JPS59118797A - アントラサイクリノングリコシドの精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は樹脂上への選択的吸糸によるアントラサイクリ
ノングリコシドの精製法に関する。

前記クリコシドを咲σ上糾棒な形態で取得するのに使用
するためのに、嵐に牛−：美的な方法を得る必要性は、
発、ｂｚ的製造法オ６よび合成的爬造法のいずれにおい
ても粗生成物中におり′る不桜および無根不純物のけが
恥に高くそして平和１２〜２５％まで達ずろという１火
がら王どして生ずる。

しかしなから、塩素化された溶妖・での粗生成物の抽出
そして次に緩衝液での洗浄を行なう従来既知の杯製抄作
による方法では、不純物嘱が相轟低下しているにしても
なお４５〜５．０％の範囲にある最終生成物を生ずる。

一力では一般的に受容しうるものと考えられるが、前記
の純度４ｉ準は配糖体分子の取扱いおよび化写的試薬に
対する特別な感受性を考伽、すると、実質上純粋な最終
生成物の取掃を可能にする改良された程製法の仙究にお
ける興味を刺激した。抗ａｈ剤としてのアントラサイク
リノングリコシドの臨床的使用、そして薬用量および毒
性という副次的問題を考慮しつつ、一般的に母性の高い
不純物の最適な除去を達成できることは本発明の明らか
な有用性である。

不純物を最高２％の量で含有する最終生成物の取得を可
能にする本発明の方法は粗生成物を酸性環境（ｐ）ｉ　
３〜５）で種々のタイプの樹脂上に吸温させそして次に
水または水と極性溶媒との混合物を用いて溶離する方法
に実質的に基いている。より詳しくは、本発明方法は水
溶性物質を溶解含有する弱酸性水性媒体を顆粒またはビ
ードのような粒子中に分散された樹脂上に吸着させる段
階および第１の段階において吸着された物質を脱着させ
る引続く段階を包含するものである。

吸着する樹脂は、実質上一般的に好都合には樹脂粒子を
充填した塔またはカラムの形状をした適当な容器中に含
有さハうる。粗生成物中に含有される不純物の種類の如
何により、最初の樹脂からの物質の脱着により得られる
溶出液は好都合には引続いて異なる型の樹脂上に吸糸さ
れ、そこから次に既知方法で溶離されうる。

本発明のクロマトグラフィ鞘製法においては、■（合体
状且つイオン交換型またはカルホキジメチルセルロース
型の吸う？イ梢脂が使用された。秤製すべき粗生成物に
応じた種々の型の拘脂の使用における正しい）ル択およ
び適当な順序そして吸光期山」中の弱い酸性環境により
、高純良の最終生成物の取得、塩素化准機溶媒使用の排
除および優れた狛製収幕か得られる。

以下の非限定的例により本発明方法を説明する。

例　　１ ４−デメトキシグウノルビシンの精製 力価７０２％および不純物含量１８％を有する精製状態
の４−テメトキシータウノルビシン１５．０２を０５％
酢酸ナトリウム溶液３．６を中に溶解させる。酢酸の添
加によりｐＨ４，７としたこの溶液を直径２．５　ｃ７
ｎのカラ人中のアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉ　ｔｅ
町ＸＡ−Ｄ２型Ｉｉ月旨［ローム・アント拳ハース社製
品、１４００ｄ上に吸潮させる。生成物を水１０１００
Ｏで洗いそして次に水／メタノール（５：　１　）　（
ｖ、／ｖ）混合物を用いて溶離す、る。第１蚤目の溶出
液として、アグリコンおよび種々の不純物を含有する浴
液２０００ｍ７を集める。

水／メタノール（１：１）（ｖ／ｖ）混合物を用いて溶
離を続けそして４５００ｍ１のフラクションを集める。

溶液状態において溶出液は前記４−デメトキシータウノ
ルビシンを１０％の不純物と共に含有する。

この溶出液を塩酸の添加によりｐＨ２，８となｔ７そし
て次１１と下に濃縮し２て容Ｊ４１５００ｍｇとな１ｏ
た綺され、た電像に酢酸す）・リウノ、を添加すること
によりｐＨを４０とカ〜しそしてこの弱酸性溶液を１ｅ
径２．５　ｏｎＯｎシカラム中有されたＣＭセファロー
ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　　）Ｃ１，６Ｂ’ｍ伽脂〔フ
ァルマシア社製品）１ｓｏｍｚ上に流量毎時１５０ｍ１
！で吸着させる。吸漸先軸後、カラムを初め水４５０ｍ
ｅでそして次に０．０３％塙酸で溶離する。

不純物１８係を含有する初めの溶出ン俟８００ｒｎｌを
酢酸ナトリウムの添加によりｐ）１４．７としそして第
１番目の精製段１階のアンバーライ）　ＸＡＤ２槓１脂
上に吸着させるべき粗製４−デメトキシ−ダウノルビシ
ンの溶液に加えて再楯環させろ。

純粋な４−テメトキシーダウノルビシンを含イｉ下る続
く溶出液（３５００ゴ）を容量５０　ｍｌとなるまで真
空砲盃、する。°アセトン２５０１ｎｌを加え、得られ
た沈殿をｆ過し、アセトンで洗いそして乾燥する。出発
粗生成物に基いて計鏝して５２チの収率で４−デメトキ
シータウノルヒンンが力価９７チおよび不純物含量３％
以下でイ号られる。

例　　２ タウノルビシンの精製 力価７４２％および不純物含量８５ヂを有する塩素化ダ
ウノルビシン１５０２を水４５ＤＯｄ中に溶解させる。

酢酸ナトリウムの添加によりこの溶液をｐＨ５，０とな
しそして直径２．５　ｃｍのカラム中の８１１２カスチ
ル（Ｋａｓｔｅｌｌ’、、　）樹脂またはアンバーライ
トＥＲ１８０型樹脂（ローム・アンド・ハース社製品）
４０〇−上に流量毎時６００づ（１，５ｂ、Ｖ、）で吸
着させる。

この生成物を１％塩化ナトリウム溶Ｑ１ｏｏ。

−で洗いそして次に水／エタノール（１：１）（Ｖ／■
）４５合物で溶離する。

溶液中にアクリコンを含有する最初のフラクション（”
４００ｍｇ）を除去しそして溶離を継続して純粋なダウ
ノルビシンを含有する浴出Ｍ　２６．　Ｑ−を集める。

希塩酸の添加によりｐＨを２５に調整し、アセトンをＩ
ｓ　））ＩＪ　Ｌそして生成物を＋５℃で６時間結晶化
せしめる。生成物を１過し、アセトンで洗いそして１２
時１μ］具空乾燥する。

出発粗生成物に基いて計算して収率８０％でタウノルビ
シンか得られる。ＨＰＬＣにより測定して力価９７％、
不純物含ｔｉ：　２．６−％である。

例　　６ ４−テメトキシードキンルヒシンの精製不紳物含錦１４
％を有する４−デメトキシードキンルビシン１０．１’
を含有する水溶液２ｏ　ｏ　ｃ−を直径２．５　ｃＩｎ
Ｏカラム内に含有されるＥＲ１８０創ａ１月旨（ローム
・アンド・ハース社製品）５０ｔｎｌ上に流、桁毎時２
５０ｍ１で吸着させろ。

不純物の選択的吸瘤により部分的に精製された溶出液を
次に、ＣＭセファロースＣ１，，６Ｂ型楡１脂２００ｍ
１上に吸着させる。生成物をメタノール／水／濃塩酸（
５０：５０：００１５）の混合物を用いて溶離し、アグ
リコンおよび他の手許１（物を含有する最初のフラクシ
ョン（約８００ｍ１．）を倦てる。次に純粋な物質な含
有する溶出久２０００彪を菓め、そして６０ｍ１となる
まで真空製靴する。アセトン３００ｍｔを溶加し、３時
間攪拌する。沈殿をｆ過し、アセトンで洗いそして乾燥
する。不純物含量６％の純粋な４−テメトキシードキン
ルビシン６５２が理論上の５８２チの収率で得られる。

例　　４ ４′−デスオキシードキンルヒシンの棺製力価６９２％
そして有機不純物含量１２％ならびに鉱物塩不純物１２
％を有する４′−デスオキシードキンルビシン１５ｏ２
を水２ｏｏｏｍｌ中に溶解しそしてＣＭセファデックス
Ｃ２５型樹脂６ａｏｍｔ上に流量毎時６００−で吸着さ
せる。吸着が完了すると、溶液を０．０６％塩酸で溶離
しそして４′−デスオキシ−ドキソルビシンを含有する
フラクション（６５００ＴｎＩ２）を得る。

前記溶出液を水酸化す）　ＩＪウム溶液の添加によりｐ
Ｈ３，８となし、そしてこれを８１１２カスチル樹脂２
０〇−上に毎時４００ｍ１の流量で吸着させる。

生成物を水６００鉱で洗いそして次に塩酸の添加Ｋ　ヨ
’）　ｐＨ２，０Ｋ酸性化したメタノールで溶離スる。

コア溶出液６００ｍ１！を得、これを真空濃縮して６０
ｍ１となす。攪拌しながら、この濃縮した溶液をアセト
ン６０ｏｔｎｌ中に徐々に加える。形成された沈殿を１
過し、アセトンで洗いそして乾燥する。

力価９５８％および不純物含量４２％を有する４′−デ
スオキシードキンルビシンが珍論上の６１チの収率で得
られる。

例　　５ ４′−エビ−ドキソルビシンの精製 力価７．５．９修および不純物含量１５％を有する粗製
４′〜エビードキンルビシン１５０りを水４（３００ｍ
ｌ中に溶解させる。

＠酸す）　ＩＪウムの添加によりこの溶液をｐ）１４．
８となしそして直径２．５　ｃＩｎＯカラム内に含有さ
れるアンバーライトＩＲＣ７２４型樹脂４０Ｍ上に毎時
１６００ｍ（４ｂ、ｖ、）の流量で吸着させる。

カラムを水８００−で洗いそして次にメタノール／水／
濃塩酸（９５：５：０．０１５）の混合物を用いて溶離
する。まだ１０％の不純物を含量する４′−エビ−ドキ
ソルビシンを含有するコア浴出液４０００ｔｎｔおよび
不純物含量の多い後部溶出液１５００−を犯める。

コア溶出液を１５００ｍ７！まで濃縮し１、蟻酸ナトリ
ウムの除却によりｐＨ４，８となしそして直径２５ｃ１
ｒｒのカラム内に含有されるカルボキシメチルセルロー
ス［ワスマン（Ｗａｔｎｍａｎｏ）Ｊ樹脂２５０＋＋＋
７！上に毎時５００ｍｇ　（２ｂ、ｖ、）の流量で吸瘤
させる。

吸殆が完了すると、生成物をエタノール／水／儂堵酸（
９９，３：０．７：００１５）混合物で洗いそして次に
エタノール／水／濃隼敵（９０：１０　：０．０５）の
混合物で溶離してコア溶出液３２００＋ｎｌを集める。

浴出液を６０ｍ１となるまで真空濃縮し、そしてアセト
ン゛３００−の添加により生成物を沈殿させる。

力佃１９１．２％および不純物含量６％を廟する４′−
エビ−ドキソルビシン６９ｖが得らする。収率５５ろチ
。

例　　６ ドキソルビシンのイＹｊ製 （ａ）　　ドキソルビシン７０７を水２′８を中に溶解
させる。緩衝液の添加によりｐＨ６７〜４５となしそし
てこの浴液を直径６０を有するカラム内に含有される５
１１２カスチル樹脂２を上に吸光させる。

生成物を水６５ｔおよびメタノール１５７の混合物で溶
離する。

溶出？俟（４０ｔ）を０．５７となるまで真空びｔ縮し
そして５℃で６時１”ｉ」ｔｚ拌しなから９エタノール
１ｔおよびアセトン４．５１の混合物を添加することに
より生成物を結晶化させる。

この生成物をＦ’ａし、Ｏ，ＳＺのアセトンで洗いそし
て４０℃で５時間真空乾燥する。１回精製されたドキソ
ルビシン（Ｉ）５６．　ＯｒがＱられる。

（ｂ）　　前記方法鉤で得られた１回精製ドキソルビシ
ン（Ｉ）８０．　Ｏｆを水２４を中に溶解させそして緩
衝液の添加によりｐＨ４，０となす。

この溶液を直径１２ｃｍを有しそしてカルホキシメチル
セルロースワスマン衛脂１．６ｔを含有するカラムに吸
着させる。

カラム流出液を除去する。水６．２ｔで洗ったのち、生
成物を塩酸の添加によりｐＨ２，５となした水５５１を
用いて溶離する。

溶出液４６ｔを集めそして真空下に０．６ｔとなるまで
訳縮しそしてイソプロパツール／アセトン（１：３）混
合物の注意深い添加により生成物を結晶化せしめる。

生成物を沢過し、アセトン１ｔで洗いそして＋４０℃で
４時間乾燥する。力価９８．５％および不純物含量１５
％を有するドキソルビシン６５ｆが得られる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）粗生成物の水浴液を樹脂上にか択的に吸着さぜるこ
   とにより精製を実施することからなるアントラサイクリ
   ノングリコシドの精製法。 ２）精製すべき′ｉ１（生ｂｋ物を含廟する溶液を佼脂
   」二に吸光させるｉｉＪ　Ｋ　ｐ８３〜５となすことか
   らなる前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ろ）吸オーに使用される樹脂か重合体状イオン交４Ａ　
   Ｍ　Ｗｊ　ｈ１月旨およびカルボキシメチルセルロース
   記ＩＪ許請求の範囲第１歩記載の方法。 ４）精製すべき粗生成物を含鳴する溶液の樹脂への吸着
   がただ１椹の型のｍ１脂を用いることにより、または不
   純物の性質に応じて異なる型の樹脂を適当に選択された
   順序で用いろことにより実施されることからなろ前記特
   許請求の範囲第１項記載の方法。 ５）將］製された物個を４９１月りから８兄篇すること
   からなる前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６）樹脂からの精製された物質の脱着が弱し性の水、ま
   たは水と極性電媒との混合物を用℃・て溶離することに
   より実施されることからなる前記特許請求の範囲．第５
   項記載の方法。 ７）樹脂上への選択的吸着による精製が発醇により得ら
   れたアントラサイクリノングリコシドおよび同様の合成
   化合物のいずれにも使用されうろことからなる前記特許
   請求の範囲第１項記載の方法。