ES2741524T3 - Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador - Google Patents

Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador Download PDF

Info

Publication number
ES2741524T3
ES2741524T3 ES05716306T ES05716306T ES2741524T3 ES 2741524 T3 ES2741524 T3 ES 2741524T3 ES 05716306 T ES05716306 T ES 05716306T ES 05716306 T ES05716306 T ES 05716306T ES 2741524 T3 ES2741524 T3 ES 2741524T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
group
substituted
prodrug
unsubstituted
poly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES05716306T
Other languages
English (en)
Inventor
Ulrich Hersel
Harald Rau
Robert Schnepf
Dirk Vetter
Thomas Wegge
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ascendis Pharma GmbH
Original Assignee
Ascendis Pharma GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from EP04075892A external-priority patent/EP1579873A1/en
Priority claimed from GB0415043A external-priority patent/GB0415043D0/en
Priority claimed from EP04019293A external-priority patent/EP1625855A1/en
Application filed by Ascendis Pharma GmbH filed Critical Ascendis Pharma GmbH
Application granted granted Critical
Publication of ES2741524T3 publication Critical patent/ES2741524T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6903—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being semi-solid, e.g. an ointment, a gel, a hydrogel or a solidifying gel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/96—Esters of carbonic or haloformic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Un profármaco polimérico en cascada que comprende: - una amina que contiene una unidad estructural biológicamente activa; - un grupo de enmascaramiento que tiene al menos un nucleófilo y que es distinto del portador; en donde el profármaco tiene la siguiente estructura:**Fórmula** en donde T es D; D es un residuo de una amina que contiene una unidad estructural biológicamente activa, que está conectada a la unidad estructural de la molécula a través de un grupo amina; X es una unidad estructural espaciadora, tal como R5-Y6; Y1, Y2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S; Y3, Y5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S; Y4 es O, NR6 o -C(R7)(R8)-; Y6 es O, S, NR6, succinimida, maleimida, un enlace carbono-carbono insaturado, cualquier heteroátomo que contenga un par de electrones libres, o está ausente; R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; ciano; nitro; halógeno; carboxi; carboxialquilo; alquilcarbonilo y carboxamidoalquilo; cada R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilo; arilo sustituido; heteroarilo sustituido o no sustituido; alcoxi sustituido, no sustituido, lineal, ramificado o cíclico; heteroalquiloxi lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; ariloxi; heteroariloxi; ciano y halógeno; R5 se selecciona del grupo que consiste en alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos; R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; carboxialquilo; alquilcarbonilo; carboxamidoalquilo; ciano y halógeno; R6 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos; R1 es un polímero; W se selecciona del grupo que consiste en alquilos lineales, ramificados o cíclicos sustituidos o no sustituidos; arilos; arilos sustituidos; heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos; Nu es un nucleófilo seleccionado del grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios o terciarios; tiol; ácido carboxílico; hidroxilamina e hidrazina; n es cero o un entero positivo; y Ar es un hidrocarburo aromático de múltiples sustituciones o un heterociclo aromático de múltiples sustituciones seleccionado del grupo que consiste en:**Fórmula** y en donde cada V se selecciona independientemente del grupo que consiste en O, S y N.

Description

DESCRIPCIÓN
Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador
Campo
La presente invención está dirigida a profármacos poliméricos que tienen enlaces temporales a grupos amino de entidades biológicamente activas tales como péptidos, proteínas, productos naturales o compuestos químicos sintéticos.
Antecedentes
Normalmente, los polímeros se usan de forma no covalente, con el compuesto del fármaco formulado de forma fisicoquímica en una mezcla de disolvente-polímero, o mediante la unión covalente permanente de un reactivo polimérico a uno de los grupos funcionales del fármaco.
La encapsulación de fármacos no covalentes se ha aplicado a formulaciones de deposición para perfiles de liberación de acción prolongada. Normalmente, el fármaco se mezcla con material polimérico y se procesa de tal manera que el fármaco se distribuye por todo el material polimérico a granel. Dichos agregados polímero-proteína pueden tener la forma de micropartículas que se administran como una suspensión inyectable o se formulan como geles que se administran en una sola inyección de bolos. La liberación del fármaco se produce cuando el polímero se hincha o la degradación del polímero permite la difusión del fármaco hacia el exterior. Tales procesos de degradación pueden ser autohidrolíticos o catalizados por enzimas. Un ejemplo de un medicamento comercializado basado en la administración en bolo de un gel de polímero-fármaco es Lupron Depot. Un ejemplo de un medicamento comercializado basado en micropartículas suspendidas es Nutropin Depot.
Una desventaja de la metodología no covalente es que, para evitar la liberación descontrolada y no controlada del fármaco, la encapsulación debe ser altamente eficiente al crear un entorno muy saturado estéricamente. La restricción de la difusión de una molécula de fármaco soluble en agua no unida requiere fuertes contactos de van der Waals, a menudo mediados por unidades estructurales hidrófobas. Muchos agentes terapéuticos conformacionalmente sensibles tales como proteínas o péptidos se vuelven disfuncionales durante el proceso de encapsulación y/o durante el almacenamiento posterior. Además, tales compuestos farmacológicos que contienen amino experimentan fácilmente reacciones secundarias con productos de degradación de polímeros (D.H. Lee et al., J. Contr. Rel., 2003, 92, 291 -299). Además, la dependencia del mecanismo de liberación de la biodegradación puede causar variabilidad entre pacientes.
Como alternativa, los fármacos pueden conjugarse con polímeros a través de enlaces covalentes permanentes. Esta metodología se aplica a diversas clases de moléculas, desde las llamadas moléculas pequeñas, pasando por productos naturales hasta proteínas más grandes.
Muchos agentes medicinales de moléculas pequeñas, como los alcaloides y los agentes antitumorales, muestran baja solubilidad en fluidos acuosos. Una forma era solubilizar estos compuestos de moléculas pequeñas para conjugarlos con polímeros hidrófilos. Una variedad de polímeros solubles en agua, como la albúmina de suero humano, dextrano, lectinas, poli(etilenglicol) (PEG), poli(estireno-co-anhídrido maleico), poli(N-hidroxipropilmetacrilamida), poli(divinil éter-co-anhídrido maleico), ácido hialurónico, se han descrito para este propósito (R. Duncan, Nature Rev. Drug Disc., 2003, 2, 347-360).
Un reto importante en la terapia del cáncer es dirigir selectivamente agentes citotóxicos a células tumorales. Un método prometedor para acumular agentes anticancerígenos de moléculas pequeñas en el tejido tumoral y disminuir los efectos secundarios indeseables de estos agentes es la unión de la citotoxina a un portador macromolecular. La orientación pasiva de los conjugados de fármacos poliméricos a los tumores se basa en el llamado efecto de permeabilidad y retención mejorada (EPR) descrito por Matsumura, Y. y Maeda, H., en Cancer Res., 1986, vol. 6, páginas 6387-6392. Como resultado, varios conjugados polímero-fármaco han entrado en ensayos clínicos como agentes anticancerosos.
La modificación covalente de las moléculas biológicas con poli(etilenglicol) ha sido ampliamente estudiada desde fines de los años setenta. Las llamadas proteínas PEGiladas han demostrado una eficacia terapéutica mejorada al aumentar la solubilidad, reducir la inmunogenicidad y aumentar la vida media de la circulación in vivo debido a la reducción de la eliminación renal y la proteólisis por enzimas (véase, por ejemplo, Caliceti P., Veronse F.M., Adv. Drug. Deliv. Rev.
2003, 55, 1261-1277).
Sin embargo, muchos agentes medicinales como INFalpha2, saquinavir o somatostatina son inactivos o muestran una actividad biológica disminuida cuando un polímero se conjuga covalentemente con la molécula del fármaco (T. Peleg-Shulman et al., J. Med. Chem., 2004, 47, 4897-4904).
Con el fin de evitar las deficiencias impuestas por las mezclas de polímeros no covalentes o la unión covalente permanente, puede ser preferible emplear una metodología profármaco para la conjugación química del fármaco al vehículo polimérico. En tales profármacos poliméricos, las unidades estructurales biológicamente activas están unidas típicamente a la unidad estructural portador polimérica mediante un enlace temporal formado entre la unidad estructural portadora y un grupo hidroxi, amino o carboxi de la molécula de fármaco (tal como se muestra en la Figura 1).
Los profármacos son agentes terapéuticos que son casi inactivos per se, pero se transforman de manera predecible en metabolitos activos (véase B. Testa, J.M: Mayer en Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH, 2003, página 4). La metodología del profármaco portador se puede aplicar de tal manera que el agente medicinal se libere in vivo del polímero para recuperar su actividad biológica. La actividad biológica reducida del profármaco en comparación con el fármaco liberado es ventajosa si se desea una liberación lenta o controlada del fármaco. En este caso, se puede administrar una cantidad relativamente grande de profármaco sin efectos secundarios concomitantes y el riesgo de sobredosis. La liberación del fármaco ocurre con el tiempo, lo que reduce la necesidad de una administración repetida y frecuente del fármaco.
La activación del profármaco puede producirse por escisión enzimática o no enzimática del enlace temporal entre el vehículo y la molécula de fármaco, o una combinación secuencial de ambos, es decir, una etapa enzimática seguida de un reordenamiento no enzimático. En un entorno in vitro libre de enzimas, como una solución reguladora acuosa, un enlace temporal como un éster o una amida puede sufrir hidrólisis, pero la rata correspondiente de hidrólisis puede ser demasiado lenta y no es terapéuticamente útil. En un ambiente in vivo, las esterasas o las amidas están típicamente presentes y pueden causar una aceleración catalítica significativa de la cinética de la hidrólisis desde dos hasta varios órdenes de magnitud (véase, por ejemplo, R.B. Greenwald et al. J. Med. Chem. 1999, 42(18), 3857-3867).
Definiciones basadas en IUPAC
(como se indica en http://www.chem.qmul.ac.uk/iupac/medchem/ (consultado el 8 de marzo de 2004).
Profármaco
Un profármaco es cualquier compuesto que experimenta biotransformación antes de mostrar sus efectos farmacológicos. Por lo tanto, los profármacos pueden verse como medicamentos que contienen grupos protectores no tóxicos especializados que se usan de manera transitoria para alterar o eliminar propiedades indeseables en la molécula original.
Profármaco ligado a portador (profármaco portador)
Un profármaco ligado a un portador es un profármaco que contiene un enlace temporal de una sustancia activa dada con un grupo portador transitorio que produce propiedades fisicoquímicas o farmacocinéticas mejoradas y que puede eliminarse fácilmente in vivo, generalmente por una escisión hidrolítica. Esto se muestra gráficamente en la Figura 1.
Profármaco en cascada
Un profármaco en cascada es un profármaco portador para el cual la escisión del grupo portador se hace efectiva solo después de desenmascarar un grupo activador.
Profármaco polimérico en cascada
Un profármaco polimérico en cascada es un profármaco portador que contiene un enlace temporal de una sustancia activa dada con un grupo portador polimérico transitorio para el cual la escisión del portador se hace efectiva solo después de desenmascarar un grupo activador.
Profármaco bioprecursor
Un profármaco bioprecursor es un profármaco que no implica el enlace a un grupo portador, sino que resulta de una modificación molecular del principio activo en sí. Esta modificación genera un nuevo compuesto, que se puede transformar metabólica o químicamente, y el compuesto resultante es el principio activo.
Biotransformación
La biotransformación es la conversión química de sustancias por organismos vivos o preparaciones de enzimas.
Los profármacos se clasifican en dos clases, bioprecursores y profármacos ligados a portadores. Los bioprecursores no contienen un grupo portador y se activan mediante la creación metabólica de un grupo funcional. En profármacos ligados a portadores, la sustancia activa está enlazada a una unidad estructural portadora por un enlace temporal. Esta invención se refiere a profármacos poliméricos unidos a portadores o profármacos macromoleculares, en los que el propio portador es una macromolécula tal como una proteína portadora o polisacárido o polietilenglicol. Específicamente, la invención se refiere a profármacos unidos a un vehículo polimérico para los cuales esta división entre el polímero y el fármaco se realiza en dos etapas de acuerdo con un mecanismo en cascada.
La escisión de un profármaco portador genera una entidad molecular (fármaco) de bioactividad incrementada y al menos un producto secundario, el portador. Este producto secundario puede ser biológicamente inerte (por ejemplo, PEG) o puede tener propiedades de direccionamiento (por ejemplo, anticuerpos). Después de la escisión, la entidad bioactiva revelará al menos un grupo funcional previamente conjugado y, por lo tanto, protegido, y la presencia de este grupo contribuye típicamente a la bioactividad del fármaco.
Para implementar una estrategia de profármaco, se emplea al menos un cierto grupo funcional en la molécula de fármaco para la unión del polímero portador. Los grupos funcionales preferidos son grupos hidroxilo o amino. En consecuencia, tanto la química de unión como las condiciones de hidrólisis varían mucho entre estas dos funcionalidades.
En un mecanismo simple de un solo paso, el enlace temporal del profármaco se caracteriza por una labilidad intrínseca o dependencia de la enzima. La susceptibilidad de este enlace a la hidrólisis en un ambiente acuoso con o sin catálisis enzimática controla la cinética de escisión entre el vehículo polimérico y el fármaco. Numerosos profármacos macromoleculares se describen en la literatura donde el enlace temporal es un enlace éster lábil. En estos casos, el grupo funcional proporcionado por la entidad bioactiva es un grupo hidroxilo o un ácido carboxílico (por ejemplo, Y. Luo, MR Ziebell, GD Prestwich, "A Hyaluronic Acid-Taxol Antitumor Bioconjugate Targeted to Cancer Cells",Biomacromolecules 2000, 1,208-218, J Cheng et al, Synthesis of Linear, betaCyclodextrin Based Polymers and Their Camptothecin Conjugates, Bioconjugate Chem. 2003, 14, 1007-1017, R. Bhatt et al, Synthesis and in Vivo Antitumor Activity of Poly(L-glutamic acid) Conjugates of 20(S)-Campthothecin,J. Med. Chem. 2003, 46, 190-193; R.B. Greenwald, A. Pendri, C.D. Conover, H. Zhao, Y.H. Choe, A. Martinez, K. Shum, S. Guan, J. Med. Chem., 1999, 42, 3657-3667; B. Testa, J.M: Mayer in Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH, 2003, Capítulo 8).
Especialmente para biomacromoléculas terapéuticas, pero también para ciertos fármacos de molécula pequeña, puede ser deseable vincular el portador macromolecular a grupos amino de la entidad bioactiva (es decir, grupos amino de N-terminal o lisina amino de proteínas). Este será el caso si el enmascaramiento de la bioactividad del medicamento requiere la conjugación de un cierto grupo amino de la entidad bioactiva, por ejemplo, un grupo amino ubicado en un centro activo o una región o epítopo involucrado en la unión del receptor. Además, durante la preparación del profármaco, los grupos amino pueden dirigirse de manera más quimioselectiva y servir como un mejor manejo para conjugar el vehículo y el fármaco debido a su mayor nucleofilicidad en comparación con los grupos hidroxílicos o fenólicos. Esto es particularmente cierto para proteínas que pueden contener una gran variedad de funcionalidades reactivas diferentes, donde las reacciones de conjugación no selectivas conducen a mezclas de productos no deseados que requieren una caracterización o purificación extensas y pueden disminuir el rendimiento de la reacción y la eficacia terapéutica del producto.
Los enlaces amida, así como los carbamatos alifáticos, son mucho más estables a la hidrólisis que los enlaces éster, y la rata de aumento sería demasiado lenta para la utilidad terapéutica en un profármaco ligado a un vehículo. Por lo tanto, es ventajoso añadir componentes químicos estructurales tales como grupos vecinos para ejercer control sobre la escisión del enlace amida del profármaco. Dichas estructuras químicas adicionales que controlan la escisión que no son proporcionadas por la entidad portadora ni por el medicamento se denominan enlazadores. Los enlazadores de profármacos pueden tener un fuerte efecto en la velocidad de hidrólisis de un enlace temporal dado. La variación de la naturaleza química de estos enlazadores permite diseñar las propiedades del enlazador en gran medida.
Por ejemplo, los enlazadores de profármacos pueden diseñarse para la selectividad enzimática. El requisito previo para la dependencia enzimática es que la estructura del enlazador muestre un motivo estructural que sea reconocido como un sustrato por una enzima endógena correspondiente (Figura 2).
La aceleración catalizada por enzimas de la escisión del profármaco es una característica deseable para aplicaciones de selección de órganos o celulares. La liberación dirigida de la entidad bioactiva se efectúa, si una enzima, que corta selectivamente el enlace está específicamente presente en el órgano o tipo de célula elegido para el tratamiento.
Una propiedad típica de un enlace temporal dependiente de enzimas es su estabilidad con respecto a la hidrólisis. El enlace temporal en sí no sufrirá autohidrólisis a una velocidad que liberaría el fármaco en tal medida que se pudiera inducir un efecto terapéutico en un régimen de dosificación normal. Es solo en presencia de la enzima, que el ataque de la enzima en el enlace provoca una aceleración significativa de la escisión y, concomitantemente, un aumento de la concentración de fármaco libre.
Se han publicado varios ejemplos para la activación de profármacos de unidades estructurales biológicamente activas que contienen amina por enzimas específicas para la liberación dirigida. En estos casos, la escisión se produce en un proceso de un solo paso que es catalizado por la enzima. G. Cavallaro et al., Bioconjugate Chem. 2001, 12, 143-151 describen la liberación enzimática de un agente antitumoral por la proteasa plasmina. La citarabina se acopla a través de la secuencia tripeptídica D-Val-Leu-Lys al polímero alfa, beta-poli(N-hidroxietil)-DL-aspartamida (PHEA). La liberación enzimática de citarabina se efectúa por la proteasa plasmina, cuya concentración es relativamente alta en varios tipos de masa tumoral.
Otros ejemplos de profármacos antitumorales poliméricos activados por enzimas específicas como la beta lactamasa (R. Satchi-Fainaro et al., Bioconjugate Chem. 2003, 14, 797-804) y cisteína proteasas como la catepsina B (R. Duncan et al. J. Contr. Release 2001,74, 135-146) han sido descritos. Wiwattanapatapee et al. (2003) esbozan un profármaco dendrímero para el suministro colónico de ácido 5-aminosalicílico. La molécula de fármaco se conjuga mediante un enlace azo al dendrímero PAMAM de la "generación 3". El ácido 5-aminosalicílico se libera en el colon por una enzima bacteriana llamada azo reductasa (W. R. Wiwattanapatapee, L. Lomlim, K. Saramunee, J. Controlled Release, 2003, 88: 1-9).
A. J. Garman et al. (A.J. Garman, S.B. Kalindjan, FEBS Lett. 1987, 223(2), 361-365 1987) usa PEG5000-anhídrido maleico para la modificación reversible de grupos amino en el activador del plasminógeno de tipo tisular y la uroquinasa. La regeneración de la enzima funcional a partir del conjugado PEG-uPA después de la incubación a pH 7.4 de regulador por escisión del enlace de ácido maléxico sigue una cinética de primer orden con una vida media de 6.1 h. La escisión del profármaco no se investigó en presencia de enzimas, y se puede esperar, como se explicó anteriormente, que las proteasas presentes en el entorno in vivo contribuirán significativamente a la escisión del enlace amida temporal. Una desventaja adicional de este enlace es la falta de estabilidad del conjugado a valores de pH más bajos. Esto limita la aplicabilidad del enlazador a los agentes activos que son estables a valores de pH básicos, ya que la purificación del conjugado polimérico del agente activo se debe realizar en condiciones básicas para prevenir la escisión prematura del profármaco.
Los mecanismos de cascada han demostrado ser particularmente útiles en la liberación controlada de fármacos que contienen funcionalidades de grupos amino debido a que las características de división del enlazador pueden optimizarse con mayor flexibilidad que en los profármacos simples de un solo paso.
La división en cascada está habilitada por compuestos enlazadores que se componen de una combinación estructural de un grupo de enmascaramiento y un grupo activador. El grupo de enmascaramiento se une al grupo de activación por medio de un primer enlace temporal, como un éster o un carbamato. El grupo activador está unido a un grupo amino de la molécula de fármaco a través de un segundo enlace temporal, por ejemplo, un carbamato. La estabilidad o susceptibilidad a la hidrólisis del segundo enlace temporal depende de la presencia o ausencia del grupo de enmascaramiento. En presencia del grupo de enmascaramiento, el segundo enlace temporal es altamente estable y es poco probable que libere el fármaco con una cinética terapéuticamente útil. En ausencia del grupo de enmascaramiento, este enlace se vuelve altamente lábil, causando una rápida escisión y liberación del fármaco.
La escisión del primer enlace temporal es el paso limitante de la velocidad en el mecanismo en cascada. Este primer paso puede inducir un reordenamiento molecular del grupo activador, como una eliminación de 1,6. El reordenamiento hace que el segundo enlace temporal sea mucho más lábil que se induce su escisión. Idealmente, la rata de escisión del primer enlace temporal es idéntica a la rata de liberación deseada para la molécula de fármaco en un escenario terapéutico dado. Además, es deseable que la escisión del segundo enlace temporal sea instantánea después de que se haya inducido su labilidad por la escisión del primer enlace temporal.
Existe una variedad de ejemplos para profármacos portadores en cascada en los que la funcionalidad del grupo de enmascaramiento es realizada por el propio polímero portador como se muestra esquemáticamente en la Figura 3. En los sistemas que se describen a continuación, el grupo de enmascaramiento no es solo parte del portador, sino que también se ha diseñado para la dependencia de enzimas (Figura 4). Solo en presencia de una enzima correspondiente es la velocidad de escisión del primer enlace temporal suficientemente acelerada para uso terapéutico.
R. B. Greenwald, A. Pendri, C.D. Conover, H. Zhao, Y.H. Choe, A. Martínez, K. Shum, S. Guan, J. Med. Chem., 1999, 42, 3657-3667 y la Solicitud de Patente PCT WO-A-99/30727 describen una metodología para sintetizar profármacos de poli(etilenglicol) de compuestos de moléculas pequeñas que contienen amino basados en la eliminación de 1,4- o 1,6-bencilo. En este enfoque, el poli(etilenglicol) como vehículo polimérico se une al grupo bencilo por medio de un primer enlace temporal, como un enlace éster, carbonato, carbamato o amida. El grupo bencilo sirve como grupo activador, y el polímero PEG también tiene la función del grupo de enmascaramiento en este mecanismo de escisión en cascada. El grupo amino de la molécula de fármaco está unido a través de un segundo enlace temporal, que contiene un grupo carbamato, a la unidad estructural bencilo. La liberación de PEG de la molécula de fármaco se inicia mediante la escisión enzimática del primer enlace temporal seguida de una eliminación rápida de 1,4- o 1,6-bencilo, iniciando la escisión del segundo enlace temporal.
El mismo sistema enlazador también se usa para conjugados de poli(etilenglicol) liberables de proteínas (S. Lee, R. B. Greenwald et al., Bioconj. Chem. 2001, 12(2), 163-169). La lisozima se usa como proteína modelo porque pierde su actividad cuando la PEGilación tiene lugar en el grupo épsilon-amino de los residuos de lisina. Se conjugaron diversas cantidades de enlazador de PEG con la proteína. La regeneración de la proteína nativa a partir de los conjugados de PEG se produce por escisión enzimática en plasma de rata o en regulador no fisiológico de pH alto.
Greenwald et al., publicó en 2000 un sistema de administración de fármacos de poli(etilenglicol) de profármacos que contienen amino basados en la lactonización con bloqueo de trimetilo (R.B. Greenwald et al. J. Med. Chem. 2000, 43(3), 457-487; Solicitud de Patente PCT No. WO-A-02/089789). En este sistema de profármacos, el ácido ohidroxifenil-dimetilpropiónico sustituido está unido a PEG por un grupo éster, carbonato o carbamato como primer enlace temporal y a grupos amino de moléculas de fármaco por medio de un enlace amida como segundo enlace temporal. El paso determinante de la velocidad en la liberación del fármaco es la escisión enzimática del primer enlace. Este paso es seguido por la rápida escisión de la amida por la lactonización, liberando un producto secundario de lactona aromática potencialmente tóxico.
Sistemas de profármacos similares fueron descritos por F.M.H. DeGroot et al. (WO02083180 y WO04043493A1) y D. Shabat et al. (WO04019993A1). El documento WO02083180 describe un sistema de profármacos con enlaces alargados y múltiples basados en 1,(4+2n) eliminación. Las unidades estructurales de enmascaramiento en estos ejemplos se diseñaron específicamente para la escisión enzimática. Este enfoque se extendió al sistema de profármacos dendríticos donde un evento de activación enzimática desencadenó la liberación de más de una molécula de fármaco (documento WO04043493A1). El documento WO04019993A1 describe un sistema de profármaco similar basado en un dendrímero autoinmolativo que libera muchas unidades estructurales de fármaco en un único evento de activación enzimática. Estos sistemas se caracterizan por la ausencia de un portador polimérico. En cambio, la oligomerización de los componentes del enlazador del profármaco proporciona un alto peso molecular del profármaco, y la escisión del profármaco genera residuos del enlazador y el fármaco libre, pero no se libera ninguna entidad polimérica.
La desventaja en los sistemas de profármacos mencionados anteriormente descritos por Greenwald, DeGroot and Shabat es la liberación de productos secundarios de moléculas pequeñas aromáticas potencialmente tóxicas, como los metiuros de quinona, después de la escisión del enlace temporal. Las entidades potencialmente tóxicas se liberan en una estequiometría 1:1 con el medicamento y pueden asumir altas concentraciones in vivo. Este factor de riesgo es aún mayor si se emplean estructuras dendríticas autoinmolables basadas en oligómeros del grupo activador y se liberan más productos secundarios aromáticos que moléculas de fármaco.
Más recientemente, R. B. Greenwald et al. (Greenwald et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 726-734) describieron un sistema de profármaco PEG basado en el enlazador de amida de bis-(N-2-hidroxietil)glicina (amina de bicina). En este sistema, dos moléculas de PEG están conectadas a una molécula de bicina acoplada a un grupo amino de la molécula de fármaco. Los dos primeros pasos en la activación de profármacos es la escisión enzimática de ambas moléculas de PEG. Se describen diferentes enlaces entre PEG y bicina que dan como resultado diferentes cinéticas de activación de profármacos. La principal desventaja de este sistema es la lenta rata de hidrólisis de la amina de bicina conjugada con la molécula del fármaco (t1/2 = 3 h en regulador fosfato), lo que resulta en la liberación de un producto intermedio profármaco modificado con bicina que puede mostrar diferentes propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas. en comparación con la molécula de fármaco original.
Los profármacos en cascada con grupos de enmascaramiento que forman parte del polímero portador están limitados en el control de la cinética de liberación del fármaco. Dado que la división del grupo de enmascaramiento es el paso limitante de la velocidad en el mecanismo en cascada, su estructura molecular gobierna la cinética. Si el polímero portador es idéntico al grupo de enmascaramiento, la flexibilidad estructural está restringida a las características de los polímeros. Alternativamente, si el polímero requiere una modificación estructural para cumplir los requisitos de escisión controlada, la síntesis de las estructuras correspondientes puede ser más difícil. Además, la incorporación de las características del grupo de enmascaramiento en un polímero puede cambiar su perfil de seguridad.
Por lo tanto, se prefiere separar estructuralmente el grupo de enmascaramiento y el portador. Esto se puede lograr empleando un enlace permanente entre el polímero transportador y el grupo activador. Este enlace estable no participa en el mecanismo de escisión en cascada. Si el portador no sirve como grupo de enmascaramiento y el grupo activador se acopla al portador por medio de un enlace estable, se evita la liberación de productos secundarios potencialmente tóxicos, como el grupo activador. La unión estable del grupo activador y el polímero también suprime la liberación de intermediarios de fármacos con farmacología indefinida.
Se han desarrollado sistemas para la administración dirigida de agentes terapéuticos haciendo que el grupo de enmascaramiento dependa de la enzima. Solo en presencia de una enzima correspondiente es la velocidad de escisión del primer enlace temporal que conecta el grupo de enmascaramiento con el grupo activador lo suficientemente acelerado para uso terapéutico.
Antczak et al. (Bioorg Med Chem 9 (2001) 2843-48) describe un reactivo que forma la base de un sistema de profármaco en cascada macromolecular para moléculas de fármaco que contienen amina. En esta metodología, un anticuerpo sirve como portador, un enlace estable conecta el anticuerpo a una unidad estructural activadora, que lleva un grupo de enmascaramiento enzimáticamente escindible. Tras la eliminación enzimática del grupo de enmascaramiento unido a éster, un segundo enlace temporal se escinde y libera el compuesto del fármaco, como se muestra en la Figura 6.
D. Shabat et al. (Chem. Eur. J. 2004, 10, 2626-2634) describe un sistema de profármaco polimérico basado en una unidad estructural activadora de ácido mandélico. En este sistema, el grupo de enmascaramiento está vinculado a la unidad estructural activadora por un enlace carbamato. La unidad estructural activadora se conjuga permanentemente con un polímero de poliacrilamida a través de un enlace amida. Después de la activación enzimática del grupo de enmascaramiento por un anticuerpo catalítico, el grupo de enmascaramiento se escinde por ciclización y se libera el fármaco. La unidad estructural activadora todavía está conectado al polímero de poliacrilamida después de la liberación del fármaco.
M.-R. Lee et al. describe (Angew. Chem. 2004, 116, 1707-1710) un sistema de profármaco similar basado en una unidad estructural activadora de ácido mandélico y un grupo de enmascaramiento unido a éster enzimáticamente escindible.
En todos estos sistemas profármaco-polímero descritos, el grupo de enmascaramiento está diseñado específicamente para ser sustrato de una enzima, y la escisión del grupo de enmascaramiento dependerá casi completamente de la catálisis enzimática con las desventajas de la variabilidad entre pacientes, la variabilidad del sitio de inyección y la pobre correlación in vitro-in vivo.
Un inconveniente importante de la escisión predominantemente enzimática es la variabilidad entre pacientes. Los niveles de enzima pueden diferir significativamente entre los individuos, lo que resulta en una variación biológica de la activación del profármaco por escisión enzimática. Los niveles de enzima también pueden variar según el lugar de administración, por ejemplo, se sabe que, en el caso de la inyección subcutánea, ciertas áreas del cuerpo producen efectos terapéuticos más predecibles que otras. Para reducir este efecto impredecible, el corte no enzimático o la catálisis intramolecular son de particular interés (véase, por ejemplo, B. Testa, J.M: Mayer in Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH, 2003, página 5).
Además, es difícil establecer una correlación in vivo-in vitro de las propiedades farmacocinéticas para tales profármacos ligados a portadores dependientes de enzimas. En ausencia de una sólida correlación in vivo-in intro, la optimización de un perfil de liberación se convierte en una tarea incómoda.
Además, la necesidad de selectividad enzimática impone una severa limitación en las características estructurales que se pueden usar en el enlazador de profármaco. Esta restricción dificulta en gran medida el desarrollo de una sólida relación estructura-actividad y, en consecuencia, la optimización de la cinética de escisión del enlazador.
Por estas razones, existe la necesidad de proporcionar nuevas tecnologías de enlazador y/o portador para formar profármacos poliméricos de agentes activos que contienen amina para superar las limitaciones de los profármacos poliméricos descritos.
Descripción detallada de la invención
La presente invención aborda las desventajas descritas anteriormente. La invención proporciona profármacos poliméricos en cascada caracterizados por un grupo de enmascaramiento que contiene un nucleófilo y que es distinto del portador.
El nucleófilo está a una distancia adecuada para un primer enlace temporal con un grupo activador aromático capaz de experimentar una reacción de eliminación 1,(4+2p) (con p=0, 1,2, 3, 4, ...) después de la escisión del primer enlace temporal. La invención se caracteriza además porque el grupo activador está conectado al grupo amino de una molécula de fármaco a través de un segundo enlace temporal que se escinde como consecuencia de la eliminación 1, (4+2p). Una característica estructural adicional es la unión de un portador polimérico al grupo activador por medio de un enlace permanente.
Los grupos de enmascaramiento de acuerdo con la presente invención contienen al menos un nucleófilo Nu. Este nucleófilo, que puede ser, por ejemplo, un grupo amino primario, secundario o terciario puede ayudar a la escisión del grupo de enmascaramiento de la unidad estructural activadora mediante catálisis o ciclización intramolecular.
La invención proporciona profármacos poliméricos en cascada de Fórmula Ia o Ib. También se describen los correspondientes reactivos enlazadores de profármacos en cascada poliméricos de Fórmula Ia o Ib.
Figure imgf000008_0001
en donde Yi a Y5 , R1 a R4, T, X, W, Nu y Ar se definen a continuación:
La liberación de drogas nativas se efectúa por un mecanismo de dos pasos. El primer paso es la división determinante de la velocidad del primer enlace temporal entre el grupo de enmascaramiento
Figure imgf000008_0002
y la porción activadora
Figure imgf000008_0003
del profármaco polimérico in vivo.
Como se describió anteriormente, la escisión del grupo de enmascaramiento puede estar mediada por una etapa enzimática o no enzimática, tal como hidrólisis dependiente del pH o ciclización intramolecular. En la realización preferida de la invención, la escisión se efectúa no enzimáticamente mediante ciclización o catálisis intramolecular. La vida media de la cinética de escisión en un regulador acuoso de pH 7.4 a 37°C del grupo de enmascaramiento según la presente invención es preferiblemente entre 1 hora y 6 meses, más preferiblemente entre 1 día y 3 meses, y lo más preferiblemente entre 1 día y 2 meses.
El segundo y último paso en la liberación del fármaco nativo regenerado es el llamado, rápido, espontáneo e irreversible, llamado 1,4 o 1,6 o 1,(4+2p) (en donde p=2, 3, 4 o superior) eliminación de la unidad estructural
Figure imgf000009_0001
del profármaco polimérico restante de fórmula la o fórmula Ib, respectivamente.
Este mecanismo de liberación de fármaco nativo a partir de un profármaco polimérico desencadenado por escisión hidrolítica del grupo de enmascaramiento seguido por una etapa de eliminación 1,6 del grupo activador se ejemplifica mediante un profármaco polimérico de acuerdo con la presente invención.
Polímero
NU
Figure imgf000009_0002
— Fármaco
escisión del grupo de enmascaramiento
mediante catálisis intramolecular
Polímero
R- RS
OH -« + NU
Mu Z J
Figure imgf000009_0003
Fármaco
Figure imgf000009_0004
o
Figure imgf000009_0005
Definición de Y1 a Y5 , R1 a R4, T, X, W, Nu y Ar en la fórmula Ia o Ib
T es D. También se describe, T es A.
Se describe un reactivo enlazador de profármaco en cascada polimérico, donde T es A y A es un grupo saliente. Ejemplos de grupos salientes A adecuados incluyen cloruro, bromuro, fluoruro, nitrofenoxi, imidazolilo, Nhidroxisuccinimidilo, N-hidroxibenzotriazolilo, N-hidroxiazobenzotriazolilo, pentafluorfenoxi, N-hidroxisulfosuccinimidilo, o cualquier otro grupo saliente conocido por los expertos en la técnica.
La estructura de la invención es un profármaco polimérico en cascada, T es D, y
D es un residuo de una unidad estructural biológicamente activa que contiene amina, que está conectada a la unidad estructural de la molécula a través de un grupo amina. Preferiblemente, D se selecciona del grupo de unidades estructurales biológicamente activas que consisten en agentes bioactivos y biopolímeros de moléculas pequeñas. Los biopolímeros se seleccionan del grupo que consiste en proteínas, polipéptidos, oligonucleótidos (ARN, ADN) y ácidos nucleicos peptídicos (ANP).
Nótese que en esta descripción a menudo se hace referencia a profármacos. Un verdadero profármaco se encuentra cuando T es el residuo del material o unidad estructural biológicamente activa que contiene amina. Si T es un grupo saliente A, entonces la fórmula representa un reactivo enlazador de profármaco en cascada polimérico. Por simplicidad, estos serán referidos a profármacos en esta descripción. Se entenderá a partir del contexto si indica un profármaco verdadero o un reactivo como precursor.
Las unidades estructurales bioactivas de moléculas pequeñas orgánicas adecuadas incluyen unidades estructurales tales como agentes activos para el sistema nervioso central, antiinfecciosos, antineoplásicos, agentes antibacterianos, antifúngicos, analgésicos, anticonceptivos, antiinflamatorios, esteroideos, vasodilatadores, vasoconstrictores y cardiovasculares con al menos un grupo amino primario o secundario. Ejemplos de tales compuestos son daunorrubicina, doxorrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, aminoglutetimida, amantadina, diafenilsulfona, etambutol, sulfadiazina, sulfamerazina, sulfametoxazol, sulfaleno, clinafloxacina, moxifloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, norfloxacina, neomicina B, espectinomicina, kanamicina A, meropenem, dopamina, dobutamina, lisinopril, serotonina, carbutamida y acivicina.
Las proteínas y polipéptidos adecuados que tienen al menos un grupo amino libre incluyen ACTH, adenosina desaminasa, agalsidasa, albúmina, alfa-1 antitripsina (AAT), inhibidor de la alfa-1 proteinasa (API), alteplasa, anistreplasa, ancrod serina proteasa, anticuerpos (monoclonales o policlonales, y fragmentos o fusiones), antitrombina III, antitripsina, aprotinina, asparaginasas, bifalina, proteínas morfogénicas óseas, calcitonina (salmón), colagenasa, ADNasa, endorfinas, enfuvirtida, encefalinas, eritropoyetinas, factor VIIa, factor VIII, factor VIIIa, factor IX, fibrinolisina, proteínas de fusión, hormonas estimulantes de folículos, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), galactosidasa, glucagón, péptidos similares al glucagón como GLP-1, glucocerebrosidasa, factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos (GM-CSF), proteína activadora de fosfolipasa (PLAP), gonadotropina coriónica (hCG), hemoglobinas, vacunas contra la hepatitis B, hirudina, hialuronidasas, iduronidasas, inmunoglobulinas, vacunas contra la influenza, interleucinas (1 alfa, 1 beta, 2, 3, 4, 6, 10, 11, 12), antagonista del receptor IL-1 (rhIL-1 ra), insulinas, interferones (alfa 2a, alfa 2b, alfa 2c, beta 1 a, beta 1 b, gamma 1 a, gamma 1 b), factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), factores de crecimiento transformantes, lactasa, leuprolida, levotiroxina, hormona luteinizante, vacuna para Lyme, péptido natriurético, pancrelipasa, papaína, hormona paratiroidea, PDGF, pepsina, factor activador de plaquetas acetilhidrolasa (PAF-AH), prolactina, proteína C, octreotida, secretina, sermorelina, superóxido dismutasa (SOD), somatropinas (hormona de crecimiento), somatostatina, estreptoquinasa, sucrasa, fragmento de toxina tetánica, tilactasa, trombinas, timosina, hormona estimulante de la tiroides, tirotropina, factor de necrosis tumoral (TNF), receptor de TNF-IgG Fc, activador del plasminógeno tisular (tPA), TSH, urato oxidasa,
uroquinasa, vacunas y proteínas vegetales como las lectinas o las ricinas.
En este documento también se incluye cualquier polipéptido sintético o cualquier porción de un polipéptido con bioactividad in vivo. Además, se incluyen proteínas preparadas por tecnología de ADN recombinante que incluyen versiones mutantes de proteínas mencionadas anteriormente, fragmentos de anticuerpos, proteínas de unión de cadena simple, anticuerpos catalíticos y proteínas de fusión.
Las proteínas preferidas son anticuerpos, calcitonina, G-CSF, GM-CSF, eritropoyetinas, hemoglobinas, interleucinas, insulinas, interferones, SOD, somatropina, TNF, TNF-receptor-IgG Fc y péptidos similares al glucagón como GLP-1.
X es una unidad estructural espaciadora tal como R5-Y6.
Y1, Y2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S;
Y3 , Y5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S;
Y4 es O, NR6 o -C(R7)(R8)-;
Y 6 es O, S, NR6, succinimida, maleimida, un enlace carbono-carbono insaturado, cualquier heteroátomo que contenga un par de electrones libres, o está ausente.
R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; ciano; nitro; halógeno; carboxi; carboxialquilo; alquilcarbonilo y carboxamidoalquilo.
El término "heteroalquilo" en el contexto de la presente invención denota cadenas de alquilo (lineales, cíclicas o ramificadas) en las que las cadenas de alquilo contienen o están sustituidas en cualquier posición uno o más heteroátomos, seleccionados independientemente de O, S, N, P, Si, Cl, F, Br, I o grupos, seleccionados independientemente de carboxamida, éster carboxílico, éster de fosfonato, éster de fosfato, enlaces dobles o triples, carbamato, urea, tiourea, tiocarbamato, oxima, ciano, carboxilo y carbonilo.
Cada sustitución de R4 en Ar puede ser igual o diferente y se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilo; arilo sustituido; heteroarilo sustituido o no sustituido; alcoxi sustituido, no sustituido, lineal, ramificado o cíclico; heteroalquiloxi lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; ariloxi; heteroariloxi; ciano y halógeno.
R4 se selecciona preferiblemente de sustituyentes pequeños tales como hidrógeno, metilo, etilo, etoxi, metoxi y otros alquilos y heteroalquilos lineales, cíclicos o ramificados de C1 a C6.
n es cero o un entero positivo.
R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico, arilo, arilo sustituido o no sustituido; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; carboxialquilo; alquilcarbonilo; carboxamidoalquilo; ciano y halógeno.
R5 se selecciona del grupo que consiste en alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos.
R6 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos.
R1 es un polímero.
Ejemplos de polímeros adecuados son polímeros basados en polialquiloxi como poli(propilenglicol) o poli(etilenglicol); dextrano, quitosano, ácido hialurónico, alginato, xilano, manano, carragenano, agarosa, celulosa, almidón, hidroxietil almidón (HES) y otros polímeros a base de carbohidratos; poli(alcoholes vinílicos); poli(oxazolinas); poli(anhídridos); poli(ortoésteres); poli(carbonatos); poli(uretanos); poli(ácidos acrílicos); poli(acrilamidas) tales como poli(hidroxipropilmetacrilamida) (HMPA); poli(acrilatos); poli(metacrilatos) como poli(metacrilato de hidroxietilo); poli(organofosfazenos); poli(siloxanos); poli(vinilpirrolidona); poli(cianoacrilatos); poli(ésteres) tales como poli(ácido láctico) o poli(ácidos glicólicos); poli(iminocarbonatos); poli(aminoácidos) tales como poli(ácido glutámico), colágeno, gelatina; copolímeros; copolímeros injertados; polímeros reticulados; hidrogeles y copolímeros de bloque de los polímeros enumerados anteriormente.
Los hidrogeles pueden definirse como redes poliméricas tridimensionales, hidrófilas o anfifílicas que contienen grandes cantidades de agua. Las redes están compuestas de homopolímeros o copolímeros, son insolubles debido a la presencia de enlaces químicos covalentes o físicos (interacciones iónicas, hidrófobas, enredos). Los enlaces cruzados proporcionan la estructura de red y la integridad física. Los hidrogeles exhiben una compatibilidad termodinámica con el agua que les permite hincharse en medios acuosos (véase: N.A. Peppas, P. Bures, W. Leobandung, H. Ichikawa, Hydrogels in pharmaceutical formulations, Eur. J. Pharm. Biopharm. 2000, 50, 27-46). Las cadenas de la red están conectadas de tal manera que existen poros y que una fracción sustancial de estos poros tienen dimensiones de entre 1 y 1000 nm. Seleccionando ciertas condiciones de polimerización, el hidrogel se puede obtener en forma de un gel amorfo o como resina en perlas. Tales perlas blandas pueden tener un diámetro de entre 1 y 1000 micrómetros.
Los hidrogeles se pueden sintetizar a partir de los polímeros y copolímeros enumerados anteriormente y físicamente reticulados o químicamente reticulados por polimerización radical, aniónica o catiónica, por reacciones químicas como las reacciones de condensación o adición como se describe en W.E. Hennink and C.F. van Nostrum, Adv. Drug Del. Rev. 2002, 54, 13-36.
Otros ejemplos incluyen polímeros ramificados e hiperramificados. Ejemplos de tales polímeros incluyen dendrímeros y otros polímeros en estrella densa. (R. Esfand, D.A. Tomalia, Drug Discov Today, 2001,6(8), 427-436; P.M. Heegaard, U. Boas, Chem. Soc. Rev. 2004 (33(1), 43-63; S.M. Grayson, J.M. Frechet, Chem. Rev. 2001, 101(12), 3819-3868).
R1 también puede ser un biopolímero como una proteína. Ejemplos de tales proteínas incluyen albúmina, anticuerpos, fibrina, caseína y otras proteínas plasmáticas.
Cada polímero R1 puede transportar una o más sustancias biológicamente activas unidas al polímero por conjugación con un segundo enlazador de profármaco como se describe en el presente documento o cualquier otro enlazador conocido por el experto en la materia. Los polímeros pueden tener otros sustituyentes y pueden funcionalizarse para unirse a la unidad estructural espaciadora X. R1 tiene al menos un grupo funcional para la unión a X y se selecciona del grupo que consiste en ácido carboxílico, amino, maleimida, tiol, ácido sulfónico y derivados , carbonato, carbamato, hidroxilo, aldehído, cetona, hidracina, isocianato, isotiocianato, ácido fosfórico, ácido fosfónico, haloacetilo, haluros de alquilo, acriloilo, agentes de arilación como fluoruros de arilo, hidroxilamina, disulfuros como disulfuro de piridilo, vinil sulfona, vinil cetona, diazoalcanos, compuestos de diazoacetilo, epóxido, oxirano y aziridina.
Los grupos funcionales preferidos para el polímero R1 incluyen tiol, maleimida, amino, ácido carboxílico, carbonato, carbamato, aldehído y haloacetilo.
Los grupos funcionales especialmente preferidos incluyen tiol, maleimida, amino, ácido carboxílico y derivados, carbamato y derivados, y carbonato y derivados de los mismos.
Ejemplos de un enlace o grupo adecuado formado entre X y R1 se seleccionan del grupo que consiste en disulfuro, S-succinimida, amida, amino, éster carboxílico, sulfonamida, carbamato, carbonato, éter, oxima, hidrazona, urea, tiourea, fosfato y fosfonato.
Un enlace o grupo preferido formado entre X y R1 se selecciona del grupo que consiste en S-succinimida, amida, carbamato y urea.
Preferiblemente, los polímeros R1 son bien hidratados, degradables o excretables, no tóxicos y no inmunogénicos en mamíferos. Los polímeros R1 preferidos incluyen polímeros basados en polialcoxi como polietilenglicol y reactivos de polietilenglicol como los descritos en el catálogo Nektar Inc. 2003 ''Nektar Molecule Engineering-Polyethylene Glycol and Derivatives for Advanced PEGylation" y polímeros e hidrogeles ramificados, hiperramificados y reticulados, y proteínas como la albúmina.
W se selecciona del grupo que consiste en alquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos. W se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en alquilos o heteroalquilos lineales, ramificados o cíclicos, no tóxicos, sustituidos o no sustituidos.
Variaciones preferidas de
Figure imgf000012_0001
Variaciones especialmente preferidas de
Figure imgf000012_0002
que forman profármacos poliméricos de las siguientes fórmulas
Figure imgf000013_0001
La variación más preferida es
Figure imgf000013_0002
En la fórmula laa y Iba R6 también puede ser Nu-W.
Al menos un Nu está presente en Nu-W.
Nu es un nucleófilo que puede realizar un ataque nucleófilo en el carbono carbonílico de
Xi
Y _ IL y 2
y así catalizar la escisión del grupo de enmascaramiento por catálisis intramolecular o ciclización (Figura 8). La Figura 8 muestra un ejemplo de acuerdo con la fórmula Ia o Ib en donde la escisión del grupo de enmascaramiento es por ciclización intramolecular. En los casos en que Nu solo cataliza la escisión del grupo de enmascaramiento por catálisis intramolecular, no se forma ningún producto cíclico del grupo de enmascaramiento.
Nu es un nucleófilo seleccionado del grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios y terciarios, tiol, ácido carboxílico, hidroxilamina e hidrazina. Los nucleófilos también descritos son heteroarilos que contienen nitrógeno.
Los nucleófilos especialmente preferidos incluyen grupos amino primarios, secundarios y terciarios. Con el fin de catalizar eficazmente la escisión del grupo de enmascaramiento, el espaciado entre el nucleófilo Nu y Y2 está preferiblemente entre tres y quince átomos.
Más preferiblemente, el espaciado entre Nu e Y2 está entre cuatro y diez átomos. El al menos un nucleófilo Nu puede estar unido en cualquier lugar a W (por ejemplo, en el extremo o en medio de W) o puede ser parte de W.
Variaciones preferidas para el grupo de enmascaramiento.
Figure imgf000013_0003
son seleccionados independientemente de
Figure imgf000014_0001
en donde
R9x
/ N~W
RIO
forma una amina primaria, secundaria o terciaria nucleófila Nu.
Estas variaciones preferidas dan como resultado profármacos poliméricos de acuerdo con las siguientes fórmulas:
Figure imgf000014_0002
R9, R10 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo o heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido.
Variaciones especialmente preferidas para el grupo de enmascaramiento.
Figure imgf000014_0003
son seleccionados de
Figure imgf000014_0004
R9, R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo o heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo y heteroarilo sustituido o no sustituido.
Preferiblemente, R9, R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido y R7 y/o R8 no son hidrógeno.
R6 también puede ser
Figure imgf000015_0001
y preferiblemente no es hidrógeno.
Sorprendentemente, se encontró que el grupo de enmascaramiento puede modificar de manera irreversible la amina que contiene la unidad estructural biológicamente activa cuando el nucleófilo Nu está ausente en el grupo de enmascaramiento. Como se muestra en la sección del ejemplo, durante la liberación del grupo bioactivo de insulina de un profármaco polimérico con un grupo de enmascaramiento de pentanoílo que no forma parte de la presente invención (ya que no contiene un nucleófilo), aproximadamente el 30% de la molécula de insulina se modificó con el grupo de enmascaramiento por transferencia de acilo. El mecanismo de un ejemplo de esta modificación donde D contiene un grupo amino libre adicional que sirve como nucleófilo para la transferencia de acilo del grupo de enmascaramiento se muestra en la Figura 9.
Ar de fórmula Ia o Ib es un hidrocarburo aromático multisustituido o un heterociclo aromático multisustituido. Para ser aromático, el número de electrones pi debe satisfacer la regla de Hückel (4n+2) y el ciclo debe ser plano. Una gran variedad de compuestos satisface estos criterios y, por lo tanto, son adecuados como Ar en la fórmula Ia o Ib. Ar se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000015_0002
en donde cada V se selecciona independientemente del grupo que consiste en O, N y S. Y2 y
Figure imgf000016_0001
en la fórmula Ia o Y2 y
R2 Y5
- Y r ^ r
R3
en la fórmula Ib tienen que estar dispuestos en el anillo aromático de tal manera que puede tener lugar una eliminación 1,4- o 1,6- o 1, (4+2p), con p=2, 3, 4 y superior, (véase más arriba).
Por ejemplo, en el caso de un anillo de 6 miembros, los sustituyentes deben estar dispuestos orto o para.
Las unidades estructurales preferidas para Ar son hidrocarburos aromáticos mono- y dicíclicos o heterociclos aromáticos.
Las unidades estructurales especialmente preferidas son hidrocarburos aromáticos monocíclicos de cinco o seis miembros o heterociclos aromáticos.
Procedimientos generales de síntesis de los profármacos poliméricos.
La síntesis de ejemplos representativos de profármacos poliméricos de acuerdo con la presente invención se describe en la sección de Ejemplos.
Los profármacos de la presente invención se pueden preparar de varias formas diferentes. La Figura 10 muestra rutas generales para la síntesis de los profármacos poliméricos de la presente invención de acuerdo con la fórmula la.
En un primer método, el intermedio (lll) se proporciona mediante la acilación de Y2 del material de partida (II) con el grupo de enmascaramiento.
Figure imgf000016_0002
Para esto, X o Nu pueden tener que estar protegidos con un grupo protector reversible PG1. Los grupos protectores adecuados se describen en TW Greene, P.G.M. Wuts, Protective groups in organic synthesis, 1999, John Wiley & Sons, 3a ed. Desde el intermedio (III) se pueden utilizar dos rutas alternativas para producir (Iaa). En una primera ruta, el intermedio (III) se activa mediante un agente activador tal como cloroformiato de 4-nitrofenilo o carbonato de disuccinilo para obtener (IV). La molécula de fármaco que contiene amina se une a (IV) para producir (V) desplazando el grupo saliente del compuesto intermedio activado (IV). Después de la desprotección de X, por ejemplo, tratando el intermedio (V) con reactivos como el ácido trifluoroacético o el intermedio desprotegido con DTT (donde corresponda), se hace reaccionar con el polímero R1 para producir el profármaco polimérico (Iaa).
En una segunda ruta, el polímero R1 se une primero al intermedio (III) después de la desprotección de X (donde sea aplicable) para formar el intermedio (VI). Después de un paso de activación se forma el intermedio (VII). (VII) se hace reaccionar con la molécula de fármaco que contiene amina para formar el profármaco polimérico (lac). En un segundo método, el intermedio (VIII) se proporciona activando el material de partida (II) mediante un agente activador tal como cloroformiato de 4-nitrofenilo. Para esto, Y2 y/o X pueden tener que estar protegidos con un grupo protector PG2 y/o PG1. El fármaco que contiene amina se hace reaccionar con el intermedio (VIII) para formar (IX). En una primera ruta, Y2 de (IX) se desprotege selectivamente y se acila para formar el intermedio (V) que se procesa adicionalmente a (Iaa) como se describe anteriormente. En una segunda ruta, X se desprotege selectivamente y se hace reaccionar con el polímero R1 para formar el intermedio (X). Y2 de (X) se desprotege y acila para formar el profármaco polimérico (lac).
En un tercer método, el material de partida (II) se hace reaccionar con el polímero R1 para formar el intermedio (XI). En una ruta, el intermedio (XI) se puede acilar para formar el intermedio (VI) que se procesa como se describe anteriormente para formar un profármaco polimérico (Iaa). En una segunda ruta, Y2 está protegido por el grupo protector PG2 , se activa y reacciona con la molécula de fármaco que contiene amina para formar (X). El intermedio (X) luego se procesa como se describe anteriormente para formar el profármaco polimérico (lac).
Para todos los métodos descritos, los grupos funcionales adicionales tales como Y3 o nucleófilos presentes en Nu-W pueden tener que estar protegidos con grupos protectores adecuados.
Los profármacos poliméricos de acuerdo con la fórmula Ib se pueden preparar mediante los métodos descritos anteriormente para profármacos de acuerdo con la fórmula Ia usando el material de partida IIb en lugar de II en la figura 10.
Figure imgf000017_0001
Se entiende que las estructuras enlazadoras de acuerdo con la invención descrita y que llevan grupos protectores o grupos salientes como se describe y se usa en la síntesis de profármacos poliméricos correspondientes se consideran dentro del alcance de la invención.
Aplicación de los profármacos poliméricos en terapia molecular
Para los profármacos poliméricos en cascada, es deseable que la cinética de escisión del primer enlace temporal se desarrolle en las condiciones presentes en la circulación sanguínea del cuerpo humano (pH 7.4, 37°C). Un método para hidrolizar los profármacos poliméricos en cascada comprende una etapa de colocar el profármaco en solución con un pH de aproximadamente 7.4. Lo más importante es que la escisión del primer enlace temporal debe basarse en la hidrólisis y exhibir una dependencia nula o muy limitada de las entidades químicas o bioquímicas o fisicoquímicas presentes en la circulación sanguínea humana, como enzimas, sales o proteínas de unión.
Se encontró ahora sorprendentemente que la velocidad de escisión del primer enlace temporal que conecta el grupo de enmascaramiento con el grupo activador, así como su dependencia de los componentes sanguíneos, se puede controlar por los efectos de los grupos vecinos mediados por los grupos funcionales nucleofílicos (tales como, aminas secundarias o terciarias) presentes en el grupo de enmascaramiento y ubicadas a una distancia del enlace temporal correspondiente. Si el grupo de enmascaramiento está estructurado de esta manera, una reacción intramolecular con contribución del nucleófilo gobierna la cinética del enlace (Figura 5 y Figura 8).
La ventaja clave de los profármacos poliméricos de la presente invención es su escisión predominantemente no enzimática: la vida media del profármaco en plasma sanguíneo humano adecuadamente tamponado de pH 7.4 (con una concentración de regulador acuoso <50%) es al menos el 50% de la vida media del profármaco en regulador libre de enzimas pH 7.4.
Esta característica permite una mejor previsibilidad y control de las ratas de liberación después de la administración a un organismo vivo y reduce la variabilidad entre pacientes.
En contraste con la dependencia enzimática de la eliminación del grupo de enmascaramiento como se describe en los ejemplos mencionados anteriormente de Antzczak et al., Shabat et al., y Lee et al., se puede lograr un mayor nivel de control sobre las ratas de liberación si el grupo de enmascaramiento tiene propiedades de autoeliminación independientes de la enzima.
Los grupos de enmascaramiento de acuerdo con la presente invención contienen al menos un nucleófilo Nu. Las características estructurales de este grupo de enmascaramiento, como la nucleofilicidad del grupo amina y la capacidad de formación de anillos, pueden optimizarse sistemáticamente para ajustar con precisión la rata de escisión del profármaco. Dichas reacciones intramoleculares que resultan en el desenmascaramiento y el reordenamiento subsiguiente son altamente independientes de las enzimas debido al hecho de que las reacciones intramoleculares generalmente se prefieren a las reacciones intermoleculares como se muestra esquemáticamente en la Figura 8.
En otra realización de la invención, la independencia de la escisión del profármaco a partir de los niveles de enzima se logra proporcionando un profármaco que contiene un grupo portador estéricamente exigente como se muestra en la Figura 7.
Dicha encapsulación o protección estérica por el grupo portador estéticamente exigente puede ser conferida por una estructura ramificada, hiperramificada, reticulada o autoensamblada del polímero portador. Tales polímeros tienden a formar un volumen molecular densamente empaquetado, como se ejemplifica, por ejemplo, en dendrímeros, polímeros en estrella densa o nanopartículas y micropartículas en forma de perlas o geles amorfos. Si el enlace del portador de polímero al fármaco se ubica en el interior del portador de polímero, el fármaco enlazado se encapsulará y protegerá de manera eficiente del ataque enzimático. En este caso, el impedimento estérico del polímero impide que las enzimas accedan y rompan los enlaces temporales.
En otra realización más, la escisión del profármaco independiente de la enzima se logra combinando un grupo de enmascaramiento autoeliminatorio intramolecular con un vehículo encapsulado hiperramificado o reticulado o autoensamblado.
Una ventaja adicional de la presente invención es la liberación de una unidad estructural biológicamente activa no modificada. En los casos en los que la unidad estructural biológicamente activa contiene otros grupos funcionales reactivos, como los grupos amino de residuos de lisina en proteínas, puede ocurrir una reacción secundaria no deseada entre el grupo de enmascaramiento y la unidad estructural biológicamente activa. Los grupos funcionales reactivos de la unidad estructural biológicamente activa pueden reaccionar con el grupo de enmascaramiento, formando un enlace covalente estable y dando como resultado la liberación de una unidad estructural biológicamente activa modificada. Esta posible reacción secundaria se muestra esquemáticamente en la Figura 9. La aparición de tales reacciones secundarias se muestra en la sección de ejemplos utilizando profármacos poliméricos que no forman parte de la presente invención con grupos de enmascaramiento simples como un residuo de pentanoilo sin un nucleófilo Nu presente en el grupo de enmascaramiento y como se describe por Antczak et al. o Lee et al. La reacción secundaria en este sistema enlazador se suprime utilizando profármacos poliméricos de acuerdo con la presente invención con grupos de enmascaramiento activados intramolecularmente que contienen nucleófilos Nu (véase sección de ejemplo).
El control de liberación independiente de la enzima permite formulaciones de depósito sin la necesidad de encapsulación. Hasta ahora, muchos materiales biocompatibles, como los hidrogeles con tamaños de poros grandes, no podían usarse para formulaciones de depósito debido a su falta de propiedades de encapsulación. A partir de dichos materiales biocompatibles bien hidratados y mecánicamente blandos, se liberará una unidad estructural biológicamente activa demasiado rápido para la mayoría de las aplicaciones terapéuticas. En combinación con los enlazadores de profármacos descritos en esta invención, el material portador puede optimizarse por sus propiedades de biocompatibilidad ya que la liberación está gobernada únicamente por la cinética de escisión del enlazador y no requiere degradación química o enzimática del propio polímero.
Las velocidades de liberación se rigen por una reacción química sustancialmente no enzimática que a su vez depende de la estructura molecular del enlazador. Las modificaciones sistemáticas o aleatorias de la estructura química, por ejemplo, al cambiar los sustituyentes en una o más posiciones, por ejemplo, un grupo de enmascaramiento en un profármaco en cascada, permite la generación de enlazadores de profármacos con diferentes ratas de liberación. Por lo tanto, es posible crear una variedad de enlazadores de profármacos y seleccionar aquellos enlazadores de profármacos de escisión rápida o lenta de acuerdo con las demandas planteadas por una aplicación terapéutica o medicinal determinada.
Otra característica ventajosa que forma parte de esta invención es la unión del soporte polimérico a través de un enlace covalente estable a una unidad estructural activadora involucrada en un mecanismo de liberación de profármaco doble o en cascada. Como parte de esta invención, la unidad estructural activadora permanece unida al vehículo polimérico después de la liberación del fármaco y, por lo tanto, no puede difundirse al medio ambiente. El enlace permanente del portador de polímero al grupo activador reduce en gran medida la reactividad lateral de la unidad estructural activadora y la probabilidad de efectos tóxicos no deseados. En otros profármacos poliméricos en cascada conocidos en la técnica, la unidad estructural activadora se libera además del fármaco. Debido a los mecanismos de reordenamiento molecular utilizados en los profármacos en cascada, la unidad estructural activadora se libera en una forma altamente reactiva y puede causar daño directo a las biomoléculas circundantes, o se pueden formar derivados potencialmente tóxicos de la unidad estructural activadora in vivo.
Descripción de las figuras
La Figura 1 muestra un profármaco unido a portador.
La Figura 2 muestra un profármaco unido a un portador dependiente de enzima.
La Figura 3 muestra un profármaco en cascada donde el grupo de enmascaramiento es parte del portador.
La Figura 4 muestra un profármaco en cascada dependiente de la enzima donde el grupo de enmascaramiento es parte del portador.
La Figura 5 muestra un profármaco en cascada de autoescisión en donde el grupo de enmascaramiento está separado del portador.
La Figura 6 muestra un profármaco en cascada dependiente de la enzima donde el grupo de enmascaramiento está separado del portador.
La Figura 7 muestra un profármaco en cascada donde el portador está protegiendo estéricamente del grupo de enmascaramiento.
La Figura 8 muestra la escisión del grupo de enmascaramiento por ciclización intramolecular.
La Figura 9 muestra una posible reacción lateral de la activación del profármaco polimérico.
La Figura 10 muestra los métodos generales de síntesis.
La Figura 11 muestra los espectros de masas de las moléculas de insulina liberadas de profármacos.
Ejemplos
Materiales
Los Fmoc-aminoácidos, resinas y PyBOP se adquirieron de Novabiochem y se nombran de acuerdo con el catálogo. El Fmoc-Ado-OH se obtuvo de Neosystem. Todos los productos químicos adicionales fueron comprados de Sigma Aldrich. La insulina humana recombinante era de ICN Biomedicals (Estados Unidos). La maleimida-PEG5k se obtuvo de Nektar (Estados Unidos). El éster succinimidílico de 5-(y -6)-carboxifluoresceína (isómeros mixtos) se obtuvo de Molecular Probes.
Medio de reacción de síntesis en fase sólida
La síntesis en fase sólida se realizó en resina de amida NovaSyn TG Sieber con una carga de 0.17 mmol/g o resina de cloruro de 2-clorotritilo con una carga de 1.4 mmol/g. Se utilizaron jeringas equipadas con fritas de polipropileno como recipientes de reacción.
Ciclo de acoplamiento estándar para aminoácidos protegidos por fmoc
Para la eliminación del grupo protector fmoc, la resina se agitó repetidamente (tres veces, 4 minutos cada una) con 2/2/96 (v/v/v) de piperidina/DBU/DMF y se lavó repetidamente (seis veces) con DMF.
El acoplamiento de aminoácidos protegidos con fmoc a grupos amino libres en la resina se logró agitando la resina con 3 equivalentes (eq) de fmoc-aminoácido, 3 eq PyBOP y 6 eq DIEA en relación con los grupos amino libres en DMF para 60 min.
Finalmente, la resina se lavó repetidamente (cinco veces) con DMF.
Protocolo de escisión estándar para la resina de amida TentaGel Sieber
Una vez completada la síntesis, la resina se lavó con DCM, se secó al vacío y se trató repetidamente (cinco veces) con 97/2/1 (v/v) DCM/TES/TFA. Después de la evaporación, los compuestos se purificaron por RP-HPLC preparativa (Waters 600).
Protocolo estándar de escisión para la resina de cloruro de 2-clorotritilo
Una vez completada la síntesis, la resina se lavó con DCM, se secó al vacío y se trató dos veces durante 30 minutos con 65/35 (v/v) HFIP/DCM. Después de combinar los eluidos, se evaporaron los componentes volátiles.
Análisis
La espectrometría de masas (MS) se realizó en un instrumento Waters ZQ 4000 ESI y los espectros, si fuera necesario, fueron interpretados por el software MaxEnt de Waters.
La cromatografía de exclusión por tamaño se realizó usando un sistema básico Amersham Bioscience AEKTA equipado con una columna Superdex 200 (Amersham Bioscience). Los espectros de RMN se registraron en un Bruker AC300.
Visión general - síntesis de profármacos poliméricos de acuerdo con la fórmula Ia con grupos de enmascaramiento unidos a éster
Figure imgf000020_0001
Síntesis de profármacos poliméricos según la fórmula la con grupos de enmascaramiento unidos a carbamatos) a)
Ċ
Figure imgf000021_0001
b)
Ċ
Figure imgf000022_0001
c)
Ċ
Figure imgf000023_0001
Síntesis de profármacos poliméricos según la fórmula Ib con un grupo de enmascaramiento unido a carbamatos) Ċ
Figure imgf000024_0001
b)
Figure imgf000025_0001
Ċ
Figure imgf000026_0001
Síntesis del compuesto 2
Figure imgf000026_0002
Se disolvieron cloruro de Mmt (1 eq) y ácido mercaptopropiónico (1.1 eq) en TFA y se incubaron durante 30 min. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto se disolvió en piridina, se diluyó en agua, se acidificó con ácido acético y se extrajo con éter. La fase etérea se separó y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el producto 2 se purificó por RP-HPLC.
Síntesis de los compuestos 3a y 3b
Figure imgf000027_0001
3a R1 =H
3b R1 = OMe
Se disolvieron clorhidrato de octopamina (1a) (2 eq), DIEA (4 eq) y PyBOP (1 eq) en DMF, se añadió 2 (1 eq) y la mezcla se hizo reaccionar durante 50 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición de ácido acético (7 eq), el producto 3a se purificó por RP-HPLC.
3b se sintetizó a partir de clorhidrato de normetanefrina (1b) como se describe anteriormente.
3a: MS [M+Na]+ = 536 (MW+Na calculado = 536.2 g/mol)
3b: MS [M+Na]+ = 566 (MW+Na calculado = 566.2 g/mol)
Síntesis de mercaptotiazolida 4
Figure imgf000027_0002
Se disolvieron 2-mercaptotiazolina y trietilamina (1.5 eq) en THF seco y se añadió cloruro de pentanoílo (1 eq). La mezcla se agitó durante 1 hora a 50°C bajo una atmósfera de gas inerte y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió HCl acuoso 0.5 N y las fases orgánicas separadas se secaron sobre Na2SO4. Después de concentrar al vacío, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (1/1) como fase móvil. La mercaptotiazolida 4 se recogió como un aceite amarillo viscoso.
4 Rf (heptano/acetato de etilo 1:1) = 0.7
Síntesis de los compuestos 5a y 5b.
Figure imgf000027_0003
Protocolo de síntesis general:
Se incubó 1 g de resina de cloruro de 2-clorotritilo (cargando 1.6 mmol/g) durante 1 h con 850 mg (2.4 mmol) de Fmoc-Ile-OH y 840 pl (4.8 mmol) de DIEA en 5 ml 1/1 de DCM/DMF. Después de la eliminación de fmoc y el lavado de la resina con DMF, se acopló ácido boc-aminobutírico a 0.5 g de resina de acuerdo con el método de acoplamiento estándar. El compuesto 5a se escindió de la resina con 97/1/2 (v/v) de DCM/TFA/TES durante 45 min. Después de la neutralización con piridina, los disolventes se eliminaron a presión reducida y la 5a se purificó por RP-HPLC.
5b se sintetizó a partir de ácido boc-aminohexanoico como se describe anteriormente.
5a MS [M+Na]+ = 339.2 (MW+Na calculado = 339.4 g/mol)
5b MS [M+Na]+ = 367.4 (MW+Na calculado = 367.5 g/mol)
Síntesis del compuesto 6a
Figure imgf000028_0001
Mercaptotiazolida 4 (1 eq), fenol 3a (4 eq) y DMAP (4 eq) se sometieron a reflujo en DCM durante 2 h en atmósfera de nitrógeno. Después de la neutralización con ácido acético, el disolvente se eliminó al vacío y el producto 6a se purificó por RP-HPLC.
6a MS [M+Na]+ = 620 (MW+Na calculado = 620.3 g/mol)
Síntesis de compuestos 6b a 6e
Figure imgf000028_0002
El ácido carboxílico 5a (1 eq), fenol 3b (1 eq), DIC (1 eq) y DMAP (2 eq) en DMF se hicieron reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la adición de ácido acético (4 eq), el éster carboxílico resultante 6c se purificó por RP-HPLC.
La 6d se sintetizó como se describió anteriormente utilizando 5b y 3b como materiales de partida.
6b se sintetizó como se describió anteriormente utilizando Z-Lys(Boc)-OH y 3b.
6e se sintetizó como se describe anteriormente utilizando 5b y 3a.
6b MS [M+Na]+ = 928 (MW+Na calculado = 928.6 g/mol)
6c MS [M+Na]+ = 864 (MW+Na calculado = 864.5 g/mol)
6d MS [M+Na]+ = 892 (MW+Na calculado = 892.6 g/mol)
6e MS [M+Na]+ = 862 (MW+Na calculado = 862.6 g/mol)
Síntesis de los compuestos 7a a 7e
Figure imgf000029_0001
Protocolo de síntesis general:
El alcohol 6a (1 eq), el cloroformiato de 4-nitrofenilo (10 eq) y el DIEA (10 eq) se agitaron en dioxano seco durante 3 h a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. Después de la adición de ácido acético (25 eq), las mezclas se diluyeron con 7/3 (v/v) de acetonitrilo/H2O y el carbonato 7a se purificó por RP-HPLC.
7b, 7c, 7d o 7e se sintetizaron a partir de 6b, 6c, 6d o 6e, respectivamente, como se describió anteriormente.
7a MS [M+Na]+ = 785 (MW+Na calculado = 785.5 g/mol)
7b MS [M+Na]+ = 1093 (MW+Na calculado = 1093.7 g/mol)
7c MS [M+Na]+ = 1029 (MW+Na calculado = 1029.6 g/mol)
7d MS [M+Na]+ = 1057 (MW+Na calculado = 1057.6 g/mol)
7e MS [M+Na]+ = 1027 (MW+Na calculado = 1027.6 g/mol)
Síntesis de los compuestos 8a a 8c (NaA1-enlazador-insulina)
Figure imgf000029_0002
Protocolo general de síntesis:
Se mezcló Rh-Insulina en 1/1 (v/v) DMSO/DMF con una solución de 0.9 eq de carbonato 7a en DMSO. La solución resultante se ajustó a pH básico con DIEA y se agitó durante 1.5 h a temperatura ambiente. La purificación por RP-HPLC dio un intermedio protegido con Mmt.
Después de la liofilización, el intermedio protegido con Mmt se mezcló con 95:5 (v/v) de TFA/trietilsilano y se agitó durante 5 min. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno y 8a se purificó por RP-HPLC y se liofilizó. La regioselectividad de la modificación de la insulina se verificó mediante reducción con DTT y análisis de MS.
8b u 8c se sintetizaron a partir de 7c, o 7d, respectivamente, como se describe anteriormente.
8a MS [M+2H]2+ = 3078,9; [M+3H]3+ = 2053.2 [M+4H]4+ = 1540.6 (MW calculado = 6158 g/mol)
b MS [M+2H]2+ = 3152,9; [M+3H]3+ = 2100.6 [M+4H]4+ = 1575.8 (MW calculado = 6302 g/mol)
8c MS: [M+3H]3+ = 2110,7; [M+4H]4+ = 1583,7; [M+5H]5+ = 1266.6 (MW calculado = 6330 g/mol)
Síntesis de los compuestos 8d a 8g (NEB29-Fluoresceina-NaA1-enlazador-insulina)
Figure imgf000030_0001
Se disolvieron 80 mg (13.8 gmol) de rh-insulina en 4 ml 1/1 (v/v) de DMF/DMSO y se agregaron 40 gl de DIEA. Se añadieron 8 mg (17 gmol) de éster succinimidílico de 5-(y -6)-carboxifluoresceína y la solución se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregaron 4 ml de 5/5/1 (v/v/v) de acetonitrilo/agua/ácido acético, el producto NEB29-fluoresceína insulina se purificó por RP-HPLC y se liofilizó. El sitio de conjugación se verificó mediante la reducción de insulina NEB9-fluoresceína con 1,4-ditiotreitol, digestión con proteasas y análisis de MS.
MS: [M+2H]2+ = 3084.0; [M+3H]3+ = 2054.6 (MW calculado = 6166 g/mol)
La insulina NEB29-fluoresceína en 1/1 (v/v) de DMF/DMSO se mezcló con una solución de 0.9 eq de carbonato 7b en DMSO. La solución resultante se ajustó a pH básico con DIEA y se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La purificación por HPLC-P dio un producto intermedio protegido con Mmt.
Después de la liofilización, el intermedio se disolvió en 95/5 (v/v) de TFA/trietilsilano y se agitó durante 5 min. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno y 8d se purificó por RP-HPLC y se liofilizó.
8e, 8f u 8g se sintetizaron como se describió anteriormente utilizando 7c, 7d o 7e, respectivamente.
8d MS: [M+2H]2+ = 3364.1; [M+3H]3+ = 2242.7; [M+4H]4+ = 1681.5 (MW calculado = 6724 g/mol)
8e MS: [M+3H]3+ = 2219.2 [M+4H]4+ = 1665.9; [M+5H]5+ = 1332.8 (MW calculado = 6660 g/mol)
8f MS: [M+3H]3+ = 2229.7 [M+4H]4+ = 1673.3; [M+5H]5+ = 1337.7 (MW calculado = 6689 g/mol)
8g MS: [M+3H]3+ = 2218.7 [M+4H]4+ = 1664.9 (MW calculado = 6659 g/mol)
Síntesis de los compuestos 9a a 9g (compuestos de insulina monopegilados)
Se mezclaron 70 |ul de 500 |uM 8a en 1/4 (v/v) de acetonitrilo/agua con 7 |ul de maleimida 10 mM-PEG5k en 1/4 (v/v) de acetonitrilo/agua y 10 |ul de regulador de fosfato de sodio 0.5 M pH 7.0 y se incuba durante 15 min. El compuesto 9a se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando un regulador HEPES 10 mM (pH 7.4), NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% como fase móvil. El eluato recogido (aproximadamente 1.5 ml) se usó directamente como tal para la determinación de la velocidad de liberación.
9b, 9c, 9d, 9e, 9f o 9g se sintetizaron como se describe anteriormente a partir de 8b, 8c, 8d, 8e, 8f, u 8g, respectivamente.
9a a 9g: tiempo de retención de SEC: 19.5 min
Síntesis de los compuestos 11a y 11b
Figure imgf000031_0001
11a R1 = R2 = Me
11b R1 = Me, R2 =H
Se disolvieron 3,5-dimetil-4-hidroxi-acetofenona (5.0 mmol) (10a) y CuBr2 (1.7 g, 7.5 mmol) en 10 ml de acetato de etilo y se sometieron a reflujo durante 2 h. Los subproductos sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se evaporó y el producto bruto 11a se purificó por RP-HPLC.
11b se sintetizó a partir de 4-hidroxi-3-metil-acetofenona (10b) (0.75 g, 5.0 mmol) como se describe anteriormente.
11a: Rendimiento 754 mg (62%)
MS [M+H]+ = 243.1/245.1 (MW+H calculado = 244.1 g/mol)
11b: Rendimiento de 533 mg (47%)
MS [M+H]+ = 229.2/231.1 (MW+H calculado = 230.1 g/mol)
Síntesis de los compuestos 12a y 12b
Figure imgf000031_0002
12a R1 =R2=Me
12b R1 = Me, R2 = H
Se disolvieron 500 mg de 11a (2.06 mmol) y 576 mg (4.11 mmol) de hexametilentetramina en 20 ml de triclorometano y se calentaron a reflujo durante 30 minutos. El disolvente se eliminó a vacío. Se añadieron 4 ml de etanol y 2 ml de HCl concentrado y la suspensión se calentó a 50°C durante 4 h. La mezcla se concentró al vacío, se diluyó con acetonitrilo/agua y la 12a se purificó por RP-HPLC.
12b se sintetizó a partir de 472 mg (2.06 mmol) de 11b como se describe anteriormente.
12a: Rendimiento 547 mg (81%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 202.2 (MW+Na calculado = 202.2 g/mol)
12b: Rendimiento 455 mg (70%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 188.2 (MW+Na calculado = 188.2 g/mol)
Síntesis del compuesto 13
Figure imgf000032_0001
Se disolvieron 500 mg (171 mmol) de 12a (sal de TFA) en 10 ml 1/1 (v/v) de metanol/agua, se añadieron 129 mg (3.41 mmol) de NaBH4 y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 0.5 ml de ácido acético y 13 se purificaron por RP-HPLC.
13: Rendimiento 313 mg (62%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 204.2 (MW+Na calculado = 204.2 g/mol)
RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5[ppm] = 8.25 (s, 1H, Fenol), 7.84 (bs, 3H, NH3+), 6.89 (s, 2H, CHar), 5.85 (d, 1H, Hidroxilo, J=3.7 Hz), 4.62 (m, 1H, CHBencilo), 2.93 (m, 1H, CHa), 2.80 (m, 1H, CHb), 2.17 (s, 6H, CH3).
Síntesis de compuestos 14a a 14d
Figure imgf000032_0002
14b R1 R2 = H, R7 = Me, R4 Mmt
14c R1 = OMe, R2 = H, R7 = Me, R4 = Mmt
14d R1 = H, R2 = H, R7 = Me, R4 = Trt
13 (sal de TFA, 159 mg, 0.541 mmol) se acopló al compuesto 2 como se describe para el compuesto 3a para producir 14a.
14b o 14c se sintetizaron como se describió anteriormente utilizando sinefrina (335 mg, 2.00 mmol) o metanefrina (sal de HCl, 281 mg, 1.20 mmol), respectivamente. Se acopló sinefrina (335 mg, 2.3 mmol) a ácido 3-tritilsulfanil-propiónico como se describió anteriormente para producir 14d.
14a: Rendimiento 254 mg (87%)
MS [M+Na]+ = 564.7 (MW+Na calculado = 564.3 g/mol)
14b: Rendimiento 760 mg (72%)
MS [M+Na]+ = 550.2 (MW+Na calculado = 550.3 g/mol)
14c: Rendimiento 530 mg (80%)MS [M+Na]+ = 580.4 (MW+Na calculado = 580.4 g/mol)
14d: Rendimiento 567 mg (49%)
MS [M+Na]+ = 520.5 (MW+Na calculado = 520.7 g/mol)
Síntesis de compuestos 15c, 15d y 15f.
Figure imgf000033_0001
Protocolo de síntesis general:
Se incubó 1 g de resina de cloruro de 2-clorotritilo (cargando 1.4 mmol/g) durante 1 h con N,N'-dimetilpropano-1,3-diamina (para síntesis de 15c), o N,N'-dietil-propano-1,3-diamina (para síntesis de 15d) o N,N'-dimetil-etano-1,2-diamina (4 eq) (para síntesis de 15f) en DCM. Después del lavado de la resina con DMF, las aminas se acetilaron con 1/1/2 (v/v/v) de anhídrido acético/piridina/DMF durante 14 h. La resina se lavó con THF y se secó. Se añadió gota a gota LiAlH4 (1 M en THF, 4 eq) a la resina suspendida en THF. La suspensión resultante se agitó durante 3 horas a 45°C en atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar, se añadió solución acuosa de sal de Rochelle y la resina se separó y se secó. Los compuestos se escindieron de la resina con 2/1 (v/v) HFIP/DCM (2 x 30 min). Los componentes volátiles se evaporaron y los productos 15c, 15d o 15f se usaron en los siguientes pasos sin purificación adicional.15c MS [M+H]+ = 131.2 (MW = 130.1 g/mol)
15d MS [M+H]+ = 159.2 (MW = 158.1 g/mol)
15f MS [M+H]+ = 117.1 (MW = 116 g/mol)
Síntesis de los compuestos 16a a 16f y 16i.
Figure imgf000033_0002
16b R1 = OMe, R2 = H, R5 = Et, R6 = 2-(dietilamino)etilo, R7 = H, R4 = Mmt
16c R1 = OMe, R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
16d R1 = R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
16e R1 = OMe, R2 = H, R5 = Et, R6 = 3-(dietilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
16f 1R1 = R2 = H, R5 = Et, R6 = 3-(dietilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
16i R1 = R2 = H, R5 = Et, R6 = 2-(dietilamino)etilo, R7 = Me, R4 = Trt
Se disolvió 14a (120 mg, 0.222 mmol) en 1.5 ml de THF seco. Se añadieron cloroformiato de p-nitrofenilo (45 mg, 0.222 mmol) y DIEA (113 gl, 0.665 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió 15a (N,N,N'-trimetil-etilen-1,2-diamina) (72 gl, 0.554 mmol) y se continuó la agitación durante 30 min. El disolvente se eliminó al vacío, se agregaron 100 gl de AcOH y 16a se purificó por RP-HPLC.
16b se sintetizó como se describe anteriormente a partir de 3b (80 mg, 0.15 mmol) y 15b (N,N,N'-trietil-etileno-1,2-diamina) (55 mg, 0.38 mmol).
16c o 16d se sintetizaron como se describe anteriormente a partir de 14c (56 mg, 0.1 mmol) o 14b (53 mg, 0.1 mmol), respectivamente, y diamina 15c.
16e o 16f se sintetizaron como se describió anteriormente a partir de 14c (56 mg, 0.1 mmol) o 14b, respectivamente, (53 mg, 0.1 mmol) y diamina 15d.
16i se sintetizó como se describió anteriormente a partir de 14d (350 mg, 0.7 mmol) y 15b (N,N,N'-trietil-etileno-1,2-diamina) (180 gl, 1 mmol).16a: Rendimiento 120 mg (69%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 692.4 (MW+Na calculado = 692.9 g/mol)
16b: Rendimiento de 48 mg (40%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 736.3 (MW+Na calculado = 736.4 g/mol)
16c: Rendimiento de 8 mg (10%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 736.4 (MW+Na calculado = 736.4 g/mol)
16d: Rendimiento 20 mg (25%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 706.3 (MW+Na calculado = 706.3 g/mol)
16e: Rendimiento 2 mg (3%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 764.6 (MW+Na calculado = 764.4 g/mol)
16f: Rendimiento 6 mg (8%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 734.4 (MW+Na calculado = 734.3 g/mol)
16i: Rendimiento 152 mg (28%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 690.5 (MW+Na calculado = 690.9 g/mol)
Síntesis del compuesto 17
Figure imgf000034_0001
La amina 12b (sal de TFA) se acopló al compuesto 2 como se describe para el compuesto 3a.
17: Rendimiento 608 mg (74%)
MS [M+Na]+ = 548.3 (MW+Na calculado = 548.7 g/mol)
Síntesis de los compuestos 18a y 18b.
Figure imgf000034_0002
18a R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 3-(dimetilamino)propilo
18b R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 2-(N-etil-N-metilamino)etilo
383 mg (0.729 mmol) de 17 se hicieron reaccionar con cloroformiato de p-nitrofenilo y N,N,N'-trimetil-propano-1,3-diamina (15e) o 15f, respectivamente, para producir 18a o 18b como se describe para el compuesto 16a.
18a: Rendimiento 287 mg (50%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 690.7 (MW+Na calculado = 690.9 g/mol)
18b: Rendimiento 148 mg (26%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 690.9 (MW+Na calculado = 690.9 g/mol)
Síntesis de compuestos 16g y 16h.
Figure imgf000035_0001
16g R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 3-(dimetilamino)propilo
16h R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 2-(N-etil-N-metilamino)etilo
Se disolvió 18a (287 mg, 0.367 mmol, sal de TFA) en 5 ml de metanol, se añadió NaBH4 (41 mg, 1.07 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 0.5 ml de ácido acético y se purificaron 16 g mediante RP-HPLC.
Se hizo reaccionar 18b (8 mg, 0.010 mmol, sal de TFA) como se describe anteriormente para producir 16 h.
16 g: Rendimiento de 201 mg (70%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 692.7 (MW+Na calculado = 692.9 g/mol)
16h: Rendimiento 6 mg (77%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 692.7 (MW+Na calculado = 692.9 g/mol)
Síntesis de los compuestos 19a a 19i.
Figure imgf000035_0002
19a R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo, R7 = H, R4 = Mmt
19b R1 = OMe, R2 = H, R5 = Et, R6 = 2-(dietilamino)etilo, R7 = H, R4 = Mmt
19c R1 = OMe, R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
19d R1 = R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
19e R1 = OMe, R2 = H, R5 = Et, R6 = 3-(dietilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
19f R1 = R2 = H, R5 = Et, R6 = 3-(dietilamino)propilo, R7 = Me, R4 = Mmt
19g R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 3-(dimetilamino)propilo, R7 = H, R4 = Mmt
19h R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 2-(N-etil-N-metilamino)etilo, R7 = H, R4 = Mmt
19i R1 = R2 = H, R5 = Et, R6 = 2-(dietilamino)etilo, R7 = Me, R4 = Trt
Los carbonatos 19a a 19i se sintetizaron de 16a a 16i, respectivamente, como se describe para el compuesto 7a.19a: Rendimiento de 98 mg (72%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 857.8 (MW+Na calculado = 858.0 g/mol)
19b: Rendimiento 6 mg (11%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 901.8 (MW+Na calculado = 901.5 g/mol)
19c: Rendimiento 1 mg (15%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 901.4 (MW+Na calculado = 901.5 g/mol)
19d: Rendimiento 8 mg (29%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 871.4 (MW+Na calculado = 871.4 g/mol)
19e: Rendimiento de 0.3 mg (18%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 929.4 (MW+Na calculado = 929.5 g/mol)
19f: Rendimiento de 4 mg (45%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 899.7 (MW+Na calculado = 899.6 g/mol)
19 g: Rendimiento 6 mg (6%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 857.8 (MW+Na calculado = 858.0 g/mol)
19h: Rendimiento de 0.8 mg (11%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 857.7 (MW+Na calculado = 858.0 g/mol)
19i: Rendimiento de 77 mg (49%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 856.2 (MW+Na calculado = 856.0 g/mol)
Síntesis de compuestos 20a a 20f
Figure imgf000036_0001
5 = Me, R2 = H, R6 = 3-(dimetilamino)propilo, R7 = H
20f R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 2-(N-etil-N-metilamino)etilo, R7 = H
Los derivados de insulina 20a, 20b, 20c, 20d, 20e o 20f se sintetizaron a partir de 19a, 19b, 19c, 19d, 19g o 19h respectivamente, como se describe para el compuesto 8a.
20a MS [M+3H]3+ = 2077.3 [M+4H]4+ = 1 559.2 (MW calculado = 6231.3 g/mol)
20b MS [M+3H]3+ = 2093.0 [M+4H]4+ = 1 569.6 (MW calculado = 6274 g/mol)
20c MS [M+3H]3+ = 2090.8 [M+4H]4+ = 1 568.7 (MW calculado = 6274 g/mol)
20d MS [M+3H]3+ = 2081.3 [M+4H]4+ = 1 561.8 (MW calculado = 6244 g/mol)
20e MS [M+3H]3+ = 2077.1 [M+4H]4+ = 1 558.2 (MW calculado = 6231.3 g/mol)
20f MS [M+3H]3+ = 2076.7 [M+4H]4+ = 1559.3 (MW calculado = 6231.3 g/mol)
Síntesis de los compuestos 21a a 21f (derivados de insulina monopegilados)
Figure imgf000037_0001
21a R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo, R7 = H
2 1 b R1 = OMe, R2 = H, R5 = Et, R6 = 2 -(dietilamino)etilo, R7 = H
21c R1 = OMe, R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me
21d R1 = R2 = H, R5 = Me, R6 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo, R7 = Me
21e R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 3-(dimetilamino)propilo, R7 = H
21f R1 = R5 = Me, R2 = H, R6 = 2-(N-etil-N-metilamino)etilo, R7 = H
Los derivados de insulina 21a, 21b, 21c, 21d, 21e o 21 f se sintetizaron a partir de los compuestos 20a, 20b, 20c, 20d, 20e o 20f, respectivamente, como se describe para el compuesto 9a.
21a a 21f: tiempo de retención SEC: 19.5 min
Síntesis de los compuestos 23a y 23b.
Figure imgf000037_0002
23a R1 = Yo, R2 = H
23b R1 = R2 = Me
o-Cresol (22a) (1 eq), anhídrido succínico (1 eq) y AlCÍ3 (3 eq) en nitrobenceno se calentaron a 100°C durante 1 h. La mezcla de reacción se vertió en HCl/hielo y se extrajo con éter. La capa orgánica se extrajo con NaOH 1 N y la capa acuosa se acidificó con HCl concentrado. La capa acuosa se extrajo con éter y el éter se evaporó. 23a se purificó por RP-HPLC.
23b se sintetizó a partir de 2,6-dimetilfenol (22b) como se describe anteriormente.
23a: Rendimiento 552 mg (31%)MS [M+Na]+ = 231.0 (MW+Na calculado = 231.2 g/mol)
RMN (300 MHz, DMSO-ds) 5 [ppm] = 12.05 (bs, 1H, CO2H), 10.23 (s, 1H, fenol OH), 7.74 (s, 1H, CHar), 7.7 (d, 1H, CHar, 3Jh,h = 8.4 Hz), 6 .8 6 (d, 1H, CHar, 3Jh,h = 8.4 Hz), 3.13 (t, 2H, C(O)CH2 , 3Jh,h = 6.4 Hz), 2.53 (t, 2H, CH2CO2 , 3JH, H = 6.4 Hz), 2.16 (s, 3H, CHa)
23b: Rendimiento 166 mg (15%)
MS [M+Na]+ = 245.4 (MW+Na calculado = 245.2 g/mol)
Síntesis del compuesto 24
Figure imgf000038_0001
Se disolvieron 1.85 g (16.02 mmol) de clorhidrato de cisteamina en 15 ml de TFA y se agregaron 2.47 g (8.01 mmol) de MmtCl. Después de agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 20 min, el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en éter dietílico y se extrajo con NaHCO3 acuoso saturado, IN H2SO4 y salmuera. El disolvente se evaporó y 24 se purificó por RP-HPLC.
24: Rendimiento de 1.11 g (30%) como sal de TFA
TLC (AcOEt/Et3N 99/1), Rf = 0.24
Síntesis de los compuestos 25a y 25b.
Figure imgf000038_0002
25a R1 = Me, R2 = H
25b R1 = R2 = Me
23a (leq), HOBt (1.1 eq) y DIC (1 eq) se disolvieron en DMF y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadieron 24 (sal de TFA, 1 eq) y DIEA (3 eq) y la solución se agitó durante 60 min. Se añadió ácido acético y 25a se purificó por RP-HPLC.
25b se sintetizó a partir de 23b como se describe anteriormente.
25a: Rendimiento 552 mg (25%)
MS [M+Na]+ = 562.7 (MW+Na calculado = 562.7 g/mol)
25b: Rendimiento 15 mg (40%)
MS [M+Na]+ = 576.6 (MW+Na calculado = 576.6 g/mol)
Síntesis de los compuestos 26a y 26b.
Figure imgf000038_0003
26a R1 = Me, R2 = H, R5 = R6 = 3-(dimetilamino)propilo
26b R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo
Se hicieron reaccionar 267 mg (0.495 mmol) de 25a con cloroformiato de p-nitrofenilo y N-(3-dimetilaminopropil)-N',N'dimetil-propano-1,3-diamina (15 g) para producir 26a como se describe para el compuesto 16a.
26b se sintetizó como se describió anteriormente usando 15 mg de 25b y N,N,N'-trimetil-etano-1,2-diamina (15a).
26a: Rendimiento 282 mg (58%) como sal doble de TFA
MS [M+Na]+ = 775.2 (MW+Na calculado = 776.0 g/mol)
26b: Rendimiento 17 mg (70%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 704.5 (MW+Na calculado = 704.6 g/mol)
Síntesis de los compuestos 27a y 27b.
Figure imgf000039_0001
27a R1 = Me, R2 = H, R5 = R6 = 3-(dimetilamino)propilo
27b R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo
26a (272 mg, 0.277 mmol, sal doble de TFA) se disolvió en 5 ml de metanol, se añadió NaBH4 (42 mg, 1.09 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 0.5 ml de ácido acético y 27a se purificó por RP-HPLC.
El alcohol 27b se sintetizó igualmente a partir de 26b (17 mg, 25 pmol, sal de TFA).
27a: Rendimiento 142 mg (52%) como sal doble de TFA
MS [M+Na]+ = 777.9 (MW+Na calculado = 778.0 g/mol)
27b: Rendimiento 6 mg (40%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 706.5 (MW+Na calculado = 706.6 g/mol)
Síntesis de los compuestos 28a y 28b
Figure imgf000039_0002
28a R1 = Me, R2 = H, R5 = R6 = 3-(dimetilamino)propilo
28b R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo
Los carbonatos 28a o 28b se sintetizaron a partir de 27a o 27b, respectivamente, como se describe para el compuesto 7a.
28a: Rendimiento 1 mg (29%)
MS [M+Na]+ = 942.9 (MW+Na calculado = 943.2 g/mol)
28b: Rendimiento 1.5 mg (19%)
MS [M+Na]+ = 871.6 (MW+Na calculado = 871.7 g/mol)
Síntesis de los compuestos 29a y 29b.
Figure imgf000040_0001
29a R1 = Me, R2 = H, R5 = R6 = 3-(dimetilamino)propilo
29b R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo
Los derivados de insulina 29a o 29b se sintetizaron a partir de 28a o 28b, respectivamente, como se describe para el compuesto 8a.
29a MS [M+3H]3+ = 2105.8 [M+4H]4+ = 1580.2 (MW calculado = 6316.4 g/mol)29b MS [M+3H]3+ = 2081.8 [M+4H]4+ = 1562.4 (MW calculado = 6244 g/mol)
Síntesis de los derivados de insulina monopegilados 30a y 30b
Figure imgf000040_0002
30a R1 = Me, R2 = H, R5 = R6 = 3-(dimetilamino)propilo
30b R1 = R2 = R5 = Me, R6 = 2-(dimetilamino)etilo
Los derivados de insulina 30a o 30b se sintetizaron a partir de 29a o 29b, respectivamente, como se describe para el compuesto 9a.
30a y 30b: Tiempo de retención de SEC: 19.5 min
Síntesis de un profármaco polimérico de acuerdo con la fórmula Ia con un grupo de enmascaramiento unido a éster y un portador dendrítico (9h)
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0001
31 se obtuvo de acuerdo con el protocolo estándar de síntesis en fase sólida. Los aminoácidos Fmoc-Dpr(Boc)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Ado-OH y Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH se acoplaron a Resina amida NovaSyn TG Sieber. Después de la eliminación final de fmoc, la resina se agitó con 5 eq de ácido maleimidopropiónico y 5 eq de DIC en relación con los grupos amino en DMF durante 30 min. 31 se escindió de la resina con TFA/TES/agua 95/3/2 (v/v/v). Después de la evaporación del disolvente, el producto 31 se purificó por RP-HPLC.
MS: [M+H]+ = 2494.6 (MW calculado = 2495.4 g/mol)
Síntesis del compuesto 32
Figure imgf000044_0001
El compuesto 32 se obtuvo de acuerdo con el protocolo estándar de síntesis en fase sólida. Los aminoácidos Fmoc-Cys(Mmt)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Ado-OH y Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH se acoplaron a resina amida NovaSynTG Sieber.
Después de la eliminación final de fmoc, la resina se agitó con 3 eq de ácido Boc-aminoxiacético, 3 eq de DIC y 3 eq de HOBt en relación con los grupos amino en DMF durante 30 min. 32 se escindió de la resina con DCM/TFA/TES 97/1/2 (v/v/v). Después de la adición de 0.8 eq de piridina en relación con TFA, el disolvente se evaporó y el producto 32 se purificó por RP-HPLC.
MS: [M+H]+ = 2688.2 g/mol (MW calculado = 2688.8 g/mol)Síntesis del compuesto 33
Figure imgf000045_0001
El compuesto 33 se obtuvo de acuerdo con el protocolo estándar de síntesis en fase sólida. Los aminoácidos Fmoc-Dpr(ivDde)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH, Fmoc-Lys(Fmoc)-OH, y Fmoc-Ado-OH se acoplaron a Resina amida NovaSyn TG Sieber.
Después de la eliminación final de fmoc, la resina se agitó con 3 eq de ácido 3,6,9-trioxadecanoico, 3 eq de PyBOP y 6 eq de DIEA en relación con los grupos amino en DMF durante 60 min.
Para escindir el grupo protector ivDde, la resina se trató tres veces con hidrazina al 2% en DMF. Después del lavado, se acoplaron 3 eq de Fmoc-Ser-OH con 3 eq de DIC y 3 eq de HOBt durante 30 min. Después de la eliminación final, la resina se retiró y el producto se escindió de la resina con DCM/TFA/TES 88/10/2 (v/v/v). El disolvente se evaporó y el residuo se oxidó con 10 eq de peryodato de sodio en fosfato de sodio 0.1 M 3/2 (v/v), pH 7/acetonitrilo durante 15 minutos para producir 33. El producto 33 se purificó por RP-HPLC y se liofilizó.
MS: [M+H]+ = 3372.1 g/mol (3372.8 g/mol)
Síntesis del compuesto 34
Figure imgf000046_0001
Se disolvieron 6 mg (2.4 pmol) del compuesto 31 en 1 ml de acetonitrilo 2/1 (v/v)/fosfato de sodio 0.1 M, pH 7 y se agregaron 65 mg (24.2 pmol) del compuesto 32. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y luego el producto se purificó por RP-HPLC y se liofilizó (rendimiento: 45 mg (78%)).
El producto liofilizado (45 mg) se disolvió en 0.5 ml de DMF y se añadieron 10 pl de DIEA. Se añadieron 5 mg (30 pmol) de ácido 3-maleimidopropiónico y 4.7 pl (30 pmol) de DIC en 150 pl de DMF y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos, el producto se purificó por RP-HPLC y se liofilizó.
El producto liofilizado se incubó durante 10 minutos en 95/5 (v/v) de TFA/agua y luego el disolvente se eliminó en una corriente de nitrógeno. El producto 34 se purificó por RP-HPLC y se liofilizó (rendimiento global para las tres etapas: 20 mg (47%)).
MS: 17700-18200 (pico ancho) (MW calculado = 17749 g/mol)
Síntesis del compuesto 9h.
Se mezclaron 1.5 mg (225 nmol) 8 g y 5 mg (280 nmol) 34, se disolvieron en 300 pl de 2/1 (v/v) 0.1 M de regulador de fosfato de sodio pH 7/acetonitrilo y se incubaron durante 15 minutos a temperatura ambiente. El producto se purificó por RP-HPLC y se liofilizó. (rendimiento 4 mg, 160 nmol, 70%)
El producto liofilizado se disolvió en 200 pl de regulador de citrato de sodio 0.1 M a pH 1.5 y se agregaron 69 mg (20.5 pmol) 33 en 200 pl de 2/1 (v/v) de regulador de acetonitrilo/citrato de sodio de pH 1.5. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y el producto 9h se purificó por cromatografía de exclusión por tamaño (columna: Superdex 200, regulador: HEPES 10 mM, pH 7.4, Tween-20 al 0.005%, EDTA 3 mM, rata de flujo: 0.75 ml/min)
Tiempo de elución SEC: 15 min
Síntesis del compuesto 37a
Figure imgf000047_0001
Se incubaron 250 mg (0.35 mmol) de resina de cloruro de 2-clorotritilo (con una carga de 1,4 mmol/g) durante 1.5 h con 308 mg (4 eq., 1.4 mmol) de 4,7,10-trioxatridecano-1,13-diamina en 4 ml DCM para generar 35a. La resina se lavó con DCM y se secó. Se agregaron 107 mg (0.7 mmol) de HOBt, 110 pl (0.7 mmol) de DIC y 150 mg (0.9 mmol) de ácido 5-formil salicílico en 3 ml de DMF y la suspensión resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente para producir 36a. Después de lavar con DCM y THF, la resina se suspendió en 6 ml de THF y se añadieron gota a gota 3 ml (3 mmol) de BH3 THF (1 M en THF, 8.5 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a 45°C en atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar 4 ml de THF, se añadieron sucesivamente 0.8 ml de DIEA y 1.6 ml de MeOH. Se agregaron 210 mg (0.84 mmol) de I2 (como una solución concentrada de THF) y la suspensión se agitó durante 1 h. La resina se lavó repetidamente (tres veces cada una) con THF, DMF, MeOH y DCM. La resina seca se hizo reaccionar con 107 mg (0.7 mmol) de HOBt, 110 pl (0.7 mmol) de DIC y 55 pL (0.9 mmol) de AcOH en 3 ml de DMF durante 1 h. Después del lavado de la resina con DMF y DCM, el compuesto 37a se escindió de la resina con 2/1 (v/v) HFIP/DCM (dos veces durante 30 minutos). Los componentes volátiles se evaporaron y el producto 37a se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
37a: Rendimiento 29 mg (20%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 421.4 (MW+Na calculado = 421.5 g/mol)
Síntesis del compuesto 38
Figure imgf000047_0002
Se hicieron reaccionar 24 mg (0.06 mmol) 37a, 31 mg (0.06 mmol) de PyBOP, 32 pl (0.18 mmol) de DIEA y 23 mg (0.06 mmol) 2 en 0.5 ml de DMF durante 50 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición de 50 pl, el producto de ácido acético 38 se purificó por RP-HPLC.
38: Rendimiento 7 mg (15%)
MS [M+Na]+ = 781.3 (MW+Na calculado = 781.6 g/mol)
Síntesis del compuesto 39
Figure imgf000048_0001
Se incubaron 300 mg (0.42 mmol) de resina de cloruro de 2-clorotritilo (cargando 1.4 mmol/g) durante 1.5 h con 245 mg (4 eq., 1.7 mmol) de 1,8 -diaminooctano en 4 ml de DCM para obtener 35b. La resina se lavó con DCM y se secó. Se agregaron 107 mg (0.7 mmol) de HOBT, 110 gl (0.7 mmol) de DIC y 150 mg (0.9 mmol) de ácido 5-formil salicílico en 3 ml de DMF y la suspensión resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente para generar 36b. Después de lavar con DCM y THF, la resina se suspendió en 6 ml de THF y se agregaron gota a gota 3 ml (3 mmol) de BH3 THF (1 M en THF). La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a 45°C en atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar 4 ml de THF, se añadieron sucesivamente 0.8 ml de DIEA y 1.6 ml de MeOH. Se agregaron 210 mg (0.84 mmol) de I2 (como una solución concentrada de THF) y la suspensión se agitó durante 1 h. La resina se lavó repetidamente (tres veces cada una) con THF, DMF, MeOH y DCM. La resina seca reaccionó con 107 mg (0.7 mmol) de HOBT, 110 gl (0.7 mmol) de DIC y 55 gL (0.9 mmol) de AcOH en 3 ml de DMF durante 1 h. Después del lavado de la resina con DMF y el compuesto 37b de DCM, se hicieron reaccionar 78 mg (0.39 mmol) de cloroformiato de p-nitrofenilo y 210 gl (1.2 mmol) de DIEA en 1/1 (v/v) de THF/DCM durante 30 min a temperatura ambiente. La resina separada se suspendió en 1/1 (v/v) THF/DCM y se agregaron 210 gl (1.2 mmol) de N,N,N'-trimetiletilendiamina. La suspensión resultante se agitó durante 25 min a temperatura ambiente. La resina se separó y se lavó con DCM. El producto 39 se escindió de la resina con 2/1 (v/v) HFIP/DCM (dos veces durante 30 min). Los componentes volátiles se evaporaron y el producto 39 se purificó por HPLC.
39: Rendimiento 16 mg (8 %) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 473.5 (MW+Na calculado = 473.3 g/mol)
Síntesis del compuesto 40a
Figure imgf000048_0002
Se disolvió 38 (7 mg, 9 gmol) en 200 gl de THF seco. Se añadieron cloroformiato de p-nitrofenilo (2.0 mg, 10 gmol) y DIEA (4.4 gl, 25 gmol) y la mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se añadió N,N,N'-trietiletilendiamina (15b) ( 1 8 gl, 0.1 mmol) y se continuó la agitación durante 30 min. El disolvente se eliminó al vacío, se agregaron 10 gl de AcOH y 40a se purificó por RP-HPLC.
40a: Rendimiento de 1 mg (11%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 951.1 (MW+Na calculado = 951.8 g/mol)
Síntesis del compuesto 40b
Figure imgf000049_0001
Se hicieron reaccionar 15 mg (33 gmol) 39, 18 mg (33 gmol) de PyBOP, 23 gl (0.13 mmol) de DIEA y 13 mg (35 gmol) 2 en 0.5 ml de DMF durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición de 50 gl, el producto de ácido acético 40 se purificó por RP-HPLC.
40b: rendimiento 10 mg (37%) como sal de TFA
MS [M+H]+ = 811.5 (MW+Na calculado = 810.5 g/mol)
Síntesis del compuesto 41a y 41b
Figure imgf000049_0002
El carbonato 41a o 41b se sintetizó a partir de 40a o 40b como se describe para el compuesto 7a
41 a: Rendimiento 0.4 mg como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 1116.8 (MW+Na calculado = 1116.9 g/mol)
41b: Rendimiento de 2 mg (16%) como sal de TFA
MS [M+H]+ = 976.8 (MW calculado = 975.8 g/mol)
Síntesis del compuesto 42
Figure imgf000050_0001
El derivado de insulina 42 se sintetizó a partir de 41 b como se describe para el compuesto 8 a.
42 MS [M+3H]3+ = 2124.5 [M+4H]4+ = 1594.6 (MW calculado = 6371 g/mol)
Síntesis del compuesto 43
Figure imgf000050_0002
43: Tiempo de retención de SEC: 18.0 min
Síntesis de hidrogel de PEGA cargado con rh-insulina 45
Figure imgf000051_0001
Derivación con maleimida de hidrogel a base de poliacrilamida (PEGA):
Las perlas de hidrogel NH2-PEGA con una carga de 0.4 mmol/g y un tamaño de perla de 150-300 gm se adquirieron de Novabiochem.
Se pesaron 2.5 g de hidrogel de NH2-PEGA metanol (0.4 mmol/g de carga de NH2) en una jeringa equipada con una frita de polipropileno. La carga de maleimida se ajustó por acilación empleando una mezcla de ácido maleimidopropiónico activado y ácido acético como se describe a continuación. El hidrogel se lavó 5 veces con DMF y se hizo reaccionar con 13.5 mg (0.08 mmol) de ácido 3-maleimidopropiónico, 115.2 pl (1.92 mmol) de ácido acético y 313 pl (2 mmol) de DIC en 4 ml de DMF durante 30 min. El hidrogel 44 derivado de maleimida se lavó 10 veces con DMF y DCM y finalmente con acetonitrilo.
Se hicieron reaccionar 30 mg de resina derivada de maleimida 44 (cargando 16 pmol/g) con 3 mg de compuesto 20b (480 nmol, 1.06 eq) en 600 pl de 20/80 (v/v) acetonitrilo/regulador fosfato 50 mM (pH 7.4) durante 10 minutos para dar hidrogel cargado con rh-insulina 45. El hidrogel 45 se lavó 5 veces con acetonitrilo/agua 50/50 (v/v) y tres veces con acetonitrilo y se secó al vacío.
Síntesis de hidrogel a base de carbohidrato de rh-insulina 46
Figure imgf000052_0001
Las perlas de hidrogel "Sepharose 4 Fast Flow" activadas por NHS (agarosa reticulada químicamente, epiclorhidrina reticulante) se compraron a Amersham.
Se pesaron 1.5 g de hidrogel de sefarosa húmedo con etanol (150 mg de hidrogel seco) en una jeringa equipada con una frita de polipropileno y se hizo reaccionar con 4,7,10-trioxatridecano-1,13-diamina 1 M en DMF durante 30 min. Después de 5 etapas de lavado con DMF, se hizo reaccionar hidrogel con 8.5 mg (0.05 mmol) de ácido 3-maleimidopropiónico, 57 pl (0.95 mmol) de ácido acético, 151 mg (1 mmol) de HOBt y 158 pl (1 mmol) de DIC en 4 ml de DMF durante 30 min para dar hidrogel derivado de maleimida. El hidrogel se lavó 10 veces con DMF y finalmente con acetonitrilo.
Se disolvieron 1.5 mg de 8 c en 25/75 (v/v) de acetonitrilo/regulador fosfato 50 mM, pH 7.4 y se hicieron reaccionar con 10.8 mg de hidrogel derivado de maleimida durante 10 minutos. El hidrogel cargado con rh-insulina 46 se lavó cinco veces con acetonitrilo/agua 50/50 (v/v) y tres veces con acetonitrilo y se secó al vacío.
Esquema de síntesis de fluoresceína-insulina-rHSA (50)
Figure imgf000053_0001
Síntesis de bismaleimida 47
Figure imgf000053_0002
Se hizo reaccionar ácido 3-maleimido-propiónico (92 mg, 0.54 mmol) en 200 gl de DMF con DIC (78 gl, 0.50 mmol) a temperatura ambiente durante 15 min. Se añadió 4,7,10-trioxa-tridecan-1,13-diamina (43.5 gl, 0.20 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Después de la adición de 800 gl, se purificó 1/4 (v/v) de ácido acético/agua 47 mediante RP-HPLC.
47: Rendimiento 23 mg (22%)
MS [M+Na]+ = 545.5 (MW+Na calculado = 545.6 g/mol)
Síntesis de rHSA-maleimida (48)
Se mezclaron 66.5 pl de solución de rHSA 3 mM en NaCI 145 mM, octanoato de sodio 32 mM, Tween-80 al 0.0015% con 66.5 pl de regulador de fosfato 0.5 M, pH 7.0. Se añadieron 0.41 mg de bismaleimida 47 (0.8 pmol) y la mezcla se hizo reaccionar durante 15 minutos a temperatura ambiente. El Compuesto 48 se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando un regulador HEPES 10 mM a pH 7.4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% como fase móvil. (Rendimiento: 2.6 ml 77.5 pM 48).
Tiempo de retención de SEC: 17.1 min (280 nm)
ESI-MS = 66988 (MW calculado = 66984 g/mol)
Síntesis de fluoresceína-insulina-enlazador-maleimida (49)
Se mezclaron 40 pl de bismaleimida 47 2.4 mM en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua (96 nmol) con 40 pl de regulador de borato de sodio 0.5 M, pH 5.8. Se agregaron 24 nmol de en 16.8 pl de 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua y la mezcla se incubó durante 10 minutos a RT. Se agregaron 5 pl de AcOH y 49 se purificaron por RP-HPLC.
ESI-MS = 7211 (MW calculado = 7211 g/mol)
Síntesis de fluoresceína-insulina-enlazador-rHSA 50a) de 49 y Rhsa
b) de 48 y 8 f
a)
Se mezclaron 30 pl de 4980 pM en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua (2.4 nmol) con 70 pl de regulador de fosfato de sodio 0.25 M, pH 6.4. Se añadieron 8 pl de 3 mM de rHSA en NaCl 145 mM, octanoato de sodio 32 mM, Tween-80 al 0.0015% (24 nmol) y la mezcla se incubó a temperatura ambiente durante 20 min.
El compuesto 50 se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando un regulador HEPES 10 mM a pH 7.4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% como fase móvil.
Tiempo de retención de SEC: 17.3 min (500 nm)
ESI-MS = 73676 (MW calculado = 73673 g/mol)
b)
El eluato SEC de rHSA-maleimida 48 (241 pl, 77.5 pM, 18.7 nmol) se mezcló con 20 pl de regulador de borato de sodio 0.5 M pH 5.8. Se agregaron 14 pl de 1.41 mM 8 f (19.6 nmol) en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua y la mezcla se incubó a temperatura ambiente durante 10 min. Se añadieron 1.2 pl de ácido 3-maleimidopropiónico 48.5 mM (58 nmol) en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua y el compuesto 50 se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) usando regulador HEPES 10 mM a pH 7.4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% como fase móvil.
Tiempo de retención de SEC: 17.1 min (500 nm)
ESI-MS = 73698 (MW calculado = 73673 g/mol)Esquema de síntesis de rHSA-enlazador-GLP-1 53a y 53b
Figure imgf000055_0001
Síntesis de 51a
GLP(7-36) (secuencia: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-amida) se sintetizó sobre resina de amina Rink empleando fmoc-Strategy (Specialty Peptide Laboratories, Heidelberg, Alemania). El grupo protector fmoc N-terminal se eliminó y la resina se lavó con DCM y se secó. Se suspendieron 118 mg de resina (0.11 mmol/g, 13.2 pmol) en una solución de 50 mg 19i (53 pmol) en 75o pl de DMSO seco y 22.4 pl de DIEA. Se añadieron 2.1 pl de piridina y la mezcla se agitó durante 48 horas a temperatura ambiente. Después de lavar la resina 6 veces cada una con DMF y DCM, la escisión del péptido de la resina y la eliminación de los grupos protectores se logró con 96/2/2 (v/v/v) TFA/trietilsilano/agua. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno y 51a se purificó por RP-HPLC y se liofilizó.
51a: Rendimiento 4.6 mg (9%)
MS: [M+3H]3+ = 1251.0 (MW calculado = 3750.3 g/mol)
Síntesis de 51bLys28 ivDde cadena protegida GLP (7-36) (secuencia: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK (ivDde)GR-amida) se sintetizó en una resina de Rink-amida empleando fmoc-Strategy (Specialty Peptide Laboratories, Heidelberg, Alemania). El grupo protector fmoc N-terminal se eliminó y la resina se lavó con DCM y se secó. Se suspendieron 50 mg de resina (0.11 mmol/g, 5.5 pmol) en una solución de 25 mg 19i (26 pmol) en 400 pl de DMSO seco y 11.2 pl de DIEA. Se añadieron 1.1 pl de piridina y la mezcla se agitó durante 48 horas a temperatura ambiente. Después de lavar la resina seis veces con DMF, el grupo protector ivDde se escindió incubando la resina 3 veces con hidracina al 5% en DMF durante 20 minutos. El ácido Fmoc-8 -amino, 3,6-dioxaoctanoico se acopló de acuerdo con el ciclo de acoplamiento estándar. Se eliminó el grupo protector Fmoc y se acopló carboxi-fluoresceína incubando la resina con 8 mg de 5-(y -6 )-carboxifluoresceína éster succinimidílico y 2 pl de DIEA durante 60 min. La resina se lavó seis veces cada una con DMF y DCM. La escisión del péptido de la resina y la eliminación de los grupos protectores se logró con 96/2/2 (v/v/v) TFA/trietilsilano/agua. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno. Se utilizó 51 b para la síntesis de 52 sin purificación adicional.
MS: [M+3H]4+ = 1064.3, [M+2H]3+ = 1418.3 (MW calculado = 4254 g/mol)
Síntesis de 52
La materia prima 51b se disolvió en 500 pl de acetonitrilo 1/1 (v/v) / fosfato de sodio 0.25 M, pH 7 y se añadieron 8 mg de N,N'-bis(3-maleimidopropionil)-2-hidroxi-1,3-propanodiamina. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 15 min y 52 se purificó por RP-HPLC y se liofilizó.
52: Rendimiento: 5.1 mg
MS [M+3H]4+ = 1162.8, [M+2H]3+ = 1549.4 (MW calculado = 4645 g/mol)
Síntesis del compuesto 53a
Figure imgf000056_0001
Se mezclaron 30 pl de 1.57 mM 48 (47 nmol) en regulador HEPES 10 mM, pH 7.4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% con 10 pl de regulador fosfato de sodio 0.5 M, pH 7,4. Se añadió una mezcla de 2 pl de DMSO y 12 pl de 6.06 mM 51a (73 nmol) en agua/acetonitrilo 9/1 (v/v) y la solución se incubó a temperatura ambiente durante 30 min. La 53a se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando regulador fosfato 10 mM pH 7.4, NaCl 150 mM y Tween al 0.005% como fase móvil.
Tiempo de retención de SEC: 17.7 min (280 nm)
ESI-MS = 70745 (MW calculado = 70734 g/mol)
Síntesis de 53b
Figure imgf000056_0002
100 pl de 3 mM 52 (300 nmol) en 9/1 50 mM de fosfato de sodio, pH 7.0/acetonitrilo, se mezclaron con 100 pl de HSA 3 nM (300 nmol) y la solución se incubó a temperatura ambiente durante 30 min. 53b se purificó por SEC (columna: Superdex 200, rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando un regulador HEPES 10 mM a pH 7.4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM y Tween al 0.005% como fase móvil.
Tiempo de retención de SEC: 17.7 min (500 nm)
Síntesis de los compuestos 54a y 54b
54a R1 = Me
54b R1 = H
Se suspendió AÍCÍ3 (1.05 eq) en DCM y se añadió cloruro de ácido 6 -bromohexanoico (1 eq). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 0 minutos, se añadió o-cresol (1 eq) y la mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 25 minutos. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica separada se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El producto 54a se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando heptano/acetato de etilo (4/1) como fase móvil.
54b se sintetizó como se describe anteriormente utilizando cloruro de ácido 6 -bromohexanoico y fenol.
54a: Rendimiento 3.7 g (33%)
MS [M+H]+ = 285.1 y 287.2 (MW+H calculado = 386.2 g/mol)
54b: Rendimiento 620 mg (15%)
MS [M+H]+ = 271.2 (MW calculado = 271.0 g/mol)
Síntesis de los compuestos 55a y 55b
Figure imgf000057_0001
55a R1 = Me
55b R1 = H
Se añadió DBU (105 gl, 701 gmol) a una solución de bromuro 54a (105 mg, 369 gmol) y tritiltiol (204 mg, 738 gmol) en 50 ml de DMSO seco. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 min y se acidificó con H2SO4 1N. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se evaporó. 55a se purificó por RP-HPLC.
55b se sintetizó de acuerdo con el mismo protocolo utilizando 54b (180 mg, 0.66 mmol).
55a: Rendimiento 173 mg (97%)
MS [M+Na]+ = 503.6 (MW+Na calculado = 503.7 g/mol)
55b: Rendimiento 160 mg (85%)
MS [M+Na]+ = 489.5 (MW+Na calculado = 489.3 g/mol)
Síntesis de los compuestos 56a y 56b.
Figure imgf000057_0002
56a R1 = Me, R2 = R3 = 3-(dimetilamino)propilo,
56b R1 = H, R2 = Me, R3 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo
56a se preparó a partir de 55a (9 mg, 19 gmol), cloroformiato de p-nitrofenilo y bis(3-dimetilamino-propil)amina (21 gl, 94 gmol) como se describe para el compuesto 16a.
56b se sintetizó a partir de 55b (160 mg, 0.34 mmol), cloroformiato de p-nitrofenilo y N-etil-N,N'-dimetil-1,3-propanodiamina (15c) como se describe para el compuesto 16a.
56a: Rendimiento 12 mg (70%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 716.8 (MW+Na calculado = 717.0 g/mol)
56b: Rendimiento de 80 mg (32%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 645.6 (MW+Na calculado = 645.4 g/mol)
Síntesis de los compuestos 57a y 57b
Figure imgf000058_0001
57a R1 = Me, R2 = R3 = 3-dimetilamino-propilo,
57b R1 = H, R2 = Me, R3 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo
57a y 57b se sintetizaron a partir de 56a (12 mg, 13 gmol, sal doble de TFA) y 56b (80 mg, 110 gmol, sal de TFA), respectivamente, como se describe para el compuesto 16g.
57a: Rendimiento 9 mg (75%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 719.0 (MW+Na calculado = 718.7 g/mol)
57b: Rendimiento 60 mg (75%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 647.4 (MW+Na calculado = 647.4 g/mol)
Síntesis de los compuestos 58a y 58b
Figure imgf000058_0002
58a R1 = Me, R2 = R3 = 3-(dimetilamino)propilo,
58b R1 = H, R2 = Me, R3 = 3-(N-etil-N-metilamino)propilo
57a (1 eq, 8 mg, 9 gmol), cloroformiato de 4-nitrofenilo (3.5 eq, 6 mg, 30 gmol), DIEA ( 6 eq, 9 gl, 52 gmol) y DMAP (1 eq, 1 mg, 9 gmol) se agitaron en 1 ml de DCM seco a temperatura ambiente durante 45 min bajo atmósfera de nitrógeno. Los volátiles se evaporaron y se añadió ácido acético. La mezcla se disolvió en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua y el carbonato 58a se purificó por RP-HPLC.
El carbonato 58b se preparó igualmente a partir de 57b (135 mg, 0.18 mmol).
58a: Rendimiento de 7 mg (70%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 883.8 (MW+Na calculado = 884.1 g/mol)
58b: Rendimiento 110 mg (77%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 812.4 (MW+Na calculado = 812.5 g/mol)
Síntesis del compuesto 59
Figure imgf000059_0001
Rh-Insulina (44.5 mg, 7.7 gmol), carbonato de 58a (1 eq, 7 mg, 6.4 mmol), DIEA (15 gl, 8 8 gmol) y DMAP (1.5 mg, 12 gmol) en 0.3 ml de DMSO se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se neutralizó con ácido acético y se diluyó con 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua. La purificación por RP-HPLC dio el intermedio protegido con Trt apropiado.
Después de la liofilización, el intermedio protegido con Trt se mezcló con 95/5 (v/v) de TFA/trietilsilano y se agitó durante 5 min. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno y 59 se purificaron por RP-HPLC y se liofilizaron. La posición de la modificación de la insulina se verificó mediante reducción de la TDT y análisis de la EM.
59: MS [M+3H]3+ = 2095.5 [M+4H]4+ = 1572.2 (MW calculado = 6288 g/mol)
Síntesis del compuesto 60
Figure imgf000059_0002
Se preparó 60 a partir de 59 (0.17 gmol) como se describe para el compuesto 9a.
60: Tiempo de retención de la SEC: 19.5 min.
Síntesis del compuesto 61
Figure imgf000060_0001
57b (70 mg, 90 gmol), DSC (161 mg, 630 gmol), DIEA (192 gl, 1.1 mmol) y DMAP (11 mg, 90 gmol) se agitaron en 1 ml de acetonitrilo seco a temperatura ambiente durante 14 h bajo atmósfera de nitrógeno. Los volátiles se evaporaron y se añadió ácido acético. La mezcla se disolvió en 1/1 (v/v) de acetonitrilo/agua y el carbonato 61 se purificó por RP-HPLC.
61: Rendimiento 40 mg (51%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 788.4 (MW+Na calculado = 788.5 g/mol)
Síntesis del compuesto 62
Figure imgf000060_0002
61 (12 mg, 13 gmol) y NPys-Cl (4 mg, 21 gmol) se agitaron en 1 ml de DCM a -10°C durante 2 h en atmósfera de nitrógeno. Los volátiles se eliminaron bajo flujo de nitrógeno y 62 se purificaron por RP-HPLC.
62: Rendimiento de 7 mg (65%) como sal de TFA
MS [M+Na]+ = 700.9 (MW+Na calculado = 701.4 g/mol)
Síntesis del compuesto 63
Figure imgf000060_0003
0.9 mg de rhGH desalinizada (ProspecTany, Israel, MW 22250 g/mol, 40 nmol) en 200 gl de regulador borato 50 mM (pH 8.0), 8 gl de carbonato 62 en acetonitrilo (38 mM, 300 nmol) y 40 gl de DMSO se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de disolventes y los compuestos pesados de bajo peso molecular se reemplazaron por agua y posteriormente con regulador de acetato (25 mM, pH 4.2, 0.005% de Tween 20) mediante ultrafiltración utilizando un filtro Centricon 5 (corte de 5 kDa). 8 pl (80 nmol) de DTT 10 mM en regulador de acetato 25 mM, pH 4.2, se añadió Tween al 0.005% y se incubó a temperatura ambiente durante 30 min. Los compuestos de bajo peso molecular se eliminaron mediante ultrafiltración utilizando un filtro Centricon 5 y un regulador de acetato 25 mM a pH 4.2, Tween al 0.005% como eluato. Después de la concentración a un volumen de 100 pl (Centricon 5), se agregaron 20 pl (100 nmol) de maleimida 5 mM-PEG5k en agua y 80 pl de regulador de fosfato 0.5 M, pH 7.0. La mezcla se incubó a temperatura ambiente durante 5 min. El monoconjugado 63 se separó mediante SEC (columna: Superdex 2 0 0 , rata de flujo: 0.75 ml/min) utilizando un regulador de fosfato 10 mM pH 7.4, NaCl 150 mM y Tween 2 0 al 0.005% como fase móvil. El eluato recogido (aproximadamente 1.0 ml) se diluyó con 0.5 ml de regulador que contenía NaN3 al 0.05% y se usó directamente para la determinación de la velocidad de liberación.
63: Tiempo de retención SEC: 17.5 min
Liberación de insulina o fluoresceína-insulina de los conjugados en un regulador pH 7.4La liberación de (fluoresceína)-insulina de los conjugados (fluoresceína)-insulina 9a a 9h, 21a a 21f, 30a, 30b, 43, 50 y 60, la liberación de fluoresceína-GLP-1 de 53b y la liberación de rhGH de 63 fue realizada por hidrólisis del enlazador en regulador acuoso pH 7.4. Los eluatos de SEC recogidos de (fluoresceína)-insulina conjugados (véase arriba), fluoresceína-GLP-1 conjugado y rhGH-conjugado, respectivamente, se incubaron a 37°C y las muestras se tomaron a intervalos de tiempo y se analizaron por RP-HPLC (conjugados de insulina) o SEC (conjugado de rhGH, conjugados de insulina con fluoresceína y conjugado de fluoresceína-GLP-1) y detección de UV a 215 o 280 nm o detección de VIS a 500 nm. Los picos que se correlacionan con el tiempo de retención de la insulina nativa, la fluoresceína-insulina, la fluoresceína-GLP-1 y la rhGH, respectivamente, se integraron y se representaron en función del tiempo de incubación, y se aplicó un software de ajuste de curvas para estimar el medio tiempo de liberación correspondiente.
Liberación de insulina a partir de conjugados de hidrogel 45 y 46
Se pesaron 4 mg de 45 o 2 mg 46 en un tubo de ensayo y se incubaron con 1 ml de regulador HEPES 10 mM, pH 7.4, NaCl 150 mM, Tween al 0.005% a 37°C. Se tomaron muestras de 45 pl a diferentes intervalos de tiempo y se analizaron cuantitativamente en busca de rh-insulina mediante un ensayo RP-HPLC. Los picos de rh-insulina se integraron y la concentración de rh-insulina se obtuvo a partir de una curva estándar. Se ajustó una cinética de liberación de primer orden a los puntos de datos para dar la vida media del enlazador.
Análisis de MS de la insulina liberada del compuesto 9a, 9b y 30aLas muestras de regulador de insulina liberada (véase arriba) fueron analizadas por espectrometría de masas. La Figura 11 muestra los espectros de masas de la insulina liberada del compuesto 9a, 9b y 30a. El espectro de masas de la insulina liberada a partir del compuesto 9a muestra claramente un producto secundario principal (indicado por flechas), correspondiente a la insulina irreversiblemente modificada con pentanoílo. En este caso, la eliminación del grupo de enmascaramiento de pentanoílo no fue por hidrólisis sino por transferencia de acilo a la insulina. El espectro de masas de la insulina liberada a partir del compuesto 9b y 30a no muestra ninguna modificación.
Liberación de fluoresceína-insulina del conjugado 9d y 9e en plasma humano al 80%
La liberación de fluoresceína-insulina de 9d o 9e se efectuó mediante hidrólisis en plasma humano al 80% en HEPES 20 mM, pH 7.4 a 37°C. Se tomaron muestras a intervalos de tiempo y se analizaron mediante detección de SEC y VIS a 500 nm. Los picos que se correlacionaban con el tiempo de retención de la fluoresceína-insulina se integraron y se representaron en función del tiempo de incubación, y se aplicó un software de ajuste de curvas para estimar el medio tiempo de liberación correspondiente.
Tabla: Hidrólisis de profármacos poliméricos.
Figure imgf000061_0001
Figure imgf000062_0001
Lo anterior se considera ilustrativo de los principios de la invención y dado que los expertos en la materia tendrán numerosas modificaciones, no se pretende limitar la invención a la construcción y operación exactas descritas. Todas las modificaciones y equivalentes adecuados caen dentro del alcance de las reivindicaciones.
Abreviaturas:
Boc t-butiloxicarbonilo
DBU 1,3-diazabiciclo[5.4.0]undeceno
DCM dicolorometano
(iv)Dde 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxo-ciclohexilideno)3-metil-butilo DIC diisopropilcarbodiimida
DIEA diisopropiletilamina
DMAP dimetilamino-piridina
DMF N,N-dimetilformamida
DMSO dimetilsulfóxido
Dpr ácido diaminopropiónico
DSC carbonato de disuccinidilo
EDTA ácido etilenediaminetetraacético
Et etilo
Eq. equivalente estequiométrico
Fmoc fluorenilmetoxicarbonilo
Fmoc-Ado-OH Ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico
HFIP hexafluoroisopropanol
HEPES N-(2-hidroxietil)piperazin-N'-(ácido 2-etanosulfónico)
HOBt N-hidroxibenzotriazol
LCMS cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas Mal maleimidopropionilo
Me metilo
Mmt 4-metoxitritilo
MS espectro de masas
MW masa molecular
Npys 3-nitro-2-piridinesulfonilo
PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio rHSA albúmina sérica humana recombinante
rhGH hormona de crecimiento humano recombinante
RP-HPLC Cromatografía líquida de alto rendimiento en fase reversa RT temperatura ambiente
SEC cromatografía de exclusión por tamaño
Suc succinimidopropionilo
TES trietilsilano
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
UV ultravioleta
VIS visual
Z benziloxicarbonilo

Claims (30)

REIVINDICACIONES
1. Un profármaco polimérico en cascada que comprende:
- una amina que contiene una unidad estructural biológicamente activa;
- un grupo de enmascaramiento que tiene al menos un nucleófilo y que es distinto del portador;
en donde el profármaco tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000064_0001
en donde
T es D;
D es un residuo de una amina que contiene una unidad estructural biológicamente activa, que está conectada a la unidad estructural de la molécula a través de un grupo amina;
X es una unidad estructural espaciadora, tal como R5-Y6 ;
Y1, Y2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S;
Y3 , Y5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O y S;
Y4 es O, NR6 o -C(R7)(R8)-;
Y 6 es O, S, NR6, succinimida, maleimida, un enlace carbono-carbono insaturado, cualquier heteroátomo que contenga un par de electrones libres, o está ausente;
R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; ciano; nitro; halógeno; carboxi; carboxialquilo; alquilcarbonilo y carboxamidoalquilo;
cada R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilo; arilo sustituido; heteroarilo sustituido o no sustituido; alcoxi sustituido, no sustituido, lineal, ramificado o cíclico; heteroalquiloxi lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; ariloxi; heteroariloxi; ciano y halógeno;
R5 se selecciona del grupo que consiste en alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos;
R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; heteroarilos sustituidos o no sustituidos; carboxialquilo; alquilcarbonilo; carboxamidoalquilo; ciano y halógeno;
R6 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo o heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; arilos; arilos sustituidos; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos;
R1 es un polímero;
W se selecciona del grupo que consiste en alquilos lineales, ramificados o cíclicos sustituidos o no sustituidos; arilos; arilos sustituidos; heteroalquilo lineal, ramificado o cíclico sustituido o no sustituido; y heteroarilos sustituidos o no sustituidos;
Nu es un nucleófilo seleccionado del grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios o terciarios; tiol; ácido carboxílico; hidroxilamina e hidrazina;
n es cero o un entero positivo; y
Ar es un hidrocarburo aromático de múltiples sustituciones o un heterociclo aromático de múltiples sustituciones seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000065_0001
y en donde cada V se selecciona independientemente del grupo que consiste en O, S y N.
2. El profármaco de la reivindicación 1, en donde la unidad estructural biológicamente activa se selecciona del grupo que consiste en agentes biológicamente activos y biopolímeros de molécula pequeña.
3. El profármaco de la reivindicación 2, en donde los biopolímeros se seleccionan del grupo que consiste en proteínas, polipéptidos, oligonucleótidos y ácidos nucleicos peptídicos.
4. El profármaco de la reivindicación 3, en donde los polipéptidos se seleccionan del grupo que consiste en ACTH, adenosina desaminasa, agalsidasa, albúmina, alfa-1 antitripsina (AAT), alfa-1 proteinasa inhibidor (API), alteplasa, anistreplasa, ancrod serina proteasa, anticuerpos (monoclonales o policlonales y fragmentos o fusiones), antitrombina III, antitripsinas, aprotinina, asparaginasas, bifalina, proteínas óseas morfogénicas, calcitonina (salmón), colagenasa,
DNasa, endorfinas, enfuvirtida, encefalinas, eritropoyetinas, factor VIIa, factor VIII, factor VIIIa, factor IX, fibrinolisina, proteínas de fusión, hormonas folículo estimulantes, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), galactosidasa, glucagón, péptidos glucagón como GLP-1, glucocerebrosidasa, factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos (GM-CSF), proteína activadora de fosfolipasa (PLAP), gonadotropina coriónica (hCG), hemoglobinas, vacunas contra la hepatitis B, hirudina, hialuronidasas, globulinas inmunes iduronidasa, vacunas contra la influenza, interleucinas (1 alfa, 1 beta, 2, 3, 4, 6, 10, 11, 12), antagonista del receptor IL-1 (rhIL-1 ra), insulinas, interferones (alfa 2a, alfa 2b, alfa 2c, beta 1 a, beta 1 b, gamma 1 a, gamma 1 b), factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), factores de crecimiento transformantes, lactasa, leuprolida, levotiroxina, hormona luteinizante, vacuna de Lyme, péptido natriurético, pancrelipasa, papaína, hormona paratiroidea, PDGF, pepsina, factor activador de plaquetas acetilhidrolasa (PAF-AH), prolactina, proteína C, octreotida, secretina, sermorelina, superóxido dismutasa (SOD), somatropinas (hormona del crecimiento), somatostatina, estreptoquinasa, sucrasa, fragmento de toxina tetánica, tilactasa, trombinas, timosina, hormona estimulante de la tiroides, tirotropina, factor de necrosis tumoral (TNF), receptor de TNF-IgG Fc, activador tisular del plasminógeno (tPA), TSH, urato oxidasa, uroquinasa, vacunas y proteínas de plantas tales como lectina o ricina.
5. El profármaco de la reivindicación 3, en donde la proteína se prepara mediante tecnología de ADN recombinante.
6. El profármaco de la reivindicación 3, en donde la proteína se selecciona del grupo que consiste en fragmentos de anticuerpo, proteínas de unión de cadena simple, anticuerpos catalíticos y proteínas de fusión.
7. El profármaco de la reivindicación 3, en donde la proteína se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos, calcitonina, G-CSF, GM-CSF, eritropoyetinas, hemoglobinas, interleucinas, insulinas, interferones, SOD, somatropina, TNF, receptor de TNF IgG-Fc y péptidos similares al glucagón como GLP-1.
8. El profármaco de la reivindicación 2, en donde las moléculas pequeñas biológicamente activas se seleccionan del grupo que consiste en agentes activos del sistema nervioso central, antiinfecciosos, antineoplásicos, antibacterianos, antifúngicos, analgésicos, anticonceptivos, antiinflamatorios, esteroides, vasodilatadores, vasoconstrictores y agentes cardiovasculares con al menos un grupo amino primario o secundario.
9. El profármaco de la reivindicación 2 u 8, en donde los agentes biológicamente activos de molécula pequeña se seleccionan del grupo que consiste en daunorrubicina, doxorrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, aminoglutetimida, amantadina, diafenilsulfona, etambutol, sulfadiazina, sulfamerazina, sulfametoxazol, sulfaleno, clinafloxacina, moxifloxacina,
ciprofloxacina, enoxacina, norfloxacina, neomicina B, espectinomicina, kanamicina A, meropenem, dopamina, dobutamina, lisinopril, serotonina, acivicina y carbutamida.
10. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde cada R4 se selecciona independientemente del grupo de sustituyentes pequeños que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, etoxi, metoxi y otros alquilos lineales, cicloalquilos o alquilos y heteroalquilos ramificados que comprenden uno a seis átomos de carbono.
11. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde R1 se selecciona del grupo que consiste en polímeros basados en polialquiloxi como poli(propilenglicol) o poli(etilenglicol); dextrano, quitosano, ácido hialurónico, alginato, xilano, manano, carragenano, agarosa, celulosa, almidón, hidroxietil almidón (HES) y otros polímeros a base de carbohidratos; poli(alcoholes vinílicos); poli(oxazolinas); poli(anhídridos); poli(ortoésteres); poli(carbonatos); poli(uretanos); poli(ácidos acrílicos); poli(acrilamidas) tales como poli(hidroxipropilmetacrilamida) (HMPA); poli(acrilatos); poli(metacrilatos) como poli(metacrilato de hidroxietilo); poli(organofosfazenos); poli(siloxanos); poli(vinilpirrolidona); poli(cianoacrilatos); poli(ésteres) tales como poli(ácido láctico) o poli(ácidos glicólicos); poli(iminocarbonatos); poli(aminoácidos) tales como poli(ácido glutámico), colágeno o gelatina; copolímeros; copolímeros injertados; polímeros reticulados; y copolímeros de bloque de los polímeros enumerados anteriormente.
12. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R1 es un hidrogel.
13. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R1 es un polímero ramificado o hiperramificado.
14. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R1 es un dendrímero o polímero de estrella denso.
15. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R1 es un biopolímero.
16. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o 15, en donde R1 es una proteína.
17. El profármaco de la reivindicación 16, en donde la proteína es albúmina, un anticuerpo, fibrina, caseína o cualquier otra proteína plasmática.
18. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en donde R1 incluye además una o más sustancias biológicamente activas.
19. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en donde el polímero de R1 tiene al menos un grupo funcional para la unión a X.
20. El profármaco de la reivindicación 19, en donde al menos un grupo funcional se selecciona del grupo que consiste en ácido carboxílico, amino, maleimida, tiol, ácido sulfónico y derivados, carbonato, carbamato, hidroxilo, aldehído, cetona, hidrazina, isocianato, isotiocianato, ácido fosfórico, ácido fosfónico, haloacetilo, haluros de alquilo, acriloilo, agentes de arilación como fluoruros de arilo, hidroxilamina, disulfuros como disulfuro de piridilo, vinilsulfona, vinilcetona, diazoalcanos, compuestos de diazoacetilo, epóxido, oxirano y aziridina.
21. El profármaco de la reivindicación 19 o 20, en donde al menos un grupo funcional se selecciona del grupo que consiste en tiol, maleimida, amino, ácido carboxílico, carbonato, carbamato, aldehído y haloacetilo.
22. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en donde el enlace o grupo formado entre X y R1 se selecciona del grupo que consiste en disulfuro, S-succinimida, amida, amino, éster carboxílico, sulfonamida, carbamato, carbonato, éter, oxima, hidrazona, urea, tiourea, fosfato y fosfonato.
23. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en donde el enlace o grupo formado entre X y R1 se selecciona del grupo que consiste en S-succinimida, amida, carbamato y urea.
24. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, en donde la unidad estructural
Figure imgf000067_0001
se selecciona del grupo que consiste en
Figure imgf000067_0002
25. El profármaco de la reivindicación 24, en donde la unidad estructural
Figure imgf000067_0003
es
Figure imgf000067_0004
26. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, en donde R6 es un Nu-W adicional.
27. El profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, en donde
Figure imgf000068_0001
es
Figure imgf000068_0002
m = 2-10
en donde R9, R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo o heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo y heteroarilo sustituido o no sustituido.
28. El profármaco de la reivindicación 27, en donde R9, R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
29. El profármaco de la reivindicación 27 o 28, en donde R7 y/o R8 no son hidrógeno.
30. Un método para hidrolizar el profármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 que comprende una etapa de poner el profármaco en solución con un pH de aproximadamente 7.4.
ES05716306T 2004-03-23 2005-03-22 Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador Active ES2741524T3 (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04075892A EP1579873A1 (en) 2004-03-23 2004-03-23 Polymeric prodrugs
GB0415043A GB0415043D0 (en) 2004-07-05 2004-07-05 Prodrug linker
EP04019293A EP1625855A1 (en) 2004-08-13 2004-08-13 Polymeric prodrug with a self-immolative linker
PCT/EP2005/003061 WO2005099768A2 (en) 2004-03-23 2005-03-22 Polymeric prodrug with a self-immolative linker

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2741524T3 true ES2741524T3 (es) 2020-02-11

Family

ID=34961964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05716306T Active ES2741524T3 (es) 2004-03-23 2005-03-22 Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador

Country Status (11)

Country Link
US (4) US8377917B2 (es)
EP (2) EP1732607B1 (es)
JP (2) JP4950022B2 (es)
AU (2) AU2005232371B2 (es)
BR (2) BR122019000248B8 (es)
CA (4) CA2824093C (es)
DK (1) DK1732607T3 (es)
ES (1) ES2741524T3 (es)
HU (1) HUE045882T2 (es)
MX (1) MXPA06010782A (es)
WO (1) WO2005099768A2 (es)

Families Citing this family (141)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7601691B2 (en) 1999-05-17 2009-10-13 Conjuchem Biotechnologies Inc. Anti-obesity agents
EA006484B1 (ru) 2001-02-02 2005-12-29 Конджачем, Инк. Долгоживущие производные рилизинг-фактора гормона роста
BR122019000248B8 (pt) * 2004-03-23 2021-07-27 Complex Biosystems Gmbh reagente de ligador de pró-fármaco de cascata polimérico
US8293869B2 (en) 2005-12-16 2012-10-23 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of GLP-1
EP1973952A4 (en) * 2006-01-23 2010-09-01 Kwangju Inst Sci & Tech CONJUGATE COMPRISING A COVALENT TO A MUCOADHESIVE POLYMER-ASSOCIATED PHARMACEUTICALLY ACTIVE COMPOUND, AND A TRANSMUCOSAL ADMINISTRATION METHOD FOR A PHARMACEUTICALLY ACTIVE COMPOUND USING THEREOF
EP2114437A2 (en) 2006-10-16 2009-11-11 ConjuChem Biotechnologies Inc. Modified corticotropin releasing factor peptides and uses thereof
JP2010527372A (ja) 2007-05-14 2010-08-12 タイコ ヘルスケア グループ リミテッド パートナーシップ ペプチドを放出する生分解性ポリマー
AU2008258548B2 (en) * 2007-06-08 2014-07-10 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Long-acting transient polymer conjugates of exendin
WO2009009712A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric drug delivery system containing a multi-substituted aromatic moiety
AU2008303775A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Noxxon Pharma Ag C5a binding nucleic acids
US8263704B2 (en) 2008-04-23 2012-09-11 Tyco Healthcare Group Lp Bioabsorbable surgical composition
EP2113256A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ascendis Pharma AS PEGylated rhGH compounds
ES2875426T3 (es) * 2008-04-29 2021-11-10 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Compuestos de hormona de crecimiento humana recombinante pegilada
WO2009156481A1 (en) * 2008-06-25 2009-12-30 Ascendis Pharma As Pegylated bnp
US8680315B2 (en) 2008-06-26 2014-03-25 Prolynx, Llc Prodrugs and drug-macromolecule conjugates having controlled drug release rates
WO2010033207A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
AU2010220324A1 (en) 2009-03-05 2011-09-01 Ascendis Pharma As Interferon alpha carrier prodrugs
WO2010108657A2 (en) 2009-03-23 2010-09-30 Noxxon Pharma Ag C5a binding nucleic acids and the use thereof
PL2432489T3 (pl) 2009-05-20 2017-05-31 Biomarin Pharmaceutical Inc. Warianty peptydu natriuretycznego typu C
US9173953B2 (en) 2009-07-31 2015-11-03 Ascendis Pharma As Prodrugs containing an aromatic amine connected by an amido bond to a linker
AU2010277560B2 (en) * 2009-07-31 2014-12-11 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Long acting insulin composition
PL2459220T3 (pl) * 2009-07-31 2021-03-08 Ascendis Pharma A/S Biodegradowalne nierozpuszczalne w wodzie hydrożele na bazie poli(glikolu etylenowego)
SG178193A1 (en) 2009-07-31 2012-03-29 Sanofi Aventis Deutschland Prodrugs comprising an insulin linker conjugate
EP2485712A1 (en) 2009-10-06 2012-08-15 Ascendis Pharma A/S Subcutaneous paliperidone composition
BR112012009847B1 (pt) * 2009-10-26 2021-04-13 Dendritc Nanotechnologies, Inc. Formulação compreendendo dendrímeros peham para uso em agricultura, e método para tratamento de plantas ou sementes
KR101756493B1 (ko) 2009-10-29 2017-07-10 아센디스 파마 에이에스 생분해성 하이드로겔의 살균
RU2012129674A (ru) 2009-12-15 2014-01-27 Аспендис Фарма Ас Композиция гормона роста
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
DK2525830T3 (en) 2010-01-22 2016-08-15 Ascendis Pharma As DIPEPTID-BASED PRODRUG LINKERS TO ALIFATIC AMINE-CONTAINING MEDICINES
WO2011089214A1 (en) 2010-01-22 2011-07-28 Ascendis Pharma As Carrier-linked carbamate prodrug linkers
WO2011089215A1 (en) 2010-01-22 2011-07-28 Ascendis Pharma As Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
KR102416359B1 (ko) 2010-04-15 2022-07-01 코디악 사이언시스 인코포레이티드 고분자량 쌍성이온-함유 중합체
US8871920B2 (en) 2010-04-21 2014-10-28 Noxxon Pharma Ag Lipid binding nucleic acids
WO2012025251A1 (en) 2010-08-27 2012-03-01 Noxxon Pharma Ag Nucleic acids for treatment of chronic complications of diabetes
CN103108641B (zh) 2010-09-09 2016-01-13 诺松制药股份公司 Sdf-1结合性核酸及其在癌症治疗中的用途
EP2438930A1 (en) 2010-09-17 2012-04-11 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Prodrugs comprising an exendin linker conjugate
US20140057970A1 (en) 2010-10-29 2014-02-27 Frank Schwobel Use of Hepcidin Binding Nucleic Acids for Depletion of Hepcidin From the Body
JP2014504865A (ja) 2011-01-10 2014-02-27 ノクソン ファーマ エージー 標的分子との結合親和性を有する核酸分子およびその生成方法
US8440309B2 (en) 2011-01-31 2013-05-14 Confluent Surgical, Inc. Crosslinked polymers with the crosslinker as therapeutic for sustained release
CA2843506C (en) 2011-08-12 2020-05-12 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked prodrugs having reversible carboxylic ester linkages
WO2013024048A1 (en) 2011-08-12 2013-02-21 Ascendis Pharma A/S Polymeric hyperbranched carrier-linked prodrugs
AU2012296949B2 (en) 2011-08-12 2016-09-15 Ascendis Pharma A/S High-loading water-soluble carrier-linked prodrugs
EP2741782B1 (en) 2011-08-12 2020-05-06 Ascendis Pharma A/S Protein carrier-linked prodrugs
CA2849192C (en) 2011-10-12 2019-09-24 Ascendis Pharma Ophthalmology Division A/S Prevention and treatment of ocular conditions
MX2014004658A (es) 2011-10-21 2015-08-13 Noxxon Pharma Ag Ácidos nucleícos que unen glucagón.
KR20150000464A (ko) 2011-11-03 2015-01-02 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 펩티드의 방출가능한 연결을 위한 티로신 기재의 링커
JOP20190001B1 (ar) 2011-11-03 2022-03-14 Bayer Pharma AG عقار أولي معتمد على جليكول عديد إثيلين من أدرينومدالين واستخدامه
CN104145018B (zh) 2012-01-10 2019-05-10 诺松制药股份公司 新型C5a结合性核酸
US9163243B2 (en) 2012-01-10 2015-10-20 Noxxon Pharma Ag Nucleic acids specifically binding CGRP
RU2704833C2 (ru) 2012-05-16 2019-10-31 Аптарион Биотек Аг Ферментативный синтез l-нуклеиновых кислот
JP2015525222A (ja) 2012-06-08 2015-09-03 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． キメラ性凝固因子
CA2875246A1 (en) * 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Procoagulant compounds
US10519226B2 (en) 2012-10-11 2019-12-31 Ascendis Pharma Opthalmology Division A/S VEGF neutralizing prodrugs for the treatment of ocular conditions
MY178680A (en) 2012-10-11 2020-10-20 Ascendis Pharma As Hydrogel prodrugs
EP2906245B1 (en) 2012-10-11 2021-01-13 Ascendis Pharma A/S Diagnosis, prevention and treatment of diseases of the joint
CN102924725B (zh) * 2012-11-29 2014-11-26 中国科学院长春应用化学研究所 一种聚氨基酸/壳聚糖复合材料及其制备方法
CN105102455B (zh) 2012-12-21 2018-05-25 荷商台医(有限合伙)公司 亲水性自消耗连接子及其缀合物
EP2786766A1 (en) * 2013-04-05 2014-10-08 Ufpeptides S.r.l. Supramolecular aggregates comprising maleimido cores
WO2014173759A1 (en) 2013-04-22 2014-10-30 Ascendis Pharma A/S Hydrogel-linked prodrugs releasing modified drugs
CA2925190C (en) 2013-10-08 2021-10-12 Ascendis Pharma A/S Protecting group comprising a purification tag
WO2015057699A2 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
JP2017502075A (ja) 2013-11-04 2017-01-19 ノクソン ファーマ エージー 腎障害治療の手段および方法
AU2014345511A1 (en) 2013-11-11 2016-05-12 Ascendis Pharma A/S Relaxin prodrugs
IL290330B2 (en) * 2013-12-19 2023-09-01 Seagen Inc Methylene carbamate binders for use with drug-targeting conjugates
US20170073465A1 (en) * 2014-02-28 2017-03-16 Michigan Molecular Institute Sustained release composition using biobased biodegradable hyperbranched polyesters
CA2952026A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Tenboron Oy Conjugates comprising an anti-egfr1 antibody
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
AU2015299055C1 (en) 2014-08-06 2021-05-06 Ascendis Pharma A/S Prodrugs comprising an aminoalkyl glycine linker
EP3197481A1 (en) 2014-09-26 2017-08-02 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Stabilized adrenomedullin derivatives and use thereof
US9585934B2 (en) 2014-10-22 2017-03-07 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin D conjugates
MX2017006113A (es) * 2014-11-18 2017-10-16 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Nuevos profarmacos polimericos de la hormona del crecimiento humana (hgh).
WO2016079302A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Ascendis Pharma Growth Disorders Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms
EP3303365A4 (en) 2015-05-29 2019-04-24 Ascendis Pharma Inc. PRODRUGS WITH A PYROGLUTAMATE LINKER
AU2016316846B2 (en) 2015-08-28 2021-07-08 Ventana Medical Systems, Inc. Protein proximity assay in formalin fixed paffafin embedded tissue using caged haptens
AU2017205688C1 (en) 2016-01-08 2022-03-10 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Cnp prodrugs with carrier attachment at the ring moiety
MX2018008061A (es) 2016-01-08 2018-08-23 Ascendis Pharma Growth Disorders As Profarmacos de peptido natriuretico tipo c (cnp) con porciones portadoras grandes.
BR112018013912A2 (pt) 2016-01-08 2018-12-18 Bioalliance C.V. anticorpos tetravalentes anti-psgl-1 e usos dos mesmos
IL259658B2 (en) 2016-01-08 2024-06-01 Ascendis Pharma Growth Disorders As Controlled-release CNP agonists with reduced side effects
AU2017205694B2 (en) 2016-01-08 2022-05-26 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Controlled-release CNP agonists with low NPR-C binding
KR20180100624A (ko) 2016-01-08 2018-09-11 아센디스 파마 그로우쓰 디스오더스 에이/에스 증가된 nep 안정성을 갖는 제어 방출성 cnp 작용제
CA3007982C (en) 2016-01-08 2023-12-19 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Controlled-release cnp agonists with low initial npr-b activity
MY196308A (en) * 2016-03-01 2023-03-24 Ascendis Pharma Bone Diseases As PTH Prodrugs
MA43835A (fr) 2016-03-25 2018-11-28 Seattle Genetics Inc Procédé de préparation de lieurs de médicaments pégylés et leurs intermédiaires
WO2017178119A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Noxxon Pharma Ag Method of modulating the number and the distribution of tumor-infiltrating leukocytes in tumors
WO2018011266A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Ascendis Pharma A/S Conjugation method for carrier-linked prodrugs
HRP20231079T1 (hr) 2016-09-29 2023-12-22 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Režim za doziranje pth spoja s kontroliranim oslobađanjem
BR112019005351A2 (pt) 2016-09-29 2019-06-11 Ascendis Pharma Growth Disorders As terapia combinada com agonistas de cnp de liberação controlada
MA46428A (fr) 2016-09-29 2019-08-07 Ascendis Pharma Bone Diseases As Schéma posologique incrémentiel dans des composés de pth à libération contrôlée
DK3518961T3 (da) 2016-09-29 2023-04-24 Ascendis Pharma Bone Diseases As PTH-forbindelser med lave forhold mellem top og bund
KR20190125310A (ko) 2017-03-10 2019-11-06 퀴아펙 파마슈티칼스 에이비 방출가능한 접합체
AU2018240375C1 (en) 2017-03-22 2024-02-01 Ascendis Pharma A/S Hydrogel cross-linked hyaluronic acid prodrug compositions and methods
AU2018237683A1 (en) 2017-03-24 2019-10-31 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
JOP20190245A1 (ar) 2017-04-20 2019-10-15 Novartis Ag أنظمة توصيل إطلاق مستدام تتضمن روابط بلا أثر لنقطة الربط
AU2019246389A1 (en) * 2018-03-28 2020-08-27 Ascendis Pharma Oncology Division A/S IL-2 conjugates
WO2019219896A1 (en) 2018-05-18 2019-11-21 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Starting dose of pth conjugates
JP2021535920A (ja) 2018-09-12 2021-12-23 キアペグ ファーマシューティカルズ アクチエボラグ 放出可能なｇｌｐ−１コンジュゲート
EP3856257A1 (en) 2018-09-26 2021-08-04 Ascendis Pharma A/S Degradable hyaluronic acid hydrogels
CA3114329A1 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Ascendis Pharma A/S Novel hydrogel conjugates
WO2020064844A1 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Ascendis Pharma A/S Treatment of infections
AR116566A1 (es) 2018-10-03 2021-05-19 Novartis Ag Administración sostenida de polipéptidos similares a la angiopoyetina 3
WO2020123882A1 (en) * 2018-12-12 2020-06-18 The General Hospital Corporation Prodrugs with a tridentate self-immolative linker
CA3125488A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Induction of sustained local inflammation
WO2020141225A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma A/S Minimization of systemic inflammation
CA3125533A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Conjugates of pattern recognition receptor agonists
JP2022516314A (ja) 2019-01-04 2022-02-25 アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー／エス 自然免疫アゴニストのための持続性局所性薬物レベル
CN117281783A (zh) 2019-02-11 2023-12-26 阿森迪斯药物生长障碍股份有限公司 Cnp缀合物的干燥药物制剂
CN113423383A (zh) 2019-02-11 2021-09-21 阿森迪斯药物骨疾病股份有限公司 Pth缀合物的液体药物制剂
SG11202108735QA (en) 2019-03-04 2021-09-29 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
JP2022537369A (ja) 2019-06-18 2022-08-25 バイエル アクチェンゲゼルシャフト 長期安定化のためのアドレノメデュリン－類似体およびその使用
AU2020295725A1 (en) 2019-06-21 2021-12-02 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-CTLA4 conjugates
JP2022537405A (ja) 2019-06-21 2022-08-25 アセンディス ファーマ エー／エス π電子対供与複素環式芳香族窒素含有化合物のコンジュゲート
AU2020296297A1 (en) 2019-06-21 2021-12-16 Ascendis Pharma A/S Conjugates of heteroaromatic nitrogen-comprising compounds
EP3986471A1 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Ascendis Pharma A/S Conjugates of an electron-donating nitrogen or tertiary amine comprising compounds
WO2020254607A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-ctla4 compounds with localized pd properties
WO2020254609A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Tyrosine kinase inhibitor conjugates
WO2020254617A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-ctla4 compounds with localized pk properties
WO2020254612A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Controlled-release tyrosine kinase inhibitor compounds with localized pd properties
WO2020254613A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Controlled-release tyrosine kinase inhibitor compounds with localized pk properties
CN114786731A (zh) 2019-10-10 2022-07-22 科达制药股份有限公司 治疗眼部病症的方法
IL294327A (en) 2020-01-03 2022-08-01 Ascendis Pharma As Conjugates undergoing intramolecular rearrangements
AU2021208398A1 (en) 2020-01-13 2022-06-09 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Hypoparathyroidism treatment
CA3175974A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Oliver Boris Stauch Hydrogel irradiation
KR20230019889A (ko) 2020-06-03 2023-02-09 아센디스 파마 온콜로지 디비전 에이/에스 Il-2 서열 및 이의 용도
WO2022029178A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Ascendis Pharma A/S Conjugates comprising reversible linkers and uses thereof
CA3192772A1 (en) 2020-09-28 2022-03-31 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Improvement of physical and mental well-being of patients with hypoparathyroidism
WO2022094262A1 (en) 2020-10-30 2022-05-05 Avacta Life Sciences Limited Fap-activated serum extended half-life therapeutic conjugates
CA3201844A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 William W. Bachovchin Fap-activated radiotheranostics, and uses related thereto
BR112023018802A2 (pt) 2021-04-01 2023-10-31 Ascendis Pharma As Uso de hormônio de crescimento de ação prolongada para o tratamento de doenças induzidas por inflamação
WO2022234003A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Avacta Life Sciences Limited Cd33 binding polypeptides with stefin a protein
KR20240082355A (ko) 2021-09-22 2024-06-10 아센디스 파마 본 디지즈 에이/에스 장시간 작용형 pth 화합물 치료
WO2023057946A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Avacta Life Sciences Limited Serum half-life extended pd-l1 binding polypeptides
TW202334196A (zh) 2021-10-07 2023-09-01 英商阿法克塔生命科學有限公司 Pd-l1結合多肽
AU2022409306A1 (en) 2021-12-13 2024-06-06 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Cancer treatments with tlr7/8 agonists
AU2022413318A1 (en) 2021-12-13 2024-05-16 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Effective doses of cnp conjugates
WO2023218243A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Avacta Life Sciences Limited Lag-3/pd-l1 binding fusion proteins
WO2023227505A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Liquid pharmaceutical formulations of cnp compounds
WO2023247651A1 (en) 2022-06-21 2023-12-28 TME Pharma AG Methods for treating a tumor in a subject
EP4306640A1 (en) 2022-06-21 2024-01-17 TME Pharma AG Method for treating a tumor in a subject
WO2024094673A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Pth treatment regimen comprising two pth compounds
WO2024104922A1 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Method of improving skeletal muscle function

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5510418A (en) * 1988-11-21 1996-04-23 Collagen Corporation Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates
US5730990A (en) * 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
JP4465109B2 (ja) * 1997-12-17 2010-05-19 エンゾン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド アミノ及びヒドロキシル含有生物活性剤のポリマープロドラッグ
US6624142B2 (en) 1997-12-30 2003-09-23 Enzon, Inc. Trimethyl lock based tetrapartate prodrugs
US5965119A (en) * 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
EP1243276A1 (en) * 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
CA2461896C (en) * 2001-09-28 2012-09-18 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Injections for eye tissues containing drug bonded to polyethylene glycol
US20040038892A1 (en) * 2001-11-20 2004-02-26 Rory Finn Chemically-modified human growth hormone conjugates
CA2472917A1 (en) * 2002-01-08 2003-07-17 New River Pharmaceuticals Inc. Dendritic encapsulation of active agents
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7122189B2 (en) * 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
WO2004019993A1 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
US7705045B2 (en) 2002-11-14 2010-04-27 Syntarga, B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
EP1525890A1 (en) * 2003-10-02 2005-04-27 Complex Biosystems GmbH Protein-Proteophore complexes
US7375078B2 (en) * 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
BR122019000248B8 (pt) * 2004-03-23 2021-07-27 Complex Biosystems Gmbh reagente de ligador de pró-fármaco de cascata polimérico
US7968085B2 (en) * 2004-07-05 2011-06-28 Ascendis Pharma A/S Hydrogel formulations
ES2875426T3 (es) * 2008-04-29 2021-11-10 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Compuestos de hormona de crecimiento humana recombinante pegilada
SG178193A1 (en) * 2009-07-31 2012-03-29 Sanofi Aventis Deutschland Prodrugs comprising an insulin linker conjugate
AU2010277560B2 (en) * 2009-07-31 2014-12-11 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Long acting insulin composition
US9173953B2 (en) * 2009-07-31 2015-11-03 Ascendis Pharma As Prodrugs containing an aromatic amine connected by an amido bond to a linker
DK2525830T3 (en) * 2010-01-22 2016-08-15 Ascendis Pharma As DIPEPTID-BASED PRODRUG LINKERS TO ALIFATIC AMINE-CONTAINING MEDICINES
EP2438930A1 (en) * 2010-09-17 2012-04-11 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Prodrugs comprising an exendin linker conjugate

Also Published As

Publication number Publication date
MXPA06010782A (es) 2007-03-28
JP5436509B2 (ja) 2014-03-05
US20130150281A1 (en) 2013-06-13
BR122019000248B1 (pt) 2020-04-22
AU2005232371B2 (en) 2010-10-14
US8377917B2 (en) 2013-02-19
CA2602705C (en) 2016-10-25
BRPI0507875B1 (pt) 2020-11-03
BRPI0507875B8 (pt) 2021-05-25
BRPI0507875A (pt) 2007-07-24
BR122019000248B8 (pt) 2021-07-27
EP1732607A2 (en) 2006-12-20
JP2007530485A (ja) 2007-11-01
CA2824093A1 (en) 2005-10-27
EP2087910B1 (en) 2022-05-04
WO2005099768A3 (en) 2006-08-10
US9238686B2 (en) 2016-01-19
EP2087910A3 (en) 2013-05-15
JP2012072142A (ja) 2012-04-12
HUE045882T2 (hu) 2020-01-28
CA2940803A1 (en) 2005-10-27
WO2005099768A2 (en) 2005-10-27
AU2005232371A1 (en) 2005-10-27
JP4950022B2 (ja) 2012-06-13
AU2010212335B2 (en) 2011-06-23
CA2824093C (en) 2016-10-25
US20160089448A1 (en) 2016-03-31
DK1732607T3 (da) 2019-07-22
CA2786794A1 (en) 2005-10-27
US20080241102A1 (en) 2008-10-02
CA2602705A1 (en) 2005-10-27
CA2786794C (en) 2017-09-12
EP2087910A2 (en) 2009-08-12
US20210283264A1 (en) 2021-09-16
AU2010212335A1 (en) 2010-09-09
EP1732607B1 (en) 2019-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2741524T3 (es) Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador
ES2390816T3 (es) N,N-bis-(2-hidroxietil) glicina amida como ligador en profármacos conjugados con polímeros
ES2386258T3 (es) Relaciones de adición conjugadas para la entrega controlada de compuestos farmacéuticamente activos
EP1579873A1 (en) Polymeric prodrugs
EP1625855A1 (en) Polymeric prodrug with a self-immolative linker
AU2011213827B2 (en) Polymeric prodrug with a self-immolative linker