SA08290513B1 - إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية - Google Patents

إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية Download PDF

Info

Publication number
SA08290513B1
SA08290513B1 SA8290513A SA08290513A SA08290513B1 SA 08290513 B1 SA08290513 B1 SA 08290513B1 SA 8290513 A SA8290513 A SA 8290513A SA 08290513 A SA08290513 A SA 08290513A SA 08290513 B1 SA08290513 B1 SA 08290513B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
seq
enzyme
sequence
acyltransferase
milk
Prior art date
Application number
SA8290513A
Other languages
English (en)
Inventor
جورن بورش سوي
نيلز اريك لارسن
Original Assignee
دانسكو ايه / اس
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by دانسكو ايه / اس filed Critical دانسكو ايه / اس
Publication of SA08290513B1 publication Critical patent/SA08290513B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/1203—Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
    • A23C9/1216—Other enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A21D8/042—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
    • A23C19/0328—Enzymes other than milk clotting enzymes, e.g. lipase, beta-galactosidase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/068—Particular types of cheese
    • A23C19/0684—Soft uncured Italian cheeses, e.g. Mozarella, Ricotta, Pasta filata cheese; Other similar stretched cheeses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A23L15/25—Addition or treatment with microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/06—Enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)

Abstract

إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية Stabilising UHT milk الملخص15 طريقة لإستخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز Lipid Acyltransferase في صناعة لبن معالج عند درجة حرارة فائقة (UHT) Ultra High Temperature milk لتحسين الثبات، وخاصة الثبات طويل الأجل، و/ أو تحسين الإختلاف المستشعر perceptible sensory difference الذي يمكن إدراكه ويحس به نحو رائحة smell و/ أو مذاق اللبن و/ أو إختزال محتوى الكوليسترول cholesterol content و/ أو إزالة تقليل القشدة creaming في اللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة UHT milk. يتعلق الاختراع بطريقة لإنتاج اللبن (طويل الأجل) المعالج عند درجة حرارة فائقة حيث تتضمن هذه الطريقة خلط إنزيم اسيل ترانسيفيرايز lipid acyltransferase في اللبن (مشتملة على خطوة معالجة اللبن processing the milk لجعله لبن معالج عند درجة حرارة عالية UHT milk)، يفضل ان يكون انزيم آسيل ترانسيفيراز Lipid Acyltransferase فيها البولي ببتيد polypeptide يحصل عليه عن طريق تمييزه تسلسل متتالية جينية نيكليوتيدية expression of the nucleotide sequence معرفة الهوية بالاستنساخ الجيني كمتتالية رقم تعريفها 49 او تسلسل نيوكلوتيد nucleotide sequence تم فيه تحديد الهوية بنسبة اكبر من 70%, و/ او تم الحصول عليه من تمييز الحمض النووي nucleic acid الذي يهجن في ظل ظروف متوسطة الضبط للحصول على مسبار نووي nucleic probe يتضمن تسلسل نيوكلوتيدي nucleotide sequence كما يظهر في المتتالية برقم تعريف 49 SEQ ID No. 49, و/ او بولي ببتيد polypeptide فيه نشاط انزيم آسيل ترانسيفيراز acyltranferase يتضمن البولي ببتيد تسلسل حمض امينو amino acid sequence يظهر في المتتالية برقم تعريف 68 SEQ ID No. 68 او تسلسل حمض امينو amino acid sequence تم فيه تحديد الهوية identity بنسبة اكبر من 70%.

Description

إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية ‎Stabilising UHT milk‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الإختراع الحالي بطريقة لصناعة ألبان معالجة في درجة حرارة فائقة للغاية ‎Ultra‏ ‎High Temperature milk‏ (10111),_ وهى طريقة للمعالجة الإنزيمية ‎enzymatic‏ للألبان في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ وإستخدامات (إنزيم) ‎enzyme‏ لعلاج ألبان في درجات حرارة © عالية للغاية لإيجاد مميزات فنية جديدة وغير متوقعة. تعرف إنزيمات ‎enzymes‏ ”الأسيل ترانسفيريز“ الدهنية ‎Lipid Acyltransferases‏ بميزاتها في إستخدامات الأغذية. وجد أن (إنزيم) ” الأسيل ترانسفيريز” الدهني ‎Lipid Acyltransforase‏ لها نشاط خميرى ملموس في المواد الغذائية ولهذا النشاط تطبيقات مفيدة مدهشة في طرق تحضير المواد الغذائية. ‎٠‏ على سبيل المثال» يكشف الطلب الدولى 2004/064537 170 عن طريقة للحصول موضعيا على عامل إستحلاب ‎emulsifier‏ عن طريق إستخدام (إنزيم ‎(enzyme‏ ” الأسيل ترانسفيريز“ ‎Alls Lipid Acyltransferase‏ للدهن ومميزات ترافقها. يكشف طلب البراءة الدولية ‎PCT/IB2001/000558‏ تمييز ‎expression‏ (إنزيمات) أسيل ترانسفيريز ‎Acyltransferases‏ 0 في مناظرات مختلفة الاصول لخلايا ‎Jalal‏ ‎(heterologous) host cell Vo‏ وهى متضمنة هنا في هذا الوصف على سبيل المرجعية. تسمى المعالجة الحرارية ‎Heat treatment‏ في إنتاج منتجات طويلة الأجل بعملية 'تعقيم" ‎“sterilisation”‏ وهذا يعنى أن المنتج يعرض إلى معالجة حرارية قوية تثبط فيها كل الغ
‎v‏ ا الكائنات الحية الدقيقة المرتبطة وأغلب الإنزيمات ‎(enzymes)‏ المقاومة للحرارة. ولهذه المنتجات خواص ممتازة للحفظ ويمكن خزنها لفترات طويلة من الزمن عند درجات الحرارة المحيطة. ومن ثم يمكن لكثير من معامل الألبان أن توزع هذه المنتجات ضمن مسافات ‎J‏ وبذلك تجد أسواقاً جديدة. ‎٠‏ يستخدم كمثال طريقتان لإنتاج منتجات معقمة (وخلافاً لذلك معروفة كألبان طويلة الأجل يمكن تخزينها في درجات الحرارة المحيطة) ‎long-life milk for ambient storage’‏ ', بمعنى تعقيم وعائى ‎in-container sterilisation‏ أو معالجة عند درجات حرارة عالية للغاية ‎UHT‏ ‎Lendl treatment‏ تعبئة معقمة في عبوات ‎lead‏ المنتج من الضوء والأوكسجين الجوي. ويمكن تطبيق الإختراع الحالي على اللبن طويل الأجل المنتج بواسطة أى طريقة؛ على سبيل ‎٠‏ المثالء الألبان المعالجة عند درجات حرارة فائقة. : هناك العديد من المميزات للمنتج؛ وبائع التجزئة والمستهلك إذا لم يتطلب المنتج تبريداء؛ ويمكن خزنه لفترات طويلة من الزمن بدون أن يتلف. تسمى هذه المنتجات في الغالب منتجات معالجة في درجات حرارة فائقة ‎«UHT-products‏ ‏وخاصة الألبان ‎dalled)‏ في درجات عالية للغاية ‎milk‏ 0117 أو الألبان المنكهة والمعالجة ‎flavoured milks ٠٠‏ 11انا. يجب أن يكون للألبان المعرضة إلى المعالجة في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ جودة ‎Alle‏ ‏جداً. ومن الأهمية بمكانة خاصة أن لا تسبب البروتينات في اللبن الخام ‎raw milk‏ عدم ثبات حرارىء والتى يمكن أن تسبب عكس ذلك إذا كان اللبن الخام ‎raw milk‏ من نوع ردىء. ويكون اللبن غير مناسب لمعالجة في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ إذا كان رائبا ‎esour‏ له ‎٠‏ توازن املاح غير مناسب ‎wrong salt balance‏ و/أو يحتوى على بروتينات مصلية ‎serum‏ ‎proteins‏ عديدة؛ مثل ‎.colostrum Wl‏ ‎YAMA‏
¢ عندما يحفظ اللبن ‎milk‏ درجة حرارة عالية لفترة طويلة من 0« تتكون منتجات تفاعل كيميائى معينة؛ التى ينتج عنها تغير في اللون (لون بنى) ‎(browning)‏ وهى تكتسب أيضاً نكهة السكر المحروق؛ وأحياناً قدر كبير من الترسيب. وهذه العيوب يمكن تحاشيها كثيراً عن طريق المعالجة الحرارية ‎treatment‏ 1684 في درجة حرارة أعلى لفترة قصيرة من الزمن. ‎٠‏ ومن الأهمية بمكان أن تختار أنسب ائتلاف للفترات الزمنية/ درجات الحرارة للتمكين من إتلاف الابواغ ‎spore‏ بدرجة ملائمة؛ بينما يحافظ على عدم إتلاف اللبن بالحرارة وتقليل ذلك إلى أدنى حد. إتضح أنه عند تسخين اللبن ‎Ste)‏ تعقيمه عند = ‎PAL‏ لمدة 8- ‎٠١‏ ثانية)؛ يحدث تأثير معروف ك "ظاهرة سطام القشدة" ‎“cream plug phenomenon”‏ وقد تكون المعالجة ‎٠‏ الحرارية ‎Heat treatment‏ للألبان ضارة لثبات اللبن ‎milk‏ : يتكون اللبن أساسياً من الماء ‎cwater‏ والدهن ‎ofat‏ والبروتينات ‎proteins‏ وسكر اللبن (اللاكتوز ‎lactose (milk sugar)(‏ والمعادن (الأملاح) ‎minerals (salts)‏ ويحتوى اللبن أيضاً على مقادير صغيرة من المواد الأخرى مثل المصبغات ‎pigments‏ و (الإنزيمات) ‎cenzymes‏ والفيتامينات ‎vitamins‏ والدهون الفوسفاتية ‎phospholipids‏ (مواد بخواص أشبه ‎ve‏ بالدهون)؛ والإستيرولات ‎sterols‏ والغازات ‎-gases‏ ‏يكون لكثير من دهون ‎of milk Gall‏ 118109 المشكلة 'لدهن اللبن" ‎'milk fat’‏ تركيب وتكوين معقدان ‎chan‏ وحتى أكثر تعقيداً من أغلب الدهون الطبيعية الأخرى. ويتكون اللبن مثالياً من ث_لاثى جليسريدات ‎ctriglycerides‏ تشائى ‎٠‏ وأحادى جليسريدات ‎di, and‏ ‎«monoglycerides‏ وأحماض دهنية ‎cfatty acids‏ وإستيرولات ‎sterols‏ ومصبغات ‎Y.‏ صفراء (كاروتينويدات ‎carotenoids‏ ؛ وفيتامينات ل د ‎«a‏ و ك) ‎vitamins (A, D,‏ ‎.E and K)‏ وتشمل مكونات أخرى من دهون فوسفاتية ‎phospholipids‏ وبروتينات دهينة o
‎lipoproteins‏ وجليسريدات ‎cgycerides‏ وسيروبروزيدات ‎ccerebrosides‏ وبروتينات
‎«proteins‏ وأحماض نووية ‎cnucleic acids‏ وانزيمات ‎cenzymes‏ ومعادن ‎metals‏ وماء
‎-water
‏تكون الدهون الفوسفاتية (الفوسفاليبيدات) ‎Phospholipids‏ هى الفئة الأكثر نشاطاً ‎ial‏ ‏© طالما أنها تتميز بخاصية ‎"Ad go sal”‏ (نهايات موجبة وسالبة الشحنة في نفس الوقت). كلما
‏كان الوزن الجزيئى كبيراً نسبياء تكون ‎ALE‏ للذوبان بصعوبة؛ في الماء أو في الدهن. وفي
‏كلا السائلين تميلان إلى تكوين طبقات مزدوجة رقيقة ‎lamellar bilayers‏ ينظر إلى الدهون
‏الفوسفاتية ‎Phospholipids‏ للألبان عامة في إتصال مع البروتينات؛ وخاصة عندما تكون في
‏الغشاء (الأغشية) لمكورات دهنية مستخلصة من اللبن. الجزء الرئيسى المكون للدهون ‎٠‏ الفوسفاتية هو اللسيثينات ‎Lecithing‏ التى تكون بمثابة مكون نشيط السطح ذات خاصية
‏متوسطة محبة للماء ‎.moderate hydrophilicity‏ وهكذاء يمكن رؤية اللسيثين 1601010 كعامل
‏تعليق وتشتيت أو كعامل إستحلاب لمستحلبات دهن/ ‎emulsions ele‏ 0/17 وكذلك ماء/ دهن
‎-W/O emulsions
‏تتضمن الدهون الفوسفاتية ‎٠ ./8 Phospholipids‏ - 901.00 من دهن اللبن الطبيعى ‎natural‏ ‎milk fat ٠‏ والأنواع الرئيسية للدهون الفوسفاتية/ اللسيثين ‎phospholipids/lecithin‏ في اللبن
‏هى الفوسفاتيدل كولين ‎phosphatidylcholine‏ والفوسفاتيديل إيثانول أمين
‎.phosphatidylethanolamine
‏تكون الإستيرولات ‎Sterols‏ غير ‎ALG‏ للذوبان بدرجة عالية في الماء؛ وتوضح نشاطاً سطحيا
‎SLE‏ جداً. وهى تترافق بسهولة مع الدهون الفوسفاتية ‎phospholipids‏ وقد يعتبر ‎٠‏ الكوليسترول ‎cholesterol‏ بمثابة مكون غير مرغوب في اللبن عند إعتبار القيمة الغذائية
للبن. ويتضمن الكوليسترول ‎٠.7 cholesterol‏ - 960.4 من دهن اللبن الطبيعى ‎natural milk‏
-fat
تكشف براة الاختراع الاوروبية 863 532 1 ‎EP‏ عن إستخدام (انزيم للدهن الفوسفاتى)
cheese milk ‏أو مستقطر لبن الجبن‎ cheese milk ‏لمعالجة لبن الجبن‎ phospholipase fraction ©
يكشف )89-94 :)2001( 22 ‎Tanji et al (Res.
Bull.
Obihiro Univ.,‏ إستخدام (إنزيم)
(الليبيز) 5 لتحسين النكهة في زيت الزبدة ‎butter oil‏ عند 40 "م.
تكشف براة الاختراع اليابانية 57-189637 ‎TP‏ و 1057-189638 عن معالجة اللبن للحصول
على مشروبات لبن مخمر أو حمضى بإستخدام (إنزيمات) الدهن الفوسفاتى ‎phospholipases ٠‏ -- حيث تتم المعالجة الإنزيمية عند ‎٠‏ 46-7 تم.
‎Cuil gall‏ المختصرة للإختراع الحالي
‏تعرض الجوانب المختصرة للإختراع الحالي في عناصر الحماية في التوضيح الأتى.
‏لقد وجد بما يثير الدهشة أن ‎ocd‏ وخاصة الثبات طويل الأجل للألبان المعالجة ‎UHT milk‏
‏في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ يمكن تحسينها بدرجة ملموسة بتعريض اللبن أو جزء منه ‎1o‏ .خلال إنتاج لبن معالج ‎UHT milk‏ عند درجات حرارة عالية للغاية مع إنزيم ‎dal‏
‏ترانسفيزيز ‎Lipid Acyltransferase‏ كما عرف هنا في هذا الوصف.
‏يثير الدهشة أن المخترعين للإختراع ‎Jal‏ وجدوا أن المعالجة الإنزيمية ‎enzymatic‏
‎(Se treatment‏ إجراؤها بدون خطوة تسخين إضافية. ومن ثم؛ يمكن تحاشى التأثيرات
‏العكسية لتسخين اللبن مرتين بمعنى مرة واحدة للمعالجة الإنزيمية ‎enzymatic treatment‏ ثم ‎Y‏ .من جديد للمعالجة في درجات حرارة فائقة (10111). ولهذا مميزات عديدة كما وصف أدناه.
‏| الوصف العام للاختراع ‎YAAT‏ v ‏في درجات‎ UHT milk ‏طبقاً لجانب أولي للإختراع الحالي؛ تتاح طريقة لإنتاج لبن معالج‎
Lipid ‏حرارة عالية للغاية» حيث تتضمن فيها الطريقة المذكورة خلط إنزيم آسيل ترانسفيريز‎ ‏ولبن أو جزئه؛ ومعالجة اللبن المعالج بالإنزيم عن طريق معالجة حرارية‎ Acyliransferase ‏في درجات‎ UHT milk ‏في درجات حرارة مرتفعة لإنتاج لبن معالج‎ ultra-heat treatment (UHT) ‏حرارة فائقة‎ © ‏بمثابة‎ “Ultra-heat treatment (UHT)” "(UHT) ‏تكون "المعالجة في درجات حرارة فائقة‎ ‏درجة الحرارة لبعضة‎ led ‏وتثبت‎ م٠5٠0‎ IY ‏طريقة حيث يسخن فيها اللبن إلى حوالى‎ ‏ثوانى؛ يفضل لمدة ثانيتين . ويستخدم مصطلحاً 'معالجة في درجات‎ -١ ‏ثوانى؛ مثل‎
Alle ‏درجة حرارة‎ Saale J's “ultra-heat treatment” "(UHT) ‏حرارة فائقة‎ ‏كمترادفين هنا في هذا الوصف.‎ “high temperature treatment” ٠٠ ‏كما‎ “ultra-heat treatment” ‏حرارية فائقة الحرارة‎ dallas’ ‏في أحد تجسيدات الإختراع؛‎ ‏في‎ sterilization ‏إستخدم هنا في هذا الوصف ليعنى أنه يتضمن ويشتمل على كلا من التعقيم‎ ‏وعاء و/أو معالجة في درجة حرارة فائقة للغاية يتبعها تغليف في ظروف معقمة في عبوات‎ ٠ atmospheric oxygen ‏تحمى المنتج ضد الضوء والأوكسجين الجوي‎ ‏سوف يدرك الخبير في هذا المجال بإن توافق الوقت المستغرق والحرارة في المعالجة‎ Vo ‏سوف يحدد بناء على المنتج‎ laa ‏عند درجات حرارة عالية‎ UHT heat treatment ‏الحرارية‎ ‏المراد معالجته والذي قد يتباين إلى درجة معينة.‎ buffer ‏يرسل اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة إلى صهريج معقم لإيجاد وسط منظم‎ ‏قبل ملىء العبوات.‎ ‏م17‎ "ْ
A
‏تجرى التعبئة غالباً في جو معقم حيث تشطف ماكينة التعبئة عند درجات حرارة عالية للغاية‎ ‏وكذلك تحفظ المساحة داخل رؤؤس التعبثة مغمورة‎ nitrogen ‏العبوة بالنيتروجين‎ ‏لإزالة أى تلوث هوائى.‎ nitrogen ‏بالنيتروجين‎ يتاح طبقاً لجاب 36 للإختراع الحالي؛ طريقة لإستخدام (إنزيم) آسيل ترانسفيريز ‎Lipid‏ ‎Acyltransferase ©‏ في صناعة لبن معالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ لتحسين الثبات؛ وخاصة الثبات طويل الأجل للبن المعالج في درجات حرارة عالية للغاية ‎UHT milk‏ يعنى المصطلح 'تحسين الثبات" ‎“improving the stability”‏ كما إستخدم هنا في هذا الوصف أنه يوجد إختزال في مقدار القشدة ‎creaming‏ و/أو الترسيب ‎sedimentation‏ و/أو التعكتل ‎«flocculation‏ و/أو فصل الأطوار ‎phase separation‏ بعد ‎Adee‏ التخزين (ويفضل بعد ‎٠‏ التخزين لمدة ‎YE‏ ساعة على الأقل). وقد يتم التخزين بطريقة مناسبة عند درجة حرارة بين ‏حوالى دم و8 7ثم. ‏في واحد من التجسيدات؛ يعنى المصطلح 'تحسين ‎“improving the stability” "Lal‏ كما ‏إستخدم هنا في هذا الوصف أن ثمة إختزال في مدار القشدة دون تكوين طبقة رواسب تتبع ‏التخزين (ويفضل بعد التخزين لمدة 7 ساعة على الأقل). وقد تتم عملية التخزين بطريقة ‎Ve‏ مناسبة عند درجة حرارة بين حوالى 8نم و ‎V0‏ ‏يمكن ان تقاس كمية القشدة ‎Creaming‏ بشكل عملي بواسطة طريقة ‎Turbiscan‏ (كما كشف ‏هنا في هذا الوصف في القسم الخاص بالأمثلة) و/أو موضوعيا بواسطة إختبار الإجهاد ‎LS) Stress Test‏ كشف هنا في القسم الخاص بالأمثلة). ‏يمكن ان يقاس التكتل ‎Flocculation’‏ " بشكل عملي بواسطة طريقة 'توربسكان" ‎Turbiscan‏ ‏© (كما كشف هنا في هذا الوصف في القسم الخاص بالأمثلة) و/أو موضوعيا بواسطة إختبار ‏الإجهاد ‎Stress Test‏ (كما كشف هنا في القسم الخاص بالأمثلة) .
يمكن ان يقاس الترسيب «©56010601800بواسطة طريقة 'توربسكان" ‎Turbiscan‏ (كما كشف هنا في هذا الوصف في القسم الخاص بالأمثلة). يمكن ان يقاس فصل الأطوار ‎Phase separation‏ بالنظر أو بواسطة طريقة 'توربسكان" ‎Turbiscan‏ (كما كشف هنا في هذا الوصف في ‎andl‏ الخاص بالأمثلة). 0 يعنى المصطلح 'تحسين الثبات طويل ‎“improving the long term stability” "dead!‏ كما إستخدم هنا في هذا الوصف أنه يوجد إختزال في مقدار القشدة ‎creaming‏ (يفضل بدون تكوين طبقة من الرواسب) و/أو تكتيل و/أو فصل الأطوار يتبعه تخزين خلال فترة ممتدة من الزمن (يفضل بعد التخزين لمدة حوالى ‎VY -١‏ شهراً؛ وأكثر تفضيلاً بعد التخزين لمدة حوالى ‎١7-7‏ شهراً؛ يفضل كذلك بعد التخزين لمدة تصل إلى حوالى ستة ‎el‏ يفضل ‎٠‏ أيضاً بعد التخزين لمدة تصل إلى حتى حوالى ‎١١‏ شهراً؛ وأكثر تفضيلاً بعد تخزين لمدة 6 أشهر على الأقل). وقد يتم التخزين في درجة حرارة بين حوالى دم ود #م. يتاح طبقاً لتجسيد ثالث للإختراع الحالي؛ طريقة لإستخدام إنزيم آسيل ترانسفيريز ‎Lipid‏ ‎Acyltransferase‏ .في صناعة لبن معالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ لتحسين الفرق في ملموس الحسية ‎perceptible sensory difference‏ للألبان المعالجة في درجات حرارة عالية جداً ‎٠‏ وقد الفرق في ملموس الحسية ‎perceptible sensory difference‏ بصفة مناسبة للألبان المعالجة في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ بإستخدام "الإختبار المثتلث" ‎“triangle test”‏ في هذا الوصف أدناه. يشتمل في أحد الجوانب مصطلح الفرق في ملموس الحسية ‎perceptible sensory difference‏ على رائحة و/أو مذاق محسن؛ على سبيل المثال مذاق محسن عن طبخة و/أو رائحة عطرية ‎Ye‏ و/أو مذاق مختزل لزناخة الطعم والرائحة. ا 7
A
تتاح طريقة طبقاً لجانب رابع للإختراع الحالي؛ إستخدام إنزيم ” الأسيل ترانسفيريز” ‎Lipid‏ ‎Acyltransferase‏ في صناعة لبن معالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ لإختزال محتوى ‏الكوليسترول ‎cholesterol‏ في لبن معالج في درجات حرارة عالية ‎Jas‏ ‏يمكن قياس الإختزال في كمية الكوليسترول ‎cholesterol‏ عن طريق التحليل الكروماتوجرافي © للطبقة الرقيقة ‎Thin Layer Chromatography (TLC)‏ و/أو التحليل الكروماتو غرافي الغازي ‎.Chromatography (GLC) Gas Liquid ‏يتاح إستخدام,طبقاً لجانب خامس للإختراع الحالي؛ إنزيم آسيل ترانسفيزيز ‎Lipid‏ ‎Acyltransferase‏ في صناعة لبن معالج في درجات حرارة عالية ‎las‏ لإزالة أو إختزال ‏كمية القشدة (يفضل بدون تكوين طبقة رواسب) في اللبن المعالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT) ٠‏ ‏يعنى التحسن في الثبات؛ وخاصة الثبات طويل الأجل و/أو التحسين في فرق ملموس الحسية ‏و/أو التحسين في الرائحة و/أو المذاق و/أو الإختزال في محتوى الكوليسترول و/أو الإختزال ‏في كمية القشدة (يفضل بدون تكوين طبقة رواسب) لللبن المعالج في درجة حرارة عالية جداً ‏تحسيناً عند مقارنة اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة إنزيمياً (معالج بإنزيمات طبقاً ‎٠‏ للإختراع الحالي). بلبن معالج عند درجات حرارة عالية جداً الذى لم يعالج إنزيمياً و/أو ‏مقارناً بلبن معالج في درجات حرارة عالية الذى قد عولج بإنزيم فوسفولايبيز ‎Ld)‏ بجود ‏إنزيم فوسفولايبيز -أ١ ‎phospholipase Al‏ المصنفة ك 3.1.1.32 .2.0 أو فوسؤوليبيز ‎Yi‏ ‏2ه ‎phospholipase‏ المصنفة 20.3.1.1.4). ‏وبصفة مناسبة؛ فإن التحسين في الثبات؛ وخاصة الثبات طويل الأجل و/أو التحسين في فرق ‎YS‏ ملموس الحسية و/أو التحسن في الرائحة و/أو المذاق و/أو الإختزال في محتوى الكوليسترول ‎cholesterol‏ و/أو الإختزال في كمية القشدة (يفضل بدون تكوين طبقة رواسب) قد يعنى لبن ‎YAAT
‎١ |‏ معالج في درجات حرارة فائقة (0117) تحسيناً عندما يقارن اللبن المعالج عند درجات حرارة عالية جداً في وجود إنزيمات (معالجة بإنزيمات طبقاً للإختراع الحالي بإستعمال لبن معالج (إنزيمياً) ‎(enzymatically treated UHT milk‏ عند درجات حرارة فائقة والذى عولج بواحد أو أكثر من الإنزيمات الدهون الفوسفاتية ‎phospholipases‏ إنزيم الدهون الفوسفاتية أ١‏ ‎Phospholipase Al °‏ من 'فيوساريوم اوكسيسبورم (ليبوبان-ف ماركة تجارية مسجلة) ‎Fusarium oxysporum (Lipopan F™)‏ و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية من فيوساريوم هيتيروسبورم ‎Fusarium heterosporum‏ و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية أ ‎Phospholipase‏ ‎Al‏ من جنس وفصيلة فيوساريوم فنيناتوم (ييلدماكس- إسم تجارى مسجل) ‎Fusarium‏ ‎venenatum(YieldMax™)‏ و/أو إنزيم الفوسفاتية من أسبرجيللوس نيجر ‎Aspergillus‏ ‎niger ٠‏ و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية ‎Phospholipase A2 Yi‏ من ستربتوميسيس فيولاسيورابر ض ‎Streptomyces violaceoruber‏ و/أو إنتزيم الدهون الفوسفاتية أ ؟ 2ه ‎Phospholipase‏ من الغدة البنكرياسية و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية ‎Phospholipase A2 YT‏ من تيوبر بورشى
‎. Tuber borchii
‏التحسن في الثبات؛ وخاصة الثبات طويل الأجل و/أو التحسين في فرق ملموس الحسية و/أو
‎١‏ التحسين في الرائحة و/أو المذاق و/أو الإختزال في محتوى الكوليسترول و/أو الإختزال في كمية القشدة (يفضل بدون تكوين طبقة رواسب) لللبن المعالج في درجة حرارة عالية جدا يمكن ان يكون تحسناً عند مقارنة اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة معالج إنزيمياً بلبن ‎CC‏ ‏معالج عند درجات حرارة عالية ‎las‏ والذى لم يعالج إنزيمياً و/أو مقارناً بلبن معالج في درجات حرارة ‎Alle‏ الذى قد عولج بإنزيم فوسفولايبيز -أ١‏ من 'فيوساريوم اوكسيسبورم
‎Fusarium oxysporum (Lipopan FT™) ‏(ليبوبان-ف ماركة تجارية مسجلة)‎ ٠
‎"7 0
VY
يفضل ان يخلط إنزيم آسيل ترانسفيريز ‎Lipid Acyltransferase‏ مع اللبن أو جزء منه قبل أن يعتريه معالجة حرارية عالية ‎.high temperature treatment‏ وبمعنى آخر قد يضاف إنزيم ” الأسيل ترانسفيريز” ‎Lipid Acyltransferase‏ إلى اللبن الخام أو جزء منه؛ ويعترى اللبن الخام المعالج بالإنزيم أو جزء منه معالجة حرارية في درجة حرارة عالية جداً ‎ultraheat‏ ‎treatment ©‏ (مما ينتج عنه لبن معالج أو جزء منه في درجة حرارة فائقة. في واحد من التجسيدات من ضمن الإختراع ‎call‏ يتيح فيها الإختراع الحالي طريقة للحصول على لبن معالج ‎milk‏ 11117 في درجات حرارة مرتفعة ‎Al‏ حيث تتضمن الطريقة المذكورة خلط إنزيم أسيل ترانسفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ ولبن معالج في درجات حرارة مرتفعة جداً أو جزء منه. وبصفة ملائمة وفي بعض التجسيدات قد يضاف ‎0٠‏ إنزيم آسيل ترانسفيراز ‎Lipid Acyliransferase‏ إلى اللبن أو جزء منه بعد معالجته في درجة حرارة مرتفعة جداً. يفضل ان يضاف إنزيم ‎dual‏ ترانسفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ إلى اللبن ويوضع في حضانة معه في درجة حرارة أقل من حوالى ١٠7*م؛‏ يفضل أقل من حوالى ١٠ثم.‏ يفضل ‎La‏ يضاف إنزيم آسيل ترانسفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ ال إلى اللبن ويتم وضعه ‎١‏ .في حضانة معه في درجة حرارة ما بين حوالى ١"م‏ وحوالى ١٠م‏ يفضل بين حوالى ثم وحوالى 7*م؛ وأكثر تفضيلاً حوالى 220 يفضل ان يكون زمن الحضن فعالاً لضمان وجود 965 على الأقل من نشاط إنزيم الترانسفيراز» يفضل ‎96٠0‏ على الأقل من نشاط الإنزيم المذكور؛ يفضل أيضاً 10 اك داك تاك تاف امك 9670 ‎Pte‏ .65 أو 9660 أو 9075 من نشاط © إنزيم ال“ الأسيل ترانسفيريز“.
VY cholesterol ‏إستر الكوليسترول‎ molar amount ‏يقاس النشاط الإنزيمى بواسطة مقدار مولات‎ phospholipids ‏من الدهون الفوسفاتية‎ acyl ‏المشكل عن طريق نقل مجموعات الأسيل‎ ©: ‏في اللبن إلى الكوليسترول بالنسبة إلى مقدار‎ triacylglycerides ‏او تراياسلجليسيرايد‎ ‏الكوليسترول المتواجد في الاصل.‎ ‏عدد‎ —(t) cholesterol ester ‏نشاط إنزيم الترانسفيراز- (عدد المولات/ لتر إستر كوليستزول‎ © ‏عدد المولات/ لتر‎ ٠٠١ X ‏(ه)‎ cholesterol ester ‏المولات/ لتر إبستر كوليسترول‎ (0) ‏كوليسترول‎ ‏حيث:‎ ‏مقدار إستر كوليسترول نسبة إلى الزمن‎ =(t) cholesterol ester ‏إستر كوليسترول‎ 0 ‏(ه)- مقدار إستر كوليسترول نسبة إلى الزمن‎ cholesterol ester ‏إستر كوليسترول‎ 0) (0) ‏مقدار الكوليسترول في اللبن نسبة إلى الزمن‎ =(0) Cholesterol ‏كوليسترول‎ ‏عن طريق‎ cholesterol ester ‏وإستر الكوليسترول‎ Cholesterol ‏ويعين الكوليسترول‎
GLC ‏التحليل الكروماتوغرافي للسائل الغازى‎ ١ : Gas Chromatography ‏التحليل الكروماتو غرافي للغاز‎ ‏لقيساس الكوليسترول‎ Gas Chromatography ‏يستخدم التحليل الكروماتوغرافي للغاز‎ ‏في عينات اللبن.‎ cholesterol-ester ‏وإستر الكوليسترول‎ cholesterol ‏ويستخدم نظام التحليل الكروماتوغرافي للغاز كالأتى:‎ ‏للتحليل الكروماتوغرافي للغاز‎ Perkin Elmer Autosystem 9000 ‏المر"‎ (Su ‏جهاز‎ Y. ١ ‏الشعرى مزود بعمود سيليكا مصهورة من نوع 17001 7.0ام 75 مم‎
١ "(CP Sil 8 phenyl-methyl-silicone ‏ميكرون سمك الداخلى 966 فنيل- ميثيل سيليكون‎
CB from Chrompack)
Helium ‏الهليوم‎ :Carrier gas ‏الغاز الناقل‎ 00 ‏(درجة الحرارة الإبتدائية‎ (PSSI) cold split injection ‏وسيلة الحقن: حقن مجزاً‎ ‏ميكرو لتر.‎ ١ ٠ ‏هه مسخنة إلى 7/85ثم)؛ الحجم‎ ‏7م‎ 15 FID ‏الكاشف‎ ‏ا‎ Vo (Tet) [Fe ‏برنامج الفرن (مستخدم منذ‎
Yoo YA. 4. a ‏حرارة الفرن؛‎ Ax ٠١ ‏صفر‎ ١ ‏؛ دقيقة‎ Isothermal ‏فترة التشبع الحرارى‎ ‏ض‎ ¢ Yo ‏سرعة التسخين؛ م*/ دقيقة‎ ٠
Preparation of milk samples for GC ‏تحضير عينات اللبن للتحليل الكروماتو غرافي للغاز‎ analysis ‏بإستخدام الإيثانول‎ Mojonnier AOAC 989.05 ‏تستخلص دهون اللبن طبقاً لطريقة‎ (methyl-tert-butyl 141188 (dy ‏بوتيل‎ = Ab ‏و (ميثيل-‎ (NH;) ‏والامونيا‎ cethanol ‏يعاد ذوبان الجزء المستقطر الدهنى في مخلوط الهبتان/‎ pecther ‏وبارا - إيثير‎ ether) e ‏المحتوى على ديكان خماسى 1601806080 كمادة قياسية‎ )١ :7( heptane/pyridine ‏البيريدين‎ ‎GC ‏داخلية ويقاس محتوى الكوليسترول بواسطة التحليل الكروماتوغرافي للغاز‎ ‏كمادة معيارية‎ Squalane ‏لتحضير عينات لقياسات الكوليسترول- الإسترء يضاف "سكوالين"‎ ‏ويركز‎ Hexan ‏داخلية إضافية. ويعاد ذوبان الجزء المتستقطر الدهنى في الهكسان‎ ‏انها 8030 وغسيل بالهكسان «11»8. ويعاد‎ NHy ‏الكوليسترول- الإسترات بإستخدام عمود‎ ٠ ‏و‎
Ve
ذوبان العينات في مخلوط الهبتان/ البيريدين (7: ‎)١‏ ويقاس الكوليسترول- الأسترات بواسطة
التحليل الغازى ‎sles SI‏ غرافي.
يفضل ان يكون هناك تلام درجة الحرارة وفترة الحضن فعالاً لضمان وجود %0 على الأقل
من نشاط إنزيم الترانسفيراز ‎transferase activity‏ ؛ يفضل ‎96٠١‏ على الأقل من نشاط إنزيم الترانسفيراز» وعلى الأقل 36150 ١٠67ى ‎FY YA FY %hYe‏ نلوك ممق
© أو 9675 من نشاط إنزيم الترانسفيراز.
من المناسب أن تكون فترة الحضن ‎incubation time‏ من © دقائق حتى ‎٠١‏ ساعة؛ ومن
المناسب أيضاً أن فترة الحضن قد تتراوح من £0 دقيقة إلى ‎Fo‏ ساعة.
في أحد التجسيدات؛ قد تتراوح فترة الحضن ‎incubation time‏ من حوالى ‎٠١‏ ساعات إلى ‎٠‏ حوالى ‎“٠‏ ساعة؛ ويفضل من حوالى ‎١١5‏ إلى ‎Yo‏ ساعة؛ وأكثر تفضيلاً حوالى ‎Ye‏ ساعة.
في تجسيد مفضل؛ تحدث المعالجة الإنزيمية عند حوالى "م إلى حوالى ١٠م‏ (يفضل
حوالى 00( لمدة ‎٠١‏ ساعات على ‎(J)‏ يفضل بين حوالى ‎٠١‏ و75 ساعة؛ وأكثر تفضيلاً
حوالى ‎٠١‏ ساعة.
يؤدى إستخدام درجات حرارة منخفضة مع فترات تحضين فعالة إلى مميزات ملموسة في ‎٠‏ الإختراع الحالي.
يفضل في طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي؛ أن لا يسخن اللبن (لبن مسخن إلى درجة
حرارة فائقة ‎(UHT milk‏ أثناء المعالجة الإنزيمية.
يفضل؛ في طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي ان يسخن اللبن مرة واحدة فقط (عندما
يعالج عند درجة حرارة فائقة- لاعطاء لبن- مسخن عند درجة حرارة عالية ‎٠ (laa‏ ومن ثم؛ ‎٠‏ يفضل لا يعترى اللبن ‎Je)‏ سبيل المثال اللبن المسخن عند درجة حرارة فائقة) في الإختراع
الحالي أكثر من خطوة تسخين واحدة أثناء إنتاجه.
ْم 77"
Vi ‏يمكن ان يتضمن في بعض الجوانب؛ إنزيم آسيل ترانسفيريز المستخدم في أى من الطرق‎ .GANDY ‏و/أو لحافز‎ GDSx ‏و/أو إستخدامات الإختراع الحالي كحافز‎ ‏ض يفضل ان يتميز إنزيم الآسيل ترانسفيراز بأنه يمتلك نشاط آسيل ترانسفيراز والذى يتضمن‎ ‏تكون واحد أو أكثر من بقايا‎ X ‏حيث‎ camino acid ‏لمتتالية حمض الأمينو‎ GDSx ils ‏التالية:‎ amino acid ‏حمض الأمين‎ ©
LLAV,LF,Y,H 9. 1. ‏م آل ا‎ ‏وبصفة مناسبة؛ فإن متتالية النيوكليوتايد التى تشفر إنزيم آسيل ترانسفيراز المستخدم في أى‎ ‏من الطرق و/أو إستخدمات الإختراع الحالي أو المحتمل إستخدامها؛ والمفضل إستخدامها يتم‎ ‏عليها من كائن حى دقيق واحد أو أكثر من الأجناس الأتية: آيروماناس‎ asl) «Saccharomyces ‏ساكاروميسيس‎ ¢ (Streptomyces ‏ستربتوميسيس‎ cAeromonas ٠ «Streptococcus ‏ستربتوكوكس‎ «Mycobacterium ‏مايكوباكتريوم‎ (Lactococcus ‏لاكتوكوكس‎ ‎«Bacillus ‏باسيلس‎ <Desulfitobacterium ‏ديسلفيتو باكتريوم‎ Lactobacillus ‏لاكتوباسيلوس‎ ‏سلفولوبس‎ (Xylella ‏زيليللا‎ ¢Vibrionaceae ‏فيبريوناشى‎ «Campylobacter ‏كامبيلوباكتر‎ ‎«Schizosaccharomyces ‏شيزوساكروميسيس‎ <Aspergillus ‏أسبرجيللوس‎ «Sulfolobus ‏رالستونيا‎ ¢Mesorhizobium ‏ميزوريزوبيوم‎ «Neisseria ‏نيسيريا‎ Listeria ‏ليستريا‎ ٠٠ ‏يفضل الحصول على إنزيم‎ (Candida ‏وكانديدا‎ «Xanthomonas ‏زانثوموناس‎ «Ralstonia ‏آسيل ترانسفيراز ان يكون ممكنا الحصول عليه, ويفضل ان يتم الحصول عليه من كائن حى‎
Aeromonas (li sa gl ‏من جنس‎ ‏في بعض جوانب الإختراع الحالي؛ تشيفر متتالية النيوكليوتيد إنزيم آسيل ترانسفيراز‎ ‏المستخدم في أى واحدة من الطرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي التى تشيفر إنزيم آسيل‎ © ‏في وضع مناظر ل 11-80 في‎ aspartic acid ‏ترانسفيراز يتضمن راكد من حمض أسبارتيك‎
Vv ‏متتالية حمض الأمينو لإنزيم آسيل ترانسفيراز لجنس وفصيلة آيروموناس هيدروفيلا‎
Yo ‏الموضح كمتتالية رقمنها التعريفي‎ lipid acyltransferase ‏ترانسفيراز‎ Jal ‏في بعض جوانب الإختراع الحالي « يكون إنزيم‎ ‏المستخدم في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي عبارة عن إنزيم ترانسفيراز‎ ‏في وضع مناظر‎ aspartic acid ‏الذى يتضمن بقايا لحمض أسبارتيك‎ lipid acyltransferase © ‏رقم 80 في متتالية حمض الأمينو لإنزيم آسيل ترانسفيراز‎ nitrogen ‏لذرة النيتروجين‎ ‏الموضح كمتتالية‎ Aeromonas hydrophila ‏المنتمى إلى جنس وفصيلة إيروموناس هيدروفيلا‎
SEQ ID No. 35 78 ‏رقم تعريفها‎ ‏بالإضافة إلى أو بديلاً عن متتالية النيوكليوتيد التى تعمل على شيفرة إنزيم آسيل ترانسفيراز‎ ‏المستخدم في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي والتى قد تتضمن متتالية حمض‎ ٠ ‏لها‎ sud ‏أو متتالية حمض‎ (SEQ ID No. VV ‏الأمينو الموضحة كمتتالية رقمها التعريفي‎ ‏أو أكثر من مثيلها. وبصفة مناسبة؛ فإن متتالية النيوكليوتيد التى تعمل على شيفرة‎ 678 ‏إنزيم آسيل ترانسفيراز تقوم بالتالى بشيفرة إنزيم آسيل ترانسفيراز الذى قد يتضمن متتالية‎ . SEQID No. 3 ‏حمض الأمينو الموضح كمتتالية رقمها التعريفي‎ ‏عن متتالية النيوكليوتيد التى تعمل على تشفير إنزيم آسيل ترانسفيراز‎ Sy ‏بالإضافة إلى أو‎ vo ‏المستخدم في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي مما يعمل على تشفير إنزيم‎ ‏آسيل ترانسفيراز الذى قد يتضمن متتالية حمض الأمينو الموضح كمتتالية رقمها التعريفي‎ ‏التى لها 96785 أو أكثر من مثيلها. وبصفة‎ sid ‏أو متتالية حمض‎ SEQ ID No. TA ‏الترانسفيراز الذى قد يتضمن‎ dad ‏مناسبة؛ تعمل متتالية النيوكليوتيد على تشفير إنزيم‎ .5850910 No. TA ‏متثتالية حمض الأمينو الموضحة كمتتالية تعريفية رقم‎ 7 ‏الي‎ .
YA
‏في أحد تضمينات إنزيم الترانسفيراز المستخدم في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع‎
SEQ ID No. ‏يتسنى للإختراع الحالي متتالية حمض أمينو موضح في متتالية تعريفية‎ Mad ‏أو ذات متتالية حمض أمينو له على الأقل 9675 من تعريفها يفضل‎ (RA) ‏أو‎ )١١( ‏رقم‎ ‏وكذلك 9692 على الأقل؛ والأكثر تفضيلاً‎ (JWT ‏يفضل أيضاً 9688 على‎ (JS) ‏على‎ 0 ‏على الأقل من تعريفها.‎ 9658 ٠ ‏هنا في هذا الوصف أى‎ “UHT milk” ‏معالج في درجة حرارة فائقة"‎ olf ‏يعنى المصطلح‎ ‏لبن يخزن لاجل طويل للتخزين عند درجة الحرارة المحيطة. ويعنى المصطلح "لبن معالج‎ ‏أى لبن قد عولج حرارياً لجعله لبن طويل‎ “10147 mille” ‏عند درجة حرارة عالية للغاية"‎ ‏الأجل ويشتمل هذا على منتجات منكهة وغير منكهة.‎ denaturing the ‏قد تتضمن بصفة مناسبة الطريقة خطوة إزالة الإنزيم و/أو حيود الإنزيم‎ ٠ ‏عن طبيعته.‎ enzyme ‏قد يكون الإنزيم المستخدم في الإختراع الحالي بصفة مناسبة عبارة عن إنزيم ساكن.‎ ‏يكون منتج اللبن طبقاً للإختراع الحالي عبارة عن لبن معالج في درجة حرارة مرتفعة جداً‎ ‏أو لبن منكه عولج في درجة حرارة فائقة.‎ UHT milk ‏لا يراد هنا في هذا الوصف تغطية لبن الجبن (بمعنى لبن ليس من النوع المعالج عند درجات‎ ve ‏حرارة مرتفعة والذى يستخدم بالتالى في إعداد الجبن) و/أو الجبن أو منتجات الأجبان‎ .17117 ‏المنتجة من لبن ليس بلبن (معالج عند درجات حرارة فائقة)‎
ADVANTAGES ‏المميزات‎ ‏أحدى مزايا هذا الإختراع هى الثبات؛ وخاصة الثبات طويل الأجل لألبان معالجة في درجات‎ ‏حرارة عالية والتى بالتالى يمكن تحسينها بدرجة ملموسة.‎ Yo ‏لغلا‎
من الميزات الاخرى أن التأثير الطبيعى غير المرغوب التكوين قشدة' ‎creaming‏ للبن المعالج
عند درجة حرارة فائقة سوف يمنع و/أو يقل بالمقارنة باللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة
والمعالج في نفس الوقت إنزيمياً و/أو بالمقارنة باللين المعالج عند درجة حرارة فائقة الذى
أثناء تصنيعه قد عولج بإنزيم فوسفوليبيز ‎phospholipase‏ (وخاصة إما إنزيم فوسفليبيز أ-١‏ ‎phospholipase Al ©‏ المصنف فئوياً ك 3.1.1.32 ‎E.C.‏ أو فوسفوليبيز أ-7 ‎phospholipase‏
2ه المصنف ك 20.3.1.1.4 (أقرب منه إلى إنزيم آسيل ترانسفيراز_ كما وصف هنا).
يعنى مصطلح "تكوين قشدة" ‎“creaming”‏ صعود غير مرغوب لكريات الدهن إلى قمة اللبن
(مثلاً في الوعاء) خلال فترة من الزمن.
من مزايا للإختراع الحالي أيضاً إختزال التوتر السمطحى ‎surface tension‏ في اللبن المعالج
‎UHT milk ٠‏ عند درجة حرارة فائقة طبقاً للإختراع الحالي مقارنة باللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة ولكنه في نفس الوقت لم يعالج إنزيمياً و/أو بالمقارنة بلبن معالج عند درجة حرارة فائقة الذى أثناء تصنيعه قد عولج بإنزيم فوسفليبيز ‎phospholipase‏ (وخاصة ‎Ld‏ أن يكون فوسفوليبيز أ-11ه ‎phospholipase‏ مصنف ك 3.1.1.32 .2.0 أو إنزيم فوسفوليبيز ‎Y=‏ مصنف ك 20.3.1.1.4 (أقرب منه إلى إنزيم آسيل ترانفسيراز كما وصف هنا).
‏10 يمكن ان تكون ميزة أخرى للإختراع الحالي تتعلق بإختزال أو تقليل الخطأ الذى قد يقع في مصنع الألبان الذى يتبنى تقنية معالجة الألبان في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ (على سبيل المثال خلال شبكة أنابيب المصنع و/أو الأسطح الفولاذية) عند إستخدام لبن معالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ طبقاً للإختراع الحالي مقارنة بلبن معالج في درجات حرارة فائقة (0117) الذى في نفس الوقت لم يعالج إنزيمياً و/أو بالمقارنة بلبن معالج في درجة
‏.¥ حرارة فائقة الذى أثناء تصنيعه يكون قد عولج بإنزيم فوسفوليبيز ‎phospholipase‏ (وخاصة إما بإستخدام إنزيم فوسفوليبيز أ-١ ‎phospholipase Al‏ مصنف ك 3.1.1.32 .5.0 أو إنزيم
‎YAAT
فوسفوليبيز ‎phospholipase A2 Y=‏ مصنف ‎EC.3.1.1.4 —S‏ (أقرب منه إلى إستخدام إتزيم آسيل ترانسفيراز هنا). يمكن ان تكون ميزة أخرى للإختراع الحالي كامنة في إختزال الأحماض الدهنية الحرة في اللبن المعالج في درجات حرارة فائقة (0117) ‎las‏ للإختراع الحالي مقارنة بلبن معالج في © درجة حرارة فائقة الذى أثناء تصنيعه يكون قد عولج بإنزيم فوسفوليبيز (وخاصة إما بإستخدام إنزيم فوسفوليبيز أ-1 ‎phospholipase Al‏ مصنف ‎E.C. 3.1.1.32 —S‏ أو إنزيم فوسفوليبيز ‎phospholipase A2 Y=‏ مصنف ‎—S‏ 20.3.1.1.4 (أقرب منه إلى إستخدام إنزيم اسيل ترانسفيراز ) كما وصف هنا. ومما يثير الدهشة أكثر أن المخترعين للإختراع الحالي قد وجدوا أن المعالجة ‎٠‏ الإنزيمية يمكن إجراءها بدون خطوة تسخين إضافية. وخاصة أن المعالجة الإنزيمية بإستخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز طبقاً للإختراع الحالي قد تجرى في درجات حرارة منخفضة حوالى ‎p00)‏ يفضل عند حوالى ١-١٠”م؛‏ يفضل بين حوالى © وحوالى ‎oY‏ وأكثر تفضيلاً حوالى ©"م. ومن ثم؛ يمكن تحاشى التأثيرات السلبية لتسخين اللبن مرتين؛ بمعنى للمعالجة بالتسخين في درجة حرارة فائقة؛ ومن جديد للمعالجة الإنزيمية. ولهذا مميزات عديدة تشتمل ‎Ye‏ على: أ) أن الطريقة تكون أكثر إقتصاداً؛ وهي ميزة مهمة لمنتجى الألبان المعالجة في درجات: حرارة فائقة ‎«(UHT)‏ ‏ب) يمكن أن يؤدى تسخين اللبن إلى تأثيرات سلبية ‎Jie‏ تدهور ثبات مكونات اللبن؛ ويقلل الإختراع الحالي بدرجة ملموسة هذه الخاصية المعيبة؛ و/أو ٠0ج‏ تغييرات أقل في الخواص العضوية ‎-organoleptic properties‏ تنغ
‏ثمة ميزة اخرى للإختراع الحالي وهى إختزال محتوى الكوليسترول في اللبن المعالج في‎ ‏درجة حرارة فائقة التى قد تنتج فوائداً صحية كبيرة.‎ ‏ومن المناسب أن التحسن في أى من الخصائص المذكورة في هذا الوصف (مثل تكوين‎ ‏القشدة) قد يقارن باللبن المعالج في درجة حرارة عالية التى قد عولج بها بإستعمال واحد أو‎ ١أ ‏إنزيم الدهون الفوسفاتية‎ : phospholipases ‏أكثر من إنزيمات الفوسفوليبيز‎ © ‏من 'فيوساريوم اوكسيسبورم (ليبوبان-ف ماركة تجارية مسجلة)‎ Phospholipase Al ‏و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية من فيوساريوم‎ Fusarium oxysporum (Lipopan FTV)
Phospholipase ١ j ‏و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية‎ Fusarium heterosporum ‏هيتيروسبورم‎ ‎Fusarium ‏من جنس وفصيلة فيوساريوم فنيناتوم (ييلدماكس- إسم تجارى مسجل)‎ Al - Aspergillus niger ja ‏و/أو إنزيم الفوسفاتية من أسبرجيللوس‎ venenatum (YieldMax™) ٠ ‏من ستربتوميسيس فيولاسيورابر‎ Phospholipase A2 ‏و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية أ7‎ ‏الغدة‎ Phospholipase A2 Yi ‏و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية‎ Streptomyces violaceoruber
Tuber ‏من تيوبر بورشى‎ Phospholipase A2 ‏البنكرياسية و/أو إنزيم الدهون الفوسفاتية أ‎
Fusarium oxysporum a sy sie ‏من فيوساريوم أوكسى‎ ١ ‏أند©0. ويفضل فوسفوليبيز أ-‎ -(Lipopan F™) ‏ا‎ ‎HOST CELL ‏الخلية المضيفة‎ ‏حى "بروكاريوتيك” (الخلايا التي تفتقر لغشاء يحيط‎ GIS ‏يمكن أن يكون العائل المضيف‎ : eukaryotic ‏أو "ايوكاريوتيك" (حقيقية التواة)‎ prokaryotic ‏بالنواة)‎ ‎1 ْ
YY lipid acyl transferase ‏في واحد من تجسيدات الإختراع الحالي يميز إنزيم أسيل ترانسفيراز‎ ‏مثل فصيلة عصية‎ iS ‏طبقاً للإختراع في خلية مضيفة؛ وعلى سبيل المثال خلايا‎ -Bacillus licheniformis ‏وعلى سبيل المثال خلية مضيفة تنتمى إلى‎ (Bacillus ‏يمكن ان تنتمي الخلايا المضيفة البديلة إلى الفطريات أو أو نباتات وذلك على سبيل المثال.‎ ‏ينتج عنها تمييز متزايد من‎ Bacillus licheniformis ‏إستخدام خلية مضيفة من‎ of ‏لقد وجد‎ ٠
Bacillus subtilis Jie ‏إنزيم آسيل ترانسفيراز بالمقارنة بكائنات دقيقة حية أخرى؛‎ ‏في عدد من موجهات تمييز‎ Aeromonas salmonicida ‏أدخل أنزيم آسيل ترانسفيراز من‎ ‏مصممة لأن تكون الأمثل للتمييز في باسيلوس سوبتيليس‎ dain expression vectors ‏شيزو سكاروميسيس‎ cpolymorpha ‏بولى مورفا‎ <Hansenula ‏هانسينولا‎ «Bacillus subtilis «Aspergillus tubigensis ‏وأسبريجيللوس تيو بيجنسيس‎ «Schizosaccharomyces pombe ‏بومب‎ V+ ‏مع ذلك في هانزولا بولى مورفا‎ oda ‏على التوالى. وكشف فقط عن مستويات منخفضة جداً‎ «Schizosaccharomyces pombe ‏وشيزو سكاروميسيس بومبيه‎ Hansenula polymorpha ‏كانت مستويات التمييز تحت واحد‎ (Aspergillus tubigensis ‏وأسبريجيللوس تيونى جنسيس‎ ‏ميكرو جرام/ ملليلتر؛ ولم يكن محتملاً إختيار خلايا أنتجت كفاية من البروتين لبدء إنتاج‎
Bacillus ‏على مستوى تجارى (لم توضح النتائج). في المقابل ؛ كانت عصيات ليشنييفورمس‎ ١ ‏قادرة على انتاج مستويات البروتين؛ والتي هي جذابة لإنتاج مجدي اقتصاديا.‎ licheniformis ‏ما‎ Bacillus licheniformis ‏وجد على وجه الخصوص ¢ أن التعبير في عصيات ليشنييفورمس‎ ‏تحت سيطرة‎ Bacillus subtilis ‏مرة أكبر من التعبير في باسيلوس سوبتيليس‎ ٠٠١ ‏يقرب من‎ 5. lividans ‏مرة أكبر من التعبير في ش. ليفيدانس‎ ٠٠١ ‏المثير "أبر" :م8 أو ما يقرب من‎ ‏وتندمج مع السليلوز (النتائج لم تظهر هنا)‎ Ad ‏تحت سيطرة المثير‎ ٠ 7 ٍ
YY
‏سوبتيليس‎ sli) ‏خلافاً‎ Bacillus ‏وقد تكون الخلية المضيف أى خلية عصية باسيلوس‎ ‏؛ يفضل ان تكون الخليّة المضيفة باسيلوس المذكورة من إحدى الفصائل التالية:‎ 3.5 + «B. alkalophilus ‏ب. الكالوفيليس‎ «Bacillus licheniformis ‏باسيلوس ليشينى فورميس‎
B. ‏.3؛ ب. كلوزى‎ circulans ‏ب. سيركولانس‎ 3. amyloliquefaciens ‏أميلو ليكى فاشنس‎ ‏ب.‎ «Bl lautus ‏.3؛ ب. لوتس‎ firmus ‏.3؛ ب. فيرمس‎ coagulans ‏ب. كو أجيو لانس‎ «clausii © ‏أواب.‎ «B. pumilus ‏ب. بوميلس‎ «B. megaterium ‏.3؛ ب. ميجاتريوم‎ lentus ‏لنتس‎ ‎.B. stearothermophilus ‏ستياروث_موفياتس‎ ‏بالعلاقة مع الإختراع الحالي على أى خلية‎ ~“host cell” ‏يشتمل المصطلح "خلية مضيفة'‎ ‏إنزيم اسيل ترانسيفراز‎ nucleotide sequence encoding ‏تتضمن إما متتالية نيوكليوتيد تشيفر‎ sadly ‏كما عرف هنا أو موجه تمييز كما عرف هنا في هذا الوصف‎ lipid acyltransferase ٠ ‏يستخدم في الحصول على مستنسخ إنزيم آسيل ترانسيفراز له الخواص النوعية أو المحددة‎ ‏كما عرف هنا في هذا الوصف.‎ ‏بصفة مناسبة؛ قد تكون الخلية المضيفة عبارة عن إنزيم بروتاز (حال للبروتينات) أ أو سلالة‎ ‏سالبة البروتاز و/أو إنزيم مفتقر لألفا- أميلاز (حال لسكر الشعير) ©27105-» أو سلالة‎ .o-amylase minus strain ‏سالبة لألفا- أميلاز‎ ve ‏كما إستخدم هنا في هذا الوصف متتالية‎ “heterologous” ‏يعنى المصطلح "النظير المتغاير"‎ ‏مشتقة من مصدر مورث (جينى) أو فصائل معينة. وتكون ثمة متتالية لنظير متعاير عبارة‎ ‏عن متتالية غير مضيفة؛ أو متتالية معدلة؛ أو متتالية مشتقة من سلالة خلوية لمضيف‎ ‏أو متتالية متناظرة مثلية من موضع مورثات مختلفة للخلايا المضيفة.‎ (alias ‏عبارة عن متتالية موجودة في نفس المصدر‎ “homologous” ‏تكون المتتالية 'المتناظرة المثلية"‎ ‏الجينى أو الفصيلى للخلية المضيفة.‎
Ys ‏كما‎ “recombinant Lipid Acyltransferase” " ‏يعنى "إنزيم أسيل ترانسيفيراز المستتنسخ‎ ‏إستخدم هنا في هذا الوصف أن إنزيم آسيل ترانسيفيراز قد حصل عليه بواسطة إستنساخ‎ ‏للأجناس (جينى). وعلى سبيل المثال؛ فقد أدخلت متتالية نيوكليوتيدية تشيفر إنزيم أسيل‎ 3. ‏خلية باسيلوس ليشتينى فورميس‎ die ‏ترانسيفيراز في موجه إستنساخى؛ مما ينتج‎ ‏يتميز عن طريق وجود إنزيم آسيل ترانسيفيراز لمتناظر متغاير‎ licheniformis © -heterologous lipid acyltransferase
REGULATORY SEQUENCES ‏متتاليات تنظيمية‎ lipid acyltransferase ) sian) 5 ‏يحصل في بعض الإستخدامات؛ على متتالية إنزيم أسيل‎ ‏المستخدم في الطرق و/أو الإستخدامات طبقاً للإختراع الحالي وذلك عن طريق‎ sequence ‏ربط فعلى لمتتالية نيوكليوتيدية تشيفرها لمتتالية تنظيمية التى تكون قادرة على إيجاد تمييز‎ ٠ ‏لمتتالية نيوكليوتيدية؛ مثلما عن طريق خلية مضيفة مختارة (مثل خلية باسيلوس. ليشني‎ .(B. licheniformis ‏فرميس‎ ‏تتضمن متتالية نيوكليوتيدية طبقا للإختراع‎ vector ‏وعلى سبيل المثال؛ قد يستخدم موجه‎ ‏بمعنى أن الموجه يكون بمثابة‎ «regulatory sequence ‏تنظيمية‎ Allie; ‏الحالي مرتبطة فعلياً‎ . ‏موجه تمييز‎ 5 ‏إلى وضع متجاور حيث فيه المكونات‎ "operably linked” "Led ‏يشير المصطلح 'مرتبط‎ ‏الموصوفة تكون في علاقة تسمح لهم بالعمل في طريقتهم المرادة. وتربط المتتالية التنظيمية‎ ‏'المرتبطة فعلياً" بمتتالية شيفرة بطريقة بحيث أن تمييز متتالية شيفرة تتحقق تحت ظروف‎ ‏متسقة بمتتاليات ضابطة.‎ ‏على محسنات ومسرعات‎ “regulatory sequences” ‏يشتمل المصطلح 'متتاليات تنظيمية"‎ YL ‏وإشارات لتنظيم التمييز.‎ vo ‏موقع ربط إنزيم‎ Sle ‏في معناه العادى التقنى؛‎ “promoter” ‏يستخدم المصطلح "'محث"‎ -RNA polymerase ‏لحمض النووى الرايبوكسي بوليميراز‎ ‏قد يتم أيضاً تحقيق تمييز محسن لمتتالية نيوكليوتيدية تشيفر الإنزيم له الخواص النوعية كما‎ ‏مثلاً محث‎ Jal ‏حدد هنا في هذا الوصف عن طريق إختيار المناطق التنظيمية؛ على سبيل‎ ‏التى لا‎ terminator regions ‏مناطق ايقاف‎ secretion leader ‏؛ موجه إفرازات‎ promoter © ‏تكون بمثابة مناطق تنظيمية لمتتالية نيوكليوتيدية تشيفر الإنزيم كما في الطبيعة.‎ ‏وبصفة مناسبة؛ قد ترتبط فعلياً المتتالية النيوكليوتيدية طبقاً للإختراع الحالي بعامل محث‎
JN ‏على‎ promoter acyltransferase ‏ومن المناسب؛ أن المتتالية النيوكليوتيدية لتى تشيفر إنزيم آأسيل ترانسيفيراز‎ en pd ‏قد ترتبط بمتتالية تشيفر متتالية خاتمة. ومن أمثلتها المستخدم في أى واحد من‎ ٠ ‏والطرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي ما يشتمل‎ « host cells ‏والخلايا العائلة‎ » vectors ‏(وعلى سبيل المثال)‎ 0-20137188© terminator ‏على: متتالية ايقاف من إنزيم ألفا- أميلاز‎
CGGGACTTACCGAAAGAAACCATCAATGATGGTTTCTTTTTTGTTCATAAA alkaline ‏ومتتالية ايقاف لإنزيم بروتاز قلوى‎ (SEQ ID No. 64 764 ‏(متتالية برقم تعريفي‎ ‏(وعلى سبيل المثال):‎ protease terminator Vo
CAAGACTAAAGACCGTTCGCCCGTTTTTGCAATAAGCGGGCGAATCTTACA
TAAAAATA glutamic- ‏ومتتالية ايقاف نوعية لحمض جلوتاميك‎ » (SEQ ID No. 5 ‏متتالية برقم تعريفي‎ ‏(على سبيل المثال):‎ 0
ACGGCCGTTAGATGTGACAGCCCGTTCCAAAAGGAAGCGGGCTGTCTTCG Ye.
TGTATTATTGT
‏تم‎
(متتالية برقم تعريفي 5 ‎ID No‏ 580). ومتتالية ايقاف ليفانيز ‎levanase‏ (وعلى سبيل المثال):
TCTTTTAAAGGAAAGGCTGGAATGCCCGGCATTCCAGCCACATGATCATCG
7 متتالية برقم تعريفي ‎(TV‏ ومتتالية ايقاف (ه) من لتيليسين فرعى (وعلى سبيل ‎Jad oo‏ ( :
GCTGACAAATAAAAAGAAGCAGGTATGGAGGAACCTGCTTCTTTTTACTA
TTATTG
( متتالية برقم تعريفي ‎SEQ ID No ١١9‏ ( وبصفة مناسبة قد تكون المتتالية النيوكليوتيدية التى تشيفر إنزيم آسيل ترانسيفيراز مرتبط فعلياً بموقف إنزيم ألفا- أميلاز ‎Jie amylase‏ ‎٠‏ الجزء الطرفي لإنزيم ألفا- أميلاز المستخلص من موقف ألفا- أميلاز لباسيلوس .B. licheniformis a-amylase terminator ‏ليخنيفورميس‎ عامل التعزيز (المحث) ‎PROMOTER‏ يمكنم ان تكون المتتالية المعززة المراد إستخدامها طبقاً للإختراع الحالي متناظرة بالتغايير ‎heterologous‏ أو متناظرة ‎homologous Uke‏ مع المتتالية المشيفرة لإنزيم ‎Jud‏ ترانسيفيراز م ‎acyltransferase‏ ‏يمكن ان تكون المتتالية المعززة ‎promoter sequence‏ عبارة عن أى متتالية معززة قادرة ‏على توجيه تمييز إنزيم آسيل ترانسيفيراز في الخلية المضيفة موضع الإختيار . ‏وبصفة مناسبة؛ قد تكون المتتالية المعززة ‎promoter sequence‏ متناظرة مثليا مع فصائل ‏عصية (باسيلوس) ‎«Bacillus‏ وعلى سبيل المثال باسيلوس ليخنيفورميس ‎licheniformis‏ .3. ‎٠‏ يفضل ان تكون المتتالية المعززة متناظرة مثلياً ‎homologous‏ مع الخلية المضيفة موضع ‏الإختيار. ض ‎YAAY
بو وبصفة مناسبة؛ قد تكون المتتالية المعززة متناظرة ‎Ube‏ مع الخلية المضيفة. ويعنى مصطلح "متناظرة مثلياً مع الخلية المضيفة" ‎“Homologous to the host cell”‏ النشأة ‎Sy al‏ داخل الكائن الحى المضيف؛ بمعنى متتالية معززة التى توجد طبيعياً في الكائن الحى المضيف. بصفة مناسبة؛ فق تختار المتتالية المعززة من المجموعة المكونة من متتالية نيوكليوتيدية ‎٠‏ تشيفر: معزز (منشط) إنزيم ألفا- أميلاز ‎a-amylase promoter‏ ومعزز لإنزيم البروتاز ‎a‏ ‎protease promoter‏ ومعزز السبتيليسين ‎subtilisin promoter‏ ؛ ومعزز بروتاز محدد لحمض جلوتاميك ‎glutamic acid-specific protease‏ ومعزز لإنزيم لافين سكراز ‎levansucrase‏ ‎.promoter‏ ‏وبصفة مناسبة أيضاً؛ قد تكون المتتالية المعززة عبارة عن متتالية نيوكليوتيدية تشيفر: ‎LAT‏ ‎٠‏ (على سبيل المثقال؛ معزز ألفا- أميلاز ‎alpha-amylase promoter‏ من باسيلوس ليخنيوفورميس ‎licheniformis‏ .3 ؛ والمعروفة ‎Lead‏ ب ‎((Amyl‏ و ‎Sa) Apr]‏ معزز سبتيليسين كا رلسبرج ‎EndoGluc s «(subtilisin Carlsberg promoter‏ (مثلاً المعزز النوعى لحمض جلوتاميك ‎glutamic-acid specific promoter‏ من جنس باسيلوس ليخنيفورميس ‎B.‏ ‏متمو«طتعطنا). ووحسط (مثلاً معزز إنزيم ألفا- أميلاز من جنس باسيلوس أميلو ليكو ‎٠١‏ فاشينس ‎(aff‏ — أميلاز ‎(B. amyloliquefaciens alpha-amylase‏ 6و ‎SacB‏ (مثلاء معزز باسيلوس سبتليس ليفان ‎subtilis levansucrase 3 Su‏ .3 ). تشتمل أمثلة أخرى من معززات مناسبة لتوجيه إستنساخ متتالية حمض نووى في الطرق طبقاً للإختراع الحالي على: معزز لجينة ‎(aprH)‏ إنزيم بروتاز قلوى ‎alkaline protease‏ من جنس وفصيلة باسيلوس لنتوس ‎Bacillus lentus‏ معزز جينة إنزيم ألفا- أميلاز ‎alpha-‏ ‎amylase gene ٠٠‏ من جنس وفصيلة باسيلوس ستيروثرموفيلوس ‎Bacillus stearothermophilus‏ ‎«(amym)‏ معزز جينة باسيلوس ليخنيفورميس بنيسيليناز ‎Bacillus licheniformis‏ ‎YAAR "©‏
YA
‏و‎ xylA) Bacillus subtilis ‏ومعززات جينات باسيلوس سبتيليس‎ ٠ (penP) penicillinase «Bacillus thuringiensis Gaia jh ‏و/أو معززات الفصيلة الفرعية باسيلوس‎ ¢(xylB .tenebrionis CryllIA gene CryllIA ‏وجينة تتبريوتيس‎ a-amylase ‏في تجسيد مفضلء تكون المتتالية المعززة عبارة عن معزز إنزيم ألفا- أميلاز‎
Bacillus ‏«اه««م(مثل معزز إنزيم ألفا- أميلاز من جنس وفصيلة باسيلوس ليخنيفورميس‎ © ‏متتالية من معزز إنزيم‎ Vem J Yo sand ‏يفضل تتضمن متتالية عامل‎ (licheniformis
B. licheniformis a-amylase ‏ألفا- أميلاز من جنس وفصيلة باسيلوس ليخنيفورميس‎ (00 sor ‏أنظر الشكلين‎ —promoter ‏الوضع بالنسبة إلى موضع بدء الإستتساخ. وكلاً من‎ "٠١ ‏تصف "لمتتالية -75- إلى‎ + ‏هما خانتين تمثلان عدداً من النيوكليوتيدات؛ كل منهما تتضمن‎ "٠١-" Foo! ‏المتتاليتين‎ ٠ ‏نيوكليوتيد. ويشار في الغالب إلى هذه‎ ١7 ‏نيوكليوتيدات وتفصل هذه الخانات عن طريق‎ ‏ب 'وسيلة مباعدة". ويصور هذا في شكل )90( حيث يركز على‎ VY ‏النيوكليوتيدات أل‎ ‏هنا في‎ "٠١ ‏إلى‎ Yom ‏ولتحاشى الشك؛ وحيث تستخدم‎ .)٠١-( ‏و‎ (Fon) ‏الخانات‎ ‏هذا الوصف إلى متتالية من بدء الخانة (-5©) إلى نهاية الخانة (-١٠)؛ بمعنى المشتملة‎ (Vm) ‏نيوكليوتيد لعنصر مباعدة طويل بما فيها الخانة‎ ١7 ‏كليهما على الخانة -5؛ وأل‎ ١
SIGNAL PEPTIDE ‏ببتيد إشارى‎ ‏المتحصل عليه عن طريق خلية‎ acyltransferase ‏يمكن يفرز إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏مضيفة عن طريق تمييز متتالية النيوكليوتيد المشيفرة لإنزيم آسيل ترانسيفيراس أو قد يكون‎ ‏المستخدم.‎ vector ‏محتوياً فيما بين الخلايا على أساس المتتالية و/أو الموجه‎ ‏.قد تستخدم المتتالية الإشارية لتوجيه إفراز متتاليات التشفير خلال غشاء خلوى خاص. وقد‎ ‏تكون المتتاليات الإشارية طبيعية أو غريبة بالنسبة إلى متتالية شيفرة إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏تم‎
Yq ‏وعلى سبيل المثال؛ قد يحصل على متتالية شيفرة ببتيد إشارى من جينة‎ . acyltransferase ‏من فصائل عصية‎ 01016886 gene ‏أو إنزيم بروتاز‎ a-amylase gene ‏إنزيم أميلاز‎ ‘Bacillus licheniformis ‏(باسيلوس)؛ يفضل من جنس وفصيلة باسيلوس ليخنيفورميس‎ ْ ‏يمكن ان يحصل على متتاليات شيفرة الببتيد الإشارى من واحد أو أكثر من الجينات الأتية:‎ ‏ء وجينة سبتيليسين 80511150؛ وجينة بيتا- لاكتاماز‎ o-amylase gene ‏جينة إنزيم ألفا اميلاز‎ 0 ‏المحايد؛ وجينة (ذئم)؛ و/أو جينة إنزيم أسيل‎ protease ‏وجينة بروتاز‎ cbeta-lactamase -acyltransferase ‏تر انسيفيراز‎ ‏يفضل ان يكون الببتيد الإشارى عبارة عن ببتيد إشارى لإنزيم ألفا- أميلاز من جنس وفصيلة‎
Aeromonas Lipid ‏؛ وإيروموناس‎ Bacillus ‏باسيلوس ليخينيفورميس116060100:0(1‎ ْ ‏(على سبيل المثال:‎ Acyltransferase ٠ mkkwfvcliglialtvqa - SEQ ID No. 21), B. subtilis subtilisin (for instance, mrskklwisllfaltliftmafsnmsaga - SEQ ID No. 22) or B. licheniformis subtilisin (for instance, mmrkksfwfgmltafmlvftmefsdsasa - SEQ ID No. 23) ‏وبصفة مناسبة؛ قد يكون الببتيد الإشارى عبارة عن الببتيد الإشارى لالفا-اميلاز لجنس‎ -B. licheniformis a-amylase ‏وفصيلة باسيلوس ليخينيفورميس‎ ١ ‏ومع ذلك فإن ثمة متتالية لشيفرة أى ببتيد إشسارى قادرة على توجيه إنزيم آسيل‎ ‏ترانسيفيرازمميز إلى المجاز الإفرازى لخلية مضيفة من جنس باسيلوس يفضل خلية مضيفة‎ ‏محل الإختيار.‎ )3. licheniformis ‏من باسيلوس ليخنيفورميس‎ ‏في تجسيدات للإختراع الحالي؛ ترتبط متتالية نيوكليوتيدية مشيفرة لببتيد إشارى بمتتالية‎ ‏تيكليوتيدية بفعالية لشيفرة إنزيم آسيل ترانسيفراز محل إختيار.‎ © 1 CL
Ye قد يميز (خلوياً) إنزيم آسيل ترانسيفيراز محل إختيار في خلية مضيفة كما عرف هنا في هذا الوصف كبروتين إتحادى ‎.fusion protein‏
EXPRESSION VECTOR ‏موجه التمييز‎ يعنى مصطلح "موجه التمييز (الخلوى)" ‎"expression vector”‏ تركيباً قادراً على التمييز ‎٠‏ الخلوى في التجارب على الأحياء أو في المختبر. يفضل؛ يتم تضمين موجه التمييز في الخلية الجينية للكائن. مثل مضيف ‎(Je)‏ باسيلوس ليخنيفورميس ‎licheniformis‏ .3. يفضل ان يغطى المصطلح ‎“incorporated” "axa a’‏ تضميناً ثابتا في الخلية الجينية ‎.genome‏ يمكن ان توجد المتتالية النيوكليوتيدية المشيفرة لإنزيم ‎Jal‏ ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ كما ٍ ‎٠‏ .عرف هنا في هذا الوصف وذلك في موجه ترتبط فيه متتالية النيوكليوتيد بفعالية بالمتتاليات التنتظيمية بحيث أن المتتاليات التنظيمية تكون قادرة على إيجاد تمييز خلوى لمتتالية النيوكليوتيدية عن طريق كائن مضيف (عائل) مناسب ‎Gash nl Ji)‏ ليخينيفورميس .3 ‎(licheniformis‏ بمعنى أن يكون الموجه بمثابة موجه تمييزى (خلوى). ‏يمكن ان تحول الموجهات طبقاً للإختراع الحالي إلى خلية عائلة مناسبة كما وصف أعلاه ‎ve‏ لإيجاد التمييز الخلوى متعدد ببتيد ‎polypeptide‏ له نشاط إنزيمى لإنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ كما عرف هنا في هذا الوصف. ‏سوف يعتمد ‎WE‏ إختيار الموجه؛ ‎Mie‏ بلازميد ‎«plasmid‏ أو كوزميد ‎cosmid‏ ؛ أو فيروس ‏أو موجه ‎phage vector agile‏ » أو خلية جينية على الخلية المضيفة التى يراد إدخالها ‎genomic insert‏ وقد يغطى الإختراع الحالي صوراً اخرى لموجهات تمييز (خلوية) التى © تخدم دالات مكافئة والتى تكون أو تصبح معروفة في المجال.
زه وبمجرد تحويله إلى الخلية المضيفة أو ‎chost cell Alita)‏ محل الإختيارء فقد يتعدد ‎Aa gall‏ ويعمل على حدة دون الإعتماد على الخلية الجينية المضيفة؛ أو قد تتكامل إلى الخلية الجينية ذاتها. قد تحتوى الموجهات على واحد أو أكثر من الجينات المميزة خلوياً- مثل جينة تصف مقاومة ض هم للمضادات الحيوية؛ على سبيل المثال؛ الأمبيسيلين ‎ampicillin‏ » أو كاناميسين ‎kanamycin‏ « أو مقاومة الكلورامفينيكول ‎chloramphenicol‏ أو مقاومة التتراسيكلين ‎tetracyclin‏ وبديلاً عن ذلك؛ قد يتم الإختيار عن طريق التحويل المترافق (كما وصف في 117091/17243). قد تستخدم الموجهات أيضاً في تجارب في الزجاجيات ‎Je gin vitro‏ سبيل المثال للحصول على الحمض النووى ‎((RNA)‏ أو يستخدم لتحويل الخلية المضيفة. قد يتضمن الموجه أيضاً متتالية نيكليوتيدية تمكن الموجه من التعدد في الخلية المضيفة ‎Sl)‏ ‏العائلة) موضع التساؤل. ومن أمثل هذه المتتاليات يمكن ذكر متعددات البلازميدات ‎pUB110, pE194, pAMBI and 11702 :plasmids‏ ,0177 لانعخم ,019ل01. (إنزيم) أسيل تر انسيفيراز ‎LIPID ACYL TRANSFERASE‏ قد تشيفر متتالية النيوكليوتيد المشيفرة لإنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ المستخدم ‎٠‏ في أى واحد من الطرق و/أو الإستخدام ‎Gada‏ للإختراع الحالي إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ طبيعى أو إنزيم أسيل تر انسفيراز ‎a variant lipid acyl transferase jae‏ وقد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ المستخدم في أى واحد من الطرق و/أو الإستخدامات طبقاً للإختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز طبيعى أو إنزيم آسيل ترانسيفيراز متغاير. ‎YAAT‏
YY nucleotide sequence encoding ‏وعلى سبيل المثال؛ قد تكون متتثالية النيوكليوتيد المشيفرة‎ ‏المستخدم في الإختراع الحالي واحدة من مما‎ ( acyltransferase ‏ترانسيفيراز‎ Jal ‏لإنزيم‎ ‏أو‎ W02004/064537, 7102004/064987, W02005/066347 ‏وصف فسسي‎ ‏وهذه الوثائق تكون متضمنة هنا في هذا الوصف على سبيل المرجعية.‎ WO2006/008508 ‎e‏ ويعنى المصطلح "إنزيم آسيل ترانسيفيراز " ‎“lipid acyl transferase”‏ كما إستخدم هنا في هذا الوصف بصفة مفضلة إنزيماً له نشاط آسيل ترانسفيراز (مصنف عامة ك ‎EC.‏ ‏2.3.1 على سبيل المثال ‎(B.C.23.1.43‏ حيث يكون الإنزيم قادراً على هذا النحو على تحويل مجموعة آسيل من دهن إلى طبقات تحتية لمستقبل واحد أو أكثر؛ ‎Jie‏ مركب واحد أو أكثر من المركبات الأتية؛ ستيرول؛ ستانول؛ مادة سكريات (كربوهيدرات)؛ بروتين» وحدة ‎٠‏ فرعية بروتينية؛ كحول سكرى؛ مثل حمض أسكوربيك و/أو جليسرول- يفضل جليسرول و/أو ستيرول ‎sterol‏ ؛ ‎Jus‏ كوليسترول ‎cholesterol‏ ‏يفضل انه يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ المستخدم في أى طريقة من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي بمثابة إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ الذى يكون مقبولاً لتحويل مجموعة آسيل من الدهن الى واحد او اكثر من ركائز المستقبلات؛ مثل ‎Ve‏ ستيرول ‎sterol‏ , ستانول ‎stanol‏ , كربوهيدرات, بروتين, وحدة بروتين, سكر كحولي, مثل حمض أسكوربيك ‎ascorbic acid‏ و/أو جليسرول ‎glycerol‏ والأكثر ‎Sais‏ جليسرول ‎glycerol‏ و/أو ستيرول ‎Shia) sterol‏ كوليسترول). وفي بعض ‎cil gall‏ قد يكون أى 'مستقبل الأسيل" ‎“acyl acceptor”‏ طبقاً للإختراع الحالي أى مركب يتضمن مجموعة هيدروكسى (011-)؛ على سبيل المثال؛ كحولات متعددة التكافؤ ‎polyvalent alcohols ٠‏ مشتملة على جليسرول ‎glycerol‏ ؛ إستيرولات ‎sterols‏ ؛ ستانولات ‎stanols‏ ¢ كربو هيدرتات ‎٠ carbohydrates‏ أحماض هيدروكسى مشتملة على أحماض فواكه ‏تم
01114 حمض السيتريك ‎«citric acid‏ حمض الطرطريك ‎«tartaric acid‏ حمض اللبنيك ‎acid‏ 186016 وحمض أسكوربيك ‎ascorbic acid‏ ؛ أو بروتينات أو وحداتها الفرعية؛ ‎Jie‏ أحماض أمينو؛ ومستذيبات البروتينات ‎protein hydrolysates‏ والببتيدات ‎peptides‏ على سبيل المثالء ومخاليطهم ومشتقاتهم. يفضل ان لا يكون "مستقبل الآسيل" طبقاً للإختراع © الحالي ماءً. يفضل ان يكون "مستقبل الآسيل" طبقاً للإختراع ‎all‏ عبارة عن كحول سكرى؛ مثل بولى أول ‎«polyol‏ والأكثر تفضيلاً جليسرول. وللوفاء بأغراض هذا الإختراع يعتبر حمض الأسكوربيك ‎Lad‏ عبارة عن كحول سكرى. يفضل أن لا يكون مستقبل الآسيل ‎acceptor‏ النه#عبارة عن أحادى جليسريد ‎.monoglyceride‏ ‎٠‏ يفضل أن لا يكون مستقبل الآسيل عبارة عن ثنائى جليسريد ‎diglyceride‏ ‏وفي أحد جوانب الاختراع يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز في أى من طرق و/أو وإستخدامات الإختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎cacyliransforase‏ الذى قد يكون قادراً كذلك على تحويل مجموعة آسيل من دهن إلى جليسرول ‎«glycerol‏ وقادراً إضافياً على تحويل مجموعة الآسيل من دهن إلى واحد أو أكثر من الأتى: كربوهيدرات؛ وحدة فرعية ‎Vo‏ لبروتين؛ إستيرول و/أو ستانول 8001 ؛ يفضل ان تتوافر لها القدرة على التحول إلى كل من كحول سكرى؛ ‎Jie‏ حمض أسكوربيك و/أو جليسرول؛ والأكثر تفضيلاً إستيرول ‎Oia‏ ‏كوليسترولء و/أو إستيرولات/ ستانولات من أصل نباتى ‎plant sterols/stanols‏ يفضل ان تكون الطبقة التحتية الدهنية ‎Al lipid substrate‏ تؤثر عليها مجموعة الأسيل الدهنية واحدة أو أكثر من الليبيدات الأتية: دهن أو شضحم فوسفاتى ‎phospholipid‏ « مثل ‎٠‏ اللسيثين ‎Mia » lecithin‏ فوسفاتيديل كولين ‎phosphatidylcholine‏ و/أو فوسفاتيديل إيثانول أمين ‎.phophatidylethanolamine‏ ‎YAAY‏
Ye ‏آسيل دهنى'‎ ld ‏يمكن ان يشار إلى هذه الطبقة التحتية الدهنية هنا في هذا الوصف ك‎ ‏يشتمل مصطلح لسييثين كما إستخدم وعرف هنا في هذا الوصف‎ “lipid acyl donor” ‏فوسفاتيديل إيقانول أمين‎ phosphatidylcholine ‏فوس_فاتيديل كولين‎ ‏وفسفاتيديل‎ cphosphatidylinosito]l ‏عصتدصه 1 مصمط113110716م0105» فوسفاتيديل إينوسيتول‎ .phosphatidylglycerol ‏وفوسفاتيديل جليسرول‎ cphosphatidylserine ‏سيرين‎ © ‏المستخدم في أى طرق‎ acyltransferase ‏في جوانب أخرى؛ يفضل إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏الذى‎ acyltransferase ‏و/أو إستخدامات الإختراع الحالي عبارة عن إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ triglyceride ‏لا يكون قادراً على؛ أو غير قادر جوهرياً على التأثير على ثلاثى جليسريد‎ .2-monoglyceride ‏و/أو "- أحادى جليسريد‎ 1-monoglyceride ‏أحادى جليسريد‎ -١ ‏و/أو‎ ‏المستخدم في أى واحد من.‎ acyltransferase ‏في جوانب أخرى؛ يفضل إنزيم أسيل ترانسفيراز‎ ٠ ‏طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي كونه عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز الذى لا‎ ‏أو لا‎ (E.C. 3.1.1.3) triacylglycerol lipase ‏جليسرول الليبيز‎ eh ‏يظهر نشاطاً لإنزيم‎ .)].0.3.1.1.3( triacylglycerol lipase ‏جليسرول ليبيز‎ SN ‏يظهر نشاطاً‎
Lik (EC. 3.1.1.3 ‏(نشاط‎ triglyeride ‏يمكن ان تعين القدرة على تحلل ثلاثى جليسريد‎ ‏المعدلة‎ Food Chemical Codex (3rd Ed., 1981, pp 492-493(( ‏لقوانين كيمياء الأغنية‎ ١ ‏لزيت زهرة عباد الشمس وأس هيدروجينى 000 بدلاً من زيت الزيتون وأس هيدروجينى‎ ‏ويقاس‎ .modified to sunflower oil and pH 5.5 instead of olive oil and pH 6.5 ٠.6
LUS (lipase units ‏كما قيس لزيت زهرة عباد الشمس‎ lipase activity ‏نشاط الليبيز‎ ‏من حيث تأثير إنزيم الليبيز عليه وحيث تعرف زيت زهرة عباد الشمس بتأثير‎ sunflower) ‏إنزيم الليبيز عليه على أنه كمية الإنزيم التى التى تطلق 000[:01] 1 من أحماض دهنية لكل‎ © ‏دقيقة من زيت زهرة عباد الشمس تحت ظروف التحليل أعلاه. وبدلاً من ذلك؛ فقد يستخدم‎ ‏م7‎ i ye
تحليل زيت درنات زيتية لوحدات الليبيز ‎LUT‏ كما عرفت في 1709845453. وقد تم تضمين
هذا المرجع هنا في هذا الوصف على سبيل المرجعية.
قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في أى واحدة من طرق و/أو إستخدامات
الإختراع الحالي عبارة إنزيم آسيل ترانسيفيراز الذى يكون غير قادر جوهرياً على التأثير © على ثلاثى جليسريد ‎Cus triglyceride‏ وحدات إنزيم الليبيز المؤثرة على زيت عباد الشمس
لكل ملليجرام ‎LUS/mg‏ تكون اقل من ‎٠٠٠١‏ (وحدة)؛ وعلى سبيل المثال أقل من 00؛
وربما اقل من 00 يفضل أقل من ‎٠٠١‏ وأكثر تفضيلاً ‎J‏ من ١٠٠؛‏ وأكثر تفضيلاً ‎Lad‏
اقل من ‎٠0‏ 8؛ وكذلك أقل من ‎Ye‏ وقد يصل ذلك إلى أقل من ١٠؛‏ وربما أقل من ©؛ أو أقل
من ؛ وأكثتر تفضيلاً أقل من وحدة واحدة لكل مللى جرام. ‎Yas‏ من ذلك يكون نشاط ‎LUT‏ ‎٠‏ ا لكل مللى جرام ‎LUT/mMg‏ ؛ أقل من ‎٠٠٠‏ وحدة؛ أو أقل من ‎Fev‏ يفضل أقل من ١٠٠؛‏
وأكثر تفضيلاً أقل من ١٠٠؛‏ وكذلك اقل من ‎٠‏ ©؛ وأيضاً أقل من ‎Ye‏ وربما أقل من ‎٠١‏ أو
5. أو ؟ وكذلك اقل من واحد ‎LUT/mg‏
قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي عبارة
عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز الذى يكون غير قادر على التأثير على أحادى جليسريد ‎.monoglyceride | ٠‏ وقد يعين هذا عن طريق إستخدام أحادى أوليات ‎mono-oleate‏ (-1/17765
1- أوليل- مترازم- جليسرول بنسبة 9644) )99% ‎1-Oleoyl-rac-glycerol‏ 147765 وذلك
محل زهرة عباد الشمس في تحليل وحدات الإنزيم المؤثرة على زيت زهرة عباد الشمس
‎(LUS)‏ ويعرف مصطلح ‎١1 MGHU‏ بكمية الإنزيم الذى يمكن أن يطلق واحد [ميكر]
‏مول ‎[mu]mol‏ 1 من أحماض دهنية لكل دقيقة من أحادى جليسريد ‎monoglyceride‏ تحت ‎٠‏ | ظروف التحليل.
‏| الغا
يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ المستخدم في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ الذى يفضل أن يكون غير قادر جوهرياً على التأثير على الجليسريدات الثلاثية ‎triglyceride‏ وحيث الكمية المناظرة من الإنزيم الذى يمكن أن يطلق ‎MGHU/mg‏ من أحماض دهنية لكل دقيقة من الجليسريدات ‎٠‏ الأحادية ‎one‏ وحدة؛ وعلى سبيل المثال أقل من ١٠٠٠؛‏ وعلى سبيل المثال اقل من ‎er‏ ‏أو أقل من ‎Fee‏ يفضل أقل من ١٠7؛‏ يفضل أيضاً أقل من ‎٠٠١‏ وأكثر تفضيلاً ‎J‏ من ‎con‏ وكذلك أقل من ‎Ye‏ وأقل من ‎Lalas Ve‏ اقل من ©؛ أو أقل من ؟؛ وأكثر تفضيلاً أقل من وحدة واحدة من كمية الإنزيم الذى يمكن أن يطلق واحد ‎MGHU/mg‏ ‏ومن المناسب أن يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ المستخدم في أى من طرق .0 و/أو إستخدامات الإختراع الحالي بمثابة إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ الذى قد : يظهر واحد أو أكثر من الأنشطة المميزة لإنزيم الفوسفاتية (فوسفليبيز) الأتية: نشاط إنزيم فوسفوليبيز أ- 27م ‎(E.C. 3.1.1.4) phospholipase‏ و/أو نشاط إنزيم فوسفليبيز أ- ‎١‏ ‎phospholipase Al‏ (8.0..3.1.1.32). وقد يكون لإنزيم أسيل ترانسيفيراز (ب)
-(E.C 3.1.1.5) phospholipase B ‏قد يكون قادرا‎ acyltransferase ‏وبصفة مناسبة؛ ولبعض جوانب إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ Vo ‏إلى كحول سكرى؛ يفضل‎ phospholipid ‏من دهن فوسفاتى‎ Jad) ‏على تحويل مجموعة‎
جليسرول ‎glycerol‏ و/أو ‎(men‏ أسكوربيك ‎.ascorbic‏ ‏وبصفة مناسبة ولبعض جوانب الإختراع؛ قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎(J)‏ ‏قادراً على تحويل مجموعة آسيل من دهن فوسفاتى إلى ستانول ‎stanol‏ و/أو ستيرول ‎sterol‏
.cholesterol ‏يفضل كوليسترول‎ ء١‎ ٠
0 ا vv ‏في واحد من‎ acyltransferase ‏يفضل في بعض الجوانب استخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏حيث يشفر إنزيم آسيل ترانسيفيراز ليكون قادراً على‎ Jad ‏طرق و/أو إستخدامات الإختراع‎ ‏تحويل مجموعة آسيل من دهن فوسفاتى إلى ستيرول و/أو ستانول لتكوين إستر ستيرول‎ ‏واحد على الأقل و/أو ستانول واحد على الأقل.‎ ‎٠‏ قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز_قادراً على تحويل مجموعة آسيل ‎acyl group‏ من دهن إلى ‎de sane‏ بولى أول ‎Jie polyol‏ جليسرول؛ و/أو ستيرول مثل كوليسترول أو ستيرول/ ستانولات نبايتة. وهكذاء ففي أحد التجسيدات؛ قد يكون "مستقبل الآسيل" طبقاً للإختراع الحالي عبارة عن جليسرول و/أو كوليسترول أو ستيرولات/ ستانولات نباتية ‎.sterol/stanols‏ ‏يفضل ان يتم تمييز إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase‏ بإستخدام المعايير الأتية: ‏0 يمتلك إنزيم آسيل ترانسيفيراز نشاطاً الذى يعرف بنشاط ناقل لمجموعة الأستر ‎ester‏ ‎transfer activity‏ » وعن طريقه فإن جزء الأسيل لرابطة إستر أصلية لمانح مجموعة أسيلية للدهن ينتقل إلى مستقبل مجموعة الأسيل ر؛ يفضل جليسرول أو كوليسترول لتكوين إستر جديد؛ و ‏يتضمن الأنزيم المتتالية لحمض الأمينو ‎(GDSX‏ حيث فيه ‎X‏ تكون واحد من رواكد ‎L,A,V,LF,Y,H,Q, T,N,MorS ‏التالية‎ sud! eo
GDSX ‏حافز المتتالية‎ 4X Sbuass ‏وأكثر‎ oy ‏ان تكون .1 أو‎ GDSX ‏من‎ X ‏يفضل في‎ ‏لحمض‎ GDSL ‏تكون .1. وهكذاء يتضمن الإنزيم طبقاً للإختراع الحالي حافز المتتالية‎ ‏الأمينو.‎ ‏يتضمن حافز المتتالية 005 أربعة أحماض أمينو محتفظة. يفضل ان يكون السيرين ‎serine Y-‏ داخل حافز المتتالية عبارة عن سيرين حفزى لإنزيم آسيل ترانسفيراز . يت
YA
بصفة مناسبة قد يكون السيرين ‎serine‏ حافزاً للمتتالية ‎GDSX‏ في موضع مناظر لسيرين ‎٠6‏ 6 في إنزيم أسيل ترانسيفيراز مشتق من جنس وفصيلة إيروماناس هيدروفيلا ‎Aeromonas hydrophila‏ حسبما ورد في مقال: ‎Brumlik & Buckley (Journal of Bacteriology Apr. 1996, Vol. 178, No. 7, ‏م‎ 2060- ‎2064) 5 ‏لتعيين ما إذا كان ثمة بروتين له حافز لمتتالية ‎GDSX‏ طبقاً للإختراع الحالي؛ يفضل مقارنة ‏المتتالية بجانبيات (بروفيلات) نموذج 'ماركوف" المتوايرة ‎HMM ) hidden markov model‏ ‎(profile‏ لقاعدة بيانات كمبيوترية (لمتتالية ‎Lik (pfam‏ للطرق الواردة في ‎WO2004/064987 5 WO2004/064537‏ المتضمنين هنا في هذا الوصف على سبيل ‎٠‏ المرجعية. ‏يفضل ان تتم محاذاة إنزيم آسيل ترانسيفيراز بإستخدام متتالية متفق عليها بالإجماع ‏7 وللشرح التام أنظر 11702004/064537 أو 17/02004/064987). ‏يفضل ان يبين التطابق الإيجابى مع ‎J dyn‏ نموذج 'ماركوف" ‎markov model profile‏ ‎(HMM profile )‏ المنتمى إلى العائلة التى تضم قاعدة البيانات المتتالية 018000657 وجود ‎١‏ _المجال ‎GDCL‏ أو ‎GDSX‏ طبقاً للإختراع الحالي. ‏يفضل عند محاذاة المتتالية المجمع عليها 7700000657 لإنزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في ‏طرق أو إستخدامات الإختراع؛ فقد يتاح لها على الأقل أكثر من واحد؛ يفضل اكثر من إثنين ‏من "بلوك" ‎«GANDY block (sila‏ وبلوك ‎(HPT)‏ وبصفة مناسبة؛ قد يتاح إنزيم ‎Jil‏ ‏ترانسيفيراز "بلوك" ‎(GDSX)‏ وبلوك" ‎(HPT)‏ يفضل ان يتضمن الإنزيم قالب ((بلوك") ‎v.‏ واحد على الأقل من ‎(GDSX)‏ أنظر ‎W02004/064537‏ أو ‎W02004/064987‏ لتفاصيل ‏أخرى. ‏تم
Ya
GANDY, GGNDA, ‏من‎ GANDY motif ‏يفضل ان تختار رواكد حافز "جاندى"‎ (GANDY) ‏والأكثر تفضيلاً قالب (بلوك)‎ «GGNDL ‏المتفق عليه بالإجماع؛ يتاح للإنزيم المتاح‎ Pfam00657 ‏عند المحاذاة مع المتتالية‎ (Lindy ‏المستخدم في طرق وإستخدامات الإختراع الحالي واحد على الأقل؛ يفضل أكثر من واحدء؛‎ ‏وأكثر تفضيلاً ما يزيد على إثنين؛ يفضل أكثر من ثلاثة؛ وكذلك أكثر من أربعة؛ أو أكثر من‎ ٠ ‏خمسة؛ أو أكثر من ستة؛ أو أكثر من سبعة؛ أو اكثر من ثمانية؛ يفضل كذلك أكثر من تسعة؛‎ ‏وكذلك أكثر من إثنى عشر؛ أو ثلاثة عشر»‎ de ‏أو أكثر من عشرة؛ وأيضاً أكثر من إحدى‎ ‏أو أربعة عشرة من رواكد حمض الأمينو التالية عند المقارنة بالمرجع من متتالية البولى ببتيد‎ :)١( ‏.م بمعنى المتتالية بالرقم التعريفي‎ hydrophilia ‏من جنس وفصيلة (أ. هيدروفيليا)‎ 28hid, 2%hid, 30hid, 31hid, 32gly, 33Asp, 34Ser, 35hid, 130hid, 131Gly, 132Hid, ٠ 133Asn, 134Asp, 135hid, 309His. ‏بمثابة عامل تعريف فريد الذى يميز البروتينات؛‎ pfam00657 GDSX ‏يكون مجال المتتالية‎ ِ ‏ويشغل هذا المجال بإنزيمات أخرى.‎ ‏بالإجماع في شكل (©) بالرقم التعريفي للمتتالية‎ de ‏الموافق‎ pfam00657 ‏تعرض متتالية‎ ‏ويشتق هذا من تعريف عائلة المتتاليات 0018977 نسخة قاعدة البيانات‎ SEQ ID No (Y) ٠ -pfam00657.6 ‏الاشارة اليها كمتتالية‎ (Say ‏والتي‎ database version 7 ‏رقم‎ ‏يمكن ان يتم اللجوء إلى تحديث المتتالية المجمع عليها عن طريق إستخدام إطلاقات أخرى‎ ‏أو‎ W02004/064537 ‏أنظر‎ Jal ‏(وعلى سبيل‎ pfam ‏لقاعد بيانات المتتالية‎ (W02004/064987 ‏ل‎
$a ‏المستخدم‎ acyltransferase ‏وفي تجسيد من ضمن الإختراع؛ يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏في أى من طرق و/أو إستخدامات الإختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز الذى‎ ‏قد يميز بإستخدام المعايير الأتية:‎ acyltransferase ‏أولاً: يمتلك النظام الإنزيمى نشاطاً إنزيمياً لأسيل تر انسيفير از‎ I ‏الذى قد يعرف كنشاط ناقل للإستر وبهذا يحول جزء الآسيل لرابطة الأستر.‎ ° ‏إلى مستقبل الآسيل؛ يفضل الجليسرول‎ acyltransferase ‏الأصلى لمائح الأآسيل‎ ‏أو‎ monoglyceride ‏يفضل أحادى جليسريد‎ cana ‏أو الكوليسترول لتكوين إستر‎ ‏على التوالى.‎ cholesterol ester ‏إستر كوليسترول‎ ‏تكون واحدة‎ X ‏لحمض أمينو + حيث فيه‎ GDSX ‏يتضمن الإنزيم حافز متتالية‎ 11 ‏وا ,1 مآ إلا بظ مآ‎ HQTNM adil ‏أو أكثر من رواكد أحماض الأمينو‎ Ve or S
His- ‏أو راكد هستدين في موضع مناظر ل‎ His-309 ‏يتضمن الإنزيم هيستدين‎ 1 ‏من جنس وفصيلة-‎ acyltransferase ‏في إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ 9 ‏و‎ (Y) ‏الموضح في الشكلين‎ Aeromonas hydrophila ‏أروموناس هيدروفيلا‎ .)3 ‏أو المتتالية بالتعريف رقم‎ ١ ‏(؟) (المتتالية بالتعريف رقم‎ Vo ‏هو آ.‎ (GDSX) ‏يفضل ان يكون راكد حمض الأمينو لحافز متتالية‎
SEQ ID )١( ‏أو المتتالية بالتعريف رقم‎ (SEQ ID No. 3 (¥) ‏في المتتالية بالتعريف رقم‎ (His-309 ‏لمتتالية ببناء تام‎ * ٠ ‏تشكل الرواكد لحمض الأمينو. ويتساوى الهستدين-‎ No. 1 ‏للجزء الناتج‎ (His-291 YA) ‏بمعنى البروتين المشتمل على المتتالية الإشارية مع هستدين-‎ ‏للبروتين؛ بمعنى المتتالية دون المتتالية الإشارية.‎ - ٠
YAAR
Ia acyltransferase ‏وفي أحد تجسيدات الإختراع؛ يكون إنزيم آأسيل ترانسيفيراز‎
المستخدم في أى واحد من الطرق والإستخدامات طبقاً للإختراع الحالي هو إنزيم آأسيل
ترانسيفيراز الذى يتضمن الثلاثى الحفزى الآتى:
‎Ser-34, Asp-306‏ و ‎His-309‏ أو يتضمن راكد سيرين ‎«serine‏ وراكد حمض أسبارتيك ‎aspartic ©‏ وراكد هستيدين؛ أو يتضمن راكد سيرين؛ وراكد حمض أسبارتيك؛ وراكد
‏هستدين؛ على التوالى؛ في مواضع مناظر سيرين ‎FE‏ أسبارتيك ‎FeV‏ وهستدين ‎Teas‏
‏في إنزيم آسيل ترانسيفيراز من آيرونوماس هيدروفيلا ‎Aeromonas hydrophila‏ الموضح في
‏شكل (؛) (المتتالية بالرقم التعريفي “) أو الشكل ‎)١(‏ (المتتالية بالرقم التعريفي ‎.)١‏ وكما
‏ذكر أعلاه؛ ففي المتتالية الموضحة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية رقم (©) أو المتتالية ‎٠‏ _بالرقم التعريفي للهوية رقم (١)؛‏ وتشكل رواكد حمض الأمينو الثمانية عشر الأولى متتالية
‏إشارية. وتتساوي المتتاليات الثلاثية ‎Asp-306 and His-309‏ ,50-34 لمتتالية بطول كامل؛
‏بمعنى البروتين المشتمل على المتتالية الإشارية مع المتتاليات: ‎Ser-16, Asp-288 and His-‏
‏1 للجزء الناضج من البروتين؛ بمعنى المتتالية بدون المتتالية الإشارية. وفي المتتالية
‎(pfam00657)‏ المتفق ‎Lede‏ بالإجماع كما هو معطى في الشكل (©) (المتتالية بالرقم ‎vo‏ التعريفي للهوية ‎(Y‏ وتناظر الرواكد الموضعية النشيطة:
‎Ser-7, Asp-345 and His-348
‏في أحد تجسيدات الاختراع؛ يستخدم إنزيم آسيل ترنسيفيراز ‎transferase enzyme‏ المستخدم
‏في أي واحد من الطرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي هو إنزيم آسيل ترنسيفيراز
‎transferase enzyme‏ الذي قد يتميز بإستخدام المعايير الأثية:
‎YAAT 0"
رز يمتلك الإنزيم نشاطاً إنزيميا لإنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ الذي قد يحدد لنشاط ناقل للإستر حيث عن طريقة ينتقل جزء الآسيل لرابطة إستر ‎ester‏ أصلي لمانح اسيل ‎ester‏ أولي إلى مستقبل ‎acyl Jul‏ لتكوين ‎ester sid‏ جديد؛ و يشتمل الانزيم على : ‎Gly-32, Asp-33, 56-34, Asp-134 and 1119-9‏ أو يتضمن رواكد جليسين ‎glycine‏ حمض أسبارتيك ‎caspartic acid‏ سيرين ‎serine‏ حمض أسبارتيك ‎aspartic acid‏ وهستيدين ‎aspartic acid‏ في أوضاع مناظرة ل: ‎Asp-33, Ser-34, Asp-306 and 1119-9‏ ,17-32 على التوالي وذلك في إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ _من جنس وفصيلة أرومانس هيدروفيلا ‎Aeromonas hydrophila‏ الموضح في المتتالية بالتعريف للهوية رقم ‎٠‏ (©) أو المتتالية بالتعريف للهوية رقم ‎.)١(‏ ‏وبصفة مناسبة؛ قد يشيفر إنزيم ‎Jul‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ للإستخدام في أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عن طريق المتتاليات النيوكليوتيدية الآتية: ;)29 انظر الشكل) 36 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(a) nucleotide sequence‏ :1 3انظر الشكل ( 38 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(b) nucleotide sequence‏ ‎Vo‏ :32 انظر الشكل ( 39 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(c) nucleotide sequence‏ :3 انظر الشكل ( 42 ‎SEQ ID No.‏ المشار ‎(d) nucleotide sequence 4a}‏ ‎lad 37);‏ الشكل ( 44 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎nucleotide sequence‏ ©) ;)39 انظر الشكل ( 46 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(f) nucleotide sequence‏ انظر الشكل ( 48 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎nucleotide sequence‏ )8( ‎Y.‏ :5 انظر الشكل ( 49 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(h) nucleotide sequence‏ ‎YAAT 0‏
(i) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 50 ) ‏انظر الشكل‎ 58); )0( nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 51 ) ‏انظر الشكل‎ 59); (k) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 52 ( ‏انظر الشكل‎ 60); (1) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 53 ( ‏انظر الشكل‎ 61); (m) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 54 ( ‏الشكل‎ dail 62); ° (n) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 55 ( ‏انظر الشكل‎ 63); ~ (0) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 56 ( ‏انظر الشكل‎ 64); (p) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 57 ( ‏انظر الشكل‎ 65); (q) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 58 ( ‏انظر الشكل‎ 66); (r) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 59 ( ‏الشكل‎ had 67); ٠١ (s) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 60 ) ‏انظر الشكل‎ 68); (t) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 61 ( ‏انظر الشكل‎ 69); (u) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 62 ( ‏انظر الشكل‎ 70); (v) nucleotide sequence ‏المشار اليه‎ SEQ TD No. 63 ( ‏انظر الشكل‎ 71); (w) ٠ ‏للتعريف للهوية‎ «SST ‏أو متتالية نيكليوتيدية لها 96768 أو أو أكثر. يفضل 9675 أو‎ ‏بإستخدام المتتاليات الموضحة كالآتي:‎
SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44, 580 ID No. 46, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49,
SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54,
YAAY
SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59,
SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62 or SEQ ID No. 63. ‏أو أكثر‎ 169٠0 ‏أكثرء وأكثرتفضيلاً‎ A ‏وبصفة مناسبة؛ قد يتاح لمتتالية النيكوتيدية‎ ‏وكذلك 9655 أو أكثر بإستخدام أي من المتواليات الموضحة كمتتاليات تعريفية للهوية‎ ‏كالاتي: ض ض‎ ° ‎SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44,‏ ‎SEQ ID No. 46, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51,‏ ‎SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56,‏ ‎SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61,‏ ‎‘SEQ ID No. 62 or SEQ ID No. 63. ve‏ في أحد التجسيدات؛ تكون المتتالية النيكليوتيدية المشيفرة لإنزيم آأسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ المستخدم في في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي بمثابة متتالية نيكليوتيدية التي لها 96760 أو أكثرء يفضل 9675 أو أكثر؛ وتعريف بالهوية مع أي واحد من المتتاليات الموضحة كمتتالية بالتعريف للهوية رقم £9 وبالتعريف رقم ‎On‏ ‎١‏ والتعريف رقم )0 والمتتالية وبالتعريف للهوية رقم ‎TY‏ والمتتالية بالتعريف للهوية رقم ‎TY‏ وبصفة مناسبة؛ فقد يتسنى للمتتالية النيكليوتيدية ‎%A‏ أو أكثر؛ يفضل 9685 أو أكثرء وأكثر تفضيلاً ‎Lad‏ 9690؛ أو أكثر وحتى أكثر تفضيلاً 9695 بإستخدام أي من المتتاليات الموضحة ك: المتتالية برقم تعريفي للهوية £9 والمتتالية برقم تعريفي 00 للهوية والمتتالية بالرقم التعريفي للهوية ١©؛‏ والمتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎NY‏ والمتتالية بالرقم ‎SY ‏التعريفي للهوية‎ ٠ ‎5 |ّ
م في أحد التجسيدات؛ تكون المتتالية النيكليوتيدية ض المشيفرة لإنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ المستخدم في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن متتالية نيكليوتيدية التي يتسنى لها 9670 أو أكثر؛ 9675 أو أكثر؛ 9680 أو أكثر؛ يفضل 685 أو أكثر. وكذلك أكثر تفضيلاً ‎164٠‏ أو أكثر وحتى أكثر تفضيلاً 1645 أو أكثر ‎٠‏ لتعريف المتتالية الموضحة كمتتالية بالرقم التعريفي رقم 45. وبصفة مناسبة؛ قد يكون إنزيم ‎Juul‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي واحدة من طرق و/ إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ الذي يتضمن واحدة أو أكثر من متتاليات أحماض الأمينو التالية: ‎SEQ ID 3‏ المشار اليه ‎amino acid sequence‏ )0 ‎SEQ ID No. 4 Y.‏ المشار اليه ‎(ii) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 5‏ المشار اليه ‎(ili) amino acid sequence‏ ض 6 ‎SEQ ID No.‏ المشار اليه ‎(iv) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID 7‏ المشار اليه ‎(v) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 8‏ المشار اليه ‎(vi) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 9 Vo‏ المشار اليه ‎(vii) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 10‏ المشار اليه ‎(viii) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 11‏ المشار اليه ‎(ix) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 12‏ المشار اليه ‎(x) amino acid sequence‏ ‎SEQ ID No. 13‏ المشار اليه ‎(xi) amino acid sequence‏ ‎YAAY‏
£1 (xii) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 14 (xiii) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 1 (xiv) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 15 (xv) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 16 (xvi) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 17 ° (xvii) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 18 (xviii) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 34 (xix) amino acid sequence ‏المشار اليه‎ SEQ ID No. 35 ‏4م أو‎ %AT Fa %Ac FAs ‏أو متتالية حمض أمينو التي يتسنى لها درفت‎ ٠ ‏أكثر من التعريف أو الهوية بإستخدام أي متتالية من المتتاليات كالموضحة أدناه:‎
SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID
No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14 or SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34 or SEQ ID No. 35. yo ‏المستخدم في أي من‎ acyl transferase enzyme ‏وبصفة مناسبة؛ فإن إنتزيم آسيل الترانتسيفيراز‎ acyl transferase ‏طرق وإستخدامات الاختراع الحالي قد يكون إنزيم أسيل الترانسيفيران‎ ‏الذي يتضمن إما متتالية الحمض الأمينى الموضح ك:‎ enzyme
SEQ ID No. 3 or as SEQ ID No. 4 or SEQ ID No. 1 or SEQ ID No. 15 or SEQ ID
No. 16, or SEQ ID No. 34 or SEQ ID No. 35 Y. ‏تم‎
ف أو يتضمن متتالية حمض أمينو الذي يتسنى له 9675 أو ‎ST‏ يفضل ‎%A‏ أو ‎SST‏ يفضل أو أكثر ‎٠‏ يفضل 9640 أو أكثر؛ يفضل 9665 أو أكثر؛ والتعريف بإستخدام متتالية حمض أمينى موضح كمتتالية برقم تعريفي للهوية رقم (©) أو متتالية حمض أميني موضحة كمتتالية برقم تعريفي للهوية )£( أو متتالية لحمض أميني الموضحة كمتتالية تعريفية للهوية ‎١‏ رقم (١)؛‏ أو متتالية حمض ‎id‏ موضحة كمتتالية تعريفية للهوية رقم )19( أو متتاليسة حمض أميني؛ الموضحة كمتتالية تعريفية للهوية رقم )11( أو متتالية لحمض أميني موضح كمتتالية تعريفية للهوية رقم ‎(FE)‏ أو متتالية أميني موضح كمثتالية تعريفية للهوية رقم )70( وبصفة مناسبة؛ فإن إنزيم أسيل ترانسيفراز ‎acyltransferase enzyme‏ المستخدم لأي من طرق و/ أو إستخدام الاختراع الحالي قد يكون عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase enzyme ٠‏ الذي يتضمن متتالية حمض أمينو الذي يتسنى له 96860 أو أكثرء يفضل 9685 أو أكثرء وأكثر تفضيلاً ‎964٠0‏ أو كذلك أكثر تفضيلاً 9646 أو أكثر من تعريف الهوية بإستخدام أي واحد من المتتاليات ك: ‎SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID‏ ‎No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No.‏ ‎SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, ٠‏ ,13 ‎SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34 or SEQ ID No. 35.‏ وبصفة مناسبة؛ قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ لإستخدام أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع ‎Jad‏ عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ الذي يتضمن واحدة أو أكثر من متتاليات حمض الأمينو الآتية: ‎Ye‏ 0 متتالية حمض أمينو ‎acid sequence‏ 100<هموضحة كرواكد أحماض دهنية ‎Voom)‏ ‏للمتتالية بالهوية رقم (©) أو المتتالية بالرقم التعريفي للهوية رقم (١)؛‏
م (ب) متتالية حمض أمينو ‎amino acid sequence‏ موضحة كرواكد أحماض ‎amino sual‏ ‎700-٠١‏ لمتتالية برقم تعريفي للهوية رقم (©) أو متوالية برقم تعريفي للهوية رقم (١)؛‏ )©( متوالية حمض أمينو ‎acid sequence‏ 0ل««هموضحة كرواكد أحماض دهنية ‎—Y oY‏ 05 للمتتالية بالرقم التعريفي للهوية رقم (©) أو المتتالية بالرقم التعريفي للهوية (١)؛‏ أو )3( ‎oo‏ متتالية حمض أمينو ‎amino‏ الذي يتسنى لها 9675 أو ‎«SSE‏ يفضل 1685 أو أكثرء؛ وأكثر تفضيلاً % أو أكثر؛ وحتى أكثر من 9645 أو أكثر من ذلك لتعريف الهوية لأي من متتاليات أحماض الأمينو المعرفة في الفقرات (أ)-(ج) أعلاه. وبصفة مناسبة قد يتضمن إنزيم اسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في طرق وإستخدامات الاختراع الحالي واحداً أو أكثر من متتاليات أحماض الأمينو الآتية: ‎Ye‏ 0( متتالية حمض أمينو ‎amino acid sequence‏ موضحة كرواكد أحماض أمينية (7- 4؟) لمتتالية بالرقم التعريفي للهوية )7( أو المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎.)١(‏ ‏(ب) متتالية حمض أمينو ‎amino acid sequence‏ موضحة كرواكد أحماض أمينية ف ‎(AA‏ للمتتالية بالرقم التعريفي للهوية (©) أو الرقم التعريفي للهوية (١)؛‏ ‎(z)‏ متتالية حمض أمينو ‎amino acid sequence‏ موضحة كرواكد أحماض أمينية ‎-١77(‏ ‎(VFI ve‏ لمتتالية برقم تعريفي للهوية )1( أو متوالية برقم تعريفي للهوية (١)؛‏ ‎Allie 6)‏ حمض أمينو ‎acid sequence‏ 100موضحة كرواكد أحماض أمينية ‎—11Y)‏ ‎(VV‏ لمتتالية بالرقم )1( لتعريف الهوية أو متتالية بالرقم ‎)١(‏ لتعريف الهوية؛ (ه) متتالية حمض أمينو ‎dais seamino acid sequence‏ كرواكد أحماض دهينة )+ )1( للمتتالية بالرقم (©) لتعريف الهوية أو المتتالية بالرقم )1( لتعريف الهوية؛ أو ‎Ye‏ )3( متتالية حمض أمينو ‎acid sequence‏ 100«<ديتسنى لها 76175 0 أكثرء يفضل 9680 أو أكثر؛ وأكثر تفضيلاً 0٠969؛‏ وحتى أكثر من 9646؛ أو تفضيلاً أكثر أو نسبة تفضيلية يخ
أكبر بالنسبة إلى أي واحدة من متتاليات أحماض الأمينو المعرفة من (حيث الهوية) في الفقرات (أ)- (ه) أعلاه. وفي أحد جوانب الاختراع؛ فإن إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي واحدة من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي تكون عبارة عن إنزيم آسيل 0 ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ الذي قد يكون عبارة عن إنزيم سيل ترانسيفيراز ْ ‎acyl transferase enzyme‏ من جنس وفصيلة كانديدا بارابسيلوزيس ‎Candida parapsilosis‏ كما تلقنه براءة الاختراع الأوربية رقم 711 125. وهكذاء ففي أحد جوانب إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في الطريقة وإستخدامات الاختراع الحالي قد يكون عبارة عن إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ يتضمن متتاليات ‎٠‏ أحماض أمينو ملقنة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(VV)‏ أو المتتالية بالرقم التعريفي:. للهوية ‎(VA)‏ ‏وعلى سبيل الأفضلية؛ يكون إتزيم اسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ التي قد تكون بمثابة إنزيم ‎Jol‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ 0 يتضمن متتالية حمض الأمينو ‎amino‏ الموضحة كمتوالية برقم تعريفي للهوية (١١)؛‏ أو متتالية حمض أمينو ‎amino‏ التي لها 96785 أو أكثرء أو تفضيلاً 9645 أو أكثرء وأيضاً أكثر تفضيلاً 96460 أو أكثرء وحتى أكثر من 9648 بصفة مفضلة؛ وكذلك أكثر تفضيلاً 9644 أو أكثرء أو حتى أكثر تفضيلاً من 9644 لتعريف الهوية المتتالية بالرقم التعريفي للهوية )01( ويمكن إعتبار هذا الإنزيم ‎enzyme‏ كإنزيم متباين ‎-variant enzyme‏ ‎Ye‏ وفي أحد ‎cca sal‏ فإن إنزيم اسيل الترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎YAAT‏
‎transferase enzyme‏ الذي قد يكون مخلوط لسيثين ‎lecithin‏ أسيل ترانسيفيراز كوليسترول ‎(LCAT) cholesterol Lipid Acyltransferase‏ أو متغايره (وعلى سبيل المشال؛ متغاير مصنوع بواسطة نشوء جزيئي ‎.(molecular evolution‏ يعرف مخلوط اللسيثين ‎lecithin‏ إنزيم أسيل ترانسيفيراز الكوليسترول ‎cholesterol Lipid‏ : ‎Acyltransferase ©‏ 10875 في المجال ويمكن الحصول عليه من واحد أو أكثر من الكائئنات الأتية على سبيل المثال: الثدييات؛ الجرذان؛ الفثران»؛ الدجاج؛ دروسفيلا ‎Drosophila‏ ‏ميلانوجاستر 610008056 النباتات مشتملة على أر ابيدوبسيس ‎«Arabidopsis‏ وأوريزا ساتيفا ‎«Oryza sativa‏ والعنكبوتيات ‎cnematodes‏ والفطريات ‎«fungi‏ وال أقدعر. وفي أحد التجسيدات؛ يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyltransferase enzyme‏ المستخدم ‎٠‏ في أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي بمثابة إنزيم آأسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ الذي قد يكون بمثابة إنزيم أسيل ترانسيفيران ‎acyl transferase‏ 0 الذي يمكن الحصول عليه؛ ويفضل الحصول علية من سلالات !. كولاي 'توب- ‎coli strains TOP 10 ٠‏ .2 المستوعبة للكائنات الحية الدقيقة من سلالة ‎pPet12aAhydro‏ و ‎pPetl2aASalmo‏ المودعة بواسطة: ‎Danisco A/S of Langebrogade 1, 016-1001 Copenhagen K, Denmark \e‏ وذلك تحت وبمقتضى معاهدة بودابست ‎Budapest‏ للتعرف الدولي على الكائنات الدقيقة المودعة لأغراض عملية منح البراءات في: ‎National Collection of Industrial, Marine and Food Bacteria (NCIMB) 23 St.
Machar‏ ‎Street, Aberdeen Scotland, GB on 22 December 2003‏ ‎٠‏ تحت أرقام الدخول أو الإيداع 41204 ‎NCIMB‏ و 41205 ‎(NCIMB‏ على التوالي.
)0 وقد يكون إنزيم ‎Jal‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في واحدة من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي لإنزيم آسيل ترانسيفراز جليسرول لدهن فوسفاتي ‎phospholipid glycerol acyl transferase‏ ويشتمل الإنزيم ‎enzyme‏ المذكورة على تلكم المفصولة من فصائل أروموناس ‎Aeromonas‏ . يفضل أروموناس هيدروفيلا ‎Aeromonas‏ ‎hydrophila ©‏ أو أ. سالموئيسيدا ‎<A. salmonicida‏ والأكثر تفضيلاً ‎J‏ سالمونيسيدا ‎A.‏ ‎salmonicida‏ أو متغايراتهم. والأكثر تفضيلاً من إنزيمات أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في الاختراع الحالي تلكم التي تشيفر عن طريق المتتالية بالأرقام التعريفية للهوية 1 ‎fF‏ ‎TE 6‏ و ‎YO‏ وسوف يتعرض الشخص العامل في هذا المجال على أنه من المفضل ‎٠‏ أن تكون الببتيدات الإشارية ل (إنزيم ‎Jeu) (enzyme‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase‏ قد إنقسمت أثناء تمييز الترانسيفيراز» وأن الببتيد الإشاري ‎signal peptides‏ للمتتالية التي تحمل الأرقام التعريفية للهوية ‎٠‏ 7؛ ‎١6 cf‏ و ‎VT‏ هى الأحماض الأمينية ‎NA-Y amino acids‏ ومن ثم؛ فإن المناطق الأكثر تفضيلاً هى أحماض أمينية ‎PTO‏ للمتتالية المتعرف على هويتها بالرقم (١)؛‏ والمتتالية المتعرف على هويتها بالرقم ؟ (أ. هيدروفيليا ‎(A. hydrophilia‏ ‎١‏ والأحماض الأمينية ‎FYE‏ للمتتالية بالرقم التعريفي للهوية )£( ورقم ‎(V0)‏ ورقم ‎٠6‏ (أ. سالمونيسيدا ‎(A. salmonicida‏ وعند الإستخدام للتعرف على وتعيين مثلية الهوية لمتتاليات أحماض الأمينو ‎camino‏ يفضل أن تكون المحاذاة كما وصف هنا لمتتالية ناضجة ‎mature‏ ‎.sequence‏ ‏في أحد التجسيدات؛ يتضمن إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في ‎٠‏ -_ الاختراع الحالي من متتالية حمض الأمينو ‎amino‏ في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(V1)‏ ‏أو يتضمن (أو يتكون من) متتالية حمض أمينو ‎amino‏ التي تتساوي في الهوية بقدر على ض ل 71 oY
الأقل 9670 وعلى الأقل 9675؛ وعلى الأقل ‎Shao‏ وعلى الأقل 9690؛ وعلى الأقل
05 وعلى الأقل 9648 بالمتتالية بالرقم التعريفي بالهوية )07(
يتم في أحد التجسيدات تمييز (بمعنى التحويل إلى شفرة) إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏
‎transferase enzyme‏ المستخدم في الاختراع الحالي عن طريق متتالية نيكليوتيدية ‎nucleotide ©‏ تتضمن (أو تتكون من) متتالية نيكليوتيدية ‎nucleotide‏ موضحة في المتتالية
‏المتعرف على هويتها بالرقم ‎(TA)‏ أو المتضمنة (أو المكونة من) متتالية نيكليوتيدية
‎9660 ‏لها 96970 على الأقل؛ أو 9675 على الأقل. أو 96858 على الأقلء أو‎ Nucleotide
‏على الأقل؛ أو 9648 على الأقل؛ أو 96548 على الأقل من هوية المتتالية المتعرف على
‏هويتها بالرقم ‎(TA)‏
‎٠‏ ومن ثمء؛ فإن أغلب المناطق المفضلة لتعيين المثلية (أو الهوية) ما يتعلق بالأحماض الأمينية 4--8؟؟ للمتتالية المتعرف على هويتها بالرقم ‎)١(‏ و (©) (آ. هيدروفيليا ‎(A. hydrophilia‏ والأحماض الأمينية 49١-7؟؟‏ للمتتاليات المتعرف على هوياتهم بالأرقام التعريفية ‎V0 of‏ 5. )1 سالمونيسيدا ‎L(A. salmonicida‏ وتكون المتتاليات التي تحمل هويات لها أرقام تعريفية ‎(VE)‏ و ‎(TO)‏ هى متتاليات بروتينية ناضجة من إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏
‎transferase enzyme 5‏ )( من أ هيدروفيليا ‎A. hydrophilia‏ و أ. سالمونيسيدا ‎A.‏ ‎csalmonicida‏ على التوالي؛ والتي قد أو قد لا يعتريها تعديل آخر إنتقالي لاحق ‎post-‏ ‎.translational modification‏ يمكن ان يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ الذي قد لا يفصل ‎La‏ ‏من فصيلة 'ثرموبيفيدا ‎isolated‏ يفضل؛ ت. فوسكا ‎fusca‏ .1 والأكثر تفضيلاً التي تمت
‎Ye‏ شيفرتها (تحويلها إلى شفرة) عن طريق المتتالية المتعرف على هويتها بالرقم التعريفي ‎(YA)‏
‎YAAT 0 oy ‏المناسب المستخدم طبقاً‎ acyl transferase enzyme ‏وقد يتضمن إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏للاختراع الحالي و/ أو في طرق الاختراع الحالي على أي من متاليات الأحماض الأمينية‎ ‏الآتية:‎ nucleotide ‏التالية و/ أو مشيفرة بواسطة المتتاليات النيكيوتيدية‎ ‏يظهر نشاطاً إنزيمياً‎ polypeptide ‏أ) حمض نووي الذي يعمل على تشفير بولي ببتيد‎ ‏و 9670 على الأقل مطابقا (ويفضل‎ acyl transferase enzyme ‏ترانسيفيراز‎ Jud ‏الإنزيم‎ ‏على الأقل من التطابق) لمتتالية بولي ببتيد‎ 969٠ ‏وأكثر تفضيلاً‎ JEN ‏على‎ 0٠ ‏مع البولي ببتيد‎ ON ‏موضحة في متتالية يتعرف على هويتها بالرقم‎ 56 f(A) ‏الموضح في المتتالية المتعرف على هويتها بالرقم‎ polypeptide ‏يتضمن (أو يتكون من) متتالية حمض‎ (isolated) polypeptide ‏ب بولي ببتيد (مفصول)‎ ‏كما وضح في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية )17( المتتالية المتعرف على‎ amino ‏أمينو‎ ٠ ‏أو متتالية حمض أميني التي تتطابق بنسبة 9670 (يفضل 9680 على‎ (TA) ‏هويتها بالرقم‎ ‏على الأقل من حيث التطابق) مع المتتالية بالرقم‎ 969٠0 ‏من التطابق؛ وأكثر تفضيلاً‎ JY) ‏أو المتوالية المتعرف على هويتها بالرقم (68)؛‎ (V1) ‏التعريفي للهوية‎ cacyl transferase enzyme ‏حمض نووي يعمل على تشفير إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ fa ‏موضحة في‎ nucleotide ‏فيه الحمض النووي يتضمن (أو يتكون من) متتالية نيكليوتيدية‎ ١ ‏التي تكون متطابقة‎ nucleotide ‏كمتتالية لها رقم تعريفي للهوية )£9( أو متتالية نيكليوتيدية‎ ‏بنسبة 9670 على الأقل (يفضل حوالي 9680 على الأقل؛ وأكثر تفضيلاً بنسبة +969 على‎ ‏كمتتالية ذات رقم تعريفي‎ Asa sell nucleotide ‏الأقل من التطابق) مع المتتالية النيكليوتيدية‎ ‏للهوية (449)؛‎ ‏مجس نووي يتضمن متالية‎ ha ‏د) حمض نووي يهجن تحت ظروف تهجينية أو مقيدة‎ Ye £9 ‏موضحة كمتتالية يمكن التعرف عليها هويتها بالرقم التعريفي‎ nucleotide ‏نيكليوتيدية‎ ‏الغا‎
وتحول إلى شفرة بولي ببتيد ‎polypeptide‏ تظهر نشاطا إنزيميا لإنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ ¢ ه) حمض نووي ‎nucleic acid‏ بشكل شطراً 71 من مثتاليات الحمض النووي ‎a said‏ عليها في الفقرة ‎of‏ أو ج)؛ أو د)؛ أو 0 و) بولي ببتيد ‎polypeptide‏ عبارة عن شطرة من البولي ببتيد ‎polypeptide‏ المنصوص عليه في ب). إنزيم اسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من الطرق والإستخدامات طبقاً للاختراع الحالي والذي قد يتكون من إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ الذي قد يفصل أيضاً من فصيلة إستربتوميسيس ‎«Streptomyces‏ يفضل ‎٠‏ إس. أفرميتيس ‎eS. avermitis‏ وأكثر تفضيلاً المشيفرة بواسطة المتتالية المتعرف عليها بالرقم التعريفي ‎(FY)‏ والإنزيمات المحتملة الأخرى المستخدم في الاختراع الحالي من فصيلة إستربتوميسيس ‎Streptomyces‏ تشتمل على تلكم المشيفرة (المحولة إلى شفرات) بواسطة المتتاليات التي يمكن التعرف على هوياتهم بالأرقام التعريفية فت ف يك نكت ‎AY AY‏ ‎FY و١ Of‏ ‎٠‏ قد يفصل أيضاً إنزيم المستخدم في الاختراع من فصيلة كورينباكتريوم ‎«Corynebacterium‏ ‏يفضل سي. إفيشنز ‎efficiens‏ .©؛ والأكثر تفضيلاً تلك الفصيلة من الكائنات المشيفرة بواسطة المتتالية بالرقم التعريفي للهوية )79( ض ومن المناسب؛ ان يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من الطرق و/ أو الإستخدامات طبقاً للاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme ٠‏ الذي يتضمن أي واحد من متتاليات الأحماض الدهنية الموضحة كمتتاليات بأرقام معرفة للهوية وهى 77 78 40 41 ‎(EY‏ £0 أو 497 أو متتالية حمض co ‏أو‎ 96377 (%Aa% %a0 ‏نوك دحك نحو‎ %VO 610 ‏تتطابق مع‎ amino ‏أمينو‎ ‏من تطابق الهوية؛ أو قد تشيفر (تحول إلى شفرات) عن طريق أي واحد من المتتاليات‎ %3A
EY 4 5 ‏الموضحة كمتتاليات تحمل الأرقام التعريفية للهوية‎ nucleotide ‏النيكليوتيدية‎ ‎WV + ‏التي تحمل تطابقاً يساوي‎ nucleotide ‏أو متتالية نيكليوتيدية‎ (EA ‏أو‎ (£7 4 ‏655ء 965977 أو 9648 على الأقل من التطابق معها.‎ 9645 960 Ae (A. Vo ‏م‎ ‏في واحد من التجسيدات من ضمن هذا الاختراع تشيفر‎ nucleotide ‏تختار متتالية نيكليوتيدية‎ ‏لإستخدام أي من طرق و/ أو‎ acyl transferase enzyme ‏إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏إستخدامات الاختراع الحالي من المجموعة المكونة من:-‎ ‏موضحة في‎ nucleotide ‏يتضمن متتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid ‏حمض نووي‎ { (FT) ‏المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ ٠ ‏لمتتالية‎ nucleotide ‏الذي يتعلق بمتتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid ‏ب حمض نووي‎ ‏يتعرف عليها بواسطة الرقم التعريقي عن طريق تدهور الشفرة الجينية؛ و‎ ‏لها على الأقل‎ nucleotide ‏يتضمن متتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid ‏حمض نووي‎ (7 ‏الموضحة في المتتاليات بالرقم‎ nucleotide ‏من تطابق الهوية بالمتتالية النيكليوتيدية‎ 707٠ (7) ‏التعريفي للهوية‎ ٠ ‏المستخدم في‎ acyl transferase enzyme ‏وفي تجسيد للاختراع؛ فإن إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ acyl ‏أي طريقة من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏وضح في المتتالية‎ LS amino ‏الذي يتضمن متتالية حمض أمينو‎ transferase enzyme ‏ذات تطابق معها بنسبة‎ amino ‏أو متتالية حمض أمينو‎ (TV) ‏المتعرف على هويتها بالرقم‎ ‏من حيث الهوية.‎ 3٠0 XL ‏تخ‎ ٍ a ‏المستخدم في‎ acyl transferase enzyme ‏تر انسيفيراز‎ Jal ‏؛» قد يكون إنزيم‎ Al ‏وفي تجسيد‎ acyl ‏أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏الموضحة‎ amino ‏يتضمن متتانية واحدة من متتاليات حمض الأمينو‎ transferase enzyme ‏أو متثالية حمض أمينو‎ EY £0 (EF 41 460 (FA CTV ‏كمتتالية لتعريف الهوية برقم‎ ‏محفت 45م 9647 أو‎ Yds Fro ‏التي تتطابق معها بنسبة .افق .6ق‎ amino © ‏على الأقل من حيث التعريف؛ أو قد تشيفر عن طريق أي من المتتاليات النيكليويتيدية‎ 4
Allie ‏أو‎ £A ‏الموضحة كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية 749 47؛ 44 £7 أو‎ nucleotide ‏.6م96 ممق .9641 محمك‎ Ve FY. ‏بتطابق للهوية بنسب‎ nucleotide ‏نيكليوتيدية‎ ‏أرى 44م‎ 9647 6 ‏المستخدم في‎ acyl transferase enzyme ‏وفي تجسيد آخر ؛ قد يكون إنزيم أسيل تراتسيفيراز‎ 0٠ acyl ‏عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ Jad ‏أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع‎ ‏الموضحة في المتتاليات بالأرقام‎ amino ‏يتضمن أي من متتاليات أمينو‎ transferase enzyme ‏التي تتطابق على‎ amino sud ‏41؛ £0 7؛ أو متتالية حمض‎ 40 (FA ‏المعرفة للهوية‎ ‏حزق دحؤى تحوى لأحوك‎ TAS ‏الأقل من حيث الهوية بنسب 6176 قلاف نااك‎ ‏أو 9698 بالنسبة للإستخدامات الموصوفة هنا.‎ ve ‏المستخدم في أي‎ acyl transferase enzyme ‏ترانسيفيراز‎ anal ‏يكون إنزيم‎ al ‏وفي تجسيد‎ acyl ‏من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏موضحة كمتتالية بالرقم‎ amino ‏يتضمن أي واحد من متتاليات أمينو‎ transferase enzyme ‏التي لها تطابق من حيسث‎ amino ‏أو 7؛ أو متثالية حمض أمينو‎ (Ee (FA ‏التعريفي للهوية‎
PAT ‏محمق‎ ha HAS ‏.نفك‎ HVE HY ‏التعرف على الهوية بنسب حولي‎ yy ‏أو 9698 للإستخدامات الموصوفة هنا في هذا الوصف.‎ 969 ‏ا تخ‎ ov acyl ‏وأكثر تفضيلاً؛ وفي تجسيد آخر للاختراع؛ يمكن ان يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏المستخدم في طريقة من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي‎ transferase enzyme ‏موضح كمتتالية يتعرف عليها‎ acyl transferase enzyme ‏ترانسيفيراز‎ Jal ‏عبارة عن إنزيم‎ ‏يتطابق معها من حيث التعرف‎ amino ‏من خلال الهوية برقم (7؛) أو متتالية حمض أمينو‎ %aY ‏مدحجىك تحمؤق‎ a+ YA FAs ‏دلافمىك‎ (PV. ‏على الهوية بنسب على الأقل‎ © 6446 ‏أو‎ ‏المستخدم في أي من‎ acyl transferase enzyme ‏وفي تجسيد آخر لإنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ acyl transferase ‏طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ (£7) ‏يتضمن متتالية الحمض الأميني كمتتالية يمكن التعرف على هويتها بالرقم‎ () enzyme (PAS 68.2 ‏التي لها تتطابق هويتها بنسب‎ amino ‏أمينو‎ (mes ‏أو )££( متتالية‎ ٠ ‏محقم‎ J %AY %aT ‏محكك‎ 8 ‏المستخدم في‎ acyl transferase enzyme ‏قد يكون إنزيم أسيل تراتسيفيراز‎ » DA ‏وفي تجسيد‎ acyl ‏أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏بالرقم التعريفي للهوية )£1( أو‎ amino ‏يتضمن متتالية حمض أمينو‎ transferase enzyme 968. ‏دلامك‎ KV ‏التي تتطابق معها على الأقل بنسب‎ amino sual ‏حمض‎ Allie ١ ‏.حمق محكاف تحمف 6477 § محم‎ YAo acyl transferase enzyme ‏تر انسيفيراز‎ Jou ‏للاختراع؛ قد يشيفر إنزيم‎ Al ‏وفي تجسيد‎ ‏المستخدم في أي واحد من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي وذلك عن طريق حمض‎ ‏نووي مختار من المجموعة المكونة من:‎ ‏موضح في‎ nucleotide ‏يتضمن متتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid ‏حمض نووي‎ ( Y. ‏المتتالية بالرقم التعريفي للهوية رقم 36؛‎ oA ‏للمتتالية‎ nucleotide ‏الذي يتعلق يمتتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid ‏ب) حمض نووي‎ ‏بالرقم التعريفي للهوية رقم (7") عن طريق تدهور الشفرة الجينية؛ و‎ 907٠١ ‏بهوية‎ nucleotide ‏يتضمن متتالية نيكليوتيدية‎ nucleic acid | ‏ج) حمض نووي‎ ‏لتعريف‎ YA ‏موضحة في المتتالية بالرقم‎ nucleotide ‏على الأقل مع متتالية تيكليوتيدية‎ ‏الهوية.‎ ‏طبقاً‎ acyl transferase enzyme ‏وفي أحد التجسيدات؛ قد يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏يمكن‎ acyl transferase enzyme ‏للاختراع الحالي عبارة عن إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏أو 1131 المودعة‎ L130 Streptomyces ‏الحصول عليه تفضيلاً من سلالات ستربتوميسيس‎ ‏عن طريق:‎
Danisco A/S of Langebrogade 1, DK-1001 Copenhagen K, Denmark Ye ‏للتعرف في الدولي على الكائنات الدقيقة‎ Budapest ‏وذلك يندرج تحت معاهدة بودابست‎ ‏المودعة لأغراض إجراءات تسجيل البراءات لدى:‎
National Collection of Industrial, Marine and Food Bacteria (NCIMB) 23 St. Machar
Street, Aberdeen Scotland, GB on 25 June 2004 ‏على التوالي.‎ (NCIMB 41227 ‏و‎ NCIMB 41226 ‏وذلك يندرج أيضاً أرقام الدخول‎ ١5 ‏المناسبة المشفرة لإتزيم‎ nucleotide ‏ان تشيفر (تحول إلى شفرة) متتاليات النيكليوتيد‎ (Sa ‏المستخدم في أي من طرق و/ أو إستخدامات‎ acyl transferase enzyme ‏أسيل ترانسيفيراز‎ acyl ‏يشفر بدوره إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ nucleotide ‏الاختراع الحالي بولي نيكليوتيد‎ ‏؛ أو قد تشيفر متثالية حمض أمينو‎ (V1 ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ transferase enzyme ‏(متتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ acyl transferase enzyme ‏لإنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ amino ٠
AN
7 0 ‏ا‎ eq ‏مناسبة المستخدم في أي‎ (acyl transferase enzyme ‏وقد تكون إنزيمات أسيل تر انسيفيراز‎ amino ‏حمض أمينو‎ Ale ‏واحد من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن‎ ‏بإستخدام معامل‎ (VV ‏التي قد يتعرف عليها بواسطة محاذاة 1131 (المتتالية بالرقم التعريفي‎ (NTI) ‏العنقودية للموجه‎ (W) Clustal ‏ولوغاريتم محاذاة إزدواجات‎ (X) Align ‏المحاذاة‎ ‏وبإستخدام معايير ضبط معييارية.‎ VectorNTI © 5. ‏من جنس وفصيلة س. آفرميتيلس‎ homologues ‏والمناظرات المثلية‎ L131 ‏تصور محاذاة‎ ‏في متتالية 1131 و س.‎ GDSY) (GDSx) ‏أن حفظ حافز‎ 1. fusca ‏وات. فوسكا‎ avermitili ‏التي إما أن‎ «GANDY ‏وحيث خانة‎ (T. fusca ‏وات. فومكا‎ 58. avermitilis ‏أفرميليتس‎ ‏(التي تعتبر بمثابة‎ (HPT) ‏و‎ (GGNDL) ‏أو‎ (GGNDA) ‏تنتمي إلى قوالب (بلوكات)‎ ‏الحفزي المحتفظ). وهذه القوالب المحتفظة الثلاثة توضح بجلاء في شكل‎ histidine ‏الهستيدين‎ ٠ (£Y) ‏وتحديداً 700000657 المجمع عليها (كما وصف في براءة‎ pram ‏وعندما تحاذي إما متتالية‎ ‏التي كشف عنها هنا في هذا‎ (L131) ‏الاختراع الدولية رقم 2004/064987 و/ أو متتالية‎ ‏يكون من المحتمل التعرف على ثلاثة مناطق‎ (TV ‏الوصف (المتتالية بالرقم التعريفي‎ ‏براءة الاختراع الدولية‎ had) HTP ‏وقالب‎ GANDY ‏وقالب‎ «GDSx ‏محفوظة؛ وهى قالب‎ ٠ ‏رقم 2004/064987 لتفاصيل أخرى).‎ ‏وصف في براءة‎ LS) ‏وتحديداً 700100657 المجمع عليها‎ pam ‏متتالية‎ Ly ‏عند محاذاة‎ ‏الاختراع الدولية رقم 2004/064987) و/ أو المتتالية (1-131) التي كشف هنا في هذا‎ (YY ‏الوصف (المتتالية بالرقم التعريفي رقم‎ ‏المستخدم في أي من‎ acyl transferase enzyme ‏قد يكون إنزيم آأسيل ترانسيفيراز‎ (i Ye acyl ransferase ‏طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم أسيل تراتنسيفيراز‎
YAAT .
“+ ‎enzyme‏ الذي يتسم بحافز ‎«GDSx‏ وأكثر تفضيلاً حافز ‎GDSx‏ مختار من حافز ‎GDSL‏ أو ‎.GDSY‏ ‏و/ أو ‎(if‏ قد يكون إنزيم ‎Jed‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسفيرازن ‎acyl transferase‏ ‎cenzyme‏ الذي له بلوك ‎(GANDY) block‏ وأكثر تفضيلاً بلوك ‎(GANDY) block‏ يتضمن ‎«<GGNDx amino sil‏ يفضل ‎.GGNDL sl GGNDA‏ و/ أو ‎(ii‏ قد يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من ‎Ve‏ طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم أسيل ترانسيفيران ‎acyl transferase‏ ‎enzyme‏ الذي له بلوك ‎HTP block‏ ‎(iid‏ إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم ‎Jan‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ ‎yo‏ الذي يتسم بحافز ‎GDSx‏ أو ‎«<GDSY‏ وبلوك ‎GANDY block‏ يتضمن أمينو ‎amino‏ ض ‎«GGNDx‏ يفضل بلوك ‎GANDY block‏ أو ‎GGNDL‏ و ‎HTP‏ (هيستيدين ‎histidine‏ ‏محفوظ). ‏وبدون الرغبة في الإرتباط بأي نظرية لكيفية حدوث تفاعل إنزيم آسيل ترانسيفيراز زمه ‎transferase enzyme‏ ولسيثين ‎lecithin‏ الموجود طبيعياً في اللبن المعالج في درجات حرارة ‎v.‏ فائقة ‎(UHT)‏ لتغيير النشاط السطحي للمكونات الطبيعية للألبان و/ أو يمكن إستخدامه لإختزال مقدار الكوليسترول في اللبن. ْ اد
يشار إلى إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ هنا في هذا الوصف كإنزيم كوليسترول لجليسروفوسفولبيد أسيل ثرانسيفيراز ‎glycerophospholipid cholesterol‏ ‎Lipid‏ 2071100516058. وبمعنى ‎Jal‏ ¢ إنزيم أسيل ترانسيفيراس ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في الاختراع الحالي؛ يفضل له القدرة على "التحليل المائي" ‎“hydrolyse”‏ للدهون الفوسفاتية وفي نفس الوقت أسترة ‎esterify‏ الكوليسترول ‎cholesterol-ester‏ بإستخدام حمض دهني حر من التحلل المائي؛ ويكون هذا بمثابة تفاعل فعال وجود حفاز الترانسيفيراز 6 (بمعنى تفاعل أسترة بيني ‎interesterification‏ 5 / أو إبسترة إنتقالية ‎(transesterification‏ . ويمكن وصف درجة "التحليل المائي" كنسبة فوسفا تيديل كولين ‎phosphatidylcholine‏ ‏.© ال أو فوسفا تيديل إيثانول أمين ‎phosphatidylethanolamine (PE)‏ المحول إلى ‎lyso-‏ ‎PC‏ أو ‎dyso-PE‏ على التوالي. وعن طريق التحلل المائي ‎PC‏ في ‎(lyso-PC‏ والنسبة بين الجزء الميال للماء لجزئ الدهن الفوسفاتي ‎de sana)‏ الرؤوس القطبية) ‎(polar head group)‏ ويبدل الجزء الكاره للماء (سلاسل أحماض دهنية) ‎(fatty acid chains)‏ وعن طريق إزالة حمض دهني (أحماض دهنية مشبعة و/ اىو غير مشبعة) ‎(saturated and/or unsaturated‏ ‎fatty acids) Vo‏ يختزل الجزء الكاره للماء؛ وهكذاء مما يعمل على جعل الجزئ برمته أكثر ميلا للماء. ‎Sad‏ عن ذلك؛ قد يغير تطابق الجزئ الفراغي؛ الذي قد يؤثر على التركيبات الطورية (على سبيل المثال التركيبات الميسيلية ‎(micellation‏ المكونة عن طريق الجزيئنات في المشتت؛ وكذلك كتفاعلات بينية مع جزيئات أخرى. ‎Jie‏ بروتينات اللبن. تعرف منتجات ‎Lyso-lecithin‏ تمتلك بأنها تمتلك خواص إستحلاب محسنة. ومع درجة عالية ‎7٠‏ .-_من الأسترة البينية ‎interesterification‏ و/ أو الأسترة الإنتقالية ‎ctransesterification‏ يحتمل الحصول على قطيرات زيت أصغر في إختبار إستحلاب ‎emulsification test‏ مقارن. أ
وعن طريق تغيير الكوليسترول ‎cholesterol‏ إلى إستر كوليسترول ‎cholesterol-ester‏ مع التغيير في فوسفوتيديل كولين ‎phosphatidylcholine (PC)‏ وفوسفوتيديل إيثانول أمين إلى ‎lyso-PC‏ و 180-015 (التي لها نشاط سطحي متفوق بالمقارنة بنسبة ‎(PC/PE‏ حيث من المحتمل الحصول على منتجات البان معالجة عند حرارة فائقة بدون كوليسترول ‎cholesterol‏ ‏© وبإستخدام ثبات مستحلب محسن. ويكون هذا من الأهمية بمكان في الحصول على لبن معالجة عند درجات حرارة فائقة وخاصة في إنتاج لبن منكه معالج في درجات حرارة فائقة ‎٠ (UHT)‏ حيث أحد العيوب الرئيسية تتعلق بثبات مستحلب منخفض ومعدل عالي لتكوين قشدة ‎.rate of creaming‏ كوليسترول فوسفاتيديل كولين ,ا 7 ا 1 | : ال اا اا ص الي ‎fe f deni‏ ْ" | ا ‎TL = a Te TT‏ ‎vom)‏ أسيل ترانسيفيراز + إستركوليسترول ليزوفوسغاتيديل كولين ‎Ae‏ ‎r‏ ‎ele 7‏ : اح ‎I‏ ‎Be < ~ uk‏ 2و ,= ‎ke = =‏ 1 | - : ‎dns‏ ‎em TET‏ ‎YAAT‏
م إن إستخدام إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ كما عرف هنا في هذا الوصف ينتج عنه جزيئات صغيرة في اللبن التي تعتبر ميزة في اللبن المعالج في درجات حرارة فائقة (10117)؛ ‎Cus‏ طالما تشاهد القشدة كعيب. تكمن وظيفة إنزيم ‎Juul‏ تر انسيفير از ‎Lipid Acyltransferase‏ في أن الكوليسترول ‎cholesterol o‏ والفوسفوليبيدات ‎phospholipids‏ أو بمعنى الدهون الفوسفاتية سوف تتعير إلى كوليسترول- إسترات ‎cholesterol-ester‏ وليزو = فوسفو ليبيدات ‎«lyso-phospholipids‏ ‏تعطي مكونين ناتجين بخواص نشيطة السطح لمستحلبات دهن/ ‎.O/W emulsions ele‏ ولقد وضح أن إنزيمات آسيل ترانسيفيراز تحسن ‎BLE‏ متزايداً ضد تكوين القشدة وكذلك مستوى الكوليسترول في اللبن المعالج بالحرارة عند درجة حرارة فائقة. وهكذاء سوف لا تحتوي ‎٠"‏ المنتجات النهائية على أي أو كمية ملموسة مختزلة من الكوليسترول ولها ثبات مستحلب: يفضل أن لا يكون الاتزيم ‎enzyme‏ طبقاً للاختراع منتمياً إلى إنزيم فوسفوليبيز ‎Jie cphospholipase enzyme‏ فوسفوليبار ‎phospholipase Al‏ مصنف ‎E.C. 3.1.1.32 —S‏ 0 إنزيم فوسفوليبيز ‎phospholipase A2‏ مصنف ‎‘E.C. 3.1.1.4 —S‏ . إنزيم ‎Juul‏ ترانسيفيراز متغاير ‎Variant lipid acyl transferase‏ في تجسيد مفضل قد تشيفر متتالية النيكليوتيد ‎nucleotide‏ (بمعنى المحولة إلى شفرة) إنزيم اسيل ترانسيفيراز 071000812886 ‎Lipid‏ المستخدم في أي واحدة من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي الذي يكون بمثابة إنزيم ‎Jad‏ ترانسيفيراز متغاير ‎variant lipid‏ ‎-acyl transferase‏ ‎YAAY‏ ng
قد تستخدم متغايرات لها نشاط متزايد على الفوسفوليبيدات ‎cphospholipids‏ مثل نشاط حال
للماء متزايد و/ أو نشاط إنزيمي متزايد لانزيم ترانسيفيراز» يفضل نشاط إنزيمي متزايد
للترانسيفيراز .
يفضل ان يحضر إنزيم أسيل ترانسيفيراز متغاير ‎variant lipid acyl transferase‏ من واحد م او اكثر من معدلات احماض الأمينو ‎amino acid modifications‏ لانزيم اسيل ترانسيفيراز
‎lipid acyl transferases‏ كما تم وصفه في الاعلى.
‏وبصفة مناسبة؛ قد يكون إنزيم ‎Jad‏ ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ المستخدم في أي
‏من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آأسيل ترانسيفيراز ‎Lipid‏
‎« variant lipid ‏الذي قد يكون بمثابة إنزيم آسيل متغايرعية:]: ابرع‎ Acyltransferase (GDSX ‏بأنه يتضمن متتالية حافز حمض دهني‎ enzyme ‏وفي هذه الحالة؛ قد يميز الانزيم‎ ١
‏حيث فيه ‎X‏ تكون واحداً أو أكثر من رواكد حمض الامينو ‎amino‏ الأتية كل ‎VA‏ ل كل
‎MN © <Q 1 7 |‏ أو 5؛ حيث فيه الانزيم ‎enzyme‏ يتضمن واحداً أو أكثر من تعديلات
‏حمض الامينو ‎amino‏ المقارنة بالمتتالية الاصلية في أي واحد أو أكثر من رواكد حمض
‏الامينو ‎amino‏ المعرفة في المجموعة ؟ أو المجموعة ؛ أو المجموعة ‎١‏ أو المجموعة 7 ‎WS) yo‏ عرف في ‎WO2005/066347‏ وهنا في هذا الوصف أدناه).
‎eg‏ سبيل المثال؛ قد يميز إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ بأن الاتزيم
‎enzyme‏ يتضمن حافز ‎Allie‏ حمض أمينو ‎(GDSX‏ حيث ل تكون واحدا أو أكثر من رواكد
‏أحماض الامينو ‎amino‏ الأتية ل هه 27 1 تل ل 1ل ‎MN TQ‏ أو ‎S‏ حيث فيه
‏الانزيم 3 ‎enzyme‏ تكون واحداً أو أكثر من تعديلات أحماض الامينو ‎amino‏ مقارنة ,, بالمتتالية الاصلية في أي واحدة أو أكثر من رواكد حمض الامينو ‎amino‏ المعرفة في
‏المجموعة ؟ أو المجموعة ؛ أو المجموعة ‎١‏ أو المجموعة ‎١‏ (كما عرف في
‎Lia 5 WO2005/066347‏ في هذا الوصف أدناه) المعرفة بواسطة المتتالية الاصلية المذكورة المحاذية تركيبياً للنموذج التركيبي 010480 المعرف هنا في هذا الوصف؛ والذي يفضل الحصول عن طريق المحاذاة التركيبية لاحداثيات تركيب بلوري مع 11710.03 و/ أو 8 كما هو معرف في ‎WO2005/066347‏ والموضحة هنا في هذا الوصف أدناه. وفي تجسيد آخرء قد يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ المستخدم في أي من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز متغاير ‎variant lipid acyltransferase‏ الذي قد يتميز بأن الانزيم يتضمن حافز متتالية حمسض الامينو ‎«GDSX‏ حيث ‎X‏ تكون واحداً أو أكثر من رواكد أحماض الامينو ‎amino‏ الاتية ‎L‏ ‎(A‏ لت 1 تل ال 1 ‎MN CT <Q‏ أو 5؛ حيث فيه الانزيم ‎enzyme‏ المتغاير يتضمن واحداً أو أكثر من تعديلات أحماض أمينو مقارنة بالمتتالية أصلية في أي واحدة أو أكثر من رواكد الاحماض الدهنية ‎Ald)‏ في المجموعة ¥ المعرفة عندما تتحاذى المتتالية الاصلية المذكورة مع المتتالية ‎pfam‏ المجمع عليها (المتتالبة بتعريف الهوية رقم "- الشكل “) والمعدلة طبقاً لنموذج تركيبي 010480 لضمان تراكب أفضل كما عرف في ‎WO2005/066347‏ وهنا أدناه في هذا الوصف.
‎١‏ وبصفة مناسبة؛ قد يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ المستخدم في أي من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز متغاير ‎variant‏ ‎lipid acyltransferase‏ الذي قد يتضمن متتالية حمض أمينو ‎٠‏ التي توضح كمتتاليات بالارقام بالرقم التعريفية للهوية ك ‎SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ‏
‎ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID ‏ب‎ ‎No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID
‎YAAT in
No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID
No. 30, , SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 or SEQ ID No. 35 ‏عدا تعديلات حمض واحد أو أكثر من أحماض دهنية في أي واحد أو أكثر من رواكد‎ Les ‏(كما عرف في‎ ١ ‏أحماض أمينو معرفة في المجموعة ؟ أو المجموعة ؛ أو المجموعة‎ ‏وهنا في هذا الوصف أدناه) المتعرف عليها عن طريق محاذاة المتتالية‎ 1702005/066347
YE ‏بإستعمال المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ ‏كونه إنزيم‎ Lipid Acyltransferase ‏وفضلاً عن ذلك؛ قد يتغاير إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏الذي يتضمن متتالية حمض أمينو 0 توضح‎ Lipid Acyltransferase ‏آسيل ترانسيفيراز‎ ‏كمتتاليات بأرقام تعريفية للهوية الآتي‎ ‏أ‎ ‎SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ‏ض‎ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID
No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID
No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID
No. 30, , SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 or SEQ ID No. 35 ‏في أي واحد أو أكثر من‎ amino ‏فيما عدا تعديل واحد أو أكثر من تعديلات أحماض أمينو‎ ve ‏أو‎ ١ ‏رواكد الاحماض الامينية المعرفة في المجموعة ؟ أو المجموعة ؛ أو المجموعة‎ ‏كما عرف في 7 وفي الوصف أدناه.؛ والمتعرف عليها بواسطة‎ ١7 ‏المجموعة‎ ‏المتتالية الاصلية المذكورة والمحاذية تركيبياً النموذج التركيبي 710480 المعرفة هنا في هذا‎ ‏الوصف؛ والتي يحصل عليها تفضيلاً عن طريق المحاذاة التركيبية لاحداثيات التركيب‎
W02005/066347 ‏كما لقن في إطار‎ IDEO.PDB ‏و/ أو‎ IIVN.PDB ‏البلوري 010480 مع‎ "٠ old ‏وهنا في هذا الوصف‎ ‏م"‎ 0
Tv وفضلاً عن ذلك؛ قد يكون إنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ بمثابه إنزيم أسيل تر انسيفير از ‎variant lipid acyltransferase‏ يتضمن ‎Allie‏ حمض أمينو ‎amino‏ حيث توضح متتالية حمض الامينو كمتتالية بالاقام التعريفية للهوية
SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ
ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID»
No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID
No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID
No. 30, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 or SEQ ID No. 35 ‎Lad‏ عدا تعديل واحد أو أكثر من تعديلات أحماض دهنية في أي من رواكد أحماض الامينو ‎٠‏ الملقنة في المجموعة ؟ المتعرف ‎Lede‏ عند محاذاة المتتالية الاصلية المذكورة مع المتتالية ‎pam‏ (المتتالبة بالرقم التعريفي للهوية ‎(Y‏ والمعدلة طبقاً لنموذج تركيبي من 010480 لضمان ‏أفضل ملائمة للتركيب كما يلقن خلال ‎WO2005/066347‏ والوصف هنا أدناه. ‏يفضل؛ يكون الانزيم ‎enzyme‏ الاصلي عبارة عن إنزيم ‎enzyme‏ يتضمن؛ أو يكون بمثابة ‏مناظر مثلى لمتتالية موضحة كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية 4 و/ أو متتالية بالرقم م _التعريفي ‎١١‏ و/ أو المتتالية بالرقم التعريفي ‎Yo‏ ‏يفضصل؛ قد يكون إنزيم أسيل تر انسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ بمثابه إنزيم مغاير الذي ‏يتضمن متتالية حمض أمينو والذي يوضح ‎AAS‏ برقم تعريف للهوية ‎YE‏ أو متتالية برقم ‏تعريفي للهوية ‎Yo‏ فيما عدا لواحد أو أكثر من تعديل من تعديلات أحماض أمينو في راكد ‏واحد أو أكثر من رواكد أحماض الامينو في ‎J Yodo penal‏ المجموعة ؛ أو المجموعة + ,+ أو المجموعة ‎V‏ كما عرف في ‎WO2005/066347‏ وفي هذا الوصف هنا أدناه. ‏تل
TA
DEFINITION OF SETS ‏تعريف المجاميع‎ :١ Amino ‏أحماض الامينو‎ de gana ‏لأحماض الامينو لاحظ أن المعنى بهذه الاحماض هي أحماض أمينو‎ ١ ‏المجموعة‎ ‎(of ‏والشكل‎ ov ‏في 117777- الشكل‎ 0178. Asp9, Seri0, Leull, 5612, Tyrl5, ‏,44ر6‎ Asp45, Thr46, Glu69, Leu70,
Gly71, Gly72, Asn73. Asp74, Gly75, Leu76, 62106, 16107, Argl08, Leul09,
Prol10, 17113, Phel2l, Phel39, Phel40, 1160141, 17145, 1160151, Aspl54,
His157, Gly155, lle156, Pro158 ° ‏ورواكد حفزية من‎ GDSx Jie ‏وتم تجنيب؛ الحوافز أو البواعث المحتفظة بدرجة عالية‎ ‏رواكد‎ ١ ‏(الرواكد بوضع خطوط أسفلها ولتحاشي الشك؛ تعرف المجموعة‎ ١ ‏المجموعة‎ ‏وحدات أنجستروم لذرة الكربون المركزية لجليسرول‎ ٠١ ‏أحماض الامينو في حدود‎
Amino sue) ‏من أحماض‎ Y ‏في الموضع النشط للنموذج 11777. المجموعة‎ glycerol ‏(لاحظ أن ترقيم أحماض الامينو يشير إلى أحماض‎ Amino ‏مجموعة لأحماض الامينو‎ ٠ : . (Pp 10480 ‏الناضجة‎ Adal ‏الامينو في‎
Leul7, Lys22, Met23, 61740, Asn80, Pro81, Lys82, Asn87, Asn§8, Trplll, Valll2, ‏لعل‎ 14, Tyr117, Leul18, Pro156, 617159, 610160, Asn161, Pro162, Serl 63, Alal64, 518165, 561166, 610167, Lys168, Vall69, Vall70, Glul71, Alal72, Tyr179, 1115180,
Asnl81, Met209, Leu210, Arg211, Asn215, Lys284, Met285, 610289 and Val290. Ve
YAAT
‏بالمقارنة بالمجموعة ؟:‎ ١ ‏جدول الرواكد المختارة في المجموعة‎
IVN ‏النموذج‎ | P10480 ‏عدد رواكد المتتاليات الناضجة‎ 1777 ‏الرقم مناظر مثلى أ. هيد‎ ‏التركيب اله‎ 000
Gly8 | Gly32
Asp9 | Asp33 5010 Ser34
Leull | ‏5ه‎ Leul? 5112 Ser36 Serl8
Lys22
Met23
Tyrl5 | 8 Gly40
Gly44 ١ 8 Asn80
Asp4S ٠١ 9 Pro&1
Thr46 | Lys100 Lys82
Asn87 ‏ض‎ ‎Asng8 ‎Glu69 | 9 Trpll1
Leu70 | 0 Vall12
YAAT 0
ول ‎Gly71 | 21‏ ‎Gly72 | Alal32 Ala] 14‏ ‎Asn73 | Asnl33‏ ‎Asp74 | Aspl34‏ ‎Gly75 | 5 Tyr117‏ ‎Leu76 | Leul36 Leull8‏ ‎GIn106 Prol74 Prol156‏ ‎Ile107 Glyl77 Gly159‏ ‎Argl08 GInl178 GIn160‏ ‎‘LeulO9 Asnl79 Asnl6l‏ ‎Prol10 180 to 190 Pro162‏ ‎Tyrll3 Serl63‏ ‎Alal64‏ ‎Argl6s‏ ‎Serl66‏ ‏1167 ‎Lys168‏ ‎Vall69‏ ‎Vall170‏ ‎Glul71‏ ‎Alal72‏ ‎YAAT‏
ال ‎Phel21 | His198 Tyr197 Tyrl79 |‏ ‎His198 His180‏ ‎Asnl99 Asnlg8l‏ ‎Phel39 | Met227 Met209‏ ‎Phel40 | Leu228 Leu210‏ ‎Met141 | Arg229 Arg211‏ ‎Asn233 Asn215‏ 17145 ‎Lys284‏ ‎Metl51 | Met303 Met285‏ ‎Aspl154 | Asp306‏ ‎Gly155 ١ 7 66189‏ ‎Val290‏ 8 116156 ‎His157 | His309‏ ‎Pro158 | Pro310‏ المجموعة ¥ لأحماض الأمينى ‎Amino‏ ‏تتطابق المجموعة * لأحماض الامينو ‎Amino‏ مع المجموعة ‎oY‏ ولكنها تشير إلى المتتالية المشيفرة من جنس وفصيلة إيروموناس سالمونيسيدا ‎Aeromonas salmonicida‏ (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ؛)؛ بمعنى أن أعداد رواكد أحماض الامينو تكون أعلى ب ‎١8‏ راكد © في المجموعة ¥ طالما أن هذا يعكس الفرق بين 5 ‎a8‏ رواكد أحماض الامينو في البروتين ٍ اد
ل الناضج (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(TE‏ بالمقارنة بالبروتين المشتمل على ‎Ane‏ ‏إشارية (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎L(Y‏ ‏تختلف البروتينات الناضجة لإيروموناس ‎Aeromonas salmonicida GDSX Jase galls‏ (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ؛) وإيروموناس ‎Aeromonas hydrophila ds ue‏ ‎GDSX ©‏ (لمتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(YE‏ في خمسة أحماض أمينية ‎camino‏ وهي الرواكد ‎Thr3Ser, GIn182Lys, Glu309Ala, Ser310Asn, and 617318-‏ حيث راكد سالمونيسيدا ‎salmonicida‏ يدون أولاً ويدون راكد هيدروفيلا ‎ua hydrophila‏ ويكون بروتين هيدروفيلا ‎hydrophila‏ مكونا من ‎٠١7‏ حمض أميني ‎amino‏ فقط في طول ‎٠‏ سلسلته ويفتقر إلى راكد في الوضع ‎FIA‏ وتتميز الرواكد الحفزية كثيراً بنشاط عالي على دهون أو شحوم ‎Auld‏ (بمعنى ذات شقوق قطبية) مثل طبقات تحتية من جالاكتوليبيد ‎galactolipid‏ أقرب إلى بروتين إيروماناس هيدروفيا ‎.Aeromonas hydrophila‏ وأجري مسح موضعي على كل مواضع أحماض الامينو الخمسة. المجموعة ؛ لأحماض الأمينو ‎Amino‏ ‏ينتمي إلى المجموعة ؛ لأحماض الاميتو ‎Amino‏ الرواكد 83« ‎«E309 «Q182‏ 0 و 318- ‎١‏ المجموعة © لأحماض الأمينو ‎Amino‏ ‎D15N, 5186, S18V, Y30F, D116N, D116E, D157 N, Y226F, D228N 7230‏ ,1135 المجموعة + لأحماض الأمينو ‎Amino‏ ‏تتضمن المجموعة الرواكد الاتية: ‎YAAT‏ vy
Ser3, 1.6017, Lys22, Met23, Gly40, Asn80, Pro81, Lys82, Asn 87, Asn88, 110111
Vall12, Alall4, Tyr117, 160118, Prol56, Gly159, 610160, Asn161, Pro162, Serl63,
Alal64, Argl6s, Serl66, GInl67, Lys168, Vall69, Vall 70, Glul71, Alal72, Tyr179,
His180, Asnl81, 0182, Met209, Leu210, Arg211, Asn215, Lys284, Met285,
GIn289, Val290, Glu309, Ser310, -318. °c ‏في المجموعة “ إلى رواكد أحماض الامينو في المتتالية‎ amino ‏ويشير ترقيم أحماض الامينو‎ ‏الناضجة 010480 (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ©7)- وهي أحماض أمينو مناظرة في‎ ‏أعمدة فقارية أخرى يمكن تعيينها عن طريق المحاذاة المثلية و/ أو المحاذاة التركيبية مع‎
JAIVN ‏المتتالية الناضجة 010480 و/ أو‎ : ‏لأحماض الامينيو‎ ١7 ‏المجموعة‎ ٠ ‏تضم هذه المجموعة 7 الرواكد الاتية:‎ 5613, 1.6017, Lys22, Met23, 61740, Asn80, Pro81, Lys82, Asn 87, AsnS88, 110111
Vall12, Alal14, 177117, 160118, 010156, 617159, 610160, Asnl61, Prol62, 561163,
Alal64, Argl6s, 56166, 610167, Lys168, Vall69, Val170, 6010171, Alal72, 177179,
His180, Asnl81, 10182, Met209, Leu210, Arg211, Asn215, Lys284, Met285, 1o
GIn289, Val290, Glu309, Ser310, -318, Y30X ‏تختار من‎ X ‏(حيث‎ ‏م‎ CDE GHILKLMNPQR,S,T,V, or W), Y226X ‏تختار من‎ X ‏(حيث‎ ‏إل 1 .5 ب ,9 إل اا بلا ما بكا مآ ملا م مط ونا إن مط‎ or W), Y230X Ye ‏تختار من‎ X ‏(حيث‎ ‏تمأ‎ | 0
Vi ‏بلا ,6 مق ,طن مظ‎ LK, L,M,N,P,Q,R,S,T,V, or W), SI8X ‏تختار من‎ X ‏(حيث‎ ‏مق مط مظ‎ F,H,LK,L,M,N,P,Q,R, T, Wor Y), 76 ‏تختار من‎ X ‏(حيث‎ ‎A,C,E,F,G,H,LK,L,M,P,Q,R,S,T,V,WorY). ° ‏المجموعة 7 إلى رواكد الاحماض الامينية في‎ amino ‏ويشير ترقيم أحماض الامينو‎ ‏المتتالية الناضجة 210480 (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ©7)- ويمكن تعيين أحماض‎ ‏أمينو المناظرة في التركيب الفقاري للمتتاليات الأخرى عن طريق المحاذاة المثلية و/ أو‎ (1TVN ‏و/ أو‎ P10480 ‏المحاذاة التركيبية (البنائية) للمتتالية الناضجة‎ ‏ومن المناسب أن يتضمن الانزيم المغاير واحداً أو أكثر من تعديلات أحماض الامينو‎ ٠ ‏بالمقارنة بالانزيم الاصلي ض‎
S3E,A,G,K,M,Y,R,P,N, Tor G
E309Q, R or A, ‏يفضل‎ Q or R -318Y, H, Sor Y, ‏يفضل‎ 7. ‏يكون بمثابة متتالية .,1. وهكذاء يفضل‎ GDSX ‏الضمنية في حافز الراكد الحفزي‎ X ‏يفضلء‎ Ve . 6081, ‏الاصلي راكداً لحافز حمض أميني‎ enzyme ‏يتضمن الانزيم‎ first parent lipid ‏ترانسيفيراز الاصلي الاول‎ Jad ‏وبصفة مناسبة؛ قد يتضمن إنزيم‎ ‏المذكور في أي واحد من متتاليات أحماض الامينو الاتية:‎ 71056
SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ
ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID ٠
No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID No.
YAAT 0 ve 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 or SEQ ID No. 35. second related lipid ‏وبصفة مناسبة .قد يتضمن إنزيم آسيل ترانسيفيراز الثاني‎ ‏الإ أي واحد من متثتاليات أحماض أمينو الاتية بالارقام التعريفية للهوية الاتية:‎ 0516©
SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ه٠‎
ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID
No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 or SEQ 1D No. 35. ‏تعديلاً واحداً على الاقل بالمقارنة بالانزيم‎ variant enzyme ‏يجب أن يتضمن الاتزيم المغاين‎ ٠ ‏على‎ Vedat oF ‏الاصلي. وفي بعض التجسيدات؛ قد يتضمن الانزيم المغاير على الاقل‎ ‏على الأقل؛ يفضل 7 على الأقل؛‎ ١ ‏يفضل © على الأقل؛ يفضل‎ (JY) ‏يفضل ؛ على‎ SY) ‏على الأقل من تعديلات أحماض أمينو‎ ٠١ ‏يفضل 4 على الأقل؛ يفضل‎ OW ‏على‎ A ‏يفضل‎ ‏بالمقارنة بالانزيم الاصلي.‎ ‏وعند الإشارة إلى رواكد أحماض الامينو النوعية هنا في هذا الوصف»ء فإن الترقيم يتناول‎ ‏ذلك المتحصل عليه من مجاذاة المتتالية المتغيرة بالاشارة إلى المتتالية المرجعية الموضحة‎ 0 ‏أو المتتالية المعرفة برقم الهوية‎ YE ‏في المتتالية المعرفة برقم الهوية‎ ‏يفضل أن يتضمن الانزيم المتغير واحدا أو أكثر من إستبدالات أحماض‎ AT ‏وفي تجسيد‎ ‏الامينو:‎ ‏مل وى م ما نا نأ بده‎ LK, L,M,N,P,Q,R, T, V, W, or Y; and/or Yo
L17A,C,D,E,F,G H,L K, M,N, P,Q, R,S, T, V, W, or Y; and/or
YAAT 0
Vv
SISA,C,D,E,F, H, LK, ‏ما‎ M,N, P, Q,R, T, W, or Y; and/or
K22A,C,D,E,F,GGH, LL, M,N, P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
M23A,C,D,E,F, GH, LK, L,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
Y30A,C,D,E,G,H, LK, ‏ما‎ M,N, P,Q, R,S, T, V,or W; and/or
G40A,C,D,E,F, H, LK, ‏ما‎ M,N, P,Q, R,S, T, V, W, or Y; and/or ©
N8OA,C,D,E,F,G,H,L K,L,M,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
P8IA,C,D,E,F,GGH, LK, L,M,N,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
K82A,C,D,E.F,GGH,LL,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
N87A,C,D,E,F,G,H,, K,L, M,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
N8SA,C,D,E,F, GH, LK, L,M,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or ٠١
WIA, ‏مط ونان‎ F,GGH, LK, ‏ما‎ M,N, ‏بكلا ,ل‎ 5 T, V, Wor Y; and/or
VII2A,C,D,E,F, GH, LK,L, M,N,P,Q,R,S, T, W, or Y; and/or
All14C,D,E,F,G,H,LK,L,M,N,P, Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
Y117A,C,D,E,F, GH, LK, L, M,N, P,Q, R, S, T, V, or W; and/or
LIISA, C,D,E,F, GH, LK, M,N, P,Q,R, S, T, V, W, or Y; and/or Vo
P156A,C,D,E,F,G,H, LK, ‏ما‎ M,N, Q,R, S, T, V, W, or Y; and/or
DI57A,C,E,F,G, H,LK,L,M,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
GI59A,C,D,E,F, H,LK,L,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
Q160A,C,D,E,F, GH, LK, ‏ما‎ M,N,P,R,S, T, V, W, or Y; and/or
N161A,C,D,E,F, GH, LK, L,MP,Q,R,S, T,V, W, or Y; and/or Ye.
P162A,C,D,E,F, GH, LK, L, M,N, Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or 17 0
إلا
S163A,C,D,E,F, GH, LK, ‏بك مج إل ملا بألا ما‎ T, V, W, or Y; and/or
A164C,D,E,F,G ‏ملا‎ LK, L, M,N, P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
R165A,C,D,E,F,G,H, LK, L,M,N, P,Q, S, T, V, W, or Y; and/or
S166A,C,D,E,F, GH, LK, LLM, N,P, Q,R, T, V, W, or Y; and/or
Q167A,C,D,E,F,G,H,LK,L, M,N,P,R,S, T, V, W, or Y; and/or °
K168A,C,D,E,F,G,H, LL, M,N,P,Q,R, S, T, V, W, or Y; and/or
V169A,C,D,E,F,G,H, LK, ‏ما‎ M,N,P,Q,R,S, T, W, or Y; and/or
V170A,C,D,E,F, GH, LK, L, M,N, P,Q,R, S, T, W, or Y; and/or
E171A,C,D,F,G,H, LK, L, M,N, P,Q, R, S, T, V, W, or Y; and/or 'A172C,D,E,F,G,H,LK,L,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or ‏ب"‎ ‎Y179A,C,D,E,F,G,H, ‏مثا م ل ملا مالل ما مكل ما‎ 5. T, V, or W; and/or
HI180A,C,D,E,F,G, LK, L,M,P,Q,R,S, 1 ‏وأ‎ W, or Y; and/or
NI181A,C,D,E,F,G,H, LK, L,M,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
QI82A,C,D,E,F,G,H,L K,L, M,N, P,R,S, T, V, W, or Y, preferably K; and/or
M209A, C,D,E,F,GGH,LK,L,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or Vo
L2I0A,C,D,E,F, GH, LK, M, N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
R2ITA,C,D,E,F, GH, LK, L,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or ‏ملا م مط ونا ون بخ 215ل‎ LK, L,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
Y226A,C,D,E,G,H, LK, ‏ما‎ M,N, P,Q,R, S, T, V, or W; and/or
Y230A,C,D,E,G,H, LK, L, M,N, P, Q,R, S, T, V or W; and/or Ya
K284A,C,D,E,F,G,H,LL,M,N,P,Q,R,S, T,V, W, or Y; and/or
YAAR
VA
M285A,C,D,E,F,G, H,LK,L,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
Q289A,C,D,E,F,G, H,LK,L,M,N,P,R,S, T,V, W, or Y; and/or
V290A,C,D,E.F,G,H, LK, ‏ما‎ M,N, P,Q, R, S, T, W, or Y; and/or
E309A,C,D,F,G,H, LK, L,M,N,P,Q,R,S, T, V, W, or Y; and/or
S310A,C,D,E,F,G HL LK, ‏ما‎ M,N,P,Q,R, T, V,W, or Y. 2
C-terminal ‏طرفية‎ eS ‏يمكن ان يوجد اضافياً أو فضلاً لذلكء إمتدادات عن ذرة‎ ‏يفضل ان يكون الامتداد الطرفي الإضافي عند ذرة الكربون متضمناً واحداً أو‎ extensions
VL dl ‏أكثر من أحماض أمينو دهنية؛ يفضل حمض أمينو غير قطبي؛ وأكثر تفضيلاً من‎ ‏يتضمن إمتدادات‎ variant enzyme ‏أو 6. وهكذاء يتيح الاختراع الحالي أيضاً إنزيماً متغايراً‎ 318G 318177 3181 81 ‏ا ذرات كربون طرفية:‎ ٠ ‏متغايرة مفضلة نشاط تحلل مائي متناقص ضد الدهون‎ enzymes ‏قد يتسنى لإنزيمات‎ ‏وقد يتسنى‎ cphosphatidylcholine (PC) ‏فوسفاتيديل كولين‎ Jie «phospholipid ‏الفوسفاتية‎ ‎phospholipid ‏لها أيضاً نشاط إنزيمي متزايد لانزيم ترانسيفيراز من دهن فوسفاتي‎ ‏المفضلة نشاط ترانسيفيراز متزايد من‎ variant enzymes ‏يمكن ان يتسنى للانزيمات المتغايرة‎ ‏وقد يتسنى لها‎ cphosphatidylcholine ‏فوسفاتيديل كولين‎ Jie phospholipid ‏الفوسفوليبيد‎ Ve ‏نشاط تحليل ماي ضد الدهن الفوسفاتي.‎ La ‏قد ينتج عن تعديل واحد أو أكثر من الرواكد الاتية إنزيم متغاير له نشاط إنزيمي لانزيم‎ :phospholipids ‏الترانسيفيراز المطلق المتزايد ضد الدهن الفوسفاتي‎
S3, D157, S310, E309, Y179, N215, K22, 0289, M23, 11180, M209, L210, R211,
P81, V112, N&O, L82, N8§; N87 . Y. ‏ب"‎ v4 ‏وقد تختار تعديلات مفضلة معينة التي قد تتيح إنزيما متغايراً له نشاط إنزيمي لانزيم‎ ‏تراتسيفيراز من دهن فوسفاتي وذلك من واحد أو أكثر من الاتي:‎
S3A,C,D.E ‏بلا .© مل‎ LK,L,M,N,P, Q,R,T, V, Wor Y; ‏,ا تفضيلاً‎ E, K, R, A, P or M, ‏أكثر تفضيلاً‎ S3A
DIS7A, CE, F,G, ‏با بلا‎ K,L, M,N, P, Q,R, S, T, V, W or Y; Sun 01575, R, E, ©
N,GT,V,Q KorC
S310A, C.D, EF, GH, LK,L, M,N, P, Q,R, T, V, W or Y; ‏تضيلاً‎ 7 318E
E309A,C,D, E,F, GH, ‏إل بلا بلا ما مكل با‎ QR, T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ E309 R, E, ‏مآ‎ ‎8 or A ١
Y179A,C,D,E F,G, H,LK,L,M,N,P,Q,R,S, ‏7ر1‎ or W; ‏تفضيلاً‎ Y179 D, T, E,
R,N,V,K,QorS, ‏أكثر تفضيلاً‎ 8, RN, V,KorQ
N215A,C, D,E,F,G, H,LK,L,M,P,Q,R,S, T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ N215 S, L, R orY
K22A,C,D,E, F,G,H, LL, M,N, P,Q, R, S,T, V, Wor Y; ‏تفضيلاً‎ K22 E,R, Coro
A
Q289A,C, DE, ‏ما بك با بلا ,© بت‎ M,N, P,R, S, T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ 0289 R, E, ©,
PorN
M23A, C,D, E, F,G,H, LK, LN,P,Q,R,S,T, V, Wor Y; ‏تفضيلاً‎ M23 K, ©, L, ©,
TorS Y.
HI180A, C,D,E,F,G,LK,L, M,P,Q,R,S, T, V, Wor Y: ‏تفضيلاً‎ H180 Q, R or K
YAAT
A
M209 A, ‏مط رط‎ F,G H,LK,L,N,P,Q,R,S, T,V,WorY; ‏تفضيلاً‎ M209 Q, 8, R,
ANY, E,VorL
L210A,C,D,EF, GH, LK, ‏إل جلا ملظ‎ Q,R,S, T, V, Wor Y; ‏تفضيلاً‎ L210 R, A, V,
S,T,, WorM
R211A,C,D, EF, 6, ‏بلا‎ LK, ‏ما‎ M,N, P,Q, S,T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ 7 °
PS1A, C,D,E ‏بلا ,6 رق‎ LK, L, M,N, Q,R, S, T, V, W or Y; ‏فضيلاً‎ 60
VI12A,C,D,E,F,G,H,LK,L, M,N, P, QR, S, T, W or Y; ‏تفضيلاً‎ V112C
N80A, C,D,E,F, 6, ‏با بلا‎ K,L,M,P,Q,R, 8, T, V, Wor Y; ‏تفضيلاً‎ NSO R, G, N, D,
P,T,E,V,AorG
L82A,C, DE, F, 6, ‏ما بلا‎ M,N,P,Q,R,S, T, V, Wor Y; ‏تفضيلاً‎ L82N, S or E ‘a
NSSA, C,D,E,F,G,H,LK,L,M,P, Q,R, S, T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ 11880
N87A,C,D,E.F,G,H, LK,L,M, P,Q, R, S, T, V, W or Y; ‏تفضيلاً‎ N87Mor G ‏وثمة تعديل مفضل لواحد أو أكثر من الروابط الاتية ينتج عنه إنزيم متغاير ذات‎ نشاط إنزيمي متزايد ومطلق لانزيم ترانسيفيراز ضد دهن فوسفاتي: ‎S3N,R, A, 6 Ve‏ ‎M23K,Q,L,G,T,S‏ ‎HISOR‏ ‎G‏ 182 ‎Y179E,R,N, V,K or Q‏ ‎E309R,S,LorA Y.‏ تنغ
AN
‏وهي الحالة خاصة حالة إستخدام المتتالية المعيارية‎ NSOD ‏إن أحد التعديلات المفضلة هي‎ ‏وهكذاء قد تكون المتتالية المعيارية‎ backbone ‏كعمود بنائي‎ YO ‏بالرقم التعريفي للهوية‎ ‏وقد يضاف هذا التعديل مع واحد أو أكثر من‎ .٠7 ‏عبارة عن متتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ ‏تعديلات أخرى. ومن ثم؛ ففي ثمة تجسيم مفضل للاختراع الحالي؛ فإن متتالية النيكليوتيد‎ ‏المستخدم في أي‎ Lipid Acyltransferase ‏التي تشيفر إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ nucleotide ©
Lipid ‏واحد من طرق وإستخدامات الاختراع الحالي وقد يشفر إنزيم أسيل ض ترانسيفيراز‎ ‏أو متتالية حمض أمينو‎ OF ‏الذي يتضمن المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ 710805956 ‏أو أكثرء‎ 96960 Sami ‏يتسنى لها 9675 أو أكثرء. يفضل 9688 أو أكثرء وأكثر‎ amino ‏وحتى أكثر تفضيلاً 9696 أو أكثر؛ وحتى أكثر تفضيلاً 1644 أو أكثر؛ وربما 1644 أو أكثر‎
Yo ‏من هوية المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ ٠ ‏هنا في هذا الوصف؛ يكون‎ amino ‏لوحظ أعلاه؛ وعند الإشارة إلى رواكد حمض أمينو‎ WS ‏الترقيم هو ذلك الترقيم من محاذاة المتتالية المتغايرة مع المتتالية المعيارية الموضحة كمتتالية‎
Yo YE ‏بالرقم التعريفي للهوية‎ ‏التي تشيفر إنزيم أسيل‎ nucleotide ‏سبيل الإشارة؛ قد تشيفر المتتالية النيكليوتيدية‎ Jes ‏المستخدم في أي واحد من طرق وإستخدامات‎ Lipid Acyltransferase ‏ترانسيفيراز‎ ١ ‏الموضحة في‎ amino acid sequence ‏الاختراع الحالي دهناً يتضمن متتالية حمض الامينو‎ ‏الموضحة بالرقم‎ amino ‏أو متتالية حمض أمينو‎ ١١ ‏المتتالية المعرفة من حيث هويتها بالرقم‎ ‏يفضل 9685 أو‎ «SE ‏التعريفي للهوية الذي يتسنى ب 9670 أو أكثرء أو 9675 أو‎ TA ‏أكثرء وأكثر تفضيلاً 9696 أو أكثر وحتى أكثر تفضيلاً 9645 أو أكثرء ربما 9644 أو أكثرء‎ ‏أو‎ ١١6 ‏أو حتى أكثر تفضيلاً كذلك 96944 أو أكثر من درجة هوية المتتالية بالرقم التعريفي‎ .variant enzyme ‏وقد يعتبر هذا الانزيم بمثابة إنزيم مغأير‎ . 4
AY
‏على‎ degree of identity ‏لتحقيق أهداف أو أغراض الاختراع الحالي؛ تعتمد درجة الهوية‎ ‏التي تكون لها نفس الذاتية ؛ و أن درجة الهوية ؛ طبقا للاختراع الحالي‎ All) ‏عدد عناصر‎ ‏لمتتاليات أحماض أمنيو قد تعين بصفة مناسبة عن طريق برامج حاسوبية (كمبيوترية)‎ ‏و‎ (Invitrogen Corp.) ‏من شركة إنفتروجين‎ (NTI 10( ‏معروفة في الفن التقني؛ مثل الموجة‎ ‏مع‎ BLOSUMG2 (1Y ‏للمحاذاة في ازدواجات؛ يفضل أن يستخدم نظام إحراز نقاط (بلوسوم‎ ٠
Gap jail ‏و نقطة جزاء امتداد‎ ٠٠٠١ = Gap opening penalty ‏نقطة جزاء فتح ثغرات‎ ٠٠.١ =extension penalty ‏بالنسبة إلي متتالية‎ degree of identity ‏ومن المناسب إن درجة تكون التعرف على الهوية‎ ‏يفضل خلال‎ « contiguous amino acids ‏حمض امينو متجاور‎ Yo ‏حمض الأمينو تعين خلال‎ aes 5٠ ‏متجاور؛ يفضل خلال‎ sud ‏حمض امينو ؛ يفضل على الأقل £0 حمض‎ © ٠ ‏المتتالية‎ gle ‏امينو متجاور؛ يفضل على الأقل 760 حمض امينو متجاور. ومن المناسب‎ ‏النيكيوتيدية المشيفرة لانزيم آسيل او انزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في الاختراع الحالي‎ : ‏قد يمكن الحصول عليه ؛ تفضيلا من كائنات من واحد او اكثر من الاجناس الاتيه‎
Saccharomyces ‏ساكاروميسيس‎ ¢Streptomyces ‏؛ ستربتوميسيس‎ Aeromonas ‏ايروموناس‎ ‏ستربتوكوكس؛ لاكتوباسيلوس‎ «Mycobacterium ‏مايكوبكتريوم‎ «Lactococcus ‏لء لاكتوكوكس‎ ٠١ ‏كامبيلوباكتر‎ Bacillus ‏دوسلفيتوباكتريوم (070نة©165015005861؛ ياسيلوس‎ «Streptococcus ¢ Sulfolobus ‏ء سلفولويس‎ Xylella ‏زيليلا‎ ¢ Vibrionaceae ‏فيبريوناسي‎ « Campylobacter
Listeria ‏ليستريا‎ ¢ Schizosaccharomyces ‏شيزوساكروميسيس‎ ¢ Aspergillus ‏اسبريجللوس‎ ‎¢ Ralstonia ‏رالستونيا‎ « Mesorhizobium ‏ميزورهيزوبيوم‎ « Neisseria ‏نيسيريا‎ + «Thermobifida ‏ترمويفيدا‎ «Candida ‏كانديدا‎ « Xanthomonas ‏زاتثوموناس‎ Y. . Corynebacterium ‏وكوريذباكتريوم‎ ‎YAM
: AY acyl transferase ‏وبصفة مناسبه؛ فان متتاليه النيكليوتيديه؛.المشفرة لانزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏او انزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في الاختراع الحالي يمكن الحصول عليه؛‎ enzyme ‏ويفضل ان يحصل عليه من واحد أو أكثر من الكائنات الآتية: إيرموناس هيدروفيلا‎ ‏؛‎ Aeromonas salmonicida ‏إيرونوماس سالمونيسيدا‎ ¢ Aeromonas hydrophila ‏ستربتوميسيس ريموزس‎ oo Streptomyces coelicolor ‏ستربتوميسيس كوليكولور‎ © ‏استربتوكوكسي بيوجينس‎ « Mycobacterium ‏ميكوباكتربوم‎ «Streptomyces rimosus ‏ستربتوكوكسي‎ ¢ Lactococcus lactis ‏لاكتوكوكسي لاكتيسي‎ » Streptococcus pyogenes
Streptococcus ‏ستربتوكوكسي ثرموفيليس‎ «Streptococcus pyogenes ‏بيوجينس‎ ‎« Streptomyces thermosacchari ‏ستربتوميسيس ترموساخاري‎ «thermophilus ‏الاكتوباسيلوس هلفتيكسي:‎ Streptomyces avermitilis ‏ستربتوميسيس أفرمتيليس‎ ٠
Desulfitobacterium ‏دوسيلفيتوباكتريوم دي هالوجثناتنس‎ ¢ Lactobacillus helveticus
Campylobacter ‏؛ كامبيلوباكتر جوجيني‎ Bacillus sp ‏؛ فصيلة باسيلوس‎ dehalogenans ‏؛ سلفولوبسي‎ Xylella fastidiosa ‏زيليللا فاستيديوسا‎ « Vibrionaceae ‏فيبريوناشي‎ «jejuni
Saccharomyces ‏ساكاروميسيس سرفيسيا‎ «Sulfolobus solfataricus ‏سولفاتاريكسي‎ ‏سيزوسكاروميسيس بومبيه‎ ¢ Aspergillus terreus ‏أسبريجللوسي تيروسي‎ ¢ cerevisiae Vo ‏ليستريا مونوسيتو جيني‎ ¢ Listeria innocua ‏ليستريا إنوكوا‎ ٠ Schizosaccharomyces pombe ‏ميزوريزوبيوم‎ « Neisseria meningitidis ‏نيسيريا فينجيتيدس‎ +» Listeria monocytogenes « Ralstonia solanacearum ‏_رالستونياسولانا سيروم‎ « Mesorhizobium loti Js! ‏زانثوموناس اكسونوبوديس‎ «Xanthomonas campestris ‏زانثوموناس كامستريس‎ ‏ثرموفيدا فوسكا‎ «Candida parapsilosis ‏كانديدا باربسيلوزيس‎ Xanthomonas axonopodis | ٠ .Corynebacterium efficiens uid ‏وكورين باكتريوم‎ Thermobifida fusca
YAAT
عم وفي أحد جوانب الاختراع؛ تشفير المتتالية النيكليوتيدية تفضيلاً المشيفرة لإنزيم أسيل ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ المستخدم في أي من طرق و/أو استخدامات الاختراع الحالي لإنزيم ‎Juul‏ ترانسيفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ طبقاً للاختراع الحالي الذي يمكن الحصول ‎cade‏ يفضل المتحصل عليه أو المشتق من واحد أو أكثر من فصائل إيروموناس ‎spp. ©‏ 80000028 إيروموناس هيدروفيلا ر أو إيروموناس سالمونيسيدا ‎Aeromonas‏ ‎.salmonicida‏ ‏وفي أحد جوانب الاختراع؛ يكون ثمة إنزيم آسيل ترانسيفيراس المستخدم في أي من طرق و/أو استخدامات الاختراع الحالي عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز يمكن الحصول عليه أو اشتقاقه يفضل من واحد أو أكثر من فصائل إيروموتناس ‎(Aeromonas spp.‏ ‎٠‏ إيروموناس هيدروفيلا ر أو إيروموناس سالمونيسيدا ‎Aeromonas salmonicida‏ . : يمكن التعرف روتينيا على انزيمات تعمل كأنزيمات أسيل ترانسيفيراز طبقا للاختراع الحالي بأستخدام التحليل الوارد هنا أسفله في هذا الوصف: تحليل نشاط إنزيم تر انسيفيراز ‎ASSAY FOR TRANSFERASE ACTIVITY‏ يفضل قياس نشاط إنزيم ترانسيفيراز عن طريق المقدار ‎molar amount J sell‏ لإستر ‎No‏ كوليسترول بواسطة تحويل الآسيل من دهون فوسفاتية ‎phospholipids‏ و/ أو دهون في اللبن إلي كوليسترول بالنسبة إلي مقدار الكوليسترول المتاحة أصلا. يتم حضن اللبن مع الانزيم أو الماء (للتحكم) لمدة ‎Te‏ دقيقة عند ‎5٠‏ درجة مئوية. تفصل دهون اللبن بواسطة الاستخلاص بالمذيبات و تحلل الدهون المفصولة عن طريق التحليل الكروماتوغرافي لسائل الغاز ‎GLC‏
AO
(CHL) ‏أساس التحليل الكروماتوغرافي لسائل الغاز يحسب الكوليسترول‎ le : ‏حسب المعادلة الآتية‎ (FFA) ‏والأحماض الدهنية الحرة‎ (CHLE) ‏واستر الكوليسترول‎ (CHLE (t) - CHLE(O) x 100 —_— = ‏لإنزيم ترانسيفيراز‎ 6 (CHLE (t) - CHLE(O) + (FFA ‏م‎ - FFA(O) ‏مول / لتر لضابط استر الكوليسترول‎ = CHLE (0) ‏مول / لتر إنزيم استر الكوليسترول معالج‎ = CHLE )© ‏مول / لتر إنزيم أحماض دهنية حرة معالجة‎ = FFA )0( : ‏مول / لتر إنزيم أحماض دهنية حرة معالجة‎ = FFA (1) Ve : ‏قد يجري تحليل كروماتوغرافي لسائل الغاز كالأتي‎ ‏للتحليل الكروماتوغرافي للغاز‎ Perkin Elmer Autosystem 9000 ‏جهاز "بيركن المر"‎ 2١ ‏الشعرى مزود بعمود سيليكا مصهورة من نوع 170071 7.5١م 2787 مم‎ phenyl-methyl-silicone (CP Sil 8 68 ‏ميكرون سمك الداخلى 965 فنيل- ميثيل سيليكون‎ ّ from Chrompack) ٠
Helium ‏الهليوم‎ :Carrier gas ‏الغاز الناقل‎ 220+ ‏(درجة الحرارة الإبتدائية‎ (PSSI) cold split injection ‏وسيلة الحقن: حقن مجزاً‎ ‏ميكرو لتر.‎ ٠٠١ ‏الحجم‎ (FAS ‏مسخنة إلى‎ ‏"م‎ 45 FID ‏الكاشف‎ ‎9٠ ‏م‎ Yao FID ‏الكاشف‎ ‏ت17‎ .
AT
3 Y ١ ‏برنامج الفرن‎ vo. YA q. ‏حرارة الفرن‎ As ٠١ ‏فترة الثبات الحراري؛ دقيقة صفر‎ ¢ Yo oo ‏معدل التسخين ؛ م" / دقيقة‎ - ‏مجم من العينة في مخلوط من 4 ملليلتر من هبتان‎ ٠0 ‏تحضير العينة : أذيب‎ ‏تحتوي على هبتان ديكان كمادة قياسية داخلية‎ Heptane:Pyridin, 2:1 ١ : ‏بيريدين بنسبة ؟‎ ‏ميكرولتر من محلول‎ 0٠0 ‏مجم / ملليلترء ونقل‎ +.0 5 ¢ internal standard heptadecane
DE = N = ‏ميثيل‎ - N) MSTFA ‏قارورة صغيرة؛ وأضيف 3060 ميكرولتر‎ J) ‏العينة‎ ‎(N-Methyl-N-trimethylsilyl-trifluoraceamid) ) ‏زيليل - ثلاثي فلورو أسيتاميد‎ Jue ©
CST ‏دقيقة في درجة حرارة‎ 7١0 ‏وأجري التفاعل لمدة‎ mono- ‏عينت معاملات الاستجابة لأول - ثنائي -جليسريدات‎ Calculation ‏طريقة الحساب‎ ‏وحمض دهني حر من المعيار ؟ (أحادي - ثتائي - ثلاثي جليسريد)‎ di-triglycerides
Cholesteryl palmitate ‏للكوليسترول» كوليستريل بالميتات‎ ((mono-di-triglyceride) ‏0015)©1؛ وعينت عوامل الاستجابة من المادة القياسية‎ stearate ‏وكوليستريل اسيتارات‎ ٠ ‏مجم من مادة نقية).‎ ٠١ ‏(المرجعية) النقية (تزن‎ lipid ‏وباستخدام هذا التحليل؛ تكون إنزيمات آسيلترانسفيريز / إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ ‏طبقاً للاختراع الحالي التي لها نشاط ترانسيفيراس‎ acyltransferases/lipid acyl transferase ‏يفضل على الأقل‎ ٠ ‏على الأقل لنشاط إنزيم ترانسيفيراز‎ 96٠0 ‏على الأقل؛ يفضل‎ 5 ‏م داك .افك داومك كافك غامك 960 9646 .968 960 أو 9675 من نشاط‎ . ‏إنزيم الترانسيفيراز‎
AV
يعني مصطلح "إنزيم ترانسيفيراز " ‎“transferase”‏ المستخدم هنا في هذا الوصف أو يمكن أن يتغاير بينيا بالمصطلح "إنزيم أسيل ترانسيفيراز الدهني' ‎“lipid acyltransferase”‏ ليعطي نفس المعنى. وبصفة مناسبة؛ يحفز إنزيم آسيل ترانسيفيراز واحد أو أكثر من التفاعلات الآتية: أسترة بينية ‎interesterification ©‏ ؛ أسترة انتقالية ‎transesterification‏ » التحلل الكحولي ‎alcoholysis‏ ؛ التحلل المائي ‎hydrolysis‏ يشير مصطلح "أسترة بينية” ‎interesterification‏ الي الانتقال الحفزي الإنزيمي لمجموعات ‎Sas!‏ بين المائح الدهني والمستقبل الدهني؛ حيث لا يكون فيه المانح الدهني مجموعة آسيل ‏حرة. ‎٠‏ يعني المصطلح "أسترة انتقالية" ‎“transesterification”‏ كما استخدم هنا في هذا الوصف الانتقال المحفز الإنزيمي لمجموعة آسيلية من مائح دهني (خلافاً لحمض دهني حر) الي مستقبل آسيل (خلافاً للماء). ‎LS,‏ استخدم هنا في هذا الوصف يشير المصطلح "التحلل الكحولي" ‎“aleoholysis”‏ اللي الانقسام الإنزيمي لرابطة تكافؤ إسهامي حمضي عن طريق التفاعل مع كحول ‎(ROH)‏ ‎٠‏ بحيث أن واحداً من المنتجات يتحد مع ذرة الهيدروجين ‎(H)‏ للكحول؛ ويتحد المنتج الآخر مع مجموعة ‎(OR)‏ للكحول. وكما استخدم هنا في هذا الوصف يشير مصطلح "كحول" ‎“alcohol”‏ الي مركب الكيلي يحتوي على مجموعة هيدروكسيلية. ‎LS‏ استخدم هنا أيضاً في هذا الوصف؛ يشير المصطلح 'تحلل مائي" ‎“hydrolysis”‏ السي ‏© الانتقال المحفز الإنزيمي لمجموعة آسيل من دهن الي مجموعة الهيدروكسيل ‎(OH)‏ لجزئي ماء. ‎YAAT
’ AA “without ‏يعني المصطلح "دون زيادة أو دون زيادة جوهرياً لأحماض دهنية حرة”‎ ‏كما استخدم هنا في‎ increasing or without substantially increasing the free fatty acids” 9610٠0 ‏هذا الوصف أن إنزيم الترانسيفيراز لآسيل دهني طبقاً للاختراع الحالي له نشاط‎ ‏من مجموعات الآسيل من مانح مجموعات آسيل‎ 96٠0 ‏لإنزيم الترانسيفيراز (بمعني ينقل‎ ‏م الي مستقبل لهاء دون أن يظهر نشاطاً للتحلل المائي)؛ ومع ذلك؛ قد ينقل الإنزيم أقل من‎ ‏من مجموعات الآسيل الموجودة في مانح الآسيل الدهني الي مستقبل الآسيل. وفي‎ +» ‏يفضل يسبب نشاط إنزيم آسيل ترانسيفيراز على الأقل 965؛ وأكثر تفضيلاً‎ lal ‏تلك‎ ‏وكذلك 967+0؛ وكذلك أكثر تفضيلاً حوالي‎ FV ‏حوالي © وأكثر تفضيلاً أيضاً حوالي‎ ‏على الأقل وربما أكثر من 96660 على الأقل؛ وربما حتى 9670 على‎ Shon ‏وكذلك‎ 6 ‏الأقلء وأيضاً 9680 على الأقل؛ وأكثر تفضيلاً أيضاً 9640 على الأقل؛ وحتى 9648 على‎ ٠ ‏الأقل من النشاط الخميري (الإنزيمي). وقد تعين النسبة المئوية لنشاط إنزيم الترانسيفيراز‎ ‏(بمعني نشاط الترانسيفيراز كنسبة مئوية من النشاط الإنزيمي الكلي) بواسطة الطريقة الآتية‎ ‏المعطاة أعلاه.‎ “Assay for Transferase Activity” ‏التحليل النشاط الإنزيمي للترانسيفيراز"‎ ‏وفي بعض جوانب الاختراع الحالي؛ يعني مصطلح "دون زيادة الأحماض الدهنية الحرة‎ ‏كما استخدم هنا في هذا‎ “without substantially increasing free fatty acids” ‏جوهريا"‎ yo ‏الوصف؛ يعني المصطلح "بدون زيادة الأحماض الدهنية الحرة جوهرياً” أن مقدار الحامض‎ ‏الدهني الحر في زيت طعام معالج بإنزيم آسيل ترانسيفيراز طبقاً للاختراع الحالي يكون أقل‎ ‏يكون ثمة إنزيم خلافا‎ Laie ‏المتحصل عليه في زيت طعام‎ al ‏من مقدار الحمض الدهني‎ ‏لآسيل ترانسيفيراز طبقاً للاختراع الحالي قد استخدم؛ مثلما على سبيل المثال؛ بالمقارنة‎ phospholipase ‏بمقدار الحمض الدهني الحر المتحصل عليه يكون ثمة إنزيم فوسفوليبيز‎ . ٠
YAAR
كم
‎enzyme‏ تقليدي قد استخدم؛ على سبيل المثال؛ ليسيتاز الترا ‎Lecitase Ultra™‏ . - ماركة
‏تجارية مسجلة لشركة (نوفوزيمس أي/إس ‎Novozymes A/S‏ بالدنمارك) مستخدماً.
‏وقد يتضمن المصطلح "لبن" كما استخدم هنا في هذا الوصف ‎Ld‏ أو لبناً من إما أصل حيواني
‏أو نباتي. ومن المحتمل استخدام لبن من مصادر حيوانية ‎io‏ الجاموس؛ والأبقار بمعناها
‎oo |‏ (التقليدي)؛ والغنم؛ والماعزء الخ. إما كل على حدة أو متحدة معاً. وقد تستخدم أيضاً الألبان
‏النباتية مثل لبن الصوياء وعادة بالاتحاد مع اللبن الحيواني؛ ومثالياً في نسبة مئوية منخفضة
‏(من لبن نباتي) مثلاً تحت ‎(Pode‏ أو تحت 9670 أو تحت 9675 (حجم الي حجم). ويفضل
‏أن لا يتضمن مصطلح لبن أو لبن على لبن الجبن والقشدة.
‏يعني المصطلح 'يتكون أساسا" ‎essentially consists’‏ كما استخدم هنا في هذا الوصف؛ عندما ‎٠‏ يشار الي منتج أو تركيب؛ أن المنتج أو التركيب؛ قد يتكون من منتجات أو تركيبات ‎coal‏
‏ولكن يشير فقط الي تركيز أقصي؛ يفضل 0٠96؛ ‎Sas‏ %0 وكذلك ‎oY‏ وأيضاً 967 أو
‎Yor N ‏أو 968 أو‎ 961
‏يفضل ان يكون للتعديل الإنزيمي لللبن و/أو قشدة وعلى سبيل المثال قد يكون من المفضل
‏استخدام درجة حرارة أقل من حوالي ٠*تم؛‏ على سبيل ‎(Jal‏ وبصفة مناسبة أقل من ‎Ys 10‏ على سبيل المثال؛ وبصفة ملائمة أقل من ١٠م‏ مثلاً. وقد تستخدم درجات حرارة
‏بين ‎oF - ١‏ مثلما بين * - ١٠7"م‏ وعلى سبيل المثال مثلما بين ‎١‏ - ١٠تم.‏
‏قد يستخدم الإنزيم طبقاً للاختراع الحالي باستخدام واحد أو أكثر من (إنزيمات) مناسبة برتبة
‎dalla dle‏ لمعالجة الأغذية. وهكذاء فإن ذلك يقع داخل مجال الاختراع ‎Mall‏ إضافة الي
‏أن الإنزيم طبقاً للاختراع» يضاف أيضاً على الأقل الي المواد الغذائية. وتشتمل مثل هذه © الإنزيمات الأخرى على (إنزيمات) محللة للنشا مثل إنزيمات ‎Alls‏ السكر الشعير داخلية أو
‏خارجية ‎endo- or exoamylases‏ ¢ وبولولاناز ‎pullulanases‏ ؛ وإنزيمات نازعة للمجموعات
‏. تل a. ‏مشتملة‎ , hemicellulases ‏؛ وإنزيمات أشباه السيليلوزات‎ debranching enzymes ‏الفرعية‎ ‏والإنزيمات المختزلة‎ «cellulases ‏و السيليلوزات‎ xylanases ‏على إنزيمات الزيلينات‎ ‏والمؤكسدة لسكر‎ ٠ phenol oxidases ‏ء والمؤكسدة للفينو لات‎ oxidoreductases ‏المؤكسدة‎ ‎0170056 oxidase ‏وبيرانوز أوكسيداز‎ glucose oxidase ‏(الجلوكوز)‎ coal ‏أو الإنزيمات المؤكسدة للكربوهيدرات‎ «sulfhydryl oxidase ‏وسلفوهيدريل أوكسيداز‎ 0 ‏وعلى سبيل المثال‎ oxidises maltose ‏الشعير‎ Sw ‏مثل التي تؤكسد‎ carbohydrate oxidase , phospholipases ‏فوسفوليبيز‎ clipases ‏وليبيز‎ «(HOX) hexose oxidase ‏هكسوز أوكسيداز‎ proteases ‏و جالاكتوليبيز؛ و بروتييز‎ , glycolipases ‏جلايكو لايبيز‎ ‏وفي تجسيد آخر للاختراع؛ قد يكون الإنزيم مندرجاً تحت الاسم التجاري "ديري هوكس"‎ ‏الذي يعمل ككاسح أكسجين لإطالة عمر تخزين عرض الجبن على الأرفف:‎ Dairy 1107279“ ٠ ‏(في المحال التجارية والسوبر ماركاتات) بينما يعمل على ضبط اللون الذهبي لشطائر‎ ‏يتعلق الاختراع‎ (Mal ‏المعجنات في أفران البيتزا. ومن ثم؛ ففي أحد جوانب الاختراع‎ ‏في منتجات الألبان (ارجع الى‎ maillard ‏باستخدام إنزيم قادر على اختزال تفاعل 'ميلارد"‎ ‏والتي تم الاشارة اليها هنا في مجملها)؛ وعلى سبيل المثال؛ الجبن؛ حيث فيه‎ 8 ‏إنزيم مؤكسد‎ J Aamaltose oxidising ‏الإنزيم يفضل كونه إنزيم مؤكسد للمالتوز‎ Ve ‏و/أو‎ glucose oxidase ‏وإتنزيم مؤكسد جلوكوز‎ carbohydrate oxidae ‏الكربوهيدرات‎ ‎Lik ‏غذاء و/أو مادة تغذنية‎ sale ‏في طريقة تحضير‎ ¢ hexose oxidase ‏هكسوز أوكسيداز‎ ‏للاختراع الحالي.‎ ‏بالاتحاد مع إنزيم ليبيز‎ acyltransferase ‏وفي تجسيد مفضل؛ يستخدم إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ glycolipase ‏نشاط إنزيمي لجليكوليبيز‎ clipase ‏له نشاط واحد أو أكثر من نشاط ليبيز‎ lipase Ye
E.C. )triacylglycerol lipase ‏ونشاط إنزيمي لثلاثي جليسرول ليبيز‎ ¢(E.C. 3.1.1.26( ‏ادل‎ ْ
3.1.1.3(« نشاط فوسفوليبيز أ ‎(E.C. 3.1.1.4) phospholipase A2‏ أو نشاط فوسفوليبيز ‎Vi‏ ‎(EC. 3.1.1.32) phospholipase Al‏ وبصفة مناسبة؛ تعرف ‎laa‏ إنزيمات حالة للدهن ‎lipolytice‏ في المجال تشتمل على سبيل المثال (إنزيمات) حالة للدهن الآتية: ليبوبان ‎.LIPOPAN® Fi‏ و/أو ليسيتاز ألترا ‎Ge) LECITASE® ULTRA‏ شركة نوفوزيس أي © إس ‎Novozymes A/S‏ , الدنمارك)؛ فوسفوليبيز أ؟ ‎Jo)‏ سبيل المشال؛ فوسفوليبيز ‎YI‏ ‎phospholipase A2‏ من ليبومود ‎YY‏ ل 221 ‎LIPOMOD™‏ من حفازات حيوية؛ ( ليبوماكس ‎LIPOMAX™‏ من شركة جنكور ‎(Genecor‏ وليبولاز ‎LIPOLASE®‏ (نوفوزيمس آيه/إس؛ الدنمارك)؛ والإنزيمات الحالة للدهن ‎lipases‏ الملقنة في البراءة الدولية رقم ‎٠0/597875‏ ‏أو البراءة الأوربية 99778549 أو البراءة الأوربية رقم ‎١11977146‏ وهذا الاتحاد لإنزيم ‎Jud ٠‏ ترانسفيراز ‎acyl transferase enzyme‏ كما عرف هنا في هذا الوصف وقد يفضل” خاصة استخدام إنزيم ليبيز في عجينة أو منتجات مخبوزة أو في منتجات أغذية قيمة ‎tie‏ ‏الكعك والحلويات. وفي بعض التجسيدات؛ قد يكون مفيداً أيضاً اتحاد إنزيم أسيل ترانسيفيراز بإنزيمات ‎lipolytic enzymes (pall Alla‏ مثل عجينة محضرة من مصادر حيوانية من العجول؛ أو ‎٠‏ _ الغنم؛ أو معدة صغار الحيوانات؛ أو إنزيم بالاتاز أ ‎Vou‏ ل (شركة نوفو) 7501م ‎Palatase‏ ‎¢(Novo)‏ وبالاتاز م ‎J ٠٠0١‏ (شركة نوفو) ‎Palatase 112001. (Novo)‏ وبالاتاز م ‎Vee‏ ‏(شركة نوفو) ‎cPalatase M1000 (Novo)‏ أو بيكانتاز أ (شركة دي. إس. ‎Piccantase A (po)‏ ‎(DSM)‏ وكذلك إنزيم باكانتاز ‎Piccantase‏ من مصادر حيوانية من دي. إس. إم ‎af)‏ كيه إل. إل وسي) © & ‎DSM (K, KL, L‏ أو ليبومود ‎VAY‏ 187 000000 وليبومود 38 ‎٠‏ (حفازات حيوية) ‎.Lipomod 338 (Biocatalysts)‏ وهذه الإنزيمات الحالة للدهون تستخدم تقليدياً في إنتاج الجبن للحصول على نكهات الجبن. وقد تستخدم مثل هذه الإنزيمات للحصول 0 5م77 ay ‏وعلى سبيل المثال منتج من منتجات ألبان (على سبيل المثال‎ 5 clea 3d ‏على مواد غذائية معدلة‎ ‏الجبن)؛ وخاصة حيث منتج الألبان المذكور يتكون من أو يتضمن دهن قشدة. وقد يكون‎ ‏لدهون أخري تأثير مفيد‎ Ala ‏لاتحاد إنزيم أسيل ترانسيفيراز مع واحد أو أكثر من إنزيمات‎ ‏على نكهة منتج الألبان (مثل الجبن على سبيل المثال).‎
‎٠‏ إن استخدام إنزيمات ‎Ala)‏ للدهون) ‎lipases‏ بالاتحاد مع إنزيم الاختراع قد يكون متميزاً خاصة في حالات حيز بعض تراكمات أحماض دهنية حرة قد تكون مرغوبة؛ وعلى سبيل المثال؛ في الجبن حيث يمكن أن تضفي الأحماض الدهنية الحرة نكهة مرغوبة؛ أو في تحضير أطعمة جيدة, وسوف يكون شخص ماهر في الفن التقني؛ قادراً على اتحاد نسب من (إنزيمات) ‎Alls‏ للدهن؛ وعلى سبيل ‎JL‏ ليبوبان ‎Fs‏ 11000/119: و/أو ليسيتاز
‎, Novozymes A/S ‏(من شركة نوفوزيس أي / إس‎ 12011529 ULTRA aly. ‏من ليبومود‎ phospholipase A2 YT ‏فوسفوليبيز‎ «Jal ‏(على سبيل‎ Yad sion gb ‏الدنمارك)؛‎ ‏من شركة‎ LIPOMAX™ ‏من حفازات حيوية؛ ) ليبوماكس‎ LIPOMOD™ 220 J YY ‏(نوفوزيمس آيه/إس؛ الدنمارك)؛ والإنزيمات‎ LIPOLASE® ‏وليبولاز‎ ¢(Genecor ‏جنكور‎ ‏والإنزيمات الحالة للدهون الملقنة والواردة في براءة الاختراع الدولية‎ lipases (all ‏الحالة‎
‎١‏ .رقم 7/997875١٠٠؛‏ وبراءة الاختراع الأوربية 099778549 أو براءة الاختراع الأوربية رقم ‎٠9731١‏ وإنزيم آسيل ترانسيفيراز طبقاً للاختراع الحالي لايجاد النسبة المرغوبة للتأثير الحال للماء الي النشاط لترانسيفيراز الذي ينتج ‎die‏ تأثير تقني مفضل أو مجموعة من التأثيرات الفنية في المواد الغذائية ‎Jie)‏ تلكم المدونة هنا في هذا الوصف والمدرجة تحت مصطلح 'تأثيرات فنية" ‎.('Technical Effects’‏
‎٠‏ _يمكن ان يكون من المفيد ‎Loaf‏ دمج استخدام إنزيم مثل أسيل ترانسيفيراز مع إنزيم فوسفوليبيز مثل فوسفو ليبيز أ - ‎phospholipase Al ١‏ وفوسؤوليبيز أ ‎phospholipase‏
‎77 0 ay ‏و/أو‎ ¢ Phospholipase © ‏؛ وفوسفؤفوليبيز جب‎ phospholipase 8 ‏وفوسفوليبيز ب‎ 2 . phospholipase D ‏فوسفوليبيز د‎ ‏وعلى سبيل المثال؛ قد تظهر معالجة بإنزيم‎ lid Bo ‏قد يجري الاستخدام المشترك تتابعياً‎ ‏قبل أو أثناء المعالجة الإنزيمية الأآخري. وبديلاً‎ lipid acyl transferase ‏آأسيل تر انسيفيراز‎ ‏عن ذلك؛ قد تظهر المعالجة الإنزيمية الآأخري قبل أو أثناء المعالجة بإنزيم آأسيل‎ 5 ‏تر انسيفيراز.‎ ‏وفي حالة المعالجات الإنزيمية المتتابعة في بعض التجسيدات؛ قد يكون من المميز إزالة‎ ‏عن طريق التثبيط الحراري أو عن طريق‎ cB ‏الإنزيم الأول المستخدم؛ وعلى سبيل‎ ‏قبل المعالجة بإنزيم ثاني (و/أو ثالث؛ الخ).‎ immobilised enzyme ‏(إنزيم) ساكنة‎
POST-TRANSCRIPTION AND POST- ‏استنساخ لاحق وتعديلات اتتقالية لاحقة‎ Va
TRANSLATIONAL MODIFICATIONS
‏من قبل أي واحد من المتتاليات‎ lipid acyl transferase ‏قد يشيفر إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏النيكليوتيدية الملقنة هنا في هذا الوصف.‎ ‏تعديلات استتساخية لاحقة و/أو‎ host ‏يمكن ان يتاح على أساس الخلية المضيفة المستخدمة1!ء»‎ ‏انتقالية. ويمكن تخيل إنزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في الطرق الحالية و/أو الاستخدامات‎ ve ‏ترانسيفيراز (حالة للدهن) التي قد يعتريها تعديل استتساخي لاحق‎ Jal ‏التي تضم إنزيمات‎ ‏لاحق.‎ post-translational ‏و/أو انتقالي‎ post-transcriptional ‏فإن تمييز متتالية التيكليوتيد الموضحة هنا في هذا الوصف‎ oda ‏وعلى سبيل المثال‎
Jie) ‏في خلية مضيفة‎ (oF ‏كمتتالية يتعرف على هويتها بالرقم التعريفي £9 (أنظر شكل‎ ‏ينتج عنها تعديلات استنساخية لاحقة و/أو‎ (Bacillus licheniformis ‏باسيلوس ليخنيفورميس‎ _ ٠ 7 0
¢ انتقالية لاحقة التي تؤدي الي متتالية حمض الأمينو الموضحة هنا في هذا الوصف كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎TA‏ (أنظر شكل ‎YY‏ ‏وتكون المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(TA)‏ هي ذاتها المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎VT‏ (الموضحة هنا في هذا الوصف في شكل ‎Lad )١‏ عدا أن المتتالية بالرقم التعريفي ‎٠‏ للهوية ‎(TA)‏ قد اعتراها تعديلات انتقالية لاحقة و/أو استتساخية لاحقة لإزالة ‎TA‏ حمض أمينو. فصل الإنزيم ‎ISOLATED‏ ‏في أحد جوانب الاختراع؛ يكون إنزيم آسيل ترانسيفيراز بمثابة إنزيم أسيل مسترجع / ‎٠‏ مفصول ‎JA Sa 4 .recovered/isolated lipid acyltransferase‏ قد يكون إنزيم ‎Jad‏ ‏ترانسيفيراز المتحصل عليه في صورة مفصولة. وفي جانب أخرء قد تكون ‎Ale‏ النيكليوتيدية المشيفرة لآسيل ترانسيفيراز المستخدم في الاختراع الحالي في صورة مفصولة. يعني مصطلح "'مفصول" ‎“isolated”‏ أن المتتالية أو البروتين يكون خالياً جوهرياً علي الأقل ‎١‏ .من مكون واحد أو ‎Al‏ علي الأقل يرافقه طبيعياً المتتالية أو البروتين وكما وجد في الطبيعة. تنقية الإنزيم ‎PURIFIED‏ ‏في أحد جوانب الاختراع؛ قد يكون إنزيم أسيل الترانسيفيراز في حالة نقنية. وفي جانب ‎«aT‏ قد تكون المتتالية النيكليوتيدية المشيفرة لإنزيم آأسيل ترانسيفيراز ‎acyl‏ ‎transferase enzyme‏ المستخدم في الاختراع الحالي في صورة نقية. ‎YAAT |‏ qo ‏أن المتتالية تكون في حالة نقية نسبياً - وعلي‎ “purified” ‏أو منقي”‎ A ‏يعني المصطلح‎ ‏سبيل المثال؛ بنقاء حوالي ١965؛ أو حوالي 9675 علي الأقل؛ أو حوالي 96850 علي الأقل؛‎ ‏علي الأقل من النقاء؛ أو علي الأقل حوالي ©9692 من درجة نقاء أو حوالي درجة نقاء‎ 9٠ ‏أو‎ ‏علي الأقل؛ أو حوالي 9648 من النقاء علي الأقل.‎ 05 ‏تهجين وراثي لمتتالية نيكليوتيدية تشيفر بولي ببتيد طبقاً للاختراع الحالي‎ ©
CLONING A NUCLEOTIDE SEQUENCE ENCODING A POLYPEPTIDE
ACCORDING TO THE PRESENT INVENTION
‏له الخواص النوعية كما‎ polypeptide ‏قد تعزل متتالية نيكليوتيدية تشيفر إما بولي ببتيد‎ ‏للتعديل من أي خلية أو‎ polypeptide ‏عرفت هنا في هذا الوصف أو فصل متتالية بولي ببتيد‎ ‏كائن حي ينتج البولي الببتيد المذكور. وتعرف جيداً الطرق المتنوعة في إطار الفن التقني‎ ٠ : ‏المرتبط لعزل متتاليات نيكليوتيدية.‎ ‏و/أو بمجموعاته‎ (DNA) ‏علي سبيل المثال؛ قد تبني مكتبة لإيداع أحماض لا أوكسي (نووي)‎ messenger RNA ‏المراسل‎ (RNA) ‏أو‎ DNA ‏باستخدام حمض كروموسوم‎ cDNA ‏الوراثية‎ ‏وإذا عرفت متتالية حمض الأمينو للبولي‎ polypeptide ‏من الكائن الحي المنتج للبولي ببتيد‎ ‏الوحدات مميزة؛ ومستخدمة‎ ALB oligonucleotide ‏فقد تصنع مسبارات نيكليوتيدية‎ caf Ve ‏مسن‎ polypeptide-encoding clones ‏لتعريف عناصر مهجنة مشيفرة للبولي ببتيدات‎ ‏المجموعات الجناسية المرتبة المحضرة من الكائن الحي. وبديلاً عن ذلك؛ قد يستخدم مسبار‎ ‏يحتوي علي مناظرات مثلية لمتتاليات‎ labelled oligonucleotide probe ‏نيكليوتيدية مميز‎ ‏تناظر أخريات من جينات بولي ببتيدية معروفة يمكن استخدامها لتعريف عناصسر مهجنة‎ ‏وظروف‎ hybridisation ‏تشيفر بولي ببتيدات. وفي الحالة الأخيرة؛ تستخدم عملية للتهجين‎ - ٠ ‏غسيل أقل قيوداً.‎ "71 ٍ
وبديلاً عن ذلك؛ يمكن التعرف علي عناصر مهجنة تشيفر بولي ببتيدات ‎polypeptide-‏ ‎encoding clones‏ عن طريق إدخال اجزاء من حمض ‎Y‏ أوكسي نيوكلييك جناسي الي موجه تمبيزي؛ مثل "بلازميد" ‎«plasmid‏ وتحويل البكتريا سلبية الإنزيمات في مجموعة (مكتبة) : أحماض لا أوكسي نيوكلييك؛ ومن ثم دهان البكتيريا المتحولة علي هلام الأجار المحتوي © علي إنزيم مثبط بواسطة بولي ‎ais‏ مما يعمل علي السماح لعناصر مهجنة أن تميز البولي ببتيد ‎polypeptide‏ المراد تعريفه. ض وفي بديل ‎al‏ قد يحتوي المتتالية النيكليوتيدية المشيفرة للبولي ببتيد ‎polypeptide‏ المحضرة ‎Lelia‏ بواسطة طرق معيارية راسخة؛ وعلي سبيل المثال؛ طريقة فوسفورو أمتيدية ‎phosphoroamidite‏ موصوفة في المؤلف: ‎Beucage S.L. et al (1981) Tetrahedron Letters 22, p 1859-1869, Ye‏ أو الطريقة الموصوفة عن طريق ‎Matthes et al (1984) EMBO J. 3, p 801-805.‏ وفي طريقة فوسفوروأمنيدية ‎«phosphoroamidite‏ يتم تصنيع (تخليق) نيكليوتيدات تحتوي على عناصر ‎ALE‏ وعلي سبيل ‎JB‏ وفي وسيلة مصنعة لحمض لا أوكسي نيوكلييك؛ ‎Vo‏ ومنقاة؛ ‎dialog‏ ومرتبطة ومهجنة في موجهات مناسبة. وقد تكون متتالية النيكليوتيد ‎nucleotide‏ من مورثات جينية مخلوطة ومن أصل صناعيء أو من أصل مخلوط لأحماض لا أوكسي نووية ‎cDNA origin‏ ؛ أو من ‎dual‏ جيني مختلط أو من أصل حمض لا أوكسي ‎origin‏ 00108 ؛ محضرة عن طريق ربط شطيرات من أمصسل مورثات جينية أو حمض لا أوكسي ‎cDNA origin‏ (عند اللزوم) وذلك ‎Lak‏ لطرق فنية ‎#٠‏ معيارية. وتناظر كل شطيرة مربوطة أجزاءً متنوعة لمتتالية نيكليوتيدية برمتها. وقد تحضر ‎Lad‏ متتالية حمض لا أوكسي ‎DNA sequence‏ عن طريق تفاعل متسلسل باستخدام مواد ‎YAAT‏ av ‏سبيل المثال كما وصف في‎ Je 5 « polymerase chain reaction (PCR) ‏متفاعلة محددة‎
CVA) ‏براءة الاختراع الأمريكية رقم 687707 أو في مقال سايكي آر. كيه وزملاثه‎ (E94) = SAY ‏مجلة العلوم مجلد 7749 الصفحات‎
Saiki ‏مكل‎ et al (Science (1988) 239, 239, pp. 487 — 491).
NUCLEOTIDE SEQUENCES ‏متتاليات نيكليوتيدية‎ o ‏تشيفر البولي ببتيدات‎ nucleotide ‏يشتمل الاختراع الحالي أيضاً علي متتاليات نيكليوتيدية‎ ‏التي لها خواص محددة كما عرف هنا في هذا الوصف. ويستخدم مصطلح 'متتالية نيكليوتيدية‎ ‏كما استخدم هنا في هذا الوصف ليشير الي متتالية بولي‎ “nucleotide sequence” ' ‏أجزائهم). وقد تكون‎ Ji) ‏نيكليوتيدية؛ ومتغايرة؛ ومناظرات مثلية وشطيرات ومشتقاتهم؛‎ ‏متثالية النيكليوتيد من أصل جينومي أو صناعي أو أصل شطرات جينية متحدة؛ التي قد تكون‎ مزدوجة الجدائل أو وحيدة الجديلة سواءً كانت تمثل جديلة محسوسة أو مضادة للحس. يشتمل مصطلح 'متتالية نيكليوتيدية " بالعلاقة مع الاختراع الحالي علي أحماض نووية جناسية وصناعية ‎(DNA, cDNA, RNA)‏ وتعني تفضيلاً حمض لا أوكسي نووي؛ وأكثر تفضيلاً ‎(cDNA)‏ للمتتالية تشفيرية ‎.coding sequence‏ ‎Ye‏ تتمتع المتتالية النيكليوتيدية ‎nucleotide sequence‏ في تجسيم مفضل؛ بحد ذاته تشيفر بولي ‎polypeptide ads‏ له الخواص النوعية كما عرف هنا في هذا الوصف ولا تغطي متتالية النيكليوتيد الأصلية في بيئتها الطبيعية عندما ترتبط بمتتالية (متتاليات) المرافقة طبيعيا والتي / اللاتي في بيئتها أو بيئاتهم. ولسهولة المرجعية؛ سوف نسمي هذا التجسيم المفضل ب "متتالية نيكليوتيدية غير ‎“non-native nucleotide sequence” "ileal‏ وفي هذا ‎‘agai‏ ‎٠‏ يعني المصطلح "متتالية نيكليوتيدية أصلية" ‎"native nucleotide sequence”‏ متتالية نيكليوتيدية برمتها التي تكون كائنة في بيئتها الأصلية وعندما ترتبط عملي بعنصر معزز برمته ترافقه ‎YAAT‏
AA
‏طبيعياً؛ يكون العنصر المعزز أيضاً في بيئته الأصلية. وهكذاء يمكن تمييز البولي ببتيد‎ ‏طبقاً للإختراع الحالي بواسطة متتالية نيكليوتيدية في كائنها الحي الطبيعي؛‎ polypeptide ‏ولكن حيث فيه متتالية نيكليوتيدية في كائنها الأصلي ولكن حيث فيها متتالية النيكليوتيد لا‎ ‏ويترافق معه طبيعياً داخل ذلك الحي.‎ epromoter ‏تكون تحت سيطرة العامل المعزز‎ ‏وفي‎ ٠ ‏أصليا‎ polypeptide ‏عبارة عن بولي ببتيد‎ polypeptide ‏يفضل ان لا يكون البولي ببتيد‎ ‏كامل في رمته‎ polypeptide ‏ببتيد أصلي" بولي ببتيد‎ Jo ‏هذا الخصوص؛ يعني مصطلح‎ ‏الذي يكون في بيئته الأصلية وعندما يكون قد ميز عن طريق متتالية النيكليوتيدية الطبيعية‎ ‏الأصلية.‎ ‏بشكل مثالي تحضر البولي ببتيدات المشيفرة للنيكليوتيد والتي لها خواص نوعية كما عرفت‎ ‏من.‎ recombinant DNA ‏هنا في هذا الوصف باستخدام استنساخ لحمض لا أوكسي نووي‎ ‏شطيرات متحدة (بمعني؛ حمض لا أوكسي نووي متحد؛ ومع ذلك؛ ففي تجسيم بديل‎ ‏للاختراع؛ يمكن تصنيع متتالية نيكليوتيدية كلياً أو جزئياًء باستخدام طرق كيميائية معروفة في‎ ‏أنظر:‎ das pall ‏الفن التقني‎
Caruthers MH et al (1980) Nuc Acids Res Symp Ser 215-23 and Horn T et al (1 980)
Nuc Acids Res Symp Ser 225-232). Ve
MOLECULAR EVOLUTION ‏النشوء الجزيني‎ enzyme-encoding nucleotide Lay yi ‏بمجرد أن فصلت متتالية نيكليوتيدية مشيفرة‎ putative enzyme-encoding ‏أو متتالية نيكليوتيدية مشيفرة إنزيمياً وظنياً‎ 8601167286 ‏فقد يكون مرغوباً تعديل متتالية نيكليوتيد المختارة؛ وعلي سبيل‎ nucleotide sequence ‏للاختراع الحالي.‎ da ‏المثال؛ فقد يكون مرغوباً تهجين المتتالية لتحضير إنزيم‎ ©
وطبقاً لعمليات تهجينية باستخدام نيكليوتيد قليل الوحدات نيكليوتيدية الصناعية ‎synthetic‏ ‎oligonucleotides‏ + تحتوي هذه الوحدات النيكليوتيدية المقلة علي متتاليات نيكليوتيدية تحف مواقف التهجين المرغوبة ‎desired mutation sites‏ وتكشف طريقة مناسبة في مقال: ‎Morinaga et al (Biotechnology (1984) 2. p 646-649).‏ ‎٠‏ توصف طرق أخري لإدخال عناصر مهجنة في متتاليات نيكليوتيدية مشيفرة إنزيمياً وذلك في مقال: ‎Nelson and Long (Analytical Biochemistry (1989), 180 p 147-151).‏ وبدلاً من التهجين الوراثي الموجه لمواقع التهجين ‎site directed mutagenesis‏ ¢ مثلما وصف أعلاه؛ يمكن للمرء أن يدخل عمليات تهجين عشوائياً باستخدام مجموعة محضرة تجاريا ‎commercial kit ٠‏ تحتوي علي عناصر وأدوات تهجينية ‎Jie‏ مجموعة للتهجين الجناسي من نوعية ‎GeneMorph PCR‏ من شركة ‎Stratagene‏ لإجراء تفاعلات متسلسلة لإنزيم بوليميراز أو مجموعة التهجين الجناسي العشوائي ‎Diversify PCR‏ لإجراء تفاعلات متسلسلة لإنزيم بوليميراز من شركة ‎(Clontech)‏ وتشير براءة الاختراع الأوربية رقم 587 7158 الي طرق أمثل لعملية تهجين جناسي أساسه تفاعلات متسلسلة لإنزيم بوليمراز الذي يمكن أن ‎ve‏ يتحد ‎Lad‏ باستخدام مناظرات حمض لا أوكسي نووي ‎(DNA)‏ مهجنة ‎Lilia‏ مثل التي وصفت في براءة الاختراع الأوربية رقم ‎AVIVA‏ وتكون تقنيات التفاعلات المتسلسلة لإنزيم بوليمراز مناسبة للحصول علي متغايرات من إنزيمات آسيل ترانسيفيراز لها خواص مفضلة. وتشير براءة الاختراع الدولية رقم ‎٠٠١/١145‏ الي نشوء جزيئي لإنزيمات الحالة للدهون ‎lipases‏ ‏¥ ثمة طريقة ثالثة للحصول علي متتاليات مستحدثة تتعلق بشطر متتاليات نيكليوتيدية؛ إما عن طريق استخدام عدد من الإنزيمات المفيدة أو إنزيم مثل إنزيم ديناز ‎Dnase 1١‏ ؛ وإعادة 0 1م
.أ تجميع تشفير متتاليات نيكليوتيدية تامة من أجل الحصول علي بروتينات وظيفية. وبدلاً من ذلك؛ يمكن للمرء أن يستخدم واحداً أو عديداً من متتاليات نيكليوتيدية عديدة غير متطابقة وإدخال عناصر تهجينية أثناء إعادة تجميع متوالية نيكليوتيدية تامة التكوين. وتكون تقنيات تفريق أحماض لا أوكسي ذرية ومجموعاتهم مناسبة للحصول علي متغايرات من إنزيمات ‎Judo‏ ترانسيفيراز ذات خواص مفضلة. ومن الطرق المناسبة لتنفيذ وإجراء طرق ‎AA‏ ‏الموجودة في براءة الاختراع الأوربية رقم ‎١١875‏ وبراءة الاختراع الأوربية رقم 5 . ويمكن أن يقرن التفريق بصور أخري من التهجين الجناسي لحمض لا أوكسي نووي كما وصف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 1.180.409 والبراءة الدولية رقم مي ‎٠٠١/٠‏ ‎٠‏ وهذاء ومن المحتمل الحصول علي موقع عديد موجه أو تهجينات ع_شوائية الي متتالية نيكليوتيدية» إما في الأحياء أو في الزجاجيات ‎in vivo or in vitro‏ ¢ ولفرز بالتالي للوظطيفة المحسنة للبولي ببتيد ‎polypeptide‏ المشيفر بواسطة طرق متنوعة وباستخدام في طرق اتحاد شطيرات مسببة لجناس خارجي ومواقع داخلية سياليكونية (أنظر البراءة الدولية ا ‎(Va‏ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 1.74.7 وبراءة الاختراع الأمريكية ‎١‏ .رقم 3.771.45974)؛ ‎Ses‏ سبيل المثال؛ يمكن للنشوء الجزيئي أن ‎Tas‏ حيث المتغاير المتحصل عليه ويحتفظ بالمثلية المنخفضة جداً للإنزيمات أو البروتينات المعروفة.وقد تكون هذه المتغايرات المتحصل عليها تناظرية تركيبية ملموسة ل إنزيمات ترانسيفيراز معروفة؛ ولكن لها مثلية لمتتاليات أحماض أمينو منخفضة ‎is‏ ‏وكمثال غير محدد لنطاق الاختراع؛ وإضافة الي ‎alld‏ يمكن تنفيذ عمليات تهجين ‎mutations‏ ‎٠‏ أو متغايرات طبيعية ‎natural variants‏ لمتتثالية نيكليوتيدية مع إما نوع بري أو تهجينات ت7
Ye ‏فرز مثل هذه‎ Lad ‏أخري أو متغايرات طبيعية للحصول علي متغايرات جديدة. ويمكن‎ ‏المشيفرة.‎ polypeptide ‏المتغايرات الجديدة لتحسين وظيفة البولي ببتيد‎ ‏المشابه‎ molecular evolution ‏يسمح الاستخدام المذكور أعلاه وطرق النشوء الجزيئثشي‎ ‏بالتعرف علي واختبار متغايرات من إنزيمات الاختراع الحالي التي لها خواص مفضلة دونما‎ ‏معرفه مسبقة بتركيب البروتين أو وظيفته مما يسمح بالحصول علي مهجنات (جناسات) أو‎ 0 ‏متغايرات غير متوقعة ولكنها مفيدة. وهناك أمثلة عديدة لاستخدام نشوء جزيئي في الفن‎ ‏التقني لتحقيق العوامل أو العناصر الأمثل أو تبديلات النشاط الإنزيمي؛ وتشتمل مثل هذه‎ ‏الأمثلة؛ ولكنها لا تقتصر علي واحد أو أكثر من الآتي: تمييز و/أو نشاط أمثل في خلية‎ ‏+058(عائلة) أو في الزجاجيات؛ أو نشاط إنزيمي متزايد؛ أو طبقة تحتية متبدلة‎ cell ‏مضيفة‎ ‏أو نشاط / ميل نوعي‎ (allie ‏و/أو ميل نوعي منتج؛ أو ثبات إنزيمي أو تركيبي متزايد أو‎ ٠ ‏إنزيمي متبدل في ظروف بيئية مفضلة؛ وعلي سبيل المثال؛ درجة الحرارة؛ الأس‎ -substrate ‏؛ طبيعة الطبقة التحتية‎ pH ‏الهيدرو جيني‎ ‏سوف يظهر واضحاً وجلياً لشخص ماهر في الفن التقني؛ وباستخدام وسائل نشوء‎ LS ‏جزيئي. قد يتبدل ثمة إنزيم لتحسين الخواص الوظيفية للإنزيم.‎ acyl ‏ترانسيفيراز‎ Jal ‏ومن المناسب تشيفر المتتالية النيكليوتيدية المشيفرة بالتالي لإنزيم‎ Yo ‏ترانسيفيراز () متغايرء بمعني أن إنزيم أسيل‎ Jad ‏في الاختراع إنزيم‎ transferase enzyme ‏شطب أو إضافة؛ عند‎ (JY ‏قد يحتوي علي إحلال حمض أمينو واحد علي‎ (J) ‏ترانسيفيراز‎ ‎90٠ 968 967 967 96١ ‏المقارنة بإنزيم أصلي. وتحتفظ الإنزيمات المتغايرة بمثلية‎ 7654 %Y ‏وى لوك عوك توك الاو دوق حمق محمق‎ FY. ‏دحت‎ ‏علي الأقل باستخدام الإنزيم الأصلي. وقد تشتمل الإنزيمات الأصلية المناسبة علي أي إنزيم‎
YAMA
٠١ ‏باستعمال نشاط إنزيم حال للاسترات أو . يفضل يحاذي الإنزيم الأصسلي متتالية‎ ‏مجمع عليها.‎ (pfam00657) ‏أو‎ variant lipid acyltransferase ‏وفي تجسيد مفضل؛ يحتفظ إنزيم آسيل ترانسيفيراز متغاير‎ ‏مجمع عليها لرواكلا حمض‎ (pfam00657) ‏يتضمن علي الأقل واحداً أو أكثر من متتاليات‎ .005«, GANDY, HPT ‏أمينو موجود في قوالب‎ © ‏قد تهجن إنزيمات مثل تلكم الحالة للدهون لها نشاط منخفض أو لا نشاط لها لإنزيم أسيل‎ ‏وسط مائي والتي قد تهجن باستخدام أدوات أو‎ Aacyl transferase enzyme ‏ترانسيفيراز‎ ‏؛ مما يساعد‎ acyltransferase ‏وسائل نشوء جزيئي لتقديم أو تحسين نشاط إنزيم ترانسيفيراز‎ ‏علي الحصول أو إنتاج إنزيم أسيل ترانسيفيراز مع نشاط إنزيمي ملحوظ ومناسب المستخدم‎ ‏في تركيبات وطرق الاختراع الحالي.‎ ‏من المناسب؛ ان تشيفر المتتالية النيكليوتيدية المشيفرة بالتالي إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ ‏المستخدم في أي واحدة من طرق و/أو استخدامات الاختراع الحالي إنزين أسيل ترانسيفيراز‎ ‏الذي قد يتغاير بنشاط إنزيمي محسن علي دهون قطبي؛ يفضل ان تكون دهون فوسفاتية‎
Yl ‏و/أو دهون جليكولية مقارنة بالإنزيم‎ phospholipids ‏يفضل ان يكون لهذه المتغايرات نشاط ضئيل أو لا نشاط علي الإطلاق علي الدهون القطبية‎ ‏القابلة للإنحلال. وقد يكون النشاط المحسن علي الدهون القطبية؛ والدهون الفوسفاتية و/أو‎ ‏نتاجاً من التحليل المائي و/أو نشاط إنزيمي محلول ترانسيفيراز‎ glycolipids ‏دهون جليكولية‎ ‏أو اتحاد منهما.‎ ‏يمكن ان يكون لنشاط إنزيمات آسيل ترانسيفيراز خاصية متغايرة متناقصة علي الجليسريدات‎ ‏و/أو الجليسريدات الأحادية 11000817660068 و/أو جليسريدات ثنائية‎ triglycerides ‏الثلاثية‎ ٠ ‏مقارنة بالإنزيم الأصلي.‎ diglycerides
YAAY
Yay ‏يكون من المناسب للإنزيم المتغاير نشاط علي الجليسريدات الثلاثية و/أو الجليسريدات‎ ‏الآحادية و/أو الجليسريدات الثنائية.‎ ‏عن ذلك للإنزيم المتغاير نشاط متزايد علي الجليسريدات الثلاثية؛ و/أو‎ Sy ‏يمكن ان يكون‎ ‏؛ ودهون‎ polar lipids ‏قد يكون لها نشاط متزايد علي واحد أو أكثر من دهون قطبية‎ ‏فوسفاتية؛ واللسيثين؛ والفوسفوكولين؛ والدهون الجليكولية؛ وديجا لاكتوزيل آحادية الجليسريد‎ 0 monogalactosyl ‏وأحادي جالاكتوزيل أحادية الجليسريد‎ « digalactosyl monoglyceride .monoglyceride ‏ويمكن ان يكون واحد أو أكثر من هذه‎ «lial ‏تعرف متغايرات إنزيمات آسيل‎ ‏المتغايرات مناسباً ومستخدم في طرق واستخدامات طبقا للاختراع الحالي و/أو في تركيبات‎ ‏إنزيمية طبقا للاختراع الحالي وعلى سبيل المثال, فإن متغيرات فقط من أنزيمات أسيل‎ ٠ ‏توصف في المراجع الآتية قد تستخدم طبقا للاختراع الحالي,‎ acyltransferases ‏ترانسيفيراز‎ ‏أنظر:‎ ‎Hilton & Buckley J Biol. Chem. 1991 Jan 15: 6 (2): 997 - 1000, Robertson et al
J. Biol. Chem. 1994 Jan 21: 269 (3): 2146 — 50, Brumlik et al J. Bacteriol 1996 Apr. 179 (7): 2060 - 4, Peelman et al Protein Sci. 1998 Mar, 7 (3): 587 — 99. Yo
AMINO ACID SEQUENCES ‏متتاليات حمض الأمينو‎ ‏يتضمن الاختراع الحالي أيضاً استخدام متتاليات حمض أمينو مشيفرة عن طريق متتالية‎ ‏نيكليوتيدية التي تشيفر إنزيم آسيل ترانسيفيراز دهني المستخدم في أي من الطرق و/أو‎ ‏الاستخدامات طبقاً للاختراع الحالي.‎ ‏مم7‎
١.
ض يمكن ان يستخدم هنا في هذا الوصف»؛ مصطلح "متتالية حامض أمينو" ‎“amino acid‏ ‎sequence”‏ مرادفة للمصطلح "بولي ‎“polypeptide” "ain‏ و/أو المصطلح ‎Obs‏ وفي بعض الأحبان؛ يكون المصطلح 'متتالية حمض ‎sind‏ مرادفاً للمصطلح ‎“peptide” "sf‏ يمكن ان تحضر متتالية حمض الأمينو أو تفصل من مصدر مناسب؛ أو قد تصنع أو قد
‎٠‏ تحضر باستخدام طرق فنية من شطرات معاد اتحادها من حمض لا أوكسي نووي ‎recombinant DNA‏ يمكن ان يتم الحصول على متتاليات حمض ‎gid‏ من البولي ببتيدات المفصولة الملقنة هنا في هذا الوصف بواسطة طرق فنية معيارية وبصفة مناسبة. تكون أحدى الطرق المناسبة لتعيين متتاليات حمض الأمينو من بولي ببتيدات كالآتي:
‎٠٠١ ‏بواسطة التجميد وقد يذاب‎ 0 polypeptide ‏يمكن ان يجفف الببتيد المنقي‎ ٠ ‏مول 100016 من‎ A ‏ميكرولتر من مخلوط‎ 5٠ ‏ميكروجرام من المادة المجففة بالتجميد في‎ ammonium hydrogen ‏اليوريا و؛.٠ مول 100016 من كربونات أموتيوم هيدرو جينية‎ ‏دقيقة‎ ١١ ‏وقد تغير صفات البروتين ويختزل لمدة‎ ALS ‏عند أس هيدروجيني‎ «carbonate ‏وإضافة © ميكرولتر من £0 مللي مول من‎ nitrogen ‏عند ٠2م بعد المعالجة بالنيتروجين‎
‎* ‏وبعد التبريد الي درجة حرارة الغرفة؛ قد يضاف‎ dithiothreitol ‏شائي ثيوثريتول‎ ve ‏من ايودوسيتاميد 10008061800106 الى بقايا السيستين‎ mole ‏مللي مول‎ ٠٠١ ‏ميكرولتر من‎ ‏دقيقة في درجة حرارة الغرفة المظلمة تحت فيض من النيتروجين‎ ١١ ‏لمدة‎ cysteine .nitrogen (Lys - ©( ‏يمكن ان يضاف 170 ميكرولتر و© ميكروجرام من إنزيم إندو بروتيناز‎
‎Adee ‏وقد تجري‎ del ‏في © ميكرولتر من الماء الي مخلوط التفاعل‎ ©00000160888 Y-
م١٠١‏ هضم كيميائي عند درجة حرارة ‎OF‏ تحت جو من غاز النيتروجين ‎nitrogen‏ لمدة 54 ساعة. يمكن ان تفصل الببتيدات الناتجة بواسطة التحليل الكروماتوغرافي لأطوار متعاكسة ‎reverse‏ ‎phase HPLC‏ على عمود كروماتوجرافي من نوع )8 ‎VO » ..47( (VYDAC C1‏ سم ‎٠١‏ ‏م ميكرومتر؛ سبراشون جروب؛ كاليفورنياء الولايات المتحدة الأمريكية) ‎(0.46x15em; 100m;‏ ‎The Separation Group, California, USA)‏ باستخدام مذيب 0( الذي يتكون من: 76001 ‎(TFA)‏ في ماء ومذيب (ب) ‎(TFA) 960.0٠:‏ اسيتونيتريل ‎acetonitrile‏ وقد يعاد تنقية البولي ببتيدات المختارة كروماتوجرافيا علي عمود ديفلوسيل سي ‎Develosil C18 YA‏ باستخدام نفس النظام من المذيبات؛ قبل إجراء عملية التوالي عند ذرة النيتروجين ‎nitrogen‏ ‎٠‏ الطرفية. وقد تجري هذه العملية باستخدام جهاز نموذج ) ‎Applied Biosystems (i — {v1‏ ‎476A sequencer‏ باستخدام دورات سريعة السائل مستحث ‎La‏ خلال دورات نبضية سريعة طبقاً لإرشادات المصنع ‎(Applied Biosystems, California, USA)‏ + هوية المتتالية أو المثلية للمتتاليات (الجناسية) ‎SEQUENCE IDENTITY OR SEQUENCE‏ ‎HOMOLOGY ٠‏ يعني المصطلح "نظير مثلي' ‎“homologue”‏ كياناً له مثلية معينة مع متتاليات أحماض أمينو الخاضعة للتجارب موضوع الاختراع والمتثاليات النيكليوتيدية موضوع الاختراع وهنا يمكن مساواة المصطلح "المثلية" ب "الهوية" ‎identity”‏ ‏يجب أن تتيح متوالية حمض الأمينو المثلية ‎homologous amino acid sequence‏ و/أو ‎die‏ ‏© النيكليوتيدية و/أو شيفرة (تحويل الي شفرة) بولي ببتيد ‎polypeptide‏ الاحتفاظ بالنشاط الوظيفي و/أو حفز النشاط الإنزيمي.
٠١
تشتمل في السياق الحالي؛ متتالية مثلية علي متتالية حمض أمينو التي قد تكون متطابقة بنسبة ‎AS (Vo‏ أو 9650؛ يفضل 90 أو 9698 على الأقل مع المتتالية موضوع الاختراع. ومثاليا سوف تتضمن المناظرات المثلية ‎homologues‏ نفس المواقع النشيطة كمتتالية حمض أمينو الخاضعة للتجارب موضوع الاختراع. وبالرغم من أن المثلية يمكن اعتبارها أيضاً داخلة في مضمون المشابهة (بمعني رواكد حمض الأمينو التي لها خواص / وظائف كيميائية
متشابهة)؛ وفي سياق الاختراع الحالي يفضل التعبير عن المثلية نسبة الي هوية المتتاليات. يعبر عن متتالية مثلية في السياق الحالي في إطار كونها تشتمل على متتالية نيكليوتيدية التي قد تتطابق بنسبته ‎(VO‏ 85 أو 9690 على الأقل؛ يفضل 95 أو 9648 على الأقل من التطابق مع متتالية نيكليوتيدية تشيفر بولي ببتيد ‎polypeptide‏ طبقاً للاختراع الحالي (المتتالية
‎٠‏ الخاضعة للتجارب موضوع الاختراع). تتضمن المناظرات المثلية بشكل مثالي نفس المتتاليات التي تشيفر (تحول الي شفرة) المواقع النشيطة؛ الخ. كالمتتالية موضوع الاختراع. وبالرغم من أنه يمكن اعتبار المثلية كالمشابهة (بمعني رواكد حمض الأمينو التي لها خواص / وظائف كيميائية مشابهة)؛ ففي سياق الاختراع الحالي يفضل تمييز أو التعبير عن المثلية نسبة الي هوية المتتاليات.
‎١‏ يمكن إجراء مقارنات المثلية ‎Homology‏ بالعين؛ أو غالبا بمساعدة برامج مقارنة لمتتاليات متاحة بالفعل. ويمكن حساب هذه البرامج الحاسوبية للنسبة المئوية للمثلية بين متتاليتين أو أكثر. يمكن ان تحسب النسبة المئوية للمثلية خلال متتاليات متجاورة ‎contiguous sequences‏ ¢ بمعني تحاذي إحدي المتتاليات المتتالية الأخرى وكل حمض أمينو في ‎Allie‏ يقارن بحمض
‏© الأمينو المقارن في المتتالية الأخرى, بمعني راكد واحد لمرة واحدة. ويسمي هذا محاذاة
‏. تل
و 'بدون ‎(Lies “ungapped” cd iS‏ فإن هذه المحاذاة للمتتاليات المتقاربة أو المتماسة بدون ثغرات ‎“ungapped”‏ تنفذ فقط خلال عدد قصير نسبياً من الرواكد. بالرغم من أن هذه طريقة بسيطة جداً وضمنية؛ إلا أنها تفشل في الأخذ في الاعتبارء ‎Se‏ ‏في زوج متطابق خلافاً لذلك من متتاليات أن إيلاج أو شطب ثمة عناصر سوف يجعل رواكد
م حمض الأمينو التالية خارجه عن المحاذاة؛ مما يعمل على وينتج عنه بقوة اختزال كبير في مثلية ‎96٠0‏ عندما تنفذ محاذاة شاملة. وبالتالي؛ فإن أغلب طرق المقارنة تصمم للحصول على محاذاة مثلي التي تأخذ في اعتبارها إيلاجات وشطوبات دون مجازاة إحرازات المتلية الكلية. ويتحقق هذا عن طريق إدخال "ثغور” ‎“gaps”‏ في محاذاة المتتاليات المراد لتعظيم المثلية الموضعية ‎homology‏ 10021.
‎٠‏ مع ذلك؛ فإن هذه الطرق المعقدة تخص "جزاءات ثغرية" ‎“gap penalties”‏ لكل ثغرة تظهر في المحاذاة بالنسبة لنفس عدد أحماض الأمينو المتطابقة؛ وتكون محاذاة المتتالية بنفس الثغرات القليلة كلما أمكن - تعكس ارتباطاً ‎Jef‏ بين المتتاليتين المقارنتين - والتي تحقق إحرازاً أعلى من واحدة ذات ثغرات كثيرة. وتستخدم مثاليا مثل هذا "الميل لتكوين ثغرات" ‎“Affine gap costs”‏ الذي يحمل بين جنباته كلفة عالية نسبياً لوجود ثغرة وجزا ‎Is‏ أصغر لكل
‎١‏ _ راكد تالي في الثغرة. ويعتبرا هذا بمثابة نظام إحراز ثغرات الأكثر شيوعاً. وسوف ينتج عن الجزاءات الثغرية العالية بالطبع تحاذيات أمثل مع أقل ثغرات. وأن أغلب برامج المحاذاة تسمح بجزاءات ثغرية يراد تعديلها. ومع ذلك؛ يكون من المفضل استخدام القيم المخالفة عند استخدام مثل هذه البرمجيات لمقارنات متتاليات ببعضها البعض. يتطلب أولاً حساب النسبة المئوية القصوي الحصول على محاذاة أمثل؛ مع الأخذ في الاعتبار
‎٠‏ جزاءات الثغرات. ومن البرمجيات الحاسوبية المناسبة لإجراء ‎io‏ هذه المحاذاة النوع:
‎-(Invitrogen Corp.) Vector NTI‏ ومن أمثلة البرمجيات الأخرى التي يمكن أن تنفذ ا ‎YAAY‏
١١ ‏(أنظر‎ BLAST package ‏مقارنات ؛ ولكن لا تقتصر عليها ؛ مجموعة برمجيات بلست‎
Ausubel et al 1999 Short Protocols in Molecular Biology, 4" Ed- Chapter 18). ‏مقال:‎ ‏وكاد‎ Altschul et al 1990 J. Mol. Biol. 403 — 410). ‏(أنظر:‎ (FASTA) ‏وبرمجية فاستا‎
Ausubel et al ‏تتاحان لبحث نطاقي وخارج النطاق (أنظر:‎ FASTA ‏و‎ BLAST ‏البرمجيتان‎ ‏ومع ذلك ولبعض الاستخدامات؛ يفضل استخدام برنامج‎ .1999 Short Pages 7-58 to 7-60) © ‏لمقارنة متتالية‎ (BLAST 2) ‏وتتاح أيضاً وسيلة جديدة تسمي متتاليات‎ (Vector NTI)
FEMS Microbiol Lett 1999 174(2): 247-50. FEMS ‏بروتين بمتتالية نيكليوتيد (أنظر:‎ +(tatiana@ncbi.nim.nih.gov ‏وكذلك‎ Microbiol Lett 1999 177(1): 187-8 ‏يمكن قياسها بالنسبة الي‎ final % homology ‏بالرغم من أن النسبة المئوية للمثلية النهائية‎ ‏الهوية؛ فإن طريقة المحاذاة لا تعتمد مثالياً على مقارنة إزدواجات "الكل أو لا شئ". وبدلاً من‎ ٠ ‏ذلك؛ تستخدم عادة مصفوفة نقط محرزة بمقياس مستخدم يخصص النقط المحرزة لكل مقارنة‎ ‏لكل زوج بعد الآخر على أساس التشابه الكيميائي أو المسافة المرتبطة بالنشوء. وثمة مثال‎ ‏وهي المصفوفة‎ BLOSUMG62 matrix ‏لمثل مصفوفة تستخدم عامة تحت مسمي مصفوفة‎ ‏عامة إما القيم الافتراضية‎ (Vector NTI) ‏وتستخدم برامج‎ . (BLAST) ‏الافتراضية لبرامج‎ ‏إن وجدت (أنظر نشرة المستخدم لتفاصيل أخرى).‎ saline ‏العمومية لجدول مقارنة رموز‎ ١ ‏وبالنسبة الي بعض التطبيقات؛ يفضل استخدام القيم الافتراضية لمجموعة (برمجيات)‎ -(Vector NTI) ‏وبشكل بديل قد تحسب النسبة المئوية للمناظرات المثلية باستخدام خاصية المحاذاة المتعددة‎ old ‏على‎ (Invitrogen ‏الشركة‎ (Vector NTI) ‏في برنامج‎ multiple alignment feature
Higgins DG & Sharp PM (1988), ‏(أنظر مقال:‎ CLUSTAL ‏لوغاريتمي؛ مناظر لبرنامج‎ . ٠ (Gene 73 (1), 237-244).
YAAY
٠ ‏يفشضل‎ All ‏بمجرد أن تحصل البرمجية على محاذاة أمثل؛ يحتمل حساب النسبة المئوية‎ ‏النسبة المئوية لهوية المتتالية. وتنفذ البرمجية مثالياً هذا كجزء من مقارنة المتتالية وتولد‎ ‏نتيجة عددية.‎ ‏فمن ثم يفضل‎ Alla ‏عند تعيين هوية‎ Gap Penalties ‏إذا استخدمت جزا ءات ثغرية‎ ‏استخدام المقومات الآتية لمحاذاة في إزدواجات:‎ © 0 ‏حمض لا أوكسي نووي بروتين‎ | UGS ‏لبرمجية‎ ‎PROTEIN DNA CLUSTAL
K triple ١ | Y ‏حجم الكلمات‎
WORD SIZE
٠١ Yo ‏نقط الجزاء للثغرات‎
GAP PENALTY
2) 1 ‏امتداد الثغرات‎
GAP
EXTENSION
YAAT
ا يفضل في أحد التجسيدات ان تعين هوية المتتالية بالنسبة الي متتاليات نيكليوتيدية باستخدام برنامج كلستال ‎(CLUSTAL)‏ باستخدام نقط الجزاء عن الثغرات وامتدادها المضبوطة كما عرفت أعلاه. بصفة مناسبة؛ تعين درجة التعريف بالهوية بالنسبة الي متتالية نيكليوتيدية خلال ‎٠١‏ (متتالية) ‎oo‏ تنيكليوتيدية متماسة ‎(Jad contiguous nucleotides‏ خلال ‎Vo‏ (متتالية) نيكليوتيدية متجاورة أو متماسة؛ يفضل ‎5٠‏ (متتالية) نيكليوتيدية متجاورة أو متماسة؛ يفضل خلال ‎or‏ ‏متتالية نيكليوتيدية على الأقل؛ يفضل ‎٠١‏ (متتالية) نيكليوتيدية على الأقل؛ يفضل كذلك خلال ‎(Ada) ٠‏ نيكليوتيدية على الأقل. يفضل ان تعين درجة التعرف على الهوية بالنسبة الي متتالية نيكليوتيدية خلال المتتاليبة ‎٠‏ برمتها. في أحد التجسيدات , قد تعين درجة التعرف على هوية حمض الأمينو طبقاً للاختراع الحالي بصفة ملائمة عن طريق برامج كمبيوترية معروفة في الفن التفني؛ متل برمجيات: ‎Vector‏ ‎NTI 10 (Invitrogen Corp.)‏ وبالنسبة الي محاذاة إزدواجات يفضل أن تكون المصفوفة المستخدمة مرتبطة ببرنامج 62 ‎BLOSUM‏ مع جزاء فتح ثغرة ‎٠٠٠١‏ وجزاء امتداد الثغرات ‎LY = yo‏ بصفة مناسبة؛ تعين درجة التعرف على الهوية بالنسبة الي متتالية حمض أمينو خلال ‎٠١‏ ‏متتالية حمض أمينو متماسة أو متجاورة؛ يفضل خلال ‎Te‏ متتالية حمض أمينو على الأقل تكاد أن تكون متماسة؛ يفضل خلال ٠؟‏ متتالية على الأقل لحمض أمينو متقاربة جدا أو متماسة؛ وخلال ‎٠‏ متتالية على الأقل من حمض أمينو متماسة أو متقاربة؛ وأكثر تفضيلاً ‎a Y.‏ ‎YAAT‏
١١ ‏بصفة مناسبة؛ قد تعين درجة التعرف بالهوية بالنسبة الي متتالية حمض أمينو خلال المتتالية‎ ‏برمتها.‎ ‏أو إيلاجات أو استبدالات لرواكد حمض‎ cdeletions ‏يمكن ان يكون للمتتاليات أيضاً إلغاءات‎ ‏أمينو التي تنتج تغييراً صامتاً وتنتج في مادة مكافئة وظيفياً . وقد تصنع إحلالات حمض أمينو‎ ‏على أساس التشابه في القطبية؛ والشحنة؛‎ Deliberate amino acid substitutions 38% © ‏و/أو الطبيعة المتفاعلة مع‎ cel all ‏وصفة الميل‎ ell ‏وصفة كراهية‎ boll ‏وقابلية‎ ‏الأحماض والقواعد للرواكد طالما يحتفظ بالنشاط الرابط الثانوي للمواد. وعلى سبيل المثال؛‎ ‏؛‎ aspartic acid ‏تشتمل أحماض الأمينو المشحونة بشحنات سالبة على حمض أسبارتيك‎ ‏وتشتمل أحماض الأمينو المشحونة بشحنات موجبة على‎ ¢ glutamic acid ‏وحمض جلوتاميك‎ ‏ولأحماض الأمينو المشتملة على مجموعات رؤوس"‎ ¢ arginine ‏والأرجنين‎ lysine ‏الليسين‎ ٠ leucine ‏قطبية غير متغيرة قيم تميل للماء مشابهة تشتمل بالتالي على الليوسين‎ «asparagine ‏والأسباراجين‎ calanine ‏والألانين‎ evaline ‏والفالين‎ «isoleucine ‏والأيزوليوسين‎ ‏والفئيل ألانين‎ threonine ‏والثريونين‎ eserine ‏والسيرين‎ cglutamine ‏والجلوتامين‎ ‎-tyrosine ‏والتيروزين‎ phenylalanine ‏طبقاً للجدول أدناه. وقد تستبدل أحماض أمينو في نفس‎ Ste ‏يمكن ان تصنع بدائل متحفظة‎ ١ ‏الخانة في العمود الثاني يفضل في نفس السطر في العمود الثالث كل منهم بالآخر:‎ ow
ILV
‏غير مشحون‎ i
١١ ‏اغا‎ ‏ل‎
يشتمل الاختراع الحالي أيضاً على إحلال بمناظرات مثلية (إحلال واستبدال كلاهما المستخدمان هنا في هذا الوصف ليعني ذلك التغيير البيني لراكد حمض أمينو موجود؛ مع راكد بديل) الذي قد يظهر نتيجة لذلك؛ بمعني استبدال شبيه بشبيه مثل قاعدة بقاعدة أو حمض ‎٠‏ بحمض؛ أو قطب بقطبء الخ وقد يظهر أيضاً استبدال لا مثلي؛ بمعني من فئة من راكد الي أخرى أو بدلاً من ذلك يعني استيعاب أحماض أمينو مثل أورنثين 08:06 (يشار إليها هنا فيما يلي ب "72)؛ وأورنثين حمض ثنانئي بيوتريك ‎diaminobutyric acid ornithine‏ (يشار إليه فيما يلي في هذا الوصف بالحرف ب)؛ وأورنشين نورليوسين ‎norleucine ornithine‏ (يشار إليه فيما يلي في هذا الوصف بالحرف ©- اللاتيني)؛ وبيريل ألانين ‎pyriylalanine‏ « ‎٠‏ وثينيل ألانين ‎cthienylalanine‏ ونافثيل ألانين ‎naphthylalanine‏ وفنيل جليسين ‎.phenylglycine‏ ‏| يمكن ان تتم الإحلالات أيضاً عن طريق أحماض ‎gud‏ غير طبيعية ‎unnaturalamino—‏ ‎—aeids‏ ‏يمكن ان تشتمل متتاليات حمض أمينو متغايرة على مجموعات مباعدة قد تولج بين أي ‎ve‏ راكدين لحمض أمينو للمتتالية المحتوية على مجموعات مثل ‎edie‏ إثيل أو بروبيل إضافة الى مجموعات مباعدة من حمض الأمينو مثل رواكد جليسين »راع أو بيتا - الانين -0 ‎alanine‏ وتتعلق صورة أخرى من التباين بوجود راكد أمينو واحد أو أكثر في صورة ببتويد 1م سوف يفهم بدرجة أفضل عن طريق من لهم المهارة في الفن التقني. ولتحاشي الشك أو تحري اليقين تستخدم "صورة الببتويد" ‎“the peptoid form”‏ لتشير الي وراكد
١١ »- ‏حمض الأمينو المتغايرة؛ حيث فيها مجموعة البديل عند ذرة الكربون - في الوضع ألفا‎ ‏تكون ذرة نيتروجين الراكد أقرب منه الي ذرة الكربون في الوضع ألفا. وتعد طرق‎ carbon ‏تحضير الببتيدات في صورة الببتويد معروفة في الفن التقني المرتبط. أنظر على سبيل المثال‎ ‏مقال:‎ ‎Simon RJ et al., PNAS (1992) 89 (20), 9367 - 9371 and Horwell DC, Trends ٠
Biotechnol. (1995) 13 (14), 132-134. ‏يمكن ان تشتمل متتاليات نيكليوتيدية المستخدمة في الاختراع الحالي أو تشيفر (بمعني تحول‎
Lod ‏له الخواص النوعية المعرفة هنا في هذا الوصف‎ polypeptide ‏الي شفرة) بولي ببتيد‎ ‏بينهم على نيكليوتيدات صناعية أو معدلة. ويعرف عدد من أنواع مختلفة من تعديل على‎ ‏وهي تشتمل على مكونات‎ data ‏التقني‎ cdl ‏الوحدات وذلك في‎ ALE ‏تيكليوتيدات‎ ‎phosphorothioate ‏وفوسفوروثيوات‎ methylphosphonate ‏ميثيل فوسفونات‎ backbones ‏في مواضع طرفية ؟'‎ polylysine ‏أو بولي ليسين‎ acridine ‏و/أو إضافة سلاسل أكريدين‎ ‏و/أو 0 من الجزيء . ولتحقيق أغراض الاختراع الحالي؛ ينبغي أن يفهم أيضاً أن متتاليات‎ ‏النيكليوتيد الموصوفة هنا قد تعدل بواسطة أي طريقة متاحة في الفن التقني المرتبط. وقد‎ ‏مدى عمر المتتاليات‎ fin vive ela¥l ‏تجرى هذه التعديلات لتحسين النشاط في‎ ١ ‏التيكليوتيدية.‎ ‏على استخدام متتاليات النيكليوتيدية التى تكمل المتتاليات‎ Lad Sal ‏يشمل الاختراع‎ ‏المناقشة هنا في هذا الوصف أو أي مشتق ؛ أو شطر أو مشتقها . إذا كانت المتتالية مكملة‎ ‏لشطيرتها؛ فمن ثم؛ فإن المتتالية يمكن استخدامها كمسبار للتعرف على متتاليات تشفير‎ ‏متشابهة في كائنات حية أخرى ,الخ.‎ » 3 ‏ض‎
و يمكن الحصول على بولى نيكليوتيدات ‎Polynucleotides‏ لا تكون متناظرة مثليا ‎90٠0٠‏ مع متتاليات الاختراع الحالي؛ ولكنها تقع داخل مجال الاختراع وذلك في عدد من الطرق. وقد يحصل على متغايرات أخرى موصوفة هنا على سبيل المثال عن طريق سبر مجموعات مرتبة ومفهرسة من أحماض لا أوكسى نووية ‎(DNA)‏ من مجموعة من مصدات فردية كل على حدة؛ وعلى سبيل المثال؛ مفردات من تجمعات كائنة مختلفة. وإضافة لذلك؛ فقد يحصل على متناظرات مثلية أخرى جرثومية / بكتيرية أو خلوية؛ وخاصة متناظرات مثلية خلوية موجودة في خلايا ثدييات ‎Jie)‏ خلايا الجرذ ‎lal‏ والبقر والقرود) وهذه المتناظرات المثلية وشطراتها عامة سوف تكون قادرة على التهجيبن انتقائيا إلى متتاليات موضحة في تدوين المقتاليات هنا في هذا الوصف. وقد يحصل على ‎Jie‏ هذه المتتاليات عن طريق سبر ‎٠‏ المجموعات المفهرسة من ‎probing cDNA libraries‏ وذلك منهم أو مجموعات أحماض لا ‎Adie (DNA) dss Sf‏ ومفهرسة من فصائل حيوانية أخرى؛ ‎Jie aus‏ هذه المجموعات المفهرسة والمرتبة باستعمال مسبارات تتضمن كل أو جزء من أي من المتاليات في ندوينات المتاليات المرتبطة تحت ظروف مقيدة متوسطة الى مرتفعة. وتنطبق اعتبارات : مشابهة على الحصول على متناظرات مثلية من الفصائل ومتغايرات مشمولة من متتاليات ‎ve‏ البولى ببتيد أو النيكليوتيد طبقا الاختراع . يمكن ان نحصل أيضا على متناظرات مثلية من سلالات / فصائل أخرى باستخدام تفاعل متسلسل الإنزيم محلل ‎degenerate PCR‏ الذي سوف يستخدم عناصر ‎Gla‏ لاستهداف متتاليات داخل المتغايرات والتناظرات المثلية التي تشيفر متتاليات أحماض أمينو محفوظة داخل متتاليات الاختراع الحالي. ويمكن توقيع متتاليات محفوظة؛ ‎le‏ عن طرق تحاذى © متثاليات أحماض الامينو من متغايرات متناظرات مثلية عديدة. ويمكن أيضا تنفيذ مجموعات تضم7
Vio ‏محاذية من متتاليات باستخدام برمجية حاسوب في هذا المجال المرتبط. وعلى سبيل المثال؛‎
GCG Wisconsin PileUp Program. ‏طالما أستخدم على نطاق واسع برنامج:‎ ‏المستخدمة في التفاعل المتسلسل لإنزيم بوليمراز المتدنى‎ primers ‏يمكن ان تحتوى البطانات‎ ‏على موضع واحد أو أكثر متدنى في ظروف مقيدة أخفض من تلكم المستخدمة لتجنيس‎ ‏متتاليات لها بطانات متتاليات وحدة ضد متتاليات معروفة.‎ © ‏عن طريق عملية تهجين‎ polynucleotides ‏يمكن الحصول بشكل بديل على بولى نيكليوتيدات‎ ‏إلى موقع بعينها من متتاليات المخصصة. وقد يكون هذا‎ site directed mutagenesis ‏موجهة‎ ‏مفيدا حيثما تتطلب تغيرات في متتالية عنصر شفري صامت للحصول على تفاضليات أمثل‎ ‏(أو عائل) خاصة والتي فيها يمكن تمييز متتاليات‎ host cell ‏لعناصر شفرية لخلية مضيفة‎ ‏بولى نيكليوتيدية. وقد يرغب في إدخال تغيرات على مواقع التعرف على بولى ببتيدات‎ ٠ ‏مقيدة؛ أو لتبديل خاصية أو وظيفة البولى ببتيدات المشيفرة بواسطة البولى نيكليوتيدات.‎ lik (nucleotide sequences) ‏يمكن ان تستخدم بولى نيكليوتيدات (متتاليات النيكليوتيدية)‎ ‏بطانة للتمهيد لتفاعل‎ PCR primer ‏على سبيل المثال‎ primer ‏للاختراع للحصول على بطانة‎ ‏متسلسل لإنزيم بوليمرازء مسبار على سبيل المثال مميز بوسيلة تمييز إيضاحية مثلما عن‎ ‏طريق وسيلة تستخدم تمييزات نظائر مشعة أو وسائل غير مشعة؛ أو أن بولى نيكليوتيدات قد‎ Ve ‏تهجن جناسيا إلى موجهات. ومثل هذه البطانات والمسبارات والشطيرات الأخرى سوف‎ 6 ‏أو‎ ١ Yo (Jad ‏على الأقل؛ وعلى سبيل‎ 7١ ‏على الأقل؛ وتفضيلا‎ Vo ‏تكون‎ ‏على الأقل من أطوال نيكليوتيدات ومشمولة أيضا عن طريق المصطلح بولى نيكليوتيدات‎ ‏طبقا الاختراع كما استخدمت هنا في هذا الوصف.‎ ‏بولى نيكليوتيدات أحماض لا أوكسى نووية‎ Jie ‏يمكن ان نحصل على بولى نيكليوتيدات‎ © : ‏أو صناعيا‎ recombinantly ‏للاختراع جناسيا عن طريق إتحادهم‎ Eada ‏ومسبارات‎ (DNA)
Y AAR
VA
أو بواسطة أي وسيلة أخرى متاحة لمن لهم المهارة في هذا المجال. وقد تستنسخ وراثيا 0 بواسطة طرق فنية معيارية. يمكن ان نحصل وبشكل عام على بطانات ‎primers‏ عن طريق وسيلة صناعية (تخليقية)؛ تتعلق بتصنيع على خطوات لنيكليوتيد واحد من متتالية حمض نووي مرغوب في مرة 0 واحدة. وتتاح بسهولة طرق فنية الإجراء هذا باستخدام طرق فنية تامة الآلية وذلك في الفن التقني المرتبط.
Longer polynucleotides ‏ان نحصل وبشكل عام على بولى نيكليوتيدات أطول‎ (Say باستخدام وسيلة إتحاد جناسي ‎recombinant means‏ ¢ على سبيل ‎(JB‏ باستخدام طرق فنية جناسية عن طريق تفاعل متسلسل ‎PCR (polymerase chain reaction)‏ لإنزيم بوليمراز. ‎٠‏ وسوف يتعلق هذا تصنع بطانات (على سبيل المثال حوالي ‎١5‏ إلى ‎Te‏ نيكليوتيدات) تحف. منطقة متتالية الاستهداف الدهنية والتي يرغب في جناسها؛ مما يعمل على تماس البطانات مع ‎(mRNA)‏ أو ‎(cDNA)‏ المتحصل عليهما من خلية حيوانية أو بشرية؛ لإجراء تفاعل متسلسل ‏لإنزيم بوليمراز تحت ظروف تعمل على إيجاد تكبير للمنطقة المرغوبة؛ وفصل الشطيرة ‏المكبرة (مثلا عن طريق تنقية مخلوط التفاعل على هلام أجاروز ‎(agarose gel‏ واسترجاع : ‎Ne‏ حمض لا أوكسى نووي ‎(DNA)‏ وقد تعمم البطانات ‎primers‏ لاحتواء موقع التعرف على ‏إنزيمات تقييدية بحيث يمكن مجانسة حمض لا أوكسى نيوكلييك المكبر ‎amplified DNA‏ إلى ‏موجة جناسي ‎cloning vector‏ مناسب. ‏ا 171
VAY
HYBRIDISATION ‏التهجين‎ ‏يشمل أيضا الاختراع الحالي على استخدام متتاليات التي تكمل متتاليات الاختراع الحالي؛ أو‎ ‏متتاليات تكون قادرة على تهجين موجة لإما متتاليات الاختراع الحالي أو إلى متتاليات مكملة‎ ‏لها.‎ ‏كما أستخدم هنا في هذا الوصف " الطريقة التي‎ “hybridisation” ‏يعنى مصطلح" تهجين”‎ “the " ‏عن طريقها تتحد جديلة من حمض نووي بجديلة مكملة خلال إزدواجات أساس‎ process by which a strand of nucleic acid joins with a complementary strand through ‏وكذالك طريقة تكبير كما نفذت في تقنيات تفاعل متسلسل لإنزيم بوليمراز‎ base pairing” (PCR) ‏يشمل الاختراع الحالي أيضا على استخدام متتاليات النيكليوتيدية تكون قادرة على التهجين‎ Ys ‏إلى متتاليات مكملة متتاليات موضوع الاختراع المناقشة هنا في هذا الوصف ؛ أو أي مشتق؛‎ ‏أو شطر منها أو مشتقها.‎ ‏يشتمل الاختراع أيضا على متتاليات مكملة متتاليات قادرة على الجناس إلى متتاليات‎ ‏النيكليوتيدية نوقشت هنا في هذا الوصف.‎ ‏لمعقد‎ (Tm) melting temperature ‏تعتمد ظروف التهجين على درجة حرارة الانصهار‎ ١ ‏ترابط نيكليوتيد؛ كما يلقنة المرجع:‎
Benger and kimmel (1987, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in
Enzymology, Vol. 152 , Academie Press, San Diego CA). ‏كما يشرح أدناه.‎ "stringency" " ‏والذى يضقى تعريف " تفييد‎ 220) 2° = ‏مثاليا عند درجة حرارة اتنصهار‎ Maximum stringency ‏أقصى‎ ME ‏يحدث‎ Y. ‏تحت‎ م*٠١‎ Ve pre ‏عند حوالي‎ Alle ‏تحت 0]للمسبار)؛ وتقييد مرتفع بدرجة‎
YAAT
لا 0؛ وتقييد منخفض عند حوالي 0٠م‏ إلى ٠7م‏ تحت ‎Tm‏ . وكما سوف يفهم من العاملين في هذا المجال التقني؛ يمكن استخدام عملية تهجين مقيدة لأقصى حد لتعريف أو الكشف عن متتاليات النيكليوتيدية متطابقة بينما يمكن استخدام عملية تهجين مقيدة متوسطة (أو منخفضة) لتعريف أو الكشف عن متتاليات بولي النيكليوتيدية مشابهة أو مرتبطة.
0 يشمل الاختراع الحالي بشكل مفضل على استخدام متتاليات التي تكون مكملة متتاليات القادرة على التهجين تحت ظروف التقييد العالية أو ظروف تقييد متوسطة إلى متتاليات النيكليوتيدية تشيفر بولى ببتيدات لها خواص نوعية محددة كما عرفت هناك في هذا الوصف. يشمل الاختراع الحالي بشكل أكثر تفضيلا على استخدام متتاليات المكملة متتاليات قادرة على التهجين تحت ظروف تهجين عالية ‎e210 Sle)‏ و ).+ ‎١# - SSC x 1} SSC‏ مول
‎٠‏ كلوريد صوديوم ‎(NaCl)‏ و ‎١.015‏ مول من سيترات الصوديوم ‎Na-citrate‏ عند رقم هيدروجين = 7؛ ‎SSC Cum‏ = التركيز المقيد للمتتالية )) إلى متتاليات النيكليوتيدية تشيفر بولى ‎Shady‏ ذات خواص نوعية كما عرفت هنا في هذا الوصف. يتعلق الاختراع الحالي أيضا باستخدام متتاليات النيكليوتيدية التي يمكن أن تهجن إلى متتاليات
‏التيكليوتيدية المناقشة هنا في هذا الوصف (مشتملة على متتاليات مكملة لتلكم المناقشة هنا في
‎oe‏ هذا الوصف).
‏يتعلق الاختراع الحالي أيضا باستخدام متتاليات النيكليوتيدية التي تكون مكملة متتاليات التي يمكن أن تهجن إلى متتاليات النيكليوتيدية المناقشة هنا في هذا الوصف (مشتملة على متتاليات المكملة لتلكم المناقشة هنا في هذا الوصف). يشتمل أيضا ضمن مجال الاختراع الحالي استخدام متتاليات النيكليوتيدية قادرة على التهجين ‎٠٠‏ إلى متتاليات النيكليوتيدية الناقشة هنا في هذا الوصف تحت ظروف تقييد متوسطة إلى قصوى. ‎YAAR‏
يغطى في جانب للاختراع الحالي استخدام متتاليات النيكليوتيدية التى يمكن أن تهجن إلى متتاليات النيكليوتيدية المناقشة هنا في هذا الوصف ؛ أو مكملتها تحت ظروف مقيدة (على سبيل المثال +20 و ‎x ١.7‏ التركيز المقيد للمتتاليات ‎(50°C and 0.2xSSC‏ يغطى الاختراع الحالي في جانب ‎al‏ أكثر تفضيلا استخدام متتاليات النيكليوتيدية التي يمكن م أن تهجن متتاليات النيكليوتيدية المناقشة هنا في هذا الوصفء أو المكملة لهاء تحت ‎Gh‏ ‏مقيدة بدرجة عالية (على سبيل ‎x «Vote (Jud‏ تركيز المتتاليات المقيد ‎65°C and‏ ©0.155). تمييز البولي ببتيدات ‎EXPRESSION OF POLYPEPTIDES‏ ‎٠‏ يمكن تضمين ‎Ale‏ النيكليوتيدية المستخدمة في الاختراع الحالي أو لتشفير ‎Je‏ ببتيد ‎polypeptide‏ له الخواص النوعية والمحددة كما عرف هنا في هذا الوصف وذلك في موجة يمكن تعديد عناصر الجناسية المتحدة ‎recombinant replicable vector‏ وقد يستخدم ‎da gall‏ لتعديد وتمييز متتالية ‎appl‏ في صورة بولى ببتيد؛ في و/أو من خلية مضيفة ‎host‏ ‎(Jile)cell‏ متسقة. وقد يضبط التمييز باستخدام متتاليات ضابطة التي تشمل على معززات / 0 مسرعات وإشارات تمييز أخرى. ومعززات الانقسام النووي الخلوي ومعززات وظيفية في تحسين انقسام نواة الخلية. وقد تستخدم أيضا معززات أو محسنات أنسجة بعينها أو وسائل حثية بعينها. وقد تستخدم أيضا معززات وهمية تتضمن عناصر متتاليات من معززات مختلفة (اثنتين أو أكثر موصوفة أعلاه). يمكن ان يفرز البولى ببتيد ‎polypeptide‏ المتحصل عليه عن طريق خلية جناسبة متحدة ‎host‏ ‎recombinant cell Y.‏ عن طريق تمييز متتالية النيوكليوتيد أو قد تحتوى خلوياً ‎Li‏ على أساس المتتالية و/أو الموجه المستخدم. ويمكن تصميم متتاليات التشفير بإستخدام المتتاليات الإشارية ‎YAAT‏
YY. ‏التى توجه إفراز متتاليات التشفير المادى خلال غشاء خلوى معزز لإنقسام الخلية أو محسن‎ ‏له.‎ ‎CONSTRUCTS ‏التركيبات (الجينية)‎ eal ‏المرادف للمصطلحات مثل‎ construct” ‏يشتمل المصطلح 'تركيب جينى”‎ ‏على متتالية نيوكليوتيدية‎ "hybrid" ‏و"هجين”‎ "cassette ‏"العليب أو الكاسيت"‎ "conjugate" ٠ ‏تشيفر بولى ببتيد له خواص معين كما عرف هنا في هذا الوصف المستخدم طبقاً للإختراع‎ ‏الحالي مباشرة أو بصفة غير مباشرة متصلة بوسيلة معززة. وثمة مثال لإتصال غير مباشر‎ ‏التى‎ ¢<ADH intron ‏أو‎ Shl-intron ٠ ‏هو وسيلة لمجموعة مباعدة مناسبة مثل متتالية إنترون‎ ‏تتوسط الوسيلة المعززة والمتتالية النيوكليوتيدية طبقاً للإختراع الحالي. وينطبق نفس الشىء‎ ‏بالنسبة إلى الإختراع الحالي الذى يشتمل على توصيل مباشر أو غير‎ Tei’ ‏على المصطلح‎ ٠ ‏مباشر. وفي بعض الحالات؛ لا تغطى المصطلحات الإتحاد الطبيعى لمتتالية النيوكليوتيد‎ ‏المشيفرة للبروتين المترافقة للوسيلة المعززة الجينية من النوع البرى وعندما تكون كلاهما‎ ‏في بيئتهم الطبيعية.‎ ‏تسمح بإختيار التركيب الجينى.‎ marker ‏يمكن ان يحتوى التركيب على أى مميز علامة‎ ‏يتضمن التركيب الجينى ولإستخدامات معينة؛ على الأقل متتالية نيكليوتيدية طبقاً للإختراع‎ 10 ‏الحالي أو متتالية نيكليوتيدية تشيفر (بمعنى تحول إلى شفرة) بولى ببتيد له الخواص النوعية‎ ‏كما عرفت هنا في هذا الوصف والمرتبطة فعلياً بعامل معزز.‎
ORGANISM ‏الكائن الحى‎
YAAT
١ ‏بالنسبة إلى الإختراع الحالي على أى كائن حى الذى‎ "organism" ‏يشتمل مصطلح "كائن حى"‎ ‏يمكن أن يتضمن متتالية نيكليوتيدية طبقاً للإختراع الحالي أو متتالية نيكليوتيدية تشيفر لبولى‎ ‏ببتيد له الخواص النوعية كما عرفت هنا في هذا الوصف و/أو منتجات حصل عليها منهم.‎ ‏بالنسبة إلى الإختراع الحالي‎ "transgenic organism" ‏يشتمل مصطلح "كائن جينى إنتقالى"‎ ‏على أى كائن حى يتضمن متتالية نيكليوتيدية تشيفر لبولى ببتيد له خواص نوعية كما عرف‎ ‏هنا في هذا الوصف و/أو المنتجات المتحصل عليها منه و/أو حيث فيه العامل المعزز يمكن‎ ‏أن يسمح بتمييز شيفرة المتتالية النيكليوتيدية للبولى ببتيد الذى له خواص كما عرفت هنا في‎ ‏هذا الوصف داخل الكائن الحى. يفضل يمكن تضمين المتتالية النيكليوتيدية في العنصر‎ ‏الوراثى للكائن الحى.‎
‎٠‏ الا يغطى مصطلح ‎PE‏ حى جناسى" ‎“transgenic organism”‏ أو "جينى إنتقالى" متتاليات شيفرة نيكليوتيدات أصلية في بيئتهم الطبيعة عندما يكونون تحت ضبط الوسيلة المعززة الأصلية التى تكون أيضاً في بيئتهم الطبيعية. يشتمل مصطلح كائن ‎a‏ جناسى ‎transgenic organism‏ إنتقال طبقاً للإختراع على كائن حى يتضمن واحد أو مجموعات من متتالية نيكليوتيدية مشيفرة لبولى ببتيد له خواص نوعية
‏5 محددة كما عرف هنا في هذا الوصف؛ وتركيبات جناسية أو جينية كما عرفت في هذا الوصف؛ وموجهات كما عرفت هنا في هذا الوصفء؛ وبلازميدات ‎plasmids‏ كما عرفت هنا في هذا الوصف؛ وخلايا كما عرفت هنا في هذا الوصف أو منتجاتهم. وعلى سبيل المثال؛ يمكن أن يتضمن الكائن الحى الجينى الإنتقالى شيفرة متتالية نيكليوتيدية لبولى ببتيد له الخواص النوعية كما عرفت هنا في هذا الوصف تحت ضبط وسيلة التعزيز غير المترافقة
‎٠‏ مع متتالية تشيفر (تحول إلى شفرة) إنزيم ‎acyltransferase) bid! 5 Jad‏ في طبيعته.
‎YAAT .
١7
TRANSFORMATION OF HOST ‏حية مضيفة (عائلة)‎ WS ‏تحويل خلايا/‎
CELLS/ORGANISM ‏يمكن أن يكون الكائن الحى المضيف (العائل) معززاً لإنقسام نواة الخلية أو كائن مسرعاً‎ ‏لإنقسام نواة الخلية.‎
E. coli and Jie ‏تشتمل أمثلة العوائل المناسبة المعززة لإنقسام نواة الخلية على بكتيريا‎ © .B. licheniformis ‏يفضل‎ «Bacillus licheniformis ‏توثق جيداً التعاليم عن تحويل العوائل المعززة لإنقسام نواة الخلية في المجال الفني لهذا‎ ٍ ‏الاختراع؛ على سبيل المثال؛ أنظر مقال:‎
Sambrook et al (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, 1989, Cold
Spring Harbor Laboratory Press) ٠١ ‏إذا إستخدم عائل معزز لإنقسام نواة الخلية؛ فقد يحتاج إلى متتالية نيكليوتيدية لتعدل بصفة‎ introns ‏عن طريق إزالة الأنترونات‎ Labia ‏مناسبة قبل التحويل-‎ ‏في تجسيد‎ yeast ‏يمكن أن يكون الكائن الحى الجناسى (الجينى) الإنتقالى عبارة عن خميرة‎ ‏آخر.‎ ‎Ac sia ‏بإستخدام طرق‎ Filamentous fungi cells ‏يمكن ان تحول خلايا فطرية فتيلية‎ Vo ‏معروفة في المجال الفني لهذا الاختراع مثل طريقة تتعلق بتكوين السائل الخلوى المحتوى‎ ‏على بروتون الخلية وتحويل السوائل الخلوية يتبعها إعادة توليد جدار الخلية بطريقة معروفة.‎ ‘EP 0 238 023 ‏ويوصف إستخدام جنس أسبرجيللس في هيئة كائن حى دقيق كعائل وذلك في‎ ‏نباتاً. وقد توجد إطلالة على الطرق الفنية‎ (Jad) ‏يمكن أن يكون الكائن الحى المضيف‎ ‏العامة المستخدمة لتحويل النباتات في المقالات لمؤلفها:‎ ٠
Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991 142:205-225)
YAAT
باكر ومقال: ‎Christou (Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27)‏ وقد توجد ‎Lad‏ تعاليم عن التحويل النباتى في ‎.EP-A-0449375‏ تعرض تعاليم عن تحويل فطريات؛ و ونباتات في الأقسام الأتية. ‎o‏ ‏فطر متحول ‎TRANSFORMED FUNGUS‏ يمكن ان يكون الكائن الحى العائل فطراً- مثل فطر خيطى أو فتيلى. وتشتمل ‎Abd‏ من عوائل مناسبة على أى عضو ينتمى إلى الأجناس ثرمومسيس 7160700088 أكريمونيوم تمص أسبرجيللوس ‎<Aspergillus‏ بنتسليوم ‎«Penicillium‏ ميبسوكر ‎«Mucor‏ ‎٠‏ نوررسبورا ‎«Neurospora‏ تريكودرما ‎Trichoderma‏ وما أشبه. يمكن الإطلاع على تعاليم تحويل الفطريات الخيطية أو الفتيلية في براءة ‎US-A-5741665‏ ‏التى تذكر أن الطرق الفنية المعيارية لتحويل الفطريات الفتيلية أو الخيطية وزراعة الفطريات معروفة جيداً في الفن التقنى المرتبط. ويمكن بإستفاضة للطرق الفنية كما إستخدمت بالنسبة إلى جنس وفصيلة ‎NL crassa‏ وذلك في مرجع بإسم: ‎Davis and de Serres, Methods Enzymol (1971) 17A: 79-143 ٠‏ ثمة تعاليم أخرى عن تحويل فطريات خيطية أو فتيلية في 108-8-5674707. في أحد الجوانب؛ يمكن أن يكون الكائن الحى منتمياً إلى جنس أسبرجيللس ‎Jie Aspergillus‏ أسبرجيللس نيجر ‎-Aspergillus niger‏ ويمكن أيضاً تحضير أسبرجيللس ‎Aspergillus‏ إنثقال جينى ‎lida‏ للإختراع الحالي © عن طريق المثال الأتى؛ وعلى سبيل المثال؛ تعاليم: ّ| تلم
١7
Turmer G. 1994 (Vectors for genetic manipulation. In: Martinelli S.D., Kinghorn
J.R.( Editors) Aspergillus: 50 years on. Progress in industrial microbiology vol 29.
Elsevier Amsterdam 1994. pp. 641-666) ‏روجع تمييز جناسى لفطريات فتيلية أو خيطية في مقال:‎
Punt et al. (2002) Trends Biotechnol 2002 May;20(5):200-6, Archer & Peberdy Crit 8
Rev Biotechnol (1997) 17(4):273-306
TRANSFORMED YEAST ‏متحولة‎ ‏يمكن أن يكون الكائن الحى الجناسى الإنتقالى في تجسيد آخر.‎ ‏لمناظرات متغايرة‎ heterologous gene expression ‏تتاح مطالعة الأسس تمييز جناسى (جينى)‎ ‏في الخميرة على سبيل المثال؛‎ ٠
Methods Mol Biol (1995), 49:341-54, and Curr Opin Biotechnol (1997)
Oct;8(5):554-60
Saccharomyces cerevisi or Pichia pastoris ‏في فصائل‎ Labia ‏وفي هذا الخصوص»ء الخميرة‎ ‏يمكن ان تستخدم كوسيلة لتمييز مورث‎ FEMS Microbiol Rev (2000 24(1):45-66) ‏أنظر‎ ‏(حينة) كمتناظرات مغايرة.‎ yo ‏تعطى مراجعة أو إطلالة عن أسس تمييز جناسى (جينى) متغاير في سكارومسيس سرفيزى‎ ‏وإفراز منتجات جناسية (جينية) عن طريق مؤلف:‎ Saccharomyces cerevisiae
E Hinchcliffe E Kenny (1993, "Yeast as a vehicle for the expression of heterologous genes", Yeasts, Vol 5, Anthony H Rose and J Stuart Harrison, eds, 2nd edition,
Academic Press Ltd.) Y.
YAAY
١١ ‏طورت بروتوكولات تحويل متعددة. وعلى سبيل المثال؛ يمكن تحضير‎ yeast ‏لتحويل الخميرة‎ ‏للإختراع الحالي عن طريق‎ lis ‏جناسى (جينى) إنتقالى‎ Saccharomyces ‏ساكاروميسيس‎ ‏التعاليم الأتية. أنظر‎
Hinnen et al., (1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75, 1929); Beggs, J D (1978, Nature, London, 275, 1 04); and Ito, H et al (1983, J e
Bacteriology 153, 163-168) ‏يمكن ان تختار خلايا الخميرة المتحولة بإستخدام علامات تمييزية إنتقالية متنوعة- مثل‎ ‏علامات تمييزية إنتقائية لنمو غذائى بالنسبة إلى وسائل تمييز مقاومة للمضادات الحيوية‎ .auxotrophic markers dominant antibiotic resistance markers ‏بصف سائدة‎ ٠ ‏المناسبة من فصائل مرتبطة من حيث التقنية‎ yeast host ‏يمكن إنتقاء الخميرة العائلة‎ «Pichia spp ‏الحيوية؛ من الامثلة عليه ودون الحصر فصائل منتقاه من فصائل بنتشيا‎ ‏وفصائل ياروينيا‎ Kluyveromyces ‏وكلوفيروميسيس‎ +8 spp ‏وهنسولا‎ ‏مشتملة على سلالات‎ 58001870107088 spp ‏وفصائل ساكاروميسيس‎ <Yarrowinia spp ‏مشتملة‎ «Schizosaccharomyce spp ‏أو فصائل شيزوساكاروميس‎ cerevisiae, ‏سيرفيزيى‎ Ye -Schizosaccharomyce pombe ‏على فصيلة وسلالة سيزوساكروميس بومبيه‎
Pichia pastoris ‏من بيتشيا باستوريس‎ methylotrophic ‏يمكن ان تستخدم سلالة ميثيلولية‎ ‏ككائن حى عائل.‎
Hansenula ‏لا‎ gu ila ‏في تجسيد محدد بعينه؛ قد يكون الكائن الحى العائل منتمياً إلى فصيلة‎ (W001/39544 ‏(كما وصف في‎ 11. polymorpha ‏مثل‎ ٠ ‏اد‎
اد نباتات/ خلايا نباتية محولة ‎TRANSFORMED PLANTS/PLANT CELLS‏ يمكن ان يكون الكائن الحى العائل المناسب للإختراع الحالي عبارة عن نبات. يمكن الرجوع الى مقالات: )42:205-225 ]1991[ ‎Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol‏ و
‎Christou (Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27)‏ أو في ‎WO01/16308‏ ‎٠‏ ا لمراجعة الطرق العامة. قد ينتج النبات الجناسى (الجينىي) الإنتقالى ‎transgenic plant‏
‏مستويات محسنة من إسترات إستيرول نباتية ‎phytosterol esters‏ وإسترات ستانول
‎phytostanol esters‏ نباتية؛ وذلك على سبيل المثال.
‏يتعلق الإختراع الحالي ‎Lad‏ بطريقة للحصول على نبات جناسى أو جينى إنتقالى له
‏مستويات محسنة من إسترات ستيرول ‎phytosterol esters‏ نباتية؛ وإسترات ستانول ‎dil phytostanol esters ٠‏ تتضمن خطوات تحويل خلية نباتية بإستعمال إنزيم أسيل
‏ترانسيفيراز كما عرف هنا في هذا الوصف (وخاصة بإستعمال موجه تمييزى أو تركيب
‏جينى يتضمن إنزيم آسيل ترانسيفيراز كما عرف هنا في هذا الوصف)؛ وتنمية نبات من
‏خلية نباتية متحولة.
‎SECRETION ‏الإفراز‎ ١ culture ‏يفضل غالباً في البولى ببتيد المراد إفرازه من العائل التمييزى إلى وسط المزرعة‎ ‏من حيث الإنزيم قد يكون اسهل إسترجاعاً. وطبقاً للإختراع الحالي قد تختار‎ medium ‏متتالية رائدة من حيث الإفراز على أساس العائل التمييزى المرغوب. وقد تستخدم أيضا‎
‏متتاليات إشارية مهجنة ‎Hybrid signal sequences‏ مع سياق الإختراع الحالي. © .من ‎ABA‏ النموذجية لمتتاليات رائدة من حيث الإفراز لا تترافق مع متتالية نيكليوتيدية تشيفر (تحول إلى شفرة) إنزيم آسيل ترانسيفيراز في الطبيعة يمكن ذكر تلكم المتأصلة من جينة
ا إنزيم أميلو جلوكوسيداز ‎(AG) amyloglucosidase‏ من أصل فطرى (خواع لكليهما ‎٠١‏ و 4 صورة أحماض أمينية؛ وعلى سبيل المثال من جنس أسبريجيللوس ‎Ais «(Aspergillus‏ عامل أ- ‎a-factor gene‏ ( مثل ساكاروميسيس ‎(Saccharomyces‏ كلوفيروميسيس ‎Kluyveromyces‏ وهانسينو لا ‎(Hansenula‏ أو جينة ألفا- ‎o-amylase gene Dual‏ ‎(Bacillus) °‏ . الكشف ‎DETECTION‏ ‏تعرف العديد من بروتوكولات كشف وقياس تمييز متتالية حمض الأمينو في هذا المجال. وتشتمل الأمثلة على تحليل ماص مناعى مرتبط إنزيمياً ‎enzyme-linked immunosorbent‏ ‎«(ELISA) assay ٠‏ وتحليل مناعى إشعاعى ‎radioimmunoassay‏ (هل8)؛ وفرز خلوى ‎Lilie‏ ‏لصفي ‎(FACS) fluorescent activated cell sorting‏ . يعرف العاملون في هذا المجال المرتبط بمجموعة متنوعة من تقنيات التمييز والترابط الإسهامى والتى يمكن إستخدامها في تحاليل أحماض متنوعة من الحمض النووى وحمض الأمينو . ‎١5‏ هناك عدد من الشركات مقتل ‎Pharmacia Biotech (Piscataway, NJ)‏ وشركة ‎Promega‏ ‎(Madison, WI)‏ و ‎US Biochemical Corp (Cleveland, OH)‏ تورد ادوات القياس بشكل تجاري وبروتوكولات لهذه العمليات (التحليلية والكشف). تشتمل جزيئات أو عناصر تمييزية لإخراج تقارير مناسبة لنتائج الكشف والتحليل على نيوكليوتيدات مشعة ‎radionuclides‏ أو إنزيمات؛ أو مشعة ‎«fluorescent‏ أو إنبعاث ضوئى ‎٠‏ متثلالىء نتيجة تأثير كيميائى ‎chemiluminescent‏ أو عوامل جناسى لونى ‎chromogenic‏ ‏5 وكذلك تكوين طبقات تحتية ‎substrates‏ « وعوامل مترافقة 018010:8؛ ومثبطات 1م"
١ ‏وما أشبه. وتشتمل البرءات الملقنة‎ smagnetic particles ‏وحيبيات مغناطيسية‎ 5 ‏لإستخدام هذه العلامات التمييزية على براءت الإختراع الأمريكية أرقام:‎
US-A-3,817,837; US-A-3,850,752; US-A-3,939,350; US-A-3,996,345; US-A- 4,277,437; US-A-4,275,149 and US-A-4,366,241. recombinant immunoglobulins ‏يمكن ان نحصل على جلوبيولينات مناعية معادة الإتحاد‎ © .US-A-4,816,567 ‏كما وضح في‎
FUSION PROTEINS ‏بروتينات متحدة‎ ‏يمكن ان نحصل على إنزيم آسيل ترانسيفيراز المستخدم في الإختراع الحالي كبروتين متحد؛‎ ‏سبيل المثال؛ للمساعدة في إستخلاصه وتنقيته. وتشتمل أمثل إتحاد مشاركات بروتينية‎ Je
GAL4 « 6xHis «glutathione-S-transferase ‏ترانسيفيراز‎ -S- ‏متحدة على جلوتاثيون‎ ٠
Br ‏(مجالات تتشيط ربط حمض لا أوكسى نووى و/أو إستنساخ) وبيتا- جالاكتوسيدار‎ ‏وقد يكون من المناسب أيضاً تضمين موقع إنقسام حال للبروتين بين مشارك‎ galactosidase ‏يروتين متحد ومتتالية البروتين موضع الإهتمام للسماح بإزالة متتاليات البروتين. يفضل ان‎ ‏لا يعوق البروتين المتحد نشاط متتالية البروتين.‎ ‏يمكن الإطلاع على نظم تمييز إتحاد الجينات في‎ ١
E. coli have been reviewed in Curr. Opin. Biotechnol. (1995) 6(5):501-6 ‏قد تربط متتالية حمض الأمينو لبولى ببتيد له الخواص النوعية كما عرفت هنا في هذا‎ ‏لفرز مجموعات‎ (JOA ‏الوصف بمتتالية غير أصلية لشيفرة بروتين متحد. وعلى سبيل‎ ‏فقد يكون من‎ ald ‏مرتبة ومفهرسة من الببتيدات لعوامل قادرة على التأثير على النشاط‎ ‏المفيد شيفرة مادة وهمية تميز متناظر علوى يتعرف عليه بواسطة جسم مضاد متاح تجاريا.‎ YL ‏شرح مختصر للرسومات:-‎
يصف الإختراع الأن على سبيل المثال فقط مع الرجوع إلى الأشكال والأمثلة الأتية: شكل ‎)١(‏ يوضح متتالية الحمض الدهنى لإنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid‏ ‎acyltransferase (GCAT)‏ ناضج من جنس وفصيلة ‎(ule gig pl‏ سالمونيسيدا ‎Aeromonas‏ ‏8018 هجين مع تهجين ‎Asn80ASp‏ (وبصفة ملحوظة يكون حمض الأمينو ‎٠‏ في ‎٠‏ المتتالية الناتجة) (المتتالية برقم تعريفي للهوية 07( يوضح شكل ‎)١(‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية ١)؛‏ عبارة عن إنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس وفصيلة إيرومانوس هيدر وفيا ‎Aeromonas hydrophila‏ ‎ATCC)‏ رقم ‎(Vale‏ ‏يوضح شكل (©) المتتالية ‎pam00657‏ المتفق ‎Lede‏ بالإجماع من الصورة )7( ‎n.‏ لقاعدة بيانات (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية 7)؛ ض يوضح شكل )£( متتالية حمض أمينو (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ؟) المتحصل عليها من الكائن إيروتوماس هيدر ‎Acromonas hydrophila (P10480; ds‏ (51:121051)؛ يوضح شكل )0( متتالية حمض أمينو (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ؛) المتحصل ‎Vo‏ عليها من الكائن الحى من جنس وفصيلة إيروموناس سالمونيسيدا ‎Aeromonas salmonicida‏ ‎G1:9964017)‏ :098404) همل)؛ يوضح شكل )1( متتالية حمض أمينو (متتالية بالرقم التعريفي للهوية ©) متحصل عليها من الكائن ‎oad)‏ من جنس وفصيلة ستربتوميسيس كوليكولر أ ؟(7) ‎Streptomyces‏ ‎coelicolor A3(2)‏ (رقم الدخول إلى بنك الجينات ‎{(NP_631558‏
VY. ‏متتالية حمض أمينو (متتالية بالرقم التعريفي للهوية 7) المتحصل‎ (V) ‏يوضح شكل‎
Streptomyces ‏عليها من الكائن الحى من جنس وفصيلة ستربتومسيس كوليكور أ ؟(7)‎ ‏(رقم الدخول إلى بنك الجينات: 042140م0)؛‎ coelicolor A3(2) ‏بالرقم التعريفي للهوية ") المتحصل‎ Adil) ‏متتالية حمض أمينو‎ (A) ‏يوضح شكل‎
Saccharomyces ‏عليها من الكائن الحى من جنس وفصيلة ساكاروميسيس سيرفيزى‎ o ‏(رقم دخول بنك الجينات 041734)؛‎ cerevisiae ‏المتحصل‎ (A ‏يوضح شكل )3( متتالية حمض أمينو (متتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ ‏(رقم الدخول إلى بنك الجينات: 1.646052م)؛‎ Ralstonia ‏عليها من الكائن الحى رالستونيا‎ protein 50061 NCBI ‏متتالية بالرقم التعريفي للهوية (1)؛‎ (V+) ‏يوضح شكل‎ ‏بروتين وهمى ((إفتراضى) محفوظ [من‎ accession code CAB39707.1 01:4539178 ٠٠ [Streptomyces coelicolor A3(2)] )7( ¥1 ‏ستربتوميسيس كوليكلور‎
Scoe2 ٠١ ‏حمض أمينو موضح كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ )١١( ‏يوضح شكل‎ ‏وشفرة دخول بنك الجينات 61:9716139 001477.1م©؛ بروتين وهمى (إفتراضى)‎ NCBI ‘[Streptomyces coelicolor A3(2)] )7( vi ‏محفوظ من [ستربتوميسيس كوليكلور‎
Scoed )١١ ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية‎ (VY) ‏يوضح شكل‎ Vo ‏من بروبتين مفرز‎ CABSSS33.1 GL7635996 ‏رقم شفرة دخول جينة البروتين‎ NCBI [Streptomyces (Y) ‏إفتراضى أو وهمى من جنس وفصيلة [ستربتوميسيس كوليكلور أ‎ ¢coelicolor A3(2)] 50064 (VY ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية‎ (VF) ‏يوضح شكل‎ ‏شفرة دخول متتالية بروتينية 1ت 28894501 ؛ بروتين مفرز وهمى من‎ NCBI 0 ٠٠ [Streptomyces coelicolor A3(2)] )7( vi ‏جنس وفصيلة [إستربتوميسيس كوليكلور‎ ‏تي‎
١١ 50085 (VV ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية‎ (V£) ‏يوضح شكل‎ ‏0862724.1)؟؛ بروتين دهنى وهمى من‎ GL:6562793 ‏شفرة دخول متتالية بروتينية‎ NCBI ¢[Streptomyces coelicolor A3(2)] (Y) visa ‏جنس وفصيلة [ستربتوميسيس‎ 5:001 )١٠4 ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية‎ (V0) ‏يوضح شكل‎ ‏إنزيم 0051- ليبيز [حنس‎ AAK84028.1 GL:15082088 ‏شفرة دخول البروتين‎ NCBI © ¢[Streptomyces rimosus] ‏وفصيلة ستربتوميسيس ريموسوس‎ ‏لإنزيم‎ (V0 ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية‎ (V1) ‏يوضح شكل‎ ~Aeromonas salmonicida ‏آسيل ترانسيفيراز () من جنس وفصيلة إيروموناس سالمونيسيدا‎ ؛)١٠1754 ‏رقم‎ ATCC) Salmonicida ‏فصيلة فرعية سالمونيسدا‎ ‏50061؛ شفرة دخول‎ NCBI (14) ‏متتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ (VV) ‏يوضح شكل‎ ١ ‏839707.1م0 من بروتين وهى محفوظ [من جنس وفصيلة‎ GL4539178 ‏متثالية بروتينية‎ {Streptomyces coelicolor A3(2)] (¥) ‏ستربتوميسيس أ‎ ‏متتالية حمض أمينو (متوالية برقم تعريفي للهوية ©7) للتركيب‎ (VA) ‏يوضح شكل‎ ‏البنائى للجينات المتحدة المتسخدمة للتهجين الجناسى لجينة إنزيم آسيل ترانسفيراز من جنس‎ ‏وتكون أحماض أمينو عبارة عن‎ Aeromonas hydrophila ‏وفصيلة إيروموناس هيد روفيلا‎ ١ ‘xylanase ‏ببتيد إشارى لإتزيم الزيليناز‎ ‏يوضح شكل )14( متتالية بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس‎ ‏بالرقم التعريفي للهوية 36)؛‎ A) ‏ستربتوميسي‎ ‏متتالية بولى ببتيد إنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس ثرموبفيدا‎ )٠١( ‏يوضح الشكل‎ (VV ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ 71001508 ٠
‘YY ‏متتالية بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس ثرموبفيدا‎ (V1) ‏يوضح شكل‎ (YA ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ Thermobifida ‏بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس وفصيلة كوين‎ (YY) USS ‏يوضح‎ ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ Corynebacterium efficiens GDSx 300 ‏باكتريوم إفيشنز‎ ‏اا‎ ‏بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس وفصيلة نوفوسفين‎ (YY) ‏يوضح شكل‎ ‏لحمض أمينو‎ Novosphingobium aromaticivorans GDSx 284 ‏تسيفوراتز‎ Lag ‏جوبيوم‎ ‎؛)3١ ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ ‏بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس وفصيلة‎ (YE) ‏يوضح شكل‎ ‏(متتالية برقم تعريفي‎ Streptomyces coelicolor GDSx 269 aa ‏ستربتومسيس كوليكلور‎ > (VY ‏للهوية‎ ‏لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس وفصيلة ستربتوميسيس‎ (Y0) ‏يوضح شكل‎ ‏لحمض أمينو (متتالية برقم تعريفي‎ Streptomyces avermitilis ١ GDSX 269 ‏آفرمتيليس‎ ‏للهوية 7")؛‎ ‏بولى ببتيد لإنزيم آسيل ترانسيفيراز من جنس ستربتوميسيس‎ )٠١( ‏يوضح شكل‎
VY ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية‎ Streptomyces ‏متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية ؟؟) متحصل‎ (YY) ‏يوضح شكل‎
Aeromonas hydrophila és jaa ‏عليها من الكائن الحى من جنس وفصيلة إيروموناس‎ ‏(وتمييزاً هى المتتالية الناضجة)؛‎ 010480: 01:121051(
اا يوضح شكل ‎(YA)‏ متتالية حمض الأمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية 70( من إنزيم آسيل ترانسيفيراز ناضج من كائن ينتمى إلى جنس وفصيلة إيروموناس سالمونيسيدا مهجن ‎(GCAT) Aeromonas salmonicida‏ (وتمييزا فهى متتالية ناضجة)؛ يوضح شكل ‎(V4)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية 7( من كائن © ينتمى إلى جنس وفصيلة ‎-Streptomyces thermosacchari‏ يوضح شكل (0©) متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(TV‏ من كائن ينتمى إلى جنس وفصيلة ‎-Streptomyces thermosacchari‏ يوضح شكل ‎(VY)‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(VA‏ من ‎aes Thermobifida fusca/GDSx 548‏ أمينو ¢ ‎٠‏ يوضح شكل ‎(TY)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية 7( من ‎¢Thermobifida fusca‏ يوضح شكل ‎(YY)‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي ‎Ansell‏ £0( من ‎¢Thermobifida fusca/GDSx‏ يوضح شكل ‎(YE)‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية )8( من ‎Corynebacterium efficiens/GDSx 300 ١٠‏ حمض أمينو يوضح شكل ‎(TO)‏ متتالية نيكليوتيدية (متثالية برقم تعريفي للهوية 8( من ‎¢Corynebacterium efficiens‏ يوضح شكل ‎(V1)‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية 7؛) من .5 ‎coelicolor/ GDSx 268‏ حمض أمينو؛ يوضح شكل ‎(VV)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية ؛؛) من .5 ‎¢coelicolor‏ ‏تل
يوضح شكل ‎(FA)‏ متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية 0( من .5 ‎tavermitilis‏ ‏يوضح شكل ‎(V4)‏ متتالية نيكليوتدية (متتالية برقم تعريفي للهوية 31( من .5 ‎tavermitilis‏ ‏يوضح شكل )£4( متتالية حمض أمينو (متتالية برقم تعريفي للهوية 7؛) من ‎Thermobifida fusca/GDSx‏ حمض أمينو ويوضح شكل )£1( متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(8A‏ من ‎Thermobifida fusca/GDSx‏ حمض أمينو يوضح شكل (7؛) ومحاذاة المتتالية ‎(V1) J)‏ والمتناظرات المثلية من جنس ‎٠‏ وفصيلة ‎avermitilis‏ .5 و ‎T. fusca‏ ويصور أن المحافظة على حافز ‎GDSx) GDSx‏ في المتتالية ل ‎١7١‏ وجنس وفصيلة ‎avermitilis‏ .5 و ‎(T. fusca‏ وخانة (6007)؛ التى كونها إما قالب ‎GGNDA‏ و ‎GGNDL‏ و ‎HPT‏ والتى تعتبر بمثابة هستدين حفزى محفوظ). ويركز على هذه القوالب المحفوظة الثلاثة. يوضح شكل (©؟) المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(VV)‏ التى هى متتالية حمض ‎١‏ أمينو لإنزيم اسيل ترانسيفيراز من ‎¢Candida parapsilosis‏ يوضح شكل )£8( المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎)١8(‏ التى كونها متتالية إنزيم آسيل ترانسيفيراز من ‎¢Candida parapsilosis‏ يوضح شكل )£0( تمثيل لشريط جناسى من تركيب بلورى 11718.03 التى لها جليسرول في الموقع النشيط. وبنى الشكل بإستخدام وسيلة الرؤية ‎‘Deep View Swiss-PDB‏
ه١٠١‏ يوضح شكل )£1( تركيب بلورى 11777708- منظر جانبى بإستخدام منظار رؤية عميقة سويسرى ‎PDB‏ مع جليسرول في موقع نشيط- رواكد في نطاق ‎٠١‏ وحدات أنجستروم لجليسرول مواقع نشيطة كونها ملون بلون أسود؛ يوضح شكل (7؛) تركيباً بلورياً 1177.001 منظار رؤية علوية بإستخدام رؤية © عميقة ‎PDB‏ سويسرى؛ مع رواكد جليسرول في موقع نشيط في نطاق ‎٠١‏ وحدات انجستروم لجليسرول ذات مواقع نشيطة بلون أسود؛ يوضح شكل )£4( المحاذاة (١)؛‏ يوضح شكل (9؛) المحاذاة (7)؛ يوضح الشكلان )+0( و (21) محاذاة متتالية ناضجة 11707 إلى متتالية ناضجة ‎٠‏ 10480 (متتالية ناضجة 10480 هى متتالية قاعدة بيانات لإنزيم من ‎(A. hydrophila‏ ‘ ويحصل على هذه المحاذاة من قاعدة بيانات المتتالية ‎PFAM‏ وتستخدم في طريقة بناء النموذج؛ يوضح شكل ‎(OF)‏ المحاذاة حيث المتتالية الناضجة 010480 تكون متتالية قاعدة البيانات — ‎«Aeromonas hydrophila‏ وتستخدم هذه المتتالية لتركيب النموذج وإنتقاء ‎١5‏ _المواقع. لاحظ أن البروتين التام (المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(V0‏ يصورء ويبداً البروتين الناضج (المكافيء للمتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎(TE‏ في الراكد ‎-١‏ أ ‎ale‏ كونه ينتمى إلى جنس رفصيلة ‎Aeromonas salmonicida‏ (متثالية يرقم تعريفي للهوية ؛ ( لإتزيم ‎A‏ ‎GDSX‏ ؛ مائى من ‎Aeromonas hydrophila‏ (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(Fe‏ لإنزيم ‎.GDSX‏ وتحتوى المتتالية المتفق عليها بالإجماع على أ* في وضع إختلاف بين المتتاليات ‎x.‏ المدونة. يوضح الشكل ‎(OF)‏ تركيب بنائى لمورث جينى مستخدم في مثال (1)؛ 5م17 ye ).51407 ‏يوضح شكل )01( تركيب بنائى لجينة أمثل من متتالية مشيفرة (رقم‎ ‏مستخدمة في مثال (١)؛ و‎ (LAT-KLM3 ‏تحتوى على جينة بدئية‎ Xhol ‏مثتالية وليجة‎ (co) ‏يوضح شكل‎ ؛٠١-‎ Tema ‏وحيث توضع خطوط (بمعنى يركز على)‎
يوضح شكل )071( الجينات 3141.780-6114308050 (المتضمنة المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎-١١‏ المستعمرة العلوية) والجينة ‎BML780‏ (السلالة العائلة الخاوية- المستعمرة السفلية) بعد ‎EA‏ ساعة من النمو في ‎FY‏ على هلام (961) من ثلاثى بوتيرين؛
يوضح شكل ‎(ov)‏ متتالية نيكليوتيدية من ‎Aeromonas salmonicida‏ (متتالية برقم تعريفي للهوية £9( مشتملة على المتتالية الإشارية ‎prelate‏ المواضع ‎١‏ إلى ‎HAY‏
‎٠‏ يوضح شكل ‎(0A)‏ متتالية نيوكليوتيدية ‎A)‏ برقم تعريفي للهوية ‎)٠٠‏ تشيفر إنزيم ‎Jad‏ ترانسيفيراز طبقاً للإختراع الحالي المتحصل عليه من الكائن الحى ‎Aeromonas‏ ‎¢thydrophila‏
‎ey‏ الشكل )09( متتالية نيكليوتيدية (متتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎)5١‏ تشيفر (تحول إلى شفرة) إنزيم آسيل ترانسيفيرازطبقاً للإختراع الحالي المتحصل عليه من الكائن
‎tAeromonas salmonicida sll ‏د‎
‏يوضح شكل )14( متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(OF‏ تشيفر ‎Sl)‏ ‏تحول إلى شفرة) إنزيم آسيل ترانسيفيراز. طبقاً للإختراع الحالي المتحصل عليه من الكائن الحى ‎Streptomyces coelicolor A3(2)‏ (رقم الدخول إلى بنك حفظ الجينات ‎¢NC_003888.1:8327480..8328367‏ ‎YAAT‏
ب ‎١‏ ‏يوضح شكل )11( متتالية نيلكليوتيدية (المتتالية برقم تعريفي للهوية ‎(OF‏ تشيفر إنزيم اسيل ترانسيفراز طبقاً للإختراع المتحصل عليه من الكائن الحى ‎Streptomyces coelicolor‏ ‎A3(2)‏ (رقم الدخول إلى بنك وحفظ الجينات ‎tALO39131.1:265480..266367‏ ‏يوضج شكل (17) متتالية نيكليوتيدية (المتتالية برقم تعريفي للهوية 0( لشيفرة ‎٠‏ إنزيم آسيل ترانسيفيراز (حال الدهن) طبقاً للإختراع الحالي متحصل عليه من الكائن الحى ‎Saccharomyces cerevisiae‏ (رقم الدخول إلى بنك إيداع وحفظ الجينات 275034)؛ يوضح شكل ‎(TF)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية 00( لشيفرة إنزيم آسيل ترانسيفيراز طبقا للإختراع ‎Jal‏ المتحصل عليه من الكائن الحى ‎Ralstonia‏ ‏يوضح الشكل )16( متتالية نيكليوتيدية موضحة كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية )07( ‎٠‏ لشيفرة (تحول إلى شفرة) بروتين ‎(NCBI)‏ شفرة الدخول إلى بنك إيداع وحفظ الجينات: 278 839707.1م0 لبروتين إفتراضى (وهمى) محفوظ ‎[Streptomyces coelicolor‏ 3201 ؛ يوضح شكل )10( متتالية نيكليوتيدية موضحة كمتتالية برقم تعريفي للهوية )09( لشيفرة ‎dius‏ بروتين ‎Scoe2 NCBI‏ - شفرة الدخول إلى بنك إيداع وحفظ الجينات: ‎CACO1477.1 GI:9716139 ١‏ لبروتين إفتراضى (وهمى) محفوظ ‎[Streptomyces coelicolor‏ [(3)2م؛ يوضح شكل )11( متتالية نيكلوتيدية موضحة بالرقم التعريفي للهوية ‎SA‏ لشيفرة (تحويل إلى شفرة) بروتين ‎—Scoe3 NCBI‏ شفرة الدخول إلى بنك حفظ الجينات: 6 4888833.1ي0 من بروتين إفرازى مزعوم ‎[Streptomyces coelicolor‏ ‎٠‏ [3)0م؛
د يوضح شكل (17) متتالية نيكليوتيدية موضحة كمتتالية برقم تعريفي للهوية )09( لشيفرة جينة بروتين ‎~Scocd NCBI‏ شفرة الدخول إلى بنك أيداع وحفظ الجينات: ‎CAB89450.1 GI:7672261‏ من بروتين مزعرم ‎Streptomyces coelicolor A3(2)]‏ [¢ يوضح شكل ‎(TA)‏ متتالية نيكليوتيدية موضحة كمتتالية برقم تعريفي للهوية )10( © لشيفرة ‎dua‏ بروتين ‎NCBI‏ 50065- شفرة الدخول ‎CAB62724.1 GL:6562793‏ من بروتين دهنى مزعوم ‎¢[Streptomyces coelicolor A3(2)]‏ يوضح شكل )19( متتالية نيكليوتيدية موضحة كمتتالية برقم تعريفي للهوية )11( لشيفرة جينة بروتين ‎—Srim1 NCBI‏ شفرة الدخول ‎~AAK84028.1 01:15082088 GDSL‏ أنزيم ليبيز ‎¢[Streptomyces rimosus]‏ ‎x‏ يوضح شكل ‎(V+)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية 17) لشيفرة إنزيم : آسيل تر انسيفيراز من ‎ATCC) Aeromonas hydrophila‏ رقم ‎¢(Y410‏ ‏يوضح شكل ‎(V1)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(VF‏ لشيفرة (تحويل إلى شفرة) إنزيم آسيل ترانسيفيراز من كائن حى ينتمى فصيلة فرعية ‎Aeromonas‏ ‎¢((VEYVE a8) ATCC) salmonicida‏ ‎Vo‏ يوضح شكل ‎(VY)‏ متتالية نيكليوتيدية (متتالية برقم تعريفي للهوية ‎(YE‏ لشيفرة إنزيم من كائن حى ‎Aeromonas hydrophila‏ مشتملة على ببتيد إشارى ‎‘xylanase‏ ‏يوضح شكل ‎(VF)‏ متتالية حمض الأمينو لعامل تهجين ناضج من إنزيم ‎dial‏ ‏ترانسيفياز ‎GCAT‏ من كائن حى ‎Aeromonas salmonicida‏ مع عملية تهجين ل ‎Asn80Asp‏ (وبصفة ملحوظة؛ حمض أمينو 80 في المتتالية الناضجة)- الموضحة هنا في © هذا الوصف كمتتالية برقم تعريفي للهوية ‎-١١‏ وبعد تعديل إنتقالي لاحق جار كمتتالية بالرقم التعريفي للهوية 74- رواكد حمض أمينو ‎amino‏ 772 و 777 للمتتالية بالرقم التعريفي ‎YAAT‏
للهوية ‎TA‏ واللتين لا ترتبطان تساهمياً بعد تعديل إنتقالي لاحق. ويرتبط ‎LS pe‏ الببتيدين المشكلين ‎be‏ عن طريق واحد أو أكثر من جسور 5-5. ويناظر حمض الأمينو ‎YU Amino‏ في المتتالية بالرقم التعريفي ‎TA‏ راكد حمض الأمينو ‎Amino‏ 774 في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية ‎١١6‏ الموضحة هنا في هذا الوصف؛ ° يوضح شكل ‎(VE)‏ قياسي مسح مضطرب ‎turbiscan measurement‏ من القمة — © ‎fe‏ ‏يوضح الشكل ‎(VO)‏ قياسي مسح مضطرب ‎turbiscan measurement‏ من القاع ب © ‎“pe‏ ‏يوضح الشكل ‎(V1)‏ التوتر السطحي للبن المبستر 11-1-12983 (عينة الضبط)؛ -12-1 ‎٠‏ 129083 (معالجة بالإنزيم ‎(enzyme‏ ولبن معالج عند درجات حرارة فائقة 13-1-12983 (عينة ضبط) ‎«(control)‏ 14-1-12983 (معالج بالإنزيم ‎t(enzyme‏ ‏يوضح الشكل ‎(VV)‏ قياسات على لبن خال من الكوليسترول ‎cholesterol‏ ‏وإستركوليسترول ‎cholesterol-ester‏ عن طريق تحليل كروماتوجر افي ‎-Chromatography‏ ‏والعينتان ‎)١١(‏ و ‎(VY)‏ كانتا لبن مبستر والعينتان ‎(VF)‏ و ‎(VE)‏ كانتا لبن معالج عند درجة ‎eo‏ حرارة فائقة. والعينة-7١‏ والعينة -؛١‏ كانتا معالجتين إنزيميا ‎KLM3 enzyme‏ عند ‎p70‏ ‏لمدة ‎Ye‏ ساعة. وكان اللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة متاحاً تجارياً من ‎(Arla Yl)‏ ومشتملاً في التحليل في المقارنة؛ يوضح الشكل ‎(VA)‏ نتيجة التحليل الكروماتوغرافي ‎commercially‏ للطبقة الرقيقة عالي الضغط ‎HPTLC‏ البسترة مستخلصة (90*م) ودهون في لبن معالج عند درجة حرارة فائقة ‎٠ 47( ov.‏ م) مذابة في مخلوط ‎.)١ :7( CHCI3:MeOH‏ وتحتوي العينة المعيارية ‎(Std)‏ على اليه
VEL
‏كعينة للتحليل الطيفي (رقم‎ Lecithin ‏واللسيثين‎ Soy ‏مخلوط معياري من دهن الصويا‎ ؛)١‎ :7( ‏كنسبة‎ CHCI;:MeOH ‏مذابة في مخلوط‎ (SLM43 ‏نتائج التعرض لدخان البخر في وجود ضوء شديد باستخدام جهاز‎ (VA) ‏يوضح شكل‎ ‏المشيفر بمتتالية‎ enzyme ‏لمزيج من لبن الشوكولاتة للبن معالج إنزيميا‎ Lumifugation tKLM3 ((DK 14636-2-3); ‏هه‎ ‏نتائج التعرض لدخان البخر في وجود ضوء شديد باستخدام جهاز‎ (A) ‏يوضح شكل‎
KIM ‏لمزيج من لبن الشوكولاتة بدون معالجة إنزيمية للبن المشيفر بمتتالية‎ Lumifugation ‏؛‎ enzyme(DK 14636-2-4): a3 5 ‏بإستخدام‎ 3 ¢(% Integral Transmission) ‏التوضيح )% لنقل متكامل)‎ (AV) ‏يوضح الشكل‎ ‏بمعنى مراقبة الحركة.‎ Front tracking ‏نتائج التتبع الأمامي‎ (AY) ‏يوضح الشكل‎ Ve ‏الأمامية للخلوص عند نقل 9615؛ و‎ ‏؛ بمعنى مراقبة الحركة الأمامية‎ Front tracking ‏نتائج التتبع الأمامي‎ (AY) ‏يوضح شكل‎ .9768 ٠ ‏للخلوص عند نقل‎ ‏الوصف التفصيلي:-‎ ١ ‏مثال‎ ٠
Bacillus licheniformis ‏تمييز المتتالية :1611/3 في الكائن الحي باسيلوس ليشيني فورميس‎ ‏(متتالية بالرقم التعريفي للهوية رقم £9( تشيفر إنزيم‎ nucleotide ‏يتم تمييز متتالية نيكليوتيدية‎ ‏يشار إليه‎ ON ‏(المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ 11010 Acyltransferase ‏آسيل ترانسيفيراز‎ ‏كبروتين‎ Bacillus licheniformis ‏في باسيلوس ليشيني فورميس‎ (KLM3 ‏هنا هذا الوصف‎ [alpha-amylase ‏أميلاز]‎ =] 8. licheniformis ‏متحد بالببتيد الإشاري ب ليشنفورميس‎ YL ‏بناء‎ Bacillus ‏(أنظر الشكلين “© و 24). وبالنسبة إلى التمييز الأمثل في باسيلوس‎ (LAT) ‏تمي‎
Vey تركيب بنائي لجينة مستنسخة مشيفر ‎codon optimized gene‏ (رقم 02907) من شركة "جينارت ‎"Geneart‏ (شركة جينارت آية. جيء؛ ريجنسبرج؛ ألمانيا ‎Geneart AG,‏ -(Regensburg, Germany يحتوي التركيب البنائي رقم 7 على معزز لإنزيم ألفا- أميلاز غير مكتمل ‎incomplete‏ ‎LAT promoter ©‏ (فقط المتتالية-١٠)‏ أمام الجينة ‎(LAT-KLM3’) precursor gene (Aga)‏ وإستنساخ إنزيم ألفا- أميلاز أمام الجينة البدئية ‎(LAT-KLM3’)‏ لفرعيات وإستنساخ إنزيم ألفا- أميلاز ‎dual (LAT)‏ بدئية :187-1621143 (أنظر الشكلين “© و 00( ولإيجاد شطيرات ‎Xhol‏ الذي يحتوي على جينة بدئية :1.87-121143 يحفه معزز إنزيم ألفا-أميلاز (الحال لسكر الشعير والمواد النشوية) عند الطرف ©' والوسيلة الطرفية لإنزيم ألفا-أميلاز ‎٠‏ (حال للنشويات) عند الطرف ‎oF‏ وأجرى تكبير تفاعل متسلسل لإنزيم بوليميراز مع بطانات ‎PlatSXhol FW‏ و ‎EBS2Xhol RV‏ و وتركيب بنائي للجينات رقم 7 قكقالب. ‎Plat5Xhol FW: cceegetegaggcttttctittggaagaaaatatagggaaaatggtacttgttaaaaattc ggaatatttatacaatatcatatgtttcacattgaaagggg vo
EBS2Xhol RV: tggaatctegaggttttatcctttaccttgtctee a ‏لإنزيم بوليميراز على وسيلة موجدة لدورة حرارية‎ PCR ‏أجرى تفاعل متسلسل‎ ‏بإستخدام إنزيم بوليمراز حمض لاأوكسي‎ thermocycler with Phusion High Fidelity ‎Finnzymes OY, ‏(شركة‎ Phusion High Fidelity ‏من نوع‎ DNA polymerase ‏نووي‎ Y- ‎(p00 ‏طبقاً لإرشادات المصنع (درجة حرارة تلدين‎ (Finland ‏بقتلدا‎ Espoo ‎YAM
VEY
‏بإستخدام إنزيم مقيد ويرتبط بإنزيم‎ resulting ‏هضمت شطيرة تفال متسلسل لإنزيم بوليمراز‎ ‏طبقاً لإرشادات المورد‎ pICatH ‏مهضوم‎ Xhol ‏رابط لإنزيم لاأوكسي نووي إلى إنزيم‎ ‏الولايات المتحدة الأمريكية‎ Calif Li, sallS «Carlsbad ‏كارلسباد‎ Invitrogen ‏(إتفيترون‎ ‎(USA ‏كما وصف في طلب‎ B. subtilis strain 506.1 ‏يحول مخلوط الربط إلى سلالة ب. سبتيليس‎ © ‏البراءة الأمريكية رقم 4 البراءة الدولية رقم 1702002/14490) وتم تأكيد‎ ‏محتوية على جينة بدئية '1.41-161143 عن طريق‎ Xhol sequence ‏المتتالية لوليجة إنزيمية‎ ‏ليدن 1.6100 هولاندا‎ «(BaseClear ‏إيجاد متثاليات أحماض لاأوكسي نووية (شركة باسكلير‎ pICatH-KLM3’(oril) ‏وخصص واحد من مجنسات بلازميدية صحيحة‎ )) 5 3. ‏وحول (10801-1613437)0:01م إلى سلالة باسيلوس ليشينيفورميس‎ (oF ‏(شكل‎ ٠ ‏أنظر براءة الاختراع الدولية‎ (BML612 ‏و‎ BRAY ‏(مشتق‎ BML780 licheniformis strain (FTV) ‏في درجة الحرارة المسموح بها‎ (WO2005111203 ‏رقم‎ ‏و مقاوم للكلور مفينيكول‎ neomycin resistant (neoR) ‏أختبرناقل مقاوم للنيوميسين‎ ‏وخصص .((1113:)0:1ك31/1.780)0108111-1 . يتكامل‎ chloramphenicol resistant (CmR) ‏في‎ plasmid ‏البلازميد‎ ve 3. ‏على الجينومة ب. ليشينفورميس‎ cat 11 ‏في منطقة‎ BML780(plCatH-KLM3"(oril)) ‏عن طريق نمو السلالة عند درجة مسموح بها (090م) ج) وفي‎ licheniformis genome ‏وأخيراً عنصر‎ chloramphenicol ‏وسط مع © [ميكروجرام/ ملي لتر كلو رومفينيكول‎
BML780-pICatH-KLM3'(oril). ‏وخصص لإنزيم بلازميدي‎ CR ‏جناسي مقاوم ل‎ ‏ونمى من جديد الإنزيم البلازميدي المذكور أخيراً عند‎ BMLTSO-pICatH- KLM3 (orl) > ‏درجة حرارة مسموح بها لأجيال متعددة بدون متتاليات موجهات أنشوطية للمضادات‎ ‏1م17‎ 0
VEY
‏وفي هذا العنصر‎ CmR ‏وعنصر جناسي‎ (ne0S) ‏الحيوية؛ ومن ثم أختبر حساس نيوميسين‎ ‏الجناسي تم تشريح متتاليات موجهة من البلازميد 010801 على العنصر المورث‎ ‏وتركت‎ (neomycin ‏(مشتملاً على الجين المقاوم للنيوميسين‎ chromosome ‏(الكروموسوم‎ ‏على العخصر‎ cat - LATKLM3® ‏وبالتالي؛ ثم تكبير العليبة‎ .catH - LATKLM3’ ‏عليبة‎ ‏المورث عن طريق تنمية أوساط في/ على السلالات مع تركيزات متزايدة من الكلورر‎ ٠
Or ‏مفينيكول. وبعد عدة دورات من التكبير أختبر واحد من المجنسات (المقاوم لكمية‎
BML780- ‏ميكروجرام/ ملي لتر كلورومفينيكول) وخصصت للإنزيم السلالتان‎ ‏وكذلك:‎ BML780-KLM3’CAPS0 ‏نميت السلالتان‎ (KLM3® ‏0م:1)12/3 ولتأكيد تمييز‎ ‏على لوح‎ ATV ‏(السلالة العائلة الخاوية) لمدة 48 ساعة عند‎ BML780-KLM3’CAP50 ‏وكانت منطقة‎ -tributyrin ‏بإستخدام 961 ثلاثي بيوترين‎ [(Bacto ‏أجار [إرتشاح القلب (باكتو‎ ٠ ‏ظاهرة للعيان حول‎ Lipid Acyltransferase ‏مميزة لنشاط آسيل ترانسيفيراز‎ cada ‏(أنظر شكل‎ BML780 ‏ولكن ليس حول السلالة العائلة‎ BML780-KLM3'CAPS0 ‏مستعمرة‎ ‏وتوضح هذه النتيجة أن ثمة مقدار جوهري من 013437 يميز في سلالة باسيلوس‎ .)7 lf all ‏وأن هذه‎ BML780-KLM3 CAP50 B. licheniformis strain ‏لبشينيفورميس‎ ‏تكون وظيفية.‎ KLM3® ١ )١( ‏مثال مقارن‎
Vector construct ‏تركيب بنائي موجه للجينات‎
PCC ‏جديد 00801 الذي كونه مشتق صغير من‎ pCS32 ‏يكون التركيب البنائي للبلازميد‎ ‏لأسيل ترانسيفيراز‎ Aeromonas salmonicida ‏يحمل متتالية تشيفر الصورة الناضجة ل‎ ‏مع‎ Glycerophospholipid-cholesterol acyltransferase ‏جليسرو فوسفوليبيد كوليسترول‎ YL
Ves ‏تحت ضبط محسن 32م المتتاليات الناضجة‎ (KLMB) Av ‏في وضع‎ Asp ‏إلى‎ Asn ‏استبدال‎ ‎-CGTase ‏إشارة إنزيم‎ lle ‏ومع‎ ‎bacillus subtilis ‏سبتيليس‎ (ele Wb ‏تكون السلالة المضيفة (العائل) للتمييز هى سلالة‎ ‏مميزا‎ 120316856 activity ‏يقاس مستوى التمييز كتشاط إنزيم تر انسيفيراز‎ 052148 ‏محسوباً من الفرق في‎ « % cholesterol esterified ‏كنسبة مئوية من كوليسترول مؤستر‎ © ‏الحر في‎ cholesterol ‏الحر في العينة المرجعية والكوليسترول‎ cholesterol ‏الكوليسترول‎ ‏كمانح‎ PC (Tre) ‏المربوط‎ enzyme sample in reactions ‏عينة الإنزيم مع الفوسفاتيديل كولين‎ ‏كجزئ مستقبل.‎ cholesterol ‏والكوليسترول‎ ‎Culture conditions ‏ظروف المزرعة‎ «A ‏جرام/‎ ٠١ ‏و‎ enzymatic ‏(نتاج هضم إالإنزيمي للكازيين‎ LB ‏لقح © ملي لتر من مرق‎ ٠ ‏و © جرام/ لتر؛‎ » low-sodium Yeast extract ‏ومستخلص خميري منخفض الصوديوم‎ ‏و © جرام/ لتر؛ ومواد مساعدة خاملة مساعدة على‎ Sodium ‏وكلوريد صوديومع0010:0‎ ‏وذلك‎ kanamycin ‏ب 50 مجم/ لتر كاناميسين‎ Ala ‏تشكيل أقراص " جرام/ لتر)‎ ‏لفة في الدقيقة.‎ Yeo ‏بمستعمرة واحدة وحضنت عند 2° لمدة 7 ساعات مع الدوران عند‎ ‏(فوسفات‎ SAS ‏ملي لتر من وسط‎ * ٠ ‏ملي لتر من هذه المزرعة لتلقيح‎ ١97 ‏وإستخدم‎ ٠ ‏مورفولينو بروبان‎ =F) MOPS ‏جرام/ لتر؛ و‎ ٠١ (KoHPO, ‏البوتاسيوم الهيدروجينية‎
Sodium ‏حمض كبريتونيك)؛ 56 جرام/ لتر؛ وكلوريد صوديوم‎ morpholinopropane ‏نقط/ لتر؛ ودقيق صويا منزوع‎ © (Sin 260) ‏جرام/ لتر؛ ورغوة مضادة‎ © «Chloride 0+ —— ‏مكمل‎ (dw YE %) ++) ٠٠١١ Biospringer ‏جرام/ لتر؛ وبيوسبربجر‎ ٠١ ‏الدهنء‎ ‏ومحلول ناتج تحلل مائي من نشا غني بسكر الشعير‎ kanamycin ‏مجم/ لتر من كاناميسين‎ ©
Veo )10 جرام/ لتر). وإستمرت عملية الحفظ في الحضانة لمدة 46 ساعة عند ‎oF‏ وعند ‎YA‏ ‏لفة في الدقيقة قبل فصل المحلول العائم الطافي للمزرعة عن طريق الطرد المركزي عند لفة في الدقيقة لمدة ‎We‏ دقيقة. ونقل المحلول المعلق العائم إلى أنبوبة نظيفة وإستخدام مباشرة لقياس نشاط إنزيم التر انسيفير ‎٠ transferase J‏ © تحضير الطبقات التحتية والتفاعل الخميري (الإتزيمي) ‎Preparation of substrates and‏ ‎enzymatic reaction‏ وزن فوسفاتيديتيل كولين ‎enzyme sample reactions‏ مربوط (شحوم قطبية ‎PC‏ رقم 441601 من شركة أفانتي ‎(Avanti‏ وكوليسترول ‎cholesterol‏ (شركة سيجما ‎Sigma‏ سي ‎(C8503‏ ‏بنسبة 9: ‎cud ge)‏ في كلوروفورم ‎«chloroform‏ وبخر حتى الجفاف. ٠*٠ ‏في‎ 9:١ cholesterol ‏كوليسترول‎ PC 967 ‏حضرت الطبقة التحتية عن طريق تشتيت‎ ٠ .7 Ph ‏عند أس هيدروجيني‎ Hepes ‏مللي مول من محلول منظم‎ ‏ملي لتر من محلول طبقة تحتية إلى أنبوبة زجاجية سعة * ملي لتر مزودة بغطاء‎ ١.72 ‏نقل‎ ‏وضع المخلوط في‎ de all ‏ملي لتر من المحلول المعلق العائم‎ ١.075 ‏ملولب. وأضيف‎ ‏حضانة عند 45م لمدة ساعتين. وحضرت أيضاً عينة مرجعية مع الماء بدلاً من الإنزيم.‎
Y ‏دقائق تفاعل الإنزيم. وأضيف‎ ٠١ ‏وأوقف تسخين مخلوط التفاعل في حمام ماء مغلي لمدة‎ ve ‏مللي لتر من إيثانول تركيزه 9699 إلى مخلوط التفاعل قبل تعريضه لتحليل حيوي لقياس‎ .cholesterol ‏كمية الكوليسترول‎ التحليل الحيوي لقياس محتوي الكوليسترول ‎—:cholesterol‏ وضع في حضانة ‎٠٠١‏ ميكرولتر من طبقة تحتية ‎substrate‏ تحتوي على ‎٠١4‏ وحدة/ ملي ‎٠‏ التر من إنزيم أكسدة الكروليسترول ‎Cholesterol oxidase‏ (من شركة 'سيرفا الكترو فوروزيس" ‎«SERVA Electrophoresis GmbH‏ شركة المانية خاصة- رقم الصنف ‎cat. No‏ ‏م7
١ 2 ‏1488م)‎ VY AAA-T Sigma "Leap ‏(شركة‎ ABTS ‏مجم/ ملي لتر من‎ +f ‏و‎ )9 ٠١٠١ ‏وحدات/ ملي لتر من إنزيم بيروكسيداز (شركة سيجما - رقم الصنف 6782) وذلك في‎ ‏(شركة سيجما‎ X-100 Triton ‏هيدروجيني 1.7 و 0+ تريتون‎ od ‏عند‎ (Tris-HCI ‏تريس‎ ‏لمدة © دقائق قبل أن تضاف (*) ميكرولتر عينة تفاعل إنزيمي‎ LTV ‏وذلك عند‎ (X-100 ‏والخلط. وعولج مخلوط التفاعل في حضانة لمدة © دقائق أخرى وقيس معدل الهضم‎ o ‏من تحاليل محاليل معيارية‎ cholesterol ‏وحسب محتوي الكوليسترول‎ .ODyps ‏الإنزيمي‎ ‏ملي جرام/ ملي‎ ١7 ‏و‎ A ‏ملي جرام/ ملي‎ ١4 ‏المحتوي على‎ cholesterol ‏للكوليسترول‎ ‏مجم/ ملي لترء؛ و 005 مجم/ ملي لترء و صفر مجم/ ملي لتر من‎ ١0٠ ‏لترء و‎
EtOH ‏في 97699 من الكحول الإيثيلي‎ cholesterol ‏الكوليسترول‎ ‎|ّ Results ‏النتائج‎ ٠ ‏مزارع تمييز منفصلة‎ A ‏يوضح الجدول متوسط‎ ‏ض‎ ‎cholesterol ‏مميزاً كنسبة مئوية للكوليسترول‎ ctransferase activity ‏نشاط ترانسيفيراز‎ = Tpc® ‏الحر في العينة المرجعية‎ cholesterol ‏المؤسترء محسوباً من الفرق في الكوليسترول‎ ‏في عينة الإنزيم في تفاعلات مع إنزيم الترانسيفيراز كجزئ مانح‎ cholesterol ‏والكوليسترول‎ ‏كجزرئ مستقبل.‎ cholesterol ‏والكوليسترول‎ ‏مزارع تمييزية منفصلة‎ A ‏(ب) متوسط‎ ‏اد‎ |ّ
٠
مثال ؟: ثبات المستحلب؛ وإزالة الكوليسترول في اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة ‎Emulsion stability, removal of cholesterol in UHT milk‏ ان إستخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎Lipid Acyltransferase‏ الموضح هنا كمتتالية برقم تعريفي للهوية ‎TA‏ (يشار إليها هنا ب 37( لعملية أسترة بينية ‎interesterification‏ و
أو عملية أسترة إنتقالية ‎transesterifcation‏ بين الدهون الفوسفاتية ‎phospholipids‏ ‏والكوليسترول ‎cholesterol‏ في اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة تأثير على تحسين ثبات المستحلب؛ ومقارنة النتائج في لبن عادي معالج عند درجات حرارة فائقة ولبن يتمتع بنكهة معالج عند درجة حرارة فائقة؛ منتج على أساس لبن طازج وكذلك كلبن مجانس معاد الإتحاد (عن طريق التأثير الإنزيمي) ولتحاشي الشك يكون اللبن المجانس معاد الإيحاد (عن
‎٠‏ طريق التأثير الإنزيمي) هو مصطلح عام الذي ينتج من لبن أصلي أساسه مكونات صلبة مخلوطة بالماء ومعالج بطريقة يحصل معها بخصائص مشابهة للبن الأصلي. إختبار إنزيم 161143 في لبن وقشدة معالجين عند درجة حرارة فائقة
‎A Vv 1 ¢ v Y ١ a gall ‏النسب‎
‏للتركيب ‏لبن يحتوي على | .19.9 .949.9 .449.49 .44.9 27
‏96.8 دهن
‏لبن بودرة بيخ ‎dee‏ | للح الل
‎Skim ‏مقشوط‎
‎milk powder
‎(AMF) ‎YAAY
YEA wl [Je] | | T= vor Y CY ‏نكهة فراولة تي.‎ ٠١.١ : Strawberry
Flavouring
T10063 voy coy ‏مستخلص‎ ‏كارمين (أحمر)‎
Carmine
Extract (red)
A ..5 ‏ا‎ 25 LY Ne AI AR RECODAN™
RS 100 ‏ريكودان (ماركة‎ ‏تجارية مسجلة‎ 100-RS ove | owe fuse [ues | [us ‏ترانسيفيراز‎ ‎(KLM3) ‎K460 (KLM3)
Units/liter are ‏نافع‎ Tei
YAAT
١8 ٠١... ‏.ارقا .اقل‎ Dh ‏.نال ممقلا‎ Ya Yee ‏النسب لمئوية‎ ‏الكلية‎ ‏في مصنع ألبان تجريبي كالآتي:‎ (recombined milk) ‏وعولجت العينات (اللبن المجانس)‎ ‏(تحضير المواد) على مستوى تجريبي‎ ‏سخن مخلوط ماء/ لبن إلى 8٠؟"م في صهريج خلاط وضف الإنزيميات.‎ -١
Yo ‏أضيف لبن بودرة مقشود؛ وسكر ومكونات جافة أخرى إلى الماء وأحفظة لمدة‎ -" ‏دقيقة.‎ ° ‏/اكم.‎ ٠ ‏أصهر زيت زبدة عند‎ VF ‏مصهورة.‎ bu) ‏؛- ضف عامل تثبيت/ عامل إستحلاب إلى زيت‎ ‏ضف زيت زبدة؛ عالم تثبيت/ عامل إستحلاب إلى اللبن.‎ —0 ‏ضف نكهات‎ - ‏أخلط مسبقاً على خلاط من نوع سيلفرسون . «810©800- سرعة متوسطة لمدة دقيقة‎ -" ٠ ‏واحدة.‎ ‎١ ‏دقيقة تقريباً في القادوس اللبن الطازج وخطوات المعالجة‎ 9٠ ‏إنزع الهواء لمدة‎ - ‏اللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة- المعالجة الإنزيمية.‎ A GV oY ‏ثانية)‎ ©٠ ‏سخن مسبقا إلى ٠٠م (إحفظ الخلية عند‎ -4 ‏لمدة ؟ ثوان.‎ VEY ‏تسخين غير مباشر عند‎ -٠ yo poVe ‏بار عند‎ ٠00 ‏إنسياب المزج السوي عند ضغط‎ -١١
LoVe ‏برد إلى‎ -١ ‏عبوات اللبن في ظروف معقمة.‎ SU YY ‏ال‎ .
YO. ‏تم شراء المكونات المكونات المستخدمة للتجارب من اللبن برمته و/ أو مواد خام قياسية‎ ‏مستخدمه لأغلب التجارب في وضع الألبان النتجريبي.‎ ‏موضح‎ -16460( KLM3 ‏من إنزيم ترانسيفيراز‎ Ae ‏كان المحلول الإنزيمي المستخدم بمتابة‎ ٠0٠0 ‏هنا في هذا الوصف). يحتوي الإنزيم 16460 على‎ TA ‏كمتتالية بارقم التعريفي للهوية‎ .1400 TIPU units/ml ‏خلية إنزيمية وحدات منشطة/ ملي لتر‎ ©
TIPU ASSAY ‏تحليل حيوي للنشاط الإنزيمي‎
Substrate ‏الطبقة التحتية‎ ‏(من‎ 969558 L-a. Phosphatidylcholine ‏أذيب 960.76 من مثتالية ألفا فوسفا تيديل كولين‎
Triton-X 100 ٠٠١ ‏رقم الصنف 441601)؛ و 960.4 تريتون-ة‎ Avanti ‏شركة أفانتي‎ ٠ ‏و © ملي مول .6801 وذلك في 2.506 مول‎ )٠٠١-# ‏من (شركة 'سيجما"- رقم الصنف‎
Y= ‏الأس الهيدروجيني‎ HEPES ‏محلول منظم‎
Eppendorf ‏ملي لتر من أنبوب إبيندورف‎ ٠١6 ‏أضيف 080 ميكرولتر من طبقة تحتية إلى‎ ‏عند كم‎ Eppendorf Thermomixer ‏ويوضع في خلاط حراري من نوع إبيندروف‎ tube
La J ‏المدة © دقائق. وفي الزمن ز = صفر دقيقة؛ وأضيف محلول 00 ميكرولتر. وحلل‎ ve ‏لفة‎ ٠١* ٠٠١ ‏محلول فارغ يحتوي على الماء بدلاً من محلول إنزيمي وخلطت العينة عند‎ ‏دقائق. وفي نفس الوقت‎ ٠١ ‏في الدقيقة في خلاط حراري من نوع إبيندروف عند ١””م لمدة‎ ‏دقائق‎ ٠١ ‏دقيقة وضع أنبوب أبيندورف في خلاط حراري آخر عند 14م لمدة‎ ٠١ = ‏ز‎ ‏لإيقاف التفاعل.‎
Alene ‏في العينات بإستخدام علبة تحاليل حيوية‎ Free fatty acid ‏الحامض الدهني الحر‎ Js.
WAKO GmbH ‏من شركة واكو؛ شركة المانية خاصة‎ NEFA © ‏من نوع‎ ‏يت‎
Yo ‏كحمض دهني بوحدات‎ ١ - ‏عند أس هيدروجيني‎ TIPU ‏حسب النشاط الخميري (الإنزيمي)‎ ‏ميكرو مول حصل عليه لكل دقيقة تحت ظروف تحليل حيوية.‎ ‏و )£4( وحدة لكل لتر. وكان زمن التفاعل ودرجة الحرارة‎ (VO) ‏كانت مستويات الجرعات‎ ‏دقيقة.‎ Te ‏؟"م لمدة‎ ٠ ‏في هذه التجربة ثابتين عند‎ ‏لتقييم النتائج من التجربة؛ حللت كل العينات كالآتي:-‎ oo -phospholipids ‏والدهون الفوسفاتية‎ cholesterol ‏المحتوي المتبقى من الكوليسترول‎ o ‏مضاف.‎ SDS 6١ ‏توزيع حجم حبيبي في الماء وبإستخدام‎ ٠ ‏في مصنع ألبان تجريبي). وتقاس‎ DLA ‏ه تقاس اللزوجة والرواسب (طرق معيارية‎
Brookfield ‏على مقياس اللزوجة 'بروكفيلد"‎ centipoises ‏اللزوجة في وحدات سنتي بواز‎ ‏ويقاس‎ of ‏لفة في الدقيقة و‎ ٠١ ‏وعدد لفات‎ (V) ‏بإستخدام عمود دوار‎ Viscosimeter Ye ‏الترسيب عن طريق إختبار الترسيب معبر عنه بنسبة مئوية عند تعريض عينة منتج إلى قوة‎ ‏دقيقة وعند ١٠"م (جهاز طرد مركزي فائق القوى)‎ 7٠ ‏جرام لمدة‎ YA + ‏طرد مركزي من‎ ‏من العينة الكلية.‎ Asha ‏عند نسبة‎ pellet ‏ومن ثم حساب الكرية‎ (Ultracentrifuge)
Malvern Mastersizer "(ul ‏قيس حجم الحبيبة بواسطة مقياس الحجم 'مالفيرن ماستر سايزر‎ ‏طويل المهدء تشكيل ألفاء 3001 1:086. ويعاير الجهاز بإستخدام معيار بوليمري إلى‎ 5 ‏ميكرومتر. وتخفف العينة في الماء (عينة ¥ جرام‎ ١007١ + ‏مواصفة 0.997 ميكرومتر‎ ‏لتحاشي تكتل الجزئيات طالما أن‎ (SDS) ‏وأضيف‎ (SDS 96١ ‏بإستخدام‎ ele ‏ملي لتر‎ ٠١ ‏إلى‎ ‏التكتيل سوف يعطى نتيجة كاذبة.‎ ‏النتائج‎ ‏نتائج التحليل‎ ٠ ve] culinfralra]in]
YAAT
٠7 ‏كوليسترول | منسوب | مؤسترة مؤسترة . مؤسترة | منسوب مؤسترة | مؤسترة | مؤسترة‎ ‏تماماً تماماً عادي جزيئاً جزيئاً جزيئاً‎ Lalas ‏عادي‎ Cholesterol ‏(فوسفو ليبيدات) | منسوب | لا ل لا توجد | منسوب | منسوب | منسوب | لا توجد‎ gle ‏عادي عادي‎ whl ‏اتوجد‎ gle Phospholipids ‏تحليل الحجم الحبيبي:‎ ‏العينة | العينة | العينة “ | العينة ؛ | العينة | العينة | العينة | العينة‎
A 7 2 o Y \ £9) oF 08 5 ‏اف‎ oA ‏القطر الحبيبي 87.. ل8م..‎ ‏المتوسط (ميكرو‎ ‏جميع العينات لها حجم حبيبي متوسط تحت واحد ميكرومتر‎ ‏دقيقة وعند‎ Yo ‏توزن العينات؛ ثم تعرض إلى قوى طرد مركزي فائقة 7800 جرام لمدة‎ ‏الجافة‎ pellet ‏وبعد الطرد المركزي يزال السائل العائم الطافي؛ وتوزن الكرية‎ 20 ‏عينة أصلية. وكما لوحظ أعلاه؛ تقاس اللزوجة في‎ anal ‏وتحسب المادة الراسبة كنسبة مئوية‎ 0 sedimentation in % ‏وحدات سنتي بواز ورواسب في نسبة مثوية‎ ‏العينة | العينة | العينة | العينة‎ | Amd | ‏العينة‎ | OY ued |) dad
A 7 1 2 ًّ v oe ew [ea = om ‏تا أت ادإ اه‎ Loa Tor ‏هما‎
١ ‏توضح النتائج أن إستخدام إنزيم 1011/3 يمكن أن يحسن ثبات المستحلب في لبن معالج عند‎ ‏درجة حرارة فائقة؛ وإزالة الكوليسترول.‎ :)( ‏مثال‎ ‎| Effect of KLM-3 ‏تأثير إنزيم 1143© في لبن مبستر أو معالج عند درجة حرارة فائقة‎ enzyme in pasteurized or UHT treated milk © ‏المواد والطرق‎
Glycerophospholipid cholesterol ‏إنزيم آسيل ترانسيفيراز لجليسرو فوسفوليبيد كوليسترول‎ acyltransferase KLM3 (K460) ‏نظام مثبت القشدة: من مصدر تجاري‎ :٠٠١ ‏ريكودان آر سي‎ : ‏لبن مقشود: من مصدر تجاري‎ ٠ ‏الجزء التجريبي‎ ‏لترسيخ ما إذا كان إستخدام الإنزيم 101143 أيضاً في اللبن له تأثير على تحسين ثبات‎ ‏المستحلب؛ أجريت التجربة الآتية؛ مع مقارنة النتائج في لبن معالج عند درجة حرارة فائقة‎ ‏ولبن مبسترء متحصل عليه على أساس لبن طازج مجانس معاد الإتحاد. وفي هذه التجربة؛‎ (VY) ‏و‎ )١١( ‏إجرى التفاعل الإنزيمي. عند 220 إختبار إنزيم 161143 في لبن مبستر (عينة‎ 00 (V£) ‏و‎ (VY) ‏ولبن معالج عند درجة حرارة فائقة (العينة‎ ‏مئوية)‎ ‎CY ‏ال‎ vo «Vo ٠٠١ ‏ريكودان ار إس‎
RECODAN RS 100
YAAT
١ ‏ل‎ ‎1.71 11.71 4.74 4174 Skimmed ‏لبن مقشود‎ milk + + ٠٠١ (KIM3 ‏إنزيم‎ ‎KLM3, ‏وحدة/ ملي لتر‎ 100 U/ml ‏وعولجت العينات المذكورة في مصنع ألبان تجريبي كالآتي:‎ : VE AY OY 1 ‏العينة‎ ‏على نحو تجريبي‎ ~UHT milk ‏لبن معالج عند درجة حرارة فائقة‎ ‏إخلط لبن مقشوط وقشدة.‎ -١ dua ‏7؟- ضف إنزيم 1621343 وحرك‎ ٠ ‏ساعة).‎ Yo) ‏أترك المخلوط في مخزن بارد طيلة ليلة لمدة‎ -* (VE) ‏و‎ )١١( ‏وضف ريكودان العينة‎ Te ‏؛- سخن اللبن إلى‎ ‏ثانية).‎ ©٠ ‏سخن مسبقاً إلى ٠٠م (مع حفظ الخلية عند‎ =o ‏لمدة ؟ ثوان.‎ VEY ‏بطريقة غير مباشرة عند‎ ALT ‏بارء عند 8لا*م.‎ ٠٠00 ‏إمزج في تيار هابط عند ضغط‎ -# oY ‏-برد إلى‎ ‏العبورات في ظروف معقمة‎ SL - :)١١( ‏و‎ )١١( ‏عينة‎ ‎YAAR
مه ‎١‏ ‎-٠‏ إمزج في تيار صاعد عند لاثم وضغط ‎٠٠0‏ بار 0 ‎-١١‏ يستر عند 229 لمدة ‎٠‏ ؟ ثانية ‎-١‏ برد إلى 00 وإملا العبوات. تم شراء المكونات المستخدمة في التجارب من لبن كامل الدسم و/ أو المواد الخام القياسية ‎e‏ المستخدمة لأغلب التجارب في المصنع التجريبي للالبان. كان منسوب جرعات الانزيمات هو ذاته كما في الامثلة الاخرى الموصوفة هنا الموضحة للمعالجة الانزيمية للالبان عند 220 بإنزيم 121143. لتقييم النتائج من التجربة؛ حللت كل العينات كالآتي: ه مسح مضطرب ‎Turbiscan‏ خلال © أيام . 0 ه إختيار الجهد لعينات البان معالجة عند درجة حرارة فائقة (ثبات طويل الاجل). .Surface Tension ‏توتر سطحي‎ ٠ ‎o‏ كوليسترول ‎Cholesterol‏ وفوسفاتيدينيل إيثانول أمين ‎-phosphatidylethanolamine‏ ‎Sensoric analysis by Triangle Test Abe ‏ه تحليل إستشعاري عن طريق إختبار‎ ‎Turbiscan ‏مسح مضطرب (تربيسكان)‎ Vo ‏لقياس ثيات المستحلبات عن طريق قياس‎ Turbiscan MA 2000 ‏إستخدم جهاز تيربيسكان‎ ‏التشتت الظهير لشعاع ليزر من المنتج.‎ ‏ملئت عينات اللبن؛ في ظروف تعقيمية في أنبوبة إختبار معقمة؛ وحفظت أنابيب الاختبار عند‎
AY -# ‏درجة الحرارة المحيطة. وقيست العينات عند فواصل زمنية منتظمة خلال فترة‎
YAM ve ‏قيست العينات من القمة ب © مم ومن القاعدة ب © مم لانبوبة الاختبار» حيث الزيادة في‎ ‏التشتيت الخلفي من الطبقة العلوية التي تبين القشدة والزيادة في القاع لبيان ترسيب الحبيبات‎ ‏في العينة.‎ ‏إختبار الجهد لمنتجات البان طبيعية معالجة عند درجة حرارة فائقة‎
STRESS Test of Neutral UHT Milk Products e ‏تحت ظروف معقمة (مثالياً عند درجة حرارة محيطة) ووضعت‎ SL ‏بعد‎ -١ 200 ‏و ) ¢\ طوال الليل في مخزن بارد عند‎ ( ١ ¥) ‏العينة‎ ‏ساعة.‎ YE ‏ثم نقلت العينات إلى حضانة عند 2°70 لمدة‎ -" ‏ساعة.‎ YE ‏ونقلت العينات إلى مخزن بارد عند #©*م لمدة‎ -* ‏ساعة.‎ YE ‏75م لمدة‎ -7١ ‏؛- نقلت العينات إلى درجة حرارة الغرفة من‎ Va ‏ساعة.‎ YE ‏نقلت العينات إلى مخزن تبريد عند "م لمدة‎ —o ‏وبعد المعالجة الحرارية المذكورة؛ تركت العينات عند درجة الحرارة المحيطة لمدة‎ ‏أيام ثم قيمت بصرياً عمليات تكوين القشدة؛ وتكتيل المواد الدهنية؛ والترسيب وفصل‎ © -" ‏الاطوار المحتملة.‎ ‏وبرهن تطابق هذا الاختبار مع ثبات المنتتجات طويل الاجل الفعلي وذلك خلال سنتين‎ Vo daa ‏من الملاحظات أن لها تطابق عالي‎
Surface tension ‏التوتر السطحي‎ ‏بإستخدام مقياس‎ Wilhelmy plate ‏قيس التوتر السطحي لعينات اللبن بإستخدام لوح 'ويلهلمى"‎
Kriss ‏من "كروس"‎ Tensiometer K10 ‏التوتر‎ ‎Gas Chromatography ‏تحليل الكروماتوغرافي الغازي‎ ٠ ‏تل‎ 03
بام إستخدام التحليل الكروماتوغرافي الغازي لقياس محتوى الكوليسترول ‎cholesterol‏ وإستر الكوليسترول ‎cholesterol-ester‏ في عينات اللبن. وإجريت عمليات الضبط الأتية: جهاز "بيركن المر" 9000 ‎Perkin Elmer Autosystem‏ للتحليل ‎Ae ola SI‏ للغاز الشعرى مزود بعمود سيليكا مصهورة من نوع ‎WCOT‏ ©.7ام ‎YO X‏ 0 مم ‎rN X‏ ‎٠‏ ميكرون سمك الداخلى 9658 فنيل- ميثيل سيليكون ‎(CP Sil 8 phenyl-methyl-silicone‏ ‎CB from Chrompack)‏ الغاز الناقل ‎:Carrier gas‏ الهليوم ‎Helium‏ ‏وسيلة الحقن: حقن مجزاً ‎(PSSI) cold split injection‏ (درجة الحرارة الإبتدائية ‎٠‏ #"م مسخنة إلى 885”تم)؛ الحجم ‎٠.١‏ ميكرو لتر. ‎٠‏ الكاشف ‎(FID‏ ممم ض برنامج الفرن: ‎١‏ 3 درجة حرارة الفرن؛ م" .1 ‎Yo.
YA.‏ زمن التساوى الحرارى, دقيقة ‎١‏ صفر ‎٠١‏ ‏معدل الحرارة؛ م*/ دقيقة ‎٠١‏ ¢ ‎١5‏ تحضير عينات اللبن للتحليل الغاز الكروماتوجرافي: إستخلصت دهون اللبن طبقاً ل 989.05 ‎Mojonnier AOAC‏ بإستخدام مخلوط إيثانولء (إيثير ميثيل- تلثى- ‎MTBE (methyl-tert-butyl ether) (Jie‏ وبارا- إيثير 0-006 . وتعاد إذابة مستقطر جزء الدهن في مخلوط هبتان/ بيريدين (7: ‎heptane/pyridine )2:1( )١‏ يحتوى على هبتان ديكان كمادة معيارية (قياسية) داخلية ويقاس الكوليسترول بواسطة كروماتوغرافيا ‎٠‏ - الغاز. ‎YAAT‏
أ ‎١‏ ‏ويضاف "سكوالين' ‎Squalane‏ الى عملية تحضير العينات لقياس إستر الكوليسترول
كمادة قياسية داخلية مضافة. ويعاد ذوبان المستقطر الدهنى في الهكسان؛ وتركز إسترات الكوليسترول بإستخدام عمود "بوند إيلوت" ‎Bond Elut‏ ل 11112 وغسيل دافق الهكسان. ويعاد ذوبان العينات في مخلوط من الهبتان/ البيريدين (؟: ‎heptane/pyridine )2:1( )١‏ وتقاس
‎٠‏ إسترات الكوليسترول ‎cholesterol-esters‏ بواسطة التحليل الكروماتوغرافي للغاز. التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة ‎Je‏ الأداء ‎HPTLC‏ ‏يستخدم التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة عالى الأداء لقياس فوسفا تيديل إيثانول أمين ‎(PE)‏ في عينات لبن مبستر وعينات لبن معالج عند درجات حرارة فائقة. الملقم: مقلم ‎.(AST4 ~CAMAG)‏
‎: (Merck no. 1.05641) ‏سم‎ ٠١ XY: dl je gles SH ‏الوح التحليل‎ ٠ ‏دقيقة.‎ 0-7١ ‏لمدة‎ YT ‏ينشط اللوح قبل الإستخدام بالتجفيف في فرن عند‎ ‏بنسبة‎ CHCl: Methanol ‏ميكرو لتر من دهون مستخلصة مذابة في مخلوط‎ ١7 ‏الإستخدام:‎ ‏على لوح التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة عالى الأداء بإستخدام ملقم‎ )١ :7( .(AST4)
‎ve‏ يستخدم أيضاً 01 ات © 4 و ‎٠.5‏ ميكرو لتر من محلول قياسى يحتوى على مكونات قياسية بتركيز معين على لوح التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة عالى الأداء. المحلول المنظم الجارى + 6 ع015-عدند«و«ن: خلات الميثشهيل: ‎tJ plas» -١ (CHCl‏ ‎:MeOH‏ © 960.7 كلوريد بوتاسيم ‎٠١ :Yo :٠ :¥0) (KCI)‏ 3( طول عمود الغسيل الدافق: اسم
‎٠‏ سائل التظهير: 967 خلات نحاس ‎Cupriacetate‏ في 1617 حمض فوسفوريك (ب,11:70).
‏ّ| ا
١٠ ‏دقائق؛ ويبرد ويغمر‎ ٠١ ‏بعد عملية الغسيل الدافق؛ يجفف اللوح في فرن عند 0١6٠م لمدة‎ ‏م. ويقيم اللوح‎ ٠6١0 ‏ثوان) ثم يجفف لمدة 6 دقائق إضافية عند‎ ٠١ ‏في سائل التظهير (لمدة‎ (Camag ‏بصريا ويسمح (ماسح كروماتوغرافي للطبقة الرقيقة من نوع‎
Triangle Test ‏إختبار ثلاثى‎ ‏طبقاً لمواصفات أيزو 4176: 7004 إختبار تحليل إستشعارى- منهجى ثلاثى.‎ تصف مواصفة الأيزو ‎Yer :417٠0‏ طريقة لتعيين ما إذا كان هناك فرق إستشعار مدرك ‎perceptible sensory‏ أو تشابه موجود بين عينات المنتجين. والإختبار الثلاثى هو إختبار لثلاثة بدائل فيها إحدى العبنات عن الأخرتين. يعادل الإختبار لتعيين هوية العينة الشاذة (ويستخدم لكليهما ‎ABB‏ و ‎(BAA‏ وإستساغة ‎٠‏ (بدائل) أوضاعهم من عدمة ‎(ABB, BAB, BBA, AAB, ABA, BAA)‏ . والأداء الإحتمالى هو البديل الثالث؛ ويوجد الأداء في مجموعة أعلاه أن المنسوب ينتج قرينة على وجود وسيلة مولدة. وتنتمى الطريقة إلى عملية إختيار قهرى. وتنطبق الطريقة على ما إذا كان هناك فرق موجود في سبب إستشعارى واحد من عدمه أو أن ذلك يعزى إلى أسباب عديدة. النتائج ‎Vo‏ توضح النتائج من قياسات 'تربيسكان" ‎Turboscan‏ لألبان مبسترة أو لبن معالج عند درجات حرارة فائقة في الجدول أدناه وكذلك في شكلى ‎(Yo) (VE)‏ الجدول: قياس تربيكسان ‎Turboscan‏ للبن مبستر ‎١١-١-١١87‏ ) عينة ‎Alaa‏ ‎١-١-١ 7‏ (معالج إنزيميا) ولبن معالج عند درجات حرارة فائقة ‎VF) =) YAY‏ (عينة ضابطة)؛ ‎١-١-١١87‏ (معالج إنزيميا). متوسط ‎od‏ | نسبة إلى مم عند القمة ‎YAAR
ما ‎Average top‏ ‎Smm‏ ‏الزمن (دقيقة) ا حا- 7 ١ح‏ بجاح ‎“YY Y4AY‏ ‎٠ Vv ١١ ١١‏ ‎ee‏ ل متوسط أل ‎o‏ مم عند القا حَّ ‎Average‏ ‎bottom Smm‏ الزمن (دقيقة) ا احاح احاح ‎YAAY --١ ١‏ احاح ‎٠ VY ١" ١١‏ ا اع ‎ee‏ ا اد ‎en eee Lene |v |v‏ تخ
‎VI‏ ض توضح نتائج المسح المضطرب تيربيسكان ‎Turboscan‏ تناقصاً في كميات القشدة (الدهن) ونقصاناً في الترسيب في العينات المبسترة. وكانت فترة التخزين قصيرة جداً لتعيين التأثير في اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة. وعين ثبات التخزين للألبان المعالجة عند درجات حرارة فائقة عن طريق إختبار "الإجهاد". ‎oo‏ إختبار الإجهاد لألبان معالجة إنزيمياً ‎Stress Test of enzymatically treated milk‏ في ‎allie‏ ‏(جناسية) تجريدية 12938 ‎DK‏ ‏العينة التقييم بعد إختبار الإجهاد موضوعة 9 أسابيع عند ‎١‏ كم بعد ؟ أسابيع عند ١7"م؛‏ لوحظ فرق بين العينة الضابطة والعينة المعالجة بالإنزيم. التوتر السمطحى ‎Surface tension‏ قيس التوتر السطحى لعينات اللبن عند 0١٠*م‏ بإستخدام مقياس "كروس" ‎Kruss‏ لقياس التوتر ‎٠‏ (السطحى). تصور النتائج في شكل (776). تبين النتائج من القياس السطحى تأثيراً ملحوظاً لمعالجة اللبن إنزيمياً بالمتتالية الجناسبة ‎KLM3‏ ‏التحليل الكروماتو غرافي للكوليسترول وإستر الكوليسترول ‎Gas Chromatography of free‏ ‎cholesterol and cholesterol-ester Ve‏ توضح نتائج قياسات التحليل الكروماتوغرافي للغاز لكوليسترول وإستر الكوليسترول للألبان في شكل ‎(VY)‏ ‏م1
VY
توكد نتائج التحليل الكروماتوغرافي للغاز بشكل عام لكلاً من اللبن المبستر والمعالج عند درجات حرارة فائقة بإستعمال إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎(KLM3)‏ قابلية هذا الإنزيم إلى تحويل الكوليسترول إلى إستر كوليسترول. وتختزل معالجة عينات اللبن بإنزيم ‎(KLM3)‏ الكوليسترول الحر بنسبة 88- 96460 في اللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة وكذلك اللبن © المبستر. وإضافة إلى ذلك؛ زادت المعالجة بإنزيم ‎(KLM3)‏ من مستوى إستر الكوليسترول في لبن مبستر ولبن معالج في درجات حرارة فائقة ‎(UHT)‏ عن طريق معامل حوالى (6) وحوالى (١٠)؛‏ على التوالى. وهكذا يلاحظ تأثير واضح من المعالج بإنزيم ‎(KLM3)‏ لعينات لبن مبستر وأخرى معالجة عند درجات حرارة فائقة بالنسبة إلى إختزال الكوليسترول الحر. تشابهت العينات الضابطة للبن المبستر والعنيات المعالجة عند درجات حرارة فائقة مع اللبن ‎٠‏ التجارى طويل الأجل المعالج عند درجات حرارة فائقة من شركة "ارلا" بالنسبة إلى مستويات الكوليسترول الحر وإستر الكوليسترول. التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة عالى الأداء لفوسفاتيديل إيثانول أمين للبن ‎HPTLC‏ of milk phosphatidylethanolamine توضح نتائج ‎gan‏ اللبن المستخلصة من لبن مبستر ولبن معالج عند درجات حرارة فائتقة ‎Ve‏ وقيست بواسطة التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة عالى الأداء وذلك في شكل ‎(VA)‏ قياسات التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة ‎le‏ الأداء ‎HPTLC Measurements‏ توضح المعالجة الإنزيمية لكلاً من عينات اللبن المبستر والمعالجة عند درجة حرارة فائقة بإستخدام إنزيم ‎KLM3‏ إختزالاً ملحوظاً في محتوى فوسفاتيديل إيثانول أمين ‎(PE)‏ للبن كما عرض في الجدول أدناه. لبن ‎UHT‏ لبن مبستر ‎ 12983-1-| 12983-1- 12983-1-‏ -12983-1 ا 1
اا 14 13 12 11 الجدول: فوسفاتيديل إثيانول أمين لبن ‎Milk phosphatidylethanolamine‏ المعين كمياً من مسح لوح تحليل كروماتوجرافيا للطبقة الرقيقة عالي الأداء. إستخدام دهن برتبه صالحة للتحليل الطيفي؛ معيار خلطة ليثين ‎Lecithin‏ ودقيق الصويا (رقم 3 ) في عملية التحليل الكمي. ويناظر الاختزال في محتوى فوسفاتيديل إيثانول أمين ‎phosphatidylethanolamine ©‏ كإستجابة للمعالجة الانزيمية ‎enzymatic‏ بإنزيم 1113ل وبالتالي الفوسفاتيديل إيثانول أمين ‎PE‏ المحلل ‎Like‏ جزئياً ‎(Lyso-PE)‏ ثباتاً أفضل للمستحلب وميلاً أقل لتكوين المواد الدهنية (القشدة) بمرور الزمن. وإضافة إلى ذلك يناظر فوسفاتيديل إيثانول أمين ‎PE‏ للبن تكوين إسترات كوليسترول ‎cholesterol-esters‏ وإختزالاً للكوليسترول ‎cholesterol‏ الحر حسب المعطيات في شكل ‎YY‏ وكذلك ثباتاً أفضل للمستحلب.
Triangle test ‏الإختبار الثلاثي‎ ٠ ‏قيمت الإختلافات الدهنية العضوية بين عينات الضبط من اللبن والعينات المبسترة المعالجة‎ ‏أو المعالجة عند درجة حرارة فائقة وذلك عن طريق إختبار ثلاثي. وتدون‎ enzyme ‏بالانزيم‎ النتائج من الإختبارات في الجدول أدناه: الجدول: إختبارات ثلاثية للبن معالج عند درجات حرارة فاتقة ولبن مبستر ‎Pasteurised milk‏ م ‎(PAST) milk‏ رقم نتائج الاختبارات (المخاطر ألفا) بدون | إجابات ‎١‏ إجابات | الدلالات الاختبار إجابة | مأخوذة | صحيحة ‎١‏ | معالجة حرارية فائقة بدون معالجة إنزيمية/ | صفر ‎CAT A‏ معالجة حرارية فائقة بإستعمال الانزيم لغلا
‎Y‏ | معالجة حرارية فائقة بدون معالجة إنزيمية/ | صفر ‎A‏ يي معالجة حرارية فائقة بإستعمال الانزيم معالجة حرارية فائقة بدون معالجة إنزيمية/ | صفر ‎A‏ 8 مب معالجة حرارية فائقة بإستعمال الانزيم ‎-١‏ ؟- | معالجة حرارية فائقة بدون معالجة إنزيمية/ | صفر ‎Ve Y¢‏ ااا ل ‎o‏ معالجة حرارية فائقة بإستعمال الانزيم ‎Y‏ لبن مبستر بدون إستخدام معالجة إنزيمية/ ‎١‏ صفر ‎v A‏ ا لبن مبستر بإستخدام معالجة إنزيمية ‎ol |‏ مبستر بدون معالجة إنزيمية/ لبن مبستر | صفر ‎Ave | A‏ مع معالجة إنزيمية ‎١‏ البن مبستر بدون معالجة إنزيمية/ لبن مبستر | صفر ‎A‏ م مع معالجة إنزيمية “- ؛- | لبن مبستر بدون معالجة إنزيمية/ لبن مبستر | صفر ‎٠١ ve‏ 7 1 مع معالجة إنزيمية يوضح الاختبار الثلاثي أن المعالجة بالانزيم ‎enzyme (KLM3)‏ لا يؤثر عكسياً على مذاق اللبن المعالج عند درجات حرارة فائقة أو لبن مبستر بالمقارنة بلبن بدون إضافة إنزيم. مثال ؛: تحضير لبن شكولاته ‎chocolate milk‏ المواد والطرق ‎YAAT‏
٠١5
Glycerophospholipid cholesterol ‏ترانسيفيراز جليسروفوسفوليبيد كوليسترول‎ Jad ‏إنزيم‎ ‏وحدة/ جرام‎ ١١4 ‏(متتالية برقم تعريفي للهوية):‎ Lipid Acyltransferase 161143 (K932) ‏من إنزيم ليشينوفورميس [لفا]- أميلاز (حال للنشويات)؛ خلطة معيارية من دقيق الصويا‎ .Germany lel! <Spectra Lipid ‏من سبكترا ليبيد‎ (ST16) Lecithin ‏واللسيثين‎ ‎Recipe ‏المكونات‎ © ‏إنزيم‎ mY ‏عينة رقم‎ ١ ‏إنزيم‎ -١ ‏إسم المكون عينة رقم‎
DK14636-2-4 DK14636-2-3
CAA CAA i ‏أحادي-‎ «CREMODAN® SUPER
Mono-diglyceride ‏جليسريد‎ ‎er ‏سس‎ ‏ملي لتر‎ ‏الطريقة‎ ‏وحدة/ ملي لتر) إلى اللبن المقشود المبستر للعينة‎ ٠٠١( 16143 ‏أضف (إنزيم)‎ ‏ملي لتر لكل لتر من اللبن.‎ ١٠00 ‏بجرعة‎ 014663 ‏حرك لمدة دقيقتين‎
ضع في خزانة باردة عند #"م ‎YE sad‏ ساعة أيضاً ضع اللبن للعينة رقم 21614636-2-4 في الخزانة الباردة عند 20 لمدة ؛؟ ساعة وبعد ‎YE‏ ساعة من التخزين عند 220 سخن اللبن إلى ١7م‏ وضف كل المكونات ‎oe‏ الأخرى سخن إلى ‎"1٠‏ لمدة ‎AB Te‏ عالج اللبن عند درجة حرارة فائقة (مبادل حراري مكون من ألواح) عند ‎“IY‏ ‏7 م] ‎-١‏ 4 ثانية إمزج عند ضغط ‎١5١‏ بار/ ‎9٠‏ بار و ‎Vo‏ ‎Ye‏ برد إلى ‎pve =v.‏ : إنقل إلى خزانة باردة خزن تحت ‎p70‏ ‏تحضير عينات لبن الكاكاو ‎Cocoa milk‏ وللتحليل الكروماتوجرافي للغاز والتحليل الكروماتوجرافي للسائل ‎Vo‏ تم وزن ¥ جم من لبن الكاكاو ‎Cocoa milk‏ في إختبار سعة ‎١١‏ ملي لتر مزودة بغطاء ملولب وأضيف ‎٠‏ ملي لتر من مخلوط هكسان «116»8: أيزوبروبانول ‎Isopropanol‏ بنسة :7 ّ خلطت العينة على جهاز 'ويرلي” ‎Whitley‏ وإستخلصت على خلاط مزود بقلاب يلف © بسرعة ‎"١‏ لفة في الدقيقة لمدة ‎Ve‏ دقيقة م1
احج عرضت أنبوبة الاختبار إلى قوى طرد مركزي عند لفات تحت تأثير قوى الطرد المركزي لمدة ‎٠‏ دقائق. وعزل الطور العلوي الذي يصل إلى 8.5 ملي لتر. نقل © ملي لتر من الطور المذيب إلى حاوية زجاجية سعة ‎٠١‏ ملي ‎eA‏ وبخر حتى الجفاف عند 26م تحت جو من بخار النيتروجين ‎nitrogen‏ وأذيبت العينة من جديد في ‎٠.400‏ ‏© ملي لتر من مخلوط الكلوروفورم ‎:Chloroform‏ الميشائول ‎Methanol‏ بنسبة ‎٠:7‏ ‏وإستخدمت لتحليل كروماتوجرافي من نوع الطبقة الرقيقة فصلت ؟ ملي لتر أخرى من الطور المذيب؛ وبخرت عند ٠9م‏ تحت جو من بخار النيتروجين ‎nitrogen‏ وإستخدمت لتحليل كروماتوجرافي للغاز. التحليل الكروماتوجرافي للغاز ‎Gas Chromatography‏ ‎٠‏ يستخدم تحليل كروماتوجرافي للغاز ‎Gas Chromatography‏ لقياس محتوى الكوليسترول. ‎cholesterol‏ وإستر الكوليسترول ‎cholesterol-ester‏ في الدهن ‎lipid‏ من عبنات لبن الكاكاو. وأجريت عمليات الضبط الالية للتحليل الكروماتوجرافي للغاز جهاز "بيركن المر" 9000 ‎Perkin Elmer Autosystem‏ للتحليل الكروماتوغرافي للغاز الشعرى مزود بعمود سيليكا مصهورة من نوع 17001 .7١م‏ 7 275 مم ‎١‏ ‎Vo‏ ميكرون سمك الداخلى 9658 فنيل- ميثيل سيليكون ‎(CP Sil 8 phenyl-methyl-silicone‏ ‎CB from Chrompack)‏ الغاز الناقل ‎:Carrier gas‏ الهليوم ‎Helium‏ ‏وسيلة الحقن: حقن مجزاً ‎(PSSI) cold split injection‏ (درجة الحرارة الإبتدائية +220 مسخنة ‎(FAC)‏ الحجم ‎٠٠١‏ ميكرو لتر. ‎٠‏ الكاشف ‎FID‏ 16م ‎YAM‏
VIA
‏:اد‎ Te | seas
HPTLC
‏يستخدم تحليل كروماتوجرافي من نوع الطبقة الرقيقة عالي الأداء لقياس محتوى فوسفاتيدينيل‎ ‏وفوسفاتيدينيل كولين‎ phosphatidylethanolamine (PE) ‏أمين‎ Jel ‏المفصول من عينات لبن الكاكاو.‎ lipid ‏في الدهن‎ Phosphatidylcholine(PC) ‏514م.‎ ~CAMAG) ‏الملقم: ملقم‎ o (Merck no. 1.05641( ‏سم‎ ٠١ XY + ‏لوح التحليل الكروماتوجرافي:‎ ‏دقائق‎ ٠١ ‏وينشط اللوح قبل الاستخدام بالتجفيف في فرن عند ١٠6٠م لمدة‎ ‏ميثانول‎ CHCl; ‏الاستخدام: 0 ميكرولتر من دهون مستخلصة مذابة في مخلوط‎ ‏على لوح التحليل الكروماتوجرافي للطبقة الرقيقة عالي الأداء‎ ١ ‏بنسبة ؟:‎ Methanol .88574 ‏بإستخدام ملقم‎ ٠ ‏و 1.0 ميكرولتر من محلول قياسي يحتوي‎ ١.8 © 7 001 Lad ‏ويستخدم‎ ‏على مكونات قياسية بتركيز معين على لوح التحليل الكروماتوجرافي للطبقة الرقبقة عالي‎ ‏الاداء.‎ ‏بروبانول‎ -١ ‏و0116:‎ :Methylacetate ‏المحلول المنظم الجاري +: أسيتات المثيل‎ (2 ٠ ٠ 7٠ 5 ) KCl ‏كلوريد بوتاسيوم‎ 960.75 :MeOH :1 -propanol ٠ ‏سم.‎ ١ ‏طول عمود الغسيل الدافق:‎ ‏1م77‎
سائل التظهير: 967 خلات نحاس ‎Cupriacetate‏ في 7 حمض فوسفوريك 1100 وبعد عملية الغسيل الدافق؛ يجفف اللوح في فرن عند ‎OV‏ لمدة ‎٠١‏ ثواني. ثم يجفف لمدة 6 دقائق عند ١٠٠"م.‏ ويقيم اللوح بصرياً (ماسح كروماتوجرافي للطبقة الرقيقة ‎(Camag gsm ٠‏ . وتقيم مكونات الفوسفوليبيدات ‎LS Phospholipid‏ على أساس منحنيات المعايرة من التركيب الدهني الفوسفوري القياسي (الفوسفوليبيد ‎-(Phospholipid‏ ‏المسح المضطرب (تربيسكان ‎(Turbiscan‏ ‏يستخدم جهاز مسح مضطرب تربيسكان (نموذج 2000 ‎(MA‏ لقياس ثبات المستحلبات عن طريق قياس التشتت الظهير لشعاع ليزر (طرد مصدر ضوئي قوي) من المنتج. ‎٠‏ > النتائج تظهر النتائج من التحليل الكروماتوجرافي لسائل الغاز والتحليل الكروماتوجرافي ‎Ail‏ الرقيقة لصورة مستخلصة دهنية من لبن كاكاو معالج بإنزيم 1011437 وعينة ضابطة بدون معالجة إنزيمية في جدول ‎١‏ ‏تحليل كروماتوجرافي لسائل الغاز لبن كاكاو عينة ضابطة (جزء في المليون) (جزء في المليون) د فوسفاتيدينيل إيثائول أمين ‎٠‏ 71 ‎Phosphatidylethanolamine‏ ‎YAAY 0‏
ول فوسفاتيدينيل كولين أ 4 ‎Phosphatidylcholine‏ ‏تبين النتائج في جدول ‎١‏ أن نصف الكوليسترول تقريباً في لبن الكاكاو قد تمت إسترته ‎esterified‏ وإختزل مقدار الدهون الفوسفاتية ‎phospholipids‏ في عينة معالجة بالانزيم ‎enzyme‏ وتبين النتائج أن إنزيم 1437© يكون أكثر نشاطاً على فوسفاتيدينيل كولين ‎phosphatidylcholine‏ أكثر منه على فوسفاتيدينيل إيثانول أمين ‎phosphatidylethanolamine‏ ‎٠‏ في لبن ‎-Cocoamilk SSI‏ طرد ‎Js)‏ مع مصدر ضوئي للبن شوكولاته باستخدام . ‎Lumifugation‏ مع أو بدون إنزيم ‎KLM 3 (DK14636-2)‏ التجربة: أجريت تجربة طرد دوّار بإستعمال ‎"٠0٠0‏ لفة في الدقيقة ‎XV Y)‏ جم)؛ في زجاجة ‎.١‏ ‏تعرض لقوى طرد مركزي؛ وتوضح النتائج في شكل 79 (مع إنزيم (14636-2-3 ‎(DK‏ ‎٠‏ وشكل ‎(DK14636-2-4) Av‏ التموضيح )% للنقل المتكامل) ‎‘Clarification (% Integral Transmission)‏ توضح النتائج في شكل ‎AY‏ ‏طالما أن التغير في النقل هو قياس معدل الصفاءء فإن العينة 7 هي العينة الأقل ‎Los‏ في الغالب. ولدراسة معدل الصفاء؛ فقد أجريت عملية تتبع أمامية. وللتتبغ؛ بمعنى مراقبة ‎AS ja‏ وإجهة الصفاء؛ عند نقل 70615 (إنظر شكل ‎(AY‏
١/١ ‏مع التتبع الامامي‎ (AY ‏(إنظر الشكل‎ 968 ٠ ‏عند نقل‎ Front tracking ‏يوضع التتبع الأمامي‎ ‏لها‎ ١ ‏الاختلاف في درجة صفاء العينتين؛ طالما أن العينة‎ (AY ‏عند 9615 (إنظر الشكل‎ ‏لها ؟ مم أقل من‎ Y ‏صافيء بينما العينة‎ (T 965( ‏مم تقريباً من سائل عائم وطافي‎ ١ ‏صفاء‎ ‎.7 ‏سائل طافي عائم رائق. وهذا هو نتاج توزيع حبيبي في نطاق عريض في العينة‎ ‎٠‏ النتائج تكون العينة المعالجة بالانزيم ‎enzyme‏ هي العينة الاكثر ثباتاً وكذلك فلها الحجم الحبيبي الضيق الغالب. مثال ©: مقارنة إنزيم (1932) 1213437 بإنزيمات ‎all Alla‏ هون الفوسفاتية ‎phospholipases‏ ‎daha) ‏_المواد والطرق‎ ٠
Lipid Acyltransferase - 1211137 (K932) ‏إنزيم اسيل ترانسيفيراز‎ ‏حي ينتمي إلى جنس وفصيلة فيوساريوم‎ GIS ‏إنزيم الفطري يمكن الحصول عليه من‎ ‏يلي يشار إليه بإنزيم‎ led La) Fusarium heterosporum CBS 782.83 ‏هسيتروسبوريوم‎ ‏حسب التلقين في 11702005/087818. وإنزيم‎ (Danisco A/S ‏من شركة دانيسكو‎ “117
Fusarium oxysporum ‏فوسفاتية) من كائن حي ينتمي إلى‎ ) Phospholipase Al ‏فوسفوليبيز‎ Yo
Novozymes ‏من شركة‎ (LIPOPAN F™)
Porcine pancreas ‏حي ينتمي إلى بورسين بنكرياس‎ AS ‏من‎ Pphospholipase ‏2ه‎ ‏من حفازات حيوية؛ المملكة المتحدة.‎ (LIPOMOD 699 LT) 771 ‏ا‎
يف
لبن كامل الدسم مبستر قياسي )0 6 دهن) من شركة ‎ARLA‏ في الدنمارك ‎Denmark‏
درس لبن معالج إنزيمياً في المقارنة بلبن قياسي بالنسبة إلى الثبات في مواجهة تقييم بصري
لتكوين القشدة وترسيبها وفصل طورها في عينات مخزنة فوق ‎Ve‏ يوما.
فضلاً عن ذلك حلل مقدار الاحماض الدهنية الحرة لتقييم مستوى الزناخة في المنتج النهائي © ومقدار الكوليسترول ‎cholesterol‏ و/ أو الدهون الفوسفورية ‎phospholipids‏ للحصول على
مؤشر لمستوى التفاعل الانزيمي. :
الجزء التجريبي
تحضير اللبن
الجدول: صيغة طهوية ‎٠‏ النسبة المئوية للمكونات '!
ان ا ان سن ا لين كامل ‎Vereen Vee cn ee Ee Ye | al‏ 6.5 دهن ‎١ 111‏ ‎JLATU‏ ‏ملي لتر ‎KLM3'‏ م ‎J/LATU‏ ‏1 ملي لتر ‎TET‏ ‏ملي لتر ‎YAAT‏
١ e- +.Yo Lipomod 699 L ‏ملي‎ [PLU ‏لتر‎ ‏الطريقة‎ ‏خلط اللبن البارد بجزء إنزيمي وترك المخلوط في خزانة باردة طوال الليل.‎ -١ ‏ثانية‎ ١ ‏سخن مسبقاً إلى "م لمدة‎ -" ‏لمدة ؟ ثواني.‎ م”١٠‎ EY ‏معالجة اللبن عند درجة حرارة فائقة عند‎ —¥ ‏بار‎ Yer ‏وضغط‎ ove ‏؛- إمزج عند‎ ° ‏إلى ٠٠م وإملاً 7 قوارير تحت ظروف معقمة.‎ apo
Real time shelf-life test ‏جدول: إختبار الزمن الحقيقي للحفظ بعد التخزين‎ ‏العينة‎ | Ld | ‏العينة‎ ١ OY dud ‏العينة ؟‎ ١ ‏العينة‎ ‎1 ° ¢ 0 ‏بق‎ ‏مع ذلك | تركيب نسيجي | كالعنية ! كالعنية | كالعنية‎ ١ ‏تقييم الدهن | معالجة مثالية عند | كعينة‎ \ ١ ١ ‏العضوي درجة حرارة فائقة | مطبوخ قليلاً | مع زناخة قوية‎ ‏للبن منكه مطبوخ جداً‎ Organoleptic ‏قليلاأً‎ evaluation
YAAT 0
VV
‏كما وصفت سابقا‎ UHT ‏خزنت العينات عن طريق معالجة بالتسخين عند درجة حرارة فائقة‎ ‏يوماء حيث بعد تقييم العينات لتقدير طبقة‎ 1١ ‏لفترة‎ (,°Y0 -١ A) ‏في درجات حرارة محيطة‎ ‏القشدة وكذلك فصل الاطوار النهائية أو ترسيب في قاع القوارير.‎ ‏بواسطة مجموعة ذواقة مدربة من + أشخاص؛ في جلسة للتذوق‎ Lind ‏إختبرت العينات‎ ه كإختبار مثلثي عشوائي مع العينة ‎١‏ (لبن عادي معالج عند درجة حرارة فائقة) مستخدمة كعينة قياسية في كل جلسات الإختبار. بالنسبة إلى كلا من الزمن الحقيقي لملاحظة الثبات وكذلك التقييم الدهني العضوي؛ يمكن رؤية أن العيئة ¥ ‎(enzymated with LIPOPAN F™)‏ تعطي نتائجاً تحيد بصفة ملحوظة؛ مع ثبات منخفض ونكهة حالة للدهون في العينات. ‎٠‏ إختزل إنزيم 121143 (العينتان " و 1) طبقة القشدة دون تكوين طبقة رأسية وأظهر تحسيناً ‎Us pale‏ بالمقارنة بالعينة الضابطة ‎.)١(‏ ‏يمكن ان تختزل أيضاً العينات المعالجة بإنزيم الفوسفوليبيز ‎phospholipase‏ أرقام « 4 © طبقة القشدة مقارنة بالعينة الضابطة (بالرغم من عدم وصولها إلى الدرجة كإنزيم :61143)؛ ولكن هذا كان على حساب تكوين طبقة راسب. ‎١‏ بالنسبة إلى خواص المادة الدهنية العضوية؛ إتسمت العينة ‎(KLM3') ١‏ بمذاق مطبوخ قليلاً وبدرجة ضئيلة بالمقارنة بالعينة الضابطة ‎.١‏ ومن ثم؛ للعينة " مذاق محسن بالمقارنة بالعينة الضابطة ‎.١‏ وقد أنتجت المعالجة بإنزيم ‎Lipopan F™‏ (العينة “) ‎Wd‏ ذات خواص دهنية عضوية سيئة؛ ربما بسبب المستوى العالي للاحماض الحرة المنتجة. التحليل الكروماتوجرافي للطبقة الرقيقة عالي الأداء وكروماتوجرافي الغاز ‏© إستخلص ‎ol‏ عند درجات حرارة عالية طبقاً للصيغ الطبخية الموضحة في الجدول بإستعمال مذيبات عضوية وحللت الدهون المفصولة لتقدير الدهون الفوسفاتية عن طريق ‏ايض
ذل التحليل الكروماتوجرافي للطبقة الرقيقة ‎Je‏ الأداء لتعيين نسبة ‎Js fds‏ وإستر الكوليسترول والاحماض الدهنية الحرة عن طريق كروماتوجرافي الغاز ‎GLC‏ ‏الجدول: التحليل الكروماتوجرافي للدهون الفوسفاتية ‎phospholipids‏ الرئيسية في ‎alll‏ حيث فيه ‎=PC‏ فوسفاتيديل كولين ‎phosphatidylcholine‏ ‎=PE ©‏ فوسفاتيديل إيثانول أمين ‎phosphatidylethanolamine‏ ‏المليون) في المليون) | (جزء في المليون) المائي ‎a)‏ | مم | ‎[ve‏ ال ‎ae‏ ‏ملي لتر ‎Lipopan‏ © وحدات ‎FPG‏ ‏...ملي لتر ‎١. Yeu Slang ٠ KLM1‏ 1.7" ‎A J [TIPU‏ ‎Lipomod 699L‏ 8+ وحدة 8.1 م لا ‎ay‏ ‎frLy‏ ملي لتر ‎ow |‏ | ا ات | ان الس الي الجدول: تحليل كروماتوجرافي الغاز للكوليسترول ‎ccholesterol‏ وإستر كوليسترول ‎cholesterol ester‏ والاحماض الدهنية ‎fatty acids (FFA)‏ الاحماض الدهنية | الكوليسترول ‎١‏ إستر كوليسترول الحرة الكلية ‎cholesterol ester | cholesterol FFA‏ 0 11
YVR
1 7 cle ved
I ceed AE ‏جم‎ [TIPU KLM3* ‏إنزيم‎ تبين النتائج من التحليل الكروماتوجرافي للطبقة الرقيقة عالي الاداء (إنظر الجدول أعلاه) أن كل الانزيمات المختبرة كانت قادرة على أن تحل مائياً جزءاً من الدهون الفوسفاتية في اللبن يصل إلى 90797 إلى 90957 ‎Sy‏ أيضاً إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferease‏ :3 كانت قادرة على إجراء تحويل للاحماض الدهنية إلى كوليسترول أثناء تكوين إستر © الكوليسترول ‎-cholesterol ester‏ بالرغم من أن كل الانزيمات أنتجت درجة عالية من تحليل مائي للفوسفوليبيد (إنزيم )» إلا أن الاحماض الدهنية المتحصل عليها كانت مختلفة بدرجة ملموسة. وعلى أساس مقدار التحلل المائي للفوسفوليبيد والحمض الدهني الحر المتحصل عليه؛ يحتمل حساب على أساس جزيئي جرامي؛ مقدار الحمض الدهني الحر بالنسبة إلى مقدار الفوسفوليبيدات المتحصل عليها (إنظر ‎٠‏ الجدول أسفله). وتظهر هذه النتائج أن الانزيمات الحالة للدهون الفوسفاتية ١أ‏ تنتج أحماضاً دهنية حرة أكثر من إنزيم ,161143 لان هذه الانزيمات من فوسفوليبيزات لا تكون نوعية؛ ‎Lil Jas Lag,‏ أيضاً الجليسريدات ‎AEN‏ (دهن_اللبن). ويعرف إنزيم بنكرياس فوسفوليبارز ‎(Lipomod 699 L)‏ بأنه محدد جداً للفوسفوليبيدات؛ ولكن لا يزال ‎baie‏
YAAT
لالحا لأحماض دهنية حرة أكثر مقارنة بالجرعات المنخفضة من إنزيم '12143. وعند جرعات عالية من إنزيم ‎KIM3‏ يحصل على أحماض دهنية أكثر من فوسفوليبيز البنكرياس ‎«pancreas phospholipase‏ ولكن يشرح هذا عن طريق النشاط الحال للفوسفوليبيدات. وإنتج إنزيم ‎lsd) Lipopan F‏ الأعلى من الحمض الدهني الحر لان النشاط ‎le Jad‏ م للجليسريدات الثلاثية ‎triglycerides‏ التي أسهمت إلى التقييم السالب في الإختبار لتقدير الدهون العضوية. الجدول: تكوين الحمض الدهني ‎(FFA) all‏ بالنسبة إلى مقدار الدهون الفوسفاتية (الفوسفوليبيدات) التي تحل ‎Lie‏ ‏العينة الجرعات التغير في الاحماض | التغير في إنزيم النسبة الجزيئية ‎Aan‏ الحرة ‎a)‏ فوسفوليبيز الجرامية للحمض جزئ جرام/ كجم) | (ملي ‎tse‏ الدهني الحر/ إنزيم جرام/ كجم) فوسفوليبيز ‎[an |‏ صر | ‎se‏ | صر | حا ‎co‏ ‏إنزيم ‎[TIPU KLM3*‏ جم 4 ال 1 جم
‎YVYA |‏ نتيجة لذلك: أظهر إنزيم 1212437 ‎UW‏ محسناً (مع طبقة قشدة مختزلة بدون تكوين طبقة رسوبية) بالمقارنة مع ‎SS‏ من العينة الضابطة (بدون إنزيم) وإنزيمات_الفوسفوليبيزات ‎phospholipase enzymes‏ المقارنة. وبدون الرغبة في الارتباط بنظرية معينة؛ فقد ‎Som‏ ‏الثبات المحسن إلى توزيع مختزل للحجم الحبيبي لكريات الدهن في اللبن المعالج بإنزيم
‎13 e ‏ينتج حمض دهني أقل بالمقارنة بنفس تركيز إنزيم‎ KIM3 ‏ثمة تأثير هام آخر هو أن إنزيم‎ ‏وأثناء التخزين الممتد عند درجات الحرارة المحيطة؛ يمكن‎ phospholipase ‏الفوسفوليبيز‎ ‏للحمض الدهني الحر أن ينتج أكسدة أكثر للبن وهكذا يسبب مشاكلاً للدهن العضوي لاحقاً.‎ ‏وعلى هذا النحو قد يسبب محتوى الحمض الدهني الحر المرتفع ثمة مشاكل ملحوظة في‎ ‏في درجات حرارة محيطة لمدة تزيد‎ We ‏اللبن المعالج عند درجة حرارة فائقة والذي يخزن‎ ٠
‏عن شهر. يتم تضمين كل النشرات المذكورة في الطلب السابق والمتضمنة هنا في هذا الوصف على سبيل المرجعية. وسوف تتضح تعديلات وتباينات عديدة للطرق الموصوفة ونظام الاختراع الحالي لذوي الخبرة في المجال التقني المرتبط بدون الابتعاد عن مجال وروح الاختراع ‎١‏ _ الحالي. وبالرغم من أن الاختراع الحالي قد وصف ‎Lad‏ يتصل بتجسيدات مفضلة بعينها؛ يجب أن يفهم أن الاختراع حسبما ورد في عناصر ‎Alea‏ يجب أن لا يكون قاصراً على تجسيدات بعينها. ويراد بتعديلات متنوعة للطرق الموصوفة لإجراء الاختراع التي تكون واضحة لذوي المهارة في علم الكيمياء الحيوية والتقنية الحيوية أو المجالات المتعلقة الواقعة في مجال عناصر الحماية الاتية.

Claims (1)

  1. عناصر_الحماية ‎-١ ٠‏ طريقة لانتاج لبن ‎(UHT‏ حيث تتضمن الطريقة المذكورة خلط اسيل ترانسفيراز ‎lipid‏ ‎acyltransferase ¥‏ دهني ولبن او جزء منه ومعالجة اللبن ‎milk‏ المعالج بالإنزيم ‎enzyme‏ عن ‎v‏ طريق المعالجة بالحرارة الفائقة للحصول على لبن ‎milk‏ معالج عند درجة حرارة فائقة. ‎١‏ 7- طريقة طبقاً لعنصر الحماية ‎Cum)‏ يضاف فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid‏ ‎acyltransferase |"‏ (المحول للدهون) إلى اللبن ‎milk‏ المعالج عند درجة حرارة ‎AB‏ وضعه 7 في حضانة مع الإنتزيم ‎enzyme‏ عند درجة حرارة أقل من حوالي ‎١‏ 5م وتفضيلاً أقل من ¢ حوالي ‎٠١‏ تم ‎٠‏ *- طريقة طبقاً لعنصر الحماية ‎١‏ أو ‎١‏ حيث يضاف فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid‏ ‎acyltransferase 7‏ (حال ومحول للدهون) إلى اللبن ‎milk‏ المعالج عند درجة حرارة ‎AB‏ ‎dang 7‏ في حضانة مع الإنزيم ‎enzyme‏ عند درجة حرارة بين حوالي ‎١‏ م وحوالي ‎a” Yo‏ ؛ وتفضيلا بين حوالي ‎oF‏ وحوالي 7*م؛ وأكثر تفضيلا حوالي 020 ‎٠‏ +- طريقة طبقاً لأي من العناصر ‎١‏ إلى © حيث فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid‏ ‎acyltransferase ¥‏ يتضمن حافز ‎«GDSx‏ حيث تكون ‎X‏ عبارة عن واحدة أو أكثر من الوحدات البنائية التالية من الحمض الأميني بل و/أو له و/أو تت وار ل رأ ل ‎fs‏ ات ور ‎H‏ ‏¢ و/أو ‎«Q‏ و/أو 1 و/أو ‎«N‏ و/أو ‎«M‏ و/أو ‎S‏ و أو دافع ‎٠ GANDY‏ ‎YAAR‏
    YA.
    lipid ‏طريقة طبقاً لأي من عناصر الحماية حيث فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ -* ١ ‏(الحال والمحول للدهون) للاستخدام في أي من طرق و/ أو إستخدامات‎ 20710056086 ‏من كائن حي من‎ Shall ‏الاختراع الحالي والتي يمكن الحصول عليهم؛ والمتحصل عليها‎ . » «Streptomyces ‏ستربتوميسين‎ Aeromonas ‏؛ واحد أو أكثر من الاجناس الاتية: أيروموناس‎ ‏مايكر بكتريوم‎ «Lactococcus ‏لاكتوكوكس‎ «Saccharomyces ‏ساكاروميسيس‎ 0 «Lactobacillus ‏لاكتوباسيلوس‎ (Streptococcus ‏ستربتوكوكس|‎ Mycobacterium «Campylobacter ‏كامبيلوباكتر‎ Bacillus ‏_باسيلوس‎ <Desulfitobacterium ‏دوسيلفيتوبكتريوم‎ ١ ‏أسبرجيللوس‎ Sulfolobus ‏سلفوبس‎ Xylella ‏زيليلا‎ Vibrionaceae ‏فيبريوناسي‎ A ‏نيسيريا‎ Listeria) judd «Schizosaccharomyces ‏شيزوسكروميسيس‎ «Aspergillus 4 ‏زانثوموناس:‎ Ralstonia اينوتسلار‎ «Mesorhizobium ‏ميزوريزوبيوم‎ «Neisseria ٠ Candida ‏وكانديدا‎ 10717000107053 | ١١ lipid acyltransferase ‏طريقة طبقاً لعنصر الحماية © حيث فيها إنزيم اسيل تر انسيفيراز‎ -١ ١ ‏(الحال والمحول للدهون) طبقاً لعنصر الحماية 7؛ حيث يمكن فيها الحصول على إنزيم آسيل‎ ٠ ‏(الحال والمحول للدهون)؛ والمتحصل عليه تفضيلاً من‎ lipid acyltransferase ‏ترانسيفيراز‎ ¥ Aeromonas ‏كان حي من جنس أيروموناس‎ ؛‎ lipid ‏طريقة طبقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ حيث فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ -7 ٠ ‏ذات نشاط إنزيمي لأسيل‎ polypeptide ad ‏كونه بولي‎ SAN acyltransferase " ‏(محول وحال للدهن)؛ ويحصل على البولي الببتيد‎ lipid acyltranferase ‏ترانسيفيراز‎ ¥
    YAAT
    VAY ‏الموضحة كمتتاليات‎ nucleotide ‏عن طريق تمييز أي من متتابعات النيكلوتيد‎ polypeptide ‏؛‎ ‏ذات أرقام تعريفية للهوية كالآتي‎ ٠ SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 46, = SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, Vv SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, A SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62or 4 SEQ ID No. 63 Va ‏التي لها 9675 أو أكثر من هوياتهم.‎ nucleotide ‏أو متتالية نيكليوتيدية‎ ‏آسيل ترانسيفيراز.‎ led ‏حيث‎ BL lead ale ‏لأي من‎ Gd ‏طريقة‎ -+ ١ ‏ذات نشاط‎ polypeptide ‏المذكورة (الحال للدهون) عبارة عن بولي ببتيد‎ acyltransferase |" ‏(حال للدهن) ذات نشاط إنزيمي 11010 ويحصل على‎ acyltranferase ‏آسيل ترانسيفيراز‎ ¥ ‏عن طريق:‎ polypeptide ‏البولي ببتيد‎ ؛‎ ‏الموضحة كمتتالية برقم تعريفي £9 أو متتالية نيكليوتيدية‎ nucleotide ‏متتالية النيكليوتيد‎ (i ٠ ‏الذي له 969705 أو أكثر من تعريفهاء‎ nucleotide ‏المذكور‎ polypeptide ‏(نووي) الذي يشيفر البولي ببتيد‎ nucleic acid ‏ب) حمض نيوكليك‎ v ‏المذكور يتسم على الاقل بحوالي 96750 من هوية متتالية‎ polypeptide ‏حيث فيه البولي ببتيد‎ + ‏أو مع متتالية‎ ON ‏الموضحة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ polypeptide ‏البولي ببتيد‎ 4 CUA ‏الموضحة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ polypeptide ‏ببتيد‎ Sed YAAT ‏ل"‎ :
    YAY : ‏الذي يهجن تحت ظروف حاسمة متوسطة إلى مسبار‎ nucleic acid ‏حمض نيوكليك‎ 0 (z 1) ‏الموضحة كمتتالية بالرقم‎ nucleotide ‏يتضمن المتتالية النيكليوتيدية‎ nucleid probe ‏نيوكليد‎ VY . 49 ‏التعريفي للهوية‎ ٠ lipid ‏فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ Cum ‏طريقة طبقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛‎ -4 ١ ‏نشاط آسيل ترانسيفيراز‎ al polypeptide im Js oe ‏_عبارة‎ acyltransferase Y ‏هذا أي واحد‎ polypeptide ‏ذات نشاط إنزيمي 11010 ويتضمن البولي ببتيد‎ acyltransferase ‏الموضحة كمتتاليات‎ amino acid ‏من متتاليات حمض الامينو‎ ؛‎ SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, 5801© ه٠‎
    No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 1 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. Vv 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 35, , SEQ ID No, A 38, SEQ ID No. 68 q ‏لها 9675 أو أكثر من تعريفاتهم.‎ amino acid ‏حمض الامينو‎ Aloe ‏أو‎ ٠ lipid ‏حيث فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ Aad) ‏طريقة طبقاً لأي من عناصر الحماية‎ -٠١ ٠ ‏وحيث يتضمن‎ lipid ‏له نشاط إنزيمي‎ polypeptide ‏عبارة عن بولي ببتيد‎ acyltransferase " ‏كمتتالية برقم تعريفي‎ amino acid ‏ببتيد متتالية حمض الامينو‎ polypeptide ‏البولي ببتيد‎ ‏لها 1675 أو أكثر من تعريفها.‎ amino acid ‏أو متتالية حمض الامينو‎ TA ‏للهوية‎ ؛‎ ‏تل‎ ١ :
    VAY
    ‎-١١ ١‏ استعمال اسيل ترانسفيراز دهني في صناعة لبن ‎UHT‏ لتحسين الثباتء وبصفة خاصة الثبات على المدى ‎cand‏ لحليب 11111.
    ‎UHT ‏دهني في صناعة لبن‎ lipid acyltransferase ‏استعمال اسيل ترانسفيراز‎ -١ ١ .10111 ‏لتحسين اختلاف الحساسية الملموسة؛ ولحليب‎ y
    ‎UHT ‏دهني في صناعة لبن‎ lipid acyltransferase ‏استعمال اسيل ترانسفيراز‎ =) ¥ ١ UHT ‏لتحسين الطعم و/او الرائحة لحليب‎ x
    ‎-١4 ١‏ إستخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferase‏ في صنع لبن ‎milk‏ معالج عند ¥ درجة حرارة فائقة لإختزال محتوى الكوليسترول ‎cholesterol‏ في لبن ‎milk‏ معالج عند درجة حرارة فائقة.
    ‎—Ye ١‏ إستخدام إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferase‏ في صنع لبن ‎milk‏ معالج عند درجة حرارة فائقة لإزالة أو إختزال القشدة في اللبن ‎milk‏ المعالج عند درجة حرارة فائقة.
    ‎١‏ = إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية ‎VY‏ إلى ؛ ‎Cus‏ فيه إنزيم أسيل تر انسيفيراز ‎lipid acyltransferase Y‏ يضاف إلى لبن ‎milk‏ معالج بالتسخين عند درجة حرارة فائقة؛ والذي
    YAS ‏م وتفضيلا أقل‎ ٠ ‏عند درجة حرارة أقل من حوالي‎ lipid ‏يوضع في حضانة مع الأنزيم‎ 7 ‏عم‎ Ye. ‏من حوالي‎ ¢ ‏حيث يضاف فيه إنزيم آسيل‎ V0 ‏إلى‎ ١١ ‏إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية‎ -١7 ٠ ‏المعالج عند درجة حرارة فائقة؛ والذي‎ milk ‏إلى اللبن‎ lipid acyltransferase ‏ترانسيفيراز‎ " ‘a’ Yo ‏م وحوالي‎ ١ ‏يوضع في حضانة مع الانزيم 40 عند درجة حرارة بين حوالي‎ 3 220 ‏وحوالي 7*م؛ وأكثر تفضيلا حوالي‎ oF ‏؛ وتفضيلا بين حوالي‎ ‏حيث يتضمن فيها إنزيم آسيل‎ ١١7 ‏إلى‎ ١١ ‏إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية‎ -١8 ١ ‏عبارة عن واحدة أو أكثر‎ X ‏حيث تكون‎ «GDSx ‏حافز‎ lipid acyltransferase ‏ترانسيفيراز‎ " ‏و/أو 2 و/أو 39 و/أو‎ V ‏من الوحدات البنائية التالية من الحمض | لأميني ب و/أو كر و/أو‎ Y GANDY ‏و/أو 1 و/أو 5 و أو دافع‎ «N ‏و/أو 0 و/أو 1 و/أو‎ «H ‏و/أو‎ Y ¢ ‏فيه إنزيم أسيل ترانسيفيراز‎ Sus YA ‏إلى‎ ١١ ‏إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية‎ -١ 8 ١ ‏للاستخدام أي من من طرق و/ أو إستخدامات الاختراع الحالي قد‎ lipid acyltransferase ¥ ‏واحد أو أكثر ينتمي إلى الاجناس:‎ GIS ‏أو يمكن الحصول عليهاء من‎ ede ‏يحصل‎ » «Saccharomyces ‏ساكاروميسيس‎ Streptomyces ‏_ستربتوميسين‎ «Aeromonas ‏أيروموناس‎ 3 «Streptococcus ‏ستربتوكوكس‎ Mycobacterium ‏مايكربكتريوم‎ (Lactococcus ‏لاكتوكوكس‎ © «Bacillus ‏باسيلوس‎ <Desulfitobacterium ‏دوسيلفيتوبكتريوم‎ Lactobacillus ‏لاكتوباسيلوس‎ 1 ‏سلفوبس‎ Xylella ‏زيليلا‎ Vibrionaceae ‏فيبريوناسي‎ Campylobacter ‏كامبيلوباكتر‎ " ‏شيزوسكروميسيس 2/7205202/0707665ى؛ ليسترا‎ «Aspergillus ‏أسبرجبللوس‎ «Sulfolobus ~~ A 1 0
    YAO
    «Ralstonia ‏رالستونيا‎ «Mesorhizobium ‏ميزوريزوبيوم‎ Neisseria ايريسين‎ Listeria 4 Candida ‏وكانديدا‎ Xanthomonas ‏زانثوموناس‎ ٠
    ‎Ty‏ طريقة طبقاً لعنصر الحماية ‎V4‏ حيث فيه يمكن الحصول على أو يحصل على إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferase‏ (الحال والمحول للدهون)؛ من كائن حي من جنس ¥ أيروموناس 2/005
    ‎-7١ ١‏ طريقة طبقاً لأي من عناصر الحماية ‎Ye -١١‏ حيث فيه إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferase‏ يكون عبارة عن نشاط آسيل ترانسيفيراز ‎acyltranferase‏ (محول ‎Jay v‏ للدهن)؛ ويحصل على البولي الببتيد ‎polypeptide‏ عن طريق تمييز أي واحد من.
    ‏؛ متتابعات النيكلوتيد ‎nucleotide‏ الموضحة كمتتاليات
    ‎SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 46, ٠
    ‎SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, 1 SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, Vv SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62 or A
    ‎SEQ ID No. 63 1‏ ‎٠‏ أو نيكلوتيدية ‎nucleotide‏ التي لها تعريف 9675 أو أكثر من تعريف الهوية.
    ‎٠‏ 77- إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية ‎VY -١١‏ حيث فيها إنزيم آسيل ترانسيفيراز
    ‎lipid acyltransferase ¥‏ يكون عبارة عن بولي ببتيد ‎polypeptide‏ له نشاط إنزيمي ‎lipid‏
    ‏ويحصل عليه بواسطة تمبيز :
    ‎"75 ْ 0
    . i VAT ‏الموضحة كمتتالية برقم تعريفي £4 أو متتالية نيكليوتيدية‎ nucleotide ‏؛ ) متتالية النيكليوتيد‎ 706165 ‏بنسبة تعريف للهوية‎ nucleotide © ‏المذكور‎ polypeptide ‏(نووي) الذي يشيفر البولي ببتيد‎ nucleic acid ‏ب) حمض نيوكليك‎ 01 ‏المذكور يكون على الاقل بحوالي 9670 من هوية متتالية‎ polypeptide ‏حيث فيه البولي ببتيد‎ v ‏أو مع متتالية‎ ON ‏الموضحة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية‎ polypeptide ‏البولي ببتيد‎ A ‏الموضحة في المتتالية بالرقم التعريفي للهوية 14 أو‎ polypeptide ‏البولي ببتيد‎ _ 4 ‏الذي يهجن تحت ظروف حاسمة متوسطة إلى مسبار‎ nucleic acid ‏ج) أو حمض نيوكليك‎ ٠ ‏الموضحة كمتتالية بالرقم‎ nucleotide ‏يتضمن المتثالية النيكليوتيدية‎ nucleid probe ‏نيوكليد‎ ‎A ‏التعريفي للهوية‎ ay ‏حيث فيه إنزيم آسيل ترانسيفيراز‎ YY -١١ ‏إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية‎ YY ‏له نشاط إنزيمي 1:01 ويتضمن‎ polypeptide ‏عبارة عن بولي ببتيد‎ lipid acyltransferase Y ‏الموضحة‎ amino acid ‏هذا أي واحد من متتاليات حمض الامينو‎ polypeptide ‏_البولي ببتيد‎ ‏؛ كمتتاليات‎ SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQIDNo.6,SEQID
    No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. a 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. ١ 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 35, SEQ ID No. A 38, SEQ ID No. 68 : 4 ‏من التعريف بالهوية.‎ % VO ‏التي لها‎ amino acid ‏حمض أمينو‎ Allie ‏أو‎ ٠ 175 | 0
    لاا ‎x‏ ؛7- إستخدام طبقاً لأي من عناصر الحماية ‎YF -١١‏ حيث فيه إنزيم آسيل ترانسيفيراز ‎lipid acyltransferase “‏ عبارة عن بولي ببتيد ‎polypeptide‏ له نشاط إنزيمي ‎lipid‏ ويتضمن ‎Sell‏ ببتيد ‎polypeptide‏ متتالية حمض الامينو ‎amino acid‏ الموضحة كمتتالية برقم تعريفي 6 للهوية ‎TA‏ أو متتالية حمض الامينو ‎amino acid‏ 7678 من التعريف بالهوية. 0 م7
SA8290513A 2007-08-17 2008-08-17 إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية SA08290513B1 (ar)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0716126.8A GB0716126D0 (en) 2007-08-17 2007-08-17 Process

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA08290513B1 true SA08290513B1 (ar) 2012-03-13

Family

ID=38566602

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA8290513A SA08290513B1 (ar) 2007-08-17 2008-08-17 إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية

Country Status (17)

Country Link
US (1) US8652809B2 (ar)
EP (2) EP2190864B1 (ar)
CN (3) CN101874039A (ar)
AR (1) AR067953A1 (ar)
AU (2) AU2008290424B2 (ar)
BR (2) BRPI0814971A8 (ar)
CA (2) CA2695562C (ar)
CL (1) CL2008002415A1 (ar)
DK (2) DK2190864T3 (ar)
EA (2) EA018153B1 (ar)
ES (2) ES2415873T3 (ar)
GB (1) GB0716126D0 (ar)
MX (2) MX2010001856A (ar)
NZ (2) NZ583047A (ar)
PL (2) PL2190864T3 (ar)
SA (1) SA08290513B1 (ar)
WO (2) WO2009024736A1 (ar)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR0209154A (pt) 2001-05-18 2004-07-20 Danisco Processo de preparação de uma massa com uma enzima
DK1776455T3 (da) 2004-07-16 2015-06-22 Dupont Nutrition Biosci Aps Lipolytisk enzym, anvendelser deraf i fødevareindustrien
EA020035B1 (ru) * 2007-12-21 2014-08-29 ДюПон НЬЮТРИШН БАЙОСАЙЕНСИЗ АпС Способы
GB0905367D0 (en) * 2009-03-27 2009-05-13 Danisco Method
EP2432876A1 (en) 2009-05-19 2012-03-28 Danisco A/S Use
JP5667183B2 (ja) 2009-07-22 2015-02-12 グリュネンタール・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング 加熱溶融押出成型した制御放出性投与剤型
GB0920089D0 (en) * 2009-11-17 2009-12-30 Danisco Method
WO2011110967A1 (en) 2010-03-12 2011-09-15 Danisco A/S Process
GB201007668D0 (en) * 2010-05-07 2010-06-23 Danisco Method
AR081950A1 (es) 2010-06-17 2012-10-31 Danisco Proceso de tratamiento de semillas que contienen aceite
ES2649912T3 (es) 2011-02-23 2018-01-16 Dupont Nutrition Biosciences Aps Tratamiento enzimático de la clorofila en los aceites vegetales
WO2012114232A1 (en) 2011-02-23 2012-08-30 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process
WO2013104660A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for treating a plant oil comprising hydrolysing chlorophyll or a chlorophyll derivative and involving partial caustic neutralisation
WO2013104659A2 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process
WO2013160372A1 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for treating plant oil involving addition of serial doses of chlorophyll or chlorophyll derivative degrading enzyme
WO2015150372A1 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Dupont Nutrition Biosciences Aps Method for increasing crude palm oil yields
EP3508585B1 (en) * 2016-08-30 2021-12-15 Mitsubishi Chemical Corporation Method for producing mutant enzyme, and mutant alcohol acyltransferase
CN113545393A (zh) * 2020-04-23 2021-10-26 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 一种减少杀菌机结垢的方法、液体乳制品及其制备方法

Family Cites Families (243)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA805618A (en) 1969-02-04 C. White Halbert Nutritionally improved cereal products
CA462382A (en) 1950-01-10 Leach Company Self-loading vehicle
AT110768B (de) 1927-09-29 1928-10-10 Patiag Patentverwertungs Und I Windkraftmaschine.
US2888385A (en) 1952-11-28 1959-05-26 Grandel Felix Process of making a preparation containing lipases and oxidases
US3260606A (en) 1964-04-29 1966-07-12 Taiyo Food Co Ltd Enzymatic treatment of egg
GB1092775A (en) 1965-07-07 1967-11-29 Knud Aunstrup Preparation of amyloglucosidase
US3368903A (en) 1966-02-18 1968-02-13 Vanderbilt Co R T Baked goods dough and method
CH461935A (fr) 1966-05-03 1968-08-31 Menzi Robert Procédé de fabrication de pâtes alimentaires séchées
DE1900959A1 (de) 1969-01-09 1970-08-27 Unilever Nv Verfahren zur Herstellung von Pflanzenphosphatiden mit universeller Emulgierkraft
US3634195A (en) 1969-09-08 1972-01-11 Miles Lab Production of lipase
NL154598B (nl) * 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) * 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
GB1375783A (ar) 1972-02-04 1974-11-27
GB1442418A (en) 1972-12-14 1976-07-14 Procter & Gamble Method of cleansing polyester-containing fabrics
IL46862A (en) 1974-04-08 1977-12-30 Baxter Travenol Lab Lipolytic enzyme flavoring system for fat-containing food
US3939350A (en) * 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3973042A (en) 1974-05-10 1976-08-03 Cornell Research Foundation, Inc. Flavor development by microbial lipases in pasteurized milk blue cheese
US3996345A (en) * 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
GB1525929A (en) 1974-11-25 1978-09-27 Unilever Ltd Stabilised emulsions comprising phospholipoprotein
GB1577933A (en) 1976-02-11 1980-10-29 Unilever Ltd Fat process and composition
US4160848A (en) 1977-04-18 1979-07-10 Pennwalt Corporation Antistaling agent for bakery products
JPS6049477B2 (ja) 1977-04-19 1985-11-01 協和醗酵工業株式会社 グリセロ−ル酸化酵素およびその製造法ならびにグリセロ−ル酸化酵素を用いるグリセロ−ルの定量法
US4277437A (en) * 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4275149A (en) * 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4399218A (en) 1980-02-05 1983-08-16 Boehringer Mannheim Gmbh Method and reagent for the determination of glycerin
US4366241A (en) * 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
JPS6030488B2 (ja) 1982-11-10 1985-07-17 協和醗酵工業株式会社 生地の改良剤およびそれを含有してなる生地
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DK402583D0 (da) 1983-09-05 1983-09-05 Novo Industri As Fremgangsmade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat og anvendelse deraf
US4707364A (en) 1984-01-27 1987-11-17 Miles Laboratories, Inc. Composition for accelerating cheese aging
US4636468A (en) 1984-06-25 1987-01-13 Genencor, Inc. Lipolytic enzyme derived from a aspergillus microorganism having an accelerating effect on cheese flavor development
CA1262654A (en) 1984-08-10 1989-11-07 Takaoki Torigoe Food quality improving agent
NL8402979A (nl) 1984-09-28 1986-04-16 Tno Werkwijze voor het bestrijden van vaatverwelkingsziekten bij gewassen, in het bijzonder de iepeziekte.
JPS61181390A (ja) 1985-02-06 1986-08-14 Amano Pharmaceut Co Ltd 酵素によるグリセライドの製造法
US4689297A (en) 1985-03-05 1987-08-25 Miles Laboratories, Inc. Dust free particulate enzyme formulation
US5219733A (en) 1985-03-06 1993-06-15 Yoshikawa Oil & Fat Co., Ltd. Process for preparing fatty acid esters
EP0195311B2 (en) 1985-03-06 1996-01-17 Yoshikawa Oil &amp; Fat Co., Ltd. Process for preparing fatty acid esters
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
JPS61242542A (ja) 1985-04-22 1986-10-28 Fuji Oil Co Ltd チ−ズ風味材の製造法
US5310679A (en) * 1985-05-13 1994-05-10 Artiss Joseph D Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids
GB8514708D0 (en) 1985-06-11 1985-07-10 Unilever Plc Enzymatic detergent composition
GB8514707D0 (en) 1985-06-11 1985-07-10 Unilever Plc Enzymatic detergent composition
DK154572C (da) 1985-08-07 1989-04-24 Novo Industri As Enzymatisk detergentadditiv, detergent og fremgangsmaade til vask af tekstiler
GB8525012D0 (en) 1985-10-10 1985-11-13 Cpc International Inc Carbohydrate refining process
GB2185990B (en) 1986-02-05 1990-01-24 Unilever Plc Margarine fat
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
US5874558A (en) 1986-03-17 1999-02-23 Novo Nordisk Nucleic acid encoding a recombinant humicola sp. lipase
US5536661A (en) 1987-03-10 1996-07-16 Novo Nordisk A/S Process for the production of protein products in aspergillus
US5766912A (en) 1986-03-17 1998-06-16 Novo Nordisk A/S Humicola lipase produced in aspergillus
JPS62262997A (ja) 1986-05-02 1987-11-16 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ ワツクスの製造方法
JPS6344892A (ja) 1986-08-13 1988-02-25 Kao Corp 油脂類のエステル交換反応方法
US4810414A (en) 1986-08-29 1989-03-07 Novo Industri A/S Enzymatic detergent additive
EP0260573A3 (de) 1986-09-18 1989-03-22 Lucas Meyer GmbH &amp; Co Verfahren zur Herstellung eines hydrolysierten Lecithins, sowie Anwendung des hydrolysierten Lecithins
US5273898A (en) 1986-10-17 1993-12-28 Noro Nordisk A/S Thermally stable and positionally non-specific lipase isolated from Candida
US5108457A (en) 1986-11-19 1992-04-28 The Clorox Company Enzymatic peracid bleaching system with modified enzyme
KR900003014B1 (ko) 1986-12-27 1990-05-04 도오아 야꾸힌 고오교오 가부시끼가이샤 양식어(養殖魚)용 사료 첨가제
US5219744A (en) 1987-08-26 1993-06-15 Ajinomoto Co., Inc. Process for modifying fats and oils
EP0305216B1 (en) 1987-08-28 1995-08-02 Novo Nordisk A/S Recombinant Humicola lipase and process for the production of recombinant humicola lipases
ES2032939T5 (es) 1987-12-21 2000-06-01 Dsm Nv Un metodo para mejorar una masa de harina.
DK6488D0 (da) 1988-01-07 1988-01-07 Novo Industri As Enzymer
DK77788A (da) 1988-02-16 1989-08-17 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af kokosnoedolie
JP3079276B2 (ja) 1988-02-28 2000-08-21 天野製薬株式会社 組換え体ｄｎａ、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法
EP0334462B2 (en) 1988-03-25 2002-04-24 Genencor International, Inc. Molecular cloning and expression of genes encoding lipolytic enzymes
US5232846A (en) 1988-08-09 1993-08-03 Unitika Ltd. Method for producing a thermostable lipoprotein lipase from streptomyces
GB8906837D0 (en) 1989-03-23 1989-05-10 Unilever Plc Bread improvers
DE3920561A1 (de) 1989-06-23 1991-01-10 Knoll Ag Verfahren zur vermeidung von verdauungsstoerungen bei pflanzenfressenden tieren
US5213968A (en) 1989-08-21 1993-05-25 Nestec S.A. Process for preparing emulsifying agents
ATE97555T1 (de) 1989-09-29 1993-12-15 Unilever Nv Getrocknetes lyso-phospholipoprotein enthaltendes nahrungsmittel.
US5677160A (en) 1989-10-30 1997-10-14 Henkel Corporation Fat splitting process
US5288619A (en) 1989-12-18 1994-02-22 Kraft General Foods, Inc. Enzymatic method for preparing transesterified oils
JPH03262492A (ja) 1990-03-06 1991-11-22 P Macneil Gerald モノグリセリドの製造方法
DK19991D0 (da) 1991-02-06 1991-02-06 Novo Nordisk As Proteinpraeparationer
KR100225087B1 (ko) 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
US5814501A (en) 1990-06-04 1998-09-29 Genencor International, Inc. Process for making dust-free enzyme-containing particles from an enzyme-containing fermentation broth
EP0468731A1 (en) 1990-07-26 1992-01-29 Oriental Yeast Co., Ltd. Bread improver and method of producing bread
US5892013A (en) 1990-09-13 1999-04-06 Novo Nordisk A/S Lipase variants
US5869438A (en) 1990-09-13 1999-02-09 Novo Nordisk A/S Lipase variants
AU657278B2 (en) 1990-09-13 1995-03-09 Novo Nordisk A/S Lipase variants
CA2058056C (en) 1990-12-21 1996-11-05 Chiaki Saito Method of decreasing cholesterol concentration in food
PH31068A (en) 1991-03-07 1998-02-05 Ici Plc Process for the production of terephthalic acid.
DE4112440C1 (ar) 1991-04-16 1992-10-22 Diagen Institut Fuer Molekularbiologische Diagnostik Gmbh, 4000 Duesseldorf, De
DK0585285T3 (da) 1991-05-01 1999-05-10 Novo Nordisk As Stabiliserede enzymer
DE4115938A1 (de) 1991-05-16 1992-11-19 Metallgesellschaft Ag Enzymatisches verfahren zur verminderung des gehaltes an phosphorhaltigen bestandteilen in pflanzlichen und tierischen oelen
CA2077020A1 (en) 1991-09-03 1993-03-04 Yoshikazu Isono Process for producing lipoprotein-containing substance having reduced lipid content and food containing substance thus produced
US5879920A (en) 1991-10-07 1999-03-09 Genencor International, Inc. Coated enzyme-containing granule
EP0542351B1 (en) 1991-11-11 1996-01-17 Akzo Nobel N.V. Process for the preparation of salt granulates
EP0558112A1 (en) 1992-02-25 1993-09-01 Unilever N.V. Enzymic diglyceride removal
CA2079839A1 (en) 1992-02-28 1993-08-29 Vincent Destefanis Calcium peroxide and ascorbic acid containing compositions as replacements for bromate in breadmaking
GB2267033B (en) 1992-03-07 1996-01-24 David Garnett Lysophospholipid Animal Feed Supplement
DK42092D0 (ar) 1992-03-27 1992-03-27 Novo Nordisk As
DK73592D0 (da) 1992-06-03 1992-06-03 Novo Nordisk As Nyt enzym
TW362115B (en) 1992-06-16 1999-06-21 Sankyo Lifetech Co Ltd Novel phospholipase A1, process for its preparation and the use thereof
DK88892D0 (da) 1992-07-06 1992-07-06 Novo Nordisk As Forbindelse
EP0580252A2 (en) 1992-07-20 1994-01-26 Quest International B.V. Improvements in or relating to pectin methyl esterase
EP0585988B1 (en) 1992-07-27 1996-03-13 Gist-Brocades N.V. Enzyme product and method for improving bread quality
DK104592D0 (da) 1992-08-21 1992-08-21 Novo Nordisk As Fremgangsmaade
EP0673429B1 (en) * 1992-12-10 2002-06-12 Dsm N.V. Production of heterologous proteins in filamentous fungi
CA2152342A1 (en) 1992-12-22 1994-07-07 Miyoko Hashida Alkaline lipases
DK154292D0 (da) 1992-12-23 1992-12-23 Novo Nordisk As Nyt enzym
JP2937746B2 (ja) 1993-04-25 1999-08-23 昭和産業株式会社 油脂の精製方法
ZA943640B (en) 1993-06-07 1995-01-26 Buckman Labor Inc Synergistically stabilized liquid enzymatic compositions
JP2859520B2 (ja) 1993-08-30 1999-02-17 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物
ATE211621T1 (de) 1993-10-29 2002-01-15 Dsm Nv Backverbesserende zusammensetzungen
EP0652289A1 (en) 1993-11-05 1995-05-10 Unilever Plc Random interesterification of triglyceride fats
DE4339556C1 (de) 1993-11-19 1995-02-02 Metallgesellschaft Ag Verfahren zum Entschleimen von Pflanzenöl mittels Enzymen
PT659344E (pt) * 1993-12-24 2001-12-28 Dsm Nv Composicoes de levedura seca traducao
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
ATE247707T1 (de) 1994-02-21 2003-09-15 Novozymes As Verfahren zur herstellung einer immobilisierten enzympräparation und ihre verwendung
DE69527835T2 (de) 1994-02-22 2003-04-10 Novozymes As Methode zur herstellung einer variante eines lipolytischen enzymes
US5834280A (en) 1994-05-03 1998-11-10 Novo Nordisk A/S Glucose oxidases obtained from a cladosporium
US5741665A (en) * 1994-05-10 1998-04-21 University Of Hawaii Light-regulated promoters for production of heterologous proteins in filamentous fungi
EP0682116B1 (en) 1994-05-11 1997-12-17 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Ascorbate oxidase, gene encoding the same, process for producing the same, and reagent composition using the same
AU693896B2 (en) 1994-06-16 1998-07-09 Firmenich S.A. Flavouring composition and process
EP0687414B1 (en) 1994-06-17 2000-11-08 Dsm N.V. Bread improving composition
AU3741995A (en) 1994-10-26 1996-05-23 Novo Nordisk A/S Enzymatic detergent composition
EP0785994A1 (en) 1994-10-26 1997-07-30 Novo Nordisk A/S An enzyme with lipolytic activity
ES2181792T3 (es) 1994-10-26 2003-03-01 Novozymes As Nueva enzima lipolitica.
GB2296011B (en) 1994-12-13 1999-06-16 Solvay Novel fusarium isolate and lipases, cutinases and enzyme compositions derived therefrom
US6093562A (en) 1996-02-05 2000-07-25 Novo Nordisk A/S Amylase variants
EP0810826B1 (en) * 1995-02-22 2003-06-11 Cerestar USA, Inc. Process for reducing sterols and free fatty acids from animal fat
JPH08228778A (ja) 1995-02-27 1996-09-10 Showa Denko Kk 新規なリパーゼ遺伝子及びそれを用いたリパーゼの製造方法
JP3359777B2 (ja) 1995-03-06 2002-12-24 日清製粉株式会社 油揚げ即席麺およびその製造方法
DE69628642T2 (de) 1995-03-30 2004-05-13 Novozymes A/S Alkalisches lypolitsches enzym
US5919746A (en) 1995-03-30 1999-07-06 Novo Nordisk A/S Alkaline lipolytic enzyme
US5989599A (en) 1995-04-24 1999-11-23 Nestec S.A. Process for the interesterification of phospholipids
US5912032A (en) * 1995-05-11 1999-06-15 Meiji Milk Products Company, Limited Process of producing calcium-supplemented milk drinks
EP0743017B1 (en) 1995-05-15 2004-09-29 DSM IP Assets B.V. Application of phospholipases in animal feed
GB2301103B (en) 1995-05-23 1999-12-22 Danisco An enzyme system comprising ferulic acid esterase
CA2224203C (en) 1995-06-07 2003-08-12 Jorn Borch Soe A method for improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products
GB0112226D0 (en) * 2001-05-18 2001-07-11 Danisco Method of improving dough and bread quality
CA2224143C (en) 1995-06-07 2009-10-27 Bioteknologisk Institut Recombinant hexose oxidase, a method of producing same and use of such enzyme
US6936289B2 (en) * 1995-06-07 2005-08-30 Danisco A/S Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products
US6495357B1 (en) 1995-07-14 2002-12-17 Novozyme A/S Lipolytic enzymes
JP4307549B2 (ja) 1995-07-14 2009-08-05 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 脂肪分解活性を有する修飾された酵素
DE19527274A1 (de) 1995-07-26 1997-01-30 Metallgesellschaft Ag Enzymatisches Verfahren zur Entschleimung von pflanzlichen Ölen mit Aspergillus-Phospholipase
JP4068142B2 (ja) 1995-08-11 2008-03-26 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 新規の脂肪分解酵素
JP4053595B2 (ja) 1995-09-22 2008-02-27 メディカル・リサーチ・カウンシル 核酸の突然変異誘発におけるまたはそれに関する改良
ATE212189T1 (de) 1995-12-01 2002-02-15 Unilever Nv Mikrowellen erhitzbare knusperige brötchen
US6344328B1 (en) 1995-12-07 2002-02-05 Diversa Corporation Method for screening for enzyme activity
US6361974B1 (en) 1995-12-07 2002-03-26 Diversa Corporation Exonuclease-mediated nucleic acid reassembly in directed evolution
US5756328A (en) 1995-12-20 1998-05-26 Cornell Research Foundation, Inc. Acyltransferase and cDNA encoding acyltransferase
US5942430A (en) 1996-02-16 1999-08-24 Diversa Corporation Esterases
US6001586A (en) 1996-03-29 1999-12-14 Genencor International, Inc. Compartmentalization method for screening microorganisms
EP0897423B1 (en) 1996-04-25 2004-10-13 Novozymes A/S Alkaline lipolytic enzyme
DE19620649A1 (de) 1996-05-22 1997-11-27 Roehm Gmbh Rekombinant hergestellte Lysophospholipase aus Aspergillus
ES2202410T3 (es) 1996-10-04 2004-04-01 Societe Des Produits Nestle S.A. Procedimiento para la preparacion de un agente de aromatizacion para bebidas.
JP3182381B2 (ja) 1996-10-25 2001-07-03 日清製粉株式会社 麺類の機械製麺法
DE19648343C1 (de) * 1996-11-22 1998-02-12 Roehm Gmbh Verfahren zur Herstellung von Backwaren mit verbesserter Frischhaltung
JP3582265B2 (ja) 1996-11-28 2004-10-27 味の素株式会社 改質穀粉及びこれを使用した穀粉加工食品
DK0869167T4 (da) 1996-12-09 2010-03-08 Novozymes As Reduktion af phosphor-indeholdende bestanddele i spiseolier; som omfatter en stor mængde ikke-hydrerbart phosphor, ved anvendelse af en phospholipase, en phospholipase fra en trådsvamp, der har en phospholipase A og/eller B aktivitet
US6103505A (en) 1996-12-09 2000-08-15 Novo Nordisk A/S Method for reducing phosphorus content of edible oils
DE19701348A1 (de) 1997-01-16 1998-07-23 Roehm Gmbh Protein mit Phospholipaseaktivität
US5821102A (en) 1997-01-21 1998-10-13 Novo Nordisk Biotech Inc. Nucleic acids encoding polyeptides having absidia lipase activity
ATE331793T1 (de) 1997-04-09 2006-07-15 Danisco Verwendung von lipase zur verbesserung von teigen und backwaren
EP0882797B1 (en) 1997-06-04 2003-07-16 Loders Croklaan B.V. Preparation of symmetrical triglycerides aba
RU2140751C1 (ru) 1997-06-11 1999-11-10 Ассоциация "Ассоя" Пищевая добавка для производства хлеба и хлебобулочных изделий
JP4121186B2 (ja) 1997-06-16 2008-07-23 株式会社日立製作所 セラミックス管の検査方法及びその装置
ES2234067T5 (es) 1997-07-31 2009-05-01 Dsm Ip Assets B.V. Composicion para mejorar el pan.
EP0913092B1 (en) 1997-10-31 2005-05-11 Amano Enzyme Inc. Dough composition and preparation thereof
US6156548A (en) 1997-12-23 2000-12-05 Novo Nordisk A/S Immobilization of enzymes with a fluidized bed for use in an organic medium
DK1042458T3 (da) 1997-12-23 2004-03-22 Novozymes As Fremgangsmåde til immobilisering af enzymer
AU3247699A (en) 1998-02-17 1999-09-06 Novo Nordisk A/S Lipase variant
WO1999053001A1 (en) 1998-04-08 1999-10-21 Novo Nordisk A/S An enzymatic oil-degumming process
US6815190B1 (en) 1998-04-12 2004-11-09 Novozymes A/S Cutinase variants
ES2188143T5 (es) 1998-04-20 2008-11-01 Novozymes A/S Preparacion de masa y de productos horneados.
US6365204B1 (en) 1998-04-20 2002-04-02 Novozymes Preparation of dough and baked products
US6866837B2 (en) * 1998-06-05 2005-03-15 Mallinckrodt Inc. Radiolabeled peptides for the diagnosis and treatment of breast and prostate tumors and metastases of such tumors
US20030074695A1 (en) 1998-06-24 2003-04-17 Farese Robert V. Plant diacylglycerol O-acyltransferase and uses thereof
DE69941390D1 (de) 1998-07-02 2009-10-22 Calgene Llc Diacylglyzerin-acyltransferase proteine
ATE231186T1 (de) * 1998-07-21 2003-02-15 Danisco Lebensmittel
JP3414652B2 (ja) 1998-10-12 2003-06-09 敷島製パン株式会社 小麦粉焼成品、その製造方法および品質改良剤
US6489154B1 (en) 1998-11-10 2002-12-03 Novozymes Biotech, Inc. Polypeptides having lysophospholipase activity and nucleic acids encoding same
RU2235775C2 (ru) 1998-11-27 2004-09-10 Новозимс А/С Способ получения варианта липолитического фермента и липолитический фермент (варианты)
NZ511340A (en) 1998-11-27 2003-07-25 Novozymes As Lipolytic enzyme variants
US7312062B2 (en) 1998-11-27 2007-12-25 Novozymes A/S Lipolytic enzyme variants
PL199746B1 (pl) 1998-12-04 2008-10-31 Novozymes As Wariant kutynazy macierzystej, sekwencja DNA kodująca wariant kutynazy macierzystej, wektor zawierający sekwencję DNA, transformowana komórka gospodarza, sposób wytwarzania wariantu kutynazy macierzystej, sposób hydrolizy enzymatycznej cyklicznego oligomeru poli(tereftalanu etylenu), sposób barwienia poliestrowej tkaniny lub przędzy, kompozycja detergentowa i sposób polepszania wykończenia specjalnego przędzy lub tkaniny zawierającej PET
JP2000226335A (ja) 1998-12-04 2000-08-15 Amano Pharmaceut Co Ltd 経口用酵素製剤、酵素含有食材及び酵素製剤の服用方法
US6399121B1 (en) 1999-03-16 2002-06-04 Novozymes A/S Process for producing cheese
EP1162889B2 (en) 1999-03-16 2012-10-10 Novozymes A/S Process for producing cheese
WO2000075295A1 (en) * 1999-06-02 2000-12-14 Novozymes A/S Chemically modified lipolytic enzyme
EP1057415A1 (en) 1999-06-04 2000-12-06 Societe Des Produits Nestle S.A. Lipase-treated pasta and manufacturing process
US6254645B1 (en) 1999-08-20 2001-07-03 Genencor International, Inc. Enzymatic modification of the surface of a polyester fiber or article
US6337187B1 (en) 1999-11-05 2002-01-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18891, a novel human lipase
DK1224267T3 (da) 1999-10-14 2011-04-26 Novozymes As Lysophospholipase
US6146869A (en) 1999-10-21 2000-11-14 Novo Nordisk Biotech, Inc. Polypeptides having phospholipase B activity and nucleic acids encoding same
GB2358784B (en) 1999-12-03 2004-06-30 Danisco Method of improving dough and bread quality
WO2001039602A1 (en) 1999-12-03 2001-06-07 Danisco A/S Method of improving dough and bread quality
US7078205B2 (en) * 2000-02-17 2006-07-18 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid sequences encoding melanoma associated antigen molecules, aminotransferase molecules, atpase molecules, acyltransferase molecules, pyridoxal-phosphate dependent enzyme molecules and uses therefor
DE10018787A1 (de) 2000-04-15 2001-05-03 Nikolaus Weber Enzymatisches Verfahren zur Herstellung von Carbonsäure-sterylestern
US20020192792A1 (en) 2000-04-28 2002-12-19 Palle Schneider Laccase mutants
US6506588B2 (en) 2000-06-26 2003-01-14 Novozymes, A/S Lipolytic enzymes
US6432898B1 (en) 2000-10-31 2002-08-13 Novozymes Biotech, Inc. Polypeptides having lipase activity and nucleic acids encoding same
US6511837B2 (en) 2000-06-26 2003-01-28 Novozymes A/S Lipolytic enzymes
US6558715B1 (en) 2000-10-31 2003-05-06 Novozymes Biotech, Inc. Methods for using lipases in baking
US6509182B2 (en) 2000-06-26 2003-01-21 Novozymes A/S Lipolytic enzymes
WO2002002762A1 (fr) 2000-07-03 2002-01-10 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Nouvelle lipase
AU7235901A (en) 2000-07-06 2002-01-21 Novozymes As Method of preparing a dough or a baked product made from a dough, with addition of lipolytic enzymes
EP1309677B2 (en) * 2000-08-11 2012-04-11 Genencor International, Inc. Bacillus transformation, transformants and mutant libraries
CA2421820A1 (en) 2000-09-25 2002-01-03 Novozymes A/S Methods for processing crustacean material
US6660491B2 (en) 2000-11-24 2003-12-09 Ikeda Food Research Co., Ltd. Process for producing dietary sterol fatty acid esters
MXPA03007393A (es) 2001-02-21 2004-03-16 Novozymes As Produccion de productos alimenticios almidonosos.
US6645749B2 (en) 2001-05-25 2003-11-11 Novozymes A/S Lipolytic enzyme
US7630836B2 (en) 2001-05-30 2009-12-08 The Kitasato Institute Polynucleotides
DE50115482D1 (de) * 2001-07-11 2010-06-24 Cognis Ip Man Gmbh Lipase/Acyltransferase aus Candida parapsilosis
ATE342374T1 (de) 2001-08-22 2006-11-15 Haerting Thomas Francis Verfahren zur herstellung von sterol- und stanolestern mittels enzymatischer transesterifikation in lösungsmittel- und wasserfreien medien
DE10142014B4 (de) 2001-08-28 2004-11-11 Degussa Bioactives Deutschland Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin
US7226771B2 (en) * 2002-04-19 2007-06-05 Diversa Corporation Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them
SE0201581D0 (sv) * 2002-05-29 2002-05-29 Scandinavian Biotechnology Res New improved acyltransferase
CN100347278C (zh) 2002-05-30 2007-11-07 科学与工业研究委员会 物理精炼植物油的预处理方法
CA2490944C (en) 2002-07-03 2012-05-15 Novozymes A/S Treatment of dough with a lipoxygenase and a lipolytic enzyme
PL375355A1 (en) 2002-08-19 2005-11-28 Dsm Ip Assets B.V. Novel lipases and uses thereof
CA2403025A1 (en) * 2002-10-08 2004-04-08 Cognis Deutschland Gmbh & Co. Kg Enzymes with lipase/acyltransferase activity
GB2379165A (en) 2002-10-22 2003-03-05 Dsm Nv Animal feed
JP4300839B2 (ja) 2002-11-14 2009-07-22 セイコーエプソン株式会社 画像処理装置、画像処理方法および画像処理プログラム
CN1738899A (zh) 2002-12-11 2006-02-22 诺和酶股份有限公司 洗涤剂组合物
ATE389731T1 (de) 2002-12-12 2008-04-15 Novozymes As Verfahren zur auswahl eines lipolytischen enzyms
AU2003300289A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Novozymes North America, Inc. A method of treating polyester fabrics
GB0301117D0 (en) * 2003-01-17 2003-02-19 Danisco Method
ATE506440T1 (de) 2003-01-17 2011-05-15 Danisco Verfahren zur herstellung eines hydroxysäureesters
MXPA05007654A (es) * 2003-01-17 2005-09-30 Danisco Metodo.
US7955814B2 (en) * 2003-01-17 2011-06-07 Danisco A/S Method
EP1620551B1 (en) 2003-04-28 2013-09-18 Novozymes A/S Phospholipase and method of producing it
WO2004111216A2 (en) 2003-06-19 2004-12-23 Novozymes A/S Phospholipase variants
WO2005005977A2 (en) 2003-06-30 2005-01-20 Applera Corporation Fluorescent phospholipase assays and compositions
CN102796717A (zh) 2003-07-07 2012-11-28 金克克国际有限公司 外切特异性的淀粉酶多肽、编码那些多肽的核酸及其应用
JP4327536B2 (ja) 2003-09-01 2009-09-09 レシップ株式会社 券硬貨投入口及びそれを備えた券硬貨分離装置
ES2361838T3 (es) 2003-12-03 2011-06-22 Danisco Us Inc. Perhidrolasa.
DK1704240T3 (da) 2003-12-24 2008-02-25 Danisco Enzymatisk behandling af olier
US7718408B2 (en) 2003-12-24 2010-05-18 Danisco A/S Method
US7906307B2 (en) * 2003-12-24 2011-03-15 Danisco A/S Variant lipid acyltransferases and methods of making
WO2005066347A1 (en) 2003-12-24 2005-07-21 Danisco A/S Proteins
CN1922301A (zh) 2004-02-24 2007-02-28 诺和酶股份有限公司 液体去污剂中酶的稳定化
GB0405637D0 (en) 2004-03-12 2004-04-21 Danisco Protein
DK1776455T3 (da) 2004-07-16 2015-06-22 Dupont Nutrition Biosci Aps Lipolytisk enzym, anvendelser deraf i fødevareindustrien
ES2271776T3 (es) 2004-08-06 2007-04-16 De Smet Engineering N.V. Proceso de recuperacion de aceite.
WO2006032279A1 (en) 2004-09-21 2006-03-30 Novozymes A/S Subtilases
WO2006039541A2 (en) * 2004-09-30 2006-04-13 Novozymes, Inc. Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same
DE102005039836A1 (de) * 2005-08-23 2007-03-01 Cognis Ip Management Gmbh Sterolesterpulver
EP1788080A1 (en) 2005-11-22 2007-05-23 Süd-Chemie Ag Use of a thermostable phospholipase in the degumming of an oil or fat, and a method for obtaining a thermostable phopholipase
BRPI0720801A2 (pt) * 2007-01-25 2014-09-16 Dupont Nutrition Biosci Aps Produção de um lipídio aciltranfersase a partir de células transformadas de bacillus licheniformis.
CN101200754B (zh) 2007-12-07 2010-06-02 中国农业科学院油料作物研究所 无溶剂系统中固定化全细胞酶催化生产植物甾醇酯的方法
JP5211852B2 (ja) 2008-05-23 2013-06-12 株式会社Ｉｈｉ 加圧浮上装置及び加圧浮上方法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2415873T3 (es) 2013-07-29
EA201000323A1 (ru) 2011-02-28
WO2009024862A3 (en) 2009-05-22
PL2190864T3 (pl) 2013-09-30
DK2190296T3 (en) 2014-12-01
CN101917862A (zh) 2010-12-15
WO2009024862A2 (en) 2009-02-26
DK2190864T3 (da) 2013-05-13
AU2008290273B2 (en) 2014-01-09
US8652809B2 (en) 2014-02-18
CA2695562A1 (en) 2009-02-26
EP2190296A2 (en) 2010-06-02
NZ583006A (en) 2011-06-30
EA018153B1 (ru) 2013-05-30
BRPI0816413A2 (pt) 2019-02-12
CL2008002415A1 (es) 2009-01-02
CA2695562C (en) 2012-04-17
CA2693361A1 (en) 2009-02-26
EP2190864B1 (en) 2013-04-10
BRPI0814971A2 (pt) 2015-02-03
BRPI0814971A8 (pt) 2016-01-26
MX2010001858A (es) 2010-03-11
US20100215803A1 (en) 2010-08-26
AU2008290424A1 (en) 2009-02-26
WO2009024736A1 (en) 2009-02-26
AR067953A1 (es) 2009-10-28
AU2008290273A1 (en) 2009-02-26
EP2190864A1 (en) 2010-06-02
GB0716126D0 (en) 2007-09-26
CN101874039A (zh) 2010-10-27
MX2010001856A (es) 2010-03-11
NZ583047A (en) 2012-03-30
EP2190296B1 (en) 2014-09-24
CN107094883A (zh) 2017-08-29
EA201000327A1 (ru) 2010-10-29
CA2693361C (en) 2015-12-08
ES2524307T3 (es) 2014-12-05
PL2190296T3 (pl) 2015-02-27
AU2008290424B2 (en) 2010-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA08290513B1 (ar) إستقرار اللبن المعالج بالحرارة فوق العادية
CN101978037B (zh) 使用脂质酰基转移酶精炼食用油的方法
US7638293B2 (en) Method
EP2278015B1 (en) Method of producing a carbohydrate ester
US7960150B2 (en) Production of a lipid acyltransferase from transformed Bacillus licheniformis cells
CN102365031A (zh) 生产植物甾醇/植物甾烷醇磷脂酯的方法
CN101606647B (zh) 使用脂质酰基转移酶产生乳化剂的方法
EP2501242B1 (en) Method for producing powder milk