BR112012014556B1 - Polímero multifuncional conjugado zwiteriônico - Google Patents

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Clizbe Lane A
Benoit Didier G
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Abstract

POLÍMERO MULTIFUNCIONAL CONJUGADO ZWITERIÔNICO A presente invenção provém copolímeros random contendo zwieriões e um ou mais agentes funcionais, e métodos de preparação de cada copolímero random.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA PAA APLICAÇÕES RELATIVAS
[0001] Esta Aplicação reivindica a prioridade do Deposito Provisório U.S. No. 61/288,127, depositado 18 de dezembro de 18, 2009.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] Uma corrida de armamento do tipo está acontecendo entre como companhias farmacêutica que estão todas tentando entregar "produtos médicos diferenciados". Correntemente formatos de droga são inflexíveis, isto geralmente permite para uma única atividade. Por exemplo, um recombinante monoclonal anticorpo geralmente é designado e otimizado para ligar e substituir uma única proteína designada. Por exemplo, uma droga de molécula pequena é geralmente designada e otimizada para ligar e ativar (ou inibir) um alvo simples. Em alguns casos, a droga não é seletiva e existem múltiplas atividades (por exemplo, uma quinase de molécula pequena inibidora que é designada para ligar o sitio de ligação de ATP de uma quinase única mas que mostra um nível de afinidade e bioatividade contra membros de família de quinase adjacente). Mas geralmente fomentadores de droga são otimista usando como drogas de hoje formadas para atividades únicas e não seletividade é vista como algo para criar um caminho no processo de desenvolvimento de droga. Em desenvolvimentos de droga atuais, então, a seleção de um único alvo é a variável fundamental. Drogas, portanto, são desenvolvidas do ponto de vista de um formato central. Mas drogas são desenvolvidas para tratar doença. E doenças geralmente são compostas de mais que um mecanismo patológico acontecendo em série ou em paralelo. Um mecanismo é um caminho ou conjunto de caminhos divididos ocorrendo em uma localizada célula ou tecido ou órgão ou sistematicamente ao longo do organismo. Um caminho sendo um conjunto de porções que interagem entre si. Um modo mais ideal para se ocupar de desenvolvimento de droga é poder levar para um centro de doença ou aproximação de centro da biologia. Por exemplo, baseada na soma de acadêmica e corporativa e pesquisa histórica e experiência para dados, doença x caminhos envolvidos a, b, e c. Dentro do caminho a, proteína alvo z é conhecida para ser regulada para cima (e pode ser limitada e inibida por um fragmento de anticorpo). Dentro do caminho b, tipo de célula y é conhecida para ser não apropriada proliferativa (e poderia ser impactada por uma pequena molécula de agente anti-proliferativo). E o fisiopatologia do caminho a e b esta ocorrendo dentro do subtipo de tecido x (e o qual poderia ser alvo ou enriquecido com a droga por inclusão sobre a reprodução de várias drogas de um pequeno segmento de peptídeo). Isto seria ideal para ter uma tecnologia de droga ou formato que permitisse estas múltiplas funções e diferentes tipos de porções bioativa (proteína, oligonucleotídeo, pequena molécula, lipídeo, etc.) para ser integrado em uma droga simples, adaptável, multifuncional que é uma melhor pratica de produção e diretamente no projeto, implementação, fabricação, e administração. Em adição, a tecnologia deveria permitir com certeza como porções bioativas para serem ligadas instáveis tal que eles possam ser liberados sob como condições desejáveis (tempo, ambiente de pH aquoso, outros). Estas drogas mostraram alta eficácia e segura quando provida uma mais alta probabilidade de técnica global, reguladora, e sucesso comercial dos desenvolvimentos atuais em processo de desenvolvimento de droga. A maioria das doenças são complexas e multifatorial na origem. Por esta razão, na aplicação destas abordagens de biologia central ou doença central, a pessoa poderia imaginar que num futuro de dez ou quinze anos onde uma grande doença como artrite reumática é na verdade dividida por diagnósticos (molecular, imagem, biomarca, genética) ou dentro de outras abordagens, digo, dez maiores subtipos principais cada um dos quais é dirigido para um particular conjunto de fisiopatologia e o qual pode ser alvo usando uma droga multifuncional tal que dez drogas multifuncionais são desenvolvidas para tratar os dez tipos de doenças diferentes
[0003] A presente invenção descreve tal formato de tecnologia de droga que pode ser a estrutura central da próxima geração de desenvolvimento de droga multifuncional. A tecnologia entrega uma estrutura central de polímero que (i) que entrega biocompatibilidade fundamental para a droga através da seleção de monômero hidrofílico e arquitetura, e (ii) também, forma uma essência de estrutura central ou scaffold para conjugação e/ou adsorção para agentes múltiplos de diferente tipos (ácido amino, pequena molécula, oligonucleotídeo, lipídeo, outros, agente de diagnóstico, agente de imagem, agente de monitoração de terapia, pré definido estequiometria e funções (biocompatibilidade, espacial, bioatividade, segmentação, diagnóstico, imagem, outros), e (iii) pode empregar qualquer estável ou flexível (sob condições predefinidas) conjugação ligação e químicas.
[0004] Polímeros hidrofílico para conjugação de droga foram bem descritos e a drogas conjugadas estão gerando um excesso de 5 bilhões de dólares de renda por ano. Que é importante para estes polímeros é a extensão para os quais eles ligam moléculas de água e como propriedades físicas desta interação de ligação de água. Esta combinação de propriedades dirige a fundamental biocompatibilidade do polímero. PEG é um exemplo de um polímero hidrofílico, mas existem outros exemplos de polímero hidrofílico que ligam a água para uma para a diferente extensão e com diferentes propriedades físicas e portanto com diferente biocompatibilidade fundamental. Um tal exemplo é polímeros baseado em fosforilcolina, especialmente polímeros derivado de 2-metacriloiloxietil fosforilcolina, cujos polímeros foram comercializados em várias formas em dispositivos médicos tais como stents farmacológicos coronários e lentes de contato. Nos últimos anos, novos métodos de controle polimerização de radical foram desenvolvidas com a promessa de habilitar a produção de polímeros grandes e arquitetura complexa com baixo custo e alta qualidade. A presente invenção integra uma tecnologia de forma de droga que permite um novo paradigma de desenvolvimento de droga, partindo com um conjunto de biologias dirigidas a fisiopatologia da doença; integrando porções de biocompatibilidade, porções de droga de diferentes classes, arquiteturas estendidas, química flexível, todas em um pacote prático. Colocando mais simplesmente, a presente invenção apresenta uma forma de droga que permite o usuário para criar uma bio máquina de nano escala com a meta de criar balas mágicas para combater doenças para o benefício dos pacientes. Esforços para formular agentes biologicamente ativo para entrega precisa negociar com uma variedade de variáveis incluindo a forma de administração, a estabilidade biológica do agente ativo e a solubilidade dos agentes ativos no meio fisiologicamente compatível. Escolhas feitas na formulação de agente ativos biologicamente e a seleção de formas de administração podem afetar a biodisponibilidade dos agentes ativos. Por exemplo, a escolha de administração parenteral dentro da circulação sistêmica para proteínas biologicamente ativas e polipeptídios evita o meio proteolítico encontrado no trato gastrointestinal. Embora, até mesmo administração direta, tal como por injeção, de agentes biologicamente ativos é possível, formulações podem não ser satisfatória por uma variedade de razões incluindo a geração de uma resposta imune para o agente administrado e resposta para qualquer excipientes incluindo queimadura e picada. Até mesmo se o agente ativo é não imunogênico e excipientes satisfatório pode ser empregado, agentes biologicamente ativos podem ter uma solubilidade limitada e vida média biológica curta que pode requerer administração repetida ou continua infusão, que pode ser doloroso e/ou inconveniente.
[0005] Para alguns agentes biologicamente ativos um grau de sucesso foi alcançado em desenvolvimento da formulações adequada de agentes funcionais por conjugar os agentes com polímeros solúvel em água. A conjugação de agentes biologicamente ativos para polímeros solúveis em água é geralmente visto como provendo uma variedade de benefícios para a entrega de agentes biologicamente ativos, e em particular, proteínas e peptídeos. Entre os polímeros solúveis em água empregados, polietileno glicol (PEG) foi amplamente conjugado para uma variedade de agentes biologicamente ativos incluindo biologicamente ativo peptídeos. Uma redução na imunogenicidade ou antigenicidade, aumenta a vida média, aumenta solubilidade, reduz liberação pelo rim e reduz degradação enzimática que foi atribuída para conjugados de uma variedade de polímeros solúveis em água e agentes funcionais, incluindo PEG conjugados. Como um resultado destes atributos, os polímeros conjugados de agente biologicamente ativos requer frequência de dosagem menor e pode permitir o uso de menos agente ativo para alcançar um ponto de extremidade terapêutica. A menor frequência de dosagem reduz o número global de injeções, que pode ser doloroso e que requer inconvenientes visitas para profissionais que cuidam da saúde. Conjugação de PEG ou outros polímeros pode também modificar a atividade central da própria droga - a Idea de “adicionalmente conferir bioatividades para a droga por virtude de conjugação de polímero (por exemplo, o radio hidrodinâmico grande aumenta o escopo de inibição da droga (fragmento de anticorpo) inibi ligação para receptor A, mas droga de polímero conjugado inibi ligação para receptor A mais receptor B como uma função de qualquer número de diferentes mecanismos mas certamente impedimento estérico. Embora alguns sucessos tenham sido alcançado com Conjugação PEG, “PEGUILAÇÃO” de agente biologicamente ativos permanece um desafio. Como o fomento de droga progrediu além de muitas proteínas agonistas tal como eritropoietina e vários interferon, os benefícios da hidrofílicopolímeros PEG são insuficiente para conduzir o aumento na solubilidade, estabilidade e a redução na viscosidade e imunogenicidade que são necessárias para um sucesso comercial do produto que é subcutaneamente administrado. Conjugação de PEG pode também resultar na perda de atividade biológica. Uma variedade de teorias foi avançada para considerar a perda de atividade biológica em conjugação com PEG. Estes incluem bloqueio de necessários locais para o agente interagir com outros componentes biológicos, para a conjugação ligação ou para o agente ser enterrado dentro do Conjugado PEG, particularmente onde o polímero é longo e pode “wrap” em torno de alguns dos agente ativo, assim bloqueando o acesso para potencial ligantes requeridas para a atividade. Formas ramificadas de PEG para uso em conjugada preparação foi introduzida para aliviar alguma das dificuldades encontrada com o uso de cadeia longa linear de polímero de PEG. Enquanto polímeros ramificados podem superar alguns dos problemas associados com formas conjugadas com polímeros PEG suscetível longo, ou polímero PEG ramificado não suscetível conjugado completamente resolve como questões associadas com o uso de agentes conjugados funcionais. Ambos suscetível e ramificado conjugados PEG podem, por exemplo, experimentar taxas de degradação que são muito grande ou muito curta. Uma rápida razão de degradação pode resultar em um conjugado tendo também uma curta vida média in vivo, enquanto que, uma razão de degradação muito rápida pode resultar em um não aceitável conjugado de vida média longa in vivo. Devido como vantagens reconhecidas de agentes funcionais conjugados para polímeros solúveis em água, e como limitações de polímeros solúveis em água tal como PEG na forma conjugada adequado para propósitos terapêuticos, adicionalmente polímeros solúveis em água para formar conjugados com agentes funcionais são desejáveis. Os polímeros solúveis em água, particularmente estes que possuem muitas das vantagens de PEG para uso em conjugada formação, e que não sofrem das desvantagens observadas com PEG como um agente de conjugação agente seriam desejáveis para uso e em formas terapêuticas e agentes de diagnóstico. Para este fim, polímeros contendo monômero zwiteriônico, em particular, 2-metacriloiloxietil-fosforilcolina são conjunto adiantado para uso em preparação de conjugados de agentes biologicamente ativos.
[0006] Em uma concretização, os copolímeros aleatórios da presente invenção têm a fórmula I:
Figure img0001
Cada monômero M1 e M2 da fórmula I pode independentemente ser um acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina ou a vinil-pirrolidona. Além disso, R1 da fórmula I pode independentemente ser H, L1-A1, um grupo de ligação LG1 ou L1-LG1, e cada R2 da fórmula I é independentemente H, C1-6 alcil, C2-6 alcenil, C2-6 alcinil, C1-6 haloalcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, heteroaril, A2, L2-A2, LG2, L2-LG2, I2 e L2-I2. O grupo ZW da fórmula I é uma porção de zwiteriônico. O grupos I é um fragmento iniciador e I’ é um radical eliminador, tal que a combinação de I-I’ é um iniciador, I1, para a polimerização do copolímero aleatório da Fórmula I. Alternativamente, I’ pode ser H ou C1-6 alcil. O grupo I2 é um iniciador. Em adição, cada um dos grupos L1 e L2 é um ligador, cada um dos grupos A1 e A2 é um agente funcional, e cada um dos grupos LG1 e LG2 é um grupo de ligação. Na fórmula I acima, subscritos x e y1 são cada um independentemente um inteiro de 1 a 1000, subscrito z é um inteiro de 1 a 10, subscrito s é um inteiro de 1 a 100, e subscrito n é um inteiro de 1 a 20, caracterizado por: R1 ser L1-A1 ou um dos R2 ser L2-A2. Em outras concretizações, a presente invenção prover um processo para preparação de um copolímero aleatório da presente invenção, o processo inclui o passo de contactar uma mistura de um primeiro monômero e um segundo monômero com um iniciador, I1, sob condições suficientes para preparar um copolímero aleatório via radical de polimerização livre, caracterizado por: o primeiro monômero incluir uma fosforilcolina, e cada um dos segundo monômero e iniciador independentemente compreende pelo menos um dos agentes funcionais ou um grupo de ligação para ligação com o agente funcional. Em outra concretização, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com um zwiteriônico tal como fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero ter um agente funcional ou um grupo de ligação, e uma porção iniciadora tendo um agente funcional ou um grupo de ligação, caracterizado por: o agente funcional é ligado para o segundo monômero ou a porção iniciadora via um ligador. Em outra concretização, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com um zwiteriônico tal como fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero tendo um agente funcional ou um grupo de ligação, o dito segundo monômero tendo uma razão de reatividade diferente do primeiro monômero permitindo o polímero final ser um copolímero alternativo, um copolímero periódico, um copolímero gradiente, um copolímero bloqueio ou um copolímero estatístico.
[0007] Em outra concretização, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com um zwiteriôonico tal como fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero tendo um agente funcional e um grupo tunable de ligação, o dito segundo monômero tendo a mesma reatividade razão como o primeiro monômero permitindo o polímero final para ser um copolímero alternativo, a periódico copolímero, um copolímero de gradiente, um copolímero de bloqueio ou um copolímero estatístico. Em outra concretização, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com um zwiteriônico tal como fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero tendo um agente funcional ou um grupo de ligação e outros monômeros que tenham afinidade a ambientes diferentes permitindo para a formação de novas topologias para ligação não covalente.
[0008] Em outra concretização, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com a zwiteriônico tal como fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero tendo um agente funcional e um grupo tunable de ligação e outros monômero que tenham afinidade a ambientes diferentes permitindo para a formação de novas topologias para ligação não covalente.
[0009] “Fosdorilcorina,” também denominada como “PC,” refere-se para a seguinte:
Figure img0002
onde * denota o ponto de ligação. A fosforilcolina é a grupo zwiteriônico e inclui sais (tal como sais internos), e protonatado e desprotonatado formas destes. “Fosdorilcorina contendo polímero” é um polímero que contém fosforilcolina. É especialmente contemplado que em cada exemplo onde uma fosforilcolina contendo polímero é especificada nesta aplicação para um uso particular, uma simples fosforilcolina pode também ser empregada em cada uso. “polímero contendo Zwiterion” refere-se para um polímero que contém um zwiteriônico. “Poli(acriloiloxietil fosforilcolina) contendo polímero” refere-se para um polímero de ácido acrílico contendo pelo menos um acriloiloxietil fosforilcolina monômero tal como 2-metacriloiloxietil fosforilcolina (isto é, 2-metacriloil-2’-trimetilamônia etil fosfato).
[0010] “Contactando” refere-se para o processo de trazer dentro contato pelo menos duas espécies distintas tal que eles possam reagir. Isto pode ser apreciado, embora, que o produto da reação resultante possa ser produzido diretamente de uma reação entre os reagentes acrescentados ou de um intermediário de um ou mais dos reagentes acrescentados que podem ser produzido na reação mistura. “Polímero solúvel em água” refere-se para um polímero que é solúvel em água. Uma solução de um polímero solúvel em água pode transmitir pelo menos cerca de 75%, mais preferencialmente pelo menos cerca de 95% de luz, transmitindo uma mesma solução depois de filtrada. Sobre uma base de peso, um polímero solúvel em água ou segmento deste pode ser pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 50%, cerca de 70%, cerca de 85%, cerca de 95% ou 100% (por peso do polímero seco) solúvel em água.
[0011] “Peso molecular” no contexto do polímero pode ser expressado como ou uma média de número do peso molecular, ou uma média de peso do peso molecular ou um pico do peso molecular. Se não de outra forma indicado, todas as referências para peso molecular neste documento refere para o pico do peso molecular. Esta determinação doe peso molecular, média de número, média de peso e pico, pode ser medido usando cromatografia de permeação de gel ou outras técnicas de cromatografia líquida. Outros métodos para medir o valor do peso molecular podem também serem usados, tal como o uso de análise de grupo final ou a medida de propriedades coligativa (exemplo, diminuição do ponto de congelamento, elevação do ponto de evaporação, ou pressão osmótica) para determinar a média de número de peso molecular, ou o uso de técnicas de espalhamento de luz, ultracentrifugação ou viscometria para determinar o peso médio do peso molecular. Os reagentes poliméricos da invenção são tipicamente polidisperso (isto é, média do número peso molecular e peso médio do peso molecular dos polímeros não são iguais), possuindo baixo valor de polidispersidade de preferência menor que cerca de 1,5, como demonstrada pela cromatografia de permeação de gel. Em outras concretizações as polidispersidades podem ser no intervalo de cerca de 1.4 a cerca de 1,2, mais preferencialmente menor que cerca de 1,15, ainda Petição 870210105911, de 16/11/2021, pág. 38/280 21/262 mais preferencialmente menor que cerca de 1,10, contudo ainda mais preferencialmente menor que cerca de 1,05, e mais preferencialmente menor que cerca de 1,03. A Locução “um" ou "uma” entidade como usado neste documento refere-se para um ou mais de tais entidades; por exemplo, um composto refere-se para um ou mais compostos ou pelo menos um composto. Tal como, os termos “um” (ou “uma”), “um ou mais”, e “pelo menos um” pode ser usado intercabiados neste documento.
[0012] “Cerca” como usado neste documento significa uma que poderia ser na medida levada por diferentes instrumentos, amostras, e preparações de amostra.
[0013] “Protetor,”, “forma protetora”, “grupo de proteção” e “grupo protetor” refere para a presença de um grupo (isto é, o grupo de proteção) que impede ou bloqueia reação de um particular grupo reativo quimicamente funcional em uma molécula sob certas condições de reação. Grupo de proteção varie dependendo do tipo do grupo quimicamente reativo que está sendo protegido como também as condições de reação a serem empregadas e a presença de adicional grupos reativo ou de proteção na molécula, se qualquer. O experiente qualificado reconhecerá o grupos de proteção conhecido na matéria, tal como estes encontrados no tratado por "Greene et al., “Protective Groups In Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1999".
[0014] “Espacial,” e “grupo espacial” são usado intercambiáveis neste documento para referir para um átomo ou uma coleção de átomos opcionalmente usado para ligar porções interconectadas tal como um terminal de um polímero solúvel em água e um grupo reativo de um agente funcional e um grupo reativo. Um espacial pode ser hidroliticamente estável ou pode incluir um ligação hidroliticamente suscetível ou enzimaticamente degradável. “Alcil” refere-se para um radical linear ou em ramos, saturado, alifático tendo o número de átomos de carbono indicados. Por exemplo, C1-C6 alcil inclui, mas não é limitado para, metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil, tert-butil, pentil, isopentil, hexil, etc. Outros grupos alcil incluindo, mas não são limitados para hepil, octil, monil, decil, etc. Alcil pode incluir qualquer número de carbonos, tal como 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 3-4, 3-5, 3-6, 4-5, 4-6 e 5-6. o grupo alcil é tipicamente monovalente, mas pode ser divalentee, tal como quando o grupo alcil liga duas porções juntas.
[0015] O termo “abaixar” refere-se para acima e em seguida em conexão com radicais orgânicos ou compostos respectivamente define um composto ou radical que pode ser ramificado ou não ramificado com subida para e incluir 7, preferencialmente subir para e incluir 4 e (como não ramificado) um ou dois átomos de carbono. “Alcileno” refere-se para um grupo alcil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos, isto é, um radical de hidrocarbono divalentee. As duas porções ligadas para o alcileno pode ser ligado para um mesma átomo ou diferente átomos o alcileno. Por exemplo, um alcileno de cadeia linear pode ser o radical bivalente de -(CH2)n, onde n é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Grupos alcileno incluem, mas não são limitados para, metileno, etileno, propileno, isopropileno, butileno, isobutileno, sec-butileno, pentileno e hexileno.
[0016] Substituintes para os radicais de alcil e heteroalcil (incluindo estes grupos frequentemente refere para alcileno, alcenil, heteroalcileno, heteroalcenil, alcinil, cicloalcil, heterocicloalcil, cicloalcenil, e heterocicloalcenil) pode ser uma variedade de grupos selecionado de: -OR’, =O, =NR’, =N-OR’, -NR’R”, -SR’, -halógeno, -SiR’R”R”’, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO2R’, -CONR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R”’, -NR”C(O)2R’, -NH-C(NH2)=NH, -NR’C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR’, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR’R”, -CN e -NO2 em um número no intervalo de zero a (2m’+1), onde m’ é o número total de átomos de carbono em tal radical. R’, R” e R”’ cada um independentemente refere para hidrogênio, não substituído (C1-C8)alcil e heteroalcil, não substituído aril, aril substituído com 1-3 halógenos, não substituído grupos alcil, alcoxi ou tioalcoxi, ou aril-(C1-C4)grupo alcil. Quando R’ e R” são ligados para um mesmo átomo de nitrogênio, eles podem ser combinado com o átomo de nitrogênio para formar um anel de 5-, 6-, ou 7-membros. Por exemplo, -NR’R” significa para incluir 1-pirrolidinil e 4-morfolinil. Da discussão acima de substituintes, um experiente na matéria entenderá que o termo “alcil” significa para incluir grupos tal como haloalcil (exemplo, -CF3 e -CH2CF3) e acil (exemplo, -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3, e os semelhantes). Preferencialmente, o substituído grupo alcil e heteroalcil tem de 1 a 4 substituintes, mais preferencialmente 1, 2 ou 3 substituintes. Exceções são estes grupos de perhalo alcil (exemplo, pentaflúoretil e os semelhantes) que são também preferidos e contemplados pela presente invenção. Substituintes para os radicais alcil e heteroalcil (incluindo estes grupos frequentemente refere-se para alcileno, alcenil, heteroalcileno, heteroalcenil, alcinil, cicloalcil, heterocicloalcil, cicloalcenil, e heterocicloalcenil) pode ser um ou mais de uma variedade de grupos selecionado de, mas não limitados para: -OR’, =O, =NR’, =N-OR’, -NR’R”, -SR’, -halógeno, -SiR’R”R”’, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO2R’, -CONR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R”’, -NR”C(O)2R’, -NR-C(NR’R”R’”)=NR””, -NR-C(NR’R”)=NR’”, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR’R”, -NRSO2R’, -CN e —NO2 em um número no intervalo de zero a (2m’+1), onde m’ é o número total de átomos de carbono em tal radical. R’, R”, R”’ e R”” cada um preferencialmente independentemente refere-se para hidrogênio, substituído ou não substituído heteroalcil, substituído ou não substituído aril, exemplo, aril substituído com 1-3 halógenos, substituído ou não substituído grupos alcil, alcoxi ou tioalcoxi, ou grupo aril alcil. Quando um composto da invenção inclui mais que um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é independentemente selecionado como são cada um dos R’, R”, R’” e R”” grupos quanto mais que um destes grupos é presente. Quando R’ e R” são ligados para um mesma átomo de nitrogênio, eles podem ser combinados com o átomo de nitrogênio para formar um anel de 5-, 6-, ou 7-membros. Por exemplo, -NR’R” significa para incluir, mas não ser limitado para, 1-pirrolidinil e 4-morfolinil. Da discussão acima de substituintes, um experiente na matéria entenderá que o termo “alcil” significa para incluir grupos incluindo átomos de carbono ligado para outros grupos que grupos de hidrogênio, tal como haloalcil (exemplo, -CF3 e -CH2CF3) e acil (exemplo, -C(O)CHs, -C(O)CFs, -C(O)CH2OCH3, e os semelhantes). “Alcoxi” refere-se para grupo alcil tendo um átomo de oxigênio que conecta o grupo alcoxi para o ponto de ligação ou é ligado para dois carbonos do grupo alcoxi. Grupos alcoxi inclui, por exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, iso-propoxi, butoxi, 2-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, tert-butoxi, pentoxi, hexoxi, etc. Os grupos alcoxi podem ser também substituído com uma variedade de substituintes descritos aqui. For exemplo, o grupo alcoxi pode ser substituído com halógenos para formar um grupo “halo-alcoxi” grupo.
[0017] “Carboxialcil” significa um grupo alcil (como definido neste documento) substituído com um grupo carboxi. O termo “carboxicicloalcil” significa um grupo ciclo alcil (como definido neste documento) substituído com um grupo carboxi. O termo alcoxialcil significa um grupo alcil (como definido neste documento) substituído com um grupo alcoxi. O termo “carboxi” empregado neste documento refere-se para ácidos carboxílicos e seus ésteres.
[0018] “Hal oalcil” refere-se para alcil como definido acima onde alguns ou todos os átomos de hidrogênio são substituído com átomos halógeno. Halógeno (halo) preferencialmente representa cloro ou flúor, mas pode também ser bromo ou iodo. Por exemplo, haloalcil inclui triflúormetil, flúormetil, 1,2,3,4,5-pentaflúor-fenil, etc. O termo “perflúor” define um composto ou radical que possui todos os hidrogênios disponíveis que são recolocados com fluorina. Por exemplo, perflúorfenil refere-se para 1,2,3,4,5-pentaflúorfenil, perflúormetil refere-se para 1,1,1-triflúormetil, e perflúormetoxi refere-se para 1,1,1-triflúormetoxi. “Flúor-substituído alcil” refere-se para um grupo alcil onde um, alguns, ou todos os átomos de hidrogênio foram repassados por fluorina.
[0019] “Citocina” no contexto desta invenção é um membro de um grupo de proteína sinalizando moléculas que podem participar na comunicação célula-célula em respostas imune e inflamatória. Citocinas são tipicamente pequena, glicoproteínas solúvel em água que possui uma massa de cerca de 8-35 kDa.
[0020] “Cicloalcil” refere-se para um grupo cíclico de hidrocarbono que contém de cerca de 3 a 12, de 3 a 10, ou de 3 a 7 endocíclico átomos de carbono. Grupos cicloalcil inclui estruturas de anel fundido, ponte e aspiral. “Endocíclico” refere-se para um átomo ou grupo de átomos que compreende parte de uma estrutura de anel cíclico
[0021] “Exo cíclico” refere-se para um átomo ou grupo de átomos que são ligados mas não define a estrutura do anel cíclico.
[0022] “Cíclico alcil éter” refere-se para um grupo alcil cíclico de 4 ou 5 membros tendo 3 ou 4 endocíclico átomos de carbono e 1 endocíclico átomo de oxigênio ou enxofre (exemplo, oxetano, tietano, tetrahidrofuran, tetrahidrotiofene); ou um grupo alcil cíclico de 6 para 7 membros tendo 1 ou 2 endocíclico átomos de oxigênio ou enxofre (exemplo, tetrahidropiran, 1,3-dioxana, 1,4-dioxana, tetrahidrotiopiran, 1,3-ditiano, 1,4-ditiano, 1,4-oxatiano). “Alcenil” refere-se para uma cadeia linear ou ramificado de hidrocarbono de 2 a 6 átomos de carbonos, tendo pelo menos um ligação dupla. Exemplos de grupos alcenil incluem, mas não são limitados para, vinil, propenil, isopropenil, 1-butenil, 2-butenil, isobutenil, butadienil, 1-pentenil, 2-pentenil, isopentenil, 1,3-pentadienil, 1,4-pentadienil, 1-hexenil, 2-hexenil, 3-hexenil, 1,3-hexadienil, 1,4-hexadienil, 1,5-hexadienil, 2,4-hexadienil, ou 1,3,5-hexatrienil. Grupos alcenil podem também ter de 2 a 3, 2 a 4, 2 a 5, 3 a 4, 3 a 5, 3 a 6, 4 a 5, 4 a 6 e 5 a 6 carbonos. O grupo alcenil é tipicamente monovalente, mas pode ser divalente, tal como quando o grupo alcenil liga duas porções juntas.
[0023] “Alcenileno” refere-se para um grupo alcenil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos, isto é, um radical divalente de hidrocarbono. As duas porções ligadas para o alcenileno pode ser ligado para um mesma átomo ou diferentes átomos do alcenileno. Grupos alcenileno incluem, mas não são limitados para, etenileno, propenileno, isopropenileno, butenileno, isobutenileno, sec-butenileno, pentenileno e hexenileno.
[0024] “Al cinil” refere-se para uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbono de 2 a 6 átomos de carbonos, tendo pelo menos uma ligação tripla. Exemplos de grupos alcinil incluem, mas não são limitados para, acetilenil, propinil, 1-butinil, 2-butinil, isobutinil, sec-butinil, butadiinil, 1-pentinil, 2-pentinil, isopentinil, 1,3-pentadienil, 1,4-pentadienil, 1-hexinil, 2-hexinil, 3-hexinil, 1,3-hexadienil, 1,4-hexadienil, 1,5-hexadienil, 2,4-hexadienil, ou 1,3,5-hexatriinil. Grupos alcenil podem também terem de 2 a 3, 2 a 4, 2 a 5, 3 a 4, 3 a 5, 3 a 6, 4 a 5, 4 a 6 e 5 a 6 carbonos. O grupo alcinil é tipicamente monovalente, mas pode ser divalente, tal como quando o grupo alcinil liga duas porções juntas.
[0025] “Alcinileno” refere-se para um grupo alcinil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos, isto é, um radical divalente de hidrocarbono. As duas porções ligadas para o alcileno pode ser ligado para um mesma átomo ou diferentes átomos do alcileno. Grupos alcileno incluem, mas não são limitados para, etinileno, propinileno, butinileno, sec-butinileno, pentinileno e hexinileno. “Cicloalcil” refere-se para uma montagem de anel saturado ou parcialmente não saturado, monocíclico, fundido bicíclico ou ponte policíclica contendo de 3 a 12 átomos no anel, ou o número de átomos indicado. Anéis monocíclico incluem, por exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, e ciclooctil. Anéis bicíclico e policíclico incluem, por exemplo, norbornane, decahidronaftaleno e adamantane. Por exemplo, C3-8cicloalcil inclui ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, ciclooctil, e norbornane. “Cicloalcileno” refere-se para a ciclogrupo alcil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos, isto é, um radical divalente de hidrocarbono. As duas porções ligadas para o cicloalcileno podem ser ligadas para um mesma átomo ou diferentes átomos do cicloalcileno. Grupos cicloalcileno incluem, mas não são limitados para, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclohexileno, e ciclooctileno. “Heterocicloalcil” refere-se para um sistema de anel tendo de 3 membros no anel a cerca de 20 membros no anel e de 1 a cerca de 5 heteroátomos tal como N, O e S. Adicionalmente heteroátomos podem também ser útil, incluindo, mas não limitado para, B, Al, Si e P. Os heteroátomos podem também ser oxidado, tal como, mas não limitado para, -S(O)- e -S(O)2-. Por exemplo, heterociclo inclui, mas não é limitado para, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, morfolino, pirrolidinil, pirrolinil, imidazolidinil, imidazolinil, pirazolidinil, pirazolinil, piperazinil, piperidinil, indolinil, quinuclidinil e 1,4-dioxa-8-aza-aspiral[4.5]dec-8-il. “Heterocicloalcileno” refere-se para um heterociclogrupo alcil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos. As duas porções ligadas para o heterocicloalcileno podem ser ligadas para o mesma átomo ou diferente átomos do heterocicloalcileno. “Aril” refere-se para uma montagem de anel monocíclico ou fundido bicíclico, tricíclico ou maior, anel aromático contendo 6 a 16 átomos de carbono no anel. Por exemplo, aril pode ser fenil, benzil ou naftil, preferencialmente fenil. “Arileno” significa um radical divalente derivado de um grupo aril. Grupos aril podem ser mono-, di- ou tri-substituido por um, dois ou três radicais selecionado de alcil, alcoxi, aril, hidroxi, halógeno, ciano, amino, amino-alcil, triflúormetil, alcilenodioxi e oxi-C2-C3-alcileno; todos dos quais são opcionalmente também substituído, por exemplo como neste documento antes definido; ou 1- ou 2-naftil; ou 1- ou 2-fenantrenil. Alcilenodioxi é um divalente substituído ligado para dois átomos adjacentes de carbono de fenil, exemplo metilenodioxi ou etilenodioxi. Oxi-C2-C3-alcileno é também um divalente substituinte ligados para dois átomos adjacentes de carbono de fenil, exemplo oxietileno ou oxipropileno. Um exemplo para oxi- C2-C3-alcileno-fenil é 2,3-dihidrobenzofuran-5-il. Preferidos como aril é naftil, fenil ou fenil mono- ou desubstituído por alcoxi, fenil, halógeno, alcil ou triflúormetil, especialmente fenil ou fenil-mono- ou disubstituido por alcoxi, halógeno ou triflúormetil, e em particular fenil.
[0026] Exemplos de substituído grupos final como R são, exemplo 4-clorofen-1-il, 3,4-diclorofen-1-il, 4-metoxifen-1-il, 4-metilfen-1-il, 4-aminometilfen-1-il, 4-metoxietilaminometilfen-1-il, 4-hidroxietilaminometilfen-1-il, 4-hidroxietil-(metil)-aminometilfen-1-il, 3-aminometilfen-1-il, 4-N-acetilaminometilfen-1-il, 4-aminofen-1-il, 3-aminofen-1-il, 2-aminofen-1-il, 4-fenil-fen-1-il, 4-(imidazol-1-il)-fenil, 4-(imidazol-1-ilmetil)-fen-1-il, 4-(morfolin-1-il)-fen-1-il, 4-(morfolin-1-ilmetil)-fen-1-il, 4-(2-metoxietilaminometil)-fen-1-il e 4-(pirrolidin-1-ilmetil)-fen-1-il, 4-(tiofenil)-fen-1-il, 4-(3-tiofenil)-fen-1-il, 4-(4-metilpiperazin-1-il)-fen-1-il, e 4-(piperidinil)-fenil e 4-(piridinil)-fenil opcionalmente substituído no anel heterocíclico. “Arileno” refere-se para um grupo aril, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos. As duas porções ligadas para o arileno são ligados para diferentes átomos do arileno. Grupos arileno incluem, mas não são limitados para, fenileno.
[0027] “Arileno-oxi” refere-se para um grupo arileno, como definido acima, onde uma das porções ligada para o arileno é ligado através de um átomo de oxigênio. Grupos arileno-oxi incluem, mas não são limitados para, fenileno-oxi. Similarmente, substituintes para os grupos aril e heteroaril são variados e são selecionados de: -halógeno, -OR’, -OC(O)R’, -NR’R”, -SR’, -R’, -CN, -NO2, -CO2R’, -CONR’R”, -C(O)R’, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR”C(O)2R’, ,-NR’-C(O)NR”R”’, -NH-C(NH2)=NH, -NR’C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR’, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR’R”, -N3, -CH(Ph)2, perflúor(C1-C4)alcoxi, e perflúor(C1-C4)alcil, em número variando de zero a número total de valências aberta sobre o0 sistema de anel aromático; e onde R’, R” e R”’ são independentemente selecionado de hidrogênio, (C1-C8)alcil e heteroalcil, não substituído aril e heteroaril, (não substituído aril)-(C1-C4)alcil, e (não substituído aril)oxi-(C1-C4)alcil. Dois dos substituintes sobre átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente ser substituído com um substituinte da fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, caracterizado por: T e U serem independentemente -NH-, -O-, -CH2- ou uma ligação simples, e q ser um inteiro de 0 a 2. Alternativamente, dois dos substituintes sobre átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente ser substituído com um substituinte da fórmula -A-(CH2)r-B-, caracterizado por: A e B serem independentemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR’- ou uma ligação simples, e r ser um inteiro de 1 a 3. Uma das ligações simples do novo anel então formado pode opcionalmente ser substituído com uma ligação dupla. Alternativamente, dois dos substituintes sobre átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente serem substituído com um substituinte da fórmula -(CH2)s-X-(CH2)t-, onde s e t são independentemente inteiros de 0 a 3, e X ser -O-, -NR’-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, ou -S(O)2NR’-. O substituinte R’ em -NR’- e -S(O)2NR’- ser selecionado de hidrogênio ou não substituído (C1-C6)alcil.
[0028] “Heteroaril” refere-se para montagem de anel monocíclica ou fundida bicíclica ou tricíclica aromática contendo de 5 a 16 átomos no anel, onde de 1 a 4 dos átomos do anel serem um heteroátomo cada N, O ou S. Por exemplo, heteroaril incluem piridil, indolil, indazolil, quinoxalinil, quinolinil, isoquinolinil, benzothienil, benzofuranil, furanil, pirrolil, tiazolil, benzotiazolil, oxazolil, isoxazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, imidazolil, tienil, ou qualquer outros radicais substituído, especialmente mono- ou di-substituido, por exemplo alcil, nitro ou halógeno. Piridil representa 2-, 3- ou 4-piridil, vantajosamente 2- ou 3-piridil. Tienil representa 2- ou 3-tienil. Quinolinil representa preferencialmente 2-, 3- ou 4-quinolinil. Isoquinolinil representa preferencialmente 1-, 3- ou 4-isoquinolinil. Benzopiranil, benzotiopiranil representa preferencialmente 3-benzopiranil ou 3-benzotiopiranil, respectivamente. Tiazolil representa preferencialmente 2- ou 4-tiazolil, e mais preferencialmente, 4-tiazolil. Triazolil é preferencialmente 1-, 2- ou 5-(1,2,4-triazolil). Tetrazolil é preferencialmente 5-tetrazolil. Preferencialmente, heteroaril é piridil, indolil, quinolinil, pirrolil, tiazolil, isoxazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, imidazolil, tienil, furanil, benzotiazolil, benzofuranil, isoquinolinil, benzothienil, oxazolil, indazolil, ou qualquer dos radicais substituído, especialmente mono- ou di-substituido. Como usado neste documento, o termo “heteroalcil” refere-se para um grupo alcil tendo de 1 a 3 heteroátomos tal como N, O e S. Adicionalmente heteroátomos podem também ser útil, incluindo, mas não limitado para, B, Al, Si e P. Os heteroátomos podem também ser oxidizados, tal como, mas não limitado para, -S(O)- e -S(O)2-. Por exemplo, heteroalcil pode incluir éteres, tioéteres, alcil-aminas e alcil-tiois. Como usado neste documento, o termo “heteroalcileno” refere-se para um heterogrupo alcil, como definido acima, ligando pelo menos dois outros grupos. As duas porções ligadas para o heteroalcileno podem ser ligadas para uma mesma átomo ou diferentes átomos do heteroalcileno. “Eletrófilo” refere-se para um íon ou átomo ou coleção de átomos, que podem ser iônico, tendo um centro eletrofílico, isto é, um centro que é busca de elétron, capaz de reagir com um nucleófilo. Um eletrófilo (ou reagente eletrofílico) é um reagente que forma uma ligação para seu sócio de reação (o nucleofilo) por aceitar ambas as ligações de elétrons do sócio da reação. “Nucleofilo” refere-se para um íon ou átomo ou coleção de átomos, que podem ser iônico, tendo um centro nucleofílico, isto é, um centro que busca um centro eletrofílico ou capaz de reagir com um eletrófilo. Um nucleofilo (ou reagente nucleofílico) é um reagente que forma uma ligação para seus sócio de reação (o eletrófilo) por doar ambas ligações de elétrons. Um “grupo nucleofílico” refere-se para um nucleofilo depois ter reagido com um grupo reativo. Exemplos não limitantes incluem amino, hidroxil, alcoxi, haloalcoxi e os semelhantes. “Maleimido” refere-se para um grupo pirrole-2,5-dione-1-il grupo tendo a estrutura:
Figure img0003
que em reação com um sulfidril (exemplo, a tio alcil) forma um grupo -S-maleimido tendo a estrutura
Figure img0004
onde “•” indica o ponto de ligação para o grupo maleimido e “^“indica o ponto de ligação do átomo de enxofre do tiol para permanecer o grupo sulfidril original de referência. Para o propósito desta revelação, “naturalmente ocorrem ácido Amin os” encontrados nas proteínas e polipeptídios são L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L-aspartico, L-cisteina, L-glutamina, ácido L-glutamico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofan, L-tirosina, e ou L-valina. “Ácido aminos não ocorrendo naturalmente” encontrados em proteínas são qualquer ácido amino outros que estes narrado como ácido aminos naturalmente ocorrendo. Ácido aminos não ocorrendo naturalmente inclui, sem limitação, os isômeros D dos ácido aminos ocorrendo naturalmente, e misturas de isômeros D e L dos ácido aminos ocorrendo naturalmente. Outros ácido aminos, tal como 4-hidroxiprolino, desmosina, isodesmosina, 5-hidroxilisina, epsilon-N-metilisina, 3-metilistidina, embora encontrado em proteínas ocorrendo naturalmente, são considerados para ser ácido aminos oco rendo não naturalmente encontrado em proteínas para o propósito desta revelação como eles são geralmente introduzidos por significar outros que ribosomal translação de mRNA.
[0029] “Suscetível” em referência para a geometria, arquitetura ou estrutura global de um polímero, refere-se para polímero tendo um monômero simples derivado da coluna central.
[0030] “Ramos,” em referência para a geometria, arquitetura ou estrutura geral de um polímero, refere- se para polímero tendo 2 ou mais polímero “ramos” estendido de um grupo simples, tal como um grupo L que pode ser derivado de um iniciador empregado em um átomo transferido de reação de polimerização de radical. Um polímero ramificado pode possuir 2 ramos de polímero, 3 ramos de polímero, 4 ramos de polímero, 5 ramos de polímero, 6 ramos de polímero, 7 ramos de polímero, 8 ramos de polímero ou mais. Para o propósito desta revelação, compostos tendo três ou mais ramos de polímero estendido de uma grupo simples suscetível são denominados como tendo um “comb” estrutura ou “comb” arquitetura. Ramos podem também ser alcançado através de estruturas “estatística” de criar espalhamento dendrímero como arquiteturas.
[0031] Composição “Farmaceuticamente aceitável” ou “composição farmacêutica” refere-se para uma composição compreendendo um composto da invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável ou excipientes farmaceuticamente aceitável. “Excipiente farmaceuticamente aceitável” e “transportador farmaceuticamente aceitável” refere-se para um excipiente que pode ser incluído em composições da invenção e que não causam efeitos toxicológicos adverso significante sobre o paciente. Exemplos não limitante de excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem água, NaCl, soluções salina normal, Ringer com lactato, sucrose normal, glucose normal e os semelhantes. “Paciente” ou “sujeito" na necessidade destes” refere- se para um organismo vivo sofrendo de ou propenso para uma condição que pode ser prevenida ou tratada por administração de uma composição farmacêutica como provida neste documento. Exemplos não limitantes incluem humanos, outros mamíferos e outros animais não mamífero. “Quantidade Terapeuticamente Efetiva” refere-se para uma quantidade de um agente funcional conjugado ou de uma composição farmacêutica útil para tratamento, melhorar, ou prevenir uma doença ou condição identificada, ou para exibir uma detectável terapêutica ou efeito inibidor. O efeito pode ser detectável por qualquer método de ensaio conhecido na matéria. A “Vida média biológica” de uma substância é um parâmetro farmacocinético que especifica o tempo requerido para uma metade da substância ser removida de um organismo depois da introdução da substância dentro do organismo. Copolímeros aleatórios contendo Zwiterion A presente invenção prover copolímero aleatório tendo grupo zwiteriônicos, tal como fosforilcolina, e pelo menos um agente funcional. Em algumas concretizações, o copolímero aleatório da presente invenção tem um primeiro monômero com fosforilcolina, pelo menos um segundo monômero tendo um agente funcional ou um grupo de ligação, e uma porção iniciadora tendo um agente funcional ou um grupo de ligação, caracterizado por: o agente funcional poder ser ligado para o segundo monômero ou a porção iniciadora via um ligador.
[0032] Em outras concretizações, o copolímero aleatório da presente invenção tem a fórmula I:
Figure img0005
Na fórmula I, as unidades do monômero M1 e M2 são quaisquer monômero adequado para polimerização via método de controle de radical livre, tal como transferência de átomo de polimerização de radical (ATRP). Cada um dos monômero M1 e M2 pode ter qualquer adequado número de comonômero no copolímero aleatório, como definido pelos radicais x e y1, respectivamente. O monômero M1 é ligado para um grupo zwiteriônico ZW, tal como fosforilcolina, via uma cadeia de alcileno (como definido pelo radical n). O copolímero aleatório pode incluir um simples comonômero M2 (radical z é 1), ou pode incluir vários comonômero M2 (z é maior que 1) caracterizado por: os diferentes comonômeros M2 são um mesma ou diferentes. Os comonômero M2 são cada um ligado para um grupo R2 que pode ser inerte, mas modifica as propriedades do copolímero aleatório (tal como alcil, aril, etc.), ou o grupo R2 pode ser funcional tal como quando o grupo R2 inclui um agente funcional A, um grupo de ligação LG ou um iniciador I. Quando o grupo R2 inclui um destes grupo funcionais, o grupo funcional pode opcionalmente ser ligado para o comonômero M2 via um ligador L. Os grupos R2 podem incluir uma variedade de grupos funcionais e grupos inertes para afinar as propriedades e funcionalidade do copolímero aleatório. Por exemplo, vários diferentes agentes de segmentação podem ser incluídos junto com várias diferentes drogas ou proteínas terapêuticas como agentes funcionais A. Os monômeros M1 e M2 podem ser polimerizado por um iniciador, I-I’, que pode ser penetrado dentro do fragmento iniciador I e radical eliminador I’. O fragmento iniciador I pode ser qualquer grupo que inicia a polimerização. O radical eliminador I’ pode ser qualquer grupo que reversivelmente termina o crescimento da cadeia de polímero. O radical eliminador I’ pode ser um halógeno tal como bromina, permitindo o fim do polímero para ser funcionalizado depois da polimerização. Em adição, o fragmento iniciador I pode ser (mas não é necessário que seja) funcionalizado com um grupo R1 que pode incluir uma variedade de grupos funcionais para afinar a funcionalidade do copolímero aleatório. Por exemplo, o grupo R1 pode incluir um agente funcional A ou um grupo de ligação LG, cada um opcionalmente ligado para o fragmento iniciador I via um ligador L. Além disso, o fragmento iniciador I pode ter múltiplos sites de inicialização tal que o produto polímero tenha várias ramos de polímero (radical s maior que 1). Em algumas concretizações, cada monômero M1 e M2 da fórmula I pode independentemente ser um acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina ou um vinil-pirrolidona. Além disso, R1 da fórmula I pode independentemente ser H, L1-A1, um grupo de ligação LG1 ou L1-LG1, e cada R2 da fórmula I ser independentemente H, C1-20 alcil, C2-6 alcenil, C2-6 alcinil, C1-6 haloalcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, heteroaril, A2, L2-A2, LG2, L2-LG2, I2 e L2-I2. O grupo ZW da fórmula I é uma porção zwiteriónica. O grupos I e I’ da fórmula I pode cada um independentemente ser um fragmento iniciador, tal que a combinação de I-I’ seja um iniciador, I1, para a polimerização do copolímero aleatório da fórmula I. Alternativamente, I’ pode ser H ou C1-6 alcil. O grupo I2 é um iniciador. Em adição, cada um dos grupos L1 e L2 é um ligador, cada um dos grupos A1 e A2 é um agente funcional, e cada um dos grupos LG1 e LG2 é um grupo de ligação. Na fórmula I acima, subscritos x e y1 são cada um independentemente um inteiro de 1 a 1000, subscrito z é um inteiro de 1 a 10, subscrito s é um inteiro de 1 a 100, e subscrito n é um inteiro de 1 a 20, caracterizado por: R1 é L1-A1 ou um dos R2 ser L2-A2. Os copolímeros aleatórios da presente invenção podem ter qualquer adequado número de unidades repetidas para cada um dos monômero M1 e M2. Exemplarmente intervalo de unidades repetidas para cada comonômero inclui, mas não são limitados para, de cerca de 1 a cerca de 10.000, de cerca de 10 a cerca de 5.000, de cerca de 10 a cerca de 2000, de cerca de 10 a cerca de 1.500, de cerca de 10 a cerca de 1.000, de cerca de 100 a cerca de 1.000, de cerca de 100 a cerca de 900, de cerca de 100 a cerca de 800, de cerca de 100, a cerca de 700, de cerca de 100 a cerca de 600, e de cerca de 100 a cerca de 500. Quando múltiplos de monômero M2 estão presente, cada monômero M2 pode ter um diferente número de unidades repetidas.
[0033] Os copolímeros aleatórios da presente invenção pode ter qualquer adequado peso molecular. Exemplarmente o peso molecular para o copolímero aleatório da presente invenção pode ser de cerca de 1000 a cerca de 1.500,000 Daltons (Da). Em alguma invenção podem ter um peso molecular de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de 75.000 Daltons, cerca de 100.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de 200.000 Daltons, cerca de 250.000 Daltons, cerca de 300.000 Daltons, cerca de 350.000 Daltons, cerca de 400.000 Daltons, cerca de 450.000 Daltons, cerca de 500.000 Daltons, cerca de 550.000 Daltons, cerca de 600.000 Daltons, cerca de 650.000 Daltons, cerca de 700.000 Daltons, cerca de 750.000 Daltons, cerca de 800.000 Daltons, cerca de 850.000 Daltons, cerca de 900.000 Daltons, cerca de 950.000 Daltons, cerca de 1.000 .000 Daltons e cerca de concretizações, os copolímeros aleatórios da presente 1.250.000 Daltons.
[0034] Os copolímeros aleatórios da presente invenção podem também ter qualquer adequado número de comonômero M2. Por exemplo, o número de comonômero, subscrito z, pode ser de 1 a 10, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. O número de comonômero, subscrito z, pode também ser de 1 a 5, 1 a 4, 1 a 3, ou 1 a 2. Em alguma concretizações, o copolímero aleatório da presente invenção pode ter dois diferentes monômeros onde subscrito z é 1, tal como na fórmula II:
Figure img0006
Em outras concretizações, o copolímero aleatório pode ter 3 diferentes monômero onde subscrito z é 2, tal como na fórmula III:
Figure img0007
Adicionalmente comonômero M2 pode ser presente no copolímero aleatório da presente invenção, tal como M2c M2d M2e M2f M2g M2h etc onde cada comonômero é , , , , , , ec., on e caa comonmero presente em um mesmo ou diferente valor de y1, e cada comonômero tendo um correspondente grupo R2 ligado, R2c, R2d, R2e, R2f, R2g, R2h, etc., respectivamente. Cada grupo M2, tal como M2a, M2b, M2c, etc., pode ser como definido acima para M2. Cada grupo R2, tal como R2a, R2b, R2c, etc., pode ser como definido acima para R2. Similarmente, cada grupo y1, tal como y1a, y1b, y1c, etc., pode ser como definido acima para y1. Em alguma concretizações, o copolímero aleatório pode ser da fórmula III, caracterizado por: R2a e R2b serem cada um independentemente H, C1-20 alcil, C2-6 alcenil, C2-6 alcinil, C1-6 haloalcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, heteroaril, A2, L2-A2, LG2, ou L2-LG2; M2a e M2b serem cada um independentemente acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina ou vinil-pirrolidona; e subscritos y1a e y1b serem cada um independentemente um inteiro de 1 a 1000. Os diferentes monômeros do copolímero aleatório pode também ser presente em qualquer razão adequada. Por exemplo, o monômero M2, coletivamente ou individualmente, pode ser presente relativo para o monômero M1 em uma razão de 100:1, 50:1, 40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50 e 1:100. Em adição, cada monômero M2 pode ser presente em qualquer adequado razão relativa para o M1 ou qualquer outros monômero M2, tal como 100:1, 50:1, 40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50 e 1:100.
[0035] Os copolímeros aleatórios da presente invenção pode ter qualquer adequada arquitetura. Por exemplo, o copolímero aleatório pode ser suscetível ou em ramos. Quando os copolímeros aleatórios são ramos, eles pode ter qualquer adequado número de ramos de copolímero, como definido pelo subscrito s da fórmula I, tal como 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 e mais para 100 ramos. Em algumas concretizações, subscrito s pode ser de 1 a 20, 1 a 15, 1 a 10, 1 a 9, 1 a 8, 1 a 7, 1 a 6, 1 a 5, 1 a 4, 1 a 3 ou 1 a 2. Os copolímeros aleatórios da presente invenção pode adotar qualquer adequada arquitetura. Por exemplo, o copolímero aleatório pode ser suscetível, ramos, estrela, dendrimeros, dendrigrafts, combs, etc.
[0036] Um agente funcional do copolímero aleatório pode ser ligado para um dos comonômero M2, ou para o fragmento iniciador I, ou ambos. Quando agentes funcionais múltiplos são presente, um agente funcional pode ser ligado para ambos o comonômero M2 e o fragmento iniciador I. Em algumas concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula IIa:
Figure img0008
Na fórmula IIa, o agente funcional A1 pode ser uma droga ou proteína terapêutica e agente funcional A2 pode ser um agente de segmentação. Alternativamente, o agente funcional A1 pode ser um agente de segmentação e agente funcional A2 pode ser uma droga ou proteína terapêutica. Além disso, agentes funcionais A1 e A2 podem ambos serem agentes terapêuticos. Agentes funcionais podem ser escolhidos para substituir (ou ativar) alvos distintos em uma mesmo caminho molecular, provendo inibição (ou ativação) de ambos um primário e caminho compensatório, ou substituir (ou ativar) um mesmo alvo em diferentes sites ligações para reduzir a resistência ou permitir uso de doses baixa para minimizar toxicidade. Além disso, os ligantes L e L podem ser um mesmo ou diferentes. Por exemplo, ligante L1 pode ser um ligante clivável, tal como quando ligado para uma droga ou proteína terapêutica para facilitar liberação da droga ou proteína terapêutica, enquanto ligante L2 pode ser um ligante não clivável, tal como quando ligado para um agente de segmentação. Além disso, ligante L1 pode ser um ligante não clivável, enquanto ligante L2 pode ser um ligante clivável. Alternativamente, ambos ligantes L1 e L2 podem ser ligantes cliváveis ou ligantes não cliváveis. Em adição, o ligante ligado para o agente de segmentação pode também ser um ligante clivável. Alternativamente, um ou ambos de L1 e L2 pode ser auto imolativo ou ligante duplo de pró droga. Quando múltiplos comonômero M2 são presente, cada comonômero M2 pode ter um diferente agente funcional ligado. Por exemplo, o copolímero aleatório pode ter a fórmula IIIa:
Figure img0009
[0037] Quando múltiplos comonômero M2 são presente, cada comonômero M2 pode ter um diferente agente funcional ligado. Por exemplo, o copolímero aleatório pode ter a fórmula IIIa:
Figure img0010
Na fórmula IIIa, M2a e M2b podem ser como definido e A2b podem ser como definido acima para A2; L2a e L2b podem ser como definido acima para L2; e y1a e y1b podem ser como definido acima para y1. Em algumas concretizações, cada de L2a e L2b é um ligante; e cada um dos A2a e A2b é a agente funcional.
[0038] Agente funcional A2a e A2b podem ser um mesmo ou diferente na fórmula IIIa. Agente funcional A2a pode ser uma droga ou proteína terapêutica e agente funcional A2b pode ser um agente de segmentação. Alternativamente, agentes funcionais A2a e A2b podem ambos ser agentes de segmentação, e agente funcional A1 pode ser a droga ou agente terapêutico. Os agentes funcionais A2a e A2b podem também ambos serem uma droga ou agente terapêutico, enquanto agente funcional A1 é o agente de segmentação. Quando agentes funcionais A2a e A2b são ambos uma droga ou agente terapêutico, cada agente funcional A2a e A2b pode ser uma droga diferente ou agente terapêutico. Em adição, um dos agentes funcionais A2a e A2b pode ser uma droga ou agente terapêutico e os outros podem ser um agente de segmentação, onde agente funcional A1 pode ser qualquer agente funcional.
[0039] Como descrito acima para a fórmula IIa, os ligantes L1, L2a e L2b da fórmula IIIa podem ser um mesmo ou diferentes. Por exemplo, ligante L1 pode ser um ligante clivável quando ligado para uma droga ou agente terapêutico para facilitar a liberação da droga ou agente terapêutico, enquanto ligantes L2a e L2b podem ser ligantes não cliváveis quando ligado para agentes de segmentação. Alternativamente, ligante L1 pode também ser um ligante não clivável e ligantes L2a e L2b podem ser ligantes cliváveis. Além disso, ligantes L2a e L2b podem ser um mesmo ou diferentes, tal como onde um é um ligante clivável e o outro é um ligante não clivável. Ligantes L2a e L2b podem também ser diferentes ligantes cliváveis, tal como quando cada um é ligado para uma droga, para prover diferentes razões de liberação para as diferentes drogas.
[0040] Em algumas concretizações, não existe agente funcional ligado para o fragmento iniciador I, tal como na fórmula IIIb:
Figure img0011
M2a e M2b podem ser como definido acima para M2; A2a e A2b podem ser como definido acima para A2; L2a e L2b podem ser como definido acima para L2; e y1a e y1b podem ser como definido acima para y1. Em algumas concretizações, cada um dos L2a e L2b é um ligante; e cada um dos A2a e A2b é um agente funcional.
[0041] Na fórmula IIIb, agentes funcionais A2a e A2b podem ser um mesmo ou diferentes, como descrito acima, e ligantes L2a e L2b podem ser um mesmo ou diferentes. Em outros concretizações, um dos comonômero M2 pode não ter agente funcional ou grupo de ligação, tal como na fórmula IIIc:
Figure img0012
Na fórmula IIIc, M2a e M2b podem ser como definido acima para M2; A2a pode ser como definido acima para A2; L2a pode ser como definido acima para L2. Similarmente, y1a e y1b podem ser como definido acima para y .
[0042] Quando adicionalmente comonômeros, M2 são presentes no copolímero aleatório da presente invenção, os correspondentes ligantes L2 pode ser um mesmo ou diferente como ligantes L1, L2a e L2b, como descrito acima. Além disso, os correspondentes agentes funcionais A2 pode ser um mesmo ou diferentes como agentes funcionais A1, A2a e A2b, como descrito acima.
[0043] Em algumas concretizações, o copolímero aleatório tem grupo de ligações LG ligado a qualquer um ou ambos dos fragmento iniciador I e o comonômero M2, tal como mostrado nas estruturas abaixo:
Figure img0013
Figure img0014
O grupo de ligações LG2 facilita o “giro” em covalente ligação química de agentes funcionais e grupos seguinte iniciadores de polimerização.
[0044] Quando uma pluralidade de comonômero M2 é presente, o comonômero pode ser ligado para um agente funcional ou um grupo de ligação, por exemplo como mostrado na fórmula seguinte:
Figure img0015
caracterizado por: M2a e M2b poderem ser como definido acima para M2; LG2a poder ser como definido acima para LG2; L2b poder ser como definido acima para L2; A2b poder ser como definido acima para A2; e y1a e y1b poder ser como definido acima para y1. Em adição, o grupo de ligação pode ser presente no fragmento iniciador I enquanto agentes funcionais A2 são ligados para o comonômero M2. Alternativamente, quando o grupo de ligação LG é ligado para o fragmento iniciador I, um segundo grupo de ligação LG pode ser ligado para um dos comonômero M2:
Figure img0016
Além disso, um agente funcional A1 pode ser ligado para o fragmento iniciador I enquanto os grupos de ligações LG são ligado para o comonômero M2, onde os grupos de ligações pode ser um mesmo ou diferentes:
Figure img0017
caracterizado por: M2a e M2b poderem ser como definido acima para M2; L2a e L2b poderem ser como definido acima para L2; LG2a e LG2b poderem ser como definido acima para LG2; e y1a e y1b poderem ser como definido acima para y1.
[0045] Em alguma concretizações quando existem múltiplos comonômero M2, um dos comonômero M2 pode ser ligado para um grupo outros que um grupo de ligação LG, um agente funcional A ou um iniciador I. Em outras concretizações, pelo menos um grupo R2 é H, C1-20 alcil, C2-6 alcenil, C2-6 alcinil, C1-6 haloalcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, ou heteroaril. Por exemplo, tais estruturas incluem as seguintes:
Figure img0018
caracterizado por: R2a poder ser H, C1-20 alcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, ou heteroaril. Em outras concretizações, R2a pode ser uma espécie tendo um ou mais carga positiva ou negativa, tal como ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, histidina, arginina, colina ou ácido hialuronico. Outros radicais M2a, M2b, y1a, y1b, R2a e LG2b podem ser como definido acima.
[0046] Quando R2 de algum comonômero M2 é o iniciador I2, arquitetura mais complexa pode ser preparada do copolímero aleatório. Por exemplo, polímeros ponte, hiperpolímeros ramificados, dendrimeros, e dendrigrafts podem ser preparados. Quando iniciador I2 é presente sobre um comonômero M2, polimerização usando iniciador I2 tipicamente ocorre seguindo polimerização usando iniciador I-I’. Em algumas concretizações, polimerização via I-I’ e I2 pode m ser simultâneas. Além disso, o iniciador I2 pode ser ligado para o comonômero M2 via um ligante clivável ou não clivável L2.
[0047] Em alguma concretizações, o copolímero aleatório da presente invenção pode ser modificado via uma polimerização subsequente com um ou mais monômero adicionais. Por exemplo, na fórmula III acima, monômero M1 e M2a podem ser copolimerizado em uma primeira polimerização, e monômero M2b pode ser polimerizado em uma segundo polimerização. Um copolímero de bloqueio será formado tendo dois bloqueios, o primeiro bloqueio sendo um copolímero aleatório de M1 e M2a, e o segundo bloqueio um homopolímero de M2b. Alternativamente, a polimerização seguinte de monômero M1 e M2a, monômero M2b pode ser copolimerizado com monômero M2c, então formando um copolímero de bloqueio onde o primeiro bloqueio é um copolímero aleatório de M1 e M2a, e o segundo bloqueio é um copolímero aleatório de M2b e M2c. Adicionalmente estruturas de polímero podem ser preparadas por copolimerização de monômero M1, M2a e M2b em uma primeiro polimerização, seguida por copolimerização de monômero M2c, M2d, e outros, em uma segundo copolimerização. Adicionalmente bloqueio pode ser preparado ainda por uma terceira polimerização usando adicionais monômero. Tais polímeros provem bloqueios de copolímeros que podem ter diferentes propriedades, drogas e agentes funcionais.
[0048] Em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0019
Figure img0020
Figure img0021
Figure img0022
caracterizado por: L-CTP ser da fórmula:
Figure img0023
Em algumas outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0024
Figure img0025
Figure img0026
caracterizado por: PC ser fosforilcolina; HEMA ser hidroxietil metacrilato; GMA é glicidil metacrilato; e Glu é ácido glutâmico.
[0049] Ainda em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0027
caracterizado por: o copolímero de bloqueio ter a
Figure img0028
[0050] Os copolímeros aleatórios da presente invenção são polimerizado usando qualquer adequado iniciador. Iniciadores úteis na presente invenção podem ser descrito pela fórmula: I-(I’)m, onde subscrito m é um inteiro de 1 a 20. O fragmento iniciador I pode ser qualquer grupo que inicia a polimerização. O radical eliminador I’ pode ser qualquer grupo que terminará reversivelmente o crescimento da cadeia de polímero. O radical eliminador I’ pode ser um halógeno tal como bromina, permitindo o fim do polímero para ser funcionalizado depois da polimerização. Em adição, o fragmento iniciador I pode opcionalmente ser funcionalizado com um grupo R1 que pode incluir uma variedade de grupos funcionais para afinar a funcionalidade do copolímero aleatório.
[0051] Iniciadores útil na presente invenção pode tem uma radical simples eliminador I’, ou qualquer adequado número de ramos tal que exista múltiplos radicais eliminador I’ cada um capaz de terminando reversível um crescimento a cadeia de polímero. Quando o fragmento iniciador I é ramificado e é capaz de inicialização de múltiplas cadeia de polímero, subscrito m é maior que um tal que existam como vários radicais eliminador I’ como existem crescimento de cadeias de polímero.
[0052] A ligação entre fragmento iniciador I e radical eliminador I’ é nomeada, tal que durante o processo de polimerização de monômero M1 e comonômero M2 são inseridos entre fragmento iniciador I e radical eliminador I’. Por exemplo, durante uma polimerização de radical livre, tal como ATRP, fragmento iniciador I e radical eliminador I’ dissociado, como mostrado na Figura 1, para formar radicais de I e I’. O radical de fragmento iniciador I então reagido com o monômero em solução para crescer o polímero e formar uma polímero de propagação de radical (espécies A e espécies C da Figura 1). Durante o processo de polimerização, o radical do radical eliminador I’ reage reversível com o polímero de propagação de radical para temporariamente parar o crescimento de polímero. A ligação entre o monômero e o radical savenger I’ é também nomeada, tal que a ligação pode partir e permitir o polímero propagação de radical para reagir com adicional monômero para crescimento do polímero. O resultado final do processo de polimerização é que o fragmento iniciador I está a um fim da cadeia de polímero e o radical eliminador I’ está a um oposto fim da cadeia de polímero.
[0053] O radical do fragmento iniciador I é tipicamente sobre um carbono secundário ou terciário, e pode ser estabilizado por um adjacente carbonil carbono. O radical eliminador I’ é tipicamente um halógeno, tal como bromina, clorina ou iodina. Juntos, fragmento iniciador I e radical eliminador I’ formam os iniciadores I1 e I2 útil na preparação do copolímero aleatório da presente invenção. Uma larga variedade de iniciadores podem ser usados para preparar o copolímero aleatório da invenção, incluindo um número de iniciadores do conjunto na US 6,852,816 (incorporada neste documento por referência). Em algumas concretizações, os iniciadores empregados para reações de ATRP para preparar copolímeros aleatórios da invenção são selecionados de alcanos, cicloalcanos, ácidos alcil carboxílicos ou ésteres destes, ácidos cicloalcil carboxílicos ou ésteres destes, grupos éteres e éteres cíclico alcil, alcil aril, alcil amidas, ácidos alcil-aril ácidos carboxílicos e ésteres destes, e também orientando um radical eliminador I’ onde copolímeros aleatórios não ramificado são preparados, e mais que um radical eliminador I’ onde moléculas ramificadas são preparadas.
[0054] Radicais eliminador I’ útil na presente invenção incluem, mas não são limitados para, halógenos, tal como Br, Cl e I, tiocianato (-SCN) e isotiocianato (-N=C=S). Outros grupos são proveitosos para o radical eliminador I’ da presente invenção. Em algumas concretizações, o radical eliminador I’ é bromina. Iniciadores empregada para reações de ATRP podem ser hidroxilatado. Em algumas concretizações, os iniciadores empregados para reações ATRP para preparar copolímeros aleatórios da invenção são selecionado de alcanos, cicloalcanos, ácidos alcilcarboxílicos ou ésteres destes, ácidos cicloalcilcarboxílicos ou ésteres destes, éteres, éteres cíclico alcil, grupos alcil aril, alcil amidas, ácidos alcil-arilcarboxílicos e ésteres destes, referenciando um grupo hidroxil, e também orientando um radical eliminador I’ onde copolímeros aleatórios não ramificados estão para ser preparados, ou alternativamente, mais que um radical eliminador I’ onde moléculas ramificado estão para ser preparadas.
[0055] Iniciadores empregados para reações ATRP podem orientar um ou mais grupos amina. Em algumas concretizações, os iniciadores empregados para reações ATRP para preparar copolímeros aleatórios da invenção são alcanos, cicloalcanos, ácidos alcilcarboxílicos ou ésteres destes, ácidos cicloalcilcarboxílicos ou ésteres destes, éteres, cíclico alcil éteres, grupos alcil-aril, alcil amidas, ácidos alcil-arilcarboxílicos e ésteres destes, orientando um grupo amina e também orientando um radical eliminador I’ onde copolímeros aleatórios não ramificados estão para ser preparados, ou alternativamente, mais que um radical eliminador I’ onde moléculas ramificadas estão para ser preparadas.
[0056] Ác idos alcilcarboxílicos, incluindo ácidos alcil dicarboxílicos, tendo pelo menos um radical eliminador I’, e substituído com amino ou grupo hidroxi podem também ser empregados como iniciadores. Em algumas concretizações da invenção onde o ATRP é empregado para preparar copolímero aleatório da presente invenção, os iniciadores podem ser ácidos alcilcarboxílicos orientando um ou mais halógenos selecionado de clorina e bromina.
[0057] Al canos substituído com dois ou mais grupos selecionado de -COOH, -OH e -NH2, e pelo menos um radical eliminador I’, podem também ser empregados como iniciadores para a preparação de copolímero aleatório onde ATRP é empregada para preparar copolímeros aleatórios da presente invenção.
[0058] Iniciadores podem também conter um ou mais grupos incluindo, mas não limitado para, grupos -OH, amino, monoalcilamino, dialcilamino, -O-alcil, -COOH, -COO-alcil, ou fosfato (ou formas protetora destes).
[0059] Uma larga variedade de iniciadores são comercialmente disponível, por exemplo ácido bromoacetico éster de N-hidroxisuciinimida disponíveis de "Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)". Formas de protetores adequado destes iniciadores podem ser preparadas usando métodos padrões na matéria quando necessário.
[0060] Outros iniciadores incluem termal, redox ou foto iniciadores, incluindo, por exemplo, alcil peróxido, substituído alcil peróxidos, aril peróxidos, substituído aril peróxidos, acil peróxidos, alcil hidroperoxidos, substituído aril hidroperoxidos, aril hidroperoxidos, substituído aril hidroperoxidos, heteroalcil peróxidos, substituído heteroalcil peróxidos, heteroalcil hidroperoxidos, substituído heteroalcil hidroperoxidos, heteroaril peróxidos, substituído heteroaril peróxidos, heteroaril hidroperoxidos, substituído heteroaril hidroperoxidos, alcil perésteres, substituído alcil perésteres, aril perésteres, substituído aril perésteres, compostos azo e compostos halide. Específicos iniciadores incluem cumene hidroperoxido (CHP), tert-butil hidroperoxido (TBHP), tert-butil perbenzoate, (TBPB), sódio carbonateperoxido, benzoil peroxido (BPO), lauroil peroxido (LPO), metiletil cetona 45%, potássio persulfato, amônia persulfato, 2,2-azobis(2,4-dimetil-valeronitrila), 1,1-azobis(ciclo-hexanecarbonitrila), 2,2-azobis(N,N-dimetileneisobutiramidine) dihidrocloridato, e 2,2-azobis (2-amido-propano) dihidrocloridato. Pares Redox tal como persulfato/sulfito e Fe (2+) peroxido ou amônia persulfato e N,N,N’N’-tetrametiletilenediamina (TEMED).
[0061] Ainda outros iniciadores útil para preparação do copolímero aleatório da presente invenção, são ramificados. Adequado iniciadores tendo um simples ponto de ramificação incluem os seguintes:
Figure img0029
onde o radical R pode ser qualquer dos seguintes:
Figure img0030
Em alguma concretizações, o iniciador pode ser:
Figure img0031
o qual é um protetor maleimida que pode ser desprotetor depois da polimerização para formar o maleimida para reação com adicional grupos funcionais. Adicionalmente ramificados iniciadores incluem, mas não são limitados para, os seguintes, onde o radical R os iniciadores ramificado incluem, mas não são limitados para, os seguintes:
Figure img0032
Em algumas concretizações, os iniciadores ramificado incluem, mas não são limitados para, os seguintes:
Figure img0033
[0062] Outros iniciadores ramificado úteis para a preparação do copolímero aleatório da presente invenção incluem os seguintes: onde o radical R é como definido acima, e radical X pode ser CHO, SO2Cl, SO2CH=CH2, NHCOCH2I, N=C=O e N=C=S, entre outros. Adicionalmente grupos X podem incluir os seguintes:
Figure img0034
onde o radical R é como definido acima, e radical X pode ser CHO, SO2Cl, SO2CH=CH2, NHCOCH2I, N=C=O e N=C=S, entre outros. Adicionalmente grupos X podem incluir os seguintes:
Figure img0035
Ainda outros iniciadores incluem, mas não são limitados para, os seguintes:
Figure img0036
[0063] Em outras concretizações, o iniciador pode ter vários pontos de ramificação para fornecer uma pluralidade de ramos de polímero, tais como:
Figure img0037
onde o radical R é como definido acima. Em algumas outras concretizações, o iniciador pode ter a seguinte estrutura:
Figure img0038
[0064] Em algumas outras concretizações, o iniciador pode ter as seguintes estruturas:
Figure img0039
Figure img0040
Figure img0041
Figure img0042
Figure img0043
Figure img0044
[0065] Como descrito acima, o iniciador pode ser acrescentado separadamente para a mistura de polimerização, ou pode ser incorporada dentro de outras moléculas, tal como um monômero (estrutura hiper ramificada) ou um fragmento de polímero (tal como copolímeros graft). A iniciação da polimerização pode ser realizada por calor, luz UV, ou outros métodos conhecidos para um experiente na matéria. Em alguma concretizações, o iniciador I-I’ da presente invenção tem a fórmula: (F)r-Sp1-C-Sp2-I’ onde o fragmento iniciador I corresponde para F-Sp1-C- Sp2. Cada radical F é um grupo funcional para reação com um agente funcional ou grupo de ligação da presente invenção. O radical r é de 1 a 10. Os radicais Sp1 e Sp2 são espaciais e podem ser qualquer adequado grupo para formação de uma ligação covalente, tal como C1-6 alcil, aril ou heteroaril. O radical C pode ser qualquer núcleo provendo uma ou uma pluralidade de pontos para ligar a um ou mais espaciais, Sp2 (que podem ser o mesmo ou diferentes), e um ou mais radicais eliminador, I’, e provendo um ou uma pluralidade de pontos para ligar a um ou mais espaciais, Sp1 (que podem ser o mesmo ou diferentes), e um ou mais grupo funcionais, F (que pode ser o mesmo ou diferentes). O núcleo C pode ser qualquer estrutura adequada, tal como uma estrutura ramificada, uma estrutura de ligação cruzada incluindo heteroátomos, tal como silsesquiloxanas, e um linear, polímero curto com múltiplas grupos funcionais pendentes. Em adição, o núcleo C pode ser ligado para um ou mais espaciais Sp1 e Sp2 por qualquer adequado grupo para formar uma ligação covalente incluindo, mas não limitado para, ésteres, amidas, éteres, e cetonas. Radical eliminador I’ é um átomo radicalmente transferido ou grupo tal como, mas não limitado para, um halógeno, Cl, Br, I, OR10, SR11, SeR11, OC(=O)R11, OP(=O)R11, OP(=O)(OR11)2, O-(R11)2, S-C(=S)N(R11)2, CN, NC, SCN, CNS, OCN, CNO, N3, OH, O, C1-C6-alkoxi, (SO4), PO4, HPO4, H2 PO4, triflato, hexafluorofosfato, metanesulfonato, arilsulfonato, ácido carboxílico halide. R10 é um alcil de 1 a 20 átomos de carbono ou um alcil de 1 a 20 átomos de carbono no qual cada um dos átomos de hidrogênio pode ser recolocado por um halide, alcenil de 2 a 20 átomos de carbono, alcinil de 2 a 10 átomos de carbono, fenil, fenil substituído com de 1 a 5 átomos de halógeno ou alcil grupos com de 1 a 4 átomos de carbono, aralcil, aril, aril substituído alcil, no qual o grupo aril é fenil ou substituído fenil e o grupo alcil é de 1 a 6 átomos de carbono, e R11 é aril ou um linear ou ramificado grupo C1-C20 alcil ou onde um grupo N(R11)2 é presente, os dois grupos R11 podem ser unidos para formar um 5-, 6- ou 7-membros do anel heterocíclico. Espacial Sp1 covalentemente ligado grupo funcional F e núcleo C enquanto espacial Sp2 covalentemente liga o núcleo C e radical eliminador I’. Em outras concretizações, o iniciador da presente invenção tem a fórmula:
Figure img0045
caracterizado por: cada I’ ser independentemente selecionado de halógeno, -SCN, ou -NCS. L4 e L5 serem cada um independentemente uma ligação ou um ligante, tal que um dos L4 e L5 é um ligante. C ser uma ligação ou um grupo do núcleo. LG2 ser um grupo de ligação. E subscrito p ser de 1 a 32, caracterizado por: quando o subscrito p é 1, C é uma ligação, e quando subscrito p é de 2 a 32, C ser um grupo do núcleo. Em algumas outras concretizações, o iniciador tem a fórmula:
Figure img0046
caracterizado por: cada R3 e R4 serem independentemente selecionados de H, CN ou C1-6 alcil. Monômeros
[0066] Monômeros úteis para preparação do copolímero aleatório da presente invenção inclui qualquer monômero capaz de polimerização de radical. Tipicamente, cada monômero tem um grupo vinil. Adequado monômero incluem, mas não são limitados para, monômero acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil-piridina e vinil- pirrolidona. Monômeros, M1, contendo a porção zwiteriónica, ZW, inclui, mas não são limitados para, os seguintes:
Figure img0047
Monômeros, M2, contendo o grupo de ligação ou agente funcional incluem, mas não são limitados para, as estruturas seguinte:
Figure img0048
Outros monômeros são bem conhecidos para um experiente na matéria, e inclui vinil acetato e derivativos destes.
[0067] Em algumas concretizações, o monômero são acrilato ou monômero metacrilato. Em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0049
caracterizado por: cada de R3 e R4 serem independentemente H ou C1-6 alcil; e PC ser fosfatidilcolina. Em algumas outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0050
[0068] Em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0051
caracterizado por: A2 ser camptotecina.
[0069] Ainda em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
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caracterizado por: R4a e R4b poderem ser como definido acima para R4; R2a e R2b poder ser como definido acima para A2; e y1a e y1b poderem ser como definido acima para y1. Em algumas concretizações, R2a e R2b são cada um independentemente H, C1-20 alcil, C2-6 alcenil, C2-6 alcinil, C1-6 haloalcil, C1-6 heteroalcil, C3-8 cicloalcil, C3-8 heterocicloalcil, aril, heteroaril, A2, L2-A2, LG2, ou L2-LG2; cada um dos R3, R4a e R4b são independentemente H ou C1-6 alcil; subscritos y1a e y1b são cada independentemente um inteiro de 1 a 1000; e PC é fosfatidilcolina.
[0070] Ainda em outras concretizações, o copolímero qualquer das fórmulas seguintes:
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caracterizado por: R4a e R4b poderem ser como definido L2a e L2b poderem ser como definido A2a e A2b poderem ser como definido acima para A2; e y1a e y1b poderem ser como definido acima para y1. Em algumas concretizações, cada um dos L2a e L2b são um ligantes; e cada um dos A2a e A2b é um agente funcional. Zwitterions
[0071] Os zwiteriônicos da presente invenção incluem qualquer composto tendo ambos uma carga negativa charge e uma carga positiva. Grupos tendo uma carga negativa e adequado para uso no zwiteriônicos da presente invenção incluindo, mas não são limitados para, fosfato, sulfato, outros oxoanions, etc. Grupos tendo uma carga positiva e adequado para uso nos zwiteriônicos da presente invenção incluem, mas não são limitados para, amônia íons. Em algumas concretizações, o zwiteriônico pode ser fosforilcolina. Ligantes
[0072] Os copolímero aleatório da presente invenção podem também incorporar qualquer adequado ligante L. Os ligantes providos para ligação dos agentes funcionais para o fragmento iniciador I e o comonômero M2. Os ligantes podem ser clivável ou não clivável, homobifuncional ou heterobifuncional. Outros ligantes podem ser ambos heterobifuncional e clivável, ou homobifuncional e clivável. Ligantes cliváveis incluem estes que são ligantes hidrolisáveis, ligantes enzimaticamente cliváveis, ligantes sensível a pH, ligantes de disulfeto e ligantes de marcação de radio, entre outros. Ligantes hidrolisáveis incluem estes que têm um éster, carbonato ou grupo carbonato funcional no ligante tal que a reação com água parte o ligante. Ligantes enzimaticamente cliváveis incluem estes que são penetrados por enzimas e podem incluir um éster, amida, ou grupo carbanato funcional no ligante. Ligante sensível a pH incluem estes que são estável a um pH mas são lábil a outros pH. Para ligantes sensíveis a pH, a troca de pH pode ser de condições ácida para básica, de condições básica para ácida, de condições mediamente ácida para fortemente ácida, ou de condições mediamente básica para fortemente básica. Adequados Ligantes sensíveis a pH são conhecidos para um experiente na matéria e incluem, mas não são limitados para, cetal, acetal, iminas ou imínio, siloxanas, silazanas, silanas, ligações maleamato-amida, orto ésteres, hidrazonas, ativados ácido carboxílico derivativos e vinil éteres. Ligantes de disulfeto são caracterizado por ter ligação de disulfeto no ligante e são penetrado sob condições reduzidas. Ligantes marcado de radio incluem estes que são penetrados em exposição a luz, tal como visível, infravermelha, ultravioleta, ou radiação eletromagnética a outros comprimentos de onda. Outros ligantes útil na presente invenção incluem estes descrito no Deposito de Patente U.S. Números. 2008/0241102 (concedida para "Ascendis/Complex Biosystems") e 2008/0152661 (concedida para Mirus), e Aplicação de Patente Internacional Números. WO 2004/010957 e 2009/117531 (concedida para "Seattle Genetics") e 01/24763, 2009/134977 e 2010/126552 (concedida para "Immunogen") (incorporada inteiramente neste documento). Ligantes Mirus útil na presente invenção incluem, mas não são limitados para,
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Outros ligantes incluem estes descrito em "Bioconjugado Techniques, Greg T. Hermanson, Academic Press, 2d ed., 2008" (incorporado inteiramente neste documento), e estes descrito em "Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 6974-6998 (Bertozzi, C.R. e Sletten, E.M" (incorporado inteiramente neste documento). Em algumas concretizações, ligantes L1 e L2 podem ter um comprimento acima de 30 átomos, cada átomo independentemente C, N, O, S, e P. Em outras concretizações, os ligantes L1 e L2 pode ser qualquer das seguintes: -C1-12 alcil-, -C3-12 cicloalcil-, -(C1-8 alcil)-(C3-12 cicloalcil)-(C0-8 alcil)-, -(CH2)1-12O-, (-(CH2)1-6-O-(CH2)1-6-)1-12-, (-(CH2)1-4-NH-(CH2)1-4)1-12-, (-(CH2)1-4-O-(CH2)1-4)1-12-O-, (-(CH2)1-4-O-(CH2)1-4-)1-12O-(CH2)1-12-, -(CH2)1-12-(C=O)-O-, -(CH2)1-12-O-(C=O)-, -(fenil)-(CH2)1-3-(C=O)-O-, -(fenil)-(CH2)1-3-(C=O)-NH-, -(C1-6 alcil)-(C=O)-O-(C0-6 alcil)-, -(CH2)1-12-(C=O)-O-(CH2)1-12-, -CH(OH)-CH(OH)-(C=O)-O- -CH(OH)-CH(OH)-(C=O)-NH-, -S-maleimido-(CH2)1-6-, -S-maleimido-(C1-3 alcil)-(C=O)-NH-, -S-maleimido-(C1-3 alcil)-(C5-6 cicloalcil)-(C0-3 alcil)-, -(C1-3 alcil)-(C5-6 cicloalcil)-(C0-3 alcil)-(C=O)-O-, -(C1-3 alcil)-(C5-6 cicloalcil)-(C0-3 alcil)-(C=O)-NH-, -S-maleimido-(C0-3alcil)-fenil-(C0-3alcil)-, -(C0-3 alcil)-fenil-(C=O)-NH-, -(CH2)1-12-NH-(C=O)-, -(CH2)1-12-(C=O)-NH-, -(fenil)-(CH2)1-3-(C=O)-NH-, -S-(CH2)-(C=O)-NH-(fenil)-, -(CH2)1-12-(C=O)-NH-(CH2)1-12-, -(CH2)2-(C=O)-O-(CH2)2-O-(C=O)-(CH2)2-(C=O)-NH-, -(C1-6 alcil)-(C=O)-N-(C1-6 alcil)-, acetal, cetal, aciloxialcil éter, -N=CH-, -(C1-6 alcil)-S-S-(C0-6 alcil)- , -(C1-6 alcil)-S-S-(C1-6 alcil)-(C=O)-O-, -(C1-6 alcil)-S-S-(C1-6 alcil)-(C=O)-NH-, -S-S-(CH2)1-3-(C=O)-NH-(CH2)1-4-NH-(C=O)- (CH2)1-3-, -S-S-(C0-3 alcil)-(fenil)-, -S-S-(C1-3-alcil)-(fenil)-(C=O)-NH-(CH2)1-5-, -(C1-3 alcil)-(fenil)-(C=O)-NH-(CH2)1-5-(C=O)-NH-, -S-S-(C1-3-alcil)-, -(C1-3-alcil)-(fenil)-(C=O)-NH-, -O-(C1-C6 alcil)-S(O2)-(C1-6 alcil)-O-(C=O)-NH-, -S-S-(CH2)1-3-(C=O)-, -(CH2)1-3-(C=O)-NH-N=C-S-S-(CH2)1-3-(C=O)-NH-(CH2)1-5-, -(CH2)1-3-(C=O)-NH-(CH2)1-5-(C=O)-NH-, -(CH2)0-3-(heteroaril)-(CH2) 0-3-, -(CH2)0-3-fenil-(CH2)0-3-, -N=C(R)-, -(C1-6 alcil)-C(R)=N-(C1-6 alcil)-, -(C1-6 alcil)-(aril)-C(R)=N-(C1-6 alcil)-, -(C1-6 alcil)-C(R)=N-(aril)-(C1-6 alcil)-, e -(C1-6 alcil)-O-P(O)(OH)-O-(C0-6 alcil)-, caracterizado por: R ser H, C1-6 alcil, C3-6 cicloalcil, ou um grupo aril tendo 5-8 átomos endocíclicos. Em algumas outras concretizações, ligantes L1 e L2 podem ser qualquer dos seguintes: -C1-C12 alcil-, -C3-C12 cicloalcil-, (-(CH2)1-6-O-(CH2)1-6-)1-12-, (-(CH2)1-4-NH-(CH2)1-4)1-12-, -(CH2)1-12O-, (-(CH2)1-4-O-(CH2)1-4)1-12-O-, -(CH2)1-12-(CO)-O-, -(CH2)1-12-(CO)-NH-, -(CH2)1-12-O-(CO)-, -(CH2)1-12-NH-(CO)-, (-(CH2)1-4-O-(CH2)1-4)1-12-O-(CH2)1-12-, -(CH2)1-12-(CO)-O-(CH2)1-12-, -(CH2)1-12-(CO)-NH-(CH2)1-12-, -(CH2)1-12-O-(CO)-(CH2)1-12-, -(CH2)1-12-NH-(CO)-(CH2)1-12-, -(C3-C12 cicloalcil)-, -(C1-C8alcil)-(C3-C12 cicloalcil)-, -(C3-C12 cicloalcil)-(C1-8alcil)-, -(C1-8alcil)-(C3-C12 cicloalcil)-(C1-8alcil)-, e -(CH2)0-3-aril-(CH2)0-3-. Em ainda outras concretizações, cada um dos ligantes L1 e L2 é um ligante clivável independentemente selecionado de ligante hidrolisáveis, ligante enzimaticamente cliváveis, ligante sensível a pH, ligantes de disulfeto e ligante de marcação de radio. Outros ligantes útil na presente invenção incluem ligantes auto imolativos. Ligantes úteis auto imolativo são conhecidos para um experiente na matéria, tal como estes útil para anticorpo de droga conjugadas. Exemplarmente ligantes auto imolativo são descrito na Patente U.S. No. 7,754,681. Grupo de ligação "Linking Groups - LG" Os ligantes e agentes funcionais da presente invenção podem reagir com um grupo de ligação sobre os fragmento iniciador I ou o comonômero M2 para formar uma ligação. O grupo de ligações LG da presente invenção pode ser qualquer adequado grupo funcional capaz de formar uma ligação para um outro grupo funcional, assim ligando os dois grupos juntos. Por exemplo, grupo de ligações LG úteis na presente invenção incluem estes usados em química clique, química maleimida, e NHS-ésteres, entre outros. Grupos de ligação envolvidos em química clique incluem, mas não são limitados para, azidas e alcinas que formam um anel triazol via o processo de cicloadição de Huisgen (ver Patente U.S. No. 7,375,234, incorporada neste documento inteiramente). A química maleimida envolve reação do maleimida olefin com um nucleofile, tal como -OH, -SH ou -NH2, para formar um ligação estável. Outros grupo de ligações incluem estes descrito em "Bioconjugado Techniques, Greg T. Hermanson, Academic Press, 2d ed., 2008" (incorporado inteiramente neste documento). Alguns exemplos não limitantes de reação dos grupos de ligações e alguns grupos tipicamente encontrado ou introduzido dentro de agentes funcionais estão na Tabela I.
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R’’ é H, C1-6 alcil, C3-6 cicloalcil, ou um grupo aril tendo 5-8 átomos endocíclicos; R’’’ é um carbonil derivativo *- (C=O)-, * - (C=O)-(CH2)1-8-S-S-, *- (C=O)-(CH2)1-8-(C=O)-O-, *- (C=O)-(CH2)1-8-O-(C=O)-, * - (C=O)-(CH2)1-8-(C=O)-NH- , ou * - (C=O)-(CH2)1-8-NH-(C=O)-, ou alternativamente, R’’’ é carbonil derivativo da forma *- (C=O)-O-(CH2)1-8-S-S-, *- (C=O)-O-(CH2)1-8-(C=O)-O- , * - (C=O)-O-(CH2)1-8-O-(C=O)-, *- (C=O)-O-(CH2)1-8-(C=O)-NH- , ou *- (C=O)-O-(CH2)1-8-NH-(C=O)-, onde “*” indica o ponto de ligação para grupos sucinimidil ou benzotriazolil; X e Y são cada um o agente ativo, ligante, monômero ou fragmento iniciador I. C 1a 1b 1a 1b 1a 1b 1a 1b (O)NR aR , -NR aR , C1-6 alcil-NR aR , -N(R a)C(O)R , 1a 1b 1a 1a 1b 1a * N(R )C(O)OR , -N(R )C(O)NR R , -OP(O)(OR )2, * S(O)2OR1a, -S(O)2NR1aR1b, -CN, -NO2, cicloalcil, heterocicloalcil, aril e heteroaril. Agentes Funcionais
[0073] Agentes funcionais útil no copolímero aleatório da presente invenção incluem qualquer agente biológico ou composto sintético capaz de segmentar uma particular ligante, receptor, complexo, organela, célula, tecido, folhas epitelial, ou organismo, ou de tratamento de uma condição particular ou estado de doença. De particular interesse, é uma combinação de agentes bioativos que juntos a mecanismos designados comum para uma particular doença. Por exemplo, um primeiro agente bioativo (ligado estavelmente) que é um agente biofarmacêutico que liga para uma proteína reguladora de uma doença; um segundo agente bioativo (ligado estavelmente) que é uma peptídeo que liga para uma matriz de tecido extracelular constituindo tal como sulfato de heparina; um terceiro agente bioativo (ligado estavelmente) que é uma droga de pequena molécula que libera com o passar do tempo e mostra um local, efeito intracelular por exemplo, um efeito anti-proliferativo. Em algumas concretizações, o agente bioativo é uma droga, um proteína terapêutica, uma molécula pequena, um peptídeo, um peptídeo, um oligonucleotídeo (aptamer, siRNA, microRNA), uma nanopartícula, um ccarbohidrato, um lipídeo, um glicolipídeo, um fosfolipídeo, ou um agente de segmentação. A razão de comonômero é escolhida baseado no predefinido estequiometria (por exemplo, para emparelhar uma biológica avidez; para emparelhar uma estequiometria biológica; para conceder um efeito de "engrenagem"). Outros agentes funcionais útil no copolímero aleatório da presente invenção incluem, mas não são limitados para, marcador isotópico, fluoróforo e tintura. Os agentes funcionais podem ser ligados para o fragmento iniciador I ou o comonômero M2, ou ambos, dos copolímero aleatório. Os agentes funcionais podem ser ligados para o fragmento iniciador I ou o comonômero M2 antes ou depois da polimerização via ligantes clivável, não clivável, ou auto imolativo descritos acima. O agente funcional pode também ser absorvido fisicamente ou absorvido ionicamente para o copolímero aleatório ao invés de ligado covalentemente. A preparação do copolímero aleatório da presente invenção ligado para um agente funcional pode ser conduzida por primeiro ligar o agente funcional para um grupo de ligação ligado para um monômero e subseqüente o acoplado agente funcional para condições adequada para síntese dos copolímeros aleatórios inventivo. Neste casos, um adequado grupo de ligação pode ser um iniciador (exemplo,composto/grupo iodado, bromonado ou clorado) para uso em reações ATRP. Tal esquema de reação é possível onde o agente funcional é compatível com o polímero da reação de polimerização e qualquer subsequente trabalho requerido. Embora, acoplamento de agentes funcionais para pré formar copolímeros aleatórios pode ser usado onde o agente funcional não é compatível com as condições adequada para polimerização. Em adição, onde o custo faz a perda de um agente para rendimentos sintéticos imperfeitos , frequentemente encontrados particularmente em reações de multipassos sintético, acoplamento de agente funcional para pré formar copolímeros aleatórios da presente invenção pode ser empregado. Onde um agente funcional não é compatível com as condições empregada para reações de polimerização funcional, pode ser desejável para introduzir o agente funcional subsequente para a reação de polimerização Agentes bioativos, A, podem ser largamente selecionado. Em algumas concretizações os agentes bioativos podem ser selecionado de uma ou mais drogas, vacinas, aptâmeros, avimer scaffolds baseado em humano um domínio de scaffolds, diacorpos, camelids, anticorpos shark IgNAR, fibronectina tipo III scaffolds com mudanças especificas , anticorpos, fragmentos de anticorpo, vitaminas e cofatores, polisacarídeos, carbohidratos, esteróides, lipídeos, gorduras, proteínas, peptídeos, polipeptídeos, nucleotídeos, oligonucleotídeos, polinucleotídeos, e ácidos nucleíco (exemplo, mRNA, tRNA, snRNA, RNAi, microRNA, DNA, cDNA, construtores anti sentido, ribozimas, etc., e combinações destes). Em uma concretização, os agentes bioativos podem ser selecionados de proteínas, peptídeos, polipeptídeos, solúvel ou ligação de célula, extracelular ou intracelular, cinesim, motores molecular, enzimas, materiais de matriz e combinações destes. Em outra concretização, agente bioativos pode ser selecionado de nucleotídeos, oligonucleotídeos, polinucleotídeos, e ácidos nucleíco (exemplo, mRNA, tRNA, snRNA, RNAi, DNA, cDNA, construtores anti sentido, ribozimas, etc., e combinações destes). Em outra concretização, agentes bioativos podem ser selecionados de esteroides, lipídeos, gorduras e combinações destes. Por exemplo, os bioagentes ativo podem ligar para a matriz extracelular, tal como quando a matriz extracelular é ácido hialuronico ou sulfato de heparina proteoglican e o agente bioativo é uma porção carregada positivamente tal como colina para não especifico, eletrostático, tipo Velcro para ligações de interações. Em outra concretização, o agente bioativo pode ser uma sequência de peptídeo que liga não especialmente ou especialmente. Agentes bioativos podem ser designados e/ou selecionados para ter uma atividade completa(tal como um alto nível de agonismo ou antagonismo). Alternativamente, um bioagente multifuncional ativo pode ser selecionado para modular um alvo de atividade de proteína enquanto imprensando outro completamente. Da mesma maneira que proteínas mosaica contendo domínio ou subdomínio de ligação extracelular (exemplo, VEGF e ligação à heparina de fator de crescimento epidérmico), sequências destes sites de ligações podem ser replicadas como um agente bioativo para ligação de polímero. Mais largamente, proteínas mosaica representa sequência de domínio de muitas funções (alvo de ligação, ligação de matriz extracelular, espaciais, aumento de avidez, enzimática). O conjunto de bioativos escolhidos para uma particular aplicação pode ser montado de maneira similar para replicar um conjunto de atividades funcionais desejadas. Outros agentes funcionais, A, incluem carregar espécies tal como colina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, e ácido hialuronico, entre outros. As espécies cargas são proveitosas para facilitar ligação iônica, para vítreo por exemplo.
Proteína Terapêutica e Anticorpos
[0074] Em uma particular útil concretização, o agente funcional é uma proteína terapêutica. Numerosas proteínas terapêutica são descritas através de aplicação tal como, e sem limitação, eritropoetina, colônias de granulócitos fator estimulante(G-CSF), GM-CSF, interferon alfa, interferon beta, crescimento de hormônio humano, e imiglucerase. Em uma concretização, os agentes funcionais podem ser especialmente selecionado de identificado polissacarídeo, agente bioativos de proteína ou peptídeo, incluindo, mas não limitados para: Aβ, agalsidase, alefacept, alcalina fosfatase, aspariginase, amdoxovir (DAPD), antide, becaplermin, toxina botulinica incluindo tipos A e B e compostos de peso molecular baixo com atividade de toxina botulinica, calcitoninas, cianovírus, denileucin diftitox, eritropoetina (EPO), EPO agonistas, dornase alfa, proteína eritropoeses de estimulação(NESP), fatores de coagulação tal como Fator V, Fator VII, Fator VIIa, Fator VIII, Fator IX, Fator X, Fator XII, Fator XIII, fator de von Willebrand; ceredase, cerezimea, alfa-glucosidase, N-Acetilgalactosamine-6-sulfato sulfatase, colágeno, ciclosporin, alfa defensins, beta defensins, desmopressina, exendin-4, citocinas, receptores de citosina, granulocite colônia fator de estimulação (G-CSF), trombopoietin (TPO), alfa-1 proteínase inibidor, elcatonin, granulócito macrófago colônia fator de estimulação (GM-CSF), fibrinôgenio, filgrastim, hormônio de crescimento de hormônio de crescimento humano (hGH), somatropina ,hormônio crescimento de liberação de hormônio (GHRH), GRO-beta, GRO-beta anticorpo, proteínas de estrutura central morfogênica tal como estrutura central morfogênica de proteína-2, estrutura central morfogênica de proteína-6, paratireóide hormônio, paratireóide hormônio relatado peptídeo, OP-1; fator de crescimento fibroblástico ácido, fator de crescimento fibroblastico básico, Fator de crescimento fibroblástico 21, CD-40 ligante, heparina, albumina de soro humano, heparina de peso molecular baixo (LMWH), interferon alfa, interferon beta, interferon gama, interferon omega, interferon tau, consensus interferon, humano lisil oxidase-like-2 (LOXL2); interleucinaas e interleucinaa receptores tal como interleucina-1 receptor, interleucina-2, interleucina-2 fusão proteínas, interleucina-1 receptor antagonista, interleucina-3, interleucina-4, interleucina-4 receptor, interleucina-6, interleucina-8, interleucina-12, interleucina-17, interleucina-21, interleucina-23, p40, interleucina-13 receptor, interleucina-17 receptor; lactoferrina e fragmentos de lactoferrina, hormônio luteinizante hormônio de liberação (LHRH), insulina, pró-insulina, insulina análogos, leptina, grelina, amilina, C-peptídeo, somatostatina, somatostatina análogos incluindo octreotide, vasopressina, hormônio folículo estimulante (FSH), imiglucerase, vacina influenza, insulina-like fator de crescimento (IGF), insulinatropina, macrofago colônia fator de estimulação (M-CSF), plasminogênio ativadores tal como alteplase, uroquinase, reteplase, estreptoquinase, pamiteplase, lanoteplase, e teneteplase; fator de crescimento de nervo (NGF), osteoprotegerina, platelet-derivado fator de crescimento, fator de crescimentos de tecido, fator de transformação crescimento-1, fator de crescimento vascular endotelial, fator de inibição de leucemia, fator de crescimento de queratina (KGF), fator de crescimento glial (GGF), receptores de Célula T, CD moléculas/antígenos, fator de necrose tumoral (TNF) (exemplo, TNF-α e TNF-β), TNF receptores (exemplo, TNF-α receptor e TNF-β receptor), CTLA4, CTLA4 receptor, monocite quimoatractante proteína-1, fator de crescimentos endotelial, paratireóide hormônio (PTH), glucagon-like peptídeo, somatotropina, timosina alfa 1, rasburicase, timosina alfa 1 IIb/IIIa inibidor, timosina beta 10, timosina beta 9, timosina beta 4, alfa-1 antitripsina, fosfodiesterase (PDE) compostos, VLA-4 (very late antígeno-4), VLA-4 inibidores, bisfosfonados, anticorpo vírus respiratório sincicial, regulador de transmembrana de fibrose cística (CFTR) gene, desoxiribonuclease (Dnase), bactericida/permeabilidade de incremento de proteína (BPI), e anticorpo anti-CMV. Exemplarmente anticorpos monoclonal incluem etanercept (um fusão dimérica de proteína consistindo de porção extracelular de ligante-ligação da humano 75 kD TNF receptor ligado para uma porção Fc de IgG1), abciximab, adalimumab, afelimomab, alemtuzumab, anticorpo para B-lymphocite, atlizumab, basiliximab, bevacizumab, biciromab, bertilimumab, CDP-484, CDP-571, CDP-791, CDP-860, CDP-870, cetuximab, clenoliximab, daclizumab, eculizumab, edrecolomab, efalizumab, epratuzumab, fontolizumab, gavilimomab, gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab tiuxetan, infliximab, inolimomab, queliximab, labetuzumab, lerdelimumab, olizumab, marcador isotópico lym-1, metelimumab, mepolizumab, mitumomab, muromonad-CD3, nebacumab, natalizumab, odulimomab, omalizumab, oregovomab, palivizumab, pemtumomab, pexelizumab, rhuMAb-VEGF, rituximab, satumomab pendetide, sevirumab, siplizumab, tositumomab, I131tositumomab, trastuzumab, tuvirumab, visilizumab, e fragmentos e mimeticas destes. Agentes funcionais também incluem agentes que ligam para estes especialmente identificados polissacarídeo, proteína ou agentes peptídeos bioativos. Em uma concretização, o agente bioativo é uma proteína de fusão. Por exemplo, e sem limitação, o componente bioativo pode ser uma imunoglobulina ou porção de uma imunoglobulina fundida para uma ou mais certas sequências úteis peptídeo. Por exemplo, o agente bioativo pode conter um fragmento de anticorpo Fc. Em uma concretização, o agente bioativo é um CTLA4 proteína de fusão. Por exemplo, o agente bioativo pode ser um Fc-CTLA4 proteína de fusão. Em outra concretização, o agente bioativo é um Fator VIII proteína de fusão. Por exemplo, o agente bioativo pode ser um Fc-Fator VIII proteína de fusão. Em uma particularmente útil concretização, o agente bioativo é uma proteína humana ou polipeptídeo humano, por exemplo, um heterólogo produzido de proteína humano ou polipeptídeo humano. Numerosas proteínas e polipeptídeos são descritos neste documento para qual existe uma correspondente forma humana (isto é, a proteína ou peptídeo é normalmente produzido em células humanas no corpo humano). Por esta razão, em uma concretização, o agente bioativo é a forma humano de cada uma das proteínas e polipeptídeos descritos neste documento para qual existe a forma humana. Exemplos de tais proteínas humana incluem, sem limitação, anticorpos humanos, enzimas humanas, hormônios humanos e citosinas humanas tal como fator de estimulação de colônia de granulócitos, fator de estimulação de colônia de granulócitos e macrófagos, interferons (exemplo, alfa interferons e beta interferons), hormônio de crescimento humano e eritropoetina. Outros exemplos de terapêuticas proteínas que podem servir como agente bioativos incluem, sem limitação, fator VIII, b-domínio deletado fator VIII, fator VIIa, fator IX, anticoagulantes; hirudin, alteplase, tpa, reteplase, tpa, tpa - 3 de 5 domínio deletado, insulina, insulina lispro, insulina asparte, insulina glargine, análogos de insulina de atividade longa, hgh, glucagons, tsh, folitropin-beta, fsh, gm-csf, pdgh, ifn alfa2, ifn alfa2a, ifn alfa2b, inf-apha1, consensus ifn, ifn-beta, ifn-beta 1b, ifn-beta 1a, ifn-gama (exemplo, 1 e 2), ifn-lambda, ifn-delta, il-2, il-11, hbsag, ospa, murino mab direcionado contra t-limfocite antigen, murino mab direcionado contra tag-72, tumor-associados glicoproteína, fab fragmentos derivados de quimérico mab direcionado contra platelet receptor de superfície gpII(b)/III(a), murino mab fragmento direcionado contra tumor-associados antígeno ca125, murino mab fragmento direcionado contra carcinoembrionico antígeno humano, cea, murino mab fragmento direcionado contra humano cardíaco miosina, murino mab fragmento direcionado contra tumor superfície antígeno psma, murino mab fragmentos (fab/fab2 mix) direcionado contra hmw-maa, murino mab fragmento (fab) direcionado contra carcinoma associados antígeno, mab fragmentos (fab) direcionado contra nca 90, a superfície granulocítica não especifica através de reação antígena, quimerica mab direcionado contra cd20 antígeno encontrado sobre superfície de linfócitos b, humanizados mab direcionado contra a cadeia alfa do il2 receptor, quimérico mab direcionado contra a cadeia alfa do il2 receptor, quimérico mab direcionado contra tnf-alfa, humanizado mab direcionado contra um epitope sobre a superfície de vírus respiratório sincicial, humanizado mab direcionado contra her 2, humano epidérmico fator de crescimento receptor 2, humano mab direcionado contra citoqueratina tumor-associados antígeno anti-ctla4, quimérico mab direcionado contra cd 20 superfície antígeno de linfócitos b dornase-alfa dnase, beta glucocerebrosidase, tnf-alfa, il-2-difteria toxina fusão proteína, tnfr-lgg fragmento proteína de fusão laronidase, dnaases, alefacept, darbepoetin alfa (colônia fator de estimulação), tositumomab, murino mab, alemtuzumab, rasburicase, agalsidase beta, teriparatide, paratireóide hormônio derivativos, adalimumab (lgg1), anaquinra, modificado biologicamente, nesiritide, humano b-tipo natriurético peptídeo (hbnp), colônia fator de estimulações, pegvisomant, humano crescimento hormônio receptor antagonista, recombinante de proteína ativada c, omalizumab, imunoglobulin e (lge) bloqueio, lbritumomab tiuxetan, ACTH, glucagon, somatostatina, somatotropina, timosina, hormônio da paratireóide, hormônios pigmentar, somatomedina, eritropoietina, hormônio luteinizante, gonadotrofina coriônica, fatores de liberação do hipotálamo, etanercept, hormônios antidiuréticos, prolactina e hormônio estimulante da tireóide. E qualquer destes podem ser modificados para ter um site específico de ponto de conjugação (um N-terminus, ou C-terminus, ou outras locações) usando natural (por exemplo, uma serina para cisteína substituição) (por exemplo, formilaldeído por método de Redwood Biosciences) ou ácido amino não natural. Exemplos de anticorpos terapêuticos (ou seus respectivos fragmentos de scFv ou Fab) que podem servir como agentes bioativos incluem, mas não são limitados, para HERCEPTINTM (Trastuzumab) (Genentech, CA) que é um humanizado anti-HER2 monoclonal anticorpo para o tratamento de pacientes com câncer metastático de peito; REOPROTM (abciximab) (Centocor) que é um anti-glicoproteína IIb/IIIa receptor sobre as plateletes para a prevenção de formação de coágulo; ZENAPAXTM (daclizumab) (Roche Pharmaceuticals, Switzerland) que é um imunosupressivo, humanizado anti-CD25 monoclonal anticorpo para a prevenção rejeição de aloenxerto de aguda renal; PANOREX™ que é um anticorpo murino anti-l7-IA célula superfície antígeno IgG2a (Glaxo Wellcome/Centocor); BEC2 que é um anticorpo murino anti-idiotipo (GD3 epitope) IgG (ImClone System); IMC-C225 que é um anticorpo quimérico anti-EGFR IgG (ImClone System); VITAXIN™ que é um anticorpo humanizado anti-αVβ3 integrina (Applied Molecular Evolution/MedImmune); Campath; Campath 1H/LDP-03 que é um anticorpo humanizado anti CD52 IgG1 (Leucócitos); Smmateria M195 que é um anticorpo humanizado anti-CD33 IgG (Protein Design Lab/Kanebo); RITUXAN™ que é um anticorpo quimérico anti-CD2O IgG1 (IDEC Pharm/Genentech, Roche/Zettyaku); LYMPHOCIDE™ que é um anticorpo humanizado anti-CD22 IgG (Immunomedics); ICM3 é um anticorpo humanizado anti-ICAM3 (ICOS Pharm); IDEC-114 é um anticorpo primata anti-CD80 (IDEC Pharm/Mitsubishi); ZEVALIN™ é um anticorpo marcador isotópico murino anti-CD20 (IDEC/Schering AG); IDEC-13l é um anticorpo humanizado anti-CD40L (IDEC/Eisai); IDEC-151 é um anticorpo primatizado anti-CD4 (IDEC); IDEC-152 é um anticorpo primatizado anti-CD23 (IDEC/Seikagaku); SMMATÉRIA anti-CD3 é um anticorpo humanizado anti-CD3 IgG (Protein Design Lab); 5G1.l é um anticorpo humanizado fator de anti-complemento 5 (CS) (Alexion Pharm); D2E7 é um humanizado anticorpo anti-TNF-α (CATIBASF); CDP870 é um humanizado fragmento de anti-TNF-α Fab (Celltech); IDEC-151 é um anticorpo primatizado anti-CD4 IgG1 (IDEC Pharm/SmithKline Beecham); MDX-CD4 é um anticorpo humano anti-CD4 IgG (Medarex/Eisai/Genmab); CDP571 é um anticorpo humanizado anti-TNF-α IgG4 (Celltech); LDP-02 é um anticorpo humanizado anti-α4β7 (Leucócitos/Genentech); OrthoClone OKT4A é um anticorpo humanizado anti-CD4 IgG (Ortho Biotech); ANTOVA™ é um anticorpo humanizado anti-CD40L IgG (Biogen); ANTEGREN™ é um anticorpo humanizado anti-VLA-4 IgG (Elan); CAT-152, um anticorpo humano anti-TGF-β2 (Cambridge Ab Tech); Cetuximab (BMS) é um anticorpo monoclonal anti-EGF receptor (EGFr); Bevacizuma (Genentech) é um anticorpo anti-VEGF humano monoclonal; Infliximab (Centocore, JJ) é um anticorpo quimérico (rato e humano) monoclonal usado para tratar autoimune desordens; Gemtuzumab ozogamicin (Wyeth) é um anticorpo monoclonal usado para quimoterapia; e Ranibizumab (Genentech) é um anticorpo quimérico (rato e humano) monoclonal usado para tratar degeneração macular. O espectro de existentes abordagens para criar droga anticorpo conjugadas depende da conjugação de simples toxin-like moléculas juntos com um ligante para um anticorpo geralmente de um a oito sites. O contorno da abordagem nesta invenção envolve ligação de um ligante copolímero aleatório para a imunoglobulina via a clivável ou non-clivável ligante químico. O copolímero é designado para ter múltiplas copias d porção de molécula pequena bioativa ligada estequiometriamente via ligante clivável (incluindo auto imolativo) ou não clivável químico. Por causa da adicional flexibilidade inerente na invenção, mais que um tipo de poção bioativa e muito mais copias de cada porção bioativa pode ser incluída via conjugação ou ligação para polímero comonômero, por exemplo 10, 20, 50, 100, 250, ou 500. A habilidade para incluir muitos mais permite alargar a perspectiva de droga de anticorpo conjugados além de toxins para incluir outras drogas de molécula pequena com sinergética biologias (não limitando, exemplos incluem inibidores panitumumab e kras; inibidores adalimumab e p38 ou JAK; inibidores bevacizumab e cMet). O resultado é distribuição de alvo, entrega focada, droga construída de liberação cinética que diminui efeitos colaterais. Além disso, a ligação de bioativos de molécula pequena para a estrutura central do polímero comonômero libera bioativos com pouca absorção oral, distribuição, metabolismo e/ou eliminação ou outros desvantagens. Tudo em, o resultado é uma mudança passo na eficácia duvido para multifuncionalidades, baixo Cmax, aumento da carga da droga, mais outros benefícios. Importante, esta abordagem para criar combinações terapêuticas com os diferentes agente bioativos ligados para um núcleo comum do polímero ou resulta scaffold no efeito local no tecido terapêutico que pode ser sinergético e que pode substancialmente aumentar a eficácia enquanto diminui a toxicidade. Os anticorpos da presente invenção podem também serem ligados para um agente terapêutico descrito dentro ou conhecido na matéria para formar um droga de anticorpo conjugada (ADC). Terapêuticos alvo provêem muitas vantagens sobre tecnologias existentes, incluindo redução de não específica toxicidade e aumento da eficácia. A segmentação de propriedades de anticorpos, tal como anticorpos monoclonal (mABs) e fragmentos mAB (scFv e FAb'), capacita a entrega de um agente terapêutica potente que é acoplado para o mAB. O agente terapêutico pode ser qualquer droga útil, proteína, peptídeo, ou radionuclídeos. Droga de anticorpo conjugado útil em combinação com o copolímero aleatório da presente invenção são descritos em, por exemplo, Patente U.S. Nos. 7,745,394 (Seattle Genetics), 7,695,716 (Seattle Genetics), 7,662, 387 (Seattle Genetics), 7,514, 080 (ImmunoGen), 7,491,390 (Seattle Genetics), 7,501,120 (ImmunoGen), 7,494,649 (ImmunoGen), e 7,374,762 (ImmunoGen). Proteínas, Peptídeos e Ácidos Amino Proteínas e peptídeos para uso como agentes bioativos como descritos neste documento podem ser produzidos por qualquer método útil incluindo produção por síntese in vitro e por produção em sistemas de biologia. Exemplos típicos de métodos de síntese in vitro que são bem conhecidas na matéria incluem síntese de fase sólida (solid-phase síntese - "SPPS”) e condensação de fragmento de fase sólida (solid-phase fragmento condensation - “SPFC”). Sistemas biológicos usados para a produção de proteínas são também bem conhecidos na matéria. Bactéria (exemplo, E coli e Bacillus sp.) e fermento (exemplo, Saccharomyces cerevisiae e Pichia pastoris) são largamente usados para a produção de proteínas heteróloga. Em adição, expressão de gene heterólogo para a produção de agentes bioativos para uso como descritas neste documento pode ser realizado usando linha de célula animal tal como linha de célula mamífera (exemplo, células CHO). Em uma particularmente útil concretização, os agentes bioativos são produzido em animais transgênico ou clonado tal como vacas, ovelha, cabras e pássaros (exemplo, galinha, codorniz, patos e peru), cada um como é entendido na matéria. Ver, por exemplo, Patente US No. 6,781,030, depositada em 24 de agosto de 2004, a revelação que é incorporada inteiramente neste documento por referência. Agentes bioativos tal como proteínas produzidas em pássaros domesticados tal como galinhas pode ser referido para como “derivado de aviário” agente bioativos (exemplo, proteína terapêuticas derivada de aviário). Produção de proteína terapêuticas derivada de aviário é conhecida na matéria e é descrita em, por exemplo, Patente US No. 6,730,822, deposita em 4 de maio de 2004, a revelação que é incorporada inteiramente neste documento por referência. Em concretizações onde o agente bioativo é uma proteína ou polipeptídeo, grupos funcionais presente na sequência de ácidos amino da proteína de polipeptídeo pode ser usada para ligar o agente para o copolímero aleatório. Ligações para proteína ou polipeptídeo de agentes bioativos podem ser feita para natural ocorrência de ácidos amino em suas sequência ou para natural ocorrência de ácidos amino que têm ou foi acrescentado para a sequência ou inserida no lugar de outros ácidos amino, por exemplo a troca de uma serina por uma cisteina. Agentes bioativos de proteína ou polipeptídeo podem também compreender ocorrência não natural de ácidos amino em adição para a comum ocorrência natural de ácidos amino encontrado em proteínas e polipeptídeos. Além de estar presente com o propósito de alterar as propriedades de um polipeptídeo ou proteína, ocorrência não natural de ácidos amino pode ser introduzida para prover um grupo funcional que pode ser usado para ligar a proteína ou polipeptídeo diretamente para o copolímero aleatório. Além disso, ocorrência natural de ácidos amino, exemplo, cisteina, tirosina, triptofan pode ser usado neste modo. Ocorrência não natural ácidos amino pode ser introduzida dentro proteínas e peptídeos por uma variedade de meios. Algumas das técnicas para a introdução de ácidos amino não natural são discutidas na Patente US No. 5,162,218, a revelação da qual é incorporada inteiramente neste documento por referencia. Primeiro, ocorrência não natural de ácidos amino pode ser introduzida por modificação química de um polipeptídeo ou proteína sobre a cadeia lateral de ácido amino no ácido amino terminal ou no carboxil terminal. Exemplos de não natural modificação química de uma proteína ou peptídeo pode ser metilação por agentes tal como diazometano, ou a introdução de acetilação em um grupo amino presente na cadeia lateral de lasina ou no amino terminal de um peptídeo ou proteína. Em outros exemplo de grupo amino proteína/polipeptídeo modificação para preparar um ácido amino não natural é o uso de metil 3-mercaptopropionimidate éster ou 2-iminotiolana para introduzir um tiol (sulfhidril, -SH) orientando a funcionalidade ligada para posições em uma proteína ou polipeptídeo orientando uma amina primaria. Uma vez introduzida, tais grupos podem ser empregados para formar um ligante covalente para a proteína ou polipeptídeo. Segundo, ocorrência não natural ácidos amino pode ser introduzida dentro de proteínas e polipeptídeos durante síntese química. Métodos se síntese são tipicamente utilizados para a preparação polipeptídeos tendo menos que cerca de 200 ácidos amino, usualmente tendo menos que cerca de 150 ácidos amino, e mais usualmente tendo 100 ou menos ácidos amino. Proteínas ou polipeptídeos menores tendo menos que cerca de 75 ou menos que cerca de 50 ácidos amino podem ser preparados por síntese química. Os métodos de preparação de síntese que são particularmente conveniente para permitir a inserção de ácidos amino não natural em uma desejada localização são conhecidos na matéria. Adequados métodos de preparação de síntese polipeptídeo podem ser baseados no método de síntese de fase sólida de Merrifield onde ácidos amino são sequencialmente acrescentados para uma cadeia de crescimento ("Merrifield (1963) J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2156"). Sistemas automáticos para sintetização de polipeptídeos por tais técnicas são agora comercialmente disponíveis para fornecimento tal como "Applied Biosystems, Inc., Foster City, Calif. 94404; New Brunswick Scientific, Edison, N.J. 08818; e Pharmacia, Inc., Biotecnologia Group, Piscataway, N.J. 08854". Exemplos de ocorrência de ácidos amino não naturais que podem ser introduzidos durante síntese química de polipeptídeos incluem, mas não são limitados para: D-ácidos amino e misturas de formas D e L da 20 ocorrência natural ácidos amino, N-formil glicina, ornitina, norleucina, hidroxiprolina, beta-alanina, hidroxivalina, norvalina, fenilglicina, ciclohexilalanina, t-butilglicina (ácido t-leucina, 2-amino-3,3-dimetilbutanoic ), hidroxi-t-butilglicina, ácido amino butirico, cicloleucina, 4-hidroxiprolina, ácida piroglutamico (5-oxoprolina), azetidina ácido carboxílico, ácido pipecolinico, indoline-2-ácido carboxílico, tetrahidro-3-isoquinolina ácido carboxílico, 2,4-diaminobutiricacid, ácido 2,6-diaminopimelic, 2,4-diaminobutiricacid, 2,6-diaminopimelicacid, 2,3-diaminopropionicacid, 5-hidroxilisina, ácido neuraminico, e 3,5-diiodotirosina. Terceiro, ocorrência não natural de ácidos amino pode ser introduzida através de síntese biológica in vivo ou in vitro por inserção de um códon não sensível (exemplo, um amber ou códon ocre ) em uma sequência de DNA (exemplo, o gene) codificação do polipeptídeo no códon correspondente para uma posição onde o ácido amino não natural é para ser inserido. Tais técnicas são discutida por exemplo nas Patentes US No.: 5,162,218 e 6,964,859, as revelações das quais são incorporadas inteiramente neste documento por referencia. Uma variedade de métodos podem ser usados para inserir o códon mutante incluindo oligonucleotídeo direcionado metagêneses. A sequência alterada é subsequentemente transcrita e translata, in vivo ou in vitro em um sistema que prover um supressor tRNA, direcionado contra o códon sem sentido que foi quimicamente ou enzimaticamente acilatado com a desejada ocorrência não natural de ácido amino. O ácido amino sintético será inserido na correspondente locação para o códon sem sentido. Para a preparação de grande e/ou glocosolatado polipeptídeos, técnicas de preparação recombinante destes tipo são usualmente preferidas. Entre os ácidos amino que podem ser introduzidos deste modo são: formil glicina, fluoroalanina, ácido 2-Amino-3-mercapto-3-metilbutanoico, homocisteina, homoarginina e os semelhantes. Outros similares abordagens para obter não natural ácidos amino em uma proteína incluem métodos de substituição de metionina. Onde a ocorrência não natural de ácidos amino tem uma funcionalidade que é susceptível para modificação seletiva, eles são particularmente útil para formar um ligante covalente para a proteína ou polipeptídeo. Circunstancias onde uma funcionalidade é susceptível para seletiva modificação incluem estes onde a funcionalidade é única ou onde outras funcionalidades que podem reagir sob as condições de interesse são impedidas estereoquimicamente ou de outra maneira.
[0075] Outros anticorpos, tais como anticorpos de domínio simples são proveitosos na presente invenção. Um anticorpo de domínio simples (sdAb, chamado Nanocorpo por Ablynx) é um fragmento de anticorpo consistindo de um simples anticorpo monomérico de domínio variável. Como um anticorpo inteiro, o sdAb é capaz para ligar seletivamente para um antígeno específico. Com um peso molecular de apenas 12-15 kDa, anticorpos de domínio simples são menores que anticorpos inteiro comum(150-160 kDa). Um anticorpo de domínio simples é uma cadeia de peptídeo de cerca de 110 ácidos amino no comprimento, compreendendo uma variedade de domínio (VH) de um anticorpo de cadeia pesada, ou de um IgG comum. Anticorpos inteiro não conhecidos, sdAbs não apresentam sistema complementar de espalhamento de citotoxicidade porque eles não têm uma região de Fc. Camelideos e derivados de peixe sdAbs são capazes para ligar para antígenos ocultos que não são acessíveis para anticorpos inteiro, por exemplo para osites ativo sites de enzimas. Um simples domínio de anticorpo (sdAb) pode ser obtido por imunização de dromedários, camelos, ihamas, alpacas ou tubarões com o desejado antígeno e subsequente isolação o código mRNA para anticorpos de cadeia pesada. Alternativamente eles podem ser feito pela biblioteca sintética de penetração. Camelideoss são membros da família biológica Camelidae, a única família viva no suborder Tylopoda. Camelos, dromedários, Camelos Bactrian, ihamas, alpacas, vicunhas, e guanacos estão neste grupo. Peptídeos úteis na presente invenção também incluem, mas não são limitados para, a peptídeo macrocíclico, um ciclotide, um receptor LDL A-domínio, uma proteína scaffold (como revelada na Patente US Número 60/514,391, incorporada inteiramente neste documento), um receptor solúvel, uma enzima, um peptídeo multimer, um multímero de domínio, um fragmento de anticorpo multímero, e uma proteína fusão. Drogas Em outra concretização, os agente bioativos podem também ser selecionados de especialmente identificadas drogas ou agentes terapêuticos, incluindo mas não limitado: tacrina, memantina, rivastigmina, galantamina, donepezil, levetiracetam, repaglinida, atorvastatina, alefacept, tadalafil, vardenafil, sildenafil, fosamprenavir, oseltamivir, valaciclovir e valganciclovir, abarelix, adefovir, alfuzosin, alosetron, amifostine, amiodarone, aminocaproic acid, aminohipurato sódio, aminoglutethimide, aminolevulinic acid, aminosalicylic acid, amlodipine, amsacrina, anagrelida, anastrozola, aprepitant, aripiprazola, asparaginasa, atazanavir, atomoxetina, anthraciclinas, bexarotena, bicalutamida, bleomicin, bortezomib, buserelin, busulfan, cabergolina, capecitabina, carboplatin, carmustine, chlorambucin, cilastatin sódio, cisplatin, cladribine, clodronate, ciclophosphamida, cyproterona, citarabina, camptothecins, 13-cis ácido retinóico, todos os ácidos retinóico trans; dacarbazina, dactinomicin, daptomicin, daunorubicin, deferoxamine, dexametasone, diclofenac, dietilstilbestrol, docetaxel, doxorubicin, dutasteride, eletriptan, emtricitabina, enfuvirtide, eplerenone, epirubicin, estramustina, etinil estradiol, etoposida, exemestana, ezetimiba, fentanil, fexofenadine, fludarabina, fludrocortisona, fluorouracil, fluoximesterone, flutarnida, fluticazona, fondaparinux, fulvestrant, gama-hidroxibutirato, gefitinib, gemcitabina, epinefrina, L-Dopa, hidroxiurea, icodextrin, idarubicin, ifosfamida, imatinib, irinotecan, itraconazole, goserelin, laronidase, lansoprazole, letrozole, leucovorin, levamisole, lisinopril, lovothiroxine sódio, lomustine, mechloretamina, medroxiprogesterone, megestrol, melphalan, memantina, mercaptopurina, mequinol, metaraminol bitartrato, metotrexato, metoclopramida, mexiletina, miglustat, mitomicin, mitotano, mitoxantrona, modafinil, naloxone, naproxen, nevirapine, nicotine, nilutamida, nitazoxanide, nitisinone, noretindrone, octreotide, oxaliplatin, palonosetron, pamidronate, pemetrexed, pergolide, pentostatin, pilcamicin, porfimer, prednisone, procarbazine, prochlorperazine, ondansetron, palonosetron, oxaliplatin, raltitrexed, rosuvastatin, sirolimus, streptozocin, pimecrolimus, sertaconazole, tacrolimus, tamoxifen, tegaserod, temozolomide, teniposide, testosterone, tetrahidrocannabinol, thalidomide, thioguanine, tiotepa, tiotropium, topiramate, topotecan, treprostinil, tretinoin, valdecoxib, celecoxib, rofecoxib, valrubicin, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, voriconazole, dolasetron, granisetron, formoterol, fluticasone, leuprolide, midazolam, alprazolam, amphotericin B, podophilotoxins, nucleoside antivirals, aroil hidrazones, sumatriptan, eletriptan; macrolides tal como eritromicin, oleandomicin, troleandomicin, roxithromicin, clarithromicin, davercin, azithromicin, flurithromicin, dirithromicin, josamicin, spiromicin, midecamicin, loratadine, desloratadine, leucomicin, miocamicin, rokitamicin, andazithromicin, e swinolide A; fluoroquinolones tal como ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, trovafloxacin, alatrofloxacin, moxifloxicin, norfloxacin, enoxacin, gatifloxacin, gemifloxacin, grepafloxacin, lomefloxacin, sparfloxacin, temafloxacin, pefloxacin, amifloxacin, fleroxacin, tosufloxacin, prulifloxacin, irloxacin, pazufloxacin, clinafloxacin, e sitafloxacin; aminoglicosides tais como gentamicin, netilmicin, paramecin, tobramicin, amikacin, kanamicin, neomicin, e streptomicin, vancomicin, teicoplanin, rampolanin, mideplanin, colistin, daptomicin, gramicidin, colistimetate; polimixins tal como polimixin B, capreomicin, bacitracin, penems; penicillins incluindo penicllinase-sensitive agentes like penicillin G, penicilin V; penicilinase-resistant agentes como meticilin, oxacilin, cloxacilin, dicloxacilin, floxacilin, nafcilin; gram negativo agente de microorganismo ativos como ampicilin, amoxicilin, e hetacilin, cilin, e galampicilin; antipseudomonal penicillins like carbenicillin, ticarcilin, azlocillin, mezlocilin, e piperacilin; cephalosporins like cefpodoxime, cefprozil, ceftbuten, ceftizoxime, ceftriaxone, cephalothin, cephapirin, cephalexin, cephradrine, cefoxitin, cefamandole, cefazolin, cealoridin, cefaclor, cefadroxil, cephaloglcin, cefuroxime, ceforanide, cefotaxime, cefatrizine, cephacetrile, cefepime, cefixime, cefonicid, cefoperazone, cefotetan, cefmetazole, ceftazidime, loracarbef, e moxalactam, monobactams like aztreonam; e carbapenems tal como imipenem, meropenem, e ertapenem, pentamidine isetionate, albuterol sulfate, lidocaine, metaproterenol sulfate, beclometasone diprepionate, triamcinolone acetamida, budesonide acetonide, salmeterol, ipratropium bromide, flunisolide, cromolyn sódio, e ergotamine tartrate; taxanes tais como paclitaxel; SN-38, e tirphostines. Agentes bioativos podem também ser selecionado do grupo consistindo de sódio de aminohipurato, amfotericin B, doxorubicin, ácido aminocapróico, ácido aminolevulinico, ácido arninosalicíclico, metaraminol bitartrato, pamidronato disódio, daunorubicin, levotiroxina sódio, lisinopril, cilastatin sódio, mexiletine, cephalexin, deferoxamine, e amifostine em outras concretização. Outros agentes bioativos útil na presente invenção incluem matriz extracelular de agentes alvo, porções de transporte funcional e agentes de marcação. Matriz extracelular de agentes de segmentação incluem, mas não são limitados para, porções de ligação heparina, matriz de metaloproteínase de porções de ligação, domínios de ligação de lisil oxidase, porções negativamente carregadas ou porções positivamente carregadas e ácido hialurónico. Porções de funcional transportador incluem, mas não são limitados para, porções de transporte de barreira de sangue de cérebro, porções de transporte porções intracelular, porções de transporte organela, domínios de transporte epitelial e porções de segmentação de tumor(folato, outros). Em alguma concretizações, os agentes de segmentação úteis na presente invenção tem como alvo anti-TrkA, anti A-beta (peptídeo 1-40, peptídeo 1-42, forma monomerica, forma oligomerica), anti-IGF1-4, agonista RANK-L, anti-ApoE4 ou anti-ApoA1, entre outros. Agentes de Diagnóstico Agentes de Diagnóstico úteis no copolímero aleatório da presente invenção incluem agentes de imagem e agentes de detecção tais como marcadores isotópico, fluoróforo, tintura e agentes de contraste. Agente imagem refere-se para uma marca que é ligada para o copolímero aleatório da presente invenção para imagem de um tumor, órgão, ou tecido em um sujeito. A porção de imagem pode ser ligada covalentemente ou não covalente para o copolímero aleatório. Exemplos de porções de imagem adequados para uso na presente invenção incluem, sem limitação, radionuclídeos, fluoróforo tal como fluoresceina, rodamina, Texas Red, Cy2, Cy3, Cy5, Cy5.5, e o AlexaFluor (Invitrogen, Carlsbad, CA) intervalo de fluoróforo, anticorpos, gadolinium, gold, nanomatérials, horseradish peroxidasa, alcalina fosfatase, derivativos destes, e misturas destes. Marcador isotópico refere-se para um nuclídeo que exibe radioatividade. Um "nuclídeo" refere-se para um tipo de átomo especificado por seu número atômico, massa atômica, e estado de energia, tal como carbono 14 (14C). "Radioatividade" refere-se para a radiação, incluindo partículas alfa, partículas beta, núcleos, elétrons, pósitrons, neutrinos, e raios gama, emitidos por uma substância radioativa. Radionuclídeos adequado para uso na presente invenção incluem, mas não são limitados para, fluorina 18 (18F), fósforos 32 (32P), scandium 47 (47Sc), cobalto 55 (55Co), cobre 60 (60Cu), cobre 61 (61Cu), cobre 62 (62Cu), cobre 64 (64Cu), gallium 66 (66Ga), cobre 67 (67Cu), gallium 67 (67Ga), gallium 68 (68Ga), rubidium 82 (82Rb), yttrium 86 (86Y), itrium 87 (87Y), estrontium 89 (89Sr), itrium 90 (90Y), rodium 105 (105Rh), prata 111 (111Ag), indium 111 (111In), iodina 124 (124I), iodina 125 (125I), iodina 131 (131I), tin 117m (117mSn), tecnetium 99m (99mTc), prometium 149 (149Pm), samarium 153 (153Sm), holmium 166 (166Ho), lutetium 177 (177Lu), renium 186 (186Re), renium 188 (188Re), talium 201 (201Tl), astatina 211 (211At), e bismuth 212 (212Bi). Como usado neste documento, o "m" em 117mSn e 99mTc padrões para estado meta. Adicionalmente, naturalmente ocorrem elementos radioativos tal como urânio, radio, e tório, que tipicamente representa misturas de radioisótopos, são adequados exemplos de radionuclídeos emitindo gama. 67Cu, 131I, 177Lu, e 186Re são beta- e radionuclídeos. 212Bi é um alfa- e emitindo beta radionuclídeo. 211At é um radionuclídeo emitindo alfa. 32P, 47Sc, 89Sr, 90Y, 105 111 117m 149 153 166 188 Rh, Ag, mSn, Pm, Sm, Ho, e Re são exemplos de radionuclídeos emitindo beta. 67Ga, 111In, 99mTc, e 201Tl são exemplos de emitindo gama 55 60 61 62 66 68 82 radionuclídeos. Co, Cu, Cu, Cu, Ga, Ga, Rb, e 86Y são exemplos de radionuclídeos emitindo pósitron. 64Cu é um beta- e radionuclídeo emitindo pósitron. Agentes de imagem e detecção podem também serem designados dentro do copolímero aleatório da invenção através da adição de isótopos ocorrendo naturalmente tal como deuterium, 13C, ou 15N durante a síntese do iniciador, ligantes, grupo de ligações, comonômero. Nanopartículas Os agentes funcionais podem também incluírem nanopartículas. Nanopartículas útil na presente invenção incluem partículas tendo um tamanho no intervalo de 1 a 1000 nm. Nanopartículas podem ser gotas, partículas metálicas ou pode em alguma casos serem micelas e em alguns outros ser liposomas. Outros nanopartículas incluem carbono nanotubes, quantum dots e colloidal gold. Nanopartículas podem ser empacotadas com agentes de diagnóstico e/ou terapêutica. Os experientes na matéria também reconheceram que a invenção pode ser usada para permitir detecção coincidente de mais que um agente de uma mesma ou diferentes tipos. Também, o uso de ligante de química flexível pode também ser usado para presenciar a perda de uma marca fluorescente, por exemplo como a molécula é colocada dentro da célula e dentro de um ambiente de pH baixo. Em alguma concretizações, o copolímero aleatório possui a seguinte fórmula:
Figure img0070
caracterizada por: subscritos Mn da porção do polímero ser ser um anticorpo; e L-CTP ter
Figure img0071
Em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0072
caracterizada por: subscritos x, y1a e y1b serem tal que o Mn da porção do polímero ser cerca de 107.100g/mol; A1 ser um anticorpo; e L-CTP ser como definido acima. Ainda em outras concretizações, caracterizada por: subscritos x e y1 serem tal que o Mn da porção do polímero ser cerca de 95.000g/mol; A1 ser um IgG; e L-CTP ser como definido acima. Ainda em outras concretizações, o copolímero aleatório tem a fórmula:
Figure img0073
Em algumas concretizações, cada um dos A1 e A2 é independentemente um anticorpo, um fragmento de anticorpo, um Fab, IgG, um peptídeo, uma proteína, uma enzima , um oligonucleotídeo, um polinucleotídeo, ácidos nucleíco, ou um anticorpo de droga conjugada (ADC). Em algumas concretizações, A1 é independentemente selecionado de um anticorpo, um fragmento de anticorpo, um Fab, um scFv, um domínio de imunoglobulina, um IgG, e A2 ser independentemente selecionado de um agente anti câncer, uma toxina, uma droga de molécula pequena, um agente de quimioterapia, um inibidor quinase, um agente anti inflamatório, e um agente antifibrótico. Em algumas concretizações, R1 é LG1, e L2-A2 é independentemente selecionado de um agente anti câncer, uma toxina, uma droga de molécula pequena, um agente de quimioterapia, um inibidor quinase, um agente anti inflamatório, e um agente anti fibrótico. Preparação de Copolímeros aleatórios contendo Zwitterion Os copolímeros aleatórios da presente invenção podem ser preparado por qualquer meio conhecido na matéria. Em algumas concretizações, a presente invenção prover um processo para preparação de um copolímero aleatório da presente invenção, o processo inclui o passo de contactar uma mistura de um primeiro monômero e um segundo monômero com um iniciador, I1, sob condições suficientes para preparar um copolímero aleatório via polimerização de radical livre, caracterizado por: o primeiro monômero compreender um fosforilcolina, e cada um dos segundo monômero ser iniciador independentemente compreendendo pelo menos um dos agente funcional ou um grupo de ligação para ligação para o agente funcional. A mistura para preparação do copolímero aleatório da presente invenção pode incluir uma variedade de outros componentes. Por exemplo, a mistura pode também incluir catalisador, ligante, solvente, e outros aditivos. Em algumas concretizações, a mistura também inclui um catalisador e um ligante. Adequados catalisadores e ligantes são descritos em mais detalhes abaixo. A mistura para preparação do copolímero aleatório da presente invenção pode ser preparado usando um processo semi continuo para controlar a estrutura do polímero quando a razão de reatividade dos monômero são diferentes de modo a permitir o polímero final para ser um copolímero, a copolímero periódico alternativo, um copolímero de gradiente, um copolímero de bloqueio ou copolímero estatístico. Qualquer adequado monômero pode ser usado no processo da presente invenção, tal como estes descritos acima. Os copolímeros aleatórios da presente invenção podem ser preparados por qualquer método adequado de polimerização, tal como por polimerização de radical vivo. Polimerização de radical vivo, discutido por "by Odian, G. in Principles de Polimerization, 4th , Wiley-Interscience John Wiley & Sons: New York, 2004", e aplicado para polímeros zwiteriônico por exemplo na Patente US 6,852,816. Vários diferentes metodologia de polimerização de radical vivo podem ser empregadas, incluindo polimerização de radical livre estável "Stable Free Radical Polymerization" - FRP"), Transferência de Adição de Fragmento de Radical Radical "Addition-Fragmentation Transfer" - RAFT) e Polimerização de Nitroxida Mediadora "Nitroxide- Mediated Polimerization" - NMP). Em adição, Polimerização de Transferência de Átomo de RAdical "Atom Transfer Radical Polimerization" - TRP), provêem um método conveniente para a preparação do copolímero aleatório da invenção. A preparação de polímeros via ATRP envolve a polimerização de radical de monômero iniciando com um iniciador referência um ou mais halógenos. O iniciador halogenado é ativado por um catalisador (ou uma mistura de catalisadores quando CuBr2 é empregado) tal como um metal de transição de sal (CuBr) que pode ser solubilidade para um ligante (exemplo, bipiridina ou PMDETA). Polimerização RAFT usa compostos de tiocarboniltio, tal como ditioésteres, ditiocarbamatos, tritiocarbonatos, e xantates, para mediar o processo de polimerização via um processo de transferência reversível de cadeia. Outros processos de radical “vivos” ou controlados úteis na preparação do inventivo copolímeros aleatórios incluem NMP. Iniciadores Iniciadores úteis para a preparação do copolímero aleatório da presente invenção incluem qualquer iniciador adequado para polimerização via polimerização de transferência de átomo de radical (ATRP), tal como estes descritos acima. Outros úteis iniciadores incluem estes para polimerização de radical mediada de nitroxido (NMP), ou polimerização reversível de adição de fragmentação de terminal (RAFT ou MADIX). Ainda outras técnicas para controlar processo de polimerização de radical livre podem ser usadas, tal como o uso de iniferteres, degenerativos transfer ou processo de telomerização. Além disso, os iniciadores úteis na presente invenção incluem estes tendo pelo menos um ponto de ramificação, tal como estes descritos acima. Copolímeros Rondon da presente invenção tendo arquiteturas complexas incluindo compostos ramificados tendo polímero de múltiplos braços incluindo mas não limitado para, estruturas de partida e combinadas. arquiteturas combinadas podem ser alcançadas empregando iniciadores linear orientando três ou mais átomos halógenos, preferencialmente os halógenos são átomo de clorina, bromina, ou iodina, mais preferencialmente os átomos halógenos são átomo de clorina, bromina. Arquiteturas de partida podem também serem preparadas empregando compostos orientando halógenos múltiplos sobre um átomo simples de carbono ou moléculas cíclica orientando múltiplos halógenos. Em algumas concretizações compostos tendo arquiteturas de partida tendo polímero de 3 braços e em outros concretizações eles têm polímeros de 4 braços. Ver iniciadores descritos acima. Catalisador e ligantes O Catalisador para uso em ATRP ou polimerizações de transferência de grupo de radical pode incluir adequado sais de Cu1+, Cu2+, Fe2+, Fe3+, Ru2+, Ru3+, Cr2+ Cr3+ Mo2+ Mo 3+ W2+ W3+ Mn2+ Mn2+ Mn4+ Rh3+ r , r , o , o. , , , n , n , n , , 4+ 2+ 3+ 1+ 2+ 3+ 2+ 3+ 1+ 2+ Rh , Re , Re , Co , Co. , Co , V , V , Zn. , Zn , Ni2+, Ni3+, Au1+, Au2+, Ag1+ e Ag2+. Sais adequados incluem, mas não são limitados para: halógeno, sias de C1 - C6 -alcoxi, sulfatos, fosfato, triflato, hexafluorofosfato, metanosulfonato, arilsulfonato. Em alguma concretizações o catalisador é um dos sais de cloreto, bromida dos acima citados de íons de metal. Em outras concretizações o catalisador é CuBr, CuCl ou RuCl2. Em alguma concretizações, o uso de um ou mais ligantes para solubilizar o catalisadores de metal de transição é desejáveis. Ligantes adequados são proveitosamente usados em combinação com uma variedade de catalisadores de metal de transição incluindo onde cloreto de cobre ou bromido, ou rutênio cloreto rutênio de transição de sais metais são parte do catalisador. A escolha de um ligante afeta a função do catalisador como ligantes não só auxilia solubilizar a transição de catalisadores de metal em reação orgânica em mídia de reação, mas também ajusta seus potenciais redox. A seleção de um ligante é também baseada na solubilidade e separabilidade do catalisador da mistura do produto. Onde polimerização é para ser transportada em uma fase líquida ligantes/catalisadores solúveis são geralmente desejáveis embora catalisadores imobilizados possam ser empregados. Ligantes adequados incluem estes grupos piridil (incluindo alcil piridinas exemplo, 4.4. dialcil-2,2’ bipiridinas) e grupos piridil conduzindo um alcil substituindo grupo imino, onde presente, mais longos provêem solubilidade em misturas de monômero menos polares e solvente media. Trifenil fosfinas e outros fósforos ligantes, em adição para ligante de indanil, ou ciclopentadienil, podem também serem empregados com catalisadores de transição de metal (exemplo, Ru+2-halide ou Fe+2-halide complexos com trifenilfosfina, indanil ou ciclopentadienil ligantes). Uma quantidade aproximadamente estequiométrica de composto de metal e ligante no catalisador, baseado na razão molar dos compostos quando o íon metal é completamente complexado, é empregada em algumas concretizações. Em outras concretizações a razão entre metal composto e ligante é no intervalo de 1:(0,5 a 2) ou no intervalo 1:(0,8 a 1,25). Geralmente, onde o catalisador é cobre, ligantes bidentado ou multidentado de nitrogênio produzem mais catalisadores ativos. Em adição, ligante em ponte ou cíclico e poliamidas alifáticas ramificadas provêem mais catalisadores ativo que ligantes linear simples. Onde bromina é o contador de íon, ligante bidentado ou meio tetradentado são necessários para Cu+1. Onde contador de íons mais complexos são empregado, tal como ligantes triflato ou hexafluorofosfato, dois bidentado ou um tetradentado podem ser empregados. A adição de cobre metálico pode ser vantajoso em algumas concretizações particularmente onde polimerização rápida é desejada como cobre metálico e Cu+2 pode suportar reação redox para formar Cu+1. A adição de algum Cu+2 no começo de algumas reações ATRP pode ser empregado para diminuir a quantidade de terminação normal. Em algumas concretizações, a quantidade de catalisador empregado na reações de polimerização é o equivalente molar do iniciador que está presente. Desde que catalisador não seja consumido na reação, embora, não seja essencial para incluir uma quantidade de catalisador tal alto como de iniciador. A razão de catalisador para cada halógeno contido no iniciador, baseado na transição de composto metal em algumas concretizações é de cerca de 1:(1 a 50), em outras concretizações de cerca de 1:(1 para 10), em outras concretizações de cerca de 1:(1 a 5), e em outras concretizações de 1:1. Condições de Polimerização Em algumas concretizações, o radical “living” ou controlado do processo de polimerização da invenção é preferencialmente conduzido para alcançar um grau de polimerização no intervalo de 3 a cerca de 2000, e em outras concretizações de cerca de 5 a cerca de 500. o grau de polimerização em outras concretizações é no intervalo 10 a 100, ou alternativamente no intervalo de cerca de 10 a cerca de 50. O grau de polimerização no grupo ou átomo transferência de técnicas de polimerização de radical, é diretamente relatada para a razão inicial de iniciador para monômero. Por esta razão, em algumas concretizações o razão inicial de iniciador para monômero são no intervalo de 1:(3 a cerca de 2.000) ou cerca de 1:(5 a 500), ou cerca de 1:(10 a 100), ou cerca de 1:(10 a 50). Reações de polimerização são tipicamente conduzidas na fase líquida, empregando uma solução simples de homogêneos. A reação pode, embora, seja heterogêneos compreender uma fase sólida e uma fase líquida (exemplo, a suspensão ou emulsão aquosa). A reação pode proceder no estado sólido onde o polímero é ligado para uma superfície plana (wafer) ou uma superfície não plana (beads). Nestas concretizações onde um solvente não polimerizado é empregado, o solvente empregada é selecionado escolhendo dentro de considerações na natureza do zwiteriônico monômero, o iniciador, o catalisador e seus ligantes; e em adição, qualquer comonômero que pode ser empregado. O solvente pode compreender um composto simples ou uma mistura de compostos. Em algumas concretizações o solvente é água, e em outras concretizações a água é presente em uma quantidade de cerca de 10% a cerca de 100% por peso, baseado no peso do monômero presente na reação. Nestas concretizações um comonômero insolúvel em água é para ser polimerizado com um monômero zwiteriônico, pode ser desejável para empregar um solvente ou co-solvente (em conjunção com água) que permita solubilização de todos os monômero presentes. Solventes orgânicos adequados incluem, sem limitação, formamidas (exemplo, N,N’- dimetilformamida), éteres (exemplo, tetrahidrofuran), ésteres (etil acetato) e, mais preferencialmente, alcoóis. Em algumas concretizações onde uma mistura de água e solvente orgânico é para ser empregado, C1-C4 miscível em água alcil alcoóis (metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, e tertbutanol) são proveitosos solventes orgânicos. Em outros concretizações, combinações água e metanol são adequadas para conduzir reações de polimerização. A reação pode também ser conduzida em solventes supercríticos tal como CO2. Como notado acima, em algumas concretizações é desejável para incluir água na mistura de polimerização em uma quantidade de cerca de 10% a cerca de 100% por peso baseado no peso do monômero para ser polimerizado. Em outras concretizações o total de solvente não polimerizavel é de cerca de 1% a cerca de 500% por peso, baseado no peso do monômero presente na mistura da reação. Em outras concretizações, o total de solvente não polimerizável é de cerca de 10% a cerca de 500% por peso ou alternativamente de 20% para 400%, baseado no peso do monômero presente na mistura da reação. É também desejável em alguns casos para manipular a solubilidade de um reagente de entrada, tal como iniciador ou monômero, por exemplo por modificação da temperatura ou solvente ou outros métodos como para modificar as condições da reação de um modo dinâmico. Em algumas concretizações, o tempo de contato do monômero zwiteriônico e água antes do contato com o iniciador e catalisador são minimizados por formação de um pré mistura compreendendo todos os componentes outros que o monômero zwiteriônico e para ser acrescentado o monômero zwiteriônico para a última pré mistura. As reações de polimerização podem ser conduzidas a qualquer adequada temperatura. Em algumas concretizações a temperatura pode ser de cerca da temperatura ambiente (temperatura da sala) para cerca de 120° C. Em outras concretizações as polimerizações pode ser conduzidas a temperatura elevada da temperatura ambiente no intervalo de cerca de 60° a 80° C. Em outras concretizações a reação é conduzida a temperatura ambiente (temperatura da sala). Em algumas concretizações, os compostos da invenção tem uma polidispersidade (de peso molecular) de menos que 1,5, como julgado por cromatografia de permeação de gel. Em outras concretizações a polidispersidade pode ser no intervalo de 1,2 a 1,4. Um número de procedimentos de trabalho podem ser usados para purificar o polímero de interesse tal como precipitação, fracionamento, reprecipitação, separação de membrana e secagem gelada dos polímeros. Polímero Terminal Não-Halogenatado
[0076] Em algumas concretizações, pode ser desejável para recolocar o halógeno, ou outros radicais eliminador I’, com outras funcionalidade. Uma variedade de reações podem ser empregadas para a conversão do halógeno alifático. Em algumas concretizações, a conversão do halógeno alifático pode incluir reação para preparar um grupo alcil, alcoxi, cicloalcil, aril, heteroaril ou hidroxi. Halógenos podem também ser sujeito para uma reação de eliminação para dar origem para um alceno (ligação dupla). Outros métodos de modificação do halogenatado terminal são descritos em "Matyjaszewski et al. Prog. Polim. Sci. 2001, 26, 337", incorporada por referência inteiramente neste documento. Ligação de Agentes Funcionais A ligação de agentes funcionais para o copolímero aleatório da presente invenção pode ser conduzida empregando condições químicas e reagentes aplicáveis para as reações sendo conduzidas. Exemplares métodos são descritos em "Bioconjugado Techniques, Greg T. Hermanson, Academic Press, 2d ed., 2008" (incorporada inteiramente neste documento). Outros técnicas de bioconjugação são descritas em " Bertozzi et al. Angewandte Chemie 2009, 48, 6974, and Gauthier et al. Chem. Commun. 2008, 2591", cada uma delas incorporadas por referência inteiramente neste documento. Onde, por exemplo, a requerida ligação da formação de um éster ou uma amida, reações de desidratação entre um ácido carboxílico e um álcool ou amina pode empregar um agente de desidratação (exemplo, um carbodiimida tal como diciclohexilcarbodimida, DCC, ou um agente solúvel em água 1-etil-3-(3-dimetillaminopropil)carbodiimida hidrocloreto, EDC). Alternativamente, N-hidroxisuccinimida ésteres (NHS) podem ser empregados para preparar amidas. A reação para preparar amidas empregando NHS ésteres são tipicamente conduzidas perto do pH neutro em fosfato, bicarbonato, borato, HEPES ou outros não amina contendo tampões de 4° a 25° C. Em algumas concretizações, reações empregando EDC como um agente de desidratação, um pH de 4,5-7,5 pode ser empregado; em outras concretizações, um pH de 4,5 a 5 pode ser empregado. Ácido de morfolinoetanoácidosulfônico, MES, é um efetivo reação de tampão de carbodiimida. Grupos tiol podem ser reagido sob uma variedade de condições para preparar diferente produtos. Onde um tiol é reagido com uma maleimida para formar uma ligação tioéter, a reação é tipicamente conduzida a um pH de 6,5-7,5. Excesso de grupos de maleimida pode ser extinto por adição reagente de tiol livre tal como mercaptoetanol. Onde ligações de disulfeto estão presente como uma ligação, eles podem ser preparados por intercambio de tiol-disulfeto entre uma sulfidril presente no grupo bioativo e uma funcionalidade X que é um disulfeto tal como um piridil disulfeto. Reações envolvendo piridil disulfetos podem ser conduzidas a pH 4 - pH 5 e a reação pode ser monitorada a 343 nm para detectar a liberação de piridina-2-tione. Grupos tiol podem também ser reagidos com epoxides em solução aquosa para render hidroxi tioéteres. Um tiol pode também ser reagido a pH estritamente alcalino com um haloacetato tal como iodoacetato para formar uma ligação tioéter. A reação de grupos guanido (exemplo, estes de um arginina em uma proteína ou polipeptídeo de interesse) com um glioxal pode ser conduzida a pH 7,0-8,0. A reação tipicamente procede a 25° C. O derivativo, que contem duas porções fenilglioxal por grupo guanido, é mais estável sob condições de acides média (pH abaixo de 4) quanto a pH neutro ou alcalino, e permite isolação dos materiais ligados. A valores de pH neutro ou alcalino, o ligante decompõem lentamente. Onde um resíduo de arginina da proteína ou polipeptídeo é reagida com um reagente de fenilglioxal, cerca de 80% do ligação será hidrolisada para regenerar o resíduo original de arginina (na ausência de excesso de reagente) em aproximadamente 48 horas a 37° C a cerca de pH 7. Reações de imidoéster com aminas são tipicamente conduzidas a pH de 8-10, e preferencialmente a cerca de pH 10. A ligação de amidina formada da reação de um imidoéster com uma amina reversível, particularmente a pH alta. Haloacetais podem ser reagido com grupos sulfidril sobre um largo intervalo de pH. Para permitir apoiar reações entre resíduos de histidina que podem estar presente, particularmente onde o grupo sulfidril é presente sobre uma proteína ou polipeptídeo, a reação pode ser conduzida a cerca de pH 8,3. Aldeídos podem ser reagidos com aminas sob uma variedade de condições para formar iminas. Onde o aldeído ou a amina é imediatamente adjacente para um grupo aril o produto é uma base Schiff que tende para ser mais estável que onde grupo aril não está presente. Condições para a reação de aminas com aldeídos para formar uma ligação de imina inclui o uso de uma base de pH de cerca de pH 9 a cerca de pH 11 e uma temperatura de cerca de 0° C a temperatura ambiente, por 1 a 24 horas. Alternativamente, onde preferencial ligação para a amina N-terminal de uma proteína é desejada, pHs baixo de cerca de 4-7 pode ser empregado. Tampões incluindo borohidrito e amina terciária contendo tampão são frequentemente empregadas para a preparação de iminas. Onde é desejável iminas conjugadas, que são hidroliticalmente suscetíveis, pode ser reduzida para formar uma ligação amina que não é hidroliticamente suscetível. Redução pode ser conduzida com uma variedade de adequado agentes de redução incluindo sódio borohidreto ou sódio cianoborhidreto. As condições de reação provida acima são entendidas para prover geral orientação para o artesão. O artesão qualificado reconhecerá que as condições da reação podem ser variadas como necessário para promover a ligação do agente funcional para o copolímero aleatório da presente invenção e esta orientação para modificação das reações pode ser obtida de textos padrões na química orgânica. Adicionalmente a orientação pode ser obtida de textos tal como "Wong, S.S., Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking,, (CRC Press 1991)", que discute relatadas reações. Composições A presente invenção inclui e prover para composições farmacêutica compreendendo um ou mais compostos da invenção e um ou mais excipiente aceitável farmaceuticamente. Os compostos da invenção pode estar presente como um sal aceitável farmaceuticamente, pró droga, metabolito, análogo ou derivativo destes, nas composições farmacêutica da invenção. Como usado neste documento, “excipiente aceitável farmaceuticamente” ou “transportador aceitável farmaceuticamente” é entendido para incluir qualquer e todos solventes, meios de dispersão, coberturas, agentes antibacterial e antifungal, isotônico e agentes de retardo de absorção, e os semelhantes, compatíveis com administração farmacêutica. Transportadores farmaceuticamente aceitável para uso e, formulações de copolímero aleatório da presente invenção incluem, mas não são limitados para: transportadores sólidos tal como lactose, terra alba, sucrose, talco, gelatina, agar, pectin, acácia, éstereato de mágnesio, ácido esteárico e os semelhantes; e transportadores líquido tal como xarope, salina, tampões salino de fosfato, água e os semelhantes. Transportadores podem incluir qualquer material de retardo de tempo conhecido na matéria, tal como gliceril monostearate ou gliceril distearato, sozinho ou com uma graxa, etilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, metilmetacrilato ou os semelhantes. Outros preenchedores, excipientes, sabores, e outros aditivos tal como são conhecida na matéria podem também ser incluídos em uma composição farmacêutica de acordo com esta invenção. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativa é bem conhecida na matéria. Exceto insuflar como qualquer convencional meio ou agente é incompatível com o composto ativa, uso destes nas composições da invenção é contemplada. Adicionalmente compostos ativo podem também ser incorporados dentro das composições da presente invenção. As preparações farmacêutica engloba todos os tipos de formulações. Em algumas concretizações eles são parenteral (incluindo subcutâneos, intramuscular, intravenoso, intradermal, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intracranial, intraspinal, intracapsular, e intra-ósseos) formulações adequadas para injeção ou infusão (exemplo, pó ou soluções concentradas que podem ser reconstituída ou diluída como também suspensões e soluções). onde a composição é um sólido que requer reconstituição ou um concentrado que requer diluição com meio líquido, qualquer adequado meio líquido pode ser empregado. Preferidos exemplos de meio líquido incluem, mas não são limitados para, água, salina, tampões salino fosfato, soluções de Ringer, soluções de Hank, soluções de dextrose, e soro de albumina 5% humana. Onde um composto ou composição farmacêutica compreendendo um copolímero aleatório da presente invenção é adequado para tratamento de desordens de célula proliferativa, incluindo mas não limitado para cânceres, o composto ou composição farmacêutica pode ser administrado para um sujeito através de uma variedade de rotas incluindo injeção diretamente dentro dos tumores, do fluxo do sangue, ou cavidades do corpo. Enquanto as composições farmacêuticas podem ser soluções líquida, suspensões, ou pó que podem ser reconstituídos imediatamente antes da administração, eles podem também tomarem outras formas. Em algumas concretizações, as composições farmacêuticas podem ser preparadas como xaropes, poção, bolus, granulados, pastas, suspensões, cremes, bálsamo, tabletes, cápsulas (dura ou mole) sprays, emulsões, micro emulsões, adesivos, supositórios, pó, e os semelhantes. As composições podem também ser preparadas para rotas de administração outras como administração parenteral incluindo, mas não limitado para, topical (incluindo bucal e sublingual), pulmonar, retal, transdermal, transmucosal, oral, ocular, e outros. Em algumas concretizações, as composições farmacêuticas da presente invenção compreendem um ou mais copolímero aleatórios da presente invenção. Outras composições farmacêutica da presente invenção podem compreende um ou mais copolímero aleatório da presente invenção que funciona como biológico ligantes que são específico para um antígeno ou molécula alvo. Tais composições podem compreender um copolímero aleatório da presente invenção, onde os bioagentes ativo são um polipeptídeo que compreende a sequência de ácido amino de um anticorpo, ou um fragmento de anticorpo tal como um fragmento de FAb2 ou FAb’ ou um anticorpo de região variável. Alternativamente, o composto pode ser um copolímero aleatório e o polipeptídeo pode compreender uma sequência de antígeno de ligação de uma cadeia simples de anticorpo. Onde um bioagente ativo está presente em um copolímero aleatório da presente invenção funções como a ligação específica para um antígeno ou molécula alvo molécula, destes compostos podem também ser empregadas como diagnóstico e/ou reagentes de imagem e/ou em ensaios de diagnóstico. A quantidade de um composto em uma composição farmacêutica variará dependendo de vários fatores. Em uma concretização, pode ser uma dose terapeuticamente efetiva que é adequada para ter contida uma dose simples (exemplo, um frasco). Em uma concretização, uma quantidade do composto é uma quantidade adequado para um uso simples da seringa. Em ainda outra concretização, uma quantidade é adequada para dispensadores de multiuso (exemplo, contadores adequado para entrega de gotas das formulações quando usado para entrega de formulações topical). Um artesão experiente será capaz de determinar uma quantidade de um composto que produzirá uma dose terapeuticamente efetiva experimentalmente por repetida administração de incrementados de quantidade de uma composição farmacêutica para alcançar um ponto clinicamente desejável. Geralmente, excipiente farmaceuticamente aceitável estará presente na composição em um quantidade de cerca de 0,01% a cerca de 99,999% por peso, ou cerca de 1% a cerca de 99% por peso. Composições farmacêuticas podem conter de cerca de 5% a cerca de 10%, ou de cerca de 10% a cerca de 20%, ou de cerca de 20% a cerca de 30%, ou de cerca de 30% a cerca de 40%, ou de cerca de 40% a cerca de 50%, ou de cerca de 50% a cerca de 60%, ou de cerca de 60% a cerca de 70%, ou de cerca de 70% a cerca de 80%, ou de cerca de 80% a cerca de 90% excipiente por peso. Outros adequado intervalos de excipientes incluem de cerca de 5% a cerca de 98%, de cerca de cerca de 15 a cerca de 95%, ou de cerca de 20% a cerca de 80% por peso. Excipientes farmaceuticamente aceitável são descritos em uma variedade de fontes bem conhecidas, incluindo mas não limitado para "Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 19th ed., Williams & Williams, (1995) and Kibbe, A. H., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Edition, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., 2000". VI Métodos Os copolímeros aleatórios da presente invenção são proveitosos para tratamento de qualquer estado ou condição da doença. Por combinação de apropriado agentes de segmentação, drogas e proteínas terapêutica, ao lado de um zwiteriônico tal como fosforilcolina, o copolímero aleatório da presente invenção pode ser usado para endereçar com a panóplia de mecanismos providos por qualquer uma doença estado ou condição. Por exemplo, o estado ou condição da doença pode ser agudo ou crônico.
[0077] Estados e condições de doença que podem ser tratados usando o copolímero aleatório da presente invenção incluem, mas não são limitados para, câncer, desordens auto-impune, desordens genéticas, infecções, inflamações, desordens fibróticas e desordens metabólicas. Cânceres que pode ser tratados usando o copolímero aleatório da presente invenção incluem, mas não são limitados para, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de bexiga, câncer de tireóide, câncer de fígado, câncer pleural, câncer pâncreas, câncer cervical, câncer testicular, câncer de colon, câncer anal, câncer ductor biliar, tumores carcinóide gastrointestinal , câncer de esôfago, câncer de bexiga gall, câncer retal, câncer de apêndice, câncer de intestino pequeno, câncer gástrico, câncer renal, câncer de sistema nervoso central, câncer de pele, coriocarcinomas; cânceres cabeça e pescoço, sarcomas osteogenico, fibrosarcoma, neuroblastoma, glioma, melanoma, leucemia, e linfoma. Doenças autoimune que podem ser tratadas usando o copolímero aleatório da presente invenção incluem, mas não são limitadas para, esclerose múltipla, miastenia gravis, doença de Crohn, colite ulcerativa , cirrose biliar primária, diabetes mellitus tipo 1 (diabetes mellitus dependente de insulina ou IDDM), doenças de Grave, anemia autoimune hemolitica, anemia perniciosa, autoimune trombocitopenia, vasculitides tal como granulomatosis de Wegener, doença de Behcet, artrite rhumatoide, lupus sistêmico eritematosu (lupus), escleroderma, esclerose sistêmica, síndrome de Guillain-Barre, fibrose, fibrose hepática, fibrose pós transplante, fibrose pulmonar idiopatica, tiroidite de Hashimoto, espondiloartropatias tal como ancilosing spondilitis, psoriase, dermatite herpetiformqs, doenças inflammatoria de intestino, vulgare de penfigus e vitiligo. Algumas desordens metabólicas tratáveis pelo copolímero aleatório da presente invenção incluem armazenagem de desordens lisosomal, tal como mucopolisaccharidosis IV ou Morquio Sindrome, Activator Deficienci/GM2 Gangliosidosis, Alfa- manosidosis, Aspartilglucosaminuria, doença de armazenamento de colesteril éster, Hexosaminidase A Deficiencia crônica, Cistinose, doença de Danon, doença de Fabry, doença de Farber, Fucosidose, Galactosialidose, Doença de Gaucher, gangliosidose GM1, hipofosfatase, doença I-Célula /Mucolipídeoosis II, Doença de Armazenagem de Infantila Ácido Sialico livre /ISSD, Deficiencia Juvenil de Hexosaminidase A, doença de Krabbe, Leucodistrofia Metacromatica, desordens de Mucopolisacaridoses tal como polidistrofia de Pseudo-Hurler /Mucolipídeoosis IIIA, Sindrome Hurler, Sindrome de Scheie, Sindrome Hurler- Scheie, Hunter, Sindrome de Sanfilippo, Deficiencia Hialuronidase, Maroteaux-Lami, Sindrome de Sly, Mucolipídeoose I/Sialidose, Mucolipídeoose, e Mucolipídeose, deficiencia de Múltiplos sulfatase, Doença de Niemann-Pick, Lipofuscinoses Neuronal Ceroid, doença de Pompe / doença armazenagem de Glicogen tipo II, Picnodisostose, doença de Sandhoff, doença de Schindler, doença de Salla / Doença dem armazenagem de ácido Sialico, doença Tay-Sachs/GM2 gangliosidosis e Wolman. Conjugados da invenção e composições (exemplo, composições farmacêutica) contendo conjugados da invenção podem ser usados para tratar uma variedade de condições. Por exemplo, existem muitas condições para quais o tratamento terapêutico são conhecidos pela habilidades de experientes na matéria na qual agentes funcionais, como descritas neste documento, são empregados. A invenção contempla que os conjugados da invenção (exemplo, fosforilcolina contendo polímeros conjugados para uma variedade de agentes funcionais) e composições contendo os conjugados da invenção podem ser empregados para tratar tais condições e que tais conjugados prover para uma melhora do tratamento terapêutico relativo para um mesma agente funcional não ligado para uma fosforilcolina contendo polímero. Por esta razão, a invenção contempla o tratamento de uma condição conhecida para ser tratada por um certo bioagente ativo para tratamento da condição usando um mesmo certo bioagente ativo conjugado para uma fosforilcolina contendo polímero. Outros aspectos da presente invenção relata para métodos de tratamento de uma condição responsável para um agente biológico compreendendo administrar para um sujeito na necessidade destes uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção ou de uma composição farmaceuticamente aceitável da invenção como descritos acima. Dosagem e administração são ajustadas para prover suficiente níveis do bioagente ativo(s) para manter o efeito desejado. A dosagem apropriada e/ou protocolo de administração para qualquer dado sujeito pode variar dependendo de vários fatores incluindo a severidade do estado da doença, saúde geral do sujeito, idade, peso, e gênero do sujeito, dieta, tempo e freqüência de administração, combinação(s) de droga, reação de sensitividades, e tolerância/resposta para terapia. Quantidade terapeuticamente efetiva para um dada situação pode ser determinada por experimentação de rotina que está dentro da experiência e julgamento do médico. As composições farmacêuticas descritas neste documento pode ser administradas sozinhas. Alternativamente, dois ou mais composições farmacêuticas pode ser administradas seqüencialmente, ou em um cocktail ou combinação contendo dois copolímero aleatórios da presente invenção ou um copolímero aleatório da presente invenção e outros bioagente ativo. Outros usos de bioagentes ativos podem ser encontrados neste documento e em textos de referencia padrão tal como as de "Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, NJ and Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Pergamon Press, Inc., Elmsford, N.Y., (1990)". Os copolímero aleatório da presente invenção são proveitosos para o tratamento, detecção e imagem de uma variedade de estados e condições de doenças. Os copolímeros aleatórios podem ser usados como um agente quimioterápico no tratamento de câncer onde o fragmento iniciador I não é funcionalizado e R2 inclui um agente quimioterápico de câncer A2 que é carregado dentro do copolímero aleatório via click químico ou qualquer adequado conjugação química:
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Adicionalmente agentes de tratamento de câncer usando os copolímeros aleatórios podem incluir um agente de segmentação de uma proteína anti angiogênica tal como um anti-VEGF scFv fragmento A1 conjugado via uma cistina C-terminal para um iniciador maleimida I. O copolímero aleatório pode também incluir um agente quimioterápico de câncer A2a que é ligado para a estrutura central do polímero via uma ligação clivável ou auto imolativa. Além disso, a quimioterapia câncer é carregada dentro dos copolímeros aleatórios via click químico ou qualquer adequado conjugação química. Por exemplo, em sarcoma de Ewing: o agente de segmentação pode ser um fragmento de anticorpo anti- câncer tal como um fragmento de Fab’ ou scFv que liga para um fator de crescimento angiogênico tal como VEGF. Em adição, comonômero de segmentação de osso A2b pode incluir um aspartato ou glutamato rico em peptídeo ou um bisfosfonato. Outros comonômero A2c podem incluir Vincristinea, Doxorubicin, e/ou ciclofosfamida ligada via ligante clivável ou auto imolativo:
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Copolímeros aleatórios para maior eficácia e longo tempo de resistência da terapia para degeneração de macula seca ou úmida podem incluir uma proteína antiinflamatória ou anti-angiogenica tal como anti- VEGF ou anti-IL-6 scFv fragmento A1 conjugado via uma cistina C-terminal para um iniciador maleimida I. O copolímero aleatório preparado pode ser um homopolímero de fosforilcolina ou um copolímero de fosforilcolina ligado estavelmente para a estrutura central do polímero, em combinação com um antiinflamatório de molécula pequena ou um anti- angiogénico de molécula pequena A2 ligado para a estrutura central do polímero via um ligante clivável L2. Alternativamente, o copolímero aleatório pode incluir outros comonômero tendo uma matriz vitreous extracelular de porções de ligação(ácido hialuronico) A2 ligada via um ligante não clivável L2 tal como colina ou um ácido amino carregado positivamente:
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[0078] Copolímeros aleatórios para diagnóstico em tempo real estimado de fardo de tumor e imagem para oncologia pode incluir uma proteína anti tumor associada tal como um anti de Carcino Embrionico Antígeno (CEA) scFv fragmento A1 conjugado via uma cisteina C-terminal cisteina para um iniciador maleimida I. O copolímero aleatório pode incluir fosforilcolina ligada estavelmente e um reagente de imagem A2a tal como uma tintura fluorescente (detecção de sonda fluorescente) ou gadolinio (para completa de recção da imagem do corpo). Adicionalmente comonômero pode ser acrescentado tendo agente quimioterápico de molécula pequena A2b ligado via um ligante clivável L2b para acrescentar um elemento terapêutico. Estas estruturas provêem ambas funções terapêutica e diagnóstica, e são comumente referida para como teranósticos:
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Copolímeros rondom para uso como uma plataforma alvo para terapias de substituição de enzima de osso, especialmente hipofosfatasia, pode incluir recombinante enzima alcalina fosfatase A1 conjugada via iniciador de aldeído modificado I através de um ligante estável L1. O copolímero aleatório pode incluir fosforilcolina ligada estavelmente para o polímero, e um comonômero útil para alcançar via uma ligação estavelmente a porção do osso alvo A2 tal como um aspartato ou glutamat0 rico em sequência de peptídeo ou um bisfosfonato tal que mais que cinco porções de segmentação são presentes (y1 é maior que 5). A1, naturalmente, pode ser qualquer proteína tal como um fator de crescimento, por exemplo hormônio de crescimento humano, e a segmentação peptídeo pode ser qualquer peptídeo adequado para locação do conjugado em qualquer tecido. Estes copolímeros são proveitosos para entrega subcutâneas:
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Outros copolímeros aleatórios são proveitosos como uma plataforma alvo para enzima de terapia de recolocação de osso, especialmente "Morquio Síndrome" (MPS tipo IVÃ). Estes tipos de copolímeros aleatórios incluem um recombinante N-Acetilgalactosamina-6-sulfato enzima sulfatase A1 conjugada via site quimicamente especificado iniciador I através de um ligante clivável L1. O copolímero aleatório pode incluir fosforilcolina ligada estavelmente para o polímero, e um comonômero de segmentação contendo uma porção de segmentação de osso A2 tal como um aspartato ou glutamato rico em sequência de peptídeo ou um bisfosfonato ligado via um ligante não clivável L2, tal que mais que cinco porções de segmentação são presentes. Estes copolímeros são proveitosos para entrega subcutâneas:
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Os copolímeros aleatórios para plataformas alvos para segura, maiores eficiência do tratamento de Artrite Reumatóide podem incluir várias drogas diferentes, incluindo um biofarmacêutico anti-TNFα tal como um fragmento de anticorpo A1 que é ligado para o iniciador I via um ligante não clivável L1, ou um anti-VEGFR2, uma molécula pequena A2a, como um inibidor quinase, e metotrexato A2b, um antineoplástico antimetabolito com propriedades imunosupressoras ambos ligados via ligantes cliváveis L2a e L2b respectivamente:
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Similares copolímeros aleatórios para estes acima podem ser preparados por recolocação do biofarmacêutica anti-TNFα de A1 com uma pequena proteína dual inibidora de domínio tal como um avimer ou um dimer scFv que inibi duas proteínas, por exemplo TNFα e também VEGF, mas sem o inibidor de molécula pequena. Em adição, o metotrexato A2 pode ser substituído por ciclodosdamida:
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Finalmente, um copolímero aleatório como alvo e protetor de RNAi pode ser preparado sem um iniciador funcionalizado I. O copolímero aleatório pode incluir fosforilcolina ligada estavelmente para o polímero, e um comonômero tendo um siRNA A2a ligado para o polímero via uma ligação clivável L2a, e uns outros comonômero tendo um grupo de segmentação de células ou tecido A2b ligados via um ligante não clivável L2b. O siRNA contendo comonômero pode ser preparado usando um monômero tendo um grupo de ligação adequado para click químico ou qualquer adequado conjugação química caracterizada por: o siRNA ser ligado para o grupo de ligação seguinte a polimerização. O comonômero tendo porção de segmentação pode ainda conter a porção de segmentação, ou ligar para a porção de segmentação via um comonômero tendo um grupo de ligação adequado para click químico ou qualquer adequada conjugação químicos via uma química diferente como por ligação do siRNA. O ligante clivável é preferencialmente um ligador sensível a pH. O copolímero aleatório pode ser preparado com uma esteoquimetria alvo de aproximadamente cinco porções de oligonucleotídeo por droga A2c e cinco porções segmentação por droga (tal que a razão de y1a:y1b:y1c é cerca de 5:5:1). Além disso, o fosforilcolina da estrutura central do polímero pode não ser otimizada para vida média, mas para protetor de siRNA em suas jornadas de site de injeção para os tecidos alvos. O siRNA pode ser trocado com microRNA:
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Em adição, o iniciador I pode opcionalmente ser ligado para uma porção bioativa A1 tal como um fragmento de anticorpo para segmentação e terapia:
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Em algumas outras concretizações, a engenharia de novos sistemas de terapêutica multifuncional pode combinar polímeros de fosforilcolina com droga ou gene de agente de segmentação com imagem e/ou sensível capabilidades. Sistemas podem ter pelo menos 3 componentes: (1) uma porção de segmentação ou assinaturas moleculares que podem apontar a entrega para sites específicos, (2) os agentes de imagem/sonda/etiqueta apropriados para visualização ou monitoração dos sistemas, e (3) um ou mais agentes terapêuticos para efetivamente tratar uma particular doença ou desordem. Os seguinte são exemplos de sistemas multifuncionais que contem segmentação, imagem, e porções de droga/gene. Esta lista não é entendida para ser exclusiva de um fosforilcolina contendo sistema de polímero. Sistemas alvos que podem ser ativado por processos internos tal como pH, clivagem de enzima ou estímulo externo tal como próximo da luz, ultra som, calor, ou campo magnético para entrega terapêutica e imagem são também adequados. Primeiro, nossa abordagem conceitualmente pode ser combinada com todos os seguintes: Polímero Sintético Biodegradável baseado em nanopartículas encapsulando um gene terapêutico, um agente de contraste de gadolini para análise de MRI, e funcionalizados com anticorpos para específicados alvos de sites de doença. Liposomes encapsulando drogas de moléculas pequena ou grande, nomeados com 18Fluorine para análise de PET, e funcionalizado com anticorpos para específicos alvos sites de doença. Poliplexos contendo uma molécula siRNA, um agente de contraste de óxido de ferro para análise MRI, e modificados com célula que ligam ligantes e peptídeos de penetração de células para celular alvo e entrega intracelular respectivamente. Quantum de ponto fluorescente intercalados com um molécula de droga para imagem ótica e sensível da entrega e funcionalizado com um RNA aptâmero para específicos alvos de doenças. Nanopartículas inorgânica ou orgânica contendo um antisensível oligonucleotídeo para terapia de gene, a agente de contraste de gadolinium para análise MRI, a fluoroforo para imagem ótica, e modificação de superfície para específicos alvos de doenças. Polimérico sensível a pH nanocompostos com uma molécula de droga que é liberada como uma função de pH, um agente de contraste de óxido de ferro para imagem de MRI, quantum CdTe marcados por imagem ótica, e funcionalizado com anticorpos para específicos alvos da doenças. Nanopartículas DNA aptâmero conjugadas contendo uma droga e um radiotracer tal como 111In para imagem de SPECT e funcionalizado com anticorpos de membrana de doença específica.
[0079] Segundo, os polímeros da presente invenção podem ser especialmente combinados com os acima: Fosdorilcorina baseado de polímero construído contendo um gene terapêutica (bioativa 1), uma gadolinium agente de contraste para análise MRI (funcional 1), e uma pequena proteína (tal como um fragmento de anticorpo) para específicos alvos sites de doença. Agente de Imagem 18Fluorine para análise PET, e funcionalizado com pequena proteína (tal como um fragmento de anticorpo) para específicos alvos sites de doença. Fosdorilcorina polímeros contendo um ou mais moléculas siRNA, um agente de contraste de óxido de ferro para análise MRI, e modificado com célula ligando ligantes e peptídeos de penetração de célula para celular alvo e entrega intracelular respectivamente. Polímeros fosdorilcorina contendo marcação de quantum fluorescente (agente funcional) intercalados com uma molécula de droga (agente funcional) para imagem ótica e entrega sensível e funcionalizado com um aptâmero RNA ou uma proteína pequena (tal como um fragmento de anticorpo ou proteína derivado de scaffold) para específicos alvos de doenças. Polímeros de fosdorilcorina contendo um oligonucleotídeo não sensível para terapia de gene, a gadolinium agente de contraste para análise MRI, um agente de contraste de fluoroforo para imagem ótica, e um agente funcional adicional para segmentação especificada da doenças tal como folato para tumor ou colina para interações eletrostática para segmentação de matriz extracelular. Polímero sensível a pH fosforilcolina com uma molécula de droga que é liberada como uma função de pH, um agente de contraste óxido de ferro para imagem MRI, CdTe, quantum marcado para imagem ótica, e funcionalizado com anticorpos ou outros proteína ou aptâmero para o alvo e tratar específicas doenças. Polímero fosdorilcorina com agente funcional de aptâmero conjugados contendo uma droga e um radio traçados tal como 111In para imagem SPECT e também funcionalizado com anticorpos membrana de doença específica. Exemplos Exemplo 1. Preparação de N-(2-hidroxietil)-exo-3,6- epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida
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A 100-ml frasco de fundo redondo equipado com uma barra de agitação foi carregado com 50 ml etanol e 2.0 gramas de exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalico anidrido. A mistura agitada foi resfriada com um banho de água gelada, e a solução de 0,73 gramas de etanolamina em 20 ml de etanol foi acrescentada em conta gotas over 10 minutos. A reação foi aquecida a refluxo para 4 horas, então refrigerada durante a noite. Filtração e tintura com etanol rendeu 0,73 gramas do produto desejado como um sólido branco cristalino. O filtrado foi concentrado e gelado outra vez para obter uma segundo colheita de cristal. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 2,90 (s, 2H, CH), 3,71 (m, 2H, OCH2), 3,77 (t, J=5.0 Hz, NCH2), 5,29 (t, J=1,0 Hz, 2H, OCH), 6,53 (t, J=1.0 Hz, 2H, CH=CH). Exemplo 2.Preparação de isopropilidene-2,2- bis(hidroximetil)ácido propánico
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Um frasco de fundo redondo de equipado com uma barra de agitação foi carregado com 50 ml de acetona, 13,8 ml de 2,2-dimetoxipropano, 10 gramas de 2,2- bis(hidroximetil)ácido propánico, e 0,71 gramas p- ácido toluenosulfônico monohidrato. A mistura foi agitada por duas horas a temperatura ambiente, então neutralizada com 1 ml de 2M amônia em metanol. O solvente foi evaporado e a mistura dissolvida em diclorometano, então extraída duas vezes com 20 ml de água. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio e evaporado para dar 10,8 gramas do produto como um sólido cristalino branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,20 (s, 3H, CH3CC=O), 1,43 (s, 3H, CH3), 1,46 (s, 3H, CH3), 3,70 (d, J=12,4 Hz, 2H, OCH2), 4,17 (d, J=12.4 Hz, 2H, OCH2). Exemplo 3.Preparação de N,N-dimetilpiridinium p- toluenosulfonado (DPTS)
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Uma solução de 1,9 gramas de p-ácido toluenosulfônico monohidrato em 10 ml benzeno foi secado por destilação azeotropica usando um sifão "Dean-Stark", então 3,42 gramas de 4-dimetilaminopiridina foram acrescentada. Muito sólido formado, e um adicional 25 ml de benzeno foram requeridas para mobilizar a reação, que foi agitada lentamente enquanto aquecida para temperatura da sala. O sólido resultante foi isolado por filtração, lavado com 10 ml de benzeno, e secado para render 7,88 gramas do produto como um sólido branco. Exemplo 4.Preparação de protetor maleimida bromopropionato iniciador
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Um frasco de fundo redondo de 100-ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 50 ml tetrahidrofuran, 2 gramas de N-(2-hidroxietil)-exo- 3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida, e 2,0 ml trietilamina. A mistura agitada foi resfriada para 0 graus, e uma solução de 1,18 ml de 2-bromoisobutiril bromida em 5 ml tetrahidrofuran foi acrescentada em conta gotas por mais de 30 minutos. A reação foi permitida para agitar sobre gelo por mais de 3 horas seguido para temperatura da sala durante a noite. concentração da mistura da reação deu um resíduo oleoso, que foi purificado por cromatografia de flash de sílica gel com 30-50% etil acetato em exata, dando 1,96 gramas do produto desejado como um pó branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,89 (s, 6H, CH3), 2,87 (s, 2H, CH), 3,82 (t, J=5,4 Hz, 2H, NCH2), 4,33 (t, J=5,4 Hz, 2H, OCH2), 5,27 (t, J=1,0 Hz, 2H, OCH), 6,51 (t, J=1,0 Hz, 2H, CHvinil). Exemplo 5.Preparação de protetor maleimida bis(bromopropionato) iniciador Protetor ácido de maleimida isopropilidena
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Uma solução de 2,00 gramas de N-(2-hidroxietil)-exo- 3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida e 1,67 gramas de isopropilidene-2,2-bis(hidroximetil)ácido propánico em 30 ml de diclorometano seco, junto com 563 mg de DPTS foram tratados em conta gotas com uma solução de 2,37 gramas N,N’-diciclohexilcarbodiimida em 10 ml de diclorometano seco. Muito sólido começou a formar quando uma mistura da reação foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A reação foi filtrada, e o precipitado foi lavado com uma pequena quantidade de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas para dar um óleo claro contendo uma pequena quantidade de sólido. Este óleo foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel, usando primeiro 20-100% etil acetato em hexana. As frações contendo o produto desejado foram combinados e concentrados para dar 3,17 gramas do produto final como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,19 (s, 3H, CH3CC=OO), 1,37 (s, 3H, CH3), 1,41 (s, 3H, CH3), 1,55 (s, 6H, (CH3)2C), 2,86 (s, 2H, C=OCHCHC=O), 3,58 (d, J=12Hz, CH2O), 3,78 (t, J=5.4Hz, CH2CH2O), 4,14 (d, J=12H, CH2O), 4.30 (t, J=5.4Hz, CH2CH2O), 5.27 (t, 2H, CHOCH), 6,51 (s, 2H, CH=CH). Protetor maleimida diol
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A solução do isopropilidene composto do procedimento acima em 50 ml de metanol foi tratado com 1,0 gramas de Dowex 50Wx8-100 resina de troca de ion (H+ form) e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite, tempo no qual a reação aparece completa por tlc (silica gel, etil acetato). A mistura foi filtrada, e a resina sólida foi lavada com uma pequena quantidade de metanol. Os combinados orgânicos foram concentrados e colocados sob alto vácuo para dar 1,55 gramas de um óleo ligeiramente nublado, que foi usado na reação seguinte sem purificação adicional. Protetor maleimida bis(bromopropionato) iniciador
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Uma solução do produto bruto acima de 40 ml de anidro tetrahidrofuran (THF), junto com 1,45 ml de trietilamina foi resfriada em um banho de água gelada, e uma solução de 1,23 ml de 2-bromoisobutiril bromida em 20 ml de anidro THF foi acrescentada em conta gotas por poucos minutos. A reação foi agitada no calor por mais de 30 minutos, então permitida para aquecer para a temperatura da sala por mais de 6 horas. Outros 600 μl de trietilamina foram acrescentadas, seguido por outros 0,5 ml de 2-bromoisobutiril bromida. A reação foi acidificada por papel do pH, então outros 200 μl de trietilamina foram acrescentada para trazer o pH da solução para 9. A reação foi agitada durante a noite, concentrada, e o resíduo foi particionado entre 50 ml de diclorometano e 50 ml de água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentradas para dar um óleo. Este foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel, primeiro com 20%, então 30% e finalmente 40% etil acetato em hexana. As frações contendo produto foram combinadas e concentradas para dar 1,63g de um óleo que solidificou para um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDC13): δ = 1,32 (s, 3H, CH3CC=O), 1,91 [s, 12H, (CH3)2CBr], 2,90 (s, 2H, CHC=O), 3,78 (t, 2H, NCH2CH2O), 4,28 (t, 2H, NCH2CH2O), 4,31 (app q, 4H, CH2OC=O), 5,30 (s, 2H, CHOCH), 6,52 (s, 2H, CH=CH). Exemplo 6. Preparação de N-[2-(2-hidroxietoxi)etil]- exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida
Figure img0091
Um frasco de fundo redondo de 250 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 100 ml metanol e 20 gramas de exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalico anidrito. A mistura agitada foi resfriada para 0 graus, e uma solução de 0,73 gramas 2-(2- aminoetoxi)etanol em 40 ml de metanol foi acrescentada em conta gotas por mais de 45 minutos. A reação foi agitada a temperatura da sala por mais de 2 horas, então aquecida suavemente a refluxo durante a noite. A solução foi concentrada e o produto foi dissolvido em 100 ml de diclorometano, então lavado com 100 ml salmoura. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, concentradas, e purificadas por passagem através de um plug de sílica gel com 100 ml diclorometano e 100 ml etil acetato. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 2,90 (s, 2H, CH), 3,49 (m, 2H, OCH2), 3,59 (m, 4H, OCH2), 3,65 (m, 2H, NCH2), 5,15 (t, J=0.8 Hz, 2H, OCH), 6.55 (t, J=0,8 Hz, 2H, CH=CH). Exemplo 7 .Preparação de bis 2,2-[(2- bromoisobutiril)hidroximetil]ácido propánico
Figure img0092
Para uma solução de 17,5 ml de 2-bromoisobutiril bromida em 100 ml de diclorometano, resfriada em um banho de água gelada, foi acrescentado a conta gota por mais de 30 minutos a solução de 10.0 gramas de 2,2-bis(hidroximetil)ácido propánico e 41 ml de trietilamina em 100 ml de diclorometano. A reação foi permitida para agitar no frio por mais de 1 hora, então permitida para aquecer para a temperatura da sala. A mistura da reação foi então lavada com 200 ml de 1N HCl, então com 100 ml de 0,5N HCl, e finalmente com 50 ml de NaCl saturado. A camada orgânica foi secada sobre sulfato sódio anidro, filtrada e concentrada para dar um óleo amarelo. Este óleo foi levado em 100 ml de 15% etil acetato em hexana usando um arma de calor para efetuar a solução se necessário. A solução foi então permitida para resfriar por mais 1 hora, acrescentando um cristal de semente como a solução próxima da temperatura da sala. Cristalização foi permitida para ocorrer por 2 horas, primeiro resfriada em um banho de água gelada, então no refrigerador durante a noite. A solução resultante quase tinha solidificado, então 25 ml de 10% etil acetato em hexana foram acrescentados, a mistura foi agitada, e o sólido cristalino foi recuperado por filtração. Foi lavado com uma quantidade mínima de hexana e secado sob vácuo para dar 14,55 gramas do produto desejado como um sólido branco. Adicionalmente o produto pode ser obtido de licor mãe de desejado. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ = 1,33 (s, 3H, CCHa), 1,90 (s, 12H, (CHs^CBr), 4,30 (d, J=5,4 Hz, 2H, NCH2), 4,39 (d, J=5,4 Hz, 2H, OCH2). Exemplo 8. Preparação de protetor maleimida estendido bis(bromopropionato) iniciador
Figure img0093
Um frasco de fundo redondo de 250 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 100 ml diclorometano, 1,0 gramas de N-[2-(2- hidroxietoxi)etil]-exo-3,6-epoxi-1,2,3,6- tetrahidroftalimida, 2,5 gramas de ácido de dibromo do Exemplo 7, 0,5 gramas de dimetilaminopiridina, e 0,35 gramas DPTS. Nitrogênio foi borbulhado através da solução brevemente, e 1,6 gramas DCC foi acrescentada lentamente. A reação foi permitida para agitar a temperatura da sala durante a noite. Filtração e evaporação deu um resíduo oleoso rosa, que foi purificado por cromatografia flash de sílica gel. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ = 1,34 (s, 3H, CH3), 1,90 (s, 6H, CH3), 2,94 (s, 2H, CH), 3,64 (m, 6H, OCH2), 4,22 (t, J=5,4 Hz, 2H, NCH2), 4.35 (app q, 4H, OCH2), 5,15 (t, J=1.0 Hz, 2H, OCH), 6,54 (t, J=1.0 Hz, 2H, CH=CH). Exemplo 9. Preparação de N-[2-(2-hidroxietoxi)etil]- exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida, isopropilidene-2,2-bis(hidroximetil)propionato
Figure img0094
Uma solução de 11,0 gramas de N-[2-(2- hidroxietoxi)etil]-exo-3,6-epoxi-1,2,3,6- tetrahidroftalimida e 8,22 gramas de isopropilidene- 2,2-bis(hidroximetil)ácido propánico em 250 ml de diclorometano, junto com 1,3 gramas de DPTS e 5,24 gramas de DMAP foram tratados com 12,9 gramas de DCC, e a reação foi agitada durante a noite. A reação foi hexana para dar o produto desejado como um óleo claro. Exemplo 10. Preparação de N-[2-(2-hidroxietoxi)etil]- exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida,2,2- bis(hidroximetil)propionato
Figure img0095
O produto de acima foi dissolvido em 100 ml de metanol e tratado com 2,0 gramas de Dowex 50Wx8-100 resina de troca de íon (formar H+) e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada e concentrada para dar o produto desejado como um óleo que foi usado sem purificação adicional. NMR (CD3OD) : □ 6, 546 (t, 2H, CH=CH, J=0,8 Hz), 5,158 (t, 2H, CH-O, J=0,8 Hz), 4,180 (m, 2H, CH2-CH2-O-C=O, J= 4.9 Hz), 3,63 (m, 10H, N-CH2 e N-CH2-CH2 e CH2-CH2- O-C=O e CH2-OH), 2,936 (s, 2H, CH-CH), 1,147 (s, 3H, CH3). Exemplo 11. Preparação de N-[2-(2-hidroxietoxi)etil]- exo-3,6-epoxi-1,2,3,6-tetrahidroftalimida,2,2-bis- [2,2-bis(2-bromoisobutiriloximetil) propioniloximetil] propionato iniciador
Figure img0096
Para uma solução de 1,5 gramas do diol do passo anterior e 3,72 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico em 50 ml de diclorometano, junto com 500 mg de DPTS e 810 mg de DMAP, foi tratado com 1,40 gramas de diisopropilcarbodiimida, e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi concentrada e o resíduo foi cromatografado várias vezes sobre sílica gel com 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas em cada caso foram combinadas e concentradas para dar o produto desejado como um óleo. NMR (CD3OD): □ 6,55 (t, 2H, CH=CH, J=0,8 Hz), 5,17 (t, 2H, CH-O, J=0,8 Hz), 3,34 (m, 12H, CCH2), 4,23 (m, 2H, CH2-CH2-O-C=O, J= 4,7 Hz), 3,68 (m, 2H, N-CH2, J=4,7 Hz), 3,64 (app q, 4H, N-CH2-CH2 e CH2-CH2-O-C=O), 2,95 (s, 2H, CH-CH), 1, 907 (s, 24H, Br-C-CH3), 1,34 (s, 6H, CH3), 1,308 (s, 3H, CH3). Exemplo 12. Preparação de N-(3-ácido propánico)-exo- 3,6-epoxi-3,6-dimetil-1,2,3,6-tetrahidroftalimida, éster com 2,2-bis[(2-bromoisobutiriloxi)metil] ácido propánico, 3-hidroxipropil éster iniciador
Figure img0097
Uma solução de 738 mg de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, hidroxipropil éster e 399 mg de N-(3-ácido propánico)- exo-3,6-epoxi-3,6-dimetil-1,2,3,6-tetrahidroftalimida em 20 ml de acetonitrila seco, junto com 50 mg de DPTS e 100 mg de DMAP, foi tratado com 375 mg de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 30 - 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 1,02 gramas do produto desejado como um óleo claro. Por 1H NMR, apareceu que cerca de 10% do produto já tinha sofrido retro reação de Diels-Alder. NMR (CDCI3): □ 6,19 (s, 2H, CH=CH) , 4,37 (app q, 4H, CCH2O, J=10,9, 29,7 Hz), 4,23 (t, 2H,CH2CH2O, J=6,3 Hz), 4,15 (t, 2H, CH2CH2O, J=6,3 Hz), 3,62 (t, 2H, NCH2, J=7,4 Hz), 3,22 (s, 2H, CHC=O), 2,48 (t, 2H, CH2C=O, J=7,4 Hz), 2,00 (m, 2H, CH2CH2CH2, J=6,3 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C (CH3)2), 1,78 (s, 6H, CH3), 1,35(s, 3H,CH3). Exemplo 13. Preparação de acetal bis(bromopropionato) iniciador
Figure img0098
Para uma solução de 1,03 gramas de 3,3-dietoxi-1- propanol e 3,0 gramas de 2,2-bis(2- bromoisobutiriloximetil)ácido propánico em 50 ml de diclorometano, junto com 817 mg de N,N- dimetilpiridinium p-toluenesulfonato, foi tratados com 1,58 gramas de N,N’-diciclohexilcarbodiimida, e a reação foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A reação foi filtrada, e o precipitado foi lavado com uma pequena quantidade de diclorometano. Os combinados orgânicos foram concentrados, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 10-20% etil acetato em hexana. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas para dar 2,87 gramas de um claro, óleo sem cor. Este material não foi ainda puro por 1H NMR, então foi outra vez submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel usando diclorometano. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 2,00 gramas do produto desejado como um viscoso, óleo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,20 (t, 6H, CH3CH2O), 1,34 (s, 3H, CH3CC=O), 1,92 [s, 12H, (CH3)2CBr], 1,98 (app q, 2H, CHCH2CH2), 3,50 (m, 2H, OCH2CH3), 3,66 (m, 2H, OCH2CH3), 4,24 (t, 2H, CH2CH2OC=O), 4,37 (app q, 4H, CH2OC=OCBr), 4,60 (t, 1H, O-CH-O). Exemplo 14. Preparação de vinil bis(bromopropionato) iniciador 1
Figure img0099
Um frasco de fundo redondo de 100 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 30 ml de diclorometano, 86 miligramas de 4-penten-1-ol, 432 miligramas do ácido dibromo do Exemplo 7, e 88 miligramas de DPTS. Nitrogênio foi borbulhado brevemente através da solução, e 169 μl de N,N’- diisopropilcarbodiimida foi acrescentado lentamente. A reação foi permitida para agitar a temperatura da sala durante a noite, então outros 0,1 gramas DPTS foi acrescentado e a reação foi outra vez agitada durante a noite. Filtração e evaporação deu um resíduo oleoso, que foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel usando 20-40% etil acetato em hexana. O solvente foi removido do primeiro produto para fora da coluna, rendendo 0,13 gramas do produto desejado como óleo sem cor. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ = 1,34 (s, 3H, CH3), 1,77 (m, 2H, CH2CH2CH2), 1,90 (s, 12H, CH3), 2,15 (q, J=7.2 Hz, 2H, CHCH2CH2), 4,16 (t, J=6,4 Hz, 2H, OCH2), 4,36 (app q, 4H, CCH2O), 5,02 (m, 2H, CH2=CH), 5,82 (m, 1H, CH2=CH). Exemplo 15. Preparação de vinil bis(bromopropionato) iniciador 2
Figure img0100
Um frasco de fundo redondo de 100 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 25 ml diclorometano, 370 miligramas de etileno glicol monovinil éter, 432 miligramas do] ácido dibromo do Exemplo 7, e 590 gramas de DPTS. O frasco foi corado com nitrogênio, e 681 μl de N,N’- diisopropilcarbodiimida foi acrescentado lentamente. A reação foi permitida para agitar a temperatura da sala durante a noite. A mistura foi filtrada e então secada com cromatografia flash sobre sílica gel usando 5-10% etil acetato em hexana, rendendo o produto como um óleo sem cor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,36 (s, 3H, CH3), 1,92 (s, 12H, CH3), 3,90 (app q, J=5,4 Hz, 2H, NCH2CH2O), 4,05 (dd, 1H, J=2.4, 6,8 Hz, =CH), 4,19 (dd, J=2.4, 14,4 Hz, 1H, =CH), 4,39 (m, 2H, NCH2CH2O), 4,40 (app q, 4H, OCH2), 6,45 (dd, 1H, J=6,8, 14,4 Hz, =CHO). Exemplo 16. Preparação de Boc-amino bis(maleimida) iniciador
Figure img0101
Uma solução de 2,19 gramas de N-Boc-3-amino-1-propanol e 5,20 gramas de 2,,2-bis(2- bromoisobutiriloximetil)ácido propánico em 50 ml de diclorometano, junto com 350 mg de DPTS, foi tratada com 3,0 gramas de N,N’-diciclohexilcarbodiimida e a reação foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A mistura da reação foi filtrada, e o precipitado foi lavado com uma pequena quantidade de diclorometano. Concentração deu um resíduo, que foi submetido para cromatografia de coluna sobre sílica gel flash com 5-20% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar um óleo contendo um pequeno resíduo sólido. Este material foi partido em etil acetato e filtrado. Concentrado outra vez deu um óleo ainda contendo um pequeno sólido, então o material foi partido em etil acetato, filtrado, e concentrado para dar o produto desejado como um óleo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 4,8 (br s, 1H, NH), 4,37 (app q, 4H, CH2OC=OCBr), 4,22 (t, 2H, CH2CH2OC=O), 3,20 (app q, 2H, NHCH2), 1,92 [s, 12H, (CH3)2CBr ], 1,85 (t, 2H, CH2CH2CH2), 1,43 (s, 9H, (CHs)3θ), 1,35 (s, CHaCC=O). Exemplo 17. Preparação de N-(3-ácido Propiônico, t- butil éster)-2,2-Bis[(2-bromoisobutiriloxi) metil] propionamida
Figure img0102
Uma solução de 1,00 gramas de b-alanine t-butil éster hidrocloreto em 50 ml de diclorometano foi tratada com 25 ml de bicarbonado de sódio aquoso saturado, e a mistura foi agitada por 15 minutos. As camadas foram separadas, e os orgânicos foram secados sobre sulfato de sódio. Para esta solução foi acrescentado 2,38 gramas de 2,2-bis[(2-bromoisobutiriloxi]metil)ácido propánico, seguido por 1,92 ml de diisopropiletilamina e 2,1 gramas de HBTU, e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A mistura da reação foi então diluída com outros 50 ml de diclorometano, lavado com 2 x 50 ml de água, e secada sobre sulfato de sódio. Filtração e concentração deu um óleo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna com 20 - 25% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 730 mg de um sólido branco. NMR (CDCl3): δ 6,70 (t, 1H,NH, J=5.4 Hz), 4,33 (app q, 4H, CH2O, J=16,3, 11,4 Hz), 3,51 (q, 2H, NCH2, J=6,0 Hz), 2,46 (t, 2H, CH2CO, J=6,0 Hz), 1,93 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,45 (s, 9H, C(CH3)3), 1,33 (s, 3H, CH3). Exemplo 18. Preparação de protetor maleimida 4-ol
Figure img0103
Um frasco de fundo redondo de 100 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 30 ml de diclorometano, 1,6 gramas do diol do Exemplo 7, 1,71 gramas de isopropilidene-2,2-bis(hidroximetil)ácido propánico, e 0,5 gramas de DPTS. Nitrogênio foi borbulhado através da solução brevemente, 1,70 ml de N,N’-diisopropilcarbodiimida foi acrescentado lentamente, e a reação foi permitida para agitar a temperatura da sala durante a noite. Filtração e evaporação deu um resíduo oleoso, que foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel usando 10-40% etil acetato em hexana. Uma segundo purificação por cromatografia flash sobre sílica gel usando 2% metanol em diclorometano rendeu cerca de 2 gramas de óleo sem cor. Este óleo foi dissolvido em 25 ml de metanol e agitado por 60 horas a temperatura da sala com resina de Dowex 50WX8-100 (formar H+). A reação foi filtrada, concentrada, então passada através de um plug de sílica gel com 150 ml de 15% metanol em diclorometano. Evaporação rendeu 1,3 gramas de uma espuma dura quase incolor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,13 (s, 6H, CH3), 1,25 (s, 3H, CH3), 2,96 (s, 2H, CHC=ON), 3,573.65 (m, 8H, CH2OH), 3,64 (t, J=2.8 Hz, 2H, CH2CH2OC=O),4,22 (app q, 4H, C(CH3)CH2OC=Oi), 4,22 (t, J=2.8 Hz, CH2CH2OC=O), 5,21 (t, J=0.8 Hz, CHOCH), 6,55 (t, J=0.8 Hz, CH=CH). Exemplo 19.Preparação de protetor maleimida tetra(bromopropionato) iniciador
Figure img0104
Um frasco de fundo redondo de 100 ml equipado com uma barra de agitação foi carregado com 20 ml de diclorometano, 0,55 gramas do tetraol do Exemplo 13, e 1,69 ml de trietilamina. A mistura agitada foi resfriada para 0 graus, e uma solução de 0,99 ml de 2- bromoisobutiril bromida em 10 ml diclorometano foi acrescentada em conta gotas. A reação foi permitida para agitar a temperatura da sala durante a noite, então lavado com 50 ml de bicabornato de sódio meio saturado. A concentração da mistura da reação deu um resíduo oleoso marrom, que foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel com 40% etil acetato em hexana. O resíduo marrom foi dissolvido em metanol e tratado com charcoal para remover a cor, rendendo 0,68 gramas do produto desejado como um óleo marrom luminoso. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1.26 (s, 3H, CHaCC=O), 1,34 (s, 6H, CHaCC=O), 1,90 (s, 24H, (CH3)2CBr), 2,95 (s, 2H, CH), 3,78 (t, J=5 Hz, 2H, NCH2), 4,25 (m, 6H, OCH2C (4H) e OCH2CH2N (2H)), 4,35 (app q, 8H, OCH2), 5,23 (t, J=1 Hz, 2H, CHOCH), 6,55 (t, J=1 Hz, 2H, CH=CH). Exemplo 20.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,2- hidroxietil éster iniciador
Figure img0105
Uma solução de 4,32 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi]metil)ácido propánico e 12,41 gramas de etileno glicol em 50 ml de diclorometano, junto com 883 mg de DPTS foi tratado com 1,39 gramas de diisopropilcarbodiimida, e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A mistura da reação foi concentrada, então particionada entre 150 ml de etil acetato e 70 ml de água. A camada orgânica foi concentrada, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 20% - 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 2,7 gramas do produto desejado como a óleo claro. NMR (CD3OD): δ 4,38 (app q, 4H, CCH2, J=11,2, 30,2 Hz), 4,20 (t, 2H, CH2OH, J=5,0 Hz), 3,75 (t, 2H, CH2CH2OH, J=5,0 Hz), 1,90 (s, 12H, Br-CCH3), 1,36 (s, 3H,CH3). Exemplo 21.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,3- hidroxipropil éster iniciador
Figure img0106
Uma solução de 5,31 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico e 4,68 gramas de 1,3-propanodiol em 80 ml de diclorometano e 20 ml de acetonitrila foi tratado com 1,0 gramas de DPTS, seguido por 3,0 gramas de DCC, e a reação foi agitada a temperatura da sala por 2 horas. A reação foi então filtrada, concentrada e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 30% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar um óleo claro, que não foi muito puro. Recromatografia sobre sílica gel com 10 - 15% acetona em hexana deu o produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,38 (app q, 4H, CCH2O, J=11,2 Hz), 4,31 (t, 2H, CH2CH2O, J=6,3 Hz), 3,71 (q, 2H, CH2OH, J=5,9 Hz), 1,92 (s, 12H, Br- C(CH3)2), 1,9 (m, 2H, CH2CH2CH2), 1,35 (s, 3H, CH3). Exemplo 22. 2,2-Bis[(2-bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,11-hidroxi-3,6,9-trioxaundecanoate iniciador
Figure img0107
Uma solução de 1,86 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico e 4,18 gramas de tetraetilene glicol em 50 ml de diclorometano, junto com 250 mg de DPTS, foi tratada com 1,15 gramas de DCC e areação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada e o filtrado foi diluído com 50 ml de diclorometano e lavado com 20 ml de água. Os orgânicos foram secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel primeiro com 50 - 70% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas, filtradas e concentradas para dar 1,19 gramas do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,38 (app q, 4H, CCH2O, J=31,8, 11,2 Hz), 4,31 (t, 2H, CH2CH2OC=O, J=5,0 Hz), 3,6 - 3,73 (m, 14H,CH2O), 2,46 (t, 1H, OH, J=6,3 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1.35 (s, 3H, CH3). Exemplo 23.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, 11-hidroxi- 3,6,9-trioxaundecanoate, NHS carbonato iniciador
Figure img0108
Uma solução de 630 gramas do composto hidroxil acima e 1,28 gramas de disuccinimidil carbonato em 3 ml de acetonitrila seca foi tratada com 610 mg de DMAP e a reação foi agitada a temperatura da sala. A reação foi ainda heterogênea, então 4 ml de THF seco foram acrescentados, e depois de 2 horas a reação ficou amarela e se tornou homogênea, mas contendo vários spots sobre tlc (sílica gel, 50% etil acetato em hexana). A reação foi concentrada para dar um resíduo que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 50 - 60% etil acetato em hexana. Duas frações foram isoladas, e a fração com um baixo rf foi concentrada para dar 260 mg do produto desejado como um óleo claro. NMR (CDCl3): δ 4,47 (m, 2H,CH2O(C=O)O), 4,37 (app q, 4H, CCH2O, J=11,2, 31,6 Hz), 4,30 (m, 2H, CH2CH2O(C=O)C), 3,79 (m, 2H, CH2CH2O(C=O)C), 3,71 (t, 2H, CH2CH2O(C=O)O, J=5,0 Hz), 3,67 (s, 4H,CH2O), 3,65 (s, 4H, CH2O), 2,84 (s, 4H,CH2C=O), 1,92(s, 12H, Br-C (CH3)2), 1.35(s, 3H,CH3). Exemplo 24.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, solcetal éster iniciador
Figure img0109
Uma solução de 918 mg de solketal e 3,0 gramas de 2,2- bis[(2-bromoisobutiriloxi) metil]ácido propánico, junto com 200 mg de DPTS foi tratada com 2,15 gramas de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 10% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 1,85 gramas do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,38 (app q, 4H,CCH2O), 4,32 (m, 1H, OCH), 4,19 (m, 2H, CHCH2OC=O), 4,07 (d de d, 1H, OCH2CH, J=6,7, 8,6 Hz), 3,76 (d de d, 1H, OCH2CH, J=5,7, 8,6 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,43 (s, 3H, (CH3)2CO), 1,36 (s, 3H, CH3), 1.35 (s, 3H, (CH3)2CO). Exemplo 25.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,2,3- dihidroxipropil éster iniciador
Figure img0110
Uma solução de 1,0 gramas do cetal anterior em 50 ml de metanol foi tratado com 750 mg de Dowex 50Wx8-100 e a reação foi agitada durante a noite. A reação foi então filtrada, concentrada, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 20 - 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 630 mg do produto desejado como a limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3+D2O): δ 4,40 (app q de d, 4H,CCH2O, J=2,8, 11,5, 30,2 Hz), 4,24 (app q de d, 2H, CHCH2OC=O, J=4,5, 6,6, 11,5 Hz), 3,96 (m, 1H, CH), 3,66 (app q de d, 2H, HOCH2CH, J=3,8, 5,6, 11,5, 37,9 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,37 (s, 3H, CH3). Exemplo 26.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,2-(2,3- dihidroxipropoxi)etil éster iniciador
Figure img0111
Para uma solução de 1,5 gramas de 2-[(2- bromoisobutiriloxi)metil]-2-hidroximetilácido propánico, 2-(aliloxi)etil éster em 15 ml de água e 15 ml de t-butanol foi acrescentada 2,86 gramas (3 eq) de potássio ferricianida, 1,20 gramas (3 eq) de carbonato de potássio, 7,5 mg de potássio osmate dehidrato, 11 mg de quinuclidina, e 276 mg (1 eq) de metanosulfonamida, e a mistura da reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação pareceu estar completa por TLC (sílica gel, 50% etil acetato em hexana), então a reação foi colocada dentro de 100 ml de água, então extraída com 100 ml de diclorometano. Os combinados orgânicos foram secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar um resíduo oleoso, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 30 - 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinados, tratadas com carbono de descolorização, filtradas e concentradas para dar 850 mg do produto desejado como um óleo aproximadamente sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,39 (app q de d, 4H, CCH2O, J=4.1, 11,1, 3,0, 37,6 Hz), 4,31(t, 2H, OCH2CH2OC=O, J=4,7 Hz), 3,87 (m, 1H, CH-OH), 3,54 — 3,77 (m, 2H,CH2-OH), 3,72(m, 2H, OCH2CH), 3,58(app t, 2H, OCH2CH2OC=O), 2,68 (d, 1H, CH-OH, J=5,1 Hz), 2,15 (app t, 1H, CH2-OH, J=6,1 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C(CHs)2), 1,36 (s, 3H, CH3). Exemplo 27. 2,2-Bis[(2-bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, 12-(alliloxi)-3,6,9,12-tetraoxadodecanoate iniciador
Figure img0112
Para uma solução de 1,60 g de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico e 870 mg de 12-(alliloxi)-3,6,9,12-tetraoxadodecano em 30 ml de acetonitrila seca, junto com 218 mg de DPTS e 362 mg de DMAP, foi acrescentado 917 mg de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A mistura foi então filtrada e concentrada, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel primeiro com 50 - 60% etil acetato em hexanas, e o produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 1,35 gramas do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 5l87-5l97 (m, 1H, CH2CH=CH2), 5128 (dq, 1H, H-CH=CH), 5118 (dq, 1H, H-CH=CH), 4137 (app q, CH2OC=O), 4130 (dd, 2H, CH2CH2OC=O), 4102 (d, 2H, CH2=CHCH2), 3160-3172 (m, 14H, CH2CH2OCH2), 1192 (s, 12H, Br-C (CHa)2), 1135 (s, 3H, CH3). Exemplo 28.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, 12-(2,3- dihidroxipropoxi)-3,6,9,12-tetraoxadodecil éster iniciador
Figure img0113
Para uma mistura de 1,29 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiri1oxi)meti1]ácido propánico, 12- (a11i1oxi)-3,6,9,12-tetraoxadodeci1 éster em 15 m1 de água e 15 m1 de t-butano1 foi acrescentado 1,98 gramas (3 eq) de potássio ferricianida, 829 mg (3 eq) de carbonato de potássio, 8 mg de potássio osmate dehidrato, 11 mg de quinuc1idine, e 190 mg (1 eq) de metanosu1fonamida, e a mistura da reação foi agitada a temperatura da sa1a durante a noite. A reação apareceu para ser comp1etada por TLC (sí1ica ge1, 50% eti1 acetato em hexana), então a reação foi co1ocada dentro 50 m1 de água, então extraída com 100 m1 de dic1orometano. Os combinados orgânicos foram secados sobre su1fato de sódio, fi1trados e concentrados para dar um resíduo o1eoso, que foi submetido para cromatografia f1ash de co1una sobre sí1ica ge1 com 5% metanol em diclorometano. O produto contendo frações foi combinado e tratado duas vezes com dois pequenos espatulados de carbono ativado, filtrada entre tratamentos. A filtração e concentração deu um óleo cinza luminoso contendo uma pequena quantidade de sólido, então foi colocado em etil acetato e filtrado, então concentrado para dar 1,06 gramas do produto desejado como um óleo cinza luminoso, ainda contendo uma fina quantidade de sólido. NMR (CDCl3): δ 4,38 (app q, 4H, CCH2OC=O), 4,30 (t, 2H, CH2CH2OC=O, J=5,0 Hz), 3,85(p, 1H, CHOH, J=5 Hz), 3,71 (t, 2H, OCH2CHOH, J= 4,8 Hz), 3,72 - 3,55 (m, 16H, OCH2CH2O e CH2OH), 3,12 (s, 1H, CHOH), 2,37 (s, 1H, CH2OH), 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3). Exemplo 29.Preparação de 2,2,5-Trimetil-1,3- dioxane-5-ácido carboxílico, 2-(alliloxi)etil éster
Figure img0114
Uma solução de 1,4 gramas de etileno glicol monoalil éter e 2,35 gramas de 2,2,5-trimetil-1,3-dioxane-5- ácido carboxílico em 25 ml de anidro THF foi tratada com 500 mg de 4-dimetilaminopiridinium p- toluenesulfonate (DPTS) e 1,44 gramas de dimetilaminopiridina (DMAP), seguido por adição de 3,38 gramas de diciclohexilcarbodiimida, e a reação foi agitada a temperatura da sala por 3 dias. A mistura da reação foi filtrada e concentrada para dar um resíduo semi sólido, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 20% etil acetato em hexana. O produto contendo frações foi combinado, concentrado e filtrado para dar 2,83 gramas (81%) de um óleo claro contendo uma pequena quantidade de sólido. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,23 (s, 3H, C=OCCH3), 1,39 (s, 3H, CH3), 1,43 (s, 3H, CH3), 3,66 (m, 4H), 4,02 (dd, 2H, CH2=CHCH2), 4,20 (d, 2H), 4,31 (t, 2H, C=OOCH2), 5,18 (dd, 1H, =CH), 5,28 (dd, 1H, =CH), 5,89 (m, =CHCH2). Exemplo 30. 2,2-Bis(hidroximetil)ácido propánico, 2- (alliloxi)etil éster
Figure img0115
Uma solução de 2,72 gramas de 2,2,5-trimetil-1,3- dioxane-5-ácido carboxílico, 2-(alliloxi)etil éster em 50 ml de metanol foi tratada com 1,0 grama de resina de Dowex 50W-X8 (formar H+) e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado para dar um óleo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 5% de metanol em diclorometano. O produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 2,23 gramas do produto como um limpo, óleo amarelo luminoso. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 5, 84-5, 94 (ddt, 1H, H2C=CHCH2), 5,28 (dq, 1H, HHC=CHCH2), 5,22 (dq, 1H, HHC=CHCH2), 4,36 (app t, 2H, OCH2CH2), 4,02 (dt, 2H, H2C=CHCH2), 3,86 (dd, 2H, CH2OH), 3,74 (dd, 2H, CH2OH), 3,68 (app t, 2H, OCH2CH2), 2,90 (br d, 2H, OH), 1,11 (s, CH3). Exemplo 31.Preparação de 2,2-Bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,2- (alliloxi)etil éster iniciador
Figure img0116
Uma solução de 1,2 gramas de aliloxietanol, 5,0 gramas de 2,2-bis(2-bromoisobutiriloximetil) ácido propánico e 690 mg de DPTS em 100 ml de diclorometano foi agitada a temperatura da sala como 2,86 gramas de DCC foram acrescentado como uma solução em uma pequena quantidade de diclorometano. A reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite, então filtrada e concentrada para dar um óleo. Este foi submetido para cromatografia flash sobre sílica gel com 10% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar um óleo claro, que não estava suficientemente puro. Este óleo foi outra vez submetido para cromatografia flash sobre sílica gel com 3 - 4% etil acetato em hexana. O produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 2,78 gramas do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 5,89 (m, 1H, CH2CH=CH2), 5,28 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=17,2, 1,7 Hz), 5,20 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=10,5, 1,5 Hz), 4,38 (app q, 4H, CH2OC=O), 4,31 (t, 2H, OCH2, J=4,7 Hz), 4,01 (d de t, 2H, OCH2, J=5,6, 1.5 Hz), 3,65 (t, 2H, OCH2, J=4.7 Hz), 1,91 (s, 12H, Br-C (CH3)2), 1,35 (s, 3H, CH3). Exemplo 32.2,2-Bis-[2,2-bis(2- bromoisobutiriloximetil)propioniloximetil]ácido propánico, 2-(alliloxi)etil éster iniciador
Figure img0117
Uma solução de 2,42 gramas de 2-[(2- bromoisobutiriloxi)metil]-2-hidroximetilácido propánico, 2-(alliloxi)etil éster e 1,73 gramas de 2,2-[bis-(2-bromoisobutiriloxi)metil] ácido propánico em 25 ml de acetonitrila seca, junto com 200 mg de DPTS e 580 mg de DMAP, foi tratada com 1,03 gramas de DCC, e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. Por TLC (sílica gel, 30% etil acetato em hexana) aparecendo que a reação foi incompleta, então outros 812 mg de 2,2-[bis-(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico e 400 mg de DCC foram acrescentados, e a reação foi outra vez agitada a temperatura da sala durante a noite. A mistura da reação foi filtrada e concentrada, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel primeiro com 20%, e então com 30% etil acetato em hexanas. O produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 1,27 gramas do composto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 5,88 (m, 1H, CH2CH=CH2), 5,28 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=17,4, 1,6 Hz), 5,20 (d de q, 1H, H-CH=CH, J=10,3, 1,3 Hz), 4,24 — 4,44 (m, 14H, CH2OC=O), 4,01 (d, 2H, CH2=CHCH2, J=5.6), 3,65 (t, 2H, CH2CH2OCH2, J=4,7 Hz), 1,91 (s, 24H, Br-C (CHah), 1,33 (s, 6H, CH3), 1,30 (s, 3H, CH3). Exemplo 33.Preparação de 2,2-Bis-[2,2-Bis[(2- Bromoisobutiriloxi)propioniloximetil]ácido propánico],2-[(2,3-dihidroxi)propoxi]etil éster iniciador
Figure img0118
Para uma mistura de 1,21 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico, 2- (alliloxi)etil éster em 15 ml de água e 15 ml de t- butanol foi acrescentado 1,14 gramas (3 eq) de potássio ferricianida, 480 mg (3 eq) de carbonato de potássio 7,5 mg de potássio osmate dehidrato, 11 mg de quinuclidine, e 110 mg (1 eq) de metanosulfonamida, e a mistura da reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação apareceu para ser completada por tlc (sílica gel, 50% etil acetato em hexana), então a reação foi colocada dentro 50 ml de água, então extraída com 100 ml de diclorometano, seguido por outros 50 ml de diclorometano. Os combinados orgânicos foram secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar um resíduo oleoso, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 50% etil acetato em hexana, e o produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 620 mg do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,28-4.41 (m, 14H, CCH2OC=O), 3,86 (m, 1H, CH2CHOHCH2), 3, 69-3,75 (m, 3H), 3,56-3.65 (m, 3H), 2,78 (dd, 1H, OH), 2,23 (app t, 1H, OH), 1,92 (s, 24H, CH3CBr), 1,34 (s, 6H, CH3), 1,31 (s, 3H, CH3). Exemplo 34.Preparação de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico,(2- azidoetoxi)etil éster iniciador
Figure img0119
Para uma solução de 3,30 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi)metil]ácido propánico e 1,0 gram de 2-(2-azidoetoxi)etanol em 20 mL de acetonitrila seca, junto com 225 mg de DPTS, foi acrescentado 1,89 gramas de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada e concentrada para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 10 - 15% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 2,06 gramas do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCl3): δ 4,39 (app q, 4H, CCH2O, J=11,1, 33,8 Hz), 4,31 (t, 2H, OCH2CH2OC=O, J=5 Hz), 3,72 (t, 2H, CH2N3, J=5 Hz), 3,67 (t, 2H, CH2CH2N3, J=5 Hz), 3,38 (t, 2H, OCH2CH2OC=O, J=5 Hz), 1,92 (s, 12H, Br-C(CH3)2), 1,36 (s, 3H, CH3). Exemplo 35.Preparação de 3,5-bis- (2- bromoisobutirioxi) benzaldeído
Figure img0120
Uma solução de 1,0 grama de 3,5-dihidroxibenzaldeído e 4,0 ml (4 eq) de trietilamina em 20 ml de diclorometano foi resfriado com um banho de água gelada, e uma solução de 3,35 gramas de 2- bromoisobutiril bromida em 5 ml de diclorometano foi acrescentado em conta gota por mais de uns poucos minutos como formou muito sólido. A reação foi agitada a temperatura da sala por 1,5 hora, tempo no qual a reação apareceu ter completada por TLC (sílica gel, 30% etil acetato em hexana). A reação foi lavada com 25 ml de água, então concentrada para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 10% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas, tratadas com uma pequena quantidade de carbono decolorizante, filtradas e concentradas para dar 2,2 gramas de um óleo, que cristalizado no refrigerador para dar um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDC13): □ = 2,08 (s, 12H, CH3), 7,29 (t, 1H, J=2,4 Hz, ArH), 7,61 (d, J=2,4 Hz, 2H, ArH), 10,0 (s, 1H, CHO). Exemplo 36.Preperação de 7-(13-aliloxi-2,5,8,11- tetraoxatridecil)-2,4,9-trifenil-1,3,5- triazatriciclo[3.3.1.13,7]decano
Figure img0121
Uma solução de 870 mg de 11-aliloxi-3,6,9- trioxaundecan-1-ol metanosulfanato e 1,01 gramas de 2,4,9-trifenil-1,3,5-triazatriciclo[3.3.1.13,7]decano- 7-metanol (WO2000/037658) em 10 ml de THF seco foi tratado com 410 mg de hidreto de sódio (60% em óleo) e a reação foi aquecida a 80°C por 20 horas. A reação foi então extinta cuidadosamente pela adição de uns poucos ml de água, derramado dentro 20 ml de NaCl saturado, então extraído com 3 x 10 ml de diclorometano. Os orgânicos foram secados por mais de sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash em sílica gel com 25-35% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 920 mg do produto desejado como um óleo sem cor. NMR (DMSO-d6): □ 7,70-7,82 (m, 6H, PhH), 7,267,51 (m, 9H, PhH), 3,69-3,75 (m, 3H), 3,56-3,65 (m, 3H), 2,78 (dd, 1H, OH), 2,23 (app t, 1H, OH), 1,92 (s, 24H, CH3CBr), 1,34 (s, 6H, CH3), 1,31 (s, 3H, CH3). Exemplo 37.Preparação de 1-Amino-15-aliloxi-2,2- bis(aminometil)-4,7,10,13-tetraoxapentadecano trihidroclorido
Figure img0122
O composto de triazaadamantane de reação anterior foi levantado em 20 ml de etanol e 4 ml de éter, então tratado com 2 ml de ácido hidrocloríco concentrado. A reação foi misturado e então deixado para permanecer a 4°C por 1,5 horas. Então 30 ml de éter foram acrescentados e a mistura foi resfriado outra vez por outros 30 minutos. Então acrescentado 100 ml de éter e o produto sólido foi recuperado por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo para dar 564 mg do produto como um sólido branco. NMR (DMSO-d6) : □ 7,75 (m, 6H, CCH), 7,44 (m, 6H, CCHCH), 7,30 (m, 3H, CCHCHCH), 5,86 (m, 1H, CH2=CH), 5,70 (s, 1H, NCH (equatorial)), 5,250 (s, 2H, NCH(axial)), 5,23 (d de q, 1H, CH2=CH), 5,11 (d de q, 1H, CH2=CH), 3,93 (d de t, 2H, CH-CH2-O), 3,55-3,25 (m, 16H, OCH2CH2O), 3,26 (m, 2H, NCH2), 3,19 (d, 2H, NCH2), 2,88 (s, 2H, NCH2), 2,719 (s, 2H, CCH2O). Exemplo 38.Preparação de N-(2-Bromo-2- metilpropionil)-1-Amino-15-aliloxi-2,2-bis[N-(2-bromo- 2-metilpropionil)aminometil]-4,7,10,13- tetraoxapentadecano iniciador
Figure img0123
A triamina hidroclorido do procedimento anterior foi levantado em 25 ml de diclorometano, a solução foi resfriado com e banho de água gelada, e tratada com 1,35 ml de trietilamina, seguido pela adição de 0,46 ml de 2-bromoisobutiril bromida. A reação foi então agitada como foi permitida para aquecer para temperatura da sala por mais de 2 horas. A mistura da reação foi então lavada com 3 x 10 ml de 1N HCl, 2 x 10 mL de NaHCO3 aturado, 10 ml de NaCl saturado, e secado por mais sulfato de magnésio. A solução foi filtrada e concentrada para dar um resíduo, que foi corada através de um plug de sílica gel com etil acetato. Concentração deu 989 mg do produto desejado como um óleo viscoso. NMR (DMSO-d6) : □ 8,004 (t, 3H, NH), 5,87 (m, 1H, CH), 5,23 (d de q, 1H, CH2=CH), 5,12 (d de q, 1H, CH2=CH), 3,93 (d de t, 2H, CH2-CH), 3,6 - 3,45 (m, 16H, OCH2CH2O), 3,289 (s, 2H, CCH2O), 3,12 (d, 6H, CCH2N), 1,907 (s, 18H, CH3). Exemplo 39.Preparação de N-(2-Bromo-2- metilpropionil)-1-Amino-15-(2,3-dihidroxipropil)-2,2- bis[N-(2-bromo-2-metilpropionil)aminometil]-4,7,10,13- tetraoxapentadecano iniciador
Figure img0124
Para uma mistura de 350 mg do alceno do procedimento anterior em 5 ml de t-butanol e 5 ml de água foi acrescentado 433 mg (3 eq) de potássio ferricianida, 182 mg (3 eq) de potássio carbonato, 42 mg (1 eq) de metanosulfonamida, 7,5 mg de quinuclidina, e 4 mg de potássio osmate dihidrato, e a solução foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação apareceu para ser completa por TLC (sílica gel, 5% metanol em diclorometano), então 50 ml de água foram acrescentadas e a solução foi extraída com 50 ml de diclorometano, seguido por outros 2 x 25 ml de diclorometano. O combinado extraído foi secado por mais de sulfato de sódio, concentrado, e o resíduo cinza escuro foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 2-5% metanol em diclorometano. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 310 mg do desejado dihidroxi composto como um óleo cinza luminoso. NMR (CDClβ) : □ 7,91 (t, 3H, NH) , 3,88 (m, 1H, HOCH2CHOHCH2), 3,55-3.72 (complexo m, 21H), 3,35 (s, 1H, OCH2C(CH2) 3), 3,19 (d, 6H, J=6.4 Hz, CH2NH), 1,99 (s, 18H, CH3). Exemplo 40.Preparação de 7-(7-Azido-2,5- dioxaheptil)-2,4,9-trifenil-1,3,5- triazatriciclo[3.3.1.13,7]decano
Figure img0125
Para uma solução de 1,1 gramas de 2,4,9-trifenil- 1,3,5-triazatriciclo[3.3.1.13,7]decano-7-metanol (WO2000/037658) e 585 mg de 2-(2-azidoetoxi)etil metanosulfanato em 15 ml de anidro THF foi acrescentado 224 mg de NaH (60% em óleo), e a solução foi aquecida a 70°C durante a noite. Outros 245 mg de NaH e 600 mg de 2-(2-azidoetoxi) etil metanosulfanato foram acrescentado, e aquecido foi outra vez continuado durante a noite. A mistura da reação foi resfriada, diluída com 25 ml de água, e extraída com 50 ml de diclorometano. A camada orgânica foi lavada com NaCl saturado, secado por mais de sulfato de sódio, filtrado e concentrada para dar um resíduo. Este material foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 10 - 25% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 1,15 gramas do produto desejado como um óleo, que não foi completamente puro, mas usado na reação seguinte sem purificação adicional. NMR(DMSO) extremamente complexo. Exemplo 41.Preparação de 1-Amino-9-azido-2,2- bis(aminometil)-4,7-dioxanonane trihidroclorido
Figure img0126
Uma solução de 1,15 gramas do composto de triazaadamantano do procedimento anterior em 20 ml de etanol e 4 ml de éter foi resfriado com um banho de água gelada, e 3 ml de HCl concentrado foram acrescentados. O produto sólido começou para formar imediatamente, e a reação foi permitida para permanecer no frio por 10 minutos. Outros 30 ml de éter foram acrescentados, e a reação foi refrigerada durante a noite. A mistura da reação foi diluída com outros 100 ml de éter, e o produto sólido foi isolado por filtração, lavado com mais éter e secado sob vácuo para dar 800 mg do produto como um sólido branco. Exemplo 42.Preparação de N- (2-Bromo-2- metilpropionil)-1-Amino-9-azido-2,2-bis[N-(2-bromo-2- metilpropionil)aminometil]-4,7-dioxanonane iniciador
Figure img0127
Uma solução de 800 mg do sal de trihidroclorido do procedimento anterior em 25 ml de diclorometano foi resfriado com um banho de água gelada, então tratado com 3,5 ml de trietilamina. Para esta mistura foi acrescentado em conta gota 1,07 ml de 2- bromoisobutiril bromida, e a reação foi agitada enquanto aquecida para a temperatura da sala por mais de 2 horas. A mistura foi então lavada com 3 x 10 ml de 1N HCl, 2 x 10 ml de NaHCO3 saturado, e com 10 ml de NaCl saturado, então secado por mais sulfato de magnésio. Filtração e concentração deu um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 20-30% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentrada para dar 630 mg do produto desejado como um óleo. NMR(CDCl3): □ 7,76 (t, 3H, NH, J=6,3 Hz), 3,68 (m, 4H, OCH2CH2O), 3,63 (m, 2H, N3CH2CH2O), 3,40 (t, 2H, N3CH2, J=5,0 Hz), 3,37 (s, 2H, CCH2O), 3,19 (d, 6H, CCH2N, J=6.8 Hz), 1,99 (s, 18H, CH3). Exemplo 43. 13-Alliloxi-2,5,8,11-tetraoxatridecil 6- braços iniciador
Figure img0128
Para uma solução de 0,9 gramas de 1-amino-15-aliloxi- 2,2-bis(aminometil)-4,7,10,13-tetraoxapentadecano trihidroclorido e 3,89 gramas de 2,2-bis[(2- bromoisobutiriloxi]metil)ácido propiônico em 25 ml de diclorometano, junto com 530 mg de DPTS e 890 mg de DMAP, foi acrescentado 2,7 gramas de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada e concentrada, e o resíduo foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 50-70% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentrada para dar 1,9 gramas do produto desejado como um óleo viscoso. NMR (CDCl3): J=6,5 Hz), 5,91 (m, 1H, CH), 5,27 (d de q, 1H, CH2=CH, J=17,4, 1,6 Hz), 5,18 (d de q, 1H, CH2=CH, J=10,4, 1,4 Hz), 4,38 (app q, 12H, CH2OC=O), 4,01 (d de t, 2H, CH-CH2, J=5,7, 1,4 Hz), 3,61 (dois m, 16H, OCH2CH2O), 3,30 (s, 2H, CCH2O), 3,14 (d, 6H, CH2N, J=6,1 Hz), 1,92 (d, 36H, BrC(CH3)2, J=1,2 Hz), 1,38 (s, 9H, CH3). Exemplo 44. 13-(2,3-Dihidroxipropil)-2,5,8,11- tetraoxatridecil 6-braços iniciador
Figure img0129
Para uma mistura de 1,0 grama do alceno do procedimento anterior em 10 ml de água e 10 ml de t- butanol foi acrescentado 638 mg (3 eq) de potássio ferricianida, 268 mg (3 eq) de potássio carbonato, 10 mg de potássio osmate dehidrato, 12 mg de quinuclidina, e 61 mg (1 eq) de metanosulfonamida, e a mistura da reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi derramada dentro 50 ml de água, então extraída com 50 ml de diclorometano, seguido por outros 25 ml de diclorometano. Os combinados orgânicos foram secados por mais sulfato de sódio, filtrado e concentrado para dar um resíduo oleoso, que foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 2-4% metanol em diclorometano, e o produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 417 mg do produto desejado como um óleo viscoso. NMR (CDCl3): □ 7,78 (t, 3H, NH, J=6.0 Hz), 4,39 (app q, 12H, CH2OC=O), 3,86 (broad s, 1H, OH-CH), 3,62 (m, 20H, OCH2CH2O e OHCHCH2O e OH-CH2), 3,27 (s, 2H, CCH2O), 3,13 (s, 6H, NCH2), 2,40 (s, 2H, OH), 1,92 (s, 36H, BrC(CH3)2), 1,38 (s, 9H, CH3). Exemplo 45. Preparação de Hexaglutamic ácido amida com 9-Azido-4,7-ácido dioxanononanoic Preparação de t-Butil 9-hidroxi-4,7-dioxanonanoato metano sulfanato
Figure img0130
Uma solução de 3,0 gramas de t-Butil 9-hidroxi-4,7- dioxanonanoato (Bioconjugado Chem, 2004, 15, 1349) em 50 ml de diclorometano foi resfriado com um banho de água gelada, tratado com 2,5 ml de trietilamina seguido pela adição de 1,60 gramas de metanosulfonil clorido. A reação foi agitada em frio por 10 minutos, então permitida para agitar enquanto aquecida para temperatura da sala por mais de 1 hora. A reação foi diluída com 50 ml de diclorometano, lavada com 50 ml de água e secada por mais sulfato de sódio. Filtração e concentração deu um óleo, que foi submetido para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 50% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 3,99 gramas do produto como um claro, óleo sem cor. NMR (CDCl3): □ 4,38 (m, 2H), 3,76 (m, 2H), 3,70 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2), 3,61-3,66 (m, 4H), 3,08 (s, 3H, OSO2CH3), 2,49 (t, 2H, J=6.4 Hz, C=OCH2CH2), 1,45 (s, 9H, CH3). Preparação de t-Butil 9-azido-4,7-dioxanonanoate
Figure img0131
Uma solução de 2,0 gramas do mesilato do procedimento anterior em 25 ml de DMF, junto com 1,25 gramas (3 eq) de sódio azide, foi aquecida a 85°C durante a noite. A mistura da reação foi derramada dentro de 100 ml de água, então extraída com 4 x 50 ml de éter. As camadas orgânicas combinadas foram secadas por mais sulfato de sódio, filtrado e concentrado para dar um óleo claro. Este óleo foi corado através de um plug de sílica gel com 200 ml de 50% etil acetato em hexana, e o filtrado foi concentrado para dar 1,63 gramas do produto como um limpo, óleo sem cor. NMR (CDCI3) : □ 3,73 (t, 2H, J=6.4 Hz, C=OCH2), 3, 63-3, 69 (m, 6H), 3,39 (app t, 2H, CH2N3), 2.51 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2), 1,45 (s, 9H, CH3). Preparação de 9-Azido-4,7-ácido dioxano nonanóico O
Figure img0132
Uma solução de 1,63 gramas do azido éster do procedimento anterior em 5 ml de 88% ácido fórmico foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A mistura da reação foi diluída com 50 ml de água, então extraída com 4 x 25 ml de éter. Os combinados orgânicos foram secados por mais sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar 1,14 gramas do produto como um óleo claro. NMR (CDCl3): □ 3,79 (t, 2H, J=6.4 Hz, C=OCH2), 3,68 (app t, 2H), 3,67 (s, 4H), 3,39 (app t, 2H, CH2N3), 2,66 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2CH2). Preparação de 9-Azido-4,7-ácido dioxanononanóico, N- hidroxisuccinimide éster
Figure img0133
Uma solução de 1,14 gramas do ácido do procedimento anterior e 650 mg de N-hidroxisuccinimide em 15 ml de acetonitrila seco, junto com 150 mg de DMAP, foi tratado com 1,4 gramas de DCC e a reação foi agitada a temperatura da sala por 3 horas. A reação foi filtrada e concentrada para dar um resíduo, que foi submetida para cromatografia flash em coluna de sílica gel com 10-30% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentrada para dar 960 mg do produto como um óleo limpo contendo uma pequena quantidade de sólido. NMR (CDC13) : □ 3,87 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2), 3,68 (app t, 2H), 3,67 (s, 4H), 3,39 (app t, 2H, CH2N3), 2,91 (t, 2H, J=6.4 Hz, C=OCH2CH2), 2,84 (br s, 4H, CH2CH2). Preparação de Hexaglutamic ácido amida com 9-Azido- 4,7-ácido dioxanononanóico
Figure img0134
A mistura de 17 mg de ácido hexaglutamico em 1 ml de 25 mM tampão HEPES pH 7 foi preparado, acrescentando 350 μL de DMF para melhorar a solubilidade. Então foi acrescentado 7 mg do NHS éster acima em solução de DMF, e conferido o pH, que foi cerca de 5. Um total de 240 μL de 0,5 M NaOH foram acrescentados para trazer o pH para cerca de 7,5, e acrescentado outros 13 mg do éster NHS. A reação foi seguido por fase reversa HPLC usando um sistema "Waters HPLC with a 2695 Alliance Solvent" sistema de entrega equipado com um "Waters 2685 Dual Wavelength Detector". amostras foram cromatografada usando um Jupitor C18 HPLC coluna (8x260mm) de Phenomenex a 1,2ml/min com bomba A tampão como 0,08% TFA em água e bomba B tampão como 0,1% TFA em acetonitrila por 25 min. Seguindo a injeção da amostra, a coluna foi lavada por 1min. com isocrático 100%A, então aumentado para 20%B por mais de 10 min. com um gradiente linear seguido por um aumento linear para 50%B por mais de 6min. A coluna foi tirada com 95%B por 2 min. antes da regeneração usando um isocrático 100%A por 2min. O cromatograma foi monitorado a OD220nm. O peptídeo nativo e o azide modificado peptídeo eluído como cumes afiados a 5,6 min. e 9,6 min., respectivamente. Seguindo a reação durante a noite, o cume de peptídeo foi aumentando e o cume do produto foi no seu máximo. Pureza de produto foi confirmada por cromatografia de troca de ánion usando um Sistema "Waters HPLC with 2695 Alliance Solvent" o equipamento do sistema de entrega equipado com um "Waters 2685 Dual Wavelength Detector". As amostras foram cromatografadas usando uma troca de ánion fraco "DEAE-825 HPLC coluna (8x75mm) from Shodex at 1ml/min". Com bomba A tampão como 20 mM Tris pH 7,5 e bomba B tampão como tampão A contendo 0,5M NaCl por 16 min. Seguindo injeção da amostra, a coluna foi primeiro lavada por 5min. com isocrático 30%B, então aumentado para 100%B por mais de 10 min. com um gradiente linear e então mantido a 100%B por 2min. A coluna foi então regenerada usando isocrático 30%B por 3min. antes da próxima injeção. O cromatograma foi monitorado a OD220nm. O peptídeo nativo eluído como um simples cume afiado a 10,1min enquanto o peptídeo modificado eluído como um simples cume afiado a 10.6min. A reação foi concentrada usando uma bomba de vácuo sobre o evaporador rotativo para remover todo o solvente, e o resíduo foi triturado com 100 μL de 2.5 M HCl, resultando em um sólido branco. Esta mistura foi vorticicada e centrifugada por 5 min a 5000 rpm, e o supernadante foi decantado. O sólido foi lavado outra vez de uma maneira similar com 2 x 100 μL de 2,5 M HCl, então secado sob vácuo para dar o produto desejado como um sólido branco. Exemplo 46. Preparação de camptotecina PC-copolímero Síntese de 2-(2-Azidoetoxi)etanol
Figure img0135
Uma solução de 10,0 gramas de 2-(2-cloroetoxi)etanol em 50 ml de água deionizada foi tratada com 10,4 gramas (2 eq) de sódio azide, e a mistura da reação foi aquecida a 80°C por 48 horas. A solução foi resfriada para a temperatura da sala, saturada com sódio clorido e extraída com 3 x 50 ml de éter. Os combinados orgânicos foram secado por mais anidro sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar 7,25 gramas (69%) do produto desejado como um claro, óleo sem cor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 2,05 (t, J = 6,4 Hz, 1H, OH), 3,42 (t, J = 5Hz, 2H), 3,63 (dd, J = 4,4, 5,6 Hz), 3,71 (dd, J = 4,4, 4,8 Hz, 2H), 3,77 (dt, J = 4,4, 6Hz, 2H). Síntese de 5-[2-(2-Azidoetoxi)etoxi]-4-ácido oxopentanóico
Figure img0136
Uma solução de 3,0 gramas de 2-(2-azidoetoxi)etanol em 50 ml de diclorometano foi tratada com 280 mg de 4- (dimetilamino)piridina e 64 ml (2 eq) de trietilamina, e a solução foi resfriada com um banho de gelo. Uma solução de 2,61 gramas (1,0 eq) de anidrido glutárico em 5 ml de diclorometano foi então acrescentada em conta gota por mais de uns poucos minutos. A reação foi agitada, então aquecida a refluxo suave durante a noite. A reação foi resfriada para a temperatura da sala, lavada com 2 x 25 ml de 1N HCl e 25 ml de H2O, então secada por mais sulfato de sódio. Filtração e concentração deu 4,66 gramas (83%) do produto desejado como um limpo, óleo sem cor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,97 (quintet, J = 7,2 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 3,39 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,66 - 3,72(m, 4H), 4,26 (app t, J = 4,6 Hz, 2H). Síntese de Camptotecina azide conjugado
Figure img0137
Uma solução de 70 mg de 5-[2-(2-azidoetoxi)etoxi]-4- ácido oxopentanóico em 10 ml de diclorometano foi resfriada em um banho de água gelada, e tratada com 55 mg de EDC, seguida por 35 mg de DMAP e 50 mg de camptotecina. A reação foi então permitida para aquecer para temperatura da sala e agitada durante a noite para a solução tornar lentamente homogênea. A mistura da reação foi então concentrada e aplicada para uma coluna de sílica gel, que foi eluída primeiro com 1 - 2% metanol em diclorometano. As frações apropriadas foram então concentradas para dar o desejado conjugado como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 0,98 (t, J = 7.6H), 1,98 (quintet, J = 7,2 Hz, 2H), 2,13-2,32 (complexo m, 2H), 2,45(t, J =7,6 Hz, 2H), 2,51-2,65 (complexo m, 2H), 3,35 (t, J = 5 Hz, 2H), 3,63-3,68 (m, 4H), 4,21-4,25 (m, 2H), 5,30 (br s, 2H), 5,41 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 17,2 Hz, 1 H), 7,21 (s, 1H), 7,68 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,84 (app t, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,23(d, J = 8 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H). Síntese de copolímero de metacrilóleooxietil fosforilcolina e trimetilsilil(TMS) -protetor propargil metacrilato Etil α-bromoisobutirato (18,84mg, 0,096mmol), bipiridina (30,1mg, 0,192mmol) e 450mg de DMSO foram carregado inicialmente dentro de um tubo Schlenk. A mistura foi cuidadosamente desgaseificada e o tubo preenchido com nitrogênio. CuBr foi então acrescentado para o tubo sob condições inertes (13,8mg, 0,096mmol). A mistura da reação foi marcada e resfriada a -78°C. A mistura de trimetilsilil- protetor propargil metacrilato (TMS-PgMA) (66mg, 0,336mmol) e metacrilóleooxietil fosforil colina (0,9, 3,04mmol) foram dissolvidas em 4mL de desgaseificada etanol, 200 prova. A solução foi acrescentada em conta gota sob condições inertes para o vaso da reação resfriado. A mistura foi completamente desgaseificado sob vácuo por 15 min a 0°C e preenchido com gás inerte. Polimerização foi permitida para proceder por 15 horas.
Figure img0138
Depois de 15 horas, a mistura da reação foi encontrada muito homogênea sem ligações cruzadas aparentes. A reação foi extinta por exposição ao ar e a mistura tornada de marrom escuro para verde. Análise GPC de uma amostra bruta antes de realizar a purificação sobre uma Coluna Shodex (OH806) calibrada com óxido de polietileno padrão indicou a formação de um polímero como um simples pico de distribuição estreita (peso molecular no cume Mp foi encontrado para ser 13200g/mol). Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 22900g/mol, Mp de 25000g/mol e PDi de 1,14. A reação bruta foi passada através de sílica gel, concentrada e precipitada cuidadosamente dentro de dietil éter. O sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. Copolímero foi secado dentro de um forno a 50°C durante a noite, rendendo 0,9g de copolímero. Análise por 1H NMR espectroscopia mostrou no grupo TMS. Como um passo precatório, 0,5g do copolímero foi tratado adicionalmente por 100mg de tetrabutil amônia fluorida trihidado e purificado por precipitação. Enxerto de camptotecina azide conjugado dentro de alcina funcionalizado copolímero CuBr (13mg) foi carregado dentro de um tubo desgaseificador Schlenk seguido pela adição de 15mg de N, N, N’, N”, N”-pentametil dietilenetriamina. 240mg de copolímero foi dissolvido dentro de 2g de 200, prova desgaseificado etanol e 50 mg de camptotecina azide conjugado (CPT-L-N3) foram dissolvidos dentro de 1,5g de DMF. A solução de CPT-L-N3 foi acrescentada em conta gota sob condições inertes para o tubo Schlenk enquanto agitada, seguido pela adição de uma solução de alcina funcionalizada copolímero. A mistura foi desgaseificada por três ciclos de vácuo-nitrogênio e foi permitida para reagir a temperatura da sala por 3 horas.
Figure img0139
Depois de 3 horas, uma alíquota foi retirada da mistura bruta e analisada por GPC a 370 nm que mostrou o desaparecimento do pico de camptotecina livre e um pico de peso molecular alto que corresponde para o camptotecina copolímero conjugado. A mistura da reação foi exposta para o ar, concentrada para metade do seu volume, passada através de sílica gel para remover o cobre catalisador e então precipitado cuidadosamente dentro de dietil éter. O polímero foi lavado com um excesso de dietil éter. o sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. O polímero foi secado em um forno a 50°C durante a noite e foi isolado como um pó marrom luminoso. Análise espectroscopia 1HNMR realizada sobre o copolímeros enxertado de camptotecina (CD3OD) mostrou pico e sinais de espalhamento aromático na 79ppm área, característica de prótons do incorporado camptotecina. Exemplo 47.Camptotecina estudo de liberação do copolímero enxertado com camptotecina Amostras de copolímero enxertado com camptotecina foram preparadas a aproximadamente 10 mg/ml em Tris Tampão, pH=8,0. Esterase viva de fígado de coelho (Sigma-Aldrich E0887-IKU, Lot # 061K74451) foi acrescentada para a amostra e a amostra foi encubada a 37°C por mais de 65 horas. Análise GPC das amostras foi feira usando um sistema HPLC consistindo de um "Waters Alliance 2995" com "Waters 2410 Refractive Index Detector, Waters 2996 Fotodiode Array Detector", e uma coluna "Shodex Protein KW-803". A fase móvel usada para elução foi tampão de fosfáto salino contendo 10% etanol absoluto etanol. A razão de fluxo foi ajustada para 1 ml/min e a presença de camptotecina monitorada a 370 nm. Foram feitas dez injeções de microliter da amostras a cada ponto de tempo.
Figure img0140
Figure img0141
Exemplo 48. Preparação de maleimida-funcionalizado PC-copolímero contendo camptotecina
Figure img0142
O protocolo de polimerização seguido foi essencialmente o mesma descrito no Exemplo 46 exceto que o protetor maleimida funcionalizado iniciador descrito em Exemplo 5 foi usado no lugar de etil α- bromoisobutirato. A quantidade dos reagentes utilizados foram como descrito na tabela seguinte:
Figure img0143
A mistura da reação de polimerização foi completamente desgaseificada a -78°C e a reação permitida para proceder a temperatura da sala por 17 horas. A polimerização foi extinta em exposição ao ar. Uma solução de 100mg de tetrabutil amônia fluoride dissolvido em 1 ml de metanol foi acrescentada para a mistura da reação. A reação bruta foi passada através concentrada e precipitada cuidadosamente dentro de dietil éter. O sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. O polímero foi secado dentro de um forno a 40°C durante a noite. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 73.000g/mol, Mp de 74.000g/mol e PDi de 1,15. Análise por espectroscopia 1H NMR não mostrou grupo TMS. Desproteção do protetor maleimida grupo funcional
Figure img0144
O polímero do passo anterior foi borificado como uma camada fina de pó sobre o fundo de um prato cristalizado largo. O prato foi colocado em um forno a vácuo pré aquecida a 125°C e plicado vácuo. Aquecimento a 125°C foi conduzido por 1 hora e o vácuo foi gradualmente descontinuado uma vez que a temperatura alcançou a temperatura da sala. O sólido/pó resultante foi coletado sobre um dispositivo frit/filtração , lavado várias vezes com dietil éter e secado em um forno de vácuo a temperatura da sala.
Figure img0145
Análise 1H NMR mostrou desaparecimento de sinais a 5,2 e 6,6ppm (representando o grupo furan) e o aparecimento de um novo sinal a 6,95ppm (representando o CH de maleimida). Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 77.000g/mol, Mp de 69.000g/mol e PDi de 1,1. Preparação de maleimida funcionalizado PC copolímero contendo camptotecina
Figure img0146
A ligação de camptotecina para o polímero funcionalizado com maleimida do passo anterior foi essencialmente como descrito no Exemplo 43. 170mg do polímero do passo anterior foi dissolvido em 0,5ml de etanol 200, prova em um tubo Schlenk. Para a solução foi acrescentado 50μL de uma solução de PMDETUma em DMF seco (5mg em 50μL), seguido pela adição de 200μL de uma solução de camptotecina azide conjugada dissolvida em DMF (125mg de CPT-L-N3 per ml de DMF). Para a mistura foi acrescentado adicionalmente 210mg de DMF seco para asseguras a homogenidade de uma mistura da reação. A mistura foi desgaseificada brevemente e 4mg de CuBr foram acrescentados sob condições inertes. A mistura foi desgaseificada e a reação permitida para ser realizada a temperatura da sala durante a noite. A mistura bruta foi dissolvida em metanol e passada através de uma curta coluna de sílica gel e purificada por precipitação e lavado em THF. O sólido foi finamente lavada]o com dietil éter e secado durante a noite a 35-40°C. Análise por espalhamento de luz mostrou um aumento de 20% no peso molecular (Mp), com Mn de 95.000g/mol, Mp de 84.000g/mol e PDi de 1,14. análise de 1H NMR do polímero resultante em CD3OD mostrou sinais de pico aromáticos no intervalo de 7-9 ppm. Uma estimativa rápida em CH de camptotecina a 8,4ppm e grupo metilena de HEMA-PC na região de 4-4.5ppm deu uma incorporação de camptotecina de 1,5-2%. Exemplo 49.Desproteção de protetor PC-copolímero funcionalizado com maleimida seguindo ligação de camptotecina azide conjugado
Figure img0147
Para 100mg do protetor maleimida funcionalizado copolímero do Exemplo 46 em 300μL de etanol foi acrescentado 29,4μL de uma solução reserva de PMDETA dissolvida em DMF (10mg/ml), seguido pela adição de 117μL de uma solução reserva de camtotecin azida conjugado em DMF (30mg em 240μL de DMF), 85μL de DMF e 2,1mg de CuBr. A mistura da reação foi completamente desgaseificada e agitada durante a noite. Desproteção da funcionalidade de maleimida foi realizada como descrita no Exemplo 48. Exemplo 50.Preparação de PC-copolímero funcionalizada com maleimida contendo camptotecina e fluoresceina Polimerização
Figure img0148
O protocolo de polimerização seguido foi essencialmente o mesma como que descrito no Exemplo 46 exceto que um terceiro comonômero, metacrilato fluorescente (FLMA), foi acrescentado:
Figure img0149
A quantidade de reagentes utilizados descrito na tabela seguinte:
Figure img0150
A mistura da polimerização da reação foi completamente desgaseificada a -78°C e a reação permitida para realizar a temperatura da sala por 17 horas. A polimerização foi extinta em exposição ao ar. Uma solução de 100mg de tetrabutil amônia fluoride dissolvida em 1 ml de metanol foi acrescentada para a mistura da reação. A reação bruta foi passada através de sílica gel, concentrada e precipitada cuidadosamente dentro de dietil éter. o sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. O copolímero foi secado dentro de um forno a 40°C durante a noite. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 69.000g/mol, Mp de 70.000g/mol e PDi de 1,15. Espectroscopia de1H NMR do polímero seco não mostrou grupo TMS. Desproteção do protetor grupo maleimida funcional
Figure img0151
O grupo protetor maleimida funcional do polímero do passo anterior foi desprotegido usando o protocolo detalhado no Exemplo 46. análise 1H NMR mostrou desaparecimento de sinais a 5,2 e 6,6ppm (representando o grupo furan) e a aparecimento de um novo sinal a 6,95ppm (representando o CH da maleimida). Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 72.200g/mol, Mp de 63.700g/mol e PDi de 1.1. Preparação de PC-copolímero funcionalizado com maleimida contendo camptotecina e fluoresceina
Figure img0152
[0080] A ligação de camptotecina para o polímero funcionalizado com maleimida do passo anterior foi essencialmente como descrito no Exemplo 46. 170mg do polímero do passo anterior foi dissolvido em 0,5ml de etanol, prova 200 em um tubo Schlenk. Para a solução foi acrescentado 50μL de uma solução de PMDETUma solução em DMF seco(5mg em 50μL), seguido pela adição de 200μL de uma solução de camptotecina azide conjugada dissolvida em DMF (125mg de CPT-L-N3 por ml de DMF). Para a mistura foi acrescentado adicionalmente 210mg de DMF seco para garantir a homogenidade da mistura da reação. A mistura foi brevemente desgaseificada e 4mg de CuBr foram acrescentados sob condições inertes. A mistura foi desgaseificada e a reação permitida para realizar a temperatura da sala durante a noite. A mistura bruta foi dissolvida em metanol e passada através de curta coluna de sílica gel e purificada por precipitação e lavada em THF. O sólido foi finamente lavada com dietil éter e secado durante a noite a 35-40°C. Análise por espalhamento de luz mostrou um aumento de 20% no peso molecular (Mp), com Mn de 107.100g/mol, Mp de 98.100g/mol e PDi de 1,14. Análise 1H NMR do polímero resultante em CD3OD mostrou sinais de pico aromático no intervalo de 7-9 ppm. Uma estimativa grosseira baseada em CH da camptotecina a 8,4ppm e grupos metileno de HEMA-PC na região de 4-4,5ppm deu uma incorporação camptotecina de 2,5-5%. Exemplo 51.Desproteção de protetor maleimida funcionalizado fluoresceina PC-copolímero seguindo ligação de campototecina azida conjugada
Figure img0153
Para 100mg do protetor copolímero funcionalizado com maleinida do Exemplo 50 em 300μL de etanol foi acrescentado 29,4μL de uma solução reserva de PMDETA dissolvida em DMF (10mg/ml), seguido pela adição de 117μL de uma solução reserva de camtotecina azida conjugada em DMF (30mg em 240μL de DMF), 85μL de DMF e 2,1mg de CuBr. A mistura da reação foi completamente desgaseificada e agitada durante a noite. Desproteção da funcionalidade de maleimida foi realizada como descrita no Exemplo 43. Exemplo 52.Preparação de 4-braços maleimida funcionalizado HEMA-PC colina bloqueado copolímero Preparação de 4-braços protetor PC-polímero funcionalizado com maleimida
Figure img0154
[0081] O protetor maleimida 4-braços funcionalizado iniciador do Exemplo 11 e o ligante 2,2’-bipiridil foram introduzidos dentro de um tubo Schenk. Dimetil formamida foi introduzido a conta gota de forma que o percentual de peso do iniciador e ligante foi aproximadamente 20%. A solução resultante foi resfriada para -78°C usando um mistura de gelo/acetona seca, e foi desgaseificada sob vácuo por 10min. O tubo foi preenchido sob nitrogênio e o catalisador CuBr, colocado sob nitrogênio, foi introduzido dentro do tubo Schlenck (a razão molar de bromina/catalisador/ligante foi colocada 1/1/2). A solução tornou imediatamente marrom escuro. O tubo Schlenk foi selado e colocado a -78°C. A solução foi purgada por aplicação de um ciclo vácuo/nitrogênio três vezes. A solução de HEMA-PC foi preparada por misturar uma definida quantidade de monômero, colocado sob nitrogênio, com desgaseificada etanol 200 provas. A solução de monômero foi acrescentada a conta gota dentro do tubo Schlenk e homogeneizada por agitação de luz. A temperatura foi mantida a -78°C. Um completo vácuo foi aplicado para a mistura da reação por pelo menos 10 a 15 minutos. Até cessar o borbulhar da solução. O tubo foi então preenchido com nitrogênio e aquecido para temperatura da sala. A solução foi agitada, e como a polimerização foi processada, a solução tornou viscosa. Depois 38 hora, a reação foi extinta por exposição direta para o ar de modo o Cu (I) oxidar para Cu (II), a mistura tornou azul-verde sem cor, e foi passada através de sílica gel, concentrada e precipitada cuidadosamente dentro de dietil éter. O sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. Polímero foi secado dentro de um forno a 40°C durante a noite. As quantidades de reagentes utilizados foram como descrito na tabela seguinte:
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Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 550.000g/mol, Mp de 640.000g/mol e PDi de 1.18. Preparação de HEMA-PC colina bloqueado copolímero funcionalizado com maleimida 4-braços
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caracterizado por: o bloqueado copolímero ter a fórmula:
Figure img0157
Para uma mistura de 300mg do polímero do passo anterior em 0,7ml de etanol foi acrescentar, sob condições inertes, 1mg de PMDETA dissolvida em 42mg de DMF seguido por 1mg de CuBr. A mistura da reação foi imediatamente resfriada para -78°C e desgaseificada completamente. 2(Metacriloiloxi) etiltrimetil amônia cloreto (MC) como um solução aquosa (72% w/w) foi preliminarmente passada através de uma curta coluna para remover o estabilizador. 177mg da solução foi acrescentada para a mistura da reação, e a mistura foi completamente desgaseificada a -78°C por 30min. Até que não foi visto o borbulho. A mistura da reação foi enchida com nitrogênio e a reação permitida para ser realizada a temperatura da sala por 44 horas. A conversão estimada por 1H NMR indicou que 15% de MC foi convertido dentro de um polímero. Mistura bruta foi purificada por diálise para remover qualquer impureza de peso molecular baixo (MWCO 15kDa) seguido por liofilização. Análise 1H NMR indicou um novo pico na região 4.5ppm (CH2O) do grupo colina próximo para os três picos da fosforilcolina (de 4ppm a 4.5ppm). Análise 1H NMR do polímero final em CD3OD mostrou uma razão molar de 5-10% de MC versus HEMA-PC. O grupo maleimida funcional foi gerado por desproteção como descrito no Exemplo 43. Similar extensão de cadeia foi observado em um passo do processo onde o MC foi acrescentado no fim da polimerização HEMA-PC. Exemplo 53.Preparação de HEMA-PC fluoresceina bloqueado copolímero funcionalizado diol de 3-braços Polimerização
Figure img0158
4,66mg de 2,2’bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 41,3μL de uma solução reserva do iniciador do Exemplo 37 em DMF (10mg/100mL de DMF) e por 83,4μL de uma solução reserva de CuBr2 em DMF (10mg/ml de DMF). A mistura foi desgaseificada sob vácuo a -78°C. para a mistura da reação foi acrescentado 1,6mg de CuBr sob condições inertes, seguido por uma adição de 2g de HEMA-PC dissolvido em 3,75ml de etanol 200 provas em conta gota. O vaso foi selado e desgaseificada a -78°C sob vácuo até o borbulho não ser visto. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e a reação permitida para ser realizada a temperatura da sala por 48 horas. A conversão foi estimada por 1H NMR para ser acima 98%. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 457kDa, Mn de 407kDa e PDi de 1,13. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação dentro THF seguido por lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Preparação de HEMA-PC fluoresceina bloqueado copolímero funcionalizado diol 3 braços
Figure img0159
1,409g do polímero do passo anterior foram dissolvidos em 4ml de etanol 200 provas. Para a mistura da reação foi acrescentado uma solução de 14mg de FLMA dissolvida em 182mg de DMF, 510mg de DMF e 3mg de 2,2’bipiridil. A mistura da reação foi completamente desgaseificada antes da adição de 1,34 mg de CuBr e 1mg de Cu(0). A mistura da reação foi completamente desgaseificada e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 8 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação em THF, seguido por uma lavagem com THF e outras lavagem com dietil éter. O polímero final foi isolado como um pó amarelo. A presença de fluoresceina foi demonstrada por 1H NMR em metanol e aborbância a 370 nm. A análise do peso molecular realizada sobre o polímero por espalhamento de luz indicou um aumento em peso molecular para Mp de 501kDa e um PDi de 1,28. Exemplo 54.Preparação de PC copolímero contendo grupos alcino funcionalizado aldeído
Figure img0160
As quantidades de reagentes utilizados foram como descritos na tabela seguinte:
Figure img0161
Figure img0162
O iniciador do Exemplo 39 foi utilizados A mistura da reação da polimerização foi completamente desgaseificada a -78°C e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 64 horas. A reação foi extinta em exposição para o ar. A solução de 100mg de tetrabutil amônia fluoreto dissolvida em 1 ml de metanol foi acrescentado para a mistura da reação. A mistura bruta da reação foi passada através de sílica gel, concentrada e precipitada cuidadosamente dentro de dietil éter. O sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. O polímero foi secado em um forno a 40°C durante a noite. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 71.000g/mol, Mp de 64.000g/mol e PDi de 1,15. Espectroscopia de 1H NMR do polímero seco mostrou o grupo TMS. Geração de aldeído grupo funcional por periodato oxidação
Figure img0163
Para uma solução de polímero funcionalizado com diol em água destilada (10 peso %) foi introduzido a grande excesso de periodato de sódio dissolvido em água destilada. A reação foi permitida para ser realizada a temperatura da sala por 90min. no escuro. A reação foi extinta com uma solução aquosa de glicerol (1,5X vs. NaIO4) para remover qualquer periodato de sódio não reagido. A mistura foi agitada a temperatura da sala por 15min. e colocada em um saco de diálise (MWCO 14 para 25kDa) para purificação a temperatura da sala por um dia. Água foi removida por liofilização e o polímero foi coletado como um
Figure img0164
Exemplo 55.Preparação de PC copolímero contendo grupo de epoxide funcionalizado com diol
Figure img0165
9,13 mg de 2,2’bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 80μl de uma solução reserva do iniciador do Exemplo 26 em DMF (10mg/100ml de DMF). A mistura foi desgaseificada sob vácuo a -78°C. Para a mistura da reação foi acrescentado 4,2mg de CuBr sob condições inertes, seguido por um adição de uma mistura de 1g de HEMA-PC e 23μL de purificada glicidil metacrilato (GMA) (passado através de um removedor estabilizador, para remover o estabilizador MEHQ) que foi dissolvido em 2ml de etanol 200 provas foi acrescentado por adição a conta gota. O vaso foi selado e desgaseificada a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação dentro THF seguido por uma lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 92kDa, Mn de 83kDa e PDi de 1,1. Exemplo 56.Preparação de protetor PC copolímero contendo grupo epoxido funcionalizado com maleimida
Figure img0166
3,55 mg de 2,2’bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 13,52mg do iniciador do Exemplo 26. Os sólidos foram dissolvida em 142mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo a -78°C. para a mistura da reação foi acrescentado 6,22mg de CuBr sob condições inertes, seguido por uma adição de uma mistura de 1g de HEMA-PC e 78μL de purificado GMA (passada através de um removedor estabilizador, para remover o estabilizador MEHQ) que foi dissolvida em 2ml de etanol 200 provas foi acrescentado por adição a conta gota. O vaso foi selado e desgaseificada a - 78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação dentro de THF seguido por uma lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 71kDa, Mn de 65kDa e PDi de 1,13. Exemplo 57.Preparação de protetor PC copolímero contendo grupos acetoacetato funcionalizado com maleimida
Figure img0167
[0082] 13,55 mg de 2,2’bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 13,52mg do iniciador do Exemplo 26. Os sólidos foram dissolvida em 142mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo a -78°C. Para a mistura da reação foi acrescentado 6,22mg de CuBr sob condições inertes, seguido por uma adição de uma mistura de 1g de HEMA-PC e 110μL de purificada 2- (acetoacetiloxi)etil 2-metacrilato (MEA) (passada através de um removedor estabilizador, para remover o estabilizador MEHQ) que foi dissolvido em 2ml de etanol 200 provas foi acrescentado por adição a conta gota. O vaso foi selado e desgaseificada a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação dentro de THF seguido por uma lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 85kDa, Mn de 79kDa e PDi de 1,15. Exemplo 58. Preparação de protetor PC copolímero contendo alcino e grupos acetoacetato funcionalizado com maleimida
Figure img0168
13.55 mg de 2,2’bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 13,52mg do iniciador do Exemplo 26. Os sólidos foram dissolvida em 142mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo a -78°C. Para a mistura da reação foi acrescentado 6.22mg de CuBr sob condições inertes, seguido por um adição de uma mistura de 1g de HEMA-PC, 56,3mg de TMS-PgMA e 55μL de purificada MEA (passado através de um removedor estabilizador, para remover o estabilizador MEHQ) que foi dissolvida em 2ml de etanol 200 provas foi acrescentado por adição a conta gota. O vaso foi selado e desgaseificada a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação dentro THF seguido por uma lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 78kDa, Mn de 72kDa e PDi de 1,13. Exemplo 59. Preparação de PC copolímero contendo grupos alcino funcionalizado com diol
Figure img0169
As quantidades de reagentes utilizados foram como descrita na tabela seguinte:
Figure img0170
O iniciador do Exemplo 26 foi utilizado. A mistura da reação da polimerização foi completamente desgaseificada a -78°C e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 14 horas. A reação foi extinta em exposição para o ar. A solução de 100mg de tetrabutil amônia fluoreto dissolvida em 1 ml de metanol foi acrescentado para a mistura da reação. A mistura da reação bruta foi passada através de sílica gel, concentrada e precipitada cuidadosamente dentro dietil éter. O sólido foi isolado por filtração e lavado várias vezes com dietil éter. O polímero foi secado em um forno a 40°C durante a noite. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mn de 222.000g/mol, Mp de 277.000g/mol e PDi de 1.2. Espectroscopia de 1H NMR do polímero seco não mostrou grupo TMS. Exemplo 60. Ligação de ácido hexaglutamico amida com 9-azido-4,7-ácido dioxanononanoic para PC copolímero contendo alcino grupos funcionalizado com diol e subsequente generação de grupos aldeído funcional de diol precursores
Figure img0171
45mg do PC copolímero com grupos alcino funcionalizado com diol do exemplo 58. 13,55 mg de2,2bipiridil foram acrescentados para um tubo Schlenk seguido por 13,52 mg do iniciador do Exemplo 26. Os sólidos foram dissolvidos em 142 mg de DMSO. A mistura foi desigaeificada sob vácuo a -78o C. Para a mistura da reação foi acrescentado 6,22 mg de CuBr sob condições inertes, seguido por uma adição de uma mistura de 1g de HEMA-PC 56,3 mg de TMS-PgMA e 55 uL de MEA purificado (passado através de um removedor estabilizador, para remover o estabilizado MEHQ) que foi dissolvido em 2ml de etano 200 provas foi acrescentado por adição a conta gota. O vaso foi selado e desgaseificado a -78oC a vácuo até a borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. A mistura bruta foi passada através de um plug de sílica gel e purificada por precipitação em THF seguido por lavagem com THF e então uma lavagem final com dietil éter. Análise por luz scattering mostrou um MP de 78KDa, Mn de 72 KDA e PDi de 1,13 Exemplo 59 foi dissolvido em 800-900mg de água ionizada. 13,5μl de PDMETA (da solução reserva de 10mg em 100μl de DMF) foram acrescentados para a mistura da reação em um frasco de fundo redondo. 7mg de ácido hexaglutámico com 9-azido-4,7-ácido dioxanononanóico do Exemplo 45 foi dissolvido rm 70μl de DMF e acrescentado para a mistura da reação, junto com 2,1mg de CuBr. A mistura foi completamente degaseificda, colocada sob condições inertes e agitada durante a noite a temperatura da sala. Eficiência da reação foi monitorada por cromatografia de troca de ânion a OD220nm como descrito no Exemplo 45. Injeção no tempo zero mostrou a presença de polímero não reagido pela presenças dentro do fluxo, e o peptídeo não reagido a 10,6min. Seguindo a reação durante a noite, o pico de polímero desapareceu, e um novo pico, correspondente para o polímero modificado de peptídeo, apareceu a 11,6min. Este pico foi espalhado indicando a presença de múltiplas espécies polímero peptídeo devido ao fato que cada polímero tem múltiplos grupos alcino grupos para potencial ligação da azida modificada peptídeo. Purificação por cromatografia de troca de ânion Baseado na analítica experiência de cromatografia de troca de ânion, o polímero modificado peptídeo foi purificada usando cromatografia de troca de ânion em um Sistema "Akta Prime Plus" usando uma coluna "Hitrap DEAE FF" (5 ml) de GE Healthcare. Tampão A foi 20mM Tris pH7,5, e Tampão B foi Tampão A contendo 0,5M NaCl. A coluna foi equilibrada com Tampão A, seguido por três volumes da coluna de Tampão B, e então suficiente Tampão A para retornar a eluida coluna para uma mesma condutividade como Tampão A. 700μg do polímero bruto modificado peptídeo foi carregado dentro da coluna em Tampão A, e a coluna foi lavado com suficiente Tampão A para retornar a eluida coluna para uma mesma condutividade como Tampão A. Eluição foi realizada em um modo de passos usando 20%B, 30%B, 50%B, 70%B, e 100%B. Frações de 10ml foram coletadas e frações 17 e 18 foram agrupadas (20ml) para formar um agrupado de 40%B, e frações 19 e 20 foram agrupadas para formar um agrupamento de 70%B (20ml). Ambos agrupamentos foram concentrados para um volume de 0,51ml usando um concentrador "Amicon Ultra 30 kDa MWCO". A análise foi realizada usando a o método de troca analítica de ânion do Exemplo 45 que indicou que o agrupado de 70%B continha uma simples pico espalhado como descrito previamente. O agrupado de 40%B também continha um simples pico espalhado que iludido ligeiramente mais cedo que o pico de 70%B indicando a presença de polímero modificado peptídeo com poucos peptídeos por polímero. Análise adicional foi realizada usando cromatografia de exclusão de tamanho em sistema "Waters HPLC" com um equipamento de sistema de entrega "2695 Alliance Solvent" com um "Waters 2685 Dual Wavelength Detector". Amostras foram cromatografadas usando uma coluna "Superdex 200" (10x300mm) da GE Healthcare a 1ml/min. com 1x PBS pH 7,4 por 25 min. O cromatograma foi monitorado a OD220nm e OD280nm. Ambos os agrupados de 40%B e 70%B da purificação de troca de ânion elutido com retenção de pico no tempo em torno de 9min. Comparando para um peso molecular no intervalo de 500 kDa - 600 kDa. Os picos foram visíveis a 220nm e 280nm indicando a presença de polímero e peptídeo. Polímero eluido em uma posição similar, mas foi visível só a 220nm, enquanto peptídeo eluido não reagido com um tempo de retenção de 18min, mas só foi visível a 280nm. Conversão de terminal grupos funcional diol dentro de grupos funcionais aldeído por oxidação de periodato no ácido hexaglutámico modificado PC copolímero O terminal grupos funcionais de diol na troca de ânion purificada e concentrado agrupamento de eluição de 70%B do polímero modificado peptídeo do passo anterior foram convertidos dentro do grupo funcional de aldeído usando oxidação de periodato como descrita no Exemplo 54. Exemplo 61. Conjugação de PC polímero contendo ácido hexaglutámico funcionalizado com alcalina fosfatase para aldeído Alcalina fosfatase(Sigma-Aldrich) foi trocada tampão dentro de 25mM Hepes pH 7 (tampão conjugação) e concentrada para 5-8 mg/ml. Reações de conjugação foram conduzidas a 3-5X molar excesso do PC copolímero contendo ácido hexaglutámico funcionalizado com aldeído do Exemplo 60 para proteína na presença de 40mM sódio cianoborohidrito com uma concentração final de proteína de aproximadamente 1mg/ml. todas as reações foram conduzidas em vasos de vidro selado talhado durante a noite a temperatura da sala. A forma diol do polímero foi usada como um controle negativo. 40μl de cada reação foi fracionada sobre uma coluna Superdex 200 (10/300mm) a 1ml/min. em 1x PBS pH 7.4. Frações de 1ml foram coletadas e testadas por atividade de alcalino fosfatase como segue. 5μl das frações SEC foram diluídas 5x com 20mM Tris pH 7.5, e 100μl de substrato de PNPP foi acrescentado e as amostras foram incubadas a 37°C por 20 min. OD405nm foi medido usando um "SpectraMax Plus 384 plate reader from Molecular Devices". Como esperando, na conjugação foi observado quando polímero o funcionalizado com diol foi usado. Embora, no caso do polímero funcionalizado com aldeído, atividade de alcalino fosfatase foi determinada no 8-10min. intervalo do tempo de retenção, correspondendo com o polímero livre e as espécies de peso molecular mais alto, como também no intervalo de 12-13min. correspondendo com alcalino fosfatase livre. Exemplo 62. Conjugação de PC copolímero contendo campototecina funcionalizada com humano Fab para maleimida Humano Fab foi preparado por digestão completa de pepsin humano IgG (Innovative Research) para render Fab2, seguido por subsequente redução com TCEP para render Fab. Digestão de pepsin de IgG foi realizada em 0,1M sódio acetato pH 4,5 a 4°C durante a noite para obter mais de 90% eficiência na digestão. A fração Fab2 foi então adicionalmente purificada usando troca cromatografia de troca de câtion com uma coluna "MacroCap SP". A fração de Fab2 foi eluido com 100200mM NaCl a pH 5 enquanto o pepsin livre e outros eluidos contaminados nas frações não ligadas. O purificada Fab2 foi então reduzido com um razão molar de 2X de TCEP a 37°C por 30min., e cromatografia de filtração de gel foi usada para purificar o Fab do não reduzido Fab2 e TCEP livre. As frações de Fab foram então agrupadas e tampão trocados dentro do tampão de conjugação. A experimento de conjugação descrito abaixo é para conjugação de 1mg de Fab para um excesso de 13x molar do 84 kDa de PC copolímero funcionalizado com maleimida contendo campototecina do Exemplo 48. A reação de conjugação foi realizada em 10mM de sódio acetato pH 5 com 2mM EDTA. A concentração final de Fab foi 2,7mg/ml na presença de um excesso de 13x molar de polímero dissolvido no tampão de conjugação e excesso de 3x molar de TCEP como agente de reação. O polímero foi dissolvido em tampão de conjugação a uma concentração de 100-300mg/ml seguido por adição do TCEP e Fab. A mistura da reação foi mexida levemente, e a conjugação conduzidas no escuro a temperatura da sala durante a noite. O estado da conjugação pode ser monitorado com SDS- PAGE onde sob condições de não redução, a acumulação de espécies de MW maior que o Fab livre é uma ótima indicação do evento de conjugação. Tais espécies conjugadas de alto MW são caracterizadas por serem: (1) fluorescente sob iluminação ultra violeta devido a presença de campototecina; (2) a faixa de conjugado deveria ser capaz de marcar por Azul de Coomassie devido a presença de proteína (o polímero não marca); (3) as espécies de alto MW não trocam sob condições de redução que é uma ótima indicação que eles não são devido a disulfeto mediador agregados. Alternativamente, o evento de conjugação pode ser monitorado com uso de SEC analítico uma coluna "Superdex 200" (10/300mm) da GE Healthcare a 1ml/min em 1x PBS pH 7,4. Sob tais condições de corrida, o Fab livre elude a 15,3 min. e o polímero livre elude a 10,6 min. Para adicional caracterização da presença de Fab polímero de campototecina Fab conjugado como descrito acima, uma mistura da reação foi adicionalmente fracionada usando uma 1ml de cromatografia de troca de câtion (CEX) ou coluna de MacroCap SP da GE Healthcare a pH 5. A coluna foi conectada para um sistema de cromatografia "AKTA Prime Plus" equipado com um OD280nm detector, medidor de condutividade e coletor de frações. Tampão A foi 10mM sódio acetato pH 5 e Tampão B foi Tampão A contendo 0,5M NaCl. As frações eluido foram adicionalmente analisadas usando SDS- PAGE. Como o Fab é protonatado a pH 5, junto com a baixa força iônica a 10mM NaCl, Fab conjugado e locação de Fab livre para a coluna de troca de câtion enquanto o não conjugado polímero não deveria interagir com o CEX e portanto deveria permanecer no fluxo através da fração. A fração não ligada foi coletada por análise. Depois lavado com pelo menos 15 volumes da coluna (CV) de tampão A, a coluna foi eluido em modo de passo com 8%, 12%, 20%, 40% e 100% tampão B que são equivalente para o tampão A contendo 40mM, 60mM, 100mM, 200mM e 500mM NaCl, respectivamente. Em cada passo de eluição, pelo menos 10 CV de cada tampão de eluição foi passada através da coluna e 1,5ml de frações foram coletadas e o localizado OD280nm foi monitorado continuamente até a linha de base derrubar pelo menos para 5% do inicial tampão da experiência antes da mais alto gradiente de eluição do sal ser iniciado. As frações de pico de cada passo de eluição foram coletadas e concentradas com um Amicon Ultra livre concentrador com 10 kDa MW cutoff (MWCO) membrana. O concentraste foi analisado com SDS-PAGE sob condições de não redução e redução usando um 1mm NuPAGE Novex 412% gradiente gel, e electroforeses foi realizada de acordo com as especificações de fabricação (Invitrogen Corp). Amostras para análise SDS-PAGE incluem a mistura da reação inicial, MacroCap SP frações não ligadas da coluna, frações da coluna lavada, e concentradas de agrupamentos de 8%, 12%, 20% e 40% eluição. Uma vez a electroforeses foi completada, o PAGE foi desmontado do cassete e colocado o iluminador UV para rever a fluorescência que é devido para a campototecina contendo polímero e conjugado. Uma visão foi tomada imediatamente antes do gel ser submetido para a mancha Azul Coomassie usando a sistema de mancha SimplyBlue de Invitrogen para rever a proteína contendo faixa. Os resultados baseado na análise SDS-PAGE indicou o seguinte: O tamanho da fração ligada MacroCap SP não conteve proteína baseado na mancha Azul de Coomassie mas exibindo uma extensivo sinal de fluorescente no maior intervalo de MW do well (>160 kDa). Em adição, quando a fração foi analisado por ensaio de proteína Bradford, não mostrou sinal de proteína sinal tudo comparado com carregada coluna de MacroCap SP; isto é adicionalmente evidencia para confirmar que a fração não ligada é destituída de qualquer proteína incluindo Fab e polímero Fab conjugada. Embora, contendo principalmente polímero mas não campototecina livre como a campototecina é muito pequena para migrar neste intervalo de MW. Frações a 8% e 12%B contem as duas maiores espécies que foram manchadas por Azul Coomassie, uma foi o Fab livre e os outros um mais alto intervalo de difusão MW com MW alcançando entre 110-260 kDa, só a faixa posterior mostrou fluorescência mas não Fab livre. Baseado na evidencia previa que o polímero não pode ser manchadas por Azul Coomassie e o fato que a fração não ligada contem principalmente polímero e mostrou não mancha Azul Coomassie, nós podemos concluir que a alta espécies MW é o conjugado que contém ambos Fab e polímero com campototecina. Não fluorescência foi observada nas frações eluidas de 20% e 40% como estes correspondentes para o Fab livre e fração de Fab2. Estas duas frações constituem a maioria das proteínas eluidas (>80%) que é um ótima indicação que o conjugado foi enriquecido frações baixas de sal eluido como esperado (devido ao efeito protetor do polímero). As frações agrupadas eluidas foram também sujeitas para condições de redução usando DTT, e o intervalo Fab foi trocado abaixo para a posição 25 kDa que é uma ótima indicação de cadeia leve e cadeia meio pesada dissociação devido a redução da ligação de disulfeto inter cadeia. Sob tais condições, o sinal fluorescente a alto MW como descrito acima não foi troado e foi também manchado por Azul Coomassie. Esta observação confirma que altas espécies de MW é covalentemente ligado para o polímero em lugar de associação não covalente ou conexão através de ligação de disulfeto. Em adição para a análise SDS-PAGE, as frações eluidas de MacroCap SP foram submetidas para analítico SEC usando uma coluna de Superdex 200 (10x300mm) da GE Healthcare e um sistema de Waters HPLC com sistema de entrega 2695 Alliance Solvent com um detector de Arranjo de Diodo 2669. A análise foi realizada em 1xPBS pH 7,4 a uma razão de fluxo de 1ml/min. O cromatograma foi monitorado usando OD220nm, OD280nm e OD355nm onde OD220nm detecta proteína, polímero e campototecina, OD280nm detecta só proteína e campototecina, e OD355nm detecta só a campototecina. Os resultados são como seguem:
Figure img0172
Exemplo 63.Conjugação de PC copolímero contendo campototecina e fluoresceina funcionalizado com humano Fab para maleimida As condições da reação de conjugação, purificação, análises e conclusões foram essencialmente as mesmas como para o Exemplo 62, exceto para as seguintes: Um PC copolímero contendo campototecina e fluoresceina funcionalizado com 98 kDa maleimida do Exemplo 50 foi usado. Para a eluição de MacroCap SP, uma adicional eluição de 4%B precedeu a eluição 8%B. Por esta razão, o agrupamento de eluição 4%B foi incluído em ambas as análises SDS-PAGE e SEC. O agrupamento 4%B também mostrou fluorescência, uma ótima indicação que esta fração também contem conjugados. A análise SEC/MALS da fração não ligada MacroCap SP confirmou que esta fração foi composta só de polímero livre. Exemplo 64.Conjugação de PC copolímero contendo campototecina e fluoresceina funcionalizado com reagente de Traut modificado IgG humano completo para maleimida Neste exemplo, IgG humano completo (Pesquisa Inovativa) foi o primeiro modificado com reagente de Traut de um molar de 3 dobras a razão de excesso em 1xPBS pH 7,4. O conjunto da reação inclui 10mg/ml IgG e 3mg/ml reagente de Traut em 1xPBS pH 7,4, o volume da reação foi 300μl e a reação foi conduzidas por 1 hora a temperatura da sala no escuro com mistura. Para completar a reação, uma mistura da reação era tampão trocada dentro de 10mM de sódio acetato pH 5 com 2mM EDTA usando uma coluna de sinalização 10ml BioGel P30. A pH 5 e na presença de EDTA, oxidação de grupos sulfidril para formar ligação de disulfeto foi preventiva. A coluna foi conectada para um "AKTA Prime Plus" equipado com um detector OD280nm, medido de condutividade, e coletor de fração. As frações de Proteína foram coletadas e concentrada para 4,45mg/ml. A amostra foi liga agora por conjugação para o polímero. A análise SDS-PAGE mostrou que modificação de IgG com reagente de Traut sob estas condições não resultou em agregação de proteína. Conjugação do Traut modificado IgG para polímero foi realizada em 10mM sódio acetato pH 5 com polímero de 20 dobras de excesso molar. A concentração final de IgG e polímero foi 3,8mg/ml e 44mg/ml, respectivamente. A reação foi conduzida a temperatura da sala durante a noite. Quando a reação foi completada, a conjugação da reação foi submetida para cromotografia de troca de câtion como descrito no Exemplo 62 sem modificação. o agrupamento da fração eluido fração a 8%B, 12%B, 20%B e 40%B foram analisados por SDS-PAGE e submetidas para iluminação ultra violeta. O resulto indicou que só a fração eluida de 8%B continha espécies de mais alto MW que o monômero IgG e o polímero livre. Em adição, a faixa manchadas com Azul Coomassie e fluorescência exibida, indicando a presença de conjugado. Sob condições reduzidas condições, a faixa não ficou novamente abaixo indicando a presença polímero conjugado IgG como descrito no Exemplos 62 e 63. Exemplo 65 .Preparação de 2-(Acriloiloxietil-2‘- (trimetilamônia)etil fosfato, sal interno 1o intermediário
Figure img0173
Uma solução de 11,6 gramas de 2-hidroxietilacrilato e 14,0 ml de trietilamina em 100 ml de acetonitrila seca, sob uma atmosfera de nitrogênio, foi resfriada para -20°C, e a solução de 14,2 gramas de 2-cloro-2- oxo-1,3,2-dioxafosfolano em 10 ml de acetonitrila seca foi acrescentada a conta gota por cerca de mais de 30 minutos. A reação foi agitada no frio por 30 minutos, então filtrada sob a atmosfera de nitrogênio. O precipitado foi lavado com 10 ml de acetonitrila fria, e o filtrado foi usado diretamente na reação seguinte. 2-(Acriloiloxietil-2'-(trimetilamônia)etil sal interno
Figure img0174
Para a solução do procedimento anterior foi acrescentado 14,0 ml de trimetilamina (condensada usando acetona gelada seca condensada sob nitrogênio), a mistura da reação foi selada dentro de um vaso pressurizado, e agitada a 65°C por 4 horas. A mistura da reação foi permitida para agitar enquanto resfriava para a temperatura da sala, e quando alcançou cerca de 30°C, um sólido começou a formar. O vaso foi então colocada em um refrigerador a 4°C durante a noite. Estritamente sob uma atmosfera de nitrogênio, o sólido foi recuperado por filtração, lavado com 20 ml de acetonitrila fria seca, então secado sob um fluxo de nitrogênio por 15 minutos. O sólido foi então secado sob alto vácuo durante a noite para dar 12,4 gramas do produto como um sólido branco. NMR (CDClβ): □ 6,41 (dd, 1H, J=1,6, 17,2 Hz, vinil CH), 6,18 (dd, 1H, J=10,6, 17,2 Hz, vinil CH), 5,90 (dd, 1H, J=1,6, 10,4 Hz, vinil CH), 4,35 (m, 2H), 4,27 (m, 2H), 4,11 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,22 (s, 9H, N(CH3)3). Exemplo 66. Preparação de 3-Trimetilsililpropargil metacrilato
Figure img0175
Uma solução de 3,0 gramas de 3- (trimetilsilil)propargil álcool e 4,2 ml de trietilamina em 50 ml de éter foi resfriado para -10 °C com um banho de gelo seco/acetonitrila/etileno glicol, e uma solução de 2,9 gramas de metacriloil cloreto em 25 mL de éter foram acrescentados a conta gota por mais de 30 minutos. A mistura da reação foi agitada enquanto aquecia para a temperatura da sala por mais 4 horas, então filtrada e concentrada para dar um resíduo oleoso, que submetidas para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 1% éter em hexana. O produto contendo frações foi combinado, ccncentrado, e submetido para uma segundo cromatografia como antes para dar 2,46 g do produto como um limpo, um óleo incolor. NMR(CDCl3): □□6.18 (t, 1H, CCH2, J=1,2 Hz), 5,62 (p, 1H, CCH2, J=1,6 Hz), 4,76 (s, 2H, CH2), 1,97 (d de d, 3H, CCH3, J=1,0, 1,6 Hz), 0,187 (s, 9H, Si(CH3)3). Exemplo 67. Preparação de N-Iodoacetilpropargilamina
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Uma solução de 1,05 gramas de propargilamina hidrocloreto em 20 ml de acetonitrila seca foi tratada com 4,0 ml de diisopropiletilamina, seguido pela adição de 4,29 gramas de iodoacétici anidro em 20 ml de acetonitrila seca. A reação foi agitada a temperatura da sala por 1,5 horas, então concentrada para dar um resíduo, que foi particionado entre 100 ml de etil acetato e 100 ml de água. A fase orgânica foi lavada com 50 ml de cloreto de sódio saturado, então secado sobre sulfato de sódio. Concentração deu um sólido escuro, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 30-40% etil acetato em hexana. O produto contendo frações que foram limpas foi combinado e concentrado para dar um sólido, que foi triturado com uma pequena quantidade de hexana e secada ao ar para dar 940 mg do produto como um sólido amarelo muito luminoso. NMR(CDCl3): □ 6,25 (s, 1H,CH), 4,08 (app d de d, 2H, NCH2, J=2.6, 5.3), 3,72 (s, 2H, ICH2), 2,28 (t, 1H,NH, J=2,6 Hz). Exemplo 68. Preparação de 4-Pentin-1-ol, NHS éster
Figure img0177
Uma solução de 1,02 gramas de 4-ácido pentinóico e 1,20 gramas de N-hidroxisuccinimide em 20 ml de acetonitrila seca foi tratada com 300 mg de DPTS, seguido por 2,8 gramas de DCC, e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. A reação foi filtrada e concentrada para dar um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash coluna sobre sílica gel com 30% etil acetato em hexana. O produto contendo frações foi combinado e concentrado para dar 1,62 gramas do produto desejado como um sólido branco. NMR(CDClβ): DD2,89 (d de d, 2H, CH2C=O, J=7,9, 6,4 Hz), 2,85 (s, 4H, O=CCH2CH2C=O), 2,62 (app d de d de d, 2H, CHCCH2, J=8,6, 6,9, 2,7 Hz), 2,06 (t, 1H, CH, J=2,7 Hz). Exemplo 69. Preparação de N-Propargilmaleimida
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Uma solução de 1,08 gramas de propargilamina hidrocloreto em 50 ml de bicabornato de sódio saturado foi resfriada com um banho de água gelada, e 2,0 gramas de N-carboethoximaleimida foram acrescentados a conta gota por mais de uns poucos minutos. A reação foi agitada no frio por 30 minutos, então enquanto aquecida para temperatura da sala por mais de 25 minutos. A reação foi então extraída com 3 x 25 ml de diclorometano, que foi secada por sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O resíduo foi colocado em 10 ml de etil acetato e aquecido a 50°C por duas horas para completar a ciclização. A reação foi concentrada e o resíduo foi submetidas para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 30% etil acetato em hexana. Uma segunda cromatografia como antes deu 1,24 g do produto como um óleo amarelo muito luminoso. NMR(CDCl3): DD6,77 (s, 2H, CHC=O) , 4,30 (d, 2H, NCH2, J=24 Hz) 222 (t 1H CCH, J=25 Hz). Exemplo 70. Preparação de 5-Hexina-1-al
Figure img0179
Uma solução de 694 mg de 5-hexino-1-ol em 20 ml de dicorometano foi tratada a temperatura da sala com 3,0 gramas de Dess-Martin periodinana e a solução foi agitada a temperatura da sala por 2 horas. A reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado para dar um resíduo que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com etil acetato em hexana. Concentração das frações apropriadas deu o produto como um óleo amarelo muito luminoso. NMR(CDCl3): □□9,81 (t, 1H, CH=O, J=2,6 Hz), 2,61 (t de d, 2H, CH2CH=O, J=7,1, 1,2 Hz), 2,28 (t de d, 2H, CCH2, J=7,1, 2,6 Hz), 1,99 (t, 1H, CCH, J=2.6 Hz), 1,86 (p, 2H, CCH2CH2, J=7,0 Hz). Exemplo 71. Conjugação de PC polímero contendo ácido hexaglutámico funcionalizado com recombinante humano eritropoietina para aldeído
Figure img0180
Recombinante humano eritropoietina (R&D Systems) foi tampão trocado dentro 25mM Hepes pH 7 (tampão de conjugação) e concentrado para 5 mg/ml. Reações de conjugação foram conduzidas a 3-5X excesso molar do PC copolímero contendo ácido hexaglutámico funcionalizado com aldeído do Exemplo 60 para proteína na presença de 40mM sódio cianoborohidreto com uma proteína final concentração de aproximadamente 1mg/ml. Todas as reações foram conduzidas em vasos selados de vidro talhado durante a noite a temperatura da sala. A forma diol do polímero foi usada como um controle negativo. 40μl de cada reação foi fracionado sobre uma coluna Superdex 200 (10/300mm) a 1ml/min. em 1x PBS pH 7,4. Frações de 1ml foram coletadas e analisadas a OD220nm e OD280nm. Como esperado, conjugação não foi observada quando o polímero funcionalizado com diol foi usado. Embora, no caso do polímero funcionalizado com aldeído, a presença de polímero eritropoietina conjugado foi observado porque a razão de OD280nm:OD220nm foi mais alta que a do polímero livre sozinho no 8-10min. O intervalo do tempo de retenção, onde o polímero livre e espécies de eluida de maior peso molecular. Eritropoietina livre eluida no intervalo de 14-15minuto. Exemplo 72 .Preparação de 9-(Metacriloiloxi)-4,7- ácido dioxanonanóico, 4-sulfo-2,3,5,6-tetrafluorfenil éster, sal de sódio Preparação de 9- (Metacriloiloxi) - 4,7-ácido dioxanonanóico, t-butil éster
Figure img0181
Uma solução de 5,0 gramas de t-butil 4,7-dioxa-9- hidroxinonanoato em 100 ml de éter, junto com 5,9 ml (2 eq) de trietilamina, foi resfriada com um banho de água gelada, e a solução de 2,3 gramas de metacriloil cloreto em 5 ml de éter foi acrescentado a conta gota por mais de alguns poucos minutos. A reação foi agitada no frio por 30 minutos, então permitida para aquecer para a temperatura da sala. Por TLC (sílica gel, 50% etil acetato em hexana) a reação pareceu ser incompleta, então outros 1,0 g de metacriloil cloreto foi acrescentado a conta gota. Depois de outras 2 horas, areação pareceu completa, então uma mistura da reação foi lavada com 50 ml de água, então secada sobre sulfato de sódio. Filtração e concentração deu um resíduo oleoso, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 20 30% etil acetato em hexana. As apropriadas frações foram combinadas e concentrada para dar 4,07 gramas do produto desejado como um limpo, óleo aproximadamente incolor. NMR (CDClβ): □ 6,13 (br m, 1H, C=CHH), 5,57 (br app t, 1H, J=1,6 Hz, C=CHH), 4,29 (app t, 2H, J=4,8 Hz, C=OOCH2), 3,70-3,76 (m, 4H), 3,61-3,67 (m, 4H), 2,50 (t, 2H, J=6,4 Hz, C=OCH2), 1,95 (app t, 3H, CH2=CCH3),1,45 (s, 9H, C(CHs)3). Preparação de dioxanonanóico
Figure img0182
Uma solução de 3,70 gramas de t-butil 9- (metacriloiloxi)-4,7-dioxanonanoato em 15 ml de 88% ácido formico foi agitada a temperatura da sala por 5 horas, tempo no qual a reação foi completada por TLC (sílica gel, 50% etil acetato em hexana). Concentração deu um óleo, que foi particionado entre 100 ml de diclorometano e 50 ml de água, e a camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio. Filtração e concentração deu um óleo, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 40% etil acetato em hexana. As frações apropriadas foram combinadas e concentradas para dar 2,01 gramas do produto desejado como um limpo, óleo incolor. NMR (CDCl3) : DD6, 14 (br m, 1H, C=CHH), 5,58 (br app t, 1H, J=1,6 Hz, C=CHH), 4,31 (app t, 2H, J=4,8 Hz, C=OOCH2), 3,73-3,80 (sobrepor tem, 4H, J=6 Hz), 3,66 (m, 4H), 2,65 (t, 2H, J=6 Hz, C=OCH2), 1,95 (app t, 3H, CH2=CCH3). Preparação de 9- (Metacriloiloxi) - 4,7-ácido dioxanonanóico, 4-sulfo-2,3,5,6-tetrafluorfenil éster, sal de sódio
Figure img0183
Uma mistura de 970 mg de 9-(metacriloiloxi)-4,7-ácido dioxanonanóico e 1,06 gramas de 4-sulfo-2,3,5,6- tetrafluorfenil, sal de sódio em 20 ml de acetonitrila seca foi tratado com 1,06 gramas de DCC, e a reação foi agitada a temperatura da sala por 1,5 horas. Filtração e concentração quase para seca deu um resíduo, que foi submetido para cromatografia flash coluna sobre sílica gel com 5% metanol em diclorometano. As frações apropriado foram combinadas e concentradas para dar um sólido, que foi colocado sob vácuo alto durante a noite para fornecer 783 mg do produto desejado como um sólido ligeiramente pegajoso. NMR (1H, CD3OD): □ 6,10 (h, 1H, CH2, J=0,9 Hz), 5,61 (p, 1H, CH2, J=1,6 Hz), 4,27 (m, 2H, CH2OC=O), 3,87 (t, 2H, CH2CH2C=O, J=6,0 Hz), 3,75 (m, 2H, CH2CH2OC=O), 3,67 (s, 4H, OCH2CH2O), 2,98 (t, 2H, CH2C=O, J=6,0 Hz), 1,92 (d de d, 3H, CH3, J=1,6, 0,9 Hz). NMR (19F, CD3OD): □ -140,92 (m, 2F, SCCF), 155,00 (m, 2F, OCCF). Exemplo 73 .Preparação de(2- Mercaptoetil)metacrilato, S-sulfato Preparação de (2-Bromoetil)metacrilato
Figure img0184
Uma solução de 6,25 gramas de bromoetanol e 8,36 ml de trietilamina em 50 ml de diclorometano foi resfriada com um banho de água gelada, e uma solução de 5,0 gramas de metacriloil cloreto em 5 ml de diclorometano foi acrescentado, a conta gota. A reação foi agitada a temperatura da sala por 4 horas, então outros 50 ml de diclorometano foram acrescentados e a reação foi lavada com 2 x 25 mL de água, então com 25 ml de cloreto de sódio saturado. Os orgânicos foram secado sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar um resíduo laranja, que foi submetido para cromatografia flash de coluna sobre sílica gel com 10% etil acetato em hexana. As apropriadas frações foram combinadas e concentradas para dar 3,15 gramas do produto como um óleo claro, que era suficientemente puro para uso na reação seguinte. NMR (CDCl3): □ 6,18 (app p, 1H, J=1,1 Hz, C=CHH), 5,62 (p, 1H, C=CHH, J=1,6 Hz), 4,46 (t, 2H, J=6,0 Hz, CH2OC=O), 3,56 (t, 2H, CH2Br, J=6.0 Hz), 1,97 (dd, 3H, J=1,4, 1,1 Hz, CH3C=C). Preparação de (2-Mercaptoetil)metacrilato, S-sulfato
Figure img0185
Para uma solução de 5,25 gramas de sódio tiosulfato pentahidrato e 10 mg de hidroquinona em 45 ml de água e 30 ml de isopropanol foi acrescentado 3,0 gramas de (2-bromoetil)metacrilato e a reação foi agitada a temperatura da sala durante a noite. Concentração deu um resíduo, que foi colocado em 20 ml de etanol e 20 ml de metanol. Filtração e concentração deu um sólido branco, que foi suspenso com 45 ml de isopropanol. Depois de agitada vigorosamente por 4 horas, o sólido foi recuperado por filtração lavado com uma pequena quantidade de isopropanol e secado sob vácuo alto para dar 940 mg do produto desejado como um sólido branco. NMR (CD3OD) : □ 6, 11 (h, 1H, CH2, J=0,9 Hz), 5,62 (p, 1H, CH2, J=1,6 Hz), 4,47 (t, 2H, OCH2, J=6,9 Hz), 3,31 (t, 2H, SCH2, J=6,9 Hz), 1,93 (d de d, 3H, CH3, J=1,5, 1,0 Hz). Exemplo 74.Preparação de PC copolímero contendo trimethoxisilane grupo funcionais
Figure img0186
32,18 mg de 2,2’bipiridil foram colocados em um tubo Schlenk seguido por 20,1 mg do iniciador etil α-bromo isobutirato e dissolvidos em 160mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo por 10 minutos. 14,78mg de CuBr foram acrescentados sob condições inertes, e a mistura da reação foi resfriada para -78°C, desgaseificada e preenchida com gás inerte. 1,.033g de HEMA-PC e 46mg de 3-(trimethoxisilil) propil metacrilato foram dissolvidos em 4ml de etanol 200 provas e acrescentado para uma mistura da reação a conta gota. O vaso foi selado e completamente desgasieficado a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 2 horas. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 24kDa, Mn de 22kDa e PDi de 1,05. Exemplo 75.Preparação de PC copolímero contendo protetor grupo funcionais tiol
Figure img0187
74,8 mg de 2,2’bipiridil foram colocados em um tubo Schlenk seguido por 46,58 mg do iniciador etil α-bromo isobutirato e dissolvidos em 520mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo por 10 min. 34,26mg de CuBr foram acrescentados sob condições inertes, e a mistura da reação foi resfriada para -78°C, desgaseificada e preenchida com gás inerte. 1,601g de HEMA-PC e 70,8mg de S-Sulfo-(2-tioetil)metacrilato, sal de sódio (do Exemplo 73) foram dissolvidos em 6,2ml de etanol 200 provas e acrescentado para a mistura da reação a conta gota. O vaso foi selado e completamente desgaseificada a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 3 horas. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 17kDa, Mn de 16kDa e PDi de 1,05. Exemplo 76.Preparação de PC copolímero contendo protetor grupos funcionais tiol e grupo funcionais tetrafluorfenol éster
Figure img0188
64 mg de 2,2’bipiridil foram colocados em um tubo Schlenk seguido por 40 mg do iniciador etil α-bromo isobutirato e dissolvido em 300mg de DMSO. A mistura foi desgaseificada sob vácuo por 10 min. 29,4mg de CuBr foram acrescentados sob condições inertes, e a mistura da reação foi resfriada para -78°C, desgaseificada e preenchida com gás inerte. 1,8g de HEMA-PC, 6,77x10-4mol de S-Sulfo-(2- tioetil)metacrilato, sal de sódio (do Exemplo 73), e 6,77x10-4mol de 4,7-Dioxa-9-(metacriloiloxi)ácido nonanóico, 4-sulfo,2,3,5,6-tetrafluorfenil éster, sal de sódio (do Exemplo 72) foram dissolvidos em 7,5ml de etanol 200 provas e acrescentado para a mistura da reação a conta gota. O vaso foi selado e completamente desgaseificada a -78°C sob vácuo até borbulha não ser mais vista. A mistura da reação foi colocada sob condições inertes e permitida para ser realizada a temperatura da sala por 2 horas. Análise por espalhamento de luz mostrou um Mp de 24kDa, Mn de 25kDa e PDi de 1,05. Embora a invenção precedente tenha sido descrita em algum detalhe por meio de ilustrações e exemplo for propósitos de claridade de entendimento, um experiente na matéria apreciará que certas trocas e modificações podem ser praticadas dentro do escopo das reivindicações anexadas. além disso, cada referência provida neste documento é incorporada por referência inteiramente como se cada referência fosse individualmente incorporada por referência neste documento.

Claims (14)

1. Um copolímero aleatório caracterizado pela Fórmula IIa:
Figure img0189
onde: cada M1 e M2 é selecionado independentemente do grupo que consiste em acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida, estireno, vinil piridina e vinil pirrolidona; ZW é uma fração zwitteriônica; I é um fragmento iniciador e I' é um eliminador de radicais, de modo que a combinação de I-I' é um iniciador, I1, para a polimerização do copolímero aleatório de Fórmula IIa; alternativamente, I' é selecionado a partir do grupo que consiste em H e C16 alquil; cada um de L1 e L2 é um ligante; cada um de A1 e A2 é um agente funcional; os índices x e y1 são cada um independentemente um número inteiro de 1 a 1000; índice s é um número inteiro de 2 a 100; e índice n é um número inteiro de 1 a 20.
2. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela fórmula:
Figure img0190
onde PC é fosforilcolina e cada um de R3 e R4 é independentemente H ou metil.
3. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada um de L1 e L2 é um ligante clivável selecionado independentemente do grupo que consiste em ligantes hidrolisáveis, ligantes enzimaticamente cliváveis, ligantes sensíveis ao pH, ligantes dissulfeto, ligantes fotolábeis e autoimolativos ou ligantes pró-drogas duplos.
4. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de L1 e L2 é um ligante clivável selecionado independentemente do grupo que consiste em ligantes hidrolisáveis, ligantes cliváveis enzimaticamente, ligantes sensíveis ao pH, ligantes dissulfeto, ligantes fotolábeis e autoimolativos ou ligantes pró-drogas duplos.
5. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo agente funcional e um agente bioativo selecionado do grupo que consiste em um fármaco, uma proteína terapêutica e um agente de direcionamento.
6. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo eliminador de radicais I' é um halogênio.
7. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo iniciador I1, é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Figure img0191
Figure img0192
Figure img0193
Figure img0194
Figure img0195
Figure img0196
Figure img0197
8. Copolímero aleatório, de acordo com a fórmula:
Figure img0198
onde: os índices x e y1 são tais que o Mn da porção de polímero é de 95.000 g/mol; A1 é um anticorpo; e L-CTP tem a fórmula:
Figure img0199
9. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela fórmula:
Figure img0200
onde: os índices x e y1 são tais que o Mn da porção de polímero é de 95.000 g/mol; A1 é uma IgG; e L-CTP tem a fórmula:
10. Copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada um de A1 e A2 é selecionado independentemente do grupo que consiste em um anticorpo, um fragmento de anticorpo, um Fab, IgG, um peptídeo, uma proteína, uma enzima, um oligonucleotídeo, um polinucleotídeo , ácidos nucleicos e um conjugado de anticorpo-droga (ADC).
11. O copolímero aleatório da reivindicação 1, caracterizado por A1 ser selecionado a partir de um anticorpo, um fragmento de anticorpo, um Fab, um scFv, um domínio de imunoglobulina, uma IgG e A2 ser selecionado independentemente de um agente anticâncer, uma toxina, um fármaco de molécula pequena, um agente de quimioterapia, um inibidor de cinase, um agente anti-inflamatório e um agente antifibrótico.
12. Copolímero aleatório, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que cada um de M1, M2, M2a e M2b ser metacrilato e ZW é fosforilcolina.
13. Processo para preparar o copolímero aleatório, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela etapa de entrar em contato com uma mistura de um primeiro monômero e um segundo monômero com um iniciador, I1, sob condições suficientes para preparar o copolímero aleatório via polimerização de radical livre, em que o primeiro monômero compreende uma fosforilcolina, e cada um do segundo monômero e iniciador está independentemente ligado a um agente funcional.
14. Processo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a mistura compreende ainda um catalisador e um ligante.
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Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI1988910T1 (en) 2006-02-28 2018-02-28 Kodiak Sciences Inc. Polymeric conjugates containing acryloyloxyethylphosphorylcholine and their preparations
CA2665493A1 (en) 2006-08-07 2008-02-14 University Of Washington Mixed charge copolymers and hydrogels
WO2011075185A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
WO2011130694A2 (en) * 2010-04-15 2011-10-20 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
CN102977275B (zh) * 2011-09-07 2014-12-10 佛山市博新生物科技有限公司 一种经过预处理的含有磷酰胆碱基团的单体改善吸附树脂生物相容性的应用
WO2013059137A1 (en) * 2011-10-17 2013-04-25 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
JP6234064B2 (ja) * 2012-05-23 2017-11-22 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析用または磁気共鳴イメージング用の造影剤、化合物、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析方法および磁気共鳴イメージング方法
US10159735B2 (en) 2012-06-26 2018-12-25 The Curators Of The University Of Missouri Photocleavable drug conjugates
CN102875733B (zh) * 2012-10-25 2014-06-11 西安科技大学 具有仿细胞外层膜结构的纳米颗粒及其制备方法
WO2014144744A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Aptamer methods and compositions
PL3041513T3 (pl) * 2013-09-08 2021-01-25 Kodiak Sciences Inc. Obojnaczojonowe polimerowe koniugaty czynnika viii
EP3068378A4 (en) * 2013-11-12 2017-05-03 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Random copolymer therapeutic agent carriers and assemblies thereof
US20160303242A1 (en) * 2013-12-09 2016-10-20 Durect Corporation Pharmaceutically Active Agent Complexes, Polymer Complexes, and Compositions and Methods Involving the Same
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10588564B2 (en) 2014-09-30 2020-03-17 Moein Health, LLC Method and kit for diagnosing and treating neoplastic tissue
JP6849590B2 (ja) 2014-10-17 2021-03-24 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート
JP6736278B2 (ja) * 2014-10-24 2020-08-05 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を有する光音響イメージング用造影剤
IL243285A0 (en) 2015-12-22 2016-04-21 Yeda Res & Dev Analogues of lipids and liposomes containing them
CN108712911A (zh) * 2015-12-30 2018-10-26 科达制药股份有限公司 抗体及其缀合物
EP3558384A4 (en) * 2016-12-23 2020-08-19 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation BIOCOMPATIBLES AND HYDROPHILIC POLYMER CONJUGATE FOR THE TARGETED RELEASE OF AN ACTIVE SUBSTANCE
WO2018191548A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Kodiak Sciences Inc. Complement factor d antagonist antibodies and conjugates thereof
EP3720506A4 (en) * 2017-12-04 2021-09-29 Lecouteur, David COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING THE WINDOWS OF HEPATIC ENDOTHELIAL CELLS
JP2019112533A (ja) * 2017-12-24 2019-07-11 国立大学法人千葉大学 貴金属分離回収可能なコポリマー及びそのコポリマーを用いた貴金属回収方法
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
EP3831909A1 (en) * 2019-12-03 2021-06-09 Université de Strasbourg Luminescent zwitterionic polymeric nanoparticles
JP7425405B2 (ja) * 2020-03-13 2024-01-31 日油株式会社 共重合体およびその用途
KR20220164547A (ko) * 2020-04-06 2022-12-13 티바 바이오테크 엘엘씨 효율적인 핵산 전달을 위한 운반체
CN112033943B (zh) * 2020-08-17 2021-03-30 中南民族大学 一种基于量子点-铜离子荧光基底传感器的精氨酸检测方法
WO2022235329A1 (en) * 2021-05-06 2022-11-10 University Of South Carolina Brain-targeted antibody nanoparticle for neurodegenerative diseases therapy
WO2022255204A1 (ja) * 2021-06-01 2022-12-08 デンカ株式会社 リン酸基又はリン酸エステル基を有するコポリマー、その製造方法、及び樹脂組成物
AU2022328663A1 (en) 2021-08-16 2024-02-15 Tiba Biotech Llc Nanoparticle compositions containing sugar functionalized nucleic acid carriers
CN114410735B (zh) * 2022-01-25 2023-10-27 河南中医药大学 以氨磷汀为底物利用atrp信号放大策略检测碱性磷酸酶的电化学试剂盒及使用方法

Family Cites Families (241)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH652145A5 (de) 1982-01-22 1985-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen.
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4634666A (en) 1984-01-06 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Human-murine hybridoma fusion partner
EP0218712B1 (en) 1985-04-12 1992-02-26 Genetics Institute, Inc. Novel procoagulant proteins
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
US5250421A (en) 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JPH0387173A (ja) 1987-09-10 1991-04-11 Teijin Ltd ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
US5283187A (en) 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
US4892538A (en) 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
US5162218A (en) 1988-11-18 1992-11-10 The Regents Of The University Of California Conjugated polypeptides and methods for their preparation
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992013867A1 (en) 1991-01-31 1992-08-20 Cor Therapeutics, Inc. Domains of extracellular region of human platelet derived growth factor receptor polypeptides
US5871907A (en) 1991-05-15 1999-02-16 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
AU666485B2 (en) * 1991-07-05 1996-02-15 Biocompatibles Uk Limited Polymeric surface coatings
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5817310A (en) 1991-12-02 1998-10-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitory immunoglobulin polypeptides to human PDGF beta receptor
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
CA2134773A1 (en) 1992-06-04 1993-12-09 Robert J. Debs Methods and compositions for in vivo gene therapy
KR100303872B1 (ko) 1992-10-02 2001-11-22 크리스터 발스트룀, 프레드릭 베르그, 하랄트 알름 응고인자ⅷ제형을포함하는조성물,이것의제조방법및안정화제로서의계면활성제의사용방법
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
GB9301701D0 (en) 1993-01-28 1993-03-17 Biocompatibles Ltd New zwitterionic materials
GB9301702D0 (en) 1993-01-28 1993-03-17 Biocompatibles Ltd New materials
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
GB9324033D0 (en) 1993-11-23 1994-01-12 Biocompatibles Ltd Ethylenically unsaturated compounds
US5877218A (en) 1994-01-10 1999-03-02 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5681746A (en) 1994-12-30 1997-10-28 Chiron Viagene, Inc. Retroviral delivery of full length factor VIII
US5763548A (en) 1995-03-31 1998-06-09 Carnegie-Mellon University (Co)polymers and a novel polymerization process based on atom (or group) transfer radical polymerization
US6541580B1 (en) 1995-03-31 2003-04-01 Carnegie Mellon University Atom or group transfer radical polymerization
GB9521234D0 (en) 1995-10-16 1995-12-20 Biocompatibles Ltd Synthesis of polymerisable phospho diesters
WO1997014702A1 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Biocompatibles Limited Oxidation of phosphorus compounds
US5807937A (en) 1995-11-15 1998-09-15 Carnegie Mellon University Processes based on atom (or group) transfer radical polymerization and novel (co) polymers having useful structures and properties
US5663425A (en) 1996-01-26 1997-09-02 Lignotech Usa, Inc. Production of acid soluble humates
US5882644A (en) 1996-03-22 1999-03-16 Protein Design Labs, Inc. Monoclonal antibodies specific for the platelet derived growth factor β receptor and methods of use thereof
US6100071A (en) 1996-05-07 2000-08-08 Genentech, Inc. Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US5789487A (en) 1996-07-10 1998-08-04 Carnegie-Mellon University Preparation of novel homo- and copolymers using atom transfer radical polymerization
US6156884A (en) 1996-08-05 2000-12-05 Prolinx, Inc. Bifunctional boronic compound complexing reagents and complexes
JPH10139832A (ja) * 1996-11-08 1998-05-26 Nof Corp 共重合体およびグルコースセンサー
US7125938B2 (en) 1997-03-11 2006-10-24 Carnegie Mellon University Atom or group transfer radical polymerization
EP1325932B9 (en) 1997-04-07 2006-07-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US7365166B2 (en) 1997-04-07 2008-04-29 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
JP3052923B2 (ja) 1997-05-30 2000-06-19 日本油脂株式会社 （メタ）アクリレート誘導体の製造方法
ATE489461T1 (de) 1997-10-16 2010-12-15 Univ Georgia Transgene vögel und proteinproduktion
US6555593B1 (en) 1998-01-30 2003-04-29 Albemarle Corporation Photopolymerization compositions including maleimides and processes for using the same
JP4162284B2 (ja) 1998-02-04 2008-10-08 日油株式会社 洗浄剤組成物
US6121371A (en) 1998-07-31 2000-09-19 Carnegie Mellon University Application of atom transfer radical polymerization to water-borne polymerization systems
US6153655A (en) 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
US6159942A (en) 1998-06-19 2000-12-12 Bioenergy, Inc. Compositions for increasing energy in vivo
JP4145403B2 (ja) * 1998-09-29 2008-09-03 日油株式会社 免疫学的活性物質測定用高分子／酵素結合体
US6781030B1 (en) 1998-11-02 2004-08-24 Trustee Of Tufts College, Ballou Hall Methods for cloning mammals using telophase oocytes
DK1141335T3 (da) 1998-12-21 2009-11-09 Genencor Int Kemisk modificerede enzymer med multipelt ladede varianter
AU4195100A (en) 1999-04-05 2000-10-23 Research Foundation Of State University Of New York, The Graft, graft-block, block-graft, and star-shaped copolymers and methods of making them
FR2794459B1 (fr) 1999-05-19 2004-09-03 Atofina Polyalcoxyamines issues de nitroxydes beta-substitues
US8137695B2 (en) 2006-08-18 2012-03-20 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US7070959B1 (en) 1999-06-08 2006-07-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified chimeric polypeptides with improved pharmacokinetic properties
US7306799B2 (en) 1999-06-08 2007-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF inhibitors for treatment of eye disorders
CZ299516B6 (cs) 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US7754855B1 (en) 1999-07-13 2010-07-13 Bolder Biotechnology, Inc. Immunoglobulin fusion proteins
US7049373B2 (en) 1999-08-06 2006-05-23 Carnegie Mellon University Process for preparation of graft polymers
AU7025600A (en) 1999-09-08 2001-04-10 School Of Pharmacy, University Of London, The Uniform molecular weight polymers
EP2289549A3 (en) 1999-10-01 2011-06-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
US6348554B1 (en) 1999-11-30 2002-02-19 Rohmax Additives Gmbh Method for preparation of a liquid polymer composition and use of this composition
GB9928956D0 (en) 1999-12-07 2000-02-02 Malik Navid Internally supported biomimetic coating systems
IL144815A (en) 2000-08-11 2005-07-25 Sumitomo Chemical Co Process for producing carbonyl or hydroxy compound
WO2002028912A2 (en) 2000-10-06 2002-04-11 Carnegie Mellon University Preparation of nanocomposite structures by controlled polymerization
WO2002028914A2 (en) 2000-10-06 2002-04-11 Carnegie Mellon University A catalyst system for controlled polymerization
JP5005155B2 (ja) 2000-10-06 2012-08-22 カーネギー−メロン ユニバーシティ イオンモノマーの重合方法
DE60129148T2 (de) 2000-10-06 2008-02-28 Biocompatibles Uk Ltd., Farnham Zwitterionische polymere
US6979556B2 (en) 2000-12-14 2005-12-27 Genentech, Inc. Separate-cistron contructs for secretion of aglycosylated antibodies from prokaryotes
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7829084B2 (en) 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
DE60236642D1 (de) 2001-04-06 2010-07-22 Univ Carnegie Mellon Verfahren zur herstellung von nanostrukturierten materialien
US6858580B2 (en) 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
AU2002361223A1 (en) 2001-08-27 2003-03-18 Zeptosens Ag Bioanalytical recognition surface with optimised recognition element density
JP2003064132A (ja) 2001-08-28 2003-03-05 Nof Corp 重合体、製造方法および乳化・分散剤
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
SE523617C2 (sv) 2001-10-01 2004-05-04 Sandvik Ab Skär för spånavskiljande bearbetning försedd med spånbrytande geometri
WO2003031481A2 (en) 2001-10-12 2003-04-17 Carnegie Mellon University Simultaneous reverse and normal initiation of atrp
US7064166B2 (en) 2001-10-12 2006-06-20 Carnegie Mellon University Process for monomer sequence control in polymerizations
US6964859B2 (en) 2001-10-16 2005-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Suppressor tRNA system
JP4758608B2 (ja) 2001-11-07 2011-08-31 ネクター セラピューティックス 分枝ポリマーおよびそれらの結合体
US7737260B2 (en) 2003-11-13 2010-06-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
EP1465933B1 (en) 2002-01-16 2007-08-29 Biocompatibles UK Limited Polymer conjugates
WO2003074026A1 (en) 2002-03-07 2003-09-12 Biocompatibles Uk Limited Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers
DE60334779D1 (en) 2002-03-07 2010-12-16 Biocompatibles Uk Ltd Mit nucleinsäure complexierte block-copolymere
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7196142B2 (en) 2002-04-04 2007-03-27 The University Of Akron Polyisobutylene-based block anionomers and cationomers and synthesis thereof
JP4248189B2 (ja) 2002-04-09 2009-04-02 株式会社資生堂 ホスホリルコリン基含有多糖類及びその製造方法
AU2003241531A1 (en) * 2002-05-21 2003-12-12 Emory University Multivalent polymers with chain-terminating binding groups
ES2346646T5 (es) 2002-05-30 2018-02-15 The Scripps Research Institute Ligación catalizada con cobre de azidas y acetilenos
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
AU2003276847A1 (en) 2002-08-09 2004-02-25 Carnegie Mellon University Polymers, supersoft elastomers and methods for preparing the same
WO2004028569A1 (en) 2002-09-25 2004-04-08 Biocompatibles Uk Limited Polymer compositions for administration to animals
JP2006505686A (ja) 2002-11-07 2006-02-16 ロディア・シミ 両性又は双極性イオン性部分を含む制御された構造のコポリマー
US20070111279A1 (en) 2002-11-13 2007-05-17 Procell, Inc. Production of recombinant therapeutic bioscavengers against chemical and biological agents
GB0301014D0 (en) 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20060167230A1 (en) 2003-01-20 2006-07-27 Takaki Koga Anti-pci neutralizing antibody
US7820753B2 (en) 2003-02-05 2010-10-26 Biocompatibles Uk Limited Block copolymers
MY162623A (en) 2003-02-10 2017-06-30 Biogen Ma Inc Immunoglobulin formulation and method of preparation thereof
US7662387B2 (en) 2003-02-20 2010-02-16 Seattle Genetics Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EP1613272B1 (en) 2003-04-11 2013-12-18 Antriabio, Inc. Method for preparation of site-specific protein conjugates
EA009285B1 (ru) 2003-05-14 2007-12-28 Иммуноджен, Инк. Композиция конъюгированного лекарственного средства
CA2510040C (en) * 2003-05-23 2012-01-03 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymeric reagents and polymer-biomolecule conjugates comprising carbamate linkages
PE20050627A1 (es) 2003-05-30 2005-08-10 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
GB0314472D0 (en) 2003-06-20 2003-07-23 Warwick Effect Polymers Ltd Polymer
CN1208358C (zh) 2003-07-31 2005-06-29 上海交通大学 含多羟基官能团多臂星状超支化聚合物刷及其制备方法
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
EP3168304A1 (en) 2003-08-27 2017-05-17 Ophthotech Corporation Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders
KR101200729B1 (ko) 2003-09-17 2012-11-13 넥타르 테라퓨틱스 다분지형 고분자 전구약물
US20050164301A1 (en) 2003-10-24 2005-07-28 Avidia Research Institute LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
CN1925875A (zh) 2003-12-16 2007-03-07 尼克塔治疗亚拉巴马公司 化学改性的小分子
US8298532B2 (en) 2004-01-16 2012-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
KR100593443B1 (ko) 2004-02-11 2006-06-28 삼성전자주식회사 트랜지스터들 및 그 제조방법들
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
JP4727938B2 (ja) 2004-02-24 2011-07-20 泰彦 岩崎 リビングラジカル重合開始基を持つポリリン酸の製造方法および用途
DE602005027673D1 (de) 2004-03-05 2011-06-09 Vegenics Pty Ltd Materialien und verfahren für wachstumsfaktorbindende konstrukte
JP4727941B2 (ja) 2004-03-12 2011-07-20 泰彦 岩崎 生分解性重合体の製造方法および用途
US20050208093A1 (en) 2004-03-22 2005-09-22 Thierry Glauser Phosphoryl choline coating compositions
ES2741524T3 (es) 2004-03-23 2020-02-11 Ascendis Pharma Gmbh Profármaco polimérico con un enlazador autoinmolador
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
US7863238B2 (en) * 2004-06-10 2011-01-04 Saint Louis University Proteins with an attached short peptide of acidic amino acids
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
CA2583208C (en) 2004-10-15 2015-08-25 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
EP2371856B1 (en) 2004-11-12 2022-05-18 Bayer HealthCare LLC Site-directed modification of FVIII
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
WO2006063055A2 (en) 2004-12-06 2006-06-15 Bolder Biotechnology, Inc. Enzyme conjugates for use as detoxifying agents
TW200635608A (en) 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
ATE369486T1 (de) 2004-12-18 2007-08-15 Haldor Topsoe As Verfahren zur regelung der zugabe eines reduktionsmittels in das abgas einer brennkraftmaschine
TW200714290A (en) 2005-03-08 2007-04-16 Pharmacia & Upjohn Co Llc Anti-M-CSF antibody compositions having reduced levels of endotoxin
US20060234347A1 (en) 2005-04-13 2006-10-19 Harding Thomas C Targeting multiple angiogenic pathways for cancer therapy using soluble tyrosine kinase receptors
EP1874844A4 (en) 2005-04-29 2010-03-24 Agency Science Tech & Res HYPERRAMIFIED POLYMERS AND THEIR APPLICATIONS
US20070005130A1 (en) 2005-06-29 2007-01-04 Thierry Glauser Biodegradable polymer for coating
WO2008020827A2 (en) 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US7893173B2 (en) 2005-08-26 2011-02-22 Carnegie Mellon University Polymerization process with catalyst reactivation
EP1968644B1 (en) 2005-12-16 2012-06-27 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of glp-1
US7906134B2 (en) * 2005-12-21 2011-03-15 Abbott Laboratories Room temperature-curable polymers
DE102006009004A1 (de) 2006-02-23 2007-09-06 Sustech Gmbh & Co. Kg Multifunktionelle sternförmige Präpolymere, deren Herstellung und Verwendung
SI1988910T1 (en) 2006-02-28 2018-02-28 Kodiak Sciences Inc. Polymeric conjugates containing acryloyloxyethylphosphorylcholine and their preparations
JP2007263935A (ja) 2006-03-30 2007-10-11 Canon Inc 磁性マーカー及びその製造方法
WO2007148230A2 (en) 2006-04-14 2007-12-27 Interface Biologics Incorporated Grafted polymers and uses thereof
JP5313129B2 (ja) 2006-05-02 2013-10-09 アロザイン， インコーポレイテッド 非天然アミノ酸置換ポリペプチド
JP5030036B2 (ja) * 2006-05-23 2012-09-19 一彦 石原 生体成分固定化ポリマー組成物および三次元架橋体
EP2038320B1 (en) 2006-06-29 2014-03-12 Life Technologies AS Particles containing multi- block polymers
US20080008736A1 (en) * 2006-07-06 2008-01-10 Thierry Glauser Random copolymers of methacrylates and acrylates
EP2041196B1 (en) 2006-07-14 2012-11-28 Biocompatibles UK Limited Polymer
KR100808116B1 (ko) 2006-08-22 2008-03-03 전남대학교산학협력단 미생물 점착 방지용 공중합체 수지 코팅재
ES2531934T3 (es) 2006-09-01 2015-03-20 Novo Nordisk Health Care Ag Glicoproteínas modificadas
JP5111016B2 (ja) 2006-11-01 2012-12-26 三井化学株式会社 表面親水性ポリオレフィン成形体およびその製造方法
EP2084527A4 (en) 2006-11-02 2011-07-27 Seattle Genetics Inc METHOD FOR TREATING NEOPLASIA, AUTOIMMUNE AND INFLAMMATORY DISEASES
JP5557373B2 (ja) 2006-11-21 2014-07-23 アボット ラボラトリーズ 薬剤溶出性コーティングにおけるテトラフルオロエチレン、ヘキサフルオロプロピレン、及びフッ化ビニリデンのターポリマーの使用
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
US7651527B2 (en) 2006-12-15 2010-01-26 Medtronic Vascular, Inc. Bioresorbable stent
US20090060906A1 (en) 2007-01-09 2009-03-05 Wyeth Anti-IL-13 antibody formulations and uses thereof
KR20090104847A (ko) 2007-02-01 2009-10-06 제넨테크, 인크. 혈관신생 억제제와의 조합 요법
EP2118150B1 (en) 2007-02-14 2015-09-23 Biocompatibles UK Limited Derivatisation of biological molecules
EP2121031B1 (en) 2007-03-12 2013-10-16 Nektar Therapeutics Oligomer-antihistamine conjugates
JP5448854B2 (ja) 2007-03-12 2014-03-19 ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション オリゴマー−プロテアーゼ阻害剤複合体
CN101053681B (zh) 2007-04-10 2010-05-19 天津大学 用于血管栓塞材料的温敏性MPC-b-NIPAM二嵌段星型共聚物及制备方法和应用
WO2008130704A2 (en) 2007-04-17 2008-10-30 Imclone Llc PDGFRβ-SPECIFIC INHIBITORS
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
US7999051B2 (en) * 2007-05-14 2011-08-16 Tyco Healthcare Group Lp Furanone copolymers
JP5019524B2 (ja) * 2007-06-01 2012-09-05 国立大学法人 東京大学 新規ポリ（メタ）アクリレート共重合体ならびに小胞体及びゴルジ体への送達方法
NZ580670A (en) 2007-06-21 2011-09-30 Univ Muenchen Tech Biological active proteins having increased in vivo and/or vitro stability
JP2009042617A (ja) 2007-08-10 2009-02-26 Canon Inc 静電荷像現像用トナー及びその製造方法
US7943370B2 (en) 2007-08-23 2011-05-17 Canon Kabushiki Kaisha Structure, target substance detection element and target substance detection kit
NZ584514A (en) 2007-10-19 2012-07-27 Genentech Inc Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
ES2400107T3 (es) 2007-10-22 2013-04-05 Merck Serono S.A. IFN-beta sencillo fusionado a un fragmento Fc de lgG mutado
JP2009114283A (ja) 2007-11-05 2009-05-28 Asahi Kasei Chemicals Corp 吸引用シートおよびそれを用いた装置
WO2009066746A1 (ja) 2007-11-22 2009-05-28 The University Of Tokyo 組織癒着防止材および関節拘縮防止材
ES2613963T3 (es) 2008-01-18 2017-05-29 Medimmune, Llc Anticuerpos manipulados con cisteína para conjugación específica de sitio
PL2842575T3 (pl) 2008-03-18 2018-02-28 Seattle Genetics, Inc. Koniugaty aurystatyny lek łącznik
SI2281006T1 (sl) 2008-04-30 2017-12-29 Immunogen, Inc. Premreževalci in njihova uporaba
EP2282720B1 (en) 2008-05-15 2013-09-11 Biocompatibles Uk Ltd. Intracellular antibody delivery
US8187623B2 (en) * 2008-06-25 2012-05-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical copolymers
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
JP2010117189A (ja) 2008-11-12 2010-05-27 Sumitomo Bakelite Co Ltd 生理活性物質固定化用基板
US8802738B2 (en) 2008-12-12 2014-08-12 University Of Massachusetts Polyesters with grafted zwitterions
US8822610B2 (en) 2008-12-22 2014-09-02 ATRP Solutions, Inc. Control over controlled radical polymerization processes
US20100158850A1 (en) 2008-12-23 2010-06-24 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer based modular platforms
WO2010111625A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for using multispecific-binding proteins comprising an antibody-receptor combination
WO2010126552A1 (en) 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent cell-binding agent drug conjugates
CA2760687A1 (en) 2009-05-01 2010-11-04 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
CN101575402B (zh) 2009-05-31 2012-06-27 中国科学院化学研究所 一种多臂星型聚合物及其制备方法
EP2260873B1 (en) 2009-06-08 2019-07-24 Biocompatibles UK Limited Pcylation of proteins
UA104626C2 (ru) 2009-06-17 2014-02-25 Эббви Биотерапеутикс Инк. Анти-vegf антитело и его применение
AU2010270979B2 (en) 2009-06-22 2015-04-23 Medimmune, Llc Engineered Fc regions for site-specific conjugation
CN102025901A (zh) 2009-09-23 2011-04-20 国基电子（上海）有限公司 相机模组及其检测方法
US20110165648A1 (en) 2009-11-04 2011-07-07 Menno Van Lookeren Campagne Co-crystal structure of factor D and anti-factor D antibody
WO2011066417A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Carnegie Mellon University Antibodies and conjugates for modulators of angiogenesis
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
EP2536753B1 (en) 2010-02-16 2017-12-20 Novo Nordisk A/S Factor viii molecules with reduced vwf binding
JP2013519699A (ja) 2010-02-16 2013-05-30 ノヴォ ノルディスク アー／エス 因子ｖｉｉｉ融合タンパク質
WO2011130694A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
JP2012025820A (ja) 2010-07-21 2012-02-09 Kansai Paint Co Ltd 親水化処理剤組成物
KR101380009B1 (ko) 2011-01-17 2014-04-02 주식회사 엘지화학 신규한 화합물 및 이를 포함하는 유기 발광 소자
JP6152090B2 (ja) 2011-04-21 2017-06-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイトＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲＡＤＯ，ａ ｂｏｄｙ ｃｏｒｐｏｒａｔｅ 視神経脊髄炎を処置するための組成物および方法
US20130071394A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 John K. Troyer Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use
WO2013059137A1 (en) 2011-10-17 2013-04-25 Oligasis High molecular weight zwitterion-containing polymers
EP3539982A3 (en) 2011-12-23 2020-01-15 Pfizer Inc Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013152020A1 (en) 2012-04-03 2013-10-10 Novelmed Therapeutics, Inc. Humanized and chimeric anti-factor bb antibodies and uses thereof
JP6234064B2 (ja) 2012-05-23 2017-11-22 キヤノン株式会社 重合体、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析用または磁気共鳴イメージング用の造影剤、化合物、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析方法および磁気共鳴イメージング方法
JP5846044B2 (ja) 2012-05-23 2016-01-20 日油株式会社 （メタ）アクリル酸誘導体の製造方法
CN104704118A (zh) 2012-10-15 2015-06-10 诺和诺德保健Ag（股份有限公司） 凝血因子vii多肽
CN103193819A (zh) 2013-03-13 2013-07-10 苏州蔻美新材料有限公司 一锅法合成mpc的方法
PT2968461T (pt) 2013-03-13 2022-12-26 Genzyme Corp Proteínas de fusão que compreendem porções de ligação ao pdgf e ao vegf e seus métodos de utilização
AU2014274660B2 (en) 2013-06-06 2019-05-16 Pierre Fabre Médicament Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof
CN103421039B (zh) 2013-09-03 2015-12-23 重庆工商大学 2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱的合成方法
PL3041513T3 (pl) 2013-09-08 2021-01-25 Kodiak Sciences Inc. Obojnaczojonowe polimerowe koniugaty czynnika viii
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
WO2015200905A2 (en) 2014-06-28 2015-12-30 Oligasis, Llc Dual pdgf/vegf antagonists
JP6849590B2 (ja) 2014-10-17 2021-03-24 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート
CN108712911A (zh) 2015-12-30 2018-10-26 科达制药股份有限公司 抗体及其缀合物
GB2551979A (en) 2016-06-30 2018-01-10 Rs Arastirma Egitim Danismanlik Llac Sanayi Ticaret Ltd Cleavable polymer drug conjugates
WO2018191548A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Kodiak Sciences Inc. Complement factor d antagonist antibodies and conjugates thereof
WO2019169341A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Kodiak Sciences Inc. Il-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder

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