KR20240037185A - 키메라 공동자극 수용체, 케모카인 수용체, 및 세포 면역치료에서의 이의 용도 - Google Patents

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라파엘 쿠바스
프레데릭 쥐. 보그트
용리앙 장
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이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR), 및/또는 케모카인 수용체를 포함한 키메라 수용체, CCR 및/또는 케모카인 수용체를 제조하는 방법, 및 치료 성능이 증가된 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 발현하는 종양 침윤 림프구, 골수 침윤 림프구, 및 말초 혈액 림프구의 치료 집단을 포함하는 조성물을 제공하며 고형 종양 암을 포함한 암의 치료를 위한 다른 이점을 제공한다.

Description

키메라 공동자극 수용체, 케모카인 수용체, 및 세포 면역치료에서의 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 4월 19일 출원된 미국 가출원 번호 63/176,675; 2021년 7월 20일 출원된 미국 가출원 번호 63/223,925; 2021년 10월 11일 출원된 미국 가출원 번호 63/254,297; 및 2021년 11월 30일 출원된 미국 가출원 번호 63/284,177에 대한 우선권을 주장하며, 각각의 전체 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
고형 종양 암의 치료는 특히 화학치료, 표적 치료법, 및 니볼루맙(nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 이필리무맙(ipilimumab), 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 더발루맙(durvalumab)과 같은 체크포인트 억제제, 및 이러한 면역치료의 조합(예컨대 니볼루맙 및 이필리무맙) 또는 이러한 면역치료와 화학치료의 조합을 사용한 요법을 포함하여 흔히 사용되는 초기 요법에 반응하지 않는 환자에게 어려운 과제로 남아있다. 종양 침윤 림프구(TIL)의 입양 전달을 사용한 벌키한 불응성 암의 치료는 초기 요법에 실패한 환자를 포함하여 예후가 좋지 않은 고형 종양 암환자의 요법에 대한 강력한 접근법을 나타낸다. Gattinoni, 등, Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 383-393. 성공적인 면역치료를 위해 다수의 활성 TIL이 필요하고, 상용화를 위해 강력하고 신뢰할 수 있는 프로세스가 요구된다. 이는 세포 확장으로 인한 기술적, 물류적, 규제적 문제로 인해 달성하기 어려운 과제였다. IL-2-기반 TIL 확장에 이어 급속 확장 프로세스(REP)는 속도 및 효율성으로 인해 TIL 확장에 선호되는 방법이 되었다. Dudley, 등, Science 2002, 298, 850-54; Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-57; Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-39; Riddell, 등, Science 1992, 257, 238-41; Dudley, 등, J. Immunother. 2003, 26, 332-42. REP는 14-일 기간에 걸쳐 TIL의 1,000-배 확장을 초래할 수 있지만, 영양 세포(feeder cell)로서 종종 다중 공여자로부터의 많은 양(예를 들어, 200-배)의 조사된 동종이계 말초 혈액 단핵 세포(PBMC, 단핵 세포(MNC)로도 알려짐), 뿐만 아니라 항-CD3 항체(OKT3) 및 고용량의 IL-2를 필요로 한다. Dudley, 등, J. Immunother. 2003, 26, 332-42. REP 절차를 거친 TIL은 제1선 및 후선 요법 환경 모두에서 흑색종, 두경부암, 비소세포 폐암, 및 자궁경부암 환자에서 숙주 면역억제 후 성공적인 입양 세포 전달을 생성하였다. Jimeno, 등, Poster 353, SITC Annual Meeting, Nov.9-14, 2020; Sarnaik, 등, Oral Presentation at ASCO Annual Meeting, May 29-30, 2020; Jazaeri, 등, Poster 182, ASCO Annual Meeting, May 31 - June 4, 2019.
키메라 공동자극 수용체(CCR)는 활성화를 강화하기 위해 T-세포와 같은 효과기 세포에 공동자극 신호를 제공하도록 설계된 유전적으로 조작된 키메라 수용체이다. Sadelain, 등, Cancer Discovery, 2013, 3, 388-398; Liao, 등, Biomarker Res. 2020, 8, 57. CCR은 키메라 항원 수용체(CAR) 변형된 T-세포(CAR-T) 생성물에 기반한 T-세포 요법과 가장 통상적으로 연관되어 있으며, 활성화를 향상시키기 위해 CAR과 조합하여 사용될 수 있다. 그러나, CCR은 예를 들어 종양 연관 항원 또는 활성화를 위한 다른 항원을 사용하는 고형 종양 암에서 다클론 TIL 요법을 포함한 다른 새로 생겨난 세포 요법으로 아직 광범위하게 탐구되지 않았다. 최근 TIL 요법은 안전성 및 효능을 입증하였지만, 특히 국소 진행성 또는 전이성 고형 종양 암 환자의 경우 다른 인자 중에서 개선된 효능, 반응 기간, 및 안전성을 갖춘 TIL 요법에 대한 상당한 미충족된 요구가 존재한다.
본 발명은 고형 종양 환자의 치료에서 사용하기 위한, CCR, 및 이의 조성물을 사용하여 향상된 특성을 갖는 TIL을 제조하고 사용하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함한다:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함한다:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, IL-13Rα2, FAS, TGFβRII, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포외 도메인은 PD-1 도메인이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α, CD3β, CDζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, 및 IL-2Rγ의 막관통 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α, CD3β, CDζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, 및 IL-2Rγ의 막관통 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 단계 (d)는 CCR을 발현하기 위해 렌티바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α, CD3β, CDζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, 및 IL-2Rγ의 막관통 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 단계 (d)는 CCR을 발현하기 위해 렌티바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함하고, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), SOCS1, ANKRD11, BCOR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키기 위해 추가로 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함하고:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계,
여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α, CD3β, CDζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, 및 IL-2Rγ의 막관통 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 단계 (d)는 CCR을 발현하기 위해 렌티바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함하고, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), SOCS1, ANKRD11, BCOR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키기 위해 추가로 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL의 투여에 의해 치료되는 고형 종양 암이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 육종, 췌장암, 간암, 교모세포종, 위장관암, 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 폐암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 중피종, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 환자는 인간이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용하여 TIL과 조합하여 추가로 치료되며, 여기서 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙(cemiplimab), 티슬레리주맙(tislelizumab), 신틸리맙(sintilimab), 토리팔리맙(toripalimab), 도스타를리맙(dostarlimab), 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙(retifanlimab), 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 비소세포 폐암이며, 여기서 환자는 다음 중 적어도 하나이다:
1) <1%의 PD-L1의 미리 결정된 종양 비율 점수(TPS),
2) 1%-49%의 PD-L1의 TPS 점수, 또는
3) 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 비소세포 폐암이며, 여기서 환자는 PD-L1의 TPS가 <1%이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 환자는 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는 암을 갖는다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 환자는 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 부재하며, 여기서 하나 이상의 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK-돌연변이, c-ROS-돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 화학치료제 또는 화학치료 레지멘을 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 VEGF-A 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 VEGF-A 억제제는 베바시주맙(bevacizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 이크루쿠맙(icrucumab), 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 티슬레리주맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 토스타를리맙, 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 CTLA-4 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 CTLA-4 억제제는 이필리무맙, 트레멜리무맙(tremelimumab), 잘리프렐리맙(zalifrelimab), 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, IL-2는 초기에 제1 세포 배양 매질 및 제2 세포 배양 매질에 1000 IU/mL 내지 6000 IU/mL의 초기 농도로 존재한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, OKT-3 항체는 초기에 제2 세포 배양 매질에 약 30 ng/mL의 초기 농도로 존재한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제1 세포 배양 매질은 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제2 세포 배양 매질은 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈(fludarabine)을 투여하는 단계를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 다음 날에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 당일에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된, 600,000 또는 720,000 IU/kg의 알데스류킨(aldesleukin), 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함하는 고용량 IL-2 레지멘이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 벰페갈데스류킨(bempegaldesleukin), 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 THOR-707, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 넴발류킨 알파(nemvaleukin alfa), 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 서열번호:29 및 서열번호:38로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 서열번호:37 및 서열번호:39로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄를 포함하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 치료적으로 유효한 TIL 집단이 투여되고 약 2x109개 내지 약 15x1010개의 TIL을 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제1 확장은 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제2 확장은 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함한다:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하며, 여기서 scFv 결합 도메인은 항-CD19 도메인, 항-CD20 도메인, 항-CD22 도메인, 항-CD24 도메인, 항-CD33 도메인, 항-CD38 도메인, 항-CD39 도메인, 항-CD73 도메인, 항-CD123 도메인, 항-CD138 도메인, 항-CD228 도메인, 항-LRRC15 도메인, 항-CEA 도메인, 항-FRα 도메인, 항-EPCAM 도메인, 항-PD-L1 도메인, 항-PSMA 도메인, 항-gp100 도메인, 항-MUC1 도메인, 항-MCSP 도메인, 항-EGFR 도메인, 항-GD2 도메인, 항-TROP-2 도메인, 항-GPC3 도메인, 항-MICA 도메인, 항-MICB 도메인, 항-VISTA 도메인, 항-ULBP 도메인, 항-HER2 도메인, 항-MCM5 도메인, 항-FAP 도메인, 항-5T4 도메인, 항-LFA-1 도메인, 항-B7-H3 도메인, 및 항-MUC16 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포외 도메인은 PD-1 도메인이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포내 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포내 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 도메인,
ii. 임의적으로, 힌지 도메인,
iii. 임의적으로, 막관통 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 도메인,
여기서 세포내 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함한다:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포외 단백질 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포외 단백질 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하며, 여기서 scFv 결합 도메인은 항-CD19 도메인, 항-CD20 도메인, 항-CD22 도메인, 항-CD24 도메인, 항-CD33 도메인, 항-CD38 도메인, 항-CD39 도메인, 항-CD73 도메인, 항-CD123 도메인, 항-CD138 도메인, 항-CD228 도메인, 항-LRRC15 도메인, 항-CEA 도메인, 항-FRα 도메인, 항-EPCAM 도메인, 항-PD-L1 도메인, 항-PSMA 도메인, 항-gp100 도메인, 항-MUC1 도메인, 항-MCSP 도메인, 항-EGFR 도메인, 항-GD2 도메인, 항-TROP-2 도메인, 항-GPC3 도메인, 항-MICA 도메인, 항-MICB 도메인, 항-VISTA 도메인, 항-ULBP 도메인, 항-HER2 도메인, 항-MCM5 도메인, 항-FAP 도메인, 항-5T4 도메인, 항-LFA-1 도메인, 항-B7-H3 도메인, 및 항-MUC16 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포외 단백질 도메인은 PD-1 도메인이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 힌지 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 힌지 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 조성물은 종양 침윤 림프구를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 힌지 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 조성물은 골수 침윤 림프구를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 CCR은 다음을 포함하고:
i. 세포외 단백질 도메인,
ii. 힌지 단백질 도메인,
iii. 막관통 단백질 도메인, 및
iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인,
여기서 세포내 단백질 도메인은 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 막관통 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 힌지 단백질 도메인은 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 조성물은 말초 혈액 림프구를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 다음을 포함한다:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) 케모카인 수용체를 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료적 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 포함하고, 여기서 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 포함하고, 여기서 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이고, 여기서 단계 (d)는 케모카인 수용체를 발현하기 위해 렌티바이러스 또는 레트로바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함한다
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 포함하고, 여기서 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이고, 여기서 단계 (d)는 케모카인 수용체를 발현하기 위해 렌티바이러스 또는 레트로바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함하고, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), SOCS1, ANKRD11, BCOR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 암은 TIL을 투여함으로써 치료되는 고형 종양 암이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 육종, 췌장암, 간암, 교모세포종, 위장관암, 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 폐암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 중피종, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 환자는 인간이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용하여 TIL과 조합하여 추가로 치료되며, 여기서 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 티슬레리주맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 토스타를리맙, 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 비소세포 폐암이며, 여기서 환자는 다음 중 적어도 하나를 갖는다:
1) <1%의 PD-L1의 미리 결정된 종양 비율 점수(TPS),
2) 1%-49%의 PD-L1의 TPS 점수, 또는
3) 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 비소세포 폐암이며, 여기서 환자는 <1%의 PD-L1의 TPS를 갖는다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 환자는 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는 암을 갖는다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 환자는 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 부재하며, 여기서 하나 이상의 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK-돌연변이, c-ROS-돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 화학치료제 또는 화학치료 레지멘을 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 VEGF-A 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 VEGF-A 억제제는 베바시주맙, 라니비주맙, 이크루쿠맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 티슬레리주맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 토스타를리맙, 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 암은 CTLA-4 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있으며, 여기서 CTLA-4 억제제는 이필리무맙, 트레멜리무맙, 잘리프렐리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, IL-2는 초기에 제1 세포 배양 매질 및 제2 세포 배양 매질에 1000 IU/mL 내지 6000 IU/mL의 초기 농도로 존재한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, OKT-3 항체는 초기에 제2 세포 배양 매질에 약 30 ng/mL의 초기 농도로 존재한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제1 세포 배양 매질은 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제2 세포 배양 매질은 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 다음 날에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 당일에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된, 600,000 또는 720,000 IU/kg의 알데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함하는 고용량 IL-2 레지멘이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 벰페갈데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 THOR-707, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 넴발류킨 알파, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 방법은 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 IL-2 레지멘은 서열번호:29 및 서열번호:38로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 서열번호:37 및 서열번호:39로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄를 포함하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 치료적으로 유효한 TIL 집단이 투여되고 약 2x109개 내지 약 15x1010개의 TIL을 포함한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제1 확장은 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행된다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, 제2 확장은 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 제94항의 본 발명의 조성물, 여기서 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이다.
일부 구현예에서, 제94항 또는 제95항 중 어느 한 항의 조성물, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 케모카인 수용체를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 조성물은 종양 침윤 림프구, 골수 침윤 림프구, 또는 말초 혈액 림프구를 추가로 포함한다.
도 1: 단계 A 내지 F의 개요를 제공하는 예시적인 Gen 2(프로세스 2A) 차트.
도 2a-2c: TIL 제조를 위한 Gen 2(프로세스 2A)의 구현예에 대한 프로세스 순서도.
도 3: 동결보존된 TIL 예시적인 제조 프로세스(~22일)의 구현예에 대한 다이어그램을 보여준다.
도 4: TIL 제조를 위한 22-일 프로세스인 프로세스 2A의 구현예에 대한 다이어그램을 보여준다.
도 5: TIL 제조를 위한 프로세스 1C 및 Gen 2(프로세스 2A)의 예시적인 구현예로부터 단계 A 내지 F의 비교표.
도 6: TIL 제조를 위한 프로세스 1C의 구현예 및 Gen 2(프로세스 2A)의 구현예에 대한 상세한 비교.
도 7: 예시적인 Gen 3 유형 TIL 제조 프로세스.
도 8a-8d: a) 2A 프로세스(대략 22-일 프로세스)와 TIL 제조를 위한 Gen 3 프로세스(대략 14-일 내지 16-일 프로세스)의 구현예 간의 비교를 보여준다. b) 단계 A 내지 F의 개요를 제공하는 예시적인 프로세스 Gen 3 차트(대략 14-일 내지 16-일 프로세스). c) 3가지 프로세스 변경 각각에 대해 단계 A 내지 F의 개요와 함께 3가지 예시적인 Gen 3 프로세스(대략 14-일 내지 16-일 프로세스)를 제공하는 차트. d) 단계 A 내지 F의 개요를 제공하는 예시적인 변형된 Gen 2-유사 프로세스(대략 22-일 프로세스).
도 9: Gen 2(프로세스 2A) 대 Gen 3 프로세스 간의 비교가능성에 대한 실험 순서도를 제공한다.
도 10: 다양한 Gen 2(프로세스 2A)와 Gen 3.1 프로세스 구현예 간의 비교를 보여준다.
도 11: Gen 2, Gen 2.1 및 Gen 3.0 프로세스의 구현예에 대한 다양한 특징을 설명하는 표.
도 12: Gen 3.1로 언급되는 Gen 3 프로세스의 구현예에 대한 배지 조건의 개요.
도 13: Gen 2, Gen 2.1 및 Gen 3.0 프로세스의 구현예에 대한 다양한 특징을 설명하는 표.
도 14: Gen 2 및 Gen 3.0 프로세스의 구현예에 대한 다양한 특징을 비교하는 표.
도 15: 기재된 확장 프로세스의 다양한 구현예서 배지 사용을 제공하는 표.
도 16: Gen 3 프로세스(16-일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 17: Gen 3 확장 플랫폼을 사용하여 조혈 악성종양으로부터 T 세포를 확장시키는 방법의 예시적인 구현예의 개략도.
도 18: 구조 I-A 및 I-B를 제공한다. 원통형은 개별 폴리펩티드 결합 도메인을 지칭한다. 구조 I-A 및 I-B는 예를 들어, 4-1BBL 또는 4-1BB에 결합하는 항체로부터 유래된 3개의 선형으로 연결된 TNFRSF 결합 도메인을 포함하며, 이는 접혀서 3가 단백질을 형성한 다음, IgG1-Fc(CH3 및 CH2 도메인 포함)를 통해 두번째 3가 단백질에 연결된 다음 이황화 결합(작은 길쭉한 타원형)을 통해 함께 2개의 3가 단백질을 연결하는 데 사용되어, 구조를 안정화하고 6개 수용체의 세포내 신호전달 도메인 및 신호전달 단백질을 함께 모아 신호전달 복합체를 형성할 수 있는 작용제를 제공한다. 원통형으로 표시된 TNFRSF 결합 도메인은 예를 들어, 친수성 잔기 및 유연성을 위한 Gly 및 Ser 서열, 뿐만 아니라 가용성을 위한 Glu 및 Lys를 포함할 수 있는 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 쇄를 포함하는 scFv 도메인일 수 있다.
도 19: Gen 3 프로세스(16-일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 20: Gen 3.1 프로세스(16일 프로세스)의 예시적인 구현예에 대한 프로세스 개요를 제공한다.
도 21: Gen 3.1 프로세스(16-17일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 22: Gen 3 프로세스(16-일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 23: 예시적인 Gen 2 및 예시적인 Gen 3 프로세스에 대한 비교표.
도 24: 제조 타임라인을 보여주는 Gen 3 프로세스(16-17일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 25: Gen 3 프로세스(14-16일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 26a-26b: Gen 3 프로세스(16일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 27: Gen 3 프로세스(16일 프로세스)의 예시적인 구현예의 개략도.
도 28: Gen 2, Gen 2.1 및 Gen 3 프로세스(16일 프로세스)의 예시적인 구현예의 비교.
도 29: Gen 2, Gen 2.1 및 Gen 3 프로세스(16일 프로세스)의 구현예의 비교.
도 30: Gen 3 구현예 구성요소.
도 31: Gen 3 구현예 순서도 비교(Gen 3.0, Gen 3.1 대조군, Gen 3.1 테스트).
도 32: Gen 3 프로세스(16-17일 프로세스)의 예시적인 구현예의 구성요소가 제시되어 있다.
도 33: 허용 기준 표.
도 34: 예시적인 scFv CCR 작제물의 다이어그램.
도 35: 예시적인 PD-1 전환 CCR 설계.
도 36: 대안적인 CD28 신호전달 도메인을 갖는 예시적인 PD-1 전환 CCR 설계.
도 37: 예시적인 CCR 작제물 설계.
도 38: IgG4 힌지 및 막관통 도메인 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 항-TROP-2(VL-링커-VH) CCR에 대한 TIL 및 본 발명의 구현예에서 CCR의 렌티바이러스 발현을 위한 예시적인 벡터 설계.
도 39: CD8α 힌지 및 막관통 도메인 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 항-FAP(VL-링커-VH) CCR에 대한 TIL 및 본 발명의 구현예에서 CCR의 렌티바이러스 발현을 위한 예시적인 벡터 설계.
도 40: 38A1 항체를 사용하는 CD8α 힌지 및 막관통 도메인 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 항-PD-L1(VL-링커-VH) CCR에 대한 TIL 및 본 발명의 구현예에서 CCR의 렌티바이러스 발현을 위한 예시적인 벡터.
도 41: TIL 및 본 발명의 구현예에서 CXCR1의 레트로바이러스 발현을 위한 예시적인 벡터 설계.
도 42: TIL 및 본 발명의 구현예에서 CCR8의 레트로바이러스 발현을 위한 예시적인 벡터 설계.
도 43: 자궁경부암 종양 소화물의 유세포 측정 분석. EPCAM 피코에리트린(PE)/TROP-2 PE.
도 44: EPCAM 알로피코시아닌(APC)/TROP-2 PE에 대한 자궁경부암 종양 소화물의 유세포 측정 분석.
도 45: 두경부 편평 세포암 소화물에서 EPCAM/TROP-2 발현.
도 46: 비소세포 폐암 종양 소화물에서 EPCAM/TROP-2 발현.
도 47: Gen 2 REP 제조로부터 TIL 제조 시 세포 빈도 분포. 9개의 상이한 TIL을 해동하고 특성화를 위해 2일간에 걸쳐 염색하였고 PBMC를 대조군으로 사용하였다.
도 48: Gen 2 REP 제조로부터 TIL 제조 시 세포 빈도 분포. 9개의 상이한 TIL을 해동하고 특성화를 위해 2일간에 걸쳐 염색하였고 PBMC를 대조군으로 사용하였다.
도 49: CD8+ TIL에서 케모카인 수용체를 보여주는 유세포 측정 결과.
도 50: CD4+ TIL에서 케모카인 수용체를 보여주는 유세포 측정 결과.
도 51: 본 발명의 키메라 공동자극 수용체의 예시적인 구현예. PD-1 또는 항-PD-1(38A1) scFv 세포외 도메인(ECD)을 사용하는 6개의 CCR 작제물이 제시된다. TM은 막관통 도메인을 지칭하고 ICN은 세포내 도메인을 지칭한다.
도 52: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예인 pQCXIX 벡터 백본의 맵.
도 53: HEK 리포터 세포에서 CCR 작제물 "CCR4" 및 "CCR5"(도 51에 제시된 바와 같음)의 발현.
도 54: 본 발명의 키메라 공동자극 수용체의 예시적인 구현예.
도 55: 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 모두 사용하는 SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열의 도메인 맵(서열번호:658).
도 56: 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 모두 사용하는 SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18R1 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열의 도메인 맵(서열번호:659).
도 57: SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rβ 막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rγ 막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열의 도메인 맵(서열번호:660).
도 58: SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18R1-막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18RAP-막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열의 도메인 맵(서열번호:661).
도 59: 아미노산 서열의 도메인 맵은 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(KM4097 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다(서열번호:662).
도 60: SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18R1 세포내)- T2A-SP-(KM4097scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열 아미노산 서열의 도메인 맵(서열번호:663).
도 61: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예인 pLenti 벡터의 맵.
도 62: (A) 비에피토프 CCR8(38A1scFv-CD28TM-IL-18R1-T2A-19H9scFv-CD28TM-IL-18RAP)로 형질도입되고 스트렙타비딘-형광 염색 후 비오틴 접합된 PD-L1 단백질과 인큐베이션된 HEK-IL-18 리포터 세포에 대한 결과, 및 (B) CCR12(cAR47A6.4 scFv-CD28TM- IL-18R1-T2A- KM4097scFv-CD28TM-IL-18RAP)로 형질도입되고 스트렙타비딘-형광 염색 후 비오틴 접합된 TROP2 단백질과 인큐베이션된 HEK-IL-18 리포터 세포에 대한 결과. CCR8 및 CCR12 둘 다의 발현은 이들 결과에 의해 입증된다.
도 63: hPD-L1 Raji 세포를 경쟁적 hPD-L1 결합 항체 19H9의 존재 하에 PD-L1을 표적하는 지시된(x-축) 농도의 38A1-IgG4-HA(헤마글루티닌) 항체와 인큐베이션하였다. 2시간 인큐베이션 후, 세포를 세척하고 항-HA-APC(알로피코시아닌)로 염색하였다. x-축은 적정된 38A1-IgG4-HA 항체의 농도를 나타내고 Y-축은 총 hPD-L1 Raji 세포의 PD-L1 양성 염색 세포 %를 나타낸다.
도 64: hPD-L1 Raji 세포를 경쟁적 hPD-L1 결합 항체 38A1의 존재 하에 PD-L1을 표적하는 지시된(x-축) 농도의 19H9-IgG4-플래그 항체와 인큐베이션하였다. 2시간 인큐베이션 후, 세포를 세척하고 항-플래그-AF488로 염색하였다. 도 64에서, x-축은 적정된 19H9-IgG4-플래그 항체의 농도를 나타내고 y-축은 총 hPD-L1 Raji 세포의 PD-L1 양성 염색 세포 %를 나타낸다.
도 65: 각 축에서 지시된 항체로 염색한 유세포 측정 결과.
도 66: pre-REP 및 REP 동안(파란색 막대) 또는 REP 단계 단독 동안(보라색 막대) 첨가된 2가지 상이한 농도의 범-AKT 억제제 이파타세르팁(ipatasertib)(0.3 μM 및 1 μM)에서 TIL 확장 및 생존력에 대한 AKT 억제제(AKTi) 처리의 효과. 22-일 확장 프로세스가 끝날 때 TIL의 배수 확장 및 생존력이 제시된다. 동결보존된 세포에서 확장 프로세스 후 CD8+, CD4+ 및 CD4+(Foxp3+) 세포의 빈도가 또한 제시된다.
도 67: 2개의 PD-L1 항체(38A1 및 19H9)의 차단 효능을 평가하기 위한 실험 설계.
도 68: 2개의 PD-L1 항체(38A1 및 19H9)의 차단 효능을 평가하기 위한 실험 결과.
도 69: 대조군 및 AKT 억제제(AKTi) 처리된 TIL의 T-세포 하위집합. 처리 후 CD8+ 및 CD4+ TIL에서 TCM(CD45RA-CCR7+), TEM(CD45RA-CCR7-) 및 TEMRA(CD45+CCR7-) 세포의 빈도가 제시되며, *는 p < 0.05를 나타낸다.
도 70: 대조군 및 AKT 억제제(AKTi)-처리된 TIL에서 사이토카인 및 케모카인 수용체 발현. 동결보존된 대조군 또는 AKTi 처리된 TIL을 유세포 측정에 의해 분석하였다. IL-7R+ 및 CXCR3+ CD8+ TIL의 대표적인 히스토그램 및 빈도, *는 p < 0.05를 나타내고 **는 p < 0.01을 나타낸다.
도 71: 유세포 측정에 의해 평가된 바와 같은 대조군 및 AKT 억제제(AKTi) 처리된 CD8+ TIL에서 CD69 및 CD39 단일 및 이중 양성 집단의 분포, *는 p < 0.05를 나타내고, **는 p < 0.01을 나타내고, ***는 p < 0.001을 나타낸다.
도 72: CD69-CD39- 및 CD69+CD39+ CD8+ TIL에서 억제 수용체 및 전사 인자의 발현; CD69-CD39- 및 CD69+CD39+ 세포에서 PD1, LAG-3, TIM-3, 및 TIGIT 뿐만 아니라 Tbet, Eomes, BATF 및 TOX의 빈도, *는 p < 0.05를 나타내고, **는 p < 0.01을 나타내고, ****는 p < 0.0001을 나타낸다. CD69-CD39- 및 CD69+CD39+ CD8+ TIL에서 CD62L 발현의 대표적인 히스토그램 및 빈도가 제시된다.
도 73: 밤새 자극 후 대조군 및 AKT 억제제(AKTi) 처리된 TIL에서 마커 발현. 1 μM AKTi를 사용하여 pre-REP 및 REP 둘 다에서 처리된 동결보존된 대조군 및 TIL을 1:5의 비드 대 세포 비율로 항-CD3/CD28 비드로 밤새 자극하였다. CD69-CD39- 및 CD69+CD39+ 세포의 빈도 및 CD8+ TIL에서 전사 인자 발현, *는 p < 0.05를 나타내고, **는 p < 0.01을 나타내고, ***는 p < 0.001을 나타낸다.
도 74: 대조군 및 AKT 억제제(AKTi)-처리된 CD8+ TIL에서 사이토카인 발현, *는 p < 0.05를 나타낸다.
도 75: 동종이계 세포독성 검정 결과. 왼쪽 패널에서는, 동종이계 환경에서 세포독성을 측정하기 위해 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 KILR® THP-1 세포(미국 캘리포니아주 프레몬트 소재의 Eurofins DiscoverX)와 24시간 동안 공동 배양된 1 uM의 AKT 억제제(이파타세르팁)를 사용하여 pre-REP 및 REP 둘 다 동안 처리된 동결보존된 대조군 및 TIL에 대한 결과가 제시된다. 오른쪽 패널은 1:1 비드 대 세포 비율로 항-CD3/CD28 비드로 5일마다 자극된 대조군 및 AKT 억제제(AKTi) 처리된 TIL의 결과는 제시한다. 세번째 자극 3일 후, 세포를 세척하고, 비드를 제거하고, 세포를 KILR THP-1 세포와 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 24시간 동안 공동 배양하였다.
도 76: 대조군 TIL(회색 막대) 및 데시타빈(decitabine) 농도가 증가하는 데시타빈-처리된 TIL에 대한 확장, 생존력, 및 T-세포 분포 데이터가 제시된다. REP 단계 단독 동안(파란색 막대) 또는 pre-REP 및 REP 단계 둘 다 동안(녹색 막대) 처리가 첨가되었다. 패널 A는 22-일 확장 프로세스가 끝날 때 TIL의 배수-확장 및 생존력을 보여준다. 패널 B는 동결보존된 세포에서 확장 프로세스 후 유세포 측정에 의한 CD8+, CD4+, 및 CD4+(Foxp3+) 세포의 빈도를 보여준다. *P < 0.05, **P < 0.01.
도 77: 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL에서 T-세포 하위집합. TCM(CD45RA-CCR7+), TEM(CD45RA-CCR7-), 및 TEMRA(CD45+CCR7-) 세포의 빈도가 확장 후 패널 A(CD8+) 및 패널 B(CD4+) TIL에서 제시된다. *P < 0.05, **P < 0.01.
도 78: 데시타빈-처리된 TIL에서 표면 마커의 발현. 대조군 동결보존된 TIL 또는 데시타빈-처리된 동결보존된 TIL을 해동하고 유세포 측정 분석을 위해 염색하였다. 패널 A는 CD8+ TIL에서 CD25, ICOS, CD28, 및 IL-7R의 발현을 보여준다. 패널 B는 CD8+ TIL에서 억제 수용체 PD-1 및 TIGIT의 발현을 보여준다. CD4+ TIL에 대해 유사한 결과가 관찰되었다. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, ****P < 0.0001.
도 79: 데시타빈-처리된 TIL에서 전사 인자의 발현. 대조군 또는 데시타빈 처리된 동결보존된 TIL을 해동하고 유세포 측정 분석을 위해 염색하였다. CD8+ TIL에서 Eomes, KLF2, BATF, 및 T-bet의 발현이 제시된다. *P < 0.05, **P < 0.01.
도 80: 시험관 내 자극 후 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL에서 사이토카인 발현. 동결보존된 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL을 1:5의 비드 대 세포 비율로 항-CD3/CD28 비드로 밤새 자극하였다. CD8+ TIL에서 IFN-γ(IFNγ), TNF-α(TNFα), 및 그랜자임 B(GZMB)의 발현이 제시된다. *P < 0.05, **P < 0.01.
도 81: 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL의 세포독성. 패널 A에서는, 동종이계 환경에서 세포독성을 측정하기 위해 동결보존된 대조군 TIL 및 REP에서 100 nM DAC로 처리된 TIL을 KILR® THP-1 세포(미국 캘리포니아주 프레몬트 소재의 Eurofins DiscoverX)와 10:1 효과기:표적 세포 비율로 24시간 동안 공동배양하였다. 패널 B에서는, 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL을 TransActtm(독일 소재의 Miltenyi Biotec)으로 5일마다 자극하였다. 세번째 자극 1일 후, 세포를 세척하고 세포독성을 측정하기 위해 KILR THP-1 세포와 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 24시간 동안 공동배양하여 세포독성을 측정하였다. *P < 0.05.
도 82: 대조군 TIL 및 데시타빈-처리된 TIL을 TransActtm(독일 소재의 Miltenyi Biotec)으로 5일마다 자극하였다. 세번째 자극 1일 후, 세포를 세척하고 유세포 측정 분석을 위해 염색하였다. 반복된 자극 후 TIL에서 IL-7R, PD-1, 및 TIM3의 발현이 패널 A에 제시되어 있고, 반복된 자극 후 TIL에서 및 전사 인자의 발현 수준이 패널 B에 제시되어 있다. *P < 0.05, **P < 0.01.
도 83: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 PD-L1을 표적하는 CCR7.2 비에피토프 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 84: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 PD-L1을 표적하는 CCR8.2 비에피토프 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 85: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 TROP-2를 표적하는 CCR11.2 비에피토프 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 86: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 TROP-2를 표적하는 CCR12.2 비에피토프 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 87: 대체 막관통(TM) 도메인의 사용에 의해 향상된 IL-18 신호전달을 나타내는, PD-L1 표적화된 CCR(CCR8 및 CCR8.2)을 사용한 HeKIL-18 리포터 계통 실험 결과. CCR8은 본원에 기재된 바와 같은 일반 구조 38A1scFv-CD28TM-IL-18R1-IC-T2A-19H9scFv-CD28TM-IL-18RAP-IC를 갖는 비에피토프 CCR이다. CCR8.2는 일반 구조 38A1scFv-IL-18R1TM-IL-18R1-IC-T2A-19H9scFV-IL-18RAPTM-IL-18RAP-IC를 갖는 비에피토프 CCR이다.
도 88: 대체 막관통(TM) 도메인의 사용에 의해 향상된 IL-18 신호전달을 나타내는, PD-L1 표적화된 CCR(CCR12 및 CCR12.2)을 사용한 HeKIL-18 리포터 계통 실험 결과. CCR12는 본원에 기재된 바와 같은 일반 구조 cAR47A6.4 scFv-CD28TM- IL-18R1-IC-T2A-KM4097scFv-CD28TM-IL-18RAP-IC를 갖는 비에피토프 CCR이다. CCR12.2는 일반 구조 cAR47A6.4 scFv-IL-18R1TM-IL-18R1-IC-T2A-KM4097scFv-IL-18RAPTM-IL-18RAP-IC를 갖는 비에피토프 CCR이다.
도 89: 상이한 농도에서 IL-18 대조군과 비교하여 나타낸 PD-L1 표적화된 CCR 실험 결과(도 87에서와 같음).
도 90: 상이한 농도에서 IL-18 대조군과 비교하여 나타낸 TROP-2 표적화된 CCR 실험 결과(도 88에서와 같음).
도 91: 본 발명의 구현예이기도 한 주로 4-1BB(CD137) 세포내 도메인을 갖는 작제물에 대한 예시적인 CCR 설계. EC는 세포외를 지칭하고, TM은 막관통을 지칭하고, SP는 신호 펩티드를 지칭하고, IC는 세포내를 지칭한다.
도 92: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 FAS를 표적하는 CCR13 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 93: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 PD-1을 표적하는 CCR14 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 94: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 TGFβRII를 표적하는 CCR15 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 95: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 PD-1(CD28 세포내 도메인 포함)을 표적하는 CCR14 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 96: CCR 작제물을 pLenti-IRES-GFP 렌티바이러스 플라스미드에 삽입하였다. TIL을 렌티바이러스에 의해 형질도입하고, 2일 동안 휴지한 다음, 11일 REP 확장 프로세스를 사용하여 확장하였다. 여기에 제시된 CCR 작제물의 표면 발현은 유세포 측정에 의해 검출되었다.
도 97: CCR-발현 REP후 TIL의 확장, 생존력 및 사멸 효능.
도 98: 본 발명의 구현예이기도 한 LTBR 세포내 도메인을 갖는 작제물에 대한 예시적인 CCR 설계. EC는 세포외를 나타내고, TM은 막관통을 나타내고, SP는 신호 펩티드를 나타내고, IC는 세포내를 나타낸다.
도 99: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 FAS를 표적하는 CCR17 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 100: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 PD-1을 표적하는 CCR18 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
도 101: 본 발명의 상이한 CCR 및 케모카인 수용체 벡터의 구현예이기도 한 TGFβRII를 표적하는 CCR19 CCR에 대한 pLenti 백본을 사용한 벡터 설계.
서열 목록의 간단한 설명
서열번호:1은 무로모납(muromonab)의 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:2는 무로모납의 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:3은 재조합 인간 IL-2 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호:4는 알데스류킨의 아미노산 서열이다.
서열번호:5는 IL-2 형태이다.
서열번호:6은 넴발류킨 알파의 아미노산 서열이다.
서열번호:7은 IL-2 형태이다.
서열번호:8은 뮤신 도메인 폴리펩티드이다.
서열번호:9는 재조합 인간 IL-4 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호:10은 재조합 인간 IL-7 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호:11은 재조합 인간 IL-15 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호:12는 재조합 인간 IL-21 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호:13은 IL-2 서열이다.
서열번호:14는 IL-2 뮤테인 서열이다.
서열번호:15는 IL-2 뮤테인 서열이다.
서열번호:16은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR1_IL-2이다.
서열번호:17은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR2이다.
서열번호:18은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR3이다.
서열번호:19는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR1_IL-2 카바트(kabat)이다.
서열번호:20은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR2 카바트이다.
서열번호:21은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR3 카바트이다.
서열번호:22는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR1_IL-2 클로티아(clothia)이다.
서열번호:23은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR2 클로티아이다.
서열번호:24는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR3 클로티아이다.
서열번호:25는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR1_IL-2 IMGT이다.
서열번호:26은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR2 IMGT이다.
서열번호:27은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 HCDR3 IMGT이다.
서열번호:28은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 VH 쇄이다.
서열번호:29는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 중쇄이다.
서열번호:30은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR1 카바트이다.
서열번호:31은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR2 카바트이다.
서열번호:32는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR3 카바트이다.
서열번호:33은 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR1 초티아(chothia)이다.
서열번호:34는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR2 초티아이다.
서열번호:35는 IgG.IL2R67A.H1에 대한 LCDR3 초티아이다.
서열번호:36은 VL 쇄이다.
서열번호:37은 경쇄이다.
서열번호:38은 경쇄이다.
서열번호:39는 경쇄이다.
서열번호:40은 인간 4-1BB의 아미노산 서열이다.
서열번호:41은 뮤린 4-1BB의 아미노산 서열이다.
서열번호:42는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(utomilumab)(PF-05082566)에 대한 중쇄이다.
서열번호:43은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 경쇄이다.
서열번호:44는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:45는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:46은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:47은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:48은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:49는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:50은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:51은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우토밀루맙(PF-05082566)에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:52는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(urelumab)(BMS-663513)에 대한 중쇄이다.
서열번호:53은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 경쇄이다.
서열번호:54는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:55는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:56은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:57은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:58은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:59는 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:60은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:61은 4-1BB 작용제 단클론 항체 우렐루맙(BMS-663513)에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:62는 TNFRSF 작용제 융합 단백질에 대한 Fc 도메인이다.
서열번호:63은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:64는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:65는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:66은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:67은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:68은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:69는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:70은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:71은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:72는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:73은 TNFRSF 작용제 융합 단백질에 대한 Fc 도메인이다.
서열번호:74는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:75는 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:76은 TNFRSF 작용제 융합 단백질 또는 scFv에 대한 링커이다.
서열번호:77은 4-1BB 리간드(4-1BBL) 아미노산 서열이다.
서열번호:78은 4-1BBL 폴리펩티드의 가용성 부분이다.
서열번호:79는 4-1BB 작용제 항체 4B4-1-1 버전 1에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:80은 4-1BB 작용제 항체 4B4-1-1 버전 1에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:81은 4-1BB 작용제 항체 4B4-1-1 버전 2에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:82는 4-1BB 작용제 항체 4B4-1-1 버전 2에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:83은 4-1BB 작용제 항체 H39E3-2에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:84는 4-1BB 작용제 항체 H39E3-2에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:85는 인간 OX40의 아미노산 서열이다.
서열번호:86은 뮤린 OX40의 아미노산 서열이다.
서열번호:87은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(tavolixizumab)(MEDI-0562)에 대한 중쇄이다.
서열번호:88은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 경쇄이다.
서열번호:89는 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:90은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:91은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:92는 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:93은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:94는 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:95는 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:96은 OX40 작용제 단클론 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:97은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 중쇄이다.
서열번호:98은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 경쇄이다.
서열번호:99는 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:100은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:101은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:102는 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:103은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:104는 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:105는 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:106은 OX40 작용제 단클론 항체 11D4에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:107은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 중쇄이다.
서열번호:108은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 경쇄이다.
서열번호:109는 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:110은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:111은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:112는 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:113은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:114는 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:115는 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:116은 OX40 작용제 단클론 항체 18D8에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:117은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:118은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:119는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:120은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:121은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:122는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:123은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:124는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu119-122에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:125는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:126은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:127은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 중쇄 CDR1이다.
서열번호:128은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 중쇄 CDR2이다.
서열번호:129는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 중쇄 CDR3이다.
서열번호:130은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 경쇄 CDR1이다.
서열번호:131은 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 경쇄 CDR2이다.
서열번호:132는 OX40 작용제 단클론 항체 Hu106-222에 대한 경쇄 CDR3이다.
서열번호:133은 OX40 리간드(OX40L) 아미노산 서열이다.
서열번호:134는 OX40L 폴리펩티드의 가용성 부분이다.
서열번호:135는 OX40L 폴리펩티드의 대안적인 가용성 부분이다.
서열번호:136은 OX40 작용제 단클론 항체 008에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:137은 OX40 작용제 단클론 항체 008에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:138은 OX40 작용제 단클론 항체 011에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:139는 OX40 작용제 단클론 항체 011에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:140은 OX40 작용제 단클론 항체 021에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:141은 OX40 작용제 단클론 항체 021에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:142는 OX40 작용제 단클론 항체 023에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:143은 OX40 작용제 단클론 항체 023에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:144는 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:145는 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:146은 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:147은 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:148은 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:149는 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:150은 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:151은 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:152는 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:153은 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:154는 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:155는 인간화 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:156은 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호:157은 OX40 작용제 단클론 항체에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호:158은 PD-1 억제제 니볼루맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:159는 PD-1 억제제 니볼루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:160은 PD-1 억제제 니볼루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:161은 PD-1 억제제 니볼루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:162는 PD-1 억제제 니볼루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:163은 PD-1 억제제 니볼루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:164는 PD-1 억제제 니볼루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:165는 PD-1 억제제 니볼루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:166은 PD-1 억제제 니볼루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:167은 PD-1 억제제 니볼루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:168은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:169는 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:170은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:171은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:172는 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:173은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:174는 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:175는 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:176은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:177은 PD-1 억제제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:178은 PD-L1 억제제 더발루맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:179는 PD-L1 억제제 더발루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:180은 PD-L1 억제제 더발루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:181은 PD-L1 억제제 더발루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:182는 PD-L1 억제제 더발루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:183은 PD-L1 억제제 더발루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:184는 PD-L1 억제제 더발루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:185는 PD-L1 억제제 더발루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:186은 PD-L1 억제제 더발루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:187은 PD-L1 억제제 더발루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:188은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:189는 PD-L1 억제제 아벨루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:190은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:191은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:192는 PD-L1 억제제 아벨루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:193은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:194는 PD-L1 억제제 아벨루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:195는 PD-L1 억제제 아벨루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:196은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:197은 PD-L1 억제제 아벨루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:198은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:199는 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:200은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:201은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:202는 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:203은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:204는 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:205는 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:206은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:207은 PD-L1 억제제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:208은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:209는 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:210은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:211은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:212는 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:213은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:214는 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:215는 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:216은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:217은 CTLA-4 억제제 이필리무맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:218은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:219는 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:220은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:221은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:222는 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:223은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:224는 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:225는 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:226은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:227은 CTLA-4 억제제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:228은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:229는 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:230은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호:231은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호:232는 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:233은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:234는 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:235는 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:236은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:237은 CTLA-4 억제제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:238은 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:239는 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:240은 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:241은 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:242는 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:243은 scFv 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:244는 PD-1 세포외 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:245는 PD-1 세포외 및 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:246은 PD-1 세포외 도메인 및 CD28 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:247은 PD-1 세포외 및 막관통 도메인의 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:248은 PD-1 세포외 도메인 및 CD28 막관통 도메인의 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:249는 scFv-Fc 항체 38A1의 아미노산 서열이다.
서열번호:250은 scFv 항체 38A1 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:251은 scFv 항체 38A1 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:252는 scFv 항체 38A1 가변 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:253은 scFv 항체 38A1 가변 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:254는 scFv 항체 38A1 가변 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:255는 scFv 항체 38A1 가변 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:256은 scFv 항체 38A1 가변 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:257은 scFv 항체 38A1 가변 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:258은 scFv-Fc 항체 19H9의 아미노산 서열이다.
서열번호:259는 scFv 항체 19H9 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:260은 scFv 항체 19H9 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:261은 scFv 항체 19H9 가변 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:262는 scFv 항체 19H9 가변 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:263은 scFv 항체 19H9 가변 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:264는 scFv 항체 19H9 가변 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:265는 scFv 항체 19H9 가변 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:266은 scFv 항체 19H9 가변 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:267은 항-CEA 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:268은 항-CEA 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:269는 항-CEA 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:270은 항-CEA 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:271은 항-CEA 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:272는 항-CEA 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:273은 항-CEA 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:274는 항-CEA 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:275는 항-CD73 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:276은 항-CD73 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:277은 항-CD73 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:278은 항-CD73 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:279는 항-CD73 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:280은 항-CD73 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:281은 항-CD73 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:282는 항-CD73 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:283은 항-CD73 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:284는 항-CD73 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:285는 항-CD73 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:286은 항-CD73 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:287은 항-CD73 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:288은 항-CD73 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:289는 항-CD73 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:290은 항-CD73 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:291은 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:292는 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:293은 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:294는 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:295는 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:296은 항-TROP-2 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:297은 항-TROP-2 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:298은 항-TROP-2 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:299는 항-TROP-2 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:300은 항-TROP-2 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:301은 항-TROP-2 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:302는 항-TROP-2 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:303은 항-TROP-2 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:304는 항-TROP-2 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:305는 항-TROP-2 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:306은 항-TROP-2 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:307은 항-TROP-2 항체 m7E6 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:308은 항-TROP-2 항체 m7E6 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:309는 항-TROP-2 항체 h7E6 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:310은 항-TROP-2 항체 m7E6 및 h7E6_SVG 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:311은 항-TROP-2 항체 h7E6_SVGL 및 h7E6_SVG 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:312는 항-TROP-2 항체 h7E6_SVGL 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:313은 항-TROP-2 항체 m6G11 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:314는 항-TROP-2 항체 m6G11 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:315는 항-TROP-2 항체 h6G11 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:316은 항-TROP-2 항체 h6G11 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:317은 항-TROP-2 항체 h6G11-FKG_SF 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:318은 항-TROP-2 항체 h6G11-FKG_SF 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:319는 항-TROP-2 항체 가변 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:320은 항-TROP-2 항체 가변 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:321은 항-TROP-2 항체 가변 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:322는 항-TROP-2 항체 가변 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:323은 항-TROP-2 항체 가변 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:324는 항-TROP-2 항체 가변 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:325는 항-TROP-2 항체 m7E6 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:326은 항-TROP-2 항체 m7E6 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:327은 항-TROP-2 항체 h7E6 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:328은 항-TROP-2 항체 m7E6 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:329는 항-TROP-2 항체 h7E6_SVGL 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:330은 항-TROP-2 항체 h7E6_SVGL 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:331은 항-TROP-2 항체 m6G11 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:332는 항-TROP-2 항체 m6G11 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:333은 항-TROP-2 항체 h6G11 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:334는 항-TROP-2 항체 h6G11 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:335는 항-TROP-2 항체 h6G11-FKG_SF 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:336은 항-TROP-2 항체 h6G11-FKG_SF 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:337은 항-TROP-2 사시투주맙(sacituzumab) 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:338은 항-TROP-2 사시투주맙 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:339는 항-TROP-2 사시투주맙 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:340은 항-TROP-2 사시투주맙 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:341은 항-TROP-2 사시투주맙 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:342는 항-TROP-2 사시투주맙 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:343은 항-TROP-2 사시투주맙 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:344는 항-TROP-2 사시투주맙 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:345는 항-EPCAM scFv 항체 3-17I scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:346은 항-EPCAM scFv 항체 7-F17 scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:347은 항-EPCAM scFv 항체 12-C15 scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:348은 항-EPCAM scFv 항체 16-G5 scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:349는 항-EPCAM scFv 항체 17-C20 scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:350은 항-EPCAM scFv 항체 24-G6 scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:351은 항-EPCAM 항체 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:352는 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:353은 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:354는 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:355는 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:356은 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:357은 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:358은 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:359는 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:360은 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:361은 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:362는 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:363은 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:364는 항-EPCAM scFv 항체 3-17I scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:365는 항-EPCAM scFv 항체 7-F17 scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:366은 항-EPCAM scFv 항체 12-C15 scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:366은 항-EPCAM scFv 항체 16-G5 scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:367은 항-EPCAM scFv 항체 17-C20 scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:368은 항-EPCAM scFv 항체 24-G6 scFv를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:369는 항-EPCAM scFv 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:370은 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:371은 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:372는 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:373은 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:374는 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:375는 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:376은 항-EPCAM scFv 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:377은 항-EPCAM 항체 가변 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:378은 항-EPCAM 항체 가변 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호:379는 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:380은 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:381은 항-EPCAM 항체 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:382는 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:383은 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:384는 항-EPCAM 항체 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:385는 항-조직 인자 항체 TF260 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:386은 항-조직 인자 항체 TF260 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:387은 항-조직 인자 항체 TF196 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:388은 항-조직 인자 항체 TF196 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:389는 항-조직 인자 항체 TF278 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:390은 항-조직 인자 항체 TF278 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:391은 항-조직 인자 항체 TF277 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:392는 항-조직 인자 항체 TF277 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:393은 항-조직 인자 항체 TF392 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:394는 항-조직 인자 항체 TF392 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:395는 항-조직 인자 항체 TF9 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:396은 항-조직 인자 항체 TF9 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:397은 항-조직 인자 항체 TF260 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:398은 항-조직 인자 항체 TF260 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:399는 항-조직 인자 항체 TF260 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:400은 항-조직 인자 항체 TF260 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:401은 항-조직 인자 항체 TF260 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:402는 항-조직 인자 항체 TF260 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:403은 항-조직 인자 항체 TF196 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:404는 항-조직 인자 항체 TF196 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:405는 항-조직 인자 항체 TF196 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:406은 항-조직 인자 항체 TF196 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:407은 항-조직 인자 항체 TF196 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:408은 항-조직 인자 항체 TF196 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:409는 항-조직 인자 항체 TF9 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:410은 항-조직 인자 항체 TF9 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:411은 항-조직 인자 항체 TF9 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:412는 항-조직 인자 항체 TF9 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:413은 항-조직 인자 항체 TF9 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:414는 항-조직 인자 항체 TF9 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:415는 항-조직 인자 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:416은 항-조직 인자 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:417은 항-조직 인자 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:418은 항-조직 인자 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:419는 항-조직 인자 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:420은 항-조직 인자 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:421은 항-조직 인자 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:422는 항-조직 인자 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:423은 항-조직 인자 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:424는 항-조직 인자 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:425는 항-조직 인자 항체 TF260 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:426은 항-조직 인자 항체 TF260 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:427은 항-조직 인자 항체 TF196 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:428은 항-조직 인자 항체 TF196 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:429는 항-조직 인자 항체 TF278 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:430은 항-조직 인자 항체 TF278 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:431은 항-조직 인자 항체 TF277 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:432는 항-조직 인자 항체 TF277 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:433은 항-조직 인자 항체 TF392 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:434는 항-조직 인자 항체 TF392 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:435는 항-조직 인자 항체 TF9 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:436은 항-조직 인자 항체 TF9 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:437은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:438은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:439는 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:440은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:441은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:442는 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:443은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:444는 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호:445는 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호:446은 항-LFA-1 또는 항-CD11a 항체 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호:447은 시브로투주맙(sibrotuzumab)에 기반한 항-FAP scFv의 아미노산 서열이다.
서열번호:448은 항-FAP 항체 시브로투주맙 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:449는 항-FAP 항체 시브로투주맙 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:450은 항-FAP 항체 FAP5 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:451은 항-FAP 항체 FAP5 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:452는 항-FAP 항체 시브로투주맙 가변 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:453은 항-FAP 항체 시브로투주맙 가변 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:454는 항-VISTA 항체 1B8 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:455는 항-VISTA 항체 1B8 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:456은 항-VISTA 항체 1B8 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:457은 항-VISTA 항체 1B8 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:458은 항-VISTA 항체 1B8 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:459는 항-VISTA 항체 1B8 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:460은 항-VISTA 항체 1B8 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:461은 항-VISTA 항체 1B8 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:462는 항-VISTA 항체 2C12 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:463은 항-VISTA 항체 2C12 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:464는 항-VISTA 항체 2C12 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:465는 항-VISTA 항체 2C12 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:466은 항-VISTA 항체 2C12 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:467은 항-VISTA 항체 2C12 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:468은 항-VISTA 항체 2C12 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:469는 항-VISTA 항체 2C12 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:470은 항-VISTA 항체 1A12 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:471은 항-VISTA 항체 1A12 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:472는 항-VISTA 항체 1A12 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
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서열번호:474는 항-VISTA 항체 1A12 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:475는 항-VISTA 항체 1A12 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:476은 항-VISTA 항체 1A12 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:477은 항-VISTA 항체 1A12 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
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서열번호:480은 항-VISTA 항체 3C5 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
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서열번호:482는 항-VISTA 항체 3C5 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
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서열번호:494는 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
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서열번호:497은 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:498은 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:499는 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:500은 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:501은 항-LRRC15 항체 huAD208.4.1 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
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서열번호:506은 항-LRRC15 항체 huAD208.12.1 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:507은 항-LRRC15 항체 huAD208.12.1 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:508은 항-LRRC15 항체 huAD208.12.1 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:509는 항-LRRC15 항체 huAD208.12.1 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:510은 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:511은 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:512는 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:513은 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:514는 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:515는 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:516은 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:517은 항-LRRC15 항체 huAD208.14.1 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:518은 항-LRRC15 항체 hu139.10 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:519는 항-LRRC15 항체 hu139.10 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:520은 항-LRRC15 항체 hu139.10 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:521은 항-LRRC15 항체 hu139.10 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:522는 항-LRRC15 항체 hu139.10 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:523은 항-LRRC15 항체 hu139.10 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:524는 항-LRRC15 항체 hu139.10 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:525는 항-LRRC15 항체 hu139.10 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:526은 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:527은 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:528은 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:529는 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:530은 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
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서열번호:532는 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:533은 항-LRRC15 항체 muAD210.40.9 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:534는 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:535는 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:536은 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:537은 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:538은 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:539는 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:540은 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:541은 항-LRRC15 항체 muAD209.9.1 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:542는 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:543은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:544는 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 중쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:545는 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 중쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:546은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 중쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:547은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 경쇄 CDR1의 아미노산 서열이다.
서열번호:548은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 경쇄 CDR2의 아미노산 서열이다.
서열번호:549는 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 경쇄 CDR3의 아미노산 서열이다.
서열번호:550은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 가변 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:551은 항-B7-H3 항체 hBRCA84D 가변 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호:552는 PD-1 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:553은 CD28 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:554는 CD27 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:555는 CD8α 막관통 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:556은 CD8α 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:557은 IL-2Rβ 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:558은 IgG1 막관통 및 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:559는 IgG1 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:560은 IgG4 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:561은 IgD 힌지 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:562는 PD-1 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:563은 CD28 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:564는 CD27 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:565는 CD8α 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:566은 CD8α 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:567은 IL-2Rβ 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:568은 IgG1 막관통 및 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:569는 IgG1 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:570은 IgG4 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:571은 IgD 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:572는 CD28 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:573은 CD134(OX40) 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:574는 CD278(ICOS) 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:575는 CD137(4-1BB) 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:576은 CD27 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:577은 CD3ζ 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:578은 IL-2Rβ 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:579는 IL-2Rγ 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:580은 IL-18R1 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:581은 IL-7Rα 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:582는 IL-12R1 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:583은 IL-12R2 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:584는 IL-15Rα 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:585는 IL-21R 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:586은 LTBR 세포내 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:587은 링커의 아미노산 서열이다.
서열번호:588은 CD28 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:589는 CD134(OX40) 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:590은 CD278(ICOS) 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:591은 CD137(4-1BB) 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:592는 CD27 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:593은 CD3ζ 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:594는 IL-2Rβ 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:595는 IL-2Rγ 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:596은 IL-18R1 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:597은 IL-7Rα 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:598은 IL-12R1 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:599는 IL-12R2 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:600은 IL-15Rα 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:601은 IL-21R 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:602는 LTBR 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:603은 링커를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:604는 EF-1 프로모터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:605는 CMV 프로모터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:606은 MSCV 프로모터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:607은 NFAT 프로모터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:608은 T2A 자기 절단 펩티드(토세아 아시그나 바이러스(thosea asigna virus) 2A로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:609는 P2A 자기 절단 펩티드(돼지 테스코바이러스(porcine teschovirus)-1 2A로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:610은 E2A 자기 절단 펩티드(말 비염(equine rhinitis) A 바이러스로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:611은 F2A 자기 절단 펩티드(구제역(foot-and-mouth disease) 바이러스로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:612는 링커에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:613은 T2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:614는 P2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:615는 E2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:616은 F2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:617은 IRES 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:618은 (항-TROP2-VL)-(링커)-(항-TROP2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:619는 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:620은 본원에 기재된 38A1 항-PD-L1 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:621은 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 모두 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:622는 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 모두 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18R1 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:623은 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rβ 막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rγ 막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:624는 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18R1-막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18RAP-막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:625는 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(KM4097 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:626은 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18R1 세포내)- T2A-SP-(KM4097scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:627은 CXCR1 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:628은 CXCR2 변이체 1 및 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:629는 CXCR3 변이체 1 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:630은 CXCR3 변이체 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:631은 CXCR4 변이체 1 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:632는 CXCR4 변이체 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:633은 CXCR4 변이체 3 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:634는 CXCR4 변이체 4 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:635는 CXCR4 변이체 5 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:636은 CXCR5 변이체 1 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:637은 CXCR5 변이체 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:638은 CCR2 변이체 A 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:639는 CCR2 변이체 B 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:640은 CCR4 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:641은 CCR6 변이체 1 및 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:642는 CCR7 변이체 1 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:643은 CCR7 변이체 2 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:644는 CCR7 변이체 3, 4, 및 5 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:645는 CCR8 도메인의 아미노산 서열이다.
서열번호:646은 CXCR1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:647은 CXCR2 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:648은 CXCR2 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:649는 CXCR3 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:650은 CXCR3 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:651은 CXCR4 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:652는 CXCR4 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:653은 CXCR4 변이체 3 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:654는 CXCR4 변이체 4 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:655는 CXCR4 변이체 5 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:656은 CXCR5 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:657은 CXCR5 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:658은 CCR2 변이체 A 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:659는 CCR2 변이체 B 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:660은 CCR4 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:661은 CCR6 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:662는 CCR6 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:663은 CCR7 변이체 1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:664는 CCR7 변이체 2 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:665는 CCR7 변이체 3 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:666은 CCR7 변이체 4 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:667은 CCR7 변이체 5 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:668은 CCR8 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:669는 CXCR1 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:670은 CCR8 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:671은 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 모두 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:672는 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18R1 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:673은 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rβ 막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rγ 막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:674는 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18R1-막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18RAP-막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:675는 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(KM4097 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:676은 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18R1 세포내)-T2A-SP-(KM4097scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭한다.
서열번호:677은 CCR7.2:chPD-L1-IL-2R(SP-38A1scFv-IL2Rβ12aaEC-TM-IL-2Rβ-IC-T2A-SP-19H9scFv-IL2Rγ12aaEC-TM-IL-2Rγ-IC)을 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭하고, EC는 세포외를 지칭하고, TM은 막관통을 지칭하고, IC는 세포내를 지칭한다.
서열번호:678은 CCR8.2:chPD-L1-IL-18R(SP-38A1scFv-IL-18R112aaEC-TM-IL-18R1-IC-T2A-SP-19H9scFv-IL-18RRAP12aaEC-TM-IL-18RAP-IC)을 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭하고, EC는 세포외를 지칭하고, TM은 막관통을 지칭하고, IC는 세포내를 지칭한다.
서열번호:679는 CCR11.2:TROP2-IL-2R(SP-cAR47A6.4 scFv-IL2Rβ12aaEC-TM -IL-2Rβ-IC-T2A-SP-KM4097scFV-IL2Rγ12aaEC-TM-IL-2Rγ-IC)을 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭하고, EC는 세포외를 지칭하고, TM은 막관통을 지칭하고, IC는 세포내를 지칭한다.
서열번호:680은 CCR12.2:TROP2-IL-18R(SP-cAR47A6.4 scFv-IL-18R112aaEC-TM-IL-18R1-IC-T2A-SP-KM4097scFv-IL-18RRAP12aaEC-TM-IL-18RAP-IC)을 포함하는 2개의 CCR에 대한 아미노산 서열이다. SP는 신호 펩티드를 지칭하고, EC는 세포외를 지칭하고, TM은 막관통을 지칭하고, IC는 세포내를 지칭한다.
서열번호:681은 CCR7.2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:682는 CCR8.2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:683은 CCR11.2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:684는 CCR12.2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:685는 CCR7.2를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:686은 CCR8.2를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:687은 CCR11.2를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:688은 CCR12.2를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:689는 CCR13(ch Fas-4-1BB)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:690은 CCR14(ch PD-1-4-1BB)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:691은 CCR15(TGFβRII-4-1BB)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:692는 CCR16(ch PD-1-CD28)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:693은 FAS 결합 도메인에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:694는 TGFβRII 결합 도메인에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:695는 CCR13(ch Fas-4-1BB)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:696은 CCR14(ch PD-1-4-1BB)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:697은 CCR15(TGFβRII-4-1BB)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:698은 CCR16(ch PD-1-CD28)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:699는 CCR13(ch Fas-4-1BB)을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:700은 CCR14(ch PD-1-4-1BB)를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:701은 CCR15(ch TGFβRII-4-1BB)을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:702는 CCR16(ch PD-1-CD28)을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:703은 CCR17(ch Fas-LTBR)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:704는 CCR18(ch PD-1-LTBR)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:705는 CCR19(ch TGFβRII-LTBR)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:706은 CCR17(ch Fas-LTBR)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:707은 CCR18(ch PD-1-LTBR)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:708은 CCR19(ch TGFβRII-LTBR)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:709는 CCR17(ch Fas-LTBR)을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:710은 CCR18(ch PD-1-LTBR)을 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:711은 CCR19(ch TGFβRII-LTBR)를 암호화하는 벡터에 대한 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:712는 CCR20(ch 19H9-4-1BB)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:713은 CCR21(ch 19H9-LTBR)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:714는 CCR22(ch 19H9-4-1BB 버전 2)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:715는 CCR23(ch 19H9-LTBR 버전 2)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:716은 CCR24(ch 19H9-LTBR-4-1BB)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:717은 CCR25(ch 19H9-4-1BB-LTBR)에 대한 아미노산 서열이다.
서열번호:718은 CCR20(ch 19H9-4-1BB)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:719는 CCR21(ch 19H9-LTBR)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:720은 CCR22(ch 19H9-4-1BB 버전 2)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:721은 CCR23(ch 19H9-LTBR 버전 2)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:722는 CCR24(ch 19H9-LTBR-4-1BB)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
서열번호:723은 CCR25(ch 19H9-4-1BB-LTBR)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다.
I. 도입
급속 확장 프로토콜(REP)에 의해 생체 외에서 배양된 TIL을 활용하는 입양 세포 요법은 흑색종과 같은 암 환자에서 숙주 면역억제 후 성공적인 입양 세포 요법을 생산하였다. 현재 TIL 제조 및 치료 프로세스는 길이, 비용, 멸균 문제, 및 본원에 기재된 다른 요인에 의해 제한된다. 실행가능한 치료 옵션이 거의 또는 전혀 남아있지 않는 환자를 치료하는 데 사용하기에 적절한 TIL 제조 프로세스 및 이러한 프로세스에 기반한 요법을 제공하려는 긴급한 요구가 있다. 본 발명은 CCR 또는 케모카인 수용체를 사용하여 변형된 TIL을 생성하는 데 사용하기 위한 제조 프로세스 및 생성물을 제공함으로써, 본원에 기재된 다른 변형 중에서, 효능, 잠재력, 안전성, 줄기세포능(stemness), 또는 다른 성능 척도를 개선시키려는 이 요구를 충족시킨다.
II. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급되는 모든 특허 및 간행물은 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "공동 투여," "공통 투여하는," "와 조합하여 투여된," "와 조합하여 투여하는," "동시," 및 "동시에"는 2개 이상의 활성 약제학적 성분(본 발명의 바람직한 구현예에서, 예를 들어, 복수의 TIL)을 대상체에게 투여하여 두 활성 약제학적 성분 및/또는 그들의 대사산물이 동시에 대상체에 존재하도록 하는 것을 포함한다. 공동 투여는 별도의 조성물로 통시 투여, 별도의 조성물로 상이한 시점에 투여, 또는 2개 이상의 활성 약제학적 성분이 존재하는 조성물로 투여를 포함한다. 별도의 조성물로 동시 투여 및 두 제제가 존재하는 조성물로 투여가 바람직하다.
용어 "생체 내"는 대상체의 신체에서 일어나는 사건을 지칭한다.
용어 "시험관 내"는 대상체의 신체 외부에서 일어나는 사건을 지칭한다. 시험관 내 검정은 살아있거나 죽은 세포를 이용하는 세포-기반 검정을 포함하고 또한 온전한 세포가 이용되지 않은 무세포 검정을 포함할 수 있다.
용어 "생체 외"는 대상체의 신체로부터 제거된 세포, 조직 및/또는 기관에서 치료하거나 절차를 수행하는 것을 수반하는 사건을 지칭한다. 적절하게, 세포, 조직 및/또는 기관은 수술 또는 치료 방법으로 대상체의 신체로 되돌릴 수 있다.
용어 "급속 확장"은 항원-특이적 TIL의 수가 일주일에 걸쳐 적어도 약 3-배(또는 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 또는 9-배), 보다 바람직하게는 일주일에 걸쳐 적어도 약 10-배(또는 20-, 30-, 40-, 50-, 60-, 70-, 80-, 또는 90-배), 또는 가장 바람직하게는 일주일에 걸쳐 적어도 약 100-배 증가함을 의미한다. 다수의 급속 확장 프로토콜이 본원에 기재되어 있다.
본원에서 "종양 침윤 림프구" 또는 "TIL"이란 대상체의 혈류를 떠나 종양으로 이동하는 백혈구로서 원래 수득된 세포 집단을 의미한다. TIL은 CD8+ 세포독성 T 세포(림프구), Th1 및 Th17 CD4+ T 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포 및 M1 대식세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. TIL은 1차 및 2차 TIL을 모두 포함한다. "1차 TIL"은 본원에 요약된 바와 같은 환자 조직 샘플에서 수득된 것이고(때때로 "새로 수확된" 것으로 언급됨), "2차 TIL"은 벌크 TIL 및 확장된 TIL("REP TIL" 또는 "Post-REP TIL")을 포함하나 이에 제한되지 않는, 본원에 논의된 바와 같이 확장되거나 증식된 임의의 TIL 세포 집단이다. TIL 세포 집단은 유전적으로 변형된 TIL을 포함할 수 있다.
본원에서 "세포 집단"(TIL 포함)이란 공통 특성을 공유하는 다수의 세포를 의미한다. 일반적으로, 집단의 수는 일반적으로 1 X 106 내지 1 X 1010 범위이며, 상이한 TIL 집단은 상이한 수를 포함한다. 예를 들어, IL-2의 존재 하에 1차 TIL의 초기 성장은 대략 1 x 108개 세포의 벌크 TIL 집단을 초래한다. REP 확장은 일반적으로 주입을 위해 1.5 x 109개 내지 1.5 x 1010개의 세포 집단을 제공하기 위해 수행된다.
본원에서 "동결보존된 TIL"이란 1차, 벌크, 또는 확장된 TIL(REP TIL)이 약 -150℃ 내지 -60℃ 범위에서 처리되고 저장됨을 의미한다. 일반적인 동결건조 방법은 또한 실시예를 포함한 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 명확성을 위해, "동결보존된 TIL"은 1차 TIL의 공급원으로서 사용될 수 있는 동결된 조직 샘플과 구별가능하다.
본원에서 "해동된 동결보존된 TIL"이란 이전에 동결보존된 다음 세포 배양 온도 또는 TIL이 환자에게 투여될 수 있는 온도를 포함하나 이에 제한되지 않는 실온 이상으로 돌아가도록 처리된 TIL 집단을 의미한다.
TIL은 일반적으로 세포 표면 마커를 사용하여 생화학적으로, 또는 종양에 침투하여 치료에 영향을 미치는 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 일반적으로 다음 바이오마커 중 하나 이상을 발현함으로써 분류될 수 있다: CD4, CD8, T-세포 수용체(TCR) αβ, CD27, CD28, CD56, CCR7, CD45Ra, CD95, PD-1, 및 CD25. 추가적으로 및 대안적으로, TIL은 환자에게 재도입 시 고형 종양을 침투하는 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다.
용어 "동결보존 배지" 또는 "동결보존 매질"는 세포의 동결보존을 위해 사용될 수 있는 임의의 매질을 지칭한다. 이러한 배지는 7% 내지 10% DMSO를 포함하는 배지를 포함할 수 있다. 예시적인 배지는 CryoStor CS10, Hyperthermasol, 뿐만 아니라 이의 조합을 포함한다. 용어 "CS10"은 Stemcell Technologies 또는 Biolife Solutions에서 수득한 동결보존 매질을 지칭한다. CS10 매질은 상표명 "CryoStor® CS10"으로 언급될 수 있다. CS10 매질은 DMSO를 포함하는 무혈청, 무동물 성분 매질이다.
용어 "중추 기억 T 세포"는 인간에서 CD45R0+이고 CCR7(CCR7hi) 및 CD62L(CD62hi)을 구성적으로 발현하는 T 세포의 하위집합을 지칭한다. 중추 기억 T 세포의 표면 표현형은 또한 TCR, CD3, CD127(IL-7R), 및 IL-15R를 포함한다. 중추 기억 T 세포에 대한 전사 인자는 BCL-6, BCL-6B, MBD2, 및 BMI1을 포함한다. 중추 기억 T 세포는 주로 TCR 촉발 후 효과기 분자로서 IL-2 및 CD40L을 분비한다. 중추 기억 T 세포는 혈액의 CD4 구획에서 우세하고, 인간에서 림프절 및 편도선에서 비례적으로 풍부한다.
용어 "효과기 기억 T 세포"는 중추 기억 T 세포와 마찬가지로, CD45R0+이지만, CCR7(CCR7lo)의 구성적 발현이 손실되고 CD62L(CD62Llo) 발현에 대해 이질적이거나 낮은 인간 또는 포유류 T 세포의 하위집합을 지칭한다. 중추 기억 T 세포의 표면 표현형은 또한 TCR, CD3, CD127(IL-7R), 및 IL-15R을 포함한다. 중추 기억 T 세포에 대한 전사 인자는 BLIMP1을 포함한다. 효과기 기억 T 세포는 항원 자극 후 인터페론-γ, IL-4, 및 IL-5를 포함한 높은 수준의 염증성 사이토카인을 급속히 분비한다. 효과기 기억 T 세포는 혈액의 CD8 구획에서 우세하고, 인간에서 폐, 간, 및 장에서 비례적으로 풍부하다. CD8+ 효과기 기억 T 세포는 다량의 퍼포린을 운반한다.
용어 "폐쇄형 시스템"은 외부 환경에 대해 폐쇄된 시스템을 지칭한다. 세포 배양 방법에 적절한 임의의 폐쇄형 시스템은 본 발명의 방법과 함께 이용될 수 있다. 폐쇄형 시스템은 예를 들어, 폐쇄형 G-용기를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 종양 분절이 폐쇄형 시스템에 첨가되면, 시스템은 TIL이 환자에게 투여될 준비가 될 때까지 외부 환경에 대해 개방되지 않는다.
종양을 파괴하는 과정을 설명하기 위해 본원에 사용된 바와 같은 용어 "단편화," "단편," 및 "단편화된"은 종양 조직의 분쇄, 슬라이싱, 분할, 및 세절화와 같은 기계적 단편화 방법 뿐만 아니라 종양 조직의 물리적 구조를 파괴하는 임의의 다른 방법을 포함한다.
용어 "말초 혈액 단핵 세포" 및 "PBMC"는 림프구(T 세포, B 세포, NK 세포) 및 단핵구를 포함하여 둥근 핵을 갖는 말초 혈액 세포를 지칭한다. 항원 제시 세포로서 사용되는 경우(PBMC는 항원 제시 세포의 유형임), 말초 혈액 단핵 세포는 바람직하게는 조사된 동종이계 말초 혈액 단핵 세포이다.
용어 "말초 혈액 림프구" 및 "PBL"은 말초 혈액에서 확장된 T 세포를 지칭한다. 일부 구현예에서, PBL은 공여자의 전혈 또는 성분채집술 생성물로부터 분리된다. 일부 구현예에서, PBL은 CD3+ CD45+의 T 세포 표현형과 같은 T 세포 표현형의 양성 또는 음성 선택에 의해 공여자의 전혈 또는 성분채집술 생성물로부터 분리된다.
용어 "항-CD3 항체"는 성숙 T 세포의 T 세포 항원 수용체 내 CD3 수용체에 대해 지시되는 인간, 인간화, 키메라 또는 뮤린 항체를 포함하는 항체 또는 이의 변이체, 예를 들어, 단클론 항체를 지칭한다. 항-CD3 항체는 무로모납으로도 알려진 OKT-3을 포함한다. 항-CD3 항체는 또한 T3 및 CD3ε으로도 알려진 UHCT1 클론을 포함한다. 다른 항-CD3 항체는 예를 들어, 오텔릭시주맙(otelixizumab), 테플리주맙(teplizumab), 및 비실리주맙(visilizumab)을 포함한다.
용어 "OKT-3"(본원에서 "OKT3"으로도 언급짐)은 성숙 T 세포의 T 세포 항원 수용체 내 CD3 수용체에 대해 지시된 인간, 인간화, 키메라, 또는 뮤린 항체를 포함하는 단클론 항체 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체를 지칭하며, OKT-3(30 ng/mL, MACS GMP CD3 순수, 미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 Miltenyi Biotech, Inc.) 및 무로모납과 같은 상업적으로 입수가능한 형태 또는 이의 변이체, 보존적 아미노산 치환, 글리코폼, 또는 바이오시밀러를 포함한다. 무로모납의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 표 1에 제시된다(서열번호:1 및 서열번호:2). OKT-3을 생산할 수 있는 하이브리도마는 아메리카 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 기탁되어 있고 ATCC 수탁 번호 CRL 8001로 지정된다. OKT-3을 생산할 수 있는 하이브리도마는 또한 인증된 세포 배양 유럽 콜렉션(European Collection of Authenticated Cell Cultures, ECACC)에 기탁되어 있고 카탈로그 번호 86022706으로 지정된다.
표 1. 무로모납(예시적인 OKT-3 항체)의 아미노산 서열.
용어 "IL-2"(본원에서 "IL2"로도 언급됨)는 인터류킨-2로 알려진 T 세포 성장 인자를 지칭하며 인간 및 포유류 형태, 이의 보존적 아미노산 치환, 글리코폼, 바이오시밀러, 및 변이체를 포함한 IL-2의 모든 형태를 포함한다. IL-2는 예를 들어, Nelson, J. Immunol. 2004, 172, 3983-88 및 Malek, Annu. Rev. Immunol. 2008, 26, 453-79에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-2의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:3). 예를 들어, 용어 IL-2는 알데스류킨(PROLEUKIN, 단일 사용 바이알 당 2,200만 IU로 다중 공급업체로부터 상업적으로 입수가능)과 같은 IL-2의 인간 재조합 형태, 뿐만 아니라 미국 뉴햄프셔주 포츠머스 소재의 CellGenix, Inc.(CELLGRO GMP) 또는 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-209-b)에 의해 상업적으로 공급된 재조합 IL-2 형태 및 다른 공급처의 상업적 등가물을 포함한다. 알데스류킨(데스-알라닐-1, 세린-125 인간 IL-2)은 분자량이 대략 15 kDa인 비글리코실화된 인간 재조합 IL-2 형태인다. 본 발명에 사용하기에 적합한 알데스류킨의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:4). 용어 IL-2는 또한 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코 소재의 Nektar Therapeutics에서 입수가능하거나, 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2018/132496 A1의 실시예 19에 기재된 방법 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0275133 A1의 실시예 1에 기재된 방법과 같은 당업계에 알려진 방법에 의해 제조될 수 있는, 페길화된 IL2 전구약물 벰페갈데스류킨(NKTR-214, 평균 6개의 리신 잔기가 [(2,7-비스{[메틸폴리(옥시에틸렌)]카르바모일}-9H-플루오렌-9-일)메톡시]카르보닐로 치환된 N6인 서열번호:4에서와 같은 페길화된 인간 재조합 IL-2)을 포함한 본원에 기재된 바와 같은 페길화된 IL-2 형태를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 벰페갈데스류킨(NKTR-214) 및 다른 페길화된 IL-2 분자는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2014/0328791 A1 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2012/065086 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 접합된 IL-2의 대안적인 형태는 미국 특허 번호 4,766,106, 5,206,344, 5,089,261 및 4,902,502에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2의 제형은 미국 특허 번호 6,706,289에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 Synthorx, Inc에서 입수가능한 THOR-707이다. THOR-707 및 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2의 추가의 대안적인 형태의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0181220 A1 및 US 2020/0330601 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 그리고 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된 아미노산 위치에서 정제 및 단리된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 접합 모이어티를 포함하는 인터류킨 2(IL-2) 접합체이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열번호:5에 상응한다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 R38 및 K64로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 E61, E62, 및 E68로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 아미노산 위치는 E62에 있다. 일부 구현예에서, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된 아미노산 잔기는 리신, 시스테인, 또는 히스티딘으로 추가로 돌연변이된다. 일부 구현예에서, 아미노산 잔기는 시스테인으로 돌연변이된다. 일부 구현예에서, 아미노산 잔기는 리신으로 돌연변이된다. 일부 구현예에서, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된 아미노산 잔기는 비천연 아미노산으로 추가로 돌연변이된다. 일부 구현예에서, 비천연 아미노산은 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK), N6-프로파길에톡시-L-리신(PraK), BCN-L-리신, 노르보넨 리신, TCO-리신, 메틸테트라진 리신, 알릴옥시카르보닐리신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파길옥시페닐알라닌, p-프로파길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-Dopa, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2 접합체는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대해 감소된 친화도를 갖는다. 일부 구현예에서, 감소된 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rα에 대한 결합 친화도의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과 감소이다. 일부 구현예에서, 감소된 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 30-배, 50-배, 100-배, 200-배, 300-배, 500-배, 1000-배, 또는 그 이상이다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티 IL-2와 IL-2Rα의 결합을 손상시키거나 차단한다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 접합 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀계 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(당류), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 중합체 각각은 독립적으로 PEG를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG는 선형 PEG 또는 분지형 PEG이다. 일부 구현예에서, 수용체 중합체 각각은 독립적으로 다당류를 포함한다. 일부 구현예에서, 다당류는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 황산염(HS), 덱스트린, 또는 하이드록시에틸-전분(HES)을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 중합체 각각은 독립적으로 글리칸을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 중합체 각각은 독립적으로 폴리아민을 포함한다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 접합 모이어티는 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 각각은 독립적으로 알부민, 트랜스페린, 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 각각은 독립적으로 Fc 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 각각은 독립적으로 IgG의 Fc 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 접합 모이어티는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 각각은 독립적으로 XTEN 펩티드, 글리신-풍부 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드, 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드는 글루타밀화에 의해 변형된다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드에 직접 결합된다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 링커를 통해 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드에 간접적으로 결합된다. 일부 구현예에서, 링커는 동종이작용성 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 동종이작용성 링커는 로만트 시약(Lomant's reagent) 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트) DSP, 3'3'-디티오비스(술포숙신이미딜 프로프리오네이트)(DTSSP), 디숙신이미딜 수베레이트(DSS), 비스(술포숙신이미딜)수베레이트(BS), 디숙신이미딜 타르트레이트(DST), 디술포숙신이미딜 타르트레이트(술포 DST), 에틸렌 글리코비스(숙신이미딜숙시네이트)(EGS), 디숙신이미딜 글루타레이트(DSG), N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트(DSC), 디메틸 아디피미데이트(DMA), 디메틸 피멜리미데이트(DMP), 디메틸 수베리미데이트(DMS), 디메틸-3,3'-디티오비스프로피오니미데이트(DTBP), 1,4-디-(3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미도)부탄(DPDPB), 비스말레이미도헥산(BMH), 예를 들어 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠 또는 1,3-디플루오로-4,6-디니트로벤젠과 같은 알릴 할라이드-함유 화합물(DFDNB), 4,4'-디플루오로-3,3'-디니트로페닐술폰(DFDNPS), 비스-[β-(4-아지도살리실아미도)에틸]디술파이드(BASED), 포름알데하이드, 글루타르알데하이드, 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 아디프산 디하이드라진, 카르보하이드라지드, o-톨루이딘, 3,3'-디메틸벤지딘, 벤지딘, α,α'-p-디아미노디페닐, 디요오도-p-크실렌 술폰산, N,N'-에틸렌-비스(요오도아세트아미드), 또는 N,N'-헥사메틸렌-비스(요오도아세트아미드)를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 이종이작용성 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 이종이작용성 링커는 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(sPDP), 장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(LC-sPDP), 수용성-장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(술포-LC-sPDP), 숙신이미딜옥시카르보닐-α-메틸-α-(2-피리딜디티오)톨루엔(sMPT), 술포숙신이미딜-6-[α-메틸-α-(2-피리딜디티오)톨루아미도]헥사노에이트(술포-LC-sMPT), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(sMCC), 술포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(술포-sMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르(MB), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시술포숙신이미드 에스테르(술포-MB), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(sIAB), 술포숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(술포-sIAB), 숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(sMPB), 술포숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(술포-sMPB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)숙신이미드 에스테르(GMB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시) 술포숙신이미드 에스테르(술포-GMB), 숙신이미딜 6-((요오도아세틸)아미노)헥사노에이트(sIAX), 숙신이미딜 6-[6-(((요오도아세틸)아미노)헥사노일)아미노]헥사노에이트(slAXX), 숙신이미딜 4-(((요오도아세틸)아미노)메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(sIAC), 숙신이미딜 6-(((((4-요오도아세틸)아미노)메틸)사이클로헥산-1-카르보닐)아미노) 헥사노에이트(sIACX), p-니트로페닐 요오도아세테이트(NPIA), 카르보닐-반응성 및 술피드릴-반응성 교차 링커 예컨대 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라지드(MPBH), 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실-하이드라지드-8(M2C2H), 3-(2-피리딜디티오)프로피오닐 하이드라지드(PDPH), N-하이드록시숙신이미딜-4-아지도살리실산(NHs-AsA), N-하이드록시술포숙신이미딜-4-아지도살리실산(술포-NHs-AsA), 술포숙신이미딜-(4-아지도살리실아미도)헥사노에이트(술포-NHs-LC-AsA), 술포숙신이미딜-2-(p-아지도살리실아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAsD), N-하이드록시숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(HsAB), N-하이드록시술포숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(술포-HsAB), N-숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐 아미노)헥사노에이트(sANPAH), 술포숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)헥사노에이트(술포-sANPAH), N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드(ANB-NOs), 술포숙신이미딜-2-(m-아지도-o-니트로벤즈아미도)-에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAND), N-숙신이미딜-4(4-아지도페닐)1,3'-디티오프로피오네이트(sADP), N-술포숙신이미딜(4-아지도페닐)-1,3'-디티오프로피오네이트(술포-sADP), 술포숙신이미딜 4-(p-아지도페닐)부티레이트(술포-sAPB), 술포숙신이미딜 2-(7-아지도-4-메틸쿠마린-3-아세트아미드)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAED), 술포숙신이미딜 7-아지도-4-메틸쿠마인-3-아세테이트(술포-sAMCA), p-니트로페닐 디아조피루베이트(pNPDP), p-니트로페닐-2-디아조-3,3,3-트리플루오로프로피오네이트(PNP-DTP), 1-(p-아지도살리실아미도)-4-(요오도아세트아미도)부탄(AsIB), N-[4-(p-아지도살리실아미도)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오) 프로피온아미드(APDP), 벤조페논-4-요오도아세트아미드, p-아지도벤조일 하이드라지드(ABH), 4-(p-아지도살리실아미도)부틸아민(AsBA), 또는 p-아지도페닐 글리옥살(APG)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 임의적으로 디펩티드 링커를 포함하는 절단가능한 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 디펩티드 링커는 Val-Cit, Phe-Lys, Val-Ala, 또는 Val-Lys를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 절단불가능한 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 임의적으로 말레이미도카프로일(mc), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(sMCC), 또는 술포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(술포-sMCC)를 포함하는 말레이미드 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 스페이서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 p-아미노벤질 알코올(PAB), p-아미노벤지옥시카르보닐(PABC), 이의 유도체, 또는 유사체를 포함한다. 일부 구현예에서, 접합 모이어티는 IL-2 접합체의 혈청 반감기를 확장할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 접합 모이어티는 IL-2 접합체의 혈청 반감기를 확장할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 본원에 기재된 임의의 IL-2 형태의 단편이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0181220 A1 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0330601 A1에 개시된 바와 같이 페길화된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호:5에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호:5 내의 아미노산 위치에 관하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72에서 아미노산을 치환한다. 일부 구현예에서, IL-2 폴리펩티드는 서열번호:5에 대해 하나의 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 IL-2R 알파 쇄 결속(engagement)이 결여되어 있지만 중간 친화성 IL-2R 베타-감마 신호전달 복합체에 대한 정상적 결합을 유지한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호:5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호:5 내의 아미노산 위치에 관하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72에서 아미노산을 치환한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호:5에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호:5 내의 아미노산 위치에 관하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72에서 아미노산을 치환한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호:5에 대해 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호:5 내의 아미노산 위치에 관하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72에서 아미노산을 치환한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 Alkermes, Inc에서 입수가능한 ALKS-4230(서열번호:6)으로도 알려진 넴발류킨 알파이다. 넴발류킨 알파는 펩티딜 링커(60GG61)를 통해 인간 인터류킨 2 단편(62-132)에 융합되고, 펩티딜 링커(133GSGGGS138)를 통해 인간 인터류킨 2 수용체 α-쇄 단편(139-303)에 융합된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생산된 글리코실화 인간 인터류킨 2 단편(1-59), 변이체(Cys125>Ser51); G2 펩티드 링커(60-61)를 통해 인간 인터류킨 2(IL-2)(4-74)-펩티드(62-132)에 융합되고 GSG3S 펩티드 링커(133-138)를 통해 인간 인터류킨 2 수용체 α-쇄(IL2R 서브유닛 알파, IL2Rα, IL2RA)(1-165)-펩티드(139-303)에 융합된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 글리코폼 알파에서 생산된 인간 인터류킨 2(IL-2)(75-133)-펩티드 [Cys125(51)>Ser]-돌연변이체(1-59)로도 알려져 있다. 넴발류킨 알파의 아미노산 서열은 서열번호:6에 제시된다. 일부 구현예에서, 넴발류킨 알파는 다음 번역후 변형을 나타낸다: 위치: 31-116, 141-285, 184-242, 269-301, 166-197 또는 166-199, 168-199 또는168-197(서열번호:6의 넘버링 사용)에서 이황화 가교, 및 서열번호:6의 넘버링 사용하여 위치: N187, N206, T212에서 글리코실화 부위. 넴발류킨 알파, 뿐만 아니라 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2의 추가 대안적인 형태의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2021/0038684 A1 및 미국 특허 번호 10,183,979에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호:6에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 단백질이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호:6에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호:7의 아미노산 24-452, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체를 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태 서열번호:7의 아미노산 24-452에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체를 포함하는 융합 단백질이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 다른 IL-2 형태는 미국 특허 번호 10,183,979에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 임의적으로, 일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커에 의해 제2 융합 파트너에 연결된 제1 융합 파트너를 포함하는 융합 단백질이며, 여기서 제1 융합 파트너는 IL-1Rα 또는 IL-1Rα에 대해 적어도 98% 아미노산 서열 동일성을 갖고 IL-Rα의 수용체 길항제 활성을 갖는 단백질이고, 여기서 제2 융합 파트너는 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커는 서열번호:8 또는 서열번호:8에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고 여기서 융합 단백질의 반감기는 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커의 부재 하에 제1 융합 파트너와 제2 융합 파트너의 융합과 비교하여 개선된다.
표 2. 인터류킨의 아미노산 서열.
일부 구현예에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 이식된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하는 항체 사이토카인 이식된 단백질을 포함하며, 여기서 항체 사이토카인 이식된 단백질은 조절 T 세포에 비해 T 효과기 세포를 우선적으로 확장시킨다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 이식된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 여기서 항체 사이토카인 이식된 단백질은 조절 T 세포에 비해 T 효과기 세포를 우선적으로 확장시킨다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0270334 A1에 기재된 항체의 투여를 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 이식된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 여기서 항체 사이토카인 이식된 단백질은 조절 T 세포에 비해 T 효과기 세포를 우선적으로 확장시키고, 여기서 항체는 서열번호:39를 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호:38을 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 서열번호:37을 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호:29를 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 서열번호:39를 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호:29를 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 및 서열번호:37을 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및서열번호:38을 포함하는 IgG 클래스 중쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 IgG 클래스 중쇄 및 IgG 클래스 경쇄를 추가로 포함한다.
구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR1에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR2에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR3에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR1에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR2에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 구현예에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR3에 이식되며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다.
IL-2 분자의 삽입은 CDR의 N-말단 영역 또는 그 근처, CDR의 중간 영역 또는 CDR의 C-말단 영역 또는 그 근처에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 CDR에 혼입된 IL-2 분자를 포함하며, 여기서 IL2 서열은 CDR 서열을 프레임시프트하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 CDR에 혼입된 IL-2 분자를 포함하며, 여기서 IL-2 서열은 CDR 서열의 전부 또는 일부를 대체한다. IL-2 분자에 의한 대체는 CDR의 N-말단 영역, CDR의 중간 영역 또는 C-말단 영역 CDR 또는 그 근처에 있을 수 있다. IL-2 분자에 의한 대체는 CDR 서열의 1 또는 2개의 아미노산만큼 적거나, 전체 CDR 서열일 수 있다.
일부 구현예에서, IL-2 분자는 펩티드 링커 없이 CDR에 직접 이식되며, CDR 서열과 IL-2 서열 사이에 추가 아미노산이 없다. 일부 구현예에서, IL-2 분자는 펩티드 링커로 CDR에 간접적으로 이식되며, CDR 서열과 IL-2 서열 사이에 하나 이상의 추가 아미노산이 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-2 분자는 IL-2 뮤테인이다. 일부 경우에, R67A 치환을 포함하는 IL-2 뮤테인. 일부 구현예에서, IL-2 뮤테인은 아미노산 서열번호:14 또는 서열번호:15를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2 뮤테인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0270334 A1의 표 1의 아미노산 서열을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:16, 서열번호:19, 서열번호:22 및 서열번호:25로 이루어진 군으로부터 선택된 HCDR1을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:7, 서열번호:10, 서열번호:13 및 서열번호:16으로 이루어진 군으로부터 선택된 HCDR1을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:17, 서열번호:20, 서열번호:23, 및 서열번호:26으로 이루어진 군으로부터 선택된 HCDR2로 이루어진 군으로부터 선택된 HCDR1을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:18, 서열번호:21, 서열번호:24, 및 서열번호:27로 이루어진 군으로부터 선택된 HCDR3을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 서열번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호:39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 서열번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호:39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 미국 특허 출원 공개 번호 2020/0270334 A1의 IgG.IL2F71A.H1 또는 IgG.IL2R67A.H1, 또는 이의 변이체, 유도체, 또는 단편, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이와 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 단백질을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 항체 사이토카인 이식된 단백질의 항체 구성요소는 면역글로불린 서열, 프레임워크 서열, 또는 팔리비주맙의 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체 사이토카인 이식된 단백질은 알데스류킨과 같으나 이에 제한되지 않는 야생형 IL-2 분자 또는 필적할만한 분자보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 구현예에서, 본원에 기재된 항체 사이토카인 이식된 단백질은 표 3에 제시된 바와 같은 서열을 갖는다.
표 3. 예시적인 팔리비주맙 항체-IL-2 이식된 단백질의 서열.
용어 "IL-4"(본원에서 "IL4"로도 언급됨)는 Th2 T 세포 및 호산구, 호염기구, 및 비만 세포에 의해 생산된 인터류킨 4로 알려진 사이토카인을 지칭한다. IL-4는 미경험 헬퍼 T 세포(Th0 세포)의 Th2 T 세포로의 분화를 조절한다. Steinke and Borish, Respir. Res. 2001, 2, 66-70. IL-4에 의해 활성화 시, Th2 T 세포는 이후에 양성 피드백 루프에서 추가 IL-4를 포함한다. IL-4는 또한 B 세포 증식 및 클래스 II MHC 발현을 자극하고, B 세포에서 IgE 및 IgG1 발현으로의 클래스 전환을 유도한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4는 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-211) 및 미국 매사추세츠주 월섬 소재의 ThermoFisher Scientific, Inc.(인간 IL-15 재조합 단백질, Cat. No. Gibco CTP0043)를 포함하여 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:9).
용어 "IL-4"(본원에서 "IL4"로도 언급됨)는 Th2 T 세포 및 호산구, 호염기구, 및 비만 세포에 의해 생산된 인터류킨 4로 알려진 사이토카인을 지칭한다. IL-4는 미경험 헬퍼 T 세포(Th0 세포)의 Th2 T 세포로의 분화를 조절한다. Steinke and Borish, Respir. Res. 2001, 2, 66-70. IL-4에 의해 활성화 시, Th2 T 세포는 이후에 피드백 루프에서 추가 IL-4를 생산한다. IL-4는 또한 B 세포 증식 및 클래스 II MHC 발현을 자극하고, B 세포에서 IgE 및 IgG1 발현으로의 클래스 전환을 유도한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4는 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-211) 및 미국 매사추세츠주 월섬 소재의 ThermoFisher Scientific, Inc.(인간 IL-15 재조합 단백질, Cat. No. Gibco CTP0043)를 포함하여 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:5).
용어 "IL-7"(본원에서 "IL7"로도 언급됨)은 기질 및 상피 세포, 뿐만 아니라 수지상 세포로부터 수득될 수 있는 인터류킨 7로 알려진 글리코실화된 조직-유래 사이토카인을 지칭한다. Fry and Mackall, Blood 2002, 99, 3892-904. IL-7은 T 세포 발달을 자극할 수 있다. IL-7은 IL-7 수용체 알파 및 공통 감마 쇄 수용체로 이루어진 이종이량체인 IL-7 수용체에 결합하며, 이는 흉선 내 T 세포 발달 및 말초 내 생존에 중요한 일련의 신호이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-7은 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-254) 및 미국 매사추세츠주 월섬 소재의 ThermoFisher Scientific, Inc.(인간 IL-15 재조합 단백질, Cat. No. Gibco PHC0071)를 포함하여 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-7의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:6).
용어 "IL-15"(본원에서 "IL15"로도 언급됨)는 인터류킨-15로 알려진 T 세포 성장 인자를 지칭하며 인간 및 포유류 형태, 이의 보존적 아미노산 치환, 글리코폼, 바이오시밀러, 및 변이체를 포함하는 IL-2의 모든 형태를 포함한다. IL-15는 예를 들어, Fehniger and Caligiuri, Blood 2001, 97, 14-32에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IL-15는 IL-2와 β 및 γ 신호전달 수용체 서브유닛을 공유한다. 재조합 인간 IL-15는 분자 질량이 12.8 kDa인 114개 아미노산(및 N-말단 메티오닌)을 함유하는 단일 비글리코실화된 폴리펩티드 쇄이다. 재조합 인간 IL-15는 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-230-b) 및 미국 매사추세츠주 월섬 소재의 ThermoFisher Scientific, Inc.(인간 IL-15 재조합 단백질, Cat. No. 34-8159-82)를 포함하여 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-15의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:7).
용어 "IL-21"(본원에서 "IL21"로도 언급됨)은 인터류킨-21로 알려진 다면발현성 사이토카인 단백질을 지칭하며 인간 및 포유류 형태, 이의 보존적 아미노산 치환, 글리코폼, 바이오시밀러, 및 변이체를 포함한 IL-21의 모든 형태를 포함한다. IL-21은 예를 들어, Spolski and Leonard, Nat. Rev. Drug. Disc. 2014, 13, 379-95에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IL-21은 주로 자연 살해 T 세포 및 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 의해 생산된다. 재조합 인간 IL-21은 분자 질량이 15.4 kDa인 132개 아미노산을 함유하는 단일 비글리코실화된 폴리펩티드 쇄이다. 재조합 인간 IL-21은 미국 뉴저지주 이스트 브런즈윅 소재의 ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.(Cat. No. CYT-408-b) 및 미국 매사추세츠주 월섬 소재의 ThermoFisher Scientific, Inc.(인간 IL-21 재조합 단백질, Cat. No. 14-8219-80)를 포함하여 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-21의 아미노산 서열은 표 2에 제시된다(서열번호:8).
"항종양 유효량", "종양-억제 유효량", 또는 "치료량"이 표시되는 경우, 투여될 본 발명의 조성물의 정확한 양은 환자(대상체)의 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이 정도, 및 상태에서 개인차를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로 본원에 기재된 종양 침윤 림프구(예를 들어 2차 TIL 또는 유전적으로 변형된 세포독성 림프구)를 포함하는 약제학적 조성물은 104 내지 1011개 세포/kg 체중(예를 들어, 105 내지 106개, 105 내지 1010개, 105 내지 1011개, 106 내지 1010개, 106 내지 1011개, 107 내지 1011개, 107 내지 1010개, 108 내지 1011개, 108 내지 1010개, 109 내지 1011개, 또는 109 내지 1010개 세포/kg 체중)의 투여량으로 투여될 수 있으며, 이들 범위 내의 모든 정수 값을 포함하는 것으로 언급될 수 있다. TIL(일부 경우에, 유전적으로 변형된 세포독성 림프구 포함) 조성물은 또한 이러한 투여량으로 여러 번 투여될 수 있다. TIL(일부 경우에, 유전적으로 조작된 TIL 포함)은 면역치료에서 공통으로 알려진 주입 기술을 사용하여 투여될 수 있다(예를 들어, Rosenberg, 등, New Eng. J. Med. 1988, 319, 1676 참조). 특정 환자에 대한 최정의 투여량 및 치료 레지멘은 질환 징후에 대해 환자를 모니터링하고 이에 따라 치료를 조정함으로써 의학 분야의 숙련자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
용어 "혈액학적 악성종양", "혈액 악성종양" 또는 상관 의미가 있는 용어는 혈액, 골수, 림프절, 및 림프계의 조직을 포함하나 이에 제한되지 않는 조혈 및 림프 조직의 포유류 암 및 종양을 지칭한다. 혈액학적 악성종양은 또한 "액체 종양"으로 언급될 수 있다. 혈액학적 악성종양은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구 림프종(CLL), 소림프구 림프종(SLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 급성 단핵구 백혈병(AMoL), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 및 비호지킨 림프종을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 용어 "B 세포 혈액학적 악성종양"은 B 세포에 영향을 미치는 혈액학적 악성종양을 지칭한다.
용어 "액체 종양"은 본질적으로 유체인 비정상적인 세포 덩어리를 지칭한다. 액체 종양 암은 백혈병, 골수종, 및 림프종, 뿐만 아니라 다른 혈액학적 악성종양을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 액체 종양에서 수득된 TIL은 본원에서 골수 침윤 림프구(MIL)로도 언급될 수 있다. 말초 혈액에서 순환하는 액체 종양을 포함하여 액체 종양에서 수득된 TIL은 본원에서 PBL로도 언급될 수 있다. 용어 MIL, TIL, 및 PBL은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며 세포가 유래된 조직 유형에 기반해서만 상이하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "미세환경"은 전체로서 고형 또는 혈액학적 종양 미세환경 또는 미세환경 내 세포의 개별 하위집합을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 종양 미세환경은 Swartz, 등, Cancer Res., 2012, 72, 2473에 기재된 바와 같이 "신생물 형질전환을 촉진하고, 종양 성장 및 침입을 지지하고, 숙주 면역으로부터 종양을 보호하고, 치료 내성을 조성하고, 우성 전이가 번성하기 위한 틈새를 제공하는 세포, 가용성 인자, 신호전달 분자, 세포외 기질, 및 기계적 단서"의 복잡한 혼합물을 지칭한다. 종양은 T 세포에 의해 인식되어야 하는 항원을 발현하지만, 면역계에 의한 종양 제거율은 미세환경에 의한 면역 억제로 인해 드물다.
구현예에서, 본 발명은 TIL 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 본 발명에 따른 TIL의 주입 전에 비골수파괴성 화학치료로 사전 치료된다. 일부 구현예에서, TIL 집단이 제공될 수 있으며 여기서 환자는 본 발명에 따른 TIL의 주입 전에 비골수파괴성 화학치료로 사전 치료된다. 구현예에서, 비골수파괴성 화학치료는 2일 동안사이클로포스파미드 60 mg/kg/d(TIL 주입 전 27일 및 26일차) 및 5일 동안 플루다라빈 25 mg/m2/d(TIL 주입 전 27일 내지 23일차)이다. 구현예에서, 비골수파괴성 화학치료 및 본 발명에 따른 TIL 주입(0일차) 후, 환자는 생리적 내성에 대해 8시간마다 720,000 IU/kg으로 정맥내로 IL-2 정맥내 주입을 받는다.
실험 결과는 종양-특이적 T 림프구의 입양 전달 전에 림프구 고갈이 조절 T 세포 및 면역계의 경쟁 요소를 제거함으로써("사이토카인 싱크") 치료 효능을 향상시키는 데 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일부 구현예는 본 발명의 TIL을 도입하기 전에 환자에서 림프구고갈 단계(때때로 "면역억제 조건화(conditioning)"로도 언급됨)를 활용한다.
용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 질환 치료를 포함하나 이에 제한되지 않는 의도될 적용을 실행하기에 충분한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 화합물 조합의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 의도된 적용(시험관 내 또는 생체 내), 또는 치료되는 대상체 및 질환 상태(예를 들어, 대상체의 체중, 연령 및 성별), 질환 상태의 중증도, 또는 투여 방식에 따라 달라질 수 있다. 용어는 표적 세포에서 특정 반응(예를 들어, 혈소판 부착 및/또는 세포 이동의 감소)을 유도하는 용량에도 적용된다. 특이적 용량은 선택된 특정 화합물, 따라야 할 투약 레지멘, 화합물이 다른 화합물과 조합하여 투여되는지 여부, 투여 시기, 투여되는 조직, 및 화합물이 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 달라질 것이다.
용어 "치료", "치료하는", "치료하다" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 지칭한다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방하는 측면에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 질환에 기인할 수 있는 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치유 측면에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환의 임의의 치료를 포괄하고, (a) 질환에 걸리기 쉽지만 아직 걸린 것으로 진단되지 않은 대상체에서 발생하는 질환을 예방하는 것; (b)　질환을 억제하는 것, 즉, 발달 또는 진행을 저지하는 것; 및 (c) 질환을 완화하는 것, 즉, 질환의 퇴행을 야기하고/하거나 하나 이상의 질환 증상을 완화하는 것을 포함한다. "치료"는 또한 질환 또는 병태의 부재에도 약리학적 효과를 제공하기 위한 제제의 전달을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, "치료"는 예를 들어, 백신의 경우, 질환 상태의 부재 하에 면역 반응을 도출하거나 면역력을 부여할 수 있는 조성물의 전달을 포함한다.
핵산 또는 단백질의 일부와 관련하여 사용되는 경우 용어 "이종"은 핵산 또는 단백질이 자연에서 서로 동일한 관계로 발견되지 않는 2개 이상의 하위서열을 포함한다는 것을 나타낸다. 예를 들면, 새로운 기능적 핵산을 만들기 위해 배열된 관련되지 않은 유전자로부터 2개 이상의 서열, 예를 들어, 하나의 공급원으로부터의 프로모터 및 또 다른 공급원으로부터의 코딩 영역, 또는 상이한 공급원으로부터의 코딩 영역을 갖는 핵산이 전형적으로 재조합적으로 생산된다. 유사하게, 이종 단백질은 단백질이 자연에서 서로 동일한 관계에서 발견되지 않는 2개 이상의 하위서열을 포함한다는 것을 나타낸다(예를 들어, 융합 단백질).
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드의 맥락에서 용어 "서열 동일성," "퍼센트 동일성," 및 "서열 퍼센트 동일성"(또는 이의 동의어, 예를 들어, "99% 동일한")은 임의의 보존적 아미노산 치환을 서열 동일성의 일부로서 고려하지 않고, 최대 상응을 위해 비교되고 정렬(필요한 경우 간격 도입)되는 경우, 동일한 2개 이상의 서열 또는 하위서열 또는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 것을 지칭한다. 퍼센트 동일성은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하거나 육안 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 수득하는 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어가 당업계에 알려져 있다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하는 데 적합한 프로그램은 예를 들어 미국 정부의 국립생명공학정보센터(U.S. Government's National Center for Biotechnology Information) BLAST 웹 사이트에서 이용가능한 BLAST 프로그램 제품군을 포함한다. 두 서열 간의 비교는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하는 데 사용되는 반면, BLASTP는 아미노산 서열을 비교하는 데 사용된다. ALIGN, ALIGN-2(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코 소재의 Genentech) 또는 DNASTAR에서 입수가능한 MegAlign은 서열을 정렬하는 데 사용될 수 있는 추가 공개적으로 이용가능한 소프트웨어 프로그램이다. 당업자는 특정한 정렬 소프트웨어에 의해 최대 정렬을 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 특정 구현예에서, 정렬 소프트웨어의 기본 매개변수가 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변이체"는 참조 항체의 아미노산 서열 내 또는 인접한 특정 위치에서 하나 이상의 치환, 결실 및/또는 부가에 의해 참조 항체의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 변이체는 참조 항체의 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 서열에 하나 이상의 보존적 치환을 포함할 수 있다. 보존적 치환은 예를 들어, 유사하게 하전되거나 비하전된 아미노산의 치환을 수반할 수 있다. 변이체는 참조 항체의 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 유지한다. 용어 변이체는 또한 페길화된 항체 또는 단백질을 포함한다.
본원에서 "종양 침윤 림프구" 또는 "TIL"이란 대상체의 혈류를 떠나 종양으로 이동하는 백혈구로서 원래 수득된 세포 집단을 의미한다. TIL은 CD8+ 세포독성 T 세포(림프구), Th1 및 Th17 CD4+ T 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포 및 M1 대식세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. TIL은 1차 및 2차 TIL을 모두 포함한다. "1차 TIL"은 본원에 요약된 바와 같은 환자 조직 샘플로부터 수득된 것이고(때때로 "새로 수확된" 것으로 언급됨), "2차 TIL"은 벌크 TIL, 확장된 TIL("REP TIL") 뿐만 아니라 본원에 논의된 바와 같은 "reREP TIL"을 포함하나 이에 제한되지 않는, 본원에 논의된 바와 같이 확장되거나 증식된 임의의 TIL 세포 집단이다. reREP TIL은 예를 들어 제2 확장 TIL 또는 제2 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 언급되는 TIL을 포함하며 도 8의 단계 D에 기재된 것들)을 포함할 수 있다.
TIL은 일반적으로 세포 표면 마커를 사용하여 생화학적으로, 또는 종양에 침투하여 치료에 영향을 미치는 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 일반적으로 다음 바이오마커 중 하나 이상을 발현함으로써 분류될 수 있다: CD4, CD8, TCR αβ, CD27, CD28, CD56, CCR7, CD45Ra, CD95, PD-1, 및 CD25. 추가적으로, 및 대안적으로, TIL은 환자에게 재도입 시 고형 종양을 침투하는 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 효능에 의해 추가로 특정화될 수 있으며, 예를 들어, TIL은 예를 들어, 인터페론(IFN) 방출이 약 50 pg/mL 초과, 약 100 pg/mL 초과, 약 150 pg/mL 초과, 또는 약 200 pg/mL 초과인 경우 강력한 것으로 간주될 수 있다.
용어 "데옥시리보뉴클레오티드"는 천연 및 합성, 비변형 및 변형된 데옥시리보뉴클레오티드를 포함한다. 변형은 당 모이어티, 염기 모이어티 및/또는 올리고뉴클레오티드에서 데옥시리보뉴클레오티드 간의 연결에 대한 변경을 포함한다.
용어 "RNA"는 적어도 하나의 리보뉴클레오티드 잔기를 포함하는 분자를 정의한다. 용어 "리보뉴클레오티드"는 b-D-리보푸라노즈 모이어티의 2' 위치에 하이드록실 기가 있는 뉴클레오티드를 정의한다. 용어 RNA는 이중 가닥 RNA, 단일 가닥 RNA, 단리된 RNA 예컨대 부분적으로 정제된 RNA, 본질적으로 순수한 RNA, 합성 RNA, 재조합적으로 생산된 RNA, 뿐만 아니라 하나 이상의 뉴클레오티드의 부가, 결실, 치환 및/또는 변경에 의해 자연 발생 RNA와 상이한 변경된 RNA를 포함한다. 본원에 기재된 RNA 분자의 뉴클레오티드는 또한 비가닥 뉴클레오티드, 예컨대 비자연 발생 뉴클레오티드 또는 화학적으로 합성된 뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이러한 변경된 RNA는 유사체 또는 자연 발생 RNA의 유사체로 언급될 수 있다.
용어 "약제학적으로 허용되는 담체" 또는 "약제학적으로 허용되는 부형제"는 임의의 및 모든 용매, 분산 배지, 코팅제, 항미생물제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제, 및 불활성 성분을 포함하도록 의도된다. 활성 약제학적 성분을 위한 이러한 약제학적으로 허용되는 담체 또는 약제학적으로 허용되는 부형제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 약제학적으로 허용되는 담체 또는 약제학적으로 허용되는 부형제가 활성 약제학적 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 본 발명의 치료 조성물에서 그의 사용이 고려된다. 다른 약물과 같은 추가 활성 약제학적 성분은 또한 기재된 조성물 및 방법에 혼입될 수 있다.
용어 "약" 및 "대략"은 값의 통계적으로 의미있는 범위 내에 있음을 의미한다. 이러한 범위는 주어진 값 또는 범위의 한 자릿수 이내, 바람직하게는 50% 이내, 보다 바람직하게는 20% 이내, 보다 더 바람직하게는 10% 이내, 보다 더 바람직하게는 5% 이내에 있을 수 있다. 용어 "약" 또는 "대략"에 의해 포함되는 허용가능한 변경은 연구 중인 특정 시스템에 따라 달라지며, 당업자에 의해 용이하게 이해될 수 있다. 더욱이, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 치수, 크기, 공식, 매개변수, 모양 및 다른 수량 및 특성이 정확하지 않고 정확할 필요도 없지만, 허용오차, 변환 계수, 반올림, 측정 오류 등 및 당업자에게 알려진 다른 요인을 반영하여 원하는 대로 근사치이고/이거나 더 크거나 더 작을 수 있음을 의미한다. 일반적으로, 치수, 크기, 공식, 매개변수, 모양 또는 다른 수량 /또는 특성은 명시적으로 그렇게 언급되어 있는지 여부에 관계 없이 "약" 또는 "근사치"이다. 매우 상이한 크기, 모양 및 치수의 구현예가 기재된 배열을 이용할 수 있다는 점에 유의한다.
첨부된 청구범위, 원래 및 개정된 형태에서 사용되는 경우 전환 용어 "포함하는," "로 본질적으로 이루어진," 및 "로 이루어진"은 인용되지 않은 추가 청구범위 요소 또는 단계가 있는 경우 청구범위에서 제외되는 것과 관련하여 청구범위를 정의한다. 용어 "포함하는"은 포괄적이거나 개방형인 것으로 의도되며 임의의 추가 인용되지 않은 요소, 방법, 단계 또는 재료를 제외하지 않는다. 용어 "로 이루어진"은 청구범위에 명시된 것 이외의 임의의 요소, 단계 또는 재료를 제외하며, 후자의 경우, 명시된 재료(들)와 연관된 보통의 불순물을 제외한다. 용어 "로 본질적으로 이루어진"은 명시된 요소, 단계 또는 재료(들) 및 청구된 본 발명의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들로 청구 범위를 제한한다. 본 발명을 구현하는 본원에 기재된 모든 조성물, 방법, 및 키트는 대체 구현예에서 전환 용어 "포함하는," "로 본질적으로 이루어진," 및 "로 이루어진" 중 임의의 것에 의해 보다 구체적으로 정의될 수 있다.
용어 "항체" 및 이의 복수형 "항체들"은 전체 면역글로불린 및 임의의 항원-결합 단편("항원-결합 부분") 또는 이의 단일 쇄를 지칭한다. "항체"는 추가로 이황화 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 이의 항원-결합 부분을 지칭한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, CL로 구성된다. 항체의 VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역(HVR)으로 언급되고, 보다 보존된 영역, 즉 프레임워크 영역(FR)으로 산재될 수 있는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 다음 순서로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원 에피토프 또는 에피토프들과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 구성요소(Clq)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
용어 "항원"은 면역 반응을 유도하는 물질을 지칭한다. 일부 구현예에서, 항원은 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자에 의해 제시되는 경우 항체 또는 TCR에 의해 결합될 수 있는 분자이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원"은 또한 T 세포 에피토프를 포함한다. 항원은 추가적으로 면역계에 의해 인식될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 체액성 면역 반응 또는 세포성 면역 반응을 유도하여 B 림프구 및/또는 T 림프구의 활성화로 이어질 수 있다. 일부 경우에, 이것은 항원이 Th 세포 에피토프를 함유하거나 이에 연결되는 것을 필요로 할 수 있다. 항원은 또한 하나 이상의 에피토프(예를 들어, B- 및 T-에피토프)를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 바람직하게는 다른 항원에 의해 유도될 수 있는 다수의 다른 항체 또는 TCR이 아니라, 상응하는 항체 또는 TCR과 전형적으로 매우 특이적이고 선택적인 방식으로 반응할 것이다.
용어 "단클론 항체," "mAb," "단클론 항체 조성물," 또는 이의 복수형은 단일 분자 조성물의 항체 분자 제제를 지칭한다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다. 특정 수용체에 특이적인 단클론 항체는 적합한 항원을 테스트 대상체에게 주입한 다음 원하는 서열 또는 기능적 특성을 갖는 항체를 발현하는 하이브리도마를 단리하는 기술 분야의 지식 및 기술을 상용하여 만들어질 수 있다. 단클론 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 단클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 작용한다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터에 배치될 수 있으며, 그런 다음 이. 콜라이(E. coli) 세포, 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 달리 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포로 형질감염되어 재조합 숙주 세포에서 단클론 항체의 합성을 수득한다. 항체의 재조합 생산은 아래에 보다 상세하게 기재될 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항원-결합 단편"(또는 간단히 "항체 부분" 또는 "단편")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 나타났다. 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 또는 VL 도메인으로 이루어질 수 있는 도메인 항체(dAb) 단편(Ward, 등, Nature, 1989, 341, 544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 단일 쇄 Fv(scFv)로 알려진 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄로서 만들어질 수 있게 하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있으며; 예를 들어, Bird, 등, Science 1988, 242, 423-426; 및 Huston, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 5879-5883을 참조한다). 이러한 scFv 항체는 또한 용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항원-결합 단편" 내에 포함되도록 의도된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 알려진 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 구현예에서, scFv 단백질 도메인은 VH 부분 및 VL 부분을 포함한다. scFv 분자는 VL 도메인이 scFv 분자의 N-말단 부분인 경우 VL-L-VH로 표시되거나, VH 도메인이 scFv 분자의 N-말단 부분인 경우 VH-L-VL로 표시된다. scFv 분자를 제조하고 적합한 펩티드 링커를 설계하는 방법은 미국 특허 번호 4,704,692, 미국 특허 번호 4,946,778, R. Raag and M. Whitlow, "Single Chain Fvs." FASEB Vol 9:73-80(1995) 및 R. E. Bird and B. W. Walker, Single Chain Antibody Variable Regions, TIBTECH, Vol 9: 132-137(1991)에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 모두 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하도록 의도된다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관 내에서 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이생성에 의해 또는 생체 내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유류 종의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다.
용어 "인간 단클론 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 모두 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 구현예에서, 인간 단클론 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 이식유전자 및 경쇄 이식유전자를 포함하는 게놈을 갖는 형질전환 비인간 동물, 예를 들어, 형질전환 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대 (a) 인간 면역글로불린 유전자에 대한 형질전환 또는 염색체전이(transchromosomal)인 동물(예컨대 마우스) 또는 그로부터 제조된 하이브리도마(아래에 추가로 기재됨)로부터 단리된 항체, (b) 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어, 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 단리된 항체, (c) 재조합, 조합적 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 구현예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이생성(또는, 인간 Ig 서열에 대한 동물 형질전환이 사용되는 경우, 생체 내 체세포 돌연변이생성)에 적용될 수 있으며 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되어 있지만, 생체 내에서 인간 항체 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용된 바와 같이, "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화된 항체 부류(예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다.
어구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "인간 항체 유도체"는 항체의 접합체 및 또 다른 활성 약제학적 성분 또는 항체를 포함한 인간 항체의 임의의 변형된 형태를 지칭한다. 용어 "접합체," "항체-약물 접합체", "ADC," 또는 "면역접합체"는 또 다른 치료 모이어티에 접합된 항체, 또는 이의 단편을 지칭하며, 이는 당업계에서 이용가능한 방법을 사용하여 본원에 기재된 항체에 접합될 수 있다.
용어 "인간화 항체," "인간화 항체," 및 "인간화"는 마우스와 같은 또 다른 포유류 종의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 지칭하도록 의도된다. 추가 프레임워크 영역 변형은 인간 프레임워크 서열 내에서 이루어질 수 있다. 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 15개 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 개선하기 위해 이루어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 임의적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가로 상세한 내용에 대해, Jones, 등, Nature 1986, 321, 522-525; Riechmann, 등, Nature 1988, 332, 323-329; 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 1992, 2, 593-596을 참조한다. 본원에 기재된 항체는 또한 효과기 기능 및/또는 FcR 결합의 개선(예를 들어, 감소)을 부여하는 것으로 알려진 임의의 Fc 변이체를 이용하도록 변형될 수 있다. Fc 변이체는 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 1988/07089 A1, WO 1996/14339 A1, WO 1998/05787 A1, WO 1998/23289 A1, WO 1999/51642 A1, WO 99/58572 A1, WO 2000/09560 A2, WO 2000/32767 A1, WO 2000/42072 A2, WO 2002/44215 A2, WO 2002/060919 A2, WO 2003/074569 A2, WO 2004/016750 A2, WO 2004/029207 A2, WO 2004/035752 A2, WO 2004/063351 A2, WO 2004/074455 A2, WO 2004/099249 A2, WO 2005/040217 A2, WO 2005/070963 A1, WO 2005/077981 A2, WO 2005/092925 A2, WO 2005/123780 A2, WO 2006/019447 A1, WO 2006/047350 A2, 및 WO 2006/085967 A2; 및 미국 특허 번호 5,648,260; 5,739,277; 5,834,250; 5,869,046; 6,096,871; 6,121,022; 6,194,551; 6,242,195; 6,277,375; 6,528,624; 6,538,124; 6,737,056; 6,821,505; 6,998,253; 및 7,083,784에 개시된 아미노산 치환 중 임의의 하나를 포함할 수 있으며; 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래된 항체와 같이 가변 영역 서열이 하나의 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래된 항체를 지칭하도록 의도된다.
"디아바디(diabody)"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편이다. 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)(VH-VL 또는 VL-VH)을 포함한다. 동일한 쇄에 있는 2개 도메인 사이에 쌍을 이루기에 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강제한다. 디아바디는 예를 들어, 유럽 특허 번호 EP 404,097, 국제 특허 공개 번호 WO 93/11161; 및 Bolliger, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6444-6448에 보다 상세하게 기재되어 있다.
용어 "글리코실화"는 항체의 변형된 유도체를 지칭한다. 무글리코실화 항체는 글리코실화가 결여되어 있다. 글리코실화는 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키도록 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어, 항체 서열 내에서 하나 이상의 글리코실 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하여 해당 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 글리코실화는 미국 특허 번호 5,714,350 및 6,350,861에 기재된 바와 같이 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 푸코실 잔기 양이 감소된 저푸코실화된 항체 또는 이분화 GlcNac 구조가 증가된 항체와 같이 변경된 유형의 글리코실화를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변형된 글리코실화 패턴은 항체 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어, 글리코실화 기구가 변경된 숙주 세포에서 항체를 발현함으로써 달성될 수 있다. 글리코실화 기구가 변경된 세포는 당업계에 기재되었고 본 발명의 재조합 항체를 발현하여 글리코실화가 변경된 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포주 Ms704, Ms705, 및 Ms709는 푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8(알파(1,6) 푸코실트랜스퍼라제)이 결여되어 있으며, Ms704, Ms705, 및 Ms709 세포주에서 발현된 항체는 탄수화물에 푸코스가 결여되어 있다. Ms704, Ms705, 및 Ms709 FUT8-/- 세포주는 2개의 대체 벡터를 사용하여 CHO/DG44 세포에서 FUT8 유전자의 표적화된 파괴에 의해 생성되었다(예를 들어 미국 특허 공개 번호 2004/0110704 또는 Yamane-Ohnuki, 등, Biotechnol. Bioeng., 2004, 87, 614-622 참조). 또 다른 예로서, 유럽 특허 번호 EP 1,176,195는 푸코실 트랜스퍼라제를 암호화하는 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주를 기재하고 있으며, 이러한 세포주에서 발현된 항체는 알파 1,6 결합 관련 효소를 감소시키거나 제거함으로써 저푸코실화를 나타내고, 또한 항체의 Fc 영역에 결합하는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 첨가하기 위한 낮은 효소 활성을 갖거나 효소 활성을 갖지 않는 세포주, 예를 들어 래트 골수종 세포주 YB2/0(ATCC CRL 1662)을 기재한다. 국제 특허 공개 WO 03/035835는 Asn(297)-연결된 탄수화물에 푸코스를 부착하는 능력이 감소되어, 또한 해당 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화를 초래하는 변이체 CHO 세포주, Lec 13 세포가 기재되어 있다(또한 Shields, 등, J. Biol. Chem. 2002, 277, 26733-26740 참조. 국제 특허 공개 WO 99/54342는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제(예를 들어, 베타(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기재하고 있으며 조작된 세포주에서 발현된 항체는 항체의 ADCC 활성을 증가시키는 증가된 이분화 GlcNac 구조를 나타낸다(또한 Umana, 등, Nat. Biotech. 1999, 17, 176-180 참조). 대안적으로, 항체의 푸코스 잔기는 푸코시다제 효소를 사용하여 절단될 수 있다. 예를 들어, 푸코시다제 알파-L-푸코시다제는 Tarentino, 등, Biochem. 1975, 14, 5516-5523에 기재된 바와 같이 항체로부터 푸코실 잔기를 제거한다.
"페길화"는 전형적으로 하나 이상의 PEG 기가 항체 또는 항체 단편에 부착되게 되는 조건 하에 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데하이드 유도체와 같은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 반응하는 변형된 항체, 또는 이의 단편을 지칭한다. 페길화는 예를 들어, 항체의 생물학적(예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 모노 (C1-C10)알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드와 같은 다른 단백질을 유도체화하는데 사용된 임의의 PEG 형태를 포함하도록 의도된다. 페길화될 항체는 무글리코실화된 항체일 수 있다. 페길화 방법은 당업계에 알려져 있고 예를 들어 유럽 특허 번호 EP 0154316 및 EP 0401384 및 미국 특허 번호 5,824,778에 기재된 바와 같이 본 발명의 항체에 적용될 수 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
용어 "바이오시밀러"는 임상적으로 불활성 구성요소의 사소한 차이에도 불구하고 미국 허가 참조 생물학적 제품과 매우 유사한 생물학적 제품인 단클론 항체 또는 단백질을 포함한 생물학적 제품을 의미하며, 이 경우 제품의 안전성, 순도, 및 효능 측면에서 생물학적 제품과 참조 제품 사이에 임상적으로 의미있는 차이가 없다. 또한, 유사한 생물학적 또는 "바이오시밀러" 의약품은 이미 유럽의약품청(European Medicines Agency)에 의해 사용 승인된 또 다른 생물학적 의약품과 유사한 생물학적 의약품이다. 용어 "바이오시밀러"는 또한 다른 국가 및 지역 규제 기관에 의해 동의어로 사용된다. 생물학적 제품 또는 생물학적 의약품은 박테리아 또는 효모와 같은 생물학적 공급원에 의해 제조되거나 이로부터 유래된 의약품이다. 이들은 인간 인슐린 또는 에리트로포이에틴과 같은 상대적으로 작은 분자, 또는 단클론 항체와 같은 복잡한 분자로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 참조 IL-2 단백질이 알데스류킨(PROLEUKIN)인 경우, 알데스류킨과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 단백질은 알데스류킨에 "대한 바이오시밀러"이거나 알데스류킨의 "이의 바이오시밀러"이다. 유럽에서, 유사한 생물학적 또는 "바이오시밀러" 의약품은 이미 유럽의약품청(EMA)에 의해 사용 승인된 또 다른 생물학적 의약품과 유사한 생물학적 의약품이다. 유럽에서 유사한 생물학적 적용에 대한 관련 법적 근거는 개정된 규정(EC) NO 726/2004의 제6조 및 훈령 2001/83/EC의 제10(4)조이며, 따라서 유럽에서, 바이오시밀러는 규정(EC) NO 726/2004의 제6조 및 훈령 2001/83/EC의 제10(4)조 하에 허가, 허가 승인 또는 허가 신청 대상일 수 있다. 이미 승인된 원래의 생물학적 의약품은 유럽에서 "참조 의약품"으로 언급될 수 있다. 바이오시밀러로 간주되는 제품에 대한 요건 중 일부는 동등생물의약품 CHMP 지침(CHMP Guideline on Similar Biological Medicinal Products)에 요약되어 있다. 게다가, 단클론 항체 바이오시밀러와 관련한 지침을 포함하여 제품 특이적 지침은 EMA에 의해 제품별로 제공되고 웹사이트에 게시되어 있다. 본원에 기재된 바와 같은 바이오시밀러는 품질 특성, 생물학적 활성, 작용 메커니즘, 안전성 프로파일 및/또는 효능에서 참조 의약품과 유사할 수 있다. 게다가, 바이오시밀러는 참조 의약품과 동일한 병태를 치료하도록 사용될 수 있거나 사용하도록 의도될 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 바이오시밀러는 참조 의약품과 유사하거나 매우 유사한 품질 특성을 갖는 것으로 간주될 수 있다. 대안적으로, 또는 게다가, 본원에 기재된 바와 같은 바이오시밀러는 참조 의약품과 유사하거나 매우 유사한 생물학적 활성을 갖는 것으로 간주될 수 있다. 대안적으로, 또는 게다가, 본원에 기재된 바와 같은 바이오시밀러는 참조 의약품과 유사하거나 매우 유사한 안전성 프로파일을 갖는 것으로 간주될 수 있다. 대안적으로, 또는 게다가, 본원에 기재된 바와 같은 바이오시밀러는 참조 의약품과 유사하거나 매우 유사한 효능을 갖는 것으로 간주될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 유럽에서 바이오시밀러는 EMA에 의해 승인된 참조 의약품과 비교된다. 그러나, 일부 경우에, 바이오시밀러는 특정 연구에서 유럽경제지역(European Economic Area) 외부에서 승인된 생물학적 의약품(EEA 승인되지 않은 "대조약(comparator)")과 비교될 수 있다. 이러한 연구는 예를 들어 특정 임상 및 생체 내 비임상 연구를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "바이오시밀러"는 또한 EEA 승인되지 않은 대조약과 비교되었거나 비교될 수 있는 생물학적 의약품과 관련된다. 특정 바이오시밀러는 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 부분) 및 융합 단백질과 같은 단백질이다. 단백질 바이오시밀러는 폴리펩티드의 기능에 유의하게 영향을 미치지 않는 아미노산 구조의 사소한 변형(예를 들어 아미노산의 결실, 부가, 및/또는 치환 포함)을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 바이오시밀러는 참조 의약품의 아미노산 서열과 97% 이상, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바이오시밀러는 의약품의 안전성 및/또는 효능에 변화를 초래하지 않는다면, 하나 이상의 번역후 변형, 예를 들어, 참조 의약품의 번역후 변형과 상이한 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및/또는 절두를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 바이오시밀러는 참조 의약품과 동일하거나 상이한 글리코실화 패턴을 가질 수 있다. 특히, 배타적이지 않지만, 바이오시밀러는 차이가 참조 의약품과 연관된 안전성 문제를 다루거나 다루는 것으로 의도되는 경우 상이한 글리코실화 패턴을 가질 수 있다. 추가적으로, 바이오시밀러는 의약품의 안전성 및 효능이 손상되지 않으면, 예를 들어 강도, 약제학적 형태, 제형, 부형제 및/또는 제시에서 참조 의약품으로부터 벗어날 수 있다. 바이오시밀러는 예를 들어 참조 의약품과 비교하여 약동학(PK) 및/또는 약력학(PD) 프로파일의 차이를 포함할 수 있지만 여전히 허가받을 만큼 참조 의약품과 충분히 유사하거나 허가에 적합한 것으로 간주된다. 특정 상황에서, 바이오시밀러는 참조 의약품과 비교하여 상이한 결합 특성을 나타내며, 여기서 상이한 결합 특성은 EMA와 같은 규제 기관에 의해 유사한 생물학적 제품으로 허가 받는데 장벽이 되지 않는 것으로 간주된다. 용어 "바이오시밀러"는 다른 국가 및 지역 규제 기관에서도 동의어로 사용된다.
III. Gen 2 TIL 제조 프로세스
이러한 특징 중 일부를 함유하는 Gen 2(프로세스 2A로도 알려짐)로 알려진 TIL 프로세스의 예시적인 계열이 도 1 및 2에 도시되어 있다. Gen 2의 구현예는 도 2에 제시되어 있다.
본원에 논의된 바와 같이, 본 발명은 대사 활성을 증가시켜 환자에게 이식하기 전에 상대 건강을 증가시키기 위해 동결보존된 TIL의 재자극과 관련된 단계, 및 상기 대사 건강을 테스트하는 방법을 포함할 수 있다. 본원에 일반적으로 요약된 바와 같이, TIL은 일반적으로 환자 샘플에서 취하고 환자에게 이식하기 전에 수를 확장하도록 조작된다. 일부 구현예에서, TIL은 아래에 논의된 바와 같이 임의적으로 유전적으로 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL은 동결보존될 수 있다. 일단 해동되면, 이들은 또한 환자에게 주입하기 전에 대사를 증가시키도록 재자극될 수 있다.
일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 뿐만 아니라 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 제1 확장(pre-REP로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1에 단계 A로 제시된 프로세스 포함)은 3 내지 14일로 단축되고 제2 확장(REP로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1에 단계 B로 제시된 프로세스 포함)은 7 내지 14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 제1 확장(예를 들어, 도 1에 단계 B로 기재된 확장)은 11일로 단축되고 제2 확장(예를 들어, 도 1에 단계 D로 기재된 확장)은 11일로 단축된다. 일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 및 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 제1 확장 및 제2 확장의 조합(예를 들어, 도 1에 단계 B 및 단계 D로 기재된 확장)은 22일로 단축된다.
아래의 "단계" 지정 A, B, C 등은 도 1을 참조하고 본원에 기재된 특정 구현예를 참조한다. 아래 단계 및 도 1의 순서는 예시적이며 단계의 임의의 조합 또는 순서, 뿐만 아니라 추가 단계, 단계의 반복, 및/또는 단계의 생략이 본 출원 및 본원에 개시된 방법에 의해 고려된다.
A. 단계 A: 환자 종양 샘플 수득
일반적으로, TIL은 초기에 환자 종양 샘플에서 수득한 다음 본원에 기재된 바와 같이 추가 조작을 위해 더 큰 집단으로 확장되고, 임의적으로 동결보존되고, 본원에 요약된 바와 같이 재자극되고 임의적으로 TIL 건강의 지표로서 표현형 및 대사 매개변수에 대해 평가된다.
환자 종양 샘플은 일반적으로 외과적 절제, 바늘 생검, 중심부 생검, 소형 생검, 또는 종양 및 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 다른 수단을 통해 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 다중병변 샘플링이 사용된다. 일부 구현예에서, 외과적 절제, 바늘 생검, 중심부 생검, 소형 생검, 또는 종양 및 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 다른 수단 다중병변 샘플링(즉, 환자의 하나 이상의 종양 부위 및/또는 위치, 뿐만 아니라 동일한 위치 또는 근접한 하나 이상의 종양으로부터 샘플을 수득하는 것)을 포함한다. 일반적으로, 종양 샘플은 원발성 종양, 침습성 종양 또는 전이성 종양을 포함한 임의의 고형 종양으로부터 유래될 수 있다. 종양 샘플은 또한 혈액학적 악성종양으로부터 수득된 종양과 같은 액체 종양일 수 있다. 고형 종양은 폐 조직일 수 있다. 일부 구현예에서, 유용한 TIL은 비소세포 폐 암종(NSCLC)으로부터 수득된다.
일단 수득되면, 종양 샘플은 일반적으로 날카로운 절개를 사용하여 1 내지 약 8 mm3의 작은 조각으로 단편화되며, 약 2-3 mm3가 특히 유용하다. 일부 구현예에서, TIL은 효소적 종양 소화물을 사용하여 이들 단편으로부터 배양된다. 이러한 종양 소화물은 효소적 배지(예를 들어, Roswell Park Memorial Institute(RPMI) 1640 완충액, 2 mM 글루타메이트, 10 mcg/mL 젠타마이신, 30 단위/mL의 DNase 및 1.0 mg/mL의 콜라게나제)에서 인큐베이션한 후 기계적 해리(예를 들어, 조직 해리장치 사용)에 의해 생성될 수 있다. 종양 소화물은 종양을 효소적 배지에 배치하고 종양을 대략 1분 동안 기계적 해리한 후, 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 후, 작은 조직 조각만 존재할 때까지 전술한 조건 하에 기계적 해리 및 인큐베이션 주기를 반복함으로써 생성될 수 있다. 이 프로세스가 끝나면, 세포 현탁액이 다량의 적혈구 또는 죽은 세포를 함유하는 경우, FICOLL 분지형 소수성 다당류를 사용한 밀도 구배 분리를 수행하여 이들 세포를 제거할 수 있다. 미국 특허 출원 공개 번호 2012/0244133 A1에 기재된 것들과 같은 당업계에 알려진 대안적인 방법이 사용될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 임의의 전술한 방법은 TIL을 확장하는 방법 또는 암을 치료하는 방법에 대해 본원에 기재된 임의의 구현예에서 사용될 수 있다.
종양 해리 효소 혼합물은 콜라게나제(콜라게나제의 임의의 블렌드 또는 유형 포함), Accutase™, Accumax™, 히알루로니다제, 중성 프로테아제(디스파제), 키모트립신, 키모파파인, 트립신, 카제이나제, 엘라스타제, 파파인, 프로테아제 유형 XIV(프로나제), 데옥시리보뉴클레아제 I(DNase), 트립신 억제제, 임의의 다른 해리 또는 단백질분해 효소, 및 이의 임의의 조합과 같으나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 해리(소화) 효소를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 해리 효소는 동결건조된 효소로부터 재구성된다. 일부 구현예에서, 동결건조된 효소는 HBSS와 같은 멸균 완충액의 양으로 재구성된다.
일부 경우에, 콜라게나제(예컨대 무동물 유형 1 콜라게나제)는 10 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액으로 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 2892 PZ U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 구현예에서, 콜라게나제는 5 mL 내지 15 mL 완충액으로 재구성된다. 일부 구현예에서, 재구성 후 콜라게나제 스톡은 약 100 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 예를 들어,　약 100 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL-약 350 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL-약 300 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL, 약 200 PZ U/mL, 약 210 PZ U/mL, 약 220 PZ U/mL, 약 230 PZ U/mL, 약 240 PZ U/mL, 약 250 PZ U/mL, 약 260 PZ U/mL, 약 270 PZ U/mL, 약 280 PZ U/mL, 약 289.2 PZ U/mL, 약 300 PZ U/mL, 약 350 PZ U/mL, 또는 약 400 PZ U/mL 범위이다.
일부 구현예에서, 중성 프로테아제는 1 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액으로 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 175 DMC U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 구현예에서, 재구성 후 중성 프로테아제 스톡은 약 100 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 예를 들어, 약 100 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL-약 350 DMC/mL, 약 100 DMC/mL-약 300 DMC/mL, 약 150 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL, 약 110 DMC/mL, 약 120 DMC/mL, 약 130 DMC/mL, 약 140 DMC/mL, 약 150 DMC/mL, 약 160 DMC/mL, 약 170 DMC/mL, 약 175 DMC/mL, 약 180 DMC/mL, 약 190 DMC/mL, 약 200 DMC/mL, 약 250 DMC/mL, 약 300 DMC/mL, 약 350 DMC/mL, 또는 약 400 DMC/mL 범위이다.
일부 구현예에서, DNAse I은 1 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액으로 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 4 KU/바이알의 농도였다. 일부 구현예에서, 재구성 후 DNase I 스톡은 약 1 KU/mL-10 KU/mL, 예를 들어, 약 1 KU/mL, 약 2 KU/mL, 약 3 KU/mL, 약 4 KU/mL, 약 5 KU/mL, 약 6 KU/mL, 약 7 KU/mL, 약 8 KU/mL, 약 9 KU/mL, 또는 약 10 KU/mL 범위이다.
일부 구현예에서, 효소 스톡은 가변적이며 농도를 결정해야 할 필요가 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 동결건조된 스톡의 농도가 검증될 수 있다. 일부 구현예에서, 소화 카테일에 첨가되는 효소의 최종 양은 결정된 스톡 농도에 기반하여 조정된다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 약 4.7 mL의 멸균 HBSS 중에 약 10.2-ul의 중성 프로테아제(0.36 DMC U/mL), 21.3 μL의 콜라게나제(1.2 PZ/mL) 및 250-ul의 DNAse I(200 U/mL)를 포함한다.
상기 나타낸 바와 같이, 일부 구현예에서, TIL은 고형 종양으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 단편화되지 않는다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 단편화되지 않고 전체 종양으로서 효소적 소화를 거친다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 회전시키면서 1-2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 일정하게 회전시키면서 밤새 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 일정하게 회전시키면서 37℃, 5% CO2에서 밤새 소화된다. 일부 구현예에서, 전체 종양은 효소와 조합되어 종양 소화물 반응 혼합물을 형성한다.
일부 구현예에서, 종양은 멸균 완충액 중에서 동결건조된 효소로 재구성된다. 일부 구현예에서, 완충액은 멸균 HBSS이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 콜라게나제를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜라게나제는 콜라게나제 IV이다. 일부 구현예에서, 콜라게나제에 대한 작업 스톡은 100 mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 DNAse를 포함한다. 일부 구현예에서, DNAse에 대한 작업 스톡은 10,000IU/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 히알루로니다제를 포함한다. 일부 구현예에서, 히알루로니다제에 대한 작업 스톡은 10-mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 1000 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 500 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일반적으로, 수확된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수확된" 세포 집단이라고 한다.
일부 구현예에서, 단편화는 예를 들어, 절개 뿐만 아니라 소화를 포함한 물리적 단편화를 포함한다. 일부 구현예에서, 단편화는 물리적 단편화이다. 일부 구현예에서, 단편화는 절개이다. 일부 구현예에서, 단편화는 소화에 의해서다. 일부 구현예에서, TIL은 환자로부터 수득된 효소적 종양 소화물 및 종양 단편으로부터 초기에 배양될 수 있다. 구현예에서, TIL은 환자로부터 수득된 효소적 종양 소화물 및 종양 단편으로부터 초기에 배양될 수 있다.
일부 구현예에서, 종양이 고형 종양인 경우, 종양은 종양 샘플이 예를 들어, 단계 A(도 1에 제공)에서 수득된 후 물리적 단편화를 겪는다. 일부 구현예에서, 단편화는 동결보존 전에 발생한다. 일부 구현예에서, 단편화는 동결보존 후에 발생한다. 일부 구현예에서, 단편화는 종양을 수득한 후 임의의 동결보존 없이 발생한다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 10, 20, 30, 40개 이상의 단편 또는 조작이 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 30 또는 40개의 단편 또는 조각이 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 40개의 단편 또는 조각이 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 4 내지 약 50개의 단편을 포함하며, 여기서 각각의 단편은 약 27 mm3의 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1300 mm3 내지 약 1500 mm3의 총 부피를 갖는 약 30 내지 약 60개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1350 mm3의 총 부피를 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1 그램 내지 약 1.5 그램의 총 질량을 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 4개의 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, TIL은 종양 단편으로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 날카로운 절개에 의해 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 8 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 2 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 3 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 4 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 5 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 6 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 7 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 8 mm3 이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 9 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 10 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양은 1-4 mm x 1-4 mm x 1-4 mm이다. 일부 구현예에서, 종양은 1 mm x 1 mm x 1 mm이다. 일부 구현예에서, 종양은 2 mm x 2 mm x 2 mm이다. 일부 구현예에서, 종양은 3 mm x 3 mm x 3 mm이다. 일부 구현예에서, 종양은 4 mm x 4 mm x 4 mm이다.
일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 출혈성, 괴사성, 및/또는 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 출혈성 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 괴사성 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다.
일부 구현예에서, 종양 단편화는 종양 내부 구조를 유지하기 위해 수행된다. 일부 구현예에서, 종양 단편화는 메스로 톱질 동작을 수행하지 않고 수행된다. 일부 구현예에서, TIL은 종양 소화물로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 소화물은 RPMI 1640, 2 mM GlutaMAX, 10 mg/mL 젠타마이신, 30 U/mL DNase, 및 1.0 mg/mL 콜라게나제와 같으나 이에 제한되지 않는 효소 배지에서 인큐베이션 후, 기계적 해리(GentleMACS, 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotec)하여 생성되었다. 종양을 효소 배지에 배치한 후, 종양을 대략 1분 동안 기계적으로 해리할 수 있다. 그런 다음 용액을 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 다음 대략 1분 동안 다시 기계적으로 파괴할 수 있다. 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 다시 인큐베이션한 후, 종양을 대략 1분 동안 세번째로 기계적으로 파괴할 수 있다. 일부 구현예에서, 세번째 기계적 파괴 후 큰 조직 조각이 존재하는 경우, 37℃, 5% CO2에서 추가 30분 인큐베이션 여부에 관계 없이, 1 또는 2회 추가 기계적 해리를 샘플에 적용하였다. 일부 구현예에서, 최종 인큐베이션의 마지막에 세포 현탁액에 다수의 적혈구 또는 죽은 세포가 함유된 경우, Ficoll을 사용한 밀도 구배 분리를 수행하여 이들 세포를 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 확장 단계 전에 수확된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수확된" 세포 집단이라고 한다.
일부 구현예에서, 세포는 샘플 수확 후 임의적으로 동결될 수 있고 아래에 추가로 상세하게 기재될 뿐만 아니라 도 1에 예시된 단계 B에 기재된 확장에 들어가기 전에 동결 저장될 수 있다.
1. 흉막 삼출액 T-세포 및 TIL
일부 구현예에서, 샘플은 흉막액 샘플이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 프로세스에 따른 확장을 위한 T-세포 TIL의 공급원은 흉막액 샘플이다. 일부 구현예에서, 샘플은 흉막 삼출액 유래 샘플이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 프로세스에 따른 확장을 위한 T-세포 또는 TIL의 공급원은 흉막 삼출액 유래 샘플이다. 예를 들어, 미국 특허 공개 US 2014/0295426에 기재된 방법을 참조하여, 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, TIL이 의심되고/되거나 함유하는 임의의 흉막액 또는 흉막 삼출액이 이용될 수 있다. 이러한 샘플은 NSCLC 또는 SCLC과 같은 원발성 또는 전이성 폐암으로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 또 다른 기관, 예를 들어, 유방, 난소, 결장 또는 전립선으로부터 유래된 속발성 전이성암 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 삼출액이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 여출액이다. 다른 생물학적 샘플은 예를 들어, 복부 또는 췌장 낭종액의 복수액을 포함하여 TIL을 함유하는 다른 장액을 포함할 수 있다. 복수액 및 흉막액은 매우 유사한 화학 시스템을 수반하며; 복부 및 폐 모두 중피선을 갖고 악성종양에서 동일한 물질로 흉막강 및 복강에 유체를 형성하고 이러한 유체는 일부 구현예에서 TIL을 함유한다. 본 개시내용이 흉막액을 예시하는 일부 구현예에서, TIL을 함유하는 복수 또는 다른 낭종액을 사용한 동일한 방법을 수행하여 유사한 결과를 수득할 수 있다.
일부 구현예에서, 흉막액은 환자로부터 직접 제거된 미처리 형태이다. 일부 구현예에서, 미처리 흉막액은 접촉 단계 전에 EDTA 또는 헤파린 튜브와 같은 표준 혈액 수집 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 미처리 흉막액은 접촉 단계 전에 표준 CellSave® 튜브(Veridex)에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 생존가능한 TIL 수의 감소를 피하기 위해 환자로부터 수집한 직후 CellSave 튜브에 배치된다. 생존가능한 TIL 수는 처리되지 않은 흉막액에 방치되는 경우, 4℃에서도 24시간 내에 상당한 정도로 감소할 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 환자에서 꺼낸 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 넣는다. 일부 구현예에서, 샘플은 4℃에서 환자에서 꺼낸 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 넣는다.
일부 구현예에서, 선택된 대상체로부터의 흉막액 샘플은 희석될 수 있다. 하나의 구현예에서, 희석은 1:10 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:9 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:8 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:5 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:2 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:1 흉막액 대 희석제이다. 일부 구현예에서, 희석제는 식염수, 포스페이트 완충 식염수, 또 다른 완충액 또는 생리학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 샘플은 처리되지 않은 흉막액에 방치되는 경우, 4℃에서도 24-48시간 이내에 상당한 정도로 발생할 수 있는 생존가능한 TIL의 감소를 피하기 위해 환자로부터 수집 및 희석한 직후 CellSave 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 환자에서 꺼내어 희석한 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 넣는다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 4℃에서 환자에서 꺼내어 희석한 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 넣는다.
또한 또 다른 구현예에서, 흉막액 샘플은 추가 처리 단계 전에 통상적인 수단에 의해 농축된다. 일부 구현예에서, 흉막액의 이러한 전처리는 흉막액이 방법을 수행하는 실험실로의 수송 또는 나중 분석을 위해(예를 들어, 수집 후 24-48시간 이후) 동결보존되어야 하는 상황에서 바람직하다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 흉막액 샘플을 대상체로부터 채취한 후 원심분리하고 원심분리액 또는 펠릿을 완충액에 재현탁함으로써 제조된다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 수송 또는 나중 분석 및/또는 처리를 위해 동결보존되기 전에 다중 원심분리 및 재헌탁을 거친다.
일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 여과 방법을 사용하여 추가 처리 단계 전에 농축된다. 일부 구현예에서, 접촉 단계에서 사용되는 흉막액 샘플은 흉막액이 막을 통해 통과하도록 허용하지만 종양 세포는 유지하는 알려진 본질적으로 균일한 기공 크기를 함유하는 필터를 통해 유체를 여과함으로서 제조된다. 일부 구현예에서, 막의 기공 직경은 적어도 4 μM일 수 있다. 또 다른 구현예에서 기공 직경은 5 μM 이상, 다른 구현예에서, 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM 중 임의의 것일 수 있다. 여과 후, 막에 남은 TIL을 포함한 세포를 막에서 적합한 생리학적으로 허용되는 완충액으로 헹굴 수 있다. 그런 다음 이 방식으로 농축된 TIL을 포함하는 세포를 방법의 접촉 단계에서 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 흉막액 샘플(예를 들어, 처리되지 않은 흉막액 포함), 희석된 흉막액, 또는 재현탁된 세포 펠릿은 샘플에 존재하는 비-유핵 적혈구를 차등적으로 용해하는 용해 시약과 접촉된다. 일부 구현예에서, 이 단계는 흉막액이 상당한 수의 RBC를 함유하는 상황에서 추가 처리 단계 전에 수행된다. 적합한 용해 시약은 단일 용해 시약 또는 용해 시약 및 급랭 시약, 또는 용해제, 급랭 시약 및 고정 시약을 포함한다. 적합한 용해 시스템은 상업적으로 시판되며 BD Pharm Lyse™ 시스템(Becton Dickenson)을 포함한다. 다른 용해 시스템은 Versalyse™ 시스템, FACSlyse™ 시스템(Becton Dickenson), Immunoprep™ 시스템 또는 Erythrolyse II 시스템(Beckman Coulter, Inc.), 또는 염화암모늄 시스템을 포함한다. 일부 구현예에서, 용해 시약은 적혈구의 효율적인 용해, 및 흉막액에서 TIL 및 TIL 표현형 특성의 보존이라는 주요 요건에 따라 달라질 수 있다. 용해용 단일 시약을 이용하는 것 외에도, 본원에 기재된 방법에 유용한 용해 시스템은 제2 시약, 예를 들어, 방법의 나머지 단계 동안 용해 시약의 효과를 억제하거나 지연시키는 것, 예를 들어, Stabilyse™ 시약(Beckman Coulter, Inc.)을 포함할 수 있다. 통상적인 고정 시약은 또한 용해 시약의 선택 또는 바람직한 방법 구현에 따라 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 본원에 기재된 바와 같이 미처리, 희석 또는 다중 원심분리 또는 처리된 흉막액 샘플은 본원에 게공된 바와 같이 추가로 처리되고/되거나 확장되기 전에 약 -140℃의 온도에서 동결보존된다.
B. 단계 B: 제1 확장
일부 구현예에서, 본 방법은 대상체/환자에게 투여 시 복제 주기를 증가시킬 수 있고 이와 같이 오래된 TIL(즉, 대상체/환자에게 투여 전에 더 많은 복제 라운드를 추가로 겪은 TIL)에 비해 추가 치료 이점을 제공할 수 있는 젊은 TIL을 수득하기 위한 방법을 제공한다. 젊은 TIL의 특징은 문헌, 예를 들어 Donia, 등, Scand. J. Immunol. 2012, 75, 157-167; Dudley, 등, Clin. Cancer Res. 2010, 16, 6122-6131; Huang, 등, J. Immunother. 2005, 28, 258-267; Besser, 등, Clin. Cancer Res. 2013, 19, OF1-OF9; Besser, 등, J. Immunother. 2009, 32, 415-423; Robbins, 등, J. Immunol. 2004, 173, 7125-7130; Shen, 등, J. Immunother., 2007, 30, 123-129; Zhou, 등, J. Immunother. 2005, 28, 53-62; and Tran, 등, J. Immunother., 2008, 31, 742-751에 기재되었으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
T 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한적이지만, 다수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생산된다. 이러한 유전자 분절: V(가변성), D(다양성), J(결합), 및 C(상수)은 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하며 본원에 제공된 것들 이외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 도 5 및/또는 도 6에 예시된 바와 같이 프로세스 1C로 언급된 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 중쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 경쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 알파, 베타, 감마, 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
예를 들어 도 1의 단계 A에 기재된 바와 같이 종양 단편의 절개 또는 소화 후, 생성된 세포는 종양 및 다른 세포에 비해 TIL의 성장을 선호하는 조건 하에 IL-2를 함유하는 혈청에서 배양된다. 일부 구현예에서, 종양 소화물은 6000 IU/mL의 IL-2와 함께 불활성화 인간 AB 혈청을 포함하는 배지 중 2 mL 웰에서 인큐베이션된다. 이 1차 세포 집단은 일반적으로 3 내지 14일의 기간 동안 배양되어, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포인 벌크 TIL 집단을 생성한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단은 7 내지 14일의 기간 동안 배양되어, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포인 벌크 TIL 집단을 생성한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단은 10 내지 14일의 기간 동안 배양되어, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포인 벌크 TIL 집단을 생성한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단은 약 11일의 기간 동안 배양되어, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포인 벌크 TIL 집단을 생성한다.
바람직한 구현예에서, TIL의 확장은 아래 및 본원에 기재된 바와 같은 초기 벌크 TIL 확장 단계(예를 들어 pre-REP로 언급된 프로세스를 포함할 수 있는 도 1의 단계 B에 기재된 것들과 같음)를 사용하여 수행된 후, 아래 단계 D 하에 및 본원에 기재된 바와 같은 제2 확장(급속 확장 프로토콜(REP) 단계로 언급된 프로세스를 포함하는 단계 D)을 사용하여 수행된 후, 임의적 동결보존, 및 이어서 아래 및 본원에 기재된 바와 같은 제2 단계 D(재자극 REP 단계로 언급된 프로세스 포함)를 사용하여 수행될 수 있다. 이 프로세스로부터 수득되는 TIL은 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 표현형 특성 및 대사 매개변수에 대해 특성화될 수 있다.
TIL 배양이 24-웰 플레이트, 예를 들어, Costar 24-웰 세포 배양 클러스터, 평편 바닥(뉴욕주 코닝 소재의 Corning Incorporated을 사용하여 시작되는 구현예에서, 각 웰은 IL-2(6000 IU/mL; 캘리포니아주 애머리빌 소재의 Chiron Corp.)를 함유하는 2 mL의 완전 매질(CM) 중에 1 x 106개의 종양 소화물 세포 또는 하나의 종양 단편으로 시딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다.
일부 구현예에서, 제1 확장 배양 매질은 배양 배지의 약어인 "CM"으로 언급된다. 일부 구현예에서, 단계 B에 대한 CM은 10% 인간 AB 혈청, 25 mM Hepes, 및 10 mg/mL 젠타마이신이 보충된 GlutaMAX를 함유하는 RPMI 1640으로 이루어진다. 배양이 40 mL 용량 및 10 cm2 가스 투과성 실리콘 바닥을 갖는 가스 투과성 플라스크(예를 들어, G-Rex10; 미네소타주 뉴 브라이턴 소재의 Wilson Wolf Manufacturing)에서 시작되는 구현예에서(도 1), 각 플라스크에 IL-2를 함유하는 10-40 mL의 CM 중에 10-40 x 106개의 생존가능한 종양 소화물 세포 또는 5-30개의 종양 단편으로 로딩하였다. G-Rex10 및 24-웰 플레이트는 모두 배양 개시 5일 후에 37℃, 5% CO2에서 가습 인큐베이터에서 인큐베이션하고, 배지의 절반을 제거하고 새로운 CM 및 IL-2로 교체하고 5일 후, 배지의 절반을 2-3일마다 교체하였다.
종양 단편의 제조 후, 생성된 세포(즉, 단편)를 종양 및 다른 세포에 비해 TIL의 성장을 선호하는 조건 하에 IL-2를 함유하는 혈청에서 배양한다. 일부 구현예에서, 종양 소화물을 6000 IU/mL의 IL-2와 함께 불활성화 인간 AB 혈청(또는, 일부 경우에, 본원에 요약된 바와 같이 aAPC 세포 집단의 존재 하에)을 포함하는 배지의 2 mL 웰에서 인큐베이션한다. 이 1차 세포 집단은 일반적으로 10 내지 14일의 기간 동안 배양되어, 일반적으로 약 1x108개의 벌크 TIL 세포인 벌크 TIL 집단을 생성한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 동안 성장 배지는 IL-2 또는 이의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, IL은 재조합 인간 IL-2(rhIL-2)이다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20-30x106 IU/mg의 특이적 활성(specific activity)을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 25x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 30x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 4-8x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 5-7x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 6x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL-2 스톡 용액은 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조된다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 10,000 IU/mL의 IL-2, 약 9,000 IU/mL의 IL-2, 약 8,000 IU/mL의 IL-2, 약 7,000 IU/mL의 IL-2, 약 6000 IU/mL의 IL-2 또는 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 9,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 8,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 7,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15, 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL-21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
구현예에서, 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 및 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, OKT-3 항체는 무로모납이다.
일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 세포 배양 매질에 하나 이상의 TNFRSF 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제이며, 4-1BB 작용제는 우렐루맙, 우토밀루맙, EU-101, 융합 단백질, 및 단편, 유도체, 변이체, 바이오시밀러 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL의 세포 배양 매질에서 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 20 μg/mL 내지 40 μg/mL의 세포 배양 매질에서 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 TNFRSF 작용제 외에도, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 확장 배양 매질은 배양 배지에 대한 약어인 "CM"으로 언급된다. 일부 구현예에서, CM1(배양 매질 1)로 언급된다. 일부 구현예에서, CM은 10% 인간 AB 혈청, 25 mM Hepes, 및 10 mg/mL 젠타마이신이 보충된 GlutaMAX를 함유하는 RPMI 1640으로 이루어진다. 배양이 40 mL 용량 및 10cm2 가스 투과성 실리콘 바닥을 갖는 가스 투과성 플라스크(예를 들어, G-Rex10; 미네소타주 뉴 브라이턴 소재의 Wilson Wolf Manufacturing)에서 시작되는 구현예에서(도 1), 각 플라스크에 IL-2를 함유하는 10-40mL의 CM 중에 10-40x106개의 생존가능한 종양 소화물 세포 또는 5-30개의 종양 단편으로 로딩하였다. G-Rex10 및 24-웰 플레이트를 모두 배양 개시 5일 후 37℃, 5% CO2에서 가습 인큐베이터에서 인큐베이션하고, 배지의 절반을 제거하고 새로운 CM 및 IL-2로 교체하고, 5일 후 배지의 절반을 2-3일마다 교체하였다. 일부 구현예에서, CM은 실시예에 기재된 CM1이며, 실시예 1을 참조한다. 일부 구현예에서, 제1 확장은 초기 세포 배양 매질 또는 제1 세포 배양 매질에서 발생한다. 일부 구현예에서, 초기 세포 배양 매질 또는 제1 세포 배양 매질은 IL-2를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP로 언급되는 것들을 포함할 수 있는 도 1의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 실시예 및 도면에서 논의된 바와 같이 3-14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP로 언급되는 것들을 포함할 수 있는 도 1의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함)은 실시예에서 논의되고 도 4 및 5 뿐만 아니라 예를 들어, 도 1의 단계 B에 기재된 확장에 제시된 바와 같이 7 내지 14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 단계 B의 제1 확장은 10-14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 제1 확장은 예를 들어, 도 1의 단계 B에 기재된 확장에 논의된 바와 같이 11일로 단축된다.
일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 1일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 2일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 3일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 4일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 5일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 6일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 7일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 8일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 9일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 10일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 11일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 12일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 13일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 1일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 2일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 3일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 4일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 5일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 6일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 7일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 8일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 9일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 10일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 11일 동안 진행될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21의 조합은 제1 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 예를 들어 본원에 기재된 도 1에 따른 단계 B 프로세스 동안을 포함하여 제1 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 제1 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 본원에 기재된 도1에 따른 단계B 프로세스 동안 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 확장(pre-REP로 언급된 프로세스 포함; 예를 들어, 도 1에 따른 단계 B) 프로세스는 실시예 및 도면에서 논의된 바와 같이 3 내지 14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 단계 B의 제1 확장은 7 내지 14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 단계 B의 제1 확장은 10 내지 14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 제1 확장은 11일로 단축된다.
일부 구현예에서, 제1 확장, 예를 들어, 도 1에 따른 단계 B는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 단일 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
1. 사이토카인 및 다른 첨가제
본원에 기재된 확장 방법은 일반적으로 당업계에 알려진 바와 같이 고용량의 사이토카인, 특히 IL-2를 함유하는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0107490 A1에 기재된 바와 같이 IL-2, IL-15 및 IL-21 중 2개 이상의 조합을 사용하여 TIL의 급속 확장 및 또는 제2 확장을 위해 사이토카인의 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 가능한 조합은 IL-2와 IL-15, IL-2와 IL-21, IL-15와 IL-21과 IL-2, 또는 IL-15와 IL-21을 포함하며, 후자는 많은 구현예에서 특히 사용된다. 사이토카인 조합의 사용은 본원에 기재된 바와 같은 림프구, 및 특히 T-세포의 생성을 특이적으로 선호한다.
구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OKT-3 항체 또는 무로모납을 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 4-1BB 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OX-40 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 티아졸리딘디온 화합물과 같은 증식인자-활성화 수용체(PPAR)-감마 작용제를 포함하는 퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 감마 보조활성인자 I-알파 작용제와 같은 첨가제는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0307796 A1에 기재된 바와 같이 단계 B 동안 배양 배지에서 사용될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
C. 단계 C: 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이
일부 경우에, 예를 들어, 도 1에 표시된 단계 B에서 수득된 예를 들어 TIL 집단을 포함하는 제1 확장에서 수득된 벌크 TIL 집단은 본원에서 아래에 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 동결보존될 수 있다. 대안적으로, TIL의 제2 집단으로 언급되는 제1 확장에서 수득된 TIL 집단은 제2 확장(이는 때때로 REP로 언급되는 확장을 포함할 수 있음)을 거친 다음 아래에 논의된 바와 같이 동결보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, TIL의 제1 집단(때때로 벌크 TIL 집단으로 언급됨) 또는 TIL의 제2 집단(이는 일부 구현예에서 REP TIL 집단으로 언급되는 집단을 포함할 수 있음)은 확장 전 또는 제1 확장 후 및 제2 확장 전에 적합한 처리를 위한 유전적 변형을 거칠 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 확장(예를 들어, 도 1에 표시된 바와 같은 단계 B로부터)에서 수득된 TIL은 선택을 위한 표현형 결정까지 저장된다. 일부 구현예에서, 제1 확장(예를 들어, 도 1에 표시된 바와 같은 단계 B로부터)에서 수득된 TIL은 저장되지 않고 제2 확장으로 직접 진행된다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 수득된 TIL은 제1 확장 후 및 제2 확장 전에 동결보존되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 3일, 4,일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 3일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 4일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 4일 내지 10일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 7일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 약 14일에 발생한다.
일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 1일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 2일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 3일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 4일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 5일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 6일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 7일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 8일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 9일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 10일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 11일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 12일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 13일 내지 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 14일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 1일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 2일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 3일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 4일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 5일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 6일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 7일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 8일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 9일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 10일 내지 11일에 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때로부터 11일에 발생한다.
일부 구현예에서, TIL은 제1 확장 후 및 제2 확장 전에 저장되지 않고, TIL은 제2 확장으로 직접 진행된다(예를 들어, 일부 구현예에서, 도 1에 제시된 바와 같이 단계 B에서 단계 D로의 전이 동안 저장하지 않음). 일부 구현예에서, 전이는 본원에 기재된 바와 같이 폐쇄형 시스템에서 발생한다. 일부 구현예에서, 제1 확장으로부터의 TIL인 TIL의 제2 집단은 전이 기간 없이 제2 확장으로 직접 진행된다.
일부 구현예에서, 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이, 예를 들어, 도 1에 따른 단계 C는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 단일 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100 생물반응기이다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
D. 단계 D: 제2 확장
일부 구현예에서, TIL 세포 집단은 수확 및 초기 벌크 처리 후, 예를 들어, 단계 A 및 단계 B, 및 도 1에 표시된 바와 같이 단계 C로 언급되는 전이 후 수적으로 확장된다). 이 추가 확장은 급속 확장 프로세스(REP)로 기술 분야에서 일반적으로 언급되는 확장 프로세스; 뿐만 아니라 도 1의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스를 포함할 수 있는 제2 확장으로 본원에서 언급된다. 제2 확장은 일반적으로 가스 투과성 용기에 영양 세포, 사이토카인 공급원, 및 항-CD3 항체를 포함하여 다수의 구성요소를 포함하는 배양 배지를 사용하여 달성된다.
일부 구현예에서, TIL의 제2 확장 또는 제2 TIL 확장(이는 때때로 REP로 언급되는 확장; 뿐만 아니라 도 1의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스를 포함할 수 있음)은 당업자에게 알려진 임의의 TIL 플라스크 또는 용기를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 7일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 8일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 9일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 10일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 11일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 12일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 13일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 약 14일 동안 진행될 수 있다.
구현예에서, 제2 확장은 본 개시내용의 방법(예를 들어, REP로 언급되는 확장; 뿐만 아니라 도 1의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스 포함)을 사용하여 가스 투과성 용기에서 수행될 수 있다. 예를 들어, TIL은 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터류킨-15(IL-15)의 존재 하에 비특이적 T-세포 수용체 자극을 사용하여 급속히 진행될 수 있다. 비특이적 T-세포 수용체 자극은 예를 들어, 항-CD3 항체, 예컨대 약 30 ng/mL의 OKT3, 마우스 단클론 항-CD3 항체(뉴저지주 라리탄 소재의 Ortho-McNeil 또는 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotech에서 상업적으로 입수가능) 또는 UHCT-1(미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 BioLegend에서 상업적으로 입수가능)을 포함할 수 있다. TIL은 제2 확장 동안 임의적으로 T-세포 성장 인자, 예컨대 300 IU/mL IL-2 또는 IL-15의 존재 하에 임의적으로 벡터로부터 발현될 수 있는 암의 에피토프(들)와 같은 이의 항원성 부분을 포함하는 하나 이상의 항원, 예컨대 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2) 결합 펩티드, 예를 들어, 0.3 μM MART-1 :26-35(27 L) 또는 gpl 00:209-217(210M)을 포함함으로써 시험관 내에서 TIL의 추가 자극을 유도하도록 확장될 수 있다. 다른 적합한 항원은 예를 들어, NY-ESO-1, TRP-1, TRP-2, 티로시나제 암 항원, MAGE-A3, SSX-2, 및 VEGFR2, 또는 이의 항원성 부분을 포함할 수 있다. TIL은 또한 HLA-A2-발현 항원 제시 세포에 펄스를 가한 암의 동일한 항원(들)으로 재자극함으로써 급속히 확장될 수 있다. 대안적으로, TIL은 예를 들어, 예를 들어, 조사된 자가 림프구 또는 조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2로 추가로 재자극될 수 있다. 일부 구현예에서, 재자극은 제2 확장의 일부로서 발생한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 조사된 자가 림프구의 존재 하에 또는 조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2와 함께 발생한다.
구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 8000 IU/mL 사이의 IL-2를 포함한다.
구현예에서, 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 및 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함하지 않는다.　일부 구현예에서, OKT-3 항체는 무로모납이다.
일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 세포 배양 매질에 하나 이상의 TNFRSF 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제이고, 4-1BB 작용제는 우렐루맙, 우토밀루맙, EU-101, 융합 단백질, 및 단편, 유도체, 변이체, 바이오시밀러, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL의 세포 배양 매질 내 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 20 μg/mL 내지 40 μg/mL의 세포 배양 매질 내 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 TNFRSF 작용제 외에도, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21의 조합은 제2 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 예를 들어 도 1에 따르고, 본원에 기재된 바와 같은 단계 D 프로세스 동안을 포함하여 제2 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 2 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 도 1에 따르고 본원에 기재된 바와 같은 단계 D 프로세스 동안 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제2 확장은 IL-2, OKT-3, 항원 제시 영양 세포, 및 임의적으로 TNFRSF 작용제를 포함하는 보충된 세포 배양 매질에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 보충된 세포 배양 매질에서 발생한다. 일부 구현예에서, 보충된 세포 배양 매질은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 세포 배양 매질은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC; 항원 제시 영양 세포로도 언급됨)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 영양 세포(즉, 항원 제시 세포)를 포함하는 세포 배양 매질에서 발생한다.
일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15, 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL-21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
일부 구현예에서 항원 제시 영양 세포(APC)는 PBMC이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC 및/또는 항원 제시 세포의 비율은 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC의 비율은 1 대 50 내지 1 대 300이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC의 비율은 1 대 100 내지 1 대 200이다.
구현예에서, REP 및/또는 제2 확장은 150 mL 배지 중 100- 또는 200-배 과잉 불활성화 영양 세포, 30 mg/mL OKT3 항-CD3 항체 및 3000 IU/mL IL-2와 혼합된 벌트 TIL을 갖는 플라스크에서 수행된다. 세포가 대체 성장 챔버로 옮겨질 때까지 배지 교체가 수행된다(일반적으로 호흡을 통해 새로운 배지로 2/3 배지 교체). 대체 성장 챔버는 아래에 보다 상세하게 논의된 바와 같이 G-REX 플라스크 및 가스 투과성 용기를 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 확장(이는 REP 프로세스로 언급된 프로세스를 포함할 수 있음)은 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이 7-14일로 단축된다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 11일로 단축된다.
구현예에서, REP 및/또는 제2 확장은 이전에 기재된 바와 같은 T-175 플라스크 및 가스 투과성 백(Tran, 등, J. Immunother. 2008, 31, 742-51; Dudley, 등, J. Immunother. 2003, 26, 332-42) 또는 가스 투과성 컬쳐웨어(G-Rex 플라스크)를 사용하여 수행할 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 확장(급속 확장으로 언급된 확장 포함)은 T-175 플라스크에서 수행하고, 150 mL의 배지에 현탁된 약 1 x 106개의 TIL이 각 T-175 플라스크에 첨가할 수 있다. TIL은 mL 당 3000 IU의 IL-2 및 mL 당 30 ng의 항-CD3이 보충된 CM 및 AIM-V의 1 대 1 혼합물 매질에서 배양할 수 있다. T-175 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션할 수 있다. 배지의 절반은 mL 당 3000 IU의 IL-2를 함유하는 50/50 매질을 사용하여 5일차에 교환할 수 있다. 일부 구현예에서, 7일차에 2개의 T-175 플라스크로부터의 세포를 3 L 백에서 합하고 5% 인간 AB 혈청 및 mL 당 3000 IU의 IL-2를 함유하는 300 mL의 AIM V를 300 mL의 TIL 현탁액에 첨가하였다. 각 백의 세포 수를 매일 또는 2일마다 계수하고 새로운 배지를 첨가하여 0.5 내지 2.0 x 106개 세포/mL의 세포 계수를 유지하였다.
구현예에서, 제2 확장(이는 REP로 언급된 확장, 뿐만 아니라 도 1의 단계 D에 언급된 것들을 포함할 수 있음)은 100 cm 가스 투과성 실리콘 바닥이 있는 500 mL 용량 가스 투과성 플라스크(G-Rex 100, 미국 미네소타주 뉴 브라이턴 소재의 Wilson Wolf Manufacturing Corporation에서 상업적으로 입수가능)에서 수행할 수 있고, 5 x 106개 또는 10 x 106개의 TIL은 5% 인간 AB 혈청, mL 당 3000 IU의 IL-2 및 mL 당 30 ng의 항-CD3(OKT3)이 보충된 400 mL의 50/50 매질에서 PBMC와 함께 배양할 수 있다. G-Rex 100 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션할 수 있다. 5일차에, 상청액 250 mL를 꺼내어 원심분리 병에 넣고 500 rpm(491 x g)에서 10분 동안 원심분리할 수 있다. TIL 펠릿을 5% 인간 AB 혈청, mL 당 3000 IU의 IL-2를 함유하는 새로운 매질 150 mL로 재현탁하고, 원래 G-Rex 100 플라스크에 다시 첨가할 수 있다. TIL을 G-Rex 100 플라스크에서 연속으로 확장하는 경우, 7일차에 각 G-Rex 100에서 TIL을 각 플라스크에 존재하는 배지 300 mL에 현탁할 수 있고 세포 현탁액을 3개의 G-Rex 100 플라스크에 시딩하는 데 사용될 수 있는 3개의 100 mL 분취량으로 나눌 수 있다. 그런 다음 5% 인간 AB 혈청 및 mL 당 3000 IU의 IL-2를 함유하는 AIM-V 150 mL를 각 플라스크에 첨가할 수 있다. G-Rex 100 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션할 수 있고 4일 후 mL 당 3000 IU의 IL-2를 함유하는 AIM-V 150 mL를 각 G-REX 100 플라스크에 첨가할 수 있다. 세포를 배양 14일차에 수확할 수 있다.
구현예에서, 제2 확장(REP로 언급된 확장 포함)은 150 mL 배지 중 100- 또는 200-배 과잉 불활성화 영양 세포, 30 mg/mL OKT3 항-CD3 항체 및 3000 IU/mL IL-2와 혼합된 벌크 TIL을 함유하는 플라스크에서 수행한다. 일부 구현예에서, 세포가 대체 성장 챔버로 옮겨질 때까지 배지 교체를 수행한다. 일부 구현예에서, 배지의 2/3를 호흡에 의해 새로운 배지로 교체한다. 일부 구현예에서, 대체 성장 챔버는 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 G-REX 플라스크 및 가스 투과성 용기를 포함한다.
구현예에서, 제2 확장(REP로 언급된 확장 포함)을 수행하고 TIL이 우수한 종양 반응성을 위해 선택되는 단계를 추가로 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 선택 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0010058 A1에 기재된 방법은 우수한 종양 반응성을 위한 TIL의 선택에 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
임의적으로, 세포 생존력 검정은 당업계에 알려진 표준 검정을 사용하여 제2 확장(REP 확장으로 언급된 확장 포함) 후 수행할 수 있다. 예를 들어, 트립판 블루 배제 검정은 죽은 세포를 선택적으로 표지하고 생존력 평가를 허용하는 벌크 TIL의 샘플에서 수행할 수 있다. 일부 구현예에서, TIL 샘플은 Cellometer K2 자동화 세포 계수기(Nexcelom Bioscience, 매사추세츠주 로렌스)를 사용하여 계수하고 생존력을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 생존력은 표준 Cellometer K2 Image Cytometer 자동 세포 계수기 프로토콜에 따라 결정한다.
일부 구현예에서, TIL의 제2 확장(REP로 언급된 확장 포함)은 이전에 기재된 바와 같은 T-175 플라스크 및 가스 투과성 백(Tran, 등, 2008, J Immunother., 31, 742-751, 및 Dudley, 등 2003, J Immunother., 26, 332-342) 또는 가스 투과성 G-Rex 플라스크를 사용하여 수행할 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 플라스크를 사용하여 수행한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 가스 투과성 G-Rex 플라스크를 사용하여 수행한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 T-175 플라스크에서 수행하고, 약 1 x 106개의 TIL을 약 150 mL의 배지에 현탁하고 이것을 각 T-175 플라스크에 첨가한다. TIL을 1 대 100의 비율로 "영양" 세포로서 조사된(50 Gy) 동종이계 PBMC와 함께 배양하고 세포를 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/mL의 항-CD3이 보충된 CM 및 AIM-V의 1 대 1 혼합물 매질(50/50 매질)에서 배양하였다. T-175 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한다. 일부 구현예에서, 배지의 절반을 3000 IU/mL의 IL-2를 함유하는 50/50 매질을 사용하여 5일차에 교체한다. 일부 구현예에서, 7일차에, 2개의 T-175 플라스크로부터의 세포를 3 L 백에서 합하고 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2를 함유하는 300 mL의 AIM-V를 300 mL의 TIL 현탁액에 첨가한다. 각 백의 세포 수는 매일 또는 2일마다 계수할 수 있고 새로운 배지를 첨가하여 약 0.5 내지 약 2.0 x 106개 세포/mL의 세포 계수를 유지할 수 있다.
일부 구현예에서, 제2 확장(REP로 언급된 확장 포함)은 100 cm2 가스 투과성 실리콘 바닥이 있는 500 mL 용량 플라스크(G-Rex 100, Wilson Wolf)에서 수행하고(도 1), 약 5 x 106개 또는 10 x 106개의 TIL을 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/ mL의 항-CD3이 보충된 400 mL의 50/50 매질에서 1 대 100의 비율로 조사된 동종이계 PBMC와 함께 배양한다. G-Rex 100 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한다. 일부 구현예에서, 5일차에, 상청액 250mL를 꺼내어 원심분리 병에 넣고 1500 rpm(491 g)에서 10분 동안 원심분리한다. 그런 다음 TIL 펠릿을 3000 IU/ mL의 IL-2를 함유하는 새로운 50/50 매질 150 mL로 재현탁하고 원래 G-Rex 100 플라스크에 다시 첨가할 수 있다. TIL이 G-Rex 100 플라스크에서 연속으로 확장된 구현예에서, 7일차에 각 G-Rex 100의 TIL을 각 플라스크에 존재하는 배지 300 mL에 현탁하고 세포 현탁액을 3개의 G-Rex 100 플라스크에 시딩하는 데 사용되는 3개의 100 mL 분취액으로 나누었다. 그런 다음 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2를 함유하는 AIM-V 150 mL를 각 플라스크에 첨가한다. G-Rex 100 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고 4일 후 3000 IU/mL의 IL-2를 함유하는 AIM-V 150 mL를 각 G-Rex 100 플라스크에 첨가한다. 세포를 배양 14일차에 수확한다.
T 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한적이지만, 다수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생산된다. 이러한 유전자 분절: V(가변성), D(다양성), J(결합), 및 C(상수)은 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 제2 확장에서 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 중쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 경쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 알파, 베타, 감마, 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
일부 구현예에서, 제2 확장 배양 매질(예를 들어, 때때로 CM2 또는 제2 세포 배양 매질로 언급됨)은 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 IL-2, OKT-3, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포(APC)를 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 확장, 예를 들어, 도 1에 따른 단계 D는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 단일 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 이용된 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX -10 또는 G-REX -100이다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
1. 영양 세포 및 항원 제시 세포
구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차(예를 들어 도 1의 단계 D에 기재된 것들과 같은 확장, 뿐만 아니라 REP로 언급된 것들 포함)는 REP TIL 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 과잉 영양 세포를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 조사한 동종이계 PBMC의 복제 무능력을 평가하기 위한 예시적인 프로토콜을 제공하는 실시예에 기재된 바와 같은 REP 절차에 사용된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 14일차에 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일)에 배양에 투입한 초기 생존가능한 세포 수보다 적은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기 위해 허용된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일차 및 14일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일)에 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가하지 않는 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기 위해 허용된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일차 및 14일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일)에 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가하지 않는 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기 위해 허용된다. 일부 구현예에서, PBMC는 5-60 ng/mL OKT3 항체 및 1000-6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 10-50 ng/mL OKT3 항체 및 2000-5000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 20-40 ng/mL OKT3 항체 및 2000-4000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 25-35 ng/mL OKT3 항체 및 2500-3500 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 PBMC이다. 일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 인공 항원 제시 영양 세포이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 50 내지 1 대 300이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 100 내지 1 대 200이다.
구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 2.5x109개의 영양 세포 대 약 100x106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 2.5x109개의 영양 세포 대 약 50x106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 2.5x109개의 영양 세포 대 약 25x106개의 TIL을 필요로 한다.
구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 제2 확장 동안 과잉 영양 세포를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다. 구현예에서, 인공 항원 제시(aAPC) 세포는 PBMC 대신에 사용된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 도면 및 실시예에 기재된 예시적인 절차를 포함하여 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용된다.
구현예에서, 인공 항원 제시 세포는 PBMC를 대체하거나, 이와 조합하여 제2 확장에 사용된다.
2. 사이토카인 및 다른 첨가제
본원에 기재된 확장 방법은 일반적으로 당업계에 알려진 바와 같이 고용량의 사이토카인, 특히 IL-2를 함유하는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0107490 A1에 기재된 바와 같이 IL-2, IL-15 및 IL-21 중 2개 이상의 조합을 사용하여 TIL의 급속 확장 및 또는 제2 확장을 위해 사이토카인의 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 가능한 조합은 IL-2와 IL-15, IL-2와 IL-21, IL-15와 IL-21과 IL-2, IL-15와 IL-21을 포함하며, 후자는 많은 구현예에서 특히 사용된다. 사이토카인 조합의 사용은 본원에 기재된 바와 같은 림프구, 및 특히 T-세포의 생성을 특이적으로 선호한다.
구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OKT-3 항체 또는 무로모납을 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 4-1BB 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OX-40 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 게다가, 티아졸리딘디온 화합물과 같은 증식인자-활성화 수용체(PPAR)-감마 작용제를 포함하는 퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 감마 보조활성인자 I-알파 작용제와 같은 첨가제가 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0307796 A1에 기재된 바와 같이 단계 D 동안 배양 배지에서 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
E. 단계 E: TIL 수확
제2 확장 단계 후, 세포가 수확될 수 있다. 일부 구현예에서 TIL은 예를 들어 도 1에 제공된 바와 같이 1, 2, 3, 4개 이상의 확장 단계 후 수확된다. 일부 구현예에서 TIL은 예를 들어 도 1에 제공된 바와 같이 2개의 확장 단계 후 수확된다.
TIL은 예를 들어 원심분리를 포함하여 임의의 적절한 멸균 방식으로 수확될 수 있다. TIL을 수확하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고 임의의 이러한 알려진 방법은 본 프로세스에 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 자동화 시스템을 사용하여 수확한다.
세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 예를 들어, Fresenius Kabi, Tomtec Life Science, Perkin Elmer, 및 Inotech Biosystems International, Inc를 포함한 다양한 공급업체로부터 상업적으로 입수가능하다. 임의의 세포 기반 수확기는 본 방법과 함께 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 막 기반 세포 수확기이다. 일부 구현예에서, 세포 수확은 LOVO 시스템(Fresenius Kabi에서 제조됨)과 같은 세포 처리 시스템을 통해 이루어진다. 용어 "LOVO 세포 처리 시스템"은 또한 멸균 및/또는 폐쇄형 시스템 환경에서 방사 막 또는 방사 필터와 같은 막 또는 필터를 통해 세포를 포함하는 용액을 펌핑하여, 연속 흐름 및 세포 처리를 허용하여 펠릿화 없이 상청액 또는 세포 배양 배지를 제거할 수 있는 임의의 공급업체에 의해 제조된 임의의 기기 또는 장치를 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 폐쇄형 멸균 시스템에서 세포 분리, 세척, 유체 교환, 농축, 및/또는 다른 세포 처리 단계를 수행할 수 있다.
일부 구현예에서, 수확, 예를 들어, 도 1에 따른 단계 E는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 단일 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX -10 또는 G-REX -100이다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
일부 구현예에서, 도 1에 따른 단계 E는 본원에 기재된 프로세스에 따라 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 시스템의 멸균성 및 폐쇄 속성을 유지하기 위해 멸균 조건 하에 주사기를 통해 접근된다. 일부 구현예에서, 실시예에 기재된 바와 같은 폐쇄형 시스템이 이용된다.
일부 구현예에서, TIL은 실시예에 기재된 방법에 따라 수확된다. 일부 구현예에서, 1일차 내지 11일차 TIL은 실시예에서 11일차 TIL 수확과 같이 본원에 언급된 단계에 사용된 바와 같은 방법을 사용하여 수확된다. 일부 구현예에서, 12일차 내지 22일차 TIL은 실시예에서 22일차 TIL 수확과 같이 본원에 언급된 단계에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 수확된다.
F. 단계 F: 최종 제형 및 주입 용기로의 전달
도 1에 예시적인 순서로 제공되고 상기 및 본원에 상세하게 요약된 바와 같이 단계 A 내지 E가 완료된 후, 세포는 주입 백 또는 멸균 바이알과 같은 환자에게 투여하는 데 사용하기 위한 용기로 옮겨진다. 일부 구현예에서, 상기 기재된 확장 방법을 사용하여 치료적으로 충분한 수의 TIL이 수득되면, 이들은 환자에게 투여하는 데 사용하기 위한 용기로 옮겨진다.
구현예에서, 본 개시내용의 APC를 사용하여 확장된 TIL은 약제학적 조성물로서 환자에게 투여된다. 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균 완충액 중 TIL의 현탁액이다. 본 개시내용의 PBMC를 사용하여 확장된 TIL은 당업계에 알려진 바와 같은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, T-세포는 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로 투여되며, 바람직하게는 대략 30 내지 60분 지속된다. 다른 적합한 투여 경로는 복강내, 척수강내, 및 림프내 투여를 포함한다.
IV. Gen 3 TIL 제조 프로세스
임의의 특정 이론에 제한되기를 바라지 않고, T 세포의 활성화를 프라이밍하는 프라이밍 제1 확장에 이어 본 발명의 방법에 기재된 바와 같이 T 세포의 활성화를 부스트하는 급속 제2 확장은 "더 젊은" 표현형을 유지하는 확장된 T 세포 집단을 허용하며, 이에 따라 본 발명의 확장된 T 세포는 다른 방법에 의해 확장된 T 세포보다 암 세포에 대한 더 큰 세포독성을 나타낼 것으로 예상되는 것으로 여겨진다. 특히, 본 발명의 방법에 의해 교시된 바와 같이 항-CD3 항체(예를 들어 OKT-3), IL-2 및 임의적으로 항원 제시 세포(APC)에 노출되어 프라이밍된 다음 추가 항-CD-3 항체(예를 들어 OKT-3), IL-2 및 APC에 후속 노출되어 부스트된 T 세포의 활성화는 배양 시 T 세포의 성숙을 제한하거나 회피하여 덜 성숙한 표현형을 갖는 T 세포 집단을 생성하며, 이러한 T 세포는 배양 시 확장에 의해 덜 고갈되고 암 세포에 대해 더 큰 세포독성을 나타내는 것으로 여겨진다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 단계는 다음에 의해 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할된다: (a) T 세포를 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100 MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 소규모 배양물로 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 단계, 이어서 (b) 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500 MCS 용기로 옮기고, 소규모 배양물의 T 세포를 제2 용기의 대규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양하는 단계. 일부 구현예에서, 급속 확장의 단계는 다음에 의해 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할된다: (a) 제1 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100 MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 단계, 및 이어서 (b) 제1 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기로 옮기고 할당하는 단계, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물의 T 세포 부분은 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장의 단계는 다음에 의해 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할된다: (a) 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100 MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 단계, 및 이어서 (b) 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮기고 할당하는 단계, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물의 T 세포 부분은 대규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장의 단계는 다음에 의해 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할된다: (a) 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100 MCS 용기에서, 약 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수해하는 단계, 및 이어서 (b) 소규모 배양물의 T 세포를 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500 MCS 용기로 옮기고 할당하는 단계, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물의 T 세포 부분은 대규모 배양물에서 약 5일의 기간 동안 배양된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 감소, 약화, 붕괴 또는 사그라들기 시작한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%만큼 감소한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 1% 내지 100% 또는 약 1% 내지 100% 범위의 백분율만큼 감소한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90%, 또는 90% 내지 100% 또는 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90%, 또는 90% 내지 100% 범위의 백분율만큼 감소한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99%만큼 감소한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포의 활성화가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%만큼 감소한 후 수행된다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 의해 실행된 T 세포 활성화의 감소는 항원으로의 자극에 반응하여 T 세포에 의해 방출되는 인터페론 감마 양의 감소에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 최대 7일 또는 8일 또는 약 7일 또는 약 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 최대 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 급속 제2 확장은 최대 11일 또는 약 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 급속 제2 확장은 최대 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 급속 제2 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 1일 또는 약 1일에서 7일 또는 약 7일까지의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 1일 또는 약 1일에서 11일 또는 약 11일까지의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 최대 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 최대 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 1일 또는 약 1일에서 8일 또는 약 8일까지의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 1일 또는 약 1일에서 9일 또는 약 9일까지의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 8일의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 1일 또는 약 1일에서 7일 또는 약 7일까지의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 1일 또는 약 1일에서 9일 또는 약 9일까지의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포의 프라이밍 제1 확장은 7일의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 제2 확장은 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 종양 침윤 림프구(TIL)이다.
일부 구현예에서, T 세포는 골수 침윤 림프구(MIL)이다.
일부 구현예에서, T 세포는 말초 혈액 림프구(PBL)이다.
일부 구현예에서, T 세포는 암을 앓고 있는 공여자로부터 수득된다.
일부 구현예에서, T 세포는 암을 앓고 있는 환자로부터 절제된 종양에서 수득된 TIL이다.
일부 구현예에서, T 세포는 혈액 악성종양을 앓고 있는 환자의 골수에서 수득된 MIL이다.
일부 구현예에서, T 세포는 공여자의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 수득된 PBL이다. 일부 구현예에서, 공여자는 암을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 암은 암은 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 공여자는 종양을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 종양은 액체 종양이다. 일부 구현예에서, 종양은 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 공여자는 혈액 악성종양을 앓고 있다.
본 개시내용의 특정 측면에서, 면역 효과기 세포, 예를 들어, T 세포는 FICOLL 분리와 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위에서 수득될 수 있다. 하나의 바람직한 측면에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포 성분채집술에 의해 수득된다. 성분채집술　생성물은 전형적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구, 및 혈소판을 포함한 림프구를 함유한다. 하나의 측면에서, 성분채집술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 임의적으로 후속 처리 단계를 위해 세포를 적절한 완충액 또는 배지에 넣을 수 있다. 하나의 구현예에서, 세포는 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 대안적인 구현예에서, 세척 용액은 칼슘이 부족하고 마그네슘이 부족할 수 있거나 모두 2가 양이온은 아니지만 많은 것이 부족할 수 있다. 하나의 측면에서, T 세포는 예를 들어, PERCOLL 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심분리 용출법에 의해 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리된다.
일부 구현예에서, T 세포는 공여자로부터 림프구에 풍부화된 전혈 또는 성분채집술 생성물에서 분리된 PBL이다. 일부 구현예에서, 공여자는 암을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 암은 암은 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 공여자는 종양을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 종양은 액체 종양이다. 일부 구현예에서, 종양은 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 공여자는 혈액 악성종양을 앓고 있다. 일부 구현예에서, PBL은 양성 또는 음성 선택 방법을 사용하여, 즉, T 세포 표현형에 대한 마커(들), 예를 들어, CD3+ CD45+를 사용하여 PBL을 제거하거나, 또는 비-T 세포 표현형 세포를 제거하여, PBL을 남김으로써 림프구에 대해 풍부화된 전혈 또는 성분채집술 생성물로부터 단리된다. 다른 구현예에서, PBL은 구배 원심분리에 의해 단리된다. 공여자 조직으로부터 PBL의 단리 시, PBL의 프라이밍 제1 확장은 본원에 기재된 임의의 방법의 프라이밍 제1 확장 단계에 따라 적합한 수의 단리된 PBL(일부 구현예에서, 대략 1x107개 PBL)을 프라이밍 제1 확장 배양물에 시딩함으로써 개시될 수 있다.
이러한 특징 중 일부를 함유하는 프로세스 3으로 알려진 예시적인 TIL 프로세스(본원에서 GEN 3으로도 언급됨)는 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 도시되어 있고, Gen 2에 비해 본 발명의 이러한 구현예의 이점 중 일부는 도 1, 2, 30, 및 31(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 기재되어 있다. 프로세스 3의 2개의 구현예는 도 1 및 30(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시되어 있다. Gen 2 또는 Gen 2A는 또한 미국 특허 공개 번호 2018/0280436에 기재되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. Gen 3 프로세스는 또한 2018년 11월 5일 출원된 USSN 62/755,954(116983-5045-PR)에 기재되어 있다.
본원에 논의되고 일반적으로 요약된 바와 같이, TIL은 환자 샘플에서 취하고 본원에 기재되고 Gen 3으로 언급된 TIL 확장 프로세스를 사용하여 환자에게 이식하기 전에 수를 확장시키도록 조작된다. 일부 구현예에서, TIL은 임의적으로 아래에 논의된 바와 같이 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 확장 전 또는 후에 동결보존될 수 있다. 해동되면, 이들은 또한 환자에게 주입하기 전에 대사를 증가시키도록 재자극될 수 있다.
일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 뿐만 아니라 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 프라이밍 제1 확장(본원에서 급속 확장 전(Pre-REP)으로 언급된 프로세스, 뿐만 아니라 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 단계 B로 제시된 프로세스 포함)은 1 내지 8일로 단축되고 급속 제2 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 제시된 프로세스 포함)은 1 내지 9일로 단축된다. 일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 뿐만 아니라 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 프라이밍 제1 확장(본원에서 급속 확장 전(Pre-REP)으로 언급된 프로세스, 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 제시된 프로세스 포함)은 1 내지 8일로 단축되고 급속 제2 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 언급된 프로세스 포함)은 1 내지 8일로 단축된다. 일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 뿐만 아니라 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 프라이밍 제1 확장(본원에서 급속 확장 전(Pre-REP)으로 언급된 프로세스, 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 제시된 프로세스 포함)은 1 내지 7일로 단축되고 급속 제2 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 언급된 프로세스 포함)은 1 내지 9일로 단축된다. 일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 뿐만 아니라 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 프라이밍 제1 확장(본원에서 급속 확장 전(Pre-REP)으로 언급된 프로세스, 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 제시된 프로세스 포함)은 1 내지 7일이고 급속 제2 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)로 언급된 프로세스 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 언급된 프로세스 포함)은 1 내지 10일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 8일로 단축되고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 7 내지 9일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 8일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 8 내지 9일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 7일로 단축되고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 7 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 8일로 단축되고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 8일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 9일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 8일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 10일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 7일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 7 내지 10일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 7일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 8 내지 10일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 7일이고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 9 내지 10일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 B로 기재된 확장)은 7일로 단축되고 급속 제2 확장(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계 D로 기재된 확장)은 7 내지 9일이다. 일부 구현예에서, 아래 상세한 설명 및 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이, 프라이밍 제1 확장 및 급속 제2 확장의 조합(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)에서 단계 B 및 단계 D로 기재된 확장)은 14-16일이다. 특히, 본 발명의 특정 구현예는 TIL이 IL-2의 존재 하에 항-CD3 항체, 예를 들어, OKT-3에 대한 노출 또는 적어도 IL-2 및 항-CD3 항체 예를 들어 OKT-3의 존재 하에 항원에 대한 노출에 의해 활성화되는 프라이밍 제1 확장 단계를 포함하는 것으로 간주된다. 특정 구현예에서, 상기 기재된 바와 같은 프라이밍 제1 확장 단계에서 활성화되는 TIL은 TIL의 제1 집단 즉, 1차 세포 집단이다.
아래의 "단계" 지정 A, B, C 등은 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 비제한적인 예를 참조하고 본원에 기재된 특정 비제한적인 구현예를 참조한다. 아래 및 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 단계의 순서는 예시적이고 단계의 임의의 조합 또는 순서, 뿐만 아니라 추가 단계, 단계의 반복, 및/또는 단계의 생략이 본 출원 및 본원에 개시된 방법에 의해 고려된다.
A. 단계 A: 환자 종양 샘플 수득
일반적으로, TIL은 초기에 환자 종양 샘플("1차 TIL") 또는 TIL-유사 특성을 갖는 말초 혈액 림프구를 포함한 말초 혈액 림프구와 같은 순환 림프구로부터 수득된 다음, 본원에 기재된 바와 같은 추가 조작을 위해 더 큰 집단으로 확장되고, 임의적으로 동결보존되고, 임의적으로 TIL 건강의 지표로서 표현형 및 대사 매개변수에 대해 평가된다.
환자 종양 샘플은 외과적 절제, 바늘 생검 또는 종양 및 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 다른 수단을 통해 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 일반적으로, 종양 샘플은 원발성 종양, 침습성 종양 또는 전이성 종양을 포함한 임의의 고형 종양으로부터 유래될 수 있다. 종양 샘플은 또한 혈액학적 악성종양으로부터 수득된 종양과 같은 액체 종양일 수 있다. 고형 종양은 유방암, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 폐암, 뇌암, 신암, 위암, 및 피부암(편평 세포 암종, 기저세포 암종, 및 흑색종)을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 암 유형일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 자궁경부암, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM), 위장관암, 난소암, 육종, 췌장암, 방광암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 및 비소세포 폐 암종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 유용한 TIL은 악성 흑색종 종양으로부터 수득되며, 이들은 특히 높은 수준의 TIL을 갖는 것으로 보고되었다.
일단 수득되면, 종양 샘플은 일반적으로 단 날카로운 절개를 사용하여 1 내지 약 8 mm3의 작은 조각으로 단편화되며, 약 2-3 mm3가 특히 유용하다. TIL은 효소적 종양 소화물을 사용하여 이러한 단편으로부터 배양된다. 종양 소화물은 효소적 배지(예를 들어, RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 1640 완충액, 2 mM 글루타메이트, 10 mcg/mL 젠타마이신, 30 단위/mL의 DNase 및 1.0 mg/mL의 콜라게나제)에서 인큐베이션 후 기계적 해리(예를 들어, 조직 해리장치 사용)에 의해 생산될 수 있다. 종양 소화물은 종양을 효소적 배지에 배치하고 종양을 대략 1분 동안 기계적 해리한 후, 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 후 작은 조직 조각만이 존재할 때까지 전술한 조건 하에 기계적 해리 및 인큐베이션 주기를 반복함으로써 생산될 수 있다. 이 프로세스의 끝에, 세포 현탁액이 다량의 적혈구 또는 죽은 세포를 함유하는 경우, FICOLL 분지형 소수성 다당류를 사용한 밀도 구배 분리를 수행하여 이러한 세포를 제거할 수 있다. 미국 특허 출원 공개 번호 2012/0244133 A1에 기재된 것들과 같은 대안적인 당업계에 알려진 방법이 사용될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 임의의 전술한 방법은 TIL을 확장하는 방법 또는 암을 치료하는 방법에 대해 본원에 기재된 임의의 구현예에서 사용될 수 있다.
상기 나타낸 바와 같이, 일부 구현예에서, TIL은 고형 종양으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 단편화되지 않는다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 단편화되지 않고 전체 종양으로서 효소적 소화를 거친다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제, DNase, 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 회전시키면서 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 일정하게 회전시키면서 밤새 소화된다. 일부 구현예에서, 종양은 일정하게 회전시키면서 37℃, 5% CO2에서 밤새 소화된다. 일부 구현예에서, 전체 종양은 효소와 조합하여 종양 소화물 반응 혼합물을 형성한다.
일부 구현예에서, 종양은 멸균 완충액에서 동결건조된 효소로 재구성된다. 일부 구현예에서, 완충액은 멸균 HBSS이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 콜라게나제를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜라게나제는 콜라게나제 IV이다. 일부 구현예에서, 콜라게나제에 대한 작업 스톡은 100 mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 DNAse를 포함한다. 일부 구현예에서, DNAse에 대한 작업 스톡은 10,000IU/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 히알루로니다제를 포함한다. 일부 구현예에서, 히알루로니다제에 대한 작업 스톡은 10-mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 1000 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 500 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일반적으로, 종양으로부터 수득된 세포 현탁액은 은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수득된" 또는 "새로 단리된" 세포 집단이라고 한다. 특정 구현예에서, TIL의 새로 수득된 세포 집단은 항원 제시 세포, IL-12 및 OKT-3을 포함하는 세포 배양 매질에 노출된다.
일부 구현예에서, 단편화는 예를 들어, 절개 뿐만 아니라 소화를 포함하는 물리적 단편화를 포함한다. 일부 구현예에서, 단편화는 물리적 단편화이다. 일부 구현예에서, 단편화는 절개이다. 일부 구현예에서, 단편화는 소화에 의해서다. 일부 구현예에서, TIL은 초기에 환자로부터 수득된 효소적 종양 소화물 및 종양 단편으로부터 배양될 수 있다. 구현예에서, TIL은 초기에 환자로부터 수득된 효소적 종양 소화물 및 종양 단편으로부터 배양될 수 있다.
종양이 고형 종양인 일부 구현예에서, 종양은 종양 샘플이 예를 들어, 단계 A(도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같음)에서 수득된 후 물리적 단편화를 겪는다. 일부 구현예에서, 단편화는 동결보존 전에 발생한다. 일부 구현예에서, 단편화는 동결보존 후에 발생한다. 일부 구현예에서, 단편화는 종양을 수득한 후 그리고 임의의 동결보존의 부재 하에 발생한다. 일부 구현예에서, 단편화 단계는 시험관 내 또는 생체 외 프로세스이다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 10, 20, 30, 40개 이상의 단편 또는 조각이 프라이밍 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 30 또는 40개의 단편 또는 조각이 프라이밍 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 종양은 단편화되고 40개의 단편 또는 조각이 프라이밍 제1 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 4 내지 약 50개의 단편을 포함하며, 여기서 각 단편은 약 27 mm3의 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1300 mm3 내지 약 1500 mm3의 총 부피를 갖는 약 30 내지 약 60개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1350 mm3의 총 부피를 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 1 그램 내지 약 1.5 그램의 총 질량을 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중 단편은 약 4개의 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, TIL은 종양 단편으로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 날카로운 절개에 의해 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 8 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 2 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 3 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 4 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 5 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 6 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 7 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 8 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 9 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 10 mm3이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 1-4 mm x 1-4 mm x 1-4 mm이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 1 mm x 1 mm x 1 mm이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 2 mm x 2 mm x 2 mm이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 3 mm x 3 mm x 3 mm이다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 4 mm x 4 mm x 4 mm이다.
일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 출혈성, 괴사성, 및/또는 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 단편화된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 출혈성 조직의 양을 최소화하기 위해 단편화된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 괴사성 조직의 양을 최소화하기 위해 단편화된다. 일부 구현예에서, 종양은 각 조각에서 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 단편화된다. 특정 구현예에서, 종양의 단편화 단계는 시험관 내 또는 생체 외 방법이다.
일부 구현예에서, 종양 단편화는 종양 내부 구조를 유지하기 위해 수행된다. 일부 구현예에서, 종양 단편화는 메스로 톱질 동작을 수행하지 않고 수행된다. 일부 구현예에서, TIL은 종양 소화물로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 소화물은 RPMI 1640, 2 mM GlutaMAX, 10 mg/mL 젠타마이신, 30 U/mL DNase, 및 1.0 mg/mL 콜라게나제와 같으나 이에 제한되지 않는 효소 배지에서 인큐베이션한 후, 기계적 해리(GentleMACS, 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotec)에 의해 생성되었다. 효소 배지에 종양을 배치한 후, 종양은 대략 1분 동안 기계적으로 해리될 수 있다. 그런 다음 용액은 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션된 다음 대략 1분 동안 다시 기계적으로 파괴될 수 있다. 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 다시 인큐베이션 후, 종양은 대략 1분 동안 세번째로 기계적으로 파괴될 수 있다. 일부 구현예에서, 세번째 기계적 파괴 후 큰 조직 조각이 존재하는 경우, 37℃, 5% CO2에서 30분 추가 인큐베이션 여부에 관계 없이, 1 또는 2회 추가 기계적 해리가 샘플에 적용되었다. 일부 구현예에서, 최종 인큐베이션 마지막에 세포 현탁액이 다수의 적혈구 또는 죽은 세포를 함유하는 경우, Ficoll을 사용한 밀도 구배 분리를 수행하여 이러한 세포가 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 단계 전에 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수득된" 또는 "새로 단리된" 세포 집단이라고 한다.
일부 구현예에서, 세포는 샘플 단리 후(예를 들어, 종양 샘플을 수득한 후 및/또는 종양 샘플로부터 세포 현탁액을 수득한 후) 임의적으로 동결될 수 있고 아래에 추가로 상세히 기재될 뿐만 아니라 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b)에 예시된 단계 B에 기재된 확장에 들어가기 전에 동결 저장될 수 있다.
1. 중심부/소형 생검 유래 TIL
일부 구현예에서, TIL은 초기에 중심부 생검 또는 유사한 절차에 의해 수득된 환자 종양 샘플("1차 TIL")로부터 수득된 다음 본원에 기재된 바와 같은 추가 조작을 위해 더 큰 집단으로 확장되고, 임의적으로 동결보존되고, 임의적으로 표현형 및 대사 매개변수에 대해 평가된다.
일부 구현예에서, 환자 종양 샘플은 일반적으로 소형 생검, 중심부 생검, 바늘 생검 또는 종양 및 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 다른 수단을 통해 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 일반적으로, 종양 샘플은 원발성 종양, 침습성 종양 또는 전이성 종양을 포함한 임의의 고형 종양으로부터 유래될 수 있다. 종양 샘플은 또한 혈액학적 악성종양으로부터 유래된 종양과 같은 액체 종양일 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 다중 소형 종양 샘플 또는 생검으로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 동일한 환자의 단일 종양으로부터의 다중 종양 샘플을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 동일한 환자의 1, 2, 3, 또는 4개의 종양으로부터의 다중 종양 샘플을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 동일한 환자의 다중 종양으로부터의 다중 종양 샘플을 포함할 수 있다. 고형 종양은 폐 및/또는 비소세포 폐 암종(NSCLC)일 수 있다.
일반적으로, 종양 중심부 또는 단편으로부터 수득된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수득된" 또는 "새로 단리된" 세포 집단이라고 한다. 특정 구현예에서, TIL의 새로 수득된 세포 집단은 항원 제시 세포, IL-2 및 OKT-3을 포함하는 세포 배양 매질에 노출된다.
일부 구현예에서, 종양이 전이성이고 원발성 병변이 과거에 효율적으로 치료/제거된 경우, 전이성 병변 중 하나의 제거가 필요할 수 있다. 일부 구현예에서, 최소 침습적 접근법은 피부 병변, 또는 이용가능한 경우 목 또는 겨드랑이 부분의 림프절을 제거하는 것이다. 일부 구현예에서, 피부 병변이 제거되거나 이의 소형 생검이 제거된다. 일부 구현예에서, 림프절 또는 이의 소형 생검이 제거된다. 일부 구현예에서, 폐 또는 간 전이성 병변, 또는 복강내 또는 흉부 림프절 또는 이의 소형 생검이 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 종양은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종에 대한 소형 생검은 점 또는 이의 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 펀치 생검이다. 일부 구현예에서, 펀치 생검은 피부에 압착된 원형 칼날로 수득된다. 일부 구현예에서, 펀치 생검은 의심스러운 점 주위의. 피부에 압착된 원형 칼날로 수득된다. 일부 구현예에서, 펀치 생검은 피부에 압착된 원형 칼날로 수득되고, 피부의 둥근 조각이 제거된다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 펀치 생검이고 종양의 둥근 부분이 제거된다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 절제 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절제 생검이고 전체 점 또는 성장물이 제거된다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절제 생검이고 전체 점 또는 성장물이 비정상적으로 보이는 피부의 작은 경계선을 따라 제거된다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 절개 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절개 생검이고 점 또는 성장물의 가장 불규칙한 부분만을 취한다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절개 생검이고 절개 생검은 의심스러운 점이 매우 큰 경우와 같이 다른 기술을 완료할 수 없는 경우에 사용된다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 폐 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 기관지경술(bronchoscopy)에 의해 수득된다. 일반적으로, 기관지경술, 환자를 마취하고, 일부 조직을 제거하는 데 사용된 작은 도구를 코 또는 입을 통해 목구멍 아래로 기관지 통로를 통해 둔다. 일부 구현예에서, 종양 또는 성장물이 기관지경술을 통해 도달할 수 없는 경우, 흉부경유 바늘 생검이 이용될 수 있다. 일반적으로, 흉부경유 바늘 생검의 경우, 환자를 또한 마취하고 바늘을 피부를 통해 의심스러운 지점으로 직접 삽입하여 작은 조직 샘플을 제거한다. 일부 구현예에서, 흉부경유 바늘 생검은 중재적 영상의학(예를 들어, 바늘을 안내하기 위한 x-선 또는 CT 스캔의 사용)을 필요로 할 수 있다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 바늘 생검에 의해 수득된다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 내시경 초음파(예를 들어, 발광체가 있는 현미경 및 입을 통해 식도로 넣음)로 수득된다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 외과적으로 수득된다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 두경부 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절개 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 작은 조직 조각은 비정상적으로 보이는 영역으로부터 절단된 절개 생검이다. 일부 구현예에서, 비정상적인 영역에 용이하게 접근하는 경우, 샘플은 입원하지 않고 취할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양이 입 또는 목구멍 내부의 더 깊은 곳에 있는 경우, 생검은 전신 마취로 수술실에서 수행되어야 할 수 있다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 절제 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 전체 부위가 제거된 절제 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 미세 바늘 흡인(FNA)이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 주사기에 부착된 매우 얇은 바늘을 사용하여 종양 또는 덩어리로부터 세포를 추출(흡인)하는 미세 바늘 흡인(FNA)이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 펀치 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 펀치 포셉을 사용하여 의심스러운 영역의 조작을 제거하는 펀치 생검이다.
일부 구현예에서, 소형 생검은 자궁경부 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 질경검사를 통해 수득된다. 일반적으로, 질경검사 방법는 확대 쌍안경(질경)에 부착된 조명 확대 기기 사용을 이용한 다음 자궁경부 표면의 작은 절편을 생검하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 원추절제/원추 생검이다. 일부 구현예에서, 소형 생검은 자궁경부로부터 큰 조직 조각을 제거하기 위해 외래환자 수술이 필요할 수 있는 원추절제/원추 생검이다. 일부 구현예에서, 원추 생검은 진단을 확인하는 데 도움을 주는 것 외에도, 원추 생검은 초기 치료로 역할을 할 수 있다.
용어 "고형 종양"은 일반적으로 낭종 또는 액체 부위를 함유하지 않는 비정상적인 조직 덩어리를 지칭한다. 고형 종양은 양성 또는 악성일 수 있다. 용어 "고형 종양 암은 악성, 신생물성, 또는 암성 고형 종양을 지칭한다. 고형 종양 암은 폐의 암을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비소세포 폐 암종(NSCLC)이다. 고형 종양의 조직 구조는 실질(암 세포) 및 암 세포가 분산되어 있고 지지 미세환경을 제공할 수 있는 지지 간질 세포를 포함한 상호의존적인 조직 구획을 포함한다.
일부 구현예에서, 종양으로부터의 샘플은 미세 바늘 흡인(FNA), 중심부 생검, 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로 수득된다. 일부 구현예에서, 샘플은 먼저 G-Rex 10에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 1 또는 2개의 중심부 생검 및/또는 소형 생검 샘플이 있는 경우 먼저 G-Rex 10에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 3, 4, 5, 6, 8, 9, 또는 10개 이상의 중심부 생검 및/또는 소형 생검 샘플이 있는 경우 먼저 G-Rex 100에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 3, 4, 5, 6, 8, 9, 또는 10개 이상의 중심부 생검 및/또는 소형 생검 샘플이 있는 경우 먼저 G-Rex 500에 배치된다.
FNA는 예를 들어, NSCLC를 포함한 폐 종양으로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, FNA는 비소세포 폐암(NSCLC) 환자의 폐 종양과 같은 폐 종양으로부터 수득된다. 일부 경우에, NSCLC 환자는 이전에 수술 치료를 겪었다.
본원에 기재된 TIL은 FNA 샘플로부터 수득될 수 있다. 일부 경우에, FNA 샘플은 18 게이지 바늘 내지 25 게이지 바늘 범위의 미세 게이지 바늘을 사용하여 환자로부터 수득되거나 단리된다. 미세 게이지 바늘은 18 게이지, 19 게이지, 20 게이지, 21 게이지, 22 게이지, 23 게이지, 24 게이지, 또는 25 게이지일 수 있다. 일부 구현예에서, 환자로부터의 FNA 샘플은 적어도 400,000개의 TIL, 예를 들어, 400,000개의 TIL, 450,000개의 TIL, 500,000개의 TIL, 550,000개의 TIL, 600,000개의 TIL, 650,000개의 TIL, 700,000개의 TIL, 750,000개의 TIL, 800,000개의 TIL, 850,000개의 TIL, 900,000개의 TIL, 950,000개의 TIL, 또는 그 이상을 함유할 수 있다.
일부 경우에, 본원에 기재된 TIL은 중심부 생검 샘플로부터 수득될 수 있다. 일부 경우에, 중심부 생검 샘플은 11 게이지 바늘 내지 16 게이지 바늘 범위의 외과용 또는 의료용 바늘을 사용하여 환자로부터 수득되거나 단리된다. 바늘은 11 게이지, 12 게이지, 13 게이지, 14 게이지, 15 게이지, 또는 16 게이지일 수 있다. 일부 구현예에서, 환자로부터의 중심부 생검 샘플은 적어도 400,000개의 TIL, 예를 들어, 400,000개의 TIL, 450,000개의 TIL, 500,000개의 TIL, 550,000개의 TIL, 600,000개의 TIL, 650,000개의 TIL, 700,000개의 TIL, 750,000개의 TIL, 800,000개의 TIL, 850,000개의 TIL, 900,000개의 TIL, 950,000개의 TIL, 또는 그 이상을 함유할 수 있다.
일반적으로, 수확된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "새로 수확된" 세포 집단이라고 한다.
일부 구현예에서, TIL은 종양 소화물로부터 수득되지 않는다. 일부 구현예에서, 고형 종양 중심부는 단편화되지 않는다.
일부 구현예에서, TIL은 종양 소화물로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 종양 소화물은 RPMI 1640, 2mM GlutaMAX, 10 mg/mL 젠타마이신, 30 U/mL DNase, 및 1.0 mg/mL 콜라게나제와 같으나 이에 제한되지 않는 효소 배지에서 인큐베이션 후, 기계적 해리(GentleMACS, 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotec)에 의해 생성되었다. 효소 배지에 종양을 배치한 후, 종양은 대략 1분 동안 기계적으로 해리될 수 있다. 그런 다음 용액은 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션된 다음 대략 1분 동안 다시 기계적으로 파괴될 수 있다. 30분 동안 37℃, 5% CO2에서 다시 인큐베이션한 후, 종양은 대략 1분 동안 세번째로 기계적으로 파괴될 수 있다. 일부 구현예에서, 세번째 기계적 파괴 후 큰 조직 조각이 존재하는경우, 37℃, 5% CO2에서 추가 30분 인큐베이션 여부에 관계 없이, 1 또는 2회 추가 기계적 해리가 샘플에 적용되었다. 일부 구현예에서, 마지막 인큐베이션 끝에 세포 현탁액이 다수의 적혈구 또는 죽은 세포를 함유하는 경우, Ficoll을 사용한 밀도 구배 분리를 수해하여 이들 세포가 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL의 제1 집단을 수득하는 것은 다중병변 샘플링 방법을 포함한다.
종양 해리 효소 혼합물은 콜라게나제(콜라게나제의 임의의 블렌드 또는 유형 포함), Accutase™, Accumax™, 히알루로니다제, 중성 프로테아제(디스파제), 키모트립신, 키모파파인, 트립신, 카제이나제, 엘라스타제, 파파인, 프로테아제 유형 XIV(프로나제), 데옥시리보뉴클레아제 I(DNase), 트립신 억제제, 임의의 다른 해리 또는 단백질분해 효소, 및 이의 임의의 조합과 같으나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 해리(소화) 효소를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 해리 효소는 동결건조된 효소로부터 재구성된다. 일부 구현예에서, 동결건조된 효소는 Hank의 균형잡힌 염 용액(HBSS)과 같은 멸균 완충액의 양으로 재구성된다.
일부 경우에, 콜라게나제(예컨대 무동물 유형 1 콜라게나제)는 10 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 2892 PZ U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 구현예에서, 콜라게나제는 5 mL 내지 15 mL 완충액에서 재구성된다. 일부 구현예에서, 재구성 후 콜라게나제 스톡은 약 100 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 예를 들어, 약 100 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL-약 350 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL-약 300 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL, 약 200 PZ U/mL, 약 210 PZ U/mL, 약 220 PZ U/mL, 약 230 PZ U/mL, 약 240 PZ U/mL, 약 250 PZ U/mL, 약 260 PZ U/mL, 약 270 PZ U/mL, 약 280 PZ U/mL, 약 289.2 PZ U/mL, 약 300 PZ U/mL, 약 350 PZ U/mL, 또는 약 400 PZ U/mL 범위이다.
일부 구현예에서 중성 프로테아제는 1 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 175 DMC U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 구현예에서, 재구성 후 중성 프로테아제 스톡은 약 100 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 예를 들어, 약 100 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL-약 350 DMC/mL, 약 100 DMC/mL-약 300 DMC/mL, 약 150 DMC/mL-약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL, 약 110 DMC/mL, 약 120 DMC/mL, 약 130 DMC/mL, 약 140 DMC/mL, 약 150 DMC/mL, 약 160 DMC/mL, 약 170 DMC/mL, 약 175 DMC/mL, 약 180 DMC/mL, 약 190 DMC/mL, 약 200 DMC/mL, 약 250 DMC/mL, 약 300 DMC/mL, 약 350 DMC/mL, 또는 약 400 DMC/mL 범위이다.
일부 구현예에서, DNAse I은 1 mL의 멸균 HBSS 또는 또 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 4 KU/바이알의 농도였다. 일부 구현예에서, 재구성 후 DNase I 스톡은 약 1 KU/mL 내지 10 KU/mL, 예를 들어, 약 1 KU/mL, 약 2 KU/mL, 약 3 KU/mL, 약 4 KU/mL, 약 5 KU/mL, 약 6 KU/mL, 약 7 KU/mL, 약 8 KU/mL, 약 9 KU/mL, 또는 약 10 KU/mL 범위이다.
일부 구현예에서, 효소 스톡은 변경될 수 있으므로 동결건조된 스톡의 농도를 확인하고 이에 따라 소화 칵테일에 첨가된 효소의 최종 양을 개정할 수 있다.
일부 구현예에서, 효소 혼합물은 약 4.7 mL의 멸균 HBSS 중에 약 10.2-ul의 중성 프로테아제(0.36 DMC U/mL), 21.3-ul의 콜라게나제(1.2 PZ/mL) 및 250-ul의 DNAse I(200 U/mL)를 포함한다.
2. 흉막 삼출액 T-세포 및 TIL
일부 구현예에서, 샘플은 흉막액 샘플이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 프로세스에 따른 확장을 위한 T-세포 또는 TIL의 공급원은 흉막액 샘플이다. 일부 구현예에서, 샘플은 흉막 삼출액 유래 샘플이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 프로세스에 따른 확장을 위한 T-세포 또는 TIL의 공급원은 흉막 삼출액 유래 샘플이다. 예를 들어, 미국 특허 공개 US 2014/0295426에 기재된 방법을 참고하며, 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, TIL이 의심되고/되거나 함유하는 임의의 흉막액 또는 흉막 삼출액이 이용될 수 있다. 이러한 샘플은 NSCLC 또는 SCLC와 같은 원발성 또는 전이성 폐암으로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 다른 기관, 예를 들어, 유방, 난소, 결장 또는 전립선으로부터 유래된 속발성 전이성 암 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 삼출액이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 여출액이다. 다른 생물학적 샘플은 예를 들어, 복부의 복수액 또는 췌장 낭종액을 포함한 TIL을 함유하는 다른 장액을 포함할 수 있다. 복수액 및 흉막액은 매우 유사한 화학 시스템을 수반하며; 복부 및 폐 모두 중피선을 갖고 악성종양에서 동일한 물질로 흉막강 및 복강에 유체를 형성하고 이러한 유체는 일부 구현예에서 TIL을 함유한다. 본 개시내용이 흉막액을 예시하는 일부 구현예에서, TIL을 함유하는 복수 또는 다른 낭종액을 사용한 동일한 방법을 수행하여 유사한 결과를 수득할 수 있다.
일부 구현예에서, 흉막액은 환자로부터 직접 제거된 미처리 형태이다. 일부 구현예에서, 미처리 흉막액은 접촉 단계 전에 EDTA 또는 헤파린 튜브와 같은 표준 혈액 수집 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 미처리 흉막액은 접촉 단계 전에 표준 CellSav® 튜브(Veridex)에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 생존가능한 TIL 수의 감소를 피하기 위해 환자로부터 수집한 직후 CellSave 튜브에 배치된다. 생존가능한 TIL 수는 처리되지 않은 흉막액에 방치되는 경우, 4℃에서도 24시간 내에 상당한 정도로 감소할 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 환자로부터 제거된 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 샘플은 4℃에서 환자로부터 제거된 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다.
일부 구현예에서, 선택된 대상체로부터의 흉막액 샘플은 희석될 수 있다. 하나의 구현예에서, 희석은 1:10 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:9 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:8 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:5 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:2 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 구현예에서, 희석은 1:1 흉막액 대 희석제이다. 일부 구현예에서, 희석제는식염수, 포스페이트 완충 식염수, 또 다른 완충액 또는 생리학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 샘플은 처리되지 않은 흉막액에 남아 있는 경우, 4℃에서도 24-48시간 이내에 상당한 정도로 발생할 수 있는 생존가능한 TIL의 감소를 피하기 위해 환자로부터 수집 및 희석한 직후 CellSave 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 환자로부터 제거 및 희석 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 4℃에서 환자로부터 제거 및 희석 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다.
또한 또 다른 구현예에서, 흉막액 샘플은 추가 처리 단계 전에 통상적인 수단에 의해 농축된다. 일부 구현예에서, 흉막액의 이러한 전처리는 흉막액이 방법을 수행하는 실험실로의 수송 또는 나중 분석을 위해(예를 들어, 수집 후 24-48시간 이후) 동결보존되어야 하는 상황에서 바람직하다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 흉막액 샘플을 대상체로부터 채취한 후 원심분리하고 원심분리액 또는 펠릿을 완충액에 재현탁함으로써 제조된다. 일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 수송 또는 나중 분석 및/또는 처리를 위해 동결보존되기 전에 다수의 원심분리 및 재헌탁을 거친다.
일부 구현예에서, 흉막액 샘플은 여과 방법을 사용하여 추가 처리 단계 전에 농축된다. 일부 구현예에서, 접촉 단계에서 사용되는 흉막액 샘플은 흉막액이 막을 통해 통과하도록 허용하지만 종양 세포는 남아있는 알려지고 본질적으로 균일한 기공 크기를 함유하는 필터를 통해 유체를 여과함으로서 제조된다. 일부 구현예에서, 막의 기공 직경은 적어도 4 μM일 수 있다. 또 다른 구현예에서 기공 직경은 5 μM 이상, 다른 구현예에서, 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM 중 임의의 것일 수 있다. 여과 후, 막에 남은 TIL을 포함한 세포는 막에서 적합한 생리학적으로 허용되는 완충액으로 헹굴 수 있다. 그런 다음 이 방식으로 농축된 TIL을 포함하는 세포를 방법의 접촉 단계에서 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 흉막액 샘플(예를 들어, 처리되지 않은 흉막액 포함), 희석된 흉막액, 또는 재현탁된 세포 펠릿은 샘플에 존재하는 비-유핵 적혈구를 차등적으로 용해하는 용해 시약과 접촉된다. 일부 구현예에서, 이 단계는 흉막액이 상당한 수의 RBC를 함유하는 상황에서 추가 처리 단계 전에 수행된다. 적합한 용해 시약은 단일 용해 시약 또는 용해 시약 및 급랭 시약, 또는 용해제, 급랭 시약 및 고정 시약을 포함한다. 적합한 용해 시스템은 상업적으로 시판되며 BD Pharm Lyse™ 시스템(Becton Dickenson)을 포함한다. 다른 용해 시스템은 Versalyse™ 시스템, FACSlyse™ 시스템(Becton Dickenson), Immunoprep™ 시스템 또는 Erythrolyse II 시스템(Beckman Coulter, Inc.), 또는 염화암모늄 시스템을 포함한다. 일부 구현예에서, 용해 시약은 적혈구의 효율적인 용해, 및 흉막액에서 TIL 및 TIL 표현형 특성의 보존이라는 주요 요건에 따라 달라질 수 있다. 용해용 단일 시약을 이용하는 것 외에도, 본원에 기재된 방법에 유용한 용해 시스템은 제2 시약, 예를 들어, 방법의 나머지 단계 동안 용해 시약의 효과를 억제하거나 지연시키는 것, 예를 들어, Stabilyse™ 시약(Beckman Coulter, Inc.)을 포함할 수 있다. 통상적인 고정 시약은 또한 용해 시약의 선택 또는 바람직한 방법 구현에 따라 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 본원에 기재된 바와 같이 미처리, 희석 또는 다중 원심분리 또는 처리된 흉막액 샘플은 본원에 게공된 바와 같이 추가로 처리되고/되거나 확장되기 전에 약 -140℃의 온도에서 동결보존된다.
3. 말초 혈액으로부터 말초 혈액 림프구(PBL)를 확장하는 방법
PBL 방법 1. 본 발명의 구현예에서, PBL은 본원에 기재된 프로세스를 사용하여 확장된다. 본 발명의 구현예에서, 방법은 전혈로부터 PBMC 샘플을 수득하는 것을 포함한다. 구현예에서, 방법은 비-CD19+ 분획의 음성 선택을 사용하여 PBMC로부터 순수한 T-세포를 단리함으로써 T-세포를 풍부화하는 것을 포함한다. 구현예에서, 방법은 비-CD19+ 분획의 자기 비드-기반 음성 선택을 사용하여 PBMC로부터 순수한 T-세포를 단리함으로써 T-세포를 풍부화하는 것을 포함한다.
본 발명의 구현예에서, PBL 방법 1은 다음과 같이 수행된다: 0일차에, 동결보존된 PBMC 샘플을 해동하고 PBMC를 계수한다. T-세포를 인간 Pan T-세포 단리 키트 및 LS 컬럼(Miltenyi Biotec)을 사용하여 분리한다.
PBL 방법 2. 본 발명의 구현예에서, PBL은 전혈로부터 PBMC 샘플을 수득하는 것을 포함하는 PBL 방법 2를 사용하여 확장된다. PBMC의 T-세포는 PBMC를 적어도 3시간 동안 37℃에서 인큐베이션한 다음 비부착 세포를 단리함으로써 풍부화된다.
본 발명의 구현예에서, PBL 방법 2는 다음과 같이 수행된다: 0일차에, 동결보존된 PMBC 샘플을 해동하고 PBMC 세포를 CM-2 배지를 함유하는 6 웰 플레이트에 웰 당 600만개 세포로 시딩하고 3시간 동안 37℃에서 인큐베이션한다. 3시간 후, PBL인 비부착 세포를 제거하고 계수한다.
PBL 방법 3. 본 발명의 구현예에서, PBL은 말초 혈액으로부터 PBMC 샘플을 수득하는 것을 포함하는 PBL 방법 3을 사용하여 확장된다. B-세포는 CD19+ 선택을 사용하여 단리되고 T-세포는 PBMC 샘플의 비-CD19+ 분획의 음성 선택을 사용하여 선택된다.
본 발명의 구현예에서, PBL 방법 3은 다음과 같이 수행된다: 0일차에, 말초 혈액으로부터 유래된 동결보존된 PBMC를 해동하고 계수한다. CD19+ B-세포는 CD19 Multisort Kit, Human(Miltenyi Biotec)을 사용하여 분류한다. 비-CD19+ 세포 분획 중, T-세포는 인간 Pan T-세포 단리 키트 및 LS 컬럼(Miltenyi Biotec)을 사용하여 정제한다.
구현예에서, PBMC는 전혈 샘플로부터 단리된다. 구현예에서, PBMC 샘플은 PBL을 확장시키는 출발 물질로서 사용된다. 구현예에서, 샘플은 확장 프로세스 전에 동결보존된다. 또 다른 구현예에서, 새로운 샘플은 PBL을 확장시키는 출발 물질로서 사용된다. 본 발명의 구현예에서, T-세포는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 PBMC로부터 단리된다. 구현예에서, T-세포는 인간 Pan T-세포 단리 키트 LS 컬럼을 사용하여 단리된다. 본 발명의 구현예에서, T-세포는 당업계에 알려진 항체 선택 방법, 예를 들어, CD19 음성 선택을 사용하여 PBMC로부터 단리된다.
본 발명의 구현예에서, PBMC 샘플은 비부착 세포를 식별하는 데 효과적인 원하는 온도에서 일정 기간 동안 배양된다. 본 발명의 구현예에서, 배양 시간은 약 3시간이다. 본 발명의 구현예에서, 온도는 약 37℃이다. 그런 다음 비부착 세포는 상기 기재된 프로세스를 사용하여 확장된다.
일부 구현예에서, PBMC 샘플은 임의적으로 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료된 대상체 또는 환자로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양 샘플은 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료된 대상체 또는 환자로부터 유래된다. 일부 구현예에서, PBMC 샘플은 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료되며, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 또는 1년 또는 그 이상 동안 치료를 겪은 대상체 또는 환자로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, PBMC는 현재 이브루티닙(ibrutinib)과 같은 ITK 억제제 레지멘을 받고 있는 환자로부터 유래된다.
일부 구현예에서, PBMC 샘플은 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료받았고 키나제 억제제 또는 ITK 억제제, 예컨대 이브루티닙을 사용한 치료에 불응성인 대상체 또는 환자로부터 유래된다.
일부 구현예에서, PBMC 샘플은 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료받았지만 더 이상 키나제 억제제 또는 ITK 억제제로의 치료를 겪지 않는 대상체 또는 환자로부터 유래된다. 일부 구현예에서, PBMC 샘플은 키나제 억제제 또는 ITK 억제제를 포함하는 레지멘으로 사전 치료되었지만 더 이상 키나제 억제제 또는 ITK 억제제로의 치료를 겪지 않고 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 또는 적어도 1년 또는 그 이상 동안 치료를 겪지 않은 대상체 또는 환자로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, PBMC는 이전에 ITK 억제제에 노출되었지만, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 또는 적어도 1년 내에 치료를 받지 않은 환자로부터 유래된다.
본 발명의 구현예에서, 0일차에, 세포는 CD19+에 대해 선택되고 이에 따라 저장된다. 본 발명의 구현예에서, 선택은 항체 결합 비드를 사용하여 이루어진다. 본 발명의 구현예에서, 순수한 T-세포는 PBMC로부터 0일차에 단리된다.
본 발명의 구현예에서, 이브루티닙 또는 다른 ITK 억제제로 사전 치료되지 않은 환자의 경우, 10-15 mL의 버피 코트(Buffy Coat)는 약 5x109개의 PBMC를 생성할 것이며, 차례로 약 5.5x107개의 PBL을 생성할 것이다.
본 발명의 구현예에서, 이브루티닙 또는 다른 ITK 억제제로 사전 치료된 환자의 경우, 확장 프로세스는 약 20x109개의 PBL을 생성할 것이다. 본 발명의 구현예에서, 40.3x106개의 PBMC는 약 4.7x105개의 PBL을 생성할 것이다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, PBMC는 전혈 샘플로부터, 성분채집술에 의해, 버피 코트로부터, 또는 PBMC를 수득하기 위해 당업계에 알려진 임의의 다른 방법으로부터 유래될 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, PBL은 본원에 기재된 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, PBL은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0347350 A1에 기재된 방법을 사용하여 제조되며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
4. 골수에서 유래된 PBMC로부터 골수 침윤 림프구(MIL)를 확장하는 방법
MIL 방법 3. 본 발명의 구현예에서, 방법은 골수로부터 PBMC를 수득하는 것을 포함한다. 0일차에, PBMC를 CD3+/CD33+/CD20+/CD14+에 대해 선택하고 분류하고, 비-CD3+/CD33+/CD20+/CD14+ 세포 분획을 초음파처리하고 초음파처리된 세포 분획의 일부를 선택된 세포 분획에 다시 추가한다.
본 발명의 구현예에서, MIL 방법 3은 다음과 같이 수행된다: 0일차에, PBMC의 동결보존된 샘플을 해동하고 PBMC를 계수한다. 세포를 CD3, CD33, CD20, 및 CD14 항체로 염색하고 분류된 S3e 세포(Bio-Rad)를 사용하여 분류한다. 세포를 2개 분획, 즉, 면역 세포 분획(또는 MIL 분획)(CD3+CD33+CD20+CD14+) 및 AML 모세포 분획(비-CD3+CD33+CD20+CD14+)으로 분류한다.
본 발명의 구현예에서, PBMC는 골수로부터 수득된다. 구현예에서, PBMC는 성분채집술, 흡인, 바늘 생검, 또는 당업계에 알려진 다른 유사한 수단을 통해 골수로부터 수득된다. 구현예에서, PBMC는 새로운 것이다. 또 다른 구현예에서, PBMC는 동결보존된다.
본 발명의 구현예에서, MIL은 10-50 mL의 골수 흡인물로부터 확장된다. 본 발명의 구현예에서, 10 mL의 골수 흡인물은 환자로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 20 mL의 골수 흡인물은 환자로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 30 mL의 골수 흡인물은 환자로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 40 mL의 골수 흡인물은 환자로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 50 mL의 골수 흡인물은 환자로부터 수득된다.
본 발명의 구현예에서, 약 10-50 mL의 골수 흡인물로부터 생성된 PBMC 수는 약 5x107개 내지 약 10x107개의 PBMC이다. 또 다른 구현예에서, 생성된 PMBC 수는 약 7x107개의 PBMC이다.
본 발명의 구현예에서, 약 5x107개 내지 약 10x107개의 PBMC는 약 0.5x106개 내지 약 1.5x106개의 MIL을 생성한다. 본 발명의 구현예에서, 약 1x106개의 MIL이 생성된다.
본 발명의 구현예에서, 골수 흡인물로부터 유래된 12x106개의 PBMC는 대략 1.4x105개의 MIL을 생성한다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, PBMC는 전혈 샘플로부터, 골수로부터, 성분채집술에 의해, 버피 코트로부터, 또는 PBMC를 수득하기 위해 당업계에 알려진 임의의 다른 방법으로부터 유래될 수 있다.
전술한 구현예 중 임의의 것에서, MIL은 본원에 기재된 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, MIL은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0347350 A1에 기재된 방법을 사용하여 제조되며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
B. 단계 B: 프라이밍 제1 확장
일부 구현예에서, 본 방법은 오래된 TIL(즉, 대상체/환자에게 투여하기 전에 더 많은 복제 라운드를 추가로 겪은 TIL)에 비해 추가 치료 이점을 제공할 수 있는 더 젊은 TIL에 대한 것을 제공한다. 젊은 TIL의 특징은 문헌, 예를 들어 Donia, 등, Scand. J. Immunol. 2012, 75, 157-167; Dudley, 등, Clin. Cancer Res. 2010, 16, 6122-6131; Huang, 등, J. Immunother. 2005, 28, 258-267; Besser, 등, Clin. Cancer Res. 2013, 19, OF1-OF9; Besser, 등, J. Immunother. 2009, 32, 415-423; Robbins, 등, J. Immunol. 2004, 173, 7125-7130; Shen, 등, J. Immunother., 2007, 30, 123-129; Zhou, 등, J. Immunother. 2005, 28, 53-62; 및 Tran, 등, J. Immunother., 2008, 31, 742-751에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
예를 들어 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 A에 기재된 바와 같이, 종양 단편 및/또는 종양 단편의 절개 또는 소화 후, 생성된 세포를 종양 및 다른 세포에 비해 TIL의 성장을 선호하는 조건 하에 IL-2, OKT-3, 및 영양 세포(예를 들어, 항원 제시 영양 세포)를 함유하는 혈청에서 배양한다. 일부 구현예에서, IL-2, OKT-3, 및 영양 세포를 종양 소화물 및/또는 종양 단편과 함께 배양 개시 시(예를 들어, 0일차에) 첨가한다. 일부 구현예에서, 종양 소화물 및/또는 종양 단편을 용기 당 최대 60개 단편 및 6000 IU/mL의 IL-2를 함유하는 용기에서 인큐베이션한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단을 일정 기간, 일반적으로 1 내지 8일 동안 배양하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단을 일정 기간, 일반적으로 1 내지 7일 동안 배양하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 1 내지 8일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 1 내지 7일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 5 내지 8일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 5 내지 7일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 약 6 내지 8일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 약 6 내지 7일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 약 7 내지 8일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 약 7일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 이 프라이밍 제1 확장은 약 8일의 기간 동안 발생하여, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 x 108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다.
바람직한 구현예에서, TIL 확장은 아래 및 본원에 기재된 바와 같은 프라이밍 제1 확장 단계(예를 들어 예컨대 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 이는 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 프로세스를 포함할 수 있고 0일차 및/또는 배양 개시로부터 영양 세포를 함유함)를 사용한 후, 아래에 단계 D 하에 본원에 기재된 바와 같은 급속 제2 확장(단계 D, 급속 확장 프로토콜(REP) 단계로 언급된 프로세스 포함)을 사용한 후, 임의적 동결보존 후, 아래 및 본원에 기재된 바와 같은 제2 단계 D(재자극 REP 단계로 언급된 프로세스 포함)를 사용하여 수행된다. 이 프로세스로부터 수득된 TIL은 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 표현형 특성 및 대사 매개변수에 대해 특성화될 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다.
일부 구현예에서, 제1 확장 배양 매질은 배양 배지에 대한 약어인 "CM"로 언급된다. 일부 구현예에서, 단계 B에 대한 CM은 10% 인간 AB 혈청, 25 mM Hepes, 및 10 mg/mL 젠타마이신이 보충된 GlutaMAX를 함유하는 RPMI 1640으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 240개 이하의 종양 단편이 존재한다. 일부 구현예에서, 4개 이하의 용기에 배치된 240개 이하의 종양 단편이 존재한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 60개 이하의 종양 단편이 1개의 용기에 배치된다. 일부 구현예에서, 각 용기는 용기 당 500 mL 이하의 배지를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 6000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 항원 제시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 30 ng/mL의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 배지는 6000 IU/mL의 IL-2, 30 ng의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 6000 IU/mL의 IL-2, 30 ng/mL의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다.
종양 단편의 제조 후, 생성된 세포(즉, 1차 세포 집단인 단편)는 종양 및 다른 세포에 비해 TIL의 성장을 선호하는 조건 하에 IL-2, 항원 제시 영양 세포 및 OKT-3를 함유하는 배지에서 배양되며 이는 0일차에 배양 개시로부터 TIL 프라이밍 및 가속화된 성장을 허용한다. 일부 구현예에서, 종양 소화물 및/또는 종양 단편은 6000 IU/mL의 IL-2, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포 및 OKT-3과 함께 인큐베이션된다. 이 1차 세포 집단는 일정 기간, 일반적으로 1 내지 8일 동안 배양되어, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1x108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 성장 배지는 IL-2 또는 이의 변이체, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포 및 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 이 1차 세포 집단은 일정 기간, 일반적으로 1 내지 7일 동안 배양되어, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1x108개의 벌크 TIL 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 성장 배지는 IL-2 또는 이의 변이체, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포 및 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2는 재조합 인간 IL-2(rhIL-2)이다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20-30x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 25x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서 IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 30x106 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 4-8x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 5-7x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL- 2 스톡 용액은 6x106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, IL-2 스톡 용액은 실시예 C에 기재된 바와 같이 제조된다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 10,000 IU/mL의 IL-2, 약 9,000 IU/mL의 IL-2, 약 8,000 IU/mL의 IL-2, 약 7,000 IU/mL의 IL-2, 약 6000 IU/mL의 IL-2 또는 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 9,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 8,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 7,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15, 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL-21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 및 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 15 ng/mL 내지 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, OKT-3 항체는 무로모납이다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 세포 배양 매질에 하나 이상의 TNFRSF 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제이고, 4-1BB 작용제는 우렐루맙, 우토밀루맙, EU-101, 융합 단백질, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 바이오시밀러, 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL의 세포 배양 매질 내 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 20 μg/mL 내지 40 μg/mL의 세포 배양 매질 내 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 TNFRSF 작용제 외에도, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 TNFRSF 작용제 외에도, 프라이밍 제1 확장 세포 배양 매질은 약 6000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 매질은 배양 배지에 대한 약어인 "CM"으로 언급된다. 일부 구현예에서, CM1(배양 매질 1)로 언급된다. 일부 구현예에서, CM은 10% 인간 AB 혈청, 25 mM Hepes, 및 10 mg/mL 젠타마이신이 보충된 GlutaMAX를 함유하는 RPMI 1640으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CM은 실시예에 기재된 CM1이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 초기 세포 배양 매질 또는 제1 세포 배양 매질에서 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 배양 매질 또는 초기 세포 배양 매질 또는 제1 세포 배양 매질은 IL-2, OKT-3 및 항원 제시 영양 세포(본원에서 영양 세포로도 언급됨)를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 확장 프로세스에 사용되는 배양 매질은 무혈청 매질 또는 한정된 매질이다. 일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 기저 세포 매질 및 혈청 보충물 및/또는 혈청 대체물을 포함한다. 일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 부분적으로 혈청-함유 배지의 로트간 변경으로 인해 실험적 변경을 방지 및/또는 감소시키는 데 사용된다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 기저 세포 매질 및 혈청 보충물 및/또는 혈청 대체물을 포함한다. 일부 구현예에서, 기저 세포 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM, CTS™ AIM-V 매질, CTS™ AIM-V SFM, LymphoONE™ T-세포 확장 Xeno-Free 매질, 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 혈청 보충물 또는 혈청 대체물은 CTS™ OpTmizer T-세포 확장 혈청 보충물, CTS™ 면역 세포 혈청 대체물, 하나 이상의 알부민 또는 알부민 치환체, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 하나 이상의 항생제, 및 하나 이상의 미량 요소 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 및 글리신, L- 히스티딘, L-이소류신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L- 하이드록시프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신, L-발린, 티아민, 환원된 글루타티온, L-아스코르브산-2-포스페이트, 철 포화 트랜스페린, 인슐린, 및 미량 요소 모이어티 Ag+, Al3+, Ba2+, Cd2+, Co2+, Cr3+, Ge4+, Se4+, Br, T, Mn2+, P, Si4+, V5+, Mo6+, Ni2+, Rb+, Sn2+ 및 Zr4+를 함유하는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 L-글루타민, 중탄산나트륨 및/또는 2-메르캅토에탄올을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 면역 세포 혈청 대체물은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM, CTS™ AIM-V 매질, CST™ AIM-V SFM, LymphoONE™ T-세포 확장 Xeno-Free 매질, 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질을 포함하나 이에 제한되지 않는 통상적인 성장 배지와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질 내 총 혈청 대체물 농도(vol%)는 총 무혈청 또는 한정된 매질의 부피 기준 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 3%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 5%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 10%이다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM(ThermoFisher Scientific)이다. CTS™ OpTmizer™의 임의의 제형이 본 발명에서 유용하다. CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 1 L CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질 및 26 mL CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물의 조합이며, 사용 전에 함께 혼합된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 55mM의 2-메르캅토에탄올과 함께 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충되고 배지 내 2-메르캅토에탄올의 최종 농도는 55μM이다.
일부 구현예에서, 한정된 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM(ThermoFisher Scientific)이다. CTS™ OpTmizer™의 임의의 제형이 본 발명에 유용하다. CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 1 L CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질 및 26 mL CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물의 조합이며, 사용 전에 함께 혼합된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 55mM의 2-메르캅토에탄올과 함께 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충되고 배지 내 2-메르캅토에탄올의 최종 농도는 55μM이다.
일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 0.1 mM 내지 약 10mM, 0.5 mM 내지 약 9 mM, 1 mM 내지 약 8 mM, 2 mM 내지 약 7 mM, 3 mM 내지 약 6 mM, 또는 4 mM 내지 약 5 mM의 농도로 글루타민(즉, GlutaMAX®)이 보충된다. 일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 2 mM의 농도로 글루타민(즉, GlutaMAX®)이 보충된다.
일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 5 mM 내지 약 150 mM, 10 mM 내지 약 140 mM, 15 mM 내지 약 130 mM, 20 mM 내지 약 120 mM, 25 mM 내지 약 110 mM, 30 mM 내지 약 100 mM, 35 mM 내지 약 95 mM, 40 mM 내지 약 90 mM, 45 mM 내지 약 85 mM, 50 mM 내지 약 80 mM, 55 mM 내지 약 75 mM, 60 mM 내지 약 70 mM, 또는 약 65 mM의 농도로 2-메르캅토에탄올이 보충된다. 일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 55 mM의 농도로 2-메르캅토에탄올이 보충된다. 일부 구현예에서, 배지 내 2-메르캅토에탄올의 최종 농도는 55 μM이다.
일부 구현예에서, 본원에 참조로 포함된 국제 PCT 공개 번호 WO/1998/030679에 기재된 한정된 배지가 본 발명에 유용하다. 해당 간행물에는, 무혈청 진핵생물 세포 배양 배지가 기재되어 있다. 무혈청 진핵생물 세포 배양 매질은 무혈청 배양물에서 세포의 성장을 지지할 수 있는 무혈청 보충물이 보충된 기저 세포 배양 매질을 포함한다. 무혈청 진핵생물 세포 배양 매질 보충물은 하나 이상의 알부민 또는 알부민 치환체, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 하나 이상의 미량 요소, 및 하나 이상의 항생제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하거나 조합함으로써 수득된다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 L-글루타민, 중탄산나트륨 및/또는 베타-메르캅토에탄올을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 또는 알부민 치환체 및 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 및 하나 이상의 미량 요소로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 및 글리신, L- 히스티딘, L-이소류신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L- 하이드록시프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신, L-발린, 티아민, 환원된 글루타티온, L-아스코르브산-2-포스페이트, 철 포화 트랜스페린, 인슐린, 및 미량 요소 모이어티 Ag+, Al3+, Ba2+, Cd2+, Co2+, Cr3+, Ge4+, Se4+, Br, T, Mn2+, P, Si4+, V5+, Mo6+, Ni2+, Rb+, Sn2+ 및 Zr4+를 함유하는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 기저 세포 배지는 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 한정된 매질 내 글리신의 농도는 약 5-200 mg/L 범위이고, L- 히스티딘의 농도는 약 5-250 mg/L이고, L-이소류신의 농도는 약 5-300 mg/L이고, L-메티오닌의 농도는 약 5-200 mg/L이고, L-페닐알라닌의 농도는 약 5-400 mg/L이고, L-프롤린의 농도는 약 1-1000 mg/L이고, L- 하이드록시프롤린의 농도는 약 1-45 mg/L이고, L-세린의 농도는 약 1-250 mg/L이고, L-트레오닌의 농도는 약 10-500 mg/L이고, L-트립토판의 농도는 약 2-110 mg/L이고, L-티로신의 농도는 약 3-175 mg/L이고, L-발린의 농도는 약 5-500 mg/L이고, 티아민의 농도는 약 1-20 mg/L이고, 환원된 글루타티온의 농도는 약 1-20 mg/L이고, L-아스코르브산-2-포스페이트의 농도는 약 1-200 mg/L이고, 철 포화 트랜스페린의 농도는 약 1-50 mg/L이고, 인슐린의 농도는 약 1-100 mg/L이고, 아셀레늄산나트륨의 농도는 약 0.000001-0.0001 mg/L이고, 알부민(예를 들어, AlbuMAX® I)의 농도는 약 5000-50,000 mg/L이다.
일부 구현예에서, 한정된 매질 내 비미량 원소 모이어티 성분은 아래 표 4의 제목 "1X 매질 내 농도 범위" 아래 열에 나열된 농도 범위로 존재한다. 다른 구현예에서, 한정된 매질 내 비미량 원소 모이어티 성분은 아래 표 4의 제목 "1X 매질의 바람직한 구현예" 아래 열에 나열된 최종 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, 한정된 매질은 무혈청 보충물을 포함하는 기저 세포 매질이다. 이들 구현예 중 일부에서, 무혈청 보충물은 아래 표 4의 제목 "보충물 내 바람직한 구현예" 아래 열에 나열된 농도 및 유형의 비미량 모이어티 성분을 포함한다.
표 4. 비미량 원소 모이어티 성분의 농도
일부 구현예에서, 한정된 매질의 삼투압 농도는 약 260 내지 350 mOsmol을 포함한다. 일부 구현예에서, 삼투압 농도는 약 280 내지 310 mOsmol이다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 최대 약 3.7 g/L, 또는 약 2.2 g/L 중탄산나트륨이 보충된다. 한정된 매질은 L-글루타민(최종 농도 약 2 mM), 하나 이상의 항생제, 비필수 아미노산(NEAA; 최종 농도 약 100 μM), 2-메르캅토에탄올(최종 농도 약 100 μM)이 추가로 보충될 수 있다.
일부 구현예에서, 개시내용이 본원에 참조로 포함된 Smith, 등, Clin. Transl. Immunology, 2015, 4(1), e31에 기재된 한정된 배지가 본 발명에 유용하다. 간단히 말해서, RPMI 또는 CTS™ OpTmizer™이 기저 세포 매질로서 사용되고, 0, 2%, 5%, 또는 10% CTS™ 면역 세포 혈청 대체물이 보충되었다.
구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 매질은 여과되지 않는다. 여과되지 않은 세포 매질의 사용은 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 단순화할 수 있다. 구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 매질은 베타-메르캅토에탄올(BME 또는 βME; 2-메르캅토에탄올로도 알려짐, CAS 60-24-2)이 결여되어 있다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이 1 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 2 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 3 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이 4 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이 1 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 2 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 2 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 3 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 3 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스 4 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 4 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 5 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 5 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 6 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 6 내지 7일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 제공된 것들와 같은 프로세스 포함) 프로세스는 7 내지 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 제공된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 8일이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어 때때로 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들을 포함할 수 있는, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 제공된 것들과 같은 프로세스 포함) 프로세스는 7일이다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 1일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 1일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 2일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 2일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 3일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 3일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 4일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 4일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 5일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 5일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 6일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 6일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 7 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 TIL 확장은 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 7일 동안 진행될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL의 프라이밍 제1 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 1일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 1일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 2일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 2일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 3일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 3일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 4일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 4일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 5일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 5일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 6일 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 6일 내지 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 7 내지 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 TIL 확장은 7일 동안 진행될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21의 조합은 프라이밍 제1 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따를 뿐만 아니라 본원에 기재된 단계 B 프로세스 동안을 포함하여 프라이밍 제1 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 프라이밍 제1 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따르고 본원에 기재된 바와 같은 단계 B 프로세스 동안 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따른 단계 B는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기는 용기로 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-100이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-10이다.
1. 영양 세포 및 항원 제시 세포
구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 1(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 4-8일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 4-7일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 5-8일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 5-7일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 6-8일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 6-7일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 7 또는 8일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 7일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다. 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 하지 않지만, 오히려 8일 동안 임의의 시간에 프라이밍 제1 확장 동안 첨가된다
구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b)의 단계 B에 기재된 것들, 뿐만 아니라 pre-REP 또는 프라이밍 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 TIL 확장 개시 시 및 프라이밍 제1 확장 동안 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 동종이계 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다. 일부 구현예에서, 2.5 x 108개의 영양 세포가 프라이밍 제1 확장 동안 사용된다. 일부 구현예에서, 용기 당 2.5 x 108개의 영양 세포가 프라이밍 제1 확장 동안 사용된다. 일부 구현예에서, GREX-10 당 2.5 x 108개의 영양 세포가 프라이밍 제1 확장 동안 사용된다. 일부 구현예에서, GREX-100 당 2.5 x 108개의 영양 세포가 프라이밍 제1 확장 동안 사용된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 조사한 동종이계 PBMC의 복제 무능력을 평가하기 위한 예시적인 프로토콜을 제공하는 실시예에 기재된 바와 같은 REP 절차에 사용된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 14일차에 생존가능한 세포의 총 수가 프라이밍 제1 확장의 0일차 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수보다 적은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에서 사용하기에 허용가능하다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 프라이밍 제1 확장의 0일차 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가하지 않은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기에 허용가능하다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 프라이밍 제1 확장의 0일차 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가하지 않은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기에 허용가능하다. 일부 구현예에서, PBMC는 5-60 ng/mL OKT3 항체 및 1000-6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 10-50 ng/mL OKT3 항체 및 2000-5000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 20-40 ng/mL OKT3 항체 및 2000-4000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 25-35 ng/mL OKT3 항체 및 2500-3500 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 15 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 15 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 PBMC이다. 일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 인공 항원 제시 영양 세포이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 50 내지 1 대 300이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 100 내지 1 대 200이다.
구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차는 약 2.5 x 108개의 영양 세포 대 약 100 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차는 약 2.5 x 108개의 영양 세포 대 약 50 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장은 약 2.5 x 108개의 영양 세포 대 약 25 x 106개의 TIL을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장은 약 2.5 x 108개의 영양 세포를 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 급속 제2 확장에 사용된 수의 1/4, 1/3, 5/12, 또는 1/2를 필요로 한다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 6000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 용기 당 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 30 ng의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 배지는 6000 IU/mL의 IL-2, 30 ng/mL의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 6000 IU/mL의 IL-2, 30 ng/mL의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포 당 500 mL의 배양 매질 및 15 μg의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 500 mL의 배양 매질 및 15 μg의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 배지는 500 mL의 배양 매질, 6000 IU/mL의 IL-2, 30 ng/mL의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 500 mL의 배양 매질, 6000 IU/mL의 IL-2, 15 μg의 OKT-3, 및 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 2.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포 당 500 mL의 배양 매질 및 15 μg의 OKT-3을 포함한다.
구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장 절차는 제2 확장 동안 TIL에 비해 과잉 영양 세포를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 동종이계 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다. 구현예에서, 인공 항원 제시(aAPC) 세포는 PBMC 대신에 사용된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 도면 및 실시예에 기재된 예시적인 절차를 포함하여 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용된다.
구현예에서, 인공 항원 제시 세포는 PBMC를 대체하거나, 이와 조합하여 프라이밍 제1 확장에 사용된다.
2. 사이토카인 및 다른 첨가제
본원에 기재된 확장 방법은 일반적으로 당업계에 알려진 바와 같이 고용량의 사이토카인, 특히 IL-2를 함유하는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0107490 A1에 기재된 바와 같이 IL-2, IL-15 및 IL-21 중 2개 이상의 조합을 사용하여 TIL의 프라이밍 제1 확장을 위해 사이토카인의 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 가능한 조합은 IL-2와 IL-15, IL-2와 IL-21, IL-15와 IL-21, 및 IL-2, IL-15와 IL-21을 포함하며, 후자는 많은 구현예에서 특히 사용된다. 사이토카인 조합의 사용은 본원에 기재된 바와 같은 림프구, 및 특히 T-세포의 생성을 특이적으로 선호한다.
구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OKT-3 항체 또는 무로모납을 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 4-1BB 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OX-40 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 게다가, 티아졸리딘디온 화합물과 같은 증식인자-활성화 수용체(PPAR)-감마 작용제를 포함하는 퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 감마 보조활성인자 I-알파 작용제와 같은 첨가제가 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0307796 A1에 기재된 바와 같이 단계 B 동안 배양 배지에 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
C. 단계 C: 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이
일부 경우에, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 표시된 바와 같이 단계 B에서 수득된 예를 들어 TIL 집단을 포함하여, 프라이밍 제1 확장(때때로 pre-REP로 언급되는 확장을 포함할 수 있음)에서 수득된 벌크 TIL 집단은 급속 제2 확장(때때로 급속 확장 프로토콜(REP)로 언급되는 확장을 포함할 수 있음)을 거친 다음 아래에 논의된 바와 같이 동결보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우에, 프라이밍 제1 확장에서 확장된 TIL 집단 또는 급속 제2 확장에서 확장된 TIL 집단은 확장 단계 전 또는 프라이밍 제1 확장 후 및 급속 제2 확장 전에 적합한 치료를 위해 유전적 변형을 거칠 수 있다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)에 표시된 바와 같은 단계 B)에서 수득된 TIL은 선택을 위해 표현형이 결정될 때까지 저장된다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장(예를 들어, 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)에 표시된 바와 같은 단계 B)에서 수득된 TIL은 저장되지 않고 급속 제2 확장으로 직접 진행된다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 수득된 TIL은 프라이밍 제1 확장 후 및 급속 제2 확장 전에 동결보존되지 않는다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 종양 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 2일, 3일, 4,일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 3일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 3일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 4일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 4일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 5일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 5일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 6일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 6일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 7일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 약 8일에 발생한다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 1일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 1일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 2일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 2일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 3일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 3일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 4일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 4일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 5일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 5일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 6일 내지 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 6일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 7일 내지 8일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 7일에 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 단편화가 발생한 때 및/또는 제1 프라이밍 확장 단계가 시작된 때로부터 8일에 발생한다.
일부 구현예에서, TIL은 1차 제1 확장 후 및 급속 제2 확장 전에 저장되지 않고, TIL은 급속 제2 확장으로 직접 진행된다(예를 들어, 일부 구현예에서, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같이 단계 B에서 단계 D로의 전이 동안 저장 없음). 일부 구현예에서, 전이는 본원에 기재된 바와 같이 폐쇄형 시스템에서 발생한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장으로부터의 TIL인 TIL의 제2 집단은 전이 기간 없이 급속 제2 확장으로 직접 진행된다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따른 단계 C는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 단일 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 단일 생물반응기는 예를 들어 GREX-10 또는 GREX-100이다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템 생물반응기는 단일 생물반응기이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 급속 제2 확장으로의 전이는 용기 크기의 규모 확대를 수반한다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 급속 제2 확장보다 더 작은 용기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장은 GREX-100에서 수행되고 급속 제2 확장은 GREX-500에서 수행된다.
D. 단계 D: 급속 제2 확장
일부 구현예에서, TIL 세포 집단은 수확 및 프라이밍 제1 확장 후, 단계 A 및 단계 B 후, 및 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c))에 표시된 바와 같이 단계 C로 언급된 전이 후 수적으로 추가로 확장된다. 이러한 추가 확장은 본원에서 급속 제2 확장 또는 급속 확장으로 언급되며, 이는 일반적으로 급속 확장 프로세스(급속 확장 프로토콜 또는 REP; 뿐만 아니라 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b)의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스)로 기술분야에서 언급된 확장 프로세스를 포함한다. 급속 제2 확장은 일반적으로 가스 투과성 용기에 영양 세포, 사이토카인 공급원, 및 항-CD3 항체를 포함한 다수의 구성요소를 포함하는 배양 배지를 사용하여 달성된다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 개시 1일, 2일, 3일, 또는 4일 후(즉, 전반적인 Gen 3 프로세스의 8, 9, 10, 또는 11일차), TIL은 더 큰 부피 용기로 옮겨진다.
일부 구현예에서, TIL의 급속 제2 확장(이는 때때로 REP로 언급되는 확장을 포함할 수 있음; 뿐만 아니라 도 1(특히, 예를 들어, 도 1b 및/또는 도 8c)의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스)은 당업자에게 알려진 임의의 TIL 플라스크 또는 용기를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 1일, 2일, 3일, 4,일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 1일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 1일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 2일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 2일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 3일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 3일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 4일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 4일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 5일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 5일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 6일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 6일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 7일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 7일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 8일 내지 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 8일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 9일 내지 약 10일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 1일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 2일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 3일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 4일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 5일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 6일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 7일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 8일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 9일 동안 진행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 TIL 확장은 급속 제2 확장 개시 후 약 10일 동안 진행될 수 있다.
구현예에서, 급속 제2 확장은 본 개시내용의 방법(예를 들어, REP로 언급된 확장; 뿐만 아니라 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 D에 표시된 바와 같은 프로세스 포함을 사용하여 가스 투과성 용기에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 IL-2, OKT-3, 및 영양 세포(본원에서 "항원 제시 세포"로도 언급됨)의 존재 하에 급속 제2 확장에서 확장된다. 일부 구현예에서, TIL은 IL-2, OKT-3, 및 영양 세포의 존재 하에 급속 제2 확장에서 확장되며, 여기서 영양 세포는 프라이밍 제1 확장에 존재하는 영양 세포 농도의 2배, 2.4배, 2.5배, 3배, 3.5배 또는 4배인 최종 농도로 첨가된다. 예를 들어, TIL은 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터류킨-15(IL-15)의 존재 하에 비특이적 T-세포 수용체 자극을 사용하여 급속히 확장될 수 있다. 비특이적 T-세포 수용체 자극은 예를 들어, 항-CD3 항체, 예컨대 약 30 ng/mL의 OKT3, 마우스 단클론 항-CD3 항체(뉴저지주 라리탄 소재의 Ortho-McNeil 또는 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotech에서 상업적으로 입수가능) 또는 UHCT-1(미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 BioLegend에서 상업적으로 입수가능)을 포함할 수 있다. TIL은 암의 에피토프(들)와 같은 이의 항원성 부분을 포함하여 제1 확장 동안 하나 이상의 항원을 포함함으로써 시험관 내에서 TIL의 추가 자극을 유도하도록 확장될 수 있으며, 이는 임의적으로 300 IU/mL IL-2 또는 IL-15와 같은 T-세포 성장 인자의 존재 하에 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2) 결합 펩티드, 예를 들어, 0.3 μM MART-1 :26-35(27 L) 또는 gpl 00:209-217(210M)와 같은 벡터로부터 임의적으로 발현될 수 있다. 다른 적합한 항원은 예를 들어, NY-ESO-1, TRP-1, TRP-2, 티로시나제 암 항원, MAGE-A3, SSX-2, 및 VEGFR2, 또는 이의 항원성 부분을 포함할 수 있다. TIL은 또한 HLA-A2-발현 항원 제시 세포에 펄스를 가한 암의 동일한 항원(들)으로 재자극함으로써 급속히 확장될 수 있다. 대안적으로, TIL은 예를 들어, 예시적인 조사된 자가 림프구 또는 조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2로 추가로 재자극될 수 있다. 일부 구현예에서, 재자극은 제2 확장의 일부로서 발생한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 조사된 자가 림프구 또는 조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2의 존재 하에 발생한다.
구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다.
구현예에서, 세포 배양 매질은 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 및 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 15 ng/mL 내지 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 30 ng/mL 내지 60 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 30 ng/mL OKT-3을 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 60 ng/mL OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, OKT-3 항체는 무로모납이다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 6000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 용기 당 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배지에서 용기 당 500 mL의 배양 매질 및 30 μg의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배지에서는 6000 IU/mL의 IL-2, 60 ng/mL의 OKT-3, 및 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 500 mL의 배양 매질 및 용기 당 6000 IU/mL의 IL-2, 30 μg의 OKT-3, 및 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 6000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 용기 당 5 x 108개 내지 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 500 mL의 배양 매질 및 용기 당 30 μg의 OKT-3을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 GREX100 MCS 플라스크이다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 6000 IU/mL의 IL-2, 60 ng/mL의 OKT-3, 및 5 x 108개 내지 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장의 배지는 500 mL의 배양 매질 및 용기 당 6000 IU/mL의 IL-2, 30 μg의 OKT-3, 및 5 x 108개 내지 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 세포 배양 매질에 하나 이상의 TNFRSF 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제이고, 4-1BB 작용제는 우렐루맙, 우토밀루맙, EU-101, 융합 단백질, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 바이오시밀러, 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL의 세포 배양 매질의 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다. 일부 구현예에서, TNFRSF 작용제는 20 μg/mL 내지 40 μg/mL의 세포 배양 매질의 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 TNFRSF 작용제 외에도, 세포 배양 매질은 약 3000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작용제는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21의 조합은 제2 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따를 뿐만 아니라, 본원에 기재된 단계 D 동안을 포함하여 제2 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 제2 확장 동안 조합으로 이용된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이의 임의의 조합은 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따르고 본원에 기재된 바와 같은 단계 D 프로세스 동안 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제2 확장은 IL-2, OKT-3, 항원 제시 영양 세포, 및 임의적으로 TNFRSF 작용제를 포함하는 보충된 세포 배양 매질에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 보충된 세포 배양 매질에서 발생한다. 일부 구현예에서, 보충된 세포 배양 매질은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 영양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 세포 배양 매질은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APCs; 항원 제시 영양 세포로도 언급됨)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 영양 세포(즉, 항원 제시 세포)를 포함하는 세포 배양 매질에서 수행된다.
일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15, 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL-21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 구현예에서, 세포 배양 매질은 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포 배양 매질은 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포(APC)는 PBMC이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC의 비율 및/또는 항원 제시 세포는 약 1 대 10, 약 1 대 15, 약 1 대 20, 약 1 대 25, 약 1 대 30, 약 1 대 35, 약 1 대 40, 약 1 대 45, 약 1 대 50, 약 1 대 75, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC의 비율은 1 대 50 내지 1 대 300이다. 구현예에서, 급속 확장 및/또는 제2 확장에서 TIL 대 PBMC의 비율은 1 대 100 내지 1 대 200이다.
구현예에서, REP 및/또는 급속 제2 확장은 벌크 TIL이 100- 또는 200-배 과잉 불활성화 영양 세포와 혼합된 플라스크에서 수행되며, 여기서 영양 세포 농도는 프라이밍 제1 확장에서 영양 세포 농도의 적어도 1.1배(1.1X), 1.2X, 1.3X, 1.4X, 1.5X, 1.6X, 1.7X, 1.8X, 1.8X, 2X, 2.1X2.2X, 2.3X, 2.4X, 2.5X, 2.6X, 2.7X, 2.8X, 2.9X, 3.0X, 3.1X, 3.2X, 3.3X, 3.4X, 3.5X, 3.6X, 3.7X, 3.8X, 3.9X 또는 4.0X, 150 mL 배지 중 30 ng/mL OKT3 항-CD3 항체 및 6000 IU/mL IL-2이다. 세포가 대체 성장 챔버로 옮겨질 때까지 배지 교체가 수행된다(일반적으로 사용한 배지의 2/3의 흡인을 통한 2/3 배지 교체 및 동일한 부피의 새로운 배지로 교체). 대체 성장 챔버는 아래에 보다 상세하게 논의된 바와 같은 G-REX 플라스크 및 가스 투과성 용기를 포함한다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장(이는 REP 프로세스로 언급된 프로세스를 포함할 수 있음)은 실시예 및 도면에 논의된 바와 같이 7 내지 9일이다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 7일이다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 8일이다. 일부 구현예에서, 제2 확장은 9일이다.
구현예에서, 제2 확장(이는 REP로 언급된 확장, 뿐만 아니라 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 D에서 언급된 것들을 포함할 수 있음은 100 cm 가스 투과성 실리콘 바닥이 있는 500 mL 용량 가스 투과성 플라스크(G-Rex 100, 미국 미네소타주 뉴 브라이턴 소재의 Wilson Wolf Manufacturing Corporation에서 상업적으로 입수가능)에서 수행하며, 5 x 106개 또는 10 x 106개의 TIL을 5% 인간 AB 혈청, mL 당 3000 IU의 IL-2 및 mL 당 30 ng의 항-CD3(OKT3)이 보충된 400 mL의 50/50 매질 중 PBMC와 함께 배양할 수 있다. G-Rex 100 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션할 수 있다. 5일차에, 250 mL의 상청액을 제거하고 원심분리 병에 배치하고 1500 rpm(491 x g)에서 10분 동안 원심분리할 수 있다. TIL 펠릿을 5% 인간 AB 혈청, mL 당 6000 IU의 IL-2를 함유하는 150 mL의 새로운 매질로 재현탁하고, 원래 GREX-100 플라스크에 다시 첨가할 수 있다. TIL이 GREX-100 플라스크에서 연속으로 확장되는 경우, 10 또는 11일차에 TIL을 GREX-500과 같은 더 큰 플라스크로 옮길 수 있다. 세포는 배양 14일차에 수확할 수 있다. 세포는 배양 15일차에 수확할 수 있다. 세포는 배양 16일차에 수확할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 대체 성장 챔버로 옮겨질 때까지 배지 교체를 수행한다. 일부 구현예에서, 배지의 2/3을 사용한 배지를 흡인하여 교체하고 동일한 부피의 새로운 배지로 교체한다. 일부 구현예에서, 대체 성장 챔버는 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같은 GREX 플라스크 및 가스 투과성 용기르르 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 확장 프로세스에 사용되는 배양 매질은 무혈청 매질 또는 한정된 매질이다. 일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 기저 세포 매질 및 혈청 보충물 및/또는 혈청 대체물을 포함한다. 일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 부분적으로 혈청-함유 배지의 로트간 변경으로 인해 실험 변경을 방지 및/또는 감소시키는 데 사용된다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 기저 세포 매질 및 혈청 보충물 및/또는 혈청 대체물을 포함한다. 일부 구현예에서, 기저 세포 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM, CTS™ AIM-V 매질, CTS™ AIM-V SFM, LymphoONE™ T-세포 확장 Xeno-Free 매질, 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 혈청 보충물 또는 혈청 대체물은 CTS™ OpTmizer T-세포 확장 혈청 보충물, CTS™ 면역 세포 혈청 대체물, 하나 이상의 알부민 또는 알부민 치환체, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 하나 이상의 항생제, 및 하나 이상의 미량 요소 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 및 글리신, L- 히스티딘, L-이소류신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L- 하이드록시프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신, L-발린, 티아민, 환원된 글루타티온, L-아스코르브산-2-포스페이트, 철 포화 트랜스페린, 인슐린, 및 미량 요소 모이어티 Ag+, Al3+, Ba2+, Cd2+, Co2+, Cr3+, Ge4+, Se4+, Br, T, Mn2+, P, Si4+, V5+, Mo6+, Ni2+, Rb+, Sn2+ 및 Zr4+를 함유하는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 L-글루타민, 중탄산나트륨 및/또는 2-메르캅토에탄올을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, CTS™OpTmizer™ T-세포 면역 세포 혈청 대체물은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM, CTS™ AIM-V 매질, CST™ AIM-V SFM, LymphoONE™ T-세포 확장 Xeno-Free 매질, 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질을 포함하나 이에 제한되지 않는 통상적인 성장 배지와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질 내 총 혈청 대체물 농도(vol%) 는 총 무혈청 또는 한정된 매질의 부피 기준 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 3%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 5%이다. 일부 구현예에서, 총 혈청 대체물 농도는 무혈청 또는 한정된 매질의 총 부피의 약 10%이다.
일부 구현예에서, 무혈청 또는 한정된 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM(ThermoFisher Scientific)이다. CTS™ OpTmizer™의 임의의 제형이 본 발명에 유용하다. CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 1 L CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질 및 26 mL CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물의 조합이며, 사용 전에 함께 혼합된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 55mM의 2-메르캅토에탄올과 함께 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충된다.
일부 구현예에서, 한정된 매질은 CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM(ThermoFisher Scientific)이다. CTS™ OpTmizer™의 임의의 제형이 본 발명에 유용하다. CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 1 L CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질 및 26 mL CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물의 조합이며, 사용 전에 함께 혼합된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 55mM의 2-메르캅토에탄올과 함께 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific)이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충된다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific), 55mM의 2-메르캅토에탄올, 및 2mM의 L-글루타민이 보충되며, 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 55mM의 2-메르캅토에탄올이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 1000 IU/mL 내지 약 8000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 3000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM은 약 3%의 CTS™ 면역 세포 혈청 대체물(SR)(ThermoFisher Scientific) 및 약 2mM 글루타민이 보충되며, 약 6000 IU/mL의 IL-2를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 0.1 mM 내지 약 10 mM, 0.5mM 내지 약 9 mM, 1 mM 내지 약 8 mM, 2 mM 내지 약 7 mM, 3 mM 내지 약 6 mM, 또는 4 mM 내지 약 5 mM의 농도로 글루타민(즉, GlutaMAX®)이 보충된다. 일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 2 mM의 농도로 글루타민(즉, GlutaMAX®)이 보충된다.
일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 5 mM 내지 약 150 mM, 10 mM 내지 약 140 mM, 15 mM 내지 약 130 mM, 20 mM 내지 약 120 mM, 25 mM 내지 약 110 mM, 30 mM 내지 약 100 mM, 35 mM 내지 약 95 mM, 40 mM 내지 약 90 mM, 45 mM 내지 약 85 mM, 50 mM 내지 약 80 mM, 55 mM 내지 약 75 mM, 60 mM 내지 약 70 mM, 또는 약 65 mM의 농도로 2-메르캅토에탄올이 보충된다. 일부 구현예에서, 무혈청 매질 또는 한정된 매질은 약 55mM의 농도로 2-메르캅토에탄올이 보충된다.
일부 구현예에서, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 1998/030679 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2002/0076747 A1에 기재된 한정된 배지가 본 발명에 유용하며 상기 문헌은 본원에 참조로 포함된다. 해당 간행물에는, 무혈청 진핵생물 세포 배양 배지가 기재되어 있다. 무혈청 진핵생물 세포 배양 매질은 무혈청 매질에서 세포의 성장을 지지할 수 있는 무혈청 보충물이 보충된 기저 세포 배양 매질을 포함한다. 무혈청 진핵생물 세포 배양 매질 보충물은 하나 이상의 알부민 또는 알부민 치환체, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 하나 이상의 미량 요소, 및 하나 이상의 항생제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하거나 이를 조합함으로써 수득된다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 L-글루타민, 중탄산나트륨 및/또는 베타-메르캅토에탄올을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 또는 알부민 치환체 및 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 비타민, 하나 이상의 트랜스페린 또는 트랜스페린 치환체, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 인슐린 또는 인슐린 치환체, 하나 이상의 콜라겐 전구체, 및 하나 이상의 미량 요소로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 알부민 및 글리신, L- 히스티딘, L-이소류신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L- 하이드록시프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신, L-발린, 티아민, 환원된 글루타티온, L-아스코르브산-2-포스페이트, 철 포화 트랜스페린, 인슐린, 및 미량 요소 모이어티 Ag+, Al3+, Ba2+, Cd2+, Co2+, Cr3+, Ge4+, Se4+, Br, T, Mn2+, P, Si4+, V5+, Mo6+, Ni2+, Rb+, Sn2+ 및 Zr4+를 함유하는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 기저 세포 배지는 듈베코의 변형된 이글 매질(DMEM), 최소 필수 매질(MEM), 기저 매질 이글(BME), RPMI 1640, F-10, F-12, 최소 필수 매질(αMEM), 글래스고의 최소 필수 매질(G-MEM), RPMI 성장 매질, 및 이스코브의 변형된 듈베코 매질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 한정된 매질 내 글리신의 농도는 약 5-200 mg/L 범위이고, L- 히스티딘의 농도는 약 5-250 mg/L이고, L-이소류신의 농도는 약 5-300 mg/L이고, L-메티오닌의 농도는 약 5-200 mg/L이고, L-페닐알라닌의 농도는 약 5-400 mg/L이고, L-프롤린의 농도는 약 1-1000 mg/L이고, L- 하이드록시프롤린의 농도는 약 1-45 mg/L이고, L-세린의 농도는 약 1-250 mg/L이고, L-트레오닌의 농도는 약 10-500 mg/L이고, L-트립토판의 농도는 약 2-110 mg/L이고, L-티로신의 농도는 약 3-175 mg/L이고, L-발린의 농도는 약 5-500 mg/L이고, 티아민의 농도는 약 1-20 mg/L이고, 환원된 글루타티온의 농도는 약 1-20 mg/L이고, L-아스코르브산-2-포스페이트의 농도는 약 1-200 mg/L이고, 철 포화 트랜스페린의 농도는 약 1-50 mg/L이고 인슐린의 농도는 약 1-100 mg/L이고, 아셀레늄산나트륨의 농도는 약 0.000001-0.0001 mg/L이고, 알부민(예를 들어, AlbuMAX® I)의 농도는 약 5000-50,000 mg/L이다.
일부 구현예에서, 한정된 매질 내 비미량 원소 모이어티 성분은 표 4의 제목 "1X 매질 내 농도 범위" 아래 열에 나열된 농도 범위로 존재한다. 다른 구현예에서, 한정된 매질 내 비미량 원소 모이어티 성분은 표 4의 제목 "1X 매질의 바람직한 구현예" 아래 열에 나열된 최종 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, 한정된 매질은 무혈청 보충물을 포함하는 기저 세포 매질이다. 이들 구현예 중 일부에서, 무혈청 보충물은 표 4의 제목 "보충물 내 바람직한 구현예" 아래 열에 나열된 농도 및 유형의 비미량 모이어티 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, 한정된 매질의 삼투압 농도는 약 260 내지 350 mOsmol이다. 일부 구현예에서, 삼투압 농도는 약 280 내지 310 mOsmol이다. 일부 구현예에서, 한정된 매질은 최대 약 3.7 g/L, 또는 약 2.2 g/L 중탄산나트륨이 보충된다. 한정된 매질은 L-글루타민(최종 농도 약 2 mM), 하나 이상의 항생제, 비필수 아미노산(NEAA; 최종 농도 약 100 μM), 2-메르캅토에탄올(최종 농도 약 100 μM)이 추가로 보충될 수 있다.
일부 구현예에서, Smith, 등, Clin Transl Immunology, 2015, 4(1), e31에 기재된 한정된 배지가 본 발명에 유용하며 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 간단히 말해서, RPMI 또는 CTS™ OpTmizer™은 기저 세포 매질로 사용되고, 0, 2%, 5%, 또는 10% CTS™ 면역 세포 혈청 대체물이 보충되었다.
구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 매질은 여과되지 않는다. 여과되지 않은 세포 매질의 사용은 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 단순화할 수 있다. 구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 매질은 베타-메르캅토에탄올(BME 또는 βME; 2-메르캅토에탄올로도 알려짐, CAS 60-24-2)이 결여되어 있다.
구현예에서, 급속 제2 확장(REP로 언급된 확장 포함)이 수행되며 TIL이 우수한 종양 반응성에 대해 선택되는 단계를 추가로 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 선택 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0010058 A1에 기재된 방법은 우수한 종양 반응성을 위한 TIL의 선택에 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
임의적으로, 세포 생존력 검정은 당업계에 알려진 표준 검정을 사용하여 급속 제2 확장(REP 확장으로 언급된 확장 포함) 후에 수행될 수 있다. 예를 들어, 트립판 블루 배제 검정은 죽은 세포를 선택적으로 표지하고 생존력 평가를 허용하는 벌크 TIL의 샘플에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL 샘플은 Cellometer K2 자동화 세포 계수기(매사추세츠주 로렌스 소재의 Nexcelom Bioscience)를 사용하여 계수되고 생존력이 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 생존력은 표준 Cellometer K2 Image Cytometer 자동 세포 계수기 프로토콜에 따라 결정된다.
T 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한적이지만 다수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생산된다. 이러한 유전자 분절: V(가변성), D(다양성), J(결합), 및 C(상수)는 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 제2 확장에서 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 중쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 경쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 알파, 베타, 감마, 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배양 매질(예를 들어, 때때로 CM2 또는 제2 세포 배양 매질로 언급됨)은 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 IL-2, OKT-3, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포(APC)를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배양 매질(예를 들어, 때때로 CM2 또는 제2 세포 배양 매질로 언급됨)은 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 6000 IU/mL IL-2, 30 ug/플라스크 OKT-3, 뿐만 아니라 7.5 x 108개의 항원 제시 영양 세포(APC)를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배양 매질(예를 들어, 때때로 CM2 또는 제2 세포 배양 매질로 언급됨)은 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 IL-2, OKT-3, 뿐만 아니라 항원 제시 영양 세포(APC)를 포함한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 배양 매질(예를 들어, 때때로 CM2 또는 제2 세포 배양 매질로 언급됨)은 아래에 보다 상세히 논의된 바와 같이 6000 IU/mL IL-2, 30 ug/플라스크 OKT-3, 뿐만 아니라 5 x 108개의 항원 제시 영양 세포(APC)를 포함한다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따른 단계 D는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기는 용기로서 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 예를 들어 G-REX-100 또는 G-REX-500이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-100이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-500이다.
1. 영양 세포 및 항원 제시 세포
구현예에서, 본원에 기재된 급속 제2 확장 절차(예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 D에 기재된 것들, 뿐만 아니라 REP로 언급된 것들과 같은 확장 포함)는 REP TIL 확장 동안 및/또는 급속 제2 확장 동안 과잉 영양 세포를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 건강한 혈액 공여자의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 조사한 동종이계 PBMC의 복제 무능력을 평가하기 위한 예시적인 프로토콜을 제공하는 실시예에 기재된 바와 같은 REP 절차에 사용된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7 또는 14일차에 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일) 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수보다 적은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기에 허용가능하다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일 및 14일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일) 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가되지 않은 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용하기에 허용가능하다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 60 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 60 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, PBMC는 복제 무능력으로 간주되고 7일 및 14일차에 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존가능한 세포의 총 수가 REP의 0일차 및/또는 제2 확장의 0일차(즉, 제2 확장 시작 일) 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 증가하지 않는 경우 본원에 기재된 TIL 확장 절차에서 사용하기에 허용가능하다. 일부 구현예에서, PBMC는 30-60 ng/mL OKT3 항체 및 1000-6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30-60 ng/mL OKT3 항체 및 2000-5000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30-60 ng/mL OKT3 항체 및 2000-4000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30-60 ng/mL OKT3 항체 및 2500-3500 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, PBMC는 30-60 ng/mL OKT3 항체 및 6000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 PBMC이다. 일부 구현예에서, 항원 제시 영양 세포는 인공 항원 제시 영양 세포이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 약 1 대 10, 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 50 내지 1 대 300이다. 구현예에서, 제2 확장에서 TIL 대 항원 제시 영양 세포의 비율은 1 대 100 내지 1 대 200이다.
구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 5 x 108개의 영양 세포 대 약 100 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 7.5 x 108개의 영양 세포 대 약 100 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 5 x 108개의 영양 세포 대 약 50 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 7.5 x 108개의 영양 세포 대 약 50 x 106개의 TIL의 비율을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 5 x 108개의 영양 세포 대 약 25 x 106개의 TIL을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 제2 확장 절차는 약 7.5 x 108개의 영양 세포 대 약 25 x 106개의 TIL을 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장은 급속 제2 확장보다 2배의 영양 세포 수를 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장이 약 2.5 x 108개의 영양 세포를 필요로 하는 경우, 급속 제2 확장은 약 5 x 108개의 영양 세포를 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 프라이밍 제1 확장이 약 2.5 x 108개의 영양 세포를 필요로 하는 경우, 급속 제2 확장은 약 7.5 x 108개의 영양 세포를 필요로 한다. 또한 또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장은 프라이밍 제1 확장보다 2배(2.0X), 2.5X, 3.0X, 3.5X 또는 4.0X의 영양 세포 수를 필요로 한다.
구현예에서, 본원에 기재된 급속 제2 확장 절차는 급속 제2 확장 동안 과잉 영양 세포를 필요로 한다. 많은 구현예에서, 영양 세포는 동종이계 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전혈 단위로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다. 구현예에서, 인공 항원 제시(aAPC) 세포는 PBMC 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, PBMC는 프라이밍 제1 확장에 첨가된 PBMC 농도의 2배로 급속 제2 확장에 첨가된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 조사 또는 열 처리를 통해 불활성화되고, 도면 및 실시예에 기재된 예시적인 절차를 포함하여 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용된다.
구현예에서, 인공 항원 제시 세포는 PBMC를 대체하거나, 이와 조합하여 급속 제2 확장에 사용된다.
2. 사이토카인 및 다른 첨가제
본원에 기재된 급속 제2 확장 방법은 일반적으로 당업계에 알려진 바와 같은 고용량의 사이토카인, 특히 IL-2를 함유하는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0107490 A1에 기재된 바와 같이 IL-2, IL-15 및 IL-21 중 2개 이상의 조합을 사용하여 TIL의 급속 제2 확장을 위해 사이토카인의 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 가능한 조합은 IL-2와 IL-15, IL-2와 IL-21, IL-15와 IL-21, 및 IL-2, IL-15와 IL-21을 포함하며, 후자는 많은 구현예에서 특히 사용된다. 사이토카인 조합의 사용은 본원에 기재된 바와 같은 림프구, 및 특히 T-세포의 생성을 특이적으로 선호한다.
구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OKT-3 항체 또는 무로모납을 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 4-1BB 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 구현예에서, 단계 D는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 OX-40 작용제를 배양 배지에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 게다가, 티아졸리딘디온 화합물과 같은 증식인자-활성화 수용체(PPAR)-감마 작용제를 포함하는 퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 감마 보조활성인자 I-알파 작용제와 같은 첨가제가 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0307796 A1에 기재된 바와 같은 단계 D 동안 배양 배지에서 사용될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
E. 단계 E: TIL 수확
급속 제2 확장 단계 후, 세포가 수확될 수 있다. 일부 구현예에서 TIL은 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같이 1, 2, 3, 4개 이상의 확장 단계 후에 수확된다. 일부 구현예에서 TIL은 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같이 2개의 확장 단계 후에 수확된다. 일부 구현예에서 TIL은 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같이 2개의 확장 단계, 1회 프라이밍 제1 확장 및 1회 급속 제2 확장 후에 수확된다.
TIL은 예를 들어 원심분리를 포함하여 임의의 적절한 멸균 방식으로 수확될 수 있다. TIL을 수확하는 방법은 당업예게 잘 알려져 있으며 임의의 이러한 알려진 방법이 본 프로세스에 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 자동화 시스템을 사용하여 수확된다.
세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 예를 들어, Fresenius Kabi, Tomtec Life Science, Perkin Elmer, 및 Inotech Biosystems International, Inc를 포함하여 다양한 공급업체로부터 상업적으로 입수가능하다. 임의의 세포 기반 수확기가 본 방법에 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 막 기반 세포 수확기이다. 일부 구현예에서, 세포 수확은 LOVO 시스템(Fresenius Kabi에서 제조됨)과 같은 세포 처리 시스템을 통해 이루어진다. 용어 "LOVO 세포 처리 시스템"은 또한 멸균 및/또는 폐쇄형 시스템 환경에서 방사 막 또는 방사 필터와 같은 막 또는 필터를 통해 세포를 포함하는 용액을 펌핑하여, 펠릿화 없이 상청액 또는 세포 배양 배지를 제거하기 위해 연속 흐름 및 세포 처리를 허용할 수 있는 임의의 공급처에 의해 제조된 임의의 기기 또는 장치를 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 폐쇄형 멸균 시스템에서 세포 분리, 세척, 유체 교환, 농축, 및/또는 다른 세포 처리 단계를 수행할 수 있다.
일부 구현예에서, 급속 제2 확장, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따른 단계 D는 폐쇄형 시스템 생물반응기에서 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 TIL 확장을 위해 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기가 이용된다. 일부 구현예에서, 생물반응기는 용기로서 이용된다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 예를 들어 G-REX-100 또는 G-REX-500이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-100이다. 일부 구현예에서, 이용되는 생물반응기는 G-REX-500이다.
일부 구현예에서, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 따른 단계 E는 본원에 기재된 프로세스에 따라 수행된다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 시스템의 멸균성 및 폐쇄 속성을 유지하기 위해 멸균 조건 하에 주사기를 통해 접근된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 폐쇄형 시스템이 이용된다.
일부 구현예에서, TIL은 본원에 기재된 방법에 따라 수확된다. 일부 구현예에서, 14 내지 16일차에 TIL은 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 수확된다. 일부 구현예에서, TIL은 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 14일에 수확된다. 일부 구현예에서, TIL은 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 15일에 수확된다. 일부 구현예에서, TIL은 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 16일에 수확된다.
F. 단계 F: 최종 제형 및 주입 용기로의 전달
도 8(특히, 예를 들어, 도 8b)의 예시적인 순서로 제공되고 상기 및 본원에 상세하게 요약된 바와 같이 단계 A 내지 E가 완료된 후, 세포를 주입 백 또는 멸균 바이알과 같은 환자에게 투여하는 데 사용하기 위한 용기로 옮긴다. 일부 구현예에서, 상기 기재된 확장 방법을 사용하여 치료적으로 충분한 수의 TIL이 수득되면, 이들은 환자에게 투여하는 데 사용하기 위한 용기로 옮겨진다.
구현예에서, 본 개시내용의 방법을 사용하여 확장된 TIL은 환자에게 약제학적 조성물로 투여된다. 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균 완충액 중 TIL의 현탁액이다. 본원에 개시된 바와 같이 확장된 TIL은 당업계에 알려진 바와 같은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로 투여되며, 바람직하게는 대략 30 내지 60분 지속된다. 다른 적합한 투여 경로는 복강내, 척수강내, 및 림프내 투여를 포함한다.
V. 추가의 Gen 2, Gen 3, 및 다른 TIL 제조 프로세스 구현예
이 섹션은 CCR, 케모카인 수용체, 및 본 발명의 다른 구현예와 함께 사용될 수 있는 Gen 2, Gen 3, 및 다른 TIL 제조 프로세스의 대안적인 구현예를 기재한다.
A. PBMC 영양 세포 비율
일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c) 참조)에 사용되는 배양 배지는 항-CD3 항체 예를 들어 OKT-3을 포함한다. IL-2와 조합된 항-CD3 항체는 TIL 집단에서 T 세포 활성화 및 세포 분열을 유도한다. 이 효과는 전장 항체 뿐만 아니라 Fab 및 F(ab')2 단편으로 볼 수 있으며, 전자가 일반적으로 바람직하고; 예를 들어, Tsoukas 등, J. Immunol. 1985, 135, 1719를 참조하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, PBMC 영양 층의 수는 다음과 같이 계산된다:
A. T-세포의 부피(10 μm 직경): V =(4/3) πr3 =523.6 μm3
B. 40 μm(4개 세포) 높이의 G-Rex 100(M) 컬럼: V =(4/3) πr3 = 4x1012 μm3
C. 컬럼 B를 채우는 데 필요한 세포 수: 4x1012 μm3 / 523.6 μm3 = 7.6x108 μm3 * 0.64 = 4.86x108
D. 4D 공간에서 최적으로 활성화될 수 있는 세포 수: 4.86x108 / 24 = 20.25x106
E. G-Rex 500으로 외삽된 배양 보조물 및 TIL의 수: TIL: 100x106 및 영양물: 2.5x109
이 계산에서, 밑면이 100 cm2인 원통형에서 TIL의 활성화를 위한 정이십면체 기하구조를 제공하는 데 필요한 단핵 세포 수의 근사치가 사용된다. 계산은 Jin, 등, J. Immunother. 2012, 35, 283-292에 기재된 바와 같이 NCI 실험 데이터를 밀접하게 반영하는 T-세포의 임계치 활성화에 대해 ~5x108개의 실험 결과를 도출한다. (C)에서, 곱하는 수(0.64)는 Jaeger and Nagel, Science, 1992, 255, 1523-3에 의해 계산된 바와 같이 등가 구체에 대한 무작위 패킹 밀도이다. (D)에서, 나누는 수 24는 4-차원 공간에서 유사한 물체와 접촉할 수 있는 등가 구체의 수 또는 Musin, Russ. Math. Surv., 2003, 58, 794-795에 기재된 바와 같은 "뉴턴 수"이다.
구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 항원 제시 영양 세포의 수는 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 항원 제시 영양 세포의 수의 대략 절반이다. 특정 구현예에서, 방법은 급속 제2 확장의 세포 배양 매질과 비교하여 대략 50% 더 적은 항원 제시 세포를 포함하는 세포 배양 매질에서 프라이밍 제1 확장을 수행하는 것을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 항원 제시 영양 세포(APC)의 수는 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 20:1 또는 약 20:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 9:1 또는 약 9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 8:1 또는 약 8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 7:1 또는 약 7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 6:1 또는 약 6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은) 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2:1 또는 약 2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1이다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수 대 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수의 비율은 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1 또는 약 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1이다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC 또는 약 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC이고, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC 또는 약 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC이다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 1.5x108개의 APC 또는 약 1.5x108개의 APC 내지 3x108개의 APC 또는 약 3x108개의 APC 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 4x108개의 APC 또는 약 4x108개의 APC 내지 7.5x108개의 APC 또는 약 7.5x108개의 APC 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 2x108개의 APC 또는 약 2x108개의 APC 내지 2.5x108개의 APC 또는 약 2.5x108개의 APC 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 4.5x108개의 APC 또는 약 4.5x108개의 APC 내지 5.5x108개의 APC 또는 약 5.5x108개의 APC 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 2.5x108개의 APC 또는 약 2.5x108개의 APC이고, 급속 제2 확장 동안 외인성으로 공급된 APC의 수는 5x108개의 APC 또는 약 5x108개의 APC이다.
구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 첨가된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 프라이밍 제1 확장의 7일차(예를 들어, 방법의 7일차)에 첨가된 PBMC 수의 대략 절반이다. 특정 구현예에서, 방법은 프라이밍 제1 확장의 0일차에 항원 제시 세포를 TIL의 제1 집단에 첨가하고 7일차에 항원 제시 세포를 TIL의 제2 집단에 첨가하는 것을 포함하며, 여기서 0일차에 첨가된 항원 제시 세포의 수는 프라이밍 제1 확장의 7일차(예를 들어, 방법의 7일차)에 첨가된 항원 제시 세포 수의 대략 50%이다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 PBMC 수보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.0x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개 APC/cm2 내지 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 4.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.5x106개 APC/cm2 내지 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2x106개 APC/cm2 또는 약 2x106개 APC/cm2 내지 3x106개 APC/cm2 또는 약 3x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2x106 APC/cm2 또는 약 2x106 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.0x106개, 1.1x106개, 1.2x106개, 1.3x106개, 1.4x106개, 1.5x106개, 1.6x106개, 1.7x106개, 1.8x106개, 1.9x106개, 2x106개, 2.1x106개, 2.2x106개, 2.3x106개, 2.4x106개, 2.5x106개, 2.6x106개, 2.7x106개, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개 또는 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개, 1.1x106개, 1.2x106개, 1.3x106개, 1.4x106개, 1.5x106개, 1.6x106개, 1.7x106개, 1.8x106개, 1.9x106개, 2x106개, 2.1x106개, 2.2x106개, 2.3x106개, 2.4x106개, 2.5x106개, 2.6x106개, 2.7x106개, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개 또는 4.5x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2 내지 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 7.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 내지 약 6.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2 내지 약 5.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2.5x106개 APC/cm2, 2.6x106개 APC/cm2, 2.7x106개 APC/cm2, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개, 4.5x106개, 4.6x106개, 4.7x106개, 4.8x106개, 4.9x106개, 5x106개, 5.1x106개, 5.2x106개, 5.3x106개, 5.4x106개, 5.5x106개, 5.6x106개, 5.7x106개, 5.8x106개, 5.9x106개, 6x106개, 6.1x106개, 6.2x106개, 6.3x106개, 6.4x106개, 6.5x106개, 6.6x106개, 6.7x106개, 6.8x106개, 6.9x106개, 7x106개, 7.1x106개, 7.2x106개, 7.3x106개, 7.4x106개 또는 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2, 2.6x106개 APC/cm2, 2.7x106개 APC/cm2, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개, 4.5x106개, 4.6x106개, 4.7x106개, 4.8x106개, 4.9x106개, 5x106개, 5.1x106개, 5.2x106개, 5.3x106개, 5.4x106개, 5.5x106개, 5.6x106개, 5.7x106개, 5.8x106개, 5.9x106개, 6x106개, 6.1x106개, 6.2x106개, 6.3x106개, 6.4x106개, 6.5x106개, 6.6x106개, 6.7x106개, 6.8x106개, 6.9x106개, 7x106개, 7.1x106개, 7.2x106개, 7.3x106개, 7.4x106개 또는 7.5x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.0x106개, 1.1x106개, 1.2x106개, 1.3x106개, 1.4x106개, 1.5x106개, 1.6x106개, 1.7x106개, 1.8x106개, 1.9x106개, 2x106개, 2.1x106개, 2.2x106개, 2.3x106개, 2.4x106개, 2.5x106개, 2.6x106개, 2.7x106개, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개 또는 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개, 1.1x106개, 1.2x106개, 1.3x106개, 1.4x106개, 1.5x106개, 1.6x106개, 1.7x106개, 1.8x106개, 1.9x106개, 2x106개, 2.1x106개, 2.2x106개, 2.3x106개, 2.4x106개, 2.5x106개, 2.6x106개, 2.7x106개, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개 또는 4.5x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩되고, 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2.5x106개 APC/cm2, 2.6x106개 APC/cm2, 2.7x106개 APC/cm2, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개, 4.5x106개, 4.6x106개, 4.7x106개, 4.8x106개, 4.9x106개, 5x106개, 5.1x106개, 5.2x106개, 5.3x106개, 5.4x106개, 5.5x106개, 5.6x106개, 5.7x106개, 5.8x106개, 5.9x106개, 6x106개, 6.1x106개, 6.2x106개, 6.3x106개, 6.4x106개, 6.5x106개, 6.6x106개, 6.7x106개, 6.8x106개, 6.9x106개, 7x106개, 7.1x106개, 7.2x106개, 7.3x106개, 7.4x106개 또는 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2, 2.6x106개 APC/cm2, 2.7x106개 APC/cm2, 2.8x106개, 2.9x106개, 3x106개, 3.1x106개, 3.2x106개, 3.3x106개, 3.4x106개, 3.5x106개, 3.6x106개, 3.7x106개, 3.8x106개, 3.9x106개, 4x106개, 4.1x106개, 4.2x106개, 4.3x106개, 4.4x106개, 4.5x106개, 4.6x106개, 4.7x106개, 4.8x106개, 4.9x106개, 5x106개, 5.1x106개, 5.2x106개, 5.3x106개, 5.4x106개, 5.5x106개, 5.6x106개, 5.7x106개, 5.8x106개, 5.9x106개, 6x106개, 6.1x106개, 6.2x106개, 6.3x106개, 6.4x106개, 6.5x106개, 6.6x106개, 6.7x106개, 6.8x106개, 6.9x106개, 7x106개, 7.1x106개, 7.2x106개, 7.3x106개, 7.4x106개 또는 7.5x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.0x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개 APC/cm2 내지 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 4.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩되고 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2 내지 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 7.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 1.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.5x106개 APC/cm2 내지 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩되고 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 내지 6x106개 APC/cm2 또는 약 6x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2x106개 APC/cm2 또는 약 2x106개 APC/cm2 내지 3x106개 APC/cm2 또는 약 3x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩되고 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 4x106개 APC/cm2 또는 약 4x106개 APC/cm2 내지 5.5x106개 APC/cm2 또는 약 5.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에 외인성으로 공급된 APC는 2x106개 APC/cm2 또는 약 2x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩되고 급속 제2 확장에 외인성으로 공급된 APC는 4x106개 APC/cm2 또는 약 4x106개 APC/cm2의 밀도로 배양 플라스크에 시딩된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 PBMC 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 20:1 또는 약 20:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 PBMC 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 PBMC 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 9:1 또는 약 9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 8:1 또는 약 8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 7:1 또는 약 7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 6:1 또는 약 6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2:1 또는 약 2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 2:1 또는 약 2:1이다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수 대 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수의 비율은 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1 또는 약 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1이다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)이고, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)이다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 1x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 1x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 내지 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 3.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 내지 1x109개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 1x109개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 1.5x108개의 APC 또는 약 1.5x108개의 APC 내지 3x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 3x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 4x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 4x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 내지 7.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 7.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 2x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 2x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 내지 2.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 2.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 4.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 4.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 내지 5.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 5.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 2.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 2.5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)이고 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함) 수는 5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함) 또는 약 5x108개의 APC(예를 들어, PBMC 포함)이다
구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차에 첨가된 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 층 수는 급속 제2 확장의 7일차에 첨가된 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 층 수의 대략 절반이다. 특정 구현예에서, 방법은 0일차에 프라이밍 제1 확장의 항원 제시 세포 층을 TIL의 제1 집단에 첨가하고 7일차에 항원 제시 세포 층을 TIL의 제2 집단에 첨가하는 것을 포함하며, 여기서 0일차에 첨가된 항원 제시 세포 층의 수는 7일차에 첨가된 항원 제시 세포 층의 수의 대략 50%이다.
또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장의 7일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 층의 수는 프라이밍 제1 확장의 0일차에 외인성으로 공급된 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 층의 수보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 2개 또는 약 2개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 4개 또는 약 4개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1개 또는 약 1개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 3개 또는 약 3개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1.5개 또는 약 1.5개 세포 층 내지 2.5개 약 2.5개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 3개 또는 약 3개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1개 또는 약 1개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 2개 또는 약 2개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 또는 약 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1개 또는 약 1개 세포 층 내지 2개 또는 약 2개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 3개 또는 약 3개 세포 층 내지 10개 또는 약 10개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 2개 또는 약 2개 세포 층 내지 3개 또는 약 3개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 4개 또는 약 4개 세포 층 내지 8개 또는 약 8개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 2개 또는 약 2개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 4개 또는 약 4개 세포 층 내지 8개 또는 약 8개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 평균 두께가 1, 2 또는 3개 또는 약 1, 2 또는 3개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 평균 두께가 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 세포 층인 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생한다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:10 또는 약 1:10의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:8 또는 약 1:8의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:7 또는 약 1:7의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:6 또는 약 1:6의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:5 또는 약 1:5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:4 또는 약 1:4의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:3 또는 약 1:3의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:2 또는 약 1:2의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.2 또는 약 1:1.2 내지 1:8 또는 약 1:8의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.3 또는 약 1:1.3 내지 1:7 또는 약 1:7의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.4 또는 약 1:1.4 내지 1:6 또는 약 1:6의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.5 또는 약 1:1.5 내지 1:5 또는 약 1:5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.6 또는 약 1:1.6 내지 1:4 또는 약 1:4의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.7 또는 약 1:1.7 내지 1:3.5 또는 약 1:3.5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.8 또는 약 1:1.8 내지 1:3 또는 약 1:3의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.9 또는 약 1:1.9 내지 1:2.5 또는 약 1:2.5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1: 2 또는 약 1: 2이다.
또 다른 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 0일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수와 동일한 제1 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하고 급속 제2 확장의 7일차는 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수와 동일한 제2 평균 두께를 갖는 층상 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 존재 하에 발생하며, 여기서 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제1 층 수 대 APC(예를 들어, PBMC 포함)의 제2 층 수의 비율은 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.1, 1:2.2, 1:2.3, 1:2.4, 1:2.5, 1:2.6, 1:2.7, 1:2.8, 1:2.9, 1:3, 1:3.1, 1:3.2, 1:3.3, 1:3.4, 1:3.5, 1:3.6, 1:3.7, 1:3.8, 1:3.9, 1:4, 1:4.1, 1:4.2, 1:4.3, 1:4.4, 1:4.5, 1:4.6, 1:4.7, 1:4.8, 1:4.9, 1:5, 1:5.1, 1:5.2, 1:5.3, 1:5.4, 1:5.5, 1:5.6, 1:5.7, 1:5.8, 1:5.9, 1:6, 1:6.1, 1:6.2, 1:6.3, 1:6.4, 1:6.5, 1:6.6, 1:6.7, 1:6.8, 1:6.9, 1:7, 1:7.1, 1:7.2, 1:7.3, 1:7.4, 1:7.5, 1:7.6, 1:7.7, 1:7.8, 1:7.9, 1:8, 1:8.1, 1:8.2, 1:8.3, 1:8.4, 1:8.5, 1:8.6, 1:8.7, 1:8.8, 1:8.9, 1:9, 1:9.1, 1:9.2, 1:9.3, 1:9.4, 1:9.5, 1:9.6, 1:9.7, 1:9.8, 1:9.9 또는 1:10 또는 약 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.1, 1:2.2, 1:2.3, 1:2.4, 1:2.5, 1:2.6, 1:2.7, 1:2.8, 1:2.9, 1:3, 1:3.1, 1:3.2, 1:3.3, 1:3.4, 1:3.5, 1:3.6, 1:3.7, 1:3.8, 1:3.9, 1:4, 1:4.1, 1:4.2, 1:4.3, 1:4.4, 1:4.5, 1:4.6, 1:4.7, 1:4.8, 1:4.9, 1:5, 1:5.1, 1:5.2, 1:5.3, 1:5.4, 1:5.5, 1:5.6, 1:5.7, 1:5.8, 1:5.9, 1:6, 1:6.1, 1:6.2, 1:6.3, 1:6.4, 1:6.5, 1:6.6, 1:6.7, 1:6.8, 1:6.9, 1:7, 1:7.1, 1:7.2, 1:7.3, 1:7.4, 1:7.5, 1:7.6, 1:7.7, 1:7.8, 1:7.9, 1:8, 1:8.1, 1:8.2, 1:8.3, 1:8.4, 1:8.5, 1:8.6, 1:8.7, 1:8.8, 1:8.9, 1:9, 1:9.1, 1:9.2, 1:9.3, 1:9.4, 1:9.5, 1:9.6, 1:9.7, 1:9.8, 1:9.9 또는 1:10으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 APC의 수는 약 1.0x106개 APC/cm2 내지 약 4.5x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장에서 APC의 수는 약 2.5x106개 APC/cm2 내지 약 7.5x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택된다
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 APC의 수는 약 1.5x106개 APC/cm2 내지 약 3.5x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장에서 APC의 수는 약 3.5x106개 APC/cm2 내지 약 6.0x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장에서 APC의 수는 약 2.0x106개 APC/cm2 내지 약 3.0x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택되고, 급속 제2 확장에서 APC의 수는 약 4.0x106개 APC/cm2 내지 약 5.5x106개 APC/cm2의 범위로부터 선택된다.
B. 임의적인 세포 매질 구성요소
1. 항-CD3 항체
일부 구현예에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용되는 배양 배지(REP로 언급된 것들 포함, 예를 들어, 도 1 및 8(특히, 예를 들어, 도 8b) 참조)는 항-CD3 항체를 포함한다. IL-2와 조합된 항-CD3 항체는 TIL 집단에서 T 세포 활성화 및 세포 분열을 유도한다. 이 효과는 전장 항체 뿐만 아니라 Fab 및 F(ab')2 단편에서 볼 수 있으며, 전자가 일반적으로 바람직하고; 예를 들어, Tsoukas 등, J. Immunol. 1985, 135, 1719를 참조하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 뮤린, 인간, 영장류, 래트, 및 개과 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 포유동물로부터의 항-인간 CD3 다클론 및 단클론 항체를 포함하여, 본 발명에 사용되는 다수의 적합한 항-인간 CD3 항체가 있다. 일부 구현예에서, OKT3 항-CD3 항체 무로모납이 사용된다(뉴저지주 라리탄 소재의 Ortho-McNeil 또는 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotech에서 상업적으로 입수가능). 일부 구현예에서, OKT-3과 같은 항-CD3 항체는 종양 단편 또는 소화물이 제1 가스 투과성 플라스크, 백, 또는 다른 용기의 배지에 첨가된 직후 (Gen 3 방법의) pre-REP 단계 또는 초기 REP 단계 동안 첨가된다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 뮤린, 인간, 영장류, 래트, 및 개과 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 포유동물로부터의 항-인간 CD3 다클론 및 단클론 항체를 포함하여, 본 발명에서 사용되는 다수의 적합한 항-인간 CD3 항체가 있다. 일부 구현예에서, OKT3 항-CD3 항체 무로모납이 사용된다(뉴저지주 라리탄 소재의 Ortho-McNeil 또는 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotech에서 상업적으로 입수가능).
2. 4-1BB(CD137) 작용제
구현예에서, 제1 확장 및/또는 급속 제2 확장의 세포 배양 매질은 TNFRSF 작용제를 포함한다. 구현예에서, TNFRSF 작용제는 4-1BB(CD137) 작용제이다. 4-1BB 작용제는 당업계에 알려진 임의의 4-1BB 결합 분자일 수 있다. 4-1BB 결합 분자는 인간 또는 포유류 4-1BB에 결합할 수 있는 단클론 항체 또는 융합 단백질일 수 있다. 4-1BB 작용제 또는 4-1BB 결합 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 이소형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위클래스의 면역글로불린 중쇄를 포함할 수 있다. 4-1BB 작용제 또는 4-1BB 결합 분자는 중쇄 및 경쇄를 모두 가질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 결합 분자는 또한 항체(전장 항체 포함), 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 인간, 인간화 또는 키메라 항체, 및 항체 단편, 예를 들어, Fab 단편, F(ab') 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편, 및 4-1BB에 결합하는 항체의 조작된 형태, 예를 들어, scFv 분자를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 완전 인간 항체인 항원 결합 단백질이다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 인간화 항체인 항원 결합 단백질이다. 일부 구현예에서, 현재 개시된 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 4-1BB 작용제는 항-4-1BB 항체, 인간 항-4-1BB 항체, 마우스 항-4-1BB 항체, 포유동물 항-4-1BB 항체, 단클론 항-4-1BB 항체, 다클론 항-4-1BB 항체, 키메라 항-4-1BB 항체, 항-4-1BB 애드넥틴(adnectin), 항-4-1BB 도메인 항체, 단일 쇄 항-4-1BB 단편, 중쇄 항-4-1BB 단편, 경쇄 항-4-1BB 단편, 항-4-1BB 융합 단백질, 및 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함한다. 작용성 항-4-1BB 항체는 강한 면역 반응을 유도하는 것으로 알려져 있다. Lee, 등, PLOS One 2013, 8, e69677. 바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제는 작용성 항-4-1BB 인간화 또는 완전 인간 단클론 항체(즉, 항체 단일 세포주로부터 유래된 항체)이다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 EU-101(Eutilex Co. Ltd.), 우토밀루맙, 또는 우렐루맙, 또는 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다. 바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제는 우토밀루맙 또는 우렐루맙, 또는 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다.
바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제 또는 4-1BB 결합 분자는 또한 융합 단백질일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 삼량체성 또는 육량체성 4-1BB 작용제(3 또는 6개의 리간드 결합 도메인 함유)와 같은 다량체성 4-1BB 작용제는 전형적으로 2개의 리간드 결합 도메인을 보유하는 작용성 단클론 항체와 비교하여 우수한 수용체(4-1BBL) 클러스터링 및 내부 세포 신호전달 복합체 형성을 유도할 수 있다. 3개의 TNFRSF 결합 도메인 및 IgG1-Fc를 포함하고 임의적으로 이들 융합 단백질 중 2개 이상을 추가로 연결하는 삼량체성(3가) 또는 육량체성(또는 6가) 또는 그 이상의 융합 단백질이 예를 들어, Gieffers, 등, Mol. Cancer Therapeutics 2013, 12, 2735-47에 기재되어 있다.
작용성 4-1BB 항체 및 융합 단백질은 강한 면역 반응을 유도하는 것으로 알려져 있다. 바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제는 독성을 감소시키기에 충분한 방식으로 4-1BB 항원에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 4-1BB 작용제는 항체-의존적 세포 독성(ADCC), 예를 들어 NK 세포 세포독성을 폐지하는 작용성 4-1BB 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 4-1BB 작용제는 항체-의존적 세포 식세포작용(ADCP)을 폐지하는 작용성 4-1BB 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 4-1BB 작용제는 보체-의존적 세포독성(CDC)을 폐지하는 작용성 4-1BB 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 4-1BB 작용제는 Fc 영역 기능성을 폐지하는 작용성 4-1BB 단클론 항체 또는 융합 단백질이다.
일부 구현예에서, 4-1BB 작용제는 높은 친화성 및 작용 활성으로 인간 4-1BB(서열번호:40)에 결합하는 것을 특징으로 한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 인간 4-1BB(서열번호:40)에 결합하는 결합 분자이다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 뮤린 4-1BB(서열번호:41)에 결합하는 결합 분자이다. 4-1BB 작용제 또는 결합 분자가 결합하는 4-1BB 항원의 아미노산 서열은 표 5에 요약되어 있다.
표 5. 4-1BB 항원의 아미노산 서열.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 100 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 90 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 80 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 70 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 50 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 40 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 30 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 8 x 105 l/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 8.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 9 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 9.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 1 x 106 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.1 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.4 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.5 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.6 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나 약 2.7 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.8 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2.9 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하는 4-1BB 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 10 nM 이하의 IC50로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 9 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 8 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 7 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 6 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 5 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 4 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 3 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 2 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하거나, 약 1 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 4-1BB에 결합하는 4-1BB 작용제를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제는 PF-05082566 또는 MOR-7480로도 알려진 우토밀루맙, 또는 이의 단편, 유도체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다. 우토밀루맙은 Pfizer, Inc에서 입수가능하다. 우토밀루맙은 면역글로불린 G2-람다, 항-[호모 사피엔스 TNFRSF9(종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리 구성원 9, 4-1BB, T 세포 항원 ILA, CD137)], 호모 사피엔스(완전 인간) 단클론 항체이다. 우토밀루맙의 아미노산 서열을 표 6에 제시되어 있다. 우토밀루맙은 Asn59 및 Asn292에 글리코실화 부위; 위치 22-96(VH-VL), 143-199(CH1-CL), 256-316(CH2) 및 362-420(CH3)에 중쇄 쇄내 이황화 가교; 위치 22'-87'(VH-VL) 및 136'-195'(CH1-CL)에 경쇄 쇄내 이황화 가교; IgG2A 이소형 위치 218-218, 219-219, 222-222, 및 225-225, IgG2A/B 이소형 위치 218-130, 219-219, 222-222, 및 225-225, 및 IgG2B 이소형 위치 219-130(2), 222-222, 및 225-225에 쇄간 중쇄-중쇄 이황화 가교; 및 IgG2A 이소형 위치 130-213'(2), IgG2A/B 이소형 위치 218-213' 및 130-213', 및 IgG2B 이소형 위치 218-213'(2)에 쇄간 중쇄-경쇄 이황화 가교를 포함한다. 우토밀루맙 및 그의 변이체 및 단편의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 8,821,867; 8,337,850; 및 9,468,678, 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2012/032433 A1에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 우토밀루맙의 전임상 특성은 Fisher, 등, Cancer Immunolog. & Immunother. 2012 , 61, 1721-33에 기재되어 있다. 다양한 혈액학적 및 고형 종양 징후에서 우토밀루맙의 현재 임상 시험은 미국 국립보건원(U.S. National Institutes of Health) clinicaltrials.gov 식별자 NCT02444793, NCT01307267, NCT02315066, 및 NCT02554812를 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 서열번호:42에 의해 제시된 중쇄 및 서열번호:43에 의해 제시된 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:42 및 서열번호:43에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 우토밀루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:44에 제시된 서열을 포함하고, 4-1BB 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:45에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 서열번호:44 및 서열번호:45에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 항체를 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:46, 서열번호:47, 및 서열번호:48에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:49, 서열번호:50, 및 서열번호:51에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 우토밀루맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 4-1BB 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 4-1BB 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우토밀루맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받았거나 승인을 위해 제출된 4-1BB 작용제 항체이며, 여기서 4-1BB 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우토밀루맙이다. 4-1BB 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우토밀루맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우토밀루맙이다.
표 6. 우토밀루맙과 관련된 4-1BB 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
바람직한 구현예에서, 4-1BB 작용제는 BMS-663513 및 20H4.9.h4a로도 알려진 단클론 항체 우렐루맙, 또는 이의 단편, 유도체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다. 우렐루맙은 Bristol-Myers Squibb, Inc., 및 Creative Biolabs, Inc로부터 입수가능하다. 우렐루맙은 면역글로불린 G4-카파, 항-[호모 사피엔스 TNFRSF9(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9, 4-1BB, T 세포 항원 ILA, CD137)], 호모 사피엔스(완전 인간) 단클론 항체이다. 우렐루맙의 아미노산 서열은 표 7에 제시되어 있다. 우렐루맙은 위치 298(및 298'')에 N-글리코실화 부위; 위치 22-95(VH-VL), 148-204(CH1-CL), 262-322(CH2) 및 368-426(CH3)(및 위치 22''-95'', 148''-204'', 262''-322'', 및 368''-426'')에 중쇄 쇄내 이황화 가교; 위치 23'-88'(VH-VL) 및 136'-196'(CH1-CL)(및 위치 23'''-88''' 및 136'''-196''')에 경쇄 쇄내 이황화 가교; 위치 227-227'' 및 230-230''에 쇄간 중쇄-중쇄 이황화 가교; 및 135-216' 및 135''-216'''에 쇄간 중쇄-경쇄 이황화 가교를 포함한다. 우렐루맙 및 그의 변이체 및 단편의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 7,288,638 및 8,962,804에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 우렐루맙의 전임상 및 임상 특성은 http:/dx.doi.org/ 10.1158/1078-0432.CCR-16-1272에서 이용가능한 Segal, 등, Clin. Cancer Res. 2016에 기재되어 있다. 다양한 혈액학적 및 고형 종양 징후에서 우렐루맙의 현재 임상 시험은 미국 국립보건원 clinicaltrials.gov 식별자 NCT01775631, NCT02110082, NCT02253992, 및 NCT01471210을 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 서열번호:52에 의해 제시된 중쇄 및 서열번호:53에 의해 제시된 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:52 및 서열번호:53에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 우렐루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:54에 제시된 서열을 포함하고, 4-1BB 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:55에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함을 포함하는 scFv 항체를 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 각각 서열번호:56, 서열번호:57, 및 서열번호:58에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:59, 서열번호:60, 및 서열번호:61에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 우렐루맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 4-1BB 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 4-1BB 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우렐루맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받았거나 승인을 위해 제출된 4-1BB 작용제 항체이며, 여기서 4-1BB 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우렐루맙이다. 4-1BB 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우렐루맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 우렐루맙이다.
표 7. 우렐루맙과 관련한 4-1BB 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 1D8, 3Elor, 4B4(BioLegend 309809), H4-1BB-M127(BD Pharmingen 552532), BBK2(Thermo Fisher MS621PABX), 145501(Leinco Technologies B591), ATCC No. HB-11248로 기탁되고 미국 특허 번호 6,974,863에 개시된 세포주에 의해 생산된 항체, 5F4(BioLegend 31 1503), C65-485(BD Pharmingen 559446), 미국 특허 출원 공개 번호 US 2005/0095244에 개시된 항체, 미국 특허 번호 7,288,638에 계시된 항체(예컨대 20H4.9-IgGl(BMS-663031)), 미국 특허 번호 6,887,673에 개시된 항체(예컨대 4E9 또는 BMS-554271), 미국 특허 번호 7,214,493에 개시된 항체, 미국 특허 번호 6,303,121에 개시된 항체, 미국 특허 번호 6,569,997에 개시된 항체, 미국 특허 번호 6,905,685에 개시된 항체(예컨대 4E9 또는 BMS-554271), 미국 특허 번호 6,362,325에 개시된 항체(예컨대 1D8 또는 BMS-469492; 3H3 또는 BMS-469497; 또는 3El), 미국 특허 번호 6,974,863에 개시된 항체(예컨대 53A2); 미국 특허 번호 6,210,669에 개시된 항체(예컨대 1D8, 3B8, 또는 3El), 미국 특허 번호 5,928,893에 기재된 항체, 미국 특허 번호 6,303,121에 개시된 항체, 미국 특허 번호 6,569,997에 개시된 항체, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2012/177788, WO 2015/119923, 및 WO 2010/042433에 개시된 항체, 및 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 전술한 특허 또는 특허 출원 간행물 각각의 개시내용은 여기에 참조로 포함된다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2008/025516 A1, WO 2009/007120 A1, WO 2010/003766 A1, WO 2010/010051 A1, 및 WO 2010/078966 A1; 미국 특허 출원 공개 번호 US 2011/0027218 A1, US 2015/0126709 A1, US 2011/0111494 A1, US 2015/0110734 A1, 및 US 2015/0126710 A1; 및 미국 특허 번호 9,359,420, 9,340,599, 8,921,519, 및 8,450,460에 기재된 4-1BB 작용성 융합 단백질이며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 구조 I-A(C-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질) 또는 구조 I-B(N-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질)에 묘사된 바와 같은 4-1BB 작용성 융합 단백질, 또는 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다(도 18 참조). 구조 I-A 및 I-B에서, 원통형은 개별 폴리펩티드 결합 도메인을 지칭한다. 구조 I-A 및 I-B는 예를 들어, 4-1BBL(4-1BB 리간드, CD137 리간드(CD137L), 또는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 9(TNFSF9)) 또는 4-1BB에 결합하는 항체로부터 유래된 3개의 선형으로 연결된 TNFRSF 결합 도메인을 포함하며, 이는 접혀서 3가 단백질을 형성한 다음, IgG1-Fc(CH3 및 CH2 도메인 포함)를 통해 두번째 3가 단백질에 연결된 다음 이황화 결합(작은 길쭉한 타원형)을 통해 함께 2개의 3가 단배질을 연결하는 데 사용되어, 구조를 안정화하고 6개의 수용체의 세포내 신호전달 도메인 및 신호전달 단백질을 함께 모아 신호전달 복합체를 형성할 수 있는 작용제를 제공한다. 원통형으로 표시된 TNFRSF 결합 도메인은 예를 들어, 친수성 잔기 및 유연성을 위한 Gly 및 Ser 서열, 뿐만 아니라 가용성을 위한 Glu 및 Lys를 포함할 수 있는 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 쇄를 포함하는 scFv 도메인일 수 있다. de Marco, Microbial Cell Factories, 2011, 10, 44; Ahmad, 등, Clin. & Dev. Immunol. 2012, 980250; Monnier, 등, Antibodies, 2013, 2, 193-208; 또는 본원의 다른 곳에 포함된 참고문헌에 기재된 것들과 같은 임의의 scFv 도메인 설계가 사용될 수 있다. 이 형태의 융합 단백질 구조는 미국 특허 번호 9,359,420, 9,340,599, 8,921,519, 및 8,450,460에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
도 18에 주어진 구조 I-A의 다른 폴리펩티드 도메인에 대한 아미노산 서열은 표 8에서 발견된다. Fc 도메인은 바람직하게는 완전 불변 도메인(서열번호:62의 아미노산 17-230) 힌지 도메인(서열번호:62의 아미노산 1-16) 또는 힌지 도메인의 일부(예를 들어, 서열번호:62의 아미노산 4-16)를 포함한다. C-말단 Fc-항체를 연결하기 위한 바람직한 링커는 추가 폴리펩티드의 융합에 적합한 링커를 포함하여 서열번호:63 내지 서열번호:72에 주어진 구현예로부터 선택될 수 있다.
표 8. C-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질 설계(구조 I-A)에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질을 포함한 TNFRSF 작용제 융합 단백질에 대한 아미노산 서열.
도 18에 주어진 구조 I-B의 다른 폴리펩티드 도메인에 대한 아미노산 서열은 표 9에서 발견된다. Fc 항체 단편이 구조 I-B에서와 같이 TNRFSF 융합 단백질의 N-말단에 융합되는 경우, Fc 모듈의 서열은 바람직하게는 서열번호:73에 제시된 것이고, 링커 서열은 바람직하게는 서열번호:74 내지 서열번호:76에 제시된 구현예로부터 선택된다.
표 9. N-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질 설계(구조 I-B)에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질을 포함한 TNFRSF 작용제 융합 단백질에 대한 아미노산 서열.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 우토밀루맙의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 우렐루맙의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 우토밀루맙의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 표 10에 기재된 가변 중쇄 및 가변 경쇄로부터 선택된 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 전술한 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 및 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 및 바이오시밀러의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함한다.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 4-1BBL 서열을 포함하는 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 서열번호:77에 따른 서열을 포함하는 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 가용성 4-1BBL 서열을 포함하는 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 서열번호:78에 따른 서열을 포함하는 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함한다.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:43 및 서열번호:44에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:54 및 서열번호:55에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 4-1BB 작용제 융합 단백질은 표 10에 주어진 VH 및 VL 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 4-1BB 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다.
표 10. 융합 단백질에서 4-1BB 결합 도메인으로 또는 scFv 4-1BB 작용제 항체로 유용한 추가 폴리펩티드 도메인.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 (i) 제1 가용성 4-1BB 결합 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 4-1BB 결합 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 4-1BB 결합 도메인을 포함하는 4-1BB 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, N-말단 및/또는 C-말단 끝에 추가 도메인을 추가로 포함하며, 여기서 추가 도메인은 Fab 또는 Fc 단편 도메인이다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 (i) 제1 가용성 4-1BB 결합 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 4-1BB 결합 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 4-1BB 결합 도메인을 포함하는 4-1BB 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, N-말단 및/또는 C-말단 끝에 추가 도메인을 추가로 포함하며, 여기서 추가 도메인은 Fab 또는 Fc 단편 도메인이며, 여기서 가용성 4-1BB 도메인 각각은 줄기 영역이 결여되어 있고(이는 삼량체화에 기여하고 세포 막에 일정 거리를 제공하지만, 4-1BB 결합 도메인의 일부는 아님) 제1 및 제2 펩티드 링커는 독립적으로 3-8개의 아미노산 길이를 갖는다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 (i) 제1 가용성 종양 괴사 인자(TNF) 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인을 포함하는 4-1BB 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, 여기서 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인 각각은 줄기 영역이 결여되어 있고 제1 및 제2 펩티드 링커는 독립적으로 3-8개의 아미노산 길이를 갖고, 여기서 각각의 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인은 4-1BB 결합 도메인이다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 전술한 VL 도메인 중 임의의 것에 연결된 전술한 VH 도메인 중 임의의 것을 포함하는 4-1BB 작용성 scFv 항체이다.
구현예에서, 4-1BB 작용제는 미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 BPS Bioscience에서 상업적으로 입수가능한 BPS Bioscience 4-1BB 작용제 항체 카탈로그 번호 79097-2이다. 구현예에서, 4-1BB 작용제는 미국 뉴욕주 셜리 소재의 Creative Biolabs에서 상업적으로 입수가능한 Creative Biolabs 4-1BB 작용제 항체 카탈로그 번호 MOM-18179이다.
3. OX40(CD134) 작용제
구현예에서, TNFRSF 작용제는 OX40(CD134) 작용제이다. OX40 작용제는 당업계에 알려진 임의의 OX40 결합 분자일 수 있다. OX40 결합 분자는 인간 또는 포유류 OX40에 결합할 수 있는 단클론 항체 또는 융합 단백질일 수 있다. OX40 작용제 또는 OX40 결합 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 이소형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위클래스의 면역글로불린 중쇄를 포함할 수 있다. OX40 작용제 또는 OX40 결합 분자는 중쇄 및 경쇄를 모두 가질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 결합 분자는 또한 항체(전장 항체 포함), 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 인간, 인간화 또는 키메라 항체, 및 항체 단편, 예를 들어, Fab 단편, F(ab') 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편, 및 OX40에 결합하는 항체의 조작된 형태, 예를 들어, scFv 분자를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 완전 인간 항체인 항원 결합 단백질이다. 구현예에서, OX40 작용제는 인간화 항체인 항원 결합 단백질이다. 일부 구현예에서, 현재 개시된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 OX40 작용제는 항-OX40 항체, 인간 항-OX40 항체, 마우스 항-OX40 항체, 포유동물 항-OX40 항체, 단클론 항-OX40 항체, 다클론 항-OX40 항체, 키메라 항-OX40 항체, 항-OX40 애드넥틴, 항-OX40 도메인 항체, 단일 쇄 항-OX40 단편, 중쇄 항-OX40 단편, 경쇄 항-OX40 단편, 항-OX40 융합 단백질, 및 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함한다. 바람직한 구현예에서, OX40 작용제는 작용성 항-OX40 인간화 또는 완전 인간 단클론 항체(즉, 단일 세포주로부터 유래된 항체)이다.
바람직한 구현예에서, OX40 작용제 또는 OX40 결합 분자는 또한 융합 단백질일 수 있다. OX40L에 융합된 Fc 도메인을 포함하는 OX40 융합 단백질은 예를 들어, Sadun, 등, J. Immunother. 2009, 182, 1481-89에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서, 삼량체성 또는 육량체성 OX40 작용제(3 또는 6개의 리간드 결합 도메인 함유)와 같은 다량체성 OX40 작용제는 전형적으로 2개의 리간드 결합 도메인을 보유하는 작용성 단클론 항체와 비교하여 우수한 수용체(OX40L) 클러스터링 및 내부 세포 신호전달 복합체 형성을 포함할 수 있다. 3개의 TNFRSF 결합 도메인 및 IgG1-Fc를 포함하고 임의적으로 이들 융합 단백질 중 2개 이상을 추가로 연결하는 삼량체성(3가) 또는 육량체성(또는 6가) 또는 더 큰 융합 단백질은 예를 들어, Gieffers, 등, Mol. Cancer Therapeutics 2013, 12, 2735-47에 기재되어 있다.
작용성 OX40 항체 및 융합 단백질은 강한 면역 반응을 유도하는 것으로 알려져 있다. Curti, 등, Cancer Res. 2013, 73, 7189-98. 바람직한 구현예에서, OX40 작용제는 독성을 감소시키기에 충분한 방식으로 OX40 항원에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체-의존적 세포 독성(ADCC), 예를 들어 NK 세포 세포독성을 폐지하는 작용성 OX40 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체-의존적 세포 식세포작용(ADCP)을 폐지하는 작용성 OX40 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 보체-의존적 세포독성(CDC)을 폐지하는 작용성 OX40 단클론 항체 또는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 Fc 영역 기능성을 폐지하는 작용성 OX40 단클론 항체 또는 융합 단백질이다.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 높은 친화성 및 작용 활성으로 인간 OX40(서열번호:85)에 결합하는 것을 특징으로 한다. 구현예에서, OX40 작용제는 인간 OX40(서열번호:85)에 결합하는 결합 분자이다. 구현예에서, OX40 작용제는 뮤린 OX40(서열번호:86)에 결합하는 결합 분자이다. OX40 작용제 또는 결합 분자가 결합하는 OX40 항원의 아미노산 서열은 표 11에 요약되어 있다.
표 11. OX40 항원의 아미노산 서열.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 100 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 90 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 80 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 70 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 50 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 40 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 30 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하는 OX40 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 8 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 8.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 9 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 9.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 1 x 106 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하는 OX40 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.1 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.4 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.5 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.6 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나 약 2.7 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.8 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2.9 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하는 OX40 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 약 10 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 9 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 8 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 7 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 6 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 5 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 4 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 3 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 약 2 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하거나, 또는 약 1 nM 이하의 IC50으로 인간 또는 뮤린 OX40에 결합하는 OX40 작용제를 포함한다.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 MEDI0562 또는 MEDI-0562로도 알려진 타볼릭시주맙이다. 타볼릭시주맙은 AstraZeneca, Inc의 MedImmune 자회사로부터 입수가능하다. 타볼릭시주맙은 면역글로불린 G1-카파, 항-[호모 사피엔스 TNFRSF4(종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리 구성원 4, OX40, CD134)], 인간화 및 키메라 단클론 항체이다. 타볼릭시주맙의 아미노산 서열은 표 12에 제시되어 있다. 타볼릭시주맙은 푸코실화된 복합 바이안테나리(bi-antennary) CHO-유형 글리칸을 함유하는 위치 301 및 301''에 N-글리코실화 부위; 위치 22-95(VH-VL), 148-204(CH1-CL), 265-325(CH2) 및 371-429(CH3)(및 위치 22''-95'', 148''-204'', 265''-325'', 및 371''-429'')에 중쇄 쇄내 이황화 가교; 위치 23'-88'(VH-VL) 및 134'-194'(CH1-CL)(및 위치 23'''-88''' 및 134'''-194''')에 경쇄 쇄내 이황화 가교; 위치 230-230'' 및 233-233''에 쇄간 중쇄-중쇄 이황화 가교; 및 224-214' 및 224''-214'''에 쇄간 중쇄-경쇄 이황화 가교를 포함한다. 다양한 고형 종양 징후에서 타볼릭시주맙의 현재 임상 시험은 미국 국립보건원 clinicaltrials.gov 식별자 NCT02318394 및 NCT02705482를 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 서열번호:87에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:88에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:87 및 서열번호:88에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 타볼릭시주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:89에 제시된 서열을 포함하고, OX40 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:90에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 항체를 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:91, 서열번호:92, 및 서열번호:93에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:94, 서열번호:95, 및 서열번호:96에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 타볼릭시주맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 OX40 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 OX40 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 타볼릭시주맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 OX40 작용제 항체이며, 여기서 OX40 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 타볼릭시주맙이다. OX40 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 타볼릭시주맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 타볼릭시주맙이다.
표 12. 타볼릭시주맙과 관련된 OX40 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 Pfizer, Inc로부터 입수가능한 완전 인간 항체인 11D4이다. 11D4의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 7,960,515; 8,236,930; 및 9,028,824에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 11D4의 아미노산 서열은 표 13에 제시되어 있다.
구현예에서, OX40 작용제는 서열번호:97에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:98에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:97 및 서열번호:98에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 11D4의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:99에 제시된 서열을 포함하고, OX40 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:100에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:101, 서열번호:102, 및 서열번호:103에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:104, 서열번호:105, 및 서열번호:106에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 11D4와 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 OX40 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 OX40 항체이며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 11D4이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 OX40 작용제 항체이며, 여기서 OX40 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 11D4이다. OX40 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 11D4이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 11D4이다.
표 13. 11D4와 관련된 OX40 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 Pfizer, Inc에서 입수가능한 완전 인간 항체인 18D8이다. 18D8의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 7,960,515; 8,236,930; 및 9,028,824에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 18D8의 아미노산 서열은 표 14에 제시되어 있다.
구현예에서, OX40 작용제는 서열번호:107에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:108에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:107 및 서열번호:108에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 18D8의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:109에 제시된 서열을 포함하고, OX40 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:110에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:111, 서열번호:112, 및 서열번호:113에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:114, 서열번호:115, 및 서열번호:116에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 18D8과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 OX40 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 OX40 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 18D8이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 OX40 작용제 항체이며, 여기서 OX40 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 18D8이다. OX40 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 18D8이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 18D8이다.
표 14. 18D8과 관련된 OX40 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 GlaxoSmithKline plc에서 입수가능한 인간화 항체인 Hu119-122이다. Hu119-122의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 9,006,399 및 9,163,085, 및 국제 특허 공개 번호 WO 2012/027328에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. Hu119-122의 아미노산 서열은 표 15에 제시되어 있다.
구현예에서, OX40 작용제는 Hu119-122의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:117에 제시된 서열을 포함하고, OX40 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:118에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:117 및 서열번호:118에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:117 및 서열번호:118에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:117 및 서열번호:118에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:117 및 서열번호:118에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:117 및 서열번호:118에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:119, 서열번호:120, 및 서열번호:121에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 이의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호:122, 서열번호:123, 및 서열번호:124에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 Hu119-122와 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 OX40 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 OX40 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu119-122이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 OX40 작용제 항체이며, 여기서 OX40 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu119-122이다. OX40 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu119-122이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu119-122이다.
표 15. Hu119-122와 관련된 OX40 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 GlaxoSmithKline plc에서 입수가능한 인간화 항체인 Hu106-222이다. Hu106-222의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 9,006,399 및 9,163,085, 및 국제 특허 공개 번호 WO 2012/027328에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. Hu106-222의 아미노산 서열은 표 16에 제시되어 있다.
구현예에서, OX40 작용제는 Hu106-222의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:125에 제시된 서열을 포함하고, OX40 작용제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:126에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 각각 서열번호:127, 서열번호:128, 및 서열번호:129에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:130, 서열번호:131, 및 서열번호:132에 제시된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 Hu106-222와 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 OX40 작용제 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러 단클론 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 OX40 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu106-222이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 OX40 작용제 항체이며, 여기서 OX40 작용제 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu106-222이다. OX40 작용제 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu106-222이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 Hu106-222이다.
표 16. Hu106-222와 관련된 OX40 작용제 항체에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, OX40 작용제 항체는 MEDI6469(9B12로도 언급됨)이다. MEDI6469는 뮤린 단클론 항체이다. Weinberg, 등, J. Immunother. 2006, 29, 575-585. 일부 구현예에서 OX40 작용제는 Weinberg, 등, J. Immunother. 2006, 29, 575-585에 기재된 바와 같이 Biovest Inc.(미국 매사추세츠주 맬번 소재)에 기탁된 9B12 하이브리도마에 의해 생산된 항체이며, 상기 문헌의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 항체는 MEDI6469의 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 MEDI6469의 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
구현예에서, OX40 작용제는 L106 BD(Pharmingen 제품 #340420)이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체 L106(BD Pharmingen 제품 #340420)의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체 L106(BD Pharmingen 제품 #340420)의 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 ACT35(Santa Cruz Biotechnology, 카탈로그 #20073)이다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체 ACT35(Santa Cruz Biotechnology, 카탈로그 #20073)의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, OX40 작용제는 항체 ACT35(Santa Cruz Biotechnology, 카탈로그 #20073)의 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 구현예에서, OX40 작용제는 뉴햄프셔주 웨스트 레버넌 소재의 InVivoMAb, BioXcell Inc에서 상업적으로 입수가능한 뮤린 단클론 항체 항-mCD134/mOX40(클론 OX86)이다.
구현예에서, OX40 작용제는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 95/12673, WO 95/21925, WO 2006/121810, WO 2012/027328, WO 2013/028231, WO 2013/038191, 및 WO 2014/148895; 유럽 특허 출원 EP 0672141; 미국 특허 출원 공개 번호 US 2010/136030, US 2014/377284, US 2015/190506, 및 US 2015/132288(클론 20E5 및 12H3 포함); 및 미국 특허 번호 7,504,101, 7,550,140, 7,622,444, 7,696,175, 7,960,515, 7,961,515, 8,133,983, 9,006,399, 및 9,163,085에 기재된 OX40 작용제로부터 선택되며, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, OX40 작용제는 구조 I-A(C-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질) 또는 구조 I-B(N-말단 Fc-항체 단편 융합 단백질)에 묘사된 바와 같은 OX40 작용성 융합 단백질, 또는 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 또는 바이오시밀러이다. 구조 I-A 및 I-B의 특성은 상기 및 미국 특허 번호 9,359,420, 9,340,599, 8,921,519, 및 8,450,460에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 도 18에 주어진 구조 I-A의 폴리펩티드 도메인에 대한 아미노산 서열은 표 9에서 발견된다. Fc 도메인은 바람직하게는 완전 불변 도메인(서열번호:62의 아미노산 17-230) 완전 힌지 도메인(서열번호:62의 아미노산 1-16) 또는 힌지 도메인의 일부(예를 들어, 서열번호:62의 아미노산 4-16)를 포함한다. C-말단 Fc-항체를 연결하기 위한 바람직한 링커는 추가 폴리펩티드의 융합에 적합한 링커를 포함하여 서열번호:63 내지 서열번호:72에 주어진 구현예로부터 선택될 수 있다. 마찬가지로, 도 18에 주어진 구조 I-B의 폴리펩티드 도메인에 대한 아미노산 서열은 표 10에서 발견된다. Fc 항체 단편이 구조 I-B에서와 같이 TNRFSF 융합 단백질의 N-말단에 융합되는 경우, Fc 모듈의 서열은 바람직하게는 서열번호:73에 제시된 것이고, 링커 서열은 바람직하게는 서열번호:74 내지 서열번호:76에 제시된 구현예로부터 선택된다.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 타볼릭시주맙의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 11D4의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 18D8의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, Hu119-122의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, Hu106-222의 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 표 17에 기재된 가변 중쇄 및 가변 경쇄로부터 선택된 가변 중쇄 및 가변 경쇄, 전술한 것의 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 임의의 조합, 및 이의 단편, 유도체, 접합체, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 OX40L 서열을 포함하는 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 서열번호:133에 따른 서열을 포함하는 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 가용성 OX40L 서열을 포함하는 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 서열번호:134에 따른 서열을 포함하는 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 서열번호:135에 따른 서열을 포함하는 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함한다.
구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:89 및 서열번호:90에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:99 및 서열번호:100에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:109 및 서열번호:110에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:127 및 서열번호:128에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다. 구현예에서, 구조 I-A 또는 I-B에 따른 OX40 작용제 융합 단백질은 표 17에 주어진 VH 및 VL 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함하는 scFv 도메인인 하나 이상의 OX40 결합 도메인을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 링커에 의해 연결된다.
표 17. 융합 단백질(예를 들어, 구조 I-A 및 I-B)에서 OX40 결합 도메인으로 또는 scFv OX40 작용제 항체로 유용한 추가 폴리펩티드 도메인.
구현예에서, OX40 작용제는 (i) 제1 가용성 OX40 결합 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 OX40 결합 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 OX40 결합 도메인을 포함하는 OX40 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, N-말단 및/또는 C-말단 끝에 추가 도메인을 추가로 포함하고, 여기서 추가 도메인은 Fab 또는 Fc 단편 도메인이다. 구현예에서, OX40 작용제는 (i) 제1 가용성 OX40 결합 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 OX40 결합 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 OX40 결합 도메인을 포함하는 OX40 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, N-말단 및/또는 C-말단 끝에 추가 도메인을 추가로 포함하며, 여기서 추가 도메인은 Fab 또는 Fc 단편 도메인이며 여기서 각각의 가용성 OX40 결합 도메인은 줄기 영역이 결여되어 있고(이는 삼량체화에 기여하고 세포 막에 일정 거리를 제공하지만, OX40 결합 도메인의 일부는 아님) 제1 및 제2 펩티드 링커는 독립적으로 3-8개의 아미노산 길이를 갖는다.
구현예에서, OX40 작용제는 (i) 제1 가용성 종양 괴사 인자(TNF) 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인, (ii) 제1 펩티드 링커, (iii) 제2 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인, (iv) 제2 펩티드 링커, 및 (v) 제3 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인을 포함하는 OX40 작용성 단일-쇄 융합 폴리펩티드이며, 여기서 각각의 가용성 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인은 줄기 영역이 결여되어 있고 제1 및 제2 펩티드 링커는 독립적으로 3-8개의 아미노산 길이를 갖고, 여기서 TNF 슈퍼패밀리 사이토카인 도메인은 OX40 결합 도메인이다.
일부 구현예에서, OX40 작용제는 MEDI6383이다. MEDI6383은 OX40 작용성 융합 단백질이고 미국 특허 번호 6,312,700에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, OX40 작용제는 전술한 VL 도메인 중 임의의 것에 연결된 전술한 VH 도메인 중 임의의 것을 포함하는 OX40 작용성 scFv 항체이다.
구현예에서, OX40 작용제는 미국 뉴욕주 셜리 소재의 Creative Biolabs, Inc.에서 상업적으로 입수가능한 Creative Biolabs OX40 작용제 단클론 항체 MOM-18455이다.
구현예에서, OX40 작용제는 미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 BioLegend, Inc.에서 상업적으로 입수가능한 OX40 작용성 항체 클론 Ber-ACT35이다.
4. AKT 억제제 및 DNA 저메틸화제
구현예에서, Gen 2 또는 Gen 3 프로세스, 또는 본원에 기재된 다른 프로세스의 제1 확장 및/또는 급속 제2 확장의 세포 배양 매질은 AKT 억제제를 포함한다. TIL, MIL, 및 PBL 확장 프로세스에서 AKT 억제제의 사용은 국제 특허 공개 번호 WO 2020/096927 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본원에 개시된 AKT 억제제는 본원에 개시된 프로세스와 관련하여 본원에 개시된 CCR 및 케모카인 수용체와 함께 사용될 수 있거나, CCR 또는 케모카인 수용체 변형의 사용 없이 본원에 개시된 프로세스(예컨대 Gen 2 또는 Gen 3 프로세스)와 함께 단독으로 사용될 수 있다.
적합한 AKT 억제제는 AKT1, AKT2, 및/또는 AKT3 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 아푸레세르팁(afuresertib), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물, 및 이의 조합이다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 이파타세르팁, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물, 및 이의 조합이다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 아푸레세르팁, 우프로세르팁(uprosertib), 이파타세르팁, 보루세르팁(borussertib), 카피바세르팁(capivasertib), 미란세르팁(miransertib), 오리도닌(oridonin), 베보리세르팁(vevorisertib), AT7867, AT13148, BAY1125976, GSK-690693, MK-2206, LY294002, PF-04691502 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 Gen 2 프로세스의 pre-REP 단계 동안, 예컨대 단편화 또는 소화된 종양을 배양물에 첨가한 직후 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 Gen 2 프로세스의 REP 단계 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 Gen 3 프로세스의 프라이밍 단계 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 Gen 3 프로세스의 REP 단계 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 TIL, MIL, 또는 PBL 제조 프로세스의 REP 단계 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 TIL 확장 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 본원에 기재된 유전적 변형 단계를 포함하는 TIL 확장 프로세스 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 CCR 또는 케모카인 수용체에 대한 형질도입 단계를 포함하는 TIL 확장 프로세스 동안 배지에 첨가된다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 알로스테릭(allosteric) AKT 억제제이다. 일부 구현예에서, AKT 억제제는 공유 AKT 억제제이다.
일부 구현예에서, TIL 확장 동안 AKT 억제제의 사용은 CD39-CD69- 세포가 분화된 TIL을 생성한다. 일부 구현예에서, TIL 확장 동안 AKT 억제제의 사용은 예를 들어, CCR 또는 케모카인 수용체의 발현을 위해 변형된 Gen 2 또는 Gen 3 프로세스를 사용하여 AKT 억제제를 사용하지 않고 제조된 TIL에 비해 CD39-CD69- 세포의 양이 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%(즉, 2배)인 TIL을 생성한다. 일부 구현예에서, TIL 확장 동안 AKT 억제제의 사용은 IFNγ+TNFα+ CD8+ T 세포가 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%(즉, 2배)인 TIL을 생성한다.
구현예에서, 본 발명은 CCR 또는 케모카인 수용체를 포함하는 TIL을 포함하는 치료 TIL 조성물을 포함하며, 여기서 TIL은 유전자(예컨대 PDCD1)의 녹아웃(knockout) 또는 녹다운(knockdown)에 의해 단백질(예컨대 PD-1)의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 임의적으로 변형되고/되거나, 여기서 TIL은 AKT 억제제로 제조되고 AKT 억제제를 사용하지 않고 제조된 TIL에 비해 CD39-CD69- 세포 양의 증가를 나타낸다.
구현예에서, Gen 2 또는 Gen 3 프로세스, 또는 본원에 기재된 다른 프로세스의 제1 확장 및/또는 급속 제2 확장의 세포 배양 매질은 단독으로 또는 AKT 억제제 이외에, 그리고 단독으로 또는 본원에 기재된 CCR 및 케모카인 수용체와 함께 데시타빈, 또는 이의 염, 공결정, 용매화물, 또는 수화물을 포함한다.
C. 임의적인 세포 생존력 검정
임의적으로, 세포 생존력 검정은 당업계에 알려진 표준 검정을 사용하여 프라이밍 제1 확장(때때로 초기 벌크 확장으로 언급됨) 후에 수행될 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 방법은 프라이밍 제1 확장 다음에 세포 생존력 검정을 수행하는 것을 포함한다. 예를 들어, 트립판 블루 배제 검정은 죽은 세포를 선택적으로 표지하고 생존력 평가를 허용하는 벌크 TIL의 샘플에서 수행될 수 있다. 생존력을 테스트하는 데 사용하기 위한 다른 분석은 Alamar 블루 검정 및 MTT 검정을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
1. 세포 계수, 생존력, 유세포 측정
일부 구현예에서, 세포 계수 및/또는 생존력이 측정된다. CD3, CD4, CD8, 및 CD56과 같으나 이에 제한되지 않는 마커, 뿐만 아니라 본원에 개시되거나 기재된 임의의 다른 마커의 발현은 FACSCantoTM 유세포 측정기(BD Biosciences)를 사용하여 BD Biosciences(캘리포니아주 산호세 소재)에서 상업적으로 입수가능한 것과 같으나 이에 제한되지 않는 항체를 사용하여 유세포 측정에 의해 측정될 수 있다. 세포는 일회용 c-칩 혈구계산기(일리조이주 바타비아 소재의 VWR)를 사용하여 수동으로 계수될 수 있고 생존력은 트립판 블루 염색을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 세포 생존력은 또한 미국 특허 출원 공개 번호 2018/0282694에 기반하여 검정될 수 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 세포 생존력은 또한 미국 특허 출원 공개 번호 2018/0280436 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2018/081473에 기반하여 검정될 수 있으며, 둘 다 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 경우에, 벌크 TIL 집단은 아래 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 동결보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크 TIL 집단은 REP를 거친 다음 아래 논의된 바와 같이 동결보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, 벌크 또는 REP TIL 집단은 적합한 치료를 위해 유전적 변형을 거칠 수 있다.
2. 세포 배양
구현예에서, 위에 논의된 것들 뿐만 아니라 도 1 및 8, 특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c에 예시된 것들을 포함하여 TIL을 확장하는 방법은 약 5,000 mL 내지 약 25,000 mL의 세포 매질, 약 5,000 mL 내지 약 10,000 mL의 세포 매질, 또는 약 5,800 mL 내지 약 8,700 mL의 세포 매질을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 배지는 무혈청 매질이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장의 배지는 무혈청이다. 일부 구현예에서, 제2 확장의 배지는 무혈청이다. [.]일부 구현예에서, 프라이밍 제1 확장 및 제2 확장(급속 제2 확장으로도 언급됨)의 배지는 모두 무혈청이다. 구현예에서, TIL의 수를 확장하는 것은 하나의 유형의 세포 배양 매질만 사용한다. 임의의 적합한 세포 배양 매질, 예를 들어, AIM-V 세포 매질(L-글루타민, 50 μM 스트렙토마이신 술페이트, 및 10 μM 젠타마이신 술페이트) 세포 배양 매질(캘리포니아주 칼즈배드 소재의 Invitrogen)이 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 방법은 유리하게는 TIL의 수를 확장하는 데 필요한 매질의 양 및 매질 유형의 수를 감소시킨다. 구현예에서, TIL의 수를 확장하는 것은 3일 또는 4일마다 보다 더 빈번하지 않게 세포를 공급하는 것을 포함할 수 있다. 가스 투과성 용기에서 세포 수를 확장하는 것은 세포를 확장하는 데 필요한 공급 빈도를 줄임으로써 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 단순화한다.
구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 배양 매질은 여과되지 않는다. 여과되지 않은 세포 매질의 사용은 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 단순화할 수 있다. 구현예에서, 제1 및/또는 제2 가스 투과성 용기 내 세포 매질은 베타-메르캅토에탄올(BME)이 결여되어 있다.
구현예에서, 포유동물로부터 종양 조직 샘플을 수득하는 단계; 종양 조직 샘플을 IL-2, 1X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제1 가스 투과성 용기에서 프라이밍 제1 확장으로서 약 1 내지 8일, 예를 들어, 약 7일, 또는 프라이밍 제1 확장으로서 약 8일의 기간 동안 배양하는 단계; TIL을 제2 가스 투과성 용기로 옮기고 IL-2, 2X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제2 가스 투과성 용기에서 약 7 내지 9일, 예를 들어, 약 7일, 약 8일, 또는 약 9일의 기간 동안 TIL의 수를 확장하는 단계를 포함하는 방법의 기간.
구현예에서, 포유동물로부터 종양 조직 샘플을 수득하는 단계; 종양 조직 샘플을 IL-2, 1X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제1 가스 투과성 용기에서 프라이밍 제1 확장으로서 약 1 내지 7일, 예를 들어, 약 7일의 기간 동안 배양하는 단계; TIL을 제2 가스 투과성 용기로 옮기고 IL-2, 2X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제2 가스 투과성 용기에서 약 7 내지 14일, 또는 약 7 내지 9일, 예를 들어, 약 7일, 약 8일, 또는 약 9일, 약 10일, 또는 약 11일의 기간 동안 TIL의 수를 확장하는 단계를 포함하는 방법의 기간.
구현예에서, 포유동물로부터 종양 조직 샘플을 수득하는 단계; 종양 조직 샘플을 IL-2, 1X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제1 가스 투과성 용기에서 프라이밍 제1 확장으로서 약 1 내지 7일, 예를 들어, 약 7일의 기간 동안 배양하는 단계; TIL을 제2 가스 투과성 용기로 옮기고 IL-2, 2X 항원 제시 영양 세포, 및 OKT-3을 포함하는 세포 매질을 함유하는 제2 가스 투과성 용기에서 약 7 내지 11일, 예를 들어, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10, 또는 약 11일의 기간 동안 TIL의 수를 확장하는 단계를 포함하는 방법의 기간.
구현예에서, TIL은 가스 투과성 용기에서 확장된다. 가스 투과성 용기는 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0106717 A1에 기재된 것들을 포함하여, 당업계에 알려진 방법, 조성물, 및 장치를 사용하여 PBMC를 사용하여 TIL을 확장하는 데 사용되었으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL은 가스 투과성 백에서 확장된다. 구현예에서, TIL은 Xuri 세포 확장 시스템 W25(GE Healthcare)와 같은 가스 투과성 백에서 TIL을 확장하는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 구현예에서, TIL은 Xuri 세포 확장 시스템 W5(GE Healthcare)로도 알려진 WAVE 생물반응기 시스템과 같은 가스 투과성 백에서 TIL을 확장하는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 구현예에서, 세포 확장 시스템은 약 100 mL, 약 200 mL, 약 300 mL, 약 400 mL, 약 500 mL, 약 600 mL, 약 700 mL, 약 800 mL, 약 900 mL, 약 1 L, 약 2 L, 약 3 L, 약 4 L, 약 5 L, 약 6 L, 약 7 L, 약 8 L, 약 9 L, 및 약 10 L로 이루어진 군으로부터 선택된 부피를 갖는 가스 투과성 세포 백을 포함한다.
구현예에서, TIL은 G-Rex 플라스크(Wilson Wolf Manufacturing에서 상업적으로 입수가능)에서 확장될 수 있다. 이러한 구현예는 세포 집단이 약 5x105개 세포/cm2에서 10x106개 내지 30x106개 세포/cm2까지 확장하는 것을 허용한다. 구현예에서 이는 공급 없이 이루어진다. 구현예에서, 이는 매질이 G-Rex 플라스크의 약 10 cm 높이에 있는 한 공급 없이 이루어진다. 구현예에서 이는 공급 없이 이루어지지만 하나 이상의 사이토카인이 첨가된다. 구현예에서, 사이토카인은 사이토카인을 매질과 혼합할 어떠한 필요성도 없이 볼루스로서 첨가될 수 있다. 이러한 용기, 장치, 및 방법은 당업계에 알려져 있고 TIL을 확장하는 데 사용되었고, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2014/0377739A1, 국제 공개 번호 WO 2014/210036 A1, 미국 특허 출원 공개 번호 us 2013/0115617 A1, 국제 공개 번호 WO 2013/188427 A1, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2011/0136228 A1, 미국 특허 번호 US 8,809,050 B2, 국제 공개 번호 WO 2011/072088 A2, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2016/0208216 A1, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2012/0244133 A1, 국제 공개 번호 WO 2012/129201 A1, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2013/0102075 A1, 미국 특허 번호 US 8,956,860 B2, 국제 공개 번호 WO 2013/173835 A1, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0175966 A1에 기재된 것들을 포함하며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 프로세스는 또한 Jin 등, J. Immunotherapy, 2012, 35:283-292에 기재되어 있다.
D. TIL에서 유전자의 임의적인 녹다운 또는 녹아웃
일부 구현예에서, 본 발명의 확장된 TIL은 일시적 방식으로 단백질 발현을 변경하기 위해, 각각 본원에 제공된 바와 같은 폐쇄형 멸균 제조 프로세스 동안을 포함하여, 확장 단계 전, 동안, 또는 후에 추가로 조작된다. 일부 구현예에서, 일시적으로 변경된 단백질 발현은 일시적 유전자 편집으로 인한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 확장된 TIL은 전사 인자(TF) 및/또는 TIL에서 단백질 발현을 일시적으로 변경할 수 있는 다른 분자로 처리된다. 일부 구현예에서, TF 및/또는 단백질 발현을 일시적으로 변경할 수 있는 다른 분자는 종양 항원의 발현 변경 및/또는 TIL 집단에서 종양 항원 특이적 T 세포 수의 변경을 제공한다.
특정 구현예에서, 방법은 TIL 집단을 유전적으로 편집하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 방법은 TIL의 제1 집단, TIL의 제2 집단 및/또는 TIL의 제3 집단을 유전적으로 편집하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 단백질 발현의 촉진 또는 하나 이상의 단백질 발현의 억제, 뿐만 아니라 동시에 하나의 단백질 세트의 촉진과 또 다른 단백질 세트의 억제 둘 다의 조합을 위해 TIL 집단에 메신저 RNA(mRNA) 또는 작은(또는 짧은) 간섭 RNA(siRNA)의 삽입을 포함한 리보핵산(RNA) 삽입을 통해서와 같은 뉴클레오티드 삽입을 통한 유전자 편집을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 확장된 TIL은 단백질 발현의 일시적 변경을 겪는다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 제1 확장 전에 벌크 TIL 집단에서 발생한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 제1 확장 후에 발생한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 제2 확장 전에 벌크 TIL 집단에서 발생한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 제2 확장 후에 발생한다.
구현예에서, TIL 집단에서 단백질 발현을 일시적으로 변경하는 방법은 전기천공 단계를 포함한다. 전기천공 방법은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, Tsong, Biophys. J. 1991, 60, 297-306, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2014/0227237 A1에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단에서 단백질 발현을 일시적으로 변경하는 방법은 칼슘 포스페이트 형질감염 단계를 포함한다. 칼슘 포스페이트 형질감염 방법(칼슘 포스페이트 DNA 침전, 세포 표면 코팅, 및 세포내이입)은 당업계에 알려져 있고 Graham and van der Eb, Virology 1973, 52, 456-467; Wigler, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 1979, 76, 1373-1376; 및 Chen and Okayarea, Mol. Cell. Biol. 1987, 7, 2745-2752; 및 미국 특허 번호 5,593,875에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단에서 단백질 발현을 일시적으로 변경하는 방법은 리포솜 형질감염 단계를 포함한다. 여과수 중 양이온성 지질 N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-n,n,n-트리메틸염화암모늄(DOTMA) 및 디올레일 포스포티딜에탄올아민(DOPE)의 1:1(w/w) 리포솜 제형을 이용하는 방법과 같은 리포솜 형질감염 방법은 당업계에 알려져 있고 Rose, 등, Biotechniques 1991, 10, 520-525 및 Felgner, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 7413-7417 및 미국 특허 번호 5,279,833; 5,908,635; 6,056,938; 6,110,490; 6,534,484; 및 7,687,070에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단에서 단백질 발현을 일시적으로 변경하는 방법은 미국 특허 번호 5,766,902; 6,025,337; 6,410,517; 6,475,994; 및 7,189,705에 기재된 방법을 사용한 형질감염 단계를 포함하며; 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, CCR을 발현하도록 변형된 TIL을 포함한 본 발명의 TIL은 TIL을 유전적으로 편집하여 PD-1 및 CTLA-4를 코딩하는 유전자와 같은 특이적 표적 유전자를 녹아웃시키는 본원에 기재된 방법을 포함하여, 국제 특허 출원 번호 WO 2019/136456 A1 또는 WO 2019/210131 A1에 기재된 방법을 사용하여 하나 이상의 유전자의 발현을 일시적으로 또는 영구적으로 억제하도록 추가로 변형되며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 줄기 기억 T 세포(TSCM)의 증가를 초래한다. TSCM은 항원-경험 중추 기억 T 세포의 초기 전구체이다. TSCM은 일반적으로 장기 생존, 자기 재생, 및 줄기 세포를 정의하는 다능성 능력을 나타내며, 일반적으로 효과적인 TIL 생성물의 생성에 바람직하다. TSCM은 입양 세포 전달의 마우스 모델에서 다른 T 세포 하위집합과 비교하여 향상된 항종양 활성을 나타내었다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 높은 비율의 TSCM을 포함하는 조성물을 갖는 TIL 집단을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TSCM 백분율의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIL 집단에서 TSCM의 적어도 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 또는 10-배 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 적어도 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% TSCM을 갖는 TIL 집단을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 적어도 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% TSCM을 갖는 TIL의 치료 집단을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 항원-경험 T-세포의 회춘(rejuvenation)을 초래한다. 일부 구현예에서, 회춘은 예를 들어, 증식 증가, T-세포 활성화 증가, 및/또는 항원 인식 증가를 포함한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 종양-유래 TCR 레퍼토리를 보존하기 위해 T-세포의 큰 분획에서 발현을 변경한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 종양-유래 TCR 레퍼토리를 변경하지 않는다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 종양-유래 TCR 레퍼토리를 유지한다.
일부 구현예에서, 단백질의 일시적 변경은 특정 유전자의 발현 변경을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1(PDCD1 또는 CC279로도 알려짐), TGFBR2, CCR4/5, CBL-B(CBLB 및 Cbl-b로도 알려짐), CISH, CCR(키메라 공동자극 수용체), IL-2, IL-12, IL-15, IL-21, NOTCH 1/2 ICD, TIM-3, LAG-3, TIGIT, TGFβ, CCR2, CCR4, CCR5, CXCR1, CXCR2, CSCR3, CCL2(MCP-1), CCL3(MIP-1α), CCL4(MIP1-β), CCL5(RANTES), CXCL1/CXCL8, CCL22, CCL17, CXCL1/CXCL8, VHL, CD44, PIK3CD, SOCS1, 흉선세포 선택 연관 고이동성 그룹(HMG) 박스(TOX), 안키린 반복 도메인 11(ANKRD11), BCL6 공동 억제인자(BCOR) 및/또는 cAMP 단백질 키나제 A(PKA)를 포함하나 이에 제한되지 않는 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, TGFBR2, CCR4/5, CBL-B, CISH, CCR(키메라 공동자극 수용체), IL-2, IL-12, IL-15, IL-21, NOTCH 1/2 ICD, TIM-3, LAG-3, TIGIT, TGFβ, CCR2, CCR4, CCR5, CXCR1, CXCR2, CSCR3, CCL2(MCP-1), CCL3(MIP-1α), CCL4(MIP1-β), CCL5(RANTES), CXCL1/CXCL8, CCL22, CCL17, CXCL1/CXCL8, VHL, CD44, PIK3CD, SOCS1, 흉선세포 선택 연관 고이동성 그룹(HMG) 박스(TOX), 안키린 반복 도메인 11(ANKRD11), BCL6 공동 억제인자(BCOR) 및/또는 cAMP 단백질 키나제 A(PKA)로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TGFBR2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR4/5를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CBL-B를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CISH를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR(키메라 공동자극 수용체)을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 IL-2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 IL-12를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 IL-15를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 NOTCH 1/2 ICD를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIM-3을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 LAG-3을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIGIT를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TGFβ를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR4를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR5를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CSCR3을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL2(MCP-1)를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL3(MIP-1α)을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL4(MIP1-β)를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL5(RANTES)를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCL1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCL8을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL22를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCL17을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 VHL을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD44를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PIK3CD를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 SOCS1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 흉선세포 선택 연관 고이동성 그룹(HMG) 박스(TOX)를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 안키린 반복 도메인 11(ANKRD11)을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 BCL6 공동 억제인자(BCOR)를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 cAMP 단백질 키나제 A(PKA) 공동 억제인자를 표적한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 케모카인 수용체의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 일시적 단백질 발현에 의해 과발현되는 케모카인 수용체는 CCL2(MCP-1), CCL3(MIP-1α), CCL4(MIP1-β), CCL5(RANTES), CXCL1, CXCL8, CCL22, 및/또는 CCL17을 포함하나 이에 제한되지 않는 리간드를 갖는 수용체를 포함한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, TIGIT, TGFβR2, 및/또는 TGFβ의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다(예를 들어, TGFβ 경로 차단 초래 포함). 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CISH의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 예를 들어, TIL의 종양 부위로의 수송 또는 이동을 개선하기 위해 케모카인 수용체의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR(키메라 공동자극 수용체)의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CXCR1, CXCR2, 및/또는 CSCR3으로 이루어진 군으로부터 선택된 케모카인 수용체의 증가 및/또는 과발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 막 결합된 인터류킨을 포함한 인터류킨의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 IL-2, IL-12, IL-15, 및/또는 IL-21로 이루어진 군으로부터 선택된 인터류킨의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 막 결합된 IL-2, IL-12, IL-15, 및/또는 IL-21(mbIL-2, mbIL-12, mbIL-15, 및/또는 mbIL-21, 및 단일-쇄 변이체 예컨대 단일-쇄 mbIL-12)의 전기천공은 단독으로 또는 본원에 기재된 CCR 및 케모카인 수용체와 조합하여, 그리고 단독으로 본원에 기재된 유전자의 녹다운 또는 녹아웃과 조합하여 본 발명의 TIL에 포함될 수 있다. 전술한 것과 관련한 조성물 및 방법은 본원 및 Zhang, 등, J. Immunother. Cancer 2020, 8, e000210, 국제 특허 공개 번호 WO 2020/123716 A1, 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0291934 A1에 기재되어 잇으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 NOTCH 1/2 ICD의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 VHL의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD44의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PIK3CD의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 SOCS1의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD40 리간드(CD40L)의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 cAMP 단백질 키나제 A(PKA)의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 cAMP 단백질 키나제 A(PKA)의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1 및 LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, LAG-3, CISH, CBL-B, TIM-3, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1 및 LAG-3, CISH, CBL-B, TIM-3, 및 이의 조합 중 1개의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1 및 LAG-3의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1 및 CISH의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1 및 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 LAG-3 및 CISH의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 LAG-3 및 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CISH 및 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIM-3 및 PD-1의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIM-3 및 LAG-3의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIM-3 및 CISH의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 TIM-3 및 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 부착 분자는 감마레트로바이러스 또는 렌티바이러스 방법에 의해 TIL의 제1 집단, TIL의 제2 집단, 또는 수확된 TIL 집단에 삽입된다(예를 들어, 부착 분자의 발현이 증가함).
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현, 및 CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PD-1, LAG-3, TIM-3, CISH, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현, 및 CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, TIL은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, CD40L, 및/또는 c-Jun을 포함하나 이에 제한되지 않는 유전자를 표적하는 단백질 발현의 안정하거나 일시적인 변경을 위해 추가로 유전적으로 변형된다. 일부 구현예에서, TIL은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, CD40L, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 표적하는 단백질 발현의 변경을 위해 추가로 유전적으로 변형된다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 HPK1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 YAP1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PTPN22를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CBL-B를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 NT-PGC1알파를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR3을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR4를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR5를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR6을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CX3CR1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR1을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR2를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR4를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR5를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR6을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR7을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR8을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR9를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR10을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 BATF를 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 c-Jun을 표적한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD40L을 표적한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이상의 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개 이상의 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 4개 이상의 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1 및/또는 YAP1의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 HPK1의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 YAP1의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PTPN22의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 분자의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이상의 분자의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개 이상의 분자의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 4개 이상의 분자의 증가 및/또는 과발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 5개 이상의 분자의 증가 및/또는 과발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자의 감소 및/또는 줄어든 발현, 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF, c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CD38의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 HPK1의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 YAP1의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PTPN22의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CBL-B의 감소 및/또는 줄어든 발현 및 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합의 증가 및/또는 향상된 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CX3CR1, CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF,c-Jun, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 PGC1알파의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 NT-PGC1알파의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR1의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR2의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR3의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR4의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR5의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CXCR6의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CX3CR1의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR1의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR2의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR4의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR5의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR6의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR7의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR8의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR9의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 CCR10의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 BATF의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 c-Jun의 증가 및/또는 향상된 발현 및 CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, CBL-B, 및 이의 조합의 감소 및/또는 줄어든 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, 약 5%, 약 10%, 약 10%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%의 발현 감소가 있다, 일부 구현예에서, 적어도 약 90%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 99%의 발현 감소가 있다.
일부 구현예에서, 약 5%, 약 10%, 약 10%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%의 발현 증가가 있다, 일부 구현예에서, 적어도 약 90%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 95%의 발현 증가가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 99%의 발현 증가가 있다.
일부 구현예에서, 단백질 발현의 일시적 변경은 전사 인자(TF) 및/또는 TIL에서 단백질 발현을 일시적으로 변경할 수 있는 다른 분자로 TIL을 처리함으로써 유도된다. 일부 구현예에서, SQZ 벡터가 없는 미세유체 플랫폼은 전사 인자(TF) 및/또는 단백질 발현을 일시적으로 변경할 수 있는 다른 분자의 세포내 전달에 이용된다. T 세포를 포함한 다양한 1차 인간 세포에 전사 인자를 포함한 단백질을 전달하는 능력을 입증하는 이러한 방법은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0093073 A1, US 2018/0201889 A1, 및 US 2019/0017072 A1에 기재되었으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 방법은 TIL 집단을 전사 인자(TF) 및/또는 일시적인 단백질 발현을 유도할 수 있는 다른 분자에 노출시키기 위해 본 발명과 함께 이용될 수 있으며, 여기서 상기 TF 및/또는 일시적인 단백질 발현을 유도할 수 있는 다른 분자는 종양 항원의 발현 증가 및/또는 TIL 집단에서 종양 항원 특이적 T 세포 수 증가를 제공하여, TIL 집단의 재프로그래밍 및 프로그래밍되지 않은 TIL 집단과 비교하여 재프로그래밍된 TIL 집단에서 치료적 효능의 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 재프로그래밍은 본원에 기재된 바와 같이 TIL의 시작 또는 이전 집단(즉, 재프로그래밍 전) 집단에 비해 효과기 T 세포 및/또는 중추 기억 T 세포의 하위집단 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 TCF-1, NOTCH 1/2 ICD, MYB, BATF, CD40L, 및/또는 C-Jun을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 TCF-1이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 NOTCH 1/2 ICD이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 MYB이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 BATF이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 c-Jun이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 CD40L이다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 추가 TIL 재프로그래밍을 유도하기 위해 상업적으로 입수가능한 KNOCKOUT 혈청 대체물(Gibco/ThermoFisher)과 같은 유도 만능 줄기 세포 배양물(iPSC)과 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 추가 TIL 재프로그래밍을 유도하기 위해 iPSC 칵테일과 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 전사 인자(TF)는 iPSC 칵테일 없이 투여된다. 일부 구현예에서, 재프로그래밍은 TSCM의 백분율 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 재프로그래밍 약 5%, 약 10%, 약 10%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95% TSCM만큼 TSCM의 백분율 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, 위에 기재된 바와 같이 단백질 발현을 일시적으로 변경하는 방법은 하나 이상의 단백질 생산을 위한 유전자의 안정한 혼입 단계를 포함하는, CCR을 발현하기 위해 본원의 다른 곳에 기재된 유전적 변형과 같은 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 단계와 조합될 수 있다. 특정 구현예에서, 방법은 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 방법은 TIL의 제1 집단, TIL의 제2 집단 및/또는 TIL의 제3 집단을 유전적으로 변형시키는 것을 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 레트로바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 렌티바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 렌티바이러스 형질도입 시스템은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, Levine, 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. 2006, 103, 17372-77; Zufferey, 등, Nat. Biotechnol. 1997, 15, 871-75; Dull, 등, J. Virology 1998, 72, 8463-71, 및 미국 특허 번호 6,627,442에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 감마-레트로바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 감마-레트로바이러스 형질도입 시스템은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, Cepko and Pear, Cur. Prot. Mol. Biol. 1996, 9.9.1-9.9.16에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 트랜스포존 매개 유전자 전달 단계를 포함한다. 트랜스포존 매개 유전자 전달 시스템은 당업계에 알려져 있고 트랜스포사제가 DNA 발현 벡터로서 또는 발현가능한 RNA 또는 단백질로서 제공되어 트랜스포사제의 장기 발현이 형질전환 세포에서 발생하지 않도록 하는 시스템, 예를 들어, mRNA(예를 들어, 캡 및 폴리-A 꼬리를 포함하는 mRNA)로서 제공된 트랜스포사제를 포함한다. SB10, SB11, 및 SB100x와 같은 연어과-유형 Tel-유사 트랜스포사제(SB 또는 잠자는 숨속의 미녀 트랜스포사제), 및 효소적 활성이 증가된 조작된 효소를 포함하는 적합한 트랜스포존 매개 유전자 전달 시스템은 예를 들어, Hackett, 등, Mol. Therapy 2010, 18, 674-83 및 미국 특허 번호 6,489,458에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, TIL에서 단백질 발현의 일시적 변경은 일반적으로 19-25개 염기쌍 길이의 이중 가닥 RNA 분자인 때때로 짧은 간섭 RNA 또는 침묵 RNA로 알려진 작은 간섭 RNA(siRNA)에 의해 유도된다. siRNA는 특이적 유전자의 발현을 상보적 뉴클레오티드 서열로 방해하는 경우 RNA 간섭(RNAi)에 사용된다. siRNA는 본 발명에 따른 CCR로 또한 변형된 TIL에서 유전자를 일시적으로 녹다운하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL에서 단백질 발현의 일시적 변경은 20-뉴클레오티드 안티센스(가이드) 가닥 및 테트라에틸렌글리콜(TEG) 링커를 사용하여 3' 단부에서 콜레스테롤에 접합된 13 내지 15개의 염기 센스(패신저) 가닥을 포함하는 높은 백분율의 2'-OH 치환(전형적으로 불소 또는 -OCH3)을 갖는 화학적으로 합성된 비대칭 siRNA인 이중체인 자기 전달 RNA 간섭(sdRNA)에 의해 유도된다. 때때로 짧은 간섭 RNA 또는 침묵 RNA로 알려진 작은 간섭 RNA(siRNA)는 일반적으로 19-25개 염기쌍 길이의 이중 가닥 RNA 분자이다. siRNA는 특이적 유전자의 발현을 상보적 뉴클레오티드 서열로 방해하는 경우 RNA 간섭(RNAi)에 사용된다. sdRNA는 세포에 들어가기 위해 전달 비히클이 필요하지 않는 공유적으로 및 소수성으로 변형된 RNAi 화합물이다. sdRNA는 일반적으로 최소 이중 가닥 영역을 갖는 비대칭 화학적으로 변형된 핵산 분자이다. sdRNA 분자는 전형적으로 단일 가닥 영역 및 이중 가닥 영역을 함유하고, 분자의 단일 가닥 및 이중 가닥 영역 내에 다양한 화학적 변형을 함유할 수 있다. 추가적으로, sdRNA 분자는 본원에 기재된 바와 같이 통상적인 고급 스테롤-유형 분자와 같은 소수성 접합체에 부착될 수 있다. sdRNA 및 이러한 sdRNA를 제조하는 연관된 방법은 또한 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2016/0304873 A1, US 2019/0211337 A1, US 2009/0131360 A1, 및 US 2019/0048341 A1, 및 미국 특허 번호 10,633,654 및 10,913,948B2에 광범위하게 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. sdRNA 구조, 화학, 표적화 위치, 서열 선호도 등을 최적화하기 위해, 알고리즘은 sdRNA 효능 예측을 위해 개발되고 활용되었다. 이들 분석에 기반하여, 기능적 sdRNA 서열는 일반적으로 1 μM 농도에서 발현이 70% 초과 감소하는 것으로 정의되었으며, 확률은 40% 초과이다.
이중 가닥 DNA(dsRNA)는 일반적으로 센스(패신저) 및 안티센스(가이드) 가닥인 RNA의 상보적 가닥 쌍을 포함하는 임의의 분자를 정의하는 데 사용될 수 있고, 단일 가닥 오버행(overhang) 영역을 포함할 수 있다. siRNA와 대조적으로 용어 dsRNA는 일반적으로 다이서(Dicer)를 포함한 절단 효소 시스템 작용에 의해 더 큰 dsRNA 분자로부터 방출되는 siRNA 분자의 서열을 포함하는 전구체 분자를 지칭한다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA의 사용을 포함하는 방법은 CCR을 발현하도록 변형된 TIL을 포함하는 TIL 집단에서 단백질 발현의 일시적 변경을 포함한다. siRNA 및 sdRNA를 사용하는 방법은 Khvorova and Watts, Nat. Biotechnol. 2017, 35, 238-248; Byrne, 등, J. Ocul. Pharmacol. Ther. 2013, 29, 855-864; 및 Ligtenberg, 등, Mol. Therapy, 2018, 26, 1482-93에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, siRNA의 전달은 전기천공 또는 세포 막 파괴(예컨대 스퀴즈 또는 SQZ 방법)를 사용하여 달성된다. 구현예에서, sdRNA를 TIL 집단에 전달하는 것은 전기천공, SQZ, 또는 다른 방법을 사용하지 않고, 대신에 TIL 집단이 매질에서 1 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출되는 1 내지 3일 기간을 사용하여 달성된다. 특정 구현예에서, 방법은 TIL 집단을 1 내지 3일 기간 동안 매질에서 1 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출시키는 것을 포함하는 TIL 집단에 대한 전달 또는 siRNA 또는 sdRNA를 포함한다. 구현예에서, sdRNA를 TIL 집단에 전달하는 것은 TIL 집단이 매질에서 10 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출되는 1 내지 3일 기간을 사용하여 달성된다. 구현예에서, sdRNA를 TIL 집단에 전달하는 것은 TIL 집단이 매질에서 50 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출되는 1 내지 3일 기간을 사용하여 달성된다. 구현예에서, sdRNA를 TIL 집단에 전달하는 것은 TIL 집단이 매질에서 0.1 μM/10,000 TIL 내지 50 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출되는 1 내지 3일 기간을 사용하여 달성된다. 구현예에서, sdRNA를 TIL 집단에 전달하는 것은 TIL 집단이 매질에서 0.1 μM/10,000 TIL 내지 50 μM/10,000 TIL의 농도로 sdRNA에 노출되는 1 내지 3일 기간을 사용하여 달성되며, 여기서 sdRNA에 노출은 새로운 sdRNA를 배지에 첨가함으로써 2, 3, 4, 또는 5회 수행된다. 다른 적합한 프로세스는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2011/0039914 A1, US 2013/0131141 A1, 및 US 2013/0131142 A1, 및 미국 특허 번호 9,080,171에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 제조 동안 TIL 집단에 삽입된다. 일부 구현예에서, sdRNA는 NOTCH 1/2 ICD, PD-1, CTLA-4 TIM-3, LAG-3, TIGIT, TGFβ, TGFBR2, cAMP 단백질 키나제 A(PKA), BAFF BR3, CISH, CBL-B, CD38, HPK1, YAP1, 및/또는 PTPN22 및/또는을 방해하는 RNA를 암호화한다. 일부 구현예에서, 발현 감소는 예를 들어, 유세포 측정 및/또는 qPCR에 의해 측정된 바와 같이 유전자 침묵 백분율을 기준으로 결정된다. 일부 구현예에서, 약 5%, 약 10%, 약 10%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 80%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 85%의 발현 감소가 있다, 일부 구현예에서, 적어도 약 90%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 95%의 발현 감소가 있다. 일부 구현예에서, 적어도 약 99%의 발현 감소가 있다.
siRNA의 화학적 변형에 기반한 자기 절단가능 RNAi 기술이 본원에 기재된 바와 같이 sdRNA를 TIL에 성공적으로 전달하기 위해 본 발명의 방법과 함께 이용될 수 있다. 백본 변형과 비대칭 siRNA 구조 및 소수성 리간드의 조합(예를 들어, Ligtenberg, 등, Mol. Therapy, 2018, 26, 1482-93 및 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0304873 A1을 참조하여, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함됨)은 sdRNA의 뉴클레아제 안정성을 이용하여 배양 배지에 간단히 첨가함으로써 추가 제형 및 방법 없이 sdRNA가 배양되는 포유류 세포에 침투하는 것을 허용한다. 이 안정성은 배지에서 sdRNA의 활성 농도를 유지함으로써 단순히 표적 유전자 활성의 RNAi 매개 감소 수준을 일정하게 지지하는 것을 허용한다. 이론에 얽매이지 않지만, sdRNA의 백분 안정화는 비분할 세포에서 수개월 동안 지속될 수 있는 유전자 발현 효과의 확장된 감소를 제공한다.
일부 구현예에서, TIL의 95% 초과의 형질감염 효율 및 다양한 특이적 siRNA 또는 sdRNA에 의한 표적의 발현 감소가 발생한다. 일부 구현예에서, 여러 변형되지 않은 리보스 잔기를 함유하는 siRNA 또는 sdRNA를 완전히 변형된 서열로 대체하여 RNAi 효과의 효능 및/또는 수명을 증가시켰다. 일부 구현예에서, 발현 효과의 감소는 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 5일, 6일, 7일, 또는 8일 이상 동안 유지된다. 일부 구현예에서, 발현 효과의 감소는 TIL의 siRNA 또는 sdRNA 처리 후 10일 이상에 감소한다. 일부 구현예에서, 표적 발현의 발현에서 70% 초과 감소가 유지된다. 일부 구현예에서, 표적 발현의 발현에서 70% 초과 감소가 TIL에서 유지된다. 일부 구현예에서, PD-1/PD-L1 경로에서 발현 감소는 일부 구현예에서, PD-1/PD-L1 경로의 억제 효과 회피로 인해 TIL이 더 강력한 생체내 효과를 나타내는 것을 허용한다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA에 의한 PD-1의 발현 감소는 TIL 증식 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 70% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 75% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 80% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 85% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 90% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 95% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 표적 유전자의 발현에서 99% 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 0.25 μM 내지 약 4 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 0.25 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 0.5 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 0.75 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 1.0 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 1.25 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 1.5 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 1.75 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 2.0 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 2.25 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 2.5 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 2.75 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 3.0 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 3.25 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 3.5 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 3.75 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 sdRNA 서열은 약 4.0 μM의 농도로 전달될 때 표적 유전자의 발현에서 감소를 나타낸다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드 제제는 치료제의 안정성 및/또는 유효성을 증가시키고, 올리고뉴클레오티드를 치료될 세포 또는 조직에 효율적으로 전달하기 위해 하나 이상의 변형을 포함한다. 이러한 변형은 2'-O-메틸 변형, 2'-O-플루로 변형, 디포스포로티오에이트 변형, 2' F 변형된 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형된 및/또는 2'데옥시 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 예를 들어, 스테롤, 콜레스테롤, 비타민 D, 나프틸, 이소부틸, 벤질, 인돌, 트립토판, 및/또는 페닐을 포함한 하나 이상의 소수성 변형을 포함하도록 변형된다. 일부 구현예에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트, 2'-O-메틸, 2'데옥시, 소수성 변형 및 포스포로티오에이트의 조합이다. 일부 구현예에서, 당은 변형될 수 있고 변형된 당은 D-리보스, 2'-O-알킬(2'-O-메틸 및 2'-0-에틸 포함), 즉, 2'-알콕시, 2'-아미노, 2'-S-알킬, 2'-할로(2'-플루오로 포함), T- 메톡시에톡시, 2'-알릴옥시(-OCH2CH=CH2), 2'-프로파길, 2'-프로필, 에티닐, 에테닐, 프로페닐, 및 시아노 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 하나의 구현예에서, 당 모이어티는 헥소스일 수 있고 Augustyns, 등, Nucl. Acids. Res. 1992, 18, 4711에 기재된 바와 같은 올리고뉴클레오티드에 혼입될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 전체 길이에 걸쳐 이중 가닥이며, 즉, 분자의 어느 한쪽 끝에 돌출부 단일 가닥 서열이 없으며, 즉, 무딘 말단이다. 일부 구현예에서, 개별 핵산 분자는 길이가 상이할 수 있다. 다시 말해서, 본 발명의 이중 가닥 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 전체 길이에 걸쳐 이중 가닥이 아니다. 예를 들면, 2개의 별도의 핵산 분자가 사용되는 경우, 분자 중 하나, 예를 들어, 안티센스 서열을 포함하는 첫번째 분자는 이에 혼성화하는 두번째 분자보다 더 길 수 있다(분자 단일 가닥의 일부로 남음). 일부 구현예에서, 단일 핵산 분자가 사용되는 경우 어느 한쪽 끝에 있는 분자의 일부는 단일 가닥으로 유지될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 불일치 및/또는 루프 또는 돌출부를 함유하지만, 올리고뉴클레오티드 길이의 적어도 약 70%에 걸쳐 이중 가닥이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 길이의 적어도 약 80%에 걸쳐 이중 가닥이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 길이의 적어도 약 90%-95%에 걸쳐 이중 가닥이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 길이의 적어도 약 96%-98%에 걸쳐 이중 가닥이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 올리고뉴클레오티드는 적어도 또는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 불일치를 함유한다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 미국 특허 번호 5,849,902에 기재된 바와 같이, 예를 들어 3' 또는 5' 연결을 변형시킴으로써 뉴클레아제로부터 실질적으로 보호될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 "차단기"를 포함함으로써 저항성을 만들 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "차단기"는 합성을 위한 보호기 또는 커플링 기(예를 들어, FITC, 프로필(CH2-CH2-CH3), 글리콜(-0-CH2-CH2-O-) 포스페이트(PO3 2"), 수소 포스포네이트, 또는 포스포르아미다이트)로서 올리고뉴클레오티드 또는 핵단량체에 부착될 수 있는 치환기(예를 들어, OH 기 이외)를 지칭할 수 있다. "차단기"는 또한 변형된 뉴클레오티드 및 비-뉴클레오티드 엑소뉴클레아제 저항성 구조를 포함하여, 올리고뉴클레오티드의 5' 및 3' 말단을 보호하는 "말단 차단기" 또는 "엑소뉴클레아제 차단기"를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 내의 연속 폴리뉴클레오티드의 적어도 일부는 대체 연결, 예를 들어, 포스포로티오에이트 연결에 의해 연결된다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 siRNA 또는 sdRNA의 세포 흡수에서 적어도 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 또는 500 향상을 야기할 수 있다. 일부 구현예에서, C 또는 U 잔기 중 적어도 하나는 소수성 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 복수의 C 및 U는 소수성 변형을 함유한다. 일부 구현예에서, C 및 U의 적어도 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60% 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 적어도 95%는 소수성 변형을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, C 및 U는 모두 소수성 변형을 함유한다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 분자는 양성자화가능 아민의 혼입을 통해 향상된 엔도솜 방출을 나타낸다. 일부 구현예에서, 양성자화가능 아민은 센스 가닥(RISC 로딩 후 버려지는 분자의 일부)에 혼입된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 또는 sdRNA 화합물은 이중체 영역(10-15개 염기 길이의 효율적인 RISC 진입에 필요) 및 4-12개 뉴클레오티드 길이의 단일 가닥 영역을 포함하는 비대칭 화합물을 포함하며; 13개의 뉴클레오티드 이중체가 있다. 일부 구현예에서, 6개의 뉴클레오티드 단일 가닥 영역이 이용된다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA의 단일 가닥 영역은 2-12개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결(포스포로티오에이트 변형으로 언급됨)을 포함한다. 일부 구현예에서, 6-8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결이 이용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 또는 sdRNA 화합물은 또한 고유한 화학적 변형 패턴을 포함하며, 안정성을 제공하고 RISC 항목과 호환가능하다. 예를 들어, 가이드 가닥은 또한 RISC 항목을 방해하지 않고 안정성을 확인하는 임의의 화학적 변형에 의해 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 가이드 가닥에서 화학적 변형 패턴은 2' F 변형되고 5' 단부가 인산화되는 대부분의 C 및 U 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 내 뉴클레오티드의 적어도 30%가 변형된다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 내 뉴클레오티드의 적어도 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%가 변형된다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 내 뉴클레오티드의 100%가 변형된다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 분자는 최소 이중 가닥 영역을 갖는다. 일부 구현예에서 이중 가닥인 분자의 영역은 8-15개 뉴클레오티드 길이 범위이다. 일부 구현예에서, 이중 가닥인 분자의 영역은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서 이중 가닥 영역은 13개 뉴클레오티드 길이이다. 가이드 가닥과 패신저 가닥 사이에 100% 상보성이 있을 수 있거나, 가이드 가닥과 패신저 가닥 사이에 하나 이상의 불일치가 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 분자의 한쪽 단부에서 분자는 무딘 단부이거나 1개-뉴클레오티드 오버행을 갖는다. 분자의 단일 가닥 영역은 일부 구현예에서 4-12개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 또한 4개 미만 또는 12개 초과의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 단일 가닥 영역은 6 또는 7개 뉴클레오티드 길이이다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 분자는 증가된 안정성을 갖는다. 일부 경우에, 화학적으로 변형된 siRNA 또는 sdRNA 분자는 임의의 중간 값을 포함하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간 이상 또는 24시간 초과인 배지 내 반감기를 갖는다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sd-RNA는 12시간 이상의 배지 내 반감기를 갖는다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 효능 증가 및/또는 독성 감소를 위해 최적화된다. 일부 구현예에서, 가이드 및/또는 패신저 가닥의 뉴클레오티드 길이, 및/또는 가이드 및/또는 패신저 가닥의 포스포로티오에이트 변형의 수는 일부 측면에서 RNA 분자의 효능에 영향을 미칠 수 있지만, 2'-플루오로(2'F) 변형을 2'-0-메틸(2'OMe) 변형으로 대체하는 것은 일부 측면에서 분자의 독성에 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, 분자의 2'F 함량 감소는 분자의 독성을 감소시키는 것으로 예측된다. 일부 구현예에서, RNA 분자에서 포스포로티오에이트 변형의 수는 분자의 세포로의 흡수, 예를 들어 분자의 세포로의 수동적 흡수 효율에 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 2'F 변형을 갖지 않지만 세포 흡수 및 조직 침투에서 동일한 효능을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 가이드 가닥은 대략 18-19개 뉴클레오티드 길이이고 대략 2-14개 포스페이트 변형을 갖는다. 예를 들어, 가이드 가닥은 포스페이트-변형된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개 또는 14개 초과의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 가이드 가닥은 RISC 진입을 방해하지 않고 증가된 안정성을 부여하는 하나 이상의 변형을 함유할 수 있다. 포스포로티오에이트 변형된 뉴클레오티드와 같은 포스페이트 변형된 뉴클레오티드는 3' 단부, 5' 단부에 있거나 가이드 가닥 전체에 퍼질 수 있다. 일부 구현예에서, 가이드 가닥의 3' 말단의 10개 뉴클레오티드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 포스포로티오에이트 변형된 뉴클레오티드를 함유한다. 가이드 가닥은 또한 2'F 및/또는 2'OMe 변형을 함유할 수 있으며, 이는 분자 전체에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, 가이드 가닥의 위치 1의 뉴클레오티드(가이드 가닥의 가장 5' 위치의 뉴클레오티드)는 2'OMe 변형 및/또는 인산화된다. 가이드 가닥 내의 C 및 U 뉴클레오티드는 2'F 변형될 수 있다. 예를 들어, 19 nt 가이드 가닥의 위치 2-10(또는 상이한 길이의 가이드 가닥의 상응하는 위치)에서 C 및 U 뉴클레오티드는 2'F 변형될 수 있다. 가이드 가닥 내의 C 및 U 뉴클레오티드는 또한 2'OMe 변형될 수 있다. 예를 들어, 19 nt 가이드 가닥의 위치 11-18(또는 상이한 길이의 가이드 가닥의 상응하는 위치)에서 C 및 U 뉴클레오티드는 2'OMe 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 가이드 가닥의 가장 3' 단부에 있는 뉴클레오티드는 변형되지 않는다. 특정 구현예에서, 가이드 가닥 내의 대다수의 C 및 U는 2'F 변형되고 가이드 가닥의 5' 단부는 인산화된다. 다른 구현예에서, 위치 1 및 및 위치 11-18에서 C 또는 U는 2'OMe 변형되고 가이드 가닥의 5' 단부는 인산화된다. 다른 구현예에서, 위치 1 및 위치 11-18에서 C 또는 U는 2'OMe 변형되고, 가이드 가닥의 5' 단부는 인산화되고, 위치 2-10에서 C 또는 U는 2'F 변형된다.
자기 절단가능 RNAi 기술은 추가 제형 또는 기술에 대한 필요성 없이 RNAi 제제(siRNA, sdRNA, 또는 다른 RNAi 제제든)로 세포를 직접 형질감염시키는 방법을 제공한다. 형질감염이 어려운 세포주를 형질감염시키는 능력, 높은 생체 내 활성, 및 사용의 단순성은 전통적인 siRNA-기반 기술에 비해 상당한 기능적 이점을 제시하는 조성물 및 방법의 특성이며, 따라서 sdRNA 방법은 본 발명의 TIL에서 표적 유전자 발현을 감소시키는 방법과 관련된 여러 구현예에 이용된다. sdRNA 방법은 화학적으로 합성된 화합물을 생체 외 및 생체 내 모두에서 광범위한 1차 세포 및 조직에 직접 전달하는 것을 허용한다. 본 발명의 일부 구현예에 기재된 sdRNA는 미국 매사추세츠주 우스터 소재의 Advirna LLC로부터 상업적으로 입수가능하다.
siRNA 및 sdRNA는 소수성으로 변형된 siRNA-안티센스 올리고뉴클레오티드 하이브리드 구조로 형성될 수 있고, 예를 들어 Byrne, 등, J. Ocular Pharmacol. Therapeut., 2013, 29, 855-864에 개시되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드는 멸균 전기천공을 사용하여 본원에 기재된 TIL에 전달될 수 있다. 특정 구현예에서, 방법은 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드를 전달하기 위해 TIL 집단의 멸균 전기천공을 포함한다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 막관통 전달 시스템과 조합하여 세포에 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 막관통 전달 시스템은 지질, 바이러스 벡터 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 제제는 자기 전달 RNAi 제제이며, 임의의 전달제를 필요로 하지 않는다. 특정 구현예에서, 방법은 siRNA 또는 sdRNA 올리고뉴클레오티드를 TIL 집단으로 전달하기 위한 막관통 전달 시스템의 사용을 포함한다.
올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드 조성물은 TIL에 의한 수동 흡수를 통한 것을 포함하여, 본원에 기재된 TIL과 접촉되고(예를 들어, 접촉하게 되며, 본원에서 투여되거나 전달되는 것으로 언급됨) TIL에 의해 흡수된다. sdRNA는 제1 확장, 예를 들어 단계 B 동안, 제1 확장 후, 예를 들어, 단계 C 동안, 제2 확장 전 또는 동안, 예를 들어 단계 D 전 또는 동안, 단계 D 후 및 단계 E에서 수확 전, 단계 F에서 수확 동안 후, 최종 제형 및/또는 단계 F에서 주입 백에 전달 전 또는 동안, 뿐만 아니라 단계 F에서 임의의 임의적인 동결보존 단계 전에 본원에 기재된 바와 같이 TIL에 첨가될 수 있다. 더욱이, sdRNA는 단계 F에서 임의의 동결보존 단계로부터 해동 후에 첨가될 수 있다. 구현예에서, PD-1, LAG-3, TIM-3, CISH, CBL-B, CD38, HPK1, YAP1, 및/또는 PTPN22를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 유전자를 표적하는 하나 이상의 sdRNA는 100 nM 내지 20 mM, 200 nM 내지 10 mM, 500 nm 내지 1 mM, 1 μM 내지 100 μM, 및 1 μM 내지 100 μM으로 이루어진 군으로부터 선택된 농도로 TIL 및 다른 제제를 포함하는 세포 배양 배지에 첨가될 수 있다. 구현예에서, PD-1, LAG-3, TIM-3, CISH, 및 CBL-B를 포함하여, 본원에 기재된 바와 같은 유전자를 표적하는 하나 이상의 sdRNA는 0.1 μM sdRNA/10,000 TIL/100 μL 배지, 0.5 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 0.75 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 1 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 1.25 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 1.5 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 2 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 5 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지, 또는 10 μM sdRNA/10,000 TIL /100 μL 배지로 이루어진 군으로부터 선택된 양으로 TIL 및 다른 제제를 포함하는 세포 배양 배지에 첨가될 수 있다. 구현예에서, PD-1, LAG-3, TIM-3, CISH, CBL-B, CD38, HPK1, YAP1, 및/또는 PTPN22를 포함하여, 본원에 기재된 바와 같은 유전자를 표적하는 하나 이상의 sdRNA는 pre-REP 또는 REP 단계 동안 1일 2회, 1일 1회, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 또는 7일마다 TIL 배양물에 첨가될 수 있다.
sdRNA를 포함한 본 발명의 올리고뉴클레오티드 조성물은 예를 들어 sdRNA를 고농도로 세포 배양 배지에 용해시키고 수동 흡수가 발생하기에 충분한 시간을 허용함으로써 확장 프로세스 동안 본원에 기재된 바와 같이 TIL과 접촉될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 TIL 집단을 본원에 기재된 바와 같은 올리고뉴클레오티드 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 방법은 올리고뉴클레오티드 예를 들어, sdRNA를 세포 배양 배지에 용해시키고 세포 배양 배지를 TIL 집단과 접촉시키는 것을 포함한다. TIL은 본원에 기재된 바와 같은 제1 집단, 제2 집단 및/또는 제3 집단일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 세포에 전달하는 것은 칼슘 포스페이트, DMSO, 글리세롤 또는 덱스트란, 전기천공을 포함한 당업계에서 인정된 적합한 방법, 또는 예를 들어, 양이온성, 음이온성, 또는 중성 지질 조성물을 사용하는 형질감염 또는 미국 특허 번호 4,897,355; 5,459,127; 5,631,237; 5,955,365; 5,976,567; 10,087,464; 및 10,155,945; 및 Bergan, 등, Nucl. Acids Res. 1993, 21, 3567에 기재된 방법과 같은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 리포솜에 의해 향상될 수 있으며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 하나 초과의 siRNA 또는 sdRNA는 표적 유전자의 발현을 감소시키는 데 사용된다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA를 표적하는 PD-1, TIM-3, CBL-B, LAG-3, CISH, CD38, HPK1, YAP1, 및/또는 PTPN22 중 하나 이상이 함께 사용된다. 일부 구현예에서, PD-1 siRNA 또는 sdRNA는 하나 초과의 유전자 표적의 발현을 감소시키기 위해 TIM-3, CBL-B, LAG-3 및/또는 CISH 중 하나 이상과 함께 사용된다. 일부 구현예에서, LAG-3 siRNA 또는 sdRNA는 두 표적의 유전자 발현을 감소시키기 위해 CISH 표적화 siRNA 또는 sdRNA와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 본원에서 PD-1, TIM-3, CBL-B, LAG-3 및/또는 CISH 중 하나 이상을 표적화하는 siRNA 및 sdRNA는 미국 매사추세츠주 우스터 소재의 Advirna LLC 또는 다수의 다른 공급업체로부터 상업적으로 입수가능하다.
일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), CD38, HPK1, YAP1, PTPN22 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 PD-1을 표적하고 또 다른 siRNA 또는 sdRNA는 LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), CD38, HPK1, YAP1, PTPN22, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 PD-1, LAG-3, CISH, CBL-B, TIM-3, 및 이의 조합으로부터 선택된 유전자를 표적한다. 일부 구현예에서, siRNA 또는 sdRNA는 PD-1로부터 선택된 유전자 및 LAG-3, CISH, CBL-B, TIM-3, 및 이의 조합 중 하나를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 PD-1을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 LAG-3을 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 PD-1을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CISH를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 PD-1을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CBL-B를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 LAG-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CISH를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 LAG-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CBL-B를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CISH를 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CBL-B를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 TIM-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 PD-1을 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 TIM-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 LAG-3을 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 TIM-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CISH를 표적한다. 일부 구현예에서, 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 TIM-3을 표적하고 하나의 siRNA 또는 sdRNA는 CBL-B를 표적한다.
본원에 논의된 바와 같이, 본 발명의 구현예는 치료 효과를 향상시키기 위해 유전자 편집을 통해 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL)를 제공한다. 본 발명의 구현예는 하나 이상의 단백질 발현의 촉진 및 하나 이상의 단백질 발현의 억제 모두, 뿐만 아니라 이의 조합을 위해 TIL 집단에 뉴클레오티드 삽입(RNA 또는 DNA)을 통한 유전자 편집을 수용한다. 본 발명의 구현예는 또한 TIL을 치료 집단으로 확장하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 TIL을 유전자 편집하는 것을 포함한다. 본 발명에 따라 사용하기에 적합한 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 데 사용될 수 있는 여러 유전자 편집 기술이 있다. 이러한 방법은 아래 기재된 방법 뿐만 아니라 본원의 다른 곳에 기재된 바이러스 및 트랜스포존 방법을 포함한다. 구현예에서, CCR을 발현하도록 TIL, MIL, 또는 PBL을 유전적으로 변형시키는 방법은 또한 이러한 유전자의 안정한 녹아웃 또는 이러한 유전자의 일시적인 녹다운을 통해 유전자의 발현을 억제하는 변형을 포함할 수 있다.
구현예에서, 방법은 본원에 기재된 바와 같은 제1 집단, 제2 집단 및/또는 제3 집단에서 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법을 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 하나 이상의 단백질의 생산 또는 억제(예를 들어, 침묵)를 위한 유전자의 안정한 혼입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 전기천공 단계를 포함한다. 전기천공 방법은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어, Tsong, Biophys. J. 1991, 60, 297-306, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2014/0227237 A1에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 개시내용이 본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 5,019,034; 5,128,257; 5,137,817; 5,173,158; 5,232,856; 5,273,525; 5,304,120; 5,318,514; 6,010,613 및 6,078,490에 기재된 것들과 같은 당업계에 알려진 다른 전기천공 방법이 사용될 수 있다. 구현예에서, 전기천공 방법은 멸균 전기천공 방법이다. 구현예에서, 전기천공 방법은 펄스 전기천공 방법이다. 구현예에서, 전기천공 방법은 전계 강도가 100 V/cm 이상인 적어도 3개의 단일 작동자 제어 독립적 프로그래밍 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하는, TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL의 한정되고 제어된 영구적 또는 일시적인 변화를 변경, 조작, 또는 야기하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 여기서 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열은 다음 특성 중 1, 2, 또는 3개를 갖는다: (1) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이함; (2) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이함; 및 (3) 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 간격은 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이함. 구현예에서, 전기천공 방법은 전계 강도가 100 V/cm 이상인 적어도 3개의 단일 작동자 제어 독립적 프로그래밍 DC 전기 펄스를 TIL에 적용하는 단계를 포함하는, TIL에서 한정된 및 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 야기하기 위해 TIL을 펄스 전기장으로 처리하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 전계 강도가 100 V/cm 이상인 적어도 3개의 단일 작동자 제어 독립적 프로그래밍 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 것을 포함하는, TIL에서 한정된 및 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 야기하기 위해 TIL을 펄스 전기장으로 처리하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 전계 강도가 100 V/cm 이상인 적어도 3개의 단일 작동자 제어 독립적 프로그래밍 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 것을 포함하는, TIL에서 한정된 및 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 야기하기 위해 TIL을 펄스 전기장으로 처리하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 간격은 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 전계 강도가 100 V/cm 이상인 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하는, TIL에서 기공 형성을 유도하기 위해 TIL을 전기장으로 펄스하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 여기서 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열은 다음 특성 중 1, 2, 또는 3개를 갖는다: (1) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이함; (2) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이함; 및 (3) 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 간격은 적어도 3개의 펄스 중 2개 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이하여, 유도된 기공이 상대적으로 긴 시간 동안 지속되도록 하고, TIL의 생존력이 유지되도록 한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 칼슘 포스페이트 형질감염 단계를 포함한다. 칼슘 포스페이트 형질감염 방법(칼슘 포스페이트 DNA 침전, 세포 표면 코팅, 및 세포내이입)은 당업계에 알려져 있고 Graham and van der Eb, Virology 1973, 52, 456-467; Wigler, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 1979, 76, 1373-1376; 및 Chen and Okayarea, Mol. Cell. Biol. 1987, 7, 2745-2752; 및 미국 특허 번호 5,593,875에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 리포솜 형질감염 단계를 포함한다. 여과수 중 양이온성 지질 N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-n,n,n-트리메틸염화암모늄(DOTMA) 및 디올레오일 포스포티딜에탄올아민(DOPE)의 1:1(w/w) 리포솜 제형을 이용하는 방법과 같은 리포솜 형질감염 방법은 당업계에 알려져 있고 Rose, 등, Biotechniques 1991, 10, 520-525 및 Felgner, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 7413-7417 및 미국 특허 번호 5,279,833; 5,908,635; 6,056,938; 6,110,490; 6,534,484; 및 7,687,070에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 미국 특허 번호 5,766,902; 6,025,337; 6,410,517; 6,475,994; 및 7,189,705에 기재된 방법을 사용하는 형질감염 단계를 포함하며; 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. TIL은 본원에 기재된 바와 같은 제1 집단, 제2 집단 및/또는 TIL의 제3 집단일 수 있다.
구현예에 따르면, 유전자 편집 프로세스는 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자에서 이중 가닥 또는 단일 가닥 파손의 생성을 매개하는 프로그램화가능 뉴클레아제의 사용을 포함할 수 있다. 이러한 프로그램화가능 뉴클레아제는 특이적 게놈 유전자좌에 파손을 도입함으로써 정확한 게놈 편집을 가능하게 하며, 즉, 이들은 게놈 내의 특이적 DNA 서열의 인식에 의존하여 뉴클레아제 도메인을 이 위치로 표적하고 표적 서열에서 이중 가닥 파손의 생성을 매개한다. DNA에서 이중 가닥 파손은 이후에 비동종 말단 결합(NHEJ) 또는 상동성 지시 복구(HDR)에 의한 게놈 편집을 매개하기 위해 파손 부위에 내인성 복구 기계를 모집한다. 따라서, 파손 복구는 표적 유전자 산물을 방해(예를 들어, 침묵, 억제, 또는 향상)하는 삽입/결실 돌연변이의 도입을 초래할 수 있다.
특이적 게놈 편집을 가능하게 하도록 개발된 뉴클레아제의 주요 부류는 아연 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성인자-유사 뉴클레아제(TALEN), 및 CRISPR 연관 뉴클레아제(예를 들어, CRISPR/Cas9)를 포함한다. 이러한 뉴클레아제 시스템은 DNA 인식 모드에 기반하여 2개의 범주로 광범위하게 분류될 수 있다: ZFN 및 TALEN은 단백질-DNA 상호작용을 통해 특이적 DNA 결합을 달성하는 반면, Cas9와 같은 CRISPR 시스템은 표적 DNA와 직접적으로 염기쌍을 이루는 짧은 RNA 가이드 분자 및 단백질-DNA 상호작용에 의해 특이적 DNA 서열에 표적화된다. 예를 들어, Cox 등, Nature Medicine, 2015, Vol. 21, No. 2를 참조한다.
본 발명의 TIL 확장 방법에 따라 사용될 수 있는 유전자 편집 방법의 비제한적인 예는 CRISPR 방법, TALE 방법, 및 ZFN 방법을 포함하며, 아래에 보다 상세하게 기재되어 있다. 구현예에 따르면, TIL을 치료 집단으로 확장하는 방법은 본원에 기재된 방법의 임의의 구현예(예를 들어, Gen 2)에 따라 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0299644 A1 및 US 2020/0121719 A1 및 미국 특허 번호 10,925,900에 기재된 바와 같이 수행될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함되고, 여기서 방법은 향상된 치료 효과를 제공할 수 있는 TIL을 생성하기 위해 CRISPR 방법, TALE 방법 또는 ZFN 방법 중 하나 이상에 의해 TIL의 적어도 일부를 유전자 편집하는 것을 추가로 포함한다. 구현예에 따르면, 유전자 편집된 TIL은 이들을 시험관 내에서 변형되지 않은 TIL과 비교함으로써, 예를 들어, 변형되지 않은 TIL과 비교하여 시험관 내 효과기 기능, 사이토카인 프로파일 등을 평가함으로써 개선된 치료 효과에 대해 평가될 수 있다. 특정 구현예에서, 방법은 CRISPR, TALE 및/ 또는 ZFN 방법을 사용하여 TIL 집단을 유전자 편집하는 것을 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 전기천공은 CRISPR, TALEN, 및 ZFN 시스템과 같은 유전자 편집 시스템의 전달을 위해 사용된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 전기천공 시스템은 유체 전기천공 시스템이다. 본 발명의 일부 구현예에 사용하기에 적합한 유체 전기천공 시스템의 예는 상업적으로 입수가능한 MaxCyte STX 시스템이다. BTX-Harvard Apparatus로부터 입수가능한 AgilePulse 시스템 또는 ECM 830, Cellaxess Elektra(Cellectricon), Nucleofector(Lonza/Amaxa), GenePulser MXcell(BIORAD), iPorator-96(Primax) 또는 siPORTer96(Ambion)과 같은 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 여러 대안적인 상업적으로 입수가능한 전기천공 기기가 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 전기천공 시스템은 TIL 확장 방법의 나머지와 함께 폐쇄형 멸균 시스템을 형성한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 전기천공 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 펄스형 전기천공 시스템이며, TIL 확장 방법의 나머지와 함께 폐쇄형 멸균 시스템을 형성한다.
TIL을 치료 집단으로 확장하는 방법은 본원에 기재된 방법의 임의의 구현예(예를 들어, Gen 2)에 따라 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0299644 A1 및 US 2020/0121719 A1 및 미국 특허 번호 10,925,900에 기재된 바와 같이 수행될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함되고, 여기서 방법은 CRISPR 방법(예를 들어, CRISPR/Cas9 또는 CRISPR/Cpf1)에 의해 TIL의 적어도 일부를 유전자 편집하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구현예에 따르면, TIL 확장 프로세스 동안 CRISPR 방법을 사용하면 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 침묵되거나 감소된다. 대안적으로, TIL 확장 프로세스 동안 CRISPR 방법을 사용하면 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 향상된다.
CRISPR은 클러스터링된 주기적으로 간격을 둔 짧은 회문구조 반복부를 의미한다. 유전자 편집을 위해 CRISPR 시스템을 사용하는 방법은 본원에서 CRISPR 방법으로도 언급된다. RNA 및 Cas 단백질을 혼입하고, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 3가지 유형의 CRISPR 시스템이 있다: 유형 I, II, 및 III. 유형 II CRISPR(Cas9로 예시됨)는 가장 잘 특성화된 시스템 중 하나이다.
CRISPR 기술은 박테리아 및 고세균(단세포 미생물의 도메인)의 자연 방어 메커니즘으로부터 채택되었다. 이들 유기체는 CRISPR-유래 RNA 및 다양한 Cas9를 포함한 Cas 단백질을 사용하여 외래 침입자의 DNA를 자르고 파괴함으로써 바이러스 및 다른 이물질에 의한 공격을 저지한다. CRISPR는 2가지 뚜렷한 특성을 갖는 DNA의 특수 영역이다: 뉴클레오티드 반복부 및 스페이서의 존재. 뉴클레오티드의 반복된 서열은 반복된 서열 중에 산재된 외래 DNA의 짧은 분절(스페이서)과 함께 CRISPR 영역 전체에 분포된다. 유형 II CRISPR/Cas 시스템에서, 스페이서는 CRISPR 게놈 유전자좌 내에 통합되어 있고 전사되고 짧은 CRISPR RNA(crRNA)로 처리된다. 이러한 crRNA는 트랜스-활성화 crRNA(tracrRNA)에 어닐링하고 Cas 단백질에 의한 병원성 DNA의 서열 특이적 절단 및 침묵을 지시한다. Cas9 단백질에 의한 표적 인식은 crRNA 내에 "시드(seed)" 서열 및 crRNA-결합 영역의 상류에 보존된 디뉴클레오티드-함유 프로토스페이서 인접 모티프(PAM) 서열을 필요로 한다. 이에 의해 CRISPR/Cas 시스템은 crRNA를 재설계함으로써 사실상 임의의 DNA 서열을 절단하도록 재표적화될 수 있다. 천연 시스템에서 crRNA 및 tracrRNA는 유전자 조작에 사용하기 위해 대략 100개 뉴클레오티드의 단일 가이드 RNA(sgRNA)로 단순화될 수 있다. CRISPR/Cas 시스템은 Cas9 엔도-뉴클레아제 및 필요한 crRNA 구성요소를 발현하는 플라스미드의 공동 전달에 의해 인간 세포에 직접 휴대할 수 있다. Cas 단백질의 상이한 변이체는 표적화 제한을 줄이는 데 사용될 수 있다(예를 들어, Cpf1과 같은 Cas9의 오솔로그).
CRISPR 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 침묵되거나 억제될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 PD-1, CTLA-4, LAG-3, HAVCR2(TIM-3), Cish, TGFβ, PKA, CBL-B, PPP2CA, PPP2CB, PTPN6, PTPN22, PDCD1, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, EIF2AK4, CSK, PAG1, SIT1, FOXP3, PRDM1, BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2, GUCY1B3, TOX, SOCS1, ANKRD11, BCOR, CD38, HPK1, YAP1, 및 PTPN22를 포함한다.
CRISPR 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 향상될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, IL-2, IL12, IL-15, 및 IL-21, PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CCR1, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF 및 c-Jun을 포함한다.
CRISPR 방법에 의해 표적 유전자 서열의 발현을 변경하고, 본 발명의 구현예에 따라 사용될 수 있는 시스템, 방법, 및 조성물의 예는 미국 특허 번호 8,697,359; 8,993,233; 8,795,965; 8,771,945; 8,889,356; 8,865,406; 8,999,641; 8,945,839; 8,932,814; 8,871,445; 8,906,616; 및 8,895,308에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. CRISPR/Cas9 및 CRISPR/Cpf1을 발현하기 위한 플라스미드와 같은 CRISPR 방법을 수행하기 위한 자원은 GenScript와 같은 회사에서 상업적으로 입수가능하다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL 집단의 유전적 변형은 미국 특허 번호 US 9790490에 기재된 바와 같은 CRISPR/Cpf1 시스템을 사용하여 수행될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
TIL을 치료 집단으로 확장하는 방법은 본원에 기재된 방법의 임의의 구현예(예를 들어, Gen 2)에 따라 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0299644 A1 및 US 2020/0121719 A1 및 미국 특허 번호 10,925,900에 기재된 바와 같이 수행될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함되고, 여기서 방법은 TALE 방법에 의해 TIL의 적어도 일부를 유전자 편집하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구현예에 따르면, TIL 확장 프로세스 동안 TALE 방법의 사용하면 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 침묵되거나 감소된다. 대안적으로, TIL 확장 프로세스 동안 TALE 방법을 사용하면 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 향상된다.
TALE는 전사 활성인자-유사 효과기 단백질을 의미하며, 전사 활성인자-유사 효과기 뉴클레아제(TALEN)를 포함한다. 유전자 편집을 위해 TALE 시스템을 사용하는 방법은 또한 본원에서 TALE 방법으로 언급될 수 있다. TALE는 식물 병원성 박테리아 속 잔토모나스(Xanthomonas)의 자연 발생 단백질이며, 단일 염기쌍을 각각 인식하는 일련의 33-35개의 아미노산 반복 도메인으로 구성된 DNA-결합 도메인을 함유한다. TALE 특이성은 반복 가변 이잔기(RVD)로 알려진 2개의 초가변 아미노산에 의해 결정된다. 모듈식 TALE 반복부는 함께 연결되어 인접한 DNA 서열을 인식한다. DNA-결합 도메인에서 특이적 RVD는 표적 유전자좌에서 염기를 인식하여, 예측가능한 DNA-결합 도메인을 조립하는 구조적 특징을 제공한다. TALE의 DNA 결합 도메인은 IIS FokI 엔도뉴클레아제 유형의 촉매 도메인에 융합되어 표적가능한 TALE 뉴클레아제를 만든다. 부위 특이적 돌연변이를 유도하기 위해, 14-20개의 염기쌍 스페이서 영역에 의해 분리된 2개의 개별 TALEN 부문은 FokI 단량체를 가까이 가져와 이량체화하고 표적화된 이중 가닥 파괴를 생성한다.
다양한 조립 방법을 활용하는 여러 대규모 체계적 연구는 TALE 반복부가 조합되어 사실상 임의의 사용자 정의된 서열을 인식할 수 있음을 나타내었다. 맞춤형-설계된 TALE 어레이는 또한 Cellectis Bioresearch(프랑스 파리 소재), Transposagen Biopharmaceuticals(미국 켄터키주 렉싱턴 소재), 및 Life Technologies(미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재)를 통해 상업적으로 입수가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 TALE 및 TALEN 방법은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2011/0201118 A1; US 2013/0117869 A1; US 2013/0315884 A1; US 2015/0203871 A1 및 US 2016/0120906 A1에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
TALE 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 침묵되거나 억제될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 PD-1, CTLA-4, LAG-3, HAVCR2(TIM-3), Cish, TGFβ, PKA, CBL-B, PPP2CA, PPP2CB, PTPN6, PTPN22, PDCD1, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, EIF2AK4, CSK, PAG1, SIT1, FOXP3, PRDM1, BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2, GUCY1B3, TOX, SOCS1, ANKRD11, BCOR, CD38, HPK1, YAP1, 및 PTPN22를 포함한다.
TALE 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 향상될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, IL-2, IL12, IL-15, IL-21, PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CCR1, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF 및 c-Jun을 포함한다.
TALE 방법에 의해 표적 유전자 서열의 발현을 변경하고, 본 발명의 구현예에 따라 사용될 수 있는 시스템, 방법, 및 조성물의 예는 미국 특허 번호 8,586,526에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
TIL을 치료 집단으로 확장하는 방법은 본원에 기재된 방법의 임의의 구현예에 따라 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0299644 A1 및 US 2020/0121719 A1 및 미국 특허 번호 10,925,900에 기재된 바와 같이 수행될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함되고, 여기서 방법은 아연 핑거 또는 아연 핑거 뉴클레아제 방법에 의해 TIL의 적어도 일부를 유전자 편집하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구현예에 따르면, TIL 확장 프로세스 동안 아연 핑거 방법을 사용하며 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 침묵되거나 감소된다. 대안적으로, TIL 확장 프로세스 동안 아연 핑거 방법을 사용하면 TIL의 치료 집단의 적어도 일부에서 하나 이상의 면역 체크포인트 유전자의 발현이 향상된다.
개별 아연 핑거는 보존된 ββα 구성에서 대략 30개의 아미노산을 함유한다. α-나선 표면 상의 여러 아미노산은 전형적으로 DNA의 주요 홈에서 3 bp와 접촉하며, 다양한 수준의 선택성을 갖는다. 아연 핑거는 2개의 단백질 도메인을 갖는다. 첫번째 도메인은 DNA 결합 도메인이며, 진핵생물 전사 인자를 포함하고 아연 핑거를 함유한다. 두번째 도메인은 뉴클레아제 도메인이며, FokI 제한 효소를 포함하고 DNA의 촉매 절단을 담당한다.
개별 ZFN의 DNA-결합 도메인은 전형적으로 3 내지 6개의 개별 아연 핑거 반복부를 함유하고 각각 9 내지 18개의 염기쌍을 인식할 수 있다. 아연 핑거 도메인이 의도된 표적 부위에 특이적이면 총 18개의 염기쌍을 인식하는 한 쌍의 3-핑거 ZFN조차도 이론적으로 포유류 게놈의 단일 유전자좌를 표적할 수 있다. 새로운 아연 핑거 어레이를 생성하는 한 가지 방법은 특이성이 알려진 더 작은 아연 핑거 "모듈"을 조합하는 것이다. 가장 흔한 모듈식 조립 프로세스는 각각 3개의 염기쌍 DNA 서열을 인식할 수 있는 3개의 별도의 아연 핑거를 조합하여 9개의 염기쌍 표적 부위를 인식할 수 있는 3-핑거 어레이를 생성하는 것을 수반한다. 대안적으로, 올리고머화 통합 조작(OPEN)과 같은 선택 기반 접근법을 사용하여 이웃 핑거 사이의 맥락 의존적 상호작용을 고려하여 무작위화 라이브러리로부터 새로운 아연 핑거 어레이를 선택할 수 있다. 조작된 아연 핑거는 Sangamo Biosciences(미국 캘리포니아주 리치먼드 소재) 및 Sigma-Aldrich(미국 미주리주 세인트루이스 소재)에서 상업적으로 입수가능하다.
아연 핑거 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 침묵되거나 억제될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 PD-1, CTLA-4, LAG-3, HAVCR2(TIM-3), Cish, TGFβ, PKA, CBL-B, PPP2CA, PPP2CB, PTPN6, PTPN22, PDCD1, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, EIF2AK4, CSK, PAG1, SIT1, FOXP3, PRDM1, BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2, GUCY1B3, TOX, SOCS1, ANKRD11, BCOR, CD38, HPK1, YAP1, 및 PTPN22를 포함한다.
아연 핑거 방법을 통해 영구적인 유전자 편집 TIL에 의해 향상될 수 있는 유전자의 비제한적인 예는 CCR2, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CX3CR1, IL-2, IL12, IL-15,IL-21, PGC1알파, NT-PGC1알파, CXCR1, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CCR1, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, BATF 및 c-Jun을 포함한다.
본 발명의 구현예에 따라 사용될 수 있는 아연 핑거 방법에 의해 표적 유전자의 발현을 변경하기 위한 시스템, 방법, 및 조성물의 예는 미국 특허 번호 6,534,261, 6,607,882, 6,746,838, 6,794,136, 6,824,978, 6,866,997, 6,933,113, 6,979,539, 7,013,219, 7,030,215, 7,220,719, 7,241,573, 7,241,574, 7,585,849, 7,595,376, 6,903,185, 및 6,479,626에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 구현예에 따라 사용될 수 있는 아연 핑거 방법에 의해 표적 유전자 서열의 발현을 변경하기 위한 시스템, 방법, 및 조성물의 다른 예는 Beane, 등, Mol. Therapy, 2015, 23, 1380-1390에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, TIL은 임의적으로 고친화성 TCR, 예를 들어, MAGE-1, HER2, 또는 NY-ESO-1과 같은 종양 연관 항원에서 표적화된 TCR, 또는 종양 연관 세포 표면 분자(예를 들어, 메소텔린) 또는 계통 제한 세포 표면 분자(예를 들어, CD19)에 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하나 이에 제한되지 않는 추가 기능을 포함하도록 유전적으로 조작된다. 특정 구현예에서, 방법은 고친화성 TCR, 예를 들어, MAGE-1, HER2, 또는 NY-ESO-1과 같은 종양 연관 항원에서 표적화된 TCR, 또는 종양 연관 세포 표면 분자(예를 들어, 메소텔린) 또는 계통 제한 세포 표면 분자(예를 들어, CD19)에 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하도록 TIL 집단을 유전적으로 조작하는 것을 포함한다. 적절하게, TIL 집단은 본원에 기재된 바와 같은 제1 집단, 제2 집단 및/또는 제3 집단일 수 있다.
일부 구현예에서, CCR 및/또는 케모카인 수용체를 발현하도록 변형된 TIL를 포함하는 본 발명의 TIL은 임의적으로 유전적으로 조작된 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 US 2021/0052647 A1 또는 US 2020/0172879 A1에 기재된 바와 같이, 막 결합된 IL-2, IL-12, IL-15 및/또는 IL-21을 발현하도록 유전적으로 조작되며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
E. TIL 제조를 위한 폐쇄형 시스템
본 발명은 TIL 배양 프로세스 동안 폐쇄형 시스템의 사용을 제공한다. 이러한 폐쇄형 시스템은 미생물 오염을 방지 및/또는 줄이고, 더 적은 플라스크를 사용하고, 비용을 절감할 수 있다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 2개의 용기를 사용한다.
이러한 폐쇄형 시스템은 당업계에 잘 알려져 있고 예를 들어, http://www.fda.gov/cber/guidelines.htm 및 https://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htm에서 찾을 수 있다.
멸균 연결 장치(STCD)는 호환가능한 배관의 2개 조각 사이에 멸균 용접을 생성한다. 이 절차는 다양한 용기와 튜브 직경의 멸균 연결을 허용한다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 예를 들어, 실시예 G에 기재된 바와 같은 루어 잠금 및 가열 밀봉 시스템을 포함한다. 일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 시스템의 멸균성 및 폐쇄 속성을 유지하기 위해 멸균 조건 하에 주사기를 통해 접근된다. 일부 구현예에서, 실시예 G에 기재된 바와 같은 폐쇄형 시스템이 이용된다. 일부 구현예에서, TIL은 본원에 기재된 방법에 따라 최종 제품 제형 용기로 제형화된다.
일부 구현예에서, 폐쇄형 시스템은 종양 단편이 수득된 시점부터 TIL이 환자에게 투여되거나 동결보존될 준비가 될 때까지 하나의 용기를 사용한다. 일부 구현예에서 2개의 용기가 사용되는 경우, 제1 용기는 폐쇄된 G-용기이고 TIL 집단은 원심분리되고 제1 폐쇄된 G-용기를 열지 않고 주입 백으로 옮겨진다. 일부 구현예에서, 2개의 용기가 사용되는 경우, 주입 백은 HypoThermosol-함유 주입 백이다. 폐쇄형 시스템 또는 폐쇄형 TIL 세포 배양 시스템은 종양 샘플 및/또는 종양 단편이 첨가되면, 시스템이 외부로부터 단단히 밀봉되어 박테리아, 진균, 및/또는 임의의 다른 미생물 오염물의 침입이 없는 폐쇄된 환경을 형성하는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 100%이다. 일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 10% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 15% 내지 약 85%이다. 일부 구현예에서, 미생물 오염의 감소는 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.
폐쇄형 시스템은 미생물 오염의 부재 및/또는 상당한 감소와 함께 TIL 성장을 허용한다.
더욱이, TIL 세포 배양 환경의 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압은 세포가 배양됨에 따라 각각 달라진다. 결과적으로, 세포 배양에 적절한 매질이 순환되더라도, 폐쇄된 환경은 여전히 TIL 증식을 위한 최적의 환경으로 지속적으로 유지되어야 한다. 이를 위해, 폐쇄된 환경의 배양 액체 내 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압의 물리적 인자를 센서에 의해 모니터링하고, 이에 대한 신호를 사용하여 배양 환경의 유입구에 설치된 가스 교환기를 제어하고, 세포 배양 환경을 최적화하기 위해 배양 액체에서의 변화에 따라 폐쇄된 환경의 가스 분압을 실시간으로 조정하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 본 발명은 폐쇄된 환경의 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압을 측정하는 모니터링 장치가 장착된 가스 교환기를 폐쇄된 환경의 유입구에 혼입하고, 모니터링 장치로부터의 신호에 기반하여 가스 농도를 자동으로 조정하여 세포 배양 환경을 최적화하는 폐쇄형 세포 배양 시스템을 제공한다.
일부 구현예에서, 폐쇄된 환경 내의 압력은 연속적으로 또는 간헐적으로 제어된다. 즉, 폐쇄된 환경 내의 압력은 예를 들어 압력 유지 장치에 의해 달라질 수 있으므로, 양압 상태에서 TIL의 성장에 적합한 공간을 보장하거나, 음압 상태에서 유체의 삼출을 촉진하여 세포 증식을 촉진한다. 더욱이, 음압을 간헐적으로 적용함으로써, 폐쇄된 환경의 부피를 일시적으로 수축시켜 폐쇄된 환경에서 순환 액체를 균일하고 효율적으로 교체하는 것이 가능하다.
일부 구현예에서, TIL의 증식을 위한 최적의 배양 구성요소는 대체되거나 첨가될 수 있으며 IL-2 및/또는 OKT3과 같은 인자, 뿐만 아니라 조합도 포함하여 첨가될 수 있다.
F. TIL의 임의적인 동결보존
벌크 TIL 집단(예를 들어 TIL의 제2 집단) 또는 확장된 TIL 집단(예를 들어 TIL의 제3 집단)은 임의적으로 동결보존될 수 있다. 일부 구현예에서, 동결보존은 TIL의 치료 집단에서 발생한다. 일부 구현예에서, 동결보존은 제2 확장 후 수확된 TIL에서 발생한다. 일부 구현예에서, 동결보존은 도 1 및/또는 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 예시적인 단계 F에서 TIL에서 발생한다. 일부 구현예에서, TIL은 주입 백에 동결보존된다. 일부 구현예에서, TIL은 주입 백에 넣기 전에 동결보존된다. 일부 구현예에서, TIL은 동결보존되고 주입 백에 넣지 않는다. 일부 구현예에서, 동결보존 동결보존 매질을 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 동결보존 배지는 디메틸술폭사이드(DMSO)를 함유한다. 이것은 일반적으로 TIL 집단을 동결 용액, 예를 들어 85% 보체 불활성화 AB 혈청 및 15% 디메틸 술폭사이드(DMSO)에 넣어 달성된다. 용액 내 세포를 극저온 바이알에 넣고 -80℃에서 24시간 동안 저장하며, 임의적으로 동결보존을 위해 기체 질소 냉동고로 옮긴다. Sadeghi, 등, Acta Oncologica 2013, 52, 978-986 참조.
적절한 경우, 세포를 냉동고에서 제거하고 용액의 대략 4/5가 해동될 때까지 37℃ 수조에서 해동한다. 세포를 일반적으로 완전 배지에 재현탁하고 임의적으로 1회 이상 세척한다. 일부 구현예에서, 해동된 TIL을 계수하고 당업계에 알려진 바와 같이 생존력에 대해 평가할 수 있다.
바람직한 구현예에서, TIL 집단은 CS10 동결보존 배지(CryoStor 10, BioLife Solutions)에서 동결보존된다. 바람직한 구현예에서, TIL 집단은 디메틸술폭사이드(DMSO)를 함유하는 동결보존 배지를 사용하여 동결보존된다. 바람직한 구현예에서, TIL 집단은 1:1(vol:vol) 비율의 CS10 및 세포 배양 배지를 사용하여 동결보존된다. 바람직한 구현예에서, TIL 집단은 추가 IL-2를 추가로 포함하는 약 1:1(vol:vol) 비율의 CS10 및 세포 배양 배지를 사용하여 동결보존된다.
위에 논의되고, 도 1 및/또는 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같은 단계 A 내지 E에 예시된 바와 같이, 동결보존은 TIL 확장 프로세스 전체에 걸쳐 수많은 지점에서 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 확장 후 확장된 TIL 집단(예를 들어, 단계 B에 따라 또는 도 1 또는 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)의 단계 D에 따라 1회 이상의 제2 확장 후 확장된 TIL 집단에 따라 제공된 바와 같음은 동결보존될 수 있다. 동결보존은 일반적으로 TIL 집단을 동결 용액, 예를 들어, 85% 보체 불활성화 AB 혈청 및 15% 디메틸 술폭사이드(DMSO)에 넣어 달성될 수 있다. 용액 내 세포를 극저온 바이알에 넣고 -80℃에서 24시간 동안 저장하며, 임의적으로 동결보존을 위해 기체 질소 냉동고로 옮긴다. Sadeghi, 등, Acta Oncologica 2013, 52, 978-986 참조. 일부 구현예에서, TIL은 5% DMSO에서 동결보존된다. 일부 구현예에서, TIL은 세포 배양 배지 + 5% DMSO에서 동결보존된다. 일부 구현예에서, TIL은 실시예 6에 제공된 방법에 따라 동결보존된다.
적절한 경우, 세포를 냉동고에서 제거하고 용액의 대략 4/5가 해동될 때까지 37℃ 수조에서 해동한다. 세포를 일반적으로 완전 배지에 재현탁하고 임의적으로 1회 이상 세척한다. 일부 구현예에서, 해동된 TIL을 계수하고 당업계에 알려진 바와 같이 생존력에 대해 평가할 수 있다.
일부 경우에, 단계 B TIL 집단은 아래 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 동결보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크 TIL 집단은 단계 C 및 단계 D를 거친 다음 단계 D 후에 동결보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, 단계 B 또는 단계 D TIL 집단은 적합한 치료를 위한 유전적 변형을 거칠 수 있다.
G. 확장된 TIL의 표현형 특성
일부 구현예에서, TIL은 본원 및 실시예에 기재된 것들을 포함하여, 확장 후 수많은 표현형 마커의 발현에 대해 분석된다. 구현예에서, 하나 이상의 표현형 마커의 발현이 검사된다. 일부 구현예에서, TIL의 표현형 특성은 단계 B에서 제1 확장 후에 분석된다. 일부 구현예에서, TIL의 표현형 특성은 단계 C에서 전이 동안 분석된다. 일부 구현예에서, TIL의 표현형 특성은 단계 C에 따른 전이 동안 및 동결보존 후에 분석된다. 일부 구현예에서, TIL의 표현형 특성은 단계 D에 따른 제2 확장 후에 분석된다. 일부 구현예에서, TIL의 표현형 특성은 단계 D에 따른 2회 이상의 확장 후에 분석된다.
일부 구현예에서, 마커는 CD8 및 CD28로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, CD8의 발현이 검사된다. 일부 구현예에서, CD28의 발현이 검사된다. 일부 구현예에서, CD8 및/또는 CD28의 발현은 다른 프로세스와 비교하여 본 발명의 프로세스에 따라 생산된 TIL(예를 들어, 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 것과 같은 2A 프로세스와 비교하여 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 것과 같은 Gen 3 프로세스보다 더 높다. 일부 구현예에서, CD8의 발현은 다른 프로세스와 비교하여 본 발명의 프로세스에 따라 생산된 TIL(예를 들어, 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같은 2A 프로세스와 비교하여 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b)에 제공된 바와 같은 Gen 3 프로세스 보다 더 높다. 일부 구현예에서, CD28의 발현은 다른 프로세스와 비교하여 본 발명의 프로세스에 따라 생산된 TIL(예를 들어, 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8a)에 제공된 바와 같은 2A 프로세스와 비교하여 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같은 Gen 3 프로세스)보다 더 높다. 일부 구현예에서, 높은 CD28 발현은 더 젊고 더 지속적인 TIL 표현형을 나타낸다. 구현예에서, 하나 이상의 조절 마커의 발현이 측정된다.
구현예에서, CD8 및/또는 CD28 발현에 기반한 TIL의 제1 집단, TIL의 제2 집단, TIL의 제3 집단, 또는 수확된 TIL 집단의 선택은 본원에 기재된 종양 침윤 림프구(TIL)를 확장하는 방법에 대한 임의의 단계 동안 수행되지 않는다.
일부 구현예에서, 중추 기억 세포의 백분율은 다른 프로세스와 비교하여 본 발명의 프로세스에 따라 생산된 TIL(예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8a)에 제공된 바와 같은 2A 프로세스와 비교하여 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c))에 제공된 바와 같은 Gen 3 프로세스보다 더 높다. 일부 구현예에서 중추 기억 세포에 대한 기억 마커는 CCR7 및 CD62L로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, CD4+ 및/또는 CD8+ TIL 기억 하위집합은 상이한 기억 하위집합으로 분할될 수 있다. 일부 구현예에서, CD4+ 및/또는 CD8+ TIL은 미처리(CD45RA+CD62L+) TIL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD4+ 및/또는 CD8+ TIL은 중추 기억(CM; CD45RA-CD62L+) TIL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD4+ 및/또는 CD8+ TIL은 효과기 기억(EM; CD45RA-CD62L-) TIL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD4+ 및/또는 CD8+ TIL은 RA+ 효과기 기억/효과기(TEMRA/TEFF; CD45RA+CD62L+) TIL을 포함한다.
일부 구현예에서, TIL은 그랜자임 B, 퍼포린, 및 그래눌리신으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 마커를 발현한다. 일부 구현예에서, TIL은 그랜자임 B를 발현한다. 일부 구현예에서, TIL은 퍼포린을 발현한다. 일부 구현예에서, TIL은 그래눌리신을 발현한다.
구현예에서, 재자극된 TIL은 또한 사이토카인 방출 검정을 사용하여 사이토카인 방출에 대해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 인터페론-γ(IFN-γ) 분비에 대해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 ELISA 검정에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 급속 제2 확장 단계 후, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제공된 바와 같은 단계 D 후 ELISA 검정에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, TIL 건강은 IFN-감마(IFN-γ) 분비에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 활성 TIL을 나타낸다. 일부 구현예에서, IFN-γ 생산에 대한 효능 검정이 이용된다. IFN-γ 생산은 세포독성 잠재력의 또 다른 척도이다. IFN-γ 생산은 CD3, CD28, 및 CD137/4-1BB에 대한 항체로 자극된 TIL의 배지에서 사이토카인 IFN-γ의 수준을 결정함으로써 측정될 수 있다. 이러한 자극된 TIL의 매질 내 IFN-γ 수준은 IFN-γ 방출 측정을 사용하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8a)에 제공된 바와 같은 2A 프로세스에서 단계 D와 비교하여 예를 들어 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c) TIL에 제공된 바와 같은 Gen 3 프로세스에서 단계 D에서 IFN-γ 생산 증가는 단계 D TIL의 세포독성 잠재력의 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 또는 5-배 이상 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 1-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 2-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 3-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 4-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 5-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 Quantikine ELISA 키트를 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 생체 외 TIL에서 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 예를 들어 도 8b 방법을 포함하는 본 발명의 방법에 의해 생산된 TIL을 포함하여, 생체 외 TIL에서 측정된다.
일부 구현예에서, 적어도 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 또는 5-배 이상 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다. 일부 구현예에서, 적어도 1-배 이상의 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다. 일부 구현예에서, 적어도 2-배 이상의 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다. 일부 구현예에서, 적어도 3-배 이상의 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다. 일부 구현예에서, 적어도 4-배 이상의 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다. 일부 구현예에서, 적어도 5-배 이상의 IFN-γ를 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 8b 및/또는 도 8c 방법을 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생산된 TIL이다.
T 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한적이지만 다수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생산된다. 이러한 유전자 분절: V(가변성), D(다양성), J(결합), 및 C(상수)는 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성에서 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에서 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성에서 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에 의해 수득되는 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 도 8(특히, 예를 들어, 도 8a)에서 예시된 바와 같이 Gen 2로 언급된 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성에서 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 제1 확장에서 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성에서 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 중쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 면역글로불린 경쇄에 있는 면역글로불린에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 구현예에서, 다양성은 알파, 베타, 감마, 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 프로세스(예를 들어, Gen 3 프로세스)는 다른 프로세스, 예를 들어 샘플 내 고유한 펩티드 CDR의 수에 기반하여 Gen 2로 언급된 프로세스와 비교하여 더 높은 클론 다양성을 나타낸다(예를 들어 도 12-14 참조).
일부 구현예에서, TIL의 활성화 및 고갈은 하나 이상의 마커를 검사함으로써 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 활성화 및 고갈은 다색 유세포 측정을 사용하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 마커의 활성화 및 고갈은 CD3, PD-1, 2B4/CD244, CD8, CD25, BTLA, KLRG, TIM-3, CD194/CCR4, CD4, TIGIT, CD183, CD69, CD95, CD127, CD103, 및/또는 LAG-3)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 마커를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 마커의 활성화 및 고갈은 BTLA, CTLA-4, ICOS, Ki67, LAG-3, PD-1, TIGIT, 및/또는 TIM-3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 마커를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 마커의 활성화 및 고갈은 BTLA, CTLA-4, ICOS, Ki67, LAG-3, CD103+/CD69+, CD103+/CD69-, PD-1, TIGIT, 및/또는 TIM-3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 마커를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, T-세포 마커(활성화 및 고갈 마커 포함)는 T-세포 활성화, 억제, 또는 기능을 조사하기 위해 결정 및/또는 분서될 수 있다. 일부 구현예에서, T-세포 마커는 TIGIT, CD3, FoxP3, Tim-3, PD-1, CD103, CTLA-4, LAG-3, BTLA-4, ICOS, Ki67, CD8, CD25, CD45, CD4, 및/또는 CD59로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 마커를 포함하나 이에 제한되지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 표현형 특성화는 동결보존 후에 검사된다.
H. 추가 프로세스 구현예
일부 구현예에서, 본 발명은 (a) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 단계; (b) IL-2 및 OKT-3을 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하되, 여기서 프라이밍 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 7일 또는 약 1 내지 8일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 더 큰 것인, 단계; (c) TIL의 제2 집단을 IL-2, OKT-3 및 외인성 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 세포 배양 매질과 접촉시킴으로써 급속 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 급속 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 11일 또는 약 1 내지 10일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단인, 단계; 및 (d) 단계 (c)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계를 포함하는, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일, 또는 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮김으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단은 약 4 내지 7일, 또는 약 4 내지 8일의 기간 동안 대규모 배양물에서 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 제1 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 7일, 또는 약 4 내지 8일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일, 또는 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 7일, 또는 약 4 내지 8일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5 내지 7일의 기간 동안 배양된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (a) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 단계; (b) IL-2 및 OKT-3을 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하되, 여기서 프라이밍 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 8일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 더 큰 것인, 단계; (c) TIL의 제2 집단을 IL-2, OKT-3 및 외인성 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 세포 배양 매질과 접촉시킴으로써 급속 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 급속 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 8일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단인, 단계; 및 (d) 단계 (c)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계를 포함하는, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, 및 (2) 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮김으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단은 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 8일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 제1 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 6일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 6일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 5일의 기간 동안 배양된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (a) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 단계; (b) IL-2 및 OKT-3을 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하되, 여기서 프라이밍 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 7일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 더 큰 것인, 단계; (c) TIL의 제2 집단을 IL-2, OKT-3 및 외인성 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 세포 배양 매질과 접촉시킴으로써 급속 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 급속 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 11일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단인 것인, 단계; 및 (d) 단계 (c)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계를 포함하는, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 급속 제2 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮김으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단은 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 제1 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 일부 구현예에서, 급속 확장 단계는 (1) 소규모 배양물의 TIL의 제2 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (2) 제1 소규모 배양물로부터 TIL의 제2 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 소규모 배양물로부터 이러한 제2 용기로 옮겨진 TIL의 제2 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단을 외인성 항원 제시 세포(APC)를 추가로 포함하는 배양 매질과 접촉시킴으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 배양 매질 내 APC 수는 단계 (b)에서 배양 매질 내 APC 수보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 배양 매질에 추가 외인성 APC가 보충되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 20:1 또는 약 20:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 9:1 또는 약 9:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 8:1 또는 약 8:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 7:1 또는 약 7:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 6:1 또는 약 6:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1 또는 약 1.1:1 내지 2:1 또는 약 2:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 10:1 또는 약 10:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 5:1 또는 약 5:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 4:1 또는 약 4:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 3:1 또는 약 3:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.9:1 또는 약 2.9:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.8:1 또는 약 2.8:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.7:1 또는 약 2.7:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.6:1 또는 약 2.6:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.5:1 또는 약 2.5:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.4:1 또는 약 2.4:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.3:1 또는 약 2.3:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.2:1 또는 약 2.2:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1 내지 2.1:1 또는 약 2.1:1의 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 2:1 또는 약 2:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수 대 단계 (b)에서 첨가된 APC 수의 비율이 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1 또는 약 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1, 1.6:1, 1.7:1, 1.8:1, 1.9:1, 2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1, 3:1, 3.1:1, 3.2:1, 3.3:1, 3.4:1, 3.5:1, 3.6:1, 3.7:1, 3.8:1, 3.9:1, 4:1, 4.1:1, 4.2:1, 4.3:1, 4.4:1, 4.5:1, 4.6:1, 4.7:1, 4.8:1, 4.9:1, 또는 5:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 1차 제1 확장에 첨가된 APC 수가 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC 또는 약 1x108개, 1.1x108개, 1.2x108개, 1.3x108개, 1.4x108개, 1.5x108개, 1.6x108개, 1.7x108개, 1.8x108개, 1.9x108개, 2x108개, 2.1x108개, 2.2x108개, 2.3x108개, 2.4x108개, 2.5x108개, 2.6x108개, 2.7x108개, 2.8x108개, 2.9x108개, 3x108개, 3.1x108개, 3.2x108개, 3.3x108개, 3.4x108개 또는 3.5x108개의 APC이고, 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수가 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC 또는 약 3.5x108개, 3.6x108개, 3.7x108개, 3.8x108개, 3.9x108개, 4x108개, 4.1x108개, 4.2x108개, 4.3x108개, 4.4x108개, 4.5x108개, 4.6x108개, 4.7x108개, 4.8x108개, 4.9x108개, 5x108개, 5.1x108개, 5.2x108개, 5.3x108개, 5.4x108개, 5.5x108개, 5.6x108개, 5.7x108개, 5.8x108개, 5.9x108개, 6x108개, 6.1x108개, 6.2x108개, 6.3x108개, 6.4x108개, 6.5x108개, 6.6x108개, 6.7x108개, 6.8x108개, 6.9x108개, 7x108개, 7.1x108개, 7.2x108개, 7.3x108개, 7.4x108개, 7.5x108개, 7.6x108개, 7.7x108개, 7.8x108개, 7.9x108개, 8x108개, 8.1x108개, 8.2x108개, 8.3x108개, 8.4x108개, 8.5x108개, 8.6x108개, 8.7x108개, 8.8x108개, 8.9x108개, 9x108개, 9.1x108개, 9.2x108개, 9.3x108개, 9.4x108개, 9.5x108개, 9.6x108개, 9.7x108개, 9.8x108개, 9.9x108개 또는 1x109개의 APC가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 1차 제1 확장에 첨가된 APC 수가 1x108개의 APC 또는 약 1x108개의 APC 내지 3.5x108개의 APC 또는 약 3.5x108개의 APC 범위로부터 선택되고, 여기서 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수가 3.5x108개의 APC 또는 약 3.5x108개의 APC 내지 1x109개의 APC 또는 약 1x109개의 APC 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 1차 제1 확장에 첨가된 APC 수가 1.5x108개의 APC 또는 약 1.5x108개의 APC 내지 3x108개의 APC 또는 약 3x108개의 APC 범위로부 선택되고, 여기서 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수가 4x108개의 APC 또는 약 4x108개의 APC 내지 7.5x108개의 APC 또는 약 7.5x108개의 APC 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 1차 제1 확장에 첨가된 APC 수가 2x108개의 APC 또는 약 2x108개의 APC 내지 2.5x108개의 APC 또는 약 2.5x108개의 APC 범위로부터 선택되고, 여기서 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수가 4.5x108개의 APC 또는 약 4.5x108개의 APC 내지 5.5x108개의 APC 또는 약 5.5x108개의 APC 범위로부터 선택되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 2.5x108개의 APC 또는 약 2.5x108개의 APC가 1차 제1 확장에 첨가되고 5x108개의 APC 또는 약 5x108개의 APC가 급속 제2 확장에 첨가되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 항원 제시 세포가 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 종양 단편이 복수의 별도의 용기에 분포되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 각각의 별도의 용기에서 TIL의 제1 집단은 단계 (a)에서 수득되고, TIL의 제2 집단은 단계 (b)에서 수득되고, TIL의 제3 집단은 단계 (c)에서 수득되고, 단계 (c)에서 복수의 용기로부터의 TIL의 치료 집단은 조합되어 단계 (d)에서 수확된 TIL 집단이 생성된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 종양이 복수의 별도의 용기에 고르게 분포되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 적어도 2개의 별도의 용기를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 2 내지 20개의 별도의 용기를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 2 내지 15개의 별도의 용기 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 2 내지 10개의 별도의 용기를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 2 내지 5개의 별도의 용기를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 복수의 별도의 용기가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 별도의 용기를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 프라이밍 제1 확장이 단계 (b)에서 TIL의 제1 집단에서 수행되는 각 용기에 대해 단계 (c)에서 급속 제2 확장이 동일한 용기에서 이러한 TIL의 제1 집단으로부터 생산된 TIL의 제2 집단에서 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 별도의 용기 각각이 제1 가스 투과성 표면적을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 종양 단편이 단일 용기에 분포되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단일 용기가 제1 가스 투과성 표면적을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 APC는 1개 또는 약 1개 세포 층 내지 3개 또는 약 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1.5개 또는 약 1.5개 세포 층 내지 2.5개 약 2.5개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 2개 또는 약 2개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 또는 약 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3개 또는 약 3개 세포 층 내지 10개 또는 약 10개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4개 또는 약 4개 세포 층 내지 8개 또는 약 8개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 또는 약 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 프라이밍 제1 확장이 제1 가스 투과성 표면적을 포함하는 제1 용기에서 수행되고 단계 (c)에서 급속 제2 확장이 제2 가스 투과성 표면적을 포함하는 제2 용기에서 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제2 용기가 제1 용기보다 더 크도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 많고, 여기서 단계 (b)에서 APC는 1개 또는 약 1개 세포 층 내지 3개 또는 약 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1.5개 또는 약 1.5개 세포 층 내지 2.5개 약 2.5개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 2개 또는 약 2개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 또는 약 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3개 또는 약 3개 세포 층 내지 10개 또는 약 10개 세포 층의 평균 두께로 제2 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4개 또는 약 4개 세포 층 내지 8개 또는 약 8개 세포 층의 평균 두께로 제2 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 세포 층의 평균 두께로 제2 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 또는 약 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 세포 층의 평균 두께로 제2 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 프라이밍 제1 확장이 제1 가스 투과성 표면적을 포함하는 제1 용기에서 수행되고 단계 (c)에서 급속 제2 확장이 제1 용기에서 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 APC는 1개 또는 약 1개 세포 층 내지 3개 또는 약 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1.5개 또는 약 1.5개 세포 층 내지 2.5개 약 2.5개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 2개 또는 약 2개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC가 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 또는 약 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3개 또는 약 3개 세포 층 내지 10개 또는 약 10개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4개 또는 약 4개 세포 층 내지 8개 또는 약 8개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 APC가 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 또는 약 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8개 세포 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면적 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:10 또는 약 1:10의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:9 또는 약 1:9의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:8 또는 약 1:8의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:7 또는 약 1:7의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:6 또는 약 1:6의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:5 또는 약 1:5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:4 또는 약 1:4의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:3 또는 약 1:3의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1 또는 약 1:1.1 내지 1:2 또는 약 1:2의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.2 또는 약 1:1.2 내지 1:8 또는 약 1:8의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.3 또는 약 1:1.3 내지 1:7 또는 약 1:7의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공히먀, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.4 또는 약 1:1.4 내지 1:6 또는 약 1:6의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.5 또는 약 1:1.5 내지 1:5 또는 약 1:5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.6 또는 약 1:1.6 내지 1:4 또는 약 1:4의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.7 또는 약 1:1.7 내지 1:3.5 또는 약 1:3.5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.8 또는 약 1:1.8 내지 1:3 또는 약 1:3의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.9 또는 약 1:1.9 내지 1:2.5 또는 약 1:2.5의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:2 또는 약 1:2의 범위로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 1차 제1 확장이 TIL의 제1 집단의 세포 배양 매질에 추가 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 단계 (c)에서 첨가된 APC 수는 단계 (b)에서 첨가된 APC 수보다 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (c)에서 적층된 APC 층의 평균 수의 비율은 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.1, 1:2.2, 1:2.3, 1:2.4, 1:2.5, 1:2.6, 1:2.7, 1:2.8, 1:2.9, 1:3, 1:3.1, 1:3.2, 1:3.3, 1:3.4, 1:3.5, 1:3.6, 1:3.7, 1:3.8, 1:3.9, 1:4, 1:4.1, 1:4.2, 1:4.3, 1:4.4, 1:4.5, 1:4.6, 1:4.7, 1:4.8, 1:4.9, 1:5, 1:5.1, 1:5.2, 1:5.3, 1:5.4, 1:5.5, 1:5.6, 1:5.7, 1:5.8, 1:5.9, 1:6, 1:6.1, 1:6.2, 1:6.3, 1:6.4, 1:6.5, 1:6.6, 1:6.7, 1:6.8, 1:6.9, 1:7, 1:7.1, 1:7.2, 1:7.3, 1:7.4, 1:7.5, 1:7.6, 1:7.7, 1:7.8, 1:7.9, 1:8, 1:8.1, 1:8.2, 1:8.3, 1:8.4, 1:8.5, 1:8.6, 1:8.7, 1:8.8, 1:8.9, 1:9, 1:9.1, 1:9.2, 1:9.3, 1:9.4, 1:9.5, 1:9.6, 1:9.7, 1:9.8, 1:9.9 또는 1:10 또는 약 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.1, 1:2.2, 1:2.3, 1:2.4, 1:2.5, 1:2.6, 1:2.7, 1:2.8, 1:2.9, 1:3, 1:3.1, 1:3.2, 1:3.3, 1:3.4, 1:3.5, 1:3.6, 1:3.7, 1:3.8, 1:3.9, 1:4, 1:4.1, 1:4.2, 1:4.3, 1:4.4, 1:4.5, 1:4.6, 1:4.7, 1:4.8, 1:4.9, 1:5, 1:5.1, 1:5.2, 1:5.3, 1:5.4, 1:5.5, 1:5.6, 1:5.7, 1:5.8, 1:5.9, 1:6, 1:6.1, 1:6.2, 1:6.3, 1:6.4, 1:6.5, 1:6.6, 1:6.7, 1:6.8, 1:6.9, 1:7, 1:7.1, 1:7.2, 1:7.3, 1:7.4, 1:7.5, 1:7.6, 1:7.7, 1:7.8, 1:7.9, 1:8, 1:8.1, 1:8.2, 1:8.3, 1:8.4, 1:8.5, 1:8.6, 1:8.7, 1:8.8, 1:8.9, 1:9, 1:9.1, 1:9.2, 1:9.3, 1:9.4, 1:9.5, 1:9.6, 1:9.7, 1:9.8, 1:9.9 또는 1:10으로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단에서 TIL 수 대 TIL의 제1 집단에서 TIL 수의 비율이 1.5:1 또는 약 1.5:1 내지 100:1 또는 약 100:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단에서 TIL 수 대 TIL의 제1 집단에서 TIL 수의 비율이 50:1 또는 약 50:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단에서 TIL 수 대 TIL의 제1 집단에서 TIL 수의 비율이 25:1 또는 약 25:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단에서 TIL 수 대 TIL의 제1 집단에서 TIL 수의 비율이 20:1 또는 약 20:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단에서 TIL 수 대 TIL의 제1 집단에서 TIL 수의 비율이 10:1 또는 약 10:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단이 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 또는 약 50-배 더 크도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제2 집단이 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, 14-, 15-, 16-, 17-, 18-, 19-, 20-, 21-, 22-, 23-, 24-, 25-, 26-, 27-, 28-, 29-, 30-, 31-, 32-, 33-, 34-, 35-, 36-, 37-, 38-, 39-, 40-, 41-, 42-, 43-, 44-, 45-, 46-, 47-, 48-, 49- 또는 50-배 또는 약 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, 14-, 15-, 16-, 17-, 18-, 19-, 20-, 21-, 22-, 23-, 24-, 25-, 26-, 27-, 28-, 29-, 30-, 31-, 32-, 33-, 34-, 35-, 36-, 37-, 38-, 39-, 40-, 41-, 42-, 43-, 44-, 45-, 46-, 47-, 48-, 49- 또는 50-배 더 크도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 제2 기간의 개시 2일 또는 약 2일 또는 3일 또는 약 3일 후, 세포 배양 매질에 추가 IL-2가 보충되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (d)에서 수확된 TIL 집단을 동결보존하는 단계를 추가로 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (d) 후 단계 (d)에서 수확된 TIL 집단을 임의적으로 HypoThermosol을 함유하는 주입 백으로 옮기는 추가 단계 (e)를 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 프로세스가 1:1 비율의 수확된 TIL 집단 대 동결보존 배지를 사용하여 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 항원 제시 세포가 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 PBMC가 조사되고 동종이계가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 세포 배양에 첨가된 APC의 총 수가 2.5 x 108개가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 세포 배양에 첨가된 APC의 총 수가 5 x 108개가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 APC가 PBMC가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 PBMC가 조사되고 동종이계가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 항원 제시 세포가 인공 항원 제시 세포가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (d)에서 수확이 막 기반 세포 처리 시스템을 사용하여 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (d)에서 수확이 LOVO 세포 처리 시스템을 사용하여 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 5 또는 약 5개 내지 60 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 10 또는 약 10개 내지 60 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 15 또는 약 15개 내지 60 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 20 또는 약 20개 내지 60 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 25 또는 약 25개 내지 60 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 30개 또는 약 30개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 35개 또는 약 35개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 40개 또는 약 40개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 45개 또는 약 45개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 50개 또는 약 50개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 단계 (b)에서 용기 당 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60개 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60개의 단편(들)을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 27 mm3 또는 약 27 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 20 mm3 또는 약 20 mm3 내지 50 mm3 또는 약 50 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 21 mm3 또는 약 21 mm3 내지 30 mm3 또는 약 30 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 22 mm3 또는 약 22 mm3 내지 29.5 mm3 또는 약 29.5 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 23 mm3 또는 약 23 mm3 내지 29 mm3 또는 약 29 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 24 mm3 또는 약 24 mm3 내지 28.5 mm3 또는 약 28.5 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 25 mm3 또는 약 25 mm3 내지 28 mm3 또는 약 28 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 26.5 mm3 또는 약 26.5 mm3 내지 27.5 mm3 또는 약 27.5 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 각 단편이 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50 mm3 또는 약 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50 mm3의 부피를 갖도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 1300 mm3 또는 약 1300 mm3 내지 1500 mm3 또는 약 1500 mm3의 총 부피를 갖는 30개 또는 약 30개 내지 60개 또는 약 60개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 1350 mm3 또는 약 1350 mm3의 총 부피를 갖는 50개 또는 약 50개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다중 단편이 1 그램 또는 약 1 그램 내지 1.5 그램 또는 약 1.5 그램의 총 질량을 갖는 50 또는 약 50개의 단편을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 세포 배양 매질이 G-용기 또는 Xuri 세포백인 용기에 제공되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 세포 배양 매질 내 IL-2 농도가 약 10,000 IU/mL 내지 약 5,000 IU/mL가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 세포 배양 매질 내 IL-2 농도가 약 6,000 IU/mL가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 배지가 디메틸술폭사이드(DMSO)를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 배지가 7% 내지 10% DMSO를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 제1 기간이 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일의 기간 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 제2 기간이 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 제1 기간 및 단계 (c)에서 제2 기간이 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일의 기간 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 제1 기간 및 단계 (c)에서 제2 기간이 각각 개별적으로 5일, 6일, 또는 7일 또는 약 5일, 6일, 또는 7일의 기간 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 제1 기간 및 단계 (c)에서 제2 기간이 각각 개별적으로 7일 또는 약 7일의 기간 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 14일 또는 약 14일 내지 18일 또는 약 18일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 15일 또는 약 15일 내지 18일 또는 약 18일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 16일 또는 약 16일 내지 18일 또는 약 18일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 17일 또는 약 17일 내지 18일 또는 약 18일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 14일 또는 약 14일 내지 17일 또는 약 17일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 15일 또는 약 15일 내지 17일 또는 약 17일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 16일 또는 약 16일 내지 17일 또는 약 17일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 14일 또는 약 14일 내지 16일 또는 약 16일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 15일 또는 약 15일 내지 16일 또는 약 16일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 14일 또는 약 14일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 15일 또는 약 15일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 16일 또는 약 16일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 17일 또는 약 17일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 18일 또는 약 18일 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 14일 이하 또는 약 14일 이하 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 15일 이하 또는 약 15일 이하 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 16일 이하 또는 약 16일 이하 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a) 내지 (d)가 총 18일 이하 또는 약 18일 이하 내에 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (d)에서 수확된 TIL의 치료 집단이 TIL의 치료적 유효량에 대해 충분한 TIL을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량에 충분한 TIL 수가 2.3x1010개 또는 약 2.3x1010개 내지 13.7x1010개 또는 약 13.7x1010개가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 TIL의 제3 집단이 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 TIL의 제3 집단이 16일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 내지 5-배 이상의 인터페론-감마 생산을 제공하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 TIL의 제3 집단이 17일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 내지 5-배 이상의 인터페론-감마 생산을 제공하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 TIL의 제3 집단이 18일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 내지 5-배 이상의 인터페론-감마 생산을 제공하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)의 TIL의 제3 집단으로부터 수득된 효과기 T 세포 및/또는 중추 기억 T 세포가 단계 (b)의 제2 세포 집단으로부터 수득된 효과기 T 세포 및/또는 중추 기억 T 세포에 비해 증가된 CD8 및 CD28 발현을 나타내도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법에 언급된 각각의 용기가 밀폐 용기가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법에 언급된 각각의 용기가 G-용기가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법에 언급된 각각의 용기가 GREX-10이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법에 언급된 각각의 용기가 GREX-100이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법에 언급된 각각의 용기가 GREX-500이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 적용가능한 경우 이전 단락의 임의의 것에 기재된 방법에 의해 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 항원 제시 세포(APC) 또는 OKT3 없이 수행되는 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 항원 제시 세포(APC) 없이 수행되는 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 OKT3 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 TIL의 제1 확장이 첨가된 항원 제시 세포(APC)도 첨가된 OKT3도 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 16일 초과의 프로세스에 의해 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 17일 초과의 프로세스에 의해 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자의 종양 조직으로부터 제조된 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공하며, 여기서 TIL의 치료 집단은 18일 초과의 프로세스에 의해 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 증가된 효능, 증가된 인터페론-감마 생산, 및/또는 증가된 다클론성을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 증가된 인터페론-감마 생산을 제공하는 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 증가된 다클론성을 제공하는 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 증가된 효능을 제공하는 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 16일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 17일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 18일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 16일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 17일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 18일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 16일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 17일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 치료 집단이 18일 초과의 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 항원 제시 세포(APC) 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 OKT3 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 종양 침윤 림프구(TIL)의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 APC 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 OKT3 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 2-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 APC 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 1-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 한든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 확장이 임의의 첨가된 OKT3 없이 수행된 프로세스에 의해 제조된 TIL과 비교하여 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 하는 TIL의 치료 집단을 제공한다. 일부 구현예에서, TIL은 예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재되거나 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 8(특히, 예를 들어, 도 8b 및/또는 도 8c)에 제시된 바와 같은 본원에 기재된 확장 프로세스로 인해 적어도 3-배 이상의 인터페론-감마 생산을 가능하게 만든다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 종양 단편이 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 종양 단편이 중심부 생검이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 종양 단편이 미세 바늘 흡인이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 종양 단편이 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 종양 단편이 중심부 바늘 생검이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 방법이 대상체로부터 종양 조직의 하나 이상의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 것을 포함하고, (ii) 방법이 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하기 전에 약 3일의 기간 동안 IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양하는 단계를 수행하는 것을 포함하고, (iii) 방법이 약 8일의 기간 동안 프라이밍 제1 확장을 수행하는 것을 포함하고, (iv) 방법이 약 11일의 기간 동안 급속 제2 확장을 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 전술한 구현예 중 일부에서, 방법의 단계는 약 22일 내에 완료된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 방법이 대상체로부터 종양 조직의 하나 이상의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 것을 포함하고, (ii) 방법이 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하기 전에 약 3일의 기간 동안 IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양하는 단계를 수행하는 것을 포함하고, (iii) 방법이 약 8일의 기간 동안 프라이밍 제1 확장을 수행하는 것을 포함하고, (iv) 방법이 TIL의 제2 집단의 배양물을 약 5일 동안 배양하고, 배양물을 최대 5개의 하위배양물로 분할하고 하위배양물을 약 6일 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 전술한 구현예 중 일부에서, 최대 5개의 하위배양물은 각각 TIL의 제2 집단의 배양물이 급속 제2 확장에서 시작되는 용기와 크기가 동일하거나 더 큰 용기에서 각각 배양된다. 전술한 구현예 중 일부에서, TIL의 제2 집단의 배양물은 최대 5개의 하위배양물 사이에 동일하게 나누어진다. 전술한 구현예 중 일부에서, 방법의 단계는 약 22일 내에 완료된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 20개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 중심부 생검을 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 20개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 20개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 TIL의 제1 집단이 대상체로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 방법이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 중심부 생검으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 것을 포함하고, (ii) 방법이 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하기 전에 약 3일의 기간 동안 IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양하는 단계를 수행하는 것을 포함하고, (iii) 방법이 TIL의 제1 집단을 IL-2, OKT-3 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 배양 매질에서 약 8일의 기간 동안 배양함으로써 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하여 TIL의 제2 집단을 수득하는 것을 포함하고, (iv) 방법이 TIL의 제2 집단을 IL-2, OKT-3 및 APC를 포함하는 배양 매질에서 약 11일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장 단계를 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 전술한 구현예 중 일부에서, 방법의 단계는 약 22일 내에 완료된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 방법이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 중심부 생검으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 것을 포함하고, (ii) 방법이 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하기 전에 약 3일의 기간 동안 IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양하는 단계를 수행하고, (iii) 방법이 TIL의 제1 집단을 IL-2, OKT-3 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 배양 매질에서 약 8일의 기간 동안 배양함으로써 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하여 TIL의 제2 집단을 수득하는 것을 포함하고, (iv) 방법이 TIL의 제2 집단의 배양물을 IL-2, OKT-3 및 APC를 포함하는 배양 매질에서 약 5일 동안 배양하고, 배양물을 최대 5개의 하위배양물로 분할하고 각각의 하위배양물을 IL-2를 포함하는 배양 매질에서 약 6일 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 전술한 구현예 중 일부에서, 최대 5개의 하위배양물은 TIL의 제2 집단의 배양물이 급속 제2 확장에서 시작되는 용기와 크기가 동일하거나 더 큰 용기에서 각각 배양된다. 전술한 구현예 중 일부에서, TIL의 제2 집단의 배양물은 최대 5개의 하위배양물 사이에 동일하게 나누어진다. 전술한 구현예 중 일부에서, 방법의 단계는 약 22일 내에 완료된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 방법이 대상체로부터 종양 조직의 1 내지 약 10개의 중심부 생검으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 것을 포함하고, (ii) 방법이 프라이밍 제1 확장 단계를 수행하기 전에 약 3일의 기간 동안 G-Rex 100M 플라스크에 0.5 L의 CM1 배양 매질 중 6000 IU IL-2/mL를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양하는 단계를 수행하는 것을 포함하고, (iii) 방법이 6000 IU/mL IL-2, 30 ng/mL OKT-3, 및 약 108개의 영양 세포를 함유하는 0.5 L의 CM1 배양 매질을 첨가하고 약 8일의 기간 동안 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하는 것을 포함하고, (iv) 방법이 (a) TIL의 제2 집단을 3000 IU/mL IL-2, 30 ng/mL OKT-3, 및 5x109개의 영양 세포를 함유하는 5 L의 CM2 배양 매질을 함유하는 G-Rex 500MCS 플라스크로 옮기고 약 5일 동안 배양하고 (b) 109개의 TIL을 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 5 L의 AIM-V 매질을 함유하는 최대 5개 G-Rex 500MCS 플라스크 각각으로 옮김으로써 배양물을 최대 5개의 하위배양물로 분할하고, 하위배양물을 약 6일 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행하는 것을 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 전술한 구현예 중 일부에서, 방법의 단계는 약 22일 내에 완료된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (a) 성장에 영향을 미치고 T 세포의 제1 집단의 활성화를 프라이밍하기 위해 T 세포의 제1 집단을 배양함으로써 공여자로부터 수득된 T 세포의 제1 집단의 프라이밍 제1 확장을 수행하는 단계; (b) 단계 (a)에서 프라이밍된 T 세포의 제1 집단의 활성화가 붕괴되기 시작한 후, 성장에 영향을 미치고 T 세포의 제1 집단의 활성화를 촉진하기 위해 T 세포의 제1 집단을 배양함으로써 T 세포의 제1 집단의 급속 제2 확장을 수행하여 T 세포의 제2 집단을 수득하는 단계; 및 (c) T 세포의 제2 집단을 수확하는 단계를 포함하는, T 세포를 확장시키는 방법을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 급속 제2 확장 단계는 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮기고, 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 더 큰 규모의 배양물에서 제2 용기에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할된다. 또 다른 구현예에서, 급속 확장 단계는 (a) 제1 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 제1 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양된다. 또 다른 구현예에서, 급속 확장 단계는 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 동안 배양된다. 또 다른 구현예에서, 급속 확장 단계는 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할되며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 약 5일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 제2 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 더 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로 옮기고, 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 더 큰 규모의 배양물에서 제2 용기에서 약 5 내지 7일의 기간 동안 배양함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 제1 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 제1 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 제1 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 5 내지 7일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 2 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 중에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5 내지 7일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5 내지 6일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배앙함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 6일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 급속 확장 단계가 (a) 소규모 배양물의 T 세포의 제1 집단을 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서, 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 제2 확장을 수행한 다음, (b) 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단을 제1 용기보다 크기가 더 큰 2, 3 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 사이에 옮기고 할당함으로써 배양물의 규모 확장 및 규모 확대를 달성하기 위해 복수의 단계로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 각각의 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 옮겨진 소규모 배양물로부터 T 세포의 제1 집단의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 7일의 기간 동안 배양된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)의 프라이밍 제1 확장이 최대 7일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 8일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 9일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 10일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 11일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 7일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 9일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 7일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 10일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 7일 또는 8일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 9일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 7일 또는 8일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 10일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 8일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 9일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 프라이밍 제1 확장이 8일의 기간 동안 수행되고 단계 (b)의 급속 제2 확장이 최대 8일의 기간 동안 수행되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 T 세포의 제1 집단이 OKT-3 및 IL-2를 포함하는 제1 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제1 배양 매질이 4-1BB 작용제, OKT-3 및 IL-2를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제1 배양 매질이 OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제1 배양 매질이 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 T 세포의 제1 집단이 OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제2 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제2 배양 매질이 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 T 세포의 제1 집단이 제1 가스 투과성 표면을 포함하는 용기 내 제1 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 제1 배양 매질은 OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)의 제1 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제1 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제1 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 단계 (b)에서 T 세포의 제1 집단은 용기 내 제2 배양 매질에서 배양되고, 여기서 제2 배양 매질은 OKT-3, IL-2 및 APC의 제2 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제2 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제2 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 APC의 제2 집단은 APC의 제1 집단보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 T 세포의 제1 집단이 제1 가스 투과성 표면을 포함하는 용기 내 제1 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 제1 배양 매질은 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)의 제1 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제1 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제1 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 단계 (b)에서 T 세포의 제1 집단은 용기 내 제2 배양 매질에서 배양되고, 여기서 제2 배양 매질은 OKT-3, IL-2 및 APC의 제2 집단을 포함하고, 어기서 APC의 제2 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제2 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 APC의 제2 집단은 APC의 제1 집단보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 T 세포의 제1 집단이 제1 가스 투과성 표면을 포함하는 용기 내 제1 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 제1 배양 매질은 OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)의 제1 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제1 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제1 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 단계 (b)에서 T 세포의 제1 집단은 용기 내 제2 배양 매질에서 배양되고, 여기서 제2 배양 매질은 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 APC의 제2 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제2 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제2 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 APC의 제2 집단은 APC의 제1 집단보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 T 세포의 제1 집단이 제1 가스 투과성 표면을 포함하는 용기 내 제1 배양 매질에서 배양되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공하며, 여기서 제1 배양 매질은 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 항원 제시 세포(APC)의 제1 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제1 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제1 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 단계 (b)에서 T 세포의 제1 집단은 용기 내 제2 배양 매질에서 배양되고, 여기서 제2 배양 매질은 4-1BB 작용제, OKT-3, IL-2 및 APC의 제2 집단을 포함하고, 여기서 APC의 제2 집단은 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이고 APC의 제2 집단은 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되고, 여기서 APC의 제2 집단은 APC의 제1 집단보다 더 크다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 APC의 제2 집단에서 APC 수 대 APC의 제1 집단에서 APC 수의 비율이 약 2:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 APC의 제1 집단에서 APC 수가 약 2.5 x 108개이고 APC의 제2 집단에서 APC 수가 약 5 x 108개가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 APC의 2개 층의 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 APC의 4 내지 8개 층의 범위로부터 선택된 평균 두께로 제1 가스 투과성 표면 위에 적층되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 제1 가스 투과성 표면 위에 적층된 APC 층의 평균 수 대 단계 (a)에서 제1 가스 투과성 표면 위에 적층된 APC 층의 평균 수의 비율이 2:1이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 1.0x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개 APC/cm2 내지 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 4.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 1.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.5x106개 APC/cm2 내지 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 2.0x106개 APC/cm2 또는 약 2.0x106개 APC/cm2 내지 3.0x106개 APC/cm2 또는 약 3.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 2.0x106개 APC/cm2 또는 약 2.0x106개 APC/cm2의 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 2.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2 내지 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 7.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 내지 6.0x106개 APC/cm2 또는 약 6.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2 내지 5.5x106개 APC/cm2 또는 약 5.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2의 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 1.0x106개 APC/cm2 또는 약 1.0x106개 APC/cm2 내지 4.5x106개 APC/cm2 또는 약 4.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되고 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 2.5x106개 APC/cm2 또는 약 2.5x106개 APC/cm2 내지 7.5x106개 APC/cm2 또는 약 7.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 1.5x106개 APC/cm2 또는 약 1.5x106개 APC/cm2 내지 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되고 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 3.5x106개 APC/cm2 또는 약 3.5x106개 APC/cm2 내지 6.0x106개 APC/cm2 또는 약 6.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 2.0x106개 APC/cm2 또는 약 2.0x106개 APC/cm2 내지 3.0x106개 APC/cm2 또는 약 3.0x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되고 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2 내지 5.5x106개 APC/cm2 또는 약 5.5x106개 APC/cm2 범위로부터 선택된 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (a)에서 APC의 제1 집단이 2.0x106개 APC/cm2 또는 약 2.0x106개 APC/cm2의 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되고 단계 (b)에서 APC의 제2 집단이 4.0x106개 APC/cm2 또는 약 4.0x106개 APC/cm2의 밀도로 제1 가스 투과성 표면 상에 시딩되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 APC가 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 PBMC가 조사되고 T 세포의 제1 집단의 공여자에 대해 외인성이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포가 종양 침윤 림프구(TIL)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포가 골수 침윤 림프구(MIL)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포가 말초 혈액 림프구(PBL)가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자의 전혈로부터 분리하여 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자의 성분채집술 생성물로부터 분리하여 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 T 세포 표현형의 양성 또는 음성 선택에 의해 공여자의 전혈 또는 성분채집술 생성물로부터 분리되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포 표현형이 CD3+ 및 CD45+가 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단의 프라이밍 제1 확장을 수행하기 전에 T 세포가 NK 세포로부터 분리되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다. 또 다른 구현예에서, T 세포는 T 세포의 제1 집단에서 CD3- CD56+ 세포를 제거함으로써 T 세포의 제1 집단의 NK 세포로부터 분리된다. 또 다른 구현예에서, CD3- CD56+ 세포는 CD3- CD56+ 세포 분획을 제거하고 음성 분획을 회수하는 게이팅 전략을 사용하여 T 세포의 제1 집단을 세포 분류에 적용함으로써 T 세포의 제1 집단으로부터 제거된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 높은 백분율의 NK 세포를 특징으로 하는 T 세포의 제1 집단에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 높은 백분율의 CD3- CD56+ 세포를 특징으로 하는 T 세포의 제1 집단에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 많은 수의 NK 세포 퍼센트를 특징으로 하는 종양 조직에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 많은 수의 CD3- CD56+ 세포를 특징으로 하는 종양 조직에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 많은 수의 NK 세포의 존재를 특징으로 하는 종양을 앓고 있는 환자의 종양 조직에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 많은 수의 CD3- CD56+ 세포의 존재를 특징으로 하는 종양을 앓고 있는 환자에서 수득된 종양 조직에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 방법은 난소암을 앓고 있는 환자에서 수득된 종양 조직에서 T 세포의 확장을 위해 활용된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단으로부터의 1x107개 또는 약 1x107개의 T 세포를 용기에 시딩하여 이러한 용기에서 1차 제1 확장 배양을 개시하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 복수의 용기에 분포되고, 각 용기에 T 세포의 제1 집단으로부터의 1x107개 또는 약 1x107개의 T 세포를 시딩하여 이러한 용기에서 1차 제1 확장 배양을 개시하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 단계 (c)에서 수확된 T 세포의 제2 집단이 TIL의 치료 집단이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 하나 이상의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인이 되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함), 중심부 생검, 중심부 바늘 생검 또는 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 하나 이상의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 20개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 10개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 중심부 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 하나 이상의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 20개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 10개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 미세 바늘 흡인물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 하나 이상의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 소형 생검(예를 들어, 펀치 생검 포함)으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 하나 이상의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 20개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1 내지 10개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 T 세포의 제1 집단이 공여자로부터 종양 조직의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 중심부 바늘 생검으로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 i) IL-2를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 약 3일 동안 종양 샘플을 배양함으로써 대상체에서 종양의 하나 이상의 소형 생검, 중심부 생검, 또는 바늘 생검으로부터 수득된 종양 샘플에서 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계; (ii) IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생성하되, 여기서 프라이밍 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 포함하는 용기에서 수행되고, 여기서 프라이밍 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 7 또는 8일의 제1 기간 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 더 큰 것인, 단계; (iii) TIL의 제2 집단의 제2 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 APC를 보충함으로써 급속 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 급속 제2 확장에 첨가된 APC 수는 단계 (ii)에서 첨가된 APC 수의 적어도 2배이고, 여기서 급속 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 11일의 제2 기간 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 급속 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 포함하는 용기에서 수행되는 것인, 단계; (iv) 단계 (iii)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계; 및 (v) 단계 (iv)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기는 단계를 포함하는, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) IL-2를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 약 3일 동안 종양 샘플을 배양함으로써 대상체에서 종양의 하나 이상의 소형 생검, 중심부 생검, 또는 바늘 생검으로부터 수득된 종양 샘플에서 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계; (ii) IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 프라이밍 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생성하되, 여기서 프라이밍 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 7 또는 8일의 제1 기간 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 더 큰 것인, 단계; (iii) TIL의 제2 집단을 IL-2, OKT-3, 및 APC를 포함하는 제3 세포 배양 매질과 접촉시킴으로써 급속 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 급속 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 11일의 제2 기간 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단인, 단계; 및 (iv) 단계 (iii)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계를 포함하는, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제2 기간의 5일차 후 배양물을 2개 이상의 하위배양물로 분할하고, 각각의 하위배양물에 추가 양의 제3 배양 매질을 보충하고 약 6일 동안 배양하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제2 기간의 5일차 후 배양물을 2개 이상의 하위배양물로 분할하고, 각각의 하위배양물에 IL-2를 포함하는 제4 배양 매질을 보충하고 약 6일 동안 배양하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 제2 기간의 5일차 후 배양물을 최대 5개의 하위배양물로 분할하도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 방법의 모든 단계가 약 22일 내에 완료되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 (i) 성장에 영향을 미치고 T 세포의 제1 집단의 활성화를 프라이밍하기 위해 T 세포의 제1 집단을 배양함으로써 공여자에서 종양의 하나 이상의 소형 생검, 중심부 생검, 또는 바늘 생검으로부터 수득된 종양 샘플에서 T 세포의 제1 집단의 프라이밍 제1 확장을 수행하는 단계; (ii) 단계 (a)에서 프라이밍된 T 세포의 제1 집단의 활성화가 붕괴되기 시작한 후, 성장에 영향을 미치고 T 세포의 제1 집단의 활성화를 촉진시키기 위해 T 세포의 제1 집단을 배양함으로써 T 세포의 제1 집단의 급속 제2 확장을 수행하여 T 세포의 제2 집단을 수득하는 단계; 및 (iv) T 세포의 제2 집단을 수확하는 단계를 포함하는, T 세포를 확장시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 종양 샘플은 복수의 중심부 생검으로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 복수의 중심부 생검은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10개의 중심부 생검으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명 T 세포 또는 TIL이 종양 소화물로부터 수득되도록 변형된 상기 적용가능한 경우 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 방법. 일부 구현예에서, 종양 소화물은 RPMI 1640, 2mM GlutaMAX, 10 mg/mL 젠타마이신, 30 U/mL DNase, 및 1.0 mg/mL 콜라게나제와 같으나 이에 제한되지 않는 효소 배지에서 종양을 인큐베이션한 후, 기계적 해리(GentleMACS, 캘리포니아주 오번 소재의 Miltenyi Biotec)에 의해 생성된다. 일부 구현예에서, 종양은 콜라게나제(콜라게나제의 임의의 블렌드 또는 유형 포함), Accutase™, Accumax™, 히알루로니다제, 중성 프로테아제(디스파제), 키모트립신, 키모파파인, 트립신, 카제이나제, 엘라스타제, 파파인, 프로테아제 유형 XIV(프로나제), 데옥시리보뉴클레아제 I(DNase), 트립신 억제제, 임의의 다른 해리 또는 단백질분해 효소, 및 이의 임의의 조합과 같으나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 해리(소화) 효소에 배치된다. 다른 구현예에서, 종양은 콜라게나제(콜라게나제의 임의의 블렌드 또는 유형 포함), 중성 프로테아제(디스파제) 및 데옥시리보뉴클레아제 I(DNase)를 포함한 종양 해리 효소 혼합물에 배치된다.
VI. 약제학적 조성물, 투여량, 및 투약 레지멘
구현예에서, 본 개시내용의 방법을 사용하여 확장 및/또는 유전적으로 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL(CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL 포함)은 환자에게 약제학적 조성물로서 투여된다. 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균 완충액 중 TIL의 현탁액이다. 본 개시내용의 PBMC를 사용하여 확장된 TIL은 당업계에 알려진 바와 같은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, T-세포는 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로 투여되며, 바람직하게는 대략 30 내지 60분 지속된다. 다른 적합한 투여 경로는 복강내, 척수강내, 및 림프내 투여를 포함한다.
TIL의 임의의 적합한 용량이 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 특히 암이 흑색종인 경우, 약 2.3x1010개 내지 약 13.7x1010개의 TIL, 평균 약 7.8x1010개의 TIL이 투여된다. 구현예에서, 약 1.2x1010개 내지 약 4.3x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 3x1010개 내지 약 12x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 4x1010개 내지 약 10x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 5x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 6x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 7x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 2.3x1010개 내지 약 13.7x1010개이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 7.8x1010개의 TIL이며, 특히 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 1.2x1010개 내지 약 4.3x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 3x1010개 내지 약 12x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 4x1010개 내지 약 10x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 5x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 6x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 7x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 수는 약 1x106개, 2x106개, 3x106개, 4x106개, 5x106개, 6x106개, 7x106개, 8x106개, 9x106개, 1x107개, 2x107개, 3x107개, 4x107개, 5x107개, 6x107개, 7x107개, 8x107개, 9x107개, 1x108개, 2x108개, 3x108개, 4x108개, 5x108개, 6x108개, 7x108개, 8x108개, 9x108개, 1x109개, 2x109개, 3x109개, 4x109개, 5x109개, 6x109개, 7x109개, 8x109개, 9x109개, 1x1010개, 2x1010개, 3x1010개, 4x1010개, 5x1010개, 6x1010개, 7x1010개, 8x1010개, 9x1010개, 1x1011개, 2x1011개, 3x1011개, 4x1011개, 5x1011개, 6x1011개, 7x1011개, 8x1011개, 9x1011개, 1x1012개, 2x1012개, 3x1012개, 4x1012개, 5x1012개, 6x1012개, 7x1012개, 8x1012개, 9x1012개, 1x1013개, 2x1013개, 3x1013개, 4x1013개, 5x1013개, 6x1013개, 7x1013개, 8x1013개, 및 9x1013개이다. 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 수는 1x106개 내지 5x106개, 5x106개 내지 1x107개, 1x107개 내지 5x107개, 5x107개 내지 1x108개, 1x108개 내지 5x108개, 5x108개 내지 1x109개, 1x109개 내지 5x109개, 5x109개 내지 1x1010개, 1x1010개 내지 5x1010개, 5x1010개 내지 1x1011개, 5x1011개 내지 1x1012개, 1x1012개 내지 5x1012개, 및 5x1012개 내지 1x1013개 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 예를 들어, 약제학적 조성물의 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v 또는 v/v 미만이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25% 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v, 또는 v/v 초과이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 약 0.0001% 내지 약 50%, 약 0.001% 내지 약 40%, 약 0.01% 내지 약 30%, 약 0.02% 내지 약 29%, 약 0.03% 내지 약 28%, 약 0.04% 내지 약 27%, 약 0.05% 내지 약 26%, 약 0.06% 내지 약 25%, 약 0.07% 내지 약 24%, 약 0.08% 내지 약 23%, 약 0.09% 내지 약 22%, 약 0.1% 내지 약 21%, 약 0.2% 내지 약 20%, 약 0.3% 내지 약 19%, 약 0.4% 내지 약 18%, 약 0.5% 내지 약 17%, 약 0.6% 내지 약 16%, 약 0.7% 내지 약 15%, 약 0.8% 내지 약 14%, 약 0.9% 내지 약 12% 또는 약 1% 내지 약 10% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 약 0.001% 내지 약 10%, 약 0.01% 내지 약 5%, 약 0.02% 내지 약 4.5%, 약 0.03% 내지 약 4%, 약 0.04% 내지 약 3.5%, 약 0.05% 내지 약 3%, 약 0.06% 내지 약 2.5%, 약 0.07% 내지 약 2%, 약 0.08% 내지 약 1.5%, 약 0.09% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 0.9% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 양은 10 g, 9.5 g, 9.0 g, 8.5 g, 8.0 g, 7.5 g, 7.0 g, 6.5 g, 6.0 g, 5.5 g, 5.0 g, 4.5 g, 4.0 g, 3.5 g, 3.0 g, 2.5 g, 2.0 g, 1.5 g, 1.0 g, 0.95 g, 0.9 g, 0.85 g, 0.8 g, 0.75 g, 0.7 g, 0.65 g, 0.6 g, 0.55 g, 0.5 g, 0.45 g, 0.4 g, 0.35 g, 0.3 g, 0.25 g, 0.2 g, 0.15 g, 0.1 g, 0.09 g, 0.08 g, 0.07 g, 0.06 g, 0.05 g, 0.04 g, 0.03 g, 0.02 g, 0.01 g, 0.009 g, 0.008 g, 0.007 g, 0.006 g, 0.005 g, 0.004 g, 0.003 g, 0.002 g, 0.001 g, 0.0009 g, 0.0008 g, 0.0007 g, 0.0006 g, 0.0005 g, 0.0004 g, 0.0003 g, 0.0002 g, 또는 0.0001 g 이하이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 양은 0.0001 g, 0.0002 g, 0.0003 g, 0.0004 g, 0.0005 g, 0.0006 g, 0.0007 g, 0.0008 g, 0.0009 g, 0.001 g, 0.0015 g, 0.002 g, 0.0025 g, 0.003 g, 0.0035 g, 0.004 g, 0.0045 g, 0.005 g, 0.0055 g, 0.006 g, 0.0065 g, 0.007 g, 0.0075 g, 0.008 g, 0.0085 g, 0.009 g, 0.0095 g, 0.01 g, 0.015 g, 0.02 g, 0.025 g, 0.03 g, 0.035 g, 0.04 g, 0.045 g, 0.05 g, 0.055 g, 0.06 g, 0.065 g, 0.07 g, 0.075 g, 0.08 g, 0.085 g, 0.09 g, 0.095 g, 0.1 g, 0.15 g, 0.2 g, 0.25 g, 0.3 g, 0.35 g, 0.4 g, 0.45 g, 0.5 g, 0.55 g, 0.6 g, 0.65 g, 0.7 g, 0.75 g, 0.8 g, 0.85 g, 0.9 g, 0.95 g, 1 g, 1.5 g, 2 g, 2.5, 3 g, 3.5, 4 g, 4.5 g, 5 g, 5.5 g, 6 g, 6.5 g, 7 g, 7.5 g, 8 g, 8.5 g, 9 g, 9.5 g, 또는 10 g 초과이다.
본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 정확한 투여량은 투여 경로, 화합물이 투여되는 형태, 치료될 대상체의 성별 및 연령, 치료될 대상체의 체중, 및 주치의의 선호도 및 경험에 따라 달라질 것이다. 적절한 경우 TIL의 임상적으로 확립된 투여량이 또한 사용될 수 있다. TIL의 투여량과 같은 본원의 방법을 사용하여 투여되는 약제학적 조성물의 양은 치료되는 인간 또는 포유동물, 장애 또는 병태의 중증도, 투여 경로, 활성 약제학적 성분의 성향 및 처방 의사의 재량에 따라 달라질 것이다.
일부 구현예에서, TIL은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 주사, 예를 들어, 정맥내 주사에 의해 이루어질 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 다중 용량으로 투여될 수 있다. 투여량은 연간 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 또는 6회 초과일 수 있다. 투여량은 한달에 1회, 2주마다 1회, 주 1회, 또는 이틀에 1회일 수 있다. TIL의 투여는 필요한만큼 계속될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 1x106개, 2x106개, 3x106개, 4x106개, 5x106개, 6x106개, 7x106개, 8x106개, 9x106개, 1x107개, 2x107개, 3x107개, 4x107개, 5x107개, 6x107개, 7x107개, 8x107개, 9x107개, 1x108개, 2x108개, 3x108개, 4x108개, 5x108개, 6x108개, 7x108개, 8x108개, 9x108개, 1x109개, 2x109개, 3x109개, 4x109개, 5x109개, 6x109개, 7x109개, 8x109개, 9x109개, 1x1010개, 2x1010개, 3x1010개, 4x1010개, 5x1010개, 6x1010개, 7x1010개, 8x1010개, 9x1010개, 1x1011개, 2x1011개, 3x1011개, 4x1011개, 5x1011개, 6x1011개, 7x1011개, 8x1011개, 9x1011개, 1x1012개, 2x1012개, 3x1012개, 4x1012개, 5x1012개, 6x1012개, 7x1012개, 8x1012개, 9x1012개, 1x1013개, 2x1013개, 3x1013개, 4x1013개, 5x1013개, 6x1013개, 7x1013개, 8x1013개, 및 9x1013개이다. 일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 1x106개 내지 5x106개, 5x106개 내지 1x107개, 1x107개 내지 5x107개, 5x107개 내지 1x108개, 1x108개 내지 5x108개, 5x108개 내지 1x109개, 1x109개 내지 5x109개, 5x109개 내지 1x1010개, 1x1010개 내지 5x1010개, 5x1010개 내지 1x1011개, 5x1011개 내지 1x1012개, 1x1012개 내지 5x1012개, 및 5x1012개 내지 1x1013개 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 4.3 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 3.2 mg/kg, 약 0.35 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.3 mg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 1.3 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 1.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.55 mg/kg 내지 약 0.85 mg/kg, 약 0.65 mg/kg 내지 약 0.8 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 0.75 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.85 mg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 1.85 mg/kg, 약 1.15 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 1.3 mg/kg mg 내지 약 1.6 mg/kg, 약 1.35 mg/kg 내지 약 1.5 mg/kg, 약 2.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 2.3 mg/kg 내지 약 3.4 mg/kg, 약 2.4 mg/kg 내지 약 3.3 mg/kg, 약 2.6 mg/kg 내지 약 3.15 mg/kg, 약 2.7 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2.8 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 또는 약 2.85 mg/kg 내지 약 2.95 mg/kg 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 1 mg 내지 약 500 mg, 약 10 mg 내지 약 300 mg, 약 20 mg 내지 약 250 mg, 약 25 mg 내지 약 200 mg, 약 1 mg 내지 약 50 mg, 약 5 mg 내지 약 45 mg, 약 10 mg 내지 약 40 mg, 약 15 mg 내지 약 35 mg, 약 20 mg 내지 약 30 mg, 약 23 mg 내지 약 28 mg, 약 50 mg 내지 약 150 mg, 약 60 mg 내지 약 140 mg, 약 70 mg 내지 약 130 mg, 약 80 mg 내지 약 120 mg, 약 90 mg 내지 약 110 mg, 또는 약 95 mg 내지 약 105 mg, 약 98 mg 내지 약 102 mg, 약 150 mg 내지 약 250 mg, 약 160 mg 내지 약 240 mg, 약 170 mg 내지 약 230 mg, 약 180 mg 내지 약 220 mg, 약 190 mg 내지 약 210 mg, 약 195 mg 내지 약 205 mg, 또는 약 198 내지 약 207 mg 범위 내에 있다.
TIL의 유효량은 비강내 및 경피 경로, 동맥내 주사, 정맥내, 복강내, 비경구, 근육내, 피하, 국소, 이식, 또는 흡입을 포함하여 유사한 유용성을 갖는 제제의 임의의 허용되는 투여 방식에 의해 단일 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단을 포함하는 주입 백을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 종양 침윤 림프구(TIL) 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL 조성물을 포함하는 주입 백을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단의 동결보존된 제제를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단 및 동결보존 배지를 포함하는 종양 침윤 림프구(TIL) 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 배지가 DMSO를 함유하도록 변형된 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 동결보존 배지가 7-10% DMSO를 함유하도록 변형된 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL 조성물의 동결보존된 제제를 제공한다.
구현예에서, 본 개시내용의 방법을 사용하여 확장된 TIL은 환자에게 약제학적 조성물로서 투여된다. 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균 완충액 중 TIL의 현탁액이다. 본 개시내용의 PBMC를 사용하여 확장된 TIL은 당업계에 알려진 바와 같은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, T-세포는 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로 투여되며, 바람직하게는 대략 30 내지 60분 지속된다. 다른 적합한 투여 경로는 복강내, 척수강내, 및 림프내 투여를 포함한다.
TIL의 임의의 적합한 용량이 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 암이 NSCLC인 경우, 약 2.3x1010개 내지 약 13.7x1010개의 TIL, 평균 약 7.8x1010개의 TIL이 투여된다. 구현예에서, 약 1.2x1010개 내지 약 4.3x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 3x1010개 내지 약 12x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 4x1010개 내지 약 10x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 5x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 6x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 7x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이 투여된다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 2.3x1010개 내지 약 13.7x1010개이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 7.8x1010개의 TIL이며, 특히 암은 NSCLC이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 1.2x1010개 내지 약 4.3x1010의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 3x1010개 내지 약 12x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 4x1010개 내지 약 10x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 5x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 6x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 약 7x1010개 내지 약 8x1010개의 TIL이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 수는 약 1x106개, 2x106개, 3x106개, 4x106개, 5x106개, 6x106개, 7x106개, 8x106개, 9x106개, 1x107개, 2x107개, 3x107개, 4x107개, 5x107개, 6x107개, 7x107개, 8x107개, 9x107개, 1x108개, 2x108개, 3x108개, 4x108개, 5x108개, 6x108개, 7x108개, 8x108개, 9x108개, 1x109개, 2x109개, 3x109개, 4x109개, 5x109개, 6x109개, 7x109개, 8x109개, 9x109개, 1x1010개, 2x1010개, 3x1010개, 4x1010개, 5x1010개, 6x1010개, 7x1010개, 8x1010개, 9x1010개, 1x1011개, 2x1011개, 3x1011개, 4x1011개, 5x1011개, 6x1011개, 7x1011개, 8x1011개, 9x1011개, 1x1012개, 2x1012개, 3x1012개, 4x1012개, 5x1012개, 6x1012개, 7x1012개, 8x1012개, 9x1012개, 1x1013개, 2x1013개, 3x1013개, 4x1013개, 5x1013개, 6x1013개, 7x1013개, 8x1013개, 및 9x1013개이다. 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 수는 1x106개 내지 5x106개, 5x106개 내지 1x107개, 1x107개 내지 5x107개, 5x107개 내지 1x108개, 1x108개 내지 5x108개, 5x108개 내지 1x109개, 1x109개 내지 5x109개, 5x109개 내지 1x1010개, 1x1010개 내지 5x1010개, 5x1010개 내지 1x1011개, 5x1011개 내지 1x1012개, 1x1012개 내지 5x1012개, 및 5x1012개 내지 1x1013개 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 예를 들어, 약제학적 조성물의 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v 또는 v/v 미만이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25% 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v, 또는 v/v 초과이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 약 0.0001% 내지 약 50%, 약 0.001% 내지 약 40%, 약 0.01% 내지 약 30%, 약 0.02% 내지 약 29%, 약 0.03% 내지 약 28%, 약 0.04% 내지 약 27%, 약 0.05% 내지 약 26%, 약 0.06% 내지 약 25%, 약 0.07% 내지 약 24%, 약 0.08% 내지 약 23%, 약 0.09% 내지 약 22%, 약 0.1% 내지 약 21%, 약 0.2% 내지 약 20%, 약 0.3% 내지 약 19%, 약 0.4% 내지 약 18%, 약 0.5% 내지 약 17%, 약 0.6% 내지 약 16%, 약 0.7% 내지 약 15%, 약 0.8% 내지 약 14%, 약 0.9% 내지 약 12% 또는 약 1% 내지 약 10% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 농도는 약제학적 조성물의 약 0.001% 내지 약 10%, 약 0.01% 내지 약 5%, 약 0.02% 내지 약 4.5%, 약 0.03% 내지 약 4%, 약 0.04% 내지 약 3.5%, 약 0.05% 내지 약 3%, 약 0.06% 내지 약 2.5%, 약 0.07% 내지 약 2%, 약 0.08% 내지 약 1.5%, 약 0.09% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 0.9% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 양은 10 g, 9.5 g, 9.0 g, 8.5 g, 8.0 g, 7.5 g, 7.0 g, 6.5 g, 6.0 g, 5.5 g, 5.0 g, 4.5 g, 4.0 g, 3.5 g, 3.0 g, 2.5 g, 2.0 g, 1.5 g, 1.0 g, 0.95 g, 0.9 g, 0.85 g, 0.8 g, 0.75 g, 0.7 g, 0.65 g, 0.6 g, 0.55 g, 0.5 g, 0.45 g, 0.4 g, 0.35 g, 0.3 g, 0.25 g, 0.2 g, 0.15 g, 0.1 g, 0.09 g, 0.08 g, 0.07 g, 0.06 g, 0.05 g, 0.04 g, 0.03 g, 0.02 g, 0.01 g, 0.009 g, 0.008 g, 0.007 g, 0.006 g, 0.005 g, 0.004 g, 0.003 g, 0.002 g, 0.001 g, 0.0009 g, 0.0008 g, 0.0007 g, 0.0006 g, 0.0005 g, 0.0004 g, 0.0003 g, 0.0002 g, 또는 0.0001 g 이하이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL의 양은 0.0001 g, 0.0002 g, 0.0003 g, 0.0004 g, 0.0005 g, 0.0006 g, 0.0007 g, 0.0008 g, 0.0009 g, 0.001 g, 0.0015 g, 0.002 g, 0.0025 g, 0.003 g, 0.0035 g, 0.004 g, 0.0045 g, 0.005 g, 0.0055 g, 0.006 g, 0.0065 g, 0.007 g, 0.0075 g, 0.008 g, 0.0085 g, 0.009 g, 0.0095 g, 0.01 g, 0.015 g, 0.02 g, 0.025 g, 0.03 g, 0.035 g, 0.04 g, 0.045 g, 0.05 g, 0.055 g, 0.06 g, 0.065 g, 0.07 g, 0.075 g, 0.08 g, 0.085 g, 0.09 g, 0.095 g, 0.1 g, 0.15 g, 0.2 g, 0.25 g, 0.3 g, 0.35 g, 0.4 g, 0.45 g, 0.5 g, 0.55 g, 0.6 g, 0.65 g, 0.7 g, 0.75 g, 0.8 g, 0.85 g, 0.9 g, 0.95 g, 1 g, 1.5 g, 2 g, 2.5, 3 g, 3.5, 4 g, 4.5 g, 5 g, 5.5 g, 6 g, 6.5 g, 7 g, 7.5 g, 8 g, 8.5 g, 9 g, 9.5 g, 또는 10 g 초과이다.
본 발명의 약제학적 조성물에 제공되는 TIL은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 정확한 투여량은 투여 경로, 화합물이 투여되는 형태, 치료될 대상체의 성별 및 연령, 치료될 대상체의 체중, 및 주치의의 선호도 및 경험에 따라 달라질 것이다. 적절한 경우 TIL의 임상적으로 확립된 투여량이 또한 사용될 수 있다. TIL의 투여량과 같은 본원의 방법을 사용하여 투여되는 약제학적 조성물의 양은 치료되는 인간 또는 포유동물, 장애 또는 병태의 중증도, 투여 경로, 활성 약제학적 성분의 성향 및 처방 의사의 재량에 따라 달라질 것이다.
일부 구현예에서, TIL은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 주사, 예를 들어, 정맥내 주사에 의해 이루어질 수 있다. 일부 구현예에서, TIL은 다중 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 연간 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 또는 6회 초과일 수 있다. 용량은 한달에 1회, 2주마다 1회, 1주 1회, 또는 2일마다 1회일 수 있다. TIL의 투여는 필요한만큼 계속될 수 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 1x106개, 2x106개, 3x106개, 4x106개, 5x106개, 6x106개, 7x106개, 8x106개, 9x106개, 1x107개, 2x107개, 3x107개, 4x107개, 5x107개, 6x107개, 7x107개, 8x107개, 9x107개, 1x108개, 2x108개, 3x108개, 4x108개, 5x108개, 6x108개, 7x108개, 8x108개, 9x108개, 1x109개, 2x109개, 3x109개, 4x109개, 5x109개, 6x109개, 7x109개, 8x109개, 9x109개, 1x1010개, 2x1010개, 3x1010개, 4x1010개, 5x1010개, 6x1010개, 7x1010개, 8x1010개, 9x1010개, 1x1011개, 2x1011개, 3x1011개, 4x1011개, 5x1011개, 6x1011개, 7x1011개, 8x1011개, 9x1011개, 1x1012개, 2x1012개, 3x1012개, 4x1012개, 5x1012개, 6x1012개, 7x1012개, 8x1012개, 9x1012개, 1x1013개, 2x1013개, 3x1013개, 4x1013개, 5x1013개, 6x1013개, 7x1013개, 8x1013개, 및 9x1013개이다. 일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 1x106개 내지 5x106개, 5x106개 내지 1x107개, 1x107개 내지 5x107개, 5x107개 내지 1x108개, 1x108개 내지 5x108개, 5x108개 내지 1x109개, 1x109개 내지 5x109개, 5x109개 내지 1x1010개, 1x1010개 내지 5x1010개, 5x1010개 내지 1x1011개, 5x1011개 내지 1x1012개, 1x1012개 내지 5x1012개, 및 5x1012개 내지 1x1013개 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 4.3 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 3.2 mg/kg, 약 0.35 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.3 mg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 1.3 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 1.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.55 mg/kg 내지 약 0.85 mg/kg, 약 0.65 mg/kg 내지 약 0.8 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 0.75 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.85 mg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 1.85 mg/kg, 약 1.15 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 1.3 mg/kg mg 내지 약 1.6 mg/kg, 약 1.35 mg/kg 내지 약 1.5 mg/kg, 약 2.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 2.3 mg/kg 내지 약 3.4 mg/kg, 약 2.4 mg/kg 내지 약 3.3 mg/kg, 약 2.6 mg/kg 내지 약 3.15 mg/kg, 약 2.7 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2.8 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 또는 약 2.85 mg/kg 내지 약 2.95 mg/kg의 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, TIL의 유효 투여량은 약 1 mg 내지 약 500 mg, 약 10 mg 내지 약 300 mg, 약 20 mg 내지 약 250 mg, 약 25 mg 내지 약 200 mg, 약 1 mg 내지 약 50 mg, 약 5 mg 내지 약 45 mg, 약 10 mg 내지 약 40 mg, 약 15 mg 내지 약 35 mg, 약 20 mg 내지 약 30 mg, 약 23 mg 내지 약 28 mg, 약 50 mg 내지 약 150 mg, 약 60 mg 내지 약 140 mg, 약 70 mg 내지 약 130 mg, 약 80 mg 내지 약 120 mg, 약 90 mg 내지 약 110 mg, 또는 약 95 mg 내지 약 105 mg, 약 98 mg 내지 약 102 mg, 약 150 mg 내지 약 250 mg, 약 160 mg 내지 약 240 mg, 약 170 mg 내지 약 230 mg, 약 180 mg 내지 약 220 mg, 약 190 mg 내지 약 210 mg, 약 195 mg 내지 약 205 mg, 또는 약 198 내지 약 207 mg의 범위 내에 있다.
TIL의 유효량은 비강내 및 경피 경로, 동맥내 주사, 정맥내, 복강내, 비경구, 근육내, 피하, 국소, 이식, 또는 흡입을 포함하여, 유사한 유용성을 갖는 제제의 임의의 허용되는 투여 방식에 의해 단일 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다.
VII. 환자를 치료하는 방법
치료 방법은 하나 이상의 CCR 및/또는 하나 이상의 케모카인 수용체를 발현하도록 본원에 기재된 바와 같은 임의적으로 변형된 초기 TIL 수집 및 TIL의 배양으로 시작된다. 이러한 치료 방법은 모두 예를 들어, Jin, 등, J. Immunotherapy 2012, 35(3):283-292에 의해 당업계에 기재되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 치료 방법의 구현예는 실시예를 포함하여 아래 섹셕 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
상기 단계 A 내지 F에 기재된 것(또는 예를 들어, 도 1에 제시된 것)을 포함하여, 본원에 기재된 방법에 따라 생산된 확장된 TIL은 특히 암 환자의 치료에 사용된다(예를 들어, Goff, 등, J. Clinical Oncology, 2016, 34(20):2389-239, 뿐만 아니라 보충 내용에 기재된 바와 같으며; 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, TIL은 이전에 기재된 바와 같이 전이성 흑색종의 절제된 침착물로부터 성장되었다(Dudley, 등, J Immunotherapy 2003, 26:332-342를 참조하며; 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 새로운 종양은 멸균 조건 하에 절개될 수 있다. 대표적인 샘플은 공식 병리학적 분석을 위해 수집될 수 있다. 2 mm3 내지 3 mm3의 단일 단편이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 환자 당 5, 10, 15, 20, 25 또는 30개의 샘플이 수득된다. 일부 구현예에서, 환자 당 20, 25, 또는 30개의 샘플이 수득된다. 일부 구현예에서, 환자 당 20, 22, 24, 26, 또는 28개의 샘플이 수득된다. 일부 구현예에서, 환자 당 24개의 샘플이 수득된다. 샘플은 24-웰 플레이트의 개별 웰에 배치되고, 고용량 IL-2(6,000 IU/mL)를 함유하는 성장 배지에서 유지되고, 종양 파괴 및/또는 TIL 증식에 대해 모니터링될 수 있다. 처리 후 생존가능한 세포가 남아있는 임의의 종양은 본원에 기재된 바와 같은 단일 세포 현탁액으로 효소적으로 소화되고 동결보존될 수 있다.
일부 구현예에서, 성공적으로 성장한 TIL은 표현형 분석(CD3, CD4, CD8, 및 CD56)을 위해 샘플링되고 이용가능한 경우 자가 종양에 대해 테스트될 수 있다. 밤새 공동 배양하여 인터페론-감마(IFN-γ) 수준 >200 pg/mL 및 2배 배경을 생성하는 경우 TIL은 반응성으로 간주될 수 있다. (Goff, 등, J Immunother., 2010, 33:840-847; 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 일부 구현예에서, 자가 반응성의 증거 또는 충분한 성장 패턴을 갖는 배양물은 때때로 급속 확장(REP)으로 언급되는 제2 확장을 포함하여 제2 확장을 위해 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 높은 자가 반응성을 갖는 확장된 TIL(예를 들어, 제2 확장 동안 높은 증식)은 추가 제2 확장을 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 높은 자가 반응성을 갖는 TIL이 추가 제2 REP 확장을 위해 선택된다.
주입 백 TIL의 동결보존된 샘플의 세포 표현형은 표면 마커 CD3, CD4, CD8, CCR7, 및 CD45RA(BD BioSciences)에 대한 유세포 측정(예를 들어, FlowJo), 뿐만 아니라 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 분석될 수 있다. 혈청 사이토카인은 표준 효소 결합 면역흡착 검정 기술을 사용함으로써 측정되었다. 혈청 IFN-g의 상승은 >100 pg/mL 및 4 초과의 3개 기준선 수준으로 정의되었다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법, 예를 들어 본원에 예시된 것들에 의해 생산된 TIL은 TIL 임상 효능의 놀라운 개선을 제공한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법, 예를 들어 도 1에 예시된 것들에 의해 생산된 TIL은 예를 들어, 도 1에 예시된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 기재된 것들 이외의 방법에 의해 생산된 TIL과 비교하여 증가된 임상 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 것들 이외의 방법은 프로세스 1C 및/또는 Generation 1(Gen 1)로 언급된 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 증가된 효능은 DCR, ORR, 및/또는 다른 임상 반응에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 의해 생산된 TIL, 예를 들어 도 1에 예시된 것들은 예를 들어, 도 1에 예시된 것들 이외의 방법, 예를 들어 Gen 1 프로세스를 포함하여 본원에 기재된 것들 이외의 방법에 의해 생산된 TIL과 비교하여 유사한 반응 시간 및 안전성 프로파일을 나타낸다.
일부 구현예에서, IFN-감마(IFN-γ)는 치료 효능 및/또는 증가된 임상 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, TIL로 처리된 대상체의 혈액 내 IFN-γ는 활성 TIL을 나타낸다. 일부 구현예에서, IFN-γ 생산에 대한 효능 검정이 이용된다. IFN-γ 생산은 세포독성 잠재력의 또 다른 척도이다. IFN-γ 생산은 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료된 대상체의 생체 외 혈액, 혈청, 또는 TIL 내 사이토카인 IFN-γ 수준을 결정함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, IFN-γ의 증가는 본 발명의 방법에 의해 생산된 TIL로 치료된 환자에서 치료 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 또는 5-배 이상 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 2-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 3-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 4-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 5-배 증가된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 Quantikine ELISA 키트를 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료된 대상체의 생체 외 TIL에서 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료된 대상체의 혈액에서 측정된다. 일부 구현예에서, IFN-γ는 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료된 대상체의 TIL 혈청에서 측정된다.
일부 구현예에서, 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL은 예를 들어, 프로세스 1C 방법으로 언급된 방법과 같은 도 1에 예시되지 않은 것들을 포함한 다른 방법에 의해 생산된 TIL과 비교하여 증가된 다클론성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 유의하게 개선된 다클론성 및/또는 증가된 다클론성은 치료 효능 및/또는 증가된 임상 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 다클론성은 T-세포 레퍼토리 다양성을 지칭한다. 일부 구현예에서, 다클론성의 증가는 본 발명의 방법에 의해 생산된 TIL의 투여에 관한 치료 효능을 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 다클론성은 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 1-배, 2-배, 10-배, 100-배, 500-배, 또는 1000-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 2-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 10-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 100-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 500-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1000-배 증가된다.
효능의 측정은 당업계에 알려져 있을 뿐만 아니라 본원에 기재된 질병통제율(DCR) 뿐만 아니라 전체반응률(ORR)을 포함할 수 있다.
A. 암을 치료하는 방법
본원에 기재된 조성물 및 방법은 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 구현예에서, 이는 성인 환자 또는 소아 환자에서 암과 같은 과증식성 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 것이다. 이는 또한 본원 및 다음 단락에 기재된 바와 같은 다른 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 과증식성 장애는 암이다. 일부 구현예에서, 과증식성 장애는 고형 종양 암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 항문암, 방광암, 유방암(삼중 음성 유방암 포함), 골암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암(HPV), 중추신경계 연관 암(뇌실막세포종(ependymoma), 속질모세포종(medulloblastoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 송과체모세포종(pineoblastoma), 및 원시성 신경외배엽 종양(primitive neuroectodermal tumor) 포함), 자궁경부암(편평 세포 자궁경부암, 선편평 세포 자궁경부암, 및 자궁경부 선암종 포함), 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 식도위접합부암, 위암, 위장관암, 위장관 간질 종양, 교모세포종, 신경교종, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC), 하인두암, 후두암, 비인두암, 구인두암, 및 인두암 포함), 신장암, 간암, 폐암(비소세포 폐암(NSCLC) 및 소세포 폐암 포함), 흑색종(포도막 흑색종, 맥락막 흑색종, 모양체 흑색종, 또는 홍채 흑색종 포함), 중피종(악성 흉막 중피종 포함), 난소암, 췌장암(췌관 선암종 포함), 음경암, 직장암, 신장암, 신세포 암종, 육종(유잉(Ewing) 육종, 골육종, 횡문근육종, 및 다른 뼈 및 연조직 육종 포함), 갑상선암(역형성 갑상선암 포함), 자궁암, 및 질암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 과증식성 장애는 혈액학적 악성종양이다. 일부 구현예에서, 혈액학적 악성종양은 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액학적 악성종양이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액학적 악성종양이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 MIL 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액학적 악성종양이다.
구현예에서, 암은 화학치료, 방사선 요법, 또는 면역치료를 포함하는 적어도 하나의 이전 요법을 사용한 치료에 재발성이거나 불응성인 고형 종양 암 및 혈액학적 악성종양을 포함하는 전술한 암 중 하나이다. 구현예에서, 암은 화학치료, 방사선 요법, 또는 면역치료를 포함하는 적어도 2개의 이전 요법을 사용한 치료에 대해 재발성이거나 불응성인 전술한 암 중 하나이다. 구현예에서, 암은 화학치료, 방사선 요법, 또는 면역치료를 포함하는 적어도 3개의 이전 요법을 사용한 치료에 대해 재발성이거나 불응성인 전술한 암 중 하나이다.
일부 구현예에서, 암은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 암이다. MSI-H 및 dMMR 암 및 이에 대한 테스트는 Kawakami, 등, Curr. Treat. Options Oncol. 2015, 16, 30에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 인간이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 비인간이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 반려 동물이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 영장류, 말과, 개과, 또는 고양이과 동물이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 BRAF 억제제 및/또는 MEK 억제제를 사용한 치료에 불응성이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib), 엔코라페닙(encorafenib), 소라페닙(sorafenib), 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된 BRAF 억제제를 사용한 치료에 불응성이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 트라메티닙(trametinib), 코비메티닙(cobimetinib), 비니메티닙(binimetinib), 셀루메티닙(selumetinib), 피마세르티닙(pimasertinib), 레파메티닙(refametinib), 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된 MEK 억제제를 사용한 치료에 불응성이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 베무라페닙, 다브라페닙, 엔코라페닙, 소라페닙, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된 BRAF 억제제, 및 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, 피마세르티닙, 레파메티닙, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된 MEK 억제제를 사용한 치료에 불응성이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 소아 암이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 포도막 흑색종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 포도막 흑색종은 맥락막 흑색종, 모양체 흑색종, 또는 홍채 흑색종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 소아 암은 신경모세포종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 소아 암은 육종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 육종은 골육종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 육종은 연조직 육종이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 연조직 육종은 횡문근육종, 유잉 육종, 또는 원시성 신경외배엽 종양(PNET)이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 소아 암은 중추신경계(CNS) 연관 암이다. 일부 구현예에서, 소아 암은 화학치료를 사용한 치료에 불응성이다. 일부 구현예에서, 소아 암은 방사선 요법을 사용한 치료에 불응성이다. 일부 구현예에서, 소아 암은 디누툭시맙(dinutuximab)을 사용한 치료에 불응성이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 CNS 연관 암은 속질모세포종, 송과체모세포종, 신경교종, 뇌실막세포종, 또는 교모세포종이다.
본원에 기재된 조성물 및 방법은 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 암은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체로 치료 전에 불응성 또는 내성이다. 일부 구현예에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 원발성 불응성 환자이다. 일부 구현예에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 사전 반응을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 사전 반응을 나타낸 후, 환자의 암이 진행된다. 일부 구현예에서, 암은 적어도 하나의 화학치료제와 조합된 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대해 불응성이다. 일부 구현예에서, 선행 화학치료제는 카보플라틴(carboplatin), 파클리탁셀(paclitaxel), 페메트렉세드(pemetrexed), 및/또는 시스플라틴(cisplatin)이다. 일부 이전 구현예에서, 화학치료제(들)는 백금 이중항 화학치료제이다. 일부 구현예에서, 백금 이중항 요법은 시스플라틴 및 카보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 제1 화학치료제 및 비노렐빈(vinorelbine), 젬시타빈(gemcitabine) 및 탁산(taxane)(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀(docetaxel) 또는 납-파클리탁셀 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 화학치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 백금 이중항 화학치료제는 페메트렉세드와 조합된다.
일부 구현예에서, NSCLC는 PD-L1 음성이고/이거나 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 종양 비율 점수(TPS)가 <1%인 PD-L1을 발현하는 암 환자로부터 유래된다.
일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및백금 이중항 요법을 포함하는 조합 요법에 불응성이며, 여기서 백금 이중항 요법은 다음을 포함한다:
i) 시스플라틴 및 카보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 제1 화학치료제,
ii) 및 비노렐빈, 젬시타빈 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 납-파클리탁셀 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 화학치료제.
일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체, 페메트렉세드, 및 백금 이중항 요법을 포함하는 조합 요법에 불응성이며, 여기서 백금 이중항 요법은 다음을 포함한다:
i) 시스플라틴 및 카보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 제1 화학치료제,
ii) 및 비노렐빈, 젬시타빈 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 납-파클리탁셀 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 화학치료제.
일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-1 항체로 치료되었다. 일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-L1 항체로 치료되었다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없다. 일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-1 항체로 치료되지 않았다. 일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-L1 항체로 치료되지 않았다. 일부 구현예에서, NSCLC는 이전에 화학치료제로 치료되었다. 일부 구현예에서, NSCLC는 이전에 화학치료제로 치료되었지만 더 이상 화학치료제로 치료되지 않는다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 PD-L1 발현이 낮다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없는 NSCLC를 갖거나 화학치료 후 치료이지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없거나 화학치료 후 치료이지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없고 PD-L1 발현이 낮다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 기준선에서 벌크 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 기준선에서 벌크 질환을 가지며 PD-L1 발현이 낮다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 PD-L1 발현이 검출가능하지 않다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없거나 화학치료 후 치료이지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없고 PD-L1 발현이 검출가능하지 않다. 일부 구현예에서, 환자는 기준선에서 벌크 질환을 가지며 PD-L1 발현이 검출가능하지 않다. 일부 구현예에서, NSCLC 환자는 NSCLC 치료 경험이 없거나 화학치료 후(예를 들어, 화학치료제 후)지만 PD-L1 발현이 낮고/낮거나 기준선에서 벌크 질환을 갖는 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 구현예에서, 벌크 질환은 최대 종양 직경이 횡방향 또는 관상면에서 측정 시 7 cm 초과인 경우 나타난다. 일부 구현예에서, 벌크 질환은 단축 직경이 20 mm 이상인 부푼 림프절이 있는 경우 나타난다. 일부 구현예에서, 화학치료는 NSCLC에 대한 표준 치료를 포함한다.
일부 구현예에서, PD-L1 발현은 종양 비율 점수에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 불응성 NSCLC 종양이 있는 대상체는 <1% 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 구현예에서, 불응성 NSCLC 종양이 있는 대상체는 ≥1% TPS를 갖는다. 일부 구현예에서, 불응성 NSCLC가 있는 대상체는 이전에 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 상기 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다. 일부 구현예에서, 불응성 NSCLC가 있는 대상체는 이전에 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 상기 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다.
일부 구현예에서, 예를 들어 도 1에 기재된 바와 같은 것들을 포함하여, 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL은 예를 들어, 프로세스 1C 방법에 언급된 방법과 같은 도 1에 예시되지 않은 것들을 포함한 다른 방법에 의해 생산된 TIL과 비교하여 증가된 다클론성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 유의하게 개선된 다클론성 및/또는 증가된 다클론성은 암 치료에 대한 치료 효능 및/또는 증가된 임상 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 다클론성 T-세포 레퍼토리 다양성을 지칭한다. 일부 구현예에서, 다클론성의 증가는 본 발명의 방법에 의해 생산된 TIL의 투여에 관한 치료 효능을 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 다클론성은 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 기재된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 1-배, 2-배, 10-배, 100-배, 500-배, 또는 1000-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 2-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 10-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 100-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 500-배 증가된다. 일부 구현예에서, 다클론성은 치료되지 않은 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 것들 이외의 방법을 포함하여, 본원에 제공된 것들 이외의 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료된 환자와 비교하여 1000-배 증가된다.
일부 구현예에서, PD-L1 발현은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 테스트 방법을 사용하여 종양 비율 점수에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, NSCLC 종양이 있는 대상체 또는 환자는 <1% 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 구현예에서, NSCLC 종양은 ≥1% TPS를 갖는다. 일부 구현예에서, NSCLC가 있는 대상체 또는 환자는 이전에 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다. 일부 구현예에서, NSCLC가 있는 대상체 또는 환자는 이전에 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다. 일부 구현예에서, 불응성 또는 내성 NSCLC 종양이 있는 대상체 또는 환자는 <1% 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 구현예에서, 불응성 또는 내성 NSCLC 종양이 있는 대상체 또는 환자는 ≥1% TPS를 갖는다. 일부 구현예에서, 불응성 또는 내성 NSCLC가 있는 대상체 또는 환자는 이전에 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다. 일부 구현예에서, 불응성 또는 내성 NSCLC가 있는 대상체 또는 환자는 이전에 항-PD-L1 항체로 치료받았고 종양 비율 점수는 항-PD-L1 항체 치료 전에 결정되었다.
일부 구현예에서, NSCLC는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법 전에 취한 환자로부터의 종양 비율 점수(TPS), 또는 생존가능한 종양 세포 백분율을 나타내는 NSCLC이며, 1% 미만(TPS <1%)인 PD-L1 단백질에 대해 임의의 강도에서 부분적 또는 전체 막 염색을 나타낸다. 구현예에서, NSCLC는 <50%, <45%, <40%, <35%, <30%, <25%, <20%, <15%, <10%, <9%, <8%, <7%, <6%, <5%, <4%, <3%, <2%, <1%, <0.9%, <0.8%, <0.7%, <0.6%, <0.5%, <0.4%, <0.3%, <0.2%, <0.1%, <0.09%, <0.08%, <0.07%, <0.06%, <0.05%, <0.04%, <0.03%, <0.02%, 및 <0.01%로 이루어진 군으로부터 선택된 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 약 0.9%, 약 0.8%, 약 0.7%, 약 0.6%, 약 0.5%, 약 0.4%, 약 0.3%, 약 0.2%, 약 0.1%, 약 0.09%, 약 0.08%, 약 0.07%, 약 0.06%, 약 0.05%, 약 0.04%, 약 0.03%, 약 0.02%, 및 약 0.01%로 이루어진 군으로부터 선택된 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 1% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.9% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.8% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.7% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.6% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.5% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.4% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.3% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.2% TPS를 나타내는 NSCLC이다. 구현예에서, NSCLC는 0% 내지 0.1% TPS를 나타내는 NSCLC이다. TPS는 Hirsch, 등 J. Thorac. Oncol. 2017, 12, 208-222에 기재된 것들 또는 펨브롤리주맙 또는 다른 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법으로의 치료 전에 TPS의 결정에 사용되는 것들과 같은 당업계에 알려진 방법에 의해 측정될 수 있다. 미국 식품의약국에 의해 승인된 TPS 측정 방법이 또한 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, PD-L1은 엑소솜 PD-L1이다. 일부 구현예에서, PD-L1은 순환 종양 세포에서 발견된다.
일부 구현예에서, 부분적 막 염색은 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99%, 또는 그 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 전체 막 염색은 대략 100% 막 염색을 포함한다.
일부 구현예에서, PD-L1에 대한 테스트는 환자 혈청 내 PD-L1 수준을 측정하는 것을 수반할 수 있다. 이러한 구현예에서, 환자 혈청 내 PD-L1 측정은 종양 이질성의 불확실성 및 연속 생검의 환자 불편함을 제거한다.
일부 구현예에서, 기준선 또는 표준 수준과 비교하여 상승된 가용성 PD-L1은 NSCLC에서 악화된 예후와 상관관계가 있다. 예를 들어, Okuma, 등, Clinical Lung Cancer, 2018, 19, 410-417; Vecchiarelli, 등, Oncotarget, 2018, 9, 17554-17563 참조. 일부 구현예에서, PD-L1은 엑소솜 PD-L1이다. 일부 구현예에서, PD-L1은 순환 종양 세포에서 발현된다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여함으로써 비소세포 폐 암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 대상체 또는 환자는 다음 중 적어도 하나를 갖고:
i. <1%의 PD-L1의 미리 결정된 종양 비율 점수(TPS),
ii. 1%-49%의 PD-L1의 TPS 점수, 또는
iii. 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재,
여기서 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체 또는 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (c)에서 단계 (d)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(e) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(f) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(g) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(h) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비소세포 폐 암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 환자의 종양을 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재에 대해 테스트하되, 여기서 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 단계,
(c) 환자가 약 1% 내지 약 49%의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지 결정하고 또한 환자에게 구동인자 돌연변이가 없는지 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체 또는 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(f) IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (e)에서 단계 (f)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(g) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (f)에서 단계 (g)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(i) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(j) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비소세포 폐 암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 환자의 종양을 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재에 대해 테스트하되, 여기서 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 단계,
(c) 환자가 약 1% 미만의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지 결정하고 또한 환자에게 구동인자 돌연변이가 없는지 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체 또는 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(f) IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (e)에서 단계 (f)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(g) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (f)에서 단계 (g)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(i) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(j) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비소세포 폐 암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 환자의 종양을 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재에 대해 테스트하되, 여기서 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, 또는 RET 융합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 단계,
(c) 환자가 약 1% 내지 약 49%의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지 결정하고 또한 환자에게 구동인자 돌연변이가 없는지 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체 또는 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(f) IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (e)에서 단계 (f)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(g) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (f)에서 단계 (g)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(i) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(j) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비소세포 폐 암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 환자의 종양을 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재에 대해 테스트하되, 여기서 구동인자 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, 또는 RET 융합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 단계,
(c) 환자가 약 1% 내지 의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지 결정하고 또한 환자에게 구동인자 돌연변이가 없는지 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 대상체 또는 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(f) IL-2를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (e)에서 단계 (f)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(g) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (f)에서 단계 (g)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(i) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(j) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본원에 기재된 TIL의 치료 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본원에 기재된 TIL 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 각각 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 및 TIL 조성물을 투여하기 전에, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘을 대상체에게 투여하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 적합한 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 본원에 기재되어 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 아파미스타맙(apamistamab)-131I, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 바이오시밀러를 포함하는 림프구고갈 레지멘을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. IOMAB-ACT로도 알려진 아파미스타맙-131I는 Actinium Pharmaceuticals, Inc에서 입수가능한 항-CD45 항체이다.
구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 바와 같은 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 알렘투주맙(alemtuzumab), 또는 이의 변이체, 단편, 또는 바이오시밀러를 포함하는 림프구고갈 레지멘을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. LEMTRADA로도 알려진 알렘투주맙은 Sanofi, Inc에서 입수가능하다.
구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 본원에 기재된 바와 같은 CCR의 사용은 대상체에게 IL-2 레지멘을 사용하는 단계를 대체하여, IL-2 레지멘이 TIL, MIL, 또는 PBL 요법과 함께 대상체에게 투여되지 않도록 한다. 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 IL-2 레지멘은 TIL, MIL, 또는 PBL 요법과 함께 대상체에게 투여되지 않는다. 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 CCR을 발현하도록 변형되고, 여기서 IL-2 레지멘은 TIL, MIL, 또는 PBL 요법과 함께 대상체에게 투여되지 않는다. 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 본원에 기재된 바와 같은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 IL-2R 세포내 도메인(IL-2Rβ 및 IL-2Rγ 도메인 포함)과 함께 본원에 기재된 바와 같은 CCR 및/또는 케모카인 수용체의 사용이 사용되고, 여기서 IL-2 레지멘은 TIL, MIL, 또는 PBL 요법과 함께 대상체에게 투여되지 않는다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 TIL 세포를 투여한 다음 날에 시작하여 고용량 IL-2 레지멘으로 대상체를 치료하는 단계를 추가로 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 고용량 IL-2 레지멘이 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된 600,000 또는 720,000 IU/kg을 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 고형 종양이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 또는 신세포 암종이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 흑색종, HNSCC, 자궁경부암, NSCLC, 교모세포종(GBM 포함), 및 위장관암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 흑색종이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 HNSCC이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 자궁경부암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 NSCLC이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 교모세포종(GBM 포함)이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 위장관암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 과돌연변이된 암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 소아 과돌연변이된 암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 TIL의 치료 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 TIL의 치료 집단을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 TIL 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물을 대상체에게 투여하기 전에, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 대상체에게 투여되도록 변형된 본원에 기재된 TIL 치료 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하도록 변형된 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 환자에게 TIL 세포를 투여한 다음 날에 시작하여 고용량 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하도록 변형된 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 고용량 IL-2 레지멘이 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된 600,000 또는 720,000 IU/kg을 포함하도록 변형된 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암이 고형 종양이 되도록 변형된 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평상피 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암, 또는 신세포 암종이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 흑색종, HNSCC, 자궁경부암, NSCLC, 교모세포종(GBM 포함), 및 위장관암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 흑색종이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 HNSCC이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 자궁경부암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 NSCLC이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 교모세포종이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 위장관암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 과돌연변이된 암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 TIL의 치료 집단 또는 TIL 조성물을 제공하며, 여기서 암은 소아 과돌연변이된 암이다.
일부 구현예에서, 암은 과돌연변이된 암 또는 과돌연변이된 암 표현형이다. 과돌연변이된 암은 Campbell, 등, Cell 2017, 171, 1042-1056에 광범위하게 기재되어 있으며; 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 9 내지 10개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 소아 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 9.91개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 성인 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 9개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 향상된 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 10 내지 100개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 향상된 소아 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 10 내지 100개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 향상된 성인 과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 10 내지 100개의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 초-과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 100개 초과의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 소아 초-과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 100개 초과의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 성인 초-과돌연변이된 종양은 메가베이스(Mb) 당 100개 초과의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 복제 복구 경로에 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 복제 복구 연관 DNA 폴리머라제에 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 미세부수체 불안정성을 갖는다. 일부 구현예에서, 초-과돌연변이된 종양은 복제 복구 연관 DNA 폴리머라제에 돌연변이를 가지며 미세부수체 불안정성을 갖는다. 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 면역 체크포인트 억제제에 대한 반응과 상관관계가 있다. 일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 치료에 내성이 있다. 일부 구현예에서, 과돌연변이된 종양은 본 발명의 TIL을 사용하여 치료될 수 있다. 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 환경적 요인(외인성 노출)에 의해 유발된다. 예를 들어, UV 광은 악성 흑색종에서 다수의 돌연변이의 주요 원인이 될 수 있다(예를 들어, Pfeifer, 등 Mutat. Res. 2005, 571, 19-31; Sage, Photochem. Photobiol. 1993, 57, 163-174 참조). 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 폐 및 후두의 종양의 경우 담배 연기 뿐만 아니라 다른 종양의 경우 직접적인 돌연변이원 노출로 인해 60개 초과의 발암물질에 의해 유발될 수 있다(예를 들어, Pleasance, 등, Nature 2010, 463, 184-190 참조). 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 광범위한 암에서 C에서 T로의 전이 수준이 증가하는 것으로 나타난 아포지단백질 B mRNA 편집 효소 촉매적 폴리펩티드-유사(APOBEC) 패밀리 구성원의 조절장애에 의해 유발된다(예를 들어, Roberts, 등, Nat. Genet. 2013, 45, 970-976 참조). 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 주요 복제 효소 Pol3 및 Pold1에 의해 수행되는 교정을 손상시키는 돌연변이에 의한 결함성 DNA 복제 복구에 의해 유발된다. 일부 구현예에서, 종양에서 과돌연변이는 결장직장암, 자궁내막암, 및 다른 암에서 과돌연변이와 연관된 DNA 불일치 복구의 결함에 의해 유발된다(예를 들어, Kandoth, 등, Nature 2013, 497, 67-73.; Muzny, 등, Nature 2012, 487, 330-337 참조). 일부 구현예에서, DNA 복제 복구 돌연변이는 또한 전신성 또는 이중대립유전자 불일치 복구 결핍(CMMRD), Lynch 증후군, 및 폴리머라제 교정 연관 폴립증(PPAP)과 같은 암 소아 증후군에서 발견된다.
구현예에서, 본 발명은 TIL 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 과돌연변이된 암이다. 구현예에서, 본 발명은 TIL 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 향상된 과돌연변이된 암이다. 구현예에서, 본 발명은 TIL 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 초-과돌연변이된 암이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 TIL의 치료 집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에서 본원에 기재된 TIL의 치료 집단의 용도를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 TIL 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에서 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘을 환자에게 투여한 다음 대상체 치료적 유효량의 이전 단락 중 임의의 것에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 치료적 유효량의 본원에 기재된 TIL 조성물을 투여하는 것을 포함하는 환자에서 암을 치료하는 방법에서 본원에 기재된 TIL의 치료 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물의 용도를 제공한다.
1. 구동인자 돌연변이에 기반한 암을 치료하는 방법
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "구동인자 돌연변이" 및/또는 "작용가능한 돌연변이" 및/또는 "발암성 구동인자 돌연변이"는 전형적으로 발암성 구동인자(즉, 암 구동인자 또는 암 유도인자)로 간주되는 돌연변이를 지칭한다. 이러한 돌연변이 중 하나 이상의 존재는 전통적으로 표적화 요법에 대한 표적으로 활용되었다. 종종, 구동인자 돌연변이는 예를 들어 티로신 키나제 억제제(TKI)를 포함하여 표적화 치료 모이어티를 사용한 치료를 위해 조사 및/또는 분석된다. 이러한 구동인자 돌연변이는 일부 구현예에서, 1차 치료적 치료에 대한 반응에 영향을 주거나 영향을 미칠 수 있다. 본원에 기재된 TIL 요법 방법 및 조성물은 환자 또는 대상체에 존재 또는 부재하는지 여부에 관계 없이 치료에 효과적이다. 이러한 구동인자 돌연변이는 전체 엑솜 서열분석 또는 특이적 구동인자 돌연변이의 검출에 표적화된 방법을 포함한 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 테스트되고 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 암은 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 존재 또는 부재를 나타내는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 존재를 나타낸다. 일부 구현예에서, 암은 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재를 나타낸다. 일부 구현예에서, 암은 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 부재 또는 존재에 대해 분석되었다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 구동인자 돌연변이는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 암 치료는 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 존재 또는 부재와 무관하다. 일부 구현예에서, 암은 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600E 돌연변이, BRAF V600K 돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구동인자 돌연변이를 나타낸다. 일부 구현예에서, 암은 PD-L1 TPS <1%를 나타내고 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재를 갖는다.
일부 구현예에서, 암은 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는 암이다.
일부 구현예에서, 암은 PD-L1 TPS <1%를 나타내고 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는다.
일부 구현예에서, 암은 NSCLC이고, EGFR 돌연변이는 NSCLC에서 소세포 폐암(SCLC)으로의 종양 변환을 초래한다.
일부 구현예에서, 암(또는 이의 생검)은 높은 종양 돌연변이 부담(높은-TMB; > 10 mut/kb) 및/또는 미세부수체 불안정성 높음(MSI-높음)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 암(또는 이의 생검)은 높은 종양 돌연변이 부담(높은-TMB; > 10 mut/kb)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 암(또는 이의 생검)은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-높음)을 나타낸다. 종양 돌연변이 부담을 평가하기 위한 방법 및 시스템은 당업계에 알려져 있다. 이러한 방법 및 시스템의 예시적인 개시내용은 미국 특허 번호 9,792,403, 미국 특허 출원 공개 번호 US 2018/0363066 A1, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2013/070634 A1 및 WO 2018/106884 A1, 및 Metzker, Nature Biotechnol. Rev. 2010, 11, 31-46에서 찾을 수 있으며, 각각은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, EGFR 돌연변이는 예를 들어, T790M, Ex19Del, L858R, 엑손 20 삽입, delE709-T710insD, I744_K745insKIPVAI, K745_E746insTPVAIK, E709X, E709K, E709A, 엑손 18 결실, G719X, G719A, G719S, L861Q, S768I, L747P, A763_764insFQEA, D770_N771insNPG, A763_764insFQEA, P772_H773insDNP 엑손 20 삽입, H773_V774insNPH 엑손 20 삽입, S768I, D770_N771insSVD, V769_D770InsASV, p.K745_E746insIPVAIK, p.K745_E746insTPVAIK, p.I744_K745insKIPVAI, D770_N771insNPG, P772_H773insPNP, A763_Y764insFQEA, 및/또는 EGFR 키나제 도메인 복제(EGFR-KDD)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, EGFR 돌연변이는 T790M, Ex19Del, L858R, 엑손 20 삽입, delE709-T710insD, I744_K745insKIPVAI, K745_E746insTPVAIK, E709X, E709K, E709A, 엑손 18 결실, G719X, G719A, G719S, L861Q, S768I, L747P, A763_764insFQEA, D770_N771insNPG, A763_764insFQEA, P772_H773insDNP 엑손 20 삽입, H773_V774insNPH 엑손 20 삽입, S768I, D770_N771insSVD, V769_D770InsASV, p.K745_E746insIPVAIK, p.K745_E746insTPVAIK, p.I744_K745insKIPVAI, D770_N771insNPG, P772_H773insPNP, A763_Y764insFQEA, 및 EGFR 키나제 도메인 복제(EGFR-KDD)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, EGFR 돌연변이는 L858R/T790M, Ex19Del/T790M, G719X/L861Q, G719X/S768I(또는 S768I/G719X), S768I/L858R, L858R/E709A, 및/또는 E746_T751delinsA+T790M을 포함하나 이에 제한되지 않는 이중 돌연변이이다. 일부 구현예에서, EGFR 돌연변이는 L858R/T790M, Ex19Del/T790M, G719X/L861Q, G719X/S768I(또는 S768I/G719X), S768I/L858R, L858R/E709A, 및 E746_T751delinsA+T790M으로 이루어진 군으로부터 선택된 이중 돌연변이이다. EGFR 돌연변이에 관한 추가 특성 및 방법은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2010/020618 A1에 제공되어 있으며, 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, ALK 돌연변이는 EML4-ALK 변이체 1(AB274722.1; BAF73611.1), EML4-ALK 변이체 2(AB275889.1; BAF73612.1), EML4-ALK 변이체 3a(AB374361.1; BAG55003.1), EML4-ALK 변이체 3b(AB374362.1; BAG55004.1), EML4-ALK 변이체 4(AB374363.1; BAG75147.1), EML4-ALK 변이체 5a(AB374364.1; BAG75148.1), EML4-ALK 변이체 5b(AB374365.1; BAG75149.1), EML4-ALK 변이체 6(AB462411.1; BAH57335.1), EML4-ALK 변이체 7(AB462412.1; BAH57336.1), KIF5B-ALK(AB462413.1; BAH57337.1), NPM-ALK, TPM3-ALK, TFGXL-ALK, TEGL-ALK, TFGS-ALK, A11C-ALK, CLTC-ALK, MSN-ALK, TPM4-ALK, MYH9-ALK, RANBP2-ALK, AL017-ALK, 및 CARS-ALK를 포함하나 이에 제한되지 않는다(예를 들어. Pulford 등, (2004) J. Cell. Physiol. 199:330-358 참조). 게다가, 당업자는 ALK 키나제 변이체가 ALK 키나제와 그의 융합 파트너 사이의 특정 융합 이벤트에 따라 발생할 수 있음을 이해할 것이다(예를 들어, EML4는 예를 들어, Horn 및 Pao, J. Clin. Oncol. 2009, 27, 4247-4253에 기재된 바와 같이 적어도 엑손 2, 6a, 6b, 13, 14, 및/또는 15를 융합할 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
ALK 돌연변이의 추가 예는 미국 특허 번호 9,018,230 및 9,458,508에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 ROS1 돌연변이는 ROS1 융합이며, 여기서 ROS1 단백질의 키나제 도메인을 포함하는 ROS1 폴리펩티드의 일부(또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드)는 또 다른 폴리펩티드의 전부 또는 일부(또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드)에 융합되고 여기서 해당 제2 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드의 이름은 융합으로 명명된다. 일부 구현예에서, ROS1 돌연변이는 ROS1-융합 단백질(예를 들어, IHC에 의해) 및/또는 ROS-융합 유전자(예를 들어 FISH에 의해), 및/또는 ROS1 mRNA(예를 들어 qRT-PCR에 의해)로 결정되며, 바람직하게는 SLC34A2-ROS1(ROS1 엑손 32 및 34에 융합된 SLC34A2 엑손 13del2046 및 4), CD74-ROS1(ROS1 엑손 32 및 34에 융합된 CD74 엑손 6), EZR-ROS1(ROS1 엑손 34에 융합된 EZR 엑손 10), TPM3-ROS1(ROS1 엑손 35에 융합된 TPM3 엑손 8), LRIG3-ROS1(ROS1 엑손 35에 융합된 LRIG3 엑손 16), SDC4-ROS1(ROS1 엑손 32에 융합된 SDC4 엑손 2 및 4 및 ROS1 엑손 34에 융합된 SDC4 엑손 4), FIG-ROS1로도 알려진 GOPC-ROS1, (ROS1 엑손 35에 융합된 GOPC 엑손 8 및 ROS1 엑손 36에 융합된 GOPC 엑손 4), 및 ROS1G2032R로도 알려진 G2032R로 이루어진 군으로부터 선택된 ROS1-융합 단백질을 나타낸다.
ROS1 돌연변이 및 ROS 융합의 추가 개시내용은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2010/0221737 A1, US 2015/0056193 A1, 및 US 2010/0143918 A1, 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2010/093928 A1에 제공되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, RET 돌연변이는 RET 융합 또는 점 돌연변이이다.
일부 구현예에서, RET 점 돌연변이는 H6650, K666E, K666M, S686N, G691S, R694Q, M700L, V706M, V706A, E713K, G736R, G748C, A750P, S765P, P766S, E768Q, E768D, L769L, R770Q, D771N, N777S, V7781, Q781R, L790F, Y791F, Y791N, V804L, V804M, V804E, E805K, E806C, Y806E, Y806F, Y806S, Y806G, Y806C, E818K, S819I, G823E, Y826M, R833C, P841L, P841P, E843D, R844W, R844Q, R844L, M848T, 1852M A866W, R873W, A876V, L881V, A883F, A883S, A883T, E884K, R886W, S891A, R8970, D898V, E901K, 5904F, S904C2, K907E, K907M, R908K, G911D, R912P, R912Q M918T, M918V, M918L6, A919V, E921K, S922P, S922Y, T930M, F961L, R972G, R982C, M1009V, D1017N, V10416, 및 M1064T를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, RET 융합은 BCR, BCR, CLIP 1, KIFSB, CCDC6, PTClex9, NCOA4, TRIM33, ERC1, FGFRIOP, MBD1, RAB61P2, PRKARIA, TRIM24, KTN1, GOLGA5, HOOK3, KIAA1468, TRIM27, AKAP13, FKBP15, SPECCIL, TBL1XR1, CEP55, CUX1, ACBD5, MYH13, PIBF1, KIAA1217, 및 MPRIP로 이루어진 군으로부터 선택된 RET와 융합 파트너 사이의 융합이다.
RET 돌연변이의 추가 개시내용은 미국 특허 번호 10035789에 제공되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, BRAF 돌연변이는 BRAF V600E/K 돌연변이이다. 다른 구현예에서, BRAF 돌연변이는 비-V600E/K 돌연변이이다.
일부 구현예에서, 비-V600E/K BRAF 돌연변이는 키나제-활성화 돌연변이, 키나제-손상 돌연변이, 또는 키나제-미지 돌연변이, 및 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 키나제-활성화 돌연변이는 R4621, 1463S, G464E, G464R, G464V, G466A, G469A, N58은 E586K, F595L, L597Q, L597R, L5975, L597V, A598V, T599E, V600R, K601E, 5602D, A728V, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 키나제-손상 돌연변이는 G466E, G466R, G466V, Y472C, K483M, D594A, D594E, D594G, D594H, D594N, D594V, G596R, T599A, 5602A, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 키나제-미지 돌연변이는 T4401, 5467L, G469E, G469R, G4695, G469V, L584F, L588F, V600 K6OldelinsE, 56051, Q609L, E611Q, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 비-V600E/K BRAF 돌연변이는 D594, G469, K601E, L597, T599 복제, L485W, F247L, G466V, BRAF 융합, BRAF-AGAP3 재배열, BRAF 엑손 15 슬라이스 변이체, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, Met 돌연변이는 점 돌연변이, 결실 돌연변이, 삽입 돌연변이, 역전, 비정상 스플라이싱, 미스센스 돌연변이, 또는 개선된 수용체 상동 이량체화 리간드 결합 형성, 신체 향상 및 이종이량체 등과 같은 티로신 키나제 활성인 c-Met 단백질의 적어도 하나의 생체활성의 증가를 야기하는 유전자 확대를 포함한다. Met 돌연변이는 c-Met 유전자의 임의의 부분에 위치할 수 있다. 하나의 구현예에서, 돌연변이는 c-Met 유전자에 의해 암호화된 c-Met 단백질의 키나제 도메인에 있다. 일부 구현예에서, c-Met 돌연변이는 N375, V13, V923, R175, V136, L229, S323, R988, S1058/T1010 및 E168에서의 점 돌연변이이다.
일부 구현예에서, ERBB2 돌연변이는 ERBB2의 아미노산 서열에 있는 점 돌연변이이다. 일부 구현예에서, ERBB2의 점 돌연변이는 아미노산 치환을 야기하거나, mRNA 스플라이싱을 야기하는 점 돌연변이, 또는 상류 영역에 있는 점 돌연변이이다. 여기서 돌연변이는 Q568E, P601R, I628M, P885S, R143Q, R434Q, 및 E874K로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 야기하는 뉴클레오티드 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, ERBB2 돌연변이는 ERBB2 증폭이다. 일부 구현예에서, ERBB2 증폭은 V659E, G309A, G309E, S310F, D769H, D769Y, V777L, P780ins, P780-Y781insGSP, V842I, R896C, K753E, 및 L755S로 이루어진 군으로부터 선택된 점 돌연변이를 포함하고 폴리머라제 연쇄 반응 또는 Bose, 등, Cancer Discov. 2013, 3(2), 224-237; 및 Zuo, 등 Clin Cancer Res. 2016, 22(19), 4859-4869에 기재된 것들와 같은 당업계에 알려진 다른 서열분석 기술에 의해 검출될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 BRCA1 및/또는 BRCA2, 바람직하게는 BRCA1, 및/또는 단백질 산물이 ATM, ATR, Chk2, H2AX, 53BP1, NFBD1, Mre11, Rad50, Nibrin, BRCA1-연관 고리 도메인(BARD1), Abraxas, 및 MSH2를 포함하는 DNA 손상 부위에서 BRCA1 및/또는 BRCA2와 회합하는 하나 이상의 다른 유전자에 있는 돌연변이이다. 이들 유전자 중 하나 이상에서 돌연변이는 BRCA1 및/또는 BRCA2에서 돌연변이를 모방하는 유전자 발현 패턴을 초래할 수 있다.
특정 구현예에서, BRCA 돌연변이는 비동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 돌연변이체 mRNA 및 궁극적으로 돌연변이체 단백질로서 발현된다. 일부 구현예에서, BRCA1/2 단백질은 기능적이다. 다른 구현예에서, BRCA1/2 단백질은 활성이 감소된다. 다른 구현예에서, BRCA1/2 단백질은 비기능적이다.
치환과 관련하여 본원에 사용된 바와 같이, 돌연변이와 관련하여 "=" 기호는 일반적으로 동의어 치환, 침묵 코돈, 및/또는 침묵 치환을 지칭한다. 특히, 동의어 치환(침묵 치환 또는 침묵 코돈으로도 불림)은 단백질을 암호화하는 유전자의 엑손에서 하나의 뉴클레오티드 염기가 또 다른 뉴클레오티드 염기로 치환되는 것을 지칭하며, 여기서 생산된 아미노산 서열은 변형되지 않는다. 이것은 유전자 코드가 "축퇴"된다는 사실, 즉, 일부 아미노산이 1개 초과의 3-염기쌍 코돈에 의해 코딩되기 때문이다. 주어진 아미노산에 대한 코돈 중 일부는 동일한 아미노산을 코딩하는 다른 코돈과 1개 염기쌍만 다르기 때문에, 야생형 염기를 대체물 중 하나로 대체하는 점 돌연변이는 유전자 번역 동안 동일한 아미노산을 늘어나는 폴리펩티드 쇄에 혼입할 것이다. 일부 구현예에서, 비코딩 DNA에 영향을 미치는 동의어 치환 및 돌연변이는 종종 침묵 돌연변이로 간주되지만; 돌연변이가 침묵하고 어떠한 영향도 미치지 않는 경우 항상 그런 것은 아니다. 예를 들어, 동의어 돌연변이는 전사, 스플라이싱, mRNA 수송, 및 번역에 영향을 미칠 수 있으며, 이 중 임의의 것은 생성된 표현형을 변경하여, 동의어 돌연변이를 침묵하지 않게 만들 수 있다. 희귀 코돈에 대한 tRNA의 기질 특이성은 번역 시기, 및 차례로 단백질의 공동 번역 접힘에 영향을 미칠 수 있다. 이것은 많은 종에서 관찰된 코돈 용법 편향에서 나타난다. 비동의어 치환/돌연변이는 보존적(유사한 물리화학적 특성을 갖는 아미노산으로 변화), 반보존적(예를 들어 음으로 하전된 아미노산에서 양으로 하전된 아미노산으로), 또는 라디칼(매우 상이한 아미노산)로서 임의로 분류될 수 있는 아미노산의 변화를 초래한다. 일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 P871L, K1183R, D693N, S1634G, E1038G, S1040N, S694=(=: 침묵 코돈), M1673I, Q356R, S1436=, L771=, K654Sfs*47, S198N, R496H, R841W, R1347G, H619N, S1533I, L30=, A622V, Y655Vfs*18, R496C, E597K, R1443*, E23Vfs*17, L30F, E111Gfs*3, K339Rfs*2, L512F, D693N, P871S, S1140G, Q1240*, P1770S, R7=, L52F, T176M, A224S,L347=, S561F, E597*, K820E, K893Rfs*107, E962K, M1014I, R1028H, E1258D, E1346K, R1347T, L1439F, H1472R, Q1488*, S1572C, E1602K, R1610C, L1621=, Q1625*, Q1625=, D1754N, R1772Q, R1856*, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 BRCA1 돌연변이이다.
일부 구현예에서, BRCA 돌연변이는 V2466A, N289H, N991D, S455=(=: 침묵 코돈), N372H, H743=, V1269=, S2414=, V2171=, L1521=, T3033Nfs*11, K1132=, T3033Lfs*29, R2842C, N1784Tfs*7, K3326*, K3326*, D1420Y, I605Yfs*9, I3412V, A2951T, T3085Nfs*26, R2645Nfs*3, S1013*, T1915M, F3090=, V3244I, A1393V, R2034C, L1356=, E2981Rfs*37, N1784Kfs*3, K3416Nfs*11, K1691Nfs*15, S1982Rfs*22, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 BRCA2 돌연변이이다.
일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 E63K, Q61R, Q61K, G12D, G13D, Q61R, Q61L, Q61K, G12S, G12C, G13R, Q61H, G12V, G12A, Q61L, G13V, Q61H, Q61H, G12R, G13C, Q61P, G13S, G12D, G13A, G13D, A18T, Q61X, G60E, G12S, Q61=(=: 침묵 코돈), Q61E, Q61R, A146T, A59T, A59D, Q61=, R68T, A146T, G12A, E62Q, G75=, A91V, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
E132K일부 구현예에서, PIK3CA　돌연변이는 치환 돌연변이, 결실 돌연변이, 및 삽입 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 PIK3CA의 나선형 도메인 및 그의 키나제에서 발생한다. 다른 구현예에서, PIK3CA의 P85BD 도메인에서. 일부 구현예에서, PIK3CA　돌연변이는 엑손 1, 2, 4, 5, 7, 9, 13, 18, 및 20에 있다. 일부 구현예에서, PIK3CA　돌연변이는 엑손 9 및 20에 있다. 또 다른 구현예에서, PIK3CA　돌연변이는 위에 나열된 임의의 돌연변이의 조합이다. 임의적으로 다른 엑손을 테스트하는 것과 함께 이러한 엑손의 임의의 조합이 테스트될 수 있다. 돌연변이에 대한 테스트는 전체 코딩 서열과 함쎄 수행될 수 있거나 돌연변이가 클러스터링된 것으로 밝혀진 영역에 집중될 수 있다. 돌연변이의 특정 핫스팟은 PIK3CA　코딩 서열의 뉴클레오티드 위치 1624, 1633, 1636, 및 3140에서 발생한다.
일부 구현예에서, PIK3CA　돌연변이의 크기는 1 내지 3개의 뉴클레오티드 범위로 작다. 일부 구현예에서, PIK3CA　돌연변이는 G1624A, G1633A, C1636A, A3140G, G113A, T1258C, G3129T, C3139T, E542K, E545K, Q546R, H1047L, H1047R 및 G2702T를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, MAP2K1 돌연변이는 체세포 MAP2K1 돌연변이, 임의적으로 MEK1 수준을 상향 조절하는 MAP2K1 돌연변이이다. 일부 구현예에서, MAP2K1 돌연변이는 HRAS, KRAS, NRAS, ARAF, BRAF, RAFl, MAP2K2, MAPKl, MAPK3, MAP3K3을 포함하는 RAS/MAPK 경로와 연관된 하나 이상의 유전자에서의 돌연변이이다. 특정 구현예에서, MAP2K1 돌연변이는 RASA, PTEN, ENG, ACVRL1, SMAD4, GDF2 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자에 있다.
일부 구현예에서, MAP2K1 돌연변이는 P124S, Q56P, K57N, E203K, G237*, P124L, G128D, D67N, K57E, E102_I103del, C121S, K57T, K57N, Q56P, P124L, K57N, G128V, Q58_E62del, F53L, I126=, I103_K104del, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 비동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 돌연변이체 mRNA 및 궁극적으로 돌연변이체 단백질로서 발현된다. 일부 구현예에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 기능적이다. 다른 구현예에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 활성이 감소된다. 다른 구현예에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 비기능적이다.
일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G13D, G12C, G12A, G12S, G12R, G13C, Q61H, A146T, Q61R, Q61H, Q61L, G13S, A146V, Q61K, G13R, G12F, K117N, G13A, G13V, A59T, V14I, K117N, Q22K, Q61P, A146P, G13D, L19F, L19F, Q61K, G12V, G60=, G12=, G13=, A18D, T58I, Q61E, E63K, G12L, G13V, A59G, G60D, G10R, G10dup, D57N, A59E,, V14G, D33E, G12I, G13dup, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 여기서 =는 침묵 코딩을 나타낸다.
일부 구현예에서, NF1 돌연변이는 치환 돌연변이, 결실 돌연변이, 미스센스 돌연변이, 비정상 스플라이싱 돌연변이, 및 삽입 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, NF1 돌연변이는 기능 상실(LOF) 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NF1 돌연변이는 R1947X(C5839T), R304X, 엑손 37 돌연변이, 엑손 4b 돌연변이, 엑손 7 돌연변이, 엑손 10b 돌연변이, 및 엑손 10c 돌연변이(예를 들어, 1570G→T, E524X)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, CDKN2A 돌연변이는 R24P, D108G, D108N, D108Y, G125R, P114L, R80*, R58*, H83Y, W110*, P114L, E88*, W110*, E120*, D108Y, D84Y, D84N, E69*, P81L, Q50*, L78Hfs*41, D108N, S12*, P48L, E61*, Y44*, E88K, R80*, D84G, L16Pfs*9, Y129*, D108H,A148T, A36G, A102V, W15*, H83R, A57V, E33*, D74Y, A76V, E153K, D74N, H83D, V82M, R58*, Y129*, E119*, Y44*, D74A, T18_A19dup, Y44Lfs*76, L32_L37del, V28_E33del, D14_L16del, A68T, 또는 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, PTEN 돌연변이는 비동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, PTEN 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, PTEN 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, PTEN 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이된 PTEN은 mRNA 및 궁극적으로 단백질로서 발현된다. 일부 구현예에서, 돌연변이된 PTEN 단백질은 기능적이다. 다른 구현예에서, 돌연변이된 PTEN 단백질 활성이 감소된다. 다른 구현예에서, 돌연변이된 PTEN 단백질은 비기능적이다. 일부 구현예에서, PTEN 돌연변이는 R130Q, R130G, T319*, R233*, R130*, K267Rfs*9, N323Mfs*21, N323Kfs*2, R173C, R173H, R335*, Q171*, Q245*, E7*, D268Gfs*30, R130Q, Q214*, R130L, C136R, Q298*, Q17*, H93R, P248Tfs*5, I33del, R233*, E299*, G132D, Y68H, T319Kfs*24, N329Kfs*14, V166Sfs*14, V290*, T319Nfs*6, R142W, P38S, A126T, H61R, F278L, S229*, R130P, G129R, R130Qfs*4, P246L, R130*, G165R, C136Y, R173C, I101T, Y155C, D92E, K164Rfs*3, N184Efs*6, G129E,R130G, G36R, F341V, H123Y, C124S, M35VG127E, G165E 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, TP53 돌연변이는 R175H, G245S, R248Q, R248W, R249S, R273C, R273H, R282W, C135Y, C141Y, P151S, V157F, R158L, Y163C, V173L, V173M, C176F, H179R, H179Y, H179Q, Y205C, Y220C, Y234C, M237I, C238Y, S241F, G245D, G245C, R248L, R249M, V272M, R273L, P278L, R280T, E285K, E286K, R158H, C176Y, I195T, G214R, G245V, G266R, G266E, P278S, R280K, 또는 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 추가 구현예에서, TP53 돌연변이는 G245S; R249S; R273C; R273H; C141Y, V157F, R158L, Y163C, V173L, V173M, Y205C, Y220C, G245C, R249M, V272M, R273L, 및 E286K로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TP53 돌연변이는 위의 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, CREBBP 돌연변이는 R1446C, R1446H, S1680del, I1084Sfs*15, P1948L, I1084Nfs*3, ?R386*, S893L, R1341*, P1423Lfs*36, P1488L, Y1503H, R1664C, A1824T, R1173*, R1360*, Y1450C, H2228D, S71L, P928=, D1435N, W1502C, Y1503D, R483*, R601Q, S945L, R1103*, R1288W, R1392*, C1408Y, D1435G, R1446L, H1485Y, Q1491K, Q96*, L361M, L524Wfs*6, Q540*, Q1073*, A1100V, R1169C, C1237Y, R1347W, G1411E, W1472C, I1483F, P1488T, R1498*, Y1503F, Q1856*, R1985C, R2104C, S2328L, V2349=, S2377L, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, KMT2C 돌연변이는 D348N, P350=, R380L, C391*, P309S, C988F, Y987H, S990G, K2797Rfs*26, V346=, R894Q, R284Q, S806=, R1690=, P986=, A1685S, G315S, Q755*, R909K, T316S, S772L, G838S, L291F, P335=, C988F, Q2680=, E765G, K339N, Y816*, R526P, N729D, G845E, I817Nfs*11, G892R, C1103*, S3660L, F4496Lfs*21, G315C, R886C, D348N, S793=, V919L, R2481S, R2884*, R4549C, M305Dfs*28, T316S, P377=, I455M, T820I, S965=, S730Y, P860S, Q873Hfs*40, R904*, R2610Q, R4478*, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, KMT2D 돌연변이는 L1419P, E640D, E541D, E455D, T2131P, K1420R. P2354Lfs*30, G2493=, Q3612=, I942=, T1195Hfs*17, P4170=, P1194H, G1235Vfs*95, P4563=, P647Hfs*283, L449_P457del, P3557=, Q3603=, R1702*, P648Tfs*2, R5501*, R4198*, R4484*, R83Q, R1903*,,R2685*, R4282*, L5326=, R5432W, R2734*, Q2800*, R2830*, Q3745dup, S4010P, R4904*, G5182Afs*61, R5214H, R1615*, Q2380*, R2687*, R2771*, V3089Wfs*30, Q3799Gfs*212, R4536*, R5030C, R5048C, R5432Q, A221Lfs*40, A476T, A2119Lfs*25,P2557L, R2801*, Q3913*, R4420W, G4641=, R5097*, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, ARID1A 돌연변이는 예를 들어, C884*(*: 넌센스 돌연변이), E966K, Q1411*, F1720fs(fs: 프레임시프트), G1847fs, C1874fs, D1957E, Q1430, R1721fs, G1255E, G284fs, R1722*, M274fs, G1847fs, P559fs, R1276*, Q2176fs, H203fs, A591fs, Q1322*, S2264*, Q586*, Q548fs, 및 N756fs로 이루어진 군으로부터 선택된 ARID1A의 돌연변이를 갖는 대상체를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, RB1 돌연변이는 R320X, R467X, R579X, R455X, R358X, R251X, R787X, R552X, R255X, R556X, Y790X, Q575X, E323X, R661W, R579*, R455*, R556*. R787*, R661W, R445*, R467*, Q217*,Q471*, W195*, Q395*, I680T, E137*, R255*, Q344*, Q62*, E440K, A488V, P777Lfs*33, E322K, R656W, G617Rfs*36, C221*, E440*,Q93*, Q504*, E125*, S834*, E323*, Q685*, S829*, W516*, G435*, Q257*, E79*, S567L, V654M, V654Sfs*14,G100Efs*11, K715*, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, ATM 돌연변이는 10744A>G;10744A>G; 11482G>A; IVS3-558A>T; 146C>G; 381delA; IVS8-3delGT; 1028delAAAA; 1120C>T; 1930ins16; IVS16+2T>C; 2572T>C; IVS21+1G>A; 3085delA; 3381delTGAC; 3602delTT; 4052delT; 4396C>T; 5188C>T; 5290delC; 5546delT; 5791G>CCT; 6047A>G; IVS44-1G>T; 6672delGC/6677delTACG; 6736dell 1/6749del7; 7159insAGCC; 7671delGTTT; 7705del14; 7865C>T; 7979delTGT; 8177C>T; 8545C>T; 8565T>A; IVS64+1G>T; 및 9010del28을 포함하나 이에 제한되지 않는 ATM 유전자 서열에서의 돌연변이이다.
본 발명의 일부 구현예에서, SETD2 돌연변이는 NCBI 수탁 번호 NM_014159의 mRNA 서열의 전사 초기 코돈 위치가 1로 설정되는 경우, SETD2 단백질을 암호화하는 유전자 서열에서의 변경이다. 일부 구현예에서, 7558번째 G(구아닌)는 T(티민)으로 치환되거나, 4774번째 C(사이토신)은 T로 치환되거나, 1210번째 A(아데닌)은 T로 치환되거나, 4883번째 T는 G로 치환되거나, 5290번째 C는 T로 대체되거나, 7072번째 C는 T로 대체되거나, 4144번째 G는 T로 치환되거나, 1297 C는 T로 대체되거나, 755번째 T는 G로 대체되거나, 7261 T는 G로 치환되거나, 6700은 T로 대체되거나, 2536번째 C는 T로 치환되거나, 7438번째 C는 T 치환으로 대체되거나, 또는 위치 3866에 A의 삽입, 위치 6712에 T의 삽입, 위치 7572에 T의 삽입, 913번째 A의 결실, 5619번째 C의 결실, 염기 4603-4604의 결실, 1번째 염기의 결실, 1936번째 C의 결실, 3094-3118 염기의 결실, 5289번째 위치에서 A의 삽입, 및 6323-6333 염기의 결실이 있다.
일부 구현예에서, FLT3 돌연변이는 (Q569_E648)ins, D835X, (Q569_E648)delins, (D835_I836), D835Y, D835V, D835Y, D835H, T227M, I836del, N676K, D835E, Y597_E598insDYVDFREY,D835E, D835del, F594_D600dup, A680V, D839G, D96=, D835H, V491L, D835E, Q989*, D835V, L561=, I836del, P986Afs*27, D7G, D324N, S451F, D835N, L576P, Y597_E598insDVDFREY, V491L, N841T, D324N, Y572C, R595_L601dup, K663R, N676K, F691L, D835A, I836H, N841K, S993L, L832F, I836M, A66V, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, PTPN11 돌연변이는 E76K, A72V, A72T, D61Y, D61V,,G60V, E69K, E76G, G507V, S506L, G507A, T73I, E76A, E76Q, S506P, D61N, F71L, E76V, F71L, A72D, V432M, T472M, P495L, N58Y, F285S, S506A, S189A, A465T, R502W, G507R, T511K, D61H, D61G, G507E, G60R, G60A, Q514L, E139D, Y197*, N308D, Q514H, Q514H, N58S, E123D, L206=, A465G, P495S, G507R, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, FGFR1 돌연변이는 N577K, K687E, N577K, D166del, T371M, R476W, T350=, E498K, N577D, D683G, R87C, A154D, N303=, A374V, D550=, S633=, V695L, G728=, R765W, P803S, W19C, P56=, R113C, V149I, S158L, D166dupR220C, N224Kfs*8, D249N, R281W, R281Q, A299S, S424L, S461F, S467F, R506Q, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, EP300 돌연변이는 D1399N, Y1414C, M1470Cfs*26, Y1111*, H2324Pfs*55, R1627W, N2209_Q2213delinsK, Q2268del, L415P, M1470Nfs*3, E1514K, C1201Y, P1452L, S952*, C1164Y, D1399Y, S507G, Q824*, D1507N, H2324Tfs*29, P925T, P1440L, W1466C, P1502L, A1629V, R1645*, N1700Tfs*9, P1869L, Q65*, A171V, R202*, R580Q, A627V, Q1082*, N1236Kfs*2, N1286S, R1312*, R1356*, C1385F, H1451L, R1462*, Y1467N, Y1467H, R1478H, R1627Q, R86*, R370H, R397*, R754C, P842S, I997V, E1014*,및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, MYC 돌연변이는 E61T, E68I, R74Q, R75N, W135E, W136E, V394D, L420P, W96E, V325D, L351P, N-말단에서 41개 아미노산이 결실된 MYC 단백질(dN2MYC), N26S, S161L, P74L, V7M, F153S, E54D, P246, L164V, P74S, A59V, T73I, P72T,T73A, H374R, P17S, T73N, S264N, P72S, Q52del, S21T, P74A, S107N, P75S, S77P, P261S, P74Q, S190R, A59T, F153C, P75H, T73I, S77F, N11S, S21N, P78L, P72L, N9K, S190N, S267F, T73P, P78S, G105D, S187C, L71M, Q10H, L191x, Q50x, L191F, R25K, F130L, Y27S, D195N, D2G, V20A, V6G, V20I, D2H, P75A, G152D, P74T, C40Y, E8K, Q48x, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, EZH2 돌연변이는 변경된 히스톤 메틸화 패턴과 연관된다. 일부 구현예에서, EZH2 돌연변이는 아미노산 Y641(Y646과 동등, 촉매 도메인)을 F, N, H, S 또는 C로 전환시켜 H3K27의 과트리메틸화를 초래하고 림프종생성을 유도한다. 일부 구현예에서, EZH2 돌연변이는 EZH2 SET-도메인 돌연변이, EZH2의 과발현, 다른 PRC2 서브유닛의 과발현, 히스톤 아세틸 트랜스퍼라제(HAT)의 기능 상실 돌연변이, 및 MLL2의 기능 상실을 포함한다. EZH2 Y646 돌연변이에 대해 이종접합성인 세포는 EZH2 단백질에 대해 동종접합성 야생형(WT)인 세포, 또는 Y646 돌연변이에 대해 동종접합성인 세포에 비해 H3K27의 과트리메틸화를 초래한다.
일부 구현예에서, EZH2 돌연변이는 Y646F, Y646N, D185H, Y646F, Y646S, Y646H, R690H, Y646X, E745K, Y646C, V626M, V679M, R690H, R684H, A682G, E249K, G159R, R288Q, N322S, A692V, R690C, D730*(삽입 프레임시프트), S695L, R684C, M667T, R288*, S644*, D192N, K550T,Q653E, D664G, R347Q,Y646C,G660R, R213C, A255T, S538L, N693K, I55M, R561H, A692V, K515R,Y733*, R63*, Q570*, Q328*, R25Q, T467P A656V, T573I, C571Y, E725K, R16W, P577L, F145S, V680M, G686D, G135R, K634E, S652F, R298C, G648E, R566H, L149R, R502Q, Y731D, R313W, N675K, S652C, T374Hfs*3, N152Ifs*15, E401Kfs*22, K406Mfs*17, E246*, S624C, I146T, V626M, L674S, H694R, A581S, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, JAK2 돌연변이는 G1920T 돌연변이, G1920T / C1922T 돌연변이, 또는 G1920A 돌연변이와 조합된 T1923C 돌연변이를 포함하나 이에 제한되지 않는 JAK2 유전자에서의 돌연변이이다. 일부 구현예에서, JAK2 돌연변이는 V617F, V617I, R683G, N542_E543del, E543_D544del, R683S, R683X, F537_K539delinsL(프레임 내 결실), K539L, N1108S, R1113H, R1063H, R487C, I540Mfs*3(결실-프레임시프트), R867Q, K539L, G571S, R1113C, R938Q, R228Q, L830*, E1080*, K539L, C618R, R564Q, D1036H, L1088S, H538Nfs*4, D873N, V392M, I682F, L393V, M535I, C618R, T875N, L611V, D319N, L611S, G921S, H538Y, S1035L, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 치환을 포함하는 돌연변이체 JAK2 단백질이다.
일부 구현예에서, FBXW7 돌연변이는 W244*(*:정지 코돈), R222*, R278*, E192A, S282*, E113D, R465H/C, 726+1 G>A 스플라이스, R505C, R479Q, R465C, R367*, R499Vfs*25(fs*: 프레임시프트), R658*, D600Y, D520N, D520Y, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 점 돌연변이이다. 추가 구현에에서, FBXW7 돌연변이는 R479Q 및 S582L, R465H 및 S582L, D520N, D520Y 및 R14Q, 및 R367* 및 S582L을 포함하나 이에 제한되지 않는 이중- 또는 삼중-돌연변이이다.
일부 구현예에서, CCND3 돌연변이는 S259A, R271Pfs*53(삽입으로 야기된 프레임시프트), E51*, Q260*, P199S, T283A, T283P, V287D, D286_T288del, R271Gfs*33, Q276*, R241Q, D238G, R33P, I290K, I290T, I290R, P267fs, P284S, P284L, P100S, E253D, S262I, R14W, R114L, D238N, A266E, R167W, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, GNA11 돌연변이는 Q209L, R183C, T257=, R183C, G208Afs*16, Q209H, R183C, Q209P, Q209R, Q209H, ?T96=, R210W, R256Q, T334=, G48D, S53G,, Q209P, R213Q, 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, GNA11 돌연변이는 엑손 4에 2개의 돌연변이, 예를 들어, V182에 돌연변이 및 T175에 돌연변이, 또는 엑손 5에 하나 이상의 돌연변이를 갖는다.
2. PD-1 및 PD-L1 억제제와의 조합
일부 구현예에서, 암 환자에게 제공되는 TIL 요법은 TIL 단독의 치료 집단으로의 치료를 포함할 수 있거나 TIL 및 하나 이상의 PD-1 및/또는 PD-L1 억제제를 포함하는 조합 치료를 포함할 수 있다.
프로그램화 사멸 1(PD-1)은 T 세포, B 세포, 자연 살해(NK) T 세포, 활성화된 단핵구, 및 수지상 세포에 의해 발현되는 288-아미노산 막관통 면역체크포인트 수용체 단백질이다. CD279로도 알려진 PD-1은 CD28 패밀리에 속하며, 인간에서는 염색체 2 상의 Pdcd1 유전자에 의해 암호화된다. PD-1은 하나의 면역글로불린(Ig) 슈퍼패밀리 도메인, 막관통 영역, 및 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM) 및 면역수용체 티로신-기반 전환 모티프(ITSM)를 함유하는 세포내 도메인으로 이루어진다. PD-1 및 그의 리간드(PD-L1 및 PD-L2)는 Keir, 등, Annu. Rev. Immunol. 2008, 26, 677-704에 기재된 바와 같이 면역 내성에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. PD-1은 T 세포 면역 반응을 부정적으로 조절하는 억제 신호를 제공한다. PD-L1(B7-H1 또는 CD274로도 알려짐) 및 PD-L2(B7-DC 또는 CD273으로도 알려짐)는 종양 세포 및 간질 세포 상에서 발현되며, 이는 PD-1을 발현하는 활성화된 T 세포에 의해 접하여, T 세포의 면역억제를 야기할 수 있다. PD-L1은 인간 염색체 9 상의 Cd274 유전자에 의해 암호화된 290개의 아미노산 막관통 단백질이다. PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 및/또는 PD-L2 억제제를 사용하여 PD-1과 그의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 사이의 상호작용을 차단하면 Topalian, 등, N. Eng. J. Med. 2012, 366, 2443-54에 기재된 것과 같은 최근 임상 연구에서 입증된 바와 같이 면역 저항성을 극복할 수 있다. PD-L1은 많은 종양 세포주 상에서 발현되는 반면, PD-L2는 주로 수지상 세포 및 약간의 종양주 상에서 발현되며 발현된다. T 세포(활성화 후 PD-1을 유도적으로 발현함) 외에도, PD-1은 또한 B 세포, 자연 살해 세포, 대식세포, 활성화된 단핵구, 및 수지상 세포 상에서 발현된다.
구현예에서, PD-1 억제제는 당업계에 알려진 임의의 PD-1 억제제 또는 PD-1 차단제일 수 있다. 특히, 다음 단락에서 보다 상세히 기재된 PD-1 억제제 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "억제제," "길항제," 및 "차단제"는 PD-1 억제제와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 항체인 PD-1 억제제에 대한 언급은 화합물 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 PD-1 억제제에 대한 언급은 또한 소분자 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
바람직한 구현예에서, PD-1 억제제는 항체(즉, 항-PD-1 항체), Fab 단편을 포함하는 이의 단편, 또는 이의 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 구현예에서 PD-1 억제제는 다클론 항체이다. 바람직한 구현예에서, PD-1 억제제는 단클론 항체이다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 PD-1과의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, PD-1 상의 에피토프에 결합한다. 구현예에서, 항체는 PD-1과의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, PD-1 상에 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 100 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 90 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 80 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 70 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 50 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 40 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 30 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 20 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 10 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 1 pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 7.5 x 105 l/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 8 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 8.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 9 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 9.5 x 105 l/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 1 x 106 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.1 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.4 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.5 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.6 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나 약 2.7 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.8 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.9 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 10 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 9 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 8 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 7 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 6 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 5 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 4 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 3 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 2 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나, 약 1 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하는 것이다.
구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb Co.에서 OPDIVO로 상업적으로 입수가능), 또는 이의 바이오시밀러, 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 니볼루맙은 PD-1 수용체를 차단하는 완전 인간 IgG4 항체이다. 구현예에서, 항-PD-1 항체는 면역글로불린 G4 카파, 항-(인간 CD274) 항체이다. 니볼루맙은 화학 초록 서비스(CAS) 등록 번호 946414-94-4로 지정되며 5C4, BMS-936558, MDX-1106, 및 ONO-4538로도 알려져 있다. 니볼루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 8,008,449 및 국제 특허 공개 번호 WO 2006/121168에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 다양한 형태의 암에서 니볼루맙의 임상 안전성 및 효능은 Wang, 등, Cancer Immunol. Res. 2014, 2, 846-56; Page, 등, Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202; 및 Weber, 등, J. Clin. Oncology, 2013, 31, 4311-4318에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 니볼루맙의 아미노산 서열은 표 18에 제시되어 있다. 니볼루맙은 22-96,140-196, 254-314, 360-418, 22''-96'', 140''-196'', 254''-314'', 및 360''-418''에 중쇄내 이황화 결합; 23'-88', 134'-194', 23'''-88''', 및 134'''-194'''에 경쇄내 이황화 결합; 127-214', 127''-214'''에 중쇄-경쇄간 이황화 결합, 219-219'' 및 222-222''에 중쇄-중쇄간 이황화 결합; 및 290, 290''에 N-글리코실화 부위(H CH2 84.4)를 갖는다.
구현예에서, PD-1 억제제는 서열번호:158에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:159에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:158 및 서열번호:159에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 또는 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:158 및 서열번호:159에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:158 및 서열번호:159에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:158 및 서열번호:159에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:158 및 서열번호:159에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:463 및 서열번호:159에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:160에 제시된 서열을 포함하고, PD-1 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:161에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:160 및 서열번호:161에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:160 및 서열번호:161에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:160 및 서열번호:161에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:160 및 서열번호:161에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:160 및 서열번호:161에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:162, 서열번호:163, 및 서열번호:164에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:165, 서열번호:166, 및 서열번호:167에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 PD-1 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-PD-1 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는, 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-PD-1 항체이며, 여기서 항-PD-1 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 니볼루맙이다. 항-PD-1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 니볼루맙이다.
표 18. 니볼루맙과 관련된 PD-1 억제제에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 약 1 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 3 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 후, 2주마다 240 mg 또는 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 2주마다 약 3 mg/kg으로 6주마다 약 1 mg/kg의 이필리무맙과 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 3주마다 약 360 mg으로 6주마다 이필리무맙 1 mg/kg과 함께 백금 이중항 화학치료의 2회 주기로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 또는 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 소세포 폐암을 치료하기 위해 약 240 mg으로 2주마다 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 3주마다 약 360 mg으로 6주마다 이필리무맙 1 mg/kg과 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 약 1 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 약 1 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 고전적인 호지킨 림프종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 고전적인 호지킨 림프종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 고전적인 호지킨 림프종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 국소 진행성 또는 전이성 요로상피 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 국소 진행성 또는 전이성 요로상피 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 성인 및 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 <40 kg의 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 2주마다 약 3 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 1 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로 투여된 다음 이필리무맙 1 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 약 1 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 3 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 약 1 mg/kg으로 투여된 후 이필리무맙 3 mg/kg이 4회 용량으로 3주마다 동일한 날에 투여된 다음, 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙(미국 뉴저지주 케닐워스 소재의 Merck & Co., Inc.에서 KEYTRUDA로 상업적으로 입수가능), 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체를 포함한다. 펨브롤리주맙은 CAS 등록 번호 1374853-91-4로 지정되며 람브롤리주맙(lambrolizumab), MK-3475, 및 SCH-900475로도 알려져 있다. 펨브롤리주맙은 면역글로불린 G4, 항-(인간 단백질 PDCD1(프로그램화 세포 사멸 1))(인간-무스 무스쿨루스 단클론 중쇄), 인간-무스 무스쿨루스 단클론 경쇄를 갖는 이황화물, 이량체 구조를 갖는다. 펨브롤리주맙의 구조는 또한 면역글로불린 G4, 항-(인간 프로그램화 세포 사멸 1); 인간화 마우스 단클론 κ 경쇄 이량체(226-226'':229-229'')-비스이황화물을 갖는 인간화 마우스 단클론 [228-L-프롤린(H10-S>P)]γ4 중쇄(134-218')-이황화물로 기재된 수 있다. 펨브롤리주맙의 특성, 용도, 및 제조는 국제 특허 공개 번호 WO 2008/156712 A1, 미국 특허 번호 8,354,509 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2010/0266617 A1, US 2013/0108651 A1, 및 US 2013/0109843 A2에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 다양한 형태의 암에서 펨브롤리주맙의 임상 안전성 및 효능은 Fuerst, Oncology Times, 2014, 36, 35-36; Robert, 등, Lancet, 2014, 384, 1109-17; 및 Thomas, 등, Exp. Opin. Biol. Ther., 2014, 14, 1061-1064에 기재되어 있다. 펨브롤리주맙의 아미노산 서열은 표 19에 제시되어 있다. 펨브롤리주맙 다음 이황화 가교: 22-96, 22''-96'', 23'-92', 23'''-92''', 134-218', 134''-218''', 138'-198', 138'''-198''', 147-203, 147''-203'', 226-226'', 229-229'', 261-321, 261''-321'', 367-425, 및 367''-425'', 및 다음 글리코실화 부위(N)를 포함한다: Asn-297 및 Asn-297''. 펨브롤리주맙은 Fc 영역에 안정화 S228P 돌연변이가 있는 IgG4/카파 이소형이며; IgG4 힌지 영역에서 이 돌연변이의 삽입은 IgG4 항체에 대해 전형적으로 관찰되는 절반 분자의 형성을 방지한다. 펨브롤리주맙은 각 중쇄의 Fc 도메인 내의 Asn297에서 이질적으로 글리코실화되어, 온전한 항체에 대해 대략 149 kDa의 분자량을 생성한다. 펨브롤리주맙의 우세한 당형태는 푸코실화 아갈락토 디안테나리 글리칸 형태(G0F)이다.
구현예에서, PD-1 억제제는 서열번호:168에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:169에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:168 및 서열번호:169에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:170에 제시된 서열을 포함하고, PD-1 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:171에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 각각 서열번호:172, 서열번호:173, 및 서열번호:174에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:175, 서열번호:176, 및 서열번호:177에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 것과 같은 PD-1 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-PD-1 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-PD-1 항체이며, 여기서 항-PD-1 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 항-PD-1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다.
표 19. 펨브롤리주맙과 관련된 PD-1 억제제에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 펨브롤리주맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 펨브롤리주맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 이의 바이오시밀러이며, 여기서 펨브롤리주맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 이의 바이오시밀러이며, 여기서 펨브롤리주맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 소세포 폐암(SCLC)을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 SCLC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 SCLC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 두경부 편평 세포 암(HNSCC)을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 HNSCC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 HNSCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 고전적인 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 고전적인 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 고전적인 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 요로상피 암종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 요로상피 암종을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR 암을 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR 암을 치료하기 위해 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함 결장직장암(dMMR CRC을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR CRC을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 위암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 위암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 식도암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 식도암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 자궁경부암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 자궁경부암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 간세포 암종(HCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 HCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 메르켈 세포 암종(MCC)을 치료하기 위해 성인의 경우 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 MCC를 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 MCC를 치료하기 위해 성인의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 신세포 암종(RCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 RCC를 치료하기 위해 악시티닙(axitinib) 5 mg의 1일 2회 경구 투여와 함께 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 자궁내막 암종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 자궁내막 암종을 치료하기 위해 MSI-H 또는 dMMR이 아닌 종양에 대해 렌바티닙(lenvatinib) 20 mg의 1일 1회 경구 투여와 함께 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 종양 돌연변이 부담-높음(TMB-H) 암을 치료하기 위해 성인의 경우 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 TMB-H 암을 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 TMB-H 암을 치료하기 위해 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 피부 편평 세포 암종(cSCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 cSCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 삼중 음성 유방암(TNBC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 TNBC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
구현예에서, 환자 또는 대상체가 성인인 경우, 즉, 성인 징후의 치료, 및 6주마다 400 mg의 추가 투약 레지멘이 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일에 시작된다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 투여될 수 있다.
구현예에서, PD-1 억제제 또는 항-PD-1 항체는 세미플리맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, Regeneron, Inc에서 상업적으로 입수가능하다. 구현예에서, PD-1 억제제 또는 항-PD-1 항체는 티슬레리주맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, Novartis AG 및 Beigene Co., Ltd에서 상업적으로 입수가능하다. 구현예에서, PD-1 억제제 또는 항-PD-1 항체는 신틸리맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, Eli Lilly and Co에서 상업적으로 입수가능하다. 구현예에서, PD-1 억제제 또는 항-PD-1 항체는 토리팔리맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, Junshi Biosciences Co., Ltd. 및 Coherus BioSciences, Inc에서 상업적으로 입수가능하다. 구현예에서, PD-1 억제제 또는 항-PD-1 항체는 토스타를리맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, GlaxoSmithKline plc에서 상업적으로 입수가능하다.
구현예에서, PD-1 억제제는 항-m-PD-1 클론 J43(Cat # BE0033-2) 및 RMP1-14(Cat # BE0146)(Bio X Cell, Inc., 미국뉴햄프셔주 웨스트 레버넌 소재)와 같은 상업적으로 입수가능한 항-PD-1 단클론 항체이다. 다수의 상업적으로 입수가능한 항-PD-1 항체가 당업자에게 알려져 있다.
구현예에서, PD-1 억제제는 미국 특허 번호 8,354,509 또는 미국 특허 출원 공개 번호 2010/0266617 A1, 2013/0108651 A1, 2013/0109843 A2에 개시된 항체이며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, PD-1 억제제는 미국 특허 번호 8,287,856, 8,580,247, 및 8,168,757 및 미국 특허 출원 공개 번호 2009/0028857 A1, 2010/0285013 A1, 2013/0022600 A1, 및 2011/0008369 A1에 기재된 항-PD-1 항체이며, 상기 문헌의 교시는 본원에 참조로 포함된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 억제제는 미국 특허 번호 8,735,553 B1에 개시된 항-PD-1 항체이며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, PD-1 억제제는 CT-011로도 알려진 피딜리주맙(pidilizumab)이며, 미국 특허 번호 8,686,119에 기재되어 있고, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, PD-1 억제제는 미국 특허 번호 8,907,053; 9,096,642; 및 9,044,442 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0087581에 기재된 것들과 같은 소분자 또는 펩티드, 또는 펩티드 유도체; 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0073024에 기재된 것들과 같은 1,2,4-옥사디아졸 화합물 및 유도체; 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0073042에 기재된 것들과 같은 환형 펩티도모방체 화합물 및 유도체; 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0125491에 기재된 것들과 같은 환형 화합물 및 유도체; 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2015/033301에 기재된 것들과 같은 1,3,4-옥사디아졸 및 1,3,4-티아디아졸 화합물 및 유도체; 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2015/036927 및 WO 2015/04490에 기재된 것들과 같은 펩티드-기반 화합물 및 유도체, 또는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2014/0294898에 기재된 것들과 같은 대환식 펩티드-기반 화합물 및 유도체일 수 있으며; 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 당업계에 알려진 임의의 PD-L1 또는 PD-L2 억제제, 길항제, 또는 차단제일 수 있다. 특히, 다음 단락에 보다 상세하게 기재된 PD-L1 또는 PD-L2 억제제, 길항제, 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "억제제," "길항제," 및 "차단제"는 PD-L1 및 PD-L2 억제제와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 항체인 PD-L1 또는 PD-L2 억제제에 대한 언급은 화합물 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 PD-L1 또는 PD-L2 억제제에 대한 언급은 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 PD-L1 또는 PD-L2 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 소분자이다. 바람직한 구현예에서, PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 항체(즉, 항-PD-1 항체), Fab 단편을 포함한 이의 단편, 또는 이의 단일-쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 구현예에서 PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 다클론 항체이다. 바람직한 구현예에서, PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 단클론 항체이다. 일부 구현예에서, PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 PD-L1 또는 PD-L2와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, PD-L1 또는 PD-L2 상의 에피토프에 결합한다. 구현예에서, 항체는 PD-L1 또는 PD-L2와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 및/또는 PD-L1 또는 PD-L2 상의 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 PD-L1 억제제는 PD-L1에 대해 선택적이며, 그 점에서 화합물은 PD-L2 수용체를 포함한 다른 수용체에 결합하거나 상호작용하는 것보다 실질적으로 더 낮은 농도로 PD-L1에 결합하거나 상호작용한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PD-L2 수용체에 대한 것보다 적어도 약 2-배 더 높은 농도, 약 3-배 더 높은 농도, 약 5-배 더 높은 농도, 약 10-배 더 높은 농도, 약 20-배 더 높은 농도, 약 30-배 더 높은 농도, 약 50-배 더 높은 농도, 약 100-배 더 높은 농도, 약 200-배 더 높은 농도, 약 300-배 더 높은 농도, 또는 약 500-배 더 높은 농도인 결합 상수로 PD-L1 수용체에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 PD-L2 억제제는 PD-L2에 대해 선택적이며, 그 점에서 화합물은 PD-L1 수용체를 포함한 다른 수용체에 결합하거나 상호작용하는 것보다 실질적으로 더 낮은 농도로 PD-L2에 결합하거나 상호작용한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PD-L1 수용체에 대한 것보다 적어도 약 2-배 더 높은 농도, 약 3-배 더 높은 농도, 약 5-배 더 높은 농도, 약 10-배 더 높은 농도, 약 20-배 더 높은 농도, 약 30-배 더 높은 농도, 약 50-배 더 높은 농도, 약 100-배 더 높은 농도, 약 200-배 더 높은 농도, 약 300-배 더 높은 농도, 또는 약 500-배 더 높은 농도인 결합 상수로 PD-L2 수용체에 결합한다.
임의의 이론에 얽매이지 않고, 종양 세포는 PD-L1을 발현하고, T 세포는 PD-1을 발현하는 것으로 여겨진다. 그러나, 종양 세포에 의한 PD-L1 발현은 PD-1 또는 PD-L1 억제제 또는 차단제의 효능을 필요로 하지 않는다. 구현예에서, 종양 세포는 PD-L1을 발현한다. 또 다른 구현예에서, 종양 세포는 PD-L1을 발현하지 않는다. 일부 구현예에서, 방법은 TIL과 조합하여, 본원에 기재된 것들과 같은 PD-1 및 PD-L1 항체의 조합을 포함할 수 있다. PD-1 및 PD-L1 항체 및 TIL의 조합을 투여하는 것은 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 억제제는 약 100 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 90 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 80 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 70 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 50 pM 이하의 KD, 약 40 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 30 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하는 것이다
일부 구현예에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 억제제는 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 8 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 8.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 9 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 9.5 x 105 1/M·s 및/또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하거나, 약 1 x 106 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하는 것이다.
일부 구현예에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 억제제는 약 2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합하거나, 약 2.1 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.4 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.5 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.6 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-1에 결합하거나, 약 2.7 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합하거나, 약 3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합하는 것이다.
일부 구현예에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 억제제는 약 10 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 9 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 8 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 7 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 6 nM 이하의 IC50로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 5 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 4 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 3 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 약 2 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단 또는 억제하거나; 인간 PD-1을 차단하거나, 약 1 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2와 인간 PD-1의 결합을 차단하는 것이다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 MEDI4736(AstraZeneca plc.의 자회사인 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 Medimmune, LLC에서 상업적으로 입수가능)으로도 알려진 더발루맙, 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 미국 특허 번호 8,779,108 또는 미국 특허 출원 공개 번호 2013/0034559에 개시된 항체이며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 더발루맙의 임상 효능은 Page, 등, Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202; Brahmer, 등, J. Clin. Oncol. 2014, 32, 5s(보충, 요약서 8021); 및 McDermott, 등, Cancer Treatment Rev., 2014, 40, 1056-64에 기재되었따. 더발루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 8,779,108에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 더발루맙의 아미노산 서열은 표 20에 제시되어 있다. 더발루맙 단클론 항체는 22-96, 22''-96'', 23'-89', 23'''-89''', 135'-195', 135'''-195''', 148-204, 148''-204'', 215'-224, 215'''-224'', 230-230'', 233-233'', 265-325, 265''-325'', 371-429, 및 371''-429'에 이황화 결합; 및 Asn-301 및 Asn-301''에 N-글리코실화 부위를 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 서열번호:178에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:179에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 더발루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:180에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:181에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:182, 서열번호:183, 및 서열번호:184에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:185, 서열번호:186, 및 서열번호:187에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 PD-L1 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 더발루맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 더발루맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이며, 여기서 항-PD-L1 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 더발루맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 더발루맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 더발루맙이다.
표 20. 더발루맙과 관련된 PD-L1 억제제에 대한 아미노산 서열.
구현예에서, PD-L1 억제제는 MSB0010718C(Merck KGaA/EMD Serono에서 상업적으로 입수가능)로도 알려진 아벨루맙, 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 아벨루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2014/0341917 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 구체적으로 본원에 참조로 포함된다. 아벨루맙의 아미노산 서열은 표 21에 제시되어 있다. 아벨루맙은 22-96, 147-203, 264-324, 370-428, 22''-96'', 147''-203'', 264''-324'', 및 370''-428''에 중쇄내 이황화 결합(C23-C104); 22'-90', 138'-197', 22'''-90''', 및 138'''-197'''에 경쇄내 이황화 결합(C23-C104); 223-215' 및 223''-215'''에 중쇄-경쇄내 이황화 결합(h 5-CL 126); 229-229''및 232-232''에 중쇄-중쇄내 이황화 결합(h 11, h 14); 300, 300''에 N-글리코실화 부위(H CH2 N84.4); 푸코실화 복합 바이안테나리 CHO-유형 글리칸; 및 450 및 450'에 H CHS K2 C-말단 리신 클립핑을 갖는다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 서열번호:188에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:189에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:188 및 서열번호:189에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:190에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:191에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:192, 서열번호:193, 및 서열번호:194에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:195, 서열번호:196, 및 서열번호:197에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 PD-L1 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이며, 여기서 항-PD-L1 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아벨루맙이다.
표 21. 아벨루맙과 관련된 항-PD-L1 항체에 대한 아미노산 서열.
구현예에서, PD-L1 억제제는 MPDL3280A 또는 RG7446(스위스 바젤 소재의 Roche Holding AG의 자회사인 Genentech, Inc.에서 TECENTRIQ로 상업적으로 입수가능)으로도 알려진 아테졸리주맙, 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 미국 특허 번호 8,217,149에 개시된 항체이며, 이의 개시내용은 구체적으로 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 미국 특허 출원 공개 번호 2010/0203056 A1, 2013/0045200 A1, 2013/0045201 A1, 2013/0045202 A1, 또는 2014/0065135 A1에 개시된 항체이며, 이들의 개시내용은 구체적으로 본원에 참조로 포함된다. 아테졸리주맙의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 8,217,149에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 아테졸리주맙의 아미노산 서열은 표 22에 제시되어 있다. 아테졸리주맙 22-96, 145-201, 262-322, 368-426, 22''-96'', 145''-201'', 262''-322'', 및 368''-426''에 중쇄내 이황화 결합(C23-C104); 23'-88', 134'-194', 23'''-88''', 및 134'''-194'''에 경쇄내 이황화 결합(C23-C104); 221-214'및 221''-214'''에 중쇄-경쇄내 이황화 결합(h 5-CL 126); 227-227''및 230-230''에 중쇄-중쇄내 이황화 결합(h 11, h 14); 및 298 및 298'에 N-글리코실화 부위(H CH2 N84.4>A)를 갖는다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 서열번호:198에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:199에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:198 및 서열번호:199에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다..
구현예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:200에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:201에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 각각 서열번호:202, 서열번호:203, 및 서열번호:204에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:205, 서열번호:206, 및 서열번호:207에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 PD-L1 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이며, 여기서 항-PD-L1 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다.
표 22. 아테졸리주맙과 관련된 PD-L1 억제제에 대한 아미노산 서열.
구현예에서, PD-L1 억제제 또는 항-PD-L1 항체는 레티판리맙, 또는 이의 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러이며, Incyte, Inc에서 입수가능하다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2014/0341917 A1에 기재된 항체를 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 또 다른 구현예에서, PD-L1에 결합하기 위해 이러한 항체 중 임의의 것과 경쟁하는 항체가 또한 포함된다. 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-935559로도 알려진 MDX-1105이며, 미국 특허 번호 US 7,943,743에 개시되어 있고, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 미국 특허 번호 US 7,943,743에 개시된 항-PD-L1 항체로부터 선택되며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, PD-L1 억제제는 INVIVOMAB 항-m-PD-L1 클론 10F.9G2(카탈로그 # BE0101, 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레버넌 소재의 Bio X Cell, Inc.)와 같은 상업적으로 입수가능한 단클론 항체이다. 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(MIH1)와 같은 상업적으로 입수가능한 단클론 항체이다. 다수의 상업적으로 입수가능한 항-PD-L1 항체가 당업자에게 알려져 있다.
구현예에서, PD-L2 억제제는 BIOLEGEND 24F.10C12 마우스 IgG2a, κ 이소형(카탈로그 # 329602, 캘리포니아주 샌디에이고 소재의 Biolegend, Inc.), SIGMA 항-PD-L2 항체(카탈로그 # SAB3500395, 미주리주 세인트루이스 소재의 Sigma-Aldrich Co.), 또는 당업자에게 알려진 다른 상업적으로 입수가능한 항-PD-L2 항체와 같은 상업적으로 입수가능한 단클론 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하는 단계를 포함하며, PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 키트를 포함한다.
3. CTLA-4 억제제와의 조합
일부 구현예에서, 암 환자에게 제공되는 TIL 요법은 TIL 단독의 치료 집단으로의 치료를 포함할 수 있거나 TIL 및 하나 이상의 CTLA-4 억제제를 포함하는 조합 치료를 포함할 수 있다.
세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA-4)는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 구성원이며 헬퍼 T 세포의 표면 상에서 발현된다. CTLA-4는 CD28-의존적 T 세포 활성화의 음성 조절자이며 입양 면역 반응의 체크포인트로서 작용한다. T 세포 공동자극 단백질 CD28과 유사하게, CTLA-4 결합 항원은 세포 상에 CD80 및 CD86을 제시한다. CTLA-4는 T 세포에 억제 신호를 전달하는 반면, CD28은 자극 신호를 전달한다. 인간 CTLA-4에 대한 인간 항체는 바이러스 및 박테리아 감염을 치료 또는 예방하고 암을 치료하는 것과 같은 많은 질환 상태에서 면역자극 조절제로서 기재되었다(WO 01/14424 및 WO 00/37504). 이필리무맙(MDX-010) 및 트레멜리무맙(CP-675,206)을 포함하나 이에 제한되지 않는 다수의 완전 인간 항-인간 CTLA-4 단클론 항체(mAb)는 다양한 유형의 고형 종양의 치료를 위한 임상 시험에서 연구되었다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 당업계에 알려진 임의의 CTLA-4 억제제 또는 CTLA-4 차단제일 수 있다. 특히, 다음 단락에서 보다 상세하게 기재된 CTLA-4 억제제 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "억제제," "길항제," 및 "차단제"는 CTLA-4 억제제와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 항체인 CTLA-4 억제제에 대한 언급은 화합물 또는 항원-결합 단편, 변이체, 접합체, 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심을 피하기 위해, 본원에서 CTLA-4 억제제에 대한 언급은 또한 소분자 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정, 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 CTLA-4 억제제는 항-CTLA-4 항체, 인간 항-CTLA-4 항체, 마우스 항-CTLA-4 항체, 포유동물 항-CTLA-4 항체, 인간화 항-CTLA-4 항체, 단클론 항-CTLA-4 항체, 다클론 항-CTLA-4 항체, 키메라 항-CTLA-4 항체, MDX-010(이필리무맙), 트레멜리무맙, 항-CD28 항체, 항-CTLA-4 애드넥틴, 항-CTLA-4 도메인 항체, 단일 쇄 항-CTLA-4 단편, 중쇄 항-CTLA-4 단편, 경쇄 항-CTLA-4 단편, 공동자극 경로에 작용하는 CTLA-4의 억제제, PCT 공개 번호 WO 2001/014424에 개시된 항체, PCT 공개 번호 WO 2004/035607에 개시된 항체, 미국 공개 번호 2005/0201994에 개시된 항체, 및 승인된 유럽 특허 번호 EP 1212422 B1에 개시된 항체를 포함하나 이에 제한되지 않으며, 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 추가 CTLA-4 항체는 미국 특허 번호 5,811,097, 5,855,887, 6,051,227, 및 6,984,720; PCT 공개 번호 WO 01/14424 및 WO 00/37504; 및 미국 공개 번호 2002/0039581 및 2002/086014에 기재되어 있으며, 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 항-CTLA-4 항체는 예를 들어, WO 98/42752; 미국 특허 번호 6,682,736 및 6,207,156; Hurwitz 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071(1998); Camacho 등, J. Clin. Oncology, 22(145): 초록 번호 2505(2004)(항체 CP-675206); Mokyr 등, Cancer Res., 58:5301-5304(1998), 및 미국 특허 번호 5,977,318, 6,682,736, 7,109,003, 및 7,132,281에 기재된 것들을 포함하며, 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
추가 CTLA-4 억제제는 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다: 동족 리간드에 결합하는 CD28 항원의 능력을 방해하고 동족 리간드에 결합하는 CTLA-4의 능력을 억제하고, 공동자극 경로를 통해 T 세포 반응을 증대시키고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 B7의 능력을 방해하고, 공동자극 경로를 활성화하는 B7의 능력을 방해하고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 CD80의 능력을 방해하고, 공동자극 경로를 활성화하는 CD80의 능력을 방해하고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 CD86의 능력을 방해하고, 공동자극 경로를 활성화하는 CD86의 능력을 방해하고, 일반적으로 활성화되는 것으로부터 공동자극 경로를 방해할 수 있는 임의의 억제제. 이것은 CD28, CD80, CD86, CTLA-4, 특히 공동자극 경로의 다른 구성원의 소분자 억제제; CD28, CD80, CD86, CTLA-4, 특히 공동자극 경로의 다른 구성원에 대해 지시된 항체; CD28, CD80, CD86, CTLA-4, 특히 공동자극 경로의 다른 구성원에 대해 지시된 안티센스 분자; CD28, CD80, CD86, CTLA-4, 특히 공동자극 경로의 다른 구성원에 대해 지시된 애드넥틴, CD28, CD80, CD86, CTLA-4, 특히 공동자극 경로의 다른 구성원의 RNAi 억제제(단일 및 이중 가닥 둘 다), 특히 CTLA-4 억제제를 반드시 포함한다.
일부 구현예에서 CTLA-4 억제제는 약 10-6 M 이하, 10-7M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 예를 들어, 10-13 M 내지 10-16 M, 또는 상기 언급된 값 중 임의의 2개를 종료점으로 갖는 임의의 범위 내의 Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 구현예에서 CTLA-4 억제제는 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 이필리무맙의 10-배 이하인 Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 구현예에서 CTLA-4 억제제는 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 이필리무맙과 동일하거나 그보다 낮은(예를 들어, 최대 10-배 더 낮거나, 또는 최대 100-배 더 낮은) Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 구현예에서, CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 CTLA-4 억제제에 의한 억제에 대한 IC50 값은 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 각각 CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 이필리무맙-매개 억제보다 10-배 이하 더 크다. 일부 구현예에서, CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 CTLA-4 억제제에 의한 억제에 대한 IC50 값은 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 각각 CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 이필리무맙-매개 억제와 거의 동일하거나 더 낮다(예를 들어, 최대 10-배 더 낮거나, 최대 100-배 더 낮다).
일부 구현예에서 CTLA-4 억제제는 적합한 대조군에 비해 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%, 예를 들어, 50% 내지 75%, 75% 내지 90%, 또는 90% 내지 100%만큼 CTLA-4의 발현을 억제하고/하거나 생물학적 활성을 감소시키기에 충분한 양으로 사용된다. 일부 구현예에서 CTLA-4 경로 억제제는 CD80, CD86, 또는 둘 다에 대한 CTLA-4에 대한 결합을 감소시킴으로써 적합한 대조군에 비해 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%, 예를 들어, 적합한 대조군에 비해 50% 내지 75%, 75% 내지 90%, 또는 90% 내지 100%만큼 CTLA-4의 생물학적 활성을 감소시키기에 충분한 양으로 사용된다. 관심 제제의 효과를 평가하거나 정량화하는 맥락에서 적합한 대조군은 전형적으로 관심 제제, 예를 들어, CTLA-4 경로 억제제에 노출되거나 처리되지 않은(또는 무시할만한 양에 노출되었거나 처리된) 필적할만한 생물학적 시스템(예를 들어, 세포 또는 대상체)이다. 일부 구현예에서 생물학적 시스템은 그 자체의 대조군으로 역할을 할 수 있다(예를 들어, 생물학적 시스템은 제제에 노출되거나 이로 처리되기 전에 평가될 수 있고 노출 또는 처리가 시작되거나 끝난 후의 상태와 비교될 수 있다. 일부 구현예에서 과거의 대조군이 사용될 수 있다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb Co.에서 Yervoy로서 상업적으로 입수가능), 또는 이의 바이오시밀러, 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 당업계에 알려진 바와 같이, 이필리무맙은 기능적 인간 레퍼토리를 생성하기 위해 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 인간 유전자를 갖는 형질전환 마우스로부터 유래된 완전 인간 IgG 1κ 항체인 항-CTLA-4 항체를 지칭한다. 거기 있다. 이필리무맙은 또한 CAS 등록 번호 477202-00-9에 의해, 그리고 PCT 공개 번호 WO 01/14424에 언급될 수 있으며, 이는 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다. 항체 10DI로 개시되어 있다. 구체적으로, 이필리무맙은 쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 함유한다(서열번호:211을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖고 서열번호:210을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가짐). 이필리무맙의 약제학적 조성물은 이필리무맙 및 하나 이상의 희석제, 비히클, 또는 부형제를 함유하는 모든 약제학적으로 허용되는 조성물을 포함한다. 이필리무맙을 함유하는 약제학적 조성물의 예는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2007/67959에 기재되어 있다. 이필리무맙 정맥내로(IV) 투여될 수 있다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 서열번호:208에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:209에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:208 및 서열번호:209에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:210에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:211에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:210 및 서열번호:211에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:210 및 서열번호:211에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:210 및 서열번호:211에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:210 및 서열번호:211에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:210 및 서열번호:211에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:212, 서열번호:213, 및 서열번호:214에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:215, 서열번호:216, 및 서열번호:217에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 CTLA-4 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 결합한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 CTLA-4 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 이필리무맙의 아미노산 서열은 표 23에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 이필리무맙이다.
표 23. 이필리무맙에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 최대 4회 용량으로 3주마다 약 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 4회 용량으로 3주마다 약 10 mg/kg으로 투여된 후, 최대 3년 동안 12주마다 10 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 니볼루맙 3 mg/kg이 투여된 직후 4회 용량으로 3주마다 같은 날에 약 1 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 4회 용량의 조합이 완료된 후, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종 및/또는 신세포 암종에 대한 표준 투약 레지멘에 따라 단일 제제로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 니볼루맙 3 mg/kg이 동일한 날에 30분에 걸쳐 정맥내로 투여된 직후 4회 용량으로 3주마다 30분에 걸쳐 정맥내로 약 1 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 4회 용량의 조합이 완료된 후, 미세부수체 불안정성 높음(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 전이성 결장직장암에 대한 표준 투약 레지멘에 따라 권고된 바와 같이 단일 제제로서 니볼루맙을 투여한다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 니볼루맙 1 mg/kg이 동일한 날에 30분에 걸쳐 정맥내로 투여된 직후 4회 용량으로 3주마다 30분에 걸쳐 정맥내로 약 3 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 4회 용량의 조합이 완료된 후, 간세포 암종에 대한 표준 투약 레지멘에 따라 단일 제제로서 니볼루맙을 투여한다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 2주마다 니볼루맙 3 mg/kg과 함께 6주마다 약 1 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 전이성 비소세포 폐암을 치료하기 위해 3주마다 니볼루맙 360 mg과 함께 6주마다 약 1 mg/kg 및 백금 이중항 화학치료의 2회 주기로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, 이필리무맙은 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙은 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 3주마다 니볼루맙 360 mg과 함께 6주마다 약 1 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
트레멜리무맙(CP-675,206으로도 알려짐)은 완전 인간 IgG2 단클론 항체이며 CAS 번호 745013-59-6을 갖는다. 트레멜리무맙은 미국 특허 번호 6,682,736(본원에 참조로 포함된)에서 항체 11.2.1로 개시되어 있다. 트레멜리무맙의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 각각 서열번호:218 및 219에 제시되어 있다. 트레멜리무맙은 흑색종 및 유방암을 포함한 다양한 종양의 치료를 위한 임상 시험에서 조사되었으며; 여기서 트레멜리무맙은 0.01 내지 15 mg/kg의 용량 범위로 4 또는 12주마다 단일 용량 또는 다중 용량으로 정맥내로 투여되었다. 본 발명에 의해 제공되는 레지멘에서, 트레멜리무맙은 국소로, 특히 피내로 또는 피하로 투여된다. 피내로 또는 피하로 투여되는 트레멜리무맙의 유효량은 전형적으로 사람 당 5 - 200 mg/용량 범위에 있다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙의 유효량은 용량 당 사람 당 10 -150 mg/용량 범위에 있다. 일부 특정 구현예에서, 트레멜리무맙의 유효량은 사람 당 약 10, 25, 37.5, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 또는 200 mg/용량이다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 서열번호:218에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:219에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:218 및 서열번호:219에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:220에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:221에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:220 및 서열번호:221에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:220 및 서열번호:221에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:220 및 서열번호:221에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:220 및 서열번호:221에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:220 및 서열번호:221에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:222, 서열번호:223, 및 서열번호:224에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:225, 서열번호:226, 및 서열번호:227에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 CTLA-4 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 항-CTLA-4 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 트레멜리무맙의 아미노산 서열은 표 24에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다.
표 24. 트레멜리무맙에 대한 아미노산 서열.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙 또는 이의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4, 또는 5주에 시작된다. 일부 구현예에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주에 시작된다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 Agenus의 잘리프렐리맙, 또는 이의 바이오시밀러, 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 잘리프렐리맙은 완전 인간 단클론 항체이다. 잘리프렐리맙은 화학 초록 서비스(CAS) 등록 번호 2148321-69-9로 지정되고 또한 AGEN1884로도 알려져 있다. 잘리프렐리맙의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 10,144,779 및 미국 특허 출원 공개 번호 US2020/0024350 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 서열번호:228에 의해 주어진 중쇄 및 서열번호:229에 의해 주어진 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일-쇄 가변 단편(scFv), 변이체, 또는 접합체를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:228 및 서열번호:229에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 잘리프렐리맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호:230에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 억제제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:231에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:230 및 서열번호:231에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:230 및 서열번호:231에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:230 및 서열번호:231에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:230 및 서열번호:231에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:230 및 서열번호:231에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 각각 서열번호:231, 서열번호:233, 및 서열번호:234에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호:235, 서열번호:236, 및 서열번호:237에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항체는 전술된 항체 중 임의의 것과 같은 CTLA-4 상의 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, 이에 결합한다.
구현예에서, CTLA-4 억제제는 잘리프렐리맙과 관련하여 약물 규제 기관에 의해 승인된 CTLA-4 바이오시밀러 단클론 항체이다. 구현예에서, 바이오시밀러는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 번역후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 번역후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화, 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 잘리프렐리맙의 아미노산 서열은 표 25에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 승인을 받거나 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합 EMA와 같은 약물 규제 기관에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 일부 구현예에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하며, 여기서 참조 의약품 또는 참조 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다.
표 25. 잘리프렐리맙에 대한 아미노산 서열.
추가 항-CTLA-4 항체의 예는 AGEN1181, BMS-986218, BCD-145, ONC-392, CS1002, REGN4659, 및 ADG116을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 이는 당업자에게 알려져 있다.
일부 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 다음 특허 간행물 중 임의의 것에 개시된 항-CTLA-4 항체이며: US 2019/0048096 A1; US 2020/0223907; US 2019/0201334; US 2019/0201334; US 2005/0201994; EP 1212422 B1; WO 2018/204760; WO 2018/204760; WO 2001/014424; WO 2004/035607; WO 2003/086459; WO 2012/120125; WO 2000/037504; WO 2009/100140; WO 2006/09649; WO2005092380; WO 2007/123737; WO 2006/029219; WO 2010/0979597; WO 2006/12168; 및 WO1997020574, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다. 추가 CTLA-4 항체는 미국 특허 번호 5,811,097, 5,855,887, 6,051,227, 및 6,984,720; PCT 공개 번호 WO 01/14424 및 WO 00/37504; 및 미국 공개 번호. 2002/0039581 및 2002/086014; 및/또는 미국 특허 번호 5,977,318, 6,682,736, 7,109,003, 및 7,132,281에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 예를 들어, WO 98/42752; 미국 특허 번호 6,682,736 및 6,207,156; Hurwitz, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 10067-10071(1998); Camacho, 등, J. Clin. Oncol., 2004, 22, 145(초록 번호 2505(2004)(항체 CP-675206); 또는 Mokyr, 등, Cancer Res., 1998, 58, 5301-5304(1998)에 개시된 것들이며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 WO 1996/040915(본원에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같은 CTLA-4 리간드이다.
일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 CTLA-4 발현의 핵산 억제제이다. 예를 들어, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 PCT 공개 번호 WO 1999/032619 및 WO 2001/029058; 미국 공개 번호. 2003/0051263, 2003/0055020, 2003/0056235, 2004/265839, 2005/0100913, 2006/0024798, 2008/0050342, 2008/0081373, 2008/0248576, 및 2008/055443; 및/또는 미국 특허 번호 6,506,559, 7,282,564, 7,538,095, 및 7,560,438(본원에 참조로 포함됨)에 기재된 분자 형태를 취할 수 있다. 일부 경우에, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 유럽 특허 번호 EP 1309726(본원에 참조로 포함됨)에 기재된 이중 가닥 RNAi 분자 형태를 취한다. 일부 경우에, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 미국 특허 번호 7,056,704 및 7,078,196(본원에 참조로 포함됨)에 기재된 이중 가닥 RNAi 분자 형태를 취한다. 일부 구현예에서, CTLA-4 억제제는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2004/081021(본원에 참조로 포함됨)에 기재된 압타머이다.
다른 구현예에서, 본 발명의 항-CTLA-4 RNAi 분자는 미국 특허 번호 5,898,031, 6,107,094, 7,432,249, 및 7,432,250, 및 유럽 출원 번호 EP 0928290(본원에 참조로 포함됨)에 기재된 RNA 분자이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인 단계를 포함하고, CTLA-4 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) CTLA-4 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) CTLA-4 억제제를 포함하는 키트를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인 단계를 포함하고, CTLA-4 억제제 및 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 억제제, 및 (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 억제제, 및 (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 키트를 포함한다.
4. 환자의 림프구고갈 사전 조건화(preconditioning)
구현예에서, 본 발명은 TIL 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 본 개시내용에 따른 TIL의 주입 전에 비골수파괴성 화학치료로 사전 치료된다. 구현예에서, 본 발명은 비골수파괴성 화학치료로 사전 치료된 환자에서 암 치료에 사용하기 위한 TIL 집단을 포함한다. 구현예에서, TIL 집단은 주입에 의한 투여를 위한 것이다. 구현예에서, 비골수파괴성 화학치료는 3일 동안(TIL 주입 전 27일 및 26일차) 사이클로포스파미드 60 mg/kg/d 및 5일 동안(TIL 주입 전 27일 내지 23일차) 플루다라빈 25 mg/m2/d이다. 구현예에서, 본 개시내용에 따른 비골수파괴성 화학치료 및 TIL 주입(0일차에) 후, 환자는 생리학적 내성까지 8시간마다 720,000 IU/kg으로 정맥내로 IL-2(알데스류킨, PROLEUKIN로 상업적으로 입수가능)의 정맥내 주입을 받는다. 특정 구현예에서, TIL 집단은 IL-2와 조합하여 암을 치료하는 데 사용하기 위한 것이며, 여기서 IL-2는 TIL 집단 후에 투여된다.
실험적 발견은 종양-특이적 T 림프구의 입양 전달 전에 림프구고갈이 조절 T 세포 및 면역계의 경쟁 요소를 제거함으로써('사이토카인 싱크') 치료 효능을 향상시키는 데 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일부 구현예는 본 발명의 TIL의 도입 전에 환자에게 림프구고갈 단계 (때때로 "면역억제 조건화"로도 언급됨)를 활용한다.
일반적으로, 림프구고갈은 플루다라빈 또는 사이클로포스파미드(활성 형태는 마포스파미드로 언급됨) 및 이의 조합의 투여를 사용하여 달성된다. 이러한 방법은 Gassner, 등, Cancer Immunol. Immunother. 2011, 60, 75-85, Muranski, 등, Nat. Clin. Pract. Oncol., 2006, 3, 668-681, Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-5239, 및 Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-2357에 기재되어 있으며, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 플루다라빈은 0.5 μg/mL 내지 10 μg/mL 플루다라빈의 농도로 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 1 μg/mL 플루다라빈의 농도로 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈 치료는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 또는 그 이상 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 10　mg/kg/일, 15　mg/kg/일, 20　mg/kg/일¸ 25　mg/kg/일, 30　mg/kg/일, 35　mg/kg/일, 40　mg/kg/일, 또는 45　mg/kg/일의 투여량을 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈 치료는 35　mg/kg/일로 2-7일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈 치료는 35　mg/kg/일로 4-5일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈 치료는 25　mg/kg/일로 4-5일 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 사이클로포스파미드의 활성 형태인 마포스파미드는 사이클로포스파미드의 투여에 의해 0.5 μg/mL -10　μg/mL의 농도로 수득된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드의 활성 형태인 마포스파미드는 사이클로포스파미드의 투여에 의해 1 μg/mL의 농도로 수득된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드 치료는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 또는 그 이상 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 100　mg/m2/일, 150　mg/m2/일, 175　mg/m2/일¸ 200　mg/m2/일, 225　mg/m2/일, 250 mg/m2/일, 275　mg/m2/일, 또는 300　mg/m2/일의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 정맥내로(즉, i.v.) 투여된다 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드 치료는 35　mg/kg/일로 2-7일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드 치료는 250　mg/m2/일 i.v로 4-5일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드 치료는 250　mg/m2/일 i.v로 4일 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구고갈은 환자에게 플루다라빈 및 사이클로포스파미드를 함께 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 25　mg/m2/일 i.v.로 투여되고 사이클로포스파미드는 4일에 걸쳐 250　mg/m2/일 i.v.로 투여된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 이틀에 투여되고, 여기서 림프구고갈은 총 5일 내에 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 약 50 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로서 수행되며, 여기서 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 이틀에 투여되고, 여기서 림프구고갈은 총 5일 내에 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 약 50 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 20 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 이틀에 투여되고, 여기서 림프구고갈은 총 5일 내에 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 약 40 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 20 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 이틀에 투여되고, 여기서 림프구고갈은 총 5일 내에 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 약 40 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 15 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 이틀에 투여되고, 여기서 림프구고갈은 총 5일 내에 수행된다.
구현예에서, 림프구고갈은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행된다.
구현예에서, 사이클로포스파미드는 메스나(mesna)와 함께 투여된다. 구현예에서, 메스나는 15 mg/kg으로 투여된다. 메스나가 주입되는 구현예에서, 연속으로 주입되는 경우, 메스나는 사이클로포스파미드와 함께 대략 2시간에 걸쳐 주입된 다음(-5일 및/또는 -4일차), 각 사이클로포스파미드 용량과 동시에 시작하여 24시간에 걸쳐 나머지 22시간 동안 3 mg/kg/시간의 속도로 주입될 수 있다.
구현예에서, 림프구고갈은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 다음 날에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함한다.
구현예에서, 림프구고갈은 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 당일에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 림프구고갈은 5일의 사전 조건화 치료를 포함한다. 일부 구현예에서, 일은 -5일차 내지 -1일차, 또는 0일차 내지 4일차로 표시된다. 일부 구현예에서, 레지멘은 -5일차 및 -4일차(즉, 0일차 및 1일차)에 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 -5일차 및 -4일차(즉, 0일차 및 1일차)에 정맥내 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 -5일차 및 -4일차(즉, 0일차 및 1일차)에 60 mg/kg 정맥내 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 메스나와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 레지멘은 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 -5일차 및 -1일차(즉, 0일차 내지 4일차)에 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 레지멘은 -5일차 및 -1일차(즉, 0일차 내지 4일차)에 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 26에 따라 투여된다.
표 26. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 27에 따라 투여된다.
표 27. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 28에 따라 투여된다.
표 28. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 29에 따라 투여된다.
표 29. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 30에 따라 투여된다.
표 30. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 31에 따라 투여된다.
표 31. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 32에 따라 투여된다.
표 32. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 표 33에 따라 투여된다.
표 33. 예시적인 림프구고갈 및 치료 레지멘.
일부 구현예에서, 골수파괴성 림프구고갈 레지멘의 전술한 구현예와 함께 사용되는 TIL 주입은 본원에 기재된 바와 같이 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하여 본원에 기재된 임의의 TIL 조성물일 수 있고, TIL 주입 대신 MIL 및 PBL의 주입, 뿐만 아니라 IL-2 레지멘의 추가 및 본원에 기재된 바와 같은 공동 요법(예컨대 PD-1 및 PD-L1 억제제)의 투여를 또한 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입일 전 1, 2, 또는 3일 과정에 걸쳐 100 mg/m2의 총 용량으로 투여되는 멜팔란(melphalan)을 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입일 전 1, 2, 또는 3일 과정에 걸쳐 200 mg/m2의 총 용량으로 투여되는 멜팔란을 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입일 전 1, 2, 또는 3일 과정에 걸쳐 100 mg/m2의 총 용량을 투여되는 멜팔란 및 30 mg/m2/일의 용량으로 투여되는 플루다라빈을 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입일 전 1, 2, 또는 3일 과정에 걸쳐 200 mg/m2의 총 용량으로 투여되는 멜팔란 및 30 mg/m2/일의 용량으로 투여되는 플루다라빈을 포함한다.
일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 항-CD45 항체의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 항-CD45 항체-약물 접합체의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 항-CD45 항체-방사성 동위원소 접합체의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 아파미스타맙-131I의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입 전 2 내지 9일에 25 mCi, 50 mCi, 75 mCi, 100 mCi, 150 mCi, 또는 200 mCi의 용량으로 투여되는 아파미스타맙-131I를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입 전 2 내지 9일에 25 mCi 내지 200 mCi의 용량으로 투여되는 아파미스타맙-131I를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입 전 4 내지 8일에 50 mCi 내지 150 mCi의 용량으로 투여되는 아파미스타맙-131I를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입 전 약 6일에 약 75 mCi의 용량으로 투여되는 아파미스타맙-131I를 포함한다. 일부 구현예에서, 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘은 TIL 주입 전 약 7일에 약 100 mCi의 용량으로 투여되는 아파미스타맙-131I를 포함한다.
일부 구현예에서, 골수파괴성 림프구고갈 레지멘의 전술한 구현예와 함께 사용되는 TIL 주입은 본원에 기재된 바와 같이 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하여 본원에 기재된 임의의 TIL 조성물일 수 있고, TIL 주입 대신 MIL 및 PBL의 주입, 뿐만 아니라 항-CD52 항체 알렘투주맙, 또는 이의 변이체, 단편, 항체-약물 접합체, 또는 바이오시밀러를 포함하는 대안적인 림프구고갈 레지멘의 첨가를 또한 포함할 수 있다.
5. IL-2 레지멘
구현예에서, IL-2 레지멘은 고용량 IL-2 레지멘을 포함하며, 여기서 고용량 IL-2 레지멘은 TIL의 치료 집단의 치료적 유효 부분을 투여한 다음 날에 시작하여 정맥내로 투여된 알데스류킨, 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체를 포함하고, 여기서 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체는 내성이 생길 때까지, 최대 14회 용량으로 8시간마다 15-분 볼루스 정맥내 주입을 사용하여 0.037 mg/kg 또는 0.044 mg/kg IU/kg(환자 체질량)의 용량으로 투여된다. 9일 휴식 후, 이 일정은 또 다른 14회 용량을 반복하여, 최대 총 28회 용량이 될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6회 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, IL-2는 최대 6회 용량까지 투여량으로 투여된다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 점점 줄어드는 IL-2 레지멘을 포함한다. 점점 줄어드는 IL-2 레지멘은 O'Day, 등, J. Clin. Oncol. 1999, 17, 2752-61 및 Eton, 등, Cancer 2000, 88, 1703-9에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 점점 줄어드는 IL-2 레지멘은 6시간에 걸쳐 정맥내로 투여된 18 x 106 IU/m2 알데스류킨, 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체, 이어서 12시간에 걸쳐 정맥내로 투여된 18 x 106 IU/m2, 이어서 24시간에 걸쳐 정맥내로 투여된 18 x 106 IU/m2, 이어서 72시간에 걸쳐 정맥내로 투여된 4.5 x 106 IU/m2를 포함한다. 이 치료 주기는 최대 4 주기 동안 28일마다 반복될 수 있다. 구현예에서, 점점 줄어드는 IL-2 레지멘은 1일차에 18,000,000 IU/m2, 2일차에 9,000,000 IU/m2, 및 3 및 4일차에 4,500,000 IU/m2를 포함한다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 저용량 IL-2 레지멘을 포함한다. Dominguez-Villar and Hafler, Nat. Immunology 2000, 19, 665-673; Hartemann, 등, Lancet Diabetes Endocrinol. 2013, 1, 295-305; 및 Rosenzwaig, 등, Ann. Rheum. Dis. 2019, 78, 209-217에 기재된 저용량 IL-2 레지멘을 포함하여, 당업계에 알려져 있는 임의의 저용량 IL-2 레지멘이 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 저용량 IL-2 레지멘은 5일 동안 연속 주입으로 투여된 24시간 당 알데스류킨, 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체의 m2 당 18 x 106 IU, 이어서 IL-2 요법 없이 2-6일, 이어서 임의적으로 24시간 당 m2 당 18 x 106 IU의 연속 주입으로 정맥내 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체의 추가 5일, 이어서 임의적으로 IL-2 요법 없이 3주를 포함하며, 이후에 추가 주기가 투여될 수 있다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 페길화된 IL-2의 투여를 포함한다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 벰페갈데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 THOR-707, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 넴발류킨 알파, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 항체 백본에 이식된 IL-2 단편의 투여를 포함한다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 IL-2 저친화성 수용체에 결합하는 항체-사이토카인 이식된 단백질의 투여를 포함한다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 이식된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 항체 사이토카인 이식된 단백질은 조절 T 세포에 비해 T 효과기 세포를 우선적으로 확장시킨다. 구현예에서, 항체 사이토카인 이식된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 이식된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 여기서 항체 사이토카인 이식된 단백질은 조절 T 세포에 비해 T 효과기 세포를 우선적으로 확장시킨다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 서열번호:29 및 서열번호:38로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 서열번호:37 및 서열번호:39로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄의 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체 사이토카인 이식된 단백질은 알데스류킨(Proleukin®) 또는 필적할만한 분자와 같으나 이에 제한되지 않는 야생형 IL-2 분자보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다.
구현예에서, IL-2 레지멘은 항체 백본에 이식된 IL-2 단편의 투여를 포함한다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 IL-2 저친화성 수용체에 결합하는 항체-사이토카인 이식된 단백질의 투여를 포함한다. 구현예에서, IL-2 레지멘은 IL-2Rα 수용체에 대한 결합에 영향을 미치지 않고, 알데스류킨과 비교하여 IL-2Rβ 및/또는 IL-2Rγ 수용체에 대한 향상된 결합을 나타내는 항체-사이토카인 이식된 단백질의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 골수파괴성 림프구고갈 레지멘의 전술한 구현예와 함께 사용되는 TIL 주입은 본원에 기재된 임의의 TIL 조성물일 수 있고 TIL 주입 대신 MIL 및 PBL의 주입, 뿐만 아니라 IL-2 레지멘의 첨가 및 본원에 기재된 공동 요법(예컨대 PD-1 및 PD-L1 억제제)의 투여를 또한 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인, 단계를 포함하고, IL-2 레지멘을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) IL-2 레지멘을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) IL-2 레지멘을 포함하는 키트를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인, 단계를 포함하고, IL-2 레지멘 및 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 레지멘, 및 (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 레지멘, 및 (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 키트를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인, 단계를 포함하고, CTLA-4 억제제 및 IL-2 레지멘을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 억제제, 및 (iii) IL-2 레지멘을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 억제제, 및 (iii) IL-2 레지멘을 포함하는 키트를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TIL 레지멘을 투여하되, 여기서 TIL 레지멘은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인, 단계를 포함하고 IL-2 레지멘, CTLA-4 억제제, 및 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 레지멘, (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제, 및 (iv) CTLA-4 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 레지멘, (iii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제, 및 (iv) CTLA-4 억제제를 포함하는 키트를 포함한다.
VIII. 키메라 공동자극 수용체
일부 구현예에서, Gen 2 및 Gen 3, 및 TIL, MIL, 및 PBL를 제조하는 다른 프로세스를 포함하는 전술한 제조 프로세스는 본원에 기재된 하나 이상의 CCR을 발현하기 위한 TIL, MIL, 또는 PBL의 바이러스 또는 비바이러스 형질도입을 포함하는 단계를 포함하도록 변형될 수 있다. 구현예에서, CCR은 세포외 결합 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 세포외 결합 도메인 및 하나 이상의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 세포외 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 세포외 결합 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 다중 연결된 도메인을 함유하는 단일 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, CCR은 전환 수용체이다. 일부 구현예에서, CCR은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0388468 A1에 기재된 바와 같은 하나 이상의 폴리펩티드 도메인을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 다른 구현예에서, CCR은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2020/152451 A1에 기재된 바와 같은 하나 이상의 폴리펩티드 도메인을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 TIL, MIL, 또는 PBL 제조 프로세스와 조합하여 사용되는 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 형식의 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 TIL, MIL, 또는 PBL 제조 프로세스와 조합하여 사용되는 본 발명의 CCR CCR은 도 34에 제시된 바와 같이 서로 작동가능하게 연결된 도 34에 제시된 도메인을 포함한다.
A. 세포외 도메인
구현예에서, CCR은 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 종양 연관 단백질에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 세포 표면 분자에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 세포외 분자에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 항원에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 CD274로도 알려져 있고 PDCD1에 의해 코딩되는 PD-L1에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 CD274로도 알려져 있는 PD-L1에 결합하는 PD-1 도메인이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 항원에 결합하며, 여기서 종양 연관 항원은 신생항원이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 항원에 결합하며, 여기서 종양 연관 항원은 펩티드-주요 조직적합성 복합체이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 종양 연관 항원에 결합하며, 여기서 종양 연관 항원은 열 충격 단백질 펩티드 복합체이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM(CD326), PD-1, PD-L1(CD274), PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질에 결합한다.
일부 구현예에서, 세포외 결합은 종양 연관 항원에 결합할 수 있는 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM(CD326), PD-1, PD-L1(CD274), PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, B7-H3, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질에 결합할 수 있는 VH 및 VL 쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 보존적 아미노산 치환을 통해서와 같이 기능적으로 동등한 분자를 생성하기 위해 본원에 개시된 scFv 아미노산 서열의 변형을 포함한다. 예를 들어, CCR 내에 포함되는 scFv 결합 도메인의 VH 또는 VL은 scFv의 시작 VH 또는 VL 프레임워크 영역의 적어도 약 70%, 71%. 72%. 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 유지하도록 변형될 수 있다. 본 발명은 또한 기능적으로 동등한 분자를 생성하기 위해 CCR 작제물의 다양한 도메인의 하나 이상의 아미노산 서열의 변형과 같은 전체 CCR 작제물의 변형을 포함한다.
구현예에서, 세포외 도메인은 인간 종양 연관 항원에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 종양 연관 세포 표면 분자에 결합한다.
일부 구현예에서, 세포외 도메인은 약 100 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 90 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 80 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 70 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 50 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 40 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 30 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 20 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 10 pM 이하의 KD로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 세포외 도메인은 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 7.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 8 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 8.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 9 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 9.5 x 105 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 1 x 106 1/M·s 또는 더 빠른 kassoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 세포외 도메인은 약 2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.1 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.2 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.4 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.5 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.6 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.7 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.8 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 2.9 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합하거나, 약 3 x 10-5 1/s 또는 더 느린 kdissoc로 인간 또는 뮤린 종양 연관 항원에 결합한다.
CCR에 대한 세포외 scFv 도메인으로서 본원에 기재된 VH 및 VL 도메인와 함께 사용하기에 적합한 링커 서열은 표 34에 제시되어 있다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 링커 서열에 의해 VL 결합 도메인에 연결된 VH 결합 도메인을 포함하는 scFv를 포함하는 세포외 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 scFv는 다음 형식을 갖는다: (VH)-(scFv 링커)-(VL)-(작제물의 나머지). 일부 구현예에서, 본 발명의 scFv는 다음 형식을 갖는다: (VL)-(링커)-(VH)-(작제물의 나머지). 일부 구현예에서, 링커는 표 34에 주어진 링커로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:238, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과의 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:239, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:240, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:241, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:242, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:243, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다.
표 34. scFv 링커 서열의 아미노산 서열.
CCR에 대한 세포외 scFv 도메인으로서 본원에 기재된 VH 및 VL 도메인과 함께 사용하기에 적합한 추가 링커 서열은 표 8에 주어진다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:63, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:64, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:65, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:66, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:67, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:68, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:69, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:70, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:71, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:72, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다.
CCR에 대한 세포외 도메인으로서 본원에 기재된 scFv에서 VH 및 VL 도메인과 함께 사용하기에 적합한 추가 링커 서열은 표 9에 주어진다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:74, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:75, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:76, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 또는 95% 초과 상동성을 갖는 서열이다.
CCR의 세포외 도메인 대한 scFv 도메인의 구축에 사용하기에 적합한 대안적인 링커 서열은 Bird, 등, Science 1988, 242, 423-426에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 신호 펩티드를 포함한다. 이론에 얽매이지 않고, 신호 펩티드를 포함하는 CCR은 세포 내에서 발현 시, 소포체로 향하고 후속적으로 세포 표면으로 향하여 발현될 수 있다. 구현예에서, 신호 펩티드는 CCR의 아미노 말단에 있을 수 있다. 당업계에 알려져 있는 임의의 적합한 신호 펩티드는 미국 특허 번호 9,856,322 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0321404 A1, US 2019/0002573 A1, US 2020/0024342 A9, 및 US 2020/0078399 A1에 기재된 것들과 같이 본 발명의 CCR과 함께 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 다른 적합한 신호 펩티드가 실시예를 포함하여 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
1. 세포외 PD-1 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 PD-1 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 융합 단백질을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 TIL 집단에서 면역 반응의 활성화를 방지하거나 세포자멸사를 유도하는 음성 신호와 연관된 PD-1과 같은 억제 폴리펩티드의 세포외 도메인의 적어도 일부이고, 여기서 세포내 도메인은 CD28과 같은 면역 세포를 활성화하는 양성 신호와 연관된 자극 폴리펩티드의 세포내 도메인의 적어도 일부이고, 추가로 여기서 융합 단백질은 상기 세포 상에 나타날 때 음성 면역 반응을 양성 면역 반응으로 전환하기 위해 면역 세포에서 상기 음성 신호를 상기 양성 신호로 전환시킬 수 있다.
예시적인 PD-1 도메인의 아미노산 서열은 표 35에 제공되어 있다. 이들 도메인을 사용하는 예시적인 PD-1 CCR 작제물은 도 35에 제시되어 있다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 35 또는 도 36에 제시된 바와 같은 세포외 PD-1 도메인을 포함한다. PD-1 도메인 및 PD-1 전환 CCR 작제물로도 언급되는 이러한 도메인을 사용하는 CCR 작제물은 이들의 제조, 특성화, 및 사용 방법을 포함하여 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0345219 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 구현예에서, PD-1 전환 CCR 작제물은 Gen 2 프로세스의 pre-REP 내지 REP 단계 사이의 기간 동안을 포함하여, Gen 2, Gen 3, 또는 다른 TIL 제조 프로세스 동안 TIL에 형질도입된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:244, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:244, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과의 상동성을 갖는 서열을 포함하는 세포외 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:245, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 세포외 및 막관통 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:245, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과의 상동성을 갖는 서열을 포함하는 세포외 및 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:246, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 세포외 및 막관통 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:246, 또는 이에 대해 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과의 상동성을 갖는 서열을 포함하는 세포외 및 막관통 도메인을 포함한다.
표 35. 예시적인 PD-1 세포외 도메인의 아미노산 서열.
예시적인 PD-1 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 36에 제공되어 있다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 및 막관통 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 및 막관통 도메인은 서열번호:247의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 PD-1 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 및 막관통 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 및 막관통 도메인 서열번호:247의 적어도 약 70%, 적어도 약 71%, 적어도 약 72%, 적어도 약 73%, 적어도 약 74%, 적어도 약 75%, 적어도 약 76%, 적어도 약 77%, 적어도 약 78%, 적어도 약 79%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 동일성을 유지하는 도메인을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 표 36의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 및 막관통 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 및 막관통 도메인은 서열번호:248의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 PD-1 및 CD28 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 및 막관통 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 및 막관통 도메인 서열번호:248의 적어도 약 70%, 적어도 약 71%, 적어도 약 72%, 적어도 약 73%, 적어도 약 74%, 적어도 약 75%, 적어도 약 76%, 적어도 약 77%, 적어도 약 78%, 적어도 약 79%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 동일성을 유지하는 도메인을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 표 36의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 36. 선택된 예시적인 세포외 PD-1 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 Liu, 등, Cancer Res. 2016, 76, 1578-90에 기재된 바와 같은 PD-1 전환 작제물을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2018/119298 A1에 기재된 바와 같은 PD-1 전환 작제물을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
2. 세포외 PD-L1 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 PD-L1 결합 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 세포외 항-PD-L1 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 scFv 항체 38A1 및 19H9를 포함하며, 이러한 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하여 특성 및 제조는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0298770 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 항-PD-L1 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 37에 제공되어 있다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인이고, 여기서 VH 도메인은 서열번호:250, 서열번호:259, 및 이의 보존적 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 VL 도메인은 서열번호:251, 서열번호:260, 및 이의 보존적 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
표 37. 예시적인 세포외 PD-L1 결합 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 scFv 항체 38A1, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:249에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하여, 여기서 VH 도메인은 서열번호:250에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:251에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:250 및 서열번호:251에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:252, 서열번호:253, 및/또는 서열번호:254에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:255, 서열번호:256, 및/또는 서열번호:257에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 scFv 항체 19H9, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 서열번호:258에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:259에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:260에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:259 및 서열번호:260에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:261, 서열번호:262, 및/또는 서열번호:263에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:264, 서열번호:265, 및/또는 서열번호:266에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 더발루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:180에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:181에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:180 및 서열번호:181에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:182, 서열번호:183, 및/또는 서열번호:184에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:185, 서열번호:186, 및/또는 서열번호:187에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 아벨루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:190에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:191에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:190 및 서열번호:191에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:192, 서열번호:193, 및/또는 서열번호:194에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:195, 서열번호:196, 및/또는 서열번호:197에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 아테졸리주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:200에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:201에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:200 및 서열번호:201에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 scFv 도메인은 각각 서열번호:202, 서열번호:203, 및/또는 서열번호:204에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:205, 서열번호:206, 및/또는 서열번호:207에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-PD-L1 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0048085 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-PD-L1 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,604,581에 기재된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
3. 세포외 CEA 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 본원에서 항-CEA 도메인으로도 언급되는 암종배아성 항원(CEA) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 CD66 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 CD66a 결합 도메인, CD66b 결합 도메인, CD66c 결합 도메인, CD66d 결합 도메인, CD66e 결합 도메인, 및 CD66f 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 CD66 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, CEA 또는 CD66 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, CEA 결합 도메인은 뮤린 CEA에 결합한다. 구현예에서, CEA 결합 도메인은 인간 CEA에 결합한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-CEA VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다. 구현예에서, CEA 결합 도메인은 미국 특허 번호 8,470,994에 기재된 CDR, VH, 및 VL 도메인으로부터 제조된 scFv 항체를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 CEA 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 38에 제공되어 있다.
표 38. 예시적인 세포외 CEA 결합 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:267에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:268에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:267 및 서열번호:268에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-CEA scFv 도메인은 각각 서열번호:269, 서열번호:270, 및/또는 서열번호:271에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:272, 서열번호:273, 및/또는 서열번호:274에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-CEA 결합 도메인은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2020/152451 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-CEA 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2009/0117108 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-CEA 결합 도메인은 미국 특허 번호 5,081,235에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-CEA 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,865,243에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
4. 세포외 CD73 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 본원에서 항-CD73 도메인으로도 알려진 CD73 결합 도메인을 포함한다. 엑토-5'-뉴클레오티다제 또는 엑토-5'NT로도 알려진 CD73은 내피 세포 및 조혈 세포의 하위집합에서 발현되는 글리코실-포스파티딜이노시톨(GPI)-연결 세포 표면 효소이다. Resta, 등, Immunol. Rev. 1998 , 161, 95-109. CD73은 세포외 뉴클레오시드 모노포스페이트의 아데노신과 같은 뉴클레오시드로의 탈인산화를 촉매하는 것으로 알려져 있으며, 이는 많은 암의 증식 및 이동을 조절하고 항종양 T 세포의 조절을 통해 면역 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다. Zhang, 등, Cancer Res. 2010, 70, 6407-11). CD73은 결장암, 폐암, 췌장암, 난소암, 방광암, 백혈병, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 갑상선암, 식도암, 전립선암 및 유방암을 포함하여 많은 상이한 암에서 발현되고 발현된다. Jin, 등, Cancer Res. 2010 , 70, 2245-55; Stagg, 등, Proc. Nat'l. Acad. Sci. 2010, 107, 1547-52. 더욱이, 암에서의 CD73 발현은 증가된 증식, 이동, 혈관신생, 침습성, 전이, 및 더 짧은 환자 생존과 연관되었다. 구현예에서, CD73 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, CD73 결합 도메인은 뮤린 CD73에 결합한다. 구현예에서, CD73 결합 도메인은 인간 CD73에 결합한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-CD73 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, 항-CD73 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,287,362; 10,556,968; 및 10,864,269에 기재된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며; 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 CD73 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 39에 제공되어 있다.
표 39. 예시적인 세포외 CD73 결합 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:275에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:276에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:275 및 서열번호:276에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:277, 서열번호:278, 및/또는 서열번호:279에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:280, 서열번호:281, 및/또는 서열번호:282에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-CD73 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,388,249에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며; 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 추가 예시적인 CD73 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 40에 제공되어 있다.
표 40. 예시적인 세포외 CD73 결합 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:283에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:284에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:283 및 서열번호:284에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-CD73 scFv 도메인은 각각 서열번호:277, 서열번호:278, 및/또는 서열번호:279에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:280, 서열번호:281, 및/또는 서열번호:282에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-CD73 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,822,426에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-CD73 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0284293 A1에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-CD73 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0392243 A1에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
5. 세포외 TROP-2 결합 도메인
구현예에서, CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 인간 TROP-2에 결합할 수 있는 도메인이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 TACSTD2에 의해 암호화되는 영양막 세포-표면 항원-2, 종양 연관 칼슘 신호 형질변환기 2 또는 상피 당단백질-1 항원(EGP-1)으로도 알려진 인간 TROP-2에 결합한다. ERK-MAPK 경로 및 PI3K-AKT 경로의 활성화를 포함하여 TROP-2의 기능 및 종양 발병기전에서 이의 역할은 Cubas, 등, Mol. Cancer 2010, 9, 253; Gu, 등, Mol. Med. Rep. 2018, 18, 1782-88; 및 McDougall, 등, Dev. Dyn. 2015, 244, 99-109에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 또는 인간 TROP-2에 결합한다. 구현예에서, 세포외 TROP-2 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, TROP-2 scFv 결합 도메인은 뮤린 TROP-2에 결합한다. 구현예에서, TROP-2 scFv 결합 도메인은 인간 TROP-2에 결합한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-TROP-2 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, CCR은 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인을 포함하고 미국 특허 출원 공개 번호 US 2012/0237518 A1에 기재된 바와 같은 VH, VL, 또는 CDR 도메인, 또는 이러한 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 TROP-2 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 41에 제공되어 있다.
표 41. 예시적인 TROP-2 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 99% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 98% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 98% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 97% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 97% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 96% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 96% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 95% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 95% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 90% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 85% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 85% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 서열번호:291, 서열번호:292, 서열번호:293, 서열번호:294, 서열번호:295, 및 서열번호:296으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 80% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:297, 서열번호:298, 서열번호:299, 및 서열번호:300으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일한 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:301, 서열번호:302, 및/또는 서열번호:303에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:304, 서열번호:305, 및/또는 서열번호:306에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, CCR은 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인을 포함하고 서열번호:292에 따른 VH 쇄를 포함한다. 구현예에서, CCR은 서열번호:298에 따른 VH 쇄를 포함하는 세포외 scFv 도메인을 포함하며 여기서 위치 9의 Ala을 Pro으로, 위치 12의 Lys을 Val으로, 위치 20의 Val을 Ile으로, 위치 38의 Arg을 Lys으로, 위치 48의 Met을 Ile으로, 위치 67의 Arg을 Lys으로, 위치 68의 Val을 Ala으로, 위치 70의 Ile을 Leu으로, 위치 95의 Tyr을 Phe으로, 또는 위치 112의 Val을 Leu으로 치환하는 적어도 하나의 아미노산 변형이 서열번호:292의 아미노산 서열에 도입된다. 구현예에서, 세포외 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, CCR은 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인을 포함하고 서열번호:298에 따른 VL 쇄를 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,399,074에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-TROP-2 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,399,074에 개시된 바와 같은 항체 m7E6, h7E6, h7E6_SVG, h7E6_SVGL, m6G11, h6G11, 또는 h6G11-FKG_SF에 대한 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-TROP-2 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,399,074에 개시된 바와 같은 항체 m7E6, h7E6_SVG, h7E6_SVG4, h7E6_SVG19, h7E6_SVG6, h7E6_SVG20, h7E6_SVG22, h7E6_SVG28, h7E6_SVG30, h7E6_SVGL, h7E6_SVGL1, h7E6_SVGL2, h7E6_SVGL3, h7E6_SVGL4, h7E6_SVGL5, h7E6_SVGN, m6G11, h6G11, 또는 h6G11_FKG_SF에 대한 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 TROP-2 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 42에 제공되어 있다.
표 42. 예시적인 TROP-2 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 m7E6의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:307에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:308에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:307 및 서열번호:308에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 h7E6의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:309에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:310에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:309 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 h7E6_SVG의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:311에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:310에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:310에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 h7E6_SVGL의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:311에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:312에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:311 및 서열번호:312에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 m6G11의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:313에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:314에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:313 및 서열번호:314에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 h6G11의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:315에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:316에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:315 및 서열번호:316에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 scFv 항체 h6G11-FKG_SF의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:317에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:318에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:317 및 서열번호:318에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:319, 서열번호:320, 및/또는 서열번호:321에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:322, 서열번호:323, 및/또는 서열번호:324에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
m7E6, h7E6, h7E6_SVG, h7E6_SVGL, m6G11, h6G11, 및 h6G11-FKG_SF의 scFv 도메인에 대한 예시적인 TROP-2 결합 VH 및 VL 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 43에 제공되어 있고 미국 특허 번호 9,399,074에 추가로 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 표 43의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 43. 예시적인 TROP-2 결합 scFv 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 m7E6의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:325에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:326에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:325 및 서열번호:326에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:325 및/또는 서열번호:326은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 h7E6의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:327에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:328에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:327 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:327 및/또는 서열번호:328은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 h7E6_SVG의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:329에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:328에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:328에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 표 43의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:329 및/또는 서열번호:328은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 h7E6_SVGL의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:329에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:330에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:329 및 서열번호:330에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:329 및/또는 서열번호:330은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 m6G11의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:331에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:332에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:331 및 서열번호:332에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:331 및/또는 서열번호:332는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 h6G11의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:333에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:334에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:333 및 서열번호:334에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:333 및/또는 서열번호:334는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 h6G11-FKG_SF의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:335에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:336에 제시된 서열에 의해 암호하된다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:335 및 서열번호:336에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:335 및/또는 서열번호:336은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, CCR은 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인을 포함하고 사시투주맙의 VH, VL, 또는 CDR 도메인, 또는 이의 단편, 유도체, 또는 변이체를 포함한다. 항-TROP-2 단클론 항체인 사시투주맙, 및 이의 VH, VL, CDR 및 이의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 포함한 다른 관련 도메인의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 9,770,517에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 CCR에 사용하기 위한 예시적인 TROP-2 결합 도메인의 아미노산 서열은 표 44에 제공되어 있다.
표 44. 사시투주맙 TROP-2 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 사시투주맙의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인, 또는 이의 단편, 변이체, 유도체, 또는 바이오시밀러를 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:337에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:338에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:337 및/또는 서열번호:338에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 사시투주맙의 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 및/또는 사시투주맙의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TROP-2 scFv 도메인은 각각 서열번호:339, 서열번호:340, 및/또는 서열번호:341에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:342, 서열번호:343, 및/또는 서열번호:344에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
구현예에서, CCR은 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인, 또는 VH 및/또는 VL 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 도메인을 포함하고, 미국 특허 번호 9,062,100; 9,670,287; 9,850,312; 및 10,202,461; 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0144559 A1에 개시되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, CCR은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2008/0131428 A1에 개시된 항체 AR47A6.4.2로부터의 TROP-2에 결합하는 세포외 scFv 도메인, 또는 VH 및/또는 VL 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 도메인을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다
6. 세포외 EPCAM 결합 도메인
구현예에서, CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 상피 세포 부착 분자, 종양 연관 칼슘 신호 형질변환기 1 또는 TACSTD1, CD326, 및 17-A1 항원으로도 알려진 EPCAM에 결합할 수 있는 도메인이다. EPCAM에 결합할 수 있는 도메인은 본원에서 항-EPCAM 도메인으로도 언급된다. 구현예에서, 세포외 도메인은 인간 EPCAM에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 EPCAM에 결합한다. 구현예에서, 세포외 EPCAM 결합 도메인은 인간 EPCAM 또는 뮤린 EPCAM에 결합하는 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-EPCAM VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, EPCAM 결합 도메인은 항체 3-17I scFv, 7-F17 scFv, 12-C15 scFv, 16-G5 scFv, 17-C20 scFv, 및 24-G6 scFv에 대한 scFv 도메인, 및 이의 단편, 변이체, 및 유도체를 포함하며, 각각은 미국 특허 번호 8,637,017에 기재된 바와 같고, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 CCR에 사용하기 위한 예시적인 EPCAM 결합 도메인의 아미노산 서열은 표 45에 제공되어 있다.
표 45. 예시적인 EPCAM 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 3-17I scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:345에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 7-F17 scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:346에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 12-C15 scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:347에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 16-G5 scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:348에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 17-C20 scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:349에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 scFv 항체 24-G6 scFv, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:350에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 99% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 98% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 98% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 97% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 98% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 96% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 96% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 95% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 95% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 90% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 85% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 및 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 85% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 80% 동일한 VH 영역 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체, 서열번호:352, 서열번호:353, 서열번호:354, 서열번호:355, 서열번호:356, 서열번호:357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일한 VL 영역, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체를 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:358, 서열번호:359, 및/또는 서열번호:360에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:361, 서열번호:362, 및/또는 서열번호:363에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
항체 3-17I scFv, 7-F17 scFv, 12-C15 scFv, 16-G5 scFv, 17-C20 scFv, 및 24-G6 scFv에 대한 예시적인 EPCAM 결합 scFv 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열, 및 이의 단편, 변이체, 및 유도체, 뿐만 아니라 추가 scFv 도메인에 대한 VH 및 VL 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 46에 제공되어 있고 미국 특허 번호 8,637,017에 추가로 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 표 46의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 46. 예시적인 EPCAM 결합 scFv 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 3-17I scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:364에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:364는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 7-F17 scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:365에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:365는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 12-C15 scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:366에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:366은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 16-G5 scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:367에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:367은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 17-C20 scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:368에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:368은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 scFv 항체 24-G6 scFv를 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:369에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:369는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환에 의해 암호화되고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:372, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 99% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 99% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 98% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 98% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 97% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 97% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 96% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 96% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 95% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 95% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 90% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 90% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 85% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 85% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 서열번호:370으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 80% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:371, 서열번호:372, 서열번호:373, 서열번호:374, 서열번호:375, 서열번호:376으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 80% 동일한 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, EPCAM 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,388,249에 기재된 바와 같은 scFv, VH, VL, 및 CDR 도메인을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 CCR에 사용하기 위한 예시적인 EPCAM 결합 도메인의 아미노산 서열은 표 47에 제공되어 있다.
표 47. 예시적인 세포외 EPCAM 결합 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:377에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:378에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:377 및 서열번호:378에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM scFv 도메인은 각각 서열번호:379, 서열번호:380, 및/또는 서열번호:381에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:382, 서열번호:383, 및/또는 서열번호:384에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-EPCAM 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,388,249에 개시된 바와 같은 추가 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-EPCAM 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0233536 A1에 개시된 바와 같은 추가 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
7. 세포외 조직 인자 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 본원에서 항-TF 도메인으로도 언급되는 조직 인자(TF) 결합 도메인을 포함한다. TF는 219개의 아미노산 잔기 세포외 영역, 23개의 아미노산 잔기 막관통 영역 및 21개의 아미노산 잔기 세포질 영역을 갖는 막관통 당단백질이며, 이는 인자 VIIa와 함께 혈액 응고를 개시한다. TF는 폐암, 췌장암, 유방암, 결장암, 및 위 암종에서 발현된다. Hu, 등, Oncol. Res. 1994, 6, 321-327; Callander, 등, Cancer 1992, 70, 1194-201. TF의 비정상적으로 높은 발현은 결장직장암, NSCLC, 및 유방암을 포함한 많은 종양의 불량한 분화와 연관되어 있는 것으로 임상적으로 나타났다. Shigernori, 등, Thromb. Haemost. 1998, 80, 894-898; Seto, 등, Cancer 2000, 88, 295-301; Sawada, 등, Br. J. Cancer 1999, 79, 472-477; Kirschmann, 등, Breast Cancer Res. Treat. 1999, 55, 127-136; Schwirzke, 등, Anticancer Res. 1999, 19, 1801-1814. 구현예에서, TF 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, CCR은 인간 TF에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 TF에 결합한다. 구현예에서, 세포외 TF 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-TF VH 및 VL 도메인, 및 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, TF 결합 도메인은 미국 특허 번호 7,993,644에 기재된 CDR, VH, 및 VL 도메인으로부터 제조된 scFv 항체를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, scFv 도메인은 TF260, TF196, TF278, TF277, TF392, 또는 TF9 각각의 VH, VL, 및 CDR 도메인을 포함하여, 항체 TF260, TF196, TF278, TF277, TF392, 또는 TF9의 scFv, VH, VL, 또는 CDR 도메인을 포함하며, 이들 각각의 제조 및 특성은 미국 특허 번호 7,993,644에 개시되어 있고 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, scFv는 티소투맙(tisotumab), 또는 이의 변이체, 단편, 또는 유도체의 scFv, VH, VL, 또는 CDR 도메인을 포함하며, 이의 구조는 본 발명의 구현예에 사용될 수 있는 다른 scFv, VH, VL, 또는 CDR 도메인과 함께 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0169311 A1, US 2019/0315880 A1, US 2020/0246477 A1, 및 US 2021/0030888 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, scFv는 미국 특허 번호 9,168,314에 기재된 항체를 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, scFv는 미국 특허 번호 7,824,677에 기재된 항체이며, 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 TF 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 48에 제공되어 있다.
표 48. 예시적인 조직 인자 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF260의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:385에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:386에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:385 및 서열번호:386에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF196의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:387에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:388에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:387 및 서열번호:388에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF278의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:389에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:390에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:389 및 서열번호:390에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF277의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:391에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:392에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:391 및 서열번호:392에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF394의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:393에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:394에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:393 및 서열번호:394에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 scFv 항체 TF9의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:395에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:396에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:395 및 서열번호:396에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:385, 서열번호:387, 서열번호:389, 서열번호:391, 서열번호:393, 서열번호:395로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:386, 서열번호:388, 서열번호:390, 서열번호:392, 서열번호:394, 서열번호:396으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:397, 서열번호:398, 및/또는 서열번호:399에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:400, 서열번호:401, 및/또는 서열번호:402에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:403, 서열번호:404, 및/또는 서열번호:405에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:406, 서열번호:407, 및/또는 서열번호:408에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:409, 서열번호:410, 및/또는 서열번호:411에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 및/또는 각각 서열번호:412, 서열번호:413, 및/또는 서열번호:414에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:415에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:416에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:415 및 서열번호:416에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하여, 여기서 VH 도메인은 서열번호:417에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:418에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:417 및 서열번호:418에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:419에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:420에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:419 및 서열번호:420에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:421에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:422에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:421 및 서열번호:422에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:415, 서열번호:417, 서열번호:419, 서열번호:421로 이루어진군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:416, 서열번호:418, 서열번호:420, 서열번호:422로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:423에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:424에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:423 및 서열번호:424에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
TF260, TF196, TF278, TF277, TF392, 및 TF9의 scFv 도메인에 대한 예시적인 TF 결합 VH 및 VL 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 49에 제공되어 있고 미국 특허 번호 7,993,644에 추가로 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 표 49의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 49. 예시적인 조직-인자 결합 scFv 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 TF260의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:425에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:426에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:425 및 서열번호:426에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:425 및/또는 서열번호:426은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 TF196의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:427에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:428에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:427 및 서열번호:428에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:427 및/또는 서열번호:428은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 TF278의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:429에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:430에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:429 및 서열번호:430에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:429 및/또는 서열번호:430은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 TF277의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:431에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:432에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:431 및 서열번호:432에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:431 및/또는 서열번호:432는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 TF392의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:433에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:434에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:433 및 서열번호:434에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:433 및/또는 서열번호:434는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 TF9의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:435에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:436에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:435 및 서열번호:436에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:435 및/또는 서열번호:436은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
8. 세포외 LFA-1 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 본원에서 항-LFA-1 도메인으로도 언급되는 림프구 기능 연관 항원 1(LFA-1)로서 알려진 T-세포 인테그린에 결합할 수 있는 도메인을 포함한다. LFA-1의 알파 서브유닛은 CD11a로 알려져 있고, 그의 리간드는 ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, ICAM-4, ICAM-5, 및 JAM-A를 포함한다. LFA-1은 Walling and Kim, Front. Immunol., 2018, 9, 1-10에 보다 상세하게 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 세포외 도메인은 인간 LFA-1에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 LFA-1에 결합한다. 구현예에서, 세포외 LFA-1 결합 도메인은 인간 LFA-1 또는 뮤린 LFA-1에 결합하는 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-LFA-1 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다. 구현예에서, 세포외 도메인은 인간 CD11a(본원에서 항-CD11a로도 언급됨)에 결합한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 CD11a에 결합한다. 구현예에서, 세포외 CD11a 결합 도메인은 인간 CD11a 또는 뮤린 CD11a에 결합하는 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-CD11a VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR의 LFA-1 결합 도메인 또는 CD11a 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0079075 A1에 기재된 항체의 scFv 도메인을 포함한다. 본 발명의 CCR에 사용하기 위한 예시적인 LFA-1 또는 CD11a 결합 도메인의 아미노산 서열은 표 50에 제공되어 있다.
표 50. 예시적인 LFA-1 또는 CD11a 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:437에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:438에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:437 및 서열번호:438에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:439에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:440에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:439 및 서열번호:440에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:437, 서열번호:439, 및 이의 보존적 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:438, 서열번호:440, 및 이의 보존적 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
구현예에서, 항-LFA-1 또는 항-CD11a scFv 도메인은 각각 서열번호:441, 서열번호:442, 및/또는 서열번호:443에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:444, 서열번호:445, 및/또는 서열번호:446에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LFA-1 결합 도메인 또는 항-CD11a 결합 도메인은 오둘리모맙(odulimomab)의 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 또는 유도체, 변이체, 또는 단편, 또는 이의 인간화 변이체를 포함한다. 오둘리모맙은 Creative Biolabs, Inc.(미국 뉴욕주 셜리 소재)로부터 상업적으로 입수가능하다.
구현예에서, 추가 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함한 항-LFA-1 결합 도메인 또는 항-CD11a 결합 도메인은 미국 특허 번호 5,284,931에 개시된 항체로부터 수득되며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 추가 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함한 항-LFA-1 결합 도메인은 M17/4.4(ATCC TIB-217), TS2/18.1.1(ATCC HB-195), TS1/22.1.1.13(ATCC HB-202), TS1/18.1.2.11(ATCC HB-203), LM2/1.6.11(ATCC HB-204), TS2/9.1.4.3(ATCC HB-205), 2E6(ATCC HB-226), BE29G1(ATCC HB-233), TS2/16.2.1(ATCC HB-243), TS2/4.1.1(ATCC HB-244), TS2/7.1.1(ATCC HB-245), S6F1(ATCC HB-9579), M5/114.15.2(ATCC IIB-120), M1/70.15.11.5 HL(ATCC TIB-128), FD441.8(ATCC TIB-213), M17/4.4.11.9(ATCC TIB-217), M18/2.a.12.7(ATCC TIB-218), M17/5.2(ATCC TIB-237), 및 M5/49.4.1(ATCC TIB-238)을 포함하여, ATCC에 기탁된 세포주에 의해 생산된 항체로부터 수득된다.
구현예에서, 항-LFA-1 결합 도메인 또는 항-CD11a 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2008/0038259 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 추가 항체를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
9. 세포외 FAP 결합 도메인
구현예에서, CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 인간 FAP에 결합할 수 있는 도메인이다. 구현예에서, 세포외 도메인은 섬유모세포 활성화 단백질 및 섬유모세포 활성화 단백질 α로도 알려진 인간 FAP에 결합한다. FAP의 기능 및 결합조직형성을 포함한 고형 종양의 종양 간질에서의 역할, 및 유방, 폐, 결장, 췌장, 및 다른 종양에서 발견된 암 연관 섬유모세포 상의 발현은 Liu, 등, Cancer Biol. & Ther. 2012, 13, 123-129에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 세포외 FAP 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, FAP scFv 결합 도메인은 뮤린 FAP에 결합한다. 구현예에서, FAP scFv 결합 도메인은 인간 FAP에 결합한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-FAP VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 FAP 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, FAP 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0233536 A1에 기재된 항-FAP 결합 도메인이며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-FAP 결합 도메인은 BIBH1로도 알려진 시브로투주맙의 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2003/0103968 A1에 개시되어 있고, 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-FAP 결합 도메인은 FAP5의 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2009/0304718 A1에 기재되어 있고, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 FAP 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 51에 제공되어 있다.
표 51. 예시적인 FAP 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 열번호:447에 제시된 서열과 적어도 99% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 98% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 96% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 90% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 85% 동일한 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 서열번호:447에 제시된 서열과 적어도 80% 동일한 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:448에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:449에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:448 및 서열번호:449에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:450에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:451에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 각각 서열번호:450 및 서열번호:451에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:448, 서열번호:450으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:449, 서열번호:451로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
구현예에서, 항-FAP 결합 도메인은 OMTX-705(Oncomatryx SL로부터 입수가능)의 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하고, 이는 미국 특허 번호 10,864,278에 기재되어 있으며, 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
scFv 도메인에 대한 예시적인 FAP 결합 VH 및 VL 도메인 및 CDR 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열는 표 52에 제공되어 있고 미국 특허 출원 공개 번호 US 2003/0103968 A1; US 2009/0304718 A1; 및 US 2019/0233536 A1에 추가로 기재되어 있으며; 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 표 52의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 52. 예시적인 FAP 결합 scFv 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 항-FAP scFv 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 항체 시브로투주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:452에 제시된 서열에 의해 암호화되고 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:453에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-TF scFv 도메인은 각각 서열번호:452 및 서열번호:453에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:452 및/또는 서열번호:453은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
10. 세포외 VISTA 결합 도메인
구현예에서, CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 이론에 얽매이지 않고, 항종양 면역 반응을 억제하는 것으로 여겨진 면역 체크포인트 유전자인 c10orf54, PD-1H 및 B7-H5로도 알려진 T-세포 활성화의 V-도메인-함유 Ig 억제인자(VISTA)에 결합할 수 있는 도메인이다. VISTA 및 그의 특성은 Wang, 등, J. Exp. Med. 2011, 208, 577-92; Nowak, 등, Immunol. Rev. 2017, 276, 66-79; 및 Deng, 등, J. Immunother. Cancer, 2016, 4, 86에 기재되어 있으며; 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. VISTA는 골수 세포 및 T-림프구 상에서 발현되고 이의 과발현은 초기 T-세포 활성화 및 증식의 억제 및 사이토카인 생산 감소와 연관된다. VISTA는 항원 제시 세포 상에서 리간드로서 그리고 T-세포 상에서 수용체로서 역할을 한다. VISTA는 또한 중피종 및 흉막 중피종과 같은 특정 폐암에서 과발현되는 것으로도 알려져 있다. 구현예에서, CCR은 인간 VISTA에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 VISTA에 결합한다. 구현예에서, 세포외 VISTA 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-VISTA VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, scFv 도메인은 1B8, 2C12, 1A12, 또는 3C5 각각의 VH, VL, 및 CDR 도메인, 및 이의 변이체, 유도체, 및 단편을 포함하여, 항체 1B8, 2C12, 1A12, 또는 3C5의 scFv, VH, VL, 또는 CDR 도메인을 포함하며, 이들 각각의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0407449 A1에 기재되어 있고 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 본 발명의 CCR의 VISTA scFv 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0407449 A1에 기재된 VH 및 VL 도메인을 포함하는 scFv 항체를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 VISTA 결합 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열은 표 53에 제공되어 있다.
표 53. 예시적인 VISTA 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 1B8의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:454에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:455에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:454 및 서열번호:455에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 1B1의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:456, 서열번호:457, 및/또는 서열번호:458에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:459, 서열번호:460, 및/또는 서열번호:461에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 2C12의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:462에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:463에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:462 및 서열번호:463에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 2C12의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:464, 서열번호:465, 및/또는 서열번호:466에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:467, 서열번호:468, 및/또는 서열번호:469에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 1A12의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:470에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:471에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:470 및 서열번호:471에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 2C12의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:472, 서열번호:473, 및/또는 서열번호:474에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:475, 서열번호:476, 및/또는 서열번호:477에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 3C5의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:478에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:479에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:478 및 서열번호:479에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 항체 3C5의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 각각 서열번호:480, 서열번호:481, 및/또는 서열번호:482에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:483, 서열번호:484, 및/또는 서열번호:485에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환에 의해 암호화되고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 99% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 99% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 98% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 98% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 97% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 97% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 96% 동일한 VL 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 96% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 95% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 95% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 90% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 90% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 85% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 85% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-VISTA scFv 도메인은 서열번호:454, 서열번호:462, 서열번호:470, 서열번호:478로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 80% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:455, 서열번호:463, 서열번호:471, 서열번호:479로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 80% 동일한 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, scFv 도메인은 항체 1B8, 2C12, 1A12, 3C5, 2B7, 2C12(H), 2C12(L), 1C9, 1D10의 scFv, VH, VL, 또는 CDR 도메인, 및 이의 변이체, 유도체, 및 단편을 포함하며, 이들 각각의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0407449 A1에 기재되어 있고 본원에 참조로 포함된다. 본 발명과 함께 사용하기에 적합한 대안적인 VISTA 결합 도메인의 구축을 위해 이용될 수 있는 다른 서열은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0407449 A1에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-VISTA 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0306024 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
11. 세포외 LRRC15 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 류신 풍부 반복부-함유 단백질 15(LRRC15) 결합 도메인을 포함한다. LRRC15는 알려진 2개의 이소형을 갖는 세포 표면 단백질이며 Purcell, 등, Cancer Res. 2018, 78, 4059-72에 기재된 바와 같이, 유방, 두경부, 폐, 및 췌장 종양을 포함한 많은 고형 종양에서 간질 및 암 연관 섬유모세포 상에서 발현될 뿐만 아니라 육종, 흑색종, 및 교모세포종을 포함한 중간엽 기원의 암 세포 하위집합 상에서 직접적으로 발현되는 것으로 알려져 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, CCR은 인간 LRRC15에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 LRRC15에 결합한다. 구현예에서, 세포외 LRRC15 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-LRRC15 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, 항-LRRC15 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,188,660에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-LRRC15 결합 도메인은 각각 미국 특허 번호 10,188,660에 개시된 바와 같은 항체 huM25, huAD208.4.1, huAD208.12.1, huAD208.14.1, hu139.10, muAD210.40.9, 또는 muAD209.9.1에 대한 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 LRRC15 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 54에 제공되어 있다.
표 54. 예시적인 LRRC15 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huM25의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:486에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:487에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:486 및 서열번호:487에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huM25의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:488, 서열번호:489, 및/또는 서열번호:490에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:491, 서열번호:492, 및/또는 서열번호:493에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.4.1의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:494에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:495에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:494 및 서열번호:495에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.4.1의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:496, 서열번호:497, 및/또는 서열번호:498에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:499, 서열번호:500, 및/또는 서열번호:501에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.12.1의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:502에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:503에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:502 및 서열번호:503에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.12.1의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:504, 서열번호:505, 및/또는 서열번호:506에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:507, 서열번호:508, 및/또는 서열번호:509에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.14.1의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:510에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:511에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:510 및 서열번호:511에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 huAD208.14.1의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:512, 서열번호:513, 및/또는 서열번호:514에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:515, 서열번호:516, 및/또는 서열번호:517에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 hu139.10의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:518에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:519에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:518 및 서열번호:519에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 hu139.10의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:520, 서열번호:521, 및/또는 서열번호:522에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:523, 서열번호:524, 및/또는 서열번호:525에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 muAD210.40.9의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:526에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:527에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:526 및 서열번호:527에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 muAD210.40.9의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:528, 서열번호:529, 및/또는 서열번호:530에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:531, 서열번호:532, 및/또는 서열번호:533에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 muAD209.9.1의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:534에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:535에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:534 및 서열번호:535에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 항체 muAD209.9.1의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 각각 서열번호:536, 서열번호:537, 및/또는 서열번호:538에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:539, 서열번호:540, 및/또는 서열번호:541에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환에 의해 암호화되고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 및 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 99% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 99% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 98% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 98% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 97% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 97% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 96% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 96% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 95% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 95% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 90% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 90% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 85% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 85% 동일한 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-LRRC15 scFv 도메인은 서열번호:486, 서열번호:494, 서열번호:502, 서열번호:510, 서열번호:518, 서열번호:526, 서열번호:534로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 80% 동일한 VH 영역, 및 서열번호:487, 서열번호:495, 서열번호:503, 서열번호:511, 서열번호:519, 서열번호:527, 서열번호:535로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 및 이의 단편, 유도체, 및 변이체와 적어도 80% 동일한 VL 영역을 포함한다.
12. 세포외 B7-H3 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 B7-H3(CD276으로도 알려짐) 결합 도메인을 포함한다. B7-H3(B7 상동성 3)은 항원 제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 당단백질이고 Castellanos, 등, Am. J. Clin. Exp. Immunol. 2017, 6, 66-75에 기재된 바와 같이 면역 회피 및 암 진행 둘 다에서 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 인간에서 엑손 복제는 단일 IgV-IgC-유사 도메인(2IgB7-H3 이소형) 또는 여러 보존된 시스테인 잔기를 함유하는 IgV-IgC-IgV-IgC-유사 도메인(4IgB7-H3 이소형)을 둘 다 갖는 2개의 B7-H3 이소형의 발현을 초래한다. 인간 조직 및 세포주에서 우세한 B7-H3 이소형은 Steinberger, 등, J. Immunol. 2004, 172, 2352-59에 기재된 바와 같은 4IgB7-H3 이소형이며, 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.구현예에서, CCR은 인간 B7-H3에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 인간 4IgB7-H3에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 인간 2IgB7-H3에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 구현예에서, 세포외 도메인은 뮤린 B7-H3에 결합한다. 구현예에서, 세포외 B7-H3 결합 도메인은 scFv 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 작제물을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 항-B7-H3 VH 및 VL 도메인이고, 링커는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예에서, 항-B7-H3 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,730,945에 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 항-B7-H3 결합 도메인은 항체 BRCA84D(BRCA84D-1 및 BRCA84D-2 및 이들의 변이체 포함), BRCA68D, BRCA69D, PRCA157, TES7, OVCA22, GB8, 또는 SG27, 이들의 변이체를 포함한 인간화 또는 뮤린에 대한 VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열, 또는 이러한 서열을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하고, 각각은 미국 특허 번호 10,730,945에 개시된 바와 같으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 B7-H3 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열은 표 55에 제공되어 있다.
표 55. 예시적인 B7-H3 결합 scFv 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 인간화 또는 뮤린 변이체를 포함하는 항체 BRCA84D(BRCA84D-1 및 BRCA84D-2 및 이들의 변이체 포함), BRCA68D, BRCA69D, PRCA157, TES7, OVCA22, GB8, 또는 SG27의 중쇄 가변 영역(VH) 도메인 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 도메인, 또는 이의 변이체, 유도체, 단편, 또는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:542에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:543에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:542 및 서열번호:543에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 인간화 또는 뮤린 변이체를 둘 다 포함하는 항체 BRCA84D(BRCA84D-1 및 BRCA84D-2 및 이들의 변이체 포함), BRCA68D, BRCA69D, PRCA157, TES7, OVCA22, GB8, 또는 SG27의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:544, 서열번호:545, 및/또는 서열번호:546에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및/또는 각각 서열번호:547, 서열번호:548, 및/또는 서열번호:549에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열번호:550에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호:551에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 90% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 85% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 각각 서열번호:550 및 서열번호:551에 제시된 서열과 각각 적어도 80% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
구현예에서, 항-B7-H3 scFv 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 BRCA84D, BRCA69D, PRCA157, BRCA84D-1, hBRCA84D-2VH, hBRCA84D-3VH, hBRCA84D-4VH, chBRCA84D로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 경쇄 가변 영역(VL)은 BRCA84D, BRCA69D, PRCA157, BRCA84D-1, hBRCA84D-2VL, hBRCA84D-3VL, hBRCA84D-4VL, hBRCA84D-5VL, hBRCA84D-6VL, chBRCA84D로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 각각은 미국 특허 번호 10,730,945에 개시된 바와 같으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-B7-H3 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,371,395에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-B7-H3 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,501,544에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 항-B7-H3 결합 도메인은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0338209 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열, 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
13. 다른 세포외 결합 도메인
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 CD44 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-CD44 결합 도메인은 미국 특허 번호 7,361,347; 9,388,249 및 11,220,544 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2004/0048319 A1; US 2005/0214283 A1; US 2007/0237761 A1; US 2010/0092484 A1; US 2012/0201751 A1; 및 US 2020/0291113 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-CD44 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 CD40 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-CD40 결합 도메인은 국제 특허 공개 번호 WO 2018/027025 A1; 미국 특허 공개 번호 2021/0188992 A1 및 2015/0110783 A1; 및 미국 특허 번호 11,001,637 및 10,577,425에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며; 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. CD40 결합 도메인은 또한 CD40 리간드(CD40L) 도메인의 결합 또는 세포외 부분을 포함한다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-CD40 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 ALCAM(CD166) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-ALCAM(항-CD166) 결합 도메인은 미국 특허 번호 9,388,249 및 11,220,544 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2004/0048319 A1 및 US 2020/0291113 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-ALCAM 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 IL-13Rα 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 IL-13Rα1 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 IL-13Rα2 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-IL-13Rα 결합 도메인은 미국 특허 번호 6,428,788; 7,994,302; 8,221,755; 9,315,575; 8,318,910; 9,650,438; 9,828,428; 및 9,587,026; 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0008966 A1; US 2021/0000875 A1; 및 US 2019/0359723 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-IL-13Rα, IL-13Rα1, 또는 IL-13Rα2 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 형질전환 성장 인자 β 수용체(TGFβR) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 TGFβRII(본원에서 TGFβR2로도 언급됨) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TGFβR 결합 도메인은 미국 특허 번호 6,201,108 및 7,579,186; 미국 특허 출원 공개 번호 US 2012/0177666 A1; 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2021/133167 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. TGFβR 결합 도메인은 또한 TGFβ 도메인의 결합 또는 세포외 부분을 포함한다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-TGFβR 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 형질전환 성장 인자 β(TGFβ) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-TGFβ 결합 도메인은 미국 특허 번호 10,947,303; 9,714,285; 및 9,676,863 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2021/0061897 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. TGFβ 결합 도메인은 또한 TGFβRII 도메인을 포함하는 TGFβR 도메인의 결합 또는 세포외 부분을 포함한다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-TGFβ 결합 도메인이 또한 사용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 FAS(또는 Fas) 결합 도메인을 포함한다. 구현예에서, 항-FAS 결합 도메인은 미국 특허 번호 6,086,877; 6,746,673; 및 6,972,323; 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2006/0083738 A1 및 US 2010/0233157 A1에 개시된 바와 같은 scFv, VH 및/또는 VL 서열 또는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 당업계에 알려진 다른 적합한 항-FAS 결합 도메인이 사용될 수 있다.
구현예에서, 본원에 개시된 세포외 도메인 중 임의의 것을 사용하여 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 비에피토프 결합 CCR 작제물을 생성할 수 있다.
B. 막관통 및 힌지 도메인
구현예에서, CCR은 막관통 도메인을 포함한다. 구현예에서, 막관통 도메인은 한쪽 단부에서 CCR의 세포외 도메인에 연결되고 다른쪽 단부에서 CCR의 적어도 하나의 세포내 도메인에 연결된다. 구현예에서, 막관통 도메인은 한쪽 단부에서 CCR의 세포외 도메인에 연결되고 다른쪽 단부에서 CCR의 적어도 하나의 세포내 도메인에 연결된다. 또 다른 구현예에서, CCR은 CCR의 스페이서 또는 힌지 도메인에 융합되어, 그 자체가 CCR의 세포외 도메인에 융합되는 막관통 도메인을 포함하도록 설계된다. 구현예에서, CCR의 도메인 중 하나와 자연적으로 연관되는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형되어 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 이러한 도메인의 결합을 피할 수 있으며, 예를 들어, 임의의 이론에 얽매이지 않고, 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화할 수 있다.
본 발명의 CCR과 함께 사용하는 막관통 도메인은 T-세포 수용체(CD3ζ 포함)의 알파(α), 베타(β), 또는 제타(ζ) 쇄, CD3 엡실론(CD3ε), CD4, CD5, CD8(CD8α 포함), CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, 및 IL-2Rγ의 적어도 막관통 영역(들)으로부터 유래되거나 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 합성일 수 있고, 류신 및 발린과 같은 주로 소수성 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판, 및 발린의 삼중항은 합성 막관통 도메인의 각 단부에 위치할 것이다. 임의적으로, 일부 구현예에서, 2 내지 10개의 아미노산 길이의 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커는 CCR의 막관통 도메인과 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있고, 일부 구현예에서, 이 링커는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 글리신-세린 이중항을 포함할 수 있다. 적합한, 본 발명의 CCR 작제물에 유용한 비제한적인 막관통 도메인은 표 56에 제시되어 있다.
표 56. 예시적인 막관통 및 힌지 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 막관통 도메인 및 임의적으로 힌지 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 도 34에 제시된 바와 같은 막관통 도메인 및 임의적으로 힌지 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 T-세포 수용체(CD3ζ 포함)의 알파(α), 베타(β), 또는 제타(ζ) 쇄, CD3 엡실론(CD3ε), CD4, CD5, CD8(CD8α 포함), CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, IL-2Rγ로 이루어진 군으로부터 선택된 막관통 영역, 및 이의 변이체, 단편, 및 유도체로부터 선택된 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR의 막관통 도메인은 류신 및 발린과 같은 주로 소수성 잔기를 포함할 경우 재조합일 수 있고, 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중항은 재조합 막관통 도메인의 각 단부에 위치할 수 있다. 구현예에서, CCR은 힌지 도메인을 포함한다. 구현예에서, 힌지 도메인은 스페이서 도메인이다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 인간 단백질로부터 유래된 힌지 도메인 또는 스페이서 도메인을 포함한다. 구현예에서, 힌지 도메인 또는 스페이서 도메인은 세포외 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치하고 이에 연결된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 힌지 도메인 없이 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 힌지 도메인이 있거나 없이 막관통 도메인을 포함하는 세포내 도메인 및 세포외 도메인을 포함한다.
일부 경우에, 막관통 도메인은 인간 단백질의 힌지 영역과 같은 힌지 도메인을 통해 CCR의 세포외 영역에 부착될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 인간 Ig(면역글로불린) 힌지, 예컨대, IgG4 힌지, 또는 CD8α 힌지를 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 T-세포 수용체의 알파(α), 베타(β), 또는 제타(ζ) 쇄, CD3 엡실론(CD3ε), CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45,CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, IL-2Rγ로 이루어진 군의 힌지 영역, 및 이의 변이체, 단편, 및 유도체로부터 선택된 힌지 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:552의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:552에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 PD-1 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:553의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:553에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD28 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:554의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:554에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD27 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:555의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:555에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD8α 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:556의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:556에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD8α 힌지 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:557의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:557에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-2Rβ 막관통 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:558의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:558에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 막관통 및 힌지 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:559의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:559에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 힌지 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:560의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:560에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG4 힌지 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:561의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:561에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgD 힌지 도메인을 포함한다.
본 발명의 CCR과 함께 사용하기 위한 예시적인 막관통 및 힌지 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 57에 제공되어 있다. 구현예에서, 표 57의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 57. 예시적인 막관통 및 힌지 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 도메인을 포함하며, 이러한 도메인은 T-세포 수용체의 알파(α), 베타(β), 또는 제타(ζ) 쇄, CD3 엡실론(ε), CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45,CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, IL-2Rγ, 및 이의 변이체, 단편, 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다. 구현예에서, 막관통 및/또는 힌지 도메인은 서열번호:562, 서열번호:563, 서열번호:564, 서열번호:565, 서열번호:566, 서열번호:567, 서열번호:568, 서열번호:569, 서열번호:570, 및 서열번호:571로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드에 의해 암호화된 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 힌지 도메인은 2 내지 40개의 아미노산을 포함하는 링커에 의해 막관통 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 힌지 도메인은 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71, 서열번호:72, 서열번호:74, 서열번호:75, 서열번호:76, 서열번호:238, 서열번호:239, 서열번호:240, 서열번호:241, 서열번호:242, 서열번호:243, 서열번호:587, 및 이의 단편, 변이체, 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 링커에 의해 막관통 도메인에 연결된다. 미국 특허 번호 9,394,368에 기재된 링커와 같은 본원에 개시되거나 당업계에 알려진 대안적인 링커가 또한 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 scFv 도메인을 포함하고, 힌지 도메인은 2 내지 40개의 아미노산을 포함하는 링커에 의해 scFv 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 scFv 도메인을 포함하고, 힌지 도메인은 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71, 서열번호:72, 서열번호:74, 서열번호:75, 서열번호:76, 서열번호:238, 서열번호:239, 서열번호:240, 서열번호:241, 서열번호:242, 서열번호:243, 서열번호:587, 및 이의 단편, 변이체, 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 링커에 의해 scFv 도메인에 연결된다. 미국 특허 번호 9,394,368에 기재된 링커와 같은 본원에 개시되거나 당업계에 알려진 대안적인 링커가 또한 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 scFv 도메인을 포함하고, 막관통 도메인은 2 내지 40개의 아미노산을 포함하는 링커에 의해 scFv 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 scFv 도메인을 포함하고, 막관통 도메인은 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71, 서열번호:72, 서열번호:74, 서열번호:75, 서열번호:76, 서열번호:238, 서열번호:239, 서열번호:240, 서열번호:241, 서열번호:242, 서열번호:243, 서열번호:587, 및 이의 단편, 변이체, 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 링커에 의해 scFv 도메인에 연결된다. 미국 특허 번호 9,394,368에 기재된 링커와 같은 본원에 개시되거나 당업계에 알려진 대안적인 링커가 또한 사용될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 CD40L(CD154) 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다. 적합한 CD40L 막관통 도메인은 Aloui, 등, Int. J. Mol. Sci. 2014, 15(12), 22342-22364 및 미국 특허 번호 10,287,354에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
C. 세포내 도메인
구현예에서, CCR은 본원에서 신호전달 도메인, 공동자극 도메인, 또는 엔도도메인으로도 언급되는 세포내 도메인을 포함한다. 이러한 세포내 도메인은 T 세포에 공동자극 활성화 신호를 제공할 수 있거나 본 발명에 유용한 T 세포에서 대안적인 신호전달 경로를 활성화할 수 있다. 구현예에서, CCR은 세포질인 세포내 도메인을 포함한다. 구현예에서, CCR은 세포질 및 막관통인 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 T-세포 수용체(CD3ζ 포함)의 알파(α), 베타(β), 또는 제타(ζ) 쇄, CD3 엡실론(ε), CD4, CD5, CD8(CD8α 포함), CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45,CD64, CD80, CD86, CD134(OX40), CD137(TNFRSF9, 4-1BB), CD150(SLAM), CD270(HVEM), CD278(ICOS), CD357(GITR), EphB6, STAT3, IL-2R, IL-2Rα, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL18-R1, IL-18RAP, IL-21R, 및 LTBR(림포톡신 β 수용체, TNFRSF3)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 전술한 단백질 서열 중 하나의 전장(신호 펩티드 제외)이 세포내 도메인에 이용된다. 일부 구현예에서, 전술한 단백질 서열 중 하나의 절두된 부분 또는 부분들이 세포내 도메인에 이용된다. 구현예에서, 세포내 도메인은 전장 CD28 서열이다. 본 발명의 CCR 작제물에 유용한 적합한 비제한적인 세포내 도메인은 표 58에 제시되어 있다.
표 58. 예시적인 세포내 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:572의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:572에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD28 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:573의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:573에 주어진 서열과 또는 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD134(OX40) 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:574의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:574에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD278(ICOS) 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:575의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:575에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD137(4-1BB) 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:576의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:576에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD27 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:577의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:577에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD3ζ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:578의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:578에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:579의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:579에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-2Rγ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:580의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:580에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-18R1 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:581의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:581에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-7Rα 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:582의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:582에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-12R1 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:583의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:583에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-12R2 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:584의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:584에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-15Rα 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:585의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:585에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IL-21R 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:586의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:586에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 LTBR 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 막관통 도메인에 직접 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 링커를 통해 막관통 도메인에 연결될 수 있다. 임의적으로, 일부 구현예에서, 2 내지 10개의 아미노산 길이의 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커는 CCR의 막관통 도메인과 세포내 사이에 연결을 형성할 수 있고, 일부 구현예에서, 이 링커는 글리신-세린 이중항, 또는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 다른 대안적인 링커를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호:587, 서열번호:238, 서열번호:239, 서열번호:240, 서열번호:241, 서열번호:242, 서열번호:243, 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71, 서열번호:72, 서열번호:74, 서열번호:75, 및 서열번호:76으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 CCR과 함께 사용하기 위한 예시적인 세포내 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 표 59에 제공되어 있다. 구현예에서, 표 59의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
표 59. 예시적인 세포내 신호전달 도메인의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:588의 서열, 또는 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:588에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 CD28 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:589의 서열, 또는 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:589에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된, OX40 세포내 도메인으로도 언급되는 CD134 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:590의 서열, 또는 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:590에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된, ICOS 세포내 도메인으로도 언급되는 CD278 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:591의 서열, 또는 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:591에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된, 4-1BB 세포내 도메인으로도 언급되는 CD137 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:592의 서열, 또는 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:592에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 CD27 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:593의 서열, 또는 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:593에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 CD3ζ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:594의 서열, 또는 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:594에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:595의 서열, 또는 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:595에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-2Rγ 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:596의 서열, 또는 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:596에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-18R1 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:597의 서열, 또는 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:597에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-7Rα 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:598의 서열, 또는 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:598에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-12R1 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:599의 서열, 또는 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:599에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-12R2 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:600의 서열, 또는 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:600에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-15Rα 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:601의 서열, 또는 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:601에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-21R 세포내 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:602의 서열, 또는 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:602에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-21R 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 IL-21RAP(인터류킨 18 수용체 보조 단백질) 세포내 도메인을 포함한다. IL-18RAP 도메인은 아래 실시예에 기재되어 있고 또한 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0350974 A1에 개시되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0350974 A1의 서열번호:10의 서열, 또는 해당 서열과 적어도 99% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 98% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 97% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 96% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 95% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 90% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 85% 동일하거나, 해당 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 IL-18RAP 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열번호:603의 서열을 포함하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 링커를 통해 막관통 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 막관통 도메인 및 세포외 도메인의 짧은 부분(예를 들어, 1 내지 15개 아미노산 길이)을 포함하도록 확장된 다음, 세포외 결합 도메인의 나머지에 작동가능하게 연결될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 STAT3 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 또는 공동자극 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 JAK-STAT 경로 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 도메인을 포함한다. 적합한 STAT3 및 JAK-STAT 도메인은 Kagoya, 등, Nature Med. 2018, 24, 352-359 및 미국 특허 번호 10,822,392에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 CD40 리간드(CD40L 또는 CD154) 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 또는 공동자극 도메인을 포함한다. 적합한 CD40L 신호전달 도메인은 Aloui, 등, Int. J. Mol. Sci. 2014, 15(12), 22342-22364 및 미국 특허 번호 10,287,354에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
D. 유전자 발현 방법
일부 구현예에서, CCR 또는 케모카인 수용체를 발현하도록 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 하나 이상의 단백질의 생산을 위한 유전자의 안정한 통합 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 레트로바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 감마-레트로바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 아데노바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 아데노 연관 바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 단순 포진 바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 폭스바이러스 바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 HIV-1을 포함하여 인간 면역결핍 바이러스(HIV)를 사용한 렌티바이러스 형질도입을 포함하는 렌티바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 렌티바이러스 형질도입 시스템 및 다른 적합한 바이러스 형질도입 시스템은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, Levine, 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. 2006, 103, 17372-77; Zufferey, 등, Nat. Biotechnol. 1997, 15, 871-75; Dull, 등, J. Virology 1998, 72, 8463-71, 및 미국 특허 번호 5,350,674; 5,585,362; 및 6,627,442에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 감마-레트로바이러스 형질도입 단계를 포함한다. 감마-레트로바이러스 형질도입 시스템은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어, Cepko and Pear, Cur. Prot. Mol. Biol. 1996, 9.9.1-9.9.16, Hawley, 등, Gene Ther. 1994, 1, 136-38에 기재되어 있으며; 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, pQCXIX 레트로바이러스 벡터는 본 발명의 CCR 또는 케모카인 수용체를 발현하도록 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다. 당업계에 알려져 있는 다른 바이러스 시스템은 CCR을 안정하게 또는 일시적으로 발현하도록 TIL 집단을 변형시키는 데 유사하게 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, CCR을 발현하도록 TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 Milone, 등, Mol. Ther. 2009, 17, 1453-1464에 제공된 바와 같은 자기 불활성화 렌티바이러스 벡터를 포함하는 렌티바이러스 게놈의 적어도 일부로부터 유래된 렌티바이러스 벡터를 제조하는 단계를 포함한다. 클리닉에서 사용될 수 있는 렌티바이러스 벡터의 다른 예는 예를 들어, Oxford BioMedica의 LENTrVECTO™ 유전자 전달 기술, Lentigen의 LENTIMAX™ 벡터 시스템, 및 유사한 시스템을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 이식유전자를 운반하는 렌티바이러스 벡터는 수포성 구내염 바이러스 당단백질(VSV-G) 플라스미드와 조합되어, 특이적 세포 표면 수용체 및 플라스미드보다 원형질막의 편재적 인지질 구성요소에 결합하는 랍도바이러스 외피 단백질의 발현을 야기한다. 일부 구현예에서, 이식유전자를 운반하는 렌티바이러스 벡터는 Gag/Pol 및 Rev 패키징 플라스미드와 조합된다. 일부 구현예에서, 렌티바이러스 패키징은 HEK293T 세포주와 같은 293T 세포주, 또는 이의 변이체, 유도체, 또는 자손을 사용하여 수행된다.
구현예에서, 바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 Zhao, 등, Mol. Ther. 2006, 13, 151-9에 기재된 바와 같은 PGEM.64A이며, 문헌 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 렌티바이러스 벡터 백본은 Lois, 등, Science 2002, 295, 868-72에 기재된 바와 같은 pFUGW이며, 문헌 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 렌티바이러스 벡터는 이식유전자의 발현을 구동하기 위해 소 성장 호르몬 폴리A 서열을 포함한다. 구현예에서, 렌티바이러스 벡터는 Kozak 리보솜 개시 서열을 포함한다. 구현예에서, 렌티바이러스 벡터는 우드척 간엽 바이러스 전사후 조절 요소(WPRE)를 포함한다. 구현예에서 렌티바이러스 벡터는 pFUGW　플라스미드에서 유래된 긴 말단 반복(LTR) 서열을 포함한다. 구현예에서, 바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 pRRLSIN이다. 구현예에서, 바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 pLenti이다. 구현예에서, 바이러스 또는 레트로바이러스 벡터 백본은 pQCXIX이다.
구현예에서, 바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 프로모터를 추가로 포함한다. 구현예에서, 프로모터는 인간 신장 성장 인자-1, 또는 EF-1, 프로모터이다. 구현예에서, 프로모터는 EF-1α(EF-1a 또는 EF-1 알파로도 알려짐) 프로모터이다. 구현예에서, 프로모터는 서열번호:604의 EF-1 프로모터 또는 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체이다. 구현예에서, 프로모터는 즉시 초기 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터　서열이며, 이에 작동가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오티드　서열의 발현을 높은 수준으로 구동할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 구현예에서, 프로모터는 서열번호:605의 CMV 프로모터 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체이다. 구현예에서, 바이러스 벡터 백본은 프로모터를 추가로 포함하며, 여기서 프로모터는 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스(MSCV) 프로모터이다. 구현예에서, 프로모터는 서열번호:606의 MSCV 프로모터 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체이다. 구현예에서, 바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 프로모터를 추가로 포함하며, 여기서 프로모터는 활성화된 T 세포의 핵 인자(NFAT) 프로모터이다. 적합한 NFAT 프로모터는 미국 특허 번호 8,556,882 및 Merlet, 등, Gene Therapy 2013, 20, 248-254에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함되고, 이는 NFAT1, NFAT2, NFAT3, 및 NFAT4 반응 요소를 포함하는 하나 이상의 NFAT 결합 모티프를 포함할 수 있다. 구현예에서, NFAT 프로모터는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 또는 적어도 12개의 결합 모티프를 포함한다. 구현예에서, NFAT 프로모터는 최대 12개의 결합 모티프를 포함한다. 구현예에서, NFAT 프로모터는 4, 5, 6, 또는 7개의 결합 모티프를 포함한다. 구현예에서, NFAT 프로모터는 6개의 결합 모티프를 포함한다. 구현예에서, 프로모터는 서열번호:607의 NFAT 프로모터 또는 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체이다.
구현예에서, 프로모터는 EF-1 프로모터, 유인원 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) LTR 프로모터, MSCV 프로모터, NFAT 프로모터, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMuLV) 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스타인 바(Epstein-Barr) 바이러스 즉시 초기 프로모터, 라우스(Rous) 육종 바이러스 프로모터, 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헤모글로빈 프로모터, 및 크레아틴 키나제 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구현예에서, 프로모터는 구성적 프로모터이다. 구현예에서, 프로모터는 유도성 프로모터이며, 일부 구현예에서 이러한 발현이 바람직한 경우 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드　서열의 발현을 켤 수 있거나, 발현이 바람직하지 않은 경우 발현을 끌 수 있다. 구현예에서, 유도성 프로모터는 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린 프로모터로 이루어진 군으로부?? 선택된다. 적합한 프로모터의 예시적인 비제한적인 서열은 표 60에 제공되어 있다.
표 60. 예시적인 프로모터의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:604의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:604는 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:605의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:605는 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:606의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:606은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 프로모터 도메인은 서열번호:607의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:607은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
하나의 구현예에서, 벡터는 본원에 기재된 핵산 분자의 RNA를 전사하는 벡터를 포함하는 시험관 내 전사된 벡터이다. 하나의 구현예에서, 벡터의 핵산 서열은 약 10개, 약 20개, 약 30개, 약 40개, 약 50개, 약 60개, 약 70개, 약 80개, 약 90개, 약 100개, 약 110개, 약 120개, 약 130개, 약 140개, 약 150개, 약 160개, 약 170개, 약 180개, 약 190개, 또는 약 200개의 아데노신 염기를 포함하는 폴리아데닐화 또는 폴리(A) 꼬리를 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 벡터 내 핵산 서열은 인간 베타-글로불린으로부터 유래된 3' UTR의 적어도 하나의 반복부를 포함하는 3' 비번역 영역(UTR)을 추가로 포함한다.
본 발명은 또한 세포에 직접 형질감염될 수 있는 RNA 작제물을 포함한다. 형질감염에 사용하기 위한 mRNA를 생성하는 방법은 특별히 설계된 프라이머로 주형의 시험관 내 전사(IVT) 후, 폴리(A)를 첨가하여, 3' 및 5' UTR, 5' 캡 및/또는 내부 리보솜 진입 부위(IRES), 발현될 핵산, 및 전형적으로 50-2000개 염기 길이의 폴리A 고리를 함유하는 작제물을 생성하는 것을 수반한다. 이렇게 생성된 RNA는 상이한 종류의 세포에 효율적으로 형질감염될 수 있다. 하나의 구현예에서, 주형은 본원에 기재된 CCR에 대한 서열을 포함한다. 구현예에서, RNA CCR 벡터는 전기천공에 의해 T 세포로 형질도입된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR을 암호화하는 적절한 이식유전자로 치환된 미국 특허 출원 공개 번호 US 2019/0298770 A1에 개시된 벡터 발현 시스템이 사용될 수 있고, 이들 벡터 발현 시스템의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 트랜스포존 매개 유전자 전달 단계를 포함한다. 트랜스포존 매개 유전자 전달 시스템은 당업계에 알려져 있고 트랜스포사제가 DNA 발현 벡터 또는 발현성 RNA 또는 단백질로서 제공되어 트랜스포사제의 장기 발현이 형질전환 세포에서 발생하지 않는 않도록 하는 시스템, 예를 들어, mRNA(예를 들어, 캡 및 폴리-A 꼬리를 포함하는 mRNA)로서 제공되는 트랜스포사제를 포함한다. SB10, SB11, 및 SB100x와 같은 연어과-유형 Tel-유사 트랜스포사제(SB 또는 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포사제), 및 효소적 활성이 증가된 조작된 효소를 포함하는 적합한 트랜스포존 매개 유전자 전달 시스템은 예를 들어, Hackett, 등, Mol. Therapy 2010, 18, 674-83 및 미국 특허 번호 6,489,458에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, CCR은 TIL 집단에 의해 일시적으로 발현된다. 일부 구현예에서, CCR은 RNA의 전기천공을 통해 TIL 집단에 의해 일시적으로 발현된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 전기천공 단계를 포함한다. 전기천공 방법은 당업계에 알려져 있고 예를 들어, Tsong, Biophys. J. 1991, 60, 297-306, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2014/0227237 A1에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 미국 특허 번호 5,019,034; 5,128,257; 5,137,817; 5,173,158; 5,232,856; 5,273,525; 5,304,120; 5,318,514; 6,010,613 및 6,078,490에 기재된 것들과 같은 다른 당업계에 알려진 전기천공 방법이 사용될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, 전기천공 방법은 멸균 전기천공 방법이다. 구현예에서, 전기천공 방법은 펄스 전기천공 방법이다. 구현예에서, 전기천공 방법은 TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL의 한정되고 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 유발하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 100 V/cm 이상의 전계 강도를 갖는 적어도 3개의 단일 작동자 제어된 독립적으로 프로그래밍된 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하고, 여기서 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열은 다음 특성 중 1, 2, 또는 3개를 갖는다: (1) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이함; (2) 적어도 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이함; 및 (3) 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 간격은 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이함. 구현예에서, 전기천공 방법은 TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL의 한정되고 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 유발하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 100 V/cm 이상의 전계 강도를 갖는 적어도 3개의 단일 작동자 제어된 독립적으로 프로그래밍된 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하고, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL의 한정되고 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 유발하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 100 V/cm 이상의 전계 강도를 갖는 적어도 3개의 단일 작동자 제어된 독립적으로 프로그래밍된 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하고, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL의 한정되고 제어된 영구적 또는 일시적 변화를 변경, 조작, 또는 유발하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 100 V/cm 이상의 전계 강도를 갖는 적어도 3개의 단일 작동자 제어된 독립적으로 프로그래밍된 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하고, 여기서 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이하다. 구현예에서, 전기천공 방법은 TIL을 펄스 전기장으로 처리하여 TIL에 기공 형성을 유도하는 단계를 포함하는 펄스 전기천공 방법이며, 100 V/cm 이상의 전계 강도를 갖는 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열을 TIL에 적용하는 단계를 포함하고, 여기서 적어도 3개의 DC 전기 펄스의 서열은 다음 특성 중 1, 2, 또는 3개를 갖는다: (1) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 진폭이 서로 상이함; (2) 적어도 3개의 펄스 중 적어도 2개는 펄스 폭이 서로 상이함; 및 (3) 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제1 세트에 대한 제1 펄스 간격이 적어도 3개의 펄스 중 2개의 제2 세트에 대한 제2 펄스 간격과 상이하여, 유도된 기공이 비교적 긴 시간 동안 지속되도록 하고, TIL의 생존력이 유지되도록 함. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 칼슘 포스페이트 형질감염 단계를 포함한다. 칼슘 포스페이트 형질감염 방법(칼슘 포스페이트 DNA 침전, 세포 표면 코팅, 및 세포내이입)은 당업계에 알려져 있고 Graham and van der Eb, Virology 1973, 52, 456-467; Wigler, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 1979, 76, 1373-1376; 및 Chen and Okayarea, Mol. Cell. Biol. 1987, 7, 2745-2752; 및 미국 특허 번호 5,593,875에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 리포솜 형질감염 단계를 포함한다. 여과수 중 양이온성 지질 N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-n,n,n-트리메틸염화암모늄(DOTMA) 및 디올레오일 포포티딜에탄올아민(DOPE)의 1:1(w/w) 리포솜 제형을 이용하는 방법과 같은 리포솜 형질감염 방법이 당업계에 알려져 있고 Rose, 등, Biotechniques 1991, 10, 520-525 및 Felgner, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 7413-7417 및 미국 특허 번호 5,279,833; 5,908,635; 6,056,938; 6,110,490; 6,534,484; 및 7,687,070에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL 집단을 유전적으로 변형시키는 방법은 미국 특허 번호 5,766,902; 6,025,337; 6,410,517; 6,475,994; 및 7,189,705에 기재된 방법을 사용하는 형질감염 단계를 포함하며; 상기 문헌 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
하나의 구현예에 따르면, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편에 처리함으로써 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2, 및 임의적으로 OKT-3(예를 들어, OKT-3은 확장 프로세스 시작 날짜에 시작하여 배양 매질에 존재할 수 있음)을 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL-의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생성하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 및 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, 배지, 임의적으로 OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충하거나 교체함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (c)에서 단계 (d)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(e) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하되, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(g) 단계 (e) 내지 (f) 동안 언제든지, 하나 이상의 키메라 공동자극 수용체를 안정하게 또는 일시적으로 발현하도록 TIL의 적어도 일부를 유전적으로 변형시키는 단계.
상기 기재된 구현예의 단계 (g)에 언급된 바와 같이, 유전자 변형 프로세스는 TIL 확장 방법 동안 언제든지 수행될 수 있으며, 이는 유전자 변형이 확장 방법의 임의의 단계 전에, 동안, 또는 후에; 예를 들어, 위의 방법에 요약된 단계 (a)-(f) 중 임의의 단계 동안, 또는 위의 방법에 요약된 단계 (a)-(f) 중 임의의 단계 전 또는 후에 TIL에 대해 수행될 수 있음을 의미한다. 특정 구현예에 따르면, TIL은 확장 방법 동안 수집되고(예를 들어, 확장 방법은 TIL의 적어도 일부에 대해 "일시 정지"됨), 수집된 TIL은 유전자-변형 프로세스를 거치고, 일부 경우에, 후속적으로 다시 확장 방법에(예를 들어, 다시 배양 매질에) 재도입되어 확장 프로세스를 계속하여, 결국 주입 백으로 옮겨진 TIL의 치료 집단의 적어도 일부가 영구적으로 유전자 편집되도록 한다. 구현예에서, 유전자 변형 프로세스는 확장 전에 TIL을 활성화하고, 활성화된 TIL에 대해 유전자 변형 단계를 수행하고, 본원에 기재된 프로세스에 따라 유전적으로 변형된 TIL을 확장함으로써 수행될 수 있다. 전술한 구현예 중 임의의 것에서, 유전자 변형 프로세스는 본원에 기재된 CCR의 발현을 유발할 수 있다. 확장 프로세스의 대안적인 구현예는 위에 제시된 방법과 상이할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 대안적인 구현예는 동일한 단계 (a)-(g)를 가질 수 있거나, 상이한 수의 단계를 가질 수 있다. 구체적 구현예와 관계 없이, 유전자 편집 프로세스는 TIL 확장 방법 동안 언제든지 수행될 수 있다. 예를 들어, 대안적인 구현예는 2회 초과의 급속 확장을 포함할 수 있고, 유전자 편집은 3차 또는 4차 확장 동안 TIL에 대해 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 편집 프로세스는 본원에 기재된 TIL 제조를 위한 프로세스의 제1 집단, 제2 집단, 및 제3 집단 중 하나 이상으로부터의 TIL에 대해 수행된다. 예를 들어, 유전자 편집은 TIL의 제1 집단, 또는 제1 집단으로부터 수집된 TIL의 일부에 대해 수행될 수 있고, 유전자 편집 프로세스 후 이들 TIL은 후속적으로 다시 확장 프로세스에(예를 들어, 다시 배양 매질에) 배치될 수 있다. 대안적으로, 유전자 편집은 제2 또는 제3 집단의 TIL, 또는 각각 제2 또는 제3 집단으로부터 수집된 TIL의 일부에 대해 수행될 수 있고, 유전자 편집 프로세스 후 이들 TIL은 후속적으로 다시 확장 프로세스에(예를 들어, 다시 배양 매질에) 배치될 수 있다. 또 다른 구현예에 따르면, TIL이 배양 매질에 남아있고 확장이 수행되는 동안 유전자 편집이 수행된다.
일부 구현예에서, 유전자 편집 프로세스는 제1 확장의 TIL, 또는 제2 확장의 TIL, 또는 둘 다에 대해 수행된다. 예를 들어, 제1 확장 또는 제2 확장 동안, 유전자 편집은 배양 매질에서 수집된 TIL에 대해 수행되고, 유전자 편집 프로세스 후 이들 TIL은 후속적으로 예를 들어, 다시 배양 매질에 재도입함으로써 다시 확장 방법에 배치될 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 편집 프로세스는 제1 확장 후 및 제2 확장 전에 TIL의 적어도 일부에 대해 수행된다. 예를 들어, 제1 확장 후, 유전자 편집은 배양 매질에서 수집된 TIL에 대해 수행될 수 있고, 유전자 편집 프로세스 후 이들 TIL은 후속적으로 확장 방법, 예를 들어, 제2 확장을 위해 다시 배양 매질에 재도입함으로써 다시 확장 방법에 배치될 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 편집 프로세스는 단계 (c) 전(예를 들어, 단계 (a)-(b) 중 임의의 단계 전, 동안, 또는 후), 단계 (d) 전(예를 들어, 단계 (a)-(c) 중 임의의 단계 전, 동안, 또는 후), 단계 (e) 전(예를 들어, 단계 (a)-(d) 중 임의의 단계 전, 동안, 또는 후), 또는 단계 (f) 전(예를 들어, 단계 (a)-(e) 중 임의의 단계 전, 동안, 또는 후)에 수행된다.
일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 제1 확장의 시작 일(0일차), 또는 1일차에 시작하여 OKT-3을 포함할 수 있으며, 유전자 편집이 0일차 및/또는 1일차에 세포 배양 매질에서 OKT-3에 노출된 후 TIL에 대해 수행되도록 한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 OKT-3을 포함하고, 유전자 편집은 OKT-3이 세포 배양 매질에 도입되기 전에 수행된다. 대안적으로, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 OKT-3을 포함하고, 유전자 편집은 OKT-3이 세포 배양 매질에 도입된 후에 수행된다.
일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 제1 확장의 시작 일(0일차), 또는 1일차에 시작하여 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제를 포함할 수 있으며, 유전자 편집이 0일차 및/또는 1일차에 세포 배양 매질에서 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제에 노출된 후 TIL에 대해 수행되도록 한다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제를 포함하고, 유전자 편집은 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제가 세포 배양 매질에 도입되기 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제를 포함할 수 있고, 유전자 편집은 4-1BB 작용제 또는 OX40 작용제가 세포 배양 매질에 도입된 후에 수행된다.
일부 구현예에서, 해당 세포 배양 매질은 제1 확장의 시작 일(0일차), 또는 1일차에 시작하여 IL-2를 포함할 수 있으며, 유전자 편집이 0일차 및/또는 1일차에 세포 배양 매질에서 IL-2에 노출된 후 TIL에 대해 수행되도록 한다. 또 다른 구현예에 따르면, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 IL-2를 포함하고, 유전자 편집은 IL-2가 세포 배양 매질에 도입되기 전에 수행된다. 대안적으로, 세포 배양 매질은 제1 확장 동안 및/또는 제2 확장 동안 IL-2를 포함할 수 있고, 유전자 편집은 IL-2가 세포 배양 매질에 도입된 후에 수행된다.
위에 논의된 바와 같이, OKT-3, 4-1BB 작용제 및 IL-2 중 하나 이상이 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 세포 배양 매질에 포함될 수 있다. 하나의 구현예에 따르면, OKT-3은 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 세포 배양 매질에 포함되고/되거나, 4-1BB 작용제는 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 세포 배양 매질에 포함되고/되거나, IL-2는 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 세포 배양 매질에 포함된다. 예에 따르면, 세포 배양 매질은 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 OKT-3 및 4-1BB 작용제를 포함한다. 또 다른 예에 따르면, 세포 배양 매질은 제1 확장의 0일차 또는 1일차에 시작하여 OKT-3, 4-1BB 작용제 및 IL-2를 포함한다. 물론, OKT-3, 4-1BB 작용제 및 IL-2 중 하나 이상이 본원에 기재된 다양한 구현예에 제시된 바와 같이, 확장 프로세스 동안 하나 이상의 추가 시점에 세포 배양 매질에 첨가될 수 있다.
하나의 구현예에 따르면, 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 임의적으로 동결보존된 다중 종양 단편 또는 동결보존된 종양 소화물을 해동한 후, 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절제된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편 또는 종양 소화물을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하고 임의적으로 4-1BB 작용제 항체를 포함하는 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 약 2 내지 5일 동안 배양함으로써 제1 확장을 수행하는 단계;
(d) OKT-3을 첨가하여 TIL의 제2 집단을 생성하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 1 내지 3일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제2 집단은 TIL의 제1 집단보다 수적으로 적어도 50-배 더 크고, 여기서 단계 (c)에서 단계 (d)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(e) TIL의 적어도 일부를 하나 이상의 키메라 공동자극 수용체를 안정하게 또는 일시적으로 발현하도록 유전적으로 변형시켜, 임의적으로 TIL의 이러한 부분을 임시 용기로 옮기는 단계;
(f) 임의적으로 TIL의 제2 집단을 약 1일 내지 약 5일 동안 휴지시키는 단계;
(g) TIL의 제2 집단의 세포 배양 매질에 추가 IL-2, 임의적으로 OKT-3 항체, 임의적으로 OX40 항체, 및 항원 제시 세포(APC)를 보충함으로써 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 7 내지 11일 동안 수행되고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 단계 (f)에서 단계 (g)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 단계 (g)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하여 수확된 TIL 집단을 제공하되, 여기서 단계 (g)에서 단계 (h)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하고, 여기서 수확된 TIL 집단은 TIL의 치료 집단인, 단계;
(i) 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (h)에서 (i)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계; 및
(j) 디메틸술폭사이드-기반 동결보존 매질을 사용하여 수확된 TIL 집단을 동결보존하는 단계.
하나의 구현예에 따르면, 전술한 방법을 사용하여 암이 있는 인간 대상체의 치료를 위한 자가 수확된 TIL 집단을 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 2A 자기 절단 펩티드를 암호화하는 벡터는 번역 동안 리보솜 스킵핑을 유도하고 폴리단백질을 생성하기 위해 본 발명의 CCR 및 케모카인과 함께 이용될 수 있다. 이론에 얽매이지 않고, 2A 자기 절단 펩티드를 포함하는 CCR 또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 세포 내에서 발현 시, 2개의 CCR 또는 CCR 및 또 다른 단백질과 같은 2개의 단백질로 절단될 수 있다. 예시적이고 비제한적인 2A 자기 절단 펩티드 도메인의 아미노산 서열은 표 61에 제공되어 있다. 서열번호:608은 T2A 자기 절단 펩티드(토세아 아시그나 바이러스 2A로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이고, 서열번호:609는 P2A 자기 절단 펩티드(돼지 테스코바이러스-1 2A로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이고, 서열번호:610은 E2A 자기 절단 펩티드(말 비염 A 바이러스로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이고, 서열번호:611은 F2A 자기 절단 펩티드(구제역바이러스로부터 유래)에 대한 아미노산 서열이다.
표 61. 예시적인 2A 자기 절단 펩티드의 아미노산 서열.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 97% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 96% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:608의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 97% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 96% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:609의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 97% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 96% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:610의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 97% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 96% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:611의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
전술한 2A 자기 절단 펩티드 도메인는 또한 N-말단에서 GSG 링커(서열번호:612)와 같은 링커와 조합될 수 있다. 대안적인 링커는 서열번호:238, 서열번호:239, 서열번호:240, 서열번호:241, 서열번호:242, 서열번호:243, 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71, 서열번호:72 서열번호:74, 이의 보존적 아미노산 치환, 이의 변이체, 또는 Bird, 등, Science 1988, 242, 423-426에 기재된 것들을 포함하여 당업계에 알려진 다른 링커를 포함하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
적합한 2A 자기 절단 펩티드 도메인의 예시적인 비제한적인 뉴클레오티드 서열은 표 62에 제공되어 있다.
표 62. 예시적인 2A 자기 절단 펩티드의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:613의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:613은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:614의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:614는 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:615의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:615는 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열의 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터와 함께 사용되는 2A 자기 절단 펩티드 도메인은 서열번호:616의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:616은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 IRES 도메인을 포함한다. 적합한 IRES 도메인은 당업계에 알려져 있다. 구현예에서, 본 발명의 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TIL, MIL, 또는 PBL의 변형을 위한 CCR 및/또는 케모카인 수용체를 암호화하는 벡터는 서열번호:617의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:617은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:617은 단백질 발현을 개선하도록 최적화된다. 다른 적합한 IRES 도메인은 Bochkov and Palmenberg, Biotechniques 2006, 41(3), 283에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
E. CCR 작제물
본 발명의 TIL과 함께 사용하기에 적합한 CCR을 제공하기 위해 전술한 세포외 및 세포내 도메인이 조합될 수 있고, 임의적으로 막관통 도메인에 의해 추가로 조합될 수 있다. 본 발명의 여러 예시적인 CCR 작제물은 이전에 논의되었고, 다른 예시적인 CCR 작제물은 도 37에 도시되어 있거나 본원에 기재되어 있으며, 각각은 본 발명의 구현예이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 PD-1 도메인, FAS 결합 도메인, TGFβ 결합 도메인, PD-L1 scFv 결합 도메인, CEA scFv 결합 도메인, CD73 scFv 결합 도메인, TROP-2 scFv 결합 도메인, EPCAM scFv 결합 도메인, 조직 인자 scFv 결합 도메인, FAP scFv 결합 도메인, LFA-1 scFv 결합 도메인, VISTA scFv 결합 도메인, 및 LLRC15 scFv 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포외 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, FAS, TGFβ, TGFβRII, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 (i) PD-1 도메인, PD-L1 scFv 결합 도메인, CEA scFv 결합 도메인, CD73 scFv 결합 도메인, TROP-2 scFv 결합 도메인, EPCAM scFv 결합 도메인, 조직 인자 scFv 결합 도메인, LFA-1 scFv 결합 도메인, FAP scFv 결합 도메인, VISTA scFv 결합 도메인, 및 LLRC15 scFv 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포외 도메인, 및 (ii) CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-18RAP, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, 및 IL-21R로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 (i) CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 분자에 결합하는 세포외 도메인, 및 (ii) CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-18RAP, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, 및 IL-21R로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 (i) PD-1 도메인, PD-L1 scFv 결합 도메인, CEA scFv 결합 도메인, CD73 scFv 결합 도메인, TROP-2 scFv 결합 도메인, EPCAM scFv 결합 도메인, 조직 인자 scFv 결합 도메인, LFA-1 scFv 결합 도메인, FAP scFv 결합 도메인, VISTA scFv 결합 도메인, 및 LLRC15 scFv 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포외 도메인, 및 (ii) CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인을 포함하는 단백질이다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 세포내 도메인은 작동가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 세포내 도메인은 링커 도메인에 의해 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 (i) PD-1 도메인, PD-L1 scFv 결합 도메인, CEA scFv 결합 도메인, CD73 scFv 결합 도메인, TROP-2 scFv 결합 도메인, EPCAM scFv 결합 도메인, 조직 인자 scFv 결합 도메인, LFA-1 scFv 결합 도메인, FAP scFv 결합 도메인, VISTA scFv 결합 도메인, 및 LLRC15 scFv 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포외 도메인, (ii) CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-18 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 막관통 도메인, 및 (iii) CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-18RAP 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인을 포함하는 단백질이다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 막관통 도메인은 작동가능하게 연결되고, 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 작동가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 각각 링커 도메인에 의해 서로 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 CCR은 (i) PD-1 도메인, PD-L1 scFv 결합 도메인, CEA scFv 결합 도메인, CD73 scFv 결합 도메인, TROP-2 scFv 결합 도메인, EPCAM scFv 결합 도메인, 조직 인자 scFv 결합 도메인, LFA-1 scFv 결합 도메인, FAP scFv 결합 도메인, VISTA scFv 결합 도메인, 및 LLRC15 scFv 결합 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포외 도메인, (ii) CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 막관통 도메인, (iii) CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 힌지 단백질 도메인, 및 (iv) CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-18RAP 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인을 포함하는 단백질이다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 힌지 도메인은 작동가능하게 연결되고, 힌지 도메인 및 막관통 도메인은 작동가능하게 연결되고, 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 작동가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 각각 링커 도메인에 의해 서로 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-1 도메인 및 PD-1 막관통 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:245에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 링커 도메인을 통해 서열번호:245에 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:245에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함하며, 이는 세포내 도메인에 추가로 작동가능하게 연결된다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:245에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함하며, 이는 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인에 추가로 작동가능하게 연결된다
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-1 도메인 및 CD28 막관통 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:246에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 링커 도메인을 통해 서열번호:246에 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 발현하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함한다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:246에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 포함하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함하며, 이는 세포내 도메인에 추가로 작동가능하게 연결된다. 구현예에서, 본 발명은 서열번호:246에 작동가능하게 연결된 서열번호:244를 포함하는 단백질 서열을 포함하는 TIL, MIL 또는 PBL을 포함하며, 이는 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 세포내 도메인에 추가로 작동가능하게 연결된다
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-VISTA) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-L1 결합(항-PD-L1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CEA 결합(항-CEA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 CD73 결합(항-CD73) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TROP-2 결합(항-TROP-2) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 EPCAM 결합(항-EPCAM) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 조직 인자 결합(항-TF) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LFA-1 결합(항-LFA-1) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 FAP 결합(항-FAP) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 VISTA 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:572의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(OX40) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:573의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD134(ICOS) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:574의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-VISTA) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD137(4-1BB) 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:575의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:576의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:578의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 LRRC15 결합(항-LRRC15) 도메인, 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인(예를 들어, 서열번호:580의 도메인)을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 CD28 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, 임의적인 CD8α 힌지 도메인, CD28 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD28 막관통 도메인, CD28 세포내 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-B7-H3 scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAS scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TGFβRII scFv 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD1 결합 도메인, IgG4 힌지 도메인, IgG4 막관통 도메인, 및 IL-2Rβ 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-B7-H3 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAS 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TGFβRII 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD1 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 IL-18R1 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-B7-H3 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAS scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TGFβRII scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-1 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 CD27 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PD-L1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CEA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-CD73 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TROP-2 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-EPCAM scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-조직 인자 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LFA-1 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAP scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-VISTA scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-LRRC15 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-B7-H3 scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-FAS scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-TGFβRII scFv 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PD-1 결합 도메인, CD8α 힌지 도메인, CD8α 막관통 도메인, 및 4-1BB 세포내 도메인을 포함하는 단백질 서열을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-TROP-2-VL)-(링커)-(항-TROP-2-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-FAP-VL)-(링커)-(항-FAP-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(IL-18R1)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD28)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD137)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD134)를 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(IgG4 힌지 및 막관통)-(CD278)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 38A1 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8α 힌지 및 막관통)-(CD27)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (CD8 신호 펩티드)-(항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8 힌지 및 막관통)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (CD8 신호 펩티드)-(항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8 힌지 및 막관통)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(LTBR 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (CD8 신호 펩티드)-(항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(LTBR 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8 힌지 및 막관통)-(LTBR 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (CD8 신호 펩티드)-(항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(CD8 힌지 및 막관통)-(LTBR 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(4-1BB 세포내 도메인)-(LTBR 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 임의적으로 본원에 기재된 19H9 항-PD-L1 VH 및 VL 도메인을 사용하여, (CD8 신호 펩티드)-(항-PD-L1-VL)-(링커)-(항-PD-L1-VH)-(힌지 및 막관통)-(LTBR 세포내 도메인)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (PD-1 세포외 도메인)-(CD28 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(CD28 막관통 도메인)-(CD28 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (PD-1 세포외 도메인)-(CD28 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(CD28 막관통 도메인)-(CD28 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (PD-1 세포외 도메인)-(4-1BB 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(4-1BB 막관통 도메인)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (TGFβRII 세포외 도메인)-(CD28 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(CD28 막관통 도메인)-(CD28 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (TGFβRII 세포외 도메인)-(4-1BB 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(4-1BB 막관통 도메인)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (FAS 세포외 도메인)-(FAS 막관통 도메인)-(FAS 세포내 도메인의 7개 아미노산)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (IgE 신호 펩티드)-(PD-1 세포외 도메인)-(CD28 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(CD28 막관통 도메인)-(CD28 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (IgE 신호 펩티드)-(PD-1 세포외 도메인)-(4-1BB 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(4-1BB 막관통 도메인)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (IgE 신호 펩티드)-(TGFβRII 세포외 도메인)-(CD28 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(CD28 막관통 도메인)-(CD28 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (IgE 신호 펩티드)-(TGFβRII 세포외 도메인)-(4-1BB 세포외 도메인의 12개 아미노산)-(4-1BB 막관통 도메인)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 (IgE 신호 펩티드)-(FAS 세포외 도메인)-(FAS 막관통 도메인)-(FAS 세포내 도메인의 7개 아미노산)-(4-1BB 세포내 도메인)을 포함하는 단백질을 포함하는 CCR을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함하며, 여기서 괄호로 표시된 각각의 도메인은 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 비에피토프 CCR 작제물을 발현하는 TIL, MIL, 또는 PBL을 포함한다.
본 발명의 예시적인 CCR을 암호화하는 벡터의 뉴클레오티드 서열은 표 63에 제공되어 있다. 구현예에서, 표 63의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다. 구현예에서, 표 63의 뉴클레오티드 서열은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 추가 링커 도메인을 포함하도록 추가로 변형된다. 구현예에서, 표 63의 뉴클레오티드 서열은 렌티바이러스 발현 시스템에서 사용된다. 구현예에서, 표 63의 뉴클레오티드 서열은 추가 플라스미드를 사용하여 렌티바이러스 발현 시스템에서 사용된다.
표 63에 제공된 벡터에 대한 예시적인 벡터 설계는 도 38 내지 40에 제공되어 있다. 구현예에서, 도 38에 제시된 벡터에 의해 암호화된 CCR은 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다. 구현예에서, 도 39에 제시된 벡터에 의해 암호화된 CCR은 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다. 구현예에서, 도 40에 제시된 벡터에 의해 암호화된 CCR은 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다.
표 63. CCR의 발현을 위한 예시적인 벡터의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, CCR은 항-TROP-2-VL-링커-항-TROP-2-VH-IgG4(힌지 및 막관통)-IL2Rβ 작제물을 포함한다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:618과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
구현예에서, CCR은 항-FAP-VL-링커-항-FAP-VH-CD8α(힌지 및 막관통)-IL-18R1 작제물을 포함한다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:619와 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
구현예에서, CCR은 본원에 기재된 38A1 항체를 기반으로 하는 항-PD-L1-VL-링커-항-PD-L1-VH-CD8α(힌지 및 막관통)-CD27 작제물을 포함한다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, CCR은 서열번호:620과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 둘 다 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2 개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:621과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 본원에 기재된 38A1 및 19H9 PD-L1 도메인을 둘 다 사용하여, SP-(38A1 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18R1 세포내)-T2A-SP-(19H9 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622와 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rβ 막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-2Rγ 막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:622를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:623과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18R1-막관통 및 세포내)-T2A-SP-(항-TROP-2 scFv)-(CD8 힌지)-(IL-18RAP-막관통 및 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:624와 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-2Rβ 세포내)-T2A-SP-(KM4097 scFv)-(CD28 힌지 및 막관통)-(IL-2Rγ 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:625와 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 비에피토프 CCR은 SP-(cAR47A6.4 scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18R1 세포내)- T2A-SP-(KM4097scFv)-(CD28 힌지-막관통)-(IL-18RAP 세포내)를 포함하는 2개의 CCR을 포함하며, 여기서 SP는 신호 펩티드를 지칭한다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 열번호:626과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 비에피토프 CCR은 서열번호:626과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 전술한 구현예는 필요에 따라 분석을 위해 eGFP와 같은 형광 단백질을 포함할 수 있거나 생략할 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:562 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:562에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:658, 서열번호:659, 서열번호:660, 서열번호:661, 서열번호:662, 또는 서열번호:663에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
구현예에서, 하나 초과의 CCR은 폴리시스트론 벡터 내 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 하나의 케모카인 수용체 및 적어도 하나의 CCR은 폴리시스트론 벡터 내 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 2개의 케모카인 수용체 및 적어도 하나의 CCR은 폴리시스트론 벡터 내 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 하나의 케모카인 수용체 및 적어도 2개의 CCR은 폴리시스트론 벡터 내 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 전술한 구현예 중 임의의 것에서, CCR 및/또는 케모카인 수용체는 비시스트론 벡터에 의해 암호화된다. 적합한 폴리시스트론 벡터는 본원 및 Liu, 등, Scientific Reports 2017, 7(1), 2193; Kim, 등, PLoS One 2011, 6(4), e18556에 기재되어 있다. 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IRES 기술은 또한 폴리시스트론 벡터 설계를 달성하기 위해 본원의 구현예에서 이용될 수 있다.
구현예에서, 본 발명의 CCR은 동일한 표적의 상이한 에피토프에 결합하는 2개의 CCR을 포함하는 비에피토프 CCR이다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 각각의 CCR은 표적의 상이한 에피토프에 결합한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM(CD326), PD-1, PD-L1(CD274), PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 표적의 제1 에피토프에 결합하는 제1 scFv 도메인을 포함하고, 제2 CCR은 표적의 상이한 에피토프에 결합하는 제2 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 PD-L1의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 PD-L1의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 PD-1의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 PD-1의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 CEA의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 CEA의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 CD73의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 CD73의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 TROP-2의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 TROP-2의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 조직 인자의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 조직 인자의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 LFA-1의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 LFA-1의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 FAP의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 FAP의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 VISTA의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 VISTA의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다. 구현예에서, 2개의 CCR은 비시스트론 벡터에 의해 암호화되며, 여기서 제1 CCR은 LRRC15의 제1 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함하고 제2 CCR은 LRRC15의 제2 에피토프에 결합하는 scFv 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택된다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 암은 TIL 집단을 투여함으로써 치료되고, 여기서 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
(c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생성하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
(e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생성하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
(f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
(g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
(h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
(i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 단백질의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, IL-13Rα2, FAS, TGFβRII, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 표적 단백질의 에피토프에 결합한다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 단백질의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 세포외 도메인은 PD-1 도메인, FAS 도메인, 및 TGFβRII 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 단백질의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, IL-13Rα2, FAS, TGFβRII, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 표적 단백질의 에피토프에 결합하고, 여기서 세포내 도메인은 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, CD40L, STAT3, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-18RAP, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, LTBR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 PD-L1의 2개의 상이한 에피토프에 결합한다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 TROP-2의 2개의 상이한 에피토프에 결합한다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 각각의 CCR 상의 PD-L1의 2개의 상이한 에피토프에 결합하고, 여기서 세포내 도메인은 각각의 CCR 상의 IL-18R1 및 IL-18RAP이다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 각각의 CCR 상의 TROP-2의 2개의 상이한 에피토프에 결합하고, 여기서 세포내 도메인은 각각의 CCR 상의 IL-18R1 및 IL-18RAP이다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 각각의 CCR 상의 PD-L1의 2개의 상이한 에피토프에 결합하고, 여기서 세포내 도메인은 각각의 CCR 상의 IL-2Rβ 및 IL-2γ이다.
구현예에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 TIL, MIL, 또는 PBL은 2개의 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되고, 여기서 각각의 CCR은 다음을 포함하고:
a) 세포외 도메인,
b) 힌지 도메인,
c) 막관통 도메인, 및
d) 적어도 하나의 세포내 도메인;
여기서 각각의 세포외 도메인은 표적 항원의 상이한 에피토프에 결합하여 비에피토프 복합체를 형성하고 각각의 세포내 도메인은 신호전달을 위한 2개의 서브유닛을 제공하도록 선택되고, 여기서 각각의 세포외 도메인은 scFv 결합 도메인을 포함하고, 여기서 scFv 결합 도메인은 각각의 CCR 상의 TROP-2의 2개의 상이한 에피토프에 결합하고, 여기서 세포내 도메인은 각각의 CCR 상의 IL-2Rβ 및 IL-2γ이다.
IX. 케모카인 수용체
일부 구현예에서, Gen 2 및 Gen 3을 포함하는 전술한 제조 프로세스 및 TIL, MIL, 및 PBL을 제조하는 다른 프로세스는 화학주성 사이토카인 수용체로도 알려진 하나 이상의 케모카인 수용체를 발현하기 위해 TIL, MIL, 또는 PBL의 바이러스 또는 비바이러스 형질도입을 포함하는 단계를 포함하도록 변형될 수 있다. 케모카인 수용체는 일반적으로 로돕신-유사 7-막관통(7TM) 구조를 갖고, 케모카인과 상호작용하고, G-단백질과의 커플링을 통해 세포내 신호를 변환하고, Murdoch and Finn, Blood 2000, 95, 3032-3043에 기재된 바와 같이 주화성을 매개하며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체를 발현하도록 변형된다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체 및 CCR을 발현하도록 변형된다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체 및 CCR을 발현하도록 변형되며, 이러한 변형은 별도로 발생한다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 케모카인 수용체 및 CCR을 발현하도록 변형되며, 이러한 변형은 동시에 발생한다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 또한 CCR을 발현하도록 변형되지 않고 케모카인 수용체를 발현하도록 변형된다. 기재된 케모카인 수용체는 본원에 기재된 CCR과 함께 또는 본원에 기재된 CCR과 별도로 유전적으로 변형된 TIL, MIL, 및 PBL에 사용될 수 있다.
A. 케모카인 수용체 도메인
구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 C-X-C(또는 CXC) 모티프 케모카인 수용체, 예컨대 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, 또는 CXCR5를 발현하도록 일시적으로 또는 안정하게 변형된다. 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL은 C-C 모티프 케모카인 수용체를 발현하도록 일시적으로 또는 안정하게 변형된다. 적합한 C-C 모티프 케모카인 수용체는 CCR2, CCR4, CCR6, CCR7, 및 CCR8이다. C-C 모티프 케모카인 수용체, 예컨대 CCR2, CCR4, CCR6, CCR7, 및 CCR8과 조합하여 사용되는 명칭 "CCR"은 공동자극 키메라 수용체에 대해 본원에서 사용되는 약어 CCR과 혼돈되어서는 안 된다. 예를 들어, 용어 "CCR2"는 본원에서 C-C 모티프 케모카인 수용체 2를 지칭하고, 용어 "CCR4"는 본원에서 C-C 모티프 케모카인 수용체 4를 지칭하고, 용어 "CCR6"은 본원에서 C-C 모티프 케모카인 수용체 6을 지칭하고, 용어 "CCR7"은 본원에서 C-C(또는 CC) 모티프 케모카인 수용체 7을 지칭하고, 용어 "CCR8"은 본원에서 C-C 모티프 케모카인 수용체 8을 지칭한다. 일부 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL 집단은 종양 조직 운반을 개선하기 위해 리간드 구배에 직면하는 경우 TIL, MIL, 또는 PBL 집단에 화학주성 반응 및 Ca2+ 흐름을 유도하기 위해 전장 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된다. 일부 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL 집단은 C-X-3-C(또는 CX3C) 모티프 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된다. 일부 구현예에서, TIL, MIL, 또는 PBL 집단은 X-C(또는 XC) 모티프 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된다. T-세포 귀소에서 케모카인 수용체의 역할은 Sackstein, 등, Lab. Invest. 2017, 97, 669-97에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-X-C 모티프 케모카인 수용체이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-C 모티프 케모카인 수용체이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-X-3-C 모티프 케모카인 수용체이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 X-C 모티프 케모카인 수용체이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CCR2, CCR4, CCR6, CCR7, CCR8, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 표 64에 주어진 케모카인 수용체로부터 선택된다.
표 64. 예시적인 케모카인 수용체 도메인의 아미노산 서열.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:627의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:627에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:627의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:628의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:628에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:628의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:629의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:629에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:629의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:630의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:630에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:630의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:631의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:631에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:631의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:632의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:632에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:632의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:633의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:633에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:633의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:634의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:634에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:634의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:635의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:635에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:635의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:636의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:636에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:636의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:637의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:637에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:637의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:638의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:638에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:638의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:639의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:639에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:639의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:640의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:640에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:640의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:641의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:641에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:641의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:642의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:642에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:642의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:643의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:643에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:643의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:644의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:644에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:644의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:645의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:645에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:645의 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 암호화하는 뉴클레오티드 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-X-C 모티프 케모카인 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-C 모티프 케모카인 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 C-X-3-C 모티프 케모카인 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 X-C 모티프 케모카인 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질이다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CCR2, CCR4, CCR6, CCR7, CCR8, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 케모카인 수용체는 표 65에 주어진 뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질이다.
표 65. 예시적인 케모카인 수용체 도메인을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646의 예시적인 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:646과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:646은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:647과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:647은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:648과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:648은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:649와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:649는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:650과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:650은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:651과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:651은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:652와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:652는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:653과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:653은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:654와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:654는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:655와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:655는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 뉴클레오티드 서열번호:656과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:656과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:656은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:657과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:657은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:658과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:658은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:659와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:659는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:660과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:660은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:661과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:661은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 열번호:662와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:662와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:662는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:663과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:663은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의헤 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:664와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:664는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:665와 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:665는 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:666과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:666은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:667과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:667은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668의 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 96% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 85% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 구현예에서, 본 발명의 케모카인 수용체는 서열번호:668과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 도메인을 포함한다. 전술한 구현예를 포함하는 구현예에서, 서열번호:668은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다.
B. 케모카인 수용체에 대한 유전자 발현 방법
렌티바이러스, 레트로바이러스, 및 트랜스포존-기반 시스템를 포함하나 이에 제한되지 않고, 프로모터, 자기 절단 펩티드, 링커, 조절 요소 또는 도메인, 및 다른 벡터 구성요소 또는 도메인을 포함하는 본원의 다른 곳 또는 당업계에 기재된 유전자 발현 방법은 상기 섹션 VIII.D에 기재된 예시적인 시스템과 같은 TIL, MIL, 또는 PBL에서 케모카인 수용체의 안정한 발현을 제공하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 예시적인 CCR을 암호화하는 벡터의 뉴클레오티드 서열은 표 66에 제공되어 있다. 구현예에서, 표 66의 뉴클레오티드 서열은 단백질 발현을 개선하기 위해 코돈 최적화된다. 구현예에서, 표 66의 뉴클레오티드 서열은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 대안적인 프로모터 또는 조절 도메인을 포함하도록 추가로 변형된다. 구현예에서, 표 66의 뉴클레오티드 서열은 레트로바이러스 발현 시스템에서 사용된다. 구현예에서, 표 66의 뉴클레오티드 서열은 추가 프라스미드를 사용하는 레트로바이러스 발현 시스템에서 사용된다. 추가 세부사항은 Hawley, 등, Gene Ther. 1994, 1, 136-38에 기재되어 있으며; 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
표 66에 제공된 벡터에 대한 예시적인 벡터 설계는 도 41 및 42에 제공되어 있다. 구현예에서, 도 41에 제시된 벡터에 의해 암호화된 케모카인 수용체는 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다. 구현예에서, 도 41에 제시된 벡터에 의해 암호화된 케모카인 수용체는 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다. 구현예에서, 도 42에 제시된 벡터에 의해 암호화된 케모카인 수용체는 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 TIL 생성물을 유전적으로 변형시키는 데 사용된다.
표 66. 케모카인 수용체의 발현에 대한 예시적인 벡터의 뉴클레오티드 서열.
구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:669와 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 99% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 98% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 97% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 96% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 95% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 94% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 93% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 92% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 91% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 90% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 85% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 구현예에서, 케모카인 수용체는 서열번호:670과 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
구현예에서, 하나 초과의 케모카인 수용체는 폴리시스트론 벡터의 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 하나의 케모카인 수용체 및 적어도 하나의 CCR은 폴리시스트론 벡터의 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 2개의 케모카인 수용체 및 적어도 하나의 CCR은 폴리시스트론 벡터의 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 구현예에서, 적어도 하나의 케모카인 수용체 및 적어도 2개의 CCR은 폴리시스트론 벡터의 다중 이식유전자에 의해 암호화된다. 전술한 구현예 중 임의의 것에서, CCR 및/또는 케모카인 수용체는 비시스트론 벡터에 의해 암호화된다. 적합한 폴리시스트론 벡터는 본원 및 Liu, 등, Scientific Reports 2017, 7(1), 2193에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IRES 기술은 또한 폴리시스트론 벡터 설계를 달성하기 위해 본원의 구현예에서 이용될 수 있다.
실시예
본원에 포함된 구현예는 이제 하기 실시예를 참조하여 기재된다. 이러한 실시예는 단지 예시의 목적을 위해 제공되며 본원에 포함된 개시내용은 어떠한 방식으로도 이러한 실시예에 제한되는 것으로 해석되어서는 안되며, 오히려 본원에 제공된 교시의 결과로 명백해지는 임의의 및 모든 변경을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
실시예 1: PRE-REP 및 REP 프로세스를 위한 배지 제조
이 실시예는 다양한 고형 종양으로부터 유래된 종양 침윤 림프구(TIL)의 배양을 수반하는 프로토콜에 사용하기 위한 조직 배양 배지의 제조를 위한 절차를 설명한다. 이 배지는 본 출원 및 다른 실시예에 기재된 임의의 TIL의 제조에 사용될 수 있다.
CM1의 제조. 하기 시약을 저온 저장고에서 꺼내고 이들을 37℃ 수조에서 가온시킨다: (RPMI1640, 인간 AB 혈청, 200 mM L-글루타민). 여과할 부피에 적절할 0.2 μm 필터 장치의 상단 섹션에 각 성분을 첨가하여 하기 표 67에 따라 CM1 매질을 제조한다. 4℃에서 저장한다.
표 67. CM1의 제조.
사용 당일에, 필요한 양의 CM1을 37℃ 수조에서 가온시키고 6000 IU/mL IL-2를 첨가한다.
필요에 따라 추가 보충이 표 68에 따라 수행될 수 있다.
표 68. 필요에 따라 CM1의 추가 보충.
CM2의 제조. 제조된 CM1을 냉장고에서 꺼내거나 상기 섹션 7.3에 따라 새로운 CM1을 제조한다. AIM-V®를 냉장고에서 꺼내고 제조된 CM1을 동일한 부피의 AIM-V®와 멸균 배지 병에서 혼합하여 필요한 양의 CM2를 제조한다. 사용 당일에 3000 IU/mL IL-2를 CM2 매질에 첨가한다. 사용 당일에 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 충분한 양의 CM2를 만든다. CM2 배지 병에 라벨링하고 조직 배양에 필요할 때까지 4℃에서 저장한다.
CM3의 제조. CM3은 사용이 필요한 날에 제조한다. CM3은 AIM-V® 매질과 동일하였으며, 사용 당일에 3000 IU/mL IL-2가 보충되었다. IL-2 스톡 용액을 AIM-V 병 또는 백에 직접 첨가하여 실험 요구에 충분한 양의 CM3을 제조한다. 부드럽게 진탕하여 잘 혼합한다. AIM-V를 첨가한 직후 병에 "3000 IU/mL IL-2"로 라벨링한다. CM3이 과잉인 경우, 이를 라벨링된 병에 넣어 4℃에서 저장하며, 유통 기한은 제조 후 7일이다. 4℃에서 7일 저장 후 IL-2가 보충된 배지를 폐기한다.
CM4의 제조. CM4는 CM3과 동일하며, 2mM G1utaMAXTM(최종 농도)가 추가로 보충된다. CM3 1 L마다, 200 mM GlutaMAXTM 10 mL를 첨가한다. IL-2 스톡 용액 및 GlutaMAXTM 스톡 용액을 AIM-V 병 또는 백에 직접 첨가하여 실험 요구에 충분한 양의 CM4를 제조한다. 부드럽게 진탕하여 잘 혼합한다. AIM-V를 첨가한 직후 병에 "3000 IL/mL IL-2 및 GlutaMAX"로 라벨링한다. CM4가 과잉인 경우, 이를 배지 이름 및 유통 기한(제조 후 7일)이 라벨링된 병에 넣어 4℃에서 저장한다. 4℃에서 7일 초과 저장한 후 IL-2가 보충된 배지를 폐기한다.
실시예 2: IL-2, IL-15, 및 IL-21 사이토카인 칵테일의 사용
이 실시예는 본원의 임의의 실시예의 TIL 프로세스와 조합하여 추가 T 세포 성장 인자로서 역할을 하는 IL-2, IL-15, 및 IL-21 사이토카인의 사용을 설명한다.
본원에 기재된 프로세스를 사용하면, TIL은 배양 개시 시 실험의 한쪽 부문에 IL-2가 존재하고, 또 다른 부문에 IL-2 대신, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합이 존재하는 종양으로부터 성장할 수 있다. pre-REP 완료 시, 배양물을 확장, 표현형, 기능(CD107a+ 및 IFN-γ) 및 TCR Vβ 레퍼토리에 대해 평가하였다. IL-15 및 IL-21은 본원의 다른 곳 및 Santegoets, 등, J. Transl. Med., 2013, 11, 37에 기재되어 있다.
결과는 IL-2, IL-15, 및 IL-21 처리된 조건으로 CD4+ 및 CD8+ 세포 둘 다에서 향상된 TIL 확장(>20%)이 IL-2 단독 조건에 비해 관찰될 수 있음을 보여줄 수 있다. IL-2 단독 배양물에 비해 IL-2, IL-15, 및 IL-21 처리된 배양물로부터 수득된 TIL에서 비대칭(skewed) TCR Vβ 레퍼토리를 갖는 주로 CD8+ 집단 쪽으로 비대칭이 있었다. IFN-γ 및 CD107a는 IL-2 단독으로 처리된 TIL과 비교하여 IL-2, IL-15, 및 IL-21 처리된 TIL에서 상승되었다.
실시예 3: 감마-조사된 말초 단핵 세포의 개별 로트 적격화
이 실시예는 본원에 기재된 예시적인 방법에서 동종이계 영양 세포로서 사용하기 위한 감마-조사된 말초 단핵 세포(PBMC, 단핵 세포 또는 MNC로도 알려짐)의 개별 로트를 적격화하는 약식 절차를 설명한다.
각각의 조사된 MNC 영양 로트는 개별 공여자로부터 준비하였다. 각각의 로트 또는 공여자를 정제된 항-CD3(클론 OKT3) 항체 및 인터류킨-2(IL-2)의 존재 하에 REP에서 TIL을 확장하는 능력에 대해 개별적으로 스크리닝하였다. 게다가, 영양 세포의 각각의 로트를 TIL을 첨가하지 않고 테스트하여 감마 방사선의 수용된 용량이 복제 무능력을 만들기에 충분하였음을 확인하였다.
감마-조사된 성장-저지된 MNC 영양 세포는 TIL의 REP 동안 필요하다. 영양 MNC의 막 수용체는 항-CD3(클론 OKT3) 항체에 결합하고 REP 플라스크에서 TIL에 교차 연결되어 TIL가 확장되도록 자극한다. 영양 로트는 개별 공여자로부터 채취한 전혈의 백혈구성분채집술(leukapheresis)로부터 준비하였다. 백혈구성분채집술 생성물을 Ficoll-Hypaque 상에서 원심분리에 적용하고, 세척하고, 조사하고, GMP 조건 하에 동결보존하였다.
TIL 요법을 받은 환자는 이식편대숙주병(GVHD)을 유발할 수 있으므로 생존가능한 영양 세포를 주입하지 않는 것이 중요하다. 따라서 영양 세포는 세포에 감마-조사를 투약함으로써 성장이 저지되어, 재배양 시 MNC 세포의 세포 생존력 상실 및 이중 가닥 DNA 파손을 초래한다.
영양 로트는 다음 2가지 기준으로 평가하였다: (1) 공동배양에서 TIL을 >100-배 확장하는 능력 및 (2) 복제 부적격.
영양 로트를 직립형 T25 조직 배양 플라스크에서 성장한 2개의 1차 pre-REP TIL 계통을 활용하여 미니-REP에서 테스트하였다. 영양 로트를 2개의 별도 TIL 계통에 대해 테스트하였는 데, 각각의 TIL 계통은 REP의 활성화에 반응하여 증식하는 능력이 고유하기 때문이다. 대조군으로서, 역사적으로 상기 기준을 충족하는 것으로 보여진 조사된 MNC 영양 세포의 로트를 테스트 로트와 함께 실행하였다.
단일 실험에서 테스트된 모든 로트가 동등한 테스트를 받는 것을 보장하기 위해, 동일한 pre-REP TIL 계통의 충분한 스톡이 모든 조건 및 모든 영양 로트를 테스트하는 데 이용가능하였다.
테스트된 영양 세포 각각의 로트의 경우, 총 6개의 T25 플라스크가 있었다: Pre-REP TIL 계통 #1(2개 플라스크); Pre-REP TIL 계통 #2(2개 플라스크); 및 영양 대조군(2개 플라스크). TIL 계통 #1 및 #2를 함유하는 플라스크에서는 TIL을 확장하는 영양 로트의 능력을 평가하였다. 영양 대조군 플라스크에서는 영양 로트의 복제 무능력을 평가하였다.
A. 실험 프로토콜
-2/3일차, TIL 계통의 해동. CM2 매질을 준비하고 CM2를 37℃ 수조에서 가온하였다. 3000 IU/mL IL-2가 보충된 CM2 40 mL를 준비한다. 사용할 때까지 따뜻하게 유지한다. IL-2 없이 미리 가온된 CM2 20 mL를 사용된 TIL 계통의 이름이 라벨링된 2개의 50 mL 코니칼 튜브 각각에 넣는다. 2개의 지정된 pre-REP TIL 계통을 LN2 저장고에서 꺼내고 바이알을 조직 배양실 옮겼다. 이들을 소량의 얼음이 남을 때까지 37℃ 수조에서 밀봉된 지퍼 저장 백 안에 넣어 바이알을 해동하였다.
멸균 트랜스퍼 피펫을 사용하여, 각 바이알의 내용물을 준비된 라벨링된 50 mL 코니칼 튜브 내 CM2 20 mL로 즉시 옮겼다. IL-2가 없는 CM2를 사용하여 40 mL로 QS하여 세포를 세척하고 400 x CF에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡인하고 3000 IU/mL IL-2가 보충된 가온된 CM2 5 mL에 재현탁하였다.
자동화 세포 계수기를 사용하여 세포 계수를 위해 작은 분취량(20 μL)을 이중으로 제거하였다. 계수를 기록하였다. 계수하는 동안, TIL 세포를 함유하는 50 mL 코니칼 튜브를 가습 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 넣고, 가스 교환하기 위해 캡을 느슨하게 하였다. 세포 농도를 결정하고, TIL을 3000 IU/mL의 IL-2가 보충된 CM2에서 1 x 106개 세포/mL로 희석하였다.
미니-REP의 0일차까지 가습 37℃ 인큐베이터에서 필요한 만큼 많은 웰에서 24-웰 조직 배양 플레이트의 2 mL/웰로 배양하였다. 혼란 및 교차 오염 가능성을 피하기 위해 상이한 TIL 계통을 별도의 24-웰 조직 배양 플레이트에서 배양하였다.
0일차, 미니-REP를 개시한다. 테스트할 영양 로트의 수만큼 충분한 CM2 매질을 준비하였다. (예를 들어, 한번에 4개의 영양 로트를 테스트하기 위해, CM2 매질 800 mL를 제조함). 위에서 준비한 CM2의 일부를 분취하고 세포 배양을 위해 3000 IU/mL IL-2를 보충하였다. (예를 들어, 한번에 4개의 영양 로트를 테스트하기 위해, 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 CM2 매질 500 mL를 제조함).
교차 오염을 방지하기 위해 각 TIL 계통을 별도로 작업하여, TIL 배양물을 함유하는 24-웰 플레이트를 인큐베이터에서 제거하고 BSC로 옮겼다.
멸균 트랜스퍼 피펫 또는 100-1000 μL 피펫터 및 팁을 사용하여, 약 1 mL의 매질을 사용할 TIL의 각 웰에서 제거하고 24-웰 조직 배양 플레이트의 사용하지 않은 웰에 넣었다.
새로운 멸균 트랜스퍼 피펫 또는 100-1000 μL 피펫터 및 팁을 사용하여, 남아있는 매질을 웰 내 TIL과 혼합하여 세포를 재현탁시킨 다음 세포 현탁액을 TIL 로트 이름이 라벨링된 50 mL 코니칼 튜브로 옮기고 부피를 기록하였다.
웰을 보존된 배지로 세척하고 해당 부피를 동일한 50 mL 코니칼 튜브로 옮겼다. 세포를 400 x CF로 회전시켜 세포 펠렛을 수집하였다. 배지 상청액을 흡인하고 세포 펠렛을 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 CM2 매질 2-5 mL에 재현탁하였고, 사용될 부피는 수확된 웰의 수 및 펠렛 크기에 기반하였으며 - 부피는 >1.3 x 106개 세포/mL의 농도를 보장하기에 충분해야 한다.
혈청학적 피펫을 사용하여, 세포 현탁액을 철저히 혼합하고 부피를 기록하였다. 자동화 세포 계수기를 사용하여 세포 계수를 위해 200 μL를 꺼냈다. 계수하는 동안, TIL 세포를 함유하는 50 mL 코니칼 튜브를 가습, 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에 넣고, 가스 교환을 허용하기 위해 캡을 느슨하게 하였다. 계수를 기록하였다.
TIL 세포를 함유하는 50 mL 코니칼 튜브를 인큐베이터에서 꺼내고 세포를 3000 IU/mL IL-2가 보충된 가온된 CM2에 1.3 x 106개 세포/mL의 농도로 재현탁하였다. 50 mL 코니칼 튜브를 캡을 느슨하게 하여 인큐베이터에 다시 넣었다.
위의 단계를 제2 TIL 계통에 대해 반복하였다.
실험을 위해 TIL을 T25 플라스크에 플레이팅하기 직전에, TIL을 아래와 같이 1.3 x 105개 세포/mL의 최종 농도가 되도록 1:10으로 희석하였다.
MACS GMP CD3 순수(OKT3) 작업 용액을 준비한다. 4℃ 냉장고에서 OKT3(1 mg/mL)의 스톡 용액을 꺼내고 BSC에 넣었다. 30 ng/mL OKT3의 최종 농도를 미니-REP의 배지에 사용하였다.
실험 시 각각의 T25 플라스크에서 20 mL에 대해 OKT3 600 ng이 필요하였으며; 이는 각 20 mL에 대해 10 μg/mL 용액 60 μL, 또는 각 영양 로트에 대해 테스트된 6개 플라스크 모두에 대해 360 μL와 동등하였다.
테스트된 각 영양 로트의 경우, 10 μg/mL의 작업 농도에 대해 1 mg/mL OKT3의 1:100 희석액 400 μL를 만들었다(예를 들어, 한번에 4개의 영양 로트를 테스트하기 위해, 1 mg/mL OKT3의 1:100 희석액 1600 μL: 1 mg/mL OKT3 16 μL + 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 CM2 매질 1.584 mL를 제조함.)
T25 플라스크를 준비한다. 영양 세포를 준비하기 전에 각 플라스크를 라벨링하고 플라스크를 CM2 매질로 채웠다. 플라스크를 37℃ 가습 5% CO2 인큐베이터에 넣어 남아있는 구성요소 첨가를 기다리는 동안 배지를 따뜻하게 유지하였다. 영양 세포가 준비되면, 구성요소는 각각의 플라스크의 CM2에 첨가될 것이다.
추가 정보는 표 69에 제공되어 있다.
표 69. 용액 정보.
영양 세포를 준비한다. 이 프로토콜을 위해 로트 당 최소 78 x 106개의 영양 세포가 필요하였다. SDBB에 의해 동결된 각각의 1 mL 바이알은 동결 시 100 x 106개의 생존가능한 세포가 있었다. 액체 N2 저장고에서 해동 시 50% 회수를 가정하면, 각 REP에 대해 추정된 100 x 106개의 생존가능한 세포를 제공하는 로트 당 영양 세포의 1 mL 바이알을 적어도 2개 해동하는 것이 권장되었다. 대안적으로, 1.8 mL 바이알에 공급되는 경우, 하나의 바이알만으로 충분한 영양 세포를 제공하였다.
영양 세포를 해동하기 전에, IL-2가 없는 대략 50 mL의 CM2를 테스트할 각각의 영양 로트에 대해 미리 가온하였다. 지정된 영양 로트 바이알을 LN2 저장고에서 꺼내고,지퍼 저장 백에 넣고, 얼음에 넣었다. 바이알을 37℃ 수조에 담가 밀폐된 지퍼 저장 백 내에서 해동하였다. 바이알을 지퍼 백에서 꺼내고, 70% EtOH로 닦거나 분무하고, BSC로 옮겼다.
트랜스퍼 피펫을 사용하여, 영양 바이알의 내용물을 50 mL 코니칼 튜브의 가온된 CM2 30 mL로 즉시 옮겼다. 바이알을 소량의 CM2로 세척하여 바이알 내 임의의 잔류 세포를 제거하고, 400 x CF에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡인하고 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 가온된 CM2 4 mL에 재현탁하였다. 자동화 세포 계수기를 사용하여 세포 계수를 위해 200 μL를 꺼냈다. 계수를 기록하였다.
세포를 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 가온된 CM2에 1.3 x 107개 세포/mL로 재현탁하였다. TIL 세포를 1.3 x 106개 세포/mL에서 1.3 x 105개 세포/mL로 희석하였다.
공동 배양을 설정한다. TIL 세포를 1.3 x 106개 세포/mL에서 1.3 x 105개 세포/mL로 희석하였다. CM2 매질 4.5 mL를 15 mL 코니칼 튜브에 첨가하였다. TIL 세포를 인큐베이터에서 꺼내고 10 mL 혈청학적 피펫을 사용하여 잘 재현탁하였다. 1.3 x 106개 세포/mL TIL 현탁액에서 세포 0.5 mL를 꺼내고 15 mL 코니칼 튜브의 매질 4.5 mL에 첨가하였다. TIL 스톡 바이알을 인큐베이터에 다시 넣었다. 잘 혼합하였다. 제2 TIL 계통에 대해 반복하였다.
단일 영양 로트를 위해 미리 가온된 배지를 함유하는 플라스크를 인큐베이터에서 BSC로 옮겼다. 1 mL 피펫 팁으로 여러 번 위 아래로 피펫팅하여 영양 세포를 혼합하고 1 mL(1.3 x 107개 세포)를 해당 영양 로트의 각 플라스크로 옮겼다. OKT3 작업 스톡(10 μg/mL) 60 μL를 각 플라스크에 첨가하였다. 2개의 대조군 플라스크를 인큐베이터에 다시 넣었다.
각각의 TIL 로트 1 mL(1.3 x 105개)를 상응하는 라벨링된 T25 플라스크로 옮겼다. 플라스크를 인큐베이터에 다시 넣고 세워서 인큐베이션하였다. 5일차까지 방해하지 않았다. 이 절차를 테스트된 모든 영양 로트에 대해 반복하였다.
5일차, 배지 교환. 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 CM2를 준비하였다. 각각의 플라스크에 대해 10 mL가 필요하다. 10 mL 피펫을 사용하여, 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 10 mL 가온된 CM2를 각각의 플라스크로 옮겼다. 플라스크를 인큐베이터에 다시 넣고 7일차까지 세워서 인큐베이션하였다. 테스트된 모든 영양 로트에 대해 반복하였다.
7일차, 수확. 플라스크를 인큐베이터에서 꺼내고 BSC로 옮겼으며, 플라스크 바닥에서 세포 층을 방해하지 않도록 주의하였다. 플라스크 바닥에서 성장하는 세포를 방해하지 않고, 매질 10 mL를 각각의 테스트 플라스크에서 제거하고 매질 15 mL를 각 대조군 플라스크에서 제거하였다.
10 mL 혈청학적 피펫을 사용하여, 세포를 남아있는 매질에 재현탁하고 잘 혼합하여 임의의 세포 덩어리를 부수었다. 피펫팅에 의해 세포 현탁액을 철저히 혼합한 후, 세포 계수를 위해 200 μL를 꺼냈다. 자동 세포 계수기 장비와 함게 적절한 표준 작동 절차를 사용하여 TIL을 계수하였다. 7일차에 계수를 기록하였다. 이 절차를 테스트된 모든 영양 로트에 대해 반복하였다.
영양 대조군 플라스크를 복제 무능력에 대해 평가하고 TIL을 함유하는 플라스크를 0일차부터 배수 확장에 대해 평가하였다.
7일차, 14일차까지 영양 대조군 플라스크 계속. 7일차에 영양 대조군 플라스크의 계수를 완료한 후, 3000 IU/mL IL-2를 함유하는 새로운 CM2 매질 15 mL를 각 대조군 플라스크에 첨가하였다. 대조군 플라스크를 인큐베이터에 다시 넣고 14일차까지 세워둔 위치에서 인큐베이션하였다.
14일차, 영양 대조군 플라스크의 확장된 비증식. 플라스크를 인큐베이터에서 꺼내고 BSC로 옮겼으며, 플라스크 바닥에 있는 세포 층을 방해하지 않도록 주의하였다. 플라스크 바닥에서 성장하는 세포를 방해하지 않고, 대략 17 mL의 매질을 각 대조군 플라스크에서 제거하였다. 5 mL 혈청학적 피펫을 사용하여, 세포를 남아있는 매질에 재현탁하고 잘 혼합하여 임의의 세포 덩어리를 부수었다. 각 플라스크에 대해 부피를 기록하였다.
피펫팅에 의해 세포 현탁액을 철저히 혼합한 후, 세포 카운팅을 위해 200 μL를 꺼냈다. TIL을 자동 세포 계수기 장비와 함께 적절한 표준 작동 절차를 사용하여 계수하고 계수를 기록하였다. 이 절차를 테스트된 모든 영양 로트에 대해 반복하였다.
B. 결과 및 허용 기준 프로토콜
결과. 감마 조사의 용량은 영양 세포를 복제를 무능력하게 만들기에 충분하였다. 모든 로트는 평가 기준을 충족할 것으로 예상되었으며 또한 0일차와 비교하여 REP 배양의 7일차에 남아있는 총 생존가능한 영양 세포 수의 감소를 입증하였다. 모든 영양 로트는 REP 배양의 7일차까지 TIL 성장의 100-배 확장에 대한 평가 기준을 충족할 것으로 예상되었다. 14일차 영양 대조군 플라스크의 계수는 7일차에 보여진 비증식 경향을 계속할 것으로 예상되었다.
허용 기준. 하기 허용 기준은 각 영양 세포의 각각의 로트에 대해 테스트된 각각의 복제 TIL 계통에 대해 충족되었다. 허용은 아래 표 70에서와 같이 2-배였다.
표 70. 허용 기준의 구현예.
30 ng/mL OKT3 항체 및 3000 IU/mL IL-2의 존재 하에 배양될 때 MNC 영양 세포를 복제 무능력하게 만드는 충분성에 대해 조사 용량을 평가하였다. 복제 무능력을 REP의 7일차 및 14일차에 자동 세포 계수에 의해 결정된 바와 같은 총 생존가능한 세포 계수(TVC)에 의해 평가하였다.
허용 기준은 "성장 없음"이었으며, 이는 총 생존가능한 세포 수가 REP의 0일차에 배양에 투입된 초기 생존가능한 세포 수로부터 7일차 및 14일차에 증가하지 않았음을 의미한다.
TIL 확장을 지지하는 영양 세포의 능력을 평가하였다. TIL 성장을 REP의 0일차에 배양 개시부터 REP의 7일차까지 생존가능한 세포의 배수 확장 측면에서 측정하였다. 7일차에, TIL 배양은 자동 세포 계수에 의해 평가된 바와 같이 최소 100-배 확장, (즉, 0일차에 REP 배양에 투입된 총 생존가능한 TIL 세포 수의 100배 초과)을 달성하였다.
허용 기준을 충족하지 않는 MNC 영양 로트의 비상 테스트. MNC 영양 로트가 위에 요약된 허용 기준 중 어느 하나를 충족하지 않는 경우, 단순한 실험자 오류를 원인으로 배제하기 위해 로트를 다시 테스트하는 다음 단계를 취할 것이다.
로트의 위성 테스트 바이알이 2개 이상 남아있다면, 로트를 다시 테스트하였다. 로트의 위성 테스트 바이알이 1개 남아있거나 전혀 남아있지 않으며, 로트는 위에 나열된 허용 기준에 따라 실패하였다.
적격화하기 위해, 해당 로트 및 대조군 로트는 위의 허용 기준을 달성해야 한다. 이러한 기준을 충족하면 로트는 사용을 위해 출시된다
실시예 4: IL-2 스톡 용액의 제조
이 실시예는 rhIL-2의 사용을 수반하는 것을 포함하여 본 출원 및 실시예에 포함된 모든 것을 포함한 정제된 동결건조된 재조합 인간 인터류킨-2를 추가 조직 배양 프로토콜을 사용하여 적합한 스톡 샘플에 용해시키는 프로세스를 설명한다.
절차. 0.2% 아세트산 용액(HAc)을 준비한다. 29 mL 멸균수를 50 mL 코니칼 튜브로 옮긴다. 1 mL 1 N 아세트산을 50 mL 코니칼 튜브에 첨가한다. 튜브 2-3번 뒤집어 잘 혼합한다. Steriflip 필터를 사용하여 여과에 의해 HAc 용액을 멸균한다.
PBS 중 1% HSA를 준비한다. 25% HSA 스톡 용액 4 mL를 150 mL 멸균 필터 장치 내 96 mL PBS에 첨가한다. 용액을 여과하고 4℃에서 저장한다. 제조된 rhIL-2의 각 바이알에 대해, 양식을 작성한다.
rhIL-2 스톡 용액(6 x 106 IU/mL 최종 농도)을 준비한다. rhIL-2의 각각의 로트는 상이하였고 다음과 같은 제조업체의 분석 인증서(COA)에서 발견된 정보가 필요하였다: 1) 바이알 당 rhIL-2의 질량(mg), 2) rhIL-2의 특이적 활성(IU/mg) 및 3) 권장된 0.2% HAc 재구성 부피(mL).
rhIL-2 로트에 필요한 1% HSA의 부피는 아래 방정식을 사용하여 계산할 수 있다:
예를 들어, CellGenix의 rhIL-2 로트 10200121 COA에 따르면, 1 mg 바이알에 대한 특이적 활성은 25 x 106 IU/mg이다. 2mL 0.2% HAc에서 rhIL-2를 재구성하는 것을 권장한다.
IL-2 바이알의 고무 마개를 알코올 천으로 닦았다. 3mL 주사기에 부착된 16G 바늘을 사용하여, 0.2% Hac의 권장된 부피를 바이알에 주입하였다. 바늘을 뺄 때 마개가 빠지지 않도록 주의하였다. 바이알을 3번 뒤집고 모든 분말이 용해될 때까지 휘저었다. 마개를 조심스럽게 제거하고 알코올 천 위에 따로 보관하였다. 1% HSA의 계산된 부피를 바이알에 첨가하였다.
rhIL-2 용액 저장. 단기 저장(<72시간)의 경우, 바이알을 4℃에서 저장하였다. 장기 저장(>72시간)의 경우, 바이알을 더 작은 부피로 분취하고 사용 준비가 될 때까지 -20℃에서 극저온 바이알에 저장하였다. 동결/해동 주기를 피하였다. 제조 날짜 6개월 후 만료되었다. Rh-IL-2 라벨은 공급업체 및 카탈로그 번호, 로트 번호, 만료 일, 작업자 이니셜, 농도 및 분취량의 부피를 포함하였다.
실시예 5: 동결보존 프로세스
이 실시예는 CryoMed 제어 속도 냉동고, Model 7454(Thermo Scientific)를 사용하여 본원에 기재된 절차에 따라 제조된 TIL에 대한 동결보존 프로세스 방법을 설명한다.
사용된 장비는 다음과 같았다: 알루미늄 카세트 홀더 랙(CS750 냉동고 백과 호환가능), 750 mL 백용 극저온저장 카세트, 저압(22 psi) 액체 질소 탱크, 냉장고, 열전대 센서(백용 리본형), 및 CryoStore CS750 동결 백(OriGen Scientific).
동결 프로세스는 핵 생성부터 -20℃까지 0.5℃ 속도 및 -80℃ 종료 온도까지 분 당 1℃ 냉각 속도를 제공한다. 프로그램 매개변수는 다음과 같다: 단계 1 - 4℃에서 기다림; 단계 2: -4℃까지 1.0℃/분(샘플 온도); 단계 3: -45℃까지 20.0℃/분(챔버 온도); 단계 4: -10.0℃까지 10.0℃/분(챔버 온도); 단계 5: -20℃에서 0.5℃/분(챔버 온도); 및 단계 6: -80℃까지 1.0℃/분(샘플 온도).
실시예 6: GEN 2 및 GEN 3 예시적인 프로세스
이 실시예는 Gen 2 및 Gen 3 프로세스를 입증한다. 프로세스 Gen 2 및 Gen 3 TIL은 일반적으로 종양의 외과적 절제를 통해 개별 환자로부터 유래된 다음 생체 외에서 확장된 자가 TIL로 구성된다. Gen 3 프로세스의 프라이밍 제1 확장 단계는 인터류킨-2(IL-2) 및 단클론 항체 OKT3의 존재 하에 세포 배양이었으며, 이는 조사된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 스캐폴드에서 T-세포 공동 수용체 CD3을 표적한다.
Gen 2 TIL 생성물의 제조는 2 단계로 이루어진다: 1) pre-급속 확장(Pre-REP) 및 2) 급속 확장 프로토콜(REP). Pre-REP 동안 절제된 종양을 각 치수가 2-3 mm인 ≤50개의 단편으로 절단하였으며 이를 혈청-함유 배양 매질(보충된 10% HuSAB를 함유하는 RPMI 1640 배지) 및 6,000 IU/mL의 인터류킨-2(IL-2)와 함께 11일 기간 동안 배양하였다. 11일차에 TIL을 수확하고 대규모 2차 REP 확장에 도입하였다. REP는 5일 동안 3000 IU/mL의 rhIL-2가 보충된 CM2의 5 L 부피에서 단클론 항-CD3 항체(OKT3) 150 μg이 로딩된 5x109개의 조사된 동종이계 PBMC 영양 세포의 공동 배양 시 pre-REP의 ≤200 x 106개의 생존가능한 세포의 활성화로 이루어진다. 16일차에 배양물의 부피가 90% 감소하고 세포 분획은 ≥1 x 109개의 생존가능한 림프구/플라스크로 다중 G-Rex-500 플라스크로 분할되고 CM4를 사용하여 5L까지 QS한다. TIL은 추가 6일 동안 인큐베이션한다. REP는 22일 차에 수확하고, 세척하고, 제형화하고, 동결 보존한 후 -150℃에서 주입을 위한 임상 현장으로 수송한다.
Gen 3 TIL 생성물의 제조는 3 단계로 이루어진다: 1) 프라이밍 제1 확장 프로토콜, 2) 급속 제2 확장 프로토콜(급속 확장 단계 또는 REP로도 언급됨), 및 3) 하위배양 분할. 프라이밍 제1 확장 TIL 증식을 수행하기 위해, 절제된 종양을 각 치수가 2-3 mm인 ≤120개의 단편으로 절단하였다. 프라이밍 제1 확장 0일차에, OKT-3이 로딩된 대략 2.5 x 108개의 동종이계 조사된 PBMC 영양 세포의 영양 층이 3개의 100 MCS 용기 각각에서 대략 100cm2의 표면적에서 확립되었다. 종양 단편을 500 mL 혈청-함유 CM1 배양 매질 및 6,000 IU/mL의 인터류킨-2(IL-2) 및 15 ug OKT-3을 함유하는 각각 3개의 100 MCS 용기에 분배하여 7일의 기간 동안 배양하였다. 7일차에, OKT-3이 로딩된 대략 5x108개의 동종이계 조사된 PBMC 영양 세포의 추가 영양 세포 층을 3개의 100 MCS 용기 각각에서 종양 단편화된 배양 단계로 혼입하고 500 mL CM2 배양 매질 및 6,000 IU/mL IL-2 및 30 μg OKT-3과 함께 배양함으로써 REP를 개시하였다. REP 개시는 100MCS 용기에 OKT3 로딩된 영양 세포의 폐쇄형 시스템 유체 전달을 사용하여 동일한 용기에서 전체 프라이밍 제1 확장 배양을 활성화함으로써 향상되었다. Gen 3의 경우, TIL 규모 확대 또는 분할은 전체 세포 배양물을 폐쇄형 시스템 유체 전달을 통해 더 큰 용기로 확장하고 (100 M 플라스크에서 500 M 플라스크로) 옮기고 추가 4 L의 CM4 배지를 첨가하는 프로세스 단계를 수반하였다. REP 세포를 16일차에 수확하고, 세척하고, 제형화하고, 동결 보존한 후 -150℃에서 주입을 위한 임상 현장으로 수송하였다.
전반적으로, Gen 3 프로세스는 표 71에 요약된 바와 같이, 더 짧고, 더 확장가능하고, 용이하게 변형가능한 확장 플랫폼이다.
표 71. 예시적인 Gen 2 및 예시적인 Gen 3 제조 프로세스의 비교.
0일차에, 두 프로세스의 경우, 종양을 3회 세척하고 단편을 무작위 배정하여 프로세스 당 1개 모음씩 2개 모음으로 나누었다. Gen 2 프로세스의 경우, 단편을 6,000IU/mL rhIL-2를 함유하는 CM1 배지 1L가 포함된 1개 -GREX 100MCS 플라스크로 옮겼다. Gen 3 프로세스의 경우, 단편을 6,000IU/mL rhIL-2, 15 ug OKT-3 및 2.5 x 108개의 영양 세포를 함유하는 CM1 500 mL가 포함된 1개 G-Rex 100MCS 플라스크로 옮겼다. Rep 개시 일에 대한 TIL의 시딩은 각 프로세스에 따라 상이한 날에 발생하였다. G-Rex 100MCS 플라스크의 부피가 90% 감소된 Gen 2 프로세스의 경우, IL-2(3000 IU/mL), + 5x109개의 영양 세포 및 OKT-3(30 ng/mL)을 함유하는 CM2 배지에서 11일차에 REP 개시를 시작하기 위해 수집된 세포 현탁액을 새로운 G-Rex 500MCS로 옮겼다. 세포를 확장하고 16일차에 프로토콜에 따라 IL-2(3000 IU/mL)를 함유하는 CM4 배지를 포함한 다중 G-Rex 500 MCS 플라스크로 분할하였다. 그런 다음 배양물을 수확하고 프로토콜에 따라 22일차에 동결보존하였다. Gen 3 프로세스의 경우, REP 개시는 7일차에 발생하였으며, 여기서 동일한 G-Rex 100MCS를 REP 개시에 사용하였다. 간단히 말해서, IL-2(6000 IU/mL) 및 5 x 108개의 영양 세포와 30ug OKT-3을 함유하는 CM2 배지 500 mL를 각 플라스크에 첨가하였다. 9-11일차에 배양 규모를 확장하였다. G-Rex100M의 전체 부피(1 L)를 G-Rex 500MCS로 옮기고 IL-2(3000 IU/mL)를 함유하는 CM4 4L를 첨가하였다. 플라스크를 5일 동안 인큐베이션하였다. 배양물을 수확하고 16일차에 동결보존하였다.
2개의 폐 종양(L4054 및 L4055) 및 1개의 흑색종 종양(M1085T)의 3개의 상이한 종양을 비교에 포함하였다.
CM1(배양 배지 1), CM2(배양 배지 2), 및 CM4(배양 배지 4) 배지를 미리 준비하고 L4054 및 L4055를 위해 4℃에서 유지하였다. CM1 및 CM2 배지를 여과 없이 준비하여 배지의 여과 유무에 따른 세포 성장을 비교하였다.
배지를 REP 개시 및 규모 확대 시 L4055 종양에 대해 37℃에서 최대 24시간 전에 가온하였다.
결과. Gen 3 결과는 달성된 총 생존가능한 세포에 대해 Gen 2의 30% 이내로 떨어졌다. Gen 3 최종 생성물은 재자극후 더 높은 IFN-γ 생산을 나타냈다. Gen 3 최종 생성물은 존재하는 총 고유한 CDR3 서열에 의해 측정 시 클론 다양성 증가를 나타냈다. Gen 3 최종 생성물은 더 긴 평균 텔로미어 길이를 나타냈다.
Gen 2 및 Gen 3 프로세스에 대한 Pre-REP 및 REP 확장은 위에 기재된 절차를 따랐다. 각 종양에 대해, 2개의 모음은 동일한 수의 단편을 함유하였다. 작은 종양 크기로 인해, 플라스크 당 최대 단편 수는 달성되지 않았다. 총 pre-REP 세포(TVC)를 수확하고 Gen 2 프로세스의 경우 11일차 및 Gen 3 프로세스의 경우 7일차에 계수하였다. 2개의 pre-REP 부문을 비교하기 위해, 세포 계수를 배양물에 제공된 단편 수로 나누어 단편 당 평균 생존가능한 세포를 계산하였다. 아래 표 72에 나타낸 바와 같이, Gen 2 프로세스는 Gen 3 프로세스와 비교하여 단편 당 더 많은 세포를 지속적으로 성장시켰다. 11일차에 Gen 3 프로세스에 대해 TVC 수의 외삽된 계산을 예상하였으며, 이는 pre-REP TVC를 7로 나눈 다음 11을 곱하여 계산하였다.
표 72. Pre-REP 세포 계수.
Gen 2 및 Gen 3 프로세스의 경우, 프로세스 조건에 따라 TVC를 계수하고 프로세스의 각 일자에 생존가능한 세포 퍼센트를 생성하였다. 수확 시, 22일차(Gen 2) 및 16일차(Gen 3) 세포를 수집하고 TVC 계수를 확립하였다. 그런 다음 TVC를 0일차에 제공된 단편 수로 나누어 단편 당 생존가능한 세포의 평균을 계산하였다. 수확 TVC를 REP 개시 TVC로 나누어 배수 확장을 계산하였다. 표 73에 나타낸 바와 같이, Gen 2 및 Gen 3 프로세스를 비교하면, L4054의 경우 배수 확장은 유사하였으며; L4055의 경우, 배수 확장은 Gen 2 프로세스에 대해 높았다. 구체적으로, 이 경우, 배지를 REP 개시 일 전 24까지 가온하였다. 또한 M1085T에 대해 Gen 3에서 더 높은 배수 확장이 관찰되었다. 22일차에 Gen 3 프로세스에 대해 TVC 수의 외삽된 계산이 예상되었으며, 이는 REP TVC를 16으로 나눈 다음 22를 곱하여 계산하였다.
표 73. TIL 최종 생성물에 대한 총 생존가능한 세포 계수 및 배수 확장.
수확 시, 최종 TIL REP 생성물을 생존력 %에 대한 방출 기준에 대해 비교하였으며, 결과는 표 74에 주어진다. Gen 2 및 Gen 3 프로세스에 대한 모든 조건은 70% 생존력 기준을 능가하였고 프로세스 및 종양에 걸쳐 필적할만하였다.
표 74. REP(TIL 최종 생성물)의 생존력 %
플라스크 당 단편 수가 최대 요구 수 이하이기 때문에, 수확 일에 추정된 세포 계수를 표 75에 제시된 바와 같이 각 종양에 대해 계산하였다. 추정은 임상 종양이 0일차에 2 또는 3개 플라스크에 시딩하기에 충분히 크다는 예상에 기반하였다.
표 75. Gen 3 프로세스에서 전체 규모 2 및 3개 플라스크에 대한 외삽된 추정 세포 계수 계산.
면역표현형 결정 - TIL 최종 생성물에 대한 표현형 마커 비교. 3개의 종양 L4054, L4055, 및 M1085T는 Gen 2 및 Gen 3 프로세스 둘 다에서 TIL 확장을 거쳤다. 수확 시, REP TIL 최종 생성물을 유세포 측정 분석에 적용하여 순도, 분화, 및 기억 마커를 테스트하였다. 모든 조건에 대해 TCR a/b+ 세포의 백분율은 90% 초과였다.
Gen 3 프로세스에서 수확된 TIL은 Gen 2 프로세스에서 수확된 TIL과 비교하여 CD8 및 CD28의 더 높은 발현을 보여주었다. Gen 2 프로세스는 CD4+의 더 높은 백분율을 보여주었다.
Gen 3 프로세스에서 수확된 TIL은 Gen 2 프로세스에서의 TIL과 비교하여 중추 기억 구획에서 더 높은 발현을 보여주었다.
Gen 2 및 Gen 3 TIL 확장 프로세스에 의한 최종 TIL 생성물을 비교하기 위해 2개의 종양 L4054 및 L4055의 TIL에서 활성화 및 고갈 마커를 비교하였다. 활성화 및 고갈 마커는 Gen 2와 Gen 3 프로세스 사이에서 필적할만하였다.
재자극 시 인터페론 감마 분비. Gen 2의 경우 22일차 및 Gen 3의 경우 16일차인 수확 일에, TIL을 L4054 및 L4055을 위해 코팅된 항-CD3 플레이트를 사용하여 밤새 재자극하였다. M1085T에 대한 재자극은 항-CD3, CD28, 및 CD137 비드를 사용하여 수행하였다. 모든 조건에서 재자극 24시간 후 상청액을 수집하고 상청액을 동결시켰다. 동시에 동일한 ELISA 플레이트를 사용하여 두 프로세스의 상청액에서 ELISA에 의한 IFNγ 분석을 평가하였다. 분석된 3개 종양에서 Gen 3 프로세스로부터 IFNγ의 더 높은 생산이 관찰되었다.
배양 배지에서 IL-2 수준의 측정. Gen 2와 Gen 3 프로세스 사이의 IL-2 소모를 비교하기 위해, 종양 L4054 및 L4055에서 REP 개시, 규모 확대, 및 수확 일에 세포 상청액을 수집하였다. 세포 배양 상청액 내 IL-2의 양은 R&D의 Quantitate ELISA 키트에 의해 측정하였다. 일반적인 경향은 IL-2 농도가 Gen 2 프로세스와 비교할 때 Gen 3 프로세스에서 더 높게 유지된다는 것을 나타낸다. 이것은 Gen 3의 경우 REP 개시 시 IL-2의 더 높은 농도로 인해(6000 IU/mL) 프로세스 전반에 걸쳐 배지의 이월과 결부될 가능성이 있기 때문이다.
대사 기질 및 대사산물 분석. D-글루코스 및 L-글루타민과 같은 대사 기질의 수준을 전체 배지 소모의 대용으로 측정하였다. 락트산 및 암모니아와 같은 상호 대사산물을 측정하였다. 글루코스는 ATP 형태의 에너지를 생산하기 위해 미토콘드리아에 의해 활용되는 배지 내 단순 당이다. 글루코스가 산화될 때, 락트산이 생산된다(락테이트는 락트산의 에스테르임). 락테이트는 세포 기하급수적 성장 단계 동안 강력하게 생산된다. 높은 수준의 락테이트는 세포 배양 프로세스에 부정적인 영향을 미친다.
L4054 및 L4055에 대한 소모된 배지를 두 프로세스 Gen 2 및 Gen 3에 대한 REP 개시, 규모 확대, 및 수확 일에 수집하였다. 소모된 배지 수집은 Gen 2의 경우 11일차, 16일차 및 22일차였고; Gen 3의 경우 7일차, 11일차 및 16일차였다. 글루코스, 락트산, 글루타민, GlutaMax, 및 암모니아의 농도에 대해 상청액을 CEDEX Bio-분석기에서 분석하였다.
L-글루타민은 세포 배양 배지 제형에 필요한 불안정한 필수 아미노산이다. 글루타민은 아민을 함유하고, 이 아미드 구조적 기는 질소를 세포로 운반하고 전달할 수 있다. L-글루타민이 산화되면, 독성 암모니아 부산물이 세포에 의해 생산된다. L-글루타민의 분해에 대응하기 위해 Gen 2 및 Gen 3 프로세스용 배지에 GlutaMax를 보충하였으며, 이는 수용액에서 더 안정하고 자발적으로 분해되지 않는다. 두 종양 계통에서, Gen 3 부문은 프로세스 동안 L-글루타민 및 GlutaMax의 감소 및 REP 전반에 거쳐 암모니아의 증가를 보여주었다. Gen 2 부문에서 L-글루타민 및 GlutaMax의 일정한 농도, 및 암모니아 생산의 약간 증가가 관찰되었다. Gen 2 및 Gen 3 프로세스는 수확일에 암모니아에 대해 필적할만하였고 L-글루타민 분해에서 약간의 차이를 보여주었다.
텔로미어는 Flow-FISH에 의해 반복된다. Flow-FISH 기술을 사용하여 Gen 2 및 Gen 3 프로세스 하에 L4054 및 L4055에 대한 텔로미어 반복의 평균 길이를 측정하였다. 상대 텔로미어 길이(RTL)의 결정은 DAKO의 유세포 측정 분석용 Telomere PNA 키트/FITC를 사용하여 계산하였다. Gen 3은 Gen 2와 필적할만한 텔로미어 길이를 보여주었다.
CD3 분석. 각 프로세스에서 생성된 세포 생성물의 클론 다양성을 결정하기 위해, L4054 및 L4055에 대해 수확된 TIL 최종 생성물을 샘플링하고 T-세포 수용체의 CDR3 부분의 서열분석을 통해 클론 다양성 분석을 위해 검정하였다.
표 76은 TIL 수확된 세포 생성물의 L4054에 대한 공유된 고유한 CDR3 서열 백분율로 Gen 2와 Gen 3 사이의 비교를 보여준다. 199개의 서열이 Gen 3과 Gen 2 최종 생성물 사이에 공유되며, Gen 3 최종 생성물과 공유되는 Gen 2의 고유한 CDR3 서열의 상위 80% 중 97.07%에 상응한다.
표 76. L4054에 대한 Gen 2와 Gen 3 프로세스 사이에 공유된 uCDR3 서열 비교.
표 77은 TIL 수확된 세포 생성물에서 L4055에 대한 공유된 고유한 CDR3 서열 백분율로 Gen 2와 Gen 3 사이의 비교를 보여준다. 1833개의 서열이 Gen 3과 Gen 2 최종 생성물 사이에 공유되며, Gen 3 최종 생성물과 공유되는 Gen 2의 고유한 CDR3 서열의 상위 80% 중 99.45%에 상응한다.
표 77. L4055에 대한 Gen 2와 Gen 3 프로세스 사이에 공유된 uCDR3 서열 비교.
CM1 및 CM2 배지를 여과 없이 미리 제조하고 Gen 2 및 Gen 3 프로세스에 사용하기 위해 종양 L4055에 대해 사용할 때까지 4℃에서 유지하였다.
배지를 Gen 2 및 Gen 3 프로세스에 대한 REP 개시 일에 종양 L4055에 대해 24시간 전에 최대 37℃에서 가온하였다.
LDH는 프로세스에서 수집된 상청액에서 측정되지 않았다.
M1085T TIL 세포 계수는 K2 셀로미터 세포 계수기로 실행하였다.
종양 M1085T에서, 대사 분석용 상청액, 활성화 및 고갈 마커 분석, 텔로미어 길이 및 CD3 - TCR vb 분석용 TIL 생성물과 같은 샘플은 이용가능하지 않았다.
결론. 이 실시예는 Gen 2 및 Gen 3 프로세스 사이의 기능적 품질 특성 + 확장된 표현형 특성화 및 배지 소모 측면에서 3개의 독립적인 공여자 종양 조직을 비교한다.
생성된 총 생존가능한 세포 및 총 유핵 세포 집단의 생존력 측면에서 Gen 2 및 Gen 3 pre-REP 및 REP 확장 비교를 평가하였다. 수확 일에 TVC 세포 용량은 Gen 2(22일)와 Gen 3(16일) 사이에 필적할만하지 않았다. Gen 3 세포 용량은 수확 시 수집된 총 생존가능한 세포의 약 40%로 Gen 2보다 낮았다.
pre-REP 수확이 7일차 대신 11일차에 발생하고 REP 수확이 16일차 대신 22일차에 발생하였음을 가정하여 Gen 3 프로세스에 대해 외삽된 세포 수를 계산하였다. 두 경우에, Gen 3은 TVC에서 Gen 2 프로세스와 비교하여 더 가까운 수를 보였으며, 이는 초기 활성화가 TIL 성장에 대한 전반적으로 더 나은 성능을 허용할 수 있음을 나타낸다.
Gen 3 프로세스에서 추가 플라스크(2 또는 3개)에 대한 외삽된 값의 경우 처리된 종양의 더 큰 크기를 추정하고, 기재된 바와 같이 프로세스 당 필요한 단편의 최대 수에 도달한다. 22일차에 Gen 2 프로세스와 비교하여 Gen 3 프로세스의 경우 16일차 수확 시 유사한 용량이 TVC에 도달할 수 있음이 관찰되었다. 이 관찰은 중요하며 배양물의 초기 활성화가 적은 처리 시간으로 TIL의 더 나은 성능을 허용할 수 있음을 나타낸다.
생성된 총 생존가능한 세포 및 총 유핵 세포 집단의 생존력 측면에서 Gen 2 및 Gen 3 pre-REP 및 REP 확장 비교를 평가하였다. 수확 일에 TVC 세포 용량은 Gen 2(22일)와 Gen 3(16일) 사이에 픽적할만하지 않았다. Gen 3 세포 용량은 수확 시 수집된 총 생존가능한 세포의 약 40%로 Gen 2보다 낮았다.
표현형 특성화 측면에서, Gen 2 프로세스와 비교하여 Gen 3 프로세스에서 3개의 종양에 대해 더 높은 CD8+ 및 CD28+ 발현이 관찰되었다. 이 데이터는 Gen 3 프로세스가 Gen 2와 비교하여 최종 TIL 생성물의 속성을 개선시켰음을 나타낸다.
Gen 3 프로세스는 Gen 2 프로세스와 비교하여 약간 더 높은 중추 기억 구획을 보여주었다.
Gen 2 및 Gen 3 프로세스는 Gen 3 프로세스의 더 짧은 기간에도 불구하고, 필적할만한 활성화 및 고갈 마커를 보여주었다.
IFN 감마(IFNγ) 생산은 분석된 3개의 종양에서 Gen 2와 비교하여 Gen 3 최종 생성물에서 3배 더 높았다. 이 데이터는 Gen 3 프로세스가 Gen 2 프로세스와 비교하여 매우 기능적이고 더 강력한 TIL 생성물을 생성하였으며, 아마도 Gen 3에서 CD8 및 CD28 발현의 더 높은 발현 때문임을 나타낸다. 표현형 특성화는 Gen 2 프로세스와 비교하여 3개의 종양에서 CD8+, CD28+ 발현을 향한 Gen 3의 양성 경향을 시사하였다.
Gen 2와 Gen 3 사이의 TIL 최종 생성물의 텔로미어 길이는 필적할만하였다.
글루코스 및 락테이트 수준은 Gen 2와 Gen 3 최종 생성물 사이에서 필적할만 하였으며, 이는 Gen 2와 비교하여 프로세스의 각 일자에 부피 감소 제거가 실행되지 않고 전반적으로 프로세스에서 배지 부피가 적었기 때문에 Gen 3 프로세스의 배지에서 영양소 수준이 영향을 받지 않았음을 시사한다.
전반적인 Gen 3 프로세스는 Gen 2 프로세스와 비교하여 처리 시간의 거의 2배 감소를 보였으며, 이는 Gen 3 프로세스에 의해 확장된 TIL 생성물에 대한 상품 비용(COG)의 실질적 감소를 산출할 것이다.
IL-2 소모는 Gen 2 프로세스에서 IL-2 소모의 일반적인 경향을 나타내며, Gen 3 프로세스에서 IL-2는 기존 배지를 제거하지 않았기 때문에 더 높았다.
Gen 3 프로세스는 CDR3 TCRab 서열 분석에 의해 측정된 더 높은 클론 다양성을 보여주었다.
pre-REP의 0일차에 영양물 및 OKT-3의 첨가는 Gen 3 프로세스를 사용하여 TIL의 초기 활성화 및 전반적으로 더 나은 성장 TIL 성능을 허용하였다.
표 78은 현재 Gen 2 프로세스와 비교하여 Gen 3 프로세스에 대한 다양한 구현예 및 결과를 설명한다.
표 78. 예시적인 Gen 2 및 Gen 3 프로세스 특징.
실시예 7: 0일차에 GEN 3 확장 프로세스의 예시적인 구현예
종양 세척 배지를 준비하였다. 배지는 시작 전에 가온하였다. 젠타마이신(50 mg/mL) 5 mL를 HBSS 500 mL 병에 첨가하였다. 종양 세척 배지 5 mL를 OKT3 희석에 사용할 15 mL 코니칼에 첨가하였다. 실온(RT)에서 저장하였다.
영양 세포 백을 준비하였다. 영양 세포를 영양 세포 백으로 멸균 상태로 옮기고 사용하거나 동결할 때까지 37℃에서 저장하였다. 37℃인 경우 영양 세포를 계수하였다. 해동한 다음 동결된 경우 영양 세포를 계수하였다.
영양 세포 농도의 최적 범위는 5x104개 내지 5x106개 세포/mL이다. AIM-V 4.5 mL를 함유하는 4개의 코니칼 튜브를 준비하였다. 각 세포 계수에 대해 세포 분획 0.5 mL를 첨가하였다.
총 생존가능한 영양 세포 수가 ≥1 x 109개 세포인 경우, 영양 세포 농도를 조정하기 위해 다음 단계로 진행하였다. 1 x 109개의 세포를 제2 영양 세포 백에 첨가하기 위해 제1 영양 세포 백에서 제거할 영양 세포 부피를 계산하였다.
p1000 마이크로피펫을 사용하여, 종양 세포 배지 900 μL를 OKT3 분취량(100μL)으로 옮겼다. 주사기 및 멸균 기술을 사용하여, OKT3 0.6 mL를 뽑아내어 제2 영양 세포 백에 첨가하였다. 배지 부피를 총 부피 2L로 조정하였다. 제2 영양 세포 백을 인큐베이터로 옮겼다.
OKT3 제형 세부사항: OKT3은 100 μL 분취량으로 바이알의 원래 스톡 농도(1 mg/mL)로 분취 및 동결될 수 있다. 1 mL 바이알 ~10X 분취량. -80C에서 저장하였다. 0일차: 15 μg/플라스크, 즉, 500 mL 중 30 ng/mL - 최대 60 μL ~ 1개 분취량.
종양 샘플을 준비하였다. 6-웰 플레이트 및 100 mm 페트리 접시(총 4개)를 수득하였다. 6 웰 플레이트에 '과잉 종양 조각'으로 라벨링하였다. 4개의 100 mm 페트리 접시 각각에 'Wash_01', 'Wash_02', 'Wash_03', 'Wash_04', 및 'Holding'으로 라벨링하였다.
종양 세척 매질 5 mL를 과잉 종양 조각으로 라벨링된 6-웰 플레이트의 모든 웰에 첨가하였다. 절개 동안 종양을 수화된 상태로 유지하는 데 추가로 사용하기 위해 이용가능한 종양 세척 매질을 유지하였다.
종양 세척 매질 50 mL를 Wash_01, Wash_02, Wash_03, 및 Holding으로 라벨링된 각각의 100 mm 페트리 접시에 첨가하였다. 마커를 사용하여, 각 페트리 접시를 절개 1 내지 절개 4로 라벨링한다. 종양을 주위 온도에서 Wash_01에서 ≥3분 동안 인큐베이션하였다. 종양을 주위 온도에서 Wash_02에서 ≥3분 동안 인큐베이션하였다. 종양을 주위 온도에서 Wash_03에서 ≥3분 동안 인큐베이션하였다. 세척을 완료한 후, 조직이 수화된 상태를 유지하도록 종양을 'Holding' 접시로 이동시켰다.
종양 인큐베이션이 진행되는 동안, 종양 수송 매질 10 mL를 종양 수송 매질로 라벨링된 튜브로 옮겼다. 종양 수송 매질 10 mL를 주사기로 뽑아내고 종양 수송 매질 5 mL과 함께 각각의 혐기성 및 호기성 멸균 병에 접종하였다.
절개 프로세스 전체를 위해 페트리 접시 뚜껑 아래에 눈금자를 두었다. 종양 길이 및 단편 수를 측정하고 기록하였다. 종양을 4개의 중간 조각으로 절개하거나 동일한 부피의 4개 그룹으로 그룹화하고 각 중간 조각의 종양 구조를 보존하였다. 종양 조각을 수화된 상태로 유지한다.
조직을 수화된 상태로 유지하기 위해 적극적으로 절개되지 않은 임의의 중간 종양 조각을 Holding 접시로 옮겼다.
절개 접시 뚜껑 아래의 눈금자를 참조로서 사용하여 종양을 27 mm3 단편(3x3x3mm)으로 절개하였다. 60개 단편에 도달할 때까지 중간 단편을 절개하였다. 최종 단편의 총 수를 계수하고 생성된 최종 단편 수(일반적으로 플라스크 당 60개 단편)에 따라 G-Rex 100MCS 플라스크를 준비하였다.
단편 튜브 1 내지 단편 튜브 4로 라벨링된 코니칼 튜브에 바람직한 조직 단편이 남아있었다. 유래된 단편 튜브의 수에 따라 영양 세포 현탁액으로 시딩하기 위한 G-Rex 100MCS 플라스크의 수를 계산하였다.
영양 세포 백을 인큐베이터에서 꺼내고 G-Rex 100MCS를 시딩하였다. D0(0일차)으로 라벨링한다.
G-Rex 100 MCS에서 배양물에 종양 단편 첨가. 멸균 조건 하에, 종양 단편 배양(D0) 1로 라벨링된 G-Rex 100MCS 및 단편 튜브로 라벨링된 50 mL 코니칼 튜브의 캡을 열었다. 열린 단편 튜브 1을 휘젓고, 동시에 G-Rex100MCS의 캡을 약간 들어올렸다. 단편을 함유하는 매질을 휘저으면서 G-Rex100MCS에 첨가하였다. G-Rex100MCS로 옮겨진 단편의 수를 기록하였다.
단편이 GREX 플라스크의 바닥에 위치하면, 배지 7 mL를 뽑아내고 7개의 1 mL 분취량을 생성하였다 - 확장된 특성화를 위해 5 mL 및 멸균성 샘플을 위해 2 mL. 확장된 특성화를 위해 5개의 분취량(최종 단편 배양 상청액)을 필요할 때까지 -20℃에서 저장하였다.
1개의 혐기성 BacT/Alert 병 및 1개의 호기성 BacT/Alert 병에 각각 최종 단편 배양 상청액 1 mL를 접종하였다. 샘플링된 각 플라스크에 대해 반복한다.
실시예 8: 7-8일차에 GEN 3 확장 프로세스의 예시적인 구현예
영양 세포 백을 준비하였다. 동결된 경우 영양 백을 37℃ 수조에서 3-5분 동안 해동하였다. 동결된 경우 영양 세포를 계수하였다.
영양 세포 농도에 대한 최적 범위는 5x104개 내지 5x106개 세포/mL이다. AIM-V 4.5 mL를 함유하는 4개의 코니칼 튜브를 준비하였다. 각 세포 계수에 대해 세포 분획 0.5 mL를 새로운 극저온 바이알 튜브에 첨가하였다. 샘플을 잘 혼합하고 세포 계수를 진행하였다.
총 생존가능한 영양 세포 수가 ≥2 x109개 세포인 경우, 영양 세포 농도를 조정하기 위해 다음 단계로 진행하였다. 2 x 109개의 세포를 제2 영양 세포 백에 첨가하기 위해 제1 영양 세포 백에서 제거할 영양 세포 부피를 계산하였다.
p1000 마이크로피펫을 사용하여, HBSS 900 μL를 100μL OKT3 분취량으로 옮긴다. 위 아래로 3회 피펫팅하여 혼합한다. 2개의 분취량을 준비하였다.
OKT3 제형 세부사항: OKT3은 100 μL 분취량으로 바이알의 원래 스톡 농도(1 mg/mL)로 분취 및 동결될 수 있다. 1 mL 바이알 당 ~10x 분취량. -80C에서 저장하였다. 7/8일차: 30 μg/플라스크, 즉, 500 mL 중 60 ng/mL - 최대 120 μl ~ 2개의 분취량.
주사기 및 멸균 기술을 사용하여, OKT3 0.6 mL를 뽑아내고 영양 세포 백에 첨가하여, 모두 첨가되었는지 확인하였다. 배지 부피를 총 부피 2 L로 조정하였다. 제2 OKT3 분취량을 반복하고 영양 세포 백에 첨가하였다. 제2 영양 세포 백을 인큐베이터로 옮겼다.
영양 세포 현탁액을 함유하는 G-Rex100MCS 플라스크의 제조. 0일차에 생성된 G-Rex 플라스크 수에 따라 처리할 G-Rex 100MCS 플라스크 수를 기록하였다. G-Rex 플라스크를 인큐베이터에서 꺼내고 제2 영양 세포 백을 인큐베이터에서 꺼냈다.
영양 세포 현탁액 첨가 전에 상청액의 제거. 10 mL 주사기 1개를 G-Rex100 플라스크에 연결하고 배지 5 mL를 뽑아낸다. 확장된 특성화를 위해 5개의 1 mL 분취량 - 5 mL를 생성하고 후원자가 요청할 때까지 확장된 특성화를 위해 5개의 분취량(최종 단편 배양 상청액)을 -20℃에서 저장하였다. 각 G-Rex100 플라스크를 라벨링하고 반복하였다.
플라스크 수에 따라 특성화를 위해 5-20 x 1 mL 샘플을 제조한다:
ㆍ 5 mL = 1개 플라스크
ㆍ 10 mL = 2개 플라스크
ㆍ 15 mL = 3개 플라스크
ㆍ 20 mL =4개 플라스크
영양 세포를 G-Rex100 MCS에 계속 시딩하고 각 G-Rex100 MCS 플라스크에 대해 반복하였다. 멸균 전달 방법을 사용하여, 중량은 질량 기준으로(1 g = 1 mL로 가정) 제2 영양 세포 백 500 mL를 각 G-Rex 100MCS 플라스크로 옮기고 양을 기록하였다. 7일차 배양으로 라벨링하고 각 G-Rex100 플라스크에 대해 반복하였다. G-Rex 100MCS 플라스크를 인큐베이터로 옮겼다.
실시예 9: 10-11일차에 GEN 3 확장 프로세스의 예시적인 구현예
제1 G-Rex 100MCS 플라스크를 꺼내고 멸균 조건을 사용하여 전처리 배양 상청액 7 mL를 10 mL 주사기를 사용하여 꺼냈다. 7개의 1 mL 분취량을 생성하였다 - 확장된 특성화를 위해 5 mL 및 멸균성 샘플을 위해 2 mL.
플라스크를 조심스럽게 혼합하고 새로운 10 mL 주사기를 사용하여 10 mL 상청액을 꺼내고 D10/11 마이코플라즈마 상청액으로 라벨링된 15 mL 튜브로 옮긴다.
플라스크를 조심스럽게 혼합하고 새로운 주사기를 사용하여 처리될 플라스크 수에 따라 아래 부피를 꺼냈다:
ㆍ 1개 플라스크 = 40 mL
ㆍ 2개 플라스크 = 20 mL/플라스크
ㆍ 3개 플라스크 = 13.3 mL/플라스크
ㆍ 4개 플라스크 = 10 mL/플라스크
모든 플라스크에서 총 40 mL를 뽑아내어 '10/11일차 QC 샘플'로 라벨링된 50 mL 코니칼 튜브에 모으고 필요할 때까지 인큐베이터에 보관해야 한다. 세포 계수를 수행하고 세포를 할당하였다.
확장된 특성화를 위해 5개의 분취량(전처리 배양 상청액)을 필요할 때까지 ≤-20℃에서 저장하였다. 1개의 혐기성 BacT/Alert 병 및 1개의 호기성 BacT/Alert 병에 각각 전처리 배양 상청액 1 mL를 접종하였다.
계속해서 세포 현탁액을 G-Rex 500MCS로 옮기고 각 G-Rex 100MCS에 대해 반복하였다. 멸균 조건을 사용하여, 각 G-Rex 100MCS의 내용물을 G-Rex 500MCS로 옮기고, 한번에 약 100 mL의 유체 전달을 모니터링하였다. G-Rex 100MCS의 부피가 500 mL로 감소하였을 때 전달을 중지하였다.
전달 단계 동안, 10 mL 주사기를 사용하고 G-Rex 100MCS에서 주사기로 세포 현탁액 10 mL를 뽑아냈다. 배양중인 플라스크의 수에 따라 지침을 따랐다. 플라스크가 단지 1개인 경우: 2개의 주사기를 사용하여 총 20 mL를 꺼냈다. 플라스크가 2개인 경우: 플라스크 당 10 mL를 꺼냈다. 플라스크가 3개인 경우: 플라스크 당 7 mL를 꺼냈다. 플라스크가 4개인 경우: 플라스크 당 5 mL를 꺼냈다. 세포 현탁액을 1개의 통상적인 50 mL 코니칼 튜브로 옮겼다. 세포 계수 단계 및 QC 샘플까지 인큐베이터에서 보관한다. QC에 필요한 총 세포 수는 ~ 20e6개 세포였다: 4 x 0.5 mL 세포 계수(세포 계수는 먼저 희석되지 않았음).
검정에 필요한 세포의 양은 다음과 같다:
ㆍ 본원에 기재된 것과 같은 효능 검정, 또는 IFN-γ 또는 그랜자임 B 검정의 경우 최소 10x106개의 세포
ㆍ 마이코플라즈마의 경우 1x106개의 세포
ㆍ CD3+/CD45+에 대한 유세포 측정의 경우 5x106개의 세포
G-Rex 500MCS 플라스크를 인큐베이터로 옮겼다.
QC 샘플을 준비하였다. 이 구현예에서 검정을 위해 적어도 15 x 108개의 세포가 필요하였다. 검정은 다음을 포함하였다: 세포 계수 및 생존력; 마이코플라즈마(1 x 106개의 세포/ 평균 생존가능한 농도;) 흐름(5 x 106개의 세포/ 평균 생존가능한 농도;) 및 IFN-g 검정(5 x 106개의 세포 - 1 x 106개의 세포; 8-10 x 106개의 세포가 IFN-γ 검정에 필요함.
10 x 106개 세포/mL에서 동결보존을 위한 세포 분획의 부피를 계산하고 준비할 바이알의 수를 계산하였다.
실시예 10: 16-17일차에 GEN 3 확장 프로세스의 예시적인 구현예
세척 완충액 제조(1% HSA Plasmalyte A). HSA 및 Plasmalyte를 5 L 백으로 옮겨 LOVO 세척 완충액을 제조한다. 멸균 조건을 사용하여, 총 부피 125 mL의 25% HAS를 5L 백으로 옮겼다. 실온에서 저장하였다.
'IL-2 6 x 104 IU/mL' 튜브에서 세척 완충액 10 mL 또는 40 mL를 꺼내어 옮겼다(IL-2가 미리 제조된 경우 10 mL 또는 IL-2가 새로 제조된 경우 40 mL).
Plasmalyte + 1% HSA에 첨가하기 위한 재구성된 IL-2의 부피를 계산하였다: 재구성된 IL-2의 부피 =(IL-2의 최종 농도 x 최종 부피)/ IL-2의 특이적 활성(표준 검정에 기반함). IL-2의 최종 농도는 6 x 104 IU/mL였다. 최종 부피는 40 mL였다.
재구성된 IL-2에 필요한 IL-2의 계산된 초기 부피를 꺼내어 'IL-2 6x104 IU/mL' 튜브로 옮겼다. 미리 제조된 분취량으로부터 IL-2 6x106 IU/mL 100μL를 LOVO 세척 완충액 10 mL를 함유하는 'IL-2 6x104 IU/mL'로 라벨링된 튜브에 첨가하였다.
G-Rex 500MCS 플라스크에서 상청액 약 4500 mL를 꺼냈다. 남아있는 상청액을 휘젓고 세포를 세포 수집 모음 백으로 옮겼다. 모든 G-Rex 500MCS 플라스크로 반복하였다.
상청액 60 mL를 꺼내고 마이코플라즈마 검출을 포함한 품질 관리 분석을 위해 상청액 튜브에 첨가하였다. +2-8℃에서 저장하였다.
세포 수집. 세포를 계수하였다. AIM-V 4.5 mL를 함유하는 4개의 15 mL 코니칼 바이알을 준비한다. 이들은 미리 준비될 수 있다. 최적 범위 = 5x104개 내지 5x106개 세포/mL이다. (1:10 희석이 권장됨). 1:10 희석의 경우, 이전에 제조된 AIM V 4500 μL에 CF 500 μL를 첨가한다. 희석 인자를 기록하였다.
총 세포(TC) 수가 > 5 x 109개인 경우, MDA 보유 샘플로서 동결보존할 5 x 108개의 세포를 꺼낸다. 5 x 108개 ÷ avg TC 농도(단계 14.44) = 제거할 부피.
총 세포(TC) 수가 ≤5 x 109개인 경우, MDA 보유 샘플로서 동결보존할 4 x 106개의 세포를 꺼낸다. 4 x 106개 ÷ avg TC 농도 = 제거할 부피.
적절한 크기의 주사기를 사용하여 LOVO 공급원 백에서 필요한 부피를 꺼냈다. 동결보존 단계까지 인큐베이터에서 유지하였다.
총 세포 수가 결정된 경우, 제거할 세포 수는 150x109개의 생존가능한 세포를 보유해야 한다. TVC pre-LOVO 5 x 108개 또는 4 x 106개 또는 적용가능하지 않는지 확인한다. 꺼낼 세포의 부피를 계산하였다.
백에 남아있는 나머지 총 세포를 계산하였다. TC(총 세포) pre-LOVO를 계산하였다. [Avg. 총 세포 농도 X 남아있는 부피 = 남아있는 TC pre-LOVO]
남아있는 세포의 총 수에 따라, 표 79의 상응하는 프로세스가 선택된다.
표 79. 세포의 총 수.
사용된 프로세스에 상응하게 첨가할 IL-2의 부피를 선택하였다. 부피는 다음과 같이 계산하였다: 잔류물 부피 x 2 x 300 IU/mL = 필요한 IL-2의 IU. 필요한 IL-2의 IU / 6 x104 IU/mL = Post LOVO 백에 첨가할 IL-2의 부피. 첨가된 모든 부피를 기록하였다. 추가 분석을 위해 극저온 바이알에 샘플을 수득하였다.
세포 생성물을 잘 혼합하였다. 추가 처리를 위해 모든 백을 밀봉하고, 적용가능한 경우 동결보존을 포함하였다.
수득된 극저온 바이알 샘플에 대해 필요에 따라 엔도톡신, IFN-γ, 멸균성, 및 다른 검정을 수행하였다.
실시예 11: 예시적인 GEN 3 프로세스(GEN 3.1로도 언급됨)
이 실시예는 "TIL 확장을 위한 Gen 2와 Gen 3 프로세스 사이의 비교가능성"에 관한 추가 연구를 설명한다. Gen 3 프로세스는 이전에 보여진 바와 같은 표현형 및 기능적 프로파일을 유지하면서, 최종 총 생존가능한 세포(TVC) 생산량을 Gen 2에서의 생상량과 필적할만하게(또는 더 우수하게) 증가시키는 것을 목표로 프로세스에서 초기에 활성화 단계를 포함하도록 변형되었다.
이 실시예의 범위는 0일차에 배양된 종양 단편에 활성화 단계를 도입하는 것을 통해 TVC 생산량의 평가를 수반하며; 이는 2개의 독립적인 환자 종양에 걸쳐 Gen 3 표준, 뿐만 아니라 대조군 부문에 따른 기능적 및 확장된 표현형 특성화 측면에서 비교가능성; 및 처리 매개변수를 확인하기 위한 배지 소모 및 대사산물 생산의 분석이 생리학적 조건에서 유지되었음을 입증한다.
이 실시예에 대한 모든 실행은 출발 물질로서 상업적인 공여자 종양 조직을 사용하여 전체 규모 플랫폼에서 수행하였다.
Gen 3 구현예는 추가 구현예로서 변형되었으며 이 실시예에서 Gen 3.1로 본원에 언급된다.
구현예에서, Gen 3.1 TIL 제조 프로세스는 4개의 작업자 개입을 갖는다:
1. 종양 단편 단리 및 활성화: 프로세스의 0일차에 종양을 절개하고 최종 단편을 각각 약 ~3x3mm(최대 총 240개 단편)를 생성하고 1-4개의 G-Rex100MCS 플라스크에서 배양하였다. 각 플라스크는 최대 60개 단편, 500 mL의 CM1 또는 DM1 배지를 함유하고, 6,000 IU rhIL-2, 15 μg OKT3, 및 2.5x108개의 조사된 동종이계 단핵 세포로 보충하였다. 배양물을 37℃에서 6-8일 동안 인큐베이션하였다.
2. TIL 배양 재활성화: 7-8일차에 두 경우에 6,000 IU rhIL-2, 30 μg OKT3, 및 5x108개의 조사된 동종이계 단핵 세포가 보충된 CM2 또는 DM1 배지를 천천히 첨가하여 배양물을 보충하였다. 플라스크 바닥에 있는 기존 세포를 방해하지 않도록 주의하였다. 배양물을 37℃에서 3-4일 동안 인큐베이션하였다.
3. 배양 규모 확대: 10-11일차에 발생한다. 배양 규모 확대 동안, G-Rex100MCS의 전체 내용물을 두 경우에 3,000 IU/mL의 IL-2가 보충된 CM4 또는 DM2 4L를 함유하는 G-Rex500MCS 플라스크로 옮겼다. 플라스크를 수확할 때까지 37℃에서 5-6일 동안 인큐베이션하였다.
4. 수확/세척/제형화: 16-17일차에 플라스크의 부피를 감소시키고 모았다. 세포를 농축하고 1% HSA를 함유하는 PlasmaLyte A pH 7.4로 세척하였다. 세척된 세포 현탁액을 CryoStor10과 1:1 비율로 제형화하고 rhIL-2를 보충하여 최종 농도가 300 IU/mL가 되도록 하였다.
DP를 제어 속도 동결로 동결보존하고 증기상 액체 질소에 저장하였다. *완전 표준 TIL 배지 1, 2, 또는 4(CM1, CM2, CM4)는 위에 언급된 바와 같이 한정된 매질(DM1 또는 DM2)로 언급된 CTS™OpTmizer™ T-세포 무혈청 확장 매질을 대체할 수 있다.
프로세스 설명. 0일차에, 종양을 3회 세척한 다음, 3x3x3 최종 단편으로 단편화하였다. 전체 종양이 단편화되면, 최종 단편을 동일하게 무작위 배정하고 3개의 모음으로 나누었다. 1개의 무작위 단편 모음을 각 부문에 도입하여 3개의 실험 매트릭스 당 동일한 단편 수를 첨가하였다.
종양 L4063 확장을 표준 배지로 수행하고 종양 L4064 확장을 전체 TIL 확장 프로세스에 대해 한정된 배지(CTS OpTmizer)로 수행하였다. 배지의 구성요소는 본원에 기재되어 있다.
CM1 완전 배지 1: 2mM 글루타맥스, 10% 인간 AB 혈청, 젠타마이신(50ug/mL), 2-메르캅토에탄올(55uM)이 보충된 RPMI+ 글루타민. 6000IU/mL IL-2가 보충된 최종 배지 제형.
CM2 완전 배지 2: 50% CM1 매질 + 50% AIM-V 매질. 6000IU/mL IL-2가 보충된 최종 배지 제형.
CM4 완전 배지 4: 글루타맥스(2mM)가 보충된 AIM-V. 3000IU/mL IL-2가 보충된 최종 배지 제형.
CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물(26 mL/L)이 보충된 CTS OpTmizer CTS™OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질.
DM1: CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물(26 mL/L), 및 CTS™ 면역 세포 SR(3%)과, 글루타맥스(2mM)가 보충된 CTS™OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질. 6,000 IU/mL의 IL-2가 보충된 최종 제형.
DM2: CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 보충물(26 mL/L), 및 CTS™ 면역 세포 SR(3%)과, 글루타맥스(2mM)가 보충된 CTS™OpTmizer™ T-세포 확장 기저 매질. 3,000 IU/mL의 IL-2가 보충된 최종 제형.
사용된 모든 유형의 배지, 즉, 완전(CM) 및 한정된(DM) 배지를 미리 준비하고, 사용 전날까지 4℃에서 유지하고, 처리 일 전에 미리 최대 24시간 동안 인큐베이터에서 37℃로 가온하였다.
TIL 배양 재활성화는 두 종양에 대해 7일차에 발생하였다. 규모 확대는 L4063의 경우 10일차 및 L4064의 경우 11일차에 발생하였다. 두 배양물을 16일차에 수확하고 동결보존하였다.
달성된 결과. Gen 3.0 및 Gen 3.1 프로세스에 대한 세포 계수 및 생존력 %를 결정하였다. 모든 조건에서 확장은 이 실시예에 설명된 세부사항을 따랐다.
각각의 종양에 대해, 단편을 동일한 수의 3개 모음으로 나누었다. 종양의 작은 크기로 인해, 플라스크 당 단편의 최대 수에 도달하지 않았다. 3가지 상이한 프로세스에 대해, 총 생존가능한 세포 및 세포 생존력을 각 조건에 대해 평가하였다. 세포 계수는 재활성화의 경우 7일차에 TVC, 규모 확대의 경우 10일차(L4064) 또는 11일차(L4063)에 TVC, 및 수확 시 16/17일차에 TVC로 결정하였다.
7일차 및 10/11일차에 대한 세포 계수를 FIO로 취하였다. 수확 일 16/17일차 TVC를 7일차 재활성화 일 TVC로 나누어 배수 확장을 계산하였다. 3가지 부문을 비교하기 위해, 단편 당 생존가능한 세포의 평균을 계산하기 위해 수확 일에 TVC를 0일차에 배양물에 첨가된 단편의 수로 나누었다.
세포 계수 및 생존력 검정은 L4063 및 L4064에 대해 수행하였다. Gen 3.1-테스트 프로세스는 두 종양에서 Gen 3.0 프로세스보다 단편 당 더 많은 세포를 산출하였다.
총 생존가능한 세포 계수 및 배수 확장; 프로세스 동안 생존력 %. 재활성화, 규모 확대 및 수확 시 퍼센트 생존력을 모든 조건에서 수행하였다. 16/17일차에 수확 시, 최종 TVC를 생존력 %에 대한 방출 기준에 대해 비교하였다. 평가된 모든 조건은 70% 생존력 기준을 능가하였고 프로세스 및 종양에 걸쳐 필적할만하였다.
면역표현형 결정- TIL 최종 생성물에 대한 표현형 특성화. 최종 생성물은 순도, 분화, 및 기억 마커를 테스트하기 위해 유세포 측정 분석을 거쳤다. 집단 퍼센트는 모든 조건에 대해 TCRα/β, CD4+ 및 CD8+ 세포에 대해 일관되었다.
REP TIL의 확장된 표현형 분석을 수행하였다. TIL 생성물은 두 종양에서 Gen 3.0과 비교하여 Gen 3.1 조건에 대해 더 높은 백분율의 CD4+ 세포를 보였고, 두 조건에서 Gen 3.1 조건과 비교하여 Gen 3.0에 대해 CD8+ 집단으로부터 더 높은 백분율의 CD28+ 세포를 보였다.
Gen 3.0 및 Gen 3.1 프로세스로부터 수확된 TIL은 CD4+및 CD8+ 세포에서 CD27 및 CD56 발현과 필적할만한 표현형 마커, 및 CD4+ 게이팅된 세포 집단에서 필적할만한 CD28 발현을 보여주었다. TIL 최종 생성물에서 기억 마커 비교:
16일차에 수확된 TIL의 동결된 샘플을 분석을 위해 염색하였다. TIL 기억 상태는 Gen 3.0과 Gen 3.1 프로세스 사이에 필적할만하였다. TIL 최종 생성물에서 활성화 및 고갈 마커 비교:
활성화 및 고갈 마커는 CD4+ 및 CD8+ 세포에서 게이팅된 Gen 3.0과 Gen 3.1 프로세스 사이에 필적할만하였다.
재자극 시 인터페론 감마 분비. 수확된 TIL은 L4063 및 L4064에 대한 코팅된 항-CD3 플레이트로 밤새 재자극을 거쳤다. Gen 3.0 프로세스와 비교하여 분석된 2개 종양에서 Gen 3.1 프로세스로부터 IFNγ의 더 높은 생산이 관찰되었다.
배양 배지 내 IL-2 수준 측정. 모든 조건 및 프로세스 사이의 IL-2 소모 수준을 비교하기 위해, 세포 상청액을 7일차에 재활성화 개시 시, 10일차(L4064) / 11일차(L4063) 규모 확대 시, 및 16 / 17일차 수확 시 수집하고 동결시켰다. 상청액을 후속적으로 해동한 다음 분석하였다. 세포 배양 상청액 내 IL-2의 양은 제조업체 프로토콜에 의해 측정하였다.
전반적인 Gen 3 및 Gen 3.1 프로세스는 동일한 배지 조건에 걸쳐 평가된 완전 프로세스 동안 IL-2 소모 측면에서 필적할만하였다. L4063 및 L4064에 대해 수집된 소모된 배지에서 IL-2 농도(pg/mL) 분석.
대사산물 분석. 소모된 배지 상청액을 모든 조건에 대해 L4063 및 L4064의 경우 7일차에 재활성화, 10일차(L4064) 또는 11일차(L4063)에 규모 확대, 및 16/17일차에 수확 시 L4063 및 L4064로부터 수집하였다. 상청액은 글루코스, 락테이트, 글루타민, 글루타맥스(GlutaMax), 및 암모니아의 농도에 대해 CEDEX Bio-분석기에서 분석하였다.
한정된 배지는 완전 배지(2g/L)와 비교하여 4.5 g/L의 더 높은 글루코스 농도를 가졌다. 전반적으로, 글루코스의 농도 및 소모는 각 배지 유형 내에서 Gen 3.0 및 Gen 3.1 프로세스에 대해 필적할만하였다.
모든 테스트 조건에 대해, L4063 및 L4064의 두 종양에 대해 락테이트 증가가 관찰되었다. 락테이트의 증가는 Gen 3.0과 Gen 3.1 조건 사이 및 재활성화 확장을 위해 사용된 2개 배지(L4063의 경우 완전 배지 및 L4064의 경우 한정된 배지) 사이에서 필적할만하였다.
L4063의 경우, 표준 기저 배지는 2 mM L-글루타민을 함유하고 배양 조건에서 L-글루타민의 L-글루타메이트 및 암모니아로의 자연적 분해를 보상하기 위해 2mM 글루타맥스가 보충되었다.
L4064 종양의 경우, 사용된 한정된(무혈청) 배지는 기저 배지에 L-글루타민을 함유하지 않았고, 2mM의 최종 농도로 글루타맥스만 보충되었다. 글루타맥스는 L-알라닌 및 L-글루타민의 디펩티드이며, 수용액에서 L-글루타민보다 더 안정하고 글루타메이트 및 암모니아로 자발적으로 분해되지 않는다. 대신에, 디펩티드는 개별 아미노산으로 점진적으로 해리되어, 강력한 세포 성장을 지속하기 위해 L-글루타민을 더 낮지만 충분한 농도로 유지한다
L4063의 경우, 글루타민 및 글루타맥스의 농도는 규모 확대 일에 약간 감소하였지만, 수확 일에 재활성화 일과 비교하여 유사하거나 더 가까운 수준으로 증가를 보여주었다. L4064의 경우, 글루타민 및 글루타맥스 농도는 전체 프로세스 동안 상이한 조건 사이에 유사한 속도로 약간의 분해를 보여주었다.
예상된 바와 같이, 암모니아 농도는 L4063(2 mM 글루타민 + 2 mM 글루타맥스를 함유하는 표준 배지에서 성장)의 경우 L4064(2 mM 글루타맥스를 함유하는 한정된 배지에서 성장)보다 더 높았다. 또한, 예상된 바와 같이, 배양 과정에 걸쳐 암모니아의 점진적 증가 또는 축적이 있었다. 3가지 상이한 테스트 조건에 걸쳐 암모니아 농도의 차이는 없었다.
텔로미어는 Flow - FISH에 의해 반복된다. Flow-FISH 기술을 사용하여 Gen 3 및 Gen 3.1 프로세스 하에 L4063 및 L4064에서 텔로미어 반복의 평균 길이를 측정하였다. 상대 텔로미어 길이(RTL)의 결정은 DAKO의 유세포 측정 분석용 Telomere PNA 키트/FITC를 사용하여 계산하였다. 텔로미어 검정을 수행하였다. L4063 및 L4064의 샘플에서 텔로미어 길이를 대조군 세포주(1301 백혈병)와 비교하였다. 대조군 세포주는 상대 텔로미어 길이의 계산을 허용하는 긴 안정한 텔로미어를 갖는 4배체 세포주이다. 두 종양에서 평가된 Gen 3 및 Gen 3.1 프로세스는 필적할만한 텔로미어 길이를 보여주었다. TCR Vβ 레퍼토리 분석
각 프로세스에서 생성된 세포 생성물의 클론 다양성을 결정하기 위해, TIL 최종 생성물을 T-세포 수용체의 CDR3 부분의 서열분석을 통해 클론 다양성 분석에 대해 검정하였다.
3가지 조건 사이에서 3개의 매개변수를 비교하였다:
ㆍ 고유한 CDR3(uCDR3)의 다양성 지수
ㆍ 공유된 uCDR3 %
ㆍ uCDR3의 상위 80%에 대해:
o 공유된 uCDR3 카피 % 비교
o 고유한 클론형의 빈도 비교
대조군 및 Gen 3.1 테스트, TIL 수확된 세포 생성물에 대한 L4063에서 공유된 고유한 CDR3 서열 백분율: 975개의 서열이 Gen 3과 Gen 3.1 테스트 최종 생성물 사이에 공유되며, 이는 Gen 3.1 테스트 최종 생성물과 공유된 Gen 3의 고유한 CDR3 서열의 상위 80% 중 88%에 상응한다.
대조군 및 Gen 3.1 테스트, TIL 수확된 세포 생성물에 대한 L4064에서 공유된 고유한 CDR3 서열 백분율: 2163개의 서열이 Gen 3과 Gen 3.1 테스트 최종 생성물 사이에 공유되며, 이는 Gen 3.1 테스트 최종 생성물과 공유된 Gen 3의 고유한 CDR3 서열의 상위 80% 중 87%에 상응한다.
고유한 CD3 서열의 수는 상이한 프로세스에 대해 16일차에 수확 시 수집된 1x106개의 세포로부터 식별되었다. Gen 3.1 테스트 조건은 샘플 내에서 고유한 펩티드 CDR 수에 기반하여 Gen 3.0과 비교하여 약간 더 높은 클론 다양성을 보여주었다.
Shannon 엔트로피 다양성 지수는 비교를 위한 더 신뢰할 수 있고 통상적인 척도인데, 두 종양에 대한 Gen 3.1 조건이 Gen 3 프로세스보다 약간 더 높은 다양성을 보여주기 때문이며, 이는 Gen 3.1 테스트 조건에 대한 TCR Vβ 레퍼토리가 Gen 3.0 프로세스보다 더 다클론성이라는 것을 시사한다.
추가적으로, Gen 3.1 테스트 조건에 대한 TCR Vβ 레퍼토리는 두 종양 L4063 및 L4064에서 Gen 3.0 프로세스에 대한 상응하는 레퍼토리와 87% 초과 중첩을 보여주었다.
재활성화 일에 Gen 3.1 테스트 L4064에 대한 소모된 배지에서 IL-2 농도 값은 예상된 값 이하였다(Gen 3.1 대조군 및 Gen 3.0 조건과 유사).
낮은 값은 피펫팅 오류로 인한 것일 수 있지만, 최소 샘플로 인해 검정을 반복하는 것은 가능하지 않았다.
샘플 L4064에서 규모 확대 10/ 11일차로부터 소모된 배지는 수집하지 않았고, 상청액에 대한 IL-2 농도 분석 및 대사산물 분석에 포함하지 않았다.
결론. 0일차에 영양물 및 OKT-3을 포함하는 Gen 3.1 테스트 조건은 Gen 3.0 및 Gen 3.1 대조군과 비교하여 수확 16일차에 세포 용량의 더 높은 TVC를 보여주었다. Gen 3.1 테스트 조건에 대한 최종 생성물의 TVC는 Gen 3.0보다 약 2.5배 더 높았다.
두 종양 L4063 및 L4064에 대해 0일차에 OKT-3 및 영양물을 첨가한 Gen 3.1 테스트 조건은 수확 시 플라스크의 최대 용량에 도달하였다. 이들 조건 하에, 0일차에 최대 4개 플라스크가 개시되는 경우, 최종 세포 용량은 80 - 100x109개의 TIL 사이일 수 있다.
최종 TIL 생성물에서 순도, 고갈, 활성화 및 기억 마커를 포함한 표현형 특성화와 같은 모든 품질 속성이 유지되었고 Gen 3.1 테스트와 Gen 3.0 프로세스 사이에 필적할만하였다. TIL 최종 생성물에서 텔로미어 길이 및 소모된 배지에서 IL-2 소모는 Gen 3.0과 Gen 3.1 프로세스 사이에 필적할만하였다.
최종 TIL 생성물에서 IFN-γ 생산은 분석된 두 종양에서 Gen 3.0과 비교하여 0일차에 영양물 및 OKT-3이 첨가된 Gen 3.1에서 3배 더 높았으며, 이는 Gen 3.1 프로세스가 강력한 TIL 생성물을 생성하였다는 것을 시사한다.
테스트 조건에 걸쳐 글루코스 또는 락테이트 수준에서 차이는 관찰되지 않았다. 배지 조건에 걸쳐 Gen 3.0과 Gen 3.1 프로세스 사이에 글루타민 및 암모니아에서 차이는 관찰되지 않았다. 배지에서 낮은 수준의 글루타민은 세포 성장을 제한하지 않으며 배지에서 글루타맥스만 첨가하는 것이 세포 증식에 필요한 영양소를 제공하기에 충분하다는 것을 시사한다.
L4063 및 L4064에 대한 규모 확대 일은 각각 11일차 및 10일차였고 프로세스의 수확 일에 도달한 세포 수 측면에서 주요한 차이를 보이지 않았고 대사산물 소모는 전체 프로세스 동안 두 경우에 필적할만하였다. 이 관찰은 Gen 3.0 최적화 프로세스가 처리일에 유연성을 가질 수 있어, 제조 일정에서 유연성을 촉진할 수 있다는 것을 시사한다.
0일차에 영양물 및 OKT-3이 첨가된 Gen 3.1 프로세스는 Gen 3.0과 비교하여 CDR3 TCRab 서열 분석에 의해 측정된 더 높은 클론 다양성을 보여주었다.
도 32는 Gen 3 프로세스(Gen 3 최적화 프로세스)의 구현예를 설명한다. 표준 배지 및 CTS 최적화 무혈청 배지는 Gen 3 최적화 프로세스 TIL 확장에 사용될 수 있다. CTS Optimizer 무혈청 배지의 경우 배지에서 글루타맥스를 최종 농도 4mM로 증가시키도록 권장된다.
실현가능성은 모든 실험에서 모든 연구 조건에 대해 확립되었다. 모든 실험 및 조건에 걸쳐 그리고 공여자 종양 조직 사이에서, 모든 실험은 IL-2, 인간 혈청-AB, 동종이계 영양 세포, OKT-3과 같은 중요한 원료의 동일한 로트를 활용하여 수행되었다.
비교가능성은 동결보존된 22일차 TIL 생성물에 대한 이전 사양에 따라 임상 제품의 방출 기준을 충족하는 임의의 연구 부문의 능력에 의해 결정되었다.
실시예 12: 한정된 매질을 사용한 종양 확장 프로세스
Gen 2 및 Gen 3 프로세스를 포함하여 위에 개시된 프로세스는 CM1 및 CM2 배지를 한정된 매질(예를 들어 DM1 및 DM2를 포함한, 예를 들어, CTS™ OpTmizer™ T-세포 확장 SFM, ThermoFisher)로 교체하여 수행될 수 있다.
실시예 13: 동결보존된 TIL 세포 요법의 예시적인 생산
이 실시예는 현행 우수제조관리기준(Good Manufacturing Practices)에 따라 G-Rex 플라스크(또는 대안적으로 가스 투과성 백)에서 TIL 세포 요법의 예시적인 cGMP 제조를 설명한다.
표 80. 프로세스 확장 예시적 계획.
표 81. 플라스크 부피.
0일차 CM1 배지 제조. BSC에서 시약을 RPMI 1640 배지 병에 첨가하였다. 다음 시약을 첨가하였다: 열 불활성화 인간 AB 혈청(100.0 mL); 글루타맥스(10.0 mL); 젠타마이신 술페이트, 50 mg/mL(1.0 mL); 2-메르캅토에탄올(1.0 mL)
BSC에서 불필요한 물질을 제거하였다. BSC에서 배지 시약을 배포하고, 제형화된 세척 배지 제조를 위해 BSC에서 젠타마이신 술페이트 및 HBSS를 방치하였다.
IL-2 분취량을 해동하였다. 얼음이 모두 녹을 때까지 1개의 1.1 mL IL-2 분취량(6x106 IU/mL)(BR71424)을 해동하였다. IL-2 로트 # 및 만료를 기록하였다
IL-2 스톡 용액을 배지로 옮겼다. BSC에서, IL-2 스톡 용액 1.0 mL를 제조된 CM1 0일차 배지 병으로 옮겼다. CM1 0일차 배지 1 병 및 IL-2(6x106 IU/mL) 1.0 mL를 첨가하였다.
G-Rex100MCS를 BSC로 통과시켰다. G-Rex100MCS(W3013130)를 BSC로 무균상태로 통과시켰다.
모든 완전 CM1 0일차 배지를 G-Rex100MCS 플라스크(조직 단편 코니칼 또는 GRex100MCS)로 펌핑하였다.
0일차 종양 세척 배지 제조. BSC에서, 5.0 mL 젠타마이신(W3009832 또는 W3012735)을 1 x 500 mL HBSS 배지(W3013128) 병에 첨가하였다. 병 당 다음을 첨가하였다: HBSS(500.0 mL); 젠타마이신 술페이트, 50 mg/mL(5.0 mL). 1 L 0.22-미크론 필터 장치(W1218810)를 통해 제조된 젠타마이신을 함유하는 HBSS를 여과하였다.
0일차 종양 처리. 종양 표본을 수득하고 처리를 위해 즉시 2-8℃에서 특별실로 옮겼다.
종양 세척 배지를 분취하였다. 종양 wash 1은 8" 겸자(W3009771)를 사용하여 수행한다. 종양을 표본 병에서 꺼내고 제조된 "Wash 1" 접시로 옮긴다. 이는 종양 wash 2 및 종양 wash 3으로 이어진다.
종양을 측정하고 평가하였다. 전체 종양 영역의 >30%가 괴사성 및/또는 지방 조직으로 관찰되는지 여부를 평가하였다. 적용가능한 경우 절개를 정리한다. 종양이 크고 종양 외부의 >30%가 괴사성/지방인 것으로 관찰된 경우, 메스 및/또는 겸자의 조합을 사용하여 종양 내부 구조를 보존하면서 괴사성/지방 조직을 제거하여 "절개 정리"를 수행하였다.
종양을 절개한다. 메스 및/또는 겸자의 조합을 사용하여, 종양 표본을 균일한 적절한 크기의 단편(최대 6개의 중간 단편)으로 절단하였다. 중간 종양 단편을 옮겼다. 종양 단편을 대략 3x3x3mm 크기의 조각으로 절개하였다. 건조를 방지하기 위해 중간 단편을 저장하였다.
중간 단편 절개를 반복하였다. 수집된 조각 수를 결정하였다. 바람직한 조직이 남아있는 경우, "선호하는 중간 단편" 6-웰 플레이트에서 추가 선호하는 종양 조각을 선택하여 최대 50개 조각에 대한 방울을 채웠다.
코니칼 튜브를 준비하였다. 종양 조각을 50 mL 코니칼 튜브로 옮겼다. G-Rex100MCS에 대한 BSC를 준비하였다. G-Rex100MCS를 인큐베이터에서 꺼냈다. G-Rex100MCS 플라스크를 BSC에 무균상태로 통과시켰다. 종양 단편을 G-Rex100MCS 플라스크에 첨가하였다. 조각을 균일하게 분포시켰다.
G-Rex100MCS를 다음 매개변수에서 인큐베이션하였다: 인큐베이션된 G-Rex 플라스크: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃; CO2 백분율: 5.0±1.5 %CO2. 계산: 인큐베이션 시간; 하한치 = 인큐베이션 시간 + 252시간; 상한치 = 인큐베이션 시간 + 276시간.
프로세스가 완료된 후, 임의의 남아있는 가온된 배지 및 해동된 IL-2 분취량을 폐기하였다.
11일차 - 배지 제조. 인큐베이터를 모니터링하였다. 인큐베이터 매개변수: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃; CO2 백분율: 5.0±1.5 %CO2.
3x 1000 mL RPMI 1640 배지(W3013112) 병 및 3x 1000 mL AIM-V(W3009501) 병을 인큐베이터에서 ≥30분 동안 가온하였다. RPMI 1640 배지를 인큐베이터에서 꺼냈다. RPMI 1640 배지를 준비하였다. 배지를 여과한다. 3 x 1.1 mL 분취량의 IL-2(6x106 IU/mL)(BR71424)를 해동하였다. AIM-V 배지를 인큐베이터에서 꺼냈다. IL-2를 AIM-V에 첨가한다. 10 L Labtainer 백 및 리피터 펌프 전달 세트를 BSC에 멸균상태로 옮겼다.
10 L Labtainer 배지 백을 준비하였다. Baxa 펌프를 준비하였다. 10L Labtainer 배지 백을 준비하였다. 배지를 10 L Labtainer로 펌핑하였다. 펌프매틱을 Labtainer 백에서 제거하였다.
배지를 혼합하였다. 백을 부드럽게 마사지하여 혼합하였다. 샘플 계획 당 샘플 배지. 배지 20.0 mL를 제거하고 50 mL 코니칼 튜브에 넣었다. 세포 계수 희석 튜브를 준비하였다. BSC에서, "세포 계수 희석용" 및 로트 번호가 라벨링된 AIM-V 배지 4.5 mL를 4개의 15 mL 코니칼 튜브에 첨가하였다. 시약을 BSC에서 2-8℃로 옮겼다. 1 L 전달 팩을 준비하였다. BSC 외부에서 준비된 "완전 CM2 11일차 배지" 백에 부착된 전달 세트에 1 L 전달 팩을 용접하였다(프로세스 노트 5.11에 따라). 영양 세포 전달 팩을 준비하였다. 완전 CM2 11일차 배지를 인큐베이션하였다.
11일차 - TIL 수확. 전처리 표. 인큐베이터 매개변수: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃; CO2 백분율: 5.0±1.5 % CO2. G-Rex100MCS를 인큐베이터에서 꺼냈다. 300 mL 전달 팩을 준비하였다. 전달 팩을 G-Rex100MCS에 용접하였다.
TIL 수확을 위한 플라스크를 준비하고 TIL 수확을 개시한다. TIL을 수확하였다. GatheRex를 사용하여, 세포 현탁액을 혈액 필터를 통해 300 mL 전달 팩으로 옮겼다. 부착 세포에 대한 막을 조사하였다.
플라스크 막을 헹궜다. G-Rex100MCS에서 클램프를 닫았다. 모든 클램프가 닫혀 있음을 확인하였다. TIL 및 "상청액" 전달 팩을 가열 밀봉하였다. TIL 현탁액의 부피를 계산하였다. 샘플링을 위한 상청액 전달 팩을 준비하였다.
Bac-T 샘플을 뽑아냈다. BSC에서, 1 L "상청액" 전달 팩에서 대략 20.0 mL의 상청액을 뽑아내고 멸균 50 mL 코니칼 튜브에 분배하였다.
샘플 계획에 따라 BacT를 접종하였다. 준비된 BacT로 라벨링된 50 mL 코니칼에서 적절한 크기의 주사기를 사용하여 1.0 mL 샘플을 꺼내어 혐기성 병에 접종하였다.
TIL을 인큐베이션하였다. TIL 전달 팩을 필요할 때까지 인큐베이터에 두었다. 세포 계수 및 계산을 수행하였다. 수행된 세포 계수에 대한 생존가능한 세포 농도 및 생존력의 평균을 결정하였다. 생존력 ÷ 2. 생존가능한 세포 농도 ÷ 2. 계수에 대한 상한치 및 하한치를 결정하였다. 하한치: 생존가능한 세포 농도의 평균 x 0.9. 상한치: 생존가능한 세포 농도의 평균 x 1.1. 허용가능한 한계 내에서 두 계수를 확인하였다. 수행된 4개 계수 모두에서 평균 생존가능한 세포 농도를 결정하였다.
TIL 현탁액의 부피를 조절하였다: 세포 계수 샘플을 제거한 후 TIL 현탁액의 조정된 부피를 계산한다. 총 TIL 세포 부피(A). 제거된 세포 계수 샘플의 부피(4.0 mL)(B) 조정된 총 TIL 세포 부피 C=A-B.
총 생존가능한 TIL 세포를 계산하였다. 평균 생존가능한 세포 농도*: 총 부피; 총 생존가능한 세포: C=A x B.
유세포 측정에 대한 계산: 총 생존가능한 TIL 세포 계수가 ≥4.0x107개인 경우, 유세포 측정 샘플에 대해 1.0x107개의 세포를 수득하기 위한 부피를 계산하였다.
유세포 측정에 필요한 총 생존가능한 세포: 1.0x107개의 세포. 유세포 측정에 필요한 세포 부피: 생존가능한 세포 농도를 1.0x107개의 세포 A로 나누었다.
2.0x108개의 생존가능한 세포와 동일한 TIL 현탁액의 부피를 계산하였다. 필요에 따라, 제거할 TIL 세포의 과잉 부피를 계산하여 과잉 TIL을 제거하고 필요에 따라 TIL을 인큐베이터에 넣었다. 필요에 따라 제거된 총 과잉 TIL을 계산하였다.
동결을 위한 표적 세포 농도가 1.0x108개 세포/mL인 과잉 TIL 세포에 첨가하기 위한 CS-10 배지의 양의 계산하였다. 필요에 따라 과잉 TIL을 원심분리하였다. 코니칼 튜브를 관찰하고 CS-10을 첨가하였다.
바이알을 채웠다. 1.0 mL 세포 현탁액을 적절한 크기의 극저온 바이알에 분취하였다. 잔류 부피를 적절한 크기의 극저온 바이알에 분취하였다. 부피가 ≤0.5 mL인 경우, 부피가 0.5 mL가 될 때까지 CS10을 바이알에 첨가한다.
동결보존을 위한 1x107개의 세포를 수득하는 데 필요한 세포의 부피를 계산하였다. 동결보존을 위해 샘플을 제거하였다. TIL을 인큐베이터에 넣었다.
샘플의 동결보존. 코니칼 튜브를 관찰하고 CS-10을 천천히 첨가하고 첨가된 CS10 0.5 mL의 부피를 기록한다.
11일차 - 영양 세포. 영양 세포를 수득하였다. LN2 냉동고에서 적어도 2개의 상이한 로트 번호의 영양 세포 백 3개를 수득하였다. 세포를 해동 준비가 될 때까지 드라이 아이스에서 유지하였다. 수조 또는 크라이오썸(cryotherm)을 준비하였다. 영양 세포를 수조 또는 사이토썸(cytotherm)에서 37.0 ± 2.0℃로 ~3-5분 동안 또는 얼음이 사라질 때까지 해동하였다. 배지를 인큐베이터에서 꺼냈다. 해동된 영양 세포를 모았다. 영양 세포를 전달 팩에 첨가하였다. 주사기의 영양 세포를 전달 팩에 분배하였다. 모은 영양 세포를 혼합하고 전달 팩을 라벨링하였다.
전달 팩 내 영양 세포 현탁액의 총 부피를 계산하였다. 세포 계수 샘플을 꺼냈다. 각 샘플에 대해 별도의 3 mL 주사기를 사용하여, 영양 세포 현탁액 전달 팩에서 4 x 1.0 mL 세포 계수 샘플을 무바늘 주사 포트를 사용하여 뽑아냈다. 각 샘플을 라벨링된 극저온 바이알에 분취하였다. 세포 계수를 수행하고 증배 인자를 결정하고, 프로토콜을 선별하고 증배 인자를 입력하였다. 수행된 세포 계수의 생존가능한 세포 농도 및 생존력의 평균을 결정하였다. 계수에 대한 상한치 및 하한치를 결정하고 한계 내에서 확인한다.
영양 세포 현탁액의 부피를 조정하였다. 세포 계수 샘플을 제거한 후 영양 세포 현탁액의 조정된 부피를 계산하였다. 총 생존가능한 영양 세포를 계산하였다. 필요에 따라 추가 영양 세포를 수득하였다. 필요에 따라 추가 영양 세포를 해동하였다. 4번째 영양 세포 백을 지퍼 탑 백에 넣고 37.0 ± 2.0℃ 수조 또는 사이토썸에서 ~3-5분 동안 해동하고 추가 영양 세포를 모았다. 부피를 측정하였다. 주사기 내 영양 세포의 부피를 측정하고 아래에 기록하였다(B). 영양 세포의 새로운 총 부피를 계산하였다. 영양 세포를 전달 팩에 첨가하였다.
AIM-V 배지 4.5 mL를 4개의 15 mL 코니칼 튜브에 첨가하여 필요에 따라 희석액을 제조하였다. 세포 계수를 준바하였다. 각 샘플에 대해 별도의 3 mL 주사기를 사용하여, 영양 세포 현탁액 전달 팩에서 4 x 1.0 mL 세포 카운트 샘플을 무바늘 주사 포트를 사용하여 제거하였다. 세포 카운트 및 계산을 수행하였다. 평균 생존가능한 세포 농도를 수행된 4개 카운트 모두에서 결정하였다. 영양 세포 현탁액의 부피를 조정하고 세포 카운트 샘플을 제거한 후 영양 세포 현탁액의 조정된 부피를 계산하였다. 총 영양 세포 부피에서 꺼낸 4.0 mL를 뺐다. 5x109개의 생존가능한 영양 세포를 수득하는 데 필요한 영양 세포 현탁액의 부피를 계산하였다. 과잉 영양 세포 부피를 계산하였다. 제거할 과잉 영양 세포의 부피를 계산하였다. 과잉 영양 세포를 제거하였다.
1.0 mL 주사기 및 16G 바늘을 사용하여, OKT3 0.15 mL를 뽑아내고 OKT3을 첨가하였다. 영양 세포 현탁액 전달 팩을 가열 밀봉하였다.
11일차 G-Rex 충전 및 시드 설정 G-Rex500MCS. "완전 CM2 11일차 배지"를 인큐베이터에서 꺼내고 배지를 G-Rex500MCS로 펌핑하였다. 배지 4.5L를 G-Rex500MCS에 펌핑하여, 플라스크의 표시된 선까지 채웠다. 필요에 따라 플라스크를 가열 밀봉하고 인큐베이션하였다. 영양 세포 현탁액 전달 팩을 G-Rex500MCS에 용접하였다. 영양 세포를 G-Rex500MCS에 첨가하였다. 가열 밀봉하였다. TIL 현탁액 전달 팩을 플라스크에 용접하였다. TIL을 G-Rex500MCS에 첨가하였다. 가열 밀봉하였다. G-Rex500MCS를 37.0±2.0℃, CO2 백분율: 5.0±1.5 %CO2에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션 창을 계산하였다. 16일차에 G-Rex500MCS를 인큐베이터에서 꺼내기에 적절한 시간을 결정하기 위한 계산을 수행하였다. 하한치: 인큐베이션 시간 + 108시간. 상한치: 인큐베이션 시간 + 132시간.
11일차 과잉 TIL 동결보존. 적용가능: 동결 과잉 TIL 바이알. 동결 전에 CRF가 설정되었는지 확인하였다. 동결보존을 수행하였다. 바이알을 제어 속도 냉동고에서 적절한 저장고로 옮겼다. 동결이 완료되면, 바이알을 CRF에서 적절한 저장고 용기로 옮긴다. 바이알을 적절한 저장고로 옮겼다. LN2 내 저장 위치를 기록하였다.
16일차 배지 제조. AIM-V 배지를 미리 가온하였다. 배지 백 1, 2, 및 3을 위해 배지가 가온된 시간을 계산하였다. 모든 백이 12 내지 24시간 기간 동안 가온되었는지 확인하였다. 상청액용 10L Labtainer를 설정하였다. 유체 펌프 전달 세트의 더 큰 직경 끝을 루어 커넥터를 사용하여 10L Labtainer 백의 암 포트 중 하나에 부착하였다. 상청액용 10L Labtainer를 설정하고 라벨링하였다. 상청액용 10L Labtainer를 설정하였다. BSC에서 제거하기 전에 모든 클램프가 닫혀 있는지 확인하였다. 주: 상청액 백은 TIL 수확 동안 사용되었으며, 이는 배지 제조와 동시에 수행될 수 있다.
IL-2를 해동하였다. 모든 얼음이 녹을 때까지 CTS AIM V 배지의 백 당 IL-2(6x106 IU/mL)(BR71424)의 5 x 1.1 mL 분취량을 해동하였다. 100.0 mL 글루타맥스를 분취하였다. IL-2를 글루타맥스에 첨가하였다. 제형용 CTS AIM V 배지 백을 준비하였다. 제형용 CTS AIM V 배지 백을 준비하였다. Baxa 펌프를 실행한다. 배지를 제형화하도록 준비하였다. 글루타맥스 +IL-2를 백에 펌핑하였다. 매개변수를 모니터링하였다: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃, CO2 백분율: 5.0±1.5% CO2. 완전 CM4 16일차 배지를 가온하였다. 희석액을 제조하였다.
16일차 REP 분할. 인큐베이터 매개변수를 모니터링하였다: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃, CO2 백분율: 5.0±1.5 %CO2. G-Rex500MCS를 인큐베이터에서 꺼냈다. TIL 현탁액으로서 1 L 전달 팩을 준비 및 라벨링하고 1 L로 칭량하였다.
G-Rex500MCS의 부피 감소. 배양 상청액 ~4.5 L를 G-Rex500MCS에서 10L Labtainer로 옮겼다.
TIL 수확을 위한 플라스크를 준비하였다. 상청액을 제거한 후, 모든 클램프를 적색 선까지 닫았다.
TIL 수확 개시. 플라스크를 힘차게 두드리고 배지를 휘저어 세포를 방출하고 모든 세포가 분리되었는지 확인하였다.
TIL 수확. TIL 현탁액 전달 팩으로 이어지는 모든 클램프를 해제하였다. GatheRex를 사용하여 세포 현탁액을 TIL 현탁액 전달 팩으로 옮겼다. 주: 모든 세포 및 배지가 수집될 때까지 경사진 가장자리를 유지하라. 부착 세포에 대한 막을 검사하였다. 플라스크 막을 헹궜다. G-Rex500MCS의 클램프를 닫았다. TIL을 함유하는 전달 팩을 가열 밀봉하였다. 상청액을 함유하는 10L Labtainer를 가열 밀봉하였다. 세포 현탁액을 함유하는 전달 팩의 무게를 기록하고 현탁액 부피를 계산한다. 샘플 제거를 위해 전달 팩을 준비하였다. 세포 상청액에서 테스트 샘플을 제거하였다.
멸균성 및 BacT 테스트 샘플링. 제조된 BacT로 라벨링된 15 mL 코니칼에서 1.0 mL 샘플을 꺼냈다. 세포 카운트 샘플을 꺼냈다. BSC에서, 각 샘플에 대해 별도의 3 mL 주사기를 사용하여, TIL 현탁액 전달 팩에서 4 x 1.0 mL 세포 카운트 샘플을 꺼냈다.
마이코플라즈마 샘플을 꺼냈다. 3 mL 주사기를 사용하여, TIL 현탁액 전달 팩에서 1.0 mL를 꺼내어 "마이코플라즈마 희석제"로 라벨링된 15 mL 코니칼에 넣었다.
시딩용 전달 팩을 준비하였다. TIL을 인큐베이터에 넣었다. 세포 현탁액을 BSC에서 꺼내고 필요할 때까지 인큐베이터에 넣었다. 세포 카운트 및 계산을 수행하였다. 세포 현탁액 0.5 mL를 1:10 희석을 제공하는 제조된 AIM-V 배지 4.5 mL에 첨가하여 초기에 세포 카운트 샘플을 희석하였다. 수행된 세포 카운트의 생존가능한 세포 농도 및 생존력의 평균을 결정하였다. 카운트에 대한 상한치 및 하한치를 결정하였다. 주: 희석은 기준 외 예상된 세포 농도에 따라 조정될 수 있다. 수행된 4개 계수 모두에서 평균 생존가능한 세포 농도를 결정하였다. TIL 현탁액의 부피를 조정하였다. 세포 카운트 샘플을 제거한 후 TIL 현탁액의 조정된 부피를 계산하였다. 총 TIL 세포 부피에서 테스트를 위해 뺀 5.0 mL를 뺐다.
총 생존가능한 TIL 세포를 계산하였다. 시딩할 플라스크의 총 수를 계산하였다. 주: 시딩할 G-Rex500MCS 플라스크의 최대 수는 5개였다. 시딩할 플라스크의 계산된 수가 5개를 초과하는 경우, 이용가능한 세포 현탁액의 전체 부피를 사용하여 5개만 시딩하였다.
하위배양을 위한 플라스크 수를 계산한다. 준비된 백 이외에 필요한 배지 백의 수를 계산하였다. 계산된 바와 같이 필요한 G-Rex-500M 플라스크 2개 당 "CM4 16일차 배지"의 10L 백 1개를 준비하였다. 추가 배지를 준비하고 가온하는 동안 첫번째 GREX-500M 플라스크(들)에 시딩을 진행하였다. 계산된 수의 결정된 추가 배지 백을 준비하고 가온하였다. G-Rex500MCS를 채웠다. 배지를 펌핑할 준비를 하고 배지 4.5L를 G-Rex500MCS로 펌핑하였다. 가열 밀봉하였다. 충전을 반복하였다. 플라스크를 인큐베이션하였다. 새로운 G-Rex500MCS 플라스크에 첨가할 TIL 현탁액의 목표 부피를 계산하였다. 계산된 플라스크 수가 5개를 초과하는 경우 세포 현탁액의 전체 부피를 사용하여 5개만 시딩될 것이다. 시딩을 위한 플라스크를 준비하였다. G-Rex500MCS를 인큐베이터에서 꺼냈다. 펌핑용 G-Rex500MCS를 준비하였다. 큰 필터 라인을 제외하고 모든 클램프를 닫았다. TIL을 인큐베이터에서 꺼냈다. 시딩을 위한 세포 현탁액을 준비하였다. "TIL 현탁액" 전달 팩을 펌프 주입구 라인에 멸균 용접하였다(프로세스 노트 5.11에 따라). TIL 현탁액 백을 저울에 놓았다.
플라스크에 TIL 현탁액을 시딩하였다. 계산된 TIL 현탁액 부피를 플라스크에 펌핑하였다. 가열 밀봉하였다. 남아있는 플라스크를 채웠다.
인큐베이터를 모니터링하였다. 인큐베이터 매개변수: 온도 LED 디스플레이: 37.0±2.0℃, CO2 백분율: 5.0±1.5 % CO2. 플라스크를 인큐베이션하였다.
22일차에 인큐베이터에서 G-Rex500MCS를 꺼내는 시간 범위를 결정하였다.
22일차 세척 완충액 제조. 10 L Labtainer 백을 준비하였다. BSC에서, 4" 플라즈마 전달 세트를 루어 연결을 통해 10L Labtainer 백에 부착한다. 10 L Labtainer 백을 준비하였다. BSC를 밖으로 옮기기 전에 모든 클램프를 닫았다. 주: 수확할 G-Rex500MCS 플라스크 2개 당 10L Labtainer 백 1개를 준비하였다. Plasmalyte를 3000 mL 백으로 펌핑하고 펌프를 역전시키고 백위 위치를 조작함으로써 3000 mL Origen 백에서 공기를 제거하였다, 인간 알부민 25%를 3000 mL 백에 첨가하였다. 최종 부피가 120.0 mL인 인간 알부민 25%를 수득하였다.
IL-2 희석제를 준비하였다. 10 mL 주사기를 사용하여, LOVO 세척 완충액 5.0 mL를 LOVO 세척 완충액 백의 무바늘 주사 포트를 사용하여 꺼냈다. LOVO 세척 완충액을 50 mL 코니칼 튜브에 분배하였다.
CRF 빈 백 LOVO 세척 완충액을 분취하였다. 100 mL 주사기를 사용하여, 무바늘 주사 포트에서 LOVO 세척 완충액 70.0 mL를 뽑아냈다.
모든 얼음이 녹을 때까지 IL-2(6x106 IU/mL) 1.1 mL 1개를 해동하였다. 50 μL IL-2 스톡(6x106 IU/mL)을 "IL-2 희석제"로 라벨링된 50 mL 코니칼 튜브에 첨가하였다.
동결보존 준비. 5개의 극저온 카세트를 2-8℃에서 최종 생성물 동결보존을 위해 사전 조건화에 두었다.
세포 카운트 희석액을 준비하였다. BSC에서, 로트 번호 및 "세포 카운트 희석용"으로 라벨링된 AIM-V 배지 4.5 mL를 4개의 별도의 15 mL 코니칼 튜브에 첨가하였다. 세포 카운트를 준비하였다. 4개의 극저온 바이알을 바이알 번호(1-4)로 라벨링하였다. 바이알을 사용할 BSC 하에 유지하였다.
22일차 TIL 수확. 인큐베이터를 모니터링하였다. 인큐베이터 매개변수: 온도 LED 디스플레이: 37 ± 2.0℃, CO2 백분율: 5%±1.5%. G-Rex500MCS 플라스크를 인큐베이터에서 꺼냈다. TIL 수집 백을 준비하고 라벨링하였다. 추가 연결을 봉쇄하였다. 부피 감소: 상청액 ~4.5L를 G-Rex500MCS에서 상청액 백으로 옮겼다.
TIL 수확용 플라스크를 준비하였다. TIL 수집을 개시하였다. 플라스크를 강하게 두드리고 배지를 휘저어 세포를 방출한다. 모든 세포가 분리되었는지 확인한다. TIL 수집을 개시하였다. TIL 현탁액 수집 백으로 이어지는 모든 클램프를 해제하였다. TIL 수확을 수행한다. GatheRex를 사용하여, TIL 현탁액을 3000 mL 수집 백으로 옮겼다. 부착 세포에 대한 막을 조사한다. 플라스크 막을 헹궜다. G- Rex500MCS의 클램프를 닫고 모든 클램프가 닫혔는지 확인하였다. 세포 현탁액을 LOVO 공급원 백으로 옮겼다. 모든 클램프를 닫았다. 가열 밀봉하였다. 4x1.0 mL 세포 카운트 샘플을 꺼냈다.
세포 카운트를 수행하였다. NC-200 및 프로세스 노트 5.14를 활용하여 세포 카운트 및 계산을 수행하였다. 처음에 세포 현탁액 0.5 mL를 제조된 AIM-V 배지 4.5 mL에 첨가함으로써 세포 카운트 샘플을 희석하였다. 이는 1:10 희석을 제공하였다. 수행된 세포 계수의 평균 생존력, 생존가능한 세포 농도, 및 총 유핵 세포 농도를 결정하였다. 계수에 대한 상한치 및 하한치를 결정하였다. 수행된 세포 계수의 평균 생존력, 생존가능한 세포 농도, 및 총 유핵 세포 농도를 결정하였다. LOVO 공급원 백을 칭량하였다. 총 생존가능한 TIL 세포를 계산하였다. 총 유핵 세포를 계산하였다.
마이코플라즈마 희석제를 준비하였다. 루어 샘플 포트를 통해 1개 상청액 백에서 10.0 mL를 꺼내어 15 mL 코니칼에 넣었다.
"TIL G-Rex 수확" 프로토콜을 수행하고 최종 생성물 목표 부피를 결정하였다. 일회용 키트를 로딩하였다. 여액 백을 제거하였다. 여액 용량을 입력하였다. 여액 용기를 벤치탑에 두었다. PlasmaLyte를 부착하였다. PlasmaLyte가 부착되었는지 확인하고 PlasmaLyte가 움직이는지 관찰하였다. 공급원 용기를 배관에 부착하고 공급원 용기가 부착되었는지 확인하였다. PlasmaLyte가 움직였는지 확인하였다.
최종 제형 및 충전. 목표 부피/백 계산. 빈 백을 제형화하기 위한 CS-10 및 LOVO 세척 완충액의 부피를 계산하였다. CRF 블랭크를 준비하였다.
최종 생성물에 첨가할 IL-2의 부피를 계산하였다. 바람직한 최종 IL-2 농도(IU/mL) - 300IU/mL. IL-2 작업 스톡: 6 x 104 IU/mL. 연결 장치를 조립하였다. 4S-4M60을 CC2 세포 연결에 멸균 용접하였다. CS750 극저온 백을 준비된 벨트에 멸균 용접하였다. CS-10 백을 4S-4M60의 스파이크에 용접하였다. IL-2를 함유하는 TIL을 준비하였다. 적절한 크기의 주사기를 사용하여, "IL-2 6x104"개의 분취량에서 결정된 IL-2의 양을 제거하였다. 제형화된 TIL 백을 라벨링하였다. 제형화된 TIL 백을 장치에 첨가하였다. CS10를 첨가하였다. 주사기를 교환하였다. 공기 ~10 mL를 100 mL 주사기로 뽑아 장치에 있는 60 mL 주사기를 교체하였다. CS10를 첨가하였다. CS-750 백을 준비하였다. 세포를 분배하였다.
최종 생성물 백에서 공기를 제거하고 유지였다. 마지막 최종 생성물 백이 채워지면, 모든 클램프를 닫았다. 공기 10 mL를 새로운 100 mL 주사기로 뽑아 장치에 있는 주사기를 교체하였다. 보유물을 50 mL 코니칼 튜브에 분배하고 튜브를 "Retain" 및 로트 번호로 라벨링한다. 각 백에 대한 공기 제거 단계를 반복한다.
육안 검사를 포함하여 동결 보존을 위한 최종 생성물을 준비하였다. 극저온 백을 동결보존할 때까지 냉동 백 또는 2-8℃에서 보관하였다.
세포 계수 샘플을 꺼냈다. 적절한 크기의 피펫을 사용하여, 보유물 2.0 mL를 꺼내고 세포 계수에 사용할 15 mL 코니칼 튜브에 넣는다. 세포 계수 및 계산을 수행하였다. 주: 희석이 충분한지 확인하기 위해 1개 샘플만 적절한 희석으로 희석하였다. 추가 샘플을 적절한 희석 인자로 희석하고 계수를 진행하였다. 수행된 세포 계수의 생존가능한 세포 농도 및 생존력의 평균을 결정하였다. 계수에 대한 상한치 및 하한치를 결정하였다. 주: 희석은 기준 외 세포의 예상된 농도에 따라 조정될 수 있다. IFN-γ를 계산하였다. 최종 생성물 백을 가열 밀봉하였다.
표 82의 예시적인 샘플 계획에 따라 샘플을 라벨링하고 수집하였다.
표 82. 샘플 계획.
멸균성 및 BacT 테스트. 샘플링 테스트. BSC에서, 1.0 mL 샘플을 적절한 크기의 주사기를 사용하여 수집된 보유 세포 현탁액에서 제거하고 혐기성 병에 접종한다. 호기성 병에 대해 위의 과정을 반복한다.
최종 생성물 동결보존. 제어 속도 냉동고(CRF)를 준비하였다. CRF가 설정되었는지 확인하고 CRF 프로브를 설정하였다. 최종 생성물 및 샘플을 CRF에 넣었다. 4℃ ± 1.5℃에 도달하는 데 필요한 시간을 결정하고 CRF 실행을 진행하였다. CRF를 완료하고 저장하였다. 실행을 완료한 후 CRF를 중지하였다. CRF에서 카세트 및 바이알을 제거한다. 저장을 위해 카세트 및 바이알을 증기상 LN2로 옮겼다. 저장 위치를 기록하였다.
최종 약물 제품의 후처리 및 분석은 다음 테스트를 포함하였다: (22일차) 유세포 측정에 의해 22일차 REP에서 CD3+ 세포 결정; (22일차) 그람 염색 방법(GMP); (22일차) Gel Clot LAL 검정(GMP)에 의한 박테리아 엔도톡신 테스트; (16일차) BacT 멸균성 검정(GMP); (16일차) TD-PCR(GMP)에 의한 마이코플라즈마 DNA 검출; 허용가능한 모양 속성; (22일차) BacT 멸군성 검정(GMP)(22일차); (22일차) IFN-감마 검정. 본원에 기재된 바와 같은 다른 효능 검정이 또한 TIL 생성물을 분석하는 데 이용된다.
실시예 14: 고형 종양 환자에서 자가 종양 침윤 림프구의 2상 다기관 연구
연구 설계의 개요. 이 실시예는 본 출원 뿐만 아니라 이 실시예에 기재된 바와 같이 준비된 TIL을 사용하여, 펨브롤리주맙과 조합된 TIL 또는 단일 요법으로서 TIL을 사용하여 ACT를 평가하는 전향적 공개 라벨 다중 코호트 비무작위 다기관 2상 연구를 설명한다.
목적. 1차 목적은 조사자에 의해 평가된 바와 같이, 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST 1.1)을 사용하여, 객관적 반응률(ORR)에 의해 결정된 바와 같이, MM, HNSCC, 또는 NSCLC 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 자가 TIL 또는 이전에 진행되었거나 CPI로 치료 후 재발성 또는 불응성(r/r) NSCLC 환자에서 단일 요법으로서 TIL의 효능을 평가하는 것이다.
등급 ≥3 치료 유발 이상 반응(TEAE)의 발생률에 의해 측정된 바와 같이 MM, HNSCC, 및 NSCLC 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 TIL 또는 r/r NSCLC 환자에서 단일 요법으로서 TIL의 안전성 프로파일을 특성화하기 위해.
2차 목적은 완전 반응(CR) 비율, 반응 기간(DOR), 질병통제율(DCR), 조사자에 의해 평가된 바와 같이, RECIST 1.1을 사용한 무진행 생존(PFS), 및 전체 생존(OS)을 사용하여 MM, HNSCC, 및 NSCLC 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 자가 TIL 또는 r/r NSCLC 환자에서 단일 요법으로서 TIL의 효능을 추가로 평가하는 것이다.
연구는 다음 코호트를 포함한다:
ㆍ 코호트 1A: 면역치료를 제외하고 ≤3개의 이전 전신 요법을 받은 IIIC기 또는 IV기 절제불가능 또는 MM 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 TIL 요법. 이전에 치료받은 경우, 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 방사선학적으로 입증된 진행이 있어야 한다.
ㆍ 코호트 2A: 면역치료를 제외하고 ≤3개의 이전 전신 요법을 받은 진행성, 재발성 또는 전이성 HNSCC(예를 들어, T1N1-N2B기, T2-4N0-N2b기) 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 TIL 요법. 이전에 치료받은 경우, 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 방사선학적으로 입증된 진행이 있어야 한다.
ㆍ 코호트 3A: 면역치료를 제외하고 ≤3개의 이전 전신 요법을 받은 국소 진행성 또는 전이성(III- IV기) NSCLC 환자에서 펨브롤리주맙과 조합된 TIL 요법. 이전에 치료받은 경우, 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 방사선학적으로 입증된 진행이 있어야 한다.
ㆍ 코호트 3B: ≤3개의 이전 전신 요법의 일부로서 이전에 CPI(예를 들어, 항-PD-1/항-PD-L1)를 사용한 전신 요법을 받은 III기 또는 IV기 NSCLC 환자에서 단일 제제로서 TIL 요법. 이전에 치료받은 경우, 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 방사선학적으로 입증된 진행이 있어야 한다.
이용가능한 효과적인 표적화 요법이 있는 종양유전자 유발 종양이 있는 코호트 3A 및 3B(NSCLC)의 환자는 적어도 하나의 표적화 요법을 받아야 한다.
모든 환자는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈으로 이루어진 비골수파괴성 림프구고갈(NMA-LD) 사전 조건화 레지멘에 앞서 자기 동결보존된 TIL 요법(코호트 할당에 따라 펨브롤리주맙이 있거나 없음)을 받았다. TIL 주입 후, 최대 6회 IV 인터류킨-2(IL-2) 용량이 투여되었다.
달리 명시되지 않는 한, 하기 일반적인 연구 기간은 4개 코호트 모두에서 발생하였다.
스크리닝 및 종양 절제: 연구 진입부터 최대 4주(28일); TIL 생성물의 제조: 종양 절제로부터 대략 ≤22일; 및 아래 논의된 바와 같은 치료 기간.
치료 기간(코호트 1A, 2A, 및 3A): NMA-LD(7일), TIL 주입(1일) 후 IL-2 투여(1 내지 4일)를 포함하여 최대 2년. 환자는 TIL 생산 및 기준선 스캔을 위한 종양 절제 완료 후 그러나 NMA-LD 레지멘의 개시 전에 펨브롤리주맙의 단일 주입을 받는다. 펨브롤리주맙의 다음 용량은 IL-2 완료 후보다 더 이르지 않을 것이며 이후 ≤2 년(24개월) 동안 또는 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성 중 어느 쪽이든 먼저 발생할 때까지 Q3W ± 3일 동안 지속된다. 치료 종료시점(EOT) 방문은 펨브롤리주맙의 마지막 용량 후 30일 이내에 발생하였다. 방문은 해당되는 경우 평가 종료시점(EOA) 방문과 조합될 수 있다(예를 들어, 질환 진행 시 또는 신규 항암 요법의 시작 시 펨브롤리주맙 중단이 발생함).
치료 기간(코호트 3B): NMA-LD(7일), TIL, 주입(1일) 후 IL-2 투여(1 내지 4일)를 포함하여 최대 12일. EOT 방문은 일단 환자가 IL-2의 마지막 용량을 받으면 발생하였다. EOT 방문은 치료 중단 후 30일 이내에 수행되었고 평가 기간 동안 이 간격 내에 발생하는 임의의 예정된 방문과 조합될 수 있다.
평가 기간: 0일차에 TIL 주입 후 시작되어 질환 진행 시 신규 항암 요법 시작, 연구 평가에 동의 부분 철회, 또는 5년(60개월) 중 어느 쪽이든 먼저 발생하면 종료된다. 평가 종료시점(EOA) 방문은 환자가 질환 진행에 도달하거나 신규 항암 요법을 시작하면 발생하였다.
본원에 기재된 바와 같이 제조된 TIL을 사용한 TIL 자가 요법은 다음 단계로 구성되었다:
1. TIL 세포 생성물의 공급원으로서 역할을 하는 자가 조직을 제공하기 위한 종양 절제;
2. 중앙 우수제조관리기준(GMP) 시설에서 생산된 TIL 생성물;
3. 7-일 NMA-LD 사전 조건화 레지멘;
4. 코호트 1A, 2A, 및 3A: 환자는 TIL 생산 및 기준선 스캔을 위한 종양 절제 완료 후 그러나 NMA-LD 레지멘의 개시 전에 펨브롤리주맙의 단일 주입을 받는다. 펨브롤리주맙의 다음 용량은 IL-2 완료 후보다 이르지 않으며 이후 Q3W ± 3일 동안 지속될 것이다.
5. 자가 TIL 생성물 주입(0일차); 및
6. 최대 6회 용량까지 IV IL-2 투여.
코호트 1A, 2A, 및 3A에서, 펨브롤리주맙의 다음 용량은 IL-2 완료 후보다 이르지 않았으며 ≤2년(24개월) 동안, 또는 질환 진행 또는 허용되지 않은 독성 중 어느 쪽이든 먼저 발생할 때까지 Q3W ± 3일 동안 지속되었다.
코호트 1A, 2A, 및 3A에 대한 흐름도는 도 7에서 찾을 수 있다. 코호트 3B에 대한 흐름도는 도 8에서 찾을 수 있다. 환자는 종양 적응증에 따라 적절한 코호트에 할당되었다.
TIL 요법 + 펨브롤리주맙(코호트 1A, 2A, 및 3A). 환자를 스크리닝하고 종양 절제를 위한 수술 일정을 잡았다. 그런 다음 환자에서 하나 이상의 종양 병변을 절제하여, 이를 TIL 생산을 위한 중앙 제조 시설로 보냈다.
다음으로, NMA-LD 레지멘을 모방하였고 개시하고 2일 동안 -7일차 및 -6일차에 메스나(현장 표준 치료 또는 USPI/SmPC에 따라)와 함께 IV 사이클로포스파미드(60 mg/kg) 이어서 5일 동안 IV 플루다라빈(25 mg/m2: -5일차 내지 -1일차)으로 이루어졌다.
코호트 1A, 2A, 및 3A의 환자는 TIL 생산 및 기준선 스캔을 위한 종양 절제 완료 후 및 NMA-LD 레지멘 개시 전에 펨브롤리주맙의 단일 주입을 받았다. 600,000 IU/kg IV 용량으로 IL-2 투여는 0일차에 TIL 주입 완료 후 3시간 이내, 늦어도 24 시간 까지 시작되었다. 추가 IL-2 투여는 최대 6회 용량까지 대략 8 내지 12시간마다 주어질 것이다. 펨브롤리주맙의 제2 용량은 IL-2 완료 후보다 이르지 않았다. 환자는 제2 펨브롤리주맙 투여 전에 모든 IL-2-관련 독성(등급 ≤2)에서 회복되어야 한다. 펨브롤리주맙은 이후에 ≤2년(24개월) 동안 또는 질환 진행 또는 허용되지 않은 독성 중 어느 쪽이든 먼저 발생할 때까지 Q3W ± 3일 동안 지속될 것이다.
단일 제제로서 TIL 요법(코호트 3B). 환자를 스크리닝하고 종양 절제를 위한 수술 일정을 잡았다. 그런 다음 환자에서 하나 이상의 종양 병변을 절제하여, 이를 TIL 생산을 위한 중앙 제조 시설로 보냈다.
다음으로, NMA-LD 레지멘은 2일 동안 -7일차 및 -6일차에 메스나(현장 표준 치료 또는 USPI/SmPC에 따라)와 함께 IV 사이클로포스파미드(60 mg/kg) 후 5일 동안 IV 플루다라빈(25 mg/m2: -5일차 내지 -1일차)으로 이루어졌다.
종양-유래 자가 TIL 생성물의 주입은 플루다라빈의 마지막 용량 후 24시간 이 되기 전에 발생하였다. 600,000 IU/kg IV의 용량으로 IL-2 투여는 TIL 주입 완료 후 3시간 이내, 늦어도 24시간 까지 시작될 수 있다.
추가 IL-2 투여는 최대 6회 용량까지 대략 8 내지 12시간마다 주어졌다.
종양 침윤 림프구의 생산 및 확장. TIL 자가 세포 생성물은 환자의 종양/병변에서 유래된 생존가능한 세포독성 T 림프구로 구성되었으며, 이는 중앙 GMP 시설에서 생체 외에서 제조된다. TIL 생산 프로세스를 도시하는 예시적인 흐름 다이어그램은 예를 들어 도 9에 제공되어 있다.
TIL 제조 프로세스는 각 개별 환자에서 직경이 ≥1.5 cm인 원발성 또는 속발성 전이성 종양 병변(들)의 외과적 절제 후 임상 현장에서 시작되었다. 다양한 해부학적 위치에서 다중 종양 병변을 절제하여 종양 조직의 총 응집체를 만들 수 있지만; 응집체는 수송 병에 존재하는 생물보존 배지의 제한된 양으로 인해, 직경이 4.0 cm, 또는 중량이 10 g를 초과해서는 안 된다.
일단 종양 병변(들)을 생물보존 수송 병에 넣으면, 2℃ 내지 8℃에서 특급 택배를 사용하여 중앙 GMP 제조 시설로 수송된다. 도착 시, 종양 표본(들)을 단편으로 절개한 다음, 인간 재조합 IL-2와 함께 급속 확장 전 프로토콜(Pre-REP)에서 ~11일 동안 배양하였다.
그런 다음 이들 pre-REP 세포를 영양 세포로서 IL-2, OKT3(인간 CD3에 대한 뮤린 단클론 항체, [무로모납-CD3]으로도 알려짐) 및 조사된 동종이계 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 존재 하에 11일 동안 급속 확장 프로토콜(REP)을 사용하여 추가로 확장시켰다.
그런 다음 확장된 세포를 수확하고, 세척하고, 제형화하고, 동결보존하고, 특급 택배를 통해 임상 현장으로 수송하였다. TIL 세포 생성물의 투여 형태는 TIL이 유래된 환자에게 주입할 준비가 되어 있는 동결보존된 자가 "살아있는-세포 현탁액"이었다. 환자는 생성물 사양에 따라 1 x 109개 내지 150 x 109개의 생존가능한 세포가 함유된 제조 및 출시된 생성물의 전체 용량을 받아야 했다. 임상 경험은 객관적 종양 반응이 이 용량 범위에 걸쳐 달성되었으며, 또한 안전한 것으로 보였음을 나타내었다(Radvanyi, 등, Clin Cancer Res. 2012, 18, 6758-70). 생성물의 전체 용량은 최대 4개 주입 백에 제공되었다.
TIL 세포 생성물을 받기 위한 환자의 준비. 이 연구에 사용되는 NMA-LD 사전 조건화 레지멘(즉, 2일 동안 사이클로포스파미드 + 메스나 후, 5일 동안 플루다라빈)은 국립암연구소(National Cancer Institute)에 의해 개발되고 테스트된 방법에 기반하였다. Rosenberg, 등, Clin. Cancer Res. 2011, 17(13), 4550-7; Radvanyi, 등, Clin. Cancer Res. 2012, 18(24), 6758-70; Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2008, 26(32), 5233-9; Pilon-Thomas, 등, J. Immunother. 2012, 35(8), 615-20; Dudley, 등, J. Clin. Oncol. 2005, 23(10), 2346-57; 및 Dudley, 등, Science 2002, 298(5594), 850-4. 7-일 사전 조건화 레지멘 후, 환자에게 TIL 세포 생성물을 주입하였다.
TIL 주입은 8 내지 12시간마다 IV IL-2(600,000 IU/kg)의 투여가 이루어졌으며, 첫번째 용량은 TIL 주입 완료 후 3 내지 24시간 사이에 투여되고 최대 6회 용량까지 지속되었다. 기관 표준에 따라, IL-2의 용량은 실제 체중을 기준으로 계산될 수 있다.
각 코호트에 대한 환자 집단의 선택은 다음과 같다:
ㆍ 코호트 1A: 환자는 절제 불가능한 MM(IIIC기 또는 IV기, 미국공동암위원회[AJCC] 병기 시스템에 따라 조직학적으로 확인됨) 진단이 확인되었다. 안구 흑색종 환자는 제외되었다. 환자는 사전 면역-종양학 표적화제를 투여받은 적이 없어야 한다. BRAF-돌연변이 양성인 경우, 환자는 사전 BRAF/MEK 표적화 요법을 받은 적이 있을 수 있다.
ㆍ 코호트 2A: 환자는 진행성, 재발성 및/또는 전이성 HNSCC가 있고 치료 경험이 없을 수 있으며; 병리 보고서를 통해 원발성 종양의 조직학적 진단이 요구된다. 환자는 사전 면역치료 레지멘을 받은 적이 없어야 한다.
ㆍ 코호트 3A: 환자는 III기 또는 IV기 NSCLC(편평, 선암종, 대세포 암종) 진단이 확인되었다. 효과적인 표적화 요법이 이용가능한 종양유전자 유발 종양 환자는 적어도 하나의 표적화 요법을 받은 적이 있었다.
ㆍ 코호트 3B: 환자는 III기 또는 IV기 NSCLC(편평, 선암종, 대세포 암종) 진단이 확인되었고 이전에 CPI(예를 들어, 항-PD-1/항-PD-L1)를 사용한 전신 요법을 받았다. 효과적인 표적화 요법이 이용가능한 종양유전자 유발 종양 환자는 적어도 하나의 표적화 요법을 받은 적이 있었다.
모든 환자는 코호트 1A, 2A, 및 3A에 대한 면역치료를 제외하고, 최대 3회의 사전 전신 항암 요법(아래 포함 기준 참조)을 받은 적이 있었다. 이전에 치료된 경우, 환자는 가장 최근 치료 중 또는 후에 방사선학적으로 진행이 확인되었다.
포함 기준. 환자는 연구에 참가하기 위해 다음 포함 기준을 모두 충족해야 한다:
1. 모든 환자는 각각의 조직학에 대해 조직학적으로 또는 병리학적으로 확인된 악성종양 진단을 받았다:
o 절제불가능 또는 전이성 흑색종(코호트 1A)
o 두경부의 진행성, 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종(코호트 2A)
o III기 또는 IV기 NSCLC(편평, 비편평, 선암종, 대세포 암종)(코호트 3A 및 3B).
2. 코호트 1A, 2A, 및 3A만 해당: 환자는 면역치료 경험이 없었다. 이전에 치료된 경우, 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 진행되었다. 코호트 1A, 2A, 및 3A는 최대 3회 사전 전신 항암 요법을 받은 적이 있을 수 있으며, 구체적으로:
o 코호트 1A에서: 절제불가능 또는 전이성 흑색종(IIIC기 또는 IV기) 환자; BRAF 돌연변이 양성인 경우, 환자는 BRAF 억제제를 받은 적이 있을 수 있다.
o 코호트 2A에서: 절제불가능 또는 전이성 HNSCC 환자. 초기 화학방사선요법을 받은 적이 있는 환자가 허용되었다.
o 코호트 3A에서: 단계 III기 또는 IV기 NSCLC(편평, 비편평, 선암종, 또는 대세포 암종) 환자 및 면역치료 경험이 없고 국소 진행성 또는 전이성 환경에서 ≤3회의 사전 전신 요법 후 진행된 환자. 보조 또는 신보조 환경에서, 또는 결정적화학방사선요법의 일부로서 전신 요법을 받은 환자가 적격하였고 질환이 사전 전신 요법 완료 12개월 이내에 진행된 경우 하나의 요법을 받은 적이 있는 것으로 간주되었다. 표적화 요법에 민감한 돌연변이가 있는 알려진 종양유전자 구동인자(예를 들어, EGFR, ALK, ROS)가 있는 환자는 적어도 하나의 표적화 요법 후 진행되어야 한다.
3. 코호트 3B만 해당: ≤3회 사전 전신 요법의 일부로서 이전에 CPI(예를 들어, 항-PD-1/항-PD-L1)를 함유하는 전신 요법을 받은 적이 있는 III기 또는 IV기 NSCLC(편평, 비편평, 선암종, 또는 대세포 암종) 환자.
o 환자는 가장 최근 요법 중 또는 후에 방사선학적으로 진행이 확인되었다.
o 보조 또는 신보조 환경에서, 또는 근치적 화학방사선요법의 일부로서 전신 요법을 받은 환자가 적격하였고 질환이 사전 전신 요법 완료 12개월 이내에 진행된 경우 하나의 요법을 받은 적이 있는 것으로 간주되었다.
o 표적화 요법에 민감한 돌연변이가 있는 알려진 종양유전자 구동인자(예를 들어, EGFR, ALK, ROS)가 있는 환자는 적어도 하나의 표적화 요법 후 진행되어야 한다.
4. 환자는 TIL 연구용 제품 생산을 위해 절제 후 직경이 최소 1.5 cm인 적어도 1개의 절제가능한 병변(또는 응집 병변)을 갖는다. 외과적 절제가 환자에게 추가 위험을 제기하지 않는 한, 다중 및 다양한 전이성 병변에서 종양 조직을 수득하는 것이 권장되었다.
o TIL 생성을 위해 절제가 고려되는 병변이 이전에 조사된 영역 내에 있는 경우, 병변은 절제 전에 방사선학적 진행을 입증해야 한다.
o 환자는 프로토콜이 필요한 테스트를 위해 적절한 조직병리학 표본을 가져야 한다.
5. 환자는 TIL 제조를 위해 종양 절제 후 표준 RECIST 1.1 지침(예를 들어, Eisenhauer, Eur. J. Cancer 2009, 45, 228-247 참조)에 의해 정의된 바와 같이 측정가능한 질환이 남아있었다:
o 이전에 조사된 영역의 병변은 해당 병변에서 질환의 진행이 입증되지 않는 한 표적 병변으로 선택되지 않았다;
o RECIST에 따라 여전히 측정가능한 TIL 생성을 위해 부분적으로 절제된 병변은 비표적 병변으로 선택될 수 있지만 반응 평가를 위한 표적 병변으로서 역할을 하지 않을 수 있다.
6. 환자는 동의 당시 ≥18세였다.
7. 환자는 미동부종양학협력그룹(ECOG) 수행도 상태가 0 또는 1이고, ≥3개월의 추정된 기대 수명을 갖는다.
8. 가임기 또는 가임기 파트너가 있는 환자는 치료 동안 승인된 매우 효과적인 산아 제한 방법을 기꺼이 실행해야 하며 모든 프로토콜 관련 요법을 받은 후 12개월 동안 지속되어야 한다(주: 가임기 여성은 치료 동안과 IL-2의 마지막 용량 후 12개월, 또는 펨브롤리주맙의 마지막 용량 후 4개월 중 어느 쪽이든 나중에 발생하는 동안 효과적인 피임법을 사용하기로 함). 남성은 연구 기간 동안 또는 치료 중단 후 12개월 동안 중 어느 쪽이든 나중에 발생하는 동안 정자를 기증할 수 없었다.
9. 환자는 다음 혈액학적 매개변수를 가졌다:
o 절대 호중구 수(ANC) ≥1000/mm3;
o 헤모글로빈 ≥9.0 g/dL;
o 혈소판 수 ≥100,000/mm3.
10. 환자는 적절한 장기 기능을 가졌다:
o 정상 상한치(ULN)의 ≤3배인 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT)/혈청 글루탐산-피루브산 트랜스아미나제(SGPT) 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST)/SGOT, 간 전이가 ULN의 ≤5배인 환자.
o 스크리닝 시 Cockcroft Gault 공식을 사용하여 추정된 크레아티닌 제거율 ≥40 mL/분.
o 총 빌리루빈 ≤2 mg/dL.
o 길버트 증후군 환자는 총 빌리루빈이 ≤3 mg/dL이어야 한다.
11. 환자는 인간 면역결핍 바이러스(HIV1 및 HIV2)에 대해 혈청음성이었다. 급성 또는 만성 감염을 나타내는 B형 간염 바이러스 표면 항원(HBsAg), B형 간염 핵심 항체(항 HBc), 또는 C형 간염 바이러스(항-HCV)에 대한 혈청학이 양성인 환자가 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 및 특정 바이러스 노출의 지역적 확산에 기반하여 바이러스 부하에 따라 등록하였다.
12. 환자는 첫번째 연구 치료(즉, NMA-LD 또는 펨브롤리주맙 시작) 전에 아래에 설명된 바와 같이, 최소 기간의 사전 항암 요법(들)으로부터 휴약 기간을 가졌다:
o 표적화 요법: 휴약이 치료 시작 전 최소 14일이면 상피 성장 인자 수용체(EGFR), MEK, BRAF, ALK, ROS1 또는 다른-표적화제(예를 들어, 에를로티닙(erlotinib), 아파티닙(afatinib), 다코미티닙(dacomitinib), 오시메르티닙(osimertinib), 크리조티닙(crizotinib), 세리티닙(ceritinib), 또는 로를라티닙(lorlatinib))를 사용한 사전 표적화 요법이 허용되었다
o 화학치료: 휴약이 치료 시작 전 최소 21일이면 보조, 신보조 또는 결정적 화학치료/ 화학방사선이 허용되었다.
o NMA-LD의 시작 전 ≥21일의 휴약 기간에 따라 코호트 3B에 대한 면역치료, 항-PD-1, 다른 mAb, 또는 백신을 사용한 사전 체크포인트-표적화 요법이 허용되었다.
o 완화적 방사선 요법: 탈모, 피부 색소침착 변화, 또는 다른 임상적으로 유의하지 않은 사건, 예를 들어, 소규모 방사선 피부염 또는 직장 또는 요절박을 제외하고, 모든 방사선 관련 독성이 등급 1 또는 기준선으로 해결되면 사전 외부 빔 방사선이 허용되었다.
o RECIST 1.1을 통해 반응에 대한 표적으로서 평가되는 종양 병변(들)은 방사선 포털 외부에 있지만; 포털 내에 있는 경우, 이들은 진행을 입증해야 한다(위의 포함 기준 참조).
o 수술/사전 계획된 절차: 상처 치유가 발생하고, 모든 합병증이 해결되고, 종양 절제 전에 적어도 14일이 경과하면(주요 수술 절차의 경우) 이전 수술 절차(들)가 허용되었다.
13. 환자는 코호트 배정 전에, 탈모 또는 백반증을 제외하고, 모든 사전 항암 치료 관련 이상 사례(TRAE)에서 등급 ≤1(이상 사례에 대한 공통 용어 기준[CTCAE]에 따라)으로 회복되었다.
14. 사전 항암 요법으로부터 안정한 등급 ≥2 독성을 가진 환자는 의료 모니터와의 상담 후 사례별 기준으로 고려되었다.
15. 펨브롤리주맙을 사용한 치료에 의해 악화될 것으로 합리적으로 예상되지 않는 비가역적 독성을 가진 코호트 1A, 2A, 및 3A 환자는 의료 모니터와의 상담 후에만 포함되었다. 코호트 3B 환자의 경우에만, 면역 체크포인트 억제제 CPI(들)를 사용한 이전 치료의 결과로서 등급 ≥2 이상의 설사 또는 대장염이 입증된 환자는 적어도 6개월 동안 무증상이거나 종양 절제 전 치료후 육안 평가 대장내시경에 의해 정상이어야 한다.
16. 환자는 보호된 건강 정보의 사용 및 개시에 대한 서명 승인을 제공해야 한다.
제외 기준. 다음 기준 중 어느 하나라도 충족하는 환자는 연구에서 제외되었다:
1. 포도막/안구 기원의 흑색종 환자
2. 장기 동종이식 또는 지난 20년 이내에 비골수파괴성 또는 골수파괴성 화학치료를 포함하는 이전 세포 이식 요법을 받은 적이 있는 환자. (주: 이 기준은 이전 NMA-LD 레지멘과 이전 TIL 치료를 받은 경우를 제외하고, TIL을 사용한 재치료를 겪는 환자에게 적용가능하였다.)
3. 증상을 보이고/보이거나 치료되지 않은 뇌 전이가 있는 환자.
o 명확하게 치료된 뇌전이가 있는 환자는 의료 모니터와 논의 후 등록이 고려될 것이며; 치료 시작 전에 환자가 ≥2주 동안 임상적으로 안정하고, 치료 후 자기 공명 영상(MRI)을 통해 새로운 뇌 병변이 없고, 환자가 진행중인 코르티코스테로이드 치료를 필요로 하지 않는 경우.
4. 등록 21일 이내에 전신 스테로이드 요법을 받고 있는 환자.
5. 임신 또는 수유중인 환자.
6. 조사자의 의견으로, 연구 참여 동안 위험 증가가 제기된 활성 의학적 질병(들)을 앓고 있는 환자; 예컨대 전신 감염(예를 들어, 매독 또는 항생제가 필요한 임의의 다른 감염), 응고 장애, 또는 심혈관, 호흡기, 또는 면역계의 다른 활성 주요 의학적 질병.
7. 환자는 활성 또는 이전에 문서화된 자가면역 또는 염증성 장애(폐렴, 염증성 장 질환(예를 들어, 대장염 또는 크론병), 게실염(게실증 제외), 전신 혼반성 루푸스, 유육종증 증후군, 또는 베게너 증후군(다발성혈관염을 동반한 육아종증, 그레이브스병, 류마티스 관절염, 뇌하수체염, 포도막염 등) 포함)을 앓지 않을 수 있다. 다음은 이 기준에 대한 예외였다:
o 백반증 또는 탈모 환자.
o 안정한 갑상선 기능 저하증 환자(예를 들어, 하시모토 증후군 후)
o 호르몬 대체.
o 전신 요법이 필요하지 않은 임의의 만성 피부 병태.
o 식이요법만으로 제어되는 복강병 환자.
8. 치료 시작 전 28일 이내에 생 또는 약독화 백신접종을 받은 환자.
9. 임의의 형태의 원발성 면역결핍증(예컨대 중증 복합 면역결핍증[SCID] 및 후천성 면역 결핍 증후군[AIDS])을 앓고 있는 환자.
10. 연구 약물의 임의의 구성요소에 과민증 이력이 있는 환자. TIL은 다음 중 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지 않는 TIL 생성물 제형의 임의의 구성요소에 대한 알려진 과민증이 있는 환자에게 투여되지 않았다:
o NMA-LD(사이클로포스파미드, 메스나, 및 플루다라빈)
o Proleukin®, 알데스류킨, IL-2
o 아미노글리코사이드계 항생체(즉, 스트렙토마이신, 젠타마이신[젠타마이신 과민증에 대한 피부 테스트가 음성인 환자 제외])
o 디메틸 술폭사이드[DMSO], HSA, IL-2, 및 덱스트란-40을 포함한 TIL 생성물 제형의 임의의 구성요소
o 펨브롤리주맙
11. 좌심실박출계수(LVEF)가 <45%이거나 뉴욕심장협회(New York Heart Association) 클래스 II 이상인 환자. 임의의 ≥60세 환자 또는 허혈성 심장 질환, 흉통, 또는 임상적으로 중요한 심방 및/또는 심실 부정맥 이력이 있는 환자에서 임의의 비가역저 벽 운동 이상을 입증하는 신장 스트레스 테스트.
o 비정상적인 심장 스트레스 테스트를 받은 환자는 후원자의 의료 모니터의 승인으로 적절한 박출률 및 심장학 제거율을 갖는 경우 등록할 수 있다.
12, 폐쇄성 또는 제한성 폐 질환이 있고 문서화된 FEV1(1초에 강제된 호기량)이 예측된 정상치의 ≤60%인 환자.
o 환자가 비정상적인 상기도 구조(즉, 기관절개)로 인해 신뢰할 수 있는 폐활량 측정을 수행할 수 없는 경우, 6-분 걷기 테스트를 사용하여 폐 기능을 평가하였다. 연령 및 성별에 대해 예상되는 적어도 80%의 거리를 걸을 수 없거나 테스트 동안 어느 시점에서 저산소증의 증거(SpO2<90%)를 입증하는 환자는 제외된다.
13. 이전 3년 이내에 또 다른 원발성 악성종양을 앓은 환자(치료가 필요하지 않거나 1년 초과 전에 근치적으로 치료되고, 조사자의 판단 하에, 비흑색종 피부암, DCIS, LCIS, 전립선암 Gleason 점수 ≤6 또는 방광암을 포함하나 이에 제한되지 않는 상당한 재발 위험을 제기하지 않은 환자는 제외함).
14. 치료 개시 21일 이내에 조사용 제품을 사용한 또 다른 임상 연구에 참여한 경우.
연구 평가변수 및 계획된 분석. 1차 및 2차 평가변수를 코호트에 의해 별도로 분석하였다.
1차 평가변수: ORR은 효능 분석 세트 중에서 RECIST 1.1에 따라 조사자에 의해 평가된 바와 같은 최상의 반응으로서 확인된 PR 또는 CR을 달성한 환자의 비율로서 정의되었다.
객관적 반응은 각 질환 평가에 따라 평가하였고 ORR은 상응하는 양측 90% CI를 갖는 이항 비율로서 표현하였다. 각 코호트에 대한 1차 분석은 코호트 당 치료된 모든 환자가 평가 기간에서 조기에 진행/만료되거나 중단되지 않는 한 12개월 동안 추적할 기회를 가질 때 발생하였다.
안전성 1차 평가변수는 상응하는 양측 90% CI를 갖는 이항 비율로서 표현된 각 코호트 내에서 임의의 등급 3 이상의 TEAE 발생률로 측정하였다.
2차 평가변수: 2차 효능 평가변수는 다음과 같이 정의되었다:
ㆍ 조사자에 의해 평가된 바와 같이 확인된 CR을 달성한 반응자에 기반한 CR 비율. DCR은 확인된 PR/CR 또는 지속된 SD(적어도 6주)를 달성한 환자 수의 합계를 효능 분석 세트의 환자 수로 나누고 100%을 곱하여 도출되었다. CR 비율 및 DCR은 점 추정치 및 양측 90% CI를 사용하여 요약되었다.
ㆍ DOR은 객관적 반응을 달성한 환자 중에서 정의되었다. 재발성 또는 진행성 질환이 객관적으로 문서화되거나, 후속 항암 요법을 받은 첫번째 날짜 또는 환자가 사망한 날짜(어느 쪽이든 먼저 기록된 날짜)까지 최초 반응(PR/CR) 기준을 충족한 날짜로부터 측정되었다. PD를 경험하지 않았거나 데이터 컷 또는 최종 데이터베이스 잠금 시간 전에 사망하지 않은 환자는 종양 상태의 적절한 평가가 이루어진 마지막 날짜에 사건 시간을 검열하게 될 것이다.
ㆍ PFS는 림프구고갈 시간에서 PD까지의 시간(개월), 또는 임의의 이유로 인한 사망, 어느 사건이든 더 이른 것으로 정의되었다. PD를 경험하지 않았거나 데이터 컷 또는 최종 데이터베이스 잠금 시간 시 만료되지 않은 환자는 종양 상태의 적절한 평가가 이루어진 마지막 날짜에 사건 시간이 검열되었다.
ㆍ OS는 림프구고갈 시간에서 임의의 이유로 인한 사망까지 시간(개월)으로 정의되었다. 데이터 컷 또는 최종 데이터베이스 잠금 시점까지 만료되지 않은 환자는 알려진 생존 상태의 마지막 날짜에 사건 시간이 검열되었다.
ㆍ DOR, PFS, 및 OS는 올바른 검열을 거쳤다. Kaplan-Meier 방법은 시간 대 사건 효능 평가변수를 요약하는 데 사용될 것이다. 종양 평가를 위한 기준선 데이터는 모든 코호트에 대한 림프구고갈 전 마지막 스캔이었다.
ㆍ 상기 효능 매개변수는 기준선 질환 특성; BRAF 상태(코호트 1A만), HPV 상태(코호트 2A만), 편평 또는 비편평 폐 질환(코호트 3A 및 3B만), 및 항-PD-L1 상태에 의해 정의된 하위집합에 대한 적용가능한 코호트에 대해 추정될 것이다.
실시예 15: 국소 진행성 또는 전이성 비소세포 폐암 환자에서 자가 종양 침윤 림프구의 2상 다기관 연구
이 실시예는 조합된 체크포인트 억제제(CPI) + 화학치료 ± 베바시주맙(베바시주맙(AVASTIN), VEGFA 억제제 포함)으로 이루어진 승인된 단일 전신 요법 중 또는 후에 질환 진행을 갖는 임의의 작용가능한 구동인자 돌연변이가 없는 국소 진행성, 절제불가능 또는 전이성 비소세포 폐암(NSCLC) 환자의 치료에 관한 것이며 치료 코호트는 아래에 요약되어 있다:
ㆍ 코호트 1: CPI 치료 전에 종양이 프로그램화 세포 사멸-리간드 1(PD-L1)을 발현하지 않은(종양 비율 점수 [TPS] <1%) 환자.
ㆍ 코호트 2: CPI 치료 전에 PD-L1이 발현된 종양이 있는(TPS ≥1%) 환자. 코호트 3: CPI 치료 전에 종양이 PD-L1을 발현하지 않았고(TPS <1%) 다음 중 적어도 하나로 인해 TIL 생성을 위한 외과적 수확을 안전하게 겪을 수 없는 환자:
o 허용할 수 없는 외과적 위험, 또는
o 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) v1.1 평가를 위해 외과적으로 접근가능한 병변이 필요하였다.
ㆍ 코호트 4: 재치료 코호트: 이 연구의 코호트 1, 2 또는 3에서 TIL-기반 면역치료로 이전에 치료된 환자.
환자-지정 요법을 위한 개별 환자의 종양으로부터 도출된 자가 TIL-기반 면역치료를 사용하여 치료될 것이다.
TIL-기반 면역치료 치료 레지멘은 TIL-기반 면역치료 주입 전 총 5일 동안 사이클로포스파미드 및 플루다라빈을 사용하는 NMA-LD 예비 레지멘 과정, 및 TIL-기반 면역치료 주입 후 IL-2 투여(최대 6회 용량)의 제한된 과정을 수반하였다. NMA-LD 예비 레지멘 및 IL-2는 전달된 TIL의 생착, 확장, 및 활성화를 뒷받침하기 위해 레지멘에 포함되었다.
여러 예비 레지멘은 TIL 요법과 함께 사용되었다. NMA-LD 예비 레지멘은 사이클로포스파미드/플루다라빈, 전신 조사(TBI), 또는 둘 다의 조합을 포함하였다. 본 예시적인 연구는 cy-flu 레지멘을 활용하였다. 현재 연구에 사용되는 NMA-LD 예비 레지멘은 국립암염구소(NCI)에 의해 개발되고 테스트된 방법에 기반하였으며, 이는 환자의 입원 기간을 단축하려는 노력으로 2일 동안 사이클로포스파미드와 5일 동안 플루다라빈을 병용하는 것을 수반한다. 각 환자는 TIL-기반 면역치료의 주입 전에 NMA-LD 예비 레지멘을 겪을 것이다.
요법은 주입할 준비가 된 자가 TIL-기반 면역치료이다. TIL-기반 면역치료는 개별 환자의 종양으로부터 수득되고 사이토카인 IL-2 및 인간 CD3(OKT3)에 대한 뮤린 단클론 항체(mAb)의 존재 하에 세포 배양을 통해 생체 외에서 확장된 자가 TIL로 구성되었다.
최종 의약품은 IV 주입을 위해 제형화된 동결보존된 살아있는-세포 현탁액이다. 생체 외 확장된 자가 TIL은 0.5% 인간 혈청 알부민(HSA) 및 300 IU/mL(12 ng/mL)의 IL-2를 함유하는 CryoStor® CS10 동결보존 매질/PlasmaLyte(최종 디메틸 술폭사이드[DMSO] 농도: 5%)에서 제형화되었다. 제형화된 제품은 증기상 액체 질소에서 < -150℃로 제어된 속도로 동결되고, 저온수송기에서 적절한 임상 현장으로 수송되고, 환자에게 주입하기 위해 사용하기 전에 해동되었다.
제조 프로세스는 생존가능한 종양 물질을 함유하는 종양 병변의 외과적 절제 또는 중심부 생검으로 임상 현장에서 시작되었다. 다중 별개의 병변 생검의 응집체가 또한 환자로부터 절제될 수 있고 환자 안전성이 허용되는 경우 권장되었다. 종양 표본을 수송 배지에 넣고 2-8℃에서 특급 택배에 의해 우수제조관리기준(GMP) 제조 시설로 수송하였다. GMP 제조 시설에 도착 시, 종양 표본을 단편으로 절개한 다음, 활성화하여(초기 확장 단계) 급속 확장 프로토콜(REP) 단계에 필요한 생존가능한 세포의 최소 수를 생성하였다. 종양은 또한 효소적으로 분리될 수 있고, TIL은 REP로 진행하기 전에 바이오마커의 발현을 위해 선택될 수 있다. REP 단계(제2 확장 단계)는 IL-2, OKT3, 및 조사된 동종이계 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 존재 하에 세포를 추가로 확장한다. 그런 다음 REP-확장된 세포를 수확하고, 세척하고, 혈액 수송/주입 백에서 제형화하여 택배에 의해 임상 현장으로 수송하였다. TIL-기반 면역치료에 대한 제조 프로세스의 다이어그램은 도 34 및 35에 제공되어 있다.
TIL-기반 면역치료 최종 생성물의 각 동결보존 백을 환자-특이적 라벨로 라벨링하였다. TIL-기반 면역치료는 환자에게 투여하기 위해 제조 시설에서 임상 현장으로 수송하였다.
이 실시예는 국소 진행성 절제불가능 또는 전이성 NSCLC 환자에서 TIL-기반 면역치료를 평가하는 전향적 공개 라벨 다중 코호트 비무작위 다기간 2상 연구에 관한 것이다.
다음 코호트를 연구하였다:
ㆍ 코호트 1: 알려진 작용가능한 구동인자 돌연변이가 없는 CPI 치료 전에 종양이 PD-L1을 발현하지 않았고(종양 비율 점수 [TPS] <1%), 조합된 CPI + 화학치료 ± 베바시주맙으로 이루어진 단일 승인된 전신 요법 중 또는 후에 질환이 진행되고, TIL 생산을 위해 직경이 최소 1.5 cm인 적어도 하나의 절제가능한 병변(또는 응집 병변)이 있고, 절제 후, RECIST 1.1에 의해 정의된 적어도 하나의 남아있는 측정가능한 병변이 있는 IV기 NSCLC 환자에서 단일 제제 요법으로서 TIL-기반 면역치료.
ㆍ 코호트 2: 임의의 알려진 작용가능한 구동인자 돌연변이가 없는 CPI 치료 전에 종양이 PD-L1을 발현하였고(TPS >1%), 조합된 CPI + 화학치료 ± 베바시주맙으로 이루어진 단일 승인된 전신 요법 중 또는 후에 질환이 진행되고, TIL 생산을 위해 직경이 최소 1.5 cm인 적어도 하나의 절제가능한 병변(또는 응집 병변)이 있고, 절제 후, RECIST 1.1에 의해 정의된 바와 같이 적어도 하나의 남아있는 측정가능한 병변이 있는 IV기 NSCLC 환자에서 단일 제제 요법으로서 TIL-기반 면역치료.
ㆍ 코호트 3: 임의의 알려진 작용가능한 구동인자 돌연변이가 없는 CPI 치료 전에 종양이 PD-L1을 발현하지 않았고(TPS <1%), 조합된 CPI + 화학치료 ± 베바시주맙으로 이루어진 단일 승인된 전신 요법 중 또는 후에 질환 진행이 있고, 1) 허용되지 않은 외과적 위험, 또는 2) RECIST 평가에 필요한 외과적으로 접근가능한 병변 중 적어도 하나로 인해 TIL 생성을 위한 외과적 수확을 안전하게 겪을 수 없는 IV기 NSCLC 환자에서 단일 제제 요법으로서 TIL-기반 면역치료.
ㆍ 코호트 4: 코호트 1, 2 또는 3에서 참가 일환으로 이전에 TIL-면역치료를 받은 환자에서 재치료로서 TIL-기반 면역치료 단일 제제 요법.
코호트 1, 2, 3, 및 4의 경우, 모든 환자는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈으로 이루어진 비골수파괴성 림프구고갈(NMA-LD) 사전 조건화 레지멘에 의해 진행된 자가 동결보존된 TIL-기반 면역치료를 받았다. TIL-기반 면역치료 주입 후, 최대 6회 용량의 IV IL-2(예컨대 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체)를 투여하였다. 대안적으로, 점점 줄어드는 IL-2 또는 저용량 IL-2가 본원에 제시된 바와 같이 사용될 수 있다.
TIL-기반 면역치료를 사용한 자가 TIL 요법은 다음 일반적인 단계를 포함하였다:
ㆍ 자가 TIL 세포 생성물의 공급원으로서 역할을 하는 자가 조직을 제공하기 위한 종양 수확,
ㆍ 중앙 우수제조관리기준(GMP) 시설에서 자가 TIL-기반 면역치료 조사용 제품(IP) 생산,
ㆍ 5-일 비골수파괴성 림프구고갈(NMA-LD) 사전 조건화 레지멘,
ㆍ TIL-기반 면역치료 생성물 주입(0일차), 및
ㆍ ≤6회 용량 IV IL-2 투여.
1차 목적은 독립검토위원회(Independent Review Committee, IRC)(코호트 1 및 2) 또는 조사자 코호트 3 및 코호트 4)에 의해 평가된 바와 같이, 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST 1.1)을 사용하여, 객관적 반응률(ORR)에 의해 결정된 바와 같은 조합된 체크포인트 억제제(들)(CPI[들]) + 화학치료 ± 베바시주맙으로 이루어진 단일 승인된 전신 요법 중 또는 후에 질환 진행이 있는 작용가능한 구동인자 돌연변이가 없는 국소 진행성 절제불가능 또는 전이성 NSCLC 환자에서 TIL-기반 면역치료의 효능을 평가하는 것이다.
2차 목적은 RECIST 1.1을 사용하여 ORR에 의해 결정되고, 조사자(코호트 1 및 2)에 의해 평가된 바와 같은 TIL-기반 면역치료의 효능을 평가하고, 완전 반응(CR) 비율; 반응 기간(DOR); 질병통제율(DCR); IRC(코호트 1 및 2) 및 조사자(모든 코호트)에 의해 평가된 바와 같이 RECIST 1.1을 사용한 무진행 생존(PFS); 및 전체 생존(OS)을 사용하여 TIL-기반 면역치료의 효능을 추가로 평가하고, 등급 ≥3 치료 유발 이상 반응(TEAE)의 발병률에 의해 측정된 바와 같이 NSCLC 환자에서 TIL-기반 면역치료의 안전성 프로파일을 특성화하는 것이었다. 코호트 3의 경우에만, 중심부 생검에서 TIL-기반 면역치료를 생성하는 효능이 평가된다.
탐구 목적: (1) TIL-기반 면역치료의 지속성을 평가하고 반응, 결과, 및 독성 변수에 영향을 미칠 수 있는 면역 상관관계를 식별한다. (2) 각각의 적응증-특이적 건강 관련 삶의 질(HRQoL) 매개변수를 평가하였다.
1차 평가변수: ORR은 IRC(코호트 1 및 2) 또는 조사자(코호트 3 및 4)에 의해 RECIST 1.1에 따라 평가하였다.
2차 평가변수: (1) 심각한 AE(SAE), 요법 관련 AE, 및 치료의 조기 중단 또는 평가 기간 철회 또는 사망으로 이어지는 AE를 포함한 치료 유발 이상 반응(TEAE)의 중증도, 심각성, 치료 연구와의 관계, 및 특성화의 발병률. (2) RECIST 1.1(코호트 1 및 2)에 따라 IRC에 의해 평가된 바와 같은 CR(완전 반응) 비율, DOR(반응 기간), DCR(질병통제율), 및 PFS(무진행 생존). (3) RECIST 1.1(모든 코호트)에 따라 조사자에 의해 평가된 바와 같은 ORR(객관적 반응률), CR 비율, DOR, DCR, 및 PFS. (4) OS(전체 생존). (5) 중심부 생검(코호트 3)에서 생성된 성공적인 TIL 생성물 백분율.
탐구 평가변수: TIL 생성물을 포함하는 T 세포의 생체 내 지속성은 시간 경과에 따라 환자의 혈액에서 TIL 생성물-특이적 T-세포 수용체-베타 상보성 결정 영역 3(CDR3) 서열의 존재를 모니터링함으로써 평가되었다. 생성물 및 말초 혈액 샘플에 존재하는 CDR3 서열은 심층 서열분석을 사용하여 식별되었다.
TIL-기반 면역치료의 활성에 대한 예측 및 약력한 임상 바이오마커를 식별하는 것을 목표로 하는 탐구 평가변수가 또한 포함되었다:
ㆍ TIL-기반 면역치료의 표현형 및 기능적 특성;
ㆍ 종양 조직의 면역 프로파일;
ㆍ TIL 생성물, 종양 조직, 및/또는 PBMC의 유전자 발현 프로파일;
ㆍ 종양의 돌연변이 지형;
ㆍ 순환 면역 인자; 및
ㆍ PBMC의 면역 조성물.
유럽 암연구 및 치료기구(EORTC) 삶의 질 설문지(QLQ) C30 및 QLQ LC13에 따라 평가된 바와 같은 HRQoL(건강 관련 삶의 질)이 또한 포함되었다.
연구 설계 세부사항: 전향적 공개 라벨 다중-코호트 비무작위 다기관 2상 연구는 TIL-기반 면역치료를 사용한 입양 세포 요법(ACT)을 평가하였다.
모든 환자는 다음 단계로 이루어진 TIL-기반 면역치료를 받았다:
ㆍ 자가 TIL 세포 생성물의 공급원으로서 역할을 하는 자가 조직이 제공된 종양 수확,
ㆍ 우수제조관리기준(GMP)에 따라 운영되는 중앙 시설에서 자가 TIL-기반 면역치료 조사용 제품(IP)의 생산,
ㆍ 5-일 비골수파괴성 림프구고갈(NMA-LD) 사전 조건화 레지멘,
ㆍ TIL-기반면역치료 생성물 주입(0일차), 및
ㆍ ≤6회 용량의 IV IL-2 투여.
달리 명시되지 않는 한, 하기 일반적인 순차적 기간은 4개 코호트 모두에서 발생할 것이다:
1. 스크리닝 기간: 사전 동의서(ICF) 서명부터 등록까지
2. 치료전 기간: 등록부터 예비 NMA-LD 레지멘 개시까지.
3. 치료 기간: 예비 NMA-LD 개시부터 치료 종료 (EOT) 방문까지. 이는 NMA-LD(-5일차 내지 -1일차), TIL-기반 면역치료 주입(0일차), 이어서 IL-2 투여(0 또는 1일차 내지 3 또는 4일차)를 포함하여 8 내지 9일의 요법으로 이루어졌다. EOT는 0일차 후 대략 30일에 발생하였다.
4. 다음으로 구성된 치료후 추적 기간:
a. 치료후 효능 추적 기간(TEFU): EOT 방문부터 연구 완료(치료 후 5년[60개월]) 또는 질환 진행 또는 신규 항암 요법 시작에 의해 촉발될 효능 평가 종료(EOEA) 방문 중 어느 쪽이든 먼저 발생하는 것까지.
b. 장기 추적 기간(LTFU): 위에 기재된 바와 같은 EOEA부터 연구 완료(치료 후 5년[60개월])까지.
연구 참가자(등록된 환자)는 조기에 LTFU로 전환될 것이다(예를 들어, 부분 동의 철회 시, 또는 어떠한 이유로 TIL-기반 면역치료를 받지 않을 것이라고 결정되는 경우). 조기 연구 철회는 동의 철회, 사망, 추적 실패, 또는 후원자의 연구 종료에 의해 촉발되었다. 연구 설계에 대한 흐름도는 도 36에 제시되어 있다.
환자는 0일차에 계획된 TIL-기반 면역치료 주입 전에 개시된 5-일 사전 조건화 NMA-LD 레지멘(즉,일 -5일차 내지 -1일차)을 거칠 것이다. NMA LD 레지멘은 -5일차 및 -4일차에 2일 동안 정맥내(IV) 사이클로포스파미드(60 mg/kg)와 메스나(현장 표준 치료 또는 USPI/SmPC에 따라), 및 5일 동안 플루다라빈 IV(25 mg/m2, -5일차 내지 -1일차)로 이루어졌다.
600,000 IU/kg의 용량으로 IL-2 IV 투여는 0일차에 TIL-기반 면역치료 주입 완료 후 3시간 이내, 늦어도 24시간 까지 시작되었다. 추가 IL-2 용량은 최대 총 6회 용량으로 대략 8 내지 12시간마다 주어졌다.
표 83. 치료 투여 레지멘.
메스나 제조: 메스나는 사이클로포스파미드 투여와 관련된 출혈성 방광염의 위험을 줄이기 위해 투여하였다. 메스나는 현지 표준에 따라 연속적 또는 간헐적 주입으로 투여하였다.
메스나의 총 용량은 사이클로포스파미드의 양이 감소되는 경우 조정되지 않았다. 기관 표준에 따라 메스나 주사 또는 주입 부피를 희석한다.
사이클로포스파미드 및 메스나 주입: 총 부피 250 mL 또는 500 mL 중 사이클로포스파미드(60 mg/kg)(예를 들어, 물 중 5% 덱스트로스[D5W] 또는 0.9 % 염화나트륨[NaCl]). 연속으로 주입되는 경우 메스나(15 mg/kg)는 사이클로포스파미드와 함께 대략 2시간에 걸쳐 주입된 다음(-5일차 및 -4차), 각 사이클로포스파미드 용량과 동시에 시작하여 24시간에 걸쳐 적합한 희석제에서 남은 22시간 동안 3 mg/kg/시간의 속도로 주입되었다. 투여되는 총 용량은 사이클로포스파미드 용량의 적어도 1.3배였다. 출혈성 방광염을 예방하기 위해 더 많거나 지속적인 용량의 메스타가 투여될 수 있다.
플루다라빈 주입: 플루다라빈(25 mg/m2)은 -5일차에서 -1일차까지 연속 5일 동안 매일 1회 대략 30분에 걸쳐 IV 주입되었다.
참여 기간: 전반적으로, 연구 참여 시간은 치료부터 완료까지 최대 5년일 것이다.
선택된 포함 기준:
ㆍ NSCLC(편평, 비편평, 선암종, 대세포, 또는 혼합 조직학)의 조직학적으로 또는 병리학적으로 진단이 확인되었고, CPI 치료를 받기 전 종양 비율 점수(TPS)(즉, 초기 치료 선택이 알려진 과거 TPS)에 의해 결정된 바와 같이 PD-L1 발현 상태가 문서화되어야 한다(코호트 1 및 3의 경우 TPS　<　1%, 및 코호트 2의 경우 TPS ≥1%).
ㆍ CPI 및 화학치료를 동시에 포함하는 단일 전신 요법을 받았고, 이 단일 전신 요법 중 또는 후에 방사선학적 질환 진행이 문서화되어 있다.
ㆍ 보조 또는 신보조 환경에서, 또는 결정적 화학방사선요법의 일부로서 이전 전신 요법은 질환이 이러한 요법의 완료 동안 또는 12개월 이내에 진행되지 않은 경우 일련의 요법에 포함시키지 않았다. 이 프로토콜에서 이전 TIL 치료는 코호트 4(재치료) 환자에 대한 일련의 요법에 포함시키지 않았다.
ㆍ 연령 예상 정상 범위의 85% 이상의 운동 내성이 문서화되었고 허혈 또는 임상적으로 유의한 부정맥의 징후 또는 증상이 없었다.
ㆍ 조사자의 의견에 따라 미동부종양학협력그룹(ECOG) 수행 상태가 0 또는 1이고 추정된 기대 수명이 > 6개월이었다.
ㆍ 코호트 1 및 2: TIL 생산을 위해 직경이 최소 1.5 cm인 적어도 하나의 절제가능한 병변(또는 응집 병변)이 있어야 한다.
ㆍ 코호트 3만 해당: 환자는 단일 RECIST 1.1 측정가능한 병변이 있어야 하며 외과적 수확에 이용가능한 추가 병변이 없거나, TIL 생산을 위한 외과적 수확을 안전하게 거칠 수 없지만, TIL 생성에 충분한 영상의학 유도 중심부 생검을 통해 안전하게 종양 수확할 수 있다.
ㆍ 코호트 4: 어느 한 패러다임을 따랐다.
ㆍ 모든 코호트: 수확을 위해 고려되는 병변이 이전에 조사된 영역 내에 있는 경우, 병변은 수확 전에 방사선학적 진행을 입증해야 하며 조사는 적어도 등록 3개월 전에 완료되어야 한다. 환자는 프로토콜이 필요한 테스트를 위해 적절한 조직병리학적 표본을 가져야 한다.
TIL 제조를 위한 종양 수확 후, 모든 환자는 다음 고려사항과 함께 RECIST 1.1에 의해 정의된 바와 같은 적어도 하나의 남아있는 측정가능한 병변이 있어야 한다:
ㆍ 이전에 조사된 영역의 병변은 해당 병변에서 진행이 입증되지 않고 조사가 적어도 등록 3개월 전에 완료되지 않는 한 표적 병변으로 선택되지 않았다.
ㆍ 코호트 1 및 2만 해당: 여전히 RECIST v1.1에 따라 측정가능한 TIL 생성을 위해 외과적으로 부분적으로 절제된 병변은 비표적 병변으로 선택될 수 있지만 반응 평가를 위한 표적 병변으로서 역할을 할 수 없다.
ㆍ 코호트 3만 해당: TIL 생성을 위한 중심부 생검에 이용가능한 다른 병변이 없는 경우, 단일 RECIST v1.1 측정가능한 병변은 중심부 생검을 위한 수확 부위, 및 반응 모니터링을 위한 병변 둘 다로서 역할을 할 수 있다.
ㆍ 코호트 4: 어느 한 패러다임을 따를 수 있지만 반응을 위해 따라야 하는 적어도 하나의　RECIST　v1.1 측정가능한 병변이 있어야 한다.
NSCLC 환자에서 단일 요법으로서 TIL-기반 면역치료에 대해 다음 효능 매개변수를 각 코호트에서 조사하였다: ORR, CR, DOR, DCR, PFS, 및 OS.
통계 분석은 효능 및 안전성 매개변수의 추정에 기반하였고 코호트에 의해 수행될 것이다. 코호트 간에 공식적인 통계 비교는 적용되지 않았다. 1차 효능 평가변수는 IRC(코호트 1 및 2) 또는 조사자(코호트 3 및 4)에 의해 RECIST v1.1에 따라 평가된 바와 같은 ORR이었다. ORR, CR 비율, 및 DCR은 Clopper-Pearson 정확 방법에 기반한 점 추정 및 양측 95% 신뢰 한계를 사용하여 요약되었다. Kaplan-Meier 방법은 DOR, PFS, 및 OS와 같은 시간 대 사건 효능 평가변수를 요약하는 데 사용되었다. DOR 분석은 객관적 반응을 달성한 환자에 대해 수행되었다. 안전성 분석은 서술적이고 연구 중단으로 이어지는 TEAE, SAE, 및 AE, 활력 징후, 및 임상 실험실 테스트의 요약에 기반하였다.
코호트 1, 2 및 3에서 TIL-기반 면역치료가 주입된 계획된 환자의 총 수는 대략 95명이었다. 코호트 1 및 2의 경우, 각 코호트에 대해 대략 40명의 환자가 선택되었다. 각 코호트의 경우, minimax를 사용하는 Simon의 2-단계 설계(Simon, 1989)를 사용하여 ORR >10%의 대립 가설에 대한 ≤10% ORR의 귀무 가설을 테스트하였다. 첫번째 단계에서, 25명의 환자가 발생하였다. 이러한 25명의 환자 중 치료에 반응하는 환자가 2명 이하인 경우, 코호트는 종료될 수 있다. 그렇지 않으면, 단계 1의 분석과 동시에 총 40명의 환자에 대한 단계 2로의 확장이 발생하였다. 두번째 단계가 끝났을 때, 총 40명의 환자 중 적어도 7명의 환자가 요법에 반응한 경우, 귀무 가설을 기각하였다. 이 2-단계 설계는 단측 알파 수준 0.1에서 TIL-기반 면역치료에 대한 20% ORR의 가정에 기반하여 10% ORR의 귀무 가설을 기각하는 70% 검정력을 제공하였다. 코호트 3의 경우, 대략 15명의 환자가 계획되었으며, 이는 Clopper-Pearson 정확 방법에 의해 반폭 90% 신뢰 구간(CI)이 <0.23인 추정된 ORR을 제공하였다. 재치료 코호트인 코호트 4의 경우, 이 연구의 코호트 1, 2 또는 3에서 TIL-기반 면역치료로 이전에 치료된 환자가 등록하였다는.
실시예 16: 키메라 공동자극 수용체 설계에 적합한 종양 마커 식별
이 실시예는 CCR 및 CCR을 발현하도록 변형된 TIL과 함께 사용하기에 적합한 종양 마커의 식별을 설명한다. 종양 샘플의 유세포 측정 분석을 사용하여 본원의 다른 곳에 기재된 2개의 마커인 EPCAM 및 TROP-2의 발현을 측정하였다. 유세포 측정은 EPCAM, EPCAM-PE(BD, Cat. # 566841) 및 APC(BD, Cat# 566842), 클론 9C4에 대한 항체, 및 TROP-2, TROP-2 PE(BD, Cat# 564837), 클론 162-46에 대한 항체를 사용하여 BD Canto II 시스템을 사용하여 수행하였다. 도 43은 EPCAM, TROP-2, 및 두 마커 조합의 높은 발현을 보이는 자궁경부암 종양(식별 번호 1911271423) 소화물의 유세포 측정 분석을 나타낸다. 도 44는 유사하게 EPCAM-PE 대신 EPCAM-APC를 사용한 자궁경부암 종양 소화물의 유세포 측정 분석을 보여준다. 도 45는 두경부 편평 세포암 종양(식별 번호 H3103) 소화물에서 EPCAM/TROP-2 발현의 유세포 측정 분석을 보여준다. 도 46은 비소세포 폐암 종양(식별 번호 L4172) 소화물에서 EPCAM/TROP-2 발현을 보여준다. 더 높은 EPCAM 및 TROP-2 발현은 다중 종양 유형 및 복제물에 걸쳐 일관된게 관찰되었으며, 이는 본원에 기재된 암에서 이들 분자에 표적화된 CCR의 사용에 대한 적합성을 보여준다.
실시예 17: 키메라 공동자극 수용체로 변형된 TIL 생성물의 제조
렌티바이러스 벡터는 세포외 PD-1 결합 도메인(예컨대 서열번호:244, 서열번호:245, 또는 서열번호:246에 제시된 것)을 포함하는 CCR을 생성하기 위해 제조될 수 있다. 이 CCR의 3가지 버전은 도 36에 제시된 도메인을 사용하여, CD28의 완전 신호전달 도메인(YMNM+PRRP+PYAP 모티프), 부분 신호전달 도메인(YMNM+PRRP 모티프), 및 YMNM 신호전달 도메인 단독에 대해 제조될 수 있다(서열번호:572 참조).
렌티바이러스 벡터는 또한 본원에 추가로 기재되고/되거나 당업계에 알려진 바와 같은 클로닝 방법을 사용하여 각각 도 38, 도 39, 또는 도 40에 상응하는 서열번호:618, 서열번호:619, 또는 서열번호:620의 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 구축될 수 있다.
패키징을 위해, 상기 기재된 렌티바이러스 벡터는 VSV-G 외피 플라스미드 및 Gag/Pol 및 Rev 패키징 플라스미드로 HEK293T 패키징 세포에 공동 형질감염될 수 있다. 대략 2일의 인큐베이션 후, 상청액을 수집하고, 원심분리하여 파편을 제거하고, 여과한다. 렌티바이러스 입자는 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 농축하고 수크로스 구배 쿠션 초원심분리에 의해 추가로 정제한다. 파일럿 및 임상 배치를 시도하기 전에, 연구 배치에서 형질감염 효율성을 평가하기 위해 녹색 형광 단백질 이식유전자가 첨가될 수 있다. 적어도 1x109 TU/mL의 형질감염 단위(TU) 역가가 바람직하다. 렌티바이러스 생성물은 엔도톡신 수준 및 다른 방출 매개변수에 대해 검정하고, 후속적으로 TIL, MIL, 또는 PBL을 형질감염하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, Gen 2 프로세스는 pre-REP와 REP 단계 사이의 TIL을 형질감염시키기 위해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이(예를 들어, 도 2a, 2b, 및 2c에서, 11일차 REP 개시 전) 변형될 수 있으며, 임의적으로 형질감염 전, 도중, 및/또는 후에 짧은 휴식 기간이 있으며, 여기서 pre-REP 단계의 총 기간은 약 3 내지 약 14일이고, REP 단계의 총 기간은 약 3 내지 약 14일이고, 종양이 수득된 환자에서 암 치료에 사용하기에 적합한 CCR을 발현하는 108개 세포를 초과하는 TIL의 치료 집단이 수득된다.
전술한 프로세스는 또한 본원의 다른 곳에 기재되거나 당업계에 알려진 바와 같은 레트로바이러스 및 트랜스포사제 발현 시스템을 사용하여 수행될 수 있다.
실시예 18: TIL에서 케모카인 수용체 발현
TIL에서 케모카인 수용체 발현을 평가하기 위해, Gen 2 프로세스에 의해 생성된 9개의 상이한 TIL 계통을 해동하고 2일간에 걸쳐 특성화에 대해 염색하였다. PBMC를 대조군으로서 사용하였다. 사용된 TIL 로트 및 결과는 표 84에 요약되어 있다.
표 84. 상이한 종양(OV = 난소; EP = 유방; L = 폐)에서 제조된 9개의 TIL 로트에서 케모카인 수용체 발현 평가.
유세포 측정 분석을 위해, Bio-Rad ZE5 세포 분석기를 사용하였다(미국 캘리포니아주 에르쿨레스 소재). 케모카인 수용체의 표면 염색을 위해, 1x106개의 세포를 96-웰 V-바닥 플레이트에 플레이팅하였다. 그런 다음 세포를 세척하고 BioLegend(미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재)의 인간 TruStain FcX Fc 수용체 차단 용액의 존재 하에 Life Technologies(미국, 캘리포니아주 칼즈배드 소재)의 살아있는/죽은 고정 청색 사멸 세포 염색 키트로 실온에서 10분 동안 염색하였다. 그런 다음 항체를 세포에 첨가하고 샘플을 4℃에서 25분 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 샘플을 2회 세척하고, 여과하고 ZE5 분석기에서 실행하였다. 분석은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 모든 게이팅은 형광 마이너스 원(FMO) 대조군에 기반하였다. 결과는 도 47, 48, 49 및 50에 제시된다. CXCL9/10/11에 결합하는 중간 수준의 CXCR3이 관찰된다. 각각 CXCL12 및 CXCL13에 결합하는 CXCR4 및 CXCR5는 B 세포 및 3차 림프 구조에 근접한 TIL의 위치 찾기에 사용될 수 있다. CXCR1 및 CXCR2는 다른 리간드 중에서 CXCL8과 결합하고 호중구의 수송을 끌어들이는 데 사용될 수 있다. CCR2는 MCP-1 및 다른 리간드와 결합하고 단핵구의 수송을 끌어들이는 데 사용될 수 있다. CCR4 및 CCR8은 CCL17, CCL22(CCR4) 및 CCL1(CCR8)과 결합하고, 종양으로 Treg의 수송을 끌어들이는 데 사용될 수 있다.
실시예 19: 케모카인 수용체로 변형된 TIL 생성물의 제조
VSV-G 위형 MSCV 레트로바이러스 벡터는 CXCR1 또는 CCR8 도메인(예컨대 각각 서열번호:627 및 서열번호:632에 제시된 것들)을 포함하는 케모카인 수용체를 생성하기 위해 제조될 수 있다. 패키징을 위해, 상기 기재된 벡터는 VSV-G 외피 플라스미드 및 Gag/Pol 및 Rev 패키징 플라스미드를 사용하여 HEK293T 패키징 세포로 공동 형질감염될 수 있다. 대략 2일의 인큐베이션 후, 상청액을 수집하고, 원심분리하여 파편을 제거하고, 여과한다. 바이러스 입자는 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 농축하고 수크로스 구배 쿠션 초원심분리에 의해 추가로 정제한다. 파일럿 및 임상 배치를 시도하기 전에, 연구 배치에서 형질감염 효율성을 평가하기 위해 녹색 형광 단백질 이식유전자가 첨가될 수 있다. 적어도 1x107 TU/mL의 TU 역가가 바람직하다. 레트로바이러스 생성물은 엔도톡신 수준 및 다른 방출 매개변수에 대해 검정되고, 후속적으로 TIL, MIL, 또는 PBL을 형질감염시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, Gen 2 프로세스는 pre-REP와 REP 단계 사이의 TIL을 형질감염시키기 위해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이(예를 들어, 도 2a, 2b, 및 2c에서, 11일차 REP 개시 전) 변형될 수 있으며, 임의적으로 형질감염 전, 도중, 및/또는 후에 짧은 휴식 기간이 있으며, 여기서 pre-REP 단계의 총 기간은 약 3 내지 약 14일이고, REP 단계의 총 기간은 약 3 내지 약 14일이고, 종양이 수득된 환자에서 암 치료에 사용하기에 적합한 이식유전자(들)에 기반한 하나 이상의 케모카인 수용체를 발현하는 108개 세포를 초과하는 TIL의 치료 집단이 수득된다.
예시적인 CCR 작제물은 위에 기재된 실험에서 생산된 TIL과 함께 사용될 수 있다. "CCR1" 내지 "CCR6"으로 라벨링된 작제물의 서열(도 51)을 합성하고 MCS I에 삽입함으로써 pQCXIX 벡터에 삽입하였고(도 52), eGFP를 발현 리포터로서 MCS II에 삽입하였다. 상업적으로 이용가능한 pQCXIX 벡터는 CMV 프로모터에 의해 구동되는 유전자 발현을 갖는 자기-불활성화 렌티바이러스 벡터이다. 레트로바이러스를 만들기 위해, pQCXIX 벡터를 PT67 패킹 세포에 형질감염시켰다. HEK 리포터 세포의 도입을 위해 2-3일차 배양 상청액으로부터 바이러스 상청액을 수집하였다. HEK 리포터 세포를 각 CCR 작제물이 함유된 레트로바이러스로 형질도입하였다. HEK 리포터 세포에서 "CCR4" 및 "CCR5"로 라벨링된 작제물의 발현을 결정하였으며; "CCR4"(도 53, 패널 A) 및 "CCR5"(도 53, 패널 B)에서 PD-1 세포외 도메인의 표면 발현을 유세포 측정에 의해 형질도입되지 않은(GFP-) 및 형질도입된(GFP+) HEK 리포터 세포에서 검정하였으며, 결과는 도 53에 제시된다.
실시예 20: 비에피토프 키메라 공동자극 수용체
상기 기재된 방법을 사용하여, 추가 CCR을 제조할 수 있다. 도 54는 각각 T2A 도메인에 의해 분리된 비시스트론 작제물에서 2개 CCR을 포함하도록 설계된 비에피토프 CCR에 대한 작제물을 보여준다. 이러한 CCR에 대한 라벨링된 도메인이 있는 아미노산 서열은 도 55 내지 60 및 표 85에 주어진다. CD8α 리더 펩티드는 모든 작제물에서 사용되었다. PD-L1 CCR의 경우, 19H9 및 38A1 scFv 도메인은 PD-L1의 2개 에피토프(서열번호:658 및 서열번호:659)를 잠재적으로 표적하도록 선택되었다.
항-TROP-2 CCR 작제물의 경우, 2가지 버전이 설계되었다. TROP-2는 잠재적으로 이량체를 형성할 수 있고, 이론에 얽매이지 않지만, 2개의 ScFv 대신 1개의 scFv(h6G11, 서열번호:316)가 닫힌 별개의 세포내 서브유닛을 당겨 복합체를 형성하고 하류 활성화 신호를 전송하는 데 충분할 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서 이 특징은 서열번호:660 및 서열번호:661의 설계에 포함되었다. 그러나, TROP-2가 이량체를 형성하지 않는 경우, 경쟁 검정에서 경쟁하지 않는 클론 cAR47A6.4 및 KM4097(서열번호:662 및 서열번호:663)을 사용하는 2가지 scFv 전략이 또한 포함되었다. 본 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR의 적합한 비제한적인 구현예는 표 85에 제시되어 있다.
표 85. 예시적인 비에피토프 CCR의 아미노산 서열.
또한 본 발명의 구현예인 전술한 실시예는 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676의 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:671, 서열번호:672, 서열번호:673, 서열번호:674, 서열번호:675, 또는 서열번호:676에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열의 발현을 제공한다.
구현예에서, 이들 작제물은 서열번호:621, 서열번호:622, 서열번호:623, 서열번호:624, 서열번호:625, 및 서열번호:626의 벡터에 의해 암호화된다. 구현예에서, 본 발명의 CCR은 전술한 비시스트론 작제물 중 하나를 통해 발현되는 전술한 비에피토프 CCR을 포함하는 조성물을 포함한다. eGFP 도메인은 인간 요법을 위한 TIL의 제조에 사용하기 위해 제거될 수 있다.
CCR7 내지 CCR12 서열(도 54에 제시됨)을 합성하고 Cas9-GFP 카세트를 관심 유전자로 교체함으로써 pLenti-바이러스 벡터(도 61)로 삽입하였다. pLenti-바이러스 벡터는 EF-1α 코어 프로모터에 의해 구동되는 유전자 발현을 갖는 자기-불활성화 렌티바이러스 벡터이다. 렌티바이러스를 만들기 위해, pLenti 벡터 및 헬퍼 벡터(VSV-G, Gag/Pol)를 293T 세포에 공동 형질감염시켰다. HEK 리포터 세포의 형질도입을 위해 2 내지 3일차 배양 상청액으로부터 바이러스 상청액을 수집하였다.
HEK 리포터 세포에서 비에피토프 CCR8 및 CCR12 작제물의 발현을 보여주는 예시적인 결과는 도 62에 제시되어 있다. HEK 리포터 세포를 표시된 CCR8 및 CCR12 작제물을 사용하여 렌티바이러스로 형질도입하였다. 도 62에서, CCR8로 형질도입되고 비오틴 접합된 PD-L1 단백질과 인큐베이션된 HEK-IL-18 리포터 세포에 대한 결과는 패널 (A)에 제시되고, CCR12로 형질도입되고 비오틴 접합된 TROP-2 단백질과 인큐베이션된 HEK-IL-18 리포터 세포에 대한 결과는 패널 (B)에 제시되며, 각각은 스트렙타비딘-형광 염색 후, 원하는 CCR의 발현을 입증한다.
그런 다음 비에피토프 CCR 작제물에 대한 실현가능성을 결정하기 위해 이들 항체의 경쟁적 결합을 연구하였다. 항-PD-L1 항체 클론 38A1-IgG4-HA 및 19H-IgG4-플래그에 대한 특성화 데이터는 표 86에 주어진다.
표 86. 항-PD-L1 Ab 클론 38A1-IgG4-HA 및 19H-IgG4-플래그의 특성화.
먼저, hPD-L1 Raji 세포를 경쟁적 hPD-L1 결합 항체 19H9의 존재 하에 PD-L1을 표적화하는 표시된(도 63) 농도의 38A1-IgG4-HA 항체와 함께 인큐베이션하였다. 2시간 인큐베이션 후, 세포를 세척하고 분석을 위해 항-HA-APC로 염새하였다. 도 63에서, x-축은 적정된 38A1-IgG4-HA 항체의 농도를 보여주고 y-축은 총 hPD-L1 Raji 세포의 % PD-L1 양성 염색 세포를 보여준다. 그런 다음 hPD-L1 Raji 세포를 경쟁적 hPD-L1 결합 항체 19H9의 존재 하에 PD-L1을 표적화하는 표시된(도 64) 농도의 19H9-IgG4-플래그 항체와 인큐베이션하였다. 2시간 인큐베이션 후, 세포를 세척하고 항-플래그-AF488로 염색하였다. 도 64에서, x-축은 적정된 19H9-IgG4-플래그 항체의 농도를 보여주고 Y-축은 총 hPD-L1 Raji 세포의 % PD-L1 양성 염색 세포를 보여준다. 결과는 38A1 및 19H9가 비경쟁적으로 PD-L1에 결합한다는 것을 나타낸다. 도 65는 각 표시된 항체의 염색을 사용하여 Raji 세포에 대한 공동 염색된 유세포 측정 데이터를 보여주며; 여기서 .hPDL-1-Raji 세포는 19H9-IgG4-플래그 Ab 및 38A1-IgG4-HA Ab와 함께 인큐베이션한 후 형광단-접합된 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다.
추가 도 66에 도시된 접근법을 사용하여 2개 PD-L1 항체의 차단 효능을 평가하기 위해 추가 실험을 수행하였다. Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 세포(2x105개 세포) 및 Raji-APC-hPD-L1 세포(2x105개 세포)를 도 67의 x-축에 제시되 표시된 농도로 19H9 및 38A1 항-PD-L1 항체의 존재 하에 공동 배양하였다. 19H9 및 38A1을 단독으로 또는 조합하여 공동 배양 시스템에 첨가하였다. 24시간 후, QU항-Luc™ 검정 키트를 사용하여 Lucia 활성을 정량화하였다. 결과는 도 67에 제시된다.
결론적으로, 비에피토프 CCR 작제물은 HEK-청색 리포터 세포에서 성공적으로 발현될 수 있고, 항원 특이적 결합 능력을 나타낸다. 놀랍게도, PD-L1 클론 38A1 및 19H9에 대한 PD-L1의 경쟁적 결합은 없으며, 이는 이들이 상이한 PD-L1 에피토프에 결합한다는 것을 나타낸다. 이러한 클론은 이 실시예에 제시된 바와 같은 비에피토프 CCR 설계에 적합하다. 이러한 설계는 IL-18R 및 IL-2R 세포내 도메인에 대한 2개의 서브유닛을 제공할 수 있다.
실시예 21: TIL 생성물에서 CD39-CD69- 표현형을 증가시키기 위한 AKT 억제제의 사용
기억-전구체 줄기-유사(CD39-CD69-) 표현형은 전이성 흑색종 환자의 코호트에서 완전 퇴행 및 TIL 지속성과 연관되었다(Krishna, 등, Science 2020, 370, 1328). 덜 분화되고 더 줄기-유사 속성으로 TIL을 확장하는 것을 목표로 하는 전략은 개선된 지속성, 기능성, 및 보다 효과적인 종양 반응을 초래할 수 있다. TIL에서 AKT의 약리학적 억제는 기억 T 세포의 전사적, 대사적, 및 기능적 특성 특징을 유도하는 것으로 나타났다. 이 실시예에서, 생체 외 TIL 확장 동안 AKT 억제를 조사하여 사이토카인 생상량 및 기능이 개선된 덜 분화되고 더 줄기-유사 세포의 비율을 증가시킬 수 있는지 여부를 결정하였다.
상이한 적응증의 환자 종양을 수용하고, 단편화하고, TIL 제조를 위한 확장 프로토콜에 적용하였다. 상이한 용량(0.3 μM 및 1 μM)의 범-AKT 억제제 이파타세르팁을 생체 외 확장 동안 배양물에 첨가하였다. 확장 가능성, 뿐만 아니라 표현형 및 기능적 특성을 최종 TIL 생성물에 대해 평가하였다. 흑색종, NSCLC, 두경부암, 난소암, 및 유방암의 종양을 포함한 8개의 종양을 Gen 2 프로세스와 조합하여 사용하였다.
도 68은 AKT 억제제 치료가 T 세포 비율에 영향을 미치지 않고 TIL 확장 및 생존력을 유지한다는 것을 보여준다. 대조군 및 AKT 억제제-처리된 TIL에서 확장, 생존력 및 T 세포 분포가 제시된다. TIL은 처리되지 않은 채로 방치하거나 증가하는 농도의 범-AKT 억제제 이파타세르팁으로 처리하였다. pre-REP 및 REP(파란색 막대) 동안 또는 REP 단계 단독(보라색 막대) 동안 치료를 첨가하였다. 22-일 확장 프로세스이 끝날 때 TIL의 배수 확장 및 생존력이 제시된다. 동결보존된 세포에서 확장 프로세스 후 CD8+, CD4+ 및 CD4+(Foxp3+) 세포의 빈도가 또한 제시된다.
추가 결과는 도 69 내지 75에 제시된다. AKT 억제는 도 69에서 CD8+ TEMRA 세포의 빈도 증가 및 도 70에서 CD8+ TIL에 대한 IL-7R 및 CXCR3 발현 증가를 유도하는 것으로 나타났다. 도 71은 AKT 억제가 CD8+ 및 CD4+ TIL 모두에서 덜 분화된 CD8+CD69-CD39- T 세포의 빈도를 증가시킨다는 것을 입증한다. 도 72는 CD8+CD69-CD39- TIL이 덜 분화되고 고갈된다는 것을 보여준다. AKT 억제제-처리된 TIL은 또한 도 73에 제시된 바와 같이 자극 후 더 높은 빈도의 CD8+CD69-CD39- T 세포 및 더 낮은 TOX 발현을 유지한다.
pre-REP 및 REP 모두에서 1 μM 이파타세르팁으로 처리된 동결보존된 대조군 및 TIL을 항-CD3/CD28 비드로 1:5의 비드 대 세포 비율로 밤새 자극하였다. 결과는 도 74에 제시된다. Gen 2 프로세스를 사용하여 제조된 AKT 억제제-처리된 TIL은 자극 후 더 높은 사이토카인 생산량을 유지하는 것으로 관찰되었다.
pre-REP 및 REP 모두에서 1 μM 이파타세르팁으로 처리된 동결보존된 대조군 및 TIL을 KILR® THP-1 세포로 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 24시간 동안 공동 배양하여 동종이계 환경에서 세포독성을 측정하였다. 대조군 및 이파타세르팁-처리된 TIL을 5일마다 항-CD3/CD28 비드로 1:1 비드 대 세포 비율로 자극하였다. 세번째 자극 3일 후, 세포를 세척하고, 비드를 제거하고, 세포를 KILR THP-1 세포와 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 24시간 동안 공동 배양하였다. 도 75에 제시된 바와 같이, Gen 2 프로세스를 사용하여 제조된 이파타세르팁-처리된 TIL은 반복된 자극 후 지속된 동종이계 환경에서 세포독성 증가를 보여주었다.
1 μM 용량의 AKT 억제제를 사용한 치료는 대조군에 비해 TIL의 동등한 확장 및 생존력을 야기하였지만 덜 분화된 CD39-CD69- 세포 집단은 두배가 되었다. 이 효과는 재자극 후에도 나타났으며 이들 세포는 CD38 뿐만 아니라 전사 인자 T-bet 및 TOX의 발현 감소를 보여주었고, 이는 덜 분화되고 고갈된 표현형을 시사한다. 중요하게는, AKT 억제제 치료는 IFNγ+TNFα+ CD8+ T 세포의 빈도 증가를 야기하며, 이는 세포독성 증가로 해석된다. 생체 외 TIL 확장 동안 AKT 억제제 치료는 덜 분화된 더 기억-유사 기능적 TIL의 비유를 증대시켰다.
따라서 TIL 확장 동안 AKT 신호전달을 일시적으로 억제하는 것은 CCR 및/또는 케모카인 수용체와의 조합을 포함하여 임상 환경에서 TIL 생성물의 성능을 개선하고 TIL 지속성 및 치료 효능을 증대시키기 위한 접근법을 나타낸다. AKT 억제제-처리된 TIL은 자극 후 TOX 수준이 감소되고 사이토카인 생산량이 증가되면서 CD69-CD39- 세포의 더 높은 빈도를 유지하였다. 동종이계 환경에서 AKT 억제제 처리된 TIL을 사용하여 세포독성 용량 증가가 관찰되었으며, 이는 반복된 TIL 자극 후에도 지속되었다. AKT 억제제-처리된 TIL은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 하나 이상의 CCR 또는 케모카인 수용체를 발현하도록 추가로 변형될 수 있다.
실시예 22: TIL 생성물에서 표현형을 개선하기 위한 후생적 변형의 사용
이 실시예에서, TIL 생성물의 후생적 변형자로서 배양물에서 DNA 저메틸화제인 데시타빈의 사용을 탐구하였다. 데시타빈은 본원에 개시된 AKT 억제제 및 CCR 및 케모카인 수용체, 뿐만 아니라 본원에 기재된 다른 유전적으로 변형된 TIL과 조합될 수 있다. 상이한 종양 유형(비소세포 폐암, 두경부암, 난소암, 및 유방암)의 환자 종양(N = 8)을 공여자로부터 수득하고, 단편화하고, TIL 생성을 위해 22-일 확장 프로토콜에 적용하였다. 상이한 용량(10 nM, 30 nM, 및 100 nM)의 데시타빈을 pre-REP 및 REP 단계 동안 또는 REP 동안에만 생체 외 확장 동안 배양물에 첨가하였다. TIL의 확장 가능성 뿐만 아니라 표현형 및 기능적 특성을 최종 TIL 생성물에서 평가하였다.
도 76에 제시된 결과는 데시타빈 처리가 TIL 생존력을 유지하지만, CD4+/CD8+ T-세포 비율을 증가시키면서 확장을 감소시켰다는 것을 예시한다. 대조군 TIL 및 데시타빈-처리된 TIL에서 확장, 생존력, 및 T-세포 분포는 도 76에 제시되어 있다. TIL은 처리되지 않은 채 방치하거나(CTRL, 회색 막대) 증가하는 농도의 데시타빈으로 처리하였다. 처리는 REP 단계 동안만(파란색 막대) 또는 pre-REP 및 REP 동안(녹색 막대) 첨가되었다. 도 76에서, 패널 A는 22-일 확장 프로세스가 끝날 때 TIL의 배수-확장 및 생존력을 보여주는 반면, 패널 B는 동결보존된 세포에서 확장 프로세스 후 CD8+, CD4+, 및 CD4+(Foxp3+) 세포의 빈도를 보여준다(*P < 0.05, **P < 0.01). 도 77에서, REP 단계 동안 데시타빈 처리가 CD8+ 및 CD4+ T 세포 모두에서 TCM-유사 세포의 빈도를 증가시켰다는 것을 입증하는 결과가 제시된다. 확장 후 CD8+ TIL의 경우 패널 A 및 CD4+ TIL의 경우 패널 B에 제시된 TCM(CD45RA-CCR7+), TEM(CD45RA-CCR7-), 및 TEMRA(CD45+CCR7-) 세포의 빈도와 함께, T 대조군 TIL 및 데시타빈-처리된 TIL에서 T-세포 하위집합이 제시된다(*P < 0.05, **P < 0.01). 도 78은 데시타빈-처리된 TIL에서 표면 마커의 발현을 보여준다. 데시타빈 처리는 CD8+ TIL에서 억제 수용체 발현을 감소시키면서 공동자극 수용체의 빈도를 증가시키는 것으로 관찰된다. 도 78의 패널 A는 CD8+ TIL에서 CD25, ICOS, CD28, 및 IL-7R의 발현을 보여주는 반면., 패널 B는 CD8+ TIL에서 억제 수용체 PD-1 및 TIGIT의 발현을 보여준다(*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, ****P < 0.0001). 유사한 결과가 CD4+ TIL에 대해 관찰되었다.
데시타빈-처리된 TIL에서 전사 인자의 발현은 도 79에 제시되어 있으며, 이는 데시타빈 처리가 기억 연관 전사 인자의 발현을 증가시켰다는 것을 입증한다. 대조군 또는 데시타빈-처리된 동결보존된 TIL을 해동하고 유세포 측정 분석을 위해 염색하였다. CD8+ TIL에서 Eomes, KLF2, BATF, 및 T-bet의 발현은 도 79에 제시되어 있다(*P < 0.05, **P < 0.01). 시험관 내 자극 후 대조군 또는 데시타빈-처리된 TIL에서 사이토카인 발현은 도 80에 제시되어 있다. 데시타빈 처리는 자극 후 CD8+ TIL을 발현하는 TNF-α 및 그랜자임 B의 빈도를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 동결보존된 대조군 및 데시타빈-처리된 TIL을 항-CD3/CD28 비드로 1:5의 비드 대 세포 비율로 밤새 자극하였다. CD8+ TIL에서 IFN-γ, TNF-α, 및 그랜자임 B의 발현 수준은 도 80에 제시되어 있다(*P < 0.05, **P < 0.01).
대조군 및 데시타빈-처리된 TIL의 세포독성을 또한 평가하였다. 도 81은 데시타빈-처리된 TIL이 반복된 자극 후 지속되는 세포독성 증가를 나타낸다는 것을 예시한다. 패널 A에서, REP에서 100 nM 데시타빈으로 처리된 동결보존된 대조군 및 TIL을 KILR® THP-1 세포(미국 캘리포니아주 프레몬트 소재의 Eurofins DiscoverX)와 10:1 E:T 세포 비율로 24시간 동안 공동 배양하여 동종이계 환경에서 세포독성을 측정하였다. 패널 B에서, 대조군 TIL 및 데시타빈-처리된 TIL을 5일마다 TransActtm(독일 소재의 Miltenyi Biotec)으로 자극하였다. 세번째 자극 1일 후, 세포를 세척하고 KILR THP-1 세포와 10:1 효과기 대 표적 세포 비율로 24시간 동안 공동 배양하여 세포독성을 측정하였다. *P < 0.05.
도 82는 데시타빈-처리된 TIL이 반복된 자극 후 IL-7R 발현을 증가시키면서 감소된 억제 수용체 발현 및 더 낮은 수준의 TOX를 보여준다는 것을 예시한다. 대조군- 및 데시타빈-처리된 TIL의 표현형은 반복된 자극 후에 보여진다. 대조군 TIL 및 데시타빈-처리된 TIL을 5일마다 TransActtm(독일 소재의 Miltenyi Biotec)으로 자극하였다. 세번째 자극 1일 후, 세포를 세척하고 유세포 측정 분석을 위해 염색하였다. 도 82에서, 반복된 자극 후 TIL에서 IL-7R, PD-1, 및 TIM3의 발현은 패널 A에 제시되는 반면, 반복된 자극 후 TIL에서 전사 인자의 발현 수준은 패널 B에 제시되어 있다(*P < 0.05, **P < 0.01).
결론적으로, TIL 확장 동안 데시타빈 처리는 효과기 분화에서 떨어지고 더 많은 기억-유사 표현형을 향해 균형을 이동시킬 수 있다. REP 단계 동안에만 100 nM의 데시타빈 처리는 억제 수용체 발현을 감소시키면서 공동자극 수용체의 발현을 증가시켰다. 데시타빈 처리는 반복된 자극 후에도 지속되는 증가된 살해 활성을 부여하면서 TNFα+ 및 IFNγ+TNFα+CD8+ TIL의 빈도를 증가시켰다. 데시타빈-처리된 TIL은 반복된 자극 후 감소된 TOX 수준 및 더 낮은 빈도의 PD1+TIM3+CD8+ TIL을 보여주었다. 이것은 TIL 확장 동안 DNA 메틸화 프로그램을 억제하면 TIL의 후생적 지형이 변형되어 치료 잠재력이 개선된다는 증거를 제공한다.
실시예 23: 비에피토프 TROP-2 및 PD-L1 키메라 공동자극 수용체
이 실시예에서, 상기 기재된 절차를 사용하여 TROP-2 및 PD-L1을 표적화하는 추가 비에피토프 CCR을 제조하고 다시 38A1 및 19H9에 기반한 PD-L1 scFv 및 cAR47A6.4 및 KM4097에 기반한 TROP-2 scFv를 사용하여 테스트한다. 이러한 CCR은 CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된다. 본 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR의 적합한 비제한적인 구현예는 표 87에 제시되어 있다.
표 87. CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된 예시적인 비에피토프 CCR의 아미노산 서열.
이 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR을 암호화하는 뉴클레오티드의 적합한 비제한적인 구현예는 표 88에 제시되어 있다.
표 88. CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된 예시적인 비에피토프 CCR의 뉴클레오티드 서열.
CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된 CCR을 암호화하는 벡터를 제조하였고, 표 89에 제시된다.
표 89. CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된 비에피토프 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터의 뉴클레오티드 서열.
서열번호:685 내지 서열번호:688에 상응하는 CCR7.2, CCR8.2, CCR11.2, 및 CCR12.2로 지정된 비에피토프 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터에 대한 벡터 맵은 도 83 내지 86에 제시되어 있다.
CCR 작제물의 생물학적 기능을 Hek-IL-18 SEAP 리포터 계통을 사용하여 테스트하였다. CCR8 및 CCR8.2 형질도입된 HekIL-18 리포터 세포(5x104개)를 항-His 항체의 존재 하에 표시된 농도의 PD-L1(His 태그됨)로 자극하였다(항체:단백질 비율=2:1; 예를 들어, 5 μg/mL PD-L1의 경우, 10 μg/mL 항-His 항체 첨가). 24시간 후, 상청액을 수확하고, SEAP 수준을 Quanti-blue 용액을 첨가한 후 650 nm에서 분광광도계를 사용하여 결정하였다. 결과는 도 87에 제시되어 있다. CCR12 및 CCR12.2 형질도입된 HekIL-18 리포터 세포(5x104개)를 항-His 항체의 존재 하에 표시된 농도의 TROP-2(His 태그됨)로 자극하였다(항체:단백질 비율=2:1). 24시간 후, 상청액을 수확하고, SEAP 수준을 Quanti-blue 용액을 첨가한 후 650 nm에서 분광광도계를 사용하여 결정하였다. 결과는 도 88에 제시되어 있다. 두 실험 세트에 대한 결과를 도 89(PD-L1의 경우) 및 도 90(TROP-2의 경우)에서 IL-18 표준과 추가로 비교하며, 여기서 OD 값 0.5는 약 3.175 pg/mL IL-18 자극과 동등한 것으로 나타나며, 이는 맞춤형 활성화를 입증한다.
마지막으로, 암 세포주 CaO-V3 및 MCF-7에서 TROP-2의 발현을 이소형 대조군과 비교하여, PE 형광 정량 키트를 사용하여 흐름에 의해 평가 및 정량화하였다. TROP-2는 CaO-V3에서 세포 당 대략 800,000개의 TROP-2 분자 수준으로, MCF-7에서 세포 당 대략 100,000개의 TROP-2 분자 수준으로 발현되었다.
전술한 실시예는 또한 본 발명의 구현예이다. 본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680의 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 또는 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 또는 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 또는 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:677, 서열번호:678, 서열번호:679, 및 서열번호:680에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:681, 서열번호:682, 서열번호:683, 및 서열번호:684에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:685, 서열번호:686, 서열번호:687, 및 서열번호:688에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
실시예 24: 4-1BB 세포내 도메인을 갖는 키메라 공동자극 수용체
상기 기재된 방법을 사용하여, 추가 CCR을 제조할 수 있다. 도 91은 CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 CCR에 대한 작제물을 보여준다. 렌티바이러스를 이전에 기재된 바와 같이 제조한다. 간단히 말해서, CCR을 pLenti-IRES-EGFP 플라스미드로 클로닝하였다. AfeI/EcoRI 효소 인식 서열을 CCR의 합성된 DNA 서열의 양쪽에 첨가하였다. 그런 다음, 전체 DNA 서열을 pLenti-IRES-EGFP 바이러스 벡터(실시예 25에서 CCR13-CCR16 뿐만 아니라 CCR17-CCR19)에 삽입하였다. pLenti 바이러스 벡터는 EF-1α 코어 프로모터에 의해 구동되는 유전자 발현을 갖는 자기-불활성화 렌티바이러스 벡터이다. 렌티바이러스를 만들기 위해, pLenti 벡터 및 헬퍼 벡터(VSV-G, Gag/Pol)를 293T 세포에 공동 형질감염시켰다. 바이러스 상청액을 2 또는 3일차 배양 상청액에서 수집한 후 초원심분리하여 TIL 형질도입을 위한 렌티바이러스를 농축하였다. 이들 CCR에 대한 아미노산 서열은 표 90에 제시되어 있다.
표 90. CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 예시적인 CCR의 아미노산 서열.
이 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR을 암호화하는 뉴클레오티드의 적합한 비제한적인 구현예는 표 91에 제시되어 있다.
표 91. CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 예시적인 CCR의 뉴클레오티드 서열.
CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 CCR을 암호화하는 벡터를 상기 기재된 바와 같이 제조하였다. 이들 벡터의 전체 뉴클레오티드 서열은 표 92에 제시되어 있다.
표 92. CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터의 뉴클레오티드 서열.
서열번호:699 내지 서열번호:702에 상응하는 CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16으로 지정된 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터에 대한 벡터 맵은 도 92 내지 95에 제시되어 있다. 이들 벡터는 이 실시예에서 렌티바이러스 배치의 제조에 사용되었다.
렌티바이러스의 제조 후, TIL을 각 렌티바이러스 배치를 사용하여 형질도입한 후, 2일 휴지시킨 다음 11-일 REP 확장 프로세스를 따랐다. 각 CCR 작제물의 표면 발현을 유세포 측정에 의해 검출하였다. 결과는 도 96에 제시되어 있다.
CCR을 발현하는 REP TIL의 확장, 생존력 및 사멸 효능을 또한 평가하였다. Pre-REP TIL(N=3)을 2일 동안 Trans-ACT로 활성화한 후, Fas-4-1BB, PD-1-4-1BB, TGF-bRII-4-1BB, PD-1-28, (즉, CCR13, CCR14, CCR15, 및 CCR16) 및 대조군 비히클 벡터를 포함한 CCR 작제물을 함유하는 렌티바이러스 입자로 유전자 형질도입하였다. 유전자 형질도입 2일 후, 3x104개의 pre-REP TIL을 11-일 REP 확장으로 처리하였다. 도 97 (a)는 CCR-발현 REP후 TIL의 배수 확장을 보여주고, (b)는 생존력을 보여주고, (c)는 KILR® 세포독성 검정에 의해 평가된 CCR-발현 REP후 TIL의 사멸 능력을 보여준다. 간단히 말해서, KILR® THP-1 표적 세포(1.25x104기)를 CCR 형질도입된 TIL 세포(1.25x105개, E:T 비율=10:1)와 함께 300 IU/mL IL-2를 함유하는 100 μL CM2 배양 매질이 있는 96 웰 백색 플레이트에서 공동 배양하였다. 24시간 후, KILR 시약 100 μL를 각 웰에 첨가한 후, 30분 인큐베이션하였다. 죽은 세포를 정량화하기 위해 발광 신호를 결정하였다. 사멸 백분율은 세포 용해 완충액이 첨가된 대조군 웰에 기반하여 정규화하였다.
전술한 실시예는 또한 본 발명의 구현예이다. 본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694의 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:689, 서열번호:690, 서열번호:691, 서열번호:692, 서열번호:693, 및 서열번호:694에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:695, 서열번호:696, 서열번호:697, 및 서열번호:698에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:699, 서열번호:700, 서열번호:701, 및 서열번호:702에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
실시예 25: LTBR 세포내 도메인을 갖는 키메라 공동자극 수용체
상기 기재된 방법을 사용하여, 추가 CCR을 제조할 수 있다. 도 98은 LTBR 세포내 도메인을 사용하여 CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 CCR에 대한 작제물을 보여준다. 이들 CCR에 대한 아미노산 서열은 표 93에 제시되어 있다.
표 93. CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 예시적인 CCR의 아미노산 서열.
이 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR을 암호화하는 뉴클레오티드의 적합한 비제한적인 구현예는 표 94에 제시되어 있다.
표 94. CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 예시적인 CCR의 뉴클레오티드 서열.
CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 CCR을 암호화하는 벡터는 상기 기재된 바와 같이 제조되었다. 이들 벡터의 전체 뉴클레오티드 서열은 표 95에 제시되어 있다.
표 95. CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터의 뉴클레오티드 서열.
서열번호:709 내지 서열번호:711에 상응하는 CCR17, CCR18, 및 CCR19로 지정된 CCR을 암호화하는 예시적인 벡터에 대한 벡터 맵은 도 99 내지 101에 제시되어 있다. 이들 벡터는 이 실시예에서 렌티바이러스 배치의 제조에 사용되었다.
전술한 실시예는 또한 본 발명의 구현예이다. 본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705의 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:703, 서열번호:704, 및 서열번호:705에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:706, 서열번호:707, 및 서열번호:708에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:709, 서열번호:710, 및 서열번호:711에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
실시예 26: 항-PD-L1 세포외 도메인을 갖는 키메라 공동자극 수용체
상기 기재된 방법을 사용하여, 추가 CCR을 제조할 수 있다. 이들 CCR은 CCR20, CCR21, CCR22, CCR23, CCR24, 및 CCR25로 지정되고 항-PD-L1 19H9 세포외 도메인을 사용한다. 이들 CCR에 대한 아미노산 서열은 표 96에 제시되어 있다.
표 96. CCR20, CCR21, CCR22, CCR23, CCR24, 및 CCR25로 지정된 예시적인 CCR의 아미노산 서열.
이 실시예에 따라 제조되고 본 발명의 CCR 작제물로서 유용한 CCR을 암호화하는 뉴클레오티드의 적합한 비제한적인 구현예는 표 97에 제시되어 있다.
표 97. CCR20, CCR21, CCR22, CCR23, CCR24, 및 CCR25로 지정된 예시적인 CCR의 뉴클레오티드 서열.
실시예 25 및 26에 기재된 것과 유사한 벡터 및 절차는 CCR20 내지 CCR25를 발현하는 TIL의 제조에 이용될 수 있다.
전술한 실시예는 또한 본 발명의 구현예이다. 본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717의 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:712, 서열번호:713, 서열번호:714, 서열번호:715, 서열번호:716, 및 서열번호:717에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예는 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723의 서열, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 99% 동일하거나, S 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 98% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 97% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 96% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 95% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 90% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 85% 동일하거나, 서열번호:718, 서열번호:719, 서열번호:720, 서열번호:721, 서열번호:722, 및 서열번호:723에 주어진 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
* * *
상기 제시된 실시예는 당업자에게 본 발명의 조성물, 프로세스, 검정, 시스템, 및 방법의 구현예를 만들고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제공되고, 발명자가 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 당업자에게 명백한 본 발명을 수행하기 위한 상기 기재된 모드의 변형은 다음 청구범위의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 명세서에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물은 본 발명이 속하는 당업자의 기술 수준을 나타낸다.
모든 제목 및 섹션 명칭은 명확성 및 참조 목적만을 위해 사용되며 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 예를 들어, 당업자는 본원에 기재된 본 발명의 취지 및 범위에 따라 적절한 경우 상이한 제목 및 섹션의 다양한 측면을 조합하여 유용성을 이해할 것이다.
본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 간행물 또는 특허 또는 측허 출원이 모든 목적을 위해 그들의 전문이 참조로 포함되도록 구체적으로 및 개별적으로 지시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그들의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 출원의 많은 변형 및 변경은 당업자에게 명백한 바와 같이 취지 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 기재된 구체적 구현예 및 실시예는 단지 예로서 제공되고, 적용은 청구범위에 부여된 등가물의 전체 범위와 함께 첨부된 청구범위 측면에서만 제한되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Iovance Biotherapeutics, Inc. <120> CHIMERIC COSTIMULATORY RECEPTORS AND USE OF SAME IN CELLULAR IMMUNOTHERAPIES <130> 116983-5046-WO <140> PCT/US2022/025420 <141> 2022-04-19 <150> US 63/284,177 <151> 2021-11-30 <150> US 63/254,297 <151> 2021-10-11 <150> US 63/223,925 <151> 2021-07-20 <150> US 63/176,675 <151> 2021-04-19 <160> 723 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Muromonab heavy chain <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 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Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 5 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic IL-2 form <400> 5 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 6 <211> 303 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic IL-2 form <400> 6 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atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggcctt 300 ctatggaact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcaaagct ttcagggagt 360 gcatccgccc caaaacttga agaaggtgaa ttttcagaag cacgcgtaga aacgacactc 420 acgcagtctc cagccaccct gtctgtgtct ccaggggaaa gagccaccct ctcctgcagg 480 gccagtcaga gtgttagcag caacttagcc tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc 540 aggctcctca tctatggtgc atccaccagg gccactggta tcccagccag gttcagtggc 600 agtgggtctg ggacagagtt cactctcacc atcagcagcc tgcagtctga agattttgca 660 gtttattact gtcagcagta taataactgg cctccgatgt acacttttgg ccaggggacc 720 aaggtggaga tcaaa 735 <210> 369 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Anti EPCAM 24-G6 scFv <400> 369 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac 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gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggcctt 300 ctatggaact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 371 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Anti EPCAM variable light chain <400> 371 gaaattgtaa tgacacagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcat catctatggt gcatccacca cggcctctgg tatcccagcc 180 aggttcagtg ccagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccggc gtacactttt 300 ggccagggga ccaagctgga gatcaaa 327 <210> 372 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Anti EPCAM variable light chain <400> 372 gaaacgacac tcacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca 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gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgtc gtggacgttc 300 ggccaaggga ccaaggtgga gatcaaa 327 <210> 375 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 375 gaaacgacac tcacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgat gtacactttt 300 ggccagggga ccaaggtgga gatcaaa 327 <210> 376 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Anti EPCAM variable light chain <400> 376 gaaacgacac tcacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 625 gtcgacggat cgggagatct cccgatcccc tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg 60 atgccgcata gttaagccag tatctgctcc ctgcttgtgt gttggaggtc gctgagtagt 120 gcgcgagcaa aatttaagct acaacaaggc aaggcttgac cgacaattgc atgaagaatc 180 tgcttagggt taggcgtttt gcgctgcttc gcgatgtacg ggccagatat acgcgttgac 240 attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 300 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 360 acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt 420 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 480 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 540 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 600 tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 660 ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc 720 accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg 780 gcggtaggcg tgtacggtgg 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ttctcttact 11100 gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga 11160 gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg 11220 ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc 11280 tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga 11340 tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat 11400 gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt 11460 caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt 11520 atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac 11580 <210> 627 <211> 350 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 627 Met Ser Asn Ile Thr Asp Pro Gln Met Trp Asp Phe Asp Asp Leu Asn 1 5 10 15 Phe Thr Gly Met Pro Pro Ala Asp Glu Asp Tyr Ser Pro Cys Met Leu 20 25 30 Glu Thr Glu Thr Leu Asn Lys Tyr Val Val Ile Ile Ala Tyr Ala Leu 35 40 45 Val Phe Leu Leu Ser Leu Leu Gly Asn Ser Leu Val Met Leu Val Ile 50 55 60 Leu Tyr Ser Arg 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1560 tcttttattg cctcctgttt gtattcagtc ttctgggaaa cagcctggtc atcctggtcc 1620 ttgtggtctg caagaagctg aggagcatca cagatgtata cctcttgaac ctggccctgt 1680 ctgacctgct ttttgtcttc tccttcccct ttcagaccta ctatctgctg gaccagtggg 1740 tgtttgggac tgtaatgtgc aaagtggtgt ctggctttta ttacattggc ttctacagca 1800 gcatgttttt catcaccctc atgagtgtgg acaggtacct ggctgttgtc catgccgtgt 1860 atgccctaaa ggtgaggacg atcaggatgg gcacaacgct gtgcctggca gtatggctaa 1920 ccgccattat ggctaccatc ccattgctag tgttttacca agtggcctct gaagatggtg 1980 ttctacagtg ttattcattt tacaatcaac agactttgaa gtggaagatc ttcaccaact 2040 tcaaaatgaa cattttaggc ttgttgatcc cattcaccat ctttatgttc tgctacatta 2100 aaatcctgca ccagctgaag aggtgtcaaa accacaacaa gaccaaggcc atcaggttgg 2160 tgctcattgt ggtcattgca tctttacttt tctgggtccc attcaacgtg gttcttttcc 2220 tcacttcctt gcacagtatg cacatcttgg atggatgtag cataagccaa cagctgactt 2280 atgccaccca tgtcacagaa atcatttcct ttactcactg ctgtgtgaac cctgttatct 2340 atgcttttgt tggggagaag ttcaagaaac acctctcaga aatatttcag aaaagttgca 2400 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gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 4140 agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 4200 cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga 4260 tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat 4320 tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag 4380 ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat 4440 cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc 4500 cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat 4560 accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag 4620 ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg 4680 ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc 4740 tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca 4800 acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg 4860 tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc 4920 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caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca 10140 aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt 10200 tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat 10260 gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac 10320 cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa 10380 aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt 10440 tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt 10500 tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa 10560 gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt 10620 atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa 10680 taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga c 10721 <210> 712 <211> 355 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 712 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser 20 25 30 Glu 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495 Thr Pro His Gln Glu Asp Gly Lys Ala Trp His Leu Ala Glu Thr Glu 500 505 510 His Cys Gly Ala Thr Pro Ser Asn Arg Gly Pro Arg Asn Gln Phe Ile 515 520 525 Thr His Asp Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 530 535 540 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 545 550 555 560 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 565 570 <210> 717 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 717 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser 20 25 30 Glu Ser Leu Gly Lys Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Gly 35 40 45 Ser Ile Ala Arg Lys Phe Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser 50 55 60 Ser Pro Thr Thr Val Ile Tyr Glu Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 65 70 75 80 Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Gly Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 115 120 125 Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly 145 150 155 160 Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 165 170 175 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro 180 185 190 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Thr Ala Gly Asp Thr 195 200 205 His Tyr Pro Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 210 215 220 Ala Arg Asn Ser Leu Asn Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 225 230 235 240 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Glu Arg Val Glu Arg Glu Tyr Ser 245 250 255 Gly Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 260 265 270 Ser Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala 275 280 285 Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg 290 295 300 Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys 305 310 315 320 Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 325 330 335 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 340 345 350 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 355 360 365 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 370 375 380 Glu Leu Lys Ser His Pro Ser Leu Cys Arg Lys Leu Gly Ser Leu Leu 385 390 395 400 Lys Arg Arg Pro Gln Gly Glu Gly Pro Asn Pro Val Ala Gly Ser Trp 405 410 415 Glu Pro Pro Lys Ala His Pro Tyr Phe Pro Asp Leu Val Gln Pro Leu 420 425 430 Leu Pro Ile Ser Gly Asp Val Ser Pro Val Ser Thr Gly Leu Pro Ala 435 440 445 Ala Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Pro Gln Gln Gln Ser Pro Leu Asp 450 455 460 Leu Thr Arg Glu Pro Gln Leu Glu Pro Gly Glu Gln Ser Gln Val Ala 465 470 475 480 His Gly Thr Asn Gly Ile His Val Thr Gly Gly Ser Met Thr Ile Thr 485 490 495 Gly Asn Ile Tyr Ile Tyr Asn Gly Pro Val Leu Gly Gly Pro Pro Gly 500 505 510 Pro Gly Asp Leu Pro Ala Thr Pro Glu Pro Pro Tyr Pro Ile Pro Glu 515 520 525 Glu Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Leu Ser Thr Pro His Gln Glu Asp 530 535 540 Gly Lys Ala Trp His Leu Ala Glu Thr Glu His Cys Gly Ala Thr Pro 545 550 555 560 Ser Asn Arg Gly Pro Arg Asn Gln Phe Ile Thr His Asp 565 570 <210> 718 <211> 1065 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 718 atggcgcttc cggtgactgc tcttctcttg cccctggctc tgctgctgca cgctgcccgg 60 cccaacttca tgttgaccca gccgcactcc gtgtcggaga gcctgggcaa gactgtcacg 120 atctcatgca ctggatcttc tgggtccatt gctcgcaaat ttgtgcagtg gtaccagcag 180 cgtcccgggt ctagtccgac aaccgtgatc tacgagaaca accagagacc atcgggcgtg 240 tccgacaggt tttcgggatc tatcggtagc tcctccaact ccgcttccct caccatttct 300 ggtctcaaga ccgaggacga ggctgattat tactgccaga gctacgacag cagcaacgtg 360 gtgttcggtg gcggcaccaa ggtcactgtg ctgggtggag gaggctctgg cggcggaggg 420 tccggtggcg gcggctcggg gggcggcggt tcgcaggtcc agctgcagga gagcggtggg 480 gggctggtga agcctggtgg ttccctacgg ctgtcttgtg ccgcatctgg cttcacgttc 540 tcaagctatt cgatgaattg ggtgcgccag gcccccggca aaggactgga gtgggtctcc 600 ggcattaaca cggcaggtga tacgcattac cccgagagcg tgaaaggccg cttcaccatc 660 tcccgcgaca acgcgcgcaa ctccctcaac ctgcagatga acagccttcg cgccgaggac 720 accgccgtgt actactgcgt gagggagcgc gtggagcgcg agtactccgg ctatgacgcc 780 ttcgacatct ggggccaggg caccacagtc accgtatctg cgccggcccc tgcccgagag 840 ccaggccact cccctcagat catctccttc ttcctggcct taacctccac cgcgttgctg 900 tttctgctct ttttcctgac cctgcgcttc agcgttgtta agcgcggccg caagaagctg 960 ctgtacatct tcaagcaacc cttcatgcgt cccgtgcaga ctacccagga ggaagatggg 1020 tgcagttgtc gttttcctga agaagaggag ggcgggtgcg agctg 1065 <210> 719 <211> 1485 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 719 atggctctgc ccgtcactgc cctccttctt ccgctcgcgc tgctgctgca cgctgctcgg 60 cccaacttta tgctaaccca gccgcacagc gtctccgaga gcctgggcaa aaccgtgacc 120 atctcatgca ctggatcgag tgggtccatc gcacgtaaat ttgtgcagtg gtaccagcag 180 aggcccggca gctcgccaac cacagtgatt tacgagaaca accagcgtcc gtccggggtt 240 tctgatcgtt tctcgggctc tatcggctcc tcgagcaact ccgcctccct gacgatcagc 300 ggactcaaga ccgaggacga ggcagactat tactgccaga gctacgactc ttcaaatgtg 360 gtgttcggag gaggcaccaa ggtgactgtc ttgggtggtg ggggctccgg cggcggcggc 420 tctggaggcg gcggctctgg cggcggtggc tcccaggtcc agctgcagga gagcggtggg 480 gggctggtga agcctggcgg ctcgttgcgc ctgtcatgcg ccgcttctgg cttcacgttt 540 tcttcgtact ccatgaattg ggtgcgccag gcccctggta aaggtctgga gtgggtcagt 600 ggaattaaca cggccggcga cacccactac cctgagtctg taaagggtcg cttcaccatc 660 tctcgcgaca acgccagaaa ttccctcaac ctgcagatga actccctgcg cgcagaggat 720 actgccgtgt actactgcgt gagggagcgc gtggagcggg agtactccgg ctacgacgcc 780 ttcgacatct ggggccaagg caccaccgtg actgtttccg cccccctgcc tcccgagatg 840 tccgggacga tgctgatgct ggctgtgctg ctgccgctag cgttcttcct gttgctggcg 900 actgtcttta gctgtatttg gaagtcccac cccagtttgt gccgaaagct gggctccctg 960 ctgaagcgcc gccctcaggg ggagggccca aatccagtgg cgggcagttg ggagccccca 1020 aaggcccatc cctatttccc cgacctggtg cagccgttac tgcccatctc cggggacgtg 1080 tccccagttt cgaccggtct ccctgccgca cctgtcctgg aggccggcgt gcctcaacag 1140 cagagccctt tggacctgac ccgcgaacct cagcttgagc caggggaaca gtcacaggta 1200 gcgcatggaa ccaacggcat ccacgtcacc ggaggttcta tgaccattac aggcaacatc 1260 tacatataca acggtccggt gctaggaggt ccgccagggc cgggtgatct ccccgccacc 1320 ccagaacccc cctatcccat cccggaggag ggcgacccgg gcccccccgg gctgtccacc 1380 ccccaccagg aagacggcaa ggcgtggcac ttagccgaga ctgagcactg tggcgccaca 1440 ccttctaacc gcggcccgcg caaccagttc atcacccatg actaa 1485 <210> 720 <211> 1158 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 720 atggccttgc cggtgactgc actcctgctg cctctggcgc tgctcttaca cgccgcacgt 60 cccaacttta tgctgaccca gccgcattcc gtgtcggaga gcctgggcaa aactgtgacc 120 atctcgtgta cggggtcgtc cgggagcatc gctcgcaaat ttgtgcagtg gtaccagcag 180 cgtccgggct cttcccccac cacagtaatt tacgagaaca accagcggcc ctctggcgtt 240 agtgacaggt tttcaggctc tatcggcagc agcagcaact ccgcctccct aactatctct 300 ggtctgaaga ccgaggacga ggcggactat tactgtcaga gctatgattc ttccaatgtg 360 gtgttcggag gagggactaa ggtgacggtg ctgggtggtg gtgggagcgg aggtggcgga 420 tccggcgggg gtggctccgg tggaggcggc tcccaggtcc agttgcagga gagcggcggt 480 ggcctggtga agcccggcgg ctcgttgcgc ctgtcctgtg ctgcttctgg cttcacattc 540 agttcgtact ccatgaactg ggtccgccag gcccccggaa aaggcctgga gtgggtgtcc 600 ggcattaaca cggccgggga cacccactac cctgaatctg tcaagggccg cttcaccatt 660 tcccgcgaca acgcgaggaa ctccctcaac ctgcagatga actccctgcg cgccgaggat 720 accgccgtgt actactgcgt gcgagaacgc gtggagcgcg agtactcagg ctacgacgca 780 ttcgacatat ggggccaggg caccaccgtc accgtgtccg ccaagccaac tacaaccccc 840 gccccgagac ccccaacccc tgcgccaacc atcgcttccc aacccctgtc tctgcggcct 900 gaggcctgcc gaccagcggc tggcggtgct gtccacactc gcggtttgga tttcgcttgc 960 gacatctaca tctgggcgcc tctcgccggc acctgcgggg ttcttctgct gagccttgtc 1020 atcacccttt acaagcgcgg acgcaagaag ctgctttata tcttcaagca gcccttcatg 1080 cgtcctgtgc agacgaccca ggaggaggac ggctgttcat gccgtttccc ggaagaggag 1140 gagggcgggt gcgagctg 1158 <210> 721 <211> 1593 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 721 atggcactgc ctgtgacggc tctgttgctg ccgctcgctc ttctgctaca cgccgctcgc 60 cccaacttta tgctcaccca gcctcattcc gtgtcggagt cattaggaaa aaccgtaaca 120 atctcttgca ctggctcatc tggttccatt gcacgcaaat ttgtgcagtg gtaccagcag 180 cggccaggta gcagcccaac cactgtcatc tacgagaaca accagcgtcc ttcgggggtg 240 agcgacaggt tctcgggttc tatcggctcg tcctccaact ccgcttccct gacaattagc 300 gggctgaaga ctgaggacga ggcggactac tactgtcaga gctacgattc ttccaacgtg 360 gtgttcggcg ggggcaccaa ggtgactgtg ctgggaggag gcggatctgg tggcggcggt 420 agcggtgggg gcggttcagg cggtggcggc tcccaggtgc agctgcagga gtctggcgga 480 ggcctcgtga agcccggtgg ttctctgaga ttgagttgtg ccgcgtcggg cttcaccttt 540 agctcttact ccatgaattg ggtccgccag gctcccggca agggccttga gtgggtgagc 600 ggcattaata cggccgggga tacccactac cctgagagcg ttaaaggccg cttcaccatc 660 tcgcgagaca acgcgcgcaa ctccctcaac ctgcagatga actctctgcg cgctgaagac 720 accgccgtgt actactgcgt gagggagcgg gtggagcgtg agtactccgg ctacgacgcc 780 ttcgacatat ggggccaagg caccaccgtc actgtctccg ccaagcccac caccactccc 840 gcgccacgcc cgcctacacc cgcccccacg atcgcctctc agccgctgag cctccggccg 900 gaggcctgcc gtccggccgc aggcggagcc gtgcacacac gcggcttgga cttcgcatgc 960 gacatttaca tctgggcccc cctggccggc acctgcgggg tgctgcttct ttcgctggtg 1020 atcaccctgt acaagagcca cccttctctg tgccgcaagc tgggctccct gttaaagcgc 1080 cgtcctcagg gcgagggccc caatccagtg gctgggagtt gggaaccccc caaggcgcac 1140 ccctatttcc ccgacctggt ccagcccctc ctgcccatct ccggagacgt gtccccggta 1200 tccaccggtc tgcctgctgc tccggtcctg gaggccggcg tgccgcaaca gcagagccct 1260 cttgacctga cccgcgagcc acagctcgag cccggggaac agtcccaggt cgcgcatgga 1320 accaacggca tccacgttac cggaggtagt atgactatca ccggcaacat ctatatttac 1380 aatggcccag ttttgggtgg gccccctggc cctggggatc tcccagcgac gcccgaaccg 1440 ccctatccga tcccggagga gggcgatcca ggaccccccg gcctgtccac ccctcaccag 1500 gaggacggca aggcctggca cctggccgag accgagcact gtggggccac gccgtccaac 1560 cgcggtcccc gcaaccagtt catcactcat gac 1593 <210> 722 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 722 atggccctgc ccgtcacagc acttctcctt cccctggcgc tcctgctaca cgccgctcgc 60 cccaacttta tgctcaccca gcctcattct gtttccgaga gtttgggcaa aaccgtcacc 120 atttcctgca ctggttcctc cggatctatc gcgcgcaaat ttgtccagtg gtaccagcag 180 agaccgggct ccagccctac caccgtgatt tacgagaaca accagaggcc ctccggtgtg 240 agcgatcggt tttccggttc catcggttcg agttcgaata gcgcatccct gactatctca 300 gggctgaaga ctgaagacga ggcggactat tactgccaaa gctacgattc ttccaacgtg 360 gtgttcggcg gcgggaccaa ggtgaccgtg ttgggcggcg gaggatctgg aggcggcggt 420 tctgggggtg ggggcagcgg cggtgggggc tcccaggtgc agttgcagga gagcgggggc 480 gggcttgtga agcccggcgg ctcgctgcgc ctgtcatgtg ctgcttccgg cttcacattc 540 tcgagttact ccatgaactg ggtgcgacag gccccaggca agggcctaga gtgggtcagc 600 ggaattaaca cggccggcga cacacactac cccgagagcg ttaagggacg cttcaccatc 660 tctcgtgaca acgctcgcaa ctccctcaac ctgcagatga actccctgcg agcagaggac 720 accgccgtgt actactgcgt gcgggagcgc gtggagcgtg agtacagcgg atacgacgcc 780 ttcgacatat ggggccaggg cacaaccgtt accgtgtccg ccaagcctac gaccactccc 840 gctccgcggc cgcctacccc tgccccaacc atcgccagcc agccactttc gctgagacca 900 gaagcgtgcc gtccggccgc aggtggcgct gtccacactc gcggcctcga ctttgcctgc 960 gacatctaca tttgggcgcc tttggctggc acctgcgggg tgctgctgct gagcctggtg 1020 atcaccctgt acaagagtca cccctctctg tgccgcaaac tgggctccct gctcaagcgc 1080 cgcccgcaag gcgagggccc caatccagtg gctggcagtt gggagccacc caaggctcac 1140 ccctatttcc ccgacctggt gcagccactg ctgcctatct ccggtgatgt atctccggtg 1200 tctacaggtt tgcctgctgc ccctgtctta gaggccggcg tccctcagca gcagagcccc 1260 ttggatctga ccagggagcc ccagcttgag ccaggggaac agtcacaggt cgcgcatgga 1320 accaacggca tccacgtaac cggcggatct atgacgatta ccggcaacat ctatatctac 1380 aacggacccg tgctgggtgg gcccccggga cccggggacc tgccggccac ccccgaacca 1440 ccctatccca tccctgagga gggcgacccg ggtcccccgg gcctatccac ccctcaccag 1500 gaggatggca aggcgtggca cctggctgag accgagcact gtggcgccac gccatcgaac 1560 cgcggcccgc gcaaccagtt catcactcat gacaaacgtg gcaggaagaa gctgctgtac 1620 atcttcaagc agccgttcat gcgccctgtg cagacgaccc aggaggagga cgggtgttct 1680 tgtcgcttcc cggaggagga agagggcggg tgcgagctg 1719 <210> 723 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic nucleotide <400> 723 atggccctgc ccgtcacggc cttactcctg ccactggcgc tgctgttgca cgccgcgcgc 60 cctaacttta tgctgaccca gcctcatagc gtgtccgaga gcctgggtaa aacggtcacc 120 atcagttgca ctggctcgtc tggaagcatc gcccgcaaat ttgtgcagtg gtaccagcag 180 cgcccgggca gctcgccgac cacagttatt tacgagaaca accagaggcc ctccggcgtc 240 tccgacaggt tttcaggctc catcggtagc tcctcaaatt ccgcttccct aactatctct 300 ggcctgaaga ctgaagacga ggcggactat tactgccaga gttacgattc ttccaacgtg 360 gtgttcggag gtggcaccaa ggtgaccgtg ctcgggggcg gtggctcggg cgggggcggt 420 tccggtggcg gcggctctgg tggggggggc agccaggtcc aattgcagga gagtgggggt 480 ggcctggtca agcccggcgg ctccctccgc ctgtcttgcg ctgcttctgg cttcacgttc 540 tcgtcctact ctatgaattg ggtccgccag gccccgggca aaggcctcga gtgggtgtcc 600 ggaattaaca cggccgggga cacccactac cccgagtccg taaaggggcg attcaccata 660 tcacgcgaca acgctcgcaa cagcctcaac ctgcagatga actctctgcg tgccgaggac 720 accgccgtgt actactgcgt gcgcgagcgc gtggagcggg agtactccgg ctacgacgcc 780 ttcgacattt ggggccaggg aactaccgtc acagtcagcg ccaagcctac cacaaccccc 840 gcgcctcggc ccccgactcc tgctcccacc atcgctagcc agccactgtc cctgcgcccc 900 gaggcatgcc gaccagcagc aggcggcgcc gtgcacacaa gaggattgga ttttgcttgc 960 gacatctaca tctgggcccc gctggcgggc acctgcgggg tgctactgct ctcgctggtg 1020 attaccctgt acaagcgtgg ccgcaagaag ctgctttaca tcttcaagca gcccttcatg 1080 cgccctgtgc agacgaccca ggaggaggat ggatgttctt gtcgtttccc tgaagaagag 1140 gagggcgggt gcgagttgaa atcccacccc tcgctgtgcc gcaagctggg tagcctccta 1200 aagcgtcgcc ctcagggcga gggccctaat ccagtggctg gaagttggga gccacccaag 1260 gcgcacccct atttccccga cttggtgcag cccctgctgc ccatctctgg tgatgtaagc 1320 ccggtttcca ccggccttcc tgcagcgcca gttctggagg ctggcgtgcc acaacagcag 1380 tcgcctctcg acctgactag ggagccccag ctggagccag gggaacagtc acaggtggcg 1440 catggaacca acggcatcca cgtcaccggt ggctccatga ccatcactgg caacatctat 1500 atctacaacg gccccgtgct gggcggccca cctggaccgg gagatctgcc tgccaccccc 1560 gaacccccat atccgatccc ggaggagggt gacccgggac ccccggggct ttccaccccg 1620 caccaggagg acggcaaggc ctggcacttg gccgagaccg agcactgtgg tgctactccc 1680 tctaaccggg gtccccgcaa ccagttcatc acgcatgac 1719

Claims (97)

  1. 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법으로서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형되며, 상기 CCR이 다음을 포함하는 것인, 방법:
    i. 세포외 도메인,
    ii. 힌지 도메인,
    iii. 막관통 도메인, 및
    iv. 적어도 하나의 세포내 도메인.
  2. 제1항에 있어서, 상기 암이 TIL 집단을 투여함으로써 치료되되, 다음 단계를 포함하는 것인, 방법:
    (a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
    (b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
    (c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
    (d) CCR을 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
    (e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
    (f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
    (g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
    (h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
    (i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계.
  3. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 scFv 결합 도메인을 포함하는 것인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 scFv 결합 도메인이 CD19, CD20, CD22, CD24, CD33, CD38, CD39, CD73, CD123, CD138, CD228, LRRC15, CEA, FRα, EPCAM, PD-L1, PSMA, gp100, MUC1, MCSP, EGFR, GD2, TROP-2, GPC3, MICA, MICB, VISTA, ULBP, HER2, MCM5, FAP, 5T4, LFA-1, B7-H3, IL-13Rα2, FAS, TGFβ, TGFβRII, 및 MUC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질에 결합하는 것인, 방법.
  5. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 PD-1 도메인, FAS 도메인, 및 TGFβRII 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 도메인이 CD28, CD134(OX40), CD278(ICOS), CD137(4-1BB), CD27, CD40L, STAT3, IL-2Rβ, IL-2Rγ, IL-18R1, IL-18RAP, IL-7Rα, IL-12R1, IL-12R2, IL-15Rα, IL-21R, LTBR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인이 CD3α, CD3β, CDζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, IgG1, IgG4, IgD, IL-2Rα, IL-2Rβ, IL-2Rγ, 및 CD40L의 막관통 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (d)가 CCR을 발현하기 위해 렌티바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), SOCS1, ANKRD11, BCOR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형되는 것인, 방법.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 TIL의 투여에 의해 치료되는 고형 종양 암인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 암이 육종, 췌장암, 간암, 교모세포종, 위장관암, 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 폐암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 중피종, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 환자가 인간인, 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암이고, 상기 환자가 다음 중 적어도 하나를 갖는 것인, 방법:
    1. <1%의 PD-L1의 미리 결정된 종양 비율 점수(TPS),
    2. 1%-49%의 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS), 또는
    3. 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재.
  13. 제12항에 있어서, 상기 환자가 <1%의 PD-L1의 TPS를 갖는 것인, 방법.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는 암을 앓고 있는 것인, 방법.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 없는 것인, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK-돌연변이, c-ROS-돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  17. 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 화학치료제 또는 화학치료 레지멘을 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  18. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 VEGF-A 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 VEGF-A 억제제가 베바시주맙, 라니비주맙, 이크루쿠맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  20. 제10항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 PD-1 또는 PD-L1 억제제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 티슬레리주맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 토스타를리맙, 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  22. 제10항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 CTLA-4 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 CTLA-4 억제제가 이필리무맙, 트레멜리무맙, 잘리프렐리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  24. 제10항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2가 초기에 제1 세포 배양 매질 및 제2 세포 배양 매질에 1000 IU/mL 내지 6000 IU/mL의 초기 농도로 존재하는 것인, 방법.
  25. 제10항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OKT-3 항체가 초기에 제2 세포 배양 매질에 약 30 ng/mL의 초기 농도로 존재하는 것인, 방법.
  26. 제10항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 또는 제2 세포 배양 매질이 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 4-1BB 작용제, OX-40 작용제, AKT 억제제, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  27. 제10항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 세포 배양 매질이 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  28. 제10항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  31. 제10항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 다음 날에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  32. 제10항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 당일에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  33. 제31항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된, 600,000 또는 720,000 IU/kg의 알데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함하는 고용량 IL-2 레지멘인, 방법.
  34. 제31항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 벰페갈데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  35. 제31항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 THOR-707, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  36. 제31항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 넴발류킨 알파, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  37. 제31항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 서열번호:29 및 서열번호:38로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 서열번호:37 및 서열번호:39로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄를 포함하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  38. 제10항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적으로 유효한 TIL 집단이 투여되고 약 2x109개 내지 약 15x1010개의 TIL을 포함하는 것인, 방법.
  39. 제10항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 확장이 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행되는 것인, 방법.
  40. 제10항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 확장이 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행되는 것인, 방법.
  41. 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는 조성물로서, 상기 CCR이 다음을 포함하는 것인, 조성물:
    i. 세포외 도메인,
    ii. 힌지 도메인,
    iii. 막관통 도메인, 및
    iv. 적어도 하나의 세포내 도메인.
  42. 제41항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 scFv 결합 도메인을 포함하는 것인, 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 상기 scFv 결합 도메인이 항-CD19 도메인, 항-CD20 도메인, 항-CD22 도메인, 항-CD24 도메인, 항-CD33 도메인, 항-CD38 도메인, 항-CD39 도메인, 항-CD73 도메인, 항-CD123 도메인, 항-CD138 도메인, 항-CD228 도메인, 항-LRRC15 도메인, 항-CEA 도메인, 항-FRα 도메인, 항-EPCAM 도메인, 항-PD-L1 도메인, 항-PSMA 도메인, 항-gp100 도메인, 항-MUC1 도메인, 항-MCSP 도메인, 항-EGFR 도메인, 항-GD2 도메인, 항-TROP-2 도메인, 항-GPC3 도메인, 항-MICA 도메인, 항-MICB 도메인, 항-VISTA 도메인, 항-ULBP 도메인, 항-HER2 도메인, 항-MCM5 도메인, 항-FAP 도메인, 항-5T4 도메인, 항-LFA-1 도메인, 항-B7-H3 도메인, 및 항-MUC16 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  44. 제41항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 PD-1 도메인, FAS 도메인, 또는 TGFβRII 도메인인, 조성물.
  45. 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 도메인이 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, STAT3 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-18RAP 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  46. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인이 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  47. 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형되는 것인, 조성물.
  48. 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 조성물로서, 상기 CCR이 다음을 포함하는 것인, 조성물:
    i. 세포외 단백질 도메인,
    ii. 힌지 단백질 도메인,
    iii. 막관통 단백질 도메인, 및
    iv. 적어도 하나의 세포내 단백질 도메인.
  49. 제48항에 있어서, 상기 세포외 단백질 도메인이 scFv 결합 도메인을 포함하는 것인, 조성물.
  50. 제49항에 있어서, 상기 scFv 결합 도메인이 항-CD19 도메인, 항-CD20 도메인, 항-CD22 도메인, 항-CD24 도메인, 항-CD33 도메인, 항-CD38 도메인, 항-CD39 도메인, 항-CD73 도메인, 항-CD123 도메인, 항-CD138 도메인, 항-CD228 도메인, 항-LRRC15 도메인, 항-CEA 도메인, 항-FRα 도메인, 항-EPCAM 도메인, 항-PD-L1 도메인, 항-PSMA 도메인, 항-gp100 도메인, 항-MUC1 도메인, 항-MCSP 도메인, 항-EGFR 도메인, 항-GD2 도메인, 항-TROP-2 도메인, 항-GPC3 도메인, 항-MICA 도메인, 항-MICB 도메인, 항-VISTA 도메인, 항-ULBP 도메인, 항-HER2 도메인, 항-MCM5 도메인, 항-FAP 도메인, 항-5T4 도메인, 항-LFA-1 도메인, 항-B7-H3 도메인, 항-IL-13Rα2 도메인, 항-FAS 도메인, 항-TGFβRII 도메인, 및 항-MUC16 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  51. 제48항에 있어서, 상기 세포외 단백질 도메인이 PD-1 도메인, FAS 도메인, 또는 TGFβRII 도메인인, 조성물.
  52. 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 단백질 도메인이 CD28 도메인, CD134(OX40) 도메인, CD278(ICOS) 도메인, CD137(4-1BB) 도메인, CD27 도메인, IL-2Rβ 도메인, IL-2Rγ 도메인, IL-18R1 도메인, IL-18RAP 도메인, IL-7Rα 도메인, IL-12R1 도메인, IL-12R2 도메인, IL-15Rα 도메인, IL-21R 도메인, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  53. 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 단백질 도메인이 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  54. 제48항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 단백질 도메인이 CD3α 도메인, CD3β 도메인, CDζ 도메인, CD3ε 도메인, CD4 도메인, CD5 도메인, CD8α 도메인, CD9 도메인, CD16 도메인, CD22 도메인, CD27 도메인, CD28 도메인, CD33 도메인, CD37 도메인, CD45 도메인, CD64 도메인, CD80 도메인, CD86 도메인, CD134 도메인, CD137 도메인, CD154 도메인, IgG1 도메인, IgG4 도메인, IgD 도메인, IL-2Rα 도메인, IL-2Rβ 도메인, 및 IL-2Rγ 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
  55. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 침윤 림프구를 추가로 포함하는, 조성물.
  56. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 골수 침윤 림프구를 추가로 포함하는, 조성물.
  57. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 말초 혈액 림프구를 추가로 포함하는, 조성물.
  58. 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법으로서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형되는 것인, 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 암이 TIL 집단을 투여함으로써 치료되되, 다음 단계를 포함하는 것인, 방법:
    (a) 환자로부터 수득된 종양 샘플을 다중 종양 단편 또는 종양 소화물에 처리함으로써 환자에서 절개된 종양으로부터 TIL의 제1 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
    (b) TIL의 제1 집단을 폐쇄형 시스템에 첨가하는 단계;
    (c) IL-2 및 임의적으로 OKT-3 항체 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 제1 세포 배양 매질에서 TIL의 제1 집단을 배양함으로써 제1 확장을 수행하여 TIL의 제2 집단을 생산하되, 여기서 제1 확장은 제1 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 제1 확장은 TIL의 제2 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 단계 (b)에서 단계 (c)로의 전이는 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
    (d) 케모카인 수용체를 발현하기 위해 TIL의 제2 집단을 유전적으로 변형시키는 단계;
    (e) IL-2, OKT-3 항체, 및 APC를 포함하는 제2 세포 배양 매질에서 TIL의 제2 집단의 제2 확장을 수행하여 TIL의 제3 집단을 생산하되, 여기서 제2 확장은 TIL의 제3 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, 여기서 TIL의 제3 집단은 TIL의 치료 집단이고, 여기서 제2 확장은 제2 가스 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되는 것인, 단계;
    (f) 단계 (e)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계;
    (g) 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 옮기되, 여기서 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 시스템을 개방하지 않고 발생하는 것인, 단계;
    (h) 동결보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)에서 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 동결보존하는 단계; 및
    (i) 단계 (g)의 주입 백으로부터 치료적 유효량의 TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하는 단계.
  60. 제59항에 있어서, 상기 케모카인 수용체가 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질인, 방법.
  61. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (d)가 케모카인 수용체를 발현하기 위해 렌티바이러스 또는 레트로바이러스를 사용하여 TIL을 유전적으로 변형시키는 것을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  62. 제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), SOCS1, ANKRD11, BCOR, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형되는 것인, 방법.
  63. 제58항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 TIL의 투여에 의해 치료되는 고형 종양 암인, 방법.
  64. 제63항에 있어서, 상기 암이 육종, 췌장암, 간암, 교모세포종, 위장관암, 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 폐암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 중피종, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암, 신장암, 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 환자가 인간인, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암이고, 상기 환자가 다음 중 적어도 하나를 갖는 것인, 방법:
    1. <1%의 PD-L1의 미리 결정된 종양 비율 점수(TPS),
    2. 1%-49%의 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS), 또는
    3. 하나 이상의 구동인자 돌연변이의 미리 결정된 부재.
  66. 제65항에 있어서, 상기 환자가 <1%의 PD-L1의 TPS을 갖는 것인, 방법.
  67. 제63항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 EGFR 억제제, BRAF 억제제, ALK 억제제, c-Ros 억제제, RET 억제제, ERBB2 억제제, BRCA 억제제, MAP2K1 억제제, PIK3CA 억제제, CDKN2A 억제제, PTEN 억제제, UMD 억제제, NRAS 억제제, KRAS 억제제, NF1 억제제, MET 억제제 TP53 억제제, CREBBP 억제제, KMT2C 억제제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 억제제, ATM 억제제, SETD2 억제제, FLT3 억제제, PTPN11 억제제, FGFR1 억제제, EP300 억제제, MYC 억제제, EZH2 억제제, JAK2 억제제, FBXW7 억제제, CCND3 억제제, 및 GNA11 억제제에 의한 치료를 나타내지 않는 암을 앓고 있는 것인, 방법.
  68. 제63항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 없는 것인, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 하나 이상의 구동인자 돌연변이가 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK-돌연변이, c-ROS-돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  70. 제63항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 화학치료제 또는 화학치료 레지멘을 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  71. 제63항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 VEGF-A 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 상기 VEGF-A 억제제가 베바시주맙, 라니비주맙, 이크루쿠맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  73. 제63항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 PD-1 또는 PD-L1 억제제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 티슬레리주맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 토스타를리맙, 더발루맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 레티판리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  75. 제63항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 CTLA-4 억제제를 사용한 치료에 불응성이거나 내성이 있는 것인, 방법.
  76. 제75항에 있어서, 상기 CTLA-4 억제제가 이필리무맙, 트레멜리무맙, 잘리프렐리맙, 및 이의 단편, 변이체, 및 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  77. 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2가 초기에 제1 세포 배양 매질 및 제2 세포 배양 매질에 1000 IU/mL 내지 6000 IU/mL의 초기 농도로 존재하는 것인, 방법.
  78. 제63항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OKT-3 항체가 초기에 제2 세포 배양 매질에 약 30 ng/mL의 초기 농도로 존재하는 것인, 방법.
  79. 제63항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 세포 배양 매질이 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  80. 제63항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 세포 배양 매질이 IL-4, IL-7, IL-15, IL-21, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  81. 제63항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여하기 전에 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  83. 제82항에 있어서, 상기 비골수파괴성 림프구고갈 레지멘이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  84. 제63항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 다음 날에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  85. 제63항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, TIL의 제3 집단을 환자에게 투여한 당일에 시작하여 IL-2 레지멘으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  86. 제84항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 내성이 생길 때까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥 주입으로 투여된, 600,000 또는 720,000 IU/kg의 알데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러를 포함하는 고용량 IL-2 레지멘인, 방법.
  87. 제84항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 벰페갈데스류킨, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  88. 제84항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 THOR-707, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  89. 제84항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 넴발류킨 알파, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  90. 제84항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-2 레지멘이 서열번호:29 및 서열번호:38로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 서열번호:37 및 서열번호:39로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄를 포함하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 바이오시밀러의 투여를 포함하는 것인, 방법.
  91. 제63항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 치료적으로 유효한 TIL 집단이 투여되고 약 2x109개 내지 약 15x1010개의 TIL을 포함하는 것인, 방법.
  92. 제63항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 확장이 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행되는 것인, 방법.
  93. 제63항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 확장이 11일 이하의 기간에 걸쳐 수행되는 것인, 방법.
  94. 케모카인 수용체를 발현하도록 유전적으로 변형된 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 침윤 림프구(MIL), 또는 말초 혈액 림프구(PBL)를 포함하는, 조성물.
  95. 제94항에 있어서, 상기 케모카인 수용체가 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7(ACKR3), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CCR11, XCR1, CX3CR1, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질인, 조성물.
  96. 제94항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TIL, MIL, 또는 PBL이 PD-1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, TIGIT, CISH, TGFβR2, PKA, CBL-B, BAFF(BR3), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 안정하게 또는 일시적으로 감소시키도록 추가로 유전적으로 변형되는 것인, 조성물.
  97. 케모카인 수용체를 포함하는 조성물로서, 종양 침윤 림프구, 골수 침윤 림프구, 또는 말초 혈액 림프구를 추가로 포함하는, 조성물.
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