生阻害物質が抗腫瘍効果を奏さない と予測されるものではない。
本発明の別の態様として、 周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 血管新生 阻害物質に対して高感受性を示す患者を選択する方法をあげることができる。 周 皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、 上記の通り、 当該患者は、 血管新生阻 害物質に対して高感受性を示すと判断できる。 したがって、 このような患者を、 血管新生阻害物質に対する高感受性を示す患者として選択することができる。 また、 本発明の別の態様として、 周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 血 管新生阻害物質に対する感受性を分析し、 分析結果によって患者を分類する方法 をあげることができる。 すなわち、 本発明の方法において、 上記のように血管新 生阻害物質に対する感受性を分析し、 この分析結果に基づいて、 患者を分類する ことができる。 例えば、 周皮細胞で覆われた血管数の多いグループと、 周皮細胞 で覆われた血管数の少ないグループとに分類することができる。
また、 本発明の別の態様として、 周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 血 管新生阻害物質の投与対象となる患者を選択する方法をあげることができる。 周 皮細胞で覆われた血管数の少ない患者は、 血管新生阻害物質に対して高感受性を 示すと予測されるため、 血管新生阻害物質の投与対象となる。
また、 本発明の別の態様として、 周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 患 者に対する血管新生阻害物質の治療効果を予測する方法をあげることができる。 本発明の方法において、 周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、 血管新生阻 害物質に対して高い感受性を示すと判断できるため、 当該患者における血管新生 阻害物質の治療効果は高いと予測することができる。
また、 本発明には、 患者の血管新生阻害物質に対する感受性の程度を予測する ために、 当該患者由来の周皮細胞で覆われた血管数を評価する方法が含まれる。 当該評価方法は、 上記 1 . に示すとおりである。
本工程において、 血管新生阻害物質は、 後述のとおりであるが、 好ましくは 4 ― ( 3—クロロー 4一 （シクロプロピノレアミノカノレボニノレ） アミノフエノキシ） — 7—メ トキシー 6 _キノリンカルボギサミ ド、 もしくはその薬理学的に許容さ れる塩、 またはそれらの溶媒和物である。
本発明に係る方法は、 血管新生阻害物質を患者に投与する前に、 当該患者にお ける血管新生阻害物質の有効性の程度を予測するのに用いることができる。 そし て、 血管新生阻害物質の有する効果をより期待できる患者を選択して、 疾患の治 療を行うことができる。 したがって、 本発明は、 臨床上非常に有用である。
3 . 血管新生阻害物質
本発明において、 血管新生阻害物質は、 血管新生を阻害する活性を有するもの であれば、 特には限定されない。
血管新生阻害物質は、 例えば、
VEGF阻害物質 （例えば、 VEGF レセプターキナーゼ阻害物質、 抗 VEGF レセプタ 一抗体、 抗 VEGF抗体 （Cancer Research.， 55， 5296-5301， 1995) ) 、
FGF (繊維芽細胞増殖因子： f ibroblast growth factor) 阻害物質 （例えば、 FGF レセプターキナーゼ阻害物質、 抗 FGF レセプター抗体、 抗 FGF 抗体 （Cancer Research. , 51, 6180-4, 1991) ) 、
PDGF (血小板由来増殖因子： platelet-derived growth factor)阻害物質 (例え' ば、 PDGF レセプターキナーゼ阻害物質 （J. Cl inical Invest igation. , 111, 1287-95) 、 抗 PDGF レセプター抗体、 抗 PDGF抗体） 、
EGF (上皮成長因子： epidermal growth factor) 阻害物質 （例えば、 EGF レセ プターキナーゼ阻害物質 （Cancer Research.， 51, 6180-4， 1991) 、 抗 EGF レセ プター抗体、 抗 EGF抗体） 、
インテグリン阻害物質 （例えば、 α ν ]3 3インテグリン阻害物質、 a v /3 5インテ グリン阻害物質 （Cl inical Cancer Research. , 6, 3056-61, 2000) ) 、
内因性阻害物質 （例えば、 IL-12, Trombospondin-1, Endostatin, Angiostat in (Internat ional J. Cancer. , 78， 361-5， 1998)、 COX- 2阻害物質（Annual s of N. Y. Acad. Sc ience. , 84-6, 1999) ) 、
マトリ ックスメタ口プロテイン阻害物質 (Internat ional J. Pancreatol. , 21, 1-12, 1997) 、
その他阻害物質 （例えば、 farnesyltransf erase 阻害物質、 一酸化窒素阻害物 質、 アンジォテンシン変換酵素阻害物質、 HMG-CoA reductase阻害物質、 Vascular Target 阻害物質、 メチォニンアミノぺプチダーゼ阻害剤 （Science. , 282， 1324-1327, 1998) ) 、
などがあげられ、 好ましくは VEGF阻害物質であり、 より好ましくは VEGF レセ プターキナーゼ阻害物質、 抗 VEGF レセプター抗体または抗 VEGF抗体であり、 特 に好ましくは VEGFレセプターキナーゼ阻害物質である。 (A) 化合物の基の定義
本明細書において、 「ハロゲン原子」 とは、 フッ素原子、 塩素原子、 臭素原子また はヨウ素原子を意味する。
「ハロゲン原子」 の好適な例としては、 フッ素原子、 塩素原子をあげることがで さる。
本明細書において、 「じ アルキル基」 とは、 炭素数が 1 〜 6個の直鎖状または 分枝鎖状のアルキル基を意味し、 具体例としては、 メチル基、 ェチル基、 1 _プロ ピル基 （n—プロピル基）、 2—プロピル基 （ i—プロピル基）、 2—メチルー 1—' プロピル基 （ i―ブチル基）、 2—メチル _ 2 _プロピル基 （ t -ブチル基）、 1 - ブチル基 （n—ブチル基)、 2—ブチル基 （s ( s e c ) 一ブチル基）、 1一ペンチ ル基、 2—ペンチル基、 3 ^ンチル基、 2—メチル _ 1—ブチノレ基、 3—メチル — 1—ブチル基、 2—メチルー 2—ブチル基、 3—メチル— 2—ブチル基、 2， 2 ージメチルー 1—プロピル基、 1 キシル基、 2 キシル基、 3 キシル基、 2—メチノレ _ 1 一ペンチル基、 3—メチル _ 1—ペンチル基、 4ーメチノレ一 1ーぺ ンチル基、 2—メチルー 2—ペンチル基、 3—メチル _ 2—ペンチル基、 4—メチ ノレ一 2—ペンチル基、 2—メチル _ 3—ペンチル基、 3 _メチル _ 3—ペンチル基、 2， 3—ジメチルー 1 _ブチル基、 3 , 3—ジメチル _ 1—ブチル基、 2 , 2—ジ メチルー 1一ブチル基、 2—ェチルー 1一ブチル基、 3 , 3—ジメチル一 2—ブチ ル基、 2 , 3—ジメチル一 2—ブチル基などがあげられる。
「〇ト6アルキル基」の好適な例としては、メチル基、ェチル基、 1—プロピル基、 2—プロピル基、 2—メチルー 1一プロピル基、 2—メチノレ一 2 _プロピル基、 1 —ブチル基、 2—ブチル基、 1一ペンチル基、 2—ペンチル基、 3—ペンチル基、 2—メチノレ一 1—ブチル基、 3—メチルー 1一ブチル基、 2—メチル一 2—ブチル 基、 3—メチルー 2—ブチル基、 2 , 2 _ジメチルー 1 _プロピル基をあげること ができ、 より好適な例としては、 メチル基、 ェチル基、 1一プロピル基、 2—プロ ピル基、 2—メチル— 1—プロピル基、 2—メチル一 2—プロピル基、 1一ブチル 基、 2—ブチル基をあげることができ、 さらに好適な例としては、 メチル基、 ェチ ル基、 1 _プロピル基、 2—プロピル基をあげることができ、 最も好適な例として は、 メチル基、 ェチル基をあげることができる。
本明細書において、 「〇 6アルキレン基」 とは、 上記定義 「。^ 6アルキル基」 からさらに任意の水素原子を 1個除いて誘導される二価の基を意味し、 具体例とし ては、 メチレン基、 1， 2—エチレン基、 1， 1一エチレン基、 1， 3—プロピレ ン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、へキサメチレン基などがあげられる。 本明細書において、 「C2_6アルケニル基」 とは、 二重結合を 1個有する、 炭素数 が 2〜6個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味し、 具体例としては、 ェ テニル基 （ビュル基）、 1 _プロぺニル基、 2—プロぺニル基 （ァリル基）、 1ーブ テニル基、 2—ブテュル基、 3—ブテュル基、 ペンテュル基、 へキセニル基などが あげられる。
本明細書において、 「C2-6アルキニル基」 とは、 三重結合を 1個有する、 炭素数 が 2〜6個の直鎖状または分枝鎖状のアルキニル基を意味し、 具体例としては、 ェ チュル基、 1—プロピニル基、 2—プロピニル基、 1—ブチュル基、 2—ブチニル 基、 3—ブチュル基、 ペンチュル基、 へキシュル基などがあげられる。
本明細書において、 「C3_8シクロアルキル基」 とは、 炭素数が 3〜 8個の単環ま たは二環の飽和脂肪族炭化水素基を意味し、 具体例としては、 シクロプロピル基、 シクロブチル基、 シクロペンチル基、 シクロへキシル基、 シクロへプチル基、 シク ロォクチル基、 ビシクロ [2. 1. 0]ペンチル基、 ビシクロ [3. 1. 0]へキシル 基、 ビシクロ [2. 1. 1]へキシル基、 ビシクロ [4. 1. 0]ヘプチル基、 ビシク 口 [2. 2. 1]ヘプチル基 （ノルボルニル基）、 ビシクロ [3. 3. 0]ォクチル基、 ビシクロ [3. 2. 1]ォクチル基、 ビシクロ [2. 2. 2]ォクチル基などがあげら れる。
「〇3_8シクロアルキル基」 の好適な例としては、 シクロプロピル基、 シクロプチ ル基、 シクロペンチル基をあげることができ、 より好適な例としては、 シクロプロ ピル基があげられる。
本明細書において、 「。6 ^。ァリール基」 とは、 炭素数が 6〜10個の芳香族性 の炭化水素環式基を意味し、 具体例としては、 フエ二ル基、 1一ナフチル基、 2— ナフチル基、 インデニル基、 ァズレニル基などがあげられる。 「。6 ^。ァリール基」 の好適な例としては、 フエ二ル基をあげることができる。 本明細書において、 「ヘテロ原子」 とは、 窒素原子、 酸素原子または硫黄原子を意 味する。
本明細書において、 「5〜1 0員へテロアリール基」 とは、 環を構成する原子の数 が 5〜 1 0個であり、 環を構成する原子中に 1〜 5個のへテロ原子を含有する芳香 族性の環式基を意味し、 具体例としては、 フリル基、 チェニル基、 ピロリル基、 ィ ミダゾリル基、 トリアゾリル基、 テトラゾリル基、 チアゾリル基、 ビラゾリル基、 ォキサゾリル基、 イソォキサゾリル基、 イソチアゾリル基、 フラザニル基、 チアジ ァゾリル基、 ォキサジァゾリル基、 ピリジル基、 ビラジニル基、 ピリダジニル基、 ピリミジニル基、 トリアジニル基、 プリニル基、 プテリジニル基、 キノリル基、 ィ ソキノリル基、 ナフチリジニル基、 キノキサリニル基、 シンノリニル基、 キナゾリ ニル基、 フタラジニル基、 ィミダゾピリジル基、 ィミダゾチアゾリル基、 ィミダゾ ォキサゾリル基、 ベンゾチアゾリル基、 ベンゾォキサゾリル基、 ベンズイミダゾリ ル基、 インドリル基、 イソインドリル基、 インダゾリル基、 ピロ口ピリジル基、 チ エノピリジル基、 フロピリジル基、 ベンゾチアジアゾリル基、 ベンゾォキサジァゾ リル基、 ピリ ドピリミジニル基、 ベンゾフリル基、 ベンゾチェ二ル基、 チェノフリ ル基などがあげられる。
「5〜 1 0員へテロアリール基」 の好適な例としては、 フリル基、 チェニル基、 ピロリル基、 ィミダゾリル基、 チアゾリル基、 ビラゾリル基、 ォキサゾリル基、 ィ ソォキサゾリル基、 イソチアゾリル基、 ピリジル基、 ピリミジェル基をあげること ができる。
本明細書において、 「3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基」 とは、
( 1 ) 環を構成する原子の数が 3〜1 0個であり、
( 2 ) 環を構成する原子中に 1〜 2個のへテロ原子を含有し、
( 3 ) 環中に二重結合を 1〜 2個含んでいてもよく、
( 4 ) 環中にカルボニル基、 スルフィニル基またはスルホ二ル基を 1〜 3個含んで いてもよレヽ、
( 5 ) 単環式または二環式である非芳香族性の環式基を意味し、 環を構成する原子 中に窒素原子を含有する場合、 窒素原子から結合手が出ていてもよい。
具体例としては、 アジリジニル基、 ァゼチジニル基、 ピロリジニル基、 ピベリジ ニル基、 ァゼパエル基、 ァゾカニル基、 ピペラジ-ル基、 ジァゼパニル基、 ジァゾ カニル基、 ジァザビシクロ [ 2 . 2 . 1 ]ヘプチル基、 モルホリニル基、 チオモルホ リニル基、 1 , 1ージォキソチオモルホリニル基、 ォキシラエル基、 ォキセタニル 基、 テトラヒドロフリル基、 ジォキソラニル基、 テトラヒドロビラ二ル基、 ジォキ サニル基、 テトラヒ ドロチェニル基、 テトラ七 ドロチォピラニル基、 ォキサゾリジ ニル基、 チアゾリジニル基などがあげられる。
「3 〜 1 0員非芳香族へテロ環式基」 の好適な例としては、 アジリジニル基、 ァ ゼチジュル基、 ピロリジニル基、 ピペリジニル基、 ァゼパニル基、 ピペラジ-ル基、 ジァゼパニル基、 モルホリニル基、 チオモルホリニル基、 1 ， 1ージォキソチォモ ルホリニル基、 テトラヒ ドロフリル基、 テトラヒ ドロビラ二ル基をあげることがで きる。
本明細書において、 「0 ^ 6アルコキシ基」 とは、 上記定義 「。^ 6アルキル基」 の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体的としては、メ トキシ基、 エトキシ基、 1—プロポキシ基 （n—プロポキシ基）、 2—プロポキシ基 （ i —プロ ポキシ基）、 2—メチルー 1 _プロポキシ基 （ i —ブトキシ基）、 2—メチルー 2— プロポキシ基 （ t一ブトキシ基）、 1—ブトキシ基 （n—ブトキシ基）、 2—ブトキ シ基 （s—ブトキシ基）、 1—ペンチルォキシ基、 2 _ペンチノレォキシ基、 3—ペン チルォキシ基、 2 _メチル _ 1一ブトキシ基、 3 _メチル _ 1—ブトキシ基、 2 _ メチルー 2—ブトキシ基、 3—メチルー 2—ブトキシ基、 2 , 2—ジメチルー 1 _ プロポキシ基、 1 _へキシルォキシ基、 2 —へキシルォキシ基、 3 —へキシルォキ シ基、 2 _メチル _ 1一ペンチルォキシ基、 3—メチルー 1—ペンチルォキシ基、 4一メチル一 1 _ペンチルォキシ基、 2—メチルー 2—ペンチルォキシ基、 3—メ チルー 2—ペンチルォキシ基、 4 _メチル一 2—ペンチルォキシ基、 2—メチノレ一
3—ペンチルォキシ基、 3—メチル— 3—ペンチルォキシ基、 2 , 3—ジメチルー
1—ブトキシ基、 3 ， 3—ジメチル— 1一ブトキシ基、 2 ， 2—ジメチルー 1—ブ トキシ基、 2—ェチル _ 1一ブトキシ基、 3 ， 3—ジメチルー 2—ブトキシ基、 2 , 3—ジメチル一 2—ブトキシ基などがあげられる。
「。 - 6アルコキシ基」 の好適な例としては、 メ トキシ基、 エトキシ基、 1 _プロ ポキシ基、 2 _プロポキシ基、 2—メチルー 1一プロポキシ基、 2—メチル一 2— プロポキシ基、 1—ブトキシ基、 2—ブトキシ基、 1 _ペンチルォキシ基、 2 —ぺ ンチルォキシ基、 3 _ペンチルォキシ基、 2—メチルー 1一ブトキシ基、 3—メチ ル— 1一ブトキシ基、 2—メチル一 2—ブトキシ基、 3—メチルー 2—ブトキシ基、 2， 2—ジメチル一 1一プロポキシ基をあげることができ、より好適な例としては、 メ トキシ基、 エトキシ基、 1一プロポキシ基、 2—プロポキシ基、 2—メチル一 1 —プロポキシ基、 2—メチル— 2—プロポキシ基、 1 _ブトキシ基、 2—ブトキシ 基をあげることができ、 さらに好適な例としては、 メ トキシ基、 エトキシ基、 1 _ プロポキシ基、 2—プロポキシ基をあげることができ、 最も好適な例としては、 メ トキシ基、 エトキシ基をあげることができる。
本明細書において、 「d— 6アルキルチオ基」 とは、 上記定義 「。^ 6アルキル基」 の末端に硫黄原子が結合した基であることを意味し、 具体例としては、 メチルチオ 基、 ェチルチオ基、 1—プロピルチオ基 （n—プロピルチオ基）、 2—プロピルチオ 基（ i—プロピルチオ基）、 2—メチル— 1—プロピルチオ基（ i—プチルチオ基）、 2—メチルー 2 _プロピルチオ基 （t—ブチルチオ基）、 1—ブチルチオ基 （n—ブ チルチオ基）、 2—ブチルチオ基 （s—ブチルチオ基）、 1—ペンチルチオ基、 2 _ ペンチルチオ基、 3—ペンチルチオ基、 2—メチルー 1—ブチルチオ基、 3—メチ ノレ一 1—ブチルチオ基、 2—メチノレ一 2—ブチルチオ基、 3—メチルー 2—ブチル チォ基、 2， 2—ジメチルー 1—プロピルチオ基、 1—へキシルチオ基、 2 ~キ シルチオ基、 3 —へキシルチオ基、 2—メチル _ 1 _ペンチルチオ基、 3 _メチル _ 1—ペンチルチオ基、 4—メチル一 1 _ペンチルチオ基、 2—メチル _ 2 _ペン チルチオ基、 3—メチルー 2—ペンチルチオ基、 4—メチルー 2—ペンチルチオ基、 2—メチル— 3—ペンチルチオ基、 3—メチルー 3—ペンチルチオ基、 2 , 3—ジ メチル— 1—ブチルチオ基、 3， 3—ジメチル— 1ーブチルチオ基、 2 , 2—ジメ チル— 1—ブチルチオ基、 2—ェチルー 1ーブチルチオ基、 3， 3—ジメチルー 2 ーブチルチオ基、 2 , 3 _ジメチルー 2—ブチルチオ基などがあげられる。 アルキルチオ基」 の好適な例としては、 メチルチオ基、 ェチルチオ基、 1 —プロピルチオ基 （n—プロピルチオ基）、 2—プロピルチオ基 （ i一プロピルチオ 基）、 2 _メチル一 1一プロピルチオ基 （ iーブチルチオ基）、 2—メチルー 2—プ ロピルチオ基 （t一プチルチオ基）、 1—プチルチオ基 （n—プチルチオ基）、 2— ブチルチオ基 （s—プチルチオ基） をあげることができる。
本明細書において、 「じ3_8シクロアルコキシ基」 とは、 上記定義 「〇3_8シクロ アルキル基」の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体的としては、 シクロプロポキシ基、 シクロブトキシ基、 シクロペンチルォキシ基、 シクロへキシ ルォキシ基、シクロへプチルォキシ基、シクロォクチルォキシ基、 ビシクロ [2. 1. 0]ペンチルォキシ基、 ビシクロ [3. 1. 0]へキシルォキシ基、 ビシクロ [2. 1.
1]へキシルォキシ基、 ビシクロ [4. 1. 0]ヘプチルォキシ基、 ビシクロ [2. 2.
1]ヘプチルォキシ基 （ノルボルニルォキシ基）、 ビシクロ [3. 3. 0]ォクチルォ キシ基、 ビシクロ [3. 2. 1]ォクチルォキシ基、 ビシクロ [2. 2. 2]ォクチル ォキシ基などがあげられる。
「C3— 8シクロアルコキシ基」 の好適な例としては、 シクロプロポキシ基、 シクロ ブトキシ基、シクロペンチルォキシ基をあげることができ、より好適な例としては、 シクロプロポキシ基をあげることができる。
本明細書において、 「モノ一じ アルキルアミノ基」 とは、 アミノ基中の 1個の 水素原子を、上記定義「cト 6アルキル基」で置換した基を意味し、具体例としては、 メチルァミノ基、ェチルァミノ基、 1一プロピルアミノ基（n—プロピルアミノ基）、
2 _プロピルアミノ基 （ i—プロピルアミノ基）、 2—メチルー 1—プロピルアミノ 基 （ i—ブチルァミノ基）、 2—メチル _ 2—プロピルアミノ基 （t一プチルァミノ 基）、 1一プチルァミノ基 （n—ブチルァミノ基）、 2—ブチルァミノ基 （ s—ブチ ルァミノ基）、 1一ペンチルァミノ基、 2—ペンチルァミノ基、 3—ペンチルァミノ 基、 2—メチル一 1—ブチルァミノ基、 3—メチル一 1ーブチルァミノ基、 2—メ チル一 2—ブチルァミノ基、 3—メチルー 2—ブチルァミノ基、 2， 2 _ジメチノレ
— 1—プロピルアミノ基、 1—へキシルァミノ基、 2—へキシルァミノ基、 3—へ キシルァミノ基、 2—メチルー 1—ペンチルァミノ基、 3 _メチル一 1一ペンチル アミノ基、 4ーメチルー 1一ペンチルァミノ基、 2 _メチル _ 2 _ペンチルァミノ 基、 3—メチルー 2—ペンチルァミノ基、 4—メチルー 2—ペンチルァミノ基、 2 ーメチルー 3 _ペンチルァミノ基、 3 _メチル一 3—ペンチルァミノ基、 2， 3 - ジメチル一 1—ブチルァミノ基、 3， 3—ジメチル一 1ーブチルァミノ基、 2 , 2 ージメチル _ 1ーブチルァミノ基、 2—ェチルー 1—ブチルァミノ基、 3 , 3—ジ メチル一 2—ブチルァミノ基、 2， 3—ジメチル一 2—ブチルァミノ基などがあげ られる。
本明細書において、 「ジー 6アルキルアミノ基」 とは、 アミノ基中の 2個の水 素原子を、 それぞれ同一のまたは異なる、 上記定義 「。^ 6アルキル基」 で置換した 基を意味し、 具体例としては、 N， N—ジメチルァミノ基、 N, N—ジェチルアミ ノ基、 N, N—ジ一 n—プロピルアミノ基、 N， N—ジ一 i —プロピルアミノ基、 N, N—ジ一 n—ブチルァミノ基、 N， N—ジ一 i —ブチルァミノ基、 N , N—ジ 一 s—ブチルァミノ基、 N , N—ジ一 tーブチルァミノ基、 1^ _ェチル_ !^—メチ ノレアミノ基、 N— n—プロピル一 N—メチノレアミノ基、 N— i—プロピル一 N—メ チルァミノ基、 ^^ _ 11 _ブチル一 ^ーメチルァミノ基、 N _ i—ブチルー N—メチ ルァミノ基、 N _ s—ブチル一 N—メチルァミノ基、 N— t—ブチルー N—メチル アミノ基などがあげられる。
本明細書において、 「C 2 _ 7ァシル基」 とは、 上記定義の 「。^ 6アルキル基」 結合したカルボニル基であることを意味し、具体例としては、例えば、 ァセチル基、 プ口ピオニル基、 イソプロピオニル基、 ブチリル基、 ィソブチリル基、 バレリル基、 イソバレリル基、 ビバロイル基などがあげられる。
本明細書において、 「C 2— 7アルコキシカルボニル基」 とは、 上記定義の 「じ 6 アルコキシ基」 が結合したカルボニル基であることを意味し、 具体例としては、 例 えば、 メ トキシカルボニル基、 エトキシカルボニル基、 1一プロピルォキシカルボ -ル基、 2—プロピルォキシカルボニル基、 2—メチル— 2—プロポキシカルボ二 ル基などがあげられる。
本明細書において、 「置換基を有していてもよい」 とは、 「置換可能な部位に、 任意に組み合わせて 1または複数個の置換基を有してもよい」 ことを意味し、 置 換基の具体例としては、 例えば、 ハロゲン原子、水酸基、 チオール基、 ニトロ基、 シァノ基、 ホルミル基、 カルボキシル基、 アミノ基、 シリル基、 メタンスルホ二 ル基、 C 6アルキル基、 C2_6アルケニル基、 C2— 6アルキニル基、 C3„_ ンク 口アルキル基、 C6— i。ァリール基、 5〜 ： 1 0員へテロァリール基、 3〜 ： 1 0員非 芳香族へテロ環式基、 じ 6アルコキシ基、 じ アルキルチオ基、 〇3_8シクロ アルコキシ基、 モノ一 6アルキルアミノ基、 ジー Ci一 6アルキルアミノ基、 C2 一 7ァシル基または C 2 _ 7アルコキシカルポニル基などをあげることができる。 ただ し、 じぃ6アルキル基、 C2_6アルケニル基、 C2_6アルキニル基、 C3— 8シクロ アルキル基、 。ァリール基、 5〜 1 0員へテロアリール基、 3〜 1 0員非芳 香族へテロ環式基、 C - 6アルコキシ基、 アルキルチオ基、 C3_8シクロア ルコキシ基、 モノ— アルキルアミノ基、 ジ— アルキルアミノ基、 C2_7 ァシル基および C2_7アルコキシカルボニル基はそれぞれ独立して下記置換基群 からなる群から選ばれる 1〜 3個の基を有していてもよい。
<置換基群>
ハロゲン原子、 水酸基、 チオール基、 ニトロ基、 シァノ基、 Ci- 6アルキル基、
C 3— 8シクロアルキル基、 C2— 6アルケニル基、 C2_6アルキ-ル基、 C6— 10ァ リール基、 5〜 1 0員へテロアリール基、 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 C j _6アルコキシ基および C 6アルキルチオ基。 (B) VEGFレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、
一般式 （I)
R4
A、X 丫1 (I)
O
で表される化合物を挙げることができる。
(i) A
Aは、 式
Figure imgf000028_0001
で表される基を意味する。
式中、 R1は、 式一 V — V2— V3 (式中、 V1は、 置換基を有していてもよい Cj— 6アルキレン基を意味する ； V2は、 単結合、 酸素原子、 硫黄原子、 カルボ二 ノレ基、 スルフィ-ノレ基、 スノレホニル基、 式一 CONR6—で表される基、 式一 S 02NR6_で表される基、 式 _NR6 S 02—で表される基、 式 _NR6CO_で 表される基または式一NR6_で表される基を意味する（式中、 R6は、水素原子、 置換基を有していてもよい C卜 6アルキル基または置換基を有していてもよい C 3_8シクロアルキル基を意味する。） ； V3は、 水素原子、 置換基を有していてもよ い Ci— eアルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を 有していてもよい C 2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C 3— 8シク口 アルキル基、 置換基を有していてもよいじ 。ァリール基、置換基を有していて もよい 5〜1 0員へテロァリール基または置換基を有していてもよい 3〜1 0員 非芳香族へテロ環式基を意味する。） で表される基を意味する。
R2は、 シァノ基、 置換基を有していてもよい C -6アルコキシ基、 カルボキシ ル基、 置換基を有していてもよい C2_ 7アルコキシカルボニル基または式一 CO NVa l lVa 12 (式中、 Va l 1は、 水素原子、 置換基を有していてもよい〇^6ァ ルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していて もよい C 2— 6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい〇6—10ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基または置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテ 口環式基を意味する ； Va l 2は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eァ ルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していて もよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい C^。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1
0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環 式基、 水酸基、 置換基を有していてもよい アルコキシ基または置換基を有 していてもよい C3_8シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する。
A1は、 置換基を有していてもよい炭素原子.または窒素原子を意味する。
R11は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有 していてもよい C 2 6アルケ-ル基、 置換基を有していてもよい C2 6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい。3_8シクロアルキル基、 置換基を有していて もよい Ce— i。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 10員へテロァリール 基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基または置換基を 有していてもよいモノ C^eアルキルアミノ基を意味する。
R12は、 水素原子または置換基を有していてもよい Ci-eアルキル基を意味す る。
va l 3は、 酸素原子または硫黄原子を意味する。
A11は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。
R13は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基または置換基 を有していてもよい C3_8シクロアルキル基を意味する。
R14は、 式— va l 4_Va 15 (式中、 Va l 4は、 単結合またはカルボ二ル基を 意味する ； Va l 5は、 水素原子、 水酸基、 置換基を有していてもよい 6アル キル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していても よい C2 6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C 3 8シク口アルキル基、 置換基を有していてもよい Cn。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環 式基、 アミノ基、 置換基を有していてもよいモノ一 アルキルアミノ基、 置換 基を有していてもよいジーじ アルキルアミノ基、 ホノレミノレ基、カルボキシル基ま たは置換基を有していてもよい C2_7アルコキシカルボ二ル基を意味する。）で表さ れる基を意味する。
(ϋ) X
Xは、 酸素原子または硫黄原子を意味する。
(iii) Y Yは、 式
Figure imgf000030_0001
で表される基を意味する。
式中、 R3は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C アルキル基、 置換基 を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2 6アル キニル基、 置換基を有していてもよい〇3— 8シクロアルキル基、 置換基を有して いてもよい C 2_ 7ァシル基または置換基を有していてもよい C 2 7アルコキシ力 ルボニル基を意味する。
R7および R8は、 それぞれ独立して水素原子、 ハロゲン原子、 シァノ基、 ニト 口基、 アミノ基、 置換基を有していてもよい アルキル基、 置換基を有して いてもよい C 3 8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい C — 6アルコキ シ基、 置換基を有していてもよい アルキルチオ基、 ホルミル基、 置換基を 有していてもよい C2_7ァシル基、 置換基を有していてもよい C 2_ 7アルコキシ カルボニル基または式 CONVd l Vd 2 (式中、 Vd lおよび Vd 2は、 それぞれ 独立して水素原子または置換基を有していてもよい C アルキル基を意味す る。） で表される基を意味する。
R9は、水素原子、 ハロゲン原子または置換基を有していてもよい Ci-6アルキ ル基を意味する。
W1および W2は、 それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または 窒素原子を意味する。
(iv) R4
R4は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2 6アルキニル 基、 置換基を有していてもよいじ3_8シクロアルキル基、 置換基を有していても よい C2 7ァシル基または置換基を有していてもよい C2 7アルコキシカルボ二 ル基を意味する。 (v) R5
R5は、 水素原子、 置換基を有していてもよい アルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2 6アルケ-ル基、 置換基を有していてもよい C2 6アルキニル 基、 置換基を有していてもよい C3 8シクロアルキル基、 置換基を有していても よい C6 10ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味する。
一般式 （I) で表される化合物は、 公知の方法で製造でき、 例えば、 国際公開第 02/0328 72号パンフレツト （W002/32872)、国際公開第 2004/020 434号パンフレツ ト （W02004/020434)、 および国際公開第 2005/06 3 7 1 3号パンフレツト （W02005/063713) のいずれかに記載された方法によって製造 することができる。 本発明において、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質は、 好ましくは、
一般式 （Π)
Figure imgf000031_0001
で表される化合物を挙げることができる。 一般式 （II) は、 一般式 （I) で表され る化合物の好ましい例である。
(i) R1
R1は、 前記定義と同じ意味である。
R1の好適な例としては、 C^eアルキル基があげられる。 例えば、 R1の定義 において V1が〇ト6アルキレン基、 V2が単結合、 V3が水素原子のときは、 R1 は C - 6アルキル基となる。 ただし、 この場合、 R1は、 C^eアルキル基を有し ていてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 水酸基、 Ci— eアルコキシ基、 アミノ基、モノーじ アルキルアミノ基およびジー アルキルアミノ基から選 ばれる置換基を有していてもよい。 R1のより好適な例としては、 メチル基または式
Figure imgf000032_0001
(式中、 Ra 3はメチル基を意味する ； Ra lは水素原子または水酸基を意味する ； Ra 2は、 メ トキシ基、 エトキシ基、 1一ピロリジニル基、 1ーピペリジニル基、 4—モルホリニル基、 ジメチルアミノ基またはジェチルアミノ基を意味する。） の いずれかで表される基があげられる。
R1のさらに好適な例としては、 メチル基または 2—メ トキシェチル基があげ られる。
(ii) R2
R2は、 前記定義と同じ意味である。
R2の好適な例としては、 シァノ基または式 _CONVa 11 Va 12 (式中、 Va 11および Va l 2は、 前記定義と同じ意味である。） で表される基があげられる。
R2のより好適な例としては、 シァノ基または式一 CONHVa 16 (式中、 Va 16は、 水素原子、 Ci— 6アルキル基、 C3— 8シクロアルキル基、 C — 6アルコキ シ基または C3_8シクロアルコキシ基を意味する。 ただし、 Va l 6は、 ハロゲン 原子、 シァノ基、 水酸基および C^eアルコキシ基から選ばれる置換基を有して いてもよい。） で表される基があげられる。
R2のさらに好適な例としては、 式一 CONHVa 17 (式中、 Va l 7は、 水素原 子、 C — 6アルキル基または C^eアルコキシ基を意味する。） で表される基があ げられる。
R2のもっとも好適な例としては、 式一 CONHVa 18 (式中、 Va l 8は、 水素 原子、 メチル基またはメ トキシ基を意味する。） で表される基があげられる。
(iii) Y1
Y1は、 式
Figure imgf000032_0002
(式中、 R7、 R8、 W1および W2は、 前記定義と同じ意味である。） で表される 基を意味する。
Y1の好適な例としては、 式
Figure imgf000033_0001
(式中、 R 7 1は、 水素原子またはハロゲン原子を意味する。） で表される.基があ げられる。
(iv) R3および R4
R 3および R 4は、 前記定義と同じ意味である。
R3および R4の好適な例としては、 水素原子があげられる。
(V) R5
R5は、 前記定義と同じ意味である。
R 5の好適な例としては、 水素原子、 C卜 6アルキル基、 C 3_8シクロアルキル 基または C6_1 0ァリール基 （ただし、 R5は、 ハロゲン原子およびメタンスルホ ニル基から選ばれる置換基を有していてもよレ、） があげられる。
R 5のより好適な例としては、 メチル基、 ェチル基またはシクロプロピル基が あげられる。
また、 一般式 （II) で表される化合物の好適な例としては、
N- (4一 （6—シァノー Ί— ( 2—メ トキシェトキシ） _ 4一キノ リル） ォ キシ一 2—フノレオロフェニノレ） -N' - (4—フノレオロフェニノレ） ゥレア、
N— ( 2—クロ口一 4— ((6—シァノ一 7— （（ 1—メチルー 4―ピぺリジル） メ トキシ） 一 4—キノ リル） ォキシ） フエニル） -N' —シク口プロピルゥレア、 N— (4— (( 6—シァノー 7— ((( 2 R) — 3— (ジェチルァミノ） 一 2—ヒ ドロキシプロピル） ォキシ） 一4一キノ リル） ォキシ） フエ-ル） 一 N' — （4 ーフノレ才ロフエ二ノレ） ゥレア、
N— (4— （（6—シァノ一 7— ((( 2 R) — 2—ヒ ドロキシ一 3— ( 1—ピロ リジノ） プロピル） ォキシ） 一 4—キノ リル） ォキシ） フエニル） 一 N' — (4 ーフノレオ口フエ-ル） ゥレア、
4— ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボ-ル） アミノフエノキ シ） _ 7—メ トキシ一 6—キノ リ ンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロ口一 4— (シクロプロピノレアミノカノレボニル） ァミノフエノキ シ） 一 7— ( 2—メ トキシエトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—シクロプロピノレー 4 _ ( 3—クロ口一 4一 （（（シクロプロピルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、、
N 6— ( 2—メ トキシェチル） 一4— ( 3—クロ口一 4— ( ( (シクロプロピル ァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカル ボキサミ ド、
N 6 - ( 2—フルォロェチル） ー4一 （3—クロ口一4— ( (： (シクロプロピノレ ァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカル ボキサミ ド、
N 6—メ トキシ一 4— ( 3—クロ口一 4— ( ( (シクロプロピルァミノ） カルボ ニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチル _ 4一 （3—クロロー 4— ( ( (シクロプロピルァミノ） カルボ二 ル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—ェチノレ一4— ( 3—クロ口一 4一 （（（シクロプロピノレアミノ） カノレボニ ノレ） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トギシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—フルオロー 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノ キシ） 一 7— （2—メ トキシエトキシ） 一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカノレポニル） アミノフエノキ シ） 一 7— ( 2—ヒ ドロキシエトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキ シ） 一 7— ( ( 2 S ) 一 2 , 3—ジヒ ドロキシプロピル） ォキシ一 6—キノ リンカ ルポキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— (メチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 ーメ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロロ ー 4 _ (ェチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 —メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、 .
N 6—メ トキシー 4一 （3—クロ口 一 4一 （（（ェチルァミノ） カルボニル） ァ ミノ） フエノキシ） _ 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロ口 一 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） ァ.ミノフエノキ シ） 一 7— (2—エトキシエトキシ） 一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （4一 （（シクロプロピルァミノ） カルボ-ル） アミノフエノキシ） 一 7— (2—メ トキシェトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N— (2—フルォロ一 4—((6—力ルバモイル一 7—メ トキシー 4—キノ リノレ） ォキシ） フエニル） 一 N' —シクロプロピルゥレア、
N 6 - (2—ヒ ドロキシェチル） ー 4一 （3—クロ口 一 4— (： ((シクロプロピ ルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカ ルポキサミ ド、
4— (3—クロロ ー 4一 （ 1一プロピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一4— ( c i s— 2— フノレオ口 一シクロプロピルアミノカル ボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、 N 6—メチルー 4一 （3—クロロ ー 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボ二 ノレ） ァミノ） フエノキシ） 一 7— ( 2—メ トキシェトキシ） 一 6—キノ リンカル ボキサミ ド、
N 6—メチノレ一 4— (3—クロ口一 4一 （（（ェチノレアミノ） カノレボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口 一 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） ァミノフエノキ シ） 一 7— （2— (4—モルホリノ） ェトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一 4一 （ 2—フルォロェチノレアミノカノレポ-ル） ァミノフエ ノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N6— ((2 R) テ トラヒ ドロー 2—フラニルメチル） 一 4— (3—クロロ ー 4 一 （（（メチルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシー 6— キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—フルオロー 4一 （ェチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロロー 4一 （（（シクロプロピルァミノ） カルボニル） ァミノ） フ エノキシ） 一 7— (( 2 R) _ 2—ヒ ドロキシー 3 _ ( 1—ピロリジノ） プロポキ シ） 一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4 _ ( 3—クロ口一 4 _ ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） _ 7— (( 2 R) — 3—ジェチルァミノー 2—ヒ ドロキシプロボ キシ） _ 6—キノリンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4— ( 3—クロロー 4 _ ( ((ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— (( 2 R) 一 3—ジェチルァミノ _ 2—ヒ ドロキシプロボ キシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4— ( 3—クロ口一 4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） _ 7— （（2 R) — 2—ヒ ドロキシ一 3— ( 1—ピロリジノ） プ ロポキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4一 （3—クロ口一 4一 （：（（ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） — Ί— (( 2 R) — 2—ヒ ドロキシー 3— （ 1一ピロリジノ） プ ロポキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4— ( 3—クロ口一 4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— (( 1 —メチルー 4—ピペリジル） メ トキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4— ( 3—クロロー 4— ( ((ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— （（ 1ーメチルー 4—ピペリジル） メ トキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N— （4一 （6—シァノ一 7— （2—メ トキシェトキシ） 一 4一キノ リル） ォ キシ一 2—フノレオロフェニル） 一 N' —シクロプロピノレゥレア、
N— (4— (6—シァノ一 7— （3— （4—モルホリノ） プロポキシ） 一4一 キノ リル） ォキシフエニル） 一 N' — （3— （メチノレスルホ -ル） フエ二ノレ） ゥ レア、
4一 （4一 （（シクロプロピルァミノ） カルボ-ル） アミノフエノキシ） 一 7— メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—フルオロー 4一 （（ 2 _フルォロェチルァミノ） カルボニル） ァミノ フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6 - ( 2—エトキシェチル） 一 4一 （3—クロ口一 4— ( ( (メチルァミノ） カルボ-ル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 4— ( 3—ェチルウレイ ド） 一 3—フルォロ一フエノキシ） 一 7—メ ト キシキノ リン一 6—カルボキシリ ック アシッ ド （ 2—シァノエチル） アミ ド および
N— ( 4— ( 6 - ( 2—シァノエチル） 力ルバモイル一 7—メ トキシー 4 _キ ノ リノレ） ォキシ一 2—フノレオロフェニノレ） 一 N' —シクロプロピノレゥレア を挙げることができる。
さらに、 一般式 （II) で表される化合物のより好適な例としては、
4一 （3—クロロー 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） ァミノフエノキ シ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— (ェチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 —メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メ トキシ一 4— ( 3—クロ口一 4 _ ( ( (シクロプロピノレアミノ） カノレボ ニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロ口一 4一 （メチルァミノカルボ-ル） アミノフエノキシ） 一 7 ーメ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド
および
N 6—メ トキシ一 4一 （3—クロロー 4一 （（（ェチルァミノ） カルボニル） ァ ミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ドを挙げること ができる。 また、 一般式 （II) で表される化合物のさらに好適な例としては、 4一 （3— クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカノレポニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ _ 6—キノリンカルボキサミ ド （式 （IV) 参照） を挙げることができる。 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質の最も好適な例の一^ 3としては、 4 _ ( 3—ク ロロ一 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ ト キシ一 6—キノリンカルボキサミ ドのメタンスルホン酸塩を挙げることができる
Figure imgf000038_0001
一般式 （II) で表される化合物は、 公知の方法で製造でき、 例えば、 国際公開 第 0 2 Z 3 2 8 7 2号パンフレッ ト （W002/32872) および国際公開第 2ひ 0 5 Z 0 6 3 7 1 3号パンフレツト （W02005/063713) のいずれかに記載された方法によ つて製造することができる。
本発明において、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質は、 好ましくは、 一般式 （III)
Figure imgf000038_0002
で表される化合物を挙げることができる。 一般式 （III) は、 一般式 （I) で表さ れる化合物の好ましい例である。
(i) R 1 1
R 1 1は、 前記定義と同じ意味である。
R 1 1の好適な例としては、置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテ 口環式基または置換基を有していてもよいモノ一 C ^ eアルキルアミノ基があげ られる。
R11のより好適な例としては、 以下の置換基群から選ばれる置換基を有してい てもよい式
び
Figure imgf000039_0001
で表される基から選ばれるいずれか 1の基があげられる。
[置換基群]
水酸基、 Ci- eアルキル基、 じ 3_8シクロアルキル基、 式
Figure imgf000039_0002
および
(式中、 RN1および RN2はそれぞれ独立して水素原子または置換基を有していて もよい Ci- 6アルキル基を意味する。） で表される基
R11のさらに好適な例としては、 式
Figure imgf000039_0003
で表される基から選ばれるいずれか 1の基があげられる。
(ii) R12
R12は、 前記定義と同じ意味である。
R 12の好適な例としては、 水素原子があげられる。
(iii) Va l 3
Va l 3は、 前記定義と同じ意味である。 va 13の好適な例としては、 酸素原子があげられる。
(iv) A11
A11は、 前記定義と同じ意味である。
A1 1の好適な例としては、 炭素原子があげられる。
(v) R4
R4は、 前記定義と同じ意味である。
R4の好適な例としては、 水素原子があげられる。
(vi) R5
R5は、 前記定義と同じ意味である。
R 5の好適な例としては、 C — 6アルキル基または C 3— 8シクロアルキル基があ げられる。
R 5のより好適な例としては、 メチル基があげられる。
(vii) R9
R9は、 前記定義と同じ意味である。
R9の好適な例としては、 水素原子があげられる。
また、 一般式 （III) で表される化合物の好適な例としては、
5 - (2— (((4—ヒ ドロキシ一 4—メチルビペリジン一 1—ィル） カルボ二 ル） ァミノ） ピリジン一 4一ィルォキシ） _ 1 H—インドールー 1—カルボン酸 メチルァミ ド、
N 1ーメチルー 5— （2— ((4—ヒ ドロキシピペリジノ） カルボニル） ァミノ 一 4—ピリジル） ォキシ一 1 H— 1—インドールカルボキサミ ド、
N 1—メチル一 5— (2— (((4— (ピロリジン一 1—ィル） ピぺリジン一 1 一ィル） カルボ-ル） ァミノ） ピリジン一 4一ィルォキシ） 一 1 H— 1—インド 一/レカノレポキサミ ド、
N 1—メチル一 5— (2— （（（4一 （ピペリジン一 1—ィル） ピぺリジン一 1 一ィル） カルボニル） ァミノ） ピリジン一 4—ィルォキシ） 一 1 H— 1—インド 一ルカノレボキサミ ド
および N 4 - (4一 （1— (メチルァミノ） カルボニル一 1 H— 5—インドリル） ォ キシ一 2—ピリジル） 一 4一モルホリンカルボキサミ ド
を挙げることができる。
一般式 （III) で表される化合物は、 公知の方法で製造でき、 例えば、 国際公開 第 2004Z0 20434号パンフレツ ト （W02004/020434) に記載された方法に よって製造することができる。
また、 本発明において、 VEGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、 ( 1) N- (4—ブロモ一 2—フルオロフェ -ル） 一 6—メ トキシ一 7— [ 2 - ( 1 H- 1 , 2， 3— トリァゾールー 1—ィル） エトキシ] キナゾリン一 4ーァ ミン （以下、 「ZD4190」 ともレ、う。 Cancer Research.， 60, 970-975, 2000、 Journal of Medicinal Chemistry. , 42： 5369-5389， 1999. ) (式 （V) 参照）、
Figure imgf000041_0001
(2) N- (4 _ブロモ一 2—フノレオ口フエ-ル） 一 6—メ トキシ一 7— メチルピペリジン一 4—ィル）メ トキシ]キナゾリン一 4—アミン（以下、「ZD6474」 および 「vandetanib」 ともレヽつ。 Proc. Am. Assoc. Cancer Research. , 42, D83, 2001、 Journal of Medicinal Chemistry. , 45： 1300-1312, 2002. ) (式 （VI) 参
Figure imgf000041_0002
(3) 3— [(2, 4—ジメチルピロ一ルー 5—ィル） メチレン] — 2—インドリ ノン（以下、「SU5416」および「semaxanib」ともレヽう。 Cancer Research. , 59, 99 - 106, 1999、 Journal of Medicinal Chemistry. , 41； 2588—2603, 1998.、 US5792783) (式 （VII) 参照)
Figure imgf000042_0001
(4) (Z) — 3— [(2， 4ージメチル一 5— (2—ォキソ一 1， 2—ジヒ ドロイ ンドール一 3—イ リデンメチル） 一 1 H—ピロール _ 3 _ィル） —プロピオニッ ク ァシッ ド（以下、「SU6668」 ともレヽう。 Cancer Research.， 60， 4152—4160， 2000、 Journal of Medicinal Chemistry. , 42: 5120-5130, 1999. ) (式 （VIII) 参照）、
Figure imgf000042_0002
(5) 5 - ( 5—フノレオ口一 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロインドール一 3—ィ リデンメチル） 一 2, 4—ジメチノレー 1 Η—ピロ一ルー 3—力ノレボキシリ ック ァ シッ ド （2—ジェチルァミノエチル）アミ ド（以下、 rsU11248jともいう。 Clinical Cancer Research, 9, 327—337， 2003、 Journal of Medicinal Cnemistry. , 46： 1116—9, 2003.、 W001/060814) (式 (IX) 参照）、
Figure imgf000042_0003
(6) N, N—ジメチルダリシン 3— { 5， 6， 7, 1 3—テ トラヒ ドロー 9— [( 1ーメチルェトキシ） メチル] ― 5—ォキソ一 1 2 H—インデノ （2, 1— a) ピロ口 （ 3， 4 - c ) カルバゾーノレ一 1 2—ィル } プロピノレエステノレ （以下、 「CEP- 7055」ともレヽう。 Pro. Am. Assoc. Cancer Research, 43， 1080， 2002, Journal of Medicinal Chemistry. , 46： 5375-88, 2003. ) (式 (X) 参照）、
Figure imgf000043_0001
(7) 3 - (4一ブロモ _ 2, 6—ジフルォロ—ベンジルォキシ） ー 5— [ 3 - (4—ピロリジン一 1—ィル一ブチル） 一ウレイ ド] —イソチアゾ一ル一 4—力 ルボキシリック アシッド アミ ド（以下、「CP- 547， 632」ともいう。 Cancer Research.
63:7301-9, 2003、 WO 99/62890) (式 (XI) 参照）、
Figure imgf000043_0002
(8) N- { 2—クロロー 4— [(6, 7—ジメ トキシ一 4ーキナゾリニル） ォキ シ]フエ二ノレ }_Ν'—プロピルゥレア（以下、「KRN633」ともいう oMolecular Cancer Therapeutics. , 3:1639-49, 2004·、 W000/43366) (式 （XII) 参照）、
Figure imgf000043_0003
(9) 1— (4一クロロア二リノ） 一4— (4—ピリジルメチル） フタラジン （以 下、 「PTK787/ZK222584」 および 「vatalanib」 ともレ、う。 Cancer Research, 60, 2179 - 2189， 2000、 J. Med. Chem. , 43:2310—23， 2000.、 W098/35958) (式 (XIII) 参照）、
Figure imgf000044_0001
(1 0) N- {2—クロ口 一 4一 [(6， 7—ジメ トキシー 4—キノリル） ォキシ] フエ二ル} 一 N' — ( 5—メチル一 3—ィソキサゾリル) ゥレア （以下、 「KRN951」 ともいう。 W002/088110) (式 (XIV) 参照）、
Figure imgf000044_0002
(1 1) 4 - [(4—フノレオ口 _ 2—メチノレイ ン ドーノレ一 5—ィノレ） ォキシ] _ 6 —メ トキシ一 7 _ [3— (ピロリジン一 1 fル） プロボキシ] キナゾリン （以 下、 「AZD2171」 ともレ、う。 Cancer Research. 65 :4389 - 400， 2005、 W000/47212)
(式 （XV) 参照）、
Figure imgf000044_0003
(1 2) 6— [2— （メチルカルバモイル） フエニルスノレファニル] - 3 - E - [2 - (ピリジン一 2—ィル） ェテニル] インダゾール （以下、 「AG013736」 とも レ、う。 American Journal of Pathology. 165:35-52， 2004.、 WOOl/002369) (式（XVI) 参照）、
Figure imgf000045_0001
( 1 3) 5— ((Z) 一 ( 5—フルォロ一 2—ォキソ一 1， 2—ジヒ ドロ一 3H—ィ ンドール一 3—イリデン） メチル） 一 N— (( 2S) 一 2—ヒ ドロキシ一 3—モルホ リンー 4—ィルプロピル） 一 2 , 4—ジメチル一 1 H—ピロール一 3—カルボキサ ^ 卜 (以" h、 「SU14813」 ともレヽつ。 Proceedings of the American Association for
Cancer Research, 46, (Abstract 2031)， 2005) (式 （XVII) 参照）、
Figure imgf000045_0002
( 1 4) 3 - ((キノ リン一 4—ィルメチル） ァミノ） 一 N— (4— (トリフルォ ロメ トキシ） フエニル） チォフェン一 2—カルボキサミ ド （以下、 「0SI930」 とも レヽラ。 olecular Cancer Therapeutics., 4:1186— 1197, 2005. ) (式 (XVIII) 参
Figure imgf000045_0003
( 1 5) 6 - ( 2 , 6—ジクロロフエニル） _ 8 _メチル一 2 _フエニルァミノ — 8Η—ピリ ド [2, 3— d]ピリ ミジン一 7—オン （以下、 「TKI-28」 ともレヽう。 Cancer Biol Ther.， 4, 2005. ) (式 (XIX) 参照）、
Figure imgf000046_0001
( 1 6) 2 - (( 1 , 6—ジヒ ドロ一 6—ォキソ一ピリジン一 3—ィルメチル） ァ ミノ） 一 Ν— (3— （トリフルォロメチル） フエニル） 一 3—ピリジン一カルボキ サミ ド（以下、「ΑΒΡ309」ともいう。 EORTC-NCI-AACR SympMol Targets Cancer Ther.， 2， (Abstract 172)， 2004. ) (式 (XX) 参照）、
Figure imgf000046_0002
(XX)
( 1 7) 4— (4— (4.一クロ口一フエニルァミノ） 一フ口' [2, 3— d]ピリダ ジン一 7—ィルォキシメチル） 一ピリジン一 2—カルボキシリ ック アシッ ド メチルアミ ド （以下、 「BAY 57—9352」 ともいう。 W001/23375) (式 (XXI) 参照）、
Figure imgf000046_0003
( 1 8 ) N— ( 3— トリフ 7レオ口メチル一 4—クロ口フエニル） 一 N' - (4— (2 —メチルカルバモイルピリジン一 4—ィル） ォキシフエニル） ゥレア （以下、 「BAY 43-9006」および「sorafenib」 ともレヽう。 Cancer Research. , 64, 7099-7109， 2004, Organic Process Res Dev. , 6， 777-81， 2002. ) (式 (XXII) 参照）、
Figure imgf000047_0001
( 1 9) 4ーァミノ一 5—フルォロ一 3— (6— （4—メチルーピペラジン一 1 一ィル） - 1 H—ベンズィミダゾール一 2—ィル） 一 1 H—キノ リ ン一 2—オン（以 下、 「CHIR258」 ともレヽう。 Clinical Cancer Research. , 11, 3633-3641， 2005. ) (式 （XXIII) 参照）、
Figure imgf000047_0002
(XXIII)
(20) 4— (4— ( 1—ァミノ一 1—メチノレーエチル） 一フエニル） 一 2— (4 - (2—モノレホリン一 4—ィル一ェチル） 一フエニルァミノ） 一ピリ ミジン一 5 —カノレポ'ニ卜リノレ（以下、「JNJ17029259」 ともレヽう。 Molecular Pharmacology.， 66, 635—647， 2004. ) (式 (XXIV) 参照）、
Figure imgf000047_0003
(XXIV)
(2 1 ) [6 - [4— [(4—ェチルビペラジン一 1—ィル） メチル] フエニル] — 7H—ピロ口 [2， 3 - d] ピリ ミジン一 4—ィル] ― ((R) - 1—フエニルェ チル）ァミン（以下、「AEE- 788」ともいう。 Cancer Research. , 64, 4931-4941， 2004·、 Cancer Research. , 64, 7977-7984， 2004. ) (式 (XXV) 参照）、
Figure imgf000048_0001
(XXV)
(2 2) 9— ( 1—メチルェトキシ） メチル一 1 2— ( 3—ヒ ドロキシプロピル） 一 6H， 7H， 1 3H—インデノ [2， 1— a] ピロ口 [3, 4— c ] カノレバゾーノレ一 5—オン （以下、 「CEP-5214」 ともレ、う。 Journal of Medicinal Chemistry.， 46, 5375 - 5388, 2003.、 Cancer Research. , 63, 5978-5991, 2003. ) (式 (XXVI) 参照）、
Figure imgf000048_0002
(2 3) Ν— (2， 4—ジフルオロフェニル） 一N' - {4 -[ (6 , 7—ジメ トキ シー 4一キノ リル） 一ォキシ]一 2 _フルオロフェニル } ゥレア （以下、 「ΚΙ_8751」 ともレ、う。 Journal of Medicinal Chemistry. , 48， 1359-1366, 2005. ) (式 (XXVII) 参照）、
Figure imgf000048_0003
(24) N- [4 - (3—ァミノ一 1 H—ィンダゾ一ノレ一 4一ィル） フエニル] - N' — ( 2—フルオロー 5—メチノレフエニル） ゥレア（以下、「ABT— 869」 ともレヽう。 Proceedings οτ the American Association for Lancer Research.， 46, 1407, (Abstract 5981), 2005. ) (式 (XXIX) 参照）、
Figure imgf000049_0001
(XXIX)
(2 5) 2—メチルー 6— [ 2 - ( 1—メチルー 1H—イ ミダゾール一 2 _ィル） —チェノ [3， 2 - b ] ピリジン一 7—ィルォキシ] 一べンゾ [b] チォフェン 一 3 _カルボキシリック アシッド メチルアミ ド （以下、 「AG-028262」 ともい う。 W003/06462、 US2004/009965) (式 （XXX) 参照）、
Figure imgf000049_0002
(2 6) (R) — 1— (4— (4—フルォロ一 2 _メチル _ 1H—インドール一 5— ィルォキシ） 一 5—メチルピロ口 [ 1， 2— f ] [l , 2, 4] トリァジン一 6— ィルォキシ） プロパン _ 2—オール（以下、 「BMS- 540215」 ともレ、う。 Proceedings of the American Association ror Cancer Research. , 4o， (Abstract 3033) , 2005. )
(式 （XXXI) 参照）、
Figure imgf000049_0003
(XXXI)
(2 7) (S) 一 （（R) - 1 - (4 - (4—フルォロ _ 2—メチル一 1H—インドー ル一 5—ィルォキシ） 一 5—メチルピロ口 [ 1， 2— f ] [ 1 , 2， 4] トリアジ ン一 6 fルォキシ）プロパン一 2—オール） 2—ァミノプロパノエート （以下、 「BMS- 582664」 ともレヽう。 Proceedings of the American Association for Cancer Research. , 46, (Abstract 3033)， 2005. ) (式 （XXXII) 参照）、
Figure imgf000050_0001
(2 8) 3— [(4—モルホリン一 4—ィル一フエニノレアミノ）一メチレン]— 1 3 —ジヒ ドロイ ン ドール一 2 —オン （以下、 「AGN—199659」 と もレヽ ぅ W02003/027102) (式 (XXXIII) 参照）、
Figure imgf000050_0002
(XXXIII)
(2 9) 5 - [[4— [(2, 3—ジメチルー 2 H—インダゾール _ 6—^ fル） メチ ルァミノ] ピリ ミジン一 2—ィル] ァミノ] — 2 _メチルベンゼンスルホンアミ ド（以下、「pazopanib」または「GW - 786034」ともレ、う。 Proc. Am. Soc. Clin. Oncology (Abstract 3054)， 2004. ) (式 （XXXIV) 参照）、
Figure imgf000050_0003
(30) (3Z) - 3 - [6— (2—モルホリン一 4ーィルエトキシ） キノ リン _ 2 ( 1H) —イ リデン] 一 1， 3—ジヒ ドロー 2H—インドール _ 2 _オン （以下、 「YM - 231146」ともレヽぅ。Biological and Pharmaceutical Bulletin. 28： 2096-2101, 2005. ) (式 （XXXV) 参照）、
Figure imgf000051_0001
(XXXV)
( 3 1 ) 2 - ( ( 2 - ( ( 4一 （4— ( 4 - ( t e r t -ブチル） ァニリノ） フエ ノキシ） 一 6—メ トキシ一 7—キノリル） ォキシ） ェチル） ァミノ） 一 1—エタ ノール （以下、 「KI-23057」 ともいう。 W02003/033472) (式 (XXXVI) 参照）、
Figure imgf000051_0002
(XXXVI) などを挙げることができる。
上記 ZD4190、 ZD6474、 SU5416、 SU6668、 SU11248, CEP - 7055、 CP- 547, 632、 KRN633、 PTK787/ZK222584, KRN951、 AZD2171、 AG013736、 SU14813、 0SI930、 TKI- 28、 ABP309、 BAY 57 - 9352、 BAY 43-9006、 CHIR258、 JNJ17029259、 AEE_788、 CEP_5214、 KI- 8751、 ABT - 869、 AG - 028262、 BMS - 540215、 BMS - 582664、 AGN - 199659、 pazopanib, YM - 231146 および KI- 23057は、公知の方法で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献 に記載された方法で製造することができる。
また、本発明において、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、 BIBF1120
(W001/27081)、 ZK304709 (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 46, (Abstract 5842) , 2005. )、 Exel7647 (E0RTC- NCI-AACR Symp Mol Targets Cancer Ther. , (Abstract 134) , 2004· )、 AMG706 (E0RTC- NCI- AACR Symp Mol Targets Cancer Ther. , 2， (Abstract 151)， 2004. ) および GW- 654652
(Blood.， 103, 3474-3479, 2004.、 Proceedings of the American Association for Cancer Research, 44, 9， (Abstract 39) , 2003.、 Proceedings of the American Association for Cancer Research, 44， 9， (Abstract 40) , 2003. ) などを挙げ ることができる。 BIBF1120、 ZK304709、 Exel7647、 AMG706および GW- 654652は、 公知の方法で製造することができる
(C) 抗 VEGFレセプター抗体
本発明において、 VEGF阻害物質は、 例えば、 抗 VEGFレセプター抗体を挙げるこ とができる。 抗 VEGF レセプター抗体は、 VEGF レセプターまたはその部分断片と 親和性を有する抗体である。 抗 VEGF レセプター抗体は、 VEGF レセプターを認識 し結合することで、 VEGFの活性、 例えば、 血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和 抗体であることが好ましい。 抗 VEGFレセプター抗体の作製は、 後述の抗 VEGF抗 体の製造方法と同様にして作製することができる。抗 VEGFレセプター抗体は、 ポ リクローナル抗体でも、 モノクローナル抗体であってもよい。 また、 当該抗体の アイソタイプは特に限定されない。 また、 抗 VEGFレセプター抗体は、 抗体の断片 または一本鎖抗体であってもよい （後述の抗 VEGF抗体の記載を参照）。
抗 VEGFレセプター抗体は、好ましくは 2C3 antibody (US6524583, US6676941)、 IMC- 1121b (US6811779) , IMC-18F1 (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 45, 694， (Abstract 3005) , 2004· )、 IMG-1C11 (US5747651) , IMC-2C6 (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 44, 1479, (Abstract 6454) , 2003. ) などを挙げることができる。 2C3 antibody、 IMC- 1121b、 IMC-18F1、 IMC- 1C11、 IMC-2C6は、公知の方法で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
(D) その他の VEGF阻害物質
本発明において、 VEGF阻害物質は、例えば、 PI88、AVE-0005 (Proc. Am. Soc. Cl in.
Oncology, (Abstract 776) , 2003. )、 EG-3306 (Biochem Biophys Res Commun. , 302,
793-799, 2003· )、 RPI- 4610 (Angiozyme (登録商標）、 US5180818、 US6346398)、 2— ( 8—ハイ ドロキシ一 6—メ トキシ一 1—ォキソー 1 H— 2—ベンゾピラン一
3—ィル） プロピオニック アシッド （以下、 「NM- 3」 ともいう。 W097/48693)、
5— [N_メチル _N— （4—ォクタデシルォキシフエニル） ァセチル]アミノー 2
―メチルチオべンゾイツク アシッド （以下、 「VGA- 1155」 ともいう。 Anticancer Research. , 24, 3009-3017, 2004. ) (式 (LII) 参照）、
Figure imgf000053_0001
VEGF trap ( The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 86(7), 3377-3386, 2001. )、 pegaptanib sodium (Macugen (登録商標）） などを挙げるこ とができる。 PI88、 AVE_0005、 EG-3306、 RPI- 4610、 NM- 3、 VGA- 1155およ.び VEGF trap は、 公知の方法で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献に記載された方 法で製造することができる。 また、 pegaptanib sodium は、 フアイザ一社から Macugenを購入することによって、 入手することができる。 (E) FGF レセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、 FGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、
( 1 ) 1— [2—ァミノ一 6— (3, 5—ジメ トキシフエニル） 一ピリ ド （2, 3 - d) ピリ ミジン— 7—ィル] — 3— tert—ブチルゥレア （以下、 「PD166866」 ともレ、う。 Journal of Medicinal Chemistry. , 40, 2296-2303， 1997) (式 (XXXVII) 参照）、
Figure imgf000053_0002
(2) 1—tert—ブチルー 3— [ 2 - (4—ジェチルァミノ） ブチルァミノ— 6 - (3, 5—ジメ トキシフエ二ル） 一ピリ ド （2， 3— d) ピリ ミジン _ 7—ィ ノレ]ゥレア（以下、「PD173074」ともレ、う。 EMB0J.， 17, 5896-5904, 1998、 US5733913) (式 （XXXVIII) 参照）、 (XXXVIII)
Figure imgf000054_0001
(3) (S) ― ((R) — 1— (4— (4一フルオロー 2—メチルー 1H—インドール — 5—ィルォキシ） 一5—メチルピロ口 [1， 2— f ] [l， 2， 4] トリアジン 一 6 _ィルォキシ） プロ ノ ン一 2—オール） 2—ア ミ ノ プロ ノ、。ノエー ト (BMS-582664) (式 （XXXII) 参照）、
(4) 4— [4— [N— （4一二トロフエニル） 力ルバモイル] — 1—ピペラジニ ノレ] — 6， 7—ジメ トキシキナゾリ ン （以下、 「CT - 052923」 ともレ、う。 W098/14437)
(式 （XXXIX) 参照）、
Figure imgf000054_0002
(XXXIX) (5) 4一アミノー 5—フルオロー 3— (6— (4—メチル一ピペラジン一 1— ィル） 一 1 H—ベンズイ ミダゾール _ 2—ィル） _ 1 H—キノ リ ン一 2—オン (CHIR258) (式 (XXIII) 参照）、
(6) 2— ((2 - ((4一 （4一 （4— ( t e r t—ブチル） ァニリノ） フエノ キシ） _ 6—メ トキシー 7—キノ リル） ォキシ） ェチル） ァミノ） 一 1ーェタノ ール (KI-23057) (式 (XXXVI) 参照）、
(7) (Z) — 3— [(2， 4—ジメチルー 5— （2—ォキソ一 1, 2—ジヒ ドロイ ンド一ノレ一 3—イリデンメチル） 一 1 H—ピロール一 3—ィル） 一プロピオニッ ク アシッド （SU6668) (式 （VIII) 参照） などを挙げることができる。
PD166866、 PD173074, BMS- 582664、 CT- 052923、 CHIR258, Π - 23057および SU6668 は、 公知の方法で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献に記載された方 法で製造することができる。
(F) 抗 FGF レセプター抗体
本発明において、 FGF阻害物質は、 例えば、 抗 FGF レセプター抗体を挙げるこ とができる。 抗 FGF レセプター抗体は、 FGF レセプターまたはその部分断片と親 和性を有する抗体である。 抗 FGF レセプタ一抗体は、 FGF レセプターを認識し結 合することで、 FGF の活性、 例えば、 血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体 であることが好ましい。抗 FGF レセプター抗体の作製は、後述の抗 VEGF抗体の製 造方法と同様にして作製することができる。 抗 FGF レセプター抗体は、 ポリクロ ーナル抗体でも、 モノクローナル抗体であってもよい。 また、 当該抗体のァイソ タイプは特に限定されない。 また、 抗 FGFレセプター抗体は、 抗体の断片または 一本鎖抗体であってもよい （後述の抗 VEGF抗体の記載を参照）。
(G) PDGFレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、 PDGF阻害物質は、 例えば、 PDGF レセプターキナーゼ阻害物質 を挙げることができる。 PDGF レセプタ一キナーゼ阻害物質は、 例えば、
( 1 ) 4— ( 4—メチルビペラジン一 1 _ィルメチル） 一N— [ 4—メチル _ 3— [ 4— ( 3—ピリジル） ピリ ミジン一 2—ィルァミノ] フエニル] ベンゼンアミ ド （以下、 「ィマチニブ」 ともいう。） （式 （XL) 参照）、
Figure imgf000055_0001
(XL)
( 2 ) 6 - [ 2 - (メチルカルバモイル） フエニルスルファ二ノレ] 一 3— E— [ 2 — (ピリジン _ 2—ィル） ェテニル] インダゾール （AG013736) (式 （XVI)参照）、 (3) 1— { 2- [5- (2—メ トキシ一エトキシ） 一ベンゾイミダゾール一 1 一ィル] 一キノ リ ン- 8—ィル } —ピペリ ジン一 4一ィルァミ ン （以下、 「CP- 673451」 ともいう W02001/040217, Cancer Research. , 65， 957 - 966， 2005. ) (式 (XLI) 参照）、
Figure imgf000056_0001
(XLI)
(4) 4— [4— [N- (4一-トロフエ二ノレ） 力ルバモイノレ] 一 1ーピぺラジュ ル] - 6 , 7—ジメ トキシキナゾリン （CT- 052923) (式 (XXXIX) 参照）、
(5) 4—アミノー 5—フルォロ一 3— （6— （4—メチル一ピペラジン一 1— ィノレ） 一 1 H—ベンズイ ミダゾールー 2—ィノレ） 一 1 H—キノ リ ン一 2—オン
(CHIR258) (式 （XXIII) 参照）、
( 6 ) (4一 tert—ブチルフエニル） { 4— [( 6 , 7—ジメ トキシ一 4—キノ リノレ） ォキシ] フエ二ル} メタンオン （以下、 「KI-6896」 ともいう。 Bioorganic and
Medicinal Chemistry Letters., 7, 2935-2940， 1997. ) (式 (XLIII) 参照）、
Figure imgf000056_0002
(XLIII)
(7) 5—メチノレー N— [4 - (トリフノレオロメチル） フエニル] 一 4_イソキサ ゾールカルボキサミ ド （以下、 「leflunomide」 ともいう。） （式 （XLIV) 参照）、
Figure imgf000056_0003
(XLIV) (8) trans - 4 - [(6, 7—ジメ トキシキノキサリン一 2—ィル） ァミノ] シ クロへキサノール （以下、 「RPR- 127963EJ ともいう。） （式 （XLV) 参照）、
Figure imgf000057_0001
(9) (Z) — 3— [( 2 , 4—ジメチル一 5— (2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロイ ンドーノレ一 3—イ リデンメチル） 一 1 H—ピロ一ルー 3 _ィル） 一プロピオニッ ク アシッ ド （SU6668) (式 （VIII) 参照）、
( 1 0) 5— （ 5—フルォロ一 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロインドール一 3— イ リデンメチノレ） - 2 , 4—ジメチノレ一 1 H—ピロ一ノレ一 3 _カルボキシリック アシッ ド （2—ジェチルアミノエチル） アミ ド （SU11248) (式 （IX) 参照）、 ( 1 1 ) 1— (4—クロロア二リノ） 一4— (4—ピリジルメチル） フタラジン (PTK787/ZK222584) (式 (XIII) 参照）、
( 1 2 ) N- [4— (3—ァミノ一 1 H—ィンダゾール一 4一ィル） フエニル] - N' - ( 2—フノレオロー 5—メチルフ； ϋニル） ゥレア （ΑΒΤ- 86.9) (式 （XXIX) 参照） などを挙げることができる。
イマチニブ、 AG013736、CP- 673451、CT-052923、CHIR258、KI_6896、 leflunomide, RPR-127963E、 SU6668、 SU11248、 PTK787/ZK222584および ABT- 869は、 公知の方 法で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献に記載ざれた方法で製造する ことができる。
また、 イマチニブは、 ノバルテイス社からダリベック （登録商標） を購入する ことによって、 入手することができる。
(H) 抗 PDGF レセプター抗体
本発明において、 PDGF阻害物質は、 例えば、 抗 PDGF レセプター抗体を挙げる ことができる。 抗 PDGF レセプター抗体は、 PDGF レセプターまたはその部分断片 と親和性を有する抗体である。 抗 PDGF レセプター抗体は、 PDGF レセプタ一を認 識し結合することで、 PDGFの活性、 例えば、 血管内皮細胞増殖活性を阻害する中 和抗体であることが好ましい。 抗 PDGF レセプター抗体の作製は、 後述の抗 VEGF 抗体の製造方法と同様にして作製することができる。 抗 PDGFレセプター抗体は、 ポリクローナル抗体でも、 モノクローナル抗体であってもよい。 また、 当該抗体 のアイソタイプは特に限定されない。 また、 抗 PDGFレセプター抗体は、 抗体の断 片または一本鎖抗体であってもよい （後述の抗 VEGF抗体の記載を参照）。
(I) EGFレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、 EGF阻害物質は、 例えば、 EGFレセプターキナーゼ阻害物質を 挙げることができる。 EGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、 ゲフイチ二 ブおよびその誘導体を挙げることができる。 ゲフイチニブとは、 4一 （3—クロ 口 一 4—フノレオロフェニルァミノ） 一 7—メ トキシ一 6— ( 3— ( 4—モルホリ ノ） プロボキシ—キナゾリン） をいい、 その構造式を以下の式 （XLVI) に示す。
Figure imgf000058_0001
また、 ゲフイチニブの誘導体とは、 国際公開第 9 6 / 3 3 9 8 0号パンフレツ ト （W096/33980) に記載されている化合物を挙げることができる。
ゲフイチニブおよびその誘導体は、 公知の方法で製造でき、 例えば、 国際公開 第 9 6 / 3 3 9 8 0号パンフレツ ト （W096/33980)、 特許第 3 0 4 0 4 8 6号 (JP3040486) および米国特許第 5 7 7 0 5 9 9号明細書 （US5770599) のいずれ かに記載された方法によつて製造することができる。
また、 ゲフイチニブは、 ァストラゼネカ社から Iressa (登録商標） を購入する ことによって、 入手することができる。
本発明において、 EGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、 エル口チニブ およびその誘導体を挙げることができる。 エル口チニブとは、 4一 （3—ェチニ ルフエニルァミノ） 一 6 ， 7—ビス （2—メ トキシェトキシ） 一キナゾリンをい い、 その構造式を以下の式 （XLVII) に示す。
Figure imgf000059_0001
(XLVII) また、 エル口チニブの誘導体とは、 国際公開第 9 6Z3 0 34 7号パンフレツ ト （W096/30347) に記載されている化合物を挙げることができる。
エル口チ-ブおよびその誘導体は、 公知の方法で製造でき、 例えば、 国際公開 第 9 6 Z3 0 3 4 7号パンフレツ ト （W096/30347)、 特許第 3 0 8 8 0 1 8号 (JP3088018) および特許 3 4 2 0 54 9号 （JP3420549) のいずれかに記載され た方法によって製造することができる。
また、 エノレロチニブは、 ジエネンテック社 （Genentech社） から Tarceva (登録 商標） を購入することによって、 入手することができる。
また、 本発明において、 EGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、
( 1) N— [3—クロ口一 4— [ (3—フルォロベンジル） ォキシ]フエニル] - 6 - [ 5 -[[[ 2 - (メチルスルホニル） ェチル]ァミノ]メチル]フラン一 2—ィル]キ ナゾリン一 4 _アミン
(N-[3-chloro-4-[ (3-f luorobenzyl) oxy]phenyl]- 6 - [5 - [ [ [2- (methylsu丄 fonyl) e thyl]amino]methyl」furan- 2_yl]quinazolin- 4- amineリ (以！ ^、 「lapatinib」 とも いう。 国際公開第 9 9 Z 3 5 1 4 6号パンフレッ ト （W099/35146)、 Cancer Research. , 64， 6652—6659· 2004. ) (式 (XLVIII) 参照）、
Figure imgf000059_0002
(XLVII I)
( 2)N— [4— [N—（ 3—クロ口一 4—フルオロフェニル）ァミノ]— 7— [3 _ (4 —モルホリニル） プロポキシ]キナゾリン一 6—ィル]アク リルアミ ド (N_ [4- [N- (3 - chloro- 4- f luorophenyl) amino] - 7 - [3_ (4-morphol inyl) propoxy] qu inazolin-6-yl] acrylamide) (以下、 「canertinib」 ともレヽつ。 Clinical Cancer Research. , 10:691-700， 2004. 、 W02000/31048) (式 （XLIX) 参照）、
Figure imgf000060_0001
(3) ( 2E) — N— [4— [ (3—クロロー 4—フルオロフェニル） ァミノ]— 3— シァノ一 7—エトキシ一 6—キノ リ二ル]— 4 - (ジメチルァミノ） 一 2—ブテン アミ ド
(2E)— N— [4_[ (3_ch丄 oro— 4—:r luorophenyl) amino」_3_cyano_7_ethoxy_6_quinol in yl]-4- (dimethylamino)-2-butenamide ) (以 卜 、 「 pelitinib」 と も レヽ つ 。 W02003/50090) (式 （L) 参照）
Figure imgf000060_0002
(L)
(4) [6— [4— [(4—ェチルビペラジン一 1一ィル） メチル] フエニル] 一 7H—ピロ口 [2， 3 - d] ピリ ミジン一 4 fル] ― ((R) — 1—フエニルェ チル） ァミン （AEE-788) (式 （XXV) 参照）、
(5) (E) 一 N— {4— [3—クロ口一4— ( 2—ピリジニルメ トキシ） ァニリ ノ]— 3—シァノ一 7—ェトキシー 6—キノ リ二ル} — 4— (ジメチルァミノ） 一 2—ブテンァミ ド
( (E) - N- {4- -chloro- 4- (2-pyridinylmethoxy) anilino] - 3- cyano - 7_ethoxy- 6- q uinolinyl}-4-(dimethylamino)-2-butenamide) (以下、「H1Q_272」ともレヽぅ Cancer Research. , 64， 3958-3965, 2004. 、 Journal of Medicinal Chemistry. , 48, 1107-1131， 2005. ) (式 (LI) 参照）、
Figure imgf000061_0001
などを挙げることができる。
本発明において、 EGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 4一 （3—ェチニルフ ェニルァミノ） 一 6， 7 _ビス （2—メ トキシェトキシ） 一キナゾリン （エル口 チニブ：上記式（XLVII) )であることが好ましい。
lapatinib, canertinib, pel itinib, AEE- 788および HIQ - 272は、 公知の方法 で製造することができ、 例えば、 それぞれの文献に記載された方法で製造するこ とができる。
また、 本発明において、 EGF レセプターキナーゼ阻害物質は、 例えば、 ARRY-334543 (Am. Assoc. Cancer Research, A3399, 2005. )、 MP-412 (Am. Assoc. Cancer Research, A3394, 2005.、 Am. Assoc. Cancer Research, A3405, 2005. ) などを挙げることができる。 ARRY-334543、 MP-412 は、 公知の方法で製造するこ とができる。
(J) 抗 EGF レセプター抗体
本発明において、 EGF阻害物質は、 例えば、 抗 EGF レセプター抗体を挙げるこ とができる。 抗 EGF レセプター抗体は、 EGF レセプターまたはその部分断片と親 和性を有する抗体である。 抗 EGF レセプター抗体は、 EGF レセプターを認識し結 合することで、 EGF の活性、 例えば、 血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体 であることが好ましい。抗 EGF レセプタ一抗体の作製は、後述の抗 VEGF抗体の製 造方法と同様にして作製することができる。 抗 EGFレセプター抗体は、 ポリクロ ーナル抗体でも、 モノクローナル抗体であってもよい。 また、 当該抗体のァイソ タイプは特に限定されない。 また、 抗 EGF レセプター抗体は、 抗体の断片または 一本鎖抗体であってもよい （後述の抗 VEGF抗体の記載を参照）。
本発明において、 抗 EGF レセプター抗体は、 好ま しく はセツキシマブ (cetuximab) を挙げることができる。
セツキシマブは、 特開 2002-114710 号公報 （JP2004-114710) または特開平 2- 291295号公報 （JP2-291295) に記載の方法により入手することができる。 また、 セツキシマブは、 Merck社から Erb itux (登録商標） を購入することによ つて、 入手することができる。
また、 本発明において、 抗 EGF レセプター抗体は、 nimotuzumabを挙げること ができる。 nimotuzumab は、 欧州特許第 2 0 3 1 2 6号明細書 （EP203126) また は米国特許第 5 8 9 1 9 9 6号明細書（US5891996) に記載の方法により入手する ことができる。
また、本発明において、抗 EGFレセプタ一抗体は、 pani tumumab (CAS 339177-26-3、 Cl inical Colorectal Cancer. 2005； 5 (1) : 21-3. )、 matuzumab (CAS 339186-68- 4、 Curr Opin Mol Ther. 2004； 6 (1) : 96-103. ) JMC-11F8 (Am. Assoc. Cancer Research, A5353, 2005. )、 MDX-447 (ASC0 18： 433， 1999) などを挙げることができる。
(K) 血管新生阻害物質の塩および溶媒和物
本発明において、 血管新生阻害物質は、 酸または塩基と薬理学的に許容される 塩を形成する場合もある。 本発明における上記血管新生阻害物質は、 これらの薬 理学的に許容される塩をも包含する。 酸との塩としては、 例えば、 塩酸塩、 臭化 水素酸塩、硫酸塩、 リン酸塩などの無機酸塩およびギ酸、酢酸、 乳酸、 コハク酸、 フマル酸、 マレイン酸、 クェン酸、 酒石酸、 ステアリン酸、 安息香酸、 メタンス ノレホン酸、 ベンゼンスルホン酸、 ρ—トノレエンスルホン酸、 トリフルォロ酢酸な どの有機酸塩などを挙げることができる。 また、 塩基との塩としては、 ナトリウ ム塩、 カリウム塩などのアルカリ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩などの アルカリ土類金属塩、 トリメチルァミン、 トリェチルァミン、 ピリジン、 ピコリ ン、ジシクロへキシノレアミン、 N， N ' -ジベンジノレエチレンジァミン、ァノレギニン、 リジンなどの有機塩基塩、 アンモニゥム塩などを挙げることができる。
また、 本発明において、 血管新生阻害物質は、 これら化合物の溶媒和物および 光学異性体が存在する場合には、それらの溶媒和物および光学異性体が含まれる。 溶媒和物は、 例えば、 水和物、 非水和物などを挙げることができ、 好ましぐは水 和物を挙げることができる。 溶媒は、 例えば、 水、 アルコール （例えば、 メタノ ール、 エタノール、 n -プロパノール）、 ジメチルホルムアミ ドなどを挙げることが できる。
さらに、 本発明において、 血管新生阻害物質は、 結晶でも無結晶でもよく、 ま た、 結晶多形が存在する場合には、 それらのいずれかの結晶形の単一物であって も混合物であってもよい。
また、本発明において、血管新生阻害物質は、 生体内で酸化、還元、加水分解、 抱合などの代謝を受ける血管新生阻害物質をも包含する。また、本発明において、 血管新生阻害物質は、 生体内で酸化、 還元、 加水分解などの代謝を受けて血管新 生阻害物質を生成する化合物をも包含する。
(L) 抗 VEGF抗体、 抗 FGF抗体、 抗 PDGF抗体、 抗 EGF抗体
本発明において、 抗 VEGF抗体は、 VEGFまたはその部分断片と親和性を有する 抗体である。 抗 VEGF抗体は、 VEGFを認識し結合することで、 VEGFの血管内皮細 胞增殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。 本発明において、 抗 VEGF 抗体は、 例えば、 ポリクローナル抗体、 モノクローナル抗体、 キメラ抗体、 一本 鎖抗体（scFV) (Huston et la. (1988) Proc. Natl . Acad. Sc i. USA 85： 5879-83 ; The Pharmacology of Monoclonal Antibody, vol. 113， Rosenburg and Moore ed.， Springer Verlag (1994) pp. 269-315) 、 ヒ ト化抗体、多特異性抗体 (LeDoussal et al. (1992) Int. J. Cancer Suppl . 7： 58-62 ; Paulus (1985) Behring Inst. Mitt. 78 : 118-32； Mi l lstein and Cuel lo (1983) Nature 305： 537-9 ; Zimraermann (1986)
Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 105： 176 - 260 ; Van Di jk et al. (1989) Int.
J. Cancer 43 : 944-9)、 ヒ ト抗体、 および Fab、 Fab '、 F (ab ' ) 2、 Fc、 Fvなどの 抗体断片などがあげられ、好ましくはモノクローナル抗体があげられる。さらに、 抗 VEGF抗体は、 必要に応じ、 ポリエチレングリコール (PEG)等により修飾されて いてもよレ、。 その他、 抗 VEGF抗体は、 ；3 -ガラク トシダーゼ、 MBP、 GST、 GFP等 との融合タンパク質として製造されることができ、 ELISA 法などにおいて二次抗 体を用いずに検出できるようにしてもよレ、。 また、 抗 VEGF抗体は、 ビォチン等に より抗体を標識することによりアビジン、 ストレプトアビジン等を用いて抗体の 回収を行い得るように改変されていてもよい。 抗 VEGF抗体は、 VEGFまたはその部分断片、 もしくはそれらを発現する細胞を 感作抗原と して常法に従い製造することができる （「Current Protocols in Molecular BiologyJ (John Wi ley & Sons (1987) Section 11· 4-11. 13) )。 この場 合、 VEGFまたはその部分断片は、 Fc領域、 GST、 MBP、 GFP、 APなどとの融合タン パク質であってもよい。
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は、 当業者に周知の方法で作製 すること力 5きる (Antibodies： A Laboratory Manual, E. Harlow and D. Lane, ed. , Cold Spring Harbor Laboratory (Cold Spring Harbor, NY, 1988) )。 ポリクローナル抗体は、 例えば、 抗原をマウス、 ゥサギ、 ラッ トなどの哺乳動 物に投与し、 該哺乳動物から血液を採取し、 採取した血液から抗体を分離、 精製 することにより得ることができる。 免疫感作の方法は当業者に公知であり、 例え ば抗原を 1回以上投与することにより行うことができる。 また、 抗原 （VEGFまた はその部分断片） は、 適当な緩衝液、 例えば、 完全フロイントアジュバントまた は水酸化アルミニウム等の通常用いられるアジュバントを含有する適当な緩衝液 に溶解して用いることができるが、 投与経路や条件等に応じてアジュバントを使 用しない場合もある。
最後の免疫感作から 1〜 2ヶ月後に当該哺乳動物から血液を採取して、 該血液 を、 例えば、 遠心分離、 硫酸アンモニゥムまたはポリエチレングリコールを用い た沈澱、 各種クロマトグラフィー等の常法によって分離、 精製することにより、 ポリクローナル抗血清として、 ポリクローナル抗体を得ることができる。
モノクローナル抗体を産生する方法としては、 ハイブリ ドーマ法を挙げること ができる。 ハイブリ ドーマ法は、 まず、 ポリクローナル抗体の産生と同様に哺乳 動物を免疫感作する。 免疫後、適当な日数を経過した後に部分採血を行い、 ELISA 法などの公知方法で抗体価を測定することが好ましい。
次いで、 感作の終了した免疫動物から脾臓を摘出し、 B細胞を得る。 次いで、 B 細胞を常法に従いミエローマ細胞と融合させて抗体産生ハイプリ ドーマを作製す ることができる。 用いられるミエローマ細胞は特に限定されず、 公知のものを使 用できる。細胞の融合方法は、センダイウィルス法、ポリエチレンダリコール法、 プロ トプラス ト法等、 当該分野で公知の方法を任意に選択して用いることができ る。 得られたハイブリ ドーマは、 常法に従い、 HAT 培地 （ヒポキサンチン、 アミ ノプテリン、 およびチミジン含有培地） 中で適当な期間培養し、 ハイプリ ドーマ の選択を行うことができる。 次いで、 目的とする抗体産生ハイブリ ドーマのスク リーニングを行った後、当該ハイブリ ドーマのクローニングを行うことができる。 スクリーニング法としては、 ELISA 法やラジオィムノアッセィ法などの公知の 抗体検出方法を用いることができ、 また、 クローニング法としては、 当該分野で 公知の方法を用いることができ、例えば、限界希釈法および FACS法等を用いるこ とができる。 得られたハイプリ ドーマは、 適当な培養液中で培養するか、 あるい はハイブリ ドーマと適合性のある、例えばマウス腹腔内に投与することができる。 こうして得られる培養液中または腹水中から、 塩析、 イオン交換クロマトグラフ ィー、 ゲル濾過、 ァフィ二ティークロマトグラフィー等により、 所望のモノクロ —ナル抗体を単離精製することができる。
本発明において、 抗 VEGF抗体は、 好ましくはべバシズマブ （Bevacizumab) を 挙げることができる。 べバシズマブは、 ヒ ト抗 VEGFモノクローナル抗体であり、 Genentech社から Avastin (登録商標） として販売されているものである。
べバシズマブは、 Genentech社から Avastinを購入することによって、 入手す ることができる。
本発明において、 抗 FGF抗体は、 FGFまたはその部分断片と親和性を有する抗 体である。 抗 FGF抗体は、 FGFを認識し結合することで、 FGFの血管内皮細胞増殖 活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗 FGF抗体の作製は、前記抗 VEGF 抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
本発明において、 抗 PDGF抗体は、 PDGFまたはその部分断片と親和性を有する 抗体である。 抗 PDGF抗体は、 PDGFを認識し結合することで、 PDGFの血管内皮細 胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗 PDGF抗体の作製は、前 記抗 VEGF抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
本発明において、 抗 EGF抗体は、 EGFまたはその部分断片と親和性を有する抗 体である。 抗 EGF抗体は、 EGFを認識し結合することで、 EGFの血管内皮細胞増殖 活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗 EGF抗体の作製は、前記抗 VEGF 抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
4 . キッ ト
本発明は、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法において使用するた めの、 抗 c - SMA抗体、 抗デスミン抗体、 抗コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4抗体、抗カルポニン抗体、抗カルデスモン抗体および抗 PDGFレセプタ"抗体か らなる群から選択される少なくとも一つを含む、 キッ トを提供する。 抗体は、 好 ましくは抗ひ- SMA抗体である。 抗体は、 前記抗 VEGF抗体の製造方法と同様にし て作製することができる。 キットに含まれる抗体は、 腫瘍中の周皮細胞で覆われ た血管数の測定に用いることができる。 本発明のキッ トは、 上記抗体に加えて、 一般の測定において慣用的な成分を含んでいてもよい。
また、 本発明は、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法において使用 するための、 ひ- SMA遺伝子、 デスミン遺伝子、 コンドロイチン硫酸プロテオダリ カン 4遺伝子、力ルポニン遺伝子、カルデスモン遺伝子および PDGFレセプター遺 伝子からなる群から選択される少なく とも つの遺伝子の転写産物である RNAの 少なく とも一部に相補的なポリヌクレオチドを含む、 キットを提供する。 遺伝子 は、 好ましくはデスミン遺伝子である。 当該キットの構成成分となるポリヌクレ ォチドは、 例えば、 in situ ハイブリダィゼーシヨン、 ノーザンブロット解析、 DNAマイクロアレイ、 RT_PCR、 定量的 RT-PCRなどに使用されるプライマーおよび
Zまた^;プローブでめり、 列え f3、 Primer Expression (Perkin— Elmer Applied Biosystems) を用いて設計することができる。 所望のポリヌクレオチドは、 公知 の方法により作製することができる。 キッ トに含まれるポリヌクレオチドは、 腫 瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の測定に用いることができる。 本発明のキット は、 上記ポリヌクレオチドに加えて、 一般の測定において慣用的な成分を含んで いてもよレヽ。
上記遺伝子の塩基配列は、 各種データベースに登録されており、 例えば、 以下 の GenBankァクセッション番号により塩基配列情報を入手することができる。 ct - SMA遺伝子： NM—001613
デスミン遺伝子： ΝΜ_001927
コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4遺伝子： ΝΜ— 001897
力ルポニン遺伝子： ΝΜ— 001299
カルデスモン遺伝子： ΝΜ_033138
PDGF レセプタ一遺伝子： ΝΜ— 002609
RNAの少なく とも一部とは、塩基配列として少なく とも 15塩基、好ましくは 15 〜50塩基、 より好ましくは 20〜35塩基、 さらに好ましくは 20〜30塩基の配列を 有するものであり、 配列の長さは当業者が適宜設定することができる。
さらに、 本発明のキットは、 血管内皮細胞に特異的に発現するタンパク質に対 する抗体および Ζまたは血管内皮細胞に特異的に発現する遺伝子の転写産物であ る RNAの少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドを含んでいてもよい。 これ らの抗体およびポリヌクレオチドは、 腫瘍中の血管数 （周皮細胞で覆われた血管 数および周皮細胞で覆われてレ、ない血管数の合計）の測定に用いることができる。 血管内細胞に特異的に発現するタンパク質; よび/または遺伝子は、例えば、 CD31、 wVF、 CD34、 CD105、 CXCR4、 CD146、 CD133、 KDR (VEGF2型受容体） および KITな どがあげられる。 以下に、 具体的な例をもって本発明を示すが、 本発明はこれに限られるもので はない。 実施例 1 ： ヒ ト癌細胞株皮下移植モデル （in vivo) における血管新生阻害物質の 抗腫瘍効果
ヒ ト癌細胞株 A375 (大日本製薬より購入）、 SEKI、 HMV-1 (以上、 独立法人医薬 基盤研究所 JCRB cel l bank より購入）、 FEM (The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstadより譲渡）、 LOX (Anticancerより購入）、 AZ-521 (財団法人ヒューマンサイエンス振興財団より購入）、 MDA- MB-468、DLD- 1、HCT116、 SW620、 PC- 3、 DU145、 AsPC- 1、 H526、 MDA- MB- 231、 SK- Mel- 2、 Lovo、 A431 (以上、 ATCC より購入） を 5°/。炭酸ガスインキュベーター内において RPMI1640 (10% FBS 含） で約 80%コンフルレントとなるまで培養した。 培養後、 常法に従いトリプシ ンー EDTA により、 各細胞を回収した。 各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、 I X 108cel ls/mLまたは 5 X 107 cel ls/mL懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を 0. 1 mLずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、腫瘍体積が約 100-200mm3にな つた時点から、 4— ( 3—クロロー 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） 了 ミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド （100 mg/kg、 1 日 2回、 1週間、 経口投与） の投与を開始した。 なお、 4— ( 3—クロ口一4— (シクロプロピルアミノカルボ-ル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6— キノリンカルボキサミ ド （メタンスルホン酸塩） は、 国際公開第 0 2 / 3 2 8 7 2号パンフレッ ト （W002/32872) および国際公開第 2 0 0 5 Z 0 6 3 7 1 3号パ ンフレツト （W02005/063713) の記載に基づいて製造した。 腫瘍長径および短径を デジマチックキヤリパ （Mitsutoyo) で測定し、 以下の式で腫瘍体積および Δ Τ/C を算出した。
腫瘍体積 （TV) =腫瘍長径 （mm) X腫瘍短径 2 (mm2) /2
△ T/C= (化合物投与群の day8の腫瘍体積一化合物投与群の daylの腫瘍体積）
/ (対照群の day8の腫瘍体積一対照群の daylの腫瘍体積） X 100 式中、 daylは、 投与開始日を示し、 day8は、 投与開始日から 8 日目を示す。
4— ( 3—クロ口一 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキ シ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ドの抗腫瘍効果の強さにより、 各癌細胞株をそれぞれ縮小株、 休止株、 増殖株に分類した。 なお、 分類は、 Δ T/C<-30%の癌細胞株を縮小株、 -30%く Δ Τ/(Χ10%の癌細胞株を休止株、 10%く Δ Τ/C の癌細胞株を増殖株とした。 実施例 2 ： ヒ ト癌細胞株皮下移植モデルの腫瘍組織切片の作製および染色方法な らびに血管新生阻害物質の抗腫瘍効果と血管数に対する周皮細胞で覆 われた血管数の比率との相関
ヒ ト癌細胞株 Α375 (大日本製薬より購入）、 SEKI、 HMV-1 (以上、 独立法人医薬 基盤研究所 JCRB cel l bank より購入）、 FEM (The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstadより譲渡）、 L0X (Anticancerより購入）、 AZ- 521 (財団法人ヒユーマンサイエンス振興財団より購入）、 MDA- MB- 468、DLD- 1、HCT116、 SW620、 PC-3、 DU145、 AsPC- 1、 H526、 MDA- MB- 231、 SK- Mel_2、 Lovo、 A431 (以上、 ATCC より購入） を 5%炭酸ガスインキュベーター内において RPMI 1640 (10% FBS 含） で約 80%コンフルレントとなるまで培養した。 培養後、 常法に従いトリプシ ンー EDTA により、 各細胞を回収した。 各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、 I X 108cel ls/mLまたは 5 X 107 cel ls/mL懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を 0. 1 mLずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、.腫瘍体積が約 100-200mm3にな つた時点で、 マウスを C02にて致死せしめ、 移植ヒ ト腫瘍を外科手術により摘出 した。 腫瘍組織の周辺部より約 5 mm内側をナイフで切断し、 当該腫瘍組織を OCT コンパウンドで包埋した。 その後、 ドライアイスで凍結し、 - 80°Cにて凍結組織を 作製した。 当該腫瘍組織について、 厚さ 8 μ πιの切片を作製し、 スライ ドガラスに 貼り付けた後、 流水洗浄を行い、 冷ァセ トン中に 4°Cで 10 分間静置した。 0. l%Tween20含有 0. 01Mリン酸緩衝液（以下、洗浄用 PBS)で 3回洗浄を行い、 DAK0 ピオチンブロッキングキットのアビジンブロッキング溶液にて室温で 10 分間反 応させた。 洗浄用 PBSで 3回洗浄後、 DAK0ビォチンブロッキングキットのビォチ ンブロッキング溶液にて室温で 10分間反応させた。 さらに同様に洗浄後、 VECTOR STAIN ABC ペルォキシダーゼ ラット IgGキッ ト内の正常血清にて室温で 20分間 反応させた。溶液を除去後、 1%ゥシ胎児血清含有 0. 1Mリン酸緩衝液にて 600倍希 釈した 1次抗体である抗 CD31抗体（クローン名： MEC13. 3、ラット IgG、PharMingen, BD Biosciences) を 4°Cでー晚反応させた。 洗浄後、 VECTOR STAIN ABC ペルォキ シダ一ゼ ラッ ト IgGキット内のピオチン標識した 2次抗体を室温で 30分間反応 させ、 同様に洗浄を行った後、 VECTOR STAIN ABC ペルォキシダーゼ ラット IgG キット内のアビジン試薬（試薬 Aと Bの混合液）でさらに室温で 30分間反応させた。 0. 01Mリン酸緩衝液にて 3回洗浄後、 DABにて発色させ、 CD31の染色を行った。 次に、 サンプルを流水にて水洗後、 トリスバッファ一にてさらに 3回洗浄を行 つた。 トリスバッファ一にて 100倍希釈したアル力リフォスファターゼ標識抗 α - SMA抗体 （クローン名 ： 1Α4、 マウス IgG、 SIGMA-ALDRICH) を室温、 1時間反応 させた。 トリスバッファ一にて 3回洗浄後、 DAKO LSABキッ ト内のフクシン溶液 (溶液 3および 4をそれぞれ 2滴ずつ混合した後、 1分間撹拌後、 溶液 5で 2 mL にボリュームアップした溶液） にて発色させ、 α -SMAの染色を行った。
染色サンプルを顕微鏡観察下、 CCDカメラ HYPER SCOPE (KEYENCE)にて血管数お よびペリサイ トで覆われた血管数を 1サンプルあたり大よそ 5ケ所測定し、 その 平均を単位面積辺りの血管数またはペリサイ トで覆われた血管数として換算した。 また、 その血管全体に占めるペリサイ トで覆われた血管の割合をそれぞれの癌細 胞株で算出し、 4— ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） ァ ミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6 _キノリンカルボキサミ ドの抗腫瘍効果と の比較を行った。 Dunnett型多重比較検定にて統計解析を行った。
これらの結果から、 4— ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボ二 ノレ） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ドの抗腫瘍 効果は、 腫瘍組織中における周皮細胞で覆われた血管 ¾ [と関連することが明らか になった （表 1および図 1 )。 よって、 腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定 し、 周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより、 患者に血管新生阻害物 質を投与することなく、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測することが可能と なった。 そのため、 本発明に係る方法は、 患者に血管新生阻害物質を投与するこ となく、 より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択することができ、 患者の Q0Lに 貢献することが可能となった。 表 1
Figure imgf000071_0001
表 1は、 4— ( 3—クロ口一 4一 （シクロプロピルアミノカルボニル） ァミノ フエノキシ） _ 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ドのヒ ト癌細胞株移植 マウスモデルにおける抗腫瘍効果、 分類および周皮細胞で覆われた血管の割合 (%) を示す。 実施例 3 ： ヒ ト癌細胞株皮下移植モデル （in vivo) における血管新生阻害物質の 抗腫瘍効果
ヒ ト癌細胞株 AsPC- 1、 H526 (いずれも ATCCより購入） を 5%炭酸ガスインキュ ベータ一内において RPMI 1640 (10% FBS含） で約 80%コンフルレントとなるまで 培養した。 培養後、 常法に従いトリプシン一 EDTAにより.、 各細胞を回収した。 各 細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、 5 X 107 cel ls/mL懸濁液を調製した。 そして、 細胞 懸濁液を 0. 1 mL ずつヌードマウス体側皮下に移植した。 移植後、 腫瘍体積が約 50 - 200議 3になった時点から、 5— （ 5—フルオロー 2—ォキソ _ 1 , 2 _ジヒ ド 口インドール一 3—イ リデンメチル） 一 2， 4 _ジメチノレ _ 1 H—ピロール一 3 —力ノレボキシリ ック アシッ ド （ 2—ジェチルアミノエチル） アミ ド（100mg/kg、 1 日 1回、 1 週間、 経口投与） の投与を開始した。 なお、 5— （ 5—フルオロー 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロインドール一 3—イ リデンメチル） 一 2， 4—ジ メチル一 1 H—ピロール一 3—カルボキシリ ック アシッ ド （2—ジェチノレアミ ノエチル） アミ ドは、 国際公開第 0 1 Z.0 6 0 8 1 4号パンフ レツ ト
(W001/060814) の記載に基づいて製造した。腫瘍長径および短径をデジマチック キヤリバ （Mitsutoyo) で測定し、 以下の式で腫瘍体積、 比腫瘍体積を算出した。 腫瘍体積 （TV) =腫瘍長径 （mm) X腫瘍短径 2 (mm2) /2 .
比腫瘍体積 （RTV) =測定日の腫瘍体積 Z投与開始日の腫瘍体積
その結果、 （5 _ ( 5—フルオロー 2—ォキソー 1 , 2—ジヒ ドロインドール一
3—イ リデンメチル） 一 2， 4—ジメチル一 1 H—ピロール一 3—カルボキシリ ック アシッ ド （2—ジェチルアミノエチル） アミ ド） （化合物 2 ) 投与群では、
4 - ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピノレアミノカノレボニノレ） アミノフエノキシ） _ 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ド （化合物 1 ) 投与群と同様に、 腫 瘍の増殖が、 実施例 1で休止株に分類された AsPC- 1では休止し、 また、 増殖株に 分類された H526では遅延した （図 2 )。 すなわち、 化合物 2では、 化合物 1 と同 様の抗腫瘍効果の程度を示すことが示された。 したがって、 化合物 1のみならず 他の血管新生阻害物質においても周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 抗腫 瘍効果を予測できることが明らかとなった （図 2 )。 よって、 腫瘍中の周皮細胞で 覆われた血管数を測定し、 周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより、 患者に血管新生阻害物質を投与することなく、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を 予測することが可能となった。 そのため、 本発明に係る方法は、 患者に血管新生 阻害物質を投与することなく、 より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択すること ができ、 患者の Q0Lに貢献することが可能となった。
実施例 4 ： ヒ ト癌細胞株皮下移植モデルにおける血管新生阻害物質の抗腫瘍効果 と周皮細胞で覆われた血管数の比率との闋連 （定量的 RT- PCR) 1 . ヒ ト癌細胞株皮下移植モデルにおける腫瘍組織中の全 RNAの精製
ヒ ト癌細胞株 MDA - MB - 468、 DLD- 1、 HCT116、 SW620、 PC- 3、 DU145、 AsPC - 1、 H526、 MDA- MB- 231、 MDA-MB- 435、 SK- OV- 3、 Lovo、 7860、 22Rv (以上、 ATCC より購入）、 HMV-1 (独立法人医薬基盤研究所 JCRB cell bankより購入）、 Colo320DM, A549、 A375 (大日本製薬より購入）、 FEM (The Norwegian Radiumhospital Research Foundation. Dr. Fodstad より譲渡）、 LOX (Anticancer より購入） を 5%炭酸ガス インキュベーター内において RPMI1640 (10%FBS含） で約 80%コンフルレントと なるまで培養した。 培養後、 常法に従いトリプシン一 EDTAにより、 各細胞を回収 した。 各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、 IX 108cells/mL または 5 X 107 cells/mL 懸濁液を調製した。 そして、 細胞懸濁液を 0.1 mLずつヌードマウス体側皮下に移 植した。 移植後、 腫瘍体積が約 100-200mm3になった時点で、 マウスを C02にて致 死せしめ、 移植ヒ ト腫瘍を外科手術により摘出した。 腫瘍組織を 2つに分け、 重 量を測定し、 一方の腫瘍について、 腫瘍重量 50mgに対して TRIZ0L試薬 （インビ トロジヱン社製） 1 mL を添加し、 腫瘍組織をホモジナイズし、 - 20°Cにて保存し た。
次に、 TRIZ0L試薬 1 mLに対して 0.2 mLの割合でクロ口ホルム （純正化学社よ り購入） を添加した。 この溶液を 15秒間激しく振盪、 攪拌し、 室温で 2〜 3分間 放置後遠心を行った （12,000Xg、 10 分間、 4°C)。 遠心後水層を新しいチューブ に移し、 使用した TRIZ0L試薬 1 mLに対して 0.2 mLの割合でィソプロピルアルコ ール （和光純薬社より購入） を加え、 室温で 10分間放置後遠心を行った （12,000 Xg、 10分間、 4°C)。 得られた沈殿を 75%エタノール （和光純薬社より購入） に て洗浄した後風乾した。 このようにして得られた全 RNAを以降の測定に供した。
2. RNAの定量
定量的 RT-PCR は、 遺伝子特異的プローブ （TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS- ON- DEMAND), アプライ ドバイオシステムズ社より購入） および ABI Prism 7900 Sequence Detection System (Perkin - Elmer Applied Biosystems 社より購入） を用いて、 以下のように行った。
操作は、 逆転写反応および PCR反応の 2段階で行った。 最初の段階である逆転 写反応は、 得られた lOOng/juLの RNA 3/ Lに dNTP 6 μ 、 oligo d(T) 16プライマ 一 1.5 し、 RNase Inhibitor 0.6 μ L Multiscribe Reverse Transcriptase 0.75 μ L, 25mM MgCl2 6.6 μΐ (Perkin- Elmer Applied Biosystems社より購入） およ び DEPCwater6 しを加え、 25°Cにて 10分間保温後、 48°Cにて 30分間加熱する ことにより行った。反応液を 95°C 5分間加熱することにより反応を停止させ、 PCR 用 cDNA液を得た。
得られた cDNAを第 2段階の PCR反応に供した。 PCR反応は、 DEPC waterで 5 倍希釈した PCR用 c腿液 5 //し、 TaqMan Universal PCR Master Mix 6.25 μΙ、 200 nM TaqMan Gene Expression Assaysプローブ 0.625 μΙ、 H20 0.625 μ lの 反応系で行った。 反応条件は、 50°C 2分間および 95°C 10分間の反応を行い、 次 いで、 95 °C 20秒間、 55°C 20秒間、 72°C 30秒間を 40サイクル行った。 プロ一 ブおよびプライマーは、 デスミン測定用には TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS- ON- DEMAND, Mm00802455— sl、 アプライ ドバイオシステムズ社よ り貝萬入).を用レヽ、 3—act in根 IJ定用 ίこ ίま TaqMan Gene Expression Assays mixture (ASSAYS-ON-DEMAND, Mm00607939_sl、 アプライ ドバイオシステムズ社より購入） を用いた。
3. データ解析方法
各遺伝子の定量解析を行なうため、 検量線の作成は、 SK- 0V-3の mRNAサンプル を用いて行なった。 各癌細胞株での遺伝子発現量は、 検量線から Ct (threshold cycle 値の略であり、 PCR産物がある一定の濃度に達するのに必要な PCRのサイ クル数である） を算出した。 各癌細胞株におけるデスミンの発現量を -actin発 現量で補正した値を各癌細胞株におけるデスミンの発現量比とし、 比較解析に用 いた。 各細胞株の分類は、 実施例 1にて行ったものを用いた。 なお、 縮小株およ び休止株をまとめた群を感受性株として分類した。
感受性株と増殖株との比較を permutation testにより行い、 Pく 0.05のものを 有意差ありと判断した。
その結果、 デスミンは、 感受性株 （2.5) に比べて増殖株 （5.6) において有意 に発現量が多いことが明らかとなった （図 3)。
Ί> 以上の結果から、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、 デスミンなどの周皮細胞 のマーカーの発現を指標として腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、 周 皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することが可能となつた。 産業上の利用可能性
本発明により、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法が提供された。 より詳細には、 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、 腫瘍中の周皮細胞で覆われ た血管数を測定し、 周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測する ことが可能となった。
本発明に係る方法は、 患者に血管新生阻害物質を投与することなく、 抗腫瘍効 果を予測することが可能となるため、 より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択す ることができ、 患者の Q0Lに貢献することが可能となった。

Claims

1 . 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
周皮細胞で覆われた血管数を指標として、 癌患者が血管新生阻害物質に対し て高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、 前記方法。
2 . 腫瘍中の血管数を測定する工程と、
請
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標 として、 癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断す る工程と、
囲
をさらに含む、 請求項 1に記載の方法。
3 . 血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の血管数および腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程 と、
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標 として、 当該癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判 断する工程と、
を含む、 前記方法。
4 . 腫瘍が癌患者から採取されたものである、 請求項 1〜3のいずれか一項に記 載の方法。
5 . 周皮細胞で覆われた血管数の測定が、 o: -SMA、 デスミン、 コンドロイチン硫 酸プロテオグリカン 4、 力ルポニン、 カルデスモンおよび PDGF レセプター からなる群から選択される少なく とも一つの発現を指標に行うものである、 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法。
6 . 周皮細胞で覆われた血管数の測定が、 ひ- SMAおよび またはデスミンの発現 を指標に行うものである、 請求項 1〜 3のいずれか一項に記載の方法。
7 .周皮細胞で覆われた血管数の測定が、免疫化学的方法により行うものである、 請求項 1〜 3のいずれか一項に記載の方法。
8. 周皮細胞で覆われた血管数の測定が、 in situ ハイブリダィゼーシヨンによ り行うものである、 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法。
9. 周皮細胞で覆われた血管数の測定が、 定量的 RT-PCRにより行うものである、 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法。
1 0. 腫瘍中の血管数の測定が、 CD31、 wVF、 CD34、 CD105、 CXCR4、 CD146、 CD133、 KDRおよび KITからなる群から選択される少なくとも一つの発現を指標に行 うものである、 請求項 2または 3に記載の方法。
1 1. 腫瘍中の血管数の測定が、 CD31の発現を指標に行うものである、 請求項 2 または 3に記載の方法。
1 2. 腫瘍中の血管数の測定が、 免疫化学的方法により行うものである、 請求項 2または 3に記載の方法。
1 3. 腫瘍中の血管数の測定が、 in situ ハイブリダィゼーシヨンにより行うも のである、 請求項 2または 3に記載の方法。
14. 腫瘍中の血管数の測定が、 定量的 RT- PCRにより行うものである、 請求項 2 または 3に記載の方法。
1 5. 血管新生阻害物質が、 VEGFレセプターキナーゼ阻害物質である、 請求項 1 〜 14のいずれか一項に記載の方法。
1 6. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
—般式 （ I )
R4
(I)
0
[式 （ I ) 中、 Αは、 式
Figure imgf000077_0001
(式中、 R1は、 式一 V1— V2— V3 (式中、 V1は置換基を有していてもよい
C^eアルキレン基を意味する ； V2は、 単結合、 酸素原子、 硫黄原子、 カルボ ニル基、 スルフィニル基、 スルホニル基、 式一 CONR6—で表される基、 式 一 S 02NR6—で表される基、 式一 NR6 S 02—で表される基、 式 _NR6C 0_で表される基または式一 NR6—で表される基を意味する （式中、 R6は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C ^ 6アルキル基または置換基を有して いてもよい C3— 8シクロアルキル基を意味する。） ； V3は、 水素原子、 置換基を 有していてもよい Ci— 6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2— 6アルケ ニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していて もよい C 3 8シクロアルキル基、置換基を有していてもよい C 6 ^。ァリール基、 置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基または置換基を有して いてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味する。）で表される基を意味 する ；
R2は、 シァノ基、 置換基を有していてもよい C — 6アルコキシ基、 カルボキシ ル基、 置換基を有していてもよい C 2— 7アルコキシカルボニル基または式一C
ONVa l lVa 12 (式中、 Va l 1は、 水素原子、 置換基を有していてもよいじ 丄 — 6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2:i6アルケニル基、 置換基を有し ていてもよい C2— 6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロア ノレキル基、 置換基を有していてもよい Ce^。ァリール基、 置換基を有していて もよい 5〜1 0員へテロァリール基または置換基を有していてもよい 3〜1 0 員非芳香族へテロ環式基を意味する ； Va l 2は、 水素原子、 置換基を有してい てもよい Cト 6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニル基、置換基を有していてもよい C3 —8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい C6— 10ァリール基、 置換基 を有していてもよい 5〜1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 水酸基、 置換基を有していてもよい アルコキシ基または置換基を有していてもよい C3_8シクロアルコキシ基を意 味する。） で表される基を意味する ；
A1は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する ；
R11は、 水素原子、 置換基を有していてもよい アルキル基、 置換基を有 していてもよい C 2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C 2— 6アルキ ニル基、 置換基を有していてもよい C3-8シクロアルキル基、 置換基を有して いてもよいじ 。ァリール基、置換基を有レていてもよい 5〜 1 0員へテロァ リール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基または 置換基を有していてもよいモノー C — 6アルキルアミノ基を意味する ；
R12は、 水素原子または置換基を有していてもよいじい 6アルキル基を意味す る ；
Va l 3は、 酸素原子または硫黄原子を意味する ；
A11は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する ； R13は、 水素原子、 置換基を有していてもよい Ci— 6アルキル基または置換基 を有していてもよい C3_8シクロアルキル基を意味する ；
R14は、 式— va l 4— Va l 5 (式中、 Va l 4は、 単結合またはカルボ二ル基を 意味する ； Va l 5は、 水素原子、 水酸基、 置換基を有していてもよい 6ァ ルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有してい てもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキ ル基、 置換基を有していてもよい。6 ^。ァリール基、置換基を有していてもよ い 5〜1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜1 0員非芳香 族へテロ環式基、 アミノ基、置換基を有していてもよいモノ— アルキルァ ミノ基、 置換基を有していてもよいジー C^eアルキルアミノ基、 ホノレミル基、 力 ルボキシル基または置換基を有していてもよい C2_7アルコキシカルボ二ル基を 意味する。） で表される基を意味する。） で表される基を意味する ；
Xは、 酸素原子または硫黄原子を意味する ；
Yは、 式
Figure imgf000079_0001
(式中、 R3は、 水素原子、 置換基を有していてもよいじ アルキル基、 置換 基を有していてもよい C 2— 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C 2— 6 アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を 有していてもよい c2 7ァシル基または置換基を有していてもよい c2 7アル コキシカルボ-ル基を意味する ；
R7および R8は、 それぞれ独立して水素原子、 ハロゲン原子、 シァノ基、 ニト 口基、 アミノ基、 置換基を有していてもよい Ci-eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C3_8シク口アルキル基、 置換基を有していてもよい C 6アル コキシ基、 置換基を有していてもよい C ^ 6アルキルチオ基、 ホルミル基、 置 換基を有していてもよい C2_ 7ァシル基、 置換基を有していてもよい C 2_7ァ ルコキシカルボニル基または式一 CON vd 2 (式中、 vdlおよび vd2は、 それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよい C アルキル基 を意味する。） で表される基を意味する ；
R9は、 水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよい アルキ ル基を意味する ；
W1および W2は、 それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または 窒素原子を意味する。） で表される基を意味する ；
R4は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2_ 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C2 7ァシル基または置換基を有していてもよい C2_7アルコキシ力 ルボニル基を意味する ；
R5は、 水素原子、 置換基を有していてもよいじ アルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C 6— i。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリ ール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味す る]
で表される化合物、 もしくはその薬理学的に許容される塩、 またはそれらの溶 媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。
7. VEGFレセプタ一キナーゼ阻害物質が、
一般式 (Π)
Figure imgf000081_0001
[式 （II) 中、 R1は、 式一 V1— V2— V3 (式中、 V1は、 置換基を有してい てもよい アルキレン基を意味する； V2は、単結合、酸素原子、硫黄原子、 カルボ二ノレ基、 スノレフィニル基、 スルホ-ル基、 式一 CO NR 6—で表される 基、 式一 S02NR6—で表される基、 式一 NR6 S 02—で表される基、 式一 N R6CO—で表される基または式一 NR6_で表される基を意味する （式中、 R 6は、水素原子、置換基を有していてもよい C^eアルキル基または置換基を有 していてもよい C3_8シクロアルキル基を意味する。） ； V3は、 水素原子、 置換 基を有していてもよい アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6ァ ルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有して いてもよい C 3— 8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい C6 10ァリ一 ル基、 置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基または置換基を 有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味する。）で表される基 を意味する ；
R2は、 シァノ基、 置換基を有していてもよい C^eアルコキシ基、 カルボキシ ル基、 置換基を有していてもよい C2_7アルコキシカルボニル基または式一 C ONVa l lVa 12 (式中、 Va l 1は、 水素原子、 置換基を有していてもよい —6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有し ていてもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロア ルキル基、 置換基を有していてもよい C6 10ァリール基、置換基を有していて もよい 5〜1 0員へテロァリール基または置換基を有していてもよい 3〜1 0 員非芳香族へテロ環式基を意味する ； Va l 2は、 水素原子、 置換基を有してい てもよい C — 6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニル基、置換基を有していてもよい C 3
—8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい〇6-10ァリール基、 置換基 を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 水酸基、 置換基を有していてもよい C^ アルコキシ基または置換基を有していてもよい C3_8シクロアルコキシ基を意 味する。） で表される基を意味する ；
Y1は、 式
Figure imgf000082_0001
(式中、 R 7および R 8は、 それぞれ独立して水素原子、 ハロゲン原子、 シァノ 基、 ニトロ基、 アミノ基、 置換基を有していてもよい〇ぃ6アルキル基、 置換 基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、置換基を有していてもよい C j _6アルコキシ基、 置換基を有していてもよい アルキルチオ基、 ホルミル 基、 置換基を有していてもよい C2 7ァシル基、 置換基を有していてもよい C2 — 7アルコキシカルボニル基または式 _CONVd l Vd 2 (式中、 Vd lおよび Vd 2は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよい アルキ ル基を意味する。） で表される基を意味する ；
W1および W2は、 それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または 窒素原子を意味する。） で表される基を意味する ；
R3および R4は、 それぞれ独立して水素原子、 置換基を有していてもよい Cj _6アルキル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有し ていてもよい C2_6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C 3 8シクロア ルキル基、 置換基を有していてもよい C 2 7ァシル基または置換基を有してい てもよい C2 7アルコキシカルボ二ル基を意味する ；
R5は、 水素原子、 置換基を有していてもよい。 アルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2_ 6ァルケ-ル基、 置換基を有していてもよい C2_6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3 8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C 6— i。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜1 0員へテロァリ ール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味す る]
で表される化合物、 もしくはその薬理学的に許容される塩、 またはそれらの溶 媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。
1 8. R1が — 6アルキル基 （ただし、 R 1は C アルキル基を有していても よい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基、 水酸基、 C^eアルコキシ基、 ァミノ 基、モノー C^eアルキルアミノ基およびジー Ci-6アルキルアミノ基からなる群 から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい） である、 請求項 1 7 に記載の方法。
1 9. R1がメチル基または式
Figure imgf000083_0001
(式中、 Ra 3はメチル基を意味する ； Ra 1は水素原子または水酸基を意味す る ； Ra 2は、 メ トキシ基、 エトキシ基、 1一ピロリジニル基、 1—ピペリジニ ル基、 4—モルホリニル基、 ジメチルァミノ基またはジェチルァミノ基を意味 する。） のいずれかで表される基である、 請求項 1 7に記載の方法。
20. R 1がメチル基または 2—メ トキシェチル基である、 請求項 1 7に記載の 方法。
2 1. R 2がシァノ基または式— CON Va 11 Va 12 (式中、 Va l 1は、水素原子、 置換基を有していてもよいじ アルキル基、置換基を有していてもよい C2
_6ァルケ-ル基、 置換基を有していてもよい c2_6アルキニル基、 置換基を 有していてもよい〇3_8シクロアルキル基、 置換基を有していてもよい C6_ i。ァリール基、 置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基また は置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味す る ； Va l 2は、 水素原子、 置換基を有していてもよい アルキル基、 置 換基を有していてもよい C2_6アルケニル基、置換基を有していてもよい C2 _6アルキニル基、 置換基を有していてもよい C3— 8シクロアルキル基、 置換 基を有していてもよいじ 。ァリール基、置換基を有していてもよい 5〜 1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3〜 1 0員非芳香族へテ 口環式基、 水酸基、 置換基を有していてもよい C ^6アルコキシ基または置 換基を有していてもよい〇3_8シクロアルコキシ基を意味する。）で表される 基である、 請求項 1 7に記載の方法。
22. R2がシァノ基または式一CONHVa 16 (式中、 Va l 6は、 水素原子、 C アルキル基、 C3— 8シクロアルキル基、 C — 6アルコキシ基または C3_8 シクロアルコキシ基を意味する。 ただし、 Va l 6は、 ハロゲン原子、 シァノ 基、 水酸基および
Figure imgf000084_0001
アルコキシ基からなる群から選ばれる少なくとも一 つの置換基を有していてもよい。） で表される基である、請求項 1 7に記載の 方法。
23. R2が式— CONHVa 17 (式中、 Va l 7は、 水素原子、 C — 6アルキル基 または アルコキシ基を意味する。） で表される基である、 請求項 1 7に 記載の方法。
24. R2が式— CONHVa 18 (式中、 Va l 8は、 水素原子、 メチル基またはメ トキシ基を意味する。） で表される基である、 請求項 1 7に記載の方法。 25. Y1が式
Figure imgf000084_0002
(式中、 R71は、 水素原子またはハロゲン原子を意味する。） で表される基で ある、 請求項 1 7に記載の方法。
26. R3および R4が水素原子である、 請求項 1 7に記載の方法。
27. R5が水素原子、 じ アルキル基、 C3_8シクロアルキル基または
。ァリール基 （ただし、 R5は、 ハロゲン原子およびメタンスルホニル基から なる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい） である、 請 求項 1 7に記載の方法。
28. R5がメチル基、 ェチル基またはシクロプロピル基である、 請求項 1 7に 記載の方法。
2 9. VEGF レセプタ一キナーゼ阻害物質が、
N- (4— ( 6—シァノ一 7— （2—メ トキシェトキシ） 一 4—キノ リル） ォ キシ _ 2—フノレオロフェニル） 一 N， ― (4—フゾレオ口フエ二ノレ） ゥレア、
N— （2—クロ口一 4— (( 6—シァノー 7— ( ( 1—メチルー 4一ピぺリジル） メ トキシ） 一 4—キノ リル） ォキシ） フエニル） 一 N' —シクロプロピノレゥレア、
N— (4— ((6 _シァノ一 7— ((( 2 R) — 3— (ジェチルァミノ） 一 2—ヒ ドロキシプロピル） ォキシ） 一 4一キノ リル） ォキシ） フエニル） 一 N' ― (4 ーフノレ才ロフエ二ノレ） ゥレア、
N- (4 - (( 6—シァノ _ 7— ((( 2 R) — 2—ヒ ドロキシ一 3— ( 1 —ピロ リジノ） プロピル） ォキシ） 一4—キノ リノレ） ォキシ） フエニル） 一 N' - (4 —フノレ才ロフエ二ノレ） ゥレア、
4— ( 3—クロ口一4— (シクロプロピゾレアミノ力ノレボニ^/) ァミノフエノキ シ） 一 7—メ トキシー 6—キノリ ンカルボキサミ ド、
4 _ ( 3 _クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボュル） アミノフエノキ シ） — Ί — ( 2—メ トキシェトキシ） 一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—シクロプロピノレー 4— ( 3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、、
N 6 - ( 2—メ トキシェチル） 一4— ( 3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピル ァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカル ボキサミ ド、
N 6 - ( 2—フルォロェチル） 一 4— ( 3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピノレ ァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカル ボキサミ ド、
N 6—メ トキシ一 4一 （3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カノレボ ニル） ァミノ） フエノキシ） _ 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、 N 6—メチル一 4— ( 3—クロ口一 4一 （(：（シクロプロピルァミノ） カルボ二 ル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—ェチルー 4一 （3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボ二 ノレ） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—フルオロー 4 _ (シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノ キシ） 一 7— （2—メ トキシエトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） ァミノフエノキ シ） 一 7— ( 2—ヒ ドロキシエトキシ） _ 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
4一 （3—クロロー 4— (シクロプロピノレアミノカルボニル） ァミノフエノキ シ） — Ί一 ((2 S) - 2 , 3—ジヒ ドロキシプロピル） ォキシ一 6 _キノ リ ンカ ルボキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— (メチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 —メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4 _ ( 3 _クロ口一 4— (ェチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 —メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メ トキシ一 4— ( 3—クロロー 4一 （（（ェチルァミノ） カルボ二ノレ） ァ ミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— (シクロプロピルアミノカルボニル） アミノフエノキ シ） 一 7— ( 2—エトキシエトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4 - (4 - ((シクロプロピルァミノ） カルボニル） アミノフエノキシ） 一 7— ( 2—メ トキシェトキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N— ( 2—フノレオロー 4— (( 6—力ルバモイノレ一 7—メ トキシ一 4 _キノ リル） ォキシ） フエニル） 一 N' —シクロプロピノレゥレア、
N 6 - ( 2—ヒ ドロキシェチル） 一4— ( 3—クロ口一 4一 （（（シクロプロピ ノレアミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカ ルボキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— ( 1—プロピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシー 6—キノ リンカノレポキサミ ド、
4— ( 3—クロ口一 4— ( c i s — 2—フルォロ一シクロプロピルアミノカノレ ボ -ル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6 _メチル一4一 （3—クロロー 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボ二 ル） ァミノ） フエノキシ） 一 7 _ (2—メ トキシエトキシ） _ 6 _キノ リンカル ボキサミ ド、
N6—メチル一 4— (3—クロロー 4一 （（（ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） _ 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一 4— (シクロプロピ^/アミノカノレボニノレ） アミノフエノキ シ） _ 7 _ (2 _ (4—モルホリ ノ） ェトキシ） 一 6—キノ リ ンカルボキサミ ド、 4 - (3—クロ口一4— (2—フルォロェチルァミノカルボニル） ァミノフエ ノキシ） _ 7—メ トキシー 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N6— ((2 R) テ トラヒ ドロ一 2—フラニルメチル） 一 4— (3—クロ口一 4 - ( ((メチルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6— キノ リンカルボキサミ ド、
4 - (3—フルオロー 4— (ェチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボニル） ァミノ） フ エノキシ） 一 7— ((2 R) 一 2—ヒ ドロキシ一 3— ( 1—ピロリジノ） プロポキ シ） 一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
N6—メチル一 4_ (3—クロ口一4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— ((2 R) — 3—ジエヂルァミノ一 2—ヒ ドロキシプロボ キシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N6 _メチル_4ー （3—クロ口一 4— ((： (ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— ((2 R) — 3—ジェチルァミノ一 2—ヒ ドロキシプロボ キシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチルー 4— (3—クロロー 4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フ-ノキシ） 一 7— ((2 R) — 2—ヒ ドロキシー 3— ( 1 _ピロリジノ） プ ロポキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N6—メチル一 4— (3—クロ口一4— ( ((ェチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— ((2 R) 一 2—ヒ ドロキシ一 3— （1—ピロリジノ） プ ロポキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチル一4— (3—クロロー 4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— (( 1—メチル一 4—ピペリジル） メ トキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N 6—メチル一4一 （3—クロロー 4— ( ((ェチルァミノ） カルボ二ノレ） アミ ノ） フエノキシ） 一 7— ((1—メチル一 4—ピペリジル） メ トキシ） 一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
N- (4— (6—シァノ一 7— (2—メ トキシエトキシ） 一4一キノ リル） ォ キシ一 2—フノレオロフェニノレ） -Ν' —シクロプロピノレゥレア、
Ν— (4 - (6—シァノ一 7— (3— （4一モルホリノ） プロポキシ） 一4— キノリル） ォキシフエニル） 一N' — (3— （メチノレスノレホニノレ） フエ二ノレ） ゥ レア、
4— (4— ((シクロプロピルァミノ） カルボ-ル） アミノフエノキシ） 一 7— メ トキシ一 6 _キノ リンカルボキサミ ド、
4 - (3—フルオロー 4— ((2 _フルォロェチルァミノ） カルボニル） ァミノ フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6 _キノ リ ンカルボキサミ ド、
Ν 6 - (2—エトキシェチル） 一4— (3—クロ口一4— ( ((メチルァミノ） カルボニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノ リンカルボキサミ ド、
4 - (4 - (3—ェチルウレイ ド） 一 3—フノレオ口一フエノキシ） 一 7—メ ト キシキノ リン _ 6—カルボキシリ ック アシッ ド （2—シァノエチル） アミ ド および
Ν- (4一 (6 - (2—シァノエチル） 力ルバモイル一 7—メ トキシ一 4ーキ ノ リノレ） ォキシ一 2 _フルオロフェニノレ） -Ν' —シクロプロピルウレァ からなる群から選択される少なく とも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。 30. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、 4— (3—クロ口一 4一 （シクロプロピノレアミノカノレボニノレ） アミノフエノキ シ） 一 7—メ トキシー 6—キノリンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一 4— (ェチルァミノカルボニル） ァミノフエノキシ） ー 7 ーメ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ド、
N6—メ トキシ一 4— (3—クロ口一 4— ( ((シクロプロピルァミノ） カルボ ニル） ァミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリンカルボキサミ ド、
4— (3—クロ口一 4一 （メチルァミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7 ーメ トキシー 6 _キノリンカルボキサミ ド
および
N6—メ トキシ一 4— (3—クロ口一 4— ( ((ェチルァミノ） カルボニル） ァ ミノ） フエノキシ） 一 7—メ トキシ一6 _キノリンカルボキサミ ド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。 3 1. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、 4_ (3—クロ口一 4— (シクロプ 口ピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリ ンカルボキサミ ド、 もしくはその薬理学的に許容される塩、 またはそれらの 溶媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。
32. VEGF レセプターキナーゼ阻害物質が、 4_ (3—クロ口一 4一 （シクロプ 口ピルアミノカルボニル） アミノフエノキシ） 一 7—メ トキシ一 6—キノリ ンカルボキサミ ドのメタンスルホン酸塩である、 請求項 1 5に記載の方法。 33. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
一般式 （III)
Figure imgf000089_0001
[式 （III) 中、 R11は、 水素原子、 置換基を有していてもよい Ci-eアルキル 基、 置換基を有していてもよい C2-6アルケニル基、 置換基を有していてもよ い C 2 6アルキ-ル基、 置換基を有していてもよい C 3 8シク口アルキル基、 置換基を有していてもよい C 6 。ァリール基、置換基を有していてもよい 5 1 0員へテロァリール基、 置換基を有していてもよい 3 1 0員非芳香族へテ 口環式基または置換基を有していてもよいモノ一 C^eアルキルアミノ基を意 味する ；
R12は、 水素原子または置換基を有していてもよい C^eアルキル基を意味す る ；
va 13は、 酸素原子または硫黄原子を意味する ；
A11は、 置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する ； R4は、 水素原子、 置換基を有していてもよい C^eアルキル基、 置換基を有し ていてもよい C2_6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C 2 6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3_8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい C 2_7ァシル基または置換基を有していてもよい C2-7アルコキシ力 ルボニル基を意味する ；
R5は、 水素原子、 置換基を有していてもよいじ アルキル基、 置換基を有し ていてもよい C 2 6アルケニル基、 置換基を有していてもよい C 2_6アルキニ ル基、 置換基を有していてもよい C3 8シクロアルキル基、 置換基を有してい てもよい CS 。ァリール基、置換基を有していてもよい 5 1 0員へテロァリ ール基、 置換基を有していてもよい 3 1 0員非芳香族へテロ環式基を意味す る ；
R9は、 水素原子、 ハロゲン原子または置換基を有していてもよい アルキ ル基を意味する]
で表される化合物、 もしくはその薬理学的に許容される塩、 またはそれらの溶 媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。
34. R11が置換基を有していてもよい 3 1 0員非芳香族へテロ環式基または 置換基を有していてもよいモノ一 Ci-6アルキルアミノ基である、請求項 3 3 に記載の方法。
35. R 11が以下の置換基群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していて もよい式
Figure imgf000091_0001
で表される基からなる群から選ばれるいずれか 1の基である、 請求項 33に記 載の方法。
[置換基群]
水酸基、 — 6アルキル基、 C。― 8シクロアルキル基、 式
Figure imgf000091_0002
(式中、 R N 1および R N 2はそれぞれ独立して水素原子または置換基を有してい てもよい アルキル基を意味する。） で表される基
36. R 11が式
Figure imgf000091_0003
で表される基からなる群から選ばれるいずれか 1の基である、 請求項 33に記 載の方法。
3 7. R 12が水素原子である、 請求項 33に記載の方法。
38. Va 13が酸素原子である、 請求項 3 3に記載の方法。
39. A11が炭素原子である、 請求項 33に記載の方法。
40. R4が水素原子である、 請求項 3 3に記載の方法。
4 1. R5が アルキル基または C3— 8シクロアルキル基である、 請求項 33 に記載の方法。
42. R5がメチル基である、 請求項 33に記載の方法。
43. R9が水素原子である、 請求項 33に記載の方法。
44. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
5— （2— （（（4—ヒ ドロキシ一 4—メチルビペリジン一 1 _ィル） カルボ二 ル） ァミノ） ピリジン— 4一ィルォキシ） 一 1 H—インドール一 1—カルボン酸 メチルアミ ド、
N 1—メチル一5— (2— ((4—ヒ ドロキシピペリジノ） カルボニル） ァミノ —4—ピリジル） ォキシ一 1 H_ 1—インドールカルボキサミ ド、
N 1—メチル一 5— (2— （（（4— (ピロリジン一 1—ィル） ピぺリジン一 1 —ィル） カルボニル） ァミノ） ピリジン一 4—ィルォキシ） 一 1 H— 1 Tンド ールカルボキサミ ド、
N 1—メチル一 5— ( 2 - (((4— (ピペリジン一 1—イツレ） ピぺリジン一 1 fル） カルボニル） ァミノ） ピリジン一 4一ィルォキシ） 一 1 H— 1—インド ールカルボキサミ ド
および
N 4 - (4— (1— (メチルァミノ） カルボニル一 1 H— 5—インドリル） ォ キシ一 2—ピリジル） 一 4—モノレホリンカルボキサミ ド
からなる群から選択される少なく とも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。 45. VEGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
(1) N— (4—ブロモ一 2—フルオロフェニル） 一6—メ トキシ一 7— [2— ( 1 H- 1 , 2 , 3— トリァゾールー 1一ィル） エトキシ] キナゾリン一 4ーァ ミン
(2) N- (4一ブロモ一 2—フルオロフヱニル） 一 6—メ トキシ _ 7_ [( 1 - メチルビペリジン一 4一ィル） メ トキシ] キナゾリン _4—ァミン、 (3) 3 - [(2， 4一ジメチルビロール一 5 _ィル） メチレン] 一 2_インドリ ノン、
(4) (Z) — 3— [(2, 4—ジメチルー 5— (2—ォキソ一 1, 2—ジヒ ドロイ ンドール一 3 _イリデンメチノレ） 一 1 H—ピロ一ノレ一 3—ィル） 一プロピオニッ ク ァシッ ド、
(5) 5 - ( 5—フルォロ一 2—ォキソ一 1， 2—ジヒ ドロインドール一 3—ィ リデンメチル） 一 2, 4—ジメチノレー 1 H—ピロール一 3—カルボキシリ ック ァ シッ ド （2—ジェチルアミノエチル） アミ ド、
(6) N, N—ジメチルダリシン 3— { 5 , 6 , 7， 1 3—テ トラヒ ドロ一 9_ [( 1—メチルエトキシ） メチル ] _ 5—ォキソ一 1 2 H—インデノ （ 2, 1 -a) ピロ口 （3, 4 - c ) カノレバゾーノレ一 1 2—イノレ} プロピノレエステノレ、
(7) 3 - (4—ブロモ一 2, 6—ジフルォロ一ベンジルォキシ） 一 5— [ 3 - (4—ピロリジン一 1—ィル一ブチノレ） 一ウレイ ド] 一イソチアゾール一4—力 ルボキシリ ック アシッ ド アミ ド、
(8) N— {2—クロ口一 4— [(6, 7—ジメ トキシ一 4，キナゾリニル） ォキ シ] フエ二ノレ） 一 N' —プロピノレゥレア、
(9) 1— (4—クロロア二リノ） 一4— (4—ピリジルメチル） フタラジン、
(10) N— { 2—クロ口一 4— [(6， 7—ジメ トキシ一 4—キノ リル） ォキシ] フエ二ル} — N' - ( 5—メチル一 3 _イソキサゾリル） ゥレア、
(1 1) 4 - [(4—フルオロー 2—メチノレインドール一 5 _ィル） ォキシ] _6 —メ トキシ _ 7_ [3 - (ピロリジン一 1一ィル） プロポキシ] キナゾリン、
(1 2) 6 - [ 2 - (メチルカノレバモイノレ） フエニルスルファニル] - 3 - E - [2— （ピリジン一 2—ィル） ェテュル] インダゾール、
(1 3) 5— ((Z) - ( 5—フルォロ一 2—ォキソ一 1， 2—ジヒ ドロ一 3 H—ィ ンドール一 3—イ リデン） メチル） 一 N— (( 2S) — 2—ヒ ドロキシ一 3 _モルホ リン一 4—ィルプロピル） _ 2， 4ージメチル一 1 H—ピロ一ルー 3—カルボキサ ミ ド'、
(14) 3 - ((キノ リン一 4—ィルメチル） ァミノ） 一 N— (4— (トリフルォ ロメ トキシ） フエ-ル） チォフェン一 2—カルボキサミ ド、
(1 5) 6 - (2， 6—ジクロロフエニル） 一 8—メチル一 2—フエニルァミノ 一 8H—ピリ ド [2， 3— d]ピリ ミジン一 7 _オン、
(1 6) 2— ((1, 6—ジヒ ドロー 6—ォキソ一ピリジン一3—ィルメチル） ァ ミノ） 一 N— (3— （トリフルォロメチル） フエニル） 一 3—ピリジン一カルボキ サミ ド、
(1 7) 4— (4一 （4—クロ口一フエニルァミノ） ーフロ [2, 3 _d]ピリダ ジン _ 7—ィルォキシメチル） 一ピリジン一 2—カルボキシリ ック アシッ ド メチルアミ ド、
( 1 8) N— ( 3— トリフルォロメチノレ一 4—クロロフヱニル） 一 N' - (4 - (2 ーメチルカルバモイルビリジン一 4—ィル） ォキシフエニル） ゥレア、
(1 9) 4—ァミノ一 5—フルォロ一 3— (6— (4—メチルーピペラジン一 1 —ィル） 一 1 H—ベンズイ ミダゾールー 2—ィル） 一 1H—キノ リン一 2—オン、 (20) 4— (4— ( 1—ァミノ一 1 _メチル一ェチル） 一フエニル） 一 2— (4 - (2—モルホリン一 4—ィル一ェチル） 一フエニルァミノ.） 一ピリ ミジン一 5 一カルボ二 ト リノレ、
(2 1) [ 6 - [4 - [(4ーェチルビペラジン一 1—ィル） メチル] フエニル] 一 7H—ピロ口 [2, 3- d] ピリ ミジン一 4—ィル] ― ((R) — 1—フエニルェ チル） ァミン、
(22) 9— ( 1 _メチルエトキシ） メチル一 1 2— (3—ヒ ドロキシプロピ ノレ） 一 6H， 7H， 1 3H—イ ンデノ [2， 1— a] ピロ口 [3, 4 - c ] カルバゾー ノレ一 5—オン、
(23) N- (2, 4—ジフルオロフェニル） 一 N' — { 4— [ (6， 7—ジメ ト キシ一 4—キノ リル） 一ォキシ]— 2—フルオロフェニル } ゥレア、
(24) N- [4 - ( 3—ァミノ一 1 H—インダゾール一 4—ィル） フエニル]
— N' ― ( 2—フルオロー 5 _メチルフエニル） ゥレア、
(25) 2—メチノレ一 6— [ 2— （ 1—メチルー 1 H—ィ ミダゾール一 2—ィル） —チェノ [3, 2 - b ] ピリジン _ 7—ィルォキシ] —ベンゾ [b] チォフェン — 3—カルボキシリ ック アシッ ド メチルアミ ド、
(26) (R) — 1— (4— （4—フルォロ一 2—メチル一 1H—インドール一 5 一ィルォキシ） 一 5—メチルピロ口 [1， 2— f ] [l， 2, 4] トリアジン一 6 一ィルォキシ） プロパン一 2 _オール、
(2 7) (S) - ((R) - 1 - (4 - (4—フルォロ一 2—メチル一 1H—インド ール一 5—ィルォキシ） 一 5—メチルピロ口 [1 , 2— f ] [l， 2, 4] トリア ジン一 6—ィルォキシ） プロパン一 2—オール） 2—ァミノプロパノエート、
(28) 3 - [(4—モルホリン一 4—ィル一フエニルァミノ） 一メチレン] 一 1, 3—ジヒ ドロインドール一 2—オン、
(29) 5 - [[4 - [(2, 3—ジメチル一 2 H—インダゾール一 6—ィル） メ チルァミノ] ピリ ミジン一 2—ィル] ァミノ] — 2—メチルベンゼンスルホンァ ミ ド、、
(30) ( 3Z) —3— [6 - (2—モルホリン一 4—ィルエトキシ） キノ リン一 2 ( 1H) —イ リデン] — 1, 3—ジヒ ドロ一 2H—インドール一 2—オン および
(3 1) 2— ((2 _ ((4_ (4— (4— ( t e r t -ブチル） ァニリノ） フ エノキシ） 一 6—メ トキシ一 7—キノ リル） ォキシ） ェチル） ァミノ） 一 1—ェ タノ一ノレ
からなる群から選択される少なく とも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 1 5に記載の方法。
46. 血管新生阻害物質が、 抗 VEGFレセプター抗体である、 請求項 1〜 14のい ずれか一項に記載の方法。
47. 抗 VEGFレセプター抗体が、 2C3antibody、 IMC- 1121b、 IMC- 18F1、 IMC- 1C11 および IMC-2C6からなる群から選択される少なく とも一つの抗体である、 請 求項 46に記載の方法。
48. 血管新生阻害物質が、 抗 VEGF抗体である、 請求項 1〜14のいずれか一項 に記載の方法。
49. 抗 VEGF抗体が、 べバシズマブである、 請求項 48に記載の方法。
50.血管新生阻害物質が、 PI88、 AVE- 0005、 EG- 3306、 RPI- 4610、画- 3、 VGA - 1155、 VEGF trapおよび pegaptanib sodiumからなる群から選択される少なく とも 一つである、 請求項 1〜1 4のいずれか一項に記載の方法。
5 1. 血管新生阻害物質が、 FGFレセプタ一キナーゼ阻害物質、 PDGFレセプター キナーゼ阻害物質、 EGF レセプタ一キナーゼ阻害物質、 抗 FGF レセプター抗 体、 抗 PDGF レセプター抗体、 抗 EGF レセプター抗体、 抗 FGF抗体、 抗 PDGF 抗体および抗 EGF抗体からなる群から選択される少なく とも一つである、 請 求項 1〜 14のいずれか一項に記載の方法。
52. FGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
(1) 1 _ [2—ァミノ一 6— (3, 5—ジメ トキシフエニル） 一ピリ ド （2 , 3-d) ピリ ミジン一 7—ィル] — 3— tert—ブチルゥレア、
(2) 1— tert—ブチル _ 3— [2— (4—ジェチルァミノ） ブチルァミノ一 6 - (3， 5—ジメ トキシフエニル） 一ピリ ド （2, 3 - d) ピリ ミジン一 7—ィ ル]. ゥレア、
(3) (S) - ((R) - 1 - (4 - (4—フルォロ一 2—メチル一 1H—インドール — 5—ィルォキシ） 一5—メチルピロ口 [1， 2— f ] [l， 2, 4] トリアジン _6_ィルォキシ） プロパン一 2—オール） 2—ァミノプロパノエ一ト、
(4) 4— [4— [N— (4—ニトロフエニル） 力ルバモイル] — 1—ピペラジニ ル] — 6, 7—ジメ トキシキナゾリン、
(5) 4—ァミノ一 5—フルォロ一 3— (6— (4—メチル一ピペラジン一 1一 ィル） 一 1 H—ベンズイミダゾーノレ一 2—ィル） 一 1 H—キノ リン一 2—オン、
(6) 2 - ((2 - ((4一 （4— (4— ( t e r t—ブチル） ァニリノ） フエノ キシ） 一 6—メ トキシ一 7—キノ リル） ォキシ） ェチル） ァミノ） 一 1—ェタノ 一ノレ
および
(7) (Z) — 3— [(2, 4一ジメチルー 5— （2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロイ ンドール一 3—イリデンメチル） _ 1 H—ピロール一 3—ィル） 一プロピオニッ ク ァシッ ド からなる群から選択される少なく とも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に許 容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 5 1に記載の方法。
53. PDGF レセプターキナーゼ阻害物質が、 .
(1) 4- (4—メチルビペラジン一 1 _ィルメチル） -N- [4—メチノレー 3— [4— (3—ピリジル） ピリ ミジン一 2—ィルァミノ] フエニル] ベンゼンアミ ド'、
(2) 6 - [ 2 - (メチルカルバモイル） フエニルスルファニル] — 3— E— [ 2 ― (ピリジン一 2—ィル） ェテニル] インダゾール、
(3) 1— { 2 - [5— (2—メ トキシ一ェトキシ） 一ベンゾィミダゾール一 1 一ィル] —キノ リン一 8—ィル } ーピペリジン一 4—ィルァミン、
(4) 4— [4一 [N— (4—ニトロフエニル） 力ルバモイル] — 1—ピペラジ- ル] 一 6， 7—ジメ トキシキナゾリン、
(5) 4—ァミノ一 5—フルォロ一 3— (6— (4—メチノレ一ピぺラジン一 1— ィル） 一 1 H—ベンズイミダゾール _ 2—ィル） 一 1 H—キノ リン一 2—オン、 ( 6 ) (4— tert—プチルフエ二ル） { 4— [( 6， 7—ジメ トキシ一 4—キノ リノレ） ォキシ] フエ二ル} メタンオン、
(7) 5—メチル一 N— [4— （トリフルォロメチノレ） フエニル] —4—イソキサ ゾーノレカノレボキサミ ド、
(8) trans - 4 - [(6， 7—ジメ トキシキノキサリン一 2—ィル） ァミノ] シ クロへキサノーノレ、
(9) (Z) — 3— [(2， 4—ジメチル一 5― (2—ォキソ一 1， 2—ジヒ ドロイ ン ドーノレ一 3 _イ リデンメチノレ） _ 1 H—ピロ一ノレ一 3—ィノレ） 一プロピオニッ ク ァシッ ド、
(10) 5— （5—フルォロ一 2—ォキソ一 1 , 2—ジヒ ドロインドール一 3— イ リデンメチル） 一 2， 4—ジメチル _ 1 H—ピロール一 3—カルボキシリ ック アシッ ド （2—ジェチルアミノエチル） アミ ド、
(1 1) 1— (4—クロロア二リ ノ） 一4一 （4—ピリジルメチル） フタラジン および ( 1 2 ) N— [4— ( 3 _アミノ一 1 H—ィンダゾール一 4—ィル） フエニル] ― N' - ( 2 _フルオロー 5—メチノレフエ-ル） ゥレア
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 5 1に記載の方法。 54. EGFレセプターキナーゼ阻害物質が、
(1) 4一 （ 3 _クロ口 _ 4—フルオロフェニノレアミノ） 一 7—メ トキシー 6— ( 3 - (4—モルホリノ） プロボキシ一キナゾリン）、
(2) 4一 （ 3—ェチュルフエニノレアミノ） 一6， 7—ビス （2—メ トキシエ ト キシ） 一キナゾリン、
(3) N— [3—クロ口一4— [ (3—フルォロベンジル） ォキシ]フエニル]— 6—
[5 -[[[2 - (メチルスルホニル） ェチル]ァミノ]メチル]フラン一 2—ィル]キ ナゾリ ンー 4—アミン、
(4)N— [4— [N— ( 3—クロ口一 4—フルオロフェニル）ァミノ]一 7— [3— (4
—モルホリニル） プロポキシ]キナゾリンー 6—ィル]アタリルァミ ド、
(5) ( 2E) —N— [4— [ ( 3—クロ口 _ 4—フルオロフ： ニル） ァミノ]— 3— シァノー 7—エトキシ _ 6—キノ リニル]— 4— (ジメチルァミノ） 一 2—ブテン ァミ ド、
(6) [6— [4 - [(4—ェチルビペラジン一 1一ィル） メチル] フエニル] 一 7H—ピロ口 [2， 3 -d] ピリ ミジン一 4—ィル] ― ((R) — 1—フエ二ルェチ ル） ァミン、
および
(7) (E) -N- {4— [3—クロ口 _4_ (2—ピリジニルメ トキシ） ァニリノ] — 3—シァノ一 7—エトキシ一 6—キノ リエル） 一4— (ジメチルァミノ） 一 2 —ブテンアミ ド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、 もしくはその薬理学的に 許容される塩、 またはそれらの溶媒和物である、 請求項 5 1に記載の方法。 5 5. 抗 EGF レセプタ一抗体が、 セツキシマブ、 panitunmniab、 matuzumab、 nimotuzumab, IMC - 11F8および MDX- 447 からなる群から選択される少なくと も一つの抗体である、 請求項 5 1に記載の方法。
5 6 . 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキット であって、
抗ひ- SMA抗体、 抗デスミン抗体、 抗コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4 抗体、 抗カルポニン抗体、 抗カルデスモン抗体および抗 PDGF レセプター抗 体からなる群から選択される少なく とも一つを含む、 前記キッ ト。
5 7 . 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキット であって、
抗ひ- SMA抗体を含む、 前記キット。
5 8 . 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキッ ト であって、
ひ- SMA遺伝子、 デスミン遺伝子、 コンドロイチン硫酸プロテオダリカン 4遺 伝子、 力ルポ-ン遺伝子、 カルデスモン遺伝子および PDGF レセプタ一遺伝 子からなる群から選択される少なく とも一^ 3の遺伝子の転写産物である RNA の少なく とも一部に相補的な配列を含むポリヌクレオチドを含む、 前記キッ ト。
5 9 . 請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキッ ト であって、
デスミン遺伝子の転写産物である RNAの少なくとも一部に相補的な配列を含 むポリヌクレオチドを含む、 前記キット。
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