KR20180029201A - 융합 단백질을 이용하는 tcr 리프로그래밍을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

융합 단백질을 이용하는 tcr 리프로그래밍을 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20180029201A
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패트릭 베워릴
그레고리 시크즈키위크즈
로버트 호프미스터
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티씨알2 테라퓨틱스 인크.
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Abstract

T- 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFPs), 하나 이상의 TFPs를 발현하기 위해 조작된 T-세포, 및 암을 포함한, 질환의 치료를 위한 그의 이용 방법이 본원에서 제공된다.

Description

융합 단백질을 이용하는 TCR 리프로그래밍을 위한 조성물 및 방법
교차-참조문헌
본 출원은 하기의 이익을 주장한다: 미국 가출원 번호 62/163,342 (2015년 5월 18일 출원, 본원에서 참고로 그 전문이 편입됨).
혈액 악성종양 또는 말기 고형 종양을 가진 대부분 환자는 표준 요법으로 고쳐지지 않는다. 게다가, 전통적 치료 선택은 종종 심각한 부작용을 갖는다. 집합적으로 암 면역요법으로 불리는 접근법인, 암성 세포 거부를 위한 환자의 면역 시스템에 관여하기 위한 수많은 시도가 있어 왔다. 그러나, 몇 개의 장애물이 임상 유효성을 달성하기 다소 어렵게 만든다. 수백의 소위 종양 항원이 확인되었어도, 이들은 그 자체로부터 종종 유래되고 따라서 건강한 조직에 대해 암 면역요법을 유도할 수 있고 저조하게 면역원성이다. 더욱이, 암 세포는 암 면역요법에 의한 면역 침범의 개시 및 번식에 대해 적대적이고 그들 자체를 보이지 않게 하는 다중 기전을 이용한다.
암 세포에서 적합한 세포-표면 분자에 유전자 상으로 조작된 T-세포의 재유도에 의존하는, 키메라 항원 수용체 (CAR) 변형된 자가 T-세포 요법을 이용한 최근 개발은 B 세포 악성종양을 치료하기 위한 면역 시스템의 활용에서 유망한 결과를 보여준다 (참고, 예를 들면, Sadelain 등, Cancer Discovery 3: 388-398 (2013)). (CTL019로 불리는) CD19-특이적 CAR T-세포를 이용한 임상 결과는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓고 있는 환자에서 뿐만 아니라 소아기 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)에서 완전한 차도를 보여주고 있다 (참고, 예를 들면, Kalos 등, Sci Transl Med 3: 95ra73 (2011), Porter 등, NEJM 365: 725-733 (2011), Grupp 등, NEJM 368: 1509-1518 (2013)). 대안적인 접근법은 자가 T-세포를 유전자 상으로 조작하기 위하여 종양-관련된 펩타이드 항원으로 선택된 T-세포 수용체 (TCR) 알파 및 베타 쇄의 이용이다. 이들 TCR 쇄는 완전한 TCR 복합체를 형성할 것이고 제2 한정된 특이성을 위하여 TCR을 가진 T-세포를 제공할 것이다. 고무적인 결과는 활막 암종을 가진 환자에서 조작된 자가 T-세포 발현 NY-ESO-1-특이적 TCR 알파 및 베타 쇄로 수득되었다.
시험관내/생체외 각각의 표적 세포를 인식 및 파괴하기 위해 CAR 및 제2 TCR를 발현하는 유전자 변형 T-세포에 대한 능력 이외에, 조작된 T-세포를 이용한 성공적인 환자 요법은 강한 활성화, 팽창, 경시적으로 지속성을 가능하게 하기 위해, 및, 재발 질환의 경우에, ‘메모리’ 반응을 가능하게 하기 위해 T-세포를 필요로 한다. CAR T-세포의 높은 및 감당할 수 있는 임상 효능은 CD19-양성 B 세포 악성종양 및 HLA-A2를 발현하는 NY-ESO-1-펩타이드 발현 활막 육종 환자로 현재 제한된다. 다양한 인간 악성종양에 대해 더욱 광범위하게 작용하기 위해 유전자 상으로 조작된 T-세포를 개선하는 것이 명백하게 필요하다. CD3 엡실론, CD3감마 및 CD3 델타를 포함한, TCR 서브유닛, 및 존재하는 접근법의 제한을 극복하기 위한 잠재력을 갖는 세포 표면 항원에 특이적인 결합 도메인을 가진 TCR 알파 및 TCR 베타 쇄의 신규한 융합 단백질이 본원에서 기재된다. CARs보다 더욱 효율적으로 표적 세포를 사멸하지만, 전-염증 사이토카인의 비교할만한 및 더 낮은 수준을 방출하는 신규한 융합 단백질이 본원에서 기재된다. 이들 융합 단백질 및 그들의 이용 방법은 이들 사이토카인의 상승된 수준이 입양 CAR-T 요법에 대하여 용량-제한 독성과 관련되어 왔기 때문에 CARs에 비해 TFP에 대하여 이점을 나타낸다.
발명의 요약
T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP), 하나 이상의 TFP를 발현하기 위해 조작된 T-세포, 및 질환의 치료를 위하여 그의 이용 방법이 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및 CD3 엡실론의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는 TCR 서브유닛; 및 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공되고 여기에서 TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고, 여기에서 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
하나의 측면에서, 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및 CD3 감마의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는 TCR 서브유닛; 및 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공되고 여기에서 TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고, 여기에서 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
하나의 측면에서, 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및 CD3 델타의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는 TCR 서브유닛; 및 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공되고 여기에서 TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고, 여기에서 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
하나의 측면에서, 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및 TCR 알파의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는 TCR 서브유닛; 및 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공되고 여기에서 TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고, 여기에서 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
하나의 측면에서, 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및 TCR 베타의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는 TCR 서브유닛; 및 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공되고 여기에서 TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고, 여기에서 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
하나의 측면에서, TCR 서브유닛 및 항-CD19 결합 도메인인 항원 결합 도메인을 포함한 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, TCR 서브유닛 및 항-B-세포 성숙 항원 (BCMA) 결합 도메인인 항원 결합 도메인을 포함한 인간 또는 인간화된 항체 도메인을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 재조합 핵산 분자가 본원에서 제공된다.
일부 경우에서, TCR 서브유닛 및 항체 도메인은 작동가능하게 연결된다. 일부 경우에서, TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다. 일부 경우에서, 인코딩된 항원 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 인코딩된 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 TCR 세포외 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 TCR 막관통 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 TCR 세포내 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 (i) TCR 세포외 도메인, (ii) TCR 막관통 도메인, 및 (iii) TCR 세포내 도메인을 포함하고, 여기에서 적어도 2개의 (i), (ii), 및 (iii)는 동일한 TCR 서브유닛 출신이다. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 CD3 엡실론, CD3 감마 또는 CD3 델타의 세포내 신호전달 도메인, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, TCR 서브유닛은 4-1BB의 기능성 신호전달 도메인 및/또는 CD3 제타의 기능성 신호전달 도메인, 또는 거기에 적어도 하나의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 세포내 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 인간 또는 인간화된 항체 도메인은 항체 단편을 포함한다. 일부 경우에서, 인간 또는 인간화된 항체 도메인은 scFv 또는 VH 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 하기를 인코딩한다: (i) 서열 식별 번호: 25, 서열 식별 번호: 27 및 서열 식별 번호: 29 각각과 70-100% 서열 동일성을 가진 항-CD19 경쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 경쇄 (LC) CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3, 및/또는 (ii) 서열 식별 번호: 31, 서열 식별 번호: 33 및 서열 식별 번호: 35 각각과 70-100% 서열 동일성을 갖는 항-CD19 중쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 중쇄 (HC) CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 경쇄 가변 영역을 인코딩하고, 여기에서 경쇄 가변 영역은 하기를 포함한다: 서열 식별 번호: 49의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 하기의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열: 서열 식별 번호: 49. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기에서 중쇄 가변 영역은 서열 식별 번호: 51의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 하기의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열: 서열 식별 번호: 51. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 하기를 포함한다: (i) 서열 식별 번호: 37, 서열 식별 번호: 39 및 서열 식별 번호: 41 각각과 70-100% 서열 동일성을 가진 항-BCMA 경쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 경쇄 (LC) CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3, 및/또는 (ii) 서열 식별 번호: 43, 서열 식별 번호: 45 및 서열 식별 번호: 47 각각과 70-100% 서열 동일성을 가진 항-BCMA 중쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 중쇄 (HC) CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 경쇄 가변 영역을 인코딩하고, 여기에서 경쇄 가변 영역은 하기를 포함한다: 서열 식별 번호: 53의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 하기의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열: 서열 식별 번호: 53. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기에서 중쇄 가변 영역은 서열 식별 번호: 55의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 하기의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열: 서열 식별 번호: 55. 일부 경우에서, TFP는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 서브유닛의 세포외 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 인코딩된 TFP는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 번형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 인코딩된 TFP는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, TCR 제타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD28, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 추가로 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 공자극 도메인은 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 및 4-1BB (CD137), 및 거기에 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질로부터 수득된 기능성 신호전달 도메인이다. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 추가로 리더 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 단리된 핵산 분자는 mRNA이다.
일부 경우에서, TFP는 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, TCR 제타 쇄, Fc 엡실론 수용체 1 쇄, Fc 엡실론 수용체 2 쇄, Fc 감마 수용체 1 쇄, Fc 감마 수용체 2a 쇄, Fc 감마 수용체 2b1 쇄, Fc 감마 수용체 2b2 쇄, Fc 감마 수용체 3a 쇄, Fc 감마 수용체 3b 쇄, Fc 베타 수용체 1 쇄, TYROBP (DAP12), CD5, CD16a, CD16b, CD22, CD23, CD32, CD64, CD79a, CD79b, CD89, CD278, CD66d, 그의 기능성 단편, 및 거기에 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 ITAM 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 서브유닛의 면역수용체 티로신-기반된 활성화 모티프 (ITAM) 를 포함한다. 일부 경우에서, ITAM은 CD3 감마, CD3 델타, 또는 CD3 엡실론의 ITAM을 대체한다. 일부 경우에서, ITAM은 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되고 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 상이한 ITAM을 대체한다.
일부 경우에서, 핵산은 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 일부 경우에서, 뉴클레오타이드 유사체는 2’-O-메틸, 2’-O-메톡시에틸 (2’-O-MOE), 2’-O-아미노프로필, 2’-데옥시, T-데옥시-2’-플루오로, 2’-O-아미노프로필 (2’-O-AP), 2'-O-디메틸아미노에틸 (2’-O-DMAOE), 2’-O-디메틸아미노프로필 (2’-O-DMAP), T-O-디메틸아미노에틸옥시에틸 (2’-O-DMAEOE), 변형된 2’-O-N-메틸아세트아미도 (2’-O-NMA), 잠금 핵산 (LNA), 에틸렌 핵산 (ENA), 펩타이드 핵산 (PNA), 1’,5’-안하이드로헥시톨 핵산 (HNA), 모폴리노, 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드, 티올포스포네이트 뉴클레오타이드, 및 2’-플루오로 N3-P5’-포스포르아미다이트로 구성된 군으로부터 선택된다.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 핵산 분자에 의해 인코딩된 단리된 폴리펩타이드 분자가 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있다.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 속에 기능적으로 통합할 수 있다
일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 경우에서, 항-CD19 결합 도메인은 scFv 또는 VH 도메인이다. 일부 경우에서, 항-CD19 결합 도메인은 하기를 포함한다: 하기의 아미노산 서열과 95-100% 동일성을 가진 중쇄: 서열 식별 번호: 51, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열. 일부 경우에서, 항-CD19 결합 도메인은 하기를 포함한다: 하기의 아미노산 서열과 95-100% 동일성을 가진 경쇄: 서열 식별 번호: 49, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열. 일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 세포외 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 항-CD19 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드를 기능적으로 상호작용할 수 있다.
하나의 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 속에 기능적으로 통합할 수 있다.
일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 인간 또는 인간화된 항- BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 경우에서, 항-BCMA 결합 도메인은 scFv 또는 VH 도메인이다. 일부 경우에서, 항-BCMA 결합 도메인은 하기를 포함한다: 하기의 아미노산 서열과 95-100% 동일성을 가진 중쇄: 서열 식별 번호: 55, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형 그의 아미노산 서열. 일부 경우에서, 항-BCMA 결합 도메인은 하기를 포함한다: 하기의 아미노산 서열과 95-100% 동일성을 가진 경쇄: 서열 식별 번호: 53, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열. 일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 세포외 도메인을 포함한다. 일부 경우에서, 항-BCMA 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4. 일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 세포내 신호전달 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 리더 서열을 포함한다.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 TFP를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터가 본원에서 제공된다. 일부 경우에서, 벡터는 DNA, RNA, 플라스미드, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 라우스 육종 바이러스성 (RSV) 벡터, 또는 레트로바이러스 벡터로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 경우에서, 벡터는 추가로 프로모터를 포함한다. 일부 경우에서, 벡터는 시험관내 전사된 벡터이다. 일부 경우에서, 벡터에서 핵산 서열은 추가로 폴리(A) 꼬리를 포함한다. 일부 경우에서, 벡터에서 핵산 서열은 추가로 3’UTR을 포함한다.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 벡터를 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 일부 경우에서, 세포는 인간 T-세포이다. 일부 경우에서, T-세포는 CD8+ 또는 CD4+ T-세포이다. 일부 경우에서, 세포는 추가로, 세포내 신호전달 도메인으로부터 양성 신호를 포함하는 제2 폴리펩타이드와 관련된, 적어도 일 부분의 억제 분자를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하는 억제 분자를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 경우에서, 억제 분자는 적어도 일 부분의 PD1을 포함하는 제1 폴리펩타이드 및 공자극 도메인 및 1차 신호전달 도메인을 포함한 제2 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 측면에서, TFP 분자가 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는, 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 표면내에, 표면에서 및/또는 표면 위에서 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있다.
하나의 측면에서, 하기를 포함하는 단백질 복합체가 본원에서 제공된다: 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 TFP 분자; 및 적어도 하나의 내인성 TCR 복합체.
일부 경우에서, TCR은 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함한다. 일부 경우에서, 항-CD19 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4.
하나의 측면에서, 하기를 포함하는 단백질 복합체가 본원에서 제공된다: 인간 또는 인간화된 항-BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 TFP 분자; 및 적어도 하나의 내인성 TCR 복합체.
일부 경우에서, TCR은 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함한다. 일부 경우에서, 항-BCMA 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 단백질 복합체당 적어도 2개의 상이한 TFP 단백질을 포함하는 인간 CD 8+ 또는 CD4+ T-세포가 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 벡터로 T-세포의 형질도입을 포함하는 세포의 제조 방법이 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, RNA가 본원에서 제공된 TFP 분자를 인코딩하는 핵산을 포함하는, 세포 속에 시험관내 전사된 RNA 또는 합성 RNA의 도입을 포함하는 RNA-조작된 세포의 집단의 생성 방법이 본원에서 제공된다.
하나의 측면에서, 포유동물에 본원에서 제공된 TFP 분자를 발현하는 세포의 유효량의 투여, 또는 본원에서 제공된 폴리펩타이드 분자의 발현을 포함하는 포유동물에서 항-종양 면역력의 제공 방법이 본원에서 제공된다.
일부 경우에서, 세포는 자가 T-세포이다. 일부 경우에서, 세포는 동종이계 T-세포이다. 일부 경우에서, 포유동물은 인간이다.
하나의 측면에서, 포유동물에 본원에서 제공된 TFP 분자, 본원에서 제공된 세포, 또는 본원에서 제공된 폴리펩타이드 분자의 유효량의 투여를 포함하는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법이 본원에서 제공된다.
일부 경우에서, CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환은 증식성 질환, 암, 악성종양, 골수이형성증, 골수이형성 증후군, 전백혈병, CD19의 발현과 관련된 비-암 관련된 징후로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 경우에서, 질환은 B-세포 급성 림프양 백혈병 (B-ALL), T-세포 급성 림프양 백혈병 (T-ALL), 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포-여포성 림프종, 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증, 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 전백혈병, CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 혈액성 암이다. 일부 경우에서, TFP 분자를 발현하는 세포는 TFP 분자를 발현하는 세포의 효능을 증가시키는 제제와 조합으로 투여된다. 일부 경우에서, 더 적은 사이토카인은 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 항-BCMA CAR을 발현하는 T-세포의 유효량이 투여된 포유동물과 비교되는 포유동물에서 방출된다. 일부 경우에서, TFP 분자를 발현하는 세포는 TFP 분자를 발현하는 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 부작용을 완화시키는 제제와 조합으로 투여된다. 일부 경우에서, TFP 분자를 발현하는 세포는 CD19 또는 BCMA와 관련된 질환을 치료하는 제제와 조합으로 투여된다.
하나의 측면에서, 본원에서 제공된 단리된 핵산 분자, 본원에서 제공된 단리된 폴리펩타이드 분자, 본원에서 제공된 단리된 TFP, 본원에서 제공된 복합체, 본원에서 제공된 벡터, 또는 본원에서 제공된 세포는 약제로서 사용을 위한 것이다.
하나의 측면에서, 포유동물에 본원에서 제공된 TFP 분자, 본원에서 제공된 세포, 또는 본원에서 제공된 폴리펩타이드 분자의 유효량의 투여를 포함하는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법이 본원에서 제공되고, 여기에서 더 적은 사이토카인은 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 항-BCMA CAR을 발현하는 T-세포의 유효량이 투여된 포유동물에 비교된 포유동물에서 방출된다.
참조문헌에 의한 편입
본 명세서에 언급된 모든 공보, 특허, 및 특허 출원은 각각의 개별적인 공보, 특허, 또는 특허 출원이 참고로 편입되도록 구체적으로 및 개별적으로 표시된 것처럼 동일한 정도로 본원에서 참고로 편입된다.
도면의 간단한 설명
본 발명의 신규한 특징은 특히 첨부된 청구항에서 제시된다. 본 발명의 특징 및 이점의 더 나은 이해는 예시적인 구현예로 제시되는 하기 상세한 설명을 참고로 수득될 수 있고, 여기에서 본 발명의 원리가 이용되고, 이의 수반되는 도면들은 하기이다:
도1은 본 발명의 T-세포 수용체 융합 폴리펩타이드 (TFP)의 용도를 증명하는 도식적 실례이다. 예시적 TFP는 (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 전장 CD3 엡실론 폴리펩타이드를 함유한다. T-세포에 의해 생산되고 그 속에 도입되는 경우, TFP는 내인성 CD3 엡실론 폴리펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이 TFP로 치환되는 리프로그래밍된 TCR을 형성하기 위해 (수평 회색 세그먼트가 원형질막을 나타내는, 2 CD3 엡실론 폴리펩타이드, 1 CD3 감마 폴리펩타이드, 1 CD3 델타 폴리펩타이드, 2 CD3 제타 폴리펩타이드, 1 TCR 알파 서브유닛 및 1 TCR 베타 서브유닛을 포함하도록 나타난) 내인성 T-세포 수용체 (TCR)의 다른 폴리펩타이드와 관련한다.
도2A는 본 발명의 리프로그래밍된 T-세포 수용체 융합 폴리펩타이드 (TFP)의 예시적 변동을 증명하는 도식적 실례를 나타낸다.
도 2A는 (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 전장 TCR Vα 폴리펩타이드를 함유하는 TFP를 함유한 예시적 리프로그래밍된 TCR을 예시한다.
도2B는 i) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 전장 TCR Vα 폴리펩타이드 및 ii) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 전장 TCR Vβ 폴리펩타이드를 포함한 다중 TFP를 함유하는 일련의 예시적 리프로그래밍된 TCRs를 예시한다.
도2C는 i) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 절단된 (Δ) TCR 폴리펩타이드 및 ii) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 전장 CD3 엡실론 폴리펩타이드를 포함한 다중 TFP를 함유하는 예시적 리프로그래밍된 TCR을 예시한다. 절단된 (Δ) TCR 폴리펩타이드는 Vα의 결실에 의해 절단된다.
도2D는 i) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 절단된 (Δ) TCR Vα 폴리펩타이드 및 ii) (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 scFv 및 절단된 (Δ) TCR Vβ 폴리펩타이드를 포함한 다중 TFP를 함유하는 예시적 리프로그래밍된 TCR을 예시한다. 절단된 (Δ) TCR 폴리펩타이드는 Vβ의 결실에 의해 절단된다.
도3은 본 발명의 T-세포 수용체 융합 폴리펩타이드 (TFP)의 용도를 증명하는 도식적 실례이다. 예시적 TFP는 (G4S)3 링커 서열을 통해 융합된 항-CD19 VH 도메인 및 전장 CD3 엡실론 폴리펩타이드를 함유한다. T-세포에 의해 생산되고 T-세포 속에 도입된 경우, TFP는 내인성 CD3 엡실론 폴리펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이 TFP로 치환되는 리프로그래밍된 TCR을 형성하기 위해 (수평 회색 세그먼트가 원형질막을 나타내는, 2 CD3 엡실론 폴리펩타이드, 1 CD3 감마 폴리펩타이드, 1 CD3 델타 폴리펩타이드, 2 CD3 제타 폴리펩타이드, 1 TCR 알파 서브유닛 및 1 TCR 베타 서브유닛을 포함하도록 나타난) 내인성 T-세포 수용체 (TCR)의 다른 폴리펩타이드와 관련한다.
도4는 다양한 TFP를 인코딩하는 DNA 작제물을 증명하는 일련의 도식적 실례이다.
도5는 렌티바이러스 형질도입 이후 T-세포에서 항-CD19 LL (긴 링커) TFP의 표면 발현을 도시하는 예시적 막대 그래프이다. 효과기 T-세포는 비-형질도입되었거나 항-CD19-28ζ CAR 또는 표시된 항-CD19 LL TFP 작제물로 형질도입되었다. IL-2에서 10 일 동안 팽창된 후, 적절한 CAR 또는 TFP 작제물의 그의 표면 발현은 유세포측정에 의해 결정되었다.
도6은 렌티바이러스 형질도입 이후 T-세포에서 항-CD19 SL (짧은 링커) TFP의 표면 발현을 도시하는 예시적 막대 그래프이다. 효과기 T-세포는 비-형질도입되었거나 항-CD19-28 ζ CAR 또는 표시된 항-CD19 SL TFP 작제물로 형질도입되었다. IL-2에서 7 일 동안 팽창된 후, 적절한 CAR 또는 TFP 작제물의 그의 표면 발현은 유세포측정에 의해 결정되었다.
도7은 렌티바이러스 형질도입 이후 T-세포에서 항-BCMA TFP의 표면 발현을 도시하는 예시적 막대 그래프이다. 효과기 T-세포는 비-형질도입되었거나 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP 작제물로 형질도입되었다. IL-2에서 10 일 동안 팽창된 후, 그의 표면 TFP 발현은 유세포측정에 의해 결정되었다.
도8은 항-CD19 LL TFP에 의한 CD19-발현 Raji 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 막대 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 20: 1, 10: 1, 또는 5: 1의 E: T 비에서 1x104 Raji 표적 세포로 18 시간 동안 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 백분율 세포독성은 유세포 세포독성 검정에서 결정되었다.
도9는 항-BCMA TFP에 의해 BCMA-발현 RPMI8226 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 막대 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 10: 1, 또는 5: 1의 E: T 비에서 1x104 RPMI8226 표적 세포로 4 시간 동안 인큐베이션에 앞서 12 일 동안 팽창되었다. 백분율 세포독성은 유세포 세포독성 검정에서 결정되었다.
도10A는 경시적으로 항-CD19-28ζ CAR 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10B는 경시적으로 항-CD19-CD3ε LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10C는 경시적으로 항-CD19-CD3γ LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10D는 경시적으로 항-CD19-TCRαc LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10E는 경시적으로 항-CD19-TCRβc LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10F는 경시적으로 항-CD19-TCRα LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도10G는 경시적으로 항-CD19-TCRβ LL TFP 작제물에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도11은 항-CD19 TFP에 의해 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 7 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도12는 경시적으로 항-BCMA TFP에 의해 BCMA-형질도입된 HeLa 표적 세포의 사멸을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 HeLa-BCMA 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 7 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 RTCA 검정에서 결정되었다.
도13은 경시적으로 항-CD19-CD3ε LL TFP를 인코딩하는 렌티바이러스의 다양한 양으로 형질도입된 T-세포의 사멸 활성을 도시하는 예시적 그래프이다. 항-CD19-CD3ε LL TFP를 인코딩하는 렌티바이러스의 표시된 MOI로 형질도입된 T-세포는 1x104 CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. 세포독성을 나타내는, 세포 지수는 결정되었다.
도14는 항-CD19-CD3ε SL 또는 항-CD19-CD3γ SL TRuCs를 인코딩하는 시험관내 전사된 (IVT) mRNA로 전기천공에 의해 형질감염된 T-세포의 사멸 활성을 도시하는 예시적 그래프이다. 효과기 T 세포는 GFP 대조군, 항-CD19-CD3ε SL, 또는 항-CD19-CD3γ SL TRuCs로 인코딩하는 시험관내 전사된 (IVT) mRNAs로 활성화된 PBMCs의 전기천공에 의해 형질감염되었다. 3 일 동안 팽창 이후 효과기는 10: 1의 E: T 비에서 1x104 Raji 세포 또는 K562 세포로 4 시간 동안 인큐베이션되었다. 백분율 세포독성은 유세포 세포독성 검정에서 결정되었다.
도15A는 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IL-2 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입된, 대조군 CAR, 항-CD19-28ζ CAT 또는 표시된 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 Raji 또는 K562 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. IL-2 수준은 ELISA에 의해 결정되었다.
도15B는 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IFN-γ 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입된, 대조군 CAR, 항-CD19-28ζ CAT 또는 표시된 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 Raji 또는 K562 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. IFN-γ 수준은 ELISA에 의해 결정되었다.
도15C는 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IL-2 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입된, 대조군 CAR, 항-CD19-28ζ CAT 또는 표시된 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 CD19-HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. IL-2 수준은 ELISA에 의해 결정되었다.
도15D는 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IFN-γ 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입된, 대조군 CAR, 항-CD19-28ζ CAT 또는 표시된 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 CD19-HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. IFN-γ 수준은 ELISA에 의해 결정되었다.
도16은 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IFN-γ 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 표시된 항-CD19 TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 CD19-HeLa 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 7 일 동안 팽창되었다. IFN-γ 수준은 ELISA에 의해 결정되었다.
도17A는 BCMA-보유 표적 세포에 대응하여 항-BCMA TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IL-2 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 HeLa-BCMA 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 7 일 동안 팽창되었다. IL-2 생산은 2-플렉스(plex) 루미넥스(Luminex)에 의해 결정되었다.
도17B는 BCMA-보유 표적 세포에 대응하여 항-BCMA TFP로 형질도입된 T-세포에 의해 IFN-γ 방출을 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 1x104 HeLa 또는 HeLa-BCMA 표적 세포로 인큐베이션에 앞서 7 일 동안 팽창되었다. IFN-γ 생산은 2-플렉스 루미넥스로 결정되었다.
도18은 CD19-보유 표적 세포에 대응하여 항-CD19 TFP로 형질도입된 T-세포의 탈과립화를 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 항-CD19-28ζ CAR, 항-BCMA-CD3ε LL TFP 또는 항-BCMA-CD3γ LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 표시된 CD19 +ve 또는 CD19 -ve 표적 세포의 1x104로 인큐베이션에 앞서 14 일 동안 팽창되었다. CD3+CD8+ 게이트에서 CD107+ 세포의 백분율은 결정되었다. 표적 및 효과기 세포는 형광-표지된 항-CD107a 항체의 존재하에 공-배양되었다. 세포 표면 CD107a에 대하여 양성으로 염색하였던 CD3 및 CD4/CD8 게이트 이내 T-세포의 백분율은 그 다음 유세포측정에 의해 결정되었다.
도19는 BCMA-보유 표적 세포에 대응하여 항-BCMA TFP로 형질도입된 T-세포의 탈과립화를 도시하는 예시적 그래프이다. 비-형질도입되었거나 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP의 50 MOI로 형질도입된 효과기 T-세포는 표시된 BCMA +ve RPMI8226 표적 세포의 1x104로 인큐베이션에 앞서 13 일 동안 팽창되었다. CD3+CD8+ 게이트에서 CD107+ 세포의 백분율은 결정되었다.
도20A는 파종성 인간 백혈병성 이종이식 모델에서 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포의 생체내 효능의 예시적 그래프를 도시한다. NSG 마우스는 비-형질도입되었거나 항-CD19-28ζ-CAR, 항-CD19-CD3ε LL TFP 또는 항-CD19-CD3γ LL TFP로 형질도입된 5x106 T-세포의 입양 전달에 앞서 5 x105 Raji 세포로 z3 일 정맥내로 공격받았다.
도20B는 파종성 인간 백혈병성 이종이식 모델에서 항-CD19 LL TFP로 형질도입된 T-세포의 생체내 효능의 예시적 그래프를 도시한다. NSG 마우스는 비-형질도입되었거나 항-CD19-28ζ-CAR, 항-CD19-CD3ε LL TFP 또는 항-CD19-CD3γ LL TFP로 형질도입된 5x106 T-세포의 입양 전달에 앞서 1x106 Nalm-6 세포로 (우측) z3 일 정맥내로 공격받았다. 로그-순위 (Mantel-Cox) 시험에 의한 생존 곡선의 비교는 p = 0.0001 (그룹 4 대 1, 2, 3), p = 0.0001 (그룹 1 대 2, 3), 및 p = 0.0004 (그룹 2 대 3)을 보여주었다. Gehan-Breslow-Wilcoxon 시험에 의한 생존 곡선의 비교는 p = 0.0001 (그룹 4 대 1, 2, 3), p = 0.0001 (그룹 1 대 2, 3), 및 p = 0.0005 (그룹 2 대 3)을 보여주었다.
발명의 상세한 설명
하나의 측면에서, 항-CD19 결합 도메인을 포함한 인간 또는 인간화된 항체 도메인 및 TCR 서브유닛을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는 단리된 핵산 분자가 본원에서 기재된다. 일부 구현예에서, TCR 서브유닛은 TCR 세포외 도메인을 포함한다. 다른 구현예에서, TCR 서브유닛은 TCR 막관통 도메인을 포함한다. 더욱 다른 구현예에서, TCR 서브유닛은 TCR 세포내 도메인을 포함한다. 추가 구현예에서, TCR 서브유닛은 (i) TCR 세포외 도메인, (ii) TCR 막관통 도메인, 및 (iii) TCR 세포내 도메인을 포함하고, 여기에서 적어도 2개의 (i), (ii), 및 (iii)은 동일한 TCR 서브유닛 출신이다. 더욱 추가 구현예에서, TCR 서브유닛은 CD3 엡실론, CD3 감마 또는 CD3 델타의 세포내 신호전달 도메인, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함한다. 더욱 추가 구현예에서, TCR 서브유닛은 4-1BB의 기능성 신호전달 도메인 및/또는 CD3 제타의 기능성 신호전달 도메인, 및 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 인간 또는 인간화된 항체 도메인은 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 또는 인간화된 항체 도메인은 scFv 또는 VH 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 핵산 분자는 (i) 본원에서 제공된 임의의 항-CD19 경쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 경쇄 (LC) CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3, 및/또는 (ii) 본원에서 제공된 임의의 항-CD19 중쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 중쇄 (HC) CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 본원에서 제공된 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 30, 20 또는 10 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 본원에서 제공된 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 본원에서 제공된 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 30, 20 또는 10 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 본원에서 제공된 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, TFP는 T-세포 수용체, CD3 델타, CD3 엡실론, 또는 CD3 감마의 알파 또는 베타 쇄, 또는 그의 기능성 단편, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 20, 10 또는 5 이하 개의 변형을 갖는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 서브유닛의 세포외 도메인을 포함한다. 다른 구현예에서, 인코딩된 TFP는 TCR 또는 TCR 서브유닛 CD3 엡실론, CD3 감마 및 CD3 델타의 알파, 베타 쇄, 또는 그의 기능성 단편, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 20, 10 또는 5 이하 개의 변형을 갖는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 인코딩된 TFP는 TCR 또는 CD3 엡실론, CD3 감마 및 CD3 델타 CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD28, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및 CD154의 알파, 베타 또는 제타 쇄, 또는 그의 기능성 단편, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 20, 10 또는 5 이하 개의 변형을 갖는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 인코딩된 항-CD19 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 인코딩된 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4. 일부 경우에서, 인코딩된 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 인코딩된 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 인코딩된 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 인코딩된 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
일부 구현예에서, 단리된 핵산 분자는 추가로 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 공자극 도메인은 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 및 4-1BB (CD137), 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 20, 10 또는 5 이하 개의 변형을 갖는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질로부터 수득된 기능성 신호전달 도메인이다.
일부 구현예에서, 단리된 핵산 분자는 추가로 리더 서열을 포함한다.
임의의 이전에 기재된 핵산 분자에 의해 인코딩된 단리된 폴리펩타이드 분자가 또한 본원에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 단리된 T-세포 수용체 융합 단백질 (TFP) 분자가 또한 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 단리된 TFP 분자는 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인은 scFv 또는 VH 도메인이다. 다른 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인은 본원에서 제공된 아미노산 서열, 또는 그의 기능성 단편, 또는 본원에서 제공된 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 30, 20 또는 10 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 본원에서 제공된 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열의 경쇄 및 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 TFP 분자는 T-세포 수용체, CD3 델타, CD3 엡실론, 또는 CD3 감마의 알파 또는 베타 쇄, 또는 거기에 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 그러나 20, 10 또는 5 이하 개의 변형을 갖는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 세포외 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
일부 구현예에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 세포내 신호전달 도메인을 인코딩하는 서열을 포함한다. 더욱 다른 구현예에서, 단리된 TFP 분자는 추가로 리더 서열을 포함한다.
임의의 이전에 기재된 TFP 분자를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터가 또한 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 벡터는 DNA, RNA, 플라스미드, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 또는 레트로바이러스 벡터로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 벡터는 추가로 프로모터를 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터는 시험관내 전사된 벡터이다. 일부 구현예에서, 벡터에서 핵산 서열은 추가로 폴리(A) 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터에서 핵산 서열은 추가로 3’UTR을 포함한다.
임의의 기재된 벡터를 포함하는 세포가 또한 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 세포는 인간 T-세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 CD8+ 또는 CD4+ T-세포이다. 다른 구현예에서, 세포는 추가로, 세포내 신호전달 도메인으로부터 양성 신호를 포함하는 제2 폴리펩타이드와 관련된, 적어도 일 부분의 억제 분자를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하는 억제 분자를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 경우에서, 억제 분자는 적어도 일 부분의 PD1을 포함하는 제1 폴리펩타이드 및 공자극 도메인 및 1차 신호전달 도메인을 포함한 제2 폴리펩타이드를 포함한다.
또 다른 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있다.
또 다른 측면에서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 단리된 TFP 분자가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 내인성 TCR 복합체 속에 기능적으로 통합할 수 있다.
또 다른 측면에서, TFP 분자가 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함한, 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포s 가 본원에서 제공되고, 여기에서 TFP 분자는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 표면 내에, 표면에서 및/또는 표면 위에서 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있다.
또 다른 측면에서, i) 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인; 및 ii) 적어도 하나의 내인성 TCR 복합체를 포함한 TFP 분자를 포함하는 단백질 복합체가 본원에서 제공된다.
일부 구현예에서, TCR은 T-세포 수용체, CD3 델타, CD3 엡실론, 또는 CD3 감마의 알파 또는 베타 쇄로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인은 링커 서열에 의해 TCR 세포외 도메인에 연결된다. 일부 경우에서, 링커 영역은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
임의의 기재된 단백질 복합체당 적어도 2개의 상이한 TFP 단백질을 포함하는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포가 또한 본원에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 집단이 본원에서 제공되고, 여기에서 집단의 T-세포는 개별적으로 또는 집합적으로, TFP 분자가 인간 또는 인간화된 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는, 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하고, 여기에서 TFP 분자는 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 표면내에, 표면에서 및/또는 표면 위에서 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있다.
또 다른 측면에서, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 집단이 본원에서 제공되고, 여기에서 집단의 T-세포는 개별적으로 또는 집합적으로 본원에서 제공된 단리된 핵산 분자에 의해 인코딩된 적어도 2개의 TFP 분자를 포함한다.
또 다른 측면에서, 임의의 기재된 벡터로 T-세포의 형질도입을 포함하는 세포의 제조 방법이 본원에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 세포 속에 시험관내 전사된 RNA 또는 합성 RNA의 도입을 포함하는 RNA-조작된 세포의 집단의 생성 방법이 본원에서 제공되고, 여기에서 RNA는 임의의 기재된 TFP 분자를 인코딩하는 핵산을 포함한다.
또 다른 측면에서, 포유동물에 임의의 기재된 TFP 분자를 발현하는 세포의 유효량의 투여를 포함하는 포유동물에서 항-종양 면역력의 제공 방법이 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 세포는 자가 T-세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 동종이계 T-세포이다. 일부 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
또 다른 측면에서, 포유동물에 임의의 기재된 TFP 분자의 세포의 유효량의 투여를 포함하는 CD19의 발현과 관련된 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, CD19 발현과 관련된 질환은 증식성 질환 예컨대 암 또는 악성종양 또는 전암성 병태 예컨대 골수이형성증, 골수이형성 증후군 또는 전백혈병으로부터 선택되거나, CD19의 발현과 관련된 비-암 관련된 징후이다. 일부 구현예에서, 질환은 비제한적으로 B-세포 급성 림프양 백혈병 (“B-ALL”), T-세포 급성 림프양 백혈병 (“T-ALL”), 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)을 포함하는 하나 이상의 급성 백혈병; 비제한적으로 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 혈액성 암이고; 비제한적으로 B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증)에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 “전백혈병”, 그리고 CD19 발현과 관련된 질환을 포함하는 추가 혈액성 암 또는 혈액성 병태는 비제한적으로 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성종양, 전암성 병태 또는 CD19를 발현하는 증식성 질환; 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 임의의 기재된 TFP 분자를 발현하는 세포는 TFP 분자를 발현하는 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 부작용을 완화시키는 제제와 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 임의의 기재된 TFP 분자를 발현하는 세포는 CD19와 관련된 질환을 치료하는 제제와 조합으로 투여된다.
약제로서 사용하기 위한 임의의 기재된 단리된 핵산 분자, 임의의 기재된 단리된 폴리펩타이드 분자, 임의의 기재된 단리된 TFP, 임의의 기재된 단백질 복합체, 임의의 기재된 벡터 또는 임의의 기재된 세포가 또한 본원에서 제공된다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 단수 부정관사(“a” 및 “an”)는 관사의 문법적 대상의 1 또는 1 초과 (즉, 하나 이상)을 지칭한다. 예로써, “요소”는 1 요소 또는 1 초과 요소를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, “약”은, 상황에 따라 그리고 당해 분야의 숙련가에 의해 공지되거나 공지될 수 있는, 1 미만 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 또는 30 초과 퍼센트 플러스 또는 마이너스를 의미할 수 있다.
명세서에서 본원에 사용된 바와 같이, “대상체” 또는 “대상체들” 또는 “개체”는, 비제한적으로, 포유동물 예컨대 인간 또는 비-인간 포유동물, 예를 들면, 사육된, 농업용 또는 야생, 동물, 뿐만 아니라 새, 및 수생 동물을 포함할 수 있다. “환자”는 질환, 장애 또는 병태를 앓고 있거나 발병 위험이 있거나 달리 본원에서 제공된 조성물 및 방법이 필요한 대상체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, “치료하는” 또는 “치료”는 질환 또는 병태의 치료 또는 완화에서 성공의 임의의 증상을 지칭한다. 치료는, 예를 들어, 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상의 중증도의 감소, 지연 또는 경감을 포함할 수 있거나, 질환, 결함, 장애, 또는 부정적인 병태, 기타 등등의 증상이 환자에 의해 경험되는 빈도의 감소를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, “치료하다 또는 예방하다”는 질환 또는 병태의 치료 또는 완화의 일부 수준을 초래하는 방법을 지칭하는데 본원에서 때때로 사용되고, 비제한적으로 전적으로 병태의 예방을 포함한, 그 목적에 관한 결과의 범위를 고려한다.
본원에서 사용된 바와 같이, “예방하는”은 환자에서 질환 또는 병태, 예를 들면, 종양 형성의 예방을 지칭한다. 예를 들어, 종양 또는 다른 형태의 암의 발병 위험에 있는 개체가 본 발명의 방법으로 치료받고 종양 또는 다른 형태의 암이 나중에 발병하지 않는다면, 질환은 그 개체에서 적어도 일정 기간에 걸쳐 예방되어 왔다.
본원에서 사용된 바와 같이, “치료적 유효량”은 유익한 효과를 제공하기에 또는 달리 조성물이 투여되는 개체에 해로운 비-유익한 이벤트를 감소시키기에 충분한 조성물 또는 그의 활성 성분의 양이다. “치료적으로 효과적인 용량”은 본원에서 투여되는 하나 이상의 요망된 또는 바람직한 (예를 들면, 유익한) 효과를 생산하는 용량을 의미하고, 상기 투여는 소정의 기간에 걸쳐 1회 이상 실시한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 달려있을 것이고, 하기를 이용하여 당해 분야의 숙련가에 의해 확인될 수 있을 것이다: 공지된 기술 (참고, 예를 들면Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); 및 Pickar, Dosage Calculations (1999))
본원에서 사용된 바와 같이, “T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질” 또는 “TFP”는 일반적으로 i) 표적 세포에서 표면 항원에 결합할 수 있고 ii) 전형적으로 T-세포의 표면 내에 또는 표면에서 공-위치된 경우, 온전한 TCR 복합체의 다른 폴리펩타이드 성분과 상호작용할 수 있는 TCR을 포함한 다양한 폴리펩타이드로부터 유래된 재조합 폴리펩타이드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 “CD19”는, B 세포 백혈병 전구체 세포, 다른 악성 B 세포 및 정상 B 세포 계통의 대부분의 세포에서 검출가능한 항원 결정기인, 분화 19 단백질의 클러스터를 지칭한다. 인간 및 쥣과 아미노산 및 핵산 서열은 아래에 발견될 수 있다: 공공 데이터베이스, 예컨대 GenBank, UniProt 및 Swiss-Prot. 예를 들어, 인간 CD19의 아미노산 서열은 하기로서 찾아질 수 있다: UniProt/Swiss-Prot 수탁 번호 P15391. 인간 CD19 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: UniProt 수탁 번호 P15391 (및 P15391-1): MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR (서열 식별 번호: 1).
인간 CD19의 뉴클레오타이드 서열 인코딩은 하기에서 찾아질 수 있다: 수탁 번호 NM001178098.CD19는, 하기를 포함하는, 대부분의 B 계통 암에서 발현된다: 예를 들면, ALL, CLL 및 비-호지킨 림프종 (NHL). CD19를 발현하는 다른 세포는 “CD19의 발현과 관련된 질환”의 정의에서 아래 제공된다. 또한 정상 B 세포 조상세포의 초기 마커이다. 참고, 예를 들면, Nicholson 등 Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997). 하나의 예에서, TFP의 항원-결합부는 악성 및 정상 B 세포에서 발현된 경우 CD19 단백질의 세포외 도메인 이내 에피토프를 인식하고 결합한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 “BCMA”는 종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 17 (TNFRSF17)로서 또한 공지된 B-세포 성숙 항원을 지칭하고 분화 269 단백질의 클러스터 (CD269)는 인간이 TNFRSF17 유전자에 의해 인코딩되는 단백질이다. TNFRSF17은 B-세포 활성화 인자 (BAFF)를 인식하는 TNF 수용체 상과의 세포 표면 수용체이다 (참고, 예를 들면, Laabi 등, EMBO 11 (11): 3897-904 (1992). 상기 수용체는 성숙한 B 림프구에서 발현되고, B-세포 발생 및 자가면역 반응에 중요할 수 있다. 인간 및 쥣과 아미노산 및 핵산 서열은 아래에 발견될 수 있다: 공공 데이터베이스, 예컨대 GenBank, UniProt 및 Swiss-Prot. 예를 들어, 인간 BCMA의 아미노산 서열은 하기에서 찾아질 수 있다: UniProt/Swiss-Prot 수탁 번호 Q02223. 인간 BCMA 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: UniProt 수탁 번호 Q02223 (또는 Q02223-1): MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAVFVLMFLLRKINSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDSDHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR (서열 식별 번호: 2).
인간 BCMA의 뉴클레오타이드 서열 인코딩은 하기에서 찾아질 수 있다: 수탁 번호 NM001192.BCMA는, 예를 들면, 백혈병, 림프종, 및 다중 골수종을 포함한, 대부분의 B-계통 암에서 발현된다. BCMA를 발현하는 다른 세포는 “BCMA의 발현과 관련된 질환”의 정의에서 아래 제공된다. 상기 수용체는 구체적으로 종양 괴사 인자 (리간드) 상과, 구성원 13b (TNFSF13B/TALL-1/BAFF)에 결합하고, NF-카파B 및 MAPK8/JNK 활성화로 이어지는 것으로 나타났다. 상기 수용체는 또한 다양한 TRAF 계열 구성원에 결합하고, 따라서 세포 생존 및 증식을 위하여 신호를 형질도입할 수 있다 (참고, 예를 들면, Laabi 등, Nucleic Acids Research 22 (7): 1147-54 (1994). 하나의 예에서, TFP의 항원-결합부는 악성 및 정상 B 세포에서 발현된 경우 BCMA 단백질의 세포외 도메인 이내 에피토프를 인식하고 결합시킨다.
용어 “항체”는, 본원에서 사용된 바와 같이, 단백질, 또는 구체적으로 항원에 결합하는, 면역글로불린 분자로부터 유래된 폴리펩타이드 서열을 지칭한다. 항체는 다클론성 또는 단클론성 기원의 온전한 면역글로불린, 또는 그의 단편일 수 있고, 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다.
용어 “항체 단편” 또는 “항체 결합 도메인”은, 표적, 예컨대 항원 및 그의 한정된 에피토프에 항체 단편의 인식 및 특이적 결합을 부여하는데 충분한, 항원 결합 도메인, 즉, 온전한 항체의 항원 결정 가변 영역을 함유하는, 항체의 적어도 하나의 부분, 또는 그의 재조합 변이체를 지칭한다. 항체 단편의 예는 하기를 포함한다: 비제한적으로, Fab, Fab’, F(ab’)2, 및 Fv 단편, 단일-쇄 (sc)Fv (“scFv”) 항체 단편, 선형 항체, 단일 도메인 항체 예컨대 sdAb (VL 또는 VH), 낙타과 VHH 도메인, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중-특이적 항체.
용어 “scFv”는 경쇄의 가변 영역을 포함한 하나 이상의 항체 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함한 하나 이상의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하고, 여기에서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 짧은 가요성 폴리펩타이드 링커를 통해 인접해서 연결되고, 단일 폴리펩타이드 쇄로서 발현될 수 있고, 여기에서 scFv는 유래되는 온전한 항체의 특이성을 갖는다.
항체에 관하여 “중쇄 가변 영역” 또는 “VH”는 프레임워크 영역으로서 공지된 측접하는 스트레치 사이 개재된 3 CDRs를 함유하는 중쇄의 단편을 지칭하고, 이들 프레임워크 영역은 일반적으로 CDRs보다 더욱 고도로 보존되고 CDRs를 지지하기 위해 스캐폴드를 형성한다.
지정되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같이 scFv는, 예를 들면, 폴리펩타이드의 N-말단 및 C-말단에 관하여, 어느 한쪽으로 VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있고, scFv는 VL-링커-VH를 포함할 수 있거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
항체 또는 그의 항체 단편을 포함한 본 발명의 TFP 조성물의 부분은 항원 결합 도메인이, 예를 들어, 단일 도메인 항체 단편 (sdAb), 쥣과로부터 유래된 단일 쇄 항체 (scFv), 인간화된 또는 인간 항체를 포함하는 인접 폴리펩타이드 쇄의 일부로서 발현되는 다양한 형태로 실재할 수 있다 (Harlow 등, 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y.; Harlow 등, 1989, In: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y.; Houston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883; Bird 등, 1988, Science 242: 423-426). 하나의 측면에서, 본 발명의 TFP 조성물의 항원 결합 도메인은 항체 단편을 포함한다. 한 추가 측면에서, TFP는 scFv 또는 sdAb를 포함하는 항체 단편을 포함한다.
용어 “항체 중쇄”는 그의 천연 발생 형태로 항체 분자에 존재하는 폴리펩타이드 쇄의 2 유형의 더 큰 부분을 지칭하고, 이는 정상적으로 항체가 속하는 부류를 결정한다.
용어 “항체 경쇄”는 그의 천연 발생 형태로 항체 분자에 존재하는 폴리펩타이드 쇄의 2 유형의 더 작은 부분을 지칭한다. 카파 (“κ”) 및 람다 (“λ”) 경쇄는 2개의 주요한 항체 경쇄 아이소타입을 지칭한다.
용어 “재조합 항체”는 재조합 DNA 기술을 이용하여 생성되는 항체, 예컨대, 예를 들어, 박테리오파아지 또는 효모 발현 시스템에 의해 발현된 항체를 지칭한다. 용어는 또한 항체를 인코딩하는 DNA 분자의 합성에 의해 생성되고 있는 및 DNA 분자가 항체 단백질, 또는 항체를 구체화하는 아미노산 서열을 발현하는 항체를 의미하는 것으로 해석되어야 하고, 여기에서 DNA 또는 아미노산 서열은 이용가능하고 당해 기술에서 잘 알려진 재조합 DNA 또는 아미노산 서열 기술을 이용하여 수득되어 왔다.
용어 “항원” 또는 “Ag”는 항체에 의해 구체적으로 결합될 수 있거나, 달리 면역 반응을 유발시키는 분자를 지칭한다. 상기 면역 반응은 항체 생산, 또는 특이적 면역학적으로-능숙한 세포의 활성화, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.
숙련가는 사실상 모든 단백질 및 펩타이드를 포함한 임의의 거대분자가 항원으로서 작용할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 더욱이, 항원은 재조합 또는 게놈 DNA로부터 유래될 수 있다. 숙련가는, 면역 반응을 끌어내는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 부분적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 임의의 DNA가 따라서 그 용어가 본원에서 사용되는 경우 “항원”을 인코딩한다는 것을 이해할 것이다. 더욱이, 당해 분야의 숙련가는 항원이 유전자의 전장 뉴클레오타이드 서열에 의해 단독으로 인코딩될 필요가 없다는 것을 이해할 것이다. 본 발명이, 비제한적으로, 1 초과 유전자의 부분적인 뉴클레오타이드 서열의 이용을 포함한다는 것 및 이들 뉴클레오타이드 서열이 요망된 면역 반응을 유도하는 폴리펩타이드를 인코딩하기 위해 다양한 조합으로 배열되는 것이 쉽게 명백하다. 또한, 숙련가는 항원이 “유전자”에 의해 전혀 인코딩될 필요가 없다는 것을 이해할 것이다. 항원이 합성 생성될 수 있거나 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있거나, 폴리펩타이드 이외의 거대분자일 수 있다는 것이 쉽게 명백하다. 그와 같은 생물학적 샘플은, 비제한적으로 조직 샘플, 종양 샘플, 세포 또는 다른 생물학적 성분을 가진 유체를 포함할 수 있다.
용어 “항-종양 효과”는, 비제한적으로, 예를 들면, 종양 용적에서의 감소, 종양 세포의 수에서의 감소, 전이의 수에서의 감소, 기대 수명에서의 증가, 종양 세포 증식에서의 감소, 종양 세포 생존에서의 감소, 또는 암성 병태와 관련된 다양한 생리적 증상의 완화를 포함한, 다양한 수단에 의해 명시될 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. “항-종양 효과”는 또한 제1 장소에서 종양의 발생의 예방으로 본 발명의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 세포 및 항체의 능력에 의해 명시될 수 있다.
용어 “자가”는 개체 속에 나중에 재-도입되는 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다.
용어 “동종이계”는 물질이 도입되는 개체와 동일한 종의 상이한 동물 또는 상이한 환자로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 2 이상의 개체는 하나 이상의 유전자좌에서 유전자가 동일하지 않은 경우 서로에 동종이계인 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 동일한 종의 개체로부터 동종이계 물질은 항원성으로 상호작용하기 위해 유전자 상으로 달리 충분할 수 있다.
용어 “이종계”는 상이한 종의 동물로부터 유래된 그라프트를 지칭한다.
용어 “암”은 비정상적인 세포의 급속 및 조절되지 않는 성장을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 암 세포는 국소로 또는 혈류 및 림프 시스템을 통해 신체의 다른 부분에 확산할 수 있다. 다양한 암의 예는 본원에서 기재되고 비제한적으로, 유방 암, 전립선 암, 난소 암, 자궁경부 암, 피부 암, 췌장 암, 결장직장 암, 신장 암, 간 암, 뇌암, 림프종, 백혈병, 폐 암 기타 등등을 포함한다.
어구 “CD19의 발현과 관련된 질환” 및 “BCMA의 발현과 관련된 질환”은, 비제한적으로, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환 또는, 예를 들면, 증식성 질환 예컨대 암 또는 악성종양 또는 전암성 병태 예컨대 골수이형성증, 골수이형성 증후군 및 전백혈병을 포함하는 CD19 또는 BCMA를 발현하는 세포와 관련된 병태; 또는 CD19 또는 BCMA를 발현하는 세포와 관련된 비암 관련된 징후를 포함한다. 하나의 측면에서, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 암은 혈액 암이다. 하나의 측면에서, 혈액 암은 백혈병 또는 림프종이다. 하나의 측면에서, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 암은, 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 포함하는 암 및 악성종양을 포함한다: 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 포함하는 하나 이상의 급성 백혈병: B 세포 ALL, T-세포 급성 림프양 백혈병 (TALL), 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병: CLL 또는 만성 골수성 백혈병 (CML). CD19의 발현과 관련된 추가의 암 또는 혈액성 병태는, 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 포함한다: B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증)에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 “전백혈병”, 기타 등등. CD19의 발현 또는 BCMA 발현과 관련된 추가 질환은, 비제한적으로, 예를 들면, 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성종양, 전암성 병태 또는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 증식성 질환을 포함한다. CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 비-암 관련된 징후는, 비제한적으로, 예를 들면, 자가면역 질환, (예를 들면, 낭창, 류마티스성 관절염, 결장염), 염증성 장애 (알러지 및 천식), 및 이식을 포함한다.
용어 “보존적 서열 변형”은 아미노산 서열을 함유하는 항체 또는 항체 단편의 결합 특징을 변경하지 않거나 유의미하게 영향을 주지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 상기 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 당해 기술에서 공지된 표준 기술, 예컨대 부위 지향적 돌연변이유발 및 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 본 발명의 항체 또는 항체 단편 속에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당해 기술 한정되어 왔다. 이들 계열은 염기성 측쇄 (예를 들면, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 측쇄 (예를 들면, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 무극성 측쇄 (예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄 (예를 들면, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들면, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 가진 아미노산을 포함한다. 따라서, 본 발명의 TFP 이내 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열로부터 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고 변경된 TFP는 본원에서 기재된 기능성 검정을 이용하여 시험될 수 있다.
용어 “자극”은 그의 동족 리간드로 자극 도메인 또는 자극 분자 (예를 들면, TCR/CD3 복합체)의 결합 이로써 신호 형질도입 이벤트, 예컨대, 비제한적으로, TCR/CD3 복합체를 통한 신호 형질도입의 매개에 의해 유도된 1차 반응을 지칭한다. 자극은 특정 분자의 변경된 발현, 및/또는 세포골격 구조의 재구성, 기타 등등을 매개할 수 있다.
용어 “자극 분자” 또는 “자극 도메인”은 T-세포 신호전달 경로의 적어도 일부 측면에 대하여 자극 방식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호전달 서열(들)을 제공하는 T-세포에 의해 발현된 분자 또는 그의 일부를 지칭한다. 하나의 측면에서, 1차 신호는, 예를 들면, 펩타이드로 장입된 MHC 분자와 TCR/CD3 복합체의 결합에 의해 개시되고, 비제한적으로, 증식, 활성화, 분화, 기타 등등을 포함한, T-세포 반응의 매개로 이어진다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호전달 서열 (또한 “1차 신호전달 도메인”으로 칭함)은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 “ITAM”으로서 공지되는 신호전달 모티프를 함유할 수 있다. 본 발명에서 특정 용도인 1차 세포질 신호전달 서열을 함유한 ITAM의 예는, 비제한적으로, TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (또한 “ICOS”로서 공지됨) 및 CD66d로부터 유래된 것을 포함한다.
용어 “항원 제시 세포” 또는 “APC”는 그의 표면에서 주조직 적합성 복합체 (MHC’s)로 복합된 외래 항원을 나타내는 면역 시스템 세포 예컨대 부속 세포 (예를 들면, B-세포, 수지상 세포, 기타 등등)을 지칭한다. T-세포는 그의 T-세포 수용체 (TCRs)를 이용한 이들 복합체를 인식할 수 있다. APCs는 항원을 가공하고 이들을 T-세포에 나타낸다.
용어가 본원에서 사용되는 바와 같이 “세포내 신호전달 도메인”은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 세포내 신호전달 도메인은 TFP 함유 세포, 예를 들면, TFP-발현 T-세포의 면역 효과기 기능을 촉진시키는 신호를 생성한다. 예를 들면, TFP-발현 T-세포에서, 면역 효과기 기능의 예는, 사이토카인의 분비를 포함하는, 세포용해 활성 및 T 헬퍼 세포 활성을 포함한다. 한 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 예시적 1차 세포내 신호전달 도메인은 1차 자극, 또는 항원 의존적 시뮬레이션을 책임지는 분자로부터 유래된 것을 포함한다. 한 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 공자극 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 예시적 공자극 세포내 신호전달 도메인은 공자극 신호, 또는 항원 독립적인 자극을 책임지는 분자로부터 유래된 것을 포함한다.
1차 세포내 신호전달 도메인은 ITAM (“면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프”)를 포함할 수 있다. 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는, 비제한적으로, CD3 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d DAP10 및 DAP12로부터 유래된 것을 포함한다.
용어 “공자극 분자”는 구체적으로 공자극 리간드와 결합하고, 이로써 T-세포에 의한 공자극 반응, 예컨대, 비제한적으로, 증식을 매개하는 T-세포에서 동족 결합 파트너를 지칭한다공자극 분자는 효율적인 면역 반응에 요구되는 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 공자극 분자는, 비제한적으로 MHC 부류 1 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체, 뿐만 아니라 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18) 및 4-1BB (CD137)을 포함한다. 공자극 세포내 신호전달 도메인은 공자극 분자의 세포내 부분일 수 있다. 공자극 분자는 하기 단백질 계열에서 나타낼 수 있다: TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), 및 활성화 NK 세포 수용체. 상기 분자의 예는 하기를 포함한다: CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, GITR, CD30, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, 림프구 기능-관련된 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 및 구체적으로 CD83과 결합하는 리간드, 기타 등등. 세포내 신호전달 도메인은 유래되는 분자의, 전체 세포내 부분, 또는 전체 원상태 세포내 신호전달 도메인, 또는 그의 기능성 단편을 포함할 수 있다. 용어 “4-1BB”는 하기를 지칭하고: 하기로서 제공된 아미노산 서열을 가진 TNFR 상과의 구성원: 유전자은행 수탁 번호 AAA62478.2, 또는 비-인간 종, 예를 들면, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 기타 등등으로부터 등가 잔기; “4-1BB 공자극 도메인”은 하기로서 한정된다: 하기의 아미노산 잔기 214-255: 유전자은행 수탁 번호 AAA62478.2, 또는 비-인간 종, 예를 들면, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 기타 등등으로부터 등가 잔기.
용어 “인코딩”은 뉴클레오타이드 (예를 들면, rRNA, tRNA 및 mRNA)의 한정된 서열 또는 아미노산의 한정된 서열을 갖는 생물학적 과정에서 다른 폴리머 및 거대분자의 합성을 위한 템플레이트로서 작용하기 위해, 폴리뉴클레오타이드내 뉴클레오타이드, 예컨대 유전자, cDNA, 또는 mRNA의 특이적 서열의 고유한 특성 및 거기에서 비롯된 생물학적 특성을 지칭한다. 따라서, 그 유전자에 대응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생산하면 유전자, cDNA, 또는 RNA는 단백질을 인코딩한다. mRNA 서열과 동일하고 서열 목록에 일반적으로 제공되는 뉴클레오타이드 서열인, 코딩 가닥, 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 템플레이트로서 사용된, 비-코딩 가닥 둘 모두는 그 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물로서 지칭될 수 있다.
달리 구체화되지 않는 한, “아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열”은 서로의 버전을 퇴화하는 및 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 모든 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 인코딩하는 어구 뉴클레오타이드 서열은 또한 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열이 일부 버전으로 하나 이상의 인트론을 함유할 수 있는 정도로 인트론을 포함할 수 있다.
용어 “유효량” 또는 “치료적 유효량”은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 본원에서 기재된 바와 같이 특정한 생물학적 또는 치료적 결과를 달성하는데 효과적인, 화합물, 제형, 물질, 또는 조성물의 양을 지칭한다.
용어 “내인성”은 유기체, 세포, 조직 또는 시스템 내부에서 생산된 또는 상기로부터 임의의 물질을 지칭한다.
용어 “외인성”은 유기체, 세포, 조직 또는 시스템 외부에서 생산된 또는 상기로부터 도입된 임의의 물질을 지칭한다.
용어 “발현”은 프로모터에 의해 유도된 특정한 뉴클레오타이드 서열의 전사 및/또는 번역을 지칭한다.
용어 “전달 벡터”는 단리된 핵산을 포함하고 단리된 핵산을 세포의 내부에 전달하는데 사용될 수 있는 물질의 조성물을 지칭한다. 비제한적으로, 선형 폴리뉴클레오타이드, 이온성 또는 양친매성 화합물과 관련된 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 및 바이러스를 포함한 수많은 벡터는 당해 기술에 공지되어 있다. 따라서, 용어 “전달 벡터”는 자율적으로 복제 플라스미드 또는 바이러스를 포함한다. 용어는 세포 속에 핵산의 전달을 용이하게 하는 비-플라스미드 및 비-바이러스성 화합물, 예컨대, 예를 들어, 폴리라이신 화합물, 리포좀, 기타 등등을 추가로 포함하는 것으로 또한 해석되어야 한다. 바이러스성 전달 벡터의 예는, 비제한적으로, 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련된 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 기타 등등을 포함한다.
용어 “발현 벡터”는 발현되는 뉴클레오타이드 서열에 작동가능하게 연결된 발현 대조군 서열을 포함한 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 발현을 위한 충분한 시스-작용 요소를 포함하고; 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포에 의해 그리고 시험관내 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 재조합 폴리뉴클레오타이드를 편입하는 코스미드, 플라스미드 (예를 들면, 노출된 또는 리포좀에 함유된) 및 바이러스 (예를 들면, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노-관련된 바이러스)를 포함하는, 발현 벡터는 당해 기술에서 공지된 모든 것들을 포함한다.
용어 “렌티바이러스”는 레트로비리다에 계열의 속을 지칭한다. 렌티바이러스는 비-분할 세포를 감염시킬 수 있는 레트로바이러스 중에서 독특하고; 이들은 숙주 세포의 DNA 속에 유전적 정보의 상당한 양을 전달할 수 있어서, 이들은 유전자 전달 벡터의 가장 효율적인 방법 중 하나이다. HIV, SIV, 및 FIV 모두는 렌티바이러스의 예이다.
용어 “렌티바이러스 벡터”는, 하기에서 제공된 바와 같이 특히 자기-불활성화 렌티바이러스 벡터를 포함하는, 적어도 일 부분의 렌티바이러스 게놈으로부터 유래된 벡터를 지칭한다: Milone 등, Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009). 임상에서 사용될 수 있는 렌티바이러스 벡터의 다른 예는, 비제한적으로, 예를 들면, Oxford BioMedica로부터 LENTIVECTORTM 유전자 전달 기술, Lentigen으로부터 LENTIMAXTM 벡터 시스템, 기타 등등을 포함한다. 비임상 유형의 렌티바이러스 벡터는 또한 이용가능하고 당해 분야의 숙련가에 공지될 것이다.
용어 “상동성” 및 “동일성”은 2 폴리머 분자 사이, 예를 들면, 2 핵산 분자, 예컨대, 2 DNA 분자 또는 2 RNA 분자 사이, 또는 2 폴리펩타이드 분자 사이 서브유닛 서열 동일성을 지칭한다. 2 분자의 양쪽에서 서브유닛 위치가 동일한 모노머성 서브유닛에 의해 점유되는 경우; 예를 들면 각각의 2 DNA 분자내 위치가 아데닌에 의해 점유되면, 이들은 그 위치에서 상동성이거나 동일성이다. 2 서열 사이 상동성은 매칭 또는 상동성 위치의 수의 직접 함수이고; 예를 들면, 만일 2 서열내 위치의 절반 (예를 들면, 길이로 폴리머 10 서브유닛에서 5 위치)가 상동성이면, 2 서열은 50% 상동성이고; 만일 위치의 90% (예를 들면, 10 중 9)가 매칭되거나 상동성이면, 2 서열은 90% 상동성이다.
비-인간 (예를 들면, 쥣과) 항체의 “인간화된” 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예컨대 항체의 Fv, Fab, Fab’, F(ab’)2 또는 다른 항원-결합 하위서열)이다. 대개, 인간화된 항체 및 그의 항체 단편은 수령체의 상보성-결정 영역 (CDR)으로부터 잔기가 요망된 특이성, 친화도, 및 수용력을 갖는 비-인간 종 (공여체 항체) 예컨대 마우스, 랫트 또는 토끼의 CDR로부터 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린 (수령체 항체 또는 항체 단편)이다. 일부 경우에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 대응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체/항체 단편은 수령체 항체에서도 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 찾지 못하는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 추가로 항체 또는 항체 단편 성능을 개량 및 최적화할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체 또는 그의 항체 단편은 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 여기에서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것에 대응하거나 모든 또는 상당한 부분의 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체 또는 항체 단편은 또한 적어도 일 부분의 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 수 있다. 추가 세부사항에 대하여, 참고 Jones 등, Nature, 321: 522-525, 1986; Reichmann 등, Nature, 332: 323-329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct.Biol., 2: 593-596, 1992.
“인간” 또는 “완전 인간”은, 전체의 분자가 인간 기원이거나 항체 또는 면역글로불린의 인간 형태와 동일한 아미노산 서열로 구성되는, 면역글로불린, 예컨대 항체 또는 항체 단편을 지칭한다.
용어 “단리된”은 천연 상태로부터 변경되거나 제거되는 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에서 천연적으로 존재하는 핵산 또는 펩타이드는 “단리되”지 않지만, 그의 천연 상태의 공존 물질의 형태로부터 부분적으로 및 완전히 분리된 동일한 핵산 또는 펩타이드는 “단리된”다. 단리된 핵산 또는 단백질은 실질적으로 정제된 형태로 존재할 수 있거나, 비-원상태 환경 예컨대, 예를 들어, 숙주 세포에서 존재할 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 통상적으로 발생하는 핵산 염기에 대하여 하기 약어가 사용된다. “A”는 아데노신을 지칭하고, “C”는 시토신을 지칭하고, “G”는 구아노신을 지칭하고, “T”는 티미딘을 지칭하고, “U”는 우리딘을 지칭한다.
용어 “작동가능하게 연결된” 또는 “전사 대조군”은 조절 서열과 후자의 발현을 초래하는 이종성 핵산 서열 사이 기능성 연결을 지칭한다. 예를 들어, 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능성 관계로 배치되는 경우 제1 핵산 서열은 제2 핵산 서열과 작동가능하게 연결된다. 예를 들면, 만일 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 주면 프로모터는 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 작동가능하게 연결된 DNA 서열은 서로 인접할 수 있고, 예를 들면, 2 단백질 코딩 영역을 결합하는데 필요한 경우, 동일한 해독틀에 있다.
면역원성 조성물의 용어 “비경구” 투여는, 예를 들면, 피하 (s.c.), 정맥내 (i.v.), 근육내 (i.m.), 및 흉골내 주사, 종양내, 또는 주입 기술을 포함한다.
용어 “핵산” 또는 “폴리뉴클레오타이드”는 단일- 또는 이중-가닥 형태로 데옥시리보핵산 (DNA) 또는 리보핵산 (RNA) 및 그의 폴리머를 지칭한다. 구체적으로 제한되지 않는 한, 용어는 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 천연 발생 뉴클레오타이드와 유사한 방식으로 대사작용되는 천연 뉴클레오타이드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 특정한 핵산 서열은 또한 전적으로 보존적으로 변형된 그의 변이체 (예를 들면, 퇴화 코돈 치환), 대립유전자, 오쏘로그, SNPs, 및 상보성 서열 뿐만 아니라 명백하게 표시된 서열을 포함한다. 구체적으로, 퇴화 코돈 치환은 하나 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합된-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다 (Batzer 등, Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991); Ohtsuka 등, J. Biol. Chem.260: 2605-2608 (1985); 및 Rossolini 등, Mol. Cell. Probes 8: 91-98 (1994)).
용어 “펩타이드”, “폴리펩타이드”, 및 “단백질”은 상호교환적으로 사용되고, 펩타이드 결합에 의해 공유결합된 아미노산 잔기가 포함된 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩타이드는 적어도 2개의 아미노산을 함유해야 하고, 단백질의 또는 펩타이드의 서열을 포함할 수 있는 아미노산의 최대 수에 제한을 두지 않는다. 폴리펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 서로 연결된 2 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어는, 펩타이드, 올리고펩타이드 및 올리고머로서, 예를 들어, 당해 기술에서 또한 통상적으로 지칭되는, 단쇄, 및 많은 유형이 있는, 단백질로서 당해 기술에서 일반적으로 지칭되는, 장쇄 모두를 지칭한다. “폴리펩타이드”는, 그 중에서도, 예를 들어, 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동성 폴리펩타이드, 올리고펩타이드, 호모다이머, 헤테로다이머, 폴리펩타이드의 변이체, 변형된 폴리펩타이드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩타이드는 천연 펩타이드, 재조합 펩타이드, 또는 이들의 조합을 포함한다.
용어 “프로모터”는 세포의 전사 기계, 또는 도입된 합성 기계에 의해 기술적으로 인식된, 또는 폴리뉴클레오타이드 서열의 특이적 전사를 개시하도록 요구된 DNA 서열을 지칭한다.
용어 “프로모터/조절 서열”은 프로모터/조절 서열에 작동가능하게 연결된 유전자 생성물의 발현에 요구되는 핵산 서열을 지칭한다. 일부 경우에서, 상기 서열은 코어 프로모터 서열일 수 있고 다른 경우에서, 상기 서열은 또한 유전자 생성물의 발현에 요구되는 다른 조절 요소 및 인핸서 서열을 포함할 수 있다. 프로모터/조절 서열은, 예를 들어, 조직 특이적 방식으로 유전자 생성물을 발현하는 것일 수 있다.
용어 “구성적” 프로모터는, 유전자 생성물을 인코딩하거나 지정하는 폴리뉴클레오타이드와 작동가능하게 연결된 경우, 세포의 대부분 또는 모든 생리적 조건하에 세포에서 유전자 생성물이 생산되도록 하는 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
용어 “유도성” 프로모터는, 유전자 생성물을 인코딩하거나 지정하는 폴리뉴클레오타이드와 작동가능하게 연결된 경우, 프로모터에 대응하는 유발제가 세포에서 존재하는 경우에만 실질적으로 세포에서 유전자 생성물이 생산되도록 하는 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
용어 “조직-특이적” 프로모터는, 유전자를 인코딩하거나 지정되는 폴리뉴클레오타이드와 작동가능하게 연결된 경우, 세포가 프로모터에 대응하는 조직 유형의 세포인 경우에만 실질적으로 세포에서 유전자 생성물이 생산되도록 하는 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다.
용어 “링커” 및 “가요성 폴리펩타이드 링커”는 scFv의 문맥에서 사용된 바와 같이 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 함께 연결하기 위해 단독으로 또는 조합으로 사용된 아미노산 예컨대 글리신 및/또는 세린 잔기로 구성되는 펩타이드 링커를 지칭한다. 하나의 구현예에서, 가요성 폴리펩타이드 링커는 Gly/Ser 링커이고 아미노산 서열 (Gly-Gly-Gly-Ser)n을 포함하고, 여기에서 n은 1 이상의 양의 정수이다. 예를 들어, n=1, n=2, n=3, n=4, n=5, n=6, n=7, n=8, n=9 및 n=10. 하나의 구현예에서, 가요성 폴리펩타이드 링커는, 비제한적으로, (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)3을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 링커는 (Gly2Ser), (GlySer) 또는 (Gly3Ser)의 다중 반복부위를 포함한다. (본원에서 참고로 편입된) WO2012/138475에 기재된 링커는 본 발명의 범위 내에 또한 포함된다. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
본원에서 사용된 바와 같이, 5’ 캡(cap) (또한 일명 RNA 캡, RNA 7-메틸구아노신 캡 또는 RNA m7G 캡)은 전사의 시작 직후 진핵 메신저 RNA의 ‘선두’ 또는 5’ 말단에 부가되어 온 변형된 구아닌 뉴클레오타이드이다. 5’ 캡은 제1 전사된 뉴클레오타이드에 연결되는 말단기로 구성될 수 있다. 그의 존재는 리보솜에 의한 인식 및 RNAses로부터 보호에 임계적이다. 캡 부가는 전사에 커플링되고, 공-전사적으로 발생하여 각각이 다른 것에 영향을 미친다. 전사의 시작 직후, 합성되는 mRNA의 5’ 말단은 RNA 폴리머라제와 관련된 복합체의 캡-합성에 의해 결합된다. 상기 효소 복합체는 mRNA 캡핑에 요구되는 화학 반응을 촉매화한다. 합성은 다단계 생화학적 반응으로서 진행한다. 캡핑 모이어티는 mRNA의 작용성 예컨대 그의 안정성 또는 번역의 효율을 조정하기 위해 변형될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, “시험관내 전사된 RNA”는, 시험관내 합성되어 온, RNA, 바람직하게는 mRNA를 지칭한다. 일반적으로, 시험관내 전사된 RNA는 시험관내 전사 벡터로부터 생성된다. 시험관내 전사 벡터는 시험관내 전사된 RNA를 생성하는데 사용되는 템플레이트를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, “폴리(A)”는 mRNA에 폴리아데닐화에 의해 부착된 일련의 아데노신이다. 일시적 발현을 위한 작제물의 바람직한 구현예에서, 폴리A는 50 내지 5000, 바람직하게는 64 초과, 더 바람직하게는 100 초과, 가장 바람직하게는 300 또는 400 초과이다. 폴리(A) 서열은 mRNA 작용성 예컨대 국재화, 안정성 또는 번역의 효율을 조정하기 위해 화학적으로 또는 효소적으로 변형될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, “폴리아데닐화”는 메신저 RNA 분자에 폴리아데닐릴 모이어티, 또는 그의 변형된 변이체의 공유결합을 지칭한다. 진핵 유기체에서, 대부분의 메신저 RNA (mRNA) 분자는 3’ 말단에서 폴리아데닐화된다. 3’ 폴리(A) 꼬리는 효소, 폴리아데닐레이트 폴리머라제의 작용을 통해 사전-mRNA에 부가된 아데닌 뉴클레오타이드 (종종 몇 백)의 긴 서열이다. 더 높은 진핵생물에서, 폴리(A) 꼬리는 특이적 서열, 폴리아데닐화 신호를 함유하는 전사체상에 부가된다. 폴리(A) 꼬리 및 그에 결합된 단백질은 엑소뉴클레아제에 의해 분해로부터 mRNA 보호를 돕는다. 폴리아데닐화는 전사 종료, 핵으로부터 mRNA의 도출, 및 번역에 또한 중요하다. 폴리아데닐화는 DNA의 RNA로의 전사 직후 핵에서 발생하지만, 추가적으로 또한 세포질에서 나중에 발생한다. 전사가 종료된 이후, mRNA 쇄는 RNA 폴리머라제와 관련된 엔도뉴클레아제 복합체의 작용을 통해 절단된다. 절단 부위는 절단 부위 근처 염기 서열 AAUAAA의 존재를 일반적으로 특징으로 한다. mRNA가 절단된 이후, 아데노신 잔기는 절단 부위에서 유리 3’ 말단에 부가된다.
본원에서 사용된 바와 같이, “일시적”은 시간, 일 또는 주의 일정 기간 동안 비-통합된 이식유전자의 발현을 지칭하고, 여기에서 발현의 기간은 숙주 세포에서 안정적인 플라스미드 레플리콘 내에 함유되면 또는 게놈 속에 통합되면 유전자의 발현에 대한 기간 미만이다.
용어 “신호 형질도입 경로”는 세포의 한 부분에서 세포의 또 다른 부분까지 신호의 전송에서 역할을 하는 다양한 신호 형질도입 분자 사이 생화학적 관계를 지칭한다. 어구 “세포 표면 수용체”는 신호를 수신 그리고 세포의 막을 통해 신호를 전송할 수 있는 분자 및 분자의 복합체를 포함한다.
용어 “대상체”는 면역 반응이 유발될 수 있는 살아있는 유기체 (예를 들면, 포유동물, 인간)을 포함하도록 의도된다.
용어, “실질적으로 정제된” 세포는 본질적으로 다른 세포 유형이 없는 세포를 지칭한다. 실질적으로 정제된 세포는 또한 그의 천연 발생 상태에서 정상적으로 관련되는 다른 세포 유형으로부터 분리되어 온 세포를 지칭한다일부 경우에서, 실질적으로 정제된 세포의 집단은 세포의 균질한 집단을 지칭한다. 다른 경우에서, 상기 용어는 그의 천연 상태에서 천연적으로 관련되는 세포로부터 분리되어 온 세포를 단순히 지칭한다. 일부 측면에서, 세포는 시험관내 배양된다. 다른 측면에서, 세포는 시험관내 배양되지 않는다.
용어 “치료적”은 본원에서 사용된 바와 같이 치료를 의미한다. 치료적 효과는 질환 상태의 감소, 억제, 차도, 또는 박멸에 의해 수득된다.
용어 “예방”은 본원에서 사용된 바와 같이 질환 또는 질환 상태의 예방 또는 보호성 치료를 의미한다.
본 발명의 문맥에서, “종양 항원” 또는 “과증식성 장애 항원” 또는 “과증식성 장애와 관련된 항원”은 특이적 과증식성 장애에 흔한 항원을 지칭한다. 특정 측면에서, 본 발명의 과증식성 장애 항원은 비제한적으로 1차 또는 전이성 흑색종, 흉선종, 림프종, 육종, 폐 암, 간 암, NHL, 백혈병, 자궁 암, 자궁경부 암, 방광 암, 신장 암 및 선암종 예컨대 유방 암, 전립선 암, 난소 암, 췌장 암, 기타 등등을 포함하는 암으로부터 유래된다.
용어 “형질감염된” 또는 “형질변환된” 또는 “형질도입된”은 외인성 핵산이 숙주 세포 속으로 전달 또는 도입되는 과정을 지칭한다. “형질감염된” 또는 “형질변환된” 또는 “형질도입된” 세포는 외인성 핵산으로 형질감염된, 형질변환된 또는 형질도입된 것이다. 세포는 1차 대상체 세포 및 그의 자손을 포함한다.
용어 “특이적으로 결합하다”는, 하기를 인식 및 결합하는, 항체, 항체 단편 또는 특이적 리간드를 지칭한다: 동족 결합 파트너 (예를 들면, CD19) (샘플에서 존재, 하지만 필연적으로 및 실질적으로 샘플에서 다른 분자를 인식 또는 결합하지 않는다).
범위: 본 개시내용 내내, 본 발명의 다양한 측면은 범위 형식으로 나타낼 수 있다. 범위 형식으로 설명이 단지 편의상이고 간결하기 위한 것임이 이해되어야 하고 본 발명의 범위에서 불변의 제한으로서 해석되지 않아야 한다. 따라서, 범위의 설명은 모든 가능한 하위범위 뿐만 아니라 그 범위 이내 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 고려되어야 한다. 예를 들어, 범위 예컨대 1 내지 6의 설명은 하위범위 예컨대 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등, 뿐만 아니라 그 범위 이내 개별적인 숫자, 예를 들어, 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3, 및 6을 구체적으로 개시한 것으로 고려되어야 한다. 또 다른 예로서, 범위 예컨대 95-99% 동일성은 95%, 96%, 97%, 98% 및 99% 동일성을 갖는 것을 포함하고, 하위범위 예컨대 96-99%, 96-98%, 96-97%, 97-99%, 97-98% 및 98-99% 동일성을 포함한다. 이는 범위의 폭과 무관하게 적용한다.
설명
T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질을 이용하는, 질환 예컨대 암의 치료를 위한 용도의 방법 및 물질의 조성물이 본원에서 제공된다. 본원에서 사용된 바와 같이, “T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질” 또는 “TFP”는 일반적으로 i) 표적 세포에서 표면 항원에 결합할 수 있고 ii) 전형적으로 T-세포의 표면 내에 또는 표면에서 공-위치된 경우, 온전한 TCR 복합체의 다른 폴리펩타이드 성분과 상호작용할 수 있는 TCR을 포함한 다양한 폴리펩타이드로부터 유래된 재조합 폴리펩타이드를 포함한다. 본원에서 제공된 바와 같이, TFP는 키메라 항원 수용체와 비교된 경우 실질적인 이점을 제공한다. 용어 “키메라 항원 수용체” 또는 대안적으로 “CAR”은 scFv의 형태로 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 아래에 정의된 바와 같이 자극 분자로부터 유래된 기능성 신호전달 도메인을 포함한 세포질 신호전달 도메인 (또한 본원에서 “세포내 신호전달 도메인”으로서 지칭됨)을 포함한 재조합 폴리펩타이드를 지칭한다. 일반적으로, CAR의 중심 세포내 신호전달 도메인은 TCR 복합체와 관련되어 정상적으로 찾아지는 CD3 제타 쇄로부터 유래된다. CD3 제타 신호전달 도메인은 하기로부터 유래된 하나 이상의 기능성 신호전달 도메인과 융합될 수 있다: 하나 이상의 공-자극 분자 예컨대 4-1BB (즉, CD137), CD27 및/또는 CD28.
T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)
본 발명은 TFP를 인코딩하는 재조합 DNA 작제물을 포함하고, 여기에서 TFP는 구체적으로 CD19, 예를 들면, 인간 CD19에 결합하는 항체 단편을 포함하고, 여기에서 항체 단편의 서열은 TCR 서브유닛 또는 그의 일부를 인코딩하는 핵산 서열로서 동일한 해독틀과 인접하고 동일한 해독틀에 있다. 본 발명은 TFP를 인코딩하는 재조합 DNA 작제물을 포함하고, 여기에서 TFP는 구체적으로 BCMA, 예를 들면, 인간 BCMA에 결합하는 항체 단편을 포함하고, 여기에서 항체 단편의 서열은 TCR 서브유닛 또는 그의 일부를 인코딩하는 핵산 서열로서 동일한 해독틀과 인접하고 동일한 해독틀에 있다. 본원에서 제공된 TFP는 기능성 TCR 복합체를 형성하기 위해 하나 이상의 내인성 (또는 대안적으로, 하나 이상의 외인성, 또는 내인성 및 외인성의 조합) TCR 서브유닛과 관련할 수 있다.
하나의 측면에서, 본 발명의 TFP는 달리 항원 결합 도메인으로서 지칭된 표적-특이적 결합 요소를 포함한다. 모이어티의 선택은 표적 세포의 표면을 명시하는 표적 항원의 유형 및 수에 의존한다. 예를 들어, 항원 결합 도메인은 특정한 질환 상태와 관련된 표적 세포에서 세포 표면 마커로서 작용하는 표적 항원을 인식하기 위해 선택될 수 있다. 따라서 본 발명의 TFP에서 항원 결합 도메인에 대한 표적 항원으로서 작용할 수 있는 세포 표면 마커의 예는 바이러스, 박테리아 및 기생충 감염; 자가면역 질환; 및 암성 질환 (예를 들면, 악성 질환)과 관련된 것을 포함한다.
하나의 측면에서, TFP-매개된 T-세포 반응은 구체적으로 요망된 항원에 결합하는 TFP에 항원-결합 도메인의 조작의 방식으로 관심 항원에 유도될 수 있다.
하나의 측면에서, 항원 결합 도메인을 포함한 TFP의 부분은 CD19를 표적하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인은 인간 CD19를 표적한다. 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인을 포함한 TFP의 부분은 BCMA를 표적하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인은 인간 BCMA를 표적한다.
항원 결합 도메인은, 비제한적으로 단일-도메인 항체 예컨대 낙타과 유래된 나노바디의 중쇄 가변 도메인 (VH), 경쇄 가변 도메인 (VL) 및 가변 도메인 (VHH), 및 항원 결합 도메인, 예컨대 재조합 파이브로넥틴 도메인, 안티칼린, DARPIN 기타 등등으로서 기능하기 위해 당해 기술에서 공지된 대안적인 스캐폴드를 포함하는, 비제한적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 및 그의 기능성 단편을 포함하는 항원에 결합하는 임의의 도메인일 수 있다. 마찬가지로 표적 항원을 구체적으로 인식 및 결합하는 천연 또는 합성 리간드는 TFP용 항원 결합 도메인으로서 사용될 수 있다. 일부 경우에서, TFP가 궁극적으로 사용될 동일한 종으로부터 유래되는 것이 항원 결합 도메인에 유익하다. 예를 들어, 인간에서 사용을 위하여, 항체 또는 항체 단편의 항원 결합 도메인에 대하여 인간 또는 인간화된 잔기를 포함하는 것이 TFP의 항원 결합 도메인에 유익할 수 있다.
따라서, 하나의 측면에서, 항원-결합 도메인은 인간화된 또는 인간 항체 또는 항체 단편, 또는 쥣과 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 본원에서 기재된 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인의 하나 이상의 (예를 들면, 모두 3) 경쇄 상보성 결정 영역 1 (LC CDR1), 경쇄 상보성 결정 영역 2 (LC CDR2), 및 경쇄 상보성 결정 영역 3 (LC CDR3), 및/또는 본원에서 기재된 인간화된 또는 인간 항-CD19 결합 도메인의 하나 이상의 (예를 들면, 모두 3) 중쇄 상보성 결정 영역 1 (HC CDR1), 중쇄 상보성 결정 영역 2 (HC CDR2), 및 중쇄 상보성 결정 영역 3 (HC CDR3), 예를 들면, 하나 이상의, 예를 들면, 모두 3, LC CDRs 및 하나 이상의, 예를 들면, 모두 3, HC CDRs를 포함하는 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 항-CD19 결합 도메인은 본원에서 기재된 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인의 하나 이상의 (예를 들면, 모두 3) 중쇄 상보성 결정 영역 1 (HC CDR1), 중쇄 상보성 결정 영역 2 (HC CDR2), 및 중쇄 상보성 결정 영역 3 (HC CDR3)을 포함하고, 예를 들면, 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 각각 본원에서 기재된 HC CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3을 포함하는, 2 가변 중쇄 영역을 갖는다. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 본원에서 기재된 인간화된 또는 인간 경쇄 가변 영역 및/또는 본원에서 기재된 인간화된 또는 인간 중쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 본원에서 기재된 인간화된 중쇄 가변 영역, 예를 들면, 본원에서 기재된 적어도 2개의 인간화된 또는 인간 중쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 본원에서 제공된 아미노산 서열의 경쇄 및 중쇄를 포함한 scFv이다. 한 구현예에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인 (예를 들면, scFv)는 하기를 포함한다: 본원에서 제공된 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 (예를 들면, 치환) 그러나 30, 20 또는 10 이하 변형 (예를 들면, 치환)을 갖는 아미노산 서열, 및 본원에서 제공된 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 가진 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 본원에서 제공된 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 적어도 1, 2 또는 3개의 변형 (예를 들면, 치환) 그러나 30, 20 또는 10 이하 변형 (예를 들면, 치환)을 갖는 아미노산 서열, 및 본원에서 제공된 아미노산 서열과 95-99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 scFv이고, 본원에서 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역은 링커, 예를 들면, 본원에서 기재된 링커를 통해 본원에서 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역에 부착된다. 하나의 구현예에서, 인간화된 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 하기를 포함한다: (Gly4-Ser)n 링커, 여기에서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6, 바람직하게는 3 또는 4이다. scFv의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역은, 예를 들면, 임의의 하기 배향일 수 있다: 경쇄 가변 영역-링커-중쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역-링커-경쇄 가변 영역. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
일부 측면에서, 비-인간 항체는 인간화되고, 여기에서 항체의 특이적 서열 또는 영역은 인간 또는 그의 단편에서 천연적으로 생산된 항체와 유사성을 증가시키도록 변형된다. 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인은 인간화된다.
인간화된 항체는, 하기를 포함하는, 당해 기술에서 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다: 비제한적으로, CDR-그라프팅 (참고, 예를 들면, 유럽 특허 번호EP 239,400; 국제 공개 번호 WO 91/09967; 및 미국 특허 번호 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089, 이들 각각은 본원에서 그 전문이 참고로 편입됨), 베니어링(veneering) 또는 재표면화 (참고, 예를 들면, 유럽 특허 번호EP 592,106 및 EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5): 489-498; Studnicka 등, 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814; 및 Roguska 등, 1994, PNAS, 91: 969-973, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에서 편입됨), 쇄 셔플링 (참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,565,332, 그 전문이 참고로 본원에서 편입됨), 및 하기에 개시된 기술: 예를 들면, 미국특허 출원 공개 번호 US2005/0042664, 미국특허 출원 공개 번호 US2005/0048617, 미국 특허 번호 6,407,213, 미국 특허 번호 5,766,886, 국제 공개 번호 WO 9317105, Tan 등, J. Immunol., 169: 1119-25 (2002), Caldas 등, Protein Eng., 13(5): 353-60 (2000), Morea 등, Methods, 20(3): 267-79 (2000), Baca 등, J. Biol. Chem., 272(16): 10678-84 (1997), Roguska 등, Protein Eng., 9(10): 895-904 (1996), Couto 등, Cancer Res., 55 (23 Supp): 5973s-5977s (1995), Couto 등, Cancer Res., 55(8): 1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene, 150(2): 409-10 (1994), 및 Pedersen 등, J. Mol. Biol., 235(3): 959-73 (1994) (이들 각각은 그 전문이 참고로 본원에서 편입됨). 종종, 프레임워크 영역에서 프레임워크 잔기는 항원 결합을 변경하기 위해, 예를 들어 개선하기 위해 CDR 공여체 항체로부터 대응하는 잔기로 치환될 것이다. 이들 프레임워크 치환은, 예를 들면, 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위해 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정한 위치에서 흔치않은 프레임워크 잔기의 서열 비교에 의해 당해 기술에서 공지된 방법에 의해 확인된다 (참고, 예를 들면, Queen 등, 미국 특허 번호 5,585,089; 및 Riechmann 등, 1988, Nature, 332: 323, 그 전체가 참고로 본원에서 편입됨).
인간화된 항체 또는 항체 단편은 비인간인 공급원으로부터 남아있는 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비인간 아미노산 잔기는, 전형적으로“도입” 가변 도메인으로부터 입수되는, 종종 “도입” 잔기로 지칭된다. 본원에서 제공된 바와 같이, 인간화된 항체 또는 항체 단편은 비인간 면역글로불린 분자 및 프레임워크 영역으로부터 하나 이상의 CDRs를 포함하고 여기에서 프레임워크를 포함하는 아미노산 잔기는 인간 생식계열로부터 완전히 또는 주로 유래된다. 항체 또는 항체 단편의 인간화를 위한 다중 기술은 당해 기술에서 공지되고 하기를 따라 본질적으로 수행될 수 있다: Winter 및 공-작업자의 방법 (Jones 등, Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann 등, Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen 등, Science, 239: 1534-1536 (1988)) (인간 항체의 대응하는 서열로 설치류 CDRs 또는 CDR 서열의 치환에 의해, 즉, CDR-그라프팅 (EP 239,400; PCT 공개 번호 WO 91/09967; 및 미국 특허 번호 4,816,567; 6,331,415; 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 6,548,640, 그의 내용은 그 전문이 본원에서 참고로 편입됨). 상기 인간화된 항체 및 항체 단편에서, 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적게 비인간 종으로부터 대응하는 서열에 의해 치환되어 왔다. 인간화된 항체는 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 프레임워크 (FR) 잔기가 설치류 항체내 유사한 부위로부터 잔기에 의해 치환되는 종종 인간 항체이다. 항체 및 항체 단편의 인간화는 또한 하기에 의해 달성될 수 있다: 베니어링 또는 재표면화 (EP 592,106; EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5): 489-498; Studnicka 등, Protein Engineering, 7(6): 805-814 (1994); 및 Roguska 등, PNAS, 91: 969-973 (1994)) 및 쇄 셔플링 (미국 특허 번호 5,565,332) (그의 내용은 그 전문이 본원에서 참고로 편입됨).
인간화된 항체 제조에서 사용되는, 경 및 중 모두인, 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키는 것이다. 소위 “최적화” 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별된다. 설치류 것과 가장 근접한 인간 서열은 그 다음 인간화된 항체를 위한 인간 프레임워크 (FR)로서 허용된다 (Sims 등, J. Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia 등, J. Mol. Biol., 196: 901 (1987), 그의 내용은 본원에서 참고로 본원에서 그 전문이 편입됨). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크를 이용한다. 동일한 프레임워크는 몇 개의 상이한 인간화된 항체에 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Nicholson 등 Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997); Carter 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992); Presta 등, J. Immunol., 151: 2623 (1993), 그의 내용은 본원에서 참고로 본원에서 그 전문이 편입됨). 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역, 예를 들면, 모두 4개의 프레임워크 영역은 VH4-4-59 생식계열 서열로부터 유래된다. 하나의 구현예에서, 프레임워크 영역은 대응하는 쥣과 서열에서, 예를 들면, 아미노산으로부터 1, 2, 3, 4 또는 5 변형, 예를 들면, 치환을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역, 예를 들면, 모두 4개의 프레임워크 영역은 VK3-1.25 생식계열 서열로부터 유래된다. 하나의 구현예에서, 프레임워크 영역은 대응하는 쥣과 서열에서, 예를 들면, 아미노산으로부터 1, 2, 3, 4 또는 5 변형, 예를 들면, 치환을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항체 단편을 포함하는 본 발명의 TFP 조성물의 부분은 표적 항원에 대한 고친화도의 체류 및 다른 양호한 생물학적 특성으로 인간화된다. 본 발명의 하나의 측면에 따라, 인간화된 항체 및 항체 단편은 친계 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 이용한 다양한 개념의 인간화된 생성물 및 친계 서열의 분석 과정에 의해 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고 당해 분야의 숙련가에 익숙하다. 선택된 후보자 면역글로불린 서열의 정황적 3차원 형태적 구조를 예시하고 표시하는 컴퓨터 프로그램은 이용가능하다. 이들 표시의 점검은 후보자 면역글로불린 서열의 기능화에서 잔기의 가능한 역할의 분석, 예를 들면, 표적 항원을 결합하기 위한 후보자 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이런 식으로, FR 잔기는 수령체 및 도입 서열로부터 선택 및 조합될 수 있어서 요망된 항체 또는 항체 단편 특징, 예컨대 표적 항원에 대한 증가된 친화도가 달성된다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합의 영향에 직접적으로 및 가장 실질적으로 관여된다.
인간화된 항체 또는 항체 단편은 최초 항체와 유사한 항원 특이성, 예를 들면, 본 발명에서, 인간 CD19를 결합하는 능력을 유지할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체 또는 항체 단편은 개선된 친화도 및/또는 인간 CD19 또는 인간 BCMA에 결합의 특이성을 가질 수 있다.
하나의 측면에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 항체 또는 항체 단편의 특정한 기능성 특질 또는 특성을 특징으로 한다. 예를 들어, 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인을 포함하는 본 발명의 TFP 조성물의 부분은 인간 CD19 pr 인간 BCMA를 특이적으로 결합한다. 하나의 측면에서, 항원 결합 도메인은 하기에 기재된 FMC63 scFv로서 인간 CD19에 동일한 또는 유사한 결합 특이성을 갖는다: Nicholson 등 Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997). 하나의 측면에서, 본 발명은 항체 또는 항체 단편을 포함하는 항원 결합 도메인에 관한 것이고, 여기에서 항체 결합 도메인은 CD19 또는 BCMA 단백질 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하고, 여기에서 항체 또는 항체 단편은 본원에서 제공된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 가변 중쇄를 포함한다. 특정 측면에서, scFv는 리더 서열로서 동일한 해독틀과 인접하고 동일한 해독틀에 있다.
하나의 측면에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인은 단편, 예를 들면, 단일 쇄 가변 단편 (scFv)이다. 하나의 측면에서, 항-CD19 결합 도메인은 Fv, Fab, (Fab’)2, 또는 2-기능성 (예를 들면 2-특이적) 혼성 항체이다 (예를 들면, Lanzavecchia 등, Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987)). 하나의 측면에서, 본 발명의 항체 및 그의 단편은 야생형 또는 향상된 친화도로 CD19 단백질을 결합시킨다.
표적 항원에 특이적인 항체 항원 결합 도메인의 수득 방법이 본원에서 또한 제공되고 (예를 들면, CD19, BCMA 또는 융합 모이어티 결합 도메인의 표적에 대하여 본원에서 다른 곳에 기재된 임의의 표적 항원), 상기 방법은 본원에서 기술된 VH 도메인의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실, 치환 또는 삽입의 방식으로 VH 도메인의 아미노산 서열 변이체인 VH 도메인의 제공, 하나 이상의 VL 도메인과 상기 제공된 VH 도메인의 선택적으로 조합, 및 하기에 대하여 특이적인 항체 항원 결합 도메인 및 특이적 결합 구성원을 확인하기 위해 VH 도메인 또는 VH/VL 조합 및 조합들의 시험을 포함한다: 관심의 표적 항원 (예를 들면, CD19 또는 BCMA) (및 선택적으로 하나 이상의 요망된 특성을 가짐).
일부 경우에서, VH 도메인 및 scFvs는 당해 기술에서 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다: (참고, 예를 들어, Bird 등, (1988) Science 242: 423-426 및 Huston 등, (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). scFv 분자는 가요성 폴리펩타이드 링커를 이용하여 VH 및 VL 영역을 함께 연결함으로써 생산될 수 있다. scFv 분자는 최적화된 길이 및/또는 아미노산 조성을 가진 링커 (예를 들면, Ser-Gly 링커) 를 포함한다. 링커 길이는 scFv의 가변 영역이 얼마나 폴딩하고 상호작용하는지에 크게 영향을 미칠 수 있다. 사실상, 만일 짧은 폴리펩타이드 링커가 이용되면 (예를 들면, 5-10 아미노산) 쇄내 폴딩은 예방된다. 쇄간 폴딩은 2 가변 영역을 함께 기능성 에피토프 결합 부위를 형성하도록 또한 요구된다. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3. 링커 배향 및 크기의 예로 참고, 예를 들면, Hollinger 등1993 Proc Natl Acad. Sci. 미국 90: 6444-6448, 미국특허 출원 공개 번호 2005/0100543, 2005/0175606, 2007/0014794, 및 PCT 공개 번호 WO2006/020258 및 WO2007/024715 (본원에서 참고로 편입됨).
scFv는 그의 VL과 VH 영역 사이 약 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 15 초과 잔기의 링커를 포함할 수 있다. 링커 서열은 임의의 천연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 아미노산 글리신 및 세린을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 링커 서열은 글리신 및 세린 반복부위의 세트 예컨대 하기를 포함한다: (Gly4Ser)n, 여기에서 n은 1 이상의 양의 정수이다. 하나의 구현예에서, 링커는 (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)3일 수 있다. 링커 길이에서 변동은 유지될 수 있고 활성을 향상시켜, 활성 연구에서 우월한 효능을 일으킬 수 있다. 일부 경우에서, 링커 서열은 긴 링커 (LL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 긴 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=2 내지 4. 일부 경우에서, 링커 서열은 짧은 링커 (SL) 서열을 포함한다. 일부 경우에서, 짧은 링커 서열은 하기를 포함한다: (G4S)n, 여기에서 n=1 내지 3.
안정성 및 돌연변이
항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv 분자 (예를 들면, 가용성 scFv)의 안정성은 종래 대조군 scFv 분자 또는 전장 항체의 생체물리학적 특성 (예를 들면, 열 안정성)에 관련하여 평가될 수 있다. 하나의 구현예에서, 인간화된 또는 인간 scFv는 기재된 검정에서 모 scFv보다 약 0.1, 약 0.25, 약 0.5, 약 0.75, 약 1, 약 1.25, 약 1.5, 약 1.75, 약 2, 약 2.5, 약 3, 약 3.5, 약 4, 약 4.5, 약 5, 약 5.5, 약 6, 약 6.5, 약 7, 약 7.5, 약 8, 약 8.5, 약 9, 약 9.5, 약 10 섭씨 온도, 약 11 섭씨 온도, 약 12 섭씨 온도, 약 13 섭씨 온도, 약 14 섭씨 온도, 또는 약 15 섭씨 온도 초과인 열 안정성을 갖는다.
항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv의 개선된 열 안정성은 그 뒤에 전체 CD19-TFP 작제물에 부여되어, 항-CD19 또는 항-BCMA TFP 작제물의 개선된 치료 특성을 초래한다. 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv의 열 안정성은 종래 항체와 비교된 경우 적어도 약 2 ℃ 또는 3 ℃ 만큼 개선될 수 있다. 하나의 구현예에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv는 종래 항체와 비교된 경우 1 ℃ 개선된 열 안정성을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인, 예를 들면, scFv는 종래 항체와 비교된 경우 2 ℃ 개선된 열 안정성을 갖는다. 또 다른 구현예에서, scFv는 종래 항체와 비교된 경우 4 ℃, 5 ℃, 6 ℃, 7 ℃, 8 ℃, 9 ℃, 10 ℃, 11 ℃, 12 ℃, 13 ℃, 14 ℃, 또는 15 ℃ 개선된 열 안정성을 갖는다. 예를 들어, 본원에서 개시된 scFv 분자와 scFv VH 및 VL이 유래된 항체의 scFv 분자 또는 Fab 단편 사이 비교될 수 있다. 열 안정성은 당해 기술에서 공지된 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, TM는 측정될 수 있다. TM의 측정 방법 및 단백질 안정성의 다른 결정 방법은 아래에 더 상세히 기재된다.
(가용성 scFv의 인간화 또는 직접적인 돌연변이유발을 통해 일어나는) scFv내 돌연변이는 scFv의 안정성을 변경하고 scFv 및 항-CD19 또는 항-BCMA TFP 작제물의 전체 안정성을 개선한다. 인간화된 scFv의 안정성은 측정 예컨대 TM, 온도 변성 및 온도 응집을 이용하여 쥣과 scFv에 대해 비교된다. 하나의 구현예에서, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv는 돌연변이된 scFv가 항-CD19 TFP 작제물에 개선된 안정성을 부여하도록 인간화 공정에서 발생하는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항-CD19 결합 도메인, 예를 들면, scFv는 돌연변이된 scFv가 CD19-TFP 또는 BCMA-TFP 작제물에 개선된 안정성을 부여하도록 인간화 공정에서 발생하는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 돌연변이를 포함한다.
하나의 측면에서, TFP의 항원 결합 도메인은 본원에서 기재된 항원 결합 도메인 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하고, 항원 결합 도메인은 본원에서 기재된 항-CD19 또는 항-BCMA 항체 단편의 요망된 기능성 특성을 유지한다. 하나의 특정한 측면에서, 본 발명의 TFP 조성물은 항체 단편을 포함한다. 한 추가 측면에서, 그 항체 단편은 scFv를 포함한다.
다양한 측면에서, TFP의 항원 결합 도메인은 하기 내에서 하나 이상의 아미노산 변형에 의해 조작된다: 한쪽 또는 양쪽 가변 영역 이내 (예를 들면, VH 및/또는 VL), 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 이내 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 이내. 하나의 특정한 측면에서, 본 발명의 TFP 조성물은 항체 단편을 포함한다. 한 추가 측면에서, 그 항체 단편은 scFv를 포함한다.
본 발명의 항체 또는 항체 단편이 추가로 변형될 수 있어서 이들이 아미노산 서열에서 (예를 들면, 야생형으로부터) 다양하지만, 요망된 활성에서는 아니도록 당해 분야의 숙련가에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, “비-필수적인” 아미노산 잔기에서 아미노산 치환을 초래하는 추가의 뉴클레오타이드 치환은 단백질로 제조될 수 있다. 예를 들어, 분자에서 비필수적인 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열로부터 또 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 일련의 아미노산은 측쇄 계열 구성원의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 일련으로 대체될 수 있고, 예를 들면, 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는, 보존적 치환이 실시될 수 있다.
유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은, 염기성 측쇄 (예를 들면, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 측쇄 (예를 들면, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 무극성 측쇄 (예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들면, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들면, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함하는, 당해 기술에서 한정되어 왔다.
2 이상의 핵산 및 폴리펩타이드 서열의 문맥에서 퍼센트 동일성은 동일한 2 이상의 서열을 지칭한다. 만일 2 서열이 하기의 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 지정된 백분율을 가지면 2 서열은 “실질적으로 동일하다”: (예를 들면, 60% 동일성, 선택적으로 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 및 99% 동일성 지정된 영역에 대해, 또는, 지정되지 않은 경우, 전체 서열에 대해), 비교 윈도우에 대해 최대 관련성으로 비교되고 정렬된 경우, 또는 수동 정렬 및 시력 검사에 의해 또는 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 이용하여 측정된 경우 지정된 영역.선택적으로, 동일성은 길이로 적어도 약 50 뉴클레오타이드 (또는 10 아미노산)인 영역에 대해, 또는 더욱 바람직하게는 길이로 100 내지 500 또는 1000 이상 뉴클레오타이드 (또는 20, 50, 200 이상 아미노산)인 영역에 대해 존재한다.
서열 비교에 대하여, 전형적으로 1 서열은 참조 서열로서 작용하고, 여기에 시험 서열이 비교된다. 서열 비교 알고리즘을 이용하는 경우, 시험 및 참조 서열은 컴퓨터에 입력되고, 하위서열 배위는 지정되고, 필요하면, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터는 지정된다. 디폴트 프로그램 파라미터가 사용될 수 있거나, 대안적인 파라미터가 지정될 수 있다. 서열 비교 알고리즘은 그 다음 프로그램 파라미터에 기반하여 참조 서열에 비하여 시험 서열에 대해 퍼센트 서열 동일성을 계산한다. 비교용 서열의 정렬 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 비교용 서열의 최적의 정렬은, 예를 들면, 하기에 의해 수행될 수 있다: Smith and Waterman의 국부 상동성 알고리즘에 의해, (1970) Adv. Appl. Math. 2: 482c, Needleman and Wunsch의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, (1970) J. Mol. Biol. 48: 443, Pearson and Lipman의 유사성 방법용 조사에 의해, (1988) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85: 2444, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행에 의해 (GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group에서, 575 Science Dr., Madison, Wis.), 또는 수동 정렬 및 시력 검사에 의해 (참고, 예를 들면, Brent 등, (2003) Current Protocols in Molecular Biology). 퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성의 결정에 적합한 알고리즘의 2개의 예는, 하기 기재되는, BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이다: Altschul 등, (1977) Nuc. Acids Res. 25: 3389-3402; 및 Altschul 등, (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 각각.BLAST 분석 수행용 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터를 통해 공공연하게 이용가능하다.
하나의 측면에서, 본 발명은 기능적으로 동등한 분자를 생성하는 개시 항체 또는 단편 (예를 들면, scFv) 아미노산 서열의 변형을 고려한다. 예를 들어, TFP에서 포함된, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, scFv의 VH 또는 VL은 하기를 유지하도록 변형될 수 있다: 적어도 약 70%, 71%, 72%.73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일성 (항-CD19 결합 도메인, 예를 들면, scFv의 개시 VH 또는 VL 프레임워크 영역의). 본 발명은 전체 TFP 작제물의 변형, 예를 들면, 기능적으로 동등한 분자를 생성하기 위한 TFP 작제물의 다양한 도메인의 하나 이상의 아미노산 서열에서 변형을 고려한다. TFP 작제물은 하기를 유지하도록 변형될 수 있다: 적어도 약 70%, 71%.72%.73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일성 (개시 TFP 작제물의).
세포외 도메인
세포외 도메인은 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 단백질로부터, 그러나 특히 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 하나의 측면에서 세포외 도메인은 막관통 도메인과 관련할 수 있다. 본 발명에서 특정 용도의 세포외 도메인은 적어도 예를 들면, T-세포 수용체, 또는 CD3 엡실론, CD3 감마, 또는 CD3 델타의 알파, 베타 또는 제타 쇄, 또는 대안적인 구현예에서, CD28, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 세포외 영역(들)을 포함할 수 있다.
막관통 도메인
일반적으로, TFP 서열은 단일 게놈 서열에 의해 인코딩된 막관통 도메인 및 세포외 도메인을 함유한다. 대안적인 구현예에서, TFP는 TFP의 세포외 도메인에 이종성인 막관통 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다. 막관통 도메인은 막관통 영역에 인접한 하나 이상의 추가의 아미노산, 예를 들면, 하기를 포함할 수 있다: 막관통이 유래된 단백질의 세포외 영역과 관련된 하나 이상의 아미노산 (예를 들면, 세포외 영역의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 최대 15 아미노산) 및/또는 막관통 단백질이 유래되는 단백질의 세포내 영역과 관련된 하나 이상의 추가 아미노산 (예를 들면, 세포내 영역의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 최대 15 아미노산). 하나의 측면에서, 막관통 도메인은 TFP의 다른 도메인 중 하나가 사용되는 것과 관련되는 것이다. 일부 경우에서, 막관통 도메인은 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 상기 도메인의 결합을 피하기 위해, 예를 들면, 수용체 복합체의 다른 구성원과 상호작용을 최소화하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택 또는 변형될 수 있다. 하나의 측면에서, 막관통 도메인은 TFP-T-세포 표면에서 또 다른 TFP와 호모다이머화할 수 있다. 상이한 측면에서 막관통 도메인의 아미노산 서열은 동일한 TFP에서 존재하는 원상태 결합 파트너의 결합 도메인과 상호작용을 최소화하기 위해 변형 또는 치환될 수 있다.
막관통 도메인은 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 하나의 측면에서 막관통 도메인은 TFP가 표적에 결합된 때마다 세포내 도메인(들)에 신호전달할 수 있다. 본 발명에서 특정 용도의 막관통 도메인은 적어도 예를 들면, T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 막관통 영역(들)을 포함할 수 있다.
일부 경우에서, 막관통 도메인은 TFP의 세포외 영역, 예를 들면, TFP의 항원 결합 도메인에 힌지, 예를 들면, 인간 단백질로부터 힌지를 통해 부착될 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 힌지는 인간 면역글로불린 (Ig) 힌지, 예를 들면, IgG4 힌지, 또는 CD8a 힌지일 수 있다.
링커
선택적으로, 길이로 2 내지 10 아미노산인, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커는 막관통 도메인과 TFP의 세포질 영역 사이 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중항은 특히 적합한 링커를 제공한다. 예를 들어, 하나의 측면에서, 링커는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: GGGGSGGGGS (서열 식별 번호: 3). 일부 구현예에서, 링커는 하기의 뉴클레오타이드 서열에 의해 인코딩된다: GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC (서열 식별 번호: 4).
세포질 도메인
TFP의 세포질 도메인은, TFP가 CD3 감마, 델타 또는 엡실론 폴리펩타이드를 함유하면, 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있고; TCR 알파 및 TCR 베타 서브유닛은 일반적으로 신호전달 도메인이 부족하다. 세포내 신호전달 도메인은 일반적으로 TFP가 도입되어 온 면역 세포의 정상 효과기 기능의 하나 이상의 활성화를 책임진다. 용어 “효과기 기능”은 세포의 특화된 기능을 지칭한다. T-세포의 효과기 기능은, 예를 들어, 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다. 따라서 용어 “세포내 신호전달 도메인”은 효과기 기능 신호를 형질도입하고 특화된 기능을 수행하기 위해 세포를 유도하는 단백질의 부분을 지칭한다. 일반적으로 전체 세포내 신호전달 도메인이 이용될 수 있는 반면, 많은 사례에서 전체 쇄를 이용하는 것이 필요하지 않다. 세포내 신호전달 도메인의 절단된 부분이 사용되는 정도로, 상기 절단된 부분은 효과기 기능 신호를 형질도입하는 한 온전한 쇄 대신에 사용될 수 있다. 용어 세포내 신호전달 도메인은 따라서 효과기 기능 신호를 형질도입하는데 충분한 세포내 신호전달 도메인의 임의의 절단된 부분을 포함하는 의미이다.
본 발명의 TFP에서 사용을 위한 세포내 신호전달 도메인의 예는 항원 수용체 참여 이후 신호 형질도입을 개시하기 위해 동시에 작용하는 T-세포 수용체 (TCR) 및 공-수용체의 세포질 서열, 뿐만 아니라 동일한 기능성 능력을 갖는 임의의 재조합 서열 및 이들 서열의 임의의 유도체 또는 변이체를 포함한다.
TCR 단독을 통해 생성된 신호가 원상태 T-세포의 전체 활성화에 불충분하다는 것 및 2차 및/또는 공자극 신호가 요구되는 것이 공지된다. 따라서, 미접촉 T-세포 활성화는 세포질 신호전달 서열의 2개 상이한 부류에 의해 매개된다고 언급될 수 있다: TCR (1차 세포내 신호전달 도메인)을 통해 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 것 및 2차 및 공자극 신호 (2차 세포질 도메인, 예를 들면, 공자극 도메인)을 제공하기 위해 항원-독립 방식으로 작용하는 것.
1차 신호전달 도메인은 자극식으로, 또는 억제식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAMs)로서 공지되는 신호전달 모티프를 함유할 수 있다.
본 발명에서 특정 용도인 1차 세포내 신호전달 도메인을 함유하는 ITAMs의 예는 CD3 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d의 것을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 TFP는 CD3-엡실론의 세포내 신호전달 도메인, 예를 들면, 1차 신호전달 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 1차 신호전달 도메인은 변형된 ITAM 도메인, 예를 들면, 원상태 ITAM 도메인과 비교된 경우 변경된 (예를 들면, 증가된 또는 감소된) 활성을 갖는 돌연변이된 ITAM 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 1차 신호전달 도메인은 변형된 ITAM-함유 1차 세포내 신호전달 도메인, 예를 들면, 최적화된 및/또는 절단된 ITAM-함유 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 한 구현예에서, 1차 신호전달 도메인은 1, 2, 3, 4 이상 ITAM 모티프를 포함한다.
TFP의 세포내 신호전달 도메인은 CD3 제타 신호전달 도메인 홀로 포함할 수 있고 본 발명의 TFP의 문맥에서 유용한 임의의 다른 요망된 세포내 신호전달 도메인(들)과 조합될 수 있다. 예를 들어, TFP의 세포내 신호전달 도메인은 CD3 엡실론 쇄 부분 및 공자극 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 공자극 신호전달 도메인은 공자극 분자의 세포내 도메인을 포함하는 TFP의 부분을 지칭한다. 공자극 분자는 항원에 림프구의 효율적인 반응에 요구되는 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 상기 분자의 예는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD1, ICOS, 림프구 기능-관련된 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 기타 등등을 포함한다. 예를 들어, CD27 상호자극은 팽창, 효과기 기능, 및 시험관내 인간 TFP-T-세포의 생존을 향상시킨다고 실증되어 왔고 생체내 인간 T-세포 지속성 및 항종양 활성을 확대한다 (Song 등 Blood. 2012; 119(3): 696-706).
본 발명의 TFP의 세포질 부분 이내 세포내 신호전달 서열은 랜덤 또는 지정된 순서로 서로에 연결될 수 있다. 선택적으로, 짧은 올리고- 및 폴리펩타이드 링커, 예를 들어, 2 내지 10 아미노산 (예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 아미노산) 길이는 세포내 신호전달 서열 사이 연결을 형성할 수 있다.
하나의 구현예에서, 글리신-세린 이중항은 적합한 링커로서 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 단일 아미노산, 예를 들면, 알라닌, 글리신은 적합한 링커로서 사용될 수 있다.
하나의 측면에서, 본원에서 기재된 TFP-발현 세포는 추가로 제2 TFP, 예를 들면, 상이한 항원 결합 도메인을, 예를 들면, 하기에 포함하는 제2 TFP를 포함할 수 있다: 동일한 표적 (CD19 또는 BCMA) 또는 상이한 표적 (예를 들면, CD123). 하나의 구현예에서, TFP-발현 세포가 2 이상의 상이한 TFP를 포함하는 경우, 상이한 TFP의 항원 결합 도메인은 항원 결합 도메인이 서로 상호작용하지 않는 것일 수 있다. 예를 들어, 제1 및 제2 TFP를 발현하는 세포는 제1 TFP의 항원 결합 도메인을, 예를 들면, 단편, 예를 들면, 제2 TFP의 항원 결합 도메인과 회합을 형성하지 않는 scFv로서 가질 수 있고, 예를 들면, 제2 TFP의 항원 결합 도메인은 VHH이다.
또 다른 측면에서, 본원에서 기재된 TFP-발현 세포는 추가로 또 다른 제제, 예를 들면, TFP-발현 세포의 활성을 향상시키는 제제를 발현시킬 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 제제는 억제 분자를 억제하는 제제일 수 있다. 억제 분자, 예를 들면, PD1은, 일부 구현예에서, 면역 효과기 반응을 탑재하기 위해 TFP-발현 세포의 능력을 감소시킬 수 있다. 억제 분자의 예는 PD1, PD-L1, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및 TGFR 베타를 포함한다. 하나의 구현예에서, 억제 분자를 억제시키는 제제는 제1 폴리펩타이드, 예를 들면, 세포에 양성 신호를 제공하는 제2 폴리펩타이드, 예를 들면, 본원에서 기재된 세포내 신호전달 도메인과 관련된, 억제 분자를 포함한다. 하나의 구현예에서, 제제는 하기를 포함한다: 예를 들면, 억제 분자 예컨대 PD1, LAG3, CTLA4, CD160, BTLA, LAIR1, TIM3, 2B4 및 TIGIT의 제1 폴리펩타이드, 또는 임의의 이들의 단편 (예를 들면, 임의의 이들의 적어도 일 부분의 세포외 도메인), 및 하기인 제2 폴리펩타이드: 본원에서 기재된 세포내 신호전달 도메인 (예를 들면, 하기를 포함하는: 공자극 도메인 (예를 들면, 4-1BB, CD27 또는 CD28, 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같이) 및/또는 1차 신호전달 도메인 (예를 들면, 본원에서 기재된 CD3 제타 신호전달 도메인). 하나의 구현예에서, 제제는 PD1의 제1 폴리펩타이드 또는 그의 단편 (예를 들면, PD1의 적어도 일 부분의 세포외 도메인), 및 본원에서 기재된 세포내 신호전달 도메인 (예를 들면, 본원에서 기재된 CD28 신호전달 도메인 및/또는 본원에서 기재된 CD3 제타 신호전달 도메인)의 제2 폴리펩타이드를 포함한다. PD1은 또한 CD28, CTLA-4, ICOS, 및 BTLA를 포함하는 수용체의 CD28 계열의 억제 구성원이다. PD-1은 활성화된 B 세포, T-세포 및 골수 세포에서 발현된다 (Agata 등1996 Int. Immunol 8: 765-75). PD1, PD-L1 및 PD-L2용 2개 리간드는 PD1에 결합시 T-세포 활성화를 하향조절하는 것으로 나타났다 (Freeman 등 2000 J Exp Med 192: 1027-34; Latchman 등 2001 Nat Immunol 2: 261-8; Carter 등 2002 Eur J Immunol 32: 634-43). PD-L1은 인간 암에서 풍부하다 (Dong 등 2003 J Mol Med 81: 281-7; Blank 등 2005 Cancer Immunol. Immunother 54: 307-314; Konishi 등 2004 Clin Cancer Res 10: 5094). 면역 억제는 PD-L1과 PD1의 국부 상호작용 억제에 의해 역전될 수 있다.
하나의 구현예에서, 제제는 억제 분자의 세포외 도메인 (ECD)을 포함하고, 예를 들면, 프로그래밍된 사망 1 (PD1)은 막관통 도메인 및 선택적으로 세포내 신호전달 도메인 예컨대 41BB 및 CD3 제타 (또한 본원에서 PD1 TFP로서 지칭됨)에 융합될 수 있다. 하나의 구현예에서, PD1 TFP는, 본원에서 기재된 항-CD19 TFP와 조합으로 사용될 때, T-세포의 지속성을 개선시킨다. 하나의 구현예에서, TFP는 PD 1의 세포외 도메인을 포함하는 PD1 TFP이다. 대안적으로, 프로그래밍된 사망-리간드 1 (PD-L1) 또는 프로그래밍된 사망-리간드 2 (PD-L2)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편 예컨대 scFv를 함유하는 TFP가 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기의 집단을 제공한다: TFP-발현 T-세포, 예를 들면, TFP-T-세포. 일부 구현예에서, TFP-발현 T-세포의 집단은 상이한 TFP를 발현하는 세포의 혼합물을 포함한다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, TFP-T-세포의 집단은 본원에서 기재된 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인을 갖는 TFP를 발현하는 제1 세포, 및 상이한 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인, 예를 들면, 제1 세포에 의해 발현된 TFP에서 항-CD19 결합 도메인과 상이한 본원에서 기재된 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인을 갖는 TFP를 발현하는 제2 세포를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, TFP-발현 세포의 집단은, 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같이, 항-CD19 또는 항-BCMA 결합 도메인을 포함하는 TFP를 발현하는 제1 세포, 및 CD19 또는 BCMA 이외의 표적 (예를 들면, 또 다른 종양-관련된 항원)에 항원 결합 도메인을 포함하는 TFP를 발현하는 제2 세포를 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포의 집단을 제공하고 여기에서 집단에서 하나 이상의 세포가 본원에서 기재된 항-CD19 또는 항-BCMA 도메인을 갖는 TFP를 발현하고, 제2 세포가 또 다른 제제, 예를 들면, TFP-발현 세포의 활성을 향상시키는 제제를 발현한다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 제제는 억제 분자를 억제하는 제제일 수 있다. 억제 분자는, 예를 들면, 일부 구현예에서, 면역 효과기 반응을 탑재하기 위해 TFP-발현 세포의 능력을 감소시킬 수 있다. 억제 분자의 예는 PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및 TGFR 베타를 포함한다. 하나의 구현예에서, 억제 분자를 억제시키는 제제는 세포에 양성 신호를 제공하는 제2 폴리펩타이드, 예를 들면, 본원에서 기재된 세포내 신호전달 도메인과 관련된, 제1 폴리펩타이드, 예를 들면, 억제 분자를 포함한다.
TFP를 인코딩하는 시험관내 전사된 RNA의 생산 방법이 본원에서 개시된다. 본 발명은 또한 세포 속에 직접적으로 형질감염될 수 있는 TFP 인코딩 RNA 작제물을 포함한다. 형질감염에서 사용을 위한 mRNA의 생성 방법은, 3’ 및 5’ 미번역된 서열 (“UTR”), 5’ 캡 및/또는 내부 리보솜 유입 부위 (IRES), 발현되는 핵산, 및 전형적으로 50-2000 염기 길이의 폴리A 꼬리를 함유하는 작제물을 생산하기 위해, 특별히 설계된 프라이머를 가진 템플레이트의 시험관내 전사 (IVT), 그 다음 폴리A 부가를 포함할 수 있다. 상기 생산된 RNA는 상이한 종류의 세포를 효율적으로 형질감염시킬 수 있다. 하나의 측면에서, 템플레이트는 TFP용 서열을 포함한다.
하나의 측면에서 항-CD19 또는 항-BCMA TFP는 메신저 RNA (mRNA)에 의해 인코딩된다. 하나의 측면에서 항-CD19 또는 항-BCMA TFP를 인코딩하는 mRNA는 TFP-T-세포의 생산을 위하여 T-세포 속에 도입된다. 하나의 구현예에서, 시험관내 전사된 RNA TFP는 일시적 형질감염의 형태로서 세포에 도입될 수 있다. RNA는 폴리머라제 쇄 반응 (PCR)-생성된 템플레이트를 이용하여 시험관내 전사에 의해 생산된다. 임의의 공급원으로부터 관심 DNA는 적절한 프라이머 및 RNA 폴리머라제를 이용하는 시험관내 mRNA 합성을 위하여 템플레이트 속에 PCR에 의해 직접적으로 전환될 수 있다. DNA의 공급원은, 예를 들어, 게놈 DNA, 플라스미드 DNA, 파아지 DNA, cDNA, 합성 DNA 서열 또는 DNA의 임의의 다른 적절한 공급원일 수 있다. 시험관내 전사를 위하여 요망된 템플레이트는 본 발명의 TFP이다. 하나의 구현예에서, PCR에 사용되는 DNA는 열린 해독틀을 함유한다. DNA는 유기체의 게놈으로부터 천연 발생 DNA 서열 출신일 수 있다. 하나의 구현예에서, 핵산은 일부 또는 모든 5’ 및/또는 3’ 미번역된 영역 (UTRs)을 포함할 수 있다. 핵산은 엑손 및 인트론을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, PCR에 사용되는 DNA는 인간 핵산 서열이다. 또 다른 구현예에서, PCR에 사용되는 DNA는 5’ 및 3’ UTRs를 포함하는 인간 핵산 서열이다. DNA는 대안적으로 천연 발생 유기체에서 정상적으로 발현되지 않는 인공 DNA 서열일 수 있다. 예시적 인공 DNA 서열은 융합 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 형성하기 위해 함께 결찰되는 유전자의 부분을 함유하는 것이다. 함께 결찰되는 DNA의 부분은 단일 유기체 또는 1 초과 유기체 출신일 수 있다.
PCR은 형질감염에 사용되는 mRNA의 시험관내 전사용 템플레이트를 생성하는데 사용된다. PCR 수행 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. PCR에서 사용을 위한 프라이머는 PCR용 템플레이트로서 사용되는 DNA의 영역에 실질적으로 상보성인 영역을 갖도록 설계된다. “실질적으로 상보성”은, 본원에서 사용된 바와 같이, 프라이머 서열에서 다수 또는 모든 염기가 상보성이거나, 하나 이상의 염기가 비-상보성이거나, 불일치되는 뉴클레오타이드의 서열을 지칭한다. 실질적으로 상보성 서열은 PCR에 사용된 어닐링 조건 하에 의도된 DNA 표적으로 어닐링 또는 하이브리드화할 수 있다. 프라이머는 DNA 템플레이트의 임의의 부분에 실질적으로 상보성이도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 프라이머는, 5’ 및 3’ UTRs를 포함한, 세포 (열린 해독틀)에서 정상적으로 전사되는 핵산의 부분을 증폭시키도록 설계될 수 있다. 프라이머는 또한 관심있는 특정한 도메인을 인코딩하는 핵산의 부분을 증폭시키도록 설계될 수 있다. 하나의 구현예에서, 프라이머는, 5’ 및 3’ UTRs의 모두 또는 부분을 포함한, 인간 cDNA의 코딩 영역을 증폭시키도록 설계된다. PCR에 유용한 프라이머는 당해 기술에 공지되어 있는 합성 방법에 의해 생성될 수 있다. “순방향 프라이머”는 증폭되는 DNA 서열의 업스트림인 DNA 템플레이트에서 뉴클레오타이드에 실질적으로 상보성인 뉴클레오타이드의 영역을 함유하는 프라이머이다. “업스트림”은 코딩 가닥에 비하여 증폭되는 DNA 서열에 대해 위치 5를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. “역방향 프라이머”는 증폭되는 DNA 서열의 다운스트림인 이중-가닥 DNA 템플레이트에 실질적으로 상보성인 뉴클레오타이드의 영역을 함유하는 프라이머이다. “다운스트림”은 코딩 가닥에 비하여 증폭되는 DNA 서열의 위치 3’에 대해 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.
PCR에 유용한 임의의 DNA 폴리머라제는 본원에서 개시된 방법에서 사용될 수 있다. 시약 및 폴리머라제는 수많은 공급원으로부터 상업적으로 입수가능하다.
안정성 및/또는 번역 효율을 촉진시키기 위한 능력을 가진 화학 구조가 또한 사용될 수 있다. RNA는 바람직하게는 5’ 및 3’ UTRs를 갖는다. 하나의 구현예에서, 5’ UTR은 1 내지 3000 뉴클레오타이드 길이이다. 코딩 영역에 부가되는 5’ 및 3’ UTR 서열의 길이는, 비제한적으로, UTRs의 상이한 영역에 어닐링하는 PCR용 프라이머 설계를 포함하는, 상이한 방법에 의해 변경될 수 있다. 상기 접근법을 이용하여, 당해 분야의 숙련가는 전사된 RNA의 형질감염 이후 최적의 번역 효율을 달성하기 위해 요구된5’ 및 3’ UTR 길이를 변형시킬 수 있다.
5’ 및 3’ UTRs는 관심 핵산용 천연 발생, 내인성 5’ 및 3’ UTRs일 수 있다. 대안적으로, 관심 핵산에 내인성이 아닌 UTR 서열은 순방향 및 역방향 프라이머 속에 UTR 서열의 편입에 의해 또는 템플레이트의 임의의 다른 변형에 의해 부가될 수 있다. 관심 핵산에 내인성이 아닌 UTR 서열의 이용은 RNA의 안정성 및/또는 번역 효율 변형에 유용할 수 있다. 예를 들어, 3’UTR 서열내 AU-풍부 요소는 mRNA의 안정성을 감소시킬 수 있다는 것이 공지된다. 따라서, 3’ UTRs는 당해 기술에 공지되어 있는 UTRs의 특성에 기반하여 전사된 RNA의 안정성을 증가시키도록 선택 또는 설계될 수 있다.
하나의 구현예에서, 5’ UTR은 내인성 핵산의 코자크(Kozak) 서열을 함유할 수 있다. 대안적으로, 관심 핵산에 내인성이 아닌 5’ UTR이 상기에 기재된 바와 같이 PCR에 의해 부가되고 있는 경우, 공통 코자크 서열은 5’ UTR 서열의 부가에 의해 재설계될 수 있다. 코자크 서열은 일부 RNA 전사체의 번역의 효율을 증가시킬 수 있지만, 모든 RNAs가 효율적인 번역이 가능하도록 요구되는 것처럼 보이지 않는다. 많은 mRNAs용 코자크 서열에 대한 요건은 당해 기술에서 공지되어 있다. 다른 구현예에서 5’ UTR은 RNA 게놈이 세포에서 안정적인 RNA 바이러스의 5’UTR일 수 있다. 다른 구현예에서 다양한 뉴클레오타이드 유사체는 mRNA의 엑소뉴클레아제 분해를 지연시키기 위해 3’ 또는 5’ UTR에서 사용될 수 있다.
유전자 클로닝에 대하여 필요성 없이 DNA 템플레이트로부터 RNA의 합성을 가능하게 하기 위해, 전사의 프로모터는 전사되는 서열의 DNA 템플레이트 업스트림에 부착되어야 한다. RNA 폴리머라제용 프로모터로서 기능하는 서열이 순방향 프라이머의 5’ 말단에 부가되는 경우, RNA 폴리머라제 프로모터는 전사되는 열린 해독틀의 PCR 생성물 업스트림 속에 편입된다. 하나의 바람직한 구현예에서, 프로모터는 본원에서 다른 곳에 기재된 바와 같이 T7 폴리머라제 프로모터이다. 다른 유용한 프로모터는, 비제한적으로, T3 및 SP6 RNA 폴리머라제 프로모터를 포함한다. T7, T3 및 SP6 프로모터용 공통 뉴클레오타이드 서열은 당해 기술에 공지되어 있다.
한 바람직한 구현예에서, mRNA는 리보솜 결합, 번역의 개시 및 세포에서 안정성 mRNA를 결정하는 5’ 말단 및 3’ 폴리(A) 꼬리에서 캡을 모두 갖는다. 원형 DNA 템플레이트, 예를 들면, 플라스미드 DNA에서, RNA 폴리머라제는 진핵 세포내 발현에 적합하지 않은 긴 연쇄체 생성물을 생성한다. 3’ UTR의 말단에서 선형화된 플라스미드 DNA의 전사는 전사 이후 폴리아데닐화될지라도 진핵 형질감염에서 효과적이지 않은 정상 크기의 mRNA를 초래한다.
선형 DNA 템플레이트에서, 파아지 T7 RNA 폴리머라제는 템플레이트의 마지막 염기를 넘어 전사체의 3’ 말단을 확장할 수 있다 (Schenborn and Mierendorf, Nuc Acids Res., 13: 6223-36 (1985); Nacheva and Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270: 1485-65 (2003).
DNA 템플레이트 속에 폴리A/T 스트레치의 통합의 종래 방법은 분자 클로닝이다. 그러나 플라스미드 DNA 속에 통합된 폴리A/T 서열은 플라스미드 불안정을 유발시킬 수 있고, 이는 박테리아 세포로부터 수득된 플라스미드 DNA 템플레이트가 결실 및 다른 이상으로 종종 고도로 오염되는 이유이다. 이는 클로닝 절차를 힘들고 시간이 걸리게 할 뿐만 아니라 종종 신뢰할 수 없게 만든다. 그렇기 때문에 클로닝 없이 폴리A/T 3’ 스트레치로 DNA 템플레이트의 작제를 허용하는 방법이 아주 바람직하다.
전사 DNA 템플레이트의 폴리A/T 세그먼트는 폴리T 꼬리, 예컨대 100 T 꼬리 (크기는 50-5000 T일 수 있다)를 함유하는 역 프라이머 이용에 의한 PCR 동안, 또는 비제한적으로, DNA 결찰 또는 시험관내 재조합을 포함하는, 임의의 다른 방법에 의한 PCR 이후 생산될 수 있다. 폴리(A) 꼬리는 또한 RNAs에 안정성을 제공하고 그의 분해를 감소시킨다. 일반적으로, 폴리(A) 꼬리의 길이는 전사된 RNA의 안정성과 양성으로 상관관계를 갖는다. 하나의 구현예에서, 폴리(A) 꼬리는 100 내지 5000 아데노신이다.
RNAs의 폴리(A) 꼬리는 폴리(A) 폴리머라제, 예컨대 E. 콜리 폴리A 폴리머라제 (E-PAP)의 이용과 함께 시험관내 전사 이후 추가로 확장될 수 있다. 하나의 구현예에서, 100 뉴클레오타이드에서 300 내지 400 뉴클레오타이드까지 폴리(A) 꼬리의 길이 증가는 RNA의 번역 효율에서 약 2-배수 증가를 초래한다. 추가로, 3’ 말단에 상이한 화학기의 부착은 mRNA 안정성을 증가시킬 수 있다. 상기 부착은 변형된/인공 뉴클레오타이드, 압타머 및 다른 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, ATP 유사체는 폴리(A) 폴리머라제를 이용하여 폴리(A) 꼬리 속에 편입될 수 있다. ATP 유사체는 추가로 RNA의 안정성을 증가시킬 수 있다.
5’ 캡스 온(caps on)은 또한 RNA 분자에 안정성을 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본원에서 개시된 방법에 의해 생산된 RNAs는 5’ 캡을 포함한다. 5’ 캡은 당해 기술에서 공지된 및 본원에서 기재된 기술을 이용하여 제공된다 (Cougot, 등, Trends in Biochem. Sci., 29: 436-444 (2001); Stepinski, 등, RNA, 7: 1468-95 (2001); Elango, 등, Biochim. Biophys. Res. Commun., 330: 958-966 (2005)).
본원에서 개시된 방법에 의해 생산된 RNAs는 또한 내부 리보솜 유입 부위 (IRES) 서열을 함유할 수 있다. IRES 서열은 mRNA에 캡-독립적인 리보솜을 개시하고 번역의 개시를 용이하게 하는 임의의 바이러스, 염색체 또는 인공적으로 설계된 서열일 수 있다. 세포 투과도 및 생존력을 촉진시키는 인자 예컨대 당, 펩타이드, 지질, 단백질, 산화방지제, 및 계면활성제를 함유할 수 있는, 세포 전기천공에 적합한 임의의 용질은 포함될 수 있다.
RNA는 임의의 수의 상이한 방법, 예를 들면, 비제한적으로, 하기를 포함하는 상업적으로 입수가능한 방법을 이용하여 표적 세포 속에 도입될 수 있다: 전기천공 (Amaxa Nucleofector-II (Amaxa Biosystems, Cologne, Germany)), (ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass.) 또는 Gene Pulser II (BioRad, Denver, Colo.), Multiporator (Eppendort, Hamburg Germany), 리포펙션을 이용한 양이온성 리포좀 매개된 형질감염, 폴리머 캡슐화, 펩타이드 매개된 형질감염, 및 바이오리스틱 입자 전달 시스템 예컨대 “유전자 총” (참고, 예를 들어, Nishikawa, 등Hum Gene Ther., 12(8): 861-70 (2001).
TFP를 인코딩하는 핵산 작제물
본 발명은 또한 본원에서 기재된 하나 이상의 TFP 작제물을 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 하나의 측면에서, 핵산 분자는 메신저 RNA 전사체로서 제공된다. 하나의 측면에서, 핵산 분자는 DNA 작제물로서 제공된다.
요망된 분자용 핵산 서열 코딩은 당해 기술에서 공지된 재조합 방법을 이용하여, 예컨대, 예를 들어 유전자를 발현하는 세포로부터 라이브러리의 선별에 의해, 동일한 것을 포함하도록 공지된 벡터로부터 유전자의 유래에 의해, 또는 표준 기술을 이용하여, 동일한 것을 함유하는 세포 및 조직으로부터 직접적으로 단리에 의해 수득될 수 있다. 대안적으로, 관심 유전자는 클로닝 보다는 합성으로 생산될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 DNA가 삽입되는 벡터를 제공한다. 레트로바이러스 예컨대 렌티바이러스로부터 유래된 벡터는 이들이 이식유전자의 장기간, 안정적인 통합 및 딸 세포에서 그의 번식을 허용하기 때문에 장기간 유전자 전달을 달성하기 위해 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는 이들이 비-증식 세포, 예컨대 간세포를 형질도입할 수 있다는 점에서 온코(onco)-레트로바이러스 예컨대 쥣과 백혈병 바이러스로부터 유래된 벡터에 대하여 부가된 이점을 갖는다. 이들은 또한 낮은 면역원성의 부가된 이점을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 요망된 TFP를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터는 아데노바이러스 벡터 (A5/35)이다. 또 다른 구현예에서, TFP를 인코딩하는 핵산의 발현은 트랜스포존 예컨대 슬리핑 뷰티(sleeping beauty), 크리스퍼(crisper), CAS9, 및 아연 핑거 뉴클레아제의 이용으로 달성될 수 있다. 참고 아래 June 등 2009 Nature Reviews Immunology 9.10: 704-716은, 본원에서 참고로 편입된다.
본 발명의 발현 작제물은 또한 표준 유전자 전달 프로토콜을 이용하여 핵산 면역화 및 유전자 요법에 사용될 수 있다. 유전자 전달 방법은 당해 기술에 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,399,346, 5,580,859, 5,589,466, 그의 전체가 본원에서 참고로 편입됨). 또 다른 구현예에서, 본 발명은 유전자 요법 벡터를 제공한다.
핵산은 수많은 유형의 벡터 속에 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 핵산은, 비제한적으로 플라스미드, 파아지미드, 파아지 유도체, 동물 바이러스, 및 코스미드를 포함하는 벡터 속에 클로닝될 수 있다. 특정한 관심의 벡터는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터, 및 서열분석 벡터를 포함한다.
추가로, 발현 벡터는 바이러스성 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스성 벡터 기술은 당해 기술에서 잘 알려지고, 예를 들어, 하기에 기재된다: Sambrook 등, 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY), 및 다른 바이러스학 및 분자 생물학 매뉴얼. 벡터로서 유용한, 바이러스는, 비제한적으로, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련된 바이러스, 헤르페스 바이러스, 및 렌티바이러스를 포함한다. 일반적으로, 적합한 벡터는 하나 이상의 유기체, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위, 및 하나 이상의 선별 마커에서 기능성인 복제의 기원을 함유한다 (예를 들면, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 번호 6,326,193).
수많은 바이러스성으로 기반된 시스템은 포유동물 세포 속에 유전자 전달을 위하여 개발되어 왔다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템에 편리한 플랫폼을 제공한다. 선택된 유전자는 벡터 속에 삽입될 수 있고 당해 기술에서 공지된 기술을 이용하여 레트로바이러스 입자에서 포장될 수 있다. 재조합 바이러스는 그 다음 단리될 수 있고 생체내 또는 생체외 대상체의 세포에 전달될 수 있다. 수많은 레트로바이러스 시스템은 당해 기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 아데노바이러스 벡터가 사용된다. 수많은 아데노바이러스 벡터는 당해 기술에 공지되어 있다. 하나의 구현예에서, 렌티바이러스 벡터가 사용된다.
추가의 프로모터 요소, 예를 들면, 인핸서가 전사 개시의 빈도를 조절한다. 전형적으로, 수많은 프로모터가 또한 개시 부위의 다운스트림으로 기능성 요소를 함유하는 것으로 나타나고 있어도, 이들은 개시 부위의 업스트림으로 영역 30-110 bp에서 위치한다. 프로모터 요소 사이 간격이 빈번하게 가요성이어서, 요소가 역전되고 서로에 대해 이동되는 경우 프로모터 기능은 보존된다. 티미딘 키나제 (tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 사이 간격은 활성이 쇠퇴하기 시작하기 전에 별도로 50 bp까지 증가될 수 있다. 프로모터에 의존하여, 개별적인 요소가 전사를 활성화하기 위해 협력하여 또는 독립적으로 기능할 수 있는 것처럼 보인다.
포유동물 T-세포에서 TFP 이식유전자를 발현할 수 있는 프로모터의 예는 EF1a 프로모터이다. 원상태 EF1a 프로모터는, 리보솜에 아미노아실 tRNAs의 효소 전달을 책임지는, 연신 인자-1 복합체의 알파 서브유닛의 발현을 구동한다. EF1a 프로모터는 포유동물 발현 플라스미드에서 광범위하게 사용되고 있고 렌티바이러스 벡터 속에 클로닝된 이식유전자로부터 TFP 발현 구동에 효과적인 것으로 나타나고 있다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)). 프로모터의 또 다른 예는 전초기 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터 서열이다. 상기 프로모터 서열은 거기에 작동가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현의 높은 수준을 구동할 수 있는 강한 구성적 프로모터 서열이다. 그러나, 비제한적으로 유인원 바이러스 40 (SV40) 초기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스 (MMTV), 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 긴 말단 반복 (LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡슈타인-바르 바이러스 전초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스 프로모터, 뿐만 아니라 인간 유전자 프로모터 예컨대, 비제한적으로, 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 연신 인자-1a 프로모터, 헤모글로빈 프로모터, 및 크레아틴 키나제 프로모터를 포함하는, 다른 구성적 프로모터 서열은 또한 사용될 수 있다. 추가로, 본 발명은 항시성 프로모터의 이용에 제한되지 않아야 한다. 유도성 프로모터가 또한 본 발명의 일부로서 고려된다. 유도성 프로모터의 이용은 상기 발현이 요망되는 경우 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현의 켜기, 또는 발현이 요망되지 않은 경우 발현의 끄기를 할 수 있는 분자를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는, 비제한적으로 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린-조절된 프로모터를 포함한다.
TFP 폴리펩타이드 또는 그의 부분의 발현을 평가하기 위해, 세포 속에 도입되는 발현 벡터는 또한 바이러스성 벡터를 통해 형질감염되거나 감염되는 것을 추구한 세포의 집단으로부터 발현 세포의 확인 및 선택을 용이하게 하기 위해 선별가능한 마커 유전자 또는 리포터 유전자 또는 둘 모두를 함유할 수 있다. 다른 측면에서, 선별가능한 마커는 DNA의 별개의 조각에서 계속될 수 있고 공-형질감염 절차에서 사용될 수 있다. 선별가능한 마커 및 리포터 유전자 둘 모두는 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하기 위해 적절한 조절 서열과 측접될 수 있다. 유용한 선별가능한 마커는, 예를 들어, 항생제-저항 유전자, 예컨대 네오(neo) 기타 등등을 포함한다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염된 세포의 확인 및 조절 서열의 작용성 평가에 사용된다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수령체 유기체 또는 조직에서 존재하지 않고 상기에 의해 발현되지 않는 그리고 발현이 일부 쉽게 검출가능한 특성, 예를 들면, 효소 활성에 의해 명시되는 폴리펩타이드를 인코딩하는 유전자이다. 리포터 유전자의 발현은 DNA가 수령체 세포 속에 도입되어 온 이후 적합한 시간에서 분석된다. 적합한 리포터 유전자는 루시퍼라아제, 베타-갈락토시다아제, 클로르암페니콜 아세틸 전달효소, 분비된 알칼리성 포스파타제를 인코딩하는 유전자, 또는 녹색 형광 단백질 유전자를 포함할 수 있다 (예를 들면, Ui-Tei 등, 2000 FEBS Letters 479: 79-82). 적합한 발현 시스템은 잘 알려지고 공지된 기술을 이용하여 제조될 수 있고 상업적으로 수득될 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자의 발현의 최고 수준을 보여주는 최소 5’ 측접하는 영역을 가진 작제물은 프로모터로서 확인된다. 상기 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결될 수 있고 프로모터-유도된 전사를 조정하는 능력에 대하여 제제를 평가하는데 사용될 수 있다.
세포 속에 유전자 도입 및 발현 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 발현 벡터의 문맥에서, 벡터는 당해 기술에서 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들면, 포유동물, 박테리아, 효모, 또는 곤충 세포 속에 쉽게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적, 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포 속에 이동될 수 있다.
숙주 세포 속에 폴리뉴클레오타이드 도입을 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 리포펙션, 입자 폭격, 미세주입, 전기천공, 기타 등등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함한 세포의 생산 방법은 당해 기술에서 공지된다. 참고, 예를 들어, Sambrook 등, 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY). 숙주 세포 속에 폴리뉴클레오타이드의 바람직한 도입 방법은 인산칼슘 형질감염이다
숙주 세포 속에 관심 폴리뉴클레오타이드의 생물학적 도입 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 이용을 포함한다. 바이러스성 벡터, 및 특히 레트로바이러스 벡터는 포유동물, 예를 들면, 인간 세포 속에 유전자의 가장 널리 사용된 삽입 방법이 되어 왔다. 다른 바이러스성 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순 포진 바이러스 I, 아데노바이러스 및 아데노-관련된 바이러스, 기타 등등으로부터 유래될 수 있다 (참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,350,674 및 5,585,362.
숙주 세포 속에 폴리뉴클레오타이드의 화학적 도입 수단은 콜로이드성 분산 시스템, 예컨대 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로구형체, 비드, 및 수중유 에멀젼, 교질입자, 혼합된 교질입자, 및 리포좀을 포함하는 지질-기반 시스템을 포함한다. 시험관내 및 생체내 전달 비히클로서 사용을 위한 예시적 콜로이드성 시스템은 리포좀 (예를 들면, 인공 막 소포)이다. 핵산의 최신 기술 표적화된 전달의 다른 방법, 예컨대 표적화된 나노입자 또는 다른 적합한 서브마이크론 크기의 전달 시스템으로 폴리뉴클레오타이드의 전달이 이용가능하다.
비-바이러스성 전달 시스템이 이용되는 경우에, 예시적 전달 비히클은 리포좀이다. 지질 제형의 이용은 숙주 세포 속에 핵산의 도입을 위하여 고려된다 (시험관내, 생체외 또는 생체내). 또 다른 측면에서, 핵산은 지질과 관련될 수 있다. 지질과 관련된 핵산은 리포좀의 수성 내부에서 캡슐화될 수 있거나, 리포좀의 지질 이중층 내에 산재될 수 있거나, 리포좀 및 올리고뉴클레오타이드 둘 모두와 관련되는 연결 분자를 통해 리포좀에 부착될 수 있거나, 리포좀에서 포획될 수 있거나, 리포좀과 복합될 수 있거나, 지질을 함유한 용액에서 분산될 수 있거나, 지질과 혼합될 수 있거나, 지질과 조합될 수 있거나, 지질에서 현탁액으로서 함유될 수 있거나, 교질입자와 함유 또는 복합될 수 있거나, 달리 지질과 관련될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 관련된 조성물은 용액내 임의의 특정한 구조에 제한되지 않는다. 예를 들어, 이들은 이중층 구조에서, 교질입자로서, 또는 “붕괴된” 구조로 존재할 수 있다. 이들은 또한, 가능하게는 크기 또는 형상이 균일하지 않은 응집물을 형성하는, 용액에서 단순히 산재될 수 있다. 지질은 천연 발생 또는 합성 지질일 수 있는 지방 물질이다. 예를 들어, 지질은 세포질에서 천연적으로 발생하는 지방 액적 뿐만 아니라 장쇄 지방족 탄화수소 및 그의 유도체, 예컨대 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올, 및 알데하이드를 포함하는 화합물의 부류를 포함한다.
사용에 적합한 지질은 상업적 공급원으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 디미리스틸 포스파티딜콜린 (“DMPC”)은 하기로부터 수득될 수 있고: Sigma, St. Louis, Mo.; 디세틸 포스페이트 (“DCP”)는 K & K Laboratories (Plainview, N.Y.)로부터 수득될 수 있고; 콜레스테롤 (“Choi”)은 Calbiochem-Behring으로부터 수득될 수 있고; 디미리스틸 포스파티딜글리세롤 (“DMPG”) 및 다른 지질은 하기로부터 수득될 수 있다: Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, Ala.). 클로로포름 또는 클로로포름/메탄올내 지질의 모액은 약 -20 ℃에서 저장될 수 있다. 클로로포름은 메탄올보다 더욱 쉽게 증발되기 때문에 용매로서만 사용된다. “리포좀”은 봉입된 지질 이중층 또는 응집물의 생성에 의해 형성된 다양한 단일 및 다중층 지질 비히클을 포함하는 일반 용어이다. 리포좀은 인지질 이중층 막 및 내부 수성 매질을 가진 소포성 구조를 갖는 것으로서 특성규명될 수 있다. 다중층 리포좀은 수성 매질에 의해 분리된 다중 지질 층을 갖는다. 이들은 인지질이 과잉의 수용액에서 현탁되는 경우 자발적으로 형성한다. 지질 성분은 폐쇄된 구조의 형성 이전 자기-재배열을 경험하고 지질 이중층 사이 물 및 용해된 용질을 포집한다 (Ghosh 등, 1991 Glycobiology 5: 505-10). 그러나, 정상 소포성 구조보다 용액에서 상이한 구조를 갖는 조성물이 또한 포함된다. 예를 들어, 지질은 교질입자 구조를 지닐 수 있거나 단지 지질 분자의 비균일 응집물로서 존재할 수 있다. 리포펙타민-핵산 복합체가 또한 고려된다.
숙주 세포 속에 외인성 핵산을 도입하는데 또는 달리 본 발명의 억제제에 세포를 노출시키는데 사용된 방법과 무관하게, 숙주 세포에서 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위해, 다양한 검정이 수행될 수 있다. 상기 검정은, 예를 들어, 하기를 포함한다: 당해 분야의 숙련가에 잘 알려진 “분자 생물학적” 검정, 예컨대 서던 및 노던 블랏팅, RT-PCR 및 PCR; “생화학적” 검정, 예컨대, 예를 들면, 면역학적 수단 (ELISAs 및 웨스턴 블랏)에 의해 또는 본 발명의 범위 내에 해당하는 제제를 확인하기 위해 본원에서 기재된 검정에 의해 특정한 펩타이드의 존재 또는 부재의 검출.
본 발명은 추가로 TFP 인코딩 핵산 분자를 포함한 벡터를 제공한다. 하나의 측면에서, TFP 벡터는 세포, 예를 들면, T-세포 속에 직접적으로 형질도입될 수 있다. 하나의 측면에서, 벡터는 클로닝 또는 발현 벡터, 예를 들면, 비제한적으로, 하나 이상의 플라스미드 (예를 들면, 발현 플라스미드, 클로닝 벡터, 미니서클, 미니벡터, 이중 미세 염색체)를 포함하는 벡터, 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터 작제물이다. 하나의 측면에서, 벡터는 포유동물 T-세포에서 TFP 작제물을 발현할 수 있다. 하나의 측면에서, 포유동물 T-세포는 인간 T-세포이다.
T-세포의 공급원
팽창 및 유전적 변형에 앞서, T-세포의 공급원은 대상체로부터 수득된다. 용어 “대상체”는 면역 반응이 유발될 수 있는 살아있는 유기체 (예를 들면, 포유동물)을 포함하도록 의도된다. 대상체의 예는 인간, 개, 고양이, 마우스, 랫트, 및 그들의 트랜스제닉 종을 포함한다. T-세포는, 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 가슴샘 조직, 감염, 복수, 늑막 삼출의 부위로부터 조직, 비장 조직, 및 종양을 포함하는, 수많은 공급원으로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 측면에서, 당해 기술에서 이용가능한 임의의 수의 T-세포주가 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 측면에서, T-세포는 숙련가에 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 피콜(Ficoll) TM 분리를 이용하여 대상체로부터 수집된 혈액의 유닛으로부터 수득될 수 있다. 하나의 바람직한 측면에서, 개체의 순환 혈액으로부터 세포는 분리반출법에 의해 수득된다. 분리반출법 생성물은 전형적으로 T-세포를 포함한, 림프구, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵의 백혈구, 적혈구, 및 혈소판을 함유한다. 하나의 측면에서, 분리반출법에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하기 위해 그리고 차후의 처리 단계를 위하여 적절한 완충액 또는 배지에서 세포를 배치하기 위해 세정될 수 있다. 본 발명의 하나의 측면에서, 세포는 포스페이트 완충된 염수 (PBS)로 세정된다. 한 대안적인 측면에서, 세정액은 칼슘이 부족하고 마그네슘이 부족할 수 있거나 모두 2가 양이온이 아니면 많이 부족할 수 있다. 칼슘의 부재하에 초기 활성화 단계는 확대된 활성화로 이어질 수 있다. 당해 분야의 숙련가가 쉽게 인지할 바와 같이 세정 단계는 당해 기술의 숙련가에 공지된 방법, 예컨대 제조자의 지침에 따른 세미-자동화 “통과액” 원심분리기 (예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter CytoMate, 또는 Haemonetics Cell Saver 5) 이용에 의해 달성될 수 있다. 세정 이후, 세포는 완충액과 무관하게 다양한 생체적합성 완충액, 예컨대, 예를 들어, 무Ca, 무Mg PBS, PlasmaLyte A, 또는 다른 염수 용액에서 재현탁될 수 있다. 대안적으로, 분리반출법 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거될 수 있고 세포는 직접적으로 배양 배지에서 재현탁될 수 있다.
하나의 측면에서, T-세포는, 예를 들어, PERCOLLTM 구배를 통한 원심분리에 의한 또는 역류 원심 세정에 의한, 적혈구의 용해 및 단핵구의 고갈에 의해 말초 혈액 림프구로부터 단리된다. T-세포의 특이적 하위집단, 예컨대 CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및 CD45RO+ T-세포는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 예를 들어, 하나의 측면에서, T-세포는 하기로 인큐베이션에 의해 단리된다: 항-CD3/항-CD28 (예를 들면, 3x28)-접합된 비드, 예컨대 DYNABEADSTM M-450 CD3/CD28 T (요망된 T-세포의 양성 선택에 충분한 기간 동안). 하나의 측면에서, 기간은 약 30 분이다. 한 추가 측면에서, 기간은 30 분 내지 36 시간 이상 및 그 사이에 있는 모든 정수 값 범위이다. 한 추가 측면에서, 기간은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 시간이다. 더욱 또 다른 바람직한 측면에서, 기간은 10 내지 24 시간이다. 하나의 측면에서, 인큐베이션 기간은 24 시간이다. 더 긴 인큐베이션 시간은 다른 세포 유형에 비교된 경우 소수의 T-세포가 있는 임의의 상황에서 T-세포를 단리시키는데 사용될 수 있고, 종양 조직으로부터 또는 면역저하된 개체로부터 종양 침투 림프구 (TIL) 단리에서도 그러하다. 추가로, 더 긴 인큐베이션 시간의 이용은 CD8+ T-세포의 포착 효율을 증가시킬 수 있다. 따라서, 시간의 단순 단축 및 연장으로 T-세포는 CD3/CD28 비드에 결합하게 하였고/하였거나 (본원에서 추가로 기재된 바와 같이), 비드 대 T-세포의 비의 증가 또는 감소에 의해, T-세포의 하위집단은 진행 동안 배양 개시 또는 다른 시점에서 향배에 우선적으로 선택될 수 있다. 추가적으로, 비드 또는 다른 표면에서 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체의 비 증가 또는 감소에 의해, T-세포의 하위집단은 배양 개시 또는 다른 요망된 시점에서 향배에 우선적으로 선택될 수 있다. 숙련가는 다중 라운드의 선택이 또한 본 발명의 문맥에서 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 특정 측면에서, 선택 절차를 수행하는 것 및 활성화 및 팽창 과정에서 “미선택된” 세포를 이용하는 것이 바람직할 수 있다. “미선택된” 세포는 또한 추가 라운드의 선택에 적용될 수 있다.
음성 선택에 의한 T-세포 집단의 농축은 음성으로 선택된 세포에 독특한 표면 마커에 관한 항체의 조합으로 달성될 수 있다. 하나의 방법은 음성으로 선택된 세포상에 존재한 세포 표면 마커에 관한 단클론성 항체의 칵테일을 이용하는 음성 자기 면역부착 또는 유세포측정을 통한 세포 분류 및/또는 선택이다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론성 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 특정 측면에서, 전형적으로 CD4+, CD25+, CD62Lhi, GITR+, 및 FoxP3+를 발현하는 조절 T-세포를 농축하거나 양성으로 선택하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 특정 측면에서, T 조절 세포는 항-C25 접합된 비드 또는 다른 유사한 선택 방법에 의해 감손된다.
하나의 구현예에서, 하나 이상의 IFN-γ, TNF-알파, IL-17A, IL-2, IL-3, IL-4, GM-CSF, IL-10, IL-13, 그란자임 B, 및 페르포린, 또는 다른 적절한 분자, 예를 들면, 다른 사이토카인을 발현하는 T-세포 집단이 선택될 수 있다. 세포 발현을 위한 선별 방법은, 예를 들면, 하기에 기재된 방법에 의해 결정될 수 있다: PCT 공개 번호: WO 2013/126712.
양성 또는 음성 선택에 의한 세포의 요망된 집단의 단리를 위하여, 세포의 농도 및 표면 (예를 들면, 입자 예컨대 비드)는 다양할 수 있다. 특정 측면에서, 비드 및 세포가 세포 및 비드의 최대 접촉을 확보하기 위해 함께 혼합되는 용적을 상당히 감소 (예를 들면, 세포의 농도를 증가)시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 하나의 측면에서, 20억 세포/mL의 농도가 사용된다. 하나의 측면에서, 10억 세포/mL의 농도가 사용된다. 한 추가 측면에서, 1억 초과 세포/mL가 사용된다. 한 추가 측면에서, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50 백만 세포/mL의 세포의 농도가 사용된다. 또한 하나의 측면에서, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 백만 세포/mL의 세포의 농도가 사용된다. 추가 측면에서, 125 또는 150 백만 세포/mL의 농도가 사용될 수 있다. 고 농도 이용은 증가된 세포 수율, 세포 활성화, 및 세포 팽창을 초래할 수 있다. 추가로, 고 세포 농도의 이용은 관심 표적 항원, 예컨대 CD28-음성 T-세포를, 또는 존재한 많은 종양 세포가 있는 샘플 (예를 들면, 백혈병성 혈액, 종양 조직, 등)로부터 약하게 발현할 수 있는 세포의 더욱 효율적인 포착을 허용한다. 상기 세포의 집단은 치료 가치를 가질 수 있고 수득하기에 바람직할 것이다. 예를 들어, 세포의 고 농도 이용은 정상적으로 더 약한 CD28 발현을 갖는 CD8+ T-세포의 더욱 효율적인 선택을 허용한다.
관련된 측면에서, 세포의 더 낮은 농도를 이용하는 것이 바람직할 수 있다. T-세포 및 표면 (예를 들면, 입자 예컨대 비드)의 혼합물의 상당한 희석으로, 입자와 세포 사이 상호작용은 최소화된다. 이는 입자에 결합되는 다량의 요망된 항원을 발현하는 세포를 위하여 선택한다. 예를 들어, CD4+ T-세포는 CD28의 더 높은 수준을 발현하고 희석 농도에서 CD8+ T-세포보다 더욱 효율적으로 포착된다. 하나의 측면에서, 사용된 세포의 농도는 5x106/mL이다. 다른 측면에서, 사용된 농도는 약 1x105/mL 내지 1x106/mL, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다. 다른 측면에서, 세포는 2-10 ℃ 또는 실온에서 다양한 속도로 다양한 시간의 길이 동안 회전자에서 인큐베이션될 수 있다.
자극용 T-세포는 또한 세정 단계 이후 냉동될 수 있다. 이론에 의해 구속됨의 바람 없이, 냉동 및 차후의 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도까지 단핵구를 제거함으로써 더욱 균일한 생성물을 제공한다. 혈장 및 혈소판을 제거하는 세정 단계 이후, 세포는 냉동 용액에서 현탁될 수 있다. 많은 냉동 용액 및 파라미터가 당해 기술에 공지되어 있고 상기 맥락에서 유용할 반면, 하나의 방법은 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민을 함유하는 PBS, 또는 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로오스, 20% 인간 혈청 알부민 및 7.5% DMSO, 또는 31.25% Plasmalyte-A, 31.25% 덱스트로오스 5%, 0.45% NaCl, 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로오스, 20% 인간 혈청 알부민, 및 7.5% DMSO를 함유하는 배양 배지 및 예를 들어, Hespan 및 PlasmaLyte A를 함유하는 다른 적합한 세포 냉동 배지의 이용을 포함하고, 세포는 그 다음 분당 1의 속도로 -80 ℃로 냉동되고 액체 질소 저장 탱크의 증기상에서 저장된다. 제어된 냉동의 다른 방법 뿐만 아니라 -20 ℃에서 또는 액체 질소에서 즉시 제어되지 않는 냉동이 이용될 수 있다. 특정 측면에서, 동결보존된 세포는 본원에서 기재된 바와 같이 해동되고 세정되고 본 발명의 방법을 이용한 활성화에 앞서 실온에서 1 시간 동안 둔다.
또한 본 발명의 문맥에서 본원에서 기재된 바와 같이 팽창된 세포가 필요할 경우에 앞서 일정 기간에서 대상체로부터 혈액 샘플 또는 분리반출법 생성물의 수집이 고려된다. 이와 같이, 팽창되는 세포의 공급원은 필요한 임의의 시점에서 수집될 수 있고, 요망된 세포, 예컨대 T-세포는 T-세포 요법, 예컨대 본원에서 기재된 것으로부터 유익할 임의의 수의 질환 또는 병태를 위한 T-세포 요법에서 나중 사용을 위하여 단리 및 냉동될 수 있다. 하나의 측면에서 혈액 샘플 또는 분리반출법은 일반적으로 건강한 대상체로부터 채집된다. 특정 측면에서, 혈액 샘플 또는 분리반출법은 질환 발생의 위험이 있지만, 아직 질환을 발생하지 않은 일반적으로 건강한 대상체로부터 채집되고, 관심 세포는 나중 사용을 위하여 단리 및 냉동된다. 특정 측면에서, T-세포는 팽창될 수 있고, 냉동될 수 있고, 나중 시간에 사용될 수 있다. 특정 측면에서, 샘플은 본원에서 기재된 바와 같이 특정한 질환의 진단 직후 그러나 임의의 치료에 앞서 환자로부터 수집된다. 한 추가 측면에서, 세포는 비제한적으로 제제 예컨대 나탈리주맙, 에팔리주맙, 항바이러스제, 화학요법, 방사선, 면역억제성 제제, 예컨대 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 마이코페놀레이트, 및 FK506, 항체, 또는 다른 면역절제 제제 예컨대 CAMPATH, 항-CD3 항체, 사이톡산, 플루다라빈, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀산, 스테로이드, FR901228, 및 조사로 치료를 포함하는, 임의의 수의 관련된 치료 양식에 앞서 대상체로부터 혈액 샘플 또는 분리반출법으로 단리된다.
본 발명의 한 추가 측면에서, T-세포는 기능성 T-세포를 가진 대상체를 이탈하는 치료 이후 직접적으로 환자로부터 수득된다. 이와 관련하여, 하기 특정 암 치료, 특히 면역 시스템을 손상시키는 손상시키는 약물로 치료 이후, 환자가 그 치료로부터 정상적으로 회복되고 있는 경우의 기간 동안 치료 직후, 수득된 T-세포의 품질이 최적일 수 있거나 생체외 팽창하는 그의 능력에 대하여 개선될 수 있다는 것이 관측되고 있다. 마찬가지로, 본원에서 기재된 방법을 이용한 생체외 조작 이후, 이들 세포는 향상된 생착 및 생체내 팽창에 바람직한 상태일 수 있다. 따라서, 상기 회복기 동안, T-세포, 수지상 세포, 또는 조혈 계통의 다른 세포를 포함하는, 혈액 세포를 수집하는 것이 본 발명의 문맥 내에 고려된다. 추가로, 특정 측면에서, 동원 (예를 들어, GM-CSF로 동원) 및 컨디셔닝 레지멘은 대상체에서 병태를 창출하는데 사용될 수 있고 여기에서 특정한 세포 유형의 재증식, 재순환, 재생, 및/또는 팽창은, 특히 시간을 따르는 요법의 한정된 윈도우 동안 양호하다. 예시적인 세포 유형은 T-세포, B 세포, 수지상 세포, 및 면역 시스템의 다른 세포를 포함한다.
T 세포의 활성화 및 팽창
T-세포는, 예를 들어, 하기 기재된 바와 같은 방법을 일반적으로 이용하여 활성화 및 팽창될 수 있다: 미국 특허 번호 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 미국특허 출원 공개 번호 20060121005.
일반적으로, 본 발명의 T-세포는 CD3/TCR 복합체 관련된 신호를 자극하는 제제 및 T-세포의 표면에서 공자극 분자를 자극하는 리간드를 거기에 부착된 표면과 접촉시킴으로써 팽창될 수 있다. 특히, T-세포 집단은 본원에서 기재된 바와 같이, 예컨대 항-CD3 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 표면에서 고정된 항-CD2 항체와 접촉시킴으로써, 또는 칼슘 이오노포어와 함께 단백질 키나제 C 활성제 (예를 들면, 브리오스타틴)과 접촉시킴으로써 자극될 수 있다. T-세포의 표면에서 부속 분자의 공-자극에 대하여, 부속 분자를 결합하는 리간드가 사용된다. 예를 들어, T-세포의 집단은 T-세포의 증식 자극에 적절한 조건하에, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉될 수 있다. CD4+ T-세포 또는 CD8+ T-세포의 증식을 자극하기 위해, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체. 항-CD28 항체의 예는 당해 기술에서 통상적으로 공지된 다른 방법이 할 수 있는 것처럼 사용될 수 있는 9.3, B-T3, XR-CD28 (Diaclone, Besancon, France)를 포함한다 (Berg 등, Transplant Proc. 30(8): 3975-3977, 1998; Haanen 등, J. Exp. Med. 190(9): 13191328, 1999; Garland 등, J. Immunol. Meth. 227(1-2): 53-63, 1999).
다양한 자극 시간에 노출되고 있는 T-세포는 상이한 특징을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 전형적인 혈액 또는 분리반출된 말초 혈액 단핵 세포 생성물은 세포독성 또는 억제제 T-세포 집단 (TC, CD8+) 초과인 헬퍼 T-세포 집단 (TH, CD4+)을 갖는다. CD3 및 CD28 수용체 자극에 의한 T-세포의 생체외 팽창은 약 8-9 일에 앞서 두드러지게 TH 세포로 구성되는 T-세포의 집단을 생산하고, 반면에, 약 8-9 일후, T-세포의 집단은 TC 세포의 점점 더 큰 집단을 포함한다. 따라서, 치료의 목적에 의존하여, 두드러지게 TH 세포를 포함한 T-세포 집단으로 대상체 주입은 유리할 수 있다. 유사하게, TC 세포의 항원-특이적 서브셋이 단리되고 있으면 상기 서브셋을 더 큰 정도로 팽창하는 것이 유익할 수 있다.
추가로, CD4 및 CD8 마커에 더하여, 다른 표현형 마커는 상당히, 그러나 큰 부분에서, 세포 팽창 과정 도중에 재생가능하게 다양하다. 따라서, 상기 재현성은 특별한 목적으로 활성화된 T-세포 생성물을 조정하는 능력을 가능하게 한다.
일단 항-CD19 또는 항-BCMA TFP가 작제되면, 다양한 검정은 분자의 활성, 예컨대 비제한적으로, 항원 자극 이후 T-세포를 팽창하는 능력, 재-자극의 부재하에 T-세포 팽창 유지, 및 적절한 시험관내 및 동물 모델에서 항-암 활성을 평가하는데 사용될 수 있다. 항-CD19 또는 항-BCMA TFP의 효과를 평가하는 검정은 아래 상세히 추가로 기재된다.
1차 T-세포내 TFP 발현의 웨스턴 블랏 분석은 모노머 및 다이머의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 매우 간단히, TFP를 발현하는 T-세포 (CD4+ 및 CD8+ T-세포의 1: 1 혼합물)은 10 일 초과 동안 시험관내 팽창되고 그 다음 용해 및 환원 조건하에 SDS-PAGE 적용된다. TFP는 TCR 쇄에 항체를 이용한 웨스턴 블랏팅에 의해 검출된다. 동일한 T-세포 서브셋은 공유 다이머 형성의 평가를 허용하는 비-환원 조건 하에 SDS-PAGE 분석에 사용된다.
항원 자극 이후 TFP+ T-세포의 시험관내 팽창은 유세포측정에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, CD4+ 및 CD8+ T-세포의 혼합물은 알파CD3/알파CD28 및 APCs로 자극되고 그 다음 분석되는 프로모터의 제어하에 GFP를 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된다. 예시적 프로모터는 CMV IE 유전자, EF-1알파, 유비퀴틴 C, 또는 포스포글리세로키나제 (PGK) 프로모터를 포함한다. GFP 형광은 유세포측정에 의해 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포 서브셋에서 배양의 6 일째에 평가된다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 대안적으로, CD4+ 및 CD8+ T-세포의 혼합물은 0 일째에 알파CD3/알파CD28 코팅된 자기 비드로 자극되고, 2A 리보솜 스키핑 서열을 이용하여 eGFP와 함께 TFP를 발현하는 비시스트론성 렌티바이러스 벡터를 이용하여 1 일째에 TFP로 형질도입된다. 배양액은 세정 이후 항CD3 및 항-CD28 항체 (K562-BBL-3/28)의 존재하에 hCD32 및 4-1BBL을 발현하는 CD19+ K562 세포 (K562-CD19), 야생형 K562 세포 (K562 야생형) 또는 K562 세포로 재-자극된다. 외인성 IL-2는 100 IU/mL로 하루 걸러 배양액에 첨가된다. GFP+ T-세포는 비드-기반 계수를 이용한 유세포측정에 의해 열거된다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)).
재-자극의 부재하에 지속된 TFP+ T-세포 팽창은 또한 측정될 수 있다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 간단히, 평균 T-세포 용적 (fl)은 0 일째에 알파CD3/알파CD28 코팅된 자기 비드로 자극, 및 1 일째에 표시된 TFP로 형질도입 이후 Coulter Multisizer III 입자 카운터를 이용하여 배양의 8 일째에 측정된다.
동물 모델은 또한 TFP-T 활성을 측정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역결핍 마우스에서 1차 인간 사전-B ALL을 치료하기 위해 인간 CD19-특이적 TFP+ T-세포를 이용하는 이종이식 모델이 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 매우 간단히, ALL의 확립 이후, 마우스는 처리 그룹에 관하여 무작위화된다. 상이한 수의 조작된 T-세포는 B-ALL을 보유한 NOD/SCID/γ-/- 마우스 속에 1: 1 비로 공주사된다. 마우스로부터 비장 DNA내 각각의 벡터의 카피 수는 T-세포 주사 이후 다양한 시점에서 평가된다. 동물은 매주 간격으로 백혈병에 대하여 평가된다. 말초 혈액 CD19+ B-ALL 아세포 카운트는 알파CD19-제타 TFP+ T-세포 또는 모의-형질도입된 T-세포로 주사되는 마우스에서 측정된다. 그룹에 대한 생존 곡선은 로그-순위 시험을 이용하여 비교된다. 게다가, NOD/SCID/γ-/- 마우스내 T-세포 주사 4 주 이후 절대적인 말초 혈액 CD4+ 및 CD8+ T-세포 카운트는 또한 분석될 수 있다. 마우스는 백혈병성 세포로 주사되고 3 주 후에 eGFP에 연결된 TFP를 인코딩하는 비시스트론성 렌티바이러스 벡터에 의해 TFP를 발현하도록 조작된 T-세포로 주사된다. T-세포는 주사에 앞서 모의-형질도입된 세포와 혼합에 의해 45-50% 투입 GFP+ T-세포로 정규화되고, 유세포측정에 의해 확인된다. 동물은 1-주 간격으로 백혈병에 대하여 평가된다. TFP+ T-세포 그룹에 대하여 생존 곡선은 로그-순위 시험을 이용하여 비교된다.
용량 의존적 TFP 치료 반응은 평가될 수 있다 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 예를 들어, 말초 혈액은 21 일째에 TFP T-세포, 동일한 수의 모의-형질도입된 T-세포, 또는 무 T-세포로 주사된 마우스내 백혈병 확립 35-70 일 이후 수득된다. 각각의 그룹으로부터 마우스는 말초 혈액 CD19+ ALL 블라스트 카운트의 결정을 위하여 무작위로 채혈되고 그 다음 35 및 49일째에 사망된다. 나머지 동물은 일 57 및 70 일째에 평가된다.
세포 증식 및 사이토카인 생산의 평가는, 예를 들면, 아래 이전에 기재되어 있다: Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009). 간단히, TFP-매개된 증식의 평가는 2: 1의 최종 T-세포: K562 비로 CD19 (K19) 또는 CD32 및 CD137 (KT32-BBL)을 발현하는 K562 세포와 세정된 T-세포의 혼합에 의해 미세적정 플레이트에서 수행된다. K562 세포는 사용에 앞서 감마-방사선으로 조사된다. 항-CD3 (클론 OKT3) 및 항-CD28 (클론 9.3) 단클론성 항체는 이들 신호가 생체외 장기간 CD8+ T-세포 팽창을 지지하기 때문에 T-세포 증식 자극에 대하여 양성 대조군으로서 작용하기 위해 KT32-BBL 세포를 가진 배양액에 부가된다. T-세포는 제조자에 의해 기재된 CountBrightTM 형광 비드 (Invitrogen) 및 유세포측정을 이용하여 배양액에서 늘어놓는다. TFP+ T-세포는 eGFP-2A 연결된 TFP-발현 렌티바이러스 벡터로 조작되는 T-세포를 이용하여 GFP 발현에 의해 확인된다. GFP를 발현하지 않는 TFP+ T-세포에 대하여, TFP+ T-세포는 바이오티닐화된 재조합 CD19 단백질 및 2차 아비딘-PE 콘주게이트로 검출된다. T-세포에서 CD4+ 및 CD8+ 발현은 특이적 단클론성 항체 (BD Biosciences)로 또한 동시에 검출된다. 사이토카인 측정은 제조자의 지침에 따른 인간 TH1/TH2 사이토카인 혈구계산 비드 어레이 키트 (BD Biosciences)를 이용하여 재-자극 24 시간 이후 수집된 상청액에서 수행된다. 형광은 FACScalibur 유세포측정기를 이용하여 평가되고, 데이터는 제조자의 지침에 따라 분석된다.
세포독성은 하기에 의해 평가될 수 있다: 표준 51Cr-방출 검정 (참고, 예를 들면, Milone 등, Molecular Therapy 17(8): 1453-1464 (2009)). 간단히, 표적 세포 (K562 라인 및 1차 전-B-ALL 세포)는 빈번한 진탕과 함께 2 시간 동안 37 ℃에서 51Cr (NaCrO4로서, New England Nuclear)로 장입되고, 완전한 RPMI에서 2회 세정되고 미세적정 플레이트에 플레이팅된다. 효과기 T-세포는 효과기 세포: 표적 세포 (E: T)의 다양한 비로 완전한 RPMI내 웰들에서 표적 세포와 혼합된다. 배지 단독 (자발적인 방출, SR) 또는 트리톤-X 100 세제의 1% 용액 (총 방출, TR)을 함유한 추가의 웰들은 또한 제조된다. 37 ℃에서 4 시간의 인큐베이션 이후 각각의 웰들로부터 상청액은 수확된다. 방출된 51Cr은 그 다음 하기를 이용하여 측정된다: 감마 입자 카운터 (Packard Instrument Co., Waltham, Mass.). 각각의 조건은 적어도 삼중으로 수행되고, 용해의 백분율은 하기 식을 이용하여 계산된다: % 용해=(ER-SR)/(TR-SR), 여기에서 ER은 각각의 실험 조건으로 방출된 평균 51Cr을 나타낸다.
이미지형성 기술은 종양-보유 동물 모델내 TFP의 특이적 이동조절 및 증식을 평가하는데 사용될 수 있다. 상기 검정은, 예를 들면, 하기에 기재되고 있다: Barrett 등, Human Gene Therapy 22: 1575-1586 (2011). 간단히, NOD/SCID/γc-/- (NSG) 마우스는 Nalm-6 세포로 그 다음 7 일 뒤에 TFP 작제물로 전기천공 4 시간후 T-세포로 주사된다. T-세포는 개똥벌레 루시퍼라아제를 발현하기 위해 렌티바이러스 작제물로 안정적으로 형질감염되고, 마우스는 생물발광으로 화상형성된다. 대안적으로, Nalm-6 이종이식 모델에서 TFP+ T-세포의 단일 주사의 치료 효능 및 특이성은 하기와 같이 측정될 수 있다: NSG 마우스는 개똥벌레 루시퍼라아제를 안정적으로 발현하기 위해 형질도입된 Nalm-6으로, 그 다음 7 일 뒤에 CD19 TFP로 전기천공된 T-세포의 단일 꼬리-정맥 주사로 주사된다. 동물은 주사후 다양한 시점에서 화상형성된다. 예를 들어, 5 일 (치료 2 일전) 및 8 일 (TFP+ PBLs 24 시간 후)에 대표적인 마우스내 개똥벌레 루시퍼라아제 양성 백혈병의 광자-밀도 열 지도는 생성될 수 있다.
본원에서 실시예 부문에서 기재된 것 뿐만 아니라 당해 기술에 공지되어 있는 것을 포함하는, 다른 검정은 또한 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP 작제물을 평가하는데 사용될 수 있다.
치료 적용
CD19 또는 BCMA 관련된 질환 및/또는 장애
하나의 측면에서, 본 발명은 CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환의 치료 방법을 제공한다. 하나의 측면에서, 본 발명은 종양의 일부가 CD19 또는 BCMA에 음성이고 종양의 일부가 CD19 또는 BCMA에 양성인 질환의 치료 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 TFP는 CD19 또는 BCMA의 상승된 발현과 관련된 질환에 대하여 치료를 경험한 대상체의 치료에 유용하고, 여기에서 CD19 또는 BCMA의 상승된 수준에 대하여 치료를 경험한 대상체는 CD19 또는 BCMA의 상승된 수준과 관련된 질환을 나타낸다.
하나의 측면에서, 본 발명은 포유동물 T-세포내 발현용 프로모터에 작동가능하게 연결된 항-CD19 또는 BCMA TFP를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 하나의 측면에서, 본 발명은 CD19- 또는 BCMA- 발현 종양의 치료에서 사용하기 위해 CD19 또는 BCMA TFP를 발현하는 재조합 T-세포를 제공하고, 여기에서 CD19 또는 BCMA TFP를 발현하는 재조합 T-세포는 CD19 또는 BCMA TFP-T로 지칭된다. 하나의 측면에서, 본 발명의 CD19 또는 BCMA TFP-T는 그의 표면에서 발현된 본 발명의 적어도 하나의 CD19 또는 BCMA TFP와 종양 세포를 접촉할 수 있어서 TFP-T가 종양 세포를 표적하고 종양의 성장이 억제된다.
하나의 측면에서, 본 발명은, TFP-T가 항원에 대응하여 활성화되고 암 세포를 표적하도록 본 발명의 CD19 또는 BCMA TFP T-세포와 종양 세포를 접촉하는 것을 포함하는, CD19- 또는 BCMA- 발현 종양 세포의 성장 억제 방법에 관한 것으로, 여기에서 종양의 성장이 억제된다.
하나의 측면에서, 본 발명은 대상체에서 암의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암이 대상체에서 치료되도록 본 발명의 CD19 또는 BCMA TFP T-세포를 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 CD19 또는 BCMA TFP T-세포에 의해 치료가능한 암의 예는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 암이다. 하나의 측면에서, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 암은 혈액 암이다. 하나의 측면에서, 혈액 암은 백혈병 또는 림프종이다. 하나의 측면에서, CD19의 발현과 관련된 암은, 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 포함하는 암 및 악성종양을 포함한다: 하기를 포함하는 하나 이상의 급성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, B-세포 급성 림프양 백혈병 (“BALL”), T-세포 급성 림프양 백혈병 (“TALL”), 급성 림프양 백혈병 (ALL); 하기를 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프양 백혈병 (CLL). CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 추가의 암 또는 혈액성 병태는 하기를 포함한다: 비제한적으로, 예를 들면, B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증)에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 “전백혈병”, 기타 등등. 추가로 CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환은, 비제한적으로, 예를 들면, 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성종양, 전암성 병태 또는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 증식성 질환을 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들면, 본원에서 기재된, CD19 또는 BCMA TFP로 치료될 수 있는 암은 다중 골수종이다. 다중 골수종은, 골수에서 혈장 세포 클론의 축적을 특징으로 하는, 혈액의 암이다. 다중 골수종에 대한 현행 요법은, 비제한적으로, 탈리도마이드의 유사체인, 레날리도마이드를 이용한 치료를 포함한다. 레날리도마이드는 항-종양 활성, 혈관신생 억제, 및 면역조절을 포함하는 활성을 갖는다. 일반적으로, 골수종 세포는 유세포측정에 의해 CD19 또는 BCMA 발현에 대하여 음성인 것으로 여겨진다. 본 발명은 골수종 종양 세포의 작은 퍼센트가 CD19 또는 BCMA를 발현한다는 인식을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같이, C19 또는 BCMA TFP는 골수종 세포를 표적하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CD19 또는 BCMA TFP 요법은 하나 이상의 추가 요법, 예를 들면, 레날리도마이드 치료와 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명은 T-세포가 TFP를 발현하기 위해 유전자 변형되고 TFP-발현 T-세포가 필요로 하는 수령체에 주입되는 세포 요법의 한 유형을 포함한다. 주입된 세포는 수령체에서 종양 세포를 사멸시킬 수 있다. 항체 요법과 달리, TFP-발현 T-세포는 생체내 복제할 수 있어서 지속된 종양 대조군으로 이어질 수 있는 장기 지속성을 초래한다. 다양한 측면에서, 환자에 투여된 T-세포, 또는 그의 자손은 환자에 T-세포의 투여 이후 적어도 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 12 개월, 13 개월, 14 개월, 15 개월, 16 개월, 17 개월, 18 개월, 19 개월, 20 개월, 21 개월, 22 개월, 23 개월, 2 년, 3 년, 4 년, 또는 5 년 동안 환자에서 지속한다.
본 발명은 또한, T-세포가 TFP를 일시적으로 발현하기 위해, 예를 들면, 시험관내 전사된 RNA에 의해 변형되고 TFP-발현 T-세포가 필요로 하는 수령체에 주입되는 세포 요법의 한 유형을 포함한다. 주입된 세포는 수령체에서 종양 세포를 사멸시킬 수 있다. 따라서, 다양한 측면에서, 환자에 투여된 T-세포는 환자에 T-세포의 투여 이후, 1 개월 미만, 예를 들면, 3 주, 2 주, 또는 1 주 동안 존재한다.
임의의 특정한 이론에 의해 구속됨의 바람 없이, TFP-발현 T-세포에 의해 유발된 항-종양 면역력 반응은 능동적 또는 수동적 면역 반응일 수 있거나, 대안적으로 직접적 대 간접적 면역 반응에 기인될 수 있다. 하나의 측면에서, TFP 형질도입된 T-세포는 CD19 또는 BCMA 항원을 발현하는 인간 암 세포에 대응하여 특이적 전염증 사이토카인 분비 및 강력한 세포용해 활성을 나타내고, 가용성 CD19 및 BCMA 억제를 대항하고, 방관자 사멸을 매개하고 확립된 인간 종양의 퇴행을 매개한다. 예를 들어, CD19-발현 또는 BCMA-발현 종양의 불균일 영역 이내 항원이 없는 종양 세포는 인접한 항원-양성 암 세포에 대해 이전에 반응된 CD19-재유도된 또는 BCMA-재유도된 T-세포에 의한 간접적인 파괴에 민감할 수 있다.
하나의 측면에서, 본 발명의 인간 TFP-변형된 T-세포는 포유동물에서 생체외 면역화 및/또는 생체내 요법을 위한 백신의 한 유형일 수 있다. 하나의 측면에서, 포유동물은 인간이다.
생체외 면역화에 관하여, 하나 이상의 하기가 포유동물 속에 세포 투여에 앞서 시험관내 발생한다: i) 세포의 팽창, ii) 세포에 TFP를 인코딩하는 핵산의 도입 또는 iii) 세포의 동결보존.
생체외 절차는 당해 기술에서 잘 알려지고 아래 더욱 충분히 논의된다. 간단히, 세포는 포유동물 (예를 들면, 인간)으로부터 단리되고 본원에서 개시된 TFP를 발현하는 벡터로 유전자 변형된다 (즉, 시험관내 형질도입 또는 형질감염된다). TFP-변형된 세포는 치료 이점을 제공하기 위해 포유동물 수령체에 투여될 수 있다. 포유동물 수령체는 인간일 수 있고 TFP-변형된 세포는 수령체에 관하여 자가적일 수 있다. 대안적으로, 세포는 수령체에 관하여 동종이계, 동계 또는 이종계일 수 있다.
조혈 모세포 및 조상 세포의 생체외 팽창에 대한 절차는 하기에 기재된다: 미국 특허 번호 5,199,942 (본원에서 참고로 편입되고, 본 발명의 세포에 적용될 수 있다). 다른 적합한 방법은 당해 기술에 공지되어 있고, 따라서 본 발명은 비제한적으로 세포의 생체외 팽창의 임의의 특정한 방법이다. 간단히, T-세포의 생체외 배양 및 팽창은 하기를 포함한다: (1) 말초 혈액 채집 또는 골수 외식편으로부터 포유동물에서 CD34+ 조혈 모세포 및 조상 세포 수집; 및 (2) 생체외 상기 세포 팽창. 하기에 기재된 세포 성장 인자에 더하여: 미국 특허 번호 5,199,942, 다른 인자 예컨대 flt3-L, IL-1, IL-3 및 c-키트 리간드는 세포의 배양 및 팽창에 사용될 수 있다.
생체외 면역화에 관한 세포-기반 백신 이용에 더하여, 본 발명은 또한 환자에서 항원에 관한 면역 반응을 유도하기 위한 생체내 면역화를 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
일반적으로, 본원에서 기재된 바와 같이 활성화된 및 팽창된 세포는 면역저하되는 개체에서 일어나는 질환의 치료 및 예방에서 이용될 수 있다. 특히, 본 발명의 TFP-변형된 T-세포는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환, 장애 및 병태의 치료에서 사용된다. 특정 측면에서, 본 발명의 세포는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환, 장애 및 병태의 발생 위험이 있는 환자의 치료에서 사용된다. 따라서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에 본 발명의 TFP-변형된 T-세포의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환, 장애 및 병태의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
하나의 측면에서 본 발명의 TFP-T-세포는 증식성 질환 예컨대 암 또는 악성종양을 치료하기 위해 사용될 수 있거나 전암성 병태 예컨대 골수이형성증, 골수이형성 증후군 또는 전백혈병이다. 하나의 측면에서, 암은 혈액 암이다. 하나의 측면에서, 혈액 암은 백혈병 또는 림프종이다. 하나의 측면에서, 본 발명의 TFP-T-세포는 암 및 악성종양 예컨대, 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 치료하기 위해 사용될 수 있다: 하기를 포함하는 급성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, B-세포 급성 림프양 백혈병 (“BALL”), T-세포 급성 림프양 백혈병 (“TALL”), 급성 림프양 백혈병 (ALL); 하기를 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 하기를 포함하는 추가의 혈액성 암 또는 혈액성 병태: 비제한적으로, 예를 들면, B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증)에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 “전백혈병”, 기타 등등. 추가로 CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환은, 비제한적으로, 예를 들면, 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성종양, 전암성 병태 또는 CD19 또는 BCMA를 발현하는 증식성 질환을 포함한다. CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 비-암 관련된 징후는, 비제한적으로, 예를 들면, 자가면역 질환, (예를 들면, 낭창), 염증성 장애 (알러지 및 천식) 및 이식을 포함한다.
본 발명의 TFP-변형된 T-세포는 단독으로, 또는 희석제 및/또는 다른 성분 예컨대 IL-2 또는 다른 사이토카인 또는 세포 집단과 조합으로 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다.
혈액성 암
혈액 암 병태는 혈액, 골수 및 림프 시스템에 영향을 주는 암의 유형 예컨대 백혈병 및 악성 림프증식성 병태이다.
백혈병은 급성 백혈병 및 만성 백혈병으로서 분류될 수 있다. 급성 백혈병은 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 급성 림프양 백혈병 (ALL)으로서 추가로 분류될 수 있다. 만성 백혈병은 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 만성 림프양 백혈병 (CLL)을 포함한다. 다른 관련된 병태는 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증) 에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 골수이형성 증후군 (MDS, “전백혈병”으로서 예전에 공지됨) 및 AML로의 전환의 위험을 포함한다.
본 발명은 암 치료를 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 하나의 측면에서, 암은 비제한적으로 혈액 암이 백혈병 또는 림프종인 것을 포함하는 혈액성 암이다. 하나의 측면에서, 본 발명의 TFP-T-세포는 암 및 악성종양 예컨대, 비제한적으로, 예를 들면, 하기를 치료하기 위해 사용될 수 있다: 하기를 포함하는 급성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, B-세포 급성 림프양 백혈병 (“BALL”), T-세포 급성 림프양 백혈병 (“TALL”), 급성 림프양 백혈병 (ALL); 하기를 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병: 비제한적으로, 예를 들면, 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 하기를 포함하는 추가의 혈액성 암 또는 혈액성 병태: 비제한적으로, 예를 들면, B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 효과없는 생산 (또는 이형성증)에 의해 연합된 혈액 병태의 다양한 수집인 “전백혈병”, 기타 등등. 추가로 CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환은, 비제한적으로, 예를 들면, 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성종양, 전암성 병태 또는 CD19 또는 BCMA를 발현하는 증식성 질환을 포함한다.
본 발명은 또한 CD19- 또는 BCMA-발현 세포 집단의 증식 억제 또는 감소 방법을 제공하고, 상기 방법은 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포와 CD19- 또는 BCMA-발현 세포를 포함하는 세포 집단의 접촉을 포함한다. 한 특이적 측면에서, 본 발명은 CD19 또는 BCMA를 발현하는 암 세포의 집단의 증식 억제 또는 감소 방법을 제공하고, 상기 방법은 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포와 CD19- 또는 BCMA-발현 암 세포 집단의 접촉을 포함한다. 하나의 측면에서, 본 발명은 CD19 또는 BCMA를 발현하는 암 세포의 집단의 증식 억제 또는 감소 방법을 제공하고, 상기 방법은 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포와 CD19- 또는 BCMA-발현 암 세포 집단의 접촉을 포함한다. 특정 측면에서, 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포는 음성 대조군에 비하여 CD19- 또는 BCMA-발현 세포와 관련된 또 다른 암 또는 골수 백혈병을 가진 대상체 및 상기에 대한 동물 모델에서 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 95%, 및 적어도 99% 만큼 세포 및/또는 암 세포의 수량, 수, 양 또는 백분율을 감소시킨다. 하나의 측면에서, 대상체는 인간이다.
본 발명은 또한 CD19- 또는 BCMA-발현 세포와 관련된 질환 (예를 들면, CD19 또는 BCMA를 발현하는 혈액성 암 또는 비정형 암)의 예방, 치료 및/또는 관리 방법을 제공하고, 상기 방법은 필요한 대상체에 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포의 투여를 포함한다. 하나의 측면에서, 대상체는 인간이다. CD19- 또는 BCMA-발현 세포와 관련된 장애의 비-제한 예는 자가면역 장애 (예컨대 낭창), 염증성 장애 (예컨대 알러지 및 천식) 및 암 (예컨대 CD19 또는 BCMA를 발현하는 혈액 암 또는 비정형 암)을 포함한다.
본 발명은 또한 CD19- 또는 BCMA-발현 세포와 관련된 질환의 예방, 치료 및/또는 관리 방법을 제공하고, 상기 방법은 필요한 대상체에 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포의 투여를 포함한다. 하나의 측면에서, 대상체는 인간이다.
본 발명은 CD19- 또는 BCMA-발현 세포와 관련된 암의 재발 예방 방법을 제공하고, 상기 방법은 필요로 하는 대상체에 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본 발명의 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포의 투여를 포함한다. 하나의 측면에서, 상기 방법은 필요로 하는 대상체에 또 다른 요법의 유효량과 조합으로 CD19- 또는 BCMA-발현 세포에 결합하는 본원에서 기재된 항-CD19 또는 항-BCMA TFP-T-세포의 유효량의 투여를 포함한다.
조합 요법
본원에서 기재된 TFP-발현 세포는 다른 공지된 제제 및 요법과 조합으로 사용될 수 있다. “조합으로” 투여된다는 것은, 본원에서 사용된 바와 같이, 2 (이상) 상이한 치료가 장애를 가진 대상체의 고통 과정 동안 대상체에 전달되는 것, 예를 들면, 대상체가 장애를 가진 것으로 진단된 이후 그리고 장애가 치유되거나 제거되기 이전 또는 치료가 다른 이유로 중단되기 이전 2 이상의 치료가 전달되는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 제2 치료의 전달이 시작하는 때 여전히 발생하고, 따라서 투여에 관하여 중복이 있다. 이는 때때로 본원에서 “동시” 또는 “동반 전달”로서 지칭된다. 다른 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작하기 전에 끝난다. 어느 한 경우의 일부 구현예에서, 치료는 조합된 투여 때문에 더욱 효과적이다. 예를 들어, 제2 치료는 더욱 효과적이고, 예를 들면, 동등 효과는 제2 치료의 소량으로 보여지거나, 제2 치료는, 제2 치료가 제1 치료의 부재하에 투여된 경우 보이는 것보다, 더 큰 정도로 증상을 감소시키거나 유사한 상황은 제1 치료로 보여진다. 일부 구현예에서, 전달은 증상, 또는 장애와 관련된 다른 파라미터에서의 감소가 다른 것의 부재하에 전달된 하나의 치료로 관측된 것 초과인 정도이다. 2개 치료의 효과는 부분적으로 부가적, 전체적으로 부가적, 또는 부가적 초과일 수 있다. 전달은 전달된 제1 치료의 효과가 제2 치료가 전달되는 경우 여전히 검출가능한 정도일 수 있다.
일부 구현예에서, “적어도 하나의 추가의 치료제”는 TFP-발현 세포를 포함한다. 동일한 또는 상이한 표적 항원, 또는 동일한 표적 항원에서 동일한 또는 상이한 에피토프에 결합하는, 다중 TFP를 발현하는 T-세포가 또한 제공된다. T-세포의 제1 서브셋이 제1 TFP를 발현하고 T-세포의 제2 서브셋이 제2 TFP를 발현하는 T-세포의 집단이 또한 제공된다.
본원에서 기재된 TFP-발현 세포 및 적어도 하나의 추가의 치료제는 동시에, 동일한 또는 별개의 조성물에서, 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여를 위하여, 본원에서 기재된 TFP-발현 세포가 첫번째로 투여될 수 있고, 추가의 제제가 두번째로 투여될 수 있거나, 투여의 순서는 역전될 수 있다.
추가 측면에서, 본원에서 기재된 TFP-발현 세포는 하기와 조합으로 치료 레지멘에서 사용될 수 있다: 수술, 화학요법, 방사선, 면역억제성 제제, 예컨대 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 마이코페놀레이트, 및 FK506, 항체, 또는 다른 면역절제 제제 예컨대 CAMPATH, 항-CD3 항체 또는 다른 항체 요법, 사이톡신, 플루다라빈, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀산, 스테로이드, FR901228, 사이토카인, 및 조사. 펩타이드 백신, 예컨대 하기에 기재된 것: Izumoto 등 2008 J Neurosurg 108: 963-971.
하나의 구현예에서, 대상체는 TFP-발현 세포의 투여와 관련된 부작용 감소 또는 완화시키는 제제가 투여될 수 있다. TFP-발현 세포의 투여와 관련된 부작용은, 비제한적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 및 혈구탐식성림프조직구증 (HLH), 또한 일명 대식세포 활성화 증후군 (MAS)을 포함한다. CRS의 증상은 고열, 메스꺼움, 일시적 저혈압, 저산소증, 기타 등등을 포함한다. 따라서, 본원에서 기재된 방법은 대상체에 본원에서 기재된 TFP-발현 세포 투여 및 TFP-발현 세포로 치료에서 비롯한 가용성 인자의 상승된 수준을 관리하기 위한 제제의 추가 투여를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 대상체에서 상승된 가용성 인자는 하나 이상의 IFN-γ, TNFα, IL-2 및 IL-6이다. 따라서, 상기 부작용을 치료하기 위해 투여된 제제는 하나 이상의 이들 가용성 인자를 중화시키는 제제일 수 있다. 상기 제제는, 비제한적으로 스테로이드, TNFα의 억제제, 및 IL-6의 억제제를 포함한다. TNFα 억제제의 예는 엔타네르셉트(entanercept)이다. IL-6 억제제의 예는 토실리주맙 (toc)이다.
하나의 구현예에서, 대상체는 TFP-발현 세포의 활성을 향상시키는 제제가 투여될 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 제제는 억제 분자를 억제하는 제제일 수 있다. 억제 분자, 예를 들면, 프로그래밍된 사망 1 (PD1)은, 일부 구현예에서, 면역 효과기 반응을 탑재하기 위해 TFP-발현 세포의 능력을 감소시킬 수 있다. 억제 분자의 예는 PD1, PD-L1, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및 TGFR 베타를 포함한다. 예를 들면, DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 억제에 의한, 억제 분자의 억제는 TFP-발현 세포 성능을 최적화시킬 수 있다. 구현예에서, 억제 핵산, 예를 들면, 억제 핵산, 예를 들면, dsRNA, 예를 들면, siRNA 또는 shRNA는 TFP-발현 세포에서 억제 분자의 발현을 억제하는데 사용될 수 있다. 한 구현예에서 억제제는 shRNA이다. 한 구현예에서, 억제 분자는 TFP-발현 세포 이내 억제된다. 이들 구현예에서, 억제 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자는 성분, 예를 들면, TFP의 모든 성분을 인코딩하는 핵산에 연결된다. 하나의 구현예에서, 억제 신호의 억제제는, 예를 들면, 억제 분자에 결합하는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 예를 들어, 제제는 하기에 결합하는 항체 또는 항체 단편일 수 있다: PD1, PD-L1, PD-L2 또는 CTLA4 (예를 들면, 이필리무맙 (또한 MDX-010 및 MDX-101로 지칭되고, 예르보이(Yervoy) TM; 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb); 트레멜리무맙(Tremelimumab) (틸실리무맙, CP-675,206으로서 예전에 공지된, Pfizer로부터 이용가능한 IgG2 단클론성 항체)로서 시판됨). 한 구현예에서, 제제는 TIM3에 결합하는 항체 또는 항체 단편이다. 한 구현예에서, 제제는 LAG3에 결합하는 항체 또는 항체 단편이다.
일부 구현예에서, TFP-발현 세포의 활성을 향상시키는 제제는, 예를 들면, 제1 도메인 및 제2 도메인을 포함하는 융합 단백질일 수 있고, 여기에서 제1 도메인은 억제 분자, 또는 그의 단편이고, 제2 도메인은 양성 신호와 관련되는 폴리펩타이드, 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같이 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 양성 신호와 관련되는 폴리펩타이드는 CD28, CD27, ICOS의 공자극 도메인, 예를 들면, CD28, CD27 및/또는 ICOS의 세포내 신호전달 도메인, 및/또는 본원에서 기재된, 예를 들면, CD3 제타의, 예를 들면, 1차 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 융합 단백질은 TFP를 발현한 동일한 세포에 의해 발현된다. 또 다른 구현예에서, 융합 단백질은 세포, 예를 들면, 항-CD19 TFP를 발현하지 않는 T-세포에 의해 발현된다.
약제학적 조성물
본 발명의 약제학적 조성물은 TFP-발현 세포, 예를 들면, 복수의 TFP-발현 세포를, 본원에서 기재된 바와 같이, 하나 이상의 약제학적으로 또는 생리적으로 허용가능한 캐리어, 희석제 또는 부형제와 조합으로 포함할 수 있다. 상기 조성물은 완충액 예컨대 중성 완충된 염수, 포스페이트 완충된 염수 기타 등등; 탄수화물 예컨대 글루코스, 만노스, 수크로오스 또는 덱스트란, 만니톨; 단백질; 폴리펩타이드 또는 아미노산 예컨대 글리신; 산화방지제; 킬레이트제 예컨대 EDTA 또는 글루타티온; 아쥬반트 (예를 들면, 알루미늄 수산화물); 및 보존제를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 하나의 측면에서 정맥내 투여를 위하여 제형화된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 치료되는 (또는 예방되는) 질환에 적절한 방식으로 투여될 수 있다. 적절한 복용량이 임상시험에 의해 결정될 수 있어도, 투여의 수량 및 빈도는 환자의 병태, 및 환자의 질환의 유형 및 중증도와 같은 인자에 의해 결정될 것이다.
하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 오염물질이 실질적으로 없고, 예를 들면, 내독소, 마이코플라스마, 복제 가능 렌티바이러스 (RCL), p24, VSV-G 핵산, HIV gag, 잔류 항-CD3/항-CD28 코팅된 비드, 마우스 항체, 풀링된 인간 혈청, 소 혈청 알부민, 소 혈청, 배양 배지 성분, 벡터 패키징 세포 또는 플라스미드 성분, 박테리움 및 진균으로 구성된 군으로부터 선택되는, 예를 들면, 오염물질의 검출가능한 수준이 없다. 하나의 구현예에서, 박테리움은 알칼리게네스 파에칼리스, 칸디다 알비칸스, 에스케리치아 콜라이, 헤모필루스 인플루엔자, 나이세리아 메닝자이티데스, 슈도모나스 에어루기노사, 스타필로코쿠스 아우레스, 연쇄상구균 폐렴, 및 연쇄상구균 파이오제네스 그룹 A로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.
“면역학적 유효량”, “항-종양 유효량”, “종양-억제 유효량”, 또는 “치료량”이 표시되는 경우, 투여되는 본 발명의 조성물의 정밀량은 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이의 정도, 및 환자 (대상체)의 병태에서 개별적인 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 본원에서 기재된 T-세포를 포함하는 약제학적 조성물이, 그 범위 이내 모든 정수 값을 포함하는, 104 내지 109 세포/kg 체중의 복용량, 일부 경우에서 105 내지 106 세포/kg 체중으로 투여될 수 있다는 것이 일반적으로 언급될 수 있다. T-세포 조성물은 또한 이들 복용량으로 다중 횟수로 투여될 수 있다. 세포는 하기에 통상적으로 공지되는 주입 기술을 이용함으로써 투여될 수 있다: 면역요법 (참고, 예를 들면, Rosenberg 등, New Eng. J. of Med. 319: 1676, 1988).
특정 측면에서, 대상체에 활성화된 T-세포를 투여하고 그 다음 이어서 채혈하고 (또는 분리반출법 수행하였고), 본 발명에 따라 거기로부터 T-세포를 활성화하고, 이들 활성화된 및 팽창된 T-세포로 환자에 재주입하는 것이 요망될 수 있다. 상기 과정은 몇 주 마다 다중 횟수 수행될 수 있다. 특정 측면에서, T-세포는 10 cc 내지 400 cc의 채혈로부터 활성화될 수 있다. 특정 측면에서, T-세포는 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc, 또는 100 cc의 채혈로부터 활성화된다.
주제 조성물의 투여는, 에어로졸 흡입, 주사, 섭취, 수혈, 이식(implantation) 또는 이식(transplantation)을 포함하는, 임의의 편리한 방식으로 수행될 수 있다. 본원에서 기재된 조성물은 환자에 경동맥으로, 피하로, 진피내로, 종양내로, 결절내로, 수질내, 근육내로, 정맥내 (i.v.) 주사로, 또는 복강내로 투여될 수 있다. 하나의 측면에서, 본 발명의 T-세포 조성물은 환자에 진피내 및 피하 주사로 투여된다. 하나의 측면에서, 본 발명의 T-세포 조성물은 i.v. 주사로 투여된다. T-세포의 조성물은 종양, 림프절, 또는 감염의 부위에 직접적으로 주사될 수 있다.
특정한 예시적 측면에서, 대상체는 백혈구분리반출법을 경험할 수 있고, 여기에서 백혈구는 하기를 선택 및/또는 단리시키기 위해 생체외 수집, 농축, 또는 감손된다: 관심 세포, 예를 들면, T-세포. 이들 T-세포는 당해 기술에 공지된 방법에 의해 팽창될 수 있고 본 발명의 하나 이상의 TFP 작제물이 도입될 수 있어서, 이로써 본 발명의 TFP-발현 T-세포를 창출하도록 치료될 수 있다. 필요로 하는 대상체는 이어서 고용량 화학요법으로 표준 치료 그 다음 말초 혈액 줄기 세포 이식을 경험할 수 있다. 특정 측면에서, 이식 이후 또는 이식과 동반하여, 대상체는 본 발명의 팽창된 TFP T-세포의 주입을 받는다. 추가의 측면에서, 팽창된 세포는 수술 이전 또는 이후 투여된다.
환자에 투여되는 상기 치료의 복용량은 치료받는 정확한 병태의 본성 및 치료의 수령체에 의해 다양할 것이다. 인간 투여를 위한 복용량의 스케일링은 기술-허용된 실시에 따라 수행될 수 있다. CAMPATH용 용량은, 예를 들어, 1 내지 30 일 기간 동안 일반적으로 매일 투여된, 성인 환자에 대하여 일반적으로 1 내지 약 100 mg 범위일 것이다. 일부 경우에서 최대 40 mg / 일의 더 큰 용량이 사용될 수 있어도 바람직한 1일 용량은 1 내지 10 mg / 일이다 (하기에 기재됨: 미국 특허 번호 6,120,766).
하나의 구현예에서, TFP는, 예를 들면, 시험관내 전사를 이용하여, T-세포 속에 도입되고, 대상체 (예를 들면, 인간)은 본 발명의 TFP T-세포의 초기 투여, 및 본 발명의 TFP T-세포의 하나 이상의 차후의 투여를 받고, 여기에서 하나 이상의 차후의 투여는 하기 투여된다: 15 일 미만, 예를 들면, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2 일 (이전의 투여 이후). 하나의 구현예에서, 본 발명의 TFP T-세포의 1 초과 투여는 주마다 대상체 (예를 들면, 인간)에 투여되고, 예를 들면, 본 발명의 TFP T-세포의 2, 3, 또는 4 투여가 주마다 투여된다. 하나의 구현예에서, 대상체 (예를 들면, 인간 대상체)는 하기마다 TFP T-세포의 1 초과 투여를 받고: 주 (예를 들면, 2, 3 또는 4 투여 / 주) (또한 본원에서 사이클로서 지칭됨), 그 다음 무 TFP T-세포 투여의 1 주, 및 그 다음 TFP T-세포의 하나 이상의 추가 투여 (예를 들면, 주마다 TFP T-세포의 1 초과 투여)가 대상체에 투여된다. 또 다른 구현예에서, 대상체 (예를 들면, 인간 대상체)는 TFP T-세포의 1 초과 사이클을 받고 각각의 사이클 사이 시간은 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3 일 미만이다. 하나의 구현예에서, TFP T-세포는 주마다 3 투여로 하루 걸러 투여된다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 TFP T-세포는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 주 또는 초과 동안 투여된다.
하나의 측면에서, CD19 TFP T-세포는 렌티바이러스 바이러스성 벡터, 예컨대 렌티바이러스를 이용하여 생성된다. 그 방식으로 생성된 TFP-T-세포는 안정적인 TFP 발현을 가질 것이다.
하나의 측면에서, TFP T-세포는 형질도입 이후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 일 동안 TFP 벡터를 일시적으로 발현한다. TFP의 일시적 발현은 RNA TFP 벡터 전달에 의해 영향받을 수 있다. 하나의 측면에서, TFP RNA는 전기천공에 의해 T-세포 속에 형질도입된다.
일시적으로 발현하는 TFP T-세포를 이용하여 (특히 쥣과 scFv 보유 TFP T-세포로) 치료받는 환자에서 일어날 수 있는 잠재적인 사안은 다중 치료 이후 과민증이다.
상기 이론에 구속됨 없이, 그와 같은 과민성 반응이 체액성 항-TFP 반응, 즉, 항-IgE 아이소타입을 갖는 항-TFP 항체를 발생하는 환자에 의해 야기될 수 있다고 여겨진다. 환자의 항체 생산 세포가 항원에 노출에서 10 내지 14 일 중단이 있는 경우 (과민증을 유발시키지 않는) IgG 아이소타입에서 IgE 아이소타입으로 부류 스위치를 경험한다고 생각된다.
환자가 일시적 TFP 요법 (예컨대 RNA 형질도입에 의해 생성된 것)의 과정 동안 항-TFP 항체 반응 생성의 고위험에 있으면, TFP T-세포 주입 중단은 10 내지 14 일 초과 지속되지 않아야 한다.
실시예
본 발명은 하기 실험적 실시예를 참고로 상세히 추가로 기재된다. 이들 실시예는 단지 실례의 목적으로 제공되고, 달리 구체화되지 않는 한 제한되도록 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명은 하기 실시예에 제한되는 것으로 결코 해석되지 않아야 하고, 오히려, 본원에서 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 및 모든 변동을 포함하도록 해석되어야 한다. 추가 설명 없이, 당해 분야의 숙련가가, 이전의 설명 및 하기 예시적인 실시예를 이용하여, 본 발명의 화합물을 제조 및 이용할 수 있고 청구된 방법을 실시할 수 있다고 여겨진다. 하기 작업 실시예는 본 발명의 다양한 측면을 구체적으로 언급하고, 본 개시내용의 나머지를 어떤 식으로든 제한으로서 해석되지 않아야 한다.
실시예 1: TFP 작제물
항-CD19 TFP 작제물은 하기를 인코딩하는 어느 하나의 DNA 서열에 의해 CD3 또는 TCR DNA 단편에 연결된 항-CD19 scFv DNA 단편의 클로닝에 의해 조작되었다: 짧은 링커 (SL): AAAGGGGSGGGGSGGGGSLE (서열 식별 번호: 5) 또는 긴 링커 (LL): AAAIEVMYPPPYLGGGGSGGGGSGGGGSLE (서열 식별 번호: 6) (XbaI 및 EcoR1 부위에서 p510 벡터 ((System Biosciences (SBI)) 속에).
생성된 항-CD19 TRuC 작제물은 하기이었다: p510_항CD19_LL_TCRα (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 전장 T 세포 수용체 α 쇄), p510_항CD19_LL_TCR αC (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 T 세포 수용체 α 불변 도메인 쇄), p510_항CD19_LL_TCRβ (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 전장 T 세포 수용체 β 쇄), p510_항CD19_LL_TCRβC (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 T 세포 수용체 β 불변 도메인 쇄), p510_항CD19_LL_CD3γ (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 CD3γ 쇄), p510_항CD19_LL_CDδ (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 CDδ 쇄), p510_항CD19_LL_CD3ε (항-CD19 scFv - 긴 링커- 인간 CD3ε 쇄), p510_항CD19_SL_TCRβ (항-CD19 scFv - 짧은 링커- 인간 전장 T 세포 수용체 β 쇄), p510_항CD19_SL_CD3γ (항-CD19 scFv - 짧은 링커- 인간 CD3γ 쇄), p510_항CD19_SL_CDδ (항-CD19 scFv - 짧은 링커- 인간 CDδ 쇄), p510_항CD19_SL_CD3ε (항-CD19 scFv - 짧은 링커- 인간 CD3ε 쇄).
항-CD19 CAR 작제물, p510_항CD19_28ζ는 XbaI 및 EcoR1 부위에서 p510 벡터 속에 항-CD19, 부분적인 CD28 세포외 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인 및 CD3 제타를 인코딩하는 합성된 DNA의 클로닝에 의해 생성되었다.
항-BCMA TFP 작제물은 하기를 인코딩하는 DNA 서열에 의해 CD3 DNA 단편에 연결된 항-BCMA scFv DNA 단편의 클로닝에 의해 조작되었다: 링커: GGGGSGGGGSGGGGSLE (서열 식별 번호: 7) XbaI 및 EcoR1 부위에서 p510 벡터 (SBI) 속에. 생성된 항-BCMA TFP 작제물은 p510_항BCMA_CD3γ (항-BCMA scFv - 링커- 인간 CD3γ쇄) 및 p510_항BCMA_CD3ε (항-BCMA scFv - 링커- 인간 CD3ε쇄)이었다.
전장 BCMA는, 안정적인 표적 세포주를 생성하는데 사용된, 작제물 p514_BCMA를 생성하기 위해 BamHI 및 NheI 부위에서 p514 (SBI) 속에 합성 및 클로닝되었다.
항-섬유아세포 활성화 단백질 (FAP) 및 항-카보안하이드라제-9 (CAIX) TFP 작제물은 하기를 인코딩하는 DNA 서열에 의해 CD3 DNA 단편에 연결된 항-FAP 또는 항-CAIX scFv DNA 단편의 클로닝에 의해 조작된다: 링커: GGGGSGGGGSGGGGSLE (서열 식별 번호: 7) XbaI 및 EcoR1 부위에서 p510 벡터 (SBI) 속에. 생성될 수 있는 항-FAP 또는 항-CAIX TFP 작제물은 p510_항FAP_CD3γ (항-FAP scFv - 링커-인간 CD3γ쇄) 및 p510_항FAP _CD3ε (항-FAP scFv - 링커- 인간 CD3ε쇄) 및 p510_항CAIX _CD3γ (항-CAIX scFv - 링커-인간 CD3γ쇄) 및 p510_항CAIX _CD3ε (항-CAIX scFv - 링커- 인간 CD3ε쇄)를 포함한다.
전장 FAP 및 CAIX는, 안정적인 표적 세포주를 생성하는데 사용될 수 있는, 작제물 p514_FAP 및 p514_CAIX를 생성하기 위해 BamHI 및 NheI 부위에서 p514 (SBI) 속에 합성 및 클로닝될 수 있다.
예시적 작제물 서열은 아래 보여진다:
작제물 서열
표적 작제물
P514_BCMA (서열 식별 번호: 8)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacataa acgggtctct
241 ctggttagac cagatctgag cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa
301 gcctcaataa agcttgcctt gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc
361 tggtaactag agatccctca gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtggcgc
421 ccgaacaggg acctgaaagc gaaagggaaa ccagagctct ctcgacgcag gactcggctt
481 gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg
541 actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga
601 attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta
661 aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta
721 gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga
781 tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg
841 atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt
901 aagaccaccg cacagcaagc ggccactgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga
961 caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc
1021 acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc
1081 tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct
1141 gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag
1201 ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca
1261 ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg
1321 ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa
1381 atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagctagcg ccgccaccat gctccagatg gctggccagt gcagccagaa cgagtacttc
2341 gacagcctgc tgcacgcctg catcccttgc cagctgcggt gcagcagcaa caccccaccc
2401 ctgacctgcc agcggtactg caacgccagc gtgaccaaca gcgtgaaggg caccaacgcc
2461 atcctgtgga cctgcctggg cctgagcctg atcatcagcc tggccgtgtt cgtgctgatg
2521 ttcctgctgc ggaagatcaa cagcgagccc ctgaaggacg agttcaagaa caccggcagc
2581 ggcctgctgg gcatggccaa catcgacctg gaaaagagcc ggaccggcga cgagatcatc
2641 ctgcccagag gcctggagta caccgtggaa gagtgtacct gcgaggactg catcaagagc
2701 aagcccaagg tggacagcga ccactgcttc cctctgcccg ccatggaaga gggcgccacc
2761 atcctggtga caacaaagac caacgactac tgcaagagcc tgcctgccgc cctgagcgcc
2821 accgagatcg agaagtccat cagcgccaga tgaggatccg cggccgcaag gatctgcgat
2881 cgctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca cagtccccga gaagttgggg
2941 ggaggggtcg gcaattgaac gggtgcctag agaaggtggc gcggggtaaa ctgggaaagt
3001 gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg gagaaccgta tataagtgca
3061 gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg ccagaacaca gctgaagctt
3121 cgaggggctc gcatctctcc ttcacgcgcc cgccgcccta cctgaggccg ccatccacgc
3181 cggttgagtc gcgttctgcc gcctcccgcc tgtggtgcct cctgaactgc gtccgccgtc
3241 taggtaagtt taaagctcag gtcgagaccg ggcctttgtc cggcgctccc ttggagccta
3301 cctagactca gccggctctc cacgctttgc ctgaccctgc ttgctcaact ctacgtcttt
3361 gtttcgtttt ctgttctgcg ccgttacaga tccaagctgt gaccggcgcc tacgtcgaga
3421 tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg
3481 gctatgactg ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag
3541 cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc
3601 aggacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg ccgcgacggg cgttccttgc gcagctgtgc
3661 tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg
3721 atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc
3781 ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca
3841 tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag
3901 agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg
3961 gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg
4021 gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca
4081 tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc
4141 tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg
4201 acgagttctt ctgactcgac aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg
4261 gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt
4321 atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc
4381 tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt
4441 ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga
4501 ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct
4561 gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat
4621 cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct
4681 gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc
4741 tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg
4801 cctccccgcc tggtaccttt aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac
4861 tttttaaaag aaaagggggg actggaaggg ctaattcact cccaacgaag ataagatctg
4921 ctttttgctt gtactgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc
4981 taactaggga acccactgct taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaagtagtg
5041 tgtgcccgtc tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt ttagtcagtg
5101 tggaaaatct ctagcagtag tagttcatgt catcttatta ttcagtattt ataacttgca
5161 aagaaatgaa tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa
5221 taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt
5281 ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc tctagctatc ccgcccctaa
5341 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
5401 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
5461 agtgaggagg cttttttgga ggcctagact tttgcagaga cggcccaaat tcgtaatcat
5521 ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag
5581 ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg
5641 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
5701 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca
5761 ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg
5821 taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc
5881 agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc
5941 cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac
6001 tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc
6061 tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata
6121 gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc
6181 acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca
6241 acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag
6301 cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta
6361 gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg
6421 gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc
6481 agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt
6541 ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
6601 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
6661 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
6721 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
6781 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
6841 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
6901 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
6961 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
7021 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
7081 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
7141 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
7201 tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat
7261 agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac
7321 atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa
7381 ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt
7441 cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg
7501 caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat
7561 attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt
7621 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct
7681 aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc
7741 gtctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg
7801 tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg
7861 gtgttggcgg gtgtcggggc tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag
7921 tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc
7981 gccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc
8041 tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag
8101 ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtgc caagctg.
CAR 작제물
p510_항CD19_28z (서열 식별 번호: 9)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc tagacaatga gaagagcaat ggaaccatta tccatgtgaa agggaaacac
3181 ctttgtccaa gtcccctatt tcccggacct tctaagccct tttgggtgct ggtggtggtt
3241 gggggagtcc tggcttgcta tagcttgcta gtaacagtgg cctttattat tttctgggtg
3301 aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc
3361 gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc
3421 tccagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag
3481 ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt
3541 ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac
3601 aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag
3661 cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac
3721 acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgct aagaattcgg atccgcggcc
3781 gcgaaggatc tgcgatcgct ccggtgcccg tcagtgggca gagcgcacat cgcccacagt
3841 ccccgagaag ttggggggag gggtcggcaa ttgaacgggt gcctagagaa ggtggcgcgg
3901 ggtaaactgg gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt tttcccgagg gtgggggaga
3961 accgtatata agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt cgcaacgggt ttgccgccag
4021 aacacagctg aagcttcgag gggctcgcat ctctccttca cgcgcccgcc gccctacctg
4081 aggccgccat ccacgccggt tgagtcgcgt tctgccgcct cccgcctgtg gtgcctcctg
4141 aactgcgtcc gccgtctagg taagtttaaa gctcaggtcg agaccgggcc tttgtccggc
4201 gctcccttgg agcctaccta gactcagccg gctctccacg ctttgcctga ccctgcttgc
4261 tcaactctac gtctttgttt cgttttctgt tctgcgccgt tacagatcca agctgtgacc
4321 ggcgcctacg ctagatgacc gagtacaagc ccacggtgcg cctcgccacc cgcgacgacg
4381 tccccagggc cgtacgcacc ctcgccgccg cgttcgccga ctaccccgcc acgcgccaca
4441 ccgtcgatcc ggaccgccac atcgagcggg tcaccgagct gcaagaactc ttcctcacgc
4501 gcgtcgggct cgacatcggc aaggtgtggg tcgcggacga cggcgccgcg gtggcggtct
4561 ggaccacgcc ggagagcgtc gaagcggggg cggtgttcgc cgagatcggc ccgcgcatgg
4621 ccgagttgag cggttcccgg ctggccgcgc agcaacagat ggaaggcctc ctggcgccgc
4681 accggcccaa ggagcccgcg tggttcctgg ccaccgtcgg cgtctcgccc gaccaccagg
4741 gcaagggtct gggcagcgcc gtcgtgctcc ccggagtgga ggcggccgag cgcgccgggg
4801 tgcccgcctt cctggagacc tccgcgcccc gcaacctccc cttctacgag cggctcggct
4861 tcaccgtcac cgccgacgtc gaggtgcccg aaggaccgcg cacctggtgc atgacccgca
4921 agcccggtgc ctgagtcgac aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg
4981 gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt
5041 atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc
5101 tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt
5161 ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga
5221 ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct
5281 gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat
5341 cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct
5401 gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc
5461 tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg
5521 cctccccgcc tggtaccttt aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac
5581 tttttaaaag aaaagggggg actggaaggg ctaattcact cccaacgaaa ataagatctg
5641 ctttttgctt gtactgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc
5701 taactaggga acccactgct taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaagtagtg
5761 tgtgcccgtc tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt ttagtcagtg
5821 tggaaaatct ctagcagtag tagttcatgt catcttatta ttcagtattt ataacttgca
5881 aagaaatgaa tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa
5941 taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt
6001 ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc tctagctatc ccgcccctaa
6061 ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag
6121 aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag
6181 gcctagactt ttgcagagac ggcccaaatt cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt
6241 gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag
6301 cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
6361 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
6421 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg
6481 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat
6541 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
6601 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
6661 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc
6721 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt
6781 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca
6841 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg
6901 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat
6961 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta
7021 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aaggacagta tttggtatct
7081 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac
7141 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
7201 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
7261 actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt
7321 taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca
7381 gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca
7441 tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc
7501 ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa
7561 accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc
7621 agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca
7681 acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat
7741 tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag
7801 cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac
7861 tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt
7921 ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt
7981 gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc
8041 tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat
8101 ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca
8161 gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga
8221 cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg
8281 gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg
8341 ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga
8401 cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tctcgcgcgt ttcggtgatg
8461 acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg
8521 atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggct
8581 ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa
8641 taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ccattcgcca ttcaggctgc
8701 gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag ctggcgaaag
8761 ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag tcacgacgtt
8821 gtaaaacgac ggccagtgcc aagctg.
p526A_19BBZ (서열 식별 번호: 10)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcg tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagatttgg aatcacacga cctggatgga gtgggacaga gaaattaaca
1441 attacacaag cttaatacac tccttaattg aagaatcgca aaaccagcaa gaaaagaatg
1501 aacaagaatt attggaatta gataaatggg caagtttgtg gaattggttt aacataacaa
1561 attggctgtg gtatataaaa ttattcataa tgatagtagg aggcttggta ggtttaagaa
1621 tagtttttgc tgtactttct atagtgaata gagttaggca gggatattca ccattatcgt
1681 ttcagaccca cctcccaacc ccgaggggac ccgacaggcc cgaaggaata gaagaagaag
1741 gtggagagag agacagagac agatccattc gattagtgaa cggatctcga cggtatcggt
1801 taacttttaa aagaaaaggg gggattgggg ggtacagtgc aggggaaaga atagtagaca
1861 taatagcaac agacatacaa actaaagaat tacaaaaaca aattacaaaa ttcaaaattt
1921 tatcgatact agtggatctg cgatcgctcc ggtgcccgtc agtgggcaga gcgcacatcg
1981 cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaacgggtgc ctagagaagg
2041 tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt tcccgagggt
2101 gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg caacgggttt
2161 gccgccagaa cacagctgaa gcttcgaggg gctcgcatct ctccttcacg cgcccgccgc
2221 cctacctgag gccgccatcc acgccggttg agtcgcgttc tgccgcctcc cgcctgtggt
2281 gcctcctgaa ctgcgtccgc cgtctaggta agtttaaagc tcaggtcgag accgggcctt
2341 tgtccggcgc tcccttggag cctacctaga ctcagccggc tctccacgct ttgcctgacc
2401 ctgcttgctc aactctacgt ctttgtttcg ttttctgttc tgcgccgtta cagatccaag
2461 ctgtgaccgg cgcctactct agagccgcca ccatggccct gcctgtgaca gctctgctgc
2521 tgcctctggc cctgctgctc catgccgcca gacccgatat ccagatgacc cagaccacca
2581 gcagcctgag cgccagcctg ggcgatagag tgaccatcag ctgccgggcc agccaggaca
2641 tcagcaagta cctgaactgg tatcagcaga aacccgacgg caccgtgaag ctgctgatct
2701 accacaccag cagactgcac agcggcgtgc ccagcagatt ttctggcagc ggctccggca
2761 ccgactacag cctgaccatc tccaacctgg aacaggaaga tatcgctacc tacttctgtc
2821 agcaaggcaa caccctgccc tacaccttcg gcggaggcac caagctggaa atcacaggcg
2881 gcggaggatc tggcggaggt ggaagtggcg gaggcggcag cgaagtgaaa ctgcaggaaa
2941 gcggccctgg cctggtggcc ccttctcagt ctctgtccgt gacctgtacc gtgtccggcg
3001 tgtccctgcc cgattatggc gtgtcctgga tccggcagcc tcccagaaag ggcctggaat
3061 ggctgggcgt gatctggggc agcgagacaa cctactacaa cagcgccctg aagtcccggc
3121 tgaccatcat caaggacaac tccaagagcc aggtgttcct gaagatgaac agcctgcaga
3181 ccgacgacac cgccatctac tactgcgcca agcactacta ctacggcggc agctacgcca
3241 tggactactg gggccagggc accagcgtga ccgtgtctag cacaaccacc cctgccccta
3301 gacctcccac cccagcccca acaattgcca gccagcctct gtctctgcgg cccgaagctt
3361 gtagacctgc tgccggcgga gccgtgcaca ccagaggact ggatttcgcc tgcgacatct
3421 acatctgggc ccctctggcc ggcacatgtg gcgtgctgct cctcagcctg gtcatcaccc
3481 tgtactgcaa gcggggcaga aagaaactgc tctacatctt caagcagccc ttcatgcggc
3541 ccgtgcagac cacacaggaa gaggacggct gctcctgcag attccccgag gaagaagaag
3601 gcggctgcga gctgagagtg aagttcagca gatccgccga cgcccctgcc taccagcagg
3661 gacagaacca gctgtacaac gagctgaacc tgggcagacg ggaagagtac gacgtgctgg
3721 acaagcggag aggcagagat cccgagatgg gcggcaagcc cagacggaag aatccccagg
3781 aaggcctgta taacgaactg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggaa
3841 tgaagggcga gcggagaaga ggcaagggcc acgatggcct gtaccagggc ctgagcaccg
3901 ccaccaagga cacctacgat gccctgcaca tgcaggccct gccacccaga gaattcgaag
3961 gatccgcggc cgctgagggc agaggaagtc ttctaacatg cggtgacgtg gaggagaatc
4021 ccggcccttc cggaatggag agcgacgaga gcggcctgcc cgccatggag atcgagtgcc
4081 gcatcaccgg caccctgaac ggcgtggagt tcgagctggt gggcggcgga gagggcaccc
4141 ccaagcaggg ccgcatgacc aacaagatga agagcaccaa aggcgccctg accttcagcc
4201 cctacctgct gagccacgtg atgggctacg gcttctacca cttcggcacc taccccagcg
4261 gctacgagaa ccccttcctg cacgccatca acaacggcgg ctacaccaac acccgcatcg
4321 agaagtacga ggacggcggc gtgctgcacg tgagcttcag ctaccgctac gaggccggcc
4381 gcgtgatcgg cgacttcaag gtggtgggca ccggcttccc cgaggacagc gtgatcttca
4441 ccgacaagat catccgcagc aacgccaccg tggagcacct gcaccccatg ggcgataacg
4501 tgctggtggg cagcttcgcc cgcaccttca gcctgcgcga cggcggctac tacagcttcg
4561 tggtggacag ccacatgcac ttcaagagcg ccatccaccc cagcatcctg cagaacgggg
4621 gccccatgtt cgccttccgc cgcgtggagg agctgcacag caacaccgag ctgggcatcg
4681 tggagtacca gcacgccttc aagaccccca tcgccttcgc cagatcccgc gctcagtcgt
4741 ccaattctgc cgtggacggc accgccggac ccggctccac cggatctcgc tagagctgaa
4801 tctaagtcga caatcaacct ctggattaca aaatttgtga aagattgact ggtattctta
4861 actatgttgc tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg tatcatgcta
4921 ttgcttcccg tatggctttc attttctcct ccttgtataa atcctggttg ctgtctcttt
4981 atgaggagtt gtggcccgtt gtcaggcaac gtggcgtggt gtgcactgtg tttgctgacg
5041 caacccccac tggttggggc attgccacca cctgtcagct cctttccggg actttcgctt
5101 tccccctccc tattgccacg gcggaactca tcgccgcctg ccttgcccgc tgctggacag
5161 gggctcggct gttgggcact gacaattccg tggtgttgtc ggggaaatca tcgtcctttc
5221 cttggctgct cgcctgtgtt gccacctgga ttctgcgcgg gacgtccttc tgctacgtcc
5281 cttcggccct caatccagcg gaccttcctt cccgcggcct gctgccggct ctgcggcctc
5341 ttccgcgtct tcgccttcgc cctcagacga gtcggatctc cctttgggcc gcctccccgc
5401 ctggtacctt taagaccaat gacttacaag gcagctgtag atcttagcca ctttttaaaa
5461 gaaaaggggg gactggaagg gctaattcac tcccaacgaa aataagatct gctttttgct
5521 tgtactgggt ctctctggtt agaccagatc tgagcctggg agctctctgg ctaactaggg
5581 aacccactgc ttaagcctca ataaagcttg ccttgagtgc ttcaagtagt gtgtgcccgt
5641 ctgttgtgtg actctggtaa ctagagatcc ctcagaccct tttagtcagt gtggaaaatc
5701 tctagcagta gtagttcatg tcatcttatt attcagtatt tataacttgc aaagaaatga
5761 atatcagaga gtgagaggaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat
5821 agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc
5881 aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg ctctagctat cccgccccta actccgccca
5941 gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg
6001 ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctagact
6061 tttgcagaga cggcccaaat tcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt
6121 atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg
6181 cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg
6241 gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc
6301 gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc
6361 ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata
6421 acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
6481 cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
6541 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
6601 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
6661 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
6721 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
6781 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
6841 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
6901 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc
6961 tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
7021 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
7081 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
7141 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa
7201 aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat
7261 gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct
7321 gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg
7381 caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag
7441 ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta
7501 attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg
7561 ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg
7621 gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct
7681 ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta
7741 tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg
7801 gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc
7861 cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg
7921 gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga
7981 tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg
8041 ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat
8101 gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc
8161 tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca
8221 catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct
8281 ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa
8341 acctctgaca catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga
8401 gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg gtgtcggggc tggcttaact
8461 atgcggcatc agagcagatt gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca
8521 gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt
8581 gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg
8641 ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga
8701 cggccagtgc caagctg.
TFP (TRuC) 작제물
p510_항CD19_LL_TCR알파 (서열 식별 번호: 11)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gaggtgaatg gagagaatgt ggagcagcat ccttcaaccc tgagtgtcca ggagggagac
3241 agcgctgtta tcaagtgtac ttattcagac agtgcctcaa actacttccc ttggtataag
3301 caagaacttg gaaaaagacc tcagcttatt atagacattc gttcaaatgt gggcgaaaag
3361 aaagaccaac gaattgctgt tacattgaac aagacagcca aacatttctc cctgcacatc
3421 acagagaccc aacctgaaga ctcggctgtc tacttctgtg cagcaagtag gaaggactct
3481 gggggttacc agaaagttac ctttggaact ggaacaaagc tccaagtcat cccaaatatc
3541 cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc
3601 tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg
3661 tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct
3721 gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt
3781 ccagaagaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa
3841 agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc
3901 ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga
3961 taagaattcg atccgcggcc gcgaaggatc tgcgatcgct ccggtgcccg tcagtgggca
4021 gagcgcacat cgcccacagt ccccgagaag ttggggggag gggtcggcaa ttgaacgggt
4081 gcctagagaa ggtggcgcgg ggtaaactgg gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt
4141 tttcccgagg gtgggggaga accgtatata agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt
4201 cgcaacgggt ttgccgccag aacacagctg aagcttcgag gggctcgcat ctctccttca
4261 cgcgcccgcc gccctacctg aggccgccat ccacgccggt tgagtcgcgt tctgccgcct
4321 cccgcctgtg gtgcctcctg aactgcgtcc gccgtctagg taagtttaaa gctcaggtcg
4381 agaccgggcc tttgtccggc gctcccttgg agcctaccta gactcagccg gctctccacg
4441 ctttgcctga ccctgcttgc tcaactctac gtctttgttt cgttttctgt tctgcgccgt
4501 tacagatcca agctgtgacc ggcgcctacg ctagatgacc gagtacaagc ccacggtgcg
4561 cctcgccacc cgcgacgacg tccccagggc cgtacgcacc ctcgccgccg cgttcgccga
4621 ctaccccgcc acgcgccaca ccgtcgatcc ggaccgccac atcgagcggg tcaccgagct
4681 gcaagaactc ttcctcacgc gcgtcgggct cgacatcggc aaggtgtggg tcgcggacga
4741 cggcgccgcg gtggcggtct ggaccacgcc ggagagcgtc gaagcggggg cggtgttcgc
4801 cgagatcggc ccgcgcatgg ccgagttgag cggttcccgg ctggccgcgc agcaacagat
4861 ggaaggcctc ctggcgccgc accggcccaa ggagcccgcg tggttcctgg ccaccgtcgg
4921 cgtctcgccc gaccaccagg gcaagggtct gggcagcgcc gtcgtgctcc ccggagtgga
4981 ggcggccgag cgcgccgggg tgcccgcctt cctggagacc tccgcgcccc gcaacctccc
5041 cttctacgag cggctcggct tcaccgtcac cgccgacgtc gaggtgcccg aaggaccgcg
5101 cacctggtgc atgacccgca agcccggtgc ctgagtcgac aatcaacctc tggattacaa
5161 aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata
5221 cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc
5281 cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg
5341 tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac
5401 ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat
5461 cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt
5521 ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat
5581 tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc
5641 ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag
5701 tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tggtaccttt aagaccaatg acttacaagg
5761 cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag aaaagggggg actggaaggg ctaattcact
5821 cccaacgaaa ataagatctg ctttttgctt gtactgggtc tctctggtta gaccagatct
5881 gagcctggga gctctctggc taactaggga acccactgct taagcctcaa taaagcttgc
5941 cttgagtgct tcaagtagtg tgtgcccgtc tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc
6001 tcagaccctt ttagtcagtg tggaaaatct ctagcagtag tagttcatgt catcttatta
6061 ttcagtattt ataacttgca aagaaatgaa tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg
6121 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
6181 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc
6241 tctagctatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
6301 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta
6361 gtgaggaggc ttttttggag gcctagactt ttgcagagac ggcccaaatt cgtaatcatg
6421 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
6481 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
6541 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
6601 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
6661 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
6721 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
6781 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
6841 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
6901 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
6961 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
7021 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
7081 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
7141 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
7201 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
7261 aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
7321 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca
7381 gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc
7441 tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag
7501 gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata
7561 tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat
7621 ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg
7681 ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc
7741 tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc
7801 aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc
7861 gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc
7921 gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc
7981 ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa
8041 gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat
8101 gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata
8161 gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca
8221 tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag
8281 gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc
8341 agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc
8401 aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata
8461 ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta
8521 gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta
8581 agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg
8641 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt
8701 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg
8761 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt
8821 gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg
8881 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
8941 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
9001 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctg.
p510_항CD19_LL_TCR알파C (서열 식별 번호: 12)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gagccaaata tccagaaccc tgaccctgcc gtgtaccagc tgagagactc taaatccagt
3241 gacaagtctg tctgcctatt caccgatttt gattctcaaa caaatgtgtc acaaagtaag
3301 gattctgatg tgtatatcac agacaaaact gtgctagaca tgaggtctat ggacttcaag
3361 agcaacagtg ctgtggcctg gagcaacaaa tctgactttg catgtgcaaa cgccttcaac
3421 aacagcatta ttccagaaga caccttcttc cccagcccag aaagttcctg tgatgtcaag
3481 ctggtcgaga aaagctttga aacagatacg aacctaaact ttcaaaacct gtcagtgatt
3541 gggttccgaa tcctcctcct gaaagtggcc gggtttaatc tgctcatgac gctgcggctg
3601 tggtccagct gataagaatt cgatccgcgg ccgcgaagga tctgcgatcg ctccggtgcc
3661 cgtcagtggg cagagcgcac atcgcccaca gtccccgaga agttgggggg aggggtcggc
3721 aattgaacgg gtgcctagag aaggtggcgc ggggtaaact gggaaagtga tgtcgtgtac
3781 tggctccgcc tttttcccga gggtggggga gaaccgtata taagtgcagt agtcgccgtg
3841 aacgttcttt ttcgcaacgg gtttgccgcc agaacacagc tgaagcttcg aggggctcgc
3901 atctctcctt cacgcgcccg ccgccctacc tgaggccgcc atccacgccg gttgagtcgc
3961 gttctgccgc ctcccgcctg tggtgcctcc tgaactgcgt ccgccgtcta ggtaagttta
4021 aagctcaggt cgagaccggg cctttgtccg gcgctccctt ggagcctacc tagactcagc
4081 cggctctcca cgctttgcct gaccctgctt gctcaactct acgtctttgt ttcgttttct
4141 gttctgcgcc gttacagatc caagctgtga ccggcgccta cgctagatga ccgagtacaa
4201 gcccacggtg cgcctcgcca cccgcgacga cgtccccagg gccgtacgca ccctcgccgc
4261 cgcgttcgcc gactaccccg ccacgcgcca caccgtcgat ccggaccgcc acatcgagcg
4321 ggtcaccgag ctgcaagaac tcttcctcac gcgcgtcggg ctcgacatcg gcaaggtgtg
4381 ggtcgcggac gacggcgccg cggtggcggt ctggaccacg ccggagagcg tcgaagcggg
4441 ggcggtgttc gccgagatcg gcccgcgcat ggccgagttg agcggttccc ggctggccgc
4501 gcagcaacag atggaaggcc tcctggcgcc gcaccggccc aaggagcccg cgtggttcct
4561 ggccaccgtc ggcgtctcgc ccgaccacca gggcaagggt ctgggcagcg ccgtcgtgct
4621 ccccggagtg gaggcggccg agcgcgccgg ggtgcccgcc ttcctggaga cctccgcgcc
4681 ccgcaacctc cccttctacg agcggctcgg cttcaccgtc accgccgacg tcgaggtgcc
4741 cgaaggaccg cgcacctggt gcatgacccg caagcccggt gcctgagtcg acaatcaacc
4801 tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg ctccttttac
4861 gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc gtatggcttt
4921 cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt tgtggcccgt
4981 tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca ctggttgggg
5041 cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc ctattgccac
5101 ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc tgttgggcac
5161 tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt ccttggctgc tcgcctgtgt
5221 tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc tcaatccagc
5281 ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc ttcgccttcg
5341 ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg cctggtacct ttaagaccaa
5401 tgacttacaa ggcagctgta gatcttagcc actttttaaa agaaaagggg ggactggaag
5461 ggctaattca ctcccaacga aaataagatc tgctttttgc ttgtactggg tctctctggt
5521 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc
5581 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta
5641 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt agtagttcat
5701 gtcatcttat tattcagtat ttataacttg caaagaaatg aatatcagag agtgagagga
5761 acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa
5821 ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt
5881 atcatgtctg gctctagcta tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc
5941 ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct
6001 attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctagac ttttgcagag acggcccaaa
6061 ttcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca
6121 caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact
6181 cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct
6241 gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc
6301 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca
6361 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
6421 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
6481 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
6541 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
6601 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
6661 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
6721 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
6781 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
6841 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
6901 cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
6961 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt
7021 tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt
7081 ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag
7141 attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat
7201 ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc
7261 tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat
7321 aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc
7381 acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag
7441 aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag
7501 agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt
7561 ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg
7621 agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt
7681 tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc
7741 tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc
7801 attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa
7861 taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg
7921 aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc
7981 caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag
8041 gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt
8101 cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt
8161 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc
8221 acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac
8281 gaggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
8341 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
8401 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat
8461 tgtactgaga gtgcaccata tgcggtgtga aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata
8521 ccgcatcagg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg
8581 ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg
8641 ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg ccaagctg.
p510_항CD19_LL_TCR베타 (서열 식별 번호: 13)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gagctgggag caggcccagt ggattctgga gtcacacaaa ccccaaagca cctgatcaca
3241 gcaactggac agcgagtgac gctgagatgc tcccctaggt ctggagacct ctctgtgtca
3301 tggtaccaac agagcctgga ccagggcctc cagttcctca ttcagtatta taatggagaa
3361 gagagagcaa aaggaaacat tcttgaacga ttctccgcac aacagttccc tgacttgcac
3421 tctgaactaa acctgagctc tctggagctg ggggactcag ctttgtattt ctgtgccagc
3481 agcccccgga caggcctgaa cactgaagct ttctttggac aaggcaccag actcacagtt
3541 gtagaggacc tgaacaaggt gttcccaccc gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca
3601 gagatctccc acacccaaaa ggccacactg gtgtgcctgg ccacaggctt cttccccgac
3661 cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg aaggaggtgc acagtggggt cagcacggac
3721 ccgcagcccc tcaaggagca gcccgccctc aatgactcca gatactgcct gagcagccgc
3781 ctgagggtct cggccacctt ctggcagaac ccccgcaacc acttccgctg tcaagtccag
3841 ttctacgggc tctcggagaa tgacgagtgg acccaggata gggccaaacc cgtcacccag
3901 atcgtcagcg ccgaggcctg gggtagagca gactgtggct ttacctcggt gtcctaccag
3961 caaggggtcc tgtctgccac catcctctat gagatcctgc tagggaaggc caccctgtat
4021 gctgtgctgg tcagcgccct tgtgttgatg gccatggtca agagaaagga tttctgataa
4081 gaattcgatc cgcggccgcg aaggatctgc gatcgctccg gtgcccgtca gtgggcagag
4141 cgcacatcgc ccacagtccc cgagaagttg gggggagggg tcggcaattg aacgggtgcc
4201 tagagaaggt ggcgcggggt aaactgggaa agtgatgtcg tgtactggct ccgccttttt
4261 cccgagggtg ggggagaacc gtatataagt gcagtagtcg ccgtgaacgt tctttttcgc
4321 aacgggtttg ccgccagaac acagctgaag cttcgagggg ctcgcatctc tccttcacgc
4381 gcccgccgcc ctacctgagg ccgccatcca cgccggttga gtcgcgttct gccgcctccc
4441 gcctgtggtg cctcctgaac tgcgtccgcc gtctaggtaa gtttaaagct caggtcgaga
4501 ccgggccttt gtccggcgct cccttggagc ctacctagac tcagccggct ctccacgctt
4561 tgcctgaccc tgcttgctca actctacgtc tttgtttcgt tttctgttct gcgccgttac
4621 agatccaagc tgtgaccggc gcctacgcta gatgaccgag tacaagccca cggtgcgcct
4681 cgccacccgc gacgacgtcc ccagggccgt acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta
4741 ccccgccacg cgccacaccg tcgatccgga ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca
4801 agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg
4861 cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga
4921 gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga
4981 aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt
5041 ctcgcccgac caccagggca agggtctggg cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc
5101 ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt
5161 ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac
5221 ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgcctg agtcgacaat caacctctgg attacaaaat
5281 ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc
5341 tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt
5401 gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg
5461 cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt tggggcattg ccaccacctg
5521 tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc
5581 cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt
5641 gttgtcgggg aaatcatcgt cctttccttg gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct
5701 gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg
5761 cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg
5821 gatctccctt tgggccgcct ccccgcctgg tacctttaag accaatgact tacaaggcag
5881 ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa aggggggact ggaagggcta attcactccc
5941 aacgaaaata agatctgctt tttgcttgta ctgggtctct ctggttagac cagatctgag
6001 cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt
6061 gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag agatccctca
6121 gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtagtag ttcatgtcat cttattattc
6181 agtatttata acttgcaaag aaatgaatat cagagagtga gaggaacttg tttattgcag
6241 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
6301 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctggctct
6361 agctatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat
6421 tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg
6481 aggaggcttt tttggaggcc tagacttttg cagagacggc ccaaattcgt aatcatggtc
6541 atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg
6601 aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt
6661 gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg
6721 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
6781 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
6841 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
6901 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
6961 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
7021 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
7081 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
7141 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
7201 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
7261 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
7321 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
7381 gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
7441 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
7501 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
7561 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
7621 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
7681 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
7741 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
7801 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
7861 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
7921 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
7981 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
8041 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
8101 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
8161 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
8221 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
8281 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
8341 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
8401 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
8461 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
8521 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
8581 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
8641 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
8701 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
8761 cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac
8821 agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt
8881 tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca
8941 ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca
9001 ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt
9061 acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt
9121 ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag ctg
p510_항CD19_LL_TCR베타C (서열 식별 번호: 14)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gaggaggacc tgaacaaggt gttcccaccc gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca
3241 gagatctccc acacccaaaa ggccacactg gtgtgcctgg ccacaggctt cttccccgac
3301 cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg aaggaggtgc acagtggggt cagcacagac
3361 ccgcagcccc tcaaggagca gcccgccctc aatgactcca gatactgcct gagcagccgc
3421 ctgagggtct cggccacctt ctggcagaac ccccgcaacc acttccgctg tcaagtccag
3481 ttctacgggc tctcggagaa tgacgagtgg acccaggata gggccaaacc cgtcacccag
3541 atcgtcagcg ccgaggcctg gggtagagca gactgtggct ttacctcggt gtcctaccag
3601 caaggggtcc tgtctgccac catcctctat gagatcctgc tagggaaggc caccctgtat
3661 gctgtgctgg tcagcgccct tgtgttgatg gccatggtca agagaaagga tttctgataa
3721 gaattcgatc cgcggccgcg aaggatctgc gatcgctccg gtgcccgtca gtgggcagag
3781 cgcacatcgc ccacagtccc cgagaagttg gggggagggg tcggcaattg aacgggtgcc
3841 tagagaaggt ggcgcggggt aaactgggaa agtgatgtcg tgtactggct ccgccttttt
3901 cccgagggtg ggggagaacc gtatataagt gcagtagtcg ccgtgaacgt tctttttcgc
3961 aacgggtttg ccgccagaac acagctgaag cttcgagggg ctcgcatctc tccttcacgc
4021 gcccgccgcc ctacctgagg ccgccatcca cgccggttga gtcgcgttct gccgcctccc
4081 gcctgtggtg cctcctgaac tgcgtccgcc gtctaggtaa gtttaaagct caggtcgaga
4141 ccgggccttt gtccggcgct cccttggagc ctacctagac tcagccggct ctccacgctt
4201 tgcctgaccc tgcttgctca actctacgtc tttgtttcgt tttctgttct gcgccgttac
4261 agatccaagc tgtgaccggc gcctacgcta gatgaccgag tacaagccca cggtgcgcct
4321 cgccacccgc gacgacgtcc ccagggccgt acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta
4381 ccccgccacg cgccacaccg tcgatccgga ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca
4441 agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg
4501 cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga
4561 gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga
4621 aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt
4681 ctcgcccgac caccagggca agggtctggg cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc
4741 ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt
4801 ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac
4861 ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgcctg agtcgacaat caacctctgg attacaaaat
4921 ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc
4981 tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt
5041 gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg
5101 cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt tggggcattg ccaccacctg
5161 tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc
5221 cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt
5281 gttgtcgggg aaatcatcgt cctttccttg gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct
5341 gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg
5401 cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg
5461 gatctccctt tgggccgcct ccccgcctgg tacctttaag accaatgact tacaaggcag
5521 ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa aggggggact ggaagggcta attcactccc
5581 aacgaaaata agatctgctt tttgcttgta ctgggtctct ctggttagac cagatctgag
5641 cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt
5701 gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag agatccctca
5761 gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtagtag ttcatgtcat cttattattc
5821 agtatttata acttgcaaag aaatgaatat cagagagtga gaggaacttg tttattgcag
5881 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
5941 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctggctct
6001 agctatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat
6061 tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg
6121 aggaggcttt tttggaggcc tagacttttg cagagacggc ccaaattcgt aatcatggtc
6181 atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg
6241 aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt
6301 gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg
6361 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
6421 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
6481 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
6541 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
6601 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
6661 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
6721 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
6781 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
6841 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
6901 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
6961 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
7021 gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
7081 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
7141 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
7201 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
7261 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
7321 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
7381 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
7441 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
7501 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
7561 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
7621 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
7681 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
7741 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
7801 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
7861 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
7921 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
7981 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
8041 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
8101 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
8161 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
8221 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
8281 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
8341 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
8401 cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac
8461 agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt
8521 tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca
8581 ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca
8641 ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt
8701 acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt
8761 ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag ctg.
p510_항CD19_LL_CD3감마 (서열 식별 번호: 15)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gagcagtcaa tcaaaggaaa ccacttggtt aaggtgtatg actatcaaga agatggttcg
3241 gtacttctga cttgtgatgc agaagccaaa aatatcacat ggtttaaaga tgggaagatg
3301 atcggcttcc taactgaaga taaaaaaaaa tggaatctgg gaagtaatgc caaggaccca
3361 cgagggatgt atcagtgtaa aggatcacag aacaagtcaa aaccactcca agtgtattac
3421 agaatgtgtc agaactgcat tgaactaaat gcagccacca tatctggctt tctctttgct
3481 gaaatcgtca gcattttcgt ccttgctgtt ggggtctact tcattgctgg acaggatgga
3541 gttcgccagt cgagagcttc agacaagcag actctgttgc ccaatgacca gctctaccag
3601 cccctcaagg atcgagaaga tgaccagtac agccaccttc aaggaaacca gttgaggagg
3661 aattgataag aattcgatcc gcggccgcga aggatctgcg atcgctccgg tgcccgtcag
3721 tgggcagagc gcacatcgcc cacagtcccc gagaagttgg ggggaggggt cggcaattga
3781 acgggtgcct agagaaggtg gcgcggggta aactgggaaa gtgatgtcgt gtactggctc
3841 cgcctttttc ccgagggtgg gggagaaccg tatataagtg cagtagtcgc cgtgaacgtt
3901 ctttttcgca acgggtttgc cgccagaaca cagctgaagc ttcgaggggc tcgcatctct
3961 ccttcacgcg cccgccgccc tacctgaggc cgccatccac gccggttgag tcgcgttctg
4021 ccgcctcccg cctgtggtgc ctcctgaact gcgtccgccg tctaggtaag tttaaagctc
4081 aggtcgagac cgggcctttg tccggcgctc ccttggagcc tacctagact cagccggctc
4141 tccacgcttt gcctgaccct gcttgctcaa ctctacgtct ttgtttcgtt ttctgttctg
4201 cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg cctacgctag atgaccgagt acaagcccac
4261 ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc cagggccgta cgcaccctcg ccgccgcgtt
4321 cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt cgatccggac cgccacatcg agcgggtcac
4381 cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt cgggctcgac atcggcaagg tgtgggtcgc
4441 ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac cacgccggag agcgtcgaag cgggggcggt
4501 gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga gttgagcggt tcccggctgg ccgcgcagca
4561 acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg gcccaaggag cccgcgtggt tcctggccac
4621 cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa gggtctgggc agcgccgtcg tgctccccgg
4681 agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc cgccttcctg gagacctccg cgccccgcaa
4741 cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac cgtcaccgcc gacgtcgagg tgcccgaagg
4801 accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc cggtgcctga gtcgacaatc aacctctgga
4861 ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg
4921 tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt
4981 ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag
5041 gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc
5101 caccacctgt cagctccttt ccgggacttt cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga
5161 actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa
5221 ttccgtggtg ttgtcgggga aatcatcgtc ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac
5281 ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct
5341 tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca
5401 gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc cccgcctggt acctttaaga ccaatgactt
5461 acaaggcagc tgtagatctt agccactttt taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa
5521 ttcactccca acgaaaataa gatctgcttt ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc
5581 agatctgagc ctgggagctc tctggctaac tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa
5641 gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga
5701 gatccctcag acccttttag tcagtgtgga aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc
5761 ttattattca gtatttataa cttgcaaaga aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt
5821 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag
5881 catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg
5941 tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
6001 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
6061 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct agacttttgc agagacggcc caaattcgta
6121 atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat
6181 acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt
6241 aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta
6301 atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc
6361 gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa
6421 ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa
6481 aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct
6541 ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac
6601 aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc
6661 gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc
6721 tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg
6781 tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga
6841 gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag
6901 cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta
6961 cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag
7021 agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg
7081 caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac
7141 ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc
7201 aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag
7261 tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc
7321 agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac
7381 gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc
7441 accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg
7501 tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag
7561 tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc
7621 acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac
7681 atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag
7741 aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac
7801 tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg
7861 agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc
7921 gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact
7981 ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg
8041 atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa
8101 tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt
8161 tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg
8221 tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga
8281 cgtctaagaa accattatta tcatgacatt aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc
8341 ctttcgtctc gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga
8401 gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc
8461 agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact
8521 gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat
8581 caggcgccat tcgccattca ggctgcgcaa ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc
8641 ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg atgtgctgca aggcgattaa gttgggtaac
8701 gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc agtgccaagc tg.
p510_항CD19_LL_CD3델타 (서열 식별 번호: 16)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gagttcaaga tacctataga ggaacttgag gacagagtgt ttgtgaattg caataccagc
3241 atcacatggg tagagggaac ggtgggaaca ctgctctcag acattacaag actggacctg
3301 ggaaaacgca tcctggaccc acgaggaata tataggtgta atgggacaga tatatacaag
3361 gacaaagaat ctaccgtgca agttcattat cgaatgtgcc agagctgtgt ggagctggat
3421 ccagccaccg tggctggcat cattgtcact gatgtcattg ccactctgct ccttgctttg
3481 ggagtcttct gctttgctgg acatgagact ggaaggctgt ctggggctgc cgacacacaa
3541 gctctgttga ggaatgacca ggtctatcag cccctccgag atcgagatga tgctcagtac
3601 agccaccttg gaggaaactg ggctcggaac aagtgataag aattcgatcc gcggccgcga
3661 aggatctgcg atcgctccgg tgcccgtcag tgggcagagc gcacatcgcc cacagtcccc
3721 gagaagttgg ggggaggggt cggcaattga acgggtgcct agagaaggtg gcgcggggta
3781 aactgggaaa gtgatgtcgt gtactggctc cgcctttttc ccgagggtgg gggagaaccg
3841 tatataagtg cagtagtcgc cgtgaacgtt ctttttcgca acgggtttgc cgccagaaca
3901 cagctgaagc ttcgaggggc tcgcatctct ccttcacgcg cccgccgccc tacctgaggc
3961 cgccatccac gccggttgag tcgcgttctg ccgcctcccg cctgtggtgc ctcctgaact
4021 gcgtccgccg tctaggtaag tttaaagctc aggtcgagac cgggcctttg tccggcgctc
4081 ccttggagcc tacctagact cagccggctc tccacgcttt gcctgaccct gcttgctcaa
4141 ctctacgtct ttgtttcgtt ttctgttctg cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg
4201 cctacgctag atgaccgagt acaagcccac ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc
4261 cagggccgta cgcaccctcg ccgccgcgtt cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt
4321 cgatccggac cgccacatcg agcgggtcac cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt
4381 cgggctcgac atcggcaagg tgtgggtcgc ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac
4441 cacgccggag agcgtcgaag cgggggcggt gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga
4501 gttgagcggt tcccggctgg ccgcgcagca acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg
4561 gcccaaggag cccgcgtggt tcctggccac cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa
4621 gggtctgggc agcgccgtcg tgctccccgg agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc
4681 cgccttcctg gagacctccg cgccccgcaa cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac
4741 cgtcaccgcc gacgtcgagg tgcccgaagg accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc
4801 cggtgcctga gtcgacaatc aacctctgga ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat
4861 tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca
4921 tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc
4981 tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc
5041 tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc caccacctgt cagctccttt ccgggacttt
5101 cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg
5161 gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa ttccgtggtg ttgtcgggga aatcatcgtc
5221 ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta
5281 cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg
5341 gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc
5401 cccgcctggt acctttaaga ccaatgactt acaaggcagc tgtagatctt agccactttt
5461 taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa ttcactccca acgaaaataa gatctgcttt
5521 ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc agatctgagc ctgggagctc tctggctaac
5581 tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg
5641 cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga gatccctcag acccttttag tcagtgtgga
5701 aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc ttattattca gtatttataa cttgcaaaga
5761 aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa
5821 gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt
5881 tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc
5941 gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc
6001 cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct
6061 agacttttgc agagacggcc caaattcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
6121 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
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6241 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
6301 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
6361 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
6421 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
6481 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
6541 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
6601 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
6661 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
6721 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
6781 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
6841 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
6901 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
6961 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
7021 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
7081 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
7141 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
7201 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
7261 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
7321 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
7381 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
7441 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
7501 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
7561 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
7621 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
7681 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
7741 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
7801 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
7861 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
7921 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
7981 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
8041 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
8101 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
8161 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
8221 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt
8281 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctc gcgcgtttcg gtgatgacgg
8341 tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc
8401 cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct
8461 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
8521 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgccat tcgccattca ggctgcgcaa
8581 ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg
8641 atgtgctgca aggcgattaa gttgggtaac gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa
8701 aacgacggcc agtgccaagc tg.
p510_항CD19_LL_CD3엡실론 (서열 식별 번호: 17)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct
3121 cctccttacc taggtggcgg cggttctggt ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc
3181 gaggatggta atgaagaaat gggtggtatt acacagacac catataaagt ctccatctct
3241 ggaaccacag taatattgac atgccctcag tatcctggat ctgaaatact atggcaacac
3301 aatgataaaa acataggcgg tgatgaggat gataaaaaca taggcagtga tgaggatcac
3361 ctgtcactga aggaattttc agaattggag caaagtggtt attatgtctg ctaccccaga
3421 ggaagcaaac cagaagatgc gaacttttat ctctacctga gggcaagagt gtgtgagaac
3481 tgcatggaga tggatgtgat gtcggtggcc acaattgtca tagtggacat ctgcatcact
3541 gggggcttgc tgctgctggt ttactactgg agcaagaata gaaaggccaa ggccaagcct
3601 gtgacacgag gagcgggtgc tggcggcagg caaaggggac aaaacaagga gaggccacca
3661 cctgttccca acccagacta tgagcccatc cggaaaggcc agcgggacct gtattctggc
3721 ctgaatcaga gacgcatctg ataagaattc gatccgcggc cgcgaaggat ctgcgatcgc
3781 tccggtgccc gtcagtgggc agagcgcaca tcgcccacag tccccgagaa gttgggggga
3841 ggggtcggca attgaacggg tgcctagaga aggtggcgcg gggtaaactg ggaaagtgat
3901 gtcgtgtact ggctccgcct ttttcccgag ggtgggggag aaccgtatat aagtgcagta
3961 gtcgccgtga acgttctttt tcgcaacggg tttgccgcca gaacacagct gaagcttcga
4021 ggggctcgca tctctccttc acgcgcccgc cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg
4081 ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag
4141 gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct
4201 agactcagcc ggctctccac gctttgcctg accctgcttg ctcaactcta cgtctttgtt
4261 tcgttttctg ttctgcgccg ttacagatcc aagctgtgac cggcgcctac gctagatgac
4321 cgagtacaag cccacggtgc gcctcgccac ccgcgacgac gtccccaggg ccgtacgcac
4381 cctcgccgcc gcgttcgccg actaccccgc cacgcgccac accgtcgatc cggaccgcca
4441 catcgagcgg gtcaccgagc tgcaagaact cttcctcacg cgcgtcgggc tcgacatcgg
4501 caaggtgtgg gtcgcggacg acggcgccgc ggtggcggtc tggaccacgc cggagagcgt
4561 cgaagcgggg gcggtgttcg ccgagatcgg cccgcgcatg gccgagttga gcggttcccg
4621 gctggccgcg cagcaacaga tggaaggcct cctggcgccg caccggccca aggagcccgc
4681 gtggttcctg gccaccgtcg gcgtctcgcc cgaccaccag ggcaagggtc tgggcagcgc
4741 cgtcgtgctc cccggagtgg aggcggccga gcgcgccggg gtgcccgcct tcctggagac
4801 ctccgcgccc cgcaacctcc ccttctacga gcggctcggc ttcaccgtca ccgccgacgt
4861 cgaggtgccc gaaggaccgc gcacctggtg catgacccgc aagcccggtg cctgagtcga
4921 caatcaacct ctggattaca aaatttgtga aagattgact ggtattctta actatgttgc
4981 tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg tatcatgcta ttgcttcccg
5041 tatggctttc attttctcct ccttgtataa atcctggttg ctgtctcttt atgaggagtt
5101 gtggcccgtt gtcaggcaac gtggcgtggt gtgcactgtg tttgctgacg caacccccac
5161 tggttggggc attgccacca cctgtcagct cctttccggg actttcgctt tccccctccc
5221 tattgccacg gcggaactca tcgccgcctg ccttgcccgc tgctggacag gggctcggct
5281 gttgggcact gacaattccg tggtgttgtc ggggaaatca tcgtcctttc cttggctgct
5341 cgcctgtgtt gccacctgga ttctgcgcgg gacgtccttc tgctacgtcc cttcggccct
5401 caatccagcg gaccttcctt cccgcggcct gctgccggct ctgcggcctc ttccgcgtct
5461 tcgccttcgc cctcagacga gtcggatctc cctttgggcc gcctccccgc ctggtacctt
5521 taagaccaat gacttacaag gcagctgtag atcttagcca ctttttaaaa gaaaaggggg
5581 gactggaagg gctaattcac tcccaacgaa aataagatct gctttttgct tgtactgggt
5641 ctctctggtt agaccagatc tgagcctggg agctctctgg ctaactaggg aacccactgc
5701 ttaagcctca ataaagcttg ccttgagtgc ttcaagtagt gtgtgcccgt ctgttgtgtg
5761 actctggtaa ctagagatcc ctcagaccct tttagtcagt gtggaaaatc tctagcagta
5821 gtagttcatg tcatcttatt attcagtatt tataacttgc aaagaaatga atatcagaga
5881 gtgagaggaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa
5941 atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca
6001 atgtatctta tcatgtctgg ctctagctat cccgccccta actccgccca gttccgccca
6061 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc
6121 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctagact tttgcagaga
6181 cggcccaaat tcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac
6241 aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt
6301 gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc
6361 gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg
6421 ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt
6481 atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa
6541 gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc
6601 gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag
6661 gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt
6721 gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg
6781 aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg
6841 ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg
6901 taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac
6961 tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg
7021 gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt
7081 taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg
7141 tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc
7201 tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt
7261 ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt
7321 taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag
7381 tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt
7441 cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc
7501 gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc
7561 cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg
7621 ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac
7681 aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg
7741 atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc
7801 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact
7861 gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc
7921 aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat
7981 acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc
8041 ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac
8101 tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa
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8281 atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg
8341 aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag
8401 gcgtatcacg aggccctttc gtctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca
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8521 ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg gtgtcggggc tggcttaact atgcggcatc
8581 agagcagatt gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag
8641 gagaaaatac cgcatcaggc gccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg
8701 atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg
8761 attaagttgg gtaacgccag ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtgc
8821 caagctg.
p510_항CD19_SL_CD3엡실론 (서열 식별 번호: 18)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caggtggcgg cggttctggt
3121 ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc gaggatggta atgaagaaat gggtggtatt
3181 acacagacac catataaagt ctccatctct ggaaccacag taatattgac atgccctcag
3241 tatcctggat ctgaaatact atggcaacac aatgataaaa acataggcgg tgatgaggat
3301 gataaaaaca taggcagtga tgaggatcac ctgtcactga aggaattttc agaattggag
3361 caaagtggtt attatgtctg ctaccccaga ggaagcaaac cagaagatgc gaacttttat
3421 ctctacctga gggcaagagt gtgtgagaac tgcatggaga tggatgtgat gtcggtggcc
3481 acaattgtca tagtggacat ctgcatcact gggggcttgc tgctgctggt ttactactgg
3541 agcaagaata gaaaggccaa ggccaagcct gtgacacgag gagcgggtgc tggcggcagg
3601 caaaggggac aaaacaagga gaggccacca cctgttccca acccagacta tgagcccatc
3661 cggaaaggcc agcgggacct gtattctggc ctgaatcaga gacgcatctg ataagaattc
3721 gatccgcggc cgcgaaggat ctgcgatcgc tccggtgccc gtcagtgggc agagcgcaca
3781 tcgcccacag tccccgagaa gttgggggga ggggtcggca attgaacggg tgcctagaga
3841 aggtggcgcg gggtaaactg ggaaagtgat gtcgtgtact ggctccgcct ttttcccgag
3901 ggtgggggag aaccgtatat aagtgcagta gtcgccgtga acgttctttt tcgcaacggg
3961 tttgccgcca gaacacagct gaagcttcga ggggctcgca tctctccttc acgcgcccgc
4021 cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt
4081 ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc
4141 ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg
4201 accctgcttg ctcaactcta cgtctttgtt tcgttttctg ttctgcgccg ttacagatcc
4261 aagctgtgac cggcgcctac gctagatgac cgagtacaag cccacggtgc gcctcgccac
4321 ccgcgacgac gtccccaggg ccgtacgcac cctcgccgcc gcgttcgccg actaccccgc
4381 cacgcgccac accgtcgatc cggaccgcca catcgagcgg gtcaccgagc tgcaagaact
4441 cttcctcacg cgcgtcgggc tcgacatcgg caaggtgtgg gtcgcggacg acggcgccgc
4501 ggtggcggtc tggaccacgc cggagagcgt cgaagcgggg gcggtgttcg ccgagatcgg
4561 cccgcgcatg gccgagttga gcggttcccg gctggccgcg cagcaacaga tggaaggcct
4621 cctggcgccg caccggccca aggagcccgc gtggttcctg gccaccgtcg gcgtctcgcc
4681 cgaccaccag ggcaagggtc tgggcagcgc cgtcgtgctc cccggagtgg aggcggccga
4741 gcgcgccggg gtgcccgcct tcctggagac ctccgcgccc cgcaacctcc ccttctacga
4801 gcggctcggc ttcaccgtca ccgccgacgt cgaggtgccc gaaggaccgc gcacctggtg
4861 catgacccgc aagcccggtg cctgagtcga caatcaacct ctggattaca aaatttgtga
4921 aagattgact ggtattctta actatgttgc tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt
4981 aatgcctttg tatcatgcta ttgcttcccg tatggctttc attttctcct ccttgtataa
5041 atcctggttg ctgtctcttt atgaggagtt gtggcccgtt gtcaggcaac gtggcgtggt
5101 gtgcactgtg tttgctgacg caacccccac tggttggggc attgccacca cctgtcagct
5161 cctttccggg actttcgctt tccccctccc tattgccacg gcggaactca tcgccgcctg
5221 ccttgcccgc tgctggacag gggctcggct gttgggcact gacaattccg tggtgttgtc
5281 ggggaaatca tcgtcctttc cttggctgct cgcctgtgtt gccacctgga ttctgcgcgg
5341 gacgtccttc tgctacgtcc cttcggccct caatccagcg gaccttcctt cccgcggcct
5401 gctgccggct ctgcggcctc ttccgcgtct tcgccttcgc cctcagacga gtcggatctc
5461 cctttgggcc gcctccccgc ctggtacctt taagaccaat gacttacaag gcagctgtag
5521 atcttagcca ctttttaaaa gaaaaggggg gactggaagg gctaattcac tcccaacgaa
5581 aataagatct gctttttgct tgtactgggt ctctctggtt agaccagatc tgagcctggg
5641 agctctctgg ctaactaggg aacccactgc ttaagcctca ataaagcttg ccttgagtgc
5701 ttcaagtagt gtgtgcccgt ctgttgtgtg actctggtaa ctagagatcc ctcagaccct
5761 tttagtcagt gtggaaaatc tctagcagta gtagttcatg tcatcttatt attcagtatt
5821 tataacttgc aaagaaatga atatcagaga gtgagaggaa cttgtttatt gcagcttata
5881 atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc
5941 attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg ctctagctat
6001 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
6061 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
6121 cttttttgga ggcctagact tttgcagaga cggcccaaat tcgtaatcat ggtcatagct
6181 gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat
6241 aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc
6301 actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg
6361 cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct
6421 gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt
6481 atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc
6541 caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga
6601 gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata
6661 ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac
6721 cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg
6781 taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc
6841 cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag
6901 acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt
6961 aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt
7021 atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg
7081 atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac
7141 gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca
7201 gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac
7261 ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac
7321 ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt
7381 tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt
7441 accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt
7501 atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc
7561 cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa
7621 tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg
7681 tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt
7741 gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc
7801 agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt
7861 aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg
7921 gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac
7981 tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc
8041 gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt
8101 tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg
8161 aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag
8221 catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa
8281 acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat
8341 tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtctcgcgcg
8401 tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg
8461 tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg
8521 gtgtcggggc tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag tgcaccatat
8581 gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gccattcgcc
8641 attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca
8701 gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag ggttttccca
8761 gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtgc caagctg.
p510_항CD19_SL_CD3감마 (서열 식별 번호: 19)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caggtggcgg cggttctggt
3121 ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc gagcagtcaa tcaaaggaaa ccacttggtt
3181 aaggtgtatg actatcaaga agatggttcg gtacttctga cttgtgatgc agaagccaaa
3241 aatatcacat ggtttaaaga tgggaagatg atcggcttcc taactgaaga taaaaaaaaa
3301 tggaatctgg gaagtaatgc caaggaccca cgagggatgt atcagtgtaa aggatcacag
3361 aacaagtcaa aaccactcca agtgtattac agaatgtgtc agaactgcat tgaactaaat
3421 gcagccacca tatctggctt tctctttgct gaaatcgtca gcattttcgt ccttgctgtt
3481 ggggtctact tcattgctgg acaggatgga gttcgccagt cgagagcttc agacaagcag
3541 actctgttgc ccaatgacca gctctaccag cccctcaagg atcgagaaga tgaccagtac
3601 agccaccttc aaggaaacca gttgaggagg aattgataag aattcgatcc gcggccgcga
3661 aggatctgcg atcgctccgg tgcccgtcag tgggcagagc gcacatcgcc cacagtcccc
3721 gagaagttgg ggggaggggt cggcaattga acgggtgcct agagaaggtg gcgcggggta
3781 aactgggaaa gtgatgtcgt gtactggctc cgcctttttc ccgagggtgg gggagaaccg
3841 tatataagtg cagtagtcgc cgtgaacgtt ctttttcgca acgggtttgc cgccagaaca
3901 cagctgaagc ttcgaggggc tcgcatctct ccttcacgcg cccgccgccc tacctgaggc
3961 cgccatccac gccggttgag tcgcgttctg ccgcctcccg cctgtggtgc ctcctgaact
4021 gcgtccgccg tctaggtaag tttaaagctc aggtcgagac cgggcctttg tccggcgctc
4081 ccttggagcc tacctagact cagccggctc tccacgcttt gcctgaccct gcttgctcaa
4141 ctctacgtct ttgtttcgtt ttctgttctg cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg
4201 cctacgctag atgaccgagt acaagcccac ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc
4261 cagggccgta cgcaccctcg ccgccgcgtt cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt
4321 cgatccggac cgccacatcg agcgggtcac cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt
4381 cgggctcgac atcggcaagg tgtgggtcgc ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac
4441 cacgccggag agcgtcgaag cgggggcggt gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga
4501 gttgagcggt tcccggctgg ccgcgcagca acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg
4561 gcccaaggag cccgcgtggt tcctggccac cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa
4621 gggtctgggc agcgccgtcg tgctccccgg agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc
4681 cgccttcctg gagacctccg cgccccgcaa cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac
4741 cgtcaccgcc gacgtcgagg tgcccgaagg accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc
4801 cggtgcctga gtcgacaatc aacctctgga ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat
4861 tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca
4921 tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc
4981 tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc
5041 tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc caccacctgt cagctccttt ccgggacttt
5101 cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg
5161 gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa ttccgtggtg ttgtcgggga aatcatcgtc
5221 ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta
5281 cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg
5341 gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc
5401 cccgcctggt acctttaaga ccaatgactt acaaggcagc tgtagatctt agccactttt
5461 taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa ttcactccca acgaaaataa gatctgcttt
5521 ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc agatctgagc ctgggagctc tctggctaac
5581 tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg
5641 cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga gatccctcag acccttttag tcagtgtgga
5701 aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc ttattattca gtatttataa cttgcaaaga
5761 aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa
5821 gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt
5881 tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc
5941 gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc
6001 cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct
6061 agacttttgc agagacggcc caaattcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
6121 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
6181 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
6241 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
6301 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
6361 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
6421 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
6481 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
6541 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
6601 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
6661 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
6721 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
6781 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
6841 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
6901 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
6961 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
7021 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
7081 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
7141 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
7201 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
7261 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
7321 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
7381 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
7441 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
7501 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
7561 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
7621 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
7681 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
7741 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
7801 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
7861 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
7921 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
7981 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
8041 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
8101 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
8161 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
8221 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt
8281 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctc gcgcgtttcg gtgatgacgg
8341 tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc
8401 cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct
8461 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
8521 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgccat tcgccattca ggctgcgcaa
8581 ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg
8641 atgtgctgca aggcgattaa gttgggtaac gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa
8701 aacgacggcc agtgccaagc tg.
p510_항CD19_SL_CD3델타 (서열 식별 번호: 20)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caggtggcgg cggttctggt
3121 ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc gagttcaaga tacctataga ggaacttgag
3181 gacagagtgt ttgtgaattg caataccagc atcacatggg tagagggaac ggtgggaaca
3241 ctgctctcag acattacaag actggacctg ggaaaacgca tcctggaccc acgaggaata
3301 tataggtgta atgggacaga tatatacaag gacaaagaat ctaccgtgca agttcattat
3361 cgaatgtgcc agagctgtgt ggagctggat ccagccaccg tggctggcat cattgtcact
3421 gatgtcattg ccactctgct ccttgctttg ggagtcttct gctttgctgg acatgagact
3481 ggaaggctgt ctggggctgc cgacacacaa gctctgttga ggaatgacca ggtctatcag
3541 cccctccgag atcgagatga tgctcagtac agccaccttg gaggaaactg ggctcggaac
3601 aagtgataag aattcgatcc gcggccgcga aggatctgcg atcgctccgg tgcccgtcag
3661 tgggcagagc gcacatcgcc cacagtcccc gagaagttgg ggggaggggt cggcaattga
3721 acgggtgcct agagaaggtg gcgcggggta aactgggaaa gtgatgtcgt gtactggctc
3781 cgcctttttc ccgagggtgg gggagaaccg tatataagtg cagtagtcgc cgtgaacgtt
3841 ctttttcgca acgggtttgc cgccagaaca cagctgaagc ttcgaggggc tcgcatctct
3901 ccttcacgcg cccgccgccc tacctgaggc cgccatccac gccggttgag tcgcgttctg
3961 ccgcctcccg cctgtggtgc ctcctgaact gcgtccgccg tctaggtaag tttaaagctc
4021 aggtcgagac cgggcctttg tccggcgctc ccttggagcc tacctagact cagccggctc
4081 tccacgcttt gcctgaccct gcttgctcaa ctctacgtct ttgtttcgtt ttctgttctg
4141 cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg cctacgctag atgaccgagt acaagcccac
4201 ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc cagggccgta cgcaccctcg ccgccgcgtt
4261 cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt cgatccggac cgccacatcg agcgggtcac
4321 cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt cgggctcgac atcggcaagg tgtgggtcgc
4381 ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac cacgccggag agcgtcgaag cgggggcggt
4441 gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga gttgagcggt tcccggctgg ccgcgcagca
4501 acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg gcccaaggag cccgcgtggt tcctggccac
4561 cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa gggtctgggc agcgccgtcg tgctccccgg
4621 agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc cgccttcctg gagacctccg cgccccgcaa
4681 cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac cgtcaccgcc gacgtcgagg tgcccgaagg
4741 accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc cggtgcctga gtcgacaatc aacctctgga
4801 ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg
4861 tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt
4921 ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag
4981 gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc
5041 caccacctgt cagctccttt ccgggacttt cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga
5101 actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa
5161 ttccgtggtg ttgtcgggga aatcatcgtc ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac
5221 ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct
5281 tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca
5341 gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc cccgcctggt acctttaaga ccaatgactt
5401 acaaggcagc tgtagatctt agccactttt taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa
5461 ttcactccca acgaaaataa gatctgcttt ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc
5521 agatctgagc ctgggagctc tctggctaac tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa
5581 gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga
5641 gatccctcag acccttttag tcagtgtgga aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc
5701 ttattattca gtatttataa cttgcaaaga aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt
5761 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag
5821 catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg
5881 tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
5941 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
6001 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct agacttttgc agagacggcc caaattcgta
6061 atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat
6121 acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt
6181 aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta
6241 atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc
6301 gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa
6361 ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa
6421 aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct
6481 ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac
6541 aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc
6601 gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc
6661 tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg
6721 tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga
6781 gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag
6841 cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta
6901 cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag
6961 agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg
7021 caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac
7081 ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc
7141 aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag
7201 tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc
7261 agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac
7321 gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc
7381 accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg
7441 tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag
7501 tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc
7561 acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac
7621 atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag
7681 aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac
7741 tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg
7801 agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc
7861 gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact
7921 ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg
7981 atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa
8041 tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt
8101 tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg
8161 tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga
8221 cgtctaagaa accattatta tcatgacatt aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc
8281 ctttcgtctc gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga
8341 gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc
8401 agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact
8461 gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat
8521 caggcgccat tcgccattca ggctgcgcaa ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc
8581 ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg atgtgctgca aggcgattaa gttgggtaac
8641 gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc agtgccaagc tg.
p510_항CD19_SL_TCR베타 (서열 식별 번호: 21)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct
2401 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat
2461 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta
2521 cactcaggag tcccatcaag gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc
2581 attagcaacc tggagcaaga agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt
2641 ccgtacacgt tcggaggggg gactaagttg gaaataacag gctccacctc tggatccggc
2701 aagcccggat ctggcgaggg atccaccaag ggcgaggtga aactgcagga gtcaggacct
2761 ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc gtcacatgca ctgtctcagg ggtctcatta
2821 cccgactatg gtgtaagctg gattcgccag cctccacgaa agggtctgga gtggctggga
2881 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tcaaatccag actgaccatc
2941 atcaaggaca actccaagag ccaagttttc ttaaaaatga acagtctgca aactgatgac
3001 acagccattt actactgtgc caaacattat tactacggtg gtagctatgc tatggactac
3061 tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcggccg caggtggcgg cggttctggt
3121 ggcggcggtt ctggtggcgg cggttctctc gagctgggag caggcccagt ggattctgga
3181 gtcacacaaa ccccaaagca cctgatcaca gcaactggac agcgagtgac gctgagatgc
3241 tcccctaggt ctggagacct ctctgtgtca tggtaccaac agagcctgga ccagggcctc
3301 cagttcctca ttcagtatta taatggagaa gagagagcaa aaggaaacat tcttgaacga
3361 ttctccgcac aacagttccc tgacttgcac tctgaactaa acctgagctc tctggagctg
3421 ggggactcag ctttgtattt ctgtgccagc agcccccgga caggcctgaa cactgaagct
3481 ttctttggac aaggcaccag actcacagtt gtagaggacc tgaacaaggt gttcccaccc
3541 gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca gagatctccc acacccaaaa ggccacactg
3601 gtgtgcctgg ccacaggctt cttccccgac cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg
3661 aaggaggtgc acagtggggt cagcacggac ccgcagcccc tcaaggagca gcccgccctc
3721 aatgactcca gatactgcct gagcagccgc ctgagggtct cggccacctt ctggcagaac
3781 ccccgcaacc acttccgctg tcaagtccag ttctacgggc tctcggagaa tgacgagtgg
3841 acccaggata gggccaaacc cgtcacccag atcgtcagcg ccgaggcctg gggtagagca
3901 gactgtggct ttacctcggt gtcctaccag caaggggtcc tgtctgccac catcctctat
3961 gagatcctgc tagggaaggc caccctgtat gctgtgctgg tcagcgccct tgtgttgatg
4021 gccatggtca agagaaagga tttctgataa gaattcgatc cgcggccgcg aaggatctgc
4081 gatcgctccg gtgcccgtca gtgggcagag cgcacatcgc ccacagtccc cgagaagttg
4141 gggggagggg tcggcaattg aacgggtgcc tagagaaggt ggcgcggggt aaactgggaa
4201 agtgatgtcg tgtactggct ccgccttttt cccgagggtg ggggagaacc gtatataagt
4261 gcagtagtcg ccgtgaacgt tctttttcgc aacgggtttg ccgccagaac acagctgaag
4321 cttcgagggg ctcgcatctc tccttcacgc gcccgccgcc ctacctgagg ccgccatcca
4381 cgccggttga gtcgcgttct gccgcctccc gcctgtggtg cctcctgaac tgcgtccgcc
4441 gtctaggtaa gtttaaagct caggtcgaga ccgggccttt gtccggcgct cccttggagc
4501 ctacctagac tcagccggct ctccacgctt tgcctgaccc tgcttgctca actctacgtc
4561 tttgtttcgt tttctgttct gcgccgttac agatccaagc tgtgaccggc gcctacgcta
4621 gatgaccgag tacaagccca cggtgcgcct cgccacccgc gacgacgtcc ccagggccgt
4681 acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta ccccgccacg cgccacaccg tcgatccgga
4741 ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga
4801 catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga
4861 gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg
4921 ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga
4981 gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt ctcgcccgac caccagggca agggtctggg
5041 cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct
5101 ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc
5161 cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgcctg
5221 agtcgacaat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta
5281 tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc
5341 ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga
5401 ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac
5461 ccccactggt tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc
5521 cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc
5581 tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aaatcatcgt cctttccttg
5641 gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc
5701 ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc
5761 gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcctgg
5821 tacctttaag accaatgact tacaaggcag ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa
5881 aggggggact ggaagggcta attcactccc aacgaaaata agatctgctt tttgcttgta
5941 ctgggtctct ctggttagac cagatctgag cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc
6001 cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt
6061 tgtgtgactc tggtaactag agatccctca gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta
6121 gcagtagtag ttcatgtcat cttattattc agtatttata acttgcaaag aaatgaatat
6181 cagagagtga gaggaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca
6241 tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac
6301 tcatcaatgt atcttatcat gtctggctct agctatcccg cccctaactc cgcccagttc
6361 cgcccattct ccgccccatg gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc
6421 ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc tagacttttg
6481 cagagacggc ccaaattcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc
6541 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta
6601 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa
6661 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
6721 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg
6781 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc
6841 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt
6901 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag
6961 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc
7021 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc
7081 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt
7141 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt
7201 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc
7261 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa
7321 gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa
7381 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg
7441 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga
7501 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg
7561 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg
7621 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt
7681 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact
7741 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat
7801 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg
7861 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg
7921 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat
7981 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc
8041 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt
8101 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc
8161 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga
8221 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc
8281 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa
8341 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta
8401 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg
8461 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg
8521 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat
8581 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt
8641 tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa
8701 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct
8761 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag
8821 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc
8881 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg
8941 cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga
9001 agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc
9061 aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc
9121 cagtgccaag ctg.
p510_항BCMA_CD3엡실론 (서열 식별 번호: 22)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaca ggtgcagctg gtgcagagcg gcgcggaagt gaaaaaaccg
2401 ggcgcgagcg tgaaagtgag ctgcaaagcg agcggctata gctttccgga ttattatatt
2461 aactgggtgc gccaggcgcc gggccagggc ctggaatgga tgggctggat ttattttgcg
2521 agcggcaaca gcgaatataa ccagaaattt accggccgcg tgaccatgac ccgcgatacc
2581 agcagcagca ccgcgtatat ggaactgagc agcctgcgca gcgaagatac cgcggtgtat
2641 ttttgcgcga gcctgtatga ttatgattgg tattttgatg tgtggggcca gggcaccatg
2701 gtgaccgtga gcagcggcgg cggcggcagc ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggcagc
2761 gatattgtga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga ccccgggcga accggcgagc
2821 attagctgca aaagcagcca gagcctggtg catagcaacg gcaacaccta tctgcattgg
2881 tatctgcaga aaccgggcca gagcccgcag ctgctgattt ataaagtgag caaccgcttt
2941 agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggcg cggattttac cctgaaaatt
3001 agccgcgtgg aagcggaaga tgtgggcgtg tattattgcg cggaaaccag ccatgtgccg
3061 tggacctttg gccagggcac caaactggaa attaaaagcg gtggcggcgg ttctggtggc
3121 ggcggttctg gtggcggcgg ttctctcgag gatggtaatg aagaaatggg tggtattaca
3181 cagacaccat ataaagtctc catctctgga accacagtaa tattgacatg ccctcagtat
3241 cctggatctg aaatactatg gcaacacaat gataaaaaca taggcggtga tgaggatgat
3301 aaaaacatag gcagtgatga ggatcacctg tcactgaagg aattttcaga attggagcaa
3361 agtggttatt atgtctgcta ccccagagga agcaaaccag aagatgcgaa cttttatctc
3421 tacctgaggg caagagtgtg tgagaactgc atggagatgg atgtgatgtc ggtggccaca
3481 attgtcatag tggacatctg catcactggg ggcttgctgc tgctggttta ctactggagc
3541 aagaatagaa aggccaaggc caagcctgtg acacgaggag cgggtgctgg cggcaggcaa
3601 aggggacaaa acaaggagag gccaccacct gttcccaacc cagactatga gcccatccgg
3661 aaaggccagc gggacctgta ttctggcctg aatcagagac gcatctgata agaattcgga
3721 tccgcggccg cgaaggatct gcgatcgctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc
3781 gcccacagtc cccgagaagt tggggggagg ggtcggcaat tgaacgggtg cctagagaag
3841 gtggcgcggg gtaaactggg aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg
3901 tgggggagaa ccgtatataa gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt
3961 tgccgccaga acacagctga agcttcgagg ggctcgcatc tctccttcac gcgcccgccg
4021 ccctacctga ggccgccatc cacgccggtt gagtcgcgtt ctgccgcctc ccgcctgtgg
4081 tgcctcctga actgcgtccg ccgtctaggt aagtttaaag ctcaggtcga gaccgggcct
4141 ttgtccggcg ctcccttgga gcctacctag actcagccgg ctctccacgc tttgcctgac
4201 cctgcttgct caactctacg tctttgtttc gttttctgtt ctgcgccgtt acagatccaa
4261 gctgtgaccg gcgcctacgc tagatgaccg agtacaagcc cacggtgcgc ctcgccaccc
4321 gcgacgacgt ccccagggcc gtacgcaccc tcgccgccgc gttcgccgac taccccgcca
4381 cgcgccacac cgtcgatccg gaccgccaca tcgagcgggt caccgagctg caagaactct
4441 tcctcacgcg cgtcgggctc gacatcggca aggtgtgggt cgcggacgac ggcgccgcgg
4501 tggcggtctg gaccacgccg gagagcgtcg aagcgggggc ggtgttcgcc gagatcggcc
4561 cgcgcatggc cgagttgagc ggttcccggc tggccgcgca gcaacagatg gaaggcctcc
4621 tggcgccgca ccggcccaag gagcccgcgt ggttcctggc caccgtcggc gtctcgcccg
4681 accaccaggg caagggtctg ggcagcgccg tcgtgctccc cggagtggag gcggccgagc
4741 gcgccggggt gcccgccttc ctggagacct ccgcgccccg caacctcccc ttctacgagc
4801 ggctcggctt caccgtcacc gccgacgtcg aggtgcccga aggaccgcgc acctggtgca
4861 tgacccgcaa gcccggtgcc tgagtcgaca atcaacctct ggattacaaa atttgtgaaa
4921 gattgactgg tattcttaac tatgttgctc cttttacgct atgtggatac gctgctttaa
4981 tgcctttgta tcatgctatt gcttcccgta tggctttcat tttctcctcc ttgtataaat
5041 cctggttgct gtctctttat gaggagttgt ggcccgttgt caggcaacgt ggcgtggtgt
5101 gcactgtgtt tgctgacgca acccccactg gttggggcat tgccaccacc tgtcagctcc
5161 tttccgggac tttcgctttc cccctcccta ttgccacggc ggaactcatc gccgcctgcc
5221 ttgcccgctg ctggacaggg gctcggctgt tgggcactga caattccgtg gtgttgtcgg
5281 ggaaatcatc gtcctttcct tggctgctcg cctgtgttgc cacctggatt ctgcgcggga
5341 cgtccttctg ctacgtccct tcggccctca atccagcgga ccttccttcc cgcggcctgc
5401 tgccggctct gcggcctctt ccgcgtcttc gccttcgccc tcagacgagt cggatctccc
5461 tttgggccgc ctccccgcct ggtaccttta agaccaatga cttacaaggc agctgtagat
5521 cttagccact ttttaaaaga aaagggggga ctggaagggc taattcactc ccaacgaaaa
5581 taagatctgc tttttgcttg tactgggtct ctctggttag accagatctg agcctgggag
5641 ctctctggct aactagggaa cccactgctt aagcctcaat aaagcttgcc ttgagtgctt
5701 caagtagtgt gtgcccgtct gttgtgtgac tctggtaact agagatccct cagacccttt
5761 tagtcagtgt ggaaaatctc tagcagtagt agttcatgtc atcttattat tcagtattta
5821 taacttgcaa agaaatgaat atcagagagt gagaggaact tgtttattgc agcttataat
5881 ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat
5941 tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctggct ctagctatcc
6001 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta
6061 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct
6121 tttttggagg cctagacttt tgcagagacg gcccaaattc gtaatcatgg tcatagctgt
6181 ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa
6241 agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac
6301 tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg
6361 cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc
6421 gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat
6481 ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca
6541 ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc
6601 atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc
6661 aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg
6721 gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta
6781 ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg
6841 ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac
6901 acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag
6961 gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat
7021 ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat
7081 ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc
7141 gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt
7201 ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct
7261 agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt
7321 ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc
7381 gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac
7441 catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat
7501 cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg
7561 cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata
7621 gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta
7681 tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt
7741 gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag
7801 tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa
7861 gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc
7921 gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt
7981 taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc
8041 tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta
8101 ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa
8161 taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca
8221 tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac
8281 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtctaa gaaaccatta
8341 ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag gccctttcgt ctcgcgcgtt
8401 tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc
8461 tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt
8521 gtcggggctg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc
8581 ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc cattcgccat
8641 tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc
8701 tggcgaaagg gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt
8761 cacgacgttg taaaacgacg gccagtgcca agctg
p510_항BCMA_CD3감마 (서열 식별 번호: 23)
1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt
1801 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat
1861 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt
1921 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca
1981 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc
2041 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga
2101 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat
2161 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag
2221 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct
2281 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca
2341 gcattcctcc tgatcccaca ggtgcagctg gtgcagagcg gcgcggaagt gaaaaaaccg
2401 ggcgcgagcg tgaaagtgag ctgcaaagcg agcggctata gctttccgga ttattatatt
2461 aactgggtgc gccaggcgcc gggccagggc ctggaatgga tgggctggat ttattttgcg
2521 agcggcaaca gcgaatataa ccagaaattt accggccgcg tgaccatgac ccgcgatacc
2581 agcagcagca ccgcgtatat ggaactgagc agcctgcgca gcgaagatac cgcggtgtat
2641 ttttgcgcga gcctgtatga ttatgattgg tattttgatg tgtggggcca gggcaccatg
2701 gtgaccgtga gcagcggcgg cggcggcagc ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggcagc
2761 gatattgtga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga ccccgggcga accggcgagc
2821 attagctgca aaagcagcca gagcctggtg catagcaacg gcaacaccta tctgcattgg
2881 tatctgcaga aaccgggcca gagcccgcag ctgctgattt ataaagtgag caaccgcttt
2941 agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggcg cggattttac cctgaaaatt
3001 agccgcgtgg aagcggaaga tgtgggcgtg tattattgcg cggaaaccag ccatgtgccg
3061 tggacctttg gccagggcac caaactggaa attaaaagcg gtggcggcgg ttctggtggc
3121 ggcggttctg gtggcggcgg ttctctcgag cagtcaatca aaggaaacca cttggttaag
3181 gtgtatgact atcaagaaga tggttcggta cttctgactt gtgatgcaga agccaaaaat
3241 atcacatggt ttaaagatgg gaagatgatc ggcttcctaa ctgaagataa aaaaaaatgg
3301 aatctgggaa gtaatgccaa ggacccacga gggatgtatc agtgtaaagg atcacagaac
3361 aagtcaaaac cactccaagt gtattacaga atgtgtcaga actgcattga actaaatgca
3421 gccaccatat ctggctttct ctttgctgaa atcgtcagca ttttcgtcct tgctgttggg
3481 gtctacttca ttgctggaca ggatggagtt cgccagtcga gagcttcaga caagcagact
3541 ctgttgccca atgaccagct ctaccagccc ctcaaggatc gagaagatga ccagtacagc
3601 caccttcaag gaaaccagtt gaggaggaat tgataagaat tcggatccgc ggccgcgaag
3661 gatctgcgat cgctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca cagtccccga
3721 gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac gggtgcctag agaaggtggc gcggggtaaa
3781 ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg gagaaccgta
3841 tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg ccagaacaca
3901 gctgaagctt cgaggggctc gcatctctcc ttcacgcgcc cgccgcccta cctgaggccg
3961 ccatccacgc cggttgagtc gcgttctgcc gcctcccgcc tgtggtgcct cctgaactgc
4021 gtccgccgtc taggtaagtt taaagctcag gtcgagaccg ggcctttgtc cggcgctccc
4081 ttggagccta cctagactca gccggctctc cacgctttgc ctgaccctgc ttgctcaact
4141 ctacgtcttt gtttcgtttt ctgttctgcg ccgttacaga tccaagctgt gaccggcgcc
4201 tacgctagat gaccgagtac aagcccacgg tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtcccca
4261 gggccgtacg caccctcgcc gccgcgttcg ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg
4321 atccggaccg ccacatcgag cgggtcaccg agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg
4381 ggctcgacat cggcaaggtg tgggtcgcgg acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca
4441 cgccggagag cgtcgaagcg ggggcggtgt tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt
4501 tgagcggttc ccggctggcc gcgcagcaac agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc
4561 ccaaggagcc cgcgtggttc ctggccaccg tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg
4621 gtctgggcag cgccgtcgtg ctccccggag tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg
4681 ccttcctgga gacctccgcg ccccgcaacc tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg
4741 tcaccgccga cgtcgaggtg cccgaaggac cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg
4801 gtgcctgagt cgacaatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc
4861 ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg
4921 ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc
4981 tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg
5041 acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg
5101 ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga
5161 caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaaa tcatcgtcct
5221 ttccttggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg
5281 tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc
5341 ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc
5401 cgcctggtac ctttaagacc aatgacttac aaggcagctg tagatcttag ccacttttta
5461 aaagaaaagg ggggactgga agggctaatt cactcccaac gaaaataaga tctgcttttt
5521 gcttgtactg ggtctctctg gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta
5581 gggaacccac tgcttaagcc tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc
5641 cgtctgttgt gtgactctgg taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa
5701 atctctagca gtagtagttc atgtcatctt attattcagt atttataact tgcaaagaaa
5761 tgaatatcag agagtgagag gaacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc
5821 aatagcatca caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg
5881 tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc tggctctagc tatcccgccc ctaactccgc
5941 ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg
6001 aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag
6061 acttttgcag agacggccca aattcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt
6121 gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg
6181 gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt
6241 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt
6301 tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc
6361 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg
6421 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg
6481 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac
6541 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg
6601 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct
6661 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg
6721 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct
6781 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac
6841 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt
6901 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc
6961 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca
7021 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat
7081 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac
7141 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt
7201 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc
7261 aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg
7321 cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg
7381 ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc
7441 cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta
7501 ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg
7561 ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct
7621 ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta
7681 gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg
7741 ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga
7801 ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt
7861 gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca
7921 ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt
7981 cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt
8041 ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga
8101 aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt
8161 gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc
8221 gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa
8281 cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtctcgc gcgtttcggt gatgacggtg
8341 aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg
8401 ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta
8461 actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc
8521 acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact
8581 gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat
8641 gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa
8701 cgacggccag tgccaagctg.
실시예 2: 항체 서열
항체 서열의 생성
인간 CD19 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: UniProt 수탁 번호 P15391 (또는 P15391-1). 인간 BCMA 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: UniProt 수탁 번호 Q02223 (또는 Q02223-1). 인간 CD19 폴리펩타이드 또는 인간 BCMA 폴리펩타이드 또는 인간 FAP 폴리펩타이드 또는 인간 BCMA 폴리펩타이드, 및 그의 단편 또는 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 폴리펩타이드가 제공된다. 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 및 항-BCMA 항체는 다양한 기술을 이용하여 생성될 수 있다 (참고, 예를 들면, (Nicholson et al, 1997). 쥣과 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 또는 항-BCMA 항체가 개시 물질로서 사용되는 경우, 쥣과 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 또는 항-BCMA 항체의 인간화는 임상 셋팅에 요망되고, 여기에서 마우스-특이적 잔기는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP) 치료, 즉, TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX, 또는 TFP.BCMA 작제물로 형질도입된 T-세포로 치료를 받는 대상체내 인간-항-마우스 항원 (HAMA) 반응을 유도할 수 있다. 인간화는, 선택적으로 CDR 및/또는 프레임워크 영역에 다른 변형을 포함하여, 적절한 인간 생식계열 수용체 프레임워크상에 쥣과 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 또는 항-BCMA 항체로부터 CDR 영역의 그라프팅에 의해 달성된다. 본원에서 제공된 바와 같이, 항체 및 항체 단편 잔기 넘버링은 하기를 따른다: 카밧 (Kabat E.A. 등, 1991; Chothia 등, 1987).
scFvs의 생성
인간 또는 인간화된 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 또는 항-BMCA IgGs는 TFP 작제물을 위한 scFv 서열을 생성하는데 사용된다. 인간 또는 인간화된 VL 및 VH 도메인을 위한 DNA 서열 코딩은 수득되고, 작제물을 위한 코돈은, 선택적으로, 호모사피엔스로부터 세포내 발현에 최적화된다. VL 및 VH 도메인이 scFv에서 나타나는 순서는 다양하고 (즉, VL-VH, 또는 VH-VL 배향), 3 카피의 “G4S” 또는 “G4S” 서브유닛 (G4S)3은 가변 도메인을 연결하여 scFv 도메인을 창출한다. 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 및 항-BCMA scFv 플라스미드 작제물은 선택적인 Flag, His 또는 다른 친화도 태그를 가질 수 있고, HEK293 또는 다른 적합한 인간 또는 포유동물 세포주 속에 전기천공되고 정제된다. 검증 검정은 FACS에 의한 결합 분석, 프로테온(Proteon)을 이용한 동력학 분석, 및 CD19-발현 세포의 염색을 포함한다.
VL 및 VH 도메인의 예시적 항-CD19 또는 항-BMCA CDRs 및 이들을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 각각, 아래 보여진다:
항-CD19
항-CD19 경쇄 CDR1
코딩 서열: AGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAA (서열 식별 번호: 24).
아미노산 서열: RASQDISK (서열 식별 번호: 25).
항-CD19 경쇄 CDR2
코딩 서열: ATCTACCATACATCAAGATTA (서열 식별 번호: 26).
아미노산 서열: IYHTSRL (서열 식별 번호: 27).
항-CD19 경쇄 CDR3
코딩 서열: CAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACG (서열 식별 번호: 28).
아미노산 서열: QQGNTLPYT (서열 식별 번호: 29).
항-CD19 중쇄 CDR1
코딩 서열: GGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGC (서열 식별 번호: 30).
아미노산 서열: GVSLPDYGVS (서열 식별 번호: 31).
항-CD19 중쇄 CDR2
코딩 서열: GTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTC (서열 식별 번호: 32).
아미노산 서열: VIWGSETTYYNSAL (서열 식별 번호: 33).
항-CD19 중쇄 CDR3
코딩 서열: CATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTAC (서열 식별 번호: 34).
아미노산 서열: HYYYGGSYAMDY (서열 식별 번호: 35).
항-BCMA
항-BCMA 경쇄 CDR1
코딩 서열: AAAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCATAGCAACGGCAACACCTATCTGCAT (서열 식별 번호: 36).
아미노산 서열: KSSQSLVHSNGNTYLH (서열 식별 번호: 37).
항-BCMA 경쇄 CDR2
코딩 서열: AAAGTGAGCAACCGCTTTAGC (서열 식별 번호: 38).
아미노산 서열: KVSNRFS (서열 식별 번호: 39).
항-BCMA 경쇄 CDR3
코딩 서열: GCGGAAACCAGCCATGTGCCGTGGACC (서열 식별 번호: 40)
아미노산 서열: AETSHVPWT (서열 식별 번호: 41).
항-BCMA 중쇄 CDR1
코딩 서열: AAAGCGAGCGGCTATAGCTTTCCGGATTATTATATTAAC (서열 식별 번호: 42).
아미노산 서열: KASGYSFPDYYIN (서열 식별 번호: 43).
항-BCMA 중쇄 CDR2
코딩 서열: TGGATTTATTTTGCGAGCGGCAACAGCGAATATAACCAGAAATTTACCGGC (서열 식별 번호: 44).
아미노산 서열: WIYFASGNSEYNQKFTG (서열 식별 번호: 45).
항-BCMA 중쇄 CDR3
코딩 서열: CTGTATGATTATGATTGGTATTTTGATGTG (서열 식별 번호: 46).
아미노산 서열: LYDYDWYFDV (서열 식별 번호: 47).
항-CD19 경쇄 가변 영역
코딩 서열: GACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACA (서열 식별 번호: 48).
아미노산 서열: DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT(서열 식별 번호: 49).
항-CD19 중쇄 가변 영역
코딩 서열: GAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (서열 식별 번호: 50).
아미노산 서열: EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS (서열 식별 번호: 51).
항-BCMA 경쇄 가변 영역
코딩 서열: GATATTGTGATGACCCAGACCCCGCTGAGCCTGAGCGTGACCCCGGGCGAACCGGCGAGCATTAGCTGCAAAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCATAGCAACGGCAACACCTATCTGCATTGGTATCTGCAGAAACCGGGCCAGAGCCCGCAGCTGCTGATTTATAAAGTGAGCAACCGCTTTAGCGGCGTGCCGGATCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCGCGGATTTTACCCTGAAAATTAGCCGCGTGGAAGCGGAAGATGTGGGCGTGTATTATTGCGCGGAAACCAGCCATGTGCCGTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAAAGC (서열 식별 번호: 52).
아미노산 서열: DIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKS(서열 식별 번호: 53).
항-BCMA 중쇄 가변 영역
코딩 서열: CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTATAGCTTTCCGGATTATTATATTAACTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCTGGATTTATTTTGCGAGCGGCAACAGCGAATATAACCAGAAATTTACCGGCCGCGTGACCATGACCCGCGATACCAGCAGCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCAGCCTGCGCAGCGAAGATACCGCGGTGTATTTTTGCGCGAGCCTGTATGATTATGATTGGTATTTTGATGTGTGGGGCCAGGGCACCATGGTGACCGTGAGCAGC (서열 식별 번호: 54).
아미노산 서열: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS (서열 식별 번호: 55).
TCR 서브유닛의 공급원
인간 T 세포 수용체 (TCR) 복합체의 서브유닛은 모두 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 함유한다. 인간 TCR 복합체는 CD3-엡실론 폴리펩타이드, CD3-감마 폴리펩타이드, CD3-델타 폴리펩타이드, CD3-제타 폴리펩타이드, TCR 알파 쇄 폴리펩타이드 및 TCR 베타 쇄 폴리펩타이드를 함유한다. 인간 CD3-엡실론 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: Uniprot 수탁 번호 P07766. 인간 CD3-감마 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: Uniprot 수탁 번호 P09693. 인간 CD3-델타 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: Uniprot 수탁 번호 P043234. 인간 CD3-제타 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: Uniprot 수탁 번호 P20963. 인간 TCR 알파 쇄 표준적 서열은 하기이다: Uniprot 수탁 번호 Q6ISU1. 인간 TCR 베타 쇄 C 영역 표준적 서열은 하기이고: Uniprot 수탁 번호 P01850, 인간 TCR 베타 쇄 V 영역 서열은 P04435이다.
인간 CD3-엡실론 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI (서열 식별 번호: 56).
인간 CD3-감마 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: MEQGKGLAVLILAIILLQGTLAQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMCQNCIELNAATISGFLFAEIVSIFVLAVGVYFIAGQDGVRQSRASDKQTLLPNDQLYQPLKDREDDQYSHLQGNQLRRN (서열 식별 번호: 57).
인간 CD3-델타 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: MEHSTFLSGLVLATLLSQVSPFKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCQSCVELDPATVAGIIVTDVIATLLLALGVFCFAGHETGRLSGAADTQALLRNDQVYQPLRDRDDAQYSHLGGNWARNK (서열 식별 번호: 58).
인간 CD3-제타 폴리펩타이드 표준적 서열은 하기이다: MKWKALFTAAILQAQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열 식별 번호: 59).
인간 TCR 알파 쇄 표준적 서열은 하기이다: MAGTWLLLLLALGCPALPTGVGGTPFPSLAPPIMLLVDGKQQMVVVCLVLDVAPPGLDSPIWFSAGNGSALDAFTYGPSPATDGTWTNLAHLSLPSEELASWEPLVCHTGPGAEGHSRSTQPMHLSGEASTARTCPQEPLRGTPGGALWLGVLRLLLFKLLLFDLLLTCSCLCDPAGPLPSPATTTRLRALGSHRLHPATETGGREATSSPRPQPRDRRWGDTPPGRKPGSPVWGEGSYLSSYPTCPAQAWCSRSALRAPSSSLGAFFAGDLPPPLQAGAA (서열 식별 번호: 60).
인간 TCR 알파 쇄 C 영역 표준적 서열은 하기이다: PNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS (서열 식별 번호: 61).
인간 TCR 알파 쇄 V 영역 CTL-L17 표준적 서열은 하기이다: MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYFCAAKGAGTASKLTFGTGTRLQVTL (서열 식별 번호: 62).
인간 TCR 베타 쇄 C 영역 표준적 서열은 하기이다: EDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF (서열 식별 번호: 63).
인간 TCR 베타 쇄 V 영역 CTL-L17 표준적 서열은 하기이다: MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQNPRHNITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSLAGLNQPQHFGDGTRLSIL (서열 식별 번호: 64).
인간 TCR 베타 쇄 V 영역 YT35 표준적 서열은 하기이다: MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGHNSLFWYRQTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSFSTCSANYGYTFGSGTRLTVV (서열 식별 번호: 65).
예시적 항-BCMA 중쇄 서열은 하기이다:
TCR 도메인 및 scFvs로부터 TFP의 생성
CD19 또는 BCMA scFvs는 링커 서열, 예컨대 G4S, (G4S)2 (G4S)3 또는 (G4S)4를 이용하는 CD3-엡실론 또는 다른 TCR 서브유닛 (참고 1C)에 재조합으로 연결된다. 다양한 링커 및 scFv 배치구성이 이용된다. TCR 알파 및 TCR 베타 쇄는 전장 폴리펩타이드 또는 단지 그의 불변 도메인으로서 TFP의 생성에 사용되었다. TCR 알파 및 TCR 베타 쇄의 임의의 가변 서열은 TFP 제조를 위하여 허용된다.
TFP 발현 벡터
하기를 포함하는 발현 벡터가 제공된다: 프로모터 (사이토메갈로바이러스 (CMV) 인핸서-프로모터), 분비를 가능하게 하는 신호 서열, 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결자 (소 성장 호르몬 (BGH) 유전자), 에피솜 복제 및 하기에서 복제를 허용하는 요소: 원핵생물 (예를 들면, SV40 기원 및 ColE1 또는 당해 기술에서 공지된 다른 것) 및 선택을 허용하는 요소 (암피실린 저항 유전자 및 제오신 마커).
바람직하게는, TFP-인코딩 핵산 작제물은 렌티바이러스 발현 벡터 속에 클로닝되고 발현은 CD19+ 표적 세포에 대응하여 TFP.CD19-형질도입된 T-세포 (“CD19.TFP” 또는 “CD19.TFP T-세포” 또는 “TFP.CD19” 또는 “TFP.CD19 T-세포”), FAP+ 표적 세포에 대응하여 TFP.FAP-형질도입된 T-세포 (“FAP.TFP” 또는 “FAP.TFP T-세포” 또는 “TFP.FAP” 또는 “TFP.FAP T-세포”), CAIX+ 표적 세포에 대응하여 TFP.CAIX-형질도입된 T-세포 (“CAIX.TFP” 또는 “CAIX.TFP T-세포” 또는 “TFP.CAIX” 또는 “TFP.CAIX T-세포”), 또는 BCMA + 표적 세포에 대응하여 TFP.BCMA-형질도입된 T-세포 (“BCMA.TFP” 또는 “BCMA.TFP T-세포” 또는 “TFP.BCMA” 또는 “TFP.BCMA T-세포”)의 효과기 T-세포 반응의 양 및 품질에 기반하여 입증된다. 효과기 T-세포 반응은, 비제한적으로, 세포 팽창, 증식, 배가, 사이토카인 생산 및 표적 세포 용해 또는 세포용해 활성 (즉, 탈과립화)를 포함한다.
TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA 렌티바이러스 전달 벡터는 VSVg 모조타이핑된 렌티바이러스 입자 속에 포장된 게놈 물질을 생산하는데 사용된다. 렌티바이러스 전달 벡터 DNA는 리포펙타민 시약과 조합으로 VSVg, gag/pol 및 rev의 3개 포장 구성요소와 혼합되어 이들을 함께 293 세포 속에 형질감염한다. 24 및 48 시간후, 배지는 수집되고, 여과되고 초원심분리로 농축된다. 수득한 바이러스성 제제는 -80C에서 저장된다. 형질도입 유닛의 수는 SupT1 세포상의 적정에 의해 결정된다. 재유도된 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포는 24시간 동안 항-CD3x 항-CD28 비드로 신선한 원상태 T-세포의 활성화 및 그 다음 형질도입된 T-세포의 요망된 백분율을 수득하기 위해 형질도입 유닛의 적절한 수의 첨가에 의해 생산된다. 이들 변형된 T-세포는 이들이 휴지되고 크기가 작아지는 때까지 팽창하고 이 시점에서 이들은 나중의 분석을 위하여 동결보존된다. 세포 수 및 크기는 코울터 멀티사이저(coulter multisizer) III을 이용하여 측정된다. 동결보존 이전, (세포 표면에서 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA를 발현하는) 형질도입된 세포의 백분율 및 그 발현의 그의 상대 형광 강도는 유세포측정 분석에 의해 결정된다. 히스토그램 플롯으로부터, TFP의 상대 발현 수준은 그의 상대 형광 강도로 형질도입된 백분율의 비교에 의해 시험된다.
일부 구현예에서 다중 TFP는 다중 바이러스성 벡터를 이용한 T-세포 형질도입에 의해 도입된다.
인간화된 TFP 재유도된 T 세포의 세포용해 활성, 증식 능력 및 사이토카인 분비의 평가
세포-표면 발현된 TFP를 생산하기 위한, 그리고 표적 종양 세포를 표적, 사이토카인을 증식 및 분비하기 위한 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포의 기능성 능력은 당해 기술에 공지된 검정을 이용하여 결정된다.
인간 PBMCs (예를 들면, 원상태 T-세포가 T-세포, CD4+ 및 CD8+ 림프구에 대하여 음성 선택에 의해 수득되는 정상 분리반출된 공여체로부터 혈액)은 인간 인터류킨-2 (IL-2)로 치료되고 그 다음 TFP-인코딩 렌티바이러스 벡터로 형질도입에 앞서 37 ℃, 5% CO2에서, 예를 들면, 10% RPMI내 항-CD3x 항-CD28 비드로 활성화된다. 유세포측정 검정은, 예컨대 항-FLAG 항체 또는 항-쥣과 가변 도메인 항체에 의한 TFP의 세포 표면 존재를 확인하는데 이용된다. 사이토카인 (예를 들면, IFN-γ) 생산은 ELISA 또는 다른 검정을 이용하여 측정된다.
실시예 3: 인간 ALL 마우스 모델에서 인간 TFP T-세포 효능
1차 인간 ALL 세포는 하기에서 성장될 수 있다: 면역 절충된 마우스 (예를 들면, NSG 또는 NOD) (이들을 시험관내 배양해야 하는 것 없이). 마찬가지로, 배양된 인간 ALL 세포주는 상기 마우스내 백혈병을 유도할 수 있다. ALL-보유 마우스는, 예를 들면, 모델 HALLX5447에서 인간 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포의 효능을 시험하는데 사용될 수 있다. 상기 모델에서 판독은 i.v. 투여된 인간 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포의 부재 및 존재하에 ALL 세포의 정맥내 (i.v.) 주입 이후 마우스의 생존이다.
실시예 4: 생체내 고형 종양 이종이식 마우스 모델에서 인간 TFP T-세포 치료
인간 TFP.CD19 또는 TFP.BCMA T-세포의 효능은 또한 인간 CD19- 또는 BCMA-발현 ALL, CLL 또는 NHL 인간 세포주로부터 유래된 피하 고형 종양을 보유하는 면역 절충된 마우스 모델에서 시험될 수 있다. 인간 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포 치료에 대응하여 종양 수축은 종양 크기의 캘리퍼스 측정에 의해, 또는 GFP-발현 종양 세포에 의해 방출된 GFP 형광 신호의 강도 따름에 의해 평가될 수 있다.
1차 인간 고형 종양 세포는 이들을 시험관내 배양해야 하는 것 없이 면역 절충된 마우스에서 성장될 수 있다. 예시적 고형 암 세포는 고형 종양 세포주, 예컨대 하기에서 제공된 것을 포함한다: Cancer Genome Atlas (TCGA) 및/또는 Broad Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE, see Barretina 등, Nature 483: 603 (2012)). 예시적 고형 암 세포는 신장 세포 암종, 유방 암, 폐 암, 난소 암, 전립선 암, 결장 암, 자궁경부 암, 뇌암, 간 암, 췌장 암, 신장 또는 위 암으로부터 단리된 1차 종양 세포를 포함한다. 이들 마우스는 인간 종양 이종이식 모델에서 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포의 효능을 시험하는데 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Morton 등, Nat.Procol.2: 247 (2007)). 1x106-1x107 1차 세포 (EC 매트릭스 물질내 콜라겐분해효소-처리된 벌크 종양 현탁액) 또는 종양 단편 (EC 매트릭스 물질내 1차 종양 단편)의 피하로 임플란트 또는 주사 이후, 종양은 치료의 개시에 앞서 200-500 mm3으로 성장하게 된다.
실시예 5: 다중화된 TFP 폴리펩타이드의 시범, 및 다중화 인간화된 TFP 재유도된 T 세포의 사용
본원에서 제공된 TFP 폴리펩타이드는 기능성 TCR 복합체를 형성하기 위해 내인성 TCR 서브유닛 폴리펩타이드와 기능적으로 관련할 수 있다. 여기서, 렌티바이러스 벡터내 다중 TFP는 기능성, 다중화된 재조합 TCR 복합체를 창출하기 위해 T-세포를 형질도입하는데 사용된다. 예를 들어, i) CD3-드셀타(dselta) 폴리펩타이드 및 CD19-, FAP-, CAIX-, 또는 BCMA-특이적 scFv 항체 단편으로부터 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 갖는 제1 TFP, 및 ii) CD3-감마 폴리펩타이드 및 CD19-, FAP-, CAIX-, 또는 BCMA-특이적 항체 단편으로부터 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 갖는 제2 TFP를 함유하는 T-세포가 제공된다. 제1 TFP 및 제2 TFP는 서로와 및 내인성 TCR 서브유닛 폴리펩타이드와 상호작용할 수 있어서, 이로써 기능성 TCR 복합체를 형성한다.
이들 다중화 인간화된 TFP.CD19, TFP.FAP, TFP.CAIX 또는 TFP.BCMA T-세포의 이용은 상기 실시예 2 및 3에 제공된 바와 같이 액형 및 고형 종양에서 실증된다.
실시예 6: TFP로 형질도입된 T-세포의 제제
렌티바이러스 생산
적절한 작제물을 인코딩하는 렌티바이러스는 아래와 같이 제조되었다. 5x106 HEK293FT-세포는 100 mm 접시에 씨딩되었고 밤새 70-90% 밀집도를 달성하게 되었다. 2.5 μg의 표시된 DNA 플라스미드 및 20 μL 렌티바이러스 패키징 혼합물 (ALSTEM, cat# VP100; 참고 부록 B3)은 혈청 없이 0.5 mL DMEM 또는 Opti-MEM I 배지에서 희석되었고 약하게 혼합되었다. 별개의 튜브에서, 30 μl의 NanoFect 형질감염 시약 (ALSTEM, cat.no.NF100)은 혈청 없이 0.5 mL DMEM 또는 Opti-MEM I 배지에서 희석되었고 약하게 혼합되었다. NanoFect/DMEM 및 DNA/DMEM 용액은 그 다음 함께 혼합되었고 15 분 동안 실온에서 DMEM-플라스미드-NanoFect 혼합물의 인큐베이션에 앞서 10-15 초 동안 와류되었다. 이전의 단계로부터 완전한 형질감염 복합체는 세포의 플레이트에 적가되었고 플레이트에서 형질감염 복합체를 고르게 분산하도록 흔들렸다. 플레이트는 그 다음 가습된 5% CO2 인큐베이터에서 37 ℃에 밤새 인큐베이션되었다. 다음 날, 상청액은 10 mL 새로운 배지로 대체되었고 하기로 보강되었다: 20 μl의 ViralBoost (500x, ALSTEM, cat.no.VB100). 플레이트는 그 다음 추가의 24 시간 동안 37 ℃에 인큐베이션되었다. 렌티바이러스 함유 상청액은 그 다음 50 mL 멸균된, 캡핑된 원뿔형 원심관 속에 수집되었고 얼음에 놓여졌다. 4 ℃에 15 분 동안 3000 rpm으로 원심분리 이후, 청소된 상청액은 저-단백질 결합 0.45 μm 멸균된 필터로 여과되었고 바이러스는 이어서 4 ℃에 1.5 시간 동안 25,000 rpm (Beckmann, L8-70M)으로 초원심분리에 의해 단리되었다. 펠렛은 제거되었고 DMEM 배지에서 재-현탁되었고 렌티바이러스 농도/역가는, Lenti-X qRT-PCR 적정 키트 (Clontech; 카탈로그 번호 631235)를 이용하는, 정량적 RT-PCR에 의해 확립되었다. 임의의 잔류 플라스미드 DNA는 DNaseI를 이용한 치료에 의해 제거되었다. 바이러스 스톡 제제는 즉시 감염에 사용되었거나 미래의 사용을 위하여 -80 ℃에서 분주 및 저장되었다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
PBMC 단리
말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 전혈 또는 버피 코트로부터 제조되었다. 전혈은 10 mL 헤파린 진공채혈기에서 수집되었고 즉시 가공되었거나 4 ℃에서 밤새 저장되었다. 대략 10 mL의 전체의 항-응고된 혈액은 50 mL 원뿔형 원심관 (PBS, pH 7.4, Ca2+/Mg2+ 없이)에서 20 mL의 총 용적으로 멸균된 포스페이트 완충된 염수 (PBS) 완충액과 혼합되었다. 20 mL의 상기 혈액/PBS 혼합물은 그 다음 중단 적용 없이 실온에서 30-40 분 동안 400g에서 원심분리에 앞서 15 mL의 Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare, 17-1440-03)의 표면상에 약하게 중복되었다.
버피 코트는 Research Blood Components (Boston, MA)로부터 구매되었다. 류코셉(Leucosep) 튜브 (Greiner bio-one)는 15 mL Ficoll-Paque (GE Health Care)의 부가에 의해 제조되었고 1 분 동안 1000g에서 원심분리되었다. 버피 코트는 PBS에서 (pH 7.4, Ca2+ 또는 Mg2+ 없이) 1: 3 희석되었다. 희석된 버피 코트는 류코셉 튜브로 이동되었고 중단 적용 없이 15 분 동안 1000g에서 원심분리되었다. 희석된 혈장/ 피콜 계면에서 보여지는, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 함유하는 세포의 층은 피콜에 의한 오염을 최소화하기 위해 주의하여 제거되었다. 잔류 피콜, 혈소판, 및 혈장 단백질은 그 다음 실온에서 10 분 동안 200g로 원심분리에 의해 40 mL의 PBS로 PBMCs를 3회 세정함으로써 제거되었다. 세포는 그 다음 혈구계로 카운트되었다. 세정된 PBMC는 CAR-T 배지 (AIM V-AlbuMAX (BSA) (Life Technologies)로, 5% AB 혈청 및 1.25 μg/mL 암포테리신 B (Gemini Bioproducts, Woodland, CA), 100 U/mL 페니실린, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신)으로 1회 세정되었다. 대안적으로, 세정된 PBMC’s는 절연된 바이알에 이동되었고 나중 사용을 위하여 액체 질소에 저장 이전 24 시간 동안 -80 ℃에서 냉동되었다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
T-세포 활성화
전혈 또는 버피 코트로부터 제조된 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 바이러스성 형질도입에 앞서 24 시간 동안 항-인간 CD28 및 CD3 항체-접합된 자기 비드로 자극되었다. 새롭게 단리된 PBMC는 CAR-T 배지 (AIM V-AlbuMAX(BSA)(Life Technologies)에서, huIL-2 없이 5% AB 혈청 및 1.25 μg/mL 암포테리신 B (Gemini Bioproducts), 100 U/mL 페니실린, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신)으로 1회 세정되었고, 그 다음 300 IU/mL 인간 IL-2 (1000x 스톡으로부터; Invitrogen)을 가진 CAR-T 배지내 1x106 세포/mL의 최종 농도에서 재-현탁되었다. PBMCs가 이전에 냉동되었다면 이들은 해동되었고 1x106 세포/mL의 농도에서 10% FBS, 100 U/mL 페니실린, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신의 존재하에 9 mL의 사전-가온된 (37 ℃) cDMEM 배지 (Life Technologies)내 1x107 세포/mL에서 재-현탁된 다음 상기에 기재된 바와 같이 CART 배지에서 1회 세정, CAR-T 배지내 1x106 세포/mL에서 재-현탁, 및 IL-2의 첨가가 실시되었다.
활성화에 앞서, 항-인간 CD28 및 CD3 항체-접합된 자기 비드 (Invitrogen)는, 용액으로부터 비드를 단리시키기 위한 자기 래크를 이용하여, 1 mL의 멸균된 1x PBS (pH7.4)로 3회 세정된 다음, CAR-T 배지에서, 300 IU/mL 인간 IL-2로, 4x107 비드/mL의 최종 농도로 재-현탁되었다. PBMC 및 비드는 그 다음, 1 mL의 PBMC에 비드의 25 μL (1x106 비드) 이동에 의해, 1: 1 비드-대-세포 비로 혼합되었다. 요망된 수의 분취액은 그 다음 12-웰 저-부착의 단일 웰들, 또는 비-치료된 세포 배양판에 분배되었고, 바이러스성 형질도입 이전 24 시간 동안 5% CO2로 37 ℃에서 인큐베이션되었다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
T-세포 형질도입/형질감염 및 팽창
PBMC의 활성화 이후 세포는 37 ℃, 5% CO2에서 24 시간 인큐베이션되었다. 렌티바이러스는 얼음에서 해동되었고 5x106 렌티바이러스는 2 μL의 트란스플러스(Transplus) (Alstem) / mL의 배지 (1: 500의 최종 희석액)과 함께 1x106 세포의 각 웰에 첨가되었다. 세포는 바이러스의 반복 첨가 이전 추가의 24 시간 동안 인큐베이션되었다. 대안적으로, 렌티바이러스는 얼음에서 해동되었고 각각의 바이러스는 5 μg/mL 폴리브렌(Polybrene) (Sigma)의 존재하에 5 또는 50 MOI에서 첨가되었다. 세포는 실온에서 100 분 동안 100g로 원심접종되었다. 세포는 그 다음 6-14 일의 기간 동안 인간 IL-2의 300 IU/mL의 계속된 존재하에 성장되었다 (총 인큐베이션 시간은 요구된 CAR-T-세포의 최종 수에 의존한다). 세포 농도는 매 2-3 일 분석되었고, 배지는 세포 현탁액을 1x106 세포/mL로 유지하기 위해 그때 첨가되었다.
일부 경우에서, 활성화된 PBMCs는 시험관내 전사된 (IVT) mRNA로 전기천공되었다 (도14). 인간 PBMCs는 300 IU/ml 재조합 인간 IL-2 (R&D System)의 존재하에 3 일 동안 1-대-1 비로 Dyna 비드 (ThermoFisher)로 자극되었다. 비드는 전기천공 이전 제거되었다. 세포는 세정되었고 2.5x107 세포/ mL의 농도로 OPTI-MEM 배지 (ThermoFisher)에서 재-현탁되었다. 200 μL의 세포 현탁액 (5x106 세포)는 2 mm 갭 Electroporation Cuvettes Plus™ (Harvard Apparatus BTX)에 이동되었고 얼음에서 사전냉각되었다. 10 μg의 IVT TFP mRNA는 세포 현탁액에 첨가되었다. mRNA/세포 혼합물은 그 다음 ECM830 Electro Square Wave Porator (Harvard Apparatus BTX)를 이용하여 20 밀리초 동안 200 V로 전기천공되었다. 전기천공 직후, 세포는 신선한 세포 배양 배지 (AIM V AlbuMAX (BSA) 무혈청 배지 + 5% 인간 AB 혈청 + 300 IU/ml IL-2)에 이동되었고 37 ℃에서 인큐베이션되었다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
세포 염색에 의한 TFP 발현의 입증
렌티바이러스 형질도입 또는 mRNA 전기천공 이후, 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 및 항-BCMA CARs 및 TFP의 발현은, 쥣과 항-CD19, 항-FAP, 항-CAIX 또는 항-BCMA scFv를 검출하기 위한 항-마우스 Fab 항체를 이용하여, 유세포측정에 의해 확인되었다. T-세포는 3 mL 염색 완충액 (PBS, 4% BSA)에서 3회 세정되었고 1x106 세포 / 웰에서 재-현탁되었다. 사멸 세포를 제외하고, 세포는 얼음에서 30 분 동안 Live dead aqua (Invitrogen)로 인큐베이션되었다. 세포는 PBS로 2회 세정되었고 50 μL 염색 완충액에서 재-현탁되었다. Fc 수용체를 차단하기 위해, 1 μL의 1: 100 희석된 정상 염소 lgG (LifeTechnologies)는 각각의 튜브에 첨가되었고 10 분 동안 얼음에서 인큐베이션되었다. 1.0 mL FACS 완충액은 각각의 튜브에 첨가되었고, 양호하게 혼합되었고, 세포는 5 분 동안 300g으로 원심분리에 의해 펠렛화되었다. scFv TFP의 표면 발현은 아이소타입 대조군으로서 작용하는 바이오틴-표지된 정상 다클론성 염소 IgG 항체 (Life Technologies)와 바이오틴-표지된 다클론성 염소 항-마우스-F(ab)2 항체 (Life Technologies)에 의해 검출되었다. 양쪽 항체는 100 μL의 반응 용적에서 10 μg/mL로 첨가되었다. 세포는 그 다음 45 분 동안 4 ℃에서 인큐베이션되었고, 1회 세정되었고, FACS 완충액에서 재-현탁되었고 각각의 튜브에 100 μL 1: 1000 희석된 정상 마우스 lgG 첨가에 의해 정상 마우스 IgG (Invitrogen)로 차단되었다. 세포는 그 다음 10 분 동안 얼음에서 인큐베이션되었고, 염색 완충액으로 세정되었고 100 μL 염색 완충액에서 재-현탁되었다. 세포는 그 다음 1.0 μL 파이코에리트린 (PE)-표지된 스트렙타비딘 (BD Biosciences) 및 APC 항-인간 CD3 항체 (클론-UCHT1, BD Biosciences)의 첨가에 의해 염색되었고, PerCP/Cy5.5 항-인간 CD8 항체 (클론-SK1, BD Biosciences) 및 퍼시픽 블루 항-인간 CD4 항체 (클론-RPA-T4, BD Biosciences)는 각각의 튜브에 첨가되었다. 유세포측정은 LSRFortessaTM X20 (BD Biosciences)를 이용하여 수행되었고 데이터는 FACS 디바(diva) 소프트웨어를 이용하여 획득되었고 하기로 분석되었다: FlowJo (Treestar, Inc. Ashland, OR). 형질도입된 T-세포의 20% 내지 40%는 항-CD19 CAR, 항-CD19 LL TFP, 항-CD19 SL TFP 또는 항-BCMA TFP를 발현하였고, 형질도입의 비교할만한 수준 및 CAR 및 TFP 작제물의 표면 발현을 나타냈다 (도5-7).
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
실시예 7: 유세포측정에 의한 세포독성 검정
각각의 CD19, FAP, CAIX 또는 BCMA 표적에 대하여 양성 또는 음성인 표적 세포는 형광 염료, 카복시플루오레신 디아세테이트 석신이미딜 에스테르 (CFSE)로 표지되었다. 이들 표적 세포는 비-형질도입되었거나, 대조군 CAR-T 작제물로 형질도입되었거나, TFP로 형질도입된 효과기 T-세포와 혼합되었다. 표시된 인큐베이션 기간 이후, 사멸 대 살아있는 CFSE-표지된 표적 세포 및 음성 대조군 표적 세포의 백분율은 유세포측정에 의해 각각의 효과기/표적 세포 배양액에 대하여 결정되었다. 각각의 T-세포 + 표적 세포 배양액에서 표적 세포의 퍼센트 생존은 표적 세포 단독을 함유하는 웰들에 대해 계산되었다.
효과기 T-세포의 세포독성 활성은, 유세포측정을 이용하는, 효과기 및 표적 세포의 코-인큐베이션 이후, 효과기 T-세포와 무관하게 표적 세포내 생존한 표적 세포의 수를 비교함으로써 측정되었다. CD19 TFP 또는 CAR-T-세포를 이용한 실험에서, 표적 세포는 CD19-양성 Raji 버킷 림프종 세포 (ATCC, CCL-86)이었고, 반면에 음성 대조군으로서 사용된 세포는 CD19-음성 K562 세포 (ATCC, CCL-243)이었다. BCMA TFP T-세포를 이용한 실험에서, 표적 세포는 BCMA-양성 RPMI-8226 형질세포종/골수종 세포 (ATCC, CCL-155)이었고, 반면에 음성 대조군으로서 사용된 세포는 BCMA-음성 Raji 버킷 림프종 세포 (ATCC, CCL-86)이었다.
표적 세포는 1회 세정되었고, 1×106 세포/mL에서 재-현탁되었다. 형광 염료 카복시플루오레신 디아세테이트 석신이미딜 에스테르 (CFSE) (ThermoFisher)는 0.03 μM의 농도에서 세포 현탁액에 첨가되었고 세포는 실온에서 20 분 동안 인큐베이션되었다. 표지화 반응은, 반응 용적의 5 배 용적에서 완전한 세포 배양 배지 (RPMI-1640 + 10% HI-FBS)로 세포 현탁액에 첨가에 의해, 중지되었고, 세포는 실온에서 추가의 2 분 동안 인큐베이션되었다. 세포는 원심분리에 의해 펠렛화되었고 2x105 세포/mL로 세포독성 배지 (페놀 레드가 없는 RPMI1640 (Invitrogen) 플러스 5% AB 혈청 (Gemini Bioproducts)에서 재-현탁되었다. 50 마이크로리터의 CFSE 표지된-표적 세포 현탁액 (10,000 세포와 동일)은 96-웰 U-최하부 플레이트 (Corning)의 각 웰에 첨가되었다.
BCMA TFP 작제물로 형질도입된 효과기 T-세포는, 음성 대조군으로서 비-형질도입된 T-세포와 함께, 세정되었고 세포독성 배지에서 2x106 세포/mL, 또는 1x106 세포/mL에서 현탁되었다. 50 μL의 효과기 T-세포 현탁액 (100,000 또는 50,000 세포와 동일)은 100 μL의 총 용적에서 10-대-1 또는 5-대-1 각각의 효과기-대-표적 비를 달성하기 위해 플레이팅된 표적 세포에 첨가되었다. 배양액은 그 다음 혼합되었고, 회전되었고, 37 ℃, 5% CO2에서 4 시간 동안 인큐베이션되었다. 상기 인큐베이션 직후, 7AAD (7-아미노악티노마이신 D) (BioLegend)는 제조자에 의해 권고된 바와 같이 배양된 세포에 첨가되었고, 유세포측정은 BD Fortessa X-20 (BD Biosciences)로 수행되었다. 유세포측정 데이터의 분석은 FlowJo 소프트웨어 (TreeStar, Inc.)를 이용하여 수행되었다.
RPMI-8226 표적 세포를 위한 생존의 백분율은 효과기 T-세포 및 표적 세포와 샘플내 살아있는 RPMI-8226 표적 세포 (CFSE+7-AAD-)의 수를 표적 세포 단독과 샘플에서 살아있는 RPMI-8226 (CFSE+7-AAD-) 세포의 수로 분할함으로써 계산되었다. 효과기 세포에 대한 세포독성은 RPMI-8226에 대한 사멸의 백분율 = 100% - RPMI-8226 세포에 대한 생존의 백분율로서 계산되었다.
이전에 기재된 바와 같이, 항-CD19 28ζ CAR 작제물로 형질도입된 T-세포는, 비-형질도입된 또는 비-CD19-특이적 CAR 대조군으로 형질도입된 T-세포와 비교된 경우, CD19-발현 Raji B 세포에 대해 세포독성을 실증하였다 (도8). 그러나, 항-CD19-CD3ε로 형질도입된 T-세포는 시험된 모든 효과기: 표적 비에서 항-CD19 CAR 대조군보다 Raji 표적에 대해 더욱 효율적인 세포독성을 유도하였다. 항-CD19-CD3γ TFP는 또한 효과기: 표적 비 5 내지 10: 1에서 항-CD19-CAR로 관측된 것 초과이었던 강력한 세포독성을 매개하였다 (도8). 일부 세포독성은 항-CD19-TCRα 및 항-CD19-TCRβ TFP로 관측되었다. 유사한 결과는 대안적인 힌지 영역으로 작제된 항-CD19 TFP로 수득되었다. 다시 한번, CD19-발현 Raji 표적 세포에 대한 세포독성은 항-CD19-CAR-형질도입된 T-세포보다 항-CD19-CD3ε 또는 항-CD19-CD3γ TFP-형질도입된 T-세포로 더 컸다.
CD-19에 특이적인 TFP를 인코딩하는 mRNA로 전기천공된 T-세포는 또한 CD19-발현 Raji 세포에 대해 강력한 세포독성을 실증하였다 CD19-음성 K562 세포의 상당한 사멸이 대조군 또는 항-CD19 TRuC 작제물로 보이지 않았던 반면, Raji의 CD19-특이적 사멸은 항-CD19-CD3ε SL, 또는 항-CD19-CD3γ SL TRuCs로 형질도입된 T 세포에 의해 관측되었다 (도14).
B-세포 성숙 항원 (BCMA)에 특이적인 TFP로 형질도입된 T-세포는 또한 BCMA-발현 RPMI8226 세포에 대해 강력한 세포독성을 실증하였다. 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 T-세포는 BCMA-발현 RPMI8226 표적 세포에 대해 세포독성을 효율적으로 매개하였다. 효과기 대 표적 세포의 10: 1 비에서, 거의 100%의 표적 세포가 사멸되었다 (도9).
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
실시예 8: 실시간 세포독성 검정에 의한 세포독성
항-CD19 및 항-BCMA TFP는 또한 실시간 세포독성 검정 (RTCA) 포멧으로 항-CD19 CARs보다 우월한 세포독성을 실증하였다. RTCA 검정은 실시간으로 특화된 96-웰 플레이트의 각각의 웰에서 부착 표적 세포 단일층의 전기 임피던스를 측정하고 세포 지수로 불리는 값으로서 최종 판독을 나타낸다. 세포 지수에서의 변화는 공-인큐베이션된 T-세포 효과기에 의한 표적 세포의 사멸의 결과로서 표적 세포 단일층의 파괴를 나타낸다. 따라서 효과기 T-세포의 세포독성은 표적 세포 단독을 가진 웰들의 것과 비교된 표적 세포 및 효과기 T-세포 둘 모두를 가진 웰들의 세포 지수에서의 변화로서 평가될 수 있다.
RTCA용 표적 세포는 음성 대조군으로서 친계, 비-형질도입된, HeLa 세포로 CD19 (CD19-HeLa) 또는 BCMA (BCMA-HeLa)를 발현하는 HeLa 세포이었다. 전장 인간 CD19 또는 BCMA를 인코딩하는 DNA는 GeneArt (ThermoFisher)에 의해 합성되었고, EF1a 프로모터의 제어하에, 선택 마커로서 네오마이신을 운반하는 이중-프로모터 렌티바이러스 벡터 pCDH514B (System Bioscience)의 다중 클로닝 부위 속에 삽입되었다. CD19 또는 BCMA 인코딩 벡터를 운반하는 렌티바이러스는 그 다음 포장되었다. HeLa 세포는 24 시간 동안 CD19- 또는 BCMA-렌티바이러스로 형질도입되었고 그 다음 G418 (1 mg/mL)로 선택되었다. 형질도입된 CD19-Hela 또는 BCMA-HeLa에 의한 CD19 또는 BCMA의 발현은 항-인간 CD19 또는 BCMA 항체 (BioLegend, 클론# 19A2; Miltenyi, 클론# REA315)로 FACS 분석에 의해 확인되었다.
부착 표적 세포는 DMEM, 10% FBS, 1% Antibiotic-Antimycotic (Life Technologies)에서 배양되었다. RTCA를 제조하기 위해, 50 μL의 RPMI 배지는 하기의 적절한 웰들 속에 첨가되었다: E-플레이트 (ACEA Biosciences, Inc, 카탈로그#: JL-10-156010-1A). 플레이트는 그 다음 RTCA MP 기기 (ACEA Biosciences, Inc.) 속에 배치되었고 적절한 플레이트 레이아웃 및 검정 스케줄은 제조자 매뉴얼에서 기재된 바와 같이 RTCA 2.0 소프트웨어에 입력되었다. 기준치 측정은 100 측정 동안 매 15 분 수행되었다. 100 μL 용적으로 1x104 표적 세포는 그 다음 각각의 검정 웰에 첨가되었고 세포는 15 분 동안 침강되었다. 플레이트는 판독기에 되돌려졌고 판독은 재개되었다.
다음 날, 효과기 T-세포는 세정되었고 세포독성 배지 (페놀 레드가 없는 RPMI1640 (Invitrogen) 플러스 5% AB 혈청 (Gemini Bioproducts; 100-318))에서 재-현탁되었다. 플레이트는 그 다음 기기로부터 제거되었고, 세포독성 배지 (페놀 레드가 없는 RPMI1640 + 5% AB 혈청)에서 현탁된, 효과기 T-세포는, 10-대-1 또는 5-대-1 각각의 효과기-대-표적 비를 달성하기 위해 100,000 세포 또는 50,000 세포로 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 그 다음 기기에 원래 위치로 되돌려졌다. 측정은 100 측정 동안 매 2 분마다, 그 다음 1000 측정 동안 매 15 분 수행되었다.
RTCA 검정에서, CD19-형질도입된 HeLa의 사멸은, 대조군 CAR 작제물로 형질도입된 T-세포로 공-인큐베이션된 HeLa 또는 HeLa 단독에 비해 효과기 세포의 첨가 이후 세포 지수에서 시간-의존적 감소에 의해 실증된 바와 같이, 항-CD19-28ζ CAR-형질도입된 T-세포로 형질도입된 T-세포에 의해 관측되었다 (도11). 그러나, 항-CD19-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP-발현 T-세포에 의한 표적 세포 사멸은 항-CD19 CAR로 관측된 것보다 더 깊고 더 신속했다. 예를 들어, 항-CD19-CD3ε TFP 형질도입된 T-세포의 첨가 4 시간 이내, CD19-발현 표적 세포의 사멸은 본질적으로 완전하였다. 다른 CD3 및 TCR 작제물을 포함하는 수많은 TFP 작제물로 형질도입된 T-세포로 사멸은 거의 관측되지 않았다. 유사한 결과는 대안적인 힌지 영역으로 작제된 항-CD19 TFP로 수득되었다. CD19-형질도입된 HeLa 표적 세포에 대한 세포독성은 항-CD19-CAR-형질도입된 T-세포보다 항-CD19-CD3ε 또는 항-CD19-CD3γ TFP-형질도입된 T-세포가 재차 더 컸다.
항-BCMA TFP로 형질도입된 T-세포는 또한 BCMA-발현 RPMI8226 세포에 대해 강력한 세포독성을 실증하였다. 하기에서 나타낸 바와 같이: 도9, 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 T-세포는 BCMA-발현 RPMI8226 표적 세포에 대해 세포독성을 효율적으로 매개하였다. 10: 1의 효과기 대 표적 비에서, 거의 100%의 표적 세포는 사멸되었다 (도12).
TFP-형질도입된 T-세포의 세포독성 활성은 형질도입에 사용된 바이러스 (MOI)의 양에 관하여 용량-의존적이었다. CD19-HeLa의 증가된 사멸은 항-CD19-CD3ε TFP 렌티바이러스의 MOI 증가, TFP 형질도입과 세포독성 활성 사이 관계의 추가 보강으로 관측되었다 (도13).
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
실시예 9: ELISA에 의한 IL-2 및 IFN-γ 분비
동족 항원을 보유하는 세포의 인식과 관련된 효과기 T-세포 활성화 및 증식의 또 다른 측정은 효과기 사이토카인 예컨대 인터류킨-2 (IL-2) 및 인터페론-감마 (IFN-γ)의 생산이다.
인간 IL-2 (카탈로그 #EH2IL2, Thermo Scientific) 및 IFN-γ 카탈로그 #KHC4012, Invitrogen)에 대한 ELISA 검정은 제품내 삽입물에서 기재된 바와 같이 수행되었다. 간단히, 50 μL의 재구성된 표준 및 샘플은 반복하여 96 웰 플레이트의 각 웰에 그 다음 50 μL의 바이오티닐화된 항체 시약이 첨가되었다. 샘플은 플레이트를 몇 번 약하게 탭핑함으로써 혼합되었다. 50 μL의 표준 희석제는 그 다음 표준 또는 샘플을 함유하지 않았던 모든 웰들에 첨가되었고 플레이트는 실온에서 (20-25 ℃)에서 3 시간 동안 인큐베이션에 앞서 접착제 플레이트 커버로 주의하여 밀봉되었다. 플레이트 커버는 그 다음 제거되었고, 플레이트 내용물은 비워졌고 각각의 웰은 세정 완충액으로 채워졌다. 상기 세정 절차는 총 3회 반복되었고 플레이트는 종이 타월 또는 다른 흡수제 물질상에 빨아들여졌다. 100 μL의 제조된 스트렙타비딘-HRP 용액은 각 웰에 첨가되었고 신규한 플레이트 커버는 실온에서 30 분 동안 인큐베이션에 앞서 부착되었다. 플레이트 커버는 재차 제거되었고, 플레이트 내용물은 버려졌고, 100 μL의 TMB 기질액은 각 웰에 첨가되었다. 반응은 30 분 동안 어두운 곳에 실온에서 발생하게 되었고, 그 후 100 μL의 중지 용액은 각 웰에 첨가되었다. 플레이트를 평가한다. 흡광도는 반응의 중지 30 분 이내 450 nm 및 550 nm에서 ELISA 플레이트 판독기 세트에서 측정되었다. 550 nm 값은 450 nm 값으로부터 공제되었고 미공지된 샘플내 IL-2 양은 IL-2 표준 곡선으로부터 수득된 값에 비해 계산되었다.
대안적으로, 2-플렉스 검정은 인간 IL-2 자기 비드 키트 (Invitrogen, LHC0021M) 및 인간 IFN-γ 자기 비드 키트 (Invitrogen, LHC4031M)와 인간 사이토카인 자기 완충액 시약 키트 (Invitrogen, LHB0001M)을 이용하여 수행되었다. 간단히, 25 μL의 인간 IL-2 및 IFN-γ 항체 비드는 96 웰 플레이트의 각 웰에 첨가되었고 하기 지침을 이용하여 세정되었다: 200 μL 1x 세정액의 2회 세정, 자기 96-웰 플레이트 분리기 (Invitrogen, A14179)와 접촉하여 플레이트 배치, 1 분 동안 비드 침강 및 액체의 디캔팅.그 다음, 50 μL의 인큐베이션 완충액은 플레이트의 각 웰에 100 μL의 재구성된 표준과 이중으로 또는 50 μL의 샘플 (세포독성 검정으로부터 상청액) 및 50 μL의 검정 희석제와, 삼중으로, 150 μL의 총 용적으로 첨가되었다. 샘플은 어둠 속에서 600 rpm으로 3 mm 궤도 반경을 가진 회전식 진탕기로 2 시간 동안 실온에서 혼합되었다. 플레이트는 동일한 세정 지침에 따라 세정되었고 100 μL의 인간 IL-2 및 IFN-γ 바이오티닐화된 검출기 항체는 각 웰에 첨가되었다. 샘플은 어둠 속에서 600 rpm으로 3 mm 궤도 반경을 가진 회전식 진탕기로 1 시간 동안 실온에서 혼합되었다. 플레이트는 동일한 세정 지침에 따라 세정되었고 100 μL의 스트렙타비딘-R-파이코에리트린은 각 웰에 첨가되었다. 샘플은 어둠 속에서 600 rpm으로 3 mm 궤도 반경을 가진 회전식 진탕기로 30 분 동안 실온에서 혼합되었다. 플레이트는 동일한 세정 지침을 이용하여 3회 세정되었고 액체 디캔팅 이후 샘플은 150 μL의 1x 세정액에서 재-현탁되었다. 샘플은 600 rpm으로 3 mm 궤도 반경을 가진 회전식 진탕기로 3 분 동안 혼합되었고 4 ℃에서 밤새 저장되었다. 나중에, 플레이트는 동일한 세정 지침에 따라 세정되었고 샘플은 150 μL의 1x 세정액에서 재-현탁되었다.
플레이트는 MAGPIX 시스템 (루미넥스) 및 xPONENT 소프트웨어를 이용하여 판독되었다. 데이터의 분석은, 표준 곡선 및 사이토카인 농도를 제공하는, MILLIPLEX Analyst 소프트웨어를 이용하여 수행되었다.
도15는, 비-형질도입된 또는 대조군 CAR-형질도입된 T-세포에 비하여, 항-CD19 TFP로 형질도입된 T-세포가 CD19 또는 CD19-형질도입된 HeLa 세포를 내인성으로 발현하는 어느 하나의 Raji 세포로 공-배양된 경우 IL-2 및 IFN-γ 둘 모두의 더 높은 수준을 생산한다는 것을 보여준다. 그에 반해서, CD19 음성 K562 세포 또는 비-형질도입된 HeLa 세포로 공-배양은 TFP-형질도입된 T-세포로부터 사이토카인 방출을 거의 초래하지 않는다. 이전의 세포독성 데이터와 일관되게, 대안적인 힌지 영역으로 작제된 항-CD19 TFP는 CD19-보유 표적 세포로 공-배양시 유사한 결과를 생성하였다 (도16).
이전의 세포독성 데이터에 따라서, 항-CD19-CD3ε 및 항-CD19-CD3γ는 TFP 작제물의 최고 IL-2 및 IFN-γ 수준을 생산하였다 (도15 및 16). 그러나, 항-CD19-CD3ε 및 항-CD19-CD3γ TFP 로 형질도입된 T-세포에 의한 사이토카인 생산은, 표적 세포 사멸의 훨씬 높은 수준을 증명하는 TFP에도 불구하고, 항-CD19-28ζ CAR을 발현하는 T-세포의 것과 비교할만한 하였다 (도8 및 11). TFP가 CARs보다 더욱 효율적으로 표적 세포를 사멸시킬 수 있지만, 비교할만한 하게 방출할 수 있거나 전-염증 사이토카인의 수준을 낮출 수 있는 가능성은 이들 사이토카인의 상승된 수준이 입양 CAR-T 요법에 대하여 용량-제한 독성과 관련되고 있기 때문에 CARs에 비하여 TFP에 잠재적인 이점을 나타낸다.
항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 T-세포는 또한 BCMA-HeLa로 그러나 BCMA를 발현하지 않았던 대조군 HeLa 세포가 아닌 것으로 공-배양시 IL-2 및 IFN-γ를 생선하였다 (도17).
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
실시예 10: 유세포측정에 의한 CD107a 노출
T-세포 활성화를 위한 추가의 검정은 휴지 세포내 세포질 세포용해 과립의 막에서 위치한 CD107a, 리소좀 관련된 막 단백질 (LAMP-1)의 표면 발현이다. 효과기 T-세포의 탈과립화, 세포용해 활성을 위한 전제조건은 활성화-유도된 과립 엑소사이토시스 이후 세포 표면에 CD107a의 동원을 초래한다. 따라서, CD107a 노출은, 사이토카인 생산에 더하여, 세포독성과 밀접하게 상관하는 T-세포 활성화의 추가의 측정을 제공한다.
표적 및 효과기 세포는 개별적으로 세정되었고 세포독성 배지 (RPMI+5% 인간 AB 혈청 + 1% 항생제 항진균성)에서 재-현탁되었다. 검정은, 0.5 μL/웰의 PE/Cy7-표지된 항-인간 CD107a (LAMP-1) 항체 (클론-H4A3, BD Biosciences)의 존재하에, U-바닥면 96-웰 플레이트 (Corning)내 100 μL 최종 용적으로 2x105 표적 세포와 2x105 효과기 세포를 배합시킴으로써 수행될 수 있다. 배양액은 그 다음 37 ℃, 5% CO2에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 상기 인큐베이션 직후, 10 μL의 1: 10 희석액의 분비 억제제 모넨신 (1000x 용액, BD GolgiStopTM)은 세포 방해 없이 각 웰에 주의하여 첨가되었다. 플레이트는 그 다음 37 ℃, 5% CO2에서 추가 2.5 시간 동안 인큐베이션되었다. 상기 인큐베이션 이후, 세포는 APC 항-인간 CD3 항체 (클론-UCHT1, BD Biosciences), PerCP/Cy5.5 항-인간 CD8 항체 (클론-SK1, BD Biosciences) 및 퍼시픽 블루 항-인간 CD4 항체 (클론-RPA-T4, BD Biosciences)로 염색되었고 그 다음 37 ℃, 5% CO2에서 30 분 동안 인큐베이션되었다. 세포는 그 다음 FACS 완충액으로 2x 세정되었다 (그리고 분석에 앞서 100 μL FACS 완충액 및 100ul IC fix 완충액에서 재현탁되었다.
T-세포의 표면에서 CD107a의 노출은 유세포측정에 의해 검출되었다. 유세포측정은 LSRFortessaTM X20 (BD Biosciences)로 수행되었고 유세포측정 데이터의 분석은 하기를 이용하여 수행되었다: FlowJo 소프트웨어 (Treestar, Inc. Ashland, OR). CD3 게이트 내에, CD107 +ve이었던 CD8+ 효과기 세포의 백분율은 각각의 효과기/표적 세포 배양액으로 결정되었다.
이전의 세포독성 및 사이토카인 데이터와 일관되게, 항-CD19-28ζ CAR로 형질도입된 효과기 T-세포와 CD19-발현 표적 세포, 예컨대 Raji 또는 Nalm-6 세포의 공-배양은 CD19 -ve 표적 세포로 인큐베이션된 효과기에 비해 표면 CD107a 발현에서 3 내지 5-배수 증가를 유도하였다 (도18). 비교로, 동일한 병태하에, 항-CD19-CD3ε LL 또는 항-CD19-CD3γ LL TFP-발현 효과기는 CD107a 발현의 5 내지 7-배수 유도를 나타냈다. 대안적인 힌지 영역으로 작제된 항-CD19 TFP는 CD19-보유 표적 세포로 공-배양시 유사한 결과를 생성하였다.
비-형질도입된 T-세포에 비해, 항-BCMA-CD3ε 또는 항-BCMA-CD3γ TFP로 형질도입된 세포는 또한 BCMA +ve RPMI8226 세포로 공-배양시 CD107a의 표면 발현에서 증가를 나타냈다 (도19). 이들 결과는 TFP-형질도입된 효과기 T-세포가 활성화되고 그의 동족 항원을 발현하는 표적 세포에 노출시 탈과립하는 것을 나타낸다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
실시예 11: 생체내 마우스 효능 연구
생체내 항-종양 반응을 달성하기 위한 항-CD19 TFP로 형질도입된 효과기 T-세포의 능력을 평가하기 위해, 항-CD19-28ζ CAR, 항-CD19-CD3ε LL TFP 또는 항-CD19-CD3γ LL TFP로 형질도입된 효과기 T-세포는 CD19+ Raji 또는 Nalm6 인간 백혈병성 세포주로 이전에 접종되어 있던 NOD/SCID/IL-2Rγ-/ (NSG-JAX) 마우스 속에 입양으로 전달되었다.
연구 시작에 앞서 적어도 6 주령인, 암컷 NOD/SCID/IL-2Rγ-/ (NSG-JAX) 마우스는 잭슨(Jackson) 실험실 (스톡 번호 005557)로부터 수득되었고 실험 사용 이전 3 일 동안 순응되었다. 접종을 위한 Raji 및 Nalm-6 인간 백혈병성 세포주는 실행가능한 세포 카운트를 결정하기 위해 수확 및 트리판 블루로 카운팅에 앞서 로그상 배양에서 유지되었다. 종양 공격의 날에, 세포는 5 분 동안 300g로 원심분리되었고 1x106 세포/100 μL (Nalm-6) 또는 5x105 세포/100 μL (Raji)에서 사전-가온된 멸균된 PBS에서 재-현탁되었다. 비-형질도입된 또는 항-CD19-28ζ CAR, 항-CD19-CD3ε LL TFP 또는 항-CD3γ LL TFP 작제물로 형질도입된, 입양 전달용 T-세포는 제조되었다. 연구의 0 일째에, 10 동물 / 실험적 그룹은 5x105 Raji 또는 1x106 Nalm-6 세포로 정맥내로 공격받았다. 3 일후, 표시된 효과기 T-세포 집단의 5x106은 100 μL의 멸균된 PBS내 각각의 동물에 정맥내로 이동되었다. 동물에 관한 상세한 임상 관찰은 안락사까지 매일 기록되었다. 체중 측정은 사망 또는 안락사까지 매주 모든 동물에서 실시되었다. 모든 동물은 시험 및 대조군 물품의 입양 전달 35 일후 안락사되었다. 연구 동안 빈사를 보이는 임의의 동물은 수의사와 협의하여 연구 책임자의 재량으로 안락사되었다.
비-형질도입된 T-세포에 비해, 항-CD19-28ζ CAR, 항-CD19-CD3ε LL TFP 또는 항-CD19-CD3γ LL TFP로 형질도입된 T-세포의 입양 전달은 하기의 생존을 연장시켰고: 양쪽 Raji (도20A) 및 Nalm6 (도20B) 종양-보유 마우스, 양쪽 항-CD19 CAR 및 TFP-형질도입된 T-세포가 이들 마우스 모델내 대응하는 증가된 생존으로 표적 세포 사멸을 매개할 수 있었다는 것을 나타냈다. 집합적으로, 이들 데이터는 TFP가 시험관내 및 생체내 둘 모두에서 제1 생성 CARs보다 우월한 항원-특이적 사멸을 입증하는 키메라 수용체 조작용 대안 플랫폼을 나타내는 것을 보여준다.
유사한 실험은 FAP.TFP 및 CAIX.TFP 작제물로 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예가 보여지고 본원에서 기재되고 있는 동안, 상기 구현예가 단지 예의 방식으로 제공되는 것이 당해 분야의 숙련가에 명백할 것이다. 수많은 변동, 변화, 및 치환은 이제 본 발명에서 이탈 없이 당해 분야의 숙련가에 발생할 것이다. 본원에서 기재된 본 발명의 구현예에 대한 다양한 대안이 본 발명의 실시에서 이용될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 하기 청구항이 본 발명의 범위를 한정하는 것 그리고 이들 청구항 및 그의 등가물의 범위가 이로써 포함되는 것이 의도된다.
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ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg 1740 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcggtt 1800 aacttttaaa agaaaagggg ggattggggg gtacagtgca ggggaaagaa tagtagacat 1860 aatagcaaca gacatacaaa ctaaagaatt acaaaaacaa attacaaaat tcaaaatttt 1920 atcgatacta gtattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca 1980 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc 2040 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga 2100 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat 2160 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggttta tataagcaga gctcgtttag 2220 tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagattct 2280 agagccgcca ccatgcttct cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca 2340 gcattcctcc tgatcccaga catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct 2400 ctgggagaca gagtcaccat cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat 2460 tggtatcagc agaaaccaga tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta 2520 cactcaggag 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tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta 120 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga 180 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc 240 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta 300 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact 360 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg 420 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct 480 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt 540 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag 600 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt 660 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt 720 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg 780 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag 840 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag 900 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc 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540 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag 600 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt 660 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt 720 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg 780 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag 840 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag 900 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg 960 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag 1020 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag 1080 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc 1140 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga 1200 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc 1260 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg 1320 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata 1380 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acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca 60 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta 120 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga 180 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc 240 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta 300 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact 360 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg 420 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct 480 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt 540 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag 600 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt 660 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt 720 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg 780 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag 840 gatagagata aaagacacca 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Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 17 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca 60 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta 120 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga 180 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc 240 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta 300 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact 360 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg 420 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct 480 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt 540 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag 600 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt 660 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt 720 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg 780 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc 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atacgcttcc gtacacg 27 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 30 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 30 ggggtctcat tacccgacta tggtgtaagc 30 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 10 <210> 32 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 32 gtaatatggg gtagtgaaac cacatactat aattcagctc tc 42 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu 1 5 10 <210> 34 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 34 cattattact acggtggtag ctatgctatg gactac 36 <210> 35 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 36 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 36 aaaagcagcc agagcctggt gcatagcaac ggcaacacct atctgcat 48 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 38 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 38 aaagtgagca accgctttag c 21 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 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Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Thr 1 5 10 15 Gly <210> 46 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 46 ctgtatgatt atgattggta ttttgatgtg 30 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 48 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 48 gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gggactaagt tggaaataac a 321 <210> 49 <211> 107 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ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatttact actgtgccaa acattattac 300 tacggtggta gctatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360 <210> 51 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 51 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 52 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 52 gatattgtga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga ccccgggcga accggcgagc 60 attagctgca aaagcagcca gagcctggtg catagcaacg gcaacaccta tctgcattgg 120 tatctgcaga aaccgggcca gagcccgcag ctgctgattt ataaagtgag caaccgcttt 180 agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggcg cggattttac cctgaaaatt 240 agccgcgtgg aagcggaaga tgtgggcgtg tattattgcg cggaaaccag ccatgtgccg 300 tggacctttg gccagggcac caaactggaa attaaaagc 339 <210> 53 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 53 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr 85 90 95 Ser His Val Pro Trp Thr Phe 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Arg Asp Asp Ala Gln Tyr 145 150 155 160 Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys 165 170 <210> 59 <211> 164 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu 1 5 10 15 Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys 20 25 30 Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala 35 40 45 Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 50 55 60 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 65 70 75 80 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 85 90 95 Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 100 105 110 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 115 120 125 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 130 135 140 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 145 150 155 160 Leu Pro Pro Arg <210> 60 <211> 281 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Met Ala Gly Thr Trp Leu Leu 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Gly Asp Thr Pro 210 215 220 Pro Gly Arg Lys Pro Gly Ser Pro Val Trp Gly Glu Gly Ser Tyr Leu 225 230 235 240 Ser Ser Tyr Pro Thr Cys Pro Ala Gln Ala Trp Cys Ser Arg Ser Ala 245 250 255 Leu Arg Ala Pro Ser Ser Ser Leu Gly Ala Phe Phe Ala Gly Asp Leu 260 265 270 Pro Pro Pro Leu Gln Ala Gly Ala Ala 275 280 <210> 61 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser 1 5 10 15 Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln 20 25 30 Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys 35 40 45 Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val 50 55 60 Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn 65 70 75 80 Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys 85 90 95 Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn 100 105 110 Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val 115 120 125 Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 62 <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Met Ala Met Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Ile Leu Trp Leu Gln Pro 1 5 10 15 Asp Trp Val Asn Ser Gln Gln Lys Asn Asp Asp Gln Gln Val Lys Gln 20 25 30 Asn Ser Pro Ser Leu Ser Val Gln Glu Gly Arg Ile Ser Ile Leu Asn 35 40 45 Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp Tyr Phe Leu Trp Tyr Lys Lys 50 55 60 Tyr Pro Ala Glu Gly Pro Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ser Ser Ile Lys 65 70 75 80 Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr Val Phe Leu Asn Lys Ser Ala 85 90 95 Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala 100 105 110 Val Tyr Phe Cys Ala Ala Lys Gly Ala Gly Thr Ala Ser Lys Leu Thr 115 120 125 Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Gln Val Thr Leu 130 135 <210> 63 <211> 177 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Phe <210> 64 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Asp His Ala Asp Thr Gly Val Ser Gln Asn Pro Arg His Asn Ile Thr 20 25 30 Lys Arg Gly Gln Asn Val Thr Phe Arg Cys Asp Pro Ile Ser Glu His 35 40 45 Asn Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Thr Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe 50 55 60 Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Glu Lys Ser Arg Leu Leu 65 70 75 80 Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Lys Gly Ser Phe Ser Thr Leu 85 90 95 Glu Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 Ser Ser Leu Ala Gly Leu Asn Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr 115 120 125 Arg Leu Ser Ile Leu 130 <210> 65 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Met Asp Ser Trp Thr Phe Cys Cys Val Ser Leu Cys Ile Leu Val Ala 1 5 10 15 Lys His Thr Asp Ala Gly Val Ile Gln Ser Pro Arg His Glu Val Thr 20 25 30 Glu Met Gly Gln Glu Val Thr Leu Arg Cys Lys Pro Ile Ser Gly His 35 40 45 Asn Ser Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Thr Met Met Arg Gly Leu Glu Leu 50 55 60 Leu Ile Tyr Phe Asn Asn Asn Val Pro Ile Asp Asp Ser Gly Met Pro 65 70 75 80 Glu Asp Arg Phe Ser Ala Lys Met Pro Asn Ala Ser Phe Ser Thr Leu 85 90 95 Lys Ile Gln Pro Ser Glu Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala 100 105 110 Ser Ser Phe Ser Thr Cys Ser Ala Asn Tyr Gly Tyr Thr Phe Gly Ser 115 120 125 Gly Thr Arg Leu Thr Val Val 130 135 <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This sequence may encompass 1-4 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 66 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This sequence may encompass 2-4 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 67 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 68 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(15) <223> This sequence may encompass 1-3 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 68 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 69 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(40) <223> This sequence may encompass 1-10 "Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 69 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 35 40 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 71 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 72 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 73 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> This sequence may encompass 1-6 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 73 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 30 <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5

Claims (112)

  1. 하기를 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자:
    (a) 하기를 포함하는 TCR 서브유닛:
    (i) 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및
    (ii) CD3 엡실론의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함하는 TCR 세포내 도메인; 및
    (b) 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인;
    상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고,
    상기 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
  2. 하기를 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자:
    (a) 하기를 포함하는 TCR 서브유닛:
    (i) 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및
    (ii) CD3 감마의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함하는 TCR 세포내 도메인; 및
    (b) 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인;
    상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고,
    상기 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
  3. 하기를 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자:
    (a) 하기를 포함하는 TCR 서브유닛:
    (i) 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및
    (ii) CD3 델타의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함하는 TCR 세포내 도메인; 및
    (b) 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인;
    상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고,
    상기 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
  4. 하기를 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자:
    (a) 하기를 포함하는 TCR 서브유닛:
    (i) 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및
    (ii) TCR 알파의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함하는 TCR 세포내 도메인; 및
    (b) 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인;
    상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고,
    상기 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
  5. 하기를 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자:
    (a) 하기를 포함하는 TCR 서브유닛:
    (i) 적어도 일 부분의 TCR 세포외 도메인, 및
    (ii) TCR 베타의 세포내 신호전달 도메인으로부터 자극 도메인을 포함하는 TCR 세포내 도메인; 및
    (b) 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인;
    상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인은 작동가능하게 연결되고,
    상기 TFP는 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입한다.
  6. 항-CD19 결합 도메인인 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인 및 TCR 서브유닛을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자.
  7. 항 내지 B 내지 세포 성숙 항원 (BCMA) 결합 도메인인 항원 결합 도메인을 포함하는 인간 또는 인간화된 항체 도메인 및 TCR 서브유닛을 포함하는 T-세포 수용체 (TCR) 융합 단백질 (TFP)을 인코딩하는, 단리된 재조합 핵산 분자.
  8. 청구항 6 또는 7에 있어서, 상기 TCR 서브유닛 및 상기 항체 도메인이 작동가능하게 연결되는, 단리된 핵산 분자.
  9. 청구항 6 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TFP가 T-세포에서 발현된 경우 TCR 속에 편입하는, 단리된 핵산 분자.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 항원 결합 도메인이 링커 서열에 의해 상기 TCR 세포외 도메인에 연결되는, 단리된 핵산 분자.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 인코딩된 링커 서열이 (G4S)n (여기에서 n=1 내지 4)를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 TCR 세포외 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 TCR 막관통 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 TCR 세포내 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 (i) TCR 세포외 도메인, (ii) TCR 막관통 도메인, 및 (iii) TCR 세포내 도메인을 포함하고, (i), (ii), 및 (iii) 중 적어도 2개가 상기 동일한 TCR 서브유닛 출신인, 단리된 핵산 분자.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 CD3 엡실론, CD3 감마 또는 CD3 델타의 세포내 신호전달 도메인, 또는 거기에 하나 이상의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 TCR 세포내 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TCR 서브유닛이 4 내지 1BB의 기능성 신호전달 도메인 및/또는 CD3 제타의 기능성 신호전달 도메인, 또는 거기에 하나 이상의 변형을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된 자극 도메인을 포함한 세포내 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  18. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 또는 인간화된 항체 도메인이 항체 단편을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  19. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 또는 인간화된 항체 도메인이 scFv 또는 VH 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: (i) 서열 식별 번호:25, 서열 식별 번호:27 및 서열 식별 번호:29 각각과 70 내지 100% 서열 동일성을 가진 항-CD19 경쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 경쇄 (LC) CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3, 및/또는 (ii) 서열 식별 번호:31, 서열 식별 번호:33 및 서열 식별 번호:35 각각과 70 내지 100% 서열 동일성을 갖는 항-CD19 중쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 중쇄 (HC) CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역이 하기를 포함하는, 경쇄 가변 영역을 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: 서열 식별 번호:49의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 식별 번호:49의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95 내지 99% 동일성을 가진 서열.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역이 하기를 포함하는, 중쇄 가변 영역을 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: 서열 식별 번호:51의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 식별 번호:51의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95 내지 99% 동일성을 가진 서열.
  23. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: (i) 서열 식별 번호:37, 서열 식별 번호:39 및 서열 식별 번호:41 각각과 70 내지 100% 서열 동일성을 가진 항 내지 BCMA 경쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 경쇄 (LC) CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3, 및/또는 (ii) 서열 식별 번호:43, 서열 식별 번호:45 및 서열 식별 번호:47 각각과 70 내지 100% 서열 동일성을 가진 항 내지 BCMA 중쇄 결합 도메인 아미노산 서열의 중쇄 (HC) CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3.
  24. 청구항 1 내지 19 및 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역이 하기를 포함하는, 경쇄 가변 영역을 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: 서열 식별 번호:53의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 식별 번호:53의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95 내지 99% 동일성을 가진 서열.
  25. 청구항 1 내지 19, 23 및 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역이 하기를 포함하는, 중쇄 가변 영역을 인코딩하는, 단리된 핵산 분자: 서열 식별 번호:55의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열의 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 식별 번호:55의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 95 내지 99% 동일성을 가진 서열.
  26. 청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TFP가 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 서브유닛의 세포외 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 TFP가 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 TFP가 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, TCR 제타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD28, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 공자극 도메인이 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM 내지 1, LFA 내지 1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 및 4 내지 1BB (CD137), 및 거기에 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질로부터 수득된 기능성 신호전달 도메인인, 단리된 핵산 분자.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 거기에 상기 적어도 하나 그러나 20 이하 변형이 세포 신호전달을 매개하는 아미노산의 변형 또는 상기 TFP에 결합하는 리간드에 대응하여 인산화되는 아미노산의 변형을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 핵산 분자가 mRNA인, 단리된 핵산 분자.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TFP가 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, TCR 제타 쇄, Fc 엡실론 수용체 1 쇄, Fc 엡실론 수용체 2 쇄, Fc 감마 수용체 1 쇄, Fc 감마 수용체 2a 쇄, Fc 감마 수용체 2b1 쇄, Fc 감마 수용체 2b2 쇄, Fc 감마 수용체 3a 쇄, Fc 감마 수용체 3b 쇄, Fc 베타 수용체 1 쇄, TYROBP (DAP12), CD5, CD16a, CD16b, CD22, CD23, CD32, CD64, CD79a, CD79b, CD89, CD278, CD66d, 그의 기능성 단편, 및 거기에 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 ITAM 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 서브유닛의 면역수용체 티로신 내지 기반된 활성화 모티프 (ITAM) 를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 ITAM이 CD3 감마, CD3 델타, 또는 CD3 엡실론의 ITAM을 대체하는, 단리된 핵산 분자.
  35. 청구항 33에 있어서, 상기 ITAM이 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되고 CD3 제타 TCR 서브유닛, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 상이한 ITAM을 대체하는, 단리된 핵산 분자.
  36. 청구항 1 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 뉴클레오타이드 유사체를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  37. 청구항 36에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 유사체가 2'-O-메틸, 2'-O-메톡시에틸 (2'-O-MOE), 2'-O-아미노프로필, 2'-데옥시, T 내지 데옥시 내지 2'-플루오로, 2'-O-아미노프로필 (2'-O-AP), 2'-O-디메틸아미노에틸 (2'-O-DMAOE), 2'-O-디메틸아미노프로필 (2'-O-DMAP), T-O-디메틸아미노에틸옥시에틸 (2'-O-DMAEOE), 변형된 2'-O-N 내지 메틸아세트아미도 (2'-O-NMA), 잠금 핵산 (LNA), 에틸렌 핵산 (ENA), 펩타이드 핵산 (PNA), 1',5'-안하이드로헥시톨 핵산 (HNA), 모폴리노, 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드, 티올포스포네이트 뉴클레오타이드, 및 2'-플루오로 N3-P5'-포스포르아미다이트로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 핵산 분자.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 리더 서열을 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  39. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산 분자에 의해 인코딩된, 단리된 폴리펩타이드 분자.
  40. 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  41. 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자로서, 상기 TFP 분자가 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  42. 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자로서, 상기 TFP 분자가 내인성 TCR 복합체와 기능적으로 상호작용할 수 있는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  43. 청구항 40에 있어서, 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함한 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  44. 청구항 40 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD19 결합 도메인이 scFv 또는 VH 도메인인, 단리된 TFP 분자.
  45. 청구항 40 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD19 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 TFP 분자: 서열 식별 번호:51의 아미노산 서열과 95 내지 100% 동일성을 가진 중쇄, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열.
  46. 청구항 40 내지 45 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD19 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 TFP 분자: 서열 식별 번호:49의 아미노산 서열과 95 내지 100% 동일성을 가진 경쇄, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열.
  47. 청구항 40 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 세포외 도메인을 포함한, 단리된 TFP 분자.
  48. 청구항 40 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서 단리된 TFP 분자.
  49. 청구항 40 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD19 결합 도메인이 링커 서열에 의해 상기 TCR 세포외 도메인에 연결되는, 단리된 TFP 분자.
  50. 청구항 49에 있어서, 상기 링커 영역이 (G4S)n (여기에서 n=1 내지 4)를 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  51. 인간 또는 인간화된 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  52. 상기 TFP 분자가 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있는, 인간 또는 인간화된 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  53. 상기 TFP 분자가 내인성 TCR 복합체속에 기능적으로 통합할 수 있는, 인간 또는 인간화된 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 재조합 TFP 분자.
  54. 청구항 53에 있어서, 인간 또는 인간화된 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함한 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  55. 청구항 51 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 내지 BCMA 결합 도메인이 scFv 또는 VH 도메인인, 단리된 TFP 분자.
  56. 청구항 51 내지 55 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 내지 BCMA 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 TFP 분자: 서열 식별 번호:55의 아미노산 서열과 95 내지 100% 동일성을 갖는 중쇄, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형 그의 아미노산 서열.
  57. 청구항 51 내지 56 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 내지 BCMA 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 TFP 분자: 서열 식별 번호:53의 아미노산 서열과 95 내지 100% 동일성을 가진 경쇄, 그의 기능성 단편, 또는 적어도 하나 그러나 30 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열.
  58. 청구항 51 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, CD3 델타 TCR 서브유닛, 그의 기능성 단편, 및 적어도 하나 그러나 20 이하 변형을 갖는 그의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는 TCR 세포외 도메인을 포함한, 단리된 TFP 분자.
  59. 청구항 51 내지 58 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 내지 BCMA 결합 도메인이 링커 서열에 의해 상기 TCR 세포외 도메인에 연결되는, 단리된 TFP 분자.
  60. 청구항 59에 있어서, 상기 링커 영역이 (G4S)n (여기에서 n=1 내지 4)를 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  61. 청구항 40 내지 60 중 어느 한 항에 있어서, 공자극 도메인을 인코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  62. 청구항 40 내지 61 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인을 인코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  63. 청구항 40 내지 62 중 어느 한 항에 있어서, 리더 서열을 추가로 포함하는, 단리된 TFP 분자.
  64. 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 TFP를 인코딩하는 서열을 포함하는, 핵산.
  65. 청구항 64에 있어서, 상기 핵산이 DNA 및 RNA로 구성된 군으로부터 선택되는, 핵산.
  66. 청구항 64 또는 65에 있어서, 상기 핵산이 mRNA인, 핵산.
  67. 청구항 64 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 뉴클레오타이드 유사체를 포함하는, 핵산.
  68. 청구항 67에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 유사체가 2'-O-메틸, 2'-O-메톡시에틸 (2'-O-MOE), 2'-O-아미노프로필, 2'-데옥시, T 내지 데옥시 내지 2'-플루오로, 2'-O-아미노프로필 (2'-O-AP), 2'-O-디메틸아미노에틸 (2'-O-DMAOE), 2'-O-디메틸아미노프로필 (2'-O-DMAP), T-O-디메틸아미노에틸옥시에틸 (2'-O-DMAEOE), 변형된 2'-O-N 내지 메틸아세트아미도 (2'-O-NMA), 잠금 핵산 (LNA), 에틸렌 핵산 (ENA), 펩타이드 핵산 (PNA), 1',5'-안하이드로헥시톨 핵산 (HNA), 모폴리노, 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드, 티올포스포네이트 뉴클레오타이드, 및 2'-플루오로 N3-P5'-포스포르아미다이트로 구성된 군으로부터 선택되는, 핵산.
  69. 청구항 64 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 프로모터를 추가로 포함하는, 핵산.
  70. 청구항 64 내지 69 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 시험관내 전사된 핵산인, 핵산.
  71. 청구항 64 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 폴리(A) 꼬리를 인코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 핵산.
  72. 청구항 64 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 3'UTR 서열을 추가로 포함하는, 핵산.
  73. 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 TFP를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는, 벡터.
  74. 청구항 73에 있어서, 상기 벡터가 DNA, RNA, 플라스미드, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 라우스 육종 바이러스성 (RSV) 벡터, 또는 레트로바이러스 벡터로 구성된 군으로부터 선택되는, 벡터.
  75. 청구항 73 또는 74에 있어서, 프로모터를 추가로 포함하는, 벡터.
  76. 청구항 73 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터가 시험관내 전사된 벡터인, 벡터.
  77. 청구항 73 내지 76 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터내 핵산 서열이 폴리(A) 꼬리를 추가로 포함하는, 벡터.
  78. 청구항 73 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터내 핵산 서열이 3'UTR을 추가로 포함하는, 벡터.
  79. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 39의 상기 폴리펩타이드 분자, 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 TFP 분자, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터를 포함하는, 세포.
  80. 청구항 79에 있어서, 상기 세포가 인간 T-세포인, 세포.
  81. 청구항 80에 있어서, 상기 T-세포가 CD8+ 또는 CD4+ T-세포인, 세포.
  82. 청구항 79 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인으로부터 양성 신호를 포함하는 제2 폴리펩타이드와 관련된, 적어도 일 부분의 억제 분자를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하는 억제 분자를 인코딩하는 핵산을 추가로 포함하는, 세포.
  83. 청구항 82에 있어서, 상기 억제 분자가 적어도 일 부분의 PD1을 포함한 제1 폴리펩타이드 및 공자극 도메인 및 1차 신호전달 도메인을 포함한 제2 폴리펩타이드를 포함하는, 세포.
  84. 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하되, 상기 TFP 분자는 인간 또는 인간화된 항-CD19 또는 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하고, 상기 TFP 분자가 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 상기 표면 내에/상에서 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있는, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포.
  85. 하기를 포함하는, 단백질 복합체:
    (i) 인간 또는 인간화된 항-CD19 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 TFP 분자; 및
    (ii) 적어도 하나의 내인성 TCR 서브유닛 또는 내인성 TCR 복합체.
  86. 청구항 85에 있어서, 상기 TCR이 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는, 단백질 복합체.
  87. 청구항 85 또는 86에 있어서, 상기 항-CD19 결합 도메인이 링커 서열에 의해 상기 TCR 세포외 도메인에 연결되는, 단백질 복합체.
  88. 청구항 87에 있어서, 상기 링커 영역이 (G4S)n (여기에서 n=1 내지 4)를 포함하는, 단백질 복합체.
  89. 하기를 포함하는, 단백질 복합체:
    (a) 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자에 의해 인코딩된 TFP, 및
    (b) 적어도 하나의 내인성 TCR 서브유닛 또는 내인성 TCR 복합체.
  90. 하기를 포함하는, 단백질 복합체:
    i) 인간 또는 인간화된 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 TFP 분자; 및
    ii) 적어도 하나의 내인성 TCR 서브유닛 또는 내인성 TCR 복합체.
  91. 청구항 90에 있어서, 상기 TCR이 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄, CD3 엡실론 TCR 서브유닛, CD3 감마 TCR 서브유닛, 및 CD3 델타 TCR 서브유닛으로 구성된 군으로부터 선택되는 단백질의 세포외 도메인 또는 그의 일부를 포함하는, 단백질 복합체.
  92. 청구항 90 또는 91에 있어서, 상기 항 내지 BCMA 결합 도메인이 링커 서열에 의해 상기 TCR 세포외 도메인에 연결되는, 단백질 복합체.
  93. 청구항 92에 있어서, 상기 링커 영역이 (G4S)n (여기에서 n=1 내지 4)를 포함하는, 단백질 복합체.
  94. 청구항 85 내지 93 중 어느 한 항에 따른 상기 단백질 복합체당 적어도 2개의 상이한 TFP 단백질을 포함하는, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포.
  95. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자에 의해 인코딩된 적어도 2개의 상이한 TFP 분자를 포함하는, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포.
  96. 상기 집단의 상기 T-세포가 개별적으로 또는 집합적으로 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하고, 상기 TFP 분자가 인간 또는 인간화된 항-CD19 또는 항 내지 BCMA 결합 도메인, TCR 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 집단으로서, 상기 TFP 분자가 상기 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 상기 표면내에, 표면에서 및/또는 표면 위에서 내인성 TCR 복합체 및/또는 적어도 하나의 내인성 TCR 폴리펩타이드와 기능적으로 상호작용할 수 있는, 집단.
  97. 상기 집단의 상기 T-세포가 개별적으로 또는 집합적으로 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자에 의해 인코딩된 적어도 2개의 TFP 분자를 포함하는, 인간 CD8+ 또는 CD4+ T-세포의 집단.
  98. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 또는 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터로 T-세포의 형질도입을 포함하는, 세포의 제조 방법.
  99. 시험관내 전사된 RNA 및 합성 RNA의 세포 속에 도입을 포함하는 RNA 내지 조작된 세포의 집단 생성 방법으로서, 상기 RNA가 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 TFP 분자를 인코딩하는 핵산을 포함하는, 방법.
  100. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자를 발현하는 세포, 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 TFP 분자, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터, 또는 청구항 79 내지 84 및 94 내지 98 중 어느 한 항에 따른 상기 세포의 유효량의 상기 포유동물에 투여를 포함하는, 포유동물내 항 내지 종양 면역력의 제공 방법.
  101. 청구항 100에 있어서, 상기 세포가 자가 T-세포인, 방법.
  102. 청구항 100에 있어서, 상기 세포가 동종이계 T-세포인, 방법.
  103. 청구항 100 내지 102 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물이 인간인, 방법.
  104. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자를 발현하는 세포, 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 TFP 분자, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터, 또는 청구항 79 내지 84 및 94 내지 98 중 어느 한 항에 따른 상기 세포의 유효량의 상기 포유동물에 투여를 포함하는, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법.
  105. 청구항 104에 있어서, CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 상기 질환이 증식성 질환, 암, 악성종양, 골수이형성증, 골수이형성 증후군, 전백혈병, CD19의 발현과 관련된 비 내지 암 관련된 징후로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  106. 청구항 104에 있어서, 상기 질환이 B 내지 세포 급성 림프양 백혈병 (B 내지 ALL), T-세포 급성 림프양 백혈병 (T 내지 ALL), 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), B 세포 전림프구성 백혈병, 아구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모양 세포 백혈병, 소세포 내지 여포성 림프종, 대세포 내지 여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, 맥아 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 다중 골수종, 골수이형성증, 골수이형성 증후군, 비 내지 호지킨 림프종, 혈질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 전백혈병, CD19 또는 BCMA 발현과 관련된 질환, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 혈액성 암인, 방법.
  107. 청구항 104에 있어서, TFP 분자를 발현하는 상기 세포가 TFP 분자를 발현하는 세포의 상기 효능을 증가시키는 제제와 조합으로 투여되는, 방법.
  108. 청구항 104 내지 107 중 어느 한 항에 있어서, 더 적은 사이토카인이 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 항 내지 BCMA CAR을 발현하는 T-세포의 유효량이 투여된 포유동물에 비교된 상기 포유동물에서 방출되는, 방법.
  109. 청구항 104 내지 108 중 어느 한 항에 있어서, TFP 분자를 발현하는 상기 세포가 TFP 분자를 발현하는 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 부작용을 완화시키는 제제와 조합으로 투여되는, 방법.
  110. 청구항 104 내지 109 중 어느 한 항에 있어서, TFP 분자를 발현하는 상기 세포가 CD19 또는 BCMA와 관련된 상기 질환을 치료하는 제제와 조합으로 투여되는, 방법.
  111. 약제로서 사용하기 위한, 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 39에 따른 상기 단리된 폴리펩타이드 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자를 발현하는 세포, 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 TFP, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터, 청구항 85 내지 93 중 어느 한 항에 따른 상기 복합체, 또는 청구항 79 내지 84 및 94 내지 98 중 어느 한 항에 따른 상기 세포.
  112. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 따른 상기 단리된 핵산 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자, 청구항 39에 따른 상기 폴리펩타이드 분자를 발현하는 세포, 청구항 40 내지 63 중 어느 한 항에 따른 상기 TFP 분자, 청구항 64 내지 72 중 어느 한 항에 따른 상기 핵산, 청구항 73 내지 78 중 어느 한 항에 따른 상기 벡터, 또는 청구항 79 내지 84 및 94 내지 98 중 어느 한 항에 따른 상기 세포의 유효량의 상기 포유동물에 투여를 포함하는, CD19 또는 BCMA의 발현과 관련된 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법으로서, 더 적은 사이토카인이 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 항 내지 BCMA CAR을 발현하는 T-세포의 유효량이 투여된 포유동물에 비교된 상기 포유동물에서 방출되는, 방법.
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