JP2749272B2 - アントラサイクリノングリコシドの精製法 - Google Patents
アントラサイクリノングリコシドの精製法Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は樹脂上への選択的吸着に
よるアントラサイクリノングリコシドの精製法に関す
る。 【０００２】 【従来の技術およびその問題点】前記グリコシドを実質
上純粋な形態で取得するのに使用するための高度に特異
的な方法を得る必要性は、発酵的製造法および合成的製
造法のいずれにおいても粗生成物中における有機および
無機不純物の量が特に高くそして平均１２〜２５％まで
達するという事実から主として生ずる。しかしながら、
塩素化された溶媒での粗生成物の抽出そして次に緩衝液
での洗浄を行なう従来既知の精製操作による方法では、
不純物％が相当低下しているにしてもなお４.５〜５.０
％の範囲にある最終生成物を生ずる。一方では一般的に
受容しうるものと考えられるが、前記の純度標準は配糖
体分子の取扱いおよび化学的試薬に対する特別な感受性
を考慮すると、実質上純粋な最終生成物の取得を可能に
する改良された精製法の研究における興味を刺激した。
抗腫瘍剤としてのアントラサイクリノングリコシドの臨
床的使用、そして薬用量および毒性という副次的問題を
考慮しつつ、一般的に毒性の高い不純物の最適な除去を
達成できることは本発明の明らかな有用性である。 【０００３】 【課題を解決するための手段】不純物を最高２％の量で
含有する最終生成物の取得を可能にする本発明の方法は
粗生成物を酸性環境（pH３〜５）で種々のタイプの樹脂
上に吸着させそして次に水または水と極性溶媒との混合
物を用いて溶離する方法に実質的に基づいている。より
詳しくは、本発明方法は水溶性物質を溶解含有する弱酸
性水性媒体を顆粒またはビードのような粒子中に分散さ
れた樹脂上に吸着させる段階および第１の段階において
吸着された物質を脱着させる引続く段階を包含するもの
である。吸着する樹脂は、実質上一般的に好都合には樹
脂粒子を充填した塔またはカラムの形状をした適当な容
器中に含有されうる。粗生成物中に含有される不純物の
種類の如何により、最初の樹脂からの物質の脱着により
得られる溶出液は好都合には引続いて異なる型の樹脂上
に吸着され、そこから次に既知方法で溶離されうる。 【０００４】本発明のクロマトグラフィ精製法において
は、重合体状且つイオン交換型またはカルボキシメチル
セルロース型の吸着樹脂が使用された。精製すべき粗生
成物に応じた種々の型の樹脂の使用における正しい選択
および適当な順序そして吸着期間中の弱い酸性環境によ
り、高純度の最終生成物の取得、塩素化有機溶媒使用の
排除および優れた精製収率が得られる。 【０００５】 【実施例】以下の非限定的例により本発明方法を説明す
る。 参考例１ ４−デメトキシダウノルビシンの精製 力価７０.２％および不純物含量１８％を有する精製状
態の４−デメトキシ−ダウノルビシン１５.０ｇを０.５
％酢酸ナトリウム溶液３.６リットル中に溶解させる。
酢酸の添加によりpH４.７としたこの溶液を直径２.５cm
のカラム中のアンバーライト（AmberliteR）ＸＡＤ２型
樹脂〔ローム・アンド・ハース社製品〕４００ml上に吸
着させる。生成物を水１００mlで洗いそして次に水／メ
タノール(５：１)(ｖ／ｖ)混合物を用いて溶離する。第
１番目の溶出液として、アグリコンおよび種々の不純物
を含有する溶液２０００mlを集める。水／メタノール
(１：１)(ｖ／ｖ)混合物を用いて溶離を続けそして４５
００mlのフラクションを集める。溶液状態において溶出
液は前記４−デメトキシ−ダウノルビシンを１０％の不
純物と共に含有する。 【０００６】この溶出液を塩酸の添加によりpH２.８と
なしそして次に真空下に濃縮して容量１５００mlとな
す。濃縮された溶液に酢酸ナトリウムを添加することに
よりpH４.０となしそしてこの弱酸性溶液を直径２.５cm
のカラム中に含有されたＣＭセファロース（Sepharos
eR）Ｃ１ ６Ｂ型樹脂〔ファルマシア社製品〕１５０ml
上に流量毎時１５０mlで吸着させる。吸着完結後、カラ
ムを初め水４５０mlでそして次に０.０３％塩酸で溶離
する。不純物１８％を含有する初めの溶出液８００mlを
酢酸ナトリウムの添加によりpH４.７としそして第１番
目の精製段階のアンバーライトＸＡＤ２樹脂上に吸着さ
せるべき粗製４−デメトキシ−ダウノルビシンの溶液に
加えて再循環させる。純粋な４−デメトキシ−ダウノル
ビシンを含有する続く溶出液（３５００ml）を容量５０
mlとなるまで真空濃縮する。アセトン２５０mlを加え、
得られた沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥す
る。出発粗生成物に基いて計算して５２％の収率で４−
デメトキシ−ダウノルビシンが力価９７％および不純物
含量３％以下で得られる。 【０００７】実施例１ ダウノルビシンの精製 力価７４．２％および不純物含量８．５％を有する塩素
化ダウノルビシン１５．０ｇを水４５００ｍｌ中に溶解
させる。酢酸ナトリウムの添加によりこの溶液をｐＨ
５．０となしそして直径２．５ｃｍのカラム中のＳ１１
２カステル（Ｋａｓｔｅｌ）（登録商標）樹脂またはア
ンバーライトＥＲ １８０（登録商標）型樹脂（ローム
・アンド・ハース社製品）４００ｍｌ上に流量毎時６０
０ｍｌ（１．５ｂ．ｖ．）で吸着させる。この生成物を
１％塩化ナトリウム溶液１０００ｍｌで洗いそして次に
水／エタノール（１：１）（ｖ／ｖ）混合物で溶離す
る。溶液中にアグリコンを含有する最初のフラクション
（４００ｍｌ）を除去しそしで溶離を継続して純粋なダ
ウノルビシンを含有する溶出液２６０ｍｌを集める。希
塩酸の添加によりｐＨ２．５に調製し、アセトンを添加
しそして生成物を＋５０℃で６時間結晶化せしめる。生
成物を濾過し、アセトンで洗いそして１２時間真空乾燥
する。出発粗生成物に基いて計算して収率８０％でダウ
ノルビシンが得られる。ＨＰＬＣにより測定して力価９
７％、不純物含量２．６％である。上記Ｓ１１２カステ
ル樹脂およびアンバーライトＥＲ１８０型樹脂はそれぞ
れ下記の組成・性質を有する樹脂である。 Ｓ１１２カステル樹脂： スチレンベースコポリマー吸着樹脂であって、 ａ）比表面積６５０ｍ２／ｇ（乾燥） ｂ）約５０オングストロンの平均孔サイズ ｃ）約６０％の気孔率および ｄ）０．３〜１．２ｍｍの粒子サイズ を有する。 アンバーライトＥＲ１８０型樹脂： 交換官能基としてスルホン酸基を持つスチレン／ジビニ
ルベンゼンコポリマーのゲルタイプマトリックスからな
る強酸性カチオン交換樹脂であって、 ａ）１．５５ｃｑ．Ｌ（Ｈ＋型）より高い総交換能 ｂ）５７〜６１％（Ｈ＋型）の水分保持能 ｃ）３２０±１０μｍの平均粒子径および ｄ）１．１０より低い均等係数 を有する。 【０００８】参考例２ ４−デメトキシードキソルビシンの精製 不純物含量１４％を有する４−デメトキシードキソルビ
シン１０．４ｇを含有する水溶液２０００ｍｌを直径
２．５ｃｍのカラム内に含有されるアンバーライトＥＲ
１８０（登録商標）型樹脂（ローム・アンド・ハース社
製品）５０ｍｌ上に流量毎時２５０ｍｌで吸着させる。
不純物の選択的吸着により部分的に精製された溶出液を
次にＣＭセファロースＣ１６Ｂ型樹脂２００ｍｌ上に吸
着させる。生成物をメタノール／水／濃塩酸（５０：５
０：０．０１５）の混合物を用いて溶離し、アグリコン
および他の不純物を含有する最初のフラクション（約８
００ｃｍ）を捨てる。次に純粋な物質を含有する溶出液
２０００ｍｌを集め、そして６０ｍｌとなるまで真空濃
縮する。アセトン３００ｍｌを添加し、３時間撹拌す
る。沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥する。不
純物含量３％の純粋な４−デメトキシードキソルビシン
６．５ｇが理論上の５８．２％の収率で得られる。 【０００９】参考例３ ４′−デスオキシ−ドキソルビシンの精製 力価６９.２％そして有機不純物含量１２％ならびに鉱
物塩不純物１２％を有する４′−デスオキシ−ドキソル
ビシン１５.０ｇを水２０００ml中に溶解しそしてＣＭ
セファデックスＣ２５型樹脂３００ml上に流量毎時６０
０mlで吸着させる。吸着が完了すると、溶液を０.０３
％塩酸で溶離しそして４′−デスオキシ−ドキソルビシ
ンを含有するフラクション（６５００ml）を得る。前記
溶出液を水酸化ナトリウム溶液の添加によりpH３.８と
なし、そしてこれをＳ １１２カステル樹脂２００ml上
に毎時４００mlの流量で吸着させる。生成物を水６００
mlで洗いそして次に塩酸の添加によりpH２.０に酸性化
したメタノールで溶離する。コア溶出液６００mlを得、
これを真空濃縮して６０mlとなす。撹拌しながら、この
濃縮した溶液をアセトン６００ml中に徐々に加える。形
成された沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥す
る。力価９５.８％および不純物含量４.２％を有する
４′−デスオキシ−ドキソルビシンが理論上の６１％の
収率で得られる。 【００１０】参考例４ ４′−エピ−ドキソルビシンの精製 力価７５.９％および不純物含量１５％を有する粗製
４′−エピ−ドキソルビシン１５.０ｇを水４０００ml
中に溶解させる。蟻酸ナトリウムの添加によりこの溶液
をpH４.８となしそして直径２.５cmのカラム内に含有さ
れるアンバーライトＩＲＣ型樹脂４００ml上に毎時１６
００ml（４ｂ.ｖ.）の流量で吸着させる。カラムを水８
００mlで洗いそして次にメタノール／水／濃塩酸（９
５：５：０.０１５）の混合物を用いて溶離する。まだ
１０％の不純物を含有する４′−エピ−ドキソルビシン
を含有するコア溶出液４０００mlおよび不純物含量の多
い後部溶出液１５００mlを集める。 【００１１】コア溶出液を１５００mlまで濃縮し、蟻酸
ナトリウムの添加によりpH４.８となしそして直径２.５
cmのカラム内に含有されるカルボキシメチルセルロース
「ワスマン（WathmanR）」樹脂２５０ml上に毎時５００
ml（２b.v.）の流量で吸着させる。吸着が完了すると、
生成物をエタノール／水／濃塩酸（９９.３：０.７：
０.０１５）混合物で洗いそして次にエタノール／水／
濃塩酸（９０：１０：０.０５）の混合物で溶離してコ
ア溶出液３２００mlを集める。溶出液を６０mlとなるま
で真空濃縮しそしてアセトン３００mlの添加により生成
物を沈殿させる。力価９１.２％および不純物含量３％
を有する４′−エピ−ドキソルビシン６.９ｇが得られ
る。収率５５.３％。 【００１２】参考例５ ドキソルビシンの精製 (ａ) ドキソルビシン７０ｇを水２８リットル中に溶解
させる。緩衝液の添加によりpH３.７〜４.５となしそし
てこの溶液を直径６cmを有するカラム内に含有されるＳ
１１２カステル樹脂２リットル上に吸着させる。生成
物を水３５リットルおよびメタノール１５リットルの混
合物で溶離する。溶出液（４０リットル）を０.５リッ
トルとなるまで真空濃縮しそして５℃で３時間撹拌しな
がらエタノール １リットルおよびアセトン４.５リット
ルの混合物を添加することにより生成物を結晶化させ
る。この生成物を濾過し、０.８リットルのアセトンで
洗いそして４０℃で５時間真空乾燥する。１回精製され
たドキソルビシン（Ｉ）５６.０ｇが得られる。 【００１３】(ｂ) 前記方法(ａ)で得られた１回精製ド
キソルビシン（Ｉ）８０.０ｇを水２４リットル中に溶
解させそして緩衝液の添加によりpH４.０となす。この
溶液を直径１２cmを有しそしてカルボキシメチルセルロ
ースワスマン樹脂１.６リットルを含有するカラムに吸
着させる。カラム流出液を除去する。水３.２リットル
で洗ったのち、生成物を塩酸の添加によりpH２.５とな
した水５５リットルを用いて溶離する。溶出液４６リッ
トルを集めそして真空下に０.６リットルとなるまで濃
縮しそしてイソプロパノール／アセトン（１：３）混合
物の注意深い添加により生成物を結晶化させしめる。生
成物を濾過し、アセトン１リットルで洗いそして＋４０
℃で４時間乾燥する。力価９８.５％および不純物含量
１.５％を有するドキソルビシン６５ｇが得られる。
よるアントラサイクリノングリコシドの精製法に関す
る。 【０００２】 【従来の技術およびその問題点】前記グリコシドを実質
上純粋な形態で取得するのに使用するための高度に特異
的な方法を得る必要性は、発酵的製造法および合成的製
造法のいずれにおいても粗生成物中における有機および
無機不純物の量が特に高くそして平均１２〜２５％まで
達するという事実から主として生ずる。しかしながら、
塩素化された溶媒での粗生成物の抽出そして次に緩衝液
での洗浄を行なう従来既知の精製操作による方法では、
不純物％が相当低下しているにしてもなお４.５〜５.０
％の範囲にある最終生成物を生ずる。一方では一般的に
受容しうるものと考えられるが、前記の純度標準は配糖
体分子の取扱いおよび化学的試薬に対する特別な感受性
を考慮すると、実質上純粋な最終生成物の取得を可能に
する改良された精製法の研究における興味を刺激した。
抗腫瘍剤としてのアントラサイクリノングリコシドの臨
床的使用、そして薬用量および毒性という副次的問題を
考慮しつつ、一般的に毒性の高い不純物の最適な除去を
達成できることは本発明の明らかな有用性である。 【０００３】 【課題を解決するための手段】不純物を最高２％の量で
含有する最終生成物の取得を可能にする本発明の方法は
粗生成物を酸性環境（pH３〜５）で種々のタイプの樹脂
上に吸着させそして次に水または水と極性溶媒との混合
物を用いて溶離する方法に実質的に基づいている。より
詳しくは、本発明方法は水溶性物質を溶解含有する弱酸
性水性媒体を顆粒またはビードのような粒子中に分散さ
れた樹脂上に吸着させる段階および第１の段階において
吸着された物質を脱着させる引続く段階を包含するもの
である。吸着する樹脂は、実質上一般的に好都合には樹
脂粒子を充填した塔またはカラムの形状をした適当な容
器中に含有されうる。粗生成物中に含有される不純物の
種類の如何により、最初の樹脂からの物質の脱着により
得られる溶出液は好都合には引続いて異なる型の樹脂上
に吸着され、そこから次に既知方法で溶離されうる。 【０００４】本発明のクロマトグラフィ精製法において
は、重合体状且つイオン交換型またはカルボキシメチル
セルロース型の吸着樹脂が使用された。精製すべき粗生
成物に応じた種々の型の樹脂の使用における正しい選択
および適当な順序そして吸着期間中の弱い酸性環境によ
り、高純度の最終生成物の取得、塩素化有機溶媒使用の
排除および優れた精製収率が得られる。 【０００５】 【実施例】以下の非限定的例により本発明方法を説明す
る。 参考例１ ４−デメトキシダウノルビシンの精製 力価７０.２％および不純物含量１８％を有する精製状
態の４−デメトキシ−ダウノルビシン１５.０ｇを０.５
％酢酸ナトリウム溶液３.６リットル中に溶解させる。
酢酸の添加によりpH４.７としたこの溶液を直径２.５cm
のカラム中のアンバーライト（AmberliteR）ＸＡＤ２型
樹脂〔ローム・アンド・ハース社製品〕４００ml上に吸
着させる。生成物を水１００mlで洗いそして次に水／メ
タノール(５：１)(ｖ／ｖ)混合物を用いて溶離する。第
１番目の溶出液として、アグリコンおよび種々の不純物
を含有する溶液２０００mlを集める。水／メタノール
(１：１)(ｖ／ｖ)混合物を用いて溶離を続けそして４５
００mlのフラクションを集める。溶液状態において溶出
液は前記４−デメトキシ−ダウノルビシンを１０％の不
純物と共に含有する。 【０００６】この溶出液を塩酸の添加によりpH２.８と
なしそして次に真空下に濃縮して容量１５００mlとな
す。濃縮された溶液に酢酸ナトリウムを添加することに
よりpH４.０となしそしてこの弱酸性溶液を直径２.５cm
のカラム中に含有されたＣＭセファロース（Sepharos
eR）Ｃ１ ６Ｂ型樹脂〔ファルマシア社製品〕１５０ml
上に流量毎時１５０mlで吸着させる。吸着完結後、カラ
ムを初め水４５０mlでそして次に０.０３％塩酸で溶離
する。不純物１８％を含有する初めの溶出液８００mlを
酢酸ナトリウムの添加によりpH４.７としそして第１番
目の精製段階のアンバーライトＸＡＤ２樹脂上に吸着さ
せるべき粗製４−デメトキシ−ダウノルビシンの溶液に
加えて再循環させる。純粋な４−デメトキシ−ダウノル
ビシンを含有する続く溶出液（３５００ml）を容量５０
mlとなるまで真空濃縮する。アセトン２５０mlを加え、
得られた沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥す
る。出発粗生成物に基いて計算して５２％の収率で４−
デメトキシ−ダウノルビシンが力価９７％および不純物
含量３％以下で得られる。 【０００７】実施例１ ダウノルビシンの精製 力価７４．２％および不純物含量８．５％を有する塩素
化ダウノルビシン１５．０ｇを水４５００ｍｌ中に溶解
させる。酢酸ナトリウムの添加によりこの溶液をｐＨ
５．０となしそして直径２．５ｃｍのカラム中のＳ１１
２カステル（Ｋａｓｔｅｌ）（登録商標）樹脂またはア
ンバーライトＥＲ １８０（登録商標）型樹脂（ローム
・アンド・ハース社製品）４００ｍｌ上に流量毎時６０
０ｍｌ（１．５ｂ．ｖ．）で吸着させる。この生成物を
１％塩化ナトリウム溶液１０００ｍｌで洗いそして次に
水／エタノール（１：１）（ｖ／ｖ）混合物で溶離す
る。溶液中にアグリコンを含有する最初のフラクション
（４００ｍｌ）を除去しそしで溶離を継続して純粋なダ
ウノルビシンを含有する溶出液２６０ｍｌを集める。希
塩酸の添加によりｐＨ２．５に調製し、アセトンを添加
しそして生成物を＋５０℃で６時間結晶化せしめる。生
成物を濾過し、アセトンで洗いそして１２時間真空乾燥
する。出発粗生成物に基いて計算して収率８０％でダウ
ノルビシンが得られる。ＨＰＬＣにより測定して力価９
７％、不純物含量２．６％である。上記Ｓ１１２カステ
ル樹脂およびアンバーライトＥＲ１８０型樹脂はそれぞ
れ下記の組成・性質を有する樹脂である。 Ｓ１１２カステル樹脂： スチレンベースコポリマー吸着樹脂であって、 ａ）比表面積６５０ｍ２／ｇ（乾燥） ｂ）約５０オングストロンの平均孔サイズ ｃ）約６０％の気孔率および ｄ）０．３〜１．２ｍｍの粒子サイズ を有する。 アンバーライトＥＲ１８０型樹脂： 交換官能基としてスルホン酸基を持つスチレン／ジビニ
ルベンゼンコポリマーのゲルタイプマトリックスからな
る強酸性カチオン交換樹脂であって、 ａ）１．５５ｃｑ．Ｌ（Ｈ＋型）より高い総交換能 ｂ）５７〜６１％（Ｈ＋型）の水分保持能 ｃ）３２０±１０μｍの平均粒子径および ｄ）１．１０より低い均等係数 を有する。 【０００８】参考例２ ４−デメトキシードキソルビシンの精製 不純物含量１４％を有する４−デメトキシードキソルビ
シン１０．４ｇを含有する水溶液２０００ｍｌを直径
２．５ｃｍのカラム内に含有されるアンバーライトＥＲ
１８０（登録商標）型樹脂（ローム・アンド・ハース社
製品）５０ｍｌ上に流量毎時２５０ｍｌで吸着させる。
不純物の選択的吸着により部分的に精製された溶出液を
次にＣＭセファロースＣ１６Ｂ型樹脂２００ｍｌ上に吸
着させる。生成物をメタノール／水／濃塩酸（５０：５
０：０．０１５）の混合物を用いて溶離し、アグリコン
および他の不純物を含有する最初のフラクション（約８
００ｃｍ）を捨てる。次に純粋な物質を含有する溶出液
２０００ｍｌを集め、そして６０ｍｌとなるまで真空濃
縮する。アセトン３００ｍｌを添加し、３時間撹拌す
る。沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥する。不
純物含量３％の純粋な４−デメトキシードキソルビシン
６．５ｇが理論上の５８．２％の収率で得られる。 【０００９】参考例３ ４′−デスオキシ−ドキソルビシンの精製 力価６９.２％そして有機不純物含量１２％ならびに鉱
物塩不純物１２％を有する４′−デスオキシ−ドキソル
ビシン１５.０ｇを水２０００ml中に溶解しそしてＣＭ
セファデックスＣ２５型樹脂３００ml上に流量毎時６０
０mlで吸着させる。吸着が完了すると、溶液を０.０３
％塩酸で溶離しそして４′−デスオキシ−ドキソルビシ
ンを含有するフラクション（６５００ml）を得る。前記
溶出液を水酸化ナトリウム溶液の添加によりpH３.８と
なし、そしてこれをＳ １１２カステル樹脂２００ml上
に毎時４００mlの流量で吸着させる。生成物を水６００
mlで洗いそして次に塩酸の添加によりpH２.０に酸性化
したメタノールで溶離する。コア溶出液６００mlを得、
これを真空濃縮して６０mlとなす。撹拌しながら、この
濃縮した溶液をアセトン６００ml中に徐々に加える。形
成された沈殿を濾過し、アセトンで洗いそして乾燥す
る。力価９５.８％および不純物含量４.２％を有する
４′−デスオキシ−ドキソルビシンが理論上の６１％の
収率で得られる。 【００１０】参考例４ ４′−エピ−ドキソルビシンの精製 力価７５.９％および不純物含量１５％を有する粗製
４′−エピ−ドキソルビシン１５.０ｇを水４０００ml
中に溶解させる。蟻酸ナトリウムの添加によりこの溶液
をpH４.８となしそして直径２.５cmのカラム内に含有さ
れるアンバーライトＩＲＣ型樹脂４００ml上に毎時１６
００ml（４ｂ.ｖ.）の流量で吸着させる。カラムを水８
００mlで洗いそして次にメタノール／水／濃塩酸（９
５：５：０.０１５）の混合物を用いて溶離する。まだ
１０％の不純物を含有する４′−エピ−ドキソルビシン
を含有するコア溶出液４０００mlおよび不純物含量の多
い後部溶出液１５００mlを集める。 【００１１】コア溶出液を１５００mlまで濃縮し、蟻酸
ナトリウムの添加によりpH４.８となしそして直径２.５
cmのカラム内に含有されるカルボキシメチルセルロース
「ワスマン（WathmanR）」樹脂２５０ml上に毎時５００
ml（２b.v.）の流量で吸着させる。吸着が完了すると、
生成物をエタノール／水／濃塩酸（９９.３：０.７：
０.０１５）混合物で洗いそして次にエタノール／水／
濃塩酸（９０：１０：０.０５）の混合物で溶離してコ
ア溶出液３２００mlを集める。溶出液を６０mlとなるま
で真空濃縮しそしてアセトン３００mlの添加により生成
物を沈殿させる。力価９１.２％および不純物含量３％
を有する４′−エピ−ドキソルビシン６.９ｇが得られ
る。収率５５.３％。 【００１２】参考例５ ドキソルビシンの精製 (ａ) ドキソルビシン７０ｇを水２８リットル中に溶解
させる。緩衝液の添加によりpH３.７〜４.５となしそし
てこの溶液を直径６cmを有するカラム内に含有されるＳ
１１２カステル樹脂２リットル上に吸着させる。生成
物を水３５リットルおよびメタノール１５リットルの混
合物で溶離する。溶出液（４０リットル）を０.５リッ
トルとなるまで真空濃縮しそして５℃で３時間撹拌しな
がらエタノール １リットルおよびアセトン４.５リット
ルの混合物を添加することにより生成物を結晶化させ
る。この生成物を濾過し、０.８リットルのアセトンで
洗いそして４０℃で５時間真空乾燥する。１回精製され
たドキソルビシン（Ｉ）５６.０ｇが得られる。 【００１３】(ｂ) 前記方法(ａ)で得られた１回精製ド
キソルビシン（Ｉ）８０.０ｇを水２４リットル中に溶
解させそして緩衝液の添加によりpH４.０となす。この
溶液を直径１２cmを有しそしてカルボキシメチルセルロ
ースワスマン樹脂１.６リットルを含有するカラムに吸
着させる。カラム流出液を除去する。水３.２リットル
で洗ったのち、生成物を塩酸の添加によりpH２.５とな
した水５５リットルを用いて溶離する。溶出液４６リッ
トルを集めそして真空下に０.６リットルとなるまで濃
縮しそしてイソプロパノール／アセトン（１：３）混合
物の注意深い添加により生成物を結晶化させしめる。生
成物を濾過し、アセトン１リットルで洗いそして＋４０
℃で４時間乾燥する。力価９８.５％および不純物含量
１.５％を有するドキソルビシン６５ｇが得られる。
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．力価７４．２％および不純物含量８．５％を有する
精製状態の発酵法または合成法により得られた粗ダウノ
ルビシンを精製するにあたり、上記粗精製物０．３％を
含むｐＨ５の水溶液をスチレンベースコポリマー吸着樹
脂もしくは強酸性カチオン交換樹脂｛該樹脂のダウノル
ビシンに対する比は２６：１（ｖ／ｗ）である｝に吸着
させ、この生成物を水／エタノール（１：１）（ｖ／
ｖ）混合物で溶離し、溶離液から所望の生成物を単離
し、力価９７％、不純物含量２．６％のダウノルビシン
を得る方法であって、上記スチレンベースコポリマー吸
着樹脂は、 ａ）比表面積６５０ｍ２／ｇ（乾燥） ｂ）約５０オングストロンの平均孔サイズ ｃ）約６０％の気孔率および ｄ）０．３〜１．２ｍｍの粒子サイズ を有する樹脂であり、上記強酸性カチオン交換樹脂は、
交換官能基としてスルホン酸基を持つスチレン／ジビニ
ルベンゼンコポリマーのゲルタイプマトリックスであ
り、 ａ）１．５５ｃｑ．Ｌ（Ｈ＋型）より高い総交換能 ｂ）５７〜６１％（Ｈ＋型）の水分保持能 ｃ）３２０±１０μｍの平均粒子径および ｄ）１．１０より低い均等係数 を有する樹脂である方法。
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| US7388083B2 (en) * | 2005-03-07 | 2008-06-17 | Solux Corporation | Epimerization of 4′-C bond and modification of 14-CH3-(CO)-fragment in anthracyclin antibiotics |
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| US3221008A (en) * | 1962-01-30 | 1965-11-30 | Merck & Co Inc | Ion exchange process for the recovery of ionic organic substances |
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| FR1527892A (fr) * | 1967-03-15 | 1968-06-07 | Rhone Poulenc Sa | Nouveau procédé de préparation de l'antibiotique 13057 r.p. |
| FR1593235A (ja) * | 1968-11-18 | 1970-05-25 | ||
| JPS4944347A (ja) * | 1972-09-01 | 1974-04-26 | ||
| US3882195A (en) * | 1973-05-16 | 1975-05-06 | Air Prod & Chem | Pre-emulsification-delayed initiation suspension pearl polymerization process |
| JPS5134915B2 (ja) * | 1974-07-27 | 1976-09-29 | ||
| AU519670B2 (en) * | 1975-01-22 | 1981-12-17 | Farmitalia Carlo Erba S.R.L. | Optically active daunosaminyl derivatives of anthracyclin- /nes |
| NL7602342A (nl) * | 1975-03-13 | 1976-09-15 | Rhone Poulenc Ind | Naftaceenderivaat met antibiotische activiteit. |
| US4029548A (en) * | 1976-05-07 | 1977-06-14 | The Upjohn Company | Process for producing antibiotics U-50,147 and U-51,738 |
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| JPS5543012A (en) * | 1978-09-20 | 1980-03-26 | Sanraku Inc | Novel anthracycline derivatine and its preparation |
| JPS6023679B2 (ja) * | 1979-07-13 | 1985-06-08 | メルシャン株式会社 | ロドマイシン群抗生物質とその製造法 |
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