KR100351718B1 - 4'-에피-독소루비신의 정제방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 4'-에피-독소루비신의 정제방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 4＇-에피-독소루비신 조생성물 용액내의 pH를 조절한 뒤, 흡착수지상 또는 분취용 액체크로마토그래피에 적용하여 4＇-에피-독소루비신을 선택적으로 흡착시킨 뒤 용출시키는 공정, 상기 용출액을 역삼투시스템으로 농축시키는 공정 및 농축기에서 에탄올만으로 결정화하는 공정을 포함하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법에 관한 것이다.
이러한 본 발명에 따르면, 4＇-에피-독소루비신을 99.7%까지 고순도로 정제할 수 있어 약효를 월등히 높히고, 불순물에 의한 부작용을 방지할 수 있을 뿐만 아니라, 고수율로 정제할 수 있어 경제적으로도 매우 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다. 또한, 본 발명에 따른 정제법에 의하면, 역삼투막에 의한 농축으로 신속하게 농축하고, 저온에서 이루어짐으로써 열에 의한 물질의 변성을 방지할 수 있었으며, 에탄올만으로 결정화함으로써 유독 잔류 용매 등에 의한 부작용을 방지할 수 있음을 알 수 있었다. 이 밖에도, 본 발명에서 사용되는 수지는 유기용매를 이용하여 반복세척함으로써 재사용할 수 있으므로 보다 경제적임을 알 수 있다.

Description

4'-에피-독소루비신의 정제방법{A purifying process of 4'-epi-doxorubicin}
본 발명은 4＇-에피-독소루비신 조생성물 용액내의 pH를 조절한 뒤, 흡착수지상 또는 분취용 액체크로마토그래피에 적용하여 4＇-에피-독소루비신을 선택적으로 흡착시킨 뒤 용출시키는 공정, 용출액을 역삼투시스템으로 농축시키는 공정 및 농축기에서 에탄올만으로 결정화하는 공정을 포함하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법에 관한 것이다.
일반적으로 4＇-에피-독소루비신은 독소루비신 동족체로서, 독소루비신 및 다우노루비신을 출발물질로 합성하여 얻을 수 있으며[미국특허 제4,058,519호], 광범위한 생물학적 항암활성을 갖는 물질로 모화합물과 유사한 항암 스펙트럼을 갖으면서 1400 mg/m2(독소루비신 550 mg/m2)까지 투여할 수 있다는 장점을 가지고 있어 1984년 발매되어 현재 전세계 70여개국에서 사용되고 있다.
오늘날, 이와 같은 항암물질 분야에서 목적하는 물질의 순도가 지니는 의미는 지대하다 할 것인 바, 이러한 순도에 있어서 0.1%와 같은 미차로 인해서도 이들 물질이 지니는 효능에 중요한 변화요소로 작용하며, 또한 다량 포함되어있는 미지의 불순물에 의한 부작용도 발생할 우려가 높기 때문에 보다 높은 순도를 갖는 원료물질을 보다 고수율로 얻고자 하는 노력이 경주되고 있다.
본 발명에서 목적하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법에 관해서는 이미 몇몇 특허에 개시되어 있으며, 가장 일반적인 제조방법이 미국특허 제4,058,519호, 미국특허 제4,345,068호, 대한민국특허 제39,720호 및 대한민국특허 제77,960호에 개시되어 있다. 그러나, 이들 특허에 따른 정제방법은 용출제로서 클로로포름-아세톤(98/2, v/v)혼합물을 사용하여 실리카겔의 칼럼 상에서 크로마토그래피로 정제하거나, 실릭산의 칼럼 상에서 크로마토그래피시켜 정제하여 불순물의 제거가 어렵고 산업적으로 재사용이 불가능한 문제점을 지니고 있다.
특히, 대한민국특허 제77,960호에 개시된 정제방법은 pH 약 4.8로 조절된 조 4＇-에피-독소루비신의 수용액을 앰버라이트(Amberlite) IRC 724 수지상에 흡착시킨 후 용출용매로 약산성물과 메탄올의 혼합물을 사용하는 용출공정에 의해 생성물을 탈흡착시키고, 이어 정제된 생성물을 pH 4.8에서 카르복시 메칠셀룰로오스 흡착시킨 후, 용출용매로 약산성물과 에탄올의 혼합물을 사용하는 공정에 의해 정제가 이루어진다. 그러나, 이러한 방법은 실리카겔이나 실릭산 등에 의한 정제시 칼럼크로마토그래피 시간이 많이 소요되고, 단 한번의 처리로 고순도 정제가 어려우며, 충전제 재생이 어려워 산업적으로 상용에 문제가 있다. 또한, 고순도 정제를 위하여 이온교환수지인 IRC를 사용하여 정제한 후에 다시 흡착수지인 카르복실 셀룰로우즈를 사용하여 정제하므로 정제시간이 많이 소요되고 고순도로 정제하기 어려울 뿐만 아니라, 수율이 저조하다. 특히 4＇-에피-독소루비신은 온도에 매우 불안정하므로 실온에서 오랫동안 정제하거나 온도를 가하여 농축할 경우에는 독소루비신논(Doxorubicinone)으로 분해 전환되는 문제점이 있어 왔다.
또한, 이상에서 전술한 여러 방법들에 의해 수득되는 4＇-에피-독소루비신은 공통적으로 여전히 높은 불순물 함량을 지니고 있어 순도가 낮고, 수율 또한 높지 않은 문제점이 있어 이에 대한 개선의 필요성이 절실한 실정이었다.
이에, 본 발명자들은 상기와 같은 순도 및 수율 상의 문제점을 개선시키기 위하여 연구 노력한 결과, 4＇-에피-독소루비신 조생성물 용액내의 pH를 2 내지 3으로 조절한 뒤, 수지 상 또는 분취용 액체크로마토그래피에 적용시켜 4＇-에피-독소루비신을 선택적으로 흡착시키고, 여기에 유기극성용매를 적용하여 용출분리시키는 공정과 용출분리된 유효 용출물을 역삼투시스템을 이용한 농축공정과 농축기를 이용하여 에탄올만으로 결정화시킴으로써 4＇-에피-독소루비신을 보다 고순도 및 고수율로 정제할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 보다 고순도 및 고수율로 4＇-에피-독소루비신을 정제하는 방법을 제공하는 데에 있다.
본 발명은
(ⅰ) 4＇-에피-독소루비신 조생성물을 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액에 용해시킨 다음, 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3의 유기용매액을 제조공정,
(ⅱ) 상기 공정에서 수득한 유기용매액을 흡착수지상 또는 분취용 칼럼크로마토래피상에 적용시키는 선택적 4＇-에피-독소루비신 흡착공정,
(ⅲ) 상기 공정에서 흡착된 4＇-에피-독소루비신을 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액으로 용출시키는 공정,
(ⅳ) 상기 공정에서 수득된 용출액에 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3으로 조절한 뒤 역삼투시스템을 이용하여 농축시키는 공정, 및
(ⅴ) 상기 공정에서 수득된 농축액에 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3으로 조절한 뒤 농축기를 이용하여 에탄올을 첨가하여 결정화하는 공정을 포함하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법에 관한 것이다.
이와 같은, 본 발명의 4＇-에피-독소루비신의 정제방법을 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.
제 1 공정 : 4＇-에피-독소루비신 조생성물의 용해 및 pH 조절 공정
우선, 합성 등의 방법에 의해 생성된 부산물 및 불순물이 함유된 4＇-에피-독소루비신 조생성물을 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액에 용해시킨다. 이때, 사용가능한 유기 극성용매로는 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴 및 이소프로필알콜 중에서 선택하여 사용할 수 있다. 다음으로, 상기 조생성물이 용해된 용액에 황산, 염산 또는 인산 등의 산용액을 첨가하여 용액의 pH를 2 내지 3으로 조절하여 안정화시킴으로써 수지를 이용한 목적물질의 분리에 적합하도록 한다.
제 2 공정 : 4＇-에피-독소루비신 흡착 공정
상기 제 1 공정에서 pH가 조절된 조생성물 용액을 흡착수지상 또는 분취용 칼럼크로마토그래피상에 적용시켜 선택적으로 4＇-에피-독소루비신을 흡착시킨다. 이때, 흡착수지는 고도의 폴리머로 이루어진 다중미세 흡착수지(Hydrophobic polyaromatic micro-particulate resin)로서 미세화(직경: 200 ∼ 800Å)되어 있어 수지표면이 활성화되어 있고, 따라서 불순 유기물 및 무기물을 효율적으로 흡착시킬 수 있다. 흡착수지로는 예를 들면 앰버라이트(Amberlite) XAD2, HP20 또는 HP2MG 중에서 선택하여 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 분취용 칼럼크로마토그래피는 실리카겔과 폴리스티렌/다이비닐/벤젠 재질로서 미세화되었고, 폐쇄칼럼(Closed column)을 사용하여 압력을 가하여 분리시킴으로써 오픈칼럼(Open column)보다 신속하게 전개시킬 수 있으며(약 1/7 기간), 모니터(Nova prep 200 : Merck)를 보면서 유효성분만 모으므로 용이하게 불순물을 제거시킬 수 있다. 분취용 칼럼크로마토그래피로는 예를 들면, 리크로스퍼(LiChrospher) 100RP-18(15 ㎛), 리크로프레프(LiChroprep) RP-18(40∼63 ㎛) 및 소스(SOURCE 15RPC 또는 SOURCE 30RPC)중에서 선택하여 사용하는 것이 바람직하다.
제 3 공정 : 4＇-에피-독소루비신 용출 공정
상기 제 2 공정에서 흡착된 4＇-에피-독소루비신에 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액을 적용시켜 흡착된 4＇-에피-독소루비신만을 용출시킨다. 이때, 유기 극성용매로는 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세트니트릴 및 이소프로필 알콜 중에서 선택 사용할 수 있다. 이때에 유기 극성용매의 사용량이 상기 혼합비의 범위 보다 과량이면 용출분리된 용출액내의 4＇-에피-독소루비신이 순도가 낮아지는 문제점이 있으며, 또한 상기 범위보다 너무 소량 첨가하면 본 발명의 목적물인 4＇-에피-독소루비신 수율이 낮을 뿐만 아니라, 시간도 오래 걸리는 문제점이 있게 된다.
제 4 공정 : 농축 공정
상기 제 3 공정에서 수득한 용출액에 황산, 염산 또는 인산을 첨가하여 pH를 2 ∼ 3으로 조절한 뒤, 역삼투시스템을 이용하여 용출액을 농축시킨다. 이때, pH 조절의 이유는 용출액을 안정화시키기 위한 것이며, 역삼투막은 폴리아마이드 필름으로 이루어져 용매에 저항성이 있고, 온도 및 pH에 안정하여 용출액을 저온에서 신속하게 농축할 수 있을 뿐만 아니라 물 및 알콜에 용해되는 저분자의 불순물까지 제거하는 효과도 있다. 또한, 이상의 역삼투시스템을 이용하여 실온(room temperature) 또는 그 이하의 저온에서 농축함으로써, 기존의 농축공정시 고온으로 인해 온도에 불안정한 4'-에피독소루비신이 독소루비신논으로 분해되어 수율 및 순도가 저하되는 문제를 근본적으로 해결하게 되었다. 이러한 역삼투막의 예로는 나노맥스(Nanomax)-50(Millipore), 또는 AFC30(PCI)을 사용한다.
제 5 공정 : 결정화 공정
상기 제 4 공정에서 얻은 농축액을 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH를 2 ∼ 3으로 조절한 뒤 20ℓ 농축기에서 에탄올만을 첨가하여 결정화한다.
이상에서 설명한 바와 같은 본 발명의 정제방법에 따르면, 흡착수지 또는 분취용 액체크로마토그래피에 의하여 불순물이 거의 완전히 제거되고, 신속히 처리함으로서 물질변성을 막을 수 있으며, 농축과정도 신속하게 처리하고 저온에서 처리함으로써 물질변성이 없으며, 결정화 과정에서 에탄올만 사용함으로써 유독 잔류용매 등을 제거할 수 있는 장점이 있다. 이 밖에도, 본 발명에 따른 정제법에 따르면, 상기 공정에서 사용된 수지에 유기용매 등을 계속 흘려서 유기 불순물 및 유기 불순물 등을 제거하여 재사용할 수 있는 장점이 있다. 이때, 유기용매로는 메탄올, 이소프로필 알코올 등을 사용하며, 특히 이소프로필 알코올을 사용하는 것이 더욱 바람직하다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 이들 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 한정되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1 : 앰버라이트(Amberlite)XAD2 수지 이용 정제
역가가 80%이고 불순물 함량이 20%인 4＇-에피-독소루비신 조생성물 50 g을20% 메탄올에 용해시킨 뒤, 여기에 염산을 첨가하여 용액내 pH를 2.5로 조절하고 이 용액을 직경 8 cm인 칼럼중에 함유된 앰버라이트(Amberlite)XAD2 수지 5ℓ상에 흡착시켰다. 그리고, 상기에서 흡착된 흡착물을 증류수로 세척하고, 물-메탄올 (8:2, v/v) 혼합물로 용출시켜 순수한 4＇-에피-독소루비신을 함유하는 100ℓ의 용출물을 수집하였다. 상기 용출물을 역삼투장비(ProLab: Millpore)를 사용하고 역삼투막은 나노맥스(Nanomax) 50(M.W: 300)을 이용하여 400 psi의 압력으로 농축하여 2 ℓ가 되도록 농축하였다. 농축 후 염산을 첨가하여 pH를 2.5로 조절한 뒤 20 ℓ 농축기에 옮기고, 과량의 에탄올을 가하여 결정화하였다. 이 결정물을 회수하여 40℃에서 4시간 동안 진공건조시켰다. 그 결과, 앰버라이트XAD2 수지를 이용한 4'-에피-독소루비신 정제의 수율은 90% 이었고, 순도는 99.0%이었다. 이때, 수득된 4＇-에피-독소루비신 결정의 순도는 다음과 같은 조건하에서 HPLC를 이용하여 측정하였다.
- HPLC 조건 -
(1) 시료용액 : 상기에서 수득한 4＇-에피-독소루비신 50 ㎎을 이동상 10 ㎖에 녹여서 사용하였다.
(2) 칼럼 : Capcell Pak C18, 4.6mmφ×250mm(Shinseido Japan)
(3) 이동상 : A-2.88 g 소듐 도데실설페이트 + 2.3 g 인산 85%/ℓ-물
B-아세토니트릴 + 메탄올 : 9 + 1
A : B = 53 : 47, Isocratic
(4) 주입부피 : 20 ㎕
(5) 검출기 : UV 254 nm
(6) 유량 : 0.8 ㎖/min
(7) 온도 : 실온
(8) 지연시간 : 40분
실시예 2 및 실시예 3: HP20 및 HP2MG 수지 이용 정제
수지를 앰버라이트 XAD2 대신 HP20 및 HP2MG를 사용한 점을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법에 의하여 4'-에피-독소루비신을 정제하였고, 동일한 조건에서 순도를 측정하였다. 그 결과, HP20 수지를 이용한 4'-에피-독소루비신 정제의 수율은 90% 이었고, 순도는 99.0% 이었으며, HP2MG 수지를 이용한 경우는 4'-에피-독소루비신의 정제수율이 85% 이었고, 그 순도는 99.5% 이었다.
실시예 4: 분취용 액체크로마토그래피를 이용한 정제
역가가 80%이고 불순물 함량이 20%인 4＇-에피-독소루비신 조생성물 50 g을 20% 메탄올에 용해시킨 뒤, 여기에 염산을 첨가하여 용액내 pH를 2.5로 조절하고 이 용액을 분취용 액체크로마토그래피(Nova prep 200, MERCK)를 이용하여 압력 150 bar, 유속 50 ㎖/분, 주입액 10 ㎖(5g)/1회, 칼럼 5cm×25cm, 리크로스퍼(LiChrospher) 100RP-18(15 ㎛), 전개시간 30분, 그리고 20% 메탄올을 전개용매로 사용하는 조건으로 전개하여, 순수한 4＇-에피-독소루비신만 분취하여 수집하였다. 상기에서 수득된 용출물을 역삼투막(AFC30, PCI)을 이용하여 450psi의 압력으로 농축하여 10ℓ가 되도록 농축하였다. 농축 후 염산을 첨가하여 pH를 2.5로 조절한 뒤, 20ℓ농축기에 옮기고 과량의 에탄올을 가하여 결정화하였다. 이 결정물을 회수하여 40℃에서 4시간 동안 진공건조시켰다. 그 결과, 목적 물질인 4'-에피-독소루비신의 수율은 90% 이었고, 순도는 99.7% 이었다. 이때, 수득된 4＇-에피-독소루비신 결정의 순도는 상기 실시예 1과 동일한 조건하에서 HPLC를 이용하여 측정하였다.
실시예 5: 분취용 액체크로마토그래피를 이용한 정제
역가가 80%이고 불순물 함량이 20%인 4＇-에피-독소루비신 조생성물 50 g을 20% 메탄올에 용해시킨 뒤, 여기에 염산을 첨가하여 용액내 pH를 2.5로 조절하고 이 용액을 분취용 액체크로마토그래피(Nova prep 200, MERCK)를 이용하여 압력 150 bar, 유속 50 ㎖/분, 주입액 10 ㎖(5g)/1회, 칼럼 5cm×25cm, 리크로스퍼(LiChrospher) RP-18(40∼63 ㎛), 전개시간 30분, 그리고 20% 메탄올을 전개용매로 사용하는 조건으로 전개하여, 순수한 4＇-에피-독소루비신만 분취하여 수집하였다. 상기에서 수득된 용출물을 역삼투막(AFC30, PCI)을 이용하여 450 psi의 압력으로 농축하여 10ℓ가 되도록 농축하였다. 농축 후 염산을 첨가하여 pH를 2.5로 조절한 뒤, 20ℓ농축기에 옮기고 과량의 에탄올을 가하여 결정화하였다. 이 결정물을 회수하여 40℃에서 4시간 동안 진공건조시켰다. 그 결과, 목적 물질인 4'-에피-독소루비신의 수율은 91% 이었고, 순도는 99.7% 이었다. 이때, 수득된 4＇-에피-독소루비신 결정의 순도는 상기 실시예 1과 동일한 조건하에서 HPLC를 이용하여 측정하였다.
실시예 6: 분취용 액체크로마토그래피를 이용한 정제
역가가 80%이고 불순물 함량이 20%인 4＇-에피-독소루비신 조생성물 50 g을 20% 메탄올에 용해시킨 뒤, 여기에 염산을 첨가하여 용액내 pH를 2.5로 조절하고 이 용액을 분취용 액체크로마토그래피(Nova prep 200, MERCK)를 이용하여 압력 150 bar, 유속 50 ㎖/분, 주입액 10 ㎖(5g)/1회, 칼럼 5cm×25cm, 소스(SOURCE) 15RPC(15 ㎛), 전개시간 30분, 그리고 20% 메탄올을 전개용매로 사용하는 조건으로 전개하여, 순수한 4＇-에피-독소루비신만 분취하여 수집하였다. 상기에서 수득된 용출물을 역삼투막(AFC30, PCI)을 이용하여 450 psi의 압력으로 농축하여 10ℓ가 되도록 농축하였다. 농축 후 염산을 첨가하여 pH를 2.5로 조절한 뒤, 20ℓ농축기에 옮기고 과량의 에탄올을 가하여 결정화하였다. 이 결정물을 회수하여 40℃에서 4시간 동안 진공건조시켰다. 그 결과, 목적 물질인 4'-에피-독소루비신의 수율은 90.5% 이었고, 순도는 99.8% 이었다. 이때, 수득된 4＇-에피-독소루비신 결정의 순도는 상기 실시예 1과 동일한 조건하에서 HPLC를 이용하여 측정하였다.
실시예 7: 분취용 액체크로마토그래피를 이용한 정제
역가가 80%이고 불순물 함량이 20%인 4＇-에피-독소루비신 조생성물 50 g을 20% 메탄올에 용해시킨 뒤, 여기에 염산을 첨가하여 용액내 pH를 2.5로 조절하고이 용액을 분취용 액체크로마토그래피(Nova prep 200, MERCK)를 이용하여 압력 150 bar, 유속 50 ㎖/분, 주입액 10 ㎖(5g)/1회, 칼럼 5cm×25cm, 리크로스퍼(LiChrospher) 100RP-18(15 ㎛), 전개시간 30분, 그리고 20% 메탄올을 전개용매로 사용하는 조건으로 전개하여, 순수한 4＇-에피-독소루비신만 분취하여 수집하였다. 상기에서 수득된 용출물을 역삼투막(Nanomax-50(Millipore))을 이용하여 450 psi의 압력으로 농축하여 10ℓ가 되도록 농축하였다. 농축 후 염산을 첨가하여 pH를 2.5로 조절한 뒤, 20ℓ농축기에 옮기고 과량의 에탄올을 가하여 결정화하였다. 이 결정물을 회수하여 40℃에서 4시간 동안 진공건조시켰다. 그 결과, 목적 물질인 4'-에피-독소루비신의 수율은 91% 이었고, 순도는 99.8% 이었다. 이때, 수득된 4＇-에피-독소루비신 결정의 순도는 상기 실시예 1과 동일한 조건하에서 HPLC를 이용하여 측정하였다.
이상에서와 같이, 본 발명은 4＇-에피-독소루비신 조생성물 용액내의 pH를 조절한 뒤, 흡착수지상 또는 분취용 액체크로마토그래피에 적용하여 4＇-에피-독소루비신을 선택적으로 흡착시킨 뒤 용출시키는 공정, 용출액을 역삼투시스템으로 농축시키는 공정 및 농축기에서 에탄올만으로 결정화하는 공정을 포함하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법을 제공한다. 이러한 본 발명에 따르면, 상기 실시예의 결과로 알 수 있듯이 4＇-에피-독소루비신을 99.7%까지 고순도로 정제할 수 있어 약효를 월등히 높히고, 불순물에 의한 부작용을 방지할 수 있을 뿐만 아니라, 고수율로 정제할 수 있어 경제적으로도 매우 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다. 또한, 본 발명에 따른 정제법에 의하면, 역삼투막에 의한 농축으로 신속하게 농축하고, 저온에서 이루어짐으로서 열에 의한 물질의 변성을 방지할 수 있었으며, 에탄올만으로 결정화함으로써 유독 잔류 용매 등에 의한 부작용을 방지할 수 있음을 알 수 있었다. 이 밖에도, 본 발명에서 사용되는 수지는 유기용매를 이용하여 반복세척함으로써 재사용할 수 있으므로 보다 경제적임을 알 수 있다.

Claims (5)

  1. (ⅰ) 4＇-에피-독소루비신 조생성물을 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액에 용해시킨 다음, 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3의 유기용매액을 제조공정,
    (ⅱ) 상기 공정에서 수득한 유기용매액을 흡착수지상 또는 분취용 칼럼크로마토래피상에 적용시키는 선택적 4＇-에피-독소루비신 흡착공정,
    (ⅲ) 상기 공정에서 흡착된 4＇-에피-독소루비신을 물과 유기 극성용매가 50 ∼ 80 : 50 ∼ 20 부피비로 혼합된 혼합용액으로 용출시키는 공정,
    (ⅳ) 상기 공정에서 수득된 용출액에 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3으로 조절한 뒤 역삼투시스템을 이용하여 농축시키는 공정, 및
    (ⅴ) 상기 공정에서 수득된 농축액에 인산, 황산 또는 염산을 첨가하여 pH 2 내지 3으로 조절한 뒤 농축기를 이용하여 에탄올을 첨가하여 결정화하는 공정이 포함되는 것을 특징으로 하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 유기 극성매로는 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴 및 이소프로필알콜 중에서 선택하여 사용하는 것을 특징으로 하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 흡착수지가 앰버라이트 XAD2, HP20 및 HP2MG으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 분취용 칼럼크로마토래피는 리크로스퍼(LiCrospher) 100RP-18(5 ㎛), 리크로프레프(LiChroprep) RP-18(40∼63 ㎛) 및 소스(SOURCE) 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 역삼투시스템은 나노맥스(Nanomax)-50(Millipore) 또는 AFC30(PCI)의 역삼투막을 이용하는 것을 특징으로 하는 4＇-에피-독소루비신의 정제방법.
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