MX2012006970A - Conjugados de polimeros zwiterionicos multifuncionales. - Google Patents

Conjugados de polimeros zwiterionicos multifuncionales.

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Didier G Benoit
Wayne To
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Abstract

La presente invención proporciona copolímeros aleatorios que contienen zwiteriones y uno o más agentes funcionales, y métodos de preparación de dichos copolímeros aleatorios.

Description

CONJUGADOS DE POLÍMEROS ZWITERIONICOS MULTIFUNCIONALES Referencias cruzadas a solicitudes de patentes relacionadas Esta solicitud de patente reivindica prioridad de la Solicitud de Patente Provisoria Estadounidense N° 61/288.127, presentada el 18 de diciembre de 2009.
Antecedentes de la Invención En este mismo momento está ocurriendo una carrera armamentista de todo tipo entre las compañías farmacéuticas que están intentando todas suministrar "productos diferenciados médicamente" . Los formatos de fármacos actuales son inflexibles, porque generalmente permiten una actividad única. Por ejemplo, un anticuerpo monoclonal recombinante generalmente está diseñado y optimizado para unirse e inhibir una proteína blanco única. Por ejemplo, un fármaco de moléculas pequeñas está generalmente diseñado y optimizado para unirse y activar (o inhibir) un blanco único. En algunos casos, el fármaco no es selectivo y existen varias actividades (por ejemplo, un inhibidor de quinasa de moléculas pequeñas que está diseñado para unirse al sitio de unión de ATP de una quinasa única pero que muestra un nivel de afinidad y bioactividad contra miembros de la familia de las quinasas adyacentes) . Pero generalmente los desarrolladores de fármacos optimizan el uso de formatos de fármacos actuales para actividades únicas y la falta de selectividad se ve como algo que no se ha de producir en el proceso de desarrollo de fármacos.
En el desarrollo de fármacos actual, entonces, la selección del blanco único es la variable clave. Los fármacos, en consecuencia, se desarrollan desde un punto de vista centrado en el formato. Pero los fármacos se desarrollan para tratar la enfermedad. Y las enfermedades generalmente están compuestas por más de un mecanismo fisiopatológico que ocurre en serie o en paralelo. Un mecanismo es una vía o un grupo de vías que se cruzan que ocurren en una célula o tejido u órgano localizado o en forma sistémica en todo el organismo. Una vía es un grupo de grupos que interactúan uno con otro. Una manera más ideal de comprometerse en el desarrollo de fármacos es poder tomar un enfoque centrado en la enfermedad o centrado en la biología. Por ejemplo, basado en la suma de la investigación académica y societaria e histórica y la experiencia hasta la fecha, la enfermedad x comprende las vías a, b y c. Dentro de la vía a, se sabe que la proteína blanco z está regulada en forma ascendente (y que se podría unir y ser inhibida por un fragmento de anticuerpo) . Dentro de la vía b, se sabe que el tipo de célula y está proliferando en forma inapropiada (y que podría recibir el impacto de un agente antiproliferativo de moléculas pequeñas) . Y la fisiopatología de la vía a y be está ocurriendo dentro del subtipo de tejido x (y que podría ser el blanco y ser enriquecido con el fármaco incluyendo sobre el fármaco varias copias de un péptido dirigido al tejido pequeño) . Sería ideal tener una tecnología o formato de fármaco que permita que estas varias funciones y diferentes tipos de grupos bioactivos (proteína, oligonucleótido, molécula pequeña, lípido, etc.) se integren en un fármaco único, adaptable, multifuncional que sea el mejor de su clase práctico y directo en su diseño, implementación, fabricación y administración. Además, la tecnología debe permitir que ciertos grupos bioactivos se unan en forma inestable de manera tal que se puedan liberar en las condiciones deseadas (tiempo, medio de pH acuoso, otros) . Estos fármacos deben demostrar una más alta eficacia y seguridad y proporcionar simultáneamente una probabilidad general más alta de éxito técnico, regulatorio y comercial desde las primeras etapas del proceso de desarrollo de fármacos .
La mayor parte de las enfermedades son de un origen complejo y multifactorial . En consecuencia, al aplicar este enfoque centrado en la biología y centrado en la enfermedad, uno podría imaginar un futuro en los próximos diez o quince años en los cuales una enfermedad importante tal como la artritis reumatoide se divida realmente a través del diagnóstico (molecular, por imágenes, por biomarcadores , genético) u otros enfoques en, por ejemplo, diez subtipos principales cada uno de los cuales esté impulsado por un grupo particular de fisiopatologías y que se puedan enfrentar usando un fármaco multifuncional de manera tal que se desarrollen diez fármacos multifuncionales para tratar los diez tipos de enfermedades diferentes.
La presente invención describe dicho formato de tecnología de fármacos que puede ser columna vertebral de la siguiente generación del desarrollo de fármacos multifuncionales . La tecnología suministra una cadena principal polimérica que (i) ella misma suministra biocompatibilidad fundamental al fármaco a través de la selección de monómero hidrófilo y arquitectura y (ii) también forma una cadena principal central o andamio para la conjugación y/o adsorción a varios agentes de diferentes tipos (aminoácido, molécula pequeña, oligonucleótido, lípido, otro, agente de diagnóstico, agente de producción de imágenes, agente de monitoreo de la terapia, etc) , estequiometrías y funciones preferidas (biocompatibilidad, separador, bioactividad, diagnóstico, producción de imágenes, otro) y (iii) puede emplear cualquier conector y composición química de conjugación estable o flexible (en condiciones predefinidas) .
Los polímeros hidrófilos para la conjugación de fármacos se han descrito bien y los conjugados de fármacos están generando más de 5.000.000.000 de ingresos por año. Lo importante para estos polímeros es la magnitud en la cual se unen a las moléculas de agua y las propiedades físicas de esas interacciones de unión al agua. Esta combinación de propiedades impulsa la biocompatibilidad fundamental del polímero. PEG es uno de los ejemplos de un polímero hidrófilo, pero existen otros ejemplos de polímeros hidrófilos que se unen al agua en una magnitud diferente y con propiedades físicas diferentes y en consecuencia con una biocompatibilidad fundamental diferente. Uno de tales ejemplos son los polímeros basados en fosforilcolina, específicamente polímeros derivados de la 2 -metacriloiloxietil fosforilcolina, cuyos polímeros se han comercializado en diferentes formas en aparatos médicos tales como stents de elución de fármacos coronarios y lentes de contacto. En los últimos años, se han desarrollado métodos nuevos de polimerización radical controlada con la promesa de permitir la fabricación de polímeros de arquitectura compleja, grandes con bajo costo y alta calidad.
La presente invención integra una tecnología y formato de fármaco que permite un paradigma nuevo de desarrollo de fármacos, que se inicia con un grupo de biologías que impulsan la fisiopatología de la enfermedad, que integran grupos de biocompatibilidad, grupos de fármacos de diferentes clases, arquitecturas ampliadas, composiciones químicas flexibles, todo en un paquete práctico. Dicho más simplemente, la presente invención presenta un formato de fármaco que permite que el usuario cree una biomáquina sin escala con la meta de crear balas mágicas para combatir enfermedades en beneficio de los pacientes.
Los esfuerzos para formular agentes biológicamente activos para el suministro deberán hacer frente a una variedad de variables que incluyen la vía de administración, la estabilidad biológica del agente activo y la solubilidad de los agentes activos en medios fisiológicamente compatibles. Las elecciones que se hacen en la formulación de agentes biológicamente activos y las vías de administración seleccionadas pueden afectar la biodisponibilidad de estos agentes activos. Por ejemplo, la elección de la administración parental dentro de la circulación sistémica para proteínas y polipéptidos biológicamente activos evita el medio proteolítico hallado en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, aún cuando la administración directa, tal como mediante la inyección, de agentes biológicamente activos es posible, las formulaciones pueden ser insatisfactorias por una amplia variedad de motivos que incluyen la generación de una respuesta inmune al agente administrado y respuestas a todos los excipientes que incluyen ardor y escozor. Aún cuando el agente activo no sea inmunogénico y se empleen excipientes satisfactorios, los agentes biológicamente activos pueden tener una solubilidad limitada y una semivida biológica corta que puede necesitar la administración repetida o la infusión continua, que puede ser doloroso y/o inconveniente.
Para algunos agentes biológicamente activos se ha alcanzado un nivel de éxito en el desarrollo de formulaciones adecuadas de agentes funcionales conjugando los agentes a polímeros solubles en agua. La conjugación de agentes biológicamente activos a polímeros solubles en agua generalmente se observa como proporcionando una variedad de beneficios para el suministro de agentes activos y específicamente, proteínas y péptidos. Entre los polímeros solubles en agua empleados, el polietilenglicol (PEG) se ha conjugado más ampliamente a una variedad de agentes biológicamente activos que incluyen péptidos biológicamente activos. Se han atribuido una reducción en la inmunogenicidad o antigenicidad, una semivida aumentada, una solubilidad aumentada, un aclaramiento reducido por el riñon y una degradación enzimática reducida a los conjugados de una variedad de polímeros solubles en agua y agentes funcionales, que incluyen conjugados de PEG. Como resultado de estos atributos, los conjugados de polímeros de agentes biológicamente activos necesitan una dosificación menos frecuente y pueden permitir el uso dé una menor cantidad del agente activo para alcanzar un punto final terapéutico. La dosificación menos frecuente reduce el numero total de inyecciones, que puede dolorosa y que necesita visitas inconvenientes a los profesionales de la salud. La conjugación del PEG u otros polímeros también puede modificar la actividad central del fármaco solo, la idea de las "bioactividades adicionales conferidas al fármaco en virtud de la conjugación de polímeros (por ejemplo, el radio hidrodinámico grande amplía el alcance de la inhibición desde el fragmento de anticuerpos de fármacos) inhibe la unión al receptor A pero el conjugado del polímero al fármaco inhibe la unión al receptor A más el receptor B en función de cualquier número de diferentes mecanismos pero ciertamente el impedimento estérico.
Aunque se ha alcanzado algún éxito con la conjugación al PEG, la "PEGilación" de los agentes biológicamente activos sigue siendo un desafío. Cuando los desarrolladores de fármacos avanzan más allá de las proteínas agonistas muy potentes tales como eritropoyetina y los diferentes interferones, los beneficios del polímero hidrófilo de PEG son insuficientes para impulsar los aumentos en la solubilidad, la estabilidad y las reducciones en la viscosidad y la inmunogenicidad que son necesarias para un producto comercialmente exitoso que se administra en forma subcutánea. La conjugación con PEG también puede derivar en la pérdida de actividad biológica. Se ha adelantado una variedad de teorías para explicar la pérdida de actividad biológica sobre la conjugación con PEG. Éstas incluyen el bloqueo de sitios necesarios para que el agente interactúe con otros componentes biológicos, mediante la ligadura de conjugación o por el agente que se entierra dentro del conjugado con PEG, específicamente cuando el polímero es largo y puede "envolverse" alrededor de alguno del agente activo, bloqueando de ese modo el acceso a los ligandos potenciales necesarios para la actividad.
Se han introducido formas ramificadas del PEG para su uso en la preparación de conjugados para aliviar algunas de las dificultades enfrentadas con el uso de las cadenas de polímeros de PEG rectas largas. Si bien los polímeros ramificados pueden resolver algunos de los problemas asociados a los conjugados formados con los polímeros de PEG lineales largos, ni los conjugados con polímeros de PEG ramificados ni lineales resuelven los problemas asociados al uso de agentes funcionales conjugados. Los conjugados con PEG lineales así como ramificados pueden, por ejemplo, sufrir índices de degradación que son demasiado largos o demasiado cortos. Una velocidad de degradación rápida puede derivar en un conjugado que tiene una semivida in vivo demasiado corta, mientras que, una velocidad de degradación demasiado lenta puede derivar en una semivida in vivo del conjugado inaceptablemente prolongada.
En vista de las ventajas reconocidas de la conjugación de agentes funcionales a los polímeros solubles en agua, y las limitaciones de los polímeros solubles en agua tales como PEG en la formación de conjugados adecuados con fines terapéuticos, son deseables polímeros solubles en agua adicionales para formar conjugados con agentes funcionales. Serían deseables polímeros solubles en agua, específicamente aquellos que tienen muchas de las ventajas del PEG para su uso en la formación de conjugados, y que no sufren la desventaja observada con el PEG como un agente de conjugación. Con este fin, se exponen polímeros que contienen monómeros zwiteriónicos, específicamente 2 -metacriloiloxietil-fosforilcolina para su uso en la preparación de conjugados de agentes biológicamente activos.
Breve extracto de la Invención En una realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen la fórmula I : ( Cada monómero M1 y M2 de la fórmula I puede ser independientemente un acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil -piridina o una vinil -pirrolidona . Además, R1 de la fórmula I puede ser independientemente H, L1-A1, un grupo conector LG1 o L1-LG1, y cada R2 de la fórmula I es independientemente H, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6/ alquinilo de C2-6/ haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6/ cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, heteroarilo, A2, L2-A2, LG2, L2 -LG2 , I2 y L2-I2. El grupo Z de la fórmula I es un grupo zwiteriónico . Los grupos I es un fragmento de iniciador e l' es un depurador de radicales, de manera tal que la combinación de I-I' sea un iniciador, I1, para la polimerización del copolímero aleatorio de la Fórmula I. Alternativamente, I' puede ser H o alquilo de Ci-6. El grupo I2 es un iniciador. Además, cada uno de los grupos L1 y L2 es un conector, cada uno de los grupos A1 y A2 es un agente funcional y cada uno de los grupos LG1 y LG2 es un grupo conector. En la fórmula I precedente, los subíndices x e y1 son cada uno independientemente un número entero de 1 a 1000, el subíndice z es un número entero de 1 a 10, el subíndice s es un número entero de 1 a 100, y el subíndice n es un número entero de 1 a 20, en donde R1 es L1-A1 o uno de R2 es L2-A2.
En otras realizaciones, la presente invención proporciona un proceso para preparar un copolímero aleatorio de la presente invención, el proceso incluye el paso de poner en contacto una mezcla de un primer monómero y un segundo monómero con un iniciador, I1, en condiciones suficientes para preparar un copolímero aleatorio a través de la polimerización de los radicales libres, en donde el primer monómero comprende una fosforilcolina y cada uno del segundo monómero y el iniciador comprenden en forma independiente por lo menos uno de un agente funcional o un grupo conector para la unión al agente funcional.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional o un grupo conector, y un grupo iniciador que tiene un agente funcional o un grupo conector, mientras que el agente funcional se une al segundo monómero o al grupo iniciador a través de un conector.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina , por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional o un grupo conector, y el segundo monómero que tiene una relación de reactividad diferente de aquella del primer monómero que permite que el polímero final sea un copolímero alternado, un copolímero periódico, un copolímero de gradiente, un copolímero de bloques o un copolímero estadístico.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional y un grupo conector sintonizable, dicho segundo monómero tiene la misma relación de reactividad como el primer monómero que permite que el polímero final sea un copolímero alternado, un copolímero periódico, un copolímero de gradiente, un copolímero de bloques o un copolímero estadístico.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional o un grupo conector y otros monómeros que tienen afinidades diferentes que permiten la formación de topologías nuevas mediante la unión no covalente.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina , por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional y un grupo conector sintonizable y otros monómeros que tienen diferentes afinidades de medio que permiten la formación de topologías nuevas mediante la unión no covalente.
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional o un grupo conector y otro monómero de afinidades de medios similares permite la formación de topologías nuevas mediante la unión no covalente (por ejemplo la quelación entre grupos carboxílieos en medios acuosos, o grupos sensibles al pH) .
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como la fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional y un grupo conector sintonizable que permite la formación de topologías nuevas mediante la unión no covalente (por ejemplo, la quelación entre grupos carboxílicos en medios acuosos, o grupos sensibles al pH) .
En otra realización, los copolímeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con un zwiterión tal como fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un grupo conector sintonizable que permite la liberación de grupos funcionales en repuesta a gatillos predefinidos tales como medios acuosos o medios de bajo pH.
Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 muestra un esquema para la preparación de los copolímeros aleatorios de la presente invención. El iniciador I-I' se descompone en el fragmento de iniciador I y el depurador de radicales I'. El fragmento del iniciador I luego reacciona con los comonómeros M1 y M2 para iniciar el proceso de polimerización y generar la especie A. El depurador de radicales I' puede entonces reaccionar en forma reversible con la especie A para formar la especie B. Alternativamente, la especie A puede reaccionar con otros monómeros para continuar la propagación del polímero (especie C) . En forma concomitante, la cadena de polímero creciente de la especie C reacciona en forma reversible con el depurador de radicales I' para formar el copolímero aleatorio, especie D.
Descripción Detallada de la Invención I . General La presente invención proporciona copolímeros aleatorios que tienen un zwiterión tal como fosforilcolina, y por lo menos un agente funcional (definido en la presente) . Un zwiterión tal como fosforilcolina como una molécula altamente biocompatible impulsa la biocompatibilidad fundamen al. También cumple funciones de tipo de acompañante, en términos de proteger a la proteína bajo la temperatura u otro estrés. También puede permitir otras funciones tales como la captación celular reversible. El agente funcional puede ser un agente bioactivo tal como un fármaco, una proteína terapéutica o un agente dirigido a un blanco, así como un agente de detección, un agente de producción de imágenes, un agente marcador o un agente de diagnóstico. Los copolímeros aleatorios son útiles para el tratamiento de una variedad de condiciones y estados de enfermedad seleccionando uno o más agentes funcionales apropiados. Se pueden unir varios agentes bioactivos al copolímero aleatorio, permitiendo así el tratamiento no simplemente de un síntoma o mecanismo de enfermedad único, sino antes bien la enfermedad completa. Además, loa agentes bioactivos se pueden unir a través de conectores no descomponibles en una forma estática, o a través de una variedad de conectores descomponibles de manera tal que diferentes gatillos predefinidos liberen los respectivos agentes bioactivos a través del uso de profármaco o conector de profármacos dobles y estrategias de grupos conectores. Además, los copolímeros aleatorios son útiles con fines de diagnóstico y de producción de imágenes mediante la unión de agentes dirigidos al blanco y agentes de producción de imágenes. Los copolímeros aleatorios pueden incluir agentes terapéuticos y de diagnóstico en un polímero único, proporcionando agentes terapéuticos que tratan la enfermedad así como la detección y el diagnóstico.
Los polímeros aleatorios se pueden preparar a través de la polimerización de radicales libres convencionales o la polimerización de radicales controlados/vivos, tales como la polimerización de radicales de transferencia de átomos (ATRP) , usando monómeros que contienen el zwiterión tal como fosforilcolina y monómeros que contienen uno o más agentes bioactivos que pueden ser los mismos o diferentes, o grupos conectores que pueden unirse a los agentes bioactivos. Los iniciadores usados para la preparación de los copolímeros aleatorios pueden tener varios sitios de inicio de manera tal que se puedan preparar los polímeros de varias ramas, tales como estrellas. El iniciador también puede contener un agente bioactivo, o grupos conectores, o composiciones químicas flexibles que pueden unirse a agentes bioactivos.
II. Definiciones Con el fin de la presente invención, se usará la siguiente terminología de acuerdo con las definiciones expuestas a continuación "Copolímero aleatorio" se refiere a un polímero que tiene por lo menos dos grupos monómeros diferentes que están distribuidos en forma aleatoria en toda la cadena principal del polímero. Los monómeros del copolímero aleatorio son los grupos químicos que están unidos juntos para formar el polímero. Cada grupo químico distinguible se denomina monómero . Los copolímeros aleatorios se preparan a partir de monómeros que incluyen, en forma no taxativa, acrilatos, metacrilatos , acrilamidas, metacrilamidas , estírenos, vinil-piridina y vinil-pirrolidona . Otros monómeros son útiles en los copolímeros aleatorios de la presente invención. Cuando se usan dos monómeros diferentes, tal como en los copolímeros aleatorios de la presente invención, los dos monómeros se denominan "comonómeros" , lo cual significa que los monómeros diferentes se copolimerizan para formar un polímero único .
"Grupo zwiteriónico" se refiere a un compuesto que tiene una carga positiva y una carga negativa. Los grupos zwiteriónicos útiles en los copolímeros aleatorios pueden incluir un nitrógeno cuaternario y un fosfato de carga negativa, tal como fosforilcolina : RO-P (=0) (0") -0-CH2CH2-N+ (Me) 3. Otros grupos zwiteriónicos son útiles en los copolímeros aleatorios de la presente invención y las Patentes WO 1994/016748 y WO 1994/016749 se incorporan en su totalidad en la presente.
"Iniciador" se refiere a un compuesto capaz de iniciar una polimerización usando los comonómeros de la presente invención. La polimerización pede ser una polimerización de radicales libres convencional o una polimerización de radicales controlados/vivos, tales como la Polimerización de Radicales de Transferencia de Átomos (ATRP) , polimerización de Terminación de Fragmentación de Agregado Reversible (RAFT) o polimerización mediada por nitróxido (NMP) . La polimerización puede ser una polimerización "pseudo" controlada, tal como una transferencia degenerativa. Cuando el iniciador es adecuado para la ATRP, contiene un enlace lábil que se puede descomponer en forma hemolítica para formar un fragmento de iniciador, I, que es un radical capaz de iniciar una polimerización de radicales, y/o un depurador de radicales, I', que reacciona con el radical de la cadena de polímero creciente para terminar en forma reversible la polimerización. El depurador de radicales I' es normalmente un halógeno, pero también puede ser un grupo orgánico, tal como un nitrilo.
"Conector" se refiere a un grupo químico que une dos grupos juntos. El conector puede ser descomponible o no descomponible. Los conectores descomponibles pueden ser conectores hidrolizables , descomponibles en forma enzimática, sensibles al pH, fotolábiles, o de disulfuro, entre otros. Otros conectores incluyen conectores homobifuncionales y heterobifuncionales . Un "grupo conector" es un grupo bifuncional, capaz de formar una unión covalente que comprende uno o más enlaces a un agente bioactivo. Ejemplos no taxativos incluyen aquellos ilustrados en la Tabla 1.
"Conector hidrolizable" se refiere a un una unión o enlace químico, tal como un enlace covalente, que experimenta la hidrólisis en condiciones fisiológicas. Al tendencia de un enlace a hidrolizarse puede depender no solamente del tipo general de unión que conecta dos átomos centrales entre los cuales corta el enlace, sino también los sustituyentes unidos estos átomos centrales. Ejemplos no taxativos de uniones susceptibles a la hidrólisis incluyen ásteres de ácidos carboxílieos , ésteres de fosfato, acétales, cetales, éter de aciloxialquilo, iminas, ortoésteres, y algunas uniones de amida.
Un "conector descomponible en forma enzimática" se refiere a una unión que experimenta la degradación por una o más enzimas . Algunas uniones susceptibles a la hidrólisis también pueden ser degradables enzimáticamente . Por ejemplo, las esterasas pueden actuar como ésteres de ácido carboxílico o ésteres de fosfato y las proteasas pueden actuar como enlaces de péptido y algunas uniones de amida.
Un "conector sensible al pH" se refiere a una unión que es estable a un pH y experimenta la degradación a otro pH. Por ejemplo, el conector sensible al pH puede ser estable o neutro en condiciones básicas, pero lábil en condiciones levemente ácidas .
Un "conector fotolábil" se refiere a una unión, tal como un enlace covalente, que se descompone al exponerlo a la luz. El conector fotolábil incluye un grupo aromático para absorber la luz entrante, que luego dispara un reordenamiento de los enlaces para descomponer ambos grupos unidos por el conector fotolábil.
Un "conector de profármaco autoinmolado o doble" se refiere a una unión en donde la función principal del conector es liberar un agente funcional solamente después de la activación de gatillo selectivo (por ejemplo, una caída en el pH o la presencia de una enzima específica del tejido) seguido por la descomposición química espontánea para liberar el agente funcional.
Un "agente funcional" se define que incluye un agente bioactivo o un agente de diagnóstico. Un "agente bioactivo" se define que incluye cualquier agente, fármaco, compuesto, o una mezcla de ellos que se dirige a un lugar biológico específico (agente dirigido) y/o proporciona algún efecto fisiológico o farmacológico local o sistémico que se puede demostrar in vivo o in vitro. Ejemplos no taxativos incluyen fármacos, vacunas, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, vitaminas y cofactores, polisacáridos , carbohidratos, esteroides, lípidos, grasas, proteínas, péptidos, polipéptidos , nucleótidos, oligonucleótidos , polinucleótidos, y ácidos nucleicos (por ejemplo, miARN, tARN, snARN, ARNi, ADN, cADN, constructos antisentido, ribozomas, etc) . Un "agente de diagnóstico" se define que incluye todos los agentes que permiten la detección o la producción de imágenes de un tejido o una enfermedad. Ejemplos de agentes de diagnóstico incluyen, en forma no taxativa, radiomarcadores , fluoróforos y colorantes .
Una "proteína terapéutica" se refiere a péptidos o proteínas que incluyen una secuencia de aminoácidos que constituye total o parcialmente un fármaco y se puede usar en aplicaciones farmacéuticas humanas o animales. Los expertos en el arte conocen numerosas proteínas terapéuticas que incluyen, en forma no taxativa, aquellos revelados en la presente.
La "fosforilcolina" , también denominada "PC", se refiere a lo siguiente : en donde * indica el punto de unión. La fosforilcolina es un grupo zwiteriónico e incluye sales (tales como sales interiores) y formas protonadas y desprotonadas de ella.
Un "polímero que contiene fosforilcolina" es un polímero que contiene fosforilcolina . Está específicamente contemplado que en cada caso en se especifica un polímero que contiene fosforilcolina en esta solicitud de patente para un uso particular, una fosforilcolina única también se puede emplear en dicho uso. Un "polímero que contiene un zwiterión" se refiere a un polímero que contiene un zwiterión.
Un "polímero que contiene poli (acriloiloxietil fosforilcolina" se refiere a un polímero de ácido acrílico que contiene por lo menos un monómero de acriloiloxietil fosforilcolina tales como 2 -metacriloiloxietil fosforilcolina (es decir, fosfato de etilo de 2-metacriloil-2 ' -trimetilamonio) .
"Que contiene" se refiere al proceso de formar un puente de contacto de por lo menos dos especies distinguibles de manera tal que puedan reaccionar. Se debe apreciar, sin embargo, que el producto de la reacción resultante se puede producir directamente desde una reacción entre los reactivos agregados o desde un compuesto intermedio desde uno más de los reactivos agregados que se pueden producir en la mezcla de la reacción.
Un "polímero soluble en agua" se refiere a un polímero que es soluble en agua. Una solución de un polímero soluble en agua puede transmitir por lo menos un 75%, más preferentemente por lo menos un 95% de luz, transmitido por la misma solución después del filtrado. Basado en el peso, un polímero soluble en agua o un segmento de él puede ser por lo menos un 35%, por lo menos un 50%, un 70%, un 85%, un 95% o un 100% (en peso del polímero seco) soluble en agua.
El "peso molecular" en el contexto del polímero se puede expresar como un peso molecular promedio en número, o un peso molecular promedio en peso o un peso molecular pico. A menos que se indique de otro modo, todas las referencias al peso molecular de la presente se refieren al peso molecular pico. Estas determinaciones del peso molecular, promedio de número, promedio de peso y pico, se pueden medir usando la cromatografía de permeación u otras técnicas de cromatografía de líquidos. También se pueden usar otros métodos para medir los valores del peso molecular, tales como el uso del análisis del grupo de extremo o la medición de propiedades coligativas (por ejemplo, depresión del punto de congelamiento, elevación del punto de ebullición, o presión osmótica) para determinar el peso molecular promedio en número, o el uso de técnicas de difusión de luz, ultracentrifugación o viscometría para determinar el peso molecular promedio de peso. Los reactivos poliméricos de la invención normalmente son polidispersos (es decir, el peso molecular promedio en número y el peso molecular promedio en peso de los polímeros no son iguales) , que poseen valores de polidispersidad bajos preferentemente menores de 1,5, juzgados por la cromatografía de permeación de gel. En otra realización, las polidispersidades pueden estar en la gama de 1,4 a 1,2, más preferentemente inferior a 1,15, aún más preferentemente inferior a 1,10, aún más preferentemente inferior a 1,05 y más preferentemente inferior a 1,03.
La frase "un" o "una" entidad como se usa en la presente se refiere a uno o más que la totalidad; por ejemplo, un compuesto se refiere a uno o más compuestos o por lo menos un compuesto. Como tales, los términos "un" (o "una"), "uno o más" y "por lo menos uno" se pueden usar en forma intercambiable en la presente. "Aproximadamente" como se usa en la presente significa la variación que se podría observar en mediciones tomadas entre diferentes instrumentos, muestras, y preparaciones de muestras.
"Protegido", "forma protegida", "grupo de protección" y "grupo protector" se refieren a la presencia de un grupo (es decir, el grupo protector) que impide o bloquea la reacción de un grupo funcional reactivo químicamente particular en una molécula en ciertas condiciones de reacción. El grupo protector varía según el tipo de grupo reactivo químicamente que se está protegiendo así como según las condiciones de la reacción que se empleen y la presencia de grupos reactivos o protectores adicionales en la molécula, si existieran. El experto en el arte reconocerá los grupos protectores conocidos en el arte, tales como aquellos que se hallan en el tratado de Greene et al, "Grupos Protectores en la Síntesis Orgánica", 3a Edición, John Wiley and Sons, Inc., Nueva York, 1999.
"Separador" y "grupo separador" se usan en forma intercambiable en la presente para referirse a un átomo o una colección de átomos usados opcionalmente para unir grupos interconectados tales como un extremo de un polímero soluble en agua y un grupo reactivo de un agente funcional y un grupo reactivo. Un separador puede ser estable en forma hidrolítica o puede incluir una unión susceptible a la hidrólisis o degradable en forma enzimática.
"Alquilo" se refiere a un radical recto o ramificado, saturado, alifático que tiene el número de átomos de carbono indicado; Por ejemplo, el alquilo de Ci-C6 incluye, en forma no taxativa, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, ventilo, isopentilo, hexilo, etc. Otros grupos alquilo incluyen, en forma no taxativa, heptilo, octilo, nonilo, decilo, etc. El alquilo puede incluir cualquier número de carbonos, tales como 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 3-4, 3-5, 3-6, 4-5, 4-6 y 5-6. El grupo alquilo es normalmente monovalente, pero puede ser divalente, tal como cuando el grupo alquilo une dos grupos juntos.
El término "inferior" citado anteriormente y en adelante en relación con los radicales o compuestos orgánicos respectivamente define un compuesto o radical que puede ser ramificado o no ramificado con hasta y que incluye 7, preferentemente hasta y que incluye 4 y (no ramificado) uno o dos átomos de carbono.
"Alquileno" se refiere a un grupo alquilo, definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos, es decir, un radical de hidrocarburo divalente. Los dos grupos unidos al alquileno pueden estar unidos al mismo átomo o a diferentes átomos del alquileno. Por ejemplo, un alquileno de cadena recta puede ser el radical bivalente de -(CH2)n, en donde n es 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Los grupos alquileno incluyen, en forma no taxativa, metileno, etileno, propileno, isopropileno, butileno, isobutileno, sec-butileno, pentileno y hexileno.
Los sustituyentes de los radicales de alquilo y heteroalquilo (que incluyen aquellos grupos que suelen denominarse alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, y heterocicloalquenilo) pueden ser una variedad de grupos seleccionados de: -0R' , =0, =NR' , =N-0R' , -NR'R", -SR' , -halógeno, -SiR'R"R"', -0C(0)R', -C(0)R', -C02R' , -CONR'R", -0C(0)NR'R", -NR"C(0)R' , -NR' -C (0) NR"R" ' , -NR"C(0)2R', -NH-C (NH2) =NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C (NH2) =NR' , -S(0)R', -S(0)2R', -S(0)2NR'R", -CN y -N02 en un número que está en la gama desde cero a (2m'+l) , donde m' es el número total de los átomos de carbono en dicho radical. R' , R" y R" ' se refieren cada uno independientemente a hidrógeno, alquilo y heteroalquilo (de Ci-C8) no sustituido, arilo no sustituido, arilo sustituido con 1-3 halógeno, grupos alquilo, alcoxi o tioalcoxi no sustituidos, o grupos aril -alquilo (de Ci-C4) . Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5, 6, o 7 miembros. Por ejemplo, se entiende que -NR'R" incluye 1-pirrolidinilo y 4 -morfolinilo . A partir de la discusión de sustituyentes precedente, un experto en el arte entenderá que el término "alquilo" incluye grupos tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo (por ejemplo, -C(0)CH3f -C(0)CF3, -C (O) CH2OCH3 , y similares) . Preferentemente, los grupos alquilo y heteroalquilo sustituidos tienen de 1 a 4 sustituyentes, más preferentemente 1, 2 o 3 sustituyentes. Son excepciones aquéllos grupos perhalo alquilo (por ejemplo, pentafluoroetilo y similares) que también son preferidos y están contemplados por la presente invención.
Los sustituyentes para los radicales de alquilo y de heteroalquilo (que incluyen aquellos grupos frecuentemente denominados alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo , cicloalquenilo y heterocicloalquenilo) pueden ser uno o más de una variedad de grupos seleccionados, en forma no taxativa'; de: -0 ' , =0, =NR' , =N-0R' , -MR'R", -SR' , -halógeno, -SiR'R"R"', -0C(0)R', -C(0)R', -C02R' , -CONR'R", -0C(0)NR'R", -NR"C(0)R', -NR' -C (O) NR"R" ' , -NR"C(0)2R', -NR-C (NR' R"R' " ) =NR" " , -NR-C (NR' R" ) =NR' " , -S(0)R', -S(0)2R', -S(0)2NR'R", -NRS02R' , -C y -N02 en un número que está en la gama de cero a (2m'+l), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R' , R" , R" ' y R"" preferentemente cada uno se refiere independientemente a hidrógeno, heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, por ejemplo, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo sustituido o no sustituido, grupos alcoxi o tioalcoxi, o grupos arilalquilo. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente así como lo son cada uno de los grupos R' , R" , R'" y R"" cuando más de uno de estos grupos está presente. Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5, 6, o 7 miembros. Por ejemplo, se entiende que -NR'R" incluye, en forma no taxativa, 1-pirrolidinilo y 4 -morfolinilo . A partir la discusión de sustituyentes precedentes, un experto en el arte entenderá que se entiende que el término "alquilo" incluye grupos que incluyen átomos de carbono unidos a grupos diferentes de los grupos hidrógeno, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo (por ejemplo, -C(0)CH3, -C(0)CF3, -C(0)CH2OCH3 y similares).
"Alcoxi" se refiere al grupo alquilo que tiene un átomo de oxígeno que conecta el grupo alcoxi al punto de unión o está unido a dos carbonos del grupo alcoxi. Los grupos alcoxi incluyen, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, iso-propoxi, butoxi , 2-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, pentoxi , hexoxi, etc. Los grupos alcoxi además se pueden sustituir adicionalmente con una variedad de sustituyentes descritos en la presente. Por ejemplo, los grupos alcoxi se pueden sustituir con halógenos para formar un grupo "halo-alcoxi" .
"Carboxialquilo" significa un grupo alquilo (definido en la presente) sustituido con un grupo carboxi . Por el término "carboxicicloalquilo" se entiende un grupo cicloalquilo (definido en la presente) sustituido con un grupo carboxi . Por el término alcoxialquilo se entiende un grupo alquilo (definido en la presente) sustituido con un grupo alcoxi . El término "carboxi" empleado en la presente se refiere a ácidos carboxilicos y sus ésteres .
"Haloalquilo" se refiere a alquilo definido anteriormente donde algunos o la totalidad de los átomos de hidrógeno se sustituyen con los átomos de halógeno. Halógeno (halo) preferentemente representa cloro o fluoro, pero también pueden ser bromo o yodo. Por ejemplo, haloalquilo incluye trifluorometilo, fluorometilo , 1 , 2 , 3 , 4 , 5-pentafluoro-fenilo, etc. El término "perfluoro" define un compuesto o radical que tiene todos los hidrógenos disponibles que se reemplazan con flúor. Por ejemplo, perfluoroalquilo se refiere a 1 , 2 , 3 , 4 , 5-pentafluorofenilo, perfluorometilo se refiere a 1 , 1 , 1 -trifluorometilo y perfluorometoxi se refiere a 1,1, 1-trifluorometoxi .
"Fluoro-alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo donde uno, algunos, o todos los átomos de hidrógeno se han reemplazado por flúor.
"Citoquina" en el contexto de esta invención es un miembro de un grupo de moléculas de señalización de proteínas que pueden participar en la comunicación de célula a célula en las respuestas inmunes e inflamatorias. Las citoquinas son normalmente glicoproteínas solubles en agua, pequeñas que tienen una masa de 8-35 kDa .
"Cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo cíclico que contiene de 3 a 12, de 3 a 10, o de 3 a 7 átomos de carbono endocíclicos . Los grupos cicloalquilo incluyen estructuras de anillos fusionados, en puente y espiro.
"Endocíclico" se refiere a un átomo o grupo de átomos que comprenden parte de una estructura de anillo cíclico.
"Exocíclico" se refiere a un átomo o grupo de átomos que están unidos pero no definen la estructura de anillo cíclico. "Éter de alquilo cíclico" se refiere a un grupo alquilo cíclico de 4 o 5 miembros que tiene 3 o 4 átomos de carbono endocíclicos y 1 átomo de oxígeno o de azufre endocíclico (por ejemplo, oxetano, tietano, tetrahidrofurano , tetrahidrotofeno) ; o un grupo alquilo cíclico de 6 a 7 miembros que tiene 1 o 2 átomos de oxígeno o de azufre endocíclicos (por ejemplo, tetrahidropirano, 1.3-dioxano, 1,4-dioxano, tetrahidrotiopirano, 1,3-ditiano, 1.4-ditiano, 1 , 4 -oxatiano) .
"Alquenilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificado de 2 a 6 átomos de carbono, que tiene por lo menos un enlace doble. Ejemplos de grupos alquenilo incluyen, en forma no taxativa, vinilo, propenilo, isopropenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, isobutenilo, butadienilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, isopentenilo, 1 , 3 -pentadienilo, 1 , 4 -pentadienilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 1 , 3-hexadienilo, 1 , 4 -hexadienilo, 1, 5-hexadienilo, 2 , 4 -hexadienilo, o 1 , 3 , 5-hexatrienilo . Los grupos alquenilo también pueden tener de 2 a 3 , de 2 a 4 , de 2 a 5, de 3 a 4, de 3 a 5, de 3 a 6, de 4 a 5, de 4 a 6 y de 5 a 6 carbonos. El grupo alquenilo es normalmente monovalente, pero puede ser divalente, tal como cuando el grupo alquenilo une dos grupos juntos.
"Alquenileno" se refiere a un grupo alquenilo, definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos, es decir un radical de hidrocarburo divalente. Los dos grupos unidos al alquenileno se pueden unir al mismo átomo o a átomos diferentes del aquenileno. Los grupos alquenileno incluyen, en forma no taxativa, etenileno, propenileno, isopropenileno, butenileno, isobutenileno, sec-butenileno, pentenileno y hexenileno.
"Alquinilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificado de 2 a 6 átomos de carbono, que tiene por lo menos un enlace triple. Ejemplos de grupos alquinilo incluyen, en forma no taxativa, acetilenilo, propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, isobutinilo, sec-butinilo, butadiinilo, 1-pentinilo, 2-pentinilo, isopentinilo, 1, 3-pentadiinilo, 1 , 4 -pentadiinilo, 1-hexinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 1, 3-hexadiinilo, 1 , 4-hexadiinilo, 1 , 5-hexadiinilo, 2 , 4-hexadiinilo, o 1 , 3 , 5-hexatriinilo . Los grupos alquinilo también pueden tener de 2 a 3 , de 2 a 4 , de 2 a 5, de 3 a 4, de 3 a 5, de 3 a 6 , de 4 a 5, de 4 a 6 y de 5 a 6 carbonos. El grupo alquinilo es normalmente monovalente, pero puede ser divalente, tal como cuando el grupo alquinilo une dos grupos juntos.
"Alquinileno" se refiere a un grupo alquinilo, definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos, es decir, un radical de hidrocarburo divalente. Los dos grupos unidos al alquinileno se pueden unir al mismo átomo o átomos diferentes del alquinileno. Los grupos alquinileno incluyen, en forma no taxativa, etinileno, propinileno, butinileno, sec-butinileno, pentinileno y hexinileno.
"Cicloalquilo" se refiere a un montaje de anillo insaturado, monocíclico, bicíclico fusionado o policíclico de puente que contienen de 3 a 12 átomos del anillo, o el número de átomos indicados. Los anillos monocíclicos incluyen, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y ciclooctilo. Los anillos bicíclicos y policíclicos incluyen, por ejemplo, norbornano, decahidronaftaleno y adamantano. Por ejemplo, el cicloalquilo de C3-8 incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclooctilo, y norbornano .
"Ciclobutileno" se refiere a un grupo cicloalquilo, como se definió anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos, es decir, un radical de hidrocarburo divalente. Los dos grupos unidos al cicloalquileno se pueden unir al mismo átomo o a átomos diferentes del cicloalquileno. Los grupos cicloalquileno incluyen, en forma no taxativa, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclohexileno y ciclooctileno .
"Heterocicloalquilo" se refiere a un sistema de anillo que tiene 3 miembros del anillo a 20 miembros del anillo y de 1 a 5 heteroátomos tales como N, 0 y S. Otros heteroátomos también pueden ser útiles, que incluyen, en forma no taxativa, B, Al, Si y P. Los heteroátomos también pueden oxidarse, por ejemplo, en forma no taxativa, hacia -S (O) - y -S(0)2-. Por ejemplo, el heterociclo incluye, en forma no taxativa, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, morfolino, pirrolidinilo, pirrolinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, piperazinilo, piperidinilo, indolinilo, quinuclidinilo y 1 , 4 -dioxa- 8 -aza-espiro [4.5]dec-8-ilo.
"Heterocicloalquileno" se refiere a un grupo heterocicloalquilo , definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos. Los dos grupos unidos al heterocicloalquileno se pueden unir al mismo átomo o a diferentes átomos del heterocicloalquileno.
"Arilo" se refiere a un montaje de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado, tricíclico o superior, que contiene de 6 a 16 átomos de carbono del anillo. Por ejemplo, el arilo puede ser fenilo, bencilo o naftilo, preferentemente fenilo. Por "arileno" se entiende un radical divalente derivado de un grupo arilo. Los grupos arilo pueden estar monosustituidos , disustituidos o trisustituidos por uno, dos o tres radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, arilo, hidroxi, halógeno, ciano, amino, amino-alquilo, trifluorometilo, alquilendioxi y oxi-alquileno de C2-C3; La totalidad de ellos opcionalmente están opcionalmente sustituidos adicionalmente, por ejemplo, como se definió anteriormente en la presente; o 1- o 2 -naftilo; o 1- o 2-fenantrenilo. Alquilendioxi es un sustituto divalente unido a dos átomos de carbono adyacentes de fenilo, por ejemplo, metilendioxi o etilendioxi. Oxi-alquileno de C2-C3 es también un sustituyente divalente unido a dos átomos de carbono adyacentes de fenilo, por ejemplo, oxietileno u oxipropileno . Un ejemplo para oxi -alquileno de C2-C3-fenilo es 2, 3-dihidrobenzofuran-5-ilo.
Los arilo preferidos son naftilo, fenilo o fenilo monosustituido o disustituido por alcoxi, fenilo, halógeno, alquilo o trifluorometilo, especialmente fenilo o fenilo-mono-sustituido o disustituido por alcoxi, halógeno o trifluorometilo y específicamente fenilo.
Ejemplos de grupos fenilo sustituido como R son, por ejemplo, 4 -clorofen-l-ilo, 3 , 4 -diclorofen-l-ilo, 4 -metoxifen- 1-ilo , 4 -metilfen-l-ilo, 4 -aminometilfen- 1- ilo, 4 -metoxietilaminometilfen-l-ilo, 4 -hidroxietilaminometilfen-l-ilo, 4 -hidroxietil - (metil) -aminometilfen-l-ilo, 3 -aminometilfen- 1- ilo, 4 -N-acetilaminometilfen-l-ilo, 4 -aminofen- 1-ilo, 3 -aminofen-l-ilo, 2 -aminofen-l-ilo, 4-fenil-fen- 1-ilo, 4 - (imidazol-l-il) -fenilo, 4- (imidazol- 1-ilmetil) -fen- 1-ilo, 4 - (morfolin-l-il) -fen-l-ilo, 4- (morfolin- 1-ilmetil) -fen- 1- ilo, 4 - (2 -metoxietilaminometil) -fen-l-ilo y 4 - (pirrolidin-l-ilmetil) -fen-l-ilo, 4- (tiofenil) -fen- 1- ilo, 4- (3-tiofenil) -fen-l-ilo, 4- (4-metilpiperazin-l-il) -fen-l-ilo y 4- (piperidinil) -fenilo y 4- (piridinil) -fenilo opcionalmente sustituido en el anillo heterocíclico .
"Arileno" se refiere a un grupo arilo, definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos . Los dos grupos unidos al amileno están unidos a átomos diferentes del amileno. Los grupos amileno incluyen, en forma no taxativa, fenileno.
"Arileno-oxi" se refiere a un grupo arileno, definido anteriormente, donde uno de los grupos unidos al arileno está unido a través de un átomo de oxígeno. Los grupos arileno-oxi incluyen, en forma no taxativa, fenileno-oxi En forma similar, los sustituyentes para los grupos arilo y heteroarilo son variados y se seleccionan de: -halógeno, -0R' , -OC(0)R', -NR'R", -SR' , -R' , -CN, -N02, -C02R' , -CONR'R", -C(0)R', -OC(0)NR'R", -NR"C(0)R', -NR"C(0)2R', , -NR' -C (0) NR"R" ' , -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C (NH2) =NR' , -S(0)R', -S(0)2R', -S(0)2NR'R", -N3, -CH(Ph)2, perfluoroalcoxi (de Ci-C4) y perfluoroalquilo (de Ci-C4) , en un número que está en la gama de cero al número total de valencias abiertas sobre el sistema del anillo aromático; y donde R' , R" y R" ' se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo (de Ci-C8) y heteroalquilo, arilo y heteroarilo no sustituido, (arilo no sustituido) -alquilo (de C1-C4) y (arilo no sustituido) oxi-alquilo (de C1-C4) .
Dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o de heteroarilo se pueden reemplazar opcionalmente con un sustituyente de la fórmula -T-C (O) - (CH2) q-U- , en donde T y U son independientemente -NH- , -O-, -CH2- o un enlace simple y q es un número entero de 0 a 2. Alternativamente, dos de los sustituyentes o átomos adyacentes del anillo de arilo o de heteroarilo opcionalmente pueden reemplazarse con un sustituyente de la fórmula -A- (CH2) r-B- , en donde A y B son independientemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, -S(0)2NR'- o un enlace simple y r es un número entero de 1 a 3. Uno de los enlaces simples del anillo nuevo así formados opcionalmente se puede reemplazar con un enlace doble. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o de heteroarilo opcionalmente se pueden reemplazar con un sustituyente de la fórmula - (CH2) 3-X- (CH2) t- , donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3 y X es -0-, -NR' - , -S-, -S(0)-, -S(0)2-, o -S(0)2NR'-. El sustituyente R' en -NR' - y -S(0)2NR'- se selecciona de hidrógeno o alquilo (de Ci-C6) no sustituido .
"Heteroarilo" se refiere a un montaje de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado o tricíclico que contiene de 5 a 16 átomos del anillo, donde de 1 a 4 de los átomos del anillo son heteroátomos cada uno de N, O o S. Por ejemplo, el heteroarilo incluye piridilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzotienilo, benzofuranilo, furanilo, pirrolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, imidazolilo, tienilo, o cualquier otro radical sustituido, especialmente monosustituido o disustituido, por ejemplo por alquilo, nitro o halógeno. Piridilo representa 2-, 3- o 4-piridilo, ventajosamente 2- o 3-piridilo. Tienilo representa 2-o 3 -tienilo. Quinolinilo representa preferentemente 2-, 3- o 4 -quinolinilo . Isoquinolinilo representa preferentemente 1-, 3- o 4-isoquinolinilo . Benzopiranilo, benzotiopiranilo representa preferentemente 3 -benzopiranilo o 3 -benzotiopiranilo , respectivamente. Tiazolilo representa preferentemente 2- o 4-tiazolilo y más preferentemente 4-tiazolilo. Triazolilo es preferentemente 1-, 2- o 5- (1 , 2 , 4-triazolilo) . Tetrazolilo es preferentemente 5-tetrazolilo.
Preferentemente, heteroarilo es piridilo, indolilo, quinolinilo, pirrolilo, tiazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, imidazolilo, tienilo, furanilo, benzotiazolilo, benzofuranilo, isoquinolinilo, benzotienilo , oxazolilo, indazolilo, o cualquiera de los radicales sustituidos, especialmente monosustituidos o disustituidos.
Como se usa en la presente, el término "heteroalquilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 3 heteroátomos tales como N, O y S. Otros heteroátomos también pueden ser útiles, e incluyen, en forma no taxativa, B, Al, Si y P. Los heteroátomos también se pueden oxidar, por ejemplo, en forma no taxativa, hacia -S(0)- y -S(0)2~- Por ejemplo, heteroalquilo puede incluir éteres, tioéteres, alquil -aminas y alquil -tioles .
Como se usa en la presente, el término "heteroalquileno" se refiere a un grupo heteroalquilo, definido anteriormente, que une por lo menos otros dos grupos. Los dos grupos unidos al heteroalquileno se pueden unir al mismo átomo o a átomos diferentes del heteroalquileno.
"Electrófilo" se refiere a un ion o átomo o colección de átomos, que pueden ser iónicos, que tienen un centro electrófilo, es decir, es decir un centro que es un electrón que busca o es capaz de reaccionar con un nucleófilo. Un electrófilo (o reactivo electrófilo) es un reactivo que forma un enlace a su pareja de reacción (el nucleofilo) aceptando ambos electrones de unión desde esa pareja.
"Nucleofilo" se refiere a un ion o átomo o colección de átomos, que pueden ser iónicos, que tienen un centro nucleofilo, es decir un centro que busca un centro electrófilo o es capaz de de reaccionar con un electrófilo. Un nucleofilo (o reactivo nucleofilo) es un reactivo que forma un enlace a su pareja de reacción (el electrófilo) donando ambos electrones de enlace. Un "grupo nucleofilo" se refiere a un nucleofilo después de que ha reaccionado con un grupo reactivo. Ejemplos no taxativos incluyen amino, hidroxilo, alcoxi, haloalcoxi y similares.
"Maleimido" se refiere a un grupo pirrol-2 , 5-diona-l-ilo que tiene la estructura: que después de reaccionar con un sulfhidrilo (por ejemplo un tio alquilo) forma un grupo -S-maleimido que tiene la estructura donde "·" indica el punto de unión para el grupo maleimido y "eP" indica el punto de unión del átomo de azufre del tiol al resto del grupo que lleva el sulfhidrilo original .
A los fines de esta invención, los "aminoácidos naturales" hallados en proteínas y polipéptidos son L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L-aspártico, L-cisteína, L-glutamina, ácido L-glutámico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptófano, L-tirosina y/o L-valina. Los "aminoácidos no naturales" hallados en proteínas son cualquier aminoácido diferente de aquellos recitados como aminoácidos naturales. Los aminoácidos no naturales incluyen, en forma no taxativa, los isómeros D de los aminoácidos naturales y mezclas de los isómeros D y L de los aminoácidos naturales. Otros aminoácidos, tales como 4-hidroxiprolina, desmosina, isodesmosina, 5-hidroxilisina, épsilon-N-metillisina, 3-metilhistidina, aunque se hallen en proteínas naturales, se considera que son aminoácidos no naturales que se hallan en proteínas con el fin de esta invención cuando se introducen generalmente por medios diferentes de la traducción de ribosomas del mARN.
"Lineal" con referencia a la geometría, arquitectura o estructura general de un polímero, se refiere a un polímero que tiene una cadena principal derivada de monómero único.
"Ramificado" con referencia a la geometría, arquitectura o estructura general de un polímero, se refiere a un polímero que tiene 2 o más "ramas" de polímero que se extienden desde un grupo único, tal como un grupo L que puede derivar de un iniciador empleado en una reacción de polimerización de radical de transferencia de átomos. Un polímero ramificado puede poseer 2 brazos de polímeros, 3 brazos de polímeros, 4 brazos de polímeros, 5 brazos de polímeros, 6 brazos de polímeros, 7 brazos de polímeros, 8 brazos de polímeros o más. Con el fin de esta invención, se indica que los compuestos que tienen tres o más brazos de polímeros que se extienden desde un grupo lineal único tienen una estructura de "peine" o arquitectura de "peine" . También se puede lograr la ramificación a través de estructuras "estadísticas" para crear arquitecturas similares a dendrímeros. Composición "farmacéuticamente aceptable" o "composición farmacéutica" se refiere a una composición que comprende un compuesto de la invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable o excipientes farmacéuticamente aceptables.
"Excipiente farmacéuticamente aceptable" y "portador farmacéuticamente aceptable" se refieren a un excipiente que puede estar incluido en las composiciones de la invención y que no produce ningún efecto toxicologico adverso importante sobre el paciente. Ejemplos no taxativos de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen agua, NaCl, soluciones salinas normales, Ringer lactado, sacarosa normal, glucosa normal y similares.
"Paciente" o "sujeto que lo necesita" se refiere a un organismo vivo que sufre o es propenso a una condición que se puede prevenir o tratar mediante la administración de una composición farmacéutica provista en la presente. Ejemplos no taxativos incluyen humanos, otros animales y otros animales no mamíferos.
"Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un agente funcional conjugado o de una composición farmacéutica útil para tratar, mejorar, o prevenir una enfermedad o condición identificada, o para presentar un efecto terapéutico o inhibitorio detectable. El efecto se puede detectar mediante cualquier método conocido en el arte.
La "semivida biológica" de una sustancia es un parámetro farmacocinético que especifica el tiempo requerido para una vida de la sustancia que se debe eliminar desde un organismo que después de la introducción de la sustancia en el organismo.
III. Copolimeros Aleatorios que Contienen un Zwiterion La presente invención proporciona copolimeros aleatorios que tienen grupos zwiteriónicos , tales como fosforilcolina y por lo menos un agente funcional. En algunas realizaciones, los copolimeros aleatorios de la presente invención tienen un primer monómero con fosforilcolina, por lo menos un segundo monómero que tiene un agente funcional o un grupo conector y un grupo iniciador que tiene un agente funcional o un grupo conector, en donde el grupo funcional se puede unir al segundo monómero o al grupo iniciador a través de un conector.
En otras realizaciones, los copolimeros aleatorios de la presente invención tienen la fórmula I : En la fórmula I, las unidades de monómero M1 y M2 son cualquier monómero adecuado para la polimerización a través de métodos de radicales libres controlados, tales como la polimerización de radicales de transferencia de átomos (ATRP) . Cada uno de los monómeros M1 y M2 pueden tener cualquier número adecuado de comonómeros en el copolímero aleatorio, definidos por los radicales x e y1, respectivamente. El monómero M1 está unido a un grupo zwiteriónico ZW, tal como fosforilcolina, a través de una cadena de alquileno (definida por el radical n) . Los copolímeros aleatorios pueden incluir un comonomero único M2 (el radical z es 1) , o pueden incluir varios comonómeros M2 (z es mayor de 1) en donde los comonómeros diferentes 2 son iguales o diferentes. Los comonómeros 2 están unidos cada uno a un grupo R2 que puede ser inerte pero modifica las propiedades del copolímero aleatorio (tal como alquilo, arilo, etc) , o los grupos R2 pueden ser funcionales por ejemplo cuando el grupo R2 incluye un agente funcional A, un grupo conector LG o un iniciador I . Cuando el grupo R2 incluye uno de los grupos funcionales, el grupo funcional puede unirse opcionalmente al comonomero M2 a través de un conector L. Los grupos R2 pueden incluir una variedad de grupos funcionales y grupos inertes para sintonizar las propiedades y la funcionalidad del copolímero aleatorio. Por ejemplo, varios agentes dirigidos diferentes pueden estar incluidos junto con diferentes fármacos o proteínas terapéuticas como el agente funcional A. Los monómeros M1 y M2 se pueden polimerizar a través de un iniciador, I-I', que se pueden descomponer en el fragmento de iniciador I y el depurador de radical I'. El fragmento de iniciador I puede ser cualquier grupo que inicia la polimerización. El depurador de radical I' puede ser cualquier grupo que termina en forma reversible la cadena de polímero creciente. El depurador de radical I' puede ser un halógeno tal como bromo, que permite que el extremo del polímero tenga una funcionalidad después de la polimerización. Además, el fragmento de iniciador I puede tener (pero no necesita tener) una funcionalidad con el grupo R1 que puede incluir una variedad de grupos funcionales para sintonizar la funcionalidad del copolímero aleatorio. Por ejemplo, el grupo R1 puede incluir un agente funcional A o un grupo conector LG , cada uno opcionalmente unido al fragmento de iniciador I a través de un conector I . Además, el fragmento de iniciador I puede tener varios sitios de inicio de manera tal que el polímero de producto tenga varias ramas de polímero (el radical s es mayor de 1) .
En algunas realizaciones, cada monómero M1 y M2 de la fórmula I puede ser independientemente un acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina o una vinil-pirrolidona. Además, R1 de la fórmula I puede ser independientemente H , L1-A1, un grupo conector LG1 o L^ - LiG1 y cada R2 de la fórmula I es independientemente H, alquilo de Ci-2o/ alquenilo de C2-6# alquinilo de C2-6# haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, heteroarilo, A2, L2-A2, LG2 , L2 - LG2 , I2 y L2-I2. El grupo ZW de la fórmula I es un grupo zwiteriónico . Los grupos I y I' de la fórmula I pueden ser cada uno independientemente un fragmento de iniciador de manera tal que la combinación de I-I' sea un iniciador, I1, para la polimerización del copolímero aleatorio de la fórmula I. Alternativamente, I' puede ser H o alquilo de Ci-6. El grupo I2 es un iniciador. Además, cada uno de los grupos L1 y L2 es un conector, cada uno de los grupos A1 y A2 es un agente funcional y cada uno de los grupos LG1 y LG2 es un grupo conector. En la fórmula I precedente, los subíndices x y y1 son cada uno independientemente un número entero de 1 a 1000, el subíndice z es un número entero de 1 a 10, el subíndice s es un número entero de 1 a 100, y el subíndice n es un número entero de 1 a 20, en donde R1 es L1-A1 o uno de R2 es L2-A2.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden tener cualquier número adecuado de unidades de repetición para cada uno de los monómeros M1 y M2. Ejemplos de gamas de unidades de repetición para cada comonómero incluyen, en forma no taxativa, de 1 a 10.000, de 10 a 5.000, de 10 a 2.000, de 10 a 1.500, de 10 a 1.000, de 100 a 1.000, de 100 a 900, de 100 a 800, de 100 a 700, de 100 a 600 y de 100 a 500. Cuando varios monómeros M2 están presentes, cada monómero M2 puede tener un número diferente de unidades de repetición.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden tener cualquier peso molecular adecuado. Ejemplos de pesos moleculares para los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden ser de 1000 a 1.500.000 Dalton (Da). En algunas realizaciones, los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden tener un peso molecular de 5.000 Dalton, de 10.000 Dalton, de 25.000 Dalton, de 50.000 Dalton, de 75.000 Dalton, de 100.000 Dalton, de 150.000 Dalton, de 200.000 Dalton, de 250.000 Dalton, de 300.000 Dalton, de 350.000 Dalton, de 400.000 Dalton, de 450.000 Dalton, de 500.000 Dalton, de 550.000 Dalton, de 600.000 Dalton, de 650.000 Dalton, de 700.000 Dalton, de 750.000 Dalton, de 800.000 Dalton, de 850.000 Dalton, de 900.000 Dalton, de 950.000 Dalton, de 1.000.000 Dalton y de 1.250.000 Dalton.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención también pueden tener cualquier número de comonómeros, M2. Por ejemplo, el número de comonómeros, el subíndice z, puede ser de 1 a 10, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. El número de comonómeros, el subíndice z, también puede ser de 1 a 5, de 1 a 4 , de 1 a 3 , o de 1 a 2. En algunas realizaciones, el copolímero aleatorio de de la presente invención puede tener dos monómeros diferentes donde el subíndice z es 1, tal como en la fórmula II: En otras realizaciones, el copolímero aleatorio puede tener monómeros diferentes donde el subíndice z es 2, tal como en fórmula III : Otros comonómeros M2 pueden estar presentes en los copolímeros aleatorios de la presente invención, tales como M2c, M2d, M2e, M2 , M29, M2h, etc., donde cada comonómero está presente en el mismo valor o en un valor diferente de y1, y cada comonómero tiene un grupo R2 correspondiente unido, R2c, R2d, R2e, R2f, R2g, R2h, etc., respectivamente. Cada grupo M2, tal como Ma, M2b, M2c, etc., puede ser lo definido anteriormente para M2. Cada grupo R2, tal como R2a, R2b, R2c, etc., puede ser lo definido anteriormente para R2. En forma similar, cada grupo y1, tal como yla, ylb, ylc, etc., puede ser lo definido anteriormente para y1.
En algunas realizaciones, el copolímero aleatorio puede tener la fórmula III, en donde R2a y R2b son cada uno independientemente H, alquilo de Ci.2o# alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3.8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, heteroarilo, A2, L2-A2, LG2, o L -LG2; M2a y M2b son cada uno independientemente acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina o vinil -pirrolidona ; e yla e ylb son cada uno independientemente un número entero de 1 a 1000.
Los monómeros diferentes de los copolímeros aleatorios también pueden estar presentes en cualquier relación adecuada. Por ejemplo, los monómeros M2, colectiva o individualmente, pueden estar presentes en relación con el monómero M1 en una relación de 100:1, 50:1, 40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50 y 1:100. Además, cada monómero M2 puede estar presente en cualquier relación adecuada en relación con M1 o cualquier otro monómero M2, tal como 100:1, 50:1, 40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50 y 1:100.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden tener cualquier arquitectura adecuada. Por ejemplo, los copolímeros aleatorios pueden ser lineales o ramificados. Cuando los copolímeros aleatorios están ramificados, pueden tener cualquier número adecuado de ramas de copolímeros, definidas por el subíndice s de la fórmula I, tal como 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y hasta 100 ramas. En algunas realizaciones, el subíndice s puede ser de 1 a 20, de 1 a 15, de 1 a 10, de l a 9, de l a 8, de l a 7, de l a 6, de l a 5, de l a 4, de l a 3 o de l a 2. Los copolímeros aleatorios de la presente invención pueden adoptar cualquier arquitectura adecuada. Por ejemplo, los copolímeros aleatorios pueden ser lineales, ramificados, estrellas, dendrímeros, dendrinjertos, peines, etc.
Un agente funcional de los copolímeros aleatorios se pueden unir a uno de los comonómeros M2, o al fragmento de iniciador I, o ambos. Cuando están presentes varios agentes funcionales, un agente funcional se puede unir tanto al comonómero M2 como al fragmento de iniciador I. En algunas realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula lia: (Ha) .
En la fórmula lia, el agente funcional A1 puede ser un fármaco o una proteína terapéutica y un agente funcional A2 puede ser un agente dirigido. Alternativamente, el agente funcional A1 puede ser un agente dirigido y el agente funcional A2 puede ser un fármaco o una proteína terapéutica. Además, los agentes funcionales A1 y A2 pueden ser ambos agentes terapéuticos. Los agentes funcionales se pueden elegir para inhibir (o activar) los agentes distinguibles en la misma vía molecular, proporcionar la inhibición (o la activación) de una vía primaria y compensatoria o, inhibir (o activar) el mismo blanco en sitios de unión diferentes para reducir la resistencia o permitir el uso de dosis más bajas para minimizar la toxicidad. Además, los conectores L1 y L2 pueden ser iguales o diferentes. Por ejemplo, el conector L1 puede ser un conector descomponible, tal como cuando se une a un fármaco o agente terapéutico para facilitar la liberación del fármaco o la proteína terapéutica, mientras que el conector L2 puede ser un conector no descomponible, tal como cuando se une a un agente dirigido. Además, el conector L1 puede ser un conector no descomponible, mientras que el conector L2 puede ser un conector descomponible. Alternativamente, los conectores L1 y L2 pueden ser conectores descomponibles o conectores no descomponibles. Además, el conector unido al agente dirigido también puede ser un conector descomponible. Alternativamente, uno o ambos de L1 y L2 puede ser conectores de profármacos autoinmolados o dobles.
Cuando varios comonómeros M2 están presentes, cada comonómero puede tener un agente funcional diferente unido. Por ejemplo, copolímero aleatorio puede tener la fórmula Illa: Cuando varios comonómeros M2 están presentes, cada comonómero M2 puede tener un agente funcional diferente unido. Por ejemplo, el copolímero aleatorio puede tener la fórmula Illa: En la fórmula Illa, 2a y M2b pueden ser lo definido anteriormente para M2; Aa y A2b pueden ser lo definido anteriormente para A2; L2a y L2b pueden ser lo definido anteriormente para L2; e yla e ylb pueden ser lo definido anteriormente para y1. En algunas realizaciones, cada uno de L2a y L2b es un conector; y cada uno de A2a y A2b es un agente funcional .
Los agentes funcionales A2a y A2b pueden ser los mismos o diferentes en la fórmula Illa. El agente funcional A2a puede ser un fármaco o una proteína terapéutica y el agente funcional A2b puede ser un agente dirigido. Alternativamente, los agentes funcionales A2a y A2b pueden ser ambos agentes dirigidos y el agente funcional A1 puede ser el fármaco o agente terapéutico. Los agentes funcionales Aa y Ab también pueden ser ambos un fármaco o un agente terapéutico, mientras que el grupo funcional A1 es el agente dirigido. Cuando los agentes funcionales A2a y A2b son ambos un fármaco o agentes terapéuticos, cada agente terapéutico A2a y A2b puede ser un fármaco o un agente terapéutico diferente. Además, uno de los agentes funcionales Aa y A2b puede ser un fármaco o un agente terapéutico y el otro puede ser un agente dirigido, donde el agente funcional A1 puede ser cualquier agente funcional .
Como se describió para la fórmula lia, los conectores L1, La y L2b de la fórmula Illa pueden ser los mismos o diferentes. Por ejemplo, el conector L1 puede ser un conector descomponible cuando se une. a un fármaco o agente terapéutico para facilitar la liberación del fármaco o del agente terapéutico, mientras que los conectores L2a y L2b pueden ser conectores no descomponibles cuando se unen a los agentes dirigidos. Alternativamente, el conector L1 también puede ser un conector no descomponible y los conectores L2a y L2b pueden ser conectores descomponibles. Además, los conectores L2a y L2b pueden ser los mismos o diferentes, por ejemplo donde uno es un conector descomponible y el otro es un conector no descomponible. Los conectores L2a y L2b también pueden ser conectores descomponibles diferentes, por ejemplo cuando cada uno se une a un fármaco, para proporcionar diferentes velocidades de liberación para diferentes fármacos.
En algunas realizaciones, no hay ningún agente funcional unido al fragmento de iniciador I, tal como en la fórmula IIIb: En la fórmula Illb, M2a y M2b pueden ser lo definido anteriormente para M2; A2 y A2b pueden ser lo definido anteriormente para A2; L2a y L2b pueden ser lo definido anteriormente para L2; e yla e ylb pueden ser lo definido anteriormente para y1. En algunas realizaciones, cada uno de L2a y L2b es un conector; y cada uno de A2a y A2b es un agente funcional .
En la fórmula IIIb, los agentes funcionales A2a y Ab pueden ser los mismos o diferentes, como se describió anteriormente y los conectores L2a y L2b pueden ser los mismos o diferentes. En otras realizaciones, uno de los comonómeros M2 pueden no tener ningún agente funcional o grupo conector, tal como en la fórmula lile: En la fórmula IIIc, M2a y M2b pueden ser lo definido anteriormente para M2; A2a puede ser lo definido anteriormente para A2; L2a puede ser lo definido anteriormente para L . En forma similar, yla e ylb pueden ser lo definido anteriormente para y1.
Cuando otros comonómeros M2 están presentes en los copolímeros aleatorios de la presente invención, los conectores correspondientes L2 pueden ser los mismos o diferentes como los conectores L1, L2a y L2b, como se describió anteriormente. Además, los agentes funcionales correspondientes A2 pueden ser los mismos o diferentes como los agentes funcionales A1, Aa y A2b, como se describió anteriormente.
En algunas realizaciones, los copolímeros aleatorios tienen los grupos conectores LG unidos a alguno o a ambos del fragmento de iniciador I y los comonómeros M2, tales como los que se muestran en las siguientes estructuras : Los grupos conectores LG2 facilitan el "chasquido" sobre la unión química covalente de agentes funcionales y grupos iniciadores después de la polimerización.
Cuando una pluralidad de comonómeros M2 está presente, los comonómeros se pueden unir a un agente funcional o a un grupo conector, por ejemplo como se muestra en la siguiente fórmula: en donde M2 y M2b pueden ser lo definido anteriormente para M2; LG2a puede ser lo definido anteriormente para LG2; L2b puede ser lo definido anteriormente para L2; A2b puede ser lo definido anteriormente para A2; e yla e yl pueden ser lo definido anteriormente para y1. Además, el grupo conector puede estar presente sobre el fragmento de iniciador I mientras que los agentes funcionales A2 se unen a los comonómeros M2. Alternativamente, cuando el grupo conector LG se une al fragmento de iniciador I, un segundo grupo conector LG se puede unir a uno de los comonómeros M2 : Además, un agente funcional A1 se puede unir al fragmento de iniciador I mientras que los grupos conectores LG se unen a los comonómeros 2, donde los grupos conectores pueden ser los mismos o diferentes: en donde M2a y M2b pueden ser los definidos anteriormente para M2; L2a y L2b pueden ser los definidos anteriormente para L2; LG2a y LG2b pueden ser los definidos anteriormente para LG2; e yla e ylb pueden ser los definidos anteriormente para y1.
En algunas realizaciones cuando hay varios comonómeros M2 , uno de los comonómeros M2 se puede unir a un grupo diferente de un grupo conector LG, un agente funcional A o un iniciador I. En otras realizaciones, por lo menos un grupo R2 es H, alquilo de Ci_2o/ alquenilo de C2-<s, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci_6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo C3-8, arilo, o heteroarilo. Por ejemplo, dichas estructuras incluyen las siguientes : en donde R2a puede ser H, alquilo de Ci-2o alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, o heteroarilo. En otras realizaciones, R2a puede ser una especie que tiene una o más cargas positivas o negativas, tales como ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, histidina, arginina, colina o ácido hialurónico. Otros radicales 2a, M2b, yla, ylb, R2a y LGb pueden ser lo definido anteriormente.
Cuando R2 de algunos comonomeros M2 es el iniciador I2, se pueden preparar arquitecturas más complejas de los copolímeros aleatorios. Por ejemplo, los polímeros de peine, polímeros hiperramificados, dendrímeros y dendrinjertos . Cuando un iniciador I2 está presente sobre un comonomero M2, la polimerización usando I normalmente ocurre después de la polimerización usando el iniciador I-I' . En algunas realizaciones, la polimerización a través de I-I' y I2 puede ser simultánea. Además, el iniciador I2 se puede unir al comonómero M2 a través de un conector descomponible o no descomponible L2.
En algunas realizaciones, los copolímeros aleatorios de la presente invención se pueden modificar a través de una polimerización posterior con uno o más monómeros adicionales. Por ejemplo, en la fórmula III precedente, los monómeros M1 y M2a se pueden copolimerizar en una primera polimerización y el monómero M2b se puede polimerizar en una segunda polimerización. Se formaría un copolímero de bloques que tiene dos bloques, el primer bloque es un copolímero aleatorio de M1 y Ma y el segundo bloque es un homopolímero de Mb. Alternativamente, después de la polimerización de los monómeros M1 y M2a, el monómero M2b se puede copolimerizar con el monómero M2c, formando así un copolímero de bloques donde el primer bloque es un copolímero aleatorio de M1 y M2a y el segundo bloque es un copolímero aleatorio de M2b y Mc. Otras estructuras de polímeros se pueden preparar copolimerizando los monómeros 1, Ma y M2b en una primera polimerización, seguida por la copolimerización de los monómeros M2c, M2d, y otros en una segunda copolimerización. Otros bloques se pueden preparar mediante aún una tercera polimerización usando monómeros adicionales. Dichos polímeros proporcionan bloques de copolímeros que pueden tener diferentes propiedades, fármacos y agentes funcionales.
En otras realizaciones, ímero aleatorio tiene fórmulas : en donde L-CTP tiene la fórmula: En algunas otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene fórmulas : en donde PC es fosforilcolina; HEMA es metacrilato de hidroxietilo; GMA es metacrilato de glicidilo; y Glu es ácido glutámico .
En aún otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula A. Iniciadores Los copolímeros de la presente invención se polimerizan usando cualquier iniciador adecuado. Los iniciadores útiles en la presente invención se pueden describir mediante la fórmula I-(I')m, donde el subíndice m es un número entero de 1 a 20. El fragmento de iniciador I puede ser cualquier grupo que inicia la polimerización. El depurador de radicales I' puede ser cualquier grupo que termina en forma reversible para la cadena de polímero creciente. El depurador de radicales I' puede ser un halógeno tal como bromo, permitiendo que el extremo del polímero tenga una función después de la polimerización. Además, el fragmento de iniciador I opcionalmente puede tener una funcionalidad con un grupo R1 que puede incluir una variedad de grupos funcionales para sintonizar la funcionalidad del copolímero aleatorio.
Los iniciadores útiles en la presente invención pueden tener un depurador de radicales único I', o cualquier número de ramas de manera tal que existan varios depuradores de radicales I' cada uno de ellos capaz de terminar en forma reversible una cadena de polímero creciente. Cuando el fragmento de iniciador I se ramifica y es capaz de iniciar varias cadenas de polímero, el subíndice m es mayor de uno, de manera tal que hayan tantos depuradores de radicales I' como cadenas de polímeros crecientes existan.
El enlace entre el fragmento de iniciador I y el depurador de radicales I' es lábil, de manera tal que durante el proceso de polimerización los monómeros M1 y los comonómeros M2 se insertan entre el fragmento de iniciador I y el depurador de radicales I'. Por ejemplo, durante una polimerización de radicales libres, tal como ATRP, el fragmento de iniciador I y el depurador de radicales I' se disocian, como se muestra en la Figura 1, para formar los radicales de I e I' . El radical del fragmento de iniciador I luego reacciona con los monómeros en solución para hacer crecer el polímero y forma un radical de polímero en propagación (la especie A y la especie C de la Figura 1) . Durante el proceso de polimerización, el radical del depurador de radicales I' reacciona en forma reversible con el radical de polímero en propagación para detener en forma temporal el crecimiento del polímero. El enlace entre el monómero y el depurador de radicales I' también es lábil, de manera tal que el enlace pueda descomponerse y permitir que el radical de polímero en propagación reaccione con el monómero adicional para hacer crecer el polímero. El resultado final del proceso de polimerización es que el fragmento de iniciador I está en uno de los extremos de la cadena del polímero y el depurador de radicales I' está en el extremo opuesto de la cadena del polímero.
El radical del fragmento de iniciador I normalmente está sobre un carbono secundario o terciario y se puede estabilizar mediante un carbono de carbonilo adyacente. El depurador de radicales I' es normalmente un halógeno, tal como bromo, cloro o yodo. Juntos, el fragmento de iniciador I y el depurador de radicales I' forman los iniciadores I1 e I2 útiles en la preparación de los copolímeros aleatorios de la presente invención.
Se puede usar una amplia variedad de iniciadores para preparar los copolímeros aleatorios de la invención, que incluyen un número de iniciadores que se exponen en US 6.852.816 (incorporada en la presente como referencia) . En algunas realizaciones, los iniciadores empleados para las reacciones de ATRP para preparar los copolímeros aleatorios de la invención se seleccionan de alcanos, cicloalcanos , ácidos alquil carboxílieos o ésteres de ellos, ácidos cicloalquilcarboxílicos o ésteres de ellos, éteres y éteres de alquilo cíclicos, grupos alquilarilo, alquil amidas, ácidos alquil-aril carboxílicos y ésteres de ellos, y también llevan un depurador de radicales I' donde se preparan los copolímeros aleatorios no ramificados y más de un depurador de radicales I' donde se preparan moléculas ramificadas.
Los depuradores de radicales I' útiles en la presente invención incluyen, en forma no taxativa, halógenos tales como Br, Cl e I, tiocianato (-SCN) e isotiocianato (-N=C=S) . Otros grupos son útiles para el depurador de radicales I' de la presente invención. En algunas realizaciones, el depurador de radicales I' es bromo.
Los iniciadores empleados para las reacciones de ATRP se pueden hidroxilar. En algunas realizaciones, los iniciadores empleados para las reacciones de ATRP para preparar copolímeros aleatorios de la invención se seleccionan de alcanos, cicloalcanos , ácidos alquil carboxílicos o esteres de ellos, ácidos cicloalquilcarboxílieos o ésteres de ellos, éteres de alquilo cíclicos, grupos alquilarilo, alquil amidas, ácidos alquil-aril carboxílicos y ésteres de ellos, que llevan un grupo hidroxilo, y que también llevan un depurador de radicales I' donde los copolímeros aleatorios no ramificados se han de preparar, o alternativamente, más de un depurador de radicales I' donde las moléculas ramificadas se han de preparar.
Los iniciadores empleados para las reacciones de ATRP pueden llevar uno o más grupos amina. En algunas realizaciones, los iniciadores empleados para una reacción de ATRP para preparar los copolímeros aleatorios de la invención son alcanos, cicloalcanos, ácidos alquil carboxílicos o ésteres de ellos, ácidos cicloalquilcarboxílicos o ésteres de ellos, éteres, éteres de alquilo cíclicos, grupos alquil -arilo, alquil amidas, ácidos alquil-aril carboxílicos y ésteres de ellos, que llevan un grupo amina y que también llevan un depurador de radicales I' donde los copolímeros aleatorios no ramificados se han de preparar, o alternativamente, más de un depurador de radicales I' donde las moléculas ramificadas se han de preparar.
Los ácidos alquilcarboxílieos , que incluyen ácidos alquil dicarboxílieos , que tienen por lo menos un depurador de radicales I' y sustituidos con grupos amino o hidroxilo también se pueden emplear como iniciadores. En algunas realizaciones de la invención donde se emplea ATRP para preparar copolímeros aleatorios de la presente invención, los iniciadores pueden ser ácidos alquilcarboxílicos que llevan uno o más halógenos seleccionados de cloro y bromo.
Los alcanos sustituidos con dos o más grupos seleccionados de -COOH, -OH y -NH2 y por lo menos un depurador de radicales I', también se pueden emplear como iniciadores para la preparación de copolímeros aleatorios donde se emplea ATRP para preparar copolímeros aleatorios de la presente invención.
Los iniciadores también pueden contener uno o más grupos que incluyen, en forma no taxativa, grupos -OH, amino, monoalquilamino, dialquilamino, -O-alquilo, -COOH, -COO-alquilo o fosfato (o las formas protegidas de ellos) .
Está comercialmente disponible una amplia variedad de iniciadores, por ejemplo, éster de N-hidroxisuccinimida del ácido bromoacético disponible en Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) . Las formas protegidas adecuadamente de esos iniciadores se pueden preparar usando métodos estándar en el arte según sea necesario.
Otros iniciadores incluyen iniciadores térmicos, redox o foto iniciadores, que incluyen, por ejemplo, peróxido de alquilo, peróxidos de alquilo sustituidos, peróxidos de arilo, peróxidos de arilo sustituidos, peróxidos de acilo, hidroperóxidos de alquilo, hidroperóxidos de arilo sustituidos, hidroperóxidos de arilo, hidroperóxidos de arilo sustituidos, peróxidos de heteroalquilo, peróxidos de heteroalquilo sustituidos, hidroperóxidos de heteroalquilo, hidroperóxidos de heteroalquilo sustituidos, peróxidos de heteroarilo, peróxidos de heteroarilo sustituidos, hidroperóxidos de heteroarilo, hidroperóxidos de heteroarilo sustituidos, perésteres de alquilo, perésteres de alquilo sustituidos, perésteres de arilo, perésteres de arilo sustituidos, compuestos azo y compuestos de haluro. Los iniciadores específicos incluyen hidroperóxido de eumeno (CHP) , hidroperóxido de tere-butilo (TBHP) , perbenzoato de tere-butilo (TBPB) , peróxido de carbonato de sodio, peróxido de benzoilo (BPO) , peróxido de lauroilo (LPO) , metiletil cetona 45%, persulfato de potasio, persulfato de amonio, 2,2-azobis (2 , 4 -dimetil-valeronitrilo) , 1 , 1 -azobis (ciclo-hexanocarbonitrilo) , diclorhidrato de 2 , 2 -azobis (N, N-dimetilenisobutiramidina) y diclorhidrato de 2,2-azobis (2 -amido-propano) . Los pares de redox tales como persulfato/sulfito y peróxido de Fe (2+) o persulfato de amonio y N, N, N' N' -tetrametiletilendiamina (TEMED) .
Aún otros iniciadores útiles para preparar los copolímeros aleatorios de la presente invención son ramificados. Los iniciadores adecuados que tienen un punto de ramificación único incluyen los siguientes: donde el radical R puede ser cualquiera de los siguientes : En algunas realizaciones, el iniciador puede ser: que es una maleimida protegida que se puede desproteger después de la polimerización para formar la maleimida para la reacción con grupos funcionales adicionales.
Otros iniciadores ramificados incluyen, en forma no taxativa, los siguientes, en donde el radical R es lo definido anteriormente: En algunas realizaciones, los iniciadores incluyen, en forma no taxativa, los siguientes: Otros iniciadores ramificados útiles para preparar los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen los siguientes : donde el radical R es lo definido anteriormente y el radical X puede ser CHO, S02C1 , S02CH=CH2, NHCOCH2I, N=C=0 y N=C=S, entre otros. Otros grupos X pueden incluir los siguientes: Aún otros iniciadores incluyen, en forma no taxativa, los siguientes : En otras realizaciones, el iniciador puede tener varios puntos de ramificación para lograr una pluralidad de ramas de polímeros, tales como: donde el radical R es lo definido anteriormente. En algunas otras realizaciones, el iniciador puede tener la siguiente estructura: En algunas otras realizaciones, el iniciador puede tener las siguientes estructuras: Como se describió anteriormente, el iniciador se puede agregar a la mezcla de polimerización por separado, o se puede incorporar en otra molécula, tal como un monómero (estructura hiperramificada) o un fragmento de polímero (tal como copolímeros de injertos) . La iniciación de la polimerización puede estar acompañada por calor, luz ultravioleta, u otros métodos conocidos para un experto en el arte .
En algunas realizaciones, el iniciador I-I' de la presente invención tiene la fórmula: (F)r-Sp1-C-Sp2-I' donde el fragmento de iniciador I corresponde a F-Sp1-C-Sp2. Cada radical F es un grupo funcional para la reacción con un agente funcional o un grupo conector de la presente invención. El radical r es de 1 a 10. Los radicales Sp1 y Sp2 son separadores y pueden ser cualquier grupo adecuado para formar un enlace covalente, tal como alquilo de Ci-6, arilo o heteroarilo. El radical C puede ser cualquier núcleo que proporciona uno o una pluralidad de puntos para la unión a uno o más separadores, Sp2 (que pueden ser los mismos o diferentes) , y uno o más depuradores de radicales, I', y que proporciona uno o una pluralidad de puntos para la unión a uno o más separadores, Sp1 (que pueden ser los mismos o diferentes) y uno o más grupos funcionales, F (que pueden ser los mismos o diferente) . El núcleo C puede tener cualquier estructura adecuada, tal como una estructura ramificada, una estructura reticulada que incluye heteroátomos , tales como silsesquiloxanos , y un polímero corto, lineal con varios grupos funcionales. Además, el núcleo C se puede unir a uno o más separadores Sp1 y Sp2 mediante un grupo adecuado para formar un enlace covalente que incluye, en forma no taxativa, esteres, amidas, éteres y cetonas . El depurador de radicales I' es un átomo transferible radicalmente o un grupo tal como, en forma no taxativa, un halógeno, Cl , Br, I, OR10, SR11, SeR11, OC^OJR11, OP(=0)R11, 0P(=0) (OR11)^ 0-(Rlx)2, S-C ( =S) N (R11) 2 , CN, NC, SCN, CNS, OCM, CNO, N3, OH, O, alcoxi de ^- e, (S04) , P04 , HP04, H2 P04, triflato, hexafluorofosfato, metanosulfonato, arilsulfonato, haluro del ácido carboxílico. R10 es un alquilo de 1 a 20 átomos de carbono o un alquilo de 1 a 20 átomos de carbono en el cual cada uno de los átomos de hidrógeno se puede reemplazar por un haluro, alquenilo de 2 a 20 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido con 1 a 5 átomos de halógeno o grupos alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, aralquilo, arilo, aril alquilo sustituido, en donde el grupo arilo es fenilo o fenilo sustituido y el grupo alquilo es de 1 a 6 átomos de carbono y R11 es arilo o un grupo alquilo de C1-C20 recto o ramificado o donde un grupo N(R13")2 está presente, los dos grupos R11 se pueden unir para formar un anillo heterocíclico de 5 , 6 o 7 miembros. El separador Sp1 une en forma covalente el grupo funcional F y el núcleo C mientras que el separador Sp2 une en forma covalente el núcleo C y el depurador de radicales I' .
En otras realizaciones, el iniciador de la presente invención tiene la fórmula: en donde I' se selecciona independientemente de halógeno, -SCN, o -NCS . L4 y L5 son cada uno independientemente un enlace o un conector, de manera tal que uno de L4 y L5 sea un conector. C es un enlace o un grupo núcleo. LG es un grupo conector. Y el subíndice p es de 1 a 32, en donde cuando el subíndice p es 1, C es un enlace y cuando el subíndice p es de 2 a 32, C es un grupo núcleo. En algunas otras realizaciones, el iniciador tiene la fórmula : en donde cada R3 y R4 se selecciona independientemente de H, CN o alquilo de Ci-6.
B . Monómeros Los monómeros útiles para preparar los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen todos los monómeros capaces de polimerización de radicales. Normalmente, dichos monómeros tienen un grupo vinilo. Los monómeros adecuados incluyen, en forma no taxativa, monómeros de acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil -piridina y vinil pirrolidona. Los monómeros, M1, que contienen el grupo zwiteriónico, ZW, incluyen, en forma no taxativa, los siguientes: Los monómeros, 2, que contienen el grupo conector o el agente funcional incluyen, en forma no taxativa, las siguientes estructuras : Otros monómeros son conocidos para un experto en el arte e incluyen acetato de vinilo y derivados de ellos.
En algunas realizaciones, los monómeros son monómeros de acrilato o de metacrilato. En otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde cada uno de R3 y R4 es independientemente H o alquilo de Ci-6/ y PC es fosfatidilcolina .
En algunas realizaciones, el copolímero aleatorio tiene fórmula : En otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde A2 es camptotecina .
En aún otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula : en donde R4a y R4 pueden ser lo definido anteriormente para R4; R2a y R2b pueden ser lo definido anteriormente para A2; e yla e ylb pueden ser lo definido anteriormente para y1. En algunas realizaciones, R2a y R2b son cada uno independientemente H, alquilo de C1-20/ alquenilo de C2-6/ alquinilo de C2-6 haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, heteroarilo, A2, L2-A2, LG2, o L2-LG2; cada uno de R3, R4a y Rb es independientemente H o alquilo de Ci-6; los subíndices yla e ylb son cada uno independientemente un número entero de 1 a 1000; y PC es fosfatidilcolina .
En aún otras realizaciones, el copolímero aleatorio puede tener cualquiera de las siguientes fórmulas: en donde R4a y R4 pueden ser lo definido anteriormente para R4; L2a y L2b pueden ser lo definido anteriormente para L2; A2a y A2b pueden ser lo definido anteriormente para A2; e yla e ylb pueden ser lo definido anteriormente para y1. En algunas realizaciones, cada uno de L2a y L2b es un conector; y cada uno de A2a y A2b es un agente funcional .
C . Zwiteriones Los zwiteriones de la presente invención incluyen cualquier compuesto que tiene tanto una carga negativa como una carga positiva. Los grupos que tienen una carga negativa y son adecuados para su uso en los zwiteriones de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, fosfato, sulfato, otros oxoaniones, etc. Los grupos que tienen una carga positiva y son adecuados para su uso en los zwiteriones de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, iones de amonio. En algunas realizaciones, los zwiteriones pueden fosforilcolina .
D . Conectores Los copolímeros aleatorios de la presente invención también pueden incorporar cualquier conector L adecuado. Los conectores proporcionan la unión de los agentes funcionales al fragmento de iniciador I y los comonómeros M2. Los conectores pueden ser descomponibles o no descomponibles, homobifuncionales o heterobifuncionales . Otros conectores pueden ser tanto heterobifuncionales como descomponibles, o tanto homobifuncionales como descomponibles.
Los conectores descomponibles incluyen aquellos que son conectores hidrolizables, conectores descomponibles enzimáticamente , conectores sensibles al pH, conectores de disulfuro y conectores fotolábiles, entre otros. Los conectores hidrolizables incluyen aquellos que tienen un grupo funcional éster, carbonato o carbamato al conector de manera tal que la reacción con el agua descomponga el conector. Los conectores descomponibles enzimáticamente incluyen aquellos que se descomponen por enzimas y pueden incluir un grupo funcional éster, amida, o carbamato en el conector. Los conectores sensibles al pH incluyen aquellos que son estables a un pH pero que son lábiles a otro pH. Para los conectores sensibles al pH, el cambio en el pH puede ser de condiciones ácidas a básicas, de condiciones básicas a ácidas, de condiciones levemente ácidas a fuertemente ácidas, o de condiciones levemente básicas a fuertemente básicas. Los conectores sensibles al pH son conocidos para un experto en el arte e incluyen, en forma no taxativa, cetales, acétales, iminas o iminios, siloxanos, silazanos, silanos, maleamato-amida enlaces, orto ésteres, hidrazonas, derivados de ácidos carboxílieos activados y ésteres de vinilo. Los conectores de disulfuro se caracterizan porque tienen un enlace de disulfuro en el conector y se descomponen en condiciones de reducción. Los conectores fotolábiles incluyen aquellos que se descomponen después de la exposición a la luz, tal como la radiación visible, infrarroja, ultravioleta, o electromagnética a otras longitudes de onda.
Otros conectores útiles en la presente invención incluyen aquellos que se describen en las Solicitudes de Patentes Estadounidenses N° 2008/0241102 (cedida a Ascendis/Complex Biosystems) y 2008/0152661 (cedida a Mirus) , y las Solicitudes de Patentes Internacionales N° WO 2004/010957 y 2009/117531 (cedidas a Seattle Genetics) y 01/24763, 2009/134977 y 2010/126552 (cedida a Immunogen) (incorporadas en su totalidad en la presente) . Los conectores de Mirus útiles en la presente invención incluyen, en forma no taxativa, los siguientes: Otros conectores incluyen aquellos descritos en Técnicas de Bioconjugados , Greg T. Hermanson, Academic Press, 2a edición, 2008 (incorporado en su totalidad en la presente) y aquellos descritos en Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 6974-6998 (Bertozzi, C.R. y Sletten, E.M) (incorporado en su totalidad en la presente) En algunas realizaciones, los conectores L1 y L2 pueden tener una longitud de hasta 30 átomos, cada átomo es independientemente C, N, O, S y P. En otras realizaciones, los conectores L1 y L2 pueden ser cualquiera de los siguientes: -alquilo de C1-12 - , -cicloalquilo de C3-i2-, -(alquilo de Ci-8) - (cicloalquilo de C3-12 ) - (alquilo de C0-8)-/ - (CH2) 1-12O - , (- (CH2) i-6-0- (CH2) i-6-) 1-12 - # (- (CH2)1-4-NH- (CH2)1-4)i-i2-, (- (CH2) 1-4-O- (CH2) 1-4) 1-12-0- , (- (CH2) 1-4-O- (CH2)1-4-)i-i20- (CH2)i-12-, - (CH2)i_i2- (C=0) -O-, - (CH2) i-12-0- (C=0) - , - (fenilo) - (CH2) 1-3- (C=0) -O- , - (fenilo) - (CH2) 1-3- (C=0) -NH- , -(alquilo de Ci-6) - (C=0) -O- (alquilo de Co-6)-, - (CH2) i-i2- (C=0) -O- (CH2) i-i2- , -CH (OH) -CH (OH) - (C=0) -O- , -CH (OH) -CH (OH) - (C=0) -NH- , -S-maleimido- (CH2) 1-6- , -S-maleimido- (alquilo de Ci_3) - (C=0) -NH- , -S-maleimido- (alquilo de C1-3) - (cicloalquilo de C5.s) - (alquilo de C0-3) -, -(alquilo de Ci-3) - (cicloalquilo de C5-6) - (alquilo de C0-3) - (C=0) -0- , -(alquilo de C1-3) - (cicloalquilo de C5.6) - (alquilo de C0-3) - (C=0) -NH- , -S-maleimido- (alquilo de C0-3) -fenilo- (alquilo de C0-3) -, -(alquilo de C0-3) -fenilo- (C=0) -NH- , - (CH2) 1-12-NH- (C=0) - , - (CH2) 1-12 - (C=0) -NH- , - (fenilo) - (CH2) i-3- (C=0) -NH- , -S- (CH2) - (C=0) -NH- (fenilo) - , - (CH2) !-12- (C=0) -NH- (CH2) .12- , - (CH2) 2- (C=0) -O- (CH2) 2-O- (C=0) - (CH2) 2- (C=0) -NH- , -(alquilo de Ci-6) - (C=0) -N- (alquilo de Ci-6)-, acetal, cetal, éter de aciloxialquilo, -N=CH-, -(alquilo de Ci-6) -S-S- (alquilo de Co-ß)-, -(alquilo de Ci-6) -S-S- (alquilo de d-6) - (C=0) -O- , -(alquilo de Ci-6) -S-S- (alquilo de Ci-6) - (C=0) -NH- , -S-S- (CH2) 1-3- (C=0) -NH- (CH2) 1-4-NH- (C=0) - (CH2)i-3-, -S-S- (alquilo de C0-3) - (fenilo) -, -S-S- (alquilo de C1-3) - (fenilo) - (C=0) -NH- (CH2) 1-5- , -(alquilo de C1-3) - (fenilo) - (C=0) -NH- (CH2) 1-5- (C=0) -NH- , -S-S- (alquilo de Ci-3)-, -(alquilo de Ci-3) - (fenilo) - (C=0) -NH- , -O- (alquilo de Ci-C6) -S (02) - (alquilo de d-6) -O- (C=0) -NH- , -S-S- (CH2)1-3- (C=0) -, - (CH2) L3- (C=0) -NH-N=C-S-S- (CH2) 1-3- (C=0) -NH- (CH2) 1-5- , - (CH2)1-3- (C=0) -NH- (CH2)i-5- (C=0) -NH-, - (CH2) 0-3- (heteroarilo) - (CH2) 0.3- , - (CH2) 0-3-fenilo- (CH2) 0-3- , -N=C(R)-, -(alquilo de Ci-6) -C (R) =N- (alquilo de Ci-6)-, -(alquilo de C1-6) - (arilo) -C (R) =N- (alquilo de Ci-6)-, -(alquilo de Ci-6) -C (R) =N- (arilo) - (alquilo de Ci-6)-, y -(alquilo de Ci-s)-O-P(O) (OH) -O- (alquilo de C0-6)-/ en donde R es H, alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, o un grupo arilo que tiene 5-8 átomos endocíclicos .
En algunas realizaciones, los conectores L1 y L2 pueden ser cualquiera de los siguientes: -alquilo de Ci-C12-, -cicloalquilo de C3-C12-, (- (C¾) 1-6-0- (Cñ2) i-e-) 1-12- , (- (CH2)1-4-NH- (CH2)1-4)i-i2-, - (CH2)1-120-, (- (CH2) 1.4-O- (CH2)1_4) 1-12-O-, - (CH2)i-i2- (CO) -0-, - (CH2)1-12- (CO) -NH-, - (CH2) 1-12-O- (CO) - , - (CH2) i-12-NH- (CO) - , (- (CH2) 1-4-0- (CH2) ?- ) 1-12-0- (CH2)i-i2-, - (CH2)i-i2- (C0) -O- (CH2)i_i2-, - (CH2) 1-12- (CO) -NH- (CH2) x.12- , - (CH2) i-12-0- (CO) - (CH2) !-i2- , - (CH2) 1-12- H- (CO) - (CH2) i-i2- , - (cicloalquilo de C3-C12) -, -(alquilo de Ci-C8) - (cicloalquílo de C3-Ci2)-, -(cicloalquilo de C3-C12) - (alquilo de Ci-8)-, -(alquilo de Ci-8) - (cicloalquilo de C3-C12) - (alquilo de Ci-8) - y - (CH2) 0-3-arilo- (CH2) 0-3- · En aún otras realizaciones, cada uno de los conectores L1 y L2 es un conector descomponible seleccionado independientemente de conectores hidrolizables , conectores descomponibles enzimáticamente , conectores sensibles al pH, conectores de disulfuro y conectores fotolábiles.
Otros conectores útiles en la presente invención incluyen conectores autoinmolados . Los conectores autoinmolados útiles son conocidos para los expertos en el arte, tales como aquellos útiles para los conjugados de anticuerpos y fármacos. Ejemplos de conectores autoinmolados se describen en la Patente Estadounidense N° 7.754.681.
E . Grupos Conectores LG Los conectores y agentes funcionales de la presente invención pueden reaccionar con un grupo conector sobre el fragmento de iniciador I o los comonómeros M2 para formar un enlace. Los grupos conectores LG de la presente invención pueden ser cualquier grup funcional adecuado capaz de formar un enlace a otro grupo funcional, uniendo de ese modo los dos grupos juntos. Por ejemplo, los grupos conectores LG útiles en la presente invención incluyen aquellos usados en la química de chasquido, la química de maleimida, y los ésteres de NHS, entre otros. Los grupos conectores involucrados en la química del chasquido incluyen, en forma no taxativa, azidas y alquinos que forman un anillo de triazol a través del proceso de cicloagregado de Huisgen (véase la Patente Estadounidense N° 7.375.234, incorporada en la presente en su totalidad) . La química de maleimida consiste en la reacción de la maleimida olefina con un nucleófilo, tales como -OH, -SH o -NH2, para formar un enlace estable. Otros grupos conectores incluyen aquellos descritos en Técnicas de Bioconjugados , Greg T. Hermanson, Academic Press, 2a edición, 2008 (que se incorpora en su totalidad en la presente) .
Algunos ejemplos no taxativos de la reacción de los grupos conectores y algunos grupos que normalmente se hallan o se introducen en agentes funcionales se exponen en la Tabla I .
Tabla I Ejemplos de Ejemplos de Grupos Producto Y-X Grupos que Conectores Reactivos pueden (se muestran como reaccionar con anexados a -X) un grupo conector (LG) Y-NH2 H(0=)C-X Y-N=CH-X Aldehido o Y-NH-CH2-X después de la reducción Y-NH2 (HO) 2HC-X Y-N=CH-X Hidrato de aldehido o Y-NH-CH2-X después de la reducción Y-NH2 (R'0)2CH-X o Y-N=CH-X o Y-NH-CH-X después de la reducción acetal Y-NH2 R'OCH(OH) -X o Y-N=CH-X hemiacetal o Y-NH-CH-X después de la reducción Ejemplos de Ejemplos de Grupos Producto Y-X Grupos que Conectores Reactivos pueden (se muestran como reaccionar con anexados a -X) un grupo conector (LG) Y-SH R" Y -S-CH2-C (OH) (R' ' ) -X- epóxido (oxirano) Y-OH Y -0-CH2-C (OH) (R' ' ) -X- Y-COOH (anión) Y -C(=0)0-CH2-C(0H) (R' ' ) -X- Y-NHR' ' Y -NR' ' -CH2-C (OH) (R' ' ) - X Ejemplos de Ejemplos de Grupos Producto Y-X Grupos que Conectores Reactivos pueden (se muestran como reaccionar con anexados a -X) un grupo conector (LG) Y-SH (halógeno) -CH2- (C=0) -0 Y- S -CH2- (C=0) - o-x -X Y- S -CH2- (C=0) -NH-X (halógeno) -CH2- (C=0) -N H-X Y- S -CH2- (C=0) - X (halógeno) -CH2- (C=0) -X (halógeno es preferentemente I o Br) R' es alquilo de Ci_6, cicloalquilo de C3-6/ o un grupo arilo que tiene 5-8 átomos endocíclicos; R" es H, alquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-6, o un grupo arilo que tiene 5-8 átomos endocíclicos; R'" es un derivado de carbonilo *-(C=0)-( *- (C=0) - (CH2) i-8-S-S- , *- (C=0) - (CHaJi-e- (C=0) -0-, *- (C=0) - (CH2) 1-8-0- (C=0) -, *- (C=0) - (CH2) i-e- (C=0) -NH- , o *- (C=0) - (CH2) 1-8-NH- (C=0) - , o alternativamente, R" ' es un derivado de carbonilo de la forma * - (C=0) -O- (CH2) i_8-S-S- , *- (C=0) -0- (CH2)i.e- (C=0) -0-, * - (C=0) -O- (CH2) 1-8-0- (C=0) - , *- (C=0) -0- (CH2)i-e- (C=0) -NH-, O *- (C=0) -O- (CH2) 1-8-NH- (C=0) - , donde "*" indica el punto de unión a los grupos succinimidilo o benzotriazolilo; X e Y son cada uno el agente activo, conector, raonómero o fragmento de iniciador I .
-C(0)NRlaRlb, -NRlaRlb, C1-6 alkyl-NRlaRlb, -N (Rla) C (0) Rlb, -N (Rla) C (O) 0Rl , -N(Rla)C(0)NRlaRlb, -0P (0) (0Rl ) 2 , -S(0)20Rla, -S (0) 2NRlaRl , -CN, -N02, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo . 10 F . Agentes Funcionales Los agentes funcionales útiles en los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen cualquier agente biológico o -^c; compuesto sintético capaz de dirigirse a un ligando particular, receptor, complejo, orgánulo, célula, tejido, lámina epitelial, u órgano o de tratar una condición particular o un estado de enfermedad. Es de particular interés una combinación de los agentes bíoactivos que juntos se dirigen a mecanismos comunes a 20 una enfermedad particular. Por ejemplo, un primer agente bioactivo (unido en forma estable) que es un agente biofarmacéutico que se une a una proteína regulada en forma ascendente en una enfermedad; un segundo agente bioactivo (unido en forma estable) que es un péptido que se une a un constituyente del tejido de la matriz extracelular tal como sulfato de heparina; un tercer agente bioactivo (unido en forma inestable) que es un fármaco de moléculas pequeñas que se libera en el tiempo y ejerce un efecto local, intracelular, por ejemplo, un efecto antiproliferativo . En algunas realizaciones, el agente bioactivo es un fármaco, una proteína terapéutica, una molécula pequeña, un péptido, un peptoide, un oligonucleótido (aptámero, siARN, microARN) , una nanopartícula, un carbohidrato, un lípido, un lípido, un glicolípido, fosfolípidos, o un agente dirigido a un blanco. La relación de los comonómeros se elige basado en la estequiometría predefinida (por ejemplo, para igualar una avidez biológica; para igualar una estequiometría biológica; para impartir un efecto de "engranaje"). Otros agentes funcionales útiles en los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, radiomarcadores , fluoróforos y colorantes .
Los agentes funcionales se pueden unir al fragmento de iniciador l o a los comonómeros M2, o ambos, de los copolímeros aleatorios. Los agentes funcionales se pueden unir al fragmento de iniciador I o los comonómeros M2 antes o después de la polimerización a través de conectores descomponibles, no descomponibles, o autoinmolados que se describieron anteriormente. Los agentes funcionales también pueden adsorberse físicamente o absorberse iónicamente hacia el copolímero aleatorio en lugar de unirse en forma covalente.
La preparación de los copolímeros aleatorios de la presente invención unidos a un agente funcional también se puede realizar uniendo primero el agente funcional a un grupo conector unido a un monómero y sometiendo al agente funcional acoplado a condiciones adecuadas para la síntesis de los copolímeros aleatorios de la invención. En esos casos, un grupo conector adecuado puede ser un iniciador (por ejemplo, compuesto/grupo yodado, bromado o clorado) para su uso en reacciones de ATRP. Dicho esquema de reacción es posible cuando el agente funcional es compatible con las reacciones de polimerización de polímeros y cualquier elaboración posterior necesaria. Sin embargo, el acoplamiento de agentes funcionales a copolímeros aleatorios preformados se puede usar cuando el agente funcional no es compatible con las condiciones adecuadas para la polimerización. Además, cuando el costo hace que la pérdida de un agente haga los rendimientos de la síntesis imperfectos, frecuentemente enfrentados particularmente en las reacciones sintéticas de varios pasos, se puede emplear el acoplamiento del agente funcional a copolímeros preformados de la presente invención.
Cuando un agente funcional no es compatible con las condiciones empleadas para reacciones de polimerización, puede ser deseable introducir el agente funcional después de la reacción de polimerización .
Los agentes bioactivos, A, se pueden seleccionar ampliamente. En algunas realizaciones, los agentes bioactivos se pueden seleccionar de uno o más fármacos, vacunas, aptámeros, andamios de avimer basados en andamios del dominio A humano, diacuerpos, camélidos, anticuerpos de IgNAR, andamios de fibronectina tipo III con especificidades modificadas, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, vitaminas y cofactores, polisacáridos , carbohidratos, esteroides, lípidos, grasas, proteínas, péptidos, polipéptidos, nucleótidos, oligonucleótidos , polinucleótidos y ácidos nucleicos (por ejemplo, mARN, tARN, snARN, ARNi, microAR , ADN, cADN, constructos antisentido, ribozimas, etc., y combinaciones de ellos) . En una realización, los agentes bioactivos se pueden seleccionar de proteínas, péptidos, polipéptidos, solubles o unidos a la célula, extracelulares o intracelulares , kinesinas, motores moleculares, enzimas, materiales de la matriz extracelular y combinaciones de ellos. En otra realización, los agentes bioactivos se pueden seleccionar de nucleótidos, oligonucleótidos, polinucleótidos y ácidos nucleicos (por ejemplo, mARN, tARN, snARN, ARNA, ADN, cADN, constructos antisentido, ribozimas, etc., y combinaciones de ellos). En otra realización, los agentes bioactivos se pueden seleccionar de esteroides, lípidos, grasas y combinaciones de ellos. Por ejemplo, el agente bioactivo se puede unir a la matriz extracelular, tal como cuando la matriz extracelular es ácido hialurónico o proteoglicanos de sulfato de heparina y el agente bioactivo es un grupo con una carga positiva tal como colina para interacciones de unión de tipo de Velero, eletrostática, no específica. En otra realización, el agente bioactivo puede ser una secuencia de péptido que se une en forma no específica o específica .
Los agentes bioactivos se pueden diseñar y/o seleccionar para tener una actividad completa (tal como un alto nivel de agonistas o antagonistas) . Alternativamente, un agente bioactivo multifuncional se puede seleccionar para modular una actividad de la proteína blanco mientras que impacta completamente en otra.
Así como las proteínas de mosaico contienen dominios o subdominios de unión extracelular (por ejemplo, VEGF y Factor de Crecimiento Epitelial de Unión a Heparina) , las secuencias de estos sitios de unión se pueden replicar como un agente bioactivo para la unión al polímero. Más ampliamente, las proteínas de mosaico representan cadenas de dominios de muchas funciones (unión al blanco, unión a la matriz extracelular , separadores, aumentos de avidez, enzimáticas) . El grupo de agentes bioactivos para una aplicación particular se puede unir en forma similar para replicar un grupo de actividades funcionales deseadas.
Otros agentes funcionales, A, incluyen especies con una carga tales como colina, lisina, ácido aspártico, ácido glutámico y ácido hialurónico, entre otros. Las especies con una carga son útiles para facilitar la unión iónica, a vitreo, por ejemplo.
Proteínas Terapéuticas y Anticuerpos En una realización particularmente útil, el agente funcional es una proteína terapéutica. Se revelan numerosas proteínas terapéuticas en toda la solicitud de patente tales como y en forma no taxativa, eritropoyetina, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , GM-CSF, interferón alfa, interferón beta, hormona del crecimiento humano e imigluceras .
En una realización, los agentes funcionales se pueden seleccionar de agentes bioactivos de polisacáridos , proteínas o péptidos identificados específicamente, que incluyen, en forma no taxativa: ?ß, agalsidasa, alefacept, fosfatasa alcalina, aspariginasa, amdoxovir (DAPD) , antide, becaplermina , toxina botulínica que incluye los tipos A y B y compuestos de bajo peso molecular con actividad de toxina botulínica, calcitoninas , cianovirina, denileucina diftitox, eritropoyetina (EPO) , agonistas de EPO, dornasa alfa, proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP) , factores de coagulación tales como Factor V, Factor VII, Factor Vlla, Factor VIII, Factor IX, Factor X, Factor XII, Factor XIII, factor von Willebrand; ceredasa, cerezima, alfa-glucosidasa, sulfatasa de 6-sulfato de N-acetilgalactosamina, colágeno, ciclosporina, alfa defensinas, beta defensinas, desmopresina, exendina 4, citoquinas, receptores de citoquina, factor estimulante de granulocitos (G-CSF) , trombopoyetina (TPO) , inhibidor de alfa-1 proteinasa, elcatonina, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) , fibrinógeno, fílgrastim, hormonas de crecimiento hormona del crecimiento humano (hGH) , somatropina, hormona de liberación de hormonas del crecimiento (GHRH) , GRO-beta, anticuerpo de GRO-beta, proteínas morfogenéticas óseas tales como proteína morfogenética ósea 2, proteína morfogenética ósea 6, hormona paratiroidea, péptido relacionado con la hormona paratiroides, OP-l; factor de crecimiento de fibroblastos ácidos, factor de crecimiento de fibroblastos básicos, Factor de Crecimiento de Fibroblastos 21, ligando de CD-40, heparina, albúmina de suero humano, heparina de bajo peso molecular (LM H) , interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interferón omega, interferón tau, interferón de consenso, lisil oxidasa similar 2 humana (L0XL2) ; interleucinas y receptores de interleucina tales como receptor de interleucina 1, interleucina 2, proteínas de fusión de interleucina 2, antagonista de receptor de interleucina 1, interleucina 3, interleucina 4, receptor de interleucina 4, interleucina 6, interleucina 8, interleucina 12, interleucina 17, interleucina 21, interleucina 23, p40, receptor de interleucina 13, receptor de interleucina 17; lactoferrina y fragmentos de lactoferrina, hormona de liberación de hormona luteinizante (LHRH) , insulina, pro-insulina, análogos de insulina, leptina, grelina, amilina, péptido C, somatostatina, análogos de somatostatina que incluyen octreotida, vasopresina, hormona estimulante de folículos (FSH) , imiglucerasa, vacuna para la gripe, factor de crecimiento similar a insulina (IGF), insulintropina, factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF) , activadores del plasminógeno tales como alteplasa, uroquinasa, reteplasa, estreptoquinasa, pamiteplasa, lanoteplasa y teneteplasa; factor de crecimiento nervioso (NGF) , osteoprotegerina, factor de crecimiento derivado de plaquetas de plaquetas, factores de crecimiento de tejidos, factor de crecimiento transformante 1, factor de crecimiento endotelial vascular, factor inhibidor de leucemia, factor de crecimiento de queratinocitos (KGF) , factor de crecimiento glial (GGF) , receptores de Células T, moléculas/antígenos CD, factor de necrosis tumoral (TNF) (por ejemplo, TNF-OÍ y TNF-ß), receptores de TNF (por ejemplo, receptor de TNF-a y receptor de TNF-ß), CTLA4, receptor de CTLA4 , proteína quimioatrayente de monocitos 1, factores de crecimiento endotelial, hormona paratiroides (PTH) , péptido similar a glucagón, somatotropina, timosina alfa 1, rasburicasa, inhibidor de timosina alfa 1 Ilb/lIIa, timosina beta 10, timosina beta 9, timosina beta 4, alfa-1 antitripsina, compuestos de fosfodiesterasa (PDE) , VLA-4 (antígeno 4 muy tardío), inhibidores de VLA-4, bisfosfonatos , anticuerpo contra el virus sincitial respiratorio, gen regulador de transmembrana de fibrosis quística (CFTR) , desoxirribonucleasa (Dnasa) , proteína bactericida por aumento de la permeabilidad (BPI) , y anticuerpo anti-CMV. Ejemplos de anticuerpos monoclonales incluyen etanercept (una proteína de fusión dimérica que comprende la parte de unión al ligando extracelular del receptor de TNF humano de 75 kD unido a la parte de Fe de IgGl) , abciximab, adalimumab, afelimomab, alemtuzumab, anticuerpo de linfocitos B, atlizumab, basiliximab, bevacizumab, biciromab, bertilimumab, CDP-484, CDP-571, CDP-791, CDP-860, CDP-870, cetuximab, clenoliximab, daclizumab, eculizumab, edrecolomab, efalizumab, epratuzumab, fontolizumab, gavilimomab, gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab tiuxetan, infliximab, inolimomab, keliximab, labetuzumab, lerdelimumab, olizumab, lym-1 radiomarcado, metelimumab, mepolizumab, mitumomab, muromonad-CD3 , nebacumab, natalizumab, odulimomab, omalizumab, oregovomab, palivizumab, pemtumomab, pexelizumab, rhuMAb-VEGF, rituximab, satumomab pendetido, sevirumab, siplizumab, tositumomab, I131tositumomab, trastuzumab, tuvirumab, visilizumab, y fragmentos y miméticos de ellos. Los agentes funcionales también incluyen agentes que se unen a estos agentes bioactivos de polisacáridos , proteínas y péptidos identificados específicamente.
En una realización, el agente bioactivo es una proteína de fusión. Por ejemplo, en forma no taxativa, el componente bioactivo puede ser una inmunoglobulina o una parte de una inmunoglobulina fusionada a una o más secuencias de péptidos útiles determinadas. Por ejemplo, el agente bioactivo puede contener un fragmento de Fe de anticuerpo. En una realización, el agente bioactivo es una proteína de fusión de CTLA4. Por ejemplo, el agente bioactivo puede ser una proteína de fusión de Fc-CTLA4. En otras realizaciones, el agente bioactivo es una proteína de fusión de Factor VIII. Por ejemplo, el agente bioactivo puede ser una proteína de fusión de Fc-Factor VIII.
En un ejemplo de realización útil, el agente bioactivo es una proteína humana o un polipéptido humano, por ejemplo, una proteína humana producida en forma heteróloga o un polipéptido humano. En la presente se revelan numerosas proteínas y polipéptidos para los cuales existe una forma humana correspondiente (es decir, la proteína o el polipéptido normalmente se producen en células humanas dentro del cuerpo humano) . En consecuencia, en una realización, el agente bioactivo es la forma humana de cada una de las proteínas y los polipéptidos revelados en la presente para los cuales existe una forma humana. Ejemplos de cada proteína humana incluyen, en forma no taxativa, anticuerpos humanos, enzimas humanas, hormonas humanas y citoquinas humanas tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos , factor estimulante de granulocitos y macrófagos, interferones (por ejemplo, interferones alfa e interferones beta) , hormona del crecimiento humano e eritropoyetina .
Otros ejemplos de proteínas terapéuticas que pueden servir como agentes bioactivos incluyen, en forma no taxativa, factor VIII, factor VIII con supresión del dominio B, factor Vlla, factor IX, anticoagulantes; hirudina, alteplasa, tpa, reteplasa, tpa, tpa con supresión de 3 de 5 dominios, insulina, insulina lispro, insulina aspart , insulina glargina, análogos de insulina de acción prolongada, hgh, glucagones, tsh, folitropina beta, fsh, gm-csf, pdgh, ifn alfa 2, ifn alfa 2a, ifn alfa 2b, inf-afa 1, ifn de consenso, ifn-beta, ifn-beta Ib, ifn-beta la, ifn-gamma (por ejemplo, 1 y 2) , ifn-lambda, ifn-delta, il-2, il-11, hbsag, ospa, mab murina dirigida contra el antígeno de linfocitos T, mab murina dirigida contra tag-72, glicoproteína asociada al tumores, fragmentos de fab derivados de mab quimérica dirigida contra el receptor de la superficie de las plaquetas gpll (b) /III (a) , fragmento de mab dirigida contra el antígeno asociado a tumores cal25, fragmento de mab murina dirigida contra el antígeno carcinoembrionario humano, cea, fragmento de mab murina dirigida contra la miosina cardíaca humana, fragmento de mab murina dirigida contra el antígeno de la superficie de tumor psma, fragmentos de mab murina (mezcla de fab/fab2) dirigida contra hmw-maa, fragmento de mab murina (fab) dirigida contra el antígeno asociado al carcinoma, fragmentos de mab (fab) dirigida contra nca 90, un antígeno de reacción cruzada no específica de granulocitos de la superficie, mab quimérica dirigida contra el antígeno cd20 hallado en la superficie de los linfocitos b, mab humanizado dirigido contra la cadena alfa del receptor de 112, mab quimérico dirigido contra la cadena alfa del receptor de 112, mab quimérico dirigido contra tnf-alfa, mab humanizado dirigido contra un epítopo sobre la superficie del virus sincitial respiratorio, mab humanizado dirigido contra her 2, receptor 2 del factor de crecimiento epidémico humano, mab humano dirigido contra el antígeno anti-ctla4 asociado a tumores de citoqueratina, mab quimérico dirigido contra el antígeno de la superficie de cd 20 de dornasa-alfa dnasa de linfocitos b, beta glucocerebrosidasa, tnf-alfa, proteína de fusión de il-2-toxina diftérica, proteína de fusión laronidasa de fragmento de tnfr-lgg, dnaasas, alefacept, darbepoetina alfa (factor estimulante de colonias) , tositumomab, mab murino, alemtuzumab, rasburicasa, agalsidasa beta, teriparatida, derivados de hormonas paratiroides , adalimumab (lggl) , anakinra, modificador biológico, nesiritida, péptido natriurético de tipo b humano (hbnp) , factores estimulantes de colonias, pegvisomant, antagonista de receptor de la hormona del crecimiento humano, proteína c activada recombinante , omalizumab, bloqueador de inmunoglobulina e (lge) , lbritumomab tiuxetan, ACTH, glucagón, somatostatina, somatotropina , timosina, hormona paratiroides, hormonas pigmentarias, somatomedina, eritropoyetina, hormona luteinizante , gonadotropina coriónica, factores de liberación hipotalámicos , etanercept, hormonas antidiuréticas, prolactina y hormona estimulante de la tiroides. Todos éstos se pueden modificar para tener un punto de conjugación específico del sitio (un extremo de N o un extremo de C, u otro lugar) usando un aminoácido natural (por ejemplo, una sustitución de serina a cisteína) (por ejemplo, formilaldehído según el método de Redwood Biosciences) o no natural .
Ejemplos de anticuerpos terapéuticos (o sus respectivos fragmentos de scFv o Fab) que pueden servir como agentes bioactivos incluyen, en forma no taxativa, HERCEPTIN (Trastuzumab) (Genentech, CA) que es un anticuerpo monoclonal anti-HER2 humanizado para el tratamiento de pacientes con cáncer de mamas metastásico; REOPRO™ (abciximab) (Centocor) que es un receptor anti-glicoproteína Ilb/lIIa sobre las plaquetas para la prevención de la formación de coágulos; ZENAPAX™ (daclizumab) (Roche Pharmaceuticals , Suiza) que es un inmunosupresor, anticuerpo monoclonal anti-CD25 humanizado para la prevención del rechazo agudo de aloinjertos renales; PANOREX™ que es un anticuerpo de IgG2a de antígeno de de la superficie celular anti-17-IA murino (Glaxo Wellcome/Centocor) ; BEC2 que es un anticuerpo de IgG anti-idiotipo murino (epítopo de GD3) (ImClone System) ; IMC-C225 que es un anticuerpo de IgG anti-EGFR quimérico (ImClone System) ; VITAXIN™ que es un anticuerpo de integrina anti-o¡vp3 humanizado (Applied Molecular Evolution/Medlmmune) ; Campath; Campath 1H/LDP-03 que es un anticuerpo de IgGl anti CD52 humanizado (Leukosite) ; Smart M195 que es un anticuerpo de IgG anti-CD33 humanizado (Protein Design Lab/Kanebo) ; RITUXAN™ que es un anticuerpo de IgGl anti-CD20 quimérico (IDEC Pharm/Genentech, Roche/Zettyaku) ; LYMPHOCIDE™ que es un anticuerpo de IgG anti-CD22 humanizado (Immunomedics) ; ICM3 es un anticuerpo anti-ICAM3 humanizado (ICOS Pharm) ,- IDEC-114 es un anticuerpo anti-CD80 de primate (IDEC Pharm/Mitsubishi) ; ZEVALIN™ es un anticuerpo anti-CD20 murino radiomarcado ( IDEC/Schering AG) ; IDEC-131 es un anticuerpo anti-CD40L humanizado (IDEC/Eisai) ; IDEC-151 es un anticuerpo anti-CD4 primatizado (IDEC) IDEC-152 es un anticuerpo anti-CD23 primatizado (IDEC/Seikagaku) ; SMART anti-CD3 es una IgG anti-CD3 humanizada (Protein Design Lab) ; 5G1.1 es un anticuerpo de factor 5 contra el complemento humanizado (CS) (Alexion Pharm) ; D2E7 es un anticuerpo anti-TNF-a humanizado (CATIBASF) ; CDP870 es un fragmento de Fab anti-TNF-a humanizado (Celltech) ; IDEC-151 es un anticuerpo de IgGl anti-CD4 primatizado (IDEC Pharm/SmithKline Beecham) ; DX-CD4 es un anticuerpo de IgG anti-CD4 humano (Medarex/Eisai/Genmab) CDP571 es un anticuerpo de IgG4 anti-TNF-a humanizado (Celltech) ; LDP-02 es un anticuerpo anti-a4 7 humanizado (LeukoSite/Genentech) ; OrthoClone 0KT4A es un anticuerpo de IgG anti-CD4 humanizado (Ortho Biotech) ; ANTOVA™ es un anticuerpo de IgG anti-CD40L humanizado (Biogen) ; ANTEGREN™ es un anticuerpo de IgG anti-VLA-4 humanizado (Elan) ; CAT-152, un anticuerpo anti-TGF- 2 humano (Cambridge Ab Tech) ; Cetuximab (BMS) es un anticuerpo de receptor anti-EGF monoclonal (EGFr) ; Bevacizuma (Genentech) es un anticuerpo monoclonal humano anti-VEGF; Infliximab (Centocore, JJ) es un anticuerpo monoclonal quimérico (de ratón y humano) usado para tratar trastornos autoinmunes ; Gemtuzumab ozogamicina ( yeth) es un anticuerpo monoclonal usado para la quimioterapia; y Ranibizumab (Genentech) es un anticuerpo quimérico y monoclonal (de ratón y humano) usado para tratar la degeneración macular.
El espectro de enfoques existentes para crear conjugados de anticuerpos y fármacos depende de una conjugación de moléculas similares a toxinas únicas con un conector a un anticuerpo generalmente en uno a ocho sitios. El enfoque descrito en esta invención consiste en la unión de un copolímero aleatorio a la inmunoglobulina a través de una composición química de unión descomponible o no descomponible. El copolímero está diseñado para tener varias copias del grupo bioactivo de moléculas pequeñas unido en forma estequiométrica a través de la composición química de la unión descomponible (que incluye la autoinmolada) o no descomponible. Debido a la flexibilidad adicional implícita de la invención, más de un tipo de grupo bioactivo y muchas más copias de cada grupo bioactivo se pueden incluir a través de la conjugación o unión a los comonómeros de polímeros, por ejemplo 10, 20, 50, 100, 250, o 500. La capacidad de incluir muchos más permite que se amplíe la perspectiva de los conjugados de anticuerpo y fármaco más allá de las toxinas para incluir otros fármacos de moléculas pequeñas con biologías sinergísticas (ejemplos no taxativos incluyen panitumumab e inhibidores de kras; adalimumab e inhibidores de p38 o de JAK; bevacizumab e inhibidores de cMet) . El resultado es la distribución dirigida, el suministro focal, la cinética de liberación de fármacos adaptados que reduce los efectos fuera del blanco. Además, la unión de los agentes bioactivos de moléculas pequeñas a los comonómeros de la cadena principal del polímero rescata agentes bioactivos con una absorción oral mala, la distribución, el metabolismo y/o la eliminación u otras desventajas. Con todo incluido, el resultado es un cambio de paso en la eficacia debido a la multifuncionalidad, Cmax más baja, carga de fármaco aumentada, más otros beneficios. Fundamentalmente, este enfoque para crear una terapia de combinación con los agentes bioactivos diferentes unidos a un núcleo o andamio de polímero común deriva en efectos terapéuticos del tejido local que pueden ser sinergísticos y que pueden aumentar sustancialmente la eficacia y simultáneamente disminuir la toxicidad.
Los anticuerpos de la presente invención también se pueden unir a un agente terapéutico descrito en la presente o conocido en el arte para formar un receptor de fármaco de anticuerpo (ADC) . Las terapias dirigidas ofrecen varias ventajas sobre las tecnologías existentes, que incluyen reducir toxinas no específicas y aumentar la eficacia. Las propiedades dirigidas de los anticuerpos, tales como los anticuerpos monoclonales (mABs) y fragmentos de mAB (scFv y FAb' ) , permiten el suministro de un agente terapéutico potente que se acopla al mAB . El agente terapéutico puede ser cualquier fármaco, proteína, péptido, o radionúclido . Los conjugados de fármacos de anticuerpos útiles en combinación con los copolímeros aleatorios de la presente invención se describen, por ejemplo, en las Patentes Estadounidenses N° 7.745.394 (Seattle Genetics) , 7.695.716 (Seattle Genetics), 7.662.387 (Seattle Genetics), 7.514.080 (ImmunoGen) , 7.491.390 (Seattle Genetics), 7.501.120 (ImmunoGen) , 7.494.649 (ImmunoGen) y 7.374.762 (ImmunoGen).
Proteínas, Péptidos y Aminoácidos Las proteínas y péptidos para su uso como los agentes bioactivos que se revelan en la presente se pueden producir mediante cualquier método útil que incluye la producción mediante la síntesis in vitro y mediante la producción en sistemas biológicos. Los ejemplos típicos de métodos de síntesis in vitro que son conocidos en el arte incluyen la síntesis de fase sólida ("SPPS") y la condensación de fragmento de fase sólida ("SPFC") . Los sistemas biológicos usados para la producción de proteínas también son conocidos en el arte. Las bacterias (por ejemplo, E coli y Bacíllus sp.) y levadura (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae y Pichia pastoris) se usan ampliamente para la producción de proteínas heterólogas. Además, la expresión de genes heterologos para la producción de agentes bioactivos para su uso como se revela en la presente se puede lograr usando líneas de células de animales tales como líneas de células de mamíferos (por ejemplo, células CHO) . En una realización particularmente útil, los agentes bioactivos se producen en animales transgénicos o clonados tales como vacas, ovejas, cabras y aves (por ejemplo, pollos, codornices, patos y pavos), cada uno de los cuales se comprende en el arte. Véase, por ejemplo, la Patente Estadounidense N° 6.781.030, concedida el 24 de agosto de 2004, cuya invención se incorpora en la presente en su totalidad como referencia.
Los agentes bioactivos tales como las proteínas producidas en las aves domesticadas tales como los pollos, se pueden denominar agentes bioactivos "derivados aviares" (por ejemplo, proteínas terapéuticas derivadas aviares) . La producción de proteínas terapéuticas derivadas aviares es conocida en el arte -y se describe, por ejemplo, en la Patente Estadounidense N° 6.730.822, concedida el 4 de mayo de 2004, cuya invención se incorpora en la presente en su totalidad como referencia.
En realizaciones en las cuales el agente bioactivo es una proteína o un polipéptido, los grupos funcionales presentes en los aminoácidos de la secuencia de polipéptido de proteína se pueden usar para unir el blanco al copolímero aleatorio. Los enlaces a agentes bioactivos de proteínas o polipéptidos se pueden hacer a aminoácidos naturales en su secuencia o a aminoácidos naturales que se han agregado a la secuencia o se han insertado en lugar de otro aminoácido, por ejemplo, el reemplazo de una serina por una cisteína.
Los agentes bioactivos de proteínas o polipéptidos también pueden comprender aminoácidos no naturales además de los aminoácidos naturales hallados en las proteínas y los polipéptidos. Además de estar presentes con el propósito de alterar las propiedades de un polipéptido o una proteína, los aminoácidos no naturales se pueden introducir para proporcionar un grupo funcional que se puede usar para unir la proteína o el polipéptido directamente al copolímero aleatorio. Además, los aminoácidos naturales, por ejemplo, cisteína, tirosina, triptófano, se pueden usar de esta manera .
Los aminoácidos no naturales se pueden introducir en proteínas y péptidos por una variedad de medios. Algunas de las técnicas para la introducción de aminoácidos no naturales se revelan en la Patente Estadounidense N° 5.162.218, cuya invención se incorpora en su totalidad en la presente como referencia. En primer lugar, los aminoácidos no naturales se pueden introducir mediante la modificación química de polipéptido o una proteína sobre la cadena lateral de aminoácido o en el extremo de amino o el extremo de carboxilo. Ejemplos no taxativos de modificaciones químicas de una proteína o un péptido podrían ser la metilación por agentes tales como diazometano, o la introducción de acetilación en un grupo amino presente en la cadena lateral de la lisina o en el extremo de amino de un péptido o una proteína. Otro ejemplo de la modificación del grupo amino de la proteína/polipéptido para preparar un aminoácido no natural es el uso de éster de 3 -mercaptopropionimidato de metilo o 2-iminotiolano para introducir un tiol (sulfhidrilo, -SH) que lleva una funcionalidad unida a las posiciones en la proteína o el polipéptido que lleva una amina primaria. Una- vez introducidos, dichos grupos se pueden emplear para formar un enlace covalente a la proteína o al polipéptido.
En segundo lugar, los aminoácidos no naturales se pueden introducir en proteínas y polipéptidos durante la síntesis química. Los métodos sintéticos normalmente se utilizan para preparar polipéptidos que tienen menos de 200 aminoácidos, habitualmente que tienen menos de 150 aminoácidos, y más habitualmente que tienen 100 o menos aminoácidos. Las proteínas o polipéptidos más cortos que tienen menos de 75 o menos de 50 aminoácidos se pueden preparar mediante síntesis química.
Los métodos de preparación sintética que son particularmente convenientes para permitir la inserción de aminoácidos no naturales en un lugar deseado son conocidos en el arte. Los métodos de preparación de polipeptidos sintéticos adecuados se pueden usar en los métodos de síntesis de fase sólida de Merrifield donde los aminoácidos se agregan en forma secuencial a una cadena creciente (Merrifield (1963) J. Am. Chem. Soc . 85:2149-2156). Actualmente están disponibles comercialmente sistemas automáticos para sintetizar polipéptidos mediante dichas técnicas, de proveedores tales como Applied Biosystems, Inc., Foster City, California 94404; New Brunswick Scientific, Edison, N.J. 08818; y Pharmacia, Inc., Biotechnology Group, Piscataway, N.J. 08854.
Ejemplos de aminoácidos no naturales que se pueden introducir durante la síntesis química de polipeptidos incluyen, en forma no taxativa: D-aminoácidos y mezclas de las formas D y L de los 20 aminoácidos naturales, N-formil glicina, ornitina, norleucina, hidroxiprolina, beta-alanina, hidroxivalina, norvalina, fenilglicina, ciclohexilalanina, t-butilglicina (t-leucina, 'ácido 2-amino-3 , 3 -dimetilbutanoico) , hidroxi-t-butilglicina, ácido amino butírico, cicloleucina, 4-hidroxiprolina, ácido piroglutámico (5-oxoprolina) , ácido azetidina carboxílico, ácido pipecolínico, ácido indolina-2 -carboxílico, ácido tetrahidro-3-isoquinolina carboxílico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ácido 2 , 6-diaminopimélico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ácido 2 , 6-diaminopimélico, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, 5-hidroxilisina, ácido neuramínico y 3 , 5-diyodotirosina .
En tercer lugar, los aminoácidos no naturales se pueden introducir a través de la síntesis biológica in vivo mediante la inserción de un codón en sentido diferente (por ejemplo, un codón ámbar u ocre) en una secuencia de ADN (por ejemplo, el gen) que codifica el polipéptido en el codón correspondiente a la posición donde se ha de insertar el aminoácido no natural . Dichas técnicas se discuten por ejemplo en las Patentes Estadounidenses N° 5.162.218 y 6.964.859, cuyas invenciones se incorporan en su totalidad en la presente como referencia. Se puede usar una variedad de métodos para insertar el codón mutante que incluye la mutagénesis dirigida al oligonucleótido . La secuencia alterada posteriormente se transcribe y se traduce, in vivo o in vitro en un sistema que proporciona un tAR supresor, dirigido contra el codón de sentido diferente que se ha acilado en forma química o enzimática con el aminoácido no natural deseado. El aminoácido sintético se inserta en el lugar que corresponde al codón de sentido diferente. Para la preparación de polipéptidos de mayor tamaño y/o glicosilados , habitualmente se prefieren técnicas de preparación recombinantes de este tipo. Entre los aminoácidos que se pueden introducir de esta forma están: formil glicina, fluoroalanina, ácido 2 -amino-3 -mercapto-3 -metilbutanoico, homocisteína, homoarginina y similares. Otros enfoques similares para obtener aminoácidos no naturales en una proteína incluyen métodos de sustitución de metionina.
Cuando los aminoácidos no naturales tienen una funcionalidad que es susceptible de la modificación selectiva, son particularmente útiles para formar un enlace covalente a la proteína o al polipéptido. Las circunstancias en las cuales una funcionalidad es susceptible de una modificación selectiva incluyen aquellas en las cuales la funcionalidad es exclusiva o donde las funcionalidades que podrían reaccionar en las condiciones de interés están impedidas en forma estereoquímica o de otro modo.
Otros anticuerpos, tales como anticuerpos de dominio único,- son útiles en la presente invención. Un anticuerpo de dominio único (sdAb, denominado Nanocuerpo por Ablynix) es un fragmento de un anticuerpo de un dominio de anticuerpo variable monomerico único. En forma similar a un anticuerpo entero, el sdAb puede unirse en forma selectiva a un antígeno específico. Con un peso molecular de solamente 12-15 kDa, los anticuerpos de dominio único son anticuerpos enteros comunes mucho más pequeños (150-160 kDa) . Un anticuerpo de dominio único es una cadena de péptido de- 110 aminoácidos de longitud, que comprende un dominio variable (VH) de un anticuerpo de cadena pesada, o de una IgG común.
A diferencia de los anticuerpos enteros, los sdAb no muestran citotoxicidad disparada al sistema de complemento porque carecen de una región de Fe. Los sdAb de camélidos y peces pueden unirse a antígenos ocultos que no son accesibles para los anticuerpos enteros, por ejemplo a los sitios activos de enzimas.
Se puede obtener un anticuerpo de dominio único (sdAb) mediante la inmunización de dromedarios, camellos, llamas, alpacas o tiburones con el antígeno deseado y el posterior aislamiento del mARN que codifica los anticuerpos de cadena pesada. Alternativamente, pueden hacerse tamizando bibliotecas sintéticas. Los camélidos son miembros de la familia biológica de Camelidae, la única familia viva del suborden Tylopoda. Los camellos, dromedarios, camellos bactrianos, llamas, alpacas, vicuñas y guanacos pertenecen a este grupo.
Los péptidos útiles en la presente invención también incluyen, en forma no taxativa, un péptido macrocíclico, un ciclotido, un dominio A de receptor de LDL, un andamio de proteína (que se discute en la Patente Estadounidense Número 60/514.391, incorporada en su totalidad en la presente) , un receptor soluble, una enzima, un multímero de péptido, un multímero de dominio, un multímero de fragmento de anticuerpo y una proteína de fusión.
Fármacos En otra realización, los agentes bioactivos también se pueden seleccionar de fármacos o agentes terapéuticos identificados en forma específica, que incluyen en forma no taxativa: tacrina, memantina, rivastigmina, galantamina, donepezil, levetiracetam, repaglinida, atorvastatina, alefacept, tadalafil, vardenafil, sildenafil, fosamprenavir, oseltamivir, valaciclovir y valganciclovir, abarelix, adefovir, alfuzosina, alosetrón, amifostina, amiodarona, ácido aminocaproico, aminohipurato de sodio, aminoglutetimida , ácido aminolevulínico, ácido aminosalicílico, amlodipina, amsacrina, anagrelida, anastrozol, aprepitant, aripiprazol, asparaginasa, atazanavir, atomoxetina, antraciclinas , bexaroteno, bicalutamida, bleomicina, bortezomib, buserelina, busulfán, cabergolina, capecitabina, carboplatino, carmustina, clorambucina, cilastatina de sodio, cisplatino, cladribina, clodronato, ciclofosfamida, ciproterona, citarabina, camptotecinas , ácido 13-cis retinoico, todos los ácidos trans retinoicos; dacarbazina, dactinomicina, daptomicina, daunorrubicina, deferoxamina, dexametasona, diclofenac, dietilestilbestrol , docetaxel, doxorubicina, dutasterida, eletriptán, emtricitabina, enfuvirtida, eplerenona, epirubicina, estramustina, etinil estradiol, etopósido, exemestano, ezetimibe, fentanilo, fexofenadina, fludarabina, fludrocortisona, fluorouracilo, fluoximesterona, flutarnida, fluticazona, fondaparinux, fulvestrant, gamma-hidroxibutirato, gefitinib, gemcitabina, epinefrina, L-Dopa, hidroxiurea, icodextrina, idarubicina, ifosfamida, imatinib, irinotecan, itraconazol, goserelina, laronidasa, lansoprazol, letrozol, leucovorina, levamisole, lisinopril, lovotiroxina de sodio, lomustina, mecloretamina, medroxiprogesterona, megestrol, melfalán, memantina, mercaptopurina, mequinol, bitartrato de metaraminol, metotrexato, metoclopramida, mexiletina, miglustat, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, modafinil, naloxono, naproxeno, nevirapina, nicotina, nilutamida, nitazoxanida, nitisinona, noretindrona, octreotida, oxaliplatino, palonosetrón, pamidronato, pemetrexed, pergolida, pentostatina , pilcamicina, porfimer, prednisona, procarbazina, proclorperazina, ondansetrón, palonosetrón, oxaliplatino, altitrexed, rosuvastatina, sirolimus, estreptozocina, pimecrolimus, sertaconazol , tacrolimus, tamoxifeno, tegaserod, temozolomida , tenipósido, testosterona, tetrahidrocannabinol , talidomida, tioguanina, tiotepa, tiotropio, topiramato, topotecan, treprostinil , tretinoína, valdecoxib, celecoxib, rofecoxib, valrubicina, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, voriconazol, dolasetrón, granisetrón, formoterol, fluticasona, leuprolide, midazolam, alprazolam, anfotericina B, podofilotoxinas , antivirales de nucleósidos, aroil hidrazonas, sumatriptán, eletriptán; macrólidos tales como eritromicina , oleandomicina, troleandomicina, roxitromicina, claritromicina, davercin, azitromicina, fluritromicina, diritromicina , josamicina, espiromicina, midecamicina, loratadina, desloratadina, leucomicina, miocamicina, rokitamicina, andazitromicina y swinolide A; fluoroquinolonas tales como ciprofloxacino, ofloxacino, levofloxacino, trovafloxacino, alatrofloxacino, moxifloxicino, norfloxacino, enoxacino, gatifloxacino, gemifloxacino, grepafloxacino, lomefloxacino, esparfloxacino, temafloxacino , pefloxacino, amifloxacino, fleroxacino, tosufloxacino, prulifloxacino, irloxacino, pazufloxacino, clinafloxacino y sitafloxacino ; aminoglicósidos tales como gentamicina, netilmicina, paramecina, tobramicina, amikacina, kanamicina, neomicina y estreptomicina, vancomicina, teicoplanina, rampolanina, mideplanina, colistina, daptomicina, gramicidina, colistimetato; polimixinas tales como polimixina B, capreomicina, bacitracina, penems; penicilinas que incluyen agentes sensibles a la penicilinasa como penicilina G, penicilina V; agentes resistentes a la penicilinasa como meticilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, floxacilina, nafcilina; agentes activos de microorganismos gram negativos como ampicilina, amoxicilina y hetacilina, cilina y galampicilina ; penicilinas antipseudomonas como carbenicilina, ticarcilina, azlocilina, mezlocilina y piperacilina ; cefalosporinas como cefpodoxima, cefprozil, ceftbuteno, ceftizoxima, ceftriáxona, cefalotina, cefapirina, cefalexina, cefradrina, cefoxitina, cefamandol, cefazolina, cefaloridina, cef clor, cefadroxil, cefaloglicina , cefuroxima, ceforanida, cefotaxima, cefatrizina, cefacetrilo, cefepima, cefixima, cefonicid, cefoperazona, cefotetan, cefmetazol, ceftazidima, loracarbef y moxalactam, monobactámicos como aztreonam; y carbapenems tales como imipenem, meropenem y ertapenem, isetionato de pentamidina, sulfato de albuterol, lidocaína, sulfato de metaproterenol, dipropionato de beclometasona, triamcinolona acetamida, budesonida acetónido, salmeterol, bromuro de ipratropio, flunisolida, cromolina de sodium y tartrato de ergotamina; taxanos tales como paclitaxel; SN-38 y tirfostinas. Los agentes bioactivos se pueden seleccionar también del grupo formado por aminohipurato de sodio, amfotericina B, doxorubicina, ácido aminocaproico, ácido aminolevulínico, ácido arninosalicílico, bitartrato de metaraminol, pamidronato de disodio, daunorubicina, levotiroxina de sodio, lisinopril, cilastatino de sodio, mexiletina, cefalexina, deferoxamina y amifostina en otra realización.
Otros agentes bioactivos útiles en la presente invención incluyen agentes dirigidos a la matriz extracelular, grupos funcionales de transporte y agentes marcadores . Los agentes dirigidos a la matriz extracelular incluyen, en forma no taxativa, grupos que se unen a heparina, grupos que se unen a la metaloproteinasa de la matriz, dominios de unión a lisil oxidasa, grupos con una carga negativa o grupos con una carga positiva y ácido hialuronico. Los grupos funcionales de transporte incluyen, en forma no taxativa, grupos de transporte de la barrera hematoencefálica, grupos de transporte intracelulares , grupos de transporte de orgánulos, dominios de transporte epiteliales y grupos dirigidos a tumores (folato, otros) . En algunas realizaciones, los agentes dirigidos útiles en la presente invención se dirigen a anti-TrkA, anti A-beta (péptido 1-40, péptido 1-42, forma monomérica, forma oligomérica) , anti-IGFl-4, contra RANK-L, anti-ApoE4 o anti-ApoAl, entre otros.
Agentes de Diagnóstico Los agentes de diagnóstico útiles en los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen agentes de producción de imágenes y agentes de detección tales como radiomarcadores , fluoróforos, colorantes y agentes de contraste.
Los agentes de producción de imágenes se refieren a un marcador que se une al copolímero aleatorio de la presente invención para producir imágenes de un tumor, órgano, o tejido en un sujeto. El grupo de producción de imágenes se puede unir en forma covalente o no covalente al copolímero aleatorio. Ejemplos de grupos de producción de imágenes adecuados para su uso en la presente invención incluyen, en forma no taxativa, radionúclidos , fluoróforos tales como fluoresceína, rodamina, rojo Texas, Cy2 , Cy3 , Cy5 , Cy5.5 y la gama de fluoróforos AlexaFluor (Invitrogen, Carlsbad, CA) , anticuerpos, gadolinio, oro, nanomateriales , peroxidada de rábano picante, fosfatasa alcalina, derivados de ellos y mezclas de ellos.
Radiomarcador se refiere a un núclido que presenta radioactividad. Un "núclido" se refiere a un tipo de átomo especificado por su número atómico, masa atómica, y estado de energía, tal como carbono 14 (14C) . "Radioactividad" se refiere a la radiación, que incluye partículas alfa, partículas beta, nucleones, electrones, positrones, neutrinos y rayos gamma, emitidos por una sustancia radioactiva. Los radionúclidos adecuados para su uso en la presente invención incluyen, en forma no taxativa, flúor 18 (18F) , fósforo 32 (32P) , escandio 47 (47Sc) , cobalto 55 (55Co) , cobre 60 (60Cu) , cobre 61 (61Cu) , cobre 62 (62Cu) , cobre 64 (64Cu) , galio 66 (66Ga) , cobre 67 (67Cu) , galio 67 (67Ga) , galio 68 (68Ga) , rubidio 82 (82Rb) , itrio 86 (86Y) , itrio 87 (87Y) , estroncio 89 (89Sr) , itrio 90 (90?) , rodio 105 (105Rh) , plata 111 (xllAg) , indio 111 (llxIn) , yodo 124 (124I), yodo 125 (125I), yodo 131 (131I), estaño 117m (117mSn) , tecnecio 99m (99raTc) , prometió 149 (149Pm) , samario 153 (153Sm) , holmio 166 (166Ho) , lutecio 177 (177Lu) , renio 186 (186Re) , renio 188 (188Re) , talio 201 (201T1) , astatina 211 (211At) y bismuto 212 (212Bi) . Como se usa en la presente, la "m" en 11 mSn y 99mTc representa el estado meta. Además, lo elementos radioactivos naturales tales como uranio, radio y torio, que normalmente representan mezclas de radioisótopos, son ejemplos adecuados de radionúclidos . 67Cu, 131I, 177Lu, y 186Re son radionúclidos beta-emisores y gamma-emisores. 212Bi es un radionúclido alfa-emisor y beta-emisor. 11At es un radionúclido alfa-emisor. 32P, 47Sc, 89Sr, 90Y, 105Rh, 211Ag, 117mSn, 149Pm, 153Sm, 166Ho, y 188Re son ejemplos de radionúclidos beta-emisores. 67Ga, li:LIn, 99mTc, y 201T1 son ejemplos de radionúclidos gamma-emisores . 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 66Ga, 68Ga, 82Rb, y 86Y son ejemplos de radionúclidos emisor de positrones. 64Cu es un radionúclido beta-emisor y emisor de positrones . Los agentes de producción de imágenes y de detección también se pueden diseñar dentro de los copolímeros aleatorios de la invención a través del agregado de isótopos naturales tales como deuterio, 13C, o 15N durante la síntesis del iniciador, los conectores, los grupos conectores, los comonómeros.
Nanopartículas Los agentes funcionales también pueden incluir nanopartículas. Las nanopartículas útiles en la presente invención incluyen partículas que tienen un tamaño en la gama de 1 a 1000 nra. Las nanopartículas pueden ser perlas, partículas metálicas o pueden en algunos casos ser micelas y en algunos otros casos pueden ser liposomas. Otras nanopartículas incluyen nanotúbulos, puntos cuánticos y oro coloidal . Las nanopartículas se pueden empaquetar con agentes de diagnóstico y/o terapéuticos.
Los expertos en el arte también reconocerán que la invención se puede usar para permitir la detección coincidente de más de un agente del mismo tipo o de un tipo diferente. Además, el uso de composiciones químicas de conectores flexibles también se puede usar para atestiguar la pérdida de un marcador fluorescente, por ejemplo, cuando la molécula se capta en una célula y en un medio de bajo pH.
En algunas realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la siguiente fórmula: en donde los subíndices x e y1 son de manera tal que Mn de la parte del polímero sea 95.000g/mol ; A1 es anticuerpo; y L-CTP tiene la fórmula: En otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde los subíndices x, yla e ylb son de manera tal que Mn de la parte del polímero sea 107.100g/mol ; A1 es un anticuerpo; y L-CTP es lo definido anteriormente.
En aún otras realizaciones, el copolímero aleatorio tiene la fórmula : en donde los subíndices x e y1 son tales que Mn de la parte del polímero sea 95.000g/mol; A1 es una IgG; y L-CTP es lo definido anteriormente .
En algunas realizaciones, cada uno de A1 y A2 es independientemente un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un Fab, IgG, un péptido, una proteína, una enzima, un oligonucleótido, un polinucleótido, ácidos nucleicos, o un conjugado de fármaco de anticuerpo (ADC) .
En algunas realizaciones, A1 se selecciona independientemente de un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un Fab, un scFv, un dominio de inmunoglobulina, una IgG, y A2 se selecciona independientemente de un agente anticáncer, una toxina, un fármaco de moléculas pequeñas, un agente de quimioterapia, un inhibidor de quinasa, un agente antiinflamatorio, y un agente antifibrótico .
En algunas realizaciones, R1 es LG1 y L2-A2 se selecciona independientemente de un agente anticáncer, una toxina, un fármaco de moléculas pequeñas, un agente de quimioterapia, un inhibidor de quinasa, un agente antiinflamatorio, y/o un agente antifibrótico .
IV. Preparación de Copolimeros Aleatorios que contienen un Zwiterión Los copolimeros aleatorios de la presente invención se pueden preparar por cualquier medio conocido en el arte. En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un proceso para preparar un copolímero aleatorio de la presente invención, el proceso incluye el paso de conectar una mezcla de un primer monómero y un segundo monómero con un iniciador, I1, en condiciones suficientes para preparar un copolímero aleatorio a través de la polimerización de radicales libres, en donde el primer monómero comprende una fosforilcolina y cada uno del segundo monómero y el iniciador comprende independientemente por lo menos uno de un agente funcional o un grupo conector para la unión al agente funcional .
La mezcla para preparar los copolimeros aleatorios de la presente invención puede incluir una variedad de otros componentes. Por ejemplo, la mezcla también puede incluir un catalizador, ligando, solvente y otros aditivos. En algunas realizaciones, la mezcla también incluye un catalizador y un ligando. Los catalizadores y ligandos adecuados se describen más detalladamente a continuación.
La mezcla para preparar los copolímeros aleatorios de la presente invención se puede preparar usando un proceso semicontinuo para controlar la estructura del polímero cuando la relación de reactividad de los monómeros es diferente para permitir que el polímero final sea un copolímero alternado, un copolímero periódico, un copolímero de gradiente, un copolímero de bloques o un copolímero estadístico.
Se puede usar cualquier monómero adecuado en el proceso de la presente invención, tal como aquellos descritos anteriormente.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención se pueden preparar mediante cualquier método de polimerización adecuado, tal como mediante la polimerización por radicales vivos. La polimerización por radicales vivos, discutida por Odian, G. en Principios de la Polimerización, 4*, iley-Interscience John Wiley & Sons: New York, 2004, aplicada en polímeros zwiteriónicos por ejemplo en US 6.852.816. Se pueden emplear varias metodologías de polimerización por radicales vivos diferentes, que incluyen la Polimerización por Radicales Libres Estables (SFRP) , la Transferencia Agregado-Fragmentación de Radicales (RAFT) y la Polimerización Mediada por Nitróxido (NMP) . Además, la Polimerización por Radicales por Transferencia de Átomos (ATRP) , proporciona un método conveniente para la preparación de los copolímeros aleatorios de la invención.
La preparación de polímeros mediante ATRP consiste en la polimerización por radicales de monómeros que empiezan con un iniciador que transporta uno o más halógenos. El iniciador halogenado se activa por un catalizador (o una mezcla de catalizadores cuando se emplea CuBr2) tal como una sal de metal de transición (CuBr) que se puede solubilizar por un ligando (por ejemplo, bipiridina o PMDTA) . La polimerización RAFT usa compuestos tiocarboniltio, tales como ditioésteres , ditiocarbamatos, tritiocarbonatos y xantatos, para mediar el proceso de polimerización a través de un proceso de transferencia de cadena reversible. Otros procesos por radicales "vivos" o controlados útiles en la preparación de los copolímeros aleatorios de la invención incluyen NMP.
Iniciadores Los iniciadores útiles para la preparación de los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen cualquier iniciador adecuado para la polimerización a través de la polimerización por radicales por transferencia de átomos (ATRP) , tales como aquellas descritas anteriormente. Otros iniciadores útiles incluyen aquellos para la polimerización por radicales mediada por nitróxido (NMP) , o la polimerización por agregado-fragmentación-terminación (RAFT o MADIX) . Se pueden usar aún otras técnicas para controlar un proceso de polimerización por radicales libres, tales como el uso de agentes iniciadores y de transferencia (iniferters) , transferencia degenerativa o proceso de telomerización. Además, los iniciadores útiles en la presente invención incluyen aquellos que tienen por lo menos un punto de ramificación, tales como aquellos descritos anteriormente.
Los copolímeros aleatorios de la presente invención que tienen arquitecturas complejas que incluyen compuestos ramificados que tienen varias ramificaciones de polímeros que incluyen, en forma no taxativa, estructuras de peine y de estrella. Las arquitecturas de peine se pueden lograr empleando iniciadores lineales que transportan tres o más átomos de halógeno, preferentemente los halógenos son átomos de cloro, bromo o yodo, más preferentemente los halógenos son átomos de cloro o bromo. Las arquitecturas de estrella también se pueden preparar empleando compuestos que transportan varios halógenos sobre un solo átomo de carbono o moléculas cíclicas que transportan varios halógenos. En algunas realizaciones, los compuestos que tienen arquitecturas de estrella tienen 3 ramificaciones del polímero y en otras realizaciones tienen 4 ramificaciones del polímero. Véanse los iniciadores descritos anteriormente.
Catalizador y Ligandos El catalizador para su uso en la ATRP o las polimerizaciones por transferencia por radicales de grupos pueden incluir sales adecuadas de Cu1+, Cu2+, Fe2+, Fe3\ Ru2+, Ru3+, Cr2+, Cr3+, Mo2+, Mo. 3\ +, W3+, Mn2+, Mn2+, Mn4+, Rh3+, Rh4+, Re2+, Re3+, Co1+, Co . 2+, Co3+, V2+, V3+, Zn. 1+, Zn2+, Ni2+, Ni3+, Au1+, Au2+, Ag1+ y Ag2+ . Las sales adecuadas incluyen, en forma no taxativa: sales de halógeno, alcoxi de Ci-C6, sulfatos, fosfato, triflato, hexafluorofosfato, metanosulfonato, arilsulfonato . En algunas realizaciones, el catalizador es cloruro, sales de bromuro del ion metal citado anteriormente. En otras realizaciones, el catalizador es CuBr, CuCl o RuCl2.
En algunas realizaciones, es deseable el uso de uno o más ligandos para solubilizar los catalizadores de metales de transición. Los ligandos adecuados se usan en forma útil en combinación con una variedad de catalizadores de metales de transición que incluyen aquellos donde el cloruro o bromuro de cobre, o las sales de metales de transición de cloruro de rutenio forman parte del catalizador. La elección de un ligando afecta la función del catalizador ya que los ligandos no solamente contribuyen a solubilizar catalizadores de metales de transición en los medios de reacción, sino que también ajustan su potencial de redox. La selección de un ligando también está basada en la solubilidad y la capacidad de separación del catalizador de la mezcla de productos. Cuando la polimerización se debe realizar en una fase líquida, los ligandos/catalizadores solubles son generalmente deseables aunque se pueden emplear catalizadores inmovilizados. Los ligandos adecuados incluyen aquellos grupos piridilo (que incluyen alquil piridinas, por ejemplo, 4.4. dialquil -2 , 2 ' bipiridinas) y grupos piridilo que transportan un grupo imino alquil sustituido, cuando está presente, los grupos alquilo más prolongados proporcionan solubilidad en mezclas de monómeros menos polares y medios de solventes. Las trifenil fosfinas y otros ligandos de fósforo, además de indanilo, o ligandos de ciclopentadienilo, también se pueden emplear con catalizadores de metales de transición (por ejemplo, complejos de Ru+2-haluro o de Fe+2-haluro con trifenolfosfina, indanilo o ligandos de ciclopentadienilo) .
En algunas realizaciones se emplea una cantidad aproximadamente estequiométrica del compuesto metal y el ligando en el catalizador, basado en las relaciones molares de los compuestos cuando el ion metal forma un complejo completo. En otras realizaciones la relación entre el compuesto metal y el ligando está en la gama 1: (0,5 a 2) o en la gama 1: (0,8 a 1,25).
Generalmente, cuando el catalizador es cobre, los ligandos de nitrógeno de bidentato o de multidentato producen catalizadores más activos. Además, los ligandos de puente o cíclicos y las poliaminas alifáticas ramificadas proporcionan catalizadores más activos que los ligandos lineales simples. Cuando el bromo es el contra ion, se necesitan ligandos de bidentato o de medio tetradentato para cada Cu+1. Cuando se emplean contra iones más complejos, tales como triflato o hexafluorofosfato, se puede emplear un ligando de dos bidentatos o un ligando de un tetradentato. El agregado de cobre metálico puede ser ventajoso en algunas realizaciones particularmente cuando se desea una polimerización más rápida para el cobre metálico y Cu+2 puede experimentar una reacción de redox para formar Cu+1. El agregado de algunos Cu+2 al comienzo de algunas reacciones de ATRP se puede emplear para reducir la magnitud de finalización normal.
En algunas realizaciones, la cantidad de catalizador empleada en las reacciones de polimerización es el equivalente molar de la mezcla que está presente. Dado que el catalizador no se consume en la reacción, sin embargo, no es esencial para incluir una cantidad del catalizador tan alta como del iniciador. La relación del catalizador a cada halógeno contenido en el iniciador, basado el compuesto metal de transición en algunas realizaciones es de 1: (1 a 50) , en otras realizaciones de 1: (1 a 10) , en otras realizaciones de 1:(1 a 5) y en otras realizaciones de 1:1.
Condiciones de la Polimerización En algunas realizaciones, el proceso de polimerización por radicales "vivos" o controlados de la invención preferentemente se lleva a cabo para lograr un nivel de polimerización en la gama de 3 a 2000, y en otras realizaciones de 5 a 500. El nivel de polimerización en otras realizaciones está en la gama de 10 a 100, o alternativamente en la gama de 10 a 50. El nivel de polimerización en las técnicas de polimerización por radicales por transferencia de grupos o de átomos, está directamente relacionado con la relación inicial del iniciador al monómero . En consecuencia, en algunas realizaciones las relaciones iniciales del iniciador al monómero están en la gama de 1: (3 a 2.000) o de 1:(5 a 500), o de 1:(10 a 100), o de 1:(10 a 50).
Las reacciones de polimerización normalmente se llevan a cabo en la fase líquida, empleando una solución homogénea única. La reacción puede ser, sin embargo, homogénea que comprende una fase sólida y una fase líquida (por ejemplo, una suspensión o una emulsión acuosa) . La reacción puede avanzar en el estado sólido donde el polímero se une a una superficie planar (oblea) una superficie no planar (perlas) . En aquellas realizaciones donde se emplea un solvente no polimerizable , el solvente empleado se selecciona tomando en consideración la naturaleza del monómero z iteriónico, el iniciador, el catalizador y su ligando y además, cualquier comonomero que se puede emplear.
El solvente puede comprender un compuesto único o una mezcla de compuestos. En algunas realizaciones, el solvente es agua y en otras realizaciones el agua está presente en una cantidad del 10% al 100% en peso, basado en el peso de los monómeros presentes en la reacción. En aquellas realizaciones donde un comonomero insoluble se debe polimerizar con un monómero zwiteriónico, puede ser deseable emplear un solvente o un cosolvente (en conjunto con agua) que permite la solubilización de todos los monómeros presentes. Los solventes orgánicos adecuados incluyen, en forma no taxativa, formamidas (por ejemplo, ?,?' -dimetilformamida) , éteres (por ejemplo, tetrahidrofurano) , esteres (acetato de etilo) y más preferentemente, alcoholes. En algunas realizaciones en las cuales se debe emplear una mezcla de agua y un solvente orgánico, los alcoholes de alquilo miscibles con agua de Ci-C4 (metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, y tercbutanol) son solventes orgánicos útiles. En otras realizaciones, las combinaciones de agua y metanol son adecuadas para realizar reacciones de polimerización. La reacción también se puede realizar en solventes supercríticos tales como C02.
Como se indicó anteriormente, en algunas realizaciones, es deseable incluir agua en la mezcla de polimerización en una cantidad del 10% al 100% en peso basado en el peso de los monómeros que se deben polimerizar. En otra realización el solvente no polimerizable es del 1% al 50% en peso, basado en espeso de los monómeros presentes en la mezcla de la reacción. En otras realizaciones, el solvente no polimerizable total es del 10% al 500% en peso o alternativamente del 20% al 400%, basado en el peso de los monómeros presentes en la mezcla de la reacción. También es deseable en algunos casos manipular la solubilidad de un reactivo de entrada, tal como el iniciador y el monómero, por ejemplo, modificando la temperatura o el solvente u otro método de mantera tal que modifique las condiciones de la reacción en una forma dinámica.
En algunas realizaciones, el tiempo de contacto del monómero zwiteriónico y el agua antes del contacto con el iniciador y el catalizador se minimizan formando una premezcla que comprende todos los componentes diferentes del monómero zwiteriónico y para el monómero zwiteriónico que se debe agregar a la premezcla en último lugar.
Las reacciones de polimerización se pueden llevar a cabo a cualquier temperatura. En algunas realizaciones, la temperatura puede ser desde la temperatura ambiente (temperatura ambiente) hasta 120°C. En otras realizaciones, la polimerización se puede llevar a cabo a una temperatura elevada desde la temperatura ambiente en la gama de 60°C a 80°C. En otras realizaciones, la reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente (temperatura ambiente) .
En algunas realizaciones, los compuestos de la invención tienen una polidispersidad (del peso molecular) menor de 1,5, a juzgar por la cromatografía de permeación de gel . En otras realizaciones, las polidispersidades pueden estar en la gama de 1,2 a 1,4.
Se pueden usar numerosos procedimientos de elaboración para purificar el polímero de interés tales como la precipitación, el fraccionado, la reprecipitación, la separación de membranas y el secado por congelamiento de los polímeros.
Extremo de Polímero No Halogenado En algunas realizaciones, puede ser deseable reemplazar el halógeno, u otro depurador de radicales I', con otra funcionalidad. Se puede emplear una variedad de reacciones para la conversión del halógeno alifático. En algunas realizaciones, la composición del halógeno alifático puede incluir la reacción para preparar un grupo alquilo, alcoxi, cicloalquilo, arilo, heteroarilo o hidroxi . Los halógenos también pueden estar sujetos a una reacción de eliminación para dar origen a un alqueno (enlace doble) . Otros métodos para modificar el extremo halogenado se describen en Matyj aszewski et al. Prog. Polym. Sci. 2001, 26, 337, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.
Uniones de Agentes Funcionales El acoplamiento de agentes funcionales a los copolímeros aleatorios de la presente invención se puede realizar empleando condiciones químicas y reactivos aplicables a las reacciones que se están realizando. Ejemplos de métodos se describen en Técnicas de Bioconjugados , Greg T. Hermanson, Academic Press, 2a ed., 2008 (incorporado en su totalidad en la presente) . Otras técnicas de bioconjugación se describen en Bertozzi et al. Angewandte Chemie 2009, 48, 6974, y en Gauthier et al. Chem. Commun. 2008, 2591, cada uno de los cuales se incorpora como referencia en su totalidad en la presente.
Cuando, por ejemplo, el acoplamiento necesita la formación de un éster o una amida, las reacciones de deshidratación entre un ácido carboxílico y un alcohol pueden emplear un agente de deshidratación (por ejemplo, una carbodiimida tal como diciclohexilcarbodimida, DCC, o el agente soluble en agua clorhidrato de l-etil-3- (3 -dimetillaminopropil ) carbodiimida EDC) . Alternativamente, se pueden emplear ésteres de N-hidroxisuccinimida (NHS) para preparar amidas. La reacción para preparar amidas empleando ésteres de NHS normalmente se realizan cerca el pH neutro en fosfato, bicarbonato, borato, HEPES u otros reguladores del pH que no contienen amina a una temperatura de 4°C a 25°C. En algunas realizaciones, las reacciones que emplean EDC como el agente de deshidratación, se puede emplear un pH de 4,5-7,5; en otras realizaciones, se puede emplear un pH de 4,5 a 5. El ácido morfolinoetanosulfónico, MES, es un regulador de pH de la reacción de carbodiimida eficaz.
Los grupos tiol pueden reaccionar en una variedad de condiciones para preparar productos diferentes. Cuando un tiol reacciona con una maleimida para formar un enlace de tioéter, la reacción normalmente se lleva a cabo a un pH de 6,5-7,5. Se pueden enfriar grupos maleimida en exceso agregando reactivos de tiol libre tales como mercaptoetanol . Cuando están presentes enlaces de disulfuro como un enlace, se pueden preparar mediante el intercambio de tiol y disulfuro entre un sulfhidrilo presente en el grupo bioactivo y una funcionalidad de X que es un disulfuro tal como un disulfuro de piridilo. Las reacciones que consisten en disulfuro de piridilo se pueden realizar a pH 4 - pH 5 y la reacción se puede monitorear a 343 nm para detectar la piridina-2-tiona liberada. Los grupos tiol también pueden reaccionar con epóxidos en solución acuosa para producir hidroxi tioéteres. Un tiol también puede reaccionar a pH ligeramente alcalino con un haloacetato tal como yodoacetato para formar un enlace de tioéter.
La reacción de grupos guanido (por ejemplo, aquellos de una arginina en una proteína o un polipéptido de interés) con un glioxal se puede realizar a pH 7,0-8,0. La reacción normalmente avanza a 25°C. El derivado, que contiene dos grupos fenilglioxal por cada grupo guanido, es más estable en condiciones levemente ácidas (por debajo de pH 4) que a pH neutro o alcalino y permite el aislamiento de los materiales unidos. A valores de pH neutro o alcalino, el enlace se descompone lentamente. Cuando reacciona un residuo de arginina de una proteína o un polipéptido con un reactivo de fenilglioxal , un 80% del enlace se hidroliza para regenerar el residuo de arginina original (con ausencia de exceso de reactivo) en aproximadamente 48 horas a 37°C a pH 7.
Las reacciones de imidoéster con aminas se realizan normalmente a pH de 8-10, y preferentemente a pH 10. El enlace de amidina formado desde la reacción de un imidoéster con una amina es reversible, específicamente a pH alto.
Los haloacetales pueden reaccionar con grupos sulfhidrilo en una gama de pH amplia. Para evitar reacciones colaterales entre los residuos de histidina que pueden estar presentes, específicamente cuando el grupo sulfhidrilo está presente sobre una proteína o un polipéptido, la reacción se puede realizar a pH 8,3.
Los aldehidos pueden reaccionar con aminas en una variedad de condiciones para formar iminas. Cuando el aldehido o la amina están inmediatamente adyacentes a un grupo acilo, el producto es una base de Schiff que tiende a ser más estable que cuando no está presente ningún grupo arilo. Las condiciones para la reacción de aminas con aldehidos para formar un enlace de imina incluyen el uso de un pH básico desde el pH 9 al pH 11 y a una temperatura desde 0°C hasta la temperatura ambiente, durante 1 a 24 horas. Alternativamente, cuando se desea un acoplamiento preferido a la amina del extremo de N de una proteína, se pueden emplear pH más bajos de 4-7. Los reguladores del pH que incluyen borohidruro y los reguladores de pH que contienen amina terciaria suelen emplearse para la preparación de iminas. Cuando se desean conjugados de imina, que son susceptibles en forma hidrolítica, se pueden reducir para formar un enlace de amina que no es susceptible en forma hidrolítica. La reducción se puede realizar con una variedad de agentes de reducción adecuados que incluyen borohidruro de sodio o cianoborohidruro de sodio.
Se desea que las condiciones de la reacción provistas anteriormente proporcionen una guía general para el experto en el arte. El experto en el arte reconocerá que las condiciones de la reacción se pueden variar según sea necesario para promover la unión del agente funcional a los copolímeros aleatorios de la presente invención y que se puede obtener una guía para la modificación de las reacciones de textos estándar en la química orgánica. Se puede obtener otra guía de textos tales como Wong, S.S., "Química de la Conjugación y la Reticulación de Proteínas," (CRC Press 1991), que discuten reacciones químicas relacionadas.
V. Composiciones La presente invención incluye y proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de la invención y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de la invención pueden estar presentes como una sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, metabolito, análogo o derivado de ellos, en las composiciones farmacéuticas de la invención. Como se usa en la presente, un "excipiente farmacéuticamente aceptable" o un "portador farmacéuticamente aceptable" está destinado a incluir todos y cada uno de los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos , agentes isotónicos y de retardo de la absorción y similares, compatibles con la administración farmacéutica .
Los portadores farmacéuticamente aceptables para su uso en la formulación de los copolímeros aleatorios de la presente invenció incluyen, en forma no taxativa, los portadores sólidos tales como lactosa, térra alba, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares; y excipientes líquidos tales como jarabes, solución salina, solución salina con regulador de pH de fosfato, agua y similares. Los portadores pueden incluir un material de retardo del tiempo conocido en el arte, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa , metilmetacrilato o similares.
Otros rellenos, excipientes, saborizantes y otros aditivos tales como los conocidos en el arte también pueden estar incluidos en una composición farmacéutica de acuerdo con la invención. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es conocido en el arte. Excepto cuando algún medio o agente convencional es incompatible con el compuesto activo, su uso en las composiciones de la invención está contemplado. También se pueden incorporar compuestos activos complementarios en la composición de la presente invención.
Las preparaciones farmacéuticas comprenden todos los tipos de formulaciones. En algunas realizaciones son formulaciones parenterales (que incluyen subcutáneas, intramusculares, intravenosas, intradérmicas , interaperitoneales, intratecales , intraventriculares , intracranealas , intraespinales , intracapsulares e intraóseas) adecuadas para la inyección o la infusión (por ejemplo, polvos o soluciones concentradas que se pueden reconstituir o diluir así como suspensiones y soluciones) . Cuando la composición es un sólido que necesita una reconstitución o un concentrado que necesita una dilución con medios líquidos, se puede emplear cualquier medio líquido adecuado. Ejemplos preferidos de medios líquidos incluyen, en forma no taxativa, agua, solución salina, solución salina con regulador de pH de fosfato, solución de Ringer, solución de Hank, solución de dextrosa, y albúmina de suero humano al 5%.
Cuando un compuesto o una composición farmacéutica que comprende un copolímero aleatorio de la presente invención es adecuado para el tratamiento de trastornos proliferativos de células, que incluyen en forma no taxativa, cánceres, el compuesto o la composición farmacéutica se pueden administrar a un sujeto a través de una variedad de vías que incluyen la inyección directamente en los tumores, el torrente sanguíneo o las cavidades corporales.
Si bien las composiciones farmacéuticas pueden ser soluciones líquidas, suspensiones líquidas, o polvos que se pueden reconstituir inmediatamente antes de la administración, también pueden tomar otras formas. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar como jarabes, pociones, bolos, gránulos, pastas, suspensiones, cremas, ungüentos, tabletas, cápsulas (duras o blandas), aspersiones, emulsiones, microemulsiones , parches, supositorios, polvos y similares. Las composiciones también pueden prepararse para vías de administración diferentes de la administración parenteral que incluye, en forma no taxativa, tópica (que incluye bucal y sublingual), pulmonar, rectal, transdérmica , transmucosa, oral, ocular, etc.
En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden uno o más copolímeros aleatorios de la presente invención.
Otras composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender uno o más copolímeros aleatorios de la presente invención que funcionan como ligandos biológicos que son específicos de un antígeno o molécula blanco. Dichas composiciones pueden comprender un copolímero aleatorio de la presente invención, donde el agente bioactivo es un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácido de un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento de FAb2 o FAb' o una región variable de anticuerpo. Alternativamente, el compuesto puede ser un copolímero aleatorio y el polipéptido puede comprender la secuencia de unión al antígeno de un anticuerpo de cadena única. Cuando un agente bioactivo presente en un copolímero aleatorio de la presente invención funciona como un ligando específico de un antígeno o una molécula blanco, esos compuestos también se pueden emplear como reactivos de diagnóstico y/o de producción de imágenes y/o en ensayos de diagnóstico .
La cantidad de un compuesto en una composición farmacéutica varía según numerosos factores. En una realización, puede ser una dosis terapéuticamente eficaz que es adecuada para un contenedor de dosis única (por ejemplo, un frasco) . En una realización, la cantidad del compuesto es una cantidad adecuada para una jeringa de uso único. En aún otra realización, la cantidad es adecuada para distribuidores multiuso (por ejemplo, contenedores adecuados para el suministro de gotas de formulaciones cuando se usan para suministrar formulaciones tópicas) . Un experto en el arte podrá determinar la cantidad de un compuesto que produce una dosis terapéuticamente eficaz en forma experimental mediante la administración repetida de cantidades crecientes de una composición farmacéutica para lograr un punto final deseado clínicamente .
Generalmente, un excipiente farmacéuticamente aceptable está presente en la composición en una cantidad del 0,01% al 99,999% en peso, o del 1% al 99% en peso. Las composiciones farmacéuticas pueden contener del 5% al 10%, o del 10% al 20%, o del 20% al 30%, o del 30% al 40%, o del 40% al 50%, o del 50% al 60%, o del 60% al 70%, o del 70% al 80%, o del 80% al 90% en peso del excipiente. Otras gamas adecuadas de excipientes incluyen del 5% al 98%, del 15% al 95%, o del 20% al 80% en peso.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables se describen en una variedad de fuentes conocidas, que incluyen en forma no taxativa, "Remington: La Ciencia y la Práctica de la Farmacia", 19* edición, Williams & Williams, (1995) y Kibbe, A. H. , Manual de Excipientes Farmacéuticos, 3a Edición, Asociación Farmacéutica Estadounidense, Washington, D.C., 2000.
VI. Métodos Los copolímeros aleatorios de la presente invención son útiles para tratar cualquier estado o condición de enfermedad. Mediante la combinación de agentes dirigidos, fármacos y proteínas terapéuticas apropiadas, junto con un zwiterión tal como fosforilcolina , los copolímeros aleatorios de la presente invención se pueden usar para enfrentar la panoplia de mecanismos provistos por un estado o condición de enfermedad cualquiera. Por ejemplo, el estado o condición de enfermedad puede ser agudo o crónico .
Los estados y condiciones de enfermedad que se pueden tratar usando los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, cáncer, trastornos autoinmunes, trastornos genéticos, infecciones, inflamación, trastornos fibroticos y trastornos metabólicos.
Los cánceres que se pueden tratar usando los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, cáncer de ovarios, cáncer de mamas, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de tiroides, cáncer de hígado, cáncer de pleura, cáncer pancreático, cáncer de cuello de útero, cáncer testicular, cáncer de colon, cáncer anal, cáncer de los conductos biliares, tumores carcinoides gastrointestinales, cáncer de esófago, cáncer de vesícula biliar, cáncer rectal, cáncer de apéndice, cáncer de intestino delgado, cáncer de estómago (gástrico), cáncer renal, cáncer del sistema nervioso central, cáncer de piel, coriocarcinomas ; cánceres de cabeza y cuello, sarcomas osteogénicos , fibrosarcoma, neuroblastoma, glioma, melanoma, leucemia y linfoma.
Las enfermedades autoinmunes que se pueden tratar usando los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, esclerosis múltiple, miastenia gravis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, cirrosis biliar primaria, diabetes mellitus tipo I (diabetes mellitus insulinodependiente o IDDM) , enfermedad de Grave, anemia hemolítica autoinmune, anemia perniciosa, trombocitopenia autoinmune, vasculitis tales como granulomatosis de Wegener, enfermedad de Behcet, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (lupus) , esclerodermia, esclerosis sistémica, síndromes de Guillain-Barré, fibrosis, fibrosis hepática, fibrosis posterior al transplante, fibrosis pulmonar idiopática, tiroiditis de Hashimoto, espondiloartropatías tales como espondilitis anquilosante, soriasis, dermatitis herpetiforme , enfermedades intestinales inflamatorias, pénfigo vulgar y vitíligo .
Algunos trastornos metabólicos tratables por los copolímeros aleatorios de la presente invención incluyen trastornos de almacenamiento lisosomal, tales como mucopolisacaridosis IV o Síndrome de Morquio, Insuficiencia de Activador/GM2 Gangliosidosis , Alfa-manosidosis , Aspartilglucosaminuria , enfermedad de almacenamiento de éster de colesterilo, Insuficiencia de Hexosaminidasa A Crónica, Cistinosis, enfermedad de Danon, enfermedad de Fabry, enfermedad de Farber, Fucosidosis, Galactosialidosis, Enfermedad de Gaucher, GM1 gangliosidosis, hipofosfatasia, enfermedad de células I/Mucolipidosis II, Enfermedad de Almacenamiento de Ácido Siálico Infantil/ISSD, Insuficiencia de Hexosaminidasa A Juvenil, enfermedad de Krabbe, Leucodistrofia Metacromática, trastornos de Mucopolisacá-ridos tales como Pseudo-polidistrofia de Hurler/Mucolipidosis IIIA, Síndrome de Hurler, Síndrome de Scheie, Síndrome de Hurler-Scheie, síndrome de Hunter, síndrome de Sanfilippo, Insuficiencia de Hialuronidasa, Maroteaux-Lamy, Síndrome de Sly, Mucolipidosis I/Sialidosis, Mucolipidosis y Mucolipidosis , insuficiencia de sulfatasa múltiple, Enfermedad de Niemann-Pick, Lupofuscinosis Ceroides Neuronales, enfermedad de Pompe/enfermedad de almacenamiento de Glucógeno tipo II, Picnodisostosis , enfermedad de Sandhoff, enfermedad de Schindler, enfermedad de Salla/Enfermedad de Almacenamiento del ácido siálico, Tay-Sachs/GM2 gangliosidosis y enfermedad de Wolman.
Se pueden usar los conjugados de la invención y las composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que contienen conjugados de la invención para tratar una variedad de condiciones. Por ejemplo, existen muchas condiciones para cuyo tratamiento los expertos en el arte conocen terapias en donde se emplean agentes funcionales, revelados en la presente. La invención contempla que los conjugados de la invención (por ejemplo, polímeros que contienen fosforilcolina conjugados a una variedad de agentes funcionales) y composiciones que contienen los conjugados de la invención se pueden emplear para tratar dichas condiciones y que dichos conjugados proporcionan una terapia de tratamiento mejorada en relación con el mismo agente funcional que no está acoplado a un polímero que contiene fosforilcolina .
En consecuencia, la invención contempla el tratamiento de una condición que se sabe que se puede tratar por cierto agente bioactivo tratando la condición usando el mismo agente bioactivo conjugado a un polímero que contiene fosforilcolina .
Otro aspecto de la presente invención se relaciona con métodos para tratar una condición sensible a un agente biológico que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o de una composición farmacéuticamente aceptable de la invención descrita anteriormente. La dosificación y la administración se ajustan para proporcionar niveles suficientes del agente bioactivo (s) para mantener el efecto deseado. El protocolo de dosificación y/o administración apropiado para cualquier sujeto dado puede variar según diferentes factores que incluyen la gravedad del estado de enfermedad, la salud general del sujeto, la edad, el peso y el género del sujeto, la dieta, el horario y la frecuencia de administración, la combinación (es) de fármacos, las sensibilidades a la reacción y la tolerancia/respuesta a la terapia. Las cantidades terapéuticamente eficaces para una situación dada se pueden determinar mediante la experimentación de rutina que está dentro de la pericia y el juicio del clínico.
Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se pueden administrar en forma única. Alternativamente, dos o~ más composiciones farmacéuticas se pueden administrar en forma secuencial, o en un cóctel o combinación que contiene dos copolímeros aleatorios de la presente invención o un copolímero aleatorio de la presente invención y otro agente bioactivo. Otros usos de agentes bioactivos expuestos en la presente se pueden hallar en textos de referencia estándar tales como el Manual de Merck de Diagnóstico y Terapia, Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, NJ y El Fundamento Farmacológico de la Terapia de Goodman y Gilman, Pergamon Press, Inc., Elmsford, N.Y., (1990).
Los copolímeros aleatorios de la presente invención son útiles para tratar, detectar y producir imágenes de una variedad de estados y condiciones de enfermedad. Los copolímeros aleatorios se pueden usar como un agente de quimioterapia en el tratamiento del cáncer cuando el fragmento de iniciador I no tiene una funcionalidad y R2 incluye un agente quimioterapéutico del cáncer A2 que se carga sobre el copolímero aleatorio a través de la química de chasquido o cualquier química de conjugación adecuada: Otros agentes de tratamiento del cáncer que usan los copolímeros aleatorios pueden incluir un agente dirigido de una proteína antiangiogénica tal como un fragmento de scFv anti-VEGF A1 conjugado a través de una cisteína del extremo de C a un iniciador de maleimida I. El copolímero aleatorio también puede incluir un agente de quimioterapia del cáncer A2a que está unido a la cadena principal de polímero a través de un conector descomponible o no descomponible. Además, el agente de quimioterapia de cáncer se carga sobre el copolímero aleatorio a través de la química de chasquido o cualquier química de conjugación adecuada. Por ejemplo, en el sarcoma de Ewing: el agente dirigido puede ser un fragmento de anticuerpo anticáncer tal como un fragmento de Fab' o de scFv que se une a un factor de crecimiento angiogénico tal como VEGF. Además, el comonómero dirigido a los huesos A2b puede incluir un péptido rico en aspartato glutamato o un bisfosfonato . Otros comonómeros A2c pueden incluir Vincristina, Doxorubicina y/o ciclofosfamida unidas a través de conectores descomponibles o autoinmolados : Los copolímeros aleatorios para una terapia con un tiempo de residencia más eficaz y prolongado para la degeneración macular húmeda o seca pueden incluir una proteína antiinflamatoria o antiangiogénica tal como el fragmento de scFv anti-VEGF o anti-IL-6 A1 conjugado a través de una cisteína del extremo de C a un iniciador de maleimida I. el copolímero aleatorio preparado puede ser un homopolímero de fosforilcolina o un copolímero de fosforilcolina unido en forma estable a la cadena principal del polímero, en combinación con un A2 de moléculas pequeñas antiinflamatorio o de moléculas pequeñas antiangiogénico unido a la cadena principal del polímero a través de un conector descomponible L2. Alternativamente, el copolímero aleatorio puede incluir otro comonómero que tiene un grupo de unión a la matriz extracelular vitrea (ácido hialurónico) A2 unido a través de un conector no descomponible L2 tal como colina o un aminoácido con una carga positiva: Los copolímeros aleatorios para la estimación de diagnóstico de tiempo real de la carga de tumor y la producción de imágenes para la oncología pueden incluir una proteína asociada al anti -tumor tal como un fragmento scFv A1 de Antígeno anti-Carcino Embrionario (CEA) conjugado a través de una cisteína del extremo de C a un iniciador de maleimida I. El copolímero aleatorio puede incluir fosforilcolina unida en forma estable y un reactivo de producción de imágenes A2a tal como un colorante fluorescente (detección de sonda fluorescente) o gadolinio (para la detección de producción de imágenes de cuerpo entero) . Se pueden agregar otros comonómeros que tienen agentes de quimioterapia de moléculas pequeñas A2b unidos a través de un conector descomponible L2b para agregar un elemento terapéutico. Estas estructuras proporcionan funciones terapéuticas así como de diagnóstico, y se denominan comúnmente teranóstico (terapia y diagnóstico) : Los copolímeros aleatorios para su uso como una plataforma dirigida para terapias de reemplazo de enzimas óseas, específicamente hipofosfatasia, pueden incluir la enzima fosfatasa alcalina recombinante A1 conjugada a través del iniciador modificado por un aldehido I a través de un enlace estable L1. El copolímero aleatorio puede incluir fosforilcolina unida en forma estable al polímero y un comonómero útil para dirigirse a través de un grupo dirigido a los huesos unido en forma estable A2 tal como una secuencia de péptido rico en aspartato o glutamato o un bisfosfonato de manera tal que más de cinco grupos dirigidos estén presentes (y1 es mayor de 5) . A1, naturalmente puede ser cualquier proteína tal como un factor de crecimiento, por ejemplo, una hormona del crecimiento humano, y el péptido dirigido puede ser cualquier péptido adecuado para colocar el conjugado en cualquier tejido. Estos copolímeros son útiles para el suministro subcutáneo: Otros copolímeros aleatorios son útiles como una plataforma dirigida para las terapias de reemplazo de enzimas óseas, específicamente, Síndrome de Morquio (MPS tipo IVa) . Estos tipos de copolímeros aleatorios incluyen una enzima sulfatasa de 6-sulfato de N-acetilgalactosamina recombinante A1 conjugada a través del iniciador de química específica del sitio I a través de un conector descomponible L1. El copolímero aleatorio puede incluir fosforilcolina unido en forma estable al polímero y un comonómero dirigido que contiene un grupo dirigido a los huesos A2 tal como una secuencia de péptido rico en aspartato o glutamato o un bisfosfonato unido a través de un conector no descomponible L2, de manera tal que estén presentes más de cinco grupos dirigidos. Estos copolímeros son útiles para el suministro subcutáneo : Los copolímeros aleatorios para plataformas dirigidas para el tratamiento más seguro, más eficaz de la Artritis Reumatoide pueden incluir varios fármacos diferentes, que incluyen un agente biofarmacéutico anti-TNFa tal como un fragmento de anticuerpo A1 que está unido al iniciador I a través de un conector descomponible L1, o un anti-VEGFR2, una molécula pequeña A2a, como un inhibidor de quinasa y metotrexato A2b, un antimetabolito antineoplásico con propiedades inmunosupresoras unido a través de conectores descomponibles L2a así como L2b, respectivamente: Los copolímeros aleatorios similares a aquellos precedentes se pueden preparar reemplazando el agente biofarmacéutico anti-TNFa de A1 con un inhibidor de dominio doble de proteína pequeña tal como un avimer o un dímero de scFv que inhibe dos proteínas, por ejemplo, TNFa y también VEGF, pero sin el inhibidor de moléculas pequeñas. Además, el metotrexato A2 se puede sustituir con ciclofosfamida : Finalmente, un copolímero aleatorio para ARNi dirigido y protegido se puede preparar sin un iniciador con funcionalidad I. el copolímero aleatorio puede incluir fosforilcolina unida en forma estable al polímero y un comonómero que tiene un A2a de siARN unido al polímero a través de un enlace descomponible L2a y otro comonómero que tiene un grupo dirigido a una célula o un tejido A2b unido a través de un conector no descomponible L2b. El comonómero que contiene siARN se puede preparar usando un monómero que tiene un grupo conector adecuado para la química chasquido o cualquier química de conjugación adecuada en donde el siARN se une al grupo conector después de la polimerización. El comonómero que tiene el grupo dirigido ya puede contener el grupo dirigido, o unirse al grupo dirigido a través de un comonómero que tiene un grupo conector adecuado para la química de chasquido o cualquier química de conjugación adecuado a través de una química diferente de la unión del siARN. El conector descomponible es preferentemente un conector sensible al pH. El copolímero aleatorio se puede preparar con una estequiometría dirigida de aproximadamente cinco grupos oligonucleótidos por cada fármaco A2c y cinco grupos dirigidos por cada fármaco (de manera tal que la relación de yla:ylb:ylc sea de 5:5:1) . Además, la cadena principal del polímero de fosforilcolina puede optimizarse no para la semivida, sino para proteger el siARN en su recorrido desde el sitio de la inyección hasta los tejidos a los cuales se dirige. El siARN se puede reemplazar con mciroARN: Además, el iniciador I puede opcionalmente unirse a un grupo bioactivo A1 tal como un fragmento de anticuerpo para la dirección y la terapia: En algunas otras realizaciones, la ingeniería de los sistemas terapéuticos multif ncionales novedosos puede combinar polímeros de fosforilcolina con fármacos o agentes dirigidos al gen con capacidades de producción de imágenes y/o de detección. Los sistemas pueden tener por lo menos 3 componentes: (1) un grupo dirigido o firmas moleculares que pueden dirigir el suministro a sitios específicos, (2) el agente de producción de imágenes/sonda/marcadores apropiados para la visualización o el monitoreo de los sistemas, y (3) uno o más agentes terapéuticos para tratar eficazmente una enfermedad o trastorno particular. Los siguientes son ejemplos de sistemas multifuncionales que contienen grupos dirigidos, de producción de imágenes y de fármaco/gen. Este listado no está destinado a ser exclusivo de un sistema de polímero que contiene fosforilcolina. Los sistemas dirigidos que se pueden activar por procesos internos tales como el pH, descomposición por enzimas o estímulos externos tales como cerca de la luz infrarroja, ultrasonido, calor o campo magnético para el suministro terapéutico y la producción de imágenes también pueden ser adecuados. En primer lugar, nuestro enfoque conceptualmente se puede combinar con la totalidad de los siguientes : • Nanopartículas basadas en polímeros biodegradables sintéticas que encapsulan un gen terapéutico, un agente de contraste de gadolinio para el análisis de RI y con funcionalidad con anticuerpos para la dirección a sitios de enfermedad específicos.
Liposomas que encapsulan moléculas pequeñas o grandes de fármaco, marcados con 18Fluorine para el análisis de PET, y con funcionalidad con anticuerpos para la dirección a sitios de enfermedad específicos.
Poliplejos que contienen una molécula de siARN, un agente de contraste de óxido de hierro para el análisis de RI , y modificados con ligandos de unión a la célula y péptidos que penetran en la célula para suministro celular e intracelular dirigido respectivamente.
Puntos cuánticos fluorescentes intercalados con una molécula de fármaco para la producción de imágenes ópticas y la detección del suministro y con funcionalidad con un aptámero de ARN para la dirección a enfermedades específicas.
Nanopartículas inorgánicas u orgánicas que contienen un oligonucleótido antisentido para la terapia de gen, un agente de constructor de gadolinio para el análisis de MRI, un fluoróforo para la producción de imágenes óptica y con la superficie modificada para la dirección a enfermedades específicas .
Nanocompuestos poliméricos sensibles al pH con una molécula de fármaco que se libera en función del pH, un agente de contraste de óxido de hierro para la producción de imágenes de MRI, puntos cuánticos de CdTe para la producción de imágenes ópticas y con funcionalidad con anticuerpos para la dirección a enfermedades específicas.
• Conjugados de nanopartícula-aptámero de ADN que contienen un fármaco y un radiotrazador tal como luIn para la producción de imágenes de SPECT y con una funcionalidad con anticuerpos de la membrana específicos de la enfermedad.
En segundo lugar, los polímeros de la presente invención se pueden combinar específicamente con los precedentes: • Un constructor basado en un polímero de fosforilcolina que contiene un gen terapéutico (bioactivo I), un agente de contraste de gadolinio para el análisis de MRI (funcional 1) y una proteína pequeña (tal como un fragmento de anticuerpo) para la dirección a sitios de enfermedad específicos.
• Agente de producción de imágenes 18Flúor para el análisis de PET, y con funcionalidad con una proteína pequeña (tal como un fragmento de anticuerpo) para la dirección a sitios de enfermedad específicos.
• Polímeros de fosforilcolina que contienen una o más moléculas de siARN, un agente de contraste de óxido de hierro para el análisis de MRI y modificados con ligandos de unión a la célula y péptidos que penetran en la célula para el suministro celular e intracelular dirigido respectivamente .
• Polímeros de fosforilcolina que contienen puntos cuánticos fluorescentes (agente funcional) intercalados con una molécula de fármaco (agente funcional) para la producción de imágenes óptica y detección del suministro y con funcionalidad con un aptámero de ARN o una proteína pequeña (tal como un fragmento de anticuerpo o una proteína derivada de un andamio) para la dirección a enfermedades específicas. · Polímeros que contienen fosforilcolina que contienen un oligonucleótido antisentido para la terapia génica, un agente de contraste de gadolinio para el análisis de MRI , un fluoróforo para la producción de imágenes óptica y agente funcional adicional para la dirección a enfermedades específicas tales como folato para tumores o colina para interacciones electrostáticas para la dirección a la matriz extracelular .
• Polímero de fosforilcolina sensible al pH con una molécula de fármaco que se libera en función del pH, un agente de contraste de oxido de hierro para la producción de imágenes de MRI, puntos cuánticos de CdTe para la producción de imágenes ópticas, y con funcionalidad con anticuerpos u otra proteína o aptámero para la dirección y el tratamiento de enfermedades .
• Polímero de fosforilcolina con conjugados de aptámero y agente funcional que contiene un fármaco y un radiotrazador tal como lxlIn para la producción de imágenes de SPECT y con otras funcionalidades con anticuerpos de la membrana específicos de la enfermedad.
VII. Ejemplos Ejemplo 1. Preparación de N- (2-hidroxietil) -exo-3 , 6-epoxi-1,2,3, 6-tetrahidroftalimida Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 50 mi de etanol y 2,0 gramos de anhídrido exo-3 , 6-epoxi - 1 , 2 , 3 , 6 -tetrahidroftálico . La mezcla agitada se enfrió con un baño de agua helada y se agregó una solución de 0,73 gramo de etanolamina en 20 mi de etanol gota a gota durante 10 minutos. La reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, luego se refrigeró toda la noche. La filtración y el enjuague con etanol dieron 0,73 gramo del producto deseado como un sólido cristalino blanco. XH NMR (400 MHz, CDC13) : d = 2,90 (s, 2H, CH) , 3,71 (m, 2H, OCH2) , 3,77 (t, J=5,0 Hz, NCH2) , 5,29 (t, J=1,0 Hz, 2H, OCH) , 6,53 (t, J=1,0 Hz, 2H, CH=CH) .
Ejemplo 2. Preparación de ácido isopropilideno-2 , 2-bis (hidroximetil) propiónico Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 50 mi de acetona, 13,8 mi de 2,2-dimetoxipropano, 10 gramos de ácido 2,2-bis (hidroximetil) propiónico y 0,71 gramo de monohidrato del ácido p-toluenosulfónico . La mezcla se agitó durante dos horas a temperatura ambiente, luego se hizo neutra con 1 mi de 2 amoníaco en metanol . El solvente se evaporó y la mezcla se disolvió en diclorometano, luego se extrajo con 20 mi de agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó y dio 10,8 gramos del producto como un sólido cristalino blanco. XH NMR (400 MHz, CDCl3) : d = 1,20 (s, 3H, CH3CC=0) , 1,43 (s, 3H, CH3) , 1,46 (s, 3H, CH3) , 3,70 (d, J=12,4 Hz, 2H, OCH2) , 4,17 (d, J=12 , 4 Hz, 2H, OCH2) .
Ejemplo 1. Preparación de p-toluenosulfonato de N.N-dimetilpiridinio (DPTS) Una solución de 1,9 gramos de monohidrato de ácido p-toluenosulfónico en 10 mi de benceno se secó mediante destilación azeotrópica usando una trampa de Dean-Stark, luego se agregaron 3,42 gramos de 4-dimetilaminopiridina. Se formó gran cantidad de sólido y se necesitaron 25 mi adicionales de benceno para movilizar la reacción, que se agitó lentamente mientras se enfriaba a temperatura ambiente. El sólido resultante se aisló mediante filtración, se lavó con 10 mi de benceno y se secó y dio 7,88 gramos del producto como un sólido blanco.
E emplo 2. Preparación del iniciador bromopropionato de maleimida protegido Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 50 mi de tetrahidrofurano, 2 gramos de N-(2-hidroxietil) -exo-3 , 6-epoxi-l , 2 , 3 , 6 -tetrahidroftalimida y 2,0 mi de trietilamina . La mezcla de agitación se enfrió a O grado y se agregó una solución de 1,18 mi de bromuro de 2 -bromoisobutilo en 5 mi de tetrahidrofurano gota a gota durante 30 minutos. La reacción se dejó agitar sobre hielo durante 3 horas y luego a temperatura ambiente durante toda la noche. La concentración de la mezcla de la reacción dio un residuo aceitoso, que se purificó mediante cromatografía rápida de gel de sílice con 30-50% de acetato de etilo en hexano, que dio 1,96 gramo del producto deseado como un polvo blanco. ¾ N R (400 MHz , CDC13) : d = 1,89 (s, 6H, CH3) , 2,87 (s, 2H, CH) , 3,82 (t, =5,4 Hz, 2H, NCH2) , 4,33 (t, J=5,4 Hz, 2H, 0CH2) , 5,27 (t, J=1,0 Hz, 2H, OCH) , 6,51 (t, J=l, 0 Hz, 2H, CHvinilo) .
Ejemplo 3. Preparación de iniciador de maleimida bis (bromopropionato) protegido Ácido de maleimida isopropilideno protegido Una solución de 2,00 gramos de N- (2 -hidroxietil ) -exo-3 , 6-epoxi-1 , 2 , 3 , 6-tetrahidroftalimida y 1,67 gramo de ácido isopropilideno-2 , 2-bis (hidroximetil) ropionico en 30 mi de diclorometano seco, junto con 563 mg de DPTS se trató gota a gota con una solución de 2,37 gramos de ?,?' -diciclohexilcarbodiimida en 10 mi de diclorometano seco. Una gran cantidad de sólido comenzó a formase cuando la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y el precipitado se lavó con una cantidad pequeña de diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se concentraron y dieron un aceite transparente que contiene una cantidad pequeña de sólido. Este aceite se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice, usando primero 20-100% de acetato de etilo en hexano . Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron y dieron 3,17 gramos del producto final como un sólido blanco. 1H N R (400 MHz, CDCl3) : d = 1,19 (s, 3H, CH3CC=00) , 1,37 (s, 3H, CH3) , 1,41 (s, 3H, CH3) , 1,55 (s, 6H, (CH3)2C), 2,86 (s, 2H, C=OCHCHC=0) , 3,58 (d, J=12Hz, CH20) , 3,78 (t, J=5,4Hz, CH2GH20) , 4,14 (d, J=12H, CH20) , 4,30 (t, J=5,4Hz, CH2CH20) , 5,27 (t, 2H, CHOCH) , 6,51 (s, 2H, CH=CH) .
Diol de maleimida protegido Una solución del compuesto isopropilideno del paso anterior en 50 mi de metanol se trató con 1,0 gramo de resina de intercambio de iones Dowex 50Wx8-100 (forma de H+) y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche, en cuyo momento la reacción pareció ser completa mediante TLC (gel de sílice, acetato de etilo) . La mezcla se filtró y la resina sólida se lavó con una pequeña cantidad de metanol. Los compuestos orgánicos combinados se concentraron y se colocaron bajo vacío y dieron 1,55 gramo de un aceite ligeramente turbio, que se usó en la reacción siguiente sin nueva purificación.
Iniciador de maleimida bis (bromopropionato) protegido Una solución del producto crudo del paso anterior en 40 mi de tetrahidrofurano anhidro (THF) , junto con 1,45 mi de trietilamina se enfrió en un baño de agua helada y se agregó una solución de 1,23 mi de bromuro de 2 -bromoisobutirilo en 20 mi de THF anhidro gota a gota durante pocos minutos. La reacción se agitó en el frío durante 30 minutos, luego se dejó calentar a temperatura ambiente durante 6 horas. Se agregaron otros 600 µ? de trietilamina, luego 0,5 mi de bromuro de 2 -bromoisobutirilo . La reacción se hizo ácida mediante papel de pH, de manera tal que se agregaran otros 200 µ? de trietilamina para llevar el pH de la solución a 9. La reacción se agitó toda la noche, se concentró y el residuo se repartió entre 50 mi de diclorometano y 50 mi de agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y dio un aceite. Esto se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice, primero con 20%, luego con 30% y finalmente con 40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron l,63g de un aceite que se acidificó a un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) : d = 1,32 (s, 3H, CH3CC=0) , 1,91 [s, 12H, (CH3)2CBr], 2,90 (s, 2H, CHC=0) , 3,78 (t, 2H, NCH2CH20) , 4,28 (t, 2H, NCH2CH20) , 4,31 (app q, 4H, CH2OC=0) , 5,30 (s, 2H, CHOCH) , 6,52 (s, 2H, CH=CH) .
Ejemplo 6. Preparación de N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-1 ,2,3, 6-tetrahidrof alimida Un matraz de base circular de 250 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 100 mi de metanol y 20 gramos de anhídrido de anhídrido exo-3 , 6-epoxi-l , 2 , 3 , 6 -tetrahidroftálico . La mezcla agitada se enfrió a 0 grado y una solución de 0,73 gramo de 2- (2-aminoetoxi) etanol en 40 mi de metanol se agregó gota a gota durante 45 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se calentó a reflujo suave toda la noche. La solución se concentró y el producto se disolvió en 100 mi de diclorometano, luego se lavó con 100 mi de salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y se purificó pasándolo a través de un tapón de gel de sílice con 100 mi de diclorometano y 100 mi de acetato de etilo. 1H NMR (400 MHz, CDC13) : d = 2,90 (s, 2H, CH) , 3,49 (m, 2H, OCH2) , 3,59 (m, 4H, OCH2) , 3,65 (m, 2H, NCH2 ) , 5,15 (t, J=0,8 Hz , 2H, OCH) , 6,55 (t, J=0,8 Hz, 2H, CH=CH) .
Ejemplo 4. Preparación de ácido bis 2,2-[(2-bromoisobutiril) hidroximetil] propionico A una solución de 17,5 mi de bromuro de 2 -bromoisobutirilo en 100 mi de diclorometano, enfriada en un baño de hielo y agua, se agregó gota a gota durante 30 minutos una solución de 10,0 gramos de ácido 2 , 2-bis (hidroximetil) propiónico y 41 mi de trietilamina en 100 mi de diclorometano . La reacción se dejó agitar en frío durante 1 hora, luego se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción luego se lavó con 200 mi de 1N HC1 , luego con 100 mi de 0,5N HCl , y finalmente con 50 mi de NaCl saturado. La capa orgánica es secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró y dio un aceite amarillo. El aceite se recogió en 100 mi de 15% de acetato de etilo en hexano usando una pistola de aire caliente para efectuar la solución si fuera necesario. La solución luego se dejó enfriar durante 1 hora, agregando un cristal de semilla cuando la solución se acercó a la temperatura ambiente. La cristalización se dejó avanzar durante 2 horas, enfriando primero en un baño de hielo y agua, luego en la heladera durante toda la noche. La solución resultante casi se había solidificado, de manera tal que se agregaron 25 mi de 10% de acetato de etilo en hexano, la mezcla se agitó y el sólido cristalino se recuperó mediante filtración. Se lavó con una cantidad mínima de hexano y se secó bajo vacío y dio 14,55 gramos del producto deseado como sólido blanco. Se obtuvo un producto adicional de los líquidos madre si se deseaba. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) : d = 1,33 (s, 3H, CCH3) , 1,90 (s, 12H, (CH3)2CBr), 4,30 (d, J=5,4 Hz, 2H, NCH2) , 4,39 (d, J=5,4 Hz, 2H, OCH2) .
Ejemplo 5. Preparación de iniciador de bis (bromopropionato) extendido de maleimida protegido Un matraz de base circular de 250 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 100 mi de diclorometano, 1,0 gramo de N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-l , 2,3,6-tetrahidroftalimida, 2,5 gramos del dibromo ácido del Ejemplo 7, 0,5 gramo de dimetilaminopiridina y 0,35 gramo de DPTS . El nitrógeno burbujeó a través de la solución brevemente y se agregaron lentamente 1,6 gramos de DCC. La reacción se dejó agitar lentamente a temperatura ambiente toda la noche. La filtración y la evaporación dieron un residuo aceitoso rosa, que se purificó mediante cromatografía rápida de gel de sílice. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) : d = 1,34 (s, 3H, CH3) , 1,90 (s, 6H, CH3) , 2,94 (s, 2H, CH) , 3,64 (m, 6H, 0CH2) , 4,22 (t, J=5,4 Hz, 2H, NCH2) , 4,35 (app q, 4H, OCH2) , 5,15 (t, J=1,0 Hz, 2H, OCH) , 6,54 (t, J=l, 0 Hz, 2H, CH=CH) .
Ejemplo 9. Preparación de N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-1 ,2,3, 6-tetrahidrof alimida, isopropilideno-2 ,2-bis (hidroximetil)propionato Una solución de 11,0 gramos de N- [2 - (2 -hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-l , 2 , 3 , 6-tetrahidroftalimida y 8,22 gramos de ácido isopropilideno-2 , 2 -bis (hidroximetil ) propiónico en 250 mi de diclorometano, junto con 1,3 gramo de DPTS y 5,24 gramos de DMAP trataron con 12,9 gramos de DCC, y la reacción se agitó toda la noche, la reacción se filtró y se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida en dos partes sobre gel de sílice con 40 - 50% de acetato de etilo en hexano y dio el producto deseado como un aceite transparente.
Ejemplo 10. Preparación de N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-1 ,2,3, 6-tetrahidroftalimida, bis (hidroximetil) propionato El producto del ejemplo anterior se disolvió en 100 mi de metanol y se trató con 2,0 gramos de resina de intercambio de iones Dowex 50Wx8-100 (forma de H+) y la reacción ise agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se filtró y se concentró y dio el producto deseado como un aceite que se usó sin nueva purificación. NMR (CD3OD) : d 6,546 (t, 2H, CH=CH, J=0,8 Hz) , 5,158 (t, 2H, CH-O, J=0,8 Hz) , 4,180 (m, 2H, CH2-CH2-0-C=0, J= 4,9 Hz) , 3,63 (m, 10H, N-CH2 y N-CH2-CH2 y CH2-CH2-0-C=0 y CH2-OH) , 2,936 (s, 2H, CH-CH) , 1,147 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 11. Preparación de iniciador de N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] -exo-3 , 6-epoxi-l ,2,3, 6-te rahidroftalimida , 2 , 2-bis- [2 , 2-bis (2-bromoisobutiriloximetil) propioniloxime il] propionato A una solución de 1,5 gramo del diol del paso previo y 3,72 gramos de ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil] propiónico en 50 mi de dielorómetaño, junto con 500 mg de DPTS y 810 mg de DMAP, se trató con 1,40 gramo de diisopropilcarbodiimida, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se concentró y el residuo se sometió a cromatografía varias veces sobre gel de sílice con40% de acetato de etilo en hexano . Las fracciones apropiadas en cada caso se combinaron y se concentraron y dieron el producto deseado como un aceite. N R (CD3OD) : d 6,55 (t, 2H, CH=CH, J=0,8 Hz) , 5,17 (t, 2H, CH-O, J=0,8 Hz) , 3,34 (m, 12H, CCH2) , 4,23 (m, 2H, CH2-CH2-0-C=0, J= 4 , 7 Hz) , 3,68 (m, 2H, N-CH2r J=4 , 7 Hz) , 3,64 (app q, 4H, N-CH2-CH2 y CH2-CH2-0-C=0) , 2,95 (s, 2H, CH-CH) , 1,907 (s, 24H, Br-C-CH3) , 1,34 (s, 6H, CH3) , 1, 308 (s, 3H, CH3) .
E emplo 12. Preparación de iniciador de N- (ácido 3-propiónico) -exo-3 , 6-epoxi-3 , 6-dimetil-l , 2 , 3 , 6-tetrahidroftalimida , éster con ácido 2 ,2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil] propiónico, éster de 3-hidroxipropilo Una solución de 738 mg de ácido 2, 2 -bis [(2 -bromoisobutiriloxi) metil] propiónico, éster de 3-hidroxipropilo y 399 mg de N- (ácido 3 -propiónico) -exo-3 , 6-epoxi-3 , 6-dimetil-1 , 2 , 3 , 6 -tetrahidroftalimida en 20 mi de acetonitrilo seco, junto con 50 mg de DPTS y 100 mg de DMAP, se trató con 375 mg de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se filtró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 30 - 40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 1,02 gramo del producto deseado como un aceite transparente. Mediante 1H NMR, pareció que un 10% del producto ya había experimentado una reacción de retro Diels-Alder. NMR (CDC13) : d 6,19 (s, 2H, CH=CH) , 4,37 (app q, 4H, CCH20, J=10,9, 29,7 Hz) , 4,23 (t, 2H,CH2CH20, J=6,3 Hz) , 4,15 (t, 2H, CH2CH20, J=6,3 Hz) , 3,62 (t, 2H, NCH2, J=7,4 Hz) , 3,22 (s, 2H, CHC=0) , 2,48 (t, 2H, CH2C=0, J=7,4 Hz) , 2,00 (m, 2H, CH2CH2CH2, J=6,3 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C (CH3) 3H, CH3) .
Ejemplo 13. Preparación del iniciador de acetal bis (bromopropionato) A una solución de 1,03 gramo de 3 , 3 -dietoxi- 1-propanol y 3,0 gramos de ácido 2 , 2-bis (2 -bromoisobutiriloximetil) propiónico en 50 mi de diclorometano, junto con 817 mg de p-toluenosulfonato de ?,?-dimetilpiridinio, se trató con 1,58 gramo de ?,?'-diciclohexilcarbodiimida y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y el precipitado se lavó con una pequeña cantidad de diclorometano. Los compuestos orgánicos combinados se concentraron, y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10-20% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron y dieron 2,87 gramos de un aceite incoloro, transparente. Este material aún no era puro mediante 1H NMR, de manera que se lo sometió nuevamente a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice usando diclorometano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 2,00 gramos del producto deseado como un aceite transparente, viscoso. ¾ NMR (400 MHz, CDC13) : d = 1,20 (t, 6H, CH3CH20) , 1,34 (s, 3H, CH3CC=0) , 1,92 [s, 12H, (CH3)2CBr], 1,98 (app q, 2H, CHCH2CH2) , 3,50 (m, 2H, OCH2CH3) , 3,66 (m, 2H, OCH2CH3) , 4,24 (t, 2H, CH2CH2OC=0) , 4,37 (app q, 4H, CH2OC=OCBr) , 4, 60 (t, 1H, O-CH-O) .
Ejemplo 14. Preparación del iniciador 1 de bis (bromopropionato) de vinilo Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 30 mi de diclorometano, 86 miligramos de -penten- 1 -ol , 432 miligramos del dibromo ácido del Ejemplo 7, y 88 miligramos de DPTS . Se hizo burbujear nitrógeno a través de la solución brevemente y se agregaron lentamente 169 µ? de ?,?'-diisopropilcarbodiimida . La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente toda la noche, luego se agregó otro 0,1 gramo de DPTS y la reacción se agitó nuevamente toda la noche. La filtración y la evaporación dieron un residuo aceitoso, que se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice usando 20-40% de acetato de etilo en hexano. El solvente se retiró del primer producto para salir de la columna, que dio 0,13 gramo del producto deseado como un aceite incoloro. XH NMR (400 MHz, CD30D) : d = 1,34 (s, 3H, CH3) , 1,77 (m, 2H, CH2CH2CH2) , 1,90 (s, 12H, CH3) , 2,15 (q, J=7,2 Hz, 2H, CHCH2CH2) , 4,16 (t, J=6,4 Hz, 2H, 0CH2) , 4,36 (app q, 4H, CCH20) , 5,02 (m, 2H, CH2=CH) , 5,82 (m, 1H, CH2=CH) .
E emplo 15. Preparación del iniciador 2 de bis (bromopropionato) de vinilo Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 25 mi de diclorometano, 370 miligramos de éter de etilenglicol monovinilo, 432 miligramos del dibromo ácido del Ejemplo 7 y 590 gramos de DPTS . El matraz se inundó con nitrógeno y se agregaron lentamente 681 µ? de ?,?'-diisopropilcarbodiimida . La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla se filtró y luego se secó sobre gel de sílice para la cromatografía rápida usando 5-10% de acetato de etilo en hexano, que dio el producto como un aceite incoloro. ?? MR (400 MHz , CDC13) : d = 1,36 (s, 3H, CH3) , 1,92 (s, 12H, CH3) , 3,90 (app q, J=5,4 Hz, 2H, NCH2CH20) , 4,05 (dd, 1H, J=2,4, 6,8 Hz, =CH) , 4,19 (dd, J=2,4, 14,4 Hz, 1H, =CH) , 4,39 (m, 2H, NCH2CH20) , 4,40 (app q, 4H, OCH2) , 6,45 (dd, 1H, J=6,8, 14,4 Hz, =CHO) .
Ejemplo 16. Preparación del iniciador de Boc-amino bis (maleimida) Una solución de 2,19 gramos de N-Boc-3 -amino-1-propanol y 5,20 gramos de ácido 2, 2 -bis (2 -bromoisobutiriloximetil )propiónico en 50 mi de diclorometano, junto con 350 mg de DPTS, se trató con 3,0 gramos de N, N' -diciclohexilcarbodiimida y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche, la mezcla de la reacción se filtró y el precipitado se lavó con una pequeña cantidad de diclorometano. La concentración dio un residuo, que se sometió a la cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 5-20% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron un aceite que contenía algo de residuo sólido. Este material se recogió en acetato de etilo y se filtró. La concentración dio nuevamente un aceite que aún contenía algo de sólido, de manera que el material se recogió nuevamente en acetato de etilo, se filtró y se concentró y dio el producto de deseado como un aceite transparente. XH NMR (400 MHz , CDC13) : d = 4,8 (br s, 1H, NH) , 4,37 (app q, 4H, CH2OC=OCBr) , 4,22 (t, 2H, CH2CH20C=0) , 3,20 (app q, 2H, NHCH2) , 1,92 [s, 12H, (CH3)2CBr ], 1,85 (t, 2H, CH2CH2CH2) , 1,43 (s, 9H, (CH3) 30), 1,35 (s, CH3CC=0) .
Ejemplo 17. Preparación de N- (ácido 3-Propiónico , éster de t-butilo) -2 , 2-Bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil] propionamida Una solución de 1,00 gramo de clorhidrato de éster de t-butilo de b-alanina en 50 mi de diclorometano se trató con 25 mi de bicarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se agitó durante 15 minutos. Las capas se separaron y los compuestos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio. A esta solución se agregaron 2,38 gramos de ácido 2 , 2 -bis [ (2 -bromoisobutiriloxi] metil) propiónico, luego 1,92 mi de diisopropiletilamina y 2,1 gramos de HBTU, y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de la reacción luego se diluyó con otros 50 mi de diclorometano, se lavó con 2 x 50 mi de agua y se secó sobre sulfato de sodio. La filtración y la concentración dieron un aceite, que se sometió a la cromatografía de columna rápida con 20 - 25% acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 730 mg de un sólido blanco. MR (CDC13) : d 6,70 (t, ??,??, J=5,4 Hz) , 4,33 (app q, 4H, CH20, J=16,3, 11,4 Hz) , 3,51 (q, 2H, NCH2, J=6,0 Hz) , 2,46 (t, 2H, CH2CO, J=6,0 Hz) , 1,93 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,45 (s, 9H, C(CH3)3), 1,33 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 18. Preparación de un maleimida 4-ol protegido
[0001] Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 30 mi de diclorometano, 1,6 gramo del diol del Ejemplo 7, 1,71 gramo de ácido isopropilideno-2 , 2 -bis (hidroximetil ) propiónico y 0,5 gramo de DPTS . Se hizo burbujear nitrógeno a través de la solución brevemente, se agregó lentamente 1,70 mi de N, ' -diisopropilcarbodiimida y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente toda la noche. la filtración y la evaporación dieron un residuo aceitoso, que se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice usando 10-40% de acetato de etilo en hexano. Una segunda purificación mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice usando 2% de metanol en diclorometano dio 2 gramos de un aceite incoloro. Este aceite se disolvió en 25 mi de metanol y se agitó durante 60 horas a temperatura ambiente con resina Dowex 50WX8-100 (forma de H+) . La reacción se filtró, se concentró, luego se pasó a través de un tapón de gel de sílice con 150 mi de 15% de metanol en dielorómetano . La evaporación dio 1,3 gramo de una espuma dura casi incolora. ¾ NMR (400 MHz , CDC13) : d = 1,13 (s, 6H, CH3) , 1,25 (s, 3H, CH3) , 2,96 (s, 2H, CHC=ON) , 3,57-3,65 (m, 8H, CH2OH) , 3,64 (t, J=2,8 Hz, 2H, CH2CH2OC=0) , 4,22 (app q, 4H, C (CH3) CH2OC=Oi) , 4,22 (t, J=2,8 Hz, CH2CH2OC=0) , 5,21 (t, <J=0,8 Hz, CHOCH) , 6,55 (t, J=0,8 Hz, CH=CH) .
Ejemplo 19. Preparación del iniciador de maleimida tetra (bromopropionato) Un matraz de base circular de 100 mi equipado con una barra de agitación se cargó con 20 mi de diclorometano, 0,55 gramo del tetraol del Ejemplo 13, y 1,69 mi de trietilamina . La mezcla agitada se enfrió a 0 grado y se agregó gota a gota una solución de 0,99 mi de bromuro de 2-bromoisobutirilo en 10 mi de dielorómetaño . La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente toda la noche, luego se lavó con 50 mi de bicarbonato de sodio semisaturado . La concentración de la mezcla de la reacción dio un residuo marrón aceitoso, que se purificó mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice con 40% de acetato de etilo en hexano. El residuo marrón se disolvió en metanol y se trató con carbón vegetal para eliminar el color, que dio 0,68 gramo del producto deseado como un aceite marrón claro, """H NMR (400 MHz, CDC13) : d = 1,26 (s, 3H, CH3CC=0) , 1,34 (s, 6H, CH3CC=0) , 1,90 (s, 24H, (CH3)2CBr), 2,95 (s, 2H, CH) , 3,78 (t, J=5 Hz, 2H, NCH2) , 4,25 (m, 6H, 0CH2C (4H) y OCH2CH2N (2H) ) , 4,35 (app q, 8H, OCH2) , 5,23 (t, J=l Hz, 2H, CHOCH) , 6,55 (t, J=l Hz, 2H, CH=CH) .
Ejemplo 20. Preparación del iniciador de ácido 2,2-Bis[(2-bromoisobutiriloxi)metil]propionico , áster de 2-hidroxietilo Una solución de 4,32 gramos de ácido 2,2-bis[(2-bromoisobutiriloxi] metil ) propionico y 12,41 gramos de etilenglicol en 50 mi de diclorometano, junto con 883 mg de DPTS se trató con 1,39 gramo de diisopropilcarbodiimida, y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche, la mezcla de la reacción se concentró, luego se repartió entre 150 mi de acetato de etilo y 70 mi de agua. La capa orgánica se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 20% - 40% de acetato de etilo en hexano . Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 2,7 gramos del producto deseado como un aceite incoloro. R (CD3OD) : d 4,38 (app q, 4H, CCH2, J=ll,2, 30,2 Hz) , 4,20 (t, 2H, CH2OH, J=5,0 Hz) , 3,75 (t, 2H, CH2CH2OH, ,7=5,0 Hz) , 1,90 (s, 12H, Br-CCH3) , 1,36 (s, 3H,CH3).
Ejemplo 21. Preparación de iniciador de ácido 2,2-Bis[(2-bromoisob tiriloxi)metil]propiónico, éster de 3-hidroxipropilo Una solución de 5,31 gramos de ácido 2,2-bis[(2-bromoisobutiriloxi ) metil] propiónico y 4,68 gramos de 1,3-propanodiol en 80 mi de diclorometano y 20 mi de acetonitrilo se trató con 1,0 gramo de DPTS, luego con 3,0 gramos de DCC, y la reacción se agitó a temperatura ambiente 2 horas. La reacción luego se filtró, se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 30% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron un aceite transparente, que no fue suficientemente puro. La nueva cromatografía sobre gel de sílice con 10 - 15% de acetona en hexano dio el producto deseado como un aceite transparente, incoloro. NMR (CDC13) : d 4,38 (app q, 4H, CCH20, J=ll,2 Hz) , 4,31 (t, 2H, CH2CH20, J=6,3 Hz) , 3,71 (q, 2H, CH2OH, J=5,9 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,9 (m, 2H, CH2CH2CH2) , 1,35 (s, 3H, CH3) .
E emplo 22. Iniciador del ácido 2 ,2-Bis [ (2-bromoisobutiriloxi)metil]propiónico , ll-hidroxi-3 ,6,9-trioxaundecanoato Una solución de 1,86 gramos de ácido 2,2-bis[(2-bromoisobutiriloxi ) metil] propiónico y 4,18 gramos de tetraetilenglicol en 50 mi de diclorometano, junto con 250 mg de DPTS, se trató con 1,15 gramos de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y el filtrado se diluyó con 50 mi de diclorometano y se lavó con 20 mi de agua. Los compuestos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y dio un residuo, que se sometió a la cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice primero con 50 - 70% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron, se filtraron y se concentraron y dieron 1,19 gramo del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 4,38 (app q, 4H, CCH20, J=31,8, 11,2 Hz) , 4,31 (t, 2H, CH2CH2OC=0, J=5,0 Hz) , 3,6 - 3,73 (m, 14H,CH20), 2,46 (t, 1H, OH, <J=6,3 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 23. Preparación del iniciador de ácido 2,2-Bis[(2-bromoisobutiriloxi) metil] propiónico ll-hidroxi-3 ,6,9-trioxaundecanoato , carbonato de NHS Una solución de 630 gramos del compuesto hidroxilo precedente y 1,28 gramo de carbonato de disuccinimidilo en 3 mi de acetonitrilo seco se trató con 610 mg de DMAP y la reacción se agitó a temperatura ambiente. La reacción aún era heterogénea, de manera que se agregaron 4 mi de THF seco y después de 2 horas la reacción se hizo amarilla y se hizo homogénea, pero contenía varios puntos sobre la TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) . La reacción se concentró y dio un residuo que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 50 - 60% de acetato de etilo en hexano. Se aislaron dos fracciones y la fracción con un rf más bajo se concentró y dio 260 mg del producto deseado como un aceite transparente. NMR (CDCI3) : d 4,47 (m, 2H,CH20(C=0)0) , 4,37 (app q, 4H, CCH20, J=ll,2, 31,6 Hz) , 4,30 (m, 2H, CH2CH20 (C=0) C) , 3,79 (m, 2H, CH2CH20(C=0)C) , 3,71 (t, 2H, CH2CH20 (C=0) O, J=5,0 Hz) , 3,67 (s, 4H,CH20), 3,65 (s, 4H, CH20) , 2,84 (s, 4H,CH2C=0), 1,92 (s, 12H, Br-C (CH3)2), l,35(s,.3H,CH3) .
Ejemplo 24. Preparación de iniciador del éster de solcetal del ácido 2 ,2-Bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil]propiónico Una solución de 918 mg de solcetal y 3,0 gramos de ácido 2,2-bis [ (2 -bromoisobutiriloxi) metil] propiónico, junto con 200 mg de DPTS se trató con 2,15 gramos de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 1,85 gramo del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. MR (CDC13) : d 4,38 (app q, 4H,CCH20), 4,32 (m, 1H, OCH) , 4,19 (m, 2H, CHCH2OC=0) , 4,07 (d de d, 1H, OCH2CH, J=6,7, 8,6 Hz) , 3,76 (d de d, 1H, OCH2CH, J=5,7, 8,6 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,43 (s, 3H, (CH3)2CO), 1,36 (s, 3H, CH3) , 1,35 (s, 3H, (CH3)2CO).
Ejemplo 25. Preparación de iniciador de éster de 2,3-dihidroxipropilo del ácido 2 ,2-Bis [ (2-bromoisobutiriloxi)metil]propiónico Una solución de 1,0 gramo del cetal previo en 50 mi de metanol se trató con 750 mg de Dowex 50Wx8-100 y la reacción se agitó toda la noche. La reacción luego se filtró, se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 20 - 40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 630 mg del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13+D20) : ? 4,40 (app q de d, 4H,CCH20, J=2 , 8 , 11,5, 30,2 Hz) , 4,24 (app q de d, 2H, CHCH20C=0, J=4 , 5 , 6,6, 11,5 Hz), 3,96 (m, 1H, CH) , 3,66 (app. q de d, 2H, HOCH2CH, J=3,8, 5,6, 11,5, 37,9 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,37 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 26. Preparación de iniciador de é3ter de 2- (2,3-dihidroxipropoxi) etilo del ácido 2,2-bis[ (2-bromoisobutiriloxi) metil]propiónico A una solución de 1,5 gramo de éster de 2 - (aliloxi) etilo del ácido 2- [ (2 -bromoisobutiriloxi) metil] -2 -hidroximetilpropiónico en 15 mi de agua y 15 mi de t-butanol se agregaron 2,86 gramos (3 eq) de ferricianuro de potasio, 1,20 gramo (3 eq) de carbonato de potasio, 7,5 mg de osmiato de potasio deshidratado, 11 mg de quinuclidina, y 276 mg (1 eq) de metanosulfonamida, y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción pareció terminar mediante TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) , de manera que la reacción se vertió en 100 mi de agua, luego se extrajo con 100 mi de dielorómetano . Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron 30 - 40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron, se trataron con carbón decolorante, se filtraron y se concentraron y dieron 850 mg del producto deseado como un aceite casi incoloro. NMR (CDC13) : d 4,39 (app q de d, 4H, CCH20, J=4,l, 11,1, 3,0, 37,6 Hz) , 4,31(t, 2H, OCH2CH20C=O, L7=4 , 7 Hz) , 3,87 (m, 1H, CH-OH) , 3,54 - 3,77 (m, 2H,CH2-OH), 3,72 (m, 2H, 0CH2CH) , 3,58 (app t, 2H, OCH2CH2OC=0) , 2,68 (d, 1H, CH-OH, J=5,l Hz) , 2,15 (app t, 1H, CH2-OH, J=6,l Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,36 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 27_. Iniciador de 12- (aliloxi) -3, 6, 9, 12- etraoxadodecanoato del ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil] propionico A una solución de 1,60 g de ácido 2, 2 -bis [(2 -bromoisobutiriloxi) metil] ropionico y 870 mg de 12- (aliloxi) -3 , 6 , 9 , 12 -tetraoxadodecano en 30 mi de acetonitrilo seco, junto con 218 mg de DPTS y 362 mg de D AP, se agregaron 917 mg de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla luego se filtró y se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice primero con 50 - 60% de acetato de etilo en hexanos y las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 1,35 gramo del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 5,87-5,97 (m, 1H, CH2CH=CH2) , 5,28 (dq, 1H, H-CH=CH) , 5,18 (dq, 1H, H-CH=CH) , 4,37 (app q, CH2OC=0) , 4,30 (dd, 2H, CH2CH2OC=0) , 4,02 (d, 2H, CH2=CHCH2) , 3,60-3, 72 (m, 14H, CH2CH2OCH2) , 1,92 (s, 12H, Br-C (CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 28. Preparación del iniciador de éster de 12- (2,3-dihidroxipropoxi) -3,6,9, 12-tetraoxadecilo del ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi)metil]propiónico A una solución de 1,29 gramo de éster de 12 - (aliloxi ) -3 , 6 , 9 , 12 -tetraoxadodecilo del ácido 2, 2-bis [(2-bromoisobutiriloxi) metil] propiónico en 15 mi de agua y 15 mi de t-butanol se agregaron 1,98 gramos (3 eq) de ferricianuro de potasio, 829 mg (3 eq) de carbonato de potasio, 8 mg de osmiato de potasio deshidratado, 11 mg de quinuclidina, y 190 mg (1 eq) de metanosulfonamida, y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche, la reacción pareció ser completa mediante TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) , de manera tal que la reacción se vertió en 50 mi de agua, luego se extrajo con 100 mi de diclorometano . Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron un residuo seco, que se sometió a la cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 5% de metanol en diclorometano. Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se trataron dos veces con dos espátulas completas pequeñas de carbón activado, filtrando entre los tratamientos. La filtración y la concentración dieron un aceite gris claro que contiene una pequeña cantidad de sólido, de manera que se recogió en acetato de etilo y se filtró, luego se concentró y dio 1,06 gramo del producto deseado como un aceite gris claro, que contiene una cantidad diminuta de sólido. NMR (CDC13) : d 4,38 (app q, 4H, CCH2OC=0) , 4,30 (t, 2H, CH2CH2OC=0, <J=5,0 Hz) , 3,85 (p, 1H, CHOH, J=5 Hz) , 3,71 (t, 2H, OCH2CHOH, J= 4,8 Hz) , 3,72 - 3,55 (m, 16H, OCH2CH20 y CH20H) , 3,12 (s, 1H, CHOH), 2,37 (s, 1H, CH20H) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 29. Preparación de éster de 2- (aliloxi) etilo de ácido 2 ,2 , 5-trimetil-l , 3-dioxano-5-carboxilico Una solución de 1,4 gramos de éter de monoalilo de etilenglicol y 2,35 gramos de ácido 2 , 2 , 5-trimetil-l , 3 -dioxano-5-carboxílico en 25 mi de THF anhidro se trató con 500 mg de p-toluenosulfonato de 4-dimetilaminopiridinio (DPTS) y 1,44 gramo de dimetilaminopiridina (DMAP) , luego se agregaron 3,38 gramos de diciclohexilcarbodiimida, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla de la reacción se filtró y se concentró y dio un residuo semisólido, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 20% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contienen el producto se combinaron, se concentraron y se filtraron y dieron 2,83 gramos (81%) de un aceite transparente que contiene una cantidad pequeña de sólido. 1H NMR (400 MHz, CDC13) : d = 1,23 (s, 3H, C=0CCH3) , 1,39 (s, 3H, CH3) , 1,43 (s, 3H, CH3) , 3,66 (m, 4H) , 4,02 (dd, 2H, CH2=CHCH2) , 4,20 (d, 2H) , 4,31 (t, 2H, C=OOCH2) , 5,18 (dd, 1H, =CH) , 5,28 (dd, 1H, =CH) , 5,89 (m, =CHCH2) .
Ejemplo 30. Ester de 2- (aliloxi) etilo del ácido 2,2-bis (hidroximetil) propiónico Una solución de 2,72 gramos de éster de 2- (aliloxi) etilo del ácido 2 , 2 , 5-trimetil - 1 , 3 -dioxano-5-carbox£lico en 50 mi de metanol se trató con 1,0 gramo de resina Dowex 50W-X8 (forma de H+) y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche.
La reacción se filtró y el filtrado se concentró y dio un aceite, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 5% de metanol en diclorometano . Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 2,23 gramos del producto como un aceite amarillo claro, transparente. XH NMR (400 MHz, CDC13) : d = 5,84-5,94 (ddt, 1H, H2OCHCH2), 5,28 (dq, 1H, HHC=CHCH2) , 5,22 (dq, 1H, HHC=CHCH2) , 4,36 (app t, 2H, OCH2CH2) , 4,02 (dt, 2H, H2C=CHCH2) , 3,86 (dd, 2H, CH2OH) , 3,74 (dd, 2H, CH2OH) , 3,68 (app t, 2H, OCH2CH2) , 2,90 (br d, 2H, OH) , 1,11 (s, CH3) .
Ejemplo 31. Preparación de iniciador del éster de 2- (aliloxi) etilo del ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil]propionico Una solución de 1,2 gramo de aliloxietanol , 5,0 gramos de ácido 2 , 2-bis (2-bromoisobutiriloximetil) propionico y 690 mg de DPTS en 100 mi de diclorometano se agitó a temperatura ambiente cuando se agregaron 2,86 gramos de DCC como una solución en una cantidad pequeña de diclorometano. La reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche, luego se filtró y se concentró y dio un aceite. Esto se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con 10% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron un aceite transparente, que no fue suficientemente puro. Este aceite se sometió nuevamente a cromatografía rápida sobre gel de sílice con 3 - 4% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 2,78 gramos del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 5,89 (m, 1H, CH2CH=CH2) , 5,28 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=17,2, 1,7 Hz) , 5,20 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=10,5, 1,5 Hz) , 4,38 (app q, 4H, CH2OC=0) , 4,31 (t, 2H, OCH2, J=4,7 Hz) , 4,01 (d de t, 2H, OCH2, J=5,6, 1,5 Hz) , 3,65 (t, 2H, OCH2, J=4,7 Hz) , 1,91 (s, 12H, Br-C (CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 32. Iniciador del éster de 2- (aliloxi) etilo del ácido 2 , 2-bis- [2 , 2-bis (2-bromoisobutiriloximetil)propioniloximetil] propiónico Una solución de 2,42 gramos de éster de 2 - (aliloxi ) etilo del ácido 2- [ (2 -bromoisobutiriloxi) metil] -2 -hidroximetilpropiónico y 1,73 gramos de ácido 2 , 2- [bis- (2 -bromoisobutiriloxi) metil] propiónico en 25 mi de acetonitrilo, junto con 200 mg de DPTS y 580 mg de DMAP, se trató con 1,03 gramo de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Mediante TLC (gel de sílice, 30% de acetato de etilo en hexano) pareció que la reacción era incompleta, de manera tal que otros 812 mg de ácido 2 , 2- [bis- (2 -bromoisobutiriloxi) metil] propiónico y se agregaron 400 mg de DCC, y la reacción se agitó nuevamente a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de la invención se filtró y se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice primero con 20%, y luego con 30% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 1,27 gramo del compuesto deseado como un aceite incoloro transparente. N R (CDC13) : d 5,88 (m, 1H, CH2CH=CH2) , 5,28 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=17,4, 1,6 Hz) , 5,20 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=10,3, 1,3 Hz) , 4,24 - 4,44 (m, 14H, CH20C=0) , 4,01 (d, 2H, CH2=CHCH2, J=5,6), 3,65 (t, 2H, CH2CH2OCH2, J=4,7 Hz) , 1,91 (s, 24H, Br-C (CH3)2), 1,33 (s, 6H, CH3) , 1,30 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 33. Preparación del iniciador de éster de 2- [(2,3-dihidroxi) propoxi] etilo del ácido 2 ,2-bis- [2 , 2-Bis [ (2-bromoiaobutiriloxi) propioniloximetil] propiónico A una solución de 1,21 gramo de éster de 2 - (aliloxi) etilo del ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil] ropionico en 15 mi de agua y 15 mi de t-butanol se agregó 1,14 gramo (3 eq) de ferricianuro de potasio, 480 mg (3 eq) de carbonato de potasio, 7,5 mg de osmiato de potasio deshidratado, 11 mg de quinuclidina, y 110 mg (1 eq) de metanosulfonamida, y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción pareció ser completa mediante TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) , de manera tal que la reacción se vertió en 50 mi de agua, luego se extrajo con 100 mi de diclorometano, luego otros 50 mi de diclorometano. Los compuestos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron un residuo aceitoso, que se sometió cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 50% de acetato de etilo en hexano y las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 620 mg del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 4,28-4,41 (m, 14H, CCH2OC=0) , 3,86 (m, 1H, CH2CHOHCH2) , 3,69-3,75 (ra, 3H) , 3,56-3,65 (m, 3H) , 2,78 (dd, 1H, OH), 2,23 (app t, 1H, OH), 1,92 (s, 24H, CH3CBr) , 1,34 (s, 6H, CH3) , 1,31 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 34. Preparación del iniciador de éster de (2-azidoetoxi) etilo del ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi) metil]propionico A una solución de 3,30 gramos de ácido 2, 2 -bis [(2-bromoisobutiriloxi) metil] propionico y 1,0 gramo de 2-(2-azidoetoxi) etanol en 20 mL de acetonitrilo seco, junto con 225 mg de DPTS, se agregaron 1,89 gramos de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10 - 15% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 2,06 gramos del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 4,39 (app q, 4H, CCH20, J=ll,l, 33,8 Hz) , 4,31 (t, 2H, OCH2CH2OC=0, J=5 Hz) , 3,72 (t, 2H, CH2N3, J=5 Hz) , 3,67 (t, 2H, CH2CH2N3, J=5 Hz) , 3,38 (t, 2H, OCH2CH2OC=0, J=5 Hz) , 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2) , 1,36 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 35. Preparación de 3 , 5-bis- (2-bromoisobutiriloxi) benzaldehido Una solución de 1,0 gramo de 3 , 5-dihidroxibenzaldehído y 4,0 mi (4 eq) de trietilamina en 20 mi de diclorometano se enfrió con un baño de hielo y agua y se agregó gota a gota una solución de 3,35 gramos de bromuro de 2 -bromoisobutirilo en 5 mi de diclorometano durante algunos minutos cuando se formó una gran cantidad de sólido. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h, en cuyo momento la reacción pareció ser completa mediante TLC (gel de sílice, 30% de acetato de etilo en hexano) . La reacción se lavó con 25 mi de agua, luego se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron, se trataron con una pequeña cantidad de carbón decolorante, se filtraron y se concentraron y dieron 2,2 gramos de un aceite, que se cristalizó en la heladera y dio un sólido blanco. ¾ NMR (400 MHz, CDC13) : d = 2,08 (s, 12H, CH3) , 7,29 (t, 1H, J=2,4 Hz, ArH) , 7,61 (d, J=2 , 4 Hz, 2H, ArH) , 10,0 (S, 1H, CHO) Ejemplo 36. Preparación de 7- (13-aliloxi-2 , 5 , 8 , 11-tetraoxatridecil) -2 , 4 , 9-trifenil-1 ,3,5-triazatriciclo [3.3.1.13 , 7] decano Una solución de 870 mg de metanosulfonato de ll-aliloxi-3 , 6, 9-trioxaundecan-l-ol y 1,01 gramo de 2 , 4, 9-trifenil-1 , 3 , 5-triazatriciclo [3.3.1.13 , 7] decano-7-metanol ( O2000/037658) en 10 mi de THF seco se trató con 410 mg de hidruro de sodio (60% en aceite) y la reacción se calentó a 80 °C durante 20 horas. La reacción luego se enfrió cuidadosamente agregando algunos mililitros de agua, se vertió en 20 mi de NaCl saturado, luego se extrajo con 3 x 10 mi de diclorometano . Los compuestos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron un residuo, que se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con 25-35% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 920 mg del producto deseado como un aceite incoloro. N R (DMSO-d6) : d 7,70-7,82 (m, 6H, PhH) , 7,26-7,51 (m, 9H, PhH) , 3,69-3,75 (m, 3H) , 3,56-3,65 (m, 3H) , 2,78 (dd, 1H, OH), 2,23 (app t, 1H, OH), 1,92 (s, 24H, CH3CBr) , 1,34 (s, 6H, CH3) , 1,31 (s, 3H, CH3) .
Ejemplo 37. Preparación de triclorhidrato de l-Amino-15-aliloxi-2 , 2-bis (aminometil) -4,7,10, 13-tetraoxapentadecano El compuesto triazaadamantano de la reacción previa se recogió en 20 mi de etanol y 4 mi de éter, luego se trató con 2 mi de ácido clorhídrico concentrado. La reacción se mezcló y luego se dejó en reposo a 4°C durante 1,5 horas. Luego se agregaron 30 mi de éter y la mezcla se enfrió nuevamente durante otros 30 minutos. Luego se agregaron 100 mi de éter y el producto sólido se recuperó mediante filtración, se lavó con éter y se secó bajo vacío y dio 564 mg del producto como un sólido blanco. NMR (DMSO-d6) : d 7,75 (m, 6H, CCH) , 7,44 (m, 6H, CCHCH) , 7,30 (m, 3H, CCHCHCH) , 5,86 (m, 1H, CH2=CH) , 5,70 (s, 1H, NCH (ecuatorial) ) , 5,250 (s, 2H, NCH(axial)), 5,23 (d de q, 1H, CH2=CH) , 5,11 (d de q, 1H, CH2=CH) , 3,93 (d de t, 2H, CH-CH2-0) , 3,55-3,25 (m, 16H, OCH2CH20) , 3,26 (m, 2H, NCH2) , 3,19 (d, 2H, NCH2) , 2,88 (s, 2H, NCH2) , 2,719 (s, 2H, CCH20) .
Ejemplo 38. Preparación del iniciador de N- (2-Bromo-2- metilpropionil) -l-Amino-15-aliloxi-2 ,2-bis[N- (2-bromo-2- metilpropionil) aminometil] -4,7,10, 13-tetraoxapentadecano El clorhidrato de triamina del procedimiento previo se recogió en 25 mi de diclorometano, la solución se enfrió con un baño de agua y hielo y se trató con 1,35 mi de trietilamina, luego se agregó 0,46 mi de bromuro de 2-bromoisobutirilo. La reacción luego se agitó cuando se la dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de la reacción luego se lavó con 3 x 10 mi de 1N HC1, 2 x 10 mL de NaHC03 saturado, 10 mi de NaCl saturado, y se secó sobre sulfato de magnesio. La solución se filtró y se concentró y dio un residuo, que se inundó a través de un tapón de gel de sílice con acetato de etilo. La concentración dio 989 mg del producto deseado como un aceite viscoso. MR (D SO-d6) : d 8,004 (t, 3H, NH) , 5,87 (m, 1H, CH) , 5,23 (d de q, 1H, CH2=CH) , 5,12 (d de q, 1H, CH2=CH) , 3,93 (d de t, 2H, CH2-CH) , 3,6 - 3,45 (m, 16H, OCH2CH20) , 3,289 (s, 2H, CCH20) , 3,12 (d, 6H, CCH2N) , 1, 907 (s, 18H, CH3) .
Ejemplo 39. Preparación del iniciador de N- (2-Bromo-2-metilpropionil) -l-Amino-15- (2 , 3-dihidroxipropil) -2 , 2-bis [N- (2-bromo-2-metilpropionil) aminometil] -4,7,10, 13-tetraoxapentadecano A una mezcla de 350 mg del alqueno del procedimiento previo en 5 mi de t-butanol y 5 mi de agua se agregaron 433 mg (3 eq) de ferricianuro de potasio, 182 mg (3 eq) de carbonato de potasio, 42 mg (1 eq) de metanosulfonamida, 7,5 mg de quinuclidina, y 4 mg de dihidrato de osmiato de potasio, y la solución se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción pareció ser completa mediante TLC (gel de sílice, 5% metanol en diclorometano) , de manera que se agregaron 50 mi de agua y la solución se extrajo con 50 mi de diclorometano, luego con otros 2 x 25 mi de diclorometano. Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se concentraron y el residuo gris oscuro se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 2-5% de metanol en diclorometano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 310 mg del compuesto dihidroxi deseado como un aceite gris claro. MR (CDC13) : d 7,91 (t, 3H, NH) , 3,88 (m, 1H, HOCH2CHOHCH2) , 3,55-3,72 (m complejo, 21H) , 3,35 (s, 1?, OCH2C (CH2) 3) , 3,19 (d, 6H, J=6,4 Hz, CH2NH) , 1, 99 (s, 18H, CH3) .
Ejemplo 40. Preparación de 7- (7-Azido-2 , 5-dioxahe til) -2 , 4 , 9-trifenil-1 , 3 , 5-triazatriciclo [3.3.1.13 , 7] decano A una solución de 1,1 gramo de 2 , 4 , 9-trifenil-1 , 3 , 5-triazatriciclo [3.3.1.13 , 7] decano-7-metanol (WO2000/037658) y 585 mg de metanosulfonato de 2- (2-azidoetoxi) etilo en 15 mi de THF anhidro se agregaron 224 mg de NaH (60% en aceite) , y la solución se calentó a 70 °C toda la noche. Se agregaron otros 245 mg de NaH y 600 mg de metanosulfonato de 2- (2-azidoetoxi) etilo y se continuó calentando nuevamente toda la noche. La mezcla de la reacción se enfrió, se diluyó con 25 mi de agua y se extrajo con 50 mi de diclorometano . La capa orgánica se lavó con NaCl saturado, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y dio un residuo. El material se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10 - 25% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 1,15 gramos del producto deseado como un aceite, que no era completamente puro, pero se usó en la reacción siguiente sin otra purificación. NMR(DMSO) muy complejo .
Ejemplo 41. Preparación de triclorhidrato de l-Amino-9-azido-2 ,2-bis (aminometil) -4 , 7-dioxanonano Una solución de 1,15 gramos del compuesto triazaadamantano del procedimiento previo en 20 mi de etanol y 4 mi de éter se enfrió con un baño de hielo y agua y se agregaron 3 mi de HCI concentrado. Inmediatamente después comenzó a formarse un producto sólido y la reacción se dejó en reposo en el frío durante 10 minutos. Se agregaron otros 30 mi de éter y la reacción se refrigeró toda la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con otros 100 mi de éter y el producto sólido se aisló mediante filtración, se lavó con éter adicional y se secó bajo vacío y dio 800 mg del producto como un sólido blanco.
Ejemplo 42. Preparación del iniciador de N- (2-Brómo-2-metilpropionil) -l-Amino-9-azido-2 , 2-bis [N- (2-bromo-2-metilpropionil) aminometil] -4 , 7-dioxanonano Una solución de 800 mg de la sal de triclorhidrato del procedimiento previo en 25 mi de diclorometano se enfrió con un baño de hielo y agua, luego se trató con 3,5 mi de trietilamina . A esta mezcla se agregó gota a gota 1,07 mi de bromuro de 2-bromoisobutirilo, y la reacción se agitó mientras se calentaba a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla luego se lavó con 3 x 10 mi de 1N HCl, 2 x 10 mi de NaHC03 saturado, y con 10 mi de NaCl saturado, luego se filtró sobre sulfato de magnesio. La filtración y la concentración dieron un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 20-30% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 630 mg del producto deseado como un aceite. NMR(CDC13) : d 7,76 (t, 3H, NH, J=6,3 Hz) , 3,68 (m, 4H, OCH2CH20) , 3,63 (m, 2H, N3CH2CH20) , 3,40 (t, 2H, N3CH2, J=5,0 Hz) , 3,37 (s, 2H, CCH20) , 3,19 (d, 6H, CCH2N, J=6,8 Hz) , 1, 99 (s, 18H, CH3) .
Ejemplo 43. Iniciador de 6 ramificaciones de 13-Aliloxi-2 , 5 , 8 , 11-tetraoxatridecilo A una solución de 0,9 gramo de triclorhidrato de l-amino-15-aliloxi-2, 2-bis (aminometil) -4, 7, 10, 13 -tetraoxapentadecano y 3,89 gramos de ácido 2 , 2-bis [ (2-bromoisobutiriloxi] metil) propiónico en 25 mi de diclorometano, junto con 530 mg de DPTS y 890 mg de DMAP, se agregaron 2,7 gramos de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se filtró y se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre 50-70% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 1,9 gramos del producto deseado como un aceite viscoso. NMR (CDC13) : d 7,78 (t, 3H, NH, J=6,5 Hz) , 5,91 (m, 1H, CH) , 5,27 (d de q, 1H, CH2=CH, J=17,4, 1,6 Hz), 5,18 (d de q, 1H, CH2=CH, J=10,4, 1,4 Hz) , 4,38 (app q, 12H, CH2OC=0) , 4,01 (d de t, 2H, CH-CH2, J=5,7, 1,4 Hz) , 3,61 (dos m, 16H, OCH2CH20) , 3,30 (s, 2H, CCH20) , 3,14 6H, CH2N, J=6,l Hz) , 1,92 (d, 36H, BrC(CH3)2, J=l , 2 Hz) 9H, CH3) .
Ejemplo 44. Iniciador de 6 ramificaciones de 13- (2,3-Dihidroxipropil) -2 , 5 , 8 , 11-te raoxatridecilo A una mezcla de 1,0 gramo del alqueno del procedimiento previo en 10 mi de agua y 10 mi de t-butanol se agregaron 638 mg (3 eq) de ferricianuro de potasio, 268 mg (3 eq) de carbonato de potasio, 10 mg de osmiato de potasio deshidratado, 12 mg de quinuclidina, y 61 mg (1 eq) de metanosulfonamida, y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se vertió en 50 mi de agua, luego se extrajo con 50 mi de diclorometano, luego otros 25 mi de dielorómetano . Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron un residuo aceitoso, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 2-4% de metanol en diclorometano, y las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron y dieron 417 mg del producto deseado como un aceite viscoso. NMR (CDC13) : d 7,78 (t, 3H, NH, J=6,0 Hz) , 4,39 (app q, 12H, CH20O0) , 3,86 (s ancho, 1H, OH-CH) , 3,62 (m, 20H, OCH2CH20 y OHCHCH2O y 0H-CH2) , 3,27 (s, 2H, CCH20) , 3,13 (s, 6H, NCH2) , 2,40 (s, 2H, OH), 1,92 (s, 36H, BrC(CH3)2), 1,38 (s, 9H, CH3) .
Ejemplo 45. Preparación de amida del ácido hexaglutámico con ácido 9-Azido-4 , 7-dioxanononanoico Preparación de metano sulfonato de 9-hidroxi-4 , 7-dioxanonanoato de t-butilo Una solución de 3,0 gramos de 9-hidroxi-4 , 7-dioxanonanoato de t-butilo (Bioconjugate Chem, 2004, 15, 1349) en 50 mi de diclorometano se enfrió con un baño de hielo y agua, se trató con 2,5 mi de trietilamina y luego se agregaron 1,60 gramos de cloruro de metanosulfonilo . La reacción se agitó en frío durante 10 minutos, luego se la dejo agitar mientras se calentaba a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se diluyó con 50 mi de diclorometano, se lavó con 50 mi de agua y se secó sobre sulfato de sodio. La filtración y la concentración dieron un aceite, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 50% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 3,99 gramos del producto como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDCI3) : d 4,38 (m, 2H) , 3,76 (m, 2H) , 3,70 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2) , 3,61-3,66 (m, 4H) , 3,08 (s, 3H, OS02CH3) , 2,49 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2) , 1,45 (s, 9H, CH3) .
Preparación de 9-azido-4 , 7-dioxanonanoato de t-butilo Una solución de 2,0 gramos del mesilato del procedimiento previo en 25 mi de DMF, junto con 1,25 gramos (3 eq) de azida de sodio, se calentó a 85°C toda la noche. La mezcla de la reacción se vertió en 100 mi de agua, luego se extrajo con 4 x 50 mi de éter. Las capas orgánicas combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se secaron, se filtraron y se concentraron y dieron un aceite transparente. Este aceite se inundó a través de un tapón de gel de sílice con 200 mi de 50% de acetato de etilo en hexano y el filtrado se concentró y dio 1,63 gramos del producto como un aceite incoloro, transparente. NMR (CDC13) : d 3,73 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2) , 3,63-3,69 (m, 6H) , 3,39 (app t, 2H, CH2N3) , 2,51 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2) , 1,45 (s, 9H, CH3) .
Preparación de ácido 9-Azido-4 , 7-dioxanononanoico Una solución de 1,63 gramos del éster de azido del procedimiento previo en 5 mi de 88% de ácido fórmico se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con 50 mi de agua, luego se extrajo con 4 x 25 mi de éter. Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron 1,14 gramo del producto como un aceite transparente. MR (CDC13) : d 3,79 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2) , 3,68 (app t, 2H) , 3,67 (s, 4H) , 3,39 (app t, 2H, CH2N3) , 2,66 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2) .
Preparación de éster de N-hidroxisuccinimida del ácido 9-azido-4 , 7-dioxanononanoico Una solución de 1,14 gramos del ácido del procedimiento previo y 650 mg de N-hidroxisuccinimida en 15 mi de acetonitrilo seco, junto con 150 mg de DMAP, se trató con 1,4 gramos de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción se filtró y se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10-30% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 960 mg del producto como un aceite transparente que contiene una pequeña cantidad de sólido. NMR (CDC13) : d 3,87 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=0CH2) , 3,68 (app t, 2H) , 3,67 (s, 4H) , 3,39 (app t, 2H, CH2N3) , 2,91 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2) , 2,84 (br s, 4H, CH2CH2) .
Preparación de amida de ácido hexaglutámico con ácido 9-azido-4 , 7-dioxanononanoico Se preparó una mezcla de 17 mg de ácido hexaglutámico en 1 mi de 25 mM regulador de pH de HEPES a pH 7 , agregando 350 de DMF para mejorar la solubilidad. Luego se agregaron 7 mg del éster de NHS precedente en solución de DMF y verificó el pH, que era 5. Se agregó un total de 240 µL de 0,5 M NaOH para llevar el pH nuevamente a 7,5, y se agregaron otros 13 mg del éster de NHS. La reacción estuvo seguida por la HPLC de fase inversa usando un sistema de HPLC de aters con un sistema de suministro de Solvente 2695 Alliance equipado con un Detector de Longitudes de Onda Doble Waters 2685. Las muestras se sometieron a cromatografía usando una columna de HPLC de C18 Jupitor (8x260mm) de Phenomenex a l,2ml/min con un regulador de pH A de bomba como 0,08% de TFA en agua y un regulador de pH B de bomba como 0,1% de TFA en acetonitrilo durante 25 minutos. Después de la inyección de la muestra, la columna se lavó durante 1 minuto con 100% A isocrático, luego se aumentó al 20% B durante 10 minutos con un gradiente lineal y luego mediante un aumento lineal al 50% B durante 6 minutos. La columna se raspó con un 95% B durante 2 minutos antes de la regeneración usando un 100% A isocrático durante 2 minutos. El cromatograma se monitoreó a OD220nm. El péptido nativo y el péptido modificado por azida eluyó como picos agudos a los 5,6 minutos y a los 9,6 minutos, respectivamente. Después de la reacción durante toda la noche, el pico de péptido desapareció y el pico del producto fue a su máximo. La pureza del producto se confirmó mediante cromatografía de intercambio de aniones usando un sistema de HPLC Waters con un sistema de suministro de Solvente 2695 Alliance equipado con un Detector de Longitudes de Onda Doble Waters 2685. Las muestras se sometieron a cromatografía usando una columna (8x75mm) de HPLC de DEAE-825 de intercambio de aniones débil de Shodex a 1 mi/minuto con un tampón A de bomba como 20 mM Tris pH 7,5 y un tampón B de bomba cuando el tampón A contiene 0 , 5M NaCl durante 16 minutos. Después de la inyección de la muestra, la columna en primer lugar se lavó durante 5 minutos con 30% B isocrático, luego se aumentó al 100% B durante 10 minutos con un gradiente lineal y luego se mantuvo a 100% B durante 2 minutos. La columna luego se regeneró usando 30% B isocrático durante 3 minutos antes de la inyección siguiente. El cromatograma se monitoreó a OD220nm. El péptido nativo eluyó como un pico agudo único a los 10,1 minutos mientras que el péptido modificado eluyó como un pico agudo único a los 10,6 minutos. La reacción se concentró usando una bomba de vacío sobre el evaporador giratorio para eliminar todo el solvente y el residuo se trituró con 100 /¿L de 2,5 M HCl, que derivó en un sólido blanco. Esta mezcla se revolvió y se centrifugó durante 5 minutos a 5000 rpm, y el sobrenadante se decantó. El sólido se lavó nuevamente en una forma similar con 2 x 100 µ?? de 2,5 M'HCl, luego se secó bajo vacío y dio el producto deseado como un sólido blanco .
Ejemplo 46. Preparación del copolimero de camptotecina PC Síntesis de 2 - (2 -Azidoetoxi) etanol Una solución de 10,0 gramos de 2 - (2 -cloroetoxi ) etanol en 50 mi de agua desionizada se trató con 10,4 gramos (2 eq) de azida de sodio, y la mezcla de la reacción se calentó a 80°C durante 48 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente, se saturó con cloruro de sodio y se extrajo con 3 x 50 mi de éter. Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron y dieron 7,25 gramos (69%) del producto deseado como un aceite incoloro transparente. XH R (400 MHz, CDC13) : d = 2,05 (t, J = 6,4 Hz, 1H, OH), 3,42 (t, J = 5Hz, 2H) , 3,63 (dd, J = 4,4, 5,6 Hz) , 3,71 (dd, J = 4,4, 4,8 Hz, 2H) , 3,77 (dt, J = 4,4, 6Hz, 2H) .
Síntesis del ácido 5- [2- (2 -azidoetoxi ) etoxi] -4 -oxopentanoico Una solución de 3,0 gramos de 2- (2-azidoetoxi) etanol en 50 mi de diclorometano se trató con 280 mg de 4 - (dimetilamino) piridina y 64 mi (2 eq) de trietilamina, y la solución se enfrió con un baño de hielo. Luego se agregó gota a gota una solución de 2,61 gramos (1,0 eq) de anhídrido glutárico en 5 mi de diclorometano durante unos minutos. La reacción se agitó, luego se calentó a reflujo suave toda la noche. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se lavó con 2 x 25 mi de 1N HCl y 25 mi de H20, luego se secó sobre sulfato de sodio. La filtración y la concentración dieron 4,66 gramos (83%) del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. XH NMR (400 MHz, CDC13) : d = 1,97 (quinteto, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,45 (t, J = 7,2 Hz, 4H) , 3,39 (t, J = 4,8 Hz, 2H) , 3,66 - 3,72 (m, 4H) , 4,26 (app t, J = 4,6 Hz, 2H) .
Síntesis del conjugado de camptotecina azida Una solución de 70 mg de ácido 5- [2- (2 -azidoetoxi) etoxi] -4-oxopentanoico en 10 mi de diclorometano se enfrió en un baño de agua y hielo y se trató con 55 mg de EDC, luego con 35 mg de DMAP y 50 mg de camptotecina. La reacción luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó toda la noche cuando la solución se hizo lentamente homogénea. La mezcla de la reacción luego se concentró y se aplicó a una columna de gel de sílice, que se eluyó en primer lugar con 1 - 2% de metanol en diclorometano. Las fracciones apropiadas luego se concentraron y dieron el conjugado deseado como un sólido amarillo. 1H MR (400 Hz, CDC13) : d = 0,98 (t, J = 7,6H), 1,98 (quinteto, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,13-2,32 (m complejo, 2H) , 2,45(t, J =7,6 Hz, 2H) , 2,51-2,65 (m complejo, 2H) , 3,35 (t, J = 5 Hz, 2H) , 3,63-3,68 (m, 4H) , 4,21-4,25 (m, 2H) , 5,30 (br s, 2H) , 5,41 (d, J = 17,2 Hz, 1H) , 5,68 (d, J = 17,2 Hz, 1 H) , 7,21 (s, 1H) , 7,68 (t, J = 6,8 Hz, 1H) , 7,84 (app t, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J = 8 Hz, 1H) , 8,23 (d, J = 8 Hz, 1H) , 8,40 (s, 1H) .
Síntesis del copolímero de metacriloiloxietil fosforilcolina y metacrilato de propargilo protegido por trimetilsililo (TMS) a-Bromoisobutirato de etilo (18,84 mg, 0,096mmol), bipiridina (30,1 mg, 0,192 mmol) y 450 mg de D SO se cargaron inicialmente en un tubo de Schlenk. La mezcla se desgasificó cuidadosamente y el tubo se llenó con nitrógeno. Luego se agregó CuBr al tubo en condiciones inertes (13,8 mg, 0,096 mmol). La mezcla de la reacción se selló y se enfrió a -78°C. Una mezcla de metacrilato de propargilo protegido por trimetilsililo (TMS-PgMA) (66 mg, 0,336 mmol) y metacriloiloxietil fosforilcolina (0,9, 3,04 mmol) se disolvieron en 4 mL de etanol de prueba 200 desgasificado. La solución se agregó gota a gota en condiciones inertes al recipiente de la reacción enfriado. La mezcla se desgasificó totalmente bajo vacío durante 15 minutos a 0°C y se llenó con gas inerte. Se dejó avanzar la polimerización durante 15 horas.
Después de 15 horas, Se halló que era muy homogénea sin ninguna reticulación evidente. La reacción se enfrió exponiéndola al aire y la mezcla cambió de marrón oscuro a verde. El análisis de GPC de una muestra cruda antes de la purificación realizada sobre una columna de Shodex (OH806) calibrada con estándares de óxido de polietileno indicó la formación de un polímero como un pico único de distribución estrecha (se halló que el peso molecular a Mp pico fue de 13200 g/mol) . El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 22900 g/mol, un Mp de 25000 g/mol y un PDi de 1,14. La reacción cruda se pasó a través de gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El copolímero se secó dentro de un horno a 50 °C toda la noche y dio 0,9 g del copolímero. El análisis mediante espectrometría de 1H MR mostró ningún grupo TMS . Como una medida de precaución, 0 , 5g del copolímero se trató nuevamente con 100 mg de trihidrato de fluoruro de tetrabutil amonio y se purificó mediante precipitación.
Injerto de conjugado de camptotecina azida sobre el copolímero con funcionalidad de alquino Se cargó CuBr (13 mg) dentro de un tubo de Schlenk desgasificado y luego se agregaron 15 mg de N, N, N' , N" , N" -pentametil dietilenetriamina . Se disolvieron 240 mg del copolímero en 2 g de etanol desgasificado de prueba 200 y 50 mg de conjugado de camptotecina azida (CPT-L-N3) se disolvieron en 1,5 g de DMF. La solución de CPT-L-N3 se agregó gota a gota en condiciones inertes al tubo de. Schlenk mientras se agitaba, luego se agregó la solución del copolímero con funcionalidad de alquino. La mezcla se desgasificó con tres ciclos de nitrógeno de vacío y se dejó que reaccionara a temperatura ambiente durante 3 horas.
CPT-L-N3 Después de 3 horas, una alícuota se transportó desde la mezcla cruda y se analizó mediante GPC a 370 nm que mostró la desaparición del pico de camptotecina libre y un pico de peso molecular alto que correspondió al conjugado de copolímero de camptotecina .
La mezcla de la reacción se expuso al aire, se concentró a la mitad de su volumen, se pasó a través del gel de sílice . para eliminar el catalizador de cobre y luego se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El polímero se lavó con un exceso de éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El polímero se secó dentro de un horno a 50°C toda la noche y se aisló como un polvo marrón claro. El análisis de espectrometría de 1HN R realizado sobre copolímeros injertados con camptotecina (CD3OD) mostró señales aromáticas débiles y anchas en la zona de 7-9 ppm, característica de los protones de la camptotecina incorporada.
Ejemplo 47. Estudio de la liberación de camptotecina desde el copolimero injertado con camptotecina Se prepararon muestras del copolímero injertado con camptotecina a aproximadamente 10 mg/ml en Regulador de pH de Tris, pH=8,0. Se agregó esterasa hepática del hígado de un conejo (Sigma-Aldrich E0887-IKU, Lote N° 061K74451) a la muestra y ésta se incubó a 37°C durante hasta 65 horas.
El análisis de GPC de las muestras se hizo usando un sistema de HPLC que comprende un aters Alliance 2995 con un Detector de índice de Refracción Waters 2410, un Detector de Red de Fotodiodos Waters 2996 y una columna de Proteína KW-803 de Shodex. La fase móvil usada para la elución fue solución salina con regulador de pH de fosfato que contenía 10% de etanol absoluto. La velocidad de flujo se fijó a 1 ml/minuto. y la presencia de camptotecina se monitoreó a 370 nm. Se hicieron inyecciones de 10 microlitros de las muestras en cada punto de tiempo .
E emplo 48. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene campto ecina Polimerización El protocolo de polimerización seguido fue esencialmente el mismo que aquel descrito en el Ejemplo 46, excepto que se usó el iniciador con funcionalidad de maleimida protegida descrito en el Ejemplo 5 en lugar de cc-bromoisobutirato de etilo. Las cantidades de los reactivos utilizadas fueron las descritas en la siguiente tabla : La reacción de polimerización se desgasificó completamente a 78°C y se dejó que la reacción avanzara a temperatura ambiente durante 17 horas. La polimerización se enfrió al exponerla al aire. Una solución de 100 mg de fluoruro de tetrabutil amonio disuelta en 1 mi de metanol se agregó a la mezcla de la reacción. La reacción cruda se gasificó a través de gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El polímero se secó dentro de un horno a 40 °C toda la noche. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 73000 g/mol, Mp de 74000 g/mol y PDi de 1,15. El análisis mediante espectrometría de XE MR no mostró ningún grupo TMS.
Desprotección del grupo funcional maleimida protegido El polímero del paso previo se asperjó como una capa delgada de polvo sobre el fondo de un plato de cristalización ancho. El plato se colocó dentro de un horno de vacío precalentado a 125°C y se aplicó vacío. El calentamiento a 125°C se realizó durante 1 hora y el vacío se interrumpió gradualmente una vez que la temperatura alcanzó la temperatura ambiente. El sólido/polvo resultante se recogió sobre un aparato de frito/filtración, se lavó varias veces con éter de dietilo y se secó dentro de un horno de vacío a temperatura ambiente .
El análisis de ¾ NMR mostró la desaparición de las señales a 5,2 y 6,6 ppm (que representan el grupo furano) y la aparición de una señal nueva a 6,95 ppm (que representa CH desde maleimida) . El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 77000 g/mol, Mp de 69000 g/mol y PDi de 1,1.
Preparación del copolímero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina La unión de la camptotecina al polímero con funcionalidad de maleimida del paso previo fue esencialmente la descrita en el Ejemplo 43. Se disolvieron 170 mg del polímero del paso previo en 0,5 mi de etanol prueba 200 dentro de un tubo de Schlenk. A la solución se agregaron 50 µ?? de una solución de PMDETA en DMF seca (5 mg en 50 µ??) , luego se agregaron 200 ?? de una solución del conjugado de camptotecina azida disuelta en DMF (125 mg de CPT-L-N3 por cada mi de DMF) . A la mezcla se agregaron otros 210 mg de DMF seca para garantizar la homogeneidad de la mezcla de la reacción. La mezcla se desgasificó brevemente y se agregaron 4 mg de CuBr en condiciones inertes. La mezcla se desgasificó y se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla cruda se disolvió en metanol y se pasó a través de una columna corta de gel de sílice y se purificó mediante precipitación y lavado en THF. El sólido finalmente se lavó con éter de dietilo y se secó toda la noche a 35-40°C. El análisis mediante difusión de luz mostró un 20% de aumento en el peso molecular (Mp) , con n de 95000 g/mol, p de 84000 g/mol y PDi de 1,14. El análisis de 1H NMR del polímero resultante en CD3OD mostró señales aromáticas débiles en la gama de 7-9 ppm. Una estimación aproximada basada en CH desde camptotecina a 8,4 ppm y grupos metileno desde HEMA-PC en región de 4-4,5 ppm dio una incorporación de camptotecina del 1,5-2%.
Ejemplo 49. Desprotección del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida protegido después de la unión del conjugado de camptotecina azida A 100 mg del copolimero con funcionalidad de maleimida protegido del Ejemplo 46 en 300 /xL de etanol se agregaron 29,4 µ?^ de una solución de material de PMDETA disuelto en DMF (10 mg/ml) , luego se agregaron 117 µ?, de una solución de material de conjugado de camptotecina azida en DMF (30 mg en 240 /xL de DMF) , 85 µ?· de D F y 2,1 mg de CuBr. La mezcla de la reacción se desgasificó completamente y se agitó toda la noche. La desprotección de la funcionalidad de maleimida se realizó como se describió en el Ejemplo 48.
Ejemplo 50. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina y fluoresceína Polimerización El protocolo de polimerización que se siguió fue esencialmente el mismo que aquel descrito en el Ejemplo 46, excepto que se agregó un tercer comonómero, metacrilato de fluoresceína (FLMA) : Las cantidades de los reactivos utilizados fueron las descritas en la siguiente tabla: La mezcla de la reacción de la polimerización se desgasificó completamente a -78 °C y se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente durante 17 horas. La polimerización se enfrió al exponerla al aire. Una solución de 100 mg de fluoruro de tetrabutil amonio disuelto en 1 mi de metanol se agregó a la mezcla de la reacción. La reacción cruda se pasó a través de gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El copolímero se secó dentro de un horno a 40 °C toda la noche. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 69000 g/mol, Mp de 70000 g/mol y PDi de 1,15. La espectrometría de ? NMR del polímero seco no mostró ningún grupo TMS.
Desprotección del grupo funcional maleimida El grupo funcional maleimida protegida del polímero del paso previo se desprotegió usando el protocolo detallado en el Ejemplo 46. El análisis de 1H NMR mostró la desaparición de las señales a 5,2 y 6,6 ppm (que representa el grupo furano) y la aparición de una señal nueva a 6,95 ppm (que representa el CH de maleimida) . El análisis por difusión de luz mostró un Mn de 72.200 g/mol, Mp de 63.700 g/mol y PDi de 1,1.
Preparación del copolímero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina y fluoresceína La unión de camptotecina al polímero con una funcionalidad de maleimida del paso previo fue esencialmente la misma que la descrita en el Ejemplo 46. 170 mg del polímero del paso previo se disolvieron en 0,5 mi de etanol prueba 200 en tubo de Schlenk. A la solución se agregaron 50 /xL de una solución de PMDETA en DMF seca (5 mg en 50 µ?^) , luego se agregaron 200 ?^ de una solución del conjugado de camptotecina azida disuelto en DMF (125 mg de CPT-L-N3 por cada mi de DMF) . A la mezcla se agregaron otros 210 mg de DMF seca para asegurar la homogeneidad de la mezcla de la reacción. La mezcla se desgasificó brevemente y se agregaron 4 mg de CuBr en condiciones inertes. La mezcla se desgasificó y se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla cruda se disolvió en metanol y se pasó a través de una columna corta de gel de sílice y se purificó mediante precipitación y lavado en THF. El sólido finalmente se lavó con éter de dietilo y se secó toda la noche a 35-40°C. El análisis mediante difusión de luz mostró un 20% de aumento en el peso molecular (Mp) , con Mn de 107.100 g/mol, Mp de 98100 g/mol y PDi de 1.14. El análisis de 1H MR del polímero resultante en CD3OD mostró señales aromáticas débiles en la gama de 7-9 ppm. Una estimación aproximada basada en CH de camptotecina a 8,4 ppm y grupos metíleño de HE A-PC en la región de 4-4,5 ppm dio una incorporación de camptotecina del 2,5-5%.
Ejemplo 51. Desprotección del copolimero de PC de fluoresceína con funcionalidad de maleimida después de la unión del conjugado de camptotecina azida A 100 mg del copolímero con funcionalidad de maleimida protegido del Ejemplo 50 en 300 µ?, de etanol se agregaron 29,4 µ?. de una solución de material de PMDETA disuelto en DMF (10 mg/ml) , luego se agregaron 117 µ?. de una solución de material del conjugado de camptotecina azida en DMF (30 mg en 240 µ?? de DMF) , 85 µ1> de DMF y 2,1 mg de CuBr. La mezcla de la reacción se desgasificó completamente y se agitó toda la noche. La desprotección de la funcionalidad de maleimida se realizó como se describió en el Ejemplo 43.
Ejemplo 52. Preparación del copolimero de bloques de colina de HEMA-PC con funcionalidad de maleimida de 4 ramificaciones Preparación del polímero de PC con funcionalidad de maleimida protegido de 4 ramificaciones El iniciador con una funcionalidad de maleimida protegido de 4 ramificaciones del Ejemplo 11 y el ligando 2 , 2 ' -bipiridilo se introdujeron en un tubo de Schlenk. Se introdujo gota a gota dimetil formamida de manera tal que el porcentaje en peso del iniciador y del ligando sea aproximadamente un 20%. La solución resultante se enfrió a -78°C usando una mezcla de hielo seco/acetona y se desgasificó bajo vacío durante 10 minutos. El tubo se rellenó bajo nitrógeno y el catalizador CuBr, se mantuvo bajo nitrógeno, se introdujo en el tubo de Schlenk (la relación molar de bromo/catalizador/ligando se mantuvo a 1/1/2) . La solución se hizo inmediatamente marrón oscuro. El tubo de Schlenk se selló y se mantuvo a -78°C. La solución se purgó aplicando un ciclo de vacío/nitrógeno tres veces. Se preparó una solución de HEMA-PC mezclando una cantidad definida del monomero, se mantuvo bajo nitrógeno, con etanol desgasificado prueba 200. La solución de monomero se agregó gota a gota dentro del tubo de Schlenk y se homogeneizó mediante agitación ligera. La temperatura se mantuvo a -78°C. Se aplicó un vacío total a la mezcla de la reacción durante por lo menos 10 a 15 minutos hasta que cesó el burbujeo desde la solución. El tubo luego se rellenó con nitrógeno y se calentó a temperatura ambiente. La solución se agitó y cuando avanzó la polimerización, la solución se hizo viscosa. Después de 38 horas, la reacción se enfrió mediante la exposición directa al aire para oxidar Cu (I) a Cu (II) , La mezcla se hizo de color verde azulado y se pasó a través del gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El polímero se secó dentro de un horno a 40°C toda la noche. Las cantidades de los reactivos utilizados fueron las que se describen en la siguiente tabla: El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 550.000 g/mol, Mp de 640.000 g/mol y PDi de 1,18.
Preparación de copolímero de bloques de colina de HEMA-PC con funcionalidad de maleimida de 4 ramificaciones en donde el copolímero de bloques tiene la fórmula: A una mezcla de 300 mg del polímero del paso previo en 0,7 mi de etanol se agregó, en condiciones inertes, 1 mg de PMDETA disuelto en 42 mg de DMF y luego 1 mg de CuBr. La mezcla de la reacción se enfrió inmediatamente a -78°C y se desgasificó completamente. Se pasó cloruro de 2 (metacriloiloxi) etiltrimetil amonio (MC) como una solución acuosa (72% p/p) en forma preliminar a través de una columna corta para eliminar el estabilizador. Se agregaron 177 mg de la solución a la mezcla de la reacción y la mezcla se desgasificó completamente a -78°C durante 30 minutos hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se repuso con nitrógeno y se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente durante 48 horas. La conversión estimada mediante XH NMR indicó que el 15% de MC se convirtió en polímero. La mezcla cruda se purificó mediante diálisis para eliminar todas las impurezas de peso molecular bajo (MWCO 15kDa) y luego se liofilizó. El análisis mediante 1H NMR indicó un pico nuevo en la región de 4,5 ppm (C¾0) desde el grupo colina adyacente a los tres picos desde fosforilcolina (de 4 ppm a 4,5 ppm). El análisis mediante 1H NMR del polímero final en CD30D mostró una relación molar del 5-10% de MC contra HEMA-PC. El grupo funcional maleimida se generó mediante la desprotección como se describió en el Ejemplo 43. Se han observado prolongaciones de cadena similares en un proceso de un paso donde se agregó MC al final de la polimerización de HEMA-PC.
Ejemplo 53. Preparación del copolimero de bloques fluoresceina de HEMA-PC con funcionalidad de diol de 3 ramificaciones Polimerización OH HO„ o tj =*0ll !HEMA-PC)E„_Br Se agregaron 4,66 mg de 2 , 2 ' bipiridilo a un tubo de Schlenk y luego 41,3 µ? de una solución de material del iniciador del Ejemplo 37 en DMF (lOmg/lOOmL de DMF) y 83,4 µ?, de una solución de material de CuBr2 en DMF (10 mg/ml de DMF) . La mezcla se desgasificó bajo vacío a -78°C. A la mezcla de la reacción se agregaron 1,6 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregaron gota a gota 2 g de HEMA-PC disuelto en 3,75 mi de etanol de prueba 200. El recipiente se selló y se desgasificó a -78 °C bajo vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente durante 48 horas. Se estimó mediante ""? NMR que la conversión era superior al 98%. El análisis mediante difusión de luz mostró un p de 457kDa, Mn de 407kDa y PDi de 1,13. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego un lavado final con éter de dietilo .
Preparación del copolímero de bloques de fluoresceína de HEMA-PC con funcionalidad de diol de 3 ramificaciones 1,409 g del polímero del paso previo se disolvieron en 4 mi de etanol de prueba 200. A la mezcla de la reacción se agregó una solución de 14 mg de FLMA disuelto en 182 mg de DMF, 510 mg de DMF y 3 mg de 2 , 2 ' bipiridilo . La mezcla de la reacción se desgasificó completamente antes de agregar 1,34 mg de CuBr y 1 mg de Cu(0) . La mezcla de la reacción se desgasificó completamente y se dejó que continuara a temperatura ambiente durante 8 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF, luego se lavó con THF y se hizo otro lavado con éter de dietilo. El polímero final se aisló como un polvo amarillo. La presencia de fluoresceína se demostró mediante ¾ NMR en metanol y con absorbencia a 370 nm. El análisis del peso molecular realizado sobre el polímero mediante difusión de luz indicó un aumento en el peso molecular a Mp de 501 kDa y un PDi de 1,28.
E emplo 54. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de aldehido que contiene grupos alquino Polimerización Las cantidades de los reactivos utilizados fueron aquellas descritas en la siguiente tabla: Se utilizó el iniciador del Ejemplo 39. La mezcla de la reacción de la polimerización se desgasificó completamente a -78°C y se dejó que avanzara a temperatura ambiente durante 64 horas. La reacción se enfrió al exponerla al aire. Se agregó una solución de 100 mg de fluoruro de tetrabutil amonio disuelto en 1 mi de metanol a la mezcla de la reacción. La mezcla de la reacción cruda se pasó a través de gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El polímero se secó dentro de un horno a 40°C toda la noche. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 71.000 g/mol, Mp de 64000 g/mol y PDi de 1,15. La espectrometría de ?. NMR del polímero no mostró ningún grupo TMS.
Generación del grupo funcional aldehido mediante oxidación de peryodato agua, 90 mn temperatura ambiente En una solución del polímero con funcionalidad de diol en agua destilada (10% en peso) se introdujo un gran exceso de peryodato de sodio disuelto en agua destilada. Se dejó avanzar la reacción a temperatura ambiente durante 90 minutos a la sombra. La reacción se enfrió con una solución acuosa de glicerol (1,5 X contra NaI0 ) para eliminar todo el peryodato de sodio insaturado. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos y se colocó dentro de una bolsa de diálisis (MWCO 14 a 25 kDa) para la purificación a temperatura ambiente durante un día. Se eliminó el agua mediante liofilización y el polímero se recogió como un polvo seco.
Ejemplo 55. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de diol que contiene grupos epóxido Se agregaron 9,13 mg de 2 , 2 ' bipiridilo a un tubo de Schlenk y luego 80 µ? de una solución de material del iniciador del Ejemplo 26 en DMF (lOmg/lOOml de DMF) . La mezcla se desgasificó bajo vacío a -78°C. A la mezcla de la reacción se agregaron 4,2 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregó una mezcla de 1 g de HEMA-PC y se agregaron 23 µ?? de metacrilato de glicidilo purificado (GMA) (pasado a través de un removedor de estabilizador, para eliminar el estabilizador de MEHQ) que se disolvió en 2 mi de etanol de prueba 200 mediante agregado gota a gota. El recipiente se selló y se desgasificó a -78°C bajo vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se la dejó avanzar a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego el lavado final con éter de dietilo. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mp de 92kDa, Mn de 83kDa y PDi de 1,1.
Ejemplo 56. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida protegido que contiene grupos epóxido C D Se agregaron 13,55 mg de 2 , 2 ' bipiridilo a un tubo de Schlenk y luego 13,52 mg del iniciador del Ejemplo 26. Los sólidos se disolvieron en 142 mg de DMSO. La mezcla e desgasificó bajo vacío a -78°C. A la mezcla de la reacción se agregaron 6,22 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregó una mezcla de 1 g de HEMA-PC y se agregaron mediante agregado gota a gota 78 µL de GMA purificado (pasado a través de un removedor del estabilizador, para eliminar el estabilizador de MEHQ) que se disolvió en 2 mi de etanol de prueba 200. El recipiente se selló y se desgasificó a -78°C bajo vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó que avanzara a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego un secado final con éter de dietilo. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mp de 71kDa, Mn de 65kDa y PDi de 1,13.
Ejemplo 57. Preparación del copolímero de PC con funcionalidad de maleimida protegido que contiene grupos acetoacetato Se agregaron 13,55 mg de 2 , 2 ' bipiridilo a un tubo de Schlenk y luego 13,52 mg del iniciador del Ejemplo 26. Los sólidos se disolvieron en 142 mg de DMSO. La mezcla se desgasificó bajo vacío a -78°C. A la mezcla de la reacción se agregaron 6,22 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregó una mezcla de 1 g de HE A-PC y se agregaron mediante agregado gota a gota 110 L de metacrilato de 2- (acetoacetiloxi) etilo purificado (MEA) (pasado a través de un removedor de estabilizador, para eliminar el estabilizador de MEHQ) que se disolvió en 2 mi de etanol de prueba 200. El recipiente se selló y se desgasificó a -78°C bajo vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó que avanzara a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante la precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego se hizo el lavado final con éter de dietilo. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mp de 85kDa, Mn de 79kDa y PDi de 1,15.
E emplo 58. Preparación del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida protegido que contiene grupos alquino y acetoacetato Se agregaron 13,55 mg de 2 , 2 ' bipiridilo a un tubo de Schlenk y luego 13,52 mg del iniciador del Ejemplo 26. Los sólidos se disolvieron en 142 mg de DMSO. La mezcla se desgasificó a 78 °C. A la mezcla de la reacción se agregaron 6,22 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregó una mezcla de lg de HEMA-PC, 56,3mg de TMS-PgMA y se agregaron mediante agregado gota a gota 55µL de MEA purificado (pasado a través de un removedor de estabilizador, para eliminar el estabilizador de MEHQ) que se disolvió en 2ml de etanol de prueba 200. El recipiente se selló y se desgasificó a -78 °C hasta no se observó burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó que avanzara a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego se hizo el lavado final con éter de dietilo. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mp de 78kDa, Mn de 72kDa y PDi de 1,13.
Ejemplo 59. Preparación del copolímero de PC con funcionalidad de diol que contiene grupos alquino Las cantidades de los reactivos utilizados fueron aquellas descritas en la siguiente tabla: Se utilizó el iniciador del Ejemplo 26. La mezcla de la reacción de polimerización se desgasificó totalmente a -78°C y se la dejó avanzar a temperatura ambiente durante 14 horas. La reacción se enfrió al exponerla al aire. Una solución de 100 mg de fluoruro de tetrabutil amonio disuelta en 1 mi de metanol se agregó a la mezcla de la reacción. La mezcla de la reacción cruda se pasó a través de gel de sílice, se concentró y se precipitó cuidadosamente en éter de dietilo. El sólido se aisló mediante filtración y se lavó varias veces con éter de dietilo. El polímero se secó dentro de un horno a 40 °C toda la noche. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mn de 222.000 g/mol, Mp de 277.000 g/mol y PDi de 1,2. La espectroscopia de 1H NMR del polímero seco no mostró ningún grupo TMS .
Ejemplo 60. Unión de amida del ácido hexaglutámico con ácido 9- azido-4 , 7-dioxanononanoico al copolimero de PC con funcionalidad de diol que contiene grupos alquino y posterior generación de grupos funcionales aldehido a partir de precursores de diol Se agregaron 45 mg copolimero de PC con funcionalidad de diol con grupos alquino desde 13,55 mg de 2 , 2 ' -bipiridilo se agregaron a un tubo de Schlenk y luego 13,52 mg del iniciador del Ejemplo 26. Los sólidos se disolvieron en 142 mg de DMSO. La mezcla se desgasificó bajo vacío a -78°C. A la mezcla de la reacción se agregaron 6,22 mg de CuBr en condiciones inertes, luego se agregó una mezcla de 1 g de HEMA-PC, 56,3 mg de TMS-PgMA y 55 ?^ de MEA purificado (pasado a través de un removedor de estabilizador, para eliminar el estabilizador de MEHQ) que se disolvió en 2 mi de etanol de prueba 200 se agregó mediante agregado gota a gota. El recipiente se selló y se desgasificó a -78°C bajo vacío hasta que no se observó burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó que avanzara temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla cruda se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se purificó mediante precipitación en THF y luego se lavó con THF y luego se hizo un lavado final con éter de dietilo. El análisis mediante difusión de luz mostró un Mp de 78 kDa, Mn de 72 kDa y Pdi de 1,13.
Ejemplo 59 se disolvieron en 800-900mg de agua desionizada. Se agregaron 13,5 µ? de PDMETA (de la solución de material de 10 mg en 100 µ? de DMF) a la mezcla de la reacción en un matraz de base circular. 7mg de amida del ácido hexaglutámico con ácido 9-azido-4 , 7-dioxanononanoico del Ejemplo 45 se disolvieron en 70 µ? de DMF y se agregaron a la mezcla de la reacción, junto con 2,1 mg de CuBr. La mezcla se desgasificó completamente, se colocó en condiciones inertes y se agitó toda la noche a temperatura ambiente .
La eficiencia de la reacción se monitoreó mediante cromatografía de intercambio de aniones a OD220nm como se describió en el Ejemplo 45. La inyección a la hora cero mostró la presencia del polímero sin reaccionar en el caudal continuo y el péptido sn reaccionar a 10,6 minutos. Después de la reacción durante toda la noche, el pico de polímero desapareció y apareció un pico nuevo, correspondiente al péptido modificado por el polímero, a 11,6 minutos. Este pico fue ancho que indicó la presencia de varias especies de péptido de polímero debido al hecho de que cada polímero tiene varios grupos alquino para la unión potencial del péptido modificado por azida.
Purificación mediante cromatografía de intercambio de aniones Basado en la experiencia de la cromatografía de intercambio de aniones analítica, el péptido modificado por un polímero se purificó usando la cromatografía de intercambio de aniones sobre un sistema Akta Prime Plus usando una columna Hitrap DEAE FF (5 mi) de GE Healthcare. El Regulador de pH A fue 20mM Tris pH 7,5, y el Regulador de pH B fue el Regulador de pH A que contiene 0 , 5M NaCl . La columna se equilibró con el Regulador de pH A, luego tres volúmenes de columna del Regulador de pH B y luego suficiente Regulador de pH A para devolver el eluato a la misma conductividad que el Regulador de pH A. Se cargaron 700 µg del péptido modificado por el polímero en la columna del regulador de pH A y la columna se lavó con suficiente regulador de pH A para devolver al eluato de columna a la misma conductividad que el regulador de pH A. La elución se realizó en una forma paso a paso usando 20%B, 30%B, 50%B, 70%B, y 100%B. Se recogieron fracciones de 10ml y las fracciones 17 y 18 se mezclaron (20ml) y formaron una mezcla de 40%B y las fracciones 19 y 20 se mezclaron y formaron una mezcla de 70%B (20ml) . Ambas mezclas se concentraron a un volumen de 0,5-lml usando un concentrador Amicon Ultra 30 kDa M CO. El análisis se realizó usando el método de intercambio de aniones analítico del Ejemplo 45 que indicó que la mezcla de 70%B contenía un pico ancho único como se describió previamente. La mezcla de 40%B también contenía un pico ancho único que se eluyó levemente antes que el pico de 70%B que indica la presencia del péptido modificado por un polímero con menos péptidos por cada polímero. Se realizó otro análisis usando la cromatografía de exclusión de tamaños sobre un sistema de HPLC Waters con un sistema de Suministro de Solvente 2695 Alliance equipado con un Detector de Longitudes de Onda Doble Waters 2685. Las muestras se sometieron a cromatografía usando una columna Superdex 200 (10x300mm) de GE Healthcare a lml/minuto con lx PBS pH 7,4 durante 25 minutos. El cromatograma se monitoreó a OD220nm y OD280nm. Ambas mezclas de 40%B y 70%B de la purificación de intercambio de aniones eluyeron con tiempos de retención de pico a los 9 minutos que equivale a un peso molecular en la gama de 500 kDa - 600 kDa. Los picos fueron visibles a 220nm y 280nm que indica la presencia del polímero y del péptido. El polímero sin reaccionar eluyó en una posición similar, pero fue visible solamente a 220nm, mientras que el péptido sin reaccionar eluyó con un tiempo de retención de 18 minutos, pero fue visible solamente a 280nm.
Conversión de grupos funcionales diol de extremo en grupos funcionales aldehido mediante la oxidación de peryodato sobre el copolímero de PC modificado por el ácido hexaglutámico Los grupos funcionales diol de extremo sobre la mezcla de elución de 70%B purificada y concentrada mediante intercambio de aniones del péptido modificado por un polímero del paso previo se convirtieron en grupos funcionales aldehido usando la oxidación de peryodato como se describió en el Ejemplo 54.
Ejemplo 61. Conjugación de fosfatasa alcalina al polímero de PC con funcionalidad de aldehido que contiene ácido hexaglutámico Se hizo el intercambio de regulador de pH de la fosfatasa alcalina (Sigma-Aldrich) en 25mM Hepes pH 7 (regulador de pH de conjugación) y se concentró a 5-8 mg/ml . Las reacciones de conjugación se llevaron a cabo a 3-5X exceso molar del copolímero de PC con funcionalidad de aldehido que contiene ácido hexaglutámico del Ejemplo 60 a la proteína en la presencia de 40m cianoborohidruro de sodio con una concentración de proteína final de 1 mg/ml. Todas las reacciones se llevaron a cabo en frascos de vidrio sellados con rizado toda la noche a temperatura ambiente. El diol del polímero se usó como un control negativo. Se fraccionaron 40µ1 de cada reacción sobre una columna Superdex 200 (10/300mm) a lml/minuto en lx PBS pH 7,4. Las fracciones de lml se recogieron y se ensayó la actividad de fosfatasa alcalina de la siguiente manera. 5µ1 de las fracciones de SEC se diluyeron 5x con 20mM Tris pH 7,5, y se agregaron ???µ? del sustrato de PNPP y las muestras se incubaron a 37°C durante 20 minutos. Se midió OD405nm usando un lector de placas Spectra ax Plus 384 de Molecular Devices. Como se esperaba, no se observó ninguna conjugación cuando se usó el polímero con funcionalidad de diol. Sin embargo, en el caso del polímero con funcionalidad de aldehido, se determinó la actividad de la fosfatasa alcalina en la gama de tiempo de retención de 8-10 minutos, que corresponde al polímero libre y la especie de peso molecular más alto, así como en la gama de 12-13 minutos que corresponde a la fosfatasa alcalina libre.
Ejemplo 62. Conjugación de Fab humano al copolimero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina Se preparó Fab humano mediante digestión por pepsina de IgG humana entera (Innovative Research) y dio Fab2/ seguido por la reducción posterior con TCEP que dio Fab. La digestión por pepsina de IgG se realizó en 0,1M acetato de sodio pH 4,5 a 41C toda la noche y se obtuvo más del 90% de eficiencia de digestión. La fracción de Fab2 luego se purificó adicionalmente usando la cromatografía de intercambio de cationes con una columna de MacroCap SP. La fracción de Fab2 se eluyó con 100-200 mM a pH 5 mientras que la pepsina libre y toda otra concentración eluyó en la fracción no unida. Fab2 purificado luego se redujo con 2X relación molar de TCEP a 37°C durante 30 minutos, y se usó la cromatografía de filtración de gel para purificar Fab desde Fab2 no reducido y TCEP libre. La fracción de Fab luego se mezcló y se intercambió el regulador de pH en el regulador de pH de conjugación. El experimento de conjugación descrito a continuación es para la conjugación de 1 mg de Fab a un exceso molar de 13x del copolimero de PC con funcionalidad de maleimida de 84 kDa que contiene camptotecina del Ejemplo 48. La reacción de conjugación se realizó en 10 mM acetato de sodio a pH 5 con 1 mM EDTA. La concentración final de Fab fue 2,7 mg/ml en la presencia de un exceso de 13x del polímero disuelto en el regulador de pH de conjugación y un exceso molar de lx de TCEP como el agente reductor. El polímero se disolvió en el regulador de pH de conjugación a una concentración de 100-300 mg/ml y luego se agregó TCEP y Fab. La mezcla de la reacción se mezcló suavemente, y la conjugación se realizó a la sombra a temperatura ambiente toda la noche.
El estado de conjugación se puede monitorear con SDS-PAGE cuando está en condiciones sin reducción, la acumulación de las especies de alto peso molecular mayor que el Fab libre es una buena indicación del evento de la conjugación. Dichas especies de conjugado de peso molecular alto se caracterizan porque son: (1) fluorescentes bajo iluminación ultravioleta debido a la presencia de la camptotecina; (2) las bandas del conjugado deben poder teñirse con Azul de Coomassie debido a la presencia de la proteína (el polímero no se tiñe) ; (3) las especies de alto peso molecular no cambian en condiciones de reducción que es una buena indicación de que no se deben a los agregados mediados por disulfuro .
Alternativamente, la conjugación aún se puede monitorear con SEC analítico usando una columna Superdex 200 (10/300 tnm) de GE Healthcare a 1 ml/minuto en lx PBS a pH 7,4. En dichas condiciones de corrida, el Fab libre eluye a 15,3 minutos y el polímero libre eluye a 10,6 minutos.
Para caracterizar adicionalmente la presencia del conjugado de Fab-polímero-camptotecina como se describió anteriormente, la mezcla de la reacción se fraccionó adicionalmente usando una columna de cromatografía de intercambio de cationes de 1 mi (CEX) o MacroCap SP de GE Healthcare a pH 5. La columna se conectó a un sistema de cromatografía AKTA Prime Plus equipado con un detector de OD280nm, un medidor de conductividad y un recolector de fracciones. El regulador de pH A fue lOmM acetato de sodio pH 5 y el regulador de pH B fue el Regulador de pH A que contiene 0,5 M NaCl . Las fracciones que eluyeron se analizaron nuevamente usando SDS-PAGE.
Cuando el Fab fue protonado a pH 5, junto con la resistencia iónica baja a 10 mM NaCl, el conjugado de Fab y el Fab libre se unen a la columna de intercambio de cationes mientras que el polímero no conjugado no debe interactuar con la CEX y en consecuencia no debe permanecer en el flujo a través de la fracción. La fracción no unida se recogió para el análisis. Después del lavado con por lo menos 15 volúmenes de columna (CV) del regulador de pH A, la columna se eluyó paso a paso con 8%, 12%, 20%, 40% y 100% de regulador de pH B que son equivalentes al regulador de pH A que contiene 40mM, 60mM, lOOmM, 200mM y 500mM NaCl, respectivamente. En cada paso de elución, por lo menos 10 CV de cada tampón de elución se pasó a través de la columna y las fracciones de 1,5 mi se recogieron y la traza de OD280nm se monitoreó en forma continua y la línea base cayó a por lo menos 5% del antecedente del regulador de pH inicial antes de que se iniciara el gradiente de elución de sal más alto.
Las fracciones de pico de cada elución de paso se recogieron y se concentraron con un concentrador Amicon Ultrafree con una membrana de corte de peso molecular de 10 kDa (MWCO) . El concentrado se analizó con SDS-PAGE en condiciones sin reducción y de reducción usando 1 mm NuPAGE Novex 4-12% de gel de gradiente y se realizó la electroforesis según las especificaciones del fabricante (Invitrogen Corp) . Las muestras para el análisis de SDS-PAGE incluyen la mezcla de la reacción inicial. La fracción sin unir de la columna MacroCap SP, la fracción de lavado de columna y las fracciones concentradas del 8%, 12%, 20% y 40% de mezclas de elución. Una vez que terminó la electroforesis , la PAGE se desmontó del cassette y se colocó sobre el iluminador ultravioleta para revisar la fluorescencia que se debe al polímero y al conjugado que contiene camptotecina . Se tomó una fotografía inmediatamente antes de someter al gel a tinción de Azul de Coomassie usando el sistema de tinción SimplyBlue de Invitrogen para revisar las bandas que contienen proteína.
Los resultados basados en el análisis de SDS-PAGE indican lo siguiente : El volumen de la fracción de MacroCap SP sin unir no contenía ninguna proteína basado en la tinción de Azul de Coomassie pero presentó una señal fluorescente amplia a una gama de peso molecular alto del receptáculo (=160 kDa) . Además, cuando la fracción se analizó mediante el ensayo de proteína de Bradford, no mostró ninguna señal de proteína en absoluto comparada con la carga de columna MacroCap SP; esta es una demostración más que confirma que la fracción no unida está desprovista de cualquier proteína que incluye Fab y el conjugado de Fab-polímero . Sin embargo, contenía principalmente el polímero libre pero no camptotecina libre ya que la camptotecina es demasiado pequeña para migrar a esta gama de peso molecular.
Las fracciones al 8% y 12%B contienen dos especies principales que se tiñeron con Azul de Coomassie, una era el Fab libre y la otra una banda difundida de peso molecular más alto con pesos moleculares en la gama de entre 110-260 kDa, solamente la última banda mostró fluorescencia pero no Fab libre. Basado en las pruebas previas de que el polímero no se puede teñir con Azul de Coomassie y el hecho de que la fracción no unida contiene principalmente el polímero y no mostró tinción con Azul de Coomassie, podemos deducir que la especie de alto peso molecular es el conjugado que contiene tanto Fab como polímero con camptotecina.
No se observó ninguna fluorescencia en las fracciones eluidas de 20% y 40% ya que éstas corresponden a la fracción de Fab libre y de Fab. Estas dos fracciones constituyen la mayor parte de la proteína eluida (>80%) que es una buena indicación de que el conjugado se enriqueció en las fracciones eluidas con bajo contenido de sal como se esperaba (debido al efecto de protección esperado del polímero) .
Las mezclas de fracciones eluidas también se sometieron a condiciones de reducción usando DTT y la banda de Fab se desplazó hacia abajo a la posición de 25 kDa que es una buena indicación de la disociación de la cadena liviana y la cadena medio pesada debido a la reducción de los enlaces de disulfuro entre cadenas. En tales condiciones, la señal fluorescente a alto peso molecular descrita anteriormente no se desplazó y también se tiñó con Azul de Coomassie. Esta observación confirma que la especie de alto peso molecular está unida en forma covalente al polímero en lugar de la asociación no covalente o la conexión a través de enlaces de disulfuro.
Además del análisis de SDS-PAGE, las fracciones eluidas de MacroCap SP se sometieron a SEC analítica usando una columna Superdex 200 (10x300mm) de GE Healthcare y un sistema de HPLC Waters con un sistema de suministro de solvente 2695 Alliance con un detector de Red de Diodos 2669. El análisis se realizó en lxPBS a pH 7,4 a una velocidad de flujo de 1 ml/minuto. El cromatograma se monitoreó usando OD220nm, OD280nm y OD355nm, donde OD220nm detecta la proteína, el polímero y la camptotecina, OD280nm detecta solamente la proteína y la camptotecina y OD355nm detecta solamente la camptotecina. Los resultados son los siguientes : Ejemplo 63. Conjugación de Fab humano al copolímero de PC cor-funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina y fluoresceína Las condiciones de la reacción de conjugación, la purificación, los análisis y las conclusiones fueron esencialmente las mismas que para el Ejemplo 62, excepto por lo siguiente: Se usó el copolímero de PC con funcionalidad de maleimida de 98 kDa que contiene camptotecina y fluoresceína del Ejemplo 50.
Para la elución de MacroCap SP, una elución de 4%B adicional precedió a la elución de 8%B. En consecuencia, la mezcla de eluciones de 4%B se excluyó en ambos análisis de SDS-PAGE y SEC. La mezcla de 4%B también mostró fluorescencia, una buena indicación de que esta fracción también contiene el conjugado.
El análisis de SEC/MALS de la fracción de MacroCap SP confirmó que esta fracción estaba compuesta solamente por polímero libre.
Ejemplo 64. Conjugación de IgG entera humana modificada por el reactivo de Traut al copolimero de PC con funcionalidad de maleimida que contiene camptotecina y fluoresceina En este ejemplo, la IgG humana entera (Innovative Research) se modificó en primer lugar con el reactivo de Traut a una relación de exceso molar de 3 veces en lxPBS a pH 7,4. La instalación de la reacción incluyó 10 mg/ml de IgG y 3 mg/ml del reactivo de Traut en lxPBS a pH 7 , 4 , el volumen de la reacción fue 300 µ? y la reacción se llevó a cabo durante 1 hora a temperatura ambiente a la sombra con mezcla. Al terminar la reacción, se hizo el intercambio de regulador de pH de la mezcla de la reacción en 10 m acetato de sodio a pH 5 con 2 mM EDTA usando una columna de desalación de BioGel P30 de 10 mi. A pH 5 y en la presencia de EDTA, se impidió la oxidación de los grupos sulfhidrilo para formar enlaces de disulfuro. La columna se conectó a un AKTA Prime Plus equipado con un detector de OD280nm, un medidor de conductividad y un recolector de fracciones. Se recogieron las fracciones de proteína y se concentraron a 4,45 mg/ml. La muestra ahora estaba preparada para la conjugación al polímero. El análisis de SDS-PAGE mostró que la modificación de IgG con el reactivo de Traut en estas condiciones no derivó en una agregación de proteínas.
La conjugación de la IgG modificada con el reactivo de Traut al polímero se realizó en 10 mM acetato de sodio a pH 5 con un exceso molar de polímero de 20 veces. La concentración final de IgG y el polímero fue de 3,8 mg/ml y 44 mg/ml , respectivamente. La reacción se realizó a temperatura ambiente toda la noche. Al terminar la reacción, la reacción de conjugación se sometió a cromatografía de intercambio de cationes como se describió en el Ejemplo 62 sin modificación. Las mezclas de fracciones que eluyeron a. 8%B, 12%B, 20%B y 40%B se analizaron mediante SDS-PAGE y se sometieron a iluminación ultravioleta. Los resultados indican que solamente las fracciones que eluyeron 8%B contenían especies de peso molecular alto mayores que el monómero de IgG y el polímero libre. Además, la banda se tiñó con azul de Coomassie y presentó fluorescencia, que indica la presencia del conjugado. En condiciones de reducción, la banda no se desplazó hacia abajo nuevamente que indica la presencia del conjugado de IgG-polímero como se describió en los Ejemplos 62 y 63.
Ejemplo 65. Preparación de la sal interior de fosfato de 2- (acriloiloxietil-2' - (trimetilamonio) etilo Primer compuesto intermedio Una solución de 11,6 gramos de 2 -hidroxietilacrilato y 14,0 mi de trietilamina en 100 mi de acetonitrilo seco, bajo una atmósfera de nitrógeno, se enfrió a -20°C, y se agregó gota a gota una solución de 14,2 gramos de 2 -cloro-2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosfolano en 10 mi de acetonitrilo seco durante 30 minutos. La reacción se agitó en el frío durante 30 minutos, luego se filtró bajo una atmósfera de nitrógeno. El precipitado se lavó con 10 mi de acetonitrilo frío y el filtrado se usó directamente en la reacción siguiente.
Sal interior de fosfato de 2- (acriloiloxietil -2 ' - (trimetilamonio) etilo A una solución del procedimiento previo se agregaron 14,0 mi de trimetilamina (condensada usando un condensador de hielo y acetona bajo nitrógeno) , la mezcla de la reacción se selló dentro de un recipiente de presión y se agitó a 65 °C durante 4 horas. La mezcla de la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente y cuando alcanza 30°C, comenzó formarse un sólido. El recipiente luego se colocó dentro de una heladera a 4°C durante toda la noche. Estrictamente bajo una atmósfera de nitrógeno, el sólido se recuperó mediante filtración, se lavó con 20 mi de acetonitrilo seco frío, luego se secó bajo una corriente de nitrógeno durante 15 minutos. Este sólido luego se secó bajo un vacío leve durante toda la noche y dio 12,4 gramos del producto como un sólido blanco. NMR (CDC13) : d 6,41 (dd, 1H, J=l,6, 17,2 Hz, vinil CH) , 6,18 (dd, 1H, J=10,6, 17,2 Hz, vinil CH) , 5,90 (dd, 1H, J=l,6, 10,4 Hz, vinil CH) , 4,35 (m, 2H) , 4,27 (m, 2H) , 4,11 (m, 2H) , 3,63 (m, 2H) , 3,22 (s, 9H, N(CH3)3).
Ejemplo 66. Preparación de metacrilato de 3-trimetilsililpropargilo Una solución de 3,0 gramos de alcohol de 3- (trimetilsilil)propargilo y 4,2 mi de trietilamina en 50 mi de éter se enfrió a -10°C con un baño de hielo/acetonitrilo/etilenglicol seco, y una solución de 2,9 gramos de cloruro de metacriloilo en 25 mL de éter se agregaron gota a gota durante 30 minutos. La mezcla de la reacción se agitó mientras se calentaba a temperatura ambiente durante 4 horas, luego se filtró y se concentró y dio un residuo aceitoso, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 1% de éter en hexano. Las fracciones que contenían el producto se combinaron, se concentraron y se sometieron a una segunda cromatografía como anteriormente y dieron 2,46 g del producto como un aceite incoloro, transparente. NMR(CDC13): d 6,18 (t, 1H, CCH2, J=l,2 Hz) , 5,62 ( , 1H, CCH2, J=l,6 Hz) , 4,76 (s, 2H, CH2) , 1,97 (d de d, 3H, CCH3 , J=1,0, 1,6 Hz) , 0,187 (s, 9H, Si(CH3)3) .
Ejemplo 67. Preparación de N-Yodoacetilpropargilamina Una solución de 1,05 gramos de clorhidrato de propargilamina en 20 mi de acetonitrilo se trató con 4,0 mi de isopropiletilamina, luego se agregaron 4,29 gramos de anhídrido yodoacetico en 20 mi de acetonitrilo. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas, luego se concentró y dio un residuo, que se repartió entre 100 mi de acetato de etilo y 100 mi de agua. La fase orgánica se lavó con 50 mi de cloruro de sodio saturado, luego se secó sobre sulfato de sodio. La concentración dio un sólido oscuro, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 30-40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones que contenían el producto que eran transparentes se combinaron y se concentraron y dieron un sólido, que se trituró con una cantidad pequeña de hexano y se secó con aire y dio 940 mg del producto como un sólido amarillo muy claro. N R (CDC13) : d 6,25 (s, 1H,CH), 4,08 (app d de d, 2H, NCH2, J=2,6, 5,3), 3,72 (s, 2H, ICH2), 2,28 (t, ??,??, J=2 , 6 Hz) .
Ejemplo 68. Preparación de éster de NHS de 4-pentin-l-ol Una solución de 1,02 gramo de ácido 4-pentinoico y 1,20 gramo de N-hidroxisuccinimida en 20 mi de acetonitrilo seco se trató con 300 mg de DPTS, luego 2,8 gramos de DCC, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se filtró y se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 30% de acetato de etilo en hexano . Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron y dieron 1,62 gramo del producto deseado como un sólido blanco. NMR(CDC13): d 2,89 (d de d, 2H, CH2C=0, J=7,9, 6,4 Hz) , 2,85 (s, 4H, 0=CCH2C¾C=0) , 2,62 (app d de d de d, 2H, CHCCH2, J=8,6, 6,9, 2,7 Hz) , 2,06 (t, 1H, CH, J=2 , 7 Hz) .
Ejemplo 69. Preparación de N-Propargilmaleimida Una solución de 1,08 gramo de clorhidrato de propargilamina en 50 mi de bicarbonato de sodio saturado se enfrió con un baño de agua y hielo y se agregaron 2,0 gramos de N-carboetoximaleimida en porciones durante algunos minutos. La reacción se agitó en el frío durante 30 minutos, luego mientras se calentaba a temperatura ambiente durante 25 minutos. La mezcla luego se extrajo con 3 x 25 mi de diclorometano, que se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se recogió en 10 mi de acetato de etilo y se calentó a 50°C durante dos horas y terminó la ciclación. La reacción se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 30% de acetato de etilo en hexano . Una segunda cromatografía como la anterior dio 1,24 g del producto como un aceite amarillo muy claro. NTyiR(CDCl3) : d 6,77 (s, 2H, CHC=0) , 4,30 (d, 2H, NCH2, J=2 , 4 Hz) , 2,22 (t, 1H, CCH, J=2 , 5 Hz) .
Ejemplo 70. Preparación de 5-hexin-l-al Una solución de 694 mg de 5-hexin-l-ol en 20 mi de diclorometano se trató a temperatura ambiente con 3,0 gramos de peryodinano de Dess -Martin y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se filtró y el filtrado se concentró y dio un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con acetato de etilo en hexano. NMR(CDC13): d 9,81 (t, 1H, CH=0, J=2,6 Hz) , 2,61 (t de d, 2H, CH2CH=0, J=7,l, 1,2 Hz) , 2,28 (t de d, 2H, CCH2, J=7,l, 2,6 Hz) , 1,99 (t, 1H, CCH, <J=2,6 Hz) , 1,86 (p, 2H, CCH2CH2 , J=7,0 Hz) .
Ejemplo 71. Conjugación de eritropoyetina humana recombinante al polímero de PC con funcionalidad de aldehido que contiene ácido hexaglutámico Se hizo el intercambio de regulador de pH de la eritropoyetina humana recombinante (R&D Systems) en 25 mM Hepes a pH 7 (regulador de pH de conjugación) y se concentró a 5 mg/ml. Las reacciones de conjugación se llevó a cabo a 3-5X de exceso molar del copolímero de PC con funcionalidad de aldehido que contiene el ácido hexaglutámico del Ejemplo 60 a la proteína en la presencia de 40 mM de cianoborohidruro de sodio con una concentración final de proteína de 1 mg/ml. Todas las reacciones se realizaron en frascos de vidrio sellados con rizado toda la noche a temperatura ambiente. La forma de diol del polímero se usó como un control negativo. Se fraccionaron 40 µ? de cada reacción sobre una columna de Superdex 200 (10/300mm) a 1 ml/minuto en lx PBS pH 7,4. Se recogieron fracciones de 1 mi y se analizaron a OD220nm y OD280nm. Como se esperaba, no se observó ninguna conjugación cuando se usó el polímero con funcionalidad de diol. Sin embargo, en el caso del polímero con funcionalidad de aldehido, se observó la presencia del conjugado de eritropoyetina-polímero porque la relación de OD280nm: OD220nm fue mucho más alta que para el polímero libre solo en la gama de tiempos de retención de 8-10 minutos, cuando eluyen el polímero libre y la especie de peso molecular más alto. La eritropoyetina libre eluyó en la gama de 14-15 minutos.
Ejemplo 72. Preparación de la sal de sodio del éster de 4-sulfo- 2 , 3 , 5 , 6-tetrafluorofenilo del ácido 9- (metacriloiloxi) - , 7-dioxanonanoico Preparación del éster de t-butilo del ácido 9- (metacriloiloxi) -4 , 7-dioxanonanoico Una solución de 5,0 gramos de 4 , 7-dioxa-9-hidroxinonanoato de t-butilo en 100 mi de éter, junto con 5,9 mi (2 eq) de trietilamina, se enfrió con un baño de hielo y agua y se agregó gota a gota una solución de 2,3 gramos de cloruro de metacriloilo en 5 mi de éter durante algunos minutos. La reacción se agitó en el frío durante 30 minutos, luego se la dejó calentar a temperatura ambiente. Mediante TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) la reacción pareció ser incompleta, de manera que se agregó gota agota otro 1,0 g de cloruro de metacriloilo. Después de otras 2 horas, la reacción pareció completa, de manera tal que la mezcla de la reacción se lavó con 50 mi de agua, luego se secó sobre sulfato de sodio. La filtración y la concentración dieron un residuo aceitoso, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 20-30% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 4,07 gramos del producto deseado como un aceite casi incoloro, transparente. N R (CDC13) : d 6,13 (br m, 1H, C=CHH) , 5,57 (br app t, 1H, J=l,6 Hz, C=CHH) , 4,29 (app t, 2H, J=4,8 Hz, C=OOCH2) , 3,70-3,76 (m, 4H) , 3,61-3,67 (m, 4H) , 2,50 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2) , 1,95 (app t, 3H, CH2=CCH3) , 1,45 (S, 9H, C(CH3)3) · Preparación del ácido 9- (metacriloiloxi) -4 , 7-dioxanonanoico Una solución de 3,70 gramos de 9- (metacriloiloxi) -4 , 7-dioxanonanoato de t-butilo en 15 mi de 88% de ácido fórmico se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas, en cuyo momento la reacción fue completa mediante análisis de TLC (gel de sílice, 50% de acetato de etilo en hexano) . La concentración dio un aceite, que se repartió entre 100 mi de diclorometano y 50 mi de agua y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio. La filtración y la concentración dieron un aceite, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 40% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 2,01 gramos del producto deseado como un aceite incoloro, transparente. MR (CDC13) : d 6,14 (br m, 1H, C=CHH) , 5,58 (br app t, 1H, J=l,6 Hz, C=CHH) , 4,31 (app t, 2H, J=4 , 8 Hz, C=OOCH2) , 3,73-3,80 (tm superpuesta, 4H, J=6 Hz) , 3,66 (m, 4H) , 2,65 (t, 2H, J=6 Hz, C=OCH2) , 1,95 (app t, 3H, CH2=CCH3) .
Preparación de la sal de sodio del áster de 4-sulfo-2 , 3 , 5 , 6-tetrafluorofenilo del ácido 9- (metacriloiloxi) -4 , 7-dioxanonanoico Una mezcla de 970 mg del ácido 9- (metacriloiloxi) -4 , 7-dioxanonanoico y 1,06 gramo de la sal de sodio de 4-sulfo-2 , 3 , 5 , 6-tetrafluorofenilo en 20 mi de acetonitrilo seco se trató con 1,06 gramo de DCC y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La filtración y la concentración casi hasta secarse dieron un residuo, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 5% de metanol en diclorometano . Las funciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron un sólido, que se colocó bajo vacío alto toda la noche y dio 783 mg del producto deseado como un sólido ligeramente pegajoso. NMR (¾, CD3OD) : d 6,10 (h, 1H, CH2, J=0,9 Hz) , 5,61 (p, 1H, CH2, J=l , 6 Hz) , 4,27 (m, 2H, CH2OC=0) , 3,87 (t, 2H, CH2CH2C=0, J=6.0 Hz) , 3,75 (m, 2H, CH2CH2OC=0) , 3,67 (s, 4H, OCH2CH20) , 2,98 (t, 2H, CH2C=0, J=6,0 Hz) , 1,92 (d de d, 3H, CH3 , J=l,6, 0,9 Hz) . MR (19F, CD3OD) : d -140,92 (m, 2F, SCCF) , 155,00 (m, 2F, OCCF) .
Ejemplo 73. Preparación de S-sulfato de (2-mercaptoetil)metacrilato Preparación de (2 -Bromoetil) metacrilato Una solución de 6,25 gramos de bromoetanol y 8,36 mi de trietilamina en 50 mi de diclorometano se enfrió con un baño de hielo y agua y se agregó gota a gota una solución de 5,0 gramos de cloruro de metacriloilo en 5 mi de diclorometano. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, luego se agregaron otros 50 mi de diclorometano y la reacción se lavó con 2 x 25 mL de agua, luego con 25 mi de cloruro de sodio saturado. Los compuestos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron y dieron un residuo naranja, que se sometió a cromatografía de columna rápida sobre gel de sílice con 10% de acetato de etilo en hexano. Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron y dieron 3,15 gramos del producto como un aceite transparente, que era suficientemente puro para su uso en la reacción siguiente. N R (CDC13) : d 6,18 (app p, 1H, J=l,l Hz, C=CHH) , 5,62 (p, 1H, C=CHH, J=l , 6 Hz) , 4,46 (t, 2H, J=6,0 Hz, CH2OC=0) , 3,56 (t, 2H, CH2Br, J=6,0 Hz) , 1,97 (dd, 3H, J=l, 4, 1,1 Hz, CH3C=C) .
Preparación de S-sulfato de (2 -mercaptoetil ) metacrilato A una solución de 5,25 gramos de pentahidrato de tiosulfato de sodio y 10 mg de hidroquinona en 45 mi de agua y 30 mi de isopropanol se agregaron 3,0 gramos de (2 -bromoetil ) metacrilato y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La concentración dio un residuo, que se recogió en 20 mi de etanol y 20 mi de metanol . La filtración y la concentración dieron un sólido blanco, que se suspendió con 45 mi de isopropanol. Después de agitar vigorosamente durante 4 horas, el sólido se recuperó mediante filtración, se lavó con una pequeña cantidad de isopropanol y se secó bajo vacío alto y dio 940 mg del producto deseado como un sólido blanco. NMR (CD3OD) : d 6,11 (h, 1H, CH2, J=0,9 Hz) , 5,62 (p, 1H, CH2, J=l,6 Hz) , 4,47 (t, 2H, OCH2, J=6,9 Hz) , 3,31 (t, 2H, SCH2, J=6,9 Hz) , 1,93 (d de d, 3H, CH3, J=l, 5, 1,0 Hz) .
Ejemplo 7 . Preparación del copolimero de PC que contiene grupos funcionales trimetoxisilano Se colocaron 32,18 mg de 2 , 2 ' bipiridilo en un tubo de Schlenk y luego 20,1 mg del iniciador a-bromo isobutirato de etilo y se disolvió en 160 mg de D SO. La mezcla se desgasificó bajo vacío durante 10 minutos. Se agregaron 14,78 mg de CuBr en condiciones inertes y la mezcla de la reacción se enfrió a -78°C, se desgasificó y se rellenó con gas inerte. Se disolvieron l,033g de HEMA-PC y 46 mg de metacrilato de 3 - (trimetoxisilil ) propilo en 4 mi de etanol de prueba 200 y se agregaron a la mezcla de la reacción gota a gota. El recipiente se selló y se desgasificó completamente a -78°C bao vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se la dejó avanzar a temperatura ambiente durante 2 horas. El análisis mediante difusión de luz mostró Mp de 24kDa, Mn de 22kDa y PDi de 1,05.
Ejemplo 75. Preparación de copolimero de PC que contiene grupos funcionales tiol Se colocaron 74,8 mg de 2 , 2 ' bipiridilo dentro de un tubo de Schlenk y luego 46,58 mg del iniciador de a-bromo isobutirato de etilo y se disolvió en 520 mg de DMSO . La mezcla se desgasificó bajo vacío durante 10 minutos. Se agregaron 34,26 mg de CuBr en condiciones inertes y la mezcla de la reacción se enfrió a -78°C, se desgasificó y se rellenó con gas inerte. Se disolvieron 1,601 g de HEMA-PC y 70,8 mg de sal de sodio de S-sulfo-(2-tioetil) metacrilato (del Ejemplo 73) en 6,2 mi de etanol de prueba 200 y se agregaron gota a gota a la mezcla de la reacción. El recipiente se selló y se desgasificó totalmente a -78°C bajo vacío hasta no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó avanzar a temperatura ambiente durante 3 horas. El análisis mediante difusión de luz mostró Mp de 17kDa, Mn de 16kDa y PDi de 1,05.
Ejemplo 76. Preparación del copolimero de PC que contiene grupos funcionales de tiol y grupos funcionales éster de tetrafluorofenilo Se colocaron 64 mg de 2 , 2 ' bipiridilo dentro de un tubo de Schlenk y luego 40 mg del iniciador de a-bromo isobutirato de etilo y se disolvió en 300 mg de DMSO. La mezcla se desgasificó bajo vacío durante 10 minutos. Se agregaron 29,4 mg de CuBr en condiciones inertes y la mezcla de la reacción se enfrió a -78°C, se desgasificó y se rellenó con un gas inerte. 1,8 g de HEMA-PC, 6,77x10-4 mol de la sal de sodio de S-sulfo-(2-tioetil) metacrilato (del Ejemplo 73), y 6,77x10-4 mol de la sal de sodio del éster de 4 -sulfo-2 , 3 , 5 , 6-tetrafluorofenilo del ácido 4 , 7-dioxa-9- (metacriloiloxi ) nonanoico (del Ejemplo 72) se disolvieron en 7,5 mi de etanol de prueba 200 y se agregaron gota a gota a la mezcla de la reacción. El recipiente se selló y se desgasificó completamente a -78°C bajo vacío hasta que no se observó ningún burbujeo. La mezcla de la reacción se colocó en condiciones inertes y se dejó que avanzara a temperatura ambiente durante 2 horas. El análisis mediante difusión de luz mostró Mp de 24kDa, Mn de 25kDa y PDi de 1,05.
Aunque la invención precedente se ha descrito algo detalladamente a modo de ejemplo con el fin de que se entienda claramente, un experto en el arte apreciará que se pueden practicar ciertos cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Además, cada referencia provista en la presente se incorpora como referencia en su totalidad en la misma magnitud que si cada referencia se incorporara individualmente como referencia.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un copolímero aleatorio de la Fórmula I: en donde cada M1 y M2 se selecciona independientemente del grupo formado por acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida , estireno, vinil-piridina y vinil -pirrolidona ; R1 se selecciona del grupo formado por H, L^-A1, LG1 y L1-LG1; cada R2 se selecciona independientemente de H, alquilo de Ci-20 alquenilo de C2-s, alquinilo de C2-e, haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8, arilo, heteroarilo, A2, L2-A2, LG2, L -LG2, I2 y L2-I2; ZW es un grupo zwiteriónico; I es un fragmento de iniciador e I' es un depurador de radicales, de manera tal que la combinación de I-I' sea un iniciador, I1, para la polimerización del copolímero aleatorio de Fórmula I; alternativamente, I' se selecciona del grupo formado por H y alquilo de Ci_6; I2 es un iniciador; cada uno de L1 y L2 es un conector; cada uno de A1 y A2 es un agente funcional; cada uno de LG1 y LG2 es un grupo conector; los subíndices x e y1 son independientemente un número entero de 1 a 1000; el subíndice z es un número entero de 1 a 10; el subíndice s es un número entero de 1 a 100; y el subíndice n es número entero de 1 a 20, en donde R1 es L^-A1 O uno de R2 es L2-A2. 2. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: 3. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: 4. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la fórmula: 5. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la fórmula: 6. El copolímero de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene fórmula : 7. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde por lo menos un R2 se selecciona del grupo formado por H, alquil de Ci-6, alquenilo de C2 -6 , alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-6, heteroalquilo de Ci-6, cicloalquilo de C3-8, heterocicloalquilo de C3-8/ arilo y heteroarilo. 8. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: 9 . El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: 10 . El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación que tiene la siguiente fórmula: 12. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de L1 y L2 es un conector descomponible que se selecciona independientemente del grupo formado por conectores hidrolizables, conectores descomponibles enzimáticamente, conectores sensibles al pH, conectores de disulfuro, conectores fotolábiles y conectores de profármacos autoinmolados o dobles. 13. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde por lo menos uno de L1 y L2 es un conector descomponible que se selecciona independientemente de conectores hidrolizables, conectores descomponibles enzimáticamente, conectores sensibles al pH, conectores de disulfuro, conectores fotolábiles y conectores de profármacos autoinmolados o dobles. 14. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente funcional es un agente bioactivo que se selecciona del grupo formado por un fármaco, una proteína terapéutica y un agente dirigido. 15. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el depurador de radicales I' es un halógeno. 16. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el iniciador I1 se selecciona del grupo formado por: 317 319 17. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio se selecciona del grupo formado por : 323 en donde L-CTP tiene la fórmula: 20 18. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: 326 en donde PC es fosforilcolina; HE A es metacrilato de hidroxietilo; G A es metacrilato de glicidilo; y Glu es ácido glutámico. 19. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde el copolímero de bloques tiene la fórmula: 20. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde los subíndices x e y1 son tales que el Mn de la parte del polímero es de 95.000 g/mol; A1 es un anticuerpo; y L-CTP tiene la fórmula: 21. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde : los subíndices x, yla e ylb son tales que el Mn de la parte del polímero es de 107.100 g/mol; A1 es un anticuerpo; y L-CTP tiene la fórmula: 22. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el copolímero aleatorio tiene la fórmula: en donde los subíndices x e y1 son tales que el Mn de la parte del polímero es de 95.000 g/mol; A1 es un anticuerpo; y L-CTP tiene la fórmula: 23. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de A1 y A2 se selecciona independientemente del grupo formado por un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un Fab, IgG, un péptido, una proteína, una enzima, un oligonucleótido, un polinucleótido, ácidos nucleicos y un conjugado de fármaco de anticuerpo (ADC) . 24. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación 1, en donde A1 se selecciona independientemente de un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un Fab, un scFv, un dominio de inmunoglobulina, una IgG, y A2 se selecciona independientemente de un agente anticáncer, una toxina, un fármaco de moléculas pequeñas, un agente de quimioterapia, un inhibidor de quinasa, un agente antiinflamatorio y un agente antifibrótico . 25. El copolímero aleatorio de acuerdo con la reivindicación en donde R1 es LG1 y L2-A2 se selecciona independientemente de un agente anticáncer, una toxina, un fármaco de moléculas pequeñas, un agente de quimioterapia, un inhibidor de quinasa, un agente antiinflamatorio y un agente antifibrótico . 26. Un proceso para preparar un copolímero aleatorio, el proceso comprende poner en contacto una mezcla de un primer monomero y un segundo monomero con un iniciador I1, en condiciones suficientes para preparar un copolímero aleatorio a través de la polimerización por radicales libres, en donde el primer monomero comprende fosforilcolina y cada uno del segundo monomero y el iniciador comprende independientemente por lo menos uno de un agente funcional o un grupo conector para la unión al agente funcional . 27. El proceso de acuerdo con la reivindicación 26, en donde la mezcla además comprende un catalizador y un ligando. 28. Un copolímero aleatorio que comprende un primer monomero que comprende fosforilcolina , un segundo monomero que comprende un agente funcional o un grupo conector y un grupo iniciador que comprende un agente funcional o un grupo conector, en donde el agente funcional está unido al segundo monomero o al grupo iniciador a través de un conector.
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10363290B2 (en) 2014-10-17 2019-07-30 Kodiak Sciences Inc. Butyrylcholinesterase zwitterionic polymer conjugates
US10702608B2 (en) 2013-09-08 2020-07-07 Kodiak Sciences Inc. Factor VIII zwitterionic polymer conjugates
US11066465B2 (en) 2015-12-30 2021-07-20 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
US11155610B2 (en) 2014-06-28 2021-10-26 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US11819531B2 (en) 2009-12-18 2023-11-21 Kodiak Sciences Inc. Multifunctional zwitterionic polymer conjugates
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI1988910T1 (en) 2006-02-28 2018-02-28 Kodiak Sciences Inc. Polymeric conjugates containing acryloyloxyethylphosphorylcholine and their preparations
CA2665493A1 (en) 2006-08-07 2008-02-14 University Of Washington Mixed charge copolymers and hydrogels
WO2011130694A2 (en) * 2010-04-15 2011-10-20 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
CN102977275B (zh) * 2011-09-07 2014-12-10 佛山市博新生物科技有限公司 一种经过预处理的含有磷酰胆碱基团的单体改善吸附树脂生物相容性的应用
WO2013059137A1 (en) * 2011-10-17 2013-04-25 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
JP6234064B2 (ja) * 2012-05-23 2017-11-22 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析用または磁気共鳴イメージング用の造影剤、化合物、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析方法および磁気共鳴イメージング方法
US10159735B2 (en) 2012-06-26 2018-12-25 The Curators Of The University Of Missouri Photocleavable drug conjugates
CN102875733B (zh) * 2012-10-25 2014-06-11 西安科技大学 具有仿细胞外层膜结构的纳米颗粒及其制备方法
WO2014144744A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Aptamer methods and compositions
EP3068378A4 (en) * 2013-11-12 2017-05-03 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Random copolymer therapeutic agent carriers and assemblies thereof
US20160303242A1 (en) * 2013-12-09 2016-10-20 Durect Corporation Pharmaceutically Active Agent Complexes, Polymer Complexes, and Compositions and Methods Involving the Same
US10588564B2 (en) 2014-09-30 2020-03-17 Moein Health, LLC Method and kit for diagnosing and treating neoplastic tissue
JP6736278B2 (ja) * 2014-10-24 2020-08-05 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を有する光音響イメージング用造影剤
IL243285A0 (en) 2015-12-22 2016-04-21 Yeda Res & Dev Analogues of lipids and liposomes containing them
EP3558384A4 (en) * 2016-12-23 2020-08-19 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation BIOCOMPATIBLES AND HYDROPHILIC POLYMER CONJUGATE FOR THE TARGETED RELEASE OF AN ACTIVE SUBSTANCE
WO2018191548A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Kodiak Sciences Inc. Complement factor d antagonist antibodies and conjugates thereof
EP3720506A4 (en) * 2017-12-04 2021-09-29 Lecouteur, David COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING THE WINDOWS OF HEPATIC ENDOTHELIAL CELLS
JP2019112533A (ja) * 2017-12-24 2019-07-11 国立大学法人千葉大学 貴金属分離回収可能なコポリマー及びそのコポリマーを用いた貴金属回収方法
EP3831909A1 (en) * 2019-12-03 2021-06-09 Université de Strasbourg Luminescent zwitterionic polymeric nanoparticles
JP7425405B2 (ja) * 2020-03-13 2024-01-31 日油株式会社 共重合体およびその用途
KR20220164547A (ko) * 2020-04-06 2022-12-13 티바 바이오테크 엘엘씨 효율적인 핵산 전달을 위한 운반체
CN112033943B (zh) * 2020-08-17 2021-03-30 中南民族大学 一种基于量子点-铜离子荧光基底传感器的精氨酸检测方法
WO2022235329A1 (en) * 2021-05-06 2022-11-10 University Of South Carolina Brain-targeted antibody nanoparticle for neurodegenerative diseases therapy
WO2022255204A1 (ja) * 2021-06-01 2022-12-08 デンカ株式会社 リン酸基又はリン酸エステル基を有するコポリマー、その製造方法、及び樹脂組成物
AU2022328663A1 (en) 2021-08-16 2024-02-15 Tiba Biotech Llc Nanoparticle compositions containing sugar functionalized nucleic acid carriers
CN114410735B (zh) * 2022-01-25 2023-10-27 河南中医药大学 以氨磷汀为底物利用atrp信号放大策略检测碱性磷酸酶的电化学试剂盒及使用方法

Family Cites Families (241)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH652145A5 (de) 1982-01-22 1985-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen.
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4634666A (en) 1984-01-06 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Human-murine hybridoma fusion partner
EP0218712B1 (en) 1985-04-12 1992-02-26 Genetics Institute, Inc. Novel procoagulant proteins
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
US5250421A (en) 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JPH0387173A (ja) 1987-09-10 1991-04-11 Teijin Ltd ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
US5283187A (en) 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
US4892538A (en) 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
US5162218A (en) 1988-11-18 1992-11-10 The Regents Of The University Of California Conjugated polypeptides and methods for their preparation
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992013867A1 (en) 1991-01-31 1992-08-20 Cor Therapeutics, Inc. Domains of extracellular region of human platelet derived growth factor receptor polypeptides
US5871907A (en) 1991-05-15 1999-02-16 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
AU666485B2 (en) * 1991-07-05 1996-02-15 Biocompatibles Uk Limited Polymeric surface coatings
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5817310A (en) 1991-12-02 1998-10-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitory immunoglobulin polypeptides to human PDGF beta receptor
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
CA2134773A1 (en) 1992-06-04 1993-12-09 Robert J. Debs Methods and compositions for in vivo gene therapy
KR100303872B1 (ko) 1992-10-02 2001-11-22 크리스터 발스트룀, 프레드릭 베르그, 하랄트 알름 응고인자ⅷ제형을포함하는조성물,이것의제조방법및안정화제로서의계면활성제의사용방법
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
GB9301701D0 (en) 1993-01-28 1993-03-17 Biocompatibles Ltd New zwitterionic materials
GB9301702D0 (en) 1993-01-28 1993-03-17 Biocompatibles Ltd New materials
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
GB9324033D0 (en) 1993-11-23 1994-01-12 Biocompatibles Ltd Ethylenically unsaturated compounds
US5877218A (en) 1994-01-10 1999-03-02 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5681746A (en) 1994-12-30 1997-10-28 Chiron Viagene, Inc. Retroviral delivery of full length factor VIII
US5763548A (en) 1995-03-31 1998-06-09 Carnegie-Mellon University (Co)polymers and a novel polymerization process based on atom (or group) transfer radical polymerization
US6541580B1 (en) 1995-03-31 2003-04-01 Carnegie Mellon University Atom or group transfer radical polymerization
GB9521234D0 (en) 1995-10-16 1995-12-20 Biocompatibles Ltd Synthesis of polymerisable phospho diesters
WO1997014702A1 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Biocompatibles Limited Oxidation of phosphorus compounds
US5807937A (en) 1995-11-15 1998-09-15 Carnegie Mellon University Processes based on atom (or group) transfer radical polymerization and novel (co) polymers having useful structures and properties
US5663425A (en) 1996-01-26 1997-09-02 Lignotech Usa, Inc. Production of acid soluble humates
US5882644A (en) 1996-03-22 1999-03-16 Protein Design Labs, Inc. Monoclonal antibodies specific for the platelet derived growth factor β receptor and methods of use thereof
US6100071A (en) 1996-05-07 2000-08-08 Genentech, Inc. Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US5789487A (en) 1996-07-10 1998-08-04 Carnegie-Mellon University Preparation of novel homo- and copolymers using atom transfer radical polymerization
US6156884A (en) 1996-08-05 2000-12-05 Prolinx, Inc. Bifunctional boronic compound complexing reagents and complexes
JPH10139832A (ja) * 1996-11-08 1998-05-26 Nof Corp 共重合体およびグルコースセンサー
US7125938B2 (en) 1997-03-11 2006-10-24 Carnegie Mellon University Atom or group transfer radical polymerization
EP1325932B9 (en) 1997-04-07 2006-07-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US7365166B2 (en) 1997-04-07 2008-04-29 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
JP3052923B2 (ja) 1997-05-30 2000-06-19 日本油脂株式会社 （メタ）アクリレート誘導体の製造方法
ATE489461T1 (de) 1997-10-16 2010-12-15 Univ Georgia Transgene vögel und proteinproduktion
US6555593B1 (en) 1998-01-30 2003-04-29 Albemarle Corporation Photopolymerization compositions including maleimides and processes for using the same
JP4162284B2 (ja) 1998-02-04 2008-10-08 日油株式会社 洗浄剤組成物
US6121371A (en) 1998-07-31 2000-09-19 Carnegie Mellon University Application of atom transfer radical polymerization to water-borne polymerization systems
US6153655A (en) 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
US6159942A (en) 1998-06-19 2000-12-12 Bioenergy, Inc. Compositions for increasing energy in vivo
JP4145403B2 (ja) * 1998-09-29 2008-09-03 日油株式会社 免疫学的活性物質測定用高分子／酵素結合体
US6781030B1 (en) 1998-11-02 2004-08-24 Trustee Of Tufts College, Ballou Hall Methods for cloning mammals using telophase oocytes
DK1141335T3 (da) 1998-12-21 2009-11-09 Genencor Int Kemisk modificerede enzymer med multipelt ladede varianter
AU4195100A (en) 1999-04-05 2000-10-23 Research Foundation Of State University Of New York, The Graft, graft-block, block-graft, and star-shaped copolymers and methods of making them
FR2794459B1 (fr) 1999-05-19 2004-09-03 Atofina Polyalcoxyamines issues de nitroxydes beta-substitues
US8137695B2 (en) 2006-08-18 2012-03-20 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US7070959B1 (en) 1999-06-08 2006-07-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified chimeric polypeptides with improved pharmacokinetic properties
US7306799B2 (en) 1999-06-08 2007-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF inhibitors for treatment of eye disorders
CZ299516B6 (cs) 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US7754855B1 (en) 1999-07-13 2010-07-13 Bolder Biotechnology, Inc. Immunoglobulin fusion proteins
US7049373B2 (en) 1999-08-06 2006-05-23 Carnegie Mellon University Process for preparation of graft polymers
AU7025600A (en) 1999-09-08 2001-04-10 School Of Pharmacy, University Of London, The Uniform molecular weight polymers
EP2289549A3 (en) 1999-10-01 2011-06-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
US6348554B1 (en) 1999-11-30 2002-02-19 Rohmax Additives Gmbh Method for preparation of a liquid polymer composition and use of this composition
GB9928956D0 (en) 1999-12-07 2000-02-02 Malik Navid Internally supported biomimetic coating systems
IL144815A (en) 2000-08-11 2005-07-25 Sumitomo Chemical Co Process for producing carbonyl or hydroxy compound
WO2002028912A2 (en) 2000-10-06 2002-04-11 Carnegie Mellon University Preparation of nanocomposite structures by controlled polymerization
WO2002028914A2 (en) 2000-10-06 2002-04-11 Carnegie Mellon University A catalyst system for controlled polymerization
JP5005155B2 (ja) 2000-10-06 2012-08-22 カーネギー−メロン ユニバーシティ イオンモノマーの重合方法
DE60129148T2 (de) 2000-10-06 2008-02-28 Biocompatibles Uk Ltd., Farnham Zwitterionische polymere
US6979556B2 (en) 2000-12-14 2005-12-27 Genentech, Inc. Separate-cistron contructs for secretion of aglycosylated antibodies from prokaryotes
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7829084B2 (en) 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
DE60236642D1 (de) 2001-04-06 2010-07-22 Univ Carnegie Mellon Verfahren zur herstellung von nanostrukturierten materialien
US6858580B2 (en) 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
AU2002361223A1 (en) 2001-08-27 2003-03-18 Zeptosens Ag Bioanalytical recognition surface with optimised recognition element density
JP2003064132A (ja) 2001-08-28 2003-03-05 Nof Corp 重合体、製造方法および乳化・分散剤
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
SE523617C2 (sv) 2001-10-01 2004-05-04 Sandvik Ab Skär för spånavskiljande bearbetning försedd med spånbrytande geometri
WO2003031481A2 (en) 2001-10-12 2003-04-17 Carnegie Mellon University Simultaneous reverse and normal initiation of atrp
US7064166B2 (en) 2001-10-12 2006-06-20 Carnegie Mellon University Process for monomer sequence control in polymerizations
US6964859B2 (en) 2001-10-16 2005-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Suppressor tRNA system
JP4758608B2 (ja) 2001-11-07 2011-08-31 ネクター セラピューティックス 分枝ポリマーおよびそれらの結合体
US7737260B2 (en) 2003-11-13 2010-06-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
EP1465933B1 (en) 2002-01-16 2007-08-29 Biocompatibles UK Limited Polymer conjugates
WO2003074026A1 (en) 2002-03-07 2003-09-12 Biocompatibles Uk Limited Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers
DE60334779D1 (en) 2002-03-07 2010-12-16 Biocompatibles Uk Ltd Mit nucleinsäure complexierte block-copolymere
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7196142B2 (en) 2002-04-04 2007-03-27 The University Of Akron Polyisobutylene-based block anionomers and cationomers and synthesis thereof
JP4248189B2 (ja) 2002-04-09 2009-04-02 株式会社資生堂 ホスホリルコリン基含有多糖類及びその製造方法
AU2003241531A1 (en) * 2002-05-21 2003-12-12 Emory University Multivalent polymers with chain-terminating binding groups
ES2346646T5 (es) 2002-05-30 2018-02-15 The Scripps Research Institute Ligación catalizada con cobre de azidas y acetilenos
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
AU2003276847A1 (en) 2002-08-09 2004-02-25 Carnegie Mellon University Polymers, supersoft elastomers and methods for preparing the same
WO2004028569A1 (en) 2002-09-25 2004-04-08 Biocompatibles Uk Limited Polymer compositions for administration to animals
JP2006505686A (ja) 2002-11-07 2006-02-16 ロディア・シミ 両性又は双極性イオン性部分を含む制御された構造のコポリマー
US20070111279A1 (en) 2002-11-13 2007-05-17 Procell, Inc. Production of recombinant therapeutic bioscavengers against chemical and biological agents
GB0301014D0 (en) 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20060167230A1 (en) 2003-01-20 2006-07-27 Takaki Koga Anti-pci neutralizing antibody
US7820753B2 (en) 2003-02-05 2010-10-26 Biocompatibles Uk Limited Block copolymers
MY162623A (en) 2003-02-10 2017-06-30 Biogen Ma Inc Immunoglobulin formulation and method of preparation thereof
US7662387B2 (en) 2003-02-20 2010-02-16 Seattle Genetics Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EP1613272B1 (en) 2003-04-11 2013-12-18 Antriabio, Inc. Method for preparation of site-specific protein conjugates
EA009285B1 (ru) 2003-05-14 2007-12-28 Иммуноджен, Инк. Композиция конъюгированного лекарственного средства
CA2510040C (en) * 2003-05-23 2012-01-03 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymeric reagents and polymer-biomolecule conjugates comprising carbamate linkages
PE20050627A1 (es) 2003-05-30 2005-08-10 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
GB0314472D0 (en) 2003-06-20 2003-07-23 Warwick Effect Polymers Ltd Polymer
CN1208358C (zh) 2003-07-31 2005-06-29 上海交通大学 含多羟基官能团多臂星状超支化聚合物刷及其制备方法
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
EP3168304A1 (en) 2003-08-27 2017-05-17 Ophthotech Corporation Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders
KR101200729B1 (ko) 2003-09-17 2012-11-13 넥타르 테라퓨틱스 다분지형 고분자 전구약물
US20050164301A1 (en) 2003-10-24 2005-07-28 Avidia Research Institute LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
CN1925875A (zh) 2003-12-16 2007-03-07 尼克塔治疗亚拉巴马公司 化学改性的小分子
US8298532B2 (en) 2004-01-16 2012-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
KR100593443B1 (ko) 2004-02-11 2006-06-28 삼성전자주식회사 트랜지스터들 및 그 제조방법들
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
JP4727938B2 (ja) 2004-02-24 2011-07-20 泰彦 岩崎 リビングラジカル重合開始基を持つポリリン酸の製造方法および用途
DE602005027673D1 (de) 2004-03-05 2011-06-09 Vegenics Pty Ltd Materialien und verfahren für wachstumsfaktorbindende konstrukte
JP4727941B2 (ja) 2004-03-12 2011-07-20 泰彦 岩崎 生分解性重合体の製造方法および用途
US20050208093A1 (en) 2004-03-22 2005-09-22 Thierry Glauser Phosphoryl choline coating compositions
ES2741524T3 (es) 2004-03-23 2020-02-11 Ascendis Pharma Gmbh Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
US7863238B2 (en) * 2004-06-10 2011-01-04 Saint Louis University Proteins with an attached short peptide of acidic amino acids
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
CA2583208C (en) 2004-10-15 2015-08-25 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
EP2371856B1 (en) 2004-11-12 2022-05-18 Bayer HealthCare LLC Site-directed modification of FVIII
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
WO2006063055A2 (en) 2004-12-06 2006-06-15 Bolder Biotechnology, Inc. Enzyme conjugates for use as detoxifying agents
TW200635608A (en) 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
ATE369486T1 (de) 2004-12-18 2007-08-15 Haldor Topsoe As Verfahren zur regelung der zugabe eines reduktionsmittels in das abgas einer brennkraftmaschine
TW200714290A (en) 2005-03-08 2007-04-16 Pharmacia & Upjohn Co Llc Anti-M-CSF antibody compositions having reduced levels of endotoxin
US20060234347A1 (en) 2005-04-13 2006-10-19 Harding Thomas C Targeting multiple angiogenic pathways for cancer therapy using soluble tyrosine kinase receptors
EP1874844A4 (en) 2005-04-29 2010-03-24 Agency Science Tech & Res HYPERRAMIFIED POLYMERS AND THEIR APPLICATIONS
US20070005130A1 (en) 2005-06-29 2007-01-04 Thierry Glauser Biodegradable polymer for coating
WO2008020827A2 (en) 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US7893173B2 (en) 2005-08-26 2011-02-22 Carnegie Mellon University Polymerization process with catalyst reactivation
EP1968644B1 (en) 2005-12-16 2012-06-27 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of glp-1
US7906134B2 (en) * 2005-12-21 2011-03-15 Abbott Laboratories Room temperature-curable polymers
DE102006009004A1 (de) 2006-02-23 2007-09-06 Sustech Gmbh & Co. Kg Multifunktionelle sternförmige Präpolymere, deren Herstellung und Verwendung
SI1988910T1 (en) 2006-02-28 2018-02-28 Kodiak Sciences Inc. Polymeric conjugates containing acryloyloxyethylphosphorylcholine and their preparations
JP2007263935A (ja) 2006-03-30 2007-10-11 Canon Inc 磁性マーカー及びその製造方法
WO2007148230A2 (en) 2006-04-14 2007-12-27 Interface Biologics Incorporated Grafted polymers and uses thereof
JP5313129B2 (ja) 2006-05-02 2013-10-09 アロザイン， インコーポレイテッド 非天然アミノ酸置換ポリペプチド
JP5030036B2 (ja) * 2006-05-23 2012-09-19 一彦 石原 生体成分固定化ポリマー組成物および三次元架橋体
EP2038320B1 (en) 2006-06-29 2014-03-12 Life Technologies AS Particles containing multi- block polymers
US20080008736A1 (en) * 2006-07-06 2008-01-10 Thierry Glauser Random copolymers of methacrylates and acrylates
EP2041196B1 (en) 2006-07-14 2012-11-28 Biocompatibles UK Limited Polymer
KR100808116B1 (ko) 2006-08-22 2008-03-03 전남대학교산학협력단 미생물 점착 방지용 공중합체 수지 코팅재
ES2531934T3 (es) 2006-09-01 2015-03-20 Novo Nordisk Health Care Ag Glicoproteínas modificadas
JP5111016B2 (ja) 2006-11-01 2012-12-26 三井化学株式会社 表面親水性ポリオレフィン成形体およびその製造方法
EP2084527A4 (en) 2006-11-02 2011-07-27 Seattle Genetics Inc METHOD FOR TREATING NEOPLASIA, AUTOIMMUNE AND INFLAMMATORY DISEASES
JP5557373B2 (ja) 2006-11-21 2014-07-23 アボット ラボラトリーズ 薬剤溶出性コーティングにおけるテトラフルオロエチレン、ヘキサフルオロプロピレン、及びフッ化ビニリデンのターポリマーの使用
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
US7651527B2 (en) 2006-12-15 2010-01-26 Medtronic Vascular, Inc. Bioresorbable stent
US20090060906A1 (en) 2007-01-09 2009-03-05 Wyeth Anti-IL-13 antibody formulations and uses thereof
KR20090104847A (ko) 2007-02-01 2009-10-06 제넨테크, 인크. 혈관신생 억제제와의 조합 요법
EP2118150B1 (en) 2007-02-14 2015-09-23 Biocompatibles UK Limited Derivatisation of biological molecules
EP2121031B1 (en) 2007-03-12 2013-10-16 Nektar Therapeutics Oligomer-antihistamine conjugates
JP5448854B2 (ja) 2007-03-12 2014-03-19 ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション オリゴマー−プロテアーゼ阻害剤複合体
CN101053681B (zh) 2007-04-10 2010-05-19 天津大学 用于血管栓塞材料的温敏性MPC-b-NIPAM二嵌段星型共聚物及制备方法和应用
WO2008130704A2 (en) 2007-04-17 2008-10-30 Imclone Llc PDGFRβ-SPECIFIC INHIBITORS
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
US7999051B2 (en) * 2007-05-14 2011-08-16 Tyco Healthcare Group Lp Furanone copolymers
JP5019524B2 (ja) * 2007-06-01 2012-09-05 国立大学法人 東京大学 新規ポリ（メタ）アクリレート共重合体ならびに小胞体及びゴルジ体への送達方法
NZ580670A (en) 2007-06-21 2011-09-30 Univ Muenchen Tech Biological active proteins having increased in vivo and/or vitro stability
JP2009042617A (ja) 2007-08-10 2009-02-26 Canon Inc 静電荷像現像用トナー及びその製造方法
US7943370B2 (en) 2007-08-23 2011-05-17 Canon Kabushiki Kaisha Structure, target substance detection element and target substance detection kit
NZ584514A (en) 2007-10-19 2012-07-27 Genentech Inc Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
ES2400107T3 (es) 2007-10-22 2013-04-05 Merck Serono S.A. IFN-beta sencillo fusionado a un fragmento Fc de lgG mutado
JP2009114283A (ja) 2007-11-05 2009-05-28 Asahi Kasei Chemicals Corp 吸引用シートおよびそれを用いた装置
WO2009066746A1 (ja) 2007-11-22 2009-05-28 The University Of Tokyo 組織癒着防止材および関節拘縮防止材
ES2613963T3 (es) 2008-01-18 2017-05-29 Medimmune, Llc Anticuerpos manipulados con cisteína para conjugación específica de sitio
PL2842575T3 (pl) 2008-03-18 2018-02-28 Seattle Genetics, Inc. Koniugaty aurystatyny lek łącznik
SI2281006T1 (sl) 2008-04-30 2017-12-29 Immunogen, Inc. Premreževalci in njihova uporaba
EP2282720B1 (en) 2008-05-15 2013-09-11 Biocompatibles Uk Ltd. Intracellular antibody delivery
US8187623B2 (en) * 2008-06-25 2012-05-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical copolymers
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
JP2010117189A (ja) 2008-11-12 2010-05-27 Sumitomo Bakelite Co Ltd 生理活性物質固定化用基板
US8802738B2 (en) 2008-12-12 2014-08-12 University Of Massachusetts Polyesters with grafted zwitterions
US8822610B2 (en) 2008-12-22 2014-09-02 ATRP Solutions, Inc. Control over controlled radical polymerization processes
US20100158850A1 (en) 2008-12-23 2010-06-24 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer based modular platforms
WO2010111625A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for using multispecific-binding proteins comprising an antibody-receptor combination
WO2010126552A1 (en) 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent cell-binding agent drug conjugates
CA2760687A1 (en) 2009-05-01 2010-11-04 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
CN101575402B (zh) 2009-05-31 2012-06-27 中国科学院化学研究所 一种多臂星型聚合物及其制备方法
EP2260873B1 (en) 2009-06-08 2019-07-24 Biocompatibles UK Limited Pcylation of proteins
UA104626C2 (ru) 2009-06-17 2014-02-25 Эббви Биотерапеутикс Инк. Анти-vegf антитело и его применение
AU2010270979B2 (en) 2009-06-22 2015-04-23 Medimmune, Llc Engineered Fc regions for site-specific conjugation
CN102025901A (zh) 2009-09-23 2011-04-20 国基电子（上海）有限公司 相机模组及其检测方法
US20110165648A1 (en) 2009-11-04 2011-07-07 Menno Van Lookeren Campagne Co-crystal structure of factor D and anti-factor D antibody
WO2011066417A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Carnegie Mellon University Antibodies and conjugates for modulators of angiogenesis
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
EP2536753B1 (en) 2010-02-16 2017-12-20 Novo Nordisk A/S Factor viii molecules with reduced vwf binding
JP2013519699A (ja) 2010-02-16 2013-05-30 ノヴォ ノルディスク アー／エス 因子ｖｉｉｉ融合タンパク質
WO2011130694A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
JP2012025820A (ja) 2010-07-21 2012-02-09 Kansai Paint Co Ltd 親水化処理剤組成物
KR101380009B1 (ko) 2011-01-17 2014-04-02 주식회사 엘지화학 신규한 화합물 및 이를 포함하는 유기 발광 소자
JP6152090B2 (ja) 2011-04-21 2017-06-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイトＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲＡＤＯ，ａ ｂｏｄｙ ｃｏｒｐｏｒａｔｅ 視神経脊髄炎を処置するための組成物および方法
US20130071394A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 John K. Troyer Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use
WO2013059137A1 (en) 2011-10-17 2013-04-25 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
EP3539982A3 (en) 2011-12-23 2020-01-15 Pfizer Inc Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013152020A1 (en) 2012-04-03 2013-10-10 Novelmed Therapeutics, Inc. Humanized and chimeric anti-factor bb antibodies and uses thereof
JP6234064B2 (ja) 2012-05-23 2017-11-22 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析用または磁気共鳴イメージング用の造影剤、化合物、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析方法および磁気共鳴イメージング方法
JP5846044B2 (ja) 2012-05-23 2016-01-20 日油株式会社 （メタ）アクリル酸誘導体の製造方法
CN104704118A (zh) 2012-10-15 2015-06-10 诺和诺德保健Ag（股份有限公司） 凝血因子vii多肽
CN103193819A (zh) 2013-03-13 2013-07-10 苏州蔻美新材料有限公司 一锅法合成mpc的方法
PT2968461T (pt) 2013-03-13 2022-12-26 Genzyme Corp Proteínas de fusão que compreendem porções de ligação ao pdgf e ao vegf e seus métodos de utilização
AU2014274660B2 (en) 2013-06-06 2019-05-16 Pierre Fabre Médicament Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof
CN103421039B (zh) 2013-09-03 2015-12-23 重庆工商大学 2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的合成方法
PL3041513T3 (pl) 2013-09-08 2021-01-25 Kodiak Sciences Inc. Obojnaczojonowe polimerowe koniugaty czynnika viii
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
WO2015200905A2 (en) 2014-06-28 2015-12-30 Oligasis, Llc Dual pdgf/vegf antagonists
JP6849590B2 (ja) 2014-10-17 2021-03-24 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート
CN108712911A (zh) 2015-12-30 2018-10-26 科达制药股份有限公司 抗体及其缀合物
GB2551979A (en) 2016-06-30 2018-01-10 Rs Arastirma Egitim Danismanlik Llac Sanayi Ticaret Ltd Cleavable polymer drug conjugates
WO2018191548A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Kodiak Sciences Inc. Complement factor d antagonist antibodies and conjugates thereof
WO2019169341A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Kodiak Sciences Inc. Il-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11819531B2 (en) 2009-12-18 2023-11-21 Kodiak Sciences Inc. Multifunctional zwitterionic polymer conjugates
US10702608B2 (en) 2013-09-08 2020-07-07 Kodiak Sciences Inc. Factor VIII zwitterionic polymer conjugates
US11590235B2 (en) 2013-09-08 2023-02-28 Kodiak Sciences Inc. Factor VIII zwitterionic polymer conjugates
US11155610B2 (en) 2014-06-28 2021-10-26 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10363290B2 (en) 2014-10-17 2019-07-30 Kodiak Sciences Inc. Butyrylcholinesterase zwitterionic polymer conjugates
US11071771B2 (en) 2014-10-17 2021-07-27 Kodiak Sciences Inc. Butyrylcholinesterase zwitterionic polymer conjugates
US11066465B2 (en) 2015-12-30 2021-07-20 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder

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