KR20160144432A - 규정된 조성물 유전자 변형된 t-세포 생성물 - Google Patents

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Abstract

본원에 기재된 본 발명의 측면은 인간 요법을 위한, 키메라 항원 수용체를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포를 제조하기 위한 접근 방식에 관한 것이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 혼합 T-세포 집단, 예컨대 말초혈 또는 성분채집술 유래 단핵 세포로부터의 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포의 선별 및/또는 단리를 활용한다. 일단 선별/단리되면, CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포를, 바람직하게 상기 세포의 생존, 생착 및/또는 증식을 지지해 줄 뿐만 아니라 세포 표면 수용체, 예컨대 CD62L, CD28, 및/또는 CD27의 잔류를 바람직하게 증진 또는 유도시켜 주는 하나 이상의 시토카인의 존재하에 별도의 또는 단리된 배양물에서 활성화시키고, 유전적으로 변형시키며 증식시킨다. 본원에는 또한, 암의 치료, 억제, 완화 또는 제거를 필요로 하는 대상체에게 한 가지 이상 유형의 유전적으로 조작된 T-세포, 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조된 유전적으로 조작된 T-세포를 포함하는 조성물을 투여함으로써 암을 치료, 억제, 완화 또는 제거하는 방법이 포함된다.

Description

규정된 조성물 유전자 변형된 T-세포 생성물 {DEFINED COMPOSITION GENE MODIFIED T-CELL PRODUCTS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2014년 4월 10일에 출원된 미국 가출원 번호 61/977,751, 2014년 4월 30일에 출원된 미국 가출원 번호 61/986,479, 2014년 10월 2일에 출원된 미국 가출원 번호 62/058,973, 2014년 12월 5일에 출원된 미국 가출원 번호 62/088,363, 2014년 12월 9일에 출원된 미국 가출원 번호 62/089,730, 및 2014년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 번호 62/090,845를 우선권 주장한다. 전술된 출원의 전체 개시내용은 그들의 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다.
서열 목록에 대한 참조
본 출원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원된다. 이러한 서열 목록은 2015년 3월 23일에 생성된, 2.92 kb 크기의 SCRI-090WO_SEQUENCE_LISTING.TXT란 명칭의 파일로서 제공된다. 전자 포맷의 서열 목록 내의 정보는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 분야
본 발명의 측면은 키메라 항원 수용체를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포를 제조하기 위한 접근 방식에 관한 것이다. 개시된 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포를 선별 및/또는 단리시킨 다음, 이를 상기 세포의 생존, 생착 및/또는 증식을 지지해 줄 뿐만 아니라 세포 표면 수용체, 예컨대 CD62L, CD28, 및/또는 CD27의 잔류를 증진시켜 주는 하나 이상의 시토카인의 존재하에 단리된 배양물에서 활성화시키고, 유전적으로 변형시키며 증식시키는 것에 관한 것이다.
동종이계 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 후에 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)의 재발이 일어날 수 있다. 따라서, 많은 사람은 상기 접근 방식이 효과적이지 못한 것으로 믿고 있다. 종양 세포 또는 악성 B 세포의 표면 상에 존재하는 분자에 대해 특이적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 유전자 전이시킴으로써 조작되는 인간 T 림프구의 입양 전이(adoptive transfer)가 또한, 많은 진행성 암과 악성 종양을 효과적으로 치료할 수 있는 잠재력을 갖고 있다. 그러나, 효과적이면서도 장시간 지속되는 치료가 되기 위해서는, 키메라 항원 수용체를 포함하는 T-세포를 투여하는 것이, 바람직하게 환자에게 전이된 후에 높은 생존율과 증식률을 나타낸다. 요법에 사용된 T-세포는 또한, 생착에 적합한 것이 바람직하다. 이러한 분야에 있어서의 엄청난 노력에도 불구하고, 부가의 효과적인 세포성 요법에 대한 필요성은 여전히 남아있다.
본원에 기재된 본 발명의 측면은 인간 요법을 위한, 키메라 항원 수용체를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법을 포함한다. 대안들은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD4+ 및/또는 CD8+ 발현성 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 선별(selection), 강화(enrichment), 및/또는 단리(isolation)를 활용하는 방법을 포함한다. 일단 선별되거나, 강화되거나 또는 단리되면, CD4+ 및/또는 CD8+ 발현성 T-세포를, 예를 들어 이러한 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하고 상기 세포의 생존, 생착 및/또는 증식을 지지하거나, 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여할 뿐만 아니라 바람직하게, 세포 표면 수용체, 예컨대 CD62L, CD28, 및/또는 CD27의 잔류를 지지하거나, 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공될 수 있는 하나 이상의 시토카인의 존재하에, 바람직하게 분리되거나, 강화되거나 또는 단리된 배양물에서 활성화시키고, 유전적으로 변형시키며 증식시킨다. 본원에는 또한, 암의 치료, 억제, 완화 또는 제거를 필요로 하는 대상체에게 한 가지 이상 유형의 유전적으로 조작된 T-세포, 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조된 유전적으로 조작된 T-세포를 포함하는 조성물을 투여함으로써 암을 치료, 억제, 완화 또는 제거하는 방법이 포함된다.
본원에 기재된 본 발명의 일부 측면은 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 접근 방식에 의해, 이들 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 분리되거나, 단리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 분리되거나, 강화되거나 또는 단리된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 예를 들어 이러한 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공될 수 있는 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열을 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 분리되거나, 강화되거나 또는 단리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 분리되거나, 강화되거나 또는 단리된 집단을 적어도 2일 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계에 의해 실시된다. 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 이상 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득할 수 있다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계는 CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계는 유동 세포계수법에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계는 면역-자기 선별에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 상기 유전적으로 변형된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 단리된 T-세포 집단을 자극하는 단계는 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행된다. 일부 대안에서, 상기 항체-결합된 지지체는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 일부 대안에서, 항체-결합된 지지체는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 이러한 스페이서는 IgG4 힌지(hinge)를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 상기 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하는데, 이는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있고/있거나 10 U/mL, 20 U/mL, 30 U/mL, 40 U/mL, 50 U/mL, 60 U/mL, 70 U/mL, 80 U/mL, 90 U/mL, 또는 100 U/mL으로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하는데, 여기서 시토카인의 양은 0.5 ng/mL 및/또는 50 U/mL로 제공된다. 일부 대안에서, 접촉 단계는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 CD8+ 세포의 부재하에, CD8+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD4+ 세포를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 CD4+ 세포의 부재하에, CD4+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD8+ 세포를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, CD4+ 발현성 T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킨다. 일부 대안에서, CD8+ T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킨다. 일부 대안에서, 상기 방법은 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 유전적으로 변형된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 유동 세포계수법에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 면역-자기 선별에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 상기 유전적으로 변형된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 바람직한 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 상기 단리되거나, 강화되거나 또는 분리된 T-세포 집단을 자극하는 단계는 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행된다. 이들 대안 중 일부에서, 항체-결합된 지지체는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 바람직한 대안에서, 항체-결합된 지지체는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다.
전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 이들 대안 중 일부에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는데, 일부 대안에서 이는 IgG4 힌지를 포함할 수 있다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 벡터는 바이러스 벡터 또는 미니-원형(mini-circle)이다.
전술된 대안 중 많은 것에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 바람직하게, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 활용되는 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함하고, 상기 시토카인은, 예를 들어 상기 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공된다.
바람직한 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 바람직한 대안에서, 접촉 기간은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 시점 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 방법은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD8+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD8+ 발현성 T-세포를 갖는, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 이용하여 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 이들 방법은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD4+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD4+ 발현성 T-세포를 갖는, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD8+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 이용하여 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, CD4+ 발현성 T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시킨다. 전술된 대안 중 많은 것에서, CD8+ 발현성 T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시킨다.
전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 방법은 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분, 예컨대 미국 특허 번호 7,446,179 (그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다)에서 입수 가능한 것을 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 방법은 유전적으로 변형된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명의 부가의 측면은 강화된 형태, 예컨대 CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포로부터 강화되거나, CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포의 부재하에 또는 CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포로부터 단리된 형태로, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포를 포함하는, 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포의 집단에 관한 것인데, 여기서 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별되거나 또는 강화된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 유전자 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별되거나 또는 강화된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는, 예를 들어 상기 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공될 수 있는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰는데, 예컨대 상기 세포를 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안, 외생적으로 부가된 시토카인과 접촉시킴으로써 자극되었다. 일부 대안에서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다.
일부 대안은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단에 관한 것이다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- T-세포의 부재하에, CD8- 및/또는 CD4- T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하는데, 여기서 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 상기 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에, CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에, CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, T 세포는 전구체 T 세포이다. 일부 대안에서, 전구체 T 세포는 조혈 줄기 세포이다. 일부 대안에서, 벡터는 스페이서, 예컨대 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 미니-원형이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 상기 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분, 예컨대 미국 특허 번호 7,446,179 (그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다)에서 입수 가능한 것을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포의 집단은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD4+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD4+ 발현성 T-세포를 갖는 단리된 CD8+ 발현성 T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포의 집단은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD8+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD8+ 발현성 T-세포를 갖는 단리된 CD4+ 발현성 T-세포를 포함한다.
본 발명의 부가의 측면은 제약 부형제; 및 앞 단락에 제시된 바와 같은, 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단을 포함하는, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합에 관한 것이다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 CD8+ 발현성 T-세포의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 CD4+ 발현성 T-세포의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 조성물 또는 생성물 조합은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1 비, 또는 전술된 비 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 비로 혼합되거나 또는 공동-투여된, 상기 제시된 바와 같은 유전적으로 변형된 CD8+ 발현성 T-세포의 집단과 상기 제시된 바와 같은 유전적으로 변형된 CD4+ 발현성 T-세포의 집단을 포함한다.
본 발명의 부가의 측면은 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게, 상기 제시된 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료, 억제 또는 완화시키는 방법에 관한 것이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 CD4+ 발현성 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포를 포함하는 조성물 또는 생성물 조합을, CD8+ 발현성 T-세포의 투여에 앞서 또는 이전에 투여하는 것을 포함하고, 다른 대안에서는, CD8+ 발현성 세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포를 CD4+ 발현성 T-세포의 투여 전에 투여한다. 많은 대안에서, 대상체는 항암 요법을 받는 것으로 확인되거나 또는 선택된다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 상기 접근 방식은 또한, 특정 질환의 억제를 측정 또는 평가하는 것을 포함한다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 상기 접근 방식은 또한, 상기 제시된 조성물 또는 생성물 조합을 투여하기 전, 투여하는 동안, 또는 투여 후에 부가의 항암 요법을 상기 대상체에게 제공하는 것을 포함한다.
전술된 방법 중 많은 것에서, 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 입양 세포 전이에 의해 투여한다. 일부 대안에서, 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여한다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 대상체는 백혈병으로 인해 고통받고 있다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 소아기 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 대상체는 자가면역 질환으로 인해 고통받고 있다. 전술된 방법 중 많은 것에서, 대상체는 HSCT 후 재발로 인해 고통받고 있다.
따라서, 본 발명의 일부 측면은 다음 대안들에 관한 것이다:
1. 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리 또는 강화시켜, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계;
이와 같이 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
상기 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안, 예를 들어 상기 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공될 수 있는 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 상기 마커 서열을 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계; 및
이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계
를 포함하는, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법.
2. 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가, CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행되는, 대안 1의 방법.
3. 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가 유동 세포계수법에 의해 수행되는, 대안 1 또는 2의 방법.
4. 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가 면역-자기 선별에 의해 수행되는, 대안 1 또는 2의 방법.
5. 유전적으로 변형된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포가, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체를 포함하는, 대안 1 내지 4 중 어느 하나의 방법.
6. 적어도 하나의 수용체가 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 대안 5의 방법.
7. 적어도 하나의 수용체가 CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 대안 5 또는 6의 방법.
8. 단리된 T-세포 집단을 자극하는 단계가, CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행되는, 대안 1 내지 7 중 어느 하나의 방법.
9. 항체-결합된 지지체가 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는, 대안 8의 방법.
10. 항체-결합된 지지체가 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는, 대안 8 또는 9의 방법.
11. 벡터가 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함하는, 대안 1 내지 10 중 어느 하나의 방법.
12. 벡터가 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 대안 1 내지 11 중 어느 하나의 방법.
13. 스페이서가 IgG4 힌지를 포함하는, 대안 12의 방법.
14. 벡터가 바이러스 벡터인, 대안 1 내지 13 중 어느 하나의 방법.
15. 바이러스 벡터가 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래되는, 대안 14의 방법.
16. 바이러스 벡터가 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터인, 대안 14 또는 15의 방법.
17. 바이러스 벡터가 렌티바이러스 벡터인, 대안 14 내지 16 중 어느 하나의 방법.
18. 마커 서열이 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩하는, 대안 1 내지 17 중 어느 하나의 방법.
19. 적어도 하나의 시토카인이 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2 및/또는 IL-21을 포함하는, 대안 1 내지 18 중 어느 하나의 방법.
20. 적어도 하나의 시토카인이 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하는데, 이는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있고/있거나 10 U/mL, 20 U/mL, 30 U/mL, 40 U/mL, 50 U/mL, 60 U/mL, 70 U/mL, 80 U/mL, 90 U/mL, 또는 100 U/mL으로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있는, 대안 1 내지 19 중 어느 하나의 방법.
21. 적어도 하나의 시토카인이 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하는데, 여기서 시토카인의 양이 0.5 ng/mL 및/또는 50 U/mL으로 제공되는, 대안 1 내지 19 중 어느 하나의 방법.
22. 접촉 단계가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행되는, 대안 1 내지 21 중 어느 하나의 방법.
23. CD8+ 세포 부재하의, 또는 CD8+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD4+ 세포를 이용하여 수행되는, 대안 1 내지 20 또는 22 중 어느 하나의 방법.
24. CD4+ 세포 부재하의, 또는 CD4+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD8+ 세포를 이용하여 수행되는, 대안 1 내지 19, 21 또는 22 중 어느 하나의 방법.
25. CD4+ 발현성 T-세포가 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식되는, 대안 1 내지 20, 22 또는 23 중 어느 하나의 방법.
26. CD8+ T-세포가 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식되는, 대안 1 내지 19, 21, 22 또는 24 중 어느 하나의 방법.
27. 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함하는, 대안 8 내지 26 중 어느 하나의 방법.
28. 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 1 내지 27 중 어느 하나의 방법.
29. 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 1 내지 28 중 어느 하나의 방법.
30. 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 1 내지 29 중 어느 하나의 방법.
31. 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 CD19에 대해 특이적인, 대안 1 내지 30 중 어느 하나의 방법.
32. 유전적으로 변형된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함하는, 대안 1 내지 31 중 어느 하나의 방법.
33. CD8- 및/또는 CD4- T-세포 부재하의, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하는데, 여기서 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극된 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
34. 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포가, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함하는, 대안 33의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
35. 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체가 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 대안 33 또는 34의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
36. 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체가 CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 대안 34 또는 35의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
37. 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포가, 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함하는, 대안 33 내지 36 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
38. 벡터가 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는, 대안 37의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
39. 스페이서가 IgG4 힌지를 포함하는, 대안 38의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
40. 벡터가 바이러스 벡터인, 대안 33 내지 39 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
41. 바이러스 벡터가 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래되는, 대안 40의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
42. 바이러스 벡터가 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터인, 대안 40 또는 41의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
43. 바이러스 벡터가 렌티바이러스 벡터인, 대안 40 내지 42 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
44. 세포 표면 선별성 마커가 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩하는, 대안 33 내지 43 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
45. 리간드 결합성 도메인이 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 37 내지 44 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
46. 리간드 결합성 도메인이 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 37 내지 45 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
47. 리간드 결합성 도메인이 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는, 대안 37 내지 46 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
48. 리간드 결합성 도메인이 CD19에 대해 특이적인, 대안 37 내지 47 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
49. CD4+ T-세포 부재하의, 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD8+ T-세포를 포함하는, 대안 33 내지 48 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
50. CD8+ T-세포 부재하의, 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD4+ T-세포를 포함하는, 대안 33 내지 48 중 어느 하나의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
51. 제약 부형제; 및
대안 33 내지 50 중 어느 하나 이상에 따르는 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단
을 포함하는, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합.
52. 대안 49의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는, 대안 51의 조성물 또는 생성물 조합.
53. 대안 50의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는, 대안 47의 조성물 또는 생성물 조합.
54. 1:1 비로 혼합되거나 또는 공동-투여된, 대안 49의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단과 대안 50의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는, 대안 47의 조성물 또는 생성물 조합.
55. 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게 대안 51 내지 54 중 어느 하나 이상의 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계
를 포함하는, 상기 대상체에게서 질환을 치료, 억제 또는 완화시키는 방법.
56. 대안 52의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는, 대안 55의 방법.
57. 대안 53의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는, 대안 55의 방법.
58. 대안 53의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 대안 56의 방법.
59. 대안 52의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 대안 57의 방법.
60. 대안 54의 조성물 또는 생성물 조합을, 예컨대 CD8+ 발현성 T-세포를 CD4+ 발현성 T-세포의 투여에 앞서, 예컨대 CD4+ T-세포를 투여하기 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60분 전에 또는 전술된 시간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간에 투여하는 접근 방식에 의해 투여하는 것을 포함하는, 대안 55의 방법.
61. 대상체가 항암 요법을 받는 것으로 확인되거나 또는 선택되는, 대안 55 내지 60 중 어느 하나 이상의 방법.
62. 특정 질환의 억제를 측정 또는 평가하는 단계를 추가로 포함하는, 대안 55 내지 61 중 어느 하나 이상의 방법.
63. 대안 51 내지 54 중 어느 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하기 전, 투여하는 동안, 또는 투여 후에 부가의 항암 요법을 상기 대상체에게 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 대안 55 내지 62 중 어느 하나 이상의 방법.
64. 대안 51 내지 54 중 어느 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합이 상기 대상체에게 입양 세포 전이에 의해 투여되는, 대안 55 내지 63 중 어느 하나 이상의 방법.
65. 대안 51 내지 54 중 어느 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합이, 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여되는, 대안 55 내지 64 중 어느 하나 이상의 방법.
66. 대안 51 내지 54 중 어느 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합이, 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여되는, 대안 55 내지 65 중 어느 하나 이상의 방법.
67. 대상체가 백혈병으로 인해 고통받고 있는, 대안 55 내지 66 중 어느 하나 이상의 방법.
68. 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 소아기 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있는, 대안 55 내지 67 중 어느 하나 이상의 방법.
69. 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있는, 대안 55 내지 68 중 어느 하나 이상의 방법.
70. 대상체가 자가면역 질환으로 인해 고통받고 있는, 대안 55 내지 69 중 어느 하나 이상의 방법.
71. 대상체가 HSCT 후 재발로 인해 고통받고 있는, 대안 55 내지 70 중 어느 하나 이상의 방법.
도 1a는 제0일에서 제65일까지 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 입양 전이 후 11명의 환자에게서 상기 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 절대 수를 도시한 것이다. 도 1b는 3가지 치료 용량의 투여 후, 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 절대 수를 도시한 것이다.
도 2a는 제0일에서 제65일까지 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 입양 전이 후 환자의 말초혈에서의 상기 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 영속성을 도시한 것이다. 도 2b는 3가지 치료 용량의 투여 후, 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 영속성을 도시한 것이다.
도 3a는 제0일에서 제65일까지 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 입양 전이 후 환자의 골수에서의 상기 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 영속성을 도시한 것이다. 도 3b는 3가지 치료 용량의 투여 후 환자의 골수에서 항-CD19 CAR 보유 T-세포의 영속성을 도시한 것이다.
도 4는 3가지 용량 투여 후 환자 X에게서의 % 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)을 도시한 것이다.
도 5는 본 연구에 사용되었던 환자 특징의 표를 나타낸 것이다.
도 6은 질환 및 투여량과 관계된 것으로서, CNS 림프종의 발생을 도시한 것이다. 도시된 바와 같이, 2개의 막대 그래프는 항-CD19 CAR 보유 T-세포를 포함하는 치료를 수행한 환자의 수, 및 3가지 치료 후 그들의 질환 중증도를 표시한다.
도 7은 ALL로 인해 고통받고 있는 환자의 비정상적 MRI에서의 등급 4 뇌병증을 도시한 것이다. 첫 번째 패널은 항-CD19 CAR 보유 T-세포를 이용하여 치료한 후의 결과를 표시한다.
도 8은 항-CD19 CAR 보유 T-세포를 이용한 치료 후 급성 피부 이식편 대 숙주 질환 (GVHD)을 도시한 것이다. 패널 A에 제시된 바와 같이, S03은 CAR T-세포 생착 d17 후 새로운 등급 2 급성 피부 GVHD를 발생하였다. 패널 B에서는, 피부 생검 결과, 피부 국한성 T-세포의 9%만이 EGFRt+를 표시한 반면, 순환성 T-세포의 79%는 EGFRt+를 표시한 것으로 밝혀졌다. 패널 C에서는, 말초혈은 동시에, 대다수의 T-세포가 CAR+였다는 것을 보여주었다. 이러한 대상체는 1 mg/kg의 프레드니손으로 2주 과정 동안 치료한 다음, 6주 기간에 걸쳐 신속하게 점차적으로 감소시키고 GVHD를 해소하였다. 프레드니손의 투여에도 불구하고, 상기 대상체는 진행중인 영속성 CAR+ T-세포를 갖고 있다.
도 9는 항-CD19 CAR 보유 T-세포를 이용한 치료 후 최소 잔류 질환 (MRD)의 마커로서 Ig 또는 TCR을 경험하는 환자의 표를 나타낸 것이다.
도 10은 항-CD19 CAR T-세포의 동종이계 조혈 줄기 세포 이식 후 환자 프로파일의 표를 나타낸 것이다.
도 11은 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 후 말초혈 및 CSF로부터 단리된 세포의 FACS 스캐터 분석을 도시한 것이다.
도 12는 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식의 3가지 용량 투여 후 종양 부담 대 반응을 도시한 것이다.
도 13은 조혈 줄기 세포 이식의 3가지 용량 투여 후 환자의 완화 지속기간을 도시한 것이다.
도 14는 제7일에 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식의 2가지 용량 투여 후 종양 부담 대 반응을 도시한 것이다.
도 15는 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식의 3가지 용량 투여 후 환자에게서 CAR/EGFRt+ T-세포 영속성의 규모 및 지속기간을 도시한 것이다.
도 16은 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식의 3가지 용량 투여 후 B 세포 무형성증의 지속기간을 도시한 것이다.
도 17은 항-CD19 CAR T-세포의 조혈 줄기 세포 이식의 3가지 용량 투여 후 환자의 CRS 프로파일을 도시한 것이다.
도 18은 유전적으로 변형된 T-세포의 제조를 예시하는 2개의 플로 다이아그램을 도시한 것이다. 도시된 바와 같이, 초기 확장 방법론의 경우에는, 벌크 프로세싱이 항상 즉시 개시되지 않았다. 성분채집술 생성물의 특정 부분이 항상, 피콜(Ficoll) 프로세싱을 위해 고려되었다. 벌크 배양물이 전혀 개시되지 않을 경우에는, 피콜에 의해 분리된 그 생성물을 동결보존하였다.
도 19는 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포를 제조하는 상이한 방법을 비교한 플로 다이아그램을 도시한 것이다.
도 20은 종균 배양에서 상이한 농도의 세포를 이용한 세포 성장에 있어서의 초기 비교를 도시한 것이다. 도시된 바와 같이, PD0064는 CD8+ 발현성 T-세포가 강화된 PD0063 공여자이고, 개시시 T25 플라스크에서 출발 세포 밀도를 시험하기 위해 사용하였다. 상기 실험은 2개의 세포 밀도를 시험하였는데, 실험 동안 초기에 용적이 증가한 경우에는, 두 가지 실험 모두가 더 큰 생존 능력과 확장을 나타냈다.
도 21은 세포 성장의 개시 비교를 도시한 것이다. 이는 현재 사용되고 있는 최신 제조 공정으로의 전이를 위해 사용된 전체 규모 데이터이다.
도 22는 성장에 관하여 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포를 시험하기 위하여 사용되었던 시토카인의 칵테일의 변동을 예시하는 플로 다이아그램을 도시한 것이다.
도 23a-f는 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포의 성장 동안 시험되었던 시토카인의 비교를 예시한 것이다.
도 24a-f는 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포의 성장 동안 시험되었던 시토카인의 비교를 예시한 것이다.
도 25a-b는 세포 성장에 관한 시토카인 비교를 도시한 것이다. PD0059 공여자 샘플에 대해서는, 새로운 CD4 및 CD8 공여자 (PD0057)를 시험하는 것을 제외하고는 PD0051에서와 동일한 시토카인 시험 실험을 수행하였다.
도 26은 상이한 시토카인 혼합물을 시험하는 실험으로부터 유래된 현재의 확장 방법론 및 초기 확장 방법론을 예시하는 플로 다이아그램을 도시한 것이다.
도 27은 샘플 PD0080, PD0084 및 PD0085의 확장 비교를 도시한 것이다. 이들 실험은 "조기 확장" 방법론의 반복이었다.
도 28은 유전적으로 변형된 세포를 생성하기 위한 PD0044 상에서의 시험을 도시한 것이다. 제1 스케일 업(scale up)을 위하여, 동결보존되고 선별된 세포로부터의 PLAT-02 (1상 및 2상 시험) "프리-퀄(pre-qual)"을 사용하였다.
도 29는 PLAT-02 "퀄 수행 #1"의 스케일 업으로부터 유전적으로 변형된 세포를 생성하기 위한 PD0046 상에서의 시험을 도시한 것이다.
도 30은 PLAT-02 "퀄 수행 #2"의 스케일 업으로부터 유전적으로 변형된 세포를 생성하기 위한 PD0063 상에서의 시험을 도시한 것이다. 성장 곡선은 세포의 V-197 백 둘 다로부터의 TNC를 함께 도시한 것이다. 비드 제거와 EGFRt 강화가 그 후에 일어났다. CD4+ 발현성 T-세포의 경우에는 D+14에 일어났고, CD8+ 발현성 T-세포의 경우에는 D+15에 일어났다. CD8+ 발현성 T-세포는 IL-2 (50 U/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장하였고, CD4+ 발현성 T-세포는 IL-7 (5 ng/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장하였다. 비드 제거와 EGFRt 강화는 CD4+ 발현성 T-세포의 경우에는 D12에 일어났고, CD8+ 발현성 T-세포의 경우에는 D13에 일어났다.
도 31a-b는 시토카인의 존재하에 성장시킨 경우에 벌크 PBMC 배양물로부터의 세포의 확장을 도시한 것이다. 도시된 바와 같이, CD4+ 발현성 T- 세포 (●)는 IL-2 및 IL-15의 존재하에 성장시켰다. CD8+ 발현성 T-세포 (■)는 IL-7 및 IL-15의 존재하에 성장시켰다.
도 32a-b는 시토카인 혼합물에서 강화된 CD8+ 및 CD4+ 발현성 T-세포의 확장을 도시한 것이다. 샘플 PD0044에 제시된 바와 같이, 강화된 CD8+ 발현성 T-세포는 IL-2 및 IL-15의 존재하에 확장되었다. 샘플 PD0044에서는, 강화된 CD4+ 발현성 T-세포가 20일에 걸쳐 IL-7 및 IL-15의 존재하에 확장되었다.
도 33은 도 18의 플로 차트에 도시된 바와 같은 초기 방법론을 이용하여, 강화된 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포의 확장을 도시한 것이다. 샘플 14602-S01, 14602-S02, 및 14602-S03/14602-S03-02에서의 세포의 실험이 도시되어 있다.
도 34는 도 18의 플로 차트에 도시된 바와 같은 초기 방법론을 이용하여, 강화된 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포의 확장을 도시한 것이다. 샘플 14602-S04/14602-S04-02, 14602-S05, 14602-SO6 및 14602-S06-2/14602-S06-04에서의 세포의 실험이 도시되어 있다.
도 35는 도 18의 플로 차트에 도시된 바와 같은 조기 확장 방법론을 이용하여, 강화된 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포의 확장을 도시한 것이다. 샘플 14602-S07, 14602-S08, 및 14602-S09에서의 세포의 실험이 도시되어 있다.
도 36은 샘플 14602-S10, 14602-S11, 14602-S12, 및 14602-S13에서의 세포의 확장이 도시되어 있다.
도 37은 샘플 14602-S14, 14602-S15, 및 14602-S16에서의 세포의 확장이 도시되어 있다.
도 38은 세포 확장 후 강화된 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포 연장된 표현형을 도시한 것이다.
도 39a-b는 샘플 PD0044 및 PD0046으로부터의 세포가 주사된 마우스의 생존을 도시한 것이다. PD0046 세포는 생착 적합도 마커 (CD27, CD28, CD127, 및 CD62L)의 발현을 갖는 것으로 언급되었다.
도 40은 PD0044 및 PD0046 세포 배치로부터의 세포로 처리된 마우스에서의 평균 종양 진행을 도시한 것이다.
도 41은 생착 적합도를 위하여 제조한 T-세포로 처리된 마우스에서 종양 진행을 시험하는 실험적 설정을 도시한 것이다.
도 42는 동물 내로의 투여 당일 및 시토카인 성장 조건에 대한 샘플 PD0051 및 PD0055로부터의 CD4+ 발현성 T-세포와 CD8+ 발현성 T-세포 간의 비교를 도시한 것이다.
도 43은 PBS, PD0051 (정상 확장 세포) 및 PD0055 (시토카인 조합물의 존재하에 확장된 세포)로 처리되었던 마우스의 3개 군의 비교를 도시한 것이다.
도 44는 EGFRt CAR 마커의 검출에 의한 마우스의 말초혈에서의 T-세포 영속성을 도시한 것이다.
도 45는 시험관내 각종 시토카인 조건에서 반복 항원 접촉자와 함께 성장시킨 세포들 간의 사멸 능력에 있어서의 생체내 차이를 결정하기 위하여, 마우스의 3개 군을 시험하기 위한 실험적 설정을 도시한 것이다.
도 46은 제0일에서 제120일까지 처리한 후 PD0051 및 PD0055 처리된 마우스의 종양 진행을 도시한 것이다.
도 47은 반복 항원 노출을 이용하여 시험감염된 PD0051 및 PD0055 세포를 도시한 것이다.
도 48은 시토카인 조합물로 펄스된 T-세포와 비교한 "정상 확장 세포"의 JME13-29 반복된 라지(Raji) 종양 시험감염을 도시한 것이다.
도 49는 PLAT-01 (1상 임상 시험) 및 PLAT-02 (1상 및 2상 임상 시험)와 동일한 조건하에 성장시킨 세포들 간의 사멸 능력에 있어서의 생체내 차이가 있는지를 결정하기 위한 실험적 설정뿐만 아니라 "중간" 프로토콜을 도시한 것이다.
도 50은 CD8+ 및 CD4+ 발현성 T-세포로부터의 EGFRt의 수준 및 세포 생성물을 표시하는 표를 나타낸다.
도 51은 특이적 용량 적정에서 T-세포로의 처리 후 평균 종양 진행을 도시한 것이다.
도 52는 T-세포 처리의 투여 군 내에서의 PLAT 비교를 도시한 것이다.
도 53a-e는 유사한 투여 농도에서 PLAT-1.00, PLAT-1.33, PLAT-1.67 및 PLAT-2.00의 생성물로부터의 T-세포의 비교를 도시한 것이다. 상기 도면은 개별 동물의 종양 진행을 예시한 것이다. 각 화살표의 출발은 각종 용량 적정을 이용하여 각 PLAT 군에 대하여 그룹화한 것을 나타내는데, 이어서 개별 군들을 가지런하게 하였다.
도 54는 PLAT-1.00, PLAT-1.33, PLAT-1.67 및 PLAT-2.00의 생성물로부터의 T-세포로 처리된 마우스의 용량 적정 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 세포 처리의 투여 군 내에서의 PLAT 비교를 예시한다.
도 55는 생존 곡선의 PLAT 비교를 도시한 것이다. 상기 도면은 특이적 용량에서 T-세포로의 처리 후 평균 종양 진행을 예시한 것이다.
도 56은 T-세포를 정상 확장 방법에서 성장시켰거나 또는 시토카인의 존재 하에 성장시킨 T-세포 처리에 반응하는 마우스의 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 또한, T-세포 처리 후에 상기 마우스에게서 이종 이식편 숙주 질환이 발생되었는지를 나타낸다.
도 57은 T-세포를 정상 확장 방법에서 성장시켰거나 또는 시토카인의 존재 하에 성장시킨 T-세포 처리에 반응하는 마우스의 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 또한, T-세포 처리 후에 상기 마우스에게서 이종 이식편 숙주 질환이 발생되었는지를 나타낸다.
도 58a-c는 T-세포를 정상 확장 방법에서 성장시켰거나 또는 시토카인의 존재 하에 성장시킨 T-세포 처리에 반응하는 마우스의 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 또한, T-세포 처리 후에 상기 마우스에게서 이종 이식편 숙주 질환이 발생되었는지를 나타낸다.
도 59a-h는 T-세포를 정상 확장 방법에서 성장시켰거나 또는 시토카인의 존재 하에 성장시킨 T-세포 처리에 반응하는 마우스의 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 또한, T-세포 처리 후에 상기 마우스에게서 이종 이식편 숙주 질환이 발생되었는지를 나타낸다.
도 60a-d는 T-세포를 정상 확장 방법에서 성장시켰거나 또는 시토카인의 존재 하에 성장시킨 T-세포 처리에 반응하는 마우스의 생존을 도시한 것이다. 상기 도면은 또한, T-세포 처리 후에 상기 마우스에게서 이종 이식편 숙주 질환이 발생되었는지를 나타낸다.
도 61은 51일 및 90일에 T 세포 처리한 후 제51일에 JME14-03 군 N의 표를 도시한 것이다.
본원에 기재된 대안들 중 몇 가지의 이해를 용이하게 하기 위해 다음 정의가 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은, 단수 형태는 1개 또는 2개 이상을 의미할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "핵산" 또는 "핵산 분자"는 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드, 예컨대 데옥시리보핵산 (DNA) 또는 리보핵산 (RNA), 올리고뉴클레오티드, 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 생성된 단편, 및 라이게이션, 절단, 엔도뉴클레아제 작용, 엑소뉴클레아제 작용, 및 합성 생성 중 임의의 것에 의해 생성된 단편을 지칭한다. 핵산 분자는 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 (예컨대, DNA 및 RNA), 또는 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드의 유사체 (예를 들어, 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드의 에난티오머성 형태), 또는 둘 다의 조합물인 단량체로 구성될 수 있다. 변형된 뉴클레오티드는 당 모이어티(moiety) 및/또는 피리미딘 또는 푸린 염기 모이어티에서의 변경을 가질 수 있다. 당 변형은, 예를 들어 하나 이상의 히드록실 기를 할로겐, 알킬 기, 아민 및 아지도 기로 대체하는 것을 포함하거나, 또는 당을 에테르 또는 에스테르로서 기능화할 수 있다. 더욱이, 전체 당 모이어티는 입체적으로 및 전자적으로 유사한 구조, 예컨대 아자-당 및 카르보사이클릭 당 유사체로 대체할 수 있다. 염기 모이어티에서의 변형의 예는 알킬화 푸린 및 피리미딘, 아실화 푸린 또는 피리미딘, 또는 기타 널리 공지된 헤테로사이클릭 치환기를 포함한다. 핵산 단량체는 포스포디에스테르 결합 또는 이러한 연쇄의 유사체에 의해 연결될 수 있다. 포스포디에스테르 연쇄의 유사체는 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐리데이트, 포스포르아미데이트 등을 포함한다. 용어 "핵산 분자"는 또한, 폴리아미드 주쇄에 부착된 자연적으로 발생하거나 또는 변형된 핵산 염기를 포함하는, 소위 "펩티드 핵산"을 포함한다. 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "유전적으로 변형시키다"는 유기체 또는 세포, 예컨대 박테리움, T-세포, 박테리아 세포, 진핵 세포, 곤충, 식물 또는 포유류를, 유전 공학 기술을 이용하여 변경시킨 유전 물질, 예컨대 핵산으로 변형시키는 과정을 지칭한다. 예를 들어, 핵산, 예컨대 DNA를, 먼저 분자 클로닝 방법을 이용하여 관심 유전 물질을 단리 및 카피하여 DNA 서열을 생성시키거나, 또는 DNA를 합성한 다음 이러한 구축물을 숙주 유기체 내로 삽입함으로써, 숙주 게놈에 삽입할 수 있다. 뉴클레아제를 이용하여 유전자를 제거하거나 또는 "녹아웃"시킬 수도 있다. 유전자 표적화는 내인성 유전자를 변화시키기 위하여 상동 재조합을 이용하는 상이한 기술이고, 이를 이용하여 유전자를 결실시키거나, 엑손을 제거하거나, 유전자를 부가하거나 또는 점 돌연변이를 도입할 수 있다.
형질도입에 의해 수행된 유전적 변형이 본원에 기재되어 있다. "형질도입"은 유전 물질, 예컨대, 예를 들어, DNA 또는 RNA를, 벡터를 통하여 세포에 전이시키는 방법을 지칭한다. 통상의 기술은 바이러스 벡터, 전기천공, 및 세포 투과성을 증가시켜 주는 화학적 시약을 이용한다. DNA는 바이러스에 의해, 또는 바이러스 벡터를 통하여 전이시킬 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 면역 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포를 변형시키는 방법이 제공된다. 치료 유전자의 고 발현을 달성하고/하거나 세포 표면 상의 키메라 항원 수용체의 양을 증가시키기 위하여, 예를 들어, T-세포를, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 유전 물질로 형질도입할 수 있다. 바이러스를 이용하여 T-세포를 유전적으로 변형시킬 수 있다. 유전자 요법에 흔히 사용되는 바이러스는 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 레트로바이러스 및 렌티바이러스이다.
키메라 항원 수용체를 코딩하는 핵산을 전달하기 위하여 재조합 감염성 바이러스 입자를 활용하는 각종 형질도입 기술이 개발되었다. 이는 T 림프구의 형질도입에 대한 현재의 바람직한 접근 방식을 나타낸다. 본원에 기재된 바와 같이, 형질도입을 위해 사용된 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 및 레트로바이러스 벡터로부터 유래된 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 따라서, 유전자 전이 및 발현 방법은 무수하지만, 본질적으로는 포유류 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 기능을 한다. 상기 기술 중 몇 가지를 이용하여 조혈 또는 림프계 세포를 형질도입할 수 있는데, 이는 인산칼슘 형질감염, 원형질 융합, 전기천공, 및 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터로의 감염을 포함한다. 1차 T 림프구는 전기천공에 의해 및 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 감염에 의해 성공적으로 형질도입되었다. 따라서, 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터는 진핵 세포에서의 유전자 전이를 위한 고도로 효율적인 방법을 제공할 수 있다. 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터는 T-세포 내로의 유전자 전이를 위한 고도로 효율적인 방법을 제공한다. 더욱이, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 통합이 제어 방식으로 일어나고, 이로써 1개의 세포당 새로운 유전 정보 1개 또는 수개의 카피가 안정적으로 통합된다.
본원에 기재된 바와 같은 "발현 벡터" 또는 벡터는 숙주 세포에서 발현되는 유전자를 코딩하는 핵산 분자이다. 전형적으로, 발현 벡터는 전사 프로모터, 유전자, 및 전사 종결인자를 포함한다. 유전자 발현은 통상적으로, 프로모터의 제어하에 놓여있고, 이러한 유전자는 상기 프로모터와 "작동적으로 연결"된다고 한다. 유사하게, 조절성 요소와 코어 프로모터는 이러한 조절성 요소가 코어 프로모터의 활성을 조정하는 경우에 작동적으로 연결된다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체로부터 유래되는 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화, 분리 또는 단리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
"5' 비번역 영역 (5' UTR)"으로서 공지되기도 한 "리더 서열"은 개시 코돈으로부터 상류에 위치하는 mRNA의 영역이고, mRNA 전사체의 번역을 조절하는 데 있어서 중요하다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 이러한 키메라 항원 수용체를 코딩하는 벡터는 리더 서열을 코딩하는 서열을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 "리간드"는 생물학적 목적, 예컨대 예를 들어, 시그널 촉발을 위하여 또 다른 분자 또는 바이오분자와 복합체를 형성할 수 있는 소분자를 지칭한다. 결합은 분자간 힘, 예를 들어 이온 결합, 수소 결합, 및 반 데르 발스(van der walls) 상호 작용을 통하여 일어날 수 있다. 수용체 단백질에 대한 리간드 결합은 3차원 구조를 변경시킬 수 있고 그의 기능적 상태를 결정할 수 있다.
제한 없이 예로서, 리간드는 기질, 단백질, 소분자, 억제제, 활성화제 및 신경전달물질을 포함할 수 있다. 리간드의 결합 강도가 결합 친화도로서 지칭되고, 이는 직접적인 상호 작용 및 용매 효과에 의해 결정될 수 있다. 리간드는 "리간드 결합성 도메인"에 의해 결합될 수 있다. 리간드 결합성 도메인은 특이적 리간드와 결합할 수 있는 구조 내에 보존된 서열을 지칭할 수 있다. 제한되는 것은 아니지만, 리간드 결합성 도메인은 리간드(들)에 대해 특이적인 특이적 단백질 도메인일 수 있다.
"특이적" 또는 "특이성"은 결합 파트너에 대한 리간드의 특징, 또는 또 다른 한편으론, 리간드에 대한 결합 파트너의 특징을 지칭할 수 있고, 결합에 대한 상보성 외형, 전하 및 소수성 특이성을 포함할 수 있다. 결합에 대한 특이성은 입체 특이성, 위치 선택성 및 화학 선택성을 포함할 수 있다.
"공동-자극성 도메인"으로서 공지되기도 한 "시그널링 도메인"은 세포의 내부와 상호 작용하고 시그널을 전달함으로써 기능하는 단백질 또는 수용체 단백질의 세포내 또는 세포질 도메인이다. 세포의 세포내 부분에 상주하는 단백질의 부분이 "엔도도메인"으로서 지칭되기도 한다. 이러한 상호 작용은 이펙터(effector) 분자 또는 이펙터 단백질 (이는 결국, 시그널 쇄를 따라 시그널을 그의 목적지로 보낼 수 있다)과의 특이적 단백질-단백질 또는 단백질-리간드 상호 작용을 통하여 소통하는 세포내 도메인을 통하여 일어날 수 있다.
시그널링 또는 공동-자극성 도메인은 또한, 예를 들어 TCR/CD3 복합체의 CD3 제타 쇄에 의해 제공된 1차 시그널 이외에도, T-세포 반응, 예컨대, 예를 들어, 면역 반응, 활성화, 증식, 분화, 시토카인 분비, 세포용해 활성, 퍼포린(perforin) 및/또는 그랜자임(granzyme) 활성 등을 매개하는 시그널을 T-세포에 제공하는 시그널링 모이어티를 지칭한다. 시그널링 또는 공동-자극성 도메인은 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, ICOS, 림프구 기능 관련 항원-l (LFA-l), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및/또는 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 중 일부 또는 전부를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
"선별성 마커 서열"은 인공적 선별에 대한 형질을 부여해 주는 세포 또는 벡터 내로 도입된 유전자이다. 선별성 마커 서열 또는 마커 서열은 연구원이 필요한 세포와 불필요한 세포를 구별할 수 있게 해주거나 또는 특이적 세포 유형에 대하여 강화시켜 줄 수 있는 스크리닝 가능한 마커일 수 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 마커 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체를 코딩하는 벡터가 제공되는데, 여기서 상기 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안, 예를 들어 상기 T-세포에 의해 생성되거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, 바람직하게 외생적으로 부가된 시토카인인 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 분리, 강화 또는 단리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다.
상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 마커 서열을 코딩하는 서열을 포함한다. 이들 대안 중 일부에서, 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)이다.
본원에 기재된 바와 같은 "코돈 최적화"는 코돈을 최대 단백질 발현 효율을 증가시키는 것으로 공지된 코돈으로 변경시키는 설계 공정을 지칭한다. 일부 대안에서, 인간에서의 발현을 위한 코돈 최적화가 기재되는데, 여기서 코돈 최적화는 인간에게서 높은 mRNA 및 단백질 수율을 위해 최적화된 합성 유전 전사체를 창출하도록 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있는 알고리즘을 이용함으로써 수행될 수 있다. 인간에게서 코돈 최적화를 위한 알고리즘을 함유하는 프로그램이 용이하게 입수 가능하다. 이러한 프로그램은, 예를 들어 옵티멈진(OptimumGene)™ 또는 진(Gene)GPS® 알고리즘을 포함할 수 있다. 부가적으로 인간 코돈 최적화 서열을, 예를 들어 인티그레이티드 DNA 테크놀러지(Integrated DNA Technologies)로부터 상업적으로 수득할 수 있다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안, 예를 들어 상기 T-세포에 의해 생성되거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, 바람직하게 외생적으로 부가된 시토카인인 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화, 단리 또는 분리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 단리되거나 또는 분리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 벡터의 서열은 인간에서의 발현을 위하여 코돈 최적화된다. 일부 대안에서, 상기 벡터의 서열은 인간 세포에서 최대 단백질 발현을 위하여 특이적으로 선별된 코돈을 갖도록 최적화되는데, 이는 T-세포의 단백질 또는 CAR의 농도를 증가시킬 수 있다.
최적화는 또한, 폴리뉴클레오티드에서 2차 구조의 발생을 저하시키기 위해 수행될 수 있다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터 내의 서열의 최적화는 또한, 총 GC/AT 비를 감소시키기 위해 수행될 수 있다. 엄격한 코돈 최적화는 불필요한 2차 구조를 초래할 수 있거나 또는 2차 구조를 야기시키는 바람직하지 못한 높은 GC 함량을 초래할 수 있다. 따라서, 이러한 2차 구조는 전사 효율에 영향을 미친다. 2차 구조 회피와 GC 함량 최적화를 위하여, 진옵티마이저(GeneOptimizer)와 같은 프로그램을 코돈 사용빈도 최적화 후에 사용할 수 있다. 이들 부가의 프로그램을, 초기 코돈 최적화 후의 문제 해결과 추가의 최적화를 위해 사용하여, 최적화 1회전 후에 발생할 수 있는 2차 구조를 제한할 수 있다. 최적화하기 위한 또 다른 프로그램이 용이하게 입수 가능하다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 2차 구조 회피를 위하여 최적화되는 서열 및/또는 총 GC/AT 비를 감소시키기 위해 최적화되는 서열 및/또는 인간에서의 발현을 위하여 최적화되는 서열을 포함한다.
마커 도메인은 또한, 본원에 기재된 대안에 대한 중요한 측면을 제공할 수 있다. 세포 표면 상의 마커 도메인을 활용하면, 형질도입된 T-세포의 존재 또는 투여와 연관된 독성 현상의 경우에 형질도입된 림프구 제거가 허용될 수 있다. 예를 들어, EGFRt 마커 서열의 경우에는, EGFR에 대한 완전한 길이의 항체를 활용하여, EGFR을 발현하는 세포와 결합할 수 있고, 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 (ADCC)을 통하여 이들을 사멸시킬 수 있다. 일부 대안에서, 마커 도메인에 대해 특이적인 항체를 세포독성제, 예컨대 방사성 핵종 또는 독소와 연결시킬 수 있는데, 이로써 형질도입된 세포를 생체 내에서 사멸 또는 제거할 수 있는 치료제가 초래된다. 일부 대안에서, 강화 및 세포 선별을 위한 마커 서열이 제공된다. 본원에 기재된 예시되는 대안에서, EGFRt 마커 서열은 EGFRt 마커에 대항한 면역자기 선별을 허용해 주는 정제 및 강화 방법에 사용된다.
본원에 기재된 바와 같은 "스페이서"는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239 또는 240개 아미노산의 길이 또는 전술된 길이 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 길이 범위일 수 있는 폴리펩티드 쇄를 지칭할 수 있다. 스페이서는 임의의 20개 아미노산을, 예를 들어 임의의 순서로 포함하여, 키메라 항원 수용체 내에 바람직한 길이의 폴리펩티드 쇄를 창출할 수 있는데, 이는 아미노산 아르기닌, 히스티딘, 리신, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 글리신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 티로신 및/또는 트립토판을 포함한다. 스페이서 서열은 키메라 항원 수용체의 막투과 도메인과 scFv 간의 링커일 수 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 스페이서는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239 또는 240개 아미노산의 길이 또는 전술된 길이 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 길이를 수반한 서열을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 스페이서는 키메라 항원 수용체의 막투과 영역과 scFv 사이에 있다.
본원에 기재된 바와 같은 "IgG4 힌지"는 IgG4 항체의 중쇄와 경쇄 사이에 있는 폴리펩티드 도메인을 지칭한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 강화 또는 단리시켜, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안, 예를 들어 상기 T-세포에 의해 생성되거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, 바람직하게 외생적으로 부가된 시토카인인 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다.
상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 인간 항체의 힌지 영역을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, IgG4 힌지 영역은 변형된 IgG4 힌지이다. 본원에 기재된 바와 같은 "변형된 IgG4 힌지"는 서열식별번호 (SEQ ID NO): 1 (서열식별번호: 1; ESKYGPPCPPCP), 서열식별번호: 2 (서열식별번호: 2; YGPPCPPCP), 서열식별번호: 3 (서열식별번호: 3; KYGPPCPPCP), 또는 서열식별번호: 4 (서열식별번호: 4; EVVKYGPPCPPCP)에 제시된 바와 같은 힌지 영역 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 또는 100% 서열 동일성, 또는 전술된 % 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 서열 동일성을 가질 수 있는 힌지 영역을 지칭할 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 이들 서열 중 임의의 하나 이상을 인간에서의 발현을 위하여 코돈 최적화시킬 수 있고, 이들 서열 중 임의의 하나 이상을 2차 구조 또는 GC/AT 비를 감소시키기 위해 최적화시킬 수 있으며, 이들 서열 중 임의의 하나 이상은 적어도 2가지 이소형 유전자로부터 생성된 컨센서스 서열일 수 있다.
"막투과 도메인"은 생물학적 막에 포매되는 단백질을 고정시키기 위해 세포의 이층에 상주할 수 있는, 소수성인 단백질의 특정 영역이다. 제한되는 것은 아니지만, 막투과 도메인의 토폴로지(topology)는 막투과 알파 나선일 수 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 벡터는 막투과 도메인을 코딩하는 서열을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 막투과 도메인은 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개 아미노산의 길이, 또는 전술된 길이 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 길이인 CD28 막투과 서열 또는 그의 단편을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, CD28 막투과 서열 또는 그의 단편은 28개 아미노산 길이를 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 막투과 도메인은 서열식별번호: 5에 제시된 서열 (서열식별번호: 5; MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV)을 포함한다.
"공동-자극성 도메인"으로서 공지되기도 한 "시그널링 도메인"은 세포의 내부와 상호 작용하고 시그널을 전달함으로써 기능하는 단백질 또는 수용체 단백질의 세포내 또는 세포질 도메인이다. 세포의 세포내 부분에 상주하는 단백질의 부분이 "엔도도메인"으로서 지칭되기도 한다. 이러한 상호 작용은 이펙터 분자 또는 이펙터 단백질 (이는 결국, 시그널 쇄를 따라 시그널을 그의 목적지로 보낼 수 있다)과의 특이적 단백질-단백질 또는 단백질-리간드 상호 작용을 통하여 소통하는 세포내 도메인을 통하여 일어날 수 있다. 시그널링 또는 공동-자극성 도메인은 또한, 예를 들어 TCR/CD3 복합체의 CD3 제타 쇄에 의해 제공된 1차 시그널 이외에도, T-세포 반응, 예컨대, 예를 들어, 면역 반응, 활성화, 증식, 분화, 시토카인 분비, 세포용해 활성, 퍼포린 및/또는 그랜자임 활성 등을 매개하는 시그널을 T-세포에 제공하는 시그널링 모이어티를 지칭한다. 시그널링 또는 공동-자극성 도메인은 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, ICOS, 림프구 기능 관련 항원-l (LFA-l), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, 및/또는 B7-H3, 및/또는 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 중 일부 또는 전부를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 벡터는 공동-자극성 도메인에 대한 서열을 추가로 포함하는데, 여기서 공동-자극성 도메인은 다른 세포내 매개인자와 상호 작용하여, 면역 반응, 활성화, 증식, 분화, 시토카인 분비, 세포용해 활성, 퍼포린 및/또는 그랜자임 활성 등을 포함한 세포 반응을 매개하는 세포내 시그널링 도메인이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 시그널링 도메인을 코딩하는 서열을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 시그널링 도메인은 4-1BB 도메인 및/또는 CD3-제타 도메인을 포함한다. 일부 대안에서, 4-1BB 도메인은 서열식별번호: 6에 제시된 서열 (서열식별번호: 6; KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL)을 포함한다. 일부 대안에서, CD3-제타 도메인은 서열식별번호: 7에 제시된 서열 (서열식별번호: 7; RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR)을 포함한다.
키메라 T-세포 수용체로서 공지되기도 한, 본원에 기재된 "키메라 항원 수용체" (CAR)는 목적하는 특이성을 면역 이펙터 세포 상으로 이식시켜 주는 인공 T-세포 수용체 또는 유전적으로 조작된 수용체를 지칭한다. 이들 수용체를 이용하여, 모노클로날 항체 또는 그의 결합성 부분의 특이성을 T-세포 상으로 이식시킬 수 있는데, 예를 들어 CAR에 대한 코딩 서열을 수용자 세포로 전이시키는 것은 레트로바이러스 벡터에 의해 촉진된다. CAR의 구조는 CD3-제타 막투과 및 엔도도메인과 융합된, 모노클로날 항체로부터 유래된 단일-쇄 가변 단편 (scFv)을 포함할 수 있다. 이러한 분자로 인해, 그의 표적의 scFv에 의한 인식에 반응하여 제타 시그널이 전송된다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화, 분리 또는 단리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 분리되거나 또는 단리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체는 CD19에 대해 특이적이다.
이들 인공 T-세포 수용체, 또는 CAR은 "입양 세포 전이"로 지칭되는 기술을 이용하여 암 또는 바이러스성 감염에 대한 요법으로서 사용될 수 있다. T-세포를 환자로부터 꺼내고 이를 변형시켜, T-세포가 암 세포 또는 바이러스, 또는 바이러스-감염된 세포 상에 디스플레이된 분자에 대해 특이적인 수용체를 발현하도록 한다. 암 세포 또는 바이러스 감염된 세포를 인식하고 이를 사멸시킬 수 있거나 또는 바이러스의 청소율을 증진시킬 수 있는 유전적으로 조작된 T-세포가 환자 내로 재도입된다. 일부 대안에서, 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게서 이러한 질환을 치료, 억제 또는 완화하는 방법이 제공된다.
일부 측면에서, 상기 방법은 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함할 수 있는데, 여기서 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하고, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포 부재 하의, 또는 CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포로부터 강화되거나, CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포로부터 실질적으로 분리되거나 또는 CD8- 및/또는 CD4- 발현성 T-세포로부터 실질적으로 단리된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포를 포함하며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 입양 세포 전이에 의해 상기 대상체에게 투여한다.
본원에 기재된 바와 같은 "항체"는 외래 물체, 예컨대 박테리아 및 바이러스를 확인 및 중화시키기 위해 면역 체계에 의해 사용되는 혈장 세포에 의해 생성된 큰 Y자형 단백질을 지칭한다. 항체 단백질은 4개의 폴리펩티드 쇄를 포함할 수 있는데, 2개의 동일한 중쇄와 2개의 동일한 경쇄가 디술피드 결합에 의해 연결된다. 각 쇄는 면역글로불린 도메인으로 지칭되는 구조적 도메인으로 구성된다. 이들 도메인은 70 내지 110개 아미노산을 함유할 수 있고, 그들의 크기와 기능에 따라서 상이한 범주로 분류된다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 항체 단편, 바람직하게 그의 결합성 부분이다. 일부 대안에서, CAR 상에 존재하는 항체 단편 또는 그의 결합성 부분은 CD19에 대해 특이적이다.
"단일 쇄 가변 단편" 또는 scFv는 짧은 링커 펩티드와 연결되는, 면역글로불린의 중쇄 (VH) 및 경쇄 (VL)의 가변 영역을 포함하는 융합 단백질이다. 제한되는 것은 아니지만, 링커는 가요성을 위하여 글리신을 포함하고, 가용성을 위하여 친수성 아미노산, 예를 들어 세린 또는 트레오닌을 포함할 수 있다. 링커는 VH의 N-말단을 VL의 C-말단과 연결시킬 수 있거나 또는 VH의 C-말단을 VL의 N-말단과 연결시킬 수 있다. 일부 대안에서, CAR 상에 존재하는 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv)이다. 일부 대안에서, CAR 상에 존재하는 scFv 도메인은 종양 세포 상에 존재하는 CD19에 대해 특이적이다.
"FMC63"은 CD19 특이적 모노클로날 항체이다. CD19는 백혈구의 표면 상에서 발견되는 단백질이고, 항원 수용체-의존성 자극에 대한 역치를 감소시키기 위하여 B 림프구의 항원 수용체와 어셈블리될 수 있다. CD19는 여포성 수지상 세포 및 B 세포 상에서 발현된다. CD19는 미분화 B-세포로의 발생 동안 가장 초기에 인식 가능한 B-계통 세포로부터의 B 세포 상에 존재하지만, 혈장 세포로의 성숙시 상실된다. CD19는 주로, CD21 및 CD81과 연계해서 B 세포 공-수용체로서 작용한다. 활성화시, CD19의 세포질 꼬리부분이 인산화되어, Src-계열 키나제에 의한 결합과 PI-3 키나제의 동원이 초래된다. T-세포 상에서, 몇 가지 표면 분자는 항원 수용체를 형성하고, B 림프구 상에서 복합체를 형성한다.
CD19에서의 돌연변이는 저하된 항체 생성을 특징으로 하는 중증의 면역결핍 증후군과 연관이 있다. 예를 들어, CD19의 이상한 발현은 급성 골수성 백혈병에서 단구 계통의 마커이다. CD19가 B-세포의 특징이기 때문에, 이러한 단백질을 사용하여, 상기 유형의 세포로부터 유발되는 암, 특히 B-세포 림프종을 진단할 수 있다. 2011년 이후로, CD19를 표적으로 하는 치료가 시험에 들어가기 시작하였다. 가장 최근에 개발 중인 항-CD19 실험 약물은, 특이적으로 B-세포 암에 대한 치료를 유도하기 위해 CD19의 존재를 이용함으로써 작동된다. 그러나, MYC 종양단백질의 농도를 안정화시킴으로써, 상기 단백질이 이들 암의 성장을 구동하는 데 있어서 능동적 역할을 한다는 사실이 본 발명에 의해 대두되고 있다. 따라서, CD19 및 그의 하류 시그널링이 관심을 끄는 치료 표적일 수 있다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 강화, 단리 또는 정제하여, 단리되거나, 분리되거나, 강화되거나 또는 정제된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나, 강화되거나 또는 정제된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커를 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다.
상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다.
본원에 기재된 바와 같은, T-세포의 "정제"는 연구를 위하여, 또는 요법을 위해 T-세포를 생성하는 방법을 위하여 고도로 정제된 기능적 T-세포의 단리를 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은, T-세포의 "단리", 또는 T-세포의 "분리"는, 예를 들어 간접 패닝과 같은 기술을 이용함으로써, 오염성 세포 집단 또는 기타 성분들로부터 목적하는 T-세포, T-세포 집단, 또는 하위집단을 단리 또는 분리하는 과정을 지칭한다. 이러한 방법에서는, 특정 지지체, 예컨대 플라스틱 또는 폴리카르보네이트 표면, 비드, 입자, 판 또는 웰에 부착되는 항체와 결합할 수 있는 능력에 의해 세포를 단리하거나, 분리하거나 또는 선별할 수 있다. 세포는 특별한 세포 표면 마커를 기준으로 하여 결합될 수 있다. 일부 경우에 목적하는 T-세포 집단은 "강화"되는데, 이는 목적하는 T-세포의 집단이, 이러한 T-세포가 유래되는 천연 집단보다 강화 후에 더 커진다는 것을 의미한다.
유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, CD8 특이적 항체 및/또는 CD4 특이적 항체를 이용하여 바람직하지 못한 성분으로부터 단리하거나, 강화하거나, 정제하거나 또는 분리한다. 상기 방법의 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 유동 세포계수법을 이용하여 단리하거나, 강화하거나 또는 정제한다. 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 면역자기 선별을 이용하여 단리하거나, 강화하거나, 정제하거나 또는 분리한다. 상기 방법의 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28, CD8, CD4, 및/또는 CD62L에 대항한 항체를 이용하여 단리하거나, 강화하거나, 정제하거나 또는 분리한다. 상기 방법의 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, CD27, CD28 및/또는 CD62L에 대항한 항체를 이용함으로써 단리하거나, 강화하거나, 정제하거나 또는 분리한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 단리, 강화 또는 정제를 위하여 사용된 혼합 T-세포 집단에서 CD8+ 발현성 세포의 부재 하에 또는 CD8+ 발현성 세포의 양보다 더 많은 존재량의, 단리되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD4+ 발현성 T-세포를 이용하여 수행한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 단리, 강화 또는 정제를 위하여 사용된 혼합 T-세포 집단에서 CD4+ 발현성 세포의 부재 하에 또는 CD4+ 발현성 세포의 양보다 더 많은 존재량의, 단리되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD8+ 발현성 T-세포를 이용하여 수행한다.
T-세포의 "자극" 또는 활성화는 T-세포 생존 능력과 면역 기능은 보존하면서도, 특정 반응, 예컨대 시그널 변환 반응, 예를 들어 증식을 개시하도록 T-세포를 유도시키는 방법을 지칭한다. 예를 들어, TCR/CD3 및 CD8에 대한 동시 시그널링은 인간 T-세포의 생리학적 활성화와 확장을 촉발시킬 수 있다. 적당한 자극 후, T-세포는 시험관 내에서 광범위하게 증식할 수 있다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 단리, 분리, 강화 또는 정제하여, 단리되거나, 분리되거나, 정제되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나, 정제되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화, 분리 또는 단리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포의 강화되거나, 단리되거나 또는 분리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 자극 단계는 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, 자극 단계는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는 항체-결합된 지지체를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, 자극 단계는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는 항체-결합된 지지체를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "T-세포" 또는 "T 림프구"는 임의의 포유류, 바람직하게 영장류 (원숭이 또는 인간 포함), 반려 동물, 예컨대 개, 고양이 또는 말, 또는 가축, 예컨대 양, 염소 또는 소로부터 유래될 수 있다. 일부 대안에서 T-세포는 수용자 대상체와 동종이계이고 (동일한 종이긴 하지만, 상이한 공여자로부터 유래된다); 일부 대안에서 T-세포는 자가이며 (공여자와 수용자가 동일하다); 일부 대안에서 T-세포는 동계이다 (공여자와 수용자는 상이하지만, 동일한 쌍둥이이다).
전반적으로 동의어로 사용된 "CD8+ 발현성 T-세포" 또는 "CD8+ T-세포"는 또한, TC, 세포독성 T 림프구, CTL, T-킬러 세포, 세포용해 T-세포 또는 킬러 T-세포로서 공지된다. 본원에 기재된 바와 같은, CD8+ T-세포는 암 세포, 바이러스에 의해 감염된 세포, 또는 손상된 세포를 사멸시킬 수 있는 T-림프구이다. CD8+ T-세포는 특이적 항원을 인식할 수 있는 T-세포 수용체 (TCR)를 발현한다. CD8+ T-세포는 표면 상의 CD8을 발현한다. CD8+ 발현성 T-세포는 일부 시토카인을 만들 수 있는 능력을 갖고 있지만, CD8+ T-세포에 의해 만들어진 시토카인의 양은 생착 적합도를 증진시키거나, 개선시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 유도시키는 농도가 아니다.
전반적으로 동의어로 사용된 "CD4+ 발현성 T-세포" 또는 "CD4+ T-세포"는 또한, 면역 체계 및 적응 면역 체계에서 중요한 역할을 하는 T 헬퍼(helper) 세포로서 공지된다. CD4+ T-세포는 또한, T-세포 시토카인을 방출시킴으로써 다른 면역 세포의 활성을 도와준다. 이들 세포는 면역 반응을 도와주거나, 억제하거나 또는 조절한다. 이들은 B 세포 항체 부류 전환에 있어서, 세포독성 T-세포의 활성화와 성장에 있어서, 및 포식세포, 예컨대 대식세포의 살균 활성을 최대화하는 데 있어서 필수적이다. CD4+ 발현성 T-세포는 일부 시토카인을 만들 수 있는 능력을 갖고 있지만, CD4+ T-세포에 의해 만들어진 시토카인의 양은 생착 적합도를 증진시키거나, 개선시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 유도시키는 농도가 아니다.
성숙 T 세포는 표면 단백질 CD4를 발현하고, CD4+ T-세포로서 지칭된다. CD4+ T-세포는 일반적으로, 면역 체계 내에서 헬퍼 T-세포로서의 미리-규정된 역할을 갖는 것으로서 처리된다. 예를 들어, 항원 제시 세포가 MHC 부류 II 상의 항원을 발현하는 경우, CD4+ 세포는 세포 대 세포 상호 작용의 조합 (예를 들어, CD40 및 CD40L)을 통하여, 및 시토카인을 통하여 상기 세포를 도와줄 것이다. 그럼에도 불구하고, 드문 예외가 있는데; 예를 들어, 조절성 T-세포, 자연 킬러 세포, 및 세포독성 T-세포의 하위군은 CD4를 발현한다. 후자 CD4+ 발현성 T-세포 군 모두는 T 헬퍼 세포로 간주되지 않는다.
본원에 사용된 "중심 기억" T-세포 (또는 "TCM")는 그의 표면 상에 CD62L 또는 CCR-7 및 CD45RO를 발현하고, 나이브 세포와 비교 시 CD45RA를 발현하지 않거나 감소된 발현을 갖는 항원 경험 CTL을 지칭한다. 일부 대안에서, 중심 기억 세포는 나이브 세포와 비교 시 CD62L, CCR7, CD28, CD127, CD45RO 및/또는 CD95의 발현에 대해 양성이고, CD54RA의 감소된 발현을 가질 수 있다.
본원에 사용된 "이펙터 기억" T-세포 (또는 "TEM")는 중심 기억 세포와 비교 시 그의 표면 상에 CD62L을 발현하지 않거나 감소된 발현을 갖고, 나이브 세포와 비교 시 CD45RA를 발현하지 않거나 감소된 발현을 갖는 항원 경험 T-세포를 지칭한다. 일부 대안에서, 이펙터 기억 세포는 나이브 세포 또는 중심 기억 세포와 비교 시 CD62L 및/또는 CCR7의 발현에 대해 음성이고, CD28 및/또는 CD45RA의 가변 발현을 가질 수 있다.
본원에 사용된 "나이브" T-세포는 중심 또는 이펙터 기억 세포와 비교하여 CD62L 및/또는 CD45RA는 발현하고 CD45RO-는 발현하지 않는 비-항원 경험 T 림프구를 지칭한다. 일부 대안에서, 나이브 CD8+ T 림프구는 CD62L, CCR7, CD28, CD127 및/또는 CD45RA를 포함한 나이브 T-세포의 표현형 마커의 발현에 의해 특징화된다.
본원에 사용된 "이펙터" "TE" T-세포는 중심 기억 또는 나이브 T-세포와 비교 시 CD62L, CCR7, CD28을 발현하지 않거나 감소된 발현을 갖고, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린에 대해 양성인 항원 경험 세포독성 T 림프구 세포를 지칭한다.
본원에 기재된 바와 같은 "생착 적합도"는 세포가 입양 전이를 통하여 신체, 예를 들어 혈류 내로 유입된 후에 성장하고 증식할 수 있는 능력을 지칭한다. 생착은 통상적으로, 상기 전이 후 2주 내지 4주 이내에 일어날 수 있다. 생착은 특이적 세포에 대한 혈구 수치를 주기적으로 검사함으로써 모니터링할 수 있다. 일부 대안에서, 특정 대상체에게서 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 본원에 기재된 바와 같은 유전적으로 변형된 T-세포를 포함하는 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 대안에서, 상기 방법은, 예를 들어 전이된 T-세포와 연관된 마커의 존재 또는 부재를 확인함으로써, 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 T-세포에 대한 혈구 수치를 검사함으로써 상기 대상체를 모니터링하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
개선된 생착 적합도를 나타내는 T-세포는 T-세포 면역의 발생과 장기간 유지를 부여해 주는 세포 표면 상의 특이적 마커를 가질 수 있다. T-세포 활성화와 생존을 위한 몇 가지 단백질이 공지되어 있다. CD28은 T-세포 활성화와 생존를 위해 필요한 공동-자극성 시그널을 제공하는, T-세포 상에 발현된 단백질이다. CD27은 T-세포 면역의 발생과 장기간 유지에 필요하다. 이는 리간드 CD70과 결합하고, B-세포 활성화 및 면역글로불린 합성을 조절하는 데 있어서 중요한 역할을 한다. CD62L로서 공지되기도 한 L-셀렉틴(selectin)은 림프구 상에서 발견되는 세포 부착 분자이다. L-셀렉틴은 림프구 또는 T-세포가 높은 내피 발생지를 통하여 이차 림프계 조직 내로 유입하기 위한 "귀소 수용체"로서 기능한다. 내피 세포 상에 존재하는 리간드는 L-셀렉틴을 발현하는 림프구와 결합하여, 혈액을 통한 림프구 수송을 느리게 할 것이고, 바로 그 시점에서 이차 림프계 기관 내로의 유입이 촉진될 수 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 상기 T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 본원에 제공된 일부 대안에서, CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포를, 벡터의 형태로 유전 물질을 형질도입함으로써 유전적으로 변형시켜, 이와 같이 유전적으로 변형된 CD4+ 및 CD8+ 발현성 T-세포가 특이적 키메라 항원 수용체를 발현하도록 하는 방법이 기재되어 있다. 유전적으로 변형된 CD4+ 및 CD8+ T-세포의 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 CD4+ 및 CD8+ T-세포는 생착 적합도를 개선 또는 증강시키도록 추가로 변형시킨다.
본원에 기재된 바와 같은 "시토카인"은 세포 시그널링에 중요한 작은 단백질 (5 내지 25 kDa)을 지칭한다. 시토카인은 세포에 의해 방출되고, 다른 세포, 및 종종 방출되는 세포 그 자체, 예컨대 T-세포의 행위에 영향을 미친다. 시토카인은, 예를 들어 케모카인, 인터페론, 인터류킨, 림포카인, 및 종양 괴사 인자를 포함할 수 있다. 시토카인은, 예를 들어 면역 세포, 예컨대 대식세포, B 림프구, T 림프구 및 비만 세포뿐만 아니라 내피 세포, 섬유모세포 및 각종 기질 세포를 포함할 수 있는 광범위한 세포에 의해 생성될 수 있다.
시토카인은 수용체를 통하여 작용할 수 있고, 면역 체계에 중요한데, 이는 시토카인이 체액성 면역 반응과 세포-기반 면역 반응 간의 균형을 조정할 수 있기 때문이며, 이들은 특별한 세포 집단의 성숙, 성장 및 반응성을 조절할 수 있다. 일부 시토카인은 다른 시토카인의 작용을 복잡한 방식으로 증강 또는 억제한다. 제한되는 것은 아니지만, 시토카인은 예를 들어, 아실화 자극성 단백질, 아디포카인(Adipokine), 알빈테르페론(Albinterferon), CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, 케모카인, 집락 자극 인자, CX3CL1, CX3CR1, CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCL17, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL9, 에리트로포이에틴, Gc-MAF, 과립구 집락 자극 인자, 과립구 대식세포 집락 자극 인자, 간세포 성장 인자, IL 10 계열의 시토카인, IL 17 계열의 시토카인, IL1A, IL1B, 인플람마솜(Inflammasome), 인터페롬(Interferome), 인터페론, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 인터페론 감마, 인터페론 유형 I, 인터페론 유형 II, 인터페론 유형 III, 인터류킨, 인터류킨 1 계열, 인터류킨 1 수용체 길항제, 인터류킨 10, 인터류킨 12, 인터류킨 12 서브유닛 베타, 인터류킨 13, 인터류킨 15, 인터류킨 16, 인터류킨 2, 인터류킨 23, 인터류킨 23 서브유닛 알파, 인터류킨 34, 인터류킨 35, 인터류킨 6, 인터류킨 7, 인터류킨 8, 인터류킨 36, 백혈병 억제 인자, 백혈구 증진 인자, 림포카인, 림포톡신, 림포톡신 알파, 림포톡신 베타, 대식세포 집락 자극 인자, 대식세포 염증성 단백질, 대식세포 활성화 인자, 모노카인, 미오카인, 미오넥틴(Myonectin), 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제, 온코스타틴(Oncostatin) M, 옵렐베킨(Oprelvekin), 혈소판 인자 4, 염증 유발성 시토카인, 프로메가포이에틴(Promegapoietin), RANKL, 기질 세포 유래 인자 1, 탈리모게네 라헤르파렙벡 (Talimogene laherparepvec), 종양 괴사 인자 알파, 종양 괴사 인자, XCL1, XCL2, GM-CSF, 및/또는 XCR1을 포함할 수 있다. 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 형질도입된 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성시킨다. 상기 방법의 일부 대안에서, 활용된 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 시토카인과의 접촉 기간은 적어도 1일, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안이다.
본원에 기재된 바와 같은 "인터류킨" 또는 IL은 면역 체계가 상당히 의존하는 시토카인이다. 본원에서 활용될 수 있는 인터류킨의 예는, 예를 들어 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, Il-7, IL-8/CXCL8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, 및/또는 IL-36을 포함한다. T-세포를 인터류킨과 접촉시키는 것은 이러한 세포의 생착 적합도를 증진시키거나, 지지하거나, 유도시키거나 또는 개선시키는 효과를 가질 수 있다. IL-1은 예를 들어, T-세포의 성숙과 증식에 있어서 기능할 수 있다. IL-2는 예를 들어, T-세포 반응의 성장과 분화를 자극할 수 있다. IL-3은 예를 들어, 골수성 전구 세포의 분화와 증식을 증진시킬 수 있다. IL-4는 예를 들어, 증식과 분화를 증진시킬 수 있다. IL-7은 예를 들어, B, T, 및 NK 세포 생존, 발생 및 생체 항상성에 관여한, 림프계 전구 세포의 분화와 증식을 증진시킬 수 있다. IL-15는 예를 들어, 자연 킬러 세포의 생성을 유도시킬 수 있다. IL-21은 예를 들어, CD8+ T-세포의 활성화와 증식을 공동-자극하고, NK 세포독성을 증대시키며, CD40-구동된 B 세포 증식, 분화 및 이소형 전환을 증대시키고, Th17 세포의 분화를 증진시킨다.
일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 정제, 분리, 강화 또는 단리하여, 단리되거나, 분리되거나, 강화되거나 또는 정제된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 단리되거나, 분리되거나, 강화되거나 또는 정제된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 상기 마커 서열에 의해 코딩된 마커를 선택함으로써 강화, 단리 또는 분리시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화되거나, 단리되거나 또는 분리된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화되거나, 단리되거나 또는 분리된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 사이에 있는 임의의 시간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-18, IL-15, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 시토카인 접촉 단계는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행된다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인의 부가는 생착 적합도를 개선시키거나, 증강시키거나, 증진시키거나 또는 유도시킨다. 일부 대안에서, 강화된 CD4+ 발현성 T-세포는 5 ng/mL 재조합 인간 IL-7 (rhIL-7) 및/또는 0.5 ng/mL 재조합 인간 IL-15 (rhIL-15)에서 접촉시키는데, 예를 들어 증식시킨다. 일부 대안에서, 강화된 CD8+ 발현성 T-세포는 50 U/mL 재조합 인간 IL-2 (rhIL-2) 및/또는 0.5 ng/mL 재조합 인간 IL-15 (rhIL-15)에서 접촉시키는데, 예를 들어 증식시킨다. 더 많은 대안에서, 강화된 CD4+ 발현성 T-세포는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL rhIL-7에서 또는 rhIL-7의 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 양에서, 및/또는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL rhIL-15에서 또는 rhIL-15의 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 양에서 접촉시키는데, 예를 들어 증식시킨다. 더 많은 대안에서, 강화된 CD8+ 발현성 T-세포는 10 U/mL, 20 U/mL, 30 U/mL, 40 U/mL, 50 U/mL, 60 U/mL, 70 U/mL, 80 U/mL, 90 U/mL, 또는 100 U/mL의 rhIL-2에서 또는 rhIL-2의 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 양에서, 및/또는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL rhIL-7 및/또는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL rhIL-15, 또는 rhIL-15의 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 양에서 접촉시키는데, 예를 들어 증식시킨다. 일부 대안에서, 전술된 시토카인 및 양은, 예를 들어 혼합물로 T-세포에 공동-투여하거나 또는 서로 부가한 직후에 부가하고, 다른 대안에서, 전술된 시토카인은 T 세포들과 별도로 접촉시키는데, 예를 들어 1 내지 10분 또는 1 내지 10시간의 간격을 둔다.
혼합물 중의 세포 유형의 양을 설명하기 위해 본원에 또한 사용된 "강화된" 및 "고갈된"은 상기 세포의 혼합물에 특정 공정이나 단계를 수행하여, "강화된" 유형의 수를 증가시켜 주고, "고갈된" 세포의 수를 감소시켜 주는 것을 지칭한다. 따라서, 강화 공정이 수행된 본래의 세포 집단의 공급원에 따라서, 혼합물 또는 조성물은 "강화된" 세포의 60, 70, 80, 90, 95, 또는 99% 또는 그 초과, 또는 이들 값 (수 또는 수치) 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 임의의 값; 및 "고갈된" 세포의 40, 30, 20, 10, 5 또는 1% 이하, 또는 이들 값 (수 또는 수치) 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 임의의 값을 함유할 수 있다. 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 세포 표면 마커를 친화성 선별함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단이 생성되도록 하는 것이 고려된다.
"세포를 증식시키는 것" 또는 증식은 세포의 증식, 확장, 성장 및 재생산을 허용해 주는 단계를 지칭한다. 예를 들어, CD8+ T-세포 및 CD4+ T-세포의 배양물은 전형적으로, T 림프구의 성장과 증식에 적합한 조건하에 인큐베이션할 수 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, CD4+ 발현성 T-세포는 적어도 1일 동안 증식시키고, 20일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킨다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포는 적어도 1일 동안 증식시키고, 20일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킨다.
본원에 기재된 바와 같은 "친화성 선별"은 특이적 관심 분자 또는 세포를 선별할 수 있게 해주는 결합 친화성 작용제를 이용하여 상기 분자 또는 마커 또는 그 위에 존재하는 에피토프와 결합함으로써 선별성 세포 표면 마커를 갖는 특이적 분자 또는 세포를 선별하는 것을 지칭한다. 친화성 선별은, 예를 들어 항체, 접합된 항체, 렉틴, 앱타머, 및/또는 펩티드에 의해 수행될 수 있다. 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리시키는 것은 CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행된다. 상기 방법의 일부 대안에서, 항-CD8 또는 항-CD4 항체 또는 그의 결합성 부분을 사용하여, 관심 세포를 선별한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리시키는 것은 유동 세포계수법에 의해 수행된다. 상기 방법의 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리시키는 것은 면역-자기 선별에 의해 수행된다. 상기 방법의 일부 대안에서, 항-CD8 또는 항-CD4 항체를 고체 지지체, 예컨대, 예를 들어 불활성 비드 또는 불활성 입자와 접합시킨다.
본원에 기재된 "T 세포 전구체"는 흉선으로 이동하고 T 세포 수용체를 발현하지 않는 T 세포 전구체가 될 수 있는 림프성 전구체 세포를 지칭한다. 모든 T 세포는 골수의 조혈 줄기 세포로부터 기원한다. 조혈 줄기 세포로부터의 조혈 전구세포 (림프성 전구 세포)는 흉선으로 이주하고, 세포 분열에 의해 확장되어 미성숙 흉선세포의 큰 집단을 생성한다. 가장 조기 흉선세포는 CD4도 CD8도 발현하지 않고, 따라서 이중-음성 (CD4-CD8-) 세포로 분류된다. 그것이 그의 발생을 통해 진행됨에 따라, 그는 이중-양성 흉선세포 (CD4+CD8+)가 되고, 최종적으로 단일-양성 (CD4+CD8- 또는 CD4-CD8+) 흉선세포로 성숙하며, 이어서 이는 흉선으로부터 말초 조직으로 방출된다. 흉선세포의 약 98%는 양성 선별 또는 음성 선별을 실패함으로써 흉선에서의 발생 과정 동안 사멸되는 반면에, 다른 2%는 생존하고 흉선에서 방출되어 성숙한 면역적격 T 세포가 된다.
전구체 T 세포의 이중 음성 (DN) 단계는 기능적 β-쇄를 생산하는 것에 초점을 맞추는 반면에, 이중 양성 (DP) 단계는 기능적 α-쇄를 생산하여 궁극적으로 기능적 αβ T 세포 수용체를 생산하는 것에 초점을 맞춘다. 발생 중인 흉선세포가 4개 DN 단계 (DN1, DN2, DN3 및 DN4)를 통해 진행함에 따라, T 세포는 불변 α-쇄를 발현하지만, β-쇄 로커스를 재배열한다. 재배열된 β-쇄가 불변 α-쇄와 성공적으로 쌍형성한 경우에, β-쇄의 재배열을 중지시키고 (및 대안적 대립유전자를 침묵시키고) 세포의 증식을 발생시키는 신호가 생성된다. 이들 신호가 세포 표면에서 이러한 프리-TCR을 필요로 하더라도, 이들은 프리-TCR에 대한 리간드 결합에 의존성이다. 이들 흉선세포는 이어서 CD4 및 CD8 둘 다를 발현할 것이고, α-쇄의 선택이 일어나는 이중 양성 (DP) 단계로 진행한다. 재배열된 β-쇄가 어떠한 신호전달로도 이어지지 않으면 (예를 들어 불변 α-쇄와 쌍형성하지 못하는 결과로서), 세포는 무시 (신호전달의 결여)에 의해 사멸할 수 있다.
본원에 기재된 "조혈 줄기 세포" 또는 "HSC"는 골수 세포 예컨대, 예를 들어, 대식세포, 단핵구, 대식세포, 호중구, 호염기구, 호산구, 적혈구, 거핵구/혈소판, 수지상 세포 및 림프계 (예컨대, 예를 들어, T-세포, B-세포, NK-세포)로 발생할 수 있는 전구체 세포이다. HSC는 줄기 세포의 3개 클래스가 존재하는 이종 집단을 가지며, 이는 혈액 내 림프성 대 골수성 자손의 그들의 비 (L/M)에 의해 구별된다.
"동결보존"은 손상되기 쉬운 세포, 전체 조직 또는 물질을 영하의 기온으로 냉각시킴으로써 보존하는 공정이다. 저온에서는, 해당 세포, 조직 또는 물질에 대한 손상을 유발시킬 수 있는 임의의 효소적 또는 화학적 활성이 효과적으로 중단된다. 동결보존 방법은 동결 동안 얼음의 형성에 의한 부가의 손상을 야기시키지 않으면서 저온에 도달하고자 한다. 전통적인 동결보존은 동결시키고자 하는 물질을 동결보존제로 일컬어지는 분자의 특정 부류로 코딩하는 것에 의존하여 왔다. 많은 동결보존제의 고유 독성으로 인해, 새로운 방법이 지속적으로 연구되고 있다. 동결보존 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법의 일부 대안에서, 상기 방법은 유전적으로 변형된 T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단이 제공되는데, 여기서 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- T-세포의 부재 하에, CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화되거나, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포로부터 단리된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포를 포함하며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는, 예컨대 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 상기 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 본원에 제공된 방법에 의해 생성된다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 유전적으로 변형된 T-세포의 집단의 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 증강시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 유도시키는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리되거나 또는 강화된 CD8+ 발현성 T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리되거나 또는 강화된 CD4+ T-세포를 포함한다.
일부 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물은 특정 질환 또는 암을 치료하는 데 유용하다. 일부 대안에서, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합이 제공되는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 제약 부형제; 및 대안 T-세포 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조되거나 수득된 유전적으로 변형된 T-세포의 집단 중 임의의 하나 이상에 따르는 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단을 포함한다. 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합의 일부 대안에서, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 포함하는데, 상기 집단은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합의 일부 대안에서, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 포함하는데, 상기 집단은 CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합의 일부 대안에서, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD8+ T-세포와, CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD4+ T-세포의 1:1 비의 조합물을 포함한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 비, 또는 이들 비 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 비인 CD4+ T-세포 대 CD8+ T-세포 비로 혼합하고, 이를 별도의 제형으로서 상기 세포를 필요로 하는 대상체에게 투여 또는 공동-투여한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 비, 또는 이들 비 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 비인 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포 비로 혼합하고, 이를 별도의 제형으로서 상기 세포를 필요로 하는 대상체에게 투여 또는 공동-투여한다.
본원에 기재된 바와 같은 "제약 부형제" 또는 제약 비히클은 의약적으로 활성인 작용제 또는 치료용 T-세포를 제제화하고/하거나 이를 투여하는 용매로서 사용된 불활성 매질 또는 담체를 지칭할 수 있다. 비히클은 중합체성 미셀, 리포솜, 지질단백질-기반 담체, 나노 입자 담체, 덴드리머(dendrimer), 및/또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되는 T-세포용 기타 비히클을 포함할 수 있다. 이상적인 비히클 또는 부형제는 무독성, 생체 적합성, 비-면역원성, 생분해성일 수 있고, 숙주의 방어 기전에 의한 인식을 피할 수 있다.
일부 대안에서, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합이 제공되는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 제약 부형제; 및 본원에 기재된 대안 중 임의의 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 부형제는 제약 비히클이다. 일부 대안에서, 제약 비히클은 제약 조성물을 포함한다.
급성 림프모구성 백혈병 (ALL) 또는 급성 림프성 백혈병은 림프모구로서 공지되기도 한, 암성의 미숙한 백혈구의 과잉 생산을 특징으로 하는 백혈구의 암이다. ALL 환자에서는, 림프모구가 골수에서 과잉 생산되고, 지속적으로 크게 증가하여, 골수 내에 있는 정상 세포, 예컨대 예를 들어, 적혈구, 백혈구 및 혈소판의 생성을 억제함으로써 그리고 다른 기관으로 확산됨으로써 손상 및 사멸을 야기시킨다. ALL은 소아기에 가장 흔히 발생하는데, 2세 내지 5세 연령에서 발병률 피크를 나타내고, 더 나이 많은 연령에서 또 다른 발병률 피크를 나타낸다.
ALL의 증상은 기능적 혈액 세포의 생성 저하를 표시하는데, 이는 새로운 기능성 혈액 세포를 생성하기 위해 정상적으로 사용되는 골수의 자원들이 백혈병으로 인해 폐기되기 때문이다. 증상은 발열, 감염 위험 증가, 출혈 경향 증가, 빈혈, 빈맥, 피로 및 두통을 포함할 수 있다. 초기 요법 후 완전 완화를 나타내긴 하지만, 재발로 인해 고통받는 어린이의 50 내지 70%와 성인의 40 내지 50%가 두 번째 완전 완화를 보일 수 있다. 첫 번째 완화 후의 재발에 대한 치료는 표준 화학요법 또는 실험적 약물, 또는 보다 공격적인 치료, 예컨대 줄기 세포 이식일 수 있다. 첫 번째 완화 후의 재발에 대한 치료는 표준 화학요법 또는 실험적 약물, 또는 보다 공격적인 치료, 예컨대 줄기 세포 이식일 수 있다. 그러나, 다른 질환, 예컨대 급성 골수성 백혈병과 ALL의 경우, 동종이계 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)과 비교해서 자생 HSCT의 사망률 감소보다는, 암 재발 가능성과 관련 사망률의 증가가 더 클 수 있으므로, 동종이계 치료가 상기 병태에 바람직할 수 있다. 따라서, 백혈병, 골수성 백혈병 및 ALL을 치료하기 위한 세포를 개선시켜 주는 방법이 필요하다.
일부 대안에서, 특정 질환, 예컨대 ALL과 같은 암의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게서, 이러한 질환, 예컨대 ALL과 같은 암을 치료, 억제 또는 완화하는 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 상기 대상체에게 본원에 기재된 대안 중 임의의 하나 이상의 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 포함하는데, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포를 포함하고, 이러한 T-세포는 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포이다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 방법은 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 추가로 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 추가로 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 단계를 추가로 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 CD4+ T-세포의 부재 하에, CD4+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD8+ T-세포와, CD8+ T-세포의 부재 하에, CD8+ T-세포에 비해 강화되거나 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈된, 단리된 CD4+ T-세포를 1:1 비로 포함한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 비, 또는 이들 비 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 비인 CD4+ T-세포 대 CD8+ T-세포 비로 혼합하고, 이를 별도의 제형으로서 상기 세포를 필요로 하는 대상체에게 투여 또는 공동-투여한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 비, 또는 이들 비 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 비인 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포 비로 혼합하고, 이를 별도의 제형으로서 상기 세포를 필요로 하는 대상체에게 투여 또는 공동-투여한다. 일부 대안에서, 대상체가 항암 요법을 받는 것으로 확인되거나 또는 선택된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 질환의 억제를 측정 또는 평가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 본원에 기재된 대안 중 임의의 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합을 투여하기 전, 투여하는 동안, 또는 투여 후에 부가의 항암 요법을 상기 대상체에게 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 대안에서, 본원에 기재된 대안 중 임의의 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합은 입양 세포 전이에 의해 상기 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 본원에 기재된 대안 중 임의의 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 본원에 기재된 대안 중 임의의 하나 이상의 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 상기 대상체는 백혈병으로 인해 고통받고 있다. 일부 대안에서, 대상체에게 재발성 및/또는 불응성 CD19+ 소아기 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 상기 방법의 일부 대안에서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 상기 방법의 일부 대안에서, 대상체는 자가면역 질환으로 인해 고통받고 있다. 상기 방법의 일부 대안에서, 대상체는 HSCT 후 재발로 인해 고통받고 있다.
부가의 대안
벡터, 세포 및 세포의 형질도입 방법
본원에 기재된 조성물은 CD4+ 및/또는 CD8+ 발현성 T 림프구, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포를 제공한다. T 림프구는 공지된 기술에 따라서 수집할 수 있고, 공지된 기술, 예컨대 항체에 대한 친화성 결합, 예컨대 유동 세포계수법 및/또는 면역자기 선별에 의해 강화 또는 고갈시킬 수 있다. 강화 및/또는 고갈 단계 후, 목적하는 T 림프구의 시험관내 확장을 공지된 기술 [미국 특허 번호 6,040,177 (Riddell et al.; 그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다)에 기재된 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다]에 따라서 수행할 수 있다. 일부 대안에서, 상기 T-세포는 자가 T-세포, 즉 세포가 전달되는 환자로부터 수득된 T-세포이다. 일부 대안에서, T 세포는 전구체 T 세포이다. 일부 대안에서, 전구체 T 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)이다.
예를 들어, 목적하는 T-세포 집단 또는 하위집단은 초기 T 림프구 집단을 시험관내 배양 배지에 부가한 다음, 이러한 배양 배지에 공급자 세포, 예컨대 비-분할성 말초혈 단핵 세포 (PBMC)를 부가하고 (예를 들어, 이로써 생성된 세포의 집단은 확장될 초기 집단 내의 각 T 림프구에 대하여 적어도 5, 10, 20, 또는 40개 또는 그 초과의 PBMC 공급자 세포를 함유한다); 상기 배양물을 (예를 들어, 수많은 T-세포를 확장시키기에 충분한 시간 동안) 인큐베이션함으로써 확장시킬 수 있다. 상기 비-분할성 공급자 세포는 감마-조사된 PBMC 공급자 세포를 포함할 수 있다. 일부 대안에서, PBMC에 3,000, 3,200, 3,300, 3,400, 3,500, 또는 3,600 rad의 감마선을 조사하여 세포 분할을 방지시키거나, 또는 전술된 rad 중 임의의 2개로써 규정된 rad의 특정 범위 내에 있는 감마선을 조사한다. T-세포와 공급자 세포를 배양 배지에 부가하는 순서는 필요에 따라 역전될 수 있다. 배양물은 T 림프구의 성장에 적합한 조건하에 인큐베이션할 수 있다. 인간 T 림프구의 성장을 위해서는, 예를 들어 온도가 일반적으로 25℃ 이상, 바람직하게 30℃ 이상, 보다 바람직하게 37℃, 또는 이들 온도 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 임의의 다른 온도일 것이다.
확장된 T 림프구는 인간 종양 또는 병원체 상에 존재하는 항원에 대해 특이적이고 키메라 항원 수용체를 발현할 수 있는 CD4+ 헬퍼 T 림프구 및 CD8+ 세포독성 T 림프구 (CTL)를 포함한다.
또 다른 대안에서, 확장 방법 또는 증식은 공급자 세포로서 비-분할성 EBV-형질전환된 림프모구성 세포 (LCL)를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. LCL에 6,000, 7,000, 8,000, 9,000, 또는 10,000 rad의 범위 내의 감마선, 또는 전술된 rad 중 임의의 2개로써 규정된 rad의 범위 내의 감마선을 조사할 수 있다. LCL 공급자 세포는 임의의 적합한 양, 예컨대 적어도 10:1의 LCL 공급자 세포 대 초기 T 림프구의 비로 제공될 수 있다.
또 다른 대안에서, 확장 방법 또는 증식은 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 배양 배지에 (예를 들어, 적어도 0.5 ng/mL의 농도로) 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법은 IL-2, IL-15, 및/또는 IL-21을 배양 배지에 부가하는 단계 (예를 들어, 여기서 IL-2의 농도는 적어도 10 단위/ml이다)를 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법은 IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21을 배양 배지에 부가하는 단계 (예를 들어, 여기서 IL-2의 농도는 적어도 10 단위/ml이다)를 추가로 포함할 수 있다. T 림프구를 단리한 후, 세포독성 T 림프구와 헬퍼 T 림프구 둘 다를 확장 전 또는 후에, 나이브, 기억, 및 이펙터 T-세포 하위집단으로 분류할 수 있다.
CD8+ 세포는 또한, 표준 방법을 이용함으로써 수득할 수 있다. 일부 대안에서, CD8+ 세포는 다음 유형의 CD8+ 세포 각각과 회합되는 세포 표면 항원을 확인함으로써 나이브 세포, 중심 기억 세포, 및 이펙터 기억 세포로 추가로 분류한다. 일부 대안에서, 기억 T-세포는 CD8+ 말초혈 림프구의 CD62L+ 서브세트와 CD62L- 서브세트 둘 다에 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체로 염색시킨 후 CD62L-CD8+ 및 CD62L+CD8+ 분획으로 분류된다. 일부 대안에서, 중심 기억 TCM의 표현형 마커의 발현은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD127을 포함하고/하거나 그랜자임 B 및/또는 CD45RA에 대하여 음성이거나 또는 낮다. 일부 대안에서, 중심 기억 T-세포는 CD28+, CD27+, CD45RO+, CD62L+, 및/또는 CD8+ T-세포이다. 일부 대안에서, 나이브 CD8+ T 림프구는 CD62L, CCR7, CD27, CD28, CD3, CD127, 및/또는 CD45RA를 포함한, 나이브 T-세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 한다.
세포 또는 세포 집단이 특별한 세포 표면 마커에 대하여 양성인지 또는 이러한 마커를 발현하는 지의 여부는 상기 표면 마커에 대해 특이적인 특이적 항체 및 이소형 매치된 대조군 항체를 이용하여 유동 세포계수법에 의해 결정할 수 있다. 마커에 대하여 음성인 세포 집단은 이러한 세포 집단과 이소형 대조군의 결합보다 우위인, 상기 세포 집단과 특이적 항체의 유의적 결합이 존재하지 않는다는 것을 지칭하는데, 이는 상기 마커의 발현 결여를 표시하고; 양성은 세포 집단과 이소형 대조군의 결합보다 우위인, 상기 세포 집단과 특이적 항체의 균일한 결합이 존재하는 것을 지칭하는데, 이는 상기 마커의 발현을 표시한다. 일부 대안에서, 마커 중 하나의 발현 저하는 평균 형광 세기에 있어서 1 log10의 상실을 지칭하고/하거나 이러한 마커를 나타내는 세포의 비율 (%)이, 참조 세포 집단과 비교한 경우에 세포의 적어도 20%, 세포의 25%, 세포의 30%, 세포의 35%, 세포의 40%, 세포의 45%, 세포의 50%, 세포의 55%, 세포의 60%, 세포의 65%, 세포의 70%, 세포의 75%, 세포의 80%, 세포의 85%, 세포의 90%, 세포의 95% 또는 세포의 100%, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 %의 범위 내에 있는 임의의 %로 감소되는 것을 지칭한다. 일부 대안에서, 마커 중 하나에 대하여 양성인 세포 집단은 이러한 마커를 나타내는 세포의 비율 (%)이, 참조 세포 집단과 비교한 경우에 세포의 적어도 50%, 세포의 55%, 세포의 60%, 세포의 65%, 세포의 70%, 세포의 75%, 세포의 80%, 세포의 85%, 세포의 90%, 세포의 95% 또는 세포의 100%, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 %의 범위 내에 있는 임의의 %라는 것을 지칭한다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브 세포, 중심 기억 세포, 및 이펙터 세포로 분류한다. CD4+ 림프구는 표준 방법에 의해 수득할 수 있다. 일부 대안에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD27+, CD28+, 및/또는 CD4+ T-세포이다. 일부 대안에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및/또는 CD45RO+이다. 일부 대안에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및/또는 CD45RO-이다. 일부 대안에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD28+, CD27+ 및/또는 CD62L+이다.
일부 대안에서, 항원 특이적인 CD4+ 및 CD8+의 집단은 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 항원으로 자극함으로써 수득할 수 있다. 예를 들어, 항원-특이적 T-세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T-세포를 단리하고 시험관내 세포를 시토메갈로바이러스 항원으로 자극함으로써, 이러한 동일한 항원에 대하여 생성시킬 수 있다. 나이브 T-세포를 사용할 수도 있다. 종양 세포로부터의 임의의 수의 항원을 표적으로서 활용하여 T-세포 반응을 유발시킬 수 있다. 일부 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물이 고형 종양, 혈액학적 악성 종양, 유방암 또는 흑색종을 포함한 질환 또는 장애의 치료에 유용하다.
T 림프구 집단의 변형
일부 대안에서는 본 개시내용에 따라서 면역요법에 사용될 T-세포 내로 기능성 유전자를 도입하는 것이 요망될 수 있다. 예를 들어, 이와 같이 도입된 유전자(들)는 전이된 T- 세포의 생존 능력 및/또는 기능을 증진시킴으로써 요법의 효능을 개선시킬 수 있거나; 또는 이들 유전자는 유전 마커를 제공하여 생체내 생존 또는 이동의 선별 및/또는 평가를 허용할 수 있게 해주거나; 또는 이들 유전자는, 예를 들어 다음 문헌에 기재된 바와 같이, 세포를 생체내 음성 선별에 대하여 감수성이 되도록 함으로써, 면역요법의 안전성을 개선시키는 기능을 혼입할 수 있다 ([Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991)]; 및 [Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]). 또한, 우성 양성 선별성 마커를 음성 선별성 마커와 융합시킴으로써 유래된 이관능성 선별성 융합 유전자의 용도가 기재되어 있는 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 (Lupton et al.)의 공보 (참고문헌 둘 다는 그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다)를 참조할 수 있다. 이는 공지된 기술 [예를 들어, 미국 특허 번호 6,040,177 (Riddell et al.)의 칼럼 14 내지 17 참조; 그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다] 또는 본 개시내용을 근거로 하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 그의 변동에 따라서 수행될 수 있다. 일부 대안에서, T 세포는 전구체 T 세포이다. 일부 대안에서, 전구체 T 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)이다.
일부 대안에서, T-세포는 본원에 기재된 바와 같이, 키메라 수용체로 변형시킨다. 일부 대안에서, T-세포는 치료하고자 하는 대상체로부터 수득하고, 다른 대안에서 림프구는 동종이계 인간 공여자, 바람직하게 건강한 인간 공여자로부터 수득한다. 일부 대안에서, T 세포는 전구체 T 세포이다. 일부 대안에서, 전구체 T 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)이다.
일부 대안에서, 키메라 수용체는 본원에 기재된 바와 같은, 세포 상의 표면 분자와 특이적으로 결합하는 리간드 결합성 도메인, 폴리펩티드 스페이서 영역, 막투과 도메인 및 세포내 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 모노클로날 항체 (mAb)의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)로부터 유래되는 단일-쇄 항체 단편 (scFv)이다. 공동-자극성 시그널은 또한, CD28 및/또는 4-1BB의 공동-자극성 도메인을 CD3ζ 쇄와 융합시킴으로써 키메라 수용체를 통하여 제공될 수 있다. 키메라 수용체는 HLA로부터 독립적인 세포 표면 분자에 대해 특이적이므로, HLA-제한을 포함한 TCR-인식의 한계와 종양 세포 상에서의 낮은 수준의 HLA-발현을 극복할 수 있다.
일부 대안에서, 동일하거나 상이한 키메라 수용체를 CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 집단 각각에 도입할 수 있다. 일부 대안에서, 이들 집단 각각에서의 키메라 수용체는 세포 상의 동일한 리간드와 특이적으로 결합하는 리간드 결합성 도메인을 갖는다. 세포성 시그널링 모듈은 상이할 수 있다. 일부 대안에서, CD8+ 세포독성 T-세포의 세포내 시그널링 도메인은 CD4+ 헬퍼 T-세포의 세포내 시그널링 도메인과 동일하다. 다른 대안에서, CD8+ 세포독성 T-세포의 세포내 시그널링 도메인은 CD4+ 헬퍼 T-세포의 세포내 시그널링 도메인과 상이하다. 일부 대안에서, 항-CD19 CAR을 림프구의 하나의 집단 내로 도입하고, EGFR 특이적 CAR은 림프구의 또 다른 집단 내로 도입한다.
기재된 바와 같이, 일부 대안에서, CD4 또는 CD8 T 림프구 각각은 나이브, 중심 기억, 이펙터 기억 또는 이펙터 세포로 형질도입 전에 분류된다. 일부 대안에서, CD4 또는 CD8 T 림프구 각각은 나이브, 중심 기억, 이펙터 기억 또는 이펙터 세포로 형질도입 후에 분류된다.
유전자 전이를 위한 재조합 감염성 바이러스 입자를 이용하는 다양한 형질도입 기술이 개발된 바 있다. 이는 여기서 기재된 T 림프구의 형질도입에 대한 현재 바람직한 접근법을 나타낸다. 이 방법에 사용된 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스 벡터 및/또는 레트로바이러스로부터 유래된 바이러스 벡터를 포함한다. 따라서, 유전자 전이 및 발현 방법은 수없이 많지만, 본질적으로 포유동물 세포에 유전 물질을 도입시키고 발현시키기 위해 기능한다. 재조합 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스 및 레트로바이러스 벡터를 사용한 인산칼슘 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 및 감염을 포함하는 몇몇 상기 기술은 조혈 또는 림프성 세포를 형질도입시키는데 사용된 바 있다. 1차 T 림프구는 전기천공에 의해 및 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 감염에 의해 성공적으로 형질도입된 바 있다.
레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터는 진핵 세포 내로의 유전자 전이를 위한 고도로 효율적인 방법을 제공한다. 더욱이, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 통합은 제어된 방식으로 일어나고, 세포당 하나 또는 소수의 카피의 새로운 유전자 정보의 안정한 통합을 발생시킨다.
일부 대안에서는 시험관 내에서 음성 선별성 표현형의 세포의 선별을 가능하게 해주는 양성 마커가 T-세포에 포함되는 것이 유용할 수 있다. 이러한 양성 선별성 마커는 숙주 세포 내로의 도입시, 특정 유전자를 수반하는 세포의 양성 선별을 허용해 주는 우성 표현형을 발현하는 상기 유전자일 수 있다. 이러한 유형의 유전자는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 특히 히그로마이신 B에 대한 내성을 부여해 주는 히그로마이신-B 포스포트랜스퍼라제 유전자 (hph), 항생제 G418에 대한 내성을 코딩하는 Tn5로부터의 아미노 글리코시드 포스포트랜스퍼라제 유전자 (neo 또는 aph), 디히드로폴레이트 환원효소 (DHFR) 유전자, 아데노신 데아미나제 유전자 (ADA), 및 다중 약물 내성 (MDR) 유전자를 포함한다. 일부 대안에서, 양성 마커는 세포 선별을 위한 EGFR 말단절단된 단백질이다.
관련 기술분야에 널리 공지되는 바와 같이, T 림프구를 형질도입하기 위한 각종 방법을 이용할 수 있다. 일부 대안에서, 형질도입은 렌티바이러스 벡터를 이용하여 수행한다. 일부 대안에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 각각, 키메라 수용체를 코딩하는 발현 벡터로 별개로 변형시켜 규정된 집단을 형성할 수 있다. 일부 대안에서, 이어서 이들 세포는 상기 언급된 바와 같은 나이브 세포, 중심 기억 세포 및 이펙터 세포 집단 각각에 대해 독특한 세포 표면 항원에 관하여 분류함으로써, 이들 나이브 세포, 중심 기억 세포 및 이펙터 세포의 하위집단으로 추가로 분류한다.
일부 대안에서, 항원 또는 종양 표적에 반응하여 증식하는 CD4+ 및 CD8+ 세포를 선별한다. 예를 들어, 모의 형질도입된 세포, 또는 CD8+ 형질도입된 세포와 비교해서 항원 또는 종양 표적으로 자극시킨 경우에 강력하게 증식하는 CD4+ 세포를 선별한다. 일부 대안에서, 항원 보유 세포에 대하여 세포독성인 CD4+ 및 CD8+ 세포를 선별한다. 일부 대안에서, CD4+는 CD8+ 세포와 비교해서 약하게 세포독성인 것으로 예측된다.
또 다른 대안에서, 특별한 유형의 암에 대해 확립된 동물 모델을 이용하여 생체 내에서 세포 사멸을 제공하는 형질도입된 림프구, 예컨대 CD8+ 중심 기억 세포를 선별한다. 이러한 동물 모델은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 인간은 배제된다. 본원에 기재된 바와 같이, 림프구 내로 형질도입된 키메라 수용체 구축물이 시험관 내에서 세포를 활성화시키고 이를 사멸시킬 수 있는 능력을 부여함에도 불구하고, 이러한 키메라 수용체 구축물 모두가 생체 내에서 종양 세포를 사멸시킬 수 있는 능력을 부여하지 않는다.
본 개시내용은 CD4+ T-세포와 CD8+ T-세포의 조합물이 조성물에 활용될 것으로 고려된다. 하나의 대안에서, 키메라 수용체 형질도입된 CD4+ 세포를 동일한 리간드 특이성의 키메라 수용체 형질도입된 CD8+ 세포와 조합하거나, 또는 별개의 종양 리간드에 대해 특이적인 CD8+ T-세포와 조합할 수 있다. 다른 대안에서, 키메라 수용체 형질도입된 CD8+ 세포를, 종양 상에 발현된 상이한 리간드에 대해 특이적인 키메라 수용체 형질도입된 CD4+ 세포와 조합한다. 또한 또 다른 대안에서, 키메라 수용체 변형된 CD4+ 세포와 CD8+ 세포를 조합한다. 일부 대안에서 CD8+ 세포와 CD4+ 세포를 상이한 비, 예를 들어 CD8+ 대 CD4+의 1:1 비, CD8+ 대 CD4+의 10:1 비 또는 CD8+ 대 CD4+의 100:1 비, 또는 전술된 비 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 임의의 다른 비로 조합할 수 있다. 일부 대안에서, 이러한 조합된 집단을 대상으로 하여, 시험관내 및/또는 생체내 세포 증식에 관하여 시험하고, 세포의 증식을 제공하는 세포의 비를 선택한다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 개시내용은 CD4+ 및 CD8+ 세포를 하위집단, 예컨대 나이브 세포, 중심 기억 세포, 및 이펙터 기억 세포 집단으로 추가로 분리할 수 있는 것으로 고려된다. 본원에 기재된 바와 같이, 일부 대안에서, 나이브 CD4+ 세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD27+, 및/또는 CD4+ 양성 T-세포이다. 일부 대안에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L 양성 및/또는 CD45RO 양성이다. 일부 대안에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L 음성 및/또는 CD45RO 양성이다. 이들 집단 각각은 키메라 수용체를 이용하여 독립적으로 변형될 수 있다. 일부 대안에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L+, CD28+ 및/또는 CD27+이다.
키메라 수용체 보유 세포에 대하여 형질도입 및/또는 선별한 후, 이러한 세포 집단을 바람직하게, 인간 대상체 내로 적어도 하나의 주입물을 제공하기에 충분한 수의 세포, 전형적으로 약 104개 세포/kg 내지 109개 세포/kg가 수득될 때까지 시험관 내에서 확장시킨다. 일부 대안에서, 상기 형질도입된 세포는 항원 보유 세포, 항-CD3, 항-CD28, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 및/또는 그의 조합물의 존재하에 배양한다. 일부 대안에서, T-세포는 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자의 존재하에 자극시킨다. 일부 대안에서, T-세포는 항체-결합된 지지체로 자극시키는데, 여기서 항체-결합된 지지체는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 일부 대안에서, T-세포는 항체-결합된 지지체로 자극시키는데, 여기서 항체-결합된 지지체는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다.
CD4+ 세포의 하위집단과 CD8+ 세포의 하위집단 각각을 서로 조합할 수 있다. 구체적 대안에서, 변형된 나이브 CD4+ 세포 또는 중심 기억 CD4+ 세포를 변형된 중심 기억 CD8+ T-세포와 조합하여, 항원 보유 세포, 예컨대 세포 표면 상에 CD19를 포함하는 B-세포에 대한 상승적 세포독성 효과를 제공한다.
조성물
본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 유전적으로 변형된 T 림프구 세포 제제를 포함하는 입양 세포성 면역요법 조성물을 제공한다.
일부 대안에서, 상기 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 특정 질환 또는 장애와 연관된 리간드에 대해 특이적인 세포외 항체 가변 도메인, 사용자 정의 가능한 스페이서 영역, 막투과 도메인, 및 T-세포 수용체 또는 다른 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다. 다른 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물은 세포성 면역 반응을 제공하는 키메라 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 추가로 포함하는데, 여기서 세포독성 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 특정 질환 또는 장애와 연관된 리간드에 대해 특이적인 세포외 단일 쇄 항체, 사용자 정의 가능한 스페이서 영역, 막투과 도메인, 및 T-세포 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ T-세포를 포함한다.
일부 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물은 세포성 면역 반응을 제공하는 키메라 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 포함하는데, 여기서 세포독성 T 림프구 세포 제제는 특정 질환 또는 장애와 연관된 리간드에 대해 특이적인 세포외 단일 쇄 항체, 사용자 정의 가능한 스페이서 영역, 막투과 도메인, 및 T-세포 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ T-세포를, CD45RO- CD62L+ 및/또는 CD4+ T-세포로부터 유래된 항원-반응성 키메라 수용체 변형된 나이브 CD4+ T 헬퍼 세포, 및 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함한다.
다른 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물은 CD8+ 면역 반응을 증대시키는 항원-반응성 키메라 수용체 변형된 나이브 CD4+ T 헬퍼 세포와 조합된, 환자로부터 유래된 세포성 면역 반응을 제공하는 항원 특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 포함하는데, 여기서 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 특정 질환 또는 장애와 연관된 항원에 대해 특이적인 세포외 항체 가변 도메인, 사용자 정의 가능한 스페이서 영역, 막투과 도메인, 및 T-세포 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다.
추가 대안에서, 입양 세포성 면역요법 조성물은 CD8+ 면역 반응을 증대시키는 항원-반응성 키메라 수용체 변형된 나이브 CD4+ T 헬퍼 세포를 포함하는데, 여기서 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 특정 질환 또는 장애와 연관된 리간드에 대해 특이적인 세포외 항체 가변 도메인, 사용자 정의 가능한 스페이서 영역, 막투과 도메인, 및 T-세포 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다.
일부 대안에서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포는 나이브 CD4+ T-세포, 중심 기억 CD4+ T-세포, 이펙터 기억 CD4+ T-세포, 및 벌크 CD4+ T-세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 대안에서, CD4+ 헬퍼 림프구 세포는 나이브 CD4+ T-세포인데, 여기서 나이브 CD4+ T-세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD28+, CD27+, 및/또는 CD4+를 포함한다. 일부 대안에서, CD8+ T 세포독성 림프구 세포는 나이브 CD8+ T-세포, 중심 기억 CD8+ T-세포, 이펙터 기억 CD8+ T-세포 및 벌크 CD8+ T-세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 대안에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중심 기억 T-세포인데, 여기서 중심 기억 T-세포는 CD45RO+, CD62L+, CD27+, CD28+ 및/또는 CD8+를 포함한다. 또한 다른 대안에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중심 기억 T-세포이고 CD4+ 헬퍼 T 림프구 세포는 나이브 CD4+ T-세포 또는 중심 기억 CD4+ T-세포이다.
본 개시내용은 입양 면역요법 조성물의 제조 방법; 및 특정 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게서 세포성 면역요법을 수행하기 위한 이들 조성물의 용도 또는 사용 방법을 제공한다. 키메라 수용체 변형된 T-세포의 증식과 영속성은 상기 질환 또는 장애의 동물 모델을 이용하고, 상기 세포를 투여하며, 이와 같이 전이된 세포의 영속성 및/또는 증식 능력을 결정함으로써 결정할 수 있다. 다른 대안에서, 증식 및 활성화는 항원 보유 세포를 이용한 활성화의 여러 주기를 조사함으로써 시험관 내에서 시험할 수 있다.
일부 대안에서, 상기 조성물의 제조 방법은 변형된 나이브 CD4+ T 헬퍼 세포를 수득하는 단계를 포함하는데, 여기서 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 종양 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다.
또 다른 대안에서, 특정 방법은 변형된 CD8+ 세포독성 T 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는데, 여기서 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 종양 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ 세포를 포함한다.
또 다른 대안에서, 특정 방법은 변형된 CD8+ 세포독성 T-세포를 수득하는 단계를 포함하고 (여기서, 이러한 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 종양 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ T-세포를 포함한다), 상기 변형된 CD8+ 세포독성 T-세포를 CD4+ 헬퍼 세포 림프구 세포 제제와 조합하는 단계를 추가로 포함한다.
키메라 수용체를 이용하여 변형시킨 CD4+ 및 CD8+ 세포의 제제가 상기 뿐만 아니라 실시예에 기재되었다. 항원 특이적 T 림프구는 특정 질환 또는 장애가 있는 환자로부터 수득할 수 있거나 또는 항원의 존재하에 T 림프구의 시험관내 자극에 의해 제조될 수 있다. 항원 특이성에 관하여 선별되지 않은 CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 하위집단을 또한, 본원에 기재된 바와 같이 단리할 수 있고, 이를 상기 제조 방법에서 조합할 수 있다. 일부 대안에서, 세포 집단들의 조합물을 대상으로 하여, 적어도 두 세대를 통하여 증식하여 균일한 세포 분화 상태를 가질 수 있는 능력인 세포 표면 마커의 균일성에 관하여 평가할 수 있다. 품질 관리는 표적 리간드를 발현하는 세포주를 키메라 수용체 변형된 T-세포와 공동-배양하여, 관련 분야에 공지되어 있는 세포독성, 증식, 또는 시토카인 생성 검정을 이용하여 키메라 수용체 변형된 T-세포가 상기 세포주를 인식하는 지를 결정함으로써 수행될 수 있다. 키메라 수용체 변형된 T-세포 상에서의 세포 분화 상태 및 세포 표면 마커는 유동 세포계수법에 의해 결정될 수 있다. 일부 대안에서, CD8+ 세포 상에서의 마커 및 세포 분화 상태는 CD3, CD8, CD62L, CD28, CD27, CD69, CD25, PD-1, CTLA-4, CD45RO, 및/또는 CD45RA를 포함한다. 일부 대안에서, CD4+ 세포 상에서의 마커 및 세포 분화 상태는 CD3, CD4, CD62L, CD28, CD27, CD69, CD25, PD-1, CTLA-4 CD45RO, 및/또는 CD45RA를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 마커는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L을 포함한다. 일부 대안에서, 마커는 CD27, CD28 및/또는 CD62L을 포함한다.
일부 대안은 특정 질환, 예컨대 ALL과 같은 암의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게서 상기 질환을 치료, 억제 또는 완화하기 위한 접근 방식에 관한 것인데, 이는 상기 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 환자에게서 암의 진행 및/또는 전이를 억제 또는 지연하는 방법, 종양 또는 암 세포의 존재를 억제 또는 저하시키는 방법, 및/또는 CD19 발현성 세포의 표적 집단을 억제 또는 감소시키는 방법을 포함한다. 이러한 방법은 상기 대상체 또는 환자에게 세포성 면역 반응을 제공하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제를 투여하는 것을 포함하는데, 여기서 세포독성 T 림프구 세포 제제는 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 [여기서, 상기 리간드는 종양 특이적 항원, 또는 림프구에 의한 인식 및 제거를 매개하는 데 적합한 표적-세포 집단 (예를 들어 CD19) 상에 발현된 임의의 다른 분자이다]; 폴리펩티드 스페이서를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 (여기서, 폴리펩티드 스페이서는 맞춤형 길이이고, 상기 스페이서는 참조 키메라 수용체와 비교해서 강화된 T-세포 증식 및/또는 시토카인 생성을 제공한다); 막투과 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 하나 이상의 세포내 시그널링 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ T-세포를 포함한다.
본 개시내용은 또한, 본원에 기재된 바와 같은 키메라 수용체를 발현하는 림프구의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 특정 질환 또는 장애, 예컨대 ALL과 같은 암이 있는 대상체에게서 세포성 면역요법을 수행하는 방법을 제공한다. 다른 대안에서, 특정 방법은 상기 대상체에게 세포성 면역 반응을 제공하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제 (여기서, 세포독성 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD8+ T-세포를 포함한다); 및 직접적인 인식을 유발시키고 세포성 면역 반응을 매개할 수 있는 상기 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제 능력을 증대시키는 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제 (여기서, 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다)를 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 범위를 제한하는 것은 아니지만, 투여하기 이전에 생체 내에서 영속할 수 있고 증식될 수 있는 키메라 수용체 변형된 T-세포 집단을 선별함으로써, 더 낮은 용량의 T-세포를 사용할 수 있고 더 균일한 치료 활성을 제공할 수 있는 능력이 초래될 수 있는 것으로 여겨진다. 일부 대안에서, T-세포의 용량은 적어도 10%, 20%, 또는 30% 또는 그 초과로 감소시킬 수 있다. T-세포의 용량을 감소시키는 것이 종양 용해 증후군과 고시토카인혈증의 위험을 저하시키는 데 유리할 수 있다.
또 다른 대안에서, 특정 질환 또는 장애가 있는 대상체에게서 세포성 면역요법을 수행하는 방법은 상기 대상체에게 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 투여하는 것을 포함하는데, 여기서 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 종양 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 대상체에게 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는데, 여기서 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 본원에 기재된 바와 같은, 종양 세포 표면 분자에 대해 특이적인 리간드 결합성 도메인, 맞춤형 스페이서 도메인, 막투과 도메인, 및 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 갖는 CD4+ 세포를 포함한다.
또 다른 대안은 특정 질환 또는 장애가 있는 대상체의 생물학적 샘플을 대상으로 하여, 이러한 질환 또는 장애와 연관된 표적 분자 (예를 들어, CD19)의 존재에 관하여 분석하는 단계; 및 본원에 기재된 입양 면역요법 조성물을 투여하는 단계 [여기서, 키메라 수용체는 상기 표적 분자 (CD19)와 특이적으로 결합한다]를 포함하는, 상기 대상체에게서 세포성 면역요법을 수행하는 방법을 설명한다.
일부 대안에서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포는 키메라 수용체를 도입하기 이전에, 나이브 CD4+ T-세포, 중심 기억 CD4+ T-세포, 이펙터 기억 CD4+ T-세포 및 벌크 CD4+ T-세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적 대안에서, CD4+ 헬퍼 림프구 세포는 나이브 CD4+ T-세포인데, 여기서 나이브 CD4+ T-세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD28+, CD27+, CD62L+ 및/또는 CD4+를 포함한다. 또한 다른 대안에서, CD8+ T 세포독성 림프구 세포는 키메라 수용체를 도입하기 이전에, 나이브 CD8+ T-세포, 중심 기억 CD8+ T-세포, 이펙터 기억 CD8+ T-세포 및 벌크 CD8+ T-세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적 대안에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중심 기억 T-세포인데, 여기서 중심 기억 T-세포는 CD45RO+, CD62L+, CD28+, CD28+, 및/또는 CD8+를 포함한다. 구체적 대안에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중심 기억 T-세포이고, CD4+ 헬퍼 T 림프구 세포는 나이브 CD4+ T-세포이다.
일부 대안에서, CD8+ T-세포와 CD4+ T-세포는 둘 다, 세포 표면 분자와 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함하는 키메라 수용체로 유전적으로 변형된다. 다른 대안에서, CD8 세포독성 T-세포의 세포내 시그널링 도메인은 CD4 헬퍼 T-세포의 세포내 시그널링 도메인과 동일하다. 또한 다른 대안에서, CD8 세포독성 T-세포의 세포내 시그널링 도메인은 CD4 헬퍼 T-세포의 세포내 시그널링 도메인과 상이하다.
본원에 기재된 대안들이 투여될 수 있는 대상체는 인간, 다른 영장류, 예컨대 원숭이 및 유인원, 반려 동물, 예컨대 개, 고양이 및 말, 및 가축, 예컨대 돼지, 염소, 양 및 소를 포함한다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있고, 임의의 적합한 연령일 수 있는데, 소아, 유년, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한다. 상기 방법은, 예를 들어 CD19 보유 암 또는 세포의 치료에 유용하다.
상기 언급된 바와 같이 제조된 세포는, 본 개시내용에 근거하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 공지된 기술 또는 그의 변동에 따라서 입양 면역요법을 위한 방법 및 조성물에 활용될 수 있다.
일부 대안에서, 상기 세포는 먼저, 그의 배양 배지로부터 상기 세포를 수집한 다음, 이러한 세포를 치료 유효량으로 투여하기 적합한 매질 ("제약상 허용되는" 담체) 및 용기 시스템에서 세척 및 농축시킴으로써 제제화한다. 적합한 주입 매질은 임의의 등장성 매질 제형, 전형적으로 정상 식염수, 노르모솔(Normosol) R [애보트(Abbott)] 또는 플라스마-라이트(Plasma-Lyte) A [백스터(Baxter)]일 수 있지만, 또한 수중 5% 덱스트로스 또는 링거 락테이트가 활용될 수 있다. 주입 매질에 태아 송아지 혈청을 보충시킬 수 있다. 이어서, 세포를 시토카인으로 처리하여, CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 비-시토카인 자극된 집단과 비교해서 증가되거나 또는 개선된 생착 적합도를 나타내는, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성시킨다. 생착 적합도에 있어서 목적하는 개선을 나타내는 세포를 생성시키기 위해, 시토카인을 상기 T-세포의 증식 동안 시험관 내에서 부가하는 것이 바람직하다. 따라서, 분리된 CD4+ 및 CD8+ T-세포는 유전적으로 변형된 T-세포의 증식 동안 시토카인을 부가함으로써 시토카인 자극시킨다. 일부 대안에서, CD4+ T 세포는 적어도 하나의 시토카인으로 자극시키는데, 여기서 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, CD8+ T 세포는 적어도 하나의 시토카인으로 자극시키는데, 여기서 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다.
조성물 중에서의 세포의 치료 또는 억제 유효량은 적어도 2개의 세포 서브세트 (예를 들어, 1개의 CD8+ 중심 기억 T-세포 서브세트와 1개의 CD4+ 헬퍼 T-세포 서브세트)이거나, 또는 보다 전형적으로 102개 초과 세포, 및 106개 이하, 108개 또는 109개 이하 세포이고, 1010개 초과 세포 또는 이들 2개 값 중 임의의 것으로써 규정된 범위 내의 임의의 다른 값일 수 있다. 세포의 수는 그 안에 포함된 세포의 유형과 같이 조성물이 의도하는 궁극적인 용도에 좌우될 것이다. 예를 들어, 특별한 항원에 대해 특이적인 세포가 요망되는 경우에는, 그 집단이 상기 세포를 70% 초과, 일반적으로 80%, 85% 및/또는 90 내지 95% 초과하여 함유할 것이다. 본원에 제공된 용도의 경우, 상기 세포는 일반적으로, 1 리터 이하의 용적이고, 500 ml 이하, 심지어 250 ml 또는 100 ml 이하, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 임의의 다른 값일 수 있다. 따라서, 목적하는 세포의 밀도는 전형적으로, 104개 초과 세포/ml이고, 일반적으로 107개 초과 세포/ml, 일반적으로 108개 세포/ml 또는 그 초과이다. 임상적으로 관련된 면역 세포의 수는 여러 주입물에 배분할 수 있는데, 이는 누적해서 106개, 107개, 108개, 109개, 1010개 또는 1011개 이상의 세포이거나 또는 이들 2개 값 중 임의의 것으로써 규정된 범위 내의 임의의 다른 양이다.
일부 대안에서, 본 발명의 림프구를 이용하여 개체에게 면역을 부여할 수 있다. "면역"이란 그에 대한 림프구 반응이 유도되는 종양, 또는 병원체에 의한 감염에 대한 반응과 연관된 한 가지 이상의 신체적 증상의 완화를 의미한다. 투여된 세포의 양은 통상적으로, 상기 병원체에 대한 면역을 지닌 정상 개체에게 존재하는 범위 내이다. 따라서, 상기 세포는 통상적으로, 주입에 의해 투여되는데, 각 주입은 2개 세포, 적어도 106개 이하 내지 3x1010개 세포의 범위, 바람직하게 적어도 107개 내지 109개 세포의 범위이다. T-세포는 특정 범위의 시간에 걸쳐 단일 주입에 의하거나 또는 다수의 주입에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 상이한 개체들은 그 반응성에 있어서 다양할 것으로 예상되기 때문에, 주입되는 세포의 유형과 양 뿐만 아니라 주입 횟수 및 다수의 주입물이 제공되는 시간 범위는 담당의에 의해 결정되고, 일상적인 검사에 의해 결정될 수 있다. 충분한 수준의 T 림프구 (세포독성 T 림프구 및/또는 헬퍼 T 림프구 포함)의 생성은 본원에 예시되는 바와 같은, 본 발명의 신속 확장 방법을 이용하여 용이하게 달성할 수 있다 [예를 들어, 미국 특허 번호 6,040,177 (Riddell et al.)의 칼럼 17 참조; 그 전문이 본원에 명확히 참조로 포함된다].
일부 대안에서, 본원에 기재된 바와 같은 조성물은 골수, 림프절, 및/또는 뇌척수액 내로 정맥내, 복강내, 종양내 투여한다.
일부 대안에서, 본원에 기재된 바와 같은 조성물은 화학요법제 및/또는 면역억제제와 함께 투여한다. 특정 대안에서, 환자에게 먼저, 다른 면역 세포를 억제 또는 파괴하는 화학요법제를 투여한 다음, 본원에 기재된 조성물을 투여한다. 일부 경우에는, 화학요법을 완전히 피할 수 있다.
ALL 환자에 대한 투여
CD4 및 CD8 T 세포 서브세트를, 연구 참가자로부터 수득된 성분채집술 생성물로부터 면역자기적으로 단리하였다. 항-CD3xCD28 비드 자극 후, T 세포주를, FMC63scFv:IgG4힌지: CD28tm:4-1BB:ζ CAR의 공동-발현을 지시하고, 선별 및 추적 자살 구축물 EGFRt을 향하는 SIN 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 형질도입된 세포를, 재조합 인간 시토카인을 이용하여 10 내지 20일에 걸쳐 (이러한 시간 동안 상기 세포에게 EGFRt 면역자기 양성 선별을 수행하였다) 임상적으로 사용하기에 적합한 수까지 증식시켰다. 림프고갈성 화학요법 직후, 동결보존된 CD4/EGFRt+ 및 CD8/EGFRt+ T 세포 생성물을 해동시키고, 침상에서 주입하여, 환자에게 표시된 프로토콜-처방된 용량 수준 (1 = 0.5 X 106개/kg; 2 = 1 X 106개/kg; 3 = 5 X 106개/ kg)에서 1:1 비의 EGFRt+ CD4 및 CD8 T 세포가 투여되도록 하였다. 일부 대안에서, 강화된 CD4+ 발현성 T-세포를 5 ng/mL 재조합 인간 IL-7 (rhIL-7) 및/또는 0.5 ng/mL 재조합 인간 IL-15 (rhIL-15)에서 접촉시켰는데, 예를 들어 증식시켰다. 일부 대안에서, 강화된 CD8+ 발현성 T-세포를 50 U/mL 재조합 인간 IL-2 (rhIL-2) 및/또는 0.5 ng/mL 재조합 인간 IL-15 (rhIL-15)에서 접촉시켰는데, 예를 들어 증식시켰다.
참여한 모든 대상체 (n=16)는 투여 명세를 충족시키는 세포 생성물을 갖고 있었고, 주입을 위하여 정리되었다. 13명의 대상체 (6m - 3 yr s/p HSCT)는 다양한 용량 수준으로 처리하였다 (0.5x106/kg 내지 5x106/kg의 범위). 상기 주입물은 단지 1 AE > 등급 2 (등급 3은 DMSO와 관련된 아나필락시스이다)로 우수하게 관용되었다. 13명의 대상체 중 12명은 ORR에 대한 92%의 반응을 나타냈다. 13명의 대상체 중 11명은 MRD 음성 CR (85%)을 달성하였다. 더 높은 질환 부담을 수반한 대상체는 MRD 음성 골수를 수반한 것과 비교해서 더 높은 피크 PB CAR T 세포 수준을 갖고 있었다 (62.7% 대 19.6%). 골수 (n=12), 말초혈 (n=12) 및 CSF에서 CAR T 세포의 확장을 수반한 축적이 관찰되었다. 그의 T 세포 이식편을 상실한 5명의 대상체에 대한 영속성의 평균 지속기간은 63일 (42일 내지 150일의 범위)이었다.
반응하는 12명의 대상체 각각에게서, 특징적 증상으로서 발열과 저혈압을 동반한 어느 정도의 CRS가 발생하였다. 2명의 대상체 S02 및 S09에게는 sCRS에 대한 면역조정 치료가 필요하였다 (2명 모두에 대해서 토실리주맙이 필요하였고, 그 중 1명에게는 덱사메타손이 부가되었다). 이들 환자 13명 중 4명에게서 뇌병증이 발생하였다 (2명은 등급 1이고, 1명은 등급 3이며 1명은 등급 4이다). 등급 4 뇌병증은 DLT였고, PRES와 유사한 비정상적인 MRI 소견과 발작이 동반되었다. MRI 소견은 요법 후 9주 정도에 정상화되었지만, 마지막 평가시의 대상체는 발작하였고, 요법으로부터 6개월 지속되었다.
제시된 바와 같이, 처방된 용량 수준의 규정된 조성물 CD4:CD8 CD19CAR/EGFRt+ T 세포/kg을 주입하면, HSCT 후 재발로 인해 고통받아 온 소아와 청소년 ALL 환자에게서 MRD-음성 CR이 고무적인 비율로 생성되었다. 따라서, 참여한 16명의 환자 각각으로부터 공여자 유래 생성물을 생성시키는 것이 실행 가능하다. 13명의 평가 가능한 환자에 대하여 예상되는 독성은 약 30% ICU 입원율을 나타내는 CRS, 및 경도에서 심각한 수준까지의 중증도를 수반한 뇌병증을 포함한다. MRD 음성 반응이 모든 용량 수준에서 관찰되었지만, 초기 데이터는 단계적 상승 용량에서 증강된 영속성을 제안하고 있다.
1명의 환자에게서 T 세포 요법 후 급성 GVHD가 발병하였지만, 예비 평가는 CAR T 세포가 상기 반응의 매개인자가 아니었다는 것을 제안하였다. 흥미롭게도, 프레드니손은 T 세포 이식편의 영속성에 영향을 미치지 못하였다. 따라서, 마커 CD28, CD27, 및 CD62L을 유지하였던 세포는 현재의 치료 방법에 사용되고 있는 T- 세포인, 규정된 시토카인 혼합물로 처리되지 않았고 생착 적합도를 위한 마커가 결여된 세포와 비교해서 높은 영속성을 나타내었다.
도 18에는 키메라 항원 수용체를 포함하는 유전적으로 변형된 T-세포를 제조하기 위해 사용되는 공정의 개발 역사를 도시하는 플로 다이아그램이 도시되어 있다. 표시된 바와 같이, 현재의 제조 과정은 피콜 프로세싱을 갖지 않는 반면, 초기 실험 공정은 피콜 프로세싱 단계를 포함하였다. 세포 농도의 초기 변동을 또한, 도 19의 플로 다이아그램에 도시된 바와 같이 시험하였다. 세포를 또한, 시토카인의 존재하에 확장시켰다 (도 20).
도 20에 도시된 바와 같이, 공여자 샘플 PD0064: PD0063 CD8+ 강화된 T-세포를 이용하여, 개시시 T25 플라스크 내에서의 출발 세포 밀도를 시험하였다. (PD0064, PD0063로부터의) 세포 둘 다를 정상 PLAT-02 배양 조건, IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL) 하에 시험하였다. 최종 세포 농도가 0.7x10^6개 세포/mL로 되도록 매질 및 시토카인을 부가함으로써 ("조기 확장"), 공여자 샘플 PD0080으로부터의 세포를 특정 연구에 사용하여 Tx 일에 세포의 확장을 시험하였다. "Tx"는 내내, 제+0일로서 규정되는 비드 자극 당일을 근거로 한, 제+1일을 지칭하는 것을 의미한다. PD0063 CD8+ 세포가 강화된 출발 물질로서 사용되었다. PD0064:PD0063 CD8+ 강화된 세포의 경우와 동일한 시토카인 조건을 사용하였다. 실험은 2개의 세포 밀도를 시험하였는데, 세포를 시토카인의 존재하에 초기에 용적 증가시킨 경우에는 상기 2개의 세포 밀도 둘 다가 보다 큰 생존 능력과 확장을 나타내었다. 이러한 맥락에서, "용적 증가"는 Tx가 "조기 확장" 조건에서 더 커진 후에 초기 공급을 위한 매질/시토카인 부가의 용적을 지칭하는데, 이로써 "조기 확장" 조건에 대한 배양물에서는 상기 시점에 세포 밀도가 감소된다.
도 21에는 세포 샘플 PD0104 및 PD0116의 성장과 실험 조건 하에 세포 성장의 비교가 도시되어 있다. PD0104 : PD0063 CD8+ 및 CD4+ 강화된 세포를 사용하여, Tx 일에 세포를 0.7x106개 세포/mL로 확장 ("조기 확장")한 것을 시험하기 위한 이전의 실험을 반복하였는데, 다음 시토카인 및 각각의 농도를 부가하였다: CD8+ T-세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)를 사용하고, CD4+ T-세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)를 사용한다. 성장과 생존 능력이 현저하게 증가하였다. 이들 곡선은 성장/비드 제거/선별/동결보존의 시한까지 임상 생성물에서 관찰되었던 것을 재현한다.
PD0116 : PD0046 CD8+ 및 CD4+ 강화된 세포를 사용하여, Tx 일에 세포를 0.7x106개 세포/mL로 확장 ("조기 확장")한 것을 시험하기 위한 실험을 반복하였다. 정상 PLAT-02 배양 조건은 CD8 세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)이고, CD4 세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)이다. PD116를 V-197 백 내의 180x10^6개 세포에서 개시하였고, 자기 강화 및 스피노쿨레이션(spinoculation)을 전이용 팩에서 수행하였다. 도시된 바와 같이, 이들 조건으로부터 성장과 생존 능력이 현저하게 증가되었다. 이들 곡선은 T-세포의 성장, 비드 제거, 선별, 및 동결보존의 시한까지 임상 생성물에서 관찰되었던 것을 재현한다.
PD0116 : PD0046 CD8+ 및 CD4+ 강화된 세포를 또한 사용하여, 최종 용적이 0.7x106개 세포/mL로 되도록 매질 및 시토카인을 부가함으로써 ("조기 확장") Tx 일에 세포의 확장을 시험하기 위한 실험을 반복하였다. 정상 PLAT-02 배양 조건에서, CD8 세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)의 부가를 수행하였고, CD4 세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)의 부가를 수행하였다. PD116를 V-197 백 내의 180x106개 세포에서 개시하였고, 자기 강화 및 스피노쿨레이션을 전이용 팩에서 수행하였다. 이는 최신화된 제조 공정으로의 전이를 위해 사용된 전체 데이터였다. 도 21에 도시된 바와 같이, 성장 확장은 CD4+ 세포와 비교해서 CD8+ 세포에 대하여 증가하였다. CD4- 및 CD8+ 세포에 대하여 사용된 시토카인, 및 사용된 시토카인의 조합물의 변동이 도 22에 제시된 바와 같은 플로 차트에 도시되었다.
각종 시토카인 조건을 또한, 공여자로부터의 CD8+ 및 CD4+ 세포 상에서 시험하였다. 도 23 패널 a-f에 도시된 바와 같이, PD0047 및 PD0040으로부터의 샘플을, IL2/IL15, IL7/IL15, IL2/IL7/IL15, IL7/IL15를 수반한 IL2 펄스, IL2 단독, IL7/IL21 및 IL2/IL15을 수반한 IL2 펄스로 시험하였다. 이는 5일 동안 IL-2 단독 (펄스)과 함께 인큐베이션한 다음, IL-7/IL-21을 부가하였고 (이는 나머지 배양 내내 존재하였다), 5일 동안 IL-2 단독 (펄스)과 함께 인큐베이션한 다음, IL-7/IL-21 및 IL2/IL15를 부가하는 것 (이는 나머지 배양 내내 존재하였다)을 포함하였다. PD0040: PD0038 CD8+ 강화된 T-세포를 사용하여, 각종 시토카인 칵테일을 시험하였다. 각 조건에 대한 농도는 다음과 같다: IL-2 (50 U/mL), IL-7 (5 ng/mL), IL-15 (0.5 ng/mL). 조건 #4는 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7/IL-15였다. 성장 배수 및 TNC를 소규모 실험으로부터 추정하였다. 현재 사용되고 있는 IL-2/IL-15 조합물이 가장 우수한 확장을 나타내었다. 본 연구에서는, IL-2/IL-15 조합물이 가장 우수한 확장을 초래하는 것으로 입증되었다.
도시된 바와 같이, PD0047: PD0038 CD8+ 강화된 세포를 사용하여 각종 시토카인 칵테일을 시험하였다. 10 U/mL 최종에서 "저 용량" IL-2를 이용하여, 상기와 동일한 시토카인 칵테일을 시험하였다. 각종 조합물에 사용된 개별 시토카인의 농도는 다음과 같다: 범례에 언급된 바와 같은 IL-2 (50 U/mL) 및 (10 U/mL), IL-7 (5 ng/mL), IL-15 (0.5 ng/mL), IL-21 (5 ng/mL). 펄스 조건은 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7/IL-21였다. 성장 배수 및 TNC를 소규모 실험으로부터 추정하였다. IL-2/IL-15 조합물이 가장 우수한 확장을 나타내었고, 이를 다음 실험에 사용하였다. "정상" 용량의 IL-2가 가장 우수한 성장을 나타내었다. 패널 a는 제15일 (D15)에서 PD0047 세포의 인큐베이션으로부터의 결과; 및 각종 시토카인 조건과의 인큐베이션 후, 각종 시토카인과의 성장 비교와 % 양성 세포 (CD3+, CD62L+, CD3+/CD62L+/CD45RO-, CD28+, CD45RA+/CD45RO-, CD45RA+/CD45RO+ 및 CD45RA-/CD45RO+)를 도시한 것이다.
패널 b는 제21일 (D21)에서 PD0047 세포의 인큐베이션 후의 결과; 및 상기 표시된 바와 같은 각종 시토카인과의 성장 비교와 % 양성 세포를 도시한 것이다. 패널 c는 PD0040 D21 및 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, 여기서 총 세포 수는 배양물에서의 성장 22일 후에 검사한다. 패널 d는 PD0040 D21 및 표시된 바와 같은 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, CD3+ 세포 성장은 배양 성장 22일 후에 검사한다. 패널 e는 PD0047 및 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, 여기서 총 세포 수는 배양물에서의 성장 22일 후에 검사한다. 패널 f는 PD0047 및 표시된 바와 같은 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, CD3+ 세포 성장은 배양 성장 22일 후에 검사한다. PD0040에 대하여 도시된 바와 같이 PD0038 CD8+ 강화된 세포를 사용하여 각종 시토카인 칵테일을 시험하였다. 각 조건에 대한 농도는 다음과 같다: IL-2 (50 U/mL), IL-7 (5 ng/mL), IL-15 (0.5 ng/mL). 조건 #4는 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7/IL-15였다. 성장 배수 및 TNC를 소규모 실험으로부터 추정하였다. IL-2/IL-15 조합물이 가장 우수한 확장을 나타내었고, 이를 추가의 실험에 사용하였다. 부가적으로, PD0047: PD0038 CD8+ 강화된 세포를 사용하여 각종 시토카인 칵테일을 시험하였다. 10 U/mL 최종에서 "저 용량" IL-2를 이용하여, 상기와 동일한 시토카인 칵테일을 시험하였다. 각 조건에 대한 농도는 다음과 같다: 범례에 언급된 바와 같은 IL-2 (50 U/mL) 및 (10 U/mL), IL-7 (5 ng/mL), IL-15 (0.5 ng/mL), IL-21 (5 ng/mL). 펄스 조건은 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7/IL-21였다. 이어서, 성장 배수 및 TNC를 소규모 실험으로부터 추정하였다. 상기 언급된 연구에 사용된 IL-2/IL-15 시토카인 조합물이 가장 우수한 확장을 나타내었다. "정상" 용량의 IL-2가 또한, 가장 우수한 성장을 나타내었다. 표현형별 성장을 알아보기 위한 유동 세포계수법이 이용 가능하고, 본원의 추가의 실험에 표시되었다.
도 24에는 시토카인의 상이한 조합물을 시험하기 위한 일련의 실험으로부터의 결과가 도시되어 있다. PD0051: 2명의 상이한 공여자로부터의 CD8+ 세포를 사용하여 "정상" 시토카인 조건을 시험하였고, IL-2 (50 U/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)를 사용하였다. 펄스 조건은 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7 (5 ng/mL), IL-21 (5 ng/mL)였다. 도시되는 성장 배수 및 TNC는 30x10^6개 세포로 출발한 일정 규모의 실험으로부터이다. 현재 사용되고 있는 IL-2/IL-15 조합물이 가장 우수한 확장을 나타냈지만, 확장은 또한, IL-2로 펄스시키고 IL-7/IL-21로 전환시킨 배양물로부터 관찰되었다. 확장 배수는 PD0047에 대하여 펄스된 조건에서와 유사하였다.
PD0055의 경우에는, CD4+ 공여자 세포 (상기에서와 동일한 공여자 PD0038)를 이용하는 것을 제외하고는, PD0051에 대하여 평가된 바와 동일한 시토카인 조건을 시험하였다. 이러한 실험에 대한 시토카인 조건은 IL-7 (5 ng/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)였다. 펄스 조건은 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7 (5 ng/mL), IL-21 (5 ng/mL)였다. 성장 배수 및 TNC는 30x10^6개 세포로 출발한 일정 규모의 실험으로부터이다. 현재 사용되고 있는 IL-7/IL-15 조합물은 통상적인 확장을 나타냈지만, 보다 우수한 확장은 IL-2로 펄스시키고 IL-7/IL-21로 전환시킨 배양물로부터 관찰되었다. 패널 a는 제15일 (D15)에서 PD0051, 및 공여자 대 공여자 시토카인 비교에서 각종 시토카인과의 성장 비교와 % 양성 세포 (EGFRt+, EGFRt+/CD4+, EGFRt+/CD8+, CD3+, CD3+/CD4+, CD3+/CD4+/CD8+, CD3+/CD8+, CD62L+, CD3+/CD8+, CD62L+, CD3+/CD28+, CD27+, CD127+, CD45RA+/CD45RO-, CD45RA+/CD45RO_/CD45RO_/CD45RA-, CD62+/CD28+)를 도시한 것이다. 패널 b는 제17일 (D17)에서 PD0055, 및 각종 시토카인과의 성장 비교와 % 양성 세포를 도시한 것이다. 패널 c는 PD0051 성장 곡선 및 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, 여기서 총 세포 수는 배양물에서의 성장 20일 후에 검사한다. 패널 d는 PD0051 및 표시된 바와 같은 각종 시토카인과의 성장 비교를 도시한 것인데, CD3+ 세포 성장은 배양 성장 20일 후에 검사한다. 패널 c 및 d는 세포를 표시된 각종 시토카인과 함께 배양물에서 20일 동안 인큐베이션한 후의 성장을 비교한, PD0051에 대한 성장 곡선 (총 세포 및 CD3+)을 도시한 것이다. 패널 e 및 f는 배양물에서의 성장 제17일에 표시된 시점에서, 표시된 각종 시토카인과의 인큐베이션 후 공여자 PD0055에 대하 성장 곡선 (각각 총 세포 및 CD3+)을 도시한 것이다.
도 25에는 시토카인의 상이한 조합물을 대상으로 하여, 세포 확장에 대한 그들의 영향력에 관하여 평가하는 시토카인 시험 실험이 도시되어 있다. 샘플 PD0059의 경우에는, PD0051에 대하여 제시된 바와 동일한 시토카인 시험 실험을 수행하였는데, 단 본 실험은 새로운 CD4+ 및 CD8+ 공여자 (PD0057)를 시험하는 것을 포함하였다. CD4 세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)를 이용하고 CD8+ 세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)를 이용하여, "정상" 시토카인 조건을 시험하였다. 펄스 조건은 5일 동안 IL-2 펄스한 다음, 나머지 배양 내내 IL-7 (5 ng/mL), IL-21 (5 ng/mL)였다. 성장 배수 및 TNC는 30x106개 세포로 출발한 일정 규모의 실험으로부터이다. 본 연구에서 "정상" 시토카인 조합물은 확장을 초래하였고; 우수한 확장은 IL-2로 펄스시키고 IL-7/IL-21로 전환시킨 후에 관찰되었다.
PD0078의 경우에는, PD0051에서와 유사한 시토카인 연구를 수행하였는데, 단 상이한 CD4+ 및 CD8+ 공여자 (PD0063)를 이용하여 본 실험을 수행하였다. 본 시험은 IL-2 단독 조건과 비교해서, CD4 세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)를 이용하고 CD8 세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) 및 IL-15 (0.5 ng/mL)를 이용하는 "정상" 시토카인 조건을 사용하여 수행하였다. 14일 동안 (D+14)의 모든 성장은 정상 수준에 있었고, 이때 배양물은 EGFRt 선별되었다. 생존 능력과 성장의 회복은 CD8+ 세포에 대한 선별 후에 관찰되지 않았다. 패널 a에는 세포 해동 후 양성 세포의 %가 도시되어 있다. 패널 B1은 PD0059 PLAT-02 시토카인 비교를 도시한 것이다. 패널 B2는 PD0059 PLAT-02 시토카인 비교 및 CD3+ 세포 성장을 도시한 것이다. 패널 B3은 PD0078 성장 곡선을 도시한 것이다. 패널 B4는 PD0078 성장 곡선 및 CD3+ 세포 성장을 도시한 것이다.
도 26에는 실험에 근거한 세포 확장의 최신 (또는 "현재")의 확장 방법론 (이를 추가의 실험에 사용하였다)과 초기 확장 방법론을 예시하는 2개의 플로 차트가 도시되어 있다.
도 27에는 PD0080, PD0084, 및 PD0085로부터의 샘플에 대한 성장 곡선 및 3가지 모두를 비교한 것이 도시되어 있다. 이들 3가지 실험은 "조기 확장" 방법론의 반복된 실험이었다. 이들 실험을 위하여, 표준 시토카인 조건을 사용하였다: CD8+ T-세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)이고, CD4+ T-세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)이다. PD0080의 경우에는, PD0063 CD8+ T-세포를 이용하여 2개의 출발 밀도를 이중으로 시험하였다. 각각의 세포 복사물 중 하나에게, 형질도입 당일에 3시간 인큐베이션한 후 약 0.7x106개 세포/mL 이하의 용적을 투여하였다. PD0084의 경우에는, 2개의 부가의 CD8+ 공여자 T-세포를 대상으로 하여 조기 확장의 효과에 관하여 평가하였다. 30x106개 세포 출발 조건을 각 공여자에 대한 대조군으로서 사용하였고, 60x106개 세포 출발 밀도를 시험 조건으로서 조기 확장과 함께 사용하였다. PD0085의 경우에는, 조기 확장을 시험하기 위해 CD4+ T-세포를 사용하였다는 것을 제외하고는, PD0084와 유사한 시험을 수행하였다. 또한, 30x106개 출발 세포 밀도를 "정상" 대조군 조건으로서 사용하였고, 60x106개 세포 출발 밀도를 시험 조건으로서 사용하였다.
도 28에 도시된 바와 같이, PD0038의 출발 물질은 선별된 CD4+ 및 CD8+ T-세포를 포함하였다. 성장 곡선은 함께 풀링된 세포의 양쪽 V-197 백으로부터의 TNC를 나타낸다. 조기 발생으로부터, 동결보존 이전에 50:50 CD4:CD8 생성물을 풀링하고자 하였다. 플로 데이터는 풀링된 생성물의 해동 후를 보여준다. 비드 제거 및 EGFRt 강화는 CD4+ T-세포의 경우에 D+14에서 일어났고, CD8+ T-세포의 경우에 D+15에서 일어났다. CD8+ T-세포는 IL-2 (50 U/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰고, CD4+ T-세포는 IL-7 (5 ng/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰다. 이러한 공정은 별도의 생성물을 동결보존시키고, 해동시 50:50 생성물을 주입하는 것으로 변경되었다.
도 29에는 PD0046에 대한 성장 곡선이 도시되어 있다. 성장 곡선은 함께 풀링된 세포의 양쪽 V-197 백으로부터의 TNC를 나타낸다. 조기 발생에서는, 동결보존 이전에 50:50 CD4:CD8 생성물을 풀링하고자 하였다. 플로 데이터는 풀링된 생성물의 해동 후를 보여준다. 이어서, 비드 제거 및 EGFRt 강화는 CD4+ T-세포의 경우에 D+14에서 일어났고, CD8+ T-세포의 경우에 D+15에서 일어났다. CD8+ T-세포는 IL-2 (50 U/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰고, CD4+ T-세포는 IL-7 (5 ng/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰다. 그러나, 공여자 세포 해동이 불충분하기 때문에, 상기 생성물 이후에는 많은 것들이 이루어지지 않았다. 세포를 나중에 사용하여 10% HA 해동을 시험하였는데, 훨씬 더 우수한 것으로 입증되었다.
도 30에는 PD0063에 대한 성장 곡선이 도시되어 있다. 성장 곡선은 함께 풀링된 세포의 양 V-197 백으로부터의 TNC를 나타낸다. 이어서, 비드 제거 및 EGFRt 강화는 CD4 세포의 경우에 D+14에서 일어났고, CD8 세포의 경우에 D+15에서 일어난 것으로 도시되어 있다. CD8+ 세포는 IL-2 (50 U/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰고, CD4+ 세포는 IL-7 (5 ng/mL)/IL-15 (0.5 ng/mL)에서 성장시켰다. 이어서, 비드 제거 및 EGFRt 강화가 일어났다.
도 31에는 시토카인의 존재하에 성장시킨 경우에 벌크 PBMC 배양물로부터의 세포의 확장이 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, CD4+ 세포 (●)는 IL2 및 IL15의 존재하에 성장시켰다. CD8+ 세포 (■)는 IL7 및 IL15의 존재하에 성장시켰다. 도 31a 및 31b의 하부 패널 (표현형별 비교)는 상이한 조건과의 인큐베이션 후 (이들 각각으로 인해, 생착 적합도의 마커, 예를 들어 CD62L, CD28, CD27, CD45RA를 발현하는 세포가 생성되었다) 그의 표면 상의 표시된 마커를 발현하는 총 세포의 비율 (%)을 나타낸다. CD8-강화된 배양물을 IL-2/IL-15에서 성장시키고, CD4-강화된 배양물을 IL-7/IL-15에서 성장시키면, 양쪽 배양물의 강력한 확장과 기억 표현형의 강한 발현이 야기되었다.
도 32에는 시토카인 혼합물에서 강화된 CD8+ 및 CD4+ 세포의 확장이 도시되어 있다. 샘플 PD0044에 나타낸 바와 같이, 강화된 CD8+ T-세포를 IL2 및 IL15의 존재하에 확장시켰다 (상부 패널). 샘플 PD0044에서는, 강화된 CD4+ T-세포를 20일 이상 동안 IL7 및 IL15의 존재하에 확장시켰다. 도시된 바와 같이, 풀링된 CD4+ 및 CD8+ T-세포는 CD3, CD4, CD8, CD62L, CD28, CD27, CD45RA 및 CD45RO를 발현하였다. 또한, 샘플 14602-S14를 시험하였다 (도 32b 참조). 도시된 바와 같이, CD8+ 강화된 배양물을 IL-2/IL-15에서 성장시키고, CD4+ 강화된 배양물을 IL-7/IL-15에서 성장시키면, 양쪽 배양물의 강력한 확장과 기억 표현형의 강한 발현이 야기되었다. 중요하게도, 도 31 및 32에 생성되고 도시된 데이터로부터, CD4+ T-세포 및 CD8+ T-세포는 상이한 시토카인 조합물과 함께 최적으로 성장하였는데, 이로써 CD4+ T-세포는 이들 연구에서 IL7 및 IL15와 함께 최상으로 수행되었지만, CD8+ T-세포는 이들 연구에서 시토카인 IL2 및 IL15와 함께 최상으로 성장하였다. 그들의 각각의 최적의 시토카인 조합물과의 성장으로 인해, 상기 세포가 표면 마커 CD45RA, CD62L, CD28, 및 CD27를 발현하는 세포 확장 후의 표현형을 갖는 세포가 생성되었는데, 이는 입양 전이시 높거나 또는 개선되거나 또는 증강된 생착 적합도를 표시한다.
도 33에는 세포 확장의 본래의 PLAT-02 (1상 및 2상의 임상 시험) 방법론을 이용하는 14602-S01 내지 14602-SO6으로부터의 샘플이 도시되어 있다. 세포는 동결보존 이전에 EGFRt에 대하여 양성이었다. 세포를 대상으로 하여 생존 능력에 관하여 시험하였다. 맨 아래 표에 제시된 바와 같이, 세포 14602-SO3 CD8+ 및 14602-SO3-02 CD8+ 세포는 CD3, CD62L, CD27, CD127, CD45RA/CD45RO- 또는 CD45RA를 발현하지 않았다.
도 34에는 CD4+ T-세포와 CD8+ T-세포 둘 다를 갖는 세포 생성물 14602-SO4 및 14602-SO4-02 상에서의 시험이 도시되어 있다. "조기 확장" 방법론을 이용하여 상기 세포를 배양물에서 성장시켰다. 세포를 대상으로 하여, 동결보존 이전에 EGFRt 발현에 대하여 양성인지를 시험하였다.
도 35에는 샘플 14602-SO7, 14602-SO8, 및 14602-SO9로부터의 세포가 도시되어 있다. 조기 확장 방법론을 이용하여 CD4+ 및 CD8+ 세포를 확장시켰다. 상부 패널에서는, 14602-SO7 CD4+ 세포 및 14602-SO7 CD8+ 세포에 대한 표에 제시된 바와 같이, 각종 시간에서 CD3, CD62L, CD27, CD27, CD127, 및 CD45RA+를 포함한 각종 마커를 발현하는 세포의 비율 (%)이 제시된다. 샘플 14602-SO8에 대한 맨 아래 패널에서는, CD4+ 및 CD8+ 강화된 T-세포가 배양물에서 10일 후에도 여전히 생존하였다.
도 36에는 14602-S10, 14602-S11, 14602-S12 및 14602-S13의 배치 샘플로부터의 생존 능력에 관하여 시험된 세포가 도시되어 있다. 수반되는 표에 제시된 바와 같이, 세포는 모두, 동결보존 이전에 EGFRt를 발현하였다. 이 세포를 대상으로 하여, 적어도 12일 동안 세포 배양물에서의 생존 능력에 관하여 시험하였다.
도 37에는 14602-S14, 14602-S15 및 14602-S16의 배치 샘플로부터의 생존 능력에 관하여 시험된 세포가 도시되어 있다. 수반되는 표에 제시된 바와 같이, 세포는 모두, 동결보존 이전에 EGFRt를 발현하였다. 이 세포를 대상으로 하여, 적어도 12일 동안 세포 배양물에서의 생존 능력에 관하여 시험하였다.
도 38에 도시된 바와 같이, 14602의 샘플로부터의 세포 (그로부터 CD4+ 및 CD8+ T-세포가 강화되었다)는 CD3, CD62L, CD28, CD127, CD45RA+/CD45RO-, CD45RA 및 CD45RO에 대하여 양성이었다. 이들은 특이적 마커인데, 이는 CD4+ 세포와 CD8+ 세포 둘 다가 그들의 특이적 시토카인 조합물로의 처리 후 고 수준의 생착 적합도를 갖고 있었다는 것을 표시한다.
도 39에는 종양 접종 후 T-세포 투여 후 마우스에 대한 결과 (생존, 종양 진행)가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 샘플 PD0046으로부터의 세포가 주사된 마우스는, 여러 농도의 세포를 이용하여 투여한지 80일 후 마우스가 생존하였기 때문에, 상기 세포가 높거나, 개선되거나 또는 증강된 생착 적합도를 갖고 있었다는 것을 표시하였다. 샘플 PD0044는 높거나, 개선되거나 또는 증강된 생착 적합도를 갖지 못하였는데, 이는 제40일에 생존 %가 하락했기 때문이다 (도 39b).
도 40에는 PD0044 및 PD0046 세포 배치로부터의 세포로 처리된 마우스에서의 평균 종양 진행이 도시되어 있다. 그래프에 도시된 바와 같이, CD8+ 및 CD4+ T-세포를 이러한 CD4+ 및 CD8+ T-세포에 적당한 시토카인 혼합물 (CD4+ T-세포의 경우에는 IL7/IL15이고 CD8+ T-세포의 경우에는 IL2/IL15이다)에서 처음으로 성장시킨 PD0046 배치로부터의 CD4+ 및 CD8+ T-세포를 상기 마우스에게 투여한 경우에는 이러한 마우스에서의 종양 진행이 저하되었다. 대조군으로서, 비히클 세포는 PD0044 및 PD0046을 이용한 어느 연구에서도 종양 진행을 중단시키지 못하였다. 맨 아래 패널에 제시된 바와 같이, PD0044 샘플로부터의 세포로 처리된 마우스에서는 종양 진행이 증가되었고, 특히 최소 농도의 T-세포로 처리된 경우에 실질적으로 증가되었다. 종양 진행은 비히클 대조군과 비교해서 저하되었다.
추가 시험으로서, 마우스의 3개 군을 시험하였는데, 각 군은 군당 총 5마리의 마우스를 갖고 있다. 군 A의 경우에는, 마우스를 인산염 완충 식염수 (PBS)의 플라시보로 처리하였다. 군 B는 Zrx-014로 형질도입된 1:1 EGFRt+ CD4:CD8을 갖는 "정상" 확장으로부터의 세포를 활용하였다. 사용된 세포는 군 PD0055 #1 (5 ng/mL IL7 & 0.5 ng/mL IL15를 수반한 공여자 PD0038 CD4, S1D14 ＠ 75.9% EGFRt+) 및 군 PD0051 #1 (50 U/mL IL2 & 0.5 ng/mL IL15를 수반한 공여자 PD0038 CD8, S1D21 ＠ 76.8% EGFRt+)로부터 유래되었다. 군 C는 Zrx-014로 형질도입된 1:1 EGFRt+ CD4:CD8, PD0055 #2 (5일 동안 50 U/mL IL2 펄스한 다음, 5 ng/mL IL7 & 5 ng/mL IL21 부가를 수반한 공여자 PD0038 CD4, S1D11 ＠ 81.2% EGFRt+) 및 PD0051 #2 (5일 동안 50 U/mL IL2 펄스한 다음, 5 ng/mL IL7 & 5 ng/mL IL21 부가를 수반한 공여자 PD0038 CD8, S1D21 ＠ 89.5% EGFRt+)로 구성된 시토카인 처리로 "펄스"되었던 세포를 활용하였다.
도 42에는 JME13-25에서 마우스 내로 주사하기 위해 사용되었던 해동 후 세포에 대한 FACS 분석이 도시되어 있다 (PD0051 및 PD0055 세포). 도시된 바와 같이 세포의 양쪽 샘플은 EGFRt를 발현한 CD8+ 및 CD4+ T-세포를 갖고 있었다.
도 43에는 플라시보 PBS (군 A), 군 B (PD0051 "정상 확장 세포") 및 군 C (PD0055, 시토카인 조합물로 펄스된 세포)로 처리시킨 군 A, B, 및 C로부터의 마우스의 3개 군이 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 군 A 내의 플라시보로 처리시킨 마우스는 제20일에 가시적으로 관찰되는 종양 진행을 나타내었다. PD0051 (정상 확장 세포)로 처리된 군 B 마우스에 대해서는, 종양 진행이 2마리 마우스에게서 실질적으로 증가하는 것으로 나타났다. 군 C에서는, PD0055로 처리된 마우스가 단지 소량의 종양 진행을 나타내므로, 이는 처리에 사용하기 이전에, 시토카인 혼합물로 처리된 세포가 보다 높은 생착 적합도를 갖고 있었다는 것을 표시한다.
도 44에는 투여 3일 후 마우스에게서 CAR 발현성 T-세포의 영속성이 도시되어 있다. 표시된 바와 같이, CAR을 발현하는 CD4+ T-세포는 정상 확장의 세포 뿐만 아니라 CD8+ T-세포와 비교해서 더 높은 영속성을 갖고 있었다.
CAR 발현성 T-세포로의 T-세포 처리 후 종양 진행을 검사하는 실험을 수행한 후, 시험관내 각종 시토카인 조건에서 반복 항원 접촉자와 함께 성장시킨 세포들 간의 사멸 능력에 있어서의 생체내 차이가 있는지를 결정하기 위한 실험을 수행하였다 (도 45). 이러한 실험을 위해, 마우스 3개 군을 사용하였는데, 이들 군은 각각 3마리 마우스를 활용하였다. 군 A의 경우에는, 마우스를 플라시보 (PBS)로 처리하였다. 군 B는 "정상 확장 방법"에 의해 확장시킨 세포로 처리하였다 (Zrx-014로 형질도입된 "정상" 1:1 EGFRt+ CD4:CD8, PD0055 #1 (5 ng/mL IL7 & 0.5 ng/mL IL15를 수반한 공여자 PD0038 CD4, S1D14 ＠ 75.9% EGFRt+) 및 PD0051 #1 (50 U/mL IL2 & 0.5 ng/mL IL15를 수반한 공여자 PD0038 CD8, S1D21 ＠ 76.8% EGFRt+) (도 18). 군 C는 확장 동안 시토카인으로 펄스된 세포로 처리하였다 [Zrx-014로 형질도입된 "펄스된" 1:1 EGFRt+ CD4:CD8, PD0055 #2 (5일 동안 50 U/mL IL2 펄스한 다음, 5 ng/mL IL7 & 5 ng/mL IL21 부가를 수반한 공여자 PD0038 CD4, S1D11 ＠ 81.2% EGFRt+) 및 PD0051 #2 (5일 동안 50 U/mL IL2 펄스한 다음, 5 ng/mL IL7 & 5 ng/mL IL21 부가를 수반한 공여자 PD0038 CD8, S1D21 ＠ 89.5% EGFRt+)].
도 46에 도시된 바와 같이, 군 A 마우스는 PBS를 주사한 후 제20일에 사망하였다. "정상 확장 방법"에 의해 확장시킨 세포로 처리된 군 B 마우스는 제120일 정도에 1마리 마우스에게서 종양 진행을 나타내었다. 그러나, 시토카인에서 확장시킨 세포로 처리된 마우스의 경우에는, 제120일 정도에 이러한 마우스에게 종양이 없어졌다. 따라서, 데이터는 CD4+ 및 CD8+에 대해 특이적인 시토카인 혼합물에서 처리된 세포가, 마우스에서 보다 높은 생착률과 증가된 생존을 초래하였다는 것을 표시한다. 부가적으로, 상기 세포는 종양 진행을 방지하는 데 있어서 더 효율적이었다.
도 47에 도시된 바와 같이, 종양 접종 후 PD0051 및 PD0055 세포로 처리한 경우에 마우스는 100% 생존율을 나타내었다. 그러나, PD0055 세포를 이용하여 처리하면, 종양 진행이 저하되는 것으로 나타났다.
도 48에 도시된 바와 같이, 플라시보, "정상 확장" 방법하에 성장시킨 T-세포, 및 시토카인 조합물로 펄스시킨 T-세포로 처리된 마우스에서 평균 종양 진행을 검사하였다. 이러한 실험을 위해, 제0일에 마우스에게 종양을 접종하고, 제6일에 종양에 대하여 영상화하였다. 이어서, 제7일에 T-세포 또는 플라시보를 투여하였다. 이어서, 제14일 및 제21일에 종양 접종을 반복하였다.
제28일, 제35일, 제49일, 제63일, 제78일, 제92일, 제105일 및 제120일에 마우스를 대상으로 하여 종양 진행에 관하여 검사하였는데, 이때 종양의 영상을 찍었다. 마우스 군에 제시된 바와 같이, 시토카인으로 펄스된 세포로 처리된 마우스에게서 종양 진행이 저하되었는데, 이는 시토카인으로 펄스된 세포가, 시토카인을 수반하지 않은 정상 조건하에 확장된 세포보다 더 높거나, 개선되거나 또는 증강된 생착 적합도를 나타냈다는 것을 표시한다.
도 49에 도시된 바와 같이, PLAT-01 및 PLAT-02와 동일한 조건뿐만 아니라 "중간" 프로토콜 하에 성장시켰던 세포들 간에 사멸 능력에 있어서 생체내 차이가 있는지를 결정하기 위한 실험을 설정하였다. 이러한 실험을 위해, 5마리 마우스의 17개 군을 사용하여, 종양 접종 후 마우스의 처리에 있어서 상기 세포를 시험하였다. 도 49의 표 상에 표시된 바와 같은 생성물 조건당 특정 용량의 세포 (1.25x106개, 2.5x106개, 5x106개, 10x106개)를 상기 마우스 군에게 제공하였다. 동일자로, 상기 세포를 해동하고, 계수한 다음, 이를 마우스 내로 주사하였다. 도 50에는 2가지 확장 방법으로부터의 상이한 세포 생성물 내에서의 CD4+ 및 CD8+ 세포의 양, 및 상기 세포에서의 그들의 EGFRt의 양이 제시되어 있다.
도 51에 도시된 바와 같이, 마우스 17개 군에게 종양을 접종한 다음, 정상 확장 방법하에 확장시켰거나 또는 시토카인 조합물로 펄스된 T-세포를 이용한 용량 적정으로 처리하였다. 그래프에서 볼 수 있는 바와 같이, PLAT-1.00 세포가 보다 높은 농도로 투여된 마우스는 종양 진행이 저하되었다. 또한 PLAT-2.00이 투여된 마우스는 보다 높은 농도의 세포를 투여한지 25일 후에 종양 진행 상의 저하가 관찰되었다. 그러나, PLAT-1.33이 투여된 마우스의 경우에는, 세포 농도와 상관없이 상기 마우스에게서 종양 진행 상의 증가가 관찰되었는데, 이는 이들 세포에 대한 생착 적합도가 낮거나 또는 저하된다는 것을 표시한다. PLAT-1.67로부터의 세포가 투여된 마우스에 대해서는, 가장 높은 농도의 세포를 투여 처리한 경우에 이러한 마우스에게서 종양 진행 상의 감소가 나타났다. 그러나, 도 50에 언급된 바와 같이, PLAT-1.33의 세포 또한, 낮은 EGFRt 수치를 나타냈는데, 이는 또한, 세포 표면 상의 감소된 양의 CAR을 표시할 수 있었다.
도 51에는 PD104 세포 생성물과 PD116 세포 생성물의 개시 비교가 도시되어 있다. PD0104 생성물에 대해서는, PD0063 CD8+ 및 CD4+ 강화된 세포를 사용하여, Tx 일에 세포를 0.7x106개 세포/mL로 확장 ("조기 확장")한 것을 시험하기 위한 실험을 반복하였다. 정상 PLAT-02 배양 조건에 대해서, CD8+ 세포의 경우에는 IL-2 (50 U/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)를 사용하고, CD4+ T 세포의 경우에는 IL-7 (5 ng/mL) + IL-15 (0.5 ng/mL)를 사용하였다. 성장과 생존 능력이 현저하게 증가하였다. 이들 곡선은 성장/비드 제거/선별/동결보존의 시한까지 임상 생성물에서 관찰되었던 것을 재현한다.
도 52에 도시된 바와 같이, 마우스를 PLAT-1.00, PLAT-1.33, PLAT-1.67 및 PLAT-2.00의 세포 생성물의 용량 적정으로 처리하였다. 모든 그래프에 도시된 바와 같이, 가장 낮은 농도의 세포가 종양 진행의 치료에 있어서 가장 덜 유효하였다. 그러나, 가장 좋은 생착 적합도를 나타낸 세포는 PLAT-1.00이었고, 보다 높은 농도에서는 PLAT-2.00이었다.
도 53에 도시된 바와 같이, 모든 세포는 1.25x106개의 농도에서 가장 덜 유효하였다. PLAT-1.00으로부터의 세포는 종양 진행을 억제하는 데 있어서 가장 유효한 것으로 나타났는데, 이는 상기 세포의 생착 적합도가 다른 군과 비교해서 탁월하거나, 개선되거나 또는 증강되었다는 것을 표시하고, 시토카인으로의 처리가 또한, 상기 세포에 대한 생착 적합도를 증진시키거나, 개선시키거나 또는 증강시켰다는 것을 표시한다. 5 X 106개의 농도에서 제시된 바와 같이, 종양 진행은 마우스를 처리하기 위해 사용된 세포의 다른 군과 비교해서 25일에 중단되었다.
도 54에 도시된 바와 같이, 마우스를 1회 용량당 2.5x106개 세포 내지 10x106개 세포의 용량으로 처리한 경우에는 마우스의 생존률이 더 높아졌다. 그러나, 마우스를 PLAT-1.00 생성물로부터의 세포로 처리하면, 생존률이 더 길어졌는데, 이는 상기 군으로부터의 T-세포가 더 강력하였고, 보다 높거나, 개선되거나 또는 증강된 생착 적합도를 나타냈다는 것을 표시한다.
도 55에 도시된 바와 같이, 마우스의 생존은 세포의 용량 농도에 의존적이었다. 모든 세포에 대하여, 마우스의 생존은 가장 낮은 용량의 T-세포 처리에 따라 감소되었다. 그러나, 앞서 제시된 바와 같이, PLAT-1.00 생성물로부터의 세포로 처리된 마우스는 보다 긴 생존률을 나타냈는데, 이는 상기 군으로부터의 T-세포가 더 강력하였고, 개선된 생착 적합도를 나타냈다는 것을 표시한다.
부가의 대안
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 단리 또는 강화시켜, 단리된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이로써 수득된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체 및 마커 서열을 코딩하는 벡터 (여기서, 마커 서열은 세포 표면 선별성 마커를 코딩한다)로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 이와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 상기 마커 서열을 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계; 및 이러한 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 적어도 1일 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계를 포함한다.
일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리하는 단계는 CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리하는 단계는 유동 세포계수법에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리하는 단계는 면역-자기 선별에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 상기 유전적으로 변형된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시켜 주는 적어도 하나의 수용체를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 단리된 T-세포 집단을 자극하는 단계는 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행된다. 일부 대안에서, 상기 항체-결합된 지지체는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 일부 대안에서, 항체-결합된 지지체는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 접촉 단계는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 CD8+ 세포의 부재하에 단리된 CD4+ 세포를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 CD4+ 세포의 부재하에 또는 CD4+ 세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ 세포를 이용하여 수행된다. 일부 대안에서, CD4+ 발현성 T-세포는 적어도 1일 동안 증식시키고, 20일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킬 수 있다. 일부 대안에서, CD8+ 발현성 T-세포는 적어도 1일 동안 증식시키고, 20일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시킬 수 있다. 일부 대안에서, 상기 방법은 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 유전적으로 변형된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단이 제공되는데, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- T-세포의 부재하에, CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화되거나, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포로부터 단리된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-18, IL-15, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다.
일부 대안에서, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합이 제공되는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 제약 부형제; 및 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- T-세포의 부재하에, CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화되거나, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포로부터 단리된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는데, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는데, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 집단은 1:1 비로 혼합되거나 또는 공동-투여되는, CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포와, CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다.
일부 대안에서, 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게서 이러한 질환을 치료, 억제 또는 완화하는 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합은 제약 부형제; 및 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단을 포함한다. 일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단은 CD8- 및/또는 CD4- T-세포의 부재하에, CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화되거나, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포로부터 단리된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극시켰다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 생착 적합도를 증진시키는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 일부 대안에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 대안에서, 세포 표면 선별성 마커는 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함한다. 일부 대안에서, 리간드 결합성 도메인은 CD19에 대해 특이적이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는데, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는데, 이러한 유전적으로 변형된 T-세포의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 집단은 1:1 비로 혼합되거나 또는 공동-투여되는, CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포와, CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 적어도 하나의 집단을 포함하고, 이러한 적어도 하나의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 적어도 하나의 집단을 포함하고, 이러한 적어도 하나의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 적어도 하나의 집단을 포함하고, 이러한 적어도 하나의 집단은 1:1 비로 혼합되거나 또는 공동-투여된, CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포와, CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 적어도 하나의 집단을 포함하고, 이러한 적어도 하나의 집단은 CD4+ T-세포의 부재하에 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD8+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는데, 이러한 조성물 또는 생성물 조합은 적어도 하나의 집단을 포함하고, 이러한 적어도 하나의 집단은 CD8+ T-세포의 부재하에 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리된 CD4+ T-세포를 포함한다. 일부 대안에서, 대상체가 항암 요법을 받는 것으로 확인되거나 또는 선택된다. 일부 대안에서, 상기 방법은 특정 질환의 억제를 측정 또는 평가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기 조성물 또는 생성물 조합을 투여하기 전, 투여하는 동안, 또는 투여 후에 부가의 항암 요법을 상기 대상체에게 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 입양 세포 전이에 의해 상기 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 상기 조성물 또는 생성물 조합은 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 상기 대상체는 백혈병으로 인해 고통받고 있다. 일부 대안에서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 소아기 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 일부 대안에서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있다. 일부 대안에서, 대상체는 자가면역 질환으로 인해 고통받고 있다. 일부 대안에서, 대상체는 HSCT 후 재발로 인해 고통받고 있다.
본원에서 실질적으로 임의의 복수 및/또는 단수 용어의 사용과 관련하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 문맥 및/또는 적용에 적당한 바대로, 복수를 단수로 번역하고/하거나 단수를 복수로 번역할 수 있다. 각종 단수/복수 순열은 본원에서 명확하게 하기 위해 분명히 제시될 수 있다.
일반적으로 본원에 사용된 용어, 및 특히 첨부된 청구범위 (예를 들어, 첨부된 청구범위의 전체)에 사용된 용어는 일반적으로 "개방" 용어로서 간주된다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이해할 것이다 (예를 들어, 용어 "포함하는"은 "포함하지만, 이에 제한되지 않는" 것으로서 해석되어야 하고, 용어 "갖는"은 "적어도 갖는" 것으로서 해석되어야 하며, 용어 "포함하다"는 "포함하지만, 이에 제한되지 않는다"는 것으로서 해석되어야 한다). 특정 번호의 도입된 청구항 구술이 의도된 경우에는, 이러한 의도가 상기 청구항에 명백하게 구술될 것이고, 이러한 구술의 부재하에서는 그러한 의도가 존재하지 않는다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 추가로 이해할 것이다. 예를 들어, 이해를 돕기 위하여, 다음 첨부된 청구범위는 청구항 구술을 도입하기 위하여 도입 문구 "적어도 하나의" 및 "하나 이상"의 활용을 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 문구를 사용하는 것은, 심지어 동일한 청구항이 도입 문구 "하나 이상" 또는 "적어도 하나" 및 "특정" (예를 들어, "특정"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 해석되어야 한다)을 포함하는 경우에서도, "특정"이란 단어에 의한 청구항 구술의 도입이, 이와 같이 도입된 청구항 구술을 함유하는 임의의 특별한 청구항을 단지 하나의 상기 구술만을 함유하는 대안으로 제한하는 것을 암시하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 또한, 특정 번호의 도입된 청구항 구술이 명백하게 구술되는 경우일지라도, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 구술이 적어도 구술된 번호를 의미하는 것으로 해석되어야 한다는 것을 인식할 것이다 (예를 들어, 다른 수식어 없이 "2번의 구술"의 가장 기본적인 구술은 적어도 2번의 구술 또는 2번 이상의 구술을 의미한다). 더욱이, "A, B, 및 C 중 적어도 하나 등"과 유사한 전통적 표현이 사용되는 경우에는, 일반적으로 이러한 구성이, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 상기 전통적 표현을 이해하는 의미로 간주된다 (예를 들어, "A, B, 및 C 중 적어도 하나를 갖는 시스템"은 A 단독, B 단독, C 단독, A와 B를 함께, A와 C를 함께, B와 C를 함께, 및/또는 A, B 및 C를 함께 갖는 시스템을 포함하지만, 이에 제한되지 않을 것이다). "A, B, 또는 C 중 적어도 하나 등"과 유사한 전통적 표현이 사용되는 경우에는, 일반적으로 이러한 구성이, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 상기 전통적 표현을 이해하는 의미로 간주된다 (예를 들어, "A, B, 또는 C 중 적어도 하나를 갖는 시스템"은 A 단독, B 단독, C 단독, A와 B를 함께, A와 C를 함께, B와 C를 함께, 및/또는 A, B 및 C를 함께 갖는 시스템을 포함하지만, 이에 제한되지 않을 것이다). 명세서, 청구범위 또는 도면에서든지 간에, 2개 이상의 대체 용어를 제시하는 사실상 임의의 이접 단어 및/또는 문구는 그러한 용어 중 하나, 그러한 용어 중 어느 하나 또는 둘 다의 용어를 포함할 가능성을 고려하는 것으로 이해되어야 한다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 추가로 이해할 것이다. 예를 들어, 문구 "A 또는 B"는 "A" 또는 "B" 또는 "A와 B"의 가능성을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
더 많은 대안
일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 유동 세포계수법에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단을 분리, 강화 또는 단리하는 단계는 면역-자기 선별에 의해 수행된다. 일부 대안에서, 상기 유전적으로 변형된 CD8+ 발현성 T-세포 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포는 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 바람직한 대안에서, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체는 CD27, CD28 및/또는 CD62L이다. 일부 대안에서, 상기 단리되거나, 강화되거나 또는 분리된 T-세포 집단을 자극하는 단계는 CD8+ 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행된다. 이들 대안 중 일부에서, 항체-결합된 지지체는 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다. 바람직한 대안에서, 항체-결합된 지지체는 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함한다.
전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 벡터는 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커 서열을 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함한다. 이들 대안 중 일부에서, 벡터는 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는데, 일부 대안에서 스페이서는 IgG4 힌지를 포함할 수 있다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 벡터는 바이러스 벡터 또는 미니-원형이다.
전술된 대안 중 많은 것에서, 바이러스 벡터는 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 대안에서, 바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터이다. 바람직하게, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 마커 서열은 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 활용되는 적어도 하나의 시토카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-15, IL-2, 및/또는 IL-21을 포함하고, 상기 시토카인은, 예를 들어 T-세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공된다.
바람직한 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함한다. 바람직한 대안에서, 적어도 하나의 시토카인은 IL-21, 및 또 다른 시토카인을 포함하고/하거나 IL-7 및 적어도 하나의 다른 시토카인을 포함하고/하거나 IL-15 및 적어도 하나의 다른 시토카인을 포함하는데, 예컨대 IL-21 및 IL-15를 포함하거나, IL-21 및 IL-7을 포함하거나, 또는 IL-15 및 IL-7을 포함하거나, 또는 IL-2 및 IL-15를 포함하거나, 또는 IL-7 및 IL-15를 포함한다. 바람직한 대안에서, 접촉 기간은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 시점 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 상기 방법은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD8+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD8+ 발현성 T-세포를 갖는, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 이용하여 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, 이들 방법은 분리되지 않거나, 강화되지 않거나 또는 단리되지 않은 천연 T-세포 집단과 비교해서, CD4+ 발현성 T-세포의 부재 하에 또는 감소된 양의 CD4+ 발현성 T-세포를 갖는, 단리되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD8+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 이용하여 수행된다. 전술된 대안 중 많은 것에서, CD4+ 발현성 T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시킨다. 전술된 대안 중 많은 것에서, CD8+ 발현성 T-세포는 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 시점 중 임의의 2개로써 규정된 시간의 특정 범위 내에 있는 임의의 시간 동안 증식시킨다.
일부 대안에서, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체 (여기서, 이러한 전구체는 임의로 iPS 세포이다)로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리 또는 강화시켜, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계; 이러한 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 상기 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계; 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안, 외생적으로 제공된 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계를 포함하는데, 이로써 상기 방법은 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포를 수득한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 마커를 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 마커는 벡터에 의해 코딩되고, 임의로는 세포 표면 마커이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기와 같이 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을, 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시키는 단계를 추가로 포함한다.
일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T 세포의 생성 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 재조합 단백질을 코딩하는 벡터를, CD4+ 강화된 T 세포 조성물의 세포 내로 도입하는 단계; 및 CD4+ 강화된 T 세포 조성물의 세포를, IL-7 및 IL-15를 포함하는 시토카인의 조합물과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함하고/하거나 재조합 단백질을 코딩하는 벡터를, CD8+ 강화된 T 세포 조성물의 세포 내로 도입하는 단계; 및 CD8+ 강화된 T 세포 조성물의 세포를, IL-2 및 IL-15를 포함하는 시토카인의 조합물과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함하는데, 이로써 상기 방법은 형질도입되고 CD4+ 강화된 집단 및/또는 형질도입되고 CD8+ 강화된 집단을 생성시킨다. 일부 대안에서, 상기 형질도입되고 CD4+ 강화된 집단은, 형질도입된 CD4+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서 더 높은 수준의 CD62L, CD27, 및/또는 CD28의 표면 발현을 갖고/갖거나 형질도입된 CD4+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서, 대상체로의 투여시 생착 적합도 및/또는 확장, 및/또는 영속성의 증가된 지표를 갖는데, 여기서 참조 집단은 시토카인의 조합물 대신 IL-2 단독을 사용한다는 것을 제외하고는 상기 방법과 동일한 또 다른 방법에 의해 제조된 CD4+ 강화된 집단이다. 일부 대안에서, 상기 형질도입되고 CD8+ 강화된 집단은, 형질도입된 CD8+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서 더 높은 수준의 CD62L, CD27, 및/또는 CD28의 표면 발현을 갖고/갖거나 형질도입된 CD8+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서, 대상체로의 투여시 생착 적합도 및/또는 확장, 및/또는 영속성의 증가된 지표를 갖는데, 여기서 참조 집단은 시토카인의 조합물 대신 IL-2 단독을 사용한다는 것을 제외하고는 상기 방법과 동일한 또 다른 방법에 의해 제조된 CD8+ 강화된 세포의 집단이다.
일부 대안에서, 유전적으로 변형된 T 세포의 생성 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 재조합 단백질을 코딩하는 벡터를, CD4+ 강화된 T 세포 조성물의 세포 내로 도입하는 단계; 및 CD4+ 강화된 T 세포 조성물의 세포를 시토카인의 제1 조합물과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함하고, 재조합 단백질을 코딩하는 벡터를, CD8+ 강화된 T 세포 조성물의 세포 내로 도입하는 단계; 및 CD8+ 강화된 T 세포 조성물의 세포를, 상기 시토카인의 제1 조합물과는 별개인 시토카인의 제2 조합물과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함하는데, 이로써 상기 방법은 형질도입되고 CD4+ 강화된 집단 및 형질도입되고 CD8+ 강화된 집단을 생성시킨다. 일부 대안에서, 상기 형질도입되고 CD4+ 강화된 집단은, 시토카인의 제1 조합물과 제2 조합물이 동일한 것을 제외하고는 상기 방법과 동일한 또 다른 방법에 의해 제조된, 형질도입된 CD4+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서 더 높은 수준의 CD62L, CD27, 및/또는 CD28의 표면 발현을 갖고/갖거나 형질도입된 CD4+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서, 대상체로의 투여시 생착 적합도 및/또는 확장, 및/또는 영속성의 증가된 지표를 갖는다. 일부 대안에서, 상기 형질도입되고 CD8+ 강화된 집단은, 시토카인의 제1 조합물과 제2 조합물이 동일한 것을 제외하고는 상기 방법과 동일한 또 다른 방법에 의해 제조된, 형질도입된 CD8+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서 더 높은 수준의 CD62L, CD27, 및/또는 CD28의 표면 발현을 갖고/갖거나 형질도입된 CD8+ 세포의 강화된 참조 집단과 비교해서, 대상체로의 투여시 생착 적합도 및/또는 확장, 및/또는 영속성의 증가된 지표를 갖는다. 일부 대안에서, 제1 조합물은 IL-7 및 IL-15를 포함하고, 제2 조합물은 IL-2 및 IL-15를 포함한다. 일부 대안에서, 시토카인 조합물(들)은 형질도입 개시에 이어서 부가하고, 임의로는 형질도입 개시와 같은 날에 부가한다. 일부 대안에서, IL-2의 농도는 적용 가능한 경우, 50 U/mL 또는 약 50 U/mL이고/이거나, IL-15의 농도는 적용 가능한 경우, 0.5 ng/mL 또는 약 0.5 ng/mL이고/이거나 IL-7의 농도는 적용 가능한 경우, 5 ng/mL 또는 약 5 ng/mL이다. 일부 대안에서, 시토카인의 조합물을 CD4+ 강화된 및/또는 CD8+ 강화된 조성물에 부가하는 것은 세포를 인큐베이션하는 조성물의 용적을 증가시킴으로써, 세포 밀도를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도의 지표는 조성물 중의 세포의 비율 (%) 또는 CD62L, CD27, 및/또는 CD28로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 표면 마커의 집단에 대한 총 표면 발현 수준을 포함한다. 일부 대안에서, 생착 적합도의 지표는 투여시 대상체에서의 영속성을 포함한다. 일부 대안에서, 상기 세포는 대상체로부터 유래된다. 일부 대안에서, 형질도입된 CD8+ 및/또는 CD4+ 세포는 대상체 (이로부터 상기 세포가 유래된다)로의 투여시, 이러한 세포가 상기 대상체 내로 주사된 후 적어도 30일 또는 60일 동안 또는 약 30일 또는 60일 동안 영속된다. 일부 대안에서, 재조합 단백질은 키메라 항원 수용체이다. 일부 대안에서, 상기 방법은 형질도입 이전에, T 세포 조성물에 CD4를 발현하는 세포를 강화시킴으로써, 형질도입되고 CD4+ 강화된 T 세포 조성물을 생성시키는 단계 및/또는 형질도입 이전에, T 세포 조성물에 CD8을 발현하는 세포를 강화시킴으로써, 형질도입되고 CD8+ 강화된 T 세포 조성물을 생성시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 상기와 같이 조작된 세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 대안에서, 상기 방법은 조작된 세포를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 임의로는 이러한 투여 이전에, 상기 형질도입되고 CD4+ 강화된 조성물 및 형질도입되고 CD8+ 강화된 조성물을 풀링하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 대안에서, 특정 세포 또는 조성물이 더 많은 대안의 본 섹션의 앞서의 단락에 열거된 방법의 대안 중 임의의 것에 의해 생성된다. 일부 대안에서, 앞서의 단락에 열거된 조성물의 대안 또는 방법의 대안 중 임의의 것에 의해 생성된 세포를 투여하는 방법이 고려된다. 일부 대안에서, 상기 세포 또는 조성물이 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 이러한 투여는 상기 세포가 유래된 대상체에 대해서이다.
일부 대안에서, 입양 세포 요법의 방법이 제공되는데, 이러한 방법은 (a) CD4+ 강화된 T 세포 조성물을 자극 조건하에 및 IL-15 및 IL-7의 존재하에 인큐베이션함으로써, 확장된 CD4+ 조성물을 생성시키는 단계, (b) CD8+ 강화된 T 세포 조성물을 자극 조건하에 및 IL-15 및 IL-12의 존재하에 별도로 인큐베이션함으로써, 확장된 CD8+ 조성물을 생성시키는 단계, 및 (c) 확장된 CD4+ 집단과 확장된 CD8+ 집단을 대상체에게 임의로 동시에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 대안에서, CD4+ 및 CD8+ 집단은 상기 대상체로부터 수득한다. 일부 대안에서, 상기 구술된 시토카인 중 하나 이상 또는 시토카인의 조합물은 CD21을 추가로 포함한다. 일부 대안에서, CD4+ 강화된 집단 또는 이 안에 있는 T 세포의 총수는 적어도 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99% CD4+ 세포를 포함하고/하거나 CD8+ 강화된 집단 또는 이 안에 있는 T 세포의 총수는 적어도 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99% CD8+ 세포를 포함한다.
또한, 본 개시내용의 특징 또는 측면이 마쿠쉬(Markush) 군에 관해서 기재되는 경우, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용이 이로써 또한, 마쿠쉬 군의 임의의 개별 구성원 또는 이러한 군의 구성원의 하위군에 관해서 기재된다는 것을 인식할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Seattle Children's Hospital dba Seattle Children's Research Institute Jensen, Michael C. <120> DEFINED COMPOSITION GENE MODIFIED T-CELL PRODUCTS <130> SCRI.090WO <150> 62/088363 <151> 2014-12-05 <160> 7 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified IgG4 hinge region <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified IgG4 hinge region <400> 2 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified IgG4 hinge region <400> 3 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified IgG4 hinge region <400> 4 Glu Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 5 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD28 transmembrane domain <400> 5 Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser 1 5 10 15 Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 6 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4-1BB domain <400> 6 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 7 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3-zeta domain <400> 7 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110

Claims (73)

  1. 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ 발현성 T-세포 집단 및/또는 CD4+ 발현성 T-세포 집단, 예컨대 흉선 세포로부터 유래되는 T-세포 또는 조작된 전구체, 바람직하게 iPS 세포로부터 유래되는 T-세포의 집단을 분리 또는 강화시켜, 분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 생성하는 단계;
    분리되거나 또는 강화된 T-세포 집단을 자극하여, 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
    상기 자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 키메라 항원 수용체, 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 마커 서열을 코딩하는 벡터로 형질도입하여, 형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
    형질도입된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안, 예를 들어 상기 세포에 의해 생성될 수 있거나 또는 배지에 존재하는 임의의 시토카인 이외에도, T-세포에 외생적으로 제공될 수 있는 적어도 하나의 시토카인과 접촉시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 생성하는 단계;
    형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을, 상기 마커 서열을 선택함으로써 강화시켜, 형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 생성하는 단계; 및
    형질도입되고 시토카인-자극된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포의 강화된 집단을 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식시켜, 키메라 항원 수용체를 갖는 유전적으로 변형된 T-세포를 수득하는 단계
    를 포함하는, 키메라 항원 수용체를 갖는 상기 유전적으로 변형된 T-세포의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가, CD8 및/또는 CD4 상에 존재하는 에피토프를 갖는 T-세포에 관하여 친화성 선별함으로써 수행되는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가 유동 세포계수법에 의해 수행되는 것인 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 혼합 T-세포 집단으로부터 CD8+ T-세포 집단 및/또는 CD4+ T-세포 집단을 분리 또는 강화시키는 단계가 면역-자기 선별에 의해 수행되는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 유전적으로 변형된 CD8+ T-세포 및/또는 CD4+ T-세포가, 생착 적합도를 증진시키거나, 유도시키거나, 이에 기여하거나 또는 이를 증강시키는 적어도 하나의 수용체를 포함하는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 적어도 하나의 수용체가 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L인 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 적어도 하나의 수용체가 CD27, CD28 및/또는 CD62L인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 T-세포 집단을 자극하는 단계가, CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자와 접촉시킴으로써 수행되는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 항체-결합된 지지체가 항-TCR, 항-CD2, 항-CD3, 항-CD4 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는 것인 방법.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 항체-결합된 지지체가 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함하는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 스페이서가 IgG4 힌지를 포함하는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 바이러스 벡터인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 바이러스 벡터가 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래되는 것인 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 바이러스 벡터가 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터인 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 벡터가 렌티바이러스 벡터인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 마커 서열이 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩하는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 시토카인이 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2 및/또는 IL-21을 포함하는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 시토카인이 IL-7, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하며, 이는 0.1 ng/mL, 0.2 ng/mL, 0.3 ng/mL, 0.4 ng/mL, 0.5 ng/mL, 0.6 ng/mL, 0.7 ng/mL, 0.8 ng/mL, 0.9 ng/mL, 또는 1.0 ng/mL로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있고/있거나 10 U/mL, 20 U/mL, 30 U/mL, 40 U/mL, 50 U/mL, 60 U/mL, 70 U/mL, 80 U/mL, 90 U/mL, 또는 100 U/mL으로 제공되거나 또는 전술된 양 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 특정 양으로 제공될 수 있는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 시토카인이 IL-2, IL-15 및/또는 IL-21을 포함하며, 여기서 시토카인의 양이 0.5 ng/mL 및/또는 50 U/mL으로 제공되는 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 접촉 단계가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 이들 값 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내의 기간 동안 수행되는 것인 방법.
  23. 제1항 내지 제20항 또는 제22항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ 세포 부재하의, 또는 CD8+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD4+ 세포를 이용하여 수행되는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제19항, 제21항 또는 제22항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ 세포 부재하의, 또는 CD4+ 세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ 세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 강화되거나 또는 분리된 CD8+ 세포를 이용하여 수행되는 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제20항, 제22항 또는 제23항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ 발현성 T-세포가 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식되는 것인 방법.
  26. 제1항 내지 제19항, 제21항, 제22항 또는 제24항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ T-세포가 적어도 1일, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 동안, 또는 전술된 기간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간 동안 증식되는 것인 방법.
  27. 제8항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-결합된 지지체, 예컨대 비드 또는 입자를 제거하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체의 리간드 결합성 도메인이 CD19에 대해 특이적인 것인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 유전적으로 변형된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 동결보존하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  33. CD8- 및/또는 CD4- T-세포 부재하의, 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8- 및/또는 CD4- T-세포에 비해 강화된, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포를 포함하며, 여기서 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 자극된 CD2, CD3, CD4 및/또는 CD28 수용체를 가지며, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 키메라 항원 수용체 및 세포 표면 선별성 마커를 코딩하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포는 적어도 하나의 시토카인으로 재자극된 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  34. 제33항에 있어서, 상기 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포가, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체를 추가로 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체가 CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 생착 적합도를 증진시키거나, 증강시키거나, 개선시키거나 또는 이에 기여하는 적어도 하나의 수용체가 CD27, CD28 및/또는 CD62L인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 복수 개의 친화성 선별된 CD8+ 및/또는 CD4+ T-세포가, 리더 서열을 코딩하는 제1 서열, 리간드 결합성 도메인을 코딩하는 제2 서열, 시그널링 도메인을 코딩하는 제3 서열 및 선별성 마커를 코딩하는 제4 서열을 갖는 벡터를 추가로 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  38. 제37항에 있어서, 벡터가 스페이서를 코딩하는 서열을 추가로 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  39. 제38항에 있어서, 스페이서가 IgG4 힌지를 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  40. 제33항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 바이러스 벡터인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  41. 제40항에 있어서, 바이러스 벡터가 원숭이 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 렌티바이러스, 또는 레트로바이러스로부터 유래되는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 바이러스 벡터가 재조합 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 벡터가 렌티바이러스 벡터인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  44. 제33항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 표면 선별성 마커가 말단절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)를 코딩하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  45. 제37항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드 결합성 도메인이 항체, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  46. 제37항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드 결합성 도메인이 단일 쇄 가변 단편 (scFv), 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  47. 제37항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드 결합성 도메인이 FMC63, 또는 그의 결합성 부분을 포함하는 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  48. 제37항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드 결합성 도메인이 CD19에 대해 특이적인 것인, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  49. 제33항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ T-세포 부재하의, 또는 CD4+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD4+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD8+ T-세포를 포함하는, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  50. 제33항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ T-세포 부재하의, 또는 CD8+ T-세포가 실질적으로 고갈되거나 또는 CD8+ T-세포에 비해 강화된, 단리되거나, 정제되거나, 분리되거나 또는 강화된 CD4+ T-세포를 포함하는, 유전적으로 변형된 T-세포의 집단.
  51. 제약 부형제; 및
    제33항 내지 제50항 중 어느 한 항에 따르는 유전적으로 변형된 T-세포의 적어도 하나의 집단
    을 포함하는, 인간 요법을 위한 조성물 또는 생성물 조합물.
  52. 제51항에 있어서, 제49항의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는 조성물 또는 생성물 조합물.
  53. 제47항에 있어서, 제50항의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는 조성물 또는 생성물 조합물.
  54. 제47항에 있어서, 1:1 비로 혼합되거나 또는 공동-투여된, 제49항의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단과 제50항의 유전적으로 변형된 T-세포의 집단을 포함하는 조성물 또는 생성물 조합물.
  55. 특정 질환의 치료, 억제 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하는 단계
    를 포함하는, 상기 대상체에게서 질환을 치료, 억제 또는 완화시키는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 제52항의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  57. 제55항에 있어서, 제53항의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  58. 제56항에 있어서, 제53항의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  59. 제57항에 있어서, 제52항의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  60. 제55항에 있어서, 제54항의 조성물 또는 생성물 조합물을, 예컨대 CD8+ 발현성 T-세포를 CD4+ 발현성 T-세포의 투여에 앞서, 예컨대 CD4+ T-세포를 투여하기 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60분 전에 또는 전술된 시간 중 임의의 2개로써 규정된 범위 내에 있는 기간에 투여하는 접근 방식에 의해 투여하는 것을 포함하는 방법.
  61. 제55항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 항암 요법을 받는 것으로 확인되거나 또는 선택되는 것인 방법.
  62. 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 특정 질환의 억제를 측정 또는 평가하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  63. 제55항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항의 조성물 또는 생성물 조합물을 투여하기 전, 투여하는 동안, 또는 투여 후에 부가의 항암 요법을 상기 대상체에게 제공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  64. 제55항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항의 조성물 또는 생성물 조합물이 상기 대상체에게 입양 세포 전이에 의해 투여되는 것인 방법.
  65. 제55항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항의 조성물 또는 생성물 조합물이, 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  66. 제55항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항의 조성물 또는 생성물 조합물이, 상기 대상체에게 또 다른 형태의 항암 요법을 투여한 후에 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  67. 제55항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 백혈병으로 인해 고통받고 있는 것인 방법.
  68. 제55항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 소아기 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있는 것인 방법.
  69. 제55항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 재발성 및/또는 화학요법 불응성 CD19+ 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)이 있는 것인 방법.
  70. 제55항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 자가면역 질환으로 인해 고통받고 있는 것인 방법.
  71. 제55항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 HSCT 후 재발로 인해 고통받고 있는 것인 방법.
  72. 제1항에 있어서, T 세포가 전구체 T 세포인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 전구체 T 세포가 조혈 줄기 세포 (HSC)인 방법.
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Families Citing this family (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100548667C (zh) * 2003-01-20 2009-10-14 日本瑞翁株式会社 层合件及其制造方法
ES2861501T3 (es) * 2013-11-21 2021-10-06 Autolus Ltd Célula
CA2945308C (en) 2014-04-10 2023-10-31 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Transgene genetic tags and methods of use
MA51794A (fr) 2014-04-23 2020-05-06 Juno Therapeutics Inc Procédés d'isolation, de culture et de modification génétique de populations de cellules immunitaires pour thérapie adoptive
GB2540694A (en) 2014-04-29 2017-01-25 Seattle Children's Hospital (Dba Seattle Children's Res Institute) CCR5 disruption of cells expressing anti-hiv chimeric antigen receptor (CAR) derived from broadly neutralizing antibodies
SG10202104804PA (en) 2014-10-20 2021-06-29 Juno Therapeutics Inc Methods and compositions for dosing in adoptive cell therapy
KR101697473B1 (ko) 2014-11-26 2017-01-18 주식회사 녹십자랩셀 T 세포를 이용한 자연살해세포의 배양방법
ES2819553T3 (es) 2014-12-03 2021-04-16 Juno Therapeutics Inc Métodos y composiciones para terapia celular adoptiva
EP3872094A3 (en) 2014-12-05 2021-12-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use
MA41346A (fr) 2015-01-12 2017-11-21 Juno Therapeutics Inc Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée
TWI718118B (zh) 2015-01-16 2021-02-11 美商奇諾治療有限公司 針對ｒｏｒ１之特異性抗體及嵌合抗原受體
EP3804741A3 (en) * 2015-02-24 2021-07-14 Board of Regents, The University of Texas System Selection methods for genetically-modified t cells
ES2923895T3 (es) 2015-02-27 2022-10-03 Icell Gene Therapeutics Llc Receptores de antígeno quimérico (CARS) dirigidos a neoplasisas malignas hematológicas, composiciones y métodos de uso de los mismos
US11173179B2 (en) 2015-06-25 2021-11-16 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptor (CAR) targeting multiple antigens, compositions and methods of use thereof
CA2990177A1 (en) 2015-06-25 2016-12-29 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof
WO2017027291A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Bispecific car t-cells for solid tumor targeting
WO2017050884A1 (en) * 2015-09-22 2017-03-30 Julius-Maximilians-Universität Würzburg A method for high level and stable gene transfer in lymphocytes
RU2759879C2 (ru) 2015-10-06 2021-11-18 Сити Оф Хоуп Химерные рецепторы антигена, нацеленные на psca
WO2017070709A1 (en) * 2015-10-23 2017-04-27 The Regents Of The University Of Colorado A Body Corporate Prognosis and treatment of squamous cell carcinomas
KR20180069067A (ko) 2015-10-30 2018-06-22 엔비이-테라퓨틱스 아게 안티-ror1 항체
WO2017079703A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 Juno Therapeutics, Inc. Vectors and genetically engineered immune cells expressing metabolic pathway modulators and uses in adoptive cell therapy
NZ742068A (en) * 2015-12-14 2023-07-28 Genomefrontier Therapeutics Inc Transposon system, kit comprising the same, and uses thereof
US20180371052A1 (en) * 2015-12-22 2018-12-27 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors and enhancement of anti-tumor activity
UA125718C2 (uk) 2016-01-20 2022-05-25 Зе Скріппс Ресеарч Інстітьют Композиції антитіл до ror1 і пов'язані з ними способи
EP3202783A1 (en) * 2016-02-02 2017-08-09 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (EPFL) Engineered antigen presenting cells and uses thereof
EP3430549A1 (en) 2016-03-16 2019-01-23 Juno Therapeutics, Inc. Methods for adaptive design of a treatment regimen and related treatments
US20220025001A1 (en) * 2016-04-28 2022-01-27 The Trustees Of Dartmouth College Nucleic acid constructs for co-expression of chimeric antigen receptor and transcription factor, cells containing and therapeutic use thereof
US20190307797A1 (en) * 2016-06-07 2019-10-10 Maax-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in der Helmholtz-Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma
CA3025667A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Intrexon Corporation Cd33 specific chimeric antigen receptors
CA3029197A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof
US20190119636A1 (en) * 2017-10-23 2019-04-25 Poseida Therapeutics, Inc. Modified stem cell memory t cells, methods of making and methods of using same
WO2018071873A2 (en) 2016-10-13 2018-04-19 Juno Therapeutics, Inc. Immunotherapy methods and compositions involving tryptophan metabolic pathway modulators
US11739129B2 (en) * 2016-10-21 2023-08-29 Washington University AP4 and methods of promoting T cell activation
KR20190090390A (ko) * 2016-11-30 2019-08-01 인트렉손 코포레이션 스테로이드 투여 및 면역요법
EP3548046A2 (en) 2016-12-03 2019-10-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for use of therapeutic t cells in combination with kinase inhibitors
AU2017375630B2 (en) * 2016-12-12 2023-12-21 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Chimeric transcription factor variants with augmented sensitivity to drug ligand induction of transgene expression in mammalian cells
CN106800601B (zh) * 2017-01-19 2021-04-06 广东昭泰体内生物医药科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
CN110418802A (zh) 2017-01-20 2019-11-05 朱诺治疗学有限公司 细胞表面缀合物及相关的细胞组合物和方法
US20200191774A1 (en) 2017-02-27 2020-06-18 Juno Therapeutics, Inc. Compositions, articles of manufacture and methods related to dosing in cell therapy
JP7178355B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-25 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞療法のための組成物および方法
AU2018234640B2 (en) 2017-03-14 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Methods for cryogenic storage
CN106963945A (zh) * 2017-03-27 2017-07-21 山东兴瑞生物科技有限公司 一种加强型人乳头瘤病毒hpv‑16/18的二价dc疫苗
WO2018191490A1 (en) * 2017-04-13 2018-10-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of gene editing to generate universal tcr re-directed t cells for adoptive immunotherapy
JOP20180040A1 (ar) 2017-04-20 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبطات pd-1/pd-l1
CN108728477B (zh) * 2017-04-24 2022-02-22 华东理工大学 一种高效的转座突变系统及构建方法
CN118147137A (zh) * 2017-05-17 2024-06-07 西雅图儿童医院（Dba西雅图儿童研究所） 生成哺乳动物t细胞活化诱导型合成启动子(syn+pro)以改善t细胞疗法
CA3064000A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Effector Therapeutics, Inc. Methods and compositions for cellular immunotherapy
CN110662834B (zh) * 2017-05-26 2023-09-12 Gc细胞治疗 使用转化的t细胞培养自然杀伤细胞的方法
CN111225675B (zh) 2017-06-02 2024-05-03 朱诺治疗学股份有限公司 使用过继细胞疗法治疗的制品和方法
CN107335054B (zh) * 2017-06-30 2021-01-15 山东兴瑞生物科技有限公司 一种慢性乙肝治疗性dc疫苗
EP3665193A1 (en) 2017-08-07 2020-06-17 NBE Therapeutics AG Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability
CA3072569A1 (en) * 2017-08-11 2019-02-14 Tribiotica Llc Methods for generating epitopes for binding to recognition molecules by templated assembly
SG11202001011XA (en) * 2017-08-23 2020-03-30 Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind cxcr5
CN111433354A (zh) * 2017-09-26 2020-07-17 朗沃德大学 作为免疫疗法的pd1特异性嵌合抗原受体
CN111511391A (zh) 2017-10-18 2020-08-07 英特拉克森公司 包含间隔区的多肽组合物
CN107759700A (zh) * 2017-10-18 2018-03-06 银丰生物工程集团有限公司 靶向cd19抗原的转基因t细胞及其制备方法与应用
US10329543B2 (en) 2017-10-23 2019-06-25 Poseida Therapeutics, Inc. Modified stem cell memory T cells, methods of making and methods of using same
BR112020008323A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-03 Juno Therapeutics Inc anticorpos e receptores de antígenos quiméricos específicos para antígeno de maturação de células b
US11851679B2 (en) 2017-11-01 2023-12-26 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
BR112020008340A2 (pt) * 2017-11-01 2020-11-17 Juno Therapeutics Inc processo para gerar composições terapêuticas de células modificadas
US11802163B2 (en) 2017-11-10 2023-10-31 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting glypican-3 or mesothelin
CN111655270A (zh) * 2017-11-14 2020-09-11 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 分泌il-36的免疫应答细胞及其用途
JP7037667B2 (ja) 2017-12-20 2022-03-16 インスティチュート オブ オーガニック ケミストリー アンド バイオケミストリー エーエスシーアール，ヴイ．ヴイ．アイ． Ｓｔｉｎｇアダプタータンパク質を活性化するホスホン酸結合を有する３’３’環状ジヌクレオチド
US11203610B2 (en) 2017-12-20 2021-12-21 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2′3′ cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
US10561686B2 (en) 2018-01-12 2020-02-18 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
CN110028588A (zh) * 2018-01-11 2019-07-19 上海细胞治疗研究院 抗原-Fc融合蛋白及其检测阳性CAR-T细胞的应用
JP2021512147A (ja) 2018-01-22 2021-05-13 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． Ｃａｒ ｔ細胞の使用方法
CN108103027B (zh) * 2018-02-02 2021-12-24 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 高效率血细胞重编程同时实现基因编辑的方法
CR20200347A (es) 2018-02-13 2020-09-23 Gilead Sciences Inc Inhibidores pd-1/pd-l1
CN108383914A (zh) * 2018-02-23 2018-08-10 北京美康基免生物科技有限公司 一种基于cd19的嵌合抗原受体及其应用
CN111936617A (zh) * 2018-03-16 2020-11-13 益缪索夫特公司 经遗传工程化以分泌卵泡抑素的b细胞以及使用所述b细胞来治疗卵泡抑素相关的疾病、病况、病症及增强肌肉生长和力量的方法
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
TWI833744B (zh) 2018-04-06 2024-03-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 3'3'-環二核苷酸
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
US10869888B2 (en) 2018-04-17 2020-12-22 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
CN112041311B (zh) 2018-04-19 2023-10-03 吉利德科学公司 Pd-1/pd-l1抑制剂
WO2019211799A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide
CN112118845B (zh) 2018-05-14 2023-06-13 吉利德科学公司 Mcl-1抑制剂
CA3100446A1 (en) * 2018-05-15 2019-11-21 Carsgen Therapeutics Co., Ltd. Genetically engineered cell and application thereof
EP3841124A4 (en) 2018-06-29 2022-03-23 ApitBio, Inc. ANTI-L1CAM ANTIBODIES AND THEIR USES
KR20230159715A (ko) 2018-07-13 2023-11-21 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
CN110845621A (zh) * 2018-08-21 2020-02-28 上海恒润达生生物科技有限公司 一种靶向egfr和cd19双靶点的嵌合抗原受体方法
US20220348682A1 (en) 2018-08-30 2022-11-03 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Chimeric antigen receptor cells for treating solid tumor
US20210324083A1 (en) * 2018-08-31 2021-10-21 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Methods and compositions comprising b7h3 chimeric antigen receptors
US11179397B2 (en) 2018-10-03 2021-11-23 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyrimidine derivatives
AU2019366355B2 (en) 2018-10-24 2022-10-13 Gilead Sciences, Inc. PD-1/PD-L1 inhibitors
US11071730B2 (en) 2018-10-31 2021-07-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
LT3873903T (lt) 2018-10-31 2024-05-10 Gilead Sciences, Inc. Pakeistieji 6-azabenzimidazolo junginiai, kaip hpk1 inhibitoriai
AU2019372673A1 (en) 2018-11-01 2021-05-27 Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. Compositions and methods for T cell engineering
BR112021009420A2 (pt) * 2018-11-16 2021-11-23 Juno Therapeutics Inc Métodos de dosagem de células t manipuladas para o tratamento de malignidades de células b
US10918667B2 (en) 2018-11-20 2021-02-16 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expressing therapeutic agent and uses thereof
MX2021006244A (es) * 2018-11-30 2021-09-10 Juno Therapeutics Inc Metodos de dosificacion y tratamiento de canceres de celulas b en terapia celular adoptiva.
KR20210111244A (ko) * 2018-11-30 2021-09-10 셀룰래리티 인코포레이티드 태반-유래 동종이계 car-t 세포 및 이의 용도
KR20210117260A (ko) * 2018-11-30 2021-09-28 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 요법을 사용한 치료방법
US11766447B2 (en) 2019-03-07 2023-09-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3′3′-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
WO2020178769A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
AU2020231115A1 (en) 2019-03-07 2021-08-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
WO2020191172A1 (en) * 2019-03-19 2020-09-24 Immatics US, Inc. Cd28 t cell cultures, compositions, and methods of using thereof
US20200308248A1 (en) * 2019-03-26 2020-10-01 ST Phi Therapeutics Chimeric Natural Killer Cell Receptors and Method of Using Thereof
EP3953383A4 (en) * 2019-04-08 2023-01-18 Russell Biotech, Inc. IMPROVED MANUFACTURING PROCESSES FOR CELL-BASED THERAPY
CN110010222A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 长沙三济生物科技有限公司 一种基于精准用药知识库的基因身份识别系统
CN109979545A (zh) * 2019-04-16 2019-07-05 北京中佰耀因医药科技有限公司 一种含样本状态信息管理模块的精准用药智能报告系统
CN109994180A (zh) * 2019-04-16 2019-07-09 北京中佰耀因医药科技有限公司 一种含基因位点信息管理模块的精准用药智能报告系统
CN109994176A (zh) * 2019-04-16 2019-07-09 北京中佰耀因医药科技有限公司 一种含样本类型信息管理模块的精准用药智能报告系统
CN110010200A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 长沙三济生物科技有限公司 一种基因身份识别系统
CN109994156A (zh) * 2019-04-16 2019-07-09 北京中佰耀因医药科技有限公司 一种含报告模板信息管理模块的精准用药智能报告系统
CN109872792A (zh) * 2019-04-16 2019-06-11 北京中佰耀因医药科技有限公司 一种用于指导精准用药的基因检测智能报告系统
TWI751516B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TWI751517B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3972695A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Gilead Sciences, Inc. Substituted exo-methylene-oxindoles which are hpk1/map4k1 inhibitors
WO2020254591A1 (en) * 2019-06-19 2020-12-24 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Ultramodular igg3-based spacer domain and multi-function site for implementation in chimeric antigen receptor design
CR20210687A (es) 2019-06-25 2022-03-03 Gilead Sciences Inc PROTEÍNAS DE FUSIÓN FLT3L-Fc Y MÉTODOS DE USO
CN110608991B (zh) * 2019-09-09 2022-04-29 浙江普罗亭健康科技有限公司 基于质谱流式检测技术的细胞周期检测试剂盒及检测方法
TW202124450A (zh) 2019-10-18 2021-07-01 美商四十七股份有限公司 用於治療骨髓發育不良症候群及急性骨髓白血病之組合療法
JP2022552748A (ja) 2019-10-31 2022-12-19 フォーティ セブン， インコーポレイテッド 抗ｃｄ４７及び抗ｃｄ２０による血液癌の治療
TWI778443B (zh) 2019-11-12 2022-09-21 美商基利科學股份有限公司 Mcl1抑制劑
WO2021130638A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 Carna Biosciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
WO2021163064A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
CN111533808B (zh) * 2020-03-10 2021-02-09 南京医科大学 一种可自分泌TLR4 scFv且靶向cMet的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用
KR20230006891A (ko) 2020-05-01 2023-01-11 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Cd73를 억제하는 2,4-다이옥소피리미딘 화합물
CN115701999A (zh) * 2020-07-09 2023-02-14 南京传奇生物科技有限公司 用白介素-36工程化γδT细胞用于免疫疗法
CA3188656A1 (en) 2020-07-17 2022-01-20 Simurx, Inc. Chimeric myd88 receptors for redirecting immunosuppressive signaling and related compositions and methods
AR124414A1 (es) 2020-12-18 2023-03-22 Century Therapeutics Inc Sistema de receptor de antígeno quimérico con especificidad de receptor adaptable
US20240076351A1 (en) * 2021-01-15 2024-03-07 Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute Hybrid and truncated immune cell proteins
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
US20220389394A1 (en) 2021-05-18 2022-12-08 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF USING FLT3L-Fc FUSION PROTEINS
KR20240005901A (ko) 2021-06-23 2024-01-12 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
CA3222277A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
EP4359389A1 (en) 2021-06-23 2024-05-01 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222439A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CN118056012A (zh) * 2021-08-24 2024-05-17 赛斯尔擎生物技术（上海）有限公司 一种修饰细胞的方法
CA3234909A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
WO2023077030A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
US20240124412A1 (en) 2021-12-22 2024-04-18 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
WO2023173137A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 Yale University Compositions and methods for efficient and stable genetic modification of eukaryotic cells
US20230373950A1 (en) 2022-03-17 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023183817A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
WO2023187031A1 (en) * 2022-04-01 2023-10-05 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG A system for drug-inducible expression of a polynucleotide
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
US20230374036A1 (en) 2022-04-21 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Kras g12d modulating compounds
US20230348561A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Immatics US, Inc. Dominant negative tgfbeta receptor polypeptides, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof
US20240066127A1 (en) 2022-04-28 2024-02-29 Immatics US, Inc. Il-12 polypeptides, il-15 polypeptides, il-18 polypeptides, cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof
WO2023212697A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Immatics US, Inc. Membrane-bound il-15, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof
CN114990069B (zh) * 2022-05-17 2023-09-22 郑州大学第一附属医院 一种过表达slc43a2的嵌合抗原受体t细胞的制备方法和应用
WO2023227900A1 (en) * 2022-05-27 2023-11-30 Autolus Limited Method
TW202413647A (zh) * 2022-06-10 2024-04-01 俄羅斯聯邦商拜奧卡德聯合股份公司 具有啟動子活性之核酸及其用途
WO2024006702A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Foundation Medicine, Inc. Methods and systems for predicting genotypic calls from whole-slide images
WO2024006929A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024064668A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPα DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
CN116179495A (zh) * 2022-11-28 2023-05-30 上海恩凯细胞技术有限公司 转基因免疫细胞及其应用
WO2024137852A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
CN116844685B (zh) * 2023-07-03 2024-04-12 广州默锐医药科技有限公司 一种免疫治疗效果评估方法、装置、电子设备及存储介质

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120301447A1 (en) * 2009-11-03 2012-11-29 Jensen Michael C TRUNCATED EPIDERIMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR (EGFRt) FOR TRANSDUCED T CELL SELECTION

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU650085B2 (en) 1990-11-13 1994-06-09 Immunex Corporation Bifunctional selectable fusion genes
US20020111474A1 (en) 1990-12-14 2002-08-15 Capon Daniel J. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
EP0650367A4 (en) 1992-06-01 1998-04-15 New England Medical Center Inc BLOCKING OF INTERCELLULAR INTERACTIONS WITH CD43 CHEMICAL MOLECULES.
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
US6133027A (en) * 1996-08-07 2000-10-17 City Of Hope Inducible expression system
US6660257B1 (en) 1996-10-25 2003-12-09 Pharmacia Corporation Circular permuteins of flt3 ligand
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
US6912492B1 (en) * 1999-05-25 2005-06-28 University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey Methods for diagnosing, preventing, and treating developmental disorders due to a combination of genetic and environmental factors
JP4045713B2 (ja) 2000-01-31 2008-02-13 松下電器産業株式会社 自動機用溶接機
GB0015119D0 (en) * 2000-06-20 2000-08-09 Angeletti P Ist Richerche Bio Methods and means for regulation of gene expression
WO2002002783A2 (en) 2000-07-03 2002-01-10 Gala Design, Inc. Expression vectors
GB0025307D0 (en) * 2000-10-16 2000-11-29 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CA2425862C (en) 2000-11-07 2013-01-22 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
CN1330664C (zh) 2001-03-07 2007-08-08 默克专利有限公司 用于含杂合同种型抗体部分的蛋白质的表达技术
US7070995B2 (en) * 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
WO2002097099A1 (en) * 2001-05-29 2002-12-05 Valentis, Inc. Regulated expression of ghrh
WO2003025228A1 (en) * 2001-09-18 2003-03-27 Proteologics, Inc. Methods and compositions for treating hcap associated diseases
US20030148982A1 (en) * 2001-11-13 2003-08-07 Brenner Malcolm K. Bi-spcific chimeric T cells
WO2003087338A2 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Amgen, Inc. Her-2 receptor tyrosine kinase molecules and uses thereof
AU2003283995A1 (en) 2002-09-30 2004-04-19 Protein Design Labs, Inc. Efficient generation of stable expression cell lines through the use of scorable homeostatic reporter genes
CA2516455C (en) * 2003-02-20 2012-05-01 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
WO2004092338A2 (en) 2003-04-11 2004-10-28 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to cancer specific genes and proteins
ZA200509363B (en) * 2003-04-18 2007-04-25 Norwood Immunology Ltd Tolerance to graft prior to thymic regeneration
US20070166318A1 (en) 2003-05-30 2007-07-19 Macina Roberto A Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific nucleic acids and proteins
CN101173282B (zh) * 2003-07-21 2011-04-06 P.安杰莱蒂分子生物学研究所 编码人表皮生长因子2/neu抗原的合成基因及其用途
US20070087346A1 (en) 2003-10-24 2007-04-19 Gennaro Ciliberto Orthogonal gene switches
WO2005062881A2 (en) 2003-12-24 2005-07-14 Transgenrx, Inc. Gene therapy using transposon-based vectors
US20090098142A1 (en) 2004-06-09 2009-04-16 Kasaian Marion T Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
US7910101B2 (en) * 2004-10-25 2011-03-22 Centocor, Inc. Melanocortin receptor binding mimetibodies, compositions, methods and uses
DE202005002921U1 (de) 2005-02-23 2005-04-21 Magcode Ag Verbindungssystem, insbesondere elektrisches Verbindungssystem
CN101212977A (zh) * 2005-06-01 2008-07-02 国际创新生物技术研究所有限公司 葡萄糖可诱导的胰岛素表达和治疗糖尿病的方法
AU2007254508B2 (en) 2006-05-22 2012-03-22 Hiprocell, Llc Protein production using eukaryotic cell lines
WO2008012237A1 (en) * 2006-07-24 2008-01-31 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Multi-antigen construct and uses thereof
US7709253B2 (en) * 2006-08-04 2010-05-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ligand-regulable transactivation systems, methods of use thereof, methods of detecting estrogen receptor ligands, and methods of differentiating estrogen receptor ligand agonists and antagonists
US20100183516A1 (en) 2007-07-25 2010-07-22 Markus Ribbert Self coupling recombinant antibody fusion proteins
DK2279253T3 (en) 2008-04-09 2017-02-13 Maxcyte Inc Construction and application of therapeutic compositions of freshly isolated cells
EP2331566B1 (en) 2008-08-26 2015-10-07 City of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
ES2706899T3 (es) * 2008-09-26 2019-04-01 Tocagen Inc Vectores de terapia génica y citosina desaminasas
US8829173B2 (en) * 2008-09-26 2014-09-09 Tocagen Inc. Recombinant vectors
US8329882B2 (en) 2009-02-18 2012-12-11 California Institute Of Technology Genetic control of mammalian cells with synthetic RNA regulatory systems
WO2010141543A1 (en) * 2009-06-02 2010-12-09 Targeted Molecular Diagnostics, Llc Methods for the detection and quantitation of the p95 component of her2/neu (erbb2)
US9873035B2 (en) * 2009-07-09 2018-01-23 Cfph, Llc Amusement device for a game of chance involving one or more rolling indicators on a rotating element with position indicators
JP5934099B2 (ja) * 2009-10-01 2016-06-15 アメリカ合衆国 抗血管内皮増殖因子受容体−２キメラ抗原受容体及び癌の治療のためのその使用
JP5285678B2 (ja) 2010-06-18 2013-09-11 株式会社エヌ・ティ・ティ・ドコモ 移動通信方法及びコアネットワーク装置
EP3012268B1 (en) * 2010-09-08 2017-11-15 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Chimeric antigen receptors with an optimized hinge region
BR122021026169B1 (pt) * 2010-12-09 2023-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Uso de uma célula
AU2012207356A1 (en) 2011-01-18 2013-08-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating cancer
AU2012230780B2 (en) 2011-03-23 2016-10-27 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
WO2012140130A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Immunicum Ab Method for proliferation of antigen-specific t cells
US20130071414A1 (en) * 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
DK3489366T3 (da) 2011-06-01 2020-02-24 Prec Biosciences Inc Fremgangsmåder og produkter til produktion af manipulerede mammale cellelinier med forstærkede transgener
AR086982A1 (es) 2011-06-22 2014-02-05 Hoffmann La Roche Eliminacion de celulas diana por parte de celulas t citotoxicas especificas de virus utilizando complejos que comprenden mhc de clase i
IN2014CN02906A (ko) * 2011-10-20 2015-07-03 Us Health
DE102011118018B4 (de) 2011-10-25 2017-10-26 Plasmidfactory Gmbh & Co. Kg Minicircles mit Transpositionskassetten und ihre Verwendung zur Transformation von Zellen
WO2013074916A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Car+ t cells genetically modified to eliminate expression of t- cell receptor and/or hla
EP2814846B1 (en) 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
ITRM20120058A1 (it) * 2012-02-20 2013-08-21 Pisanelli Giovanni Codacci Famiglia di molecole a base di zuccheri ad uso terapeutico e relativo procedimento di produzione
US9714278B2 (en) * 2012-02-22 2017-07-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of ICOS-based CARs to enhance antitumor activity and CAR persistence
EP2836239A1 (en) 2012-04-11 2015-02-18 The United States of America, as Represented By the Secretary, Department of Health and Human Services Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen
US20130280220A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Nabil Ahmed Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes
US9540657B2 (en) 2012-05-25 2017-01-10 California Institute Of Technology Expression of secreted and cell-surface polypeptides
AU2013267350A1 (en) 2012-05-30 2015-01-29 Baylor College Of Medicine Supercoiled MiniVectors as a tool for DNA repair, alteration and replacement
EP2669378A1 (en) 2012-05-31 2013-12-04 Helmut Hanenberg Cytochrome P450 suicide gene system
WO2013180287A1 (ja) 2012-06-01 2013-12-05 日本電気株式会社 スイッチングシステム、ラインカード、スイッチカード、ｆｄｂ学習方法、ｆｄｂ学習調停方法及びプログラム
RS61345B1 (sr) * 2012-08-20 2021-02-26 Hutchinson Fred Cancer Res Postupak i kompozicije za ćelijsku imunoterapiju
WO2014039044A1 (en) * 2012-09-06 2014-03-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of producing t memory stem cell populations
WO2014055657A1 (en) 2012-10-05 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
JP5372297B1 (ja) 2012-12-20 2013-12-18 三菱電機株式会社 車載装置及びプログラム
US20150329640A1 (en) * 2012-12-20 2015-11-19 Bluebird Bio, Inc. Chimeric antigen receptors and immune cells targeting b cell malignancies
CA2904369A1 (en) * 2013-03-07 2014-09-12 Baylor College Of Medicine Targeting cd138 in cancer
EP2777711A1 (en) 2013-03-11 2014-09-17 Icon Genetics GmbH Her2/Neu cancer vaccine
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
KR102095700B1 (ko) * 2013-05-14 2020-04-01 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 가공된 키메라 항원 수용체 (ｃａｒ) ｔ-세포의 인간 적용
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
KR20160079854A (ko) 2013-10-31 2016-07-06 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 변형된 조혈 줄기/선조 및 비-t 효과기 세포 및 이의 용도
ES2861501T3 (es) 2013-11-21 2021-10-06 Autolus Ltd Célula
CA2936501A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Stephen J. Forman Chimeric antigen receptors (cars) having mutations in the fc spacer region and methods for their use
JP2017513818A (ja) 2014-03-15 2017-06-01 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体を使用する癌の処置
CA2945308C (en) 2014-04-10 2023-10-31 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Transgene genetic tags and methods of use
WO2017027291A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Bispecific car t-cells for solid tumor targeting
US20170224733A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 City Of Hope Administration of Engineered T Cells for Treatment of Cancers in the Central Nervous System
AU2017375630B2 (en) 2016-12-12 2023-12-21 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Chimeric transcription factor variants with augmented sensitivity to drug ligand induction of transgene expression in mammalian cells

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120301447A1 (en) * 2009-11-03 2012-11-29 Jensen Michael C TRUNCATED EPIDERIMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR (EGFRt) FOR TRANSDUCED T CELL SELECTION

Also Published As

Publication number Publication date
EP3129053A4 (en) 2017-11-08
AU2015243927A1 (en) 2016-11-03
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IL248229B2 (en) 2023-05-01
US11414486B2 (en) 2022-08-16
JP2017512484A (ja) 2017-05-25
MX2016013158A (es) 2017-04-27
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IL248235B (en) 2021-01-31
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RU2751921C2 (ru) 2021-07-20
JP7062720B2 (ja) 2022-05-06
KR20160144431A (ko) 2016-12-16
KR20220153100A (ko) 2022-11-17
JP6788573B2 (ja) 2020-11-25
CN106661570A8 (zh) 2017-07-04
CN106535934A (zh) 2017-03-22
MX2016013144A (es) 2017-04-27
US10865242B2 (en) 2020-12-15
PH12016502011A1 (en) 2017-01-09
EP3129480A4 (en) 2017-08-16
RU2016143381A (ru) 2018-05-11
ZA201607060B (en) 2024-05-30
MX2016013159A (es) 2017-04-27
US10266592B2 (en) 2019-04-23
PH12016502012A1 (en) 2017-01-09
SA516380056B1 (ar) 2021-07-04
SG11201608393TA (en) 2016-11-29
RU2751920C2 (ru) 2021-07-20
RU2752275C2 (ru) 2021-07-26
WO2015157432A1 (en) 2015-10-15
KR20220051024A (ko) 2022-04-25
ES2880932T3 (es) 2021-11-26
JP2017515464A (ja) 2017-06-15
IL248238A0 (en) 2016-11-30
KR20230038310A (ko) 2023-03-17
CA2945305C (en) 2023-10-17
KR102387243B1 (ko) 2022-04-14
IL248229A (en) 2016-11-30
RU2016143384A (ru) 2018-05-11
CN106536558A (zh) 2017-03-22
US20210139583A1 (en) 2021-05-13
BR112016023507A2 (pt) 2017-10-17
JP2022153456A (ja) 2022-10-12
US20180009891A1 (en) 2018-01-11
IL248229B1 (en) 2023-01-01
WO2015157386A1 (en) 2015-10-15
AU2021201679B2 (en) 2023-05-04
RU2016143385A (ru) 2018-05-15
AU2015243849B2 (en) 2020-12-17
JP6772068B2 (ja) 2020-10-21
US20170029774A1 (en) 2017-02-02
EP3129399B1 (en) 2021-05-26
MX2016013160A (es) 2017-02-09
KR102508166B1 (ko) 2023-03-13
RU2729112C2 (ru) 2020-08-04
SG10201808825XA (en) 2018-11-29
KR102600544B1 (ko) 2023-11-09
AU2015243920A1 (en) 2016-11-03
RU2016143384A3 (ko) 2018-11-30
JP7106610B2 (ja) 2022-07-26
JP2021000117A (ja) 2021-01-07
JP6765968B2 (ja) 2020-10-07
EP3129053A1 (en) 2017-02-15
CA2945303A1 (en) 2015-10-15
WO2015157391A1 (en) 2015-10-15
AU2015243882B2 (en) 2020-03-12
EP3129399A4 (en) 2017-11-08
SG10201808833XA (en) 2018-11-29
IL248243A0 (en) 2016-11-30
RU2016143385A3 (ko) 2018-11-30
JP7093385B2 (ja) 2022-06-29
BR112016023517A2 (pt) 2017-10-17
KR102463529B1 (ko) 2022-11-07
KR20160143762A (ko) 2016-12-14
RU2016143381A3 (ko) 2018-11-30
SG10201808819XA (en) 2018-11-29
MY184163A (en) 2021-03-24
AU2015243882C1 (en) 2020-09-24
NZ739448A (en) 2019-10-25
CN106573969A (zh) 2017-04-19
AU2015243927B2 (en) 2021-09-02
CA2945305A1 (en) 2015-10-15
JP7402933B2 (ja) 2023-12-21
AU2015243920B2 (en) 2020-10-08
WO2015157384A1 (en) 2015-10-15
JP6788573B6 (ja) 2020-12-16
NZ725081A (en) 2018-02-23
EP3954708A1 (en) 2022-02-16
SG10201808811QA (en) 2018-11-29
MX2022010807A (es) 2022-09-27
JP2022184989A (ja) 2022-12-13
US20210371517A1 (en) 2021-12-02
BR112016023500B1 (pt) 2024-04-30
CA2945308C (en) 2023-10-31
KR102618955B1 (ko) 2023-12-27
JP7148580B2 (ja) 2022-10-05
EP3129471A1 (en) 2017-02-15
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