HU228979B1 - Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors - Google Patents

Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors Download PDF

Info

Publication number
HU228979B1
HU228979B1 HU0204433A HUP0204433A HU228979B1 HU 228979 B1 HU228979 B1 HU 228979B1 HU 0204433 A HU0204433 A HU 0204433A HU P0204433 A HUP0204433 A HU P0204433A HU 228979 B1 HU228979 B1 HU 228979B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
oxo
compound
acid
group
hydrogen
Prior art date
Application number
HU0204433A
Other languages
English (en)
Inventor
Peng Cho Tang
Todd Miller
Xiaoyuan Li
Li Sun
Chung Chen Wei
Shahrzad Shirazian
Congxin Liang
Tomas Vojkovsky
Asaad S Nematalla
Michael Hawley
Original Assignee
Sugen
Upjohn Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU228979(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sugen, Upjohn Co filed Critical Sugen
Publication of HUP0204433A2 publication Critical patent/HUP0204433A2/hu
Publication of HUP0204433A3 publication Critical patent/HUP0204433A3/hu
Publication of HU228979B1 publication Critical patent/HU228979B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Description

A találmány háttere
A jelen találmány tárgya}: bizonyos 3-pírrol-szubszihuálí 2- fodolínot! vegyületek képezik, amelyek tnőéosítják s. protein kinázok' (,,PK”l aktivitását. A jelen találmány szerimi vegyületek: ezért alkalmasak az abnormálís PK-akhvitással kapcsolatos rendellenességek kezelésére. Az ilyen vegyületeket .tartalmazó gyógyszvtkészitreéityeket, a betegségek kezelésére- szolgáló, ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészi'taifeyeket alkalmazó kezelési eljárásokat és az ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárásait színién ismertetjük
Á technika állása
Az alábbiakat csak háttér-információként közöljék, és nem tekintjük a jelen találmánnyal kapcsolatos technika állásának.
A PK-k olyan -enzimek, amelyek a fehérjék tirozin-·. széria- és treonis-maradékairs levő hidroxí--cs»portok foszforilezeséí katalizálják. Ennek a látszó Ing egyszerit aktivitásnak a kóvetkeznséayei megdöbbentőek; a ssjtfoiiődés, a differenciálódás és a -szaporodás, vagyis lényegében a sejt éleiének minden aspektusa valamilyen módon tag.e a PK-aktmíásíól, Továbbá, az abnormális PK-skíivhásrőí kmmt&dák, hogy számos rendelfenességhsz kapcsolódik,. az életet viszonylag nem fenyegető betegségektől, példáoi a pikkelysömörtől, & rendkívüli rossziaömaíü betegségekig, például a glioblastomáig (az agy rákos megbetegedése).
A PK-kat célszerű két osztályba sorobi; ezek a protein tirozin kinázok (PTK) és a szeria-treoain- kinézek iSTR-kh
A Ρ'ΓΚ-aktivifes egyék legfontosabb ele-ne a P'íK-k növekedési faktor receptorokkal -való kapcsolata. A növekedési faktor receptorok sejtíélületi fehérjék. Ha növekedési faktor öganátunhoz kapcsolódnak, a növekedési faktor receptorok: olyan aktív formává alakulnák át, amely kölcsönhatásba lép a sejtmembrán belső felületén levő fehérjékkel. £z a receptor és más fehérjék íirozin-roaradékaioak -foszforilezéséhez, valamint a sejt belsejében sokféle csíoplazmás jelzö-mofokttisval kialakított komplexek képződéséhez vezet, amelyek számos sejtválaszt befolyásolnak, például a sejtosztódást' (szaporodást), a seítdiffoíencláfodást, a sejtfejlödésí, -a mslabohkus hatások kifejezését a sejtes kívüli mikrokömyezeínek stb. A részletesebb tárgyalás megtalálható, Seídsssísger és Ullriels, Neuron, 9, 303-291 (1992) című cikkében, amelyet hivatkozásként idézünk minden ábrájával együtt, mintha teljes egészében ismertetnénk a leírásban,
A PTK-áktivMssal rendelkező növekedési faktor receptorokat receptor tirozinkinázokank (,,RTX’'j nevezik. Idetartozik a különböző biológiai aktivitással rendelkező transzmembrán receptorok nagy családja. .Eddig legalább tizenkilenc (19) különböző RTK-alcsalááot azonosítottak. Széknek sz alesaládoknak az egyikét „HliR” RTK-knak -nevezik; idetartozik: az EGFR. tepitehális növekedési faktor receptor, eplíhellai greuvth feotor receptor), H3SR2, H.ER3 és HER.4. Ezek az RTK-k exlracelluláris glikozilesstí ligsndumköíő ttomén*, teanszmembrán ttomén· és toü&eellaláris eítoplazmás ktítaiitikus domént tartalmaznak, amelyek foszforüezhstik a fehérjéken levő tirozin-maradékokat.
Egy másik RTR-alcsalád inzfoín-seaeptor: (ÍR), iazalínszerü növekedési faktor 1 receptort (losulin-líke grovüh fáctor I receptor, IGF-ÍR) és az inzulin receptorral kapcsolatos receptort (insulin receptor teleted receptor, 1RK) tartalmaz. Az IR és az 16R-1Rkölcsönhatásba lep az inzulinnal, IGF-l-gyel és IGF-íI-vel, .hogy
4 3 1.-104 5 SL
PCT/OSOL/G4S23 heterotetíamm alakítson ki kei teljesen exüaceslaláris ghkozilezeit«. alegységből és két 0 alegységből, .amelyek áthatolnak a sej:toembránon és amelyek a tirozin kmáz dómént tartalmazzak
Egy katjxisílik RTK-aícsalád neve vérletaezkéböl származó növekedést lakta receptor (platóét derived growtít íáefor receptor, „ΡΙΧΙΕΙΓ'Ι-csoport, idetartozik a PDGFRa. PXXJFRfl, CSFIR, c-kd és e-íiax. Ezek a receptorok glikoziiozeit exíraceibláris; döntéseket tartaknaznak,. amelyek változó számé Imtnuaglobmszertl hurkot és egy jatrace&dáns dotnént tartalmaznak.úgy, hogy a tirozin kiház domént ónálló amlnos&v-szekvenoták szakítják meg.
Egy másik csoport, amelyet a PDGFR alcsaláddal való hasonlósága miatt néha az utóbbi családba -sorolnak,. a magzati máj kinéz (fctus övét kinase, „fík) receptor alcsalád. Ez a -csoport feltehetően tartalmazza a kővetkezőket: kinéz inzert domén-teeeptor magzati máj kíuáz-1 (kinase insert domain-receptor fetai Ever -kinase-1, KDR/ELK-Í, VE-GF-R2),.fik-ÍR, flk-4és fitxs-szerö tirozin kmáz 1 (fíus-üke tyrosine kinase 1,
A drozís kűtáz növekedés: faktor receptor család egy további tagja a fíbrefelast növekedési faktor (Rbreblssí growth fastor, „FGE”) receptor alcsoport. Ez a csoport négy -receptort FGFR1 -4, és hét kgandümok FGFI-7 tartalmaz. Bár még nincsenek jói meghatározva, ágy tűnik, hogy a receptorok tartalmaznak egy gükozilezeít sxtacelküárss domént, amely változó számú ImmuaglobinszerÖ horkol és egy mttaceMátis domént tartalmaz, amelybes a íirosb kináz szekvenciát önálló ammosav-sorozatok tartományai szakipák meg.
A drezsa kmáz növekedési lakta receptor család fentiektől különböző tagja az érrendszeri endotóiális növekedési faktor {vascularendeúhelial erov-tn fector, „VEGF”) receptor alcsoport A VEGE dimer glikoproteirí, amely hasonlít a PDGF-hez, de kőlönbösó biológiai funkciókkal és targeí-sejí specifikusával rendelkezik m vivő. Jelenleg ágy gondolják, hogy a VEGE fontos szerepei játszik az érképsödésben (vaszkulegenezis és aogsogenezis).
Az ismert.RTK-alcsaládokrészletesebb libájának forrása: Piowraan és munkatársai, ÖN&P, 7(6), 334339 (1994), amelyet hivatkozásként idézőnk miden ábrájával együtt, mútdsa teljes egészében ismertetnénk a leírásban.
Az RTK-ksa kívül létezik egy teljeses intracellsláris PTK család, amelyet „rsem-receptor tirozin kinázoknak” vagy .„eellulárís tirozin kinázotesak” (cdlslsr tyrosme kiaases) neveznek. Ez utóbbi, „dX’-vnl rövidített ölne vésést használjuk a leírásban. A CTK-R -nem tartalmaznak extracellaltós és traaszmembráa doméaeket. Eddig több mint 24 CTK-t azonosítónak 11 stósaiádban (Src, Frk, Sík, Csk, Abi. Zap?9, Fos, Fps, Pák, Jak és AekL Eddig az Sre alcssiád tűnik a CTK-k legnagyobb csoportjának, idetartozik az Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek,
B&, Bek, Fgr és Yrk. Á CTR-kal részletesebben tárgyalja a következő forrás: Solers, Oncogene, §, 2825-2931 (: 993), amelyet hivatkozásként idézünk mindéit ábrájával együtt, mintha teljes egészében ismerteíöénk a iefeásban.
A szerin/íreoniö tönázok,- sz STK-k, a CTK-khoz hasonlóan elsősorban inírsoeiinlánsak, bár van néhány STK. típusú receptor kmáz is. Az STK-k a leggyakoribb citoszolos tarázok, vagyis olya» kinázok, amelyek működésűket & cxicpfaaásafc a eitoplazraás orgarsellákiol és a cttószkeletontól eltért! részében fejtik ki, A cítoszol az a. tartomány a sejten belül, ahol & sejt közbenső meteboíifets. és bioszintetikus- aktivitásának jelentős része zajlik, például a fehérjék a címszóiban sziaíetizálódnak. a Aoszóraákon.
Ás RTK-k, CTK-k és STK-k számos pategén állapotban szerepel játszanak, például elsősorban a rákban. a PTK-kal kapcsolatos más- patogé» állapotokhoz tartozik például, de ttsm korlátozódva a következőkre, a pikÜ7481--1Ö4S SL
ECT/ÜSŰ1/04813 kelysömör, a jsájcirrézts, a cukorbetegség, sz angksgenezis, a lestenosfe, a szembetegségek,. a remaafeid -ssthritis és más gyulladásos rendellenességek, az immunológiai' rmmeliesességsk, például az autoünntea betegség, a szívós érrendszeri 'betegségek,. például az érelmeszesedés és számos vese-rendslienesség.
A rák. esetében két fő elméletet fejlesztettek ki, amelyek a mmorieHódési elősegítő fokozott .sejtszaporodás magyarázatára szolgálnak, olyan fcmfccáökkat kapcsolatban, amelyeket ismereteink szerint a PR-k szabályoznak. Felvetették ugyanis, hogy a resszsnáulatö sejtszapörodás mmak a mechanizmusnak a meghibásodásából ered, amely a sejtosztódási és/vagy differenciálódást szabályozza. Kimutatták, hogy számos jsoto-oakogé» fehérjetermékei szerepeinek azokban a jelátadási útvoealakh^t,. amelyek -szabályozzák a sejtnövekedést es diífereúeiálódúst. A proto-oetkogének ezen fehérjetermékei közé tartoznak az exttaceüuiáris- növekedési fekíörak, a transzmembrájx növekedési faktor PTK receptorok (RTK), & citoplszmás PTK-k (CTK) és a éitoszolos STK-k, amelyeket a fentiekben ismertettünk.
A. PK-val kapcsolatos sejt-aktivitások. és a sokféle humán rendellenesség közötti kapcsolat fényébe·! nem meglepő, hogy nagy erőfeszítéseket tesznek a PK-tevékeaység módosítási lehetőségeinek kidolgozására. Ezek egy része bfomim^kus eljárási alkalmaz nagy molekulákkal, amelyekhez sz aktuális sfet&lyamatokfean résztvevő molekulák szolgáltatják a mintát, például suatáns ligandumok (4,966,849 számú amerikai egyesült államekhsli szabadalmi leírás); oldódó receptorok és antitestek [Wö 94/10202 számú szabadalmi leírás, Kendall és Thomas, Proe. Naí'l Acad Sci., 96,10705-90 (1994), Kim és -munkatársai; Natúré, 362, 841-844 (1993)); RNSligamnxnek [Jetinek és munkatársai, Sioshemístty, 33, 10450-56; Taksno és munkatársai, Mól. Bio, Cell, 4, 358Á (1993); Kírtselia és munkatársai, Exp. Cell Rés.,, 199, 56-62 (1992); Wright és munkatársai, J, Cellular Fhys.» 152:448-57 (1992}) és feozm krnáz inhibitorok [Wö 94/03427; WÖ 92/21660; WÖ 91/15495: WO 94/14808, 5 330 99.2 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; Mariam és munkatársai, Proc. Am, Assoc. Cancer Rés., 35,2268 (1994)1.
A fentieken kívül kísérleteker tettek olyan kis molekulák azonosítására, amelyek RK.-ínhibitorokk.éfk hatnak, Például bisz-monociklusos, biciklasos és .bstereciklnso» aríf-vegyüfeíeket (PCT WÖ 92/20642), Ytnilénazaindol-származékokaí (PCT WÖ 94/14808} és í~c8tiopropíl«4-páidiSds£Úonokat ($ 330 992 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) írtak ietimzia kináz inhibitorokként. Szttríí-vegyöleteket (5 217 999 •számú amerikai egyesült államokbeli szabadak»! leírás), sziiril-szubsztítaáll piridil-vcgyőleteket (5 3Ö2 606 •számú- amerikai egyesük állsmokbéli szabadalmi leírás 1, kiuasoiin-szártsazékokaí (FF 0 566.266 Al számú szabadalmi leírás), szekmmtiolokat és szelestdeket (PCI' Wö 92/03427 számú szabadalmi leírás), trlciklusos polihlárosi-vegyükdefceí (PCT Wö 92/21660 számú szabadalmi leírás) és benzílfoszionsav-vegyülcteket (PCT WO 91/15495 számú ssabdalamí leírás) ts leírtak a rák kezelésében hasznos FIK fehifeitorokksat.
Indolbtonszármazékökat és ezek tervezeti alkalmazását ismertetik a kővetkező publikációk; US 5,886,020; WO 98/50356, WO 99/61422 és WO 00/38519 (közrebocsátás 2000. július 61; I Méd. Chem. 1998, 41, 2588-2603.. Oxinriolszármazékokai és esek tervezett alkalmazását ismerteti a kővetkező publikáció; WO ÜÖ/3S908 (közrebocsátás 2000, június 22.). Szabad sav vagy szabad bázis fámájában ionizálható gyógyszer hatóanyagok kiszerelését ismerteti a kővetkező publikáció; 'WO 01/37829 (közrebocsátás 2001, május 31).
•f 4 7 3.-3 04 3 SL
PC'l/OSOl./GCSlS
A ulálmány összefoglalása
A jelen találmány tárgyát bizonyos 3-piaol-szufeszíituáfc 2.-mdölmon vegyületek képezik, amelyek FKtnodosltó képességgel rendelkeznek, és ezért alkalmasak az abnormális PK-akti vhás-saí kapcsolatos rendellenességek késelésére.
Essek megfelelően a jelen találmány tárgya egyrészt az Űj általános képietű 3^irtol-sznhsztituált 2-isdolinonok és ezek gyógyszerészetileg elfogadható sók ahol az (1) általános képletben
R1' jelentése feidrogéna-om, 1-4 szénatomos alkil·, -íCHjkS?' vagy -<XO)NR8R'’ csoport;
R'' je-lestése hidrogénatom, featogénatom, aril- vagy -S<Oj2NRi3R14 csoport;
R jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomé® alkil-, 1-4 szénatomos altat-,,aril-,.heteroaril- vagy
-ÍCOIR? csoport;
R* jelentése hidrogénatom;
R jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkil-csoport;
R* jelentése -C(O)K;e csoport;
R' jelentése hidrogénatom, I -4 szésatexaos alkil- vagy aríl-csoport;
R* és R9 jelentése egymástól föggrtleaül hidrogénatom, alkil- vagy aril-csoport:
Rív jelentése -N(R*4}(€H2XMh vsc-port, ahol» értéke 1,2 vagy3,·Ru jelentése hidrogénatom,és Ru jelentése hidroxi-, 1 -4: szénatomos alkoxi-, -CfOjR'5, heteroaril- vagy-NR‘”Rh csoport;
R’3 és R’4 jelentése egwástöl függetlenül hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, cikloalkil-, aril* vagy .hetéroaril-csopon; vagy
R'J és R?* együtt hstéréeikhrsos csoportét alkothat;
.R15 jelentése hidrogénatom, hidroxi--, M szénatonms alkoxi- vagy ariloxi-esoport;
R1 jelentése hidroxi- vagy -C(Ö}RiS csoport; és r értéke .2 vagy 3.
Másrészt & jelén találmány tárgya olyan gyógyszerkészítmény, amely egy vagy több (1) általános képletül vegyületet vagy ezok gyögyszereszetíleg elfogadható -sóját és egy gyógyszerészetileg elfogadható kötőanyagot tartalmaz.
Harmadrészt a jeles találmány tárgya az (X) általános 'képletü vegyületek vagy ezek gyógyszetészeöleg elfogadható sói alkalmazása protein kinázzal Összefüggő rendellenességek egy -szervezetbe®, különösen emberben történő kezelésére-alkalmas gyógyszerkészítmény előáll Itására. Ilyen betegség például, de nemcsak a felsoroltakra korlátozva, a rák, a cukorbetegség, a ^zsugorodás,. a szív- és érrendszeri betegségek, például az éréimeszesedé®, az asgiogenezts, az mmwr&etegsegek, például az autoimmun betegségek és a vesebetegségek.
A találmány részletes leírása
Definíciók
Hanem adunk más meghatározási, a leírásban és -az igénypontokban használt alábbi kifejezések jelentése a kővetkező.
Az „alkil-csopori’'’ jelentése telített alifás szénhidrogén csoport, beleértve az egyenes szén-láncé -és az -elágazó széaláneü, í~4 szénatomos csoportokat. Az sikü-csoportra példaként említhetők a metil-, etil-, propil-, 2 propil·, n-butíl-, izo-buril vagy terc-bulil-csopett és hasonlók. Az alkil-csoport helyerteritetlsen,
R74S:i,~XO4S Rí,
FCT/őSei/üdiíIo
-5~ * *Φ*« «φ * ♦ Φ
♦Φ ΧΦχ.ν
A „cikloalkll-cscport” .jelentés© 3-8 tagé, esak szénatomot tartalmazó, monociklusos gyűrő, csak szénatomot tamtező S tagú/6 tagú vagy 6 tagű/6 tagú koodemsák bieiklusös gyűrűs vagy tőbbciklusos kondenzált gyűrűs csapon (& „kondenzált” gyűrűs rendszer azt jeími, hogy a rendszerben minden gyűrű egyik szomszédos szénatom-párja közös a rendszer egy másik gyűrűjével), ahol egy vagy több gyűr» tartalmazhat egy vagy több kettős kötést, de egyik gyűrűnek sincs regesen komagált pi-etekmon-reodszere,
Cikloslkil-csoportok például, de nem korlátozódva a. következőkre, s citdopropán, cíklobotáa, cikiopentán, cikiopeníén, ciktohexán, eíklohexsdién, adaasantóa, elkloheptán, cikloheptstrjéa és hasonlók. A eiklo&ikilcsoport sznbszs jttúlatlan.
Az „.aril-csoport” jelentése elvan, csak szenet tartalmasé mosociklusos vagy kondenzált gyűrűs poiieikk·sos (vagyis közös .szomszédos szénatomot tartalmazó gyöngéből felépülő) csoport, amely 1-12 szénatomos, és teljesen konjagáf pi-elektronrendsz.ere van. Az aril-esoportokra példák:, de nőm korlátozódva a következükre, a fenti-, naíhdínil- és anlraeentl-esoport. Az anl-esoport lehet sznbszűtuált vagy SKubsztitaálattaa. Ha szubsatituált, előnyösen egy vagy két szufesztitoenssel helyettesített,, amely egymástól függetlenül h&logénatom, szabszütaálstíaa kis sstónatosissámú slkii-esoport, triludogénalkii-, hidroxí-, metkapio--, eiano-, N-atnidó-, mono- vagy áilakUsmmn*, ksrboxl- vagy N-sznif enam ido-mtport.
A .AeteröSfil-csoporf’jelentése olyan mosoeiktesos vagy kondenzált gyűrűs (vagyis közös szomszédos szénatomot tartalmazó gyűrűkből felépülő) csoport, amely 5-12 gytlrüatomot tartalmaz, melyből egy', két vagy három gy&üafesn heteroatom, amely N, O vagy S atom, & többi gyürűatom C, és ezenkívül tejesen .koajttgált piebkírítsreodszere van. A szubszótuálaflan heteroarii-csopörtokra példák, de aem korlátozódva a következőkre, a pírról, furán, tiofén, imidazol, oxazoi, tiazcl, pirazol, pinám, prhnidin, kinolm, ázoktaolin, porát és karbazok A bsteroaril-esőport lehet ssufeszíibtálí vagy sxobsztimálatlan. Ha szabsztimálí, egy vagy két sKöbsztltaeassel heiyetrésiíett, amely egymástól függetlenül haiogénatom, szufesztíttiálattan kis szénaiomszómi! alkil-csoport, trihaiogéítaikil-, feidroxi-, merkapto-, eiano-, Ν-amido-, mono- vagy' dílaktlamme^ karboxi- vagy H-szrdionanndncsoport,
A ,Jseteroeiklnsos csoport” jelentése telitett ciklnsos gyök, amely 3-3 gyűrasiornot tartalmaz úgy, hogy egy vagy két gyüröatom beieroatmn, amely N, O vagy S(O)„ (ahol n ö és 2 közötti egész szám), a többi gyűrüatom C, ahol egv vagy két C atomot adott esetben karbont í-csoport helyettesíthet. Konkrétabban a heterociklosos csoport kifejezés jelentése például, de nem korlátozó jelleggel, tetrahidropíranil-, 2,2-djmeni- 1,3-dxoxolá»-, piperidin»-, N-ttredipiperidln-o-ib, pipemzioo-, iN-raetilpirroadin-3-il-, 3-pírroitdiao-, morfoiino, ttomorfölino-, femor&lmö-I -oxid-, t3onaorfbl«a©-I.,l-<hoxid-, 4-s;iloxíkarboailpípetazi«e-, 3-oxopiperazdno-, 2-ijmdazoiidon-, 2-párobdmon-, 2-oxoh.omopíperteno-csöport, tetraitidripirűnidin-ü-os es ezek számtazékat. Előnyöse»: a heterociklusos csoport adott esetben xtesziünsiva van egy vagy két szabsztítaessseb amely egymástól függetlenül baiogénntom, aUdlssoport vagy észter-, hídroxi-, mono- vagy dialkösnuno-csoporttal sznbsztltaólt alkiiesoport.
A „hidroxl-espport” jelentése -OH csoport.
Az „altexi-csoperi” jelentése egyaránt -O-(szrám«tólat)an alkil-) és -O-jszubszbósálstlan clkloalkil-)-csoport. Reprezentatív példák, de nem korlátozó jelleggel, a ssetoxi-,. etoxi-, propoxi-, butóxi-, ciklopropiloxi-, eiklobutiloxi, ciktopondloxl-, ctktóhmíöxi-csoport és hasonlók.
97461-AOéS ,S:L
PCT/üSöl./OáSlÓ
-ö♦ ♦ ♦ X Jfr β ♦; ♦ ♦ ».
» * - ‘ ««» ». ,* ' -· * · « *4 «« ,.
Áz „arifoxi-esoporí” jelentése egyaránt -O-aríl- és -O-hetcrosAi-csopon, a fenti definíció szenní. Reprezentatív példák, de nem korlátozó jelleggel, a fenoxi-, púidiniioxi.', fheaniloxi-, tiéniloxi-, pirimiéiniloxi-, pirazimlcxi-csoport és hasonlók és ezek .származékai,
A „merte{5to-csopon” jelentése -SH csoport.
Az „észter-csoport”'jeleatése -€{O)Ö-R” «söpört, ahol R” jelentése nihil-csoport, ínhalogósmcdN, elkiosíkil-, adott esetben szubsztituált aril- vagy adott esetben szubsztituált fetwoaríl-csaport (györöszéuatoróoz kapcsolódva
A ..haiogénatom” jelentése fluor, klór, bröm vagy jód, előnyösen ite vagy klór.
A „trihalogérnncdl-esoport jelentése -CXS csoport ahol X jelentése halogmsatom, a leírás defmfeiója szerint.
A „ciano-csopojí” jelentése -ON csoport.
Az „N-szuifénasn-klo-csoporr jelentése -NR^SCOjiS.'·' csoport, ahol Rw és R'“ jelentése- a leírásba» definiált.
Az .„N-atnidocsoporf jelentése -R’*QO)NR.t?-csoport, ahal R“' és R59 jelentése a leírásban definiált.
R és ΚΛjelentése egymástól függetlenül hídrcgéíjascm vagy aO-csoport.
A „2~máoimon’\ „indoifo-Ü-ow’ és „S-oxicdö)'’ kifejezéseket a bírásban felváltva, egyenértékűen használjuk, és jelentésük (a> általános képletö- molekula.
A „pnrol” kifejezés jelentése olyan molekula, illetve csoport, amelynek a kémiai szerkezete a (bj általános képletnek megfelelő.
A „príTol-szufesztimáit 2-indöli«on” és a ^-pöroltóeml-Z-iadölíhon’' kifejezéseket a icírásbas felváltva, egymással egyenértékűen kaszáljuk, és jelentésűk olya» vegyüiet, amelynek általános- szerkezetét -az (1) általános képlet mutatja be.
«Azokat a vegyületeket. amelyeknek azonos sz összegképletük, de íuküöosságáik vagy atomjaiknak kötési sorrendje vagy atomjaik elrendezése kűlöaböső, „izomereknek” nevezzük, Azokat az izomereket, -amelyekbe» a atomok térbeli elrendezése különböző, „sztereoizomeíeteek” nevezzük. Azokat a sztereoizemereket,. amelyek egymásnak nem íükörképi párjak „diasrtereomerekoek” nevezzük, és azokat, amelyek egymásnak fedésbe nem hozható tükörképei, ..enantímucrckíiek” nevezzük. Ha egy vegyükünek aszimraetoa-centnana van, például négy különböző csoporthoz kötődik, esaniiomer-pár keletkezhet. Egy enantiomerí .assunmetria-centrutnáaak abszolút konfigurációjával jellemezhetünk, és leírhatjuk Cahn és Prcíog R.- és- S-szekveneia szabályaival vagy annak alapján, ahogy a -molekula a polarizált fény síkját elforgatja, és jobbra vagy balra forgatókéul jelölhetjük meg (vagyis (+)- vagy i-j-izomerekkéní). Egy kírális vegyüiet lehet egyetlen eu&attomer vagy enantiomerek keveréke. Azt a keveréket, amely azonos -arányban tartalmazza tsz enanfiemerek-et, „racésn keveréknek nevezzük.
A jelen találmány szerinti vegyületek .tartalmazhatnak egy vagy több aszünmetria-cetürcmoí; ezeket a vegyületeket ezért előáilííkaijük önálló (R)~ vagy í$>-sziewoizomerekkési vagy ezek keverékeiként Hanem jelezzük másként, a szabadalmi leírás vagy az igénypontok egy adott vegyüíeténe-k leírása vagy megnevezése magában foglalja mindkét eaantioíKcrt és ezek keverékeit, legyenek azok mcém vagy más· keverékek, A sztereokémia meghatározására és a sztereoizomerek szétválasztására szolgáló eljárások jól ismertek a szakmában (lásd az,Advanced öfgasíc Chemistry 4. fejezetét, k March. lohn Wílsy and Som, New York, .1952).
AMS1-104Ö Sl
PCT/USöő/04A12 ·* s ** * Λ * 9 * * * « # » « *
Az (1) általános képleté vegyületek mutathatják a ia&toxaéria és a szerkezed izoméria jelenségét, Például az te Seirt vegyítetek E vagy 2 konitgmáclót vehetnek fel akörül a kettős kötés körül, amelyik a 2-indoímon részt a pírról részhez köti, vagy E és 2 keverékei Is tehernek. A jelen· találmány magában foglal minden tantomer vagy szerkezeti izomer formái és ezek keverékek, melyek rendelkeznek: az RTK-. CTK.- és/vagy STK.-aktix'itás módosításának képességével, és ser» korlátozódnak egyik taatomer vagy szerkezei! izomer fonnáxs sem.
A .^yógyszerkészítsnény kifejezés jelentése sz itt forrt egy vagy több vegyüiet vagy fixielőgiailag/gyögyszefészetiteg elfogadható sóinak vagy előanyagainak keveréke irtás vegyietekkel, például fizfoiógfoíiag/gyógyszerészetifog elfogadható vivőaayagokkai vagy kötőanyagokkal. A gyógyszerkészítmény célja, hegy elősegítse egy vegyölet beadását a szervezetbe.
Az (I) általános képletü vegyölet előanyagkéxrt is viselkedhet Az „előanyag” („prodrug”) jelentése olyan szer, amely br vtvo aktív anyaggá (perem drog) alakul át, Az elöasyagpk gyakran hasznosak, mert egyes esetekben könnyebben beadhatók, mint az aktív anyag. Ezek biológiailag hozzáférhetők lehetnek például orális alkalmazással, míg az aktív anyag nem. Előfordulhat az is, hogy az elősnyag jobban oldódik a gyógyszsrkészltotéxtyekben, tnfoi az .aktív anyag. Előaayag lehet példánk de nem erre korlátozódva, egy jelen találmány szerinti vegyüiet, amelyet észterként (ez sz „előanyag) adunk be, hogy elősegítsük a sejtmembránon való átjatást, ahol a vizoldbatőság árt a mozgékonyságnak, de azután, & sejt belsejében, ahol 3 vízoldh&tóság hasznos, az észter jnetíiboíikus ütőn hidrolízissel karbonsavvá. az aktív formává alakul át.
Az elöatsyag egy további példája lehet egy rövid polipeptid, például, de .nem korlátozó jelleggel, egy 2•lö aminosavas polipeptid, amely egy texnunális .sxaino-csoporttal kapcsolódik egy jelen találmány .szerinti vegyüld karbox i-esoporíjához, és a polipeptid in w hidrolizáiódik vagy mebfootézálódik az. aktív molekula. felszabadításához. Áz (1) általános képletü vegyüle tek elöattyagaí a j eles találmány tárgykörébe tartoznak.
Ezenkívül az .{!) általános képleté vegyüieteket a szervezel, például az emberi szervezőt enzimjei metafeoltoálfeatják, hogy olyan metabolítok keletkezzenek, amelyek módosíthatják: a protein kinázok aktivitását. Ezek a ntetébolifok 3 jeles találmány tárgykörébe tartozóak.
A „rizio-lógiailag/gyógyszerisszedlég elfogadható- tévöasyag jelentése a teásban olyan vivőanyag vagy htgíiószer, amely nem okoz jelentős irritációt egy organizmusban és nem befolyásolja a bevett vegyölet biológiai aktivitását és tulajdonságait.
A „gyógyszerészetileg elfogadható kötőanyag” jeteníése· olyan Inért .anyag, amelyet a gyógyszerkészítményhez adnak, hogy még inkább elősegítsék a vegyölet bevételét Példák a kötőanyagokra, de asm korlátozó jelleggel,: a katétem karbonát. kalcium foszfát, különböző cukrok és keményítő típusok, ceílolóz-számjazékok, zselatin, növényi olajok és polietilén glikoiok.
A leírásban a „gyógyxzerészesifog elfogadható só” kifejezés azokat a sókat jelenti, amelyek az aktív vegyüiet biológiai hatékonyságát és tulajdonságait megtartják. Ilyen sók közétartoznak a kővetkezők:
1} sav-addíciós sók, amelyeket az aktív vegyüiet szabad bázisának és olyan szervetlen savaknak a reakciójával kapunk, mim. a sósav, hiőrogénbromiá, salétromsav, foszforsav, kénsav és perklórsav, es hasonlók, vagy olyan szerves savak reakciójával kspnrik. mint sz ecetsav, oxáísav, (D) vagy (Lj almassv, mteátsav, metánsznlfbusav, eiásszulfoassv, p-ioiouiszulfonsav, szaliciisav, borkősav, eitromsay, borostyánkősav vagy maicnsav és hasonlók, előnyösen sósav vagy (Lj-ab&asav, például az 5-(5-fl«or-2-oxo-l,2-dibiáfoisáol-3-jkáéínuetil}-2,4-Ö! metil-lH-píAol-J-karbonsav-íZ-dietilanÜKoetiliamtd L-malát sója; vagy
S7ÓS1-1Ö4S SA
PCT/USQI/04ÜAl
-S ♦ « »:».n
2) olyan sók, amelyek akkor képződnek, ha egy savas protont, amely az aktív vegyüte-es vart-, vagy egy fémion., például egy alkálifém, ion, egy alkálifeidfém ion vagy egy alanrinium κ® helyettesit,' vagy a savas proton szerves bázissal, például etanolajmneál, íhslanolammnai, metenolamtnnai, troösebnama-al, N-metilglui-atnlnnal és hasonlókkal koordindlóösk
A ,/PK” jelentése receptor protein tirozin- kináz (RTKj, «est-receptor vagy „celluláris’' tirozin kinéz (CTK) és szeriís-treomn kinéz iSTK)..
Az „eljárás” jelentése mód, eszköz, technika és eljárás egy adott feladat végrehajtásár;·, beleértve, de nem korlátozva azokat a módokat eszközöket, technikákat és eljárásokat, amelyek már ismertek vagy könnyes kifej·· leszihetök az ismert módokból, eszközökből, technikákból és kivitelezésekből a vegyi, gyógyszerészeti, biológiák biokémiai és orvosi szakmák szakemberei által.
A „imxlosiíás” jelentése az RTR-k, CTK-fc és STK-fc katalitikus aktivitásának megváltoztatása. A módosítás jelentése elsősorban az. RTR-fc, CTR-k és STK-k katalitikus .aktivitásának aktiválása, előnyösen az RTK-k, CTK-k és STK-k kai&biite aktivitásának aktiválása vagy gátlása, annak a vegyö-letaek vagy sónak s koucenirádójától Ikggífen, amelynek az RTR, CTR vagy STK tó vas téve, vagy előnyösebben az: RTK-k, CTR-k és STKk katalitikus aktivitásának gátlása.
A „katalitikus aktivitás” a tirozin fosrierilezésének sebességére utal az RTK-k és/v&gy CFK-k közvetlen vagy közvetett hatást! alatt, vagy a -szerln és a treonis íbszferiíezésének sebességére utol az STK-k közvetlen vagy közvetett hatása alatt.
Az „érintkezésbe hozás” jelentése egy jelen találmány szerinti vegyület és sgy target PK összehozása olyan módon, hogy a vegyület befolyásolhatja a PR. katalitikus aktivitását vagy közvetlenül, vagyis- magával a kinázzal kölcsónhatva. vagy közvetve, vagyis egy másik, olyan molekulával kolesöaítatva, amelytől a kináz katalitikus aktivitása függ. Az ilyen- „érintkezésbe hozást” elvégezhetjük ó; vriro, vagyis kémcsőben, Petií-eséssébes vagy hasonlóban, A kémcsőben az érintkezésbe hozás kiterjedhet egy vegyüietre és egy érinteti PK-ta vagy egész sejtekre. A sejteket tenyésAöedényekben is fenntarthatjuk vagy szaporíthatjuk, és ebben a környezetben hozhatjuk érintkezésbe egy vegyülettel, így egy adott vegyület képességét a PK-val kapcselaíos rendellenesség befolyásolására, vagyis a vegyület alább definiált ICso értékéi meghatározhatjuk, mielőtt a -vegyületeket fe vivő kísérelnénk alkalmazni a sokkal bonyolultabb élő szervezetekben. A szervezeten kívüli sejtek esetében többféle, eljárás létezik arra, és ezeket a szakemberek jól ismerik, hogy & PR-kat érintkezésbe hozzuk a vegyülctckkel, beleértve, de m korlátozó jelleggel, a közvetlea sejt mikromjekciói és számos membránon átjuttató eljárást.
Az „út téri» ’ kifejezés mesterséges környezetben, például, de nem korlátozó jelleggel, kémcsőben vagy tenyészkozegbea végzett eljárásokat jelent.
Az „ír vri»” kifejezés élő szervezetben, például, de nem korlátozó jelleggel, egérben, patkányban vagy nydlbaa végzett eljárásokat jelem.
A ,,ΡΚ-val kapcsolatos rendellenesség” es az „abnormális PK aktivitás” olyan állapotot jelent, amelyet a som megfelelő, vagyis a- kismértékű, vagy többnyire inkább a túlzott PK katalitikus aktivitás jellemez, ahol az adott PK lehel RTR, C'íR vagy STS. Ment megfelelő katalitikus aktivitás eredhet például vagy.abból, hogy 1 } olyan sejtek sxpresszáim-k ?K-t, amelyek normális esetben nem expresszálnak PR-í, 2) a megnövelt PR-sxpresssálás nemkívánatos -sejtszaporoááshoz, sejidiiferenciálódásfeos és/vagy sejtfejlödéshez vezet, vagy 3) -s csókkenl PK-expresszálas a sejtszapor&dás, sejtdifferenciálódás és/vagy sejtfejlödós nemkívánatos csökkenésé37-5él-104 5 St
S2T/ÖS01/04313 hez vezet. A FK. túlzott aktivitása vagy egy olyas gén arnpbflkálóáását jelenti, amely egy bizonyos PX-t kódol, vagy-olyan PK-akiívhási szint létrehozását jelend, amely összefügghet sejtszaporodási, sejtditFerenclálódásl és/vagy .sej {fejlődési rendellenességgel (vagyis ahogy a FK szintje no, a söjs-rendellenessóg egy vagy több szferptómájának súlyossága is női). A kismértékű aktivitás természetesen ennek ellenkezője, vagyis a sejtrendellenesség egy vagy több szi-nptömájáoak súlyossága oö, ha a PK aktivitási szintje- csökken.
A,,kezelni” és ..kezelés” kifejezések arra az eljárásra utalnak, amellyel enyhítjük vagy befolyásoljuk s PK-val kapcsolatos- sejt-rendellenességet és/vagy a vele járó tüneteket. Különös tekintettel a rákra, ezek a kifejezések egyszerűen azt jelentik, hogy egy rákos beteg életesélyei nőnek vagy a betegség egy vagy több títosle viszszaszomlA „szervezet” jelentése olyas élé entitás, amely legalább egy sejtet tartalmaz.. Az élő szervezet lehet olyas egyszerű, mist például egyetlen etskarióía sejt vagy olyan bonyolult, mint egy emlős, beleértve az emberi lényeket.
A „gyégyászatihig hatásos mennyiség” (gyógyászatílag hatékony mennyiség)· jelentése a kezelésre használt vegyüfetnek az a -mennyisége, amely a kezeit betegség egy vagy több szimptómáj át bizonyos mértékig. enyhíti. A rák késelésének esetében a gyógyászatílag hatásos mennyiség jelentése -az a mennyiség, amelynek hatása a következő:
1) csökkenti a tumm méretét;
2) gátolja -(vagyis bizonyos mértékig lelassítja, előnyőse» megállitja) a tumor meíaszíázisí;
3} bizonyos mértékig gátolja (vagyis bizonyos mértékig lelassítja, előnyösen megállhia} a tumcmővekeáést és/vagy;
j bizonyos mértékig csökkenti (vagy előnyősei), megszünteti) a rák által okozott egy vagy több tünetet,
A , jkövetés” (moíihorhig) jelentése annak a megfigyelése vagy detektálása, hogy egy adott pX-t exptesszáló sejtre milyen hatást fejt ki, ha vele érintkezésbe hozott vegyület. A megfigyelt vagy detektált hatás lehet változás a sejt fenofcípusában, egy FK katalitikus aktivhásáhuo vagy egy PK és egy természetes kötő partner közötti kölcsönhatás változásában. Az ilyen hatások megfigyelésére és detektálására szolgáló eljárások jól ismertek a szakmába».
A fent. említeti hatás fehet egy sejt fenotípusáuak változása vagy a fenotlpus változásának hiánya, az említett protein kinéz katalitikus aktivitásának változása vagy & katalitikus aktivitás változásának hiánya, vagy az. említett protein kináz és egy tesnészetes kötő partner közötti böícsönhatás változása vagy a kölcsönhatás változásának hiánya a jelen találmány egy végső alakjában.
A „sejt fenotlpus” jelentése «gy sejt vagy- szövet külső megjelenése vagy .a sejt vagy1 szövet biológiai fimkdoja, A sejt fenotípusm példák, m korlátozó jelleggel, a sejt mérete, a sejt fejlődése, a sejt szaporodása, a sejt differenciálódása,. a. sejt életben maradása, az apoptőzls, a tápanyag felvétel é« felhasználás. Ezek a fenol ípnsos jellemzők mérhetők a szakmában jói ismert eljárásokkal,
A „természetes kötő partner” jelentése olyan pohpeptiö, amely egy adott PK-í köt meg egy sejtben. A természetes kötő partnerek szerepet játszhafeak egy jel továbbításában egy P& közvetítésével zajló jeltovábbítási folyamatban. A természetes kötő partner és a ?K közötti kölcsönhatás változása a FK/tenuészetes kötő partner komplex megnővekedett vagy lecsökkent koncentrációjábanés esnek eredményeként abban nyilvánulhat öreg, hogy észlelhető változás következik be a P.K jeltovábbítást befolyásoló képességében..
$7451-1045 SL
PCT/öSO1/04313
-ii.
'♦**·« φφ ♦ * .
X φφφ »»»» .
/5. jelen találmány repreamtativ vegyűietssí az alábbi I iábláza: motaija be.
I, táblázat
A vegyöletek száma megfelel a példák számának a Féldák című részben, Tehát az 1, táblázat 1. vegyületéliek szintéziséi az 1. példa ismerteti. Az 1, táblázatban szereplő vegyüietek csak példák, és semmilyen tsódon· asm korlátozzák a jelest találmány tárgykörét.
Fisz. Szerkezet Vegyaleteév
1. S-(5“Brós3-2-es<)“L2-űihidi'obidol-3-slidéraneí.ii)2-íZöpropíl-4·· -fenti-líl;-pÍm!i-3~kaíb©Ksav-(3'-áieíüsniiö«^rop-ü)aníkl
·> X.S Oíjj-oű S-(5-Bróm-2-oxo-l,2~d!hídroisdol-3-tbdérimetil}-2-izopropsk4- -fenil-1 ll-eirrol- 3 -karboasav-(3-pitTolidifi-1 -itpropil janiid
3, 5“í5“.BrÓK).-2Ox.o-l,2~dihidröindoÍ-3-ilidésmetíi)-2”izGpnűpil~4- •'fenlí-l.kt'-pírrol-S-fcK'borisav-tz-íilaíiiamiaoeditainíd
: 4. 3%ro- 8'x>pY 5-(5-Btóta-2-öxo-l,2'-á-&ídrofedÍ>|i-3-ilsdés«aetíí>'2-320pn)pjM-fesűí- IH-pírrokS-karbosstsv-p-fá-steíil-pspemziji-l-il)- -propö jíarad
: 5. „ 5-{5-Bróni-2-o:xo-1,2 ~dikidroirísiol~3-öiáéoiaetU)’2-j»eöl-4- -ienii-1 H-p:rFOÍ-3-k.arboosav-(2-pirrolidiii-1 -il-etüjsrmd
6. tó' 5-(S-Brós?j-2-oso-i.2-dibldroiír<kil-3-üidén;netsÍ)-2-meíli-4- -femi-lH-pirrol-d-kurbossav-P-dirsseíilaniísti-etíljtmiid
3748 1-:LCMS Sk
PCT/17301/0/813
7. r r'*** **Oe 5-{5-R.róts-2-öxo· 1.2'á}hKÍn>mdob3-ili<fameüi}-2-ai<sj:M- J -.&wl-ÍH-pmol-3-&arboasav-{3’dieídainin:op«a>'djgíBÍd j
i 8. Ö 11 5~{5-Brási-2~oxG-M-áih?á~ümöoó3~ílidémnAií}-2A~áirat:í:i-
A- < -íFí-pirroi-S-kaíbonsav-ÍS-ársaetíiaminomjijamid
2. o ' Y-Λ· 2,4-Dimet8.-5-í2”Oxo-ő’fen)M>2:-dthtdroisdoí-3-ilidénísetii)-
s ?u < -1 H-ptrrol-3-ks!dx»t'sav-(2:-dün«rilmino-etíi jaraid
10. 5-(5-Klör-2-ox ο-1,2 -dibidroiadöb 3 -iliáérsmebl)-2,4-dimedM .H-
£8^^, •F** C -pírroí3-kadjonsaV”(2-áimetík:KmcseÍil)aía!d | i 5-í5-bróffi-2;-ox.o-í22.-dibiárKí3»&)l-3-iBdénmeíü)-2,4-d«a8ttí- j
IL CM
^ys V o -lH-póo^3-kíabo»ssv-(2*át«dlamáK>etíhanüd ϊ
12. K :5(5-Bn5m-2-í>;<o-L2-dlhsdröiadoI-3~üidé;!n5Ctd-2,4-ddne!.d· IH·!
Ψ Ύ * -pmoi-S-karbonssv-^i-pirrölidm” 1 -il-etíljamid í
13. CM 5-(5-®·άϊ»:-2-οχ<5-Ι,2-ύ{.Κίί&οίδ<ίοί’.3-}|}άέεΜίβίΐ1)-2,4-4ίη3^ϊ1-
^Ol M k-íí^SV w -lH-páTo:~3-karbousav-(3-dnidaKt!l-1 dIpjOpd)amíd
14, n 2,4-D5!»etib5-(2-oxo-5-fenil~ I .í-dihidroiKdol-d-ilidéííJsietd)-
π -lH-pitTol-3.-ka5bo«sav-(2-díeölaxBinoeta)amíd
15, ο M 2,4-öimetfl-5-(2-oxo-5-ímtd-l>2’díhjdKs3asfoí-3-did&useÉít)·· :
* Ή ö -lH-piírol-3-karboaMv-(2-pmolid3S-Í-)t-tód)aaQjd
974 31--1045 SL í'C!r/nS0.1/G-48X3 φ « ♦ » ♦ * ♦ ♦» <., · * * · » » * ** ,,χ.
* * ♦#
2,4-ΟίΗ^ίΠ-:5”{2-βχθ'5-ϊόοΐ1··Ι,2'<Η5ΐ:ίίω!ί:άο:!-3·'ίΗ<ίΑ0ϊί86ί:!'· { -IHrpírsol-S-karbonsav-CS-Knjdazol-l-ilpr^íOamiá
2,4-.öiiaetiÍ-5-C2-öxo-Wte!l- l,2-^tóáfOihdo{--3-.didéiaami}·4H-{sm:d-3-karboasaY’(2-á}etílan$ínoetíl)anMd f 2,4-Dímetü-S-(2-oxc>-6-ífe«M,2-dihÍáíwáí<kü-3-ilí<séjimeti;í- j -1Η-ρ{·σ·®1-3-&8ΰ>οη88ν·(2-ρϊίτο·ΐ5ά3^1-χ1-ε$Π)8£ηΐ0
,4-I>!írietjl-S-{2-í)xi)-6-ieS5Í4?2-áíhiflrotoáoI~3-ilidÓ!i«K:íi’0 -1 H-psm)l-3-teb«asav-<3 -emáazoí-1 -íípropilíamid ’
5-Γ6 p!5~Düdór-fenó)-2-oxo~ ΐ .2-ό960Γθίηάο]-3-ί!Ϊ<1έηϊη«ΐίΡ:’2,4-dsmetil-lH-mmd-3-karboasav-(2-dietilaíassoet3l)aíni4 i2,4-D;medl5-(2-csxö-6-pií4áíR-3-jl· 1 ^-dfei<feot»d61-3-íBd^uaetjl)-lH-©kr()h3-karbi5r5sav-(2-íbetilaniinoetil)a'KÍd
4-Dj!»ebí-5~(2~öxo-ő~pkjdtf~34í4,2-díhidkoHíáöl~3-iIídé«me- j íi!)- IH-pkí'ííl· 3-feifbotisav-{2-p«ral idin- i -il-eííDamid
2,4’0!ΓΕ!?υ1'5-(2-Είχο-6··ρΐά6ίη-3'ϊ1!.2·-όί.Η!«Γθ5ηόθί-3-ίΗίΙέ&ίϊ5«ti!)-lH-pí!To!-3-k3rboíiS;3Y-(3-db?íetilaí!iiöopTOpi!)sj-ii:i
2,4Mmed2-5-(2-öx»-5~f€3uM, 2-dfesttemáol-3-iHdémö.eúl)-l.H-pkrol-3”ksrboí?ssv-(3-dí8ikiís®dno-pfopd)3mid
9CT/US01/e4313 *» •χ χ «
-13* * -X ♦ **
Η' I- ö $4 ί ί \ >>8 2,4-DK55et!l--3-(2-öxo-S-feíl-1.2--díh5droi;5<kíi-3-í:idéE!iíKí5lf- -JH-párok3-karboasav-<3-dietik«nÍBO-p«optí)aíaid
ΛχςΡ
26. σ°ί^ν 2,4-Oiíiaföí;il-5-<2-oxo-6;-fisirá.i-l,.2-'áihitiroíxtdol-3-i5iíii6íxt$x:et£l>- - lH-pirrol-3-fcaíboasav-(3-dietitamiao-.propil)mÍ!á
ί Β'τχί® tv S-(5-Brósv2-<)xO“t,2~öifaíd!OÚKÍoI“3-3l5dex»rieíill-2,4-dlxBstü- -1 H-plnOl-j-karbcnsav-iS-dsedlan) jnopropil .saruid
28. “χχν ίΗ ίΊΙ ?V>v 5(5-Brőa4-2-OXo-l,2-dihsároíadí:<l-3-iliáé':u5Kd!l)-2,4- -^Í2<^röpií-!tí-püTQl-3-kaafeoí5sav-(2-dxetilaaimoetö)aja'id
29. η? 3-(5-8ΓάΕΗ--2-0Χ0-1\2-ΰ!ί·ύίΓ0ίΒάο1-3-ϊΕ0όηϊϊΐδΐ;1)-2ΐ4- -d!jBÍ>prí>piI-lH-p£írol-3-karboas3v-;(3-dÍ8íilamhwr<)pílíani!d
ί 30. 1 Άο 5-<S-Bróm-2-oxo-I»2-d&^Pöi8dok3-üidéíHnstU)-2»4· -áüsfipropd-lH-pixrok3-karfeoBsav-(3-pirroHd5n-l-ö- -propíhiintid
I 31. 8,XXjfí fí-G 5-(5-ΒίΓ0®-2-οχο1>2-4ϊΗΐ<&·οΐίϊ0ο1-3·ΐ1ϊ0&ί«ηβίίΙ)'2>4·<ΙβηδίίΙ- -1 Hpinol-3-tobo«sav“^iri<h?>4-itei^il)a!nrd
32. , ο j-fí ρ 5-16-·(4-Β0ΡΜ8ίύ1)-2·-ί>χο-1,2-{ίϊ0ίόί<ί!κύο1-3-1ΐ1άέ!κηβίί1}-2,4- -dúsét il-1 H-pirtöl-S-karbossav-íT-pitrelid-út-1 -Ö-eti'l}atB sá
5 t Λ ΐ ί_ 0 £> 3-(6-(4-Estl-fen.d)-2-oxo- 1,2-ό(Ηί(ίϊοίκά<ίΙ'3-ίΜόέ;ϊΓΛ€ΐί1]-2,4-6ί- : ststd-1 H~pir'!Ok3-karf3ö«sav-(2-pkTeHáÍ5t' 1 -íl-etiljanaíd
37401-1045 SL /02/0601/04013
--14fc * ,
»κ * * * ♦
34. ο Ο 5-f6-(342öpr(^ö-feiJ>2-oxo-f,2-d&fáro5adoi-3-ö'iöé{»stóQ’ -2»4-dsKí.stsf-}H-pífrot~3-karb<5ass'«'-<2-:pjnOhdH3-I-H-8ÜÍ)aíaíá
35. ‘ri r 5-i5'nuö£2-<jxo-L2-dihíd;'OÍ:KiOl“3-ÍÍjdéamfitíí)-2,4-djn!.eiÍB -IH-psrrol-B-kíahoaav^-áíedlmtBtoetyjsíaid
36. 3’H“(2-I>íeíMmt8.oetff-i:atenjoif>-3»S-dÍEaeíö-tH-p3nO.l-2-
-ümtóilÓ8>2-ox©-253-te{d3K}‘’-lH-indot-$’karborBav
öUwk
; 37. ; °'SX5: & o í~w 5-(5-Dimeüís35H&»oií-2-oxo-1.2-dihidroksdol-S-pídénmetil)- -2.4-dhaetíl- J li-pmol-S-fcatboasay-P-pnoBdsn-l -iVedljamiá
38. 5-(5-f3-Kíór-feBÜszs£tfmoii)-2-oxo-ls2-dííi5dFoindo:k3-nídéa-
jaedl|-2,4-«&a«ta- l.K-pim5l-3-karbo:íís;iv-(2-pinOiiáÍ!)~ i -ii- -€!ίΠ}<«ϊ:50
39, £> 2,4-Dsijreíil-5-0'-exö-5-(piridin-3-dsznííaÍSOii)-l!2-dihíd·
λ 'W**’#:/5 roiadöt-S-ílideamettl}- i H-pirrol-S-ksrijoiísav
x?·© üSS.^
{ 40. o ^•eotP 3-[3,5~Dinieb’M-(4-£netil-pipeTazÍ£M-k;teonil}GH-phTel-2-il- ; medlén]-4-(2«hsdroxí-etn)-1,3-d3ísdroridoi-2-oa
: 41. Q *Lh~ [>0 3~[3,5-Dimetn-4-(4-íaeíil,p5pera>:i«--2-k;irbo5'xU)-l.H-piíTel-2-íl- j nte«én}-2-oxo-23-<Í5hiria>lH-ridöl-5-szulfoas;w-fe»bn:kl j
S7481-1395 ?C77'ÜSO1/'Ö43I3
42. ©* Y „ CL· 5-?3-TíHWÍl8ZUÍlaxB<:sl- 2-ösö- í ,2-diíiiáív;íi-dol- 3-ii idéimtedl}- -2,4-diteeiiMH-pi^0J'3-ka03OÍ5sav-(2-djeiik;s:5ioeí«}a!í6íí
~v z~fc·
43. Cí o O ; 5-[5~í3'Klór-fK!:!j»a.i;faK30!l)-2-oxo-1 ^-dihidroiadoi-l-űídén·- :
Ö .faetii>2,4-dÍ3neíjI-IH-psrrol-3-karbonssv*{ •Ύ
-dteül&wnoetülaaúd
44. l.-t’7 04-Möíií-5-í4-í!>eíd-5-ínetdsziilía3í;oít-2-cxo-í,2’dihdn:;-sndűl- •·3-5ΐίόέίΒ?ϊδϋ1}-Π·ϊ“ρΰΤ0ΐ-3-1:»Ιχ>η0ΐ83»ίηο}-©ο«^ν-βϋί0.$2ίβϊ·
43. ' 04-Kí eíd~5-(5-:ffiÉíOszíílfex3WÍS-2-!3x<j-1.2-dihdrí) -kkíoí-S- j
Aj5 «Ί W $r Jh -o 1 -dsdéBíBedl}- lH-rpjrrol-3-kmbondjamtno} -«eetssv-eísldszter j :
46. Ö {f4-Mdő-5-(S-»setUs2ölfeaaoS-2-oxo-l,2-d)hdro-íBáoi-.3-
“·.£ ©' | S* W « © 0 ’iíiáéjmeüIj-lH-pirToI-S-kssfeoisiijaaiiöol-eceísav
: 47. 1 ,o ’YSL· 0 | “W © >fö er 0 34'3-MetiM-(pjpex}das-I-karbo«{l)-lH-pkrol-2-toehfe3~2·- -ö!íÍ;f-2,3'dihid.To-lH-is3.döÍ-5-szulföí3,sav-Ki<íilaiKíd
j 4S. ί **»e cw< <λμ z~€«( .·>' V~£*, 2,4-T.}íiseísl-5-(2--i>síS”l,2-dih!ihö-jíidoi-(32}-i!Klér!-· rsedi}-1 H-pírml’3-katboosav-<2-átötnamanoí?Ű)- -amid 383 ÍM+l)
j: 49. *, r Λ3 »s L,~'-=«. k«*s S-p-Klár-Z^x-o-íjS-dihidto-iHíksi-CSZJ-lljdén- meOrS-ZA-dimedi- iH-pjrro{-3-karboasav-(2'<8etíÍ- Sí»kíix:Oi}-aöjjd 435 [Μ·:·η
50. «.e. 2,4-Í>á»e{j|-5-[2-oxo 1,2-dihidro-Íjtáoi-(3Z)-10- 370
Cx .< 8 >»« 8 8 déKtsetű j-2,4-áí8ietil- i H-ptrrol-3-terijö'osav-{2- ’poöüdín- l-ilsídj-areid (M~n
OCT/US01/04877
-169 X *' * 0X
0 Jí 0 » » «
5i. '•vA'’'0 S-j5-Ftoor--2-oxo-1,2-áásidro-iodol-(3ZHHdéHír{ö- öl] -2;4-íteeni~ í H-pirrol-3-karboossv-(2-pirr£>hdm- -l~sle$n>-amid 39? ?m·· η
52. S-(5-Khk-2-oxö-l,2-dikiáre-íaáol-í3Z}-ihdéí·- ?ne<|- IH-páxo’-S-ktajösav-ÍS^oobdia-1 -iletOl· -a-Kid 413 (M-H í
53. Γ’ 2,4-Diraetií~5- [2-oxo- IJ-díhidríyiadoi-öZl-ili- démetd]-2,4-dáneíiMH-pítól-3-k2rbo:ííSs;v-(2“di-; metilaminoetílj-afnsd 353
54, ö *Wlf~ i> O-ptóiT0*1 ' W-g 0 5~:[5-Kfóf-2-oxo-l,2-d3hidro-indoí-í3Z>Í5idéöíne- iíl] -2.4-dussd Ι- Ili- párol- 3 ~kafb<sx8av-(2~acetilaná- B<!-6tíl}-anad 399 (Μ-η
55. o ö W-sri I CAjj 5-t5-FÍíior-2OXC-L2-djhidre-5aáííl-{3Z)-ibdéE- mMi|-2,4-áimstil-l H-pim>l-34tó?oosav-(2-acetíí- amino-etil)--amid 353 [Μ-η
; 56. ^rT 2,4-D»»e-tS-5-{2-oxo-l,2-^lH&O-íná&l-(3-Z)-ÜJ- déametdl-lH--pirrol-2-k3rboxÍS3v-í2-ace5}laffldK!- -edb-amsd 365 (Μ-1}
57. y~r~ö *γγζ/ ***' 5-|5-Bróm-2-oxo-l.,2-döiidro-iodöK3'Z)-iliáéreBi©- íd]-2,4-diBísíÍÍ-1 H-pi^el-3-kMbo»sav-f3-(2-oxö- ; -tetraWro-pirteidía-í-dj-ím^ilJ-aiaid 500 (Μ ί 0 502 [Μ-ί-;Π
58. y-r^ 5-(5~ΚΜ?-2-οχο--1,2~áíhídre-iadol-(3Z>- iliőém&e- ; t8J-2,4-^stól-ÍH-piraoí-3-k«cfeeiasav4'3-(2-oxo- tetraferdro-p áankHa-1 -8>jmsp8j-auad .................... ...... 454 : (Μ-13
59. ........ >irb ΙΛ-y8 545-Ffoöí-2-oxo-l,2-dihídro-j.5dcd-(3Z)-il5dén- rsetdj--2,4-áÍ3y:eíii-tH-p3no.t-3-karb<ií3sav-f 3--(2.- -oxo-teírabifo<s--pirím3diö--i“il)-prop!l]--SBi.iíí 433 [Μ-ΐ} ί
S74Sl“lö-;5 SL
FCT/LSOl/04813 *»** ««
60, «»« rvCX *M O «Ά 2l4-Dííne»I-5-(2-oxo-l,2-áifejáro-jaáoI(3Z)-ílí- ; döraaetiILHLpisTöl-3~ka!'bOHS3v-(3'-í2-oxcs-tetJ«- 'hid3-o-'pirMnidía.-!-y>-propilj~asnid .422 pwn
ÖL JM Trilfeor-;’CKt3.t-4-{2-( {5-[5-bró-n-2-oxo-L2 -düsidro- 486
*#* o O A /** -5Kdol-(3Z)-iiiáésiSietiij-2,4-dirííetíl· lH-phrol-3- [M+íj
*^***\ '* :Λ -farborll ]-amiiíc:·} · e; i: 1 -2-öxo-pípfivazin- 1-íöís; 488 [Μ~ί· i}
62. 4-Γς» 5-í5-Bróm-2~0xo-l,2-dihidro-jaáoí-(3Z)- 470
-üidéja»tóO-2,4-áaaeöHH-í»nolr3-karbon«av-(2- (M-l]
-{2-oxo-fjnidazo5idín-l-ü)-etóí3-miá 472 [Μ-Π 3
: «, , Cr -A (Τ' 0 5-(5-KMr-2-oxol,2-<diddK)-íadol-(3Z)· -iKdemnetÖ>-2,4-dsneíil·- í H«pjmdr34mrboíssav-|2-; 428 [M-H]
2l>®s p ϊ -'(2-oxo-öKicííizoHdia- 3 -U.)-et.d)-maid
64, 0 Ö* 5-{5-Fbor-2-oxo-ls2-difeidro-jad533~(3Zs- 412
Λ ihíiémnetilj-S.d-dimetd- 3H-p!íroi-3-karbíií)sav-[2- [MU]
γΡ -(2-í>xo-iniídazolidja- 3 -il)-etil]-asad
65. Srr< 2,4-Ddned3-5-p-í>xö“l,2-diIádro«iadGí-(3Z)jlidea- 392
!»eíd>lH-pírrol3-kíírbönsav-[2-(2-oxo- [M-l]
ró -aasdazoliáhv 3«d)~edl]-Maíá 392
[M-3]
66. „JÖTT (4-Í2- {{5-[5-Bröm-2-oxc-1,2-dihidfa-iadöl-(3ZF -jlsd&anp$j’2,4-dtmeti1- 3 H-pírröl-S-karboajljantí- 558 [M-H] ;
<H noLedij-píperazia- l-ií{ -aceteav-etilészter 560
{M-H 3
67. {4-(2-( {^Ίδ-ίζΙόΓ-^-οχο-Ι^-^ΙΰάκήηόοΙ-^Ζ^ίΗ- 544
*a> ~ΟΎ ~s$ áéKaíeíiI]-2,4-djEHetíLlH-pOTi>i-3-karbosd3}an!Íno)- [MM]
« •etö]-piperazia-l-fl}-ec«tssv-«dlészteF
57481-1046 SL
301/0801/04813
·.··♦
A 8-
68, vrC/ (4-(2-( {5-(S-Ffeor-2-oxo-l,2-dibídr:Oindei-pZl-5li- áéiaosdlplA-dhuebl··! íi-pirosi-S-ksibosbi : -astotoedlj-ptperszio-1 -d: -wemv-etílészto· 478 pdHj
69. V-& 5-[5-Srőm»2-oxo-l,2“áfeidr©-3n.doM32>- ’Bsáénmetill-2,4-daaeti5-lH-ptmó-l-karbonssv-J3·- -(2-oxo-azepan-1 - U>prepÖj-m-i4 5Π Pö-íj 513 (M-lj
70. Oyvrb^ S-p-Klór-l-oxo-1,2-öih!dro-mdol-(32.ó- 'iHdáitoíilj-2,4~d3meíiMH-ptoO-kstoo:f.S3V”[3- -(2-oxo3zepaa-í»i{}’pn>pxl)-assd 469 iM-.H :
71. S-[5-Haor-2-oxo-f2-dihiárO”ísdel-(3Z}- 4ddé«;«edl)--2,4-dij33eti.MH-p!rrd-3~karbossav”p-· -(2-oxo~ azep&n-I-slj-prop.ílj-amid 453 (Mtój
72. *3τΓ^0 2,4-Dhssti1-5-f2”OXO- i,2-d5hídroíndoi-(3Z)-Ü3déxs- ;xiedr:“lH-pio’ol-3-&3rboasav-p-(2-oxt>-a2'.epan-l- -il)-propil]-amid 435 ÍM-Hj
73. fc'pXjT0*· M 5-|S-BréJP>2*<SM>l ,2-dthidroiadöH3Z}- -siidén:f3K4d]-2,4-dmxetd-l}í-pirroi”3-karfeiyí3sav-(2- -accdlasiúio-etdl-ajííid 443 ÍM-Íi 445 íM-n
74. -=/4 T«fluor-aeetát4-|2-((5-[5»fluoro«2-ox5>l,2-dxtód- ro-mdoH3Z)~ösáénínta]-2,4-di«setiMH-p£rrol-3- -ka?feoaH}-málo)-ex2}-2-oxo-pKperazln-í-jiini; 426 . ÍM-< n ;
75. /b Trifíuor-aeeltó4- (2~{ {2,4-diiaedi-5-{2-oxo~ s ,2-dl- bi&ö-iadöM 3Z> ibdéroxsedl}-1 H-pÚTol-S-karboaíl} -arsiae)-et íl]~ 2-oxo-piperazin-1 - sara;. 4Ö8 ÍMU;
97431-1045 SL
PCT/OSOl/04813
-19* φ φ > φ * * * φφφφ ♦ Φφφ
76. - ’Χϊί^ :Λ Trinu<í:--aceíaí--4'|2~({S-r5-kl6r-2-os<)-L2-<iőtídrci- -fe<4~í3Z)-diöémseídJ-2,4-dinife~ 1Η-ρόϊθΐ·-3· ~kfeosü}~muÜK0’«tíi]~2-íUO~piper3zm~ l-;um; 440 [M-íl
7\ί..... ο WVCMs 5-iS-Finor-2-oxí> 3s2-dshídro-mdol-{3Z)-3Háénínő- iiB-2,4-dimeül-1 H-pim}3-3-kaafeoasav-[2-(4-nsetii- -pípsrazin-1 -il 1 -stíl j-anád 424 FM-lj
78. <5 Μ^>δ 5-[5-Kió:-2-oxo-l,2-áíhíö:-o-áiáoi-(3Z}- -iÍ!áéíKneín)-254-d!K5.eíi1-lH-pirr!:il-3-k33fb(>Xisav-[2-: -(4-rneíd-pip&razÍH-I-d}-«5d]-ainid 440 (Μ-Π
79. © rj·^ 5-[5-Bí»ín-2-ojfco- ΐ ,2-dlhidro-mdoi-í3Z: · : -ili.d6nmetilj-.254-áimetil-1 H-'pirröl-J-kí.K'bonsav-f 2- -{4-ínet5l-p5perszln-i-5l)-eí!l]-ajniá 484 [M-q ; 486 [fel]
; ,§ο. /1 « Λ CH> CQ- 2,4-Dirí3edÍ-5-[2-oxn-i ,2-ö!hídí'(5-dsdol-13Z)-iliáéf!“ í«etjlj-lH-pffmS-3-karbonsav-[2“(4-metil-p3per3zis- -l-dl-etiij-aodá 4öá (M-q
81, FA « f’aa s^4>á' δ 2,4~I>5mePl-S-f2öx<>- 3,2-dihidrö-wdöl-{3Z>iÍiáé»~ metilj-lH-píiTí)l-3~karsx!ns;3v-[2-(3;5-dK3ieíil- -pípsrsszk·-- i-ü}~eíül-amid 422 1M-M; j !
82, : 'ró, t rfe ?Ό> S-í S-Fiaor-2-oxo-1,2-dlhídro - iödöl- {32} - -üídémeiüj-S^diajetíWH-pirrtó-J-tebossaY-íl- -(3,5~dKa«i<i-p3per32:n~ 1 -ilfeij-amí d 433 IM-q
1 83. ί ; | 84, «Α O f'** «TTy * S-[5-Kiór-2-oxG-1 ^-diiddTO-indoI-fSZ)- -iliáéí5K!etsl.j-2.4-düsetil-lH-písTol-3-karbe®sav-[2- -{3,5-ílimetil-piperasm- 1-ü j -etg}~amiá 456 [M-N]
L 5A φ X5J“s 5-[5-Brém-2-sxö~ 1,2-di.hidro-indol-{3Z > -ilidénmedl]-2,4-dimetií-1 H-pirrel-3 -karbonsav- (2 - -iXS-dímedí-piperazin-1 -il} -edlpandd L. 498 FM-q: 500 FM-q
481-104
992/0001/04813
-20** * 9 * '* * « * X * * ♦ « ** χ*
35 2,4-Dtmetil-5-[2-oxo-l,2-díh3dro-bdol-(32.)-ilidés- ;metí?J-lH-pinOl-3-kaHx)Hsav-p-f4-metÍÍ-öt»>ers'Ztii- d-íD-propslí-atfod 422 i'M· 1]
86, ΧΧ^ ö 5-[5-PÍaor~2-oxO' 1,2-dibiífroíndol-(3Zj- -;Odé!K5K?!ÍS}-2,4”dÍnveíiM.H-pir!'í)i-3”karbonsav-n·· -(4-msísl-aspérazií3-1 -ds-pröpilj-arcsd 938 IM-lj
37. CM> . <Aip S-[S-Kfór-2«oxo-l^-áűa<k<wHdol-(3Z)- 4Bdéajaefd|-2,4-<Haí«t3l’lH-í»tml-3-karix)HSín'-{3- • (4-S3®5sl-pípe.razin-l-áí)-pfí!pjj'}-3K5Íd 454 [M-U j
88. TXJ>° S-[5-Bróm-2-ox<Hl,2--dihidfo-iudob(3Z)-íhde.öme-- tUJ-2,4-{HmetiWa^pihoi'3--fesíboa8aV’[3-(4-«ietS-: -piperasin-1 -il)-pröpí ipamid 498 ÍM-l] 500
:. 89. JXj MJyjXS’ e#'· 5-(5-KW-2-OXO-1 .z-dihidro-indoi-OZ}- •íiidénmedip2,4-dimetiMli-pirroí~3-k3íÍ!O£!sav-(3- -pirroKdis-1 -il-S-orO-aiKid 480 [mmj ;
90. e‘XXp ''ínöporac.eíÍd-4-(2-({5-[5-kk:r-2-oxí)-í .z-ídhidi'O- ~iíjáoi-(3Z)-ílidérímeiil]-2,4-díffieíil~lH-pOTol-3- : “ksrbönd) aw-isűi-etilpZ-oxo-psperazirs·· 1 -inra 440 IM-lj
ί 91, Cí V-n ° 545-Klót-2.-öxo-1,2-dÍhiáj:o-i:).do'i“(3Z.!- -ÍÍídéruHeíilj-2,4-dimetÍj-lB-p!rroi“3-ksrbon$av-(3- -pirrobdm~l-!Í~2-on)~smkl
ί 92. ?γγ// i 5-[5-Fíuor-2-oxo-},2-d!h!drt5:-5r5áoj-(3Z)- -ikáeiHíieijij~2,4-dí.ms5íikíH-pÍ3-K'9-3-karbonssv-(.3·· -pirroiidin- i il-2-os)-amid
93. CQ“e 5-(2-o.\0“i,2-díksdro-indoi-(3zG-ílídsm'?xStd]-24-ái- medl-lH-pirTol-3-któxiKsov-{3-pirKdidiri-l-lí-2- -<sn}-axnid
94. UZ CFSCO5K 5-[5-Klér-2-axO'l,2-dibidro-ií3dol-(32)- -üídésiKetiQ’2,4-(Sta©ttl-lH-ps«ol-3--teboas3.v-{2.- -pirídhi-S-iietii j-asüd
S74S1-I045 S.L
PCT/ÜSWG48I3 φ
Φ* fe!
ί ii 96, * ,C κ -'•“vfe» í - 3pL * ;y- fe'cx, fV7r €^,00,« 5-f5-Floor-2-oxo-1,2-ΰίίΰά!·>>·χη<Ιί>Ι-ΟΖ)- i 'ilk’ÖHiHeüi'i-2,4-őiíHstíI-iH-pÍ3TOl-3-ksrbot!sav-(2- -plridis-z-í letű )-an id-taílajoracetát só
CX«>o tt 5-í2-oxo-1,2-ddűöro-mdoÍ-(3Z)-ilidénin:enjl-2,4-á!' met il-1 K-psrrol-. J-ktaixmsav-(2 -piridm-2-iletn !- -míd-tökoktód só
; 97. [ W> ef»CÖ»H · Jtí 5~|5 -Brőm-2-οχο-1 s2.-tSktáro4ndoí-(3Z)- 'iíiíismHetílj-zA-dhxietil· lli-pirröl-3-kísrt!onsav-(2-: 'pirídái-z-i-etilj-aíKsd-öiOóoracetát só
1 98. !: a fe a 5-15-Plü:or-2'!3xol,2'<öbídro-jndPR{3Z>-iiidénme- tíÍj-2,4-áiate(íl-Ili-pircol-3-karboasav-.{2-etil-
1 L..... ................. ominoeíilj-amid
19ÍL1 t S-[ S-Etoor-2-oxo-1,2-díidáro--mdok(3Z)-lbdéi!E[ie-
¥·£ o ;ü j -2,4-dímebI -· 1 H-pirrol-S-ksrboosa v-f 2- ami ao~
! 'fe eűij-arsíd 1 5
1 SOR S-[5'Fioer'2-oxo-l,2-<Í!hidrc>-jndöR{3Z)-íÍjdénjne- i
blj-2,4-dlmeíiS·· 1 H-pirroifekarbonsav-Ckaj’box j
x»etíl}-as®d
101. : » F *»ev /-jv·*— ®hrvÖ 5-15-BrŐ!n-2-ax<í-l,2-dthtdro-bK!OÍ-(3Z>- 'jbáéíírtseíilj-1 H-pirroR'.j-karfeonsav-ío-pirtoiidin-1 ~ -n~2-OK-propil)-an»á-trtn«oraeeíát
Előnyös raegvaSóxsiásök
Noha a legtágabb értelmű de&deRs a ialálmdny összeleglalásában szerepei, az alábbiakban felsorolt, bizonyos fi) általános képletö vegyöletek előnyösek.
1) Az (I) általános képtaő vegyüietek egy előnyős csoportjában RJ és R4 jelentése hidrogésatom,
2) Az fi) ákaláöös képletü vegyüietek egy másik előnyős csoportjában R! , K? és R* jetestése hidrogénatom..
3) Áz fi) általános képletö vegyöletek egy másik előnyös csoportjába® R!, R? έ» B? jelentése hidrogénatom.
4) Az (1) általános: képletö vegyöletek egy másik előnyös csoportjában R\ P? ás R* jeieatése hidrogénatom.
57481-1045 SL
BCT/üűOl/tMSl.3
V’J:
5) Az (?) általános képletó vegyüietek egy másik előnyős csoportjában R!, R, R’ és R4 jelentése· hidrogénatom.
6) Az (1 j általános képletó vegyüietek egy másik előnyösebb csoportjában
R:- jelentése hidro-géaaite), alkil-, -CfOiNIÜR'’, előnyösen hidrogénatom vagy metii-esoport, különösen hidrogénatom;
R jelentése hidrogén-, klór-,, bróm-,. fluor-atom, fenil-,. dtroetilaroinoszniíoml-, 3-klórfenilaminos2uifonil-, amisoszalfonrl-, metilasuixmszaifoml-,. fendaromoszulfonil-, pindm-3-íl-amínoszulfmil-, dimetiiatsuno·· szulíönil, Ízoprepibaxniao-szalfonil-esepon, előnyösen hidrogén-, fiúm- vagy brómatom;
R‘‘ jelentése bibrogeaaíGai. roetoxi-, karboxi-, feml··, piddm-3-3-, 3,4-diklórfeail-, 4-n-feutilfeaií·, 3-iaopropilfcnil-, előnyösen hidrogénatom vagy iéailcsoport; és
R* jelentése hidrogénatom.
A fenti előnyös 6) csoporton belül egy előnyösebb vegyületcsoportbán
R' jelentése hidrogénatom, metii-, etil-, izopropil-, terc-butik, izobutii- vagy n-bubi-csoport, előnyösen feidrogérsatoK? vagy metií-csoport;
R' jelentése ítixhogénatom, metü-, etil-, izoprepil-, n-butik, szobntil- vagy toro-butti-, fenti-csoport, előnyösen metil-csoport. hidrogénatom vagy feuif-csoport.
7) A jelen találmány egy jelenleg tárgyalt előnyös meg valósítása esy olyas vegyölet, .amelynek a szerkezete a festi, ahol .K1 és R’” jelentése -egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil- vagy heterostil-csoporí, és RSÍ és RK együtt -ÍCÍfejs-, -ÍCH2}rÖ-Ofe)r vagy -{CH2hNíCH3XC%)r csoportot alkot.
Hasznosság
Azok a RK-k. amelyek katalitikus aktivitását osódoshják a jelen találmány szerinti vegyüietek, magukban foglalják a. protein tirozia .kinázokat, amelyeknek két típusa van, a-receptor feozxo.kmázdk (RTK-kj és a ceiiuláris tirozis kinézek (CIK-k), illetve a.sserin-troomn kisázok (STKI-k). Az RTK kőzveífsésével zajló -jeltovábbítást egy speciális növekedési faktorral'(tigsnáutsnuá) zajló kölcsönhatás: tniciálja, ezután következik a reeeptor-djmerizácié, az eredeti (jatrinsre) protein droarn kiuáz aktivitás tranziens stimulációja és a foszfotilezés. Ezért kötőhelyek keletkeznek az mtmcellulám jeltovábbító molekulák szántára, és komplexek képződnek a ortoplazmás jelző-molekulák: széles skálájával,. amelyek elősegítik s megfelelő sejt-választ (pl, sejtosztódást, metaboi&us itatásokata sejten kívüli mikrokörnyezetbea stb.}. Lásd Sdtlessbtger és Ulhich, Neuron, §·, 303-391 (1992).
Kimutatták, hogy a tirozün foszfortlezési helyek a növekedést faktor receptorokon nagy affinitása kötőhelyekként működnek. a jelző-molekulák SH2 (sre homológja) doméújei számára [Fant! és munkatársai, Cell, 69, 413-423 (1992) Songy&ng és munkatársai, Mól, Célt Biok. 14,2777-2785 (1994), Songyang és munkatársai. Coll, 72, 767-778 (1993) és &oeh és munkatársai, Science. 252, Óőö-ő?S (1991)]. Számos olyan tótracelluláris szubsztráí fehérjét azonosítottak, amely az RTK-fcal asszociálódik. Ezeket két fő csoportba oszthatjuk: 1) olyan s.zubsstrsfok, amelyek rendelkeznek katalitikus doménnel, és 2) olyan szubsztiátok, amelyeknek nincs ilyen áoménjök, de adapterokként működnek, és katalitikusán aktív molekulákkal ssszociálődsak (Songyang és máskatársai. Ceti, 72, 767-778, (1993)], Á receptorok és a szubszírátjalk S-H2 doméajei közötti kölcsönhatások specifikusságát azok az anxinosav-mmdékofc határozzák meg , amelyek a foszfonlezeö .tsozin-maradékot közvetlenül körülveszik. Áz SH2 dóménak és az. adott receptorokon levő foszfetirozm-roaradékókat körülvevő amíno974SI-1043 SL
PST/ÖS0L/O4313
-23♦χ ΦΦ*» sav-szekvenciák közötti kötési afímitásolí különbségei mcgfdeinek a szabszsrát-foszróriíezési profiljaikban megfigyelhető- különbségeknek [Songyang es msttkaSársm, Ce.il, ?2, 7ő7-778 (1993)]. Ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy az egyes RTK-k bakcsóját .nemcsak kifejezési mödjok és Oganámt-elérhetőségük határozza meg, hanem azoknak a leszármazási (dowmsfeeam) jeltovábbítási útvonalaknak a sorozata is, amelyeket egy adott receptor aktivál. Tehát a íószforilezés fontos szabályozó lépés, amely meghatározza a speciális növekedési faktor receptorok által aktíváit jeltovábbítási atvooasak szelektivitását, valamint a faktor receptorok difiérenctálődásüt.
Az S'FK-k, amelyek elsődlegesen, ckoszotosak, befolyásolják a sejt belső biokémiáját, gyakran egy PIK-esemény leszármazási sor (down-Unc) váfeszaké-at. Az STK-k részt- vesznek abba» a jelzési folyamatban, amely a DNS-szfetézist és az .azt követő, seitszoporodáshoz vezető mhózist hxiciálja.
'Tehát a EK-jeiíövábbifás eredménye tWbekközőö a sejtszaporodás, sejtdifferenc-iálódás, s^f fejlődés-és stgtmetaboifemus. Az abnormális sejtszaporodss számos, rendellenességhez és betegséghez vezethet, például .dagan-atképzödéshez, mint amilyen a ktírcisóma, szattóms, ghoblsstoma és hemangioma, -olyan rendellenességekhez, xntai például a leukémia, pikkelysömör, érelmeszesedés, izületi gyulladás és a cukorbetegség szövődményeként jelentkező szemészeti rendellenesség (reífeopathia diabetiea)·, valamint egyéb rendellenességekhez, amelyek a nem szabályozott érképződéssei («tgjogenezás és/vagy vaszkulogenezss} függenek össze.
Azt a mechrtaizmtsst, amellyel a jelen találmány szerinti vegyöletek gátolják & .PK-kat, nem szükséges pontosan ismemi a jelen találmány alkalmazásához, Azonban - bár a leírásban nem kötelezzük el magunkat valamely mechőniznms vagy elmélet melleit - úgy gondoljuk, hogy a vegyületek a PK-k kaíabtikus tartományában levő aminosavakkal lépnek kölcsönhatásba. A PK-k jellemzően kétlehenyes szerkezedéi rendelkeznek, ahol az, ATP feltehetően a két lebeny közötti hasítékba köt be, olyas tartományban, ahol az aminosavak megőrződnek a PK-k között A PK-k Inhibitorai feltehetően nem kovalens kölcsönhatásokkal kötődnek, például hídrogénkőtéssel, vas dér Waals-eroktöd és ionos kölcsönhatásokkal, ugyanabban az általános tartományban, amelyben a. fent említeti ATP kötődik a PK-khoz. Konkrétabban, ügy gondoljuk, hogy a jelen találmány szerinti vegyületek 2fedőimen komponense abba az általános helybe kötődik be, amelyet rendszerint az AT? adesfe-györűje foglal el Egy adott molekula adott PK-val szembeni specifikussága ezután .azoknak a további kölcsönhatásoknak az eredménye lehet, amelyek a 2-iodoiínon magén levő különböző szobsztimensek és az adott PK-loa specifikus aminosav bőmének közön fellépnek. Tehát különböző indáimon szubszfituensek járulhatnak'.hozzá az adott PKhoz való preferenciái» kötődéshez. A különböző ATP (vagy más aakléoíiá) kötőhelyeken aktív vegyületek kivár tatásának képessege feszi a jelen találmány szerinti vegyületeket hasznossá bármely olyan fehérje targetként váló használatára, amely ilyen hellyel resde&szik, A leírásban ismertetett vegyöletek ezért hasznosak áz ilyen fehérjék in vftro- vizsgálataiban, és is vivő -gyógyhatást mutatnak az ilyen fehérjékkel való kölcsönhatás következtében.
Ezenkívül a jelen találmány szerinti vegyületek alkalmazhatók a gyógyászatban, sokféle szilárd tumor kezelésére, ilyenek például, de .nem- korlátozó jelleggel, a karcinómák, szarkómák, beleértve a Ksposi-szarkóxuát, erythrehlasioma, gliohíastoma, jnenfegeotsa, astroevíoma, melanoma és jnyoblastoms. A sem. szilárd tumorral járó rákbetegségek, például a leukémia kezelése vagy megelőzése is lehetséges a találmánnyal, javallatok például, de nem korlátozó jelleggel, az agy, a húgyhólyag, a petefészek, a gyomor, a basayáknirigy, a vastagbél, -a vér, a tüdő és a -csont rákos m egbetegedése n
574 811-3.045 SL
ECT/S5OV 04 813 *·:♦» « «*
Azon rendellenességek további példái, körfátözás ítélfcül, amelyek & nem megfelelő PK-aktlvitással kapcsolatosak, és amelyek megelőzésében, kezelésében és tanulmányozásában a leírásban ismertetett vegyületek hasznosak lehetnek, s seítazspotodsssal járó, a rostos elfajulással járó és a metabolstes rendellenességek.
A -sejtek szaporodásával járó azon betegségek, amelyek a jelen találmánnyal megelőzhetők, kezelhetők vagy tovább tanulmányozhatok, magukban foglalják a rákot, az erek szaporodási és a mesangsalrs sejtek szaporodási rendellenességeit.
Az erek szaporodási rendellenességei olyan mnd®lfet«sségek, amelyek az .abnormális «.rképzódéssel (vaszkulogeoezís) és értenedéssel {aagiogeaezis} kapcsolatosak. Amellett, hogy a vaszknlogesezis és angiogsnezls fontos szerepet játszik sokféle nomtólis fiziológiai folyamatban, például s ntagzatfejfodésben, a sárgáiértképződésben, a sebgyógyulásban és a szervek regenerálódásában, döntő szerepet játszik a rák .kifejlődésében ís, ahol új hajszálerek képződéséhez vezet, amelyek a tumor életben tartásához szükségesek. Az erek szaporodásával járó további rendellenességek közé tartozik az ízűiért gyulladás, ahol az áj hajszálerek megtámadják az ízületet és tönkreteszik a porcot,, és iáetartozsak s szembetegségek, példáid a cukorbetegség szővődtnényeként jelentkező totrnopathíSí dlabetíea, ahol az új hajszálerek a retinába® megtámadják az övegíestet, vérezoek és vaksághoz vezetnek.
Két, .szerkezetileg rokon RTK a vizsgálatok szerint nagy .affinitással kötődik a VEGF-hez.: az fou-szerö tirozin 1 <í)t-l) receptor [Shibayaés mwkatársai,;Chsx^08e,.§, 519-524 (1960), De Vries és samkatársar, Science, 255.989-991 (1992)] és a KDE/FiK-1 receptor, amelyet VEGF-R2 néven is ismernek. A vaszknláos endotelíális növekedési faktort (VEGF) endoteiiális sejt-specifikus autogénnek találták, amely in vitro elősegíti az eodoteliáiis sejtsövekedós-fokc-zó aktivitási [Ferrara -és Henzcl, Biochem. Biophys. Rés. Conam, 16 í. 851-858 (1989); Vsismsn és munkatársai, 1 Stol. Cfeeat, 265, 19401-19506 (199ÖJJ. A 08/192,829,08/(88,596 és 07/975,750 számú amorikat egyesült államokbeli szabadalmi bejsteatósfees közölt információ nyomatékosan artu utal, hogy a VEGF nemcsak az endofoliúis sejtszaporodásért felelős, hanta» a normális és patológiás angiegeaezis elsődleges· szabályozója is. Lásd általában Kl&gsbum és Soker, Carrent Biology, 2(10), 699-762 (1993); Ilonok és ntookaiársai. I. Bioi. Chem., 267, 26031-26037 (1992).
A norui&lí s vaszkulegenezís és angiogenezis fontos szerepet játszik sokféle fizsoléglai folyamatban, például -az embriófejfodésben, a sebgyógyuiáshaíí, a szervek regenerálódásában és a női reprodokeiós folyamatokban, például a töszöképzódésben a sárgatestben az ovuláció során és a méhlepény fejlődésében a terhesség bekövetkezése ©iái- (Folkmaa és Shiug, J. Bioi. Chem., 2674.6), 10931-34 (1992)). A nem szabályozott vaszkul.ogsítezisí és/vagy augiogeaezht olyan betegségekkel hozzák 'kapcsolatba, .mist például a cukcvbetegség, valamint olyan rosszindulatú szilárd daganatokkal, amelyek növekedéséhez érkepzödés szükséges (Klagsbörn és Soker, Cnnenl Biology, 3(10), §99-702 (1993); Folkhaan, J. Natl, Cancerlnri., 82,4-6 (1991); Werdner és martoársai, New Engl. J, Moá,, 324.1.-5 (1991)].
A VEGF feltételezett szerepe az endoteliális .sejimporoááshao és sejtvápöorlásbaa az aagiogesezts és vaszkalogertezfe sorsa arra siai, hogy a KDR.TLK-Í receptor fontos szerepet játszik ezekben a folyamatokban. Az olyan betegségek, mint például a cukorbetegség (Folktosn, s Xlfo Cöngress ef Thrombosls and Haemostasis cforti kiadványban (szerk. Verstraeta és munkatársai) pp. 583-596, Leuven üniversify press Leavenj, sz izületi gyulladás, valamint s rosszindulatú fomurfejlöáés nem szabályozott angipgenerisből eredhet. Lásd például Folkman, N. Engl. J. Med... 285.1182-ϊ 186 (1971). Azok a receptorok, amelyekhez a VEGF specifikusan kőíő37421-1046 SÍ
PCT/OSöí/04813
-25átk, fontos és hatékony gyógyászati íámadáspontot (iatgeteí) képeznek a vaszkulogenezis és/vagy .angiogenezis, valamint számos olyas súlyos betegség szabályozásában és módosításában, amelyekben az ilyen folyamatokkal kiválton abnormális sejti ej lődés jut szerephez (Plowman -és munkatársai, DN&P, 7(6), 334-339 (1994 ij. Közelebbről, a KDít-rLK-1 receptornak.a seovaszkulan^cíőban játszott igen specifikus szexepe -teszi a receptort ki választott targetté a rák és más olyan betegségek: kezelésében alkalmazott gyógymódok számára, amelyek: sz erek szabályozatlan képződésével járnak.
Tebál a jelen találmány tárgyát -olyan, vegyüietek képezik, amelyek képesek szabályozni és/vagy módosítani a tirozin kinéz' jeltovábbítást, beleértve a KDS/FFK-1 receptor jeltovábbítást az angiogeaezis és/vagy vas-ámlogextezis gátlása vagy elősegítése érdekében, vagyis olyat’ vegyüietek, melyek gátolják, ntogelözik vagy zavarják a KDR/FLR-1 általi jeltovábbítást, ha ligasdum-ök, például a VB3F aktiválják Őket. Bár úgy gondolj ok, hogy a jelen találmány szemű vegyüietek egy teeept-o-íra vagy más komponensre hatnak a drozin kíxsázos jeltovábbítási útvonalon, közvetlenül g szabályozatlan angiogersezis miatt keletkező- tomorsejtekre is hathatnak.
Bár .a generikus „fik-Γ receptor megfelelő barnán és patkány nómenklatúrái eltérnek, sok esetben egymással felcseréllteto .basználhaték. A patkány Flk-1 receptor ős humán: megfobloje, a KDR 93,4%-os kczős sznkvescia-bomológiával rendelkezik az i-rtraedlulárís doménben. .Hasonlóan, a patkány FI.K.-I ugyanolyan affinitással köti meg a humán VEGF-et, mint-az egér VEGF-et, és-ennek megfelelően bármely fajból száamaző Ugandám aktiválja (Milíauer és munkatársai Ceil, 72, 835---346 (1993); Quhm és munkatársat, Ptoc. Fiaik Acad. Ser. USA, 90. 753-3-75.3? (1993)]. Az FLK-i matén asszociálódik, maid tirozűt-foszSaraiezl a humán RTK szttoszírátokai ípl. PLC-y vagy p§5), ba 293 sejtekben (humán embrió vese übrobíastok) együtt expresszálódn&k.
.Azok a modellek, amelyek az. FIX-l receptoron alapúinak, ezért közvetlenül arkain-azhatók a K OR receptor megismerésére. Például a patkány FLK-3 receptor -- azokban az eljárásokban, melyek a patkány jeltovábbítási útvonalat szabályozó vegyületeket azonosítják - közvetlenül alkalmazható azoknak a vegyüietekaek az azonosítására, amelyeket a barnán jeltovábbítási, útvonal szabályozására basználbatunk, tehát amelyek a KDR receptorral kapcsolatos aktivitási szabályozzák. Tehát azok a vegyüietek, amelyeket KDR/F.LK-1 inhibitorokként azonosítunk ík víto-o, igazolási nyerhetnek a megfelelő ík vlve modellekben. Az in vívó egér- és patkányrnodellek egyaránt kíiűnSaek bizonyulták szón szerek klinikai potonclálisnsk vizsgálatához, amelyek a KÖR/FLK-1 által indukált jeltovábbítási útvonalra hatnak.
Tehát s jelen iakömány tárgyát, olyan vegwíetok képezik, amelyek úgy szabályozzák, módosítják és/vagy gátolják, a vaszkaiogenezist és/vagy angiogenezisí. hogy a KDR/FIX-l receptor enzimes aktivitását befolyásolják, és zavarják 3 KDRZFLK-l által továbbított jelet. Tehát a jelen találmány tárgya gyógyászati eljárás sokféle szolid tömör kezelésére, amilyen például, de nem korlátozó jelleggel, -a- gltoblastoma, mélámmá, és Kaposi-szaritőma, a petefészek, tüdő, emlő, prosztata, hasnyálmirigy-', vastagbél és felhám karethóma. Ezenkívül .az adatok arra utalnak, hogy azoknak a vegyieteknek a beadása, amelyek gátolják a KDR/FBc-1 közvetítésével működő jeltovábbítási útvonaluk színiét- használható a hemangiotna, restenosis és diabéteszes reíársopátia kezelésére.
Továbbá, a jelen találmány tárgya a vsszkutogesezis és angiogenezis gátlása más receptor-közvedtossel taítkődö útvonalak által, ilyen például az fit-1 receptort tartalmazó útvonal,.
A tirozií! kináz receptor közvetítésével működő jeltovábbítási egy specifikus növekedési faktorral
37481-1945 SL
FT7/7507/948/3
-26*»»* (ligandurn) zajló, .sejten idriíl: kölcsönhatás iaieiálja, amelyet követ a receptor-dhítertzáció, az eredeti (íntriosie) protein tsrezin kioáz aktivitás tranziens stimulációja és: az autofoszforilezús.. Ezért kötőhelyek keletkeznek az jstracelluláris jeltovábbító- molekulák számára, ami komplexképzödéshez vezet a citopiazmás jeSzŐ-molekulsk széles skálájával, amelyek elősegítik a megfelelő sejt-választ (pl. sejtosztódást és metabolikus hatásokat a sejten kívüli -mikrokömyezet'éen stb.). Lásd Schlessiager és üilrieh, Neuron, 9, 1—2-0 {1992).
Az a szoros homológia, amely a KDR/FLK-1 íniraeellaiáris tartományai és a PDGF-β receptor inUaceliulárís· tartományai ($ö5%-os homológta.} es/vagy a sokon fit-3 receptor mtracelhtlárh tartományai között. fennáll, egymást átfedő· jeltovábbítási útvonalak iodukálásra. utal. Például a PDGF-β receptor esetében az s:rc család tagjai (Twamley és munkatársai, Proc.. Netí. Acad. Sci. USA, 99, 7696-7790 (1993)], a fosz&tídiinozstol-3'-kinéz {Hu ős inankaíársai, Mól. Coli. Btol., 12, 981-990 (1992)]. a fosziolípáz cy (Kashisfeiaa és Cooper, Mól. Cell, Biok, 4,49-51 (1993)], a tas-GTPáz-akfiváló fehérje (Kashíshtss és munkatársai, EMBO L, 1.1, 1373-1382 (1992)}, a PTP-lD/syp [Razlauskas és mimkstársai, Proc. Hali, Acad, Sci. USA, 10 99, 69396943 (1993)], a OH>2 [Andrison és munkatársai, Mól. Cell. Biok, _14, 671.5-6726 (1994)1 és -az Sbc és Nck adapter ujolekuisk [NUhimuta és munkatársai, Mól Célt. Bioi., .13,6889-6896 (1993)j, olyantmorsányokhoz való kötődést mufadsk, amelyek: különböző aatefeszfórilezési helyeket tartalmaznak. [Lásd általában CteessonWelsh, Pro®, Grovrfh Emez Rés., 5, 37-54 (1994)). Tehát valószínű. hogy a KDRfPLK-l által aktivált jeltovábbítási útvonalak tartalmazzák a ms-útvonalét [Rozakts és munkatársai, Natúré, 360, 689-692 (1992)1, a. ΡΪ3’~fcmázzai, az sre~vel és a plcy-val közvetített útvonalakat Ezen útvonalak mindegyike kritikus szerepet játszhat a RDR/FLK-1. nngiogeaeiiku» és/vagy vaszkulsgenetíkos hatásában az enáotehális sejtekben. Ennek megfelelően a jelen találmány további tárgya a leírásban ismertetett szeress vegyületek alkalmazása az anglog-enezts és a vaszkulogcjiczis módosítására, mivel ezeket .a folyamatokat szabályozzák a festi útvoualak.
Következésképp az erek zsugoreáásúval, Összehúzódásával vagy elzáródásával kapcsolatos rendellenességek, mint például a reslenosis, színién a tsláimány tárgykörébe tartoznak, és a találmány szerinti eljárásokkal kezelhetők vagy megelőzhetők.
A übrózisos (rostos elfajulással járó) rernteiíenességek a sejten kívül i állomány aboounábs képződését jelentik. Fibrózisos rmáellenességek például a tnátoirrözi», a mes&ogiaiís seriek szaporodási rendellenességei. Á utájcirréxisl a sejten kívüli állomány alkotórészeinek gyarapodása jellemzi, amisek következtében hegek keletkeznek a májon. Hegek keletkezéséhez vezető, nagy sejten kívüli állományt okozhat vöusfertőzés, -például hepatitisz is. A lipociták feltehetően fontos szerepet játszanak a máj zsugorodásban. A további fíbrózisos rendellenességek közé. tartozik az érelmeszesedés.
A mesa&gíális sejtek, szaporodási rendellenességeit a mesaagialis sejtek abnormális szaporodása idézi elő, A. teesangialís sejtek szaporodási rendellenességei közé tartoznak a különböző humán vesefeetegségek, például a gloinerslonephrtEs, a áiábétoszes vesetnegbetegedés (nsphrepalhia áiabetica), a rosszindulatú veseasugotoáás, valamint az olyan rendellenességek, mis: a kiserek: trombózisával járó szindrómák, a transzplantá-mri.ok kivetése és a giomeruhasok betegségei (gkuneruiopaíhssk). Az RTK PDGFR szerepet játszik a mesaagíalis sejtek szaporodásának fenntartásában (Ploege és msnkatátsai, Kidney Interaatíonal, 43,47S-S4S (1993)].
Számos rákos megbetegedés sejtszaporodási rendellenesség, és - amint, korábban megjegyeztek - a EKfcat a tejtszaporodási teúáelienességdsfcel hozzák kapcsolatba. Tehát-nem meglepő, hogy a PK-kat,.péiááal ez RTR-család tagjak kapcsolatba boz:ák a rák kifej lődésével. Ezek közül a receptorok közül néhány, például az
97483-1045 SL
PCT/0S91/04SÍ3 *- «Μ** «Κ *♦- > Φ
J. V
ί. *
EGFR (Tasi és munkatársai, Br. J. Caneer, 63, 227-233, (1991), Torpés munkatársai, AMPíS, 160, 713-719. (1992)], a HER27neu [Slamoa és: munkatársai, Science, 244, 7(17-712, (1989)1 és a PIXSF-R [Kumabe és munkatársai, Oneogene, 7, 627-633, (1992)] számos tenorban túlzót; mértékben expresszjUóásak és/vagy -az a-utokrin hurkol folyamatosan: aktiválják őket. Valóban, a leggyakoribb és legsúlyosabb rákos megbetegedésekben klmuteíák ezeknek a receptoroknak a tezott kifejezését [Akbasah és Suner-Akbasak -és munkatársai, ,k Neurol Sci., 111. 119-133 (1992), Dickson és munkatársai, Caneer Tzeaönent Rés., 63,249-273 (1992), Köre és muxskaíársíu, X Clin. invest, 90,1352-1369 ί1 992)] és az autókéin burkokat [Lee és Bonoghue, J. Cell. Biok Xi-S, 1057-1970 (1992), Köre és murúcatársei, ina,, Akbasak és Suner-Akfaasak és munkatársai, hn.]. Például az BGFR-t kapcsolásba hozzák a pikkelyes sejtkaroinőmáv-al, a csiilngsejtes agyáagsoattal, a giioblastomával, a feji és nyak! rákkal, a tödörákkal és a hólyagrákkal. A HBR2-Í kapcsolatba hozzák a mell-, petefészek-, gyomor··, födő-, hasnyálmirigy- és hőiyagrákkal. A PDGPR-t kapcsolatba hozzak a glíoblastotnávaL, a. melaaomával» valamint a tüdő*, a petefészek- és a prosztatarákkal Az RTK c-mefeef szintén, kapcsolatba hozzák a rosszindulatú tomorképződéssek Például a c-töei-ei kapcsolatba hozzák többek között a koiorektális, pajssmirígy, hasnyálmirigy, gyomor- és hepatocellníáfis- kareinőmákkal, és a nyirokszővet daganataival. Ezenkívül a c-xaet-et a leukémiával is kapcsolatba hozzák. A c-mst gén túlzott mértékű expresszálúdásái -olyan betegekben Is megfigyeltek, akik Hodgkm-fcőrban és Barkiö-kórban szenvednek.
Az IGF-ÍS.-L azonkívül hogy a tápanyag-ellátásban és a Π- típusú cukorbetegségben is szerepet játszik, többféle rákkal is kapcsolatba hozzák. Például aa IGF-l auus&rin öövekedésserkentökání játszhat, szerepet többféle rák típusban, például az etsfbsrí mellrák karcinómasejtekbes [Arteaga és munkatársai, L. Clin. levest. 89,
1418-1423 <1989)1 és a kissejtes tüdőrák sejtekben [Maeauley és munteaársai, Caneer Rés. 50. 2511-2517 (1999)]. Ezenkívül az 1GF-I, miközben integrálisán részt vesz az Idegrendszer normális fejlődésében és differenciáíödásában, úgy tüaík, az emberi .gliomák aatokrís sfimnlátoraként is megjelenik [Saödberg-biordqvist és munkatársai, Casser Rés, 53,2475-2478 (1993)]. Azt, hogy az IG.F-1R és ligandumai fontosak a sej iszapomáásban, az a tény is alátámasztja,, hogy sokféle sejt típus ffibrohlastok, epitclislis sejtek, simaizom sejtek, Tíimfotíták, csontvelősei tek, porcseitek és osteobiastok (csomépitő sejtek)] fej lődéséi stimulálja a tenyészetben az ÍGF-í [öolárisg és Goidriag, Buksayotic QeneExpression, I, 301-326 (1:99 i)]. Baserga és Coppoía szerint •az 1GF-1R alapvető szerepet játszik az átalakulási (transzformációs) mechanizmusban,, és ezérí a gyógyászati beavatkozás előnyös íargeije lehet a rosszindulatú humán betegségek széles skálája esetén [Baserga, Caneer Rés, 55,249-252 (1995), Baserga, Cell, 79, 92.7-930 (1994), Coppoia és munkatársai, Mól. Cell. Bioi. 14, 45884595 (1994)],
Az STK-k sokféle rák típusban játszanak szerepet, ilyen például a mellrák [Casce és munkatársai, int, 3. Caneer, 54, 571-77 (1993)].
Az -abnormális RK-aktivitás és a betegségek közötti kapcsolat sem korlátozódik a -rákra. Például az RTK-k&t kapcsolatba hozták olyan betegségekkel is, minta pikkelysömör, a cukorbetegség, az endoraetóosis, az angiogenezis, az- atheromás plakk-képződés, az. Aízheimer-kőr, a restenosís, a von Hippel-Lfodau-betsgség, a felhám túlburjánzása, a neurteegenemtiv betegségek, a korral járó máknlám degeneráció (foltos elváltozás)· és a hmnangiomák (vérérdaganatok). Például az EÖFR-t kapcsolatba hozták a szaruhártya- -és börsefesk gyögyuíásá* val, Az inzulm-R és az fGF-lR meghibásodását kapcsolatba hozzák a cttkorbetegséggel, Az egyes RTK-k és gyógyászati javallataik kapcsolatáról részletesebben lásd Plov-znan és munkatársai, DNRP 7, 334-339 (1994)
97481-1045 SL ?C?/oS0Í/04813 irodaítní helyet
Arniurkorábban cralhetink, nemcsak az RTR-k, tem & CTK-k is, beleértve, de nem korlátozódva a követezőkre; sre, abl,. fps, yes, fym lyn, lek, h.lk, bek, fgr és yrk [áttekintés: Bólén és munkatársai, FASEB λ, 6, 3403-3409 {3992}], szerepei játszanak a szaporodási és atetabolikas jeltovábbítási útvonalban, és így várható, és ki is mutatták, hogy sok olyan. PTK-vsl közvetítek rendellenességben vesznek részt, amelyre a jelen találmány irányul. Példás! mutáns src teste) onkoproteínt (pp$0v'sr‘} matattak ki csirkékben. Továbbá, sejthomoiógja, a. pontk^' prítto-ankögén számos receptor onfcogéa jelé· továbbítja. Az EGER vagy a H.ER2/jmu túlzott exptesszálódasa a-tumorokban a ppőtT^ expresszálóáást követő aktiválásához vezet, anti a. resszmd&lató sejteket jellemzi, de a normális sejtekben aem jelentkezik. Másrészt, a c-sre-t ősökként mértékben expresszáíó egerek siárv^tycsontbetegseges fenotípust matatnak, arai arra utal, hogy a c-src kulcsszerepet játszik a csondehoatítsfeaa és szerepet játszhat a rokon jendellenssségekbes.
Hasonlóan, a Zap70 részt vehet a 'ϊ-sejt j ekésben, arai az autoimmun rendellenességekkel lehet kapcsolatban.
Az STK-ikst a gyulladással, tsz autoimmun betegségei,az immnoválsszökkal és a rálbmjánzási rendellenességekkel, például a resienosissai, flbrosissal, pikkeiysösnötrek csont-izületi gyulladással, reumaíoid arthritisszel hozzák kapcsolatba.
A PS-kat. az embrió beágyazódásával is kapcsolatba hozzák. Tehát a találmány szériád vegyületek haté&onyak lehetnek az embrió beágyazódásának megakadályozásában, és igy alkalmas fogamzásgátló szerek lehelnek.. A találmány szerinti vegyöfetekel kezelhető vagy' megelőzhető további rendellenességek az hnmunoiógtai rendellenességek, például az autitemun betegség, az AIDS és a szív- és érrendszeri betegségek, például az érelmeszesedés.
Végül, miad az RTK-króh unod a CTK-krol feltételezik jelenleg, hogy szerepet játszanak a hiperimmtm rendellenességekben.
A jelen találmány szerinti vegyületek számos példájának különböző PTK-fea kifejtett hatására mutat példákat az alábbi 2. táblázat. Á bemutatott vegyületek és adatok seraratíyea utódon nem korlátozzak & jelen találmány tárgykörét.
A gyógyszer beadása és a gyégymrkészííraé»y
Egy jelen találmány szerint; vegyufetef vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sóját beadhatjuk önmagában egy humán betegnek vagy beadhatjuk gyögyszerkészitményekber·, amelyekben az előbbi anyagokat megfelelő vivöanyagokkal. vagy kötőanyaggal (kötőanyagokkal) kevetjük össze. A gyógyszerek elkészítésének és beadásának eljárásai megtalálhatók a következő kiadványban: Rsuráígton’ s Pltarmacologicai Sciences, Mack Publtshing Co., Easton, PA, utolsó kiadás,
A leírásban a „bead” vagy „beadás” kifejezések azt jeletek, hogy egy {1} általános képletű vegyüietet vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sóját vagy egy (í) általános képletö vegyüietet vagy annak gyógvszerészetíieg elfogadható sóját tartalmazó gyógyszerkészítményt beadunk, egy szervezetnek, hogy megelőzzünk vagy kezeíjSnk egy PK-te kapcsolatos rendellenességet.
A beadás módja alkalmasan lehet például, de n korlátozódva a következükre, orális, rskíáltsóöválkn· hártyán át történő vagy mtesztistális beadás. vagy íntramnszkulms, szubkután, esosdvelóbe adott, intratbecalIs, közvetlen .humvesttrikaláris, intravénás, intravibeális, mlraperiíoneáiis, inlranazábs vagy intraokuláris injekció.
97481-1045 SL
PCT/USÓl/OühlO
-29**'♦
Az előnyös beadási mód orális vagy pamatwális..
Hasonlóképpen, a vegyületet beadhatjuk tokáiban, és nem -szisztémásán, példán) ágy, hogy a vegyületet közvetlenül egy szolid tumorba iníekciózzuk, gyakran depó vágy elnyújtott felszabadulása készítményben.
Továbbá, a gyógyszert targetes gyógyszer-célbajuttató rendszerben is beadhatjuk, például turnor-speclflkus antitesttel bevont lípeszömában. A liposzómák í&rgetje a tumor, amely szelektíven veszt fel azokat.
A jelen találmány szerinti gyógyszerkészítményeket a szakmában jól ismert eljárásokkal állíthatjuk elő, például hagyományos keveréssel, oldással, grasaláláss&i, «fcazsírozással, őrléssel, etsuígeálással, kapsznlázással, a nedvesség megfogásával (««trapping} vagy líofüizáiással.
Azokat a gyógyszerkészítményeket, amelyeket a jelen íalálmány szerint alkalmazunk, hagyományos módon állíthatjuk elé egy vagy több fiziológiailag elfogadható vivöanyaggal, amely .kötőanyagokat és segédanyagokat {artaknáz, amelyek elősegítik a hatóanyag, feldolgozását olyan készítményekké, melyek gyógyszerészetileg alkalmazhatók.. A megfelelő készítmények a beadás módjától függenek.
Az injekcióhoz a találmány szerinti vegyületeket előáliithatjulí vizes oldatokba!?., előnyösen fiziológiailag kompatíbilis púderekben,: például Hsnk-fefe oldatban, Ringer-fefe oldatban vagy fiziológiai sóoldatban. A nyálkahártyán át forte®» beadáshoz olyan áthatelóanyagokat alkalmazunk a készitményheo, amelyek megfelelőek az áthatolandó gáthoz. Ezek az anyagok rendszerint ismertek a szakmában:.
Orális beadáshoz s vegyületeket ágy állíthatjuk elő, hogy a hatóanyagot a szakmában jól ismert, -gyógy» szerészetifeg elfogadható vlvöanyagokkal kombináljak. Ezek a vívöanyagok lehetővé teszik, hogy a találmány szerinti vegyületokfeói tabiettákaí, pilulákat, labdacsokat, drazsékat, kapszulákat, folyadékokat, géleket, szirupokat, sűrű szuszpenzlőkag sznszpenziókat és hasonlókat gyártsunk, hegy a beteg szájon át vehesse be a készítményeket. Áz orális használatra szánt gyógyszerkészítményeket előáll fosáéi u:k szilárd kötőanyaggal; adott esete» a keletkező keveréket megőrőljök, a grmüáhfotevefeket feldolgozzuk, miután kívánt eseten más megfelelő segédanyagokat adunk hozzá, hogy tablettákat vagy drazsémagokat kapjunk. Alkalmas kötőanyagok különösen a fotóanyagok, például a cukrok, beleértve a fektet, szacharózt, mamutot vagy szóróitól, a cellulőzkészhmények, például a kukorieakcménylíő, bózakeményítö, rlzskenfenyítő és burgouyaksményltö, és egyéb anyagok, például a zselatin, -a tragakaut mézga, a metíl cellulóz, .& todraxlpropihuetil cellulóz, a nátrium karbeximetíi cellulóz és/vagy a poMvmil plrroiiboH (PYP). Kívánt esetben szétesést elősegítő szereket adhatunk a készítményhez, például térhálós pofiviníl pirrolidoat, agait vagy algmsavat. Sőt, például nátrium alginátoí is használhatunk.
A dmsémagokaí megfelelő bevonatokkal láthatjuk el. Erre a óéba .használhatunk tömény eakore-idatok&t, amelyek adott esetben tartalmazhatnak gmiarábitartot, tálkamot, polívinü plrroiidont, cafbopol gélt, polietilén g.likolí, és/vagy titán dloxidot, fényező oldatokat és megfelelő szerves oldószereket vagy oldószerkeverékeket. Festékeket vagy pigmenteket adhatunk a tablettákhoz vagy drazsébevosstokhoz az azonosítás érdekében vagy az aktív vegyület-dózisok köteted kombinációinak megkülönböztetése érdekében.
Orálisan alkalmazható gyógyszerkésrifeíéxíyek például a zselatinból készült, kitolható kapszulák, valamint & zselatinból és képlékenyltöszerbői - például glicerinből vagy xzorbhból - készült puha, lezárt kapszulák. A kitolható kapszulák a hatóanyagokat tartalmazhatják fotóanyaggal, például Isktózzal, összekölőanyaggal, például keményítővel, és/vagy kenőanyaggal, például /alkummal vagy magnézium sztearáttíü és adott eseten stabilizátorokkal elkeverve. A puha kapszuiákbsa a hatóanyagokat feloldhattok vagy szuszpendMlathaíjuk megfelelő folyadékokban, például zsíros olajokban, folyékony paraffinba» vagy' folyékony polietilén glikolofchazí.
97401-1045 SL
FCT/ ŐS 01/04FT3
-30·
Ezekhez a készítményekhez ts. adhasunk stahilizátnrokat.
Ugyancsak alkalmazhatjuk a. kemény zselatin kapszules gyógyszeíkészítzuényeke?. Nem .korlátozó pél· dákén: a hatóanyag-kapszslás, orálisan aikahniizkató gyógyszerkészítmény lehet 50 és 200 mg doziserösségü (készittnénykód J-0! 1248~AA-OO, illetve J-931248-AA-öl), A két dóziserősséget azonos granulátumból készíthetjük el ágy, hogy különböző méreté kemény zselaíínkapszuláfea töltjük a gtanaiátuíueí, a 3~as .méretet használjuk az 50 mg-os kapszulához, és a 0-s méretet a 200 mg-os kapszulához. A készítmény összetétele lehet például a 2. táblázat szetiotí,
2. táblázat
Komponens ne- ve/fokuzata Koncentráció a granulátumban (iömeg%) Mennyiség az 50 mg-os kapszulában (mg) Mennyiség a 280 mg-os kapszulában (mg)
A készítmény kódja J-011248-AA J-81I248-AA-08 1-811248-AA-Öl
Hatóanyag NE 65,0 5Q,e 200,0
Mannit NT 23,5 184 72.4
Croscarmellose nátrium NE 6,0 4,6 18,4
Povidone K 30 NF 5,0 3,8 IS,2
Magsézimn sztearát NF 0,5 0,3« 1,52
Kapszula, „S weáish yelfow NF 3-as méret ö-s méret
A kapszulákat csomagolhatjuk barna üvegbe vagy műanyag palackba, hogy a hatóanyagot megvédjek a °C) kell tárolni.
Áz inbaláeiós beadáshoz a jelen találmány szerinti alkalmazáshoz szánt vegyieteket célszerűen aeroszolt sprével juttatjuk célba, nyomás alatt tartott csomagolási vagy porlasztót és megfelelő hajtógázt alkalmazna; a hajtógáz» nem korlátozódva a következőkre, lehet például dlklőtdiöussmetán, foldőriluomtetáa, diklórtcirafluorcián, vagy szén dioxiá. Nyomás alatt tartott aeroszol esetében a dózisegységet szabályozhatják egy szeleppel, hogy mért mennyiségei adagoljunk. Készíthetünk olyan zsefetinkapszuíákat vagy ssdadspatronokat, amelyek inhalátorhoz vagy msznOétorhoz használhatók, és a vegyölet» valamint egy megfelelő per alapanyag, például laktóz vagy keményítő· porkeverékét tartalmazzák.
A vegyüieteket elkészíthetjük pareneterális beadáshoz is, például bólnsz injekció vagy folyamatos iafőziő formájában. Az injekcióhoz való készítményeket készíthetjük egységdózisok, például ampullák formájában, vagy elkészíthetjük íöbbdósisa tartályokban, hozzáadott taxtősftószenel. A készítmények lehetnek ssuszpeazíók, oldatok vagy emulziók olajos vagy vizes vehiculamokban, és tartalmazhatnak s készítmény előállításához alkalmas anyagokat, például szusspendáló, stabilizáló és/vagy diszpersálö szereket.
97481-1045 SL
P€T/ÜS62/Ö4.813
-31Fareaterális beadásra- alkalmas gyógyswkészíhaények például az aktív vegyület egy vízbe» oldható formájának, például, de asm korlátozó jelleggel sójának vizes oldatai. Emellett az aktív vegyületek szuszperóéít elkészíthetjük iípoffl vehiculumhan. Megfeleld lipoftl vehfettlumok például a zsíros olajok, például a szezámolaj, a szintetikus- zsírsav észtetek, például az etil cicát és a ttiglícerídek, vagy olyan anyagok, infot a lipovzörnák. A vizes injekció szuszpenzsók temhnazhaörak olyan anyagokat, amelyek aövelík a szuszpenziő viszkozitását, ilyen például a -«átrium fcsttotímetíl cellulóz, a szerbit vagy a dextrán. Adott esetben a szuszpenziő tartalmazhat megfelelő stebílízáfe szereket és/vagy olyan szereket is, amelyek növelik a vegyületek oldhatóságát, hogy nagy koncentrációjú oldatokat készíthessünk.
Hasonlóképpen, a hatóanyag lehet por alakú, amelyhez megfelelő vshieulumot adunk használat előtt, például steril, pirogénmeoíes vizet.
A vegyüietékbői rekiális készítményekéi is készíthetünk, például kúpokat vagy visszamaradó beöntéseket, például hagyományos -kúp alapanyagokkal, például kakaóvajfáí vagy más ghceriáekkel.
A fsát leírt készítményeken kívül a vegyületekból depó készítményeket is előállíthatok. Ilyen hosszún haté készítményeket beadhatunk implantációval (például szubkután vagy iaönmuszkuláris módon) vagy' intramuszkuláris injekcióval. Egy találmány szerinti vegyüietet az ilyen jellegű beadáshoz, alkalmas polimer vagy bidrofób anyaggal (például gyógyszssrészetileg elfogadható olajos emühiiőbanl vagy Ioncserélő gyantákkal vagy rosszal oldódó származékának, példáid, de nem korlátozó jelleggel rosszul oldódó- sóláttak alakjába® alakítunk készítménnyé.
A találmány szerinti bidrofób vegyületekgyógyszerészeti vivősrtyagáaak: nem korlátozó jellegű példája az olyan oldószer-rendszer, .amely benzil alkoholt, nem poláros felületaktív anyagot, vízzel keveredő szerves polimert és vizes fázist, például VPD oldószer-rendszert tartalmaz. A YFD 3 vegyes% benzil alkohol, k vegyesül: nem poláros felületaktív Polysorbate Sb, és ó5 vegyes% polietilén glikol 3ŐŐ oldata, abszolút efanoiban térfogatra töltve,. A VPD oldószer-rendszer (VPDIDSW) olyan VPD-í tartalmaz, smely 3: l arányban van hígítva 5%-os dextróz vizes oldatával Ez az oldószer-rendszer jól okija a hídrofőb vegyületeket, és önmagában alacsony toxteitást idéz elő sztsztenás beadás esete, Természetesen sz ilyen oldószer-rendszer arányait jelentess® változtathatjuk anélkül hogy oldhatósági és toxiertási jellemzőit megváitöztaótáúk, Megváltöztaihaíjuk továbbá az oldószer-rendszer komponenseit: például más alacsony toxiciiásü, nem poláros· felületaktív anyagokat is alkalmazhatunk a Pölysorbate Ső helyett, megváltoztathatjuk a polietilén .glikol frakoiónferetél más bíokompatíbiiis polimerek helyettesíthetik a polietilén giíkolt, például poiívüüí parolidon, és más cukrok vagy políszacha.ridok helyettesíthetik a dexirózt.
Hasonlóképpen, a bidrofób gyógyszerkészítmények célba juttatásához más rendszereket is alkalmazhatok, A bidrofób gyógyszerek vehícaíumainák vagy·' v-ívőanyagamak jól ismert példái a iiposzómák és az emulziók. Ezenkívül bizonyos .szerves oldószerekéi, például áimdösatífcxldof is alkalmazhatok, bár ezeknek többnyire nagyobb a toxkúiásuk.
Ezenkívül a- vegyületeket célba jaíteíiiaíjuk elnyújtott felszabadulása rendszerekkel, ilyenek például a gyógyhatású szert tartalmazó· szilárd, híőrofófc. polimerek szemipenneábílis máinkat. Különböző elnyújtott fel szabadulásó: anyagokat állítottak már elő és ezek jól Ismertek a szakmában. Az elnyújtott felszabadulása kapszulák, kémiai jellegüktől függően, -néhány héttői akár löö napsai hosszabb Ideig terjedő intervallumban adhatják fe a vegyületeket A gyógyhatású. szer kémiai tulajdonságaitól és biológiai stóhllüásátöl fogsőeö a fehérjestabtlfeá481-1045 St
FCT/ÖS01/04S13
Sás további stratégiait tókateazhatjnk,
A találmány -szerinti gyógysztokompozielók tartalmazhatnak megfelelő szilárd vagy gél fázisú vivöanyagókat vagy kStötmyagökai. Az ilyen vívösjíyíígokra vagy kötőanyagokra példák, de nem korlátozó jelleggel, a. kalcium ksfbao&t, kalcium foszfát, különböző cukrok, keményítők, eelilufeszáresazékok, zselatin é.s polimerek, például a polietilén gilkolok.
Sok találmány szerinti PK-módosító vegyöletet készíthetünk cl fiziológiailag elfogadható só formájában, melyben a találmány szerinti vegyület képezheti a negatív vagy pozitív töltésű reszt. Olyat) sók, amelyekben a vegyület képezi a pozitív részt, például, de nem korlátozó -jelleggel, (a leírásban más helyen definiált) kv-atemer ammónium-sók, például a bidroklorid-, szulfát-, karbonát-, lafctái-, tarfsrát-, maláj-, m&leát-, szöktánát-sók, ahol a kvatarner anunóBiüra-csoport nittogéBatomja sasnak a találmány szerinti, kiválasztott vcgyüleínck a nitrogénatomja, amely a megfelelő savval reagált. Olyan sók,, esélyekben a találmány szerinti vegyület képezi a negatív töltésű részt, példán!, de nem korlátozó jelleggel, azok a nátrium-, kálium-, kalcium- és magnézium-sók, amelyek a vegyület karboxi-csoporijának egy megfelelő bázissal való reagáltatásával keletkeznek [Ilyen például a nátrium feidroxid (MaOH), kálium hidroxid (KOE), kalcium hídroxid (Ca(Ö:H);<) stb-.].
A jelen találmány szeristi alkalmazásra megfelelő gyógyszerkészítmények közé tartoznak azok a készítmények, amelyekben a hatóanyagok mennyisége elegendő a kívánt cél eléréséhez, például a PK-aktivilás tnóáosításához vagy egy PK-val kapcsolatos rendellenesség kezeléséhez vagy megelőzéséhez.
Konkrétabban, a .gyógyászatilag hatásos mennyiség a vegyület olyan mennyiségét jelenti, amely hatásos & betegség tüneteinek megelőzésében, enyhítésébe» vagy jobbra fordításában, vagy meghosszabbítja a beteg életéi.
A gyógyászatilag hatásos mennyiség meghatározásához jói édesek a szakemberek., különösen az itt közölt részletes leírás fényében,
A találmány szerinti eljárásokban alkalmazod bármely vegyület esetén a gyógyászatilag hatásos mennyiséget vagy dózist először a sejitenyészeí-vizsgálaíök alapján becsülheíjSfc meg. Ezután olyan dózist készíthetünk, amelyet állatkísérletekben használhatunk, hogy olyan keringési konceafeádótertoraásyt érjünk el, amely magában foglalja a seiííenyészeíbet! meghatározott lCj§: értéket (vagyis a vizsgált vegyűletnek azt a koncentrációsát, amely a PK-aktivítás maximális gátlásának léiét éri el). Ezt az információt szatáa arra használhatjuk, hogy pontosabban meghatározzuk az emberekben alkalmazandó dózist,
A találmány szerinti vegyületek toxicitáőát és gyógyászati hatásosságát szokásos gyógyszerészeti eljárásokkal határozhatjuk meg sejttsnyészeiekben és kísérleti állatokban, például a vizsgáit vegyüietre vonatkozó IC® érték vagy LD5;:. ériék tneshatározásával (mindkettőt tárgyaljuk a leírás egy másik .helyén). A sejhenyészetes Vizsgálatokból ás az álíatkiséríetekfcöl kapott adatokat felhasználhatjuk az emberek esetében alkalmazható dőzísiariomány meghatározására. A dózis változhat az alkalmazott dozírozási lomra és beadási mód függvényében. -A. pontos előírást, a beadás módját és a dózist az orvos- határozza meg a beteg állapotának ismeretében. (Lásd például Fing! és munkatársai, „ThePhamracologitodBasis ofTherapeuties”, 1, fejezet, 1, oldal (1975).]
A dózis-mennyiséget és dózis-áttorvalhmjri egyénenként állíthatjuk be « hatóanyagok olyan plazníasznjtjehtek eléréséhez, amelyek elegendők a kináz-médoshé hatások fenntartásához. Ezeket a plazmasziateket minimális: hatásos koocentráCKÓkaak (minimál etfective concentmíien, MEC) nevezik. A MEC minden egyes vagyaiét esetében más. de megbecsülhető az t?s riíro adatokból, például azt a koncentrációt, amely egy kínáz $Ö~ÓÖ%9'foSi-iÖ-fo, SL
PCT/USöl/04 SIS •·3>· φφ «««« os gátlásának eléréséhez szükséges, az Itt leírt vizsgálatokkal határozhatjuk meg. A MEC eléréséhez szükséges dózisok az egyedi tulajdonságokon és a beadás módján. máinak. KPLÜ-fezsgálatokal vagy bioesszéket alkatmázhatunk a plazmakoncentrációk megállapításához.
A dófes-istervallumokat szintén ueghatározhatiuk a MEC-értékekkel. A vegyületeket olyan rendszer .szerint kell beadni; amely az idd 10-9ö%-ában, előnyöse» 3Ő-5öv»-áhan, a legelőnyösebben 50-9(l%-ábast a MFC fölött -tartja a plazma-szintekek jelenleg az (1) általán©* képletö vegyítetek gyógyászatilag hatásos mennyiségeitek. 25-1500 rng.Wmap; előnyösen 3 mg/us*/nap. Még előnyösebben 5Ö-4Ö0 mg/mvsap.
Lokális beadás vagy szelektív felvétel esetés a gyógyszer hatásos lokális koacentfációját esetleg sesn hozhatjuk kapcsolatba a piamia-kosceaíráctóvai, és a szakemberek által ismer: más eljárásokat alkalmazhatunk a megfelelő dőzis-mermyiségete és dózis-imervalíumok meghatározására.
A beadott készítmény mennyisége természetesen- függ a kezelt betegtől, a. baj súlyosságától, a beadás módjától, s gyógyszert felíró orvos megítélésétől stb.
Kívánt esetben a készítményeket csomagoló vagy adagoló eszközben ádtífeafiuk elő, példás! az FDA által jóváhagyót!, készletben, amely egy vagy több, hatóanyagot tartalmazó ogységdözis formát .tartalmazhat. A csomagolás tehet például fém- vsgy műanyag fólió, például hölyagcsomagoiás. A csomagoló vagy adagoló eszközhöz használati utasítást is mellékelhetünk. A csomagoló vagy adagoló eszközhős meitókfehefenk egy teást a tartályhoz csatolva, olyan formában, amelyet a gyógyszerek gyártását, alkalmazását vagy· árusítását szabályozó állami hatóság előír, amely írás jelzi, hogy a hatóság jóváhagyta a készítmények formáját, vagy humán vagy állatgyógyászati alkalmazását Ilyen írás lehet például az amerikai egyesült- államokbeli Food and Drag Admfeistratiou által jóváhagyóit címke a vényre kopható gyógyszerekhez vagy engedélyezett termeket je lző fehraí. Flőállíthafenk olyan készltínénydeet. is, melyek, a találmány szerint; vegyületet kompatibilis gyógyszerészeti vsvöanyagban tartalmazzak, és ezeket is megfelelő tartályba tehetjük es címkével láthatjuk el, amely egy javaik állapot kezelésére utal. A címkén a jsvsllí állapotok tartalmazhatják tumor kezelését,, angiogenezis gátlását, fibrózis, cukorbetegség és hasonlók kezeléséi.
A jelen találmány tárgyát képez; továbbá, hogy egy találmány szerinti vegvüfeíet vagy sóját vagy elóany&gát más kemoterápiás szerekkel kombinálhatok a fent leírt betegségek vagy rendellenességek kezelésére. Például a jelen találmány szerinti vegyületek sót vagy olöanyago; kombinálhatjuk alkílező szerekkel, ilyen például a iluorursed (S-FU) magában, vagy feakovorínna; kombinálva; vagy kombínálhaduk más alteitező szerekkel, -ilyenek például, nem korlátozó jelleggel, más ptónídm-analógok, például az UFT, a eapeoítabln. gemeííabm és cyí&rabrn, az alkil szuifonátok, például a busulfa» (amelyet a krónikus granuloid leukémia kezelésére alkalmaznak), az improsalían és a piposulfsn; az aziridsnek, például a beuzodepa, carboquon, metnrsdepa és áz uredepa; az etöőtrimmek és metíhaelsntinok, például az altrstemm-, frietilénmelannn, trietiten&sxfnrarnid, trieriléatíofnszfortmrid és feniedíokneimnia; és a nitrogén mustárok, például s klőramhucil (amelyet a krónikus timföld leukémia, a primer makroglohuhnémte és a öem-Hodgkm-lmtfóma kezelésére alkalmaznak), a cíklofeszfami-á (amelyet a flo-ágkm-kőr, a myefema multiplex, a senrobiastoma, a ntellrák, a petefészekrák, n fedőrák, a Wilm -tnmor és a bmáatcs&oh izomszarkónta kezelésére h&sználoak), az estíamnstin, ifosfarsíd, novembrichírt, predntenusfin és az uracil mustár (amelyet a primer tromboeitózis, a nem-Hodgkín-limfrins, a kíödgkin-kór és a petefészekrák kezelésére alkalmaznak); és a triazonok, például a dakarbazin (amelyet a lágy
974S1-1045 SL
PCT/nSöl/GáSüo
-;>4* * » *0 X W * K ♦ * V 0 X 00 ν 0 0 0 *:♦' ♦* ♦0* » szövet szarkóma kezelésére alkalmismak).
Egy találmány szerinti vegyületet, sót vagy előanyagoí más· anthnetaboiít kemoterápiás szerekkel kombinálva is alkalmazhatta, ilyenek például, asm korlátozó jelleggel, a íólsav-aoalógok, például a meíhottexat (amelyet az· akut limfoid leukémia, a cborioepíthelíoma, grana-loma fungotdes, mellrák, fej - ás nyakrák és csont eredeté smtfköma kezelésére alkalmaznak) és a pteropterla; valamint a paris-analógok, például a merkaptoparia •és a tioguasia, amelyet az akut granateid, akut íimf iád és krónikus gmnuioid leukémia kezelésére alkalmaztak,.
Egy találmány szerinti vegyületet·, sót vagy elöanyagot természetes terméken alapuló kemoterápiás szerekkel kombinálva ís alkalmazhatta, ilyenek például, nem korlátozó jelleggel, a vinka-alkaloidok, például a vinblasztm (melyet a mell- ás hererák kezelésére alkalmaznak); a vinkrisztín és a viadezin; az epípodofilotoxinok, például az etopozid és a tenipozid, mindkettő használható a hererák és .a· Kaposi-szarkóma kezelésére; az antibiotikumos kemoterápiás szerek, például a dannorubtcin, a doxorabicin, az epirofeicm, a mltomycin (amelyet gyomra·-, méhnyak-, vastagbél··, mell-, hólyag- és hasnyálmsrsgyrák kezelésére alkalmaznak), a daotmotnyein, a íemozolomtde, a plicamycsn, a belomyem (amelyet a bőr, a nyelőcső, és a bögy- és ivasszexví traktus rákos megbetegedéseinek kezelésére használnak); és az enzimatikus kemoterápiás szerek, például az L-aszpsragmz.
A femíefcen· kívül egy találmány szerinti vegyületek sőt vagy előanyagot kombinálhatunk pladna koordinációs komplexekkel (cisplarin stb.}; szubszihuáh karbamtdokkal,. például hidroxikatbamiddal; metilhidrazinszármazékokkal, például prokarbazóm&l;: mellékvesekérgj gátlókkal, ilyen például a rnhotan, minoglstónrid; és hormonokká· vagy hormon-antagostistákkal, mint például ss sdrenokortíkoszteroídok (például a preáoisort), progeszííttekkd (például hidroxipregeszterost ksproát); ösztrogéne&kel (például dietüstílbösztrol); antiőszírogénekkel, sünt például a tamóxifen; androgésefekel, mint például a tesztoszteroa proploaáu és aromakor mbifeitorekkai, ilye» példáid az anasPosol.
Végül, egy jelen találmány szerinti vegyölet hatásos lehet a rnitoxaníronnal vagy a paeliíaxettél kombinálva szilárd tumoros rákbetegségek vagy leukémiás betegségek kezelésére, amilyen például, áe nem korlátozó jelleggel, az okai míeloíd (nem limlom) leukémia.
Általános előállítási eljárás
A találmány szerinti vegyületek előállításához a követező általános eljárást alkalmazhatjuk.
A mégfeleiően szubszrimált 2-oxmöoit (1 ekvivalens), a megfelelően szabsztituáh aldehidet (1,2 ekvivalens) és egy bázist {0,1 ekvivalens) összekeverünk egy oldószerben (1-2 mVmmei 2-oxiadol) és a keveréket körülbelül 2-12 óráig mslegitjök. Hűtés után a képződő csapadékot leszűrjük, hideg elanolial vagy éterrel mossuk, és vákuumban megszáritjtéc, hogy & szilárd terméket kinyerjük. Ha sem képződik csapadék, a reakclőkeveréket betöményhj&k, és a maradékot diklőnsetart.'eter-rel trltaráljuk, majd a keletkező szilárd anyagot szűréssel összegc'űjtjhk, és rnsgszárítjuk. A terméket adott esetben tovább tiszfíthasfuk kromatográfiásan.
A bázis lehet szerves vagy szervetlen bázis, Ha szerves bázist hsszttátesk, előnyösen nitrogéntartalmú bázissal dolgoznak. Szerves nltrogéatepalmd bázis például, de nem korlátozó jelleggel, .a díizopropshunís, öimetilamin, Íríetílarma, anilin, píridín, l,S-áiazsbtalo[5.4.1 Inadén- 7-én, pirroiidin és piperidin.
Szervetlen bázisok, például, de nem korlátozó jelleggel, az ammónia, alkálifém vagy alkálífoldfém bidt·· oxidok, foszkhok, karbonátok, hidrogérikarbooáiok,. hidogénszulfátok és atuídok. Az alkálifémek közé tartozik a lítium, a nátrium és a kálium, míg az alkáltfőidfémék közé tartozik a kalcium, a magnézium és a bárium.
A jelen találmány egy jelenleg íárgyalt előnyős, megvalósításában, amikor az oldószer protonos oldószer,
01-104 5 -S&
PCT/b301./Ö4 813
-35♦ «Χ«» ** «·*«« például víz vagy alkohol, a bázis alkálifém- vagy uikálilÖídFénj-Wíateá szervetlen -bázis, előnyőse» alkálifém vagy aíkáíiföldfém hiároxid
A szakemberek a szerves szmtézis általános elvei és a szabadalom leírása alapján meg todjs áilapitotü, hogy az adott reakcióhoz melyik a legalkalmasabb bázis.
Az az oldószer, amelyben a reakciói végrefeaiíjiík, lehet prolonos vagy aprotonos oldószer, előnyösen pretoaos oldószer. A '‘protoxsos oldószer' * jelentése -olyan oldószer, amely httfeogénaíomöt (mdrogénsíomokaíj tartalmaz oxigén- vagy uiírogénatc-mokhoz kovalens kötéssel kötve, ami a hidrogénatomokat érzékelhetően savassá teszi, és alkalmassá teszt arra, hogy egy oldott anyag hidrogénkötéssel szintén kötődjön hozzá. Protoaos oldószerek példán!, de mn korlátosé jelleggel, a víz és az alkobolol:
Az “aprotoöos oldószer lehet poláros vagy nem poláros, de egyik esetben .sem tartalmaz savas hidrogéneket, ezért nem képes hidrogénköíést létesíteni az oldott anyagokkal, Nem poláros aprotonos oldószerek például, de nem korlátozó jelleggel, a pentán, hexán, benzol, tohsoi, melilérs klorid és szén te&akiorid. Poláros aprotottos oldószerek például a kloroform, tettohidtöiurán, dimetllszottoxid és dxmetilfonssnriá.
A találmány egy jelenleg tárgyait előnyös megvalósításában az oldószer protosos oldószer, előnyösen víz vagy alkohol, például etanoi.
A reakciót szobahőmérséklet fölötti hőmérsékleten végezzük, A hőmérséklet általában körülbelül 30-150 X, előnyösen körülbelül S0--1OO °C, a legelőnyösebben körülbelül 75—85 X,. ami körülbelül az etetői forráspontja. A “körülbelül azt jelenti, hogy a hőmérséklet-tartomány előnyösen a jelzett hőmérséklet 1 ö Celsiusfokos tartományában, van, elöttyősefeben a jelzett hőmérséklet 5 Celsius-fokos tartományában vas, a legelőnyösebben a jelzett hőmérséklet 2 Celslus-fokos tartományában van. így például a “ körülbelül 75 C'C jelentése 75 ί lő °C, előnyösen 75 ± 5 X és a legelőnyösebben 75 ± 2 X.
A 2-öxíndolofcat és .aldehideket könnyes szistofeálhatjuk a vegyiparban jól Ismeri, eljárásokkal. A szakemberek szántára világos, hogy a találmány szerinti vegyületek előállítására más szhttézisutak Is léteznek, így a következők csak. példaként szolgálnak, és a találmányt ®s® korlátozzák.
Példák
A kővetkező készítötóyek és példák arra .szolgáinak, hogy a szakemberek még világosabban megérthessék és alkalmazhassák ideien találmányt- KzA »s«i korlátozzák a találmány tárgykörét, csak illusztrálják és szemléltetik.
Szintézis példák
A eljárás: pirtolok íormikzése
POClj-t (1,1 ekvivalens) adunk eseppenként dwedlforaisxnidhoz (3 ekvivalens)-10 X-on, majd hozzáadjuk a megfelelő pírrttlt dlmeíilíormmnidbsn feloldva, Miután két óráig kevertük, a reakciókeveréket vízzel hígítjuk, és 11 -es pH-ta lúgosítjuk 10 H KÖH-val, A keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, HjO-val mossak, és vákmwktenmeébe»: nsegszánljnk a kívánt aldehid előállításához.
S eljárás: & pbrolkarhossav észterek elsxappanosííása
Egy pírrolkarhonsav észter és KOH (2-4 ekvivalens) etetofes keveréket mftuxáltejuk, amíg a reakció befejeződését vékonvTéteg-kromatográfíával (TÍ,C) nem. észleljük. A lehűtött reakcióké verőket 3-as plí-ra savasunk 1 N HCl-lel A keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, vízzel mossuk, és váktsuntkemeneében megszánjak a kívánt párolkmbonsav előállításához.
57481-1045 SL
LCT/DSQ1/O4833
-.>«·
C eljárást Amidálás
Dirnsííiíönttanndbsn <0,3 M) oldott pirrolkarhoasav kevert oldatához l~stil-3~(3-dim«tilmro^ropii> karbodröxdde? {1,2 ekvivalens?, l-hsároxifcenzotriszoh (L2 ekvivalens) és iriebiatnim (2 ekvivalens) adunk. A megfelelő amint hozzáadjuk < 1 ekvivalens) és a reukeiókeveréket addig keverjük, amíg a reakció befejeződését sem jelzi a TLC. Ezután etd-acetátoí adunk a leakefekkevexékhez és az oldatot telheti NaHCöj-tal és (extra sót tartalmazó) söoldattal mossak, víztneotes MgSÖ4 felön, szárítjuk, és beíőmeftyíijük, hogy a kívánt amidet megkapjuk.
B eljárás: Aldehidek ás karbonsav sznbsztitneoseket tartalmazó oxíndolok kondanzádás reakciója
Az oxindol (1 ekvivaléask 1 ekvivalens aldehid és 1-3 ekvivalens pipsriáhr (vagy pirroíidio) etaaolos (0,4 M) keverékét Sö-HX) *Oo8 keverjük, amíg a reakció befejeződését nem jelzi a TLC. A keveréket ezután betöjnényltiük, és a maradékot 2 N HCl-fei savanyhjtái'. A képződő csapadekot vízzel és 'EtOH-ial mossuk, és vákunmkmeucőben megszáritjuk a. kívánt tennék előállításához.
E eljárás: Aldehidek és karbonsav szuhszdteensete. nem tartalmazó exindelek kondenzációs reakció ja
Azoxfedol (Ί ekvivalens), 1 ekvivalens aldehid és 1-3 ekvivalens pípendis (vagy pnrohdio) etaaolos (0,4 M) keverékét '90-1.00 CC -oa keverjük, mníg a reakció befejeződését nem jelzi a TLC. A keveréket szobahőmérsékletre britjük, a képződött szilárd anyagot vákuamszöfessel összegyűjtjük, efaáellal mossuk, és megszorítjuk a tennék kinyeréséhez. Ha nem. képződik csapadék a reakciőkevofek lehűtése nyomán, a keveréket befeményítjük és oszlopkrematográfíával tisztítjuk.
CL Féldák uxlndol-sztntézikre
A reprezentáns oxindoksk szintézisének kővetkező példái semmilyen' mádon nem korlátozzák a íalálmány tárgykörét Az alábbi leírásból a szakemberek számára nyilvánvaló, hogy a bemutatott oxín&n-szintéziseken kívül más szlmézisutaksí és reás oxbáoiokní is alkalmazhatunk a j elen találmány szerinti vegyületek előállítására. Az ilyen szintézisek és oxmdblok a jeles találmány tárgykörébe és szellőmébe tartoznak,
5-Amíno-2-{íXísdo;
5-Nh?ö~2-öxittdo!l (6,3 g) metanolban hidrogéneztünk szénre felvitt 10% palládium fölött, és 3,0 g (öö%~ os kiienneiés) enn szerinti vegyüfetet kaptunk fehér szilárd anyag femájában.
S~Bróm~2-ö xiíKfel ml aeetöíiiirilhez hozzáadott 2-oxiodolt <1,3 g) lehűtöttünk -10 °C~r&, és 2,0 g N-hrórnsrokelmmxdel adtunk lassan hozzá keverés közben, A rsakcíókewéket 1 órán ót kevertük— lö eC-on és 2 érén át ö;CC-on. A csapadékot összegyűjtöttük, vízzel mostak és megszárítettuk. így 1 ,$ g (90%-os kitermelés) cím szerinti vágyóié tét ksomoA, d-Metíl-ü-orindoi ml száraz éterhez hozzáadott dietíl oxaldtot (30 mii) keverés közben 19 g kálium etoxidhoz adtunk, amit 50 ml száraz éterben szaszpeudáhattunk.. A keveréket jéghlrööben lekötöttük, és 20 ml száraz éterben oldott. 20 ml 3-níiro-o-xiloh adtunk hozzá lassan, A sűrű sblétvörös keveréket reílax alatt melegítettük 9,5 órán át, sötétvörös szilárd anyaggá tőményítettók be, és 10% sátriumihiároxíddaí kezeltük, amíg szinte az összes szilárd anyag fel nem oldódott. A. sötétvőrös keverékei 30% hidrogén peroxidd&l kezeltük, amíg a vörös sah* sárgára, nem változott, A keveréket felváltva kezeltük Jö% nátrium hidroxiddal és 30% hidrogén perexiddal, amíg a sö07481-1045 SL
Ρ2Τ/0001/Ό4δ13 ·>.*>
φφ * * φ * « φ φ « * * * y » tétvörüs szia el nem tűnt. A szilárd anyagot leszűrtük, és a - szürietet 6 N sósavval, savanyítottak. A keletkező csapadékot vákoutnszöFésseí összegyűrjtüstök, vízzel mostuk,, és váksusn alatt szárítottak, így g (45%-;>s kitermelés) 2-m®Kl-ő-tutxofsniteetsavat kaptok szSrfcésíehér csapadékként A szilárd aayagot metanolban hidrogéneztük szénre felvitt 10% palládium fölött. és 9,04 g chn szerinti vegyüieteí kaptok fehér szilárd anyagként
7~Sróní“S-lílör~2-exssdol
5-Klór~3-oxíndöít.(16,8 g) és 19,6 g N-ferórnszukemímideí szuszpeadáltattek 190 ml acetoní-trilbenés 3 órán rcfiuxáltannk, A vékoaytéleg-krornatttgráfía (szilícium dioxíd, etil-acetát) 2 őrás rcfíaxáf-atásnál 5-klór-2-öxmdoít vagy N-tóuszakcmimidet (Rí 9,3), termékei (E.Í 0,85} és második terméket (Rf 0,9) matatott, amelyek arányai nem változtak egy ájabb órányi reSaxáltatás urán, A keverékei 19 C-ra kötöttük is, a csapadékot vákvaatszfiréssel összegyűjtöttük, 25 ml etanollal mostak, és 20 percen át szárazra szívattak a tofesárben; így 14,1 g nedves terméket kaptok (56%-os kitermelés), A. szilárd anyagot 200 ml denaturált etasolb&n szuszpeu·· ááltattuk, majd keveréssel es-reflux^tafesaí' iszapmesásuák (sfarry wash) vetettük alá lö percig. A keveréket jégfűrdőben 10 °C-ra kötöttük. A szilárd termékei vákunmszüréssel összegyűjtöttük, 25 ml etanollal mostuk, és vákuum alatt 40 °C-on megszáriwtak; igy 12,7 g (51 %-os kitermelés) 7-bróm-5-klör-2-oxmdolt kaptok.
5~Fla»rr2-oxiadol
S-Fluorizatint (8,2 g) fetoldottajrk 50 tnl hidrszin hidráiban, és 1,0 érán át refiuxáltattuk. A reakcíökeveréket «zártánJeges vízbe öntöttük. A csapadékot leszűrtük, vízzel mosóik, és yákuanáítoéttcébea megszárlfettök a címben megjelölt vegyület előállításához.
5-Mitre-2-oxlaá©í
2-Oxmáolt lé,5 g) feloldottunk 25 ml koncentrált kénsavban, és· a keveseket -10-(-15} ’C-on tartottak, miközben 2,1 ml festőig© salétromsavat adtok hozzá cseppenként. Miután a salétromsavat' beadagoltuk, a rcakeiőkeveréfcet ö ®€-οη 0,5 őráa át kevertük, és-jeges vízbe öntöttük. .A csapadékot szűréssel gyűjtöttük össze, vízzel mostuk, és 50%-ös eeetsavból kakristályosítottuk, A kristályos terméket ezután leszűrtök, vízzel mostuk és vákuum alatt megszáriteituk; így 6,3 g (79%) 5-nítro-2-o>:.indott kaptunk.
5~Án»ttöszn3£ö»il~2-öxsndrá
Egy 27 ml klómuifbnsavai tartalmazó löö ml-es lombikba lassan 13,3 g 2-oxindölt aásgclfeuik. A resk•etőkeverék hőmérsékletét 3ö '•'C alatt ráttohuk az adagolás alatt. A beadagolás urán a rsakeiőkeverékei szobahőmérséklete® 1,5 órán át kevertük, ŐS ^C-on hevítettük 1 órán áí, lekötöttük. és vízbe öntöttük. A csapadékot vízzel mostak, és vákuumkansucében megszárítottak; így 11,0 g 5-klárszalf<ítal-2-ox3aáolí (5039-os kitermelés) kaptunk, amit tovább; tíszíilás nélkül használtok. fel.
S-Klórsmlftol-S-oxindolt (2,1 g) adtunk 10 ml ammwram hídroxid 10 ml etauelbaa készített oldatához, és egy éjszakás áí szobaböméraékteto kevertek. A keveréket beíömmyltettük és a szilárd anyagot vákuuraszüréssei összegyűjtöttük; igy ö,4 g chn. szerinti vegyületet kaptok (2ÖH-os kitermelés) szürkésfehér szilárd anyagként.
5-izopropilamlno§zulfond-2-oxlndol
Egy 27 ml klérszulfoasavaí tartalmazé·100 ml-es len-bikba lassan 13,3 g 2-oxfeáoh. adagoltunk. A reakciokeverék hőmérsékletét 30 SC alatt tartottuk az adagolás alatt A regkciókevsréket szobahőmérsékleten 1,5 őráa át kevertük, 98 ^C-ort melegítettük 1 órán át, lehűtőttük és vízbe öntöttük. A képződött csapadékot leszür97 481-704 5 SL
8CTZOSO7/84879
-38tök, vízzel mostok, és vákunmkoneneéber; megszáríteöok; így Ií ,0 g <5ö%) d-kíórszujfbnil-z-ozisdolt kaptunk, amit további tisztítás nélkül isasznáihmk tel.
3g S-kiórszalfond-2-<!x;ndolt, 1,15 g izrtpropsisnsist és 1,2 nti piridint 50 ml diklójmeiánban kevertünk szobahőmersékletefi 4 órán át, és eközben fehér szilárd anyag képződött. A szilárd anyagot yákuomszüréssel 6sszegyöjt6hük, iszapntosfenak vetettük alá meleg etanollal, lehűtöttek, vákuumszöréssel összegyűjtöttük. és vákuum alatt saántettukdö C-on egy éjszakán át; így LS s. (45%) S-izopropilamiKCSZulRmil-z-uxlsdöit kapta nk.
Ή NMR (360 MHz, £>ΜδΟ-<Μ δ 10,69 (s, széles i'H, NH), 7,63 (dd, >2 és 8 Hz, IH), 7,59 (d, >2 Hz, iB), 7,32 (d, >7 Hz, Hl, NH-Sí»,6,93 (d, >8 Hz, IH), 3,57 (s, 2H), 3,i4-3f23 (m, IH, CH-(CHshK 0,94 (d, >lHz„ 6H, 2xCH3).
5-Ffe»Uatníö«szsdfes8-2-0X5nd®í
5'Klórszulfoníl-2-oz.in<loi (1,62 g, 7 mmol), anilin (0,782 ml, 8,4 mmol) és piridin (1 ml) diklórmetános (20 ml) szuszpeozíóját szobahőmérsékleten 4 órán: át kevertük. A rsakelökeveréket etil-aeetáttal hígítottuk (300 ml) és 1 N sósavval (16 tnl) savanyítottuk. A szerves réteget sátram hidrögénkarho-náKöl és séold&ttd mosíuk, megszántoimk és bedöményáteítük. A maradék® etanollal mostuk (3 ml), majd szíkkagéien kromatografáiluk íaeíanoVdiklórtSíehMJ 1:9 ebeussel; így S-lksaiíammoszulfeiíí-z-oxíndolt kaptunk, ’H NMR (360 MHz,: WSO-4> 3 10,71 (s, széles Hí, NH), 16,10 (s, széles IH, NH), 7,57-7,61 (m, 2Ή), ?,17-7,22 (m, 2H), 7,06-7,09 (m, 2H), 6,97-7,0 (m, IH),.6,88 (d, >8,4 Hz, Hl), 3,52 (a, 2H).
2-Oxö~2,3-dibídrs>~lH~índeI-5-szulfonsav pírldln-l-itaüntd
5-Kiörszuifőnil-2-osmdoi <3g) és o-aminepírídín (i ,46 g) pinthnes (15 sul i oldatát szobahőmérsékleten egy éjszakái! át kevertük, miközben barna csapadék jelent meg, A szilárd anyagot leszűrtük, etanollal mostuk és vákuum alatt szárítottuk; 1,4 g (38%) 2-exo-23-díhidro-1 H-indol-5-azulfonsav pírídin-d-iiamidot kaptunk.
{HNMR (360 MHz, DMSO-d,,) o 10,74 (s, IH, NH), 10,39 (s, Hl, SO2NH), 8,27-8,28 (d, IH), 8,21-8,23 (m, IH), 7,59-7,62 (m, 2Ή), 7/14-7,68 (ni, IH), 724-7,28 (m, IH), 6,69-6,71 (d, IH), 3,54 Η, 2H).
MS m/z (APCl-H 290,2.
S-Feailexiadeí
5- Bf6ra-2-öxiudolí (5 g, 23,5 mmol) 110 ml tolnaiban és 110 ml etanolban feloldottunk ke veréssel és egy kis melegítéssel. Teh-akísztírifersiltbszlínjpalládiumlöj-t (1,9 g, 1,6 mmol), majd 40 ml (80 mmol) 2M vizes náirínm karbonátot adagöltimk be. Ebhez- a keverékhez benzol beröusavai adtunk (3,7 g, 30,6 sutiéi), és a keveréket 160 “C-ös olajfürdöfeen 12 órán át atelegítsttük. A reakcíókeveréket lebütöíí&k, etíl-aeetáttal kigítoPak (500 mi), teliíeit nátrium feídrogénkarhenáítal (200 mi), vízzel (206 ml), 1 NHCl-Ial (200 ml) és ,sóoldattal (260 ml) mostuk. A szerves réteget magnézium szulfát fölött szárítottuk, és betőményítettük; így hanta szilárd anyagól kaptunk, .A áikiórmeíánnal végzett íriturálás nyoasáa 3,8 g. (7754) 5-feml-2-oxt«döií kaptunk rezsdaszfeíí szilárd anyagként, !H NMR (360 MHz, DMSO-de) δ 10,4 (széles s, Hl, NH), 7,57 idd, >1,8 és 7,2 Hz, IH), 7,5 to 7,35 (m, 5H), 7,29 (m, IH), 6,89 (d, >8,2 Hz, IH), 3,51. ís, 2H, C%CO).
MS m/z 269 (M).
A következő oxíndoiökat hasonlóképpen készíthorjűk el,
6- (3,5-ölkkkfosíl)-l,3-dihidromdoí-2-oa
97401-1045 SL
PCT/7031/04813
-39X χ ♦♦ {Η NMR (360 MHz, DMSO-4) δ 111,46 (széles 3Η, NH), 7,64 (d, >1,8 Hz, 2H>, 7,57 (m, IH), 7,27 (m, 2H), 7,05 (d., »,1 Hz, IH),3,5 (s, 2H).
MS-EWz 277/279 [M]\ ó-(4-BatSféMÜ)-13'ditódm«4»A2~öR
Ή NMR. (360 MHz, DMSO-d,) S 10,39 (s, IH, NH), 7,49 (d, >8,0 Hz, 2H), 7,25 (d, >8 Hz, 5H), 7,17 (dd, >1,5 es 7,8 Hz, íH), 6,99 (d, >1,5 Hz, IH), 3,48 (s, 2H, ORCO), 2.60 (t, > 7,5 Hz, 2Hz, CH2CH>), 1,57 ím, 2H, CHA 1,32 (m, 2H, -CH2>, 0,9 (t, >7,5 Hz, 311, CH<).
ó-iShtopröpil-S-mmaxitoníD-kS-dihldnsindol-S-on ’H NMR. (360 MHz, DMSO-ds.) δ 10,29 (széles s, IH.NH), 7,16-7,21 (m, 2H>, 7,08 (d,: >2,4 Hz, IH), 6,97-7,0! (m, 2Hj, 6,89 íd, >0,8 Hz, IH), 3,7 i (s, 3B, OCH3), 3,47 (s, 2H, CH2CO), 2,86 (m, ÍH, CH(CH3)2), 1,19 (d, > 6,8 Hz, OH, CH(CH,h).
MS-Bm/z 281 (Mf,
H4-ErófeKÜ>13-áihidre}Káói-2-öK
Hí NMR (360 MHz, DMSO·^) S 10,39 (széles s, IH, NH), 7,50 (d, >8,2 Hz, 2Hj, 7,28 (d, >8,2 Hz, 2H), 7,25 (d, >7,5 Hz, IH), 7,17 (dd, >1,6 és 7,5 Hz, IH), 6,99 íd, >1,6 Hz, Hí), 3,48 (s,2H, CH2CO), 2,63 (q, >7,6 Hz, 2H, C1HCH;), 1,20 (t, >7,6 Hz, 3H, CHjCH j).
MS-E1 m/z 237 [Mf.
6-(3-lzoprop!lfena)-l,3-díhidr»ÍHá0l-2-OK sHNMR (360MHz,ÖMSO-d0 5 10,37 (széles s, IH, NH), 7,43 (jn, IH), 7,35-7,39 (m, IH), 7,17-7,27 (m, 3H), 7,01 (4, >1,8 Hz, ÍH), 3,49 (s, 2H, CH2CO), 2,95 (m, IH, CH(CH3)2), 1-24 (d, >6,8 Hz, ÓH, CH(CH».
MS-ΕΪ m/z 251 [Mf.
6~(2,4-.B5metoxsfe5ííl)~l,3-dí35s4rolndöl-2-öí5 SH NMR (360 MHz, DMSO-ds) δ W,28 (széles s, IH, Níl), 7,17 (m, 2H), 6,93 (dd, >1,6 és 7,6 Hz,
IH), 6,86 (4, >1,6 Hz, IH), 6.63 (d, > 2,4 Hz, ÍR), 6,58 (dd, > 2,4 és 8,5 Hz, IH), 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,74 (s, 3H, OCH2), 3,45 (s, 2H, CH2CÖ).
MS-H m/z 269 jMl'.
6-?írjdsíí-3-lI-l,3-áshí4röÍKdeI-2-«s (HNMR(360 MHz, DMSO-á*) S 10,51 (s, IH, NH),8,81 (d, >2,5 Hz, IH), 8,55 (dd, >5,8 és 5,7 Hz, IH), 8 (m, IH), 7,45 (dd, >5,7 és9,3 Hz, IH), 7,3 (m, 2H), 7,05 (s, ÍH), 3,5! ís, 2H, GtRCO).
MS m/z 210 [M]7
2-Oxö“23-álhídr»l.H-máöM-karb«Rsav--(3-klór-4-eíoxjfeBíd)-amK5
4-Karhöxi-2-oxiiídoÍ (200 mg, 1,13 mmöl) és 3~klór-4-metoxífesílamm (Í78 mg, 1,.13- tnxaol) dimeíilíormamtdos (15 ml) oldatához szobahőmérsékleten benzoöiazol-l-doxítrísz/áimetÍla-aHagídszfómm» bexafmorfoszfátoí (BOP reagens, 997 mg, 2,26 -mmol), majd ó-dimetákmínopiriámt (206 mg, 1,69 nrnscá) adtunk. A keveréket szobálfömétsékten. 72 érán át kevéitfik. A reakcíókeveréket etii-asetattaí (300 ml) hígítottak, leltet nátrium hidrogemíarbonáital (100 ml), vízzel, 2 N sósavval (100 ml), vízzel (3x200 mi) és séoldattai mostuk. Ezután magnézium szálfát fölött megszántottak és betöméayítettük, A maradékét etii-aeetáttai trímráituk, és
97481-3045 71
00770301/04913
-40«anek eredosényekést 2-<sxo-2,3-dibidro=-lH'iadoM-karlx)nsav-(3-klóM-metoxiíén}l>miidot kaptunk rózsaszínű szilárd. anyag formájában.
‘Η NMR (360 MHz, DMSO-4) 5-10,50 (s, széles IH, NH), 10,12 (s, szeles IH, NH), 7,9 (s? >2,5 Hz, IH), 7,62 <M >2,5 és 9 Hz, IH), 703 (d,. 3-7,6 Hz, IH), 7,32 (t< 3-7,6 Hz, Hi), 7,13 (d, 3,-9Hz, IH), 6,98 (á, 1=-7,6 Hz, IH), 3,83 (s,'3H, OCHS), 3,69 ís, 2H, CHH.
MS-Elm/z316[MJ\
4- Kasrboxi-2-exlndoi
Trimetifoztltidinzometán hesátxss (2M) oldatát cseppenként 2,01 g 2«klör-3-karboxi-ntebeazoí 21) ml metanolba® készült oldatához adagoltuk szohahőmérsékiete®. amíg már nem észleltünk gáziejlődést. Ezután ecetsavst aátuak a keverékhez, hogy a többlet trimeülsziíiiáiazomelánt kvencse'ljük. A reakeiókeveréket vákuum alatt bepároltuk, és a maradékot kemencébe®.szárítottuk egy éjszakán át. A kapott 2-klór-3-íríetoxikarbosítelttöbenzoi elég tiszta volt a következő reakcióhoz.
DskoííI malonátot (6,0 ml) -adtunk 2,1 g nátrium hídna 15 ml DMSO-ban készük, jéghideg .saw^enziőjához. A reateókeveréket 100 eOon 1 őrén át 'hevertük, majd szobahőmérsékletre aütöttök, i-Klör-'d-öteíoxikarboniinítrobeuzoh (2,15· g) adagoltunk be egy részletbe®, és a keveréket 160 aC-os melegítettük 1,5 órán át A. reakeiókeveréket ezután ssobahőmérsckíetre hütöttük, jeges vízbe öntöttük, S-Ö& pH-ra savanyitoííak,, és etti-acetátial extraháltak. A szerves rétegei sóoldattal mostak, vízmentes nátrium szulfát fölött szárítottuk, és betöRtényiiettök; így 3,0 g dimetil 2-msíoxíkarbö8Íl->nítmfemímatonátöt kaptunk.
A dímstit Z-Kteíoxikarbosil-ő-nihofetdlmslonátot (3,0 g) 50 ml 6 N sósavban reíhixáUattak egy éjszakán át, A keveréket szárasra betöményítettük, 28 mi etanol; és 1,1 ónfll) kloridot adbmk hozzá, és a keveréket 2 órán át möuxáSattuk. A keveréket Celite-en szűrtük át, betöményítettük, és .sziíSsagálea.krmnatogmfálfok stil-aeetátthexámeeetsav -eluenssel; ágy 0,65 g (37%) 4-k3tboxí~2~oxtttáoh kaptunk fehér .szilárd anyagként.
f:H NMR (360 MHz, DMSO-<) S 12,96 (s, szeles IH, COOH), 10,74 (s, széles IH, NH), 7,53 (d, 3-8Hz, IH), 7,39 {;, >MH, IH), 7,12 fd, >8Hz, IH), 3,6? (s, 2H>.
I). Firrohsznbsztifoálf 2-indoksosek szintézise
L példa
5- (5-Bróm-2-öxö~l, 2-dihiílroiadol-3-üídéfimeíii)-2-bopropíM~f«all- lH-|d=rrol-3-karboa»av-0-diethám;nopr«pil);amid
2-AmmoacotofeaoB hidrokfortd (1 ekvivalens), etil izobatirílacetát (1,2 ekvivalens) és náhroni aortái (2,4 ekvivalens) vízben elkészített keverékéi 1ÖÖ cC«on '18 órán át kevertük, majd szofeaböméséklette hütöítük. A vizes réteget dekantáítuk, és az·, olajai ehi-aeHáiban oldottak. Ezután vízzel és sóoldattal mostuk, majd megszáritottuk; így (93 /4) 2-izopropii-4-fenil· iH-psrrohS-kaj-bonsav-^ílésztert kaptunk vörösesbarna olaj formájában.
Ή NMR 000 MHz, DMSO-cfe) Ö 11,21 (s, széles IH, NH), 7,144,2? <m, ÓH), 6,70 (d, >2,7 Hz, IH), 4,02 (q, >7,1 Hz, 2H, OCRjCH )., 3,65 (m, IH.CH(CHjh), 1,22 (d. >7,5 Hz, 6H,CH(CH3)jj, 1,84 (t, >-7tí Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-H1 m/z 257 (kfj.
A fond pirrolt az A eljárással forsnilezfük, és (41%) 5-fonnü-2-£Zöpropil-4-foiíl-lH-pfool-3-teboasav-etüésztsrt kaptunk vöröses szilárd anyag formájában.
9? 4 SÍ-10 45· S5,
PCT/W301-/848=13 « W * « * 9 9 ·* * » 9 ♦ * « « «»«» s» ’ ».’ * * * * » * · » » * ♦· »» »» (, ».» ,»»» ♦ #*» !íí NMR <300 MHz, DMSO-&) § 12,3.5 is:, széles IH, NH), 9.14 (s, IH.. CHO), 7,36 ís, 5H), 3,96 (q: >7,1 Hz, 2H, OCHjCHj), 3,74 [m, IH. CH(CH3hi 1-29 fd, >6,9 Hz,6H, CH(CK3)2], 0,90(t >7,1 Hz, 3H, ÖCHjCHj.}.
MS-El m/z285 (ΜΊ.
A pjriolkarbossav észtert a B eljárással hidrelizáltak, .és (57%) 5-fomtü-2-ízopropíl-4-fentl-lH-pt!vol-3·-karbonsavatkaptunk bézs színű szilárd anyag termájában.
!H NMR (300 MHz, DMSO-» δ 12,28 (s, széles Hí, COQH), 12,02 ís, széles IH, NH), 9,10 (s, ÍH, CHO), 7,35 {s, 5H), 3,81 <ro, IH, CH(CH3),), 1-28 (á, >6,9Hz, 611 CHÍCHró)·
MS-EI ró 257 (Ml5~Brón?~'1,3-íKhidroiadol-S-oní (129 rag, 0,31 mmol) 5-fonstl-2-.sa^propil-4~feníl-lH-pjrrol-3-lwbo}tsav-(3-díeíilam:noprG-p!l)amíddal (slőáliítva a C eljárással) kondenzáltatíunk; így 120 mg Í7 1 %} etet szeri®» vegyöletet állítattok elő.
’H NMR (300 MHz, DMSO-&) δ 14,23 ís, széles ΪΗ, NH), 11,08 is, széles ÍH, NH), 7,38-7,55 (tn, TH, Ar-H és CONHCH,), 7,30 (s, IH, H-vinil), 7,26 idd, >1 ,8 és 7,8 Hz, ΊΗ), 6,85 (d, >8,7 Hz, IH), 3,36 [m, IH, CH<ÖHU 3,07 íffi, 2H, CH2), 3,34 (q, >7,1 Hz, 4H, N(CH2CHj)2j, 2,22 (t, >6,9. Hz, 28, CH,.k 1,40 (m, 28, CB), 131 {d, >6,9 Hz, 6H, CHíCKjhJ, 9,86 [t, >7,1 Hz, ŐH, N(CBCH3):].
MS m/z 565,1 31 Ij.
2. példa
5~(5?Brőm-.2-ew4<2~di6tdrotnd^>3-Btdénmerii)-2-izeprepÍM-feniI-lH-ph’r<>l-3~km*b(msa^(3>
-ptrrolídln-l-&pr®pH)amjid
5-(5-Br6j«-2-o>;:O-l,2-dihidroindo:-3-ibdém5iciil)-2-?zopropd-4-íéaiMH-pirrol-3-fcarbensavat (127 mg, 0,28 tw-íxt-oi) 3-pitTo3ídia-l-lhwopílaiaKuiaI: (43 mg, 0,336 ttod) koadenzáltattok; így 140 mg (66%) sím szerinti vegyöletet kap tok., !H NMR (300 MHz, DMSO-4) § 14,40 is, széles ÍH, NH), 7,38-7,47 (m, 7H), 7,23-7,27 (m, 2H), 6,84 (d, >8,1 Hz, ÍH), 336 <in, IH, aí(CH})2), 3,08 (m, 2H, CH>), 2,30 (ra, 4H, 2xCH2), 2,20 (t, >7,0 Hz, 2H, CH2), 1,62 (m, 4H, 2xCW, 1-42 ít, >7,0 Hz, 2H, CB), 3 ,31 (d, >7,2 Hz, 6H, CH(CHB).
MS-El m/z 560 és 562 (M’-l és M>lj.
5-(5-Bróm-2-<íXö-lí2-dil!Íáreísidol-3-ilídéametl1)'2-ÍZOpropi3~4-feaíMH~pjrroN3'-karfe»í3Síív-<2-áietiSammoettijamid
5-Bráss- l,3-dihídrotrsáöl-2-o«t (57 mg, 6,27 awlj S-fermíÍ-2-izopKspií-4-fenii-íH-pinO?-3-k3rbossav~(2-díedisminoeísl)aHdd~d;d (120 tag) koadeszjötoask; így 78 mg (53%) eto szerinti vegyöletet áüböttnsk. elő· sárga szilárd anyag formájába?*.
*H NMR (300 MHz, ÖMSÖ-άΒ δ 14,23 (s, széles IH,.NH), 11,09 (s, széles IH, NH), 738-7,51 <m, 6H), 7,25-7,28 (m, 2H), 7,19 (1, ÍH, CONHCHj), 6,85 « >7,8 Ηζ,ϊΗ), 3,43 (m, IH, CH(CB)2], 3,11 <m, 2Ή,
CB), 2,28-2,39 (m, 6H, N/CBCBb és CB, 1,31 (d, >6,9 Hz, CHCCH^), 0,85 [í, >7,0 Hz, 6H, NÍCH2CH.j)'2·].
MS-El ?fos 548 és 550 [MM és MMi],
4. példa
9748 2-1045 SL
PCT/0301/04813
-42«#
Ο * « »*.« ♦« 9
9 φφ * + ♦ Φ »·Χ· 9 φ φ ** «♦*«
5-(S-Bróm-2-oxn~3,2-dÍhidrei»d«!-3~5!idé.anietn)-2-d:z»propíl-4-feKÍl-lR-pir!rol-3“karfeenssv43-(4-ntetílplperazm-S-iljprepillamíd
5-Bróm-I,3-»álhsör8Ínílol'2-oní <53 mg, 0,25 ntmel) 5-&inn!-2-Í2c>pí-cp!l-4-!ésiMH-=pnrn!3-ksrbo:asa$; (3-(4-melilpiperazm· l-4)propi!]aíniádai (300 mg) konáeazáltatttmk; így 6-5 mg cim szerinti vegyületet álsiícinsnk elő.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 14,22 (s, széles IH, NH), 11,88 (s, széles 141, Ml),-7,23-7,50 (m, 9H.s, 6,85 (d, 3-8,7 Hz, IH), 3,3? (m, IH, CRíCRóij,3,85 (m, 2H, CH2), 2,24 (m,-SR, 4xCH>), 241 (m, 5R, CH> és CH;i)4,42 <m,-2H, 1,31 [d, >?,2Rz, 6H, CR(CR3)2)..
MS-B m/z 589 és 591 [MM ésM^l],
5, példa
5-(S“®í'ém-2-oxo-l,2-dtfeldruhídol“3-ílsdéametÍll~2-meiil-4-íeaíS-ni-pírrol-3~kas'boosasí42-pir.rn!idín~í-Í!etil)amíil
5-Bróm-l,3-dibidroiadí>i-2-oat (44 tag, 0,21 mml) 5-formi!-2~med3-4-íeniI- Hí-pím>í-3-karijonsav-(2-pirrídídm-l-mdjsmid-dal (70 mg, a fend izöpRípd-anaiéggsl azonos módost előállítva) kenáenzáltattönk;- így 0,03 g (27%) cím szerinti vegyületet állitótodí elő sárga szilárd anyag tormájában.
'H NMR (300 MHz, DMSÖ-cUd 13,8? (s, széles 1H,NH>, Η,Π (s, széles IH/NH), 7,36-7,5! (m, 6H), 7,26 sdd, Mi,8 és 8,1 Hz, IH), 7,2 (s, IH, Hrviml), 7,09 (m, IH, CÖNHCHA, 6,83 (d, 3-8,1 Hz, IH); 3,17 (na, 2H, NCH9,2,48 <m, CH2), 2,29-2,35 <m, 6H, 3xNCH2), 1,59 (m, 4H, 2x€H2i,
MS-El m/z 518 és 32öjM'M és M%lj.
6. példa
5~(S-Brém-2Oxo-l,2~diSHdrömáol-3-illáérm5e®-2-medl»4-fend-lR-pis-ríd-3-ksirbensasf-(2-dimeíüstmmeeri))asnld
S-Bróm-1,3-dibidro!ndoI~2-cní (46 mg, 0,22 mmol) 5-foCTrdI-2-metil~4-(éníi- [H-pirrol-3-kaxbonsav-(2“dimetilaminoeiiliamiddai (65 mg) kondenzáltatok; igy 60 mg (555«) cím szerbit! vegyületet állítotok elő sárga szilárd anyag formájában ’H NMR. (360 MHz, DMSÖ-d4 6 13,86 (s, széles IH, NH), 11,08 (s, széles ÍR, NH), 7,47-7,49 (m, 2H), 7,38-7,4! (m, 4H), 7,26 (dd, 3==2,2 és 8,3 Hz, i H), 7,21 (s, IH, H-viml), 7,04 ím, ÍR, CONHCHj, 6,77 (á, 3===8,3 Hz, IH), 3,15 (m, 2H,NCR2>, 2,48 (m, CH3)> 2,16 (í, >6,8 Hz, 2H, 3xNCH2), 2,02 (s, 6H.
MS m/z 493 és 494,8 [NT és 802].
5-(5-Brém-2-öxo-R2-dihiőröindo!’3-llláénmet!!)-2-metíM~fesÍI»lH~pjj-5-eP3-karbonsav-(3-éleí!Íambmpreptljamíd
5-Bróm-l,3-díhísroin.dcíl“2-ont (0,47 g, 2,2 mm!) 5-íörmü-2-med!-4-fes4--lR~p5rrol-3-karbonssv-(3-dietílaminnprnpiijamiddal (0,75 g) kondenzáltatok; így 0,11 g (4238) ate -szerinti vegyületet állítotok elő narancssárga szilárd anyag Ibírnáiábas.
'H NME (300 MHz, DMSÖ~d;ó Ő 13,86 N, széles IH, NH), 7,42-7,46 ím, 3H), 7,37-7,50 (a, 7H), 7,24-7,28 (m, 2H), 6,83 íd, 3===84 Hz, IH), 3,09 (is, 2H, NCHj),2,45 (s, 3H, CH3), 2,38 (q,>74 Hz, 4H, 2xNCH2CIÍj), 246 (t, 3-6,9 Hz, 2H, NCH2), 1,42 (ra, 2R, NCÍlj), 0,87 0, »4 Hz, 6H, 2xNCH2CH3).
MS-1H m/z 535,0 és 537 jM* és ^2].
97481-1.045 Sl.
207/O S ö l/ 04 02.3
5-(5“Brő«K-2-exo-í,2-átfej<froiadal~3-2íáéajB«tÖ)-2>4-diwt8>-01-pirröl;-3-iíarbö»sav~(2’
-dimetílandnö-etdlamid
Törc-butil 3-oxobntírét és nátrium nitót (1 ekvivalens) ecetsavas keverékét szobahőmérsékleten kevertok, és így íerc-bvtd-2-biárexjm:ni>-3-oxob«bráteí álliiOttunk elő.
Enl-3-öxofenrlrátoí (1 ekvivalens) «mkport {3,8 ekvivalens) és nyers teíe-teü-S-h'kkoxxmáno-S-exohtiíjfá-ol eeetsavban kevertünk 60 öC-m 1 órán át. A reakcióke verőket vízbe öntöttük, és a szőrletet összegyüjfőttük; így (65%) 2-tee-feöttíoxika{bomi-3,5-<SmisriM-eíoxtkarbnndpimdt kaptok.
2-tere-BtJtücxikarb<>ídi-3,5-dünedl-4-etoxíkarbonilpkrcl és iríetií orteforntiás (1,5 ekv.) keverékét írifiaorecetsavba» kevertük 15 °C-on 1 órás át. A reakejókeverékeí betöroényítettük, és a maradékot tisztítottuk; így (64%) 2.4-<btnetil-etoxikarboa!l-5-jbrníítöirröb kaptunk sárga tök firmájában.
2,4-Dírocti.i-3-etoxík<33-bonÜ-5-S>rn!ÍÍpirrolf hiároiizáhsrok a B eljárással, és így (90%) 5-fi>tmil-2,4-tiitnetil- 1 íí-pírcoi-3-karbonsavat kantnak.
’HNMR(36©MHz,DMSO-4 ) 6 12(szétess·,2H,NHésCO2-H),9,58 (s, ÍH,00,244(s, 3H, OH), 2,40 (s, 3H,CW).
MS 05/7,262^1
5- ;Brőro.-l,3-díhídroródol-2-oní.(0,17 g, 0,i8 romol) S-fotrml-X^-titoetjl-iH-pjn'OÍ-S-kabon^v-iS-ífeieühtminoetiilamíddal (0,2 g, a C eljárás szerint elkészítve) kondenzáltadnak a B eljárás szerint; így 0,3 g (83%) cint szerinti vegyületet áílííof&tnk efö sárga, szilárd snyag formájában.
Ή NMR (369 MHz, DMSQ-d*} δ 13,60 {s, széles IH, NH), 10,94 (s, széles Π1, NH), 8,07 (d, >1,8 Hz, IH, B-4), 7,75 (S, ÍH,H-visil), 7,44 0, >5,2 Hz, IH, CONHOH), 7,24 (dd, 3-1,8 és 8,4 Hz, ÍK, H-6), 6,82 (áf >8,4 Hz, ÍH, H-7), 3,26-3,33 (ax, 2H, NCH,), 2,42 <s, 3H, Ok), 2,41 (s, 311, Oi3), 2,38 (t, >6,7 Hz, 211, NCH2),2,18(a, 611, NCOíjfc},
MS-E1 m/z 430 és 432 [M>és· M>ij.
7. példa
2,4-®is5etll~5-f.2-nso-6-feíi5Mí2-d!hiás-eí5idöi-3-ibüén.5n«ril)-lH-pírröl-3-kafb«nsav-{2-diroetilaminoeíillaxídd
6- Fénii-1,3~diktároindbí-2-tmt (0,17 g, 0,8 mmol) S~foraü-2,4-áhnetií~ 1 H-páToB3-karbonsav-(2-átmetiiaminoetil)atnjddal (0,2 g) k.endettzáUatiunk; igy 0,13 g (36%) cím szerinti vegyöletet kaptok sárgásttarascs szinti szilárd anyag formájában.
lH NMR (360MHz, DMSO-dd δ 13,59 (s, széles Hl, NH), 10,93 (széles IH, NH), ?,85 (d, > 7,92 Hz, IH, 1-1-4), 7,63-7,65 (m, 3H), 7,40-7,47 (χ», 311,), 7,32-7,36 (m, IH, Ar-H), 7,30 (dd, >1,6 és 7,9 Hz, ΓΒ, H-5), 7,11 (á, >1,6 .Hz, ÍH, H-7), 3,28-3,34 (m, 2H, NCHX), 2,43 (s, 3H, CHj), 2,41 ís,3H, OEb 2,38 (í, >6,8 Hz, 211, NOB), 2,18 [s, 6H, N(CH<h].
MS-Eí m/z 428 (Μ A lö, példa
S-(5“íűér-2-öxo-í,2-d3bidrölndtd~3-ilÍdén3wlil)-2,4-<lí?rsetil-lH-plrr»l-3-fearbos3iS3v-(2-dixsíeiílsroin»-e(íl)am.id
974 81--3045 SL
PC>ÜS02../Q4A13 ** »<·*
5-ΚϊόΜ J-áíhiánnndoi-S-on· <0,1 g, 6,6 tnsnol) 5-for:5rjl-2,4’djmcíi1-lH-pjrral-3-kiirborísav-í2-dásctílaínmeettíjaniidd&l (0,15 g; krmdmizákaínmk; igy 0,22 g (9086) cim szerinti vegyüietet kaptunk sárga színű szilárd anyag formájában.
;H NMR <300 MHz, DMSCM) S 1 Ml <s, .széles IH, NH), 10,98. (, széles ÍR, NH}, 7,96 (d, >2,0 Hz, IH, H-4), 7,75 (s, ΪΗ,Η-νΐηίΐΧ 7,50(0 3-5,5½. ΓΗ, CONöCHJ, 7J2 <dá,J-2,0és 8J Hz, IH, H-6), 6,86 (d, >8,3 Hz, ÍR, H-7), 3,26-3,33 <m, 2H, NCH;í, 2,42 <s, 3H, Oh), 2,40 <s, 3H, CHS:),2,36 <t, >6,6 Hz, 2H, NCH>2J7is, 6H,NOy:;J.
MS-Hm/z386(M'y
Ϊ1. példa
S-Hróm-iJ-dihidTOlndoi-S-oat (6,17 g, ö,8 canol) 5-ftgmií-2,4-d5m«jí-iH’pHrol-3-kaíbpnsav-<2-dietíIammoeöl)aoJÍáÍfei (0,2 g) kcsOsnzáttottok; így 0,09 g (2661} cím szerinti vegyüietet kaptánk sárga szilárd anyag fonrtájáfcaa.
‘HNMR<360 MHz, DMSO-4) S 13,61 (s,.széles IH, NH), 10,98 (széles IH,NH), 8,09<d, >1,7 Hz,
IH, H-4), 7,76 (s, IH, H-vimI), 7,42 (í, >5,5Hz, IH, CONHCH-}, 7,24 (dd, >l,7és 8,0Hz, IH, H-6), 6,82 <d, > 8,0 Hz, IH, H-7), 3,23-3,32 (ra, 2H, NCR2), 2,46-2,55 <m, 6H, 3x60%), 2,43 (s, 3H, CH}), 2,42 <s, 3H, CH3), 0,96 (t, >7,2 Hz, 6H, 2xNCR2Ctt3).
MS-Ei m/z 458 és 460 IM+-1 és Μ'7-Ij.
példa
S~{5-Sróm-2-exo-h2díhidr»ií3idM-3-dldén8netO}~2,4-dhnetsl-lH-pírrel-3-ksrbö3ssav-(2-pírrölídÍ5S-1 -il~eül) amid
5~Bfrim-l,3-dfeídmmdöl-2-oat <0,09 g, 0,4 mmol) 5-kaisll-2,4-d»aetil-ÍH-pitKs.I-3-kari>oasay-(2-piíröUdia-1 -iletü)amiddal (0,1 g) knsdessáltatenk; így 0, 14 g (8 I %} cím szerinti vegyüietet kaptunk sárgás»»· ranc-s színű szilárd anyag foroiájábsti, ’H NMR <300 MHz, DMSÖ-tQ § 13,61 ís, széles iH,-NH), 10,98 (, széles !H, NH), 8,09 (d, >1,9 Hz, IH, HM), 7,76 (s, IH, H-viníl), 7,53 <t, >5,5 Hz, IH, CONHCH;), 7,24 (dd, >1,9és 8,5 Hz, IH, H-6), 6,81 (d. >8,5 Hz, IH, H-7), 3,29-3,35 (m, 2H, NCB2), 2,54 (t, >6,9 Hz, 2H, NCH?), 2,47 {na,, wder DMSO), 2,42 <s, 3H, CH3),.2,40 (s, 3H, CHj), 1,66-1,69 (m, 4H.
MS-ΕΪ ró 4S6 és 458 (M‘f-1 és M*<
13. példa
S-{5~Brést-2-ííxsí-l,2-diÍ3ÍdröíndöH3il5dé»níeííi)~2,4-<Hmeíd-lH~pirr»l-3~ksrfennsav-(3-Inndazt>Hi
-il-pr«ptí}amid
5-Bióas-l,3-díÍ»droind£>i-2-mít <0,09 g, 0,4 mmol) 5-fortuil-2,4-dmtí-::i5-IH-p£tT<iI-3-k3rbonsav-(3-irajáazol-Hlpröpil jaariddai (0,1 g) kondenzáltnak; igy 0,1 g (59%) cím szerinti vegyüietet koptnak narancs sárga szilárd anyag fonalában.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-dó ö 13,63 ís, széles IH, NH), 10.99 (, széles 1 Η, NH), 8,09 (d, >22-Hz, IH, ΪΪ-4), 7,77 <s, IH,.H-víaíl),7,7} (t, >5,7 Hz, IH, CÖNHCHH, 7,65 (s, IH, Ar-Ηχ 7,25 (dd, >2.2 és 8,4
97481-1045
97770702/04313
-454 ·*·:,* .,s ·* s r*.
*'*·* ** κ»
'♦ * ** »X*$ «♦·»*
Hz,. ÍH, H-6), 7,20 (s, ÍH, Ar-H), 6,89 is, Hí, Ar-Hy 6,81 (d, j- 8,4 Hz, 1 K, H-7), 4,Ö2 (t > 6,7 Hz, 2H,: NCR;), 348 (q, >6,7 Hz, 2H, NCKj), 2,43 (s, 311, Cik), 2,41 (s, 3H„ CH?}, 1,93 i.m. 2H. CH2),
MS-.E1 r&%467 és 469 IM'-) és M^íj.
14. példa íA-Dímeíd-S-Cí-o'so-S-feml-l.X-íRhids'ömdonS-iKdésmHni-lU-pírj'oUl-kíírfeöKssv-tS'-dk’tsIsmíno·· eriljansád
5-FémM,3-.dihidFosndol-2-ost (80 mg, 0,4 rámol} 5-i6rmii~2.4-íl!me6l-lH-p:H-£-oj-3-k3rix>ösav-(2-dietdímimoeiil jamiddsi (0,1 g) kopámzáhatíuak a S eljárás szerint; így 79 rag Í46%) cím szemri vegyületet kaptunk.
’H mffi.(300 MHz, DMSÖ-tl·,) S 13,66 is, széles H-I.NR), 10,95 („széles ÍH,NH), 8,1.5 íd, J-1,2 Hz, IH), 7,81 Η, ΪΗ, H-vmii), 7,71 (d,2-7,5 Hz, Hl), 7,40-7,47 (m,4H), 731 (m„ IH), 6,95 (á, 1-3,1 Hz, IH), 3,2-3,31 (m, 2H, NCHH, 2,46-2,55 (m, 6H, 3xNC%), 2,44,(s. 6H, 2xOÍ;í), 0,96 (t, 7-7,4 Hz, 6H, 2χΝ€Η2€ΗΛ.}.
MS-?/ m/z 456 [M*j,
2.4- DlKteril-5~(2-oxo-5-fmsM^-áikIdzojndöl-3~ílídéomet5l)-lH-plrrol--3-karfeossae-(2-psrroHd3í3-l-lktll)&H3ld
S-Feail-l,3~dihidrc4mi<4-2-orst (0,04 g, 0,2 .rara-al) 5*&nxnl-2,4-dsraetíl- ΐ H-pitrol-3-karboÍrsav-(2-pirroíidírt-I-rfcrií}arai<táaí (0,04 g) teáenzáltattank; így a cím szerinti vegyületet kaptuk meg sátgásnaranes szítsd szilárd anyag fonalában.
’H W (300 MHz,DMS0-4) § 13,65 (a, széles ÍH, NH), 10,96 (, széles ÍH, NH), 8,15 (d, > 1,0 Hz, IH), 7,80 (s, IH, H-vinÜX 7,71 (d,. )===7,2 Hz, 2H), 7,49 (?, >6,3 Hz, ÍH,CONHCHg), 7,41-7,46 (tm 3H),7,3i (ra, 1 H). 6,95 (d,; > 7,8 Hs, IH), 4,08 (ra, 4H, 2x NCH2), 3,32 (sa, 2il NCH2), 2,55 (1, >7,1 Hz, 2H, HCiy, 2,47 (in, DMSO -alatt), 2,43 (s, ffl, 2x0-0), 1 ,66 (m, 4H, 2xCH2).
MS-B m/z 454 [Μ Ί.
16. példa
2.4- BíraetíS-$-(2-ox©-5-fmI~í,2-dibjárejKtí»}-3-5lsdéametD}-lH-p!n'eI-3-karbeBsav-(3-haiáazof-í-dpropíHarnid
5~FeaxM,3-di&ídröÍHdel-2-oiat (8 mg, 0,04 amtcl) S~ímKát-2,4-dimedí·· ?H-plr3-cl-3-karbonsav-(3-iraídazoí-í-íi|»opií)araiddál (10 mg) kcadenzálíaíiuak; így 10 mg (59%) cím szerinti vegyületet kaptunk .narancssárga szilárd anyag formájában..
!H NMR (300 MHz, DMSO-4,) δ 13,67 (s, széles 1H.NH), 30,96 (széles ÍH, NH), 8,16 (d, > 1,2 Hz, IH), 7,8.1 (s, IH, H-viatl), 7,65-7,72 (m, 4H), 7,44 (ra, 3H),7,31 (m, ÍH, CONHCJR), 7,21 (s, IH, Ar-H), 4,02 (t >6,5 Hz, 2H, NCH2), 3,19 (q, )-6,5 Hz, 2H, CONHCHj), 2,44 (s, 6H, 2xCH3), 1,93 (m3H, CHjCHjCHR.
MS-F2 ra/z. 465 [HT].
17. példa
2.4- I>h33«tlí-5-(2-oxo-6-tee!M?2-dikidrOö3dftl-3~ilídé33metíí}~lH-pírroH3-karböi8sav-(2~d3etilamínöedijamid ó-Fem.l- I,3-djhidroradol-2-ont (0,08 g. 0,4 mmol) 5-fonnM-2,4-dim^ií- t'H-piir3>l-3-toboasav-(2-áieála«ünoetü)amíddal (0, í g) koadeaafííartaak', így 65 mg (3856} eins szerinti vegyületet kaptunk sárga szilárd anyag formáiéban.
97403-1045 SL
000005/04613
-46* «· *♦ *♦ «φ * * » * * * Λ « Κ V « '* A 9 fi * * * * ♦ ·♦ >
♦ « ΛΙ 9 9 X * fi fi « ψ *♦* ♦♦ »♦ «Η 9« Vltfiü ν 5Π NMR (300 MHz, DM5O-dH δ 13,6! (s, széles LH, ΝΗ), 10,99 (, széles ΙΗ, ΝΗ), 7,86-(4, 3>,8Ηζ, 1Η), 7,62-7,66 (m5 3Η), 7,40-7,47 <m,.3H), 7,28-736 (m, 2'Η), 7,10 (d, 3-1,2 Hz, IH), 3,26 (m, 2H,NÜH,0 2,46-2,55 (m, ÓH, 3xNCBH, 2,44 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CHO., W7 (6 >7,2 Hz, 6H, 2xNCH2CH3).
MS-B w'z456 fM:].
18. példa
S.d-lHmeril-S-íS-öxö-ó-fetiil-lJ-dífeidroíndol-S-iIsdéumeriB-lH-pímd-d-karbnÍSsav-íS-plf'reíRdsn-l-OetíBamsd
6-l’enil-l,3-d;h'idreind6Í-2-Oní (30 mg, 6,1 5 mmo!) S-fonai'l-2,4-thmetíHH-pirrol-3-kffirb©nss:v-(2-pirrolíáöt-1 -$enl)ajaidáaí (40 mg) kondcnzáhadunk: így 5,9 mg (8,5%) cím szériád vegyüíelei kaptunk sárgásnarancs színö szilárd aöyag íbrrnáláhac.
'5H NM.R (390 MHz,; DMSO-d<,) S i 3,60 (5, szeles. IH, NH), 10,99 (, széles IH, NH), 7,86 (d, >7,8 Hz, Ifí), 7,63-7,66 (m, 3H), 7,51 <m, IH, CONHC», 7,45 (m, 2Hs, 7,28-7,36(m, 2H), 7,10 (d, >1,5 Hz, IH),
3,31 (:m, ŐH, 3xNCH0, 2,55 <t 3-6,6 Hz, 2H, 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (a, 3H, CH3), 1-67 (m, 4H1.
MS-H m/z 454 (M'j.
2,4-I>íí«eía-5-(2~ex©-é-fesH-i,2-áíbsárömáeí3-líldésmet0)-IH-pl)rrol-3-ksFbö»sav-<3-lKÚdazel-íδ-Fe»xi-1 .S-dihidro.yídol-z-ont (8 mg, 0,04 mmd) 5-f«rmx1-2,4-dlmsííl- lH-pirroi-3-k8rhonsa.v-(3~ -ömdazöl-1-ilprupiHaniidáH (16 mgj-kmáeaaáfetömfc; így 7,3 mg (43%) «m szerinii vegySfefet forrnak narancssárga szilárd anyag tormájában.
JH NMR (300 MHz, DMSÖ-<;) δ 13,62(s, W IH, NH), 10,99 (széles M NH), 7,86 iá, W,2 Hz, IH), 7,62-7,70 (m,5H), 7,45 ris, 2,H), 7„35 (m, IH), 7,30 (dd, >l, 4 és 8.2 Hz, IH), 7,21 (s, IH), 7,10 (d, 3-1,4 Hz, IH), 6.89 (s, IH), 4,02 (1, 3-6,9 Hz, 2H, CIN), 3,19 (m, 2H, NC% CH>), 2,43 (s, 3H, CH5), 2,4} (s, 3H, CHj), 1-93 (t, >-6,9Hz, 2H, NCH2).
MS-E1 m/z 465 ÍM).
20. példa
5- (6-(3, S-l>lk?örfeeíÍ)-2-exo-í,2-dskídrNí!d«l-3~)0déKmHíl]-2,4-dímelíl-lH-plrrí8l-3-karbens3v-(2-dietlíanwnet0)am;d
6- 73,5~13ikl6rfes!lM,3~dsh)dfö35£kd~2-ont (64 mg, 0,23 mraol) 5-6>in«l-2,4-disteí!l-lH-pirrcil-3-kartstesav-(2~áie^amisoeül)wjdáal (60 mg) kondeezáltöttunk; igy 53 mg (44%) cím szerintii vegyübíet kaptánk világosbarna. szilárd anyag fémlábán.
’HNMR (360 MHz,DMSO-dz.) 3 13.62 (s, széles IH, NH), W,99· (s, IH, NH), 7,89 (d, >7,9 Hz, IH, H-4), 7,69-7,71 (m, 3H), 7,55 (m, IH,CONHCHj), 7,3? (m, 2H), 7,14 (d, >1,4 Hz, IH, H-?>, 3,27 (m, 2H, NCH2), 2,48-2,58 (m, ÓH, 3xNCH2), 2,45 (s, 3.H, CH;i), 2,42 (s; 3H, Cíl3), 0,97 (t, >6,8 Hz, 6H, 3xNCíHCH5).
MS m/z 526,9 ÍM>I1.
21, példa
2,4-Dimeül~S-(2-öXö~6-p5ridiií-3-ll-$,2-dihidremd»l-3~ílídénmeiil)-lH-pirroi-3-karkö)asav-(2-díeiÍlammeeísRandd
-47β> * fc X X fc *♦ * 4 « ♦ φ * ♦ * x « fc χ « :♦ * * «« * fc
X » ♦ > * fc β * X X « ♦ *fc «X *v «« fcfc fcfcfcfc fc
6~Piridin~3-i! - I,3-dlfodromáel-2-ont (40 mg, Ο,19 rámol) S-f©m»l-2,4-áanetíl-lH-pirKil-3-kari«msav-(2·· -diedlami«oeísl)a-miádal (50 mg) kondeszáltattak; így 29 mg. (33¾) ebi szerinti vegyületet kaptunk világ.©» narancssárga szilárd anyag fbms^ában.
‘H NMR (300 MHz. DMSO-d,) § 13,62 (s, széles IH, NH), 11,05 (s, széles ÍR, NH·. 8,86 (s, széles IH), 8,53 (d, >5,8 Hz, IH), 8,C4 (m, IH), 7,91 (d, >8.1 Hz, Hl), 7,70 (s, IH, H-vixül), 7,40-7,48 (m, 2H), 7,35 id, >-7,5 Hz, ÍH), 7,14 fs, IH), 3,26 <m, 2K,NCW;;}, 2,48-2,55 (m,3xNCfí2), 2,42 (s, 3H: CH3), 2,38 <5,3H, €%), 0,96 (t, >0,9 Hz,OH, 2xNCH,CH3).
MS-H m/z 45? {M'(
22. péíán
2,4-Dín«íí3l~5-(2-oxö~6-plrsd:m-3-ll-l,2'difriáröindol-3-llldésÍH!et!Í)~Hí-pirr-oR3-karfeímsav-f2-plrröIsdisr-í-lDetiHamíd
6-Ririáin~3-íl 1,3-áilsdromdol-2~oid (60 mg, Ö,2S mmol) 5-fonnil-2,4-dsmeiil-lH-piraM*3-kateJWV-(2-pirr©lidm-i-ileirl)tssiddái (75 mg) konáenzátetmfe; így 90 mg (71%) cím szerinti vegyületet kaptunk világos narancssárga szilárd anyag föonájábaa, !H NMR (300 MHz, HMSÖ-d«) δ 13,01 (s, széles IH, NH), 11,05.($, széles ÍR, NH), 8,86 (d, > I,5 Hz, IM >54 (dd, > 1,5 és 4,8 Hz, IH), 8,05 (m, ÍR), 7,91 (d, > 7,8 Hz, 1H1, 7,70 (s, IH, H-visil), 7,44-7,53 (tn, 2H), 7,36 (dd, >1,5 és 0,1 Hz, IH), 7,15 (d, >1,2 Hz, IH), 3,33 (m. 2«, NClfc), 2,47-2,57 <m, 6R, SxNCHj), 2,43 (s, 3H, CH?), 2,41 (s, 3R, CH3), 1,67 lm, 4H, 2xCH2).
MS-El ts/z 455 (M*),
23, példa
6-Píriáin-3-il-1,3-dxhidroindol-2-oat (42 rag, 0,2 mmol) 5-foímil-2,4-dtnteíi)-lR~pirrob3-karbensav-{3-drmetílemm©proptl)-4middal (50 mg) kondenzá&atttmk; így 67 mg (7589) cán szerinti vegyületet kaptunk sárgásbarna szilárd anyag formájában.
;H NMR (360 MHz, DMSO-dR δ 13,61 is, széles IH, NH), 11,00 (s, széles IH, NH), 8,86 (s, széles IH), 8,54 (s, széles l.H), 04 ín·, IH), 7,90 (d, >8,0 Hz, IH), 7,69 is, IH, H-vinil), 7,63 (m, Π-Ι), 7,45-7,48 irn, IH), 7J5 (dd, >1,7 és 8,0-Hz, IH). 7,15 (d, >1,7 Hz, IH), 3,21-3,27 (m, 2», NCH2), 2,43 fs, 3H, CHR, 2,41 (s, 3H, CR1,2,28 <m, 2H, NCRR, 2,14 is, 6H, 2xNCR3), 04 im, 2H, CH),
MS-El m/z443 (MR.
24, példa
2,4-DimeíR-S”(2-o;s©-5-fertil~l,2-áikid)r©fodol-3~üídésmeril}-lH-pls'8Ol-3-ksí'l>ensnv-(3-dímetilnmínopr©pil)sn»d
5-Ftmd-I.3-d&idrossdol-2-o8t (67 mg, 0,32 mmol) 5-&rmil-2M-áimetd-ÍH-pirr©5-3-kanx)nsav-i3-ámrctilamin©propíi}smíddtd (81 mg) kondenzdlsatsunk; így 40 mg (28%) cint szerinti vegyületet kaptunk narancssárga szilárd anyag formájában.
H NMR (360 MHz, DMSO-4) 5 13,66 (s, széles ÍR, NH), 10,92 (s, széles IH, NH), 8,14 (s, IH), 7,79 (s, Hl), 7,71 (m, 2H), 7,62 im, IH), 7,44 im, 3H), 7,32 (m, IH), 6,95 (m, IH), 3,33 (m, 2H, NCH), 2,43 (s, 6R, 2xCR3) / 2,27 fin, 2H, NCH2), 2,13 is, 6R, 2zNC)R), I, 63 (m, 2H, CIR),
37401-204S SL
PCT /OS03./04613
-48« φ φ·»*» ♦ κ««» ** ** ΦΦ
Φ « X Φ X * X 4 φ ♦ # 4 Φ »*♦ ♦* 4 4
MS-Eí ate442tM'l
25. példa
2,.4-l>ítnet3-5-(2-«xo~5-feiSÍl-1,2<í^ridmindel-3-llidénmetií)-ÍH-^lrrcd-3~karbnnsa'v-(3-dietilanÍrie(»~ pmpíOaaikí
5-F'ete-L3-dihidrciatei'2-oní (l,Sg, 7,16 snnte) 5-fonna-2,4-dimetií-lH-pírr<!l-3-karbonsa:v-(3-dié:tjíanteoprapiOamiddaí (2 g) kondeszáitattunk; így 5,3 g (40%) cím szerinti vegyüfetoi kaptunk sárgáswancs színű szilárd anyag fonnájábm..
*H WR(36ÖMH<DMSÖ-dö)é 13.64 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,91 (s, Hl, NH), 8,14 (d, > 1,4 Hz, ÍH, Arii),
7,8 ís, IH, Arii), 7,7 (dd, >1,2 és 8,5 Hx, 2H, ArH), 7,6 (t, > 5,3 Hz, IH, CONHCKs),.ΊΑ (m, 3H, ArH), 7,3 (í, >7,4 Hz, ÍH, Arii), 6,9 (á, >S,ö Hz, IH, Arii), 3,2 (tn, 2H, CONHCHH, 2,5 (m, 12H, 3xNCH, és 2xCH5)5 1,61 (m, 2H, CH2CH2CHd, 0,93 (t, >6,7 Hz, 651, NCH;Ü>).
MS-EÍ m/z 470 [NT],
26. példa
2,4-mmdíí-S-{2~«Mí-6-fen>t,2-dmsAÍ-9bido5-34nd6smeriíHH-piyröí-3-karfeonsav-(3-dseatainÍH<íproplDandd
6-Fenii“l,3-difeidfőH:do5-2'Csai (1,5 g, 7,16 mmoí) 5-fosnúl-2,4-«Emetíl~lH-pírroíi-3-ksetfeoasav-!(3-díetUaminopropsEamiddal (2 g) kondenzáhatinnk; így i ,9 g (57%) cím szerinti vegyüíetet kaptunk narancssárga szilárd anyag formájában.
*H NMR. (36Ö MHz, DMSO-4) d 13,58 («, IH, NH), 10,94 (s, IH, NH), 7,8 (d, >7,9 Hz, ÍH, Arii), 7,6 te, 4H, ArH), 7,4 ií, > 7,5 Hz, 2H, Arii), 7,3 (at, 2H), 7,5 (d, > 1,4 Hz, IH, ArH), 3,2 (ra, 2H, CONHCH,)..
2,5 (ra, 12.H, 3xNCHa és 2x€H3), i ,61 (m, 2H, CH3CH2€H2), 0,93 (f, >6,7 Hz, 6H, NCH.CHÓ, MS-Eí ra/z 470 (ΜΊ.
27. példa
5”|5-®rám~2-öXo-l,2~dildát-omdol-3-ilidénmeíO)~2,4-dímerií-lH-pirr*l-3-karfeössav-{3~díettlandno-prepil)Mtdd
5-i3róra-5,3'-dihidreíitdel-2-»ra (0,5 g, 2,36 tnmrá) 5-íbrms;~2,4-dksedl-lH-píxro1~3-katfeoímv-{3-dietib arainepropiHaraíddttl (0,5 5 g) kosdeazáltattuak; így 0,84 g (26%) cint szerinti: vegyüíetet kaptunk vórdsesnarancs szinti szilárd anyag formájában.
SH NMR (360 Miíz, DMSOte) § 13,61 (s, IH, NH), 10,99 (s, IH, NH), 8.09 (d, >1,8 Hz, IH, Arii).
7,7 (at., 4H), 7,2 (dd, > 5,8 és 8.3 Hz, 2H, ArH), 6,8 (d. >7,8 Hz, ÍH, Arii), 3,3 (széles s, 4H, 2xNCH2), 3,2 (ra, 2H, CONHCHj), 2,6 (széles s, 2H, NCH2 és 2x€H5), 2,4 (s, 6H, 2xCH?), 1,66 te, 2Hf CH2CH2CH2), 0,98 (t, 3-7,1 Hz, 6H, NCrijCHri.
MS-EÍ m/z 472 és 474 [M> és:MMj,
28. példa
5-(S-Br'óm-2-Ö.X!>~í,2-díIddrömá«4-3-iRáén!merií)-2s4-áiIzöpropU-íH~pírrol''3~karb!)itsav~(2-dietilamínoetíO&míd
5-BrÓ5a-l,3-diM<fajiadoí-2'On.t (100 rag, 9,47 maíd)5-fomiÍÍ-2,4~diizopropil-i.H-pirrol-3-líarifonsav·· -(S-dietrlamÍsoettOamiiááaí (I5Ö mg) kondenzáltadnak; igy ö, 15 g (6285) dm szerinti vegyüíetet kaptánk sárgásnaranes szinti szilárd anyag formájában.
sí
9CT/ÜS02/04813
-4’
XX
Ή NMR (300MHz, DMSC-dR 5 13,97(s, ÍR, NH), 10,95 (s, ÍH, NH), 8,09 (d, > t',3 Hz, 1.11 ArH), 7,84 (ss, IH), 7,79 (s, RR,7,23 (dd, 3-1.3 és 8,1 Hz, ÍR, ArH), 6,8 (d, >8,1 Hz, 1H, ArH), 3,5 (tn, ÍH, CH), 3,3 (m, 3H, CH és NHCIl), 2,5 (széles tn, SH, 3xNCH> 1.28 (d, >6,9 Hz, SH, 2xCH0, 1,23 (d, >9,6 Hz, 6H, 2xCH,), 0,96 (m, SH, OxOMCBa
MS-H sszz 514 és 516 f.M'-Iés RT-H1.
29, pékíz
5-'(5-Hróss~2-oxo*l,2’d8kídröisdoR3~dsdésMneík}~2,4-diszoprop5Í-lB-pír{’ol-3-íkar»oKS3iv-{3-dJ€tksmkío-prepdjamid
5-Brám-l,3’dibidroiads>l-2.-ont (90 rag, 0,42 nratci) d-SisusiOdA-dkKCspropiMH-piríoRs-ksrbosisav-í?· -áxetiíamin<^}ropii)-amiddal (MO tng) kondenzátornak:; igy 54 mg (25%) cim szerinti vegtüfetet kaptánk vörösesbarna szilárd anyag formájában.
'H NMR (300 MHz, DMSO-dR δ I3,98 {s, IH, NH), 10,96 (s, ÍH, NH), 8,09 (d, 3-1,? Hz, 2H), 7,78 (s,
l.H, H-víjií3},; 7,23 (dd, 3-1,7 és 8,1 Hz, IH, ArH), 6,82 (d, 3-8,1 Hz, ÍH, ArH), 35 (m, 1H, CH), 3,25 (tn, 2H, NHCHsX 355 (m, ÍH, CH), 2,7 (széles s, 6H, OxNCÍR), 1,7 (széles m, 2H, CH:CH2CH2), I ,28 (d, .3-6,9 Hz, SH, 2xCRj), 1,24 (d, >5,9 Hz, SH, 2xCH}), 1,06 (m, SH, 2xCH2CH5).
MS-RI az 523 és 530 (M -l és M>1>.
39, példa
5“(S-BróiH-2-o:xö-l,2-áihkÍFomá«>l-3-5Íidéametn}-2,4-dilz»propR-í,H'>p8rsOÍ-3~karb8nsav-{3-pirroÍÍS-Brto-ljS-áíhii-droindol-S-oni (130 .mg, 0,6 woá) 5-fptm5l-2,4-áüzopropií-lH-.ptirol«3''kar&ortsav-{3-pin-olsáin-í-ilpröplR-amiddal (150 mg, 0,45 mmol) k<«lenzáltatttmk; így 36 tng <1584) cm szerinti vegyüietet kaptunk Tozsáásnaraacs szinti szilárd anyag formájában.
«Η NMR(5Ö0 MHz, DMSO-dRS 13,98 (s, IR, NH), 10,97 {&, 1H/NH), 8,10 (d, >1,6 Hz, 2-H),7,78 <s, Hl H-Rrah, 7,23 (dd, >1,6 és 7,9 Hz, IH, ArH), 6,82 (d, 3-7,6 Hz, ΙΠ,ΑτΗ), 3,5 (m,: 1.H, CH), 3,25 (m, 2H, NHCH2), 3,I5 (m, IH, CH),2,7 (széles s, SH, 3xNCH2), 1,7 (széles ra, SH, 3sNCH2CH,>, 128 (á, 3-5,6 Hz, 6H, 2xCH> 1,24 (d, 3-5,7¾ SH, 2xCH5).
MS-EI m/z 526 és 528 (MM és M>l).
í. példa
S-<5-®rőm-2-ox«-l,2-átfeidrolBd«l-3-Oidéniaeís5)-2,4;dimetsí-lH-pirroí-3-karbensav-(ptr3dín-4-ilmeíö>amid
5-Bróm-l,3“álhidreffidol-2-<raí (170 sng,Ö,8 sxraol) 8“íörrali-.2,4-dimeóI-l.R-pirroI-3-k3rboíiSsv·· -(piridíS-4-ibsetil}araíddaÍ (200ntg) kondenzátornak; rgv 14 mg (4%) cím szerinti vegyüietet kaptunk sárga .szilárd anyag formájában.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-ds) § 13,6? (s, Ili, NH), 11,0 i (s,széles ΪΗ, NH), 8,54 (dd, >1,6 és 4,3 Hz, 2H), 8,23 (í, 3-6,ÖHz, ÍH, CONHCRR, 8,11 (d, >1,9 Hz, ÍH), 7,78 is, IH, H-visii), 7,31 (d, 3-6,0 Hz, 2H), 7,25 (dd, >1,9 és 8,1 BzRH), 6,82 id, >8,1 Hz, SH), 4,45 (d, >6,0 Hz, 2H, NCH,),2,46 (s, 6H, 2xCH?iMS-.EÍ, o/z 450 és 452 (MM és MN-1 ].
32. példa
97481-1095 SÍ
FGT70S01/04813
-50S-fd-C'd-B’atHFeaöhí-oxe-HJ-áihidroiadai-J-tidée.metni-Sjd-dKme’dMH-pirroI-S-karhotmv-fl-pírról sdin-l-lletiljKHÚd
S-fe-fe-Bmilfeml))·'1,3-áihidf<iirídc4-2-C!8t (50 mg, 0, i 9 srursol) 5-ibrmil-2,4-dimeC!ii-lH-pgrrö.l-3·· -kart)ossav-(2-pi:rroliám-l-{tetíl)aniiááal (50 mg| kosdeszáltatnask; így 74 mg (76%) cim szedne vegyatet kaptunk narancssárga- szilárd anyag formáidban, 'H NMR (360 MHz, DMSO-fe) ö ; 3,SS (s, IH,N0), 10,93 (mAs IH, N0), 7,82 Cd, >7,9 Hz, 110,
7.63 Cs, Hí, H-vfoB),7,54 (d, >7,9 Hz, 20), 7,46 (m, IH, CONH), 7,26 fen 3H'k?,09(s, IH), 3,30 fel, 20.
Q0), 2,52-2,63 Cin, 40, Ml2), 2,49(m, 4H, 2x€%>, 2,43 (s, 30, CI0), 2,.40 (s, 30, CHj), 1,66 2xCHj), 1,58 (m, 20, C10), 1 -34 (ra, 20, CH,), 0,94 (0 1-7,2 Hz, 3H, CHsC0s!,
MS-EI5R/Z51O (M'fe
33. példa
5- (d-<4-Efei«nil)~2-öso-í,2-dRddromd&l-3O5denmct{l)-2,4-dímöfe-10-pirr<s03-k2rboöSíív-(2-pirí'&Kdin-l-Seíaiamid
6- C4-Edlfeail)- i,3-d'ihíóroKidol-2-oat (45 mg, 0,19 mmol) 5-fóra«l-2,4-dÍBaetíl-ÍH-püíO{-3-tó>08^v-(2-pforolidin- i-ik-til)a!foddal (50 mg) kondenzáltettmtk;: igy 60 tag (6554) cim szerinti vegvüfoíet kaptok sárgásmancs színű szilárd anyag formásában, ’H NMR (300 MHz, DMSO-4) δ 13,59 (s:, IH, NH). 10,96 (széles 10,. NH), 7.83 íd, >8,4 Hz, 10),
7.64 (s, IH, H-vinil),:?,$ 1-7,5:6 (ai, 30), 7,25-7,30 fen 30), 7,08 (fe >1 Hz, 10),3,31 (m, 20, CH0, 2,03 (na, 20, C10C00,2,5.5 (m, 20, CHfe 2,49(m, 4H, 2x00), 2,42 (s, 3H, CH,}, 2,40 (s, 30, CH,}, 1,67 {m,4H, 2xCH0, 1-20 (t, >7,5 Hz, 30, CH,CHfe
MS-Ei m/z4.82 [Μ'Ί.
34. példa
5- |6~{3-l£öp!röp5)fcnO>-2-oxo-l,2~dÜ5jdr»máöl-3-iÍsdésmet58)-2,4-dím«tll-lH-pirrni-3-kárbon$av02-p.feroEdra-1 -dfofesandd
6- (3-Izeprepilfefel)-l J-d&idrefedfe-í-rad (48 mg, 0,19 mmöl) 5-fiMsni02,4-dsmeta-lH-pÍ5Tö03-karboiisav-(2-pinoHdfe-0Oe«Í)amiddal (50 tag) koaáeazátatCsak; így 59 mg (63%) cim szerinti vegydkfot kaptok narancssárga szilárd anyag formájában, *H NMR (300 MHz, DMSO-fe) § 13,63 (s, 10, NH), 10,97 (^széles Hl NH), 7,87 (d, >7,8 Hz, 00, 7,68 fe, 10, H-vioil),7,24-7,55 Cm, 60), 7,13 (s, 10), 3,54 (m, 20. CHfe, 3,30 (s»,lH, CHÍCIH» W (m, 20, Cífefe 2,50 (m, 40, 2xCH0, 2,45 fe,3.H, CH0, 2, A3 fe, 30, CHS), 1,70 fet, 40, 2xCHe), 1-27 [fe >6,9 Hz, 60, CH'CHfej, [MS-B m/z 496 [M+],
35. példa
5-(S-Ffoör-2-«>xö-Í,2-dsfeldrofedol-3-d5dCfe5Hetll)-2«4-dímetn-ni-plrröl-3-líarb»nsav-(3-dfoi3k5mtÍHö-eííl)amsd
5-Fiaor-1,3-dihidroiháol.-2-.ont (0,54 g, 3,8 mmol) 5-(e;mlb2,4-d!mmj|-10-psrrc;l-3-karbcssav-(2fejeiji·· amírtofelamiádal kcnáenzáltattok; így 0,83 g (55%) cím szerinti vegy&letet kaptok sárgászöld színá szilárd anyag formájában.
97481-1045 SL
PCT/0501/04 SÍ9
Φ «ΦΧ« *φ ΦΦ «,φ
ΦΦ Φ Φ Φ * Φ Φ Χ Φ * Φ φ ♦ ♦·'# Φ » * » « X φ φ Φ « φ « φ <*♦ ♦-♦ ΦΦ XX ΦΦ «-«-«♦ !Η NMR (3® ΜΗζ, DMSO-ά;) δ 1,3,66 (s, IH. NH.),. ί 9.33 is. széles IH, NH), 7,73 (dd, 1-=2,5 és 9,4 Hz, IH), 7,69 is, IH, H-víeíI), 7,3? it,. IH, CONHCH2CH2), 6,91 fe, IH). OKOS fe.lH), 3,27 fe., 2R, CHö, 2,51 (m, 6H, 3xCHp. 2,43 fo, 3H, CHfofod 1 fo, 3H. CHR, 0,96 fo 3-6,9 Hz. 6H, NÍCH2CHj)2j.
MS· ki m/z 398 (Mj,
35. példa (Alternatív szfoiezás)
S-(S-Fhior-2’nxo-t,2-d5hídín-íí!dol-(32í)-stidénrtíefíifo2?4-dimetd-í llpír,rol-3-karfertsas'-(2-dsetí(atniiro-etdlamid
Hidrszis hidrától (55%, 3009 -ml) és S-iluorízafeí (300 g) 100 =C-ra melegítettünk. Újabb 5-fluwtjmitó tSöO g) adagoltok be részetekben. (100 g) 129 perc alatt keverés közben, A keverékei I iö “C-ra ajelegíteftak, es 4 órán át kevertük, A keveréket szofeabőnrérsékletre kötőtűik, és a szilárd anyagot vákunrnszöréssel összegyűjtöttük; Így nyers f2-mmo-5'-Suor-fenll>eceteav hidmtdot (748 g) kaptunk. A h-idmziéot vfebea szaszpendálíattek (700 ml), és a keverék pH-jái <3-rs áhítotiuk be 12 N .sósavval, A. keveréket 12 órán át kevertük szobahőmérsékleten. A szilárd anyagot vákuymszőréssel összegyűjtöttük, és kétszer mostok vízzel. A terméket vákuum alatt, megszárfetto:, és S-tíuos- .1,3-difodföitedol-2-oni kaptenk(600 g, 73%-os kitermelés) barna por formájában.
:H NMR (dimedtszsltefed-dU 53,46 fo, 2H, CHfo 6,75, 6,95, 7,05 (3 x m, 3H, aromás), 10,35 (s, JH,
NH).
MSm/zl52.[M+lJ.
3,S-DfeetH~ iH-p8rol-2,4-dÍkarboasav2-terc-bnlsl észter 4-eiil észtert (2600 g) és etanott (7809 ml) erőteljesen kevertünk, miközben lassan lí) N sósavat (3650 rnl) .adagoltok be, A hőmérséklet 25 fokról 3,5 °C-ra rtöít, és gázfejlödss indáit meg, A keveréket 54 fokra melegítettük, és további melegítés közben kevertük egy órás át, amely idő alatt a hőmérséklete 6? °C volt. A keveréket 5 fo-ra kötöttük, és 32 liter jeges vizet adtunk hozzá lassatr keverés- közben. A .szilárd anyagot, vákuamszdréssel összegyűjtöttük, és háromszor vízzel mostuk,
A szilárd anyagot levegőn sörnegáilasdóságíg szárítottuk, és 2,4-.dimetll-lH-pH?ol-3~kartx>nsav-etílésztert i 1418 g, 8754-os kitermelés) kaptunk.
lH-NMR {dimetílszaifexid-dR
2,10,2,-35 (2xs, 2x3.H, 2xC%fo 4,13 (q, 2.H, CB,). 6,37 (s,lH, CH), 5 9A5-(s, ÍH, NH), MS fez 167 (MH1.
Htmetíiftsrmamídoí (322 g) és díkiórmetást (3709 ml) jégfnrdöően lekötöttünk 4 eC-ra, és foszfor oxikleridot (684 g) adtok hozzá keverés közben. Szilárd 2,4femstil-ÍH-pi!TOi-3-k.arbonsav-etilé»zter (670 g) adagoltok be lassan alíkvotokban 15 pere alatt. Az elért maximális hőmérséklet 18- fo' volt. A keveréket reíhrxáttatva melegítettük egy órán át, lö cC-ra kötöttük jégtörőében, és 1,61 jeges vizet adtok hozzá gyorsan erőteljes keverés közben, A hőmérséklet 15 °C-ra nőit. 16 N sósavat (1,6 I) vizet adtok hozzá erőteljes keverés közben,
A hőmérséklet 22 '!C-ra nőd.. A keveréket 39 percig áltó hagytuk, és hagytuk, hogy a rétegek külön vájjanak. A hőmérséklet maximum 49 °C~ra emelkedett. A vizes réteg pH-ját 12-13-ra állltotluk be .10 N kálium biárexrédaí (3,8 1) olyan sebességgel, .amely toliét; a hőmérséklet 55 fotót ért el, és ennyi maradt az adagolás során. Miután a beadagolás befejeződött, a keveréket -10 fotóa hűtöttök, és I órán át kevertük. A szilárd anyagot vákuumszöréssei gyűjtöttük össze, -és négyszer mostuk vízzel; így 5-tónuiÍ-2,4-dfeeli)-ÍH-pírroi-3-ksrboHs;iv-eíiifozterí (778 g, 100%-os: kitenneiés) kaptunk sárga szilárd anyag formájában.
97481-194
FCT/USöl/i54213 « κ ♦. * * * « * « χχ
NMR (DMSO-áí) 5 1,25 ; í.3K. CH o. 2,44. 2,4S (2xs, 2x5H, 2xCfK). 'U6 ífo 2H, CH2),9,59 (s, Hí. CKO), 12,15 (szeles s, Ki, NK), MS m/z 195 (Mr 11.
5-F<?nnil-2,4-díUíetil-lK-psrtOl:-3-kaj’bonsa\f-etliésztert (806 g), kálium ludroxidm (548 g), vizet (2400 an} és metanolt (3ö0 ml) két órás át refínxáltotonkkeverés közben, majd 8 öC-ra kötöttük. A keveréket kétszer extraháltak diklöxmetáuaal. A vizes réteg pH-jái 4~re állítottuk be 1008 ml 10 N sósavval, miközben a hőmérsékletet 15 eC alatt tartotok. A keverékhez vizet adtunk a keverés megkönnyítése érdekéket}., A szilárd anyagot vákutanszüréssel gyűjtöttük össze, vízzel mostak háromszor, és vákuum alatt szárítottuk. 50 *€-os; igy 5-íbntui-2,4-dlraötil-lK-pir:Ol-3-k3rbonsavat (645 g, 93,5%-es kitermelés) kaptunk sárga szilárd anyag formájában.
Ή NMR fDMSO-dő) δ 2,40,2,43 (2xs, 2x3H, 2xCHj), '9,57 (s, IH, CHO), 12,07 (szeles s. 2H, NK3-COOK), MS m/z lók [M+lj.
5--Formíí-2,4-dímöíil--lH-pirfok3-karhoítsaval (1204 g) és 6020 ml dwretiRommmidoí kevertünk szobahőmérsékleten, miközben 1 -(3-dimetil-íauinnpropil)-3-eííík.3íbodsimid hidrokltiridoí (2071 g), bidroxibenzctriászok (1460 g), trietilamint (2016 ml) és díetíietilénriiaminí (1215- ml) adagoltunk: be. /k keveréket 20 érán át kevertük szöbahömérsékléíet·. A keveréket 306Ö mi vízzel, 2000 ml sóolásttal és 3000 mi telített nátrium rndrogénkarbosát oldattal higítöttulp és a pK-ját ló-riél nagyobb értékre állitottak he Ki '.N nátrium hidroxiddal. A keveréket kétszer extraháltak, alkalmanként 50.60 ad 10% metanol diklótmetáuos oldatával, az extraktmn.öka: egyesítettük, vfementes msgsémm szulfát fölött megszárhottuk és rotációs heparfássai megszáritotok. A keveréket 1950 ml tolnollal hígítottak, és isme; relációs bepáriással megszáriirsauk. A maradékot 3:1 hexsn:díuíil éter (4000 ml) eleggyei tríturálmk. A szilárd anyagot vákuumszöréssel összegyűjtöttük, kétszer mostak 400 ml etil-acetáttal és vákuum aktit szárítottuk 34 X’-m 21. órán át; így 5--fonmil-2,4-dimeií.MH“pirtrol-3 -karbosssv-(2-djtetOamino-etdjamídöt (819 g, 4354-os kitermelés) kaptunk világosbarna szilárd anyag fonákjában.
JH NMR (dáaetifaífoxid-4) δ 0,96 ít, 6K, 2xCH;), 2,31,2,38 (2xs,2 x CH5), 2,51 lm, SH 3xCK;j, 3,28 (m,2H„ CH2), 7,34 (m, IH, araidNM), 9,56 (s, IH, CHÖ). 11,86 (s, IH, pirre! NK), MSm/z266 (MM j.
5“Formd-2,4-dimetn-1 K-pirroi-3-ksrboasa.v-(2-dietflaudno-etil)amidcst (809 g i, 5-fiuor-1,3-díhiároúrdol-2-ont..(43-8 g), elánok (8000 ml) és pirroiidint (13 ml) 78 ’’C-οη meleglícííünk 3 órán át. A keveréket szobahőmérsékletre hűtöttük, és a szilárd anyagot vákuümszöréssei összegyűjtöttük, majd etsmsdlal mostuk:,
A szilárd anyagot eíanollal (5900 ml) 72 '*C~ea3Ö percig kevertük. A .keveréket szofeahömérsékletrc hötöítük. A szilárd anyagot vákuumszűresseí összegyűjtöttük, etanollaí .mostuk, és vákuum alatt 54 ’C-on 130 óránál szántottuk; így 5-l5-t)uof-2-oxo-l,2-dil5ÍdKimdol-(3Z)-ilidénmstil)]-2,4-dxmeti!-lH-5>írfol-3-karbons3v-(2-djeti!&mmoeíi))amiáo!: (1613 g, 88%-os kitermelés) kaptunk samnessárga szilárd anyag formájában.
JM NMR (dimetiIszulfosiá-4) 8 0,98 (t, 6H, 2xCH3), 2,43,2,44 (2xs, 6H, 2xClK), 2,50 fai, 6K, 3xCH;). 3,28 (q, 2H, CH;):, 6,84, 6,92, 7,42,7,71, 7,50 (Sxm, 5H, aromás, viail, CONH), 10,88 (s, 1K, CONH), 13,68 (s, 1K., púról NH), MS nvz397 (M-l).
36. példa
3-H-(2“Dietilsm5n«etilkarhamöll>3,5-dsmeííl~lH-pirfnl-2-tímetÍléul-2-öxo-22l-d&idro-l:H-indöl-6-karbonsav
2-öxo-2,3-d!bidro-lK-máol-ö-karbensava:t (86 mg,6,45 mmol) 5-form!:l-2,4-dímetii-lK~pjrrol-3-karboss3V--(2-dietílamínoeíil)-amiddal kondenzál .tatok; így 210 mg (9250) cím. szerinti, vegyöletet kaptunk sárgásnaranes színű szilárd: anyag formájában.
481-10-4 5 SL
9CT/CSO1/04813
-53* tete«* ** ♦ « te* X* te ««te «♦ Λ * * * te * * « te te te te ♦ *« «te « te * te * te ♦ te x * * 9 X· «♦te tete Ka «<* tete te«x» » !H NMR (360 MHz, DMSO-φ) § 13,6 (s, IH, NH), 7,76 (d, >8,0 Hz, Hl), 7,66 (s, IH, H-vii», 7,57 (dd, >1,5 és 8,0 Hz, 1H) 7,40-7,42 (ra. 2H), 3,28 (m, 2H, GR), 2,88 (m, H-pspendm), 2,54 (sp, 6H, 3xCH2), 2,44 (s, 3H, GR). 2,40 (s, 3H, CH;), 1,56 <m, H-piperidln), 0,97 [i, >8.98 .Hz, 6H, MCHjCHjh],
MS m/z 424 [MR
37. példa
XS-DímsdlsKöIfiímoiNí-exsí-lJ-djhsdroíadöhS-dldeiííPíesíH-lH-dímedDlii-pírrol-S-karbOÍiSíívOl-pír r ollds η-1 iledljamid
2-Öxo-2,3-áibjdrc-lH-mdel-5-BZul(bEsav dimeíilamidof (90 tag, 0,38 Emsei) S-fonaiWAáinsetíMff-pin-oI-3’kafboosav-(2-pirK'}KdÍn-Difetd)ams:ádal (100 mg) kondejszálMfönk: .így 100 mg (54%)-cím szerinti vegyüíetet kaptunk sárga szilárd anyag ibnssgáfean.
JH NMR (360 MHz, DMSO~dö) S J3,65 (s, IH, NH), 1; ,30 ó, széles Ifi, NH), 8,25 (d, IH), '7,92 (s, 1H, H-vinil), 7,48-7,53 (m, 2H), 7,07 «I, 3-8,2 Hz, IH), 3,33 (m, 2H, CH> 2,61 (s,6H, N(GR)2), 2,56 (t, 2H, GR), 2,49 (ns, 4H, 2xCH2>, 2,45 (s,3H, Gl3), 2,44 (s, 3H, CH,), 1,67 (m, 4«, 2xCH,).
MS-Εϊ. m/z 485>0
38, példa
5-(5-(3-K36rfesdisza}fa{noíí)-2-oxo-l,2'dífesároÍHáoi-3-öídé»®setaj-2,4-dímetS-IH-pírr©í-3-karb&nsav-(2-püTf>0d5a-l“dHü)3mid
2.-Öx<>-2,3-clöüdro-lH-3nd<?Í-5-szuifc«sav (3-ld6rfémi)3rmdot (120 rag, 0,38 mmol) S~t(xraíí-2,4-da»etíl-lH-pirrel-3-karbössav-(2-pjfrölídín-l-sleöl!asrsddal (100 mg) kondenzáltadnak; így 150 mg(69%) cin· szerinti vegya'letet. kaptunk sárgásnarascs színű szilárd agyág termájába», {HNMR (360 MHz, DMSO-dR δ 13,55 (s. Hí, NH), 11,26 (széles s, IH, NH), 10,30 (széles s,lH, NH), 8,26(6, IH), 7,79 (s, ΙΗ,Η-vbií), 7,51-7,57 (m, 2H), 7,22 (i, >8,1 Hz, IH), 7,15 (m,lH), 7,07 te, Hí), 7,0 (m, 2H), 3,44 <m,2H, GR), 2,57 (t, >7,0 Hz, 2H, GR), 2,49 (ra, 4H, 2xCH2), 2,44 (s, 3H, GR), 2,43(s, 3H, GR), 1,68 (ra, 4H, 2xGR).
MS m/z 568 [M'R.
2,4~í>imed)-5)2-oxö~5-(píridÍK-3~ösz8lía!fmüJ)'-H2-áili8dr(dKdol-3“iddénrfn!t.5Í!i-lH-pírröl-3-karbnnsav(2-ptrr»EdiH-S-Saísí)amíá
2- Oxü-2,3~díhidrö~lH~mdol-5SZöifbnsavpiriám-3-;lamiáM (110 mg, 0,38 .jnniol) 5-fórm:ii-2,4-dimebÍ-lH-p»-3-karbossav-(2-pjrrobáín-l~i)etil)amiádal (160 rag) kosdenzáltatrank; így 150 mg (74%) cím szerinti vegyüíetet kaptunk:narancssárga szilárd anyag formájában.
’HNMR (360 MHz,DMSO-d6) § 13,58 is, IH, NH), 8,21 (d, >2,0 Hz, 2H), 8,04 (m. IH), 7,76 (s, IH, H-vbil), 7,49-7,54(m, 2H), 7,41 (ra, IH), 7,14 (m, IH), 6,94 (d, >8,5 Hz, IH), 3,33 (m, 2H, CH,), 2,56 (t, >7,06 Hz, 2H, GR), 2,49 (ra, 4H,2xGR>, 2,43 (s, 6H, 2sGR), 1,68 (m, 4H, 2xGR).
MSwz 5351M1,
40, példa
3- 13,S~DlíneíiR4-(4'-nsHi5piperszm-Rkarbí}íill)-ÍH~psrroR2-ílmetl)e!íR4-f2-bids'exletll)-R3··
-áíhidroladtel-l-on
974.81-1045 SL
FCT/OSOL/94S17 « * *·» *·*♦.♦·
4-(2-Hidro?rietil)-15-dibrdroindnl-2-nn; (71 mg,0,4 mmol) 3,5“$raetiM-{4-metilpiperazi»-i-karbnail)-íH-pinol-2-karbaídebidd®l (WO mgjkoBdenzáÓaí&ínk; Így 90 mg (55%)· cím szerinti vcgyüteieí kaptok narancssárga szilárd anyag formájában.
(széles s, 7H), 2,19 (% 3H, CH3), 2,IS (s, 3> Ci-feí,
MS ra/z (+-v«) 4,99.3)M’ j.
41. példa
3-p,5-Öi»3eri1-4~f4«meí0piperazia-l-kas'l3í)íHl)-rH-pÚTol-2~slmeílIé!!ij~2-í)Xö-2,3-dibidr<s-lH-is3döl-S-szulformvfenilamid z-Oxo-Sp-öíbsáro-lB-íadci-S-szuIfoHsav íéaüaandot (119 mg, 9,4 mmol) 35-dimeöl-4-(4-rae$iip3pe·· rasin-l-karb<3nl))-«i-pirrol-2-karbaidöhlddei (106 mg) kondenzáhattunk; Így 50 mg (24%) cím szerinti vegyülőlei kaptunk sárga szilárd anyag .formájában.
’fí NMR. (300 MHz, DMSO-fe.) δ 13,52(% .ÍH,NH), 11,26 {&, Πί,ΝΗ), 10,08 (s, 1», NH), 8.21 <d, >R6Hz, ÍH), 7,75 (§, «Ι,Η-vfoil), 7,50 idd, >1,6 és 85 Hz, IH), 7,19 (m, 2H), 7,10 (m, 2H), §,97 ir«, 2H), 2,47 lm, 4H, 2xCHj), 2,28 (ra, 19«, 2xCHj és 2xC«2), 258 (s, 3H, CH>),
MS-Eim/z519{MÍ.
42. példa
S-(S-©lmerilszsrlíamo3l-2-öXG-V2~áfosdröm5lol-2-llldái5m€lll)-2?4-dÍmeriMH-pirrol-3-karböasav-(2-dietiíand»oe$)amfo
2-Ox<s-2,3-áiMdrc5-lH-indol-5-szBlfensaS'‘ drmerilarmdot (90 mg, 0,38 mmol) 5-fonnii-2,4-dira8SÍl- 1K-pircol-3-karb0ösav-(2-dieribraffiöetü)araíddaí (160 mg) kosdenzáltatnnik'; így §6 mg (43%) cím szerinti vegyükleí .kaptunk sárga szilárd anyag formájában.
’H NMR (300 MHz, DMSO-4) δ 1 i ,20 (s, ÍH, NH), 8,27 (d, >1,7 Hz, Hi), 7,94 (s, 1H, H-vinilX 7,49 (dd, >1,7 és §,0Hz, IH), 7,44 (m, ÍH, CONHOíjCHj), 7,07 (d, >8,0 Hz,. «1)5,26 (ra, 2fí, CH5, 2,60 (s, §H, N(CH3)j), 2,53 (m, 2«, 0^,2,45-2,50 <m, 16H, ZxCfik és N(CH2CH:;)2,0,96 (t, >7,2 Hz, 6H,N (CíkC«:5)rt·
MS-Hm/z487 (M).
43. példa
5-15-(3-Klórfesilszttlfamoil)~2-n.si>-15~8lldármndoí~3-iiidénmerii|-2,4-dhnetll-lH-pÍrrol-3-karbonsav-(2-dlétílamfooeth)amk)
2-Oxo-25*áihidro-lH-jndol-5-szalf«amv (3-klóríeriíl)amidor (120 mg, 3,8 mmol) 5-fonnO-2t4-áimetÓ-ÍO-pirrc'l-3-k3rboasav-(2-díeú)andn<etil)amiddsl (i ÖO mg) koadenzáitaímak; így 80 mg<37%) cím szerinti vegyülelei kapáink sárga szilárd anyag formájában.
Ή NMR (360 MHz, DMSO-4) δ 13,55 (s, IH, NH), 11,24 (s,lH, NH), 10,29 (s, 1.H, NH), 8,25 <d,
MS m/z 570,1 [M'5
44. példa
07481-1045 SL kCT/USCl/04513
-55X 00* {14-Met«i-S-(4-n»etil-5.metaszaJfa:m<^-2-®xo-í,2-őiMdr©”isd»i-3”aiáénBK;tö)-lH-pirtar3-karb<mUi~&mhm}-e«ets3v «tílészter d-Mebl-lH-pjrrc-bO-kzrbrsnessav erilésztert (irodalmi hivatkozás: D.O. Cheng, T.L. B»w® és £. Leöoff, .1, Heterocvchc-Chem,j.3, 1145-1147 (1970)) iónnlleztünk az A eljárás szerűit, feidrolizáhuk a B eljárás szerint,, majd amídákuk (jC eljárás), és igy [íS-fonníM-mebl- í H-pwoí-3“kaíbonil)-»tntno}-.ecet&avetílészíert kaptunk.
4-Metil-5-metilwm<(Szalfoa3-2-oxÍBáoh· (50 tag, 0,21 mmol')· i(5~ibttud--9-röeól~ IH-pirrot-3-kgrbonilj-anjxaöJ-eoetsay etiíészteirél (löö ing, 0,42 mmol) és standba»· (2 ssí} oldott piperidmaeí {0,1 ml) kondeozáltat; ank; így Sö mg, (5-2%) cím szermti vegyületet kaptunk.
•H NMR {360 MHz, DMSO-d,,) δ 13,59 (s, 1H, NHi, 11,29 (v, szétess, 1.H, NK-CO), 8,33 0, >5,8 Hz, ÍH, GONKON), 7,83 (d, >3,11 Hz, ÍH), 7,8(1 (s, IK, H-vtnií), 7,71 (d, >8.5 Hz,.lH), 7,34 (széles m, ÍH, NHCH3}, 6,8§ id, >8,5 Hz, ÍH), 4,11 (q, >7,1 Hz, 2H, OCH2CH3)·, 3,92. ( d, >5,8 Hz, 2H,GhCHj), 2,86 (s, 3H, CH,«), 2,48 is, 3H, CIL), 2,42 (á, W,71 Hz, 3H, HNCHj), 1,20 (t, >7,1 Hz, HL OCHjCH,)·
MS-Hm/z4é9(MÍ.
45. példa {H-Metlj-S-CS-mctílsznifamoíi-X-oso-ljl-düüdrts-índol-S-nidéometdj-lH-pírrdl-S-karboKsll-&jnwio)-ec«tsav“«ttíészter
5-Mmilamjnoszoífmüli-2*0xiedol (ö.öé g, 0,22 mmol), [(S-formtM-metil- ÍH-pjnuÍ-3-Jmrbonií)-amm©|-eeetsav-etíiészter (0,075 g, 0,27 mmol) és etanalban (5 ml> oldott piperidin (2 csepp) keverékét zárt kémcsőben 90 cC-on 12 órán melegítettük. Lehűtés után a csapadékot vákuumszűréssel összegyűjtöttük, etéaollal mostuk, diklómietárv éterrel tsimráltuk és megszáritoüak; így ö,035 g (3-6%) cím szériád vegyületet kaptunk sárgásbarna szilárd anyag formájában.
!H NMR ( 360 MHz, DMbO-cL) 8 13,ő (s, HL NH), 11 (v, széíess, ÍH, 'NH-CO), 8,30 (t, >5,7 Hz, IH, CONHCH2K 8,25 (d, >1,2 Hz, IK), 7,88 (s, 1H, H-vimí), 7,84 (d, >3,3 KzJK), 7,5? (dd, >1,9 és 8,5 Hz, ÍH), 7,14 (széles ja, 1H, NKCH;;), 7,04 ( d, >8,5 Hz, ÍH), 4,1.1 { q, >6,7 Hz, 2H, OCK,CK,3), 3,92 { d, >5,7 Hz, 2H, GliCHj), 2,55 ís, 3H, CH3),2,41 (ra, 3H, NCHj), 1,20 ( t, J-6,7 Hz, 3.H, OCH2CH5).
MS m/z 446 [M'j.
46, példa {(4-Metd-5-(5-aüetnsznlfsa501i-2»xo-í,2'tíihidro-mdo1“3-íl3détÍtneíil>lIí~p5rrok3-karbösíílj-samiol-ecetsav [(S-Fonrdl-'d-jneíil-lK'plrrol-d-karboodj-amsnoj-eeeísav-edlészter (0,142 g, Ö,S9 mm) és 1 N NaOH (1,2 tál) keverékét metanolban <18 ml) staah&aétséktea 1 órán át kevertük, A reakeiókeverékel betöméoyítettük, majd a maradékot 5-m«dlamínosztüfoml-2-oxmdrél&l (0,13 g, 0,48 mmol) és etanoíbaa (12 ml) oldott píperidínnei (Ö, 12 ml) keadeazáítattuk; igy 0.11 g (52%) ctm szerinti vegyületet kaptunk, JH NMR (300 MHz, DMSO-íR) S 13,98 (széles s. ÍH, NH), 8,17 (s,lH), 7,80 (s, IH), 7,75 (d, >3,IHz, IK). 7,51 (dd, >2 és 8,2 Hz, ÍH), 7,21 (m, széles s, 2H), 6,97 (d, >8,2 Hz, IK), 3,41. ( d, J-4,2 Hz, 2H, CH2NH), 2,54 (s, 3H, parol-CH,), 2,39 ís, 3H, ArCHj).
MS m/z 417/[M-lL.
48. példa
9?4SÍ-» SL
PCT/US y:l/04823
X φφ ΦΦ ΦΦ
ΦΦ Φ X * Φ * * Φ Φ « φ φ φ « ΦΦΦ ΦΦ Φ φ * φ Φ « Φ * « « Φ Φ « φ« <Φ ΦΦ ΦΦ ΦΙ»Χ* X «φ *56’
2,4“Sin3eíO-5-(2--exö-L2'*áihíáre-msloi-3--Uiáé5?ií5eisi>ffi”p5n'oS-3~karbonsíiV“í2-ái«fíiamÍ550~
-eril)amid
Rl-DibldroradM-á-ofi (266 mg, 2 mmol), 5-íerran-2,4~áímeiil··IH-pirK>í-3-katbs>asav-(2-&tilaminoerii)amid <530 rag, 2 mmohes piperiáin (1 csepp) etanolos oldatának keverékét 99 X’-oa 2 órán át melegítettük. A reakciókeveréket szrésabíknérsékletre bdíöttük, a keletkező csapadekot vákoran-züréssN Összegyűjtöttük, eteneliai mostak és megszáriíotttsk; így 422 ctg (55%! cím .szériád vegyületet kaptok viiágossárga sziláid anyag íbsanájábaa.
!H NMR (409 MHz, DMSO-dft) δ 13.7 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,9 (s, ÍH, NH>,7,88 (d, >1,6 Hz, )H},'7,64(s,
IH, »-vmil), 7,41 (t, >5,4 Hz, IH, NH), 7,13 (di, 1-1,2 ős 7,6 Hz, IH), 6,99 (át, >1,2 és 7,6 Hz, IH), 6,88 (d, >7,6 Hz, 1H)„ 3,28 (m, 2H),2,48-2,55 (ni, 6Hi, 2,44 (s, 3H, CH?}, 2,41 (s, 3H, C-Hj), 0,9? (t J-7,2 Hz, 6H, NCCHjCHifel
MS +veAPCl'381 (M% 1).
49. példa
5“(S“Kíór2-oxo-l,2~díítídro-ínáöl-3-ílídénmeril)-2,4-áÍm«l:0-lH-ptrrol-3-karboHsav-(2-dréÍÍÍU5nlso~i?ty}~as6á
5-Kíör-I,3-dibtereraáol-2-os (335 rag, 2 mmol), 5-fórmil-2,4-<fesórií-l:H-pjnöí-3-karb5>nsaV'42.-drétiI· aminoetil)amíd (539 rag, 2 xösööí) és- piperidi» (1 csepp) eíanotos eldsíástak keverékét 90 'öC-on 2 -órán át. melegítettük. Á reakeiokeveréket szobahdmérséklstre kötöttük, a keletkező csapadékot vákuumszüréssel összegyójtötíük, etanollal-naosmfc és megss&ritottuk; így 565 mg (68%) cím szerinti vegyületet kaptok aanraessárga szilárd anyag tormájában.
'H NMR (400 MHz, BMSÖ-d*) S 13,65 (s, Hl, NH), 11,0 (s, ΙΗ,ΝΗ}·, 7,98 (d, 5-2,1 Hz, ÍH) 7,77 (s, fH. H-viraí), 7,44' (t, NH), 7,13 (d<, >2,1 és 8,4 Hz, IH) 6,87 (á, >8,4 Hz, IH), 5,28 (g, 2H>, 2,48-2,53 (m, ÓH),
2,4-4 (s, 3H, C-Hj), 2,43 (s,3H, C%), 0,9? (t, >7,0 Hz, ÓH, N(CHjCH})2].
MS + ve APCI415 [&f + 1J.
50, példa
2,4-Hsn5«dl-5~(2-oso-í,2~d5.1riáro-md»?-3-Üidénm«ril)-l.H-ptooK3~karbons3v-(2-pIrroísdm-)-et3Í)-amid
1,3-Díhidromdoi-2“i>st kondenzáltatok 5-formíí-2,4-dtitoi-lH-pirrol’3-kari)onsav-(2-pt-rroltdm-1-íleííRamiddal, és a cím szerinti vegyületet kaptuk meg.
MS + ve ÁPC1 379W * 1].
5~(5-Fh3or-2-ex8-K2-dlMát'o~h5döl-3~Ílídé8metíl)-2,4-dsmerii~lB-pir8*öl-3-karbössav-(2-pírrelídis-lH~n-etH)-amíá
5-Floor-1,3-ditóároiadöl-2-.ont koadenzáltetíask 5-f<mail-2,4-dimréil-1 H-pirrol-S-karbottsav·-·;?” -pifrolidm-l-iíeíii>a-midáal, és a cím szerinti vegyületet kaptuk meg.
MS ·ννε.ΑΡα 397;Μ*-Μ],
Ipari léptékű eljárás
5-Formil-2,4-^metíí-lH-plrinl-3-kari>msavat (61 g), 5-fl-«tsr-l,3-dtfei&O-máol-2-ont (79 g), etamlt (300 ml) és pirroltdra; (32 ml) xeteáltatok 4,5 ónra át. Eeetsavat (24 .ml) adtok a keverékhez, és a reftoálíatást 50
97481--20-45 SL
9C7/US01/04813 *-· ΦΧ»Φ *57· * >χ<·» Φ» ** »*
Φ φφφ ♦ φ: » φ χ χ
Φ Φ φ Λ Φ*Φ *Φ * 9 « Φ « X « Φ φ Φ X X « *Φ «X ΦΧ Φφ ΦΦ **ΦΦ Φ percig folytattok. A ke veréket Iehűtöttük szobahőmérsékletre, és a szilárd anyagot váku-nnszüréssd összegyűjtöttük, majd kétszer eteolíaí -mostuk. A szilárd anyagot 136 percig kevertük 40% ácsion vizes (400 nd) oldatában, sraeiy 12 N sósavat (6.5 tni) tartalmazott. A szilárd anyagot vákumttszaréssd -összegyűjtötték, és kétszer mostuk 40% acélon vizes oldatával. A szilárd anyagot vákuumban megszűntettük; igy 5-[5-Ouer-2-<5xo-I,2-dihidsoÍ£r<Íd-(3Z)-:iidé!Kr!etd]-2,4-díritotiMH-piri'OÍ-3-ksr;5onsavat (86 g. 7984-os kitermelés} kaptunk:namse-ssáxgs szilárd anyag tonnájában.
!H NMR (dhneti-fezalfoxid-di) δ 2,48, 2,50 (2xs, 6H, 2xCHH, 6,86,6,88, 7,68, 7,72 (4xm,4H, aromás és vinil},. 10,88 (s, 1K,CONH), 12,12 ís, IH, COOH), 13,82 fs, Ili, pírról NH).
MS m/z 259 [M-il
5[5-FIaor-2-oxo~ ’í ,2-dihidreÍ35dol-í 3 Z)-íiidéníneri(j-2,4-diínetd-1 H-pirrol-c-karboasavsí (160 g) és dimeíilfomiastidot (500 ml) összekevertünk, maid benzötriazol-1 -itoxitHsz(ditnetli2minp;föszfQínm:) he&afluorfoszlátot (221 g), 1 -(2-8mmoeíii)p;rrijlídist (45,6 g) és trieülamffit {93 ml) adtunk hozzá. A .keveréket 2 órán át kevertünk környezeti hömérAletesn, A szilárd terméket vákuamsz&éssel gyűjtöttük össze, és etanollal mostuk.
A szilárd anyagot iszapmesásnsk vetettük alá etaaofos (560 ml) keverés revén, egy órás át, 64 °C-o&. majd szobahőmérsékletre: hűtöttük, A szilárd anyagot váksamszüréssel összegyűjtöttük, etanollal mostuk, megszűrhettek vákuum alatt, és 5-fS-fíu,<s--2'-oxo-l,2-d&idiumdol-{3ZHlidénm«ilj-2,4-<S.m^tl-J.íJ-pírrol-3rkaíboasav-{2-:ph·roiidin-ií-etilj-amidst (161,5 g, 77%-os kitermelés) kaptok.
’H NMR (dímetílss.tlfoxid-dfi) § í ,66 (m, 4H, 2xCHH, 2,40, 2,44 (2xs,6H, 2xCH3), 2,50 (m, 4H, 2xC«?), 2,57, 3,3-5 (2xm, 4H, 2XCHn,7,53, 7,70, 7,73,7,76 (4sm, 4H, aromás--és vádi), 1.6,88 (s, Hl, CONH), 13,6? is, IH, pírról NH), MS m/z 396 |M-í-lj.
52. példa
5-í5-Klór-2-cso~l52~dihsáro-índol-3-didéntn.eíil)-2,4-ílsm«tsl-l.H-pü'rol~3-karhosssv-í2-pÍrrolidü3-l4t~8Íii}~asfdd
5-Klór-1,3-dinidroind<4-2-os£ kondeazálíatlunk 5-íórmU-2,4-dimétíl- lH-pirrok3-kmhoasav-{2-pirroli^n-1 -itóHasuidául. és a cim szerinti vegyületet kaptak meg.
MS-f-ve AFCÍ413 (M t II
2,4-Dúne£U~S-(2-o’£ö-í>2-dihídro~5ndoI-3-ilidéHi35etsl)-ÍH-pirrol-3-ksrho»sav-(2-dsR5e5Ílsmía<retd}'
-amid
1,3-Díhidroirído)-2-ont konde.ozáltaönak 5-ίθΓΐηϋ'2,4-ΰΰ£λο·ϋ-lH-pi$Tol-s>-karboríSfív-i2-dimet;laínmoetil)amíddal, és a cím szerinti vegyületet k&píuk meg.
!H NMR (400 MHz, DMSO-ά;) δ 13,63 ís, IH, NH), 10,90 (s, IH, NH), 7,78 (d, >7,8 Hz, ÍH), 7,63 (s, U H-vmií), 7,48 (t, IH, NH), 7,13 (di, IH), (OH (öt, IH),6,S8 (d, >7,7Hz, IH),3,21 (q, 3-6,6 Hz, 2H>,.2,43 (s, 3H, OR), 2,40 (s, 3.H, CHj},.2,38 %, 1=6,6 Hz, 2H), 2,19 (s, ÓH, N(CH3CH3):).
MS +- ve APCI 353 [NT'+ 1).
98, példa
S-|5-Fl«or-2-«xO“l,2~ddddrö-ísdol-(3Z)-liRléKmetilj-2,4-ámmtsl~iB~pú'roi~3-k.arbonsav-í2-etibíninö-efill-smid ű?4%í.~104S SL
PCT/OS öl./04813
-58ΦΦΦ ff*· φφ φφ ff*
5At«uiii-2,4-di®ettl-lH-p!ml-3-karbossav-(2-etíl3maioettl>arnidöt(99 g), etaooH (490 ml), 5-íluor-2-oxiodolt (32 g) és pirtölidíní (1,5 gl rét) m<á itattunk 3 órán át keverés mellett. A keveréket lehűtöttek szofcahomérsékietre, és a szilárd anyagot váfcunroszüréssel összegyűjtöttük. A szilárd anyagot etanoíban 60 GC-on kevertük, szohahőmérsskletre hütöttük, és vákmireszüréssel összegyűl lőttük. A terméket vákuumban megszárxíöttuk; Így S-[5-Suor-2-ox<í~l^-dlhidrolndol-ÍŐZl-ittdéasttetilj-O.d-dáttetil-1 H-piírpí-3-karfjci»sav-(2-éttíaíníaeetti)amidot (75 g, 95%-os kitermelés) kaptunk.
NMR (dimetilszulfoxíd-ík) δ 1,03 (1,3H, CHj), .2,42,2,44 (2xs,6H, 2xCHj), 2,56 (q, 2H, Clk), 2,70, 3.30 (2xt, 4H, 2xCH>), 6,85, 6,92, 7,58, 7,72,7,76 (Sxm, 511, aromás, vinil és CONH), 10,90 (szálas s, IH, CONH), 13,65 (széles s, IH, pírról NH).
MS m/z 369 [M-l j.
95, példa
5-{5-Fhior-2-exö-l,2-dihídrö-tíKÍol-(3Z)-!5idésmets!J-2s d-dimetil-IH-plrrsil-S-karhettsav :2-(piridra-Ϊ -il)edll-art3Íd
S^Flw^oxo-ljS-dítódroiaáoHSZj-ö'tdéEBíetOjyZA&aef'H-lH-^ítyol-S-ksboimvat (I2ö tag, 0,4 ntmoí) EöC-vel, HCí~lei(96 mg, 0,5 mád) vismentes 1-hidroxi-benztrlazöllal (68 tag, 0,5 romol) ás .2-(2-aíttínoetii)plnámj3iei, amelyet az Aldriefetól vásároltunk, vízmentes DMF-bea (3 ml) 2-3 napig xdzbtnk szcbahömérsákleten. A reakcíókeveréket 1 M NaBCCMal 0,5 mi), majd 8 ml vízzel hígítottak, A lecsapott nyers termékei szűréssel összegyűjtöttük, vízzel mostak, megszáríiöttuk ás kristályosítással vagy kromafeegréSával tisztítottuk, és így 5-(5-Sum-2-oxo-l,2-díliidrolfidot-í32}~i;idénmetn)~2,4-öiraedi-IH-pirToI-3-karborís;av (2-(pindin- i-il}eűl jamídot kaptunk,
94. példa
5-Í5-Rlór-2-öSíf-l,2-álhídromdö)-(3Z)-i5sáásn8eiíi(-2,4-dSesetíl-lH-pirrol-3-karbo»sav (2-(p8ridln-l“iOetnjamid
Az eljárás azonos az előző példában ieirttal, de az 5-í5-fl«or-2-oxo-l,2-dihidroindol-(3Z)-ílídáKmetilj-2,4-di5nedl-lH-piool-3-ka-boasavat 5-(5-klór-2-ozo-i,2-djhidroróáoi-í3Z)-ilidémneíül-2,4-dánetil-lH-pirrol-3-fc«$)onsavval (127 mg:) Wyettesöve 5-(5-k!Ör-2-oxo-i,2-díhidroh3öol-í3Z)'llldéítmeíiij-2>4-dimetii-ll-l-plí'rol-3-karbonsav (2~{pirídín-1 -iljetíilamidoí kaptunk.
97. példa
5-[5~Srénj-2~oxo-l,2-dlh5droístíkd-(32i)-íl3£lénmetlij-2.4-d3met8l-líI-plrr8l-3-karhons3v jl-lphidiu“í-0)effljandd
Az eljárás azonos a 199. példában leírttal, de az 5-(5-fiiJor-2-oxo-i ,2-dikiáíOÍö<!öi-(3Z)-llldémneEd]-2,4-dimetil-lH~pirrM-3-karbonsavat 5-(5-bréÍn-2-oxo-í,2-dilttdromdoí-<3Zl-lhdá3?metíÍj-254-(feetii-lH~ptr?ül-3-karbonsavval (145 mg) helyettesítve 5-(5-feróm-2-oxo-l,2-dsl!Ídroindol-(3Z)-ilidáirojettl1-2,4-dhnetd-lH-pirroí-3-ksrbottsav [2-ípíridm-1 -iljeííljsmiáot kaptánk.
96. példa
5-|2~Oxo-l,2-dikidreiadel-{3Z)-Midá»meíílJ-2,4-d'ÍJnaetü'lH'-pírrei-3>-kMri)®Bsav j2-(píndÍR-l-iiletlijíírmd
Az eljárás azonos a 190, példában leírttal, de az 5~[5-fíüöf-2-oxo- i,2-áÍhídromdol-(3Z)-didént«e6ip2,4-áimeíil-iH-pimol-S-karbonsavító 5-[2~oxo-l,2-djhídrüindöl-(3Z)-ilidénrreeuÍ]-2,4-dnnettMH~pirrol-257481-1045 SL
577/0501/04013 * **«* ♦* 99 λ* Λβ *»99 «* * Κ * * * » * * X * » 4 » *«« *« * 9 *’.-?>* 9 9 4 4 9 * 9 99 » 9
f. 99 X* ♦·♦ 4 4 4 4 '»»·»·» *
-karbonsavval (113 mg) heíyötteshve 5-(2-oxo-l,2-dih!droindí>l-(3Z)-iíidénmetíiJ~2,4-dhnetn·· iH-pin.»l-3-fcarbonssv j2~(pbidm-1 -il)etd];smisk.)t kaptok,
9L, 92., 93. és Sől. példa
A 95., 94... 96. és 97. példa eljárását kővetve, de a 2-(2s«foooetil)pírióÍor l-(2'amiaoet}2)próetódí«nel helyettesítve, amelyet az Aidád? Chemical Cosnpaaytói szereztünk fec,. előállítóitok a kívánt vegyüieteket.
62-65, példa
A 95., 94,, 96. és 97. példa eljárását követve, de a 2-=(2-ammoetii^iridint 1 -í2-ammcetii).?midazoim-2•onoal helyettesítve (tnelyet úgy állítotok elő, hogy dimetíl karbonátot és bisz(2-totoetü) amint (2 ekvivalens) zárt karibikba» hevítettünk 150 *C-oo 3Ö percig, a 2613212 (1950) számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást követve, és a nyers temeket róHc-mm-tSozídtra tisztítottuk kterofmro.-meta?mhvizss amxaönla 80:25:2 aránya keverékét használva), előállítottuk a kívánt vegyüieteket.
66-68, és 89. példa
A 95-, 94., §6. és 97. példa eljárását követve, de & 2--(2-arónoetü)pjridim d-fS-araiaöetüjpipemzis-l-ecetsav-ettlészterrel helyettesítve (melyét úgy állítotok elő, hogy pipemzltí-l-ecetsav-íáiíésztert (11,22 g) jódacefönitrillel kezeltünk (5,0 mi) edl-aeetátos (260 ml) kálium .karbonát (6,9 .g) jelenlétében 6 ’C-on;-mintán az összes jőöscetomtrilt beadagoltak (45 perc), a .reakciókeveréket-szobahőmérsékleten 11 érán át kevertük; a reakciókeveréket leszűrtök, és· a szőrieteket bepároltuk; a maradékot kobalt borid jdenlétéhmt (amely-OOCfe-ból és nátrium borohídridböl készült) hidrogéneztük szofcahömérsékleto 344 kPa nyomáson 2 napon át etanolban; szűréssel, bepárlással és kromatográfiás tisztítással, amelyhez kloroform-metanol-vizes ammónia 80:25:2 arányú elegyét használtuk, halványsárga olaj tormájában megkaptak a kívánt amint (3,30 b g)j, megkaptok a kívánt vegyüteieket.
69-72, példa
Á 95., 94,, 96. és 97. példa eljárását követve, de a 2-{>mmöetü)pmdmt l~(3-amínopropil)-szepb-2-tmsal helyettesítve (melyet'Kraft, A... 3. Chem. Soc. Pokla Irans. 1, 6,705-14, (1999) eljárásával állítotttiok elő, azzal a kivételtel, hogy a DBU hidrolízisét 145 °C-os végeztük tisztán, lítítan hídroxid jelenlétében (1 óra, 5 ml DBU, 2 ml víz, 420 rag lítium hídroxül hidrát). A nyers terméket szilícium danádon tksztítotmk..kiorsftmrn-metocl-vizes ammónia 80:40:4 arányú eluens elegyével, és igy I-.(3-aajinqpropil>wpm-2-oní (4,973 g, 8?%-os kitermelés) kaptok),. megkaptok a kívánt vegyüieteket.
54-56, és 73. példa
A 95., 94., 96, és 97. példa eljárását követve,, de a 2><2-anrtnoetO)p3rídmt N-.acettketiléa-diamtmal helyettesítve (melyei ügy állítottunk elő, hogy etil-acetát és etilén diámra (1,5 ekvivalens) keverékéi 160 cC-on 1 órán át lezárt edényben melegítettük, és vákutundeszfillációva) 5659-os kitermeléssel előállítottuk a kívánt terméket; a.z N-acetíién díamía az Aídríehfúí is beszerezhető], megkaptuk a kíváut vegyüieteket.
57-66. példa
A 95., 94,, 96. és 97. példa eljárását követve, de a 2-(2-s»:iaosto)piriái’« 143-aminopr©pü}-teirahiároprri5iiidm-2’<í!5naí helyettesítve· (melyet ugyanúgy állítottunk elő, mint az l~(3-am5noprop:i)~a?.epiu-2-oo?
Kraft, A,, X Chem. Soc, Perkta Tram, .1, 6, 705-14, (1999) eljárásával; rövidest : l,3,4,é,7,8-hexsh}dro-2II-pirimido(l,2-ajpbm»dint: (4,939 g), lítium hidroxid.hidrától (918 mg) és 2 ml -vizet oldószer nélkül zárt eáértyben melegítettünk 145 cC-ou 1 órás át; a nyers terméket szilícium dioxid oszlopos riszlhottek klmofertu97481-1045 SL
8C0/0501/04813
-6<?” * «Χν« »* »* x ΦΦ ♦*««
ΦΦ φ XX * * * Φ * * « ·* * a φ«« ** * ν * φ * X X Φ « Φ X * * φφ» *« Κι* XX 9 9 9ΧΧ9 X
-metanol-vizes ammónia 80:40:4 arányú ©legyével, és így megkaptuk a tiszta amint (5,265 g, 94%-os kitermelés}], .megkaptuk a kívánt vegyületeket.
61., 74-75. és $0. példa
A 45., 94., 96, és 97. példa eljárását követve, de a 2-(2-ammoeril}ptridim. 1-(2-aminoesit^ipemzin-2-cnnal helyettesítve [melyet isgy álSitot&tnk eh), hogy tiszta íere-fetttíldífeisfexiííl kloridot (25 ml, 97,7 mmol} adtunk cseppenként DHU (19,5 -ml, 130 mmol) és brs2(2.-amm<seril)amin (4,32 ml, 40 mmol) vnanmtes dnaetii acetatmdns (88 ml) oldásába szobahőmérsékleten,, vízfürdőbe® bűíve, 5 pere alatt;· a keveréket 5 órán át keveríük..Brómec-etsav-etilé-szterí (6,70 rak 60 aandl} adtunk hozzá riszté® szobahőmérsékletre hűtve; a mkct-ófceve· réket 25 percig kevertük, ezután nagyvákmnubaa elpárologtattuk; a maradékot metanolban (2ÜÖ mi) feloldottuk, KHCOj-ot (.1Ö g) és KF-ot ί 12 g, 200 mmol) adtunk hozzá, és a keveréket 40 X’-en 5 órán áí kevertük, 10 g NajC'OrOi adtunk hozzá, 10 percig kevertük, .fehütöttük és leszűrtök; a szőrieteket bepároltuk; a maradékot hexánokkal extraháltjuk <2-aser 250 nü); a hexánban oldhatatlan anyagot feloldottuk etanoíban (60 mi), leszűrtük és: bepároltuk; a maradékot szilícium dioxid oszlopon tisztítottuk klorofotm-metanol-vszes ammónia 80:40:4 arányú efegyével, és igy megkaptok a tiszta amist (4,245 g, 74%-ö» kitermelés)], megkaptak a kívánt vegyületeket.
77, példa
S-(S~Flu«>r~2-öxo-lf2-dihldr<shidoí-3iljdénmeís;S)~2,4-dímeriM:H~pir5Ol-3-k2rborssav [2-14-metiíptperaris- l-tij-eritj-anrid
5-1.5-Flüc:-r-2-oxc>~l,2-dihidromöol-(3Zj'iíiöésn5íetsi]-2,4-áhse!il-líi-pí’T!-:4-3-kaj-b<msav-{OÖ mg), DMF (0,8 -sri) és TEA (0,084 ml) zavaros,, sárga, kevert keverékéhez 20 ml-es reaksáóesöben BOP reagenst (199 mg) adtunk, A keverék 5 perces belül kitisztult. 2-(4-M«rilpjperazm-141:)etíímint‘' (51 mg) adtunk a tiszta keverékhez, A keletkező oldatot szobahőmérsékleteit kevertük egy éjszakán áí. Sárga szilárd termékek csapódtak ki: a reaketórendszerbők A vékonyrcteg-kjomaíográfta (10% etanol metiléa kksidha®) azt mutatta, hogy az összes kiindulási anyag a termékké alakult át. A szilárd anyagot vákuuxnszüréssel izoláltuk, és egyszer etanollal (1 ml) mostuk. A szilárd anyagot diesii éterben (2 ml) 20 percig: szaulkáltttk, majd vákuumszűréssel összegyűjtöttük. Miután vákuumban megszárítottak, 5-(5-Ottor-2-oxí>-l,2-d!líídroin.dol-3-ilidésmieÍ!l)-2,4-áinreiü-IH-pírcol-3-karboKsav-(4-metil-piperazm- I-íí)-etn)-amidot (70 tag, 0284-os kitermelés) kaptunk.
:H NMR (DMSa<y δ 2,13 (s, 3H, CH}), 2,40,2,42 (2xs, 6H, 2xCH:>}, 2,41 lm, 2H, CHO, 2,4? <m, SH, 4x€B?), 3,30 (m, 2H, CH,.),. 6,82 (dd, >4,3, 8,7Hz, IH), 6,91 (id, >2,4, >8,8Hz, 11-1),7,43 (:, >5,6Kx, ÍH), 7,70 (s, IH), 7,75 (dd, >2,8,. 9,6Hs, IH) (aromás és vsait), 10,88 (s, IH, CONH), 13,67 (s, IHNH), LC-MS (m0) 424,4 (M-I).
?§, példa
5-(5-Klór-2-oxo-I,2-dsbhlro-md»Í-3-il5dénmeril}-2?4~dimetii-lH~pírröl-3-ksrho®sav-(4-merilplperaxln-.l -tl-eriiy-anrid .Az eljárás .azonos a 77. példában leírttal, de az 5-(5-fíuQr-2-exo-l^-<rihá&oíná5l-(3Z)-öidé5mteÖ]-.2,4-dimeiis-lH-pirrol-S-ksrfeöosavaí 5-(5-klór-2-oxo-l,2-dihidromd«l-(3Z)-ilidéametü]:-2,4-dmretn-í H-phvoi-3-karbonsavval (95 mg. 0,3 nsuol) helyettesifetink, és igy 545-kíór-2'-©xo« 1,2:-döütko-Í8dol-3-ükíémneril)-2,4-tSffieíil-lH-pirrol'3-karbonssv-.(4-meü]piperazia- r-ílj-etííj-smidoí (76 mg, 58%): kaptunk.
97441-1095 03..
PCT/UőOi ,-714013
Φ ·»*·* * Φ φ
S *» *Φ «♦«·»
XX- ΦΦΦφ ’Η NMR (UMS0-4) δ 243 (s, 3Η, CR), 2,41,2,42. Í2xs, ÓH, 2xCHj), 2,42 fm, 2H. CH,)., 2,48 tm, §R 4xCR), 3,3ö (m, 2H, CHS), 6M (d, >8,0Hz, Hí), 7,11 (dd, >2,0, S,OHz, IH), 7,44 ít, 1-5,6¾ Hí), 7,76 (s, Ui), 7,97 (d, .1-2,0¾ lH)(aromás és viaitK (0,98 (s, ÍH, CONHí, 13,-62 (s, ÍR NH'.s,
LC-MS (m/2} 449,2 (M-H
79. példa
5-(5-Bróat-2-Ox«-B2-diíisdrí?-ÍBáöl''3-ttidéssseííi)'-2<4-d{S}€ttMH-psrmí-3-karböKsav-<4~meíiIpspéfszír- 1 -íl-etii,ssrol6
Áz eljárás azonos a 77, példába» leírttal, de az: 5-(5-fi«£S--2-oxo-l^-difejdromdol-3-íhdéHmetÍl}-2,4-diíaedMH-pirrol-3-.ka^<wavat S-íS-brónví-oxu-Hz-sibídrosiáöl-S-ílidéFünetilj-SA-dinieoi-lH-pinOi-u-karbonsavval hclyenesliet-tük, és Így 5-{S-bróm-2-oxö-1,2-dthídromdo1-3-ilidénmetil}-2,4-<feaeíil-lH-pinxíl-3-karbomv-(4-metiipiperaz«i-1 -iletíl>smidot (39 mg, 54%) kaptunk SV01 16700-ból (54 mg, 0,1.5 mrad).
*H NMR (ÖMSO-dó) 5 2,14 (s, 3R CH)}, 2,41,2,42 (2xs, ÓH, 2xCHy), 2,42 (m, 2H, CRi, 2,48 (m, SH, 4xCH2), 3,31 (m, 2R Q% 6,80 (d, 5-8,9¾ IH), 7,23 (dd, >2,0, 5,0Hz, Hí), 7,44 (t, >5,óHz, IH), 7,76 (s, IH), 8,0.9 .{d, >2,0Hz, ÍK) («másés viuil), 10,99 (s, ÍR CONH), 13,61 (s, ÍR NH).
.LC-MSf'm/z) 486,6 (M).
8L példa
5-(2-Οχί>-ί,2-6ϊ6ί6Γθ-ί»6ο1~3466έηίη«Η5)-2^4-ίΗίΏ«?03·Η-ρΐΓΓθ1-3-Κδ5ΊϊθΚ«&ν-(4»ίη&05ρφεΓΖ?,ϊθ«1-15-etil)-smíd
Az eljárás azonos a 77. példába», leírttal, de az 5-(5-Öuor-2-ox<>-l,2-dihiaromdoi-3-ílídénUiet6)-2,4-dírí!etsl-lH-plrrol-á-karboasas’at, SU914900 5-(2-oxo-í,2-dibiíkoátdol-3:-ilidto3íetilj62<4-djmedl-lH’páT-ol-3-kMboxjs&vval <95 mg,0,3 mmol) belyedessíetíük, és Így 5-(2~oxo-l,2~djhídroisdol-3-ílídéíí»fíeíiH-2,4-diöJe6l·· -Hí-plrrö.l-3-karbonsav-(4-meíílpipe-razi»-1 Hletd jamiaoí SUÖ149Q3 (136 mg, 84%) kaptunk a SUO12120-feői (112,8 mg, 0,4 .rnrnd).
*Β NMR (DMSO-dH δ 2,13 (s, 3H, CR), 2,39, 2,42 (2xs, ÓH, 2xCHR 2,42 (m, 2R CR), 2,48 (m, 8H, 4xOi2), 3,30 (t, 2H, CR), 06 (d, >8,ÖHz. IH), 6,96 (t, >7,4 Hz, IB), 7,10 (1,1-7,SHz, IH), 7,41 (t, >5,4Hz, Ui), 7,62 (s, IH), 7,76 íd J-7,6ífe, IH) (aromás es vinií), 10,88 (s, ÍR CONH), 13,61 (s, IR HH).
LC-MS (m/z) 406,6 (M-i).
89. példa
5-[2-Öxo~t,2-álbldrois]s6(i5-(3Z}-ll!désífRet6!-2,4~dbRetiMH-plrrííl-3~kzs-bottsíívP-(3,5-d!.8mt£lpíperzziíi-I-il>eílljaín!d
5-12-oxo-l,2-ashldrotí5dijl“(3Z)-didéímietílj-2,4-dimetjl-lH-pí3K3í-3-kMbensay-(l 12,8 mg, 0,4 srmol}, DMF (0,5 ml}· és trietílsroin (6,111 ml}· zavaros, sárga, kevert keverékéhez 20 ml-es reakcióesőfoea BÖP reagenst (265 mg} adtunk, A keverék 5 percen belül kitisztult. 2-(2,6-Diruetiipipetazin- l-íl)etilasmí <0,6 mg) (lásd Tapsa, L. Almso-Cses, F. Lopez-Tudaaca, R. Mosqners, L. Lsbeags, A. ínseraríty, A. Osjales, 5. Med. Chem., 42,2870-2880 (1999)1 adtunk a tiszta keverékhez. A keletkező oldatot szobahőmérsékleten kevertük egy éjszakán át. A vékonyrétsg-facmatográSa <10% metanol snetiléa klómban) azt mutatta, hogy az összes kiindulási anyag termékké alakult át. A reakeiókeverékeí szárazra pároltuk, majd fíash. kmmatográfiával tlszbróítuk(CRCL/ClLORdO/l-lő/i), és ójraknsíályosiíeföík; így 5-É2-ox<s-L2-d&idromdoi-í3Z)-ílídénmelilj:-2,4-dimetd-lH-pirrol-l-karbousav 12-(3,.S-dsm^Öptperazm-I-iTjettljamidoí (83 mg, 56%-os kitermelés) kaptunk.
3-7481-1045 5.1,
FCT/US01/04813 *·*· ο * r « κ ·#···♦ »9 *
Jf * « * « χ «» «« ««« « »*« &
« »
‘Η NMR(DMS<Adö) δ 1,15, 1,16 (2xs, 6Η, 2xCB.Á 1.95 (L >!1,6Ηζ, 2Η, CHH, 2,41,2,4? (2xs,.ŐH, 2xCHj, 2,50 lm, 2Η£%), 3.03 (d,3-WHz, .211), 3,19 ím, 2H), 3,30 (m, 211, C%), 6,86 (d, >8,0Hz, Hl), 6,97 0, >7,2 Hz, IH), 7,11 |tJ-7.8Hz, 1H), 7,48 (t, 3-5,6 Hz, IH), 7,61 (s, IH), 7,75 (dJ-7,6 .Hz, )H): (aromás és virul), 10,88 (s, IH, CONH), 13,62 (s, IH,NH).
LC-MS (m/z) 422,2 (MM).
5-15rFl«er-2-»x6-l^«<}xhtáre-iS'döl>(3Z)4Jiáénmetil3r2,4-áto-tO~lll-p'irröl-3~katrb«8S8v-|2-13,5-diiHetOpiperaziíl·· I-sl)eri;j amid
A 77. példában leírt eljárást követve a kívánt vegyületet kaptak meg (60 mg, 0,2 mmol)· SH NMR ÍDMSO-á4 δ 0,891,0,907 (2x8,60, 2xCH?), 1,49 <t, >10,4Hz, 2H), 2,40, 2,42 <2xs, ŐH, 2x CH3), 2,41 ím, 2H, CHS>, 2,74 (m, 4H), 3,30 Cm, 2H), 6,82 (dd, >4,5,8:,7Hz, IH), OAOÍtá, 3>2,4, 0-8,4¾ IH), 7,42 <t, >5,őHz, IH), 7,70 (s,lH), 7,74 (dá, 3-4,6, 8,4Hz, ÍR) (aromásés toll), !0,88<s, IH, CONH), 13,65 (s, 111, NH).
LC-MS (m/z) 438,4 (MH).
83. példa
5-|:5-KIöi>2-»x®-l,2-dífel^,»-máel-<32[>öídéí»»e4il|-2,4-^me<ll-lH^ŰTal-3-kaFb«asav42;«(3,5-dÍsieti! p iperazhs-1 ~® jetii) esd d
A 80. példában, leírt eljárást követve a kívánt vegyületet kaptak meg <31,2 mg, 34%) az S-ÍS-kiór-Z-oxo-l^-áibídromdoH3-Z)-iUd!á£na«tíl]-2í4-dim«ta-lH«prrol-3-tebonsavbólC61 mg, 0.2 mmol).
*H NMR (DMSÖAí S 1,15,1,26 (2xs, 6H, 2xCíR), 1,95 (t, >11,ŐHz, 211, Clb), 2,40,2,42 <2xs, ŐH, 2xCH3), 2,50 (m, 2H, CH2>, 3,03 id, >11,2Hz, 2H), 3,19 ím, 2H), 3,30 (m, 2H, CPN), 6,85 Cd, >8,4Hz, IH), 7,11 (dd, >2,0, 8,0Hz, IH), 7,32 (í, >5,6Hz, ÍR), 7,76 (s, IH), 7,97 íd, >2.0Hz, 1.H) (aromás és vfeil), 10,99 (s, IH, CONH), 1.3,63 Cs, IH, NH).
LC-MSCm/z) 456,2 (M+í).
S4. példa
5-)5~B5'óm-2~ö>xs~l,2-íllbsdro-isdsl-(3Z)-tlÍdénmei0)-2,4-dimetli-lH-pírr»l-3-karteöSsav-p~(3,5-dimetílpipera?,5n-?-íl.!«íü|amid
A 80. példában leírt eljárást követve a kívánt vegyületet kaptuk meg (40 mg, 40%) az 5-(5-bróm-2-oxo-LZ-dlhídroiudokíSZj-iliáénmetín-Zél-di.m.eid-lH-pín'Gl-S-kaj'bonsavból (74 mg, 0,2 mmol);
;H NMR (DMSCM) 5 1,15, 1,16 (2xs, 6H, 2x€Hj), 1,95 (1, >11,6Hz, 2H, CHS), 2,40,2,42 (2xs, ŐH, 2xCH3), 2,50 (m,.2H,CH2), 3,03 (d, >10,4Hz, 2H), 3,19 (m, 211), 3,30 <«k 2H, CHj), 6,81 (d, >S,4Hz, IH>, 7,24 (dd, >2,0, 8,4Hz, IH), 7,51 (t, >5,őHz, IH), 7,76 is, IH), 8,10 {d, >2,0Hz, IH) (aromás és tol), 10,99 Ó, IH, CONH), 13,62 is, IH, NH), LG-MS{m/z) 498,4 (M-l).
Biológiai példák
A kővetkező teszteket alkalmaztuk a kívánt aktivitás optimális mértékének bemutatására.
A. Teszt eljárások
A következő teszteket alkalmazhatjuk, hogy meghatározzuk a léten találmány szerinti különböző vegyületek aktivitásának és hatásának mértékét egy vagy több PK-ra. Hasonló teszteket tervezhetünk ugyanilyen irányelvek szerint bármely PK-ta a szakmában j ói Ismert eljárások alkalmazásával.
974«2-1045 SL
PCT/OSÖ1/Ö4823
-63Számos itt leirt tesztet ELISA fErnrynie-lúsked Immunosorbent Sandudch Assay) fonásban (Volteresmunkatársai, „Enzyme-liríked Immanosorbent Ássay” Manual of Glancai htuounology, 2. kiadás, Kosé aad Friedmas, Ám, Soc. of Mterabioíogy, Washington D.C., pp. 359-371 (1980)1 végeztünk el. Áz általános eljárás a következő: a vizsgáit kínázt akár természetes, akár rekombináns ütőn kifejező sejtekhez bevezetünk egy vegvöfeíet egy adott időtartamig, és ha a vizsgált ksnáz receptor, ezután olyan ligaodum® adunk be, amelyről ismert hogy aktiválja a receptort. A sejteket lízáljuk és a lizáfomot átvísszük egy ElíSA-setnsz lyukaiba, amelye; előzőleg olyan specifikus antitesttel teritofíunk, mely felismer: az enziruaukus foszfőrílezési reakció szabsztrátját. A sejí-Ezátmaoem-sztíbsziráf komponenseit lemossuk, és a feszferifesés mértéket a szuhsztráton olyan antitesttel detektáljuk, amely specifikusan: iélisnten a foszfourozha a kontroll sejtekhez képest, amelyek nem érintkeztek a vizsgált vegyülettel.
.Az slábbtakbsa közöljük az BLISA-teszfek végzésének jelenleg előnyös protokollját specifikus FK-k esetében, A szakemberek azonban tudják, hogyan kell adaptálni ezeket a protokollokat, hogy a vegyületek aktivitását meghatározzák más RTK-kal, vafemint CTK-ksi és STK-kal szemben. Oly®; más teszteket is ismertetünk, amelyek annak a DNSmek a mennyiségéi mérik, mely a vizsgált teás aktiválásának válaszaként keletkezik, ami a szaporodási válasz, általános mértéke. Ennek a tesztnek az általános eljárása a következő: a vizsgált kinázt akár természetes, skár rekombináns ütőn kifejező sejtekhez bevezetünk egy vegyüietet egy adod időtartamig, és fea a vizsgált kínáz. receptor, ezután olyan, ligandumot adunk bs, amelyről ismert, bogy aktiválja a receptort. Legalább egy éjszakán át inkubáljuk, majd egy feNS-jelző reagenst, például 5-ferőmdeoxsndásat (BrdU) vagy 'ff-timidist adunk hozzá, A jelzett DNS mennyiségét vagy anti-BrcRl antitesttel, vagy a radioaktivitás mérésével detektáljuk, és összehasonlójuk a kontroll sejtekkel, amelyek nem érintkeztek a vizsgált vegyülettel,
GST-FLK-S BfOASSAY
Ez a teszi a GST-Flkl tirozin krnáz aktivitását elemzi poK(gla,tir) pepfidekett.
.dnyugok és reagensek:
1. Corning 9 lyukú ELISA. lemezek (Corning katalógus szám 5805 -96).
2. poli(glu,tir) 4:1, hoöízátnm (Sigma katalógus szám ΡΘ275),3. Poh(:glu,dr) (pgY) anyaggal bontott lemezek készítése: a borítást végezzük 2 ug/lyuk:poli(glo,tir) (p£Y) /
ÖÖ pl PBS anyaggal, tartsak szobahőmérsékleten 2 órát vagy 4 *C-on egy éjszakán át. Fedjük le jól a lemezt, hogy megakadályozzuk & párolgást
4, FBS puffén 1 literhez kevertünk el '0,2 g KH;POrí, 1,15 g ö,2 g KCl-í és 8 g NaCI-t kb; 900 ml dfejO-fean. Amikor az összes reagens feloldódott, HCi-lel állítsuk be a pH-t 7,2-re, Egészítsük ki a teljes térfogatot 1 literre dlLO-vsl,
5. PEST puffén 1 liter PBS paííerhez aduink 1,0 ml Tween-20-at.
6, TBB-blokkoló puííer: 1 literhez keverjünk el 1,21 g TRIS-L 8,77 g NaCI-t, 1 ml Twees-Sö-af kb, 90Ö ml dfEO-bau. Állítsuk be a pH-t 7,2-re BCl-lel. Adjunk hozzá 10 g BSA-t, és keverjük el, begy feloldódjon. Egészítsük ki a teljes térfogatot 1 Ikerre őkEO-val, Szűrjük le, hogy ekávelhstfk a szemcsék formájában: jelen levő anyagot,
7. í% BSA PBS-ben: sz ix-es oldal elkészítéséhez adjunk 10 g BSA-t kb. 990 ml PBS puS'erbe, és keverjük si, hogy feloldódj®·. Egészítsük ki a teljes térfogat® I literre PBS puSerrek és szűrjük te, hogy eltávolítsák a szemesek formájába;· jelen levő anyagot.
37431-1045 SL
ECT/OSÖi/048i3 *« «φ«χ
-64X Φ Φ « *χ Φ ♦ ♦ φ φ φ φ φ «« «χ. ΦΦφφ *
8·.. 50 mM Hep&s, pH-7,5.
9. GST-Fíklcd, amely síp rokomlnsáus baeulovirus transzformációból van tisztítva (SUG.EN, lse.).
10. 4%-DMSOdH2O-ban.
11. 10 sM AT? dHAO-ban.
12. 40 mM MnClj.
13. Kináz hígító puffot (KÖB): keverjünk össze 19 ml Hepes-t (pH-7,5), 1 ml 5 M Naö-t, 40 μ] 100 mM nsiriian ortovanadátoi és dEfeO-ban oldott, 0,4 oxl 5%-os BSA-t 88,56 ml dH:,O-val.
14. NUNC 96 lyukú: V fenekű polipropilén lemezek, Applied SclentifK katalógus szára AS-72092.
15. EDTA: 14,12 g erilésdismuatetraecetsavat (EDTA) keverjünk el kb. 70 ml dHjO-val. Adjunk 10 N NaOíí-í hozzá, amíg az EDTA föl -asm oldódik. Állásuk a pH-t 8,0-ra. Egészesük id a teljes térfogatot 100 ml-ro dH2O-val.
16. lc antitest hígító puffét; keverjünk el PBS pufforfeen,oldod, 10 ml 5%-os BSA-t 89,5 ml TEST-vei.
17. Torna peroxidázhoz konjugáh. antiíbszfotirozra monoklonáiis antitest (PY99 HRP, Santa Grúz Biotecb).
18. 2,2,-Az£!5ob!S.s(3-etühenzíiazöHn)-6-sxttlfossav (ASTS. Moss, katalógus szám A8SI)..
19. 10% SDS.
Etforás?
1. Bontsak a Corning 96 lyukú BUSA lemezeket steril PBS-fees oldott 2 pg poliEY pepiiddel, ahogy az Anyagok és reagensek 3. lépésében leírtuk.
2. Távolítsuk el a áem megkötött folyadékot a lyakakból a lemez- megfordításával. Mossuk még egyszer TBST-vel. Ötögessök a lemez papírtörülközőhöz, begy ekávoíitsuk a felesleg folyadékot.
'3. Adjunk lűö pl, PSS-hen oldott 1% BSA-t minden lyukba. InkubáHuk, rázás közben, i órán áí szobahőmérsékleten.
4. ismételjük meg a 2. lépési.
5. Áztassuk a lyukakat 50 mM HEPES-szel <pH-~'7,5) fi 50 pl/lyuk)·.
6. Hígítsuk a vizsgák vegyüíetet dHjO/4% DMSO-val a kívánt végső teszi koncentráció 4-szeresére lyukú polipropilén lemezeken.
7. Adjunk25 pl hígított vizsgált vegy&lstct az EOSA-toezre. A kontroll lyukakba helyezzünk 25 pl dH2O/4% DM8Ö-Í.
8. Adjunk 25 gi 46 mM MnCU-í 4x ATP-vel (2 pMj mindegyik lyukhoz,
9. Adjunk. 25 pl 0,5 M ΗΠ'Α-f a negatív kontroll lyukakhoz.
10. Hígítsuk a ŐST-Rk 1 -et 0,005 ug (5 ttg). iyuk-m KDB-vrf.
11. Adjunk 50 μΐ hígított enzimet mindegyik lyukhoz.
12. Inkubáljnk, rázás közben, 15 percig szobalfométsékfoses.
13. Állítsuk meg a reakciót 50 tű 256 aM EDTA hozzáadásával (pH-8,0).
14. Mossuk 3x TBST-vel, és ütögessük a lemezt papírtörölközöhöz, hogy' eltávolitstik a felesleg folyadékot.
15. Adjunk mindegyik lyukhoz 100 pl anöfoszfottrozrn HRP keajngátumct, 1:5006 hlgitássban. antitest hígító-pufferben. Inkufeáljuk, rázás közfess, 90 percig szobahőmérsékletem
16. Mossuk, nsint a 14. lépésben.
97481-1045 SL.
ACT/OSül/OáSi ;· ·*♦*-♦ *«
Μ'
17. Adjunk mindegyik lyukhoz 100 pl szobahőmérsékletű ABTS oldatot,
18. inkubáljuk, rázás közben, 1.0-15 percig. Távolitsunk el minden buborékot.
19. Állítsuk meg a reakciót ügy, hogy mindegyik lyukhoz 20 pl 10%-ós SDS -í adunk.
20. Olvassuk ie az eredményeket Dynatech MR7000 ELISA leolvasón ágy, hogy a vizsgált vegyüiethez használt szűrői 4 lő nm*re állítjuk, a referencia szerbi 630 nm-re álhitük.
PVK.2 8HMSSAY
Ezt a tesztet arra használjuk, hogy a HA .epitoppal jelzett, teljes hosszúságú pyk2 (FL.pyk2-HAl in vitro kináz aktivitását mérjük ELISA-vaL .Anyagek <fe feifí-efisei:
1. Corning 9 lyukú ELISA 'lemezek.
2. 12CA5 monoklonális anit-HA antitest (Ságén, Inc,).
3. PBS (Dolbecco Fhosphate-Buöereá Salins (foszfát pufferes sóoldat} (Gibco katalógus szám458- 130ÖEB)).
4. TBST puffer: 1 literhez kevetjánk eí 8,766 g NaCI-t, 6,05? g TRIS-í és 1 ml 0,1% Triton Χ-100-at kb. 900 ml áHjö-baa, Állítsuk be a pH-t 7,2-re, egészítsük kí a térfogatot 1 literre.
.5. Blokkoló poilér; 1 literhez.keverünk össze löö g 10%-os SSA-t, 12,1 g 100 mM TRIS-í, 58,44 g 1 M NaCI-tés 10 mi 1%-os Twesm~2ő~aí.
6. R.pyk2-HA sí9 sejí-nzátomokből (SUGEN, lse.)
7. 4% DMSO MtlhQue H2Oban.
8. 10 mM ATP dlí jO-ben.
9. 1 mM M.oCk
10. ImMMgCij.
11. ImMDitfotóiólCDTT).
12. lOx Kináz paffer íbszforílezés: keverjünk össze 3,0 tnl 1M Hepes-t (pH 7,5), 0,2 ml 1 M MnCfot, 1,0 ml 1 M MgClj-1, 1,0 ml 10%-os Triton X--lö0~aí 2,8 ml dH2O-han, Közvetlenül a felhasználás előtt adjunk hozzá 1,0 ml 1 M DTT-t.
13. NGHC 96 lyukú. V fenekű polipropilén lemezek.
14. 500 mM EDTA dH2O-ban.
15. .Antitest hígító pufiét: 100 ml-tez 1 ml 5%-osHSATBS és 1 tol 10%-os Twesa~20 88 mi IBS-bes.
16. HRP-kötsjugált· antí-Ptyr (PY99), Santa CruzBiotséhkatalógus szám SC-7Ö2Ö.
17. ABTS, Moss, katalógus .szám ABST-2000.
18. 10% SDS.
EZ/őrdí.·
L Borítsuk a Corning 96 lyukú- BUSA lemezeket lyukasként 0,5 pg 12C.A5 aati~HÁ antitesttel, amely 100 ul PBS~ben van oldva. Tároljak egy éjszakán 4 °C-on.
2. Távolítsuk el a nem megkötök HA antitestet a lyukakból a lemez megfordításával. Mossuk a lemezt áHjöval. Gtögessük a {emezt papiribrőlközbhöz, hogy ókávohsuk a fölösleg folyadékot.
3. Adjunk 150 μΐ blokkoló puffért mindegyik lyukhoz. Inkubáljuk, rázás közben, 3Ö percig szobahőmérsékleten.
4. Mossuk a lemezt 4-szer TBST-vei
PCT/0SDL/O4813
** Ψ«Μ >
5. Hígítsuk a llzámmot PBS-ben (1,5 μμ lizáism/100 μ; PBS.).
6. Adjunk ΓΟΟ μί higftott lizátutsoí mindegyik lyukhoz. Rázzuk szobahőmérsékleten 1 órán .át.
7. Mossunk ugyanúgy, mist a 4. lépésben.
8. Adjunk 50 pl 2s kináz ptsffen az E1..1S.A lemezhez, .amely befogóit pyk2-HA-t tartalmaz.
9. Adjunk 4%-os DMSO-ban oldott, 25 μί, 400 «Μ vizsgál: vegyületet mindegyik lyukhoz. A kontroli lyukakhoz csak· 4'%-os DM'SO-t haszuáljunk.
10. Adjunk 25 μί 0,5 M. EDTA-t a negatív kontroll lyukakhoz.
11. Adjunk 25 ui 2ö pM ATP-t az összes lyukhoz. Inkubáliak rázás közben 10 percig.
12. Állítsuk le a reakciót úgy. hogy mindegyik lyukhoz 25 μί 5Θ0 mM EDTA-t adunk,
13. Mossunk ugyanúgy, mintád, lépésben.
14. Adjunk snfodegyik: lyukhoz 10(5 pl HRP kofongált snti-Piyr-í. amely 1:6000 arányban van hígítva az antitest hígító puffomén. Inkubáljuk, rázás közben, 1 óráig szobahőmérsékleten.
15. Mossuk a lemezt 3-szor TBST-vel és l-szer PBS-set
16. Adjunk Γ00 μ! ÁBST oldatot miadegyifc lyukhoz.
7. Ha szükséges, állítsuk meg a reakció továbbhaladását úgy, hogy minden lyukhoz 20 μί i 0%-os- SDS-l adunk.
18, Olvassuk: le a lesnszl as ELíSÁ leolvasna úgy, hogy a vizsgált vegyöíetbez használt szőröt 410 om-te állítjuk, a referencia szűrőt 630 nns-re állítjuk.
FGFRí B1OASSAY
Ezt a tesztet arra használjuk, hogy az FGFl-R i« vázo kináz -.aktivitását ELlSA-val mérjük, sfntvtgok és reagensek:
I. Cosíar 96 lyukú Eiísa lemezek (Corning katalógus szám 3369).
.2. PolKGhs-Tir} f Sígroa katalógus szám PO27S).
3. PBS (Gíbco katalógus szám 456-13ÖÖEB).
4. 50 mM Hepes pnífor oldat,
5. Blokkoló puffot (596 B SAZPBS).
6. Tisztítod CST-FGPR1 (SUÖBN, te.)·
7. Kináz hígító puffén Keverjünk össze 500 o.l 1 M Hepes-í ÍGiheo), 20 μί 5% BSA/PBS~t, 10 pl 100 mM nátrium onnvsnadátot és 50 pl 5M bísCi-l.
8. lÖmMATP.
9. ATP/MaClj foszforilezb keverek: keverjünk össze 28 ul ATP-t, 400 u; 1 M MaClj-t és· 9,56 ml álBO-:.
10. NVNC 96 lyukú V fonekő polipropilén fojnezek (.Applied Seientífjc katalógus szánt AS-72092).
II. 9,5MEDIA.
12. 0,05% TBST, Adjunk 5ÖÖ (ti Tsveen-t 1 liter TBS-hez.
13. Nyúl poliklónozoít antifoszfotiroxin szérum (SUGEN, Inc.)
14. Kecske and-nyál IgG peroxsdáz kcnjugátunt (Blosource, katalógus szánt A1.I0404).
15. ABTS oldat.
15. ABTS/HjCb oldat.
97491-1045 SL
PCT/OS0L/64SÍ3 ♦ ♦•'Μ »* X ** ΦΦ ** »«»« « «ΦΦφ φ ♦** χ* · *
Φ φ φ· φ φ φ
ΦΦ φ« «ΦΦφ ν £7/<»
1. Borítsuk a Costar 96 lyukú BUSA lemezeket lyukaiském. 1 pg Poli(Gla,Tir>--naB amely 100 μί PSS-ben van oldva. Tároljuk egy éjszakán 4 :'C-os.
2, Mossuk a beborított lemezeket -egyszer PBS'-sel.
3'. Adjunk 150 pl 5% BS'A/P8S blokkoló puffért mindegyik lyukhoz. inkubáljuk; rázás közben, 1 óráig szobahőmérsékleten.
4. Mossuk a lemezt 2-szer PBS-sel, ezután egyszer· 50 mM Kepes-szel. Útögessűk a iercezeke· papírtör&lközőhSz, hogy -eltávolítsák a fölösleg folyadékot és a buborékokat.
5. Adjunk 4%-os DMSO-baa oldott, 25 ul 0.4 mM. vizsgált vegyüietet vagy 4%-os DMSG-t önmagában {kontrollok) & lemezhez,
6. Hígítsuk a tisztított GST-FGTR l -el kisáz higitó pufferben (5 ng kiö-áz/50 μί KDBdyuk).
7. Adjunk 50 μί hígítóit kinázt mindegyik lyukhoz;
R. Indítsuk el a kináz: reakciót úgy, hogy 25 μΙ/lyuk frnsexs. készített ATP/Msr^-í adunk be (0,4 ml 1 M MnC12, 40 pl lö mM ÁTP, 9.,56 jnldHjÖ, frissen készítve).
9. 'Ez gyors kinéz reakció, és 25 μ! 0,5 M EDTA-vsd keli megállítani, az A'fP beadásához hasonlóan eljárva.
10. Mossuk a lemezt 4-szer friss TBST-vei.
11. Antitest hígító puffer készhése. 50 ml-hes: keverjünk össze 5 ml. 5%-os BSA-t, 250 pl 556-os tejel és 50 pl 100 mM nátrium vanadátot, és a végső térfogaté? 0,05% TBST-vel állítsuk be.
12. Adjunk mindegyik, lyukhoz .100 μί antí-foszofotHo-riat-(1:10 000'hígítás ADS-hea). Inkubáljuk, rázás közben, 1 árán át szobahőmérsékleten.
13. Mossuk, mini a. 10. lépésben.
1-4.. Adjunk mindegyik lyukhoz 100 μΐ Bioseuree kecske anti-nyúl IgG perosidóz konjugátumot <1-6000 hígítás ADB-ben). Inkubáljuk, rázás- közben, 1 Órán át szobahőmérsékleten.
15. Mossuk, mint a 1Ö. lépésben, majd PBS-sd, hogy eltávolítsák a buborékokat és a fölösleg Twéen-t. l ö. Adjunk 100 μΙ áBTS/H:>03 oldatot mindegyik lyukhoz,
I?. Inknbáiiuk, rázás közben .10-.2Ö percig. Távolitsu-nk el mindén buborékot.
18. Olvassuk le az eredményeket Dyaalecfe ΜΚ70ΘΟ BLISA leolvasón úgy, hogy a vizsgált vegyülethez használt szűrő? 410 nm-re állítjuk, a referencia szűrői 630 rno-te állítják.
EGER BÍOASS AY
Ezt-a tesztet, arra használjuk, hogy- az FGFl-R fo vdn> kináz akti-vitását EITS A -val mérjük, zfrnwgífo és feagzmvcá;
1. Corning 96 lyukú Elisa lemezek,
2. SüMOí saoroklonáljs anti-BCTR antitest (SUöEK, te.)
3. PBS.
4. TBST psfíer.
5. Blokkoló puffer; 100 ml-hez keverjünk össze 5,0 g Garamion Instant Non-íat Milk&'-et (sem zsíros tejet.) 100 mlPBS-sel.
é. A43I sth't-lízátma (SUGEN, Inc,),
7. TBS puiTer.
27481-1045 SL
FCT /ÜSW 09813 χ ,»'♦·«
X « 9
V *♦
8. TBS-Í-10% DMSO: 1 literhez keverjünk össze 1,514 g TRIS-í. 2 J §2 g NaCÍ~t és 25 ml DMSO-t; egészítsük kí 1 Iker összíérfogaíra áí.í2O-val.
9. AXP (adenozut-S’-bífosz-fál, ióizotöbók Sigma katalógus szám A-53-94), i ,9 m.M oldat -dHjO-haa. Ezt & reagenst közvetlenül a felhasználás előtt keli elkészíteni és jégen kell tartod.
10. LOmMMnCh.
11. ATP/MsClj foszforílező keverék: 10 ml-hez kevertünk el 300 pl IraM ÁTP-t, 509 μί MnCU-t és 9,2 mi dH?O-t Közvetlenül a felhasználás elölt készítsük el és tartsuk jégen.
12.. N1.INC 96 lyukú V fenekű polipropilén lemezek,
13. EDTA.
1.4. Nyúl poliklonálís smi-foszfoíirozin szénás Í'S ÜGEN, Inc.)
15. Kecske anti-nyül IgG peroxhíáz konjugten (Biosource Katalógus szám ALIÖ404}.
16. ABTS.
17. 30% hidrogén peroxsd.
18.. ABTS/HjOj,
19. 0,2 M HCI.
£/?'áfíis.·
1, Borítsuk a Corning 96 lyukú ELISA lemezeket lyukasként.0,5 pg SUMOI-gyek amely 100 pl FBS-feen van oldva. Tároljuk egy ^'szakán 4 X-c©.
2. Távolítsuk el a néni megkötött SUMOl-et a lyukakból úgy, hogy a lemez megfordításával e-líávoliijnk a folyadékot. Mossuk l -szer áHjO-val. Ütögessük a lemezt egv papirtörőlközőböz, hogy eltávolítsák a fölösleg folyadékot.
3.. Adjunk I5Ö pl blokkoló pulién mindegyik lyukhoz. ínkubáljuk, rázás közben, 30 percig szobahőmérsékleten.
4. Mossuk a lemezt 3-szor ionmentes vízzel, ezután egyszer TBST-vel, Otögessök a lemezt papbtSröílfozöhöz, hogy eltávolítsák a fölösleg folyadékot és a buborékokat.
5. Hígítsuk a lízátsimot PBS-ben (7 pg íiaátatít/löö· pi PBS).
6. Adjunk IÖÖ pl hígított ÜzátsuBOt mindegyik lyukhoz. Rázzuk szobahőmérsékleten 1 óráig.
7. Mossuk a lemezeket a 4, pont szerisi,
8. Adjunk 12S pl TBS-f az befogott EGFR-t tartalmazó ELISA lemezhez,
9. Hígítsuk & vizsgált vegyületet 1:1Ö arányban TB S-be», helyezzük a lyukba,
19. Adjunk 13,5 pl hígított vizsgált vegyületet az ELISA lemezhez. A kontroll lyukakhoz adjunk 197» DMSÖbsn oldott, 13,5 ni TBS-t.
1L Inkubáljnk, rázás közben, 30 percig szobahőmérsékleten,
12. Adjunk 15 pl foszforlfezö keverékei mindegyik lyukhoz, kivéve a negatív kontroll lyukat. A végső lyuktérfogatnak kb. 150 al-nek. kell lennie úgy, hogy minden lyukbaa 3 μΜ AIT/5 mM MnCK a végső koncestiráciö, Inkubáhuh, rázás közben, 5 percig.
13. Állítsuk le a reakciót úgy, hogy 16,5 pl EDI A oldatot adunk be. rázás közben. Rázzuk tovább meg I nercig,
14. Mossuk 4-szer fonmentes vízzel 2-szer TBST-vel.
15. Adjunk mindegyik lyukba Iöö pl anii-foszfothoziní (1:3000 hígítás TBST-bea), Inknháljok, rázás közben,
97431-1045 SL vC7/OS0L/0á313 ,ν *
-69** * * « « a Φ Κ φ * » φ φ >*« <φ * φ '♦ * ♦ · ·> Φ X Κ * V φ *·** * » XX Φ>* ΦΦ ίΧ#ί >
30-45 percig szobahőmérsékleten.
16. Mottsuk a 4. lépés.szexist
17, Adjunk mindegyik lyukhoz 100 pl Biosoarce kecske aaő-nyűl ígG pcroxíáSz koajagáttxmot < 1:2000 hígítás; TBST-bes). Iskabáljuk. rázás közben, 30 percig szobaítömérsékleteK.
IS Mossuk a 4. lépés szerint.
19. Adjunk mindegyik lyukhoz 100 g| ABTSíHOÍA oldstoí.
20. íntebáljuk, rázás közben 5-1Ö percig. 'Távefosnuk el infodén buborékot.
i. Ha szükséges, állítsuk fe a reakciót ágy, hagy mindegyik lyukhoz 100 gl 0,2 M. HCl-t adunk.
22, Olvassuk fe az eredményeket Dynat.ech MR7000 ELíSA .leolvasón úgy, hogy a vizsgált regyüfeöxea használt szűrőt 410 ntn-re állítjuk, a referencia szűrét 630 ras-re állítjuk.
PBGFR BÍÖASSAY
Ezt a tesztet arra használjuk, hogy az FGF1-R in vftro kináz aktivitásét ELISA-val mérjük.
Xaypgök Á? tr?agensok;
1. Corning 96 lyukú Ehsa lemezek,
2. 28D4C10 monoklonáus anti-PDGFR antitest (SUGEN, Inc,}
3. ?BS
4. TBST puffer.
5. Blokkoló puífer (ugyanaz, mist az EGER híosssay-ben.)..
6. PDGFR-.fj.-t kifejezd NJH3T3 sejt-iüzátes (SUGEN, Inc.).
7. TBS puffét.
8·. TBS* íö% DMSO.
9. ATP.
10. MaCIj.
11- Kináz puiTerfeszfenfezö keverék: 10 Kikhez keverjünk el 250 μΐ 1 .MTRJS-t, 2-00 pl .5 M NaCl-t, 100 pl 1 M MsCl5d és 50 gl 100 saM Tritoa· X~ 106-i elegendő dHjQ-hön, hogy 10 ml-t kapjunk.
1.2, NUNC 96 lyukú V fenéké polipropilén lemezek.
13. EDTA.
14. Nyúl políklenális anti-üsszfotirozin szérum fSGGEN,. Inc,.)
15. Kecske anti-nyúl TgG pemxidáz konjugáíum (Bíosoaroe katalógus szára ΑΠ.94Ο4}.
16. ABT5.
17. Hidrogén peraxsfe 30%-osi oldat,
18. ABTS/lTCh.
19. O,2MHC1.
.E/íónit;
1. Borítsuk a Corning 96 lyukú BUSA lemezeket lyukankéní 0,5 pg 2SD4C1 ö-zel, amely 160 gl PBS-fetm vso oldva, Tároljuk egy éjszakán 4 C-oa.
2, Távolítsuk el a nem megköteti 2SB4ClÖ-et a lyokskból úgy. hogy a lemez megfordításával eltávolítjuk a folyadékot. Mossuk 1-szer dlljO-val. Üiögosshk. a lemezt egy pspfotörölközohöz, hogy eltávoítaác & felesleg folyadékot.
97481-1045 £0
FCT/OSOl/09811 * 99*9 99 99 9Κ 99 «999
9« 9 9 9 « « » * X * * » ♦ » «Λ* χ* ν Μ * * ♦ * ΐ * X ♦ » * 4 *♦* *Φ #* «Λ ** **»ψ ν
3. Adjunk 150 pl blokkoló puffért miíuiegyik lyukhoz. Inkubáljuk, rázás közben, 36 percig szoirtbőtttérsékiete®.
4. Mossuk a lemezt 3-szor xoumeutss vízzé), ezután egyszer TBST-vel. Úiögsssök a kinézi paph-iörölközobőz, hogy eltávoktsuk a fölösleg folyadékot és a buborékokat.
5. Hígítsuk a lizátumoi HNTG-ben (ff? pg hzáinnff 160 pl HNTG).
6. Adjunk 190 pl hlgitctt bzáismcí mindegyik .lyukhoz; Rázzuk.szohaMusérsékleíes 69 percig.
7. Mossuk a lemezeket a 4. pont szerint.
8. Adjunk 80 pl fcíaáz pefílsr keveréket a befogott FDGFR-t tartalmazó: BUSA lemezhez.
9. Hígítsuk. a vizsgáit vegyületet ff 16 arányban TBS-hen, 96 lyukú polipropilén lemezekben.
10. Adjunk 19 pl hígított vizsgált vegyületet az: EtíSA lemezhez. Á kosomul! lyukakhoz adjunk 16 μ) TBS ·+ 16% DMSO-t. .Istínbáljuk, rázás közben, 30 percig szobahömérséldetes.
11. Apusak 10 pl ATF-t közvetlenül mindegyik lyukhoz, kivéve a negatív kontroll lyukat (a végső lyuktésrfogataafc kb. 100 ul-nck kell tennie ágy, hogy minden, lyukban 20 pM ATP legyen), Inkubáljuk, rázás közben, 30 percig:.
12. Állítsuk le a reakciót úgy, hogy 19 pl EDTA oldatot adunk mindegyik: lyukhoz,
13. Mossuk 4-szcr ioamoates· vízzel, 2-szer TBST-vel.
14. Adjunk mindegyik lyukba 199 pl anti-fosztötlrozhít (1:3000 hígítás TBST-beá). lukubáljuk, rázás közben, 30-45 percig szobahőmérsékleten.
.15. Mossuk a 4. lépés szeriek í 6. Adjunk mindegyik lyukhoz 100 pl Bíosoorce kecske anti-nyúl IgG peroxidáz konjugáturnöt (1:2009 bigiíás TSST-beu). Inkubáljuk, rázás közben, 30 percig szobanöinérsékleten.
17. Mossuk a 4. lépés szerint,
18. Adjunk rtüudegytk lyukhoz 100 pl ABTS/HjGj oldatot.
19. Inkubálink. rázás közbe®, 10-30 percig. Távofftsusk el minden buborékot.
20. Ha szükséges, állítsuk le a reakciót úgy, hogy mindegyik lyukhoz 100 pl 0,2 M: RCl-t adunk.
21. Olvassuk le az eredményeket Dyaatech MR7990 ELISA leolvasó®· ágy; hogy a vizsgált vegyülethez hasznáh szűrőt 410 nm-re állítjuk, a referencia szűrőt 630 nm-re állítjuk.
CEEWLÁRIS HER-2 KíNÁZ VIZSGÁLAT
E:-tt a tesztel arra használjuk, hogy a HER-2 kináz aktivitását mérjük ép sejtekben ELlSA-val.
Anyagok ár í'Siígcíts'cÁ;
1. DMEM (öiíhcö katalógus szám 11965-092).
2. Borjú magzat .szérum (EBS, Gibco katalógus szám 16909-044), hővel inafch'válva vízfürdőben.30 percig 56 “C-o®,
3. Tripazis (Gibco katalógus szám 25290-956).
4. Ι,-Ghríamin (Gibco katalógus szám 25036-681).
5. Hepes· (Gibco katalógus szánt 15630-080}..
6. Tápközeg, Keverjünk össze 500 ml DMEM-eí, 55 tol hővel inaktivált FB.S-1, 19 ml Hepes-t és 5,5 ml Lglntamim.
7. Éheztél» közeg (starve média). Keverjek össze 590 ml DMEM-et, 2,5 ml hővel inaktivált FBS-t, 10 ml
3748:--1040 SL
FCT/9SQl/04Si3 ♦'** · X * *φ«ί
Hspes-t és 5,5' mi- L-gluí&mmí.
8. PBS.
§.. Lapos fenekű 96 ivüké szövelk-ultúra. mikro-fftcr lemezek {Contnsg katalógus szánt 25860;.
18. IS css-es szövefknltüra.csészék (Corning katalógus szám 08757143}
11. Corning 96 lyukú ELISÁ lemezek.
12. NUNC 96 lyukú V fenekű polipropilén lemezek.
13. Costar transzfer kazetták: a Transtar 96-hoz (Costar katalógus szám 7610).
14. SÜMO L moaokiöaozotl ann-BGFR antitest (S-UöJEN, Inc.)
15. TBST paSsr.
16. Blokkoló puffért: 5%-os Cámatíon festet Milkfo; FBS-ben.
17. BGFTigaadutn: .B3F-2Ü1, Shiako .American, Japán. .Szuszpeadáltassuk a port 1ÖÖ pl 10 mM HCl-hea. Adjunk hozzá I0Ö pl IÖ mM NaöH-t. Adjunk hozzá 800 pl FBS-t és vigyük át Eppsnáorff csőbe, majd tároljuk ~2ö °C-os, arsig fel nem használjuk.
18. HNTG Ifeis puffer, 5s HNTG tőrzsokhtthoz keverjünk össze 23,83 g Bepes-t, 43,83 g. NaCl-t, 509 -ml glicerint és 1Ö0 :ml. Triton X- 1 Oö-at, valamint elegendő dHjö-t, hogy 1 liter oldatot kapjunk. Az 1 x HNTG’Msez, kevertünk össze 2 ml BNTG-t, 3 öö gl 0,1 M Ns, VOi-t, 250 gl 0,2 M Nö4F7O7-t és ΐ 00 gi EDTA-t.
19. EDTA,
20. N&sVCl. A torzsaidat elkészítéséhez- kevertünk el 1,34 g NajVO^t 99 ml dHjO-val, Állítsuk he a pH-t lőre. Forraljuk mikrohullámú sütőben egy percig (az oldat kitisztul), Hütsük le szobahőmérsékletre. Állítsuk be a pH-t 10-re. Ismételjük addig a meiegítésifeüfesi ciklust, amíg & pH 10 nem marad.
21. 200 mM Ν&ΤΝθ?.
22. Nyúl, foszfoiirozfera specifikus poitkfoóá& antiszérmn (antt-Píyr antitest, SUGETL Inc.)
23. Afitnitás-dsztltoú: anriszérum,.kecske anú-nyúl IgG antitest, perexidáz kepjugátum (Bsosouree.katalógus, szám AI..J0404),
24. ABTS oldat.
25. 3ö% hidrogén peroxíd óidat.
26. AÖTS/HjOj.
27. 0,2 M HCI.
Abéífeí;
1. Borítsuk a Combig 96 lyukú ELISA lemezeket lyukanként 1: ,ö pg SU.MO 1 -gyei, amely PB:S-bea w oldva, 1 ÖÖ gl végső térfogat/lwk mellett. Tároljuk egy éjszakán 4 °C-on.
2. Egy nap; használat után távolítsuk el a bontáshoz, használt pufiért és mossuk a lemezt 3-szor dlíjö-val és egyszer TBST puffercel. Ebben a vizsgálatban minden mosást ezzel a móászentel kall elvégezni, Itacsák másként nem jelezzük,
3. Adjunk 1 öö p 1 blokkoló ρ-ttífer; minden lyukhoz, Inkubáljuk a lemezt, rázás közben,. 3Ö percig szobahőmérsékleten. Közvetlenül a felhasználás előtt mossuk le a lemezt.
4. Használj ttsk .EGEr/HEM-2 kiméra/3 T3 - C7 sejtvoualaí ebhez a vizsgálathoz.
5. Válasszunk olyan lemezeket, amelyek konfeatciájs 2-0-90%. Tripszhezéssel gyűjtsük össze a sejteket és cenöfeugátktk őket J8ÖÖ fordaíaOperccei szobahőmérsékleten 5 percig.
97481-1045 SL
FCT/US01/Ö4813
-72'* te β X « «♦ Xte «« «««te '« te * « » * * * te « > * * te «*♦ «te « « * * « * te X « 9 te * te *♦ v* tete tete ♦» «*«« ¢.
6. Szuszpetidákassuk újra a sejteket az éhestetö közegben, ás számokul; meg őket Trypan-kékkel. 90%-fiái nagyobb életképesség, szükséges, Oltsak a sejteket ébezteíö közegben 258Ö sejVlyak -sűrűséggel, 90 pl/lyuk me-nnyiségbe-m 96 iyskú mlkro-íher lemezen. fnkabáljuk az oltott sejteket egy éjszakán át 37 *0-0» 5% CÍR alatt.
7. Kezdjük a tesztet két nappal az oltás után.
S, Oldjuk fel a vizsgák vegyületeket 4% D&íSÖ-batt. A mintákat közvetlenül a lemezeken higitjuk tovább éheztek) DMEM-mel. Ez a hígítás jellemzően 1 :18 vagy nagyobb. Ezután minden lyukat kiveszőnk a sejtlemezre további í; lö hígítás mellett (lö pl minta és közeg 90 pl éheztetö közegbe). A végső DMSO koncentrációnak 1%-nak vagy kisebbnek kell letune. Standard sorozathígítást is használhatunk.
9. Inkubáljunk 5% Cö> alatt 37 sC-on 2 órán át
IÖ, Készítsünk EOF Hgandamoí úgy, hogy a tötzsEGE-ei{56,5 μΜ) hígítjuk mdeg DMEM-ben 158 oM-ra.
11. Készítsünk annyi friss amennyi 188 pl/iyukboz szükséges; helyezzük jégre.
12. A vizsgált vegyülettei való 2. órás ínkubálás után adjak az elkészített BGF hgaudumot a sejtekhez, 58 μΐ/lyak mennyiségben, ágy, hogy a végső· koncentráció 50 »M legyen. A pozitív kontroli lyukak agyasam az EOF mennyiséget kapják. A negatív kontrollok nem kapnak EGF-et. Inkubáljuk 37 eC-on lö percig,
13. Távolítsuk, el a vizsgáit vegyüíetet, az EGF-et és « DMEM-et. Mossuk a sejteket egyszer PBS-seh , Vigyünk át HNTS*-t a sejtekre,. 100 phfyuk mesnyiségfeen. Helyezzük jégre 5 percig. Eközben távohEuk el a blokkoló puffért az ELISA lemezről és mossuk íe a lemezt.
15. Kaparjuk össze a sejteket a lemezről egy mikropipettávaí, és homogenizáljuk a sejt-anyagot a HNTG* hzb puffer ismételt felszívásával és kiengedésével. Vigyük át a íizábunot egy beborított,. blokkolt, mosott ELISA. lemezre. Vagy használjunk Cosíar transzfer kazetták hogy a lizárustot átvigyük. a lemezre.
16. Lnknbáljtik, rázás közben, szobahőmérsékleten 1 óráig.
17. Távolítsuk el a iizáíutaoi, mossunk, Vigyük át. a frissen hígított aah-Pytr antitestet (f ;3öö8 TB.ST-benjs az ELISA lemezre, löt) pklyak mennyiségben.
18. inkubáljuk,. rázás közben, szobahőmérsékleten, 38 percig.
19. Távolhsuk el az: aatí-Ptyr antitestet, mossunk. Vigyük át a frisses hfeitott BÍOSÖUKCE antitestet az EI.IS/5. lemezre ( í :8ö0ö TBST-feen, löö ul.őyuk mennyiségben).
2.8. Inkubáhttk, rázás közben, szobahömérsékfeíen, 38 percig.
21, Távolítsuk el a BIOSOÜR.CE antitestet, mossunk. Vigyük ás a frisses készített ABTS/RjOz oldatéi az ELISA lemezre, löö pldyok mennyiségbe».
22, Inkubáljuk, rázás közben, 5-1 ö percig. Távolitsunk el minden buborékot,
23, Állítsuk le a reakciót löö μ; 0,2 M HCldyuk beadásával.
24, Olvassuk le az eredményeket Dyaatech MK788Ö ELISA leolvasón úgy, hogy a; vizsgált vegyidéihez használt szűrőt 41(1 nm-re állítjuk, a referencia szűrőt 630 nm-re állítjuk.
CBK2/CÍK1.1N A VIZSGÁLAT
Ezt s tesztet arra használjuk, hogy a humán edkd/cikíh· A sseiin/íreomo kinaz aktivitását mérjük in viíro szeinüllácíós proxmúíást vizsgálatban (Scintiliaiion Froxíanty Assay, SPA).
Áyyszgex és reagensek·
1. Wallac 96 lyukú polietilén terefbdáí tflexí) lemezek. tWailac- katalógus szám 1450-401).
97462-1046 SL
Für7ÖSŰ1/Q4&23 * ΦΦΧΦ »< ΦΦ ΦΦ ΦΧ Φ«Φ« *Φ φ φ « * X Φ Φ Φ « * » $ * Φ** Φφ * φ * Φ X Φ φ * Φ Φ « Φ Φ ♦ Φφ «Φ φφ φφ XX ΧΦΦΦ Φ
2. Amersb&tn Reáivue (y’'Pl ΑΪΡ (Ametsltatn katalógus szán; AH 9963;,
3. Axnersfeam sztreptovidmael bevont polivimltoluel SPA gyöngyök t Amershan; katalógus szánt RPNQ0007). A gyöngyöket PBS-feen kell előkészíteni magnézium vagy kalcium óéitól, 20 'mg/ml koncentrációban,
4. Aktivált cdk2ÁikÍH; A enzim komplex, S® seitekböl tisztítva (SUGEN, htc.},
5. Biotisiiezetf pepiid szabsztrát -(Deptíáe). A feiötm-X-PKTP&KAKKL -pepiidet dH2O-ban oldjuk fel 5 mg/ml koncentrációban.
6. Peptid/ATP keverék: lö ml-hez.keverjünk össze 9,979 ml dí-LO-ó 0,00125 ml „hideg ATP-t, 0,010 mi Depride-st és 0,010-stí y'’P ATP»t. A végső koncentráció lyukanként 0,5 μΜ „hideg ATP, 0,1 pg Debíiáe és 0,2 pCí ;Μ:ιΡ ATP lesz.
7. Kiaáz pufier: 10 stú-hsz. keverünk össze 8,85 ml dHjO-t. 0,625 ml TlUS-í í píí»,4), 0,25 ml ϊ M Mg.CL-;, 0,25 ml 10% NP40-et és 0,025 ml 1. M DTT-l, amit frissen adunk b®, közvetlenül .a felhasználás előtt.
8. 10 mM ATP dHjö-ban.
9. 1 M TRIS, a pH 7,4-re állítva HCMelíö. IMMgClj.
11. IMDTT.
12. PBS (Gibco katalógus szánt 14190-144}.
13. 0,5 MBDTA oldat
14. Leállító oldat: i-Ö ml-Bez keverjünk.össze 9,25 oxi PBS-t, 0,005 ad 100 mM ATP-t, 0,1 ml 0,5 M EDTA-t, •Ö,i ml 10%~©s Triton X-l;ÖÖ-at és 1,25 ml 20 mg/ml SPA .gyöngyöt
1. Késztettek oldatokat a vizsgák vegyöfeískböl, kmcentráciöjuk legyen a kívánt végső koncentráció 5-szőröse 5%-ös DMSÖ-baa, Adjunk lö μΐ-t mindegyik lyukhoz. A negatív kontrollok esetén .adjunk 10 pl 5%-os DMSO-t önmagában a lyukakba,
2. Hígítsunk 5 μί cdk2/cíklia A oldatot 2,1 ml 2x fchtáz paftenrel,
3. Adjunk 20 gl enzimet mindegyik lyukhoz.
4. Adjunk 10 pl 0,5 M EöTA-t a negatív kontroll lyukakhoz.
5. A kittáa reakció eltóáitásahoz adjunk 20 pl peptíd/ATP keveréket mindegyik lyukhoz. Inkubáljuk 1 órán át rázás nélkül,
6. Adjunk 200 pl leállító .oldatot mindegyik lyukhoz.
7. Hagyjuk állni legalább 10 percig.
<1, Centrifugáljuk a lemezt kb. 2304) feráulat/peso sebességgel 3-5 percig.
9. Értékeljük a lemezt T ritex vagy hasonló leolvasóval.
MET TRANSZFOSZFGR1LOÓ VIZSGÁLAT
Ezt a tesztet arra használjuk, hogy a polí<gltoaminsav:ttrozm (4:1)) szuhszttóton mérjük, a foszfotbozin szinteket, és: így azonosítsak a szubsztrát met esnszfoszforílezésének agoniatáíriantagontstári.
AnyőgíÁ é reagen.wÁ·.·
1. Corning 96 lyuka Elísa lemezek, Corning katalógus szám 25805-96.
2. PoIKgltt, br) 4:1, Sigtna, katalógus szám P 0275.
3. PBS, Gibco katalógus szám 450-1300 EB.
90401--3.045 Sí,
PCT/OSö 1/0484 33 ** ♦
4. 50 mM {lépés.
5. Blokkoló puffer; oídíuak fel 25 g borjú szérum slbummi (Sigma katalógus szám Á-7S88) 580 ml PBS-beu, szűrjük 4 pm-es szőrön.
6. Tisztított ŐST fúzrós fehérje. amely Mot kinéz domént tartalmaz, -Sugeo, Inc.
7. TBST puffer.
8. 10%-os vizes (MilliQue fTO) DMSO.
9. 10 ikM vizes (t&feŐ) adénozin-S'-öübszfái, Sigma katalógus szám A-5T94.
lö. ,2x khiáz hígító puffer; 100 ml-hez keverjűnkel 10 ml 1 M Hspes-ttpH:::7,5),0,4 ml S% BSA/PBS-i, 0,2 ml 0,1 M nátrium ortovasadátot és 1. ml 5 M NaCl-t, 88,5 ml dHjO-ban,
11. 4x ATP roakciókeverék: 10 ml-hes keverjünk el 0.4 ml 1 M mangán kioridot és 0,02 ml 0,1 M zkTP-t 9,56 ml dHjO-ban.
12. 4s. negatív kontroli keverék: 10 ml-feez keverjünk el 0,4 ml 1 M mangán kioridot 9,6 ml dKiO-ban.
13. NI.1.NC 96 lyukú V fenekű polipropilén lemezek, Applied Scssstifíe katalógus szám S-72092.
14. 500 mM EDTA.
15. Antitest hígító puffer: 100 mbhez keverjünk el 16 ml5% BSAZPBS-í, PBS-hes oldott, ö,5 mi 5%-os Camaüon Instant Mílk<>-et és 8,1 ml 0,1 M nátrium ortovanadátot 88,4 ml TBST-ben.
ló. Nyál poliklónozott antifoszfotirozis'i antitest, Sugea, Inc,
17. Kecske«nti-«yúl torma peroxidáz konjagSlt antitest, Biosomoe, Inc.
18. ABTS oldat: 1 literhez kevesjúnk eí 19,21 g chromssvat, 35,49 g NajHPO^-et és 500 mg ABTS~t arnyi dHyO-val, hogy 1 L oldalöt. kapjunk.
19. ABTS/ff jO;: keverjünk el 15 mi ABTS oldatot 2 pl HjQj-vel 5 perccel a használat előtt,
20. 0,2 M HCI.
ngúírds.·
I. Borítsuk az EL1SA lemezeket 1ÖÖ al PBS-feen oldott 2 p.g políIGlu-Tlrl-nsl, és tároljuk egy éjszakán át 4 °C-on.
.. Blokkoljuk a lemezt 150 pl 5% BSA/PBS-sel 68 percig,
3, Mossuk le a lemezt kétszer PBS-sel, egyszer 50 mM Hepes pufferrel (pH~7,4).
4, Adjunk 50 p 1 hígított kinézi mindegyik lyukhoz, (A tisztított klnázd hígítsuk kináz hígító púderrel. A végső koncentrációnak 10 ng/lynk-nak kell lennie.}
5, Adj-atdc 25 gi vizsgált vegyöletet (4% DMSÖ-bsa) vagy DMSO-t önmagában (4% dl-ljO-baa oldva) a kontmllokhöz a lemezen.
5. Inkubáljnk a idnáz/vegyület keveréket 15 percig.
7. Adjunk 25 pl 48 mM MuCl?-t a negatív kontrol! lyukakhoz,
8. Adjunk 25 μΙ ATp/MnCb keveréket az összes többi Íyukho2 (kivéve a negatív kontvollokai). Inkubáljuk 5 percig.
3. Adjunk be 25 «I588· m.M EDTA-ta reakció leállításához.
18. Mossuk a lemezt 3x TBST-vek
II. Adjunk 1 Oö pl nyúl poliidonális anti-Ptyr-f, amely 1:: 1 ö 808 aranyban van hígítva snittest hígító pufférhem mindegyik lyukhoz. Inkubáljuk, rázás közben, szebshömérsékieten egy óráig.
4 § 3---104 5 ÖL
PCT/USÖi/04612
X* * X » X * * 0
X 0 000 » 0 * ♦ « « » * χ * * * * ♦ «»« *« 0Χ Κ* *0*0 *
12. Mossuk s lemezt 3χ TBST-vel,
13.. Hígítsuk Biosourete HEMcsasjugált <;nü-ny«l antitesttel 1 :-600ö arányban antitest hígító pu-fferet, Adjunk. be löö μΊ-t lyukaukéRi és fekubátjuk, rázás közben, szofeahömérsékleim egy óráig,
14. Mossuk, a lemezt i-szerBBS-sek
15, Adjunk 1ÖÖ pl ABTS/HjÖj oldatot mindegyik lyukhoz.
16.. Ha szükséges, állítsuk le a reakció előrehaladását 100 pl 0,2 M HCI/fyuk-kal.
17. Olvassuk le az eredményeket Dyn&tecfc MR7000 ELíSA leolvasón úgy, begy a vizsgál! vegyidéihez használt szűrőt 4 lö sm-re állítjuk,. a referencia szikot 630 nm-re áiHttnk.
IGF-1 TRaNSZFOSZFORÍLOŰ VIZSGÁLAT
Ezt a tesztsí, arra használjuk, hogy a ;poli{glutamÍa$av:t5rözm>ban (4;1) ráérjük a foszfotiroziaszísteket, és így azonosítsuk egy szubsztrát gst-IGF-l tmszfoszfeilezésének agönistáiyantagenistáit.
.dayőgoá ói’ reagensek.1. Corning 96 lytstó Efa lemezek.
2. Pöli(glus tír) 4; 1, Slgtna, katalógus- szám P 0275.
3. PBS, Gíbco katalógus szám 450-1300 EB.
4. 50 jbM Hepes.
5. TBB blokkoló puffer: } literhez keverjünk Össze 100 gBSA-ζ 12,1 g TRIS-í (p.O7,5), 58,44 g nátrium kíorktót és 10 ml 1% I?¥EEN-20-at.
6.. Tisztított öST fúziós fehérje, amely JGF-l kináz domént tartalmaz (Suges, Inc.}.
7. TBST puffe: 1 literire® kevetjüak össze 6,057 g TRJS-t, 8,766 g nátrium ktetac; és 0,5 ml TWEEN-20-at annyi diLO-val, hogy 1 liter oldatot kapjustít.
8. 4%DMSÜMöh-0H2C>ha«.
9. 10 bíM ATP dHjO-bau.
10. 2x kináz hígító puffer: 100-ml-hez-keverjünk el 10 tol I M Hspes-iipPL-7,5), díLO-b&s oldott, 0,4 ml 5%os BSA.-Í, 8,2 tnl 0,1 M nátrium ortovaa&dátot ós 1 ml. 5 M NaCi-t annyi dBjO-vak hogy 1.80 mi oldatot kapjunk.
11. 4x ATB reaketőkeverék: 10 ml-hez kevetjürik el 0,4 ml 1 MMnCL-t, 0,008 ml ö.i M ATP-t és 9,5§ .ml dHTM
12. 4x negatív .kontroll keverék: keverjünk d 0,4 tnl I M mangán kloridöl 9,60 mi dHjO-ban.
13. NEiNC 96 lyukú V feeekő polipropilén lemezek,
14.. 50ö mM EDTA díLÖ-feíís.
15, zántítest hígító puffer: 180 ml-hez keverjünk el PBS-ben oldott, 10 ml 5%-os'BSA-t, EBS-bes oldod, 0,5 ad 5%-os Caraaíioa Instant Noa-fat Miik®-eí és ö, 1 ml 8,1 M nátrium -omvasadátoí 88,4 ml TBST-ben.
ín, Nyúl polikionális anrifoszfötsrözin antitest, Sugen, íné,
17. Kecske anti-nyűi HRP-konjugált antitest, Biosource, Inc.
18. ABTS oldat.
1.9, ABTS/Hsöj.: kevertünk el 15 ad ABTS-t2 μΐ H->O;~vd S perccel a felhasználás-, előtt.
29. 0,2 M HCI dH2O«feaa.
iJ/áb-íÁ;
97-481-1045 SL
PCT/ÖSÜI/O4B73 φφ
V * *♦ * tt* 9 φ ·»* x Φ χ ν χ * X Φ «ΦΦ χ φ φ Φ φ « φφφ Φφ Φφ « Μ φφ * * * · * φ φφ * φ * φ φ »
Φχ *«-*.« «
ί. Borítsuk sz ELISA lemezeket 2 ug/lyte mennyiségben, löö pl PBS-beö -oldott .po-ií(<jriu, Tuj-nal, 4:l. (Sigma. P8275}. Tároljuk a lemezt egy éjszakán át 4 6C-os.
2. Mossuk le a lemezt egyszer PBS-sel.
3. Adjunk löö μΐ TBB blokkoló püffed mindegyik lyukhoz. Inkubáljnk a fem«2t 1 órás á't, rázás ssslfeu, saobshómérsékteea.
4. Mossuk le a lemezt egyszer FBS-sel, trs^'d kétszer 50 xuM Kepes pufiméi (pH~7,5).
5:. Adjunk & lemezhez 4:%-os DMSO-ban oldott, 25 μι vizsgált vegyületet (úgy áíihjbk elő, hogy a 188% DMSO-val készüli, 50 ®M vizsgál; vegyületet tari&hrsazó tőrzsoldatot dHjO-val hígítjuk).
6. Adjunk 59 pl kinéz hígító pafftarben oldott, 18 ng gst-lGP-X kiaazt mindegyik lyukhoz.
7. lódítsuk el a tessz reakciót ügy, hogy 25 μ! 4x AT.P raakcióke-venéfcet adunk mindegyik vizsgált anyagot tartalmazó lyukhoz és pozitív kontroll lyukhoz, Adjunk. 25 pl 4x negatív kos»oll keveréket mindegyik negatív kontrol? lyukhoz. hítebáljuk lö percig, rázás melle», szobahöroérsékfeteo.
8. Adjunk 25 pl Ö,5 M .EDTA-t (pfe-Os mindegyik lyukhoz.
9. Mossuk a lemezt 4x TBST putotreí
19. Adjunk nyúl políkiosáíis anti-foszfodrom aotfezéramot, .amely 1:18 088 arányban van- hígítva löö μί .antitest hígító paffertm, mindegyik lyukhoz. Istebáljte, rázás közben, szobshöiHérsékisíen egy óráig,
11. Mossuk & lemezt a 9. lépés szerint.
12. Adjunk 10Ö pl Biosource anti-nyúl HRP-t, amely 1:50 ÖÖO arányhais van hígítva antitest hígító pufferben, mindegyik lyukhoz» Inkubáljuk, rázás közben, szobahőmérsékleten egy óráig.
13. Mossuk a lemezt a 9. lépés szerint, majd egyszer PBS-sel, csökkentsük a buborékokat, és a fölösleg Twseo20-at.
14. Fejlesszük kí úgy, hogy mindegyik lyukte Γ90 píffyak ABTS7 H/M adunk.
15. Körülbelül 5 perc múl va olvassuk le aa eredményeket az ELISA leolvasón úgy, hogy a vizsgák vegyülethez használt szűrői 418 nm-re állítjuk, a referencia szűrőt 630 nm-re állítják.
BROü INKORPOBÁCtó VIZSGÁLAT
A következő vizsgálatok olyan sejteket használnak, amelyek azzal a céllal készülnék (sejísebészed -eíjdtással), hogy egy kiválasztott receptort felezzenek kí, majd úgy értékelik a vizsgálj vegyület haíásáí a iigt-iíföammal isdnfcáit .DNS-szfetézis aktivitására, hogy meghatározzak a DNS BrüU-inkorpotúcíóját
A következő anyagok, reagensek és eljárások általában az összes alábbi Brdli mterporác ió vizsgál atra voaaíkozsak. Az egyes vizsgálatok eltéréseit közöljük .
Am-ögoE á? magmaek.·
1. A. megfelelő ligandum.
2,. A megfelelő, aejtsebészeíi úton előállító» sejtok,
3. BrdU-jeizöreagens: lö mM, PBS-ben (ρΕ0:;?,4) (BeehringerMannhsim, Németország).
4. FíxDenat fixáló oldat (azonnal használható) (Boeteager Mannheka, 'Németország}.
5. Antí-BrdU-PÖD: egér monoklonális antitest peroxsdázzai konjngslva (Boehmger Maxmheim, Németország).
6. TMB szubsztrát oldat: totrametilbenzjdin (TMB, Boehringer Manuheim, Németország).
7. PBS mosdóidat: ix PBS, pH=--7,4.
9748.3.-1.045 SL
PCT/ÜSÖ1/04813
Φ «ΦΦΦ ΦΦ χφ *« ΦΦ «««« φφ φ Φ φ Φ Φ Φ Φ Φ χ * * * * ΦΦ* Φφ Φ χ * X ♦ φ » Φ Φ Φ φ Φ φ
ΧΦΦ χφ φφ Φφ «·> φΧφχ $.
8. Albtxmin, borjú <ÖSÁ), V frakció, por .(Sxgjm'Chemical Co., Amerikai Egyesült Állmok).
.é/tökínos ίίί/ίήϊΑ'.'
1. A sejteket 8000 sejtdyak sjennysségben oltjuk 10%-os CS, DMEM-be« oldott 2 sjM Gln-beo. 9ö lyukú lemezes. A sejteket egy éjszakán át fokúbáljuk 37 °'G-os, 5% Görbén,
2. 24 óra elteltével a sejteket PBS-sel mossuk, sa&jd szérumra éheztetjuk szerutumetJtes közegben (0%-os CS DMEM 0, i%& BSA-va!) 24 érán át.
3. A 3. napos a megfelelő bgaadutnot és a vizsgáit vegyületet egyszerre adjuk a sejtekhez. A negatív kontroll lyukak SKéremmsutes DMEM-et kapnak, csak 9,1% BSA-vsl; a pozitív kontroll sejtek Ugandámét kapnak, de vizsgált vegyületet wa. A vizsgált vegyületeket szérumnumtes ÖMEM-bea, Ugsaáusuaal készítjük el 96 lyukú lemezen, és sorban hígítjuk 7 vizsgáit koscentócióra.
4. 18 órányi h'gartdurrs-akbválás után hígított SrdU-jekö reagenst ¢1:100 DMEM-ben, ö,l% BSA) adnak be, és a sejteket Brdö-val iukubáijuk (végső koncentráció: lö pM) 1,5 érán át
5. A jelző reagenssel való írtkubálás után a közeget, deksníáláasal és 3 megfordított lemezt papírtörülközőhöz ütegstve eltávolítják.. EixDeust oldatét adunk a lemezekhez (50 μί/lyuk), és a lemezeket szobahőmérsékleten iskübáljnk 45 percig iejnez-rázon.
6. A FíxDenst oldatot, dekausálássaí és a megfordított lemezt papírtörülközőhöz íhügcs ve gondosan eliávoiitjnk:. Tejet adsrát hozzá <5% vlmeates tej PBS-bes, 200 pi/iy«k) blokkoló oldatként, és a lemezt 30 percig fokubáljufc szobahőmérsékleten lemez-rázón,
7. A blokkoló oldatot defcaatálással ehávolitjsk, és a lyukakat egyszer mossuk PBS-sel. Anti-Brdü-EOD oldatot. (1-,200 hígít»» FBS-bea, 1% BSA) adtmk a lemezhez (5Ö μ hlyük), és a lemezt szobahőmérsékleten infcobáljak 90 percig lemes-rázóu,
8. Az antitest-kosjugáhtmot gondosan eltávolítjuk dekantálással és a lyukak S-szőri PBS-es öblítésével, majd a lemezt megfordítva és papirtörőlközöhöz iiíegetve megszárítjuk.
9. TMB szubszlrát oldatot adunk a lemezhez (löt) μΙ/lynk), és a lemezt szobahőmérsékleten ínkubáljuk 20 percig lemez-rázőn, amíg a saaa-kíféjlődés elegendő nem lesz a foíometriás detektáláshoz.
10·. A minták afeszorb&ociájtU 410 .osa-eo mérjük („két Ixalláafoossz” üzemmé-dban, olyan szűrővel, amellyel a 490 w« referencia hullámhosszon végzőnk leolvasást) Dyn&tech EOSA lemez leolvasón.
EGF-mdukált Brdü inkorpwráeiő vizsgálat ,-foyűgoÁ ík reageírreá.:
1. Eger EGE, 201 (Toyobo, Co·., lupán j.
2. 3T3/EGFRc?.
EGF~índísk$htt Ker-2-veí hajtott Brdll ískorporáesó vizsgálat
Anyogífe óv
1. Egér EGE, 201 (Toyobo, Co., Japán).
2, 3T3/EGFnTJeí2/EGPr (BGFr Her-2 kinéz doménncí.r.
BGF-lnáukáU Ber-4-gyel hajtott Brdü lakorporáció vksgáht á?p-'íígtfe ár .rgagesst’k;
1. Egér EOF, 201 floyobo, Co„ Japán).
2. 3T3/EGErO4er4/EGFr (EGFr Her-4 krnáz domesoel).
974 81--104 5 SL
PCT/ 901/0 4-81.3
444 X JCX *4. #4 4 4 «444
4*4* Λ 4 4 4 4 * 4 4 444 44 » 4
4 4 4 * 4 4 4 4 4
Χ4 44 4* »» A 44« «
-78FiXíF-ürdukált BráU Jnfcorperáelő vizsgálat
Anyaguk <>., mígmsefc·
1. Humán PDöF B/B (Boehringsr Maantó®, Németország·.
2. 3T3/EGFRe7.
EGF-máukált Brdü inkorporácíó vizsgálat
4?f><agoá é,> míge».seá,'
1. Humán FöF'2/bFGF (Gibco BRL, .Amerikai Egyesült Államok).
2, 3T3c7/EGF.r.
KSFi -indukált BrdU ínkorporádó vizsgálat ányesgoá & reagí?Bs©£;
1. Humán, rekombmáns 051 I (Promcga Coip., Amerikai Egyesült Államok).
2. 3T3/W:·.
ínzolis-isáskált Brdl'J inteporádó vizsgálat
Aíei-űgöá ás níagumeár
1. Inzulin, kristályos, borjú, cink (13087, Gibco SRI, Amerikai Egyeshh Államok),
2. 3T3ZH25.
HGF-ícd«kált RrdU inkurperádó vizsgálat'
Aíjy«gö,v ris veagen$e&:
1. Rekombináns humán HGF (katalógus szám 249-HG, K&D SysteKis, Inc,, Amerikai Egyesült Államok).
2, BxPC-3 sejtek (ATCC CRL-lóS?}.
S/árás·.'
L A sejteket 9ÖÖ8 sejt/lyuk mennyiségben oltsuk RPMí 10% FBS-ben 96 lyukú lemezen. A sejteket egy éjszakát· át inknbáljuk 37 *€~on, 5% CCA-fees.
2. 24 óra. elteltével a sejtekcí PBS-sel mossuk, majd szérumra éhezteíjsík 188 μΐ széruramentes közegben (RFMI ö,l%BSA-val) 24 órán át.
3. A 3. napon25 pl Ugandám® tartalmazó oldatot (1 pg/ml RPMí-ben 8,1% BSA-vaí készítve; végsó·HGE koncentráció 200 ííg/st!) és vizsgált vegyüieteket adnak a sejtekhez. Á negatív kontroll lyukak 25 ul sssérummentes-RPMl-t kapnak, csak 0,1% BSA-val; a pozitív kontroli sejtek ligtmdumot (HGF) .kapnak* de vizsgák vegyüietet nem,. A vizsgált vegyieteket végső koncentrációjuk 5-szöresére készítjük szénmunetsres, RPMI-bea', ligantiummal, 96 lyukú lemezen, és sorban hígítjuk a 7 vizsgái; koncentrációra. A vizsgák vegyület legnagyobb végső koncentrációja jellemxőea 108 μ'Μ, és 1:3 hígításokat használunk (vagyis a végső vizsgált vegyület koncentráció Ö, 137-100 p.M)..
4. 18 órányi ligasdnm-aktiválás után 12,5 ul hígított BrdU-jelzö reagenst (1:180 BPMí-ben, 0,1 % BSA.) adunk mindegyik lyukhoz, és a sejteket Brdü-val. inkubáljuk (végső koncenteáció; 1 ö μΜ) 1 órán át.
5. Ugyanaz, mart az általános eljárás.
6. Ugyanaz, mint az általános eljárás.
7. A blokkoló oldatot dekastálásssl eltávolítjuk, és a lyukakat egyszer mossuk PBS-sel. Anti-BrdU-FOD oldatot (1:100 hígítás PSS-ben, 1%BSA) adunk a lemezhez <iÖÖ' ph'lyuk),-és a lemezt szobahőmérsékleten inkubáljuk 90 percig leraez-rázón.
27481-1845 SL
FCT/OS0L./O4FL3 ♦-*·* *♦ φ φ
ΦΦΦΦ ♦ X X * Φ ί* ** * #
X Φ * » Φ Φ * Φ Φ Φ Φ **Φ ΦΦ »χ φφ «« χφφφ χ
8. Ugyanaz, mint az általános -eljárás.
9. Ugyanaz, mini az általános eljárás.
lő. Ugyanaz, mini az általános eljárás.
HUV-EC-G vizsgálat
A tesztet -» használjuk,.hogy «tétjük a vegyüiet aktivitását PDGF-R-ml, FöF-R-reí, VEö.F-f< aFGFíel vagy Fik- i/KDR-rel szemben, amelyek mstdegyttö' a HUV-BC sejtek természetes módon, fejezik ki.
Ö, nap
1, Mossuk és tripsmezzuk a HUV-BC-C sejteket (humán köldök vénás eodoieliáhs sejtek, American Type Cukoré Collectioa, katalógus szára Í739 ®L). Mossak Dulbeeco fosrifái-pafces-sőöldatíai (D-FBS, Gibco BSI.., katalógus szám 14190-329} 2-szer kb. 1 mi/10 cm* sejtteuyésztó lombik koncentráció mellett Tripszínezzük 0,05% tripszin-EDTA-val uem-eszimarikus sejt disszociáció» oldatban (Sigma Chemical Company, .katalógus szám C-1544). A 0,05% tripsmt ügy készítjük, hogy 0,2574 trípszm/l ®M EDTA oldatot Ooibeo, katalógus szám 25200-949} hígítunk a-sejt dtsszociác'tós oldatban. Trípszinezzák kb. 1 mi/25~3ö enri'-sejtteayésztő lombik koncentráció mellett kb. 5 percig 37 G-os. Miután a sejteket leválasztottak a lombikról, adjunk hozzájuk azonos térfogatú teszt, közeget (assay médium) és vigyük-át egy 50 -ml-es steril centrífugacsfe· (Fischer Scjmtiüe, 'katalógus- szám 05-529-6).
2, Mossuk a sejteket, kb. 35 mi teszt közeggel 50- ml steril cssitrifiigacsófeen ügy, hogy beadjuk a teszt közeget, 10 percig twtri&gáhmk kb. 20öxg mellet·, felszívjuk a fciülüszót, és újraszuszpendáltatjak 35 mi BPSS-ben, Ismételjük meg a mosást még kétszer D-PBS-sei. szustpehdáliassuk újra a .sejteket kb. 3 ml teszt közeg/15 cm* sejttenyésztó- lombik koncentráció mellett. A teszt közeg F1.2.K közeget (Gibco BR1, katalógus szám 21127-014) és 0,5% hővel aktivált magzat borjú szérumot tartalmaz. Szárnoljuk meg a sejteket Coulter Coonteri^-rel (Conlter Electronics, Inc.) és adjunk annyi teszt közeget a sejtekhez, hogy 0,8-1,0x3ö* sejt&jsl koncentrácj ót kapjunk.
3, Adjuk a sejteket % lyukú lapos fenekű lemezekhez iOö μΙ/lyok vagy 6,8“l,0xlö*sejü7>mk koncentrációban, inkubáljuk ka. 24 órás át 37 X-oa, 5% CfA mellett,
1. nap
1. Thrálfek kétszeresen (hígítsunk sorban a kétszeresére) a vizsgált vegyületet. külön- 96 lyukú lemezeken, általában 50 gM-íól lefelé 0 pM-ig. Használjuk ugyanazt azt a teszt közeget, mint a 9. napon, & 2. lépésben. A hígításokat úgy végezzük, hogy 90 μί/lyak vizsgák vegyületeí adunk 200 μΜ (a végső lyuk-konceattácíó 4szerese) mellett egy tsdofe Imez-oszlop felső lyukához. Mivel a vizsgák vegyüiet törzsolásia általában 20 mJM .DMSO-ban, a 200 μ,Μ gyógyszer-kmeéntráció 2% DMSÖ-t tartalmaz.
Olyan hígítói használunk, amely 2% BMSO-í tartalmas a teszt közegben (F12K + 0,5% magzat borjú ssésnm), hogy a vizsgált vegyületet hígítsak, de a DMSO- koncentrációt állandóan tartsuk. Adjuk ezt a hígítói az oszlop többi lyukához 60 pklyuk értéket tartva. Vegyünk ki 60 μΙ-t az oszlop felső lyukában tevő 260 pM vizsgált vegyüiet-hígltás 120 μ béből, és keverjük el az oszlop második lyukáhaa levő 60 μΙ-rel. Vegyünk ki 60 μ. 1-t ebből a lyukból, ás keverjük el az oszlop harmadik lyukában tevő 60 μΐ-rsl, és igy tovább, amíg a kétszeres hígításokat be nem fejezzük, Amikor az utolsó előtti iyakbaa elvégeztük a keverést, vegyünk kí -óö μΙ-i -az ebben o lyukban tevő I2ö μΐ-ből, és dobjak ki. Hagyjuk meg az utolsó lyukat, amely óö μι DMSQ/fcözeg hígítót tartalmaz, vizsgált vegyüieret .nem tartalmazó kontrollként. Készítsünk 9 oszlop hígítok teszt: vegyületet, hogy a k.ö>97489-109 5 Sí,
PCT/U5Ö2/Ö4B13 »·♦ «fcfc*
-80* «»«« fcfc * fc, *« fc X fc » « 9 » 9 X fcfc» **fc ♦'* *' * * » ♦ fc fc fc » » fc * x **X fcfc XX fcfc fcfc fc**» fc vetkezők, mindegyikére bárom lyuk jusson: 1) VEGF (Pepro Tech InCv, katalógus szám 100-200), 2) eadetebáhs •sejt növekedési faktor <EOGF) (más néven savas fibrobl&st növekedési fater vagy aFGF) (Soefemgtsr Manóéira 3iochen;ica. katalógus szám 1439 600), vagy 3) humán FDGF B/B (12.76-956, Boehríriger Manabcám, Németország) és teszt közeg, kontroll. Az E'CGF .eátriun: iseparini tartalmazó készítraéay.
2. A vizsgált vegyöfct-higbásokböl 50 pPíyuk mennyiségei vigyünk át a 96 lyukú teszt lemezekre,. amelyek a 0. nap óta 0,8-1 .Oxhf1 srákiÖO pl/lyuk: HUV-EC-C sejtet tartalmaznak, és iuknbáirák kb. 2 órás: át 37 rá'· en, 5% COj mellett.
3. Három párhuzamost készítve adagoljunk kt 50 plOyuk mennyiséget a 80 pg/ml A^ECE-böL 20 ng/ml ECGF-eí vagy közeg kontrollt mindegyik vizsgáit vegyüiet-hígítás esetén. A vizsgált vegyüíetekHez hasonlóan a növekedési faktor koncentrációk is 4-szereseí a kívánatos végső koncentrációsak. Használjuk a ö. nap 2. lépése szerinti- teszt közeget, hogy a növekedési faktorok koncentrációit is beállítsuk. Inknbáijunk kb, 24 óráig 37 ráoo, 5% -CÖ2 mellett Mindegyik lyukban lesz 50 μ.Ι vizsgált vegyülei-bigirás, 50 pl növekedési faktor vagy közeg és 100 μί sejt tehát összesen 200 μΐ/lynk, így s vizsgák vegyületek és a növekedési faktorok 4-szeres koncentrációi 1 -szeresek lesznek, ha mindent beadtunk a lyukakba,
2, nap
I. .Adjunk a lyukakhoz *H-timidiat (Amerstiara, katalógus szám T&K..-686) 1 gCidyúkmennyiségben ·< 10 μί/lyuk az RMF1 közegben· elkészített 3Ö0 gCíhnl oldatból + 10% bével aktivált magzat borié szérum) esi bskubáljuk kb. 24 órán át 37 rákon, 5% CO2 mellett. Az RPMf a Giboo BEL terméke, katalógus szám 11875051.
7. «ap
1. Fagyasszuk a lemezeket egy éjszakán át -20· rákon.
4. nap
Engedjük fel a lemezeket és gyűjtsük, össze az anyagot. 96 lyukú lemezhez való gyüjtőherenáe2éssel (Tómtee Harvester 96*0 szürökspokra (Wallac, katalógus szára 1205-401), és olvassuk le a beütéseket Wallue Betsplaíe™ íelyaöéksscimiliáráós számlálóval.
A 3, táblázni a jelen találmány szerinti néháíty példa-vegyüiet biológiai vizsgálatának eredményét mutatja. Az eredményeket ICse-ben adjuk meg, ami a vizsgált vegyüíetnek az a mitemótos (tiM) toceníráráója, amely 50%-ös változást idéz eló a target PKT aktivitásában a vizsgált vegySletet M taríabnazö kontroliban levő PTK -aktivitásához képest. Tehát a bemutatott eredmények a vizsgált vegyüleráek azt a koncentrációját jelzik, amely a tsrgct'FTK aktivitásának -50%-os esökkmtésébez szükséges. A vegyületek értékeléséhez használt vagy használható bioassay-fcef. az. alábbiakban újuk le.
3, táblázat
Fél-da bio ibioFCFRl bio PBGF} hí» EGE sejt EGE Mer2 kináz cáklspa j bio j
flkGST ráss ic5?, ί ICv, IC'se IC.»® (pmol) i pyk,2í€s 1
ráji) (untul) (pmei) ípntöft (umol) (pmöl) j 5(μmh1) j
(prnol) i ί 1 i
1. 0,22 3,06 I 10,78 9,84 1,4 ΐ 1
•-J X-. 4,17 3,06 j 6,04 8,97 ' 2,16 ... 1 J
97401-1045 SL
0C7/0392/04917 » ».«*·♦ »*' ** ♦'* *« « ♦ » X « ♦ * * * «Γ « 8 *8* »♦ « « * χ «· .♦ X * :♦ * * * # »♦* *Λ 8« ·Χ *.♦·*· X
S74ÖÍ-104
PCT/agí;I/Ű4S13
-82* χφφχ φ» «Φ ·-* « » * * φ « * φ φ * « * ♦ *** ί* ♦ φ » 9 9 X X * «. « Φ Φ χ *-** «* *Φ »« *Φ φΦχφ φ
49. 0.2 0,8 2,59 >109 3,76
41. 1,45 1.3 19,6 41,8 >106 3,58
; 42. 3.27 7,56 6,46 >196 9,1 9,17
43. 9,35 1,18 8,06 2.36 >190 0,99
44. >20 >100 >196 >190 <0,0005
; 45. 9,91 12,9 >100 >1:09 9,006
46, 1,93 1,2 >109 >109 0,002
4% 1,38 61,63 >190 >109 <9,9905
ΪΝ VÍV Ο ÁLLATM0ÖELLEK
A humán teuwfcaak az -a képessége, hagy'xssograftökként tudnak szaporodni eseesemörnirigyfeiányos egereken (pl. Etetita, nn/nu), hasznos is vh-o modellt teremt a harsán tumorokkal -szemben használt gyógymódok biológiát válaszainak tanulmányozásához. Azóta, hogy először végeztek humán tumor xenoteanszplantáclői «seeseatőmirigy-bíányös egerekbe [Rygaard és Povísen, Acta Faiból, Mieróbíak Scand. 77, 758--760 (19t59}l, számos tanás tumor sejtvosáíst (pl emlő, födő, hógy- és ivarszend, gyomor- és bél, fej és nyak, glsoblasföma, csont, rosszfedtilafö melanonsák) ültettek: áí és sikeresen szapcntodak csupasz egerekben. A következő teszteket felhasználhatjuk a jeles találmány szerinti különbőzé vegyítetek aktivitási, speeiíikussági és hatás szintjének meghatározására. A. vegyületek értékelésére jól haszná&atnak három általános teszi típust; ezek a eeHuláris.-kaíaliiikus, ceikíláriafoiológstl és üt vAv? tesztek. Á cellulártsZkaralitikus tesztek célja araiak meghatározása, hogy egy vegyidet milyen hatást fejt ki egy TK-aak arra a képességére, hogy egy sejtben egy ismert szubsztratím iirozmoktsí foszforilezses. Á celhöáris/híológiai tesztek célja egy vegyidet hatásának meghatározása arra a biológiai válaszra, amelyet egy sejtben egy TR. síhnuiál, Az í« tevő tesztek célja egy vegyűlet hatásának meghatározása egy adott rendelfenességü, -például rákos..áltónodeühen.
A szahkatán xenograR kísértetekhez alkalmas sejtvonalak magukban foglalják a Co sejteket (gifoma. ATCC #CC'L 107), -Α375-sejteket(meiasioma, ATCÜ6 CRL 1619), A431 sejteket^qndecxnoldkarctnómK, ATCC > CRk. 1555), Cate 6 sejteket (tüdő, ATCC # HTB 56), FC3 sejteket (prosztata, ATCC # CRC 1435), SK-ÖV3-TP5 sejteket és NíH 3T3 íibroblastokat, amelyek: génsebészeti úton varrnak előállítva az EGFR,
PIX3FR, IGF- ÍR vagy bármely mást teszt krnáz tálasod mértékű-kifejezésére. A xesograh kísértetek elvégzéséhez a következő protokollt használhatjuk
Nőstény csecsemőmirigy-hiányos egereket {8ALBfe, naűiu), szerzünk be. a Ssacasen I-aboratoriestói (Gilroy, Kalifornia), Az összes állatot tiszta szoba .feűráknéayek között tarijtsk Mtero-talátor ketrecekben, Alptaári alommal. Steril rágcsáló táplálékot és vizei kapnak tetszés szerint (ad libitum).
A sejtvonalalíat megfelelő közegben tenyésztjük (például MÉM, DMEM, Ham Fii) vagy Ham F12 plusz 5-10% magzat borjú szérum (FSS) és 2 mM glutamin (GÉN)}. Mindegyik sejt tápkőzeget, a ghrtamtm és a borjú magzat szérumot a Gibco- Life Technologies tói (Crand Jsland, New York állam) szerezzük be, ha másként nem jelezzük, .Minden sejtet nedves atmoszférában szaporítunk 99-95% levegő és 5-10% CO; mellett. 37 °C-on, Minden sejtvonaíst rutinszerűén sznhkultfeáhsn tenyésztünk kétszer egy héten, és mindegyik negatív mfenplazrnárs a M ycoiect eljárás (Gibco) széfen.
97461.-1945 >.,
PC?/0993/94013
-χ * ♦ X ♦ «· « * «* Jt * 4 « * Λ Λ X »«« * » « * « « »<* «« κχ *« * * «Γ « * β- « » «««»
A sejteket .konSueneiáttel vagy annak közelében gyűjtjük össze 0,05% Tripszín-EOTA-val és 450xg mellett tafetetázznk 10 peréig. A tablettákat ájraszasa^endáljuk steril PBS-bes vagy közegben (ESS nélkül) adott koncentrációra, és a sejteket az egerek véknyásak -hátsó részébe implaníáljuk (8-10 egér csoportonként. 2~ lö·· lö* sstt/állat). A tenmr-növekedést 3-6 hétig móljuk noniaszos tídémércével. A tumor-térfogatot a hosszúság x. szélesség x magasság szorzatból számítjuk ki, ha másként nem jelezzük, A F-értékeket Sínöent-féte t-próbával állapítják meg. Az 50- Wö pl vehiculumban (DMSO vagy VPD:D5Wj levő iesztvegySteekst IP injekcióvá; juttathatjuk be, különböző knocenöáelókban, egy nappal: az .implantáció után kezdve.
™o&iwáwsmía)eu;
A kővetkező tamor-mváziós modellt fejlesztettük ki, és használhatjuk azon vegyületek gyógyászati énekének és hatékonyságának értékelésére, amelyekről megállapítottuk, hogy szelektíven gátolják a KDB/FLK- I receptort.
B/Aírór .Kísérleti állatként 8 hetes csupasz egereket (nőstény): (Simonssn Inc.) használunk. A tumorsejtek implantációját lamináris fülkében végezhetjük. Altatáshoz Xilazfo/Retamin koktélt (1 OÖ sag/kg ketamsa és 5 mg/kg xilszhs) adunk be mtraperítoneálisa-n. A középvonalon végzünk bemetszést:, hogy feltárjuk a hasüregei (kb. 1,5 cm hosszan), és 1ÖÖ pl közegben lö! tumorsejíet juttatunk be. A sejteket vagy a hasnyálmirigy duodenálls lebenyébe injektáljuk be, vagy a vastagbél savós hártyája alá. A hashártyát és: az izmokat folylöttos 6~ö selyem sebészvanrattal, a bőrt sebkapcsokkal zárjuk te. Az állatokat naponta megfigyeljek.
áfeíBzés
2-6 hét utó®, az állatok szabad szemmel végzett megfigyelésétől függően, az egereket megöljük, a különböző szerveshez (tüdő·, máj, agy, gyomor, lép, szív, izom) kapcsolódó lokális tumor metasztázisokat Idmeísszök és elemezzük (a tumor méretesek, az invázió fokának mérése, immunkánia, 1» a-»» hibridizáció meghatározás síb.í.
C-KIT TESZT
Ezt a tesztet használjuk a okit tiroxiu feszforiíezdsi szint mérésére.
M07E (humán akut jufeloid leukémia) sejteket szérumra éhestettünk egy éjászkán át 0,1%-os szérumba®. A sejteket előkezeltük s vegyülettei (a- szérumra való éhezteíéssel. egyszerre), a ligtmdum-stimuláeió előtt. A sejteket 250· ng/ml rh-SCF-tel stimuláltuk 15 porcig. A stimuláció után a sejteket lizálmk és immunpteclpttáltuk anfi-c-kit antitesttel. A Ibszfotittmaés fehérje szintekei Western fcloítoláss&l határoztuk meg.
MIT SZAPORODÁSI TESZT
M07E sejteket szérumra ébeztettüak és-vegyülettei kezeltünk élő, ahogy a foszforilezési kísérleteknél ismertettük.. A sejteket 4· 1Ö;' sejt-lyuk 96 lyukú lemezen helyeztük el, 10Ő pl RPMI ·*· i'0% száram közegben, rh$€F-et (100 ng/ml) adagoltunk be, és a teaest 48 órán át iakuháhuk. 48' óra elteltével lö pl 5 mg/ml MTT-t P(4,S-dimettlti3zol-2-ll)--2,5-ditesil teírazóhwn hromidj adtunk be, maid 4 érán át mkuháitunk. Savas izoprópanolt ( 1Ö6 pl Ö,Ö4 N HO izepropanoltetadagoltunk be, és az optikai sűrűséget mértük 55Ö nm-en, AFOFTŐZÍS TESZT
MÖ7E sejteket mfasfeáltusk +/- SC? és A- vegyidet mellett 10% FBS-ben rfe-ÖM-GSF-fsl (10 ag/ml) és rMl-S-mal (10 ng/isl), A mintákat 24 és 48 óránál teszteltük. Az aktivált easpase-3 méréshez & mintákat PBSsel mostuk és jéghideg 70%-os etanollal permeabüizálíuk. A sejteket ezután EE-konjugált pollklóaozott nyúl
674gl-1045 SL
PCT /· IS Sl/ 04 8 23 *'**·«
-8·4·#·.* $ 8 * » »** » * 8 <
*« ** auli- aktív caspase-3-mai festettük, és EACS-szel elemeztük. A iehasitott PARP méréséhez a mintákat lizáltuk és Western blottolással elemeztük, aad-PARR antitesttel.
További tesztek
További teszteket alkalmazhatunk a jeles találmány szerinti vegyületek értékeléséhez, ilyen például, korlátozás nélkül, a bio-ílk-l teszt, az EOF ntcepter-HEíO kánéra receptor teszt ép sejtekben, a bto-sre teszt, a fejesek teszt és egy olya» teszt, amely a rsf feszferifező funkcióját mért. Mindegyik tesz· protokollja megtalálható a 09/099,842 számú amerikai egyesült, államokbeli szabadalmi bejelentés leírásában, amelyet ~ ábráival együtt hivatkozásként beépítünk a jeleit leírásba.
A sejt-toxidtás mérése
A gyógyhatású vegyüfeteknek erősebben kell gátolniuk a receptor íiroztK kináz aktivitást, mint amilyen mértékben citotoxikns hatást fejtenek ki. Egy vegyület hatékonyságának és sejt-toxieításának mértékét a terápiás index, vagyis ICji/LDjs meghatározásával kaphatjuk meg. iC$<ret, az 5ö%~os gátlás, eléréséhez szükséges dózist, szokásos eljárásokkal, például 'az th letóSdtsá mérhetjük. LDjo-et, az 5ö%~os toxtóás.dereséhez szükséges dósóst. szintén mérhetjük szokásos eljárásokkal [Mosstnaa, J. bnmtmol. Methods. 65, 5.5-63' (1983 jj, a leadott LDF1 mennyiségének mérésével (Korzeaiewski és Calíéwaert, I Immunok Methods, 64, 313 (1983), Decker és Lotenann-Matthes, I, .tnaresnol. Metbods, 11.5. 61 s193S)j, vagy ábatmoáeliekben a halálos dózis mérésével. Előnyösek a nagy terápiás indexű vegyületek, A terápiás indexnek nagyobbnak. kell lenni 2-tfel, előnyösen legalább lö, előnyősefehs® legalább 50.
B. Celtetlárte teszt, eredmények példája 5-(5-fíno8'-2~oxO”Í,2-dihídrutedol~3-ilidén5nctíl)-2,4-dlntelí.h 111pírroS~3-karbossav-(2-íiietilsmím>-eüS)amid használatával
Az 5-í5-niior-2-oxo-l,2-dih50roH:dt5j-3-ihdéS!nőiiÍ)-2.4-ájffiet!l-lH-pirrol3-karbonsav-(2-dletdaínii3íOetiljasad (35. vegyület) biokémiai tesztekbe» (vájó íajAr) mutatott potenciájának alátámasztására az említett vegyület ligandumfüggo RTK íoszibrilezást gátló képességét értékeltük sejtalapú tesztekben N1H-3T3 egérsejtekkel, amelyek ügy vannak előállóvá, hogy túlzott mértékben fejezik ki az Fik-l-et vagy a termát PDGFRfM.
Az 5-(5-S«or-2-oxcs-l,2-dibidroindoi-3-illáésr-m«tii)-2,4.-áimeóÍ-lH^ásol-3-karbonsav-(2-{üett}smínO'· etil kuniá (35. vegyület) a VEOF-fiiggÖ- Fik-1 tirozin foszforilezést kb, 0,03 μΜ lC$s értékkel gátolta. Ez az érték hasonló a 0,009 μΜ K· értékhez, -amelyet a biokémiai tesztekben határoztunk meg az Fik-1 5-(5-flu<ír-2-oxo-1,2dihidreíndol-3-!.hdén!nefi|)-2!4-dimetsl-IH-pirrol-3-karbo»s<ív-(2-dtetílamjsc-etil)atojdos (35. vegyület) gátlására. Ez -arra utal, hogy az 5-(5-fhíor-2-oxo- l:,2-dihiátsotndol-3-ilidésai«!tíl)-2,4-^m^iMíí-pinol-3-karfecnmV“f2áietöamteo-^il)am.iá(35. vegyület) könnyen behatol a sejtekbe. A biokémiai adatokkal (vids w?ó«> konzisztens módos, amelyek arra síalnak, hogy az 5-(5-Öuar-2-oxo-:l,2-d3jidroiadoi-3-ilidámtetíí>2(4-dimettl-ÍH«páÍTOÍ-3·· .karbonsav-(2-dietitootÍno-etil)amiii (35. vegyület) aktivitása hasonló az Fik-1-gyei és a PDGPRp-v&l szentben, azt tapasztaltok, hogy a vegyidet gátolta a PDGF-feggó receptor foszforílezést olyas sejtekben, asnelyek ICSO. értéke kb, 0,ö3 pM. Az 5^5.-fínw-2-oxo-l,2-dihíároíndoJ-3-üídójcsetsl)-2,4rdhn^ü-ÍH-pirrol-3-kírtKnms'-(2diehlamino-etiijamidnak (35. vegyület) azt a képességét,hogy gátolja a c-tötet - amely közeli kapcsobibars áll az KTK-val és megköti a temsejt faktort (stem.eell factor, SCF) -, MO7E sejtekkel határoztuk meg, amelyek kifejezik ezt a receptort. Ezekben a sejtekben az 5-<5-fmor-2-os.o~ 1,2-diliídrciredol-3-üídésmstil)--2,4-ditoetiÍIE-pirrol-3-karbonsav~(2-díetiíaíöma>etíl)amid (35. vegyület) 0,91-0,1 pbl íC^ értékkel gátolta az SCF-feggö
A/óél-ŰótoS £1,
PCT/nSófe/09S73 * *
-85«« ft* ♦ ♦ A » * V $ «. ® $ *4 «« * ot ♦ «. * * W trí «< 4* c-fc-ή ibszforiíczésj. Ez a vegyölet szintén -gátolta az SCE-fel stimniáh c-fck foszfőnlszést aktulmielotd leukémia <AMD'blastokbas, araslysket betegek perifériás véréből izoláltak.
.Ázott kivid, hogy megvizsgáltuk az 5-í5-tiuor-2-oxo-l ,2-íiihtdro5ndoí-'3-il':dö:n!K'.ÍÍs}-2,4-dh-tetíi-lHpinrol.-3-karbonsav-<2-diedlatnino-etíi jamíd (3.5. vegyület) képességét a hgandt-tnlöggő toceptor-fejszfenlezés gátlására sejtekbe®, szintén megvizsgáltak {»« ?h>-í?) a sejtek iíganduminggö szaporodási válaszára kifejted hatásáé Ezekben a vizsgálatokban a .-sejteket, amelyeket egy éjszakén át szánnom éheztettdnkAigy késztettük DNSszmiéztsre, hogy a roegfeielö mitogén kgandmof adtak be. Amint a 4, táblázat -mutatja, az 5-(5-ilnor-2-oxo-l,2dilüároiudob3-ilidénntesii)-2,4-dúneiil-lH-ptrtol-3-kathonsav-('2»dietilammo-stil)amid (35. vegyölet) 0,Ö31, illetve 0,069 pM TC50 értékkel gátolta a PDGFRp-í vagy FDGFRa-i túlzott mértékben kifejező ΝΙΗ-3Ϊ3 sejtek PDGE-indufcáh szaporodását, és a MÖTE sejtek SCF-sadukáit szaporodását 0,00? μΜ IC-sa ér-ékkel gátolta.
4, táblázat
i Receptor Biokémiai ....... SejíKL» i
K?{pM) Receptor FnszforUálás *>»-VlV'aaai9O0OeOOl>M*MWltt«0e^OCeQQe0WVVWb'lftVICOad «8k Ligmtdnsn függő prohferáeié | (μΜ) 0,004
PDGFRn o,oos 0,03' Ö,Ö3?
PDGFRó ND ND 'feöóí?
EGER w ND Ő,?5
c-kit ND 0,01-04' 0,07'
MHainos meghatározva
Rekowbináns enzimmel meghatározva
Szérumra éhezhetett, Fik- 1-et kifejező NIH-3T3 sejtekkel meghatározva
Száramra éheztetek: KüVEC-ekfcel meghatározva
Szérumm éheztetek, PDGFRe-t kifejező N1K-3T3 sejtekkel meghatározva
Szérumra éhezhetett, PDGFR-β-ί kifejező NIH-3T3 .sejtekkel meghatározva
Szérumra éheztetek, MÖ7E sejtekkel meghatározva
Amint a-4., táblázatból látható, általános egyezés tapasztalható az 5-(5-fíuar-.2-oxo· l,2-álh}dn>mdol-3·-Ílsdénuietilí-SA-dlme-d-IH-pirr<>l-3-kaíbonsav-(2-dietilas)iao-eöl:}a®Hd (35, vegyület} biokémiai és ceíbláris sktiviíása között, -ami alátámasztja azt a következtetést, hogy ez a vegyület áthatol a sejtotembráne®. Arra lehet továbbá következtetni, hegy a sejt-válaszok annak az aktivitásnak sz. eredményei, amelyet a 35, vegyület a jelzett target ellen kifejt. Ezzel szemben, in vhrs, teljes tapk-Szegheti végezve a kísérletet .lényegesen nagyobb az .5-(5fiuor-2~oxo~l,2-dihífeomdol-3-iiíáé»metil)-2,4-djmetil-lH--pferol-3Áarhoitsav-(2-d;etliamfec>~etíl}amídf35. vegyölet} koncentrációk {> 19 pM) voltak szükségesek a különböző humán tomorsejtok (5. táblázat) szaporodásának gátlásához. Ez arra utat, hogy a vegyület neon gátolta, közvetlenül ezeknek a sejteknek a szaporodását olyan koncentrációk eseten, amelyek a ligandntnfeggö receptor .foszíbritozé» és- a sejtszapöroáás gátlásához szükségesek.
974.82-1045 SL
SCT/USOl/04613 »♦*
5, táblázat
1 Sejtvenai Eredet IXMGbM} LÖ59 (μΜ·)
1 Hl 29 Vastagbél rák 10 -r? ,,
A549 Tüdőrák 9.5 77
NC1-H4Ó0 Nem-kissejtes tüdőrák 8,9 20
SF767í gisóma 7,9 14
A431 epidermáíis karemóma 6,0 18
Rövides, az 5. táblásaiban bemutatott eredményekéi úgy kaptak, hogy a sejteket 48 óráig rnkubákuk teljes íápközegben 5-(5-(1οοΓ-2-0.χο-1,2-0ίήί0:·οίη0ο1-3-ίΗ00ΓηΤ:0ΐί1)-2,4-0ί®«ί!ΐ-1ΙΊ-ρ5.ηο1-3-Κ830οη8ον-(2dfetilatni»oetil)awd smozataigításainak jebmlétóben. Á szaporítási periódus végén meghatároztuka sejtek relatív szúrná·. A2 IC$e értékeket azok a vegyületteacemrásíók adtak meg,, amelyek a sejtek szaporodását 59%-kal gátolták a «ess kezelt sejtekhez képest. Az LDj® értékeket azok a vegynletkoncentráeiék adták meg, amelyek a sejtek számának 59%-os csökkenését idéztek elő a kísérlet kezdetén jelen lévő sejiszámha?, képest.
Relevánssbb sejtaiapü teszt az 5-(5-flaor-2-oxo-i,2-díh!dröind4>i-3-ibdésmetíl!-2,4-dÍKíetil-tH-pírrt>i-3-karb<ssrsav-t2-dted)ammo-eöl>2n»d (35. vegyidet) snti-Kugsogétt potenciáljának értékelésére az > vit?v mitogenezxs teszt, amely humán köldök véna endotelíálís sejteket (HÜVEC-eket) alkalmaz modell rendszerként az érképzó (angiogén) folyamat szempontjából kritikus eadoteüúhs sejtsz&eorodáshoz. Ebben a tesztben a smiegén választ, amely a DNS-szintézis növekedéseként mérünk, a szérumra éhezteieti HUVEC-ek mdakálják VEGF vagyFGF hozzáadásakor. Ezekben a sejtekben az 5-(5»fhxiKr2-oxo-í^-díhjdromdol-3-ilidét5metd>-2>4·· dtmetil-1 H-pirroi-.l“k^nfisav~(2-díetjÍtemsn<>et!s)nrniá (35. vegyület) dézislUggö módon gátolta a VEGF- vagy FGP-úsásifcák tnitogén választ, 9,904 μΜ, illetve 9,7 μΜ lC5o értékkel, mikor a vegyület a teljes 48 órás vizsgálat során jeles volt.
Röviden, a .festi eredményeket szérumra éheztetek, HUVEC-ekfcel kaptuk, amelyeket VEGE ( 109 ngrtnl) vagyFGF (30 nginsl) röhögés koncentrációi mellett inkubáhnnk 5-(5~ílo«~2-oxe-l ,2-dihídroindöl-3-niáénmeííl)-2,4-dlntetii- lH-piríol-3-karbousav-(2-áietílamtno-etii)amld (35. vegyület) sorozatos hígításainak jelenlétében 24 órán át. A kővetkező 24 órában a mítögén válaszokat iigaadum ós mhihtior jelenlétében úgy határoztok meg, hogy mértük a DNS-szmtézíst. amely a brörsáeoxítírjdirmek a sejt DNS-be való- ^korporációján alapult.
Különböző kísérletekben a 35, vegyület dózisfüggd mádon gátolta az ERK 1(2 (p42/44MAF kistáz), az Fik-KKDR egy korai leszármazási (áosvustream) targeíjénsk VEGF-íaggd íoszíeniezését, Á 35, vegyület gátló aktivitása szintén hoszszan tartónak mataátozott sbbea a rendszerben; az ERK 1/2 VBQF-fiiggö toszferilezését 4S óráig gátolta az 5-(5-Sno!’'2-oxo-l,2-dihidrobáöl-3-ábdésmetí)-2H-djmetil-lH-pórol-3-karbonsav-(2-dietiímmo-edi)amíd (35, vegyület) közegből való eltávolítása «tán, amelyet a vegyület stikromólos koncemrációínak rövid (2 ós-ás) jelenléte követeti.
A VEGE az enóoteliúks sejtek fontos tölélé faktorának bizonyult Mivel az 5-(5-fiaor-2-oxo-t,2-dihi<írtl·ÍBdoi-3-ikáér,mi-sÍi)-2,4-diníeöblH-pirt'el--3-kaí'bonsav..(2-dtetdamijto-st5Í)at5vid(35. vegyület) -gátolja a HüVEC-ek VEGF-föggÓ mitogés válaszát, vizsgáltuk a vegyület 'hatását a HUVEG-tdlélésre. Ezekben a kísérte37491-7995 Sí,
ECT/9502/9491.3 .♦* ** * » * 9
If» * ♦·«*· tekbes a caspase-3 szahsztrátos pols-ADE-ribozll potóneráz (P ARP) hasítását használtuk az apoptózis megállapítására. Azok a HUVBC-ek, amelyeket 24 éra» át «zénmnnemes körülmények között tartottunk, jelentős PARP hasítást mmanak, amit a 23· kl>a PARP hasítási-fiagmens akkunmládójávai észleltünk. Ezt nagymértékben megakadályozta a VEGE 'beadagolása a sejt közegbe, amí azt jelzi, hogy a VEGE túlélési faktorként viselkedik ebben a tesztben. Az 5-(5--0u<sí-2-ozo-í,2-<Ebidroind:ol-3-iiídénmetii)-2,4-dhnetil-iíl-phrol-3-kaíbossav-(2dieti!&tosm>etíl}armd:{35.. vegyület) a kísérletek szerint gátolja a KDR-jeizést Érnek megfelelően az. 5-(5-íluor2-oxo-1,2-dihidtöíödöl-3-i!iűénn;etí)-2A-díKictil-1 íi-pirtol-3-k8tbonsav-(2:-dtetilamía0-etü)amid (35. vegyük;) dózisfüggő mádon gátolta a VEGF által közvetített HÍJVEC túlélést. Ezek az adatok tehát arra utalsak, hogy a 80. vegyület apoptözisí. indukál·, az endoteliális sejtekben a tenyészetben, VEGE jeienkiébco.
C. In vív© hatékonysági vizsgálatok
I. Tumor xesograftokknl szembeni hatékonyság
Az S-(5-ö«to,-2~.<(So-l22-díhidroi»dol-3-íitdénmetíl)-2,4-dim«tiÍ-lH-p»ro.I-3-kaibonsav-(2-!díestilsmmoetil)amid (35. vegyület) i« vúv) hatékonyságát szttbknián (SC) xenograf; modellekben tanulmányoztok esecsemőrairigy-hiájiyos egerek hátsó véknyába implaxrták humán tumor sejtek alkalmazásával. Az implantációt kővetően hagytuk, hogy a tumorok 10ö-5Sö mar m&étet érjenek «!, mielőtt megkezdtük a vegyúfcttol az orális kezelést.
A 86. vegyület oapi orális beadása dózisíuggöen gátolta az A43-1 tumor .növekedést, ha a kezelést akkor kezdtük: el, amikor a tumorok 400 mm}-re nőttek. A tumor növekedés stabAztikusan szignifikáns (P < 6,-05) gátlását 'tapasztaltuk 40 mg/kg/nap dózisok (74%-os gátlás) és 80 mg/kg/nap (84%-os gátlás)· esetén (lásd 6. táblázat). Az elökísérletekben a vegyöíet nagyobb (160 mg/kg/nap) dózisa oetn volt hatékonyabb az. A431 tumorok ellen, mmt a 80 mg/kg/nap dózis. Ezenkívül a 160 mg/kg/nap dózissal kezelt, egerek veszítettek testsúlyukból, ami arra utal, hogy a nagyobb dózist nem toleráltak jól. Hasonló eredményeket kaptunk egy kísérletben, aorely·· ben az A43 í tumorokat csak 100 tnor-ig hagytok.növekedni (lásd 5, táblázat). Ebben -a második kísérletben a tumorok teljes visszafejlődése következett be a syolé olyas állat kózal hatban, amelyet 80 mg/kg/nap dózissal kezeltünk 21 napig. Ebben a hat. állatban a tumorok nem nőttek vissza a 110 napos megfigyelési: időszakban, amely a kezelés végét követte, Abban a két -állatban, amelyben a tumorok nagy méretre (2000-3000 mm3} nőttek vissza, a tumorok visszafejlődtek a 80. vegyülettei végzet;, második kezelési ciklusra adott válaszként. Fontos megjegyezni, hogy az 5~(5-41.ttttr-2-oxo-l,2-d8üápoij^ol-3-ifidénmetil)~2,4-dtmetíli-Jíí-pirrői-3-ktobonsav-(2dfetilatoíns>etd)arnidot (35 . vegyület) az: összes hatékonyságvizsgálatban jól tolerálták 80 mg/kgöwp dózis esetén, még.akkor is, ha a dózist 100 napnál tovább adtuk he folyamatosan.
Kezdeti humor térlégal (mm3) 35. Vegyület (mg/kg/nap) %-©$ gátlás .............. .............. P-érték
400 _ 80 84 (36) 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,120
57481-1045 SL
PCT/US01/0/813 «««« *♦
Rövides, a 6. táblázalban bemátaíoít eredményeket A431 sejtekkel kaptuk (0,5 x lö'5'sejt/egsr), amelyeket SC impiamáitunk csecsemötnirigy-hiányos egerek vekssyának hátsó részébe. Az. 5-f5-fiutsr-2-oxo-i,2 áil3xásoiadol-3-ilidm»etiU-2<4-áts«^íl-ííÍ-pirF£Ü-3-kaíbon^v-(2-áietjlsantst»-eti}>8ctntá (35. vegyidet) napi orális beadása Cremoplmre--stepü vehscu&mban vagy a vehiculum kontroll beadása akkor kezdődött, amikor a tumorok elérték az jelzek átlagos térfogatot. A tumorokat riőntuszos tolómérőével mértük, es a tumor-térfogatot a hosszúság x szélesség x magasság szorzatból számítottuk ki. A P-értékekei a. 80. vegyülettel kezek állatok (s-8) íumor-nforeteinek és a vehsculnmmal kezelt állatok <n~l6) Pumor-nfom-teinek összehasonlításából számítottuk ki a kísérlet utolsó napján, páros Stuáeat-féle t-próbát alkalmazva,
A 35. vegyülni hatékonyságát a. ktilöttbözö eredetű humán tumorokkal szemben Coio2Ö5 (vastagbél karcinőma), SF763T (glioma), vsfomínt NC1-H4ŐÖ (nem kis sejtes tüdő kareinómá) xenograftek alkalmazásával állapítottuk meg (lásd 7. táblázat). Ezeket a kísérleteket 5-(5-f;uor-2-oxol,2-dihidroindol“3-rtíáémrtctil)-2,4dbneísl- lH-pirrel-3-karbo8sav-(2-diőti;3J5ifoo-et;llamid (35. vegyűlet) orális, 80 mg/kg/nap dózisé beadásával végezíűk; ez a dózis hatékony volt és & kísérleti állatok jól tűrték.
Tumor típus Kezdeti tumor tér fo ....................................... %~os gátlás .........í^p)......... Ö-Orték
A43;' Sőrdaganst 100 9.3 (40) 0.002
A431s Bőrdagsn&t 400 84 (3 b) 0,001
Coto205 Végbe; rák 370 77(54) 0,022
NCI-H460 Tüdőrák 300 61(54) 0,003
S.F763T Glroms 550 53 (30) 0,001
1 “Az 5, táblázat szerinti; kísérletből vett adutok
A fenn' kísérletekben a 3 5. vegyüietet naponta egyszer adtuk be SO mg/kg dózisban Cremepbor-alapú véhiculumbaa, amikor a tumorok elérték a jelze t; méretet. A velúculummal kezek kontrol! csoporthoz képesti százalékos gátlást a. kísérletek végén határoztak meg. A P-értékeket úgy számoltuk ki, hogy összehasonlísötttrk azon óltatok tumorjainak méretét, amelyeket a vegyülettel kezeltünk, azon állatok tumorjainak méretével, amelyeket a vehieufommal kezeltünk, és páros Student-Téls t-próbát alkalmaztak.
Elár az5-t'5-S3öor-2-oso-l>2-dih.idroináol-3-ilidémnetil)-2,4-íhínetii-lK~pirrol-3-karbossav-(z-áietilamiíkhetűjgmid (.3.5. vegyűlet) gátolta & 7. táblázatban bemutatott összes tumor típus növekedését, a különböző xesograít modellek válaszában volt különbség. Konkrétabban, az NCI-H4Ó8 és az SF7Ő3T tamearok növekedése megáll; vagy nagymértékben lelassult, mig a ColoÜCS Puntorok, az A431 tenorokhoz hasonlóan, visszafej iődísb az 5'(5'íiUor-2-oxo--i,2-dÍh;drotnáöl-3-iljdés.metil)--2,4-dínteii;--íH--pkrol-3-karbonsav-(2-die.;Ílammo-etil!atatdos kezelés hatására.
57481-1045 Sí,
PCT/ŐS01/04SIÓ
-8:
φ» * φ
A xenogreit modellek válasza közötti különbség molekuláris alapjának megállapításához as SF763T tumorokat vizsgátok. Ezért az 'SF763X tumorokat,. amelyek kevéssé reagáltak as 5-(5-Enor-2-oxo·-1 ,2~dihidroio.doi-3 •didémeti-lj-M-ö-imedl- )H-pi«í>I-3-kas;bo»áav-(2-dtenlammo-erií)aniÍdós kezelésre, molekuláris szinten értékeltünk im-muaoövettani -eljárásokkal, hogy ínegiirtároszuk a vegyöletet alkalmazó kezelés Itatását. Ezeket a vizsgálatokat azért végeztük kezdette ebben a tumor típusban, mert az SF763 tumorokat erősea behálózzák a mikroerek, amelyek fokozatta® fejezik ki a CD31 endetelíáíis sejt jelzői, és ezért jói .megfelelőek a tumor mikroér sűrűség (tumor miero véssél densíty, MVÍ>) tanulmányozására. Az SF7Ó3T tumorok mmiunsaövettaoi vizsgálata azt mutatta, hogy azoknál a tumoroknál, amelyek a kezelt állatokban. voltsk, csökkeni az MVD a vebsculummal kezelt kontrolíokhoz képest, ami megfelel az 80. vegySletnéf jelentkező anti-angiogén hatásmechanizmusnak. Az M VD 24,2.i4,1 volt a 35. vegyölettei kezelt állatokban, míg a.csak vehleulummal kezeli állatokban. 39,3-85,7 volt. Amint a tnmomövekedés megállítása alapján várfok, a «snorsejtek szaporodásának -erőteljes- gátlása mutatkozott meg azokban, a tumorokban, amelyeket a 80. vegyölettei kezeltünk. Ezeknél a tea oknál a mitóm-mdex fele akkora volt, mint a vehlenlnmmal kezelt tumoroknál (az adatok nem szerepelnek a táblázatban). A 35. vegydlet MVV-re és mmorsej t-szapörodásra kifejtett hatása szí jelzi, hogy & vegyületnek erős -anti-angiogén és anti-tumor hatása van, még olyan körülmények között Is, amikor a tumorok nem fejlődnek viszsza,
A 35. vegyületnek azt a képességéi, hogy gátolja a PDGFR foszfort (erest és az ezt kővető jelzést fe vivő, szintén vizsgátok az SF7Ő3T tumorokban, amelyek nagy mennyiségű PDGFRp-t fejeznek ki. Az SF763T fontotok kezelése a 80. vegyületssl erősen gátolta a PDGPRp tirozfe foszíbrilezésí a kialakult SF763T tumorokban. A 35. vegyület csökkentette a foszforilezetl (aktivált) foszfohpáz C gamma (PEC-v), a PDGFF, aktiválás egyik azonnali leszármazási jelzőjének szintjeit Is. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a 35 , vegyület orális beadása közvetlen hatást fej t ki a ferget (PDöFR) aktivitására a tumorokban t/t vívó.
Annak alapján, hogy a 35. vegyület képes a KUVEC-ekben in vííro a VEGE-fÜggö jelzés hosszan tartó (váfe vapízt) gátlására, a vegyölet hafekenyságát akkor értékeltük, amikor & vegyületet nem adtak be gyakran a Colo2ő5 tumor moddbek. Amist a 8. tábiázaí mutatja, 80 mg/kg- (91 %-os gátlás) és 40 mg/kg (84%-es gátlás) hatékony volt a napi beadás esetén, de akkor sem, ha hetente kétszer adtak be a vegyületet. Ezzel .szemben. a 35. vegyület nagyobb dózisa (160 mg/kg) gátolta (52%-os gátlás) a kialakult Cehfeöv tumorok növekedését, ha naponta kétszer adtuk be, ami: arra utal, hogy ez a vegyület hatékonynak bizonyulhat, hanem gyakran, de nagyobb dózisban adjak he. Meg kell jegyeznünk, hogy a dózis adagolását a szakmbetek. túlzott klsérieiezes oélkíd megállapíthatják.
8, táblázat
r Dózis (mg/kg) Gysfeöriság %-os gátlás IMnék
ti ΐ lob Hetente kétszer 52 0,085
r 1___________________ Hentente egyszer 17 NS
80 Naponta 91 0,039
Hetente kétszer 19 NS
........... .................... .... Hetente egyszer 0 NS
97483.-- lö Ab SL
PCT/ÜSS3/04333
: 40 Naponta 84 0.023 i
Hetente kétszer 3b NS j
KS: nem jelentős (p >0,05)
Röviden, e §:. táblázatban bemutatott..eredményeket Colo2i)5 sejtekkel (8,5 x. lö* -sejv'egór} kaptuk, amelyeket SC mtplautálbnsk csecsemőmirigy-hiányos egerek hátsó véknyába, A 35. vegyülte orális beadását a jelzett rendszer mellett akkor kezdtük, araikor a túrnotok elérték a 400 μ* térfogatot. A tumorokat aóniuszos tolómérőével mértük, és a tumor-térfogatot a bosszúság x szélesség s magasság .szorzatból számítottuk ki. Á Períéketea 35, vegyíiitefcl kezelt állatok temor-méreteinekés a vehicolummal kezelt állatok (rc-lét tranorraéretemek összehasonlításából számítottuk, kr a. kísérlet utolsó trapjá®, páros Studcnt-féfe t-próbát alkalmazva.
II A 3S, vegyület hatékonysága dtezem-foáli betogság-moddiben
Azon- kívül, hogy az angiogenezis elősegíti a szilárd primer tumorok elhúzódó· növekedését, fontos tényező a primer tisasr melasztázisábói adódó dtsszemináh betegség kifejlődésének elősegítésében. A 35. vegyülte teását a dtssssemíttálí betegség kifejlődésére B16-F1 egét mta«t tüdő kotomzáeiós: modellben vizsgáltok. Ebben a modellben a B16-F; sejtek, amelyeket intravénásán juttattunk be csecsexnömirigy-hiányos egerek ferokvőnáján keresxíűh kolonizálják a tüdőt. és tumort képeznek. Amint a 8, táblázat mutatja, a 3$. vegyülte orális beadása 80 rsg/kg/rtap dózisban hatékoayao csökkentette a Bl'ó-Fl sejtek terhelését a tüdőben, aratnia teljes tüdő tömegének mérése mutatta. Ezek az adatok arra maisak, begy a 35, vegyülte a betegség disszemínációját fe w'vo gátolhatja.
9, táblázat
Tüdő tömeg (g) %-os gátlás P-ériék
Hordozó 0,S3 ± 8,07 - -
35. vegyület 8,41 ±8,04 50 <0,001
Röviden, a 9. táblázatban bemutatón eredményeket ágy kaptuk, hogy csecsemőmirigy-hiányos egerekfee B16-FI íura-orsejtoket (5 χ 10'' sejVegér) juttsítottk be a farokvénán át. Az egereket naponta, kezeltük orálisan beadóit SO. vegyülettel 88 rag/kg/nap- dózisban (s~lö>, vagy vehicntan-mal (n~18} .24 napig a íumorsejtek bejuttatása után; A kezelési periódus- végén az egereket megöltök, tüdejüket eltávolítótok, és lemértük. A százalékos gátlást úgy számítottuk ki, hogy összehasonlítottak a 80·. vegyülettel kezelt és a csak vebscwlamraal kezek állatok tödéjenek tömegét- A P-értékeket páros Studeat-feié t-ptóbával határoztak meg.
B. Példák a biológiai aktivitásra
A jelen -találmány szerint} vegyületek fe Atro potenciájára a 2 , táblázat mutat példákat.
KÖVETKEZTETÉS
A jeles találmáuy előnyös megvalósításaihoz tartozó vegyületek fennakokmetfei jellemzőinek vizs-gálataihau kimutattuk, hogy az említett vegyületek egyetlen dózisának orális beadása- nagy orális hioelérkeioségoí eredményezett az egerekben, A jé orális feleeiériietöség és a lineáris feanafcokineöka sasa utat hegy a jelen találmány előnyős -megvalósításaihoz tartozó vegyületek kedvező fermakokinetikai jellemzőkkel msáelkezaek.
37431.-1340 SL
PCL/OSOL/O4Ü13
X- φ
-91β A * * ♦ * *♦ * * ♦ <► * * * * » ** ***« 4
Ezenkívül a jelen találmány előnyös megvaíóshásaiboz tartozó vegyületek a. tirozrn kináz. aktivitás potens Inhibitora? a felhasadt dóménű RTK-k, az angiogenerásben részt vevő Flk-1/KDK és PDGFR, valamint' s bizonyos? hemstológiás rákbetegségekben szerepet játszó tőrássejt fektet (SCFI receptor, az. RTK c-kit eseten. Nagyobb koncentrációkban a jelen találmány előnyös megvalósításaihoz tartozó vegyületek gátolják az FGER-1, egy angiogenezisben szerepet játszó harmadik RTK tirozin kináz aktivitását is. A jelen találmány előnyös mcg> valósításaihoz tartózó vegyületek, biokémiai akarásukkal összhangban, gátolják a sarget RTK-k íigahdnmSiggő tirozin ioszíofüszésö?, valamint a VEOF-fel vagy-EGF-íél stimulált humán köldökzsinór véna eudotelíáíis sejtek (HUVEC-ek), a PDGk-fel stimulált, PDöFR-t kifejező NIH-3T3 sejtek és az. SCF-fel stimulált ΜΟ7Έ akut túlélőid leukémia sejtek in vür& mitogé® válaszát. Ezzel szemben a Jete találmány előnyős megvalósításaihoz tartozó vegyületek nem gátolják közvetlenül a temorsejíek szaporodását a teljes szaporító közegben, kivéve azokat a koncentrácsékut, amelyek 2-3 nagyságrenddel nagyobbak, mint a Itgaudutofoggö nútogén válaszok -gátlásához szükséges koncenírácsők. Az egér xeaogtafí: vizsgáíatolib&o a jelen találmány előnyös megvalósításaihoz, tartozó vegyületek dórásföggő módon gátolták a különböző eredetű humán hunotok növekedését olyan koneeattácíők eseten, amelyeket az: egetek jói toleráltak még hosszú (> l90 nap) dózísadagolás esetést is. 89 mg/kgátsp méltót a jelen találmány előnyös megvalósításaihoz tartozó vegyüleíek a nagy- A431 és Colo26S tumorok .visszafejlődését indukálták, valamint az SF763T és NC1-H4ÓÖ ttótsorok jelentős növekedés-gátlását .vagy szüzisár idézték elő. Az SF763T tumoros; egerekben-a jeles találmány előnyös megvalósításaihoz tartozó vegyületek csökkentettek a míkreér sűrűséget, a PÍXSFR foszforilezést a tumorokban, valamim a mkőms-mdexet. a temorsejtekben. Érméi a dózisnál a jelen találmány előnyös megvalósításaihoz tartozó vegyületek gátolták a tüdő Blé-Fl tanonsejtes koloniz&íásáí is egy tumor nteíaszíárás modellben. A dózisadagolás vizsgálatai azt mutatták, hogy a jelen találmány előnyös megvalósításaihoz tartózó vegyületek akkor a iegh&íékouyafebak, ha naponta adjuk be őket. Á jelen találmány-előnyös megvalóshássamz tartozó vegyületek asö-sngiogén aktivitásának közvetlen bizonyítékát detektáltuk $P7ó3T tumorokban, ahol csökkent a mikroér sűrűség.. Ugyancsak közvetlen bizonyítékot kaptunk arra az SF7S3T tumorokban, hogy a jelen találmány előnyős megvalósításaihoz fertőző vegyületek gátolják a PDGFR foszforilezést és jelzést fe vívó.
Összegezve, ezek. az adatok alátámasztják, hogy a jelen találmány előnyös- megvalósításaihoz tartozó, •orálisan beadott vegyületek asli-angiogén. szerek a rák kezeléséhez, beleértve a szilárd tumorokat és a hematológiai rosszindulatú betegségeket, amelyekben az .angfegenezís és/vagy jelzés a c-kite& keresztül fontos a betegség patológiájában.
Nyilvánvaló, hogy a jele» rátómány szerinti vegyüleíek, eljárások és gy^gyszerkétómények hatékonyan módosítják a PK-aktivitási, és így várható·, hogy gyógyhatású szerekként hatásosak az RTK-val, CTK-vul és STK-val kapcsolatos betegségek ellesi.
A jelen, leírásban említett valamennyi szabadalmi leírás és egyéb közlemény n szakember színijét jel énti azon a szakterületen, amelyhez a találmány tartozik.
Valamennyi említed -szabadalmi leírást és közleményt referenciaként a jelen leírás részének tekiatjük, ügy, mintha valamennyi leírás és közlemény idézésénél ezt külön raegemliteiíök volna.
A találmányt a leírásban illusztraóv usödors ismertettük; a találmány megvalósítható egyes jellemző vagy jéíletnzők elhagyása trtslfest, bizonyos korlátozással is, amelyeket itt konkrétat! nem említettünk. A használt kifejezéseket és meghatározásokat a találmány leírására haszualtuk, és nem annak korlátozására.. A meghatározások
974öl-1.045 77
FCT/ÜS33/04SÍ3 te te * te tete ««χχ és kifejezések nem azt a célt szolgálják, hegy egy bemutatott Illetve leirt jellemzővel ekvivalens jellemzőt reszten vagy egészben kizárjunk; Kiemeljük, hogy sz igénypontokban meghatározott találmány terjedelmén be® többféle módosítás lehetséges; Hangsúlyozzak, hogy bár a jelen taláteányt..az előnyös megvalósítási módok ás az optimális jellemzők bemutatásával ismertettük, a feltört találmányi elgondolás módosítása és vál tozatai a szakember számára kézenfekvöek. Az ilyen módosításokat és változtatásokat az igénypontokban meghatározott oltalmi körbe tartozónak rekfétiük.
Ahol a találmány jellemzőit és egyéb v<matozása-it úgynevezett Marknsh formulákkal ittak le, a· szakember szántára nyilvánvaló, hogy a meghatározott Mát&nsh formula által stmak valamennyi tagja és alcsoportja ismertetve van. Például, te X meghatározása hmm···, klór- vagy jódatom, akkor teljes mértékben ismertetve. van például az a megoldás is, hogy X jelentése brómatom. és az a megoldás is, hogy X jelentése feróm es kloratom.

Claims (17)

  1. SZABADALMI JGÉNTPOXTOK
    1. (1) általános, képletö vegyületek vagy gyogyszerészetileg elfogadható sóik, azzal Jellemezve, hogy az általános képletben
    R! jelentése hidrogénatom, 1.-4 .ssénatomöS' alkil-, -{Cl-^yV0 vagy -CiOjNK^ csoport R” jelentése hidrogénatom, haíogénatom, mii- vagy -S{Ö)2NRWRM csoport;
    R' jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, aríl··. heteroaril- vagy
    -(COiR!S csoport;
    R4 jelentése hidrogénatom;
    R5 jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos aUdl-csoport;
    Rö jelentése -CfOjR1·1 csoport;
    R' jelentése hidrogénatom, 1 -4 szénatomos alkil- vagy aril-csc^ort;
    R8 ésR jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil- vagy aril-e,söpört;
    R’1, jeierdése -N(R :í){C'ii2},.Ru csoport, ahol n.értéke I,
  2. 2 vagy 3, R'! jelentése hidrogénatom, és R,z je ientóse hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi-,-C(O)RW, heteroaril- vagy -NR4íRh, csoport;
    R1 és Rt4 jelentése ••egymástól íüggeílenöl hidrogénatom, l -4 szénatomos állói-, cikloalkil-, arli- vagy heteroaril- csoport; vagy
    Rb és R1’ együtt heterociklusos csoportot alkothat;
    R55 jelentése hidrogénatom, hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy ariloxt-csopcrt,
    R’$ jelentése hidroxi- vagy -C(O)R’' csoport; és r értéke 2 vagy .3;
    és ahol;
    az alkoxi-csoporí jelentése Ö-alkd- vagy O-cikioalkil-osopört;
    sz ariloxi-csoport jelentése ö-aríl· vagy ö-heteroariil-csöport;
    a heteroaril-osoport jelentése monocíklustss. vagy kondenzált 5-12 gyűrő atomos gyűrű, amely egy, kettő vagy három gyűrű heteroatomot tartalmaz N. ö vagy S közöl megválasztva, és a maradék gyűrő atomok C atomok;.
    37481-1045 SL
    PC1;/USO1/94 813 ** ♦ * a heterociklo-csoport jelentése telített ciklusos 3-8 győri? atomos gyűrő, amelyben sgy vagy keltő gyár» atom hetsroatom N, ö vagy SíÖ)ti közöl snegválasztva, ahol a értéks 0-2, és a maradék gyűrű atomok C alomok, ahol egy vagy kettő C atom helyett adott esetben karbonltesttport állhat:
    as. altól·, alkoxi- és cikloaftól-csoportok szulssztitmlatlaook;
    az aríl- és-hete-roartl-csoportok adott esetben sztibszíkuáitak egy vagy kettő sztibszíitiiötssel, egymástól függetlenül halogésatoni, 1 -4 szénatornos alkil-, 1 -4 szémtemos trihaíogéa-ttltól·, hús-oximerka-ptó-, ciano-» N· amkio-, menő- vagy dif 1-4 szénatornos alkiii-astmo-, karbori- vagy N-szulfönamído-csoport közül megválasztva;
    a heíer.:x:jkki-esoport adott esetet szubszísíuák egy vagy kettő szufeszötuensssk egymástól függetlenül hslogénaíorn, 1-4 szénatornos' alkil-, 1-4 szénatornos alkO-karboxi-, 1-4 szénatomos altól-észter-, hldrcxl- vagy monovagy dd 1 -4 szénatomos alkiijsmiso-csoport közül iKegválaaziva.
    .2. Az 1. igénypont szerinti vegyületek. ahol R’ ’ és R'4 jelentése- egymástól fílggetleriülhitkogétiatom. 1 -4 szénatornos alkil- vagy heífiroard-csoport, vagy -együtt -{CH?.}.?-, -(CH2)j-, -{ClíjjvO-íCH:·)-?- vagy 4€Hj)2N(CHíXCHj>2- csoport.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, ahol a értéke 2 vagy 3 és R‘2 (jelentése -NRnRf4 csoport, ahol KA és Kijelentése egymástól függetlenül 1-4 szénatornos alkll-csoport,
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, ahol n értéke- 2 vagy 3 és R55 jelentése -NRÍÍRw csoport, ahol P, ’ ’ és R·4 jelentése együtt -{CHjR-, -(CHj)n -íCHj)rO-tCH2)2- vagy -(CI'ij)->M(CHj}(CIl2)j- csoport.
  5. 5.. Az 1. igénypont szerinti vegyietek, ahlfel R ‘ jelentése -C(0)NRgR'? csoport, ahol R8 jelentése hidrogénatom és P? jelentése aril-csoport.
  6. 6, Az 1. igénypont szerinti vegyület, antely a (2) képletnek felel meg, é,$ ennek gyögyszerészetíieg elfogadható sós.
  7. 7, Áz 1. igénypont szerinti vegyület, tímely az 5-(5-Πηο?·-2-οκο-!,2-ό11ό0ί·θ3ηόο1-3-ί1ί<Ιέκίκο1:ί1..!-2,4-0!metil· ni-pttrol-3-ksffb©ns8v-{2-áietUamisoetö)-atmdL-mtíátsója.
  8. 8, Az 1. igénypont .szerinti vegyület, mely a (4j képletnek felel meg, és-ennek gyógyszerészetíleg elfogadható sói.
  9. 9, Gyógysserkészítoény, amely egy 1. Igénypont szerinti vegyöletet vagy sót és egy gyögyszerészetileg elfogadható vivöanyagot vagy kiszerelőanyagpí tartalmaz.
  10. 10, Győgyszerkészittuény, amely egy ő. igénypont szerinti vegyütetet vagy sót és egy gyógyszerészetíleg elfogadható vivöanyagot vagy tószere&ayagot tartalmaz, '
  11. 11. A lö. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely az- 5-(5-Saor-2-oxo-l,2-áiín£hOindo!-3-ilídén· ηι^ίΙ)-2,4-ά3η)«1ϊΙ-1Η-ροοΜ-Ιε8ώοη8&ν-Γ2-«Μβί11&®ίΗθ«ΰΙ)·'δίηί4 L-mriátsóját tartalmazza.
  12. 12, As 1. vagy 6. igénypont szerinti vegyület vagy érmék gyógyszcréSKeóieg alkalmazható sója alkalmazása a szentesei protein kmázzal kapcsolatos rendellenességek kezelésére alkalmas gyógyszeriészíttnény előállttására.
    97481--1.0 45 SL
    FCT/ÖSől/04813 φφ φφφ
    Φ Φ Φ * ΦΦΦ ΦΦ X Φ χ χ φ Φ Φ * Φ Φ * χ ♦ »»« φφ φ* «« φφ «·φ« -φ
  13. 13. Α 12. igénypont szerinti- aikalmasá,A ahol -a protein k-inézzal kapcsolatos rendellenesség egy receptor tiroztn klnázzal kapcsolatos rendellenesség, cm-receptor tirozin kmázzai kapcsolatos rendellenesség vagy szerin-treonsn kinézzal kapcsolatos rendellenesség.
  14. 14. A 12. igénypont .szerinti a&airaazás, ahol a protem kinázzal kapcsolatos rendellenesség EGFR.-rel kapcsolatos rendellenesség, PDGFR-rel kapcsolatos- rendellenesség. IGFR-rel kapcsolatos .rendellenesség vagy tlfc-val kapcsolatos .rendellenesség.
  15. 15. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a protein kisázza; kapcsolatos rendellenesség rákbetegség, amely lehet pikkelyes sejt fcarcisósna, assroeytoma, Kapós i-sznrkóma. gitohlastoma, tüdőrák, hólyagrák, fej I vagy n-yaki rák, melanoma, petefészekrák, prosztatarák, mellrák, kis sejtes tüdőrák, gilosrat, vastag- és végbéfeák, ltogy- és jvarsstervt rák vagy gyomor- .és bélrák .
  16. 16. A 12. igénypont szerinti .alkalmazás, ahol a protein kinázzai kapcsolatos- rendellenesség cukorbetegség, aatolmmnn- rendellenesség, .hiperprolifetácíós rendellenesség, resteaosls, fibrosis, pikkelysömör, von Hep~ pd-Lmdau-beíegség, esosd-izüíet; gyulladás, reamatoid arthritis, érképződés (angfegenezts), gyalbdásos rendellenesség,. tmmnntáőgiai rendellenesség vagy szív- és érrendszeri rendellenesség
  17. 17. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szervezet ensfeer.
HU0204433A 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors HU228979B1 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27
PCT/US2001/004813 WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0204433A2 HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
HUP0204433A3 HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
HU228979B1 true HU228979B1 (en) 2013-07-29

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0204433A HU228979B1 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (hu)
EP (1) EP1255752B1 (hu)
JP (1) JP3663382B2 (hu)
KR (1) KR100713960B1 (hu)
CN (1) CN1329390C (hu)
AR (1) AR034118A1 (hu)
AT (1) ATE369359T1 (hu)
AU (2) AU2001239770B2 (hu)
BE (1) BE2010C009I2 (hu)
BG (1) BG65764B1 (hu)
BR (2) BRPI0108394B8 (hu)
CA (1) CA2399358C (hu)
CO (1) CO5280092A1 (hu)
CR (2) CR20120007A (hu)
CY (3) CY1108032T1 (hu)
CZ (1) CZ303705B6 (hu)
DE (3) DE122010000004I1 (hu)
DK (1) DK1255752T3 (hu)
EA (1) EA005996B1 (hu)
ES (1) ES2290117T3 (hu)
FR (1) FR08C0002I2 (hu)
HK (1) HK1051188A1 (hu)
HR (1) HRP20020751B1 (hu)
HU (1) HU228979B1 (hu)
IL (1) IL151127A0 (hu)
IS (1) IS2491B (hu)
LT (1) LTC1255752I2 (hu)
LU (2) LU91407I2 (hu)
ME (1) ME00415B (hu)
MX (1) MXPA02008021A (hu)
MY (1) MY130363A (hu)
NL (2) NL300332I2 (hu)
NO (4) NO325532B1 (hu)
NZ (1) NZ520640A (hu)
PE (1) PE20011083A1 (hu)
PL (1) PL211834B1 (hu)
PT (1) PT1255752E (hu)
RS (1) RS50444B (hu)
SI (1) SI1255752T1 (hu)
SK (1) SK287142B6 (hu)
TW (1) TWI306860B (hu)
UA (1) UA73976C2 (hu)
WO (1) WO2001060814A2 (hu)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
CA2360581A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 The Research Foundation Of State University Of New York A novel method for designing protein kinase inhibitors
MY130363A (en) * 2000-02-15 2007-06-29 Sugen Inc "pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors"
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
EP1294688A2 (en) 2000-06-02 2003-03-26 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
US6635640B2 (en) 2000-06-30 2003-10-21 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
NZ525324A (en) 2000-10-20 2005-03-24 Eisai Co Ltd Nitrogenous aromatic ring compounds
CA2432114A1 (en) 2000-12-20 2002-07-18 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
AR036042A1 (es) 2001-05-30 2004-08-04 Sugen Inc Derivados aralquilsufonil-3-(pirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona, sus composiciones farmaceuticas y metodo para la modulacion de la actividad catalitica de una proteina quinasa
EP1471907B1 (en) * 2001-06-29 2008-07-16 AB Science Use of c-kit inhibitors for treating autoimmune diseases
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
EP3168218B1 (en) * 2001-08-15 2018-11-14 Pharmacia & Upjohn Company LLC A crystal comprising an l-malic acid salt of n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide for use as a medicament
EP1436259A1 (en) * 2001-09-10 2004-07-14 Congxin Liang 3-(4,5,6,7-tetrahydroindol-2-ylmethylidiene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
JP2005508953A (ja) * 2001-10-10 2005-04-07 スージェン・インコーポレーテッド キナーゼ阻害剤としての３−［４−（置換ヘテロサイクリル）−ピロール−２−イルメチリデン］−２−インドリノン誘導体
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
US7129225B2 (en) * 2001-10-22 2006-10-31 The Research Foundation Of State University Of New York Protection against and treatment of hearing loss
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
WO2003052681A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-26 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
MXPA04006271A (es) 2001-12-27 2004-10-04 Theravance Inc Derivados de indolinona utiles como inhibidores de la proteina cinasa.
BR0307721A (pt) * 2002-02-15 2005-01-25 Upjohn Co Processo para preparação de derivados de indolinona
WO2003097854A2 (en) * 2002-05-17 2003-11-27 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
US20060084697A1 (en) * 2002-08-08 2006-04-20 Hallahan Dennis E Pi3k antagonists as radiosensitizers
WO2004015082A2 (en) * 2002-08-09 2004-02-19 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
TW200418836A (en) * 2002-09-10 2004-10-01 Pharmacia Italia Spa Formulations comprising an indolinone compound
JP2006510727A (ja) * 2002-11-15 2006-03-30 エクセリクシス， インク． キナーゼモジュレーター
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AP2114A (en) 2003-02-26 2010-03-04 Sugen Inc Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
ATE508747T1 (de) * 2003-03-10 2011-05-15 Eisai R&D Man Co Ltd C-kit kinase-hemmer
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
PL1670785T3 (pl) * 2003-10-02 2010-12-31 Pharmacia & Upjohn Co Llc Sole i polimorfy podstawionego pirolem związku indolinonowego
EP2060270A3 (en) * 2003-10-16 2009-12-09 Imclone LLC Fibroblast growth factor receptor-1 inhibitors and methods of treatment thereof
EP2762475A1 (en) 2003-11-07 2014-08-06 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Pharmaceutically acceptable salts of quinolinone compounds and their medical use
CN101337930B (zh) 2003-11-11 2010-09-08 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
WO2005053614A2 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Scripps Research Institute Advanced indolinone based protein kinase inhibitors
WO2005058341A2 (en) * 2003-12-11 2005-06-30 Theravance, Inc. Compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
JP2008504292A (ja) 2004-06-24 2008-02-14 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド 免疫増強用の化合物
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
DK1786785T3 (da) * 2004-08-26 2010-05-31 Pfizer Enantiomerisk rene aminoheteroaryl-forbindelser som proteinkinasehæmmere
AU2005283422C1 (en) 2004-09-17 2017-02-02 Eisai R & D Management Co., Ltd. Medicinal composition
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) * 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
RU2007135167A (ru) * 2005-03-23 2009-03-27 Пфайзер Продактс Инк. (Us) Комбинированная терапия с использованием анти-ctla4-антитела и индолинона для лечения рака
CA2604357C (en) 2005-04-26 2012-01-17 Pfizer Inc. P-cadherin antibodies
BRPI0609957A2 (pt) * 2005-05-12 2010-05-11 Pfizer uso de malato de sunitinib na preparação de um medicamento para o tratamento de cáncer
KR20080019236A (ko) 2005-05-18 2008-03-03 어레이 바이오파마 인크. Ｍｅｋ의 헤테로시클릭 억제제 및 그의 사용 방법
CA2609353C (en) 2005-05-23 2015-04-28 Novartis Ag Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-quinolin-2-one lactic acid salts
KR20080017058A (ko) * 2005-05-26 2008-02-25 더 스크립스 리서치 인스티튜트 향상된 인돌리논계 단백질 키나제 억제제
JP5066446B2 (ja) 2005-08-01 2012-11-07 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質の効果を予測する方法
EP2281901B1 (en) 2005-08-02 2013-11-27 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-tumour pharmaceutical composition with angiogenesis inhibitors
UY29783A1 (es) 2005-09-07 2007-04-30 Pfizer Anticuerpos monoclonales humanos para la quinasa-1 tipo receptor de activina
CN103601720B (zh) 2005-09-19 2016-08-10 硕腾服务有限责任公司 经吡咯取代的2-吲哚酮的固态盐形式
US20090053236A1 (en) * 2005-11-07 2009-02-26 Eisai R & D Management Co., Ltd. USE OF COMBINATION OF ANTI-ANGIOGENIC SUBSTANCE AND c-kit KINASE INHIBITOR
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
CN101389331A (zh) * 2005-12-29 2009-03-18 斯克里普斯研究学院 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
AR060358A1 (es) 2006-04-06 2008-06-11 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
MX2008013430A (es) 2006-04-19 2009-01-26 Novartis Vaccines & Diagnostic Compuestos de indazol y metodos para la inhibición de cdc7.
RS20080525A (en) 2006-05-09 2009-09-08 Pfizer Products Inc., Cycloalkylamino acid derivatives and pharmaceutical compositions thereof
US20090209580A1 (en) * 2006-05-18 2009-08-20 Eisai R & D Management Co., Ltd. Antitumor agent for thyroid cancer
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
US20090203693A1 (en) * 2006-06-29 2009-08-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for liver fibrosis
EP2040738A1 (en) 2006-07-13 2009-04-01 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
TW200817409A (en) 2006-08-04 2008-04-16 Takeda Pharmaceutical Fused heterocyclic derivative and use thereof
HUE033894T2 (hu) 2006-08-23 2018-01-29 Kudos Pharm Ltd 2-Metilmorfolin pirido-, pirazo- és pirimido-pirimidin származékok MTOR inhibitorokként
EP2065372B1 (en) 2006-08-28 2012-11-28 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent for undifferentiated gastric cancer
WO2008033562A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Xcovery, Inc. Kinase inhibitor compounds
BRPI0718029A2 (pt) 2006-11-06 2013-11-26 Supergen Inc Derivados de imidazo(1,2-b)piridazina e pirazolo(1,5-a)pirimidina e seu uso como inibidores da proteína cinase
CN101535302A (zh) * 2006-11-06 2009-09-16 株式会社泰丽巴镠斯 新型羟基吲哚衍生物
ES2383084T3 (es) 2006-12-04 2012-06-18 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R&D Co., Ltd. Derivados de 3-pirrolo[b]ciclohexilen-2-dihidroindolinona y usos de los mismos
KR101445892B1 (ko) 2007-01-29 2014-09-29 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 미분화형 위암 치료용 조성물
EA200970669A1 (ru) 2007-02-06 2010-02-26 Пфайзер Инк. Производные 2-амино-5,7-дигидро-6н-пирроло[3,4-d]пиримидина в качестве ингибиторов hsp-90, предназначенные для лечения рака
JPWO2008114819A1 (ja) 2007-03-20 2010-07-08 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
JP5352476B2 (ja) 2007-06-05 2013-11-27 武田薬品工業株式会社 キナーゼ阻害剤としての二環式複素環化合物
JP5270553B2 (ja) 2007-08-23 2013-08-21 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
ES2759347T3 (es) * 2007-09-06 2020-05-08 Boston Biomedical Inc Composiciones de inhibidores de quinasas y su uso para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades relacionadas con las quinasas
ME01999B (me) 2007-10-11 2015-05-20 Astrazeneca Ab Derivati pirolo[2,3-d]pirimidina kao inhibitori protein kinaze b
JP5638244B2 (ja) 2007-11-09 2014-12-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質と抗腫瘍性白金錯体との併用
EP2220072A2 (en) * 2007-11-21 2010-08-25 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
US8389562B2 (en) * 2007-12-12 2013-03-05 Medichem, S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
CN101945870B (zh) 2007-12-19 2012-10-03 健泰科生物技术公司 5-苯氨基咪唑并吡啶和使用方法
CA2710122A1 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Novartis Ag Thiazole derivatives used as pi 3 kinase inhibitors
CN101945875B (zh) 2007-12-21 2013-04-24 健泰科生物技术公司 氮杂吲嗪及其使用方法
JP5399926B2 (ja) * 2008-01-29 2014-01-29 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管阻害物質とタキサンとの併用
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
EA201001125A1 (ru) * 2008-02-13 2011-04-29 Рациофарм Гмбх Фармацевтические композиции, включающие n-[2-(диэтиламино)этил]-5-[(5-фтор-1,2-дигидро-2-оксо-3н-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1н-пиррол-3-карбоксамид
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
WO2009104021A2 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
KR20100119582A (ko) * 2008-03-31 2010-11-09 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 및 이의 염을 제조하는 방법
CA2720943A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
CA2725001C (en) * 2008-05-23 2014-05-13 Jiangsu Chiatai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd. Dihydroindolone derivatives
WO2009154697A2 (en) 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
EP2313371B1 (en) * 2008-06-13 2012-08-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
EP2313396A1 (en) 2008-06-23 2011-04-27 Natco Pharma Limited Process for the preparation of high purity sunitinib and its pharmaceutically acceptable salt
EP2138167A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
BRPI0914942A2 (pt) * 2008-06-30 2015-08-11 Cylene Pharmaceuticals Inc Compostos de oxindol
KR20110036101A (ko) 2008-06-30 2011-04-06 안지오블라스트 시스템스 인코퍼레이티드 조합된 치료를 사용한 안과질환 및 과도한 혈관신생의 치료
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
WO2010001167A2 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Generics [Uk] Limited Novel process
CA2730079A1 (en) * 2008-07-10 2010-01-14 Generics [Uk] Limited Processes for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
CA2731605A1 (en) 2008-07-24 2010-01-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib and salts thereof and their polymorphs
WO2010010454A2 (en) 2008-07-24 2010-01-28 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
EP2328920A2 (en) * 2008-08-25 2011-06-08 Amplimmune, Inc. Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
AU2009286521A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
CN102197035A (zh) * 2008-08-25 2011-09-21 基因里克斯(英国)有限公司 舒尼替尼的结晶形式及其制备方法
NZ591130A (en) 2008-08-25 2012-09-28 Amplimmune Inc Compositions comprising a PD-1 antagonists and cyclophosphamide and methods of use thereof
WO2010026388A1 (en) * 2008-09-05 2010-03-11 Imperial Innovations Limited Isatin derivatives for use as in vivo imaging agents
AU2009294415B2 (en) 2008-09-19 2015-09-24 Medimmune Llc Antibodies directed to DLL4 and uses thereof
WO2010041134A1 (en) * 2008-10-10 2010-04-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole subsituted 2-indolinone malate salt
EP2181991A1 (en) 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
EP2399921B1 (en) 2008-12-01 2015-08-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound and use thereof
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
US20110053923A1 (en) 2008-12-22 2011-03-03 Astrazeneca Chemical compounds 610
JP2012513194A (ja) 2008-12-23 2012-06-14 アストラゼネカ アクチボラグ α５β１に向けられた標的結合剤およびその使用
WO2010076805A2 (en) 2009-01-02 2010-07-08 Hetero Research Foundation Novel polymorphs of sunitinib malate
EA019959B1 (ru) 2009-01-16 2014-07-30 Экселиксис, Инк. Малатная соль n-(4-{[6,7-бис-(метилокси)хинолин-4-ил]окси}фенил)-n'-(4-фторфенил)циклопропан-1,1-дикарбоксамида и ее кристаллические формы для лечения рака
JP5977522B2 (ja) 2009-02-05 2016-08-24 イミュノジェン・インコーポレーテッド 新規ベンゾジアゼピン誘導体
AU2010210986A1 (en) 2009-02-09 2011-08-25 Supergen, Inc. Pyrrolopyrimidinyl Axl kinase inhibitors
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
WO2010103094A1 (en) 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
WO2010118986A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP2475648A1 (en) 2009-09-11 2012-07-18 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
WO2011033472A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
AR078675A1 (es) 2009-10-20 2011-11-23 Cellzome Ltd Derivados de pirazolo[3,4-d]pirimidina inhibidores de jak quinasas, composiciones farmaceuticas que los comprenden, metodo para prepararlos y uso de los mismos para el tratamiento o profilaxis de trastornos inmunologicos, inflamatorios y autoinmunes.
WO2011058521A2 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
WO2011061613A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib
KR101573109B1 (ko) 2009-11-24 2015-12-01 메디뮨 리미티드 Ｂ７―ｈ１에 대한 표적화된 결합 물질
JP2013512859A (ja) 2009-12-03 2013-04-18 大日本住友製薬株式会社 トール様受容体（ｔｌｒ）を介して作用するイミダゾキノリン
US10166142B2 (en) 2010-01-29 2019-01-01 Forsight Vision4, Inc. Small molecule delivery with implantable therapeutic device
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) * 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
JP5841072B2 (ja) 2010-02-10 2016-01-06 イミュノジェン・インコーポレーテッド Ｃｄ２０抗体およびその使用
CA2786294A1 (en) 2010-02-22 2011-08-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Pyrido[3,2-d]pyrimidine pi3k delta inhibitor compounds and methods of use
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
US9249129B2 (en) 2010-03-04 2016-02-02 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mTOR inhibitors
AU2011222470A1 (en) 2010-03-04 2012-09-27 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
EP2550263A4 (en) 2010-03-23 2013-07-24 Univ Johns Hopkins COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE
WO2011128699A2 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
WO2011134831A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Cellzome Limited Pyrazole compounds as jak inhibitors
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
US9012458B2 (en) 2010-06-25 2015-04-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
US20130143915A1 (en) 2010-07-01 2013-06-06 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
AU2011274528B2 (en) 2010-07-09 2015-04-23 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US9040545B2 (en) 2010-08-20 2015-05-26 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective JAK inhibitors
US8426418B2 (en) 2010-08-27 2013-04-23 CollabRx Inc. Method to treat melanoma in BRAF inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
ES2643851T3 (es) 2010-11-01 2017-11-24 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Procedimientos para la preparación de 3-((pirrol-2-il)metilen)-2-pirrolonas usando 2-sililoxi-pirroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
WO2012062704A1 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
WO2012068487A1 (en) 2010-11-18 2012-05-24 Synta Pharmaceuticals Corp. Preselection of subjects for therapeutic treatment with oxygen sensitive agents based on hypoxic status
WO2012068549A2 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
TWI410425B (zh) 2010-12-03 2013-10-01 Lilly Co Eli 唑并［５，４－ｂ］吡啶－５－基化合物
US10220020B2 (en) 2010-12-23 2019-03-05 Nektar Therapeutics Polymer-des-ethyl sunitinib conjugates
JP6002149B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-05 ネクター セラピューティクス ポリマー−スニチニブコンジュゲート
PL2670753T3 (pl) 2011-01-31 2017-05-31 Novartis Ag Nowe pochodne heterocykliczne
SG10201601046QA (en) 2011-02-15 2016-03-30 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
WO2012110773A1 (en) 2011-02-17 2012-08-23 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
CA2827172C (en) 2011-02-17 2019-02-26 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
WO2012136622A1 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Cellzome Limited Dihydropyrrolo pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
EP2694058B1 (en) 2011-04-08 2015-11-04 Beta Pharma, Inc. New indolinone protein kinase inhibitors
US8962650B2 (en) 2011-04-18 2015-02-24 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
US9945862B2 (en) 2011-06-03 2018-04-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
CA2843195A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrimidine analogues as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
CA2849340A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as kinase inhibitors
KR20140070616A (ko) 2011-09-21 2014-06-10 셀좀 리미티드 Mtor 저해제로서의 모르폴리노 치환된 우레아 또는 카바메이트 유도체
EP2763985B1 (en) 2011-10-07 2016-06-22 Cellzome Limited {(4-(4-morpholino-dihydrothieno[3,4-d]pyrimidin-2-yl)aryl}urea or carbamate derivatives as mtor inhibitors
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
AP2014007601A0 (en) 2011-10-28 2014-04-30 Novartis Ag Novel purine derivatives and their use in the treatment of disease
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
CN104169272A (zh) 2011-12-23 2014-11-26 赛尔佐姆有限公司 作为激酶抑制剂的嘧啶-2,4-二胺衍生物
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
ES2709110T3 (es) 2012-03-23 2019-04-15 Laurus Labs Ltd Un proceso mejorado para la preparación de sunitinib y sus sales de adición de ácido
AU2013249708B2 (en) 2012-04-20 2017-03-16 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
SI2844282T1 (sl) 2012-05-04 2019-08-30 Pfizer Inc. S prostato povezani antigeni in na cepljenju osnovan imunoterapevtski režim zdravljenja
CA2872526A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9732161B2 (en) 2012-06-26 2017-08-15 Sutro Biopharma, Inc. Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
WO2014026243A1 (en) 2012-08-17 2014-02-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Vegfr3 inhibitors
WO2014031566A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR102182800B1 (ko) 2012-08-31 2020-11-25 서트로 바이오파마, 인크. 아지도 기를 포함하는 변형된 아미노산
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
EP2909181B1 (en) 2012-10-16 2017-08-09 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Pkm2 modulators and methods for their use
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
JPWO2014098176A1 (ja) 2012-12-21 2017-01-12 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 キノリン誘導体のアモルファス及びその製造方法
EP2961434A2 (en) 2013-02-28 2016-01-06 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9901647B2 (en) 2013-02-28 2018-02-27 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2014160401A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Boston Biomedical, Inc. 3-(aryl or heteroaryl) methyleneindolin-2-one derivatives as inhibitors of cancer stem cell pathway kinases for the treatment of cancer
EP2970205B1 (en) 2013-03-14 2019-05-08 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Jak2 and alk2 inhibitors and methods for their use
EP2968113B8 (en) 2013-03-14 2020-10-28 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
US10517861B2 (en) 2013-05-14 2019-12-31 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
WO2015031604A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Crown Bioscience, Inc. Gene expression signatures predictive of subject response to a multi-kinase inhibitor and methods of using the same
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CA2838587A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta Pure crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
US9278955B2 (en) 2013-10-18 2016-03-08 Sun Pharmaceutical Industries Limited Ascorbic acid salt of sunitinib
WO2015063647A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Pfizer Inc. Vectors for expression of prostate-associated antigens
US20170000778A1 (en) 2013-12-06 2017-01-05 Emmanuelle di Tomaso Dosage regimen for an alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
CN104829596B (zh) * 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
KR20170040798A (ko) 2014-08-08 2017-04-13 포사이트 비젼4, 인크. 수용체 티로신 키나제 억제제의 안정한 가용성 제제 및 그의 제조 방법
KR102329681B1 (ko) 2014-08-28 2021-11-23 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 고순도의 퀴놀린 유도체 및 이를 제조하는 방법
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CN107530430A (zh) 2015-01-13 2018-01-02 国立大学法人京都大学 用于预防和/或治疗肌萎缩性侧索硬化症的药剂
DK3263106T3 (da) 2015-02-25 2024-01-08 Eisai R&D Man Co Ltd Fremgangsmåde til undertrykkelse af bitterhed af quinolinderivat
WO2016140717A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Combination of a pd-1 antagonist and a vegfr/fgfr/ret tyrosine kinase inhibitor for treating cancer
KR20180018507A (ko) 2015-04-20 2018-02-21 톨레로 파마수티컬스, 인크. 미토콘드리아 프로파일링에 의한 알보시딥에 대한 반응 예측
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
MX2017014645A (es) 2015-05-18 2018-01-23 Tolero Pharmaceuticals Inc Profarmacos de alvocidib que tienen una biodisponibilidad aumentada.
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
JP6757959B2 (ja) 2015-06-16 2020-09-23 株式会社 ＰＲＩＳＭ ＢｉｏＬａｂ 抗がん剤
WO2017024073A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for treatment of cancer
AU2016326564A1 (en) 2015-09-22 2018-04-26 Graybug Vision, Inc. Compounds and compositions for the treatment of ocular disorders
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
MX2018005298A (es) 2015-11-02 2018-06-22 Novartis Ag Regimen de dosificacion para un inhibidor de fosfatidilinositol 3-quinasa.
CN114469872A (zh) 2015-11-12 2022-05-13 灰色视觉公司 用于治疗的聚集性微粒
KR20180104106A (ko) 2016-01-27 2018-09-19 서트로 바이오파마, 인크. anti-CD74 항체 접합체, anti-CD74 항체 접합체를 포함하는 조성물 및 anti-CD74 항체 접합체의 이용 방법
CA3012718A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Vitrisa Therapeutics, Inc. Compositions with improved intravitreal half-life and uses thereof
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
AU2017321973A1 (en) 2016-09-02 2019-03-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
EP3532464A4 (en) 2016-10-28 2020-07-08 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING EZH2-MEDIATED CANCER
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
CN110177780B (zh) 2016-12-05 2022-11-01 阿普罗斯治疗公司 含有酸性基团的嘧啶化合物
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
JP2020514252A (ja) 2016-12-08 2020-05-21 アイカーン スクール オブ メディスン アット マウント シナイ Ｃｄｋ４／６媒介性がんを治療するための組成物および方法
CN110234659A (zh) 2016-12-19 2019-09-13 特雷罗药物股份有限公司 用于敏感性分析的分析肽和方法
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
JP7217022B2 (ja) 2017-03-23 2023-02-02 グレイバグ ビジョン インコーポレイテッド 眼障害の治療のための薬物及び組成物
CN111201040A (zh) 2017-05-10 2020-05-26 灰色视觉公司 用于医学疗法的缓释微粒及其悬浮液
EP3658588A1 (en) 2017-07-26 2020-06-03 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
EP3684814A1 (en) 2017-09-18 2020-07-29 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor alpha antibody conjugates and their uses
US20200237766A1 (en) 2017-10-13 2020-07-30 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Pkm2 activators in combination with reactive oxygen species for treatment of cancer
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
JP2021515013A (ja) 2018-03-06 2021-06-17 アイカーン スクール オブ メディスン アット マウント シナイ セリンスレオニンキナーゼ（ａｋｔ）分解／破壊化合物および使用方法
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
WO2020216450A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
JP7351859B2 (ja) 2018-06-04 2023-09-27 アプロス セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｔｌｒ７の調節に関係する疾患を処置するのに有用な酸性基を含むピリミジン化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
EP3852811A1 (en) 2018-09-17 2021-07-28 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
CA3119807A1 (en) 2018-12-04 2020-06-11 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Cdk9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
TW202038957A (zh) 2018-12-21 2020-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物與激酶抑制劑之組合
CA3127502A1 (en) 2019-02-12 2020-08-20 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
JP2022526713A (ja) 2019-03-21 2022-05-26 オンクセオ がんの処置のための、キナーゼ阻害剤と組み合わせたＤｂａｉｔ分子
KR20210141621A (ko) 2019-03-22 2021-11-23 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. Pkm2 조정제를 포함하는 조성물 및 그를 사용한 치료 방법
WO2020227105A1 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CA3137916A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Ichan School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
CA3152674A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole derivatives for fgfr inhibitor and preparation method thereof
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL104796C (hu) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (hu) 1950-11-18
BE553661A (hu) 1955-12-23
BE558210A (hu) 1956-06-08
NL251055A (hu) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (hu) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (hu) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
DE3480392D1 (en) 1983-04-29 1989-12-14 Ciba Geigy Ag Imidazolides and their use as curing agents for polyepoxides
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
WO1988007035A1 (en) 1987-03-11 1988-09-22 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene derivatives
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
DE69031649T2 (de) 1989-07-25 1998-02-26 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Oxoindolderivate
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
DE69222637T2 (de) 1991-05-10 1998-02-26 Rhone Poulenc Rorer Int Bis mono- und bicyclische aryl- und heteroarylderivate mit inhibierender wirkung auf die egf und/oder pdgf-rezeptor tyrosinkinase
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
WO1993007751A1 (en) 1991-10-18 1993-04-29 Monsanto Company Fungicides for the control of take-all disease of plants
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
EP0632102B1 (de) 1993-06-28 1997-04-02 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
EP0923546B1 (de) 1996-08-01 2003-11-26 Merckle GmbH Acylpyrroldicarbonsäuren und acylindoldicarbonsäuren sowie ihre derivate als hemmstoffe der cytosolischen phospholipase a2
EP0984930B1 (en) * 1997-05-07 2005-04-06 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
IL139934A (en) * 1998-05-29 2007-10-31 Sugen Inc History 2 - Indulinone converted to pyrrole and pharmaceutical preparations containing them
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CA2354543A1 (en) 1998-12-14 2000-06-22 Cellegy Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of anorectal disorders
JP2002532492A (ja) * 1998-12-17 2002-10-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー サイクリン−依存性キナーゼ、特にｃｄｋ２のインヒビターとしての４−アルケニル（及びアルキニル）オキシドール
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
CN1356872A (zh) * 1998-12-31 2002-07-03 苏根公司 调节蛋白激酶活性和用于癌症化疗的3－亚杂芳基－2－吲哚满酮化合物
ATE514676T1 (de) * 1999-11-24 2011-07-15 Sugen Inc Ionisierbare indolinon derivate und deren verwendung als ptk liganden
JP5004392B2 (ja) * 1999-12-22 2012-08-22 スージェン， インク． インドリノン化合物を用いてｃ−ｋｉｔチロシン蛋白質キナーゼ機能を調節する方法
MY130363A (en) * 2000-02-15 2007-06-29 Sugen Inc "pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors"
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
US6635640B2 (en) * 2000-06-30 2003-10-21 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
CA2432114A1 (en) * 2000-12-20 2002-07-18 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones

Also Published As

Publication number Publication date
CN1329390C (zh) 2007-08-01
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
US6573293B2 (en) 2003-06-03
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
NZ520640A (en) 2005-04-29
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
CR20120007A (es) 2012-02-24
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
IS6501A (is) 2002-08-13
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
NO325532B1 (no) 2008-06-09
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
CA2399358C (en) 2006-03-21
IL151127A0 (en) 2003-04-10
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
FR08C0002I1 (hu) 2008-03-21
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
US7572924B2 (en) 2009-08-11
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
IS2491B (is) 2009-01-15
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
CN1439005A (zh) 2003-08-27
AU3977001A (en) 2001-08-27
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
LU91407I9 (hu) 2018-12-28
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
BG107078A (bg) 2003-04-30
BR0108394A (pt) 2004-06-22
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
PL361209A1 (en) 2004-09-20
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
RS50444B (sr) 2010-03-02
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
AR034118A1 (es) 2004-02-04
BE2010C009I2 (hu) 2020-01-30
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
ME00415B (me) 2011-10-10
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
CR20120009A (es) 2012-02-07
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
TWI306860B (en) 2009-03-01
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
YU61402A (sh) 2005-07-19
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
US7125905B2 (en) 2006-10-24
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
PT1255752E (pt) 2007-10-17
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
NO20023831L (no) 2002-10-15
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
CY2008004I2 (el) 2009-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228979B1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AU2002247133B2 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US7053114B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
GB9A Succession in title

Owner name: PHARMACIA & UPJOHN COMPANY LLC, US

Free format text: FORMER OWNER(S): SUGEN, INC., US; PHARMACIA & UPJOHN CO., US

Owner name: SUGEN, INC., US

Free format text: FORMER OWNER(S): SUGEN, INC., US; PHARMACIA & UPJOHN CO., US

HC9A Change of name, address

Owner name: PHARMACIA & UPJOHN COMPANY LLC, US

Free format text: FORMER OWNER(S): SUGEN, INC., US; PHARMACIA & UPJOHN CO., US

Owner name: SUGEN, INC., US

Free format text: FORMER OWNER(S): SUGEN, INC., US; PHARMACIA & UPJOHN CO., US

AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB, OPTIONALLY IN THE FROM OF A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, INCLUDING THE L-MALATE SALT; REG. NO/DATE: EU/1/06/347/001-003 20060719

Spc suppl protection certif: S1300065

Filing date: 20131107

Expiry date: 20210215

Free format text: PRODUCT NAME: TOCERANIB, OPTIONALLY IN THE FORM OF A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT; REG. NO/DATE: EU/2/09/100/001-003 20090923

Spc suppl protection certif: S1300064

Filing date: 20131107

Expiry date: 20210215

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: TOCERANIB, OPTIONALLY IN THE FORM OF A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT; REG. NO/DATE: EU/2/09/100/001-003 20090923

Spc suppl protection certif: S1300064

Filing date: 20131107

Expiry date: 20210215

Extension date: 20240923

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB, OPTIONALLY IN THE FROM OF A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT, INCLUDING THE L-MALATE SALT; REG. NO/DATE: EU/1/06/347/001-003 20060719

Spc suppl protection certif: S1300065

Filing date: 20131107

Expiry date: 20210215

Extension date: 20210719