CN117142936A

CN117142936A - 月腺大戟素a的制备方法

Info

Publication number: CN117142936A
Application number: CN202310867064.0A
Authority: CN
Inventors: 赵亮; 钱勇; 舒亚平; 李盛建; 辛振强; 周瑾
Original assignee: Shanghai Standard Technology Co ltd; Shanghai Baoshan Luodian Hospital
Current assignee: Shanghai Standard Technology Co ltd; Shanghai Baoshan Luodian Hospital
Priority date: 2023-07-14
Filing date: 2023-07-14
Publication date: 2023-12-01

Abstract

本发明公开一种月腺大戟素A的制备方法，包括：提取：干燥药材粉碎后用乙醇水溶液回流提取，过滤，减压回收除去乙醇，得月腺大戟提取液；萃取：向月腺大戟提取液加入适量的水稀释后，用石油醚萃取，得石油醚萃取物；硅胶柱层析和沉淀：将石油醚萃取物经硅胶柱层析纯化，依次用石油醚、石油醚:乙酸乙酯＝100:1、50:1、20:1梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝20:1段馏分，通过沉淀工序提高最终产品纯度；凝胶柱纯化：将白色结晶重新溶解后上Sephadex LH‑20凝胶柱，采用甲醇:水＝80:20洗脱，收集单一的月腺大戟素A馏分，除去溶剂得月腺大戟素A产品。本发明在较短的工艺步骤下高得率的制备单一的月腺大戟素A。

Description

月腺大戟素A的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体是从中药材中精制单一的月腺大戟素A的方法。

背景技术

目前，对于苯乙酮类化合物月腺大戟素A(EA)抗乳腺癌活性引起了药学工作者的关注，经乳腺癌细胞毒研究发现，EA对乳腺癌细胞MDA-MB-231、Sum149、MCF7、ZR-75-1、SKBr3、BT474的增殖均表现出显著的抑制活性(曹青青,李盛建，李云青，等.月腺大戟的化学成分及其乳腺癌细胞毒活性研究[J].药学实践杂志，2019，37(4)：309-313，317)。月腺大戟素A(EA)可能通过抑制SUM149细胞周期从S期到G2/M期的转换而抑制裸鼠SUM149细胞移植肿瘤生长(李盛建，王莹，王强利，等.月腺大戟素A抗乳腺癌活性[J].第二军医大学学报,2018(7)：765-769.)。对于EA抑制乳腺细胞MCF-7增殖的具体机制研究发现，EA通过调控PKD1介导MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性影响乳腺癌细胞的增殖能力(周瑾，李盛建，覃福礼等.药学实践杂志，2020，(38)4：241-244，276.)。EA抗乳腺癌的作用机制及药物的开发有待进一步研究。既往研究中使用的月腺大戟素A主要来源于月腺大戟和狼毒大戟。通过从月腺大戟或狼毒大戟药材中提取、纯化、精制得到符合质量要求的科研用样品。但目前面临着制备工艺产率低、供应量少的问题，这极大地限制了月腺大戟素A的药用研究和成药开发。

中国专利申请(CN201510671736.6、CN201510672551.7)公开了一种月腺大戟素A(EA)的制备方法，该方法主要是采用乙醇提取30kg狼毒大戟药材，提取液浓缩得8L，然后取2L依次经不同极性的溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，再将乙酸乙酯部分过正相硅胶柱以石油醚：乙酸乙酯洗脱，得9个馏分Fr.1-Fr.7。取18g Fr.3过正相柱洗脱得17mg单一化合物，经结构鉴定为月腺大戟素A。

曹青青等“月腺大戟的化学成分及其乳腺癌细胞毒活性研究”(药学实践杂志,2019,37(4)：309-313)报道了一种类似的月腺大戟素A(EA)的制备方法，该方法主要是用乙醇提取30kg月腺大戟药材，提取液浓缩得7L，然后取2L依次经不同极性的溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，再将乙酸乙酯部分过正相硅胶柱以石油醚：乙酸乙酯洗脱，得9个馏分Fr.1-Fr.9。取Fr.4(15g)经反向C18硅胶用氯仿：甲醇体系纯化，洗脱得27mg月腺大戟素A。

目前，月腺大戟素A精制的难点主要在于由月腺大戟和狼毒大戟提取所得提取物的组分极为复杂，其中与月腺大戟素A结构近似的组分特别多，且月腺大戟素A自身含量并不占优势，纯化时月腺大戟素A极容易与其他较高含量组分交叉洗脱下来。因此，想要精制得到单一的月腺大戟素A既要排除众多极性相似组分的干扰，也要排除很多较高含量组分的残留干扰，采用单一纯化手段难以解决问题。现有技术中采用了多种溶剂萃取，萃取物经两次硅胶柱洗脱或一次硅胶柱联合一次反相C18柱洗脱，按梯度洗脱方式结合分段收集馏分的方法来进行纯化，虽然制得了符合质量要求的腺大戟素A单一化合物，但是收率极低，难以满足科研及药物研发需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种月腺大戟素A的制备方法，能够以在较短的工艺步骤下高得率的制备单一的月腺大戟素A。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

一种月腺大戟素A的制备方法，包括以下步骤：

提取工序：干燥月腺大戟药材或狼毒大戟药材粉碎后按每kg药材加入5～6L 60～80％的醇系水溶液，25～70℃提取两次，每次1.5～3小时，过滤，合并两次提取液，减压回收至无醇味道，得月腺大戟提取液；

萃取工序：将月腺大戟提取液，用0.8～1.5倍体积的石油醚萃取两次，合并石油醚相，减压回收除去石油醚，得石油醚萃取物；

正相色谱层析工序：将所述石油醚萃取物经硅胶柱层析纯化，依次用石油醚、石油醚:乙酸乙酯＝100～20:1的洗脱液，极性缓慢增加进行梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝20:1段馏分得月腺大戟素A粗品溶液；

沉淀工序：将月腺大戟素A粗品溶液浓缩，或者在其中加入贫溶剂，获得白色沉淀或晶体；

凝胶纯化工序：将所述白色结晶重新溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，采用甲醇:水＝4～5:1洗脱，收集单一的月腺大戟素A馏分，除去溶剂得月腺大戟素A产品。

在优选的实施方式中，所述提取工序中，使用65～75％乙醇水溶液溶液进行提取。进一步优选的是，所述步骤1)中使用70％乙醇水溶液溶液进行提取。

在优选的实施方式中，所述提取工序中，每次提取2～2.5小时。

在优选的实施方式中，所述萃取工序中，向所述月腺大戟提取液加入0.2～0.3倍体积的水进行稀释。

在优选的实施方式中，所述萃取工序中，用0.9～1.2倍体积的石油醚作为有机相进行萃取。

在优选的实施方式中，正相色谱层析工序中，石油醚洗脱用量为1-3倍柱体积。优选的是，石油醚洗脱用量为2.5倍柱体积。

在优选的实施方式中，正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝100:1洗脱用量为3.5倍柱体积。优选的是，石油醚洗脱用量为2.5倍柱体积。

在优选的实施方式中，正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝50:1洗脱用量为2～5倍柱体积。优选的是，石油醚洗脱用量为3倍柱体积。

在优选的实施方式中，正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱用量为2～5倍柱体积。优选的是，石油醚洗脱用量为2.5倍柱体积。

在优选的实施方式中，沉淀工序中，沉淀的条件为将石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱液浓缩至原体积的1/6-1/15，放置在常温条件下，自然沉淀；或者将石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱液浓缩至原体积的1/8-1/12，同时加入1-2倍体积的石油醚/正己烷溶剂，边加边搅拌，使其充分混合，常温静置，析出沉淀。

本发明的益效是：

1.本发明通过醇溶剂提取，特定溶剂萃取，正相硅胶柱层析，沉淀工序，凝胶柱层析法，从月腺大戟中获得EA，制备过程均为常规单体提取分离方法，提取工艺流程简单，重现性好，目标化合物纯度高，得率高等优点。

2.本发明的方法通过提取、萃取、硅胶柱层析、沉淀和凝胶柱纯化制得月腺大戟素A，全过程都不依赖于高端制备或纯化设备，仅采用传统成熟工艺手段制得纯度好的产品，得率高，方法的普适性强，设备投入成本低。

3.本发明的方法从现有方法弃用的石油醚萃取物中制得月腺大戟素A。在分段式萃取中，通常先使用低极性溶剂石油醚将极性小的杂质除去，再使用极性合适的溶剂将目标产物萃取出来做进一步纯化。因此，石油醚萃取物中含有大量的极性小的杂质，组分相比乙酸乙酯萃取物更为复杂，一般来说纯化难度相对更大。现有技术中也是按照常规思路以乙酸乙酯萃取物来做进一步纯化，而忽视了石油醚萃取物。

4.本发明的方法对白色晶体进行Sephadex LH-20凝胶柱纯化，等度洗脱即可，工艺流程简单，分离效果好，产品纯度高，重现性好。

附图说明

图1为EA的ESI-TOF/MS光谱；

图2为EA对照品的ESI-MS(进样浓度10μg/ml)图谱。

图3为EA的HPLC纯度检查色谱图。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。

本发明的月腺大戟素A的制备方法的特征步骤有以下几个：

通过本发明的方法制备得到月腺大戟素A的产品，具有得率高、纯度好的优点。能实现本发明的优点的原因在于各步骤的细节和各步骤之间的先后顺序设定。

萃取工序在本发明中至关重要，使用极性较小的石油醚提取本发明目标化合物并非本来领域的常规方法，本发明的目标化合物的极性一般会使用乙酸乙酯等极性更大的溶剂提取，然而发明人发现，石油醚提取可以极大的提高整体分离效率和总回收率。

本发明中的正相色谱层析工序至关重要，本发明通过常用方法硅胶柱色谱法直接分离石油醚萃取部位，经石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱得到目标化合物的混合物结晶，溶解结晶再经凝胶柱纯化得到高纯度目标化合物。本发明过程步骤简单，较以往EA提取过程步骤少，节约提取纯化时间；并且该提取过程得到的单体化合物的得率为4.2％，较其他提取工艺得率高40倍以上，提取效率高，是本发明的主要特色。本发明的方法在硅胶柱层析过程中利用单纯的石油醚以及石油醚:乙酸乙酯＝100:1的梯度洗脱液，将石油醚萃取物中的极性小的杂质先缓慢洗脱下来，然后再调节梯度将月腺大戟素A洗脱下来，最后的部分是目标部位，因此操作也方便。

正相色谱纯化工序的目的是将极性差别较大的杂质与目标物区分开，正相色谱纯化工序所使用的正相色谱柱的填料，可以用公知的正相填料，所谓正相填料，就是固定相的极性大于流动相的极性的填料，如果流动相为有机溶剂，常用的填料为硅胶(具体为SiO₂，二氧化硅)、Al₂O₃、极性键合相填料等，本发明中优选使用硅胶。硅胶的粒径大小没有特别限制，从效率和填料易得的角度出发，在优选的本发明的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为100～300目的硅胶。为了更好的获得分离效率，并且从分离度和吸附损失的角度出发，优选使用硅胶，进一步优选使用100～300目的硅胶。

在硅胶柱层析过程中，发明人尝试了不同梯度的洗脱条件。先是用石油醚润柱子并收集洗脱液，TLC薄层板监测显示溶剂前沿有低极性杂质点，无产品点。然后调整为石油醚:乙酸乙酯＝100:1和50:1的梯度继续洗脱，TLC薄层板监测显示洗脱液出现多个新的杂质点，无产品点。在石油醚:乙酸乙酯＝50:1之后继续降低梯度时，发现产品点(月腺大戟素A)开始以交叉组分形式被洗脱下来，TLC薄层板显示含明显杂质点。本发明中的沉淀步骤是最至关重要的步骤，按照本发明的特定顺序进行操作，梯度为石油醚:乙酸乙酯＝20:1时能够将月腺大戟素A从硅胶柱中洗脱下来。此时得到的粗品月腺大戟素A含量已经很高，已经可以直接进行反相色谱纯化或者其他方法的纯化。本发明中，梯度20:1时月腺大戟素A能从硅胶柱中快速集中洗脱下来，通过上述的沉淀工序，TLC薄层板检测，显示白色固体仅为很靠近的两个点，与洗脱液的对照点相比少了其它杂质点。本发明人发现，此时收集的馏分中月腺大戟素A的浓度接近饱和状态，通过蒸发部分溶剂或者加入贫溶剂的情况下，就可以大量析出沉淀，沉淀虽然并没有明显的提高粗品纯度，但是确能够将混在的一些与月腺大戟素A极性特别相似的杂质成分，通过这一处理过程除去，很多杂质，包括其他主要组分的残留，都仍溶在溶剂中。白色晶体经鉴定为月腺大戟素A和岩大戟内酯B，这个沉淀过程起到了富集和纯化的效果，简化了实验操作。这里的所谓贫溶剂，即月腺大戟素A在其中溶解度较差的溶剂，例如石油醚、正己烷等。例如可以将月腺大戟素A粗品溶液浓缩至原体积的1/6-1/15，静置析出白色沉淀；或者将月腺大戟素A粗品溶液浓缩至原体积的1/8-1/12，加入1-2倍体积的石油醚/正己烷溶剂，边加边搅拌，使其充分混合，静置析出沉淀。

经本发明人进一步研究，该白色沉淀主要含月腺大戟素A和岩大戟内酯B，此时通过其他方法在进一步纯化，则可以获得非常高纯度的月腺大戟素A。鉴于硅胶柱层析和重结晶都难以将月腺大戟素A和岩大戟内酯B纯化分离，发明人尝试了凝胶柱纯化，SephadexLH-20凝胶柱分离纯化得率高，效果好。

本发明方法中的各步骤的先后顺序非常重要，通过特定的原料、特定的步骤的组合和顺序，实现得率高、纯度好的优点。

实施例

以下记载本发明的具体实施例，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

对比例1

本申请在前期研究中公开了制备得到了月腺大戟素A(CN20151067136.6)的一种方法，其方法步骤如下：

取30kg干燥狼毒大戟药材，粉碎后浸泡在80％(乙醇：水80:20)乙醇热提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L。合并提取液，趁热过滤，合并浓缩至无乙醇残留，浓缩体积至8L。取2L浓缩液加1L水稀释，依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取溶剂均为3L，减压回收溶剂，得石油醚部分60g，乙酸乙酯部分160g，正丁醇部位20g。

乙酸乙酯部分过正相硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1，15:1，10:1，5:1，1:1洗脱，得Fr.1-Fr.7。取18gFr.3过正相柱，石油醚:乙酸乙酯:甲酸25:1:0.1，20:1:0.1，15:1:0.1，10:1:0.1,5:1:0.1,1:1:0.1梯度洗脱，15:1:0.1洗脱得17mg单一化合物，以每kg药材计得率为2.27mg/kg，通过MS，NMR等测定其结构3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-5'-甲基二苯基甲烷(月腺大戟素A，EA)。

对比例2

本申请在前期研究中公开了制备得到了月腺大戟素A(“月腺大戟的化学成分及其乳腺癌细胞毒活性研究”,药学实践杂志,2019,37(4)：309-313)的另一种方法，其方法步骤如下：

取月腺大戟药材30kg粉碎后，用8倍量体积分数为80％的乙醇于65℃下依次热提取2次，每次2小时，合并2次滤液减压回收溶剂至无醇残留，得浓缩液体积7L。取浓缩液2L，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次加入萃取溶剂体积2L。分别合并各萃取层溶液，减压回收溶剂，得石油醚浸膏50g，乙酸乙酯浸膏135g，正丁醇浸膏250g。

取乙酸乙酯浸膏135g过正相硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯，50:1-1:1洗脱)，得到9个馏分Fr1-Fr9。Fr4(15g)经反相C18硅胶用氯仿:甲醇(氯仿:甲醇＝20:1；10:1；5:1；2:1；每个体积约1.5L)梯度洗脱，从Fr4中得到化合物EA(27mg)，以每kg药材计得率为3.15mg/kg。通过MS，NMR等测定其结构3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-5'-甲基二苯基甲烷(月腺大戟素A，EA)。在对比例2中，实际分离出了10个经过结构鉴定的化合物以及其他多个未鉴定结构的组分。在对比例1-2中，由于提取物的组分复杂，我们按照通常的思路依次用极性相对低、中、高的三种溶剂对依次提取液进行萃取。使用低极性石油醚的目的主要是用于将几乎全部的低极性组分萃取出，再用溶解性好的乙酸乙酯从水相中萃取出主要目标产品组分，最后用正丁醇从水相中萃取出高极性组分。从月腺大戟素A的分子结构来看，其分子结构中含有4个酚羟基，推测其极性大，在石油醚中溶解度小，但在乙酸乙酯相中应有较好的溶解度，易被萃取出。

我们对乙酸乙酯萃取物的正相硅胶柱层析进行了多种流动相体系、多种梯度洗脱方式的调整，都没有达到很好的分离效果，主要是由于组分多，极性相似，且月腺大戟素A含量低不占优势。硅胶柱层析采用分段收集方式得到的多段馏分中，月腺大戟素A与个别干扰组分极难分开，含月腺大戟素A的馏分都是以多组分交叉的形式洗脱下来，通过TLC薄层板监测显示多为至少两、三个斑点或更多。一次硅胶柱层析难以得到单一的月腺大戟素A产品。最终，我们需要从多段馏分中选出月腺大戟素A含量相对较高且杂质点较少的馏分，用于进行第二步硅胶柱或反向C18凝胶柱的分离纯化，而月腺大戟素A含量相对较低和很多杂质点较多的馏分通常弃用。然而实际结果显示月腺大戟素A得率很低，如对比例1-2。

实施例1

鉴于以乙酸乙酯萃取物纯化制备月腺大戟素A得率低的问题，我们按照对比例1-2的萃取步骤进行操作得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物并采用高效液相色谱法对三种萃取物进行了检测分析。

分析结果显示，石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物中均检测到了月腺大戟素A(EA)，但正丁醇萃取物没有检测到了月腺大戟素A(EA)，且石油醚萃取物与乙酸乙酯萃取物中的组分种类及含量有明显的区别，石油醚萃取物中检测到的月腺大戟素A含量大于乙酸乙酯萃取物检测到的月腺大戟素A含量。分析结果明显推翻了之前的预期。基于实施例1的分析结果，决定对石油醚萃取物进行分离和纯化来制备月腺大戟素A，参见后述实施例。

实施例2

30kg干燥月腺大戟药材，粉碎后浸泡在70％的乙醇水(按照1:8)中65℃热提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L；趁热过滤，合并2次提取液减压回收至无乙醇残留，得月腺大戟提取液8L。

月腺大戟提物液8L加入纯净水至10L用等比的石油醚(10L)萃取2次，合并石油醚相，减压浓缩回收石油醚，得石油醚萃取部分(60g)。

浓缩后的有机相(60g)经硅胶柱层析纯化，依次用石油醚和石油醚-乙酸乙酯(100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1)梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝20:1段馏分，合并的馏分蒸去部分溶剂(约达到1/6体积)，发现有白色固体析出，薄层层析法(TLC)检测显示2个点(5*10cm薄层板，展开剂石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，即月腺大戟素A和岩大戟内酯B。

该固体(5g)重新溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用氯仿/甲醇＝80/20洗脱，即得目标化合物月腺大戟素A(2.5g)。以每kg药材计，月腺大戟素A得率为83mg/kg。通过MS，NMR等鉴定月腺大戟素A产品的结构，产品¹H-NMR和¹³C-NMR与文献一致，ESI-MS m/z389.1329[M-H]^-见图1，与EA对照品的MS m/z 389.1[M-H]^-(见图2)一致，EA的紫外光谱与其对照品一致，通过获得的紫外光谱信号，测定EA的纯度，得EA的纯度为98.8％。

实施例3

实施例2中的正相色谱分离工序中获得的白色固体(5g)重新溶解后上SephadexLH-20凝胶柱，采用甲醇水(80:20)洗脱，得到目标物1.8g，纯度99.0％。以每kg药材计，月腺大戟素A得率为60mg/kg。通过MS，NMR等鉴定月腺大戟素A产品的结构。

实施例4

实施例2中的正相色谱分离工序中获得的白色固体(5g)重新溶解后上SephadexLH-20凝胶柱，采用甲醇水(乙醇：水＝80:20)洗脱，得到目标物2.0g，纯度98.7％。以每kg药材计，月腺大戟素A得率为66mg/kg。通过MS，NMR等鉴定月腺大戟素A产品的结构。

对比例3

实施例2中的萃取工序后浓缩后的有机相(60g)经硅胶柱层析纯化，依次用石油醚和石油醚-乙酸乙酯(100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1)梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝20:1段馏分，蒸干溶剂获得固体粉末(没有沉淀工序)；将该固体粉末(5g)重新溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用氯仿/甲醇＝80/20洗脱，即得目标化合物月腺大戟素A(2.8g)。纯度为96.4％，纯度低于具备沉淀工序的方法。

实施例5

月腺大戟提物液8L加入纯净水至10L用等比的石油醚(10L)萃取2次，合并石油醚相，减压浓缩回收石油醚，得石油醚萃取部分(64g)。

浓缩后的有机相(64g)经硅胶柱层析纯化，依次用石油醚和石油醚-乙酸乙酯(100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1)梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝20:1段馏分，合并的馏分减压浓缩至原体积的约1/8，加入等体积的石油醚溶剂，静置，析出白色固体，薄层层析法(TLC)检测显示2个点(5*10cm薄层板，展开剂石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，即月腺大戟素A和岩大戟内酯B。

该固体(6.5g)重新溶解后上Sephadex LH-20凝胶柱，用氯仿/甲醇＝80/20洗脱，即得目标化合物月腺大戟素A(2.9g)，纯度98.8％。以每kg药材计，月腺大戟素A得率为96.7mg/kg。

综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种月腺大戟素A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取工序中，使用65～75％乙醇水溶液溶液作为醇系水溶液进行提取，优选所述提取工序中使用70％乙醇水溶液进行提取。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取工序中，每次提取2～2.5小时。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取工序中，向所述月腺大戟提取液加入0.2～0.3倍体积的水进行稀释。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取工序中，用0.9～1.2倍体积的石油醚作为有机相进行萃取。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取工序中，石油醚洗脱用量为1～3倍柱体积。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝100:1洗脱用量为2～5倍柱体积。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝50:1洗脱用量为2～5倍柱体积。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相色谱层析工序中，石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱用量为2～5倍柱体积。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述沉淀工序中，沉淀的条件为，将月腺大戟素A粗品溶液浓缩至原体积的1/6-1/15，静置析出白色沉淀；或者将月腺大戟素A粗品溶液浓缩至原体积的1/8-1/12，加入1-2倍体积的石油醚/正己烷溶剂，边加边搅拌，使其充分混合，静置析出沉淀。