JPS585671B2 - ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 - Google Patents
ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法Info
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- JPS585671B2 JPS585671B2 JP55116942A JP11694280A JPS585671B2 JP S585671 B2 JPS585671 B2 JP S585671B2 JP 55116942 A JP55116942 A JP 55116942A JP 11694280 A JP11694280 A JP 11694280A JP S585671 B2 JPS585671 B2 JP S585671B2
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- cells
- stimulating hormone
- human
- follicle
- human follicle
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト卵胞刺激ホルモン（ｈｕｍａｎ ｆｏｌ
ｌｉｃｌｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ
，ｈｕｍａｎ ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ）の製造方法に
関する。
ｌｉｃｌｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ
，ｈｕｍａｎ ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ）の製造方法に
関する。
ヒト卵胞刺激ホルモンは、罹丸での精子形成の促進、卵
巣での卵胞の発育、成熟およびエストロゲンの生産分泌
の促進作用を有する。
巣での卵胞の発育、成熟およびエストロゲンの生産分泌
の促進作用を有する。
ヒト卵胞刺激ホルモンを安価に大量生産する方法は、未
だ確立されていない。
だ確立されていない。
本発明者は、ヒト卵胞刺激ホルモンを安価に大量に供給
するために、鋭意研究を続けたところ、意外にもヒト卵
胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由来の細胞は、イン
ビトロでの組織培養法により得られた細胞よりも、ヒト
以外の温血動物を利用して増殖した細胞の方が、ヒト卵
胞刺激ホルモン産生量が著しく高く、細胞当り約２〜５
０倍にも達することを見いだし本発明を完成した。
するために、鋭意研究を続けたところ、意外にもヒト卵
胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由来の細胞は、イン
ビトロでの組織培養法により得られた細胞よりも、ヒト
以外の温血動物を利用して増殖した細胞の方が、ヒト卵
胞刺激ホルモン産生量が著しく高く、細胞当り約２〜５
０倍にも達することを見いだし本発明を完成した。
すなわち、本発明はヒト卵胞刺激ホルモン産生能を有す
るヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、
またはその温血動物の体液の供給を受けながら増殖させ
、得られる細胞に卵胞刺激ホルモン誘導剤を作用させて
ヒト卵胞刺激ホルモンを産生せしめることを特徴とする
ヒト卵胞刺激ホルモンに関するものである。
るヒト由来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、
またはその温血動物の体液の供給を受けながら増殖させ
、得られる細胞に卵胞刺激ホルモン誘導剤を作用させて
ヒト卵胞刺激ホルモンを産生せしめることを特徴とする
ヒト卵胞刺激ホルモンに関するものである。
本発明の方法は、インビトロで培養させる場合とは違っ
て、誘導生成されるヒト卵胞刺激ホルモンの量が犬であ
るだけでなく、高価な血清などを含む栄養培地が不要、
または大幅に節約でき、更に細胞増殖中の維持管理もき
わめて容易である。
て、誘導生成されるヒト卵胞刺激ホルモンの量が犬であ
るだけでなく、高価な血清などを含む栄養培地が不要、
または大幅に節約でき、更に細胞増殖中の維持管理もき
わめて容易である。
すなわち、ヒト卵胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由
来細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、またはその
動物の体液の供給を受けることのできるチャンバーに収
容し、通常の飼育をすれば、温血動物体から供給される
栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に増殖
しうるのである。
来細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、またはその
動物の体液の供給を受けることのできるチャンバーに収
容し、通常の飼育をすれば、温血動物体から供給される
栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に増殖
しうるのである。
更に、インビトロで培養させる場合と比較して、この細
胞の増殖が安定していること、その増殖速度の大きいこ
と、得られる細胞量が大きいこと、更には細胞当りのヒ
ト卵胞刺激ホルモン産生量の大きいことが特徴である。
胞の増殖が安定していること、その増殖速度の大きいこ
と、得られる細胞量が大きいこと、更には細胞当りのヒ
ト卵胞刺激ホルモン産生量の大きいことが特徴である。
本発明で使用するヒト由来の細胞は、ヒト卵胞刺激ホル
モン産生能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移
植して容易に増殖するものであればよい。
モン産生能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移
植して容易に増殖するものであればよい。
例えば、ヒト下垂体前葉の好塩基性細胞、またはこれを
ＥＢ Ｖｉｒｕｓ、エックス線などで腫瘍化させるか、
または下垂体前葉好塩基性細胞腺腫の患者から得られる
腫瘍性好塩基性細胞などの本来ヒト卵胞刺激ホルモン産
生能を有する細胞および肺癌細胞などの異所性ヒト卵胞
刺激ホルモン産生能を有する細胞、更にこれら細胞を培
養株化させた細胞などが好適である。
ＥＢ Ｖｉｒｕｓ、エックス線などで腫瘍化させるか、
または下垂体前葉好塩基性細胞腺腫の患者から得られる
腫瘍性好塩基性細胞などの本来ヒト卵胞刺激ホルモン産
生能を有する細胞および肺癌細胞などの異所性ヒト卵胞
刺激ホルモン産生能を有する細胞、更にこれら細胞を培
養株化させた細胞などが好適である。
また、これら細胞のヒト卵胞刺激ホルモン産生能を持つ
遺伝子を例えば、ポリエチレングリコールやセンダイウ
イルスなどを利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡ リガ
ーゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼ
などの酵素を利用する遺伝子組み換えの手段などによっ
て、より容易に継代培養しうる培養株化されたヒトリン
パ芽球様細胞に導入して使用することは、その増殖速度
が大きいだけでなく、細胞当りのヒト卵胞刺激ホルモン
産生能が約２〜１０倍、またはそれ以上にも高まるので
特に好都合である。
遺伝子を例えば、ポリエチレングリコールやセンダイウ
イルスなどを利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡ リガ
ーゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼ
などの酵素を利用する遺伝子組み換えの手段などによっ
て、より容易に継代培養しうる培養株化されたヒトリン
パ芽球様細胞に導入して使用することは、その増殖速度
が大きいだけでなく、細胞当りのヒト卵胞刺激ホルモン
産生能が約２〜１０倍、またはそれ以上にも高まるので
特に好都合である。
これらヒトリンパ芽球様細胞の利用は、ヒト以外の温血
動物に移植する時に、その宿主動物の細胞と混りにくい
軟腫瘤を形成しやすく、摘出後の分散も容易なので、生
きたヒトリンパ芽球様細胞の採取にきわめて有利である
。
動物に移植する時に、その宿主動物の細胞と混りにくい
軟腫瘤を形成しやすく、摘出後の分散も容易なので、生
きたヒトリンパ芽球様細胞の採取にきわめて有利である
。
このようなヒトリンパ芽球様細胞には、ヒト白血病もし
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
本発明のヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法に使用する温
血動物は、ヒト卵胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由
来の細胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワ
トリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、ブタ
、ウシ、ウマ、ウサギ、モルモット、ラット、ハムスタ
ー、普通マウス、ヌードマウスなどの呻乳類などが使用
できる。
血動物は、ヒト卵胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由
来の細胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワ
トリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、ブタ
、ウシ、ウマ、ウサギ、モルモット、ラット、ハムスタ
ー、普通マウス、ヌードマウスなどの呻乳類などが使用
できる。
これら動物にヒト由来の細胞を移植すると、好まし《な
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい。
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい。
また、これら動物に例えば、約２００〜６００レムのエ
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
使用する動物がヌードマウスの場合には、成長したもの
であっても免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要
とすることなく、培養株化されたヒト由来の細胞が移植
でき、急速に増殖できるので特に好都合である。
であっても免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要
とすることなく、培養株化されたヒト由来の細胞が移植
でき、急速に増殖できるので特に好都合である。
また、ヒト由来の細胞を、例えば先ずハムスターに移植
し増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植す
るなどのように、ヒト以外の温血動物間で移植して、ヒ
ト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更にそれらか
ら誘導生成されるヒト卵胞刺激ホルモン量を増加させる
ことも自由である。
し増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植す
るなどのように、ヒト以外の温血動物間で移植して、ヒ
ト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更にそれらか
ら誘導生成されるヒト卵胞刺激ホルモン量を増加させる
ことも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと同綱間、同門間
移植であってもよい。
移植であってもよい。
ヒト由来の細胞を移植する動物体内の部位は、移植した
細胞が増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静
脈、腹腔、皮下など自由に選ばれる。
細胞が増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静
脈、腹腔、皮下など自由に選ばれる。
また、直接動物体内にヒト由来の細胞を移植することな
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例え
ば孔径約１０−７〜１０−５ｍを有するメンプランフィ
ルター、限外瀘過膜またはホローファイバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖させることがで
きる。
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例え
ば孔径約１０−７〜１０−５ｍを有するメンプランフィ
ルター、限外瀘過膜またはホローファイバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖させることがで
きる。
また、必要に応じて、この拡散チャンバー内の栄養物を
含む体液を動物体内のそれと接続し潅流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバ一部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高め
ることもできる。
含む体液を動物体内のそれと接続し潅流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバ一部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高め
ることもできる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好まし《ない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好まし《ない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ヒト由来の細胞を増殖させるための期間は通常１〜２０
週である。
週である。
移植する培養株化された細胞が腫瘍細胞であるかリンパ
芽球様細胞である場合には、その増殖速度が特に犬であ
り、通常１〜５週の期間で目的を達成することができる
。
芽球様細胞である場合には、その増殖速度が特に犬であ
り、通常１〜５週の期間で目的を達成することができる
。
このようにして得られるヒト由来の細胞数は、動物個体
当り約１０７〜１０１２、またはそれ以上に達すること
も見い出した。
当り約１０７〜１０１２、またはそれ以上に達すること
も見い出した。
換言すれば、本発明で使用するヒト卵胞刺激ホルモンの
製造方法により増殖させたヒト由来の細胞数は、動物個
体当り移植した細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそ
れ以上にも達し、インビト口で栄養培地に接種して増殖
させる場合の約１０１〜１０６倍、またはそれ以上にも
達して、ヒト卵胞刺激ホルモンの製造のためきわめて好
都合である。
製造方法により増殖させたヒト由来の細胞数は、動物個
体当り移植した細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそ
れ以上にも達し、インビト口で栄養培地に接種して増殖
させる場合の約１０１〜１０６倍、またはそれ以上にも
達して、ヒト卵胞刺激ホルモンの製造のためきわめて好
都合である。
このようにして増殖させたヒト由来の生細胞にヒト卵胞
刺激ホルモン誘導剤を作用させてヒト卵胞刺激ホルモン
を産生させる方法は自由である。
刺激ホルモン誘導剤を作用させてヒト卵胞刺激ホルモン
を産生させる方法は自由である。
例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来の細
胞を採取し、または皮下で増殖した腫瘤を摘出し、分散
させた後採取し、この細胞を約２０〜４０℃に保った栄
養培地に細胞濃度が約１０４〜１，０８／ｍｌになるよ
うに浮遊させ、これに卵胞刺激ホルモン誘導剤を約１〜
５０時間作用させることによってヒト卵胞刺激ホルモン
を誘導生成させればよい。
胞を採取し、または皮下で増殖した腫瘤を摘出し、分散
させた後採取し、この細胞を約２０〜４０℃に保った栄
養培地に細胞濃度が約１０４〜１，０８／ｍｌになるよ
うに浮遊させ、これに卵胞刺激ホルモン誘導剤を約１〜
５０時間作用させることによってヒト卵胞刺激ホルモン
を誘導生成させればよい。
卵胞刺激ホルモン誘導剤は、例えば、リジン、アルギニ
ン、トリプトファン、ロイシン、カザミノ酸、などのア
ミノ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウ
ム、硫酸マグネシウムなどの塩類、黄体形成ホルモン放
出ホルモンなどのホルモンなどが適宜使用される。
ン、トリプトファン、ロイシン、カザミノ酸、などのア
ミノ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウ
ム、硫酸マグネシウムなどの塩類、黄体形成ホルモン放
出ホルモンなどのホルモンなどが適宜使用される。
なお、本発明によってヒト卵胞刺激ホルモンと他のホル
モン、例えばヒト黄体形成ホルモンとを同時に産生させ
ることも自由である。
モン、例えばヒト黄体形成ホルモンとを同時に産生させ
ることも自由である。
このようにして誘導生成されたヒト卵胞刺激ホルモンは
、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心
分離、濃縮、凍結乾燥などを行なうことによって容易に
精製分離し、採取することができる。
、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心
分離、濃縮、凍結乾燥などを行なうことによって容易に
精製分離し、採取することができる。
更に、高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオ
ン交換体への吸着・脱着、ゲル濾過およびアフイニテイ
ク口マトグラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知
の方法を更に組み合せればよく、最高純度のヒト卵胞刺
激ホルモンを採取することも可能である。
ン交換体への吸着・脱着、ゲル濾過およびアフイニテイ
ク口マトグラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知
の方法を更に組み合せればよく、最高純度のヒト卵胞刺
激ホルモンを採取することも可能である。
このようにして得たヒト卵胞刺激ホルモンは、単一物質
でまたはこれにその他の一種若しくは二種以上の物質を
含有せしめ、例えば注射薬、外用薬、内服薬、診断薬な
どとしてヒトの疾患の予防治療に有利に利用できる。
でまたはこれにその他の一種若しくは二種以上の物質を
含有せしめ、例えば注射薬、外用薬、内服薬、診断薬な
どとしてヒトの疾患の予防治療に有利に利用できる。
ヒト卵胞刺激ホルモンの産生量は、Ｃ，Ｆａｉｍａｎ、
Ｒ．Ｊ．Ｒｙａｎ，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ
ｌ，Ｍｅｔａｂ，、Ｖｏ１，２７、４４４− ４４７（
１９６７）に記載されているラジオイムノアツセイ法に
準じて測定し、国際単位（ＩＵ）で示した。
Ｒ．Ｊ．Ｒｙａｎ，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ
ｌ，Ｍｅｔａｂ，、Ｖｏ１，２７、４４４− ４４７（
１９６７）に記載されているラジオイムノアツセイ法に
準じて測定し、国際単位（ＩＵ）で示した。
また、ヒト黄体形成ホルモンの産生量は、Ａ．Ｒ．Ｍｉ
ｄｇｌｅｙ，Ｊｒ，、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．Ｖ
ｏｌ，７９、１０−１８（１９６６）に記載されている
ラジオイムノアツセイ法に準じて測定し、国際単位（Ｉ
Ｕ）で表示した。
ｄｇｌｅｙ，Ｊｒ，、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．Ｖ
ｏｌ，７９、１０−１８（１９６６）に記載されている
ラジオイムノアツセイ法に準じて測定し、国際単位（Ｉ
Ｕ）で表示した。
以下、２〜３の実施例を述べる。
実施例１
成長したヌードマウスの皮下に、下垂体前葉好塩基性細
胞腺腫の患者から摘出、細切、分散させて得た腫瘍性好
塩基性細胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育した
。
胞腺腫の患者から摘出、細切、分散させて得た腫瘍性好
塩基性細胞を移植した後、通常の方法で４週間飼育した
。
皮下に生じた腫瘤約１０２を摘出して細切した後、トリ
プシン含有生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
プシン含有生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
この細胞を、牛胎児血清１０ｖ／ｖ％を補足したＥａｒ
ｌｅ培地１９９（ｐＨ７．２）で洗浄した後、卵胞刺激
ホルモン誘導剤としてＬ−アルギニンを３０ｍＭ存在せ
しめた同培地に細胞濃度約１０５／ｍｌになるように浮
遊させ、３７℃で１５時間保ってヒト卵胞刺激ホルモン
を誘導生成させた。
ｌｅ培地１９９（ｐＨ７．２）で洗浄した後、卵胞刺激
ホルモン誘導剤としてＬ−アルギニンを３０ｍＭ存在せ
しめた同培地に細胞濃度約１０５／ｍｌになるように浮
遊させ、３７℃で１５時間保ってヒト卵胞刺激ホルモン
を誘導生成させた。
その後、細胞を超音波処理し、得られる上清を用いてヒ
ト卵胞刺激ホルモンの量を測定したところ、浮遊液ｍｌ
当り約５００ｍＩＵの産生量であった。
ト卵胞刺激ホルモンの量を測定したところ、浮遊液ｍｌ
当り約５００ｍＩＵの産生量であった。
なお、この上清には、ヒト黄体形成ホルモンの活性も認
められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約４００ｍＩＵの産生
量であった。
められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約４００ｍＩＵの産生
量であった。
これに対して、腫瘍性好塩基性細胞を牛胎児血清１０ｖ
／ｖ％を補足したＥａｒｌｅ培地１９９（ｐＨ７．２）
に３７℃でインビトロで培養させて得た対照の細胞を用
いて、前記同様にヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させ
たところ、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にすぎ
なかった。
／ｖ％を補足したＥａｒｌｅ培地１９９（ｐＨ７．２）
に３７℃でインビトロで培養させて得た対照の細胞を用
いて、前記同様にヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させ
たところ、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にすぎ
なかった。
実施例２
下垂体前葉好塩基性細胞腺腫の患者から摘出、細切、分
散させて得た腫瘍性好塩基性細胞とリンパ芽球様ナマル
バ細胞（Ｎａｍａｌｖａ ｃｅｌｌ）とを１４０ｍＭ
Ｎａｃｌ，５４ｍＭ ＫＣＩ、１ｍＭＮａＨ２ＰＯ４、
２ｍＭ ＣａＣ１２を含有する塩類溶液にそれぞれ約１
０３／ｍｌになるように浮遊させ、これに予め紫外線で
不活化したセンダイウイルスを含有する前記塩類溶液を
、水冷下で混合し、約５分後に３７℃恒温水槽に移して
、約３０分間攪拌しつつ細胞融合を起させ、リンパ芽球
様ナマルバ細胞にヒト卵胞刺激ホルモン産生能を導入し
た，このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成長したヌードマ
ウスの腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育し
た。
散させて得た腫瘍性好塩基性細胞とリンパ芽球様ナマル
バ細胞（Ｎａｍａｌｖａ ｃｅｌｌ）とを１４０ｍＭ
Ｎａｃｌ，５４ｍＭ ＫＣＩ、１ｍＭＮａＨ２ＰＯ４、
２ｍＭ ＣａＣ１２を含有する塩類溶液にそれぞれ約１
０３／ｍｌになるように浮遊させ、これに予め紫外線で
不活化したセンダイウイルスを含有する前記塩類溶液を
、水冷下で混合し、約５分後に３７℃恒温水槽に移して
、約３０分間攪拌しつつ細胞融合を起させ、リンパ芽球
様ナマルバ細胞にヒト卵胞刺激ホルモン産生能を導入し
た，このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成長したヌードマ
ウスの腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育し
た。
生じた腫瘤約１５２を摘出し、卵胞刺激ホルモン誘導剤
としてｍｌ当り約１０ｎＰの黄体形成ホルモンを使用し
たこと以外は実施例１と同様に処理してヒト卵胞刺激ホ
ルモンを誘導生成させた。
としてｍｌ当り約１０ｎＰの黄体形成ホルモンを使用し
たこと以外は実施例１と同様に処理してヒト卵胞刺激ホ
ルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は約１６００ｍＩＵであった，
なお、本浮遊液には、ヒト黄体形成ホルモンの活性も認
められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１４００ｍＩＵであ
った。
なお、本浮遊液には、ヒト黄体形成ホルモンの活性も認
められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１４００ｍＩＵであ
った。
対照として細胞融合を起させたリンパ芽球様ナマルバ細
胞を実施例１と同様にインビトロで培養し、ヒト卵胞刺
激ホルモンを誘導生成させたところ、浮遊液ｍｌ当り約
８０ｍＩＵの産生量にすぎなかった。
胞を実施例１と同様にインビトロで培養し、ヒト卵胞刺
激ホルモンを誘導生成させたところ、浮遊液ｍｌ当り約
８０ｍＩＵの産生量にすぎなかった。
実施例３
新生児のハムスターにウサギから公知の方法で調製した
抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後
、その皮下に、実施例２の方法に準じてヒト卵胞刺激ホ
ルモン産生能を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植
し、その後通常の方法で３週間飼育した。
抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後
、その皮下に、実施例２の方法に準じてヒト卵胞刺激ホ
ルモン産生能を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植
し、その後通常の方法で３週間飼育した。
生じた腫瘤約１０１を摘出し、実施例１と同様に処理し
てヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
てヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は、約１５００ｍＩＵであった
。
。
なお、本浮遊液にはヒト黄体形成ホルモンの活性も認め
られ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１３００ｍＩＵであっ
た。
られ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１３００ｍＩＵであっ
た。
対照として細胞融合を起させたリンパ芽球様ＪＢＬ細胞
を実施例１と同様にインビトロで培養し、ヒト卵胞刺激
ホルモンを誘導生成させたところ、浮遊液ｍｌ当り約１
１０ｍＩＵの産生量にすぎなかった。
を実施例１と同様にインビトロで培養し、ヒト卵胞刺激
ホルモンを誘導生成させたところ、浮遊液ｍｌ当り約１
１０ｍＩＵの産生量にすぎなかった。
実施例４
新生児ラットの静脈内へ、実施例２の方法でヒト卵胞刺
激ホルモン産生能を導入したリンパ芽球様ナマルバ細胞
を移植した後、通常の方法で４週間飼育した。
激ホルモン産生能を導入したリンパ芽球様ナマルバ細胞
を移植した後、通常の方法で４週間飼育した。
生じた腫瘤約４０１を摘出し、実施例２と同様に処理し
てヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
てヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は約１２００ｍＩＵであった。
これに対して、対照のインビトロで培養し、誘導生成さ
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にす
ぎなかった。
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にす
ぎなかった。
実施例５
成長した普通マウスに、約４００レムのエックス線を照
射してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例
１と同様に調製した腫瘍性好塩基性細胞を移植し、その
後通常の方法で４週間飼育した。
射してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例
１と同様に調製した腫瘍性好塩基性細胞を移植し、その
後通常の方法で４週間飼育した。
皮下に生じた腫瘤約１５１を摘出し、実施例２と同様に
処理してヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
処理してヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は約５００ｍＩＵであった。
これに対して、対照のインビト口で培養し、誘導生成さ
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にす
ぎなかった。
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約８０ｍＩＵの産生量にす
ぎなかった。
実施例６
孔径約０．５ミクロンのメンプランフィルターを設けた
内容量約１０ｍｌのプラスチック製円筒型拡散チャンバ
ー内に、実施例３の方法でヒト卵胞刺激ホルモン産生能
を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を生理食塩水で浮遊
させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
内容量約１０ｍｌのプラスチック製円筒型拡散チャンバ
ー内に、実施例３の方法でヒト卵胞刺激ホルモン産生能
を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を生理食塩水で浮遊
させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、この拡散
チャンバーを取り出した。
チャンバーを取り出した。
これにより得られたヒト由来の細胞濃度は、約２Ｘ１０
９／ｍｌであって、インビトロでの炭酸ガスインキュベ
ーター中で培養する場合の約１０３倍以上にも達するこ
とがわかった。
９／ｍｌであって、インビトロでの炭酸ガスインキュベ
ーター中で培養する場合の約１０３倍以上にも達するこ
とがわかった。
本細胞を実施例２と同様に浮遊液として処理しヒト卵胞
刺激ホルモンを誘導生成させた。
刺激ホルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は約１３００ｍＩＵであった。
なお、本浮遊液にはヒト黄体形成ホルモンの活性も認め
られ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１６００ｍＩＵであっ
た。
られ、その量は浮遊液ｍｌ当り約１６００ｍＩＵであっ
た。
これに対して、対照のインビトロで培養し、誘導生成さ
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約１１０ｍＩＵの産生量に
すぎなかった。
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約１１０ｍＩＵの産生量に
すぎなかった。
実施例７
３７℃で５日間保ったニワトリの受精卵に実施例３の方
法でヒト卵胞刺激ホルモン産生能を導入したリンパ芽球
様ＪＢＬ細胞を移植した後、３７℃で１週間保った。
法でヒト卵胞刺激ホルモン産生能を導入したリンパ芽球
様ＪＢＬ細胞を移植した後、３７℃で１週間保った。
この卵を割卵した後、増殖細胞を採取し、実施例１と同
様に処理してヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
様に処理してヒト卵胞刺激ホルモンを誘導生成させた。
浮遊液ｍｌ当りの産生量は約１３００ｍＩＵであった。
これに対して、対照のインビトロで培養し、誘導生成さ
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約１１０ｍＩＵの産生量に
すぎなかった。
せたものは、浮遊液ｍｌ当り約１１０ｍＩＵの産生量に
すぎなかった。
Claims (1)
- １ ヒト卵胞刺激ホルモン産生能を有するヒト由来の細
胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、またはその温血
動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細胞
に卵胞刺激ホルモン誘導剤を作用させてヒト卵胞刺激ホ
ルモンを産生せしめることを特徴とするヒト卵胞刺激ホ
ルモンの製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55116942A JPS585671B2 (ja) | 1980-08-27 | 1980-08-27 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
| US06/290,861 US4383034A (en) | 1980-08-27 | 1981-08-07 | Process for the production of human follicle-stimulating hormone |
| KR1019810003033A KR860000899B1 (ko) | 1980-08-27 | 1981-08-20 | 인체 난포(卵胞)자극 호르몬의 제조방법 |
| GB8125626A GB2085888B (en) | 1980-08-27 | 1981-08-21 | Process for the production of human follicle-stimulating hormone |
| CH5391/81A CH650023A5 (fr) | 1980-08-27 | 1981-08-21 | Production d'hormone humaine stimulant les follicules. |
| FR8116059A FR2489152B1 (fr) | 1980-08-27 | 1981-08-21 | Production d'hormone humaine stimulant les follicules |
| IT49156/81A IT1143229B (it) | 1980-08-27 | 1981-08-24 | Procedimento per la produzione dell'ormone gonadotropo dell'ipofisi anteriore |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55116942A JPS585671B2 (ja) | 1980-08-27 | 1980-08-27 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5743695A JPS5743695A (en) | 1982-03-11 |
| JPS585671B2 true JPS585671B2 (ja) | 1983-02-01 |
Family
ID=14699522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55116942A Expired JPS585671B2 (ja) | 1980-08-27 | 1980-08-27 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
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| JP (1) | JPS585671B2 (ja) |
| KR (1) | KR860000899B1 (ja) |
| CH (1) | CH650023A5 (ja) |
| FR (1) | FR2489152B1 (ja) |
| GB (1) | GB2085888B (ja) |
| IT (1) | IT1143229B (ja) |
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| JPS609795B2 (ja) * | 1980-12-11 | 1985-03-13 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト上皮細胞成長因子の製造方法 |
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| US4921808A (en) * | 1986-06-25 | 1990-05-01 | The Albany Medical College Of Union University | Method for determining follicle stimulating hormone |
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| CN109932516B (zh) * | 2019-03-19 | 2022-04-05 | 北京泰德制药股份有限公司 | 一种评价人促卵泡激素受体亲和力的分析方法 |
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| US4288546A (en) * | 1976-04-09 | 1981-09-08 | The Regents Of The University Of Minnesota | Process for the large scale production of pituitary hormones by serial secondary suspension culture |
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-
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- 1980-08-27 JP JP55116942A patent/JPS585671B2/ja not_active Expired
-
1981
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- 1981-08-21 GB GB8125626A patent/GB2085888B/en not_active Expired
- 1981-08-21 CH CH5391/81A patent/CH650023A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-08-24 IT IT49156/81A patent/IT1143229B/it active
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