CH652145A5 - Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. - Google Patents
Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. Download PDFInfo
- Publication number
- CH652145A5 CH652145A5 CH409/82A CH40982A CH652145A5 CH 652145 A5 CH652145 A5 CH 652145A5 CH 409/82 A CH409/82 A CH 409/82A CH 40982 A CH40982 A CH 40982A CH 652145 A5 CH652145 A5 CH 652145A5
- Authority
- CH
- Switzerland
- Prior art keywords
- human
- cells
- hybrid
- cell
- mouse
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 7
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 7
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- XEQLGWAGMYUVTR-UHFFFAOYSA-N O=C1NC=NC2=C1NC=N2.C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1 Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2.C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1 XEQLGWAGMYUVTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000009177 immunoglobulin therapy Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N meglumine amidotrizoate Chemical compound C[NH2+]C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
- C12N5/166—Animal cells resulting from interspecies fusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
Description
652145
PATENTANSPRUCH 1. Verfahren zur Herstellung von Zellinien, die menschliche Antikörper über längere Zeit produzieren, dadurch gekennzeichnet, dass man Mäuse-Menschen-Hybridome erzeugt, aus den erhaltenen Hybriden die Klone mit raschem Wachstum ohne Antikörperproduktion selektioniert, dann weiter auf «drug»-Resistenz selektioniert, anschliessend erneut mit menschlichen Lymphozyten fusioniert und aus den so erhaltenen Zellpopulationen das gewünschte Hybrid selektioniert.
In einem konventionellen Antiserum kann man normalerweise eine grosse Zahl von Antikörpern finden, die alle mit dem gleichen Antigen aufgrund ihrer unterschiedlichen Aminosäuresequenz im Bereich der Bindungsstelle mit mehr oder weniger hoher Affinität reagieren. Darüber hinaus enthält es eine grosse Menge von Antikörpern gegen Antigene, die die früheren Erfahrungen des Individuums, in dem das Antiserum produziert wurde, wiedergeben. Für die meisten Verwendungszwecke sind solche Antisera sicherlich ausreichend, aber neuere Entwicklungen der Wissenschaft machen höhere Anforderungen bezüglich Spezifität und Reproduzierbarkeit notwendig. Eine elegante, inzwischen bereits klassische Lösung wurde von Köhler und Milstein beschrieben, die Mäuse-Milz-Lymphozyten von immunisierten Tieren mit «drug»-sensitiven Mäuse-Myelom-Zellen erfolgreich fusionierten. Es gelang, die durch Fusion immortalisierten Zellen in vitro zu klonen und zu züchten, d.h. es wurde eine homogene Zellpopulation erhalten, die eine homogene Antikörperpopulation produzierte. Durch entsprechende Selektion dieser Zellklone aus den erhaltenen vielen Einzelzellklonen konnten die Zellen weitergezüchtet werden, welche einen Antikörper mit der gewünschten Antigenspezifität sezer-nieren.
Die auf diese Weise hergestellten Mäuseantikörper sind in Forschungs- und Diagnostikaanwendungen ausserordentlich wichtig und einige werden bereits therapeutisch am Menschen untersucht. Es würde jedoch einen wesentlichen Fortschritt für die Immunglobulintherapie bedeuten, wenn auch menschliche Antikörper mit ähnlichen Methoden erhalten werden könnten. Damit würde der Gefahr einer Sensibilisierung vorgebeugt. Einige Versuche, das Problem der Herstellung menschlicher Antikörper in vitro zu lösen, wurden bereits unternommen.
Die Transformation von normalen menschlichen Lymphozyten mit Epstein-Barr-Virus ist nicht sehr erfolgreich, da der Prozess sehr langwierig ist und auch das Klonen und Selek-tionieren sich sehr schwierig gestaltet. Fusionierung von normalen Lymphozyten mit menschlichen Myelomzellen scheint die naheliegende Analogie zum Mäuse-Verfahren darzustellen. Das Problem dabei besteht jedoch darin, dass im menschlichen System nur eine einzige Myelomzell-Linie existiert und diese Zell-Linie weltweit mykoplasmakontaminiert ist (Mykoplasmen verhindern eine erfolgreiche Fusionierung). Die Fusionierung von normalen Lymphozyten mit einer EBV-transformierten menschlichen Lymphoblastoid-B-Zell-Linie ist wahrscheinlich das zuverlässigste und reproduzierbarste Verfahren, das bisher beschrieben wurde. Es leidet jedoch an den grundlegenden in vitro-Charakteristika der Lymphoblastoid-Zellen: sie sind sehr schwer zu klonen und, da sie ein früheres Stadium in der B-Zellendifferenzierung darstellen, ist die Kapazität der Hybride, Antikörper zu produzieren und zu sezernieren, wahrscheinlich zehnmal geringer als für eine richtige Myelomzelle. Die Fusionierung von menschlichen Lymphozyten mit Mäuse-Myeloma bringt
Zellen mit den gleichen ausgezeichneten in vitro-Charakteristika wie die Mäuse-Hybridomas hervor, jedoch mit einem grossen Nachteil: Mäuse-Menschen-Hybride sind genetisch unstabil, und es ist in diesem Zusammenhang speziell nachteilig, dass sie das menschliche Chromosom, das die Information für die Synthese der leichten Ketten des Immunglobulin-Moleküls trägt, ausstösst.
Erfindungsgemäss wurden nun «drug»-resistente Mäuse-Menschen-Hybridome erzeugt, die ihre Antikörperproduktionskapazität verloren haben, und so eine «menschliche» Mäuse-Myelomzelle konstruiert, die eine freundlichere Umgebung für weitere menschliche Chromosomen darstellt. Eine derartige Zelle zeigt höhere Stabilität beim Erhalten der Antikörperproduktion.
Die Erfindung betrifft somit ein Verfahren zur Herstellung von Zellinien, die menschliche Antikörper über längere Zeit produzieren, dadurch gekennzeichnet, dass man Mäuse-Menschen-Hybridome erzeugt, aus den erhaltenen Hybriden die Klone mit raschem Wachstum ohne Antikörperproduktion selektioniert, dann weiter auf «drug»-Resistenz selektioniert, anschliessend erneut mit menschlichen Lymphozyten fusioniert und aus den so erhaltenen Zellpopulationen das gewünschte Hybrid selektioniert.
Die SP/2-Zell-Linie, ursprünglich ein Hybridom zwischen der P3-X63-Ag8-Linie und Mäuse-Milz-Zellen, die Antikörper gegen rote Schafblutzellen bilden, ist bekannt (M. Shulmann et al., Nature 276/269 [1978]) und besitzt keine Fähigkeit zur Bildung von Antikörpern. Sie wurde mit normalen menschlichen peripheren Lymphozyten nach bekannten Verfahren, wie sie z.B. von G. Galfre et al., Nature 266/550 (1977) und R. Nowinski et al., Science 210/537 (1980) beschrieben sind fusioniert. Es wurde eine grosse Anzahl von Hybriden erhalten, und nach ungefähr fünf Wochen wurden fünf Klone selektioniert, die rasches Wachstum ohne Antikörperproduktion zeigten. Diese Zellen wurden dann auf Resistenz gegen 8-Azaguanin selektioniert, und mit drei dieser Linien war es möglich, Mutanten zu erhalten, die gegen 20 [ig/ml von 8-Anzaguanin resistent waren. Diese Zellen waren dann sensitiv gegen Hypoxanthin-Aminopterin-Thymidin(HAT)-Medium, was zeigte, dass sie die Fähigkeit zur Erzeugung von Hypoxanthin-Phosphori-bosyl-Transferase verloren hatten.
Eine dieser Linien (SPAZ-4) wurde in vitro mit menschlichen Tonsillarlymphozyten fusioniert. Für 108 Tonsillar-zellen werden 2 x 107 Myelomzellen eingesetzt. Die Fusionierung wurde nach Standardmethoden durchgeführt. Parallel dazu wurde auch die SP/2-Zell-Linie fusioniert, um so die Möglichkeit eines Vergleichs der beiden Zell-Linien zu erhalten. Die so erhaltenen Zellpopulationen wurden in HAT-Medium (HAT = Hypoxanthin/Aminopterin/Thy-midin) inkubiert, um Hybride zu selektionieren. Nachdem alle Zellen in den nicht fusionierten Kontrollkulturen abgestorben waren, wurde das HAT-Medium durch ein normales, nicht selektives Wachstumsmedium ersetzt.
Nach zwei Wochen wurde der erste Versuch zur Antikörperproduktion durchgeführt, und es wurde festgestellt, dass alle Kulturen aller Fusionierungen menschliche Antikörper produzierten. Als allerdings vier Wochen später die Kulturen nochmals getestet wurden, stellte sich heraus, dass 83% der SPAZ-4-Hybridomas immer noch produzierten, während nur 55% der SP/2-Hybridomas ihre Synthesefähigkeit behielten. Eine Produktion mit hoher Ausbeute wurde für 28% der SPAZ-4-Linien, jedoch nur für 3% der SP/2-Linien gefunden.
Unter Berücksichtigung, dass der Verlust der Antikörpersekretion zum Grossteil durch den Verlust des Genoms, das für die leichten Ketten codiert, erklärt werden kann, wurde ein spezifischer Test für die Produktion von leichten Ketten
2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
3
652145
durchgeführt. Es wurde gefunden, dass 67% der SPAZ-4-Zellen Kappa-Ketten und 88% Lambda-Ketten produzierten. Für SP/2 betrugen diese Werte 39% bzw. 61% (es muss dabei daraufhingewiesen werden, dass diese prozentuellen Angaben nur innerhalb jedes einzelnen Experiments und nur für jede einzelne Art von Immunglobulinproduktion vergleichbar sind). Die Ergebnisse sind in der Tabelle 1 zusam-mengefasst. Es kann aus der Tabelle entnommen werden, dass SPAZ-4 in allen Fällen SP/2 überlegen ist, speziell wenn man die Werte für eine «starke» Produktion betrachtet, welche allein von praktischer Bedeutung sind.
Alle diese Versuche wurden mit nicht geklonten Zellen durchgeführt, um so den Selektivdruck gegen die stabilen Klone zu maximieren (die stabilen Klone tragen mehr genetisches Material und wachsen immer weniger gut als Zellen, die ihre «unnötigen» Chromosome bereits ausgestossen haben). Es wurden Versuche durchgeführt, auch diese Zellen zu klonen. Die Ergebnisse weisen daraufhin, dass kein einziges stabiles und produzierendes SP/2-Hybrid erhalten wurde (dies wurde aus der Abwesenheit von Linien geschlossen, wo alle Kulturen, die Wachstum zeigen, auch Antikörperproduktion besitzen). In der SPAZ-4-Linie wurden dagegen einige wenige Klone erhalten, die diese Kriterien erfüllen.
Das hier beschriebene erfindungsgemässe Verfahren ist substantiell besser als die literaturbekannten Methoden, da zumindest ein Teil des Instabilitätsproblems gelöst ist. Es muss dabei auch noch daraufhingewiesen werden, dass auch die konventionellen Maus-Maus-Hybridome nicht sehr stabil sind und auch langwieriges Subklonieren immer notwendig ist. Das Ausmass der Instabilität von SPAZ-4-Hybridomas liegt etwa in der gleichen Grössenordnung wie die der Maus-Maus-Hybridome, dass heisst, dass das Arbeiten mit ihnen praktikabel ist.
Die Verwendung von Heterokaryonten macht es möglich, stabile, rasch wachsende, leicht klonierbare und gut produzierende Hybridome herzustellen, welche monoklonale Humanantikörper erzeugen.
In dem nachfolgenden Beispiel, das die Erfindung näher erläutern, ihren Umfang aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.
Beispiel:
Herstellung der SPAZ-4-Zellinie
Aus dem Heparinblut eines gesunden Donors werden periphere Blutlymphozyten (PBL's) mittels Zentrifugation über Ficoll-Isopaque isoliert. Nach dem Waschen werden 108 PBL's mit 5 x 107 SP/2-Zellen in 50 ml Dulbeccos H21 Medium, eingestellt auf pH=8, gemischt. Die Zellen werden 5 Minuten bei 600 g zusammen pellettieri: und der Überstand sorgfältig entfernt. Bei 37° wird 1 ml von 50% PEG 4000 in H21 Medium langsam im Verlauf von 1 Minute zugegeben. Weitere 10 ml von H21 Medium werden dann während 2 Minuten zugemischt. Die Zellen werden dann pellettieri und in 55 ml HAT Medium suspendiert [HAT: Dulbeccos H21 mit 20% fötalem Kälberserum (FCS), 10% NCTC 109,1% nicht essentielle Aminosäuren, 0,5% Pyruvat, 0,2 U/ml Insulin, 1 mM Oxalessigsäure, 10-4 M Hypoxanthin, 4 x 10~7 M Ami-nopterin und 1,6 x 10~3 M Thymidin], Anschliessend wird die Suspension aufgeteilt in 528 0,1 ml Kulturen in Flach-Boden Mikrotiter Gewebekultur-Platten. Frisches HAT-Medium wird alle 3 bis 5 Tage zwei Wochen lang zugegeben, danach wird zu HT-Medium (Dulbecco H21 mit 10% FCS, 10~4 M Hypoxanthin und 1,6 x 10~3 M Thymidin) gewechselt.
Nach dem 15. Tag werden Proben aus den Überständen für den Test auf Produktion von humanen Antikörpern ent-s nommen. Fünf Kulturen zeigen gutes Wachstum ohne Antikörperbildung. Diese werden für die Weiterentwicklung von 8-Azaguanin-resistenten Sublinien verwendet.
Von diesen Zellinien werden jeweils 2 x 105 Zellen/ml in Dulbeccos H21 Medium mit 10% FCS und 20 /ig/ml 8-Aza-lo guanin inkubiert. Aus dreien dieser Kulturen ist es möglich, nach wenigen Wochen resistente Zellklone zu isolieren. Mit einem dieser HAT-sensitiven Klone, der SPAZ-4-Zellinie, wurden die weiteren Versuche durchgeführt.
15 Fusion mit Lymphozyten aus Tonsillen
Aus den Tonsillen eines Kindes wird wird eine Einzelzellsuspension präpariert und die Lymphozyten über Ficoll Hypaque Fraktionierung gewonnen. Von dieser Zellpopulation werden 10® Zellen mit 2 x 107 SPAZ-4- oder SP/2-Zellen 20 nach dem zuvor beschriebenen Verfahren fusioniert. Die Zellen werden dann auf47 0,5 ml Kulturen in HAT Medium verteilt, die in diesem Fall zusätzlich mit 0,5 /ig/ml Cyclo-sporin A supplementiert sind. Nach einem Tag wird 1 ml HAT Medium ohne Cyclosporin A zugegeben. Am dritten 25 Tag werden 50% des Mediums durch HT Medium ausgetauscht. Medium-Wechsel mit HT Medium wird dann alle 3 bis 5 Tage durchgeführt.
Test auf Antikörperproduktion 30 Für das Screening wird ein ELISA-System («Enzym-linked Immunosorbend Assay») verwendet. Kaninchen-anti-human-Immunglobulin wird auf Nunc ELISA Mikrotiter-platten in einer Verdünnung von 1:400 in einem Bikarbonat-Puffer pH 9,6 gebunden. Nach dem Waschen werden die 35 Kulturüberstände für 30 Minuten bei 37° in diesen Platten inkubiert. Nach erneutem Waschen wird mit Peroxidase Konjugaten Kaninchen-anti-human IgG, IgM, IgA Reagenz (Miles-Yeda) mit einer Verdünnung von 1:400 inkubiert. Nach erneutem Waschen wird die gebundene Konjugat-40 menge durch Reaktion mit 1,2-Phenylendiaminodihydro-chlorid und H2O2 bestimmt. Produktion von leichten Anti-körper-Ketten wird mit einem analogen Test unter Verwendung eines Ziegen-anti-human-Lambda- oder Ziegen-anti-human-Kappa Peroxydase Konjugats (Tago) bei einer Ver-45 dünnung von 1:3000 durchgeführt.
Die Extinktionen werden mit einem Titertek Multiscan ELISA-Photometer bestimmt. Die Werte 4 bzw. 7 in der Tabelle I beziehen sich auf schwache bzw. starke Extinktionswerte.
50
Tabelle I
Zellen
Wochen Immunglobulin % Kappa °/o
Lambda %
55
60
4
7
4
7 4
7
SPAZ-4
4
83
28
SP/2
4
55
3
SPAZ-4
5
67
25 88
46
SP/2
5
39
13 61
17
SPAZ-4
6
36
9
SP/2
6
25
2
B
Priority Applications (19)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH409/82A CH652145A5 (de) | 1982-01-22 | 1982-01-22 | Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. |
DE19833301249 DE3301249A1 (de) | 1982-01-22 | 1983-01-15 | Verfahren zur herstellung von humanen monoklonen antikoerpern |
GB08301384A GB2113715B (en) | 1982-01-22 | 1983-01-19 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
US06/459,731 US4634664A (en) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
DK23183A DK23183A (da) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Fremgangsmaade til fremstilling af humane monoclonale antistoffer |
SE8300290A SE502344C2 (sv) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Hybridomcellinje med förmåga att producera monoklonala antikroppar jämte sätt att framställa cellinjen |
FI830190A FI83538C (fi) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Foerfarande foer produktion av en hybridomcellinje. |
IL67721A IL67721A (en) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Hybridoma cell lines,their preparation and their use for the production of human monoclonal antibodies |
FR8300850A FR2522679B1 (fr) | 1982-01-22 | 1983-01-20 | Procede pour la production d'anticorps monoclonaux humains |
IT19234/83A IT1160468B (it) | 1982-01-22 | 1983-01-21 | Procedimento per la produzione di anticorpi monoclonali umani |
JP58009241A JPS58128323A (ja) | 1982-01-22 | 1983-01-21 | ヒトモノクロ−ン抗体の製造法 |
AT0019583A AT388932B (de) | 1982-01-22 | 1983-01-21 | Hybridomazellinie und verfahren zu deren herstellung |
MY169/87A MY8700169A (en) | 1982-01-22 | 1987-12-30 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
SG281/89A SG28189G (en) | 1982-01-22 | 1989-04-27 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
KE3884A KE3884A (en) | 1982-01-22 | 1989-05-16 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
HK525/89A HK52589A (en) | 1982-01-22 | 1989-06-29 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
CY1488A CY1488A (en) | 1982-01-22 | 1989-12-08 | Process for the production of human mono-clonal antibodies |
JP2267500A JPH03236794A (ja) | 1982-01-22 | 1990-10-03 | ヒトモノクローン抗体の製造法 |
JP3157731A JPH0789909B2 (ja) | 1982-01-22 | 1991-05-30 | ハイブリドーマセルラインの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH409/82A CH652145A5 (de) | 1982-01-22 | 1982-01-22 | Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CH652145A5 true CH652145A5 (de) | 1985-10-31 |
Family
ID=4186382
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CH409/82A CH652145A5 (de) | 1982-01-22 | 1982-01-22 | Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4634664A (de) |
JP (3) | JPS58128323A (de) |
AT (1) | AT388932B (de) |
CH (1) | CH652145A5 (de) |
CY (1) | CY1488A (de) |
DE (1) | DE3301249A1 (de) |
DK (1) | DK23183A (de) |
FI (1) | FI83538C (de) |
FR (1) | FR2522679B1 (de) |
GB (1) | GB2113715B (de) |
HK (1) | HK52589A (de) |
IL (1) | IL67721A (de) |
IT (1) | IT1160468B (de) |
KE (1) | KE3884A (de) |
MY (1) | MY8700169A (de) |
SE (1) | SE502344C2 (de) |
SG (1) | SG28189G (de) |
Families Citing this family (170)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1247538A (en) * | 1982-05-21 | 1988-12-28 | Mark C. Glassy | Human-human hybridomas for solid tumors |
US4613576A (en) * | 1983-03-09 | 1986-09-23 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Human monoclonal antibodies to cancer cells |
EP0148644A3 (de) * | 1984-01-06 | 1987-06-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fusionspartner und seine Produkte |
US4634666A (en) * | 1984-01-06 | 1987-01-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Human-murine hybridoma fusion partner |
US4764465A (en) * | 1984-04-26 | 1988-08-16 | Cetus Corporation | Human monoclonal antibody against group A red blood cells |
US4950595A (en) * | 1984-09-28 | 1990-08-21 | Teijin Limited | Mouse-human hybridoma which produces antivirus-human antibody, process for preparation thereof, and antivirus-human monoclonal antibody |
JPS6187630A (ja) * | 1984-10-08 | 1986-05-06 | Teijin Ltd | 単純ヘルペスウイルスに対するヒトモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
US4693975A (en) * | 1984-11-20 | 1987-09-15 | The Wistar Institute | Human hybridroma fusion partner for production of human monoclonal antibodies |
JPS61155398A (ja) * | 1984-12-28 | 1986-07-15 | Teijin Ltd | 抗緑膿菌ヒトモノクロ−ナル抗体及びその製造法並びにそれを有効成分とする治療剤 |
US4677070A (en) * | 1985-04-26 | 1987-06-30 | Cetus Corporation | Pseudomonas aeruginosa exotoxin A antibodies, their preparation and use |
USH1198H (en) | 1985-04-26 | 1993-06-01 | Cetus Corporation | Pseudomonas aeruginosa type-specific human monoclonal antibodies, their preparation and use |
CH670098B (de) * | 1985-05-23 | 1989-05-12 | ||
JPH0720885B2 (ja) * | 1985-09-27 | 1995-03-08 | 帝人株式会社 | 単純ヘルペスウイルス感染症の予防又は治療剤 |
NZ218499A (en) * | 1985-12-10 | 1990-04-26 | Genetic Systems Corp | Monoclonal antibodies against pseudomonas aeruginosa, pharmaceutical compositions and detection methods |
AU7281787A (en) * | 1986-04-01 | 1987-10-20 | Genelabs Incorporated | Immortalized cells which produce tissue-specific products |
AU613310B2 (en) * | 1986-04-01 | 1991-08-01 | Genelabs Incorporated | Immortalized virus-specific tissue cells |
US5565354A (en) * | 1986-09-05 | 1996-10-15 | Sandoz Ltd. | Production of human monoclonal antibodies specific for hepatitis B surface antigen |
US5646041A (en) * | 1987-02-12 | 1997-07-08 | Harfeldt; Elisabeth | Monoclonal antibody to herpes simplex virus and cell line producing same |
US5001065A (en) * | 1987-05-27 | 1991-03-19 | Cetus Corporation | Human cell line and triomas, antibodies, and transformants derived therefrom |
JPH01101896A (ja) * | 1987-10-14 | 1989-04-19 | Teijin Ltd | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法 |
US5215913A (en) * | 1987-11-30 | 1993-06-01 | Roger Williams General Hospital | IgG-1 human monoclonal antibody reactive with an HIV-1 antigen and methods of use |
IT1226477B (it) * | 1988-07-04 | 1991-01-16 | Genetik Mab S R L | Linee cellulari n omas quale un mezzo per immortalare cellule produttrici di sostanze di qualunque specie animale. |
US5770429A (en) * | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US7041871B1 (en) | 1995-10-10 | 2006-05-09 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
JP2535455B2 (ja) * | 1991-02-07 | 1996-09-18 | 帝人株式会社 | サイトメガロウイルスに対するヒト・モノクロ―ナル抗体を産生するハイブリド―マ |
ATE243747T1 (de) * | 1991-07-15 | 2003-07-15 | Wellcome Found | Herstellung von antikörpern |
JPH05276984A (ja) * | 1991-09-05 | 1993-10-26 | Teijin Ltd | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ |
JPH05260961A (ja) * | 1992-05-21 | 1993-10-12 | Teijin Ltd | サイトメガロウイルスに対するヒト・モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ |
DE69328135D1 (de) * | 1992-06-26 | 2000-04-27 | Aetsrn | Menschliche monoklonale Antikörper gegen Rhesus D und Zellinien die diese produzieren |
EP0583980A1 (de) * | 1992-08-20 | 1994-02-23 | Eli Lilly And Company | Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern aus Kaninchen |
CZ116495A3 (en) * | 1992-11-06 | 1996-05-15 | Sandoz Ltd | Production of human monoclonal antibodies against hepatitis b surface antigen |
US5750106A (en) * | 1993-01-28 | 1998-05-12 | Novartis Ag | Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus |
US6046310A (en) * | 1996-03-13 | 2000-04-04 | Protein Design Labs., Inc. | FAS ligand fusion proteins and their uses |
ES2331595T3 (es) | 1997-02-07 | 2010-01-08 | The Government Of The Usa As Represented By The Secretary Of Department Of Health And Human Services | Factor neurotrofico dependiente de actividad iii (adnf iii). |
US7179892B2 (en) | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US6197582B1 (en) * | 1998-03-18 | 2001-03-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Development of human monoclonal antibodies and uses thereof |
UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
AU1456101A (en) * | 1999-11-03 | 2001-05-14 | Maxygen, Inc. | Antibody diversity generation |
US7060802B1 (en) * | 2000-09-18 | 2006-06-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Tumor-associated marker |
PE20020574A1 (es) | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
JP2005502322A (ja) | 2001-04-19 | 2005-01-27 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | 非天然アミノ酸のインビボ組込み |
US7084257B2 (en) * | 2001-10-05 | 2006-08-01 | Amgen Inc. | Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
AU2002340167A1 (en) * | 2001-10-11 | 2003-06-17 | Protein Design Labs Inc. | Anti-hla-dr antibodies and the methods of using thereof |
AU2003304411A1 (en) | 2002-08-01 | 2005-03-07 | The Regents Of The University Of California | Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins |
US8506959B2 (en) | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
WO2008103472A2 (en) | 2007-02-23 | 2008-08-28 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
TW200509968A (en) | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
US7321065B2 (en) * | 2003-04-18 | 2008-01-22 | The Regents Of The University Of California | Thyronamine derivatives and analogs and methods of use thereof |
US7709610B2 (en) | 2003-05-08 | 2010-05-04 | Facet Biotech Corporation | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
US20050025763A1 (en) | 2003-05-08 | 2005-02-03 | Protein Design Laboratories, Inc. | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
PT1633189T (pt) | 2003-05-19 | 2017-10-04 | Prothena Biosciences Ltd | Fragmentos truncados de alfa-sinucleína em doença com corpos de lewy |
US7358331B2 (en) | 2003-05-19 | 2008-04-15 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease |
EP2581093B1 (de) | 2003-06-16 | 2015-03-18 | MedImmune, LLC | Influenza-Hämagglutinin- und Neuraminidase-Varianten |
EP1636340A4 (de) | 2003-06-18 | 2009-02-11 | Scripps Research Inst | Ergänzungen zum genetischen code von unnatürlichen reaktiven aminosäuren |
ES2525672T3 (es) | 2004-05-25 | 2014-12-29 | Medimmune, Llc | Variantes de la hemaglutinina y la neuraminidasa de influenza |
US7973134B2 (en) * | 2004-07-07 | 2011-07-05 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in anaplastic large cell lymphoma signaling pathways |
MX2007001679A (es) | 2004-08-09 | 2007-05-23 | Elan Pharm Inc | Prevencion y tratamiento de la enfermedad sinucleinopatica y amiloidogenica. |
US7935790B2 (en) * | 2004-10-04 | 2011-05-03 | Cell Singaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in T-cell receptor signaling pathways |
US7807789B2 (en) * | 2004-12-21 | 2010-10-05 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in EGFR-signaling pathways |
JP4993750B2 (ja) | 2005-01-27 | 2012-08-08 | チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド | 髄膜炎菌に起因する疾患に対する広域防御のための、gna1870を基にした小胞ワクチン |
WO2007094754A2 (en) | 2005-01-27 | 2007-08-23 | The Regents Of The University Of Califordnia | Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins |
EP1856271A4 (de) | 2005-03-08 | 2009-11-18 | Medimmune Vaccines Inc | Influenza-hämagglutinin- und neuraminidase-varianten |
US20090099340A1 (en) * | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
CN109187944A (zh) * | 2005-08-02 | 2019-01-11 | 埃克斯生物科技公司 | 使用IL-1α自身抗体诊断、治疗和预防血管疾病 |
WO2007027906A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in leukemia signaling pathways |
US20100151495A9 (en) * | 2005-08-31 | 2010-06-17 | Cell Signaling Technolgy, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
DOP2006000277A (es) | 2005-12-12 | 2007-08-31 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización |
CA2638774C (en) | 2006-03-31 | 2015-11-24 | Medarex, Inc. | Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies |
CN101466828B (zh) | 2006-04-13 | 2011-12-21 | 株式会社医学生物学研究所 | 融合伴侣细胞 |
US20090298093A1 (en) * | 2006-04-27 | 2009-12-03 | Roberto Polakiewicz | Reagents for the Detection of Protein Phosphorylation in ATM & ATR Kinase Signaling Pathways |
US20110008282A1 (en) * | 2006-05-15 | 2011-01-13 | Xbiotech, Inc. | IL-1alpha immunization induces autoantibodies protective against atherosclerosis |
CN102580086A (zh) * | 2006-05-22 | 2012-07-18 | 埃克斯生物科技公司 | 使用抗IL-1α抗体治疗癌症 |
ES2612383T3 (es) | 2006-07-19 | 2017-05-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | WSX-1/IL-27 como una diana para respuestas antiinflamatorias |
US7939636B2 (en) * | 2006-08-11 | 2011-05-10 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in c-Src signaling pathways |
US20090258442A1 (en) * | 2006-08-31 | 2009-10-15 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
US8652782B2 (en) | 2006-09-12 | 2014-02-18 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids |
US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
US8080645B2 (en) * | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
WO2008083169A2 (en) * | 2006-12-26 | 2008-07-10 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for the treatment of immunologic disorders |
WO2008083239A2 (en) * | 2006-12-27 | 2008-07-10 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for stimulating an immune response |
US7989173B2 (en) | 2006-12-27 | 2011-08-02 | The Johns Hopkins University | Detection and diagnosis of inflammatory disorders |
US20090142342A1 (en) * | 2006-12-27 | 2009-06-04 | Johns Hopkins University | B7-h4 receptor agonist compositions and methods for treating inflammation and auto-immune diseases |
DK2118300T3 (en) | 2007-02-23 | 2015-07-13 | Prothena Biosciences Ltd | PREVENTION AND TREATMENT OF SYNUCLEINOPATHIC AND AMYLOIDOGENIC DISEASE |
US20090081659A1 (en) | 2007-03-07 | 2009-03-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
EP1975184A3 (de) | 2007-03-26 | 2008-11-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Serin- oder Threonin-Phosphorylationsorte |
US20080238709A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-02 | Faramarz Vaziri | One-way communication apparatus with dynamic key generation |
US7977462B2 (en) | 2007-04-19 | 2011-07-12 | Cell Signaling Technology, Inc. | Tyrosine phosphorylation sites |
EP1983002A3 (de) | 2007-04-19 | 2009-03-11 | Peter Hornbeck | Tyrosinphosphorylations-Stellen und spezifische Antikörper |
EP1983003A3 (de) | 2007-04-19 | 2009-03-11 | Peter Hornbeck | Tyrosinphosphorylationsstellen und spezifische Antikörper |
US20090053831A1 (en) | 2007-05-01 | 2009-02-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Tyrosine phosphorylation sites |
WO2009020923A1 (en) | 2007-08-03 | 2009-02-12 | Musc Foundation For Research Development | Human monoclonal antibodies and methods for producing the same |
WO2009021754A2 (en) | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Monospecific and multispecific antibodies and method of use |
US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
US9683256B2 (en) | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
EP2772267B1 (de) | 2007-08-27 | 2016-04-27 | Longhorn Vaccines and Diagnostics, LLC | Immunogene Zusammensetzungen und Verfahren |
US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
US11041216B2 (en) | 2007-10-01 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
CA2861667C (en) | 2007-10-01 | 2017-06-13 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system and methods of use |
WO2009044213A1 (en) | 2007-10-05 | 2009-04-09 | National Institute For Bioprocessing Research And Training | Glycosylation markers for pancreatitis, sepsis and pancreatic cancer |
EP2062920A3 (de) | 2007-11-21 | 2009-06-17 | Peter Hornbeck | Proteinphosphorylation durch basophilische Serin-/Threonin-Kinasen in Insulinsignalisierungspfaden |
US20090169549A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-07-02 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Conformational isomers of alpha-synuclein, antibodies thereto and methods of their manufacture and use |
US20090220991A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in leukemia signaling pathways |
EP2274437B1 (de) | 2008-04-10 | 2015-12-23 | Cell Signaling Technology, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur erkennung von egfr-mutationen bei krebs |
NZ590033A (en) | 2008-05-30 | 2011-08-26 | Xbiotech Inc | Interleukin-1alpha antibodies and methods of use |
CN102112878A (zh) * | 2008-06-06 | 2011-06-29 | 国立大学法人富山大学 | 用于检测流感病毒的装置 |
CA2730408A1 (en) | 2008-07-11 | 2010-01-14 | Chin-Fen Yang | Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants |
EP2326347A4 (de) * | 2008-09-12 | 2013-03-06 | Xbiotech Inc | Targeting krankheitserregender monozyten |
WO2010085590A1 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Biosynexus Incorporated | Opsonic and protective antibodies specific for lipoteichoic acid gram positive bacteria |
BRPI1008549A2 (pt) | 2009-02-12 | 2016-03-15 | Medimmune Llc | variantes de neuraminidase e hemaglutinina de influenza |
US9309325B2 (en) | 2009-05-07 | 2016-04-12 | The Regents Of The University Of California | Antibodies and methods of use thereof |
WO2011026122A2 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Amplimmune, Inc. | B7-h4 fusion proteins and methods of use thereof |
US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
KR20180086297A (ko) | 2010-06-18 | 2018-07-30 | 엑스바이오테크, 인크. | 관절염 치료 |
EP3443985B1 (de) | 2010-08-23 | 2020-12-16 | XBiotech, Inc | Behandlung von neoplasieerkrankungen |
SG190938A1 (en) | 2010-12-06 | 2013-07-31 | Seattle Genetics Inc | Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer |
KR20190090046A (ko) | 2011-04-01 | 2019-07-31 | 엑스바이오테크, 인크. | 피부과학적 병리의 치료 |
US9724409B2 (en) | 2011-04-01 | 2017-08-08 | Xbiotech, Inc. | Treatment of inflammatory skin disease |
MX356808B (es) | 2011-09-23 | 2018-06-14 | Xbiotech Inc | Uso de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-il-1a para el tratamiento de la caquexia. |
CA2863083C (en) | 2012-01-26 | 2023-09-19 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
US20130309223A1 (en) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Seattle Genetics, Inc. | CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer |
UA105278C2 (ru) | 2012-09-06 | 2014-04-25 | Інститут Біології Клітини Нан України | Способ получения каталитически активных антител (абзимов) с сиалидазной активностью |
US9545441B2 (en) | 2012-09-18 | 2017-01-17 | Xbiotech, Inc. | Treatment of diabetes |
KR102296017B1 (ko) | 2012-10-04 | 2021-09-01 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 혈관 질환 및 이에 따른 합병증 치료 |
UA118441C2 (uk) | 2012-10-08 | 2019-01-25 | Протена Біосаєнсиз Лімітед | Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн |
AU2014248515B2 (en) | 2013-03-13 | 2019-03-07 | Prothena Biosciences Limited | Tau immunotherapy |
WO2015003114A1 (en) | 2013-07-05 | 2015-01-08 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Soluble mic neutralizing monoclonal antibody for treating cancer |
US9850302B2 (en) | 2013-07-12 | 2017-12-26 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies that recognize IAPP |
US9951131B2 (en) | 2013-07-12 | 2018-04-24 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies that recognize IAPP |
EP3760639A1 (de) | 2013-09-08 | 2021-01-06 | Kodiak Sciences Inc. | Zwitterionische polymerkonjugate |
WO2015136469A1 (en) | 2014-03-12 | 2015-09-17 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
EP3116907A1 (de) | 2014-03-12 | 2017-01-18 | Prothena Biosciences Limited | Für lg4-5 spezifische anti-laminin4-antikörper |
KR20160131082A (ko) | 2014-03-12 | 2016-11-15 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | Lg1-3에 특이적인 항-라미닌4 항체 |
TW201623331A (zh) | 2014-03-12 | 2016-07-01 | 普羅帝納生物科學公司 | 抗黑色素瘤細胞黏著分子(mcam)抗體類及使用彼等之相關方法 |
US10562973B2 (en) | 2014-04-08 | 2020-02-18 | Prothena Bioscience Limited | Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein |
US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
US20160075772A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva |
KR20210013299A (ko) | 2014-10-17 | 2021-02-03 | 코디악 사이언시스 인코포레이티드 | 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트 |
TWI769570B (zh) | 2015-01-28 | 2022-07-01 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
TWI786505B (zh) | 2015-01-28 | 2022-12-11 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
TWI718121B (zh) | 2015-01-28 | 2021-02-11 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
EP3288976B1 (de) | 2015-04-29 | 2020-04-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Behandlung von fibrodysplasia ossificans progressiva |
CA2985652C (en) | 2015-05-14 | 2020-03-10 | Gerald W. FISHER | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
JP2018530540A (ja) | 2015-09-16 | 2018-10-18 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | 巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防のための抗mcam抗体の使用 |
WO2017046774A2 (en) | 2015-09-16 | 2017-03-23 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of giant cell arteritis, polymyalgia rheumatica or takayasu's arteritis |
RU2744860C2 (ru) | 2015-12-30 | 2021-03-16 | Кодиак Сайенсиз Инк. | Антитела и их конъюгаты |
WO2017149513A1 (en) | 2016-03-03 | 2017-09-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
WO2017153953A1 (en) | 2016-03-09 | 2017-09-14 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases |
WO2017153955A1 (en) | 2016-03-09 | 2017-09-14 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases |
KR102471787B1 (ko) | 2016-05-02 | 2022-11-29 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | 타우 인식 항체 |
CN109415434B (zh) | 2016-05-02 | 2022-12-30 | 普罗塞纳生物科学有限公司 | 识别tau的抗体 |
WO2017208210A1 (en) | 2016-06-03 | 2017-12-07 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
EP3478716A2 (de) | 2016-07-02 | 2019-05-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin-antikörper |
WO2018007922A2 (en) | 2016-07-02 | 2018-01-11 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin antibodies |
EP3478715A2 (de) | 2016-07-02 | 2019-05-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin-antikörper |
AU2017292172A1 (en) | 2016-07-06 | 2019-01-03 | Prothena Biosciences Limited | Assay for detecting total and S129 phosphorylated alpha-synuclein |
SG11201907159SA (en) | 2017-02-16 | 2019-09-27 | Xbiotech Inc | Treatment of hidradenitis suppurativa |
AU2018250695A1 (en) | 2017-04-14 | 2019-11-07 | Kodiak Sciences Inc. | Complement factor D antagonist antibodies and conjugates thereof |
CA3061516A1 (en) | 2017-05-02 | 2018-11-08 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
WO2019018744A1 (en) | 2017-07-21 | 2019-01-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF NEISSERIA MENINGITIDIS |
MX2020004561A (es) | 2017-11-02 | 2020-08-13 | Bayer Ag | Anticuerpos biespecificos que se unen a alk-1 y bmpr-2. |
EP3886869A4 (de) | 2018-11-28 | 2022-07-06 | Forty Seven, Inc. | Genetisch modifizierte ablationsresistente hspcs |
TW202045206A (zh) | 2019-02-27 | 2020-12-16 | 美商健生生物科技公司 | 抗體調配物 |
WO2020180819A1 (en) | 2019-03-03 | 2020-09-10 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
CA3157509A1 (en) | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
KR20220139886A (ko) | 2020-01-08 | 2022-10-17 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 진행성 골화성 섬유이형성증의 치료 |
WO2021211924A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Janssen Biotech, Inc. | Treatment of atopic dermatitis |
MX2022015157A (es) | 2020-06-02 | 2023-01-16 | Arcus Biosciences Inc | Anticuerpos para tigit. |
JP2024503908A (ja) | 2021-01-22 | 2024-01-29 | バイエル アクチェンゲゼルシャフト | Lrrc15抗体およびそのコンジュゲート |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2757169A1 (de) * | 1977-12-22 | 1979-07-05 | Hoechst Ag | Verfahren zur gewinnung insulin produzierender tierischer zellen |
ZA806506B (en) * | 1979-11-01 | 1981-09-30 | Bio Response Inc | A method for production of monoclonal antibodies |
GB2079313A (en) * | 1980-07-07 | 1982-01-20 | Nat Res Dev | Improvements in or relating to rat myeloma cell lines |
EP0043718B1 (de) * | 1980-07-07 | 1984-11-28 | National Research Development Corporation | Zellinien |
JPS57502090A (de) * | 1980-07-18 | 1982-11-25 | ||
JPS586475B2 (ja) * | 1980-08-23 | 1983-02-04 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの製造方法 |
JPS6045849B2 (ja) * | 1980-08-25 | 1985-10-12 | 林原 健 | ヒトエリトロポエチンの製造方法 |
JPS585671B2 (ja) * | 1980-08-27 | 1983-02-01 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
JPS5743696A (en) * | 1980-08-27 | 1982-03-11 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human luteinizing hormone |
US4474893A (en) * | 1981-07-01 | 1984-10-02 | The University of Texas System Cancer Center | Recombinant monoclonal antibodies |
US4529694A (en) * | 1982-04-16 | 1985-07-16 | The Children's Medical Center Corporation | Cell fusion |
-
1982
- 1982-01-22 CH CH409/82A patent/CH652145A5/de not_active IP Right Cessation
-
1983
- 1983-01-15 DE DE19833301249 patent/DE3301249A1/de active Granted
- 1983-01-19 GB GB08301384A patent/GB2113715B/en not_active Expired
- 1983-01-20 FR FR8300850A patent/FR2522679B1/fr not_active Expired
- 1983-01-20 SE SE8300290A patent/SE502344C2/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-01-20 IL IL67721A patent/IL67721A/xx unknown
- 1983-01-20 FI FI830190A patent/FI83538C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-01-20 US US06/459,731 patent/US4634664A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-01-20 DK DK23183A patent/DK23183A/da not_active Application Discontinuation
- 1983-01-21 IT IT19234/83A patent/IT1160468B/it active
- 1983-01-21 JP JP58009241A patent/JPS58128323A/ja active Granted
- 1983-01-21 AT AT0019583A patent/AT388932B/de not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-12-30 MY MY169/87A patent/MY8700169A/xx unknown
-
1989
- 1989-04-27 SG SG281/89A patent/SG28189G/en unknown
- 1989-05-16 KE KE3884A patent/KE3884A/xx unknown
- 1989-06-29 HK HK525/89A patent/HK52589A/xx not_active IP Right Cessation
- 1989-12-08 CY CY1488A patent/CY1488A/xx unknown
-
1990
- 1990-10-03 JP JP2267500A patent/JPH03236794A/ja active Granted
-
1991
- 1991-05-30 JP JP3157731A patent/JPH0789909B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI83538B (fi) | 1991-04-15 |
DK23183D0 (da) | 1983-01-20 |
KE3884A (en) | 1989-08-11 |
SE8300290D0 (sv) | 1983-01-20 |
IL67721A (en) | 1986-04-29 |
IL67721A0 (en) | 1983-05-15 |
ATA19583A (de) | 1989-02-15 |
IT1160468B (it) | 1987-03-11 |
DE3301249C2 (de) | 1990-04-05 |
FI83538C (fi) | 1991-07-25 |
IT8319234A0 (it) | 1983-01-21 |
GB2113715A (en) | 1983-08-10 |
FR2522679B1 (fr) | 1986-05-09 |
JPH0471520B2 (de) | 1992-11-13 |
GB2113715B (en) | 1986-06-04 |
MY8700169A (en) | 1987-12-31 |
AT388932B (de) | 1989-09-25 |
JPH03236794A (ja) | 1991-10-22 |
FI830190A0 (fi) | 1983-01-20 |
DE3301249A1 (de) | 1983-09-22 |
JPS58128323A (ja) | 1983-07-30 |
HK52589A (en) | 1989-07-07 |
CY1488A (en) | 1989-12-08 |
SE502344C2 (sv) | 1995-10-09 |
SG28189G (en) | 1989-08-11 |
JPH0690753A (ja) | 1994-04-05 |
FR2522679A1 (fr) | 1983-09-09 |
US4634664A (en) | 1987-01-06 |
SE8300290L (sv) | 1983-07-23 |
JPH0365148B2 (de) | 1991-10-09 |
DK23183A (da) | 1983-07-23 |
FI830190L (fi) | 1983-07-23 |
JPH0789909B2 (ja) | 1995-10-04 |
GB8301384D0 (en) | 1983-02-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CH652145A5 (de) | Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. | |
DE69530316T2 (de) | Antithrombose mittel und gegen den von willebrand-faktor gerichtete monoklonale antikörper | |
EP0260610A2 (de) | Monoklonale Antikörper gegen humanen Tumonekrosefaktor (TNF) und deren Verwendung | |
WO1998054225A2 (de) | Human-cd28 spezifische monoklonale antikörper zur antigenunspezifischen aktivierung von t-lymphozyten | |
EP0499176B1 (de) | Monoklonale Antikörper gegen humane Pankreas-Inselzellen | |
DD210708A5 (de) | Verfahren zur herstellung permanenter tierischer und humaner zellinien | |
DE3249567C2 (de) | Hybridzell-Linie, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
CH683526A5 (de) | Zellinie für die Herstellung von Antikörper bildenden Hybridomen, Verfahren zur Herstellung einer menschlichen Zellinie und Antikörper produzierendes Hybridom. | |
DE3810331A1 (de) | Monoklonale vac-antikoerper | |
AT396936B (de) | Hybridoma zell-linien und verfahren zu ihrer herstellung sowie die verwendung der genannten zell-linien zur herstellung von monoklonalen antikörpern | |
EP0529348A1 (de) | Verfahren zur Reinigung von Faktor XIII, monoklonale Antikörper gegen Faktor XIIIA, ihre Herstellung und Verwendung | |
CH668775A5 (en) | Highly stable hybridomaoma cell line for antibody prodn. - made by fusing secreting cell with compatible xenogeneic hybrid as immortalising component | |
DD272473B3 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen die epsilon-kettedes cd 3-antigens humaner t-lymphozyten | |
DE4214999C2 (de) | Reinigung von Plasminogen-Aktivator-Inhibitor 2 durch Immunaffinitätschromatographie | |
WO1991009873A1 (de) | T-zellen-oberflächenproteine | |
CH670099A5 (en) | New hybridoma cell lines - obtd. by fusing mouse-human hybrid cells with human cells | |
WO1992004463A1 (de) | Cd58 spezifischer monoklonaler antikörper und dessen verwendung | |
DE69233623T2 (de) | Plättchen-transfusion | |
DD250333B1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler anti-human-t-lymphozytenrezeptor-antikoerper | |
DD259139B1 (de) | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen common acute lymphoblastic leukemia-associated antigen | |
DD292021B5 (de) | Verfahren zur Herstellung humaner monoklonaler Antikoerper gegen Alpha-Haemolysin von Staphylococcus aureus | |
DD292021A5 (de) | Verfahren zur Herstellung humaner monoklonaler Antikörper gegenAlpha-Hämolysin von Staphylococcus aureus | |
DD230879A1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper fuer human-igm | |
DD274446B5 (de) | Verfahren zur herstellung der parentalzellinie cb-fu2 | |
DD230882B1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper fuer ein monozyten-antigen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PFA | Name/firm changed |
Owner name: SANDOZ AG TRANSFER- NOVARTIS AG |
|
PL | Patent ceased |