KR102137291B1 - 항-pcsk9 항체 및 그의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 및 그의 단편에 관한 것이다. 본 발명의 또 하나의 구현예는 본원에서 기재된 항체 및, 그의 결합 단편에 관한 것이고, 이들은 본원에서 기재된 VH, VL 및 CDR 폴리펩타이드의 서열 및, 이 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 본 발명은 또한 하나 이상의 기능성 또는 검출가능한 모이어티에 접합된 항-PCSK9 항체 및 그의 결합 단편의 콘주게이트를 고려한다. 본 발명은 또한 상기 항-PCSK9 항체 및 그의 결합 단편을 제조하는 방법을 고려한다. 본 발명의 구현예는 또한, PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한, 항-PCSK9 항체, 및 그의 결합 단편의 용도에 속한다.
Description
관련 출원 개시내용
본원은 미국 가출원 시리즈 번호 61/654,481 (2012년 6월 1일 출원) 및 미국 가출원 시리즈 번호 61/644,065 (2012년 5월 8일 출원)을 우선권으로 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
본원 EFS-Web을 통해 ASCII 형식으로 제출되었으며 편입된 참조로 그 전체가 참고로 편입되어 있는 서열목록을 포함한다. 2013년 3월 10일에 만들어진 상기 ASCII 복사본은 67858o791000.txt로 명명되고, 그 크기는 621,210 바이트이다.
발명의 분야
본 발명은 인간 프로단백질 전환효소 서브틸리신-유사/켁신 타입 9(이하 "PCSK9")에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편 및 이를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 항체 및 항체 단편을 인코딩하는 핵산 및 원하는 숙주세포에서 상기 항체 및 항체 단편을 발현하기 위한 이의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이들 항체 및 항체 단편의 치료 용도 및 진단 용도에 관한 것이다.
더 상세하게는, 본 발명은 PCSK9에 특이적인 토끼 항체 및 이로부터 유래된 인간화 항체 및 키메라 항체 뿐만 아니라 예를 들면, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 단편, SMIP(소분자 면역의약품), 카멜바디, 나노바디, MetMab 유사 항체와 같은 1가 항체, 및 IgNAR을 포함하는 PCSK9에 특이적인 항체 단편을 제공한다.
또한, 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체, 즉, 토끼 항체 및 항체 단편 및 예로써 이로부터 유래된 인간화 항체 및 키메라 항체를 포함하는 변형된 형태 뿐만 아니라 예를 들면, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 단편, SMIP(소분자 면역의약품), 카멜바디, 나노바디, MetMab 유사 항체와 같은 1가 항체, 및 IgNAR을 포함하는 항체 단편을 인코딩하고 이의 발현을 야기하는 핵산 및 숙주세포를 제공한다.
또한 본 발명은 항체 및 항체 단편의 제조에 유용한 효모, 진균, 포유동물, 및 다른 세포를 포함하는, 본 발명의 항-PCSK9 항체의 제작을 위한 발현 시스템에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 본원에 예시된 임의의 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 같이 PCSK9 상의 동일하거나 중첩하는 에피토프(들)과 경쟁하고/거나 특이적으로 결합하는 인간 PCSK9에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 단독으로 또는 PCSK9를 차단하거나, 억제하거나, 중화하기 위한 다른 활성제 또는 약물과 회합된 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 생체내 용도에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 단독으로 또는 PCSK9와 LDLR과의 상호작용을 차단하거나 억제하기 위한 다른 활성제 또는 약물과 회합된 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 생체내 용도에 관한 것이다..
본 발명은 또한 특히 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 투여에 의해, 예로써 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 황색종, 고혈압, 협심증, 비만, 당뇨병 및 혈관 염증을 포함하는, 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 이와 연관된 장애를 치료하거나 예방하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 당해 항체 및 항체 단편은 단독으로 또는 다른 활성제와 회합되어 사용될 수 있다.
본 발명은 추가로 특히 상기 항체 또는 그의 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 병용하여 투여함으로써 PCSK9와 연관된 질환 및 장애, 예를 들면, PCSK9 수준 증가 또는 감소 및/또는 PCSK9 단백질 발현, 일차 서열 및/또는 기능에 영향을 미치는 PCSK9 유전자에서의 돌연변이와 연관된 질환을 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 추가로, 당해 항체 및 항체 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 사용하여 심장병 위험성의 증가와 연관된 혈액 콜레스테롤 마커를 개선하는 방법을 제공한다. 이들 마커는, 비제한적으로, 높은 총 콜레스테롤, 높은 LDL, 높은 총 콜레스테롤 대 HDL 비 및 높은 LDL-C 대 HDL 비를 포함한다.
본 발명은 추가로, 임의의 하기의 병태 또는 이와 연관된 합병증, 예컨대, 예를 들면, 상승된 총 혈청 콜레스테롤, 상승된 LDL, 상승된 트리글리세라이드, 상승된 VLDL, 및/또는 낮은 HDL에 의해 명시될 수 있는, 고콜레스테롤혈증, 심장병, 대사성 증후군, 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 뇌졸중, 심혈관 질환, 알츠하이머병 및 일반적으로 이상지질혈증을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 제제와 병용하여 사용하여 치료될 수 있는 일차 및 2차 이상지질혈증의 일부 비제한적인 예는 대사성 증후군, 진성 당뇨병, 가족성 결합성 고지혈증, 가족성 초고트리글리세라이드혈증, 이종접합 고콜레스테롤혈증을 포함하는, 가족성 고콜레스테롤혈증, 동종접합 고콜레스테롤혈증, 가족성 불량성 아포지질단백질 B-100; 다유전자성 고콜레스테롤혈증; 잔존조직 제거 질환, 간 리파제 결핍; 하기 중 어느 것에 2차적인 이상지질혈증을 포함한다: 무분별한 식이, 갑상선기능저하증, 에스트로겐 및 프로게스틴 요법, 베타-차단제, 및 티아자이드 이뇨제를 포함하는 약물; 신장 증후군, 만성 신부전, 쿠싱 증후군, 원발성 담도성 간경변증, 글리코겐 축적 질환, 간종양, 답즙정체증, 말단비대증, 인슐린종, 단리된 성장 호르몬 결핍, 및 알코올-유도된 초고트리글리세라이드혈증.
또한, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 또한 예를 들면, 관상동맥성 심장병, 관상동맥 질환, 말초 동맥 질환, 뇌졸중(허혈성 및 출혈성), 협심증, 또는 뇌혈관 질환 및 급성 관상동맥 증후군, 심근경색증과 같은 죽상경화성 질환을 예방하거나 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 비치명적인 심장병, 치명적인 및 비-치명적인 뇌졸중, 어떤 유형의 심장 수술, 심부전으로 인한 입원율, 심장병을 갖는 환자에서의 가슴 통증, 및/또는 전 심장병, 이전 심장 수술, 및/또는 막힌 동맥의 증거를 갖는 가슴 통증과 같은 확립된 심장병으로 인한 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 유용하다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 방법은 반복되는 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 특히 상기 장애를 치료하기 위해 전형적으로 사용되는 다른 약물과 병용하여 임의의 전술한 치료 징후 또는 병태에서의 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 용도에 관한 것이며, 여기서 상기 항체 및 다른 약물 또는 제제는 공동-투여되거나 별도로 투여될 수 있다. 당해 항체 또는 항체 단편과 공동 투여되거나 동일한 치료요법에서 사용될 수 있는 약물의 비제한적인 예는 예로써 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하는데 사용되는 다른 약물을 포함하며, 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤을 가질 수 있다.
본 발명은 추가로, 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이며, 특히 조성물은 생체내 투여, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 직장, 질의, 척추강내, 경구, 및 다른 투여가능한 복용 형태에 적합하다.
본 발명은 추가로 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물, 특히 생체내 투여에 적합한 조성물, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 직장, 질의, 척추강내, 경구, 및 또 하나의 활성제, 예컨대 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 치료된 개체가 높거나 비정상적인 지질 또는 콜레스테롤 수준을 가질 수 있는 병태를 치료하는데 사용되는 다른 약물을 함유하는 다른 투여가능한 복용 형태에 적합한 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 저장 안정한 형태, 예를 들면, 동결건조물, 현탁액, 및 완충되거나 온도 안정한 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항체 및 항체 단편의 투여가 치료 또는 예방 효과를 가질 수 있는, 잠재적으로 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 진단을 위해 또는 개인을 확인하기 위해, 또는 PCSK9를 조절하거나 중화하거나 또는 콜레스테롤 합성을 차단하기 위해 설계된 치료, 예를 들면 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편 중 하나의 투여를 포함하는 치료의 효과를 관찰하기 위해, 혈청 샘플에서 PCSK9의 수준을 검출하고 관찰하는 스크리닝 분석에서 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항체 및 항체 단편을 이용하는 방법에 관한 것이다.
관련 기술의 설명
프로단백질 전환효소 서브틸리신 켁신 타입 9(PCSK9)는 저밀도 지질단백질 수용체(LDLR) 단백질의 수준을 조절하는데 관여하는 세린 프로테아제이다(Horton 등, 32(2) Trends Biochem . Sci . 71-77 (2007); Seidah 및 Prat, 85(7) J. Mol . Med. 685-96 2007). 시험관내 실험은 HepG2 세포에 PCSK9를 첨가하는 것이 세포 표면 LDLR의 수준을 낮춘다는 것을 보여왔다(Benjannet 등, 279 J. Bio . Chem . 48865-75 (2004); Lagace 등, 116(11) J. Clin . Invest . 2995-3005 (2006); Maxwell 등, 102(6) Proc . Nat . Acad . Sci . 2069-74 (2005); Park 등, 279 J. Biol. Chem . 50630-38 (2004)). (이 단백질은 일반적으로 PCSK9로서 지칭되지만, 이 단백질 및 상응하는 유전자가 이 특허 및 비특허문헌에서 또한 PSEC0052, FH3, HCHOLA3, LDLCQ1, NARC-1, NARC1, PC9를 포함하는 다른 명칭에 의해 지칭되어 왔음에 유념한다).
마우스를 이용한 실험은 증가하는 PCSK9 단백질 수준이 간에서 LDLR 단백질의 수준을 감소시킨 반면(Benjannet 등, 279 J. Bio . Chem . 48865-75 (2004); Lagace 등, 116(11) J. Clin . Invest . 2995-3005 (2006); Maxwell 등, 102(6) Proc . Nat'l Acad . Sci . 2069-74 (2005); Park 등, 279 J. Biol . Chem . 50630-38 (2004)), PCSK9 넉아웃 마우스가 간에서 LDLR의 증가된 수준을 가진다는 것을 보여왔다(Rashid 등, 102(15) Proc . Nat'l Acad . Sci . 5374-79 (2005)). 추가로, 혈장 LDL-C의 증가되거나 감소된 수준을 야기하는 다양한 인간 PCSK9 돌연변이가 확인되어 왔다(Kotowski 등, 78(3) Am . J. Hum . Genet . 410-22 (2006); Zhao 등, 79(3) Am . J. Hum . Genet . 514-23 (2006)). PCSK9는 LDLR 단백질과 직접 상호작용하고, LDLP과 함께 흡수되고, 엔도솜 경로 동안 LDLP과 공동-면역형광된다(Lagace 등, 116(11) J. Clin . Invest . 2995-3005 (2006)). 인간 PCKS9에서의 몇 가지 돌연변이는 고콜레스테롤혈증, 증가된 LDL-C 콜레스테롤 수준, 및 관상동맥성 심장병의 증가된 위험성을 포함하는, 인간에서 기능획득 효과를 야기한다(Garnier, 11(3) Am . J. Cardiovasc . Drugs 145-52 (2011)). 훨씬 더 드문 인간 PCSK9 돌연변이는 기능손실을 유도하여, 저하된 LDL-C 수준 및 관상동맥성 심장병 위험성의 88% 감소를 야기한다.(Id.) PCSK9는 EGF 도메인을 통해 LDLR과 상호작용하고 상기 복합체는 내재화된다. 엔도솜에서, 더 낮은 pH는 PCSK9 및 LDLR 사이에 증가된 친화성을 야기하고 상기 복합체는 리소좀에서 분해를 위해 표적화된다(Horton 등, April Supp., J. Lipid Res. S172-177 (2009), Sci . 928-33 (2003)).
몇 가지 증거는 PCSK9가 특히 간 LDLR 단백질의 양을 낮추고 따라서 순환으로부터 LDL 콜레스테롤을 제거하는 간의 능력을 위태롭게 한다는 것을 입증한다. 마우스의 간에서 PCSK9의 아데노바이러스-매개된 과발현은 LDLR mRNA 수준에 영향을 미치지 않으면서, 간 LDLR 단백질의 급격한 감소로 인해 순환하는 LDL-C의 축적을 야기한다(Benjannet 등, 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; Maxwell & Breslow, 2004 PNAS 101:7100-7105; Park 등, 2004 J. Biol. Chem. 279:50630-50638; 및 Lalanne 등, 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319). 마우스에서 순환하는 LDL-C 수준을 상승시키는데 미치는 PCSK9의 효과는 LDLR의 발현에 완전히 의존하며, 다시 이는 PCSK9에 의한 LDL-C의 조절이 LDLR 단백질의 하향조절을 통해 매개된다는 것을 가리킨다. 이들 조사결과와 일치하게도, PCSK9가 결핍된 마우스 또는 PCSK9 mRNA가 안티센스 올리고뉴클레오타이드 억제제에 의해 저하된 마우스는 더 높은 수준의 간 LDLR 단백질을 가지며 순환하는 LDL-C를 소거하는 더 큰 능력을 갖는다(Rashid 등, 2005 PNAS 102:5374-5379; 및 Graham 등, 2007 J. Lipid Res. 48(4):763-767). 또한, 배양된 인간 간세포에서 siRNA에 의해 PCSK9 수준을 낮추는 것은 또한 더 높은 LDLR 단백질 수준 및 LDL-C를 흡수하는 증가된 능력을 야기한다(Benjannet 등, 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; 및 Lalanne 등, 2005 J Lipid Res. 46:1312-1319). 동시에, 이들 데이타는 PCSK9 작용이 LDLR 단백질 수준을 낮춤으로써 증가된 LDL-C를 야기한다는 것을 보여준다.
유전자 PCSK9에서의 많은 돌연변이는 또한 미성숙한 심혈관 부전을 야기할 수 있는 혈장에서의 저밀도 지질단백질("LDL") 입자의 두드러진 상승을 특징으로 하는 유전된 대사장애인 상염색체 지배적인 고콜레스테롤혈증("ADH")과 확정적으로 연관되어 왔다(Abifadel 등, 2003 Nature Genetics 34:154-156; Timms 등, 2004 Hum. Genet. 114:349-353; Leren, 2004 Clin. Genet. 65:419-422 참조). 상기 Abifadel 등의 S127R 돌연변이에 대한 후속 공개된 연구는 상기 돌연변이를 갖는 환자들이 (1) 저밀도 지질단백질("LDL"), 초저밀도 지질단백질("VLDL") 및 중간체 밀도 지질단백질("IDL")과 같은 apoB100-함유 지질단백질의 과다생산, 및 (2) 상기 지질단백질의 소거 또는 전환에서의 연관된 감소에 기인된 혈장에서의 더 높은 총 콜레스테롤 및 apoB100을 나타내었다는 것을 보고하였다(Ouguerram 등, 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1448-1453).
PCSK9는 세린 프로테아제의 서브틸리신(S8) 패밀리 내의 전구호르몬-프로단백질 전환효소이다(Seidah 등, 100(3) Proc . Nat'l Acad . Sci . 928-33 (2003)). 인간은 S8A 및 S8B 서브패밀리로 나뉠 수 있는 9개의 전구호르몬-프로단백질 전환효소를 갖는다(Rawlings 등, 34 Nucleic Acids Research D270-72 (2006)). 퓨린(furin), PC1/PC3, PC2, PACE4, PC4, PC5/PC6 및 PC7/PC8/LPC/SPC7은 서브패밀리 S8B 내에서 분류된다. 마우스 퓨린 및 PC1로부터의 상이한 도메인들의 결정 및 NMR 구조들은 서브틸리신-유사 프로- 및 촉매 도메인, 및 상기 촉매 도메인에 직접 C-말단에 있는 P 도메인을 밝혀낸다(Henrich 등, 10(7) Nature Structural Bio . 520-26 (2005); Tangrea 등, 320(4) J. Mol . Bio . 801-12 (2002)). 이 서브패밀리 내의 아미노산 유사성에 기초하여, 모든 7개의 멤버들은 유사한 구조를 갖는 것으로 예측된다(Henrich 등, 345(2) J. Mol . Bio . 211-27 (2005)). SKI-1/S1P 및 PCSK9는 서브패밀리 S8A 내에서 분류된다. 이들 단백질과의 서열 비교는 또한 서브틸리신-유사 프로- 및 촉매 도메인의 존재를 제시한다(Sakai 등, 2(4) Mol . Cell 505-15 (1998); Seidah 등, 100(3) Proc . Nat'l Acad . Sci . 928-33 (2003); Seidah 등, 96(4) Proc . Nat'l Acad . Sci . 1321-26 (1999)). 이들 단백질에서, 촉매 도메인의 C-말단에 있는 아미노산 서열은 더 가변적이며 P 도메인의 존재를 제시하지 않는다.
전구호르몬-프로단백질 전환효소는 자이모겐으로서 발현되며, 이들은 다단계 공정을 통해 성숙된다. 이 공정에서 프로-도메인의 기능은 2배이다. 상기 프로-도메인은 먼저 차페론으로서 작용하며 촉매 도메인의 적절한 접힘에 요구된다(Ikemura 등, 262 J. Biol. Chem. 7859-64 (1987)). 상기 촉매 도메인이 접히면, 프로-도메인 및 촉매 도메인 사이에 자가촉매가 일어난다. 이 초기 절단 반응 후, 프로-도메인은 촉매 도메인에 계속 결합하며, 여기서 그것은 이후 촉매적 활성의 억제제로서 작용한다(Fu 등, 275 J. Biol. Chem. 16871-78 (2000)). 조건이 정확하면, 성숙은 프로-도메인 내의 부위에서 2차 자가촉매 사건을 수행한다(Anderson 등, 16 Nature 1508-18 (1997)). 이 2차 절단 사건 후, 프로-도메인 및 촉매 도메인이 해리되어, 활성 프로테아제를 생성한다.
PCSK9 자이모겐의 자가촉매가 Gln152 및 Ser153 사이에서 일어나며(VFAQ|SIP)(Naureckiene 등, 420(1) Archives of Biochem . & Biophysics 55-67 (2003)), 세포로부터 그의 분비에 필요한 것으로 나타났다(Seidah 등, 100(3) Proc. Nat'l Acad . Sci . 928-33 (2003)). PCSK9의 프로-도메인 내의 부위에서의 2차 자가촉매 사건이 관찰되지 않았다. 정제된 PCSK9는 비환원성 SDS-PAGE에 의해 분리될 수 있는 2개의 종, 17 Kd에서 프로-도메인, 및 65 Kd에서 촉매적 도메인 및 C-말단 도메인으로 구성된다. PCSK9는 그의 억제 프로-도메인 없이 분리되지 않았으며, PCSK9의 촉매적 활성의 측정은 가변적이었다(Naureckiene 등, 420(1) Archives of Biochem . & Biophysics 55-67 (2003); Seidah 등, 100(3) Proc . Nat'l Acad . Sci. 928-33 (2003)).
따라서, PCSK9가 LDL의 조절에서 역할을 한다는 것, PCSK9의 발현 또는 상향조절이 LDL 콜레스테롤의 증가된 혈장 수준과 연관된다는 것, PCSK9의 발현의 상응하는 억제 또는 결여가 감소된 LDL 콜레스테롤 혈장 수준과 연관된다는 것; 및 PCSK9에서 서열 변화와 연관된 LDL 콜레스테롤의 감소된 수준이 관상동맥성 심장병에 대해 보호를 제공한다는 것을 보여주는 실질적인 증거가 있다(Cohen, 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272).
임상시험에서, LDL 콜레스테롤 수준 감소는 관상동맥 사건의 비율과 직접 관련되어 왔다(Law 등, 2003 BMJ 326:1423-1427). 또한, 혈장 LDL 콜레스테롤 수준의 중간적인 일생 감소가 관상동맥 사건의 발생정도의 실질적인 감소와 상호관련된 것으로 확인되었다(상기 Cohen 등,). 이것은 비-지질-관련된 심혈관 위험 인자의 높은 유행을 갖는 모집단에서도 사실이다(상기 문헌). 따라서, LDL 콜레스테롤 수준의 관리 조절로부터 획득되는 커다란 이점이 있다.
이에 기초하여, 콜레스테롤 수준을 조절하고 PCSK9의 활성을 차단하거나, 억제하거나, 중화하는데 사용될 수 있는 다른 분자들의 확인이 큰 흥미를 끌 것이다. 본 발명은 PCSK9의 활성 중 하나 이상을 차단하거나, 억제하거나 또는 중화하는데 및/또는 PCSK9와 LDLR과의 상호작용을 차단하는데 및/또는 본원에 확인된 치료 병태, 특히 높거나 비정상적인 지질 또는 콜레스테롤 수준과 관련된거나 연관된 것을 치료하기 위해, PCKS9의 신규 길항제를 제공함으로써 이들 흥미를 증진시킨다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 PCSK9에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편과 경쟁하는 항체, 또는 동일하거나 중첩하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 본원에 예시된 신규 항체 및 항체 단편의 CDR 중 어느 것 또는 모두를 함유하는 항체를 제공한다. 이들 항체 및 항체 단편은 생체내에서 혈청 PCSK9의 생체내 효과를 차단하거나, 억제하거나 중화시키는데 사용될 수 있으며, 일부 구현예에서 PCSK9/LDLR 결합 상호작용을 특이적으로 억제하거나 차단하고, 이로써 이 결합 상호작용과 연관된 생물학적 효과 중 하나 또는 모두를 억제하거나 중화시키는데 사용될 수 있다.
특히, 본 발명은 인간 PCSK9에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편 및 이를 함유하는 조성물을 제공한다. 더 상세하게는, 본 발명은 토끼 항-PCSK9 항체 및 항체 단편 뿐만 아니라 이로부터 유도된 인간화 항체, 키메라 항체 및 항체 단편, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 단편, SMIP(소분자 면역의약품), 카멜바디, 나노바디, MetMab 유사 항체와 같은 1가 항체, 및 IgNAR을 제공한다.
본 발명은 추가로 임의의 대상을 치료하기 위한 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 용도를 기술하며, 여기서 PCSK9의 생체내 효과를 차단하거나, 억제하거나, 중화시키거나 또는 PCSK9와 LDLR과의 상호작용을 차단하거나 억제하는 것이 치료적으로 바람직하며, 여기서 상기 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편은 단독으로 또는 다른 활성제 또는 약물과 회합되어 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 투여에 의해, 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 예로써 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 당뇨병, 비만, 협심증, 고혈압 및 황색종을 포함하는 이와 연관될 수 있는 장애를 치료하거나 예방하는 방법을 기술하며, 여기서 상기 당해 항체 및 항체 단편은 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 사용될 수 있다.
본 발명은 추가로, 상기 항체 또는 그의 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 병용하여 투여함으로써, PCSK9와 연관된 질환 및 장애, 예를 들면 PCSK9의 증가되거나 감소된 수준 및/또는 PCSK9 단백질 발현, 일차 서열 및/또는 기능에 영향을 미치는 PCSK9 유전자에서의 돌연변이와 연관된 질환을 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 광범위하게는 병태를 가지고 있거나 병태로 발전할 위험성이 있는 임의의 대상을 치료하는데 있어서 당해 항-PCSK9 항체 및 단편의 용도를 포함하며, 여기서 지질 또는 콜레스테롤 수준의 조절이 임상적으로 바람직하거나 또는 여기서 대상은 높은 지질 또는 콜레스테롤과 종종 연관되는 병태를 갖는다.
또한 구체적으로 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 투여함으로써, 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 그것과 연관된 장애 및 합병증, 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종, 고혈압, 협심증 및 관련된 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로, 당해 항체 및 항체 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 이용하여 심장병 위험성 증가와 연관된 혈액 콜레스테롤 마커를 개선하는 방법을 제공한다. 이들 마커는, 비제한적으로, 높은 총 콜레스테롤, 높은 LDL, 높은 총 콜레스테롤 대 HDL 비 및 높은 LDL-C 대 HDL 비를 포함한다.
본 발명은 또한 상기 장애를 치료하는데 전형적으로 사용되는 다른 약물과 병용하여 전술한 임의의 치료적 징후 또는 병태에 있어서 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 용도에 관한 것이며, 여기서 상기 항체 및 다른 약물 또는 제제는 공동 투여되거나 별도로 투여될 수 있다. 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편과 함께 또는 동일한 치료적 요법에서 공통 투여될 수 있는 약물의 예는, 예로써 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하는데 사용되는 다른 약물을 포함하고, 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤 또는 비정상적인 지질 수준 또는 지질 대사를 가질 수 있다.
본 발명은 추가로 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이며, 특히 조성물은 생체내 투여, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 척추강내, 질의, 직장, 및 다른 주사가능 또는 국소 투여가능한 복용 형태에 적합하다.
본 발명은 추가로, 예를 들면, 상승된 총 혈청 콜레스테롤, 상승된 LDL, 상승된 트리글리세라이드, 상승된 VLDL, 및/또는 낮은 HDL에 의해 명시될 수 있는, 고콜레스테롤혈증, 심장병, 대사성 증후군, 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 뇌졸중, 심혈관 질환, 알츠하이머병 및 일반적으로 이상지질혈증과 같은 이와 연관된 임의의 하기의 병태 또는 합병증을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 단독으로, 또는 하나 이상의 다른 제제와 병용하여 이용하여 치료될 수 있는 일차 및 2차 이상지질혈증의 일부 비제한적인 예는 대사성 증후군, 진성 당뇨병, 가족성 결합성 고지혈증, 가족성 초고트리글리세라이드혈증, 이종접합 고콜레스테롤혈증을 포함하는, 가족성 고콜레스테롤혈증, 동종접합 고콜레스테롤혈증, 가족성 불량성 아포지질단백질 B-100; 다유전자성 고콜레스테롤혈증; 잔존조직 제거 질환, 간 리파제 결핍; 하기 중 어느 것에 2차적인 이상지질혈증을 포함한다: 무분별한 식이, 갑상선기능저하증, 에스트로겐 및 프로게스틴 요법, 베타-차단제, 및 티아자이드 이뇨제를 포함하는 약물; 신장 증후군, 만성 신부전, 쿠싱 증후군, 원발성 담도성 간경변증, 글리코겐 축적 질환, 간종양, 답즙정체증, 말단비대증, 인슐린종, 단리된 성장 호르몬 결핍, 및 알코올-유도된 초고트리글리세라이드혈증.
또한, 본 발명은 추가로 예를 들면, 관상동맥성 심장병, 관상동맥 질환, 말초 동맥 질환, 뇌졸중(허혈성 및 출혈성), 협심증, 또는 뇌혈관 질환 및 급성 관상동맥 증후군, 심근경색증과 같은 죽상경화성 질환을 예방하거나 치료하는데, 비치명적인 심장병, 치명적인 및 비-치명적인 뇌졸중, 어떤 유형의 심장 수술, 심부전으로 인한 입원율, 심장병을 갖는 환자에서의 가슴 통증, 및/또는 전 심장병, 이전 심장 수술, 및/또는 막힌 동맥의 증거를 갖는 가슴 통증과 같은 확립된 심장병으로 인한 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데, 그리고 반복되는 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 사용하는 방법을 제공한다.
더 구체적으로, 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편 중 적어도 하나를 함유하는 조성물, 특히 또 하나의 활성제, 예컨대 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하기 위해 사용되는 다른 약물을 임의로 함유할 수 있는 생체내 투여, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 척추강내, 질의, 직장, 경구 및 다른 주사가능 또는 국소 복용 형태에 적합한 조성물을 제공하며 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤을 가질 수 있다. 본 발명은 또한 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 단독으로 또는 또 하나의 활성제와 회합하여 이용하는 신규 복용 계획, 특히 피하, 경구 및 정맥내 복용 요법을 제공한다.
본 발명은 추가로 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 저장 안정한 형태, 예를 들면, 이를 함유하는 동결건조물, 현탁액, 및 완충되거나 온도 안정한 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항체 및 항체 단편의 투여가 치료 또는 예방 효과를 가질 수 있는, 잠재적으로 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 진단을 위해 또는 개인을 확인하기 위해, 또는 PCSK9를 조절하거나 중화하거나 또는 콜레스테롤 합성을 차단하기 위해 설계된 치료, 예를 들면 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편 중 하나의 투여를 포함하는 치료의 효과를 관찰하기 위해, 혈청 샘플에서 PCSK9의 수준을 검출하고 관찰하는 스크리닝 분석에서 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항체 및 항체 단편을 이용하는 방법을 제공한다.
게다가, 본 발명은 PCSK9에 대해 특정한 에피토프 특이성을 갖는 특이적 항-PCSK9 항체 및 그의 단편 및, 바람직하게는 항체 또는 그의 단편, 및 바람직하게는 높은 친화성 또는 결합능 및/또는 다른 원하는 기능성 특성을 갖는 항체 또는 그의 단편을 제공한다.
또한, 본 발명은 본원에 기술된 항체, 또는 이와 경쟁하는 항체 또는 동일하거나 중첩하는 에피토프 특이성을 갖는 항체, 바람직하게는 예시된 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 CDR 중 하나 또는 모두를 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 더 바람직하게는 본원에서 기재된 임의의 VH, VL 및 CDR 폴리펩타이드, 및 이들 항체 및 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 적어도 80, 90, 또는 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일성을 갖는 하나 이상의 가변 또는 CDR 서열을 포함하는 항체 및 이를 함유하는 숙주 세포의 임의의 치료 또는 진단 용도에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예는 PCSK9에 결합할 수 있는, 그리고 바람직하게는 PCSK9의 생물학적 활성을 억제하거나, 차단하거나 또는 중화하거나, 또는 PCSK9와 LDLR과의 결합을 차단하거나 억제하는, 키메라 또는 인간화된 항체 및 그의 단편(예컨대 Fab 또는 Fv 또는 1가 단편)에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편와 같이 PCSK9에 대한 결합을 경쟁하거나 PCSK9 상의 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 대상에서 LDLR에 대한 PCSK9의 결합을 억제하는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 또 하나의 활성제, 예를 들면, 콜레스테롤 수준을 낮추는 제제 또는 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상에서 혈청 콜레스테롤 수준을 낮추는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을, 또 하나의 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제 또는 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상에게 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 유효량을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제 또는 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 추가로, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 다른 제제와 병용하여 투여함으로써 PCSK9와 연관된 질환 및 장애, 예를 들면, PCSK9의 증가되거나 감소된 수준 및/또는 PCSK9 단백질 발현, 일차 서열 및/또는 기능에 영향을 미치는 PCSK9 유전자에서의 돌연변이와 연관된 질환을 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.
다른 측면에서 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 이용하여 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종 및 관련된 병태와 연관된 장애 및 합병증을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
다른 구체적인 측면에서, 본 발명은 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종 및 다른 병태, 예컨대 비만, 고혈압, 당뇨병과 연관된 장애 및 합병증을 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 대상은 상기 장애를 치료하는데 사용되는 다른 약물, 예컨대 예를 들면, 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하기 위해 사용되는 다른 약물과 병용하여 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편으로 치료되고 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤을 가질 수 있다.
ACE 억제제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있으며 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써: 카포텐(카프토프릴), 바소텍(에날라프릴), 프리니빌, 제스트릴(리시노프릴), 로텐신(벤나제프릴), 모노프릴(포시노프릴), 알타세(라미프릴), 아큐프릴(퀴나프릴), 아세온(페린도프릴), 마빅(트란돌라프릴), 유니바스크(모엑시프릴)를 포함한다,
ARB는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있으며 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써: 코자르(로사르탄), 디오반(발사르탄), 아바프로(이르베사르탄), 아타칸드(칸데사르탄), 및 미카르디스(텔미사르탄)를 포함한다.
항부정맥제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 예로써: 탐보코르(플레카인나이드), 프로칸비드(프로카인아미드), 코르다론(아미오다론), 및 베타파세(소탈롤)를 포함한다.
항응고제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 이는 조직 플라스미노겐 활성제(TPA), 테넥테플라제, 알테플라제, 우로키나제, 레테플라제, 및 스트렙토키나아제를 포함한다.
베타-차단제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써: 섹트랄(아세부톨롤), 제베타(바이소프롤롤), 브레비블록(에스몰롤), 인데랄(프로프라놀롤), 테노르민(아테놀롤), 노르모다인, 트란데이트(라베탈롤), 코레그(카르베딜롤), 로프레서, 및 토프롤-XL(메토프롤롤)을 포함한다.
칼슘 통로 차단제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써: 노르바스크(암로디핀), 플렌딜(펠로디핀), 카르디젬, 카르디젬 CD, 카르디젬 SR, 딜라코르 XR, 딜티아 XT, 티아자크(딜티아젬), 칼란, 칼란 SR, Covera-HS, 이솝틴, 이솝틴 SR, 베렐란, 베렐란 PM(베라파밀), 아달라트, 아달라트 CC, 프로카르디아, 프로카르디아 XL(니페디핀), 카르덴, 카르덴 SR(니카르디핀), 술라르(디솔디핀), 바스코르(베프리딜), 및 스타틴 콜레스테롤 약물 및 암로디핀의 조합인 카두에트를 포함한다.
이뇨제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써 라식스(푸로세마이드), 부멕스(부메타나이드), 데마덱스(토르세마이드), 에시드릭스(하이드로클로로티아자이드), 자록솔린(메톨라존), 및 알닥톤(스피로노락톤)을 포함한다.
심부전 약물은 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써 도부트렉스(도부타민), 및 프리마코르(밀리논)를 포함한다.
혈관확장제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써 딜라트레이트-SR, Iso-Bid, 이소네이트, 이소르비드, 이소르딜, 이소트라테, 소르비트레이트(이소소르바이드 디니트레이트), IMDUR(이소르비드 모노니트레이트), 및 BiDil(이소소르바이드 디니트레이트를 갖는 하이드랄라진)을 포함한다.
혈액 응고방지제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 병용하여 사용될 수 있고, 여기서 상기 모이어티는 동일하거나 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있고, 예로써 와파린(쿠마딘), 헤파린, 로베녹스, 및 프라그민을 포함한다.
어떤 다른 측면에서 본 발명은 추가로, 당해 항체 및 항체 단편을 임의의 전술한 것 또는 다른 활성물질과 함께 사용하여 심장병의 증가된 위험과 연관된 혈액 콜레스테롤 마커를 향상시키는 방법을 제공하고 상기 모이어티는 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있다. 이들 마커는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 고 총 콜레스테롤, 고 LDL-C, 고 총 콜레스테롤 대 HDL 비 및 고 LDL-C 대 HDL 비.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 단편 및 또 하나의 활성제, 예를 들면, 상기-확인된 활성물질 중의 하나, 예를 들면, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제 또는 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단하는 제제는 스타틴을 포함한다. 스타틴은, 일부 예에서 잠재적으로 LDLR 수준을 추가로 상승시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 추가로 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 또는 호르몬 예컨대 에스트로겐, 및/또는 약초의 모이어티 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 그의 단편 또는 변이체 및 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 단편 및 담즙산 격리제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 PPAR 감마 작용제, PPAR 알파/감마 작용제, 스쿠알렌 합성효소 억제제, CETP 억제제, 항-고혈압, 항-당뇨제 (예컨대 설포닐 우레아, 인슐린, GLP-1 유사체, DDPIV 억제제), ApoB 조절물질, MTP 억제제, 폐쇄동맥경화증 치료제, 또는 이들의 조합 를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 HDL 수준을 증가시키는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 또는 그의 단편 또는 변이체 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 비정상적인 콜레스테롤과 연관된 병태를 치료하거나 개체가 종종 고 콜레스테롤을 갖는 병태를 치료하기 위해 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 그의 단편 또는 변이체는 하기와 조합되거나 공-투여될 수 있다: 다른 약물 예컨대 ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물 예컨대 콜레스티라민 (쿠에스트란), 젬피브로질 (로피드, 젬코르), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 치료제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온 또는 치료된 개체가 고 콜레스테롤을 가질 수 있는 병태를 치료하기 위해 사용된 다른 약물. 그와 같은 약물의 예는 상기에서 확인된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요로 하는 환자에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 병태는 고콜레스테롤혈증이다.
일부 측면에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 10 내지 약 100 nM 인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 10 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 항체 또는 단편은 약 1 내지 약 10 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 1 nM 미만인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 1 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 0.5 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.01 내지 약 0.1 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 10 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 단편은 0.120 내지 약 7.99 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 콜레스테롤을 감소시키고 LDLR 단백질의 이용가능성을 임으로 추가로 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤을 감소시키고 임의로 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙산 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 단리된 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함한다. 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 콜레스테롤을 감소시키고 임의로 LDLR 단백질의 이용가능성을 추가로 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤을 감소시키고 LDLR 단백질의 이용가능성을 추가로 상승시킬 수 있는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙산 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합 또는 당해기술에서 공지된 또 하나로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀 또는 또 하나의 항-고혈압제 예컨대 본원에서 개시되고 당해기술에서 공지된 것들이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 제공된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합 또는 당해기술에서 공지된 또 하나의 스타틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙산 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 PCSK9에 결합하고 LDLR에 대한 PCSK9의 저밀도 지질단백질 수용체(LDLR) 저하 효과를 감소시키는 중화 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 PCSK9에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 단편은 PCSK9의 촉매 도메인에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서 본 발명의 항체의 인간화 형태는 본원에 개시된 인간화 방법 또는 다른 공지된 인간화 방법을 이용하여, 토끼 항체로부터 유래될 수 있다.
특히, 본 발명은 본원에 예시된 항-PCSK9 항체의 CDR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 모두를 함유하는 임의의 항-PCSK9 항체, 뿐만 아니라 본원에 예시된 임의의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 VH 및/또는 VL 영역과 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 함유하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 고려한다. 또한 본 발명은 본원에 예시된 항-PCSK9 항체의 CDR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 모두를 함유하는 임의의 항-PCSK9 항체, 뿐만 아니라 본원에 예시된 임의의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편의 VH 및/또는 VL 영역과 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 VH 및/또는 VL 영역을 함유하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편, 및 이를 함유하는 숙주세포, 즉, PCSK9 및/또는 PCSK9/LDLR 복합체에 결합할 수 있는 항체 또는 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 고려한다.
본 발명은 또한 하나 이상의 효과기 모이어티, 예를 들면, 검출가능한 모이어티에 접합될 수 있는 항-PCSK9 항체 및 그의 결합 단편의 접합체를 고려한다. 본 발명은 또한 비제한적으로, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 단편, SMIP(소분자 면역의약품), 카멜바디, 나노바디, MetMab와 같은 1가 항체 및 IgNAR을 포함하는, 항-PCSK9 항체 및 단편을 제조하는 방법을 고려한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 또는 진단 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 약제학적 또는 진단 조성물은 추가로, 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제, 또는 그의 혼합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 약제학적 또는 진단 조성물은 추가로, 적어도 하나의 염증용 치료제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 염증용 치료제는 사이클로옥시게나제 1형 억제제, 사이클로옥시게나제 2형 억제제, p38-MAPK의 소분자 조절물질, 염증 경로와 연관된 세포내 분자의 소분자 조절물질, 또는 이의 혼합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 약제학적 또는 진단 조성물은 동결건조된다.
일부 측면에서, 본 발명은 재조합 숙주세포, 예를 들면, 효모, 진균, 포유동물 세포, 곤충 세포, 박테리아, 조류 세포 또는 달걀, 또는 식물 세포, 및 바람직하게는 효모, 섬유상 진균류 또는 포유동물 세포 내에서 본원에 개시된 임의의 VH, VL 또는 CDR 아미노산 서열을 함유하는 임의의 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법을 포함한다.
이것은 예로써 박테리아, 진균, 효모, 포유동물, 곤충, 식물 및 조류 세포를 포함한다. 바람직한 숙주세포는 효모, 진균, 특히 사상균 및 포유동물 세포이다. 효모 및 사상균은, 비제한적으로 피치아 패스토리스, 피치아 핀란디카, 피치아 트레할로필라, 피치아 코클라마에, 피치아 멤브라나에파시엔스, 피치아 미누타(오가타에아 미누타, 피치아 린드네리), 피치아 오펀티아에, 피치아 테르모톨레란스, 피치아 살릭타리아, 피치아 구에르쿰, 피치아 피에페리, 피치아 스팁티스, 피치아 메타놀리카, 피치아 종, 사카로마이세스 세레비시애, 사카로마이세스 종, 한세눌라 폴리모르파, 클루이베로마이세스 종, 클루이베로마이세스 락티스, 칸디다 알비칸스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니게르, 아스페르길루스 오리자에, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 푸사리움 종, 푸사리움 그라미네움, 푸사리움 베네나툼, 피스코미트렐라 파텐스 및 뉴로스포라 크라싸. 피치아 종, 임의의 사카로마이세스 종, 한세눌라 폴리모르파, 임의의 클루이베로마이세스 종, 칸디다 알비칸스, 임의의 아스페르길루스 종, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 임의의 푸사리움 종 및 뉴로스포라 크라싸를 포함한다.
무척추동물 세포의 예는 곤충 세포, 예컨대 드로소필라 S2 및 스포도프테라 Sf9, 뿐만 아니라 식물 세포를 포함한다. 유용한 포유동물 숙주세포주의 예는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 및 COS 세포를 포함한다. 보다 특정한 예들은 SV40(COS-7, ATCC CRL 1651)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주; 인간 배아 신장 주(293 또는 현탁 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 세포들, Graham 등, J. Gen Virol., 36:59 (1977)); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 및 마우스 유선 종양(MMT 060562, ATCC CCL51)을 포함한다. 적절한 숙주세포의 선택은 본 발명의 기술 내에 속하는 것으로 간주된다. 항체 발현을 위한 바람직한 포유동물 세포는 CHO 세포 및 COS 세포를 포함한다. 예시적인 구현예에서 상기 재조합 숙주세포는 피치아속의 다배체 효모 세포이다.
예시적인 구현예에서 숙주세포는 피치아 패스토리스 세포, 바람직하게는 2배체를 포함할 것이다. 바람직한 구현예에서 숙주세포는 적어도 10-25 mg/리터의 상기 항체의 농도에서, 숙주세포, 예를 들면, 피치아 패스토리스를 함유하는 배양 배지 내로 항-PCSK9 항체 또는 단편을 분비할 것이다.
이종기원 항체 코딩 서열을 함유하며 기능성 항체를 발현 및 분비하는 재조합 숙주세포, 예를 들면, 효모, 진균, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 조류 세포, 박테리아 등을 생산하는 방법은 잘 알려져 있다. 예시적인 구현예에서 본 발명에 따른 항체 또는 단편을 발현하는 숙주세포는 2배체 피치아 패스토리스이다. 그러나, 반수체 형태를 포함하는 다른 효모 또는 진균이 사용될 수 있다.
2배체 피치아를 사용하는 경우, 이들 방법은 일반적으로, (i) 프로모터 및 신호 서열에 작동가능하게 연결된, 상기 항체 또는 항체 단편의 가변 영역 및 임의로 불변 영역을 인코딩하는 하나 이상의 이종기원 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 적어도 하나의 발현 벡터를 숙주세포, 예를 들면, 반수체 효모 또는 진균 세포 내로 도입하는 단계; (ii) 상기 제 1 및/또는 제2 반수체 효모 또는 진균 세포로부터 교배 또는 스페로플라스트 융합에 의해 다배체 효모 또는 진균을 생산하는 단계; (iii) 상기 항체를 안정적으로 발현하는 다배체 효모 또는 진균 세포를 선별하는 단계; 및 (iv) 상기 항체를 배양 배지 내로 안정적으로 발현하는 상기 다배체 효모 또는 진균 세포로부터 안정한 다배체 효모 또는 진균 배양물을 생산하는 단계에 의해, 항체를 발현하고 분비하는 재조합 2배체 효모 또는 진균 세포를 생산하는 것을 포함한다.
그러나, 사용된 효모는 임의의 하기의 속: 아르크시오자이마; 아스코보트라이오자이마; 사이테로마이세스; 데바리오마이세스; 덱케라; 에레모테시움; 이사첸키아; 카자키스타니아; 클루이베로마이세스; 코다마에아; 로데로마이세스; 파차이솔렌; 피치아; 사카로마이세스; 사투르니스포라; 테트라피시스포라; 톨루라스포라; 윌리옵시스; 또는 자이고사카로마이세스를 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 효모 속은 피치아이다. 어떤 구현예에서, 피치아의 종은 피치아 패스토리스, 피치아 메타놀리카 또는 한세눌라 폴리모르파(피치아 앙구스타)로부터 선택된다. 당해 항체 또는 단편을 발현하는데 사용될 수 있는 적당한 사상균은 위에서 확인된다.
더 구체적으로, 본 발명은 재조합 세포에서 본원에 개시된 임의의 VH, VL 또는 CDR 아미노산 서열을 함유하는 임의의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 제조하는 방법을 고려하며, 여기서 상기 재조합 세포는 서열번호: 12, 서열번호: 52, 서열번호: 92, 서열번호: 132, 서열번호: 172, 서열번호: 212, 서열번호: 252, 서열번호: 292, 서열번호: 332, 서열번호: 372, 서열번호: 412, 서열번호: 452, 서열번호: 492, 서열번호: 532, 서열번호: 572, 서열번호: 612, 서열번호: 652, 서열번호: 692; 서열번호: 732, 서열번호: 772, 서열번호: 812, 서열번호: 852, 서열번호: 892, 또는 서열번호: 932 내의 임의의 VH 아미노산 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 VH 아미노산 서열을 함유하는 항-PCSK9 항체를 인코딩하는 이종기원 폴리뉴클레오타이드 또는 적어도 하나의 프레임워크 잔기(FR 잔기) 또는 CDR 잔기가 변경된, 예를 들면, 토끼 항-PCSK9 항체 VH 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환에서 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로 치환된 이의 변이체를 인코딩하는 이종기원 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 이종기원 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 32, 서열번호: 72, 서열번호: 112, 서열번호: 152, 서열번호: 192, 서열번호: 232, 서열번호: 272, 서열번호: 312, 서열번호: 352, 서열번호: 392, 서열번호: 432, 서열번호: 472, 서열번호: 512, 서열번호: 542, 서열번호: 582, 서열번호: 622, 서열번호: 662, 서열번호: 702, 서열번호: 742, 서열번호: 782, 서열번호: 822, 서열번호: 862, 서열번호: 902, 또는 서열번호: 942에서 임의의 VL 아미노산 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 항-PCSK9 VL 아미노산 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 적어도 하나의 프레임워크 잔기(FR 잔기) 또는 CDR 잔기가 변경된, 예를 들면, 토끼 항-PCSK9 항체 VL 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환에서 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로 치환된 이의 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 이종기원 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 12 및 서열번호: 32; 서열번호: 52 및 서열번호: 72; 서열번호: 92 및 서열번호: 112; 서열번호: 132 및 서열번호: 152; 서열번호: 172 및 서열번호: 192; 서열번호: 212 및 서열번호: 232; 서열번호: 252 및 서열번호: 272; 서열번호: 292 및 서열번호: 312; 서열번호: 332 및 서열번호: 352; 서열번호: 372 및 서열번호: 392; 서열번호: 412 및 서열번호: 432; 서열번호: 452 및 서열번호: 472; 서열번호: 492 및 서열번호: 512; 서열번호: 532 및 서열번호: 552; 서열번호: 572 및 서열번호: 592; 서열번호: 612 및 서열번호: 632; 서열번호: 652 및 서열번호: 672; 서열번호: 692 및 서열번호: 712; 서열번호: 732 및 서열번호: 752; 서열번호: 772 및 서열번호: 792; 서열번호: 812 및 서열번호: 832; 서열번호: 852 및 서열번호: 872; 서열번호: 892 및 서열번호: 912; 서열번호: 932 및 서열번호: 952에 함유된 임의의 VH 및 VL 아미노산 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 VH 및 VL 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열; 또는 본원에 개시된 임의의 VH 및 VL 아미노산 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 VH 및 VL 서열의 임의의 조합을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 이종기원 폴리뉴클레오타이드는 항-PCSK9 항체 또는 단편을 인코딩하고, 여기서 상기 항체 또는 단편은 VL 폴리펩타이드에 함유된 CDR 중 하나의 CDR, 또는 둘 또는 셋 모두 및/또는 VH 폴리펩타이드에 함유된 CDR 중 적어도 하나의 CDR, 또는 둘 또는 셋 모두를 함유하며, 여기서 상기 VH 및 VL 폴리펩타이드 서열은 서열번호: 12, 서열번호: 32; 서열번호: 52, 서열번호: 72; 서열번호: 92, 서열번호: 112; 서열번호: 132, 서열번호: 152; 서열번호: 172, 서열번호: 192; 서열번호: 212, 서열번호: 232, 서열번호: 252, 서열번호: 272; 서열번호: 292, 서열번호: 312; 서열번호: 332, 서열번호: 352; 서열번호: 372, 서열번호: 392; 서열번호: 412, 서열번호: 432; 서열번호: 452, 서열번호: 472; 서열번호: 492, 서열번호: 512; 서열번호: 532; 서열번호: 552; 서열번호: 572; 서열번호: 592; 서열번호: 612; 서열번호: 632; 서열번호: 652; 서열번호: 672; 서열번호: 692; 서열번호: 712; 서열번호: 732; 서열번호: 752; 서열번호: 772; 서열번호: 792; 서열번호: 812; 서열번호: 832; 서열번호: 852; 서열번호: 872; 서열번호: 892; 서열번호: 912; 서열번호: 932; 서열번호: 952; 또는 그의 혼합물로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 서열번호: 12, 서열번호: 52, 서열번호: 92, 서열번호: 132, 서열번호: 172, 서열번호: 212, 서열번호: 252, 서열번호: 292, 서열번호: 332, 서열번호: 372, 서열번호: 412, 서열번호: 452, 서열번호: 492, 서열번호: 532, 서열번호: 572, 서열번호: 612, 서열번호: 652, 서열번호: 692, 서열번호: 732, 서열번호: 772, 서열번호: 812, 서열번호: 852, 서열번호: 892, 또는 서열번호: 932에서의 VH 폴리펩타이드 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하거나 동일한 항-PCSK9 VH 항체 아미노산 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 적어도 하나의 프레임워크 잔기(FR 잔기) 또는 CDR 잔기가 변경된, 예를 들면, 토끼 항-PCSK9 항체 VH 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환에서 상응하는 위치에 있는 아미노산으로 치환된 이의 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 언급된 벡터를 포함하는 숙주세포를 포함한다. 어떤 구현예에서, 상기 언급된 숙주세포는 피치아속에 속하는 효모 세포이다.
일부 측면에서, 본 발명은 서열번호: 32, 서열번호: 72, 서열번호: 112, 서열번호: 152, 서열번호: 192, 서열번호: 232, 서열번호: 272, 서열번호: 312, 서열번호: 352, 서열번호: 392, 서열번호: 432, 서열번호: 472, 서열번호: 512, 서열번호: 552, 또는 서열번호: 592, 서열번호: 632, 서열번호: 672, 서열번호: 712, 서열번호: 752, 서열번호: 792, 서열번호: 832, 서열번호: 872, 서열번호: 912, 또는 서열번호: 952 내의 것 중 임의의 하나와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일하거나 동일한 항-PCSK9 VL 항체 아미노산 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 하나의 프레임워크 잔기(FR 잔기) 또는 CDR 잔기가 변경된, 예를 들면, 토끼 항-PCSK9 항체 VL 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환 내의 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로 치환된 이의 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오타이드 서열의 임의의 조합을 포함하는 벡터를 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 발명은 상기 언급된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 하나 이상의 벡터를 포함하는 숙주세포를 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 발명은 임의의 상기-언급된 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 함유하는 숙주세포, 예를 들면, 효모, 진균, 곤충, 식물, 조류, 박테리아 또는 포유동물 세포, 및 예시적인 구현예에서 피치아속에 속하는 효모 세포를 포괄한다.
일부 측면에서, 본 발명은 서열번호: 12, 서열번호: 32; 서열번호: 52, 서열번호: 72; 서열번호: 92, 서열번호: 112; 서열번호: 132, 서열번호: 152; 서열번호: 172, 서열번호: 192; 서열번호: 212, 서열번호: 232, 서열번호: 252, 서열번호: 272; 서열번호: 292, 서열번호: 312; 서열번호: 332, 서열번호: 352; 서열번호: 372, 서열번호: 392; 서열번호: 412; 서열번호: 432; 서열번호: 452; 서열번호: 472; 서열번호: 492; 서열번호: 512; 서열번호: 532; 서열번호: 552; 서열번호: 572; 서열번호: 592; 서열번호: 612; 서열번호: 632; 서열번호: 652; 서열번호: 672; 서열번호: 692; 서열번호: 712; 서열번호: 732; 서열번호: 752; 서열번호: 772; 서열번호: 792; 서열번호: 812; 서열번호: 832; 서열번호: 852; 서열번호: 872; 서열번호: 892; 서열번호: 912; 서열번호: 932; 서열번호: 952; 이의 코돈 축퇴물; 또는 PCSK9에 결합하는 항체의 VH 또는 VL 영역을 인코딩하는 그의 혼합물에 엄격한 조건 하에서 혼성화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 핵산을 포함한다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 임의의 질환 및 장애, 즉, 특히 PCSK9 또는 이의 비정상적인 발현과 연관된 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한, 상기 언급된 아미노산 또는 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하거나 이에 의해 인코딩된 항-PCSK9 항체 및 그의 결합 단편 및 이의 변이체의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 PCSK9 또는 이의 비정상적인 발현과 연관된 질환 및 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한 임의의 상기-언급된 아미노산 또는 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하거나 이에 의해 인코딩된 항-PCSK9 항체의 단편 및 그의 결합 단편 및 그의 변이체의 용도를 고려한다. 본 발명의 다른 특정 구현예는 포유동물 세포, 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 또는 효모 세포(예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주에서의 항-PCSK9 항체 또는 그의 단편의 생산에 관한 것이다.
도면의 몇 가지 그림의 간단한 설명
도 1a-1g는 그의 프레임워크 영역(FR), 상보성 결정 영역(CDR), 및 불변 영역에 의해 정렬된 항체 Ab1-Ab24에 대한 전장 중쇄의 폴리펩타이드 서열을 제공한다.
도 2a-2d는 그의 프레임워크 영역(FR), 상보성 결정 영역(CDR), 및 불변 영역에 의해 정렬된 항체 Ab1-Ab24에 대한 전장 경쇄의 폴리펩타이드 서열을 제공한다.
도 3a-3s는 그의 프레임워크 영역(FR), 상보성 결정 영역(CDR), 및 불변 영역에 의해 정렬된 항체 Ab1-Ab24에 대한 전장 중쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
도 4a-4j는 그의 프레임워크 영역(FR), 상보성 결정 영역(CDR), 및 불변 영역에 의해 정렬된 항체 Ab1-Ab24에 대한 전장 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
도 5는 항체 Ab1-Ab24에 대한 중쇄의 가변 영역 및 상보성 결정 영역(CDR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 6은 항체 Ab1-Ab24에 대한 중쇄의 불변 영역 및 프레임워크 영역(FR)의 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 7은 항체 Ab1-Ab24에 대한 경쇄의 가변 영역 및 상보성 결정 영역(CDR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 8은 항체 Ab1-Ab24에 대한 경쇄의 불변 영역 및 프레임워크 영역(FR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 9는 항체 Ab1-Ab24에 대한 중쇄의 가변 영역 및 상보성 결정 영역(CDR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다..
도 10은 항체 Ab1-Ab24에 대한 중쇄의 불변 영역 및 프레임워크 영역(FR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 11은 항체 Ab1-Ab24에 대한 경쇄의 가변 영역 및 상보성 결정 영역(CDR)에 대한 폴리펩타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 12는 항체 Ab1-Ab24에 대한 경쇄의 불변 영역 및 프레임워크 영역(FR)에 대한 폴리뉴클레오타이드 서열 좌표를 제공한다.
도 13은 항체 Ab1, Ab2, Ab3, 및 Ab4에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 14는 항체 Ab5, Ab6, Ab8, 및 Ab9에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 15는 항체 Ab7, Ab10, 및 Ab13에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 16은 항체 Ab11 및 Ab12에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 17은 항체 Ab14에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 18은 항체 Ab15에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 19는 항체 Ab16 및 Ab17에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 20은 항체 Ab18에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 21은 항체 Ab19에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 22는 항체 Ab20에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 23은 항체 Ab21에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 24는 항체 Ab22에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 25는 항체 Ab23에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 26은 항체 Ab24에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 인간 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 27은 항체 Ab1에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 28은 항체 Ab2에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 29는 항체 Ab3에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 30은 항체 Ab4에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 31은 항체 Ab5에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 32는 항체 Ab6 및 Ab7에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 33은 항체 Ab8에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 34는 항체 Ab9에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 35는 항체 Ab10, Ab11, 및 Ab12에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 36은 항체 Ab13에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 37은 항체 Ab14에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 38은 항체 Ab15에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 39는 항체 Ab16 및 Ab17에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 40은 항체 Ab18에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 41은 항체 Ab19에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 42는 항체 Ab20에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 43은 항체 Ab21에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 44는 항체 Ab22에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 45는 항체 Ab23에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 46은 항체 Ab24에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, LDL-C 흡수 억제 데이타를 제공한다.
도 47은 항체 Ab1, Ab2, Ab3, 및 Ab4에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 48은 항체 Ab5, Ab6, Ab7, 및 Ab8에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 49는 항체 Ab9, Ab10, Ab11, 및 Ab12에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 50은 항체 Ab13에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 51은 항체 Ab14에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 52는 항체 Ab15에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 53은 항체 Ab16 및 Ab17에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 54는 항체 Ab18에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 55는 항체 Ab19에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 56은 항체 Ab20에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 57는 항체 Ab21에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 58은 항체 Ab22에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 59는 항체 Ab23에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 60은 항체 Ab24에 대한 하기 실시예 1에서의 프로토콜에 따라 수득된, 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 대한 항-PCSK9 항체의 결합 데이터를 제공한다.
도 61은 항체 Ab1에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 62는 항체 Ab2에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 63은 항체 Ab3에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 64는 항체 Ab4에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 65는 항체 Ab5에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 66은 항체 Ab6에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 67은 항체 Ab7에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 68은 항체 Ab8에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 69는 항체 Ab9에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 70은 항체 Ab10에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 71은 항체 Ab11에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 72는 항체 Ab12에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 73은 항체 Ab13에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 74는 항체 Ab14에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 75는 항체 Ab15에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 76은 항체 Ab16에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 77은 항체 Ab17에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 78은 항체 Ab18에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 79는 항체 Ab19에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 80은 항체 Ab20에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 81은 항체 Ab21에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 82는 항체 Ab22에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 83은 항체 Ab23에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 84는 항체 Ab24에 대한 하기 실시예 6에서의 프로토콜에 따라 수득된, PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체에 대한 억제 데이터를 제공한다.
도 85는 항체 Ab18이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 86은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab18이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 총 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 87은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab18이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 HDL 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 88은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab11이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 89는 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab11이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 총 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 90은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab11이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 HDL 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 91은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab19가 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 92는 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab20이 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 93은 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab22가 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
도 94는 투여전 수준으로부터의 백분율 변화로서 Ab24가 주입된 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 LDL-C 콜레스테롤 수준을 보여주는 데이터를 제공한다.
발명의 바람직한 구현예
상이한 본 발명의 바람직한 구현예는 이하에서 열거되어 있고 상세한 표현된 설명 및 본원의 실시예 섹션에서 더 상세히 추가로 기재되어 있다.
본 발명의 바람직한 구현예는 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-인간 PCSK9 항체로서 인간 PCSK9 상의 동일하거나 중첩되는 에피토프(들)과 경쟁하고/하거나 특이적으로 결합하는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-인간 PCSK9 항체로서 인간 PCSK9 상의 동일하거나 중첩되는 에피토프(들)에 특이적으로 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 에피토프(들)은 인간 PCSK9 폴리펩타이드의 모든 또는 실질적으로 모든 길이에 대응하는 인간 PCSK9의 중첩 펩타이드 단편인 10-15-mer 펩타이드의 라이브러리에서 상기 항-인간 PCSK9 항체의 하나 이상의 펩타이드에의 결합을 검출하는 결합 검정을 사용하여 확인된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 결합 검정은 상기 라이브러리 중 항체 또는 항체 단편의 펩타이드에의 특이적 결합이 일어날 때 검출가능한 화학발광 신호를 방출하는 화학발광 표지의 사용에 의해 상기 라이브러리에서 항체 또는 항체 단편의 상기 10-15 mer 펩타이드 중 하나 이상에의 특이적 결합을 검출하는 웨스턴 면역블랏 검정이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 2 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 3 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체 상기 항체 또는 항체 단편은 적어도 4 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 5 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 모두 6 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 하기를 함유한다: (a) 서열번호: 4, 서열번호: 44, 서열번호: 84, 서열번호: 124, 서열번호: 164, 서열번호: 204, 서열번호: 244, 서열번호: 284, 서열번호: 324, 서열번호: 364, 서열번호: 404, 서열번호: 444, 서열번호: 484, 서열번호: 524, 서열번호: 564, 서열번호: 604, 서열번호: 644, 서열번호: 684, 서열번호: 724, 서열번호: 764, 서열번호: 804, 서열번호: 844, 서열번호: 884, 및 서열번호: 924로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR1 서열; 서열번호: 6, 서열번호: 46, 서열번호: 86, 서열번호: 126, 서열번호: 166, 서열번호: 206, 서열번호: 246, 서열번호: 286, 서열번호: 326, 서열번호: 366, 서열번호: 406, 서열번호: 446, 서열번호: 486, 서열번호: 526, 서열번호: 566, 서열번호: 606, 서열번호: 646, 서열번호: 686, 서열번호: 726, 서열번호: 766, 서열번호: 806, 서열번호: 846, 서열번호: 886, 및 서열번호: 926으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR2 서열; 및 서열번호: 8, 서열번호: 48, 서열번호: 88, 서열번호: 128, 서열번호: 168, 서열번호: 208, 서열번호: 248, 서열번호: 288, 서열번호: 328, 서열번호: 368, 서열번호: 408, 서열번호: 448, 서열번호: 488, 서열번호: 528, 서열번호: 568, 서열번호: 608, 서열번호: 648, 서열번호: 688, 서열번호: 728, 서열번호: 768, 서열번호: 808, 서열번호: 848, 서열번호: 888, 및 서열번호: 928로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR3 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및/또는
(b) 서열번호: 24, 서열번호: 64, 서열번호: 104, 서열번호: 144, 서열번호: 184, 서열번호: 224, 서열번호: 264, 서열번호: 304, 서열번호: 344, 서열번호: 384, 서열번호: 424, 서열번호: 464, 서열번호: 504, 서열번호: 544, 서열번호: 584, 서열번호: 624, 서열번호: 664, 서열번호: 704, 서열번호: 744, 서열번호: 784, 서열번호: 824, 서열번호: 864, 서열번호: 904, 및 서열번호: 944로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR1 서열; 서열번호: 26, 서열번호: 66, 서열번호: 106, 서열번호: 146, 서열번호: 186, 서열번호: 226, 서열번호: 266, 서열번호: 306, 서열번호: 346, 서열번호: 386, 서열번호: 426, 서열번호: 466, 서열번호: 506, 서열번호: 546, 서열번호: 586, 서열번호: 626, 서열번호: 666, 서열번호: 706, 서열번호: 746, 서열번호: 786, 서열번호: 826, 서열번호: 866, 서열번호: 906, 및 서열번호: 946으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR2 서열; 및 서열번호: 28, 서열번호: 68, 서열번호: 108, 서열번호: 148, 서열번호: 188, 서열번호: 228, 서열번호: 268, 서열번호: 308, 서열번호: 348, 서열번호: 388, 서열번호: 428, 서열번호: 468, 서열번호: 508, 서열번호: 548, 서열번호: 588, 서열번호: 628, 서열번호: 668, 서열번호: 708, 서열번호: 748, 서열번호: 788, 서열번호: 828, 서열번호: 868, 서열번호: 908, 및 서열번호: 948로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR3 서열을 포함하는 가변 경쇄, 추가로, 단, 임의의 상기-확인된 CDR 폴리펩타이드의 1 또는 2 개의 잔기는 또 하나의 아미노산, 바람직하게는 보존적 아미노산으로 치환될 수 있다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 4의 CDR1 서열, 서열번호: 6의 CDR2 서열, 및 서열번호: 8의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 24의 CDR1 서열, 서열번호: 26의 CDR2 서열, 및 서열번호: 28의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 44의 CDR1 서열, 서열번호: 46의 CDR2 서열, 및 서열번호: 48의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 64의 CDR1 서열, 서열번호: 66의 CDR2 서열, 및 서열번호: 68의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 84의 CDR1 서열, 서열번호: 86의 CDR2 서열, 및 서열번호: 88의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 104의 CDR1 서열, 서열번호: 106의 CDR2 서열, 및 서열번호: 108의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 124의 CDR1 서열, 서열번호: 126의 CDR2 서열, 및 서열번호: 128의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 144의 CDR1 서열, 서열번호: 146의 CDR2 서열, 및 서열번호: 148의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 164의 CDR1 서열, 서열번호: 166의 CDR2 서열, 및 서열번호: 168의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 184의 CDR1 서열, 서열번호: 186의 CDR2 서열, 및 서열번호: 188의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 204의 CDR1 서열, 서열번호: 206의 CDR2 서열, 및 서열번호: 208의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 224의 CDR1 서열, 서열번호: 226의 CDR2 서열, 및 서열번호: 228의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 244의 CDR1 서열, 서열번호: 246의 CDR2 서열, 및 서열번호: 248의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 264의 CDR1 서열, 서열번호: 266의 CDR2 서열, 및 서열번호: 268의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 284의 CDR1 서열, 서열번호: 286의 CDR2 서열, 및 서열번호: 288의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 304의 CDR1 서열, 서열번호: 306의 CDR2 서열, 및 서열번호: 308의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 324의 CDR1 서열, 서열번호: 326의 CDR2 서열, 및 서열번호: 328의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 344의 CDR1 서열, 서열번호: 346의 CDR2 서열, 및 서열번호: 348의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 364의 CDR1 서열, 서열번호: 366의 CDR2 서열, 및 서열번호: 368의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 384의 CDR1 서열, 서열번호: 386의 CDR2 서열, 및 서열번호: 388의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 404의 CDR1 서열, 서열번호: 406의 CDR2 서열, 및 서열번호: 408의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 424의 CDR1 서열, 서열번호: 426의 CDR2 서열, 및 서열번호: 428의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 444의 CDR1 서열, 서열번호: 446의 CDR2 서열, 및 서열번호: 448의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 464의 CDR1 서열, 서열번호: 466의 CDR2 서열, 및 서열번호: 468의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 484의 CDR1 서열, 서열번호: 486의 CDR2 서열, 및 서열번호: 488의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 504의 CDR1 서열, 서열번호: 506의 CDR2 서열, 및 서열번호: 508의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 524의 CDR1 서열, 서열번호: 526의 CDR2 서열, 및 서열번호: 528의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 544의 CDR1 서열, 서열번호: 546의 CDR2 서열, 및 서열번호: 548의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 564의 CDR1 서열, 서열번호: 566의 CDR2 서열, 및 서열번호: 568의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 584의 CDR1 서열, 서열번호: 586의 CDR2 서열, 및 서열번호: 588의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 604의 CDR1 서열, 서열번호: 606의 CDR2 서열, 및 서열번호: 608의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 624의 CDR1 서열, 서열번호: 626의 CDR2 서열, 및 서열번호: 628의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 644의 CDR1 서열, 서열번호: 646의 CDR2 서열, 및 서열번호: 648의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 664의 CDR1 서열, 서열번호: 666의 CDR2 서열, 및 서열번호: 668의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 684의 CDR1 서열, 서열번호: 686의 CDR2 서열, 및 서열번호: 688의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 704의 CDR1 서열, 서열번호: 706의 CDR2 서열, 및 서열번호: 708의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 724의 CDR1 서열, 서열번호: 726의 CDR2 서열, 및 서열번호: 728의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 744의 CDR1 서열, 서열번호: 746의 CDR2 서열, 및 서열번호: 748의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 764의 CDR1 서열, 서열번호: 766의 CDR2 서열, 및 서열번호: 768의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 784의 CDR1 서열, 서열번호: 786의 CDR2 서열, 및 서열번호: 788의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 804의 CDR1 서열, 서열번호: 806의 CDR2 서열, 및 서열번호: 808의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 824의 CDR1 서열, 서열번호: 826의 CDR2 서열, 및 서열번호: 828의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 844의 CDR1 서열, 서열번호: 846의 CDR2 서열, 및 서열번호: 848의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 864의 CDR1 서열, 서열번호: 866의 CDR2 서열, 및 서열번호: 868의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 884의 CDR1 서열, 서열번호: 886의 CDR2 서열, 및 서열번호: 888의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 904의 CDR1 서열, 서열번호: 906의 CDR2 서열, 및 서열번호: 908의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 924의 CDR1 서열, 서열번호: 926의 CDR2 서열, 및 서열번호: 928의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 944의 CDR1 서열, 서열번호: 946의 CDR2 서열, 및 서열번호: 948의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 2와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열 및/또는 가변 경쇄는 서열번호: 22를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 2 및 서열번호: 22 각각에서의 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 42와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 62와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 42 및 서열번호: 62 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 82와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 102와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 82 및 서열번호: 102 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 122와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 142와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 122 및 서열번호: 142 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 162와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 182와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 162 및 서열번호: 182 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고 상기 가변 중쇄는 서열번호: 202와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 222와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 202 및 서열번호: 222 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 242와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 262와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 242 및 서열번호: 262 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 282와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 302와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 282 및 서열번호: 302 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 322와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 342와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 322 및 서열번호: 342 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 362와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 382와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 362 및 서열번호: 382 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 402와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 422와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편 55에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 402 및 서열번호: 422 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 442와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 462와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 442 및 서열번호: 462 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 482와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 502와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 482 및 서열번호: 502 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 522와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 542와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 522 및 서열번호: 542 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 562와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 582와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 562 및 서열번호: 582 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 602와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 622와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 602 및 서열번호: 622 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 642와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 662와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 642 및 서열번호: 662 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 682와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 702와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 682 및 서열번호: 702 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 722와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 742와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 722 및 서열번호: 742 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 762와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 782와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 762 및 서열번호: 782 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 802와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 822와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 802 및 서열번호: 822 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 842와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 862와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 842 및 서열번호: 862 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 882와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 902와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 882 및 서열번호: 902 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄는 서열번호: 922와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 가변 경쇄는 서열번호: 942와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 922 및 서열번호: 942 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 1과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 21과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 41과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 61과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 81과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 101과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 121과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 141과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 161과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 181과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 201과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 221과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 241과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 261과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 281과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 301을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 321을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 341과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 361과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 381을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 401을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 421과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 441과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 461과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 481과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열 및 상기 경쇄는 서열번호: 501에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 521과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 541을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 561을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 581과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 601과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 621을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 641을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 661과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 681과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 701과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 721과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 741을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 761을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 781과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 801과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 821과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 841과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 861과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 881과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 901을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 중쇄는 서열번호: 921을 포함하고 상기 경쇄는 서열번호: 941과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 키메라, 인간화하고, 인간 항체 또는 항체 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 scFvs, 카멜바디, 나노바디, IgNAR, F ab 단편, F ab' 단편, 항체와 같은 MetMab, 1가 항체 단편, 및 F( ab' )2 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 N-당화 및/또는 O-당화가 실질적으로 또는 전적으로 없다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 인간 불변 도메인을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 효과기 기능, 반감기, 단백질분해, 또는 당화 중 적어도 하나를 변경하기 위해 변형되었던 Fc 영역을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 Fc 영역은 N- 및/또는 O-당화을 변경시키거나 제거하는 하나 이상의 돌연변이를 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 인간화된 항체 또는 항체 단편이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 또는 10-13 M 이하의 해리 상수 (Kd)로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 10-11 M, 5x10-12 M, 또는 10-12 M 이하의 해리 상수 (Kd)로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 10-4 S-1, 5x10-5 S-1, 10-5 S-1, 5x10-6 S-1, 10-6 S-1, 5x10-7 S-1, 또는 10-7 S-1 이하의 해리속도상수로 PCSK9에 결합하는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 검출가능한 표지 또는 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 이들은 인간 대상체에게 투여될 때 PCSK9에 의해 유발된 적어도 하나의 생물학적 효과를 억제 또는 중화한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 이들은 인간 대상체에게 투여될 때 혈청 콜레스테롤을 감소시킨다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제할 수 있다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 약 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 약 10 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 약 1 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 약 1 내지 약 10 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 약 0.1 내지 약 1 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 0.12 내지 7.99 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 효과기 모이어티에 부착된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 여기서 효과기 모이어티는 화학 링커를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 하나 이상의 검출가능한 모이어티에 부착된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 여기서 검출가능한 모이어티는 형광 염료, 효소, 기질, 생물발광 물질, 방사선활성 물질, 화학발광 모이어티, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 하나 이상의 기능성 모이어티에 부착된다.
항-유전자형 항체는 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편에 대항하여 생산된다.
치료, 예방, 또는 진단용에 적당한 조성물은 치료적으로, 예방적으로 또는 진단적으로 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는, 피하 투여에 적당한 조성물애 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는, 정맥내 투여에 적당한 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편 함유하는, 국소 투여에 적당한 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편 함유하는, 동결건조된 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 약제학적으로 허용가능한 희석제, 캐리어, 가용화제, 유화제, 보존제, 또는 그의 혼합물을 추가로 포함하는, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 추가로 포함하는, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 다른 활성제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물 예컨대 콜레스티라민 (쿠에스트란), 젬피브로질 (로피드, 젬코르), 오마코, 판테틴, 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 ACE 억제제는 하기로부터 선택된다: 카포텐 (카프토프릴), 바소텍 (에날라프릴), 프리니빌, 제스트릴 (리시노프릴), 로텐신 (벤나제프릴), 모노프릴 (포시노프릴), 알타세 (라미프릴), 아쿠프릴 (퀴나프릴), 아세온 (페린도프릴), 마빅 (트란돌라프릴), 유니바스크 (모엑시프릴),
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 ARB은 하기로부터 선택된다: 코자르 (로사르탄), 디오반 (발사르탄), 아바프로 (이르베사르탄), 아타칸드 (칸데사르탄), 및 미카르디스 (텔미사르탄).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 항부정맥제는 하기로부터 선택된다: 탐보코르 (플레카인나이드), 프로칸비드 (프로카인아미드), 코르다론 (아미오다론), 및 베타파세 (소탈롤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 항응고제는 하기를 포함하는, 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 사용될 수 있는 항응고제로부터 선택된다: 조직 플라스미노겐 활성제 (TPA), 테넥테플라제, 알테플라제, 우로키나제, 레테플라제, 및 스트렙토키나아제.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 베타 차단제는 하기로부터 선택된다: 섹트랄 (아세부톨롤), 베제타 (바이소프롤롤), 브레바이블록 (에스몰롤), 인데랄 (프로프라놀롤), 테노르민 (아테놀롤), 노르모다인, 트란다테 (라베탈롤), 코레그 (카르베딜롤), 로프레소르, 및 토프롤-XL (메토프롤롤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 칼슘 통로 차단제는 하기로부터 선택된다: 노르바그크 (암로디핀), 플렌딜 (펠로디핀), 카르디젬, 카르디젬 CD, 카르디젬 SR, 딜라코르 XR, 딜티아 XT, 티아작 (딜티아젬), 칼란, 칼란 SR, 코베라-HS, 이솝틴, 이솝틴 SR, 베렐란, 베렐란 PM (베라파밀), 아달라트, 아달라트 CC, 프로카르디아, 프로카르디아 XL (니페디핀), 카르덴, 카르덴 SR (니카르디핀), 술라르 (디솔디핀), 바스코르 (베프리딜), 및 스타틴 콜레스테롤 약물 및 암로디핀의 조합물인 카두에트.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 이뇨제는 하기로부터 선택된다: 라식스 (푸로세마이드), 부멕스 (부메타나이드), 데마덱스 (토르세마이드), 이시드릭스 (하이드로클로로티아자이드), 자록솔린 (메톨라존), 및 알닥톤 (스피로노락톤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 심부전 약물은 도부트렉스 (도부타민), 및 프리마코르 (밀리논)으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 혈관확장제는 하기로부터 선택된다: 딜라트레이트-SR, 이소-비드, 이소네이트, 이소르비드, 이소르딜, 이소트라테, 소르비트레이트 (이소소르바이드 디니트레이트), IMDUR (이소르비드 모노니트레이트), 및 BiDil (이소소르바이드 디니트레이트를 갖는 하이드랄라진.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 혈액 응고방지제는 와파린 (쿠마딘), 헤파린, 레베녹스, 및 프라그민으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 또 하나의 치료제를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 또 하나의 치료제를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 스타틴을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 스타틴은 하기로부터 선택된다: 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 그의 혼합물.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, HDL 수준을 상승시키는 또 하나의 치료제, 또는 트리글리세라이드 수준를 감소시키는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 피브레이트를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 담즙 격리제를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 여기서 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 제제는 에제티마이브를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 간 트리글리세라이드 생산을 억제하는 제제, VLDL 분비를 억제하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 제제는 아시피목스를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 추가로, 항-고혈제인 제제, 협심증을 치료하는 제제, 또는 둘 모두를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 항-고혈압제 또는 항-협심증 제제는 하기로부터 선택된다: 이뇨제, 아드레날린 수용체 길항제, 칼슘 통로 차단제, 레닌 억제제, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 알도스테론 길항제, 혈관확장제 또는 알파-2 작용제.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 이뇨제는 부메타나이드, 타크린산, 푸로세마이드, 및 토르세마이드; 티아자이드 이뇨제 예컨대 에피티자이드, 하이드로클로로티아자이드 또는 클로로티아자이드, 또는 벤드로플루메티아자이드; 티아자이드-유사 이뇨제 예컨대 인다파마이드, 클로르탈리돈, 또는 메톨라존; 칼륨-보전 이뇨제 예컨대 아밀로라이드, 트리암테렌, 또는 스피로노락톤을 포함하고; 아드레날린 수용체 길항제는 베타 차단제 예컨대 아테놀롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 또는 티몰롤을 포함하고; 알파 차단제는 독사조신, 펜톨아민, 인도라민, 페녹시벤자민, 프라조신, 테라조신, 및 톨라졸린; 혼합된 알파 + 베타 차단제 예컨대 부신돌롤, 카르베딜롤, 및 라베탈롤을 포함하고; 칼슘 통로 차단제는 디하이드로피리딘 예컨대 암로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 레르카니디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 및 니트렌디핀; 비-디하이드로피리딘 예컨대 딜티아젬 및 베라파밀; 레닌 억제제 예컨대 알리스키렌; ACE 억제제 예컨대 카프토프릴, 에날라프릴, 포시노프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 벤나제프릴; 안지오텐신 II 수용체 길항제 예컨대 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 로사르탄, 올메사르탄, 텔미사르탄, 및 발사르탄; 알도스테론 길항제 예컨대 에프레레논 및 스피로노락톤; 혈관확장제 예컨대 나트륨 니트로프루사이드; 및 알파-2 작용제 예컨대 클로니딘, 구아나벤즈, 메틸도파, 목소니딘, 구아네티딘 또는 레세르핀; 또는 니트레이트 예컨대 니트로글리세린 (글리세릴 트리니트레이트), 펜타에리트리톨 테트라니트레이트, 이소소르바이드 디니트레이트 또는 이소소르바이드 모노니트레이트를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 이것은 적어도 하나의 다른 제제를 추가로 포함하고, 상기 조합은 본원에서 함유된 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 이것은 적어도 하나의 염증용 치료제를 추가로 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 염증용 치료제는 하기를 포함한다: 사이클로옥시게나제 제 1형 억제제, 사이클로옥시게나제 제 2형 억제제, p38-MAPK의 소분자 조절물질, 염증 경로에 연루된 세포내 분자의 소분자 조절물질, 또는 그의 혼합물.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 이 조성물은 주사로 투여하기 위해 동결건조된, 안정된 및/또는 제형된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 PCSK9와 연관된 하나 이상의 생물학적 효과를 차단, 억제 또는 중화시키는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 필요로 하는 환자에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 이 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 임의로 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 현존하는 병태 때문에 필요로 하거나 상승된 혈청 콜레스테롤 수준을 발달시킬 위험이 있는 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 상기 환자에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 이 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 어떤 방법에 관한 것이고, 상기 치료된 병태는 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장병, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종, 당뇨병, 비만, 고혈압, 및 협심증으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
또 하나의 바람직한 구현예는 콜레스테롤 또는 지질 항상성을 수반하는 장애 또는 그것과 연관된 합병증을 치료 또는 예방하는 방법이고, 상기 방법은 상기 환자에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 이 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 임의로 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는, 상기 치료된 병태가 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 및 시토스테롤혈증으로부터 선택되는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 치료 방법에 관한 것이고, 상기 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 적어도 하나의 단리된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체는 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 적어도 하나의 단리된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편은 콜레스테롤 합성의 차단 또는 억제를 야기한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제를 별도로 또는 그것과 함께 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 투여는 하기 중 적어도 하나의 투여를 추가로 포함하는 치료적 레지멘의 일부이다: 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물 예컨대 콜레스티라민 (쿠에스트란), 젬피브로질 (로피드, 젬코르), 오마코, 판테틴, 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 ACE 억제제는 하기로부터 선택된다: 카포텐 (카프토프릴), 바소텍 (에날라프릴), 프리니빌, 제스트릴 (리시노프릴), 로텐신 (벤나제프릴), 모노프릴 (포시노프릴), 알타세 (라미프릴), 아쿠프릴 (퀴나프릴), 아세온 (페린도프릴), 마빅 (트란돌라프릴), 유니바스크 (모엑시프릴),
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 ARB은 하기로부터 선택된다: 코자르 (로사르탄), 디오반 (발사르탄), 아바프로 (이르베사르탄), 아타칸드 (칸데사르탄), 및 미카르디스 (텔미사르탄).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항부정맥제는 하기로부터 선택된다: 탐보코르 (플레카인나이드), 프로칸비드 (프로카인아미드), 코르다론 (아미오다론), 및 베타파세 (소탈롤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항-응고 제제는 하기로부터 선택된다: 조직 플라스미노겐 활성제 (TPA), 테넥테플라제, 알테플라제, 우로키나제, 레테플라제, 및 스트렙토키나아제.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 베타-차단제는 하기로부터 선택된다: 섹트랄 (아세부톨롤), 베제타 (바이소프롤롤), 브레바이블록 (에스몰롤), 인데랄 (프로프라놀롤), 테노르민 (아테놀롤), 노르모다인, 트란다테 (라베탈롤), 코레그 (카르베딜롤), 로프레소르, 및 토프롤-XL (메토프롤롤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 칼슘 통로 차단제는 하기로부터 선택된다: 노르바그크 (암로디핀), 플렌딜 (펠로디핀), 카르디젬, 카르디젬 CD, 카르디젬 SR, 딜라코르 XR, 딜티아 XT, 티아작 (딜티아젬), 칼란, 칼란 SR, 코베라-HS, 이솝틴, 이솝틴 SR, 베렐란, 베렐란 PM (베라파밀), 아달라트, 아달라트 CC, 프로카르디아, 프로카르디아 XL (니페디핀), 카르덴, 카르덴 SR (니카르디핀), 술라르 (디솔디핀), 바스코르 (베프리딜), 및 스타틴 콜레스테롤 약물 및 암로디핀의 조합인 카두에트.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항이뇨제는 하기로부터 선택된다: 라식스 (푸로세마이드), 부멕스 (부메타나이드), 데마덱스 (토르세마이드), 이시드릭스 (하이드로클로로티아자이드), 자록솔린 (메톨라존), 및 알닥톤 (스피로노락톤).
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 심부전 약물은 도부트렉스 (도부타민), 및 프리마코르 (밀리논)으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 혈관확장제는 하기로부터 선택된다: 딜라트레이트-SR, 이소-비드, 이소네이트, 이소르비드, 이소르딜, 이소트라테, 소르비트레이트 (이소소르바이드 디니트레이트), IMDUR (이소르비드 모노니트레이트), 및 BiDil (이소소르바이드 디니트레이트를 갖는 하이드랄라진.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 함유하는 방법에 관한 것이고, 상기 혈액 응고방지제는 와파린 (쿠마딘), 헤파린, 레베녹스, 및 프라그민으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 항체 또는 조성물과 동시에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 여기서 또 하나의 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 항체 또는 조성물의 투여에 대하여 순차적으로 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 콜레스테롤 합성 단백질을 차단 또는 억제하는 제제는 스타틴을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 스타틴은 하기로부터 선택된다: 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 그의 혼합물.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 방법은 추가로, HDL 수준을 상승시키는 제제, 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 피브레이트를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 피브레이트 제제는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 담즙 격리제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 에제티마이브를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제 174를 임의로 함유하고, 상기 방법은 추가로, 간 트리글리세라이드 생산을 억제하는 제제, VLDL 분비를 억제하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 아시피목스를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제 174를 임의로 함유하고, 상기 방법은 추가로, 항-고혈제인 제제, 협심증을 치료하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항-고혈압제 또는 항-협심증 제제는 하기로부터 선택된다: 이뇨제, 아드레날린 수용체 길항제, 칼슘 통로 차단제, 레닌 억제제, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 알도스테론 길항제, 혈관확장제 또는 알파-2 작용제.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 이뇨제는 부메타나이드, 타크린산, 푸로세마이드, 및 토르세마이드; 티아자이드 이뇨제 예컨대 에피티자이드, 하이드로클로로티아자이드 또는 클로로티아자이드, 또는 벤드로플루메티아자이드; 티아자이드-유사 이뇨제 예컨대 인다파마이드, 클로르탈리돈, 또는 메톨라존; 칼륨-보전 이뇨제 예컨대 아밀로라이드, 트리암테렌, 또는 스피로노락톤을 포함하고; 아드레날린 수용체 길항제는 베타 차단제 예컨대 아테놀롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 또는 티몰롤을 포함하고; 알파 차단제는 독사조신, 펜톨아민, 인도라민, 페녹시벤자민, 프라조신, 테라조신, 및 톨라졸린; 혼합된 알파 + 베타 차단제 예컨대 부신돌롤, 카르베딜롤, 및 라베탈롤을 포함하고; 칼슘 통로 차단제는 디하이드로피리딘 예컨대 암로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 레르카니디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 및 니트렌디핀; 비-디하이드로피리딘 예컨대 딜티아젬 및 베라파밀; 레닌 억제제 예컨대 알리스키렌; ACE 억제제 예컨대 카프토프릴, 에날라프릴, 포시노프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 벤나제프릴; 안지오텐신 II 수용체 길항제 예컨대 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 로사르탄, 올메사르탄, 텔미사르탄, 및 발사르탄; 알도스테론 길항제 예컨대 에프레레논 및 스피로노락톤; 혈관확장제 예컨대 나트륨 니트로프루사이드; 및 알파-2 작용제 예컨대 클로니딘, 구아나벤즈, 메틸도파, 목소니딘, 구아네티딘 또는 레세르핀; 또는 니트레이트 예컨대 니트로글리세린 (글리세릴 트리니트레이트), 펜타에리트리톨 테트라니트레이트, 이소소르바이드 디니트레이트 또는 이소소르바이드 모노니트레이트을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 적어도 하나의 다른 제제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 조성물 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 다른 제제에 앞서 또는 후에 투여된다.
A 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본 발명에 따른 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 여기서 적어도 하나의 단리된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편 또는 조성물의 투여는 LDLR에 결합하는 PCSK9를 억제한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 항체 또는 조성물과 동시에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 순차적으로 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 스타틴을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 방법은 추가로, HDL 수준을 상승시키는 제제, 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 피브레이트를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 방법은 추가로, 담즙 격리제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 에제티마이브를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 함유하는 임의의 하나의 방법에 관한 것이고 상기 방법은 추가로, 간 트리글리세라이드 생산을 억제하는 제제, VLDL 분비를 억제하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 아시피목스, 젬피브로질 또는 니코틴산, 및 니코틴산 유사체를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 이 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 함유하고 상기 항체 또는 항체 단편은 다른 활성제에 앞서 또는 후에 투여된다.
또 하나의 구현예는 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 바와 같은, 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 여기서 적어도 하나의 단리된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편의 투여는 LDLR에 결합하는 PCSK9를 억제한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 또 하나의 제제 또는 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 항체 또는 항체 조성물과 동시에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 항체 또는 항체 조성물에 대하여 순차적으로 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 혈청 콜레스테롤 단백질을 감소시키는 제제는 스타틴을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, HDL 수준을 상승시키는 제제, 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 다른 제제는 피브레이트를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제 234를 임의로 함유하고, 상기 방법은 추가로, 담즙 격리제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 방법은 추가로, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 에제티마이브를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 간 트리글리세라이드 생산을 억제하는 제제, VLDL 분비를 억제하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 제제는 아시피목스, 젬피브로질 또는 니코틴산, 또는 니코틴산 유사체를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제 250을 임의로 함유하고, 상기 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 추가로, 항-고혈제인 제제, 협심증을 치료하는 제제, 또는 둘 모두를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 제제는 하기를 포함한다: 암로디핀, 이뇨제, 아드레날린 수용체 길항제, 칼슘 통로 차단제, 레닌 억제제, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 알도스테론 길항제, 혈관확장제, 니트레이트 또는 알파-2 작용제.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 이뇨제는 부메타나이드, 타크린산, 푸로세마이드, 및 토르세마이드; 티아자이드 이뇨제 예컨대 에피티자이드, 하이드로클로로티아자이드 또는 클로로티아자이드, 또는 벤드로플루메티아자이드; 티아자이드-유사 이뇨제 예컨대 인다파마이드, 클로르탈리돈, 또는 메톨라존; 칼륨-보전 이뇨제 예컨대 아밀로라이드, 트리암테렌, 또는 스피로노락톤을 포함하고; 아드레날린 수용체 길항제는 베타 차단제 예컨대 아테놀롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 또는 티몰롤을 포함하고; 알파 차단제는 독사조신, 펜톨아민, 인도라민, 페녹시벤자민, 프라조신, 테라조신, 및 톨라졸린; 혼합된 알파 + 베타 차단제 예컨대 부신돌롤, 카르베딜롤, 및 라베탈롤을 포함하고; 칼슘 통로 차단제는 디하이드로피리딘 예컨대 암로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 레르카니디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 및 니트렌디핀; 비-디하이드로피리딘 예컨대 딜티아젬 및 베라파밀; 레닌 억제제 예컨대 알리스키렌; ACE 억제제 예컨대 카프토프릴, 에날라프릴, 포시노프릴, 리시노프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 트란돌라프릴, 및 벤나제프릴; 안지오텐신 II 수용체 길항제 예컨대 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 로사르탄, 올메사르탄, 텔미사르탄, 및 발사르탄; 알도스테론 길항제 예컨대 에프레레논 및 스피로노락톤; 혈관확장제 예컨대 나트륨 니트로프루사이드; 및 알파-2 작용제 예컨대 클로니딘, 구아나벤즈, 메틸도파, 목소니딘, 구아네티딘 또는 레세르핀; 또는 니트레이트 예컨대 니트로글리세린 (글리세릴 트리니트레이트), 펜타에리트리톨 테트라니트레이트, 이소소르바이드 디니트레이트 또는 이소소르바이드 모노니트레이트을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항체 또는 항체 단편 또는 조성물 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항체 또는 항체 단편 또는 조성물 및 적어도 하나의 다른 제제는 임의로 상이한 복용 방법에 의해 별도로 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 다른 제제에 앞서 또는 후에 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고 상기 조성물은 또 하나의 활성제를 임의로 함유하고 상기 항체 또는 항체 단편 또는 조성물은 염증을 억제하는 제제와 함께 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 또 하나의 활성제를 임의로 함유하는, 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 염증용 치료제는 하기를 포함한다: 사이클로옥시게나제 제 1형 억제제, 사이클로옥시게나제 제 2형 억제제, p38-MAPK의 소분자 조절물질, 염증 경로에 연루된 세포내 분자의 소분자 조절물질, 또는 그의 혼합물.
또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이고, 이 조성물은 임의로 또 하나의 활성제를 함유하고, 질환 또는 하기로부터 선택된 질환 또는 병태의 합병증을 치료 또는 예방하기 위해 사용된다: 고콜레스테롤혈증, 심장병, 대사성 증후군, 당뇨병, 관상동맥 심장병, 뇌졸중, 심혈관 질환, 알츠하이머병, 이상지질혈증, 상승된 총 혈청 콜레스테롤, 상승된 LDL, 상승된 트리글리세라이드, 상승된 VLDL, 저 HDL, 대사성 증후군, 진성 당뇨병, 가족성 결합성 고지혈증, 가족성 초고트리글리세라이드혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증 (이는 이종접합 고콜레스테롤혈증, 동종접합 고콜레스테롤혈증, 가족성 불량성 아포지질단백질 B-100을 포함); 다유전자성 고콜레스테롤혈증; 잔존조직 제거 질환, 간 리파제 결핍; 임의의 하기에 대해 부차적인 이상지질혈증: 식이 무분별, 갑상선기능저하증, 에스트로겐 및 프로게스틴 요법을 포함하는 약물, 베타-차단제, 및 티아자이드 이뇨제; 신장 증후군, 만성 신부전, 쿠싱 증후군, 원발성 담도성 간경변증, 글리코겐 축적 질환, 간종양, 답즙정체증, 말단비대증, 인슐린종, 단리된 성장 호르몬 결핍, 및 알코올-유도된 초고트리글리세라이드혈증. 죽상경화성 질환 예컨대 관상동맥 심장병, 관상동맥 질환, 말초 동맥 질환, 뇌졸중 (허혈성 및 출혈성), 협심증, 뇌혈관 질환 및 급성 관상동맥 증후군, 심근경색증, 하기의 위험의 감소: 비치명적인 심장마비, 치명적인 및 비-치명적인 뇌졸중, 어떤 유형의 심장 수술, 심부전을 위한 입원, 심장병이 있는 환자의 가슴 통증, 및/또는 심장마비 전, 심장 수술 전과 같은 불치의 심장병으로 인한 심혈관 사건, 및/또는 막힌 동맥의 증거, 또는 반복되는 심혈관 사건의 위험을 갖는 가슴 통증.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편 또는 그의 가변 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하고 적당한 숙주세포에서 발현될 때 그것이 발현되는 단리된 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 상기 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-인간 PCSK9 항체로서 인간 PCSK9 상의 동일하거나 중첩되는 에피토프(들)과 경쟁하고/하거나 특이적으로 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 발현된 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-인간 PCSK9 항체로서 인간 PCSK9 상의 동일하거나 중첩되는 에피토프(들)에 특이적으로 결합한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 에피토프(들)은 인간 PCSK9 폴리펩타이드의 모든 또는 실질적으로 모든 길이에 상응하는 중첩 단편인 10-15-mer 펩타이드의 라이브러리에서 항-인간 PCSK9 항체의 하나 이상의 펩타이드에의 결합을 검출하는 결합 검정에 의해 확인될 수 있다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 그렇게 결합된 에피토프는 상기 라이브러리 중 항체 또는 항체 단편의 펩타이드에의 특이적 결합이 일어날 때 검출가능한 화학발광 신호를 방출하는 화학발광 표지의 사용에 의해 상기 라이브러리에서 항체 또는 항체 단편의 상기 10-15 mer 펩타이드 중 하나 이상에의 특이적 결합을 검출하는 웨스턴 면역블랏 검정을 사용하여 결정된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 2 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항-인간 항- PCSK9 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 3 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 4 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 적어도 5 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체 또는 항체 단편은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23 및 Ab24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항-PCSK9 항체의 모두 6 개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편은 하기를 함유한다: (a) 서열번호: 4, 서열번호: 44, 서열번호: 84, 서열번호: 124, 서열번호: 164, 서열번호: 204, 서열번호: 244, 서열번호: 284, 서열번호: 324, 서열번호: 364, 서열번호: 404, 서열번호: 444, 서열번호: 484, 서열번호: 524, 서열번호: 564, 서열번호: 604, 서열번호: 644, 서열번호: 684, 서열번호: 724, 서열번호: 764, 서열번호: 804, 서열번호: 844, 서열번호: 884, 및 서열번호: 924로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR1 서열; 서열번호: 6, 서열번호: 46, 서열번호: 86, 서열번호: 126, 서열번호: 166, 서열번호: 206, 서열번호: 246, 서열번호: 286, 서열번호: 326, 서열번호: 366, 서열번호: 406, 서열번호: 446, 서열번호: 486, 서열번호: 526, 서열번호: 566, 서열번호: 606, 서열번호: 646, 서열번호: 686, 서열번호: 726, 서열번호: 766, 서열번호: 806, 서열번호: 846, 서열번호: 886, 및 서열번호: 926으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR2 서열; 및 서열번호: 8, 서열번호: 48, 서열번호: 88, 서열번호: 128, 서열번호: 168, 서열번호: 208, 서열번호: 248, 서열번호: 288, 서열번호: 328, 서열번호: 368, 서열번호: 408, 서열번호: 448, 서열번호: 488, 서열번호: 528, 서열번호: 568, 서열번호: 608, 서열번호: 648, 서열번호: 688, 서열번호: 728, 서열번호: 768, 서열번호: 808, 서열번호: 848, 서열번호: 888, 및 서열번호: 928로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR3 서열을 포함하는 가변 중쇄; 및/또는
(b) 서열번호: 24, 서열번호: 64, 서열번호: 104, 서열번호: 144, 서열번호: 184, 서열번호: 224, 서열번호: 264, 서열번호: 304, 서열번호: 344, 서열번호: 384, 서열번호: 424, 서열번호: 464, 서열번호: 504, 서열번호: 544, 서열번호: 584, 서열번호: 624, 서열번호: 664, 서열번호: 704, 서열번호: 744, 서열번호: 784, 서열번호: 824, 서열번호: 864, 서열번호: 904, 및 서열번호: 944로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR1 서열; 서열번호: 26, 서열번호: 66, 서열번호: 106, 서열번호: 146, 서열번호: 186, 서열번호: 226, 서열번호: 266, 서열번호: 306, 서열번호: 346, 서열번호: 386, 서열번호: 426, 서열번호: 466, 서열번호: 506, 서열번호: 546, 서열번호: 586, 서열번호: 626, 서열번호: 666, 서열번호: 706, 서열번호: 746, 서열번호: 786, 서열번호: 826, 서열번호: 866, 서열번호: 906, 및 서열번호: 946으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR2 서열; 및 서열번호: 28, 서열번호: 68, 서열번호: 108, 서열번호: 148, 서열번호: 188, 서열번호: 228, 서열번호: 268, 서열번호: 308, 서열번호: 348, 서열번호: 388, 서열번호: 428, 서열번호: 468, 서열번호: 508, 서열번호: 548, 서열번호: 588, 서열번호: 628, 서열번호: 668, 서열번호: 708, 서열번호: 748, 서열번호: 788, 서열번호: 828, 서열번호: 868, 서열번호: 908, 및 서열번호: 948로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 CDR3 서열을 포함하는 가변 경쇄, 추가로, 단, 임의의 상기-확인된 CDR 폴리펩타이드의 1 또는 2 개의 잔기는 또 하나의 아미노산으로 치환될 수 있다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 4의 CDR1 서열, 서열번호: 6의 CDR2 서열, 및 서열번호: 8의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 24의 CDR1 서열, 서열번호: 26의 CDR2 서열, 및 서열번호: 28의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 44의 CDR1 서열, 서열번호: 46의 CDR2 서열, 및 서열번호: 48의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 64의 CDR1 서열, 서열번호: 66의 CDR2 서열, 및 서열번호: 68의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 84의 CDR1 서열, 서열번호: 86의 CDR2 서열, 및 서열번호: 88의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 104의 CDR1 서열, 서열번호: 106의 CDR2 서열, 및 서열번호: 108의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 124의 CDR1 서열, 서열번호: 126의 CDR2 서열, 및 서열번호: 128의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 144의 CDR1 서열, 서열번호: 146의 CDR2 서열, 및 서열번호: 148의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 164의 CDR1 서열, 서열번호: 166의 CDR2 서열, 및 서열번호: 168의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 184의 CDR1 서열, 서열번호: 186의 CDR2 서열, 및 서열번호: 188의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 발현된 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편은 서열번호: 204의 CDR1 서열, 서열번호: 206의 CDR2 서열, 및 서열번호: 208의 CDR3 서열을 포함하는 가변 중쇄를 함유하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 224의 CDR1 서열, 서열번호: 226의 CDR2 서열, 및 서열번호: 228의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 244의 CDR1 서열, 서열번호: 246의 CDR2 서열, 및 서열번호: 248의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 264의 CDR1 서열, 서열번호: 266의 CDR2 서열, 및 서열번호: 268의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 284의 CDR1 서열, 서열번호: 286의 CDR2 서열, 및 서열번호: 288의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 304의 CDR1 서열, 서열번호: 306의 CDR2 서열, 및 서열번호: 308의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 324의 CDR1 서열, 서열번호: 326의 CDR2 서열, 및 서열번호: 328의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 344의 CDR1 서열, 서열번호: 346의 CDR2 서열, 및 서열번호: 348의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 364의 CDR1 서열, 서열번호: 366의 CDR2 서열, 및 서열번호: 368의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 384의 CDR1 서열, 서열번호: 386의 CDR2 서열, 및 서열번호: 388의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 404의 CDR1 서열, 서열번호: 406의 CDR2 서열, 및 서열번호: 408의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 424의 CDR1 서열, 서열번호: 426의 CDR2 서열, 및 서열번호: 428의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 444의 CDR1 서열, 서열번호: 446의 CDR2 서열, 및 서열번호: 448의 CDR3 서열을 포함하고; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 464의 CDR1 서열, 서열번호: 466의 CDR2 서열, 및 서열번호: 468의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 484의 CDR1 서열, 서열번호: 486의 CDR2 서열, 및 서열번호: 488의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 504의 CDR1 서열, 서열번호: 506의 CDR2 서열, 및 서열번호: 508의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 524의 CDR1 서열, 서열번호: 526의 CDR2 서열, 및 서열번호: 528의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 544의 CDR1 서열, 서열번호: 546의 CDR2 서열, 및 서열번호: 548의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 564의 CDR1 서열, 서열번호: 566의 CDR2 서열, 및 서열번호: 568의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 584의 CDR1 서열, 서열번호: 586의 CDR2 서열, 및 서열번호: 588의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 604의 CDR1 서열, 서열번호: 606의 CDR2 서열, 및 서열번호: 608의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 624의 CDR1 서열, 서열번호: 626의 CDR2 서열, 및 서열번호: 628의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 644의 CDR1 서열, 서열번호: 646의 CDR2 서열, 및 서열번호: 648의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 664의 CDR1 서열, 서열번호: 666의 CDR2 서열, 및 서열번호: 668의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 684의 CDR1 서열, 서열번호: 686의 CDR2 서열, 및 서열번호: 688의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 704의 CDR1 서열, 서열번호: 706의 CDR2 서열, 및 서열번호: 708의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 724의 CDR1 서열, 서열번호: 726의 CDR2 서열, 및 서열번호: 728의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 744의 CDR1 서열, 서열번호: 746의 CDR2 서열, 및 서열번호: 748의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 764의 CDR1 서열, 서열번호: 766의 CDR2 서열, 및 서열번호: 768의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 784의 CDR1 서열, 서열번호: 786의 CDR2 서열, 및 서열번호: 788의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 804의 CDR1 서열, 서열번호: 806의 CDR2 서열, 및 서열번호: 808의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 824의 CDR1 서열, 서열번호: 826의 CDR2 서열, 및 서열번호: 828의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 848의 CDR1 서열, 서열번호: 846의 CDR2 서열, 및 서열번호: 848의 CDR3 서열을 포함하고/하거나; 상기 가변 경쇄는 서열번호: 864의 CDR1 서열, 서열번호: 866의 CDR2 서열, 및 서열번호: 868의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 884의 CDR1 서열, 서열번호: 886의 CDR2 서열, 및 서열번호: 888의 CDR3 서열을 포함하고/거나; 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 904의 CDR1 서열, 서열번호: 906의 CDR2 서열, 및 서열번호: 908의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 924의 CDR1 서열, 서열번호: 926의 CDR2 서열, 및 서열번호: 928의 CDR3 서열을 포함하고/거나; 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 944의 CDR1 서열, 서열번호: 946의 CDR2 서열, 및 서열번호: 948의 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 2와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고/거나 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 22를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 2 및 서열번호: 22 각각에서의 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 42와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 62와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 42 및 서열번호: 62 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 82와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 102와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 82 및 서열번호: 102 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 122와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 142와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 122 및 서열번호: 142 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 162와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 182와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 162 및 서열번호: 182 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 202와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 222와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 202 및 서열번호: 222 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 242와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 262와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 47, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 242 및 서열번호: 262 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 282와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 302와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 282 및 서열번호: 302 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 322와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 342와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 322 및 서열번호: 342 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 362와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 382와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 362 및 서열번호: 382 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 402와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 422와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 55, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 402 및 서열번호: 422 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 442와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 462와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 442 및 서열번호: 462 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 482와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 502와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 482 및 서열번호: 502 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 522와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 542와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 522 및 서열번호: 542 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 562와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 582와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 562 및 서열번호: 582 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 602와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 622와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 602 및 서열번호: 622 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 642와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 662와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 642 및 서열번호: 662 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 682와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 702와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 682 및 서열번호: 702 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 722와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 742와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 722 및 서열번호: 742 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 762와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 782와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 762 및 서열번호: 782 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 802와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 822와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 802 및 서열번호: 822 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 842와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 862와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 842 및 서열번호: 862 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 882와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 902와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 882 및 서열번호: 902 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 중쇄는 서열번호: 922와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 가변 경쇄는 서열번호: 942와 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 가변 중쇄 및 경쇄 각각은 서열번호: 922 및 서열번호: 942 각각에서의 상기 가변 중쇄 및 경쇄와 적어도 90% 동일하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 1과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 21과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 41과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 61과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 81에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 101과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 121과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 141과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 161과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 181과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 201과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 221과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 241과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 261과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 281과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 301을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 321을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 341과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 361과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 381을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 401을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 421과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 441과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 461과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 481과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 501에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 521과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 541을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 561을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 581과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 601과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 621을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 641을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 661과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 681과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 701과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 721과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 741을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 761을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 781과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 801에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 821과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 841에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 861과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 881에 대해 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 901을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 중쇄는 서열번호: 921을 포함하고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 경쇄는 서열번호: 941과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 항체 또는 항체 단편은 키메라, 인간화된, 인간 항체 또는 항체 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체 또는 항체 단편은 scFvs, 카멜바디, 나노바디, IgNAR, F ab 단편, F ab' 단편, MetMabs, 1가 항체 단편, 및 F( ab' )2 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체 또는 항체 단편은 N-당화 및/또는 O-당화가 실질적으로 또는 전적으로 없다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체 또는 항체 단편은 인간 불변 도메인을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 핵산 또는 핵산들에 의해 인코딩된 발현된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 핵산 또는 핵산들은 서열번호: 12, 서열번호: 32; 서열번호: 52, 서열번호: 72; 서열번호: 92, 서열번호: 112; 서열번호: 132, 서열번호: 152; 서열번호: 172, 서열번호: 192; 서열번호: 212, 서열번호: 232, 서열번호: 252, 서열번호: 272; 서열번호: 292, 서열번호: 312; 서열번호: 332, 서열번호: 352; 서열번호: 372, 서열번호: 392; 서열번호: 412, 서열번호: 432; 서열번호: 452, 서열번호: 472; 서열번호: 492, 서열번호: 512, 서열번호: 532, 서열번호: 552, 서열번호: 572, 서열번호: 592, 서열번호: 612, 서열번호: 632, 서열번호: 652, 서열번호: 672; 서열번호: 692; 서열번호: 712; 서열번호: 732; 서열번호: 752; 서열번호: 772; 서열번호: 792; 서열번호: 812; 서열번호: 832; 서열번호: 852; 서열번호: 872; 서열번호: 892; 서열번호: 912; 서열번호: 932; 서열번호: 952; 또는 그의 코돈 축퇴물 에 대해 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 VH 및 VL 영역을 인코딩하는 서열을 포함한다.
벡터 또는 벡터들은 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 서열 또는 서열들을 포함한다.
숙주세포는 본 발명에 따른 항체 또는 벡터 또는 벡터들을 인코딩하는 핵산 서열 또는 서열들을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산 또는 산들을 함유하는 숙주세포에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 포유동물, 박테리아, 진균, 효모, 조류 또는 곤충 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 이 숙주세포는 사상균 또는 효모를 포함한다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 이 숙주세포는 하기를 포함하는 사상균 또는 효모를 포함한다: 피치아 패스토리스, 피치아 핀란디카, 피치아 트레할로필라, 피치아 코클라마에, 피치아 멤브라나에파시엔스, 피치아 미누타 (오가타에아 미누타, 피치아 린드네리), 피치아 오펀티아에, 피치아 테르모톨레란스, 피치아 살릭타리아, 피치아 구에르쿰, 피치아 피에페리, 피치아 스팁티스, 피치아 메타놀리카, 피치아 sp., 사카로마이세스 세레비시애, 사카로마이세스 sp., 한세눌라 폴리모르파, 클루이베로마이세스 sp., 클루이베로마이세스 락티스, 칸디다 알비칸스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니게르, 아스페르길루스 오리자에, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 푸사리움 sp., 푸사리움 그라미네움, 푸사리움 베네나툼, 피스코미트렐라 파텐스 및 뉴로스포라 크라싸. 피치아 sp., 임의의 사카로마이세스 sp., 한세눌라 폴리모르파, 임의의 클루이베로마이세스 sp., 칸디다 알비칸스, 임의의 아스페르길루스 sp., 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 임의의 푸사리움 sp. 및 뉴로스포라 크라싸.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 포유동물 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 하기이다: CHO, COS, BHK, 골수종, SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 라인 (현탁 배양에서 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포), 마우스 세르톨리 세포; 인간 폐 세포; 인간 간 세포, 또는 마우스 유선 종양 세포.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 상기 포유동물 세포는 CHO 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 이 숙주세포는 피치아속에 속하는 효모 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 숙주세포에 관한 것이고, 이 숙주세포는 피치아 패스토리스이다.
재조합 숙주세포에서 상기 항체 또는 항체 단편의 발현을 위해 인코딩하는 핵산을 발현시켜 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 박테리아, 효모, 진균, 곤충 세포, 식물 세포, 조류 세포, 또는 포유동물 세포로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 최적으로 다배체일 수 있는 효모 또는 사상균이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 효모 또는 사상균은 하기를 포함한다: 피치아 패스토리스, 피치아 핀란디카, 피치아 트레할로필라, 피치아 코클라마에, 피치아 멤브라나에파시엔스, 피치아 미누타 (오가타에아 미누타, 피치아 린드네리), 피치아 오펀티아에, 피치아 테르모톨레란스, 피치아 살릭타리아, 피치아 구에르쿰, 피치아 피에페리, 피치아 스팁티스, 피치아 메타놀리카, 피치아 sp., 사카로마이세스 세레비시애, 사카로마이세스 sp., 한세눌라 폴리모르파, 클루이베로마이세스 sp., 클루이베로마이세스 락티스, 칸디다 알비칸스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니게르, 아스페르길루스 오리자에, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 푸사리움 sp., 푸사리움 그라미네움, 푸사리움 베네나툼, 피스코미트렐라 파텐스 및 뉴로스포라 크라싸. 피치아 sp., 임의의 사카로마이세스 sp., 한세눌라 폴리모르파, 임의의 클루이베로마이세스 sp., 칸디다 알비칸스, 임의의 아스페르길루스 sp., 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 임의의 푸사리움 sp. 및 뉴로스포라 크라싸.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 포유동물 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 숙주세포는 하기이다: CHO, COS, BHK, 골수종, SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 라인 (현탁 배양에서 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포), 마우스 세르톨리 세포; 인간 폐 세포; 인간 간 세포, 또는 마우스 유선 종양 세포.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 포유동물 세포는 CHO 세포이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 383의 방법에 관한 것이고, 상기 재조합 숙주세포는 적어도 10-25 mg/리터의 상기 항체 또는 항체 단편을 배양 배지로 안정되게 발현시키고 분비하는 다배체 효모 배양물이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 세포는 하기를 포함하는 방법으로 만들어진 다배체 효모이다:
(i) 프로모터 및 신호 서열에 작동가능하게 연결된 상기 항체를 인코딩하는 하나 이상의 이종기원 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 적어도 하나의 발현 벡터를 반수체 효모 세포에 도입하는 단계;
(ii) 상기 제 1 및/또는 제 2 반수체 효모 세포로부터 다배체 효모를 메이팅 또는 스페로플라스트 융합에 의해 생산하는 단계;
(iii) 상기 효모를 안정되게 발현시키는 다배체 효모 세포를 선별하는 단계; 및
(iv) 상기 효모를 안정되게 발현시키는 다배체 효모 세포로부터 배양 배지로 안정한 다배체 효모 배양물을 생산하는 단계.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 발현시키는 효모 세포를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 효모는 피치아 속이다.
또 하나의 바람직한 구현예는 치료적으로 또는 진단적으로 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편의 투여를 포함하는 임의의 치료 또는 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 구강, 표피, 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 진피내, 근육내, 비강내, 안구내, 복강내, 척수내, 척추강내, 정맥내, 경구, 비경구, 직장으로, 관장 또는 좌약을 통해, 피하, 피하, 설하, 경피, 및 점막통과로부터 선택된 수단에 의해 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 피하, 정맥내, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 근육내, 복강내, 척수내, 척추강내, 및 비경구로부터 선택된 수단에 의해 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 피하 수단에 의해 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 정맥내 수단에 의해 투여된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 사용하는 방법에 관한 것이고, 상기 항체 또는 항체 단편은 분말, 액체, 겔, 드롭, 또는 다른 투여 수단으로 함유된다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 이 조성물은 하기로부터 선택된 수단에 의한 투여에 적당하다: 구강, 표피, 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 진피내, 근육내, 비강내, 안구내, 복강내, 척수내, 척추강내, 정맥내, 경구, 비경구, 직장으로, 관장 또는 좌약을 통해, 피하, 피하, 설하, 경피, 및 점막통과.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 함유하는 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 피하, 정맥내, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 근육내, 복강내, 척수내, 척추강내, 및 비경구로부터 선택된 수단에 의해 투여가능하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 조성물에 관한 것이고, 이 조성물 피하 수단에 의해 투여가능하다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 정맥내 수단에 의해 투여가능한 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 분말, 액체, 겔, 드롭, 리포좀, 또는 다른 복용 형태를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 샘플에서 PCSK9를 단리, 검출 또는 정제하기 위해 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 PCSK9의 수준을 생체내 또는 생체외에서 검출하기 위해 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는, 환자에게 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편 또는 다른 요법이 투여되어야 하는 지를 평가하기 위해 당해 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 하나의 바람직한 구현예는 콜레스테롤을 감소시키거나 지질 수준을 변경하는 것을 목적으로 하는 치료 방법의 효능을 평가하기 위해 당해 항체를 사용하는 검출 방법에 관한 것이다.
바람직한 구현예의 상세한 설명
PCSK9에 결합하는 항체 및 그의 결합 단편이 본원에 개시되어 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9에 결합하여 PCSK9가 다양한 방식으로 기능하는 것을 막는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 다른 물질, 예를 들면, LDLR과 상호작용하는 PCSK9의 능력을 차단하거나 감소시킨다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9가 LDLR에 결합할 가능성을 막거나 감소시키는 방식으로 PCSK9에 결합한다. 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9에 결합하지만 LDLR과 상호작용하는 PCSK9의 능력을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 인간 모노클로날 항체이다.
당해분야의 숙련가에 의해 인정될 바와 같이, PCSK9 및 LDLR 간의 상호작용을 변경하는 것은 LDL에 결합하는데 이용될 수 있는 LDLR의 양을 증가시킬 수 있고, 이는 결국 대상에서 혈청 LDL-C의 양을 감소시켜, 대상에서의 혈청 콜레스테롤 수준의 감소를 야기한다. 이와 같이, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 상승된 혈청 콜레스테롤 수준을 갖거나, 상승된 혈청 콜레스테롤 수준의 위험에 있거나, 또는 그의 혈청 콜레스테롤 수준의 감소로부터 이익을 얻을 수 있는 대상을 치료하기 위한 다양한 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 이들 병태는 임의의 상기-언급된 병태를 포함한다. 따라서, 혈청 콜레스테롤 증가를 낮추거나, 유지하거나, 또는 방지하는 다양한 방법 및 기술이 또한 본원에서 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 및 LDLR 간의 결합을 가능하게 하지만, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 LDLR에 대한 PCSK9의 부정적인 활성을 막거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 LDLR에의 결합을 막거나 감소시킨다.
편의상, 하기의 섹션은 일반적으로 본원에 사용된 용어들의 다양한 의미를 개괄적으로 설명한다. 이 논의 이후, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편에 관한 일반적인 측면이 논의된 다음, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 다양한 구현예의 특성을 입증하는 구체적인 예 및 이들이 어떻게 이용될 수 있는지가 논의된다.
정의
본 발명은 기재된 특정한 방법론, 프로토콜, 세포주, 동물 종 또는 속, 및 시약은 변할 수 있으므로 이에 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 또한 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 구현예를 기술하기 위한 것이며, 부가된 청구항들에 의해서만 제한될 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아닌 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 사용된 바와 같이 단수 형태는 문맥이 달리 명확히 표시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "세포"의 언급은 복수의 상기 세포를 포함하며 "단백질"의 언급은 하나 이상 단백질 및 당해분야의 숙련가 등에게 공지된 이의 등가물의 언급을 포함한다. 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 달리 명확히 명시하지 않는 한 본 발명이 속하는 당해분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
용어 "프로단백질 전환효소 서브틸리신 켁신 타입 9" 또는 "PCSK9"는 서열번호: 961 및/또는 서열번호: 962에 제시된 폴리펩타이드 또는 그의 단편, 뿐만 아니라 관련된 폴리펩타이드를 지칭하며, 비제한적으로, 대립유전자 변이체, 스플라이스 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 N-말단 메티오닌의 부가를 포함하는 삽입 변이체, 융합 폴리펩타이드, 및 종간 동족체를 포함한다. 어떤 구현예에서, PCSK9 폴리펩타이드는 비제한적으로, 선도 서열 잔기, 표적화 잔기, 아미노 말단 메티오닌 잔기, 라이신 잔기, 태그 잔기, 및/또는 융합 단백질 잔기와 같은 말단 잔기를 포함한다. "PCSK9"는 또한 FH3, NARC1, HCHOLA3, 프로단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 타입 9, 및 신경 세포자멸사 조절된 전환효소 1로서 지칭되어 왔다. PCSK9 유전자는 분비성 서브틸라아제 패밀리의 프로테이나제 K 서브패밀리에 속하는 프로단백질 전환효소 단백질을 인코딩한다. 용어 "PCSK9"는 프로단백질(서열번호: 961) 및 프로단백질의 자가촉매 후 생성된 생성물(서열번호: 962) 모두를 가리킨다. 자가촉매된 생성물만이 지칭되는 경우(절단된 PCSK9에 선택적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 경우와 같이), 상기 단백질은 "성숙한," "절단된", "가공된" 또는 "활성" PCSK9로서 지칭될 수 있다. 불활성 형태만이 지칭되는 경우, 상기 단백질은 PCSK9의 "불활성", "프로-형태", 또는 "가공되지 않은" 형태로서 지칭될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 PCSK9는 또한 자연 발생 대립유전자, 예컨대 돌연변이 D374Y, S127R 및 F216L을 포함한다. 용어 PCSK9는 또한 PCSK9 아미노산 서열의 번역후 수식을 포함하는 PCSK9 분자, 예컨대 당화된 PCSK9 서열, 페길화된 PCSK9 서열, 그의 신호 서열이 절단된 PCSK9 서열, 촉매 도메인으로부터 그의 프로 도메인이 절단되었지만 촉매 도메인으로 분리되지 않은 PCSK9 서열을 포함한다.
용어 "PCSK9 활성"은 PCSK9의 임의의 생물학적 효과를 포함한다. 어떤 구현예에서, PCSK9 활성은 기질 또는 수용체와 상호작용하거나 이들에 결합하는 PCSK9의 능력을 포함한다. 일부 구현예에서, PCSK9 활성은 LDL-R 수용체(LDLR)에 결합하는 PCSK9의 능력으로 표시된다. 일부 구현예에서, PCSK9는 LDLR에 결합하고 LDLR을 포함하는 반응을 촉매한다. 일부 구현예에서, PCSK9 활성은 LDLR의 이용가능성을 변경하는(예를 들어, 감소시키는) PCSK9의 능력을 포함한다. 일부 구현예에서, PCSK9 활성은 대상에서 LDL-C의 양을 증가시키는 PCSK9의 능력을 포함한다. 일부 구현예에서, PCSK9 활성은 LDL에 결합하는데 이용가능한 LDLR의 양을 감소시키는 PCSK9의 능력을 포함한다. 일부 구현예에서, "PCSK9 활성"은 PCSK9 신호전달로부터 야기되는 임의의 생물학적 활성을 포함한다. 예시적인 활성은, 비제한적으로, LDLR에 결합하는 PCSK9, LDLR 또는 다른 단백질을 절단하는 PCSK9 효소 활성, PCSK9 작용을 촉진하는 LDLR 이외의 단백질에 결합하는 PCSK9, APOB 분비를 변경하는 PCSK9(Sun X-M 등, "Evidence for effect of mutant PCSK9 on apoliprotein B secretion as the cause of unusually severe dominant hypercholesterolemia", Human Molecular Genetics 14: 1161-1169, 2005 및 Ouguerram K 등, "Apolipoprotein B100 metabolism in autosomal-dominant hypercholesterolemia related to mutations in PCSK9", Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24: 1448-1453, 2004), 간 재생 및 뉴런의 세포 분화에서의 PCSK9의 역할(Seidah N G 등, "The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1 (NARC-1): Liver regeneration and neuronal differentiation" PNAS 100: 928-933, 2003), 및 간 글루코오스 대사에서의 PCSK9의 역할(Costet 등, "Hepatic PCSK9 expression is regulated by nutritional status via insulin and sterol regulatory element-binding protein 1c" J. Biol. Chem. 281(10):6211-18, 2006)을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "고콜레스테롤혈증"은 콜레스테롤 수준이 원하는 수준을 초과하여 상승된 병태를 지칭한다. 일부 구현예에서, 이것은 혈청 콜레스테롤 수준이 상승된 것을 가리킨다. 일부 구현예에서, 상기 원하는 수준은 당해분야의 숙련가에게 공지된(그리고 본원에 기재되거나 참조된) 다양한 "위험 인자"를 고려한다.
본원에서 용어 "재조합 세포" 또는 "재조합 숙주세포"는 본 발명에 따른 하나 이상의 항체 폴리펩타이드를 발현하도록 조작된 임의의 세포를 지칭한다. 이것은 예로써 박테리아, 진균, 효모, 포유동물, 무척추동물 예컨대 곤충, 식물 및 조류 세포를 포함한다. 바람직한 숙주세포는 효모, 진균, 특히 사상균 및 포유동물 세포이다. 효모 및 사상균은, 비제한적으로 피치아 패스토리스, 피치아 핀란디카, 피치아 트레할로필라, 피치아 코클라마에, 피치아 멤브라나에파시엔스, 피치아 미누타(오가타에아 미누타, 피치아 린드네리), 피치아 오펀티아에, 피치아 테르모톨레란스, 피치아 살릭타리아, 피치아 구에르쿰, 피치아 피에페리, 피치아 스팁티스, 피치아 메타놀리카, 피치아 종, 사카로마이세스 세레비시애, 사카로마이세스 종, 한세눌라 폴리모르파, 클루이베로마이세스 종, 클루이베로마이세스 락티스, 칸디다 알비칸스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니게르, 아스페르길루스 오리자에, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 푸사리움 종, 푸사리움 그라미네움, 푸사리움 베네나툼, 피스코미트렐라 파텐스 및 뉴로스포라 크라싸. 피치아 종, 임의의 사카로마이세스 종, 한세눌라 폴리모르파, 임의의 클루이베로마이세스 종, 칸디다 알비칸스, 임의의 아스페르길루스 종, 트리코데르마 리세이, 크리소스포륨 루크노웬스, 임의의 푸사리움 종. 및 뉴로스포라 크라싸를 포함한다.
무척추동물 세포의 예는 곤충 세포, 예컨대 드로소필라 S2 및 스포도프테라 Sf9, 뿐만 아니라 식물 세포를 포함한다. 유용한 포유동물 숙주세포주의 예는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 및 COS 세포를 포함한다. 보다 특정한 예들은 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 라인(293 또는 현탁 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 세포, Graham 등, J. Gen Virol., 36:59 (1977)); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, Urlaub 및 Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세 (Hep G2, HB 8065); 및 마우스 유선 종양(MMT 060562, ATCC CCL51)을 포함한다. 적절한 숙주세포의 선택은 본 기술분야의 기술 내에 속하는 것으로 간주된다. 항체 발현을 위한 바람직한 포유동물 세포는 CHO 세포 및 COS 세포를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 재조합 숙주세포는 피치아속의 다배체 효모 세포이다.
교배 능력이 있는( mating competent ) 효모 종: 본 발명에서, 이것은 배양에서 성장할 수 있는 임의의 2배체 또는 4배체 효모를 광범위하게 포함하는 것으로 의도된다. 그와 같은 효모의 종은 반수체, 2배체, 또는 다른 다배체 형태로 존재할 수 있다. 주어진 배수성의 세포는 적절한 조건 하에, 상기 형태로 무수한 수의 생성을 위해 증식될 수 있다. 2배체 세포는 또한 포자를 형성하여 반수체 세포를 형성할 수 있다. 순차적인 교배는 2배체 균주의 추가 교배 또는 융합을 통해 4배체 균주를 야기할 수 있다. 본 발명은 반수체 효모, 뿐만 아니라, 예를 들면, 교배 또는 스페로플라스트 융합에 의해 생산된 2배체 또는 다른 다배체 효모의 사용을 고려한다.
교배 능력이 있는 효모는 사카로마이세타시애 패밀리의 멤버인 효모를 포함하며, 이는 속 아르크시오자이마; 아스코보트라이오자이마; 사이테로마이세스; 데바리오마이세스; 덱케라; 에레모테시움; 이사첸키아; 카자키스타니아; 클루이베로마이세스; 코다마에아; 로데로마이세스; 파차이솔렌; 피치아; 사카로마이세스; 사투르니스포라; 테트라피시스포라; 톨루라스포라; 윌리옵시스; 및 자이고사카로마이세스를 포함한다. 본 발명에서 잠재적으로 유용한 효모의 다른 유형은 야로위아; 로도스포리디움; 칸디다; 한세눌라; 필로바시움; 스포리디오볼러스; 불레라; 류코스포리디움 및 필로바시델라를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 교배 능력이 있는 효모는 피치아속의 멤버이다. 본 발명의 추가의 바람직한 구현에에서, 피치아속의 교배 능력이 있는 효모는 하기의 종 중 하나이다: 피치아 패스토리스, 피치아 메타놀리카, 및 한세눌라 폴리모르파(피치아 앙구스타). 본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 피치아속의 교배 능력이 있는 효모는 종 피치아 패스토리스이다.
반수체 효모 세포: 그것의 정상 게놈(염색체) 보체의 각 유전자의 하나의 복제수를 갖는 세포.
다배체 효모 세포: 그것의 정상 게놈(염색체) 보체의 하나를 초과하는 복제수를 갖는 세포.
2배체 효모 세포: 전형적으로 2개의 반수체 세포의 융합(교배)의 공정에 의해 형성된, 그의 정상적인 게놈 보체의 본질적으로 각 유전자의 2개의 복제수(대립유전자)를 갖는 세포.
4배체 효모 세포: 전형적으로 2개의 반수체 세포의 융합(교배)의 공정에 의해 형성된, 그의 정상 게놈 보체의 본질적으로 각 유전자의 4개의 복제수(대립유전자)를 갖는 세포. 4배체는 2, 3, 또는 그 이상의 상이한 발현 카세트를 보유할 수 있다. 그와 같은 4배체는 동형접합체 헤테로탈릭 a/a 및 알파/알파 2배체의 선택적 교배에 의해 S. 세레비시애에서 그리고 피치아에서 반수체의 순차적인 교배에 의해 영양요구성 2배체를 얻음으로써 수득될 수 있다. 예를 들면, [met his] 반수체는 [ade his] 반수체와 교배되어 2배체 [his]를 얻을 수 있으며; [met arg] 반수체는 [ade arg] 반수체와 교배되어 2배체 [arg]를 얻은 후; 2배체 [his] x 2배체 [arg]되어 4배체 독립영양생물을 얻을 수 있다. 2배체 세포의 이점 및 사용에 대한 언급이 4배체 세포에도 적용될 수 있음이 당해분야의 숙련가에게 이해될 것이다.
효모 접합: 2개의 반수체 효모 세포가 자연적으로 융합되어 하나의 2배체 효모 세포를 형성하는 공정.
감수분열: 2배체 효모 세포가 감소 분할을 겪어 반수체 포자 생성물을 형성하는 공정. 이후 각 포자는 발아하여 반수체 영양적으로 성장하는 세포주를 형성할 수 있다.
선별 마커: 선별 마커는, 예를 들면 형질전환 사건을 통해서와 같이, 상기 유전자를 받는 세포에 성장 표현형(물리적 성장 특징)을 부여하는 유전자 또는 유전자 단편이다. 선별 마커는 선별 마커 유전자를 받지 않은 세포가 성장할 수 없는 조건 하에서 상기 세포를 선택적 성장 배지에서 생존하고 성장하게 한다. 선별 마커 유전자는 일반적으로 항생제 또는 다른 약물, 2개의 온도 민감성("ts") 돌연변이체가 교차되거나 ts 돌연변이체가 형질전환될 때 온도에 세포 내성을 부여하는 유전자와 같은 양성 선별 마커 유전자; 생합성 유전자를 갖지 않는 모든 세포에 의해 요구되는 특정 영양소가 없는 배지에서 성장하는 세포 능력을 부여하는 생합성 유전자, 또는 야생형 유전자를 갖지 않는 세포에 의해 성장할 수 없는 세포 능력을 부여하는 돌연변이된 생합성 유전자와 같은 음성 선별 마커 유전자 등을 포함하는 몇 가지 유형으로 나뉜다. 적합한 마커는 비제한적으로: ZEO; G418; LYS3; MET1; MET3a; ADE1; ADE3; URA3 등을 포함한다.
발현 벡터: 이들 DNA 벡터는 표적 숙주세포 내에서 외래 단백질의 발현을 위해 조작을 용이하게 하는 요소를 함유한다. 편리하게, 서열의 조작 및 형질전환을 위한 DNA의 생산은 먼저 박테리아 숙주, 예를 들면 대장균에서 수행되며, 보통 벡터는 박테리아 복제 기점 및 적절한 박테리아 선별 마커를 포함하는 상기 조작을 용이하게 하는 서열을 포함할 것이다. 선별 마커는 선별 배양 배지에서 성장된 형질전환된 숙주세포의 생존 또는 성장에 필요한 단백질을 인코딩한다. 선별 유전자를 함유하는 벡터로 형질전환되지 않은 숙주세포는 배양 배지에서 생존하지 않을 것이다. 전형적인 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소에 대해 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보완하거나, 또는 (c) 복합 배지로부터 이용될 수 없는 매우 중요한 영양소를 공급하는 단백질들을 인코딩한다. 효모의 형질전환을 위한 예시적인 벡터 및 방법은, 예를 들면, 문헌[Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000). Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 발현 벡터는 형질전환된 효모 균주를 확인하기 위한 선택가능한 영양요구성 또는 약물 마커를 포함하는, 효모 특이적 서열을 추가로 포함할 것이다. 약물 마커는 효모 숙주세포에서 벡터의 복제수를 증폭시키기 위해 추가로 사용될 수 있다.
관심있는 폴리펩타이드 코딩 서열은 효모 세포에서 폴리펩타이드의 발현을 제공하는 전사 및 번역 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 이들 벡터 성분들은, 비제한적으로, 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열. 폴리펩타이드의 분비를 위한 서열, 예를 들면 신호 서열 등이 또한 포함될 수 있다. 발현 벡터는 종종 효모 게놈으로 통합되므로, 효모 복제 기점은 선택적이다. 본 발명의 일 구현예에서, 관심있는 폴리펩타이드는 효모 2배체 세포로부터 폴리펩타이드의 최적화된 분비를 제공하는 서열에 작동가능하게 연결되거나 융합된다.
핵산은 또 하나의 핵산 서열과 기능성 관계에 놓여질 때 "작동가능하게 연결된다". 예를 들면, 신호 서열에 대한 DNA는, 만약 그것이 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 프레단백질로서 발현되는 경우, 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는, 만약 그것이 서열의 전사에 영향을 미치는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결된 DNA 서열이 인접하고, 분비성 리더의 경우, 인접하고 해독틀 내에 있다. 그러나, 인핸서는 인접할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 라이게이션에 의해 또는 대안적으로 당해분야의 숙련가에게 익숙한 PCR/재조합 방법(GatewayR 기술; Invitrogen, Carlsbad California)을 통해 달성된다. 만약 상기 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커가 종래의 실시에 따라 사용된다.
프로모터는 이들이 작동가능하게 연결된 특정한 핵산 서열의 전사 및 번역을 제어하는 구조 유전자(일반적으로 약 100 내지 1000 bp 이내)의 시작 코돈의 상류(5')에 위치한 미번역 서열이다. 그와 같은 프로모터는 몇 가지 클래스로 나뉜다: 유도성, 항시적, 및 억제성 프로모터(억제인자의 부재에 대해 전사의 수준을 증가시킴). 유도성 프로모터는 배양 조건의 일부 변화, 예를 들면, 영양소의 존재 또는 부재 또는 온도 변화에 반응하여 그의 제어 하에 DNA로부터의 증가된 수준의 전사를 개시할 수 있다.
프로모터 단편은 또한 숙주 게놈에서 동일한 부위 내로의 발현 벡터의 상동 재조합 및 통합을 위한 부위로서 제공할 수 있으며; 대안적으로 선별 마커가 상동 재조합을 위한 부위로서 사용된다.
피치아에서 유용한 적합한 프로모터의 예는 AOX1 및 프로모터(Cregg 등 (1989) Mol . Cell . Biol. 9:1316-1323); ICL1 프로모터(Menendez 등 (2003) Yeast 20(13):1097-108); 글리세르알데하이드-3-포스페이트 탈수소효소 프로모터(GAP) (Waterham 등 (1997) Gene 186(1):37-44); 및 FLD1 프로모터(Shen 등 (1998) Gene 216(1):93-102)를 포함한다. GAP 프로모터는 강한 항시적 프로모터이고, AOX 및 FLD1 프로모터는 유도성이다.
다른 효모 프로모터는 ADH1, 알코올 탈수소효소 II, GAL4, PHO3, PHO5, Pyk, 및 이들로부터 유래된 키메라 프로모터를 포함한다. 추가로, 포유동물, 곤충, 식물, 파충류, 양서류, 박테리아, 진균, 바이러스, 및 조류 프로모터와 같은 비-효모 프로모터가 본 발명에서 사용될 수 있다. 가장 전형적으로 상기 프로모터는 포유동물 프로모터(발현된 유전자에 대해 잠재적으로 내인성임)를 포함하거나, 효모 시스템에서 효율적인 전사를 제공하는 효모 또는 바이러스 프로모터를 포함할 것이다.
관심있는 폴리펩타이드는 직접적으로 뿐만 아니라 이종기원 폴리펩타이드, 예를 들면 성숙한 단백질 또는 폴리펩타이드의 N-말단에 특정한 절단 부위를 갖는 신호 서열 또는 다른 폴리펩타이드와의 융합 폴리펩타이드로서 재조합으로 생산될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있으며, 또는 그것은 벡터 내로 삽입된 폴리펩타이드 코딩 서열의 일부일 수 있다. 선택된 이종기원 신호 서열은 바람직하게는 숙주세포 내에서 이용가능한 표준 경로 중 하나를 통해 인식되고 가공되는 것이다. S. 세레비시애 알파 인자 전-프로 신호는 P. 패스토리스 유래의 다양한 재조합 단백질의 분비에 효과적인 것으로 입증되었다. 다른 효모 신호 서열은 알파 교배 인자 신호 서열, 인버타제 신호 서열, 및 다른 분비된 효모 폴리펩타이드로부터 유래된 신호 서열을 포함한다. 추가로, 이들 신호 펩타이드 서열은 2배체 효모 발현 시스템에서의 증대된 분비를 제공하기 위해 조작될 수 있다. 관심있는 다른 분비 신호는 또한 분비될 단백질에 이종기원이거나, 분비될 단백질에 대해 천연 서열일 수 있는 포유동물 신호 서열을 포함한다. 신호 서열은 전-펩타이드 서열을 포함하며, 일부 예에서 프로펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 많은 상기 신호 서열은 당해기술에 공지되어 있고, 면역글로불린 사슬 상에서 발견되는 신호 서열, 예를 들면, K28 프리프로독소 서열, PHA-E, 얼굴, 인간 MCP-1, 인간 혈청 알부민 신호 서열, 인간 Ig 중쇄, 인간 Ig 경쇄 등을 포함한다. 예를 들면, 문헌[Hashimoto et . al . Protein Eng 11(2) 75 (1998); 및 Kobayashi et . al. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998)]을 참조한다.
전사는 벡터 내로 전사 활성자 서열을 삽입함으로써 증가될 수 있다. 이들 활성자는 보통 약 10 내지 300 bp의 DNA의 시스-작용 요소이며, 그의 전사를 증가시키는 프로모터에 작용한다. 전사 인핸서는 상대적으로 배양 및 위치 비의존적이고, 인트론 뿐만 아니라 코딩 서열 자체 내의 전사 단위의 5' 및 3'에서 발견되어 왔다. 인핸서는 코딩 서열의 5' 또는 3' 위치에 있는 발현 벡터 내로 스플라이싱될 수 있으나, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 위치에 위치한다.
진핵 숙주 세포에서 사용되는 발현 벡터는 또한 전사의 종료 및 mRNA를 안정화시키는데 필요한 서열을 함유할 수 있다. 그와 같은 서열은 진핵 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 미번역 영역 내의 번역 종료 코돈의 3'으로부터 통상적으로 이용가능하다. 이들 영역은 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오타이드 절편을 함유한다.
상기 열거된 성분들 중 하나 이상을 함유하는 적합한 벡터의 구축은 표준 라이게이션 기술 또는 PCR/재조합 방법을 이용한다. 단리된 플라스미드 또는 DNA 단편은 필요한 플라스미드를 생성하기에 원하는 형태로 절단되고, 맞추어지고, 다시 라이게이션되거나, 또는 재조합 방법을 통한다. 구축된 플라스미드 내의 정확한 서열을 확인하는 분석을 위해, 상기 라이게이션 혼합물을 사용하여 숙주세포를 형질전환시키고, 적절한 경우 항생제 내성(예를 들면 암피실린 또는 제오신)에 의해 성공적인 형질전환체를 선별한다. 형질전환체로부터 플라스미드를 제조하고, 제한 엔도뉴클레아제 절단에 의해 분석하고/하거나 서열분석한다.
단편의 제한 및 라이게이션에 대한 대안으로서, att 부위에 기초한 재조합 방법 및 재조합 효소가 DNA 서열을 벡터 내로 삽입하는데 사용될 수 있다. 그와 같은 방법은, 예를 들면, 문헌[Landy (1989) Ann.Rev.Biochem. 58:913-949]에 기재되어 있고, 당해분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 그와 같은 방법은 람다 및 E. coli -인코딩된 재조합 단백질의 혼합물에 의해 매개된 분자간 DNA 재조합을 이용한다. 재조합은 상호작용 DNA 분자 상의 특정한 부착(att) 부위들 사이에서 일어난다. att 부위의 설명을 위해, 문헌[Weisberg 및 Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda II, Weisberg, ed.(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Press), pp. 211-250]을 참조한다. 재조합 부위의 측면에 배치되는 DNA 절편들은, att 부위가 각 모 벡터에 의해 증여된 서열로 구성된 하이브리드 서열이 되도록, 교환된다. 상기 재조합은 임의의 위상기하학의 DNA 사이에서 일어날 수 있다.
Att 부위는 관심있는 서열을 적절한 벡터 내로 라이게이션하는 단계; 특정 프라이머를 사용하여 att B 부위를 함유하는 PCR 생성물을 생성하는 단계; att 부위를 함유하는 적절한 벡터 내로 클로닝된 cDNA 라이브러리를 생성하는 단계; 등에 의해, 관심있는 서열 내로 도입될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 접힘은 폴리펩타이드 및 단백질의 3차원 구조를 지칭하며, 여기서 아미노산 잔기 간의 상호작용이 상기 구조를 안정화시키는 작용을 한다. 비-공유 상호작용이 구조를 결정하는데 중요하지만, 보통 관심있는 단백질은 2개의 시스테인 잔기에 의해 형성된 분자내- 및/또는 분자간 공유 이황화 결합을 가질 것이다. 자연 발생 단백질 및 폴리펩타이드 또는 유도체 및 그의 변이체의 경우, 적절한 접힘은 전형적으로 최적의 생물학적 활성을 야기하는 배열이며, 이는 활성, 예를 들면 리간드 결합, 효소 활성 등에 대한 분석에 의해 편리하게 관찰될 수 있다.
일부 경우, 예를 들면 원하는 생성물이 합성 유래인 경우, 생물학적 활성에 기초한 분석은 덜 중요할 것이다. 그와 같은 분자의 적절한 접힘은 물리적 특성, 에너지 고려, 모델링 연구 등에 기초하여 결정될 수 있다.
발현 숙주는 접힘 및 이황화 결합 형성을 향상시키는 하나 이상의 효소, 즉 폴다아제, 샤페로닌 등을 인코딩하는 서열의 도입에 의해 추가 변형될 수 있다. 그와 같은 서열은 본 기술분야에 공지된 바와 같은 벡터, 마커 등을 이용하여 효모 숙주세포에서 항시적으로 또는 유도성으로 발현될 수 있다. 바람직하게는 원하는 발현 패턴에 충분한 전사 조절 인자를 포함하는 상기 서열들은 표적화 방법론을 통해 효모 게놈에 안정적으로 통합된다.
예를 들면, 진핵 PDI는 단백질 시스테인 산화 및 이황화 결합 이성질체화의 효율적인 촉매일 뿐만 아니라 차페론 활성을 나타낸다. PDI의 공-발현은 다중 이황화 결합을 갖는 활성 단백질의 생산을 용이하게 할 수 있다. BIP(면역글로불린 중쇄 결합 단백질); 사이클로필린 등의 발현이 또한 흥미롭다. 본 발명의 일 구현예에서, 각각의 반수체 모 균주는 뚜렷이 다른 접힘 효소를 발현하며, 예를 들면 한 균주는 BIP를 발현할 수 있고, 다른 균주는 PDI 또는 이들의 조합을 발현할 수 있다.
용어들 "원하는 단백질" 또는 "원하는 항체"는 상호교환적으로 사용되고, 일반적으로 표적, 즉, PCSK9 또는 이로부터 유래된 키메라 또는 인간화된 항체 또는 이의 결합부 또는 본원에서 기재된 임의의 항-PCSK9 항체 또는 단편과 동일한 CDR 또는 에피토프 특이성을 함유하는 항체에 특이적인 모 항체 또는 단편을 지칭한다. 용어 "항체"는 에피토프에 일치하고 이를 인식하는 특정 형상을 갖는 임의의 폴리펩타이드 사슬-함유 분자 구조를 포함하는 것으로 의도되며, 여기서 하나 이상의 비-공유 결합 상호작용은 상기 분자 구조와 에피토프 사이의 복합체를 안정화시킨다. 전형적인 항체 분자는 면역글로불린이며, 및 모든 공급원, 예를 들면 인간, 설치류, 토끼, 소, 양, 돼지, 개, 다른 포유동물, 닭, 다른 조류 등으로부터 유래된 모든 유형의 면역글로불린, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD 등이 "항체"인 것으로 고려된다. 본 발명에 따른 개시 물질로서 유용한 항체를 생산하기 위한 바람직한 공급원은 토끼이다. 수많은 항체 코딩 서열이 기재되어 왔고, 다른 것들은 본 기술분야에 공지된 방법에 의해 길러질 수 있다. 이의 예는 키메라 항체, 인간 항체 및 다른 비-인간 포유동물 항체, 인간화된 항체, 단일 사슬 항체(예컨대 scFv), 카멜바디, 나노바디, IgNAR(상어로부터 유래된 단일-사슬 항체), 소분자 면역의약품(SMIP), 및 항체 단편, 예컨대 Fabs, Fab', F(ab')2, MetMab 유사 분자와 같은 1가 항체 단편, IgNar 등을 포함한다. 문헌[Streltsov VA, 등, Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(11):2901-9. Epub 2005 Sep 30; Greenberg AS, 등, A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374(6518):168-73; Nuttall SD, 등, Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, 및 use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. 2001 Aug;38(4):313-26; Hamers-Casterman C, 등, Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8; Gill DS, 등, Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec;17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19]을 참조한다.
본 발명은 특히 MetMab 분자에 유사한, PCSK9에 결합하는 1가 항체 분자를 포함한다. MetMab는 Met에 특이적인 1가 항체이다(Met는 문헌[Park 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 84, 7479--(1987)]에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 인코딩된 단백질, 또는 그의 단편, 뿐만 아니라 관련된 폴리펩타이드를 지칭하며, 이는, 비제한적으로, 대립유전자 변이체, 스플라이스 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 삽입 변이체, 융합 폴리펩타이드, 및 종간 동족체를 포함함). MetMab 항체는, OA-5d5(Genentech)를 포함하는 다른 명칭에 의해 알려진 1가 항체이며, 그 중에서도 한팔(one-armed) 5d5, 5d5, MetMab, PRO143966으로도 불린다. 그 구조 및 특성, 및 이를 제조하고 이용하는 방법을 포함하는 항체 OA-5d5는 미국 공보 제2007/0092520호에 기재되어 있다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체는 Fc 영역에 연결된 단일 Fab 영역을 포함할 수 있다. 그와 같은 구현예에서, 본 발명의 항체는 본원에 기재된 바와 같은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 그와 같은 구현예에서, 항체는 1가이며 온전한 Fc 영역을 포함할 수 있다. 또 하나의 그와 같은 구현예에서, Fc 영역은 적어도 하나의 돌기(protuberance)(노브(knob)) 및 적어도 하나의 홀(hole)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 돌기 및 홀의 존재는 WO 2005/063816호에 기재된 바와 같이, 돌기를 포함하는 Fc 폴리펩타이드와 홀을 포함하는 Fc 폴리펩타이드 사이의 복합체의 형성을 향상시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체의 Fc 영역은 제 1 및 제 2 Fc 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 여기서 상기 제 1 및 제2 폴리펩타이드 각각은 야생형 인간 Fc에 대해 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일 구현예에서, 공동 돌연변이(cavity mutation)는 T366S, L368A 및/또는 Y407V이다. 또 하나의 구현예에서, 돌기 돌연변이는 T366W이다. 특이한 구현예에서, 본 발명에 따른 1가 항체는 WO2005/063816에 기재된 바와 같이 합성된 한팔(one-armed) 항체를 포함할 수 있다. 그와 같은 구현예에서, 한팔 항체는 WO2005/063816에 기재된 바와 같이 "노브(knob)" 및 "홀"을 구성하는 Fc 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들면, 홀 돌연변이는 Fc 폴리펩타이드에서 T366A, L368A 및/또는 Y407V 중 하나 이상일 수 있으며, 공동 돌연변이는 T366W일 수 있다. 본 발명은 또한 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편과 동일한 PCSK9 에피토프와 결합하고/하거나 PCSK9에 결합하기 위해 항-PCSK9 항체와 경쟁하는 항-인간 PCSK9 1가 제제에 관한 것이다.
예를 들면, 항체 또는 항원 결합 단편은 유전공학에 의해 생산될 수 있다. 이 기술에서, 다른 방법과 마찬가지로, 항체-생산 세포는 원하는 항원 또는 면역원에 감작화된다. 항체 생산 세포로부터 분리된 메신저 RNA는 PCR 증폭을 이용하여 cDNA를 만들기 위한 주형으로서 사용된다. 초기 항원 특이성을 보유하는 하나의 중쇄 유전자 및 하나의 경쇄 유전자를 각각 함유하는 벡터의 라이브러리는, 상기 증폭된 면역글로불린 cDNA의 적절한 부분을 발현 벡터 내로 삽입함으로써 생산된다. 조합 라이브러리는 중쇄 유전자 라이브러리를 경쇄 유전자 라이브러리와 조합함으로써 구축된다. 이는 중쇄 및 경쇄를 공동발현하는 클론의 라이브러리를 야기한다(항체 분자의 Fab 단편 또는 항원 결합 단편과 유사함). 이들 유전자를 갖는 벡터는 숙주세포 내로 공동-형질감염된다. 상기 형질감염된 숙주에서 항체 유전자 합성이 유도될 때, 중쇄 및 경쇄 단백질은 자가 조립되어 항원 또는 면역원을 이용한 스크리닝에 의해 검출될 수 있는 활성 항체를 생산한다.
관심있는 항체 코딩 서열은 천연 서열에 의해 인코딩된 것들 뿐만 아니라 유전자 코드의 축퇴에 의해, 개시된 핵산에 대해 서열이 동일하지 않은 핵산, 및 그의 변이체를 포함한다. 변이체 폴리펩타이드는 아미노산(aa) 치환, 부가 또는 결실을 포함할 수 있다. 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이거나, 당화 부위를 변경하는 치환, 또는 기능에 필요하지 않은 하나 이상의 시스테인 잔기의 치환 또는 결실에 의한 오접힘(misfolding)을 최소화하는 치환과 같은 비-필수적인 아미노산을 제거하는 치환일 수 있다. 변이체는 단백질의 특정한 영역(예를 들면, 기능성 도메인, 촉매적 아미노산 잔기 등)의 증대된 생물학적 활성을 보유하거나 갖도록 설계될 수 있다. 변이체는 또한 본원에 개시된 폴리펩타이드의 단편, 특히 기능성 도메인에 상응하는 생물학적 활성 단편 및/또는 단편을 포함한다. 클로닝된 유전자의 시험관내 돌연변이유발을 위한 기술은 공지되어 있다. 단백절단 분해에 대한 그의 내성을 개선하기 위해 또는 용해도 특성을 최적화하기 위해 또는 이들을 치료제로서 더 적합하게 만들기 위해, 통상적인 분자 생물학적 기술을 이용하여 변형된 폴리펩타이드가 본 발명에 또한 포함된다.
키메라 항체는 하나의 종의 항체 생산 세포로부터 얻은 가변 경쇄 및 중쇄 영역(VL 및 VH)을 또 다른 종의 항체 생산 세포로부터 얻은 불변 경쇄 및 중쇄 영역과 조합함으로써 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다. 전형적으로 키메라 항체는 대부분 인간 도메인을 갖는 항체를 생산하기 위해, 설치류 또는 토끼 가변 영역 및 인간 불변 영역을 이용한다. 그와 같은 키메라 항체의 생산은 당해기술분야에 널리 알려져 있으며, 표준 방법에 의해 달성될 수 있다(예를 들면, 그 전체가 참조로 본원에 통합된 미국 특허 제5,624,659호에 기재된 바와 같음). 본 발명의 키메라 항체의 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 불변 영역으로부터 선택될 수 있음이 추가로 고려된다.
인간화된 항체는 훨씬 더 인간과 유사한 면역글로불린 도메인을 함유하고, 동물 유래 항체의 단지 상보성-결정 영역을 포함하도록 조작된다. 이것은 모노클로날 항체의 가변 영역의 초가변 루프의 서열을 주의 깊게 조사하고, 이들을 인간 항체 사슬의 구조에 맞춤으로써 달성된다. 겉보기에 복잡하지만, 상기 공정은 실시가 간단하다. 예를 들면, 본원에 완전히 참조로 편입된 미국 특허 제6,187,287호를 참조한다.
전체 면역글로불린(또는 그들의 재조합 대응물) 외에, 에피토프 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 단편들(예를 들면, Fab', F(ab')2, Fab, 또는 다른 단편들)이 합성될 수 있다. "단편" 또는 최소 면역글로불린은 재조합 면역글로불린 기술을 이용하여 설계될 수 있다. 예를 들면 본 발명에 사용하기 위한 "Fv" 면역글로불린은 융합된 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역을 합성함으로써 생산될 수 있다. 항체들의 조합, 예를 들면 2개의 뚜렷이 다른 Fv 특이성을 포함하는 디아바디는 또한 흥미롭다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, SMIP(소분자 면역의약품), 카멜바디, 나노바디, 및 IgNAR은 면역글로불린 단편에 포함된다.
면역글로불린 및 그의 단편은 화학 링커와 같은 효과기 모이어티, 형광 염료, 효소, 독소, 기질, 생물발광 물질, 방사선활성 물질, 화학발광 모이어티 등과 같은 검출가능한 모이어티를 첨가하도록 번역후에 변형될 수 있거나, 스트렙타비딘, 아비딘, 또는 바이오틴 등과 같은 특이적 결합 모이어티가 본 발명의 방법 및 조성물에 이용될 수 있다. 추가의 효과기 분자의 예가 상기에 제공되어 있다.
폴리뉴클레오타이드 서열은 만약 유전자 암호에 따른 폴리뉴클레오타이드 서열의 번역이 폴리펩타이드 서열을 생산하는 경우 폴리펩타이드 서열에 "상응하고" (즉, 폴리뉴클레오타이드 서열이 폴리펩타이드 서열을 "인코딩함"), 두 서열이 동일한 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 경우 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열은 또 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열에 "상응한다".
DNA 구조체의 "이종기원" 영역 또는 도메인은 자연상에서 더 큰 분자와 함께 발견되지 않는 더 큰 DNA 분자 내의 DNA의 확인가능한 절편이다. 따라서, 이종기원 영역이 포유동물 유전자를 인코딩할 때, 상기 유전자는 일반적으로 공급원 유기체의 게놈 내에서 포유동물 게놈 DNA의 측면에 없는 DNA의 측면에 있을 것이다. 이종기원 영역의 또 하나의 예는 코딩 서열 자체가 자연상에서 발견되지 않는 구조체이다(예를 들면, 게놈 코딩 서열이 인트론을 함유하는 cDNA, 또는 원상태 유전자와 다른 코돈을 갖는 합성 서열). 대립유전자 변이 또는 자연 발생 돌연변이 사건은 본원에서 정의된 바와 같은 DNA의 이종기원 영역을 야기하지 않는다.
"코딩 서열"은 (유전자 암호를 고려하여) 단백질 또는 펩타이드 서열에 상응하거나 이를 인코딩하는 인프레임 서열이다. 2개의 코딩 서열은, 만약 상기 서열들 또는 그의 상보적 서열들이 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 경우, 서로 상응한다. 적절한 조절 서열과 회합된 코딩 서열은 전사되어 폴리펩타이드로 번역될 수 있다. 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결 서열은 보통 코딩 서열의 3'에 위치할 것이다. "프로모터 서열"은 세포에서 RNA 폴리머라제에 결합할 수 있고 하류(3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터 서열은 전형적으로 코딩 서열의 전사에 영향을 미치는 조절 분자가 결합하기 위한 추가의 부위(예를 들면, 전사 인자)를 함유한다. 코딩 서열은, RNA 폴리머라제가 세포에서 프로모터 서열에 결합하여 코딩 서열을 mRNA로 전사할 때, 프로모터 서열의 "제어 하에" 있거나 또는 프로모터에 "작동가능하게 연결"되며, 이는 이후에 결국 코딩 서열에 의해 인코딩된 단백질로 번역된다.
벡터는 DNA, RNA 또는 단백질과 같은 외래 물질을 유기체 또는 숙주세포 내로 도입하기 위해 사용된다. 전형적인 벡터는 재조합 바이러스(폴리뉴클레오타이드용) 및 리포좀(폴리펩타이드용)을 포함한다. "DNA 벡터"는 부착된 절편의 복제를 야기하기 위해 또 다른 폴리뉴클레오타이드 절편이 부착될 수 있는, 플라스미드, 파아지 또는 코스미드와 같은 레플리콘이다. "발현 벡터"는 적절한 숙주세포에 의해 폴리펩타이드 합성을 지시할 조절 서열을 함유하는 DNA 벡터이다. 이것은 보통 RNA 폴리머라제에 결합하고 mRNA의 전사를 개시하는 프로모터 뿐만 아니라 리보솜 결합 부위 및 mRNA의 폴리펩타이드(들)로의 번역을 지시하는 개시 신호를 의미한다. 적절한 부위에서 그리고 정확한 해독틀로 폴리뉴클레오타이드 서열을 발현 벡터 내로의 혼입한 다음, 상기 벡터에 의해 적절한 숙주세포를 형질전환시키는 것은 상기 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 인코딩된 폴리펩타이드의 생산을 가능하게 한다.
폴리뉴클레오타이드 서열의 "증폭"은 특정 핵산 서열의 다중 복제수의 시험관내 생산이다. 상기 증폭된 서열은 일반적으로 DNA의 형태이다. 상기 증폭을 수행하기 위한 다양한 기술들이 Van Brunt(1990, Bio/Technol., 8(4):291-294)에 의한 검토 논문에 기재되어 있다. 폴리머라제 연쇄 반응 또는 PCR은 핵산 증폭의 원형이며, 본원에서 PCR의 사용은 다른 적합한 증폭 기술의 예시인 것으로 고려되어야 한다.
현재 척추동물 내 항체의 일반적인 구조는 널리 이해되고 있다(Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). 항체는 분자량 대략 23,000 달톤의 2개의 동일한 가벼운 폴리펩타이드 사슬("경쇄"), 및 분자량 53,000-70,000의 2개의 동일한 무거운 사슬("중쇄")로 구성된다. 상기 사슬들은 "Y" 배열로 이황화 결합에 의해 연결되며, 여기서 상기 경쇄는 "Y" 배열의 입(mouth)에서 시작하는 중쇄를 묶는다. "Y" 배열의 "분지" 부분은 Fab 영역으로 지정되며, "Y" 배열의 줄기 부분은 FC 영역으로 지정된다. 아미노산 서열 배향은 "Y" 배열의 상부에 있는 N-말단으로부터 시작하여 각 사슬의 하부에 있는 C-말단까지 간다. N-말단은 그것을 유도한 항원에 대해 특이성을 갖는 가변 영역을 가지며, 대략 100 아미노산 길이이고, 경쇄 및 중쇄 사이에 그리고 항체 간에 약간의 변이가 있다.
가변 영역은 각 사슬 내에서 사슬의 잔여 길이를 연장하고 항체의 특정 클래스 내에서 항체의 특이성에 따라 변하지 않는 불변 영역에 연결된다(즉, 그것을 유도하는 항원). 면역글로불린 분자의 클래스를 결정하는 불변 영역의 5개의 공지된 주요 클래스(γ, μ, α, δ, 및 ε(감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론) 중쇄 불변 영역에 상응하는 IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE)가 있다. 상기 불변 영역 또는 클래스는 보체의 활성화(Kabat, E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976)), 및 다른 세포성 반응(Andrews, D.W., 등, Clinical Immunobiology,pp 1-18,W.B.Sanders (1980); Kohl, S., 등, Immunology, 48: 187(1983)을 포함하는 항체의 이후의 효과기 기능을 결정하는 반면, 가변 영역은 그것이 반응할 항원을 결정한다. 경쇄는 κ(카파) 또는 λ(람다) 중 하나로서 분류된다. 각 중쇄 클래스는 카파 또는 람다 경쇄 중 하나를 이용하여 제조될 수 있다. 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되고, 하이브리도마에 의해 또는 B 세포에 의해 면역글로불린이 생성될 때 2개의 중쇄의 "꼬리" 부분들은 공유 이황화 연결에 의해 서로 결합된다.
표현 "가변 영역" 또는 "VR"은 항체를 항원에 결합시키는데 직접 관여하는 항체 내의 경쇄 및 중쇄의 각각의 쌍 안에 있는 도메인을 지칭한다. 각 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH) 다음에 많은 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VL) 및 그 다른 말단에 불변 도메인을 가지며, 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다.
표현 "상보성 결정 영역," "초가변 영역," 또는 "CDR"은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역에서 발견되는 초가변 또는 상보성 결정 영역(CDR) 중 하나 이상을 지칭한다(Kabat, E. A. 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987) 참고). 이들 표현은 Kabat 등("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., 등, US Dept. of Health and Human Services, 1983)에 의해 정의된 바와 같은 초가변 영역 또는 항체의 3차원 구조 내의 초가변 루프(Chothia 및 Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987))를 포함한다. 각 사슬 내의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 가까이 유지되며, 다른 사슬 유래의 CDR과 함께, 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR 내에는 항체-항원 상호작용에서 CDR에 의해 사용된 매우 중요한 접촉 잔기를 대표하는 선택성 결정 영역(SDR)으로서 기재된 선별 아미노산이 존재한다(Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)).
"에피토프" 또는 "결합 부위"는 항원-결합 펩타이드(예컨대 항체)가 특이적으로 결합하는 항원 상의 부위 또는 영역이다. 단백질 에피토프는 결합에 직접 관여하는 아미노산 잔기(에피토프의 면역원성 성분으로도 불림) 및 특이적으로 항원 결합 펩타이드에 의해 효과적으로 차단된 아미노산 잔기와 같이, 결합에 직접 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(바꿔 말하면, 아미노산 잔기는 특이적으로 항원 결합 펩타이드의 "풋프린트(footprint)" 내에 있다). 본원에서 용어 에피토프는 항-PCSK9 항체에 특이적으로 결합하는 PCSK9의 임의의 특정한 영역 내의 아미노산 결합 부위의 두 유형을 포함한다. PCSK9는 많은 상이한 에피토프를 포함할 수 있고, 이는 비제한적으로, (1) 선형 펩타이드 항원 결정기, (2) 성숙한 PCSK9 형태로 서로 가까이 위치한 하나 이상의 비-인접 아미노산으로 구성된 형태적 항원 결정기; 및 (3) 전체적으로 또는 부분적으로, 탄수화물 그룹과 같이 PCSK9에 공유결합된 분자 구조로 구성된 번역후 항원 결정기를 포함할 수 있다.
제1 항체가 제2 항체와 "실질적으로" 또는 "적어도 부분적으로" 동일한 에피토프에 결합한다는 어구는 제1 항체에 대한 에피토프 결합 부위가 제2 항체의 에피토프 결합 부위를 구성하는 항원 상의 아미노산 잔기 중 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상을 포함한다는 것을 의미한다. 또한, 제1 항체가 제2 항체와 실질적으로 또는 부분적으로 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합한다는 것은 상기에 기재된 바와 같이 제1 및 제2 항체가 항원에 결합하는데 경쟁한다는 것을 의미한다. 따라서, 용어 모노클로날 항체와 "실질적으로 동일한 에피토프 또는 결정자에 결합한다"는 것은 항체와 "경쟁하는" 항체를 의미한다.
어구 관심있는 항체와 "동일하거나 중첩하는 에피토프 또는 결정자에 결합한다"는 것은 상기 관심있는 항체가 특이적으로 결합하는 PCSK9 상의 적어도 하나 또는 모든 잔기들에 대해 항체가 상기 관심있는 항체와 "경쟁한다"는 것을 의미한다. 본원에 기재된 모노클로날 항체와 실질적으로 또는 본질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 항체들의 확인은 항체 경쟁이 평가될 수 있는 다양한 면역학적 스크리닝 분석 중 어느 하나를 이용하여 쉽게 결정될 수 있다. 많은 상기 분석들은 일상적으로 실시되고 당해기술분야에 널리 알려져 있다(예를 들면, 본원에 참고로 명시적으로 통합된, 1997년 8월 26일에 발행된 미국 특허 제5,660,827호 참조). 본원에 기재된 모노클로날 항체와 동일하거나 실질적으로 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 항체를 확인하기 위해, 본원에 기재된 항체가 결합하는 에피토프를 실제로 결정하는 것은 어떤 식으로든 필요하지 않다.
예를 들면, 조사될 시험 항체가 상이한 공급 동물로부터 얻어지거나, 또는 심지어 상이한 Ig 아이소타입인 경우, 대조군 항체를 시험 항체와 혼합한 다음 PCSK9를 함유하는 샘플에 적용하는 단순 경쟁 분석이 이용될 수 있다. ELISA, 방사선면역검정, 웨스턴 블랏팅, 및 BIACORE 분석의 사용에 기초한 프로토콜들이 상기 단순 경쟁 연구에 사용하는데 적합하다.
어떤 구현예에서, PCSK9 항원 샘플에 적용하기 전에 일정 기간 동안 대조군 항-PCSK9 항체를 다양한 양의 시험 항체(예를 들어, 약 1:1, 1:2, 1:10 또는 약 1:100의 비)와 미리 혼합할 것이다. 다른 구현예에서, 대조군 및 다양한 양의 시험 항체는 PCSK9 항원 샘플에 노출되는 동안 별도로 간단하게 첨가되고 혼합될 수 있다. 자유 항체(예를 들면, 결합되지 않은 항체를 제거하는 분리 또는 세정 기술을 이용하여)로부터 결합된 항체를 구분하고 시험 항체로부터 대조군 항체를 구분할 수 있는 한(예를 들면, 종 특이적이거나 아이소타입 특이적인 2차 항체를 이용하여, 또는 검출가능한 라벨로 대조군 항체를 특이적으로 라벨링함으로써), 시험 항체가 PCSK9 항원에 대한 대조군 항체의 결합을 감소시키는지 여부를 결정할 수 있을 것이며, 이는 시험 항체가 대조군 항-PCSK9 항체와 실질적으로 동일한 에피토프를 인식한다는 것을 가리킨다. 완전히 무관한 항체(PCSK9에 결합하지 않는 항체)의 존재 하에 (라벨링된) 대조군 항체의 결합은 대조군 높은 수치로서 작용할 수 있다. 대조군 낮은 수치는, 라벨링된 대조군 항체를 동일하지만 라벨링되지 않은 대조군 항체와 배양함으로써 얻어질 수 있고, 여기서 경쟁이 일어나 라벨링된 항체의 결합을 감소시킬 것이다. 시험 분석에서, 시험 항체의 존재 하에 라벨링된 항체 반응성의 유의미한 감소는 실질적으로 동일한 에피토프를 인식하는 시험 항체, 즉, 라벨링된 대조군 항체와 경쟁하는 항체를 가리킨다. 예를 들면, 약 1:1 또는 1:10 및 약 1:100 사이의 대조군 항체:시험 항체의 임의의 비에서, PCSK9에 대한 대조군 항체의 결합을 적어도 약 50%, 예컨대 적어도 약 60%, 또는 더 바람직하게는 적어도 약 70%(예를 들면, 약 65-100%)까지 감소시키는 임의의 시험 항체는 대조군 항체와 실질적으로 동일하거나 중첩하는 에피토프 또는 결정자에 결합하는 항체인 것으로 고려된다.
바람직하게는, 상기 시험 항체는 PCSK9 항원에 대한 대조군 항체의 결합을 바람직하게는 시험 항체의 부재시 관찰된 1 대조군 항체의 결합의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 80% 또는 적어도 약 90%(예를 들면, 약 95%) 감소시킬 것이다.
경쟁은 또한 또는 대안적으로, 예를 들면, 유세포측정 시험에 의해 평가될 수 있다. 상기 시험에서, PCSK9를 갖는 세포는 PCSK9에 결합하는 대조군 항체와 일차적으로 배양될 수 있고, 그 다음 형광색소 또는 바이오틴으로 라벨링된 시험 항체와 함께 배양될 수 있다. 만약 대조군 항체의 포화 양과 함께 전배양시 수득된 결합이 대조군 항체와의 전배양 없이 시험 항체의 의해 수득된 결합(형광에 의해 측정된 바와 같음)의 약 80%, 바람직하게는 약 50%, 약 40% 이하(예를 들면, 약 30%)인 경우, 상기 항체는 대조군 항체와 경쟁하는 것이다. 대안적으로, 만약 시험 항체의 포화 양과 함께 전배양된 세포 상에서 라벨링된 대조군 항체를 이용하여 수득된 결합(형광색소 또는 바이오틴에 의해)이 시험 항체와의 전배양 없이 수득된 결합의 약 80%, 바람직하게는 약 50%, 약 40% 이하(예를 들면, 약 30%)인 경우, 항체는 대조군 항체와 경쟁하는 것이다.
시험 항체가 PCSK9가 고정된 표면에 대해 포화 농도로 전-흡착되고 적용되는 단순 경쟁 분석이 또한 유익하게 이용될 수 있다. 단순 경쟁 분석에서의 표면은 바람직하게는 BIACORE 칩(또는 표면 플라즈몬 공명 분석에 적합한 다른 매질)이다. PCSK9-코팅된 표면에 PCKS9를 결합시키는 대조군 항체의 결합이 측정된다. 대조군 항체 단독의 PCSK9-함유 표면에의 이러한 결합은 시험 항체의 존재 하에 대조군 항체의 결합과 비교된다. 시험 항체의 존재 하에 대조군 항체에 의한 PCSK9-함유 표면에의 결합에서의 유의미한 감소는 시험 항체가 대조군 항체와 "경쟁"하는 것과 같이 대조군 항체와 실질적으로 동일한 에피토프를 인식한다는 것을 가리킨다. 대조군 항체의 결합을 적어도 약 20% 이상, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 70%, 또는 그 이상까지 감소시키는 임의의 시험 항체는, 대조군 항체와 실질적으로 동일한 에피토프 또는 결정자에 결합하는 항체인 것으로 고려될 수 있다. 바람직하게는, 상기 시험 항체는 PCSK9에 대한 대조군 항체의 결합을 적어도 약 50%(예를 들면, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 그 이상)까지 감소시킬 것이다. 대조군 및 시험 항체의 순서는 역전될 수 있는 것으로 인식될 것이고, 즉 대조군 항체가 먼저 표면에 결합된 다음 경쟁 분석에서 이후에 표면과 접촉된다. 바람직하게는, PCSK9 항원에 대해 더 높은 친화성을 갖는 항체는 먼저 PCSK9-함유 표면에 결합하는데, 제2 항체에 대해 관찰된 결합에서의 감소(항체가 상충되는 것을 가정함)가 더 클 것임이 예측될 것이기 때문이다. 그러한 분석의 추가 예들은, 예를 들면 그 개시내용이 본원에 참조로 통합된 문헌[Saunal 및 Regenmortel, (1995) J. Immunol. Methods 183: 33-41]에 제공되어 있다.
또한, 항체가 또 다른 항체 또는 시험 항체에 의해 결합된 에피토프로서 PCSK9 상의 동일하거나 중첩하는 에피토프(들)에 결합하는지 여부는 웨스턴-블롯 기반 분석을 이용하여 특히 결정될 수 있다. 이 분석에서 항체, 본원에서 PCSK9에 의해 결합된 항원에 상응하는 펩타이드들의 라이브러리가 만들어지며, 이는 전형적으로 10-25, 10-20 또는 10-15개 아미노산 길이의 단백질의 중첩하는 부분에 상응한다. PCSK9 서열을 포함하는 이들 상이한 중첩하는 아미노산 펩타이드들은 합성되어 PepSpots 니트로셀룰로오스 막(JPT Peptide technologies, Berlin, Germany)에 공유 결합된다. 그리고 나서 블롯이 제조되며 제조자의 추천에 따라 탐침된다.
본질적으로, 이후 면역블랏 분석은 형광측정법에 의해 라이브러리 내의 무슨 펩타이드가 시험 항체에 결합하는지 검출할 수 있고, 이로써 항원, 즉, PCSK9 상의 무슨 잔기가 시험 항체와 상호작용하는지 확인할 수 있다. (본원에 참조로 통합된 US 특허 제7,935,340호에서의 이 기술의 구현예를 참조한다).
표현 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역 내의 하나 이상의 프레임워크 영역을 지칭한다(Kabat, E. A. 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987) 참고). 이 표현들은 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역 내의 CDR 사이에 개재된 상기 아미노산 서열 영역을 포함한다.
PCSK9
에 대해 결합 활성을 갖는 항-
PCSK9
항체 및 그의 결합 단편
발명의 배경에서 언급된 바와 같이, 프로단백질 전환효소 서브틸리신 켁신 타입 9(PCSK9)는 저밀도 지질단백질 수용체(LDLR) 단백질의 수준을 조절하는데 관여하는 세린 프로테아제이다(Horton 등, 32(2) Trends Biochem . Sci . 71-77 (2007); Seidah 및 Prat, 85(7) J. Mol . Med . 685-96 2007). PCSK9는 세린 프로테아제의 서브틸리신 (S8) 패밀리 내의 전구호르몬-프로단백질 전환효소이다(Seidah 등, 100(3) Proc . Nat'l Acad . Sci . 928-33 (2003)). 예시적인 인간 PCSK9 아미노산 서열은 서열번호: 961 및 서열번호: 962로서 제시된다. 예시적인 인간 PCSK9 코딩 서열은 서열번호: 963으로서 제시된다. 본원에 기재된 바와 같이, PCSK9 단백질은 또한 전장 PCSK9 단백질의 단편들을 포함할 수 있다. PCSK9 단백질의 구조는 두 그룹에 의해 해독되었으며(Cunningham 등, Nature Structural & Molecular Biology, 2007, 및 Piper 등, Structure, 15:1-8, 2007), 이 둘 모두의 전체가 참조로 본원에 통합되어 있다. PCSK9는 신호 서열, N-말단 프로도메인, 서브틸리신-유사 촉매 도메인, 및 C-말단 도메인을 포함한다.
본 발명은 인간 PCSK9를 포함하는 PCSK9에 결합하는 신규 항체 또는 항체 단편을 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본원에 기재된 항-PCSK9 항체 및 항체 단편의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 및 LDLR 간의 상호작용을 방해하거나, 차단하거나, 감소시키거나, 조절할 것이다. 일부 예에서 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면, 그것이 PCSK9와 LDLR의 상호작용을 완전히 막는 경우, "중화"하는 것으로 표시된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면, PCSK9에 계속 결합함으로써, PCSK9를 중화한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 상의 LDLR 결합 부위를 차단하지 않으면서 LDLR에 대한 PCSK9의 부정적인 영향을 막거나 감소시킨다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 및 LDLR 사이의 결합 상호작용을 막지 않으면서, LDLR의 분해를 야기하는 PCSK9의 능력을 조절하거나 변화시킨다. 더 구체적으로, 상기 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 특이적으로 "비경쟁적으로 중화하는" 항체 또는 항체 단편으로서 기재될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 중화 항체 또는 항체 단편은 PCSK9가 LDLR에 결합하는 것을 막는 위치 내에서 및/또는 방식으로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 중화 항체 또는 항체 단편은 PCSK9/LDLR 복합체의 세포내이입을 막는 위치 내에서 및/또는 방식으로 PCSK9에 결합한다. 그와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본 발명에 따른 "경쟁적으로 중화하는" 항체 또는 항체 단편로서 명시적으로 기재될 수 있다. 생체내 투여시 상기 중화 항체 모두는 대상 내에 다량의 자유 LDLR이 존재하게 할 수 있으며, 이는 더 많은 LDLR이 LDL-C에 결합하게 한다(그렇게 함으로써 대상에서 LDL-C의 양을 감소시킨다). 이것은 결국 대상 내에 존재하는 혈청 콜레스테롤의 양의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9-매개된 활성(결합 포함)을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9에 대한 완전한 인간 항체와 같은 인간 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 촉매 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 성숙한 형태에 결합한다. 일부 구현예에서 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 프로도메인에서 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 성숙한 형태에 선택적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9가 LDLR에 결합할 수 없거나 효율적으로서 결합할 수 없도록 하는 방식으로 촉매 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 촉매 도메인의 c-말단에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 촉매 도메인의 n-말단에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 단백질의 n- 또는 c-말단에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9가 LDLR과 상호작용하는 것을 막기 위해 PCSK9의 특정 형태적 상태에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 V 도메인에 결합한다. 일부 보다 특정한 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9의 V 도메인에 결합하고 PCSK9가 LDLR에 결합하는 것을 막는다(또는 감소시킨다).
언급된 바와 같이, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편은 다양한 유용성을 갖는다. 예를 들면, 당해 항체 및 단편은 치료적 적용에서 뿐만 아니라 진단적으로 결합 분석에서 유용하고, PCSK9, 특히 인간 PCSK9 또는 그의 리간드의 친화성 정제에 유용하고 PCSK9 활성의 다른 길항제를 확인하는 선별 분석에서 유용하다. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 일부는 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제하거나, 또는 PCSK9-매개된 활성을 억제하는데 유용하다.
본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 다양한 치료적 적용에서 사용될 수 있다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 PCSK9 항체 또는 항체 단편은, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 예로써 고콜레스테롤혈증을 포함하는, 콜레스테롤 관련 장애(또는 "혈청 콜레스테롤 관련 장애")와 같은 PCSK9와 연관된 병태에 유용하다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 PCSK9의 생체내 효과를 차단하거나, 억제하거나 또는 중화하는 것 또는 PCSK9와 LDLR의 상호작용을 차단하거나 억제하는 것이 치료적으로 바람직한 임의의 대상을 치료하는데 특히 사용될 수 있고, 여기서 상기 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편은 단독으로 또는 다른 활성제 또는 약물과 회합되어 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 PCSK9에 특이적으로 결합하는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 투여함으로써, 예로써 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 당뇨병, 비만, 협심증, 고혈압 및 황색종을 포함하는, 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 이와 연관될 수 있는 장애들을 치료하거나 예방하는데 특히 사용될 수 있고, 상기 당해 항체 및 항체 단편은 단독으로 또는 다른 활성제와 회합되어 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 특히 상기 항체 또는 그의 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 병용하여 투여함으로써, PCSK9와 연관된 질환 및 장애, 예를 들면, PCSK9의 증가되거나 감소된 수준 및/또는 PCSK9 단백질 발현, 일차 서열 및/또는 기능에 영향을 미치는 PCSK9 유전자에서의 돌연변이와 연관된 질환을 예방하거나 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 특히 병태를 갖거나 병태가 발전될 위험성이 있는 임의의 대상을 치료하는데 사용될 수 있고, 여기서 지질 또는 콜레스테롤 수준의 조절이 임상적으로 바람직하거나, 여기서 대상은 높은 지질 또는 콜레스테롤과 종종 연관된 병태를 갖는다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 투여함으로써 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 그것과 연관된 장애 및 합병증, 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥성 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종, 고혈압, 협심증 및 관련된 병태를 치료하거나 예방하는데 특히 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 당해 항체 및 항체 단편을 단독으로 또는 다른 활성제와 회합하여 사용하여 심장병의 증가된 위험성과 연관된 혈액 콜레스테롤 마커를 개선하는데 특히 사용될 수 있다. 이들 마커는, 비제한적으로, 높은 총 콜레스테롤, 높은 LDL, 높은 총 콜레스테롤 대 HDL 비 및 높은 LDL-C 대 HDL 비를 포함한다.
본 발명에 따른 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편은 또한 상기 장애를 치료하는데 전형적으로 사용되는 다른 약물과 병용하여 상기 언급된 치료적 징후 또는 병태 중 어느 것에 특히 사용될 수 있고, 여기서 상기 항체 및 다른 약물 또는 제제는 공동 투여되거나 별도로 투여될 수 있다. 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편과 공동 투여될 수 있거나 동일한 치료 용법에 있는 약물의 예는 예로써 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하는데 사용되는 다른 약물을 포함하고, 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤 또는 비정상적인 지질 수준 또는 지질 대사를 가질 수 있다.
본 발명은 추가로 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이고, 특히 조성물은 생체내 투여, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 척추강내, 질의, 직장, 및 다른 주사가능 또는 국소 투여가능한 복용 형태에 적합하다.
더 구체적으로, 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 함유하는 조성물, 특히 또 하나의 활성제, 예컨대 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물, 예컨대 홀레스티라민(Questran), 젬피브로질(Lopid, Gemcor), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 요법제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 병태를 치료하기 위해 사용되는 다른 약물을 임의로 함유할 수 있는, 생체내 투여, 예를 들면, 피하, 정맥내, 진피내, 비강내, 척추강내, 질의, 직장, 경구 및 다른 주사가능 또는 국소 복용 형태에 적당한 조성물을 제공하며, 여기서 상기 치료된 개체는 높은 콜레스테롤을 가질 수 있다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 또 다른 활성제, 특히 피하, 경구 및 정맥내 복용 요법과 회합하여, 당해 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 이용하는 신규 복용 요법을 제공한다.
본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 위한 다른 용도는, 예를 들면, PCSK9-연관된 질환 또는 병태의 진단 및 PCSK9의 존재 또는 부재를 결정하는 스크리닝 분석을 포함한다. 본원에 기재된 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 일부는 PCSK9 활성과 연관된 결과, 증상, 및/또는 병리를 치료하는데 유용하다.
본 발명에 따른 예시적인 항-PCSK9 항체 및 항체 단편, 및 이의 특정 CDR은 하기의 섹션에서 확인된다. 독자의 편의를 위해, 각각 예시된 항체 또는 단편, 및 그 안에 함유된 서열들은 특정 명명법, 예를 들면, Ab1, Ab2 등에 의해 예시된 항체를 확인하는 목차 아래에 별도로 기술되어 있다.
항체
Ab1
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYWMTWVRQAPGKGLEYIGIISSSGSTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLEITSPTTEDTATYFCARDSAFSSGLEFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 1).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYWMTWVRQAPGKGLEYIGIISSSGSTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLEITSPTTEDTATYFCARDSAFSSGLEFNIWGPGTLVTVSS (서열번호: 2).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab1과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 10).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AYDLTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSVYSNWLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCQQGQSSSDIDNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 21).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AYDLTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSVYSNWLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCQQGQSSSDIDNTFGGGTEVVVK(서열번호: 22).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab1과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 30).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함한다: 서열번호: 1의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 4; 서열번호: 6; 및 서열번호: 8의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 21의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 24; 서열번호: 26; 및 서열번호: 28의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 3; 서열번호: 5; 서열번호: 7; 및 서열번호: 9의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 23; 서열번호: 25; 서열번호: 27; 및 서열번호: 29의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1 또는 서열번호: 2의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 21 또는 서열번호: 22의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 4; 서열번호: 6; 및 서열번호: 8의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 24; 서열번호: 26; 및 서열번호: 28의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 3; 서열번호: 5; 서열번호: 7; 및 서열번호: 9의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 23; 서열번호: 25; 서열번호: 27; 및 서열번호: 29의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 2의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 22의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 2의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 4; 서열번호: 6; 및 서열번호: 8); 및 서열번호: 22의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 24; 서열번호: 26; 및 서열번호: 28); 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 2의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 22의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 2의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 3; 서열번호: 5; 서열번호: 7; 및 서열번호: 9); 및 서열번호: 22의 가변 경쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 23; 서열번호: 25; 서열번호: 27; 및 서열번호: 29); 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 1 및 서열번호: 21을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab1, 또는 Ab1의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab1과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab1와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab1로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab1에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 2 및/또는 서열번호: 22.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab1의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab1 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab1의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab2
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIDAIDNTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTGDTATYFCARASILGYSIATGFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 41).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIDAIDNTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTGDTATYFCARASILGYSIATGFNIWGPGTLVTVSS(서열번호: 42).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab2와 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 50).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISSHLAWYQQKSGQPPKLLIYRASTLESGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYGVSDVDNGFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 61).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISSHLAWYQQKSGQPPKLLIYRASTLESGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYGVSDVDNGFGGGTEVVVK (서열번호: 62).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab2와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 70).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 41의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 44; 서열번호: 46; 및 서열번호: 48의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 61의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 64; 서열번호: 66; 및 서열번호: 68의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 43; 서열번호: 45; 서열번호: 47; 및 서열번호: 49의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 63; 서열번호: 65; 서열번호: 67; 및 서열번호: 69의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41 또는 서열번호: 42의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 61 또는 서열번호: 62의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 44; 서열번호: 46; 및 서열번호: 48의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 64; 서열번호: 66; 및 서열번호: 68의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 43; 서열번호: 45; 서열번호: 47; 및 서열번호: 49의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 63; 서열번호: 65; 서열번호: 67; 및 서열번호: 69의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 42의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 62의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 42의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 44; 서열번호: 46; 및 서열번호: 48); 및 서열번호: 62의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 64; 서열번호: 66; 및 서열번호: 68).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 42의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 62의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 42의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 43; 서열번호: 45; 서열번호: 47; 및 서열번호: 49); 및 서열번호: 62의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 63; 서열번호: 65; 서열번호: 67; 및 서열번호: 69).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 41 및 서열번호: 61을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab2, 또는 Ab2의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab2와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab2와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab2로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab2에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 42 및/또는 서열번호: 62.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab2의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab2 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab2의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab3
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGGSLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTVEDTATYFCARGGAYATLNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 81).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다: QSVEESGGRLVTPGGSLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTVEDTATYFCARGGAYATLNLWGPGTLVTVSS (서열번호: 82).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab3과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 90).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYHNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYDASKLTSGVSSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNGFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 101).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYHNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYDASKLTSGVSSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNGFGGGTEVVVK (서열번호: 102).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab3과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 110).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 81의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 84; 서열번호: 86; 및 서열번호: 88의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 101의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 104; 서열번호: 106; 및 서열번호: 108의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 83; 서열번호: 85; 서열번호: 87; 및 서열번호: 89의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 103; 서열번호: 105; 서열번호: 107; 및 서열번호: 109의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81 또는 서열번호: 82의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 101 또는 서열번호: 102의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 84; 서열번호: 86; 및 서열번호: 88의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 104; 서열번호: 106; 및 서열번호: 108의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 83; 서열번호: 85; 서열번호: 87; 및 서열번호: 89의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 103; 서열번호: 105; 서열번호: 107; 및 서열번호: 109의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 82의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 102의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 82의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 84; 서열번호: 86; 및 서열번호: 88); 및 서열번호: 102의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 104; 서열번호: 106; 및 서열번호: 108).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 82의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 102의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 82의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 83; 서열번호: 85; 서열번호: 87; 및 서열번호: 89); 및 서열번호: 102의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 103; 서열번호: 105; 서열번호: 107; 및 서열번호: 109).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 81 및 서열번호: 101을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab3, 또는 Ab3의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab3과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab3와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab3로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab3에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 82 및/또는 서열번호: 102.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab3의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab3 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab3의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab4
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMIWVRQAPEKGLEYIGYIGGIDSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCGRWSGTSGYNTIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 121).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다: QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMIWVRQAPEKGLEYIGYIGGIDSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCGRWSGTSGYNTIWGPGTLVTVSS (서열번호: 122).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab4와 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 130).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSIYSNLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLASGVSSRFKGSRSGTEYTLTISDLECADAATYYCQCTGGGDSGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 141).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSIYSNLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLASGVSSRFKGSRSGTEYTLTISDLECADAATYYCQCTGGGDSGNTFGGGTEVVVK (서열번호: 142).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab4와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 150).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 121의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 124; 서열번호: 126; 및 서열번호: 128의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 141의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 144; 서열번호: 146; 및 서열번호: 148의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 123; 서열번호: 125; 서열번호: 127; 및 서열번호: 129의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 143; 서열번호: 145; 서열번호: 147; 및 서열번호: 149의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121 또는 서열번호: 122의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 141 또는 서열번호: 142의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 124; 서열번호: 126; 및 서열번호: 128의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 144; 서열번호: 146; 및 서열번호: 148의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 123; 서열번호: 125; 서열번호: 127; 및 서열번호: 129의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 143; 서열번호: 145; 서열번호: 147; 및 서열번호: 149의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 122의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 142의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 122의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 124; 서열번호: 126; 및 서열번호: 128); 및 서열번호: 142의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 144; 서열번호: 146; 및 서열번호: 148).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 122의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 142의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 122의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 123; 서열번호: 125; 서열번호: 127; 및 서열번호: 129); 및 서열번호: 142의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 143; 서열번호: 145; 서열번호: 147; 및 서열번호: 149).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 121 및 서열번호: 141을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab4, 또는 Ab4의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab4와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab4로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab4에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 122 및/또는 서열번호: 142.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab4의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab4 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab4의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab5
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIISNSGTTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGIYWYWRVFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 161).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다: QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIISNSGTTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGIYWYWRVFNLWGPGTLVTVSS (서열번호: 162).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab5와 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 170).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 181).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNAFGGGTEVVVK (서열번호: 182).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab5와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 190).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 161의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 164; 서열번호: 166; 및 서열번호: 168의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 181의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 184; 서열번호: 186; 및 서열번호: 188의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 163; 서열번호: 165; 서열번호: 167; 및 서열번호: 169의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 183; 서열번호: 185; 서열번호: 187; 및 서열번호: 189의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161 또는 서열번호: 162의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 181 또는 서열번호: 182의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 164; 서열번호: 166; 및 서열번호: 168의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 184; 서열번호: 186; 및 서열번호: 188의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 163; 서열번호: 165; 서열번호: 167; 및 서열번호: 169의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 183; 서열번호: 185; 서열번호: 187; 및 서열번호: 189의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 162의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 182의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 162의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 164; 서열번호: 166; 및 서열번호: 168); 및 서열번호: 182의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 184; 서열번호: 186; 및 서열번호: 188).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 162의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 182의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 162의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 163; 서열번호: 165; 서열번호: 167; 및 서열번호: 169); 및 서열번호: 182의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 183; 서열번호: 185; 서열번호: 187; 및 서열번호: 189).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 161 및 서열번호: 181을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab5, 또는 Ab5의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab5와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab5와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab5로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab5에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 162 및/또는 서열번호: 182.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab5의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab5 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab5의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab6
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASWAKGRLTISMTSSTTVTLQLNSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 201).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASWAKGRLTISMTSSTTVTLQLNSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSS (서열번호: 202).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab6과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 210).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGQPPKLLIYRAYTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 221).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGQPPKLLIYRAYTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVK (서열번호: 222).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab6과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 230).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 201의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 204; 서열번호: 206; 및 서열번호: 208의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 221의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 224; 서열번호: 226; 및 서열번호: 228의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 203; 서열번호: 205; 서열번호: 207; 및 서열번호: 209의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 223; 서열번호: 225; 서열번호: 227; 및 서열번호: 229의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201 또는 서열번호: 202의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 221 또는 서열번호: 222의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 204; 서열번호: 206; 및 서열번호: 208의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 224; 서열번호: 226; 및 서열번호: 228의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 203; 서열번호: 205; 서열번호: 207; 및 서열번호: 209의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 223; 서열번호: 225; 서열번호: 227; 및 서열번호: 229의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 202의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 222의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 202의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 204; 서열번호: 206; 및 서열번호: 208); 및 서열번호: 222의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 224; 서열번호: 226; 및 서열번호: 228); 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 202의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 222의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 202의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 203; 서열번호: 205; 서열번호: 207; 및 서열번호: 209); 및 서열번호: 222의 가변 경쇄 영역; 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 223; 서열번호: 225; 서열번호: 227; 및 서열번호: 229).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 201 및 서열번호: 221을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab6, 또는 Ab6의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab6과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab6와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab6으로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab6에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 202 및/또는 서열번호: 222.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab6의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab6 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab6의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab7
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 241).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSS (서열번호: 242).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab7과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 250).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGKVPKLLIYRAYTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 261).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGKVPKLLIYRAYTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTKVEIK (서열번호: 262).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab7과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 270).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 241의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 244; 서열번호: 246; 및 서열번호: 248의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 261의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 264; 서열번호: 266; 및 서열번호: 268의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 243; 서열번호: 245; 서열번호: 247; 및 서열번호: 249의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 263; 서열번호: 265; 서열번호: 267; 및 서열번호: 269의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241 또는 서열번호: 242의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 261 또는 서열번호: 262의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 244; 서열번호: 246; 및 서열번호: 248의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 264; 서열번호: 266; 및 서열번호: 268의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 243; 서열번호: 245; 서열번호: 247; 및 서열번호: 249의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 263; 서열번호: 265; 서열번호: 267; 및 서열번호: 269의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 242의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 262의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 242의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 244; 서열번호: 246; 및 서열번호: 248); 및 서열번호: 262의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 264; 서열번호: 266; 및 서열번호: 268).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 242의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 262의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 242의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 243; 서열번호: 245; 서열번호: 247; 및 서열번호: 249); 및 서열번호: 262의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 263; 서열번호: 265; 서열번호: 267; 및 서열번호: 269).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 241 및 서열번호: 261을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab7, 또는 Ab7의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab7과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab7와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab7로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab7에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 242 및/또는 서열번호: 262.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab7의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab7 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab7의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab8
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFSFTSDYYMCWVRQAPGKGLEWIGCISTGDGSTYYASWAKGRFTISKPSSTTVTLQMTRLTAADTATYFCARDRYYSYAYGAYVYASDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 281).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFSFTSDYYMCWVRQAPGKGLEWIGCISTGDGSTYYASWAKGRFTISKPSSTTVTLQMTRLTAADTATYFCARDRYYSYAYGAYVYASDLWGPGTLVTVSS (서열번호: 282).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab8과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 290).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVSEPVGGTVTINCQASESIRNYLSWYQQKPGQRPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSNYGISSRSYVNGFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 301).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVSEPVGGTVTINCQASESIRNYLSWYQQKPGQRPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSNYGISSRSYVNGFGGGTEVVVK (서열번호: 302).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab8과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 310).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 281의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 284; 서열번호: 286; 및 서열번호: 288의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 301의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 304; 서열번호: 306; 및 서열번호: 308의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 283; 서열번호: 285; 서열번호: 287; 및 서열번호: 289의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 303; 서열번호: 305; 서열번호: 307; 및 서열번호: 309의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281 또는 서열번호: 282의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 301 또는 서열번호: 302의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 284; 서열번호: 286; 및 서열번호: 288의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 304; 서열번호: 306; 및 서열번호: 308의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 283; 서열번호: 285; 서열번호: 287; 및 서열번호: 289의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 303; 서열번호: 305; 서열번호: 307; 및 서열번호: 309의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 282의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 302의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 282의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 284; 서열번호: 286; 및 서열번호: 288); 및 서열번호: 302의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 304; 서열번호: 306; 및 서열번호: 308).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 282의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 302의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 282의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 283; 서열번호: 285; 서열번호: 287; 및 서열번호: 289); 및 서열번호: 302의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 303; 서열번호: 305; 서열번호: 307; 및 서열번호: 309).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 281 및 서열번호: 301을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab8, 또는 Ab8의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab8과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab8와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab8로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab8에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 282 및/또는 서열번호: 302.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab8의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab8 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab8의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab9
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTAEDTATYFCARDLDANSSGYYGCFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 321).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTAEDTATYFCARDLDANSSGYYGCFNIWGQGTLVTVSS (서열번호: 322).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab9와 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 330).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVVLTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYAASPLASGVSSRFKSSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYGSSNIAFGGGTELEILRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 341).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVVLTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYAASPLASGVSSRFKSSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYGSSNIAFGGGTELEIL (서열번호: 342).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab9와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 350).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 321의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 324; 서열번호: 326; 및 서열번호: 328의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 341의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 344; 서열번호: 346; 및 서열번호: 348의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 323; 서열번호: 325; 서열번호: 327; 및 서열번호: 329의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 343; 서열번호: 345; 서열번호: 347; 및 서열번호: 349의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321 또는 서열번호: 322의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 341 또는 서열번호: 342의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 324; 서열번호: 326; 및 서열번호: 328의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 344; 서열번호: 346; 및 서열번호: 348의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 323; 서열번호: 325; 서열번호: 327; 및 서열번호: 329의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 343; 서열번호: 345; 서열번호: 347; 및 서열번호: 349의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 322의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 342의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 322의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 324; 서열번호: 326; 및 서열번호: 328); 및 서열번호: 342의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 344; 서열번호: 346; 및 서열번호: 348).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 322의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 342의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 322의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 323; 서열번호: 325; 서열번호: 327; 및 서열번호: 329); 및 서열번호: 342의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 343; 서열번호: 345; 서열번호: 347; 및 서열번호: 349).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 321 및 서열번호: 341을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab9, 또는 Ab9의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab9와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab9와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab9로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab9에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 322 및/또는 서열번호: 342.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab9의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab9 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab9의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab10
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANWAKGRFTISRTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 361).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다: QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANWAKGRFTISRTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSS (서열번호: 362).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab10과 동일한 에피토프 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 370).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISNYLAWYQQKPGQPPKLLIYRTSTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 381).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISNYLAWYQQKPGQPPKLLIYRTSTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTEVVVK (서열번호: 382).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab10과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 390).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 361의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 364; 서열번호: 366; 및 서열번호: 368의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 381의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 384; 서열번호: 386; 및 서열번호: 388의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 363; 서열번호: 365; 서열번호: 367; 및 서열번호: 369의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 383; 서열번호: 385; 서열번호: 387; 및 서열번호: 389의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361 또는 서열번호: 362의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 381 또는 서열번호: 382의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 364; 서열번호: 366; 및 서열번호: 368의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 384; 서열번호: 386; 및 서열번호: 388의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 363; 서열번호: 365; 서열번호: 367; 및 서열번호: 369의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 383; 서열번호: 385; 서열번호: 387; 및 서열번호: 389의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 362의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 382의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 362의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 364; 서열번호: 366; 및 서열번호: 368); 및 서열번호: 382의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 384; 서열번호: 386; 및 서열번호: 388).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 362의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 382의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 362의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 363; 서열번호: 365; 서열번호: 367; 및 서열번호: 369); 및 서열번호: 382의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 383; 서열번호: 385; 서열번호: 387; 및 서열번호: 389).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 361 및 서열번호: 381을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab10, 또는 Ab10의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab10과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab1와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것0 또는 Ab10로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab10에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 362 및/또는 서열번호: 382.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab10의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab10 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab1의 중쇄 및/또는 경쇄0 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab11
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 401).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSS (서열번호: 402).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab11과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 410).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYRTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 421).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYRTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTKVEIK (서열번호: 422).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab11과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 430).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 401의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 404; 서열번호: 406; 및 서열번호: 408의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 421의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 424; 서열번호: 426; 및 서열번호: 428의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 403; 서열번호: 405; 서열번호: 407; 및 서열번호: 409의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 423; 서열번호: 425; 서열번호: 427; 및 서열번호: 429의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401 또는 서열번호: 402의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 421 또는 서열번호: 422의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 404; 서열번호: 406; 및 서열번호: 408의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 424; 서열번호: 426; 및 서열번호: 428의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 403; 서열번호: 405; 서열번호: 407; 및 서열번호: 409의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 423; 서열번호: 425; 서열번호: 427; 및 서열번호: 429의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 402의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 422의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 402의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 404; 서열번호: 406; 및 서열번호: 408); 및 서열번호: 422의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 424; 서열번호: 426; 및 서열번호: 428).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 402의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 422의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 402의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 403; 서열번호: 405; 서열번호: 407; 및 서열번호: 409); 및 서열번호: 422의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 423; 서열번호: 425; 서열번호: 427; 및 서열번호: 429).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 401 및 서열번호: 421을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab11, 또는 Ab11의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab11과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab11와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab11로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab11에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 402 및/또는 서열번호: 422.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab11의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab11 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab11의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab12
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 441).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIRAGGGNYYANSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSS (서열번호: 442).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab12와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 450).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYRTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 461).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYRTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTVAYGNTFGGGTKVEIK (서열번호: 462).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab12와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 470).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 441의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 444; 서열번호: 446; 및 서열번호: 448의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 461의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 464; 서열번호: 466; 및 서열번호: 468의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 443; 서열번호: 445; 서열번호: 447; 및 서열번호: 449의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 463; 서열번호: 465; 서열번호: 467; 및 서열번호: 469의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441 또는 서열번호: 442의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 461 또는 서열번호: 462의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 444; 서열번호: 446; 및 서열번호: 448의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 464; 서열번호: 466; 및 서열번호: 468의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 443; 서열번호: 445; 서열번호: 447; 및 서열번호: 449의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 463; 서열번호: 465; 서열번호: 467; 및 서열번호: 469의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 442의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 462의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 442의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 444; 서열번호: 446; 및 서열번호: 448); 및 서열번호: 462의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 464; 서열번호: 466; 및 서열번호: 468).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 442의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 462의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 442의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 443; 서열번호: 445; 서열번호: 447; 및 서열번호: 449); 및 서열번호: 462의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 463; 서열번호: 465; 서열번호: 467; 및 서열번호: 469).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 441 및 서열번호: 461을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab12, 또는 Ab12의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab12와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab12와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab12로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab12에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 442 및/또는 서열번호: 462.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab12의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab12 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab12의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab13
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSTYGVGWVRQAPGKGLEYIGIISSSGSTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDWSSTTGYYGYFNMWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 481).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSTYGVGWVRQAPGKGLEYIGIISSSGSTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDWSSTTGYYGYFNMWGPGTLVTVSS(서열번호: 482).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab13과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 490).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AFELTQTPSPVSAAVGGTVTIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDLECADAAIYYCQSSYGSSTLAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 501).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AFELTQTPSPVSAAVGGTVTIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDLECADAAIYYCQSSYGSSTLAFGGGTEVVVK(서열번호: 502).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는Ab13과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 510).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 481의 중쇄 서열에 대응하거나 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 함유하는 서열번호: 484; 서열번호: 486; 및 서열번호: 488의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 501의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 504; 서열번호: 506; 및 서열번호: 508의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 483; 서열번호: 485; 서열번호: 487; 및 서열번호: 489의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 503; 서열번호: 505; 서열번호: 507; 및 서열번호: 509의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481 또는 서열번호: 482의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 501 또는 서열번호: 502의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 484; 서열번호: 486; 및 서열번호: 488의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 504; 서열번호: 506; 및 서열번호: 508의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 483; 서열번호: 485; 서열번호: 487; 및 서열번호: 489의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 503; 서열번호: 505; 서열번호: 507; 및 서열번호: 509의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 482의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 502의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 482의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 484; 서열번호: 486; 및 서열번호: 488); 및 서열번호: 502의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 504; 서열번호: 506; 및 서열번호: 508) 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 482의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 502의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 482의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 483; 서열번호: 485; 서열번호: 487; 및 서열번호: 489); 및 서열번호: 502의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 503; 서열번호: 505; 서열번호: 507; 및 서열번호: 509).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 481 및 서열번호: 501을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab13이거나, 또는 Ab13의 CDR 및 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나, 또는 PCSK9에 결합시 Ab13과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab13와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab13로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab13에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 482 및/또는 서열번호: 502.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab13의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab13 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab13의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab14
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTGSGFSFSSIAYMCWIRQAPGKGLEWIGCIGSGSGNTYYANWAKGRFTISKSSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDTNNGWLGQFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 521).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTGSGFSFSSIAYMCWIRQAPGKGLEWIGCIGSGSGNTYYANWAKGRFTISKSSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDTNNGWLGQFNLWGQGTLVTVSS (서열번호: 522).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab14와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 530).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVSAAVGGTVTINCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQGYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 541).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVSAAVGGTVTINCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQGYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVK(서열번호: 542).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab14와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 550).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 521의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 524; 서열번호: 526; 및 서열번호: 528의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 541의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 544; 서열번호: 546; 및 서열번호: 548의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 523; 서열번호: 525; 서열번호: 527; 및 서열번호: 529의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 543; 서열번호: 545; 서열번호: 547; 및 서열번호: 549의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521 또는 서열번호: 522의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 541 또는 서열번호: 542의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 524; 서열번호: 526; 및 서열번호: 528의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 544; 서열번호: 546; 및 서열번호: 548의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 523; 서열번호: 525; 서열번호: 527; 및 서열번호: 529의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 543; 서열번호: 545; 서열번호: 547; 및 서열번호: 549의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 522의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 542의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 522의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 524; 서열번호: 526; 및 서열번호: 528); 및 서열번호: 542의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 544; 서열번호: 546; 및 서열번호: 548).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 522의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 542의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 522의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 523; 서열번호: 525; 서열번호: 527; 및 서열번호: 529); 및 서열번호: 542의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 543; 서열번호: 545; 서열번호: 547; 및 서열번호: 549).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 521 및 서열번호: 541을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab14, 또는 Ab14의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab14와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab14와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab14로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab14에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 522 및/또는 서열번호: 542.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab14의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab14 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab14의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab15
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIDAGNSGSTYYASWAKGRFTISKASSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDLNDGWLGQFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 561).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIACIDAGNSGSTYYASWAKGRFTISKASSTTVTLQMTSLTAADTATYFCASDLNDGWLGQFNLWGPGTLVTVSS(서열번호: 562).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab15와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 570).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQTPSPVSGAVGGTVTIKCQASQSISDYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFRGSGSGTEYTLTITDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 581).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ANIVMTQTPSPVSGAVGGTVTIKCQASQSISDYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFRGSGSGTEYTLTITDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVK(서열번호: 582).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab15와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 590).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 561의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 564; 서열번호: 566; 및 서열번호: 568의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 581의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 584; 서열번호: 586; 및 서열번호: 588의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 563; 서열번호: 565; 서열번호: 567; 및 서열번호: 569의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 583; 서열번호: 585; 서열번호: 587; 및 서열번호: 589의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561 또는 서열번호: 562의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 581 또는 서열번호: 582의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 564; 서열번호: 566; 및 서열번호: 568의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 584; 서열번호: 586; 및 서열번호: 588의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 563; 서열번호: 565; 서열번호: 567; 및 서열번호: 569의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 583; 서열번호: 585; 서열번호: 587; 및 서열번호: 589의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 562의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 582의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 562의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 564; 서열번호: 566; 및 서열번호: 568); 및 서열번호: 582의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 584; 서열번호: 586; 및 서열번호: 588) 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 562의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 582의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 562의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 563; 서열번호: 565; 서열번호: 567; 및 서열번호: 569); 및 서열번호: 582의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 583; 서열번호: 585; 서열번호: 587; 및 서열번호: 589).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 561 및 서열번호: 581을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab15, 또는 Ab15의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab15와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab15와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab15로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab15에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 562 및/또는 서열번호: 582.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab15의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab15 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab15의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab16
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFSFSSDYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGSYYANWAKGRLTISMTSSTTVGLKMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 601).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFSFSSDYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGSYYANWAKGRLTISMTSSTTVGLKMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSS (서열번호: 602).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab16과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 610).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTVTYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 621).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTVTYGNTFGGGTEVVVK (서열번호: 622).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab16과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 630).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 601의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 604; 서열번호: 606; 및 서열번호: 608의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로, 서열번호: 621의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 624; 서열번호: 626; 및 서열번호: 628의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 603; 서열번호: 605; 서열번호: 607; 및 서열번호: 609의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 623; 서열번호: 625; 서열번호: 627; 및 서열번호: 629의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601 또는 서열번호: 602의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 621 또는 서열번호: 622의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 604; 서열번호: 606; 및 서열번호: 608의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 624; 서열번호: 626; 및 서열번호: 628의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 603; 서열번호: 605; 서열번호: 607; 및 서열번호: 609의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 623; 서열번호: 625; 서열번호: 627; 및 서열번호: 629의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 602의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 622의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 602의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 604; 서열번호: 606; 및 서열번호: 608); 및 서열번호: 622의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 624; 서열번호: 626; 및 서열번호: 628).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 602의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 622의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 602의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 603; 서열번호: 605; 서열번호: 607; 및 서열번호: 609); 및 서열번호: 622의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 623; 서열번호: 625; 서열번호: 627; 및 서열번호: 629).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 601 및 서열번호: 621을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab16, 또는 Ab16의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab16과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab16와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab16으로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab16에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 602 및/또는 서열번호: 622.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab16의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab16 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab16의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab17
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRPGSADYYASWAKGRFTISRASSSTVTLQMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 641).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QEQLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSSYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRPGSADYYASWAKGRFTISRASSSTVTLQMTSLTAADTATYFCASDINDGWLGQFNLWGPGTLVTVSS(서열번호: 642).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab17과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 650).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASLSIADYLAWYLQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 661).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASLSIADYLAWYLQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTEVVVK (서열번호: 662).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab17과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 670).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 641의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 644; 서열번호: 646; 및 서열번호: 648의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 661의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 664; 서열번호: 666; 및 서열번호: 668의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 643; 서열번호: 645; 서열번호: 647; 및 서열번호: 649의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 663; 서열번호: 665; 서열번호: 667; 및 서열번호: 669의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641 또는 서열번호: 642의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 661 또는 서열번호: 662의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 644; 서열번호: 646; 및 서열번호: 648의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 664; 서열번호: 666; 및 서열번호: 668의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 643; 서열번호: 645; 서열번호: 647; 및 서열번호: 649의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 663; 서열번호: 665; 서열번호: 667; 및 서열번호: 669의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 642의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 662의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 642의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 644; 서열번호: 646; 및 서열번호: 648); 및 서열번호: 662의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 664; 서열번호: 666; 및 서열번호: 668).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 642의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 662의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 642의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 643; 서열번호: 645; 서열번호: 647; 및 서열번호: 649); 및 서열번호: 662의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 663; 서열번호: 665; 서열번호: 667; 및 서열번호: 669).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 641 및 서열번호: 661을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab17, 또는 Ab17의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab17과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab17와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab17로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab17에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 642 및/또는 서열번호: 662.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab17의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab17 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab17의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab18
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 681).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYWICWVRQAPGKGLEWIGCIRDGGGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASDINDGWLGQFNLWGQGTLVTVSS(서열번호: 682).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab18과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 690).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGKVPKLLIYRAYTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 701).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ADIVMTQSPSSLSASVGDRVTIKCQASQSISAYLAWYQQKPGKVPKLLIYRAYTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYYSVTTNTYGNTFGGGTKVEIK(서열번호: 702).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab18과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 710).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 681의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 684; 서열번호: 686; 및 서열번호: 688의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 701의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 704; 서열번호: 706; 및 서열번호: 708의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 683; 서열번호: 685; 서열번호: 687; 및 서열번호: 689의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 703; 서열번호: 705; 서열번호: 707; 및 서열번호: 709의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681 또는 서열번호: 682의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 701 또는 서열번호: 702의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 684; 서열번호: 686; 및 서열번호: 688의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 704; 서열번호: 706; 및 서열번호: 708의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 683; 서열번호: 685; 서열번호: 687; 및 서열번호: 689의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 703; 서열번호: 705; 서열번호: 707; 및 서열번호: 709의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 682의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 702의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 682의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 684; 서열번호: 686; 및 서열번호: 688); 및 서열번호: 702의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 704; 서열번호: 706; 및 서열번호: 708).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 682의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 702의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 682의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 683; 서열번호: 685; 서열번호: 687; 및 서열번호: 689); 및 서열번호: 702의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 703; 서열번호: 705; 서열번호: 707; 및 서열번호: 709).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 681 및 서열번호: 701을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab18, 또는 Ab18의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab18과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab18와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab18로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab18에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 682 및/또는 서열번호: 702.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab18의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab18 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab18의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab19
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYFCARDLDAQSSGYYGAFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 721).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYFCARDLDAQSSGYYGAFNIWGQGTLVTVSS(서열번호: 722).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab19와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 730).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISTALAWYQQKPGKAPKLLIYAASPLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQSYYGSSNIAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 741).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISTALAWYQQKPGKAPKLLIYAASPLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQSYYGSSNIAFGGGTKVEIK(서열번호: 742).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab19와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 750).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 721의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 724; 서열번호: 726; 및 서열번호: 728의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 741의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 744; 서열번호: 746; 및 서열번호: 748의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 723; 서열번호: 725; 서열번호: 727; 및 서열번호: 729의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 743; 서열번호: 745; 서열번호: 747; 및 서열번호: 749의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721 또는 서열번호: 722의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 741 또는 서열번호: 742의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 724; 서열번호: 726; 및 서열번호: 728의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 744; 서열번호: 746; 및 서열번호: 748의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 723; 서열번호: 725; 서열번호: 727; 및 서열번호: 729의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 743; 서열번호: 745; 서열번호: 747; 및 서열번호: 749의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 722의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 742의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 722의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 724; 서열번호: 726; 및 서열번호: 728); 및 서열번호: 742의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 744; 서열번호: 746; 및 서열번호: 748).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 722의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 742의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 722의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 723; 서열번호: 725; 서열번호: 727; 및 서열번호: 729); 및 서열번호: 742의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 743; 서열번호: 745; 서열번호: 747; 및 서열번호: 749).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 721 및 서열번호: 741을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab19, 또는 Ab19의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab19와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab19와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab19로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab19에 대해, Fab 단편은 바람직하게는,하기를 포함한다: 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 722 및/또는 서열번호: 742.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab19의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab19 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab19의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab20
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISRDNSKSTVYLQMNSLRAEDTATYFCARDLDAQSSGYYGAFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 761).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSYGPTYYASWAKGRFTISRDNSKSTVYLQMNSLRAEDTATYFCARDLDAQSSGYYGAFNIWGQGTLVTVSS(서열번호: 762).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab20과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 770).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISTALAWYQQKPGKAPKLLIYAASPLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQSYYGSSNIAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 781).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISTALAWYQQKPGKAPKLLIYAASPLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQSYYGSSNIAFGGGTKVEIK(서열번호: 782).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab20과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 790).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 761의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 764; 서열번호: 766; 및 서열번호: 768의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 781의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 784; 서열번호: 786; 및 서열번호: 788의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 763; 서열번호: 765; 서열번호: 767; 및 서열번호: 769의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 783; 서열번호: 785; 서열번호: 787; 및 서열번호: 789의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761 또는 서열번호: 762의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 781 또는 서열번호: 782의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 764; 서열번호: 766; 및 서열번호: 768의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 784; 서열번호: 786; 및 서열번호: 788의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 763; 서열번호: 765; 서열번호: 767; 및 서열번호: 769의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 783; 서열번호: 785; 서열번호: 787; 및 서열번호: 789의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 762의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 782의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 762의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 764; 서열번호: 766; 및 서열번호: 768); 및 서열번호: 782의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 784; 서열번호: 786; 및 서열번호: 788).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 762의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 782의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 762의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 763; 서열번호: 765; 서열번호: 767; 및 서열번호: 769); 및 서열번호: 782의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 783; 서열번호: 785; 서열번호: 787; 및 서열번호: 789).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 761 및 서열번호: 781을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab20, 또는 Ab20의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab20과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab20와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab20로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab20에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 762 및/또는 서열번호: 782.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab20의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab20 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab20의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab21
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMNWVRQAPGKGLEWIGAIRSSGATFFASWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTPEDTATYFCARDTNDGWYINRLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 801).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMNWVRQAPGKGLEWIGAIRSSGATFFASWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTPEDTATYFCARDTNDGWYINRLDLWGPGTLVTVSS(서열번호: 802).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab21과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 810).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSKSVYSNYLSWFQQKPGQPPKFLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGDTNISDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 821).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSKSVYSNYLSWFQQKPGQPPKFLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGDTNISDNAFGGGTEVVVK(서열번호: 822).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab21과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 830).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 801의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 804; 서열번호: 806; 및 서열번호: 808의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 821의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 824; 서열번호: 826; 및 서열번호: 828의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 803; 서열번호: 805; 서열번호: 807; 및 서열번호: 809의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 823; 서열번호: 825; 서열번호: 827; 및 서열번호: 829의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801 또는 서열번호: 802의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 821 또는 서열번호: 822의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 804; 서열번호: 806; 및 서열번호: 808의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 824; 서열번호: 826; 및 서열번호: 828의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 803; 서열번호: 805; 서열번호: 807; 및 서열번호: 809의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 823; 서열번호: 825; 서열번호: 827; 및 서열번호: 829의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 802의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 822의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 802의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 804; 서열번호: 806; 및 서열번호: 808); 및 서열번호: 822의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 824; 서열번호: 826; 및 서열번호: 828).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 802의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 822의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 802의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 803; 서열번호: 805; 서열번호: 807; 및 서열번호: 809); 및 서열번호: 822의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 823; 서열번호: 825; 서열번호: 827; 및 서열번호: 829).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 801 및 서열번호: 821을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab21, 또는 Ab21의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab21과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab21와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab21로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab21에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 802 및/또는 서열번호: 822.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab21의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab21 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab21의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab22
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMNWVRQAPGKGLEWIGAIRSSGATFFASSVNGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDTNDGWYINRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 841).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMNWVRQAPGKGLEWIGAIRSSGATFFASSVNGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDTNDGWYINRLDLWGQGTLVTVSS(서열번호: 842).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab22와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 850).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSVYSNYLSWFQQKPGKAPKFLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGDTNIADNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 861).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
AVLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSVYSNYLSWFQQKPGKAPKFLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGDTNIADNAFGGGTKVEIK(서열번호: 862).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab22와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 870).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 841의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 844; 서열번호: 846; 및 서열번호: 848의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 861의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 864; 서열번호: 866; 및 서열번호: 868의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 843; 서열번호: 845; 서열번호: 847; 및 서열번호: 849의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 863; 서열번호: 865; 서열번호: 867; 및 서열번호: 869의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841 또는 서열번호: 842의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 861 또는 서열번호: 862의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 844; 서열번호: 846; 및 서열번호: 848의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 864; 서열번호: 866; 및 서열번호: 868의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 843; 서열번호: 845; 서열번호: 847; 및 서열번호: 849의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 863; 서열번호: 865; 서열번호: 867; 및 서열번호: 869의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 842의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 862의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 842의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 844; 서열번호: 846; 및 서열번호: 848); 및 서열번호: 862의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 864; 서열번호: 866; 및 서열번호: 868).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 842의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 862의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 842의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 843; 서열번호: 845; 서열번호: 847; 및 서열번호: 849); 및 서열번호: 862의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 863; 서열번호: 865; 서열번호: 867; 및 서열번호: 869).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 841 및 서열번호: 861을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab22, 또는 Ab22의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab22와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab22와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab22로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab22에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 842 및/또는 서열번호: 862.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab22의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab22 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab22의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab23
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSLEESGGDLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGKGLEWIACIYAGSGGSTFFANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARDGGYAGYGYAFFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 881).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSLEESGGDLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGKGLEWIACIYAGSGGSTFFANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARDGGYAGYGYAFFNLWGPGTLVTVSS(서열번호: 882).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab23과 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 890).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASERIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECDDAAIYYCQCTYYGSSYPNVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 901).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASERIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECDDAAIYYCQCTYYGSSYPNVFGGGTEVVVK(서열번호: 902).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab23과 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 910).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 881의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 884; 서열번호: 886; 및 서열번호: 888의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 901의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 904; 서열번호: 906; 및 서열번호: 908의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 883; 서열번호: 885; 서열번호: 887; 및 서열번호: 889의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 903; 서열번호: 905; 서열번호: 907; 및 서열번호: 909의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881 또는 서열번호: 882의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 901 또는 서열번호: 902의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 884; 서열번호: 886; 및 서열번호: 888의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 904; 서열번호: 906; 및 서열번호: 908의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 883; 서열번호: 885; 서열번호: 887; 및 서열번호: 889의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 903; 서열번호: 905; 서열번호: 907; 및 서열번호: 909의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 882의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 902의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 882의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 884; 서열번호: 886; 및 서열번호: 888); 및 서열번호: 902의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 904; 서열번호: 906; 및 서열번호: 908).
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 882의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 902의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 882의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 883; 서열번호: 885; 서열번호: 887; 및 서열번호: 889); 및 서열번호: 902의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 903; 서열번호: 905; 서열번호: 907; 및 서열번호: 909).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 881 및 서열번호: 901을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab23, 또는 Ab23의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab23과 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab23와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab23로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab23에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 882 및/또는 서열번호: 902.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab23의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab23 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab23의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
항체
Ab24
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSLEESGGDLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGKGLEWIACIYAGSGGSTFFANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARDGGYAGYGYAFFNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 921).
일 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
QSLEESGGDLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGKGLEWIACIYAGSGGSTFFANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARDGGYAGYGYAFFNLWGPGTLVTVSS(서열번호: 922).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 Ab24와 동일한 에피토프 특이성을 보유하고 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 중쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호: 930).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASERIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECDDAAIYYCQATYYGSSYPNVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 941).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 함유하는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는다:
DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASERIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECDDAAIYYCQATYYGSSYPNVFGGGTEVVVK(서열번호: 942).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 및 항체 단편을 포함하고, 이것은 아래에서 제시된 서열을 포함하는 불변 경쇄 서열을 함유하는 Ab24와 동일한 에피토프에 결합하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호: 950).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 921의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열을 함유하는 서열번호: 924; 서열번호: 926; 및 서열번호: 928의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3, 및/또는 추가로 서열번호: 941의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하거나 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열을 함유하는 서열번호: 944; 서열번호: 946; 및 서열번호: 948의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3을 함유하는 PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 항체 단편, 또는 그것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열의 조합을 함유하는 항체 또는 단편을 포함한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 예시된 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 또는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 추가로 고려한다: 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 923; 서열번호: 925; 서열번호: 927; 및 서열번호: 929의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4, 및/또는 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열, 또는 그것과 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 이들 폴리펩타이드 서열 또는 서열들의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 943; 서열번호: 945; 서열번호: 947; 및 서열번호: 949의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 그의 단편은 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921 또는 서열번호: 922의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩타이드. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 941 또는 서열번호: 942의 폴리펩타이드 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 924; 서열번호: 926; 및 서열번호: 928의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 944; 서열번호: 946; 및 서열번호: 948의 폴리펩타이드 서열의 1, 2 또는 3.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 923; 서열번호: 925; 서열번호: 927; 및 서열번호: 929의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명의 추가 구현예에서, 당해 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 943; 서열번호: 945; 서열번호: 947; 및 서열번호: 949의 폴리펩타이드 서열의 1, 2, 3, 또는 4.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 922의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 942의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 922의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 924; 서열번호: 926; 및 서열번호: 928); 및 서열번호: 942의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열번호: 944; 서열번호: 946; 및 서열번호: 948) 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열.
본 발명은 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 또한 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기의 항체 단편의 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 922의 가변 중쇄 영역; 서열번호: 942의 가변 경쇄 영역; 서열번호: 922의 가변 중쇄 영역의 프레임워크 영역 (서열번호: 923; 서열번호: 925; 서열번호: 927; 및 서열번호: 929); 및 서열번호: 942의 가변 경쇄 영역 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 943; 서열번호: 945; 서열번호: 947; 및 서열번호: 949).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 항-PCSK9 항체는 서열번호: 921 및 서열번호: 941을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된 Ab24, 또는 Ab24의 CDR을 포함하고 본원에서 제시된 생물학적 활성의 적어도 하나를 갖는 항체 또는 항체 단편이거나 PCSK9에 결합시 Ab24와 경쟁하는 항-PCSK9 항체, 바람직하게는 Ab24와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 함유하는 것 또는 Ab24로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프(들)에 결합하는 항체이다.
본 발명의 추가의 특히 바람직한 구현예에서, 항체 단편은 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab24에 대해, Fab 단편은 바람직하게는, 하기를 포함한다: 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열 및 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 추가로, 하기의 부가, 결실, 및 변이체를 함유하는 Fab를 포함한다: PCSK9에 대해 결합 특이성을 보유하는 서열번호: 922 및/또는 서열번호: 942.
본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab24의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab24 또는 Fab 단편은 하기에서의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 반수체 또는 2배체 효모 예컨대 반수체 또는 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
추가적 구현예에서, 본 발명은 추가로, 하기를 포함하는, PCSK9에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: Ab24의 중쇄 및/또는 경쇄 뿐만 아니라 단편, 변이체, FR, CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 또는 그것과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열 중 하나 이상의 조합.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 2, 서열번호: 42, 서열번호: 82, 서열번호: 122, 서열번호: 162, 서열번호: 202, 서열번호: 242, 서열번호: 282, 서열번호: 322, 서열번호: 362, 서열번호: 402, 서열번호: 442, 서열번호: 482, 서열번호: 522, 서열번호: 562, 서열번호: 602, 서열번호: 642, 서열번호: 692, 서열번호: 732, 서열번호: 772, 서열번호: 812, 서열번호: 852, 서열번호: 892, 서열번호: 932, 또는 그의 변이체로부터 선택된 VH 폴리펩타이드 서열; 및 추가로 서열번호: 22, 서열번호: 62, 서열번호: 102, 서열번호: 142, 서열번호: 182, 서열번호: 222, 서열번호: 262, 서열번호: 302, 서열번호: 342, 서열번호: 382, 서열번호: 422, 서열번호: 462, 서열번호: 502, 서열번호: 542, 서열번호: 582, 서열번호: 622, 서열번호: 662, 서열번호: 702, 서열번호: 742, 서열번호: 782, 서열번호: 822, 서열번호: 862, 서열번호: 902, 서열번호: 942, 또는 그의 변이체로부터 선택된 VL 폴리펩타이드 서열을 포함하는 단리된 항-PCSK9 항체를 고려하고, 여기서 상기 VH 또는 VL 폴리펩타이드 중 프레임워크 잔기 (FR 잔기) 및/또는 CDR 잔기 중 1 이상은 또 하나의 아미노산 잔기로 치환되었고, 이것으로 PCSK9에 특이적으로 결합하는 항-PCSK9 항체가 생긴다. 본 발명은 또한 이들 항체의 인간화된 및 키메라 형태를 포함한다. 키메라 및 인간화된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19 불변 영역로부터 유도된 Fc를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 키메라 또는 인간화된 항체 또는 단편 또는 VH 또는 VL 폴리펩타이드는 1 이상의 토끼 항체, 예를 들면, 클론 토끼 B 세포 집단으로부터 단리된 토끼 항체로부터 기원하거나 유도된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 숙주세포를 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 포함하고 이것은 PCSK9에 결합하기 위해 본원에서 개시된, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편과 경쟁한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 또는 진단 조성물을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 필요로 하는 환자에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제하는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 PCSK9에 선택적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 100 pM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 또 하나의 활성제, 예를 들면, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편.
일부 측면에서, 본 발명은 동일한 또는 중첩되는 에피토프 특이성과 경쟁하거나 그것을 보유하는 본원에서 기재된 항체, 또는 항체들, 바람직하게는 예시된 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편 중 하나의 하나의 또는 모든 CDR을 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 더 바람직하게는 본원에서 기재된 임의의 VH, VL 및 CDR 폴리펩타이드에 대해 적어도 80, 90, 또는 95% 동일성을 갖는 1 이상 가변 또는 CDR 서열을 포함하는 항체의 용도, 및 이들 항체 및 항체 단편 및 숙주세포를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예는 키메라 또는 인간화된 항체 및 그의 단편 (예컨대 Fab 또는 Fv 또는 1가 단편)에 관한 것이고, 이들은 PCSK9에 결합할 수 있고, 바람직하게는 PCSK9의 생물학적 활성을 억제, 차단 또는 중화하거나 PCSK9의 LDLR에의 결합을 차단 또는 억제한다.
일부 측면에서, 본 발명은 단리된 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 이들은 PCSK9에 결합하기 위해 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편으로서 PCSK9 상의 동일한 또는 중첩되는 에피토프와 경쟁하거나 그것과 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 필요로 하는 환자에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 그것을 필요로 하는 대상체에서 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제하는 방법을 포함하고, 이 방법은 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은, 또 하나의 활성제, 예를 들면, 콜레스테롤 수준을 감소시키거나 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 것들과 동시에 또는 순차적으로 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 또 하나의 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을, LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 추가로, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편을 다른 제제와 함께 투여하여 PCSK9 단백질 발현, 일차 서열 및/또는 기능에 영향을 미치는 PCSK9 유전자에서 PCSK9와 연관된 질환 및 장애, 예를 들면, 증가된 또는 감소된 PCSK9의 수준 및/또는 돌연변이와 연관된 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
어떤 다른 측면에서 본 발명은 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편을 사용하여 하기를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다: 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 그것과 연관된 장애 및 합병증, 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종 및 관련된 병태.
다른 구체적인 측면에서 본 발명은 콜레스테롤 또는 지질 항상성의 장애 및 그것과 연관된 장애 및 합병증, 예를 들면, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 관상동맥 심장병, 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종 및 다른 병태 예컨대 비만, 고혈압, 당뇨병를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하고, 상기 대상체는 하기와 같은 장애를 치료하기 위해 사용된 다른 약물과 함께 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편으로 치료된다: 예를 들면, 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물 예컨대 콜레스티라민 (쿠에스트란), 젬피브로질 (로피드, 젬코르), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 치료제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온, 및 치료된 개체가 고 콜레스테롤을 가질 수 있는 병태를 치료하기 위해 사용된 다른 약물.
ACE 억제제는, 모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있고 그 예는 하기를 포함한다: 카포텐 (카프토프릴), 바소텍 (에날라프릴), 프리니빌, 제스트릴 (리시노프릴), 로텐신 (벤나제프릴), 모노프릴 (포시노프릴), 알타세 (라미프릴), 아쿠프릴 (퀴나프릴), 아세온 (페린도프릴), 마빅 (트란돌라프릴), 유니바스크 (모엑시프릴),
ARB는, 모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있고, 그 예는 하기를 포함한다: 코자르 (로사르탄), 디오반 (발사르탄), 아바프로 (이르베사르탄), 아타칸드 (칸데사르탄), 및 미카르디스 (텔미사르탄).
항부정맥제는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있고, 그 예는 하기를 포함한다: 탐보코르 (플레카인나이드), 프로칸비드 (프로카인아미드), 코르다론 (아미오다론), 및 베타파세 (소탈롤).
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 항혈소판 약물은 예로써 하기를 포함한다:
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 항응고제는 하기를 포함한다: 조직 플라스미노겐 활성제 (TPA), 테넥테플라제, 알테플라제, 우로키나제, 레테플라제, 및 스트렙토키나아제.
베타-차단제는, 모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있고, 그 예는 하기를 포함한다: 섹트랄 (아세부톨롤), 베제타 (바이소프롤롤), 브레바이블록 (에스몰롤), 인데랄 (프로프라놀롤), 테노르민 (아테놀롤), 노르모다인, 트란다테 (라베탈롤), 코레그 (카르베딜롤), 로프레소르, 및 토프롤-XL (메토프롤롤).
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 칼슘 통로 차단제는 예로써 하기를 포함한다: 노르바그크 (암로디핀), 플렌딜 (펠로디핀), 카르디젬, 카르디젬 CD, 카르디젬 SR, 딜라코르 XR, 딜티아 XT, 티아작 (딜티아젬), 칼란, 칼란 SR, 코베라-HS, 이솝틴, 이솝틴 SR, 베렐란, 베렐란 PM (베라파밀), 아달라트, 아달라트 CC, 프로카르디아, 프로카르디아 XL (니페디핀), 카르덴, 카르덴 SR (니카르디핀), 술라르 (디솔디핀), 바스코르 (베프리딜), 및 스타틴 콜레스테롤 약물 및 암로디핀의 조합인 카두에트.
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 이뇨제는 하기를 포함한다: 예로써 라식스 (푸로세마이드), 부멕스 (부메타나이드), 데마덱스 (토르세마이드), 이시드릭스 (하이드로클로로티아자이드), 자록솔린 (메톨라존), 및 알닥톤 (스피로노락톤).
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편와 함께 사용될 수 있는 심부전 약물은 예로써 도부트렉스 (도부타민), 및 프리마코르 (밀리논)을 포함한다.
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 혈관확장제는 예로써 하기를 포함한다: 딜라트레이트-SR, 이소-비드, 이소네이트, 이소르비드, 이소르딜, 이소트라테, 소르비트레이트 (이소소르바이드 디니트레이트), IMDUR (이소르비드 모노니트레이트), 및 BiDil (이소소르바이드 디니트레이트를 갖는 하이드랄라진.
모이어티가 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 당해 항-PCSK9 항체 및 항체 단편과 함께 사용될 수 있는 혈액 응고방지제는 예로써 와파린 (쿠마딘), 헤파린, 레베녹스, 및 프라그민을 포함한다.
어떤 다른 측면에서 본 발명은 추가로, 임의의 전술한 것 또는 다른 활성물질 상기 모이어티는 동일 또는 상이한 투여 수단에 의해 공동으로 또는 별도로 투여될 수 있는 다른 활성물질과 함께 당해 항체 및 항체 단편을 사용하여 심장병의 증가된 위험과 연관된 혈액 콜레스테롤 마커를 향상시키는 방법을 제공한다. 이들 마커는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 고 총 콜레스테롤, 고 LDL, 고 총 콜레스테롤 대 HDL 비 및 고 LDL-C 대 HDL 비.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 단편 및 또 하나의 활성제, 예를 들면, 상기-확인된 활성물질, 예를 들면, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제 또는 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제 중의 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단하는 제제는 스타틴을 포함한다. 스타틴은, 일부 예에서 잠재적으로 LDLR 수준을 추가로 상승시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 추가로 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 또는 호르몬 예컨대 에스트로겐, 및/또는 약초의 모이어티 예컨대 베르베린.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 그의 단편 또는 변이체 및 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 단편 및 담즙산 격리제를 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 PPAR 감마 작용제, PPAR 알파/감마 작용제, 스쿠알렌 합성효소 억제제, CETP 억제제, 항-고혈압, 항-당뇨제 (예컨대 설포닐 우레아, 인슐린, GLP-1 유사체, DDPIV 억제제), ApoB 조절물질, MTP 억제제, 폐쇄동맥경화증 치료제, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 HDL 수준을 증가시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 또는 그의 단편 또는 변이체 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 비정상적인 콜레스테롤과 연관된 병태를 치료하거나 병태를 치료하기 위한 적어도 하나의 다른 제제를 포함하고, 여기서 개체는 종종 고 콜레스테롤을 갖는다. 예를 들면 본 발명에 따른 항체 단백질 또는 그의 단편 또는 변이체는 하기와 조합되거나 공-투여될 수 있다: 다른 약물 예컨대 ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항부정맥제, 항혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 아스피린, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 다른 항-콜레스테롤 약물 예컨대 콜레스티라민 (쿠에스트란), 젬피브로질 (로피드, 젬코르), 오마코, 및 판테틴, 다른 항-고혈압약물, 항당뇨유발 약물 예컨대 알파-글루코시다제 억제제, 바이구아나이드, 디펩티딜 펩티다아제-4 억제제, 인슐린 치료제, 메글리티나이드, 설포닐우레아, 및 티아졸리딘디온 또는 치료된 개체가 고 콜레스테롤을 가질 수 있는 병태를 치료하기 위해 사용된 다른 약물. 그와 같은 약물의 예는 상기에서 확인된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요로 하는 환자에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 병태는 고콜레스테롤혈증이다.
일부 측면에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 10 내지 약 100 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 10 nM 미만인 인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 항체 또는 단편은 약 1 내지 약 10 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 1 nM 미만인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 1 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 0.5 nM인 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.01 내지 약 0.1 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 약 0.1 내지 약 10 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은 단편은 0.120 내지 약 7.99 nM인 KD로 PCSK9에 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 콜레스테롤을 감소시키고 LDLR 단백질의 이용가능성을 임으로 추가로 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤을 감소시키고 임의로 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 담즙 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 단리된 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법. 상기 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 콜레스테롤을 감소시키고 임의로 LDLR 단백질의 이용가능성을 추가로 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤을 감소시키고 추가로 임의로 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을, 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PCSK9 항체 또는 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 제공된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항-PCSK9 항체 또는 단편을 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 콜레스테롤을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 콜레스테롤을 감소시키는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을, 또 하나의 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하거나 이용가능성 LDLR을 상승시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 스타틴을 포함하고 또한 LDLR의 이용가능성을 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 담즙산 격리제를 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 HDL 수준을 증가시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제를 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법을 포함하고, 이 방법은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 분비하는 숙주세포로부터 제조하는 단계를 포함한다.
일부 측면에서 본 발명은 약제학적 또는 진단 조성물을 포함하고, 이 조성물은 본원에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 또는 진단 조성물은 추가로, 추가의 활성제를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 추가의 활성제는 방사선동위원소, 방사선핵종, 독소, 또는 치료적 및 화학요법적 그룹으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고. 상기 방법은 필요로 하는 환자에게 효과적인 양의 적어도 하나의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명에 따른 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 병태는 고콜레스테롤혈증이다.
일부 측면에서, 본 발명은 환자에서 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본원에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서 본 발명은 100 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 10 nM 미만인 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 5 nM 미만인 KD로 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 기재된 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법. 상기 방법은 대상체에게 효과적인 양의 본원에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 혈청 콜레스테롤 수준을 저하시키는 방법을 포함하고, 이 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 효과적인 양의 본원에서 제공된 바와 같은 본 발명에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 항체 단편을 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 제제는 스타틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 스타틴은 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 스타틴은 니아신, 흡수 억제제 (에제티마이브), 지질 조정제, 또는 이들의 조합과 조합된다. 일부 구현예에서, LDLR 단백질 수준의 이용가능성을 상승시키는 제제는 어떤 사이토카인 예컨대 온코스타틴 M, 에스트로겐, 및/또는 어떤 약초의 성분 예컨대 베르베린을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 고밀도 지질단백질 (HDL)을 증가시키고/거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 제제는 피브레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로파이브레이트, 젬피브로질, 페노파이브레이트, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 담즙산 격리제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 담즙 격리제는 콜레스티라민, 콜레세벨람, 콜레스티폴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제는 에제티마이브이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 콜레스테롤 수준을 감소시키는 제제는 어떤 항정신병 제제, 어떤 HIV 프로테아제 억제제, 식이 인자 예컨대 고 푸룩토오스, 수크로오스, 콜레스테롤 또는 RXR, RAR, LXR, FXR에 대한 어떤 지방산 및 어떤 핵 수용체 작용제 및 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 HDL 수준을 증가시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, HDL 수준을 증가시키는 제제는 니코틴산으로도 공지된 니아신이다. 일부 구현예에서, 니아신은 서방성 제형이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 간 트리글리세라이드 생산 및/또는 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 분비를 억제하는 제제는 아시피목스이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제는 오를리스타트, 립스타틴, 및 이들의 일부 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 본 발명은 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-고혈제이고/거나 협심증을 치료하는 제제는 암로디핀이다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명에 따른 효과적인 양의 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 적어도 하나의 다른 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여하여 대상체에서 LDLR 단백질 수준을 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 조합은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 적어도 하나의 다른 제제는 동시에 투여되지 않고, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 적어도 하나의 다른 제제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다.
일부 측면에서, 본 발명은 PCSK9에 결합하고 LDLR에 대한 PCSK9의 저밀도 지질단백질 수용체 (LDLR) 저하 효과를 감소시키는 항체를 중화시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 PCSK9에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 PCSK9의 촉매 도메인에 결합한다.
일부 측면에서, 본 발명은 서열번호: 961의 아미노산 서열를 포함하는 PCSK9 단백질에 결합하는 본 발명에 따른 단리된 중화 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 여기서 본 발명에 따른 중화 항체 또는 항체 단편은 LDLR 수준을 저하시키는 PCSK9의 능력을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본 발명에 따른 LDLR 비-경쟁적 중화 항체 또는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본 발명에 따른 LDLR 경쟁적 중화 항체 또는 항체 단편이다.
일부 측면에서, 본 발명은 서열번호: 962의 아미노산 서열을 포함하는 PCSK9 단백질에 결합하는 본 발명에 따른 단리된 중화 항체 또는 항체 단편를 포함하고, 여기서 본 발명에 따른 중화 항체 또는 항체 단편은 LDLR에 대한 PCSK9의 LDLR 저하 효과를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본 발명에 따른 LDLR 비-경쟁적 중화 항체 또는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본 발명에 따른 LDLR 경쟁적 중화 항체 또는 항체 단편이다.
일부 측면에서, 본 발명은 결정화된 PCSK9 단백질 및 PCSK9에 결합하는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 본 조성물은 결정화된 PCSK9 단백질을 포함하고, 이로써 PCSK9 단백질의 3차원 구조는 약 2.2 옹스트롱 초과의 분해능으로 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 그의 단편이다.
일부 측면에서, 본 발명은 혈청 콜레스테롤을 저하시키는 약제의 제조에서의, 본원에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 용도를 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태를 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의, 본원에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 용도를 포함한다.
본 발명의 항체 및 그의 단편은 화학 링커와 같은 효과기 모이어티, 형광 염료, 효소, 기질, 생물발광 물질, 방사선활성 물질과 같은 검출가능한 모이어티, 및 화학발광 모이어티, 또는 예를 들면 스트렙타비딘, 아비딘, 바이오틴, 세포독소, 세포독성 약물, 및 방사선활성 물질과 같은 기능성 모이어티를 부가하기 위해 번역후 수식될 수 있다.
항체 또는 그의 단편은 또한 폴리펩타이드의 증가된 용해도, 안정성 및 순환 시간(생체내 반감기), 또는 감소된 면역원성(미국 특허 제4,179,337호 참조)과 같은 추가의 이점을 제공하기 위해 화학적으로 변형될 수 있다. 유도체화를 위한 화학적 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 코폴리머, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올 등과 같은 수용성 폴리머로부터 선택될 수 있다. 항체 및 그의 단편은 분자 내의 무작위 위치에서, 또는 분자 내의 미리결정된 위치에서 변형될 수 있고, 1, 2, 3 이상의 부착된 화학적 모이어티를 포함할 수 있다.
상기 폴리머는 임의의 분자량일 수 있으며, 분지되거나 비분지될 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜의 경우, 바람직한 분자량은 취급 및 제조의 편의를 위해 약 1 kDa 내지 약 100 kDa이다(용어 "약"은 폴리에틸렌 글리콜의 제제에서, 일부 분자가 언급된 분자량보다 더 무겁거나 일부는 더 가볍다는 것을 가리킴). 원하는 치료적 프로파일(예를 들면, 원하는 지속 방출의 지속시간, 만약 있다면 생물학적 활성에 대한 효과, 취급 편의성, 항원성의 정도 또는 결여 및 치료적 단백질 또는 유사체에 대한 폴리에틸렌 글리콜의 다른 공지된 효과)에 따라, 다른 크기들이 사용될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 약 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10,000, 10,500, 11,000, 11,500, 12,000, 12,500, 13,000, 13,500, 14,000, 14,500, 15,000, 15,500, 16,000, 16,500, 17,000, 17,500, 18,000, 18,500, 19,000, 19,500, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 50,000, 55,000, 60,000, 65,000, 70,000, 75,000, 80,000, 85,000, 90,000, 95,000, 또는 100,000 kDa의 평균 분자량을 가질 수 있다. 분지된 폴리에틸렌 글리콜은 각각 개시내용이 본원에 참조로 통합되어 있는, 예를 들면, 미국 특허 제5,643,575호; Morpurgo 등, Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996); Vorobjev 등, Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999); 및 Caliceti 등, Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999)에 기재되어 있다.
당해분야의 숙련가에게 이용될 수 있는 많은 부착 방법이 있으며, 예를 들면, 본원에 참조로 통합된 EP 0 401 384호를 참조한다(PEG를 G-CSF에 커플링시키는 것), 또한 하기를 참조한다: Malik 등, Exp. Hematol. 20:1028-1035 (1992)(트레실 클로라이드를 이용한 GM-CSF의 페길화를 보고함). 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 유리 아미노 또는 카복실 그룹과 같은 반응성 그룹을 통한 아미노산 잔기를 통해 공유결합될 수 있다. 반응성 그룹은 활성화된 폴리에틸렌 글리콜 분자가 결합될 수 있는 그룹이다. 유리 아미노 그룹을 갖는 아미노산 잔기들은 라이신 잔기 및 N-말단 아미노산 잔기를 포함할 수 있고; 유리 카복실 그룹을 갖는 잔기들은 아스파르트산 잔기, 글루탐산 잔기 및 C-말단 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 설프하이드릴 그룹이 또한 폴리에틸렌 글리콜 분자를 부착하기 위한 반응성 그룹으로서 사용될 수 있다. 아미노 그룹에서의 부착, 예컨대 N-말단 또는 라이신 그룹에서의 부착이 치료적 목적을 위해 바람직하다.
상기에서 제안한 바와 같이, 폴리에틸렌 글리콜은 임의의 수의 아미노산 잔기에의 연결을 통해 단백질에 부착될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 또는 시스테인 잔기에의 공유 결합을 통해 폴리펩타이드에 연결될 수 있다. 하나 이상의 반응 화학이 폴리에틸렌 글리콜을 특정 아미노산 잔기(예를 들면, 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 또는 시스테인)에 또는 하나를 초과하는 아미노산 잔기의 유형(예를 들면, 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인 및 이들의 조합)에 부착시키는데 이용될 수 있다.
대안적으로, 항체 또는 그의 단편은 알부민(비제한적으로 재조합 인간 혈청 알부민 또는 그의 단편 또는 변이체를 포함함(예를 들면, 그 전체가 참조로 본원에 통합된, 1999년 3월 2일에 발행된 미국 특허 제5,876,969호, EP 특허 제0 413 622호, 및 1998년 6월 16일에 발행된 미국 특허 제5,766,883호 참조) 또는 트랜스페린 또는 페리딘과 같은 다른 순환 혈액 단백질과의 융합을 통해 증가된 생체내 반감기를 가질 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 항체(그의 단편 또는 변이체 포함)는 본원에 그 전체가 참조로 통합된 인간 혈청 알부민의 성숙한 형태(즉, EP 특허 제0 322 094호의 도 1 및 2에 나타난 바와 같은 인간 혈청 알부민의 아미노산 1-585)와 융합된다. 본 발명의 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 본 발명에 포함된다.
검출가능한 모이어티와 관련하여, 추가의 예시적인 효소는, 비제한적으로, 홀스래디쉬 페록시다아제, 아세틸콜린에스테라제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다아제 및 루시퍼라아제를 포함한다. 추가의 예시적인 형광 물질은, 비제한적으로, 로다민, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 엄벨리페론, 디클로로트리아지닐아민, 파이코에리트린, 및 단실 클로라이드를 포함한다. 추가의 예시적인 화학발광 모이어티는, 비제한적으로, 루미놀을 포함한다. 추가의 예시적인 생물발광 물질은, 비제한적으로, 루시페린 및 에쿼린을 포함한다. 추가의 예시적인 방사선활성 물질은, 비제한적으로, 요오드 125(125I), 탄소 14(14C), 황 35(35S), 트리튬(3H) 및 인 32(32P)를 포함한다.
기능성 모이어티와 관련하여, 예시적인 세포독성 약물은, 비제한적으로, 메토트렉세이트, 아미노프테린, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 사이타라빈, 5-플루오로우라실 데카바진; 알킬화제, 예컨대 메클로레타민, 티오에파 클로르암부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 미토마이신 C, 로무스틴(CCNU), 1-메틸니트로소우레아, 사이클로토스파마이드, 메클로레타민, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로로디아민 백금(II)(DDP) 시스플라틴 및 카보플라틴(파라플라틴); 다우노루비신(이전에 다우노마이신), 독소루비신(아드리아마이신), 데토루비신, 카르미노마이신, 아이다루비신, 에피루비신, 미톡산트론 및 비스안트렌을 포함하는 안트라사이클린; 닥티노마이신(악티노마이신 D), 블레오마이신, 칼리키아마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)을 포함하는 항생제; 및 빈카 알카로이드, 빈크리스틴 및 빈블라스틴과 같은 항유사분열제를 포함한다. 다른 세포독성 약물은 파클리탁셀(탁솔), 리신, 슈도모나스 외독소, 젬시타빈, 사이코칼라신 B, 그라마이시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 에토포사이드, 테노포사이드, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 프로카바진, 하이드록시우레아, 아스파라기나제, 코르티코스테로이드, 미토탄(O,P'-(DDD)), 인터페론, 및 이들 세포독성 약물의 혼합물을 포함한다.
추가의 세포독성 약물은, 비제한적으로, 화학치료제, 예컨대 카보플라틴, 시스플라틴, 파클리탁셀, 젬시타빈, 칼리키아마이신, 독소루비신, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 사이클로포스파마이드, 빈크리스틴 및 블레오마이신을 포함한다. 식물 및 박테리아 유래의 독성 효소, 예컨대 리신, 디프테리아 독소 및 슈도모나스 독소가 인간화된 또는 키메라 항체, 또는 그의 결합 단편에 접합되어, 세포-타입-특이적-사멸 시약을 생성할 수 있다(Youle, 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980); Gilliland, 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980); Krolick, 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)).
다른 세포독성 약물은 미국 특허 제6,653,104호에서 골든버그에 의해 기재된 바와 같이 세포독성 리보뉴클레아제를 포함한다. 본 발명의 구현예는 또한 복합-형성제를 사용하거나 사용하지 않고, 알파 또는 베타 입자를 방출하는 방사선핵종이 항체, 또는 그의 결합 단편에 안정적으로 결합된 방사선면역접합체에 관한 것이다. 그와 같은 방사선핵종은 베타-이미터, 예컨대 인-32(32P), 스칸듐-47(47Sc), 구리-67(67Cu), 갈륨-67(67Ga), 이트륨-88(88Y), 이트륨-90(90Y), 요오드-125(125I), 요오드-131(131I), 사마륨-153(153Sm), 루테튬-177(177Lu), 레늄-186(186Re) 또는 레늄-188(188Re), 및 알파-이미터, 예컨대 아스타틴-211(211At), 납-212(212Pb), 비스무트-212(212Bi) 또는 -213(213Bi) 또는 악티늄-225(225Ac)를 포함한다.
예를 들면 문헌[Hunter 등, Nature 144:945 (1962); David 등, Biochemistry 13:1014 (1974); Pain 등, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); 및 Nygren, J., Histochem. 및 Cytochem. 30:407 (1982)]에 기재된 방법과 같이, 항체 또는 그의 결합 단편을 검출가능한 모이어티 등에 접합하기 위한 방법은 당해기술분야에 공지되어 있다.
본원에서 기재된 구현예는 추가로 본원에 제시된 항체, 항체 단편, 디아바디, SMIP, 카멜바디, 나노바디, IgNAR, 폴리펩타이드, 가변 영역 및 CDR과 실질적으로 상동인 변이체 및 등가물을 포함한다. 이들은, 예를 들면, 보존적 치환 돌연변이(즉, 유사한 아미노산에 의한 하나 이상의 아미노산의 치환)를 함유할 수 있다. 예를 들면, 보존적 치환은 아미노산을 동일한 일반적인 클래스 내의 또 다른 아미노산으로 치환하는 것, 예를 들면, 하나의 산성 아미노산을 또 다른 산성 아미노산으로, 하나의 염기성 아미노산을 또 다른 염기성 아미노산으로, 또는 하나의 중성 아미노산을 또 다른 중성 아미노산으로 치환하는 것을 지칭한다. 보존적 아미노산 치환이 의도하는 것은 당해분야에 공지되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에 제시된 임의의 하나 이상의 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩타이드 서열에 대해 적어도 90% 또는 그 이상의 서열 상동성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 고려한다. 더 바람직하게는, 본 발명은 본원에 제시된 임의의 하나 이상의 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩타이드 서열에 대해 적어도 95% 또는 그 이상의 서열 상동성, 더욱 더 바람직하게는 적어도 98% 또는 그 이상의 서열 상동성, 및 더욱 더 바람직하게는 적어도 99% 또는 그 이상의 서열 상동성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 고려한다. 핵산 및 아미노산 서열 사이의 상동성을 결정하는 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항-PCSK9 활성을 추가로 갖는 본원에 제시된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 상기 인용된 폴리펩타이드 동족체를 추가로 고려한다. 항-PCSK9 활성의 비제한적인 예는 본원에서 제시되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 임의의 전술한 서열에 결합하는 항-유전자형 항체의 생성 및 용도를 추가로 고려한다. 예시적인 구현예에서, 그러한 항-유전자형 항체는 항-PCSK9 항체의 효과를 조절하거나, 감소시키거나 중화시키는 항-PCSK9 항체를 받았던 대상에게 투여될 수 있다. 그와 같은 항-유전자형 항체는 또한 항-PCSK9 항체의 존재를 특징으로 하는 자가면역 질환의 치료에 유용할 수 있다. 그와 같은 항-유전자형 항체의 추가의 예시적인 용도는 본 발명의 항-PCSK9 항체를 검출하기 위한 것, 예를 들면 대상의 혈액 또는 다른 체액 내에 존재하는 항-PCSK9 항체의 수준을 관찰하기 위한 것이다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 임의의 다른 폴리뉴클레오타이드 서열로 치환된 본원에 기재된 임의의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 항-PCSK9 항체를 고려한다. 예를 들면, 비제한적으로, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열의 조합을 포함하는 항체를 고려하며, 추가로 본원에 기재된 임의의 CDR 서열을 본원에 기재된 임의의 다른 CDR 서열로 치환한 것으로부터 야기되는 항체를 고려한다.
본 발명의 추가의 예시적인
구현예
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 특이적으로 결합하고/거나 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, 또는 Ab24로부터 선택된 항-인간 PCSK9 항체와 온전한 인간 PCSK9 폴리펩타이드 또는 그의 단편 상의 동일하거나 중첩하는 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 결합하는 것을 경쟁하는 하나 이상의 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 그의 단편을 고려한다. 바람직한 구현예에서, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 단편은 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 특이적으로 결합하고/거나 Ab7과 온전한 인간 PCSK9 폴리펩타이드 또는 그의 단편 상의 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 결합하는 것을 경쟁한다.
본 발명의 바람직한 구현예는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖고 PCSK9의 LDLR에의 결합에 의해 매개된 생물학적 활성을 억제하는 키메라 또는 인간화된 항체 및 그의 단편(Fab 단편 포함)에 관한 것이다.
어떤 경우, PCSK9 활성은 수많은 인간 질환 상태와 상관관계가 있다. 예를 들면, 어떤 경우, 너무 많거나 너무 적은 PCSK9 활성은 고콜레스테롤혈증과 같은 어떤 병태와 상관관계가 있다. 따라서, 어떤 예에서, PCSK9 활성을 조절하는 것은 치료적으로 유용할 수 있다. 어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 중화 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 PCSK9 활성(예를 들면, LDLR에의 결합)을 조절하는데 사용된다. 그러한 방법은 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 관련되거나 또는 상승된 콜레스테롤 수준과 관련된 장애를 치료하고/거나 예방하고/거나 장애의 위험성을 감소시킬 수 있다.
본 개시내용에 비추어 당해분야의 숙련가에 의해 인식될 바와 같이, 다양한 콜레스테롤, LDL, 또는 LDLR 수준과 관련되거나, 연관되거나, 이에 의해 영향을 받을 수 있는 장애가 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 다양한 구현예에 의해 다뤄질 수 있다. 일부 구현예에서, "콜레스테롤 관련 장애"("혈청 콜레스테롤 관련 장애"를 포함함)는 고콜레스테롤혈증, 심장병, 대사성 증후군, 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 뇌졸중, 심혈관 질환, 알츠하이머병 및 일반적으로 이상지질혈증 중 어느 하나 이상을 포함하며, 이는, 예를 들면, 상승된 총 혈청 콜레스테롤, 상승된 LDL, 상승된 트리글리세라이드, 상승된 VLDL, 및/또는 낮은 HDL에 의해 명시될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 제제와 병용하여 치료될 수 있는 일차 및 2차 이상지질혈증의 일부 비-제한적인 예는 대사성 증후군, 진성 당뇨병, 가족성 결합성 고지혈증, 가족성 초고트리글리세라이드혈증, 이종접합 고콜레스테롤혈증을 포함하는 가족성 고콜레스테롤혈증, 동종접합 고콜레스테롤혈증, 가족성 불량성 아포지질단백질 B-100; 다유전자성 고콜레스테롤혈증; 잔존조직 제거 질환, 간 리파제 결핍; 임의의 하기 중 어느 것에 부수적인 이상지질혈증을 포함한다: 무분별한 식이, 갑상선기능저하증, 에스트로겐 및 프로게스틴 요법, 베타-차단제, 및 티아자이드 이뇨제를 포함하는 약물; 신장 증후군, 만성 신부전, 쿠싱 증후군, 원발성 담도성 간경변증, 글리코겐 축적 질환, 간종양, 답즙정체증, 말단비대증, 인슐린종, 단리된 성장 호르몬 결핍, 및 알코올-유도된 초고트리글리세라이드혈증. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 또한 죽상경화성 질환, 예컨대, 예를 들면, 관상동맥성 심장병, 관상동맥 질환, 말초 동맥 질환, 뇌졸중(허혈성 및 출혈성), 협심증, 또는 뇌혈관 질환 및 급성 관상동맥 증후군, 심근경색증을 예방하거나 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 비치명적인 심장병, 치명적인 및 비치명적인 뇌졸중, 어떤 유형의 심장 수술, 심부전으로 인한 입원율, 심장병을 갖는 환자에서의 가슴 통증, 및/또는 이전 심장병, 이전 심장 수술, 및/또는 막힌 동맥의 증거를 갖는 가슴 통증과 같은 확립된 심장병으로 인한 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 유용하다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 방법은 반복되는 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 사용될 수 있다.
당해분야의 숙련가에 의해 인정될 바와 같이, 스타틴을 통해 일반적으로 다뤄질 수 있는(치료가능하거나 예방가능한) 질환 또는 장애는 또한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 적용으로부터 이점을 얻을 수 있다. 또한, 일부 구현예에서, 콜레스테롤 합성 또는 증가된 LDLR 발현의 예방으로부터 이점을 얻을 수 있는 장애 또는 질환은 또한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 다양한 구현예에 의해 치료될 수 있다. 또한, 당해분야의 숙련가에 의해 인정될 바와 같이, 항-PCSK9 항체의 사용은 당뇨병의 치료에 특히 유용할 수 있다. 당뇨병은 관상동맥성 심장병에 대한 위험 인자일 뿐만 아니라, 인슐린은 PCSK9의 발현을 증가시킨다. 즉, 당뇨병을 가진 사람은 상승된 혈장 지질 수준을 가지며(이는 높은 PCSK9 수준과 관련될 수 있다), 이는 상기 수준을 낮추는 것으로부터 이점을 얻을 수 있다. 이것은 일반적으로 본원에 참조로 통합되어 있는 Costet 등("Hepatic PCSK9 Expression is Regulated by Nutritional Status via Insulin and Sterol Regulatory Element-binding Protein 1C". J. Biol. Chem., 281: 6211-6218, 2006)에서 더 상세히 논의된다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 그의 혈청 콜레스테롤 수준을 보다 안전한 범위까지 낮추기 위해 진성 당뇨병, 복부 대동맥 동맥류, 죽상동맥경화증 및/또는 말초혈관 질환을 갖는 사람에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 본원에 기재된 임의의 장애로 발전될 위험성이 있는 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 흡연하거나, 고혈압이 있거나 또는 초기 심장병의 가족성 이력이 있는 대상에게 투여된다.
일부 구현예에서, 만약 대상은 2004 NCEP 치료 목표에서 보통의 위험성 또는 더 큰 위험성이 있는 경우, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 투여받는다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 만약 대상의 LDL-C 콜레스테롤 수준이 160 mg/dL보다 더 큰 경우, 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 만약 대상 LDL-C 콜레스테롤 수준이 130보다 큰 경우(그리고 이들이 2004 NCEP 치료 목표에 따라 보통의 또는 중간 정도로 높은 위험성을 갖는 경우) 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은, 대상 LDL-C 콜레스테롤 수준이 100보다 큰 경우(그리고 이들이 2004 NCEP 치료 목표에 따라 높거나 매우 높은 위험성을 갖는 경우) 투여된다.
의사는 특정 환자의 개별적인 프로파일에 따라 적절한 치료 지시 및 표적 지질 수준을 선택할 수 있을 것이다. 고지혈증의 치료를 안내하기 위한 한 가지 널리 허용되는 표준은 인쇄된 공개 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 문헌[Third Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of the High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III) Final Report, National Institutes of Health, NIH Publication No. 02-5215 (2002)]이다.
일부 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 비정상적으로 높은 수준 또는 심지어 정상 수준으로부터 PCSK9 활성의 양을 감소시키는데 사용된다. 일부 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 고콜레스테롤혈증을 치료하거나 예방하는데 및/또는 따라서 약제의 제조에 및/또는 다른 콜레스테롤 관련 장애(예컨대 본원에 언급된 것)의 치료를 위해 사용된다. 어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 활성이 정상인 고콜레스테롤혈증과 같은 병태를 치료하거나 예방하는데 사용된다. 상기 병태에서, 예를 들면, PCSK9 활성의 정상 미만으로의 감소는 치료 효과를 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, PCSK9에 대한 하나를 초과하는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편이 PCSK9 활성을 조절하는데 사용된다.
어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 하나 이상의 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편의 치료적 유효량 및 또 다른 치료제를 투여하는 것을 포함하는 고콜레스테롤혈증과 같은, 콜레스테롤 관련 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 약제학적 또는 진단 조성물은 병용 요법으로, 즉 다른 제제와 조합되어 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 병용 요법은 적어도 하나의 항-콜레스테롤 제제와 병용된, PCSK9에 결합할 수 있는 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 제제는 비제한적으로, 시험관내에서 합성적으로 제조된 화학 조성물, 항체, 항원 결합 영역, 및 이의 조합 및 접합체를 포함한다. 어떤 구현예에서, 제제는 작용제, 길항제, 알로스테릭 조절물질, 또는 독소로서 작용할 수 있다. 어떤 구현예에서, 제제는 그의 표적(예를 들면, 수용체 또는 효소 활성화 또는 억제)를 억제하거나 자극하는 작용을 할 수 있고, 이로써 LDLR의 증가된 발현을 촉진하거나 혈청 콜레스테롤 수준을 감소시킨다.
어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 콜레스테롤-저하제(혈청 및/또는 총 콜레스테롤) 처리 이전에, 이와 동시에, 그리고 이후에 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 고콜레스테롤혈증, 심장병, 당뇨병, 및/또는 임의의 콜레스테롤 관련 장애의 개시를 예방하거나 완화하기 위해 예방적으로 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 기존 콜레스테롤혈증 병태의 치료를 위해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 장애 및/또는 상기 장애와 관련된 증상의 개시를 지연시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 어느 하나의 콜레스테롤 관련 장애 또는 이의 하위단위의 임의의 증상이 결여된 대상에게 제공된다.
어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 PCSK9 고콜레스테롤혈증과 같은 다양한 콜레스테롤 관련 장애를 치료하는 특정 치료제와 함께 사용된다. 어떤 구현예에서, 치료의 조건 및 원하는 수준에 비추어, 2, 3, 또는 그 이상의 제제들이 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 제제들은 동일한 제형 내에 포함됨으로써 함께 제공될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 제제(들)은 별도로 제형화되어 치료 키트 내에 포함됨으로써 함께 제공될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 제제 및 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 별도로 제형화되어 치료 키트 내에 포함됨으로써 함께 제공될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 제제는 별도로 제공될 수 있다. 어떤 구현예에서, 유전자 요법에 의해 투여될 때, 단백질 제제 및/또는 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 유전자들은 동일한 벡터 내에 포함될 수 있다. 어떤 구현예에서, 단백질 제제 및/또는 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 유전자들은 동일한 프로모터 영역의 제어 하에 있을 수 있다. 어떤 구현예에서, 단백질 제제 및/또는 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 유전자들은 별개의 벡터 내에 있을 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 또는 보존제와 함께 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 또는 진단 조성물을 제공한다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제와 함께, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 치료적 유효량의 적어도 하나의 추가의 치료제를 포함하는 약제학적 또는 진단 조성물을 제공한다.
어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 염증용 치료제와 함께 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 적어도 하나의 면역장애용 치료제와 함께 사용될 수 있다. 염증 및 면역 장애를 위한 예시적인 치료제는, 비제한적으로, 사이클로옥시게나제 제1형(COX-1) 및 사이클로옥시게나제 제2형(COX-2) 억제제, 38 kDa 미토겐-활성화된 단백질 키나아제(p38-MAPK)의 소분자 조절물질; 염증 경로와 연관된 세포내 분자의 소분자 조절물질을 포함하고, 여기서 상기 세포내 분자는, 비제한적으로, jnk, IKK, NF-κB, ZAP70, 및 lck를 포함한다. 염증을 위한 어떤 예시적인 치료제는, 예를 들면, 문헌[C. A. Dinarello & L. L. Moldawer Proinflammatory and Anti - Inflammatory Cytokines in Rheumatoid Arthritis: A Primer for Clinicians Third Edition (2001) Amgen Inc. Thousand Oaks, Calif.]에 기재되어 있다.
어떤 구현예에서, 약제학적 또는 진단 조성물은 PCSK9에 대한 하나를 초과하는 상이한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함할 것이다. 어떤 구현예에서, 약제학적 또는 진단 조성물은 PCSK9에 대한 하나를 초과하는 상이한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편을 포함할 것이고, 여기서 PCSK9에 대한 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 하나를 초과하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 다양한 항체 또는 항체 단편은 PCSK9에 결합하는데 서로 경쟁하지 않을 것이다.
어떤 구현예에서, 허용가능한 제형 물질은 바람직하게는 이용된 복용량 및 농도에서 수령체에 비독성이다. 일부 구현예에서, 상기 제형 물질(들)은 s.c. 및/또는 I.V. 투여용이다. 어떤 구현예에서, 약제학적 또는 진단 조성물은, 예를 들면, pH, 몰삼투압, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 취도, 멸균, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 조성물의 흡착 또는 침투를 변형시키거나, 유지하거나 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 어떤 구현예에서, 적당한 제형 물질은, 비제한적으로, 아미노산(예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신); 항미생물제; 항산화제(예컨대 아스코르브산, 나트륨 설파이트 또는 나트륨 수소-설파이트); 완충제(예컨대 보레이트, 바이카보네이트, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산); 팽화제(예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제(예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 다른 탄수화물(예컨대 글루코오스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 풍미제 및 희석제; 유화제; 친수성 폴리머(예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염 형성 반대이온(예컨대 나트륨); 보존제(예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로산, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 수소 퍼옥사이드); 용매(예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 pluronics, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제(예컨대 수크로오스 또는 소르비톨); 긴장성 향상제(예컨대 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 나트륨 또는 칼륨 클로라이드, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함한다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1995). 일부 구현예에서, 상기 제형은 PBS; 20 mM NaOAC, pH 5.2, 50 mM NaCl; 및/또는 10 mM NAOAC, pH 5.2, 9% 수크로오스를 포함한다.
본 발명은 또한 비제한적으로 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, 또는 Ab24로부터 선택되는 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편과 같이 동일한 PCSK9 에피토프와 결합하고/거나 PCSK9에 결합하는데 항-PCSK9 항체와 경쟁하는 항-PCSK9 항체에 관한 것이다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 또한 서열번호: 2, 서열번호: 42, 서열번호: 82, 서열번호: 122, 서열번호: 162, 서열번호: 202, 서열번호: 242, 서열번호: 282, 서열번호: 322, 서열번호: 362, 서열번호: 402, 서열번호: 442, 서열번호: 482, 서열번호: 522, 서열번호: 562, 서열번호: 602, 서열번호: 642, 서열번호: 682, 서열번호: 722, 서열번호: 762, 서열번호: 802, 서열번호: 842, 서열번호: 882, 서열번호: 922, 또는 그의 변이체로부터 선택된 VH 폴리펩타이드 서열 내에 함유된 CDR 중 하나 이상, 및/또는 서열번호: 22, 서열번호: 62, 서열번호: 102, 서열번호: 142, 서열번호: 182, 서열번호: 222, 서열번호: 262, 서열번호: 302, 서열번호: 342, 서열번호: 382, 서열번호: 422, 서열번호: 462, 서열번호: 502, 서열번호: 542, 서열번호: 582, 서열번호: 622, 서열번호: 662, 서열번호: 702, 서열번호: 742, 서열번호: 782, 서열번호: 822, 서열번호: 862, 서열번호: 902, 서열번호: 942, 또는 그의 변이체로부터 선택된 VL 폴리펩타이드 서열 내에 함유된 CDR 중 하나 이상을 포함하는 단리된 항-PCSK9 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-인간 PCSK9 항체는 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, 또는 Ab24로부터 선택된 항-인간 PCSK9 항체 내에 함유된 것과 동일한 각각의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 영역 내에 적어도 2개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 항-인간 PCSK9 항체는 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, 또는 Ab24로부터 선택된 항-인간 PCSK9 항체 내에 함유된 CDR과 동일한 각각의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 영역 내에 적어도 2개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또 하나의 구현에에서, 항-인간 PCSK9 항체의 모든 CDR은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, 또는 Ab24로부터 선택된 항-인간 PCSK9 항체에서 함유된 CDR과 동일하다.
본 발명은 추가로 상기 논의된 하나 이상의 항-인간 PCSK9 항체가 비당화되거나, 예를 들면 Fc 영역 체계화의 결과로서 N 및/또는 O-당화가 결여되거나 실질적으로 결여되어 있다는 것을 고려한다. 또한, 당해 항체는 효과기 기능, 반감기, 단백질분해 또는 항체의 다른 특성을 바꾸기 위해 변형된 Fc 영역을 함유할 수 있으며, 특히 본 발명에 따른 인간, 인간화된 또는 키메라 항체는 그러한 변형된 Fc 영역을 함유할 수 있다.
본 발명은 추가로 상기 항체 각각의 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역 내의 프레임워크 영역(FR)이 변형된 인간 FR이거나, 가변 경쇄 또는 중쇄 영역 내의 하나 이상의 인간 FR 잔기들이 모 토끼 항체의 상응하는 FR 잔기들에 의해 치환되어 변형된 인간 FR인 하나 이상의 항-인간 PCSK9 항체를 고려하며, 여기서 상기 인간 FR은 라이브러리 내에 함유된 다른 인간 생식계열 항체 서열 대비 상응하는 토끼 가변 중쇄 또는 경쇄 영역에 대한 이들의 높은 수준의 상동성에 기반하여 인간 생식계열 항체 서열의 라이브러리로부터 선택된 인간 가변 중쇄 및 경쇄 항체 서열로부터 유도되었다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-인간 PCSK9 항체 또는 단편은 인간 세포를 발현하는 PCSK9에 결합하고/거나 PCSK9를 발현하는 세포와 연관된 질환을 갖는 환자에서 인간 세포 상에 또는 이에 의해 발현된 PCSK9를 포함하는, 생체내에서 순환하는 가용성 PCSK9 분자에 특이적으로 결합한다.
본 발명은 추가로 검출가능한 라벨 또는 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된 항-인간 PCSK9 항체 또는 단편을 고려한다
본 발명은 또한 효모 또는 인간 바람직한 코돈을 포함하거나 대안적으로 이들로 구성된 것을 포함하는, 상기 제시된 바와 같은 항-인간 PCSK9 항체 또는 항체 단편의 발현을 야기하는 하나 이상의 핵산 서열을 고려한다. 본 발명은 또한 예를 들면, 포유동물, 효모, 진균, 박테리아, 식물, 조류, 및 곤충 세포를 포함하는, 상기 제시된 항체 중 적어도 하나를 발현하는 숙주세포 또는 재조합 숙주세포를 고려한다. 바람직한 구현예에서, 상기 숙주세포는 효모 또는 진균 또는 포유동물 세포이다. 추가의 바람직한 구현에에서, 상기 효모 세포는 2배체 효모 세포이다. 더 바람직한 구현예에서, 상기 효모 세포는 피치아 효모이다.
본 발명의 항-PCSK9 항체, 및 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 그의 단편의 항-PCSK9 활성은 또한 결합의 그의 강도 또는 PCSK9에 대한 그의 친화성에 의해 기술될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체, 및 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 그의 단편은 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 또는 10-13 M 이하의 해리 상수(Kd)로 PCSK9에 결합한다. 바람직하게는, 항-PCSK9 항체 및 그의 단편은 10-11 M, 5x10-12 M, 또는 10-12 M 이하의 해리 상수로 PCSK9에 결합한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체, 및 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 그의 단편은 선형 또는 형태적 PCSK9 에피토프에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체, 및 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 그의 단편의 항-PCSK9 활성은 10-4 S-1, 5x10-5 S-1, 10-5 S-1, 5x10-6 S-1, 10-6 S-1, 5x10-7 S-1, 또는 10-7 S-1 이하의 해리속도상수로 PCSK9에 결합한다.
본 발명의 추가 구현예에서, 본 발명의 항-PCSK9 항체, 및 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 그의 단편의 항-PCSK9 활성은 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 증상을 예방하거나, 개선하거나 감소시키거나, 대안적으로 치료함으로써 항-PCSK9 활성을 나타낸다. PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 비제한적인 예는 본원에서 제시되어 있다.
항-
PCSK9
항체
폴리펩타이드를
인코딩하는
폴리뉴클레오타이드
항체
Ab1
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(서열번호: 11).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 2의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggattctccctcagtagctactggatgacttgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatacatcggaatcattagtagtagtggtagcacatactacgcgacctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgtcgaccacggtggatctggaaatcaccagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctgtgccagagactctgcttttagttctggtttggaattcaacatctggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 12).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 10의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 20).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 21의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctatgatctgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagtgtttatagtaactggttatcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgatgcatccgatctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtcagcaggggcagagtagtagtgatattgataatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 31).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 22의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctatgatctgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagtgtttatagtaactggttatcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgatgcatccgatctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtcagcaggggcagagtagtagtgatattgataatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 32).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 30의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 40).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역) 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 14; 서열번호: 16; 및 서열번호: 18의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 21 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 34; 서열번호: 36; 및 서열번호: 38의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 13; 서열번호: 15; 서열번호: 17; 및 서열번호: 19의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 33; 서열번호: 35; 서열번호: 37; 및 서열번호: 39의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 11; 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 12; 서열번호: 21의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 31; 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 32; 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 14; 서열번호: 16; 및 서열번호: 18)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 34; 서열번호: 36; 및 서열번호: 38)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 1의 중쇄 서열 또는 서열번호: 2의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 13; 서열번호: 15; 서열번호: 17; 및 서열번호: 19)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 21의 경쇄 서열 또는 서열번호: 22의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 33; 서열번호: 35; 서열번호: 37; 및 서열번호: 39)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab1에 대해, 전체 길이 Ab1 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 1의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 11 및 서열번호: 21의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 31.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab1의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab1 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab1 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab2
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 41의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 51).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 42의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggattctccctcagtagctatgcaatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatggatcggaatcattgatgctattgataacacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatgaccagtctgacaaccggggacacggccacctatttctgtgccagagcctctattcttggttatagtattgctacgggctttaacatctggggcccagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 52).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 50의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 60).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 61의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctatgatatgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtagccacttagcctggtatcagcagaaatcagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggaatctggggtctcatcaaggttcaaaggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaacagggttatggtgttagtgatgttgataatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 71).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 62의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctatgatatgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtagccacttagcctggtatcagcagaaatcagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggaatctggggtctcatcaaggttcaaaggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaacagggttatggtgttagtgatgttgataatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 72).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 70의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 80).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 54; 서열번호: 56; 및 서열번호: 58의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 74; 서열번호: 76; 및 서열번호: 78의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 53; 서열번호: 55; 서열번호: 57; 및 서열번호: 59의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 73; 서열번호: 75; 서열번호: 77; 및 서열번호: 79의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 51; 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 52; 서열번호: 61의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 71; 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 72; 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 54; 서열번호: 56; 및 서열번호: 58)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 61의 경쇄 서열 또는 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 74; 서열번호: 76; 및 서열번호: 78)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 41의 중쇄 서열 또는 서열번호: 42의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 53; 서열번호: 55; 서열번호: 57; 및 서열번호: 59)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 61의 경쇄 서열 및 서열번호: 62의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 73; 서열번호: 75; 서열번호: 77; 및 서열번호: 79)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab2에 대해, 전체 길이 Ab2 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 41의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 51 및 서열번호: 61의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 71.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab2의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab2 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab2 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab3
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 81의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
accacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 91).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 82의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctggaggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctccctcagtagctactacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatggatcggaatcatttatcctagtggtagcacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacagtcgaggacacggccacctatttctgtgccagaggaggtgcttatgctactcttaacttgtggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 92).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 90의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 100).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 101의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagacaccatcacccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcagttgccagtccagtcagagtgtttatcataacaacctcttatcctggtatcagcagaaaccaggtcagcctcccaagctcttgatctacgatgcatccaaactgacatctggggtctcatcgcggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccataagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtctaggcggttatgatgatgatgctgataatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 111).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 102의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열의 을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagacaccatcacccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcagttgccagtccagtcagagtgtttatcataacaacctcttatcctggtatcagcagaaaccaggtcagcctcccaagctcttgatctacgatgcatccaaactgacatctggggtctcatcgcggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccataagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtctaggcggttatgatgatgatgctgataatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 112).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 110의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 120).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 94; 서열번호: 96; 및 서열번호: 98의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 114; 서열번호: 116; 및 서열번호: 118의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 93; 서열번호: 95; 서열번호: 97; 및 서열번호: 99의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 113; 서열번호: 115; 서열번호: 117; 및 서열번호: 119의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 91; 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 92; 서열번호: 101의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 111; 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 112; 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 94; 서열번호: 96; 및 서열번호: 98)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 114; 서열번호: 116; 및 서열번호: 118)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 81의 중쇄 서열 또는 서열번호: 82의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 93; 서열번호: 95; 서열번호: 97; 및 서열번호: 99)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 101의 경쇄 서열 또는 서열번호: 102의 가변 경쇄 서열의프레임워크 영역 (서열번호: 113; 서열번호: 115; 서열번호: 117; 및 서열번호: 119)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab3에 대해, 전체 길이 Ab3 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 81의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 91 및 서열번호: 101의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 111.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab3의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab3 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab3 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab4
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 121의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 131).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 122의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열의 을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggaatcgacctcagtagctatgcaatgatctgggtccgtcaggctccagaaaaggggctggaatacatcggatatattggtggtattgatagcacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatgaccagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctgtggcagatggtccggtactagtggttataataccatctggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 132).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 130의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 140).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 141의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcatttatagcaatttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccaatctggcatctggggtctcatcgcggttcaaaggcagtcgatctgggacagagtacactctcaccatcagtgacctggagtgtgccgatgctgccacctactactgtcagtgcactggtggtggtgatagcggtaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 151).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 142의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열의 을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcatttatagcaatttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccaatctggcatctggggtctcatcgcggttcaaaggcagtcgatctgggacagagtacactctcaccatcagtgacctggagtgtgccgatgctgccacctactactgtcagtgcactggtggtggtgatagcggtaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 152).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 150의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 160).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 134; 서열번호: 136; 및 서열번호: 138의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 154; 서열번호: 156; 및 서열번호: 158의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 133; 서열번호: 135; 서열번호: 137; 및 서열번호: 139의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 153; 서열번호: 155; 서열번호: 157; 및 서열번호: 159의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 131; 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 132; 서열번호: 141의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 151; 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 152; 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 134; 서열번호: 136; 및 서열번호: 138)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 154; 서열번호: 156; 및 서열번호: 158)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 121의 중쇄 서열 또는 서열번호: 122의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 133; 서열번호: 135; 서열번호: 137; 및 서열번호: 139)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 141의 경쇄 서열 또는 서열번호: 142의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 153; 서열번호: 155; 서열번호: 157; 및 서열번호: 159)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab4에 대해, 전체 길이 Ab4 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 121의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 131 및 서열번호: 141의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 151.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab4의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab4 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab4 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab5
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 161의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
ccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 171).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 162의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열의 을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggattctccctcagtagctatgcaatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatggatcggaatcattagtaatagtggtaccacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctgtgccagaggaatatattggtactggagagtttttaacttgtggggcccggggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 172).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 170의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 180).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 181의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagacaccatcgcctgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtcagagtgtttataacaacctcttatcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgatgcatccaatctggcatctggggtcccagataggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtctaggcggttatgatgatgatgctgataatgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 191).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 182의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagacaccatcgcctgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtcagagtgtttataacaacctcttatcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgatgcatccaatctggcatctggggtcccagataggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcggcgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtctaggcggttatgatgatgatgctgataatgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 192).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 190의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 200).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 174; 서열번호: 176; 및 서열번호: 178의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 194; 서열번호: 196; 및 서열번호: 198의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 인코딩하는 서열번호: 173; 서열번호: 175; 서열번호: 177; 및 서열번호: 179의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 193; 서열번호: 195; 서열번호: 197; 및 서열번호: 199의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 171; 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 172; 서열번호: 181의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 191; 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 192; 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 174; 서열번호: 176; 및 서열번호: 178)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 194; 서열번호: 196; 및 서열번호: 198)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 161의 중쇄 서열 또는 서열번호: 162의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 173; 서열번호: 175; 서열번호: 177; 서열번호: 179)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 181의 경쇄 서열 또는 서열번호: 182의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 193; 서열번호: 195; 서열번호: 197; 및 서열번호: 199)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab5에 대해, 전체 길이 Ab5 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 161의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 171 및 서열번호: 181의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 191.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab5의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab5 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab5 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab6
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 201의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 211).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 202의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggaggagtccgggggagacctggtcaagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctccttcagtagcaactactggatatgctgggtccgccaggctccagggaagggactggagtggatcggatgcattcgtgatggtggtggcacttactacgcgagctgggcgaaaggccgactcaccatctccatgacctcgtcgaccacggtgactctgcaactgaacagtctgacagccgcggacacggccacctatttttgtgcgagcgatattaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggcccaggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 212).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 210의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 220).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 221의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcgtacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatacactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 231).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 222의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctctgtggaggtagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcgtacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatacactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 232).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 230의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 240).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 214; 서열번호: 216; 및 서열번호: 218의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 234; 서열번호: 236; 및 서열번호: 238의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 213; 서열번호: 215; 서열번호: 217; 및 서열번호: 219의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 233; 서열번호: 235; 서열번호: 237; 및 서열번호: 239의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 211; 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 212; 서열번호: 221의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 231; 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 232; 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 214; 서열번호: 216; 및 서열번호: 218)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 234; 서열번호: 236; 및 서열번호: 238)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 201의 중쇄 서열 또는 서열번호: 202의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 213; 서열번호: 215; 서열번호: 217; 및 서열번호: 219)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 221의 경쇄 서열 또는 서열번호: 222의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 233; 서열번호: 235; 서열번호: 237; 및 서열번호: 239)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab6에 대해, 전체 길이 Ab6 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 201의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 211 및 서열번호: 221의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 231.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab6의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab6 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab6 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab7
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 241의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 251).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 242의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccgtcagtagcaactactggatatgctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtggatcggatgcattcgtgatggtggtggcacttactacgctagctctgctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtattactgtgctagcgatatcaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 252).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 250의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 260).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 261의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcttacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctatagggcatacactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 271).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 262의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcttacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctatagggcatacactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 272).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 270의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 280).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 254; 서열번호: 256; 및 서열번호: 258의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 274; 서열번호: 276; 및 서열번호: 278의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 253; 서열번호: 255; 서열번호: 257; 및 서열번호: 259의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 273; 서열번호: 275; 서열번호: 277; 및 서열번호: 279의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 251; 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 252; 서열번호: 261의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 271; 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 272; 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 254; 서열번호: 256; 및 서열번호: 258)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 274; 서열번호: 276; 및 서열번호: 278)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 241의 중쇄 서열 또는 서열번호: 242의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 253; 서열번호: 255; 서열번호: 257; 및 서열번호: 259)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 261의 경쇄 서열 또는 서열번호: 262의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 273; 서열번호: 275; 서열번호: 277; 및 서열번호: 279)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab7에 대해, 전체 길이 Ab7 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 241의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 251 및 서열번호: 261의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 271.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab7의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab7 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab7 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab8
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 281의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 291).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 282의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggtggagtccgggggaggcctggtccagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcttctggattctccttcactagcgactattacatgtgctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcggatgcatttctactggtgatggcagcacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaccctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccaggctgacagccgcggacacggccacctatttctgtgcgagagatcgatactatagttatgcttatggtgcttatgtttatgctagcgacttgtggggcccaggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 292).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 290의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 300).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 301의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtgaaagcattaggaactacttatcctggtatcaacagaaaccagggcagcgtcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagcaattatggtattagtagtcgtagttatgttaatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 311).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 302의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtgaaagcattaggaactacttatcctggtatcaacagaaaccagggcagcgtcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagcaattatggtattagtagtcgtagttatgttaatggtttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 312).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 310의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 320).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 294; 서열번호: 296; 및 서열번호: 298의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 314; 서열번호: 316; 및 서열번호: 318의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 293; 서열번호: 295; 서열번호: 297; 및 서열번호: 299의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 313; 서열번호: 315; 서열번호: 317; 및 서열번호: 319의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 291; 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 292; 서열번호: 301의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 311; 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 312; 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 294; 서열번호: 296; 및 서열번호: 298)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 314; 서열번호: 316; 및 서열번호: 318)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 281의 중쇄 서열 또는 서열번호: 282의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 293; 서열번호: 295; 서열번호: 297; 및 서열번호: 299)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 301의 경쇄 서열 또는 서열번호: 302의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 313; 서열번호: 315; 서열번호: 317; 및 서열번호: 319)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab8에 대해, 전체 길이 Ab8 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 281의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 291 및 서열번호: 301의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 311.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab8의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab8 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab8 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab9
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 321의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 331).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 322의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtaacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggaatcgacctcagtagctatgcaatgggctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatacatcggaatcattgttagttatgggcccacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacggccgaggacacggccacctatttctgtgccagagatctggatgctaatagtagtggttattatggatgctttaacatctggggccaggggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 332).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 330의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 340).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 341의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtcgtgctgacccagactccagcctccgtgtctgcagctgtgggtggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggggtctcatcgcggttcaagagcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttattactgtcaaagctattatggtagtagcaatattgctttcggcggagggaccgagctggagatcctacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 351).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 342의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtcgtgctgacccagactccagcctccgtgtctgcagctgtgggtggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggggtctcatcgcggttcaagagcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttattactgtcaaagctattatggtagtagcaatattgctttcggcggagggaccgagctggagatccta (서열번호: 352).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 350의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 360).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 334; 서열번호: 336; 및 서열번호: 338의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 354; 서열번호: 356; 및 서열번호: 358의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 333; 서열번호: 335; 서열번호: 337; 및 서열번호: 339의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 353; 서열번호: 355; 서열번호: 357; 및 서열번호: 359의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 331; 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 332; 서열번호: 341의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 351; 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 352; 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 334; 서열번호: 336; 및 서열번호: 338)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 354; 서열번호: 356; 및 서열번호: 358)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 321의 중쇄 서열 또는 서열번호: 322의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 333; 서열번호: 335; 서열번호: 337; 및 서열번호: 339)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 341의 경쇄 서열 또는 서열번호: 342의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 353; 서열번호: 355; 서열번호: 357; 및 서열번호: 359)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab9에 대해, 전체 길이 Ab9 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 321의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 331 및 서열번호: 341의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 351.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab9의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab9 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab9 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab10
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 361의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 371).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 362의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggaggagtccgggggagacctggtcaagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctccttcagtagcagttactggatatgctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcgcatgcattcgtgctggtggtgggaattactacgcgaactgggcgaaaggccgattcaccatctccagaacctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacctatttttgtgcgagcgatattaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggcccgggcaccctggtcaccgtctcgagc (서열번호: 372).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 370의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 380).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 381의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacaggacatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatccgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 391).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 382의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacaggacatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatccgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 392).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 390의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 400).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 374; 서열번호: 376; 및 서열번호: 378의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 394; 서열번호: 396; 및 서열번호: 398의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 373; 서열번호: 375; 서열번호: 377; 및 서열번호: 379의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 393; 서열번호: 395; 서열번호: 397; 및 서열번호: 399의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 371; 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 372; 서열번호: 381의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 391; 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 392; 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 374; 서열번호: 376; 및 서열번호: 378)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 394; 서열번호: 396; 및 서열번호: 398)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 361의 중쇄 서열 또는 서열번호: 362의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 373; 서열번호: 375; 서열번호: 377; 및 서열번호: 379)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 381의 경쇄 서열 또는 서열번호: 382의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 393; 서열번호: 395; 서열번호: 397; 및 서열번호: 399)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab10에 대해, 전체 길이 Ab10 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 361의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 371 및 서열번호: 381의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 391.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab10의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab10 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab10 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab11
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 401의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 411).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 402의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccgtcagtagcagttactggatatgctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtggatcgcatgcattcgtgctggtggtgggaattactacgctaactctgctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtattactgtgctagcgatatcaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 412).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 410의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 420).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 421의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctataggacatccactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 431).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 422의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctataggacatccactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 432).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 430의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 440).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 414; 서열번호: 416; 및 서열번호: 418의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 434; 서열번호: 436; 및 서열번호: 438의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 413; 서열번호: 415; 서열번호: 417; 및 서열번호: 419의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 433; 서열번호: 435; 서열번호: 437; 및 서열번호: 439의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 411; 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 412; 서열번호: 421의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 431; 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 432; 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 414; 서열번호: 416; 및 서열번호: 418)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 434; 서열번호: 436; 및 서열번호: 438)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 401의 중쇄 서열 또는 서열번호: 402의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 413; 서열번호: 415; 서열번호: 417; 및 서열번호: 419)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 421의 경쇄 서열 또는 서열번호: 422의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 433; 서열번호: 435; 서열번호: 437; 및 서열번호: 439)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab11에 대해, 전체 길이 Ab11 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 401의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 411 및 서열번호: 421의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 431.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab11의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab11 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab11 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab12
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 441의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 451).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 442의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccgtcagtagcagttactggatatgctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtggatcgcatgcattcgtgctggtggtgggaattactacgctaactctgctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtattactgtgctagcgatatcaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 452).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 450의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 460).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 461의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctataggacatccactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 471).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 462의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtaattacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctataggacatccactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactgttgcttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 472).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 470의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 480).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 454; 서열번호: 456; 및 서열번호: 458의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 474; 서열번호: 476; 및 서열번호: 478의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 453; 서열번호: 455; 서열번호: 457; 및 서열번호: 459의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 473; 서열번호: 475; 서열번호: 477; 및 서열번호: 479의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 451; 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 452; 서열번호: 461의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 471; 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 472; 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 454; 서열번호: 456; 및 서열번호: 458)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 474; 서열번호: 476; 및 서열번호: 478)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; (서열번호: 453; 서열번호: 455; 서열번호: 457; 및 서열번호: 459)의 서열번호: 441의 중쇄 서열 또는 서열번호: 442의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 461의 경쇄 서열 또는 서열번호: 462의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 473; 서열번호: 475; 서열번호: 477; 및 서열번호: 479)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab12에 대해, 전체 길이 Ab12 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 441의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 451 및 서열번호: 461의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 471.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab12의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab12 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab12 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab13
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 481의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 491).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 482의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggaatcgacctcagtacctatggagtgggctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatacatcggaatcattagtagtagtggtagcacatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgtcgaccacggtggatctgaaaatgaccagtctgacaaccgaggacacggccacctatttctgtgccagagattggtctagtactactggttattatgggtattttaatatgtggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 492).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 490의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 500).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 501의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcattcgaattgacccagactccatcccccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccaatctggaatctggggtcccatcgcggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccatttactactgtcaaagctcttatggtagtagtactttggctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 511).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 502의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcattcgaattgacccagactccatcccccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccaatctggaatctggggtcccatcgcggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccatttactactgtcaaagctcttatggtagtagtactttggctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 512).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 510의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 520).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 494; 서열번호: 496; 및 서열번호: 498의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 514; 서열번호: 516; 및 서열번호: 518의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 493; 서열번호: 495; 서열번호: 497; 및 서열번호: 499의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 513; 서열번호: 515; 서열번호: 517; 및 서열번호: 519의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 491; 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 492; 서열번호: 501의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 511; 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 512; 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 494; 서열번호: 496; 및 서열번호: 498)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 514; 서열번호: 516; 및 서열번호: 518)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 481의 중쇄 서열 또는 서열번호: 482의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 493; 서열번호: 495; 서열번호: 497; 및 서열번호: 499)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 501의 경쇄 서열 또는 서열번호: 502의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 513; 서열번호: 515; 서열번호: 517; 및 서열번호: 519)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab13에 대해, 전체 길이 Ab13 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 481의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 491 및 서열번호: 501의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 511.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab13의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab13 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab13 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab14
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 521의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 531).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 522의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggaggagtccgggggagacctggtcaagcctgagggatccctgacactcacctgcacaggttctggattctccttcagtagcatcgcctacatgtgctggatccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcggatgcattggttctggtagtgggaacacttactacgcgaactgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaagctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacttatttctgtgcgagcgatactaataatgggtggcttggccaattcaacttgtggggccagggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 532).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 530의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 540).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 541의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctcggtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtcagagcattagtagctacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaggctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 551).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 542의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctcggtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccaggccagtcagagcattagtagctacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaggctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 552).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 550의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 560).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 534; 서열번호: 536; 및 서열번호: 538의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 554; 서열번호: 556; 및 서열번호: 558의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 533; 서열번호: 535; 서열번호: 537; 및 서열번호: 539의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 553; 서열번호: 555; 서열번호: 557; 및 서열번호: 559의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 531; 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 532; 서열번호: 541의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 551; 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 552; 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 534; 서열번호: 536; 및 서열번호: 538)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 554; 서열번호: 556; 및 서열번호: 558)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 521의 중쇄 서열 또는 서열번호: 522의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 533; 서열번호: 535; 서열번호: 537; 및 서열번호: 539)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 541의 경쇄 서열 또는 서열번호: 542의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 553; 서열번호: 555; 서열번호: 557; 및 서열번호: 559)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab14에 대해, 전체 길이 Ab14 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 521의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 531 및 서열번호: 541의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 551.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab14의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab14 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab14 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab15
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 561의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 571).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 562의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggaggagtccgggggagacctggtcaagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctccttcagtagcagctactggatatgctgggtccgccaggctccagggaagggactggagtggatcgcatgcattgatgctggtaatagtggtagcacttactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaggcctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacctatttttgtgcgagcgatcttaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 572).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 570의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 580).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 581의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacatcgtgatgacccagactccatcccccgtgtctggagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgactacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaaactcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcagaggcagtggatctgggacagagtacactctcaccatcaccgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 591).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 582의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccaacatcgtgatgacccagactccatcccccgtgtctggagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgactacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaaactcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcagaggcagtggatctgggacagagtacactctcaccatcaccgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 592).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 590의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 600).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 574; 서열번호: 576; 및 서열번호: 578의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 594; 서열번호: 596; 및 서열번호: 598의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 573; 서열번호: 575; 서열번호: 577; 및 서열번호: 579의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 593; 서열번호: 595; 서열번호: 597; 및 서열번호: 599의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 571; 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 572; 서열번호: 581의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 591; 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 592; 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 574; 서열번호: 576; 및 서열번호: 578)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 594; 서열번호: 596; 및 서열번호: 598)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 561의 중쇄 서열 또는 서열번호: 562의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 573; 서열번호: 575; 서열번호: 577; 및 서열번호: 579)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 581의 경쇄 서열 또는 서열번호: 582의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 593; 서열번호: 595; 서열번호: 597; 및 서열번호: 599)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab15에 대해, 전체 길이 Ab15 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 561의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 571 및 서열번호: 581의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 591.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab15의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab15 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab15 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab16
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 601의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 611).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 602의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggtggagtccgggggaggcctggtccagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctcctttagtagtgattactggatatgctgggtccgccaggctccagggaagggcctggagtggatcggatgcattcgtgatggtggtgggagttactacgcgaactgggcgaaaggccgactcaccatctccatgacctcgtcgaccacggtgggtctgaaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacgtatttttgtgcgagcgatattaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggcccagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 612).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 610의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 620).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 621의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtagctacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcctctggggtcccatcgcggttcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactgttacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 631).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 622의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtagctacttagcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcctctggggtcccatcgcggttcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactgttacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 632).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 630의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 640).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 614; 서열번호: 616; 및 서열번호: 618의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 634; 서열번호: 636; 및 서열번호: 638의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 613; 서열번호: 615; 서열번호: 617; 및 서열번호: 619의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열의 조합의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 633; 서열번호: 635; 서열번호: 637; 및 서열번호: 639의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 611; 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 612; 서열번호: 621의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 631; 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 632; 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 614; 서열번호: 616; 및 서열번호: 618)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 634; 서열번호: 636; 및 서열번호: 638)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 601의 중쇄 서열 또는 서열번호: 602의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 613; 서열번호: 615; 서열번호: 617; 및 서열번호: 619)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 621의 경쇄 서열 또는 서열번호: 622의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 633; 서열번호: 635; 서열번호: 637; 및 서열번호: 639)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab16에 대해, 전체 길이 Ab16 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 601의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 611 및 서열번호: 621의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 631.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab16의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab16 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab16 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab17
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 641의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 651).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 642의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
caggagcagctggaggagtccgggggagacctggtcaagcctgagggatccctgacactcacctgcacagcctctggattctccttcagtagcagctactggatatgctgggtccgccaggctccagggaagggactggagtggatcggatgcattcgtcctggtagtgcggattactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccagagcctcgtcgtccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacctatttttgtgcgagcgatattaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggcccaggcaccctggtcaccgtctcgagc (서열번호: 652).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 650의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 660).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 661의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgatgttgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtctgagcattgctgactacttagcctggtatctccagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaagggcagtggatctgggacagagtacactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 671).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 662의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgatgttgtgatgacccagactccagcctccgtggaggcagctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtctgagcattgctgactacttagcctggtatctccagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaagggcagtggatctgggacagagtacactctcaccatcagcgacctggagtgtgccgatgctgccacttactactgtcaaagctattattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 672).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 670의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 680).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 654; 서열번호: 656; 및 서열번호: 658의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 674; 서열번호: 676; 및 서열번호: 678의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 653; 서열번호: 655; 서열번호: 657; 및 서열번호: 659의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 673; 서열번호: 675; 서열번호: 677; 및 서열번호: 679의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 651; 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 652; 서열번호: 661의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 671; 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 672; 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 654; 서열번호: 656; 및 서열번호: 658)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 674; 서열번호: 676; 및 서열번호: 678)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 641의 중쇄 서열 또는 서열번호: 642의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 653; 서열번호: 655; 서열번호: 657; 및 서열번호: 659)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 661의 경쇄 서열 또는 서열번호: 662의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 673; 서열번호: 675; 서열번호: 677; 및 서열번호: 679)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab17에 대해, 전체 길이 Ab17 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 641의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 651 및 서열번호: 661의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 671.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab17의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab17 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab17 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab18
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 681의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 691).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 682의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccgtcagtagcaactactggatatgctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtggatcggatgcattcgtgatggtggtggcacttactacgctagctctgctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccctgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtattactgtgctagcgatatcaatgatgggtggcttggccaattcaacttgtggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 692).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 690의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacgcgagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 700).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 701의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcttacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctatagggcatacactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 711).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 702의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gctgacattgtgatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaagtgccaggccagtcagagcattagtgcttacttagcctggtatcagcagaaaccagggaaagtccctaagctcctgatctatagggcatacactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtcaaagctactattccgttactactaatacttatggaaatactttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 712).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 710의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 720).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 694; 서열번호: 696; 및 서열번호: 698의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 714; 서열번호: 716; 및 서열번호: 718의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 693; 서열번호: 695; 서열번호: 697; 및 서열번호: 699의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 713; 서열번호: 715; 서열번호: 717; 및 서열번호: 719의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 691; 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 692; 서열번호: 701의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 711; 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 712; 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 694; 서열번호: 696; 및 서열번호: 698)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 714; 서열번호: 716; 및 서열번호: 718)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 681의 중쇄 서열 또는 서열번호: 682의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 693; 서열번호: 695; 서열번호: 697; 및 서열번호: 699)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 701의 경쇄 서열 또는 서열번호: 702의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 713; 서열번호: 715; 서열번호: 717; 및 서열번호: 719)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab18에 대해, 전체 길이 Ab18 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 681의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 691 및 서열번호: 701의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 711.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab18의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab18 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab18 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab19
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 721의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
ctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 731).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 722의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggaatcgacctcagtagctatgcaatgggctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtacatcggaatcattgttagttatgggcccacatactacgctagctgggctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacaccgtgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgccacctatttctgtgccagagatctggatgctcaaagtagtggttactatggagcttttaacatctggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 732).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 730의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 740).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 741의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgtcaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccaggaaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggagtcccatcaaggttcagcggcagtggatctggaacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttactactgtcaaagctattatggtagtagcaacattgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 751).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 742의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgtcaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccaggaaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggagtcccatcaaggttcagcggcagtggatctggaacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttactactgtcaaagctattatggtagtagcaacattgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 752).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 750의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 760).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 734; 서열번호: 736; 및 서열번호: 738의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 754; 서열번호: 756; 및 서열번호: 758의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 733; 서열번호: 735; 서열번호: 737; 및 서열번호: 739의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 753; 서열번호: 755; 서열번호: 757; 및 서열번호: 759의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 731; 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 732; 서열번호: 741의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 751; 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 752; 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 734; 서열번호: 736; 및 서열번호: 738)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 754; 서열번호: 756; 및 서열번호: 758)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 721의 중쇄 서열 또는 서열번호: 722의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 733; 서열번호: 735; 서열번호: 737; 및 서열번호: 739)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 741의 경쇄 서열 또는 서열번호: 742의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 753; 서열번호: 755; 서열번호: 757; 및 서열번호: 759)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab19에 대해, 전체 길이 Ab19 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 721의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 731 및 서열번호: 741의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 751.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab19의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab19 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab19 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab20
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 761의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
ctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 771).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 762의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagcttgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggaatcgacctcagtagctatgcaatgggctgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtacatcggaatcattgttagttatgggcccacatactacgctagctgggctaaaggccgattcaccatctccagagacaattccaagtccaccgtgtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgccacctatttctgtgccagagatctggatgctcaaagtagtggttactatggagcttttaacatctggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 772).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 770의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 780).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 781의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgtcaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccaggaaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggagtcccatcaaggttcagcggcagtggatctggaacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttactactgtcaaagctattatggtagtagcaacattgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 791).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 782의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgtcaggccagtcagagcattagcactgcattagcctggtatcagcagaaaccaggaaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatcccctctggcatctggagtcccatcaaggttcagcggcagtggatctggaacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttactactgtcaaagctattatggtagtagcaacattgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 792).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 790의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 800).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 774; 서열번호: 776; 및 서열번호: 778의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 794; 서열번호: 796; 및 서열번호: 798의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 773; 서열번호: 775; 서열번호: 777; 및 서열번호: 779의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 793; 서열번호: 795; 서열번호: 797; 및 서열번호: 799의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 771; 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 772; 서열번호: 781의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 791; 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 792; 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 774; 서열번호: 776; 및 서열번호: 778)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 794; 서열번호: 796; 및 서열번호: 798)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 761의 중쇄 서열 또는 서열번호: 762의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 773; 서열번호: 775; 서열번호: 777; 및 서열번호: 779)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 781의 경쇄 서열 또는 서열번호: 782의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 793; 서열번호: 795; 서열번호: 797; 및 서열번호: 799)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab20에 대해, 전체 길이 Ab20 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 761의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 771 및 서열번호: 781의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 791.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab20의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab20 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab20 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab21
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 801의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 811).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 802의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggattctccctcagtagttatgcaatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcggggccattcgtagtagtggtgccacattcttcgcgagctgggtgaatggccgtttcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacacccgaggacacggccacctatttctgtgccagagatactaatgatggttggtatattaatcggttggatctctggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 812).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 810의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 820).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 821의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgccgtgctgacccagactccatctcccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcagcatcagttgccagtccagtaagagtgtttatagtaactacttatcctggtttcagcagaaaccagggcagcctcccaagttcctgatctacaaggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtgcaggcggtgatactaatattagtgataatgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 831).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 822의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgccgtgctgacccagactccatctcccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcagcatcagttgccagtccagtaagagtgtttatagtaactacttatcctggtttcagcagaaaccagggcagcctcccaagttcctgatctacaaggcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacgtgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtgcaggcggtgatactaatattagtgataatgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 832).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 830의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 840).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 814; 서열번호: 816; 및 서열번호: 818의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 834; 서열번호: 836; 및 서열번호: 838의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 813; 서열번호: 815; 서열번호: 817; 및 서열번호: 819의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 833; 서열번호: 835; 서열번호: 837; 및 서열번호: 839의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 811; 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 812; 서열번호: 821의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 831; 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 832; 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 814; 서열번호: 816; 및 서열번호: 818)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 834; 서열번호: 836; 및 서열번호: 838)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 801의 중쇄 서열 또는 서열번호: 802의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 813; 서열번호: 815; 서열번호: 817; 및 서열번호: 819)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 821의 경쇄 서열 또는 서열번호: 822의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 833; 서열번호: 835; 서열번호: 837; 및 서열번호: 839)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab21에 대해, 전체 길이 Ab21 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 801의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 811 및 서열번호: 821의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 831.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab21의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab21 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab21 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab22
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 841의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
agccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 851).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 842의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattctccctcagtagttatgcaatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcggggccattcgtagtagtggtgccacattcttcgcgagctccgtgaatggcagattcaccatctccagagacaattccaagaacacggtgtatcttcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagatactaatgatggttggtatattaatcggttggatctctggggccaagggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 852).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 850의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacgcgagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 860).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 861의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccagtccagtaagagtgtttatagtaactacttatcctggtttcagcagaaaccagggaaagcccctaagttcctgatctataaggcatccactctggcatctggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgcgcaggcggtgatactaatattgctgataatgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 871).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 862의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gccgtgctgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccagtccagtaagagtgtttatagtaactacttatcctggtttcagcagaaaccagggaaagcccctaagttcctgatctataaggcatccactctggcatctggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgcgcaggcggtgatactaatattgctgataatgctttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaa (서열번호: 872).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 870의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 880).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 854; 서열번호: 856; 및 서열번호: 858의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 874; 서열번호: 876; 및 서열번호: 878의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 853; 서열번호: 855; 서열번호: 857; 및 서열번호: 859의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 873; 서열번호: 875; 서열번호: 877; 및 서열번호: 879의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열의 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 851; 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 852; 서열번호: 861의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 871; 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 872; 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 854; 서열번호: 856; 및 서열번호: 858)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 874; 서열번호: 876; 및 서열번호: 878)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 841의 중쇄 서열 또는 서열번호: 842의 가변 중쇄 서열 중 프레임워크 영역 (서열번호: 853; 서열번호: 855; 서열번호: 857; 및 서열번호: 859)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 861의 경쇄 서열 또는 서열번호: 862의 가변 경쇄 서열 중 프레임워크 영역 (서열번호: 873; 서열번호: 875; 서열번호: 877; 및 서열번호: 879)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab22에 대해, 전체 길이 Ab22 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 841의 중쇄 서열의 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 851 및 서열번호: 861의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 871.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab22의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab22 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab22 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab23
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 881의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
ctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 891).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 882의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcgttggaggagtccgggggagacctggtcaagcctggggcatccctgacactcacctgcaaagcctctggattctccttcagtagcggctactacatgtgctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcgcatgcatttatgctggtagtggtggtagcactttcttcgcgaactgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacctatttctgtgcgagagatggtggttatgctggctatggttatgctttctttaacttgtggggcccggggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 892).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 890의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 900).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 901의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtgagaggatttatagtggtttggcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgacgatgctgccatttactactgtcaatgtacttattatggttctagttatcctaatgttttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 911).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 902의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtgagaggatttatagtggtttggcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgacgatgctgccatttactactgtcaatgtacttattatggttctagttatcctaatgttttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 912).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 910의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 920).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 894; 서열번호: 896; 및 서열번호: 898의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 914; 서열번호: 916; 및 서열번호: 918의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 893; 서열번호: 895; 서열번호: 897; 및 서열번호: 899의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 913; 서열번호: 915; 서열번호: 917; 및 서열번호: 919의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 891; 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 892; 서열번호: 901의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 911; 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 912; 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 894; 서열번호: 896; 및 서열번호: 898)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 914; 서열번호: 916; 및 서열번호: 918)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 881의 중쇄 서열 또는 서열번호: 882의 가변 중쇄 서열 중 프레임워크 영역 (서열번호: 893; 서열번호: 895; 서열번호: 897; 및 서열번호: 899)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 901의 경쇄 서열 또는 서열번호: 902의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 913; 서열번호: 915; 서열번호: 917; 및 서열번호: 919)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab23에 대해, 전체 길이 Ab23 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 881의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 891 및 서열번호: 901의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 911.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab23의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab23 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab23 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체
Ab24
일 구현예에서, 본 발명은 추가로, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 921의 중쇄 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
ctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 931).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 922의 가변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cagtcgttggaggagtccgggggagacctggtcaagcctggggcatccctgacactcacctgcaaagcctctggattctccttcagtagcggctactacatgtgctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtggatcgcatgcatttatgctggtagtggtggtagcactttcttcgcgaactgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgtcgaccacggtgactctgcaaatgaccagtctgacagccgcggacacggccacctatttctgtgcgagagatggtggttatgctggctatggttatgctttctttaacttgtggggcccggggaccctcgtcaccgtctcgagc (서열번호: 932).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 930의 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (서열번호: 940).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 941의 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtgagaggatttatagtggtttggcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgacgatgctgccatttactactgtcaagctacttattatggttctagttatcctaatgttttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 951).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 942의 가변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
gatgttgtgatgacccagactccagcctccgtgtctgaacctgtgggaggcacagtcaccatcaagtgccaggccagtgagaggatttatagtggtttggcctggtatcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctatggtgcatccactctggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcgacctggagtgtgacgatgctgccatttactactgtcaagctacttattatggttctagttatcctaatgttttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaa (서열번호: 952).
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 950의 불변 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다:
cgtacggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (서열번호: 960).
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 934; 서열번호: 936; 및 서열번호: 938의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 대응하는 서열번호: 954; 서열번호: 956; 및 서열번호: 958의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 추가 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대응하는 서열번호: 933; 서열번호: 935; 서열번호: 937; 및 서열번호: 939의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 및/또는 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (FR 또는 불변 영역)에 대응하는 서열번호: 953; 서열번호: 955; 서열번호: 957; 및 서열번호: 959의 폴리뉴클레오타이드 서열의 1 이상, 또는 이들 폴리뉴클레오타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기 중 하나 이상의 조합을 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: FR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 이들 모두를 포함하는 상기에서 제시된 중쇄 및 경쇄 서열.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 항체 단편을 인코딩하는 하기의 폴리뉴클레오타이드 모두를 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 931; 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 932; 서열번호: 941의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 951; 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 952; 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 934; 서열번호: 936; 및 서열번호: 938)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (서열번호: 954; 서열번호: 956; 및 서열번호: 958)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 서열번호: 921의 중쇄 서열 또는 서열번호: 922의 가변 중쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 933; 서열번호: 935; 서열번호: 937; 및 서열번호: 939)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드; 및 서열번호: 941의 경쇄 서열 또는 서열번호: 942의 가변 경쇄 서열의 프레임워크 영역 (서열번호: 953; 서열번호: 955; 서열번호: 957; 및 서열번호: 959)을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCSK9에 대해 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 대안적으로 그것으로 구성된다. 항체 Ab24에 대해, 전체 길이 Ab24 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 구성된다: 서열번호: 921의 중쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 931 및 서열번호: 941의 경쇄 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열번호: 951.
본 발명의 또 하나의 구현예는 하기에서의 발현을 위해 발현 벡터로 편입된 이들 폴리뉴클레오타이드를 고려한다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO, HEK-293, 또는 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 예컨대 효모 피치아. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다. 본원의 (아래에) 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 적당한 숙주에서 전체길이 폴리뉴클레오타이드의 발현 다음에 Ab24의 효소 소화 (예를 들면, 파파인)에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-PCSK9 항체 예컨대 그의 Ab24 또는 Fab 단편은 하기에서 Ab24 폴리뉴클레오타이드의 발현을 통해 생산될 수 있다: 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주. 적당한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 12, 서열번호: 52, 서열번호: 92, 서열번호: 132, 서열번호: 172, 서열번호: 212, 서열번호: 252, 서열번호: 292, 서열번호: 332, 서열번호: 372, 서열번호: 412, 서열번호: 452, 서열번호: 492, 서열번호: 532, 서열번호: 572, 서열번호: 612, 서열번호: 652, 서열번호: 692, 서열번호: 732, 서열번호: 772, 서열번호: 812, 서열번호: 852, 서열번호: 892, 서열번호: 932로부터 선택된 항-PCSK9 VH 항체 아미노산 서열을 인코딩하거나, 그의 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 적어도 하나의 프레임워크 잔기 (FR 잔기)는 토끼 항-PCSK9 항체 VH 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환에서 상응하는 위치에서 아미노산으로 치환되었다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 32, 서열번호: 72, 서열번호: 112, 서열번호: 152, 서열번호: 192, 서열번호: 232, 서열번호: 272, 서열번호: 312, 서열번호: 352, 서열번호: 392, 서열번호: 432, 서열번호: 472, 서열번호: 512, 서열번호: 552, 서열번호: 592, 서열번호: 632, 서열번호: 672, 서열번호: 712, 서열번호: 752, 서열번호: 792, 서열번호: 832, 서열번호: 872, 서열번호: 912, 서열번호: 952로부터 선택된 항-PCSK9 VL 항체 아미노산을 인코딩하거나, 그의 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 적어도 하나의 프레임워크 잔기 (FR 잔기)는 토끼 항-PCSK9 항체 VL 폴리펩타이드 또는 보존적 아미노산 치환에서 상응하는 위치에서 존재하는 아미노산으로 치환되었다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 하기에서 함유된 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열을 포함하는 하나 이상의 이종기원 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다: 서열번호: 2 및 서열번호: 22; 서열번호: 42 및 서열번호: 62; 서열번호: 82 및 서열번호: 102; 서열번호: 122 및 서열번호: 142; 서열번호: 162 및 서열번호: 182; 서열번호: 202 및 서열번호: 222, 서열번호: 242 및 서열번호: 262; 서열번호: 282 및 서열번호: 302; 서열번호: 322 및 서열번호: 342; 서열번호: 362 및 서열번호: 382; 서열번호: 402 및 서열번호: 422; 서열번호: 442 및 서열번호: 462; 서열번호: 482 및 서열번호: 502; 서열번호: 522 및 서열번호: 542; 서열번호: 562 및 서열번호: 582; 서열번호: 602 및 서열번호: 622; 서열번호: 642 및 서열번호: 662; 서열번호: 682 및 서열번호: 702; 서열번호: 722 및 서열번호: 742; 서열번호: 762 및 서열번호: 782; 서열번호: 802 및 서열번호: 822; 서열번호: 842 및 서열번호: 862; 서열번호: 882 및 서열번호: 902; 또는 서열번호: 922 및 서열번호: 942.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항-PCSK9 항체로부터 유도된 적어도 하나의 CDR 폴리펩타이드를 함유하는 폴리펩타이드를 발현시키는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 상기 발현된 폴리펩타이드는 단독 특이적으로, PCSK9에 결합하거나, 항-PCSK9 항체로부터 유도된 적어도 하나의 CDR 폴리펩타이드를 함유하는 폴리펩타이드를 발현시키는 또 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열과 함께 발현될 때 PCSK9에 특이적으로 결합하고, 상기 적어도 하나의 CDR은 하기의 VL 또는 VH 폴리펩타이드에서 함유된 것으로부터 선택된다: 서열번호: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262, 282, 302, 322, 342, 362, 382, 402, 422, 442, 462, 482, 502, 522, 542, 562, 582, 602, 622, 642, 662, 682, 702, 722, 742, 762, 782, 802, 822, 842, 862, 882, 902, 922, 또는 942. 더 구체적으로, 적어도 하나의 CDR은 하기를 포함한다: 서열번호: 4, 6, 8, 24, 26, 28, 44, 46, 48, 64, 66, 68, 84, 86, 88, 104, 106, 108, 124, 126, 128, 144, 146, 148, 164, 166, 168, 184, 186, 188, 204, 206, 208, 224, 226, 228, 244, 246, 248, 264, 266, 268, 284, 286, 288, 304, 306, 308, 324, 326, 328, 344, 346, 348, 364, 366, 368, 384, 386, 388, 404, 406, 408, 424, 426, 428, 444, 446, 448, 464, 466, 468, 484, 486, 488, 504, 506, 508, 524, 526, 528, 544, 546, 548, 564, 566, 568, 584, 586, 588, 604, 606, 608, 624, 626, 628, 644, 646, 648, 664, 666, 668, 684, 686, 688, 704, 706, 708, 724, 726, 728, 744, 746, 748, 764, 766, 768, 784, 786, 788, 804, 806, 808, 824, 826, 828, 844, 846, 848, 864, 866, 884, 886, 888, 904, 906, 908, 924, 926, 928, 944, 946, 또는 948.
폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주세포 및 벡터가 또한 고려된다.
본 발명은 추가로 가변 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터, 뿐만 아니라 본원에서 제시된 개별적인 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역), 뿐만 아니라 상기 벡터 서열을 포함하는 숙주 세포를 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 숙주세포는 효모 세포이다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 효모 숙주세포는 피치아속에 속한다.
B-세포 스크리닝 및 분리
일 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 PCSK9 항원-특이적 세포를 분리하는데 사용될 수 있는 항원-특이적 B 세포의 클론 모집단의 제조 및 분리를 고려하며, 이는 원하는 PCSK9 항원, 또는 상기 항체에 상응하는 핵산 서열에 특이적인, PCSK9에 대한 모노클로날 항체를 생산하는데 사용될 수 있다. 항원-특이적 B 세포의 상기 클론 모집단을 제조하고 분리하는 방법은, 예를 들면 그 개시내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 특허 공보 제US 2007/0269868호(Carvalho-Jensen 등)에 교시되어 있다. 항원-특이적 B 세포의 상기 클론 모집단을 제조하고 분리하는 방법은 본원 실시예에 교시되어 있다. 크기 또는 밀도에 의해 세포 집단을 "농축"하는 방법은 당해기술분야에 알려져 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,627,052호를 참조한다. 이들 단계들은 항원-특이성에 의해 세포 집단을 농축하는 것에 부가하여 사용될 수 있다..
인간화 항체를 인간화하는 방법
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 중쇄 및 경쇄를 인간화하는 방법을 고려한다. 항-PCSK9 항체에 적용될 수 있는 항체 중쇄 및 경쇄를 인간화하는 방법은, 예를 들면, 그 개시내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 특허 출원 공보 제US 2009/0022659호(Olson 등), 및 미국 특허 제7,935,340호(Garcia-Martinez 등)에 교시되어 있다.
항체 및 그의 단편을 생산하는 방법
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항-PCSK9 항체 및 그의 단편을 생산하는 방법을 고려한다. 교배능력이 있는 효모의 다배체, 바람직하게는 2배체 또는 4배체 균주로부터 분비된 항-PCSK9 항체 및 그의 단편을 생산하는 방법은, 예를 들면, 그 개시내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 특허 출원 공보 제US 2009/0022659호(Olson 등), 및 미국 특허 제7,935,340호(Garcia-Martinez 등)에 교시되어 있다. 항체를 제조하기 위한 바람직한 효모는 피치아, 및 더 바람직하게는 피치아 패스토리스이다. 그러나, 본 발명에 따른 항체는 잠재적으로 사카로마이세타시애 패밀리의 다른 교배능력이 있는 효모와 같은 다른 효모에서 제조될 수 있으며, 이는 속 아르크시오자이마; 아스코보트라이오자이마; 사이테로마이세스; 데바리오마이세스; 덱케라; 에레모테시움; 이사첸키아; 카자키스타니아; 클루이베로마이세스; 코다마에아; 로데로마이세스; 파차이솔렌; 피치아; 사카로마이세스; 사투르니스포라; 테트라피시스포라; 톨루라스포라; 윌리옵시스; 및 자이고사카로마이세스를 포함한다. 본 발명에 따른 항체 단백질을 만드는데 잠재적으로 유용한 효모의 다른 유형은 야로위아; 로도스포리디움; 칸디다; 한세눌라; 필로바시움; 스포리디오볼러스; 불레라; 류코스포리디움 및 필로바시델라를 포함한다.
항체를 생산하는 다른 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 예를 들면, 키메라 항체를 생산하는 방법은 현재 당해기술분야에 잘 알려져 있다(예를 들면, 각각의 개시내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 특허 제4,816,567호(Cabilly 등); Morrison 등, P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. 등, Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. 등, Nature, 312:643-46 (1984) 참조).
마찬가지로, 인간화된 항체를 생산하는 다른 방법은 현재 당해 기술분야에 잘 알려져 있다(예를 들면, 미국 특허 제5,530,101호, 제5,585,089호, 제5,693,762호, 및 제6,180,370호(Queen 등); 미국 특허 제5,225,539호 및 제6,548,640호(Winter); 미국 특허 제6,054,297호, 제6,407,213호 및 제6,639,055호(Carter 등); 미국 특허 제6,632,927호(Adair); Jones, P.T. 등, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L., 등, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, 등, Science, 239:1534-36 (1988) 참조).
PCSK9 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항체 폴리펩타이드는 또한 당해분야의 숙련가에게 널리 알려진 종래의 기술을 이용하여 오페론 및 항체 중쇄를 인코딩하는 DNA 서열을 함유하는 발현 벡터를 구축함으로써 생산될 수 있으며, 여기서 항체 특이성에 필요한 CDR을 인코딩하는 DNA 서열은 비-인간 세포 공급원, 바람직하게는 토끼 B-세포 공급원으로부터 유래되는 반면, 항체 사슬의 잔여 부분을 인코딩하는 DNA 서열은 인간 세포 공급원으로부터 유래된다.
제2 발현 벡터는 당해분야의 숙련가에게 널리 알려진 동일한 종래의 수단을 이용하여 생산되며, 상기 발현 벡터는 오페론 및 항체 경쇄를 인코딩하는 DNA 서열을 함유하며, 여기서 항체 특이성에 필요한 CDR을 인코딩하는 DNA 서열은 비-인간 세포 공급원, 바람직하게는 토끼 B-세포 공급원으로부터 유래되는 반면, 항체 사슬의 잔여 부분을 인코딩하는 DNA 서열은 인간 세포 공급원으로부터 유래된다.
상기 발현 벡터는 당해분야의 숙련가에게 널리 알려진 종래 기술에 의해 숙주세포 내로 형질감염되어 형질감염된 숙주세포를 생산하고, 상기 형질감염된 숙주세포는 당해분야의 숙련가에게 잘 알려진 종래 기술에 의해 배양되어 상기 항체 폴리펩타이드를 생산한다.
상기 숙주세포는 상기 기재된 2개의 발현벡터로 공동-형질감염될 수 있으며, 제1 발현 벡터는 오페론 및 경쇄-유래 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA를 함유하고 및 제2 벡터는 오페론 및 중쇄-유래 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA를 함유한다. 상기 두 벡터는 상이한 선별 마커를 함유하지만, 바람직하게는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 실질적으로 동일한 발현을 달성한다. 대안적으로, 단일 벡터가 사용될 수 있으며, 상기 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 모두를 인코딩하는 DNA를 포함한다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 cDNA, 게놈 DNA, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.
당해 항체 폴리펩타이드를 발현하기 위해 잠재적으로 사용될 수 있는 숙주세포는 대장균과 같은 박테리아 세포, 또는 진핵 세포, 예컨대 P. 패스토리스, 다른 효모 세포, 진균, 곤충 세포, 포유동물 세포, 및 식물 세포와 같은 진핵 세포를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 골수 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주, NSO 세포주, 또는 HEK293 세포주와 같은 잘 규정된 유형의 포유동물 세포가 이러한 목적을 위한 것일 수 있다.
벡터가 구축될 수 있는 일반적인 방법, 숙주세포를 생산하는데 필요한 형질감염 방법 및 상기 숙주세포로부터 항체 폴리펩타이드를 생산하는데 필요한 배양 방법은 모두 종래의 기술을 포함한다. 바람직하게는 항체를 생산하는데 사용되는 세포주는 포유동물 세포주임에도 불구하고, 대장균-유래 세포 균주와 같은 세균 세포주 또는 효모 세포주와 같은 임의의 다른 적당한 세포주가 대안적으로 이용될 수 있다.
유사하게, 일단 생산된 항체 폴리펩타이드는, 예를 들면 교차-유동 여과, 암모늄 설페이트 침전, 친화성 칼럼 크로마토그래피 등과 같은 본 기술분야에서의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다.
본원에 기재된 항체 폴리펩타이는 또한 본 발명의 항체 폴리펩타이드와 동일한 치료적 적용에 유용할 펩타이드 또는 비-펩타이드 모방체의 설계 및 합성에 사용될 수 있다. 예를 들면, 그 내용 전체가 참조로 본원에 통합된 문헌[Saragobi 등, Science, 253:792-795 (1991)]을 참조한다.
스크리닝 분석
본 발명은 또한 PCSK9 연관된 질환 또는 장애의 증상을 나타내는 환자에서 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 확인을 돕도록 설계된 스크리닝 분석을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항체는 진단 도구로서 사용된다. 상기 항체는 샘플 및/또는 대상에 존재하는 PCSK9의 양을 분석하는데 사용될 수 있다. 당해분야의 숙련가에 의해 인식될 바와 같이, 상기 항체는 항체를 중화할 필요가 없다. 일부 구현예에서, 상기 진단 항체는 중화 항체가 아니다. 일부 구현예에서, 상기 진단 항체는상기 중화 항체가 결합하는 것 이외의 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 두 항체는 서로 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 항체는 PCSK9의 수준 변화와 연관된 질환 또는 장애를 스크리닝/진단하기 위해 포유동물 조직 또는 세포에서 PCSK9의 검출을 위한 분석 키트 및/또는 방법에서 사용되거나 제공된다. 상기 키트는 PCSK9에 결합하는 항체 및 만약 존재하는 경우 항체와 PCSK9와의 결합, 및 임의로 PCSK9 단백질 수준을 나타내기 위한 수단을 포함한다. 항체의 존재를 나타내기 위한 다양한 수단이 사용될 수 있다. 예를 들면, 형광단, 다른 분자 프로브, 또는 효소가 항체에 연결될 수 있고, 항체의 존재는 다양한 방식으로 관찰될 수 있다. 그러한 장애를 스크리닝하는 방법은 키트의 사용, 또는 간단하게는 상기 개시된 항체 중 하나의 사용 및 항체가 샘플 내의 PCSK9에 결합하는지 여부의 결정을 포함할 수 있다. 당해분야의 숙련가에 의해 인식될 바와 같이, PCSK9의 높은 또는 상승된 수준은 샘플 내에서 더 많은 양의 항체가 PCSK9에 결합하게 할 것이다. 따라서, 항체 결합의 정도는 샘플 내에 얼마나 많은 PCSK9가 있는지를 결정하는데 사용될 수 있다. 미리 결정된 양(예를 들면, PCSK9 관련된 장애가 없는 사람이 가질 양 또는 범위)보다 더 큰 PCSK9의 양을 갖는 대상 또는 샘플은 PCSK9 매개된 장애를 갖는 것으로 규명될 수 있다. 일부 구현예에서, 스타틴이 대상에서의 PCSK9의 양에 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해, 항체가 스타틴을 섭취한 대상에게 투여된다.
본 발명은 또한 진단적 유효량의 진단 조성물을 투여하는 것을 포함하는 PCSK9를 발현하는 세포의 존재를 검출하는 생체내 이미지화 방법에 관한 것이다. 상기 생체내 이미지화는 예를 들면 PCSK9 발현 세포 또는 기관의 검출 또는 이미지화에 유용하고, 효과적인 암 치료 프로토콜의 설계를 위한 계획 요법의 일부로서 유용할 수 있다. 상기 치료 프로토콜은, 예를 들면, 방사선, 화학요법, 사이토카인 요법, 유전자 요법, 및 항체 요법, 뿐만 아니라 항-PCSK9 항체 또는 그의 단편 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 추가로, PCSK9에 대한 본 발명의 항-PCSK9 항체의 결합을 검출하기 위한 키트를 제공한다. 특히, 상기 키트는 본 발명의 항-PCSK9 항체 또는 그의 면역반응성 단편과 특이적으로 반응하는 PCSK9의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 상기 키트는 또한 기질에 결합된 항체, 항원와 반응하는 2차 항체 및 2차 항체와 항원과의 반응을 검출하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 그와 같은 키트는 ELISA 키트일 수 있으며, 기질, 적절할 경우 일차 및 2차 항체, 및 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 검출가능한 모이어티, 효소 기질, 및 발색 시약과 같은 임의의 다른 필요한 시약을 포함할 수 있다. 진단 키트는 또한 면역블랏 키트의 형태일 수 있다. 진단 키트는 또한 화학발광 키트(Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD)의 형태일 수 있다. 진단 키트는 또한 란타나이드-기반 검출 키트(PerkinElmer, San Jose, CA)일 수 있다.
숙련된 임상의는 생물학적 샘플이, 비제한적으로, 혈청, 혈장, 소변, 타액, 점액, 늑막 유체, 활막 유체 및 척수액을 포함한다는 것을 이해할 것이다.
PCSK9
와 연관된 질환 및 장애의 증상을 개선하거나 감소시키거나, 또는 이를 치료하거나 예방하는 방법
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 그의 단편은 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 증상을 개선하거나 감소시키거나, 또는 이를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 그의 단편, 뿐만 아니라 조합은 또한 하기에 더 상세히 기재된 바와 같은 약제학적 또는 진단 조성물의 형태로 PCSK9와 연관된 질환 및 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료적 유효량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 제2 제제와 함께 또는 상기 제제 없이, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 그의 단편은 변화된 콜레스테롤, LDL, 또는 LDLR 수준과 관련되거나, 연관되거나 또는 이에 의해 영향을 받을 수 있는 장애의 증상을 개선하거나 감소시키거나, 또는 이를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 일부 구현예에서, "콜레스테롤 관련 장애"("혈청 콜레스테롤 관련 장애"를 포함함)는 하기 중 임의의 하나 이상을 포함한다: 예를 들면, 상승된 총 혈청 콜레스테롤, 상승된 LDL, 상승된 트리글리세라이드, 상승된 VLDL, 및/또는 낮은 HDL에 의해 명시될 수 있는, 고콜레스테롤혈증, 심장병, 대사성 증후군, 당뇨병, 관상동맥성 심장병, 뇌졸중, 심혈관 질환, 알츠하이머병 및 일반적으로 이상지질혈증. 단독으로 또는 하나 이상의 다른 제제와 병용하여, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편를 이용하여 치료될 수 있는 일차 및 2차 이상지질혈증의 일부 비제한적인 예는 대사성 증후군, 진성 당뇨병, 가족성 결합성 고지혈증, 가족성 초고트리글리세라이드혈증, 이종접합 고콜레스테롤혈증을 포함하는, 가족성 고콜레스테롤혈증, 동종접합 고콜레스테롤혈증, 가족성 불량성 아포지질단백질 B-100; 다유전자성 고콜레스테롤혈증; 잔존조직 제거 질환, 간 리파제 결핍; 하기 중 어느 것에 2차적인 이상지질혈증을 포함한다: 무분별한 식이, 갑상선기능저하증, 에스트로겐 및 프로게스틴 요법, 베타-차단제, 및 티아자이드 이뇨제를 포함하는 약물; 신장 증후군, 만성 신부전, 쿠싱 증후군, 원발성 담도성 간경변증, 글리코겐 축적 질환, 간종양, 답즙정체증, 말단비대증, 인슐린종, 단리된 성장 호르몬 결핍, 및 알코올-유도된 초고트리글리세라이드혈증. 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 죽상경화성 질환, 예컨대, 예를 들면, 관상동맥성 심장병, 관상동맥 질환, 말초 동맥 질환, 뇌졸중(허혈성 및 출혈성), 협심증, 또는 뇌혈관 질환 및 급성 관상동맥 증후군, 심근경색증을 예방하거나 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 비치명적인 심장병, 치명적인 및 비-치명적인 뇌졸중, 어떤 유형의 심장 수술, 심부전으로 인한 입원율, 심장병을 갖는 환자에서의 가슴 통증, 및/또는 전 심장병, 이전 심장 수술, 및/또는 막힌 동맥의 증거를 갖는 가슴 통증과 같은 확립된 심장병으로 인한 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 유용하다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편 및 방법은 반복되는 심혈관 사건의 위험성을 감소시키는데 사용될 수 있다.
투여
본 발명의 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 이의 PCSK9 결합 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편의 조합은, 수령 대상의 체중의 약 0.1 내지 100.0 mg/kg의 농도로 대상에게 투여된다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 이의 PCSK9 결합 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편의 조합은, 수령 대상의 체중의 약 0.4 mg/kg의 농도로 대상에게 투여된다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 PCSK9 그의 결합 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편의 조합은, 26주마다 1회 이하, 예컨대 16주마다 1회 이하, 8주마다 1회 이하, 4주마다 1회 이하, 2주마다 1회 이하, 1주마다 1회 이하, 또는 1일마다 1회 이하의 빈도로 수령 대상에게 투여된다.
Fab 단편은 2주마다 1회 이하, 1주마다 1회 이하, 매일 1회 이하, 1일당 다수, 및/또는 몇 시간마다 투여될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 환자는 원하는 결과를 얻는데 효과적인, 하루에 1 내지 6회의 분할 용량으로 또는 지속 방출 형태로 제공되는, 매일 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg의 Fab 단편을 받는다.
환자에게 투여되는 항체 또는 Fab의 농도는 상기 제시된 예시적인 투여 농도보다 크거나 낮을 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
본 기술분야의 숙련가는, 예를 들면 본원에서의 개시내용 및 문헌[Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. New York: McGraw-Hill; Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A., Champe, P. C., & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology. Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 및 Golan, D. E. (2008). Principles of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams & Wilkins]에서의 교시내용에 의해 안내된 일상적인 실험과정을 통해 효과적인 복용량 및 투여 빈도를 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 PCSK9 그의 결합 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편의 조합은 약제학적 제형으로 대상에게 투여된다.
"약제학적 조성물"은 포유동물에게 투여하기에 적합한 화학적 또는 생물학적 조성물을 지칭한다. 그와 같은 조성물은 비제한적으로 구강, 표피, 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 진피내, 근육내, 비강내, 안구내, 복강내, 척수내, 척추강내, 정맥내, 경구, 비경구, 관장 또는 좌약을 통한 직장, 피하, 피하, 설하, 경피, 및 점막통과를 포함하는, 하나 이상의 수많은 경로를 통한 투여를 위해 구체적으로 제형화될 수 있다. 또한, 투여는 주사, 분말, 액체, 겔, 액적, 또는 다른 투여 수단에 의해 일어날 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-PCSK9 항체, 또는 PCSK9 그의 결합 단편, 뿐만 아니라 상기 항체 또는 항체 단편의 조합은 하나 이상의 활성제와 병용하여 임의로 투여될 수 있다. 그와 같은 활성제는 진통제, 항히스타민제, 해열, 항-염증성, 항생제, 항바이러스, 및 항-사이토카인제를 포함한다. 활성제는, 전술한 것 중 어느 것에 대해 반응성인 항체 및 이들의 수용체 중 어느 것에 대해 반응성인 항체를 포함하는, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-α, IFN-γ, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, 간세포 성장 인자(HGF), 헵시딘의 작용제, 길항제, 및 조절물질을 포함한다. 활성제는 또한 비제한적으로 2-아릴프로피온산, 아세클로페낙, 아세메타신, 아세틸살리실산(아스피린), 알클로페낙, 알미노프로펜, 암모시프린, 암파이론, 아릴알칸산, 아자프로파존, 베노릴레이트/베노릴레이트, 베녹사프로펜, 브롬페낙, 카프로펜, 셀레콕십, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 클로페존, COX-2 억제제, 덱시부프로펜, 덱스케토프로펜, 디클로페낙, 디플루니살, 드록시캄, 에텐자마이드, 에토돌락, 에토리콕십, 파이슬라민, 페남산, 펜부펜, 페노프로펜, 플루페남산, 플루녹사프로펜, 플루르바이프로펜, 이부프로펜, 이부프록삼, 인도메타신, 인도프로펜, 케부존, 케토프로펜, 케토록락, 로르녹시캄, 록소프로펜, 루미라콕십, 마그네슘 살리실레이트, 메클로페남산, 메페남산, 멜록시캄, 메타미졸, 메틸 살리실레이트, 모페부타존, 나부메톤, 나프록센, N-아릴안트라닐산, 신경 성장 인자(NGF), 옥사메타신, 옥사프로진, 옥시캄, 옥시펜부타존, 파레콕십, 페나존, 페닐부타존, 페닐부타존, 피록시캄, 파이르프로펜, 프로펜스, 프로글루메타신, 피라졸리딘 유도체, 로페콕십, 살리실 살리실레이트, 살리실아마이드, 살리실레이트, 물질 P, 설핀파이라존, 설린닥, 수프로펜, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨페남산, 톨메틴, 및 발데콕십을 포함한다.
항히스타민제는 히스타민의 작용 또는 세포(예를 들면, 비만 세포)로부터의 히스타민의 방출을 막는 임의의 화합물일 수 있다. 항히스타민제는 비제한적으로 아크리바스틴, 아스테미졸, 아자타딘, 아젤라스틴, 베타타스틴, 브롬페니라민, 부클리진, 세티리진, 세티리진 유사체, 클로르페니라민, 클레마스틴, CS 560, 사이프로헵타딘, 데슬로라타딘, 덱스클로르페니라민, 디펜히드라민, 에바스틴, 에피나스틴, 펙소페나딘, HSR 609, 하이드록시진, 레보카바스틴, 로라티딘, 메트스모폴라민, 미졸라스틴, 노라스테미졸, 펜인다민, 프로메타진, 파이릴아민, 테르페나딘, 및 트라닐라스트를 포함한다.
항생제는 비제한적으로 아미카신, 아미노글리코사이드, 암목실린, 암피실린, 안사마이신, 아르스페나민, 아지트로마이신, 아즐로실린, 아즈트레오남, 바시트라신, 카바세펨, 케바페넴, 카르베니실린, 세파클로르, 세파드록실, 세팔렉신, 세팔로친, 세팔로틴, 세파만돌, 세파졸린, 세프디니르, 세프디토렌, 세페핌, 세픽심, 세포페라존, 세포탁심, 세폭시틴, 세프포독심, 세프프로질, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프토바이프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세팔로스포린, 클로르암페니콜, 실라스타틴, 시프로플록사신, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 클록사실린, 콜리스틴, 코-트리목사졸, 탈포프리스틴, 데메클로사이클린, 디클록사실린, 디리트로마이신, 도리페넴, 데옥시사이클린, 에녹사신, 에르타페넴, 에리트로마이신, 에탐부톨, 플루클록사실린, 포스포마이신, 푸라졸리돈, 후시딘산, 가티플록사신, 젤다나마이신, 겐타마이신, 글리코펩타이드, 허비마이신, 이미페넴, 이소니아지드, 카나마이신, 레보플록사신, 린코마이신, 리네졸라이드, 로메플록사신, 로라카르베프, 매르롤라이드, 마페나이드, 메로페넴, 메티실린, 메트로니다졸, 메즐로실린, 미노사이클린, 모노박탐, 목시플록사신, 무피로신, 나프실린, 네오마이신, 네틸마이신, 니트로푸란토인, 노르플록사신, 오플록사신, 옥사실린, 옥시테트라사이클린, 파로모마이신, 페니실린, 페니실린, 피페라실린, 플라텐시마이신, 폴리믹신 B, 폴리펩타이드, 프론토실, 피라진아미드, 퀴놀론, 퀴누프리스틴, 리팜피신, 리팜핀, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 설파세트아마이드, 설파메티졸, 설파닐리마이드, 설파살라진, 설피속사졸, 설폰아미드, 테이코플라닌, 텔리트로마이신, 테트라사이클린, 테트라사이클린, 티카실린, 티니다졸, 토브라마이신, 트리메토프림, 트리메토프림-설파메톡사졸, 트롤레안도마이신, 트로바플록사신, 및 반코마이신을 포함한다.
활성제는 또한 알도스테론, 베클로메타손, 베타메타손, 코르티코스테로이드, 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 데옥시코르티코스테론 아세테이트, 덱사메타존, 플루드로코르티손 아세테이트, 글루코코르티코이드, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 스테로이드, 및 트리암시놀론을 포함한다. 이들 활성 성분들의 임의의 적합한 조합이 또한 고려된다.
"약제학적 부형제" 또는 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 활성 치료제가 제형화되는 담체, 일반적으로 액체이다. 본 발명의 일 구현예에서, 활성 치료제는 본원에 기재된 인간화된 항체, 또는 그의 하나 이상의 단편이다. 부형제는 일반적으로 그것이 화학적 및/또는 생물학적 안정성 및 방출 특성을 제공할 수 있음에도 불구하고, 제형에게 임의의 약리적 활성을 제공하지 않는다. 예시적인 제형은, 예를 들면, 참조로 통합된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Grennaro, A., Ed., 1995]에서 발견될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "부형제"는 생리적으로 양립가능한 임의의 및 모든 용매, 분산매, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제를 포함한다. 일 구현예에서, 담체는 비경구 투여에 적합하다. 대안적으로, 담체는 정맥내, 복강내, 근육내, 또는 설하 투여에 적합할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균한 분말을 포함한다. 약제학적으로 활성 물질을 위한 그와 같은 매질 및 제제의 사용은 당해분야에 공지되어 있다. 임의의 종래의 매질 또는 제제가 활성 화합물과 양립하지 않는 점을 제외하면, 본 발명의 약제학적 조성물에서의 그의 용도가 고려된다. 보충적인 활성 화합물들이 또한 상기 조성물 내에 혼입될 수 있다.
약제학적 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에 멸균되거나 안정적이어야 한다. 본 발명은 약제학적 조성물이 동결건조된 형태로 존재하는 것을 고려한다. 상기 조성물은 용액, 마이크로유화액, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제형화될 수 있다. 담체는, 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산매일 수 있다. 본 발명은 추가로 약제학적 조성물에서 안정제의 포함을 고려한다. 적절한 유체성은, 예를 들면, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
많은 경우, 조성물 내에 등장제, 예를 들면, 당, 만니톨 또는 소르비톨과 같은 폴리알코올, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 달성될 수 있다. 더욱이, 알칼리성 폴리펩타이드는, 예를 들면 서방 폴리머를 포함하는 조성물에서, 지속 방출 제형으로 제형화될 수 있다. 상기 활성 화합물은, 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같이, 화합물이 빠르게 방출되는 것을 막을 담체를 이용하여 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산 및 폴리락트산, 폴리글리콜 코폴리머(PLG)와 같은 생분해성, 생체적합성 폴리머가 사용될 수 있다. 그와 같은 제형을 제조하기 위한 많은 방법들은 당해분야의 숙련가에게 공지되어 있다.
각각의 인용된 구현예의 경우, 화합물은 다양한 복용 형태에 의해 투여될 수 있다. 당해분야의 숙련가에게 공지된 임의의 생물학적으로-허용가능한 복용 형태, 및 이들의 조합이 고려된다. 그와 같은 복용 형태의 예는, 비제한적으로, 재구성된 분말, 엘릭시르, 액체, 용액, 현탁액, 유화액, 분말, 과립, 입자, 마이크로입자, 분산성 과립, 카셰, 흡입제, 에어로졸 흡입제, 패치, 입자 흡입제, 이식물, 데포 이식물, 주사제(피하, 근육내, 정맥내, 및 진피내를 포함함), 주입제, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 다양한 예시된 구현예의 상기 설명은 망라하거나 본 발명을 개시된 정확한 형태로 제한하고자 하는 것이 아니다. 본 발명의 특정 구현예 및 이를 위한 실시예가 예시적인 목적을 위해 본원에 기재되어 있음에도 불구하고, 관련 기술분야의 숙련가가 인식할 바와 같이, 본 발명의 범위 내에서 다양한 대등한 변형이 가능하다. 본 발명의 본원에 제공된 교시는 상기 기재된 예 이외의 다른 목적에 적용될 수 있다.
상기 상세한 설명에 비추어 본 발명에 이들 및 다른 변화가 일어날 수 있다. 일반적으로, 하기의 청구항에서, 사용된 용어들은 본 발명을 명세서 및 청구항에 개시된 특정 구현예로 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 따라서, 본 발명은 개시내용에 의해 제한되는 것이 아니며, 대신 본 발명의 범위는 하기의 청구항에 의해 전적으로 결정된다.
본 발명은 전술한 설명 및 실시예에 특히 기재된 것 이외의 방법으로 실시될 수 있다. 본 발명의 수많은 변형 및 변화는 상기 교시에 비추어 가능하며, 따라서, 부가된 청구항들의 범위 내에 속한다.
토끼-유래 모노클로날 항체의 인간화 및 항원 결합 친화도를 유지하는 바람직한 서열 변형과 관련된 어떤 교시들이 개시내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는, 2008년 5월 21일에 출원된 "Novel Rabbit Antibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies"라는 명칭의 국제 공보 제WO/2008/144757호에 대응되는 국제 출원 제PCT/US2008/064421호에 개시되었다.
교배 능력이 있는 효모 및 상응하는 방법을 이용한 항체 또는 그의 단편을 생산하는 것과 관련된 어떤 교시는 그의 개시내용이 전체가 참조로 본원에 통합된, 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 번호 11/429,053호(미국 특허 출원 공보 번호 US2006/0270045호)에 개시되었다.
어떤 PCSK9 항체 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드들은 이 특허 출원 제출에 첨부된 서열목록에 개시되어 있으며, 상기 서열목록의 개시내용은 전체가 참조로 본원에 통합되어 있다.
발명의 배경, 상세한 설명, 및 실시예에 인용된 각 문서(특허들, 특허 출원, 신문 기사, 요약, 매뉴얼, 책, 또는 다른 개시내용을 포함함)의 전체 개시내용은 그의 전체가 참조로 본원에 통합되어 있다.
하기의 예는 본 기술분야의 숙련가에게 본 발명을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시내용 및 설명을 제공하기 위해 제시되며, 본 발명으로서 간주되는 것의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 사용된 숫자(예를 들면 양, 온도, 농도 등)에 대해 정확성을 보증하기 위한 노력이 이뤄졌지만, 일부 실험 오차 및 편차는 허용되어야 한다. 달리 지적되지 않으면, 부(part)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다.
실시예
실시예
1
PCSK9
에 결합하는 항체의 제조
실질적으로 본원에 기재된 바와 같은 항체 선택 프로토콜을 이용하여, PCSK9에 특이적인 항체들의 패널을 생산하였다.
면역화 전략
토끼를 인간 PCSK9(R&D 및 사내에서 생산됨)로 면역화하였다. 면역화는 완전한 프로인드 아주반트(CFA)(Sigma) 중의 100 μg의 항원의 1차 피하(sc) 주사 다음으로 각각 불완전한 프로인드 아주반트(IFA)(Sigma) 중의 50 μg과 혼합된 50 μg 항원을 함유하는, 2주 간격의 2번의 부스트로 이루어졌다. 동물을 55일에 채혈하고, 혈청 역가를 ELISA(항원 인식)에 의해 결정하였다.
다중 부위에서 반복적인 면역화를 이용하여 추가적인 면역화를 수행하였다. 동물에게 하기 계획으로 고용량 또는 저용량의 항원을 제공하였다: 1일에 초기 용량(400 μg 또는 100 μg)과 3, 6, 9, 및 12일에 부스트(200 μg 또는 50 μg). 13일에 조직 수확을 수행하였다.
항체 선별
역가
평가
인간 PCSK9에 결합하는 항체를 확인하고 규명하기 위해, 항체-함유 용액을 ELISA에 의해 시험하였다. 요약하면, 뉴트라비딘 코팅된 플레이트(Thermo Scientific)을 실온에서 약 1시간 동안 또는 대안적으로 4℃에서 밤새, PBS에 희석된 바이오티닐화된 인간 PCSK9(50μL / 웰, 1μg/mL)로 코팅하였다. 그리고 나서, 상기 플레이트를 실온에서 1시간 동안 ELISA 완충제로 차단하고 세척 완충제(PBS, 0.05% 트윈 20)를 이용하여 세정하였다. 시험된 혈청 샘플을 ELISA 완충제(PBS pH 7.4 중의 0.5% 생선 피부 젤라틴)를 이용하여 연속 희석하였다. 50 마이크로리터의 희석된 혈청 샘플을 웰 상으로 이전시키고, 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이 배양 후, 상기 플레이트를 세척 완충제를 이용하여 세정하였다. 현상을 위해, 항-토끼 특이적 Fc-HRP(ELISA 완충제에서 1:5000 희석)를 웰 상에 부가하고 실온에서 45분간 배양하였다. 세정액을 이용한 3X 세정 단계 후, TMB 기질을 이용하여 실온에서 2분간 플레이트를 현상하고 0.5M HCl을 이용하여 반응을 켄칭하였다. 휄 흡광도를 450 nm에서 판독하였다.
조직 수확
허용가능한 역가가 확립되면, 토끼(들)를 희생시켰다. 비장, 림프절, 및 전혈을 수확하고 하기와 같이 가공하였다:
조직을 분리하고 20 cc 주사기의 플런저를 이용하여 70 μm (Fisher)의 멸균 철사 메쉬를 통과시켜, 비장 및 림프절을 단일 세포 현탁액으로 가공하였다. 세포를 PBS에서 수집하였다. 세포를 원심분리에 의해 2회 세정하였다. 마지막 세정 후, 트립판 블루에 의해 세포 밀도를 결정하였다. 세포를 1500 RPM에서 10분간 원심분리하고, 상청액을 버렸다. 세포를 FBS(Hyclone) 중의 10% 디메틸 설폭사이드(DMSO, Sigma)의 적절한 부피에 재현탁시키고, 1 mL/바이알에 분배하였다. 바이알을 24시간 동안 서냉 챔버 내에서 -70℃에 보관하고 액체 질소에 보관하였다.
B 세포 선별, 농축 및 배양 조건
B 세포 배양을 시작하는 날, PBMC, 비장세포, 또는 림프절 바이알을 사용하기 위해 해동시켰다. LN2 탱크로부터 바이알을 빼내어 녹을 때까지 37℃ 수조에 넣었다. 바이알의 내용물을 15 mL 원뿔형 원심분리 튜브(Corning)로 옮기고 상기 기술된 변형된 RPMI 10 mL을 튜브에 서서히 첨가하였다. 세포를 2K RPM에서 5분간 원심분리하고, 상청액을 버렸다. 세포를 10 mL의 새로운 배지에 재현탁시켰다. 세포 밀도 및 생존력을 트립판 블루에 의해 결정하였다.
바이오티닐화된 인간 PCSK9를 하기와 같이 스트렙타비딘 비드 상에 미리 로딩하였다. 75 마이크로리터의 스트렙타비딘 비드(Milteny Biotec, Auburn CA)를 N-말단이 바이오티닐화된 huPCSK9(10μg/mL 최종 농도) 및 300 μl PBF와 혼합하였다. 이 혼합물을 4℃에서 30분간 배양하고 MACS® 분리 칼럼(Miltenyi Biotec)을 이용하여 결합되지 않은 바이오티닐화된 인간 PCSK9를 제거하고, 1ml 세정으로 결합되지 않은 물질을 제거하였다. 그리고 나서, 물질을 빼 낸 다음, 1E7 세포 당 100 μL로 상기로부터 세포를 현탁시키는데 사용하였고, 그리고 나서, 혼합물을 4℃에서 30분간 배양하고 10 mL의 PBF를 이용하여 1회 세정하였다. 세정 후, 세포를 500 μL의 PBF에 재현탁하여 따로 두었다. MACS® MS 칼럼(Miltenyi Biotec, Auburn CA)을 자기 스탠드(Milteni) 위에서 500 mL의 PBF로 미리 세척하였다. 세포 현탁액을 프리필터를 통과시켜 칼럼에 적용하고, 결합되지 않은 분획을 수집하였다. 칼럼을 2.5 mL의 PBF 완충제로 세정하였다. 칼럼을 자석 스탠드로부터 제거하고, 깨끗한 멸균 1.5 mL 에펜도르프 튜브 위에 두었다. 1 mL의 PBF 완충제를 칼럼의 상부에 첨가하였고, 양성 선별 세포를 수집하였다. 양성 세포 분획의 수율 및 생존력을 트립판 블루 염색에 의해 결정하였다. 양성 선별은 평균 1%의 출발 세포 농도를 생성하였다.
배양을 위한 시딩 수준에 대해 정보를 제공하기 위해 파일럿 세포 스크린을 확립하였다. 플레이트를 10, 25, 50, 100, 또는 200개 농축된 B 세포/웰로 시딩하였다. 또한, 각 웰은 250 μL/웰의 최종 부피로 높은 글루코오스 변형된 RPMI 배지 중에 25-50K 세포/웰의 조사된 EL-4.B5 세포(5,000 Rads) 및 적절한 수준의 활성화된 토끼 T 세포 상청액(미국 특허 출원 공보 제20070269868호 참조)(조제물에 따라 1-5%의 범위임)을 함유하였다. 배양물을 4% CO2에서 37℃에서 5 내지 7일간 배양하였다.
항원-인식(
ELISA
)에 의한 B-세포 배양 스크리닝
항-인간 PCSK9 항체를 생산하는 웰들을 확인하기 위해, 항원-인식(ELISA)에 의해 혈청 샘플의 역가 결정을 위해 기재된 바와 같은 동일한 프로토콜을 하기와 같이 변형하여 사용하였다. 요약하면, 뉴트라비딘 코팅된 플레이트를 바이오티닐화된 인간 PCSK9(50μL / 웰, 1μg/mL 각각)로 코팅하였다. B-세포 상청액 샘플(50μL)을 이전 희석 없이 시험하였다.
하나 이상의 분석을 이용한 B-세포
상청액에서
관능적 활성의 확인
항원-인식 ELISA에 의해 확인한 후, ELISA를 차단하는 PCSK9를 이용하여 PCSK9의 기능 변형화 에티토프를 표적화하는 항체를 확인하였다. 바이오티닐화된 PCSK9를 스트렙타비딘 플레이트 상에 코팅한 다음, 인간 Fc 영역을 갖는 재조합, 기능 변형화 항-PCSK9 항체(사내에서 생성됨)를 사용하여 기능성 에피토프를 차단하였다. 에피토프가 차단되면, B-세포 배양 상청액을 웰에 놓고 항체 결합을 항-토끼 Fc-HRP(Jackson ImmunoResearch)에 의해 검출하였다.
항원-특이적 B 세포로부터 항체 서열의 증폭 및 서열 결정
원하는 기능성 특성을 갖는 항-PCSK9 항체를 함유하는 항 B 세포 상청액을 확인하는 기능 분석을 수행한 후, 이들 항체를 분비하는 항원-특이적 B 세포를 분리하였다. 이후, 단일 B-세포로부터 항체를 분리하는 조합된 RT-PCR 기반 방법을 이용하여 이들 분리된 B 세포로부터 상기 항체 서열을 회수하였다. 토끼 면역글로불린 서열과 같은 표적 면역글로불린 유전자(중쇄 및 경쇄)의 보존 및 불변 영역에서 어닐링하도록 제한 효소 인식 부위를 함유하는 프라이머를 설계하였고, 2-단계 네스티드 PCR 회수를 사용하여 상기 항체 서열을 증폭시켰다. 각 웰로부터 얻은 앰플리콘에 대해 회수 및 크기 온전성을 분석하였다. 그리고 나서, 수득한 단편을 AluI으로 절단하여 서열 클론성을 핑거프린트한다. 동일한 서열은 그의 전기영동 분석에서 공통된 단편화 패턴을 나타내었다. 그리고 나서, 최초 중쇄 및 경쇄 앰플리콘 단편을 PCR 프라이머 내에 함유된 제한 효소 부위를 이용하여 절단하고 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 서브클로닝된 DNA 단편을 함유하는 벡터를 증폭하고 정제하였다. 발현에 앞서 서브클로닝된 중쇄 및 경쇄의 서열을 확인하였다.
원하는 항원 특이성 및/또는 기능적 특성의
모노클로날
항체의 재조합 생산
특정 B-세포로부터 회수된 항체의 항원 특이성 및 기능적 특성을 결정하기 위해, 원하는 쌍으로 된 중쇄 및 경쇄 서열의 발현을 유도하는 벡터를 HEK-293 세포 내로 형질감염시켰다.
ELISA
에 의한 재조합 항체의 항원-인식
재조합 발현된 항체의 인간 PCSK9에 결합하는 능력을 규명하기 위해, 항체-함유 용액을 ELISA에 의해 시험하였다. 모든 배양은 실온에서 수행하였다. 요약하면, 뉴트라비딘 플레이트(Pierce)를 ELISA 완충제(PBS, 0.5% 생선 피부 젤라틴, 0.05% 트윈-20)를 이용하여 1시간 동안 차단하였다. 차단 후, 플레이트를 바이오티닐화된-PCSK9 함유 용액(ELISA 완충제 중에 1μg/mL)으로 1시간 동안 코팅하였다. 그리고 나서, PCSK9-코팅된 플레이트를 세척 완충제(PBS, 0.05% 트윈-20)로 3회 세정하였다. 코팅 후, 플레이트를 ELISA 완충제으로 1시간 동안 다시 차단하였다. 차단 용액을 제거한 다음, 플레이트를 대략 1시간 동안 시험될 항체의 희석 시리즈와 함께 배양하였다. 이 배양 말기에, 플레이트를 세척 완충제로 3회 세정하고, 2차 항체 함유 용액(페록시다아제 접합된 어피니퓨어 F(ab')2 단편 염소 항-인간 IgG, Fc 단편 특이적 [Jackson Immunoresearch])과 함께 대략 45분간 추가 배양하고, 3회 세정하였다. 그 다음, 기질액(TMB 페록시다아제 기질, BioFx)을 첨가하고 어두운 곳에서 3 내지 5분간 배양하였다. 0.5M HCl을 첨가하여 상기 반응을 중지시키고, 플레이트를 플레이트-판독기에서 450 nm에서 판독하였다.
결과: 도 13-26은 항-PCSK9 항체 Ab1-Ab24가 인간 PCSK9에 결합하고 이를 인식한다는 것을 입증한다.
HepG2
세포에 의한
LDL
-C 흡수의 조절에 의한 재조합 항체의 기능 규명
PCSK9에 의해 HepG2 세포에서 LDL-C 흡수의 억제를 중화하는 항-PCSK9 항체의 능력을 세포 기반 분석에서 시험하였다. HepG2 세포를 콜라겐 코팅된 96 웰 플레이트에 시딩하였다(30,000 세포/웰). 24시간 후, 배지를 0.5% 저 지질 FBS를 함유하는 새로운 배지로 교체하였다. 다양한 농도의 항-PCSK9 항체를 3μg/mL PCSK9와 함께 실온에서 1시간 동안 배양한 다음, HepG2 세포에 첨가하고 37℃에서 5시간 동안 배양하였다. BODIPY-LDL을 각 웰에 첨가하고 37℃에서 밤새 배양하였다. 배지를 제거하고 세포를 RIPA 완충제으로 용해시키고, 세포에 의해 흡수된 BODIPY-LDL의 양을 플레이트 판독기(여기, 485 nm; 방출 535 nm) 상에서 측정하였다.
결과: 도 27-46은 항-PCSK9 항체가 LDL-C 흡수를 억제하는 PCSK9의 능력을 중화한다는 것을 입증한다.
ELISA
에 의한 재조합 항체의
사이노몰구스
원숭이 항원-인식
재조합 발현된 항체의 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 결합하는 능력을 규명하기 위해, 항체-함유 용액을 ELISA에 의해 시험하였다. 절차는 사이노몰구스 PCSK9가 이용된 것을 제외하고 인간 PCSK9 ELISA에 대해 기재된 바와 같았다.
결과: 도 47-60은 항-PCSK9 항체가 사이노몰구스 원숭이 PCSK9에 결합하고 이를 인식한다는 것을 입증한다.
실시예
2
효모 세포 발현
중쇄
및
경쇄에
대한
피치아
패스토리스
발현 벡터의 구축.
인간화된 경쇄 및 중쇄 단편을 상업적으로 합성하고 pGAP 발현 벡터 내로 서브클로닝하였다. pGAP 발현 벡터는 면역글로불린 사슬의 발현을 유도하는 GAP 프로모터 및 방출을 위한 분비 선도 서열을 이용한다. 또한, 이 벡터는 박테리아 복제 기점, 및 P. 패스토리스에서 항생제 G418에 대해 내성을 부여하는 1 복제수의 카나마이신 내성 유전자와 같은 공통 요소를 함유한다. G418은 그의 게놈 내로 통합된 원하는 발현 벡터를 함유하는 균주에 대한 선별 수단을 제공한다.
피치아
패스토리스의
반수체
met1
및
lys3
숙주 균주 내로의 발현 벡터의 형질전환
반수체 P. 패스토리스 균주의 형질전환 및 P. 패스토리스 성 주기의 조작을 위해 사용된 모든 방법들은 피치아 프로토콜(Methods in Molecular Biology Higgings, DR, 및 Cregg, JM, Eds. 1998. Humana Press, Totowa, NJ)에서 기재된 바와 같이 수행하였다. 형질전환에 앞서, 각 벡터를 GAP 프로모터 서열 내에서 선형화하여 P. 패스토리스 게놈의 GAP 프로모터 좌위 내로 벡터의 통합을 유도하였다. 반수체 균주를 전기천공을 이용하여 형질감염시키고 성공적인 형질전환체를 YPDS(효모 추출물, 소르비톨을 갖는 펩톤 덱스트로오스) G418 한천 플레이트 상에서 선별하였다. 서던 블롯 분석에 의해 반수체 균주에 대해 중쇄 및 경쇄 유전자의 복제수를 결정하였다. 그리고 나서, 반수체 균주를 교배하고, 아미노산 마커(즉, Lys 및 Met)의 부재 하에 성장하는 능력에 대해 선별하였다. 그리고 나서, 수득한 2배체 클론을 마지막으로 서던 블롯하여 중쇄 및 경쇄 유전자의 복제수를 확인하였다. 발현을 관찰하는 바이오층 간섭법 단백질-A 바이오센서(Octet, ForteBio)를 이용하여 관심있는 항체를 발현하는 클론을 선별하였다. 이중 좌위 균주를 그 내용 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 출원 제61/525,307호에 개시된 방법을 이용하여 생성하였다.
실시예
3
피치아
패스토리스에서의
Ab18
의 발현
전장 항체를 발현하기 위한 피치아 균주를 제조하였다. 모든 전장 항체 발현 균주를 위해, 반수체 균주를 생성한 후 교배시켰다. 하나의 반수체 균주는 전장 경쇄 서열을 발현하였고 또 하나의 반수체 균주는 전장 중쇄 서열을 발현하였다. 각 2배체 균주를 사용하여 연구 세포 은행을 생성하였고 이를 생물반응기에서 발현하는데 사용하였다.
먼저, 하기의 영양소(%w/v)로 구성된 배지를 이용하는 연구 세포 은행을 이용하여 접종물을 확장시켰다: 효모 추출물 3%, 무수 덱스트로오스 4%, YNB 1.34%, 바이오틴 0.004% 및 100 mM 칼륨 포스페이트. 발효조용 접종물을 생성하기 위해, 상기 세포 은행을 30℃ 및 300 RPM에서 진탕 배양기에서 대략 24시간 동안 확장시켰다. 그리고 나서, 10% 접종물을 1 L 멸균 성장 배지를 함유하는 Labfors 2.5L 작업 부피 용기에 첨가하였다. 상기 성장 배지는 하기의 영양소로 구성되었다: 칼륨 설페이트 18.2 g/L, 암모늄 포스페이트 일염기성 36.4 g/L, 칼륨 포스페이트 이염기성 12.8 g/L, 마그네슘 설페이트 헵타히드레이트 3.72 g/L, 나트륨 시트레이트 디히드레이트 10 g/L, 글리세롤 40 g/L, 효모 추출물 30 g/L, PTM1 미량의 금속 4.35 mL/L, 및 거품억제제 204 1.67 mL/L. PTM1 미량 금속 용액은 하기의 성분들로 구성되었다: 황산제이구리 펜타히드레이트 6 g/L, 나트륨 아이오다이드 0.08 g/L, 망간 설페이트 수화물 3 g/L, 나트륨 몰리브데이트 탈수화물 0.2 g/L, 붕산 0.02 g/L, 코발트 클로라이드 0.5 g/L, 아연 클로라이드 20 g/L, 황산 제 1철 헵타히드레이트 65 g/L, 바이오틴 0.2 g/L, 및 황산 5 mL/L.
생물반응기 공정 대조군 파라미터를 하기와 같이 설정하였다: 진탕 1,000 RPM, 기류 분당 1.35 표준 리터, 온도 28 ℃ 및 pH는 수산화암모늄을 이용하여 조절하였다. 산소 보충은 제공하지 않았다.
용해된 산소 스파이크에 의해 표시된 바와 같이 초기 글리세롤이 소비될 때까지, 발효 배양물을 대략 12 내지 16시간 동안 성장시켰다. 용존 산소 스파이크 후, 상기 배양물을 대략 3시간 동안 기아시켰다. 이 기아 기간 후, 에탄올 1 볼러스 부가를 반응기에 첨가하여 1% 에탄올(w/v)에 도달하게 하였다. 상기 발효 배양물을 15 내지 30분간 평형화하였다. 에탄올 볼러스 30분 후 공급물 부가를 시작하고, 40분간 1 mL/분의 일정한 속도로 설정한 다음, 에탄올 감지 프로브(Raven Biotech)를 이용하여 상기 작동의 나머지에 대해 에탄올 농도를 1%로 유지시키는 에탄올 센서에 의해 공급 펌프를 조절하였다. 상기 공급물은 하기의 성분들로 구성되었다: 효모 추출물 50 g/L, 덱스트로오스 500 g/L, 마그네슘 설페이트 헵타히드레이트 3 g/L, 및 PTM1 미량의 금속 12 mL/L. 총 발효 시간은 대략 90시간이었다.
실시예
4
항체의 인간화 방법
항체를 인간화하는 방법은 그의 개시내용이 그 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 미국 특허 제7935340호에 앞서 기술되었다. 일부 예에서, 활성을 유지하기 위해 추가적인 토끼 프레임워크 잔기가 필요한지 여부를 결정하는 것이 필요하다. 일부 예에서 인간화된 항체는 친화성 또는 활성의 손실을 최소화하기 위해 일부 매우 중요한 토끼 프레임워크 잔기가 유지될 필요가 있다. 이러한 경우에, 원하는 활성을 갖기 위해 인간 생식계열 서열 유래의 단일 또는 다중 프레임워크 아미노산을 다시 원래의 토끼 아미노산으로 바꾸는 것이 필요하다. 이러한 변화는 토끼 잔기가 친화성 및 활성을 유지하는데 필요한지 확인하기 위해 실험적으로 결정된다.
실시예
5
항-
PCSK9
항체의 결합 친화성
PCSK9에 대한 모노클로날 항체의 결합 친화성을 Octet QK(ForteBio) 상의 바이오-층 간섭법(BLI)을 이용하여 추정하였다. 바이오티닐화된 항체를 스트렙타비딘(SA) 바이오센서의 표면에 고정하였다. 제조자(ForteBio)로부터 구입한 1x Kinetics 완충제(NaCl 0.0138 M; KCl 0.00027 M; 0.1 mg/mL BSA, 0.002% 트윈 및 0.005% 나트륨 아자이드; pH 7.4, 25 ℃) 중에 준비된 인간 PCSK9의 희석 시리즈를 사용하여 항체를 조사하였다. 본 발명자들의 선택된 항원 농도(~0.25 μg/mL - 2 μg/mL)에서, 15분의 회합 시간 및 25분의 해리 시간을 Octet 분석 소프트웨어(v6.4, ForteBio)와 함께 사용하여, 1:1 랑그뮈어 결합 모델을 이용하여 데이타를 전세계적으로 핏팅하였다. 이 기술은 센서 재생을 허용하지 않으며 각 시험된 항체는 독특한 세트의 센서를 필요로 한다. 항체 친화성의 예가 표 1에 열거되어 있다.
항체 | KD (pM) | kon (1/Ms) | kdis (1/s) |
Ab1 | 7990 | 1.62E+05 | 1.30E-03 |
Ab2 | 4250 | 1.07E+05 | 4.53E-04 |
Ab3 | 5870 | 9.44E+04 | 5.54E-04 |
Ab4 | 6000 | 7.03E+04 | 4.22E-04 |
Ab5 | 3160 | 8.81E+04 | 2.78E-04 |
Ab6 | 531 | 7.53E+04 | 4.00E-05 |
Ab7 | 379 | 7.07E+04 | 2.68E-05 |
Ab8 | 637 | 7.70E+04 | 4.91E-05 |
Ab9 | 637 | 7.70E+04 | 4.91E-05 |
Ab10 | 676 | 7.53E+04 | 5.09E-05 |
Ab11 | 332 | 6.68E+04 | 2.22E-05 |
Ab12 | 120 | 1.00E+05 | 1.21E-05 |
Ab13 | 2230 | 1.59E+05 | 3.53E-04 |
Ab14 | 3700 | 9.79E+04 | 3.62E-04 |
Ab15 | 839 | 6.92E+04 | 5.80E-05 |
Ab16 | 1280 | 7.75E+04 | 9.92E-05 |
Ab17 | 609 | 1.03E+05 | 6.27E-05 |
Ab18 | 215 | 9.70E+04 | 2.09E-05 |
Ab19 | 1300 | 8.80E+04 | 1.16E-04 |
Ab20 | 600 | 1.08E+05 | 6.63E-05 |
SPR
(
Ab21
-24)을 이용한 항-
PCSK9
항체의 결합 친화성
PCSK9에 대한 모노클로날 항체의 결합 친화성을 ProteOn XPR36(Bio-Rad) 상의 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 이용하여 추정하였다. 바이오티닐화된 항체를 점진적으로 증가하는 밀도로 뉴트라비딘(NLC) 칩의 표면에 고정시켰다. Jackson ImmunoResearch사의 0.2mg/mL 소 혈청 알부민(BSA) 및 VWR사의 0.005% 나트륨 아자이드가 보충된, Thermo Scientific사로부터 구입한 1x HBS-EP+ 완충제(10mM Hepes; 150mM NaCl; 3mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트 20; pH 7.6, 25℃) 중에서 제조된 인간 PCSK9의 희석 시리즈를 사용하여 항체를 조사하였다. 본 발명자들의 선택된 항원 농(~0.08 μg/mL - 6.7 μg/mL)에서, 4분의 회합 시간 및 30-120분의 해리 시간을 그룹에 대해 ProteOn 매니저 소프트웨어(v3.1.0.6, Bio-Rad)와 함께 사용하여, 1:1 랑그뮈어 결합 모델을 이용하여 데이타를 핏팅하였다. 분석대상물 쿼리 사이에서 그리고 10mM 글리신 pH 2.0을 이용하여 항체를 표면에 결합시킨 후 표면을 재생하였다. 4개의 상이한 밀도에 대한 데이타를 평균하고, 각 항체에 대해 단일 KD 및 오차의 표준 전파를 계산하였다. 이들 값이 표 2에 보고되어 있다.
항체 | KD (M) | AVG hu kd (1/s) | AVG hu ka (1/Ms) |
Ab21 | 6.1E-10 | 3.54E-04 | 5.80E+05 |
Ab22 | 4.9E-10 | 2.59E-04 | 5.29E+05 |
Ab23 | 4.0E-11 | 3.71E-05 | 9.28E+05 |
Ab24 | 9.0E-11 | 6.16E-05 | 6.84E+05 |
실시예
6
PCSK9
항체는
LDLR
과의
PCSK9
상호작용을 억제한다
PCSK9의 LDLR과의 상호작용을 차단하는 항-PCSK9 항체의 패널의 능력을 ELISA 기반 면역검정으로 평가하였다. 요약하면, LDLR(0.5μg/mL)을 4℃에서 밤새 4HBX 플레이트 상에 코팅하였다. 상기 플레이트를 PBS, pH 7.4 중의 0.5% 생선 피부 젤라틴으로 실온에서 1시간 동안 차단한 다음 PBS로 3회 세정하였다. 바이오티닐화된 PCSK9(0.3 μg/ml)를 실온에서 1시간 동안 항-PCSK9 항체의 연속 희석물의 존재하에 배양한 다음 LDLR 코팅된 플레이트에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 배양한 후, 플레이트를 세정하였다(PBS 중에서 3회). 현상을 위해, 스트렙타비딘-HRP를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 배양하고, 세정하고(PBS 중에서 3회), TMB 기질을 실온에서 3분간 첨가하였다. 0.5M HCl로 상기 반응을 켄칭하고 450 nm에서 흡광도를 판독하였다.
결과: 도 61-84는 항-PCSK9 항체가 LDLR과의 PCSK9 상호작용을 차단한다는 것을 입증한다.
실시예
7
항-
PCSK9
항체는 비-인간 영장류에서 혈장
LDL
-C 수준을 낮춘다
3-4년령 및 3-4 kg 체중의 순수한 수컷 사이노몰구스 원숭이에서 약동학적(PD) 및 약력학적(PK) 연구를 수행하였다.
3마리의 사이노몰구스 원숭이에게 비히클(15mM 히스티딘, 250mM 소르비톨, pH 5.5)을 주사하고 3마리의 원숭이에게 Ab18(5mg/kg)을 주사하였다. 주사를 1일에 투여된 IV 볼러스에 의해 수행하였다.
정맥천자에 의해 혈액을 수집하고 임상적 화학을 위해 혈청으로 가공하였다. 혈액을 K3EDTA 튜브 내에 수집하고 PK 분석을 위해 혈장으로 가공하였다. 주사전, 주사 24시간 후 및 그리고 나서 30일까지 3일마다 단식한 동물로부터 임상적 화학을 위해 혈액 샘플을 수집하였다. PK 분석을 위한 혈액 샘플을 주사전, 5분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간, 48시간, 96시간 및 그 다음 30일까지 3일마다 수집하였다. 모든 샘플을 -70℃ 이하에 보관하였다.
임상적 화학 분석은 하기의 파라미터를 포함하였다: 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소, 알칼리성 포스파타제, 감마-글루타밀전이효소, 락테이트 탈수소효소, 총 빌리루빈, 우레아 질소, C-반응성 단백질, 칼슘, 크레아티닌, 인, 저밀도 지질단백질, 고밀도 지질단백질, 총 단백질, 알부민, 글로불린, 알부민/글로불린 비, 글루코오스, 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 및 바이카보네이트.
결과: 도 85는 Ab18이 14일 기간 동안 LDL-C 수준을 60%까지 감소시켰다는 것을 입증한다. LDL-C 수준은 차후에 투여전 수준으로 빠르게 되돌아온다. 30일에 Ab18의 주사 후, LDL-C 수준의 유사한 감소가 관찰되었다. 콜레스테롤에서 20-25% 감소가 관찰된 반면(도 86), HDL-C 수준은 계속 변하지 않았다(도 87).
총 항체 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 요약하면, 다중-어레이 96 웰 고 결합 플레이트를 4℃에서 밤새 0.5μg/mL 염소 항-인간 IgG(monkey adsorbed)로 코팅하였다. 상기 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS + 0.5% 트윈 20 중의 3% 차단제 A로 차단하였다. 플레이트를 세정하고(PBS + 0.5% Tween에서 3회), 샘플을 첨가한 다음, 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 3회 세정하고, 바이오티닐화된 인간 중쇄/경쇄 항체 및 설포-TAG스트렙타비딘을 이용하여 Ab18을 검출하였다. 플레이트를 3회 세정하고 MSD를 이용하여 판독하였다.
결과: 표 3은 총 항체 수준의 3마리의 사이노몰구스 원숭이에서의 결과를 보여준다.
동물 | Cmax (mg/ml) | Tmax (h) | T1 /2 (h) |
1 | 72.93 | 4 | 71.35 |
2 | 110.35 | 4 | 63.46 |
3 | 98.99 | 4 | 69.01 |
실시예
8
항-
PCSK9
항체는 비-인간 영장류에서 혈장
LDL
-C 수준을 낮춘다
약동학적(PD) 연구를 3-4년령 및 3-4.5 kg 체중의 수컷 사이노몰구스 원숭이에서 수행하였다.
3마리의 사이노몰구스 원숭이에게 Ab11(5mg/kg)을 주사하였다. 주사는 1일에 투여된 IV 볼러스에 의해 수행하였다.
혈액을 정맥천자에 의해 수집하고 임상적 화학을 위해 혈청으로 가공하였다. 혈액을 K3EDTA 튜브 내에 수집하고 PK 분석을 위해 혈장으로 가공하였다. 주사전, 주사 24시간 후 및 그 다음 3일마다 단식한 동물로부터 임상적 화학을 위해 혈액 샘플을 수집하였다. PK 분석을 위한 혈액 샘플을 주사전, 5분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간, 48시간, 96시간, 168시간, 240시간, 312시간, 384시간, 528시간, 및 696시간에 수집하였다. 모든 샘플은 -70℃ 이하에서 보관하였다.
임상적 화학 분석은 하기의 파라미터를 포함하였다: 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소, 알칼리성 포스파타제, 감마-글루타밀전이효소, 락테이트 탈수소효소, 총 빌리루빈, 우레아 질소, C-반응성 단백질, 칼슘, 크레아티닌, 인, 저밀도 지질단백질, 고밀도 지질단백질, 총 단백질, 알부민, 글로불린, 알부민/글로불린 비, 글루코오스, 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 및 바이카보네이트.
결과: 도 88은 Ab11이 16일 기간 동안 LDL-C 수준을 60%까지 감소시켰음을 입증한다. LDL-C 수준은 이후에 투여전 수준으로 되돌아왔다. 콜레스테롤에서 25-30% 감소가 관찰된 반면(도 89), HDL-C 수준은 계속 변하지 않았다(도 90).
실시예
9
항-
PCSK9
항체는 비-인간 영장류에서 혈장
LDL
-C 수준을 낮춘다
약동학적(PD) 연구를 3-5년령 및 2.8-4.0 kg 체중의 수컷 사이노몰구스 원숭이에서 수행하였다.
3마리의 사이노몰구스 원숭이에게 Ab19(5mg/kg)를 주사하였다. 주사는 1일에 투여된 IV 볼러스에 의해 수행하였다.
혈액을 정맥천자에 의해 수집하고 임상적 화학을 위해 혈청으로 가공하였다. 혈액을 K3EDTA 튜브 내에 수집하고 PK 분석을 위해 혈장으로 가공하였다. 주사전, 주사 24시간, 48시간, 및 96시간 후 및 그 다음 34일까지 3일마다, 단식한 동물로부터 임상적 화학을 위해 혈액 샘플을 수집하였다. PK 분석을 위한 혈액 샘플을 주사전, 5분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 96시간, 및 그 다음 34일까지 3일마다 수집하였다. 모든 샘플은 -70℃ 이하에서 보관하였다.
임상적 화학 분석은 하기의 파라미터를 포함하였다: 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소, 알칼리성 포스파타제, 감마-글루타밀전이효소, 락테이트 탈수소효소, 총 빌리루빈, 우레아 질소, C-반응성 단백질, 칼슘, 크레아티닌, 인, 저밀도 지질단백질, 고밀도 지질단백질, 총 단백질, 알부민, 글로불린, 알부민/글로불린 비, 글루코오스, 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 및 바이카보네이트.
결과: 도 91은 Ab19가 19일 기간 동안 LDL-C 수준을 65%까지 감소시켰음을 입증한다. LDL-C 수준은 이후에 투여전 수준으로 되돌아왔다.
실시예
10
항-
PCSK9
항체는 비-인간 영장류에서 혈장
LDL
-C 수준을 낮춘다
약동학적(PD) 연구를 3-5년령 및 2.8-4.0 kg 체중의 수컷 사이노몰구스 원숭이에서 수행하였다.
3마리의 사이노몰구스 원숭이에게 Ab20(5mg/kg)을 주사하였다. 주사는 1일에 투여된 IV 볼러스에 의해 수행되었다.
혈액을 정맥천자에 의해 수집하고 임상적 화학을 위해 혈청으로 가공하였다. 혈액을 K3EDTA 튜브 내에 수집하고 PK 분석을 위해 혈장으로 가공하였다. 주사전, 주사 24시간, 48시간, 및 96시간 후 및 그 다음 34일까지 3일마다, 단식한 동물로부터 임상적 화학을 위해 혈액 샘플을 수집하였다. PK 분석을 위한 혈액 샘플을 주사전, 5분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 96시간, 및 그 다음 34일까지 3일마다 수집하였다. 모든 샘플은 -70℃ 이하에서 보관하였다.
임상적 화학 분석은 하기의 파라미터를 포함하였다: 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소, 알칼리성 포스파타제, 감마-글루타밀전이효소, 락테이트 탈수소효소, 총 빌리루빈, 우레아 질소, C-반응성 단백질, 칼슘, 크레아티닌, 인, 저밀도 지질단백질, 고밀도 지질단백질, 총 단백질, 알부민, 글로불린, 알부민/글로불린 비, 글루코오스, 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 및 바이카보네이트.
결과: 도 92는 Ab20이 22일 기간 동안 LDL-C 수준을 70%까지 감소시켰음을 입증한다. LDL-C 수준은 이후에 투여전 수준으로 되돌아왔다.
실시예
11
항-
PCSK9
항체는 비-인간 영장류에서 혈장
LDL
-C 수준을 낮춘다
약동학적(PD) 연구를 3-5년령 및 2.8-4.0 kg 체중의 수컷 사이노몰구스 원숭이에서 수행하였다.
3마리의 사이노몰구스 원숭이에게 Ab22 및 Ab24(5mg/kg)를 주사하였다. 주사는 1일에 투여된 IV 볼러스에 의해 수행되었다.
혈액을 정맥천자에 의해 수집하고 임상적 화학을 위해 혈청으로 가공하였다. 혈액을 K3EDTA 튜브 내에 수집하고 PK 분석을 위해 혈장으로 가공하였다. 주사전, 주사 24시간, 48시간, 및 96시간 후 및 그 다음 46일(Ab22) 또는 37일(Ab24)까지 3일마다, 단식한 동물로부터 임상적 화학을 위해 혈액 샘플을 수집하였다. PK 분석을 위한 혈액 샘플을 주사전, 5분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 96시간, 및 그 다음 46일(Ab22) 또는 37일(Ab24)까지 3일마다 수집하였다. 모든 샘플은 -70℃ 이하에서 보관하였다.
임상적 화학 분석은 하기의 파라미터를 포함하였다: 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소, 알칼리성 포스파타제, 감마-글루타밀전이효소, 락테이트 탈수소효소, 총 빌리루빈, 우레아 질소, C-반응성 단백질, 칼슘, 크레아티닌, 인, 저밀도 지질단백질, 고밀도 지질단백질, 총 단백질, 알부민, 글로불린, 알부민/글로불린 비, 글루코오스, 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 및 바이카보네이트.
결과: 도 93은 Ab22가 22일 기간 동안 LDL-C 수준을 60%까지 감소시켰음을 입증한다. LDL-C 수준은 이후에 투여전 수준으로 되돌아갔다. 도 94는 Ab24가 22일 동안 LDL-C 수준을 70%까지 감소시켰음을 입증한다. LDL-C 수준은 이후에 투여전 수준으로 되돌아갔다.
<110> Alder Biopharmaceuticals Inc.
<120> ANTI-PCSK9 COMPOSITIONS AND USE THEREOF
<130> 67858.791000
<150> US 61/644,065
<151> 2012-05-08
<150> US 61/654,481
<151> 2012-06-01
<160> 963
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 1
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp
20 25 30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Glu Ile
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ser Ala Phe Ser Ser Gly Leu Glu Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 2
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp
20 25 30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Glu Ile
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ser Ala Phe Ser Ser Gly Leu Glu Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 3
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 4
Ser Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 5
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
<210> 6
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 6
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 7
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 7
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Glu Ile
1 5 10 15
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 8
Asp Ser Ala Phe Ser Ser Gly Leu Glu Phe Asn Ile
1 5 10
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 9
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 10
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 10
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 11
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 11
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tactggatga cttgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatacat cggaatcatt agtagtagtg gtagcacata ctacgcgacc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctggaaatc 240
accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagactc tgcttttagt 300
tctggtttgg aattcaacat ctggggcccg ggcaccctcg tcaccgtctc gagcgcctcc 360
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gcccaaatct 660
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 720
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 840
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta cgccagcacg 900
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320
agcctctccc tgtctccggg taaa 1344
<210> 12
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 12
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tactggatga cttgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatacat cggaatcatt agtagtagtg gtagcacata ctacgcgacc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctggaaatc 240
accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagactc tgcttttagt 300
tctggtttgg aattcaacat ctggggcccg ggcaccctcg tcaccgtctc gagc 354
<210> 13
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 13
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagt 87
<210> 14
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 14
agctactgga tgact 15
<210> 15
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 15
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatacatcg ga 42
<210> 16
<211> 47
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 16
atcattagta gtagtggtag cacatactac gcgacctggg cgaaagg 47
<210> 17
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 17
cgattcacca tctccaaaac ctcgtcgacc acggtggatc tggaaatcac cagtccgaca 60
accgaggaca cggccaccta tttctgtgcc aga 93
<210> 18
<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 18
gactctgctt ttagttctgg tttggaattc aacatc 36
<210> 19
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 19
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 20
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 21
Ala Tyr Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Asn
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Ser Ser
85 90 95
Asp Ile Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 22
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 22
Ala Tyr Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Asn
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Ser Ser
85 90 95
Asp Ile Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 23
Ala Tyr Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
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<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 24
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Asn Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 25
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 26
Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 27
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 28
Gln Gln Gly Gln Ser Ser Ser Asp Ile Asp Asn Thr
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 29
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 30
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 31
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 31
gcctatgatc tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagtgtttat agtaactggt tatcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctat gatgcatccg atctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcag caggggcaga gtagtagtga tattgataat 300
actttcggcg gagggaccga ggtggtggtc aaacgtacgg tagcggcccc atctgtcttc 360
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aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 32
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 32
gcctatgatc tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagtgtttat agtaactggt tatcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctat gatgcatccg atctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcag caggggcaga gtagtagtga tattgataat 300
actttcggcg gagggaccga ggtggtggtc aaa 333
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 33
gcctatgatc tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
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<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 34
caggccagtc agagtgttta tagtaactgg ttatcc 36
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 35
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 36
gatgcatccg atctggcatc t 21
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 37
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 60
ggcgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgt 96
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<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 38
cagcaggggc agagtagtag tgatattgat aatact 36
<210> 39
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 39
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 40
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 40
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 41
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 41
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Asp Ala Ile Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Ser
85 90 95
Ile Leu Gly Tyr Ser Ile Ala Thr Gly Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 42
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Asp Ala Ile Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Ser
85 90 95
Ile Leu Gly Tyr Ser Ile Ala Thr Gly Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 43
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 44
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 45
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 46
Ile Ile Asp Ala Ile Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 47
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 47
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Thr Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 48
Ala Ser Ile Leu Gly Tyr Ser Ile Ala Thr Gly Phe Asn Ile
1 5 10
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 49
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 50
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 50
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 51
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 51
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tatgcaatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt gatgctattg ataacacata ctacgcgagc 180
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agtattgcta cgggctttaa catctggggc ccagggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
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ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
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<210> 52
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 52
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tatgcaatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt gatgctattg ataacacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatgacc 240
agtctgacaa ccggggacac ggccacctat ttctgtgcca gagcctctat tcttggttat 300
agtattgcta cgggctttaa catctggggc ccagggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 357
<210> 53
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 53
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagt 87
<210> 54
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 54
agctatgcaa tgagc 15
<210> 55
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 55
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatggatcg ga 42
<210> 56
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 56
atcattgatg ctattgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 57
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 57
cgattcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatgaccag tctgacaacc 60
ggggacacgg ccacctattt ctgtgccaga 90
<210> 58
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 58
gcctctattc ttggttatag tattgctacg ggctttaaca tc 42
<210> 59
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 59
tggggcccag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 60
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 60
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 61
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 61
Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Val Ser Asp
85 90 95
Val Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 62
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 62
Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Val Ser Asp
85 90 95
Val Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 63
Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 64
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His Leu Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 65
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 66
Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 67
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 67
Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 68
Gln Gln Gly Tyr Gly Val Ser Asp Val Asp Asn Gly
1 5 10
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 69
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 70
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 70
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 71
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 71
gcctatgata tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agccacttag cctggtatca gcagaaatca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctacagg gcatccactc tggaatctgg ggtctcatca 180
aggttcaaag gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatggtg ttagtgatgt tgataatggt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 72
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 72
gcctatgata tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agccacttag cctggtatca gcagaaatca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctacagg gcatccactc tggaatctgg ggtctcatca 180
aggttcaaag gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatggtg ttagtgatgt tgataatggt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 330
<210> 73
<211> 69
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 73
gcctatgata tgacccagac tccagcctct gtggaggtag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
<210> 74
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 74
caggccagtc agagcattag tagccactta gcc 33
<210> 75
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 75
tggtatcagc agaaatcagg gcagcctccc aagctcctga tctac 45
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 76
agggcatcca ctctggaatc t 21
<210> 77
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 77
ggggtctcat caaggttcaa aggcagtgga tctgggacag agttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacttac tactgt 96
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<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 78
caacagggtt atggtgttag tgatgttgat aatggt 36
<210> 79
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 79
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 80
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 80
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 81
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 81
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly
85 90 95
Ala Tyr Ala Thr Leu Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 82
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 82
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly
85 90 95
Ala Tyr Ala Thr Leu Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 83
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 83
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 84
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 84
Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 85
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 86
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 86
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 87
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 87
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 88
Gly Gly Ala Tyr Ala Thr Leu Asn Leu
1 5
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 89
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 90
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 90
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 91
<211> 1332
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 91
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattctc cctcagtagc tactacatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt tatcctagtg gtagcacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacag tcgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaggaggtgc ttatgctact 300
cttaacttgt ggggcccggg caccctcgtc accgtctcga gcgcctccac caagggccca 360
tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc 420
tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 480
accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 540
agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat 600
cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact 660
cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 720
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 780
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtacg ccagcacgta ccgtgtggtc 900
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 960
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200
ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1260
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1320
tctccgggta aa 1332
<210> 92
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 92
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattctc cctcagtagc tactacatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt tatcctagtg gtagcacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacag tcgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaggaggtgc ttatgctact 300
cttaacttgt ggggcccggg caccctcgtc accgtctcga gc 342
<210> 93
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 93
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattctc cctcagt 87
<210> 94
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 94
agctactaca tgagc 15
<210> 95
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 95
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatggatcg ga 42
<210> 96
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 96
atcatttatc ctagtggtag cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 97
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 97
cgattcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatcaccag tccgacagtc 60
gaggacacgg ccacctattt ctgtgccaga 90
<210> 98
<211> 27
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 98
ggaggtgctt atgctactct taacttg 27
<210> 99
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 99
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 100
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 100
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 101
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 101
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Asn
20 25 30
Leu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp
85 90 95
Ala Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 102
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 102
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Asn
20 25 30
Leu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp
85 90 95
Ala Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 103
<211> 22
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 103
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 104
<211> 13
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 104
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Asn Leu Leu Ser
1 5 10
<210> 105
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 105
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 106
Asp Ala Ser Lys Leu Thr Ser
1 5
<210> 107
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 107
Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 108
Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala Asp Asn Gly
1 5 10
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 109
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 110
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 111
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 111
gccgtgctga cccagacacc atcacccgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
agttgccagt ccagtcagag tgtttatcat aacaacctct tatcctggta tcagcagaaa 120
ccaggtcagc ctcccaagct cttgatctac gatgcatcca aactgacatc tggggtctca 180
tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccataag cggcgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcggttatg atgatgatgc tgataatggt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 112
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 112
gccgtgctga cccagacacc atcacccgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
agttgccagt ccagtcagag tgtttatcat aacaacctct tatcctggta tcagcagaaa 120
ccaggtcagc ctcccaagct cttgatctac gatgcatcca aactgacatc tggggtctca 180
tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccataag cggcgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcggttatg atgatgatgc tgataatggt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 330
<210> 113
<211> 66
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 113
gccgtgctga cccagacacc atcacccgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
agttgc 66
<210> 114
<211> 39
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 114
cagtccagtc agagtgttta tcataacaac ctcttatcc 39
<210> 115
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 115
tggtatcagc agaaaccagg tcagcctccc aagctcttga tctac 45
<210> 116
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 116
gatgcatcca aactgacatc t 21
<210> 117
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 117
ggggtctcat cgcggttcag cggcagtgga tctgggacac agttcactct caccataagc 60
ggcgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgt 96
<210> 118
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 118
ctaggcggtt atgatgatga tgctgataat ggt 33
<210> 119
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 119
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 120
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 120
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 121
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 121
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Gly Gly Ile Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Trp Ser
85 90 95
Gly Thr Ser Gly Tyr Asn Thr Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 122
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 122
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Gly Gly Ile Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Trp Ser
85 90 95
Gly Thr Ser Gly Tyr Asn Thr Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 123
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 123
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser
20 25
<210> 124
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 124
Ser Tyr Ala Met Ile
1 5
<210> 125
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 125
Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
<210> 126
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 126
Tyr Ile Gly Gly Ile Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 127
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 127
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg
20 25 30
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 128
Trp Ser Gly Thr Ser Gly Tyr Asn Thr Ile
1 5 10
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 129
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 130
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 130
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 131
<211> 1335
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 131
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagtagc tatgcaatga tctgggtccg tcaggctcca 120
gaaaaggggc tggaatacat cggatatatt ggtggtattg atagcacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatgacc 240
agtccgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtggca gatggtccgg tactagtggt 300
tataatacca tctggggccc gggcaccctc gtcaccgtct cgagcgcctc caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acgccagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa 1335
<210> 132
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 132
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagtagc tatgcaatga tctgggtccg tcaggctcca 120
gaaaaggggc tggaatacat cggatatatt ggtggtattg atagcacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatgacc 240
agtccgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtggca gatggtccgg tactagtggt 300
tataatacca tctggggccc gggcaccctc gtcaccgtct cgagc 345
<210> 133
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 133
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagt 87
<210> 134
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 134
agctatgcaa tgatc 15
<210> 135
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 135
tgggtccgtc aggctccaga aaaggggctg gaatacatcg ga 42
<210> 136
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 136
tatattggtg gtattgatag cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 137
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 137
cgattcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatgaccag tccgacaacc 60
gaggacacgg ccacctattt ctgtggcaga 90
<210> 138
<211> 30
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 138
tggtccggta ctagtggtta taataccatc 30
<210> 139
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 139
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 140
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 140
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 141
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 141
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Gly Gly Gly Asp Ser
85 90 95
Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 142
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 142
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Gly Gly Gly Asp Ser
85 90 95
Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 143
<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 143
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 144
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 145
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 146
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 146
Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 147
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 147
Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 148
Gln Cys Thr Gly Gly Gly Asp Ser Gly Asn Thr
1 5 10
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 149
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 150
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 151
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 151
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcatttat agcaatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatggt gcatccaatc tggcatctgg ggtctcatcg 180
cggttcaaag gcagtcgatc tgggacagag tacactctca ccatcagtga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacctacta ctgtcagtgc actggtggtg gtgatagcgg taatactttc 300
ggcggaggga ccgaggtggt ggtcaaacgt acggtagcgg ccccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 648
<210> 152
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 152
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcatttat agcaatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatggt gcatccaatc tggcatctgg ggtctcatcg 180
cggttcaaag gcagtcgatc tgggacagag tacactctca ccatcagtga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacctacta ctgtcagtgc actggtggtg gtgatagcgg taatactttc 300
ggcggaggga ccgaggtggt ggtcaaa 327
<210> 153
<211> 69
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 153
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
<210> 154
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 154
caggccagtc agagcattta tagcaattta gcc 33
<210> 155
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 155
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
<210> 156
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 156
ggtgcatcca atctggcatc t 21
<210> 157
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 157
ggggtctcat cgcggttcaa aggcagtcga tctgggacag agtacactct caccatcagt 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacctac tactgt 96
<210> 158
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 158
cagtgcactg gtggtggtga tagcggtaat act 33
<210> 159
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 159
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 160
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 160
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 161
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 161
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ile
85 90 95
Tyr Trp Tyr Trp Arg Val Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 162
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 162
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ile
85 90 95
Tyr Trp Tyr Trp Arg Val Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 163
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 163
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 164
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 164
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 165
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 165
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 166
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 166
Ile Ile Ser Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 167
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 167
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 168
Gly Ile Tyr Trp Tyr Trp Arg Val Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 169
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 169
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 170
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 170
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 171
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 171
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tatgcaatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt agtaatagtg gtaccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaggaatata ttggtactgg 300
agagttttta acttgtgggg cccggggacc ctcgtcaccg tctcgagcgc ctccaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 172
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 172
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagc tatgcaatga gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt agtaatagtg gtaccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaggaatata ttggtactgg 300
agagttttta acttgtgggg cccggggacc ctcgtcaccg tctcgagc 348
<210> 173
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 173
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagt 87
<210> 174
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 174
agctatgcaa tgagc 15
<210> 175
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 175
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatggatcg ga 42
<210> 176
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 176
atcattagta atagtggtac cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 177
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 177
cgattcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatcaccag tccgacaacc 60
gaggacacgg ccacctattt ctgtgccaga 90
<210> 178
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 178
ggaatatatt ggtactggag agtttttaac ttg 33
<210> 179
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 179
tggggcccgg ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 180
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 180
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 181
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 181
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Leu
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala
85 90 95
Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 182
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 182
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Leu
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala
85 90 95
Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 183
<211> 22
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 183
Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys
20
<210> 184
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 184
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Leu Leu Ser
1 5 10
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 185
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 186
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 186
Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 187
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 187
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 188
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 188
Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala Asp Asn Ala
1 5 10
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 189
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 190
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 190
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 191
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 191
gccgtgctga cccagacacc atcgcctgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttataac aacctcttat cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgat gcatccaatc tggcatctgg ggtcccagat 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacacag ttcactctca ccatcagcgg cgtgcagtgt 240
gacgatgctg ccacttacta ctgtctaggc ggttatgatg atgatgctga taatgctttc 300
ggcggaggga ccgaggtggt ggtcaaacgt acggtagcgg ccccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 648
<210> 192
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 192
gccgtgctga cccagacacc atcgcctgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttataac aacctcttat cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgat gcatccaatc tggcatctgg ggtcccagat 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacacag ttcactctca ccatcagcgg cgtgcagtgt 240
gacgatgctg ccacttacta ctgtctaggc ggttatgatg atgatgctga taatgctttc 300
ggcggaggga ccgaggtggt ggtcaaa 327
<210> 193
<211> 66
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 193
gccgtgctga cccagacacc atcgcctgtg tctgcagctg tgggaggcac agtcaccatc 60
aattgc 66
<210> 194
<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 194
caggccagtc agagtgttta taacaacctc ttatcc 36
<210> 195
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 195
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
<210> 196
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 196
gatgcatcca atctggcatc t 21
<210> 197
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 197
ggggtcccag ataggttcag cggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 60
ggcgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgt 96
<210> 198
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 198
ctaggcggtt atgatgatga tgctgataat gct 33
<210> 199
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 199
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 200
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 200
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 201
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 201
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 202
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 202
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 203
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 203
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 204
Ser Asn Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 205
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 205
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 206
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 206
Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 207
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 207
Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Leu
1 5 10 15
Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 208
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 208
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 209
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 209
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 210
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 210
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 211
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 211
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt agcaactact ggatatgctg ggtccgccag 120
gctccaggga agggactgga gtggatcgga tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac 180
gcgagctggg cgaaaggccg actcaccatc tccatgacct cgtcgaccac ggtgactctg 240
caactgaaca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tttgtgcgag cgatattaat 300
gatgggtggc ttggccaatt caacttgtgg ggcccaggca ccctcgtcac cgtctcgagc 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660
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gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
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gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
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cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 212
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 212
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt agcaactact ggatatgctg ggtccgccag 120
gctccaggga agggactgga gtggatcgga tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac 180
gcgagctggg cgaaaggccg actcaccatc tccatgacct cgtcgaccac ggtgactctg 240
caactgaaca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tttgtgcgag cgatattaat 300
gatgggtggc ttggccaatt caacttgtgg ggcccaggca ccctcgtcac cgtctcgagc 360
360
<210> 213
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 213
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt 90
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<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 214
agcaactact ggatatgc 18
<210> 215
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 215
tgggtccgcc aggctccagg gaagggactg gagtggatcg ga 42
<210> 216
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 216
tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 217
<211> 93
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 217
cgactcacca tctccatgac ctcgtcgacc acggtgactc tgcaactgaa cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttttgtgcg agc 93
<210> 218
<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 218
gatattaatg atgggtggct tggccaattc aacttg 36
<210> 219
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 219
tggggcccag gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 220
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 220
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 221
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 221
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 222
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 222
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
<210> 223
<211> 24
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 223
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 224
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala Tyr Leu Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 225
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 226
Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 227
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 228
Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
<210> 229
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 229
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 230
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 231
<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 231
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tctgtggagg tagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgcgtact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctac agggcataca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaac gtacggtagc ggccccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
660
<210> 232
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 232
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tctgtggagg tagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgcgtact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctac agggcataca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339
<210> 233
<211> 72
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 233
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tctgtggagg tagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gc 72
<210> 234
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 234
caggccagtc agagcattag tgcgtactta gcc 33
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<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 235
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctac 45
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<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 236
agggcataca ctctggcatc t 21
<210> 237
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 237
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacttac tactgt 96
<210> 238
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 238
caaagctatt attccgttac tactaatact tatggaaata ct 42
<210> 239
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 239
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 240
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 240
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 241
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 241
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 242
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 242
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 243
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 243
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 244
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 244
Ser Asn Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 245
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 245
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 246
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 246
Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 247
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 247
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 248
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 248
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 249
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 249
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 250
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 250
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 251
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 251
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tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactact ggatatgctg ggtccgtcag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac 180
gctagctctg ctaaaggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
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tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 252
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 252
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactact ggatatgctg ggtccgtcag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac 180
gctagctctg ctaaaggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agc 363
<210> 253
<211> 90
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 253
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt 90
<210> 254
<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 254
agcaactact ggatatgc 18
<210> 255
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 255
tgggtccgtc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ga 42
<210> 256
<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 256
tgcattcgtg atggtggtgg cacttactac gctagctctg ctaaaggc 48
<210> 257
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 257
cgattcacca tctccagaga caattccaag aacaccctgt atcttcaaat gaacagcctg 60
agagctgagg acactgctgt gtattactgt gctagc 96
<210> 258
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 258
gatatcaatg atgggtggct tggccaattc aacttg 36
<210> 259
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 259
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 260
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 260
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 261
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 261
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 262
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 262
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 263
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 263
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 264
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 264
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 265
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 265
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 266
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 266
Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 267
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 267
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 268
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 268
Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
<210> 269
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 269
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 270
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 270
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 271
<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 271
gctgacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgcttact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag tccctaagct cctgatctat agggcataca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg aaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
660
<210> 272
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 272
gctgacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgcttact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag tccctaagct cctgatctat agggcataca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg aaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 273
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 273
gctgacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gc 72
<210> 274
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 274
caggccagtc agagcattag tgcttactta gcc 33
<210> 275
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 275
tggtatcagc agaaaccagg gaaagtccct aagctcctga tctat 45
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 276
agggcataca ctctggcatc t 21
<210> 277
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 277
ggggtcccat ctcgtttcag tggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 60
agcctgcagc ctgaagatgt tgcaacttat tactgt 96
<210> 278
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 278
caaagctact attccgttac tactaatact tatggaaata ct 42
<210> 279
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 279
ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
<210> 280
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 280
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 281
<211> 456
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 281
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Ser Thr Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Pro Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Arg Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Tyr Tyr Ser Tyr Ala Tyr Gly Ala Tyr Val Tyr Ala
100 105 110
Ser Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 282
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 282
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Ser Thr Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Pro Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Arg Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Tyr Tyr Ser Tyr Ala Tyr Gly Ala Tyr Val Tyr Ala
100 105 110
Ser Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 283
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 283
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 284
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 284
Ser Asp Tyr Tyr Met Cys
1 5
<210> 285
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 285
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 286
<211> 17
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 286
Cys Ile Ser Thr Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 287
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 287
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Pro Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Arg Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 288
<211> 17
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 288
Asp Arg Tyr Tyr Ser Tyr Ala Tyr Gly Ala Tyr Val Tyr Ala Ser Asp
1 5 10 15
Leu
<210> 289
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 289
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 290
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 290
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 291
<211> 1368
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 291
caggagcagc tggtggagtc cgggggaggc ctggtccagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cttctggatt ctccttcact agcgactatt acatgtgctg ggtccgccag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcatttcta ctggtgatgg cagcacatac 180
tacgcgagct gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaac cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccaggctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatcga 300
tactatagtt atgcttatgg tgcttatgtt tatgctagcg acttgtgggg cccaggcacc 360
ctcgtcaccg tctcgagcgc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 420
tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 480
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 540
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc 600
agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 660
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cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 780
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 840
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 900
cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 960
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ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1200
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc 1260
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1320
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa 1368
<210> 292
<211> 378
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 292
caggagcagc tggtggagtc cgggggaggc ctggtccagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cttctggatt ctccttcact agcgactatt acatgtgctg ggtccgccag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcatttcta ctggtgatgg cagcacatac 180
tacgcgagct gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaac cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccaggctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatcga 300
tactatagtt atgcttatgg tgcttatgtt tatgctagcg acttgtgggg cccaggcacc 360
ctcgtcaccg tctcgagc 378
<210> 293
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 293
caggagcagc tggtggagtc cgggggaggc ctggtccagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cttctggatt ctccttcact 90
<210> 294
<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 294
agcgactatt acatgtgc 18
<210> 295
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 295
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ga 42
<210> 296
<211> 51
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 296
tgcatttcta ctggtgatgg cagcacatac tacgcgagct gggcgaaagg c 51
<210> 297
<211> 93
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 297
cgattcacca tctccaaacc ctcgtcgacc acggtgactc tgcaaatgac caggctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttctgtgcg aga 93
<210> 298
<211> 51
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 298
gatcgatact atagttatgc ttatggtgct tatgtttatg ctagcgactt g 51
<210> 299
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 299
tggggcccag gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 300
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 300
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
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tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 301
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 301
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Arg Asn
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Gly Ile Ser
85 90 95
Ser Arg Ser Tyr Val Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 302
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 302
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Arg Asn
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Gly Ile Ser
85 90 95
Ser Arg Ser Tyr Val Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
<210> 303
<211> 24
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 303
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys
20
<210> 304
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 304
Gln Ala Ser Glu Ser Ile Arg Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 305
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 306
Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 307
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 308
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 308
Gln Ser Asn Tyr Gly Ile Ser Ser Arg Ser Tyr Val Asn Gly
1 5 10
<210> 309
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 309
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 310
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 310
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 311
<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 311
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtgtctg aacctgtggg aggcacagtc 60
accatcaatt gccaggccag tgaaagcatt aggaactact tatcctggta tcaacagaaa 120
ccagggcagc gtcccaagct cctgatctat ggtgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agcaattatg gtattagtag tcgtagttat 300
gttaatggtt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaac gtacggtagc ggccccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
660
<210> 312
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 312
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtgtctg aacctgtggg aggcacagtc 60
accatcaatt gccaggccag tgaaagcatt aggaactact tatcctggta tcaacagaaa 120
ccagggcagc gtcccaagct cctgatctat ggtgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agcaattatg gtattagtag tcgtagttat 300
gttaatggtt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339
<210> 313
<211> 72
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 313
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtgtctg aacctgtggg aggcacagtc 60
accatcaatt gc 72
<210> 314
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 314
caggccagtg aaagcattag gaactactta tcc 33
<210> 315
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 315
tggtatcaac agaaaccagg gcagcgtccc aagctcctga tctat 45
<210> 316
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 316
ggtgcatcca ctctggcatc t 21
<210> 317
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 317
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacttac tactgt 96
<210> 318
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 318
caaagcaatt atggtattag tagtcgtagt tatgttaatg gt 42
<210> 319
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 319
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 320
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 320
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 321
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 321
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Leu
85 90 95
Asp Ala Asn Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Cys Phe Asn Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 322
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 322
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Leu
85 90 95
Asp Ala Asn Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Cys Phe Asn Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 323
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 323
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser
20 25
<210> 324
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 324
Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 325
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 325
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
<210> 326
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 326
Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 327
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 327
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 328
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 328
Asp Leu Asp Ala Asn Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Cys Phe Asn Ile
1 5 10 15
<210> 329
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 329
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 330
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 330
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 331
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 331
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtaacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagtagc tatgcaatgg gctgggtccg ccaggctcca 120
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tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacgg ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gagatctgga tgctaatagt 300
agtggttatt atggatgctt taacatctgg ggccagggga ccctcgtcac cgtctcgagc 360
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ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660
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<210> 332
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 332
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtaacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagtagc tatgcaatgg gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatacat cggaatcatt gttagttatg ggcccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacgg ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gagatctgga tgctaatagt 300
agtggttatt atggatgctt taacatctgg ggccagggga ccctcgtcac cgtctcgagc 360
360
<210> 333
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 333
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtaacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagt 87
<210> 334
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 334
agctatgcaa tgggc 15
<210> 335
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 335
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatacatcg ga 42
<210> 336
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 336
atcattgtta gttatgggcc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 337
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 337
cgattcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatcaccag tccgacggcc 60
gaggacacgg ccacctattt ctgtgccaga 90
<210> 338
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 338
gatctggatg ctaatagtag tggttattat ggatgcttta acatc 45
<210> 339
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 339
tggggccagg ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 340
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 341
Ala Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Ser
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 342
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 342
Ala Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Ser
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
100 105
<210> 343
<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 343
Ala Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 344
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 344
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 345
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 346
Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser
1 5
<210> 347
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 347
Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Ser Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 10
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 348
Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn Ile Ala
1 5 10
<210> 349
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 349
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
1 5 10
<210> 350
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 350
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 351
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 351
gccgtcgtgc tgacccagac tccagcctcc gtgtctgcag ctgtgggtgg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgct gcatcccctc tggcatctgg ggtctcatcg 180
cggttcaaga gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttatta ctgtcaaagc tattatggta gtagcaatat tgctttcggc 300
ggagggaccg agctggagat cctacgtacg gtagcggccc catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 352
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 352
gccgtcgtgc tgacccagac tccagcctcc gtgtctgcag ctgtgggtgg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgct gcatcccctc tggcatctgg ggtctcatcg 180
cggttcaaga gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttatta ctgtcaaagc tattatggta gtagcaatat tgctttcggc 300
ggagggaccg agctggagat ccta 324
<210> 353
<211> 69
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 353
gccgtcgtgc tgacccagac tccagcctcc gtgtctgcag ctgtgggtgg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
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<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 354
caggccagtc agagcattag cactgcatta gcc 33
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<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 355
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
<210> 356
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 356
gctgcatccc ctctggcatc t 21
<210> 357
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 357
ggggtctcat cgcggttcaa gagcagtgga tctgggacag agttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacttat tactgt 96
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 358
caaagctatt atggtagtag caatattgct 30
<210> 359
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 359
ttcggcggag ggaccgagct ggagatccta 30
<210> 360
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 360
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 361
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 361
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 362
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 362
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 363
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 363
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 364
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 364
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 365
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 365
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 366
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 366
Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 367
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 367
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 368
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 368
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 369
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 369
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 370
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 370
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 371
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 371
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gctccaggga aggggctgga gtggatcgca tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac 180
gcgaactggg cgaaaggccg attcaccatc tccagaacct cgtcgaccac ggtgactctg 240
caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tttgtgcgag cgatattaat 300
gatgggtggc ttggccaatt caacttgtgg ggcccgggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 900
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<210> 372
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 372
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt agcagttact ggatatgctg ggtccgccag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgca tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac 180
gcgaactggg cgaaaggccg attcaccatc tccagaacct cgtcgaccac ggtgactctg 240
caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tttgtgcgag cgatattaat 300
gatgggtggc ttggccaatt caacttgtgg ggcccgggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
360
<210> 373
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 373
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt 90
<210> 374
<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 374
agcagttact ggatatgc 18
<210> 375
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 375
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ca 42
<210> 376
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 376
tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac gcgaactggg cgaaaggc 48
<210> 377
<211> 93
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 377
cgattcacca tctccagaac ctcgtcgacc acggtgactc tgcaaatgac cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttttgtgcg agc 93
<210> 378
<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 378
gatattaatg atgggtggct tggccaattc aacttg 36
<210> 379
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 379
tggggcccgg gcaccctggt caccgtctcg agc 33
<210> 380
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 380
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 381
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 381
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 382
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 382
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
<210> 383
<211> 24
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 383
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 384
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 384
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 385
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 385
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 386
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 386
Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 387
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 388
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 388
Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
<210> 389
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 389
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 390
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 390
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 391
<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 391
gccaacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctac aggacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atccgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac tgttgcttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaac gtacggtagc ggccccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
660
<210> 392
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 392
gccaacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctac aggacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atccgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac tgttgcttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339
<210> 393
<211> 72
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 393
gccaacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gc 72
<210> 394
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 394
caggccagtc agagcattag taattactta gcc 33
<210> 395
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 395
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctac 45
<210> 396
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 396
aggacatcca ctctggcatc t 21
<210> 397
<211> 96
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 397
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tccgggacac agttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgccgatgc tgccacttac tactgt 96
<210> 398
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 398
caaagctatt attccgttac tactgttgct tatggaaata ct 42
<210> 399
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 399
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 400
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 400
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 401
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 401
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 402
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 402
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 403
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 403
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 404
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 404
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 405
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 405
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 406
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 406
Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 407
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 407
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 408
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 408
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 409
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 409
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 410
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 410
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 411
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 411
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tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcagttact ggatatgctg ggtccgtcag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgca tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac 180
gctaactctg ctaaaggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
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tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 412
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 412
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcagttact ggatatgctg ggtccgtcag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgca tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac 180
gctaactctg ctaaaggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agc 363
<210> 413
<211> 90
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 413
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt 90
<210> 414
<211> 18
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 414
agcagttact ggatatgc 18
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<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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<212> DNA
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<223> Humanized antibody sequence
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<212> DNA
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<223> Humanized antibody sequence
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<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 419
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 420
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
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aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
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<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 421
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 422
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
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<211> 11
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 425
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 427
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 428
Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
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<211> 10
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 429
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 430
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 431
gccaacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcactt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag tccctaagct cctgatctat aggacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac tgttgcttat 300
ggaaatactt tcggcggagg aaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
660
<210> 432
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 432
gccaacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcactt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag tccctaagct cctgatctat aggacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac tgttgcttat 300
ggaaatactt tcggcggagg aaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 433
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 433
gccaacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcactt gc 72
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<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 434
caggccagtc agagcattag taattactta gcc 33
<210> 435
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 435
tggtatcagc agaaaccagg gaaagtccct aagctcctga tctat 45
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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aggacatcca ctctggcatc t 21
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 437
ggggtcccat ctcgtttcag tggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 60
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<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 438
caaagctact attccgttac tactgttgct tatggaaata ct 42
<210> 439
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 439
ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
<210> 440
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 440
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 441
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 441
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 442
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 442
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 443
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 443
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 444
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 444
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 445
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 445
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
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<210> 446
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 446
Cys Ile Arg Ala Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Ala Asn Ser Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 447
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 447
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 448
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 448
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 449
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 449
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 450
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 450
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 451
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tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcagttact ggatatgctg ggtccgtcag 120
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tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 452
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 452
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcagttact ggatatgctg ggtccgtcag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgca tgcattcgtg ctggtggtgg gaattactac 180
gctaactctg ctaaaggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
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tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 460
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 463
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
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<223> Humanized antibody sequence
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Val Ala Tyr Gly Asn Thr
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 470
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
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cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac tgttgcttat 300
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caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
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660
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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gccaacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtaattact tagcctggta tcagcagaaa 120
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<212> DNA
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 473
gccaacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gc 72
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 474
caggccagtc agagcattag taattactta gcc 33
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<223> Humanized antibody sequence
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<210> 481
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 481
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Thr Tyr Gly
20 25 30
Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
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Trp Ser Ser Thr Thr Gly Tyr Tyr Gly Tyr Phe Asn Met Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
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225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg
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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
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Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Thr Tyr Gly
20 25 30
Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 483
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser
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<210> 484
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 484
Thr Tyr Gly Val Gly
1 5
<210> 485
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 485
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
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<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 486
Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 487
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 487
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
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<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 488
Asp Trp Ser Ser Thr Thr Gly Tyr Tyr Gly Tyr Phe Asn Met
1 5 10
<210> 489
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 489
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 490
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1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 491
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gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 492
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 492
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagtacc tatggagtgg gctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatacat cggaatcatt agtagtagtg gtagcacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagattg gtctagtact 300
actggttatt atgggtattt taatatgtgg ggcccgggca ccctcgtcac cgtctcgagc 360
360
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<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 493
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cctcagt 87
<210> 494
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 494
acctatggag tgggc 15
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<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 495
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gaatacatcg ga 42
<210> 496
<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 496
atcattagta gtagtggtag cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 497
<211> 93
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 497
cgattcacca tctccaaaac ctcgtcgacc acggtggatc tgaaaatgac cagtctgaca 60
accgaggaca cggccaccta tttctgtgcc aga 93
<210> 498
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 498
gattggtcta gtactactgg ttattatggg tattttaata tg 42
<210> 499
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 499
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
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<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 500
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 501
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Ser Ser Tyr Gly Ser Ser Thr
85 90 95
Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 502
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Ser Ser Tyr Gly Ser Ser Thr
85 90 95
Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 503
<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 503
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 504
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 504
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 505
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 506
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 507
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 10
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 508
Gln Ser Ser Tyr Gly Ser Ser Thr Leu Ala
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 510
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 510
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 511
gcattcgaat tgacccagac tccatccccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
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acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
<210> 512
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 512
gcattcgaat tgacccagac tccatccccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatggt gcatccaatc tggaatctgg ggtcccatcg 180
cggttcagcg gcagtggatc tgggacacag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccatttacta ctgtcaaagc tcttatggta gtagtacttt ggctttcggc 300
ggagggaccg aggtggtggt caaa 324
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 513
gcattcgaat tgacccagac tccatccccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
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<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 514
caggccagtc agagcattag cactgcatta gcc 33
<210> 515
<211> 45
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 515
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
<210> 516
<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 516
ggtgcatcca atctggaatc t 21
<210> 517
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 517
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<211> 30
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 518
caaagctctt atggtagtag tactttggct 30
<210> 519
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 519
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 520
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 520
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 521
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 521
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Gly Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Ala Tyr Met Cys Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Thr Asn Asn Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 522
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 522
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Gly Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Ala Tyr Met Cys Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Thr Asn Asn Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 523
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 523
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Gly Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 524
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 524
Ser Ile Ala Tyr Met Cys
1 5
<210> 525
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 525
Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 526
<211> 17
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 526
Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 527
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 527
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 528
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 528
Asp Thr Asn Asn Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 529
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 529
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 530
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 530
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 531
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 531
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acctgcacag gttctggatt ctccttcagt agcatcgcct acatgtgctg gatccgccag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcattggtt ctggtagtgg gaacacttac 180
tacgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa gctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccactt atttctgtgc gagcgatact 300
aataatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccagg gcaccctcgt caccgtctcg 360
agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
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tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
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tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
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tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
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<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 532
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag gttctggatt ctccttcagt agcatcgcct acatgtgctg gatccgccag 120
gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcattggtt ctggtagtgg gaacacttac 180
tacgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa gctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccactt atttctgtgc gagcgatact 300
aataatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccagg gcaccctcgt caccgtctcg 360
agc 363
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<213> Oryctolagus cuniculus
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caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag gttctggatt ctccttcagt 90
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 534
agcatcgcct acatgtgc 18
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 535
tggatccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ga 42
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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tgcattggtt ctggtagtgg gaacacttac tacgcgaact gggcgaaagg c 51
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 537
cgattcacca tctccaaaag ctcgtcgacc acggtgactc tgcaaatgac cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccactta tttctgtgcg agc 93
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 538
gatactaata atgggtggct tggccaattc aacttg 36
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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tggggccagg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 541
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 542
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 542
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 543
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 544
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 545
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<400> 546
Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 547
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 548
Gln Gly Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
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Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 550
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 551
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660
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 552
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tcggtgtctg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaatt gccaggccag tcagagcatt agtagctact tagcctggta tcagcagaaa 120
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tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa ggctattatt ccgttactac taatacttat 300
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gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tcggtgtctg cagctgtggg aggcacagtc 60
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 554
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<400> 555
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctac 45
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agggcatcca ctctggcatc t 21
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<400> 557
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 558
caaggctatt attccgttac tactaatact tatggaaata ct 42
<210> 559
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 559
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 560
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 561
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 561
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Asp Ala Gly Asn Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Ser Asp Leu Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 562
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 562
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Asp Ala Gly Asn Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Ser Asp Leu Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 563
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 563
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 564
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 564
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 565
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 565
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 566
<211> 18
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 566
Cys Ile Asp Ala Gly Asn Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 567
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 567
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 568
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 568
Asp Leu Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 569
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 569
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 570
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 570
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 571
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 571
caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt agcagctact ggatatgctg ggtccgccag 120
gctccaggga agggactgga gtggatcgca tgcattgatg ctggtaatag tggtagcact 180
tactacgcga gctgggcgaa aggccgattc accatctcca aggcctcgtc gaccacggtg 240
actctgcaaa tgaccagtct gacagccgcg gacacggcca cctatttttg tgcgagcgat 300
cttaatgatg ggtggcttgg ccaattcaac ttgtggggcc cgggcaccct cgtcaccgtc 360
tcgagcgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
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cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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gatcttaatg atgggtggct tggccaattc aacttg 36
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ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 583
Ala Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 584
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu Ala
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 585
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<400> 586
Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 587
Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Thr Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 588
Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
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Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 590
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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660
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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gccaacatcg tgatgaccca gactccatcc cccgtgtctg gagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgactact tagcctggta tcagcagaaa 120
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tcgcggttca gaggcagtgg atctgggaca gagtacactc tcaccatcac cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339
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gccaacatcg tgatgaccca gactccatcc cccgtgtctg gagctgtggg aggcacagtc 60
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 598
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
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agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 601
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 601
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Ser Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Gly Leu
65 70 75 80
Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 602
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 602
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Ser Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Gly Leu
65 70 75 80
Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 603
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 604
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 604
Ser Asp Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 605
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 605
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 606
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 606
Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Ser Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 607
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 607
Arg Leu Thr Ile Ser Met Thr Ser Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 608
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 608
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 609
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 610
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
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360
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
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ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
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ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 220
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 621
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 622
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 622
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Val Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
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Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 630
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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660
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 632
gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtagctact tagcctggta tcagcagaaa 120
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tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca gagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
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<213> Oryctolagus cuniculus
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gctgacattg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
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<211> 33
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 638
caaagctatt attccgttac tactgttact tatggaaata ct 42
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 639
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<211> 321
<212> DNA
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<220>
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<400> 640
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 641
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 641
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Pro Gly Ser Ala Asp Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Ser Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
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225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
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340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
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370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
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420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 642
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 642
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Pro Gly Ser Ala Asp Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Ser Thr Val Thr Leu
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Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 643
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 643
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 644
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 644
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 645
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 645
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
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<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 646
Cys Ile Arg Pro Gly Ser Ala Asp Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 647
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 647
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Ser Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ser
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<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 648
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<211> 11
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<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
<400> 649
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1 5 10
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<211> 330
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
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85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
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Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
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<211> 360
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
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caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
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gatgggtggc ttggccaatt caacttgtgg ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
360
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<213> Oryctolagus cuniculus
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caggagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaagc ctgagggatc cctgacactc 60
acctgcacag cctctggatt ctccttcagt 90
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 654
agcagctact ggatatgc 18
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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tgggtccgcc aggctccagg gaagggactg gagtggatcg ga 42
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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tgcattcgtc ctggtagtgc ggattactac gcgagctggg cgaaaggc 48
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 657
cgattcacca tctccagagc ctcgtcgtcc acggtgactc tgcaaatgac cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttttgtgcg agc 93
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
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gatattaatg atgggtggct tggccaattc aacttg 36
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<212> DNA
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<220>
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gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 661
Ala Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Leu Ser Ile Ala Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 662
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 662
Ala Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Leu Ser Ile Ala Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Ala Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
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<211> 11
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 664
Gln Ala Ser Leu Ser Ile Ala Asp Tyr Leu Ala
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 665
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
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Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 670
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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660
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 672
gccgatgttg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
accatcaagt gccaggccag tctgagcatt gctgactact tagcctggta tctccagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagct cctgatctac agggcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tcgcggttca agggcagtgg atctgggaca gagtacactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcaa agctattatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339
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gccgatgttg tgatgaccca gactccagcc tccgtggagg cagctgtggg aggcacagtc 60
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 674
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 678
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 679
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 680
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 681
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 681
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 682
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 682
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 683
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 683
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 684
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 684
Ser Asn Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 685
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 685
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 686
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 686
Cys Ile Arg Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 687
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 687
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 688
<211> 12
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 688
Asp Ile Asn Asp Gly Trp Leu Gly Gln Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 689
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 689
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 690
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 691
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gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
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cttcaaatga acagcctgag agctgaggac actgctgtgt attactgtgc tagcgatatc 300
aatgatgggt ggcttggcca attcaacttg tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agc 363
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tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt 90
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<212> DNA
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agagctgagg acactgctgt gtattactgt gctagc 96
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tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
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gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacgcgag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 701
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
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<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 702
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr
85 90 95
Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
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Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ala Tyr Leu Ala
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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Arg Ala Tyr Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ser Tyr Tyr Ser Val Thr Thr Asn Thr Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 710
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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660
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<223> Humanized antibody sequence
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gctgacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
accatcaagt gccaggccag tcagagcatt agtgcttact tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag tccctaagct cctgatctat agggcataca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa agctactatt ccgttactac taatacttat 300
ggaaatactt tcggcggagg aaccaaggtg gaaatcaaa 339
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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gctgacattg tgatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60
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<223> Humanized antibody sequence
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ggggtcccat ctcgtttcag tggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 60
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<223> Humanized antibody sequence
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
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ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
<210> 720
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
<400> 720
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 721
<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 721
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
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<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 722
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 723
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 723
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser
20 25 30
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<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 724
Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 725
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 725
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
<210> 726
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 726
Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 727
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 727
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 728
Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
1 5 10 15
<210> 729
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 729
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 730
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 730
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 731
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cgacctcagt agctatgcaa tgggctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagta catcggaatc attgttagtt atgggcccac atactacgct 180
agctgggcta aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac cgtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gccacctatt tctgtgccag agatctggat 300
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acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacgcca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
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<213> Artificial Sequence
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tcctgtgcag cctctggaat cgacctcagt agctatgcaa tgggctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagta catcggaatc attgttagtt atgggcccac atactacgct 180
agctgggcta aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac cgtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gccacctatt tctgtgccag agatctggat 300
gctcaaagta gtggttacta tggagctttt aacatctggg gccaagggac cctcgtcacc 360
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 733
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cgacctcagt 90
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<212> DNA
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agagctgagg acactgccac ctatttctgt gccaga 96
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tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
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<212> DNA
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gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
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tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 741
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 742
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 743
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 745
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 748
Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn Ile Ala
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 749
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 750
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
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<212> DNA
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gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
ggaaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatcccctc tggcatctgg agtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tggaacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttacta ctgtcaaagc tattatggta gtagcaacat tgctttcggc 300
ggaggaacca aggtggaaat caaa 324
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgt 69
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 754
caggccagtc agagcattag cactgcatta gcc 33
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<212> DNA
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<220>
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tggtatcagc agaaaccagg aaaagcccct aagctcctga tctat 45
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<213> Oryctolagus cuniculus
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gctgcatccc ctctggcatc t 21
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caaagctatt atggtagtag caacattgct 30
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ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
<400> 760
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
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<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 761
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
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<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 762
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 763
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser
20 25 30
<210> 764
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 764
Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 765
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
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<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 766
Ile Ile Val Ser Tyr Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 767
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 767
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 768
Asp Leu Asp Ala Gln Ser Ser Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asn Ile
1 5 10 15
<210> 769
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 769
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 770
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 770
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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<211> 1359
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 771
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cgacctcagt agctatgcaa tgggctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagta catcggaatc attgttagtt atgggcccac atactacgct 180
agctgggcta aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagtccac cgtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gccacctatt tctgtgccag agatctggat 300
gctcaaagta gtggttacta tggagctttt aacatctggg gccaagggac cctcgtcacc 360
gtctcgagcg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacgcca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359
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<213> Artificial Sequence
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ccagggaagg ggctggagta catcggaatc attgttagtt atgggcccac atactacgct 180
agctgggcta aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagtccac cgtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gccacctatt tctgtgccag agatctggat 300
gctcaaagta gtggttacta tggagctttt aacatctggg gccaagggac cctcgtcacc 360
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<211> 90
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 773
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tcctgtgcag cctctggaat cgacctcagt 90
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<213> Oryctolagus cuniculus
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
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ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
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tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 781
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 782
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn
85 90 95
Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
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<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
<400> 785
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 786
Ala Ala Ser Pro Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 787
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 10
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 788
Gln Ser Tyr Tyr Gly Ser Ser Asn Ile Ala
1 5 10
<210> 789
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 789
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 790
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 791
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atcacttgtc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
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ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
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caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
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gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120
ggaaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatcccctc tggcatctgg agtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tggaacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttacta ctgtcaaagc tattatggta gtagcaacat tgctttcggc 300
ggaggaacca aggtggaaat caaa 324
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gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgt 69
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 794
caggccagtc agagcattag cactgcatta gcc 33
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<212> DNA
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tggtatcagc agaaaccagg aaaagcccct aagctcctga tctat 45
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<213> Oryctolagus cuniculus
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gctgcatccc ctctggcatc t 21
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<223> Humanized antibody sequence
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agcctgcagc ctgatgattt tgcaacttac tactgt 96
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<212> DNA
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<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 798
caaagctatt atggtagtag caacattgct 30
<210> 799
<211> 30
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<223> Humanized antibody sequence
<400> 799
ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Humanized antibody sequence
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 801
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 801
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Trp Val Asn Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Thr
85 90 95
Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 802
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 802
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Trp Val Asn Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
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Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 803
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 803
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 804
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 804
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 805
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 805
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 806
<211> 16
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 806
Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Trp Val Asn Gly
1 5 10 15
<210> 807
<211> 30
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 807
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 808
<211> 13
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 808
Asp Thr Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 809
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 809
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 810
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 810
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 811
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 811
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagt tatgcaatga attgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggagtggat cggggccatt cgtagtagtg gtgccacatt cttcgcgagc 180
tgggtgaatg gccgtttcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacac ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gagatactaa tgatggttgg 300
tatattaatc ggttggatct ctggggcccg ggcaccctcg tcaccgtctc gagcgcctcc 360
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gcccaaatct 660
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 720
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 840
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta cgccagcacg 900
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320
agcctctccc tgtctccggg taaa 1344
<210> 812
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 812
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagtagt tatgcaatga attgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggagtggat cggggccatt cgtagtagtg gtgccacatt cttcgcgagc 180
tgggtgaatg gccgtttcac catctccaaa acctcgacca cggtggatct gaaaatcacc 240
agtccgacac ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gagatactaa tgatggttgg 300
tatattaatc ggttggatct ctggggcccg ggcaccctcg tcaccgtctc gagc 354
<210> 813
<211> 87
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 813
cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggattctc cctcagt 87
<210> 814
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 814
agttatgcaa tgaat 15
<210> 815
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 815
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg gg 42
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<211> 48
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 816
gccattcgta gtagtggtgc cacattcttc gcgagctggg tgaatggc 48
<210> 817
<211> 90
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 817
cgtttcacca tctccaaaac ctcgaccacg gtggatctga aaatcaccag tccgacaccc 60
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<210> 818
<211> 39
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 818
gatactaatg atggttggta tattaatcgg ttggatctc 39
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<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 819
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 820
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 820
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 821
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 821
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Phe Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile
85 90 95
Ser Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 822
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 822
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Phe Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile
85 90 95
Ser Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 823
<211> 23
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 823
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys
20
<210> 824
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 824
Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 825
<211> 15
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 825
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 826
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 826
Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 827
<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 827
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 828
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 828
Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile Ser Asp Asn Ala
1 5 10
<210> 829
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 829
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 830
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 830
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 831
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 831
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atcagttgcc agtccagtaa gagtgtttat agtaactact tatcctggtt tcagcagaaa 120
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aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
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<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 832
gccgccgtgc tgacccagac tccatctccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcagc 60
atcagttgcc agtccagtaa gagtgtttat agtaactact tatcctggtt tcagcagaaa 120
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tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtgca ggcggtgata ctaatattag tgataatgct 300
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<400> 833
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 834
cagtccagta agagtgttta tagtaactac ttatcc 36
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 835
tggtttcagc agaaaccagg gcagcctccc aagttcctga tctac 45
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<211> 21
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aaggcatcca ctctggcatc t 21
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 838
gcaggcggtg atactaatat tagtgataat gct 33
<210> 839
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 839
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 840
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 840
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 841
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 841
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Ser Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Thr Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 842
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 842
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Ser Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Thr Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 843
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 843
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 844
<211> 5
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 844
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 845
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 845
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 846
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 846
Ala Ile Arg Ser Ser Gly Ala Thr Phe Phe Ala Ser Ser Val Asn Gly
1 5 10 15
<210> 847
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 847
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 848
<211> 13
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 848
Asp Thr Asn Asp Gly Trp Tyr Ile Asn Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 849
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 849
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 850
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 850
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 851
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 851
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctccctcagt agttatgcaa tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggggcc attcgtagta gtggtgccac attcttcgcg 180
agctccgtga atggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatactaat 300
gatggttggt atattaatcg gttggatctc tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacgc gagagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 852
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 852
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctccctcagt agttatgcaa tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggggcc attcgtagta gtggtgccac attcttcgcg 180
agctccgtga atggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatactaat 300
gatggttggt atattaatcg gttggatctc tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg 360
agc 363
<210> 853
<211> 90
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 853
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctccctcagt 90
<210> 854
<211> 15
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 854
agttatgcaa tgaat 15
<210> 855
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 855
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg gg 42
<210> 856
<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 856
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<210> 857
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 857
agattcacca tctccagaga caattccaag aacacggtgt atcttcaaat gaacagcctg 60
agagccgagg acacggctgt gtattactgt gcgaga 96
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<211> 39
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 858
gatactaatg atggttggta tattaatcgg ttggatctc 39
<210> 859
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 859
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 860
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 860
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacgcgag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 861
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 861
Ala Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile Ala
85 90 95
Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 862
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 862
Ala Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile Ala
85 90 95
Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 863
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 863
Ala Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 864
<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 864
Gln Ser Ser Lys Ser Val Tyr Ser Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 865
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 865
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 866
<211> 7
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 866
Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 867
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 867
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 868
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 868
Ala Gly Gly Asp Thr Asn Ile Ala Asp Asn Ala
1 5 10
<210> 869
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 869
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 870
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 870
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 871
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 871
gccgtgctga cccagtctcc ttccaccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
acttgccagt ccagtaagag tgtttatagt aactacttat cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctataag gcatccactc tggcatctgg ggtcccatca 180
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gatgattttg caacttatta ctgcgcaggc ggtgatacta atattgctga taatgctttc 300
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tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 648
<210> 872
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 872
gccgtgctga cccagtctcc ttccaccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
acttgccagt ccagtaagag tgtttatagt aactacttat cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctataag gcatccactc tggcatctgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgcgcaggc ggtgatacta atattgctga taatgctttc 300
ggcggaggaa ccaaggtgga aatcaaa 327
<210> 873
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 873
gccgtgctga cccagtctcc ttccaccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
acttgc 66
<210> 874
<211> 36
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 874
cagtccagta agagtgttta tagtaactac ttatcc 36
<210> 875
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 875
tggtttcagc agaaaccagg gaaagcccct aagttcctga tctat 45
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<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 876
aaggcatcca ctctggcatc t 21
<210> 877
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 877
ggggtcccat caaggttcag cggcagtgga tctgggacag aattcactct caccatcagc 60
agcctgcagc ctgatgattt tgcaacttat tactgc 96
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<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 878
gcaggcggtg atactaatat tgctgataat gct 33
<210> 879
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 879
ttcggcggag gaaccaaggt ggaaatcaaa 30
<210> 880
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 880
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 881
<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 881
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 882
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 882
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 883
<211> 29
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 883
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25
<210> 884
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 884
Ser Gly Tyr Tyr Met Cys
1 5
<210> 885
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 885
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 886
<211> 18
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 886
Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 887
<211> 31
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 887
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 888
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 888
Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 889
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 889
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 890
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 890
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 891
<211> 1359
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 891
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagtagc ggctactaca tgtgctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatgctg gtagtggtgg tagcactttc 180
ttcgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatggt 300
ggttatgctg gctatggtta tgctttcttt aacttgtggg gcccggggac cctcgtcacc 360
gtctcgagcg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacgcca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359
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<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 892
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagtagc ggctactaca tgtgctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatgctg gtagtggtgg tagcactttc 180
ttcgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatggt 300
ggttatgctg gctatggtta tgctttcttt aacttgtggg gcccggggac cctcgtcacc 360
gtctcgagc 369
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 893
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagt 87
<210> 894
<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 894
agcggctact acatgtgc 18
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<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 895
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ca 42
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 896
tgcatttatg ctggtagtgg tggtagcact ttcttcgcga actgggcgaa aggc 54
<210> 897
<211> 93
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 897
cgattcacca tctccaaaac ctcgtcgacc acggtgactc tgcaaatgac cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttctgtgcg aga 93
<210> 898
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 898
gatggtggtt atgctggcta tggttatgct ttctttaact tg 42
<210> 899
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 899
tggggcccgg ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 900
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 900
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
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<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 901
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Pro Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 902
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Pro Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 903
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
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Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly Leu Ala
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 905
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 906
Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 32
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 907
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 12
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 908
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Pro Asn Val
1 5 10
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 909
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 910
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 911
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtga gaggatttat agtggtttgg cctggtatca gcagaaacca 120
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gacgatgctg ccatttacta ctgtcaatgt acttattatg gttctagtta tcctaatgtt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 912
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 912
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtga gaggatttat agtggtttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatggt gcatccactc tggcatctgg ggtcccatcg 180
cggttcaaag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gacgatgctg ccatttacta ctgtcaatgt acttattatg gttctagtta tcctaatgtt 300
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 913
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 914
caggccagtg agaggattta tagtggtttg gcc 33
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<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 915
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
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ggtgcatcca ctctggcatc t 21
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<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 918
caatgtactt attatggttc tagttatcct aatgtt 36
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 919
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 920
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 920
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
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agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 921
<211> 453
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 921
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
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Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
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Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
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Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 922
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 922
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 923
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 923
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25
<210> 924
<211> 6
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 924
Ser Gly Tyr Tyr Met Cys
1 5
<210> 925
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 925
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 926
<211> 18
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 926
Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asn Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 927
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 927
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 928
<211> 14
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 928
Asp Gly Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Phe Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 929
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 929
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 930
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 930
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 931
<211> 1359
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 931
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagtagc ggctactaca tgtgctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatgctg gtagtggtgg tagcactttc 180
ttcgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatggt 300
ggttatgctg gctatggtta tgctttcttt aacttgtggg gcccggggac cctcgtcacc 360
gtctcgagcg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacgcca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359
<210> 932
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 932
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagtagc ggctactaca tgtgctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatgctg gtagtggtgg tagcactttc 180
ttcgcgaact gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgact 240
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagatggt 300
ggttatgctg gctatggtta tgctttcttt aacttgtggg gcccggggac cctcgtcacc 360
gtctcgagc 369
<210> 933
<211> 87
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 933
cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60
tgcaaagcct ctggattctc cttcagt 87
<210> 934
<211> 18
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 934
agcggctact acatgtgc 18
<210> 935
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 935
tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtggatcg ca 42
<210> 936
<211> 54
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 936
tgcatttatg ctggtagtgg tggtagcact ttcttcgcga actgggcgaa aggc 54
<210> 937
<211> 93
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 937
cgattcacca tctccaaaac ctcgtcgacc acggtgactc tgcaaatgac cagtctgaca 60
gccgcggaca cggccaccta tttctgtgcg aga 93
<210> 938
<211> 42
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 938
gatggtggtt atgctggcta tggttatgct ttctttaact tg 42
<210> 939
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 939
tggggcccgg ggaccctcgt caccgtctcg agc 33
<210> 940
<211> 990
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 940
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 941
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 941
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Pro Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 942
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 942
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Pro Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 943
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys
20
<210> 944
<211> 11
<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 944
Gln Ala Ser Glu Arg Ile Tyr Ser Gly Leu Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 945
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 946
Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 947
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 947
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 948
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 948
Gln Ala Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Pro Asn Val
1 5 10
<210> 949
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 949
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 950
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 950
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 951
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 951
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtga gaggatttat agtggtttgg cctggtatca gcagaaacca 120
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ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 952
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 952
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtga gaggatttat agtggtttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatggt gcatccactc tggcatctgg ggtcccatcg 180
cggttcaaag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gacgatgctg ccatttacta ctgtcaagct acttattatg gttctagtta tcctaatgtt 300
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 330
<210> 953
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 953
gatgttgtga tgacccagac tccagcctcc gtgtctgaac ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgc 69
<210> 954
<211> 33
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 954
caggccagtg agaggattta tagtggtttg gcc 33
<210> 955
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 955
tggtatcagc agaaaccagg gcagcctccc aagctcctga tctat 45
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<211> 21
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 956
ggtgcatcca ctctggcatc t 21
<210> 957
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 957
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 60
gacctggagt gtgacgatgc tgccatttac tactgt 96
<210> 958
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 958
caagctactt attatggttc tagttatcct aatgtt 36
<210> 959
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 959
ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa 30
<210> 960
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Humanized antibody sequence
<400> 960
cgtacggtag cggccccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 961
<211> 692
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 961
Met Gly Thr Val Ser Ser Arg Arg Ser Trp Trp Pro Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ala Arg Ala Gln Glu
20 25 30
Asp Glu Asp Gly Asp Tyr Glu Glu Leu Val Leu Ala Leu Arg Ser Glu
35 40 45
Glu Asp Gly Leu Ala Glu Ala Pro Glu His Gly Thr Thr Ala Thr Phe
50 55 60
His Arg Cys Ala Lys Asp Pro Trp Arg Leu Pro Gly Thr Tyr Val Val
65 70 75 80
Val Leu Lys Glu Glu Thr His Leu Ser Gln Ser Glu Arg Thr Ala Arg
85 90 95
Arg Leu Gln Ala Gln Ala Ala Arg Arg Gly Tyr Leu Thr Lys Ile Leu
100 105 110
His Val Phe His Gly Leu Leu Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly
115 120 125
Asp Leu Leu Glu Leu Ala Leu Lys Leu Pro His Val Asp Tyr Ile Glu
130 135 140
Glu Asp Ser Ser Val Phe Ala Gln Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg
145 150 155 160
Ile Thr Pro Pro Arg Tyr Arg Ala Asp Glu Tyr Gln Pro Pro Asp Gly
165 170 175
Gly Ser Leu Val Glu Val Tyr Leu Leu Asp Thr Ser Ile Gln Ser Asp
180 185 190
His Arg Glu Ile Glu Gly Arg Val Met Val Thr Asp Phe Glu Asn Val
195 200 205
Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys Cys Asp
210 215 220
Ser His Gly Thr His Leu Ala Gly Val Val Ser Gly Arg Asp Ala Gly
225 230 235 240
Val Ala Lys Gly Ala Ser Met Arg Ser Leu Arg Val Leu Asn Cys Gln
245 250 255
Gly Lys Gly Thr Val Ser Gly Thr Leu Ile Gly Leu Glu Phe Ile Arg
260 265 270
Lys Ser Gln Leu Val Gln Pro Val Gly Pro Leu Val Val Leu Leu Pro
275 280 285
Leu Ala Gly Gly Tyr Ser Arg Val Leu Asn Ala Ala Cys Gln Arg Leu
290 295 300
Ala Arg Ala Gly Val Val Leu Val Thr Ala Ala Gly Asn Phe Arg Asp
305 310 315 320
Asp Ala Cys Leu Tyr Ser Pro Ala Ser Ala Pro Glu Val Ile Thr Val
325 330 335
Gly Ala Thr Asn Ala Gln Asp Gln Pro Val Thr Leu Gly Thr Leu Gly
340 345 350
Thr Asn Phe Gly Arg Cys Val Asp Leu Phe Ala Pro Gly Glu Asp Ile
355 360 365
Ile Gly Ala Ser Ser Asp Cys Ser Thr Cys Phe Val Ser Gln Ser Gly
370 375 380
Thr Ser Gln Ala Ala Ala His Val Ala Gly Ile Ala Ala Met Met Leu
385 390 395 400
Ser Ala Glu Pro Glu Leu Thr Leu Ala Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ile
405 410 415
His Phe Ser Ala Lys Asp Val Ile Asn Glu Ala Trp Phe Pro Glu Asp
420 425 430
Gln Arg Val Leu Thr Pro Asn Leu Val Ala Ala Leu Pro Pro Ser Thr
435 440 445
His Gly Ala Gly Trp Gln Leu Phe Cys Arg Thr Val Trp Ser Ala His
450 455 460
Ser Gly Pro Thr Arg Met Ala Thr Ala Val Ala Arg Cys Ala Pro Asp
465 470 475 480
Glu Glu Leu Leu Ser Cys Ser Ser Phe Ser Arg Ser Gly Lys Arg Arg
485 490 495
Gly Glu Arg Met Glu Ala Gln Gly Gly Lys Leu Val Cys Arg Ala His
500 505 510
Asn Ala Phe Gly Gly Glu Gly Val Tyr Ala Ile Ala Arg Cys Cys Leu
515 520 525
Leu Pro Gln Ala Asn Cys Ser Val His Thr Ala Pro Pro Ala Glu Ala
530 535 540
Ser Met Gly Thr Arg Val His Cys His Gln Gln Gly His Val Leu Thr
545 550 555 560
Gly Cys Ser Ser His Trp Glu Val Glu Asp Leu Gly Thr His Lys Pro
565 570 575
Pro Val Leu Arg Pro Arg Gly Gln Pro Asn Gln Cys Val Gly His Arg
580 585 590
Glu Ala Ser Ile His Ala Ser Cys Cys His Ala Pro Gly Leu Glu Cys
595 600 605
Lys Val Lys Glu His Gly Ile Pro Ala Pro Gln Glu Gln Val Thr Val
610 615 620
Ala Cys Glu Glu Gly Trp Thr Leu Thr Gly Cys Ser Ala Leu Pro Gly
625 630 635 640
Thr Ser His Val Leu Gly Ala Tyr Ala Val Asp Asn Thr Cys Val Val
645 650 655
Arg Ser Arg Asp Val Ser Thr Thr Gly Ser Thr Ser Glu Gly Ala Val
660 665 670
Thr Ala Val Ala Ile Cys Cys Arg Ser Arg His Leu Ala Gln Ala Ser
675 680 685
Gln Glu Leu Gln
690
<210> 962
<211> 662
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 962
Gln Glu Asp Glu Asp Gly Asp Tyr Glu Glu Leu Val Leu Ala Leu Arg
1 5 10 15
Ser Glu Glu Asp Gly Leu Ala Glu Ala Pro Glu His Gly Thr Thr Ala
20 25 30
Thr Phe His Arg Cys Ala Lys Asp Pro Trp Arg Leu Pro Gly Thr Tyr
35 40 45
Val Val Val Leu Lys Glu Glu Thr His Leu Ser Gln Ser Glu Arg Thr
50 55 60
Ala Arg Arg Leu Gln Ala Gln Ala Ala Arg Arg Gly Tyr Leu Thr Lys
65 70 75 80
Ile Leu His Val Phe His Gly Leu Leu Pro Gly Phe Leu Val Lys Met
85 90 95
Ser Gly Asp Leu Leu Glu Leu Ala Leu Lys Leu Pro His Val Asp Tyr
100 105 110
Ile Glu Glu Asp Ser Ser Val Phe Ala Gln Ser Ile Pro Trp Asn Leu
115 120 125
Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg Tyr Arg Ala Asp Glu Tyr Gln Pro Pro
130 135 140
Asp Gly Gly Ser Leu Val Glu Val Tyr Leu Leu Asp Thr Ser Ile Gln
145 150 155 160
Ser Asp His Arg Glu Ile Glu Gly Arg Val Met Val Thr Asp Phe Glu
165 170 175
Asn Val Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys
180 185 190
Cys Asp Ser His Gly Thr His Leu Ala Gly Val Val Ser Gly Arg Asp
195 200 205
Ala Gly Val Ala Lys Gly Ala Ser Met Arg Ser Leu Arg Val Leu Asn
210 215 220
Cys Gln Gly Lys Gly Thr Val Ser Gly Thr Leu Ile Gly Leu Glu Phe
225 230 235 240
Ile Arg Lys Ser Gln Leu Val Gln Pro Val Gly Pro Leu Val Val Leu
245 250 255
Leu Pro Leu Ala Gly Gly Tyr Ser Arg Val Leu Asn Ala Ala Cys Gln
260 265 270
Arg Leu Ala Arg Ala Gly Val Val Leu Val Thr Ala Ala Gly Asn Phe
275 280 285
Arg Asp Asp Ala Cys Leu Tyr Ser Pro Ala Ser Ala Pro Glu Val Ile
290 295 300
Thr Val Gly Ala Thr Asn Ala Gln Asp Gln Pro Val Thr Leu Gly Thr
305 310 315 320
Leu Gly Thr Asn Phe Gly Arg Cys Val Asp Leu Phe Ala Pro Gly Glu
325 330 335
Asp Ile Ile Gly Ala Ser Ser Asp Cys Ser Thr Cys Phe Val Ser Gln
340 345 350
Ser Gly Thr Ser Gln Ala Ala Ala His Val Ala Gly Ile Ala Ala Met
355 360 365
Met Leu Ser Ala Glu Pro Glu Leu Thr Leu Ala Glu Leu Arg Gln Arg
370 375 380
Leu Ile His Phe Ser Ala Lys Asp Val Ile Asn Glu Ala Trp Phe Pro
385 390 395 400
Glu Asp Gln Arg Val Leu Thr Pro Asn Leu Val Ala Ala Leu Pro Pro
405 410 415
Ser Thr His Gly Ala Gly Trp Gln Leu Phe Cys Arg Thr Val Trp Ser
420 425 430
Ala His Ser Gly Pro Thr Arg Met Ala Thr Ala Val Ala Arg Cys Ala
435 440 445
Pro Asp Glu Glu Leu Leu Ser Cys Ser Ser Phe Ser Arg Ser Gly Lys
450 455 460
Arg Arg Gly Glu Arg Met Glu Ala Gln Gly Gly Lys Leu Val Cys Arg
465 470 475 480
Ala His Asn Ala Phe Gly Gly Glu Gly Val Tyr Ala Ile Ala Arg Cys
485 490 495
Cys Leu Leu Pro Gln Ala Asn Cys Ser Val His Thr Ala Pro Pro Ala
500 505 510
Glu Ala Ser Met Gly Thr Arg Val His Cys His Gln Gln Gly His Val
515 520 525
Leu Thr Gly Cys Ser Ser His Trp Glu Val Glu Asp Leu Gly Thr His
530 535 540
Lys Pro Pro Val Leu Arg Pro Arg Gly Gln Pro Asn Gln Cys Val Gly
545 550 555 560
His Arg Glu Ala Ser Ile His Ala Ser Cys Cys His Ala Pro Gly Leu
565 570 575
Glu Cys Lys Val Lys Glu His Gly Ile Pro Ala Pro Gln Glu Gln Val
580 585 590
Thr Val Ala Cys Glu Glu Gly Trp Thr Leu Thr Gly Cys Ser Ala Leu
595 600 605
Pro Gly Thr Ser His Val Leu Gly Ala Tyr Ala Val Asp Asn Thr Cys
610 615 620
Val Val Arg Ser Arg Asp Val Ser Thr Thr Gly Ser Thr Ser Glu Gly
625 630 635 640
Ala Val Thr Ala Val Ala Ile Cys Cys Arg Ser Arg His Leu Ala Gln
645 650 655
Ala Ser Gln Glu Leu Gln
660
<210> 963
<211> 25378
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 963
gtccgatggg gctctggtgg cgtgatctgc gcgccccagg cgtcaagcac ccacacccta 60
gaaggtttcc gcagcgacgt cgaggcgctc atggttgcag gcgggcgccg ccgttcagtt 120
cagggtctga gcctggagga gtgagccagg cagtgagact ggctcgggcg ggccgggacg 180
cgtcgttgca gcagcggctc ccagctccca gccaggattc cgcgcgcccc ttcacgcgcc 240
ctgctcctga acttcagctc ctgcacagtc ctccccaccg caaggctcaa ggcgccgccg 300
gcgtggaccg cgcacggcct ctaggtctcc tcgccaggac agcaacctct cccctggccc 360
tcatgggcac cgtcagctcc aggcggtcct ggtggccgct gccactgctg ctgctgctgc 420
tgctgctcct gggtcccgcg ggcgcccgtg cgcaggagga cgaggacggc gactacgagg 480
agctggtgct agccttgcgt tccgaggagg acggcctggc cgaagcaccc gagcacggaa 540
ccacagccac cttccaccgc tgcgccaagg tgcgggtgta gggatgggag gccggggcga 600
acccgcagcc gggacggtgc ggtgctgttt cctctcgggc ctcagtttcc ccccatgtaa 660
gagaggaagt ggagtgcagg tcgccgaggg ctcttcgctt ggcacgatct tggggactgc 720
aggcaaggcg gcgggggagg acgggtagtg gggagcacgg tggagagcgg ggacggccgg 780
ctctttgggg acttgctggg gcgtgcggct gcgctattca gtgggaaggt tcgcggggtt 840
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tcccagtttc tgcctcgccg cggcacaggt gggtgaagga gtgaatgcct ggaacgtact 960
gggaactgca ccaggcacag agaaagcggg cttgccatta tagtgggttc cgatttggtt 1020
tggaaaacat gggcagcgga gggtggaggg cctggagaga aggccctacc cgagacaggg 1080
gcggggtggg aaggacggca gatgctggga gcacgaggca atttctttat gacacagaac 1140
tcatgctcta gtattccatc tgtttcagcc gaagaaaaga accagctgaa ggggcagggg 1200
agaaggggcg gaggtattct cgaggcccat tggcgtcctt taggactcag gcagggaagg 1260
gcccttggtg ctctggagcc ggaggtggtg cgcctggtac tgggaccccg gagctgagcc 1320
cggcgcctca gcccacctgg ctgtctgccg accgtgtgcg gggcgagttt gctcaacaac 1380
tctgccagct tctggccctc aggctgtggg aagcttcttc ccggggcgag accactagct 1440
ttttctaagt attaccagcc caggacttgg ctgaggttct gtgtccccca gcttggagtc 1500
agatgtgggg ttgaatcttg gcttcctctc actagctgtg gtgcttgaca agtcacttat 1560
ccttgagcct ccattgccta atctttaaaa gggaggtgac aatcgtccct acggctcagt 1620
ggcagcagat ggggagatga agggaaagtt ctgttgacca tgagtgaact tacaatgcaa 1680
gccccggggg gatcacttgc agttttgtcc ctgtctgcag tgtgacctgt tggtgacatt 1740
gtctttgctc caaaccacag ctcctggggc agaggggaaa attctgccac tcacagctgc 1800
ctgcccacgc ttctgtctga gtgtgctggg tggcaggatg gcaagtcctt actcagctca 1860
gtatagccct cttccttgtt ccctgagcct ttgactttct cgagggatgt tgtggggttg 1920
tggccaggat aagaaagggc atttcaagtt accactgctc caaaacaact gttctggaaa 1980
tagtgagtac cccatcctga gaggtgagta agcagaggct gtatgaccac ctgaaccaag 2040
cccttgagga tgtttcttct ctggtggaag tttggaacag gagcctcctc aagttcattt 2100
attcattcat tcaatggtta ttttgtggga atcgaattta gaatgaaaat attttttggc 2160
aagcagaaaa taatttttag accaatcctt ttcttttagt catgagaaac tgaggcccag 2220
agagaggagg tcaccccagg tgcattagaa ctgggtttcc agaactgaca ctccactgca 2280
cagagtactc tcccaattca ttcaattttt atttagcgga aggcattttc agatgggtct 2340
ttgaagcatt agtaggagtt cagcgatgat ggtgtcatga gaattttatt ctaggattag 2400
gaggtaccat gaacaaagat acagagctgg gaaaaccaga ggtggaagat aaggagcaca 2460
tgtccacagt tctttttctt ttttttttga gatggagttt cgctcttgtt gcccaggctg 2520
gagtgcaatg gtgcagtctc agctcactgc aacatctgtc tcccgggttc aagtggttct 2580
cctgcctcag cctcccaaga agctgggatt acaggtacct gccaccacgc ccggctaatt 2640
tttgtatttt tagtagagaa ggggtttcac cacgttggcc aggctagtcg caaactcctg 2700
acctcctcag tggatccgag gaggtgatcc tcccgcctca gcctcccaaa gtgctcgaat 2760
tacaggtgtg agccaccacg cctggcctcc acagttcttt atccaccgtc tgaaatgtaa 2820
aatgttacga aaaccaaaag ttttttttgt gatttatttg atggtagcac ctgacgtgaa 2880
ctgacatgag attattttta atttagttgt gtgaatatgc atattcatat attttgctgc 2940
atagattaca gtatgcagct ccagattctt ccaagcagac tctgattgcc cattactgcc 3000
tttctaaaat ccaaacaagt tctgaggttc aaaaccgttt tggccctaag gctttgggta 3060
aagggggtgg actctgttct actctgactg gagtccaaga tgcatatata cagagatatg 3120
ggtgatgggg ctgcaaggta ggttgaggta ggggccaagg aggagcatgg agtttggact 3180
tgattcatga ggctgtgggg agccagtgaa ggttcttaag caggtatgtc tgcctgagag 3240
cagttggagc agacaagagc taaaaaccaa acaaatcacc atagatagtg gctgctataa 3300
tttgtttgtc ccctccaaat ctcatgtgga aatttggtcc tcagtgttgg aagtggggcc 3360
taatgggagg tgtttgggtc atgggggagg aacccctgtg aaaggcttgg tgccgtcctt 3420
gtgataatga gtaagttctc ccgctatgat ttcccttgaa ggctgattat taaaaagagc 3480
ttggcacctc cctctcttct ctcttgcttc ttctcttgcc atgtgattga tctctgcaca 3540
tgtaggctcc ccttcacctt ctgccatcag tgaaagcagc ttaaggccct caccagaagc 3600
agatgctggt gccatgcttc ctggagagct tgcagaatca tgagctgaat aaatcccttt 3660
tccttgtaaa ttactcacct tcaggtattc ctttatatag caacacaaaa ggactaagac 3720
agtggccttg acttttctct ctctttaaga agtgttgcct ttgctcactt agtcatccct 3780
tctgcctgca tttgtagagc atctggatgg gagatttata taaccgtcac tcttgacttt 3840
cccagcaggc ctatgtcata ggtactgtgg tctctacaat acagcagagg tatctgaggc 3900
tccgagaggt tgagtgactt gctcatggct gcacaaccag taaatattgg agctggaatt 3960
caggtccacg gtttcctggc tccaaagccc atgatttttt ccctcaattt attctgactg 4020
gggcatgggg gagggggtgg cctttgggca gggccaccag gagcgaccag gcccgtagag 4080
agctgggtgc aggtacagag gaaaacctgt tgtcgagtgt ggcccgtagt tcccattttt 4140
gcctgaatgg cacatttgaa agtgttatat aaccatgtga ataataatag ttggcctata 4200
tgagttcttt aatttgcttt ttggtccgca tttggtaact tctttatcat ctactatact 4260
ctgttgtgtc tcttttgttg taatttgtaa gtaggggtga gataaagtac acctagggtt 4320
tgctgggttt cttccatgtc atcatgttcc tccttgcatg gggccaggat ccgtggaggt 4380
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tcttccatgg ccttcttcct ggcttcctgg tgaagatgag tggcgacctg ctggagctgg 4560
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gggactgtgc ttagtaggcc cattgctgaa aatcagaagg ggacagcaag tatgtattga 4680
gcacttatcg ggtaccaagc acagtaacta ctggctttct gtatagaatt ccctttaagc 4740
ctggccatgc cccagtggta cgtctatctt catttgaaag acgaggagac tgaagttcag 4800
aggggaccac acagacagct aggggtagag cctggatcaa acccattggt ctgcctgcca 4860
gccattcttg tgccaatgca tctgctgcct acggaaacct gtagggacaa ggccctggga 4920
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ctggatgtca catcttcggt ggaggggcag aaaggggact gggtattctc ctcaccctgg 5100
ccctagtgct tcaaatctta aaaaaacgtt tttatttgtg cttctgcacc accttctagc 5160
ccacctcgtt tcctggcctc taacttgatg agagcgtgtg tcattttcac actgattctc 5220
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aggtcacaca gcgtgtaatg ggcagggtca gagtctggag tctggacctg ggtctcctag 5340
ctgcactgca ctgctgcccc atgggttaat cagctcagca taccgtggct gaacagctac 5400
ctcataccaa ggcctgtggc gccatgacag ggattgacag ggtccctgcc ttggaaaccc 5460
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ttaccaagtg cctactgtgt gctgcagagg cgaagatgac acagctcagg cctttccctt 5580
gagcttacag ttcaggagga gagactgacc agtgactgcc agtacagttg actatgggac 5640
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gttcgagtcc tgcccagccc cttattggct gtctaaccct gagcaaatcc cttcacctct 5880
ctgagcctca ttcctctatc tgtaaaccag ttataataat tggaacattc atttaaggac 5940
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cagggagtca ggaggtaggg agggagtggg gcagatgcac accatttttt tttttttttg 6240
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cactcttgtc cttctaactc ctgctagtgc ctcccattgg ctgagcccaa ctggaagctt 6600
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ctgagcttca ctccatgtcc atcctgccca gagccttggc acagcctggc tcccagacaa 6780
gatgtcaagt tcagaatcct tcctaaaagg aatcctctat gccagaccgt gttgcaggga 6840
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cggtaccggg cggatgaata ccagcccccc ggtaagaccc ccatctgtgc cctgccccac 7200
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ccagcaggct gcacttacct tggaaggagg gttcatctga tggtgactct acctagggcc 7500
cccaggcctc tataactccc agtgccctgc agactggacc agatccttta atgggataga 7560
cacaaccctg tctgggatgc ctctgcctac cttcctgttt tgctgctcca cctgcctcca 7620
gctccgtttg gcttcctggg gctccctgcc tgggccactt tgtgtcttcc ctctaggcct 7680
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gactctagat gcacctggcc tgaggagaga atgaagggtt ctagttggac tgtgttaagt 7860
ttgaggtgcc catggtgtga ggtctggagc tcagcgcaga gatgatgcaa tgtggtgggt 7920
ccatgcaaca tggtgccagg acgcagagct tggggtgaac tcagctttca ccccttaccg 7980
gttctcgtgg gatcttggga agccactttc ttctatgagc tttgtcgttc ttgtctgtaa 8040
aatgggcaca taaccctgtc cctgtccttc tcacaggttg ctgtgagact ccaatgagtt 8100
gaaggatgtg cagatgcttt tggaagtgaa aagttggggg gctactgtgt gactttgcat 8160
acacccaaac tgtgtgacct tgcatatgtc tgagttgctg ccattgcaac agatcagagc 8220
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cagggagagg acagctcctc tgtaggaaga gcctgttcct ttccaaccag gtgagacctc 8400
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ctcttaactg tgtgaccttg catacgtcac tcaccctctc tgatcttcag gttcctctgc 9300
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tgctgtagca tgcatttctc tgtcaggtat tgagtgaggt gctgtgattt tagccctgca 9420
tttttctttt cttaccattc aataataacg ttttgagcac ccactgtgcg ccaggcacca 9480
tattaggtgc tggggataca aatgtgaatg aaatgaatgt ggtctcttcc cccaacagtg 9540
tatccagaag attaatccat tccttaaaca aatgctactt gacacagatt agttctggat 9600
aggctgagag ctctgaagga gtgcaggcag ctgcgagcct gtgtatccag cagaaggatc 9660
aggaaaggat tcctggagga agcgctgttc tagccaagac ctacgggggc attattaacc 9720
aggcaaaggg gacggtgtcc aagcagtgga atgaacgtgg attgaagctg tgaggcagga 9780
gggagtgtgg cctgtgcaga agggaccgag gctggtgaga ccaggagggc ctgggtggcc 9840
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tttgcccctg agagtggtgg ctcttcttga ggccaccttg ccacgctgtc acagggaact 10080
agcagcccct gcctcacccg ggggtttgga agatagaggg aggcctagga agggccctgt 10140
gtctcatccg agctgggccc ctttccagcc tctcactgga aggaagccca aggatgttcc 10200
tgtgggggct tttaccaggc ccacctgccc tctgctggcc atgcttgcag cctcctgacc 10260
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ggtggtccca agcacgggtg ggaccagaaa ggactctcac ctgggctaac tcagctgcag 10500
cctcagttcc ctcctcacac acgacgagga acatggactg gaagcctgcc cagcaggcct 10560
tctgctcgat gtgcgttgtg tggcttacgt ccagggaggg aagcagcctc tgtgctgtct 10620
tctagataag cctgtattcc ccgggctgtc tgccaatgta tccagttgtc ccgtcagcct 10680
ggaagctctg agggaaaacc ttgggctgct tcctgagcac ctgtatcccc tgcagccagc 10740
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agctcacagc gctctcagcc accccttccc agtgtagcac cgggcacatg gtagatgcct 10980
attgatgagt gaaagctcct aacacactca gagagcaagg actccgcctc atcccacagc 11040
ctgggaggag aggcagactg ccaaggacct gctcagcatg ctacagaaga aaccaaagtg 11100
cccacgggac tgatcagtgg agcttcctgc cgagactgga ggccttaggg cagggtagac 11160
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ccataagaag tgggtacacg ccctgagcct cccacacttg ctcacctgtc ctgagatgag 11700
aatctctact ctgcagcata tttggaggat cactgcgggg gccacagagg tgctgttcag 11760
atggcacttc agaagactca ggagaccctg gggcaggagc agtttgactg acagcccaga 11820
gggctgccct ctgattccac ctgaggccct gcttttcctg gctgcagggg ttccagggcc 11880
aggccatttc cgctggcgca ggactctgct agcagcaacc tgcctgaagt cttcctttgg 11940
cctggctgag agtttctgag acctgcgctg gagcggaggt gcttccttcc ttgcttcctt 12000
tcttcctctc tcccttctcc atccagcagg ctggacctgc ctggcatctg tgagctctcc 12060
ctactttctc ctatacccta acctttgtcc tgcatgggcg actcccccag tgagtctctt 12120
gcagctttta ccccagtgcc tgcttcttgg agaatccaaa ctgatccagt tagggatgat 12180
aaagtgtagg gtaggcgctc ggtgactgtt ttctctgagg ttgtgactcg tgtgaggcag 12240
aagcagtccc cgtgagccct cctggtatct tgtggagtgg agaacgcttg gacctggagc 12300
caggaggccc agacatacat cctgtccgag ctgcagcttc ctgtctctaa aatgagccgg 12360
ccagcgcagg tggccagaca tcactgttat tctcctttga gtctttaaat cttgttgtct 12420
ttcttgcaga ctcggtgagc tgtgaaaggc tataataggg gctttatttt acactttgat 12480
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gtgctctgta gtttctgtgt gttaactata aggttgactt tatgctcatt ccctcctctc 12780
ccacaaatgt cgccttggaa agacggaggc agcctggtgg aggtgtatct cctagacacc 12840
agcatacaga gtgaccaccg ggaaatcgag ggcagggtca tggtcaccga cttcgagaat 12900
gtgcccgagg aggacgggac ccgcttccac agacaggtaa gcacggccgt ctgatgggag 12960
ggctgcctct gcccatatcc ccatcctgga ggtgggtggg gactgccacc ccagagcgtt 13020
gcagctgtac tcctgggttg cacccccccc agctgtcact gtcccctccc tgccatcagt 13080
tgtgggaagg gcgttcatcc atccagccac ctgctgattt gttatagggt ggaggggggg 13140
tctttctcat gtggtccttg tgttcgtcga gcaggccagc aagtgtgaca gtcatggcac 13200
ccacctggca ggggtggtca gcggccggga tgccggcgtg gccaagggtg ccagcatgcg 13260
cagcctgcgc gtgctcaact gccaagggaa gggcacggtt agcggcaccc tcataggtaa 13320
gtgatggccc cagacgctgg tctctctcca tctggacctg gcctgggagg tggcttgggc 13380
tgggcccagg gagagctaat gtctcctaac caagaatgct gtggcagcct ctgccgcaga 13440
gccagagaac cagagtgcca aggctggcag ggttcccagt ggccacgagt gcagatgaag 13500
aaacccaggc cccaagaggg tcatgcaggt agcccaggga gttcagcctt gaccctgggt 13560
caatgacctt tccacagttc cacactgctc cccttttaaa atccggtgat gtctttatgt 13620
cttttgttat gttatcttca atgtggaggg actcgaggtg atctaagcaa actttttcta 13680
tcttctgctt gcatacctct gagaccaggg gactcactca cttgcatgac tgggccctgc 13740
aggtcacact ggccaggcag atgtggtgga ggaactggca gaggactttt tctagactgt 13800
gactacattt agtccaccca gcggcccccc tatgaagtcc agttgagaac taggactctg 13860
ggggccggtg gacagagaag agggagggtt ctctccctta ctgacttcct tctgtggcca 13920
gacattgagc aaggcctctg tacagcatgt cctggggctg gccttgccgt agctgctaaa 13980
tagttgacga aaccagtcca gagaggggag gtgactgcca gggtcgcaca gctcaagctg 14040
gggaactcgc tgggaaaact gtcagctctg ggcagcagct tgacttccac tgtaagcccc 14100
agcccccagg gtcaaacact ggctctggtg ctggcagagg cagcccacta gcctgtttca 14160
aaggctgaga aggcccagga gtctgccctg tgctccacca gttctgccct gagactttcc 14220
tacagagtac aggttttgat gttcagtttt aaaggcaaga atcaataacc ttctgcccca 14280
tcaggtgacc ccttgtgcct gtcccacccc tttattgact gacctcggct cagtcaggtc 14340
agttcctgaa ggtcagtgtg tggaggggag gctgttcttt cccagaaagg ccttccccag 14400
gcctggtgct ctggcctctg gaggacttcc tggagaagtc ccttctttgg ggtcccagtc 14460
agtgtatggg aagcccttat tgcatgacct ggcacggggc aggggctcaa cagtcactat 14520
tgccttcctt gccactgcca tttcctcctc tgtaagcagg tgattgtgtg tccagtctga 14580
gcacagagat aagcacacag caggtgctta ataactagca gctgtaggct gggcgcggtg 14640
gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggtg ggcagatcac ctgaggtcag 14700
gagttcgaga ccagcctgtt caacatggtg aaaccccgtc tctactaaaa atacaaaaat 14760
tagccaggca tggtggtggg tgtctgtatc ccagctactt gggaggctaa ggcaggagaa 14820
tcgcttgaac ccaggaggtg gaggttgcag tgagctgaga tcgtgccact gcaatccagc 14880
ctgagtgata gagcgagatt ccatctcaaa aataaataag taaataacta gcagctgtaa 14940
atgtggctgt tgttcttcac ctccacactc agtgccactc cactccctcc ctccgtggtg 15000
tgaggggcct cactagctgt ctcctaggag gagcatggct gtgagattcc agctccatcc 15060
ttggccacgg ctcctggaga catcttagag gccaggatcc agaaggctcc cacacctcat 15120
ttgacagggg agaagctgtc agttccaggt ccccttgcac atcagggcca gagctgcgtt 15180
aggcctccag tctccaggcc actgggccag agctcacagg ctggcagagg gttagaactg 15240
ttactggtgg ctgggtgcag tggctcacgc ctgtaatctt agcactttgg gagggcaagg 15300
cgggaggatc atgaggtcag gacatcgaga ccatccttgc taacacggtg aagccccgtc 15360
tctactaaaa ctacaaaaaa ttagccgggc gtggtggcag gcgcctgtag tcccagctac 15420
tcaggaggct gaggcaggag aatggcgtga acccgggagg cggagcttgc agtgagccga 15480
gattgcgcca ctgcactcca gcctgggcaa tagagcgaga ctccgtctgg aaagaaaaaa 15540
aaaaaaaaga gctgttactg ttgacagtag catgaggtag accatggcct gcaccaaaat 15600
gggggagtgg agtgccactg aggccagaag gaaccacacc ctcaagggtg gggagttatg 15660
gtatgggggg tcctaggcat ggagtctttt aattctttag acaatcctgg gagcaactgt 15720
ccctgtttca cagagggcgg ggccacacag ctggtgagtg ggcagccaag actctgttca 15780
agtttgtgtg ggtccaacac ttgcggccac ggtggagggg catctgagcc aggcctcaga 15840
gagtggcggg ggaagttggg tggggaagtg tgcccttctc attcctctga ggctcatcct 15900
cttggtgcct ctctttcatg gaaagggata ataaggttat tgtgaggatc ccctgagttc 15960
gtatattcag acgcttagac agagccaggc acagagaagg gcccggggtt ggctagtttg 16020
attgctggtg taattgctaa tatcttccag tttgtattgg tcaaggttct gcagagaagc 16080
agaaccagta ggatgtatat attaagagtt tcaagctcat gtgaccgtgc gggctggcaa 16140
gtctgaaatc cgcagggcag gccaggcagg ctggcaattc ctgcagaatt tgatgttgca 16200
atactgagtc ctaaggcagt cctggggcag aattccttct tccctgggag gcctcagtct 16260
gttctcttaa ggccttcaac tgattaaatg aggcctgccc aagttataga gagtaacctg 16320
ccttactccg tcttctgatt taaatgttag tcacatctaa aaaatatttt cgcagcagca 16380
tttccactgg cttttgacca aacatcaggc cacaaagttg atccccaaaa ttaaccatca 16440
ctctgtgcct gtaagggagg ggctgggaaa ggggagcagg tctccccaag gggtgacctt 16500
ggctttgttc ctcccaggcc tggagtttat tcggaaaagc cagctggtcc agcctgtggg 16560
gccactggtg gtgctgctgc ccctggcggg tgggtacagc cgcgtcctca acgccgcctg 16620
ccagcgcctg gcgagggctg gggtcgtgct ggtcaccgct gccggcaact tccgggacga 16680
tgcctgcctc tactccccag cctcagctcc cgaggtaggt gctggggctg ctgccccaag 16740
gcgcgggtag ggggcggagg gcggagggcg gagggagggc gggcgggcag gcgggcttct 16800
tgtggcacgt gggcttcttg tggcacgttc ctggaggccg aacccttctg gctttggaag 16860
gagtcgtcag agacccccgc catgcgggag gctggggagg aaggggctcg aaacctccat 16920
catcgcagag tctgaatagc agtggccccg ccatgcgccc acgtagcggc gcctacgtag 16980
ccacgccccc acaccccgtc ctggccactc tccctcctga aggtcttctg gtacccgccc 17040
cctccccatc tccatcccca ggccctgcgt cctctgccca atactctttg ggcctccctg 17100
ttgtccagct ctctccgcgg ctccatgact gacaacttga gcaaggctaa tgtgaatggg 17160
agcggttgag ggctcagacc tctcacccga ggaacatcca cagagtgtgc cgcatgcccg 17220
gtgcagtgtg gctgcgggga cacagacacg gagcctcggc cctgaggagc tggggggcag 17280
tgaccgtccc tcctctgacc caccactcct ccagtgtcag gacactgcgg gtatctaggg 17340
gaaggaatct tgttccactt caagtctgga acttcaagtc tgtgtgtgtg cgtgcgcgcg 17400
cgcgcgttgg gggtgggggt tgcagagcag atgcgtacct gacagcggta acctaggtcc 17460
cccctggcct atcaaggctt ccctggcggc cgaatttaaa ggcatcaagc aaacaaagcc 17520
caacacatct ctgccttgtc ctctcagttt ccccccgtgg cacttagaac cacttgatac 17580
accgaatagt ttcctatctc ccccactagg atgtaaactc cacaggggca ttgggaatgc 17640
tgcctggcta tggtagggac agaggggagc accagggcgg ggcaggggtg ccagagttct 17700
gcctgggcag tcagattttc cttaggaggg gacatttgag tgggacccaa acaggtgtat 17760
agcagttgtc cagcccagct ggcaaggcct gagtctgcct ctgcaacccc tctcttgggc 17820
tcctttctct gccacccacc tcctcacctt tccaggtcat cacagttggg gccaccaatg 17880
cccaagacca gccggtgacc ctggggactt tggggaccaa ctttggccgc tgtgtggacc 17940
tctttgcccc aggggaggac atcattggtg cctccagcga ctgcagcacc tgctttgtgt 18000
cacagagtgg gacatcacag gctgctgccc acgtggctgg taagtcacca ccccactgcc 18060
tcggccaccg tgatgctaac agcccctttg gcagtcaggg tctgtgccgg gacctccagt 18120
gccaggctct gtgcaggggg accagagatg aagtaggcct gatggtgcct tcaaggacac 18180
tcagtctgat gagggaggcg agtgcacaga ggaaacacga ggtcagggct gtattagagg 18240
gagcccagag gaggcacctg cccagcccga gggtcagaga aggcatcttg gaggagggac 18300
atttgatcgg gagcttgatg gatgaatagg agttcacctg gccgataaga cagcaactac 18360
caaggcttag aggtgtgaga ggaggctgtc ttacctcact gagtaaggac tgcaggcggc 18420
ttaccttcga gaagagagct tagtgtctgt gtgcacgtgt gtttgtgtgt atgtgtgtgc 18480
gtgtgtgcac tggcaggagt cccctgctgg ggcaggaggg ccgggccatc accatctttc 18540
accattcacc cctgcaccag gcattgcagc catgatgctg tctgccgagc cggagctcac 18600
cctggccgag ttgaggcaga gactgatcca cttctctgcc aaagatgtca tcaatgaggc 18660
ctggttccct gaggaccagc gggtactgac ccccaacctg gtggccgccc tgccccccag 18720
cacccatggg gcaggtaagc aggatggcag ggtgggcaag tccaggctgg ggcttgggag 18780
gtctgtgtga ccttgacagt ctctcccttc tcccttgtct gtgtaaggag gatgacgcca 18840
ccttaaatag gattaaatga gaatggggct ctgaaagggc tgtgcaatat tttcataacg 18900
tgtttttata gagacagttg agtatgttct ttaagccctc ctctctccta ccatgaacta 18960
aagatttctg tggaggtccc ctcactccca gcaccccctc ctcatcccag gccctttttg 19020
caggttggca gctgttttgc aggactgtat ggtcagcaca ctcggggcct acacggatgg 19080
ccacagccgt cgcccgctgc gccccagatg aggagctgct gagctgctcc agtttctcca 19140
ggagtgggaa gcggcggggc gagcgcatgg aggtgactgt acccctcctt cgtgtgtgtg 19200
tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtcagtgct gggccctcag 19260
ggacccccag caagcccctc catcctccag actccagctc ttctgtaagc ttacagggct 19320
ggccagacca ggagtggggc actcctcact tcacgcggct gggggctgct ggagagagcc 19380
acagcgggaa gggtttccta gaggctgcag gacagtgctg gatggatttt caatgctcac 19440
ctgggtgtga gcgtgcggca gggccgcgtg agggtcagcg atctgctact ctggactcag 19500
ccatctctag gcccctctca ctcaggtgct ccatggttct gggagctgag aaatctcaaa 19560
ccagcaaaaa agtggaattg atgttgatgc tacaggatag tgcacagatg ccatctggtt 19620
gcagcatttt ggtggaaggg cagtgcccag ctaggagagt gaggaggggc aggcatttct 19680
ggcttgagga gatggggtct taatgctcgt gtgagaggca gagtgggtgg agtggagctg 19740
gctggatcct tgctttggcc tcctggattt ctctctatct ccattttgaa accactctgt 19800
gtttggaaga acttttgagt attcagagct gcccactggc agaacagtct tccttgggca 19860
ggagtgagct ccttgtcccc agaaggctgg gtctggctgg cccctggcag ggacactgat 19920
gagggtgctt gagttgatcc tgtctagtcc ctttctgtgt tttcaaagcc cattctaaag 19980
cagattccca tttccgtctt tgactctaag gcccaagggg gcaagctggt ctgccgggcc 20040
cacaacgctt ttgggggtga gggtgtctac gccattgcca ggtgctgcct gctaccccag 20100
gccaactgca gcgtccacac agctccacca gctgaggcca gcatggggac ccgtgtccac 20160
tgccaccaac agggccacgt cctcacaggt aggaggctgg gcttgccctg gggtgaggag 20220
gggtctcttt ctccttatgc acccactgcc cgcgaggctt ggtcctcaca agtgtgatcc 20280
atgagactca agcctgactt gcagttccat actctggttc tgccacttcc atgccctttg 20340
agcctgggca ggtgacctta cttctcctca tctcagcttc ctcctccata agagggaaaa 20400
aggtattacc tgcctcattg tgttgcaagg agatgggcag catctagggc actggcctgg 20460
agtatcgcag gtgctttgcc taaggtggtg cagtccagga gaggcagctc cagagagagg 20520
cccccggctg gggctgaaag gagggcagac ctcggtttga atttcaccct gccgctctat 20580
agctgtgtga cttgggcaaa ttacttaaca tctctgtatg aggaaatgat gagtgctaag 20640
cacttagctt agtgccggga caatataaat tctagctatc gttactattg ttttcatcac 20700
ccgttgcttt aaaatccagc ctctggtata ggcaactatt gacgggctac cctgtgtcga 20760
aaacatgccc aggcaggtag caggaagtca cagatgggga cctcttgggg catcaaggga 20820
tggtgccctg aggctgagct gttctggttg ggtggagcat gagaggtctg ggaagacagt 20880
gggactccag cctggaataa gaggctcaga gttgattctc gtctgagcac gtccagggga 20940
accactgagg gtttgggaac aggagagtga gggtgagaac ctggttctgg gcacagcagg 21000
ctggcatgta ggatggatgt tcaggaaaga tgagcatagt caggtggctg gtgcccttgt 21060
ccaggggaga ggctccgtca ggttcagggg tcctggcttg gagggaagtc cgccatgctc 21120
taatcacgct cccctttgga agtgctcagc cgatgagctc acaggcacat gtcagtttga 21180
agtcatggaa tctgactcca tgaagcgcac ctcaaagagc accattttgc agctaaggga 21240
actgcaggct ggacatgctg agtggctgcc ccgagccctt gcagctagga catagagaat 21300
gctagtaacc acaaccctac catgttcaga gcacatgcca ggctccatgc tggggcttcg 21360
cacgtgtcat cttcacagtg tccctgtgag taggtgtggt ttctctttcc atcttacaaa 21420
tgagtaaaca gagcctcagt gtagctaagt aaccactatt ttaggtttct tagccaatgg 21480
gtgtgtctga ctcctaagcc catggagggc attctgaggt ggttcagaca gaccccggct 21540
tacccttgaa cttctgcctg ctggctgcat agggaggggc tggggggagt ttgagcatct 21600
caggccatag agcccctgcc tcactgtctc catctctggg tggaaagatg gtgttttccc 21660
tgagaaacta aggctcagag aggttgaatg gctctcccaa ggtcacacag ctggtcagct 21720
gcagagttga gaacacagga gtcctggtgc tcaggccagc atctcttttt ttctttgagt 21780
tgtttctagg tttcctagct cttgcctcag accttaaaga gagagggtct gatggggatg 21840
ggcactggag acggagcatc ccagcatttc acatctgagc tggctttcct ctgccccagg 21900
ctgcagctcc cactgggagg tggaggacct tggcacccac aagccgcctg tgctgaggcc 21960
acgaggtcag cccaaccagt gcgtgggcca cagggaggcc agcatccacg cttcctgctg 22020
ccatgcccca ggtctggaat gcaaagtcaa ggagcatgga atcccggccc ctcaggagca 22080
ggtgaagagg cccgtgaggc cgggtgggtg gggtgctgcg tgtctctcct gcacagcttt 22140
tctgtgtcag tttgtgccac caccataccg ccatgcatca gggtggcggt ttgccaggta 22200
gatgctgtgg gcagcttccg ccattgtgtg gacagcatgt atatgtgtct ctgtgtggct 22260
gggtctgttt ttgcttttgt ccagatcagt aaggtttgct acctgggtac cccactccac 22320
ttggagtaga atgtgcataa atatggcata aagaaatgca atatgcatgc atttattgat 22380
tgatctattt ttttctgaga tggggtcttg ctgtgttgcc caggctggtc tcaaattcct 22440
gggctcaagc aatcctctgg tctcagcctc cccaagtgtt gggattatag gcatgagccg 22500
ctgcacctgg cctctctgat ctatttaaca aacctgctgg gagggtctca gggtcaggag 22560
cagcactggg ctctgaggac acagagctca ctcagccgtg acccagaggg ggtgcctgag 22620
ctgcatgctg aaggttgtta gcatgaccag caaggcaaga aaaggccctg ccgagattag 22680
caaggcatgt gccaagccct ggaatgtgac agccgggcct tctagaaacc tgagtgtata 22740
actctcctta aaagccagta ggagctcctc aaaaggcagc cctaaggagt ccactcttaa 22800
atgaactcag agtcagtttt aaaatgcaag tctgtgttga ttctggtctg gatggtgcat 22860
tcctcgagag caaaagacag tcttggtctt ggatccactt gccctgggta cactgagggc 22920
tgctaggttc caggtgctct tcctggcact ggggagggat acaggcccaa gagacatgct 22980
gttctccctc ctggagcatc tattttagtg gaggaagaca gaaaacaaac cattaatata 23040
gagtactgaa aagatgcgat ggagaaaact atagcaagga agggaatggg gtgggagaga 23100
ggtcaggaga ggtctcgctg acaaggtgga cgaaacaggc catgaggcag agaacatgtt 23160
ccaggcaaag caaaggcccc caggtgggga tgtgcaggga gtaccaggaa accagagagg 23220
tgggaatagt tatgagatgg ggggtgcctc agaggggaca gggccaagtc aggtgagacc 23280
tgagggtcac agtcagcagt gagctggggc catgcagggg tctggcctca gaggagtgtg 23340
gtctggcctg gatctgaacc tctcactgtg gcctagctgc tgagctgaga agagatgaca 23400
aggaccttgg gcagaagcag ggagactgga gggaggcggt ggagggtcca ggcgttgggg 23460
cggggctcag gctggagtct gaagggagcc tgcaggcctg gtgggtggat gtgggtggga 23520
gagggggagg atggcaccaa ggctcgggcc cctggacaga tggagttgcc attaagtggg 23580
atggggcagg ctatggggcc atcagtttca gagggatgag tttggcactg gcatggtagg 23640
catctgtcta tctccacggc cctcaaacca ggcatgaagc aggagctcac gtgtttggtc 23700
agccatggtg cagaaccgcc tgggtgggag gtgcggggtg ggagatacac ggttgtgtcc 23760
caaatgggct ctgagccagc gagggccgtc tgcactttgg cctcacagaa ggatgtcgga 23820
gggagaaatg aagtgtgggt gggggtcccg ggccacgcta gacatgtgct ttcttttcct 23880
cgggctctgg caggtgaccg tggcctgcga ggagggctgg accctgactg gctgcagtgc 23940
cctccctggg acctcccacg tcctgggggc ctacgccgta gacaacacgt gtgtagtcag 24000
gagccgggac gtcagcacta caggcagcac cagcgaaggg gccgtgacag ccgttgccat 24060
ctgctgccgg agccggcacc tggcgcaggc ctcccaggag ctccagtgac agccccatcc 24120
caggatgggt gtctggggag ggtcaagggc tggggctgag ctttaaaatg gttccgactt 24180
gtccctctct cagccctcca tggcctggca cgaggggatg gggatgcttc cgcctttccg 24240
gggctgctgg cctggccctt gagtggggca gcctccttgc ctggaactca ctcactctgg 24300
gtgcctcctc cccaggtgga ggtgccagga agctccctcc ctcactgtgg ggcatttcac 24360
cattcaaaca ggtcgagctg tgctcgggtg ctgccagctg ctcccaatgt gccgatgtcc 24420
gtgggcagaa tgacttttat tgagctcttg ttccgtgcca ggcattcaat cctcaggtct 24480
ccaccaagga ggcaggattc ttcccatgga taggggaggg ggcggtaggg gctgcaggga 24540
caaacatcgt tggggggtga gtgtgaaagg tgctgatggc cctcatctcc agctaactgt 24600
ggagaagccc ctgggggctc cctgattaat ggaggcttag ctttctggat ggcatctagc 24660
cagaggctgg agacaggtgc gcccctggtg gtcacaggct gtgccttggt ttcctgagcc 24720
acctttactc tgctctatgc caggctgtgc tagcaacacc caaaggtggc ctgcggggag 24780
ccatcaccta ggactgactc ggcagtgtgc agtggtgcat gcactgtctc agccaacccg 24840
ctccactacc cggcagggta cacattcgca cccctacttc acagaggaag aaacctggaa 24900
ccagaggggg cgtgcctgcc aagctcacac agcaggaact gagccagaaa cgcagattgg 24960
gctggctctg aagccaagcc tcttcttact tcacccggct gggctcctca tttttacggg 25020
taacagtgag gctgggaagg ggaacacaga ccaggaagct cggtgagtga tggcagaacg 25080
atgcctgcag gcatggaact ttttccgtta tcacccaggc ctgattcact ggcctggcgg 25140
agatgcttct aaggcatggt cgggggagag ggccaacaac tgtccctcct tgagcaccag 25200
ccccacccaa gcaagcagac atttatcttt tgggtctgtc ctctctgttg cctttttaca 25260
gccaactttt ctagacctgt tttgcttttg taacttgaag atatttattc tgggttttgt 25320
agcattttta ttaatatggt gactttttaa aataaaaaca aacaaacgtt gtcctaac 25378
Claims (407)
- 서열번호: 4의 CDR1 서열, 서열번호: 6의 CDR2 서열, 및 서열번호: 8의 CDR3 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호: 24의 CDR1 서열, 서열번호: 26의 CDR2 서열, 및 서열번호: 28의 CDR3 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 2와 적어도 90% 동일한 가변 중쇄 및 서열번호: 22와 적어도 90% 동일한 가변 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 2와 적어도 95% 동일한 가변 중쇄 및 서열번호: 22와 적어도 95% 동일한 가변 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 2와 동일한 가변 중쇄 및 서열번호: 22와 적어도 90% 동일한 가변 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 1과 적어도 90% 동일한 중쇄 및 서열번호: 21과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 1과 적어도 95% 동일한 중쇄 및 서열번호: 21과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호: 1과 동일한 중쇄 및 서열번호: 21과 동일한 경쇄를 포함하는, 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편이
(1) scFvs, 카멜바디, 나노바디, IgNAR, F ab 단편, F ab' 단편, 1가 항체 단편, 및 F( ab' )2 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고/되거나;
(2) N-당화 및/또는 O-당화가 없고/거나;
(3) 인간 불변 도메인을 포함하고/하거나;
(4) IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이고/거나;
(5) 효과기 기능, 반감기, 단백질분해, 또는 당화를 변경하기 위해 변형되었던 Fc 영역을 포함하고/하거나;
(6) N- 및/또는 O-당화를 변경하거나 제거하는 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 Fc 영역을 포함하고/하거나;
(7) 10-2 M, 5x10-3 M, 10-3 M, 5x10-4 M, 10-4 M, 5x10-5 M, 10-5 M, 5x10-6 M, 10-6 M, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 또는 10-13 M 이하의 해리 상수 (Kd); 및/또는 10-11 M, 5x10-12 M, 또는 10-12 M 이하의 해리 상수 (Kd)로 PCSK9에 결합하고/하거나;
(8) 10-4 S-1, 5x10-5 S-1, 10-5 S-1, 5x10-6 S-1, 10-6 S-1, 5x10-7 S-1, 또는 10-7 S-1 이하의 해리속도상수로 PCSK9에 결합하고/하거나;
(9) 검출가능한 표지 또는 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 부착되고/되거나;
(10) 인간 대상체에게 투여될 때 PCSK9에 의해 유발된 적어도 하나의 생물학적 효과를 억제 또는 중화하고/하거나;
(11) 인간 대상체에게 투여될 때 혈청 콜레스테롤을 감소시키고/시키거나;
(12) PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제할 수 있고/거나;
(13) 100 nM 미만, 10 nM 미만, 또는 1 nM 미만인 KD로 PCSK9에 결합하고/하거나;
(14) 1 내지 10 nM, 0.1 내지 1 nM, 또는 0.12 내지 7.99 nM인 KD로 PCSK9에 결합하고/하거나;
(15) 적어도 하나의 효과기 모이어티에 부착되고/되거나;
(16) 하나 이상의 검출가능한 모이어티에 부착되고/되거나;
(17) 하나 이상의 기능성 모이어티에 부착되는 것인,
인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 결합하는 항-유전자형(anti-idiotypic) 항체.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 치료적으로 효과적인 양으로 포함하는, 상승된 혈청 콜레스테롤 수준과 연관된 병태로서 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장병, 고지혈증, 고트리글리세라이드혈증, 시토스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증 대사성 증후군, 급성 관상동맥 증후군, 혈관 염증, 황색종, 당뇨병, 비만, 고혈압, 및 협심증으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 병태를 치료 또는 예방하는데 사용하기에 적당한 조성물.
- 제10항에 있어서,
(1) 피하 투여에 적당하고/하거나;
(2) 정맥내 투여에 적당하고/하거나;
(3) 국소 투여에 적당하고/하거나;
(4) 약제학적으로 허용가능한 희석제, 캐리어, 가용화제, 유화제, 보존제, 또는 그의 혼합물을 추가로 포함하고/하거나;
(5) ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항-부정맥제, 항-혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 및 다른 항-콜레스테롤 약물 또는 그의 혼합물로부터 선택된 또 하나의 활성제를 추가로 포함하고/하거나;
(6) LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키는 또 하나의 치료제를 추가로 포함하고/하거나;
(7) 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 또 하나의 치료제를 추가로 포함하고/하거나;
(8) HDL 수준을 상승시키는 또 하나의 치료제, 또는 트리글리세라이드 수준를 감소시키는 제제, 또는 둘 모두를 하는 제제를 추가로 포함하고/하거나;
(9) 피브레이트를 추가로 포함하고/하거나;
(10) 담즙 격리제를 추가로 포함하고/하거나;
(11) 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제를 추가로 포함하고/하거나;
(12) 간 트리글리세라이드 생산을 억제하는 제제, VLDL 분비를 억제하는 제제, 또는 둘 모두를 하는 제제를 추가로 포함하고/하거나;
(13) 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제를 추가로 포함하고/하거나;
(14) 항-고혈압제인 제제, 협심증을 치료하는 제제, 또는 둘 모두인 제제를 추가로 포함하고/하거나;
(15) 적어도 하나의 다른 제제를 추가로 포함하고/하거나, 여기서 상기 조합은 포함된 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용하는 것인;
(16) 적어도 하나의 염증용 치료제를 추가로 포함하고/하거나;
(17) 주사로 투여하기 위해 동결건조된, 안정화된 및/또는 제형화된
조성물. - 제10항에 있어서, 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물이며, 여기서
(1) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 PCSK9의 LDLR에의 결합을 억제하는 것인;
(2) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 콜레스테롤 합성의 차단 또는 억제를 야기하는 것인;
(3) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 LDLR 단백질의 이용가능성을 상승시키거나 콜레스테롤 합성을 차단 또는 억제하는 또 하나의 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 또 하나의 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(4) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 스타틴, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 항-부정맥제, 항-혈소판 약물, 아스피린, 베타 차단제, 아미오다론, 디곡신, 항-응고제, 디곡신, 이뇨제, 심부전 약물, 혈관확장제, 혈액 응고방지제, 및 다른 항-콜레스테롤 약물로부터 선택된 다른 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 다른 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(5) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 HDL 수준을 상승시키고/시키거나 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 또 하나의 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 또 하나의 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(6) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 담즙 격리제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 담즙 격리제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(7) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 창자에서 콜레스테롤 흡수를 감소시키는 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(8) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 간 트리글리세라이드 생산을 억제하고/하거나 VLDL 분비를 억제하는 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(9) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 창자에서 지질 흡수를 감소시키는 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(10) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항-고혈압제인 제제 및/또는 협심증을 치료하는 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 상기 제제는 이뇨제, 아드레날린 수용체 길항제, 칼슘 통로 차단제, 레닌 억제제, ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 알도스테론 길항제, 혈관확장제 또는 알파-2 작용제로부터 선택된 것이며; 여기서 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(11) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 다른 제제의 바람직하지 않은 부작용의 완화를 허용하기 위해 적어도 하나의 다른 제제와 조합하여 사용되는 것이고, 여기서 제제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시에 투여되거나 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대하여 순차적으로 투여되는 것인;
(12) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 간 트리글리세라이드 생산을 억제하고/하거나 VLDL 분비를 억제하는 제제와 조합하여 사용되는 것인; 및/또는
(13) 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 염증을 억제하는 제제와 조합하여 사용되는 것인,
조성물. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산 또는 핵산들.
- 제13항에 따른 단리된 핵산(들)을 포함하는 벡터 또는 벡터들.
- 제13항에 따른 핵산(들) 또는 제13항에 따른 단리된 핵산(들)을 포함하는 벡터(들)을 포함하는 숙주세포이며, 여기서 숙주세포는 포유동물 세포, 박테리아 세포, 진균 세포, 효모 세포, 조류 세포 또는 곤충 세포인 숙주세포.
- 재조합 숙주세포에서 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 발현을 위해 인코딩하는 핵산을 발현시켜 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 인간화된 항-인간 PCSK9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법.
- 제10항에 있어서, 구강, 표피, 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 진피내, 근육내, 비강내, 안구내, 복강내, 척수내, 척추강내, 정맥내, 경구, 비경구, 직장으로 관장 또는 좌약을 통해, 피하(subcutaneous), 피하(subdermal), 설하, 경피, 및 점막통과로부터 선택된 수단에 의한 투여에 적당한 조성물.
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