JPH10225299A - バンコマイシンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】バンコマイシンの脱色度と回収率が両立出来る
経済的な脱色方法が必要である。 【解決手段】酸性のバンコマイシン溶液をフェノール系
吸着樹脂に通過させ通過液を得る方法、及び弱アルカリ
性のバンコマイシン溶液をフェノール系吸着樹脂に通過
させ、吸着されたバンコマイシンを酸性の低級アルコ−
ルで溶出し溶出液を得る方法、これら２つの方法に代表
される、有機溶媒を使わずに再生できるフェノール系吸
着樹脂にバンコマイシンを接触させる事を特徴とする脱
色方法により、脱色効果と良好な回収率が両立出来る経
済的な工業生産に適した脱色方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、バンコマイシンを
フェノ−ル系吸着樹脂に接触させることを特徴とするバ
ンコマイシンの脱色方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】バンコマイシンはノカルディア・オリエ
ンタリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）
により醗酵ブロス中に生産されるグリコペプチド系抗生
物質である（例えば、米国特許第３０６７０９９号）。
バンコマイシンの醗酵ブロスからの精製は、先ずイオン
交換樹脂などで醗酵濾液よりバンコマイシンを吸着回収
した上で、遊離塩基の晶析、必要であればクロマトグラ
フィ−を行って、最後に活性炭による脱色をしてから塩
酸塩として分離されるのが一般的である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】バンコマイシンの脱色
は、活性炭を用いるのが一般的であり、醗酵液から混入
して来る色素を含む不純物の除去が目的である。活性炭
は中性から弱酸性で脱色能が最も高いと一般的に言われ
ているが、この液性だと脱色率はよいが、バンコマイシ
ンも吸着され回収率の低下を来す（参考例１参照）。一
方、回収率を高めるために、より酸性又は塩基性で処理
すると回収率はよいが、脱色能の低下が起こる（参考例
２及び３参照）ので、活性炭の使用量を増やさなくては
所望の脱色度を達成する事は出来ない。回収率と脱色度
を両立させる為に液性と活性炭使用量のバランスをとる
のは難しく、回収率を犠牲にせざるを得ない。また、活
性炭は繰り返し使用が出来ないので商業的に使用するの
は望ましくない。従って、脱色度と回収率を両立する経
済的な脱色方法が必要とされている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は上記の課題を鋭
意検討の結果、従来の活性炭に代えて、フェノール系吸
着樹脂にバンコマイシンを含む水溶液を接触させること
によりバンコマイシンの脱色度と回収率を両立できる脱
色方法を見いだした。

【０００５】すなわち本発明は、 １．フェノ−ル系吸着樹脂にバンコマイシンを含む水溶
液を接触させる工程を含むことを特徴とするバンコマイ
シンの製造方法、 ２．酸性ｐＨを有するバンコマイシン溶液をフェノール
系吸着樹脂に通過させ、通過液を脱色液とする前記１項
記載の製造方法、 ３．酸性ｐＨがｐＨ３．０から５．０である前記２項記
載の製造方法、 ４．通過させるバンコマイシン溶液の濃度が３から１５
ｇ／Ｌである前記２又は３項記載の製造方法、 ５．樹脂に対するバンコマイシンの負荷量が１５０から
２５０ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂である前記２、３又は
４項記載の製造方法、

【０００６】６．弱アルカリ性ｐＨを有するバンコマイ
シン溶液をフェノ−ル系吸着樹脂に通過させ、吸着され
たバンコマイシンを酸性の低級アルコール水溶液で溶出
し回収する前記１項記載の製造方法、 ７．弱アルカリ性ｐＨがｐＨ７．０から８．５である前
記６項記載の製造方法、 ８．通過させるバンコマイシン溶液の濃度が３から１５
ｇ／Ｌである前記６又は７項記載の製造方法、 ９．メタノ−ルを１０から５０％（Ｖ／Ｖ）、ｐＨが
１．０から３．０である塩酸酸性メタノ−ル水溶液で溶
出する前記６、７又は８項記載の製造方法、 １０．樹脂に対するバンコマイシンの負荷量が１５から
２５ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂である前記６、７、８又
は９項記載の製造方法、

【０００７】１１．フェノール系吸着樹脂が、ポアー径
１５〜３５ｎｍ、ポアー容積０．９〜１．６ｍｌ／ｇの
範囲にある前記１〜１０項いずれかに記載の製造方法、 １２．フェノ−ル系吸着樹脂がアンバ−ライト（Ａｍｂ
ｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−７６１である前記１〜１１項い
ずれかに記載の製造方法、 １３．バンコマイシンを含む水溶液が、バンコマイシン
塩基の結晶を溶解した液から調製されたものである前記
１〜１２項いずれかに記載の製造方法、 １４．バンコマイシンを含む水溶液が、尿素を含むバイ
コマイシン水溶液より晶析したバンコマイシン塩基から
調製したものである前記１３記載の製造方法、 １５．フェノール系吸着樹脂より溶出したバンコマイシ
ン溶液のバンコマイシン濃度当たり（ｇ／リットル）の
４５０ｎｍの吸光度値（Ａ／Ｃ値）が０．００５以下で
ある前記１〜１４項いずれかに記載の製造方法、 １６．フェノール系吸着樹脂を通過させたバンコマイシ
ン水溶液を再度フェノール系吸着樹脂に通し、バンコマ
イシンを吸着、溶出する前記１〜１５項いずれかに記載
の製造方法、に関するものである。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明においてフェノ−ル系吸着
樹脂とは、フェノ−ル・ホルマリン縮合体よりなる架橋
構造を有するマクロポ−ラス型吸着樹脂であり、ポア−
径が１５から３５ｎｍ、ポア−容積が０．９から１．６
ｍＬ／ｇ有するものが好ましい。例えば、米国ロ−ムア
ンドハ−ス社の商標であり、日本では住友化学工業株式
会社が供給しているアンバ−ライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔ
ｅ）ＸＡＤ−７６１がある。この樹脂は、以前デュオラ
イト（Ｄｕｏｌｉｔｅ）Ｓ−３０、デュオライト（Ｄｕ
ｏｌｉｔｅ）Ｓ−７６１、及びデュオライト（Ｄｕｏｌ
ｉｔｅ）ＸＡＤ−７６１と呼ばれていたものである。

【０００９】これらのフェノ−ル系吸着樹脂は、活性炭
と異なり吸脱着が容易で、再生により繰り返し使用が可
能である。また、現在最も一般的に使われている吸着樹
脂であるスチレンジビニルベンゼン系吸着樹脂は、再生
剤に５０％（Ｖ／Ｖ）以上有機溶媒を含むような酸性又
はアルカリ性水を必要とするが、フェノ−ル系吸着樹脂
は、有機溶媒を全く含まない酸・アルカリでの再生が行
える。我々は、フェノ−ル系吸着樹脂の経済性に着目
し、バンコマイシンの脱色に利用する事を試みた結果、
活性炭に代わる優れた脱色効果を発揮させる事に成功し
た。

【００１０】本発明において、フェノ−ル系吸着樹脂を
用いたバンコマイシンの脱色方法には２通りある。１つ
は、カラムに詰めたフェノ−ル系吸着樹脂にバンコマイ
シン溶液を通過させ、通過液を脱色液として得る方法。
もう１つは、カラムに詰めたフェノ−ル系吸着樹脂にバ
ンコマイシン溶液を通過させ、バンコマイシンを吸着さ
せた後、適当な溶出剤で溶出して溶出液を脱色液として
得る方法である。

【００１１】通過液を得る場合、バンコマイシン溶液の
ｐＨを、３．０から５．０、望ましくはｐＨ３．５から
４．５に調整する。この時のバンコマイシン濃度は３か
ら１５ｇ／Ｌ、望ましくは６から１２ｇ／Ｌである。こ
のバンコマイシン溶液を、１５０から２５０ｇバンコマ
イシン／Ｌ樹脂、望ましくは１８０から２２０ｇバンコ
マイシン／Ｌ樹脂の負荷量で通過させる。通過速度は空
間速度（ｓｐａｃｅｖｅｌｏｃｉｔｙ，ＳＶ）１．０か
ら３．０、望ましくは１．５から２．５である。バンコ
マイシン溶液の着色度はバンコマイシン濃度当たり（ｇ
／リットル）の４５０ｎｍの吸光度（以下Ａ／Ｃと略
す）で評価し、処理前後のＡ／Ｃの値から色素除去率を
計算する。そうすると、色素除去率は８５から９５％で
ある。また、バンコマイシンの回収率は９０から９５％
である。この方法は、以下に述べる溶出液を得る方法で
は除けない不純物を特異的に吸着除去するのに有効であ
る。

【００１２】溶出液を得る場合は、バンコマイシン溶液
のｐＨを、７．０から８．５、望ましくは７．５から
８．０に調整する。この時のバンコマイシン濃度は３か
ら１５ｇ／Ｌ、望ましくは５から１１ｇ／Ｌである。こ
のバンコマイシン溶液を、１５から２５ｇバンコマイシ
ン／Ｌ樹脂の負荷量で吸着させる。吸着速度は空間速度
（ｓｐａｃｅ ｖｅｌｏｃｉｔｙ，ＳＶ）２．０以下で
ある。蒸留水で樹脂を洗浄したのち、酸性低級アルコ−
ル水溶液等で溶出する。低級アルコールとしてはメタノ
ール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールが
挙げられるが、本願ではメタノールが好ましい。また、
添加する酸性物質としては種々のものを用いることが可
能であるが、塩酸、硫酸、リン酸が好ましく、特に本願
では塩酸が好ましい。例えばメタノ−ルを１０から５０
％、望ましくは２５から３５％（Ｖ／Ｖ）含み、ｐＨ
１．０から３．０、望ましくは１．５から２．５である
塩酸酸性メタノ−ル水溶液で溶出する。溶出速度は空間
速度（ｓｐａｃｅ ｖｅｌｏｓｉｔｙ，ＳＶ）０．３か
ら０．７である。色素除去率は９０から９５％である。
バンコマイシン回収率は８５から９５％である。この方
法は、脱色だけでなく脱塩を兼ねているので他の吸着樹
脂の代わりに用いることもできる。

【００１３】上記の２つの方法を組み合わせる事によっ
て、更に脱色を完全にする事も出来る。得られた脱色液
から濃縮などの工程を経て望ましくは塩酸塩としてバン
コマイシンを得る。更に本発明において最も好ましい実
施態様は、フェノール系吸着樹脂に接触させるバンコマ
イシン水溶液が、尿素を含むバンコマイシン水溶液のｐ
Ｈを等電点付近に調整してバンコマイシンを晶析させて
得た沈澱を溶かした液である場合が好ましい。尿素を含
むバンコマイシン水溶液のｐＨを等電点付近に調整し
て、バンコマイシンを晶析するには次のように行われ
る。

【００１４】バンコマイシン溶液に予め尿素を１から１
５％（ｗ／ｖ）加え溶解する。次にｐＨを７．５から
８．５に調整する。ｐＨ調整に用いる酸又は塩基は、酸
は塩酸又は硫酸、塩基は水酸化ナトリウム又はアンモニ
アが望ましい。ｐＨ調整後、攪拌し続けると暫くして沈
澱（バンコマイシン塩基）が起こる。晶析の回収率は、
９１から９８％である。このバンコマイシンスラリーか
ら遠心分離機やプレスフィルターを用いて沈澱を集め
る。この沈澱は、結晶性ではない沈澱を濾過する際に用
いる、通気度（ｃｃ／ｍｉｎ／ｃｍ² ）１００前後の濾
布（綾織り）で沈澱の洩れが無く、妥当な速度で濾過可
能である。集めた沈澱を溶解し、上記の晶析方法を繰り
返し，更に純度の高いバンコマイシンを得ることも出来
る。得られた沈澱の溶解液をフェノール系吸着樹脂、た
とえばアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−
７６１に通過、又は吸着し溶出することで脱色する。ま
た、本発明においてはバンコマイシン濃度当たり（ｇ／
リットル）の４５０ｎｍの吸光度値（Ａ／Ｃ値）が０．
００５以下、好ましくは０．００２以下で得られるもの
であり、バンコマイシンの着色度が極めて小さい脱色方
法が可能となった。Ａ／Ｃ値はフェノール系吸着樹脂で
の接触をくり返すと更に着色度の小さい値のものが得ら
れる。

【００１５】

【実施例】以下に実施例を挙げ本発明を詳細に説明する
が、本発明は該実施例に限定されるものではない。

【００１６】実施例１ 醗酵ブロスからプレコートフィルター等によって菌体を
除去し、醗酵濾液を得た。醗酵濾液を強酸性イオン交換
樹脂ダイアイオンＰＫ２０８（三菱化学）に２０ｇバン
コマイシン／Ｌ樹脂の負荷量で通液し、水洗後、０．２
５Ｎアンモニア水で溶出し、６０Ｌの溶出液を得た。溶
出液のバンコマイシン濃度は１８．２ｇ／Ｌ、ｐＨは１
０．３であった。溶出液に粉末尿素６ｋｇ（１０％Ｗ／
Ｖ）を加え、溶解する。６Ｎ塩酸でｐＨを８．３に調整
し、１８℃に維持しながら２時間攪拌しつづけた後、プ
レスフィルターで濾過する。濾過液のバンコマイシン濃
度は１．６ｇ／Ｌであった。得られたバンコマイシンの
回収率は９１．２％、ＨＰＬＣ純度は９４．２％であっ
た。得られたバンコマイシン沈澱を塩酸で溶解し、溶解
液を得た。溶解液は、ｐＨ４．０、Ａ／Ｃ＝０．０１７
４、濃度１０．１ｇ／ｌであった。これを、２１６ｇバ
ンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷でアンバーライトＸＡＤ−
７６１にＳＶ＝２．５で通液し、通過液を集めた。その
結果、沈澱溶解液からの回収率９４．８％、バンコマイ
シン濃度当たり（ｇ／Ｌ）の４５０ｎｍでの吸収（以下
Ａ／Ｃと略す）はＡ／Ｃ＝０．００２１であった。色素
除去率は８７．９％であった。

【００１７】実施例２ 実施例１で得られたバンコマイシン沈殿を実施例１と同
様に塩酸で溶解し、溶解液を得た。溶解液は、ｐＨ７．
６、Ａ／Ｃ＝０．０２１１、濃度 ８．３ｇ／Ｌであっ
た。これを１８ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷でアン
バ−ライトＸＡＤ−７６１にＳＶ＝１．０で通液し、バ
ンコマイシンを吸着する。樹脂を水洗後、ｐＨ１．５の
塩酸酸性３０％メタノ−ル水溶液でＳＶ＝０．５で溶出
する。溶出液は回収率９３．２％、Ａ／Ｃ＝０．００１
５であった。色素除去率は９２．９％であった。

【００１８】実施例３ 実施例１で得られた通過液（Ａ／Ｃ＝０．００２１、濃
度 ７．７ｇ／Ｌ）を水酸化ナトリウムでｐＨ７．９に
調整し、２２ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷でアンバ
−ライトＸＡＤ−７６１にＳＶ＝１．０で通液し、バン
コマイシンを吸着する。樹脂を水洗後、ｐＨ２．０の塩
酸酸性３０％メタノ−ル水溶液でＳＶ＝０．５で溶出す
る。溶出液は回収率９１．３％、Ａ／Ｃ＝０．０００２
であった。色素除去率は９０．５％であった。

【００１９】以下に活性炭を用いた参考例を示す。 参考例１ 実施例１で得られたバンコマイシン沈殿を実施例１と同
様に塩酸で溶解し、溶解液を得た。溶解液は、ｐＨ２．
５、Ａ／Ｃ＝０．０１６８、濃度１１．２ｇ／Ｌであっ
た。これを、２０３ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷で
活性炭（白鷺ＫＬ，武田薬品工業）にＳＶ＝２．５で通
液し、通過液を集めた。その結果、溶解液からの回収率
８３．０％、Ａ／Ｃ＝０．０１０１であった。色素除去
率は３９．９％であった。

【００２０】参考例２ 参考例１に用いた溶解液をｐＨ６．０に調整した。Ａ／
Ｃは０．０１７３、濃度１０．４ｇ／Ｌであった。これ
を、１８０ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷で活性炭
（白鷺ＫＬ，武田薬品工業）にＳＶ＝２．０で通液し、
通過液を集めた。その結果、溶解液からの回収率４８．
２％、Ａ／Ｃ＝０．０００１であった。色素除去率は９
９．４％であった。

【００２１】参考例３ 実施例１で得られた溶解液をｐＨ９．０に調製した。Ａ
／Ｃは０．０１７８、濃度１０．３ｇ／Ｌであった。こ
れを、１８０ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂の負荷で活性炭
（白鷺KL、武田薬品工業）にＳＶ＝２．０で通液し、通
過液を集めた。その結果、溶解液からの回収率９４．０
％、Ａ／Ｃ＝０．０１０８であった。色素除去率は３
９．６％であった。

【００２２】参考例４ 濃度１０．４ｇ／Ｌ、Ａ／Ｃ＝０．００１３を有するｐ
Ｈ７．８のバンコマイシン溶液を２６ｇバンコマイシン
／Ｌ樹脂の負荷で活性炭（白鷺KL、武田薬品工業）に通
液し、バンコマイシンを吸着させ、水洗後、塩酸酸性の
５０％エタノール水で溶出した。回収率は７９．２％、
色素除去率は７２．１％であった。

【００２３】

【発明の効果】本発明により、バイコマイシン製造方法
において、活性炭を用いることなく、脱色効果と良好な
回収率を両立させる経済的な工業生産に適したバンコマ
イシンの脱色方法が提供される。

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】フェノ−ル系吸着樹脂にバンコマイシンを
   含む水溶液を接触させる工程を含むことを特徴とするバ
   ンコマイシンの製造方法。
2. 【請求項２】酸性ｐＨを有するバンコマイシン溶液をフ
   ェノール系吸着樹脂に通過させ、通過液を脱色液とする
   請求項１項記載の製造方法。
3. 【請求項３】酸性ｐＨがｐＨ３．０から５．０である請
   求項２項記載の製造方法。
4. 【請求項４】通過させるバンコマイシン溶液の濃度が３
   から１５ｇ／Ｌである請求項２又は３項記載の製造方
   法。
5. 【請求項５】樹脂に対するバンコマイシンの負荷量が１
   ５０から２５０ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂である請求項
   ２、３又は４項記載の製造方法。
6. 【請求項６】弱アルカリ性ｐＨを有するバンコマイシン
   溶液をフェノ−ル系吸着樹脂に通過させ、吸着されたバ
   ンコマイシンを酸性の低級アルコール水溶液で溶出し回
   収する請求項１項記載の製造方法。
7. 【請求項７】弱アルカリ性ｐＨがｐＨ７．０から８．５
   である請求項６項記載の製造方法。
8. 【請求項８】通過させるバンコマイシン溶液の濃度が３
   から１５ｇ／Ｌである請求項６又は７項記載の製造方
   法。
9. 【請求項９】メタノ−ルを１０から５０％（Ｖ／Ｖ）、
   ｐＨが１．０から３．０である塩酸酸性メタノ−ル水溶
   液で溶出する請求項６、７又は８項記載の製造方法。
10. 【請求項１０】樹脂に対するバンコマイシンの負荷量が
    １５から２５ｇバンコマイシン／Ｌ樹脂である請求項
    ６、７、８又は９項記載の製造方法。
11. 【請求項１１】フェノール系吸着樹脂が、ポアー径１５
    〜３５ｎｍ、ポアー容積０．９〜１．６ｍｌ／ｇの範囲
    にある請求項１〜１０項いずれかに記載の製造方法。
12. 【請求項１２】フェノ−ル系吸着樹脂がアンバ−ライト
    （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−７６１である請求項１
    〜１１項いずれかに記載の製造方法。
13. 【請求項１３】バンコマイシンを含む水溶液が、バンコ
    マイシン塩基の結晶を溶解した液から調製されたもので
    ある請求項１〜１２項いずれかに記載の製造方法。
14. 【請求項１４】バンコマイシンを含む水溶液が、尿素を
    含むバイコマイシン水溶液より晶析したバンコマイシン
    塩基から調製したものである請求項１３項記載の製造方
    法。
15. 【請求項１５】フェノール系吸着樹脂より溶出したバン
    コマイシン溶液のバンコマイシン濃度当たり（ｇ／リッ
    トル）の４５０ｎｍの吸光度値（Ａ／Ｃ値）が０．００
    ５以下である請求項１〜１４項いずれかに記載の製造方
    法。
16. 【請求項１６】フェノール系吸着樹脂を通過させたバン
    コマイシン水溶液を再度フェノール系吸着樹脂に通し、
    バンコマイシンを吸着、溶出する請求項１〜１５項いず
    れかに記載の製造方法。