RU2658771C2 - Композиции для борьбы с клещами варроа у пчел - Google Patents
Композиции для борьбы с клещами варроа у пчел Download PDFInfo
- Publication number
- RU2658771C2 RU2658771C2 RU2014144498A RU2014144498A RU2658771C2 RU 2658771 C2 RU2658771 C2 RU 2658771C2 RU 2014144498 A RU2014144498 A RU 2014144498A RU 2014144498 A RU2014144498 A RU 2014144498A RU 2658771 C2 RU2658771 C2 RU 2658771C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- varroa
- nucleic acid
- bees
- bee
- seq
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/90—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for insects, e.g. bees or silkworms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
Abstract
Изобретения касаются нуклеиновокислотного средства, конструкта нуклеиновой кислоты, проглатываемой пчелой композиции и способа профилактики или лечения. Выделенное нуклеиновокислотное средство содержит последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 95, 97, 98, 101, 103 и 106. Конструкт и проглатываемая пчелой композиция содержат указанное нуклеиновокислотное средство. Представленный способ заключается в обеспечении пчелы из улья композицией, включающей эффективное количество указанного нуклеиновокислотного средства. Изобретения позволяют проводить профилактику и лечение заражения улья клещом Varroa destructor. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 5 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение согласно некоторым его вариантам осуществления относится к композиции для борьбы с заражением клещом варроа у пчел.
Уровень техники
Медоносные пчелы, Apis mellifera, необходимы для эффективного опыления сельскохозяйственных культур и, следовательно, критически важны для мирового сельского хозяйства. Медоносные пчелы также производят экономически важные продукты, включая в себя мед и пчелиный воск. Медоносные пчелы подвержены ряду паразитов и патогенов, включая в себя клеща-эктопаразита, Varroa destructor.
Синдром разрушения колоний (CCD) медоносных пчел грозит уничтожением сельского хозяйства США и всего мира. В действительности, в последней вспышке CCD в США зимой 2006-2007 гг., по оценкам 25% или больше 2,4 млн. ульев медоносных пчел было потеряно вследствие CCD. По оценкам 23% пчеловодных хозяйств в США пострадали от CCD в течение зимы 2006-2007 гг., затронув в среднем 45% пчеловодных хозяйств. Зимой 2007-2008 гг. инициативная группа по CCD USDA-ARS оценила, что в общем 36% всех ульев из коммерческих хозяйств были разрушены CCD.
CCD характеризуется быстрой потерей популяции взрослых пчел колонии, при этом мертвых взрослых пчел, как правило, обнаруживают на расстоянии от колонии. На последних стадиях разрушения, матку обслуживают только несколько вновь появившихся взрослых пчел. Разрушенные колонии часто характеризуются существенным запечатанным расплодом и пищевыми запасами. Явление CCD было впервые описано в 2006 г.; тем не менее, пчеловоды отмечали разрушения уникальных колоний, соответствующие CCD, еще в 2004 г. Различные факторы, такие как клещи и инфекционные средства, погодные условия, электромагнитное излучение (антенны сотовой связи), пестициды, плохое питание и стресс, были предложены в качестве причин. В настоящее время борьба с CCD сфокусировалась на борьбе с клещом варроа, санации и удалении пораженных ульев, лечении оппортунистических инфекций (таких как Nosema) и улучшенном питании. Эффективные превентивные меры не были разработаны к настоящему времени.
Клещи варроа паразитируют на куколках и взрослых пчелах и размножаются в гони днях куколок. Клещи используют свои ротовые органы для прокола экзоскелета и питания гемолимфой пчел. В этих местах повреждения в экзоскелете скапливаются такие бактериальные инфекции, как Melissococcus pluton, которая вызывает европейский гнилец пчелиного расплода. В дополнение к их паразитическим эффектам, предполагают, что клещи варроа действуют в качестве переносчиков ряда патогенов медоносных пчел, включая в себя вирус деформации крыла (DWV), вирус Кашмира (KBV), вирус острого паралича пчел (ABPV) и вирус черных маточников (BQCV), и могут ослаблять иммунные системы своих хозяев, делая их подверженными инфекциям. Если оставить необработанными заражения варроа, как правило, приводят к смертности на уровне колонии.
Существующие способы лечения заражений варроа оказались неэффективными, поскольку клещи развивают устойчивость к существующим акарицидам. Кроме того, применение таких акарицидов может вводить вредные химические соединения в мед, который предназначен для потребления человеком.
Заявка на выдачу патента США №20090118214 раскрывает применение дсРНК для профилактики и лечения вирусных инфекций у медоносных пчел.
Сущность изобретения
Согласно аспекту некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрено выделенное нуклеиновокислотное средство, содержащее последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO. 93-105 и 106.
Согласно аспекту некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрен конструкт нуклеиновой кислоты, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую раскрытое в настоящем документе выделенное нуклеиновокислотное средство.
Согласно аспекту некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрена проглатываемая пчелой композиция, содержащая по меньшей мере одно нуклеиновокислотное средство, раскрытое в настоящем документе.
Согласно аспекту некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ профилактики или лечения заражения улья клещом Varroa destructor, включающий введение пчеле из улья эффективного количества по меньшей мере одного нуклеиновокислотного средства, характеризующегося последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO. 93-105 и 106, тем самым обеспечивая профилактику или лечение заражения улья клещом Varroa destructor.
Согласно аспекту некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ снижения подверженности медоносной пчелы синдрому разрушения колоний (CCD), включающий введение медоносной пчеле эффективного количества по меньшей мере одного нуклеиновокислотного средства, выбранного из группы, состоящей из последовательностей нуклеиновых кислот, представленных в SEQ ID NO: 93-95 и 106, тем самым снижая подверженность медоносных пчел синдрому разрушения колоний (CCD).
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция содержит по меньшей мере пять нуклеиновокислотных средств, причем каждое из нуклеиновокислотных средств характеризуется различной последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 93-105 и 106.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция содержит по меньшей мере одно из нуклеиновокислотных средств, характеризующееся последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 93, 96, 100, 104 и 106.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция содержит каждое из нуклеиновокислотных средств, характеризующееся последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 93, 96, 100, 104 и 106.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция находится в форме, выбранной из группы, состоящей из твердой формы и жидкой формы.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция дополнительно содержит белок.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения белок находится в форме пыльцы и/или соевых лепешек.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения жидкая форма выбрана из группы, состоящей из раствора сахарозы и раствора кукурузной патоки.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения медоносная пчела представляет собой пчелу колонии, и при этом введение снижает подверженность колонии пчел синдрому разрушения колоний.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения введение осуществляют путем кормления.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения нуклеиновокислотное средство предусмотрено в проглатываемой пчелой композиции, выбранной из группы, состоящей из жидкой проглатываемой пчелой композиции и твердой проглатываемой пчелой композиции.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция содержит по меньшей мере одно из нуклеиновокислотных средств, характеризующееся последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 93, 96, 100, 104 и 106.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения проглатываемая пчелой композиция содержит по меньшей мере пять нуклеиновокислотных средств, причем каждое средство характеризуется различной последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 93-106.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения нуклеиновокислотное средство вводят в виде конструкта нуклеиновой кислоты.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения нуклеиновокислотные средства представлены в SEQ ID NO: 93, 96, 100, 104 и 106.
Если не определено другое, все использованные в настоящем документе технические и/или научные термины имеют те же значения, которые обычно подразумеваются под ними специалистом в настоящей области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут использоваться в практическом осуществлении или испытании вариантов осуществления настоящего изобретения, примеры способов и/или материалов описаны ниже. В случае конфликта описание настоящего патента, включая в себя определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными, и не предусмотрено, что они являются обязательно ограничивающими.
Краткое описание чертежей
Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения описаны в настоящем документе, только в качестве примера, со ссылкой на прилагаемые графические материалы. Специально ссылаясь на графические материалы в деталях, акцентируют на том, что проиллюстрированные подробные данные представлены исключительно в качестве примера и для целей иллюстративного обсуждения вариантов осуществления настоящего изобретения. В связи с этим, описание настоящего изобретения, рассматриваемое вместе с графическими материалами, делает очевидным для специалистов в настоящей области техники то, как можно осуществить на практике варианты осуществления настоящего изобретения.
На графических материалах:
На фиг. 1 представлено схематическое представление временной динамики различных экспериментов для переноса дсРНК в клещи варроа.
На фиг. 2А-Е представлены фотографии результатов слот-блот анализа присутствия дсРНК-GFP у проглотивших дсРНК-GFP пчел (фигура 2А), у личинок, которых кормят взрослые пчелы (фигура 2 В), у куколок (фигура 2С) и у вновь появившихся пчел (фигура 2D). Присутствие дсРНК-GFP и миРНК, полученной из нее, анализировали с помощью нозерн-блоттинга (фигура 2Е). D=дни после введения дсРНК-GFP в улей.
На фиг. 3 представлена фотография, иллюстрирующая результаты анализа ОТ-ПЦР экстрагированной из варроа РНК в дни, указанные в верхнем ряду (время, как указано на фигуре 1). Числа зеленым (верхний ряд) указывают на особи варроа, которых поместили на проглотивших дсРНК-GFP пчел и числа черным указывают на РНК от варроа, помещенных на контрольных пчел. + = положительный контроль (несущая GFP плазмида).
На фиг. 4 представлена фотография, иллюстрирующая ОТ-ПЦР РНК варроа с праймерами для белка - ингибитора апоптоза (IAP; последовательность 27). М: маркеры размера. Полосы 1-3: матричная РНК варроа из ульев, обработанных дсРНК последовательностей 27. Полоса 4: матричная РНК варроа из контрольных ульев. Полоса 5: положительный контроль (несущая IAP плазмида). Полоса 6: отрицательный контроль (нет матрицы).
На фиг. 5 представлена гистограмма, иллюстрирующая количество варроа на каждую пчелу (взрослые пчелы вместе с личинками внутри запечатанных ячеек) в контрольных ульях и в ульях, обработанных смесью дсРНК I (минимальная обработка) и смесью дсРНК II (максимальная обработка).
На фиг. 6 представлена фотография, иллюстрирующая передачу дсРНК от взрослых пчел клещам варроа. ОТ-ПЦР проводили на РНК от пчел, которых кормили GFP-специфической дсРНК, и необработанных контрольных пчел (полосы В+, В-, соответственно) и РНК от клещей варроа, паразитирующих на обработанных или необработанных контрольных пчелах (полосы V+ и V-, соответственно). Полоса С: положительный контроль (несущая GFP плазмида). М = маркеры размера;
На фиг. 7 представлена фотография, иллюстрирующая передачу дсРНК от взрослых пчел клещам варроа и варроа обратно пчелам. Пчел заражали или клещами варроа, несущими GFP дсРНК или миРНК (V+), или контрольными клещами (V), свободными от GFP-специфической дсРНК или миРНК. В+ представляет собой РНК, амплифицированную из пчел, зараженных получившими GFP-дсРНК или миРНК клещами, В- представляет собой РНК, амплифицированную из пчел, зараженных контрольными клещами, свободными от GFP-специфической дсРНК или миРНК. Полоса С: положительный контроль (несущая GFP плазмида). М = маркеры размера;
На фиг. 8 представлено схематическое представление 60-дневного эксперимента по кормлению специфической для варроа дсРНК, включая в себя схему кормления медоносных пчел и график испытания для экспрессии гена варроа (внизу) и жизненный цикл медоносной пчелы, которой питается клещ варроа;
На фиг. 9A-9F проиллюстрирован сайленсинг экспрессии гена варроа после горизонтального переноса специфической для варроа дсРНК от пчелы клещу варроа. На фиг. 9А-9С представлены графики, представляющие средние значения (±SE) результатов ОТ-ПЦР в реальном времени РНК варроа с зондами в отношении мРНК гена варроа: РНК полимераза III (9А, зонды SEQ ID NO. 137 и 138), IAP1 и IAP2 (9В, зонды SEQ ID NO. 141 и 142) и вакуолярная протонная АТФаза (9С, зонды SEQ ID NO. 139 и 140), соответственно. РНК варроа экстрагировали из клещей, заражающих пчел, которых кормили смесью 5 специфических для варроа дсРНК (смесь I), или из клещей, заражающих пчел, которых кормили смесью 14 специфических для варроа дсРНК (смесь II). Контроли представляют РНК варроа, экстрагированную из клещей, заражающих необработанных пчел, или клещей, заражающих пчел, которых кормили нерелевантной (GFP) дсРНК. На фиг. 9D-9F представлены фотографии, на которых показана полуколичественная ОТ-ПЦР РНК варроа, иллюстрирующая специфический сайленсинг экспрессии гена FAS варроа - ингибитора апоптоза в клещах, заражающих пчел, которых кормили специфической для варроа дсРНК. РНК FAS ингибитора апоптоза амплифицировали (с применением праймеров SEQ ID NO. 145 и 146) в РНК варроа, экстрагированной из клещей, заражающих пчел, которых кормили смесью 5 специфических для варроа дсРНК (9D, смесь I), или из клещей, заражающих пчел, которых кормили смесью 14 специфических для варроа дсРНК (9D, смесь II). Контроли представляют амплификацию РНК FAS ингибитора апоптоза в РНК варроа, экстрагированной из клещей, заражающих необработанных пчел (9Е, необработанный), или клещей, заражающих пчел, которых кормили нерелевантной (9Е, дсРНК-GFP) дсРНК. На фиг. 9F представлен контроль, показывающий амплификацию конститутивного гена актина (с применением праймеров SEQ ID NO. 147 и 148). Числа указывают на число циклов амплификации. - ОТ реакции служат в качестве контролей для примесей ДНК. Отмечают сильный сайленсинг экспрессии FAS ингибитора апоптоза у клещей, заражающих пчел, которых кормили смесью I или смесью II (фиг. 9D);
На фиг. 10 представлен график, показывающий среднее (±SE) общего количества пчел (запечатанный расплод и взрослые особи) у пчел, которых кормили смесью 5 специфических для варроа дсРНК (смесь I) или смесью 14 специфических для варроа дсРНК (смесь II), или контрольных пчел, которых кормили нерелевантной (dsGFP) дсРНК или необработанных пчел (необработанные). Не обнаружили никаких существенных различий;
На фиг. 11 представлен график, показывающий заражение варроа (количество клещей) у обработанных пчел и контролей (как на фиг. 10), показывая значительное снижение подверженности заражению варроа после кормления пчел смесью I или смесью II.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение согласно некоторым его вариантам осуществления относится к способам и композициям для снижения подверженности пчел заражению клещом варроа.
Перед подробным объяснением по меньшей мере одного варианта осуществления настоящего изобретения, следует понимать, что настоящее изобретение не обязательно ограничено в своем применении деталями, представленными в следующем описании или проиллюстрированными примерами. Согласно настоящему изобретению возможны другие варианты осуществления или его можно осуществить на практике или выполнить различными путями.
Пчелы подвержены множеству различных вирусных инфекций. Было показано, что лечение таких инфекций отрицательной регуляцией конкретного вирусного генного продукта успешно в устранении индуцированных вирусами инфекций у пчелы (смотрите заявку на выдачу патента США №20090118214).
Авторы настоящего изобретения в настоящем документе предлагают лечение заражений клещом варроа у пчел путем отрицательной регуляции конкретных генных продуктов клеща варроа.
Клещи варроа паразитируют на куколках и взрослых пчелах и размножаются в гонидиях куколок. Клещи используют свои ротовые органы для прокола экзоскелета и питаются гемолимфой пчел. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что полинуклеотидные средства, введенные пчелам для лечения заражений клещом варроа, присутствовали в гемолимфе пчел, тем самым становясь доступными клещу.
Авторы настоящего изобретения показали, что последовательности дсРНК могут успешно передаваться клещам варроа (фигуры 6 и 7), что дсРНК может служить для отрицательной регуляции экспрессии конкретного гена у клеща варроа (9А-9Е) и дополнительно, что нацеленное воздействие на конкретные гены для отрицательной регуляции может привести к снижению числа клещей варроа (фигура 11). Кроме того, авторы настоящего изобретения показали, что последовательности РНК, переданные клещам от пчел, которых кормили дсРНК, могли передаваться обратно необработанным, "нативным" пчелам посредством заражения варроа (фигура 7).
Таким образом, согласно одному аспекту настоящего изобретения предусмотрен способ профилактики или лечения заражения пчелы клещом Varroa destructor, включающий введение пчеле из улья эффективного количества по меньшей мере одного нуклеиновокислотного средства, характеризующегося последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO. 93-105 и 106, тем самым обеспечивая профилактику или лечение заражения пчелы клещом Varroa destructor.
Используемый в настоящем документе термин "пчела" относится как к взрослой пчеле, так и ее ячейкам с куколками. Согласно одному варианту осуществления пчела находится в улье.
Взрослую пчелу определяют как любое из насекомых с несколькими крыльями, волосатым брюшком, как правило, с жалом надсемейства Apoidea в отряде Hymenoptera, включая в себя как ведущие одиночный образ жизни виды, так социальные виды, и характеризующихся сосательными и жевательными ротовыми аппаратами для сбора нектара и пыльцы. Примеры видов пчел включают в себя без ограничения Apis, Bombus, Trigona, Osmia и подобное. Согласно одному варианту осуществления пчелы включают в себя без ограничения шмелей (Bombus terrestris), медоносных пчел (Apis mellifera) (включая в себя пчел-сборщиц и ульевых пчел) и Apis cerana.
Согласно одному варианту осуществления пчела представляет собой часть колонии.
Термин "колония" относится к популяции пчел, содержащей десятки, как правило, до нескольких десятков тысяч пчел, которые кооперируются для построения гнезд, сбора пищи и вывода расплода. Колония в норме содержит одну матку, при этом остальные пчелы являются либо "рабочими" (самки), либо "трутнями" (самцы). Социальная структура колонии поддерживается маткой и рабочими пчелами и зависит от эффективной системы коммуникации. Разделение труда сред касты рабочих пчел в первую очередь зависит от возраста пчелы, но варьирует в зависимости от потребностей колонии. Размножение и сила колонии зависят от матки, количества пищевых запасов и размера рабочей силы. Медоносные пчелы также могут быть разделены на категории: "ульевые пчелы", как правило, в течение первой части жизненного цикла рабочих пчел, в течение которой "ульевая пчела" выполняет задачи в пределах улья, и "пчела-сборщица", в течение последней части жизненного цикла пчелы, в ходе которой "сборщица" определяет местонахождение и собирает пыльцу и нектар снаружи улья и приносит нектар или пыльцу в улей для потребления и запасания.
Согласно настоящему аспекту настоящего изобретения средства согласно настоящему изобретению используют для предотвращения существования клеща Varroa destructor в качестве паразита на пчеле или ее личинках.
Фраза "клещ Varroa destructor " относится к наружному паразитическому клещу, который поражает медоносных пчел Apis cerana и Apis mellifera. Клещ может присутствовать на стадии взрослой особи, питаясь на пчеле, или на стадии личинки, внутри гонидия медоносной пчелы.
Как упоминалось, средства настоящего изобретения способны отрицательно регулировать экспрессию генного продукта клеща Varroa destructor.
Используемая в настоящем документе фраза "генный продукт" относится к молекуле РНК или белку.
Примеры последовательностей, представляющих целевые сегменты гена варроа, которые могут находиться под направленным воздействием, включают в себя без ограничения последовательности нуклеиновых кислот генов варроа, фланкированные последовательностями промотора Т7 в следующих последовательностях (длина специфической для варроа последовательности указана в скобках):
SEQ ID NO: 93 - ген варроа, гомологичный α-тубулину (411 оснований); SEQ ID NO: 94 - ген варроа, гомологичный α-тубулину (277 оснований); SEQ ID NO: 95 - ген варроа, гомологичный α-тубулину (329 оснований); SEQ ID NO: 96 - ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (380 оснований); SEQ ID NO: 97 - ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (426 оснований); SEQ ID NO: 98 - ген варроа, гомологичный РНК полимеразе II (366 оснований); SEQ ID NO: 99 - ген варроа, гомологичный РНК полимеразе I (324 основания); SEQ ID NO: 100 - ген варроа, гомологичный вакуолярной транслоцирующей АТФазе (311 оснований); SEQ ID NO: 101 - ген варроа, гомологичный вакуолярной протонной АТФазе (210 оснований); SEQ ID NO: 102 - ген варроа, гомологичный Na+/K+ АТФазе (307 оснований); SEQ ID NO: 103 - ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза IAP (263 основания); SEQ ID NO: 104 - ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза FAS (277 оснований); SEQ ID NO: 105 - ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза IAP 1 и IAP2 (263 основания); SEQ ID NO: 106 - ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза IAP 1 и IAP2, обратная ориентация (282 основания).
Дополнительные генные продукты, которые могут отрицательно регулироваться согласно настоящему аспекту настоящего изобретения, включают в себя без ограничения субъединицу 2 НАДФ дегидрогеназы; - регистрационный номер Genbank NC 004454; АТФ субъединицу 8 синтетазы; - NC_004454; субъединицу 6 АТФ синтетазы; - NC 004454; ген натриевого канала - регистрационный номер Genbank FJ216963; субъединицу I цитохромоксидазы - регистрационный номер Genbank EF025469.
SEQ ID NO: 1. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 1); SEQ ID NO: 2. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 2); SEQ ID NO: 3. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 3); SEQ ID NO: 4. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 4); SEQ ID NO: 5. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 5); SEQ ID NO: 6. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 6); SEQ ID NO: 7. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 7); SEQ ID NO: 8. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 8); SEQ ID NO: 9. Ген варроа, гомологичный субъединице А АТФазы (сегмент 9); SEQ ID NO: 10. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе I (сегмент 1); SEQ ID NO: 11. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе I (сегмент 2); SEQ ID NO: 12. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе I (сегмент 3); SEQ ID NO: 13. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 1); SEQ ID NO: 14. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 2); SEQ ID NO: 15. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 3); SEQ ID NO: 16. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 4); SEQ ID NO: 17. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 5); SEQ ID NO: 18. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 6); SEQ ID NO: 19. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 7) SEQ ID NO: 20. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 8); SEQ ID NO: 21. Ген варроа, гомологичный РНК полимеразе III (сегмент 9); SEQ ID NO: 22. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 1); SEQ ID NO: 23. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 2); SEQ ID NO: 24. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 3); SEQ ID NO: 25. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 4); SEQ ID NO: 26. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 5); SEQ ID NO: 27. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 6); SEQ ID NO: 28. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 7); SEQ ID NO: 29. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза (IAP; сегмент 8); SEQ ID NO: 30. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза FAS (сегмент 1); SEQ ID NO: 31. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза FAS (сегмент 2); SEQ ID NO: 32. Ген варроа, гомологичный ингибитору апоптоза FAS (сегмент 3); SEQ ID NO: 33. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 1); SEQ ID NO: 34. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 2); SEQ ID NO: 35. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 3); SEQ ID NO: 36. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 4); SEQ ID NO: 37. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 5); SEQ ID NO: 38. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 6); SEQ ID NO: 39. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 7); SEQ ID NO: 40. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 8); SEQ ID NO: 41. Ген варроа, гомологичный α-тубулину (сегмент 9); SEQ ID NO: 42. субъединица 2 НАДФ дегидрогеназы; (NC_004454): основания 709-974; SEQ ID NO: 43. субъединица 8 АТФ синтетазы; (NC_004454): основания 3545-3643; SEQ ID NO: 44. Белок натриевого канала (AY259834): основания 3336-3836.
Согласно варианту осуществления настоящего изобретения полинуклеотидное средство является специфическим для целевой РНК и перекрестно не ингибирует или подвергает сайленсингу ген или сплайс-вариант, который проявляет 99% или меньше глобальной гомологии относительно целевого гена, например, меньше чем 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81% глобальной гомологии относительно целевого гена.
Полинуклеотидное средство предпочтительно содержит последовательность, по меньшей мере на 90% гомологичную SEQ ID NO: 93-105 и 106, более предпочтительно по меньшей мере на 91% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 91% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 92% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 93% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 94% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 95% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 96% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 97% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 98% гомологичную, более предпочтительно по меньшей мере на 99% гомологичную SEQ ID NO: 93-105 и 106.
Следует понимать, что нацеленному воздействию может подвергаться больше одного гена, чтобы сделать максимальным цитотоксический эффект на клещей варроа.
Таким образом, согласно одному варианту осуществления следующая группа генов подвергается нацеленному воздействию - субъединица А АТФазы, РНК полимераза III, ингибитор апоптоза (IAP), ингибитор апоптоза FAS и α-тубулин (например с применением средств нуклеиновой кислоты, характеризующихся последовательностью, представленной в SEQ ID NO. 1, 13, 27, 30 и 39, или средств нуклеиновой кислоты, характеризующихся последовательностью, представленной в SEQ ID NO. 93, 96, 100, 104 и 106).
Согласно другому варианту осуществления следующая группа генов подвергается нацеленному воздействию - субъединица А АТФазы, РНК полимераза I, РНК полимераза III, ингибитор апоптоза (IAP), ингибитор апоптоза FAS и α-тубулин.
Следует понимать, что наряду с отрицательной регуляцией ряда генов, настоящее изобретение дополнительно включает применение ряда средств для отрицательной регуляции одного и того же гена (например, ряд дсРНК, каждая из которых гибридизируется с различным сегментом одного и того же гена).
Согласно одному варианту осуществления используют два полинуклеотидных средства из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют три полинуклеотидных средства из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют четыре полинуклеотидных средства из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют пять полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют шесть полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют семь полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют восемь полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют девять полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют десять полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют одиннадцать полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют двенадцать полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют тринадцать полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют каждое из полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106.
Согласно одному варианту осуществления используют пять полинуклеотидных средств из группы SEQ ID NO: 93-106 - например, SEQ ID NO: 93, 96, 100, 104 и 106.
Инструменты, которые способны идентифицировать видоспецифические последовательности, могут использоваться с этой целью - например, BLASTN и другие подобные компьютерные программы.
Используемый в настоящем документе термин "отрицательная регуляция экспрессии" относится к индукции, прямо или опосредованно, снижения транскрипции требуемого гена, снижения количества, стабильности или транслируемости продуктов транскрипции (например, РНК) гена и/или снижения трансляции полипептида(ов), кодируемого(ых) требуемым геном.
Отрицательная регуляция экспрессии генного продукта клеща Varroa destructor может подвергаться мониторингу, например, путем прямого обнаружения генных транскриптов (например, с помощью ПЦР), путем обнаружения полипептида(ов), кодируемого(ых) геном или патогенной РНК пчелы (например, с помощью вестерн-блоттинга или иммунопреципитации), путем обнаружения биологической активности полипептидов, кодируемых геном (например, каталитическая активность, связывание с лигандом и подобное) или путем мониторинга изменений у клеща Varroa destructor (например, сниженная пролиферация клеща, сниженная вирулентность клеща, сниженная подвижность клеща и т.д.) и путем исследования инфекционности/патогенности пчелы.
Полинуклеотидные отрицательно регулирующие средства согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии с любым способом синтеза полинуклеотидов, известным в настоящей области техники, таким как ферментативный синтез или твердофазный синтез. Устройство и реагенты для проведения твердофазного синтеза коммерчески доступны, например, от Applied Biosystems. Также можно использовать любые другие средства для такого синтеза; фактический синтез полинуклеотидов находится в компетенции специалиста в настоящей области техники и может быть осуществлен посредством общепринятых методик, подробно изложенных, например, в "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988) и "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M.J., ed. (1984) с использованием твердофазной химии, например, цианоэтилфосфорамидита с последующим снятием защитных групп, деминерализацией и очищением, например, с помощью автоматизированного способа с применением тритил-она или ВЭЖХ.
Полинуклеотидные средства согласно настоящему изобретению могут содержать гетероциклические нуклеозиды, состоящие из пуриновых и пиримидиновых оснований, связанных в направлении 3' - 5' фосфодиэфирной связью.
Предпочтительно используемые полинуклеотидные средства представляют собой средства с модифицированным каркасом, межнуклеозидными связями или основаниями, как в широком смысле описано в настоящем документе ниже.
Конкретные примеры предпочтительных полинуклеотидных средств, применимых согласно настоящему аспекту настоящего изобретения, включают в себя полинуклеотидные средства, содержащие модифицированные каркасы или не встречающиеся в природе межнуклеозидные связи. Полинуклеотидные средства, характеризующиеся модифицированными каркасами, включают в себя средства, которые сохраняют атом фосфора в каркасе, как раскрыто в патентах США №№:4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306;5550111;5563253; 5571799; 5587361 и 5625050.
Предпочтительные модифицированные полинуклеотидные каркасы включают в себя, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, сложные фосфотриэфиры, сложные аминоалкилфосфотриэфиры, метил- и другие алкилфосфонаты, включая в себя 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая в себя 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, характеризующиеся нормальными 3-5' связями, их 2-5' связанные аналоги, и соединения, характеризующиеся инвертированной полярностью, причем соседние пары нуклеозидных звеньев связаны 3'-5' - 5'-3' или 2'-5' - 5'-2'. Также можно использовать различные соли, смешанные соли и формы свободных кислот.
Альтернативно, модифицированные полинуклеотидные каркасы, которые не включают в себя атом фосфора, характеризуются каркасами, которые образованы короткоцепочечными алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями, смешанными гетероатомными и алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями или одной или несколькими короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межнуклеозидными связями. Они включают в себя каркасы, характеризующиеся морфолино связями (образованными частично из части сахара нуклеозида); силоксановые каркасы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые каркасы; формацетильные и тиоформацетильные каркасы; метиленформацетильные и тиоформацетильные каркасы; содержащие алкен каркасы; сульфаматные каркасы; метилениминовые и метиленгидразиновые каркасы; сульфонатные и сульфонамидные каркасы; амидные каркасы; и другие, характеризующиеся смешанными N, О, S и СН2 составными частями, раскрытыми в патентах США №№5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 5264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439.
Другие полинуклеотидные средства, которые можно использовать согласно настоящему изобретению, представляют собой полинуклеотидные средства, модифицированные как в отношении сахара, так и в отношении межнуклеозидной связи, т.е. каркас нуклеотидных звеньев заменен новыми группами. Основные звенья сохраняют для комплементарности с соответствующей полинуклеотидной мишенью. Пример такого полинуклеотидного миметика включает в себя пептидную нуклеиновую кислоту (PNA). Полинуклеотид PNA относится к полинуклеотиду, в котором сахарный каркас замещен содержащим амид каркасом, в частности, аминоэтилглициновым каркасом. Основания сохраняются и связываются напрямую или опосредовано с аза-атомами азота амидной части каркаса. Патенты США, которые раскрывают получение соединений PNA, включают в себя без ограничения патенты США №№5539082; 5714331 и 5719262, каждый из которых включен посредством ссылки в настоящий документ. Другие модификации каркасов, которые можно использовать в настоящем изобретении, раскрыты в патенте США №6303374.
Полинуклеотидные средства согласно настоящему изобретению также могут включать в себя модификации или замещения оснований. Используемый в настоящем документе термин "немодифицированные" или "природные" основания включают в себя пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), и пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U). Модифицированные основания включают в себя без ограничения другие синтетические и природные основания, такие как 5-метилцитозин (5-me-С), 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галоурацил и цитозин, 5-пропинил-урацил и -цитозин, 6-азо-урацил, -цитозин и -тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-гало, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-гало, в частности, 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин и 3-деазагуанин и 3-деазааденин. Дополнительные основания включают в себя основания, раскрытые в патенте США №3687808, основания, раскрытые в The Concise Encyclopedia Of Polymer Science and Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. I., ed. John Wiley & Sons, 1990, основания, раскрытые Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, и основания, раскрытые Sanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research и Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, Β., éd., CRC Press, 1993. Такие основания особенно применимы для увеличения аффинности связывания олигомерных соединений согласно настоящему изобретению. Они включают в себя 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2, N-6 и O-6 замещенные пурины, включая в себя 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Было показано, что 5-метилцитозиновые замещения увеличивают стабильность двойной спирали нуклеиновых кислот на 0,6-1,2°С. [Sanghvi YS et al. (1993) Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton 276-278] и в настоящее время представляют собой предпочтительные замещения оснований, даже более конкретно в комбинации с 2-О-метоксиэтильными модификациями сахара.
После синтеза полинуклеотидные средства согласно настоящему изобретению можно необязательно очистить. Например, полинуклеотиды можно очистить из смеси экстракцией с растворителем или смолой, осаждением, электрофорезом, хроматографией или их комбинацией. Альтернативно, полинуклеотиды можно использовать без очистки или с минимальной очисткой во избежание потерь вследствие обработки образца. Полинуклеотиды можно высушить для хранения или растворить в водном растворе. Раствор может содержать буферы или соли для стимуляции отжига и/или стабилизации цепей двойной спирали.
Следует понимать, что полинуклеотидное средство согласно настоящему изобретению может быть предоставлено per se, или в виде конструкта нуклеиновой кислоты, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полинуклеотидное средство.
Как правило, конструкт нуклеиновой кислоты содержит последовательность промотора, который является функциональным в клетке-хозяине, как описано в настоящем документе ниже.
Полинуклеотидные последовательности согласно настоящему изобретению под контролем функционально связанной промоторной последовательности, могут дополнительно быть фланкированы дополнительными последовательностями, которые преимущественно влияют на их транскрипцию и/или стабильность полученного транскрипта. Такие последовательности, как правило, расположены выше против хода транскрипции промотора и/или ниже по ходу транскрипции 3' конца конструкта экспрессии.
Термин "функционально связанный", используемый со ссылкой на регуляторную последовательность и структурную нуклеотидную последовательность, означает, что регуляторная последовательность вызывает регулируемую экспрессию связанной с ней структурной нуклеотидной последовательности. "Регуляторные последовательности" или "элементы контроля" относятся к нуклеотидным последовательностям, расположенным выше против хода транскрипции, в пределах или ниже по ходу транскрипции структурной нуклеотидной последовательности, и которые оказывают влияние на временные характеристики и уровень или количество транскрипции, процессинг или стабильность РНК или трансляцию связанной структурной нуклеотидной последовательности. Регуляторные последовательности могут включать в себя промоторы, трансляционные лидерные последовательности, интроны, энхансеры, структуры типа "петля-на-стебле", связывающие последовательности-репрессоры, терминирующие последовательности, последовательности паузы, последовательности распознавания полиаденилирования и подобное.
Следует понимать, что нуклеиновокислотные средства могут быть доставлены клещам варроа разнообразными путями.
Согласно одному варианту осуществления нуклеиновокислотные средства могут быть доставлены напрямую клещам (например, путем опрыскивания зараженного улья). Нуклеиновокислотные средства или конструкты, кодирующие их, могут проникать в организмы клещей путем диффузии. Согласно указанному варианту осуществления промотор конструкта нуклеиновой кислоты, как правило, является функциональным в клетках клеща.
Следует понимать, что поскольку клещи варроа используют свои ротовые органы для прокола пчелиного экзоскелета и питаются гемолимфой пчелы, настоящее изобретение включает доставку полинуклеотидных средств согласно настоящему изобретению пчелам, за счет чего они начинают присутствовать в гемолимфе пчелы, тем самым становясь доступными клещу. Таким образом, согласно другому варианту осуществления нуклеиновокислотные средства доставляются опосредованно клещам (например, через пчелу). Согласно указанному варианту осуществления промотор конструкта нуклеиновой кислоты, как правило, является функциональным в клетках пчелы.
Согласно одному варианту осуществления нуклеиновокислотные средства доставляют пчелам путем опрыскивания. Нуклеиновокислотные средства или кодирующие их конструкты могут проникать в организмы пчел путем диффузии.
Согласно другому варианту осуществления нуклеиновокислотные средства доставляют пчелам через их еду. Авторы настоящего изобретения считают, что после проглатывания средств нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению средства будут присутствовать в гемолимфе пчелы, за счет чего они становятся доступными клещу варроа.
Таким образом, полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут быть синтезированы in vitro и добавлены в пищу. Например, двухцепочечная РНК может быть синтезирована путем добавления двух противоположно направленных промоторов (например, промоторов Т7; SEQ ID NO: 48 и 49) к концам генных сегментов, причем SEQ ID NO: 48 помещают непосредственно 5' относительно гена и SEQ ID NO: 49 помещают непосредственно 3' относительно генного сегмента. дсРНК могут затем транскрибировать in vitro с помощью РНК полимеразы Т7.
Примеры последовательностей для синтеза дсРНК согласно вариантам осуществления настоящего изобретения предусмотрены в SEQ ID NO: 50-91 и 93-106.
Примеры праймеров для синтеза дсРНК согласно вариантам осуществления настоящего изобретения предусмотрены в SEQ ID NO: 107-134 (каждая пара представляет прямой и обратный праймер, смотрите таблицу 1 в разделе примеров).
Согласно некоторым вариантам осуществления нуклеиновокислотные средства, предусмотренные в настоящем документе, могут быть функционально связаны с проникающим в клетку пептидом. Используемый в настоящем документе термин "проникающий в клетку пептид" представляет собой пептид, который содержит короткую (приблизительно 12-30 остатков) аминокислотную последовательность или функциональный мотив, который обеспечивает свойства энергонезависимого (т.е. не эндоцитозного) переноса, связанные с транспортом проникающего через мембрану комплекса через плазматическую и/или ядерную мембраны клетки. Проникающий в клетку пептид, используемый в проникающем через мембрану комплексе согласно настоящему изобретению, предпочтительно содержит по меньшей мере один нефункциональный остаток цистеина, который либо является свободным, либо дериватизирован для образования дисульфидной связи с двухцепочечной рибонуклеиновой кислотой, которая была модифицирована для такого связывания. Репрезентативные аминокислотные мотивы, придающие такие свойства, перечислены в патенте США №6348185, содержание которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Проникающие в клетку пептиды согласно настоящему изобретению предпочтительно включают в себя без ограничения пенетратин, транспортан, plsl, ТАТ(48-60), pVEC, MTS и MAP.
Как подробно описано в настоящем документе кормление пчел представляет собой общепринятую практику среди пчеловодов для обеспечения как пищевых, так и других, например, относящихся к подкормкам нужд. Пчелы, как правило, питаются медом и пыльцой, но было установлено, что они также питаются искусственными пищевыми продуктами. Пчел можно кормить различными кормами, включая в себя без ограничения Wheast (молочные дрожжи, растущие на зернистом твороге), соевую муку, дрожжи (например, пивные дрожжи, дрожжи торула) и дрожжевые продукты, продукты, потребляемые отдельно или в комбинации и соевую муку, потребляемую в качестве сухой смеси или влажной лепешки внутри улья или в виде сухой смеси в открытых кормушках за пределами улья. Также применим сахар или сахарный сироп. Добавление 10-12 процентов пыльцы к добавке, которой кормят пчел, улучшает поедаемость. Добавление 25-30 процентов пыльцы улучшает качество и количество незаменимых питательных веществ, которые необходимы пчелам для жизненной активности.
Тростниковый или свекольный сахар, изомеризованная кукурузная патока, и сахарный сироп 50 типа представляют собой удовлетворительные заменители меда в естественной диете медоносных пчел. Последние два могут быть поставлены пчелам только в виде жидкости.
Жидкий корм может быть доставлен пчелам внутрь улья, например, любым из следующих способов: контейнер с фрикционной крышкой, соты внутри гнездовой секции, кормушка на разделительном дне, летковая кормушка и т.д. Сухой сахар можно давать, помещая один или два фунта на перевернутый внутренний колпачок. Подача воды должна быть доступна пчелам все время. Согласно одному варианту осуществления предусмотрены поддон или лотки, в которых находятся не тонущие опоры - такие как древесные стружки, кора пробкового дерева или пластиковая губка. Подробные описания подкормок для пчел можно найти, например, в публикации USDA Standifer, et al 1977, имеющей название "Supplemental Feeding of Honey Bee Colonies" (USDA, Agriculture Information Bulletin No. 413).
Следует понимать, что клещи варроа являются причиной появления ран в экзоскелете пчел. В таких поврежденных местах скапливаются такие бактериальные инфекции, как Melissococcus pluton, которая вызывает европейский гнилец пчелиного расплода. В дополнение к их паразитическим эффектам, предполагают, что клещи варроа действуют в качестве переносчиков ряда патогенов медоносных пчел, включая в себя вирус деформации крыла (DWV), вирус Кашмира (KBV), вирус острого паралича пчел (ABPV) и вирус черных маточников (BQCV), и могут ослаблять иммунные системы своих хозяев, делая их подверженными инфекциям.
Таким образом, уничтожая клещей (или предотвращая их размножение), средства согласно настоящему изобретению могут применяться для профилактики и/или лечения таких бактериальных инфекций, как Melissococcus pluton, и вирусных инфекций, вызванных перечисленными выше вирусами.
Поскольку считают, что заражение клещом варроа и вирусными инфекциями отвечает за синдром разрушения колоний (CCD), настоящие средства также могут использоваться для профилактики или снижения подверженности колонии пчел CCD.
Следует понимать, что в дополнение к кормлению олигонуклеотидами и/или полинуклеотидами для снижения инфекции и заражения пчел патогенами, осуществление правильной санации (например, воздержание от повторного использования зараженных ульев) может усиливать эффективность лечения и профилактики инфекций.
Используемый в настоящем документе термин "приблизительно" относится к ± 10%.
Термины "содержит", "содержащий", "включает в себя", "включая в себя", "характеризующийся" и их сочетания означают "включая в себя без ограничения". Этот термин охватывает термины "состоящий из" и "состоящий по существу из".
Фраза "состоящий по существу из" означает, что композиция или способ может включать в себя дополнительные ингредиенты и/или стадии, но только если дополнительные ингредиенты и/или стадии существенно не изменяют основные и новые характеристики заявленной композиции или способа.
Используемые в настоящем документе формы единственного числа включают в себя ссылки на формы множественного числа, если контекст ясно не диктует иное. Например, термин "соединение" или "по меньшей мере одно соединение" может включать в себя множество соединений, включая в себя их смеси.
Используемый в настоящем документе термин "способ" относится к методам, средствам, техникам и процедурам для осуществления поставленной задачи, включая в себя без ограничения такие методы, средства, техники и процедуры, которые либо являются известными, либо легко разрабатываются из известных методов, средств, техник и процедур специалистами в химической, фармакологической, биологической, биохимической и медицинской областях техники.
Используемый в настоящем документе термин "лечение" включает в себя устранение, существенное ингибирование, замедление или изменение на противоположное прогрессирование состояния, существенное улучшение клинических или эстетических симптомов состояния или существенную профилактику появления клинических или эстетических симптомов состояния.
Следует понимать, что определенные признаки настоящего изобретения, которые, для ясности, описаны в контексте отдельных вариантов осуществления, также могут быть предусмотрены в комбинации в одном варианте осуществления. Напротив, различные признаки настоящего изобретения, которые, для краткости, описаны в контексте одного варианта осуществления, также могут быть предусмотрены отдельно или в любой приемлемой подкомбинации или приемлемым образом в любом другом описанном варианте осуществления настоящего изобретения. Определенные признаки, описанные в контексте различных вариантов осуществления, не должны рассматриваться в качестве основных признаков указанных вариантов осуществления, если только вариант осуществления не является функциональным без указанных элементов.
Различные варианты осуществления и аспекты настоящего изобретения, изложенные выше в настоящем документе и заявленные в формуле изобретения ниже, находят экспериментальную поддержку в следующих примерах.
ПРИМЕРЫ
Теперб будут рассмотрены следующие примеры, которые вместе с вышеприведенными описаниями иллюстрируют некоторые варианты осуществления настоящего изобретения неограничивающим образом.
Как правило, используемая в настоящем документе номенклатура и используемые в настоящем изобретении лабораторные процедуры включают в себя молекулярные, биохимические, микробиологические техники и техники рекомбинантной ДНК. Такие техники подробно объясняются в литературе. Смотрите, например, "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R.M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); методики, представленные в патентах США №№4666828; 4683202; 4801531; 5192659 и 5272057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J.E., ed. (1994); "Culture of Animal Cells - A Manual of Basic Technique" by Freshney, Wiley-Liss, N.Y. (1994), Third Edition; "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W.H. Freeman and Co., New York (1980); доступные иммуноанализы подробно описаны патентной и научной литературе, смотрите, например, патенты США №№3791932; 3839153; 3850752; 3850578; 3853987; 3867517; 3879262; 3901654; 3935074; 3984533; 3996345; 4034074; 4098876; 4879219; 5011771 и 5281521; " Oligonucleotide Synthesis" Gait, M.J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B.D., and Higgins S.J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B.D., and Higgins S. J., eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R.I., ed. (1986); "Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, В., (1984) and "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); все из которых включены посредством ссылки, как если бы они быть полностью представлены в настоящем документе. Другие общие ссылки предусмотрены по всему настоящему документу. Считается, что изложенные в них процедуры хорошо известны в настоящей области техники и предусмотрены для удобства читателя. Вся содержащаяся в них информация включена в настоящий документ посредством ссылки.
Пример 1
Кормление специфической для варроа дсРНК предотвращает заражение клещом варроа
Для определения эффективности проглоченной дсРНК на заражение клещом варроа медоносных пчел обеспечивают специфической для клеща варроа и контрольной дсРНК в корме в течение 7 дней перед и 2 дней после контакта с клещом варроа, как проиллюстрировано на фигуре 1. Подсчитывают количества мертвых клещей варроа на экспериментальный улей, и образцы живых и мертвых варроа собирают для молекулярного анализа.
Материалы и способы
Организация колоний в мини-улье: Молодых, возрастом приблизительно 2 месяца маток, вместе с приблизительно 200 рабочими пчелами собирают из ульев на местной пасеке. Пчел переносят в мини-ульи, оснащенные одним мини-сотом, который был ранее построены регулярным ульем. Все мини-ульи закрывают и помещают в помещение с контролируемой температурой (30°С).
Получение дсРНК: Последовательности клеща варроа клонируют в плазмиду между двумя противоположно направленными промоторами Т7. После размножения плазмидной ДНК вирусные фрагменты, включая в себя промоторы Т7, вырезают и очищают гель-фильтрацией. Они служат в качестве матриц для Т7-направленной in vitro транскрипции (MEGAscript™, Ambion, Austin TX). Продукт реакции подвергают обработке ДНазой с последующей фенольной экстракцией и осаждением в этаноле. Конечный препарат растворяют в не содержащей нуклеазы воде.
Кормление дсРНК в мини-ульях: 5 г лепешки пыльцевой подкормки помещают сверху каждого сота и 10 мл 50% раствор сахарозы вводят в улей в стерильной чашке Петри каждую ночь. Кормление продолжают в течение 9 дней и впоследствии только те ульи, в которых матки начали откладывать яйца, включают в испытание.
После организации активных ульев (матки, откладывающие яйца), некоторые из мини-ульев дополнительно снабжают специфической для клеща варроа (ген ингибитора апоптоза (IAP) (SEQ ID NO: 27) или неспецифической контрольной (например, GFP SEQ ID NO: 91) дсРНК, которую добавляют к 10 мл 50% раствора сахара, доставленного в ульи, доводя до приблизительно 1 мкг дсРНК на корм на одну пчелу, предполагая, что все пчелы потребляют одинаковое количество раствора сахарозы. Кормление дсРНК продолжают в течение шести дней.
Заражение мини-ульев клещом варроа: Через 7 дней после кормления в активных ульях некоторые колонии приводят в контакт с популяцией клещей варроа. После этого лечение с помощью дсРНК продолжают в течение дополнительных 2 дней. Образцы живых и мертвых пчел (личинки и взрослые особи) собирают ежедневно из каждого мини-улья после введения популяции клеща варроа в течение 32 последующих дней. Каждую собранную пчелу замораживают в жидком азоте и хранят при -70°С до проведения молекулярного анализа. Жизнеспособность колоний подвергают мониторингу, открывая ульи (без окуривания), вынимая мини-соты и фотографируя мини-соты с обеих сторон. Соты улья фотографируют ежедневно и количества оставшихся живых пчел подвергают мониторингу. Фотографии загружают в компьютер и подсчитывают общее количество пчел для каждого мини-улья.
Для исследования токсичности дсРНК другую группу ульев обеспечивают специфической для клеща варроа дсРНК, но ее не приводят в контакт с популяцией клеща варроа. Два набора ульев служат в качестве дополнительных контролей: ульи, которые не обрабатывают с помощью дсРНК и не инокулируют клещами варроа, и ульи, которые не обрабатывают с помощью дсРНК, но инокулируют клещами варроа.
Анализ ОТ-ПЦР:
Экстракция нуклеиновых кислот: Общую РНК экстрагируют из сохраненных пчел с применением способа TRIREAGENT (Sigma, St. Louis МО, USA). Кратко, РНК экстрагируют путем осаждения и разделения путем центрифугирования, затем ресуспендируют в растворе RNAsecure.
ОТ-ПЦР в реальном времени: Измеренные количества РНК (100 нг для анализов вирусной экспрессии и 100 пг для внутренних контролей 18S рРНК) подвергают одностадийной ОТ-ПЦР с применением мастер-микса SYBR Green PCR с обратной транскриптазой Taqman (Applied Biosystems, Foster City, CA). ОТ-ПЦР в реальном времени проводят в GeneAmp PCR System 5700 (Applied Biosystems). Реакции, проведенные без обратной транскриптазы или без матрицы, не должны давать в результате какой-либо продукт.
Анализ нозерн-блоттинг: Общую РНК экстрагируют из обработанных и контрольных пчел. Формальдегид добавляют к РНК до 1,8% и нагревают до 65°С. РНК, 15 мкг на полосу подвергают электрофорезу на 1,2% агарозном геле при 70 В, 4°С с перемешиванием. Описанный ранее амплифицированный продукт РНК клеща варроа метят дигоксигенином, и он служит в качестве зонда для гибридизации. Обнаружение проводят с помощью набора для люминесцентного обнаружения DIG (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany). Размеры РНК оценивают путем сравнения с подвергнутыми электрофорезу маркерами молекулярной массы РНК I (Roche). Гибридизацию проводят в условиях высокой жесткости (0,1x SSC; 65°С).
Поведение проглоченной специфической для клеща варроа дсРНК в медоносных пчелах: Для лучшего понимания механизмов действия, с помощью которых клещ варроа с дсРНК с защищает пчел от заражения клещом варроа и последствий этого, общую РНК экстрагируют из обработанных клещом варроа с дсРНК и необработанных контрольных пчел, подвергают обработке панели нуклеаз и разделяют на PAGE.
Результаты
Присутствие дсРНК в организме взрослой пчелы в личинках пчелы (которых кормили взрослые пчелы), в пчелиной куколке определяли с помощью слот-блот гибридизации с зондом для GFP. Процессинг дсРНК до миРНК определяли с помощью нозерн-блотов, обнаруживающих малые РНК (фигуры 2А-Е).
Особей варроа помещали на взрослых пчел, которых кормили в течение 7 дней дсРНК-GFP и на контрольных (которых не кормили дсРНК-GFP) пчел. РНК экстрагировали из варроа в указанные моменты времени (фигура 1) и подвергали ОТ-ПЦР с праймерами GFP. Результаты показаны на фигуре 3.
Пчел кормили сегментом дсРНК для гена ингибитора апоптоза (IAP) (SEQ ID NO: 27). Клещей варроа, собранных из этого улья, анализировали с помощью ОТ-ПЦР в отношении экспрессии гена IAP (фигура 4).
Пример 2
Материалы и способы
Ульи кормили двумя различными смесями дсРНК, соответствующими генным сегментам варроа. Все дсРНК соответствовали генным сегментам, которые не являются гомологичными пчелиным или человеческим последовательностям (не несут участков гомологичных последовательностей, длиннее 19 оснований). Смесь I (минимальная обработка) содержала SEQ ID NO: 1,13, 27, 30 и 39. Смесь II (максимальная обработка) содержала SEQ ID NO: 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 27, 30, 33, 36 и 39. 30 особей варроа помещали в каждый улей и через 2 месяца варроа и пчел подсчитывали в каждом улье. Каждую обработку повторяли 3 раза.
Результаты
Не обнаружили никаких видимых нарушений прочности улья среди различных ульев. На фигуре 5 продемонстрировано снижение популяции варроа после обработки с помощью дсРНК генных последовательностей варроа.
Пример 3
Крупномасштабные полевые испытания специфической для варроа дсРНК для профилактики связанного с клещом варроа заболевания медоносных пчел
Для определения эффективности проглоченной дсРНК клеща варроа на заражение клещом варроа в действительных полевых условиях и для оценки эффектов на важные параметры здоровья колонии, пчел в служащих образцом полноразмерных ульях обеспечивали специфической для клеща варроа дсРНК в корме в течение 5 дней перед и 4 дней после заражения клещом варроа.
Материалы и способы
Материал насекомых:
Пулы пяти пчел из групп после обработок; дистанционный контроль, только дсРНК клеща варроа, только клещ варроа и специфическая для клеща варроа дсРНК +клещ варроа в каждый момент времени в день 0-(день нанесения вируса), день 7 и день окончания (день 42). Испытание повторяли несколько раз.
Экстракция РНК:
РНК экстрагируют с применением Tri-Reagent (Sigma, USA) согласно протоколу, предусмотренному производителем. Все образцы обрабатывают DNasel и ресуспендируют с буфером загрузки (90% формамид, 0,05 бромфенолового синего, 0,05% ксиленцианола) перед загрузкой на гель.
Гель-электрофорез и блот-анализ:
10 мкг свежеприготовленной РНК измеряют с применением нанокапельного спектрофотометра и загружают на 12% акриламидный гель (соотношение акриламида к бис-акриламиду составляет 1:19) в денатурирующих условиях окружающей среды (гель содержит 7М мочевину). После электрофореза образцы переносят на положительно заряженную нейлоновую мембрану (Roch, USA) с применением способа электроблоттинга.
Гибридизация и обнаружение сигнала:
Мембрану гибридизируют со свежеприготовленным ДНК зондом сегмента клеща варроа, взятого из участка, который не соответствует дсРНК специфической для клеща варроа дсРНК. Это делают с применением набора для получения зондов для ПЦР DIG (Roch, USA) в течение ночи при 42°С в растворе DIG easyhyb (Roch, USA) в соответствии с протоколом производителя. Мембрану отмывают дважды с помощью 2 X SSC/0,1% SDS, затем отмывают для жесткости с помощью 0,1XSSC/0,1% SDS в 65°С. Мембраны дополнительно отмывают с применением набора DIG Wash and Block Kit (Roch, USA) в соответствии с протоколом производителя. Обнаружение проводят с применением субстрата CSPD-star (Roch, USA). Положительный контроль представляет собой 21nt ДНК праймеры, соответствующие гибризированной последовательности.
Сигнал обнаруживают с применением экспозиции мембраны в течение 2-12 часов в хемилюминометре, произведенном Kodak.
Основные параметры здоровья колонии пчел (количества запечатанного расплода, количества пчел в улье, возвращение сборщиц и производство меда) оценивают в ульях, в которые поставляли дсРНК клеща варроа, и контрольных ульях, при отсутствии заражения клещом варроа.
Пример 4
Двусторонняя передача проглоченной пчелой дсРНК от пчелы к клещу варроа и обратно пчеле посредством заражения варроа
В примерах 1 и 2 показали, что дсРНК можно передать от пчел клещам варроа напрямую в клещах, заражающих пчел, проглотивших дсРНК, или опосредованно в клещах, заражающих личинку, которую кормят пчелы, которые проглотили дсРНК. Для понимания того, могут ли клещи дополнительно служить в качестве дополнительного вектора, переносящего дсРНК или миРНК от клеща обратно "нативной" пчеле посредством паразитирования, "нативных" пчел заражали варроа после заражения проглотивших дсРНК пчел.
Материалы и способы
Получение дсРНК: Специфическую для варроа и GFP дсРНК получали из последовательностей, клонированных в плазмиды между противоположно направленными промоторами Т7, как описано в примере 1. Сегменты выбранных генов варроа длиной 200-450 п. н., которые не соответствовали последовательности каких-либо пчелиных или человеческих генов (идентичность меньше чем 21 последовательных оснований), выбирали для получения дсРНК варроа. На таблице I ниже подробно представлены последовательности праймеров, использованных для получения дсРНК, и длина ампликона, за исключением последовательности промотора Т7.
Экстракция и анализ РНК: Общую РНК для экспериментов по обнаружению дсРНК-GFP выделяли из одной медоносной пчелы или из 10 клещей варроа, с применением фенол-хлороформенной экстракции (peqGOLD Trifast™, Peqlab). Общую РНК для экспериментов по дсРНК варроа выделяли из 5 клещей варроа путем гомогенизации тканей, совместно с мини-колонкой, удалением ДНК и элюированием РНК (ZR Tissue & Insect RNA MicroPrep, Zymo Research, Irvine CA). ДНК обрабатывали в элюированной РНК с помощью нуклеаз (не содержащий ДНК набор TURBO, Ambion, Austin, ТХ, USA) и РНК исследовали в отношении примесей ДНК. РНК варроа затем совместно осаждали с гликогеном и 3 М ацетата натрия в 70% этаноле и ресуспендировали в 20 мкл не содержащей РНКазу воды. Количество и качество РНК определяли спектрофотометрически с применением нанокапельного способа (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA).
Обнаружение дсРНК-GFP с помощью ОТ-ПЦР: дсРНК-GFP обнаруживали с помощью ОТ-ПЦР с применением 1-этапной ОТ-ПЦР Verso (Thermo Scientific) со специфическими праймерами GFP (SEQ ID NO. 135 и 136) с применением общей РНК, экстрагированной из 10 варроа или 1 медоносной пчелы в качестве матрицы.
Экспрессия генов: ОТ-ПЦР в реальном времени и полуколичественная ОТ-ПЦР: РНК (400 нг) подвергали обратной транскрипции со случайными гексамерами (набор кДНК Verso, Thermo Scientific, Waltham MA). Каждый образец полученной кДНК разводили 1:50 перед амплификацией. Количественную ПЦР в реальном времени проводили с помощью LightCycler 480 (Roche, Indianapolis, IN) и результаты анализировали с помощью программного обеспечения прибора. Праймеры и зонды подробно представлены в таблице II.
Программа ПЦР в реальном времени была следующей: 95°С в течение 10 мин, с последующими 45 циклами при 95°С в течение 10 секунд и 60°С в течение 30 секунд и в конце при 40°С в течение 30 секунд. 18S рРНК использовали в качестве внутреннего контроля для стандартизации содержания РНК.
Программа полуколичественной ПЦР была следующей: 95°С в течение 10 мин, с последующими 40 циклами, каждый из которых состоял из 95°С в течение 10 секунд и 65°С и 55°С в течение 30 секунд для ингибитора апоптоза (FAS, праймеры представляли собой SEQ ID NO. 145 и 146) и его внутренний контроль для стандартизации (актин, праймеры представляли собой SEQ ID NO. 147 и 148), соответственно, с последующими 72°С в течение 30 секунд. Продукты реакции собирали каждые три цикла, начиная с цикла 31 для FAS и с цикла 29 для актина, образец инкубировали в течение 5 мин при 72°С и хранили при -20°С. Образцы анализировали на 1,2% агарозном геле. Каждый эксперимент полуколичественной ПЦР повторяли три раза.
Режим кормления дсРНК-GFP: 1 дневных пчел помещали в четыре пластиковых контейнера (30 пчел на контейнер). Два контейнера кормили 30 мкг дсРНК-GFP в 200 мкл 50% раствора сахарозы в течение 8 дней, а другие два контрольных контейнера кормили 50% раствором сахарозы без дсРНК. Заражение клещом инициировали путем введения взрослых самок варроа (n=30) в каждый контейнер на 5 день. Через 3 дня варроа, которые прикрепились к пчелам, удаляли и собирали и их РНК выделяли для анализа дсРНК-GFP. Для исследования в отношении двухстороннего переноса дсРНК-GFP от пчелы к клещу и на другую пчелу, вновь появившихся, необработанных пчел заражали некоторым количеством варроа, которых открепили от проглотивших дсРНК пчел в течение 4 дней и РНК пчел выделяли для анализа дсРНК-GFP. Каждый день пчелам во всех контейнерах давали дополнительный 1 мл раствора сахарозы после окончания их обработки. Кроме того, пчелы имели свободный доступ к пыльцевой лепешке, состоящей из 70% пыльцы, смешанной с сахарной пудрой.
Для исследования непрямого переноса дсРНК-GFP от взрослой пчелы к пчелиной личинке и на клеща, который питается гемолимфой развившейся пчелы в запечатанной ячейке, чашку пчел (приблизительно 250) и плодоносящую матку вводили в каждый мини-улей (два повтора в каждом из двух огороженных участков). дсРНК-GFP (200 мкг на улей) обеспечивали ежедневно в 5 мл 50% раствора сахарозы в течение 8 дней. 30 клещей варроа вводили в ульи на пятый день. Взрослых самок варроа собирали из запечатанных ячеек с 11 дня до 30 дня и их РНК выделяли для анализа дсРНК-GFP.
Кормление специфической для варроа последовательностями дсРНК: Эксперимент с дсРНК варроа проводили в мини-ульях по 12 мини-ульев на повтор, для тех повторов. В каждом повторе чашку пчел и плодоносящую матку помещали в каждый мини-улей. Три мини-улья случайным образом закрепляли за одним из четырех огороженных сеткой участков, каждых из которых представляет различную обработку кормлением, пчел кормили 5 мл 50% раствора сахарозы в кормушках, помещенный в каждый мини-улей. Четыре обработки представляли собой: 1) только раствор сахарозы (необработанный контроль), 2) смесь I (200 мкг каждой из пяти дсРНК, добавленные в раствор сахара), 3) смесь II (200 мкг каждой из 14 дсРНК, добавленные в раствор сахара), и 4) дсРНК-GFP (200 мкг дсРНК), служащий в качестве положительного в отношении дсРНК контроля. Пчел, которые полностью потребили растворы обработки, дополнительно прикармливали леденцом (67% сахарной пудры и 33% меда). Кроме того, пчелы рутинно кормили пыльцевыми лепешками (70% пыльцы и 30% сахарной пудры). Каждый повтор эксперимента длился в течение 60 дней (фигура 8). Пчел в каждой обработке кормили соответствующим раствором ежедневно в течение первых 10 дней и в течение последних 14 дней, и дважды в неделю в промежутке. Заражение клещами варроа инициировали путем введения клещей в каждый мини-улей с 7 дня до 14 дня. В первом повторе 30 клещей вводили в каждый мини-улей; в последних двух повторах 100 клещей вводили в каждый мини-улей. На 60 день всех зрелых пчел собирали, подсчитывали и встряхивали с 70% этанолом в течение ночи для сбора и подсчета клещей варроа, упавших с пчел. Все запечатанные ячейки с расплодом открывали для сбора и подсчета клещей варроа. Количество клещей на пчелу включало в себя зрелых и развивающихся (запечатанный расплод) пчел. Клещей варроа, взрослых пчел, появляющихся пчел и куколки сохраняли для молекулярных анализов.
Статистический анализ: Статистические анализы проводили с помощью статистического программного обеспечения JMP версии 9 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Статистическую достоверность устанавливали на Ρ<0,05. Для исследования достоверных различий в относительной экспрессии, однофакторный дисперсионный анализ проводили на значениях ddCt. Обработка представляла собой основной фактор. Для исследования различий в популяции клеща варроа, двухфакторный дисперсионный анализ проводили на количествах особей варроа на пчелу в блочной схеме с обработкой в качестве основного эффекта и экспериментальной повторностью в качестве блока. Для исследования различий в общей пчелиной популяции аналогичный двухфакторный дисперсионный анализ проводили на общем количестве пчел (запечатанный расплод и взрослые особи). Достоверные различия между обработками исследовали с помощью критерия Тьюки-Крамера (HSD).
Результаты
Прямой и непрямой горизонтальный перенос дсРНК между пчелами и клещами варроа: Как показано в примерах 1 и 2, пчелы, которых кормили дсРНК, могут переносить последовательности дсРНК клещам варроа посредством заражения, и пчелиным личинкам и куколкам посредством кормления с помощью несущих дсРНК пчел.
Прямой перенос GFP-специфических последовательностей от взрослых пчел, которых кормили дсРНК-GFP в 50% растворе сахарозы в течение 8 дней, клещам варроа посредством заражения на пятый день кормления подтверждали с помощью ОТ-ПЦР РНК клеща через 3 дня заражения (фигура 6, смотрите полосы В+ и V+).
Непрямой горизонтальный перенос GFP-специфических последовательностей от пчел клещам посредством личинок/куколок подтверждали путем обнаружения, путем ПЦР, GFP-специфических последовательностей в РНК варроа, собранной от клещей, питающихся на личинках/куколках, которых кормят пчелы-кормилицы, проглотившие содержащий GFP-специфическую дсРНК раствор сахара (результаты не показаны).
Для исследования двухстороннего горизонтального переноса клещей, которые питаются на пчелах, проглотивших GFP-специфическую дсРНК, удаляли от пчел через 3 дня и вводили в контейнер с необработанными, "нативными" пчелами на 4 дня. ОТ-ПЦР варроа и пчелиной РНК выявила, что GFP-специфические последовательности РНК обнаружили в экстрактах РНК "нативных" пчел, на которых паразитировали клещи варроа, предварительно заразившие пчел, несущих GFP-дсРНК (смотрите фигуру 7, полосы В- и В+). Присутствие GFP-специфических последовательностей у зараженных "нативных" пчел указывает на реципрокный, двухсторонний перенос GFP-специфических последовательностей, происходящих от дсРНК, от пчелы клещу варроа и затем другой пчеле путем заражения клещом.
Указанные результаты ясно указывают на удивительные дополнительные средства для передачи, от пчел, которых кормили дсРНК, клещам и обратно "нативным" пчелам, последовательностей РНКи, происходящих от дсРНК. Такая двухсторонняя передача может быть эффективной в дополнительной диссеминации эффекта сайленсинга специфической для эктопаразита (например, клеща) дсРНК, которой кормят пчел.
Пример 5
Сайленсинг экспрессии гена варроа, опосредованный пчелами, проглотившими дсРНК
Специфический сайленсинг экспрессии гена варроа посредством кормления дсРНК пчел исследовали в мини-ульях, состоящих из приблизительно 250 рабочих пчел и плодоносящей матки. Мини-ульи обеспечивали пчелиным кормом (раствором сахарозы) с любой одной из двух смесей дсРНК варроа: Смесь I содержала последовательности, происходящие от пяти последовательностей гена варроа (SEQ ID NO. 93, 96, 100, 104 и 106) или смесь II содержала 14 последовательностей гена варроа (SEQ ID NO. 93-106). Следует отметить, что последовательность, представленная SEQ ID NO: 101, не присутствует в смеси I. Контроли представляли собой мини-ульи, которые кормили нерелевантной дсРНК (dsGFP) или только раствором сахарозы.
Клещей варроа вводили через 1 неделю кормления, клещей добавляли каждый день в течение недели (смотрите протокол на фигуре 8). В конце 60 дней клещей варроа отбирали для получения образцов для всех четырех групп обработки и уровни транскрипции четырех выбранных генов варроа определяли ОТ-ПЦР в реальном времени или полуколичественной ОТ-ПЦР, как описано в примере 4.
Результаты
ПЦР в реальном времени РНК варроа (фигуры 9А-9С) ясно указывает на приблизительно 35-60% снижение в экспрессии трех репрезентативных специфических для варроа генов (РНК полимераза III, 9А; IAP1 и IAP2, 9В и вакуолярная протонная АТФаза, 9С), что является результатом кормления пчел специфической для варроа дсРНК. Полуколичественная ПЦР РНК варроа (фигура 9D) иллюстрирует даже более сильный, потенциально разрушительный сайленсинг экспрессии гена ингибитора апоптоза FAS варроа путем кормления пчел специфической для варроа дсРНК, очень специфическим образом (сравните с фигурами 9Е и 9F).
Эффект генного сайленсинга экспрессии гена варроа на заражение варроа в ульях: После обнаружения сайленсинга некоторых генов варроа исследовали эффект на заражение клещами.
Для определения того, воздействует ли кормление смесями дсРНК на выживаемость пчел, подсчитывали всех зрелых пчел и запечатанный расплод в мини-ульях при завершении протокола (смотрите фигуру 8). Размер пчелиной популяции не различался между контрольными и обработанными дсРНК мини-ульями (F3,29=0,62, Ρ=0,608; фигура 10). Результаты были сходными, когда расплод и взрослых пчел анализировали отдельно (не показано). Таким образом, кормление смесями дсРНК не является вредным для пчел, указывая на отсутствие нецелевого эффекта кормления.
Для определения того, можно ли использовать опосредованный пчелами сайленсинг генов варроа для контроля заражения клещами в ульях, количество особей варроа на пчелу определяли с помощью фактического изучения популяции клещей на зрелых пчелах и в запечатанных гонидиях при завершении протокола.
Заражение варроа снижалось у пчел в мини-ульях, которых кормили дсРНК варроа, по сравнению с контролями (F3,29=5,65, Ρ=0,0035; фигура 11). Эффект был даже более значительным у пчел из ульев, которые получали смесь II, которая нацеленно воздействовала на большее количество генов, чем смесь I, снижая заражение варроа в среднем на 53% по сравнению с контрольными ульями, которые кормили дсРНК-GFP контролем, и на 61% по сравнению с ульями, не получающими дсРНК контроль.
Обобщая, указанные результаты указывают на то, что кормление пчел специфической для варроа дсРНК приводят как прямой, так и непрямой передаче специфической для клеща дсРНК и миРНК клещам, которые питаются на пчелах и личинках/куколках в ульях, а также к двухсторонней передаче специфических для варроа последовательностей РНК от паразитирующих клещей обратно "нативным" пчелам, и что кормление специфической для варроа дсРНК представляет собой эффективный и безопасный способ снижения заражения ульев клещом.
Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано в связи с его конкретными вариантами осуществления, следует понимать, что многие альтернативы, модификации и варианты будут очевидны специалистам в настоящей области техники. Соответственно, предусмотрено, что все такие альтернативы, модификации и варианты, подпадают под сущность и широкий объем прилагаемой формулы изобретения.
Все упомянутые в настоящем описании изобретения публикации, патенты и патентные заявки полностью включены в настоящий документ посредством ссылки в настоящем описании изобретения, в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка была конкретно и отдельно предусмотрена для включения в настоящий документ посредством ссылки. Кроме того, цитирование или указание любой ссылки в настоящей заявке не должно рассматриваться как допущение того, что такая ссылка доступна в качестве предшествующего уровня техники для настоящего изобретения. В той степени, в которой используют названия разделов, они не должны рассматриваться как обязательно ограничивающие.
Claims (11)
1. Выделенное нуклеиновокислотное средство для применения в профилактике или лечении заражения улья клещом Varroa destructor, содержащее последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 95, 97, 98, 101, 103 и 106.
2. Конструкт нуклеиновой кислоты, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую выделенное нуклеиновокислотное средство по п. 1 для применения в профилактике или лечении заражения улья клещом Varroa destructor.
3. Проглатываемая пчелой композиция для применения в профилактике или лечении заражения улья клещом Varroa destructor, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного нуклеиновокислотного средства по п. 1.
4. Проглатываемая пчелой композиция по п. 3, содержащая эффективное количество по меньшей мере пяти нуклеиновокислотных средств, причем каждое из нуклеиновокислотных средств характеризуется различной последовательностью нуклеиновой кислоты, комплементарной последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 95, 97, 98, 101, 103 и 106.
5. Проглатываемая пчелой композиция по п. 3, содержащая эффективное количество нуклеиновокислотного средства, характеризующегося последовательностью нуклеиновой кислоты комплементарной SEQ ID NO: 106.
6. Проглатываемая пчелой композиция по п. 3, находящаяся в форме, выбранной из группы, состоящей из твердой формы и жидкой формы.
7. Проглатываемая пчелой композиция по п. 3, дополнительно содержащая белок.
8. Проглатываемая пчелой композиция по п. 7, в которой указанный белок находится в форме пыльцы и/или соевых лепешек.
9. Проглатываемая пчелой композиция по п. 6, в которой указанная жидкая форма выбрана из группы, состоящей из раствора сахарозы и раствора кукурузной патоки.
10. Способ профилактики или лечения заражения улья клещом Varroa destructor, включающий обеспечение пчелы из улья композицией, включающей эффективное количество по меньшей мере одного нуклеиновокислотного средства, характеризующегося последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 95, 97, 98, 101, 103 и 106, тем самым обеспечивая профилактику или лечение заражения указанного улья клещом Varroa destructor.
11. Способ по п. 10, при котором указанное нуклеиновокислотное средство вводят в виде конструкта нуклеиновой кислоты.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US13/446,557 US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2012-04-13 | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
US13/446,557 | 2012-04-13 | ||
PCT/IL2013/050321 WO2013153553A2 (en) | 2012-04-13 | 2013-04-11 | Compositions for controlling varroa mites in bees |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014144498A RU2014144498A (ru) | 2016-06-10 |
RU2658771C2 true RU2658771C2 (ru) | 2018-06-22 |
Family
ID=48446437
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014144498A RU2658771C2 (ru) | 2012-04-13 | 2013-04-11 | Композиции для борьбы с клещами варроа у пчел |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8962584B2 (ru) |
EP (1) | EP2836596A2 (ru) |
CN (1) | CN104718294A (ru) |
AU (1) | AU2013248167A1 (ru) |
BR (1) | BR112014025500A2 (ru) |
CA (1) | CA2869831A1 (ru) |
CL (1) | CL2014002751A1 (ru) |
IL (1) | IL235023A0 (ru) |
IN (1) | IN2014MN02141A (ru) |
MX (1) | MX2014012364A (ru) |
NZ (1) | NZ700791A (ru) |
RU (1) | RU2658771C2 (ru) |
UA (1) | UA116206C2 (ru) |
WO (1) | WO2013153553A2 (ru) |
ZA (1) | ZA201407343B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2807333C1 (ru) * | 2022-12-21 | 2023-11-14 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Средство для профилактики заболеваний пчел, вызываемых клещами рода Varroa, и способ его изготовления |
Families Citing this family (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
CA2760883A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Beeologics Inc. | Prevention and treatment of nosema disease in bees |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
MX2012010479A (es) | 2010-03-08 | 2012-10-09 | Monsanto Technology Llc | Moleculas polinucleotidicas para regulacion genetica en plantas. |
US10806146B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-10-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
UA116090C2 (uk) | 2011-09-13 | 2018-02-12 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
US10760086B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-09-01 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US10829828B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-11-10 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
PL2755467T3 (pl) | 2011-09-13 | 2018-01-31 | Monsanto Technology Llc | Sposoby i kompozycje do kontroli chwastów |
WO2013040057A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US9416363B2 (en) | 2011-09-13 | 2016-08-16 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US10240161B2 (en) | 2012-05-24 | 2019-03-26 | A.B. Seeds Ltd. | Compositions and methods for silencing gene expression |
AU2013371825B2 (en) | 2013-01-01 | 2019-10-24 | A.B. Seeds Ltd. | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
UA123082C2 (uk) | 2013-03-13 | 2021-02-17 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та гербіцидна композиція для боротьби з видами рослин роду sorghum |
AR095233A1 (es) | 2013-03-13 | 2015-09-30 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas |
US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
GB201311840D0 (en) * | 2013-07-02 | 2013-08-14 | Univ Aberdeen | Control of varroa mite infestation |
US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
CA2918387C (en) | 2013-07-19 | 2021-11-02 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
US20150123801A1 (en) * | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Eltopia Communications, LLC | Monitoring the state of a beehive |
NZ719544A (en) | 2013-11-04 | 2022-09-30 | Beeologics Inc | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |
UA119253C2 (uk) * | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
WO2015108982A2 (en) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control using epsps polynucleotides |
EP3420809A1 (en) | 2014-04-01 | 2019-01-02 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for controlling insect pests |
CN105085643B (zh) * | 2014-05-21 | 2018-01-19 | 广东省生物资源应用研究所 | 一种狄斯瓦螨毒性蛋白及其编码基因和应用 |
CN106795515B (zh) | 2014-06-23 | 2021-06-08 | 孟山都技术公司 | 用于经由rna干扰调控基因表达的组合物和方法 |
EP3161138A4 (en) | 2014-06-25 | 2017-12-06 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression |
WO2016018887A1 (en) | 2014-07-29 | 2016-02-04 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
US10515220B2 (en) * | 2014-09-25 | 2019-12-24 | Micro Focus Llc | Determine whether an appropriate defensive response was made by an application under test |
US10968449B2 (en) | 2015-01-22 | 2021-04-06 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
US10907152B2 (en) * | 2015-05-04 | 2021-02-02 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |
UY36703A (es) | 2015-06-02 | 2016-12-30 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para la administración de un polinucleótido en una planta |
AU2016270913A1 (en) | 2015-06-03 | 2018-01-04 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants |
EP3324754B1 (en) | 2015-07-22 | 2022-09-07 | Phytopharma International Ltd. | Bee-ingestible compositions, methods of using same for producing honey and honey produced thereby |
WO2017037605A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | North-West University | A method and composition for treating bees against varroa mites |
WO2017132330A1 (en) | 2016-01-26 | 2017-08-03 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
CN106577557A (zh) * | 2016-12-01 | 2017-04-26 | 安徽农业大学 | 尼龙压纹膜在家蚕散卵制种上的应用 |
US11382989B2 (en) | 2017-07-07 | 2022-07-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Engineered microbial population |
CN109043153A (zh) * | 2018-07-24 | 2018-12-21 | 山东省农业科学院植物保护研究所 | 一种平岛氏毛爪螨的人工合成饲料及其制备方法 |
US11666056B2 (en) | 2019-09-05 | 2023-06-06 | Greenlight Biosciences, Inc. | Methods and compositions for control of arthropod pests |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011045796A1 (en) * | 2009-10-14 | 2011-04-21 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Compositions for controlling varroa mites in bees |
UA67749U (ru) * | 2011-06-14 | 2012-03-12 | Национальный Научный Центр "Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины" | Способ заключительной обработки семей пчел против клеща varroa destructor |
Family Cites Families (569)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE288618C (ru) | 1911-10-16 | 1915-11-10 | ||
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
NL154599B (nl) | 1970-12-28 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking. |
US3901654A (en) | 1971-06-21 | 1975-08-26 | Biological Developments | Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors |
US3853987A (en) | 1971-09-01 | 1974-12-10 | W Dreyer | Immunological reagent and radioimmuno assay |
US3867517A (en) | 1971-12-21 | 1975-02-18 | Abbott Lab | Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies |
NL171930C (nl) | 1972-05-11 | 1983-06-01 | Akzo Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen. |
US3850578A (en) | 1973-03-12 | 1974-11-26 | H Mcconnell | Process for assaying for biologically active molecules |
US3935074A (en) | 1973-12-17 | 1976-01-27 | Syva Company | Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4034074A (en) | 1974-09-19 | 1977-07-05 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG) |
US3984533A (en) | 1975-11-13 | 1976-10-05 | General Electric Company | Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction |
US4098876A (en) | 1976-10-26 | 1978-07-04 | Corning Glass Works | Reverse sandwich immunoassay |
US4879219A (en) | 1980-09-19 | 1989-11-07 | General Hospital Corporation | Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies |
US4469863A (en) | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4476301A (en) | 1982-04-29 | 1984-10-09 | Centre National De La Recherche Scientifique | Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon |
US4535060A (en) | 1983-01-05 | 1985-08-13 | Calgene, Inc. | Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use |
US5094945A (en) | 1983-01-05 | 1992-03-10 | Calgene, Inc. | Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase, production and use |
JPS60179523A (ja) | 1983-11-10 | 1985-09-13 | ル−ク・ラメレン・ウント・クツプルングスバウ・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | トルク伝達装置 |
US4761373A (en) | 1984-03-06 | 1988-08-02 | Molecular Genetics, Inc. | Herbicide resistance in plants |
US5331107A (en) | 1984-03-06 | 1994-07-19 | Mgi Pharma, Inc. | Herbicide resistance in plants |
US5304732A (en) | 1984-03-06 | 1994-04-19 | Mgi Pharma, Inc. | Herbicide resistance in plants |
US5011771A (en) | 1984-04-12 | 1991-04-30 | The General Hospital Corporation | Multiepitopic immunometric assay |
US5550111A (en) | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
US4666828A (en) | 1984-08-15 | 1987-05-19 | The General Hospital Corporation | Test for Huntington's disease |
US4581847A (en) | 1984-09-04 | 1986-04-15 | Molecular Genetics Research And Development | Tryptophan overproducer mutants of cereal crops |
DE3587548T2 (de) | 1984-12-28 | 1993-12-23 | Plant Genetic Systems Nv | Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann. |
US5235033A (en) | 1985-03-15 | 1993-08-10 | Anti-Gene Development Group | Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof |
US5166315A (en) | 1989-12-20 | 1992-11-24 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
US5185444A (en) | 1985-03-15 | 1993-02-09 | Anti-Gene Deveopment Group | Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages |
US5405938A (en) | 1989-12-20 | 1995-04-11 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4801531A (en) | 1985-04-17 | 1989-01-31 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis |
DK175922B1 (da) | 1985-08-07 | 2005-07-04 | Monsanto Technology Llc | Glyphosat-resistente planter |
US4940835A (en) | 1985-10-29 | 1990-07-10 | Monsanto Company | Glyphosate-resistant plants |
US4810648A (en) | 1986-01-08 | 1989-03-07 | Rhone Poulenc Agrochimie | Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene |
ATE57390T1 (de) | 1986-03-11 | 1990-10-15 | Plant Genetic Systems Nv | Durch gentechnologie erhaltene und gegen glutaminsynthetase-inhibitoren resistente pflanzenzellen. |
US5188958A (en) | 1986-05-29 | 1993-02-23 | Calgene, Inc. | Transformation and foreign gene expression in brassica species |
US5273894A (en) | 1986-08-23 | 1993-12-28 | Hoechst Aktiengesellschaft | Phosphinothricin-resistance gene, and its use |
US5605011A (en) | 1986-08-26 | 1997-02-25 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
US5378824A (en) | 1986-08-26 | 1995-01-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
US5013659A (en) | 1987-07-27 | 1991-05-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
US5004863B2 (en) | 1986-12-03 | 2000-10-17 | Agracetus | Genetic engineering of cotton plants and lines |
US5015580A (en) | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US4971908A (en) | 1987-05-26 | 1990-11-20 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
US5145783A (en) | 1987-05-26 | 1992-09-08 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
US5312910A (en) | 1987-05-26 | 1994-05-17 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
US4924624A (en) | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
US5188897A (en) | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
US5922602A (en) | 1988-02-26 | 1999-07-13 | Biosource Technologies, Inc. | Cytoplasmic inhibition of gene expression |
JPH03503894A (ja) | 1988-03-25 | 1991-08-29 | ユニバーシィティ オブ バージニア アランミ パテンツ ファウンデイション | オリゴヌクレオチド n‐アルキルホスホラミデート |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US5216141A (en) | 1988-06-06 | 1993-06-01 | Benner Steven A | Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages |
US5258300A (en) | 1988-06-09 | 1993-11-02 | Molecular Genetics Research And Development Limited Partnership | Method of inducing lysine overproduction in plants |
US5416011A (en) | 1988-07-22 | 1995-05-16 | Monsanto Company | Method for soybean transformation and regeneration |
US5272057A (en) | 1988-10-14 | 1993-12-21 | Georgetown University | Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase |
GB8825402D0 (en) | 1988-10-31 | 1988-11-30 | Cambridge Advanced Tech | Sulfonamide resistance genes |
CA2006008C (en) | 1988-12-20 | 2000-02-15 | Donald J. Kessler | Method for making synthetic oligonucleotides which bind specifically to target sites on duplex dna molecules, by forming a colinear triplex, the synthetic oligonucleotides and methods of use |
US5310667A (en) | 1989-07-17 | 1994-05-10 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases |
US7705215B1 (en) | 1990-04-17 | 2010-04-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US5192659A (en) | 1989-08-25 | 1993-03-09 | Genetype Ag | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
US5286634A (en) | 1989-09-28 | 1994-02-15 | Stadler Joan K | Synergistic method for host cell transformation |
US5399676A (en) | 1989-10-23 | 1995-03-21 | Gilead Sciences | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5264564A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5177198A (en) | 1989-11-30 | 1993-01-05 | University Of N.C. At Chapel Hill | Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5484956A (en) | 1990-01-22 | 1996-01-16 | Dekalb Genetics Corporation | Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin |
CA2074355C (en) | 1990-01-22 | 2008-10-28 | Ronald C. Lundquist | Method of producing fertile transgenic corn plants |
US5321131A (en) | 1990-03-08 | 1994-06-14 | Hybridon, Inc. | Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling |
US5837848A (en) | 1990-03-16 | 1998-11-17 | Zeneca Limited | Root-specific promoter |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
DK0536330T3 (da) | 1990-06-25 | 2002-04-22 | Monsanto Technology Llc | Glyphosattolerante planter |
US5677437A (en) | 1990-07-27 | 1997-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5618704A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-08 | Isis Pharmacueticals, Inc. | Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling |
US5610289A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogues |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5541307A (en) | 1990-07-27 | 1996-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
MY107332A (en) | 1990-08-03 | 1995-11-30 | Sterling Drug Inc | Compounds and methods for inhibiting gene expression. |
US5177196A (en) | 1990-08-16 | 1993-01-05 | Microprobe Corporation | Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof |
US6403865B1 (en) | 1990-08-24 | 2002-06-11 | Syngenta Investment Corp. | Method of producing transgenic maize using direct transformation of commercially important genotypes |
US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
US5214134A (en) | 1990-09-12 | 1993-05-25 | Sterling Winthrop Inc. | Process of linking nucleosides with a siloxane bridge |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
US5596086A (en) | 1990-09-20 | 1997-01-21 | Gilead Sciences, Inc. | Modified internucleoside linkages having one nitrogen and two carbon atoms |
US5866775A (en) | 1990-09-28 | 1999-02-02 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases |
US5767366A (en) | 1991-02-19 | 1998-06-16 | Louisiana State University Board Of Supervisors, A Governing Body Of Louisiana State University Agricultural And Mechanical College | Mutant acetolactate synthase gene from Ararbidopsis thaliana for conferring imidazolinone resistance to crop plants |
USRE36449E (en) | 1991-03-05 | 1999-12-14 | Rhone-Poulenc Agro | Chimeric gene for the transformation of plants |
FR2673642B1 (fr) | 1991-03-05 | 1994-08-12 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate. |
FR2673643B1 (fr) | 1991-03-05 | 1993-05-21 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide. |
US20020123476A1 (en) | 1991-03-19 | 2002-09-05 | Emanuele R. Martin | Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof |
DK0539563T3 (da) | 1991-05-15 | 2001-11-12 | Monsanto Technology Llc | Fremgangsmåde til skabelse af en transformeret risplante |
US5719262A (en) | 1993-11-22 | 1998-02-17 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having amino acid side chains |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5714331A (en) | 1991-05-24 | 1998-02-03 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility |
US5731180A (en) | 1991-07-31 | 1998-03-24 | American Cyanamid Company | Imidazolinone resistant AHAS mutants |
US5571799A (en) | 1991-08-12 | 1996-11-05 | Basco, Ltd. | (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response |
JPH0557182A (ja) | 1991-09-03 | 1993-03-09 | Central Glass Co Ltd | 二酸化炭素吸収剤 |
US5518908A (en) | 1991-09-23 | 1996-05-21 | Monsanto Company | Method of controlling insects |
US6235887B1 (en) | 1991-11-26 | 2001-05-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines |
FR2684354B1 (fr) | 1991-11-29 | 1995-01-20 | Oreal | Dispositif distributeur pour un recipient contenant un produit liquide a pateux. |
US5593874A (en) | 1992-03-19 | 1997-01-14 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
US5434257A (en) | 1992-06-01 | 1995-07-18 | Gilead Sciences, Inc. | Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages |
US5591616A (en) | 1992-07-07 | 1997-01-07 | Japan Tobacco, Inc. | Method for transforming monocotyledons |
CA2118698A1 (en) | 1992-07-10 | 1994-01-20 | Naosuke Moriyuki | Gas generating agent and gas generator for automobile air bags |
US5281521A (en) | 1992-07-20 | 1994-01-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified avidin-biotin technique |
US5339107A (en) | 1992-08-19 | 1994-08-16 | Hewlett-Packard Company | Color optical scanner with rotating color filter assembly |
WO1994013491A1 (en) | 1992-12-14 | 1994-06-23 | Sony Corporation | Water-based ink fixing composition, thermally transferred image covering film using the same, and thermal transfer image recording medium |
US5721138A (en) | 1992-12-15 | 1998-02-24 | Sandford University | Apolipoprotein(A) promoter and regulatory sequence constructs and methods of use |
US5476925A (en) | 1993-02-01 | 1995-12-19 | Northwestern University | Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups |
US6414222B1 (en) | 1993-02-05 | 2002-07-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Gene combinations for herbicide tolerance in corn |
GB9304618D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Chemical compounds |
JPH08508491A (ja) | 1993-03-31 | 1996-09-10 | スターリング ウインスロップ インコーポレイティド | ホスホジエステル結合をアミド結合に置き換えたオリゴヌクレオチド |
DE4314274C2 (de) | 1993-04-30 | 1995-11-30 | Foerster Inst Dr Friedrich | Verfahren und Vorrichtung zur automatischen Durchmesserverstellung von an einem rotierend angetriebenen Prüfkopf vorgesehenen Gebern von Meß- und/oder Prüfeinrichtungen |
US5393175A (en) | 1993-06-18 | 1995-02-28 | Courville; Leo | Diamond core drill |
US6118047A (en) | 1993-08-25 | 2000-09-12 | Dekalb Genetic Corporation | Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction |
ES2115882T3 (es) | 1993-09-14 | 1998-07-01 | Lucas Ind Plc | Sistema de combustible. |
US6969782B2 (en) | 1993-10-06 | 2005-11-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of producing transgenic plants having improved amino acid composition |
GB9403941D0 (en) | 1994-03-01 | 1994-04-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
US5558071A (en) | 1994-03-07 | 1996-09-24 | Combustion Electromagnetics, Inc. | Ignition system power converter and controller |
US5625050A (en) | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US5939602A (en) | 1995-06-06 | 1999-08-17 | Novartis Finance Corporation | DNA molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase and inhibitor-resistant mutants thereof |
US5767373A (en) | 1994-06-16 | 1998-06-16 | Novartis Finance Corporation | Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms |
US5392910A (en) | 1994-07-21 | 1995-02-28 | Transidyne General Corporation | Package for a device having a sharp cutting edge |
DE69514924T2 (de) | 1994-08-19 | 2000-10-05 | Monsanto Co | Zuführung exogener chemischer substanzen an pflanzengewebe |
DE4430307A1 (de) | 1994-08-26 | 1996-02-29 | Bayer Ag | Verfahren und Vorrichtung zur gleichzeitigen Dispergierung und Zerstäubung von mindestens zwei Flüssigkeiten |
US5631152A (en) | 1994-10-26 | 1997-05-20 | Monsanto Company | Rapid and efficient regeneration of transgenic plants |
US5550398A (en) | 1994-10-31 | 1996-08-27 | Texas Instruments Incorporated | Hermetic packaging with optical |
US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
ES2275275T3 (es) | 1995-04-20 | 2007-06-01 | Basf Aktiengesellschaft | Productos resistentes a herbicidas diseñados sobre la base de la estructura. |
US5853973A (en) | 1995-04-20 | 1998-12-29 | American Cyanamid Company | Structure based designed herbicide resistant products |
FR2734842B1 (fr) | 1995-06-02 | 1998-02-27 | Rhone Poulenc Agrochimie | Sequence adn d'un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase et obtention de plantes contenant un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, tolerantes a certains herbicides |
US6084155A (en) | 1995-06-06 | 2000-07-04 | Novartis Ag | Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes |
EP1489184A1 (en) | 1995-06-07 | 2004-12-22 | Inex Pharmaceutical Corp. | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
US6084089A (en) | 1995-12-27 | 2000-07-04 | Japan Tobacco, Inc. | Cold-inducible promoter sequences |
US5739180A (en) | 1996-05-02 | 1998-04-14 | Lucent Technologies Inc. | Flat panel displays and methods and substrates therefor |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
GB9612403D0 (en) | 1996-06-13 | 1996-08-14 | Sandoz Ltd | Organic compounds |
EA199800212A1 (ru) | 1996-06-21 | 1998-10-29 | Монсанто Компани | Способы получения устойчивотрансформируемой высокопродуктивной пшеницы посредством трансформации, опосредованной agrobacterium, и комбинации, получаемые ими |
JP2000513228A (ja) | 1996-06-27 | 2000-10-10 | イー・アイ・デユポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | p―ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼの植物遺伝子 |
FR2751347B1 (fr) | 1996-07-16 | 2001-12-07 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene chimere a plusieurs genes de tolerance herbicide, cellule vegetale et plante tolerantes a plusieurs herbicides |
MY119146A (en) | 1996-08-16 | 2005-04-30 | Monsanto Technology Llc | Sequential application method for treating plants with exogenous chemicals |
EP0865496A1 (en) | 1996-09-05 | 1998-09-23 | Unilever N.V. | Salt-inducible promoter derivable from a lactic acid bacterium, and its use in a lactic acid bacterium for production of a desired protein |
JPH10117776A (ja) | 1996-10-22 | 1998-05-12 | Japan Tobacco Inc | インディカイネの形質転換方法 |
DE19652284A1 (de) | 1996-12-16 | 1998-06-18 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Neue Gene codierend für Aminosäure-Deacetylasen mit Spezifität für N-Acetyl-L-Phosphinothricin, ihre Isolierung und Verwendung |
US6252138B1 (en) | 1997-01-20 | 2001-06-26 | Plant Genetic Systems, N.V. | Pathogen-induced plant promoters |
US5981840A (en) | 1997-01-24 | 1999-11-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for agrobacterium-mediated transformation |
US6040497A (en) | 1997-04-03 | 2000-03-21 | Dekalb Genetics Corporation | Glyphosate resistant maize lines |
US7022896B1 (en) | 1997-04-04 | 2006-04-04 | Board Of Regents Of University Of Nebraska | Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms |
US7105724B2 (en) | 1997-04-04 | 2006-09-12 | Board Of Regents Of University Of Nebraska | Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms |
FR2770854B1 (fr) | 1997-11-07 | 2001-11-30 | Rhone Poulenc Agrochimie | Sequence adn d'un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase et obtention de plantes contenant un tel gene, tolerantes aux herbicides |
US6245968B1 (en) | 1997-11-07 | 2001-06-12 | Aventis Cropscience S.A. | Mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, DNA sequence and isolation of plants which contain such a gene and which are tolerant to herbicides |
US6069115A (en) | 1997-11-12 | 2000-05-30 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Method of controlling weeds in transgenic crops |
IL122270A0 (en) | 1997-11-20 | 1998-04-05 | Yeda Res & Dev | DNA molecules conferring to plants resistance to a herbicide and plants transformed thereby |
JP2001523475A (ja) | 1997-11-26 | 2001-11-27 | カムターター・トゥー・エルエルシー | 種子の固体マトリックスコンディショニング |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6421956B1 (en) | 1997-12-29 | 2002-07-23 | Van Dok Ijsbrand | Method and apparatus for priming seed |
US20030027173A1 (en) | 1998-01-16 | 2003-02-06 | Della-Cioppa Guy | Method of determining the function of nucleotide sequences and the proteins they encode by transfecting the same into a host |
US6303848B1 (en) | 1998-01-16 | 2001-10-16 | Large Scale Biology Corporation | Method for conferring herbicide, pest, or disease resistance in plant hosts |
US5914451A (en) | 1998-04-06 | 1999-06-22 | Monsanto Company | Efficiency soybean transformation protocol |
US8598332B1 (en) | 1998-04-08 | 2013-12-03 | Bayer Cropscience N.V. | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
US6906245B1 (en) | 1998-04-30 | 2005-06-14 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Method for producing transgenic plants resistant to weed control compounds which disrupt the porphyrin pathways of plants |
US6307123B1 (en) | 1998-05-18 | 2001-10-23 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for transgene identification |
AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
WO1999067284A2 (en) | 1998-06-20 | 1999-12-29 | Washington University | Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy |
CA2332643A1 (en) | 1998-06-22 | 1999-12-29 | Regents Of The University Of Minnesota | Dna encoding oat acetyl coa carboxylase |
WO1999067400A1 (en) | 1998-06-24 | 1999-12-29 | Musc Foundation For Research Development | Tissue-specific and target rna-specific ribozymes |
JP2000083680A (ja) | 1998-07-16 | 2000-03-28 | Nippon Paper Industries Co Ltd | 光誘導型プロモ―タ―の制御下に置かれた不定芽再分化遺伝子を選抜マ―カ―遺伝子とする植物への遺伝子導入方法及びこれに用いる植物への遺伝子導入用ベクタ― |
JP2002520064A (ja) | 1998-07-16 | 2002-07-09 | スティッチング セントルム フォール プランテンベレデリングス−エン レプロデュクティエオンデルズーク(セーペーエルオー−デーエルオー) | 昆虫による修飾された花蜜からの代謝産物を収集する方法 |
US6121513A (en) | 1998-07-20 | 2000-09-19 | Mendel Biotechnology, Inc. | Sulfonamide resistance in plants |
US6717034B2 (en) | 2001-03-30 | 2004-04-06 | Mendel Biotechnology, Inc. | Method for modifying plant biomass |
WO2000032757A2 (en) | 1998-12-03 | 2000-06-08 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Plant vitamin e biosynthetic enzymes |
US6355322B1 (en) | 1998-12-08 | 2002-03-12 | 3M Innovative Properties Company | Release liner incorporating a metal layer |
US6642435B1 (en) | 1998-12-18 | 2003-11-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Plant folate biosynthetic genes |
JP2002534129A (ja) | 1999-01-14 | 2002-10-15 | モンサント テクノロジー エルエルシー | ダイズ形質転換方法 |
IL128207A (en) | 1999-01-24 | 2005-03-20 | Bio Oz Advanced Biotechnologic | Multi-barrel plant inoculation gun |
EP1147204A1 (en) | 1999-01-28 | 2001-10-24 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US6232536B1 (en) | 1999-02-16 | 2001-05-15 | Dekalb Genetics Corporation | Inbred corn plant F307W and seeds thereof |
US6271359B1 (en) | 1999-04-14 | 2001-08-07 | Musc Foundation For Research Development | Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes |
US6992237B1 (en) | 1999-04-16 | 2006-01-31 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Regulated expression of genes in plant seeds |
KR20010112944A (ko) | 1999-04-21 | 2001-12-22 | 이곤 이 버그 | 폴리뉴클레오티드 서열의 기능을 억제하기 위한 방법 및조성물 |
US6232526B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-05-15 | Dekalb Genetics Corp. | Maize A3 promoter and methods for use thereof |
US6207879B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-03-27 | Dekalb Genetics Corporation | Maize RS81 promoter and methods for use thereof |
US6194636B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-02-27 | Dekalb Genetics Corp. | Maize RS324 promoter and methods for use thereof |
US6713077B1 (en) | 1999-07-28 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Control of shoot/foliar feeding pests with pesticide seed treatments |
US6326193B1 (en) | 1999-11-05 | 2001-12-04 | Cambria Biosciences, Llc | Insect control agent |
AU2575701A (en) | 1999-12-07 | 2001-06-18 | Monsanto Company | Sugarbeet regeneration and transformation |
DE10000600A1 (de) | 2000-01-10 | 2001-07-12 | Bayer Ag | Substituierte Oxazolyl- und Thiazolyl-uracile |
US6303374B1 (en) | 2000-01-18 | 2001-10-16 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of caspase 3 expression |
GB0001309D0 (en) | 2000-01-20 | 2000-03-08 | Nestle Sa | Valve arrangement |
IL134830A0 (en) | 2000-03-01 | 2001-05-20 | Chay 13 Medical Res Group N V | Peptides and immunostimulatory and anti-bacterial pharmaceutical compositions containing them |
JP2001253874A (ja) | 2000-03-10 | 2001-09-18 | Ishihara Sangyo Kaisha Ltd | ピリミジン系化合物、それらの製造方法及びそれらを含有する除草剤 |
NZ522045A (en) | 2000-03-30 | 2007-05-31 | Whitehead Biomedical Inst | RNA sequence-specific mediators of RNA interference |
US6444615B1 (en) | 2000-04-18 | 2002-09-03 | Dow Agrosciences Llc | Herbicidal imidazolidinetrione and thioxo-imidazolidinediones |
CA2445398A1 (en) | 2000-05-10 | 2001-11-15 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Resistance to acetohydroxyacid synthase-inhibiting herbicides |
US6768044B1 (en) | 2000-05-10 | 2004-07-27 | Bayer Cropscience Sa | Chimeric hydroxyl-phenyl pyruvate dioxygenase, DNA sequence and method for obtaining plants containing such a gene, with herbicide tolerance |
JP2002080454A (ja) | 2000-06-26 | 2002-03-19 | Nippon Nohyaku Co Ltd | ピリジン−2,3−ジカルボン酸ジアミド誘導体及び除草剤 |
US7109393B2 (en) | 2000-08-15 | 2006-09-19 | Mendel Biotechnology, Inc. | Methods of gene silencing using inverted repeat sequences |
BR0003908A (pt) | 2000-08-18 | 2002-06-18 | Suzano Papel & Celulose | Método para transformação genética de eucalyptus spp |
US6453609B1 (en) | 2000-09-06 | 2002-09-24 | University Of Iowa Research Foundation | Method for uptake of a substance into a seed |
FR2815969B1 (fr) | 2000-10-30 | 2004-12-10 | Aventis Cropscience Sa | Plantes tolerantes aux herbicides par contournement de voie metabolique |
JP2002138075A (ja) | 2000-10-30 | 2002-05-14 | Nippon Soda Co Ltd | 3−アミノアクリル酸誘導体及び除草剤 |
US7462481B2 (en) | 2000-10-30 | 2008-12-09 | Verdia, Inc. | Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes |
JP2002145707A (ja) | 2000-11-10 | 2002-05-22 | Sankyo Co Ltd | N−置換ジヒドロピロール誘導体を含有する除草剤 |
ES2728168T3 (es) | 2000-12-01 | 2019-10-22 | Max Planck Gesellschaft | Moléculas pequeñas de ARN que median en la interferencia de ARN |
JP2004528821A (ja) | 2000-12-07 | 2004-09-24 | シンジェンタ リミテッド | 除草剤抵抗性植物 |
CN101333654B (zh) | 2000-12-12 | 2011-06-15 | 柯尼卡美能达控股株式会社 | 等离子体放电处理装置 |
US7151204B2 (en) | 2001-01-09 | 2006-12-19 | Monsanto Technology Llc | Maize chloroplast aldolase promoter compositions and methods for use thereof |
JP2002220389A (ja) | 2001-01-26 | 2002-08-09 | Hokko Chem Ind Co Ltd | ピリジルベンズオキサジン誘導体、除草剤および中間体 |
AU2002256619A1 (en) | 2001-02-16 | 2002-09-04 | Metanomics Gmbh And Co. Kgaa | Method for identifying herbicidally active substances |
US7700786B2 (en) | 2001-02-20 | 2010-04-20 | Sagami Chemical Research Center | Pyrazole derivative, intermediate therefor, processes for producing these, and herbicide containing these as active ingredient |
US6843985B2 (en) | 2001-02-28 | 2005-01-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Control of parasitic mites of honey bees |
EP1238586A1 (en) | 2001-03-09 | 2002-09-11 | Basf Aktiengesellschaft | Herbicidal 2-alkynyl-pyri(mi)dines |
DE10116399A1 (de) | 2001-04-03 | 2002-10-10 | Bayer Ag | Substituierte Azolazin(thi)one |
US6743905B2 (en) | 2001-04-16 | 2004-06-01 | Applera Corporation | Mobility-modified nucleobase polymers and methods of using same |
WO2002085308A2 (en) | 2001-04-24 | 2002-10-31 | Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense and anti-inflammatory based compositions to treat respiratory disorders |
JP2003064059A (ja) | 2001-06-14 | 2003-03-05 | Nippon Soda Co Ltd | ピリミジン化合物、製造方法および除草剤 |
DE10130397A1 (de) | 2001-06-23 | 2003-01-09 | Bayer Cropscience Gmbh | Herbizide substituierte Pyridine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Herbzide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
AUPR621501A0 (en) | 2001-07-06 | 2001-08-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Delivery of ds rna |
ES2192945B1 (es) | 2001-07-06 | 2005-03-01 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Un metodo para interferir con la infeccion de virus en plantas. |
ITMI20011497A1 (it) | 2001-07-13 | 2003-01-13 | Isagro Ricerca Srl | Nuovi derivati di aniline sostituite ad attivita' erbicida |
US7612194B2 (en) | 2001-07-24 | 2009-11-03 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid sequences from Diabrotica virgifera virgifera LeConte and uses thereof |
WO2003012052A2 (en) | 2001-07-30 | 2003-02-13 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Specific inhibition of gene expression by small double stranded rnas |
BRPI0211809B1 (pt) | 2001-08-09 | 2019-04-24 | University Of Saskatchewan | Método para o controle de ervas daninhas nas vizinhanças de uma planta de trigo ou triticale, método para modificar a tolerância de uma planta de trigo ou triticale a um herbicida de imidazolinona e método de produção de uma planta de trigo ou triticale transgênica tendo resistência aumentada a um herbicida de imidazolinona |
AR035087A1 (es) | 2001-08-09 | 2004-04-14 | Syngenta Participations Ag | Piridil-alquinos y piridil-n-oxido-alquinos herbicidas activos, procedimiento para su preparacion, composicion herbicida y para inhibir el crecimiento de plantas, metodo para el control del crecimiento de plantas indeseables , y metodo para la inhibicion del crecimiento de plantas |
US20040198758A1 (en) | 2001-08-17 | 2004-10-07 | Rapado Liliana Parra | N-heterocyclyl substituted thienyloxy-pyrimidines used as herbicides |
US20040192910A1 (en) | 2001-08-28 | 2004-09-30 | Christoph Luthy | Sulfonylamino derivatives useful as herbicides |
US20040250310A1 (en) | 2001-08-31 | 2004-12-09 | Shukla Vipula Kiran | Nucleic acid compositions conferring insect control in plants |
CA2453259A1 (en) | 2001-09-06 | 2003-03-20 | Syngenta Participations Ag | Herbicidal n-alkylsulfonamino derivatives |
CA2459360A1 (en) | 2001-09-07 | 2003-03-20 | Basf Aktiengesellschaft | 4-alkyl-substitute thienyloxy-pyridines |
DE50202573D1 (en) | 2001-09-07 | 2005-04-28 | Basf Ag | Pyrazolylsubstituierte thienyloxy-pyridine |
JP2003096059A (ja) | 2001-09-21 | 2003-04-03 | Otsuka Chem Co Ltd | チアゾール化合物及び除草剤組成物 |
WO2003029243A2 (de) | 2001-09-24 | 2003-04-10 | Basf Aktiengesellschaft | 2-aryloxy-6-pyrazolyl-pyridine |
US7550578B2 (en) | 2001-09-26 | 2009-06-23 | Syngenta Participations Ag | Rice promoters for regulation of plant expression |
US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
JP2005507402A (ja) | 2001-11-01 | 2005-03-17 | ドンブ ハノン ケミカル カンパニー リミテッド | 除草活性を有する光活性(r)−フェノキシプロピオン酸−n−メチル−n−2−フルオロフェニルアミド化合物 |
DE10154075A1 (de) | 2001-11-02 | 2003-05-15 | Bayer Cropscience Ag | Substituierte Pyrimidine |
US20030150017A1 (en) | 2001-11-07 | 2003-08-07 | Mesa Jose Ramon Botella | Method for facilitating pathogen resistance |
WO2003077648A2 (en) | 2001-11-08 | 2003-09-25 | Paradigm Genetics, Inc. | Methods for the identification of herbicides and the modulation of plant growth |
US6766613B2 (en) | 2001-11-16 | 2004-07-27 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for controlling pests |
CA2467665A1 (en) | 2001-11-29 | 2003-06-05 | Basf Aktiengesellschaft | 2,w-diaminocarboxylic acid compounds |
DE10256367A1 (de) | 2001-12-06 | 2003-06-26 | Syngenta Participations Ag | Neue Herbizide |
DE10256354A1 (de) | 2001-12-06 | 2003-06-18 | Syngenta Participations Ag | Neue Herbizide |
DE10256353A1 (de) | 2001-12-06 | 2003-06-18 | Syngenta Participations Ag | Neue Herbizide |
AR037754A1 (es) | 2001-12-11 | 2004-12-01 | Syngenta Participations Ag | Herbicidas |
DE10161765A1 (de) | 2001-12-15 | 2003-07-03 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte Phenylderivate |
CA2469716A1 (en) | 2001-12-19 | 2003-06-26 | Basf Aktiengesellschaft | .alpha.-cyanoacrylates |
EP1458674B1 (en) | 2001-12-19 | 2010-02-24 | Basf Se | Beta-amino-alpha-cyanoacrylates and their use as herbicides |
ATE529512T1 (de) | 2002-02-01 | 2011-11-15 | Life Technologies Corp | Doppelsträngige oligonukleotide |
DE10204951A1 (de) | 2002-02-06 | 2003-08-14 | Basf Ag | Phenylalaninderivate als Herbizide |
CN1646687A (zh) | 2002-03-14 | 2005-07-27 | 联邦科学和工业研究组织 | 修饰的基因沉默rna及其用途 |
AU2003218758A1 (en) | 2002-03-14 | 2003-09-22 | Syngenta Participations Ag | Derivatives of 1-phenyl-3-phenylpyrazole as herbicides |
JP4504689B2 (ja) | 2002-03-20 | 2010-07-14 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 除草剤の標的としてのセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ |
US7166771B2 (en) | 2002-06-21 | 2007-01-23 | Monsanto Technology Llc | Coordinated decrease and increase of gene expression of more than one gene using transgenic constructs |
AR039208A1 (es) | 2002-04-03 | 2005-02-09 | Syngenta Participations Ag | Compuestos de fenil- y piridilalquinos, composicion herbicida que los contiene, procedimiento de preparacion de aquellos y procedimiento para combatir el crecimiento de plantas indeseadas |
EP1501361B1 (de) | 2002-04-25 | 2009-09-30 | Basf Se | 3-heteroarylsubstituierte 5-methyloxymethyl-isoxazoline als herbizide |
PL372936A1 (en) | 2002-04-26 | 2005-08-08 | Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd. | Pyridine compounds or salts thereof and herbicides containing the same |
US6645914B1 (en) | 2002-05-01 | 2003-11-11 | Ndsu-Research Foundation | Surfactant-ammonium sulfate adjuvant composition for enhancing efficacy of herbicides |
DE10219435A1 (de) | 2002-05-02 | 2003-11-13 | Bayer Cropscience Ag | Substituierte Pyrazolo-pyrimidin-4-one |
JP2004051628A (ja) | 2002-05-28 | 2004-02-19 | Ishihara Sangyo Kaisha Ltd | ピリジン系化合物又はその塩、それらの製造方法及びそれらを含有する除草剤 |
AR040413A1 (es) | 2002-05-31 | 2005-04-06 | Syngenta Participations Ag | Heterociclilalquinos activos como herbicidas |
AR041182A1 (es) | 2002-07-01 | 2005-05-04 | Syngenta Participations Ag | Derivados de fenoxipropenilfenilo y su uso como herbicidas |
AR041181A1 (es) | 2002-07-01 | 2005-05-04 | Syngenta Participations Ag | Tienilalquinos herbicidas y procedimiento de preparacion de tales compuestos |
WO2004005485A2 (en) | 2002-07-10 | 2004-01-15 | Kansas State University Research Foundation | Compositions and methods for controlling parasitic nematodes |
AU2003249302A1 (en) | 2002-07-17 | 2004-02-02 | Sepro Corporation | Herbicide-resistant plants, and polynucleotides and methods for providing same |
CA2851035C (en) | 2002-07-18 | 2018-05-29 | Stanislaw Flasinski | Methods for using artificial polynucleotides and compositions thereof to reduce transgene silencing |
CA2493030C (en) | 2002-07-24 | 2011-04-19 | Basf Aktiengesellschaft | Synergistically acting herbicidal mixtures |
DE10234875A1 (de) | 2002-07-25 | 2004-02-05 | Bayer Cropscience Gmbh | 4-Trifluormethylpyrazolyl substituierte Pyridine und Pyrimidine |
DE10234876A1 (de) | 2002-07-25 | 2004-02-05 | Bayer Cropscience Gmbh | 4-Trifluormethylpyrazolyl substituierte Pyridine und Pyrimidine |
WO2004011429A1 (ja) | 2002-07-26 | 2004-02-05 | Nihon Nohyaku Co., Ltd. | 新規なハロアルキルスルホンアニリド誘導体及び除草剤並びにその使用方法 |
US20040029275A1 (en) | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
FR2844415B1 (fr) | 2002-09-05 | 2005-02-11 | At & T Corp | Systeme pare-feu pour interconnecter deux reseaux ip geres par deux entites administratives differentes |
US20040053289A1 (en) | 2002-09-09 | 2004-03-18 | The Regents Of The University Of California | Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof |
JP2004107228A (ja) | 2002-09-17 | 2004-04-08 | Nippon Nohyaku Co Ltd | 双環性ピリミジノン誘導体及びこれを有効成分とする除草剤 |
AR044743A1 (es) | 2002-09-26 | 2005-10-05 | Nihon Nohyaku Co Ltd | Herbicida, metodo de emplearlo, derivados de tienopirimidina sustituida,compuestos intermediarios, y procedimientos que se utilizan para producirlos, |
CA2502148A1 (en) | 2002-10-16 | 2005-02-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for increasing the efficacy of biologically-active ingredients |
AU2003274025A1 (en) | 2002-10-17 | 2004-05-04 | Syngenta Participations Ag | Pyridine derivatives useful as herbicides |
WO2004035563A1 (en) | 2002-10-17 | 2004-04-29 | Syngenta Participations Ag | 3-heterocyclylpyridine derivatives useful as herbicides |
JP4398866B2 (ja) | 2002-10-18 | 2010-01-13 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 1−フェニルピロリジン−2−オン−3−カルボキサミド |
WO2004035545A2 (en) | 2002-10-18 | 2004-04-29 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Azolecarboxamide herbicides |
EP2213738B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-10-10 | Dharmacon, Inc. | siRNA molecules targeting Bcl-2 |
GB0228326D0 (en) | 2002-12-04 | 2003-01-08 | Syngenta Ltd | Method of controlling unwanted vegitation |
EP1581642B1 (en) | 2002-12-18 | 2011-04-20 | Athenix Corporation | Genes conferring herbicide resistance |
US20040123347A1 (en) | 2002-12-20 | 2004-06-24 | Hinchey Brendan S. | Water-deficit-inducible plant promoters |
US20040133944A1 (en) | 2003-01-08 | 2004-07-08 | Delta And Pine Land Company | Seed oil suppression to enhance yield of commercially important macromolecules |
WO2004062351A2 (en) | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Gene encoding resistance to acetolactate synthase-inhibiting herbicides |
CN1521165A (zh) | 2003-01-30 | 2004-08-18 | 拜尔农作物科学股份公司 | 噻吩衍生物 |
DE10303883A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-12 | Bayer Cropscience Ag | Substituierte Pyrimidine |
CN100352919C (zh) | 2003-02-18 | 2007-12-05 | 孟山都技术有限公司 | 抗草甘磷的i型5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(epsps) |
CN1526704A (zh) | 2003-03-06 | 2004-09-08 | 拜尔农作物科学股份公司 | 取代的三唑甲酰胺化合物 |
WO2005003362A2 (en) | 2003-03-10 | 2005-01-13 | Athenix Corporation | Methods to confer herbicide resistance |
EP1628519A2 (en) | 2003-04-11 | 2006-03-01 | Bio-Oz Biotechnologies Ltd. | Liquid discharge apparatus particularly useful as a portable inoculation gun for anti-virus inoculation of plants |
US7682829B2 (en) | 2003-05-30 | 2010-03-23 | Monsanto Technology Llc | Methods for corn transformation |
US7459547B2 (en) | 2003-06-02 | 2008-12-02 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for controlling efficacy of RNA silencing |
US7578598B2 (en) | 2006-11-13 | 2009-08-25 | Black & Decker Inc. | Battery charging work light |
JP2005008583A (ja) | 2003-06-20 | 2005-01-13 | Nippon Soda Co Ltd | グアニジン化合物、除草剤および植物成長調節剤 |
JP2005015390A (ja) | 2003-06-26 | 2005-01-20 | Bayer Cropscience Ag | アゾリジン誘導体及び除草剤 |
US7525013B2 (en) | 2003-06-30 | 2009-04-28 | United Soybean Board | Soybean selection system based on AEC-resistance |
JP5183064B2 (ja) | 2003-07-02 | 2013-04-17 | エムユーエスシー ファウンデイション フォー リサーチ デべロップメント | 甲殻類動物、及び他の無脊椎動物における、dsRNAで誘導された特異的、及び非特異的免疫、及びそこで使用する生物送達媒体 |
CN1208325C (zh) | 2003-07-04 | 2005-06-29 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 2-嘧啶氧基-n-脲基苯基苄胺类化合物、制备方法及其用途 |
WO2005007627A1 (ja) | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Nihon Nohyaku Co., Ltd. | フェニルピリジン誘導体、その中間体及びこれを有効成分とする除草剤 |
KR100568457B1 (ko) | 2003-07-22 | 2006-04-07 | 학교법인 성균관대학 | 양이온성 올리고펩타이드를 이용한 식물체로의 rna전달 기법 |
US7371927B2 (en) | 2003-07-28 | 2008-05-13 | Arborgen, Llc | Methods for modulating plant growth and biomass |
CN1929781A (zh) | 2003-08-21 | 2007-03-14 | 依斯克姆公司 | 用于脉管斑块检测和分析的自动化方法和系统 |
US8090164B2 (en) | 2003-08-25 | 2012-01-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Systems, methods, and computer program products for analysis of vessel attributes for diagnosis, disease staging, and surgical planning |
WO2005040152A1 (en) | 2003-10-20 | 2005-05-06 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Heteroyclylphenyl-and heterocyclylpyridyl-substituted azolecarboxamides as herbicides |
WO2005047233A1 (en) | 2003-10-31 | 2005-05-26 | Syngenta Participations Ag | Novel herbicides |
WO2005047281A1 (en) | 2003-11-13 | 2005-05-26 | Syngenta Participations Ag | Novel herbicides |
WO2005049841A1 (en) | 2003-11-17 | 2005-06-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Insect resistance using inhibition of gene expression |
MXPA06005991A (es) | 2003-12-19 | 2006-08-23 | Basf Ag | Fenilalanina-amidas sustituidas por heteroaroilo. |
WO2005061443A2 (de) | 2003-12-19 | 2005-07-07 | Basf Aktiengesellschaft | Benzoylsubstituierte phenylalanin-amide |
WO2005070889A1 (en) | 2004-01-23 | 2005-08-04 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Herbicidal amides |
US7297541B2 (en) | 2004-01-26 | 2007-11-20 | Monsanto Technology Llc | Genes encoding 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) enzymes for plant metabolic engineering |
US7855323B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-12-21 | Monsanto Technology Llc | Recombinant DNA for gene suppression |
US7622301B2 (en) | 2004-02-24 | 2009-11-24 | Basf Plant Science Gmbh | Compositions and methods using RNA interference for control of nematodes |
JP4596795B2 (ja) | 2004-02-27 | 2010-12-15 | 住友林業株式会社 | ピペリトールもしくはその誘導体を有効成分とする植物抑制剤 |
DE102004011705A1 (de) | 2004-03-10 | 2005-09-29 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte 4-(4-Trifluormethylpyrazolyl)-Pyrimidine |
WO2005092105A1 (de) | 2004-03-27 | 2005-10-06 | Bayer Cropscience Gmbh | Herbizid-kombination |
JP2005314407A (ja) | 2004-03-31 | 2005-11-10 | Nippon Nohyaku Co Ltd | 新規なハロアルキルスルホンアニリド誘導体、除草剤及びその使用方法並びにその中間体 |
WO2005095335A1 (ja) | 2004-03-31 | 2005-10-13 | Kureha Corporation | イリド化合物、その製造方法、除草剤および医薬品中間体としての利用 |
ES2547381T3 (es) * | 2004-04-09 | 2015-10-05 | Monsanto Technology, Llc | Composiciones y procedimientos de control de infestaciones de insectos en plantas |
PL2308977T5 (pl) | 2004-04-30 | 2017-10-31 | Dow Agrosciences Llc | Nowy gen odporności na herbicydy |
AU2005248147A1 (en) | 2004-05-11 | 2005-12-08 | Alphagen Co., Ltd. | Polynucleotides for causing RNA interference and method for inhibiting gene expression using the same |
WO2006006569A1 (ja) | 2004-07-12 | 2006-01-19 | Nihon Nohyaku Co., Ltd. | フェニルピリジン類又はその塩類、これらを有効成分とする除草剤及びその使用方法 |
EP1780276A4 (en) | 2004-08-04 | 2008-04-23 | Riken | GENE OF SENSITIVITY TO BONE OR JOINT DISEASE AND USE THEREOF |
ATE415819T1 (de) | 2004-08-19 | 2008-12-15 | Monsanto Technology Llc | Herbizide glyphosatsalzusammensetzung |
WO2006026738A2 (en) | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Methods and compositions for rna amplification and detection using an rna-dependent rna-polymerase |
US20060135758A1 (en) | 2004-08-31 | 2006-06-22 | Kunsheng Wu | Soybean polymorphisms and methods of genotyping |
DK1789401T3 (da) | 2004-09-03 | 2010-05-25 | Syngenta Ltd | Isoxazolinderivater og deres anvendelse som herbicider |
UA82453C2 (ru) | 2004-09-16 | 2008-04-10 | Басф Акциенгезелльшафт | Замещенные гетероароилом серин-амиды как гербициды, способ их получения (варианты), промежуточные соединения, средство и способ получения средства, способ борьбы с нежелательной растительностью |
UA82454C2 (ru) | 2004-09-16 | 2008-04-10 | Басф Акциенгезелльшафт | Замещенные бензоилом серин-амиды, их применение как гербицидов, способ получения (варианты), промежуточное соединение, средство и способ получения средства, способ борьбы с нежелательным ростом растений |
ES2530671T3 (es) | 2004-09-24 | 2015-03-04 | Simplot Co J R | Silenciamiento de genes |
US20060247197A1 (en) | 2004-10-04 | 2006-11-02 | Van De Craen Marc | Method for down-regulating gene expression in fungi |
US7465805B2 (en) | 2004-10-05 | 2008-12-16 | Syngenta Limited | Isoxazoline derivatives and their use as herbicides |
WO2006046148A2 (en) | 2004-10-25 | 2006-05-04 | Devgen Nv | Rna constructs |
DE102004054666A1 (de) | 2004-11-12 | 2006-05-18 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte Pyrazol-3-carboxamide, Verfahren zur Herstellung und Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
DE102004054665A1 (de) | 2004-11-12 | 2006-05-18 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte bi- und tricyclische Pyrazol-Derivate Verfahren zur Herstellung und Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
US7393812B2 (en) | 2004-11-19 | 2008-07-01 | Dow Agrosciences Llc | Methylidene mevalonates and their use as herbicides |
US20060200878A1 (en) | 2004-12-21 | 2006-09-07 | Linda Lutfiyya | Recombinant DNA constructs and methods for controlling gene expression |
US8314290B2 (en) | 2004-12-21 | 2012-11-20 | Monsanto Technology Llc | Temporal regulation of gene expression by MicroRNAs |
US8404927B2 (en) | 2004-12-21 | 2013-03-26 | Monsanto Technology Llc | Double-stranded RNA stabilized in planta |
EP1838144B1 (en) | 2005-01-07 | 2016-08-31 | Oregon State University | Method to trigger rna interference |
JP2006232824A (ja) | 2005-01-27 | 2006-09-07 | Sagami Chem Res Center | イミダゾール誘導体、それらの製造方法及びそれらを有効成分として含有する除草剤 |
EP1846753B1 (en) | 2005-02-04 | 2012-11-07 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | System for the determination of vessel geometry and flow characteristics |
FR2882062B1 (fr) | 2005-02-14 | 2007-06-15 | Commissariat Energie Atomique | Vecteurs d'expression stable et de longue duree de sirna et leurs applications |
EP1852425A1 (en) | 2005-02-24 | 2007-11-07 | Nihon Nohyaku Co., Ltd. | Novel haloalkylsulfonanilide derivative, herbicide, and method of use thereof |
US8088976B2 (en) | 2005-02-24 | 2012-01-03 | Monsanto Technology Llc | Methods for genetic control of plant pest infestation and compositions thereof |
DE102005014638A1 (de) | 2005-03-31 | 2006-10-05 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte Pyrazolyloxyphenylderivate als Herbizide |
JP2006282552A (ja) | 2005-03-31 | 2006-10-19 | Nippon Nohyaku Co Ltd | フェニルへテロアリール類又はその塩類及びこれらを有効成分とする除草剤 |
DE102005014906A1 (de) | 2005-04-02 | 2006-10-05 | Bayer Cropscience Gmbh | Substituierte N-[Pyrimidin-2-yl-methyl]carboxamide und ihre Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
CN101203611B (zh) | 2005-04-19 | 2013-08-14 | 巴斯福植物科学有限公司 | 控制基因表达的改良方法 |
GB0510151D0 (en) | 2005-05-18 | 2005-06-22 | Syngenta Ltd | Novel herbicides |
JP4981037B2 (ja) | 2005-05-25 | 2012-07-18 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | ヘテロアロイル置換セリンアミド |
WO2006125688A1 (de) | 2005-05-25 | 2006-11-30 | Basf Aktiengesellschaft | Benzoylsubstituierte serin-amide |
AU2006261633A1 (en) | 2005-06-17 | 2006-12-28 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions for gene silencing |
DE102005031412A1 (de) | 2005-07-06 | 2007-01-11 | Bayer Cropscience Gmbh | 3-[1-Halo-1-aryl-methan-sulfonyl]-und 3-[1-Halo-1-heteroaryl-methan-sulfonyl]-isoxazolin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
US20070011448A1 (en) | 2005-07-06 | 2007-01-11 | Microsoft Corporation | Using non 5-tuple information with IPSec |
US8013211B2 (en) | 2005-07-07 | 2011-09-06 | FuturaGene Israel, Ltd. | Compositions and methods comprising stinging capsules/cells for delivering a biologically active agent into a plant cell |
US20070026765A1 (en) * | 2005-08-01 | 2007-02-01 | Renn Richard M | Composition and method for the control of parasitic mites of honey bees |
US7702116B2 (en) | 2005-08-22 | 2010-04-20 | Stone Christopher L | Microphone bleed simulator |
BRPI0615088A2 (pt) | 2005-08-24 | 2009-07-14 | Pioneer Hi Bred Int | composições que fornecem toleráncia a herbicidas múltiplos e métodos de uso das mesmas |
US7671254B2 (en) | 2005-08-25 | 2010-03-02 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Herbicide resistance gene, compositions and methods |
US7842856B2 (en) | 2005-08-25 | 2010-11-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Herbicide resistance gene, compositions and methods |
JPWO2007026834A1 (ja) | 2005-09-01 | 2009-03-12 | クミアイ化学工業株式会社 | ピラゾール誘導体及び農園芸用除草剤 |
BRPI0615791B1 (pt) | 2005-09-16 | 2018-04-03 | Devgen Nv | Rna de fita dupla isolado compreendendo fitas complementares aneladas, método de controle de infestação de peste e uso de uma ração artificial compreendendo a sequência de ribonucleotídeo de fita dupla para tratar infestação de plantas por insetos |
RU2478710C2 (ru) | 2005-09-16 | 2013-04-10 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Способы генетического контроля поражения растений насекомыми и применяемые для этого композиции |
EP2270182B1 (en) | 2005-09-16 | 2016-02-10 | deVGen N.V. | DSRNA as insect control agent |
AU2006298844B2 (en) | 2005-09-20 | 2012-01-12 | Basf Plant Science Gmbh | Methods for controlling gene expression using ta-siRAN |
WO2007038788A2 (en) | 2005-09-29 | 2007-04-05 | The Cleveland Clinic Foundation | Small interfering rnas as non-specific drugs |
EP1934354B1 (en) | 2005-10-13 | 2017-11-08 | Monsanto Technology, LLC | Methods for producing hybrid seed |
WO2007050715A2 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-03 | Integrated Plant Genetics, Inc. | Compositions and methods for safe delivery of biologically-active plant transformation agents using non-fibrous silicon carbide powder |
EP1948196B1 (de) | 2005-11-03 | 2012-12-26 | Zoser B. Salama | Verwendung von tetraorganosilizium-verbindungen |
JP2007161701A (ja) | 2005-11-15 | 2007-06-28 | Hokko Chem Ind Co Ltd | アリールオキシ‐n‐(オキシイミノアルキル)アルカン酸アミド誘導体および用途 |
EP1951263A4 (en) | 2005-11-21 | 2009-11-18 | Johnson & Johnson Res Pty Ltd | MULTITARGETING DISTURBING RNAS WITH TWO ACTIVE STRANDS AND DESIGN AND APPLICATION METHODS |
JP2007153847A (ja) | 2005-12-08 | 2007-06-21 | Hokko Chem Ind Co Ltd | フェノキシアルカン酸アミド誘導体および除草剤 |
WO2007070389A2 (en) | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Syngenta Participations Ag | Control of parasitic weeds |
GB0526044D0 (en) | 2005-12-21 | 2006-02-01 | Syngenta Ltd | Novel herbicides |
CA2634901A1 (en) | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Basf Se | A method for controlling aquatic weeds |
KR100755027B1 (ko) * | 2005-12-28 | 2007-09-06 | 한국과학기술연구원 | 꿀벌응애 구제용 사료의 제조방법 |
AR058408A1 (es) | 2006-01-02 | 2008-01-30 | Basf Ag | Compuestos de piperazina con accion herbicida |
AR058922A1 (es) | 2006-01-05 | 2008-03-05 | Basf Ag | Compuestos de piperazina con accion herbicida |
JP2007182404A (ja) | 2006-01-10 | 2007-07-19 | Hokko Chem Ind Co Ltd | アリールオキシ−n−(アルコキシアルキル)アルカン酸アミド誘導体および除草剤 |
US8906876B2 (en) | 2006-01-12 | 2014-12-09 | Devgen Nv | Methods for controlling pests using RNAi |
WO2007080126A2 (en) | 2006-01-12 | 2007-07-19 | Devgen N.V. | Dsrna as insect control agent |
EP2347759B1 (en) | 2006-01-12 | 2017-10-18 | deVGen N.V. | Methods for controlling pests using RNAi |
WO2008063203A2 (en) | 2006-01-27 | 2008-05-29 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Compositions and methods for efficient gene silencing in plants |
US20080022423A1 (en) | 2006-02-03 | 2008-01-24 | Monsanto Technology Llc | IN PLANTA RNAi CONTROL OF FUNGI |
PL2044109T3 (pl) | 2006-02-10 | 2014-11-28 | Monsanto Technology Llc | Identyfikacja i zastosowanie genów docelowych do zwalczania nicieni pasożytów roślin |
EP2426206B8 (en) | 2006-02-13 | 2018-10-31 | Monsanto Technology LLC | Selecting and stabilizing dsRNA constructs |
EP1987015A2 (de) | 2006-02-16 | 2008-11-05 | Basf Se | Benzoylsubstituierte alanine |
WO2007093529A2 (de) | 2006-02-16 | 2007-08-23 | Basf Se | Heteroaroylsubstituierte alanine |
GB0603891D0 (en) | 2006-02-27 | 2006-04-05 | Syngenta Ltd | Novel herbicides |
US20070214515A1 (en) | 2006-03-09 | 2007-09-13 | E.I.Du Pont De Nemours And Company | Polynucleotide encoding a maize herbicide resistance gene and methods for use |
US20100068172A1 (en) | 2006-03-16 | 2010-03-18 | Devgen N.V. | Nematode Control |
TWI375669B (en) | 2006-03-17 | 2012-11-01 | Sumitomo Chemical Co | Pyridazinone compound and use thereof |
US7767234B2 (en) | 2006-03-31 | 2010-08-03 | John I. Haas, Inc. | Compositions and methods for controlling a honey bee parasitic mite |
US20070281900A1 (en) | 2006-05-05 | 2007-12-06 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR LIPID AND POLYPEPTIDE BASED siRNA INTRACELLULAR DELIVERY |
EP2018397A2 (en) | 2006-05-09 | 2009-01-28 | Reliance Life Sciences Pvt., Ltd. | MOLECULAR CLONING AND SEQUENCING OF ACETYL CoA CARBOXYLASE (ACCase) GENE FROM JATROPHA CURCAS |
US20090186766A1 (en) | 2006-05-19 | 2009-07-23 | Basf Se | Heteroaroyl-Substituted Alanines with a Herbicidal Action |
JP2009537477A (ja) | 2006-05-19 | 2009-10-29 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | ベンゾイル置換アラニン |
US7884262B2 (en) | 2006-06-06 | 2011-02-08 | Monsanto Technology Llc | Modified DMO enzyme and methods of its use |
WO2007141790A2 (en) | 2006-06-07 | 2007-12-13 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Plant expression constructs and methods of utilizing same |
AR061314A1 (es) | 2006-06-08 | 2008-08-20 | Athenix Corp | Glutamina sintetasas bacterianas y metodos para usarlas |
GB0613901D0 (en) | 2006-07-13 | 2006-08-23 | Univ Lancaster | Improvements in and relating to plant protection |
GB0614471D0 (en) | 2006-07-20 | 2006-08-30 | Syngenta Ltd | Herbicidal Compounds |
JP2008074841A (ja) | 2006-08-23 | 2008-04-03 | Nippon Nohyaku Co Ltd | 新規なハロアルキルスルホンアニリド誘導体、除草剤及びその使用方法 |
JP2008074840A (ja) | 2006-08-23 | 2008-04-03 | Nippon Nohyaku Co Ltd | 新規なハロアルキルスルホンアニリド誘導体、除草剤及びその使用方法 |
GB0617575D0 (en) | 2006-09-06 | 2006-10-18 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds and compositions |
US20090306181A1 (en) | 2006-09-29 | 2009-12-10 | Children's Medical Center Corporation | Compositions and methods for evaluating and treating heart failure |
US7897846B2 (en) | 2006-10-30 | 2011-03-01 | Pioneer Hi-Bred Int'l, Inc. | Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
TW200829171A (en) | 2006-11-17 | 2008-07-16 | Nihon Nohyaku Co Ltd | Haloalkyl sulfonanilide derivatives or salts thereof, herbicide using it as effective constituent and use-method thereof |
JP2008133207A (ja) | 2006-11-28 | 2008-06-12 | Hokko Chem Ind Co Ltd | オキサゾリノン誘導体、その製造方法および除草剤 |
JP2008133218A (ja) | 2006-11-28 | 2008-06-12 | Hokko Chem Ind Co Ltd | フェノキシ酪酸アミド誘導体および除草剤 |
GB0624760D0 (en) | 2006-12-12 | 2007-01-17 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
GB0625598D0 (en) | 2006-12-21 | 2007-01-31 | Syngenta Ltd | Novel herbicides |
JP2008169121A (ja) | 2007-01-09 | 2008-07-24 | Bayer Cropscience Ag | ジャスモン酸誘導体及び除草剤並びに除草効力増強剤 |
CN101578261B (zh) | 2007-01-11 | 2014-04-16 | 巴斯夫欧洲公司 | 杂芳酰基取代的丝氨酰胺 |
CL2008000376A1 (es) | 2007-02-09 | 2008-08-18 | Du Pont | Compuestos derivados de n-oxidos de piridina; composicion herbicida; y metodo para controlar el crecimiento de vegetacion indeseada. |
JPWO2008102908A1 (ja) | 2007-02-23 | 2010-05-27 | 日産化学工業株式会社 | ハロアルキルスルホンアニリド誘導体 |
WO2010058398A2 (en) | 2007-03-08 | 2010-05-27 | Sync-Rx, Ltd. | Image processing and tool actuation for medical procedures |
DE102007012168A1 (de) | 2007-03-12 | 2008-09-18 | Bayer Cropscience Ag | 2-[Heteroarylalkyl-sulfonyl]-thiazol-Derivate und 2-[Heteroarylalkyl-sulfinyl]-thiazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
CN101279950B (zh) | 2007-04-06 | 2010-08-11 | 中国中化股份有限公司 | 2-嘧啶氧(硫)基苯甲酸基乙酰胺类化合物及其应用 |
CN101279951B (zh) | 2007-04-06 | 2010-09-01 | 中国中化股份有限公司 | 2-嘧啶氧(硫)基苯甲酸基烯酸酯类化合物及其应用 |
GB0709710D0 (en) | 2007-05-21 | 2007-06-27 | Syngenta Ltd | Herbicidal compositions |
EP1997381A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | Commissariat à l'Energie Atomique | Use of a compound having a monogalactosyldiacylglycerol synthase inhibitory activity as herbicide or algaecide, herbicide and algaecide compositions |
CN101889091B (zh) | 2007-06-07 | 2014-02-19 | 加拿大农业及农业食品部 | 基于纳米载体的植物转染和转导 |
UY31140A1 (es) | 2007-06-12 | 2009-01-05 | Basf Se | Compuestos de piperazina con accion herbicida |
PE20090417A1 (es) | 2007-06-12 | 2009-05-08 | Basf Se | Compuestos de piperazina con accion herbicida |
EA201000023A1 (ru) | 2007-06-22 | 2010-06-30 | Басф Се | Соединения пиперазина с гербицидным действием |
NL2000719C2 (nl) | 2007-06-22 | 2008-12-23 | Synthesis B V | Werkwijze en inrichting voor het behandelen van plantaardige zaden. |
KR100884933B1 (ko) | 2007-07-03 | 2009-02-23 | 주식회사경농 | 광활성 (r)-알릴옥시프로피온산 아마이드 화합물 및 이를포함하는 제초제 조성물 |
US20130084243A1 (en) | 2010-01-27 | 2013-04-04 | Liliane Goetsch | Igf-1r specific antibodies useful in the detection and diagnosis of cellular proliferative disorders |
CN101139607A (zh) | 2007-08-07 | 2008-03-12 | 西南大学 | 家蚕微孢子虫极丝蛋白ptp1基因 |
ATE496088T1 (de) | 2007-08-14 | 2011-02-15 | Dsm Ip Assets Bv | Devulkanisation von kautschuk |
CL2008002420A1 (es) | 2007-08-16 | 2009-10-23 | Basf Se | Uso de una composicion que comprende a) un ingrediente activo seleccionado de piraclostrobina; b) un sulfato de eter poliarilfenol polialcoxi; y c) un co-polimero basado en esteres metaacrilicos para el tratamiento de semillas y composicion para el tratamiento de semillas. |
CA2735167A1 (en) | 2007-08-27 | 2009-03-05 | Boston Biomedical, Inc. | Composition of asymmetric rna duplex as microrna mimetic or inhibitor |
CL2008002703A1 (es) | 2007-09-14 | 2009-11-20 | Sumitomo Chemical Co | Compuestos derivados de 1,4-dihidro-2h-piridazin-3-ona; composicion herbicida que comprende a dichos compuestos; metodo de control de malezas; uso de dichos compuestos para el control de malezas; y compuestos intermediarios. |
JP2009067739A (ja) | 2007-09-14 | 2009-04-02 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 除草用組成物 |
DE112008002456T5 (de) | 2007-09-21 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Gmbh | Pflanzen mit erhöhtem Ertrag |
CA2701636C (en) | 2007-10-05 | 2019-10-15 | Dow Agrosciences Llc | Methods for transferring molecular substances into plant cells |
US20110015084A1 (en) | 2007-10-25 | 2011-01-20 | Monsanto Technology Llc | Methods for Identifying Genetic Linkage |
BRPI0819191A2 (pt) | 2007-11-05 | 2017-03-21 | Baltic Tech Dev Ltd | uso de oligonucleotídeos com bases modificadas como agentes antivirais. |
CA2704560A1 (en) | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Baltic Technology Development, Ltd. | Use of oligonucleotides with modified bases in hybridization of nucleic acids |
JP2009114128A (ja) | 2007-11-07 | 2009-05-28 | Hokko Chem Ind Co Ltd | アミノ酸アミド誘導体および除草剤 |
US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
GB0722472D0 (en) | 2007-11-15 | 2007-12-27 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
JP2009126792A (ja) | 2007-11-20 | 2009-06-11 | Sagami Chem Res Center | 5−置換フェニル−2−トリフルオロメチルピリミジン−6(1h)−オン誘導体及びその製造方法並びに該誘導体を有効成分として含有する除草剤 |
EP2065373A1 (de) | 2007-11-30 | 2009-06-03 | Bayer CropScience AG | Chirale 3-(Benzylsulfinyl)-5,5-dimethyl-4,5-dihydroisoxazol-Derivate und 5,5-Dimethyl-3-[(1H-pyrazol-4-ylmethyl) sulfinyl]-4,5-dihydroisoxazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
EP2065374A1 (de) | 2007-11-30 | 2009-06-03 | Bayer CropScience AG | 2-(Benzyl- und 1H-pyrazol-4-ylmethyl)sulfinyl-Thiazol-Derivate als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
JP2009137851A (ja) | 2007-12-04 | 2009-06-25 | Sagami Chem Res Center | 2−トリフルオロメチルピリミジン−6(1h)−オン誘導体及びその製造方法並びに該誘導体を有効成分として含有する除草剤 |
WO2009085982A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Monsanto Technology Llc | Method to enhance yield and purity of hybrid crops |
CL2008003785A1 (es) | 2007-12-21 | 2009-10-09 | Du Pont | Compuestos derivados de piridazina; composiciones herbicidas que comprenden a dichos compuestos; y método para controlar el crecimiento de la vegetación indeseada. |
US8847013B2 (en) | 2008-01-17 | 2014-09-30 | Pioneer Hi Bred International Inc | Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from lepidoptera |
US20090188008A1 (en) | 2008-01-17 | 2009-07-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides |
GB0800856D0 (en) | 2008-01-17 | 2008-02-27 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
MY153934A (en) | 2008-02-20 | 2015-04-15 | Syngenta Participations Ag | Herbicidal formulation |
US7807791B2 (en) | 2008-03-03 | 2010-10-05 | Ms Technologies Llc | Antibodies immunoreactive with mutant 5-enolpyruvlshikimate-3-phosphate synthase |
WO2009116151A1 (ja) | 2008-03-19 | 2009-09-24 | アグロカネショウ株式会社 | 1-フェニル-5-ジフルオロメチルピラゾール-4-カルボキサミド誘導体及びこれを有効成分とする除草剤 |
GB0805318D0 (en) | 2008-03-20 | 2008-04-30 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
WO2009125401A2 (en) | 2008-04-10 | 2009-10-15 | Rosetta Genomics Ltd. | Compositions and methods for enhancing oil content in plants |
US8271857B2 (en) | 2008-05-13 | 2012-09-18 | International Business Machines Corporation | Correcting errors in longitudinal position (LPOS) words |
JP2011522552A (ja) | 2008-06-13 | 2011-08-04 | リボックス・ゲーエムベーハー | 化学的に修飾されたrnaの酵素的合成のための方法 |
EP2135865A1 (de) | 2008-06-17 | 2009-12-23 | Bayer CropScience AG | Substituierte 1-(Diazinyl) pyrazol-4-yl-essigsäuren, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
WO2009158258A1 (en) | 2008-06-25 | 2009-12-30 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Herbicidal dihydro oxo six-membered azinyl isoxazolines |
WO2010002984A1 (en) | 2008-07-01 | 2010-01-07 | Monsanto Technology, Llc | Recombinant dna constructs and methods for modulating expression of a target gene |
TWI455944B (zh) | 2008-07-01 | 2014-10-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 雙股多核苷酸 |
NZ591057A (en) | 2008-07-10 | 2012-11-30 | Az Univ Amsterdam | Complement antagonists and uses thereof |
EP2147919A1 (de) | 2008-07-24 | 2010-01-27 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Heterocyclisch substituierte Amide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide |
WO2010012649A1 (de) | 2008-07-29 | 2010-02-04 | Basf Se | Piperazinverbindungen mit herbizider wirkung |
EP2484666A1 (en) | 2008-08-15 | 2012-08-08 | Georgetown University | Fluorescent regulators of RASSF1A expression and human cancer cell proliferation |
BRPI0917644A2 (pt) | 2008-08-15 | 2015-11-17 | Zoser B Salama | sistema transportador para agentes biológicos contendo compostos de organo-silício e usos do mesmo. |
JP5549592B2 (ja) | 2008-09-02 | 2014-07-16 | 日産化学工業株式会社 | オルト置換ハロアルキルスルホンアニリド誘導体及び除草剤 |
WO2010034153A1 (zh) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | 沈阳化工研究院 | 2-嘧啶氧(硫)基苯甲酸基烯酸酯类化合物及其应用 |
JP5670335B2 (ja) | 2008-09-25 | 2015-02-18 | セファロン、インク. | ベンダムスチン液体製剤 |
CA2738610C (en) | 2008-09-25 | 2016-10-25 | Cae Healthcare Inc. | Simulation of medical imaging |
EA018991B1 (ru) | 2008-09-30 | 2013-12-30 | Басф Се | Композиция для улучшения эффективности гербицидов |
US20100099561A1 (en) | 2008-10-15 | 2010-04-22 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Heterobicyclic alkylthio-bridged isoxazolines |
EP2350074B1 (de) | 2008-10-29 | 2013-03-06 | Basf Se | Substituierte pyridine mit herbizider wirkung |
EP2821490A3 (en) | 2008-10-30 | 2015-04-22 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Manipulation of glutamine synthetases (GS) to improve nitrogen use efficiency and grain yield in higher plants |
EP2348841A1 (en) | 2008-10-31 | 2011-08-03 | Basf Se | Method for improving plant health |
WO2010049369A1 (de) | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Basf Se | Piperazinverbindungen mit herbizider wirkung |
WO2010049405A1 (en) | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Basf Se | Method for improving plant health |
EP2194052A1 (de) | 2008-12-06 | 2010-06-09 | Bayer CropScience AG | Substituierte 1-(Thiazolyl)- und 1-(Isothiazolyl)pyrazol-4-yl-essigsäuren, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
EP2379503A1 (de) | 2008-12-18 | 2011-10-26 | Basf Se | Heterozyklische diketon-derivate mit herbizider wirkung |
US20100249214A1 (en) | 2009-02-11 | 2010-09-30 | Dicerna Pharmaceuticals | Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences |
DE102008063561A1 (de) | 2008-12-18 | 2010-08-19 | Bayer Cropscience Ag | Hydrazide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide und Insektizide |
EP2204366A1 (de) | 2008-12-19 | 2010-07-07 | Bayer CropScience AG | Herbizid und insektizid wirksame phenylsubstituierte Pyridazinone |
WO2010099016A1 (en) | 2009-02-25 | 2010-09-02 | Worcester Polytechnic Institute | Automatic vascular model generation based on fluid-structure interactions (fsi) |
EP2429399A4 (en) | 2009-03-06 | 2013-04-10 | Bio Tree Systems Inc | METHOD AND APPARATUS FOR VESSEL TESTING |
JP2010235603A (ja) | 2009-03-13 | 2010-10-21 | Sumitomo Chemical Co Ltd | ピリダジノン化合物及びその用途 |
EP2229813A1 (de) | 2009-03-21 | 2010-09-22 | Bayer CropScience AG | Pyrimidin-4-ylpropandinitril-derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren |
GB0905441D0 (en) | 2009-03-30 | 2009-05-13 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
EP2756845B1 (en) | 2009-04-03 | 2017-03-15 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA |
CA2757665C (en) | 2009-04-06 | 2017-06-27 | Syngenta Limited | Herbicidal quinoline and 1,8-naphthyridine compounds |
US20120029187A1 (en) | 2009-04-14 | 2012-02-02 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Haloalkylsulfonanilide derivative |
AU2010241034A1 (en) | 2009-04-21 | 2011-11-24 | Basf Plant Science Company Gmbh | RNA-mediated induction of gene expression in plants |
CA2760883A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Beeologics Inc. | Prevention and treatment of nosema disease in bees |
GB0908293D0 (en) | 2009-05-14 | 2009-06-24 | Syngenta Ltd | Herbicidal compounds |
EP2449110B1 (en) | 2009-06-30 | 2017-05-31 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Introducing dna into plant cells |
WO2011003776A2 (de) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Basf Se | Substituierte cyanobutyrate mit herbizider wirkung |
CA2806295A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating insects |
US20110028412A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-03 | Cappellos, Inc. | Herbal enhanced analgesic formulations |
CA2770276A1 (en) | 2009-08-21 | 2012-02-24 | Beeologics, Inc. | Preventing and curing beneficial insect diseases via plant transcribed molecules |
WO2011035874A1 (de) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | Bayer Cropscience Ag | N-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)benzamide und ihre verwendung als herbizide |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
DE102010042866A1 (de) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Basf Se | Substituierte Thioamide mit herbizider Wirkung |
US8329619B2 (en) | 2009-11-03 | 2012-12-11 | Basf Se | Substituted quinolinones having herbicidal action |
US8926626B2 (en) | 2009-11-10 | 2015-01-06 | Wake Forest University Health Sciences | Tissue tensioning devices and related methods |
US9145562B2 (en) | 2009-11-20 | 2015-09-29 | Alberta Innovates—Technology Futures | Variegation in plants |
UA115762C2 (uk) | 2009-11-23 | 2017-12-26 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Рекомбінантна молекула днк, яка вказує на присутність трансгенної події mon 87427 маїсу |
JP2011195561A (ja) | 2009-11-24 | 2011-10-06 | Sumitomo Chemical Co Ltd | ケトン化合物及びそれを含有する除草剤 |
US9562235B2 (en) | 2009-12-06 | 2017-02-07 | A.B. Seeds Ltd. | MicroRNA compositions and methods for enhancing plant resistance to abiotic stress |
BR112012015125A2 (pt) | 2009-12-23 | 2015-09-01 | Bayer Ip Gmbh | "plantas tolerantes aos herbicidas inibidores de hppd" |
US9493785B2 (en) | 2009-12-28 | 2016-11-15 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency |
AR080021A1 (es) | 2010-01-26 | 2012-03-07 | Pioneer Hi Bred Int | Tolerancia a los herbicidas inhibidores de hppd (hidrofenil piruvato dioxigenasa) |
MX2012010479A (es) | 2010-03-08 | 2012-10-09 | Monsanto Technology Llc | Moleculas polinucleotidicas para regulacion genetica en plantas. |
EP2385129A1 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-09 | BASF Plant Science Company GmbH | Enhanced methods for gene regulation in plants |
EP2588611A4 (en) | 2010-06-30 | 2014-01-22 | Basf Plant Science Co Gmbh | NOVEL MICROARN PRECURSOR AND ITS USE IN REGULATING THE EXPRESSION OF A TARGET GENE |
EP2418283A1 (en) | 2010-08-07 | 2012-02-15 | Nomad Bioscience GmbH | Process of transfecting plants |
CN101914540A (zh) | 2010-08-09 | 2010-12-15 | 大连大学 | 一种将rna干扰引入植物的方法 |
EP2633056A1 (en) | 2010-10-25 | 2013-09-04 | A.B. Seeds Ltd. | ISOLATED POLYNUCLEOTIDES EXPRESSING OR MODULATING MICRORNAs OR TARGETS OF SAME, TRANSGENIC PLANTS COMPRISING SAME AND USES THEREOF IN IMPROVING NITROGEN USE EFFICIENCY, ABIOTIC STRESS TOLERANCE, BIOMASS, VIGOR OR YIELD OF A PLANT |
WO2012058073A2 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Harrisvaccines, Inc. | Methods and compositions to protect aquatic invertebrates from disease |
WO2012083137A1 (en) | 2010-12-17 | 2012-06-21 | Monsanto Technology Llc | Methods for improving competency of plant cells |
EP3375878A1 (en) | 2010-12-30 | 2018-09-19 | Dow AgroSciences LLC | Nucleic acid molecules that target the vacuolar atphase h subunit and confer resistance to coleopteran pests |
WO2012143543A2 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Devgen Nv | Plants resistant to insect pests |
EP2530159A1 (en) | 2011-06-03 | 2012-12-05 | Sandoz Ag | Transcription terminator sequences |
MX352786B (es) | 2011-07-18 | 2017-12-08 | Devgen Nv | Plantas resistentes a plagas de insectos. |
CA2842709A1 (en) | 2011-08-16 | 2013-02-21 | Syngenta Participations Ag | Methods and compositions for introduction of exogenous dsrna into plant cells |
US9974508B2 (en) | 2011-09-01 | 2018-05-22 | Ghassan S. Kassab | Non-invasive systems and methods for determining fractional flow reserve |
EP2756085B1 (en) | 2011-09-13 | 2019-03-20 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for weed control |
UA116090C2 (uk) | 2011-09-13 | 2018-02-12 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
WO2013040057A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
BR112014005795A2 (pt) | 2011-09-13 | 2020-12-08 | Monsanto Technology Llc | métodos de controle de plantas, de redução da expressão de um gene de hppd de uma planta, de preparação de um nucleotídeo, e de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação da expressão do gene de hppd no tratamento externo de uma planta, composições e cassete de expressão microbiana |
AU2012308737B2 (en) | 2011-09-13 | 2018-06-14 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
PL2755467T3 (pl) | 2011-09-13 | 2018-01-31 | Monsanto Technology Llc | Sposoby i kompozycje do kontroli chwastów |
US9416363B2 (en) | 2011-09-13 | 2016-08-16 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
BR112014005954A2 (pt) | 2011-09-13 | 2020-12-01 | Monsanto Technology Llc | métodos e composições químicas agrícolas para controle de planta, método de redução de expressão de um gene dhps em uma planta, cassete de expressão microbiana, método para fazer um polinucleotídeo, método de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação de expressão do gene dhps |
US10034614B2 (en) | 2012-02-29 | 2018-07-31 | General Electric Company | Fractional flow reserve estimation |
US8548778B1 (en) | 2012-05-14 | 2013-10-01 | Heartflow, Inc. | Method and system for providing information from a patient-specific model of blood flow |
US10240161B2 (en) | 2012-05-24 | 2019-03-26 | A.B. Seeds Ltd. | Compositions and methods for silencing gene expression |
US20130324842A1 (en) | 2012-05-29 | 2013-12-05 | The Johns Hopkins University | Method for Estimating Pressure Gradients and Fractional Flow Reserve from Computed Tomography Angiography: Transluminal Attenuation Flow Encoding |
US9708607B2 (en) | 2012-08-03 | 2017-07-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified RNAi agents |
US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
AU2013371825B2 (en) | 2013-01-01 | 2019-10-24 | A.B. Seeds Ltd. | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
AR095233A1 (es) | 2013-03-13 | 2015-09-30 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas |
UA123082C2 (uk) | 2013-03-13 | 2021-02-17 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та гербіцидна композиція для боротьби з видами рослин роду sorghum |
US9920316B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-03-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
MX358744B (es) | 2013-03-15 | 2018-08-31 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para la producción y administración de ácido ribonucleico. |
US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
GB201311840D0 (en) | 2013-07-02 | 2013-08-14 | Univ Aberdeen | Control of varroa mite infestation |
CA2918387C (en) | 2013-07-19 | 2021-11-02 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
NZ719544A (en) | 2013-11-04 | 2022-09-30 | Beeologics Inc | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |
UA119253C2 (uk) | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
EP3420809A1 (en) | 2014-04-01 | 2019-01-02 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for controlling insect pests |
WO2016018887A1 (en) | 2014-07-29 | 2016-02-04 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
-
2012
- 2012-04-13 US US13/446,557 patent/US8962584B2/en active Active
-
2013
- 2013-04-11 MX MX2014012364A patent/MX2014012364A/es unknown
- 2013-04-11 AU AU2013248167A patent/AU2013248167A1/en not_active Abandoned
- 2013-04-11 CA CA2869831A patent/CA2869831A1/en not_active Abandoned
- 2013-04-11 BR BR112014025500A patent/BR112014025500A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-04-11 EP EP13723252.6A patent/EP2836596A2/en not_active Withdrawn
- 2013-04-11 IN IN2141MUN2014 patent/IN2014MN02141A/en unknown
- 2013-04-11 WO PCT/IL2013/050321 patent/WO2013153553A2/en active Application Filing
- 2013-04-11 CN CN201380031114.6A patent/CN104718294A/zh active Pending
- 2013-04-11 NZ NZ700791A patent/NZ700791A/en unknown
- 2013-04-11 RU RU2014144498A patent/RU2658771C2/ru active
- 2013-11-04 UA UAA201412247A patent/UA116206C2/uk unknown
-
2014
- 2014-10-06 IL IL235023A patent/IL235023A0/en unknown
- 2014-10-09 ZA ZA2014/07343A patent/ZA201407343B/en unknown
- 2014-10-13 CL CL2014002751A patent/CL2014002751A1/es unknown
-
2015
- 2015-01-27 US US14/606,328 patent/US9662348B2/en active Active
-
2017
- 2017-04-26 US US15/498,008 patent/US10801028B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011045796A1 (en) * | 2009-10-14 | 2011-04-21 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Compositions for controlling varroa mites in bees |
UA67749U (ru) * | 2011-06-14 | 2012-03-12 | Национальный Научный Центр "Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины" | Способ заключительной обработки семей пчел против клеща varroa destructor |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2807333C1 (ru) * | 2022-12-21 | 2023-11-14 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Средство для профилактики заболеваний пчел, вызываемых клещами рода Varroa, и способ его изготовления |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US8962584B2 (en) | 2015-02-24 |
RU2014144498A (ru) | 2016-06-10 |
CL2014002751A1 (es) | 2015-05-08 |
CA2869831A1 (en) | 2013-10-17 |
IN2014MN02141A (ru) | 2015-08-21 |
UA116206C2 (uk) | 2018-02-26 |
US20120258646A1 (en) | 2012-10-11 |
US9662348B2 (en) | 2017-05-30 |
ZA201407343B (en) | 2015-07-29 |
US20150133532A1 (en) | 2015-05-14 |
BR112014025500A2 (pt) | 2017-08-08 |
US20170233743A1 (en) | 2017-08-17 |
MX2014012364A (es) | 2015-04-17 |
WO2013153553A3 (en) | 2013-12-12 |
US10801028B2 (en) | 2020-10-13 |
AU2013248167A1 (en) | 2014-10-30 |
IL235023A0 (en) | 2014-12-31 |
CN104718294A (zh) | 2015-06-17 |
EP2836596A2 (en) | 2015-02-18 |
WO2013153553A2 (en) | 2013-10-17 |
NZ700791A (en) | 2016-08-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2658771C2 (ru) | Композиции для борьбы с клещами варроа у пчел | |
AU2020257097B2 (en) | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations | |
EP2488646B1 (en) | Compositions for controlling varroa mites in bees | |
RU2721248C2 (ru) | Композиции и способы борьбы с вирусом у клеща varroa и у пчел | |
AU2021202071B2 (en) | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |